Nothing Special   »   [go: up one dir, main page]

UA124198C2 - Кон'югат антитіла до в7-н3 та лікарського засобу - Google Patents

Кон'югат антитіла до в7-н3 та лікарського засобу Download PDF

Info

Publication number
UA124198C2
UA124198C2 UAA201900138A UAA201900138A UA124198C2 UA 124198 C2 UA124198 C2 UA 124198C2 UA A201900138 A UAA201900138 A UA A201900138A UA A201900138 A UAA201900138 A UA A201900138A UA 124198 C2 UA124198 C2 UA 124198C2
Authority
UA
Ukraine
Prior art keywords
amino acid
acid sequence
antibody
set forth
under
Prior art date
Application number
UAA201900138A
Other languages
English (en)
Inventor
Лоренцо Бенатуіл
Лоренцо БЕНАТУИЛ
Мілан Бранко
Милан БРАНКО
Дебра ЧАО
Камель Ізераджин
Камель Изераджин
Ендрю С. Джадд
Эндрю С. ДЖАДД
Ендрю К. Філліпс
Эндрю К. ФИЛЛИПС
Ендрю Дж. Сауерс
Эндрю Дж. Сауерс
Арчана ТАКУР
Original Assignee
Еббві Інк.
Эббви Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Еббві Інк., Эббви Инк. filed Critical Еббві Інк.
Publication of UA124198C2 publication Critical patent/UA124198C2/uk

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2827—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against B7 molecules, e.g. CD80, CD86
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/4353—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A61K31/437—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems the heterocyclic ring system containing a five-membered ring having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. indolizine, beta-carboline
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/498—Pyrazines or piperazines ortho- and peri-condensed with carbocyclic ring systems, e.g. quinoxaline, phenazine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/65—Peptidic linkers, binders or spacers, e.g. peptidic enzyme-labile linkers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/68031—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being an auristatin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/68035—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a pyrrolobenzodiazepine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6875—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody being a hybrid immunoglobulin
    • A61K47/6877—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody being a hybrid immunoglobulin the antibody being an immunoglobulin containing regions, domains or residues from different species
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6889—Conjugates wherein the antibody being the modifying agent and wherein the linker, binder or spacer confers particular properties to the conjugates, e.g. peptidic enzyme-labile linkers or acid-labile linkers, providing for an acid-labile immuno conjugate wherein the drug may be released from its antibody conjugated part in an acidic, e.g. tumoural or environment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/10—Immunoglobulins specific features characterized by their source of isolation or production
    • C07K2317/14—Specific host cells or culture conditions, e.g. components, pH or temperature
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/51—Complete heavy chain or Fd fragment, i.e. VH + CH1
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/515—Complete light chain, i.e. VL + CL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/55—Fusion polypeptide containing a fusion with a toxin, e.g. diphteria toxin

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

Винахід стосується кон'югата антитіла до hВ7-Н3 та лікарського засобу.

Description

(54) КОН'ЮГАТ АНТИТІЛА ДО В7-НЗ ТА ЛІКАРСЬКОГО ЗАСОБУ (57) Реферат:
Винахід стосується кон'югата антитіла до пПВ7-НЗ та лікарського засобу.
Споріднені заявки
Дана заявка заявляє пріоритет згідно з попередньою заявкою на видачу патенту США
Мо 62/347476, поданою 8 червня 2016 р. і попередньою заявкою на видачу патенту США
Мо 62/366511, поданою 25 липня 2016 р. Повний зміст кожної з вищевказаних заявок явним чином включено в даний документ за допомогою посилання.
Перелік послідовностей
Дана заявка містить перелік послідовностей, який був наданий в електронному вигляді у форматі АЗСІЇ і таким чином включений за допомогою посилання в усій своїй повноті. Указана копія в кодуванні АЗСІЇ, створена 7 червня 2017 р., називається 117813-12620 57Т2514Х і має розмір 1159744 байти.
Передумови винаходу
Гомолог З білка В7 (В7-НЗ) (також відомий як СО276 і В7ВР-2 і який згадується в даному документі як "В7-НЗ") є трансмембранним глікопротеїном І типу надродини імуноглобулінів. В7-
НЗ людини містить передбачуваний сигнальний пептид, М-подібні і С-подібні домени Іа, трансмембранну ділянку і цитоплазматичний домен. Дуплікація екзонів у людини приводить до експресії двох ізоформ В7-НЗ, які мають один або ІдМ-ІдС-подібний домен (ізоформа 21987-НЗ), або ІдМ-ІдС-ІдМУ-ІдС-подібний домен (ізоформа 41987-НЗ), який містить декілька консервативних залишків цистеїну. Переважна ізоформа В7-НЗ у тканинах і клітинних лініях людини являє собою ізоформу 41987-НЗ (Сіеіпрегодег" еї аї., у. Іттипої. 1 72(4): 2352-9 (2004)).
Повідомляється, що В7-НЗ має як костимулюючі, так і коінгібуючі сигнальні функції (див., наприклад, Спаромаї еї аї., Маї. Іттипої. 2: 269-74 (2001); Бий еї аї., Маї. Іттипої. 4: 899-906 (2003); Ргазаай еї аї., У. Іттипої. 173: 2500-6 (2004) ї Мапа еї аї., Єшиг. У. Іттипої. 35: 428-38 (2005)). Наприклад, дослідження іп міо продемонстрували костимулюючу функцію В7-НЗ, оскільки В7-НЗ був здатний збільшити проліферацію цитотоксичних Т-лімфоцитів (СТІ) і активувати вироблення інтерферону гамма (ІЕМ-у) у присутності антитіла до СОЗ для імітації сигналу Т-клітинного рецептора (Спарома! єї аїЇ., 2001). Крім того, дослідження іп мімо із застосуванням кардіоалотрансплантатів у мишей В7-НЗ -/- продемонстрували знижений рівень вироблення ключового цитокіну, хемокіну і транскриптів тАМА хемокінового рецептора (наприклад, 1-2, ІРМ-у, моноцитарного хемоатрактантного білка (МСР-1) та індуковного ІЕМ
Зо білка (ІР)-10) порівняно з контролем дикого типу (У/апа еї аї., 2005). Навпаки, коінгібуючу функцію В7-НЗ спостерігали, наприклад, у мишей, у яких білок В7-НЗ інгібував активацію Т- клітин і вироблення ефекторних цитокінів (Зий еї аї., 2003). Незважаючи на те, що для В7-НЗ людини не було ідентифіковано лігандів, виявили, що мишачий В7-НЗ зв'язується з тригерним рецептором, який експресується на мієлоїдних клітинах (ТКЕМ-), як транскрипт 2 (ТІ Т-2), модулятор клітинних відповідей адаптивного вродженого імунітету. Зв'язування мишачого В7-
НЗ з ТІ Т-2 на СО8:х Т-клітинах підсилює ефекторні функції Т-клітин, такі як проліферація, цитотоксичність і вироблення цитокінів (Назпідисні єї аї!., Ргос. Маї!. Асад. 5сі. О.5.А. 105(30): 10495-500 (2008)).
В7-НЗ експресується не конститутивно у багатьох імунних клітинах (наприклад, клітинах- природних кілерах (МК), Т-клітинах і антигенпрезентуючих клітинах (АРС)), однак його експресія може бути індукована. Крім того, експресія В7-НЗ не обмежується імунними клітинами.
Транскрипти В7-НЗ експресуються в різноманітних тканинах людини, у тому числі в товстій кишці, серці, печінці, плаценті, простаті, тонкому кишечнику, яєчках і матці, а також остеобластах, фібробластах, епітеліальних клітинах та інших клітинах нелімфоїдної лінії диференціювання, потенційно проявляючи імунологічні та відмінні від імунологічних функції (Муагеп еї а!ї. Егкопі Віозсі. 3:989-93 (2011)). Однак експресія білка в нормальній тканині зазвичай підтримується на низькому рівні і, отже, може піддаватися посттранскрипційній регуляції.
В7-НЗ також експресується при різних видах раку людини, у тому числі раку передміхурової залози, світлоклітинної нирково-клітинної карциноми, гліоми, меланоми, раку легенів, недрібноклітинного раку легенів (МЗСІ С), дрібноклітинного раку легенів, раку підшлункової залози, раку шлунка, гострого мієлоїдного лейкозу (АМІ), неходжкінської лімфоми (МН), раку яєчників, колоректального раку, раку товстої кишки, ниркового раку, гепатоцелюлярної карциноми, раку нирок, раку голови та шиї, гіпофарингеальної сквамозної карциноми, гліобластоми, нейробластоми, раку молочної залози, раку ендометрію та уротеліальної карциноми. Хоча роль В7-НЗ в ракових клітинах є неясною, його експресія може координувати події передачі сигналу, які можуть захистити ракові клітини від вроджених та адаптивних імунних відповідей. Наприклад, В7-НЗ надекспресується при високозлоякісній інтраєпітеліальній неоплазії передміхурової залози і видах аденокарциноми простати, а високі рівні експресії В7-
НЗ в цих ракових клітинах пов'язані з підвищеним ризиком прогресування раку після операції 60 (Воїй єї а. Сапсег Вев. 67(16): 7893-9000 (2007)). Крім того, експресія В7-НЗ у пухлині при МЗСІ С зворотно корелювала з кількістю лімфоцитів, які інфільтрують пухлину, і значно корелювала з метастазуванням у лімфатичні вузли (Зип еї аі. Гипуд Сапсег 53(2): 143-51 (2006)). Рівень циркулюючого розчинного В7-НЗ у пацієнтів з М5СІ С також був пов'язаний із більш пізньою стадією пухлини, розміром пухлини, метастазуванням у лімфатичні вузли та віддаленим метастазуванням (уУатайо еї аї!., Вг. У. Сапсег 101(10):1709-16 (2009)).
В7-НЗ також може відігравати важливу роль в опосередкованих Т-клітинами протипухлинних відповідях контекстно-залежним чином. Наприклад, експресія В7-НЗ у пухлинних клітинах раку шлунка позитивно корелює з часом виживання, глибиною інфільтрації і типом тканини (Ми еї аї.,
МУопа 9. СавзігоеєепієгоІї. 12(3): 457-9 (2006)). Крім того, високий рівень експресії В7-НЗ в пухлинних клітинах підшлункової залози був пов'язаний із виживанням пацієнтів після хірургічної резекції і значно корелював з кількістю СО8- Т-клітин, які інфільтрують пухлину (І 005 еї а!., ВМО Сапсег 9:463 (2009).
Кон'югати антитіла та лікарського засобу (АОС) являють собою відносно новий клас терапевтичних засобів, які містять антитіло, кон'юговане з цитотоксичним лікарським засобом за допомогою хімічного лінкера. Концепція АОС з погляду терапії полягає в об'єднанні здатностей до зв'язування антитіла з лікарським засобом, де антитіло використовують для доставки лікарського засобу до пухлинної клітини за допомогою зв'язування з цільовою поверхнею антигена, у тому числі цільовою поверхнею антигенів, які надекспресуються в пухлинних клітинах.
У даній галузі техніки залишається потреба в антитілах до В7-НЗ і АОС до В7-НЗ, які можуть застосовуватися в терапевтичних цілях у лікуванні раку.
Короткий опис винаходу
У деяких аспектах даний винахід стосується антитіл і кон'югатів антитіла та лікарського засобу (АОС), які специфічно зв'язуються з В7-НЗ людини. У деяких аспектах даний винахід передбачає нові АОС, які можуть селективно доставляти інгібітори Всі-хЇ для цілеспрямованої дії на ракові клітини, наприклад на клітини, які експресують В7-НЗ.
В одному аспекті даний винахід передбачає антитіло до В7-НЗ або його антигензв'язувальну частину, які зв'язуються з В7-НЗ людини (пВ7-НЗ), де антитіло або його антигензв'язувальна частина містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка містить СОКЗ з амінокислотною
Ко) послідовністю під ЗЕО ІЮ МО: 12, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка містить СОКЗ з амінокислотною послідовністю під ЗЕО ІЮО МО: 15.
В одному варіанті здійснення антитіло до В7-НЗ або його антигензв'язувальна частина містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка містить СОК2 з амінокислотною послідовністю під ЗЕО ІЮ МО: 140, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка містить СОК2 з амінокислотною послідовністю під зЗЕО ІЮО МО: 7.
В одному варіанті здійснення антитіло до В7-НЗ або його антигензв'язувальна частина містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка містить СОКІ! з амінокислотною послідовністю під ЗЕО ІЮ МО: 10, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка містить СОКІ1 з амінокислотною послідовністю під будь-якою із БЕО ІЮ МО: 136 або 138.
В одному аспекті даний винахід передбачає антитіло до В7-НЗ або його антигензв'язувальну частину, які зв'язуються з В7-НЗ людини (пВ7-НЗ), де антитіло або його антигензв'язувальна частина містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка містить СОКЗ з амінокислотною послідовністю під ЗЕО ІЮ МО: 35, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка містить СОКЗ з амінокислотною послідовністю під ЗЕО ІЮО МО: 39.
В одному варіанті здійснення антитіло до В7-НЗ або його антигензв'язувальна частина містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка містить СОМК2 з амінокислотною послідовністю під ЗЕО ІЮ МО: 34, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка містить СОК2 з амінокислотною послідовністю під ЗЕО ІЮО МО: 38.
В одному варіанті здійснення антитіло до В7-НЗ або його антигензв'язувальна частина містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка містить СОК1 з амінокислотною послідовністю під ЗЕО ІЮ МО: 33, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка містить СОКІ1 з амінокислотною послідовністю під або 5ЕО ІЮО МО: 37.
В одному варіанті здійснення антитіло до В7-НЗ або його антигензв'язувальна частина належить до ізотипу дО.
В одному варіанті здійснення антитіло до В7-НЗ або його антигензв'язувальна частина належить до ізотипу Їдс1 або Ідсаі.
В одному варіанті здійснення антитіло до В7-НЗ або його антигензв'язувальна частина характеризується Ко, яка становить 1,5х108 або менше, як визначено за допомогою поверхневого плазмонного резонансу. 60 В одному аспекті даний винахід передбачає антитіло до В7-НЗ або його антигензв'язувальну частину, які зв'язуються із ПВ7-НЗ, при цьому вказане антитіло або його антигензв'язувальна частина містить або (ї) варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка містить набір СОК під 5ЕО ІЮ
МО: 10, 11 ї 12, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка містить набір СОК під ЗЕО ІЮ МО: 14, 7 і 15, або (ії) варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка містить набір СОЕК під 5ЕО ІЮО МО: 33, 34 і 35, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка містить набір СОЕ під 5ЕО ІО МО: 37, 38 і 39.
В одному аспекті даний винахід передбачає антитіло до В7-НЗ, яке зв'язується з В7-НЗ людини (П87-НЗ), де антитіло містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка містить СОКЗ з амінокислотною послідовністю під 5ЕО ІЮ МО: 12, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка містить СОКЗ з амінокислотною послідовністю під ЗЕО ІЮО МО: 15.
В одному варіанті здійснення антитіло до В7-НЗ містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка містить СОК2 з амінокислотною послідовністю під ЗЕО ІЮ МО: 140, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка містить СОК2 з амінокислотною послідовністю під зЕО ІЮ МО: 7.
В одному варіанті здійснення антитіло до В7-НЗ містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка містить СОКІ1 з амінокислотною послідовністю під 5ЕО ІЮО МО: 10, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка містить СОМК1 з амінокислотною послідовністю під будь-якою із
ЗЕО ІЮ МО: 136 або 138.
В одному аспекті даний винахід передбачає антитіло до В7-НЗ, яке зв'язується з В7-НЗ людини (пП8В7-НЗ), де антитіло або його антигензв'язувальна частина містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка містить СОКЗ з амінокислотною послідовністю під 5ЕО ІЮ МО: 35, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка містить СОКЗ з амінокислотною послідовністю під
ЗЕО ІО МО: 39.
В одному варіанті здійснення антитіло до В7-НЗ містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка містить СОК2 з амінокислотною послідовністю під 5ЕО ІЮО МО: 34, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка містить СОК2 з амінокислотною послідовністю під зЕО ІЮ МО: 38.
В одному варіанті здійснення антитіло до В7-НЗ містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка містить СОКІ1 з амінокислотною послідовністю під 5ЕО ІЮО МО: 33, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка містить СОК1 з амінокислотною послідовністю під або 5ЕО ІЮ МО: 37.
В одному варіанті здійснення антитіло до В7-НЗ належить до ізотипу дО.
Зо В одному варіанті здійснення антитіло до В7-НЗ належить до ізотипу ІДС1 або Ідса.
В одному варіанті здійснення антитіло до В7-НЗ характеризується Ко, яка становить 1,5 х 10- 8 або менше, як визначено за допомогою поверхневого плазмонного резонансу.
В одному аспекті даний винахід передбачає антитіло до В7-НЗ, яке зв'язується із пВ7-НЗ, при цьому вказане антитіло містить або (ї) варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка містить набір СОК під ЗЕО ІЮ МО: 10, 11 і 12, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка містить набір
СОЕ під ЗЕО ІЮ МО: 14, 7 і 15, або (ії) варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка містить набір
СОК під 5ЕО ІО МО: 33, 34 і 35, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка містить набір СОК під ЗЕО ІЮ МО: 37, 38 і 39.
В одному варіанті здійснення антитіло до В7-НЗ або його антигензв'язувальна частина є гуманізованими.
В одному варіанті здійснення антитіло до В7-НЗ або його антигензв'язувальна частина додатково містить акцепторну каркасну ділянку людини. В одному варіанті здійснення акцепторна каркасна ділянка людини містить амінокислотну послідовність, вибрану із групи, яка складається із 5ЕО ІО МО: 155, 156, 164, 165, 166 і 167. В одному варіанті здійснення акцепторна каркасна ділянка людини передбачає щонайменше одну амінокислотну заміну в каркасній ділянці. В одному варіанті здійснення амінокислотна послідовність каркасної ділянки на щонайменше 65595 ідентична послідовності вказаної акцепторної каркасної ділянки людини і містить щонайменше 70 амінокислотних залишків, ідентичних указаній акцепторній каркасній ділянці людини.
В одному варіанті здійснення акцепторна каркасна ділянка людини передбачає щонайменше одну амінокислотну заміну в каркасній ділянці за ключовим залишком, причому вказаний ключовий залишок вибраний із групи, яка складається із залишку, суміжного із СОБ; залишку із сайту глікозилювання; рідкісного залишку; залишку, здатного взаємодіяти з В7-НЗ людини; залишку, здатного взаємодіяти із СОК; канонічного залишку; залишку, який знаходиться в межах контакту між варіабельною ділянкою важкого ланцюга і варіабельною ділянкою легкого ланцюга; залишку у межах зони Мепіег і залишку в ділянці, яка є результатом перекривання між визначеною за Споїйіа СОКІ варіабельної ділянки важкого ланцюга і визначеною за Караї першою каркасною ділянкою важкого ланцюга. В одному варіанті здійснення ключовий залишок вибраний із групи, яка складається із 48Н, 67Н, 69Н, 71Н, 7ЗН, бо 94Н і 2. В одному варіанті здійснення заміна ключового залишку здійснюється у варіабельній ділянці важкого ланцюга і вибрана із групи, яка складається із М481І, М67А, ІбОЇ, АТМ, К7ЗК і
КУ40. В одному варіанті здійснення заміна ключового залишку здійснюється у варіабельній ділянці легкого ланцюга і являє собою І2М.
В одному аспекті даний винахід передбачає антитіло до В7-НЗ або його антигензв'язувальну частину, які зв'язуються із пПВ7-НЗ, при цьому вони містять варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка містить набір СОК під 5ЕО ІЮО МО: 25, 26 і 27, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка містить набір СОК під 5ЗЕО ІО МО: 29, 30 їі 31. В одному варіанті здійснення антитіло до В7-НЗ або його антигензв'язувальна частина є гуманізованими. В одному варіанті здійснення антитіло до В7-НЗ або його антигензв'язувальна частина додатково містить акцепторну каркасну ділянку людини.
В одному варіанті здійснення акцепторна каркасна ділянка людини містить амінокислотну послідовність, вибрану із групи, яка складається із ЗЕО ІЮ МО: 155-158. В одному варіанті здійснення акцепторна каркасна ділянка людини передбачає щонайменше одну амінокислотну заміну в каркасній ділянці. В одному варіанті здійснення амінокислотна послідовність каркасної ділянки на щонайменше 6595 ідентична послідовності вказаної акцепторної каркасної ділянки людини і містить щонайменше 70 амінокислотних залишків, ідентичних указаній акцепторній каркасній ділянці людини. В одному варіанті здійснення амінокислотна послідовність каркасної ділянки на щонайменше 8595 ідентична, 9095 ідентична, 9595 ідентична, 96905 ідентична, 9790 ідентична, 9895 ідентична або 9995 ідентична послідовності акцепторної каркасної ділянки людини і містить щонайменше 70, щонайменше 75, щонайменше 80, щонайменше 85 амінокислотних залишків, ідентичних акцепторній каркасній ділянці людини.
В одному варіанті здійснення акцепторна каркасна ділянка людини передбачає щонайменше одну амінокислотну заміну в каркасній ділянці за ключовим залишком, причому вказаний ключовий залишок вибраний із групи, яка складається із: залишку, суміжного із СОБ; залишку із сайту глікозилювання; рідкісного залишку; залишку, здатного взаємодіяти з В7-НЗ людини; залишку, здатного взаємодіяти із СОК; канонічного залишку; залишку, який знаходиться в межах контакту між варіабельною ділянкою важкого ланцюга і варіабельною ділянкою легкого ланцюга; залишку у межах зони Мепіег і залишку в ділянці, яка є результатом перекривання між визначеною за Споїйіа СОКІ варіабельної ділянки важкого ланцюга і
Зо визначеною за Караї першою каркасною ділянкою важкого ланцюга. В одному варіанті здійснення ключовий залишок вибраний із групи, яка складається із б9Н, 46Ї, 471, 641! і 711. В одному варіанті здійснення заміна ключового залишку здійснюється у варіабельній ділянці важкого ланцюга і являє собою 1691. В одному варіанті здійснення заміна ключового залишку здійснюється у варіабельній ділянці легкого ланцюга і вибрана із групи, яка складається із І 46Р,
ГАМ, 64 і Е71Н.
В одному аспекті даний винахід передбачає антитіло до пВ7-НЗ або його антигензв'язувальну частину, що містять СОКІ важкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність, викладену під БЕО ІЮ МО: 10, СОК2 важкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність викладену під 5ЕО 10 МО: 140, СОКЗ важкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮ МО: 12, СОК'І1 легкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮ МО: 136 або 138, СОК2 легкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮО МО: 7, і СОКЗ легкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮ МО: 15.
В іншому аспекті даний винахід передбачає антитіло до пВ7-НЗ3 або його антигензв'язувальну частину, що містять СОКІ важкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність, викладену під ЗЕ ІЮ МО: 33, СОК2 важкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність, викладену під хЕО ІЮ МО: 34, СОКЗ важкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮ МО: 35, СОКІ1 легкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮ МО: 37, СОКО2 легкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮ МО: 38, і СОКЗ легкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність, викладену під зЗЕО ІЮ МО: 39.
В одному варіанті здійснення антитіло до ПВ7-НЗ або його антигензв'язувальна частина містить варіабельний домен важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕБО І МО: 139, і варіабельний домен легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під ЗЕО ІЮ МО: 135.
В одному варіанті здійснення антитіло до ПВ7-НЗ або його антигензв'язувальна частина містить важкий ланцюг, який містить амінокислотну послідовність, що характеризується щонайменше 9095, 9595, 9695, 97905, 9895 або 9995 ідентичністю із ЗЕО ІЮО МО: 139, та/або легкий ланцюг, який містить амінокислотну послідовність, що характеризується щонайменше 9095, бо 9595, 9695, 9795, 9895 або 9995 ідентичністю із ЗЕО ІЮО МО: 135.
В одному варіанті здійснення антитіло до ПВ7-НЗ або його антигензв'язувальна частина містить варіабельний домен важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕБО І МО: 139, і варіабельний домен легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під ЗЕО ІЮ МО: 137.
В одному варіанті здійснення антитіло до ПВ7-НЗ або його антигензв'язувальна частина містить важкий ланцюг, який містить амінокислотну послідовність, що характеризується щонайменше 9095, 9595, 9695, 97905, 9895 або 9995 ідентичністю із ЗЕО ІЮО МО: 139, та/або легкий ланцюг, який містить амінокислотну послідовність, що характеризується щонайменше 9095, 9595, 9695, 9795, 9895 або 9995 ідентичністю із БЕО ІЮ МО: 137.
В одному варіанті здійснення антитіло до ПВ7-НЗ або його антигензв'язувальна частина містить варіабельний домен важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕБО І МО: 147, і варіабельний домен легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під ЗЕО ІЮ МО: 144.
В одному варіанті здійснення антитіло до ПВ7-НЗ або його антигензв'язувальна частина містить важкий ланцюг, який містить амінокислотну послідовність, що характеризується щонайменше 9095, 9595, 9695, 97905, 9895 або 9995 ідентичністю із ЗЕО ІЮО МО: 147, та/або легкий ланцюг, який містить амінокислотну послідовність, що характеризується щонайменше 9095, 9595, 9695, 9795, 9895 або 9995 ідентичністю із ЗЕО ІЮО МО: 144.
В одному аспекті даний винахід передбачає антитіло до ПВ7-НЗ, що містить СОК1 важкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність, викладену під зЕО ІЮ МО: 10, СОК2 важкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність, викладену під ЗЕО ІЮ МО: 140, СОКЗ важкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність, викладену під БЕО ІЮ МО: 12, СОКІ1 легкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність, викладену під 5Е0О ІЮ МО: 136 або 138, СОК2 легкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність, викладену під ЗЕО ІЮ МО: 7, і СОКЗ легкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮ МО: 15.
В іншому аспекті даний винахід передбачає антитіло до пПВ7-НЗ, що містить СОКІТ важкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність, викладену під зЕО ІЮ МО: 33, СОК2 важкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність, викладену під зЕО ІЮ МО: 34, СОКЗ важкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність, викладену під зЕО ІО МО: 35, СОКІ1 легкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність, викладену під 5Е0 ІЮ МО: 37, СОКО2 легкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність, викладену під 5260 ІЮ МО: 38, і СОКЗ легкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність, викладену під ЗЕО ІЮО МО: 39.
В одному варіанті здійснення антитіло до ПВ7-НЗ містить варіабельний домен важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮ МО: 139, і варіабельний домен легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під
ЗЕО ІЮ МО: 135.
В одному варанті здійснення антитіло до пПВ7-НЗ містить важкий ланцюг, який містить амінокислотну послідовність, що характеризується щонайменше 9095, 9595, 9695, 9795, 9895 або 9995 ідентичністю із 5ЕО ІО МО: 139, та/або легкий ланцюг, який містить амінокислотну послідовність, що характеризується щонайменше 9095, 9595, 9695, 9795, 9895 або 9995 ідентичністю із «ЕО ІЮ МО: 135.
В одному варіанті здійснення антитіло до ПВ7-НЗ містить варіабельний домен важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮ МО: 139, і варіабельний домен легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під
ЗЕО ІЮ МО: 137.
В одному варіанті здійснення антитіло до ПВ7-НЗ містить важкий ланцюг, який містить амінокислотну послідовність, що характеризується щонайменше 9095, 9595, 9690, 9795, 9895 або 9995 ідентичністю із 5ЕО ІО МО: 139, та/або легкий ланцюг, який містить амінокислотну послідовність, що характеризується щонайменше 9095, 9595, 9695, 9795, 9895 або 99965 ідентичністю із «ЕО ІЮ МО: 137.
В одному варіанті здійснення антитіло до ПВ7-НЗ містить варіабельний домен важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮ МО: 147, і варіабельний домен легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під
ЗЕО ІЮ МО: 144.
В одному варанті здійснення антитіло до пПВ7-НЗ містить важкий ланцюг, який містить амінокислотну послідовність, що характеризується щонайменше 9095, 9595, 9695, 9795, 9895 або 9995 ідентичністю із 5ЕО ІЮО МО: 147, та/(або легкий ланцюг, який містить амінокислотну послідовність, що характеризується щонайменше 9095, 9595, 9695, 9795, 9895 або 9995 60 ідентичністю із «ЕО ІЮО МО: 144.
В одному варіанті здійснення антитіло до ПВ7-НЗ або його антигензв'язувальна частина містить набір СОМ важкого ланцюга, відповідно до антитіла пиАб1З3м1!, і набір СОК легкого ланцюга, відповідно до антитіла пиАБб13Мм1. В одному варіанті здійснення антитіло до п87-НЗ або його антигензв'язувальна частина містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, відповідно до антитіла пиАБІ13м1, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, відповідно до антитіла пиАбБ1З3м1.
В одному варіанті здійснення антитіло до ПВ7-НЗ або його антигензв'язувальна частина містить набір СОК важкого ланцюга, відповідно до антитіла пиАбЗм2.5, і набір СОК легкого ланцюга, відповідно до антитіла пиАрЗм2.5. В одному варіанті здійснення антитіло до пВ7-НЗ або його антигензв'язувальна частина містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, відповідно до антитіла пиАбрЗм2.5, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, відповідно до антитіла пиАБЗм2.5.
В одному варіанті здійснення антитіло або його антигензв'язувальна частина зв'язує В7-НЗ яванського макака.
В одному варіанті здійснення антитіло або його антигензв'язувальна частина характеризується константою дисоціації (Ко) із НВ7-НЗ, вибраною з групи, яка складається з: не більше приблизно 107 М; не більше приблизно 103 М; не більше приблизно 107 М; не більше приблизно 10-79 М; не більше приблизно 10-! М; не більше приблизно 1072 М і не більше 10- 13 М.
В одному варіанті здійснення антитіло або його антигензв'язувальна частина містить константний домен важкого ланцюга імуноглобуліну із константного домену ДМ людини, константного домену ЇД51 людини, константного домену ЇД52 людини, константного домену (ДОЗ людини, константного домену 954 людини, константного домену ЩА людини або константного домену ІДЕ людини.
В одному варіанті здійснення антитіло належить до їдсС, що містить чотири поліпептидні ланцюги, які являють собою два важкі ланцюги і два легкі ланцюги.
В одному варіанті здійснення антитіло або його антигензв'язувальна частина містить константний домен ділянки важкого ланцюга імуноглобуліну, який являє собою константний домен їдО1 людини. В одному варіанті здійснення константний домен ДО1 людини містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮ МО: 159 або 5ЕО ІЮО МО: 160.
В одному аспекті даний винахід передбачає виділене антитіло або його антигензв'язувальну частину, які зв'язуються з В7-НЗ людини (пВ7-НЗ), де антитіло або його антигензв'язувальна частина містить важкий ланцюг, який містить амінокислотну послідовність під зЕО ІЮО МО: 168, і легкий ланцюг, який містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮ МО: 169.
В одному аспекті даний винахід передбачає виділене антитіло або його антигензв'язувальну частину, які зв'язуються з В7-НЗ людини (пПВ7-НЗ), де антитіло або його антигензв'язувальна частина містить важкий ланцюг, який містить амінокислотну послідовність під «ЕО ІЮ МО: 170, і легкий ланцюг, який містить амінокислотну послідовність під 5ЕО ІЮ МО: 171.
В одному аспекті даний винахід передбачає виділене антитіло або його антигензв'язувальну частину, які зв'язуються з В7-НЗ людини (пВ7-НЗ), де антитіло або його антигензв'язувальна частина містить важкий ланцюг, який містить амінокислотну послідовність під 5ЕО І МО: 172, їі легкий ланцюг, який містить амінокислотну послідовність під зЕО ІО МО: 173.
В одному варіанті здійснення антитіло або його антигензв'язувальна частина додатково містить константний домен легкого ланцюга імуноглобуліну, який передбачає константний домен каппа-ланцюга Ід людини або константний домен лямбда-ланцюга Ід людини.
В одному варіанті здійснення антитіло до ПВ7-НЗ або його антигензв'язувальна частина конкурують з антитілом або його антигензв'язувальною частиною, будь-яким з антитіл до НВ7-
НЗ або їх антигензв'язувальних частин, розкритих в даному документі.
В одному аспекті даний винахід передбачає фармацевтичну композицію, яка містить антитіло до ПВ7-НЗ або його антигензв'язувальну частину, які розкриті в даному документі, і фармацевтично прийнятний носій.
В іншому аспекті даний винахід передбачає кон'югат антитіла до НВ7-НЗ і лікарського засобу (АрС), який містить антитіло до НВ7-НЗ, розкрите в даному документі, кон'юговане з лікарським засобом за допомогою лінкера. В одному варіанті здійснення лікарський засіб являє собою ауристатин або піролобензодіазепін (РВО). В одному варіанті здійснення лікарський засіб являє собою інгібітор Всі-хі..
В одному аспекті даний винахід передбачає кон'югат антитіла до НВ7-НЗ і лікарського засобу (АОС), який містить лікарський засіб, зв'язаний з антитілом до В7-НЗ людини (пВ7-НЗ) за допомогою лінкера, де лікарський засіб являє собою інгібітор Всі-х! згідно зі структурною формулою (Іа), (ПБ), (Пс) або (Па): бо
975 (о)
Кк он
Ме в в угат За (па) ЯК и нм Зо М; 1 М
Кк в'в в'а 925 (о) рай
Кк он
Ме в2 ВЗ ж у за7 Май 5-1 А (п) нм7Зо яка В в! ть о ва
Ге 26
М. ру (Ф) и он
Ме ва в ат (Пс) ЩА и й нм" о І кі в! в'їь д'а
Ж Ша ГФ) й он (е в2 в? га7
Ж Х 2
ІЇ 1 (по) нм со ех 1 М
Кк ть д'їта де пліч тич лм ли ли лм І мл «Ав «А Кв - - - Мн ща ооо ОО55о
М Мих хи
Аг вибраний із .ХА/ Тим ; м, 1 /, М і - (с
М
ХМ и і необов'язково заміщений одним або кількома замісниками, незалежно вибраними з галогену, гідрокси, нітро, нижчого алкілу, нижчого гетероалкілу, С:-алкокси, аміно, ціано та галогенметилу;
З
М і У я У
А? вибраний (із лм ; лм ; ли ; лм ; воша С ф хх Ж -
МИ У У У У
УА ит "о
М - М. -- М. М - ї яку сах сл пад шИея ши або їхнього М-оксиду і необов'язково заміщений одним або кількома замісниками, незалежно вибраними з галогену, гідрокси, нітро, нижчого алкілу, нижчого гетероалкілу, С:і-далкокси, аміно, ціано та галогенметилу, де замісники В/2-225-, ІД'-225-, Ж-М(В")-В'3-225- або й-В8'-725- приєднані до А!? при будь-якому атомі АгІ-, який може бути заміщений; 7" вибраний із М, СН, С-галоген, С-СНз і С-СМ; кожний із 72а | 725 незалежно один від одного вибраний зі зв'язку, МАЄ, Свбадеь, о, 5, (0), (0), -МАУС(О)-, -МА!Зас(Оо)МнАеь- ї -МАЗС(О)О-;
Гр в Я Є чу п Ре) 2 п реЇ 2
Е" являє собою т або т , де й, у випадку приєднання до КУ, є приєднаним до ЕК" при будь-якому атомі К", який може бути заміщеним; Х' у кожному випадку вибраний із -М(В"9)-, -М(В'92)2(0)-, -М(В'2)5(0)2-, -5(0)2М(А9)- ї -0О-; п вибраний із 0-3; Во незалежно у кожному випадку вибраний із водню, нижчого алкілу, гетероциклу, аміноалкілу, (- алкілу і -(СНг)2-О-(СНег)2-О-(СНг)2-МНг; б у кожному випадку незалежно вибраний із поліолу, поліетиленгліколю з 4-30 повторюваними ланками, солі і фрагмента, який є зарядженим за фізіологічного значення рН; 5Ре незалежно у кожному випадку вибраний із кисню, -5(0)2М(Н)-, -М(Н)Б(О)2-, -ЩН)ІС(О)-, -ФЧ(ОМ(Н)-, -М(Н)-, арилену, гетероциклену і необов'язково заміщеного метилену; де метилен необов'язково заміщений одним або кількома з -МН(СНег)20ї, МН», Сч- валкілу і карбонілу; т вибраний із 0-12; В' вибраний із водню, метилу, галогену, галогенметилу, етилу і ціано; К? вибраний із водню, метилу, галогену, галогенметилу і ціано; КЗ вибраний із водню, метилу, етилу, галогенметилу і галогенетилу; В" вибраний із водню , нижчого алкілу і нижчого гетероалкілу або взятий разом з атомом із КЗ з утворенням циклоалкільного або гетероциклільного кільця, яке містить 3-7 атомів у кільці; кожний із КУ, Дба і ВЕ? незалежно один від одного вибраний із водню, необов'язково заміщеного нижчого алкілу, необов'язково заміщеного нижчого гетероалкілу, необов'язково заміщеного циклоалкілу і необов'язково заміщеного гетероциклілу або взятий разом з атомом із КК" і атомом із В" з утворенням циклоалкільного або гетероциклільного кільця, яке містить 3-7 атомів у кільці; кожний із Ка і
А"? незалежно один від одного вибраний із водню, галогену, метилу, етилу, галогенметилу, гідроксилу, метокси, СМ і 5СНз; В? необов'язково являє собою К' або вибраний із водню,
Зо галогену, ціано, необов'язково заміщеного алкілу, необов'язково заміщеного гетероалкілу, необов'язково заміщеного гетероциклілу і необов'язково заміщеного циклоалкілу; К'"З вибраний із необов'язково заміщеного Сі-валкілену, необов'язково заміщеного гетероалкілену, необов'язково заміщеного гетероциклену і необов'язково заміщеного циклоалкілену; і Ж являє собою точку приєднання до лінкера; і де антитіло до ПВ7-НЗ зв'язується з В7-НЗ (ЗЕО ІО МО: 149) із константою дисоціації (Ка), яка становить приблизно 1 х 105 М або менше. В додатковому варіанті здійснення антитіло містить варіабельний домен важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮ МО: 147, і варіабельний домен легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮ МО: 144; зв'язується з В7-НЗ (ЗЕО ІЮ МО: 149) із константою дисоціації (Ка), яка становить приблизно 1 х 105 М або менше, як визначено за допомогою поверхневого плазмонного резонансу; та/або інгібує ріст пухлини в умовах іп мімо в аналізі із застосуванням ксенотрансплантата дрібноклітинної карциноми легенів (ЗСІ С) людини з інгібуванням росту пухлини у 95 (ТУ) на щонайменше приблизно 5095 щодо антитіла (ДС людини, яке не є специфічним до В7-НЗ, де антитіло |ЇДо людини вводять під час аналізу із застосуванням ксенотрансплантата СІ С з тією самою дозою і частотою, що й антитіло до пПВ7-НЗ.
В одному варіанті здійснення АОС являє собою сполуку згідно зі структурною формулою (1):
(І) | б- Я - -- к -| ль т де О є лікарським засобом, який являє собою інгібітор ВсіІ-хі, формули (Па), (ПІБ), (Пс) або (Па); Ї являє собою лінкер; АБ являє собою антитіло до ПВ7-НЗ; І К являє собою ковалентний зв'язок, який зв'язує лінкер (І) з антитілом (АБ) до ПВ7-НЗ; і т являє собою ціле число в діапазоні від 1 до 20.
В одному варіанті здійснення С у кожному випадку являє собою сіль або фрагмент, який є зарядженим за фізіологічного значення рн.
В одному варіанті здійснення (б у кожному випадку являє собою карбоксилатну, сульфонатну, фосфонатну або амонієву сіль.
В одному варіанті здійснення С у кожному випадку являє собою фрагмент, який є зарядженим за фізіологічного значення рн, вибраний із групи, яка складається із карбоксилату, сульфонату, фосфонату та аміну.
В одному варіанті здійснення с у кожному випадку являє собою фрагмент, який передбачає поліетиленгліколь із 4-30 повторюваними ланками або поліол.
В одному варіанті здійснення поліол являє собою цукор.
В одному варіанті здійснення АОС представлений у формулі (Па) або формулі (Па), і включає щонайменше один заміщуваний атом азоту, придатний для приєднання до лінкера.
В одному варіанті здійснення С у кожному випадку вибраний із: он он но он он о Ге) но он но он ОН
Хо р Х рало) Фін! сн найк х ОМ ом, он, хо ОН, (Фін! чо но он М в) СН
ОМ Й М. М-- то зом р СНз Кі СНз ин М, до о) | ОМ, СНз СНз нн, КУ | - но но он но ОН но но он он ваг он У ро он
ОН , он , он , ОН і - ; де М являє собою водень або позитивно заряджений протиіон.
В одному варіанті здійснення Е" вибраний із й я 6) ! Ге) й (Ф)
І М // І ще) ли нив же заовасюя че З-о я, , он, он, он о) кА Ж он : он ие и ис М но о , он ,
(Фін! он он но он но
Ге)
ОО що НО о он З. в) І зо снанн
М М он м; ге он. аа М
Фін! о рада но (Фін! ОН пн пово тан ото я
Ї й о я о СНз МН Пон ви ит ОН ! р-он ання хо
І ит х он , (Фін! , (Ф) , й я І н М дон о сн» Ше) га на зо ма в ж ге сон о) | й он. 9) (Ф) о (Фін!
Ін (Ф) (Фін!
М га то он сло. чий
Н , о
М щі о (Фін! но он й о рачи: он хА/он пава он че -тК пав (е) , Он. ці
М ї й ра ка о я еАдря е КАТ и " ОН, о СН он. ці
М йди сон ! ки га М Н о ричу; он
Тон но о. о.
(в) но. поО в ен
Ц Нм он Г сво Н п зр-во т МОДИ М он х ох м о | й о,
Ч но.
ВН о я бої ни о ан и анонь ой АХ аа
Н о пава ОН о
М но. й м зЗ:0 М 7 ге М о й й о о. /О-снз
М Й ва (Фін! Тими зо во
І но щі) он, я , он , г. М хи, й Я аа М о он о о бчвоа но ОНоитиЙ но он он , он ,
Х
М
І о М
НО. 7; тя
З:0 і й (о) - М ти он с Я дит ХК)
Я , лим , у й , Ч, го лузі осо опво С у о о о |! он
Д (С ГТ т) он нм о со о7То7
Тх й пом о Н а
(Фін) ще, он он щі)
М о; й Й м чі М. ай Б/ Гея но Я он
М Фін сут он а су х і я | он нів) Фін й В он он
М він /7 рр рих т он он он я 9.9 М он х
ЗИ
-М он он я о
М
/ К чию он а оту тон
Н он во | й | он (о); он в) (Ф) но. он ово и но ОН тити о он он ,; 6) і
Ех (о;
Он, де Ж являє собою або атом водню в лікарському засобі в АЮС, який є інгібітором Всі-хі. формули (ПІБ) або (Іс), або точку приєднання в лікарському засобі в АОС, який є інгібітором Всі- хі формули (Іа) або (Ід) до лінкера Ї.. хв окбво ня деко;
В одному варіанті здійснення Аг вибраний із ; Х і / | необов'язково заміщений одним або кількома замісниками, незалежно вибраними з галогену, ціано, метилу і галогенметилу.
я
В одному варіанті здійснення Аг являє собою о .
В одному варіанті здійснення Аг" являє собою Ї , необов'язково заміщений одним або кількома замісниками.
В одному варіанті здійснення Аг вибраний (із лм ; лм ;
Н
М Ге) М М
СХ, С, с ХМ, Є хх - д- М пн ли ма; у у Ь: лм ; «Аллі ; чл ; члли ; ад, ; ї 1 Сл д- М й: - ї я ул в лм ум іо і необов'язково заміщений одним або кількома замісниками.
В одному варіанті здійснення Аг" заміщений однією або кількома солюбілізувальними групами.
В одному варіанті здійснення кожна солюбілізувальна група незалежно від інших вибрана із фрагмента, який передбачає поліол, поліетиленгліколь із 4-30 повторюваними ланками, сіль або фрагмент, який є зарядженим за фізіологічного значення рн.
В одному варіанті здійснення Аг- заміщений однією або кількома солюбілізувальними групами.
В одному варіанті здійснення кожна солюбілізувальна група незалежно від інших вибрана із фрагмента, який передбачає поліол, поліетиленгліколь із 4-30 повторюваними ланками, сіль або фрагмент, який є зарядженим за фізіологічного значення рн.
В одному варіанті здійснення 7! являє собою М.
В одному варіанті здійснення 2772 являє собою 0.
В одному варіанті здійснення К' являє собою метил або хлор.
В одному варіанті здійснення Р? являє собою водень або метил.
В одному варіанті здійснення К2 являє собою водень.
В одному варіанті здійснення 7225 являє собою 0.
В одному варіанті здійснення 7225 являє собою МН або СН».
В одному варіанті здійснення АЮС являє собою сполуку згідно зі структурною формулою (Па).
В одному варіанті здійснення АОС являє собою сполуку згідно зі структурною формулою (Па), яка містить ядро, вибране зі структур (С.1)-(0.21): (е)
М. иМеу ТОН ог но ль
М са Нзе
В СН о
М. им ТОН
Її зд о но у (С.2) !
МА Нзе та
СНУ щи нс й , й о
М. им ТОН
Ї зд о нм Зо у (С.3) !
АХ М м7 Св Нзо сна щи МФ)
Її й, й о
М Мер Тон ,
А І Ж Ад ої (С.4) в о ) і м7 Св Нзо сна
У не о
М Му ТОН ,
А | Ж Х ох (С.5) де о Х й м7 8 Нзо сна щи нс й , й о Ге;
С е он « о! (св) нео ї ММ ' М мя но сна у, но
СН»
М о) ( м
Ах (0.7) "І о Й тм
М
Мм7 в Нзо сна у, че он о)
М. и Му ТОН х ох (С.8) нм7Зо Ям
М мя НзС сна о щ вощо
Ма ТОН ої нм7Зо Ям (С.9) Х м
Мм7 Св Нзо сна о че
ОСС ки
Ме ТОН о - зм (С.10) р о Х м
М" в Нзо сна (7 нас (о)
ХА Ин,
Ї Ук ох но ! (С) Ж М км
М" Св Нзо сна
ЩІ нНзос ч ) й
Осн» о
М. им ТОН
І Ж А ог (С.12) у о Й М
М
Мм7 8 нс сна у, й см о
М. и Му ТОН
І ХА ох (0.13) п" о М
М
Мм7 св Нз3о сна о че
Е о
М. и Му ТОН У ох (с.4) нм Зо Ям
М меч нНзе сна у, че
А )
ХУ Ме Фін!
І ХА о
М
(С.15) р (в, у м
М" в Нзе сна
У що гм о хх Ме (Фін! - Х о
М
(С.16) р (в, | м
М" Св Нзе сна
У що о)
М км им ТОН
Ї о
М
(С17) де о у м й
М" в Нзе сна о, не (о)
М Ма ТОН
НМ ої
М
(С.18) де ів; | м й
М" в Нзе сна о, не тм Ге)
М. и Му ТОН
Ї о
М
(С.19) ре о | ц 7 нс
М" з З сна о не
М о - Ме он
Ї о
М
(С.20) де ів; | м й
М" в Нзе сна о не о с о ще Ми ТОН м
І ХА о (С.21) нм то у М
ХК м
У
Мм7 8 Нзо сна о не
В одному варіанті здійснення АОС являє собою сполуку згідно зі структурною формулою (Па.1):
ва, о
М (Фін! б зв о М 77а М, - іх 7 г 5 вт нм о М 1 М я) Кк віть 11а
Кк (Пат), де У являє собою необов'язково заміщений С.і-Свалкілен; г дорівнює 0 або 1; і 5 дорівнює 1, 2 або 3.
В одному варіанті здійснення АОС являє собою сполуку згідно зі структурною формулою (Па.г): 2Б ві, о он , го ву дробом 7Уга у я
ЖЇ і: 7 Уа Мо нм Зо Х Ф Удата ВА? 1
Кк вть 11а й; (Па.г), де І вибраний із М, О і СН, за умови, що якщо О являє собою О, то Ме і Ка відсутні; Ко вибраний із Н і Сі-Слалкілу; кожний із Бела і В2ть незалежно один від одного відсутній або вибраний із Н, Сі-Слалкілу і б, де С вибраний із поліолу, РЕС4-30, солі і фрагмента, який є зарядженим за фізіологічного значення ріН; кожний із Ма і Ме незалежно один від одного відсутній або вибраний зі зв'язку і необов'язково заміщеного алкілену; К2О вибраний із Н і С:-
Сзалкілу; і 5 дорівнює 1, 2 або 3.
В одному варіанті здійснення АОС являє собою сполуку згідно зі структурною формулою (Па.3): 25 1277 (6)
Кк он б вош и 77а М-Т-М ря Х й з т
НМ Ге); у / ' М
Кк тв в/а (Па.3), де КУ вибраний із Н, Сі-Слалкілу і 95-03 або необов'язково взятий разом з атомом в Т з утворенням кільця, яке містить 3-7 атомів; кожний із 92 і УЄ незалежно один від одного вибраний із необов'язково заміщеного Сі-Свалкілену і необов'язково заміщеного фенілену; Т вибраний із необов'язково заміщеного Сі-Свалкілену, снснОоснсСносНнесн;»,
СснНсСнНгосСНнгснНгосСНнсСнгоснН 5» і поліетиленгліколю, який містить 4-10 ланок етиленгліколю; вибраний із поліолу, РЕФС4-30, солі і фрагмента, який є зарядженим за фізіологічного значення рН; і 5 дорівнює 1, 2 або 3.
В одному варіанті здійснення АОС являє собою сполуку згідно зі структурною формулою (ПІБ).
В одному варіанті здійснення АОС являє собою сполуку згідно зі структурною формулою (ПБ.1): 25 коша (о; 8 он ---
Меу в оз за М. - хх 7 г Ес но М 1 М
Кк вв 11а
Кк (ПБ.1), де У являє собою необов'язково заміщений С:і-Свалкілен; з вибраний із поліолу, РЕС4-30, солі і фрагмента, який є зарядженим за фізіологічного значення рн; г дорівнює 0 або 1; і 5 дорівнює 1, 2 або 3.
В одному варіанті здійснення АОС являє собою сполуку згідно зі структурною формулою (Пс).
В одному варіанті здійснення АОС являє собою сполуку згідно зі структурною формулою (Пе.1): рі
М 277-225
М ув ях, о; о й Фін! У
М еЕ2 / дал раз ря З но М 1 М
Кк вв 11а
Кк (Пет), де Уа являє собою необов'язково заміщений Сі-Свалкілен; У? являє собою необов'язково заміщений С:-Свалкілен; КЗ вибраний із Н і Сі-Слзалкілу; і о вибраний із поліолу, РЕС4-30, солі і фрагмента, який є зарядженим за фізіологічного значення рн.
В одному варіанті здійснення АОС являє собою сполуку згідно зі структурною формулою (Пес.г2): рі
М ,;77-2Ь ув, о б й Фін У
М в2 / да до й ! З щу
НМ Ге) / ій
М 554. -Ко5 в! вь 11а й; (Пе.г), де ма являє собою необов'язково заміщений С:і-Свалкілен; У? являє собою необов'язково заміщений С:-Свалкілен; у: являє собою необов'язково заміщений С.-Свалкілен; КЕ вибраний із
Н ї Сі-Слалкілу; В» являє собою Уб-с або взятий разом з атомом У: з утворенням кільця, яке містить 4-6 атомів у кільці; З вибраний із поліолу, РЕС4-30, солі і фрагмента, який є зарядженим за фізіологічного значення рн.
