WO1991019728A1

WO1991019728A1 - Derive de nucleotides

Info

Publication number: WO1991019728A1
Application number: PCT/JP1991/000795
Authority: WO
Inventors: Junichi Yano; Taadaaki Ohgi; Kouichi Ishiyama
Original assignee: Nippon Shinyaku Co., Ltd.
Priority date: 1990-06-15
Filing date: 1991-06-13
Publication date: 1991-12-26
Also published as: KR930700523A; CA2085239A1; EP0533926A4; EP0533926A1

Description

明钿誊

ヌクレオチド耪導体 ά 術分野

本発明は、例えば狭心症又は髙血圧の治癍に適するサイクリック I M P SI導体に関する。

本発明に係る化合物は新規化合物であって、次の一般式〔 I〕で表すことができ、光学的に純粋なものを含むものである ο

に、 I は

を表す。

また、 R¹は水素、水酸基、ァシルォキシ又はアルコキシを表し、 R³はアルキルを表す。 R³は氷素、ハロゲン、水酸基又はアルキルを表す。

背景技術

サイク II ック A M P等のヌクレオチド誘導体は、従来から生体内において例えばホルモンの伝達物質として知られ、種々の生理反応に闋与する物 Kであるところからその薬理効果が注目されていた。

このものは、しかし、生体への吸収性が悪くまた吸収された後も生体内酵素により分解されやすい等、医薬品としての有用性に疑問が多いものであった。

本発明者らはかねてよりヌクレオチド誘導体について研究を進め、リン酸基部位を俊飾した非解雜型のサイクリック A M P耪導体、サイクリック G M P锈導体等に ftれた薬理作用のあることを見出し特許出願した（特願平 1一 207192号）。

サイク ' J ック A M P及びサイクり Vク G M Pは広く天然に存在し、その機能は既に知られているが、サイクリック I M Pは、生体内でセカンドメッセンジャーとして ¾»能していることは全く知られていない。

そこで、本発明者らは、その後も研究を重ね、非解雜型のサイクリック I M P锈導体が、これまでに判明しているものに比べて格段に優れた薬理作用を有する一群の化合物であることを見出し、本発明を完成するに到った。

発明の開示

本発明の目的は、従って、天然に存在する通常のサイクリックヌクレオチド以外の構造锈導体から、優れた薬理作用を有するヌクレオチド誘導体を見出すことにあった。

本発明が解決しょうとする技術的事項は、これまでのヌクレオチド誘導体が有する薬効に倍する有効性を取得することにめつた 0

本発明化合物は上記一般式〔 I〕で表すことができる。この構造自体が、本発明の要旨である。

本発明は、本発明化合物に後述する薬理活性が存することを見出すことによって初めて完成した発明である。

言うまでもなく、本発明化合物には、光学的に钝粋なものが含まれる。

一般式〔 I〕において、 I はイノシンの基本骨格を有するものである。

ここに、 R ¹は永棄、永酸基、ァシルォキシ又はアルコキシを表す。ァシルォキシとしては、例えば、ァセチルォキシ、 n-プロピオ二ルォキシ、ィソプロピオニルォキシ、 π-プチリルォキシ、イソプチリルォキシ、 sec-プチリル才キシ、 tert 一プチリルォキシ等を、アルコキシとしては、メトキシ、ェトキシ、 n-プポキシ、イソプロボキシ、 n-ブトキシ、ィソブトキシ、 sec-ブトキシ、 tert—ブトキシ、テトラヒドロビラニルォキシ等を挙げることができる。 R^aは一般的なアルキルを表し、低級アルキルをも含むもので、例えば、メチル、ェチル、プロビル、イソプロビル、 n-ブチル、イソブチル、 sec-プチル、 tert—ブチル等を挙げることができる。 R³は氷素、ハゲン、水酸基又はアルキルを表し、ハロゲンとしては、例えば、塩素、フッ素、臭素、ヨウ素等を、また、アルキルとしては、例えば、メチル、ェチル、プロピル、イソブ口ビル、 π-ブチル、イソブチル、 sec-ブチリレ、 tert—ブチル等を挙げることができる。

本発明に係る化合物としては、例えば以下のものを挙げることができるが、本発明化合物はこれらに限定されるものではない。言うまでもなく、本発明化合物はこれら化合物の光学的に純粋なフォームとそのジ了ステレオマーの双方を含むものである。

