WO1997032841A1

WO1997032841A1 - PROCEDE POUR PREPARER DES AMINOACIDES BASIQUES Nφ-TRIFLUOROACETYLES

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Publication number: WO1997032841A1
Application number: PCT/JP1997/000690
Authority: WO
Inventors: Yasuyoshi Ueda; Hajime Manabe; Masaru Mitsuda
Original assignee: Kaneka Corporation
Priority date: 1996-03-08
Filing date: 1997-03-06
Publication date: 1997-09-12
Also published as: ES2157555T3; SG82013A1; DK1061067T3; DK0826664T3; DE69727324T2; EP1061067A3; DE69705275T2; DE69727324D1; PT1061067E; EP0826664B1; EP1061067B1; JP3788996B2; ATE202334T1; EP0826664A1; ES2209744T3; EP0826664A4; ATE258162T1; EP1061067A2; DE69705275D1

Description

明糸田 ω

Ν 卜リフルォロアセチル — 塩基性ァミノ酸の製造法技術分野

本発明は、塩基性アミノ酸の側鎖アミノ基（ Ν ^ω ) にのみ保護基としてのトリフルォロアセチル基を選択的に導入して Ν ^ω — トリフゾレオロアセチルー塩基性ァミノ酸を製造する方法に関し、とりわけ生理活性ペプチドなどの合成原料として有用なオル二チン、リジンおよびホモリジンの Ν ^ω — トリフノレオロアセチル誘導体を高品質、高収率かつ経済的に商業的規模で有利に製造する方法に関する。背景技術

従来、塩基性アミノ酸の側鎖アミノ基（ Ν ^ω ) にのみ保護基としてのトリフルォロアセチル基を選択的に導入して Ν ^ω — トリフルォロアセチル一塩基性アミノ酸を製造する方法、とりわけ生理活性ペプチドなどの合成原料として有用なリジンおよびオル二チンの Ν ^ω — トリフルォロアセチル誘導体を製造する方法としては、特開昭 6 2 — 2 2 6 9 5 2 号公報に記載されるように、次の反応式で示される、トリフノレオ口酢酸エステルのトランストリフルォロアセチレ一ションを利用する方法が知られている ο (CH₂)_n一 NH₂

+

CF3COOR + NH₃ - CH— COO

(CH₂)_n - NHCOCF₃

+

NH₃ - CH-COO + ROH

/ ヽ式中、 Rはアルキル基、ァラルキル基、ァリール基およびそれらの置換体を表わし、 n = l - '6である。のトランス卜リフノレオロアセチレーションを利用する方法においては、塩基性アミノ酸とトリフルォ口酢酸ェステルを水溶液中で、激しく撹拌しつつ反応させ、反応の進行に伴って析出してきた Ν ^ω — トリフルォロアセチル — 塩基性ァミノ酸を採取するいわゆる反応晶析法が前記特開昭 6 2 — 2 2 6 9 5 2 号公報に示されている ο 前記のトランストリフルォロアセチレーシヨンを利用する方法では、反応により生成してくる Ν ^ω - 卜リフゾレ才ロァセチルー塩基性ァミノ酸が次第にスラリー状（ホィップ状またはケーキ状）に析出してくる。このため、反応時の撹拌効率が悪くなり、充分な混合ができずに収 mが低下するといつた問題がある。

また、反応の進行に伴い生成物が析出し反応液の液性状がホイップ状またはケーキ状となつてくるので、激しく撹拌して充分な撹拌効率をうるためには、特殊で高価な反応設備を必要とするとか、反応濃度を高くできないなどの問題がある。

さらに、 Ν ^ω — トリフルォロアセチル — 塩基性ァミノ酸の結晶を採取する方法としては、前記特開昭 6 2 — 2

2 6 9 5 2 号公報では、反応後析出した Ν ^ω — トリフルォ口ァセチル — 塩基性ァミノ酸の結晶を引き続き採取する反応晶析による採取方法が示されているが、この場合スラリーの流動性がよくなく、缶からの払い出しが非常に難しい、濂過性 (結晶分離性）、洗浄性および脱液性が大きく低下し、結晶分離に長時間かかる、湿ケーキ (湿結晶）の乾燥においても収縮性やダマ形成などのために長時間かかるなどの操作性や生産性の面での問題がある。さらに、反応〜晶析時に生成した塩や未反応の塩基性ァミノ酸などの不純物を含有する低品質の Ν ^ω — トリフルォロアセチルー塩基性ァミノ酸がえられるため、高品質化のためには再結晶を必要とするなど、生産性、収率や品質の面での問題もある。

反応濃度や晶析澳度を低くすることにより、前記の問題点の一部を改善する（すなわち、ホイップ化やケーキ化を回避して、撹拌効率や反応混合物の流動性を改善する）方法も考えられるが、商業的規模での生産を可能とするためには反応濃度をかなり低くする必要があり、したがって、収量や生産性がいちじるしく低下する、大容量の反応設備が必要になるといった別の問題が生ずる。

前記特開昭 6 2 — 2 2 6 9 5 2 号公報の実施例 1 では、 L 一リジンに対して 1 . 5 倍モルのトリフルォロ酢酸ェチルを反応させて Ν ^ω — トリフルォロアセチル一 L 一リジンを取得する高濃度反応方法が開示されているが、取得収率は L 一リジンに対して 5 8 m 0 1 %、トリフルォロ醉酸ェチルに対しては 3 9 m o 1 % であり、 ¾液および洗浄液の濃縮による二番晶の回収分を含めた場合 L — リジンに対して 7 7 m o l %、トリフノレオ口酢酸ェチルに対しては 5 2 m o 1 % である。このとき、えられる N ^ω - トリフルォロアセチノレー L 一リジンは結晶性状が悪いため、生産性が劣り、品質においても無機塩などの混入による品質低下の問題が認められる。高品質の N ^ω — トリフノレオロアセチノレー L 一リジンを取得するために、再結晶を実施した場合には、総合収率が L 一リジンに対して 5 5 m o 1 % 、トリフノレオ口酢酸ェチノレに対してはわずか 3 6 m o 1 % である。前記特開昭 6 2 — 2 2 6 9 5 2 号公報に示された方法において、 N ^ω — 卜リフルォロアセチルー L 一リジンの収量を高めるには、高価なトリフルォロ酢酸エステルを大過剰量使用する必要があり、その場合、含フッ素廃水処理面での負荷が高くなるといつた問題もある。

前述の諸問題は、とくに商業的規模での製造法として Ν ^ω - トリフルォロアセチル一塩基性アミノ酸を大量に取り扱う上では大きな問題となる。

本発明の目的は、塩基性ァミノ酸とトリフルォロ酢酸エステルを水性液中で反応させて Ν ^ω — トリフルォロアセチルー塩基性アミノ酸を製造する方法において、前記の問題を克服し、高品質、高収率かつ経済的に Ν ^ω — トリフルォロアセチルー塩基性ァミノ酸を商業的規模で有利に製造する方法を提供することにある。発明の開示

本発明者らは、前記の現状に鑑み、前記の課題を解決するために鋭意研究を行なった結果、塩基性アミノ酸とトリフノレオ口酢酸エステルから Ν ^ω — トリフノレオロアセチルー塩基性アミノ酸を製造する方法において、塩基性ァミノ酸と塩基性 Ρ Η 調整剤とを含む水性液中に特定の条件下トリフルォロ酢酸エステルを添加して反応を行なえば、高反応濃度でも、スラリー化（ホイップ化またはケーキ化）が抑制され、良好な液性状の反応混合物をうることができ、したがって、撹拌効率面での負荷を大幅に軽減でき、また、高い反応収率を達成できること、さらに、えられた反応混合物を中和または酸性化し、加温状態で良好な結晶を成長させることで、ホイップ化またはケーキ化が抑制され、良好な流動性のスラリーをうることができるとともに、濂過性（結晶分離性）、洗浄性、脱液性および乾燥性のよい良好な結晶性状で高純度の N ω - トリフルォロアセチルー塩基性ァミノ酸を収率よく製造できることを見出し、本発明を完成させた。