В одному варіанті здійснення інгібітор Всі-хІ. вибраний із групи, яка складається з наступних сполук, модифікованих таким чином, що атом водню, який відповідає положенню Ж в структурній формулі (Па), (ПЬ), (Пс) або (Іа), відсутній, при цьому утворюється монорадикал: 6-І(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-11-(13-(2-((2-(2- (карбоксиметокси)етокси|етил)аміно)етокси|-5,7-диметилтрицикло|3.3.1.157)дец-1-ил)метил)-5- метил-1Н-піразол-4-іл|Іпіридин-2-карбонова кислота; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-3-11-(3,5-диметил-7-2-
К2-сульфоетил)аміно|етоксиутрицикло!|3.3.1.13Лдец-1-ил)метилі|-5-метил-1 Н-піразол-4- іл)піридин-2-карбонова кислота; 2-Щ(2-Ц2-(3-(К4-(6-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2- карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1-ілуметил)|-5, 7-диметилтрицикло!|3.3.1.157)дец-1- илюкси)етиліІіаміно)етил)сульфоніл|аміно)-2-дезокси-О-глюкопіраноза; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-3-11-(3,5-диметил-7-2-
К4-(3А,48,55,6Н)-3,4,5-тригідрокси-6-(гідроксиметил)тетрагідро-2Н-піран-2- іл|метилубензил)аміно|етоксиутрицикло!|3.3.1.13,7|дец-1-ил)метилі|-5-метил-1 Н-піразол-4- іл)піридин-2-карбонова кислота; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-3-11-(3,5-диметил-7-2- ((З-сульфопропіл)аміно|етоксиутрициклої|3.3.1.157)дец-1-ил)метилі|-5-метил-1 Н-піразол-4- іл)піридин-2-карбонова кислота; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-ілІ-3-11-(3-2-((2,3- дигідроксипропіл)аміно|етокси)-5,7-диметилтрицикло!/3.3.1.15Я)дец-1-илуметил|-5-метил-1 Н- піразол-4-іл)упіридин-2-карбонова кислота; 2-(14-(12-(13-(4-(6-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроїзохінолін-2(1 Н)-іл|-2- карбоксипіридин-З3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)уметил)|-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.157)дец-1- илюкси)етиліаміно)метил)феніл|Ісульфоніл)аміно)-2-дезокси-бета-О-глюкопіраноза; 8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-2-(6-карбокси-5-(1-(13-(2-(12-1П1-(бета-0- глюкопірануронозил)-1Н-1,2,3-триазол-4-іл|еєтиліаміно)етокси|-5,7-
Зо диметилтрицикло!|3.3.1.157)дец-1-ил)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл|Іпіридин-2-іл)-1,2,3,4- тетрагідроізохінолін; 3-(11-(13-(2-(2-(Ц4-(бета-О-алопіранозилокси)бензилі|аміно)етокси)етокси|-5,7- диметилтрицикло!|3.3.1.19Л|дец-1-ил)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл|-6-(8-(1,3-бензотіазол-2- ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|піридин-2-карбонова кислота; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-3-(1-(3,5-диметил-7-(2-(2-
К2-сульфоетил)аміно|етокси)етокси)трициклої3.3.1.15Лдец-1-ил|метил)-5-метил-1 Н-піразол-4- іл)піридин-2-карбонова кислота; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-3-11-(3,5-диметил-7-2-
К2-фосфоноетил)аміно|етокси)трицикло!Ї3.3.1.127|дец-1-ил)метил|-5-метил-1 Н-піразол-4- ілупіридин-2-карбонова кислота; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-3-11-(3,5-диметил-7-2-
Іметил(З-сульфо-Ї -аланіл)аміно|етокси)утрицикло!|3.3.1.127)дец-1-ил)метилі|-5-метил-1 Н-піразол- 4-ілупіридин-2-карбонова кислота; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-3-11-(3,5-диметил-7-2- ((З-фосфонопропіл)аміно|етоксиутрицикло!|3.3.1.15ЛЯдец-1-ил)метил|-5-метил-1 Н-піразол-4- іл)піридин-2-карбонова кислота; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-3-11-(3,5-диметил-7-2- ((З-сульфо-1І -аланіл)аміно|етоксиутрициклоїЇ3.3.1.157|)дец-1-ил)метилі|-5-метил-1 Н-піразол-4- іл)піридин-2-карбонова кислота; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-3-(1-(3,5-диметил-7-(2-(2- ((З-фосфонопропіл)аміно|етокси)етокси)трицикло|3.3.1.157дец-1-ил|метил)-5-метил-1 Н-піразол- 4-іл)піридин-2-карбонова кислота; 3-11-(3-(2-(І-альфа-аспартил(метил)аміно|етокси)-5,7-диметилтрициклоїЇ3.3.1.127|дец-1- ил)метилі|-5-метил-1Н-піразол-4-іл)-6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін- 2(1Н)-іл|Іпіридин-2-карбонова кислота; 6-(4-(2-(2-(2-аміноетокси)етокси|етил)(2-((3-((4-16-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)уметилі/д-5,7- диметилтрицикло!|3.3.1.13-Ядец-1-иліюкси)етил|аміно)метилі|бензил)-2,6-ангідро-І -гулонова кислота; бо 4-(Д2-(13-((4-(6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2-
карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1-ілуметил)|-5, 7-диметилтрицикло!|3.3.1.157|дец-1- илюкси)етиліІаміно)метил)фенілгексопіранозидуронова кислота; 6-(11-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-1,2,3,4-тетрагідрохінолін- 7-іл|-3-11-(3,5-диметил-7-12-
К2-фосфоноетил)аміно|етокси)трицикло!Ї3.3.1.127|дец-1-ил)метил|-5-метил-1 Н-піразол-4- ілупіридин-2-карбонова кислота; 6-(11-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-1,2,3,4-тетрагідрохінолін- 7-іл|-3-11-(3,5-диметил-7-12-
Іметил(З-сульфо-Ї -аланіл)аміно|етокси)утрицикло!|3.3.1.127)дец-1-ил)метилі|-5-метил-1 Н-піразол- 4-ілупіридин-2-карбонова кислота; 3-1-(3,5-диметил-7-2-(2-сульфоетил)аміно|етоксиутрицикло!|3.3.1.15Я)дец-1-илуметил/д-5- метил-1Н-піразол-4-іл)-6-І8-(П1,3гіазоло(|5,4-б|піридин-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін- 2(1Н)-іл|Іпіридин-2-карбонова кислота; 3-1-(3,5-диметил-7-2-(2-сульфоетил)аміно|етоксиутрицикло!3.3.1.15Я)дец-1-илуметил/д-5- метил-1Н-піразол-4-іл)-6-І8-(П1,3гіазоло(|4,5-б|піридин-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін- 2(1Н)-іл|Іпіридин-2-карбонова кислота; 6-(11-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-1,2,3,4-тетрагідрохінолін- 7-іл|-3-11-(3,5-диметил-7-12-
К2-сульфоетил)аміно|етоксиутрицикло!|3.3.1.197)дец-1-ил)метилі|-5-метил-1 Н-піразол-4- іл)піридин-2-карбонова кислота; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-11-(3-2-К(2- карбоксиетил)аміно|етокси)-5,7-диметилтрицикло!Ї3.3.1.127|дец-1-ил)метил|-5-метил-1 Н-піразол- 4-іл)упіридин-2-карбонова кислота; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-3-11-(3,5-диметил-7-2- ((З-фосфонопропіл)(піперидин-4-іл)аміно|етоксиутрициклоїЇ3.3.1.15Л)дец-1-ил)метил|-5-метил-1 Н- піразол-4-іл)упіридин-2-карбонова кислота; 3-1-(3-2-(Ю-альфа-аспартил(метил)аміно|єетокси)-5,7-диметилтрициклої3.3.1.15Я)дец-1- ил)метилі|-5-метил-1Н-піразол-4-іл)-6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін- 2(1Н)-іл|Іпіридин-2-карбонова кислота; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-(1-113-(2-(1- (карбоксиметил)піперидин-4-ілІаміно)етокси)-5,7-диметилтрицикло|3.3.1.197)дец-1-ил|метил)-5- метил-1Н-піразол-4-іл)/упіридин-2-карбонова кислота;
Коо) М-(55)-5-аміно-6-Т2-(13-((4-716-І(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)- іл|І-2-карбоксипіридин-3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)метилі|-5,7-диметилтрициклоїЇ3.3.1.127|дец-1- илюкси)етилІ(метил)аміно)-6-оксогексил|-М,М-диметилметанаміній; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-3-11-(3,5-диметил-7-2-
Іпіперидин-4-іл(2-сульфоеєетил)аміно|етоксиутрицикло!ї3.3.1.15Лдец-1-ил)метил|-5-метил-1 Н- піразол-4-іл)іпіридин-2-карбонова кислота; 6-(8-(1,3-бензотіазол-2г-ілкарбамоїл)-5-(3-фосфонопропокси)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|- 3-11-(3,5-диметил-7-(2-(метиламіно)етокси|грициклоїЇ3.3.1.157)дец-1-ил)метил)-5-метил-1 Н- піразол-4-іл|Іпіридин-2-карбонова кислота; 6-І(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-(1-113-(2-((М-(2- карбоксиетил)-І -альфа-аспартиліІаміно)етокси)-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.19Л)дец-1-ил|метил)у-
Б-метил-1Н-піразол-4-іл)піридин-2-карбонова кислота; 3-11-(3--2-(2-аміноетил)(2-сульфоетил)аміно|етокси)-5,7-диметилтрицикло!їЇ3.3.1.127Л)дец-1- ил)метилі|-5-метил-1Н-піразол-4-іл)-6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін- 2(1Н)-іл|Іпіридин-2-карбонова кислота; 6-(5-(2-аміноетокси)-8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-(1- (3,5-диметил-7-(2-(метиламіно)етокси|грицикло!|3.3.1.12|дец-1-ил)метил)-5-метил-1 Н-піразол- 4-іл|Іпіридин-2-карбонова кислота; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)нафталін-2-іл|-3-11-(3,5-диметил-7-(2-((3- сульфопропіл)аміно|етокси)трициклоїЇ3.3.1.12Л)дец-1-ил)метилі|-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)піридин-
БО 2-карбонова кислота; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-11-(3-2-К(2- карбоксиетил)(піперидин-4-іл)аміно|етокси)-5,7-диметилтрициклої|3.3.1.157)дец-1-ил)метил|-5- метил-1Н-піразол-4-іл/піридин-2-карбонова кислота; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-3-11-(3,5-диметил-7-2- ((З-сульфо-1І -аланіл)(2-сульфоетил)аміно|етоксиутрициклоїЇ3.3.1.157)дец-1-ил)метилі|-5-метил- 1Н-піразол-4-ілупіридин-2-карбонова кислота; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-71-(3-2-(2-(2- карбоксиетил)аміно|етил2-сульфоетил)аміно|етокси)-5,7-диметилтрициклої3.3.1.15Я)дец-1- ил)метилі|-5-метил-1Н-піразол-4-іліпіридин-2-карбонова кислота; бо 3-11-(3,5-диметил-7-12-(3-фосфонопропіл)аміно|етоксиутрицикло!|3.3.1.13Я)дец-1-ил)метилі-
Б-метил-1Н-піразол-4-іл)-6-І8-(Ф1,3)гіазоло|4,5-б|піридин-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін- 2(1Н)-іл|Іпіридин-2-карбонова кислота; 3-11-(3,5-диметил-7-2-(З-фосфонопропіл)аміно|етоксиутрицикло!|3.3.1.15Лдец-1-ил)метилі-
Б-метил-1Н-піразол-4-іл)-6-І8-(Ф1,3)гіазоло|5,4-б|Іпіридин-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін- 2(1Н)-іл|Іпіридин-2-карбонова кислота; 6-(8-(1,3-бензотіазол-2г-ілкарбамоїл)-5-(карбоксиметокси)-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1 Н)-іл|-3-(1- ((3,5-диметил-7-(2-(метиламіно)етокси|грицикло!|3.3.1.157|дец-1-ил)іметил)-5-метил-1 Н-піразол- 4-іл|Іпіридин-2-карбонова кислота; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-11-(3-2-((3- карбоксипропіл)(піперидин-4-іл)аміно|етокси)-5,7-диметилтрицикло|3.3.1.15Я)дец-1-илуметил/д|-5- метил-1Н-піразол-4-іл/іпіридин-2-карбонова кислота; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)нафталін-2-іл|-3-11-(3,5-диметил-7-2-(2- сульфоетил)аміно|етоксиутрициклоїЇ3.3.1.157|)дец-1-ил)метилі|-5-метил-1 Н-піразол-4-іліпіридин-2- карбонова кислота; 3-11-К3-2-(І-альфа-аспартил(2-сульфоетил)аміно|етокси)-5, 7- диметилтрициклоїЇ3.3.1.157)дец-1-ил)метилі|-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)-6-(8-(1,3-бензотіазол-2- ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|піридин-2-карбонова кислота; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-ілІ|-3-11-(3-2-(1,3- дигідроксипропан-2-іл)аміно|етокси)-5,7-диметилтрициклої|3.3.1.157)дец-1-ил)метилі|-5-метил- 1Н-піразол-4-іл)іпіридин-2-карбонова кислота; 6-(5-(2-аміноетокси)-8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-11-
І(3,5-диметил-7-(2-(метил(2-сульфоетил)аміно|етоксиутрицикло!ї3.3.1.12-Лдец-1-ил)метил|-5- метил-1Н-піразол-4-іл/іпіридин-2-карбонова кислота; 6-І(8-(1,3-бензотіазол-2г-ілкарбамоїл)-5-(2-(2-сульфоетил)аміно|етокси)-3,4-дигідроізохінолін- 2(1Н)-ілІ-3-71-(3,5-диметил-7-2-(метил(2-сульфоетил)аміно|етоксиутрицикло!ї3.3.1.19Лдец-1- ил)метилі|-5-метил-1Н-піразол-4-іліпіридин-2-карбонова кислота; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-3-11-(3,5-диметил-7-2- (2-сульфоетил)(2-(2-сульфоетил)аміно|етиліаміно|етоксиутрицикло!|3.3.1.19Лдец-1-ил)метилі-
Б-метил-1Н-піразол-4-іл)іпіридин-2-карбонова кислота;
Зо 6-І(8-(1,3-бензотіазол-2г-ілкарбамоїл)-5-(2-(2-карбоксиетил)аміно|етокси)-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-11-((3,5-диметил- 7-і2-|метил(2- сульфоетил)аміно|етоксиутрициклоїЇ3.3.1.157|)дец-1-ил)метилі|-5-метил-1 Н-піразол-4-іліпіридин-2- карбонова кислота; 3-11-((3,5-диметил-7-2-(З-фосфонопропіл)(піперидин-4- іллуаміно|етоксиутрицикло!3.3.1.12Я|дец-1-ил)метил|-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)-6-(8- (П,ЗІгіазоло|4,5-б|піридин-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|Іпіридин-2-карбонова кислота; 6-(4-(1,3-бензотіазол-2г-ілкарбамоїл)-3,4-дигідро-2Н-1,4-бензоксазин-6-іл|-3-11-(3,5-диметил- 7--2-(2-сульфоетил)аміно|етоксиутрицикло!|3.3.1.197|дец-1-ил)метилі|-5-метил-1 Н-піразол-4- ілупіридин-2-карбонова кислота; 6-(8-(1,3-бензотіазол-2г-ілкарбамоїл)-5-(3-сульфопропокси)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-3-
П1-(3,5-диметил-7-(2-(метиламіно)етоксиЇгрицикло!|3.3.1.127)дец-1-ил)метил)-5-метил-1 Н- піразол-4-іл|Іпіридин-2-карбонова кислота; 3-1-(3,5-диметил-7-2-(2-сульфоетил)аміно|етоксиутрицикло!|3.3.1.15Я)дец-1-илуметил/д-5- метил-1Н-піразол-4-ілу-6-(11-(П1,3)гіазоло|4,5-б|піридин-2-ілкарбамоїл)-1,2,3,4-тетрагідрохінолін- 7-іл|Іпіридин-2-карбонова кислота; 3-1-(3,5-диметил-7-2-(2-сульфоетил)аміно|етоксиутрицикло!|3.3.1.15Я)дец-1-илуметил/д-5- метил-1Н-піразол-4-іл)-6-І8-(П1,3)гіазоло|4,5-В|піридин-2-ілкарбамоїл)нафталін-2-іл|піридин-2- карбонова кислота; (16Є)-1-42-15-(1-13-(2-аміноетокси)-5,7-диметилтрицикло!/3.3.1.127)дец-1-ил|метил)-5-метил- 1Н-піразол-4-іл)-6-карбоксипіридин-2-іл|-8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-1,2,3,4- тетрагідроізохінолін-5-ілуметил)-1,5-ангідро-О-глюцит; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-11-(3-2-((3- карбоксипропіл)аміно|етокси)-5,7-диметилтрицикло|3.3.1.157)дец-1-ил)метилі|-5-метил-1 Н- піразол-4-іл)іпіридин-2-карбонова кислота; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)нафталін-2-іл|-3-11-(3,5-диметил-7-(2-((3- фосфонопропіл)аміно|етоксиутрициклоїЇ3.3.1.157)дец-1-ил)метилі|-5-метил-1 Н-піразол-4- іл)піридин-2-карбонова кислота; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-(1-113-(2-Ц4-(бета-О- бо глюкопіранозилокси)бензилі|аміно)етокси)-5, 7-диметилтрицикло!|3.3.1.157)дец-1-ил|метил)-5-
метил-1Н-піразол-4-іл)/упіридин-2-карбонова кислота; 3-(1-193-(2-(Ц4-(бета-О-алопіранозилокси)бензилі|аміно)етокси)-5,7- диметилтрициклоїЇ3.3.1.157)дец-1-ил|метил)-5-метил-1Н-піразол-4-іл)-6-(8-(1,3-бензотіазол-2- ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|піридин-2-карбонова кислота; 3-11-(3-(2-(азетидин-3-іл(2-сульфоетил)аміно|етокси)-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.157дец-1- ил)метилі|-5-метил-1Н-піразол-4-іл)-6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін- 2(1Н)-іл|Іпіридин-2-карбонова кислота; 3-11-(3-(2-((З-амінопропіл)(2-сульфоетил)аміно|етокси)-5,7-диметилтрицикло|3.3.1.157дец-1- ил)метилі|-5-метил-1Н-піразол-4-іл)-6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін- 2(1Н)-іл|Іпіридин-2-карбонова кислота; 6-(1-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-1,2,3,4-тетрагідрохінолін- 7-іл|-3-11-(3-2-К(2- карбоксиетил)аміно|етокси)-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.137)дец-1-ил)метил|-5-метил-1 Н-піразол- 4-ілупіридин-2-карбонова кислота; 6-І(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-ілІ|-3-11-((3-12-((Ме, Мб- диметилі-ї -лізил)у(метил)аміно|етокси)-5,7-диметилтрициклоїЇ3.3.1.12)дец-1-ил)уметилі|-5-метил- 1Н-піразол-4-ілупіридин-2-карбонова кислота; 3-11-(3-(2-(З-амінопропіл)(метил)аміно|етокси)-5,7-диметилтрицикло!Ї3.3.1.12Лдец-1- ил)метилі|-5-метил-1Н-піразол-4-іл)-6-(1-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-1,2,3,4- тетрагідрохінолін-7-іл|Іпіридин-2-карбонова кислота; 3-11-(3-(2-(азетидин-З3-іл(метил)аміно|етокси)-5,7-диметилтрицикло!Ї3.3.1.127)дец-1- ил)метилі|-5-метил-1Н-піразол-4-іл)-6-(1-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-1,2,3,4- тетрагідрохінолін-7-іл|Іпіридин-2-карбонова кислота;
М5-(37-оксо-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35-додекаоксагептатриаконтан-37-іл)-І -лізил-М-(2- ((3-К4-(6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3- іл)б5-метил-1Н-піразол-1-іл)уметил/|-5,7-диметилтрициклої3.3.1.12Я)дец-1-ил)окси)етилі-і - аланінамід; метил-6-І4-(3-Т2-(13-(4-(6-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|- 2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1-ілуметил/|-5,7-диметилтрициклоїЇ3.3.1.12Л)дец-1- илюкси)етиліаміно)пропіл)-1Н-1,2,3-триазол-1-іл|-6-дезокси-бета-І -глюкопіранозид;
Коо) 6-І(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)нафталін-2-ілІ|-3-11-((3-2-(2-карбоксиетил)аміно|етокси)- 5,7-диметилтрициклоїЇ3.3.1.127|дец-1-ил)метил/|-5-метил-1Н-піразол-4-ілупіридин-2-карбонова кислота; 6-(5-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)хінолін-З3-іл|-3-71-(3,5-диметил-7-(2-(2- сульфоетил)аміно|етоксиутрициклоїЇ3.3.1.157|)дец-1-ил)метилі|-5-метил-1 Н-піразол-4-іліпіридин-2- карбонова кислота; 6-І(4-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)хінолін-б-іл|-3-71-(3,5-диметил-7-(2-(2- сульфоетил)аміно|етоксиутрициклоїЇ3.3.1.157|)дец-1-ил)метилі|-5-метил-1 Н-піразол-4-іліпіридин-2- карбонова кислота; 6-(5-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)хінолін-З-іл|-3-11-(3-2-(2-карбоксиетил)аміно|етокси)- 5,7-диметилтрициклоїЇ3.3.1.127|дец-1-ил)метил/|-5-метил-1Н-піразол-4-ілупіридин-2-карбонова кислота; 6-(11-(1,3-бензотіазол-2г-ілкарбамоїл)-5,6-дигідроїмідазо(1,5-а|піразин-7(8Н)-іл|-3-11-К(3,5- диметил-7-2-(2-сульфоетил)аміно|етоксиугрициклоїЇ3.3.1.157)дец-1-ил)метилі|-5-метил-1 Н- піразол-4-іл)упіридин-2-карбонова кислота; 8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-2-(6-карбокси-5-(1-(13-(2-(13-П1-(бета-0- глюкопірануронозил)-1 Н-1,2,3-триазол-4-іл|Іпропіл)іаміно)етокси|-5, 7- диметилтрицикло!|3.3.1.19Л|дец-1-ил)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл|піридин-2-іл)-1,2,3,4- тетрагідроізохінолін; 6-(7-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-1Н-індол-2-іл|-3-11-(3,5-диметил-7-2-(2- сульфоетил)аміно|етоксиутрицикло!|3.3.1.157)дец-1-ил)метилі|-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)піридин-2- карбонова кислота; 6-І(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-6-(З-(метиламіно)пропіл|-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1Н)-іл|- 3-11-(3,5-диметил-7-2-(2-сульфоетил)аміно|етоксиутрицикло!|3.3.1.157)дец-1-ил)метилі-5- метил-1Н-піразол-4-іл/іпіридин-2-карбонова кислота; 5-Ц2-(13-(4-(6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2- карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1-ілуметил)|-5, 7-диметилтрицикло!|3.3.1.157)дец-1- илюкси)етилі|аміно)-5-дезокси-О-арабініт; 1-Щ2-(13-((4-16-І(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-2- карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1-ілуметил)|-5, 7-диметилтрицикло!|3.3.1.157)дец-1- бо илюкси)етиліаміно)-1,2-дидезокси-О-арабіногексит;
6-І(4-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)ізохінолін-6-іл|-3-11-(3,5-диметил-7-2-(2- сульфоетил)аміно|етоксиутрициклоїЇ3.3.1.157|)дец-1-ил)метилі|-5-метил-1 Н-піразол-4-іліпіридин-2- карбонова кислота; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-(1-113-(2-(З-гідрокси-2- (гідроксиметил)пропілІаміно)етокси)-5,7-диметилтрициклої3.3.1.12Лдец-1-ил|метил)-5-метил- 1Н-піразол-4-іл)піридин-2-карбонова кислота; 1-Щ2-(13-((4-16-І(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-2- карбоксипіридин-З3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)уметил)|-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.157)дец-1- илюкси)етиліаміно)-1,2-дидезокси-О-еритропентит; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-3-(1-(І3,5-диметил-7-(2- ((25,35)-2,3,4-тригідроксибутил|аміно)етокси)трицикло!|3.3.1.157)дец-1-ил|метил)-5-метил-1 Н- піразол-4-іл)упіридин-2-карбонова кислота; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-3-(1-((3-(2- ((25,35,48,5Н8,68)-2,3,4,5,6,7-гексагідроксигептил|Іаміно)етокси)-5,7- диметилтрициклоїЇ3.3.1.157)дец-1-ил|метил)-5-метил-1Н-піразол-4-іл)упіридин-2-карбонова кислота; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-71-(3-12-(13-(1,3- дигідроксипропан-2-іл)аміно|пропіл)усульфоніл)аміно|етокси)-5, 7-диметилтрициклоїЇ3.3.1.127|дец- 1-ил)метил|-5-метил-1Н-піразол-4-іліпіридин-2-карбонова кислота; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-11-(3-2-((3-11,3- дигідрокси-2-(гідроксиметил)пропан-2-іл|Іаміно)-З-оксопропіл)аміно|етокси)-5, 7- диметилтрицикло!|3.3.1.12Лдец-1-илуметил|-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)упіридин-2-карбонова кислота; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-3-(1-13-(2-((35)-3,4- дигідроксибутил|аміно)етокси)-5,7-диметилтрициклоїЇ3.3.1.157)дец-1-ил|метил)-5-метил-1Н- піразол-4-іл)упіридин-2-карбонова кислота; 4-(Д2-(13-((4-(6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2- карбоксипіридин-З3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)уметил)|-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.157)дец-1- илюкси)етиліаміно)метил)феніл-бета-О-глюкопіранозидуронова кислота;
Коо) 3-Ц2-((3-(4-16-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)нафталін-2-іл|-2-карбоксипіридин-3-іл)-5- метил-1Н-піразол-1-іл)уметил/|-5,7-диметилтрициклоїЇ3.3.1.12Л)дец-1-ил)іокси)етилі|аміно)пропіл- бета-О-глюкопіранозидуронова кислота; 6-І(4-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-2-оксидоізохінолін-б-іл|-3-(1-((3,5-диметил-7-(2- (метиламіно)етокси|грициклоїЇ3.3.1.157)дец-1-илу)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл|піридин-2- карбонова кислота; 6-(8-К1,3-бензотіазол-2-іл)карбамоїл|-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-ілу-3-11-(3,5-диметил-7-2-
К2-сульфоетил)аміно|ацетамідоугрициклої|3.3.1.157)декан-1-іл)уметил|-5-метил-1Н-піразол-4- іл)піридин-2-карбонова кислота; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-(1-(3,5-диметил-7-((2-
К2-сульфоетил)аміно|етилісульфаніл)трицикло!|3.3.1.197|дец-1-ил|метил)-5-метил-1 Н-піразол-4- іл)піридин-2-карбонова кислота і 6-(8-К1,3-бензотіазол-2-іл)карбамоїл|-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-ілу-3-11-(3,5-диметил-7-13-
К2-сульфоетил)аміно|пропілугрицикло|3.3.1.12|декан-1-ілуметил|-5-метил-1 Н-піразол-4- іл)піридин-2-карбонова кислота.
В одному варіанті здійснення лінкер являє собою розщеплюваний лізосомальний фермент.
В одному варіанті здійснення лізосомальний фермент являє собою катепсин В.
В одному варіанті здійснення лінкер містить сегмент згідно зі структурною формулою (ІМа), (ІМЬ), (ІМс) або (Іма): ве о вони Кз ких виь й З ра со й и лег Сех (Ма) я КО С й М «ОТГ нептня ще Є
Мн г
У Ж в о
Ж шк ша Де м я
Го ген І є а а Я (мо кі Я С на шен «Тед ой (Ме) о Г Ї в б'є
Їж Й В ке і я зи пептид М би та й
Ти в; (ма) т? г Яр
М - у п х о р й ТО внецтнд Ще ше
Н де пептид являє собою пептид (показаний М--С, де пептид включає аміно- і карбокси- "кінці", розщеплюваний лізосомальним ферментом; Т являє собою полімер, який містить одну або декілька ланок етиленгліколю, або алкіленовий ланцюг або їх комбінації;
В: вибраний із водню, Сі-валкілу, БОЗН і СН»БЗОзН; ВУ являє собою водень або Сі-залкіл-(О)- (Сі-галкілен)»5-С1! або Сі-лалкіл-(М)-(Сч-лалкілен)-С |»; В: являє собою Сі-лалкіл-(О)-(Сі-залкілен)»- (се; с! являє собою 5ОзН, СОН, РЕС 4-32 або цукровий фрагмент; 2 являє собою 5ОЗН, СОН або фрагмент РЕС 4-32; г дорівнює 0 або 1; 5 дорівнює 0 або 1; р являє собою ціле число в діапазоні від 0 до 5; д дорівнює 0 або 1; х дорівнює 0 або 1; у дорівнює 0 або 1; являє собою точку приєднання лінкера до інгібітора Всі-хі; і х являє собою точку приєднання лінкера до решти.
В одному варіанті здійснення пептид вибраний із групи, яка складається з МаІ-Сіє Сії-Маї;
АІа-АІа; Аіа-Сії; Сі-Аїа; Авзп-Сі Сп-Авп; Сіп-Сії; МаІ-сіи; Сіи-Ма!; Зег-Сіб Сп-бЗег; І уз-Сі Сп-Г ув;
Азр-Сії; Сії-Авр; Аіа-Маї; Ма!-АІа; РНе-Гуз; І уз-РНе; Ма!-Гув; Г уз-Маї; Аїа-Г ув; І уз-Аіа; Ріпе-Сії; Сії-
Рпе; Геи-СіЄ СИ-Ї ви; Пе-СіЄ Сі-МПе; Рпе-Аг9; Ага-Рпе; Сі-Тгр і Тгр-Сїї.
В одному варіанті здійснення лізосомальний фермент являє собою р-глюкуронідазу або р- галактозидазу.
В одному варіанті здійснення лінкер містить сегмент згідно зі структурною формулою (ма), (МЬ), (мс), (ма) або (Ме): ї т хх! х о о (ма) «о щі о в) т он он он р он й «ОН ух о : он (МБ) Ге) Ге!
Ко 2» їж х їж хо в (Мс) (в) «он (е) Ш о ї он он он р он и «ОН
ОХ о : он о) (о)
У
(ма) ас х! ж о й
Д х х йо: о ще хх он
Ге; «М он он он де а дорівнює 0 або 1; г дорівнює 0 або 1; Х' являє собою СН», О або МН; являє собою точку приєднання лінкера до лікарського засобу; і " являє собою точку приєднання лінкера до решти.
В одному варіанті здійснення лінкер містить сегмент згідно зі структурною формулою (МПа), (МПБ) або (МІС):
Б Гая ей са вд ра зі дня р; 3 Її іх ФХ кання в м КІ ем ик Мч її з за ож, Ше: то В: Н ; ру ни те Ме ди - р сх гу во пе 16
ГУТяЮ ірпрапеювана ферма ково жо ноя ож
Мои У кине
Ма Мо у
М. й Мої їх М фкдрошнюоввна форм) (УШЕ) З ФА ще -- і он с. Ва юю о
М -і -ф3е сжхаку их шо кад Ще ни х
ГУщЩще т ї іплротквана форма) або його гідролізовану похідну, де Кт являє собою Н або -0-(СНаСНгО)11-СН»з; х дорівнює 0 або 1; у дорівнює 0 або 1; 53 являє собою -СНаСНа.СНоБОзН або -СНаСНгО-(СНаСНгО)1-СНз;
ВУ являє собою -0О-СНа.СНоБОзН або -МН(СО)-СНаСНгО-(СНеСНгО)12-СНз; " являє собою точку приєднання лінкера до решти; і 7 являє собою точку приєднання лінкера до антитіла.
В одному варіанті здійснення лінкер містить поліетиленгліколевий сегмент, який містить 1-6 ланок етиленгліколю.
В одному варіанті здійснення т дорівнює 2, З або 4.
В одному варіанті здійснення лінкер І вибраний із ІМа або ІМр.
В одному варіанті здійснення лінкер Ї вибраний із групи, яка складається з ІМа.1-ІМа.8,
ІМБ.1-ІМБ.19, ІМос.1-ІМс.7, їма.1-ІмМа.4, Ма.1-Ма.12, Мр.1-МБ.10, Мо.1-Мо.11, ма.1-мМа.б, Ме.1-Ме.2,
Міа.1, Міс.1-МіІс.2, МІа.1-мМІіа.4, МПа.1-МПа.4, МІІБ.1-МІІЮ.8, МПс.1-МИс.б або в закритій, або у відкритій формі.
В одному варіанті здійснення лінкер Ї вибраний із групи, яка складається із ІМБ.2, ІМбо.5,
ІМсо.6, ІМс.7, ІмМа.4, МБ.9, МПа.1ї, МІПа.3, МіІс.1, МІІс.4 і МіІІс.5, де малеїмід кожного лінкера прореагував з антитілом Ар з утворенням ковалентно приєднаного фрагмента у вигляді або сукциніміду (закритої форми), або сукцинаміду (відкритої форми).
В одному варіанті здійснення лінкер Ї вибраний із групи, яка складається із ІМр.2, ІМс.5,
ІМс.6, ІмМа.4, МПа.1, МПа.3, МіІс.1, МіІс.4, МіІІс.5, де малеїмід кожного лінкера прореагував з антитілом АБ з утворенням ковалентно приєднаного фрагмента у вигляді або сукциніміду (закритої форми), або сукцинаміду (відкритої форми).
В одному варіанті здійснення лінкер Г вибраний із групи, яка складається із ІМЬ.2, МПа.3,
ІМс.6 і Міс.1, де я являє собою точку приєднання до лікарського засобу О, і (Ф являє собою точку приєднання до ІК, де у випадку, якщо лінкер знаходиться у відкритій формі, як показано нижче, то (Ф може бути або в а-положенні, або в В-положенні щодо наступної за ним карбонової кислоти:
М «В ї ща ес й
НМ. однини йо й : Н Я и дих х тод а в М ко : вин . Е й ЕЕ | || з Й яви в гако ох х - по - Ку г нен г діння У Па. акрита де КЗЗ
І Ши нин ні .
ЕК. не.
НМ. ди
КК ге ей її Є ї УНал оклювта форма
Ди, В. на у йо ші вчи аж й 7 о, ще о я В й, СОН я В ! НЕ ! в. з ще м А ж ї не ех М Сай в. я М чи ФО
Й Е ї В М ! Не Жанні рн
Ж вия Ок о го. у ри
Х
3
Е 3 с аж . ї «т пут» й що МІК. юриха Фкщхааі ване І ди Х оон нос й дети и чо в вино В г н й Е : 5 ї НН
Ще я "ї х К Її З
Кия а шу М Є о о М ях 1 в о М и ее Я С
Соц У Це 1 бидюмюх форма! он о соВ й он що ч А, х
Кая чі мч
Го п
НХ і і й Н
Їй Уж жд їх Бо м чн ши не - : а Ме а В А, Її і му і ЩІ В бод р ї- Н гу чі Я чик МЕ є ши КЕ В Ї ж ! Зм в Гук сакура ровно с дн на ї я ор с іх
НН щі ! 4 ве - ше Щщк ас
ТЯ Ох НЕ о а і в о З 4 ко с ї ІЗ З ве ДЦ : : де ан «Ж 3 ов і ї т КИ они МК
В дм оч В КН з х ї - шия З І й 7 Гесліврют йкуумай ше кн ї гос є маше чи п ча ча
Мой о ио я Я до мя шк й я шк ж р о й І БУ х ож ока НН Є - дн г ї дм су -? лк ку ! м г
ТУ Хімкрита вормак та
Ше Мне о їх ки б ЗК ек М й них ее б ка 4 зи хі ши ши ши ше і Пи КьН а зх
ТТБ пвдкрита ферм)
В одному варіанті здійснення І К являє собою зв'язок, утворений за допомогою аміногрупи антитіла АБ до пПВ7НЗ.
В одному варіанті здійснення І К являє собою амід або тіосечовину.
В одному варіанті здійснення ЇК являє собою зв'язок, утворений за допомогою сульфгідрильної групи антитіла АБ до пПВ7-НЗ.
В одному варіанті здійснення І К являє собою тіоеєтер.
В одному варіанті здійснення І К вибраний із групи, яка складається з аміду, тіосечовини і тіоетеру; і т являє собою ціле число в діапазоні від 1 до 8.
В одному варіанті здійснення ОО являє собою інгібітор Всі-хїі, який описаний у даному документі; І вибраний із групи, яка складається з лінкерів ІМа.1-ІМа.8, ІМБ.1-ІМБ.19, ІМс.1-ІМо.7,
Іма.1-іма.4, Ма.1-Ма.12, МБ.1-МБ.10, Мсо.1-Мс.11, мМа.1-ма.б, Ме.1-Ме.2, Міа.1, Міс.1-МІс.2, МІал- ма.4, МПа.1-МПа.4, МИБ.1-МИЬ.8 ії МИс.1-МІс.б, де кожний лінкер прореагував з антитілом, АБ, з утворенням ковалентно приєднаного фрагмента; І К являє собою тіоетер; і т являє собою ціле число в діапазоні від 1 до 8.
В одному варіанті здійснення О являє собою інгібітор Всі-хїі, вибраний із групи, яка складається з наступних сполук, модифікованих таким чином, що атом водню, який відповідає положенню Ж в структурній формулі (Па), (ПІБ), (Пс) або (Па), відсутній, при цьому утворюється монорадикал: 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-3-11-(3,5-диметил-7-2-
К2-сульфоетил)аміно|етоксиутрицикло!|3.3.1.13Лдец-1-ил)метилі|-5-метил-1 Н-піразол-4- іл)піридин-2-карбонова кислота; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-11-(3-2-К(2- карбоксиетил)аміно|етокси)-5,7-диметилтрициклої3.3.1.127|дец-1-ил)метил|-5-метил-1 Н-піразол- 4-ілупіридин-2-карбонова кислота; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)нафталін-2-іл|-3-11-(3,5-диметил-7-2-(2- сульфоетил)аміно|етоксиутрицикло!3.3.1.157)дец-1-ил)метилі|-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)піридин-2- карбонова кислота; 1-Щ2-(13-((4-16-І(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-2- карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1-ілуметил)|-5, 7-диметилтрицикло!|3.3.1.157)дец-1- илюкси)етиліаміно)-1,2-дидезокси-О-арабіногексит; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-(1-113-(2-(З-гідрокси-2- (гідроксиметил)пропіл|іаміно)етокси)-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.15|дец-1-ил|метил)-5-метил- 1Н-піразол-4-іл)піридин-2-карбонова кислота і 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-3-(1-13-(2-((35)-3,4- дигідроксибутил|аміно)етокси)-5,7-диметилтрицикло!Ї3.3.1.127)дец-1-ил|метил)-5-метил-1 Н- піразол-4-іл)упіридин-2-карбонова кислота;
Ї вибраний із групи, яка складається з лінкерів ІМБ.2, ІМс.5, ІМо.6, ІМо.7, ІМа.4, Мр.9, Мс.11,
МПа.1, МПа.3, Міїс.1, Міс.4 і МіІс.5 у закритій формі або відкритій формі;
ЇК являє собою тіоетер; і т являє собою ціле число в діапазоні від 2 до 4.
В одному варіанті здійснення АОС вибраний із групи, яка складається із формул і-мі: охуимна Ав
МН З т ї С зве о-57ОН но о н ом о
Кф М зм вана
Шосе
М. и ТОН бо і А из нм о м
З
(І),
Зо оху чн, А дь
МН о С ною т о-57ОН н о ц нм" Зо
М по оснавава
М. щи ТОН жи о
Її я ст нм" о М 4 ї
З
(і), о дЬ о ох ,оН но о 5 Ач ща ль ще Й парад нм о Ж 7 ор Ф) ІФ) (Ф) в М о ій о о он 7 тон он он (ії), о о дЬ о ох ,ОН нот н о У ув т
М. им ОН Я шк шк но ще р. ол о що нм" Зо См о ло мав М й Й о ори с о А он б Сон он он (ім), он () (9) що н Е о н Ї й
М пе он вав М 8 що р я ор о Ге о
Мав М щі ій о о Сон тон он он (Мі т (о) А он нм" Зо й ер
А но о й
МТ М и о - ок
Ге! - ОН о он он он (м), де т являє собою ціле число від 1 до 6. В одному варіанті здійснення АБ являє собою антитіло до пПВ7-НЗ, де антитіло до ПВ7-НЗ містить домен СОКЗ важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІО МО: 35, домен СОК2 важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під ЗЕО ІЮ МО: 34, і домен СОКІ важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮ МО: 33; і домен СОКЗ легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під ЗЕО ІЮО МО: 39, домен СОК2 легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО 10
МО: 38, і домен СОК'І легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під
ЗЕО ІО МО: 37. В одному варіанті здійснення Ар являє собою антитіло до ПВ7-НЗ, де антитіло до ПВ7-НЗ містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮ МО: 147, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮО МО: 144. В одному варіанті здійснення АБ являє собою антитіло до пПВ7-НЗ, де антитіло до ПВ7-НЗ містить константну ділянку важкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮ МО: 160, та/або константну ділянку легкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність, викладену під
ЗЕО ІЮО МО: 161. В одному варіанті здійснення АБ являє собою антитіло до ПВ7-НЗ, де антитіло до ПВ7-НЗ містить важкий ланцюг, який містить амінокислотну послідовність, викладену під БЗЕО
ІО МО: 168, і легкий ланцюг, який містить амінокислотну послідовність, викладену під ЗЕО ІЮ
МО: 169. В одному варіанті здійснення Ар являє собою антитіло до пПВ7-НЗ, де антитіло до пВ7-
НЗ містить домен СОКЗ важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під ЗЕО ІЮО МО: 12, домен СОК2 важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під ЗЕО ІЮ МО: 140, ії домен СОК1І важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮО МО: 10; ії домен СОКЗ легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під зЕО ІЮ МО: 15, домен СОКа2 легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІО МО: 7, і домен СОКІ1 легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під ЗЕО ІО МО: 136. В одному варіанті здійснення АБ являє собою антитіло до ПВ7-НЗ, де антитіло до ПВ7-НЗ містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність, викладену під
ЗБО ІО МО: 139, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮ МО: 135. В одному варіанті здійснення Ар являє собою антитіло до ПВ7-НЗ, де антитіло до пПВ7-НЗ містить константну ділянку важкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність, викладену під ЗЕО ІЮ МО: 160, та/або константну ділянку легкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮ МО: 161. В одному варіанті здійснення АБ являє собою антитіло до ПВ7-НЗ, де антитіло до ПВ7-НЗ містить важкий ланцюг, який містить амінокислотну послідовність, викладену під ЗЕО ІЮ МО: 170, і легкий ланцюг, який містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮ МО: 171.
В одному варіанті здійснення т являє собою ціле число від 2 до 6. В одному варіанті здійснення т дорівнює 2.
В одному варіанті здійснення АОС містить антитіло до ПВ7-НЗ, що містить домен СОКЗ важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮ МО: 12, домен СОК2 важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО І
МО: 140, і домен СОК1 важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІО МО: 10; домен СОКЗ легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під ЗЕО ІЮ МО: 15, домен СОК2 легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під ЗЕО І МО: 7, і домен СОКІ легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під ЗЕО ІЮ МО: 136 або 138.
В одному варіанті здійснення АОС містить антитіло, що містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮО МО: 139, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність, викладену під зЕО ІЮО МО: 135.
В одному варіанті здійснення АОС містить антитіло, що містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮО МО: 139, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮ МО: 137.
В одному варіанті здійснення АЮС містить антитіло, яке містить домен СОКЗ легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під 5Е0 ІЮО МО: 39, домен СОК2 легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під ЗЕО ІЮО МО: 38, і домен СОКІТ легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО 10
МО: 37; і домен СОКЗ важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під ЗЕО І МО: 35, домен СОК2 важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮ МО: 34, і домен СОКІ важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під зЗЕО ІЮ МО: 33.
В одному варіанті здійснення АОС містить антитіло, що містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮО МО: 147, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність, викладену під ЗЕО ІЮО МО: 144.
В одному варіанті здійснення АЮС вибраний із групи, яка складається із пиАбБЗм2.5-С2, пиАрЗмМ2.5-ТХ, пиАБЗм2.5-ТМ, пиАБЗмМ2.5-ММ, пиАБЗм2.5-ААА, пиАБЗм2.5-ААО, пиАЬЗм2.6-С7, пиАрЗмМ2.6-ТХ, пиАБЗм2.6-ТМ, пиАБЗм2.6-УМ, пиАрЗмМ2.6-ААО, пиАБІЗм1-С7, пшАБІТЗмМ1-ТХ, пиАрІТЗм1-ТМ, пиАБІ1З3м1-УМ, пиАрІ1Зм1-АДА, пиАБ1З3м1-ААО, де С2, ТХ, ТМ, ХУ, ААА і ААО являють собою синтони, розкриті в таблиці В, і де кон'юговані синтони представлені у відкритій або закритій формі.
В одному аспекті даний винахід передбачає фармацевтичну композицію, яка містить ефективну кількість АОС, описаного в даному документі, ії фармацевтично прийнятний носій.
В іншому аспекті даний винахід передбачає фармацевтичну композицію, яка містить суміш
Зо АОС, що містить сукупність АОС, описаних у даному документі, і фармацевтично прийнятний носій.
В одному варіанті здійснення суміш АОС характеризується середнім співвідношенням лікарського засобу та антитіла (БАК), яке становить від 1,5 до 4.
В одному варіанті здійснення суміш АОС містить АОС, кожний із яких характеризується БАК, яке становить від 1,5 до 8.
В одному аспекті даний винахід передбачає спосіб лікування раку, який передбачає введення терапевтично ефективної кількості АОС, описаного в даному документі, суб'єкту, який потребує цього.
В одному варіанті здійснення рак вибраний із групи, яка складається із дрібноклітинного раку легенів, недрібноклітинного раку легенів, раку молочної залози, раку яєчників, гліобластоми, раку передміхурової залози, раку підшлункової залози, раку товстої кишки, раку шлунка, меланоми, гепатоцелюлярної карциноми, раку голови та шиї, раку нирок, лейкозу, наприклад гострого мієлоїдного лейкозу (АМІ), також лімфоми, наприклад неходжкінської лімфоми (МН).
В одному варіанті здійснення рак являє собою плоскоклітинну карциному. В одному варіанті здійснення плоскоклітинна карцинома являє собою плоскоклітинний рак легенів або плоскоклітинний рак голови та шиї.
В одному варіанті здійснення рак являє собою тричі негативний рак молочної залози.
В одному варіанті здійснення рак являє собою недрібноклітинний рак легенів.
В одному варіанті здійснення рак характеризується як такий, що несе мутацію, яка призводить до активації ЕСЕК. В одному варіанті здійснення мутація, яка призводить до активації ЕСЕК, вибрана із групи, яка складається з мутації, що являє собою делецію в екзоні 19, мутації, що являє собою одноточкову заміну І 858Е в екзоні 21, точкової мутації Т790М та їх комбінацій.
В одному аспекті даний винахід передбачає спосіб пригнічення або зниження темпу росту солідної пухлини у суб'єкта, який має солідну пухлину, при цьому вказаний спосіб передбачає введення ефективної кількості АОС, описаного в даному документі, суб'єкту, який має солідну пухлину, за рахунок чого ріст солідної пухлини інгібується або його темп знижується.
В одному варіанті здійснення солідна пухлина являє собою недрібноклітинну карциному бо легенів.
В одному варіанті здійснення АЮС вводять у комбінації з додатковими засобами або додатковою терапією.
В одному варіанті здійснення додатковий засіб вибраний із групи, яка складається з антитіла до РОТ (наприклад, пембролізумабу), антитіла до РО-І 1 (наприклад, атезолізумабу), антитіла до СТІ А-4 (наприклад, іпілімумабу), інгібітора МЕК (наприклад, траметинібу), інгібітора ЕВК, інгібітора ВВАЕ (наприклад, дабрафенібу), озимертинібу, ерлотинібу, гефітинібу, сорафенібу, інгібітора СОКУ (наприклад, динациклібу), інгібітора МСІ-1, темозоломіду, інгібітора Всі-2 (наприклад, венетоклаксу), інгібітора Всі-хЇ, ібрутинібу, інгібітора ттоОйА (наприклад, еверолімусу), інгібітора РІЗК (наприклад, бупарлісибу), дувелісибу, іделалісибу, інгібітора АКТ, інгібітора НЕВ2 (наприклад, лапатинібу), таксану (наприклад, доцетакселу, паклітакселу, наб- паклітакселу), АОС, який містить ауристатин, АОС, який містить РВО (наприклад ровалпітузумаб тесирину), АОС, який містить майтанзиноїд (наприклад, ТОМІ), агоніста ТВАЇ, інгібітора протеасом (наприклад, бортезомібу) та інгібітора нікотинамідфосфорибозилтрансферази (МАМРТ).
В одному варіанті здійснення АЮС до В7-НЗ за даним винаходом вводять у комбінації з венетоклаксом суб'єкту-людині для лікування дрібноклітинного раку легенів (501 0).
В одному варіанті здійснення додаткова терапія являє собою опромінення.
В одному варіанті здійснення додатковий засіб являє собою хіміотерапевтичний засіб.
В одному аспекті даний винахід передбачає спосіб одержання АОС згідно зі структурною формулою (1): (І) | б- Я - -- к -| ль т де
Ор являє собою лікарський засіб, який являє собою інгібітор Всі-хі. формули (Па), (ППБ), (Пс) або (Па), розкритої в даному документі;
Ї являє собою лінкер, розкритий у даному документі;
Ар являє собою антитіло до ПВ7-НЗ, де антитіло до пПВ7-НЗ містить СОЕ. важкого і легкого ланцюгів із пиАбЗм2.5, пиАБЗм2.6 або пиАБ13м1;
ЇК являє собою ковалентний зв'язок, який зв'язує лінкер І. з антитілом АБ; і т являє собою ціле число в діапазоні від 1 до 20. при цьому спосіб передбачає: обробку антитіла у водному розчині за допомогою ефективної кількості засобу, що відновлює дисульфідні зв'язки, при 30-40" протягом щонайменше 15 хвилин, а потім охолодження розчину антитіла до 20-27"; додавання до розчину відновленого антитіла розчину води/диметилсульфоксиду, який містить синтон, вибраний із групи 2.1-2.176 (таблиця В); регулювання рН розчину до значення рН, що становить 7,5-8,5; забезпечення протікання реакції протягом 48-80 годин з утворенням АОС; де маса змінюється на 18ж2а.0.м. для кожного випадку гідролізу сукциніміду до сукцинаміду, як виміряно за допомогою мас-спектрометрії з іонізацією розпилюванням в електричному полі; та де АОС необов'язково очищують за допомогою хроматографії гідрофобної взаємодії.
В одному варіанті здійснення т дорівнює 2.
В іншому аспекті даний винахід передбачаєдОС, одержаний за допомогою способу, описаного вище.
Короткий опис графічних матеріалів
На фіг. 1 показано графічне зображення групування епітопів гібридомних антитіл до мишачого В7-НЗ, як визначено за допомогою попарних експериментів зі зв'язування.
На фіг. 2 показано відновлення антитіла, модифікація за допомогою похідної малеїіміду з одержанням тіосукцинімідної проміжної сполуки і подальшого гідролізу тіосукцинімідного фрагмента.
На фіг. З показана структура АОС, який являє собою антитіло-малеімідокапроїл-ус-РАВА-
ММАЕ.
На фіг. 4 показана структура димера РВО (5650-1882), кон'югованого з антитілом (АБ) за допомогою малеімідокапроїл-валін-аланінового лінкера (у сукупності називаного 5050-1910).
На фіг. 5 показана характеристика за допомогою М5 легкого ланцюга і важкого ланцюга
ПиАБІЗ3М1 1) перед кон'югацією; 2) після кон'югації з похідною малеіїміду з одержанням тіосукцинімідної проміжної сполуки і З) опосередкованого значенням рн ав гідролізу тіосукцинімідного кільця.
Докладний опис винаходу
Різноманітні аспекти даного винаходу стосуються антитіл до В7-НЗ і фрагментів антитіл,
АОС до В7-НЗ і фармацевтичних композицій на їх основі, а також нуклеїнових кислот, рекомбінантних векторів експресії і клітин-хазяїв для одержання таких антитіл і фрагментів.
Також даним винаходом охоплені способи застосування антитіл, фрагментів і АОС, описаних у даному документі, для виявлення В7-НЗ людини, пригнічення активності В7-НЗ людини (іп міго або іп мімо) і для лікування видів раку. У певних варіантах здійснення даний винахід передбачає
АС до В7-НЗ, у тому числі АС, які містять інгібітори Всі-хЇ, синтони, придатні для синтезу
АБС, композиції, які містять АОС, способи одержання АОС і різноманітні способи застосування
Ар.
Як буде зрозуміло фахівцям у даній галузі, розкриті в даному документі АОС є "модульними" за своєю природою. У всьому даному винаході описані різні конкретні варіанти здійснення різних "модулів", що містять АЮС, а також синтонів, застосовуваних для синтезу АОС. Як конкретні необмежувальні приклади описані конкретні варіанти здійснення антитіл, лінкерів та інгібіторів Всі-хІ, які можуть містити АОС та синтони. Передбачається, що всі описані конкретні варіанти здійснення можна комбінувати один з одним так, якби кожна конкретна комбінація була явно описана окремо.
Фахівцям у даній галузі також буде зрозуміло, що різноманітні описані в даному документі
АОС та/або синтони АЮС можуть бути представлені у формі солей, а у певних варіантах здійснення, у тому числі фармацевтично прийнятних солей. Сполуки за даним винаходом, які містять достатньо кислі, достатньо основні або як ті, так і інші функціональні групи, можуть реагувати з будь-яким із ряду неорганічних основ, а також неорганічних і органічних кислот з утворенням солі. Альтернативно, сполуки, які за своєю природою є зарядженими, наприклад, сполуки із четвертинним атомом азоту, можуть утворювати сіль з відповідним протиіїоном, наприклад, галогенідом, таким як бромід, хлорид або фторид.
Зо Кислоти, зазвичай використовувані для утворення солей приєднання кислоти, являють собою неорганічні кислоти, такі як хлористоводнева кислота, бромистоводнева кислота, йодистоводнева кислота, сірчана кислота, фосфорна кислота тощо, та органічні кислоти, такі як п-толуолсульфонова кислота, метансульфонова кислота, щавлева кислота, п- бромфенілсульфонова кислота, вугільна кислота, бурштинова кислота, лимонна кислота тощо.
До солей приєднання основи належать солі, одержані з неорганічних основ, таких як гідроксиди, карбонати, бікарбонати тощо амонію та лужних або лужноземельних металів.
У даному винаході нижче у випадку, якщо включені як структурні схеми, так і номенклатура, та номенклатура суперечить структурній схемі, дана структурна схема має переважну силу.
Нижче наведена схема докладного опису даного винаходу.
І. Визначення
ІЇ. Антитіла до В7-НЗ
І.А. Химерні антитіла до В7-НЗ
І.В. Гуманізовані антитіла до В7-НЗ
ІП. Кон'югати антитіла до В7-НЗ і лікарського засобу (АОС)
Ш.А. АС з антитілом до В7-НЗ/інгібітором Всі-х!.
ІШ.А.1. Інгібітори Всі-х!.
Ш.А.2 Лінкери Всі-х!.
Розщеплювані лінкери
Нерозщеплювані лінкери
Групи, застосовувані для приєднання лінкерів до антитіл до В7-НЗ
Міркування щодо вибору лінкера
Ш.А.3. Синтони АОС з Всі-х!.
Ш.А.4 Способи синтезу АОС з Всі-х!.
ІШ.А.5. Загальні способи синтезування інгібіторів Всі-х!.
І.А.6. Загальні способи синтезу синтонів
ІШ.А.7. Загальні способи синтезування АОС до В7-НЗ
ІШ.В. АОС до В7-НЗ: інші зразкові лікарські засоби для кон'югації
Ш.С. АОС до В7-НЗ: інші зразкові лінкери
ІМ. Очищення АОС до В7-НЗ 60 М. Застосування антитіл до В7-НЗ ії АОС до В7-НЗ
МІ. Фармацевтичні композиції
І. Визначення
Для більш легкого розуміння даного винаходу спочатку наведені визначення деяких термінів. Крім того, слід зазначити, що у всіх випадках перерахування значення або діапазону значень параметра передбачають, що значення й діапазони, проміжні стосовно перерахованих значень, також передбачаються як частина даного винаходу.
Під "антитілом до В7-НЗ" мають на увазі антитіло, яке специфічно зв'язується з В7-НЗ.
Антитіло, "яке зв'язує" антиген, що становить інтерес, тобто В7-НЗ, є таким, яке здатне зв'язувати даний антиген з достатньою афінністю, завдяки чому антитіло придатне для націлювання на клітину, яка експресує антиген. У переважних варіантах здійснення антитіло специфічно зв'язується з В7-НЗ людини (п87-НЗ). Приклади антитіл до В7-НЗ розкриті в прикладах нижче. Якщо не вказано інше, то мають на увазі, що термін "антитіло до В7-НЗ" стосується антитіла, яке зв'язується з В7-НЗ дикого типу (наприклад, ізоформою 4І987-НЗ В7-
НЗ) або будь-яким варіантом В7-НЗ. Амінокислотна послідовність людського В7-НЗ дикого типу представлена нижче під 5Е0О ІЮ МО: 149, де підкреслений сигнальний пептид (амінокислотні залишки 1-28).