イノシン- 3' , 5' - サイクリックメチルホスホネート、イノシン -3'，5'- サイクリックェチルホスホネート、イノシン- 3', 5*- サイク I) ックブ口ビルホスホネート、 2'- デォキシイノシン- 3'， 5'—サイクリックメチルホスホネート、 2'-デォキシイノシン - 3' , 5' - サイクリックェチルホスホネート、 2' - デォキシイノシン- 3' , 5' - サイクリックプロビルホスホネート、 2'-0-プチリルイノシン- 3', 5'—サイク U ックメチルホスホネート、 2'-0-プチリルイノシン- 3' ,5'- サイクックェチルホスホネート、 2'-0-ブチリルイノシン -3', 5'- サイクリックブ口ピルホスホネート、 8—ク口口イノシン- 3' , 5' - サイクリックメチルホスホネート、 8—クロ口イノシン- 3' , 5* - サイクりックェチルホスホネート、 8—クロ oイノシン -3', 5'- サイクリックプロピルホスホネート、 8—クロ口- 2'- デォキシイノシン -3'， 5*- サイクリックメチルホスホネート、 8—ク π τρ-2'-デォキシィノシン -3'，5'— サイクリックェチルホスホネート、 8—クロ口- 2， -デォキシイノシン -3' , 5' - サイクリヅクブ口ビルホスホネート、 8—クロ口- 2' -0-ブチリルイノシン- 3' , 5，- サイクリックメチルホスホネート、 8 一クロ口- 2' -0-プチリルイノシン -3' , 5' - サイクリックェチルホスホネート、 8—クロ口 -2' -0-ブチリルイノシン -3， . 5' - サイクりプクプロビルホスホネート、 8—ブロモイノシン -3' , 5' - サイクリックメチルホスホネート、 8—ブロモイノシン- 3，， 5' - サイクリツクェチルホスホネート、 8—ブロモイノシン- 3' , 5' - サイクリックプビルホスホネート、 8— ブロモ -2' -デォキシイノシン- 3' , 5' - サイクリックメチルホスホネート、 8—ブロモ -2' -デォキシイノシン -3' , 5* - サイクリックェチルホスホネート、 8—ブロモ -2' -デォキシイノシン- 3' , 5' - サイクリックブ口ビルホスホネート、 8—プロモ- 2' -0-プチリルイノシン- 3' , 5' - サイクリックメチルホスホネート、 8—ブロモ -2' -0-ブチリルイノシン- 3' , 5' - サイクリックェチルホスホネート、 8—ブロモ -2' -0-ブチリルイノシン -3' , 5' - サイクリックプロビルホスホネート、 8—メチルイノシン -3' , 5' - サイクリックメチルホスホネート、 8 ーメチルイノシン- 3' , 5' - サイクリ》ノクェチルホスホネート、

8—メチルイノシン- 3' , 5' - サイクリ y クプロビルホスホネート、 8—メチル -2' -デォキシイノシン- 3' , 5' - サイクリックメチルホスホネート、 8—メチル -2' -デォヰシィノシン- 3' , 5' - サイクリヅクェチルホスホネート、 8—メチル -2' -デォキシイノシン- 3' , 5' - サイクリクプロビルホスホネート、 8-メチル -2' -Q-ブチリルイノシン -3'， 5' - サイクリックメチルホスホネート、 8—メチル -2' -0-ブチリルイノシン- 3'， 5' - サイクリックェチルホスホネート、 8—メチル -2' -0 -ブチリルイノシン- 3' , 5' - サイクリヅクプロビルホスホネート、

8—ィソブロビルイノシン -3' , 5' - サイクリックメチルホスホネート、 8—イソブ π ビルイノシン- 3' , 5' - サイクリックェチルホスホネート、 8—イソプロビルイノシン- 3' , 5' - サイクリックプロビルホスホネート、 8—イソプロビル -2' -デォキシイノシン- 3' , 5' - サイクリックメチルホスホネート、