すなわち、本発明は、（ 1 ) 塩基性アミノ酸とトリフルォロ詐酸エステゾレより Ν ^ω — トリフルォロアセチルー塩基性アミノ酸を製造する方法において、仕込み溶媒の量に対する塩基性ァミノ酸の総重量が約 5 〜 4 0 % ( w / V ) になる澳度にて、塩基性アミノ酸と塩基性 ρ Η調整剤を含む塩基性水性液に、該水性液の ρ Η を 1 0 . 6 〜 1 1 . 4 、温度を 2 0 °C以下に維持しな力くらトリフルォロ酢酸エステルを逐次添加して反応させ、反応後の水性液より Ν ^ω — トリフルォロアセチソレー塩基性アミノ酸を晶出させ、採取することを特徴とする Ν ^ω — トリフルォロアセチルー塩基性ァミノ酸の製造法に関する。

さらに本発明は、（ 2 ) トリフルォロ酢酸エステルの前記塩基性水性液への逐次添加を、撹拌強度 1 Z 1 0 k W Z m ³以上で撹拌しつつ行なう前記（ 1 ) 項記載の製造法に関する。

さらに本発明は、（ 3 ) トリフルォロ酢酸エステルの逐次添加を、 1 Z 4 〜 8 時間かけて行なう前記（ 1 ) または（ 2 ) 項記載の製造法に関する。

さらに本発明は、（ 4 ) トリフノレオ口酢酸エステルの添加量が塩基性アミノ酸に対しモル比で 0 . 5 〜 2 である前記（ 1 ) 、（ 2 ) または（ 3 ) 項記載の製造法に関する。

さらに本発明は、（ 5 ) Ν ^ω — トリフノレオロアセチル一塩基性アミノ酸の溶解した水性液を、中性または酸性下で、温度を 4 0 以上に保ちつつ、 ρ Η を Ν ^ω — トリフノレオロアセチル — 塩基性ァミノ酸の等電点土 3 に調整することにより Ν ^ω — トリフルォロアセチルー塩基性ァミノ酸の結晶を成長させる前記（ 1 ) 、（ 2 ) 、（ 3 ) または（ 4 ) 項記載の製造法に関する。

さらに本発明は、（ 6 ) Ν ^ω — トリフルォロアセチル一塩基性アミノ酸の結晶の成長を、撹拌強度 0 . 0 1 〜 0 . 5 k W Z m ³で撹拌しつつ行なう前記（ 5 ) 項記載の製造法に関する。

さらに本発明は、（ 7 ) Ν ^ω - トリフルォロアセチル一塩基性アミノ酸の結晶の成長後、 2 0 て以下に冷却してさらに晶出させる前記（ 5 ) または（ 6 ) 項記載の製造法に関する。

さらに本発明は、（ 8 ) 塩基性アミノ酸がリジンである前記（ 1 ) ないし（ 7 ) 項のいずれかに記載の製造法に関する。

さらに本発明は、（ 9 ) Ν ^ω — トリフルォロアセチル一塩基性アミノ酸の溶解した水性液から、中性または酸性下、温度 4 0 以上で、 ρ Η を Ν ^ω — トリフルォロアセチルー塩基性ァミノ酸の等電点 ± 3 の範囲に調節しつつ、結晶を成長させることを特徴とする Ν ^ω — トリフルォロアセチルー塩基性アミノ酸を水性液から晶出させ、採取する方法に関する。

さらに本発明は、（ 1 0 ) Ν ^ω — 卜リフノレオロアセチル — 塩基性アミノ酸の結晶の成長を、撹拌強度 0 . 0 1 〜 0 . 5 k W / m ³で撹拌しつつ行なう前記（ 9 ) 項記載の方法に関する。

さらに本発明は、（ 1 1 ) N " — トリフルォロアセチルー塩基性アミノ酸の結晶の成長において、最終的に p H を 5 〜 6 とする前記（ 9 ) または（ 1 0 ) 項記載の方法に関する。

さらに本発明は、（ 1 2 ) Ν ^ω — トリフルォロアセチルー塩基性アミノ酸の結晶の成長後、 2 0 で以下に冷却してさらに晶出させる前記（ 9 ) 、（ 1 0 ) または（ 1 1 ) 項記載の方法に関する。

さらに本発明は、（ 1 3 ) Ν ^ω — トリフルォロアセチルー塩基性アミノ酸の結晶の採取に際し、該結晶をスラリーから分離し、引き続き、湿結晶に含まれる逋液を炭素数 1 〜 3 のアルコールを用いて洗浄除去する前記（ 9 ) 、（ 1 0 ) 、（ 1 1 ) または（ 1 2 ) 項記載の方法に関する。

さらに本発明は、（ 1 4 ) Ν ^ω - トリフルォロアセチルー塩基性ァミノ酸の溶解した水性液が、塩基性ァミノ酸と塩基性 ρ Η調整剤を含む塩基性水性液に、該塩基性水性液の Ρ Η を 1 0 . 6 〜： L 1 . 4 、温度を 2 0 で以下に維持しながら、トリフルォロ酢酸エステルを逐次添加して反応させた反応混合物である前記（ 9 ) 、（ 1 0 ) 、 ( 1 1 ) 、（ 1 2 ) または（ 1 3 ) 項記載の方法に関する ο さらに本発明は、（ 1 5 ) トリフルォロ酢酸エステルの前記塩基性水性液への逐次添加を、 1 4 〜 8 時間かけて行なう前記（ 1 4 ) 項記載の方法に関する。

さらに本発明は、（ 1 6 ) トリフルォロ酢酸エステルの前記塩基性水性液への逐次添加を、撹拌強度 1 Z 1 0 k W Z m ³以上で撹拌しつつ行なう前記（ 1 4 ) または ( 1 5 ) 項記載の方法に関する。

さらに本発明は、（ 1 7 ) トリフルォロ酢酸エステルの添加量が塩基性アミノ酸に対しモル比で 0 . 5 〜 2 である前記（ 1 4 ) 、（ 1 5 ) または（ 1 6 ) 項記載の方法に関する。

さらに本発明は、（ 1 8 ) 塩基性アミノ酸がリジンである前記（ 9 ) ないし（ 1 7 ) 項のいずれかに記載の方法に関する。

本発明においては、トリフルォロ醉酸エステルと塩基性ァミノ酸との反応により Ν ^ω — トリフルォロアセチル一塩基性アミノ酸が製造されるが、その反応の際、塩基性ァミノ酸と塩基性 ρ Η 調整剤を含む塩基性水性液中にトリフルォロ酢酸エステルが添加される。

前記トリフルォロ酢酸エステルとしては、たとえば、メチル、ェチノレ、 η — プロピル、イソプロピル、 η — ブチル、イソプチル、 s e c — ブチルなど炭素数 1 〜 8 のアルキルエステル、ベンジル、フエネチルなど炭素数 7 〜 1 2 のァラルキルエステル、またはフヱニル、 P — 二トロフエ二ノレなど炭素数 6 〜 1 0 のァリーノレエステノレもしくは置換ァリールエステルなど種々使用できるが、操作性などの点で炭素数 2 〜 4 のアルキルエステルの使用が好ましく、とりわけ、トリフノレオ口酢酸ェチノレが好ましく用いられる。これらのトリフルォロ酢酸エステルは単独で用いてもよいし、 2 種以上を併用してもよい。

前記塩基性アミノ酸は、下記一般式（ I ) ：

(CH₂)_n一 NH₂

+ ¹ - (I)

NH₃ - CH- COO

(式中、 n は 1 〜 6 の整数を表わす）で示される。好ましい代表的なものとしては、オル二チン（ n = 3 ) 、リジン（ n = 4 ) 、ホモリジン（ n = 5 ) があげられ、とくにリジンが好ましく用いられる。これらは L 体、 D体または D L 体として使用できるが、産業上の利用面から L 体または D体の光学活性体が好ましく使用される。また、前記塩基性アミノ酸は、取扱いやすさ、晶析時の塩析効果への寄与などの点から好ましくは、たとえば L 一リジン一塩酸塩などの塩酸塩のような塩基性ァミノ酸の塩（とくに好ましくは強酸の塩）として使用される。