МІ ВАВаЗРЕМОИаМУНнНМсСААІ СА МЕССІ ТА ЕМОМРЕОРУМАЇ МАТОАТІ ССЗЕЗРЕРСЕБІ АОЇ
МЕМОГТОТКОЇ МНЗЕАЕСОрОСЗАМАМАТАЇ ЕРОГ Г АОСМАБІ ВІ ОВМАМАВЕОаЗЕТСЕМ5ІВОБОИа
ЗААУБІ ОМААРУЗКРОМТІ ЕРМКОЇ АРОЮТМУТІТС55МОСУРЕАЕМЕМУОРрИадСаМУРІ ТаММТТЗОМА
МЕССІ РЕОМНОБІЇ ВУМІ ЧАМатиСЇ МАМРМІ ООВАНЗОЗМТІТРОВЗРТЕАМЕМОМРЕОВРУМАЇ МОТО
АТІ ВСЗЕЗРЕРСОЕБІ АОЇ МИМО ТОТКОЇ МНЗЕТЕСАрОСЗАМАМВАТАГ ЕРОЇГ ГГ АОСОСМАБІ ВГ ОВУ
ВМАРЕСЗЕТСЕМ5ІВОРИаЗААМУБІ ОМААРУЗКРОМТІ ЕРМКОЇ ВРИЮТМТІТС55Х9УВаМРЕАЕМЕМО раорасмуРІ/ ТаМуУТТ5ОМАМЕОСИІ єЕОУН5ЗМІ ВУМ ЧОАМаТУСЇ МАМРМ ООВАНИаЗМТІТаОРМТЕР
РЕА МУТМаї МСАТ МАГ АРМСУУАКІКОЗСЕЕЕМАСАЕРОРСЕСЕСЗКТАГ ОРІ КНІЗОЗКЕВОС
ОЕІА (5ЕО ІЮ МО: 149)
Таким чином, в одному варіанті здійснення даного винаходу антитіло або АОС зв'язує В7-НЗ людини, який визначений під 5ЕО ІЮ МО: 149. Позаклітинний домен (ЕСО) В7-НЗ людини представлений під БЕО ІЮ МО: 152 (з урахуванням Нів-мітки). Таким чином, в одному варіанті здійснення за даним винаходом антитіло з АОС зв'язує ЕСО В7-НЗ людини, який описаний в
Зо ЕСО під 5ЕО ІО МО: 152.
Терміни "специфічне зв'язування" або "специфічно зв'язується", використовувані в даному документі щодо взаємодії антитіла або АОС із другою хімічною молекулою, означають, що взаємодія залежить від наявності конкретної структури (наприклад, антигенної детермінанти або епітопу) на хімічній молекулі; наприклад, антитіло розпізнає специфічну білкову структуру та зв'язується з нею, а не з білками в цілому. Якщо антитіло або АОС є специфічним щодо епітопу "А", то наявність молекули, що містить епітоп А (або вільного неміченого А), у реакції, в якій беруть участь мічений "А" й антитіло, буде знижувати кількість міченого А, що зв'язується з антитілом або АОС. Як приклад, антитіло "специфічно зв'язується" з мішенню, якщо антитіло, у випадку, коли воно є міченим, може конкурувати далеко від його мішені з відповідним неміченим антитілом. В одному варіанті здійснення антитіло специфічно зв'язується з мішенню, наприклад В7-НЗ, якщо антитіло характеризується Ко до мішені, яка становить щонайменше приблизно 107 М, 105 М, 105 М, 107 М, 109 М, 109 М, 1079 М, 10-11 М, 1072 М або менше (менше значення, яке є меншим за 10-72, наприклад 10-53). В одному варіанті здійснення термін "специфічне зв'язування з В7-НЗ" або "специфічно зв'язується з В7-НЗ", використовуваний у даному документі, стосується антитіла або АОС, які зв'язуються з В7-НЗ і характеризуються константою дисоціації (Ко), яка становить 1,0 х 10-7 М або менше, як визначено за допомогою поверхневого плазмонного резонансу. Однак слід розуміти, що антитіло або АОС можуть бути здатні специфічно зв'язуватися із двома або більш антигенами, спорідненими за послідовністю.
Наприклад, в одному варіанті здійснення антитіло може специфічно зв'язуватися з ортологами
В7-НЗ як такими, що належать до ортологів людини, так і такими, що не належать до ортологів людини (наприклад, миші або відмінного від людини примата).
Термін "антитіло" стосується молекули імуноглобуліну, яка специфічно зв'язується з антигеном та містить важкий(важкі) (Н) ланцюг(ланцюги) і легкий(легкі) (3 ланцюг(ланцюги).
Кожний важкий ланцюг складається з варіабельної ділянки важкого ланцюга (скорочено позначуваної в даному документі як НСМК або МН) і константної ділянки важкого ланцюга.
Константна ділянка важкого ланцюга складається із трьох доменів: СНІ, СН2 ії СНЗ. Кожний легкий ланцюг складається з варіабельної ділянки легкого ланцюга (скорочено позначуваної в даному документі як СМ або МІ) і константної ділянки легкого ланцюга. Константна ділянка легкого ланцюга складається з одного домену - Сі. МН- і Мі-ділянки можуть додатково 60 підрозділятися на ділянки гіперваріабельності, які називаються ділянками, що визначають комплементарність (СОК), які перемежовуються з ділянками, що є більш консервативними, які називаються каркасними ділянками (ЕК). Кожна МН і МІ. складається із трьох СОК і чотирьох
ЕК, розташованих від амінокінця до карбоксильного кінця у наступному порядку: ЕКТ, СОМ,
ЕН2г, СОН2г, ЕВЗ, СОКЗ, ЕКА4. Антитіло може належати до будь-якого типу (наприклад, дос, ІДЕ,
ІЗМ, дО, ІдА і Ід), класу (наприклад, Іде, Іде2, Іде, Ідея, ІДА1 і ІдДА2) або підкласу.
Хоча термін "антитіло" не має на увазі включення антигензв'язувальних частин антитіла (певних нижче), у певних варіантах здійснення мається на увазі включення невеликої кількості делецій амінокислот з карбоксильного кінця важкого(важких) ланцюга(ланцюгів). В одному варіанті здійснення антитіло містить важкий ланцюг, що має 1-5 делецій амінокислот з карбоксильного кінця важкого ланцюга. В одному варіанті здійснення антитіло являє собою моноклональне антитіло, яке являє собою до із чотирма поліпептидними ланцюгами, двома важкими (Н) ланцюгами і двома легкими (І ланцюгами), які можуть зв'язуватися із пПВ7-НЗ. В одному варіанті здійснення антитіло являє собою моноклональное антитіло Їдс, що містить легкий лямбда- або каппа-ланцюг.
Використовуваний в даному документі термін "антигензв'язувальна частина" або "антигензв'язувальний фрагмент" антитіла (або просто "частина антитіла" або "фрагмент антитіла") означає один або декілька фрагментів антитіла, які зберігають здатність специфічно зв'язуватися з антигеном (наприклад, пВ7-НЗ). Було показано, що антигензв'язувальну функцію антитіла можуть здійснювати фрагменти повнорозмірного антитіла. Такі варіанти здійснення антитіла також можуть мати формати біспецифічного антитіла, антитіла з подвійною специфічністю або мультиспецифічного антитіла; в яких вони специфічно зв'язуються із двома або більше різними антигенами. Приклади зв'язувальних фрагментів, охоплюваних терміном "антигензв'язувальна частина" антитіла, включають (ї) гар-фрагмент, моновалентний фрагмент, що складається з МІ -, МН-, СІ - і СН1-доменів; (і) Е(аб)2-фрагмент, бівалентний фрагмент, що містить два ЕРар-фрагменти, зв'язані дисульфідним містком у шарнірній ділянці; (ії) га- фрагмент, що складається з МН- і СНІ1-доменів; (ім) Ем-фрагмент, що складається з Мі- і МН- доменів одного плеча антитіла, (м) ЧАБ-фрагмент (Умага еї а!ї., (1989) Майте 341:544-546, М/іпіег еї аІ., РСТ-публікація УМО 90/05144 АТ, включена в даний документ за допомогою посилання), який містить один варіабельний домен; та (мі) виділену ділянку, що визначає комплементарність (СОК). Крім того, хоча два домени Ем-фрагмента, МІ та МН, кодуються окремими генами, їх можна з'єднати із застосуванням рекомбінантних способів за допомогою синтетичного лінкера, який дозволяє одержувати їх у вигляді єдиного білкового ланцюга, в якому Мі- і МН-ділянки утворюють пари з формуванням моновалентних молекул (відомих як одноланцюговий Ем (зсЕм); див., наприклад, Віга еї а. (1988) бсіеєпсе 242:423-426 та Низюп еї а!. (1988) Ргос. Маї). Асад. 5сі.
ИБА 85:5879-5883). Мається на увазі, що такі одноланцюгові антитіла також охоплюються терміном "антигензв'язувальна частина" антитіла. У певних варіантах здійснення даного винаходу молекули 5сЕм можуть бути включені до складу злитого білка. Також охоплюються інші форми одноланцюгових антитіл, такі як діатіла. Діатіла являють собою бівалентні біспецифічні антитіла, у яких МН- і МІ -домени експресуються в одному поліпептидному ланцюзі, але з використанням лінкера, який є занадто коротким, щоб забезпечити можливість утворення пари між двома доменами одного ланцюга, що тим самим змушує домени утворювати пари з комплементарними доменами іншого ланцюга та приводить до створення двох антигензв'язувальних ділянок (див., наприклад, Ноїїдег, Р., еї аіІ. (1993) Ргос. Маї). Асад. 5сі.
ИБА 90:6444-6448; РоЦак, В.9., єї аї. (1994) Зтисіште 2:1121-1123). Такі зв'язувальні частини антитіл відомі з рівня техніки (Копіептапп апа Юибреї! єдв., Апіїбоду Епдіпеегіпу (2001) бргіпдег-
Мепад. Мем Могк. 790 рр. (ІЗВМ 3-540-41354-5).
ІДС; являє собою клас антитіл, що містять два важкі ланцюги та два легкі ланцюги, розташовані у формі У. Константний домен Ідсї означає константний домен важкого або легкого ланцюга. Зразкові амінокислотні послідовності константних доменів важкого ланцюга і легкого ланцюга Ідсї людини відомі з рівня техніки і представлені нижче в таблиці А.
Таблиця А
Послідовності константних доменів важкого ланцюга і константних доменів легкого ланцюга дО людини
Ідентифі-
Білок катор Послідовність послідов- ності
АБТКОаРОМЕРІ АРОБКОТ5ИастААасСІі МКЩОМЕРЕРУТУБМУММЗСОАЇІ Т5
СМНТЕРАМІ О55(01І М5І 55 МРБББІ ИаТОТМІСМУМНКРОМТКУОКК
Констант- МЕРК5СОКТНТСРРСОРАРЕЇГЇ СОаРБУРБІ ЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМТСУММ на ділянка! 5ЕО І. | ОМОНЕОРЕМКЕММУ УМО МЕМНМАКТКРАЕЄОСУМОТУВУМ5МІ ТМ НОЮ гамма-1 МО:159 |МІ МОКЕУКСКМУ5МКАЇ РАРІЕКТІЗКАКОИОРАЕРОМУТІ РРОВЕЕМТКМО ланцюга Ід МІ ТС МКОЕМРООІАМЕМЕЗМООРЕММУКТТРРМІ О5БОСЗЕРІ КІСТУ оКБВАУМОССММЕЗСВУМНЕАЇІ НМНУТОКОІ 5І 5РОК
АБТКОаРБОМЕРІ АРОБКОТ5ОаСТААГ СС МКОМЕРЕРУТУБММЗОАЇ Т
Мутантна ЗОМНТЕРАМІ 05501 М5І 55 МТ УРББІ СТО МІСМММНКРОМТКМОК константна КМЕРКЗСОКТНТОРРСОРАРЕАДАСОИРБУРІ ЕРРКРКОТІ МІБАТРЕМТС - ЗЕО ІЮ. | МУМОМ5НЕОРЕМКЕМУ УМО М ЕМНМАКТКРАЕЕСУМОТУВУМБМІ ТМ гамма. |) МОЛ60 НОРУЛМСКЕУКСКУЗМКАЇ РАРІЕКТІЗКАКООРВЕРОМУТІ РРОВЕЕ ланцюга Ід МІТКМОМ5І ТОЇ МКОЕМРООІАМЕМ ЕБМСОРЕММУКТТРРМІ ОБОСОБЕЕ
ГУК ТМОК5АМОСОММЕЗСЗУМНЕАЇІ НМНУТОКОБІ 5І РОК
Констант- на ділянка. ЗЕО ІЮ ВТМААРБМРІЕРРБОЕБОЇ К5атАБМУМСІ ЇЇ ММЕМРАЕАКМОМКМОМА каппа- МО-161 ГОБаМ5ОЕЗМТЕОО5БКОБЗТУБІ 55111 ТІ БКАОМЕКНКУМАСЕМТНО
І СІ 55РУТК5ЕМАОаЕС ланцюга Ід
Констант- ОРКААРБМТІ ЕРРОБЕЕЇ ОАМКАТІ МС ІЗОЕУРЕАМТМАМУКАОБ5 на ділянка 5ЕО ІЮ. | РУКАСМЕТТТРОКОЗММКМААБОМІ 5І ТРЕОСМКОЗНАЗУЗСОМТНЕС лямбда- МО:162 | з ТМЕКТМАРТЕС5 ланцюга Ід
Мається на увазі, що термін "виділене антитіло", використовуваний у даному документі, означає антитіло, яке практично не містить інших антитіл з відмінними видами антигенної специфічності (наприклад, виділене антитіло, яке специфічно зв'язує В7-НЗ, практично не містить антитіл, які специфічно зв'язують антигени, відмінні від В7-НЗ). Однак виділене антитіло, яке специфічно зв'язує В7-НЗ, може характеризуватися перехресною реактивністю щодо інших антигенів, таких як молекули В7-НЗ від інших видів. Більше того, виділене антитіло може по суті не містити інших клітинних матеріалів та/або хімічних речовин.
Термін "гуманізоване антитіло" стосується антитіл, які містять послідовності варіабельної ділянки важкого та легкого ланцюгів від видів, відмінних від людини (наприклад, миші), але в яких щонайменше частина послідовності УН та/або МІ. була змінена так, щоб вона була більш "схожою на людську" тобто більш подібною до варіабельних послідовностей людини зародкового типу. Зокрема, термін "гуманізоване антитіло" означає антитіло або його варіант, похідне, аналог або фрагмент, який імуноспецифічно зв'язується з антигеном, що становить інтерес, та який містить каркасну (ЕК) ділянку з амінокислотною послідовністю, яка по суті є послідовністю антитіла людини, та ділянку, що визначає комплементарність (СОК), з амінокислотною послідовністю, яка по суті є послідовністю антитіла від виду, відмінного від людини. Використовуваний у даному документі термін " по суті" у контексті СОК стосується СОК з амінокислотною послідовністю, яка щонайменше на 8095, переважно щонайменше на 8595, щонайменше на 9095, щонайменше на 9595, щонайменше на 9895 або щонайменше на 99965 ідентична амінокислотній послідовності СОК з антитіла від виду, відмінного від людини.
Гуманізоване антитіло містить по суті всі з щонайменше одного та, як правило, двох варіабельних доменів (Бар, Раб, Е(ар)г, Барс, Ем), в яких усі або по суті всі СОК-ділянки відповідають СОК-ділянкам з імуноглобуліну від виду, відмінного від людини (тобто донорного антитіла), і всі або по суті всі каркасні ділянки являють собою каркасні ділянки з консенсусною послідовністю імуноглобуліну людину. Гуманізоване антитіло також переважно містить щонайменше частину константної ділянки (Ес) імуноглобуліну, як правило, імуноглобуліну людини. У деяких варіантах здійснення гуманізоване антитіло містить як легкий ланцюг, так і щонайменше варіабельний домен важкого ланцюга. Антитіло також може містити СНІ1-, шарнірну, СН2-, СНЗ- і СНаі-ділянки важкого ланцюга. У деяких варіантах здійснення гуманізоване антитіло містить тільки гуманізований легкий ланцюг. В інших варіантах здійснення гуманізоване антитіло містить тільки гуманізований важкий ланцюг. У конкретних варіантах здійснення гуманізоване антитіло містить тільки гуманізований варіабельний домен легкого ланцюга та/або гуманізований важкий ланцюг.
Гуманізоване антитіло може бути вибране з будь-якого класу імуноглобулінів, у тому числі
ІаМ, да, 940, ІдА та ІЗЕ, та будь-якого ізотипу, у тому числі без обмеження Іда1, Ідс2, ІдДИЗ і
Ідс4. Гуманізоване антитіло може містити послідовності з більш ніж одного класу або ізотипу, та для оптимізації бажаних ефекторних функцій можуть бути вибрані конкретні константні домени із застосуванням методик, добре відомих з рівня техніки.
Терміни "нумерація за Кабаї", "визначення за Кабаї" і "мічення за Кабаї" використовуються в даному документі взаємозамінно. Ці терміни, які прийняті в даній галузі техніки, означають систему нумерації амінокислотних залишків, які Є більш варіабельними (тобто гіперваріабельними), ніж інші амінокислотні залишки у варіабельних ділянках важкого та легкого ланцюгів антитіла або його антигензв'язувальної частини (КаБбаї еї аї. (1971) Апп. ММ Асай, 5сі. 190:382-391 та Кабраї, Е.А., єї аї. (1991) бедиепсев ої Ргоїєїп5 ої Іттипоіодіса! Іпієтеві, Ей
Еайіоп, 0.5. Оераптепі ої Неайй апа Нитап 5егмісев, МІН Рибіїсайоп Мо. 91-3242). У випадку варіабельної ділянки важкого ланцюга гіперваріабельна ділянка розташована в межах амінокислотних положень 31-35 для СОВ1, амінокислотних положень 50-65 для СОН2 та амінокислотних положень 95-102 для СОНЗ. У випадку варіабельної ділянки легкого ланцюга гіперваріабельна ділянка розташована в межах амінокислотних положень 24-34 для СОН, амінокислотних положень 50-56 для СОНАО та амінокислотних положень 89-97 для СОВЗ.
Використовуваний у даному документі термін "СОК" означає ділянку, що визначає комплементарність, у межах варіабельних послідовностей антитіла. У кожній варіабельній ділянці важкого ланцюга (НС) і легкого ланцюга (ІС) є по три СОК, які позначаються як СОКІ,
СОР ії СОКЗ (або, зокрема, СОКІ НС, СОК2 НС, СОМЗ НС, СОК1Т ІС, СОК2І1С і СОКЗ ІС) у
Зо кожній варіабельній ділянці. Використовуваний у даному документі термін "набір СОК" означає групу із трьох СОК, які перебувають в одній варіабельній ділянці, здатній зв'язувати антиген.
Точні межі цих СОК були по-різному визначені в різних системах. Система, описана Кабаї (Кабаї еї аїЇ., Зедиеєпсе5 ої Ргоївіп5 ої Іттипоіодіса! Іпієтеві (Майопа! Інбійшев ої Неайй,
ВеїШезаа, Ма. (1987) ї (1991)), не тільки забезпечує однозначну систему нумерації залишків, застосовну до будь-якої варіабельної ділянки антитіла, але також забезпечує позначення точних границь залишків, що визначають три СОНЯ. Ці СОВА можуть позначатися як СОВ за
Кабваї. Споїніа та співробітники (Споїніа 4 евкК, 9. Мої. Віо!І. 196:901-917 (1987) та Споїніа еї аї.,
Маїшцге 342:877-883 (1989)) виявили, що певні субфрагменти в межах СОВ за Кабаї ухвалюють практично ідентичні конформації пептидного кістяка, незважаючи на те, що характеризуються більшою різноманітністю на рівні амінокислотної послідовності. Ці субфрагменти були позначені яЯкІ1,12і1І3 або НІ, Н2 ії НЗ, де "І" ї "Н" означають відповідно ділянки легкого ланцюга та важкого ланцюга. Ці ділянки можуть позначатися як СОВА за СпПоїнпіа, які мають межі, що перекриваються з СОВ за КаБбаї. Інші межі, що визначають СОВ, які перекриваються з СОВ згідно з Караї, були описані в Радіап (ЕАБЕВ у. 9:133-139 (1995)) і МасСайшит (У Мої! Віої 262(5):732-45 (1996)). Межі СОК згідно з іншими визначеннями можуть не строго дотримуватись однієї з перерахованих вище систем, проте, будуть перекриватися з СОК за Кабаї, хоча вони можуть бути вкорочені або подовжені у світлі прогнозів або експериментальних відомостей про те, що конкретні залишки або групи залишків або навіть СОК у цілому значно не впливають на зв'язування антигена. У способах, застосовуваних у даному документі, можуть використовуватися СОК, визначені відповідно до кожної із цих систем, хоча в переважних варіантах здійснення застосовуються СОБК, визначені за Кабраї або Споїпіа.
Використовуваний у даному документі термін "каркасна ділянка" або "послідовність каркасної ділянки" означає інші послідовності варіабельної ділянки за винятком СОН. Оскільки точне визначення послідовності СОВА може бути обумовлене різними системами, то значення виразу "послідовність каркасної ділянки" встановлюється відповідно до різних інтерпретацій.
Шість СОВ (СОВ-11, СОВ-12 ї СОВ-Ї З легкого ланцюга та СОВ-НІ, СОВ-Н2 і СОВ-НЗ важкого ланцюга) також ділять каркасні ділянки легкого ланцюга та важкого ланцюга на чотири під- ділянки (ЕВТ, ЕН2, ЕВЗ ї ЕН4) у кожному ланцюзі, в яких СОВІ розташована між ЕВІ1 ії ЕН2,
СОВ2 між ЕН2 і ЕВЗ, а СОВЗ між ЕВЗ і ЕН4. Без зазначення конкретних під-ділянок, таких як 60 ЕВ, ЕВ2, ЕВНЗ або ЕВ4, каркасна ділянка, як позначено в інших випадках, представляє об'єднані ЕК у межах варіабельної ділянки одного ланцюга імуноглобуліну, що зустрічається в природі. Використовуваний у даному документі вираз "одна ЕВ" представляє одну із чотирьох під-ділянок, а "декілька ЕВ" представляють дві або більше із чотирьох під-ділянок, що складають каркасну ділянку.
Каркасна і СОВ-ділянки гуманізованого антитіла не повинні точно відповідати вихідним послідовностям, наприклад, СОВ донорного антитіла або консенсусна каркасна ділянка можуть бути піддані мутагенезу шляхом заміни, вставки та/або делеції щонайменше одного амінокислотного залишку таким чином, що залишок СОВ або каркасної ділянки в даній ділянці не відповідає ні донорному антитілу, ні консенсусній каркасній ділянці. Однак, у переважному варіанті здійснення такі мутації не будуть розповсюдженими. Зазвичай, щонайменше 8095, переважно щонайменше 8595, білош переважно щонайменше 9095 і найбільше переважно щонайменше 9595 залишків у гуманізованому антитілі будуть відповідати залишкам у послідовностях вихідних ЕР і СОВ. Використовуваний у даному документі термін "консенсусна каркасна ділянка" стосується каркасної ділянки в консенсусній послідовності імуноглобуліну.
Використовуваний у даному документі термін "консенсусна послідовність імуноглобуліну" стосується послідовності, утвореної з амінокислот, що найбільш часто зустрічаються (або нуклеотидів) у родині споріднених послідовностей імуноглобуліну (див. Наприклад,, М/іппакег",
Егот Сепез Юю Сіопез (МепадздезеїІзсНнай, М/єіпнєїт, Септапу 1987)). У родині імуноглобулінів кожне положення в консенсусній послідовності зайняте амінокислотою, яка зустрічається найбільш часто в даному положенні у даної родини. Якщо дві амінокислоти зустрічаються з однаковою частотою, кожна з них може бути включена в консенсусну послідовність.
Мається на увазі, що термін "акцепторна каркасна ділянка людини", використовуваний у даному документі, стосується каркасної ділянки антитіла або його фрагмента, які містять амінокислотну послідовність МН або МІ каркасної ділянки, одержаної з антитіла людини або його фрагмента, або консенсусну послідовність каркасної ділянки людини, в яку можуть бути включені СОВ від видів, відмінних від людини.
Вираз "відсоток (95) ідентичності амінокислотної послідовності" щодо пептидної або поліпептидної послідовності визначається як процентна частка амінокислотних залишків у послідовності-кандидатові, які ідентичні амінокислотним залишкам у конкретній пептидній або поліпептидній послідовності після вирівнювання послідовностей і, за необхідності, введення гепів для досягнення максимального відсотка ідентичності послідовностей і без урахування жодних консервативних замін як частини ідентичності послідовностей. Вирівнювання для цілей визначення відсотка ідентичності амінокислотної послідовності може бути досягнуте різними способами, які входять у компетенцію фахівця в даній галузі, наприклад, з використанням загальнодоступного комп'ютерного програмного забезпечення, такого як програмне забезпечення ВІ А5Т, ВІ АЄТ-2, АСОМ або Медаїїдп (ОМА5ТАВ). Фахівці в даній галузі можуть визначити відповідні параметри для вимірювання вирівнювання, у тому числі будь-які алгоритми, необхідні для досягнення максимального вирівнювання опо всій довжині порівнюваних послідовностей. В одному варіанті здійснення даний винахід охоплює амінокислотну послідовність, що характеризується щонайменше 8095, щонайменше 85905, щонайменше 9095, щонайменше 9595, щонайменше 9695, щонайменше 9795, щонайменше 9895 або щонайменше 9955 ідентичністю з амінокислотною послідовністю, викладеною під будь-яким із Ф«ЕО І МО: 1-148.
Термін "полівалентне антитіло" використовується в даному документі для позначення антитіла, що містить дві або більше антигензв'язувальні ділянки. У певних варіантах здійснення полівалентне антитіло може бути сконструйоване так, щоб воно мало три або більше антигензв'язувальні ділянки, і воно зазвичай являє собою антитіло, що не зустрічається в природі.
Термін "мультиспецифічне антитіло" стосується антитіла, здатного зв'язувати два або більше неспоріднених антигенів. В одному варіанті здійснення мультиспецифічне антитіло являє собою біспецифічне антитіло, яке здатне зв'язуватися з двома неспорідненими антигенами, наприклад біспецифічне антитіло або його антигензв'язувальну частину, які зв'язують В7-НЗ і СОЗ.
Термін "подвійний варіабельний домен" або "ОМО", використовуваний взаємозамінно в даному документі, являє собою антигензв'язувальні білки, які містять два або більше антигензв'язувальних сайтів і є тетравалентними або мультивалентними зв'язувальними білками. Такі ОМО можуть бути моноспецифічними, тобто здатними зв'язувати один антиген, або мультиспецифічними, тобто здатними зв'язувати два або більше антигенів. Зв'язувальні білки з ОМО, що містять два поліпептиди з ЮОМО важкого ланцюга і два поліпептиди з ОМО бо легкого ланцюга, позначаються як ОМО-Ід. Кожна половина ЮОМО-Ід містить поліпептид з ОМО важкого ланцюга і поліпептид з ОМО легкого ланцюга, а також два антигензв'язувальні сайти.
Кожний зв'язувальний сайт містить варіабельний домен важкого ланцюга і варіабельний домен легкого ланцюга, які містять загалом 6 СОК, залучених у зв'язування антигена, на антигензв'язувальний сайт. В одному варіанті здійснення СОК, описані в даному документі, використовують у ОМО антитіла до В7-НЗ.
Термін "химерний антигенний рецептор" або "САК" стосується рекомбінантного білка, який містить щонайменше (1) антигензв'язувальну ділянку, наприклад варіабельну ділянку важкого або легкого ланцюга антитіла, (2) трансмембранний домен для закріплення САК в Т-клітини і (3) один або декілька внутрішньоклітинних сигнальних доменів.
Термін "активність" включає види активності, такі як специфічність/афінність зв'язування антитіла або АС з антигеном, наприклад антитіла до ПВ7-НЗ, яке зв'язується з антигеном ПВ7-
НУ, та/або нейтралізуюча дієвість антитіла, наприклад антитіла до пПВ7-НЗ, зв'язування якого з
ПВ7-НЗ пригнічує біологічну активність пПВ7-НЗ, наприклад пригнічення проліферації клітинних ліній, які експресують В7-НЗ, наприклад клітин НІ146 карциноми легенів людини, клітин Н1І650 карциноми легенів людини або клітин ЕВС1 карциноми легенів людини.
Термін "аналіз із застосуванням ксенотрансплантата недрібноклітинної карциноми легенів (МЗС С)", використовуваний у даному документі, стосується аналізу іп мімо, використовуваному для визначення того, чи здатні антитіло або АЮС до В7-НЗ пригнічувати ріст пухлини (наприклад, подальший ріст) та/або знижувати темп росту пухлини в результаті трансплантації клітин МСС імунодефіцитній миші. Аналіз із застосуванням ксенотрансплантата МЗСІ С передбачає трансплантацію клітин МОСІ С імунодефіцитній миші, так що пухлина росте до потрібного розміру, наприклад 200-250 мм", після чого антитіло або АОС вводять миші, щоб визначити, чи може антитіло або АОС пригнічувати ріст пухлини та/або знижувати темп росту пухлини. У певних варіантах здійснення активність антитіла або АОС визначають відповідно до відсотка інгібування росту пухлини (95 ТОЇ) порівняно з контрольним антитілом, наприклад, антитілом до людини (або їх групою), яке не зв'язує специфічно пухлинні клітини, наприклад, спрямоване на антиген, не асоційований з раком або одержаний із джерела, яке не є раковим (наприклад, з нормальної сироватки людини). У таких варіантах здійснення антитіло (або АОС) та контрольне антитіло вводять миші в однаковій дозі з однаковою частотою і тим самим
Зо шляхом. В одному варіанті здійснення миша, використовувана в аналізі ксенотрансплантату
МЗС С, являє собою мишу з важким комбінованим імунодефіцитом (5СІОД) та/або безтимусну голу мишу СО-1. Приклади клітин МЗС С, які можна використовувати в аналізі із застосуванням ксенотрансплантата МЗС С, включають без обмеження клітини Н1299 (МСІ-НІ1299 ІН-1299) (АТССе СВІ -5803)), клітини Н1975 (МСІ-НІ1975 клітини (НТ975) (АТССе СВІ -5908 7М)) і клітини
ЕВС-1.
Термін "аналіз із застосуванням ксенотрансплантата дрібноклітинної карциноми легенів (ЗСІ СУ", використовуваний у даному документі, стосується аналізу іп мімо, використовуваному для визначення того, чи здатні антитіло або АЮС до В7-НЗ пригнічувати ріст пухлини (наприклад, подальший ріст) та/або знижувати темп росту пухлини в результаті трансплантації клітин СІ С імунодефіцитній миші. Аналіз із застосуванням ксенотрансплантата 5СІсС передбачає трансплантацію клітин 5СІ С імунодефіцитній миші, так що пухлина росте до потрібного розміру, наприклад 200-250 мм3, після чого антитіло або АОС вводять миші, щоб визначити, чи може антитіло або АОС пригнічувати ріст пухлини та/або знижувати темп росту пухлини. У деяких варіантах здійснення активність антитіла або АОС визначають залежно від відсотка пригнічення росту пухлини (96 ТОЇ) порівняно з контрольним антитілом, наприклад, антитілом до людини (або його набору), яке специфічно не зв'язує пухлинні клітини, наприклад спрямовується на антиген, не пов'язаний із раком, або одержаний із джерела, відмінного від джерела раку (наприклад, нормальної сироватки крові людини). У таких варіантах здійснення антитіло (або АОС) та контрольне антитіло вводять миші в однаковій дозі з однаковою частотою і тим самим шляхом. В одному варіанті здійснення миша, використовувана в аналізі ксенотрансплантату М5СІ С, являє собою мишу з важким комбінованим імунодефіцитом (ЗСІЮ) та/або безтимусну голу мишу СО-1. Приклади клітин СІ С, які можна використовувати в аналізі із застосуванням ксенотрансплантата 5СІ С, включають без обмеження клітини НІ146 (клітини
МСІ-НІ146 ІНІ146|Ї (АТОСУ НТВ-1737М)) і клітини Н8ВА7 (клітини МСІ-Н8В47 ІНВА7| (АТОСе СВІ - 58467Мм)). Термін "епітоп" стосується ділянки антигена, яка зв'язується антитілом або АОС. У певних варіантах здійснення епітопні детермінанти включають у себе хімічно активні поверхневі групи молекул, таких як амінокислоти, бічні ланцюги цукрів, фосфорильна або сульфонільна групи, і в певних варіантах здійснення можуть мати специфічні характеристики тривимірної структури та/або специфічні характеристики заряду. У певних варіантах здійснення говорять, бо що антитіло специфічно зв'язує антиген, якщо воно переважно розпізнає свій антиген-мішень у складній суміші білків та/"або макромолекул.
Використовуваний у даному документі термін "поверхневий плазмонний резонанс" стосується оптичного явища, яке забезпечує можливість аналізу біоспецифічних взаємодій у режимі реального часу шляхом виявлення змін концентрацій білка в межах матриці біосенсора, наприклад, із застосуванням системи ВіАсоге (Рпапгтасіа Віозепхог АВ, Уппсала, Швеція та
Піскатауей, Нью-Джерсі). Більш докладні описи див. у Убп550п, О., еї аі. (1993) Апп. Віої. Сіїп. 51:19-26; Одбп55оп, Ш., ей аї. (1991) Віоїесппідне5 11:620-627; допп550п, В., еї аї. (1995) 9. Мо).
Весодпії. 8:125-131 і дхопппзоп, В., еї аї. (1991) Апаї. Віоспет. 198:268-277. В одному варіанті здійснення поверхневий плазмонний резонанс визначають у відповідності зі способами, описаними в прикладі 2.
Мається на увазі, що термін "Коп" або "Ка", використовуваний у даному документі, стосується константи швидкості асоціації антитіла з антигеном з утворенням комплексу антитіло/антиген.
Мається на увазі, що термін "Кок" або " Ка", використовуваний у даному документі, стосується константи швидкості дисоціації антитіла з комплексу антитіло/антиген.
Мається на увазі, що термін "Ко", використовуваний у даному документі, означає рівноважну константу дисоціації для конкретної взаємодії антитіло-антиген (наприклад, антитіла пиАбІ3 і
В7-НЗ). Ко розраховується як Ка/Ка.
Використовуваний у даному документі термін "конкурентне зв'язування" стосується ситуації, в якій перше антитіло конкурує із другим антитілом за ділянку зв'язування в третій молекулі, наприклад, антигені. В одному варіанті здійснення конкурентне зв'язування двох антитіл визначають із використанням аналізу за методом ЕАС5.
Термін "аналіз конкурентного зв'язування" означає аналіз, застосовуваний для визначення того, чи зв'язуються два або більше антитіл з одним і тим самим епітопом. В одному варіанті здійснення аналіз конкурентного зв'язування являє собою конкурентний аналіз за методом сортування клітин з активованою флуоресценцією (ЕГАС5), який використовують для визначення того, чи зв'язуються два або більше антитіл з тим самим епітопом, шляхом визначення того, чи послабляється флуоресцентний сигнал міченого антитіла внаслідок уведення неміченого антитіла, де конкуренція за один і той самий епітоп буде знижувати рівень флуоресценції.
Термін "мічене антитіло", використовуваний у даному документі, означає антитіло або його
Зо антигензв'язувальну частину із включеною міткою, яка забезпечує ідентифікацію зв'язувального білка, наприклад антитіла. Переважно, мітка являє собою детектовний маркер, наприклад, включення амінокислоти з радіоактивною міткою або приєднання до поліпептиду біотинільованих фрагментів, які можна виявити за допомогою міченого авідину (наприклад, стрептавідину, що містить флуоресцентний маркер або характеризується ферментативною активністю, які можуть бути виявлені за допомогою оптичних або колориметричних способів).
Приклади міток для поліпептидів включають без обмеження наступні: радіоіїзотопи або радіонукліди (наприклад, ЗН, 770, 355, 90, 99Тс, ТИ, 7125|, 91, 177 у, 766Но або 7"55т); флуоресцентні мітки (наприклад, РІТС, родамін, люмінофори на основі комплексів лантанідів), ферментативні мітки (наприклад, пероксидазу хріну, люциферазу, лужну фосфатазу); хемілюмінесцентні маркери; біотинільовані групи; заздалегідь визначені поліпептидні епітопи, розпізнавані вторинним репортером (наприклад, послідовності пари лейцинових застібок, зв'язувальні сайти для вторинних антитіл, метал-зв'язувальні домени, епітопні мітки); і магнітні засоби, такі як хелати гадолінію.
Термін "кон'югат антитіла та лікарського засобу" або "АХОС" стосується зв'язувального білка, такого як антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент, хімічно зв'язаний з одним або кількома хімічними лікарськими засобами (також названими в даному документі засобами, діючими засобами і навантаженнями), які можуть необов'язково являти собою терапевтичні або цитотоксичні засоби. У переважному варіанті здійснення АЮС включає антитіло, лікарський засіб (наприклад, цитотоксичний лікарський засіб) і лінкер, який здатний до приєднання лікарського засобу до антитіла або їх кон'югації. АОС, як правило, має у будь-якому разі від 1 до 8 молекул лікарського засобу, кон'югованих з антитілом, включаючи форми, навантажені 2, 4, 6 або 8 молекулами лікарського засобу. Необмежувальні приклади лікарських засобів, які можуть бути включені в АОС, являють собою інгібітори мітозу, протипухлинні антибіотики, імуномодулювальні засоби, вектори для генної терапії, алкілувальні засоби, антиангіогенні засоби, антиметаболіти, засоби, які містять бор, хемопротекторні засоби, гормони, антигормональні засоби, кортикостероїди, фотоактивні терапевтичні засоби, олігонуклеотиди, радіонуклідні засоби, інгібітори топоізомераз, інгібітори кіназ (наприклад, інгібітори кіназ родини
ТЕС та інгібітори серин-треонінових кіназ) і радіосенсибілізатори. В одному варіанті здійснення лікарський засіб являє собою інгібітор Всі-хі.. 60 Терміни "кон'югат антитіла до ПВ7-НЗ і лікарського засобу" або "АОС до В7-НЗ",
використовувані в даному документі взаємозамінно, стосуються АОС, який містить антитіло, що специфічно зв'язується з В7-НЗ, у якому антитіло кон'юговане з одним або кількома хімічними засобами. В одному варіанті здійснення АОС до В7-НЗ містить антитіло пиАбБіЗм!і, пиАБЗмМ2.5 або пиАрЗм2.6, кон'юговане з ауристатином, наприклад ММАЕ або ММАБР. В одному варіанті здійснення АОС до В7-НЗ містить антитіло пШАБ1Зм1, пиАБЗм2.5 або пиАБЗм2.6, кон'юговане з інгібітором Всі-х!. У переважному варіанті здійснення АОС до В7-НЗ зв'язується з В7-НЗ людини (пВ7-НЗ).
Термін "інгібітор Всі-х!", використовуваний у даному документі, стосується сполуки, яка протидіє активності Всі-хЇ у клітині. В одному варіанті здійснення інгібітор Всі-хЇ сприяє апоптозу клітин за допомогою пригнічення активності Всі-хі..
Термін "ауристатин", використовуваний у даному документі, стосується родини антимітотичних засобів. Похідні ауристатину також включені у визначення терміну "ауристатин".
Приклади ауристатинів включають без обмеження ауристатин Е (АЕ), монометилауристатин Е (ММАЕ), монометилауристатин Е (ММАБЕ) і синтетичні аналоги доластатину. В одному варіанті здійснення антитіло до В7-НЗ, описане в даному документі, кон'юговане з ауристатином з утворенням АОС до В7-НЗ.
Використовуваний у даному документі термін "Ар-мсММАЄЕ" використовується для позначення АОС, який містить антитіло, кон'юговане з монометилауристатином Е (ММАЕ) за допомогою малеїімідокапроїл-валін-цитрулін-р-амінобензилоксикарбамільного (РАВА) лінкера.
Використовуваний у даному документі термін "пПсСММАЕ" використовується для позначення комбінації лінкер/лікарський засіб малеімідокапроїл-монометилауристатину Е (ММАБ).
Термін "співвідношення лікарського засобу та антитіла" або "ОАВ" стосується кількості молекул лікарського засобу, наприклад, інгібітора Всі-хЇ, приєднаних до антитіла в АОС. ОАВ для АОС може перебувати в діапазоні від 1 до 8, хоча більш високі навантаження, наприклад, 20, також можливі залежно від кількості ділянок зв'язування на антитілі. Термін "САВ" може використовуватися щодо кількості молекул лікарського засобу, що навантажуються на окреме антитіло, або, альтернативно, може використовуватися щодо усередненого або середнього значення САКЕ для групи АОС.
Використовуваний у даному документі термін "небажані форми АОС" стосується будь-якої
Зо форми, навантаженої лікарським засобом, яка повинна бути відділена від форм АОС, що мають інше лікарське навантаження. В одному варіанті здійснення термін "види небажаних АОС" може стосуватися форми, навантаженої 6 або більше молекулами лікарського засобу, тобто до АОС із ОАВ, яке становить 6 або більше, у тому числі ПОАНбЄ, САН7, РАНВ ії САВ більше 8 (тобто форм, навантажених 6, 7, 8 або більше ніж 8 молекулами лікарського засобу). В окремому варіанті здійснення термін "небажані форми АОС" може стосуватися форми, навантаженої 8 або більше молекулами лікарського засобу, тобто АОС з ВАВ 8 або більше, у тому числі САВ8 і рАВ більше 8 (тобто форми, навантаженої 8 або більш ніж 8 молекулами лікарського засобу).
Використовуваний у даному документі термін "суміш АОС" стосується композиції, що містить
АС з неоднорідним розподілом САН. В одному варіанті здійснення суміш АОС містить АОС з розподілом САКЕ від 1 до 8, наприклад 1,5, 2, 4, 6 і 8 (тобто форми, навантажені 2, 4,6 і 8 молекулами лікарського засобу). Варто уваги, що можуть з'являтися продукти розпаду, так що
РАВ 1, 3, 5 і 7 також можуть бути включені в суміш. Крім того, АОС у суміші можуть також мати рАВ більше 8. Суміш АОС утворюється в результаті відновлення міжланцюгових дисульфідних зв'язків з наступною кон'югацією. В одному варіанті здійснення суміш АОС містить як АОС з рАВ 4 або менше (тобто форми, навантажені 4 або менше молекулами лікарського засобу), так і АОС з ВАВ 6 або більше (тобто форми, навантажені 6 або більше молекулами лікарського засобу).
Використовуваний у даному документі термін "аналіз ксенотрансплантату" стосується аналізу ксенотрансплантату пухлини людини, в якій клітини пухлини людини трансплантують або під шкіру, або в орган того типу, з якого походить пухлина, мишам з послабленим імунітетом, які не відторгають клітини людини.
Термін "рак" призначений для позначення або опису фізіологічного стану в ссавців, який, як правило, характеризується нерегульованим ростом клітин. Приклади раку включають без обмеження карциному, лімфому, бластому, саркому та лейкоз або лімфоїдні злоякісні новоутворення. Більш конкретні приклади таких видів раку включають гліобластому, гострий мієлоїдний лейкоз (АМІ), неходжкінську лімфому (МН), недрібноклітинний рак легенів, рак легенів, рак товстої кишки, колоректальний рак, рак голови і шиї, рак молочної залози (наприклад, потрійний негативний рак молочної залози), рак підшлункової залози, плоскоклітинні пухлини, плоскоклітинну карциному (наприклад, плоскоклітинний рак легенів або бо плоскоклітинний рак голови і шиї), рак анального отвору, рак шкіри і рак вульви. В одному варіанті здійснення антитіла або АОС за даним винаходом вводять пацієнту з пухлиною(-ами), яка(які) надекспресує(-ють) В7-НЗ. В одному варіанті здійснення антитіла або АОС за даним винаходом вводять пацієнту із солідною пухлиною, яка, ймовірно, надекспресує В7-НЗ. В одному варіанті здійснення антитіла або АБС за даним винаходом вводять пацієнту із плоскоклітинним недрібноклітинним раком легенів (М5СІ С). В одному варіанті здійснення антитіла або АОС за даним винаходом вводять пацієнту із солідними пухлинами, у тому числі солідними пухлинами на пізній стадії. В одному варіанті здійснення антитіла або АОС за даним винаходом вводять пацієнту з раком передміхурової залози. В одному варіанті здійснення антитіла або АОС за даним винаходом вводять пацієнту з недрібноклітинним раком легенів. В одному варіанті здійснення антитіла або АЮС за даним винаходом вводять пацієнту з гліобластомою. В одному варіанті здійснення антитіла або АОС за даним винаходом вводять пацієнту з раком товстої кишки. В одному варіанті здійснення антитіла або АОС за даним винаходом вводять пацієнту з раком голови та шиї. В одному варіанті здійснення антитіла або
АОС за даним винаходом вводять пацієнту з раком нирок. В одному варіанті здійснення антитіла або АОС за даним винаходом вводять пацієнту зі світлоклітинною нирково-клітинною карциномою. В одному варіанті здійснення антитіла або АОС за даним винаходом вводять пацієнту з гліомою. В одному варіанті здійснення антитіла або АОС за даним винаходом вводять пацієнту з меланомою. В одному варіанті здійснення антитіла або АОС за даним винаходом вводять пацієнту з раком підшлункової залози. В одному варіанті здійснення антитіла або АОС за даним винаходом вводять пацієнту з раком шлунку. В одному варіанті здійснення антитіла або АОС за даним винаходом вводять пацієнту з раком яєчників. В одному варіанті здійснення антитіла або АОС за даним винаходом вводять пацієнту з колоректальним раком. В одному варіанті здійснення антитіла або АОС за даним винаходом вводять пацієнту з нирковим раком. В одному варіанті здійснення антитіла або АОС за даним винаходом вводять пацієнту з дрібноклітинним раком легенів. В одному варіанті здійснення антитіла або АОС за даним винаходом вводять пацієнту з гепатоцелюлярною карциномою. В одному варіанті здійснення антитіла або АЮС за даним винаходом вводять пацієнту з гіпофарингеальною сквамозною карциномою. В одному варіанті здійснення антитіла або АОС за даним винаходом вводять пацієнту з нейробластомою. В одному варіанті здійснення антитіла або АОС за даним
Зо винаходом вводять пацієнту з раком молочної залози. В одному варіанті здійснення антитіла або АЮС за даним винаходом вводять пацієнту з раком ендометрію. В одному варіанті здійснення антитіла або АОС за даним винаходом вводять пацієнту з уротеліальною карциномою. В одному варіанті здійснення антитіла або АОС за даним винаходом вводять пацієнту з гострим мієлоїдним лейкозом (АМ/). В одному варіанті здійснення антитіла або АОС за даним винаходом вводять пацієнту з неходжкінською лімфомою (МНІ).
Термін "пухлина, яка експресує В7-НУЗ", використовуваний у даному документі, стосується пухлини, яка експресує білок В7-НЗ. В одному варіанті здійснення експресію В7-НЗ у пухлині визначають із використанням імуногістохімічного забарвлювання мембран пухлинних клітин, де будь-яке імуногістохімічне забарвлювання вище фонового рівня у зразку пухлини вказує на те, що пухлина являє собою пухлину, яка експресує В7-НЗ. Способи виявлення експресії В7-НЗ у пухлині відомі з рівня техніки і включають імуногістохімічні аналізи. Навпаки, "В7-НЗ-негативна пухлина" визначається як пухлина, яка характеризується відсутністю залежного від В7-НЗ забарвлювання мембрани вище фонового рівня у зразку пухлини, як встановлено за допомогою імуногістохімічних технік.
Терміни "надекспресувати", "надекспресія" або "надекспресований" взаємозамінно стосуються гена, який транскрибується або транслюється на більш високому рівні, що виявляється, зазвичай у раковій клітині, порівняно з нормальною клітиною. Таким чином, надекспресія стосується надекспресії як білка, так і РНК (внаслідок збільшення транскрипції, посттранскрипційного процесингу, трансляції, посттрансляційного процесингу, зміни стабільності та зміни розпаду білка), а також локальної надекспресії внаслідок зміни режимів транспортування білка (збільшення ядерної локалізації) та посилення функціональної активності, наприклад, як у випадку збільшення ферментативного гідролізу субстрату. Таким чином, надекспресія стосується рівнів білка або РНК. Надекспресія також може означати збільшення на 5095, 6095, 7095, 8095, 9095 або більше порівняно з нормальною клітиною або клітиною порівняння. У деяких варіантах здійснення антитіла або АОС до В7-НЗ за даним винаходом застосовують для лікування солідних пухлин, які, ймовірно, надекспресують В7-НЗ.
Використовуваний у даному документі термін "ампліфікація гена" стосується клітинного процесу, що характеризується утворенням декількох копій будь-якого конкретного фрагмента
ДНК. Наприклад, пухлинна клітина може ампліфікувати або копіювати хромосомні сегменти в бо результаті впливу клітинних сигналів та іноді навколишніх подій. Процес ампліфікації гена приводить до одержання додаткових копій гена. В одному варіанті здійснення ген являє собою
В7-НЗ, тобто "ампліфікований В7-НЗ". В одному варіанті здійснення композиції і способи, розкриті в даному документі, застосовують для лікування пацієнта з видом раку, при якому відбувається ампліфікація В7-НЗ.
Мається на увазі, що термін "введення", використовуваний у даному документі, стосується доставки речовини (наприклад, антитіла або АОС до В7-НЗ) із досягненням терапевтичної мети (наприклад, лікування пов'язаного з В7-НЗ порушення). Спосіб введення може бути парентеральним, ентеральним та місцевим. Парентеральне введення зазвичай здійснюється шляхом ін'єкції ота включає без обмеження внутрішньовенну, внутрішньом'язову, внутрішньоартеріальну, інтратекальну, інтракапсулярну, інтраорбітальну, внутрішньосерцеву, внутрішньошкірну, внутрішньоочеревинну, транстрахеальну, підшкірну, субкутикулярну, внутрішньосуглобну, субкапсулярну, субарахноїдальну, інтраспінальну та внутрішньогрудинну ін'єкцію та інфузію.
Термін "комбінована терапія" або "комбінація" в контексті терапевтичного способу (наприклад, способу лікування), використовуваний у даному документі, стосується введення двох або більше терапевтичних речовин, наприклад антитіла або АОС до В7-НЗ і додаткового терапевтичного засобу. Додатковий терапевтичний засіб можна вводити одночасно із введенням антитіла або АОС до В7-НЗ, перед цим або після цього.
Використовуваний у даному документі термін "ефективна кількість" або "терапевтично ефективна кількість" стосується кількості лікарського засобу, наприклад, антитіла або АОС, яке є достатнім для зниження або полегшення тяжкості та/або періоду протікання порушення, наприклад, раку, або одного або декількох його симптомів, попередження просування порушення, забезпечення регресії порушення, попередження рецидиву, розвитку, прояви або прогресування одного або декількох симптомів, асоційованих з порушенням, виявлення порушення або посилення або покращення профілактичного(профілактичних) або терапевтичного(терапевтичних) ефекту(ефектів) іншого засобу терапії (наприклад, профілактичного або терапевтичного засобу). Ефективна кількість антитіла або АОС може, наприклад, інгібувати ріст пухлини (наприклад, інгібувати збільшення обсягу пухлини), зменшувати темпи росту пухлини (наприклад, зменшувати обсяг пухлини), знижувати кількість ракових клітин та/або до деякої міри полегшувати один або декілька симптомів, асоційованих з раком. Ефективна кількість може, наприклад, покращувати виживаність без ознак захворювання (ОЕ5), покращувати загальну виживаність (ОС) або зменшувати ймовірність рецидиву.
Різні хімічні замісники визначені нижче. У деяких випадках кількість атомів вуглецю в заміснику (наприклад, алкільному, алканільному, алкенільному, алкінільному, циклоалкільному, гетероциклільному, гетероарильному та арильному) вказана за допомогою префікса "Сх-Су" або "Сху", де х - мінімальна, а у - максимальна кількість атомів вуглецю. Так, наприклад, "Сі-Свалкіл" стосується алкілу, що містить від 1 до б атомів вуглецю. Як додаткова ілюстрація, "Сз-
Свциклоалкіл" означає насичене гідрокарбільне кільце, що містить від З до 8 атомів вуглецю.
Якщо замісник описується як "заміщений", то атом водню при атомі вуглецю або азоту заміщений групою, відмінною від атома водню. Наприклад, заміщений алкільний замісник являє собою алкільний замісник, в якому щонайменше один атом водню в алкілі заміщений групою, відмінною від атома водню. Для ілюстрації монофторалкіл являє собою алкіл, заміщений фтор- радикалом, а дифторалкіл являє собою алкіл, заміщений двома фтор-радикалами. Слід зазначити, що, якщо замісник має більше одного заміщення, то всі заміщення можуть бути однаковими або різними (якщо не зазначене інше). Якщо замісник описаний як "необов'язково заміщений", то замісник може бути або (1) незаміщеним, або (2) заміщеним. Можливі замісники включають без обмеження Сі-Свалкіл, Со-Свалкеніл, Со-Свалкініл, арил, циклоалкіл, гетероцикліл, гетероарил, галоген, Сі-Свгалогеналкіл, оксо, -СМ, МО», -ОБК, -ОС(ОЖКе, -ОС(О)М(К 2)», -5Беа, -5(0)рНяе, -5(0)2М(Нх)», -С(0)Ке, -Б(фОБе, -С(О)М(Р)», 00/-С(ОМ(г)5(О2ве, -М()», -ЩщеЕеС(оО)Вве, -МЩ(ва)(О28, -Щ(Ее)С(О)О(В), -МЩ(Ра)С(О)М(Аг)», -М(ка)(О)2М(А)», -(С1-Свалкіленіл)-СМ, -(Сі-Свалкіленіл)-ОМ, -(Сі-Свалкіленіл)у-ОС(О)КУ, -(Сі-Свалкіленіл)- ОС(О)М( 2)», -(С1-Свалкіленіл)-5ЕКХа, -(Сі-Свалкіленіл)-5(0)2Н 2, -(Сі-Свалкіленіл)-5(0)2М(А2)», -(Сі-Свалкіленіл)-С(О)К, -(Сі-Свалкіленіл)-С()ОР, -(С1-Свалкіленіл)-С(ОІМ(К 2)», -(С1-Свалкіленіл)-С(О)М(К) (ОО), -(Сі-Свалкіленіл)-М(К 2)», -(Сі-Свалкіленіл)-(Ке)С(О)Ве, -(Сі-Свалкіленіл)- (Ре) 5(О)28, -(Сі-Свалкіленіл)-(Ке)С(О)О(Вх), -(Сі-Свалкіленіл)-М(Ке)С(О)М(А)» або -(Сі-Свалкіленіл)-М(Ке)5(0)2М(Н)2; де ха у кожному випадку незалежно являє собою водень, арил, циклоалкіл, гетероцикліл, гетероарил, Сі-Свалкіл або Сі-Свгалогеналкіл, і 2-2 у кожному випадку незалежно являє собою арил, циклоалкіл, гетероцикліл, гетероарил, С:і-Свалкіл або 60 Сі-Свгалогеналкіл.