8—ィソブ π ビル -2' -デォキシイノシン- 3，， 5' - サイクリックェチルホスホネート、 8—イソプ D ビル -2' -デォキシィノシン- 3' , 5'— サイクリックプロビルホスホネート、 8—イソプビル 2' -0-ブチリルイノシン -3, , 5' - サイクリックメチルホスホネート、 8—イソプ π ビル -2' -0-ブチリルイノシン -3' , 5* - サイクリックェチルホスホネート、 8—イソプロビル -2' -0-プチリルイノシン- 3' , 5' - サイクリックブロピルホスホネート、 8—ヒドロキシイノシン一 3' , 5' - サイクリックメチルホスホネート、 8—ヒドロキシイノシン- 3' , 5' - サイクリックェチルホスホネート、 8—ヒド Ώキシイノシン- 3'， 5' - サイクリックプビルホスホネート、 8—ヒドロキシ -2' - デォキシイノシン -3' , 5' - サイクリックメチルホスホネート、

8—ヒドロキシ -2' -デォキシィノシン- 3' , 5，- サイクリックェチルホスホネート、 8—ヒドロキシ -2' -デォキシイノシン一 3' , 5' - サイクリックプロビルホスホネート、 8—ヒドロキ P91/00795

7

シ -2' -0 -ブチリルイノシン- 3' , 5' - サイクリックメチルホスホネート、 8—ヒドロキシ -2' - 0 -ブチリルイノシン -3'， 5' - サイクリックェチルホスホネート、 8—ヒドロキシ- 2' -0-ブチリルイノシン -3'，5' - サイクリックブ口ビルホスホネート試蚨例ヒト血小板凝集抑制効果

あらかじめ 2. 5m£のクェン酸ナトリゥ厶溶液（ミドリ十字社製血沈用チトラート（コクサイ））をいれた注射筒に、ヒト血液を全量で 25m£となるように採血し、よく攪拌した後室温で 200 x g 、 10分の遠心分雜を行う。上清をとり、 PRP ( 血小板多血漿）とした。

馬の腾コラーゲン（H0RM0N-CHBMI B iiiiNCHBN GMBH, コラーゲンリエージュント（ホルム））を備え付きの緩衝液で 10、 20 ju g/m にそれぞれ希釈しておく。

被験薬物のそれぞれを PBSで希釈した後、紫外部吸収を測定してその «度》を决定した。

血小板凝集の測定は、 NKK HBMA TRACER 1 (二光バイオサイエンス社製）で行った。セルに PRPの 0. 2»£と被験薬物溶液を 0. 025m£入れ、 37 :に保温しつつ吸光度を測定した。またこれに上記コラーゲン溶液を 0. 025m 加え、吸光度（波長 6 60nm) を測定し、次の計算式により、血小板凝集抑制率（％ ) を算出した。

(以下次頁) 血小板凝集抑制率（％) =100 一

[PRP+被驗薬物 +コラ-タン ] 一 [PRP+被驗薬物 ]

X 100 [PRP+PBS+コラ-タン ] 一 [PRP+PBS]

C ]は、吸光度を表す。結果を下表に示す。被験薬物 IOJU * • 100 i *

c-GMP 4. OX 23%

8-Br-c-6MP 2.9% 49%

c-IMP メテ^ス < -ト 56 % 86%

8-Br-c-iMP rnnn-} 57 % コラ一ゲン濃度は 2 ug/«2とする。

被験薬物の S度は、以下の 5植を用いて計算した。

c-GMP (シグマ社 »、 λ_ΛΛΧ 253ηη(ε ： 14, 000))

8-Br-c-BMP (シグマ社製、 λ_ΛΛΧ 263ηαι(ε ： 15.300)) c-IMPメチ& スホネ-ト

(シグマ社製、 λ_Μ„ 248.5nm(e ： 11, 600)) 8-Br-c-IMP mtU%-\

(シグマ社製、ス"】 253.5ηη(ε ： 14.400)) 上記結果より、本発明化合物の血小板凝集抑制効果が.明らかである。即ち、本発明化合物は、サイクリック GMP、 8 ーブ口モサイクリック GMPに比べ、約 50%阻害 «度において 10倍強い活性を示した。本発明化合物を医薬として投与する場合、本発明化合物はそのまま又は医薬的に許容される無毒性かつ不活性の担体中に、例えば 0.1%〜99.5%、好ましくは 0.5%〜90%含有する医薬組成物として、人を含む動物に投与される。 g