前記塩基性 p H調整剤としては無機塩基があげられる。前記無機塩基としては、アルカリ金属水酸化物、アル力リ金属炭酸塩などがあげられる。前記アルカリ金属水酸化物としては、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化リチウムがあげられる。前記アルカリ金属炭酸塩としては、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸リチウムなどがあげられる。扱いやすさ、中和晶析時に生成する塩の塩析効果による晶出量の増大、反応濃度向上などの総合的観点から、水酸化ナトリゥム、水酸化力リゥム、水酸化リチウムが好ましく、水酸化ナトリウムがとくに好ましい。前記無機塩基は、たとえば、約 2 〜 2 O N の水酸化ナトリウム水溶液（取扱いやすさ、収率および反応澳度向上の点から、約 9 〜 1 O N の水酸化ナトリゥム水溶液がとくに好ましく用いられる）などのように、水溶液として使用するのが操作性などの点から好ましい。前記塩基性 p H 調整剤は、単独で用いてもよく、 2 種以上併用してもよい。また、塩基性 p H 調整剤はこれらに限定されず、必要ならば、たとえば、トリェチルァミン、ピリジンなどの有機塩基を使用することもできる。

前記塩基性 p H 調整剤の使用量は、塩基性水性液の p H を 1 0 . 6 〜： L 1 . 4 にするための必要量である。

前記塩基性水性液の溶媒としては、水、水と有機溶剤との混合物があげられる。水のみを溶媒として用いることは、原料であるオル二チン、リジン、ホモリジンなどの塩基性アミノ酸や生成物であるオル二チン、リジン、ホモリジンの N ^ω — トリフノレオロアセチノレ誘導体などの Ν ^ω - トリフノレオロアセチル一塩基性ァミノ酸の塩などの溶解度を高く保って高濃度反応を実施できる、晶析時に塩（たとえば、塩化ナトリウム）溶液中での塩析効果による晶出量の増大および高濃度晶析を実施できる、有害な有機溶剤を用いず、廃水処理を含む後処理が容易である、安価であるなどの点から好ましい。

必要に応じ、水と有機溶剤との混合物を用いてもよく、水と有機溶剤との混合物を溶媒として使用するばあい、系は水と混和性の有機溶剤と水とが均一に混合する系であってもよく、また、水と混和しない有機溶剤と水との不均一な 2 層系であってもよい。

前記有機溶剤としては、たとえば、ジェチルエーテルゃテトラヒドロフランなどのエーテル類、塩化メチレンゃジクロロエタンなどのハロゲン化炭化水素類、トルェンメチルシクロへキサン、 η — へキサンなどの炭化水素類、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノールなどのアルコール類、酢酸メチル、酢酸ェチル、酢酸プロピル、酢酸ブチルなどの酢酸エステル類、ァセトンゃメチノレエチゾレケトンなどのケトン類、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、 N — メチルピロリドンなどの非プロトン性極性溶剤などがあげられるが、これらに限定されるものではない。前記有機溶剤としては、一般に、反応速度向上などの点から、水と混和性の有機溶剤の使用が好ましい。

前記塩基性水性液とは、溶媒である水または水と有機溶剤との混合物に、塩基性ァミノ酸とともに加える塩基性 P H 調整剤によって塩基性にされた水性液のことであり、特別に水性液を塩基性にするために塩基を加える必要はないが、反応期間中の p H の調整を行ないやすくするために、リン酸水素ニナトリウム、塩酸、ホウ酸などを添加して緩衝性のある塩基性水性液にしたものを使用することもできる。また、前記塩基性水性液には、界面活性剤や相間移動触媒などを必要に応じて添加してもよい o

本発明において、トリフルォロ酢酸エステルと塩基性アミノ酸との反応は、反応混合物の p H を 1 0 . 6 〜 1 1 . 4 、収率、品質の向上などの点から好ましくは 1 0 . 8 〜： L 1 . 2 に維持しながら行なう。適切な p H 域における反応の実施は、本発明における重要なファクターである。反応 p H が 1 0 . 6 より小さくなると、生成物が折-出し、次第に液性状がスラリー状（ホイップ状、さらにはケーキ状）となって、反応時の撹拌効率が悪くなり、充分な混合ができず、反応収率が低下するといつた傾向がある。また、反応 p H が 1 1 . 4 より大きくなると、生成物の析出は抑えられるものの、原料のトリフルォロ酢酸エステルや生成物のアルカリ加水分解（脱トリフルォロアセチル化）が進みやすく、反応収率が低下する傾向がある。本発明者らの検討の結果、反応生成率、 ω Z a 位の反応選択性、生成物の安定性、反応混合物の液性状や液量少量化などの総合的観点から選択されるべき p H はおよそ 1 1 であることがわかった。

従来、代表的な塩基性ァミノ酸であるリジンまたはォルニチンの等電点（ p I ) はともに 9 . 7 であることが知られており（日本化学会編、「改訂 4 版化学便覧基礎編 I 」、 1 9 9 3 年、丸善、 4 3 1 〜 4 3 4 頁参照）、したがって、 α位のアミノ基を選択的にプロトンィ匕し、 ω位のアミノ基を未解離の状態に保つことにより、 ωノ α 位の選択性を高めるためには、ともに ρ Η 9 . 7 付近が好ましい ρ Η 領域と考えられる。なお、特開昭 6 2 — 2 2 6 9 5 2 号公報には、 ω Ζ α 位の選択性向上のためには ρ Η 8 〜 1 1 が好ましいとの記載、一方、ジャーナル * ォブ * オーガニック · ケミストリー（ J . O r g . C h e m . ) 、第 5 3 卷、 8 3 6 〜 8 4 4 頁、 1 9 8 8 年には、 ω Ζ α 位の選択性を高めるためには p H l l より高い p H領域が好ましいとの記載があるものの、反応生成率、生成物の安定性、反応混合物の液性状や液量少量化、反応濃度を高くするなどの観点からの好ましい P H は報告されていない。

塩基性ァミノ酸に対するトリフルォロ酢酸エステルのモル比は、通常 0 . 5 〜 2 であるが、本発明の条件によれば、えられる生成物の品質、廃水処理面の負荷、経済性などの観点から最も好ましいほぼ 1 (通常 0 . 7 〜 1 . 2 、品質や経済性の点から好ましくは 0 . 8 〜 1 . 1 、とくに好ましくは 0 . 9 〜 1 . 0 ) に近いモル比で使用することができる。その結果、トリフルォロ酢酸エステル当たりの収率が上がる。

塩基性アミノ酸は最初から全量加えておくのが、高収率を確保する、操作性を簡便にするなどの点から好ましい o

前記トリフルォロ酢酸エステルは、廃水処理の容易さ、反応濃度向上などの点から、そのまま単独で添加するのが好ましい。必要に応じ、たとえば、前記の有機溶剤から好適に選択される反応に悪影響のない液体（たとえば、テトラヒドロフラン、ァノレコール類）に溶かして添加することもできる。トリフルォロ齚酸エステルまたはその溶液は、商業的規模での高収率を達成するためには、添加してから時間をかけて反応させるのは好ましくなく、逐次添加しつつ反応させるのが好ましい。反応温度などにもよるが、通常、約 1 Z 4 〜 8 時間、好ましくは約 1 Z 3 〜 6 時間、とくに約 1 Z 2 〜 3 時間（約 1 時間程度が最も好ましい）で全量が添加される程度に逐次添加しつつ反応させるのが収率、品質の向上の点から好ましい。逐次添加する方法としては、一定速度で添加する方法、分割添加する方法などを採用でき、とくに、収率、品質の向上、操作性などの点から、一定速度で添加する方法が好ましい。

反応温度は、通常、約 2 0 以下、収率、品質の向上の点から好ましくは約 1 0 以下、とくに好ましくは約 5 °C 以下が採用される。下限は反応溶液が氷結しない温度である。反応温度が高すぎると、原料のトリフルォロ齚酸エステルや生成物のアル力リ加水分解（脱トリフルォロアセチル化）が起こりやすくなり、収率が低下する。