Різні АБС, синтони та інгібітори Всі-хі, що містять АОС та/або синтони, описані в деяких варіантах здійснення в даному документі з посиланням на структурні формули, що містять замісники. Слід розуміти, що різні групи, що містять замісники, можна комбінувати так, як дозволяє валентність і стабільність. У даному винаході передбачені тільки ті комбінації замісників і змінних, які приводять до утворення стабільних сполук. Використовуваний у даному документі термін "стабільний" стосується сполук, які мають стабільність, достатню для забезпечення виробництва, і які зберігають цілісність сполуки протягом достатнього періоду часу, щоб бути застосовними для мети, докладно описаної в даному документі.
Передбачається, що використовувані в даному документі наступні терміни мають наступні значення.
Термін "алкокси" стосується групи формули -ОНх, де ра являє собою алкільну групу.
Типові алкоксигрупи включають метокси, етокси, пропокси, трет-бутокси тощо.
Термін "алкоксиалкіл" стосується алкільної групи, заміщеної алкоксигрупою, та може бути представлений загальною формулою -НРОВе, де Р: являє собою алкіленову групу, і Ба являє собою алкільну групу. Термін "алкіл" сам по собі або як частина іншого замісника стосується насиченого або ненасиченого розгалуженого, нерозгалуженого або циклічного одновалентного вуглеводневого радикала, одержаного шляхом видалення одного атома водню від одного атома вуглецю вихідного алкану, алкену або алкіну. Типові алкільні групи включають без обмеження метил; етильні групи, такі як етаніл, етеніл, етиніл; пропільні групи, такі як пропан-1- іл, пропан-2-іл, циклопропан-1-іл, проп-1-ен-1-іл, проп-1-ен-2-іл, проп-2-ен-1-іл, циклопроп-1-ен- 1-іл; циклопроп-2-ен-1-іл, проп-1-ін-1-іл, проп-2-ін-1-іл тощо; бутильні групи, такі як бутан-1-іл, бутан-2-іл, 2-метилпропан-1-іл, 2-метилпропан-2-іл, циклобутан-1-іл, бут-1-ен-1-іл, бут-1-ен-2-іл, 2-метилпроп-1-ен-1-іл, бут-2-ен-1-іл, бут-2-ен-2-іл, бута-1,3-дієн-1-іл, бута-1,3-дієн-2-іл, циклобут-1-ен-1-іл, циклобут-1-ен-3-іл, циклобута-1,3-дієн-1-іл, бут-1-ин-1-іл, бут-1-ин-3-іл, бут-
З-ин-1-іл тощо. Там, де передбачаються конкретні рівні насичення, використовують номенклатуру "алканіл", "алкеніл" та/або "алкініл", як визначено нижче. Термін "нижчий алкіл" стосується алкільних груп з 1-6 атомами вуглецю.
Термін "алканіл" сам по собі або як частина іншого замісника стосується насиченого розгалуженого, нерозгалуженого або циклічного алкілу, одержаного шляхом видалення одного
Зо атома водню від одного атома вуглецю вихідного алкану. Типові алканільні групи включають без обмеження метил; етаніл; пропанільні групи, такі як пропан-1-іл, пропан-2-іл (ізопропіл), циклопропан-1-іл тощо; бутанільні групи, такі як бутан-і1-іл, бутан-2-іл (втор-бутил), 2- метилпропан-1-іл (ізобутил), 2-метилпропан-2-іл (трет-бутил), циклобутан-1-іл тощо.
Термін "алкеніл" сам по собі або як частина іншого замісника стосується ненасиченого розгалуженого, нерозгалуженого або циклічного алкілу, що має щонайменше один вуглець- вуглецевий подвійний зв'язок, одержаний шляхом видалення одного атома водню від одного атома вуглецю вихідного алкену. Типові алкенільні групи включають без обмеження етеніл; пропенільні групи, такі як проп-1-ен-1-іл, проп-1-ен-2-іл, проп-2-ен-1-іл, проп-2-ен-2-іл, циклопроп-1-ен-1-іл; циклопроп-2-ен-1-іл; бутенільні групи, такі як бут-1-ен-1-іл, бут-1-ен-2-іл, 2- метилпроп-1-ен-1-іл, бут-2-ен-1-іл, бут-2-ен-2-іл, бута-1,3-дієн-1-іл, бута-1,3-дієн-2-іл, циклобут- 1-ен-1-іл, циклобут-1-ен-3-іл, циклобута-1,З-дієн-1-іл тощо.
Термін "алкініл" сам по собі або як частина іншого замісника стосується ненасиченого розгалуженого, нерозгалуженого або циклічного алкілу, що має щонайменше один вуглець- вуглецевий потрійний зв'язок, одержаного шляхом видалення одного атома водню від одного атома вуглецю вихідного алкіну. Типові алкінільні групи включають без обмеження етиніл; пропінільні групи, такі як проп-1-ін-1-іл, проп-2-ін-1-іл тощо; бутинільні групи, такі як бут-1-ин-1- іл, бут-1-ин-3-іл, бут-3З-ин-1-іл тощо.
Термін "алкіламін" стосується групи формули -МНАХа, а "діалкіламін" стосується групи формули -МАХадха, де кожний Кг незалежно від інших являє собою алкільну групу.
Термін "алкілен" стосується алканової, алкенової або алкінової групи, що має два кінцеві одновалентні радикальні центри, одержані шляхом видалення одного атома водню від кожного із двох кінцевих атомів вуглецю. Типові алкіленові групи включають без обмеження метилен; а також насичений або ненасичений етилен; пропілен; бутилен тощо. Термін "нижчий алкілен" стосується алкіленових груп з 1-6 атомами вуглецю.
Термін "гетероалкілен" стосується двохвалентного алкілену, який має одну або декілька груп -СН»е-, заміщених тіо, окси або -МА-, де КЗ вибраний із водню, нижчого алкілу і нижчого гетероалкілу. Гетероалкілен може бути лінійним, розгалуженим, циклічним, біциклічним або їх комбінацією та може містити до 10 атомів вуглецю та до 4 гетероатомів. Термін "нижчий гетероалкілен" стосується алкіленових груп з 1-4 атомами вуглецю та 1-3 гетероатомами. бо Термін "арил" означає ароматичний карбоцикліл, що містить від б до 14 атомів вуглецю кільця. Арил може бути моноциклічним або поліциклічним (тобто може містити більше одного кільця). У випадку поліциклічних ароматичних кілець тільки одне кільце поліциклічної системи має бути ароматичним, у той час як решта(інші) кілець(кільця) можуть бути насиченими, частково насиченими або ненасиченими. Приклади арильних груп включають феніл, нафталініл, інденіл, інданіл і тетрагідронафтил.
Термін "арилен" стосується арильної групи, що має два одновалентні радикальні центри, одержані шляхом видалення одного атома водню від кожного із двох атомів вуглецю кільця.
Ілюстративною ариленовою групою є фенілен.
Алкільна група може бути заміщена "карбонілом", що означає, що два атоми водню видалені від одного атома вуглецю алканілену та замінені подвійним зв'язком з атомом кисню.
Префікс "галоген" указує на те, що замісник, який містить префікс, заміщений одним або кількома незалежно вибраними галогеновими радикалами. Наприклад, галогеналкіл означає алкільний замісник, в якому щонайменше один водневий радикал заміщений галогеновим радикалом. Типові галогенові радикали включають хлор, фтор, бром і йод. Приклади галогеналкілів включають хлорметил, 1-брометил, фторметил, дифторметил, трифторметил і 1,1,1-трифторетил. Слід розуміти, що якщо замісник заміщений більш ніж одним галогеновим радикалом, то ці галогенові радикали можуть бути однаковими або різними (якщо не зазначено інше).
Термін "галогеналкокси" стосується групи формули -ОНг, де Кг являє собою галогеналкіл.
Терміни "гетероалкіл", "гетероалканіл", "гетероалкеніл", "гетероалкініл" та "гетероалкілен" стосуються відповідно алкільної, алканільної, алкенільної, алкінільної та алкіленової груп, в яких кожний з одного або декількох атомів вуглецю, наприклад, 1, 2 або З атоми вуглецю, незалежно замінений однаковими або різними гетероатомами або гетероатомними групами. Типові гетероатоми й/або гетероатомні групи, які можуть заміняти атоми вуглецю, включають без обмеження -О-, -5-, -5-0-, -МІНе-, -РН, -5(0)-, -5(0)2-, -«530)МАе-, -550)2МА-- тощо, у тому числі їх комбінації, де кожний К- незалежно являє собою водень або С.і-Свалкіл. Термін "нижчий гетероалкіл" означає від 1 до 4 атомів вуглецю та від 1 до З гетероатомів.
Терміни "циклоалкіл" та "гетероцикліл" стосуються циклічних варіантів відповідно "алкільної" та "гетероалкільної" груп. У гетероциклільних групах гетероатом може займати положення, в
Зо якому він приєднаний до решти молекули. Циклоалкільне або гетероциклільне кільце може бути однокільцевим (моноциклічним) або мати два або більше кілець (біциклічне або поліциклічне).
Моноциклічні циклоалкільні та гетероциклільні групи зазвичай містять від З до 7 атомів кільця, у більш типовому випадку від З до 6 атомів кільця та у ще більш типовому випадку від 5 до 6 атомів кільця. Приклади циклоалкільних груп включають без обмеження циклопропіл; циклобутильні групи, такі як циклобутаніл та циклобутеніл; циклопентильні групи, такі як циклопентаніл і циклопентеніл; циклогексильні групи, такі як циклогексаніл та циклогексеніл; тощо. Приклади моноциклічних гетероциклілів включають без обмеження оксетан, фураніл, дигідрофураніл, тетрагідрофураніл, тетрагідропіраніл, тіофеніл (тіофураніл), дигідротіофеніл, тетрагідротіофеніл, піроліл, піролініл, піролідиніл, імідазоліл, імідазолініл, імідазолідиніл, піразоліл, піразолініл, піразолідиніл, триазоліл, тетразоліл, оксазоліл, оксазолідиніл, ізоксазолідиніл, ізоксазоліл, тіазоліл, ізотіазоліл, тіазолініл, ізотіазолініл, тіазолідиніл, ізотіазолідиніл, тіодіазоліл, оксадіазоліл "у тому числі 1,2,3-оксадіазоліл, 1,2,4-оксадіазоліл, 1,2,5-оксадіазоліл (фуразаніл) або 1,3,4-оксадіазоліл), оксатриазоліл (у тому числі 1,2,3,4- оксатриазоліл або 1,2,3,5-оксатриазоліл), діоксазоліл (у тому числі 1,2,3-діоксазоліл, 1,2,4- діоксазоліл, 1,3,2-діоксазоліл або 1,3,4-діоксазоліл), 1,4-діоксаніл, діоксотіоморфолініл, оксатіазоліл, оксатіоліл, оксатіоланіл, піраніл, дигідропіраніл, тіопіраніл, тетрагідротіопіраніл, піридиніл (азиніл), піперидиніл, діазиніл (у тому числі піридазиніл (1,2-діазиніл), піримідиніл (1,3- діазиніл) або піразиніл (1,4-діазиніл)), піперазиніл, триазиніл (у тому числі 1,3,5-триазиніл, 1,2,4- триазиніл та 1,2,3-триазиніл)), оксазиніл (у тому числі 1,2-оксазиніл, 1,3-оксазиніл або 1,4- оксазиніл)), оксатіазиніл (у тому числі 1,2,3-оксатіазиніл, 1,2,4-оксатіазиніл, 1,2,5-оксатіазиніл або 1,2,6-оксатіазиніл)), оксадіазиніл (у тому числі 1,2,3-оксадіазиніл, 1,2,4-оксадіазиніл, 1,4,2- оксадіазиніл або 1,3,5-оксадіазиніл)), морфолініл, азепініл, оксепініл, тієпініл, діазепініл, піридоніл (у тому числі пірид-2(1Н)-оніл та пірид-4(1Н)-оніл), фуран-2(5Н)-оніл, піримідоніл (у тому числі пірімід-2(1Н)-оніл і пірімід-4(ЗН)-оніл), оксазол-2(ЗН)-оніл, 1Н-імідазол-2(ЗН)-оніл, піридазин-З(2Н)-оніл та піразин-2(1Н)-оніл.
Поліциклічні циклоалкільні та гетероциклільні групи містять більше одного кільця, а біциклічні циклоалкільні та гетероциклільні групи містять два кільця. Кільця можуть знаходитися в містковій, конденсованій або спіро-орієнтації. Поліциклічні циклоалкільні та гетероциклільні групи можуть містити комбінації місткових, конденсованих та/або спіроколець. У бо спіроциклічному циклоалкілі або гетероциклілі один атом є спільним для двох різних кілець.
Прикладом спіроциклоалкілу є спіроІ4.5|декан, а прикладом спірогетероциклілів є спіропіразолін.
Іп а Бііддей сусіоаїКу! ог НПеїегосусіуї, Те поз 5Наге аї Ієаві їмо соттоп поп-адіасепі аотв.
Приклади місткових циклоалкілів включають без обмеження адамантильне й норборнанільне кільця. Приклади місткових гетероциклілів включають без обмеження 2- оксатрициклоїЇ3.3.1.12Лдеканіл.
У циклоалкілі або гетероциклілі з конденсованими кільцями два або більше кілець конденсовані один з одним, так що два кільця мають один спільний зв'язок. Приклади циклоалкілів з конденсованими кільцями включають декалін, нафтилен, тетралін і антрацен.
Приклади гетероциклілів з конденсованими кільцями, що містять два або три кільця, включають імідазопіразиніл (у тому числі імідазо|1,2-а|піразиніл), імідазопіридиніл (у тому числі імідазо|1,2- а|піридиніл), імідазопіридазиніл (у тому числі імідазо(1,2-б|Іпіридазиніл), тіазолопіридиніл (у тому числі тіазолоїЇ5,4-с|Іпіридиніл, тіазолої|5,4-б|Іпіридиніл, тіазоло|4,5-б|Іпіридиніл та тіазолої|4,5- с|Іпіридиніл), індолізиніл, піранопіроліл, 4Н-хінолізиніл, пуриніл, нафтиридиніл, піридопіридиніл (у тому числі піридоїЇ3,4-б|-піридиніл, піридо/3,2-б|-піридиніл або піридо|4,3-бБ|-піридиніл) та птеридиніл. Інші приклади гетероциклілів 3 конденсованими кільцями включають бензоконденсовані гетероцикліли, такі як дигідрохроменіл, тетрагідроізохінолініл, індоліл, ізоїндоліл (ізобензазоліл, псевдоізоїндоліл)у, індоленініл (псевдоіндоліл), ізоіндазоліл (бензпіразоліл), бензазиніл (у тому числі хінолініл (1-бензазиніл) або ізохінолініл (2-бензазиніл)), фталазиніл, хіноксалініл, хіназолініл, бензодіазиніл (у тому числі цинолініл (1,2-бензодіазиніл) або хіназолініл (1,3-бензодіазиніл)), бензопіраніл (у тому числі хроманіл або ізохроманіл), бензоксазиніл (у тому числі 1,3,2-бензоксазиніл, 1,4,2-бензоксазиніл, 2,3,1-бензоксазиніл або 3,1,4-бензоксазиніл), бензо|9|гіазоліл та бензизоксазиніл (у тому числі 1,2-бензизоксазиніл або 1,4-бензизоксазиніл).
Термін "циклоалкілен" стосується циклоалкільної групи, яка має два центри моновалентних радикалів, одержаних видаленням одного атома водню біля кожного з двох кільцевих атомів вуглецю. Ілюстративні циклоалкіленові групи включають ж кан 5 | З і
Термін "тгетероарил" стосується ароматичного гетероциклілу, що містить від 5 до 14 атомів
Зо кільця. Гетероарил може являти собою одне кільце або 2 або З конденсованих кільця. Приклади гетероарилів включають б-членні кільця, такі як піридил, піразил, піримідиніл, піридазиніл та 1,3,5-, 1,2,4- або 1,2,3-триазиніл; 5-членні кільцеві замісники, такі як триазоліл, піроліл, імідазил, фураніл, тіофеніл, піразоліл, оксазоліл, ізоксазоліл, тіазоліл, 1,2,3-, 1,2,4-, 1,2,5- або 1,3,4- оксадіазоліл та ізотіазоліл; 6/5-членні конденсовані кільцеві замісники, такі як імідазопіразиніл (у тому числі імідазо|/1,2-а|піразиніл), імідазопіридиніл (у тому числі імідазо(1,2-а|піридиніл), імідазопіридазиніл (у тому числі імідазо(1,2-б|Іпіридазиніл), тіазолопіридиніл (у тому числі тіазоло|5,4-с|Іпіридиніл, тіазоло|5,4-б|Іпіридиніл, тіазоло|4,5-Б|Іпіридиніл та тіазолої|4,5- с|Іпіридиніл), бензо|Ч|гіазоліл, бензотіофураніл, бензізоксазоліл, бензоксазоліл, пуриніл й антраніліл; та 6/б--ленні конденсовані кільця, такі як бензопіраніл, хінолініл, ізохінолініл, цинолініл, хіназолініл та бензоксазиніл. Гетероарили також можуть являти собою гетероцикли, що містять ароматичні (з 4М--2 пі-електронами) резонансні структури, такі як піридоніл (у тому числі пірид-2(1Н)-оніл та пірид-4(1Н)-оніл), піримідоніл (у тому числі піримід-2(1Н)-оніл та піримід-4(ЗН)-оніл), піридазин-З(2Н)-оніл та піразин-2(1Н)-оніл.
Використовуваний у даному документі термін "сульфонат" означає сіль або естер сульфонової кислоти.
Використовуваний у даному документі термін "метилсульфонат" означає метиловий естер групи сульфонової кислоти.
Використовуваний у даному документі термін "карбоксилат" означає сіль або естер карбонової кислоти.
Використовуваний у даному документі термін "поліол" означає групу, що містить більше двох гідроксильних груп незалежно або у вигляді частини мономерної ланки. Поліоли включають без обмеження відновлені Со-Сввуглеводи, етиленгліколь та гліцерин.
Термін "цукор" у разі використанні в контексті "є!" включає О-глікозидні, М-глікозидні, 5- глікозидні та С-глікозидні (С-глікозильні) похідні вуглеводів із класу моносахаридів або дисахаридів, які можуть походити із природних джерел або бути синтетичними за походженням.
Наприклад, "цукор" у разі використанні в контексті "з!" включає похідні, такі як, без обмеження,
похідні глюкуронової кислоти, галактуронової кислоти, галактози та глюкози, серед іншого.
Придатні замісники цукрів включають без обмеження гідроксил, амін, карбонову кислоту, сульфонову кислоту, фосфонову кислоту, естери та етери.
Термін "МН5З-естер" означає М-гідроксисукцинімідну естерну похідну карбонової кислоти.
Термін "амін" включає первинні, вторинні та третинні аліфатичні аміни, у тому числі їх циклічні варіанти.
Термін "сіль" у разі використанні в контексті "або його солі" включає солі, зазвичай використовувані для утворення солей лужних металів та для утворення солей приєднання вільних кислот або вільних основ. Загалом ці солі, як правило, можна одержати традиційними способами шляхом здійснення реакції, наприклад, придатної кислоти або основи зі сполукою за даним винаходом.
Якщо сіль призначена для введення пацієнту (на відміну, наприклад, від застосування в контексті іп міго), сіль переважно є фармацевтично прийнятною та/або фізіологічно сумісною.
Термін "фФармацевтично прийнятний" використовується як прикметник у даній патентній заявці та означає, що модифікований іменник придатний для застосування як фармацевтичний продукт або як частина фармацевтичного продукту. Термін "фармацевтично прийнятна сіль" включає солі, зазвичай використовувані для утворення солей лужних металів та для утворення солей приєднання вільних кислот або вільних основ. Загалом ці солі, як правило, можна одержати традиційними способами шляхом здійснення реакції, наприклад, придатної кислоти або основи зі сполукою за даним винаходом.
Різні аспекти даного винаходу більш докладно описані в наступних підрозділах.
ІЇ. Антитіла до В7-НЗ
В одному аспекті даного винаходу передбачають антитіла до В7-НЗ3 або їх антигензв'язувальні частини. В одному варіанті здійснення даний винахід передбачає химерні антитіла до В7-НЗ або їх антигензв'язувальні частини. У ще одному варіанті здійснення даний винахід передбачає гуманізовані антитіла до В7-НЗ або їх антигензв'язувальні частини. В іншому аспекті даний винахід включає кон'югати антитіла та лікарського засобу (АОС), які містять антитіло до В7-НЗ, описане в даному документі, і щонайменше один лікарський засіб, такий як без обмеження інгібітор Всі-хІ. або ауристатин. Антитіла або АОС за даним винаходом
Зо мають характеристики, які включають без обмеження зв'язування з людським В7-НЗ дикого типу іп міго, зв'язування з людським В7-НЗ дикого типу на пухлинних клітинах, які експресують В7-
НУ, і зниження темпу або пригнічення росту ксенотрансплантатної пухлини в мишачій моделі.
Один аспект даного винаходу включає кон'югат антитіла до ПВ7-НЗ людини (до ПВ7-НЗ) і лікарського засобу (АОС), який містить антитіло до ПВ7-НЗ, кон'юговане з лікарським засобом за допомогою лінкера, де лікарський засіб являє собою інгібітор Всі-хі. Ілюстративні антитіла до
В7-НЗ (та їх послідовності), які можна використовувати в АОС, описані в даному документі.
Антитіла до В7-НЗ, описані в даному документі, забезпечують АОС за даним винаходом зі здатністю зв'язуватися з В7-НЗ, так що цитотоксичний для Всі-х!. лікарський засіб, приєднаний до антитіла, може бути доставлений в клітину, яка експресує В7-НЗ, зокрема ракову клітину, яка експресує В7-НЗ.
Незважаючи на те, що по всьому даному документу використовується термін "антитіло", слід відзначити, що фрагменти антитіла (тобто антигензв'язувальні частини антитіла до В7-НЗ) також включені в даний винахід і можуть бути включені у варіанти здійснення (способи і композиції), описані по всьому даному документу. Наприклад, фрагмент антитіла до В7-НЗ може бути кон'югований з описаними в даному документі інгібіторами Всі-х!. Таким чином, в межах обсягу даного винаходу передбачається, що в деяких варіантах здійснення фрагменти антитіл описаних у даному документі антитіл до В7-НЗ кон'юговані з інгібіторами Всі-х!. (зокрема тими, які описані нижче у розділі Ш.А) за допомогою лінкерів (зокрема таких, які описані нижче у розділі Ш.А). У деяких варіантах здійснення зв'язувальна частина антитіла до В7-НЗ являє собою Рабр, Раб", К(аб)2, Ем, зв'язаний дисульфідним зв'язком Ем, зсЕмМ, однодоменне антитіло або діатіло.
І.А. Химерні антитіла до В7-НЗ
Химерне антитіло являє собою молекулу, у якій різні частини антитіла походять від різних видів тварин, як наприклад, антитіла з варіабельною ділянкою, що походить із мишачого моноклонального антитіла, і константною ділянкою імуноглобуліну людини. Способи одержання химерних антитіл відомі з рівня техніки. Див., наприклад, Могтгізоп, Зсіепсе 229:1202 (1985); ОЇ еї а!., ВіоТесппіднез 4:214 (1986); СіПев еї аї., (1989) У. Іттипої. Меїйоав5 125:191-202; патенти
США під номерами 5807715; 4816567 і 4816397, які включені в даний документ за допомогою посилання в повному обсязі. Крім того, можна застосовувати методики, розроблені для
Ге) одержання "химерних антитіл" (Могтізоп еї аї., 1984, Ргос. Май. Асай. 5сі. 81:851-855; Меибрегдег ега!., 1984, Машге 312:604-608; Такеда єї аї., 1985, Майте 314:452-454, кожне із яких включене в даний документ за допомогою посилання в повному обсязі), які полягають у сплайсингу генів молекули антитіла миші з відповідною антигенною специфічністю з генами молекули антитіла людини з відповідною біологічною активністю.
Як описано в прикладі 3, ідентифікували вісімнадцять мишачих антитіл до В7-НЗ, які характеризуються високою активністю специфічного зв'язування з В7-НЗ людини і яванського макака. Химерні антитіла стосовно константної ділянки імуноглобуліну людини були одержані з цих вісімнадцяти антитіл.
Таким чином, в одному аспекті даний винахід направлений на антитіло до В7-НЗ або його антигензв'язувальну частину, які містять варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІО МО: 1, 9, 16, 24, 32, 40, 48, 56, 64, 72, 80, 87, 95, 101 або 108; та/"або варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮО МО: 5, 13, 20, 28, 36, 44, 52, 60, 68, 76, 84, 91, 98, 105 або 112.
В іншому аспекті даний винахід направлений на антитіло до В7-НЗ або його антигензв'язувальну частину, які містять варіабельну ділянку важкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕСО ІО МО: 1, ії варіабельну ділянку легкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮО МО: 5.
В іншому аспекті даний винахід направлений на антитіло до В7-НЗ або його антигензв'язувальну частину, які містять ділянку варіабельного домену важкого ланцюга, що включає (а) СОВІ1 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 2; (в) СОВ2 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 3; і (с) СОВЗ з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕСО ІО МО: 4; і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка включає (а) СОВІ1 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 6; (в) СОВ2 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 7; і (с) СОВЗ з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 8.
В іншому аспекті даний винахід направлений на антитіло до В7-НЗ або його антигензв'язувальну частину, які містять варіабельну ділянку важкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕСО ІО МО: 9, і варіабельну ділянку легкого
Ко) ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮ МО: 13.
В іншому аспекті даний винахід направлений на антитіло до В7-НЗ або його антигензв'язувальну частину, які містять ділянку варіабельного домену важкого ланцюга, що включає (а) СОВА з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 10; (Б) СОВ2 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 11; і (с) СОВЗ з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕС ІО МО: 12; і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка включає (а) СОВА з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 14; (р) СОВ2 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 7; і (с) СОВЗ з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 15.
В іншому аспекті даний винахід направлений на антитіло до В7-НЗ або його антигензв'язувальну частину, які містять варіабельну ділянку важкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕСО 10 МО: 16, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮ МО: 20.
В іншому аспекті даний винахід направлений на антитіло до В7-НЗ або його антигензв'язувальну частину, які містять ділянку варіабельного домену важкого ланцюга, що включає (а) СОВА з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 17; (Б) СОВ2 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 18; і (с) СОВЗ з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕС ІО МО: 19; ії варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка включає (а) СОВА з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 21; (р) СОВ2 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 22; і (с) СОВЗ з амінокислотною
БО послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 23.
В іншому аспекті даний винахід направлений на антитіло до В7-НЗ або його антигензв'язувальну частину, які містять варіабельну ділянку важкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІО МО: 24, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮ МО: 28. 55 В іншому аспекті даний винахід направлений на антитіло до В7-НЗ або його антигензв'язувальну частину, які містять ділянку варіабельного домену важкого ланцюга, що включає (а) СОВА з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 25; (р) СОВ2 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 26; і (с) СОВЗ з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕСО ІО МО: 27; і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка 60 включає (а) СОВА з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 29; (р) СОВ2 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 30; і (с) СОВЗ з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 31.
В іншому аспекті даний винахід направлений на антитіло до В7-НЗ або його антигензв'язувальну частину, які містять варіабельну ділянку важкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕСО ІО МО: 32, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮ МО: 36.
В іншому аспекті даний винахід направлений на антитіло до В7-НЗ або його антигензв'язувальну частину, які містять ділянку варіабельного домену важкого ланцюга, що включає (а) СОВА з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 33; (Б) СОВ2 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 34; і (с) СОВЗ з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕС ІО МО: 35; і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка включає (а) СОВА з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 37; (в) СОВ2 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 38; і (с) СОВЗ з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 182.
В іншому аспекті даний винахід направлений на антитіло до В7-НЗ або його антигензв'язувальну частину, які містять варіабельну ділянку важкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕСО 10 МО: 40, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮ МО: 44.
В іншому аспекті даний винахід направлений на антитіло до В7-НЗ або його антигензв'язувальну частину, які містять ділянку варіабельного домену важкого ланцюга, що включає (а) СОВА з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 41; (р) СОВ2 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 42; і (с) СОВЗ з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕС ІО МО: 43; і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка включає (а) СОВА з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 45; (р) СОВ2 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 46; і (с) СОВЗ з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 47.
В іншому аспекті даний винахід направлений на антитіло до В7-НЗ або його антигензв'язувальну частину, які містять варіабельну ділянку важкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕСО ІО МО: 48, і варіабельну ділянку легкого
Ко) ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮ МО: 52.
В іншому аспекті даний винахід направлений на антитіло до В7-НЗ або його антигензв'язувальну частину, які містять ділянку варіабельного домену важкого ланцюга, що включає (а) СОВА з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 49; (р) СОВ2 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 50; і (с) СОВЗ з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕС ІО МО: 51; і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка включає (а) СОВА з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 53; (Б) СОВ2 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 54; і (с) СОВЗ з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 55.
В іншому аспекті даний винахід направлений на антитіло до В7-НЗ або його антигензв'язувальну частину, які містять варіабельну ділянку важкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕСО ІО МО: 56, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮ МО: 60.
В іншому аспекті даний винахід направлений на антитіло до В7-НЗ або його антигензв'язувальну частину, які містять ділянку варіабельного домену важкого ланцюга, що включає (а) СОВА з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 57; (Б) СОВ2 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 58; і (с) СОВЗ з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕС ІО МО: 59; і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка включає (а) СОВА з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 61; (р) СОВ2 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 62; і (с) СОВЗ з амінокислотною
БО послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 63.
В іншому аспекті даний винахід направлений на антитіло до В7-НЗ або його антигензв'язувальну частину, які містять варіабельну ділянку важкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕСО ІО МО: 64, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮ МО: 68.
В іншому аспекті даний винахід направлений на антитіло до В7-НЗ або його антигензв'язувальну частину, які містять ділянку варіабельного домену важкого ланцюга, що включає (а) СОВА з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 65; (р) СОВ2 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 66; і (с) СОВЗ з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕС ІО МО: 67; і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка 60 включає (а) СОВА з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 69; (р) СОВ2 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 70; і (с) СОВЗ з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО І1О МО: 71.
В іншому аспекті даний винахід направлений на антитіло до В7-НЗ або його антигензв'язувальну частину, які містять варіабельну ділянку важкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІО МО: 72, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮ МО: 76.
В іншому аспекті даний винахід направлений на антитіло до В7-НЗ або його антигензв'язувальну частину, які містять ділянку варіабельного домену важкого ланцюга, що включає (а) СОВА з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 73; (в) СОВ2 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 74; і (с) СОВЗ з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕС ІО МО: 75; і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка включає (а) СОВА з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 77; (в) СОВ2 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 78; і (с) СОВЗ з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО І1О МО: 79.
В іншому аспекті даний винахід направлений на антитіло до В7-НЗ або його антигензв'язувальну частину, які містять варіабельну ділянку важкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕСО ІО МО: 80, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮ МО: 84.
В іншому аспекті даний винахід направлений на антитіло до В7-НЗ або його антигензв'язувальну частину, які містять ділянку варіабельного домену важкого ланцюга, що включає (а) СОВА з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 81; (р) СОВ2 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 82; і (с) СОВЗ з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕС ІО МО: 83; і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка включає (а) СОВА з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 85; (р) СОВ2 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 7; і (с) СОВЗ з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 86.
В іншому аспекті даний винахід направлений на антитіло до В7-НЗ або його антигензв'язувальну частину, які містять варіабельну ділянку важкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕСО ІО МО: 87, і варіабельну ділянку легкого
Ко) ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮ МО: 91.
В іншому аспекті даний винахід направлений на антитіло до В7-НЗ або його антигензв'язувальну частину, які містять ділянку варіабельного домену важкого ланцюга, що включає (а) СОВА з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 88; (Б) СОВ2 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 89; і (с) СОВЗ з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕС ІО МО: 90; і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка включає (а) СОВА з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 92; (р) СОВ2 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 93; і (с) СОВЗ з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 94.
В іншому аспекті даний винахід направлений на антитіло до В7-НЗ або його антигензв'язувальну частину, які містять варіабельну ділянку важкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕСО ІО МО: 95, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮ МО: 98.
В іншому аспекті даний винахід направлений на антитіло до В7-НЗ або його антигензв'язувальну частину, які містять ділянку варіабельного домену важкого ланцюга, що включає (а) СОВА з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 49; (р) СОВ2 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 96; і (с) СОВЗ з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕС ІО МО: 97; і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка включає (а) СОВА з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 99; (р) СОВ2 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 93; і (с) СОВЗ з амінокислотною
БО послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 100.
В іншому аспекті даний винахід направлений на антитіло до В7-НЗ або його антигензв'язувальну частину, які містять варіабельну ділянку важкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО І МО: 101, ії варіабельну ділянку легкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮ МО: 105.
В іншому аспекті даний винахід направлений на антитіло до В7-НЗ або його антигензв'язувальну частину, які містять ділянку варіабельного домену важкого ланцюга, що включає (а) СОВІ1 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІЮ МО: 102; (в) СОВ2 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІЮ МО: 103; ї (су СОВЗ з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕС ІЮ МО: 104; і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка 60 включає (а) СОВІ1 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІЮ МО: 106; (в) СОВ2 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 46; і (с) СОВЗ з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО І1О МО: 107.
В іншому аспекті даний винахід направлений на антитіло до В7-НЗ або його антигензв'язувальну частину, які містять варіабельну ділянку важкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО І МО: 108, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІО МО: 112.
В іншому аспекті даний винахід направлений на антитіло до В7-НЗ або його антигензв'язувальну частину, які містять ділянку варіабельного домену важкого ланцюга, що включає (а) СОВІ1 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІЮ МО: 109; (в) СОВ2 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІЮ МО: 110; ї (су СОВЗ з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕС ІЮ МО: 111; і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка включає (а) СОВІ1 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІЮО МО: 113; (в) СОВ2 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІЮ МО: 114; ї (су СОВЗ з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО І1О МО: 115.
І.В. Гуманізовані антитіла до В7-НЗ
Для одержання гуманізованих антитіл до В7-НЗ можна використовувати химерні антитіла, розкриті в даному документі. Наприклад, після одержання і визначення характеристик химерних антитіл до В7-НЗ спАБ1-спАбБІ18 для гуманізації вибирали антитіла спАБЗ, спАбІ1З ії спАбБІ8.
Зокрема, створювали шість різноманітних гуманізованих антитіл на основі СсСпАБЗ (називані в даному документі пиАбЗмМ1, пиАрЗм2, пиАБЗмУЗ, пиАБЗм4, пиАрЗм5 і пиАбБЗмЄ (див. приклади 12 і 13)), створювали дев'ять різноманітних гуманізованих антитіл на основі СПАБ13 (називані в даному документі пиАр1З3м1, пиАр1Зм2, пиАр1З3м3, пиАБр1Зм4, пиАр1Зм5, пиАр1Змб6, пиАрІ13м7,
ПиАВрІ1ЗмУ8, пиАбБІ13м9) і створювали десять різноманітних гуманізовані антитіла на основі СПАБВ18 (називані в даному документі пиАб18м1, пиАБ18м2, пиІАБІт8м3, пиАбІТ8м4, пиАБ18м5, пиАрІ18мб, пПичАбБІ18м7, пиАр18м8, пиАБ18м9 ії пиАб18м10 (див. приклади 9 і 10)). В таблицях 8, 12, 16, 18119 представлені амінокислотні послідовності СОК, ділянок МН ї МІ. гуманізованих СспАбБЗ, СпПАбБІ3 і
СПАБІ1І8 відповідно.
Як правило, гуманізовані антитіла являють собою молекули антитіл, одержані з антитіла виду, відмінного від людини, яке зв'язується з необхідним антигеном, які мають одну або декілька гіперваріабельних ділянок (СОК) від виду, відмінного від людини, і каркасні ділянки з молекули імуноглобуліну людини. Відомі послідовності (Ж людини розкриті, наприклад, на мумуму.побрі.піт.пій.дом/епігте2- /дОегу.їсді; 0 млум.аїсс.огу/рпаде/пар.піті; мли. 5сідневісоту/; мулу.арсат.соту/; ммли.апіродугезошигсе.сот/опіїпесотр.пІті; мм. рибіїс.іазіаіе. еди/.арбоцї. реаго/гезеагсі іооі5.піті; м/млу.тдеп.ипі-пнеідерего.де/5ОЛТ/Т.Іті; 0 мли теетап.сот/іттипоіоду/СН- оБЖиБуоб.лпіт; мм Ліргагу ІіпКадневі.огу/12429Лттипе/Апіїбоду.піті; мли. питі.огу/дгапізЛесіигев/1996/иаб/; мимли.раш.сат.ас.ик/.арошї. тис 7/т- їікеїтадев5.пІті; ммли.апііродугезошгсе.соту/; тер.Нагмага.еди/Віої іпк5/ттипо- оду. літі лумли. іттипоодупК. соту; раїйброх мивії.еди/.ароцї.псепіег/Іпдех.- пІті; мли. ріоїтесп. ші .еди/.ароші. е/; млим.ребіо.сот/ра/340913/340913.піті-; м/млу.паї. изаа.дом/аміс/рирв/апіроду/; -млум.т.епіте- и.асір/.ароші.уазийо- /ЕїЇїва.піті; мумлу.ріодевідп.сот/Ларів.авр;. млуміспеї иК/ахр/Ласз/дамієвл/іп-
К5.піті; мумлму.Біоїтесп. ші. еди/.ароші Тесі/ргоїосої. літі; мили. ізас-пеї.ога/5іе5 део.піті; ахіті. ті ипі- тагбриго.ае/.ароцігек/АЕР- еїай.піті; Базегу.исі.Кип.пі/.ароці.)гааїв/Ліпкві.піті; мли. гесаб. ипі- на.де/ттипо.рте.пули.ейц/; мимлм.тгс-сре.сат.ас.ик/Іті-дос/ри- БіісС/ЛМТ ВО. піті; мимли 10. ипат.тх/міг/М тісе.піті; ітдї.спивс. "8104; мимли.ріоспет.исі.ас.иК/.ароші. тапіп/арз/Іпаех.піті; апіроаду.рат.ас.ик/; аврдеп.смт.їати.еєдиЛарлумуардеп. піті; мумли. ипі2Аи.сп/.арошцї.попедде/АНОзет- іпаг/5іїдеО1.піті; мимли.сгуві.роК.ас.ик/.арош.ирсао75/; мули. пітг.тгс.ас.ик/СС/ссаемд/ссаєм у. піт; мумм.раї.сат.ас.иКк/.ароші. тс 7/п- итапізайоп/ТАННР.піті; млмлу Бі. ипат.тх/міг/вігисіиге/віаї аіт.Ніті; мм. ріовзсі. тів5оцшгі.еди/втіИпор/іпаеєх.піті; мумуму.сгуві.Біос.сат.ас.ик/.аро- шТтоїїпа///ер- радез/РерузроЧесп.піті; млим.|егіпіделтг годисів.піт; мли. раїепів.іЮт.сот/рт.піті; в Кабаї еї аі., Зедиєпсез ої Ргоївїн5 ої Іттипоіодіса! Іпіегеві, 0.5. ЮОері. Неайй (1983), кожний включений у даний документ за допомогою посилання в повному обсязі. Такі імпортовані послідовності можна застосовувати для зниження імуногенності або зниження, підсилення або модифікації зв'язування, афінності, швидкості асоціації, швидкості дисоціації, авідності, специфічності, часу напівжиття або будь-яких інших відповідних характеристик, відомих із рівня техніки.
Залишки каркасної ділянки в каркасних ділянках людини можуть бути замінені на відповідний залишок із донорного за СОМ антитіла для зміни, переважно поліпшення, бо зв'язування антигена. Ці заміни в каркасній ділянці ідентифікують за допомогою способів, добре відомих із рівня техніки, наприклад за допомогою моделювання взаємодії СОМВ і залишків каркасної ділянки, щоб ідентифікувати залишки каркасної ділянки, важливі для зв'язування антигена, і шляхом порівняння послідовностей, щоб ідентифікувати незвичайні залишки каркасної ділянки в конкретних положеннях. (Див., наприклад, Оцееп еї аї., патент США за номером 5585089; Кіесптапп еї аї!., Майшге 332:323 (1988), які включені у даний документ за допомогою посилання в повному обсязі). Загальнодоступними є тривимірні моделі імуноглобулінів, і вони добре відомі фахівцям у даній галузі техніки. Доступні комп'ютерні програми, які ілюструють і відображають можливі структури тривимірної конформації вибраних послідовностей кандидатних імуноглобулінів. Перегляд цих відображень забезпечує аналіз можливої ролі залишків у функціонуванні послідовності кандидатного імуноглобуліну, тобто аналіз залишків, які впливають на здатність кандидатного імуноглобуліну зв'язувати свій антиген. Таким чином, ЕК-залишки можна вибирати з консенсусних та імпортованих послідовностей і комбінувати, щоб досягти потрібної характеристики антитіла, такої як підвищена афінність щодо цільового(-их) антигена(-ів). Як правило, СОкК-залишки безпосередньо і найбільш істотно залучені у вплив на зв'язування антигена. Антитіла можна гуманізувати із застосуванням цілого ряду методик, відомих із рівня техніки, таких як без обмеження описані в Щдопеб еї аїЇ., Маїшге 321:522 (1986); Метоеуеп еї аї., 5сіепсе 239:1534 (1988)), 5ітз5 еї аї., У. Іттипої. 151: 2296 (1993); Споїніа апа І е5К, У. Мої. Віо!. 196:901 (1987),
Сапег єї аї., Ргос. Маї)!. Асад. сі. 0.5.А. 89:4285 (1992); Ргевзіа вії аї!., у). Іттипої. 151:2623 (1993),
Радіап, Моїеєсшаг Іттипоіоду 28(4/5):489-498 (1991); Зщапіска єї аї., Ргоївїп Епдіпеегіпа 7(6):805-814 (1994); ВодивКа. еї а , РМАБ 91:969-973 (1994); публікація згідно з РОСТ
МО 91/09967, РСТ/: И598/16280, И596/18978, 0591/09630, И591/05939, И594/01234,
С2в89/01334, (3891/01134, 24892/01755; МО90/14443, М/О90/14424, МО90/14430, ЕР 229246,
ЕР 592106; ЕР 519596, ЕР 239400, патенти США МоМо 5565332, 5723323, 5976862, 5824514, 5817483, 5814476, 5763192, 5723323, 5766886, 5714352, 6204023, 6180370, 5693762, 5530101, 5585089, 5225539; 4816567, кожний включено в даний документ за допомогою посилання в повному обсязі, зокрема бібліографічні посилання, процитовані в них.
Гуманізовані антитіла до В7-НЗ, одержані з СПАБЗ
На основі СПАБЗ створювали шість гуманізованих антитіл. Послідовність кожного наведена нижче:
А) пПчАВБЗМ!І (амінокислотна послідовність МН викладена під 5ЕО ІЮО МО: 125, і амінокислотні послідовності СОКІ1, СОБ2 і СОКЗ МН викладені під ЗЕО ІЮО МО: 10, 11 ї 12 відповідно; і амінокислотна послідовність МІ викладена під 5ЕО ІЮ МО: 128, і амінокислотні послідовності
СО, СОК2 і СОКЗ Мі. викладені під 5ЕО ІЮ МО: 14, 7 і 15 відповідно);
В) пчАВрЗмМ2 (амінокислотна послідовність МН викладена під 5ЕО ІЮО МО: 127, і амінокислотні послідовності СОКІ, СОБ2 і СОКЗ МН викладені під ЗЕО ІЮО МО: 10, 11 їі 12 відповідно; і амінокислотна послідовність МІ викладена під 5ЕО ІЮ МО: 128, і амінокислотні послідовності
СО, СОК2 і СОКЗ Мі. викладені під 5ЕО ІЮ МО: 14, 7 і 15 відповідно);
С) пчАБЗУЗ (амінокислотна послідовність МН викладена під 5ЕО ІЮ МО: 126, і амінокислотні послідовності СОКІ, СОК2 і СОКЗ МН викладені під ЗЕО ІЮ МО: 10, 11 ї 12 відповідно; і амінокислотна послідовність МІ викладена під 5ЕО ІЮ МО: 129, і амінокислотні послідовності
СОВІ, СОР і СОКЗ МІ. викладені під ЗЕО ІЮ МО: 14, 7 і 15 відповідно); р) пиАБЗма (амінокислотна послідовність МН викладена під 5ЕО ІЮ МО: 125, і амінокислотні послідовності СОКІ1, СОБ2 і СОКЗ МН викладені під ЗЕО ІЮО МО: 10, 11 ї 12 відповідно; і амінокислотна послідовність МІ викладена під 5ЕО ІЮО МО: 130, і амінокислотні послідовності
СО, СОК2 і СОКЗ Мі. викладені під 5ЕО ІЮ МО: 14, 7 і 15 відповідно);
Е) пчІАБЗУ5 (амінокислотна послідовність МН викладена під 5ЕО ІЮО МО: 127, і амінокислотні послідовності СОБІ, СОБ2 і СОЗ3 МН викладені під 5ЕО ІЮО МО: 10, 11 ї 12 відповідно; і амінокислотна послідовність МІ викладена під 5ЕО ІЮ МО: 130, і амінокислотні послідовності
БО СО, СОК2 і СОКЗ Мі. викладені під 5ЕО ІО МО: 14, 7 і 15 відповідно) і
Е) пиАБЗУб (амінокислотна послідовність МН викладена під ЗЕО ІО МО: 126, і амінокислотні послідовності СОКІ1, СОБ2 і СОКЗ МН викладені під ЗЕО ІЮО МО: 10, 11 ї 12 відповідно; і амінокислотна послідовність МІ викладена під 5ЕО ІЮ МО: 130, і амінокислотні послідовності
СО, СОК2 і СОКЗ МІ. викладені під БЕО ІЮ МО: 14, 7 і 15 відповідно).
Із шести гуманізованих версій СПАБЗ вибирали пиАрЗм2 для додаткової модифікації, щоб видалити потенційні сайти дезамідування або ізомеризації в СОКІ1 легкого ланцюга або СОК2 важкого ланцюга. Створювали дев'ять варіантів гуманізованого антитіла пиАбЗма2 і називали в даному документі як пиАбБЗм2.1, пиАБЗм2.2, пиАБЗмМ2.3, пиАрЗм2.4, пиАБЗм2.5, пПиАрЗмМ2.6, пиАБЗм2.7, пиАрЗм2.8 і пиАБЗмМ2.9 (послідовності СОК і варіабельного домену наведені в бо таблиці 16). Дев'ять варіантів антитіла пПиАбБЗм2 включають наступні:
А) ПпПиАбБЗм2.1 (амінокислотна послідовність МН викладена під 5БЕО ІЮО МО: 131, і амінокислотні послідовності СОБІ, СОВ2 і СОКЗ МН викладені під ЗЕО ІЮ МО: 10, 132 і 12 відповідно; і амінокислотна послідовність МІ викладена під 5ЕО ІЮ МО: 133, і амінокислотні послідовності СОК1Т, СОК2 і СОКЗ МІ. викладені під ЗЕО ІЮ МО: 134, 7 і 15 відповідно);
В) ПпПиАбБЗм2.2 (амінокислотна послідовність МН викладена під 5ЕО ІЮО МО: 131, і амінокислотні послідовності СОБІ, СОМК2 і СОКЗ МН викладені під 5ЕО ІЮ МО: 10, 132 і 12 відповідно; і амінокислотна послідовність МІ викладена під ЗЕО ІО МО: 135, і амінокислотні послідовності СОК1Т, СОК2 і СОКЗ МІ. викладені під ЗЕО ІЮ МО: 136, 7 і 15 відповідно);
С) ПпПиАБЗмМ2.3 (амінокислотна послідовність МН викладена під 5ЕО ІЮО МО: 131, і амінокислотні послідовності СОКІ, СОК2 ії СОКЗ МН викладені під 5ЕО ІЮ МО: 10, 132 їі 12 відповідно; і амінокислотна послідовність МІ викладена під ЗЕО ІЮО МО: 137, і амінокислотні послідовності СОК1Т, СОК2 і СОКЗ МІ. викладені під ЗЕО ІЮ МО: 138, 7 і 15 відповідно);
Б) пиАБЗм2.4 (амінокислотна послідовність МН викладена під 5ЕО ІЮ МО: 139, ії амінокислотні послідовності СОБІ, СОВ2 і СОКЗ МН викладені під ЗЕО ІЮ МО: 10, 140 і 12 відповідно; і амінокислотна послідовність МІ викладена під 5ЕО ІЮ МО: 133, і амінокислотні послідовності СОК1Т, СОК2 і СОКЗ МІ. викладені під ЗЕО ІЮ МО: 134, 7 і 15 відповідно);
Е) ПпПиАбБЗм2.5 (амінокислотна послідовність МН викладена під 5ЕО ІО МО: 139, і амінокислотні послідовності СОБІ, СОМК2 і СОКЗ МН викладені під 5ЕО ІЮ МО: 10, 140 їі 12 відповідно; і амінокислотна послідовність МІ викладена під ЗЕО ІО МО: 135, і амінокислотні послідовності СОК1Т, СОК2 і СОКЗ МІ. викладені під ЗЕО ІЮ МО: 136, 7 і 15 відповідно);
Е) пПиАБЗм2.6 (амінокислотна послідовність МН викладена під 5ЕО ІЮ МО: 139, і амінокислотні послідовності СОБІ, СОВ2 і СОКЗ МН викладені під ЗЕО ІЮ МО: 10, 140 і 12 відповідно; і амінокислотна послідовність МІ викладена під ЗЕО ІЮО МО: 137, і амінокислотні послідовності СОК1Т, СОК2 і СОКЗ МІ. викладені під ЗЕО ІЮ МО: 138, 7 і 15 відповідно); б) пПиАБЗмМ2.7 (амінокислотна послідовність МН викладена під 5БЕО ІЮО МО: 141, і амінокислотні послідовності СОБІ, СОВ2 і СОКЗ МН викладені під ЗЕО ІЮ МО: 10, 142 і 12 відповідно; і амінокислотна послідовність МІ викладена під ЗЕО ІЮ МО: 133, і амінокислотні послідовності СОК1Т, СОК2 і СОКЗ МІ. викладені під ЗЕО ІЮ МО: 134, 7 і 15 відповідно);
Н) пидАБЗм2.8 (амінокислотна послідовність МН викладена під 5ЕО ІЮ МО: 141, і
Ко) амінокислотні послідовності СОБІ, СОМК2 і СОКЗ МН викладені під 5ЗЕО ІЮ МО: 10, 142 і 12 відповідно; і амінокислотна послідовність МІ викладена під ЗЕО ІО МО: 135, і амінокислотні послідовності СОК1Т, СОК2 і СОКЗ Мі. викладені під ЗЕО ІЮ МО: 136, 7 і 15 відповідно) і
І) пиАБбЗмМ2.9 (амінокислотна послідовність УН викладена під 5ЕО ІЮ МО: 141, і амінокислотні послідовності СОКІ, СОК2 ії СОКЗ МН викладені під 5ЕО ІЮ МО: 10, 142 і 12 відповідно; і амінокислотна послідовність МІ викладена під 5ЕО ІЮ МО: 137, і амінокислотні послідовності
СО, СОК2 і СОКЗ Мі. викладені під ЗЕО ІО МО: 138, 7 і 15 відповідно).
Таким чином, в одному аспекті даний винахід передбачає антитіла, які містять послідовності варіабельних ділянок та/"або СОК гуманізованого антитіла, одержаного з спАБЗ3. В одному варіанті здійснення даний винахід включає антитіла до В7-НЗ, які одержані з АБЗ, які мають поліпшені характеристики, наприклад поліпшену афінність зв'язування з виділеним білком В7-
НЗ ї поліпшене зв'язування з клітинами, які експресують В7-НЗ, як описано в прикладах нижче.
У сукупності ці нові антитіла називають в даному документі як "варіантні антитіла з АБЗ". Як правило, варіантні антитіла з АБЗ зберігають таку саму специфічність епітопу, як ії АБЗ. В різноманітних варіантах здійснення антитіла до В7-НЗ або їх антигензв'язувальні фрагменти за даним винаходом здатні модулювати біологічну функцію В7-НЗ.
В одному аспекті даний винахід передбачає гуманізоване антитіло або його антигензв'язувальну частину, які мають варіабельну ділянку важкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕС ІО МО: 125, 126, 127, 131, 139 або 141; та/або варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка включає амінокислотну послідовність, викладену під
ЗЕО ІЮ МО: 128, 129, 130, 133, 135 або 137.
В іншому аспекті даний винахід направлений на антитіло до В7-НЗ або його антигензв'язувальну частину за даним винаходом, які містять варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить домен СОКТ, який містить амінокислотну послідовність, викладену під БЗЕО
ІО МО: 10, і домен СОК2, який містить амінокислотну послідовність, викладену під БЕО ІЮ МО: 11, 132, 140 або 142, і домен СОМКЗ, який містить амінокислотну послідовність, викладену під
ЗЕО ІЮ МО: 12; і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка містить домен СОКТ, який містить амінокислотну послідовність, викладену під ЗЕО ІЮ МО: 14, 134, 136 або 138; домен СОК2, який містить амінокислотну послідовність, викладену під ЗЕ ІЮО МО: 7, ії домен СОКЗ, який містить амінокислотну послідовність, викладену під ЗЕО ІЮ МО: 15. 60 В одному аспекті даний винахід направлений на антитіло до В7/-НЗ або його антигензв'язувальну частину, які мають варіабельну ділянку важкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО І МО: 125, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІО МО: 128.
В одному аспекті даний винахід направлений на антитіло до В7/-НЗ або його антигензв'язувальну частину, які мають варіабельну ділянку важкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮО МО: 127, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІО МО: 128.
В одному аспекті даний винахід направлений на антитіло до В7/-НЗ або його антигензв'язувальну частину, які мають варіабельну ділянку важкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО І МО: 126, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІО МО: 129.
В одному аспекті даний винахід направлений на антитіло до В7/-НЗ або його антигензв'язувальну частину, які мають варіабельну ділянку важкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО І МО: 125, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮО МО: 130.