担体としては、固形、半固形、又は液状の希 ^剤、充填剤、及びその他の処方用の助剤一種以上が用いられる。医薬組成物は、投与単位形態で投与することが望ましい。本発明医薬組成物は、経口投与、組織内投与、局所投与（柽皮投与等）又は経直腸的に投与することができる。これらの投与方法に適した剂型で投与されるのはもちろんである。例えば、組織内投与が特に好ましい。

血小板凝集抑制剤としての用量は、年齡、体重、等の患者の状態、投与径路、病気の性質と程度等を考慮した上で調整することが望ましいが、通常は、成人に対して本発明の有効成分量として、 1 曰あたり、 100ng〜 3 g /曰/ヒトの範面が、好ましくは、 500mg〜 1 g Z日/ヒトの範囲が一般的である。場合によっては、これ以下でも足りるし、また逆にこれ以上の用量を必要とすることもある。また 1 日 1〜 3回に分割して投与することが望ましい。

本発明に係るサイクリックヌクレオチド誘導体は、例えば次の反応式で示される反応によって合成することができる。

(以下次頁） v〕

〔VI〕

(式中、 R^aは前記と同じ。 I ¹ はヒポキサンチンを表す。 R ^{1 1} は永素又はテトラヒドロビラニルォキシを表す。）

すなわち、一般式〔 H〕で表されるヌクレオシドと一般式

C I で表される了ルキル- 0, 0- ビス- (1-ペンゾトリ了ゾリル）ホスホネートを反応せしめ、さらに 1-アルキルィミダゾール、例えば 1-メチルイミダゾールを加えてサイクリック诱導体〔IV〕にする。これを必要に応じて、酸反応により、テトラヒドロビラニルを脱雜することができる。

一般式〔IV〕の化合物は、その後、さらにこれをァシル化することにより、一般式〔VI〕（2'—ァシルォキシ体〉に誘導することができる。

この方法において原料となる〔II〕は、文献（S. Honda et a l. Tetrahedron, 40, 153-163 (1984) ) 記載の方法及びこれに準じた方法により調製することができる。また一般式〔Π〕の化合物は、了ルキルホスホン酸ジクロリドと 1-ヒドロキシペンゾトリ了ゾールにより、バンブームらの方法（J. H. van Boom et al. , Nucleic Acids Research 14, 2171 -2185 (1986) ) により取得することができる。

式〔 Π〕と式〔II〕の反応は、反応に不活性な溶媒（例えぱ、無氷ジォキサン、テトラヒドロフラン等のエーテル系溶媒）中で、通常は室温、 30分〜 3時間放置し、 1-了ルキルイミダゾールを加えさらに室温で 5〜24時間放 Sすることによりなされる。

〔ΠΙ〕の使用量は〔Π〕に対して 1〜 1. 2倍モルが好ましい。 1-アルキルイミダゾールの使用量は、〔II〕と〔Π〕を反応させて生成した化合物に対して 3〜 7倍モルがよい。

その後、 PH 2. 0程度の強酸、好ましくはトリフルォロ酢酸や塩酸等のような揮発性の酸により 0 t〜室温で 5〜24時閽放匿することにより〔IV〕を得ことができる。この場合、酸は通常〔IV〕に対して大通剰用いるのがよい。

〔IV〕は、通常のブロム化の方法、例えば、醉酸バッファ中ブロム永、又はブロム水では〔V〕を得ることができない。従って、〔V〕は、後述する別法で合成することができる。

〔IV〕は、 R^aとしてのァシルに対応する酸ハライド又は酸無水物で了シル化することにより〔VI〕に導くことができる。このァシル化は、ビリジン中で 0 t〜室温で数時間〜 24時間反応させることにより行うことができる。

また、〔IV〕及び〔V〕は、次の反応式で示される反応によって合成することができる。

(式中、 R^aは前記と同じ。 I ¹ はヒポキサンチン、 Aはアデニン、 A (8-Br) は 8—ブモ了デニン、 I ' (8-Br)は 8—ブロモヒポキサンチンを表す。 R^{1 1} は氷素、永酸基、丁シルォキシ又はアルコキシを表す。）