反応に際しては、反応試剤が適切に分散されるように撹拌、混合するのが好ましいが、本発明の条件によれば、液性状のよい反応混合物がえられるので、スラリ一状 ( ホイップ状またはケーキ状）の反応混合物を撹拌混合するほどの強撹拌は必要ない。撹拌強度約 1 Z 1 0 k W m ³以上、収率、品質の向上の点から好ましくは約 1 3 k W Z m ³以上、とくに好ましくは約 l Z 2 k W Z m ³以上で実施される。上限としては実用面から約 5 k

W Z m ^dが好ましい。通常、約 l Z 3 〜 3 k W Z m ³の範囲内で好ましく選択できる。

仕込濃度は、仕込溶媒の容量に対する塩基性ァミノ酸の総重量として、約 5 〜 4 0 % ( w / V ) 程度であり、生産性の点から、通常、約 1 0 % ( w / V ) 以上、好ましくは約 1 5 % ( w / V ) 以上である。これにより、たとえば、 Ν ^ω — トリフノレオロアセチルー L — リジンの製造を例にあげれば、反応混合物に対して生成物濃度約 1 0 % ( w / w ) またはそれ以上の流動性の良好な高濃度反応混合物をうることができる。このような流動性の良好な高濃度反応混合物の取得は、操作性向上、液量の少量化などの生産性向上はもちろんのこと、晶析収量の增大に寄与する。

なお、前記の Ν ^ω — トリフルォロアセチルー塩基性ァミノ酸の製造における反応収率（生成率）は、約 7 5 m o 1 %以上、好ましくは約 8 0 m o 1 %以上が期待できる。 10 本発明の反応方法は、不活性雰囲気（たとえば、チッ素またはァゾレゴンなど）でも実施できる。

本発明により、塩基性アミノ酸に対して大過剰量のトリフルォロ酢酸エステルを用いることなく、反応生成率よく、 ω選択性にすぐれ、操作性やそののちの結晶化に適した液性状で高濃度（好ましくは、約 0 . 5 m o l Z 1 以上）の Ν ^ω — トリフルォロアセチル一塩基性ァミノ酸の反応混合水性液がえられる（特公平 6 — 1 5 5 1 4 号公報の例 3 を比較参照）。

つぎに、反応後の水性液からの Ν ^ω — トリフルォロアセチルー塩基性アミノ酸の晶出、採取プロセスについて説明する。

反応後の水性液を中和もしくは酸性化する。 Ν ^ω — トリフルォロアセチルー塩基性アミノ酸の安定な（すなわち、脱卜リフノレオロアセチノレイ匕を抑制できる） ρ Η約 8 以下、好ましくは ρ Η約 7 以下に中和または酸性化する。

酸性化または中和に使用する酸は、実用性の点から強酸が好ましい。通常、塩酸や硫酸などの鉱酸が好ましい。とくに塩酸が好ましく用いられる（濃塩酸が最も好ましい）。使用する酸は、必ずしもこれらに限定されるものではない。これらは単独で用いてもよく、 2 種以上併用してもよい。酸の使用量は、 Ν ^ω — トリフルォロアセチルー塩基性ァミノ酸結晶の採取にあたって好ましくない (不要な）塩基成分の中和量またはその過剰量である。つぎに、この水性液中で、以下に述べるように 4 O 以上に温度を保ちつつ、 p H を N ^ω — トリフルォロアセチルー塩基性アミノ酸の等電点付近、すなわち、等電点 ± 3 付近に調節しながら、結晶を成長させる。粒径が大きく、結晶性状の良好な高純度の結晶をうるためには、 4 0 °C以上、通常 4 0 〜 1 0 0 °C、操作性、より好ましい結晶の取得などの点から好ましくは 5 0 〜 9 0 、とくに好ましくは 6 0 〜 8 0 でに維持しな力、' ら結晶を成長させる。

前記の結晶成長は、通常、約 1 Z 3 時間以上、好ましくは 1 〜 3 時間以上かけてゆつくり行なうことにより、より好ましい流動性のよいスラリ一が取得できる。

このあいだ、水性液の p Hが等電点付近のばあいには、その p H を維持しつつ、また、等電点よりも酸性側にあるばあいには、 p H を塩基で等電点付近にゆっくり調整しつつ行なう。 Ν ^ω — トリフノレオロアセチルー塩基性ァミノ酸の等電点は、各々多少異なるが、通常 p H約 4 〜 7 付近、晶出量増大の点から好ましくは約 5 〜 6 付近である。 ρ Η 5 . 5 ± 0 . 5 付近が最も好ましい。この ρ Η域において、晶出量が最大になる。

p H の調節に使用する塩基としては、無機塩基が好ましい。通常、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化リチウムなどのアル力リ金属水酸化物、炭酸ナトリゥム、炭酸カリウム、炭酸リチウムなどのアルカリ金属炭酸塩または炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウム、炭酸水素リチウムなどのアルカリ金属炭酸水素塩、水酸化アンモニゥムなどが用いられる。これらのうちでは、実用性の点で水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化リチウムが好ましく、水酸化ナトリウムがとくに好ましい。前記塩基は、たとえば、約 2 〜 2 O N の水酸化ナトリウム水溶液（約 9 〜 1 O N の水酸化ナトリウム水溶液がとくに好ましく用いられる）などのように、水溶液として使用するのが操作性などの点から好ましい。使用する塩基は、必ずしもこれらに限定されるものではない。これらは単独で用いてもよく、 2 種以上併用してもよい。

反応〜晶析における好ましい酸成分および塩基成分の使用は、廃棄しやすい無機塩を生成させるとともに、生成した塩の塩析効果による Ν ^ω — トリフルォロアセチル — 塩基性アミノ酸の収量を増大する上で重要である。塩折効果においては無機塩、とくに塩化ナトリウムがすぐれている。

中和または酸性化に際して、別法としてイオン交換樹脂（ダウエックス 5 0 ( D o w e x 5 0 ) ( Η ^τ型）、ダウケミカノレ社（ D o w C h e m i c a l C o . ) 製など）を使用することができる。 N ^ω — トリフルォロァセチルー塩基性ァミノ酸の反応混合物をイオン交換樹 ]|皆と接触させ、常法にしたがい、最終的にえられる溶液を濃縮することにより Ν ^ω — トリフノレオロアセチルー塩基性アミノ酸を晶出させることができる。

結晶成長は、結晶性状、スラリー性状の点から緩やかに撹拌するのが好ましく、スラリーの流動する最低速レベルで撹拌するのがとくに好ましい。通常、撹拌強度約

0 . 0 1 〜 0 . 5 k W Z m。で実施され、とくに約 0 . 0 5 〜 0 . 2 k W / m ³で好ましく実施される。前記結晶成長時の温度は撹拌に適した流動性のよいスラリ一を与える。これにより、浮上性結晶の形成やスラリーのホイッブ化またはケーキ化の傾向を極力抑制でき、沈降性のある粒径の大きい高品質の好ましい結晶の取得、流動性のよいスラリ一の取得が助成される。

Ν ^ω — トリフルォロアセチル一塩基性アミノ酸結晶の採取に際しては、最終的にスラリーを冷却して晶出量をさらに高めることができる。このばあい、約 2 0 °C以下、通常、約 0 〜 2 0 °C ( とくに約 1 0 ΐ 付近）への冷却が操作性、晶出 S増加の点から好ましい。

なお、前記の Ν ^ω _ トリフルォロアセチルー塩基性ァミノ酸の晶析における晶析収率は、存在する Ν ^ω — 卜リフルォロアセチル一塩基性アミノ酸に対し約 7 5 m o 1 %以上、好ましくは約 8 0 m o 1 %以上が期待できる。

本発明の晶析方法は、不活性棼囲気（たとえば、窒素またはァノレゴンなど）でも実施できる。

本発明の晶析方法により、晶析液に対し 1 0 % ( w / V ) またはそれ以上の結晶濃度（スラリー濃度）でも良好な流動性を有するスラリーをうることができる。このような流動性の良好な高濃度スラリーの取得は、操作性向上、液量の少量化などの生産性向上はもちろんのこと、晶析収量の増大に寄与する。