В одному аспекті даний винахід направлений на антитіло до В7-НЗ або його антигензв'язувальну частину, які мають варіабельну ділянку важкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮО МО: 127, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІО МО: 130.
В одному аспекті даний винахід направлений на антитіло до В7/-НЗ або його антигензв'язувальну частину, які мають варіабельну ділянку важкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО І МО: 126, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮО МО: 130.
В іншому аспекті даний винахід направлений на гуманізоване антитіло до В7-НЗ або його антигензв'язувальну частину, які мають ділянку варіабельного домену важкого ланцюга, яка включає (а) СОВА з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 10; (Б) СОВ2 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 11; і (с) СОВЗ з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕС ІО МО: 12; і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка включає (а) СОВА з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 14; (р) СОВ2 з
Ко) амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 7; і (с) СОВЗ з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 15.
В одному аспекті даний винахід направлений на антитіло до В7/-НЗ або його антигензв'язувальну частину, які мають варіабельну ділянку важкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО І МО: 131, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮО МО: 133.
В іншому аспекті даний винахід направлений на гуманізоване антитіло до В7-НЗ або його антигензв'язувальну частину, які мають ділянку варіабельного домену важкого ланцюга, яка включає (а) СОВА з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 10; (Б) СОВ2 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІЮ МО: 132; ї (су СОВЗ з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕСО ІО МО: 12; і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка включає (а) СОВІ1 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІЮ МО: 134; (в) СОВ2 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 7; і (с) СОВЗ з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 15.
В одному аспекті даний винахід направлений на антитіло до В7/-НЗ або його антигензв'язувальну частину, які мають варіабельну ділянку важкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО І МО: 131, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІО МО: 135.
В іншому аспекті даний винахід направлений на гуманізоване антитіло до В7-НЗ або його антигензв'язувальну частину, які мають ділянку варіабельного домену важкого ланцюга, яка
БО включає (а) СОВА з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5БЕО ІО МО: 10; (Б) СОВ2 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІЮ МО: 132; ї (су СОВЗ з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕС ІО МО: 12; і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка включає (а) СОВІ1 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІЮ МО: 136; (в) СОВ2 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 7; і (с) СОВЗ з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 15.
В одному аспекті даний винахід направлений на антитіло до В7/-НЗ або його антигензв'язувальну частину, які мають варіабельну ділянку важкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО І МО: 131, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮО МО: 137. 60 В іншому аспекті даний винахід направлений на гуманізоване антитіло до В7-НЗ або його антигензв'язувальну частину, які мають ділянку варіабельного домену важкого ланцюга, яка включає (а) СОВА з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 10; (Б) СОВ2 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІЮ МО: 132; ї (су СОВЗ з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕС ІО МО: 12; і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка включає (а) СОВІ1 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІЮ МО: 138; (в) СОВ2 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 7; і (с) СОВЗ з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 15.
В одному аспекті даний винахід направлений на антитіло до В7/-НЗ або його антигензв'язувальну частину, які мають варіабельну ділянку важкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО І МО: 139, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮО МО: 133.
В іншому аспекті даний винахід направлений на гуманізоване антитіло до В7-НЗ або його антигензв'язувальну частину, які мають ділянку варіабельного домену важкого ланцюга, яка включає (а) СОВА з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 10; (Б) СОВ2 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІЮ МО: 140; ї (су СОВЗ з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕС ІО МО: 12; і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка включає (а) СОВІ1 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІЮ МО: 134; (в) СОВ2 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 7; і (с) СОВЗ з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 15.
В одному аспекті даний винахід направлений на антитіло до В7/-НЗ або його антигензв'язувальну частину, які мають варіабельну ділянку важкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО І МО: 139, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮО МО: 135.
В іншому аспекті даний винахід направлений на гуманізоване антитіло до В7-НЗ або його антигензв'язувальну частину, які мають ділянку варіабельного домену важкого ланцюга, яка включає (а) СОВА з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 10; (Б) СОВ2 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІЮ МО: 140; ї (су СОВЗ з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕС ІО МО: 12; і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка включає (а) СОВІ1 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІЮ МО: 136; (в) СОВ2 з
Ко) амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 7; і (с) СОВЗ з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 15.
В іншому аспекті даний винахід направлений на антитіло до В7-НЗ або його антигензв'язувальну частину, які мають важкий ланцюг, який містить амінокислотну послідовність під ФЕО ІЮО МО: 170, і легкий ланцюг, який містить амінокислотну послідовність під
ЗЕО ІЮ МО: 171.
В одному аспекті даний винахід направлений на антитіло до В7/-НЗ або його антигензв'язувальну частину, які мають варіабельну ділянку важкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО І МО: 139, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮО МО: 137.
В іншому аспекті даний винахід направлений на гуманізоване антитіло до В7-НЗ або його антигензв'язувальну частину, які мають ділянку варіабельного домену важкого ланцюга, яка включає (а) СОВА з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 10; (Б) СОВ2 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІЮ МО: 140; ї (су СОВЗ з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕС ІО МО: 12; і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка включає (а) СОВІ1 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІЮ МО: 138; (в) СОВ2 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 7; і (с) СОВЗ з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 15.
В іншому аспекті даний винахід направлений на антитіло до В7-НЗ або його антигензв'язувальну частину, які мають важкий ланцюг, який містить амінокислотну
БО послідовність під 5ЕО ІЮО МО: 172, і легкий ланцюг, який містить амінокислотну послідовність під
ЗЕО ІЮ МО: 173. В одному аспекті даний винахід направлений на антитіло до В7-НЗ або його антигензв'язувальну частину, які мають варіабельну ділянку важкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮО МО: 141, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮО МО: 133.
В іншому аспекті даний винахід направлений на гуманізоване антитіло до В7-НЗ або його антигензв'язувальну частину, які мають ділянку варіабельного домену важкого ланцюга, яка включає (а) СОВА з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 10; (Б) СОВ2 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІЮ МО: 142; ї (су СОВЗ з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕС ІО МО: 12; і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка 60 включає (а) СОВІ1 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІЮ МО: 134; (в) СОВ2 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 7; і (с) СОВЗ з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 15.
В одному аспекті даний винахід направлений на антитіло до В7/-НЗ або його антигензв'язувальну частину, які мають варіабельну ділянку важкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮО МО: 141, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮО МО: 135.
В іншому аспекті даний винахід направлений на гуманізоване антитіло до В7-НЗ або його антигензв'язувальну частину, які мають ділянку варіабельного домену важкого ланцюга, яка включає (а) СОВА з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 10; (Б) СОВ2 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІЮ МО: 142; ї (су СОВЗ з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕС ІО МО: 12; і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка включає (а) СОВІ1 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІЮ МО: 136; (в) СОВ2 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 7; і (с) СОВЗ з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 15.
В одному аспекті даний винахід направлений на антитіло до В7/-НЗ або його антигензв'язувальну частину, які мають варіабельну ділянку важкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮО МО: 141, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮО МО: 137.
В іншому аспекті даний винахід направлений на гуманізоване антитіло до В7-НЗ або його антигензв'язувальну частину, які мають ділянку варіабельного домену важкого ланцюга, яка включає (а) СОВА з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 10; (Б) СОВ2 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІЮ МО: 142; ї (су СОВЗ з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕС ІО МО: 12; і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка включає (а) СОВІ1 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІЮ МО: 138; (в) СОВ2 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 7; і (с) СОВЗ з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 15.
Гуманізовані антитіла до В7-НЗ, одержані з СПАБ1З
Дев'ять різноманітних гуманізованих антитіл, створених на основі спАбБ13, включають наступні:
Ко) А) пиАбБ13м1 (амінокислотна послідовність МН викладена під ЗЕО ІЮ МО: 147, і амінокислотні послідовності СОБІ, СОБ2 і СОКЗ МН викладені під ЗЕБЕО ІЮО МО: 33, 34 і 35 відповідно; і амінокислотна послідовність МІ викладена під 5ЕО ІЮ МО: 144, і амінокислотні послідовності
СО, СОК2 і СОКЗ Мі. викладені під 5ЕО ІЮ МО: 37, 38 і 39 відповідно);
В) пиАб13м2 (амінокислотна послідовність УН викладена під 5ЕО ІЮ МО: 146, і амінокислотні послідовності СОКІ1, СОБ2 і СОКЗ МН викладені під ЗЕО ІЮО МО: 33, 34 і 35 відповідно; і амінокислотна послідовність МІ викладена під 5ЕО ІЮ МО: 143, і амінокислотні послідовності
СОВІ, СОВ2 і СОКЗ МІ. викладені під ЗЕО ІЮ МО: 37, 38 і 39 відповідно);
С) пиАбІ1ЗУЗ (амінокислотна послідовність МН викладена під 5ЕО ІЮО МО: 146, і амінокислотні послідовності СОКІ1, СОБ2 і СОКЗ МН викладені під ЗЕО ІЮО МО: 33, 34 і 35 відповідно; і амінокислотна послідовність МІ викладена під 5ЕО ІЮО МО: 144, і амінокислотні послідовності
СО, СОК2 і СОКЗ Мі. викладені під 5ЕО ІЮ МО: 37, 38 і 39 відповідно); р) пчАбрІЗма4 (амінокислотна послідовність МН викладена під 5ЕО ІЮ МО: 146, і амінокислотні послідовності СОК1, СОБ2 і СОБЗ МН викладені під ЗЕБЕО ІЮ МО: 33, 34 і 35 відповідно; і амінокислотна послідовність МІ викладена під 5ЕО ІЮ МО: 145, і амінокислотні послідовності
СО, СОК2 і СОКЗ Мі. викладені під 5ЕО ІЮ МО: 37, 38 і 39 відповідно);
Е) пиАбБ13У5 (амінокислотна послідовність УН викладена під 5ЕО ІЮ МО: 147, і амінокислотні послідовності СОКІ1, СОБ2 і СОКЗ МН викладені під ЗЕО ІЮО МО: 33, 34 і 35 відповідно; і амінокислотна послідовність МІ викладена під 5ЕО ІЮ МО: 143, і амінокислотні послідовності
СО, СОК2 і СОКЗ Мі. викладені під 5ЕО 1ІЮ МО: 37, 38 і 39 відповідно);
БО Е) пПиАБІ13м6 (амінокислотна послідовність УН викладена під 5ЕО ІЮ МО: 147, і амінокислотні послідовності СОКІ1, СОБ2 і СОКЗ МН викладені під ЗЕО ІЮО МО: 33, 34 і 35 відповідно; і амінокислотна послідовність МІ викладена під 5ЕО ІЮО МО: 145, і амінокислотні послідовності
СО, СОК2 і СОКЗ Мі. викладені під 5ЕО ІЮ МО: 37, 38 і 39 відповідно); б) пшАбБІЗ3м7 (амінокислотна послідовність МН викладена під 5ЕО ІЮО МО: 148, й амінокислотні послідовності СОБІ, СОБ2 і СОБЗ3 МН викладені під 5ЕО ІЮО МО: 33, 34 і 35 відповідно; і амінокислотна послідовність МІ викладена під ЗЕО ІО МО: 143, і амінокислотні послідовності СОК1Т, СОК2 і СОКЗ МІ. викладені під ЗЕО ІЮ МО: 37, 38 і 39 відповідно);
Н) пчАБІТЗУв8 (амінокислотна послідовність МН викладена під 5ЕО ІЮО МО: 148, і амінокислотні послідовності СОКІ1, СОБ2 і СОКЗ МН викладені під ЗЕО ІЮО МО: 33, 34 і 35 відповідно; і 60 амінокислотна послідовність МІ викладена під 5ЕО ІЮ МО: 144, і амінокислотні послідовності
СО, СОК2 і СОКЗ Мі. викладені під БЕО ІО МО: 37, 38 і 39 відповідно);
І) пиАбІТЗ3мо (амінокислотна послідовність МН викладена під 5ЕО ІЮ МО: 148, і амінокислотні послідовності СОКІ1, СОБ2 і СОКЗ МН викладені під ЗЕО ІЮО МО: 33, 34 і 35 відповідно; і амінокислотна послідовність МІ викладена під ЗЕО ІЮО МО: 145, і амінокислотні послідовності
СО, СОК2 і СОКЗ Мі. викладені під 5ЕО ІЮ МО: 37, 38 і 39 відповідно).
Таким чином, в одному аспекті даний винахід передбачає антитіла, які містять послідовності варіабельних ділянок талабо СОК гуманізованого антитіла, одержаного з спАбБ13. В одному варіанті здійснення даний винахід включає антитіла до В7-НЗ, які одержані з СПАБІ3, які мають поліпшені характеристики, наприклад поліпшену афінність зв'язування з виділеним білком ВОВ7-
НЗ ї поліпшене зв'язування з клітинами, які експресують В7-НЗ, як описано в прикладах нижче.
У сукупності ці нові антитіла називають в даному документі як "варіантні антитіла з АБ13". Як правило, варіантні антитіла з АБ13 зберігають таку саму специфічність епітопу, як і АБ13. В різноманітних варіантах здійснення антитіла до В7-НЗ або їх антигензв'язувальні фрагменти за даним винаходом здатні модулювати біологічну функцію В7-НЗ.
В одному аспекті даний винахід передбачає гуманізоване антитіло або його антигензв'язувальну частину, які мають варіабельну ділянку важкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІО МО: 146, 147 або 148; та/або варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІО МО: 143, 144 або 145.
В іншому аспекті даний винахід направлений на антитіло до В7-НЗ або його антигензв'язувальну частину за даним винаходом, які містять варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить домен СОН, який містить амінокислотну послідовність, викладену під ЕС
ІО МО: 33, і домен СОН, який містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІО МО: 34, і домен СОВЗ, який містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕС ІЮО МО: 35; і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка містить домен СОВІ1, який містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО І МО: 37, і домен СОН2, який містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО І МО: 38, і домен СОВЗ, який містить амінокислотну послідовність, викладену під ФЕО ІЮО МО: 39.
В одному аспекті даний винахід направлений на антитіло до В7/-НЗ або його
Зо антигензв'язувальну частину, які мають варіабельну ділянку важкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО І МО: 147, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮ МО: 144. В одному варіанті здійснення даний винахід передбачає антитіло до В7НЗ, яке містить послідовності
СОН, викладені в різноманітних ділянках ПиАБ1ТЗмі (5ЕО ІО МО. 144 і 147).
В одному аспекті даний винахід направлений на антитіло до В7-НЗ або його антигензв'язувальну частину, які мають важкий ланцюг, який містить амінокислотну послідовність під БЕО ІЮО МО: 168, і легкий ланцюг, який містить амінокислотну послідовність під
ЗЕО ІЮ МО: 169.
В одному аспекті даний винахід направлений на антитіло до В7-НЗ або його антигензв'язувальну частину, які мають варіабельну ділянку важкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО І МО: 146, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІО МО: 143.
В одному аспекті даний винахід направлений на антитіло до В7/-НЗ або його антигензв'язувальну частину, які мають варіабельну ділянку важкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО І МО: 146, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮО МО: 144.
В одному аспекті даний винахід направлений на антитіло до В7/-НЗ або його антигензв'язувальну частину, які мають варіабельну ділянку важкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО І МО: 146, і варіабельну ділянку легкого
БО ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІО МО: 145.
В одному аспекті даний винахід направлений на антитіло до В7/-НЗ або його антигензв'язувальну частину, які мають варіабельну ділянку важкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО І МО: 147, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІО МО: 143.
В одному аспекті даний винахід направлений на антитіло до В7/-НЗ або його антигензв'язувальну частину, які мають варіабельну ділянку важкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО І МО: 147, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІО МО: 145.
В одному аспекті даний винахід направлений на антитіло до В7/-НЗ або його бо антигензв'язувальну частину, які мають варіабельну ділянку важкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО І МО: 148, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІО МО: 143.
В одному аспекті даний винахід направлений на антитіло до В7/-НЗ або його антигензв'язувальну частину, які мають варіабельну ділянку важкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО І МО: 148, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮО МО: 144.
В одному аспекті даний винахід направлений на антитіло до В7/-НЗ або його антигензв'язувальну частину, які мають варіабельну ділянку важкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО І МО: 148, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІО МО: 145.
Гуманізовані антитіла до В7-НЗ, одержані з СПАБ18
Десять різноманітних гуманізованих антитіл, створених на основі СпПАбБІ18, включають наступні:
А) пиАбБ18м1 (амінокислотна послідовність МН викладена під ЗЕО ІЮ МО: 116, і амінокислотні послідовності СОКІ, СОК2 і СОКЗ МН викладені під ЗЕО ІЮ МО: 25, 26 їі 27 відповідно; і амінокислотна послідовність МІ викладена під 5ЕО ІЮ МО: 120, і амінокислотні послідовності
СО, СОК2 і СОКЗ Мі. викладені під ЗЕО ІО МО: 29, 30 їі 31 відповідно);
В) пиАб18м2 (амінокислотна послідовність МН викладена під ЗЕО ІЮ МО: 118, і амінокислотні послідовності СОКІ, СОК2 ії СОКЗ МН викладені під 5ЕО ІЮО МО: 25, 119 і 27 відповідно; і амінокислотна послідовність МІ викладена під 5ЕО ІЮ МО: 120, і амінокислотні послідовності
СО, СОК2 і СОКЗ Мі. викладені під 5ЕО ІЮ МО: 29, 30 ї 31 відповідно);
С) пиАбБ18Уу3 (амінокислотна послідовність МН викладена під 5ЕО ІЮО МО: 117, і амінокислотні послідовності СОКІ, СОБ2 і СОБЗ МН викладені під ЗЕО ІЮО МО: 25, 26 і 27 відповідно; і амінокислотна послідовність МІ викладена під 5ЕО ІЮ МО: 121, і амінокислотні послідовності
СО, СОК2 і СОКЗ Мі. викладені під 5ЕО ІЮ МО: 29, 30 ї 31 відповідно); р) пчАбрІ1вма4 (амінокислотна послідовність УН викладена під 5ЕО ІЮ МО: 118, і амінокислотні послідовності СОКІ, СОК2 ії СОКЗ МН викладені під 5ЕО ІЮО МО: 25, 119 і 27 відповідно; і амінокислотна послідовність МІ викладена під 5ЕО ІЮ МО: 121, і амінокислотні послідовності
СО, СОК2 і СОКЗ Мі. викладені під 5ЕО ІЮ МО: 29, 30 ї 31 відповідно);
Ко) Е) пиАрІТ8У5 (амінокислотна послідовність УН викладена під ЗЕО ІО МО: 116, і амінокислотні послідовності СОК1, СОБ2 і СОКЗ МН викладені під ЗЕО ІЮО МО: 25, 26 і 27 відповідно; і амінокислотна послідовність МІ викладена під 5ЕО ІЮ МО: 123, і амінокислотні послідовності
СО, СОК2 і СОКЗ Мі. викладені під 5ЕО ІЮ МО: 29, 30 ї 31 відповідно);
Е) пиАБ18м6 (амінокислотна послідовність УН викладена під 5ЕО ІЮ МО: 118, і амінокислотні послідовності СОКІ, СОК2 ії СОКЗ МН викладені під 5ЕО ІЮО МО: 25, 119 і 27 відповідно; і амінокислотна послідовність МІ викладена під 5ЕО ІЮ МО: 123, і амінокислотні послідовності
СО, СОК2 і СОКЗ Мі. викладені під 5ЕО ІЮ МО: 29, 30 ї 31 відповідно); б) пшАбБІ8м7 (амінокислотна послідовність МН викладена під 5ЕО ІЮО МО: 118, і амінокислотні послідовності СОБІ, СОБ2 і СОКЗ МН викладені під 5ЗЕО ІЮО МО: 25, 119 і 27 відповідно; і амінокислотна послідовність МІ викладена під ЗЕО ІО МО: 124, і амінокислотні послідовності СОК1Т, СОК2 і СОКЗ МІ. викладені під ЗЕО ІЮ МО: 29, 30 і 31 відповідно);
Н) пиАБ8У8 (амінокислотна послідовність УН викладена під ЗЕО ІЮ МО: 117, і амінокислотні послідовності СОК1, СОБ2 і СОКЗ МН викладені під ЗЕО ІЮО МО: 25, 26 і 27 відповідно; і амінокислотна послідовність МІ викладена під 5ЕО ІЮ МО: 122, і амінокислотні послідовності
СО, СОК2 і СОКЗ Мі. викладені під 5ЕО ІЮ МО: 29, 30 ї 31 відповідно);
І) пиАбІТ8мо (амінокислотна послідовність МН викладена під 5ЕО ІЮ МО: 117, і амінокислотні послідовності СОК1, СОБ2 і СОКЗ МН викладені під ЗЕО ІЮО МО: 25, 26 і 27 відповідно; і амінокислотна послідовність МІ викладена під 5ЕО ІЮ МО: 124, і амінокислотні послідовності
СО, СОК2 і СОКЗ Мі. викладені під 5ЕО ІО МО: 29, 30 ї 31 відповідно) і
БО У) пшАБІ8м10 (амінокислотна послідовність МН викладена під 5ЕО ІЮО МО: 118, ій амінокислотні послідовності СОКІ, СОК2 і СОКЗ МН викладені під ЗЕО ІЮО МО: 25, 119 1і 27 відповідно; і амінокислотна послідовність МІ викладена під ЗЕО ІЮО МО: 122, і амінокислотні послідовності СОК1Т, СОК2 і СОКЗ МІ. викладені під ЗЕО ІЮ МО: 29, 30 і 31 відповідно).
Таким чином, в одному аспекті даний винахід передбачає антитіла, які містять послідовності варіабельних ділянок талабо СОК гуманізованого антитіла, одержаного з спАбБ18. В одному варіанті здійснення даний винахід включає антитіла до В7-НЗ, які одержані з АБІ18, які мають поліпшені характеристики, наприклад поліпшену афінність зв'язування з виділеним білком ВОВ7-
НЗ ї поліпшене зв'язування з клітинами, які експресують В7-НЗ, як описано в прикладах нижче.
У сукупності ці нові антитіла називають в даному документі як "варіантні антитіла з АБ18". Як бо правило, варіантні антитіла з АБ18 зберігають таку саму специфічність епітопу, як і АБ18. В бо різноманітних варіантах здійснення антитіла до В7-НЗ або їх антигензв'язувальні фрагменти за даним винаходом здатні модулювати біологічну функцію В7-НЗ.
В одному аспекті даний винахід передбачає гуманізоване антитіло або його антигензв'язувальну частину, які мають варіабельну ділянку важкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІО МО: 116, 117 або 118; та/або варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІО МО: 120, 121, 122, 123 або 124.
В іншому аспекті даний винахід направлений на антитіло до В7-НЗ або його антигензв'язувальну частину за даним винаходом, які містять варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить домен СОН, який містить амінокислотну послідовність, викладену під ЕС
ІО МО: 25, і домен СОН, який містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІО МО: 26 або 119; і домен СОРВЗ, який містить амінокислотну послідовність, викладену під ФЕО 10 МО: 27; і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка містить домен СОН, який містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО І МО: 29, і домен СОН2, який містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО І МО: 30, і домен СОВЗ, який містить амінокислотну послідовність, викладену під ФЕО ІО МО: 31.
В одному аспекті даний винахід направлений на антитіло до В7/-НЗ або його антигензв'язувальну частину, які мають варіабельну ділянку важкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО І МО: 116, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІО МО: 120.
В іншому аспекті даний винахід направлений на гуманізоване антитіло до В7-НЗ або його антигензв'язувальну частину, які мають ділянку варіабельного домену важкого ланцюга, яка включає (а) СОВА з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 25; (р) СОВ2 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 26; і (с) СОВЗ з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕСО ІО МО: 27; і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка включає (а) СОВА з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 29; (р) СОВ2 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 30; і (с) СОВЗ з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 31.
В одному аспекті даний винахід направлений на антитіло до В7/-НЗ або його
Зо антигензв'язувальну частину, які мають варіабельну ділянку важкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО І МО: 118, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІО МО: 120.
В іншому аспекті даний винахід направлений на гуманізоване антитіло до В7-НЗ або його антигензв'язувальну частину, які мають ділянку варіабельного домену важкого ланцюга, яка включає (а) СОВА з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 25; (р) СОВ2 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІЮ МО: 119; ї (су СОВЗ з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕСО ІО МО: 27; і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка включає (а) СОВА з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 29; (р) СОВ2 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 30; і (с) СОВЗ з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 31.
В одному аспекті даний винахід направлений на антитіло до В7/-НЗ або його антигензв'язувальну частину, які мають варіабельну ділянку важкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮО МО: 117, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮО МО: 121.
В одному аспекті даний винахід направлений на антитіло до В7/-НЗ або його антигензв'язувальну частину, які мають варіабельну ділянку важкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО І МО: 118, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮО МО: 121.
В одному аспекті даний винахід направлений на антитіло до В7/-НЗ або його антигензв'язувальну частину, які мають варіабельну ділянку важкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО І МО: 116, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮО МО: 123.
В одному аспекті даний винахід направлений на антитіло до В7/-НЗ або його антигензв'язувальну частину, які мають варіабельну ділянку важкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО І МО: 118, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІО МО: 123.
В одному аспекті даний винахід направлений на антитіло до В7/-НЗ або його антигензв'язувальну частину, які мають варіабельну ділянку важкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО І МО: 118, і варіабельну ділянку легкого 60 ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮО МО: 124.
В одному аспекті даний винахід направлений на антитіло до В7/-НЗ або його антигензв'язувальну частину, які мають варіабельну ділянку важкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО І МО: 117, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮО МО: 122.
В одному аспекті даний винахід направлений на антитіло до В7/-НЗ або його антигензв'язувальну частину, які мають варіабельну ділянку важкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО І МО: 117, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІО МО: 124.
В одному аспекті даний винахід направлений на антитіло до В7/-НЗ або його антигензв'язувальну частину, які мають варіабельну ділянку важкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО І МО: 118, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮО МО: 122.
В одному аспекті даний винахід передбачає гуманізоване антитіло або його антигензв'язувальну частину, які мають варіабельну ділянку важкого ланцюга, що включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕСО ІО МО: 116, 117, 118, 146, 147, 148, 125, 126, 127, 131, 139 або 141; та/або варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка включає амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮ МО: 120, 121, 122, 123, 124, 143, 144, 145, 128, 129, 130, 133, 135 або 137.
В іншому аспекті даний винахід направлений на антитіло до В7-НЗ або його антигензв'язувальну частину за даним винаходом, які містять варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить домен СОН, який містить амінокислотну послідовність, викладену під ЕС)
ІО МО: 10, 25 або 33; домен СОН2, який містить амінокислотну послідовність, викладену під
ЗЕО ІЮ МО: 11, 26, 34, 119, 132, 140 або 142; і домен СОВЗ, який містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮ МО: 12, 27 або 35; і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка містить домен СОН, який містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІО МО: 14, 29, 37, 134, 136 або 138; домен СОН, який містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮО МО: 7, 30 або 38; і домен СОВЗ, який містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮ МО: 15, 31 або 39.
В іншому аспекті даний винахід передбачає антитіло до В7/-НЗ або його
Зо антигензв'язувальний фрагмент, які специфічно конкурують з антитілом до В7-НЗ або його фрагментом, як описано в даному документі, де вказана конкуренція може бути виявлена в аналізі конкурентного зв'язування з використанням указаного антитіла, поліпептиду В7-НЗ людини і антитіла до В7-НЗ або його фрагмента.
В конкретних варіантах здійснення конкуруюче антитіло або його антигензв'язувальна частина являють собою антитіло або його антигензв'язувальну частину, які конкурують з пПиАБЗм2.5, пиАБЗм2.6 або пиАбІЗмМ1.
В одному варіанті здійснення антитіла до В7-НЗ або їх антигензв'язувальні частини за даним винаходом зв'язуються з позаклітинним доменом В7-НЗ людини (5ЕО ІЮ МО: 152) з константою дисоціації (Ко), яка становить приблизно 1 х 105 М або менше, визначеною за допомогою поверхневого плазмонного резонансу. Альтернативно, антитіла або їх антигензв'язувальні частини зв'язуються з В7-НЗ людини з Ко, яка становить від приблизно 1 х 105 М до приблизно 1 х 1077 М, як визначено за допомогою поверхневого плазмонного резонансу. У додатковому альтернативному випадку антитіла або їх антигензв'язувальні частини зв'язуються з В7-НЗ людини з Ко, яка становить від приблизно 1 х 105 М до приблизно 1 х 10- М, як визначено за допомогою поверхневого плазмонного резонансу. Альтернативно, антитіла або їх антигензв'язувальні частини за даним винаходом зв'язуються з В7-НЗ людини з Ко, яка становить від приблизно 1 х 105 М до приблизно 5 х 10-! М, від приблизно 1 х 105 М до приблизно 5 х 1079 М; з Ко, яка становить від приблизно 1 х 102 М до приблизно 1 х 109 М; з Ко, яка становить від приблизно 1 х 109 М до приблизно 5 х 109 М; з Ко, яка становить від
БО приблизно 1 х 105 М до приблизно 1 х 103 М; з Ко, яка становить від приблизно 1 х 105 М до приблизно 5 х 103 М; з Ко, яка становить від приблизно 1 х 1077 М до приблизно 3,4 х 10-" М; з
Ко в діапазоні від приблизно 5,9 х 107 М до приблизно 2,2 х 107 М, як визначено за допомогою поверхневого плазмонного резонансу.
В одному варіанті здійснення антитіла або їх антигензв'язувальні частини за даним винаходом зв'язуються з В7-НЗ людини (5ЕО ІЮ МО: 149) з Ко, яка становить приблизно 1 х 10- 6М або менше, як визначено за допомогою поверхневого плазмонного резонансу.
Альтернативно, антитіла або їх антигензв'язувальні частини за даним винаходом зв'язуються з
В7-НЗ людини (ЗЕО І МО: 149) з Ко, яка становить від приблизно 8,2 х 109 М до приблизно 6,3 х 1070 М; з Ко, яка становить від приблизно 8,2 х 109 М до приблизно 2,0 х 109 М; з Ко, яка 60 становить від приблизно 2,3 х 109 М до приблизно 1,5 х 10-79 М, як визначено за допомогою поверхневого плазмонного резонансу.
На основі вказаного вище встановлена нова родина В7-НЗ-зв'язувальних білків, виділених згідно з даним винаходом і які включають антигензв'язувальні поліпептиди, які містять послідовності СОН, перелічені в таблиці послідовностей, наведеній в даному документі.
Антитіла до В7-НЗ, передбачені в даному документі, можуть містити варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка містить послідовності СОВІ, СОВ2 і СОНМВЗ, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка містить послідовності СОВІ, СОВ2 і СОВЗ, де одна або декілька цих послідовностей СОМ передбачають задані амінокислотні послідовності на основі антитіл, описаних у даному документі (наприклад, пиАбБІЗ3М1 або пиАБЗм2.5), або їх консервативні модифікації, при цьому антитіла зберігають потрібні функціональні властивості антитіл до В7-
НЗ, описані в даному документі. Відповідно, антитіло до В7-НЗ або його антигензв'язувальна частина може містити варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка містить послідовності СОВ'І1,
СОВ2 ї СОВЗ, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка містить послідовності СОВІ, СОВ2 і
СОВЗ, де: (а) послідовність СОВЗ варіабельної ділянки важкого ланцюга містить 5ЕО ІО МО: 12 або 35 та їх консервативні модифікації, наприклад 1, 2, 3, 4, 5, 1-2, 1-3, 1-4 або 1-5 консервативних амінокислотних замін; (б) послідовність СОНЗ варіабельної ділянки легкого ланцюга передбачає 5ЕО ІО МО: 15 або 39 та їх консервативні модифікації, наприклад 1, 2, 3, 4, 5, 1-2, 1-3, 1-4 або 1-5 консервативних амінокислотних замін; (с) антитіло специфічно зв'язується з В7-НЗ, і (4) антитіло проявляє 1, 2, 3, 4, 5, 6 або всі з наступних описаних у даному документі функціональних властивостей, наприклад зв'язування з розчинним В7-НЗ людини. В одному варіанті здійснення послідовність СОН2 варіабельної ділянки важкого ланцюга передбачає 5ЕО І МО: 140 або 34 та їх консервативні модифікації, наприклад 1, 2, 3, 4, 5, 1-2, 1-3, 1-4 або 1-5 консервативних амінокислотних замін; і послідовність СОН2 варіабельної ділянки легкого ланцюга передбачає 5ЕО ІЮО МО: 7 або 38 та їх консервативні модифікації, наприклад 1, 2, 3, 4, 5, 1-2, 1-3, 1-4 або 1-5 консервативних амінокислотних замін. В іншому переважному варіанті здійснення послідовність СОВІ варіабельної ділянки важкого ланцюга передбачає 5ЕО 10 МО: 10 або 33 та їх консервативні модифікації, наприклад 1, 2, 3, 4, 5, 1-2, 1-
З, 1-4 або 1-5 консервативних амінокислотних замін; і послідовність СОВІ1 варіабельної ділянки легкого ланцюга передбачає 5ЕО ІО МО: 136, 138 або 37 та їх консервативні модифікації, наприклад 1, 2, 3, 4, 5, 1-2, 1-3, 1-4 або 1-5 консервативних амінокислотних замін.
Консервативні амінокислотні заміни також можуть бути виконані в частинах антитіл, відмінних від СОК або на додаток до них. Наприклад, консервативні амінокислотні модифікації можуть бути виконані в каркасній ділянці або в Ес-ділянці. Варіабельна ділянка або важкий або легкий ланцюг можуть містити 1, 2, 3, 4, 5, 1-2, 1-3, 1-4, 1-5, 1-10, 1-15, 1-20, 1-25 або 1-50 консервативних амінокислотних замін щодо послідовностей антитіла до В7-НЗ, описаних у даному документі. У певних варіантах здійснення антитіла до В7-НЗ передбачають комбінацію консервативних і неконсервативних амінокислотних модифікацій.
Для одержання і відбору СОМ з переважним зв'язуванням В7-НЗ та/або нейтралізуючою активністю щодо ПВ7-НЗ3, можна застосовувати стандартні способи, відомі з рівня техніки, для одержання антитіл або їх антигензв'язувальних частин і оцінки характеристик зв'язування та/або нейтралізації В7-НЗ у цих антитіл або їх антигензв'язувальних частин, зокрема без обмеження конкретно описаних в даному документі.
У певних варіантах здійснення антитіло містить константну ділянку важкого ланцюга, таку як константна ділянка Ідс1, Ідса2, дез, Ідс4, ІДдА, ІЗЕ, ІМ або Ідор. В певних варіантах здійснення антитіло до В7-НЗ або його антигензв'язувальна частина містять константний домен важкого ланцюга імуноглобуліну из константного домену ДМ людини, вибраний із групи, яка складається із константного домену дб людини, константного домену ДМ людини, константного домену ЇДЕ людини і константного домену ЇДА людини. У додаткових варіантах здійснення антитіло або його антигензв'язувальна частина має константну ділянку важкого ланцюга Ідс1і, константну ділянку важкого ланцюга /дс2, константну ділянку ІдСЗ або константну ділянку важкого ланцюга Ід54. Константна ділянка важкого ланцюга переважно являє собою константну ділянку важкого ланцюга Ідс1 або константну ділянку важкого ланцюга
І904. Крім того, антитіло може містити константну ділянку легкого ланцюга, яка являє собою константну ділянку легкого каппа-ланцюга або константну ділянку легкого лямбда-ланцюга.
Переважно, антитіло містить константну ділянку легкого каппа-ланцюга. Як альтернатива, частина антитіла може являти собою, наприклад, Бар-фрагмент або одноланцюговий Ем- фрагмент.
У деяких варіантах здійснення зв'язувальна частина антитіла до В7-НЗ являє собою Раб,
Еаб", Е(ар)2, Ем, зв'язаний дисульфідним зв'язком Ем, 5сЕм, однодоменне антитіло або діатіло. 60 У певних варіантах здійснення антитіло до В7-НЗ або його антигензв'язувальна частина являють собою мультиспецифічне антитіло, наприклад біспецифічне антитіло.
Описані заміщення амінокислотних залишків в Ес-частині для зміни ефекторної функції антитіла (М/іпіег, еї аІ. патенти США за номерами 5648260 і 5624821, включені в даний документ за допомогою посилання). Ес-частина антитіла опосередковує декілька важливих ефекторних функцій, наприклад, індукцію цитокінів, АОСС, фагоцитоз, комплементзалежну цитотоксичність (СОС) і період напівжиття/мунний кліренс антитіла та комплексів антиген-антитіло. У деяких випадках ці ефекторні функції є бажаними для терапевтичного антитіла, але в інших випадках можуть бути непотрібними або навіть шкідливими, залежно від терапевтичних цілей. Певні ізотипи ДО людини, зокрема, Ідс1 і І(д033, опосередковують АОСС та СОС шляхом зв'язування відповідно з Есук і компонентом С14 системи комплементу. Неонатальні Ес-рецептори (ЕсКп) являють собою найважливіші компоненти, що визначають період напівжиття антитіл у кровообігу. У ще одному варіанті здійснення щонайменше один амінокислотний залишок замінений у константній ділянці антитіла, наприклад Ес-ділянці антитіла, внаслідок чого ефекторні функції антитіла змінюються.
Один варіант здійснення даного винаходу включає рекомбінантний химерний антигенний рецептор (САК), який містить ділянки зв'язування описаних в даному документі антитіл, наприклад СОК важких та/або легких ланцюгів пиАб13м1. Рекомбінантний САК, описаний в даному документі, можна використовувати для перенаправлення специфічності Т-клітин на антиген незалежним від лейкоцитарного антигена людини (НГ А) чином. Таким чином, САК за даним винаходом можна використовувати в імунотерапії для допомоги в конструюванні власних імунних клітин суб'єкта-людини, з метою розпізнавання й атаки пухлини суб'єкта (див., наприклад, патенти США за номерами 6410319, 8389282, 8822647, 8906682, 8911993, 8916381, 8975071 і публікацію заявки на видачу патенту США за номером О520140322275, кожний із яких включений у даний документ за допомогою посилання щодо технології САК). Даний тип імунотерапії називається адоптивним переносом клітин (АСТ) і може використовуватися для лікування раку у суб'єкта, який потребує цього.
САК до В7-НЗ за даним винаходом переважно містить позаклітинний антигензв'язувальний домен, специфічний щодо В7-НЗ, трансмембранний домен, який використовується для закріплення САК в Т-клітині й один або декілька внутрішньоклітинних сигнальних доменів. В одному варіанті здійснення даного винаходу СА включає трансмембранний домен, який передбачає трансмембранний домен білка, вибраного з групи, яка складається з альфа, бета або зета ланцюга Т-клітинного рецептора, СО28, СОЗ епсилон, СО45, С0р4, СОр5, СсОр8, Сро, ср16, 2022, с033, с037, С0О64, СО80, сО086, Ср134, С0р137 і СО154. В одному варіанті здійснення даного винаходу САК містить костимулюючий домен, наприклад костимулюючий домен, який передбачає функціональний сигнальний домен білка, вибраного з групи, яка складається із ОХ40, 202, С027, С028, СО5, ІСАМ-1, І РА-1 (СО11а/С018), ІСОЗ (С0278) і 4- 1вв (СО137). У деяких варіантах здійснення даного винаходу САК передбачає 5сЕм, який містить СОК або варіабельні ділянки, описані в даному документі, наприклад СОК або варіабельні ділянки з антитіла пиАбБ13м!1, трансмембранний домен, костимулюючий домен (наприклад, функціональний сигнальний домен із СО28 або 4-188) і сигнальний домен, який передбачає функціональний сигнальний домен із СОЗ (наприклад, СОЗ-зета).
У деяких варіантах здійснення даний винахід передбачає Т-клітину, яка містить САК (також називану САК Т-клітиною), який передбачає ділянки зв'язування антигена, наприклад СОК, описаних в даному документі антитіл або 5сЕм, описаних в даному документі.
У певних варіантах здійснення даного винаходу САВ містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка містить домен СОН, який містить амінокислотну послідовність, викладену під
ЗЕО ІЮ МО: 10, 25 або 33; домен СОН2, який містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІО МО: 11, 26, 34, 119, 132, 140 або 142; і домен СОВЗ, який містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮО МО: 12, 27 або 35; і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка містить домен СОН, який містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІО МО: 14, 29, 37, 134, 136 або 138; домен СОН, який містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮО МО: 7, 30 або 38; і домен СОВЗ, який містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮ МО: 15, 31 або 39.
У певних варіантах здійснення даного винаходу САК містить ділянку варіабельного домену важкого ланцюга, яка включає (а) СОКІ1 з амінокислотною послідовністю, викладеною під ЗЕО
ІО МО: 10; (Б) СОК2 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 11; і (с) СОКЗ з амінокислотною послідовністю, викладеною під ЗЕО ІЮО МО: 12; і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка включає (а) СОКІ1 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІЮ МО: 14; (в) СОК2 з амінокислотною послідовністю, викладеною під ЗЕО ІЮО МО: 7; і (с) СОКЗ з 60 амінокислотною послідовністю, викладеною під ЗЕО ІЮ МО: 15.
У певних варіантах здійснення даного винаходу САВ містить ділянку варіабельного домену важкого ланцюга, яка включає (а) СОВІ1 з амінокислотною послідовністю, викладеною під ЗЕО
ІО МО: 10; (Б) СОВ2 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІЮО МО: 132; ії (с)
СОВЗ з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІЮО МО: 12; і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка включає (а) СОВІ1 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО
ІО МО: 134; (р) СОВ2 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 7; і (с) СОВЗ з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 15.
У певних варіантах здійснення даного винаходу САВ містить ділянку варіабельного домену важкого ланцюга, яка включає (а) СОВІ1 з амінокислотною послідовністю, викладеною під ЗЕО
ІО МО: 10; (Б) СОВ2 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІЮО МО: 132; ії (с)
СОВЗ з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІЮО МО: 12; і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка включає (а) СОВІ1 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО
ІО МО: 136; (Б) СОВ2 з амінокислотною послідовністю, викладеною під БЕО ІО МО: 7; і (с) СОВЗ з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 15.
У певних варіантах здійснення даного винаходу САВ містить ділянку варіабельного домену важкого ланцюга, яка включає (а) СОВІ1 з амінокислотною послідовністю, викладеною під БЕО
ІО МО: 10; (Б) СОВ2 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІЮО МО: 132; ії (с)
СОВЗ з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІЮО МО: 12; і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка включає (а) СОВІ1 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО
ІО МО: 138; (Б) СОВ2 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 7; і (с) СОВЗ з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 15.
У певних варіантах здійснення даного винаходу САВ містить ділянку варіабельного домену важкого ланцюга, яка включає (а) СОВІ1 з амінокислотною послідовністю, викладеною під ЗЕО
ІО МО: 10; (Б) СОВ2 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІЮО МО: 140; ії (с)
СОВЗ з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІЮО МО: 12; і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка включає (а) СОВІ1 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО
ІО МО: 134; (р) СОВ2 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 7; і (с) СОВЗ з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 15.
У певних варіантах здійснення даного винаходу САВ містить ділянку варіабельного домену важкого ланцюга, яка включає (а) СОВІ1 з амінокислотною послідовністю, викладеною під ЗЕО
ІО МО: 10; (Б) СОВ2 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІЮО МО: 140; ії (с)
СОВЗ з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІЮО МО: 12; і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка включає (а) СОВІ1 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО
ІО МО: 136; (Б) СОВ2 з амінокислотною послідовністю, викладеною під БЕО ІО МО: 7; і (с) СОВЗ з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 15.
У певних варіантах здійснення даного винаходу САВ містить ділянку варіабельного домену важкого ланцюга, яка включає (а) СОВІ1 з амінокислотною послідовністю, викладеною під БЕО
ІО МО: 10; (Б) СОВ2 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІЮО МО: 140; ії (с)
СОВЗ з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІЮО МО: 12; і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка включає (а) СОВІ1 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО
ІО МО: 138; (Б) СОВ2 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 7; і (с) СОВЗ з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 15.
У певних варіантах здійснення даного винаходу САВ містить ділянку варіабельного домену важкого ланцюга, яка включає (а) СОВІ1 з амінокислотною послідовністю, викладеною під ЗЕО
ІО МО: 10; (Б) СОВ2 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІЮО МО: 142; ії (с)
СОВЗ з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІЮО МО: 12; і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка включає (а) СОВІ1 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО
ІО МО: 134; (р) СОВ2 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 7; і (с) СОВЗ з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 15.
У певних варіантах здійснення даного винаходу САВ містить ділянку варіабельного домену важкого ланцюга, яка включає (а) СОВІ1 з амінокислотною послідовністю, викладеною під ЗЕО
ІО МО: 10; (Б) СОВ2 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІЮО МО: 142; ії (с)
СОВЗ з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІЮО МО: 12; і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка включає (а) СОВІ1 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО
ІО МО: 136; (Б) СОВ2 з амінокислотною послідовністю, викладеною під БЕО ІО МО: 7; і (с) СОВЗ з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 15.
У певних варіантах здійснення даного винаходу САВ містить ділянку варіабельного домену важкого ланцюга, яка включає (а) СОВІ1 з амінокислотною послідовністю, викладеною під БЕО
ІО МО: 10; (Б) СОВ2 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІЮО МО: 142; ії (с) 60 СОВЗ з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІЮО МО: 12; і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка включає (а) СОВІ1 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО
ІО МО: 138; (Б) СОВ2 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 7; і (с) СОВЗ з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 15.
У певних варіантах здійснення даного винаходу САВ містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка містить домен СОН, який містить амінокислотну послідовність, викладену під
ЗЕО ІО МО: 33, і домен СОН, який містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО 10
МО: 34, і домен СОНВЗ, який містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮО МО: 35; і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка містить домен СОВІ1, який містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО І МО: 37, і домен СОН2, який містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО І МО: 38, і домен СОВЗ, який містить амінокислотну послідовність, викладену під ФЕО ІЮО МО: 39.
У певних варіантах здійснення даного винаходу САВ містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка містить домен СОН, який містить амінокислотну послідовність, викладену під
ЗЕО ІО МО: 25, і домен СОН, який містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО 10
МО: 26 або 119; і домен СОРВЗ, який містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО І
МО: 27; і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка містить домен СОВІ, який містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІО МО: 29, ії домен СОН2, який містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІО МО: 30, ії домен СОВЗ, який містить амінокислотну послідовність, викладену під БЕО ІО МО: 31.
У певних варіантах здійснення даного винаходу САВ містить ділянку варіабельного домену важкого ланцюга, яка включає (а) СОВІ1 з амінокислотною послідовністю, викладеною під ЗЕО
ІО МО: 25; (в) СОВ2 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 26; і (с) СОВЗ з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІЮО МО: 27; і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка включає (а) СОВІ1 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 29; (8) СОВ2 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 30; і (с) СОВЗ з амінокислотною послідовністю, викладеною під ЗЕО ІЮО МО: 31.
У певних варіантах здійснення даного винаходу САВ містить ділянку варіабельного домену важкого ланцюга, яка включає (а) СОВІ1 з амінокислотною послідовністю, викладеною під ЗЕО
ІО МО: 25; (в) СОВ2 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІЮО МО: 1159; ії (с)
Ко) СОВЗ з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІЮО МО: 27; і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка включає (а) СОВІ1 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО
ІО МО: 29; (в) СОВ2 з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 30; і (с) СОВЗ з амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІО МО: 31.
В одному варіанті здійснення даного винаходу передбачено мічене антитіло до В7-НЗ або його антигензв'язувальну частину, де антитіло є дериватизованим або зв'язаним з однією або кількома функціональними молекулами (наприклад, іншим пептидом або білком). Наприклад, мічене антитіло можна одержати шляхом функціонального зв'язування антитіла або частини антитіла згідно з даним винаходом (шляхом з'єднання хімічним зв'язком, генетичного злиття, нековалентної асоціації або іншим способом) з одним або кількома іншими молекулярними об'єктами, такими як інше антитіло (наприклад, біспецифічне антитіло або діатіло), детектовний засіб, фармацевтичний засіб, білок або пептид, які можуть опосередковувати асоціацію антитіла або частини антитіла з іншою молекулою (такою як стрептавідинова серцевинна ділянка або полігістидинова мітка), та/або цитотоксичний або терапевтичний засіб, вибраний із групи, що складається з інгібітора мітозу, протипухлинного антибіотика, імуномодулювального засобу, вектора для генної терапії, алкілувального засобу, антиангіогенного засобу, антиметаболіту, боровмісного засобу, хемопротективного засобу, гормону, антигормонального засобу, кортикостероїду, фотоактивного терапевтичного засобу, олігонуклеотиду, радіонуклідного засобу, інгібітора топоізомерази, інгібітора кінази, радіосенсибілізатора та їх комбінації.
Придатні детектовні засоби, за допомогою яких антитіло або його частина можуть бути дериватизовані, включають флуоресцентні сполуки. Ілюстративні флуоресцентні детектовні засоби включають флуоресцеїн, флуоресцеїну ізотіоціанат, родамін, 5-диметиламін-1- нафталінсульфонілхлорид, фікоеритрин тощо. Антитіло може також бути дериватизоване за допомогою детектовних ферментів, таких як лужна фосфатаза, пероксидаза хрону, глюкозооксидаза тощо. Якщо антитіло дериватизоване за допомогою детектовного ферменту, його виявляють шляхом додавання додаткових реагентів, які фермент використовує для вироблення детектовного продукту реакції. Наприклад, якщо є присутнім детектовний засіб пероксидази хрону, то додавання пероксиду водню та діамінобензидину приводить до утворення забарвленого продукту реакції, який є детектовним. Антитіло також можна дериватизувати за допомогою біотину та виявляти за допомогою непрямого вимірювання бо зв'язування авідину або стрептавідину.
В одному варіанті здійснення антитіло за даним винаходом кон'юговане із засобом, який сприяє проявленню. Приклади засобів для візуалізації, які можна використовувати в композиціях і способах, описаних у даному документі, включають без обмеження радіоактивну мітку (наприклад, індій), фермент, флуоресцентну мітку, люмінесцентну мітку, біолюмінесцентну мітку, магнітну мітку та біотин.
В одному варіанті здійснення антитіла або АОС зв'язані з радіоактивною міткою, такою як без обмеження індій (п). "ПІндій можна використовувати для мічення антитіл і АОС, описаних у даному документі, для застосування в ідентифікації В7-НЗ-позитивних пухлин. У певному варіанті здійснення антитіла (або АОС) до В7-НЗ, описані в даному документі, мічені "7 за допомогою біфункціонального хелатора, який являє собою біфункціональний хелат циклогексил-діетилентриамінпентаоцтової кислоти (ТРА) (див. патенти США за номерами 5124471; 5434287 і 5286850, кожний із яких включений у даний документ за допомогою посилання).
В іншому варіанті здійснення даного винаходу представлений глікозильований зв'язувальний білок, при цьому антитіло до В7-НЗ або його антигензв'язувальна частина містять один або декілька вуглеводних залишків. Зростаючий під час утворення іп мімо білковий ланцюг може зазнати додаткового процесингу, відомого як посттрансляційна модифікація. Зокрема, ферментативним шляхом можуть бути додані залишки цукрів (глікозильні групи), та цей процес відомий як глікозилювання. Одержані білки, що несуть ковалентно зв'язані олігосахаридні бічні ланцюги, відомі як глікозильовані білки або глікопротеїни. Антитіла являють собою глікопротеїни з одним або декількома вуглеводними залишками в Ес-домені, а також у варіабельному домені.
Вуглеводні залишки в Ес-домені впливають на ефекторну функцію Ес-домену за мінімального впливу на зв'язування антигена або період напівжиття антитіла (К. УеПегі5, Віотесппої. Ргод. 21 (2005), рр. 11-16). На відміну від цього, глікозилювання варіабельного домену може впливати на активність зв'язування антигена в антитіла. Глікозилювання у варіабельному домені може негативно впливати на афінність зв'язування антитіл, імовірно, через стеричне утруднення (Со,
М.5., еї аїЇ., Мої. Іттипої. (1993) 30:1361-1367), або приводити до збільшення афінності до антигена (УмаїїїсК, 5.С., еї аІ., Ехр. Мед. (1988) 168:1099-1109; МУтідні, А., еї аІ., ЕМВО 3. (1991) 10:2717-2723).
Зо Один аспект даного винаходу спрямований на одержання мутантних форм за сайтом глікозилювання, в яких мутації був підданий сайт О- або М-зв'язаного глікозилювання. Фахівець у даній галузі може одержувати таких мутантів із застосуванням стандартних, добре відомих методів. Мутантні форми за сайтом глікозилювання, які зберігають біологічну активність, але характеризуються підвищеною або зниженою активністю зв'язування, являють собою інший предмет даного винаходу.
У ще одному варіанті здійснення глікозилювання антитіла до В7/-НЗ або антигензв'язувальної частини за даним винаходом є модифікованим. Наприклад, можна одержувати аглікозильоване антитіло (тобто антитіло, в якому відсутнє глікозилювання).
Глікозилювання може бути зміненим, наприклад, для підвищення афінності антитіла до антигена. Такі вуглеводневі модифікації можна здійснювати, наприклад, шляхом зміни одного або декількох сайтів глікозилювання в межах послідовності антитіла. Наприклад, можна зробити одну або декілька амінокислотних замін, які призводять до виключення одного або декількох сайтів глікозилювання варіабельної ділянки, щоб тим самим виключити глікозилювання у даному сайті. Таке аглікозилювання може підвищувати афінність антитіла до антигена. Такий підхід описаний більш докладно у РСтТ-публікації МО2003016466А2 і патентах США
МоМо 5714350 і 6350861, кожний з яких включений у даний документ за допомогою посилання у всій своїй повноті.
Як доповнення або альтернатива, можна одержувати модифіковане антитіло до В7-НЗ за даним винаходом, яке характеризується зміненим типом глікозилювання, як, наприклад, гіпофукозильоване антитіло зі зниженою кількістю фукозильних залишків або антитіло з підвищеним вмістом сІСМАс-структур у точках розгалуження. Було продемонстровано, що такі змінені патерни глікозилювання підвищують здатність антитіл до АЮСС. Такі вуглеводневі модифікації можна здійснювати, наприклад, шляхом експресії антитіла в клітині-хазяїні зі зміненим механізмом глікозилювання. Клітини зі зміненим механізмом глікозилювання були описані в рівні техніки, та їх можна застосовувати як клітини-хазяїни, в яких експресують рекомбінантні антитіла за даним винаходом з одержанням, таким чином, антитіла зі зміненим глікозилюванням. Див., наприклад, Зпієїй5, К. Ї. еї аї. (2002) 9. Віої. Спет. 277:26733-26740; тапа еї аї. (1999) Маї. Віоїесн. 17:176-1, а також європейський патент Мо ЕР 1176195; РСТ- публікації УМО 03/035835; УМО 99/54342 80, кожна з яких включена в даний документ за 60 допомогою посилання у всій своїй повноті.