〔VII〕及び〔¾Ε〕は、既知の方法（特願平 1一 207192号）によって、合成することができる。そして、一般式〔¾1〕を用い、室温で醉酸中、亜硝酸ナトリゥムで処理する脱了ミノ化反応を行うことにより、定量的に〔IV〕を得ることができる。また、一般式〔W〕より、同様に脱アミノ化反応を行うことによって、〔V〕に誘導することができる。更に、ヒポキサンチンの 8位が水酸基で E換された本発明化合物は、例えば、まず上記一般式〔 Π〕のヒポキサンチンの 8位を通常の方法でハロゲン化し、かかるハロゲンを文献 (M. I kehara et al. . Tetrahedron. 24. 3489 (1968) ) 記載に準じた方法で氷酸基に置換した後、上記と同様な操作でサイクリツク化する方法により合成することができる。

ヒポキサンチンの 8位がアルキルで置換された本発明化合物は、例えば、上記一般式〔Π〕を文献（M. Maeda et a l. , Tetrahedron, 30, 2677 (1974) ) 記載に準じた方法で直接ァルキル化し、上記と同様な操作で、サイクリツク化する方法により合成することができる。

このようにして得られた目的化合物は、公知の手段、例えば溶媒抽出、液性変換、転溶、濃縮、結晶化、再結晶、ク n マトグラフィ一等により单雜精製することができる。

発明を実施するための最良の形麿以下に本発明化合物の製造に係る実施例を掲げて、本発明を更に詳しく稅明する。

なお、実施例中で使用される下記物質は、以下のようにして製造した。

N - モノメトキシトリチル -2· -0-テトラヒドロビラ二ルイノシンは、文献（S. Honda et a l. , Tetrahedron, 40， 153 - 163 (1984) ) 記載の方法に準じて製造した。

実施例 1 イノシン一 3' , 5' -サイクリックメチルホスホネートの合成 N-モノメトキシトリチル -2' -0-テトラヒドロビラ二ルイノシン〔Π〕 113ragに、バンブーンら（ J. H. Van Boora et. al., Nucleic Acids Reseach, 14, 2171〜2185 (1986) ) の方法により翻製したメチルー 0，Q-ビス- (1-ペンゾトリ了ゾリル

) ホスホネートの 0.11Mジォキサン溶液 3.90 m を室温で加え、 30分後に 1-メチルイミダゾール 0.16«を加えた。終夜反応後、 50%ピリジン水 0.5m£を加え、反応液を約半分に接箱した。ジクロロメタンと水（鉋和食塩氷 2/10 容）で分配し、有機層を硫酸マグネシウムで乾逸後、濃綰乾固すると、粗面体を得た。これを分取用 TLC (preparative TLC) で糖製し（6 %メタノール/二埴化素）、 30mgの〔IV〕化合物（ I 1 テトラヒド

ロビラニル）を白色固体として得た。

このものを、ジォキサン Z水（9/1) 2» に溶解し、 0.1N 塩酸を滴下しながら PH を 2.0にし、これを室 Sで終夜放置し、反応が完結していることを T L Cで確 18後、濃綰乾固した。この残澄を亜硝酸ナトリウムを使用する別法（別掲）と同様に逆栢ク πマトにより精製し、 lOngの〔IV〕化合物（ I ¹ =ヒポキサンチン、 R^a=メチル、 R^ll =永酸基）を白色固体として得た。

実施例 2 イノシン一 3'，5'-サイクリックメチルホスホネートの合成（別法）

アデノシン- 3'， 5' -サイクリックメチルホスホネート〔¾11 〕（_R3-メチル、 R"=水酸基） songを 2N 醉酸 3.0«£に溶解し、亜硝酸ナトリゥム水溶液（亜硝酸ナトリウム 1 g を 3. 75m£の水に溶解したもの） 1.8m£を加え、室温で 2時簡、 4 tで終夜放匿した。反応後、了スビレータ、真空ポンプで反応混合物を濃縮乾面し、その残渣に永（30mi) を加え、逆相オーブンクマトにより精製した。

カラム： Capcell ak Cie AG120 S-20/40 JUOI ( Φ Ι. Ι Χ

7.5 α)

溶出液：水（150 mi) → 8%メタノール /水（150 mi) の直線的グラジェントにより溶出した。

インフラクシ S ン都 *集め，濱始铉因し、アセトン及びエタノールより粉末化すると、目的化合物〔IV〕（R²=メチル、 R^{l l} =水酸基） 24.0 nigを白色面体として得た。