また、本発明の晶析方法により、再結晶することなく、高品質の Ν ^ω — トリフノレオロアセチルー塩基性ァミノ酸を簡便かつ効率的に取得できる。

以下に、本発明の好ましい基本的な実施態様の例を、

Ν ^ω - トリフルォロアセチルー L ーリジンの製造を例として記載するが、この実施態様に限定されるものではない ο

L ーリジン一塩酸塩を約 3 〜 4 倍重量の水に加え、約 1 O N の水酸化ナトリウム水溶液を用いて p H をおよそ 1 1 に調整する。この混合物中に、 L 一リジン一塩酸塩に対して約 0 . 9 倍モルのトリフルォロ酢酸ェチルを約 1 〜 2 時間かけておよそ一定速度で添加しながら約 1 k W Z m ³の撹拌強度で反応させる。反応中は、反応温度約 0 〜 6 °C に維持するとともに、約 1 O N の水酸化ナトリウム水溶液を添加して反応混合物の p H をおよそ 1 1

(通常、 1 0 . 8 〜 1 1 . 2 の範囲）に維持する。トリフルォロ酢酸ェチルの添加終了後、反応混合物を酸性化または中和する。

反応混合物（約 0 〜 6 °C ) を、使用したトリフルォロ酢酸ェチルに対して約 2 倍モルの濃塩酸（約 8 〜 3 5 て）中に添加し、これを約 6 0 〜 8 0 °Cに加温する。さらに、約 1 0 N の水酸化ナトリゥム水溶液を約 1 時間かけておよそ一定速度で添加して p H約 5 . 5 に調整することにより、 Ν ^ω — トリフルォロアセチノレー L - リジン結晶を成長、晶出させる。ついで、約 1 5 で以下に冷却し、晶出を完了させる。晶出時の撹拌強度は約 0 . l k W m ³である。

別法としては、反応混合物（約 0 で）を、反応混合物の p H を約 5 . 5 とする量の濃塩酸（約 6 0 〜 8 0 で）中に、約 1 時間かけておよそ一定速度で添加して、 p H 約 5 . 5 に調整することにより、 Ν ^ω — トリフルォロアセチルー L — リジン結晶を成長、晶出させる。必要により、澳塩酸または約 1 O N の水酸化ナトリゥム水溶液を用いて、 p H を微調整する。ついで、約 1 5 以下に冷却し、晶出を完了させる。晶出時の撹拌強度は約 0 . 1 k W Z m ^ϋである。

えられるスラリー中の塩化ナトリウム濃度は約 1 0 % ( w / w ) またはそれ以上となり、 Ν ^ω — トリフルォロァセチルー L — リジンの高い晶出量がえられる。

なお、 Ν ^ω — トリフルォロアセチル一塩基性アミノ酸の晶出に際しては、必要に応じ、別途、塩析効果のある無機塩（高い塩析効果を有する塩化ナトリゥムが最も好ましい）を共存させることができるし、據液および Z または洗浄液中に含まれる Ν ^ω — トリフルォロアセチルー塩基性アミノ酸を回収、リサイクルすることもできる。これにより、廃水溶液中への生成物ロスを最小化できる。

このようにしてえられる Ν ^ω — トリフルォロアセチル一塩基性アミノ酸結晶の晶析液（スラリー）は、加圧 » 過、減圧濾過、遠心分離などの一般的な結晶分離方法 (生産性の点から遠心分離が最も好ましい）を用いて採取できる。さらに、分離ケーキは、水およびノまたは有機溶剤で洗浄することができる。また、洗浄液中への生成物ロスを抑制するために、冷水で洗浄することができる。さらに乾燥を容易にするために、有機溶剤で洗浄することができる。前記有機溶剤としては、無水または含水（通常、水分含量約 5 〜 5 0 % ( w / w ) 、実用性の点からとくに約 5 〜 1 0 % ( w / w ) が好ましく用いられる）のアルコール類が使用できる。前記アルコール類としては実用性の点から無水または含水の炭素数 1 〜 3 のァゾレコーゾレ、とくにエタノーノレを好ましく用いることができる。前記アルコールによる湿結晶中の逋液（母液）の洗浄除去は、生成物ロスを最小化するとともに、乾燥を容易にすることがわかった。本発明の晶析方法では、粒径の大きい結晶性状のよい Ν ^ω — トリフルォロアセチルー塩基性アミノ酸がえられるので、前記アルコール類による洗浄性もよく、ケーキに含まれる據液中の塩も効率よく洗浄除去できる。

えられた Ν ^ω — トリフノレオロアセチル一塩基性ァミノ酸結晶は最終的に、常圧〜減圧下、乾燥することができる。さらに、必要に応じ、粉砕または造粒することができる。

本発明にしたがい製造された Ν ^ω — トリフルォロアセチルー塩基性アミノ酸はたとえば、特開昭 6 1 — 3 6 2 9 7 号公報に記載の方法にしたがい生理活性べプチドに導くことができる。発明を実施するための最良の形態以下に実施例をあげて本発明をさらに詳しく説明するが、本発明は、これら実施例のみに限定されるものではない ο

実施例 1

L — リジン一塩酸塩 3 5 . 0 5 g ( 1 9 2 m m o l ) を水 1 3 5 m l に加え、 9 . 5 N の水酸化ナトリウム水溶液（ 2 1 7 m m o l ) で p H l l . 0 に調整した。内温約 0 〜 3 °C に冷却し、撹拌下、トリフルォロ酢酸ェチル 2 4 . 3 5 g ( 1 7 1 m m o l ) を 1 時間かけてゆつくり滴下した。滴下中は、 9 . 5 N の水酸化ナトリウム水溶液（ 1 3 0 m m o 1 ) を滴下しつつ反応混合物を p H 1 0 . 8 〜； L 1 . 2 に維持するとともに、内温 0 〜 3 で、撐拌強度 1 . 5 k W Z m ³に維持した。トリフルォ口酢酸ェチルの滴下を終了して、 2 0 分間、同条件下、撹拌を続けた。生成物の沈殿のない良好な液性状の反応混合物（ p H l l . 1 ) がえられた。別実験で取得した二番晶 4 . 0 g ( 1 7 m m 0 1 ) および反応混合物を濃塩酸 3 5 g に一括添加し、溶解した。添加後の p H は 1 . 0 以下であった。水 6 m l で洗い込んだ。 7 0 に加温し、約 9 . 5 N の水酸化ナトリウム水溶液（ 1 6 4 m m o 1 ) を 1 時間かけてほぼ一定速度で添加し、 p Hを 5 . 5 に調整した（なお、撹拌は、スラリーの回る最低速レベノレ（ 0 . 1 〜 0 . 2 k W Z m ³) で実施した。 p H 2 付近から結晶析出が開始した）。内温 1 5 °C以下に冷却し、結晶を遠心分離し、 9 3 %エタノール 2 5 g で洗浄した。分離性は非常によかった。結晶を最高 7 0 °Cの加温下、真空乾燥した。 Ν ^ω — トリフルォロアセチノレー L 一リジンの取得量は 3 1 . 4 g ( 1 3 0 m m o l ) 、純度は 9 9 % ( w / w ) 以上（ Ν ^α 異性体は不検出、塩化ナトリウム含量 0 . 1 % ( W Z W ) 以下）であった。 » 液および洗浄液中には、 7 . 3 g ( 3 0 m m o l ) の N ^ω - トリフルォロアセチル一 L 一リジン力含まれていた。濾液および洗浄液の混合物を、内温約 5 0 〜 8 0 での範囲で、 1 Z 2 重量まで減圧濃縮した。濃縮後、 3 0 で以下に冷却し、結晶を分離し、水 1 5 g で洗浄した。

N ^ω - トリフゾレオロアセチル一 L ーリジンの二番晶の取得量は 4 . 0 g ( 1 7 m m 0 1 ) であった。反応収率 (生成率）は 8 4 m o l %であった。