Глікозилювання білка залежить від амінокислотної послідовності білка, що становить інтерес, а також клітини-хазяїна, в якій білок експресується. Різні організми можуть виробляти різні ферменти глікозилювання (наприклад, глікозилтрансферази та глікозидази) та мають різні доступні субстрати (цукрові фрагменти нуклеотидів). Внаслідок таких факторів патерн глікозилювання білка та склад глікозильних залишків можуть відрізнятися залежно від системи хазяїна, в якій експресується конкретний білок. Глікозильні залишки, застосовувані в даному винаході, можуть включати без обмеження глюкозу, галактозу, манозу, фукозу, М- ацетилглюкозамін та сіалову кислоту. Глікозильований зв'язувальний білок переважно містить такі глікозильні залишки, що патерн глікозилювання характерний для молекул людини.
Відмінності в глікозилюванні більа можуть приводити до відмінностей у характеристиках білка. Наприклад, ефективність терапевтичного білка, одержаного в хазяїні-мікроорганізмі, такому як дріжджі, і глікозильованого з використанням ендогенного шляху дріжджів, може бути зниженою порівняно з ефективністю такого ж білка, експресованого в клітині ссавця, як, наприклад, у лінії клітин СНО. Такі глікопротеїни також можуть бути імуногенними для людини й демонструвати зменшений період напівжиття іп мімо після введення. Специфічні рецептори в людини та інших тварин можуть розпізнавати специфічні глікозильні залишки та сприяти швидкому кліренсу білка із кровообігу. Інші несприятливі ефекти можуть включати зміни згортання білка, його розчинності, чутливості до протеаз, міграції, транспортування, компартменталізації, секреції, розпізнавання іншими білками або факторами, антигенності або алергенності. Відповідно, фахівець-практик може надавати перевагу терапевтичному білку з конкретним складом і патерном глікозилювання, наприклад, складом і патерном глікозилювання, ідентичним або щонайменше аналогічним тому, який утворюється в клітинах людини або у видоспецифічних клітинах передбачуваного суб'єкта-тварини.
Експресія глікозильованих білків, відмінних від утворених клітиною-хазяїном, може бути досягнута шляхом генетичної модифікації клітини-хазяїна таким чином, щоб вона експресувала гетерологічні ферменти глікозилювання. За допомогою рекомбінантних методик фахівець- практик може одержувати антитіла або їх антигензв'язувальні частини, що демонструють глікозилювання, характерне для білків людини. Наприклад, штами дріжджів були генетично модифіковані для експресії ферментів глікозилювання, що не зустрічаються в природі,
Зо внаслідок чого глікозильовані білки (глікопротеїни), що виробляються в цих штамах дріжджів, демонструють глікозилювання білків, ідентичне спостережуваному в клітинах тварин, зокрема, у клітинах людини (публікації заявок на патент США МоМо 20040018590 і 20020137134 та РСТ- публікація УМО2005100584 АЗ2).
Антитіла можна одержати за допомогою кожної з ряду методик. Наприклад, за допомогою експресії в клітинах-хазяїнах, при цьому вектор(вектори) експресії, що кодує(кодують) важкий і легкий ланцюги, вводять шляхом трансфекції в клітину-хазяїна за допомогою стандартних методик. Передбачається, що різні форми терміну "трансфекція" охоплюють широкий спектр методик, зазвичай застосовуваних для введення екзогенної ДНК у прокаріотичну або еукаріотичну клітину-хазяїна, наприклад, електропорацію, осадження за допомогою фосфату кальцію, трансфекцію, опосередковану ОЕБАЕ-декстраном тощо. Хоча експресувати антитіла можливо як у прокаріотичних, так і в еукаріотичних клітинах-хазяїнах, експресія антитіл в еукаріотичних клітинах є переважною, і найбільш переважною -- у клітинах-хазяїнах, одержаних від ссавця, оскільки такі еукаріотичні клітини (і, зокрема, клітини ссавця) з більшою ймовірністю, ніж прокаріотичні клітини, можуть збирати та секретувати правильно згорнуте та імунологічно активне антитіло.
Переважні клітини-хазяїни, одержані від ссавця, для експресії рекомбінантних антитіл за даним винаходом включають клітини яєчника китайського хом'яка (СНО) (у тому числі клітини анпй-СноО, описані в Опацб апа Спавіп, (1980) Ргос. Май. Асай. 5сі. ОБА 77:4216-4220, застосовувані із селектовним маркером ОНЕК, наприклад, як описано в К.3. Кашїтап апа Р.А. зЗпагр (1982) Мої. Віої. 159:601-621), клітини мієломи М5О, клітини СОБ5 і клітини 5Р2. У випадках, коли рекомбінантні вектори експресії, що кодують гени антитіла, вводять у клітини- хазяїни, одержані від ссавця, антитіла одержують шляхом культивування клітин-хазяїнів протягом періоду часу, достатнього для забезпечення експресії антитіла в клітинах-хазяїнах або, більш переважно, секреції антитіла в середовище для культивування, в якому клітини- хазяїни вирощуються. Антитіла можна виділяти з середовища для культивування за допомогою стандартних способів очищення білка.
Клітини-хазяїни також можна застосовувати для одержання функціональних фрагментів антитіла, таких як ЕРаб-фрагменти або молекули 5сЕм. Буде зрозуміло, що видозміни вищеописаної процедури знаходяться у межах обсягу даного винаходу. Наприклад, може бути бо бажано трансфікувати клітину-хазяїна за допомогою ДНК, що кодує функціональні фрагменти одного з легкого ланцюга й/(або важкого ланцюга антитіла за даним винаходом. Технологію рекомбінантних ДНК також можна застосовувати для видалення деяких або всіх ДНК, що кодують будь-який один або обидва з легкого та важкого ланцюгів, які не є необхідними для зв'язування антигенів, що становлять інтерес. Антитіла за даним винаходом також охоплюють молекули, які експресуються з таких усічених молекул ДНК. На додаток, можна одержувати біфункціональні антитіла, в яких один важкий і один легкий ланцюг належать антитілу за даним винаходом, а інші важкий та легкий ланцюги є специфічними відносно антигена, відмінного від антигенів, що становлять інтерес, шляхом зшивання антитіла за даним винаходом із другим антитілом за допомогою стандартних способів хімічного зшивання.
У переважній системі для рекомбінантної експресії антитіла або його антигензв'язувальної частини рекомбінантний вектор експресії, що кодує як важкий ланцюг антитіла, так і легкий ланцюг антитіла, вводять у клітини апй-СНО за допомогою трансфекції, опосередкованої фосфатом кальцію. У межах рекомбінантного вектора експресії кожний з генів важкого та легкого ланцюгів антитіла функціонально зв'язаний з регуляторними елементами енхансером
СММУ/промотором АаМІ Р, які управляють високими рівнями транскрипції генів. Рекомбінантний вектор експресії також несе ген ОНЕЕК, який забезпечує можливість відбору клітин СНО, які були трансфіковані вектором, із застосуванням відбору/ампліфікації під дією метотрексату. Відібрані трансформовані клітини-хазяїни культивують, щоб забезпечити експресію важкого та легкого ланцюгів антитіла, та ціле антитіло виділяють із середовища для культивування. Застосовують стандартні методики молекулярної біології, щоб одержувати рекомбінантний вектор експресії, трансфікувати клітини-хазяїни, здійснювати відбір трансформантів, культивувати клітини- хазяїни та виділяти антитіло із середовища для культивування. Крім того, у даному винаході передбачений спосіб синтезу рекомбінантного антитіла згідно з даним винаходом шляхом культивування клітини-хазяїна у придатному середовищі для культивування доти, поки не синтезується рекомбінантне антитіло. Рекомбінантні антитіла за даним винаходом можна одержувати із застосуванням молекул нуклеїнової кислоти, які відповідають амінокислотним послідовностям, розкритим в даному документі. Спосіб може додатково передбачати виділення рекомбінантного антитіла з культурального середовища.
М- ї С-кінці поліпептидних ланцюгів антитіл за даним винаходом можуть відрізнятися від
Зо очікуваної послідовності через звичайно спостережувані посттрансляційні модифікації.
Наприклад, С-кінцеві лізинові залишки часто відсутні у важких ланцюгах антитіл. Оіск еї аї. (2008) Віоїесппої. Віоепуд. 100:1132. М-кінцеві глутамінові залишки і в меншій мірі глутаматні залишки часто перетворюються на піроглутаматні залишки як на легких, так і на важких ланцюгах терапевтичних антитіл. ОіскК еї аї!. (2007) Віоїесппої. Віоєпд. 97:544; іш еї аї. (2011) вс 28611211; Пи еї а. (2011) 9. Віої. Снет. 286:11211.
ІН. Кон'югати антитіла до В7-НЗ і лікарського засобу (АОС)
Антитіла до В7-НЗ, описані в даному документі, можуть бути кон'юговані із фрагментом лікарського засобу з утворенням кон'югата антитіла до В7-НЗ і лікарського засобу (АОС).
Кон'югати антитіло-лікарський засіб (АОС) можуть підвищувати терапевтичну ефективність антитіл під час лікування захворювань, наприклад раку, завдяки здатності АОС вибірково доставляти один або декілька фрагментів лікарського засобу в цільові тканини, такі як асоційовані з антигеном пухлини, наприклад пухлини, що експресують В7-НЗ. Таким чином, в деяких варіантах здійснення даний винахід передбачає АОС до В7-НЗ для терапевтичного застосування, наприклад лікування раку.
АОС до В7-НЗ за даним винаходом містять антитіло до В7-НЗ, тобто антитіло, яке специфічно зв'язується з В7-НЗ, зв'язане з одним або кількома фрагментами лікарського засобу. Специфічність АОС визначається специфічністю антитіла, тобто антитіла до В7-НЗ. В одному варіанті здійснення антитіло до В7-НЗ зв'язане з одним або кількома цитотоксичними лікарськими засобами, які доставляються усередину трансформованої ракової клітини, яка експресує В7-НЗ.
Приклади лікарських засобів, які можна застосовувати в АОС до В7-НЗ за даним винаходом, наведені нижче, а також лінкери, які можна застосовувати для кон'югації антитіла та одного або декількох лікарських засобів. Терміни "лікарський засіб", "засіб" і "фрагмент лікарського засобу" використовуються в даному документі взаємозамінно. Терміни "зв'язаний" і "кон'югований" також використовуються в даному документі взаємозамінно і вказують, що антитіло і фрагмент ковалентно зв'язані.
У деяких варіантах здійснення АЮС характеризується наступною формулою (формула 1):
(І) ( 6- Я - к« - | ль т де АБ являє собою антитіло, наприклад, антитіло до В7-НЗ пиАБріЗмі, пиАБЗмМ2.5 або пиАрЗма.б, і (І) є лінкером, (0) є лікарським засобом, а І К являє собою ковалентний зв'язок, який зв'язує лінкер І з антитілом АБ; і т являє собою ціле число від 1 до 20. ЮО являє собою фрагмент лікарського засобу, який характеризується, наприклад, цитостатичною, цитотоксичною або іншою терапевтичною активністю щодо цільової клітини, наприклад клітини, яка експресує В7-НЗ. У деяких варіантах здійснення т варіює від 1 до 8, від 1 до 7, від 1 доб, від 2 до 6, від 1 до 5, від 1 до 4, від 1 до 3, від 1 до 2, від 1,5 до 8, від 1,5 до 7, від 1,5 до 6, від 1,5 до 5, від1, до 4, від 2 до 6, від 1 до 5, від 1 до 4, від 1 до 3, від 1 до 2 або від 2 до 4. ОАК
АРрС являє собою еквівалент "т", указаного у формулі І. В одному варіанті здійснення АОС має формулу АБ-(І К-І О)т, де Ар являє собою антитіло до В7-НЗ, наприклад пиАБр13м1, пиАрЗмМ2.5 або пиАБЗм2.6, Ї є лінкером, О являє собою лікарський засіб, наприклад інгібітор Всі-х!. або ауристатин, такий як ММАЕ або ММАЕ, і т дорівнює від 2 до 4 (що еквівалентно ВАК 2-4).
Додаткові подробиці щодо лікарських засобів (0 з формули І) та лінкерів (Ї з формули Ї), які можна використовувати в АОС згідно з даним винаходом, а також альтернативні структури АОС описані нижче.
ШІ. А. АОС до В7-НЗ: інгібітори Всі-хі,, лінкери, синтони і способи їх одержання
Патологія раку також передбачає дисрегуляцію апоптотичних шляхів. Той факт, що пригнічення апоптозу (та, зокрема, родини білків Всі-2) залучене до виникнення злоякісних новоутворень, дозволив виявити новий спосіб спрямованого впливу на це все ще важке для розуміння захворювання. Дослідження показали, наприклад, що антиапоптотичні білки Всі 2 та
ВсіІ-хЇ надекспресуються в багатьох типах ракових клітин. Див. 7Ппапа, 2002, Маїшге
Вемівемв/Огид Оівсомегу 1:101; Кіжіп сеї аї., 2004, Віоспітіса Віорпувзіса Асіа 1644:229-249; та
Атипазоп еї аї., 2000, Сапсег Везеагсй 60:6101-6110. Ефектом цієї дерегуляції є виживання змінених клітин, які за інших обставин піддавалися б апоптозу за нормальних умов. Вважається, що повторюваність цих дефектів, асоційованих з нерегульованою проліферацією, є відправною точкою розвитку раку.
Аспекти даного винаходу стосуються АЮС до пПВ7-НЗ, які містять антитіло до пВ7-НЗ, кон'юговане з лікарським засобом за допомогою лінкера, де лікарський засіб являє собою
Зо інгібітор ВсіІ-хі. В конкретних варіантах здійснення АЮС являють собою сполуки згідно зі структурною формулою (І) нижче або їх фармацевтично прийнятну сіль, де АБ являє собою антитіло до ПВ7-НЗ, 0 являє собою інгібітор Всі-хІ. (наприклад, сполуку формули (Па), (ПІБ), (Пс) або (Па), як показано нижче), Ї являє собою лінкер, ІК являє собою ковалентний зв'язок, який зв'язує лінкер (І) з антитілом (АБ) до пПВ7-НЗ, і т являє собою кількість ланок О-ЇІ -І К, зв'язаних з антитілом, яка являє собою ціле число від 1 до 20. У певних варіантах здійснення т дорівнює 2,
З або 4. В деяких варіантах здійснення т варіює від 1 до 8, від 1 до 7, від 1 до 6, від 2 до 6, від 1 до 5, від ! до 4, від 2 до 4, від 1 до 3, від 1 до 2 або становить 1. (І) ( 6-Х -- к -) ль т
Конкретні варіанти здійснення різноманітних інгібіторів Всі-х!. рег 5е і різноманітні інгібітори
Всі-х!. (0), лінкери (І) і антитіла (АБ) до В7-НЗ, які можуть містити описані в даному документі
АРС, а також кількість інгібіторів Всі-х!., зв'язаних з АОС, описані більш докладно нижче.
Приклади інгібіторів Всі-х!, які можна застосовувати в АОС до В7-НЗ за даним винаходом, наведені нижче, а також лінкери, які можна застосовувати для кон'югації антитіла і одного або декількох інгібіторів Всі-хі. Терміни "зв'язаний" і "кон'югований" також використовуються в даному документі взаємозамінно і вказують, що антитіло і фрагмент ковалентно зв'язані.
Ш.А.1. Інгібітори Всі-х!.
Один аспект даного винаходу стосується інгібіторів Всі-хі, які характеризуються низькою здатністю до проникнення в клітини. Сполуки, як правило, є гетероциклічними за своєю природою та містять одну або декілька солюбілізувальних груп, які надають сполукам високу розчинність у воді та низьку здатність до проникнення в клітини. Солюбілізувальні групи, як правило, являють собою групи, які здатні утворювати водневий зв'язок завдяки виникненню диполь-дипольних взаємодій та/або які передбачають полімер, який являє собою поліетиленгліколь, що містить від 1 до 30 ланок, один або декілька поліолів, одну або декілька солей або одну або декілька груп, які є зарядженими за фізіологічного значення рн.
Інгібітори Всі-хІ. можуть застосуватися у вигляді сполук або солей рег 5е у різних способах, описаних у даному документі, або можуть бути включені як складова АОС.
Конкретні варіанти здійснення інгібіторів Всі-хі., які можуть застосуватися в некон'югованій формі або які можуть бути включені як частина АОС, включають сполуки згідно зі структурними формулами (Па), (ПІБ), (Пс) або (Па). У даному винаході у випадку, якщо інгібітори Всі-хі. включені як частина АОС, Ж, показаний у структурних формулах (ІПа), (ПІБ), (Пс) або (І) нижче, являє собою точку приєднання до лінкера, що вказує на те, що вони наведені у формі монорадикала: 26 віх, о он о пов в угат За (па) ЯК и нм о М, 4 М
Кк вв в'та 725 (о) рай
Кк он
Ме в -вЗ й р 2а М
ПЬ ти з (п) нм Зо Я В 1 М
Кк в'ть в'та
Ге ! 2Ь
М. за (9) яв ле) он
М 2
Ех е за7 (пс) Де 7 нм" Зо М, 1 М
Кк те ва й он
М, в: в? па А А шк я (но) но ій 1 М
Кк в/в д'та або її фармацевтично прийнятної солі, де:
«лі ли ли лм лі лм ' лм ишрчваоєвюгч еще
М7тв оо мМ7тв о м'тв МТВ МВ ом М'тмно Мн ооо
Аг вибраний і МУ ДЕ чУіН ЕД АЧХ, М, раний із ; ; ; ; ; ; ; і чллги -
ХМ х ( и. ше . . і необов'язково заміщений одним або кількома замісниками, незалежно вибраними з галогену, гідрокси, нітро, нижчого алкілу, нижчого гетероалкілу, С:-алкокси, аміно, ціано та галогенметилу;
Гез м - в кл; У м, У
А? вибраний (із лм ; лл ; лл ; лм ;
Ге) М М с з с С є
М я Ку У зу ул ту пі лм лм м Ще ще Ше і необов'язково заміщений одним або кількома замісниками, незалежно вибраними з галогену, гідрокси, нітро, нижчого алкілу, нижчого гетероалкілу, С:і-4аалкокси, аміно, ціано та галогенметилу, де замісники Н/2-22Б-, ІД'-225-, Ж-М(ВУ)-В3-225- або ЯЖ-В'-7225- приєднані до А! при будь-якому атомі Аг", який може бути заміщений; 7 вибраний із М, СН, С-галоген, С-СНз і С-СМ; кожний із 722 | 725 незалежно один від одного вибраний зі зв'язку, МАЄ, Сінбаре», о, 5, 5(0), 5(0)2, -МАС(О)-, -МАЗас(О)МнАеЬ- ії -МАЗС(О)О-;
В' являє собою алкілен, гетероалкілен, циклоалкілен, гетероциклен, арил або гетероарил, незалежно заміщений при одному або декількох атомах вуглецю або гетероатомах солюбілізувальним фрагментом, який передбачає групу, вибрану з поліолу, поліетиленгліколю, який містить від 4 до 30 етиленгліколевих ланок, солі та групи, яка є зарядженою за фізіологічного значення рн, та їх комбінацій, де Ж, у випадку приєднання до Р", приєднаний до В" при будь-якому атомі ЕВ", який може бути заміщений;
В' вибраний із водню, метилу, галогену, галогенметилу, етилу та ціано;
В2 вибраний із водню, метилу, галогену, галогенметилу та ціано;
ВЗ вибраний із водню, метилу, етилу, галогенметилу та галогенетилу;
В? вибраний із водню, нижчого алкілу та нижчого гетероалкілу або взятий разом із атомом
В'Зз утворенням циклоалкільного або гетероциклільного кільця, яке містить 3-7 атомів у кільці; кожний із БУ, ба і ве» незалежно один від одного вибраний із водню, необов'язково заміщеного нижчого алкілу, необов'язково заміщеного нижчого гетероалкілу, необов'язково заміщеного циклоалкілу та необов'язково заміщеного гетероциклілу або взятий разом із атомом із В" та атомом із В"З з утворенням циклоалкільного або гетероциклільного кільця, яке містить від З до 7 атомів у кільці;
Ко) кожний із В" ії ВИ» незалежно один від одного вибраний із водню, галогену, метилу, етилу, галогенметилу, гідроксилу, метокси, СМ і ЗСНЗз;
В! необов'язково являє собою КК або вибраний із водню, галогену, ціано, необов'язково заміщеного алкілу, необов'язково заміщеного гетероалкілу, необов'язково заміщеного гетероциклілу та необов'язково заміщеного циклоалкілу;
В'З вибраний із необов'язково заміщеного Сі-валкілену, необов'язково заміщеного гетероалкілену, необов'язково заміщеного гетероциклену та необов'язково заміщеного циклоалкілену; та
Ж являє собою точку приєднання до лінкера Ї.
Один варіант здійснення інгібіторів Всі-хі,, які можуть застосуватися в некон'югованій формі або які можуть бути включені як частина АЮС, включають сполуки згідно зі структурними формулами (Па), (ПІБ), (Пс) або (Па):
775 (о)
Кк он
Ме в в тя (па) ьо нм о М; 4 М
Кк вв в'та 775 (о) пра
Кк он
Мах ве -вВЗ й
Ї зат СМ 5-1 А (п) нм Зо Я В 1 М
Кк в'ть в'та
Ге 25
М. за (в) вв ле) он
М 2
Ж ЕЕ за7 (пс) Де 7 нм" Зо І 1 М
Кк те ва й он
М в2 в? р 727 па и (по) но ех 1 М
Кк в/в д'та або його фармацевтично прийнятна сіль, де: «а ра «А Мм7своМм7 св - М кн а во ОоОО5о
М МАХИ Х и
Аг вибраний із , х/. хи, м ; м, 17, М і - (с
М и і необов'язково заміщений одним або кількома замісниками, незалежно вибраними з галогену, гідрокси, нітро, нижчого алкілу, нижчого гетероалкілу, С:-алкокси, аміно, ціано та галогенметилу;
Ге м о КЛ; У У й, У
Аг вибраний ЇМ лм у лм ; лм ; лм ; 0, С ій ОХ, хх хх -
Му у у у МУ дини ле ум - М д- М М в ул ту - су у шх і або їхнього М-оксиду і необов'язково заміщений одним або кількома замісниками, незалежно вибраними з галогену, гідрокси, нітро, нижчого алкілу, нижчого гетероалкілу, С:--алкокси, аміно, ціано та галогенметилу, де замісники Н/'2-225-,
В-225-, Ж-АМ(ВУ)-8'3-225- або Ж-8/-725- приєднані до А!" при будь-якому атомі А!", який може бути заміщений; 7 вибраний із М, СН, С-галоген, С-СНз і С-СМ; кожний із 7272 і 725 незалежно один від одного вибраний зі зв'язку, МАЄ, СВЗаВе», О, 5, 5(0), 8(0)2, -МАУС(О)-, -МАЗас(О)МАе- і -МАЗС(О)О-;
Дю с Я с! т п Рез п реЇ г
Е" являє собою т або т , де й, у випадку приєднання до К", є приєднаним до ЕЕ: при будь-якому атомі ЕК", який може бути заміщеним;
Х у кожному випадку вибраний із -М(А9)- , -М(А9)С(О)-, -М(А"92)5(О0)2-, -5Х0)2М(А9)- і -О-; п вибраний із 0-3;
В? незалежно вибраний у кожному випадку з водню, нижчого алкілу, гетероциклу, аміноалкілу, Сс1-алкілу та -««СНг)2-О-(СНг)2-О-(СНег)2-МНег;
Сб у кожному випадку незалежно вибраний із поліолу, поліетиленгліколю з 4-30 повторюваними ланками, солі та фрагмента, який є зарядженим за фізіологічного значення рн;
Ра незалежно вибраний у кожному випадку з кисню, -5(0)2М(Н)-, -М(Н)Б(О)2-, -М(Н)С(О)-, -СФОМ(Н)-, -М(Н)-, арилену, гетероциклену та необов'язково заміщеного метилену; де метилен необов'язково заміщений одним або кількома з -МН(СН2г)2С, МН», Сз-валкілу та карбонілу; тег вибраний із 0-12;
В' вибраний із водню, метилу, галогену, галогенметилу, етилу та ціано;
В2 вибраний із водню, метилу, галогену, галогенметилу та ціано;
ВЗ вибраний із водню, метилу, етилу, галогенметилу та галогенетилу;
В? вибраний із водню, нижчого алкілу та нижчого гетероалкілу або взятий разом із атомом
В'Зз утворенням циклоалкільного або гетероциклільного кільця, яке містить 3-7 атомів у кільці; кожний із БУ, ба і ве» незалежно один від одного вибраний із водню, необов'язково заміщеного нижчого алкілу, необов'язково заміщеного нижчого гетероалкілу, необов'язково
Зо заміщеного циклоалкілу та необов'язково заміщеного гетероциклілу або взятий разом із атомом із В" та атомом із В"З з утворенням циклоалкільного або гетероциклільного кільця, яке містить від З до 7 атомів у кільці; кожний із Ка ії КИ незалежно один від одного вибраний із водню, галогену, метилу, етилу, галогенметилу, гідроксилу, метокси, СМ і 5СНз;
В! необов'язково являє собою КК або вибраний із водню, галогену, ціано, необов'язково заміщеного алкілу, необов'язково заміщеного гетероалкілу, необов'язково заміщеного гетероциклілу та необов'язково заміщеного циклоалкілу;
ВАЗ вибраний із необов'язково заміщеного С/і-валкілену, необов'язково заміщеного гетероалкілену, необов'язково заміщеного гетероциклену та необов'язково заміщеного циклоалкілену; та
Ж являє собою точку приєднання до лінкера Ї.
У випадку, якщо інгібітор Всі-хі відповідно до структурних формул (Па) - (Па) не є компонентом АОС, Ж у формулах (Іа) - (Па) являє собою точку приєднання до атома водню. У випадку, якщо інгібітор ВсІ-хі є компонентом АОС, Ж у формулах (Іа) - (Я) являє собою точку приєднання до лінкера. У випадку, якщо інгібітор ВсіІ-хЇ. являє собою компонент АОС, АОС може містити один або декілька інгібіторів Всі-хі, які можуть бути однаковими або різними, але, як правило, вони є однаковими.
У певних варіантах здійснення К' являє собою Со-Свгетероалкілен, заміщений одним або кількома фрагментами, які передбачають сіль та/або групу, яка є зарядженою за фізіологічного значення рН. Сіль може бути вибрана, наприклад, із карбоксилатної, сульфонатної, фосфонатної солі та солі з іоном амонію. Наприклад, сіль може являти собою карбоксилатну, сульфонатну або фосфонатну сіль натрію або калію або хлоридну сіль з іоном амонію. Група, яка є зарядженою за фізіологічного значення рН, може являти собою будь-яку групу, яка є зарядженою за фізіологічного значення рн, зокрема як приклад і без обмеження цвітер-іонну групу. У певних варіантах здійснення група, яка являє собою сіль, являє собою диполярний фрагмент, такий як без обмеження М-оксиди амінів, зокрема певних гетероциклілів, таких як без обмеження піридин і хінолін. У конкретних варіантах здійснення група, яка є зарядженою за фізіологічного значення рН, у кожному випадку незалежно вибрана із карбоксилату, сульфонату, фосфонату й аміну.
У певних варіантах здійснення К' являє собою Со-Свгетероалкілен, заміщений одним або кількома фрагментами, які містять поліетиленгліколь або поліол, такий як діол або цукровий фрагмент.
У певних варіантах здійснення ЕК може бути заміщений деякими групами додатково до солюбілізувального фрагмента. Наприклад, К може бути заміщений однією або кількома однаковими або різними алкільними, гетероалкільними, циклоалкільними, гетероциклільними, арильними, гетероарильними групами або групами, що являють собою атом галогену.
У певних варіантах здійснення ЕК" представлений формулою: 4-х уз п Рез т або його фармацевтично прийнятна сіль, де:
Х' у кожному випадку вибраний із -М(В9)- і -О-; п вибраний із 1-3;
В"? незалежно вибраний у кожному випадку з водню, алкілу, гетероциклу, аміноалкілу, (с- алкілу, гетероциклу та -(СНг)2-О-(СНг)2-О-(СНег)2-МН»е;
Зо б у кожному випадку незалежно вибраний із поліолу, поліеєтиленгліколю з 4-30 повторюваними ланками (називаного в даному документі РЕС4-30), солі та фрагмента, який є зарядженим за фізіологічного значення рн;
ЗР» незалежно вибраний у кожному випадку з кисню, сульфонаміду, арилену, гетероциклену та необов'язково заміщеного метилену; де метилен необов'язково заміщений одним або кількома з -МН(СНг)20, аміну та карбонілу; та те вибраний із 0-6, при цьому в К", який приєднується до лінкера або атома водню при заміщуваному атомі азоту КУ, наявний щонайменше один заміщуваний атом азоту.
Др с Я о з п Ре 2 п реЇ з
У певних варіантах здійснення ЕК" являє собою т або т;
Х у кожному випадку вибраний із -М(В9)-., -М(А9)2(О)-, -МЩ(А'9)5(0)2-, -5(0)2М(А9)- і -О-; п вибраний із 0-3;
В'? незалежно вибраний у кожному випадку з водню, алкілу, гетероциклу, аміноалкілу, С- алкілу, гетероциклу та -(СНг)2-О-(СНг)2-О-(СНег)2-МН»е;
Сб у кожному випадку незалежно вибраний із поліолу, поліетиленгліколю з 4-30 повторюваними ланками, солі та фрагмента, який є зарядженим за фізіологічного значення рн;
Ра незалежно вибраний у кожному випадку з кисню, -5(0)2М(Н)-, -М(Н)Б(О)2-, -М(Н)С(О)-, -С(О(Н)-, -М(Н)-, арилену, гетероциклену та необов'язково заміщеного метилену; де метилен необов'язково заміщений одним або кількома з -МН(СН2)25, аміну, алкілу та карбонілу; т: вибраний із 0-12, та й, у випадку приєднання до ЕК", приєднаний до ЕК" при будь-якому атомі ЕК, який може бути заміщений.
У певних варіантах здійснення С у кожному випадку являє собою сіль або фрагмент, який є зарядженим за фізіологічного значення рн.
У певних варіантах здійснення с у кожному випадку являє собою карбоксилатну, сульфонатну, фосфонатну або амонієву сіль.
У певних варіантах здійснення б у кожному випадку являє собою фрагмент, який є зарядженим за фізіологічного значення рн, вибраний із групи, яка складається з карбоксилату, сульфонату, фосфонату й аміну.
У певних варіантах здійснення С у кожному випадку являє собою фрагмент, який передбачає поліетиленгліколь із 4-30 повторюваними ланками або поліол.
У певних варіантах здійснення поліол являє собою цукор.
У певних варіантах здійснення КК у формулі (Па) або (П4) включає щонайменше один заміщуваний атом азоту, придатний для приєднання до лінкера.
У певних варіантах здійснення С у кожному випадку незалежно вибраний із он он но он он о Ге) но он но (Фін! ОН
Ж оріо Т агио) (Фін! «СНз (о ее бно 00о ото сто здтон он но он
ОМ о СНз он
М-- о ТОМ и он» ДГ он о); , ОМ , СНз і я , де М являє собою водень або позитивно заряджений протиїіон. У певних варіантах здійснення М являє собою Ма", К" або їх. У певних варіантах здійснення М являє собою водень. У конкретних варіантах здійснення С являє собою ЗОЗН.
У певних варіантах здійснення С у кожному випадку незалежно вибраний із он он но он он о Ге) но он но (Фін! он
Жоо 8-8 то он «СНз
Ех ОМ з х ОМ з он з ч о з ч о о з Ех он з он ща но он О о СН» й
ОМ Її М. М-- - со зу тоМ І СНз У. СНз ИН МІ чо 9) з ОМ з СН з СН з Н з з з но но но он он но Н он он НО. итхон. МОХИ зон що он он (Фін! І он і , я , Яся , ОН і я , де М являє собою водень або позитивно заряджений протиіон. У певних варіантах здійснення М являє собою водень. У конкретних варіантах здійснення С являє собою 5ОЗН.
У певних варіантах здійснення Е" вибраний із в) Н хв) Ге)
М 7,
М у щи лава М о
УТ иа он ге ка , он, Он, он (о)
М М он Н що анна рач но о , он ,
(он! он он но он но в) 0,,0 но (о) он ЗМ о Н се кг
М , г авьа з аа КМ (Фін ана но он о дон од) , Н , ц о о СН Мне О ОН и ит ОН М р-он то х о но. га - он. о ноМНо он о сн МН» О анна хо тити Чон о й о о о о ОН о
ОО. о но он он и ито що ів) он
МН Фін! й Ко чн, | га
Н
М
Н ц о 9) ре ман М і-й х ІФ Ї
А АХ о, і он. он,
Н
М ки Сон
СНз МН» сНз о АЖ
Мр сн и ит т ІД
І о СНз он, оон
Н (6)
НО. п,о
М Ще
ГОМнь я МН он
М 70 М он дл ро чу ра вав реа -ї чи Я но о. (Ф) , (6) ,
М но о он гово Н МН» о рана он о р он чи м ме засо КУ й
Н І х 4 АЖ а
НО. , во пава М о-
Н й хв) СНз
М в) га ОН і її он
УТ ит дц РО но он, н но ; он ,
М,
АЖ М І га М (в) (Фін! О. о он ре но зх но он он , он і в)
НО. 7;
З:0 - о тин н або їх солі. У випадку, якщо інгібітори Всі-хЇ відповідно до даного варіанту здійснення включені в АОС, лінкер у АОС зв'язаний із атомом азоту доступної групи первинного або вторинного аміну.
У певних варіантах здійснення Е" вибраний із
Н
Н | ра ах Р Н З 50 рака ра у в з з-о0 АВМ ин
Б о он бно ОН, н н (Фін! щі ц (о) ОН а итат - оо в ав но он он ного | ОН ! (Фін! он он но он но в) он 5 о н нс С Н ОН м;
М 1, ю Ж Тен М он анна но он о, /он н т тити ЗХ он зи М о од о) , Н , и итв ОН Н "рон анна ! ання х о он, (о, |) , н МН. Пон о З МН» о пав на хо ан аа ж ак сон о н он. в о о ОН о
Од о но он ОН и ито щі но он
МН ОН
Ко чн, га
Н
М
Н
Н М зала м Чун У ІФ о х 0. УТ -лн он. мон,
Н
М тая, . що; о СН он. о оїтоно
Н о
М но. по
ГОМ» й МН» он
М ;о М он Мор-вго чу ра тва га - га 5 но о. о. о
Н но.
М іо) щі - МНь о
Со н Он (в) М ? ге ма т р га ур сон в) , - , (в) ,
Нн І х (в) "М
Но ВО ей о.
Н й о в) СНнз пава ОН і ї он
УТ ит дц РО но он, Но но , он ,
М,
АЖ М І га М в) он О.Д 0 нд он но он пава но он он , он ,
М
/ но. Р ще
В й м ) хх
М ни он с дин, т
Н лм Х | МН, сто г у ооо с
Зо о оо | он
С (С Г но он нМ7ЗОо со ото 6) Н М м клю ще Ак
Н о С он но ОН но он ОН он іш Ф) о
М. о
М с МН но Я он при Н он
У он «лу лен і | он
М ОН он он ,/- нуту ут в он он он о Ге; М он
ЗИ в
НМ он он Н (є ра / о: ч р отон я , Н Н он. он ,
Ге! он о! (о) но он (Фін!
С М Ге) он є небтротено ЖИ То ст ІН он ох
Ф)
Н му 50
ЗИМ ит
ОН або їх солі. У випадку, якщо інгібітори Всі-х!. відповідно до даного варіанту здійснення включені в АОС, лінкер у АОС зв'язаний із атомом азоту доступної групи первинного або вторинного аміну. й ()
Заовасюя
У певних варіантах здійснення ЕЕ вибраний із ;
Ег3 он я М М он ан є Зоо га т а
ЩІ руль ль оо бно он, нобто7 (в) ; он я он аа но он ще он реа ОН (ен! он он но он но о ог во НО і) я 5М іФ) І ! Н ит М, ра чі он | ;М
Кз з М з (Фін о радах но ОН ОН ч фі ще ана ма оо; , й !
Ї в) о оо сно МН о он и ит он | ьоН иЙ хо
І ит х
Фін. , он, (в) , й
Ж. жо снз МН ОО
М БооН о) о он М
Гея хо УТ мак ак га (Фін! в) , й он, (6) , (в) (в) он о но он о. /0 он р ак он і . ін/Ф) (он! в) «й н з з й
М гг
З о М ч анна | б лон га ІФ о рили и о, Ех он. мон, ці
М в йод и Сон
Сну МН ще Н
М | з о ре я
У ут св и Мити те Ї о Сн он, саке, ШИ
Ес
М но.то «й к ш С он
М он М 5-0 ит га -щ га ре інф) о. (в) , Ге) , он он
Го М Фін. Со й (Фін!
ТАТИ ТАЄ и я о, о, х но. о о й С ни?о рай р сон з ен
Заовои І -- з з з
М но. й п 5: М М; що) Ул М о й о-./О-сна і ро!
М ти В, он х оно о но й , (Фін! , й М хи Ж, М У га М о ОН о о свв он дн
Но чи но он (Фін! , (Фін. ,
М
М
І о М ( -й
Но ВО : й о -о що ти он с ЕМ дит ХК)
Е- | лм | М й | т, (о г у ооо С
Зо о оо | он
БО рої нМм7Зо со ото о ср М. клю М АЖ
Н о Н я
Фін но Фін но (Фін!
Ф) он ав
М (Ф) ж но МУ он пря ї рій су ВН аа і ї | он і Ф) Фін ях - он он
М (Фін! /7 ву ррти во он он он я о, ж фИ
МИ
-М он о" я
Ак рак Мо ра ( ї М он х мМ я | г | Фін!
(6) он (Ф) (9) но он г 7 ай НО он тити о (Фін! он , о і ці о, 50 зи М ит
ОН, де 5 являє собою або атом водню в лікарському засобі, що міститься в
АОС, який є інгібітором ВсіІ-хі формули (ІБ) або (Пс), або точку приєднання в лікарському засобі, що міститься в АОС, який є інгібітором Всі-хЇ формули (Іа) або (Іа), до лінкера Ї. хв кв
ОО
У певних варіантах здійснення Аг у формулах (Па) - (Па) вибраний із ; і -- хво ня 4 у З х ; . У певних варіантах здійснення Аг' у формулах (Іа) - (Па) вибраний із ; і -- 4 з і необов'язково заміщений одним або кількома замісниками, незалежно вибраними з галогену, ціано, метилу та галогенметилу. У конкретних варіантах здійснення Аг' являє собою в (У
У певних варіантах здійснення Аг" являє собою Ї , необов'язково заміщений одним або кількома замісниками, де замісники БК/2-225-, ІВ'-225-, Ж-М(В7)-В'3-2и25- або ф-В'-725- приєднані до Аг? при будь-якому атомі Аг, який може бути заміщений.
Х С ту м У
У певних варіантах здійснення Аг? вибраний Із: для ; лм ;
Н
М Ге) М М вошвошевще вшаф. с й 2-2 М я ТУ Ку у у ту чл ; чл ; ; чл ; ли ; пад, уулюї
М м ул іх і необов'язково заміщений одним або кількома замісниками, де замісники К72- и2Ь-, ІВ!-22Б-, Ж-М(ВУ)-В83-225- або й-В'-225- приєднані до Аг? при будь-якому атомі Аг, який може войове бути заміщений. У певних варіантах здійснення Аг- вибраний із: /-ллм у лу ;
Н
0 С, с , с сх -д д-х М
М У м У У У У л лі лім лі У й
Оу
Ку ул зу лм і і необов'язково заміщений одним або кількома замісниками, де замісники Б/2-2725-, ІД'-225-, Ж-АМ(ВУ)-В3-725- або йЖ-8/-225- приєднані до А? при будь-якому атомі
Аг-, який може бути заміщений. У певних варіантах здійснення Аг? заміщений однією або кількома солюбілізувальними групами. У певних варіантах здійснення кожна солюбілізувальна група незалежно від інших вибрана із фрагмента, який передбачає поліол, поліетиленгліколь з 4-30 повторюваними ланками, сіль або фрагмент, який є зарядженим за фізіологічного значення рн.
У певних варіантах здійснення 7" у формулах (Іа) - (Іа) являє собою М.
У певних варіантах здійснення 222 у формулах (Іа) - (І) являє собою 0. У певних варіантах здійснення 222 у формулах (Іа) - (Па) являє собою Свбаре»ь, У певних варіантах здійснення 722 в формулах (Іа) - (4) являє собою 5. У певних варіантах здійснення 772 у формулах (Іа) - (Па) являє собою -МАУС(О)-. У конкретних варіантах здійснення Ре являє собою водень.
У певних варіантах здійснення 225 у формулах (Па) - (Іа) являє собою 0. У певних варіантах здійснення 225 у формулах (Па) - (Па) являє собою МН або СН».
У певних варіантах здійснення ЕК! в формулах (Па) - (Па) вибраний із метилу та хлору.
У певних варіантах здійснення К? у формулах (Іа) - (Па) вибраний із водню та метилу. У конкретних варіантах здійснення К2? являє собою водень.
У певних варіантах здійснення інгібітор ВсіІ-хЇ. являє собою сполуку формули (Па). У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор Всі-хї являє собою сполуку формули (Іа), сполука характеризується структурною формулою (Па.1): 2Ь ві, о он с ле Му в в) М 7га М, - Їх 7 г 5 рт но М 1 М 11а й; (Пал1) або солей, що відповідають їй, де:
Аг, Аг, 2, га, й, ІД, 2, Ва, ДБ, ВД!2 і Ж визначені вище;
У являє собою необов'язково заміщений С:-Свалкілен; г дорівнює 0 або 1; і
Ко) 5 дорівнює 1, 2 або 3.
У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор ВсіІ-хЇ. являє собою сполуку формули (Па.1), г дорівнює 0, і 5 дорівнює 1.
У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор ВсіІ-хЇ. являє собою сполуку формули (Па.1), г дорівнює 0, і 5 дорівнює 2.
У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор Всі-х! являє собою сполуку формули (Па.1), г дорівнює 1, і 5 дорівнює 2.
У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор ВсіІ-хі. являє собою сполуку формули (Па.1), 72а вибраний із О, МН, СН» і 5. У конкретних варіантах здійснення 222 являє собою 0. У певних варіантах здійснення 772 у формулі (Па.1) являє собою -Свсареь-, У певних варіантах здійснення
77а у формулі (Па.1) являє собою СН». У певних варіантах здійснення 272 у формулі (Па.1) являє собою 5. У певних варіантах здійснення 222 у формулі (Па.1) являє собою -МКУС(О)-.
У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор ВсіІ-х. являє собою сполуку формули (Па.1), У вибраний із етилену, пропілену та бутилену. У конкретних варіантах здійснення У вибраний із етилену та пропілену.
У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор ВсіІ-хі. являє собою сполуку формули (Па.1), о) о СНз о Ії Її Мі.
А ло том ОН 4 ТОМ ОМ ОМ ! Сн
С вибраний із ; ; і З , де М являє собою водень або (е)
І улхо позитивно заряджений протиіон. У конкретних варіантах здійснення С являє собою ОМ У конкретних варіантах здійснення С являє собою 5ОзН.
У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор ВсіІ-хЇ. являє собою сполуку формули (Па.1),
Аг? вибраний із
КУЄ г и Кк щи В я, й У ас ше ши ши Фк ши Фк в и НВ в п ! бі оо : «км ож ше ем т й зуб ЗУ ня "У везе и Мер Ей ву й 7 ких і М а і М ох те ес «ж : «адже й о : , де замісник К/2-725- приєднаний до Аг? при будь-якому атомі Аг-, який може бути заміщений.
У певних варіантах здійснення, у яких інгібітор ВсІ-х. являє собою сполуку формули (Па.1),
А? вибраний із ее кове к. й х М ме ден ГІ ван ги с щ шок чок і дит що і ще один З У Ї чо КЗ м ї й | й Й Емми
Ки: ше Й й 7 ще: сте
ОДНЕ : і і і т Е й :
Мод, ї р Я ХА МАК ях м ших Е Ж ве у; ти ех у і Е ; : ;
Шо ок « Я. ! , де замісник Б12-225- приєднаний до А!» при будь-якому атомі АгІ-, який може бути заміщений.
У конкретних варіантах здійснення, в яких інгібітор Всі-хї являє собою сполуку формули
А, (Па.1), А? являє собою лам . У конкретних варіантах здійснення, в яких інгібітор Всі- с у хІ являє собою сполуку формули (Па.1), Агг являє собою лу .
У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор ВсіІ-хі. являє собою сполуку формули (Па.1), 225-Д'? вибраний із Н, Б, СМ, ОСсСНз, ОН, МН, ОСН.СнНгОосСНн:, М(СНз)С(-О)СНз,
СснНеМ(СНз)С(-0)СНзСОН», С(-О)М(СНз)г та ОСН2СНаМ(СНз)(С(-0)СН»з). У конкретних варіантах здійснення 225-В/ вибраний із Н, Е і СМ. У конкретних варіантах здійснення 7225-В!2 являє собою
Н.
У варіантах здійснення, де 225-В!2 заміщений гідроксилом (ОН), атом кисню може слугувати як точка приєднання до зв'язувальної групи (див. розділ 4.4.1.1).
У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор ВсіІ-хі. являє собою сполуку формули (Па.1), не
Аг являє собою У
У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор ВсіІ-хЇ. являє собою сполуку формули (Па.1), б
Ге) Ай
ЯК ак я група гллля зв'язана з адамантановим кільцем, вибраним із нов я 1 х - ї- | Елі Ж о з » подано 00 пов, ал к ди. й є М. ж алу й Етя : де ох Й «Мам : нов но но но й і ї : я щу в я у їх НО Зк
Й : « см КЗ ! яйсу КгЗ и сік й ям у
УКХ З
У певних варіантах здійснення сполука формули (Па.ї) може бути перетворена в сполуку формули Па.1.1, де п вибраний із 1-3: 26 ві277 о он (Є)
Ме в о М 7га М - їх 7 г 5 )
НМ Ге) у Мі п 1 в в он 11а
В Мал
У певних варіантах здійснення сполука формули Іа.1.1 може бути перетворена в сполуку формули Па.1.2, де | являє собою лінкер, і ЇК являє собою зв'язок, утворений між реакційноздатною функціональною групою лінкера Ї ї комплементарною функціональною групою антитіла.
г віх, о он с. с) Мои в ГУ М га М - їз 7 г в Ій но М п в (в) о в ч--ІКх 11а й Мал?
У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор ВсіІ-хі являє собою сполуку формули (Па), сполука характеризується структурною формулою (ПІа.2): 2Ь 12-72 (Ф) в ОО м он о го зв А м за") і: - З 5 Уа Мо нм" Зо ї Ф г Удав В? в! в" 11а й; (Па.2) або солей, що відповідають їй, де:
Аг, Аг, 21, и2а, 2 ДВ, Вг, Ва, ДГ, В'е, с і Ж визначені вище; ) вибраний із М, О ї СН, за умови, що якщо ! являє собою 0, то Маг і К-"2 відсутні;
В2о вибраний із Н і Сі-Слалкілу; кожний із Б2та | 26 незалежно один від одного відсутній або вибраний із Н, Сі-Слалкілу і 0, де С вибраний із поліолу, РЕС4-30, солі та фрагмента, який є зарядженим за фізіологічного значення рн; кожний із Ма і Ме незалежно один від одного відсутній або вибраний зі зв'язку та необов'язково заміщеного алкілену;
В29 вибраний із Н і Сі-Сзалкілу; та 5 дорівнює 1, 2 або 3.
У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор ВсіІ-хЇ. являє собою сполуку формули (Іа.2), 5 дорівнює 2.
У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор ВсіІ-хі. являє собою сполуку формули (Па.2), 77а вибраний із О, СНео і 5. У конкретних варіантах здійснення 272 являє собою О. У певних варіантах здійснення 722 формули (Па.2) являє собою Свбаре», У певних варіантах здійснення 77а у формулі (Па.2) являє собою СН». У певних варіантах здійснення 272 у формулі (Па.2) являє собою 5. У певних варіантах здійснення 2272 у формулі (Па.2) являє собою -МА9С(О)-.
У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор ВсіІ-хі. являє собою сполуку формули (Па.2), ) вибраний із М і 0. У конкретних варіантах здійснення ) являє собою 0.
У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор ВсіІ-хі. являє собою сполуку формули (Па.2),
Ма являє собою зв'язок, Ка являє собою Сі-Сзалкільну групу, М" вибраний із метилену та
Ко) етилену, і К2"» являє собою 0. У конкретних варіантах здійснення Ме являє собою зв'язок, К2а являє собою метильну групу, та У? вибраний із метилену та етилену, і К2"?» являє собою 0.
У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор Всі-хі. являє собою сполуку формули (Па.2),
Уа вибраний із метилену та етилену, В212 являє собою с, У? вибраний із метилену та етилену, і до являє собою (с. У конкретних варіантах здійснення Ма являє собою етилен, Б2а являє собою б, У»? вибраний із метилену та етилену, і К2"» являє собою 0.
У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор ВсіІ-хі. являє собою сполуку формули (Па.2), сн
Ї о (ом ий
Що а чо С ОМ | ін
С вибраний із , ОМ, ОМ і з, де М являє собою водень або
(е)
І уро позитивно заряджений протиіон. У конкретних варіантах здійснення З являє собою ОМ У конкретних варіантах здійснення С являє собою 5ОзН.
У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор ВсіІ-хі. являє собою сполуку формули (Па.2),
Во вибраний із водню та метильної групи.
У певних варіантах здійснення, у яких інгібітор Всі-хЇ являє собою сполуку формули (Па.2),
А?" вибраний із ке: ех сли Ше лк ШЕ
Ї ши ци ши ще ж им Ж ди в- УТ ве зо ми т ЩІ т бобу зву чи їй х щ 3 ; ки ли Ше М ок кі чех
Ху В | й Ж як, к т Б й 1 Ше ї нй т Х зе й сх ту ях р й ту ху и пи "
Зх «УК н Де ,; де замісник 12-72. приєднаний до А!» при будь-якому атомі Аг, який може бути заміщений.
У певних варіантах здійснення, у яких інгібітор ВсІ-х. являє собою сполуку формули (Па.2),
Аі?"вибраний із
БЖ
Й к 3 м ах шт ще Ж дк щ7 ш роя "7 в-во Ї ее й шшши,ошш ошшни чи о т вий з и . М. у ше ЗЕ ек Моя ї гі -ї ях й гу і х
Кк ІЗ тд. МИ дм же М. Ше шк й у М у че ва й Фе "М - де те кс «кках х ках ! 1 де замісник 272-725- приєднаний до Аг? при будь-якому атомі Аг, який може бути заміщений.
У конкретних варіантах здійснення, в яких інгібітор Всі-хї являє собою сполуку формули
А, (Па.2), Аі? являє собою ля , де замісник 2/72-725- приєднаний до Аг- при будь-якому атомі АІ-, який може бути заміщений.
У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор ВсіІ-хі. являє собою сполуку формули (Па.2), 225-ДІ? вибраний із Н, Б, СМ, ОСсСН5, ОН, МН, ОСнНСНн»гОосСН:з, М(СНз)С(-О)СНз,
СнНгм(СНз)С(-0)СНзоН», С(-О)М(СНз)» та ОСН-СНа.М(СНз)(С(-0)СН»з). У конкретних варіантах здійснення 225-В/ вибраний із Н, Е і СМ. У конкретних варіантах здійснення 7225-В!2 являє собою
Н. У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор ВсІ-хЇ. являє собою сполуку формули (ПІПа.2), ли
Мм7 С
Аг являє собою З У конкретних варіантах здійснення, в яких інгібітор ВсіІ-хЇ являє собою
Со сполуку формули (ІПа.2), Аг- являє собою лм ,де замісник Б/2-725- приєднаний до Аг при будь-якому атомі Аг", який може бути заміщений.
У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор Всі-хі являє собою сполуку формули (а), сполука характеризується структурною формулою (ПІа.3): 26 175 (о; й он с
М в2 їх сй шля 2а М-Т-М
У Х я й з з нм" Зо М і М 11а в (Па.з) або солей, що відповідають їй, де:
Аг, Аг, 2, га, й, ІД, г, Ва, ДИ, ВД/2, С і Ж визначені вище;
А? вибраний із Н, Сі-Слалкілу та 95-65 або необов'язково взятий разом із атомом Т з утворенням кільця, яке містить від З до 7 атомів; кожний із да і 5 незалежно один від одного вибраний із необов'язково заміщеного С1-
Свалкілену та необов'язково заміщеного фенілену;
Т вибраний із необов'язково заміщеного Сі-Свалкілену, СНеСнНгОСнНСнНгОСсСНнснН;»,
СнНснгосСнН.нгосСНнсС нос» і поліетиленгліколю, який містить від 4 до 10 етиленгліколевих ланок;
С вибраний із поліолу, РЕС4-30, солі та фрагмента, який є зарядженим за фізіологічного значення рн; і 5 дорівнює 1, 2 або 3.
У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор ВсіІ-хЇ. являє собою сполуку формули (Іа.3), 5 дорівнює 1. У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор ВсіІ-хЇ. являє собою сполуку формули (Па.3), 5 дорівнює 2.
У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор Всі-хі. являє собою сполуку формули (Па.3), 77а вибраний із О, СНео і 5. У конкретних варіантах здійснення 272 являє собою О. У певних варіантах здійснення 7272 формули (Па.3) являє собою СЕ», У певних варіантах здійснення 772 у формулі (Па.3) являє собою СН». У певних варіантах здійснення 2272 у формулі (Па.3) являє собою 5. У певних варіантах здійснення 7272 у формулі (Па.3) являє собою -МАЯС(О)-.
У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор ВсіІ-хі. являє собою сполуку формули (Па.3),
Уа вибраний із метилену та етилену, і Б? являє собою .5-с, де д» являє собою метилен або етилен. У деяких таких варіантах здійснення Т являє собою етилен. В інших таких варіантах здійснення Т являє собою СНа.СНгОСНо.СнНгОсСН»оСсСН». В інших таких варіантах здійснення Т являє собою полієтиленгліколь, який містить від 4 до 10 етиленгліколевих ланок.