«点 209〜211 で（分解）

UV (永）：ス，" 248.5ππι ( ε ： 11.600, 中性）

HPLC： 11.95(niin) (single peak) ； Capcell pak SG120 (S-5)

Φ 4.6 x 150mm 、 260nm 、 lm£/min、 221；、 10%メタノール 50ιπΜ HF0«( H 7.0) 2oU TBHS

FAB MS ： 329 (M* )

実施例 3 8—ブロモイノシン一 3' , 5'—サイクリヅクメチルホスホネート（Sp配位）の合成

8—ブロモアデノシン一 3' , 5' -サイクリヅクホスホネート〔W〕（ =メチル、 R¹¹:永酸基） 17.8 mgの 2N 酢酸（ 2.0 ）溶液に亜硝酸ナト ) ゥム永溶液 1.2m£を加え、室温で 2.5時間、 4 tで終夜放置した。ミク n T L Cで完全に原料がないことを確 ffiした後（展開液 10%メタノール/ジメチルメタン、原料 Rf-0.45、生成物 Rf=0.20) 、了スビレータ及び真空ポンプで濃縮お固した。その残揸を水（30m£) に溶解し、逆相オーブンクロマトにより精 »した。

カラム： Capcell pak Ci, AG120 S-20/40 xm (Φ 1.7x

7.5 α)

溶出波：永（150 m ) -→20%メタノール Z氷（150 mi) の直琅的グラジェントにより溶出した。

メインフラクション部分を集め、 ¾綰乾面し、目的化合物〔V〕（R²=メチル、 R^{l l} =水酸基； Sp配位） 19.1ragを白色粉末として得た。 n-へキサンージクロ πエタンーメタノールにより再結晶。

«点 231〜233 t (分解）

U V (永）：ス„_x 253.5nm ( e ： 14, 400, 中性）

HPLC： 10.70(min) ； Capcell ak SG120 (S-5) 、 4.6x

150mm 、 260ηη 、 luf/niiu 22t：、 10%CH_aCN/5Qnil TBAA( PH 7.0)

TBAA:トリエチルアンモニゥ厶アセテート

PAB MS ："407 (MH⁺ ) 、 409 (M+2H⁺ )

lH-NMR(D_a0, 220MHz) ： δ

1.84(3H, d. J=18.0Hz, P-CH₈) 、 4.30 〜4.80 (3H， oi, H- 4*. H-5' ) 、 5.10(1H, d, J=6.0 . H-2* ) 、 5.50(1H, oi, H —3'〉、 6.18(1H. s, Η-Γ)、 8.17(1H， s, H-2 ) 元素分析值 (C₁₁H_{i a}0_eN4PBr · H₂0 として〉

C H N

理睑值 {%) ： 31.08 3.32 13.18 , 実測俵 {%) ： 31.65 3.20 13.05 また、本目的化合物〔V〕のジ丁ステレオマー（RP配位) は、上 K逆相オーブンク口マトのメインフラクションより早く溶出された (収量 1.0mg)。

U V (永）： «._χ 253.5nm (中性）

HPLC： 8.06(rain) ； Capcell ak SG120 (S-5) 、 4.6x 150η>η 、 260nn 、 ln£/min、 22で、 10½ CH₃CN/50mU TBAA( H 7.0)

TBAA: トリエチルアンモニゥムアセテート

PAB MS ： 407 ( H⁺ ) 、 409 (M+2H+ )

»H-N R(D_a0, 220MHz) ： d

1.92(3H, d, J=18.0Hz, P-CH₈) 、 4.40 〜5.10UH, m) 、 5.32(1H, ID, H-3')、 6.20(1H. s, Η-Γ)、 8.16(1H, s, H - 2 )

Claims

铕求の範囲

1 . 次の一般式〔 I〕

C I

に、 Iは、

を表す。

また、 R¹は水素、水酸基、ァシルォキシ又は了ルコキシを表し、 R^aは了ルキルを表す。

R^eは水素、ハロゲン、水酸基又はアルキルを表す。）で示される化合物。

2 . 化合物が光学的に純粋なものである、請求項 1記載の化合物。