実施例 2

L — リジン一塩酸塩 1 8 3 g ( l . O O m o i ) を水 7 0 0 m l に加え、 9 N の水酸化ナトリウム水溶液（ 1 . 2 m o l ) で p H l l . 0 に調整した。内温 4 に冷却し、撹拌下、トリフルォロ舴酸ェチル 1 4 2 g ( 1 . 0 O m o l ) を 3 0 分かけてゆっくり滴下した。滴下中は、 9 N の水酸化ナトリウム水溶液（ 0 . 7 m o 1 ) を滴下しつつ反応混合物を p H 1 0 . 6 〜： L 1 . 4 に維持するとともに、内温 4 °C、撹拌強度 0 . 5 〜 l k W Z m に維持した。トリフルォロ酢酸ェチルの滴下を終了したのち、 1 5 分間、同条件下で撹拌を続けた。生成物の沈殿のない良好な液性状の反応混合物（ P H 1 1 . 1 ) がえられた。冷却した反応混合物を 7 0 °C に加温した濃塩酸 1 0 0 g 中に 1 時間かけて添加した。添加は初期（とくに P H 1 . 3 付近まで）は速やかに行ない、徐々に遅くした。添加後の p H は約 6 であった。 9 N の水酸化ナトリウム水溶液を極少量添加して、反応混合物の p Hを 5. 8 に微調整した。塩化ナトリウム 1 5 0 g強を添加して、内温 7 °C まで 1 時間かけて冷却した。晶析時の撹拌強度は 0 . l k W Z m ³ ( スラリーの回る最低速付近）に維持した。えられた良好な性状のスラリーから結晶を 1 5 0 m m径のヌッチヱを用いて減圧據過し、 9 3 %ェタノール 2 0 0 m 1 で洗浄した。分離性は非常によかった。えられた結晶を 6 0 °Cでー晚乾燥し、 Ν ^ω — トリフルォロアセチルー L 一リジン結晶を取得した。取得量 1 6 5 g (取得収率（反応収率（生成率） X 晶析収率で示される、以下同様） 6 8 m o 1 % ) であった。

実施例 3

L 一リジン一塩酸塩 2 0 . O g ( l l O m m o l ) を水 8 0 m l に加え、 9 . 5 N の水酸化ナトリウム水溶液で p H l l . 2 〜 1 1 . 3 に調整した。内温 0 に冷却し、撹拌下、トリフルォロ酢酸ェチル 1 5 . 6 g ( 1 1 O m m o 1 ) を 3 0 分かけてゆっくり滴下した。滴下中は、 9 N の水酸化ナトリウム水溶液を滴下しつつ反応混合物を p H l l . 2 〜 1 1 . 3 に維持するとともに、内温 0 で、撹拌強度 1 . 5 k W Z m ³に維持した。トリフルォロ酢酸ェチルの滴下を終了して、 3 0 分後に、えられた良好な液性状の反応混合物を室温下で澳塩酸 2 2 g 中に一括添加した。添加後の p H は 1 . 0 以下であった。

6 5 °C に加温し、撹拌強度 0 . 2 〜 0 . 5 k WZ m ³下、 9 . 5 N の水酸化ナトリウム水溶液を 3 0 分以上かけてほぼ一定速度で添加し、 p H を 5 . 8 に調整した。内温 5 °C に冷却し、結晶を遠心分離し、 9 3 %エタノール 1 9 m 1 で洗浄した。分離性は非常によかった。 N ^ω — トリフルォロアセチル一 L ーリジンの取得量は 1 6 . 5 g ( 6 8 m m 0 1 ) (収率 6 2 m o l % ) 、純度は 9 9 % ( w / w ) 以上（ Ν ^α 異性体は不検出、塩化ナトリウム含量 0 , 1 % ( W Z W ) 以下）であった。濂液および洗浄液中には、 4 . 5 g ( 1 9 m m o 1 ) (収率 1 7 m o 1 % ) の Ν ^ω — トリフノレオロアセチノレ一 L — リジンが含まれていた。反応収率（生成率）は 7 9 m o 1 %であつた ₀

実施例 4

実施例 3 でえられた濾液および洗浄液の混合物を反応仕込水のかわりに用いて、実施例 3 と同様に実施した。なお、澳塩酸は 2 8 g 使用した。良好な液性状で反応、晶析が実施でき、 N ^ω — トリフノレオロアセチルー L ーリジンの取得量は 1 9 . 6 g ( 8 1 m m o l ) であった。鎗液および洗浄液中には、 3 . 4 g ( 1 4 m m o l ) の N ^ω - トリフルォロアセチソレー L — リジンが含まれていた ο

実施例 5

L 一リジン一塩酸塩 2 0 . O g ( l l O m m o l ) を水 8 0 m l に加え、 9 . 5 N の水酸化ナトリウム水溶液で p H l O . 9 〜 1 1 . 1 に調整した。内温 1 1 に冷却し、携拌下、トリフルォロ齚酸ェチノレ 1 5 . 6 g ( 1 1 0 m m 0 1 ) を 2 0 分かけてゆっくり滴下した。滴下中は、 9 N の水酸化ナトリウム水溶液を滴下しつつ反応混合物を P H I O . 9 〜 1 1 . 2 に維持するとともに、内温 9 〜 1 4 、撹拌強度 0 . 5 k WZ m ³に維持した。トリフルォロ齚酸ェチルの滴下を終了して、 1 0分後に、えられた良好な液性状の反応混合物を室温の濃塩酸 2 2 g 中に一括添加した。添加後の P H は 1 . 0 以下であつた。 6 5 °C に加温し、撹拌強度 0. 2 k WZ m ³下、 9. 5 N の水酸化ナトリゥム水溶液を 3 0 分以上かけてほぼ —定速度で添加し、 p H を 5 . 5 に調整した。内温 5 °C に冷却し、一晚保持した。結晶を遠心分離し、 9 3 % ェ夕ノール 1 9 m 1 で洗浄した。分離性は非常によかった。

Ν ^ω — トリフルォロアセチノレ一 L ーリジンの取得量は 1 5 . 8 g ( 6 5 m m o 1 ) 、純度は 9 9 % ( w / w ) 以上（ N " 異性体は不検出、塩化ナトリウム含量 0 . 1 % ( w / w ) 以下）であった。濂液および洗浄液中には、 4 . 4 g ( 1 8 m m o l ) の Ν ^Ω — トリフルォロアセチルー L 一リジンが含まれていた。反応収率（生成率）は 7 5 m 0 1 %であった。

実施例 6

実施例 3 と同様の方法でえられた良好な液性伏の反応混合物（ p H l l . 0 ) を 5 0 〜 6 0 ての水 1 0 m l を入れたフラスコに滴下していった。滴下中は、緩やかに撹拌（ 0 . l k W Z m ³前後）しつつ、澳塩酸を同時に 0 . 5 時間かけて滴下し、フラスコ内液の P H を 3 〜 6 、内温を 5 0 〜 6 0 でに維持した。最終的に若干量の 9 . 5 N の水酸化ナトリウム水溶液を添加し、 p H を 5 . 5 に調整し、内温約 5 °C に冷却した。結晶を遠心分離し、 9 3 %エタノール 1 9 m 1 で洗浄した。分離性は非常によかった。 Ν ^ω — トリフノレオロアセチノレ一 L ーリジンの取得量は 1 6 . 3 g ( 6 7 m m o 1 ) 、純度は 9 9 % ( w Z w ) 以上（ Ν ^α 異性体は不検出、塩化ナトリウム含量 0 . l % ( w / w ) 以下）であった。晶析収率は 7 8 m o 1 %であった。取得収率は 6 1 m o 1 %であった。実施例 7

L 一リジン一塩酸塩 2 0 . O g ( l l O m m o l ) を水 8 0 m 1 に加え、 9 . 5 N 水酸化ナトリウム水溶液で p H 1 0 . 0 に調整した。内温 3 に冷却し、撹拌下、トリフルォロ齚酸ェチノレ 1 5 . 6 g ( 1 1 O m m o 1 ) を 2 0 分かけてゆつくり滴下した。滴下中は、 9 N の水酸化ナトリゥム水溶液を滴下しつつ反応混合物を P H 9. 9 〜： L 0 . 5 に維持するとともに、内温 2 〜 7 、撹拌強度 0 . 5 〜： L k W Z m ³に維持した。トリフルォロ酢酸ェチルの滴下を終了して、 1 0 分後に、ホイップ伏の反応混合物に濃塩酸 2 2 g を一括添加し溶解させた。添加後の p H は 1 . 0 以下であった。 Ν ^ω — トリフルォロァセチルー L 一リジンの生成率は 6 3 m o 1 %であった。