У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор ВсіІ-хі. являє собою сполуку формули (Па.3), ща вибраний із метилену та етилену, і К? узятий разом із атомом Т з утворенням кільця, яке містить 4-6 атомів у кільці.
У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор ВсіІ-хі. являє собою сполуку формули (Па.3),
Уа вибраний із метилену та етилену, і ЕР? являє собою Н або алкіл. У деяких таких варіантах здійснення Т являє собою етилен. В інших таких варіантах здійснення Т являє собою
Сснсн:оснгснгосСНносн».
У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор ВсіІ-хЇ. являє собою сполуку формули (Па.3), сн
Ї сно лом и
Що «7 ом о житом яз
С вибраний із , ОМ , ОМ і з 0, де М являє собою водень або
(е)
І уро позитивно заряджений протиіон. У конкретних варіантах здійснення б являє собою ОМ У конкретних варіантах здійснення С являє собою 5ОзН.
У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор ВсіІ-хі. являє собою сполуку формули (Па.3),
Во вибраний із водню та метильної групи.
У певних варіантах здійснення, у яких інгібітор ВсіІ-хЇ являє собою сполуку формули (Па.3),
А?" вибраний із
У ве ТК два Хокі т т ї в Я М й Я В З о. М с-м М
ЗК од у и, 4 сан с а і ГУ Ї г 2 г за У ; їУ
М Ок рем ЯМ. у ; "М мае дев ТВ: рей й як бу яхМх й кЖмх й з, де замісник /ВБ/2-725- приєднаний до А!» при будь-якому атомі Аг, який може бути заміщений.
У конкретних варіантах здійснення, в яких інгібітор Всі-хї являє собою сполуку формули и, (Па.3), Аі? являє собою лам , де замісник 2/72-725- приєднаний до Аг- при будь-якому атомі АІ?7, який може бути заміщений. У певних варіантах здійснення, у яких інгібітор Всі-х!. являє собою сполуку формули (Па.3), Аг? вибраний із
Є кеша Кв оо у. роя ко Ко її й йо ре Зк З ке "В а | і; Е ши ши ши ше М, Кей М. зу ить м хи р з ї й т іх хе : з. | с КУ де М с щ з вач ря З "ВУ вес ж з ті я | дію ; де : ,; де замісник Б/2-225- приєднаний до Аг: при будь-якому атомі Аг", який може бути заміщений. У конкретних варіантах здійснення, в яких інгібітор Всі-хїі являє собою сполуку формули (Па.3), Аг" являє собою о Фе ли , де замісник К/2-725- приєднаний до Аг? при будь-якому атомі А!?, який може бути заміщений.
У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор ВсіІ-хЇ. являє собою сполуку формули (Па.3), 225-ДІ? вибраний із Н, Б, СМ, ОСсСН5, ОН, МН, ОСнНСНн»гОосСН:з, М(СНз)С(-О)СНз,
СнНгм(СНз)С(-0)СНзоН», С(-О)М(СНз)» та ОСН-СНа.М(СНз)(С(-О0)СН»з). У конкретних варіантах здійснення 225-В/ вибраний із Н, Е і СМ. У конкретних варіантах здійснення 7225-В!2 являє собою
Н.
У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор ВсіІ-хЇ. являє собою сполуку формули (Па.3),
ХК
М7 8
Аг являє собою З
У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор ВсіІ-хі. являє собою сполуку формули (Па.3), т їв а итво рі 7Уга М-Т-М з М я група пляяля вибрана з хм м що
Бан що Бон дон ке отр х дл Я вий ті ву, «б і ве і км їм - і і Е Е к7 7 -й «де ще М. й в но ' жк ШИ Що
У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор ВсіІ-хі. являє собою сполуку формули (Па.3), о р І 7уга М-Ї-М з М і група плат вибрана з ! Ки Я : Ух кох Ком х МК дет ЕД шк М, и щ: гий вч хх ж Ж су км ще зм З є дя сн, ду и 7 7 - о й Кк я М.
Ккію ба: КЗ «ЕН пух: е Я хе ОО
У зе т б меня и п шиттю ши й ом ще У т : дже НЕ
З КЗ
У певних варіантах здійснення інгібітор ВсіІ-х. являє собою сполуку формули (ПІБ). У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор Всі-хї являє собою сполуку формули (ІБ), сполука характеризується структурною формулою (ІІБ.1):
2Ь ву, о; в ле м он р
Е: во (о) Як 7у7а М - їх 7 г " нм о М 1 М 11а й (ПБ.1) або солей, що відповідають їй, де:
Аг, Аг, 2, га, й, ІД, г, ВУ, А", ДЬ і 2 визначені вище;
У являє собою необов'язково заміщений С:-Свалкілен;
С вибраний із поліолу, РЕС4-30, солі та фрагмента, який є зарядженим за фізіологічного значення рн; г дорівнює 0 або 1; і 5 дорівнює 1, 2 або 3.
У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор ВсІ-хЇ являє собою сполуку формули (ІІБ.1), 5 дорівнює 1. У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор ВсіІ-хЇ. являє собою сполуку формули (ПІЬ.1), 5 дорівнює 2. У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор Всі-хЇ. являє собою сполуку формули (ПІБ.1), 5 дорівнює 3.
У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор ВсіІ-хі. являє собою сполуку формули (ПІБ.1), 72а вибраний із О, СН», МН і 5. У конкретних варіантах здійснення 222 являє собою 0. У певних варіантах здійснення 7222 у формулі (ПБ.1) являє собою СЕаре». У певних варіантах здійснення 77а у формулі (116.1) являє собою СН». У певних варіантах здійснення 272 у формулі (ПІБ.1) являє собою 5. У певних варіантах здійснення 222 у формулі (ІІБ.1) являє собою -МАеС(О)-.
У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор ВсіІ-хі. являє собою сполуку формули (ПІБ.1), 725 вибраний із О, СНег, МН, МСОНз і 5. У конкретних варіантах здійснення 725 являє собою 0. У конкретних варіантах здійснення 225 являє собою МН. У конкретних варіантах здійснення 225 являє собою МОН».
У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор ВсіІ-х. являє собою сполуку формули (ПІБ.1), У являє собою етилен, і г дорівнює 0.
У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор ВсіІ-хІ. являє собою сполуку формули (ПІБ.1), У являє собою етилен, і г дорівнює 1.
У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор ВсіІ-хі. являє собою сполуку формули (ПІБ.1),
В" являє собою Н або метил. У конкретних варіантах здійснення К" являє собою метил. В інших варіантах здійснення К" являє собою Н.
Зо У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор ВсіІ-хЇ. являє собою сполуку формули (ПБ.1),
В? узятий разом із атомом У з утворенням кільця, яке містить 4-6 атомів у кільці. У конкретних варіантах здійснення кільце являє собою циклобутанове кільце. В інших варіантах здійснення кільце являє собою піперазинове кільце. В інших варіантах здійснення кільце являє собою морфолінове кільце.
У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор ВсіІ-хЇ. являє собою сполуку формули (ПБ.1), сн и ї- звемо мем ев
С вибраний із , ОМ , ОМ і з 0, де М являє собою водень або (в)
По ло позитивно заряджений протиіон. У конкретних варіантах здійснення б являє собою ОМ в інших варіантах здійснення С являє собою 5ОзН. У конкретних варіантах здійснення С являє собою МНг. В інших варіантах здійснення б являє собою РОзіНо. У конкретних варіантах здійснення С являє собою МН». У конкретних варіантах здійснення З являє собою С(О)ОН. У конкретних варіантах здійснення С являє собою поліол.
У певних варіантах здійснення, у яких інгібітор ВсіІ-хЇ являє собою сполуку формули (ПІБ.1),
Аг? вибраний із рови я сх р ше ке М я ши щшши ши, ши ще иа й й ен - М З уд М, х
Ї пай т й Й дек х тк б в
ДИ еш 7 М ше що в рай Мо я в - А М і: КУ в щ Ан о
З кім Н ее з ; де замісник о-(СН2г)в-225- приєднаний до А!" при будь-якому атомі Аг", який може бути заміщений.
У конкретних варіантах здійснення, в яких інгібітор Всі-хї являє собою сполуку формули
А, (ПЬ.1), А? являє собою ля , де замісник С-(СНг)5-7225- приєднаний до А!" при будь- якому атомі Аг, який може бути заміщений. У певних варіантах здійснення, у яких інгібітор Всі- хі являє собою сполуку формули (ІІБ.1), Аг? вибраний із
РаЄ ск не і як «Ж км ви Ку ери же От ж, зм в Ж ве хо р б ? ее од диня т й щі у й х 5 ї у Мо й
ДУ ная о я ух ше ли бук и М я Б чо од я ув ера ме де » ах : ; де замісник а-(СНг)5-225- приєднаний до Аг? при будь-якому атомі АІ?7, який може бути заміщений. У конкретних варіантах здійснення, в яких інгібітор ВсіІ-хЇ. являє собою сполуку формули (ІІБ.1), Аг?
А, являє собою , де замісник С-(СНг)5-725- приєднаний до А!" при будь-якому атомі
Аг?, який може бути заміщений.
У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор ВсіІ-хі. являє собою сполуку формули (ПІБ.1), ли
М7 8
Аг являє собою )
У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор ВсіІ-хЇ. являє собою сполуку формули (ПБ.1), за група З вибрана з
НО. шо пори нм й та МО ето і ий ЕІ За ж з не ча ке так «хи до ? ї се ї я мух 2 ї ї 2 а 4 і
У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор ВсіІ-хі. являє собою сполуку формули (ПІБ.1),
И7 вк А (в) Ж ж 7га М, г й група лядллля вибрана з : г дв Я і я си ли ше М ен с я їх та ла Є р Фоо00оеєх ій Ну Її
ХУ Щ ї 7 7
У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор ВсіІ-хі. являє собою сполуку формули (ПІБ.1), и тю А (в) Ж Ж 7уга М, г й група лядняля вибрана з
Ж гл і сх М. ва дині мм, ко Що щити
НА са я в їх я : ро Гея ; чо Ки жах й т ям якодух 3 ман и
З
Ва
В ом : : : -М ж й Й «о У й Е ре
М. я. М. «я по Її З жд, г о Ех Ко й М" : Е г я м «КУ Зк АХ, ж й з й ЩО УЖ «ме У хх рух :
У певних варіантах здійснення інгібітор ВсІ-хЇ являє собою сполуку формули (Іс). У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор ВсІ-хї являє собою сполуку формули (Іс), сполука характеризується структурною формулою (ПІс.1):
В
77-25 й Фін! У
М 2 /
Хо Кк М дал "в й З но М 1 М 11а
Кк (Пе.1) або солей, що відповідають їй, де:
Аг, Аг, 2, га, й, ІД, г, ВУ, А", ДЬ і 2 визначені вище; уга являє собою необов'язково заміщений С.і-Свалкілен;
У» являє собою необов'язково заміщений С:-Свалкілен;
А вибраний із Н і Сі-Слзалкілу; та
С вибраний із поліолу, РЕС4-30, солі та фрагмента, який є зарядженим за фізіологічного значення рн;
У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор ВсіІ-х. являє собою сполуку формули (ПІс.1), 72а вибраний із О, СН», МН і 5. У конкретних варіантах здійснення 222 являє собою 0. У певних варіантах здійснення 722 у формулі (ІППс.1) являє собою СЕЗаде», У певних варіантах здійснення 72а у формулі (ІПс.1) являє собою 5. У певних варіантах здійснення 222 у формулі (ІПс.1) являє собою -МА5С(О)-.
У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор ВсіІ-х. являє собою сполуку формули (ПІс.1), 775 вибраний із О, СНе, МН, МСНз і 5. У конкретних варіантах здійснення 725 являє собою 0. У конкретних варіантах здійснення 225 являє собою МН. У конкретних варіантах здійснення 225 являє собою МОН».
У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор ВсіІ-хі. являє собою сполуку формули (ППс.1), 775 являє собою зв'язок. У деяких таких варіантах здійснення 2 являє собою метилен або етилен.
У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор Всі-хЇ являє собою сполуку формули (Пс.1), 725 являє собою 0. У деяких таких варіантах здійснення Уг являє собою метилен, етилен або пропілен.
У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор ВсіІ-х. являє собою сполуку формули (ПІс.1), 725 являє собою МР, де КУ визначений вище. У деяких таких варіантах здійснення КК узятий разом із атомом із Уа з утворенням циклоалкільного або гетероциклільного кільця, яке містить від З до 7 атомів у кільці. У деяких таких варіантах здійснення кільце містить 5 атомів.
У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор Всі-хЇ являє собою сполуку формули (Пс.1),
Зо уг являє собою етилен.
У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор Всі-хЇ являє собою сполуку формули (Пс.1), уг являє собою метилен.
У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор Всі-хЇ являє собою сполуку формули (Пс.1),
Уа являє собою пропілен.
У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор ВсіІ-х. являє собою сполуку формули (ПІс.1),
В" являє собою Н або метил. У конкретних варіантах здійснення К" являє собою Н.
У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор Всі-хЇ являє собою сполуку формули (Пс.1), у» являє собою етилен або пропілен. У конкретних варіантах здійснення У? являє собою етилен.
У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор Всі-хЇ являє собою сполуку формули (Пс.1),
А являє собою метил.
У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор Всі-хЇ являє собою сполуку формули (Пс.1),
А являє собою Н.
У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор Всі-хЇ являє собою сполуку формули (Пс.1), сн о |і І (у
А УОЗ ОоМ | ТОН» 4 ТОМ К- і . СН
С вибраний із , ОМ , ОМ і з 0, де М являє собою водень або
(е)
І уро позитивно заряджений протиіон. У конкретних варіантах здійснення 5 являє собою ОМ У конкретних варіантах здійснення С являє собою 5ОзН.
У певних варіантах здійснення, у яких інгібітор Всі-хЇ. являє собою сполуку формули (ПІс.1),
А?" вибраний із кає х ше сл Ше сш ше шшшО,еш ни еще ар тії ше Ь й ух Я Ку з Фе ї Ф ЩО « ме бо, І Зв ем я гай М то Ку, я хх й ій х і щі Шк дере Щ а Ед Ша й Щк ! дих М. г М й йе Кї М оса ту а й З І ї
Б М Н УТА й -, де замісник Ж-М(В7)-Уа- 725. приєднаний до А! при будь-якому атомі А!г, який може бути заміщений.
У конкретних варіантах здійснення, в яких інгібітор Всі-хї являє собою сполуку формули и, (Пс.1), Аг? являє собою лим , де замісник Ж-М(В")-У2-725- приєднаний до А!" при будь- якому атомі Аг, який може бути заміщений. У певних варіантах здійснення, у яких інгібітор Всі- хі являє собою сполуку формули (ПІс.1), Аг? вибраний із я, ке са Ше Бл ШК її бр т
З" ше й ше ри и Х З у ж у; ще з в в
У ї КЗ ї в і : і ней щі яке
КОМ Ба Ще х з : ї
Си в М. в ва реве - : я ки, рен КІ с ас я ча ї- / и в й ех У й йо ту
Зк ях : их й ,; де замісник 2-М(В2)-уа-725- приєднаний до А!" при будь-якому атомі Аг", який може бути заміщений.
У конкретних варіантах здійснення, в яких інгібітор Всі-хЇ являє собою сполуку формули (ПІс.1), (А,
А? являє собою гля , де замісник Ж-М(В7)-у2-2725- приєднаний до Аг? при будь-якому атомі Аг, який може бути заміщений.
У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор Всі-хЇ являє собою сполуку формули (Пс.1), лм
М7 8
Аг являє собою о
У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор ВсіІ-х. являє собою сполуку формули (ПІс.1),
б
Ь
ІМ га" М доз група АЖ вибрана з не КО НЕЯеУ 3 ї м хх . й - м ; і ; С
З ! гі аоовН ГРО з вит пу дея он, га ниття мя у : сх з «ба з яко ке
В інших варіантах здійснення, в яких інгібітор Всі-хЇ являє собою сполуку формули (Іс.1), (Є) уь
ІМ дач М. доз група Я вибрана з нов не но нов з НОВ х Е Кох Ше їх - - че: ! нн я и Км щи | МедитяМ Сеть М ба ї ва жк | ік ' чату .
У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор ВсІ-хі являє собою сполуку формули (Іс), сполука характеризується структурною формулою (ІІс.2): ві г "М ' йо (Ф) ,/Зуа Ме іс) й Фін У
М в2 М 23 дл М Кк й ! З от
НМ Ге); / К
М 550. .Ко5 в! о вв 11а й: (По.2) або солей, що відповідають їй, де:
Аг, Аг, 21, и2а, 2 ДВ, Ве, ВУ, Ва, ДИ і Ж визначені вище; уга являє собою необов'язково заміщений Сі-Свалкілен;
У» являє собою необов'язково заміщений С:-Свалкілен; ух являє собою необов'язково заміщений С:-Свалкілен;
А вибраний із Н і Сі-Сзалкілу;
В25 являє собою У»-( або взятий разом з атомом У- з утворенням кільця, яке містить 4-6 атомів у кільці; та
С вибраний із поліолу, РЕС4-30, солі та фрагмента, який є зарядженим за фізіологічного значення рн.
У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор ВсіІ-х. являє собою сполуку формули (Іс.2), 77а вибраний із О, СН», МН і 5. У конкретних варіантах здійснення 772 являє собою 0. У певних варіантах здійснення 722 у формулі (ІПс.2) являє собою СЕЗаде»ь, У певних варіантах здійснення 77а у формулі (ІІс.2) являє собою 5. У певних варіантах здійснення 772 у формулі (ІПс.2) являє собою -МА5С(0)-. У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор Всі-хі. являє собою сполуку формули (ІІс.2), 2775 вибраний із О, СНег, МН, МСНз і 5. У конкретних варіантах здійснення 72725 являє собою 0. У конкретних варіантах здійснення 722 являє собою МН. У конкретних варіантах здійснення 725 являє собою МОН».
У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор Всі-хЇ являє собою сполуку формули (ПІс.2), 775 являє собою зв'язок. У деяких таких варіантах здійснення 2 являє собою метилен або етилен.
У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор ВсІ-хЇ являє собою сполуку формули (ПІс.2), 775 являє собою МЕ, де 5 визначений вище. У деяких таких варіантах здійснення Б узятий разом із атомом із 2 з утворенням циклоалкільного або гетероциклільного кільця, яке містить від З до 7 атомів у кільці. У деяких таких варіантах здійснення кільце містить 5 атомів.
У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор ВсіІ-х. являє собою сполуку формули (Іс.2),
Уг являє собою етилен.
У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор Всі-х. являє собою сполуку формули (Іс.2),
Ууг являє собою метилен.
У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор Всі-хЇ являє собою сполуку формули (ПІс.2),
В" являє собою Н або метил.
У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор Всі-хЇ являє собою сполуку формули (ПІІс.2),
У» являє собою етилен або пропілен. У конкретних варіантах здійснення У? являє собою етилен.
У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор Всі-хЇ являє собою сполуку формули (ПІс.2), уг являє собою етилен або пропілен. У конкретних варіантах здійснення У? являє собою етилен.
У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор ВсіІ-х. являє собою сполуку формули (Іс.2),
Вг» узятий разом із атомом У: з утворенням кільця, яке містить 4 або 5 атомів у кільці.
У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор ВсІ-хЇ являє собою сполуку формули (ПІс.2),
А являє собою метил.
У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор Всі-хЇ являє собою сполуку формули (ПІс.2), сн о т І у р ло зи тоМ І СНз
С вибраний із Б , ОМ, ОМ і СНз о де М являє собою водень або (е)
І чо позитивно заряджений протиіон. У конкретних варіантах здійснення С являє собою ОМ У конкретних варіантах здійснення С являє собою 5ОзН.
У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор Всі-хЇ являє собою сполуку формули (ПІс.2),
Аг? вибраний із
Зо
К ин З й М Ше В мова ши ши дини і. М яд и М й ри м Шо з є Ой С й в ке боту х Ше
В : фе М ше й М Зк у х ке Ота шив ши нов ке в о ЩЕ ери т : щ я у ІЗ 7 Я : є г - і ! ! вся «УМ х «УМ
У , де замісник Ж-М(В)-Уа-225- приєднаний до А!» при будь-якому атомі Аг, який може бути заміщений.
У конкретних варіантах здійснення, в яких інгібітор Всі-хї являє собою сполуку формули
С, (Пес.2), Аг? являє собою лм , де замісник Ж-М(Н)-уа-225- приєднаний до Аг» при будь- якому атомі Аг-, який може бути заміщений. У певних варіантах здійснення, у яких інгібітор Всі- хі являє собою сполуку формули (ІПІс.2), Аг? вибраний із ях є - х - во ен -7 ке су ц ше М" у й М" м Я й че ше ши ши ни ще я,
Я тис ве 7 не уки М у Шк би зе кн ше шк й пе ве М : ера в та ре -в п | між | І лох х л де замісник й-
М(82)-ма-2и25- приєднаний до Аг? при будь-якому атомі Аг, який може бути заміщений. У конкретних варіантах здійснення, в яких інгібітор ВсіІ-хЇ. являє собою сполуку формули (ІІс.2), Аг? вх являє собою ол , де замісник Ж-М(НВ7)-у2а-225- приєднаний до Аг? при будь-якому атомі АгІ?, який може бути заміщений.
У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор Всі-хЇ являє собою сполуку формули (ПІІс.2),
М" Св
Аг являє собою о)
У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор Всі-хЇ являє собою сполуку формули (ПІс.2), б
Ууь щй 23 ват М Ж т х група Ко вибрана з
Й й ї та г гум маних "7 дує М ше м кт вити ня фути Мо -ч «й і «КМ Е схе т М. А сх 3 і 7 й | Я жо ше я ню но
У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор ВсіІ-хі являє собою сполуку формули (Па), сполука характеризується структурною формулою (ПІа.1): са /
Уа х ,;М 725 Ге) Ге я їх х в (Фін! чо
М. е2 "і га7 7 сваЗ - їх тА к уд нм" о М 1 М о Кк вв 11а й спа.) або солей, що відповідають їй, де:
Аг, Аг, 2, га, й, ІД, 2, Ва, ДИ і Ж визначені вище; уа являє собою необов'язково заміщений алкілен;
У» являє собою необов'язково заміщений алкілен;
ВА вибраний із Н і С/-Слалкілу;
Се вибраний із поліолу, РЕС4-30, солі та фрагмента, який є зарядженим за фізіологічного значення рн.
Се вибраний із поліолу, РЕС4-30, солі та фрагмента, який є зарядженим за фізіологічного значення рн.
У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор ВсіІ-х. являє собою сполуку формули (Та.1), 5 дорівнює 1.
У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор ВсіІ-хЇ. являє собою сполуку формули (Та.1), 5 дорівнює 2.
У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор ВсіІ-хі. являє собою сполуку формули (Па.1), 77а вибраний із О, СНео і 5. У конкретних варіантах здійснення 272 являє собою О. У певних варіантах здійснення 772 формули (Па.1) являє собою СЕ», У певних варіантах здійснення 77а у формулі (Па.1) являє собою 5. У певних варіантах здійснення 7272 у формулі (Па.1) являє собою -МАС(О)-.
У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор ВсіІ-хі. являє собою сполуку формули (Па.1), 775 вибраний із О, МН, СН» і 5. У конкретних варіантах здійснення 225 являє собою 0.
У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор ВсіІ-хЇ. являє собою сполуку формули (Па.1),
Уа вибраний із етилену, пропілену та бутилену. У конкретних варіантах здійснення МУ являє собою етилен.
У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор ВсіІ-хі. являє собою сполуку формули (Іа.1),
Уа вибраний із етилену, пропілену та бутилену. У конкретних варіантах здійснення МУ являє собою етилен.
У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор ВсіІ-хі. являє собою сполуку формули (Па.1), сн
Й убно уом ий
Що «7 ом ТО зи ТОМ сін
Се вибраний із , ОМ, ОМ і з , де М являє собою водень або (в)
По хо позитивно заряджений протиїіон. У конкретних варіантах здійснення 2 являє собою ОМ У конкретних варіантах здійснення 2 являє собою 5ЗОЗзН. У конкретних варіантах здійснення са
Зо являє собою СОН.
У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор ВсіІ-хі. являє собою сполуку формули (Па.1), сн
Оу ї-
Щ «7 бом о ТОМ. ін
СЬ вибраний із , ОМ, ОМ і з , де М являє собою водень або (в)
По ло позитивно заряджений протиіон. У конкретних варіантах здійснення С? являє собою ОМ У конкретних варіантах здійснення се? являє собою 5ОзН. У конкретних варіантах здійснення сь являє собою СОН.
У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор ВсіІ-хі. являє собою сполуку формули (Па.1),
А являє собою метил.
У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор ВсіІ-хі. являє собою сполуку формули (Па.1),
А? вибраний із т 7 ше М м те, Мт М ше ет, 4 де М З де М. Е
Ж г Ще гу рак: Ше ва що. ке м а мот Оу ї Я Її х ї х те ще ххх о хх : 7 ман : че» л де замісник (3а-У2а-М(Ж)- (СНг)з-225- приєднаний до Аг: при будь-якому атомі А!-, який може бути заміщений.
У конкретних варіантах здійснення, в яких інгібітор Всі-хї являє собою сполуку формули и, (пал), Аг являє собою /сляя , де замісник (2-Уа-М(Ж)-(СНг2г)5-225- приєднаний до Аг: при будь-якому атомі Аг-, який може бути заміщений. У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор
Вс!-хІ. являє собою сполуку формули (ІІа.1), Аг? вибраний із кош хе | ран ші Ше | рин Мк | Шо З пишеш чи щи ше З КО ще; ше ій и ше т в г 4 Її З НІ г; й ах Н в б чежКх ше шо пе о у ке Ех та Ди нм ше тр ей ту щ йо т а я : сами ! , де замісник (а-уа-М(2)-(СНг)з-225- приєднаний до Аг? при будь-якому атомі Аг-, який може бути заміщений. У конкретних варіантах здійснення, в яких інгібітор ВсіІ-хЇ являє собою сполуку а, формули (Іа.1), Аг являє собою лам ; де замісник (38а-Уа-М(Ж)-(СНг)«-225- приєднаний до Аг? при будь-якому атомі Аг-, який може бути заміщений.
У певних варіантах здійснення, в яких інгібітор ВсіІ-хі. являє собою сполуку формули (Па.1), ла
М" Св
Аг являє собою о)
У певних варіантах здійснення Ка ії "5 у формулах (Па) - (Па) є однаковими. У конкретному варіанті здійснення кожний із К"2 і КИ» являє собою метил.
У певних варіантах здійснення сполуки формул (Па) - (Па) містять один із наступних остовів (С.1) - (6.21):
о
М. иМа и ТОН
Ї з о (СИ) р о ще м7 8 Нзо сна
У чо о
М. М ТОН
Ї з о но у (С.2) !
МА в Нзе СД.
СН щи нс й ; й о
М. иМаи ТОН
Її з о нм ЗО у (С.3) ; ме нНзе т сна
Щщ нзо
Її у й о
М пер Тон .
Ж І ХА ої (с.4) р о Мк
М" Св Нзо сна о, чо о
М Му ТОН .
Ж І ХА ої (С.5) о Х і
М" 8 Нзо сна що нНзС ч у з о о
С Му ТОН
Ж І ХА ох (С.6) р о | 0 м7 8 Нзо сна о чо
СН» у і
М
КД Аох (0.7) "І Ге! Й тм
М
М" Св Нзо сна у, й он о)
М. и Ме ТОН х ох (С.8) нм Зо Ям
М мя НзС сна о щ
ОСС ки
Ми ТОН ої нм7Зо Ям (С.9) Х м
М" в Нзо сна о че
ОСС ки
Ме ТОН о - зм (С.10) р о Х м
М" Св Нзо сна (7 но
СС й
Ма ТОН ох нм7Зо Ям (С.11) Х м
М" 8 Нзо сна
ЩІ нс ч ) й
Осн о)
М. им ТОН - вх ої (С.12) НМ Ге! Й М
М мч НС сна о й см )
М. и Му ТОН - Х ох (0.13) но М
М мч Нз3о сна о че
Е
)
М. Ми ТОН - Х ох (сл4) р й я
Мм7 8 нНзе сна о че
Ат ) хх Ме Фін! - Х о
М
(С.15) р (в, | м
М" в Нзе сна о що 2 ) хх Ме он - х о
М
(С.16) р (в, у м
М" в Нзе сна о що
(о)
М
М Ма ТОН
Ї о м (С17) р о у м а
М" в Нзе сна о, щ 6) в Ма ТОН
НМ ої м (С.18) р о | м а
М" в Нзе сна о щ й: о
М и Ме ТОН
Ї о м (С.19) ре о | м
ХХ
М" в Нзе сна о щ
Ме о -- М он
Ї ої м (С.20) р о Х м а
М" в Нзе сна о, щ о с о ще Ми ТОН у
Ї о й» (С.21) нм то у М
Х ню й
М" З З сна о, щ
Ілюстративні інгібітори Всі-хЇ згідно зі структурними формулами (Па) - (Па), які можуть застосуватися у способах, описаних у даному документі, в некон'югованій формі та/або можуть бути включені в АОС, описані в даному документі, включають наступні сполуки та/або їх солі:
Варто відзначити, що у випадку, коли інгібітор ВсІ-хі за даним винаходом перебуває в кон'югованій формі, атом водню, який відповідає положенню Ж структурних формул (Па) - (ПО), відсутній, при цьому утворюється монорадикал. Наприклад, сполука М/2.01 (приклад 1.1) являє собою 6-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1 Н)-іл|-3-Г11-(13-(2-(12-(2- (карбоксиметокси)етокси|етил)аміно)етокси|-5, 7-диметилтрицикло!|3.3.1.13,7|дец-1-ил)метил)-5- метил-1Н-піразол-4-іл|Іпіридин-2-карбонову кислоту.
У випадку, якщо ця сполука перебуває в некон'югованій формі, то вона характеризується наступною структурою:
М я (о) о,
МН он
Мишлт шк випала
М Ж / Ж М о
У випадку, якщо аналогічна сполука включена в АОС, як показано в структурній формулі (Па) або (ПІБ), то атом водню, що відповідає положенню Ж, відсутній, при цьому утворюється монорадикал.
М я о о)
МН он меня т вими
М Х / Ж М | Ге)
У певних варіантах здійснення інгібітори Всі-хЇ згідно з формулами (Па) - (Па), вибрані з групи, яка складається із М/2.01, Му/2.02, МУ2.03, ММУ2.04, УМ2.05, МУ2.06, ММУ2.07, МуУ2.08, МУ2.09,
Мм2.10, М2.11, М2.12, М/2.13, М/2.14, М/2.15, М2.16, М/2.17, М2.18, М/2.19, М/2.20, М2.21, М2.22, 10. М/2.23, 2.24, М/2.25, М2.26, М2.27, М2.28, М2.29, 2.30, М2.31, М/2.32, 2.33, М2.34, М2.35,
Мм2.36, М2.37, М2.38, М2.39, М2.40, М2.А41, М/2.42, 2.43, М2.44, М/2.45, М2.46, М2.47, М2.48,
М2.49, М2.50, М2.51, М2.52, 2.53, М2.54, М/2.55, М2.56, М2.57, М/2.58, М2.59, М2.60, ММ2.61, мм2.62, М2.63, М2.64, М/2.65, М2.66, М2.67, М/2.68, М/2.69, М2.70, М2.71, М2.72, М2.73, М2.74, мм2.75, М2.76, М2.77, М2.78, М2.79, М2.80, М/2.81, М/2.82, М2.83, М/2.84, М2.85, М/2.86, М2.87,
Ум2.88, МУ2.89, МУ2.90 і ММ2.91 або їх фармацевтично прийнятних солей.
У певних варіантах здійснення АЮС або його фармацевтично прийнятна сіль містять лікарський засіб, зв'язаний з антитілом за допомогою лінкера, при цьому лікарський засіб являє собою інгібітор Всі-хі,, вибраний із групи, яка складається із М/2.01, МУ2.02, М2.03, ММ2.04, ММ2.05, мм2.06, М2.07, М2.08, М/2.09, М2.10, М/2.11, М/2.12, М/2.13, М/2.14, М/2.15, М/2.16, М/2.17, М2.18, 20. М/2.19, 2.20, М/2.21, М2.22, 2.23, М2.24, М2.25, 2.26, 2.27, 2.28, М2.29, М2.30, М2.31,
Мм2.32, М2.33, М2.34, М2.35, М2.36, М2.37, М/2.38, М2.39, М2.40, М/2.41, 2.42, 2.43, М2.44,
М2.45, 2.46, М2.47, 2.48, 2.49, М2.50, М/2.51, М/2.52, М2.53, М/2.54, М2.55, М2.56, М2.57,
Мм2.58, М2.59, М2.60, М/2.61, М/2.62, М2.63, М/2.64, М/2.65, М2.66, М/2.67, М/2.68, М/2.69, М2.70,
Мм2.71, М2.72, М2.73, М2.74, М2.75, 2.76, 2.77, М2.78, М2.79, М2.80, М2.81, М/2.82, М2.83, 25. М/2.84, М/2.85, М2.86, УМ2.687, УМ2.88, МУ2.89, МУ2.90 і МУ2.91.
У певних варіантах здійснення АОС або його фармацевтично прийнятної солі інгібітор Всі-х!. вибраний із групи, яка складається з наступних сполук, модифікованих таким чином, що атом водню, який відповідає положенню 2 у структурних формулах (Іа), (ПІБ), (Пс) або (Па), відсутній, при цьому утворюється монорадикал:
Зо 6-І(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-11-(13-(2-((2-(2- (карбоксиметокси)етокси|етил)аміно)етокси|-5, 7-диметилтрицикло!|3.3.1.157)дец-1-илуметил)-5- метил-1Н-піразол-4-іл|Іпіридин-2-карбонова кислота; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-3-11-(3,5-диметил-7-2-
К2-сульфоетил)аміно|етоксиутрицикло!|3.3.1.197)дец-1-ил)метилі|-5-метил-1 Н-піразол-4- ілупіридин-2-карбонова кислота; 2-Щ(2-Ц2-(3-(К4-(6-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2- карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1-ілуметил)|-5, 7-диметилтрицикло!|3.3.1.157)дец-1- илюкси)етиліІіаміно)етил)сульфоніл|аміно)-2-дезокси-О-глюкопіраноза; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-3-11-(3,5-диметил-7-2-
К4-(3А,48,55,6Н)-3,4,5-тригідрокси-6-(гідроксиметил)тетрагідро-2Н-піран-2- іл|метилубензил)аміно|етоксиутрицикло!|3.3.1.137|)дец-1-илуметил|-5-метил-1 Н-піразол-4- іл)піридин-2-карбонова кислота; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-3-11-(3,5-диметил-7-2- ((З-сульфопропіл)аміно|етоксиутрициклої|3.3.1.157)дец-1-ил)метилі|-5-метил-1 Н-піразол-4- ілупіридин-2-карбонова кислота; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-ілІ-3-11-(3-2-((2,3- дигідроксипропіл)аміно|етокси)-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.157дец-1-ил)метилі|-5-метил-1 Н- піразол-4-іл)упіридин-2-карбонова кислота;
2-(14-(12-(13-(4-(6-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроїзохінолін-2(1 Н)-іл|-2- карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1-ілуметил)|-5, 7-диметилтрицикло!|3.3.1.157)дец-1- илюкси)етиліаміно)метил)феніл|Ісульфоніл)аміно)-2-дезокси-бета-О-глюкопіраноза; 8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-2-(6-карбокси-5-(1-(13-(2-(12-1П1-(бета-0- глюкопірануронозил)-1Н-1,2,3-триазол-4-іл|еєтиліаміно)етокси|-5,7- диметилтрициклоїЇ3.3.1.157)дец-1-ил)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл|Іпіридин-2-іл)-1,2,3,4- тетрагідроізохінолін; 3-(11-(13-(2-(2-(Ц4-(бета-О-алопіранозилокси)бензилі|аміно)етокси)етокси|-5,7- диметилтрицикло!|3.3.1.19Л|дец-1-ил)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл|-6-(8-(1,3-бензотіазол-2- ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|піридин-2-карбонова кислота; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-3-(1-(3,5-диметил-7-(2-(2-
К2-сульфоетил)аміно|етокси)етокси)трициклої3.3.1.15Лдец-1-ил|метил)-5-метил-1 Н-піразол-4- іл)піридин-2-карбонова кислота; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-3-11-(3,5-диметил-7-2-
К2-фосфоноетил)аміно|етокси)трицикло!Ї3.3.1.127|дец-1-ил)метил|-5-метил-1 Н-піразол-4- іл)піридин-2-карбонова кислота; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-3-11-(3,5-диметил-7-2-
Іметил(З-сульфо-Ї -аланіл)аміно|етокси)утрицикло!|3.3.1.127)дец-1-ил)метилі|-5-метил-1 Н-піразол- 4-ілупіридин-2-карбонова кислота; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-3-11-(3,5-диметил-7-2- ((З-фосфонопропіл)аміно|етоксиутрицикло!|3.3.1.15ЛЯдец-1-ил)метил|-5-метил-1 Н-піразол-4- іл)піридин-2-карбонова кислота; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-3-11-(3,5-диметил-7-2- ((З-сульфо-1І -аланіл)аміно|етоксиутрициклоїЇ3.3.1.157|)дец-1-ил)метилі|-5-метил-1 Н-піразол-4- ілупіридин-2-карбонова кислота; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-3-(1-(3,5-диметил-7-(2-(2- ((З-фосфонопропіл)аміно|етокси)етокси)трицикло!|3.3.1.157)дец-1-ил|метил)-5-метил-1 Н-піразол- 4-іл)піридин-2-карбонова кислота; 3-11-(3-(2-(І-альфа-аспартил(метил)аміно|етокси)-5,7-диметилтрициклоїЇ3.3.1.127|дец-1-
Зо ил)метилі|-5-метил-1Н-піразол-4-іл)-6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін- 2(1Н)-іл|Іпіридин-2-карбонова кислота; 6-(4-(2-(2-(2-аміноетокси)етокси|етил)(2-((3-((4-16-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)уметил!/д-5,7- диметилтрицикло!|3.3.1.19-Лдец-1-иліюкси)етил|аміно)метилі|бензил)-2,6-ангідро-І -гулонова кислота; 4-(Д2-(13-((4-(6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2- карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1-ілуметил)|-5, 7-диметилтрицикло!|3.3.1.157)дец-1- илюкси)етиліІаміно)метил)фенілгексопіранозидуронова кислота; 6-(11-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-1,2,3,4-тетрагідрохінолін- 7-іл|-3-11-(3,5-диметил-7-12-
К2-фосфоноетил)аміно|етокси)трицикло!Ї3.3.1.127|дец-1-ил)метил|-5-метил-1 Н-піразол-4- іл)піридин-2-карбонова кислота; 6-(11-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-1,2,3,4-тетрагідрохінолін- 7-іл|-3-11-(3,5-диметил-7-12-
Іметил(З-сульфо-І -аланіл)аміно|етоксиутрицикло!Ї3.3.1.15-Лдец-1-ил)метил|-5-метил-1 Н-піразол- 4-ілупіридин-2-карбонова кислота; 3-1-(3,5-диметил-7-2-(2-сульфоетил)аміно|етоксиутрицикло!|3.3.1.15Я)дец-1-илуметил/д-5- метил-1Н-піразол-4-іл)-6-І8-(П1,3гіазоло(|5,4-б|піридин-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін- 2(1Н)-іл|Іпіридин-2-карбонова кислота; 3-1-(3,5-диметил-7-2-(2-сульфоетил)аміно|етоксиутрицикло|3.3.1.15Я)дец-1-илуметил/д-5- метил-1Н-піразол-4-іл)-6-І8-(П1,3гіазоло(|4,5-б|піридин-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін- 2(1Н)-іл|Іпіридин-2-карбонова кислота; 6-(11-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-1,2,3,4-тетрагідрохінолін- 7-іл|-3-11-(3,5-диметил-7-12-
К2-сульфоетил)аміно|етоксиутрицикло!|3.3.1.197)дец-1-ил)метилі|-5-метил-1 Н-піразол-4- іл)піридин-2-карбонова кислота; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-11-(3-2-К(2- карбоксиетил)аміно|етокси)-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.137)дец-1-ил)метил|-5-метил-1 Н-піразол- 4-ілупіридин-2-карбонова кислота; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-3-11-(3,5-диметил-7-2- ((З-фосфонопропіл)(піперидин-4-іл)аміно|етоксиутрициклоїЇ3.3.1.157)дец-1-ил)метил|-5-метил-1 Н- піразол-4-іл)упіридин-2-карбонова кислота; бо 3-1-(3-2-(Ю-альфа-аспартил(метил)аміно|єетокси)-5,7-диметилтрициклої3.3.1.15Я)дец-1-
ил)метилі|-5-метил-1Н-піразол-4-іл)-6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін- 2(1Н)-іл|Іпіридин-2-карбонова кислота; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-(1-113-(2-(1- (карбоксиметил)піперидин-4-ілІаміно)етокси)-5,7-диметилтрицикло|3.3.1.197)дец-1-ил|метил)-5- метил-1Н-піразол-4-іл)упіридин-2-карбонова кислота;
М-(55)-5-аміно-6-Т2-(13-((4-716-І(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)- іл|І-2-карбоксипіридин-3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)метилі|-5,7-диметилтрициклоїЇ3.3.1.127|дец-1- илюкси)етилІ(метил)аміно)-6-оксогексил|-М,М-диметилметанаміній; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-3-11-(3,5-диметил-7-2-
Іпіперидин-4-іл(2-сульфоеєетил)аміно|етоксиутрицикло!ї3.3.1.15Лдец-1-ил)метил|-5-метил-1 Н- піразол-4-іл)упіридин-2-карбонова кислота; 6-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-5-(3-фосфонопропокси)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|- 3-11-(3,5-диметил-7-(2-(метиламіно)етокси|грициклоїЇ3.3.1.157)дец-1-ил)метил)-5-метил-1 Н- піразол-4-іл|Іпіридин-2-карбонова кислота; 6-І(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-(1-113-(2-((М-(2- карбоксиетил)-І -альфа-аспартиліІаміно)етокси)-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.19Л)дец-1-ил|метил)у-
Б-метил-1Н-піразол-4-іл)піридин-2-карбонова кислота; 3-11-(3--2-(2-аміноетил)(2-сульфоетил)аміно|етокси)-5,7-диметилтрицикло!їЇ3.3.1.12Лдец-1- ил)метилі|-5-метил-1Н-піразол-4-іл)-6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін- 2(1Н)-іл|Іпіридин-2-карбонова кислота; 6-(5-(2-аміноетокси)-8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-(1- (3,5-диметил-7-(2-(метиламіно)етокси|грицикло!|3.3.1.12Я|дец-1-ил)метил)-5-метил-1 Н-піразол- 4-іл|Іпіридин-2-карбонова кислота; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)нафталін-2-іл|-3-11-(3,5-диметил-7-(2-((3- сульфопропіл)аміно|етоксиутрицикло!ї3.3.1.13-Лдец-1-ил)метил|-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)іпіридин- 2-карбонова кислота; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-11-(3-2-К(2- карбоксиетил)(піперидин-4-іл)аміно|етокси)-5,7-диметилтрициклої|3.3.1.157)дец-1-ил)метил|-5- метил-1Н-піразол-4-іл/іпіридин-2-карбонова кислота;
Зо 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-3-11-(3,5-диметил-7-2- ((З-сульфо-1 -аланіл)(2-сульфоетил)аміно|етоксиутрицикло!|3.3.1.127|)дец-1-ил)метил/|-5-метил- 1Н-піразол-4-ілупіридин-2-карбонова кислота; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-71-(3-2-(2-(2- карбоксиетил)аміно|етил2-сульфоетил)аміно|етокси)-5,7-диметилтрициклої3.3.1.15Я)дец-1- ил)метилі|-5-метил-1Н-піразол-4-іліпіридин-2-карбонова кислота; 3-11-(3,5-диметил-7-12-(3-фосфонопропіл)аміно|етоксиутрицикло!|3.3.1.13Я)дец-1-ил)метилі-
Б-метил-1Н-піразол-4-іл)-6-І8-(Ф1,3)гіазоло|4,5-б|піридин-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін- 2(1Н)-іл|Іпіридин-2-карбонова кислота; 3-11-(3,5-диметил-7-2-(З-фосфонопропіл)аміно|етоксиутрицикло!Ї3.3.1.12Я|дец-1-ил)метилі-
Б-метил-1Н-піразол-4-іл)-6-І8-(Ф1,3)гіазоло|5,4-б|Іпіридин-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін- 2(1Н)-іл|Іпіридин-2-карбонова кислота; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-5-(карбоксиметокси)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-11- (3,5-диметил-7-(2-(метиламіно)етокси|грицикло!|3.3.1.12Я|дец-1-ил)метил)-5-метил-1 Н-піразол- 4-іл|Іпіридин-2-карбонова кислота; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-11-(3-2-((3- карбоксипропіл)(піперидин-4-іл)аміно|етокси)-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.15Я)дец-1-илуметил/д|-5- метил-1Н-піразол-4-іл/іпіридин-2-карбонова кислота; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)нафталін-2-іл|-3-11-(3,5-диметил-7-2-(2- сульфоетил)аміно|етоксиутрицикло!|3.3.1.157)дец-1-ил)метилі|-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)піридин-2-
БО карбонова кислота; 3-11-К3-2-(І-альфа-аспартил(2-сульфоетил)аміно|етокси)-5, 7- диметилтрициклоїЇ3.3.1.157)дец-1-ил)метилі|-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)-6-(8-(1,3-бензотіазол-2- ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|піридин-2-карбонова кислота; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-ілІ|-3-11-(3-2-(1,3- дигідроксипропан-2-іл)аміно|етокси)-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.15Л)дец-1-ил)метил|-5-метил- 1Н-піразол-4-ілупіридин-2-карбонова кислота; 6-(5-(2-аміноетокси)-8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-11-
І(3,5-диметил-7-(2-(метил(2-сульфоетил)аміно|етоксиутрицикло!ї3.3.1.12-Лдец-1-ил)метил|-5- метил-1Н-піразол-4-іл/іпіридин-2-карбонова кислота; бо 6-І(8-(1,3-бензотіазол-2г-ілкарбамоїл)-5-(2-(2-сульфоетил)аміно|етокси)-3,4-дигідроізохінолін-
2(1Н)-ілІ-3-71-(3,5-диметил-7-2-(метил(2-сульфоетил)аміно|етоксиутрицикло!ї3.3.1.19Лдец-1- ил)метилі|-5-метил-1Н-піразол-4-іліпіридин-2-карбонова кислота; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-11-(3,5-диметил-7-2- (2-сульфоетил)(2-(2-сульфоетил)аміно|етиліаміно|етоксиутрицикло!|3.3.1.19Лдец-1-ил)метилі-
Б-метил-1Н-піразол-4-іл)іпіридин-2-карбонова кислота; 6-І(8-(1,3-бензотіазол-2г-ілкарбамоїл)-5-(2-(2-карбоксиетил)аміно|етокси)-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-11-((3,5-диметил- 7-і2-|метил(2- сульфоетил)аміно|етоксиутрицикло!|3.3.1.157)дец-1-ил)метилі|-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)піридин-2- карбонова кислота; 3-11-((3,5-диметил-7-2-(З-фосфонопропіл)(піперидин-4- іллуаміно|етоксиутрицикло!3.3.1.15Я|дец-1-ил)метил|-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)-6-(8- (П,ЗІгіазоло|4,5-б|піридин-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|Іпіридин-2-карбонова кислота; 6-(4-(1,3-бензотіазол-2г-ілкарбамоїл)-3,4-дигідро-2Н-1,4-бензоксазин-6-іл|-3-11-(3,5-диметил- 7--2-(2-сульфоетил)аміно|етоксиутрицикло!|3.3.1.197|дец-1-ил)метилі|-5-метил-1 Н-піразол-4- іл)піридин-2-карбонова кислота; 6-(8-(1,3-бензотіазол-2г-ілкарбамоїл)-5-(3-сульфопропокси)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-3-
П1-(3,5-диметил-7-(2-(метиламіно)етокси|грицикло!|3.3.1.127)дец-1-ил)метил)-5-метил-1 Н- піразол-4-іл|Іпіридин-2-карбонова кислота; 3-11-(3,5-диметил-7-2-(2-сульфоетил)аміно|етоксиутрицикло!|3.3.1.157)дец-1-ил)метилі-5- метил-1Н-піразол-4-ілу-6-(11-(П1,3)гіазоло|4,5-б|піридин-2-ілкарбамоїл)-1,2,3,4-тетрагідрохінолін- 7-іл|Іпіридин-2-карбонова кислота; 3-1-(3,5-диметил-7-2-(2-сульфоетил)аміно|етоксиутрицикло!|3.3.1.15Я)дец-1-илуметил/д-5- метил-1Н-піразол-4-іл)-6-І8-(П1,3)гіазоло|4,5-В|піридин-2-ілкарбамоїл)нафталін-2-іл|піридин-2- карбонова кислота; (16Є)-1-42-15-(1-13-(2-аміноетокси)-5,7-диметилтрицикло!/3.3.1.127)дец-1-ил|метил)-5-метил- 1Н-піразол-4-іл)-6-карбоксипіридин-2-іл|-8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-1,2,3,4- тетрагідроізохінолін-5-ілуметил)-1,5-ангідро-О-глюцит; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-11-(3-2-((3-
Зо карбоксипропіл)аміно|етокси)-5,7-диметилтрицикло|3.3.1.157)дец-1-ил)метилі|-5-метил-1 Н- піразол-4-іл)упіридин-2-карбонова кислота; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)нафталін-2-іл|-3-11-(3,5-диметил-7-(2-((3- фосфонопропіл)аміно|етоксиутрициклоїЇ3.3.1.157)дец-1-ил)метилі|-5-метил-1 Н-піразол-4- іл)піридин-2-карбонова кислота; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-(1-113-(2-Ц4-(бета-О- глюкопіранозилокси)бензил|аміно)етокси)-5, 7-диметилтрицикло!|3.3.1.157)дец-1-ил|метил)-5- метил-1Н-піразол-4-іл)/упіридин-2-карбонова кислота; 3-(1-193-(2-(Ц4-(бета-О-алопіранозилокси)бензилі|аміно)етокси)-5,7- диметилтрициклоїЇ3.3.1.157)дец-1-ил|метил)-5-метил-1Н-піразол-4-іл)-6-(8-(1,3-бензотіазол-2- ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|піридин-2-карбонова кислота; 3-11-(3-(2-(азетидин-3-іл(2-сульфоетил)аміно|етокси)-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.157дец-1- ил)метилі|-5-метил-1Н-піразол-4-іл)-6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін- 2(1Н)-іл|Іпіридин-2-карбонова кислота; 3-11-(3-2-(3-амінопропіл)у(«2-сульфоетил)аміно|етокси)-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.19Я)дец-1- ил)метилі|-5-метил-1Н-піразол-4-іл)-6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін- 2(1Н)-іл|Іпіридин-2-карбонова кислота; 6-(1-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-1,2,3,4-тетрагідрохінолін- 7-іл|-3-11-(3-2-К(2- карбоксиетил)аміно|етокси)-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.137)дец-1-ил)метил|-5-метил-1 Н-піразол- 4-ілупіридин-2-карбонова кислота; 6-І(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-ілІ|-3-71-(3-2-((Ме,Мб- диметилі-ї -лізил)у(метил)аміно|етокси)-5,7-диметилтрициклоїЇ3.3.1.12)дец-1-ил)уметилі|-5-метил- 1Н-піразол-4-ілупіридин-2-карбонова кислота; 3-11-(3-(2-(З-амінопропіл)(метил)аміно|етокси)-5,7-диметилтрицикло!Ї3.3.1.12Л)дец-1- ил)метилі|-5-метил-1Н-піразол-4-іл)-6-(1-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-1,2,3,4- тетрагідрохінолін-7-іл|Іпіридин-2-карбонова кислота; 3-11-(3-2-(азетидин-3-іл(метил)аміно|етокси)-5,7-диметилтрициклоїЇ3.3.1.127)дец-1- ил)метилі|-5-метил-1Н-піразол-4-іл)-6-(1-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-1,2,3,4- тетрагідрохінолін-7-іл|Іпіридин-2-карбонова кислота;
М5-(37-оксо-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35-додекаоксагептатриаконтан-37-іл)-І -лізил-М-(2- (510) ((3-К4-(6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-
іл)б5-метил-1Н-піразол-1-іл)уметил/|-5,7-диметилтрициклої3.3.1.12Я)дец-1-ил)окси)етилі-і - аланінамід; метил-6-І4-(3-Т2-(13-(4-(6-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|- 2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1Н-піразол-1-ілуметил/|-5,7-диметилтрициклоїЇ3.3.1.12Л)дец-1- илюкси)етиліаміно)пропіл)-1Н-1,2,3-триазол-1-іл|-6-дезокси-бета-І -глюкопіранозид; 6-І(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)нафталін-2-ілІ|-3-11-((3-2-(2-карбоксиетил)аміно|етокси)- 5,7-диметилтрициклоїЇ3.3.1.127|дец-1-ил)метил/|-5-метил-1Н-піразол-4-ілупіридин-2-карбонова кислота; 6-(5-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)хінолін-З3-іл|-3-71-(3,5-диметил-7-(2-(2- сульфоетил)аміно|етоксиутрициклоїЇ3.3.1.157|)дец-1-ил)метилі|-5-метил-1 Н-піразол-4-іліпіридин-2- карбонова кислота; 6-І(4-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)хінолін-б-іл|-3-71-(3,5-диметил-7-(2-(2- сульфоетил)аміно|етоксиутрициклоїЇ3.3.1.157|)дец-1-ил)метилі|-5-метил-1 Н-піразол-4-іліпіридин-2- карбонова кислота; 6-(5-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)хінолін-З-іл|-3-11-((3-2-(2-карбоксиетил)аміно|етокси)- 5,7-диметилтрициклоїЇ3.3.1.127|дец-1-ил)метил/|-5-метил-1Н-піразол-4-ілупіридин-2-карбонова кислота; 6-(11-(1,3-бензотіазол-2г-ілкарбамоїл)-5,6-дигідроїмідазо(1,5-а|піразин-7(8Н)-іл|-3-11-К(3,5- диметил-7-(2-(2-сульфоетил)аміно|етоксиутрицикло!Ї3.3.1.157)дец-1-ил)метилі|-5-метил-1 Н- піразол-4-іл)іпіридин-2-карбонова кислота; 8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-2-(6-карбокси-5-(1-(13-(2-(13-П1-(бета-0- глюкопірануронозил)-1 Н-1,2,3-триазол-4-іл|пропіліаміно)етокси|-5, 7- диметилтрицикло!|3.3.1.19Л|дец-1-ил)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл|піридин-2-іл)-1,2,3,4- тетрагідроізохінолін; 6-(7-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-1Н-індол-2-іл|-3-11-(3,5-диметил-7-2-(2- сульфоетил)аміно|етоксиутрицикло!|3.3.1.157)дец-1-ил)метилі|-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)піридин-2- карбонова кислота; 6-І(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-6-(З-(метиламіно)пропіл|-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1Н)-іл|- 3-11-(3,5-диметил-7-2-(2-сульфоетил)аміно|етоксиутрицикло!|3.3.1.157)дец-1-ил)метилі-5-
Зо метил-1Н-піразол-4-іліпіридин-2-карбонова кислота; 5-Ц2-(13-(4-(6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2- карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1-ілуметил)|-5, 7-диметилтрицикло!|3.3.1.157)дец-1- илюкси)етилі|аміно)-5-дезокси-О-арабініт; 1-Щ2-(13-((4-16-І(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-2- карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1-ілуметил)|-5, 7-диметилтрицикло!|3.3.1.157)дец-1- илюкси)етиліаміно)-1,2-дидезокси-О-арабіногексит; 6-І(4-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)ізохінолін-6-іл|-3-11-(3,5-диметил-7-2-(2- сульфоетил)аміно|етоксиутрицикло!|3.3.1.157)дец-1-ил)метилі|-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)піридин-2- карбонова кислота; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-(1-113-(2-(З-гідрокси-2- (гідроксиметил)пропілІаміно)етокси)-5,7-диметилтрициклої3.3.1.12Лдец-1-ил|метил)-5-метил- 1Н-піразол-4-іл)піридин-2-карбонова кислота; 1-Щ2-(13-((4-16-І(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-2- карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1-ілуметил)|-5, 7-диметилтрицикло!|3.3.1.157)дец-1- илюкси)етиліаміно)-1,2-дидезокси-О-еритропентит; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-3-(1-(І3,5-диметил-7-(2- ((25,35)-2,3,4-тригідроксибутил|аміно)зетокси)трициклоїЇ3.3.1.157)дец-1-ил|метил)-5-метил-1 Н- піразол-4-іл)упіридин-2-карбонова кислота; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-3-(1-((3-(2-
БО ((25,35,48,5Н8,68)-2,3,4,5,6,7-гексагідроксигептил|Іаміно)етокси)-5,7- диметилтрицикло!|3.3.1.157)дец-1-ил|метил)-5-метил-1Н-піразол-4-іл)упіридин-2-карбонова кислота; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-71-(3-12-(13-(1,3- дигідроксипропан-2-іл)аміно|пропіл)усульфоніл)аміно|етокси)-5, 7-диметилтрицикло!|3.3.1.127|дец- 1-ил)метил|-5-метил-1Н-піразол-4-іліпіридин-2-карбонова кислота; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-11-(3-2-((3-11,3- дигідрокси-2-(гідроксиметил)пропан-2-іл|Іаміно)-З-оксопропіл)аміно|етокси)-5, 7- диметилтрицикло!|3.3.1.19Л|дец-1-илуметил|-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)упіридин-2-карбонова кислота; бо 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-3-(1-13-(2-((35)-3,4-
дигідроксибутил|аміно)етокси)-5,7-диметилтрициклоїЇ3.3.1.157)дец-1-ил|метил)-5-метил-1Н- піразол-4-іл)упіридин-2-карбонова кислота; 4-(Д2-(13-((4-(6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2- карбоксипіридин-З3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)уметил)|-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.157)дец-1- илюкси)етил|аміно)метил)феніл-бета-О-глюкопіранозидуронова кислота; 3-Ц2-((3-(4-16-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)нафталін-2-іл|-2-карбоксипіридин-3-іл)-5- метил-1Н-піразол-1-іл)уметил/|-5,7-диметилтрициклоїЇ3.3.1.12Л)дец-1-ил)іокси)етилі|аміно)пропіл- бета-О-глюкопіранозидуронова кислота; 6-І(4-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-2-оксидоізохінолін-б-іл|-3-(1-((3,5-диметил-7-(2- (метиламіно)етокси|грициклоїЇ3.3.1.157)дец-1-илу)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл|піридин-2- карбонова кислота; 6-(8-К1,3-бензотіазол-2-іл)карбамоїл|-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-ілу-3-11-(3,5-диметил-7-2-
К2-сульфоетил)аміно|ацетамідоугрициклої|3.3.1.157)декан-1-іл)уметил|-5-метил-1Н-піразол-4- іл)піридин-2-карбонова кислота; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-(1-(3,5-диметил-7-((2- (2-сульфоетил)аміно|етилісульфаніл)трицикло!|3.3.1.127|дец-1-ил|метил)-5-метил-1 Н-піразол-4- іл)піридин-2-карбонова кислота і 6-(8-К1,3-бензотіазол-2-іл)карбамоїл|-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-ілу-3-11-(3,5-диметил-7-13- (2-сульфоетил)аміно|пропілутрициклоЇ3.3.1.1927|декан-1-іл)уметил|-5-метил-1 Н-піразол-4- ілупіридин-2-карбонова кислота та їх фармацевтично прийнятна сіль.