6 5 でに加温し、携拌強度 0 . 2 k W Z m ³下、 9 . 5 N の水酸化ナトリゥム水溶液を 2 0 分以上かけてほぼ一定速度で添加し、 p H を 5 . 5 に調整した。内温 5 に冷却し、一晚保持した。結晶を遠心分離し、 9 3 %エタノール 1 9 m 1 で洗浄した。分離性は非常によかった。

N ^ω - トリフノレオロアセチルー L ーリジンの取得量は 1 3 . 1 g ( 5 4 m m o 1 ) 、純度は 9 9 % ( w / w ) 以上（ Ν ^α 異性体は不検出、塩化ナトリウム含量 0 . 1 % ( w Z w ) 以下）であった。晶析収率は 7 7 m o 1 % であった。

本実施例は、 N ^ω — トリフルォロアセチルー L ーリジンの生成を、本発明の範囲（ ρ Η Ι Ο . 6 〜： L 1 . 4 ) 外の p H にて行なったため、反応混合物はホイップ化し

N ^ω - 卜リフルォロアセチルー L 一リジンの生成率は低くなつているが、晶出〜採取の操作は本発明にしたがい行なったため、良好な結晶性状の Ν ^ω — トリフルォロアセチルー L ーリジンを操作性よくえることができたことを示している。

比較例 1

1 0 0 0 m l の円筒状フラスコ（ 6 0 m m 径の櫂型搜拌翼使用）中にて、 L 一リジン一塩酸塩 9 1 . 3 g ( 0 .

5 0 m o 1 ) を水 3 5 0 m l と 4 N の水酸化ナトリウム水溶液 1 2 5 m l ( 0 . 5 0 m o l ) に、 1 0 〜 2 0 で下、溶解させた。この溶液（ ρ Η Ι Ο . 4 ) を 4 に冷却し、激しく撹拌（ 7 0 0 r p m ) 下、トリフルォロ醉酸ェチル 7 1 . 1 g ( 0 . 5 0 m o l ) を速やかに添加した。添加後、内温 5 て前後に維持しつつ、そのまま 2 時間、激しく撹拌を続けた。この過程で、反応混合物から生成物がホイップ状に析出し、撹拌混合は不可能な性状となった（反応開始とともに反応混合物の p H は低下し、 p H 8 . 7 まで低下した）。最終的に、 p H 6 の反応混合物を、 1 5 0 m m 径のヌッチュを用いて減圧濂過し、水 2 0 0 m l 、 9 9 . 5 % エタノール 1 5 0 m l で順に洗浄した。結晶性状が悪く、 «過および洗浄に 1 時間以上要した。えられた結晶を 5 0 °Cで一晚真空乾燥し、充分に乾燥させた。ケーキは収縮し、塊状の乾体がえられた。えられた結晶は、純度 9 3 % ( w / w ) 、水およびエタノールの含量は 1 % ( w / w ) 未満で、純分量として 4 7 . 3 g ( 0 . 2 0 m o l 、収率 4 0 m o l % ) の 1^ " 一トリフルォロアセチルー L 一リジンを含んでいた。また、濂液中には 1 3 . 7 g ( 0 . 0 6 m o l 、収率 l l m o l % ) 、水洗浄液中には 9 . 8 g ( 0 . 0 4 m o 1 、収率 8 m o 1 % ) 、エタノール洗浄液中には 4. 7 g ( 0 . 0 2 m o l 、収率 4 111 0 1 % ) の 1^ ⁶ — トリフルォロアセチルー L 一リジンを含んでいた。反応収率 (生成率）は 6 3 m o l %であった。

実施例 8 および比較例 2 〜 4

L 一リジン一塩酸塩 9 . 1 3 g ( 5 0 . 0 m m 0 1 ) を水 3 7 . 5 m l に加え、 4 N の水酸化ナトリウム水溶液で所定の p H ( p H 1 3 . 0 、 1 2 . 0 、 1 1 . 0 または 1 0 . 0 ) に調整した。内温 4 °Cに冷却し、撹拌下、トリフルォロ酢酸ェチル 7 . 1 1 g ( 5 0 . O m m o l ) を 3 0 分かけてゆっくり滴下した。滴下中は、 4 N の水酸化ナトリゥム水溶液を滴下しつつ反応混合物を所定の p H ( p H 1 3 . 0 、 1 2 . 0 、 1 1 . 0 または 1 0 . 0 ) に維持するとともに、内温 4 、撹拌強度 1 . 5 k W Z m ¹³に維持した。トリフルォロ鲊酸ェチルの滴下を終了して、 1 5 分後に、濃塩酸を添加して反応混合物の p H を 1 にしてクェンチし、 H P L C 分析し、 Ν ^ω — トリフルォロアセチルー L 一リジンの生成率および ω Ζ α 選択性（ Ν ^ω 体（ m m o 1 ) Ν ^α 体（ m m o 1 ) ) を調べた。その結果を表 1 に示す。実施例および生成率

PH α選択性

Ι^ίί^ VΙ番号つ ( _m o 1 % ) ω

ノ

比較例 2 13.0 16 88/12

比校例 3 12.0 64 99/1

実施例 8 11.0 83 94/6

比較例 4 10.0 60 89/11 なお、 ρ Η 1 0 . 0 では反応時に生成物が析出してホイッブ化し、トリフルォロ酢酸ェチルの若干の残存が認められた。

比較例 5

L 一リジン一塩酸塩 9 . 1 3 g ( 5 0 . O m m o l ) を水 4 7 . 5 m l に加え、炭酸ナトリウム 2 . 6 g および炭酸水素ナトリウム 4 . 2 g を加えた。内温 4 でに冷却し、撹拌下、トリフルォロ酢酸ェチル 7 . 1 1 g ( 5 0 . O m m o l ) を 3 0 分かけてゆっくり滴下した。滴下中は、 4 N の水酸化ナトリウム水溶液を滴下しつつ反応混合物を p H 9 . 0 に維持するとともに、内温 4 て、撹拌強度 1 . 5 1ε Ψ Ζ πι ^ΰに維持した。トリフルォロ酔酸ェチルの滴下を終了して、 1 5 分後に、濃塩酸を添加して反応混合物の ρ Η を 1 にしてクェンチし、 H P L C 分析した結果、 Ν ^ω — トリフルォロアセチノレー L ーリジンの生成率は 2 9 m o 1 %、 ω Ζ α 選択性（ Ν ^ω 体（ m m o 1 ) Ζ Ν ^α 体（ m m o 1 ) ) は 6 5 3 5 であった。実施例 9 〜 1 1

L 一リジン一塩酸塩 9 . 1 3 g ( 5 0 . O m m o l ) を水 3 7 . 5 m l に加え、表 2 に示す 4 N のアルカリ金属水酸化物水溶液でそれぞれ P H 1 1 ， 0 に調整した。内温 4 に冷却し、撹拌下、トリフルォロ酢酸ェチル 7. 1 1 g ( 5 0 . O m m o l ) を 3 0 分かけてゆっくり滴下した。滴下中は、それぞれ 4 N のアルカリ金属水酸化物水溶液を滴下しつつ反応混合物を p H l l 0 に維持

3 するとともに、内温 4 、撹拌強度 1 . 5 k W Z m "に ,一維持した。トリフルォロ醉酸ェチルの滴下を終了して、 1 5 分後に、澳塩酸を添加して反応混合物の p H を 1 に

ω

し、 H P L C 分析し N 一トリフルォロアセチルし — リジンの生成率および ω Ζ α 選択性 ( Ν ^ω 体 I m m ο a

1 ) / N 体（ m m o 1 ) ) をしらべた。その結果を表 2 に示す

表 2

なお、反応時の生成物の析出はいずれも認められず、良好な液性状であった。

実施例 1 2

L 一リジン一塩酸埴 1 8 . 3 g ( 0 . l O m o l ) を水 5 0 m l に加え、 9 N の水酸化ナトリウム水溶液で P H 1 1 . 0 に調整した。内温 4 でに冷却し、撹拌下、トリフルォロ酢酸ェチル 1 4 . 2 g ( 0 . l O m o l ) を 3 0 分かけてゆっくり滴下した。滴下中は、 9 N の水酸化ナトリゥム水溶液を滴下しつつ反応混合物を P H 1 1 . 0 に維持するとともに、内温 4 、撹拌強度 1 . 5 k W Z m ³に維持した。トリフルォロ醉酸ェチルの滴下を終了して、 1 5 分後に、濃塩酸を添加して反応混合物の p H を 1 にし、 H P L C 分析した結果、 Ν ^ω — トリフルォロアセチソレー L 一リジンの生成率は 7 5 m o 1 %、 ω / α 選択性（ Ν ^ω 体（ m m o 1 ) Ζ Ν ^α 体（ m m o 1 ) ) は 9 9 / 1 であった。

実施例 1 3 および比較例 6

実施例 2 と同様の方法で、反応混合物をえた。反応混合物 3 4 0 g を水 7 0 m l および濃塩酸 2 2 g の混合物 ( 6 5 ）中に緩やかに撹拌下（ 0 . 2 Κ Ψ Ζ πι ³) 、 3 0 分かけて添加したのち、 1 0 まで 1 時間かけて冷却し、 Ρ Η 6 . 0 のスラリーをえた（スラリー Α ) 。また、反応混合物 3 4 0 g に 5 〜 2 5 での範囲で水 7 0 m 1 および澳塩酸 2 2 g を撹拌下（ 0 . 2 k W Z m ³) 3 0 分かけて添加したのち、 1 0 でまで 1 時間かけて冷却し、 P H 6 . 0 のスラリーをえた（スラリー B ) 。

スラリー A はきわめて流動性がよいのに対して、スラリー B はホイップ状であり容器を逆さまにしてもスラリ一は落ちなかった。

また、各スラリー全量をそれぞれ 1 5 O m m径のヌッチヱを用いて差圧 7 3 O m m H g で ¾過したところ、表 3 に示す濂液通過速度（所定量の «液をえるための所要時間で表わす）であった。なお、スラリー B については、スノ、 ° テラで搔き取りな力らヌッチェ上に払い出してから滅過を開始した。表 3

スラリ一 A の據過性はスラリ一 B の據過性よりも格段にょいことがわかった。また、スラリー B のケーキは収縮性が非常に大きかつた。

えられた結晶を顕微鏡観察した結果、スラリー A の結晶は約 1 0 0 〜 2 0 0 m以上の粒径であるのに対して、スラリ一 B の結晶は約 2 0 / m以下の粒径であった。

本発明により、高品質、高収率かつ経済的に Ν ^ω — トリフルォロアセチルー塩基性ァミノ酸を商業的規模で有利に製造することができる。

Claims

請求の範囲

1. 塩基性アミノ酸とトリフルォロ酢酸エステルより N ^ω - トリフルォロアセチルー塩基性アミノ酸を製造する方法において、仕込み溶媒の容量に対する塩基性アミノ酸の総重量が約 5 〜 4 0 % ( w Z v ) になる澳度にて、塩基性アミノ酸と塩基性 p H調整剤を含む塩基性水性液に、該水性液の p Hを 1 0 . 6 〜： L 1 . 4、温度を 2 0 °C以下に維持しながらトリフルォロ酔酸ェステルを逐次添加して反応させ、反応後の水性液より N ^ω - トリフルォロアセチル一塩基性アミノ酸を晶出させ、採取することを特徴とする Ν ^ω — トリフルォロァセチルー塩基性ァミノ酸の製造法。

2. トリフルォロ齚酸エステルの前記塩基性水性液への逐次添加を、撹拌強度 1 Z 1 O k W Z m "以上で撹拌しつつ行なう請求の範囲第 1 項記載の製造法。

3. トリフルォロ齚酸エステルの逐次添加を、 1 4 〜 8 時間かけて行なう請求の範囲第 1 項または第 2 項記載の製造法。

4. トリフルォロ酢酸エステルの添加量が塩基性ァミノ酸に対しモル比で 0 . 5 〜 2 である請求の範囲第 1 項、第 2 項または第 3 項記載の製造法。

5. N ^ω - 卜リフルォロアセチルー塩基性ァミノ酸の溶解した水性液を、中性または酸性下で、温度を 4 0 以上に保ちつつ、 p H を Ν ^ω _ トリフルォロアセチル一塩基性アミノ酸の等電点 ± 3 に調整することにより Ν ^ω - トリフルォロアセチルー塩基性ァミノ酸の結晶を成長させる請求の範囲第 1 項、第 2 項、第 3 項または第 4 項記載の製造法。

6. Ν ^ω — トリフルォロアセチルー塩基性アミノ酸の結晶の成長を、撹拌強度 0 . 0 1 〜 0 . 5 k W / m ³で搜拌しつつ行なう請求の範囲第 5 項記載の製造法。

7. Ν ^ω — トリフルォロアセチメレー塩基性アミノ酸の結晶の成長後、 2 0 で以下に冷却してさらに晶出させる請求の範囲第 5 項または第 6 項記載の製造法。

8. 塩基性アミノ酸がリジンである請求の範囲第 1 項ないし第 7 項のいずれかに記載の製造法。

9. Ν ^ω — トリフルォロアセチノレー塩基性アミノ酸の溶解した水性液から、中性または酸性下、温度 4 0 以上で、 ρ Η を Ν ^ω — トリフノレオロアセチルー塩基性ァミノ酸の等電点 ± 3 の範囲に調節しつつ、結晶を成長させることを特徴とする Ν ^ω — トリフルォロアセチル一塩基性アミノ酸を水性液から晶出させ、採取する方法 0

10. Ν ^ω — トリフルォロアセチルー塩基性アミノ酸の結晶の成長を、撹拌強度 0 . 0 1 〜 0 . 5 k W Z m ³で撹拌しつつ行なう請求の範囲第 9 項記載の方法。

11. Ν ^ω — トリフノレオロアセチルー塩基性アミノ酸の結晶の成長において、最終的に ρ Η を 5 〜 6 とする請求の範囲第 9 項または第 1 0 項記載の方法。

12. Ν ^ω — トリフルォロアセチルー塩基性アミノ酸の結晶の成長後、 2 0 以下に冷却してさらに晶出させる請求の範囲第 9 項、第 1 0 項または第 1 1 項記載の方 Ο

13. Ν ^ω — トリフルォロアセチルー塩基性アミノ酸の結晶の採取に際し、該結晶をスラリーから分離し、引き 00 続き、湿結晶に含まれる據液を炭素数 1 〜 3 のアルコールを用いて洗浄除去する請求の範囲第 9 項、第 1 0 項、第 1 1 項または第 1 2 項記載の方法。

14. N ^ω - トリフルォロアセチルー塩基性アミノ酸の溶解した水性液が、塩基性アミノ酸と塩基性 ρ Η 調整剤を含む塩基性水性液に、該塩基性水性液の Ρ Η を 1 0. 6 〜 1 1 . 4 、温度を 2 0 °C以下に維持しながら、トリフルォロ酢酸エステルを逐次添加して反応させた反応混合物である請求の範囲第 9 項、第 1 0 項、第 1 1 項、第 1 2 項または第 1 3 項記載の方法。

15. トリフルォロ酢酸エステルの前記塩基性水性液への逐次添加を、 1 Z 4 〜 8 時間かけて行なう請求の範囲第 1 4 項記載の方法。

16. トリフルォロ齚酸エステルの前記塩基性水性液への逐次添加を、撹拌強度 1 Z 1 0 k W Z m ³以上で撹拌しつつ行なう請求の範囲第 1 4 項または第 1 5 項記載の方法。

17. トリフルォロ酢酸エステルの添加量が塩基性ァミノ酸に対しモル比で 0 . 5 〜 2 である請求の範囲第 1 4 項、第 1 5 項または第 1 6 項記載の方法。

18. 塩基性ァミノ酸がリジンである請求の範囲第 9 項ないし第 1 7 項のいずれかに記載の方法。