Інгібітори Всі-хЇ зв'язуються з антиапоптотичними білками Всі-хі та інгібують їх, завдяки чому індукується апоптоз. Здатність специфічних інгібіторів Всі-хЇ згідно зі структурними формулами (Па) - (4) до зв'язування з Всі-хЇ та інгібування його активності може бути підтверджена за допомогою стандартних аналізів зв'язування та активності, включаючи, наприклад, аналізи зв'язування Всі-хЇ за допомогою ТК-ЕКЕТ, описані в Тао еї аї., 2014, АС5
Меа. Спет. І ей., 5:1088-1093. Специфічний аналіз зв'язування Всі-хЇ за допомогою ТЕ-ЕВЕТ, який може використовуватися для підтвердження зв'язування Всі-хЇ, наведений у прикладі 4 нижче. Як правило, інгібітори Всі-хі,, застосовні як інгібітори рег 5е і в АОС, описаних у даному
Зо документі, будуть характеризуватися значенням К; в аналізі зв'язування відповідно до прикладу 5, яке становить менше приблизно 1 нМ, але вони можуть характеризуватися значно меншим значенням Кі, наприклад, значенням Кі, яке становить менше приблизно 1, 0,1 або навіть 0,01 НМ.
Інгібуюча активність щодо Всі-хі також може бути підтверджена у стандартних аналізах клітинної цитотоксичності, таких як аналізи цитотоксичності з використанням клітин РІ 5.12 і
Мої-4, описані в Тао еї аї.,, 2014, АС5 Мей. Спет. Гей., 5:1088-1093. Специфічний аналіз цитотоксичності з використанням клітин Мой-4, який може застосуватися для підтвердження інгібуючої активності щодо Всі-хї специфічних інгібіторів ВсіІ-хЇ, які здатні проникати через клітинні мембрани, наведений у прикладах 5 і 6 нижче. Як правило, такі інгібітори Всі-хі,, здатні до проникнення в клітину, будуть характеризуватися значенням ЕСво, яке становить менше приблизно 500 нМ, в аналізі цитотоксичності з використанням клітин МойК-4 відповідно до прикладів 5 і б, але вони можуть характеризуватися значно меншим значенням ЕсСово, наприклад, значенням ЕСбзо, яке становить менше приблизно 250, 100, 50, 20, 10 або навіть
Б НМ.
Завдяки наявності солюбілізувальних груп, очікується, що чимало з інгібіторів Всі-хі, описаних у даному документі, будуть характеризуватися низькою або дуже низькою здатністю проникати в клітини, і тому в певних клітинних аналізах не буде одержана суттєва активність унаслідок нездатності сполуки проходити крізь клітинну мембрану, у тому числі в аналізі токсичності з використанням клітин Моїй-4 відповідно до прикладів 5 і 6. Інгібуюча активність щодо Всі-х!. сполук, які вільно не проходять крізь клітинні мембрани, може бути підтверджена в клітинних аналізах із використанням пермеабілізованих клітин. Процес проникності зовнішньої мітохондріальної мембрани (МОМР) регулюється білками родини Всі-2. Зокрема, МОМР стимулюється проапоптотичними білками Вах і ВаК родини Всі-2, які під час активації олігомеризуються на зовнішній мітохондріальній мембрані й утворюють пори, що призводить до вивільнення цитохрому с (суї с). Вивільнення суї с ініціює утворення апоптосоми, що своєю чергою призводить до активації каспаз і до інших явищ, які сприяють запрограмованій клітинній загибелі клітини (див. Соїавієеіїп еї аїЇ.,, 2005, Се! Оеай апа Оійегепііайоп 12:453-462).. На олігомеризувальну дію Вах і ВакК спричиняють антагоністичний вплив представники антиапоптотичної родини Всі--, у тому числі ВсіІ-2 і Всі-хі. Інгібітори Всі-хЇ у клітинах, 60 виживаність яких залежить від Всі-х, можуть зумовлювати активацію Вах та/або Вак, МОМР,
вивільнення суї с і подальші явища, які призводять до апоптозу. Процес вивільнення суї с може бути виміряний за допомогою вестерн-блотингу мітохондріальної та цитозольної фракцій клітин і може застосуватися як попередній показник апоптозу в клітинах.
Як засіб виявлення інгібуючої активності щодо Всі-х і подальшого вивільнення суї с для інгібіторів ВсіІ-хІ. із низькою здатністю проникати в клітини, клітини можна обробляти засобом, який спричиняє селективне утворення пор у плазматичній, але не мітохондріальній мембрані.
Зокрема, співвідношення холестерин/фосфоліпід є набагато вищим у плазматичній мембрані, ніж у мітохондріальній мембрані. У результаті цього, короткочасне інкубування з використанням низьких концентрацій дигітоніну, детергенту спрямованої дії щодо холестерину, забезпечує селективну проникність плазматичної мембрани без спричинення суттєвого впливу на мітохондріальну мембрану. Цей засіб утворює нерозчинні комплекси з холестерином, що призводить до відокремлення холестерину від його нормальних сайтів зв'язування з фосфоліпідами. Ця дія своєю чергою призводить до утворення отворів шириною приблизно 40- 50 А у ліпідному бішарі. Після того, як плазматична мембрана стає проникною, компоненти цитозолю, здатні до проникнення через утворені дигітоніном отвори, можуть вимиватися, у тому числі цитохром С, який вивільняється з мітохондрій у цитозоль в апоптотичних клітинах (Сатроз, 2006, Суютеїгу А 69(6):515-523).
Як правило, інгібітори ВсІ-хї будуть характеризуватися значенням ЕСб5о, яке становить менше приблизно 10 нМ, в аналізі рівня суї із використанням пермеабілізованих клітин Мої-4 відповідно до прикладів 5 і б, хоча сполуки можуть характеризуватися значно меншими значеннями ЕСзо, наприклад, менше приблизно 5, 1 або навіть 0,5 нМ. Як показано у прикладі 6, інгібітори ВсіІ-х, що характеризуються низькою або дуже низько здатністю проникати в клітини, які не проявляють активності в стандартному аналізі клітинної токсичності Мой-4 з непермеабілізованими клітинами, проявляють сильну функціональну активність, виміряну за вивільненням суї с, в аналізах клітинної цитотоксичності з пермеабілізованими клітинами.
Додатково до вивільнення цитохрому с у мітохондрій, які піддаються апоптозу, часто втрачається їхній трансмембранний потенціал мітохондріальної мембрани (Воиспіег-Науеєвз єї аІ,, 2008, МеїШтоа» 44(3): 222-228). У0-1 являє собою катіонний карбоціаніновий барвник, який накопичується в мітохондріях і демонструє червону флуоресценцію у разі, коли мітохондрії є
Зо нормальними, при цьому вона втрачається у разі, коли мітохондріальна мембрана пошкоджена (відсоткове значення деполяризації; 5тіїеу еї а!., 1991, Ргос. Маї). Асад. сі. ОБА, 88: 3671-3675;
Веегз еї аї., 1991: Віоспетівігу, 30: 4480-4486). Ця втрата сигналу може бути виявлена в пермеабілізованих клітинах із застосуванням флуориметра (збудження при 545нм та випромінювання при 590 нм), і тому її можна повністю кількісно визначити, що збільшує як збіжність результатів, так і пропускну здатність. Як правило, інгібітори Всі-хЇ будуть характеризуватися значенням ЕС»о, яке становить менше приблизно 10 НМ, в аналізі за допомогою ./С-1 із використанням пермеабілізованих клітин Моїї-4 відповідно до прикладів 5 і 6, хоча сполуки можуть характеризуватися значно меншими значеннями ЕСво, наприклад, менше приблизно 5, 1, 0,5 або навіть 0,05 нМ. Як продемонстровано в прикладі 6, інгібітори Всі-хі., які характеризуються низькою або дуже низькою здатністю проникати в клітини, які не проявляють активності у стандартному аналізі токсичності з використанням клітин Мой-4 у випадку непермеабілізованих клітин, проявляють сильну функціональну активність, виміряну за втратою їхнього трансмембранного потенціалу мітохондріальної мембрани в аналізі за допомогою .)С-1, в аналізах клітинної цитотоксичності з використанням пермеабілізованих клітин. Інгібітори Всі-х!. із низькою здатністю проникати в клітини також проявляють сильну активність у разі введення в клітини у формі АОС (див., наприклад, приклад 8).
Хоча чимало з інгібіторів ВсІ-х структурних формул (Іа) - (І) селективно або специфічно інгібують Всі-хІ. порівняно з іншими антиапоптотичними білками родини Всі-2, селективне та/або специфічне інгібування Всі-хіЇ не є необхідним. Інгібітори Всі-хЇ і АОС, які містять ці сполуки, додатково до інгібування Всі-хі також можуть інгібувати один або декілька інших антиапоптотичних білків родини Всі-2, таких як, наприклад, Всі-2. У деяких варіантах здійснення інгібітори Всі-хІ. та/або АОС є селективними та/або специфічними щодо Всі-х!. Під специфічним або селективним розуміють, що конкретний інгібітор Всі-хІ. та/або АОС зв'язують або інгібують
ВсіІ-хЇ за більш високого ступеня, ніж Всі-2 в еквівалентних умовах аналізу. У конкретних варіантах здійснення інгібітори ВсіІ-хЇ талабо АОС характеризуються значенням специфічності або селективності щодо Всі-хі, яке перебуває в діапазоні 10-разових, 100-разових або навіть більших значень, ніж Всі-2 в аналізах зв'язування.
Ш.А.2. Лінкери Всі-х!.
В АОС, описаних у даному документі, інгібітори Всі-х! зв'язані з антитілом за допомогою бо лінкерів. Лінкер, який зв'язує інгібітор ВсіІ-хЇ та антитіло в АОС, може бути коротким, довгим,
гідрофобним, гідрофільним, гнучким або жорстким або може складатися із сегментів, кожний із яких незалежно характеризується одним або кількома із вищезазначених властивостей, внаслідок чого лінкер може включати сегменти, які характеризуються різними властивостями.
Лінкери можуть бути багатовалентними, внаслідок чого вони ковалентно зв'язують більше одного інгібітора ВсІ-хі з одним сайтом антитіла, або одновалентними, внаслідок чого вони ковалентно зв'язують один інгібітор Всі-хІ. з одним сайтом антитіла.
Фахівцям у даній галузі буде зрозуміло, що лінкери зв'язують інгібітори Всі-х! з антитілом шляхом утворення ковалентного зв'язку з інгібітором Всі-хі в одному місці та ковалентного зв'язку з антитілом в іншому. Ковалентні зв'язки утворюються внаслідок реакції між функціональними групами лінкера та функціональними групами інгібіторів та антитіла.
Використовуваний у даному документі вираз "лінкер"- призначений для включення (Її) некон'югованих форм лінкера, які містять функціональну групу, яка може ковалентно зв'язувати лінкер з інгібітором Всі-хі, і функціональну групу, яка може ковалентно зв'язувати лінкер з антитілом; (ії) частково кон'югованих форм лінкера, які містять функціональну групу, яка може ковалентно зв'язувати лінкер з антитілом, і яка ковалентно зв'язана з інгібітором Всі-хі,, або навпаки; та (ії) повністю кон'югованих форм лінкера, які ковалентно зв'язані з інгібітором Всі-хі!. та з антитілом. У деяких конкретних варіантах здійснення описаних у даному документі проміжних сполук синтонів і АОС фрагменти, що містять функціональні групи на лінкері, та ковалентні зв'язки, утворені між лінкером та антитілом, конкретно проілюстровані відповідно як
ВхІі Ху.
Лінкери є переважно, але необов'язково, хімічно стійкими до позаклітинних умов, і можуть бути сконструйовані з можливістю специфічного розщеплювання, відщеплювання та/або іншого руйнування всередині клітини. Альтернативно можна використовувати лінкери, які сконструйовані з відсутністю можливості специфічного розщеплювання або руйнування всередині клітини. Із рівня техніки відомий широкий спектр лінкерів, застосовних для зв'язування лікарських засобів із антитілами в контексті АОС. Для зв'язування інгібіторів Всі-хі. з антитілом описаних у даному документі АОС можна використовувати будь-який із цих лінкерів, а також інші лінкери.
Ілюстративні багатовалентні лінкери, які можна використовувати для зв'язування багатьох інгібіторів ВсІ-хЇ з антитілом, описані, наприклад, у патенті США Мо 8399512; опублікованій заявці на патент США Мо 2010/0152725; патенті США Мо 8524214; патенті США Мо 8349308; опублікованій заявці на патент США Мо 2013/189218; опублікованій заявці на патент США
Мо 2014/017265; УМО 2014/093379; МО 2014/093394; УМО 2014/093640, зміст кожної з яких включено в даний документ за допомогою посилання в усій своїй повноті. Наприклад, технологія лінкерів РїІехітемк?», розроблена Мегзапа та співавт., має потенціал щодо забезпечення високого значення БАК для АОС із належними фізико-хімічними властивостями.
Як показано нижче, технологія лінкерів Ріехітег? базується на вбудовуванні молекул лікарських засобів у солюбілізувальний поліацетальний каркас за допомогою послідовності естерних зв'язків. Ця методики дає високонавантажені АМС (ОАК не більше 20) з одночасним збереженням належних фізико-хімічних властивостей. Ця методика може бути використана з інгібіторами Всі-хї., як показано на схемі нижче.
С о шИ а зи Щі Меибов йо пед Я щи он «ХХ своя « ПТ, ее я й ви о ви Мої й оон : о
О.М а г й - тром туту
Додавання внхеря ве до хну сни нь я т тохжінле і х ШЕ: Як на хи
КівжВхня речо) ух здо
У У х г. г й х І х х де кто ре
М Не не дн урн уник
Оех | Й де І З й о Лікарський ОО пдікюський Щю- Лікарський екю заг за
Для використання лінкера за технологією РІехітел?, зображеною на схемі вище, аліфатичний спирт може бути присутнім або може бути введений в інгібітор ВсіІ-хЇ. Фрагмент спирту потім кон'югують із фрагментом аланіну, який потім вбудовують синтетичним способом у лінкер Ріехітеглгя. Обробка ліпосомами АС іп міго забезпечує вивільнення вихідного спиртовмісного лікарського засобу.
Додаткові приклади лінкерів дендритного типу можна знайти в ОБ 2006/116422; 05 2005/271615; де Стгоої єї а!., (2003) Апдем. Спет. Іпі. Ед. 42:4490-4494:; Атік єї аї., (2003) Апдему.
Сет. Іпі. Ед. 42:4494-4499; 5натів еї аї., (2004) 9). Ат. Спет. ос. 126:1726-1731; Зип еї аї., (2002) Віоогдапіс 4 Медісіпа! Спетівігу Гейегв 12:2213-2215; Зип еї аї., (2003) Віоогдапіс 8
Меадісіпа! Спетівігу 11:1761-1768; Кіпо еї а!., (2002) Теманеагоп І енег5 43:1987-1990.
Ілюстративні одновалентні лінкери, які можна використовувати, описані, наприклад, у
Мойіпа, 2013, Апіїбоду-ЮОгиа Сопійдаїевз, Меїйоа5 іп МоїІєсшаг Віоіосду 1045:71-100; Кіїзоп еї аї., 15. 2013, СВО5/СМО: - Спетіса Одді - Спетівігу Тодау 31(4): 30-36; Бисгу єї а!., 2010, Віосопіцдаїеє
Спет. 21:5-13; 7Нао вї аї., 2011, 9. Мед. Спет. 54:3606-3623; патенті США Мо 7223837; патенті
США Мо 8568728; патенті США Мо 8535678 та в МО2004010957, зміст кожної з яких включено в даний документ за допомогою посилання в усій своїй повноті.
Як приклад і без обмеження, деякі розщеплювані та нерозщеплювані лінкери, які можуть бути включені в описані в даному документі АОС, описані нижче.
Розщеплювані лінкери
У певних варіантах здійснення вибраний лінкер є розщеплюваним іп мійго та іп мімо.
Розщеплювані лінкери можуть містити хімічно або ферментативно нестійкі зв'язки або зв'язки, які піддаються руйнуванню. У випадку розщеплюваних лінкерів вивільнення лікарського засобу, як правило, залежить від процесів усередині клітини, таких як відновлення в цитоплазмі, дія кислих умов у лізосомі або розщеплювання специфічними протеазами або іншими ферментами всередині клітини. Розщеплювані лінкери, як правило, включають один або декілька хімічних зв'язків, які можуть бути хімічно або ферментативно розщеплюваними, у той час як інша частина лінкера є нерозщеплюваною.
Зо У певних варіантах здійснення лінкер містить хімічно нестійку групу, таку як гідразонова та/або дисульфідна групи. Лінкери, які містять хімічно нестійкі групи, використовують відмінні властивості плазми крові та деяких цитоплазматичних компартментів. Внутрішньоклітинними умовами, що сприяють вивільненню лікарського засобу у випадку лінкерів, які містять гідразонові групи, є кисле середовище ендосом і лізосом, у той час як лінкери, що містять дисульфідні групи, відновлюються в цитозолі, який містить високі концентрації тіолів, наприклад глутатіону. У певних варіантах здійснення стійкість лінкера, який містить хімічно нестійку групу, У плазмі крові можна збільшувати шляхом уведення стеричного утруднення за допомогою замісників поряд із хімічно нестійкою групою.
Кислотно-нестійкі групи, такі як гідразонова, залишаються цілими під час знаходження в системному кровотоці в середовищі з нейтральним показником рН (рн 7,3-7,5) і піддаються гідролізу та вивільнюють лікарський засіб після того, як АОС інтерналізується в слабокислий ендосомальний (рН 5,0-6,5) і лізосомальний (рН 4,5-5,0) компартменти клітини. Цей рн- залежний механізм вивільнення був асоційований із неспецифічним вивільненням лікарського засобу. Для підвищення стійкості гідразонової групи в лінкері лінкер можна змінити шляхом хімічної модифікації, наприклад заміщенням, що дозволяє досягнути ефективнішого вивільнення в лізосомі з мінімальною втратою у кровотоці.
Лінкери, які містять гідразонові групи, можуть містити додаткові сайти розщеплювання, такі як додаткові кислотно-нестійкі сайти розщеплювання та/або ферментативно нестійкі сайти розщеплювання. АОС, які включають ілюстративні лінкери, що містять гідразонові групи, включають наступні структури:
М З АХ мов М-АЬ (19) ДІ Н р о п
Ч (9) (т) ДИ ру» дь (6)
В; ГФ) п
М р' й (І) нс, Н от АЬ
Ге! п де ОО і АБ являють собою відповідно лікарський засіб та АБ, і п являє собою кількість лікарських засобів-лінкерів, зв'язаних із антитілом. У певних лінкерах, таких як лінкер (Ід), лінкер містить дві розщеплювані групи - дисульфідний і гідразоновий фрагменти. У випадку таких лінкерів для ефективного вивільнення немодифікованого вільного лікарського засобу необхідними є кислий показник рН або відновлення дисульфідної групи та кислий показник рн.
Було показано, що такі лінкери, як (ІЙ) та (Ії), є ефективними з одним гідразоновим сайтом розщеплювання.
Інші кислотно-нестійкі групи, які можуть бути включені в лінкери, включають цис-аконітил- вмісні лінкери. Хімія цис-аконітилових груп передбачає використання групи карбонової кислоти, з'єднаної амідним зв'язком для прискорення гідролізу амідної групи в кислих умовах.
Розщеплювані лінкери також можуть містити дисульфідну групу. Дисульфіди термодинамічно стійкі за фізіологічного значення рнН і призначені для вивільнення лікарського засобу після інтерналізації всередину клітини, де цитозоль забезпечує середовище із значно більшою відновлюваною властивістю порівняно з внутрішньоклітинним середовищем. Для
Зо розриву дисульфідних зв'язків, як правило, необхідна наявність цитоплазматичного тіолового кофактора, такого як (відновлений) глутатіон (З5Н), так що лінкери, які містять дисульфідні групи, є достатньо стійкими в кровотоці та вибірково вивільнюють лікарський засіб у цитозолі.
Внутрішньоклітинний білок-фермент дисульфідізомераза або подібні ферменти, які можуть розщеплювати дисульфідні зв'язки, також можуть сприяти переважному розщеплюванню дисульфідних зв'язків усередині клітин. Повідомлялося, що О5Н присутній у клітинах у діапазоні концентрацій 0,5-10 мМ порівняно зі значно нижчою концентрацією ОЗН або цистеїну, найбільш поширеного низькомолекулярного тіолу, у кровотоці в кількості приблизно 5 мкМ. Пухлинні клітини, де нерегулярний потік крові призводить до гіпоксичного стану, призводять у результаті до підвищеної активності відновлювальних ферментів і, як наслідок, до ще вищих концентрацій глутатіону. У певних варіантах здійснення стійкість іп мімо лінкера, який містить дисульфідні групи, можна підсилити шляхом хімічної модифікації лінкера, наприклад, шляхом використання стеричного утруднення, яке прилягає до дисульфідного зв'язку.
АОС, які включають ілюстративні лінкери, що містять дисульфідні групи, включають наступні структури:
Кк Н () в) 5. ак й АЬ -н-Ж 5
Кк Кк о п (Ію) 0. ше п
Кк ! ра (ІІ) о в? Ар п де О і АБ являють собою відповідно лікарський засіб та антитіло, п являє собою кількість лікарських засобів-лінкерів, зв'язаних із антитілом, і КЕ у кожному випадку незалежно вибраний, наприклад, із водню або алкілу. У певних варіантах здійснення збільшення стеричного утруднення, яке прилягає до дисульфідного зв'язку, збільшує стійкість лінкера. Такі структури, як (ІЇ) ї (І), демонструють підвищену стійкість іп мімо, коли одна або декілька груп К вибрані з нижчого алкілу, такого як метил.
Іншим типом лінкера, який можна застосовувати, є лінкер, який специфічно розщеплюється ферментом. Такі лінкери зазвичай мають пептидну основу або включають пептидні ділянки, які виступають у ролі субстратів для ферментів. Лінкери на основі пептидів, як правило, більш стійкі в плазмі крові та позаклітинному середовищі, ніж хімічно нестійкі лінкери. Пептидні зв'язки, як правило, мають хорошу стійкість у сироватці крові, оскільки лізосомальні протеолітичні ферменти мають дуже низьку активність у крові внаслідок ендогенних інгібіторів та несприятливо високого значення рН крові порівняно з лізосомами. Вивільнення лікарського засобу від антитіла відбувається специфічно в результаті дії лізосомальних протеаз, наприклад, катепсину та плазміну. Ці протеази можуть бути присутніми за підвищених рівнів у певних пухлинних тканинах. У певних варіантах здійснення лінкер є розщеплюваним лізосомальним ферментом. У певних варіантах здійснення лінкер є розщеплюваним лізосомальним ферментом, і лізосомальний фермент являє собою катепсин В. У певних варіантах здійснення лінкер є розщеплюваним лізосомальним ферментом, і лізосомальний фермент являє собою р- глюкуронідазу або р-галактозидазу. У певних варіантах здійснення лінкер є розщеплюваним лізосомальним ферментом, і лізосомальний фермент являє собою В-глюкуронідазу. У певних варіантах здійснення лінкер є розщеплюваним лізосомальним ферментом, і лізосомальний фермент являє собою р-галактозидазу.
Фахівці в даній галузі усвідомлюють важливість розщеплюваних лінкерів, які є стійкими в
Зо плазмі крові та при цьому легко розщеплюються лізосомальним ферментом. У даному документі в деяких варіантах здійснення розкриті лінкери, розщеплювані лізосомальними ферментами р-глюкуронідазою або р-галактозидазою, які проявляють поліпшену стабільність у плазмі крові та знижене неспецифічне вивільнення низькомолекулярного лікарського засобу.
В ілюстративних варіантах здійснення розщеплюваний пептид вибраний із тетрапептидів, таких як сіІу-Ріе-Ї ви-С1пу, Аіа-І еи-Аїа-І ем, або дипептидів, таких як Ма!-Сії, МаІ-Аіа та Рпе-Г ув. У певних варіантах здійснення переважними є дипептиди, а не більш довгі поліпептиди, внаслідок гідрофобності більш довгих пептидів.
Були описані різні розщеплювані лінкери на основі дипептидів, застосовні для зв'язування лікарських засобів, таких як доксорубіцин, мітоміцин, камптотецин, талісоміцин та ауристатин/представники родини ауристатинів, з антитілами (див., биром/спік еї аї., 1998, 9. Ого.
Спет. 67:1866-1872; ВБиромстнік еї а!ї., 1998, Віосогу. Мед. Снет. І ен. 8(21):3341-3346; МаїКег єї аІ., 2002, Віоогд. Мей. Спет. Гей. 12:217-219; М/аїКег єї аїЇ.,, 2004, Віоога. Мей. Сет.
Ї ен.14:4323-4327; та Егапсівсо еї аї., 2003, Віоса 102:1458-1465, зміст кожної з яких включено в даний документ за допомогою посилання). Усі ці дипептидні лінкери або модифіковані варіанти цих дипептидних лінкерів можна застосовувати в АОС, описаних у даному документі. Інші дипептидні лінкери, які можна застосовувати, включають лінкери, які зустрічаються в таких АОС, як брентуксимабу вендотин-5СИ1М-35 (Аасеїгі5 "М) від ЗеашШе Сепеїіс5, 5ОМ-75 (антитіло до СО-70,
МО-монометилауристатин ЕЕ (ММАБЕ), глембатумумаб (СОХ-011) (антитіло до ММВ, МаїІ-Сй- монометилауристатин Е (ММАЕ) від Сеїдех Тпегарешісх і РЗМА-АОС (РЗМА-АОС-1301) (антитіло до РОМА, МаІ-СП-ММАЕ) від Суодеп.
Ферментативно розщеплювані лінкери можуть включати самовідщеплюваний спейсер для просторового відокремлення лікарського засобу від сайту ферментативного розщеплювання.
Пряме приєднання лікарського засобу до пептидного лінкера може призвести до протеолітичного вивільнення амінокислотного адукту з лікарським засобом, що погіршує його активність. Застосування самовідщеплюваного спейсера забезпечує можливість відокремлення повністю активного хімічно немодифікованого лікарського засобу під час гідролізу амідного зв'язку.
Одним самовідщеплюваним спейсером є біфункціональна група пара-амінобензилового спирту, яка зв'язана з пептидом за допомогою аміногрупи з утворенням амідного зв'язку, у той час як аміновмісні лікарські засоби можуть бути приєднані за допомогою карбаматних функціональних груп до бензилової гідроксильної групи лінкера (з одержанням п- амідобензилкарбамату, РАВС). Одержані в результаті проліки активуються під час опосередкованого протеазою розщеплювання, що приводить до 1,6-елімінувальної реакції, яка забезпечує вивільнення немодифікованого лікарського засобу, діоксиду вуглецю та залишків лінкерної групи. На наступній схемі зображена фрагментація п-амідобензилкарбамату та вивільнення лікарського засобу: о г о ; . пеню | Важ с х ши що - й х-В де Х-О являє собою немодифікований лікарський засіб. Також були описані гетероциклічні варіанти цієї самовідщеплюваної групи. Див. патент США Мо 7989434.
У певних варіантах здійснення ферментативно розщеплюваний лінкер являє собою лінкер, розщеплення якого базується на ВД-глюкуроновій кислоті. Легке вивільнення лікарського засобу
Зо може здійснюватись за допомогою розщеплювання глікозидного зв'язку р-глюкуроніду лізосомальним ферментом В-глюкуронідазою. Цей фермент присутній у надлишку в лізосомах і надекспресується в деяких типах пухлин, при цьому активність цього ферменту поза клітин є низькою. Лінкери на основі В-глюкуронової кислоти можна застосовувати для того, щоб уникнути тенденції АОС піддаватися агрегації внаслідок гідрофільної природи рД-глюкуронідів. У певних варіантах здійснення лінкери на основі В-глюкуронової кислоти є переважними як лінкери для АОС, зв'язаних із гідрофобними лікарськими засобами. Наступна схема описує вивільнення лікарського засобу із АОС, що містить лінкер на основі ВД-глюкуронової кислоти: ее ке шк 3 й х КО воодухуликі ня р я
ЩО джу ру МХДюЖУДОВДЯХА ши жу Крріеловвуаанх Н Е хі ! Е й щ Оуен сабо йо ин АД. шк и б в ЖК й шк.
Сколе у Тон
Були описані різні розщеплювані лінкери на основі ВД-глюкуронової кислоти, застосовні для зв'язування лікарських засобів, таких як ауристатини, аналоги камптотецину та доксорубіцину, засоби на основі СВІ, що зв'язують малу борозну, та псимберин, з антитілами (див. Уейгеу еї аї., 2006, Віосопінд. Спет. 17:831-840; дентеу єї а!., Вісогу. Мед. Спет. І ей. 17:2278-2280; і Лапод еї а!., 2005, У. Ат. Спет. бос. 127:11254-11255, уміст кожної з яких включено в даний документ за допомогою посилання). Усі ці лінкери на основі В-глюкуронової кислоти можна застосовувати в описаних у даному документі АОС. У певних варіантах здійснення ферментативно розщеплюваний лінкер являє собою лінкер на основі ВД-галактозиду. В-галактозид у надлишку є наявним в лізосомах, при цьому активність ферменту поза клітиною є низькою. Крім того, інгібітори Вс1-хі, які містять фенольну групу, можна ковалентно зв'язувати з лінкером через атом кисню фенолу. В основі одного такого лінкера, описаного в опублікованій заявці США
Мо 2009/0318668, полягає методика, в якій діаміноетан "БрасеГіпк" застосовують у поєднані з традиційними самовідщеплюваними групами на основі "РАВО" для доставки фенолів.
Розщеплювання лінкера схематично зображено нижче із застосуванням інгібітора Всі-хі за даним винаходом. у Тивозаих дівхер з лави РАВО
МКК ще о
У. Ж, « М МИ ай
Х у х ї х Ех ук я се шт, І Ех й наб о З ще а
Ну си, А жі мив Пекосоюихьний ой бе ЩІ ї ї веди З фермент "ух я А ой хо З я ре цА У Сея вив і М ог им, т не ше ж у .х ЙО г
ТА Я і Но д
Ну поиеткчу Шк вн НО в ман і А 1 АЖ Ви с їі нь і ОА АЮ В : А З
Мр ОО : ий Коош Е ЕД
АК я дак 7 8 їі Кн
Ї сан Зі Її Н М шо УК г Я в я ни Я птенннюдднннях неї в: сен: вх зн че у І я я дей в АШІЕ у їЇ які Ша шк: я Й Й х см, Вер оучинь
Аг, в ше АК ев ди в ві УК вза
Миклічна сечовина яаляє сою
Розщеплювані лінкери можуть включати нерозщеплювані частини або сегменти, та/або розщеплювані сегменти або частини можуть бути включені в інший нерозщеплюваний лінкер для того, щоб зробити його розщеплюваним. Лише як приклад, поліетиленгліколь (РЕС) та споріднені з ним полімери можуть включати розщеплювані групи в полімерному каркасі.
Наприклад, поліетиленгліколевий або полімерний лінкер може включати одну або декілька розщеплюваних груп, таких як дисульфідна, гідразонова або дипептидна.
Інші зв'язки, що піддаються руйнуванню, які можуть бути включені в лінкери, включають естерні зв'язки, утворені в результаті реакції РЕс-карбонових кислот або активованих РЕС- карбонових кислот зі спиртовими групами біологічно активного засобу, при цьому такі естерні групи, як правило, гідролізуються за фізіологічних умов із вивільненням біологічно активного засобу. Зв'язки, які руйнуються в результаті гідролізу, включають без обмеження карбонатні зв'язки; імінові зв'язки, утворені в результаті реакції аміну й альдегіду; фосфатні естерні зв'язки, утворені в результаті реакції спирту з фосфатною групою; ацетальні зв'язки, які є продуктом реакції альдегіду та спирту; ортоестерні зв'язки, які є продуктом реакції форміату та спирту; й олігонуклеотидні зв'язки, утворені фосфорамідитною групою, у тому числі без обмеження, яка розташована на кінці полімеру, і 5'-гідроксильною групою олігонуклеотиду.
У певних варіантах здійснення лінкер містить ферментативно розщеплюваний пептидний фрагмент, наприклад, лінкер, який передбачає структурну формулу (ІМа), (ІМ), (ІмМс) або (ІМа): алго є ян і Т ШУ бла ух (ма) ше о
Ж Й те і я -3 м ши вх чі пежтнх ой Куди в о я с дм й о чи ї оса ЧЕ гу ше (МБ) я а ДЦ М ої з зептвх ше ее ва й в а: ши М и ка й | у ЖЕО» (мо) оті щ- тих ; ге а пептих п що
ВУ о й й сич Я ще М КУ си Кон ке у ом, - з (ма) й ї ШІ не еВ й оокю те т пептид СМ я м або його фармацевтично прийнятну сіль, де: пептид являє собою пептид (проілюстрований М--С, де пептид містить аміно- та карбокси- "кінці", розщеплюваний лізосомальним ферментом;
Т являє собою полімер, що містить одну або декілька етиленгліколевих ланок або алкіленовий ланцюг або їх комбінації;
Ве вибраний із водню, С.-валкілу, БОЗН і СНеЗОзН;
ВУ являє собою водень, або С-лалкіл-(О)-(С:-лзалкілен)5--С, або Сі-лалкіл-(М)-((Сч-«алкілен)- се;
В: являє собою Сі-залкіл-(О)-(Сі-лалкілен)»-С2;
С! являє собою фрагмент, який являє собою 5ОзН, СОН, 4-32 РЕС або цукор; (2 являє собою фрагмент, який являє собою 5ОзН, СОН або РЕС4-32; г дорівнює 0 або 1; 5 дорівнює 0 або 1; р являє собою ціле число в діапазоні від 0 до 5; 4 дорівнює 0 або 1; х дорівнює 0 або 1; у дорівнює 0 або 1; 7 являє собою точку приєднання лінкера до інгібітора Всі-хі; і " являє собою точку приєднання лінкера до решти.
У певних варіантах здійснення лінкер містить ферментативно розщеплюваний пептидний фрагмент, наприклад, лінкер, який передбачає структурну формулу (Ма), (МБ), (ІМс) або (ІМа), або його фармацевтично прийнятна сіль.
У певних варіантах здійснення пептид вибраний із трипептиду або дипептиду. У конкретних варіантах здійснення дипептид вибраний із МаІ-Сі; Сії-Маї!; Аіа-АІа; АІа-СіЄ Сії-Аіа; Авп-СіС Сії-
Ап; СП-СіЄ МаІ-Сіи; СТІи-Ма!; бЗег-Сії; Сй-бег; Губз-Сі Сп-Ї ув; А5р-Сії; Сп-Авр; АІа-Маї!; Ма!-Аїа;
РНе-Гуз; І ув-РНе; Маї!-І ув; І уз-Маї; Аїа-ї ув; І убз-АІа; Рпе-Сії; СИ-Рпе; Геш-СіЄ Сп- еи; Пе-СіЄ Сії-
Пе; Рпе-Аг9; Ага-РНе; Сії-Тгр і Тгр-Сії або їх фармацевтично прийнятної солі.
Ілюстративні варіанти здійснення лінкерів згідно зі структурною формулою (Ма), які можуть
Зо бути включені в описані в даному документі АОС, включають лінкери, проілюстровані нижче (як проілюстровано, лінкери містять групу, яка є придатною для ковалентного зв'язування лінкера з антитілом):
(е) (о) (о) (о) но ох -- Ж о тд м Ж М.А
М М (9) (в) М ОМ (Ма.1) Х н Но хх н й В
НМ наго (о) (ІМа.2) «7 ух тов то,
Х н Нд: НН в) о ма з у н НА ува о ( а. ) рити а о Овен 9 (о) ї ААЖ І ох (ма4) с Н ва
М па
Ну ЕЕ Н і) (в) (Ф) Ге! сут нН «А и КА, (ІМа.5) н Н І Н о С Мн» мо
Н
Х н о но вд ж вит а (ІмМа.б) о Но й
МН наго (в) о о но рух"
А ик М. АХ (ІМа.7) Н НД ян
С МН» мо
Н
Фе) МН. ри 2
С о (Іма.8) її о ц Хм др - (в) о в о
Ілюстративні варіанти здійснення лінкерів згідно зі структурними формулами (ІМБ), (ІМс) або (Ма), які можуть бути включені в описані в даному документі АЮС, включають лінкери, проілюстровані нижче (як проілюстровано, лінкери містять групу, яка є придатною для ковалентного зв'язування лінкера з антитілом):
ге) о); (в) Н Ф) су
А, (ІМБ.1) Х Над н о т
МН ом, о / о (в) Н ІФ) ру
Мч М. (ІМЬ.2) г) Но ви
НМ наго о (в) (ІМЬ.3) АХ (о) ру" и є) НО ЕЕ Н о о о но у ХМ ба ра (ІМЬ.4) х Но ях нн т) йо
МН от кн
МН» о) о о) о о) су
С дра
ІМЬ.5 Х н хо Н ( ) о (Ф) т
МН от мн; є) о) о но Ку (МБ.6) вано
Х НД ЕЕ Н є)
НМ. ро ні. о о о но 9 су (ІМЬ.7) ва м.
Х н ЕІ Нн о) о ве
МН об мн о) (ІМЬ.8) Ми М.А в н ДЕ Н о / ІФ) о ще о су (ІМЬ.9) ) нН о 5
МН он,
Мне о / о о ц о о У рр М. ЖД (ІМЬб.10) М ОМ
Ге! н о й
МН от ек о в) / а о но ох о ТК М.А (ІМЬ.11) ЕН Е Н но-5-0 о о йо
МН от -мн;
о |в) / й о ц о Ку
ІМЬ.12 й Я, а (ІМБ.12) но-в-о 7 8 ї Н о Ве
МН об кн, он Ге! / й о М о ру аа м. (ІМЬ.13) (в) НН о 5
МН оно о о) о но о
Я и м. А (ІМЬ.14) о 0 в
МН наго о о но но ру панна М (ІМЬ.15) Х ої Но Нн о 8ОЗН йо
МН на бо но о-5 8 о Ох (ІМЬ.16) т о ря; 2 (в) о І 7 Ми
Н ю- о т о но. 9 є) но хх / Ох (ІМЬ.17) но о у;
ЇМ -ї 5
Н к- о а о
Н но у о (ІМЬ.18) о о;
М
-/4.Б0 о ї І но и й
Н ю- о 7 о (ІМБ.19) нм. Д у Ше «ОН
Е нд (в) он нач й 4 тро в) / / Ге) Н (в) су
С ло, ро (ІМс.1) о но в
МН о мн, ох М, с" її о (в; о (ІмМс.2) М А М Н
М М М о СТ т о, - ше о о тон
НМ. 20 с (Мс.3) но о н о 9 шва а у кро о о о (в) Ло о) т) он о
Н І 16) о НМ М : Х з о Н (ІМс.4) Ге! (о) й ле
Отут то о о зу ук (ІМс.5) Убоо А.М о о о /0 о. пита о
Ж коти ле о МУ оон щої
НО б. /чон (ІМс.6) бо
МН г ші х- ож, М о НМ у о
МН
(о) (о) / |в) Н Ф) ру (ІМс.7) в) НН о ви
НМ но 07 ит ит, чи -й (
Го! бита итеаултио (мал) о - о й нм : М г (в о терря талии мита у їх о оо ит ато
С,
Га
Ге; нем, о щ
МН ої
Х зу те (маг) го у
НМ Х М Мити ти юн ваше вовов о о КО тд ит (в) (в) (е) рою о о У вве
М Ге) іо)
М ло лико о не ва о о 3 (ма 3) Ко й 7-х ту оо і)
Мо. тов то
Ге; Кен! Стою тот о ОН доти он он 7-1
У.мн,
НМ
Н ( о н о 9
Ка М М (ІМа.4) ДУ не вам ок вро (в) Ге) о 4 о
О-5:0
ІФ)
У певних варіантах здійснення лінкер містить ферментативно розщеплюваний цукровий фрагмент, наприклад, лінкер, який передбачає структурну формулу (Ма), (МБ), (мс), (ма) або (Ме): їй ї х! х йо о (ма) о о АОН е) т он он он оно он о - "тон (УБ) о) о ку, їж
Хх
ІК мій ї па (мс) (в)
Кон! о я о) тон он он он он о Ве о о уа (9) а х! ж
Ї ї х! г о У с в) (ме) ак о «ОН он он он або його фармацевтично прийнятну сіль, де 4 дорівнює 0 або 1; г дорівнює 0 або 1;
Х' являє собою СнНаь, О або МН; ? являє собою точку приєднання лінкера до лікарського засобу; і " являє собою точку приєднання лінкера до решти.
Ілюстративні варіанти здійснення лінкерів згідно зі структурною формулою (Ма), які можуть бути включені в описані в даному документі АОС, включають лінкери, проілюстровані нижче (як проілюстровано, лінкери містять групу, яка є придатною для ковалентного зв'язування лінкера з антитілом): и, (в) - (мал) о о о моля
М но" "он он бух (в) - (ма.2) о о (, о о,
Од. ,0 но Ге) но" "Он он ох о) о о Їх (ма.3) о ев;
Н о но о ор но" зо
ОН ін й зак й Ї ОВ; (ма.4) о аа о
Ге! (Ф) Н н но Сг оон он -й ие о о о о о (ма.5) (в «Ко они холу тв и ! о 65 Н Н но о но Сон он -й Ге) ї о о) о) і;
М
(ма.в) о мити оо" о но но у он он р ий пово (
ОО. й
М о М (ма-7) о о б їх Н У но о но фон
Фін!
ма ий о Ге, Ге. а. Ге) о.,Й,о. НН Н о но но" "ОН он й чо о) і Ж Ї 9, І
З
М КА А х (ма.9) Ге) о б н Н У но но" "Он
ОН
Оки ге) - (о) Ге) о (мал10) їх й Ов;
Ге) но о. ло но" "он
Он ки? о) ж 803 о)
І, й о М мо о
Н Нн о. ,0 но но" "он он хх и о, п ЯМ М (мал2) о ує ва їх рр оо о М М
Н Н о. ,0 но но" "он он
Ілюстративні варіанти здійснення лінкерів згідно зі структурною формулою (Мб), які можуть бути включені в описані в даному документі АОС, включають лінкери, проілюстровані нижче (як проілюстровано, лінкери містять групу, яка є придатною для ковалентного зв'язування лінкера з антитілом): в о- о (е;
Мі (МБ.1) Ге! дай о) М Ге! (9) чи ""«ОН ЧІ Ге) но но ОН / "Пд, о- в)
Ох (Мр.2) З Н о; . Ге! (Ф) чо д
Р «ОН о-/ в) ще о) но ОН (о) / М ру (в) ото о 5ОЗн
НИ
(МБ.3) о
Н «ОН в : он он о своя болю
М вон і а ув (Мр.4) о мото 0)
Н «он (Ф) во он он с)
Ї м о в)
Нм но он (МЬ.5) шо бо 5 (о, хо є) о) рани 7 он о; М Но он (МЬ.6) Сай й 5 хо в) хто но. УНН о і Фін! но о)
Фа (Мб.7) о М па у: о)
М о й ря он
НО, в РО де (о) (Ф) в) ВХ о м о о у
БУ
--
М'- /Х що (е) он о а он (Ф) "є (Мр.9) (о) он
НМ
С
(в;
М е,; -х5й оо її АД (Мб.10) ана о
Н т
М но
ІФ) (9) Ге) фл Є оон но І (он ще)
Ілюстративні варіанти здійснення лінкерів згідно зі структурною формулою (Мс), які можуть бути включені в описані в даному документі АОС, включають лінкери, проілюстровані нижче (як проілюстровано, лінкери містять групу, яка є придатною для ковалентного зв'язування лінкера з антитілом):
но он о ен де; сон М з Ми о
М
(Ме.1) 9. -л- В о о зе о но он
НОмв. Я о 9 ли 7 (мс.2) о. ді у о о зе о но о7 то сон о (Мо.3) о Х дити
Н о о здо
Те, он ен о сон М о Н і (Мо.4) ра в У о ноз о хто
/ і
НМ М
Хуро о р, д о (ме.5) о о но о но" "он
ОН о) о їх й ща; хро ох о) о О. ллтедяи МН ВОЗН (Мс.6) о о) но о. ло но" "он он о) о Х й ни у я: ШИ о о мно 5оЗН (Мс.7) Италии З (о! 0. ,0 но ов он но он
НО», у (о) оо о х б ХЛ (мс.8) К-Т о в) о здо
(о); о їх
М те ща а у ох в) о 0. ли. МН ВОЗН (Мс.8) (в) о. ,0 но но" "он (он!
ХК, (Мс.10) ев он о о КК і о з () Ж м т (він! їй он он о
Н
К он о ет ех о М / (о; Н (Ме.11) М У Ге) но, ред о он (в) жо
Ілюстративні варіанти здійснення лінкерів згідно зі структурною формулою (Ма), які можуть бути включені в описані в даному документі АОС, включають лінкери, проілюстровані нижче (як проілюстровано, лінкери містять групу, яка є придатною для ковалентного зв'язування лінкера з антитілом): (в)
Її м в) (в)
М но «ОН (мал) шо (в) о в) (в) ко о) /тх
М
(маг) о з в о (Ф) но о) поді о М ех
Со 007 о - о (ма.3)
Ще: (Фін!
Ге) Ге) по ря о в) но
Ге)
У АТУ
Ге) с М о щей (ма.4) но, он ої о по ра о (є но (в) їй
М
Ф) о»
НМ о (ма.5) о о. о о) "Он є)
Тех в) но
(о; 9 Х
Н (в) о (ма.6) я он (в) (в) А он
ІФ) що ре оон
Ілюстративні варіанти здійснення лінкерів згідно зі структурною формулою (Ме), які можуть бути включені в описані в даному документі АОС, включають лінкери, проілюстровані нижче (як проілюстровано, лінкери містять групу, яка є придатною для ковалентного зв'язування лінкера з антитілом): ок (в) о) іо) о) Їх
Ме.1 ри ХА ик (Ме.1) он М М о. ,0 о но "он он
Ши
Ге) (в) о ) Н Н (Ме.г) он Б п а па ай о що Н Но о. ,0 У, (е) й но но "он о Ох шо ін вд
Нерозщеплювані лінкери
Хоча розщеплювані лінкери можуть забезпечувати певні переваги, лінкери, які входять до складу описаних у даному документі АОС, необов'язково повинні бути розщеплюваними. У випадку нерозщеплюваних лінкерів вивільнення лікарського засобу не залежить від інших властивостей у плазми крові та деяких цитоплазматичних компартментів. Припускається, що вивільнення лікарського засобу відбувається після інтерналізації АОС за допомогою антиген- опосередкованого ендоцитозу та доставки в лізосомальний компартмент, при цьому антитіло руйнується до рівня амінокислот завдяки внутрішньоклітинному протеолітичному руйнуванню.
Цей процес забезпечує вивільнення похідної лікарського засобу, яку утворено лікарським засобом, лінкером та амінокислотним залишком, до якого був ковалентно приєднаний лінкер.
Амінокислотні метаболіти з лікарським засобом із кон'югатів із нерозщеплюваними лінкерами є більш гідрофільними та, як правило, характеризуються меншою здатністю проникати через мембрану, що призводить до меншої кількості ефектів, спричинюваних щодо близько розташованих випадкових клітин, і меншої неспецифічної токсичності порівняно з кон'югатами з розщеплюваним лінкером. Загалом АОС із нерозщеплюваними лінкерами характеризуються більшою стійкістю в кровотоці, ніж АОС із розщеплюваними лінкерами. Нерозщеплювані лінкери можуть являти собою алкіленові ланцюги або можуть бути полімерними за своєю природою, як, наприклад, лінкери, в основі котрих лежать полиалкіленгліколеві полімери, амідні полімери, або можуть включати сегменти алкіленових ланцюгів, поліалкіленгліколів та/або амідних полімерів.
У деяких варіантах здійснення лінкер містить поліетиленгліколевий сегмент, що містить від 1 до
6 етиленгліколевих ланок.
Було описано багато нерозщеплюваних лінкерів, застосовуваних для зв'язування лікарських засобів із антитілами. (Див. Уейтгеу еї а!., 2006, Віосопісд. Спет. 17;831-840; Удейтеу еї аї!., 2007,
Віоогд. Мед. Спет. Гей. 17:2278-2280 і ЛЛапд еї аї., 2005, 9. Ат. Спет. бос. 127:11254-11255, вміст кожної з яких включено в даний документ за допомогою посилання). Усі ці лінксери можуть бути включені в описані в даному документі АОС.
У деяких варіантах здійснення, лінкер є нерозщеплюваним іп мімо, наприклад, лінкер згідно зі структурною формулою (Міа), (МІБ), (Міс) або (МІЯ) (як проілюстровано, лінкери включають групу, придатну для ковалентного зв'язування лінкера з антитілом): о в) (ма) я одно чув 0-7 н 0-9 (6) в) ів (МІб) Ко ан, 0-7 0-9 в) в)
Х
(Міс) яАКроечАв 0-9 Н 0-9 е) (Мія) куту ва 0-8 або його фармацевтично прийнятна сіль, де:
Ве вибраний із водню, алкілу, сульфонату та метилсульфонату;
Ах являє собою фрагмент, який включає функціональну групу, яка може ковалентно зв'язувати лінкер із антитілом; та 7 являє собою точку приєднання лінкера до інгібітора Всі-хі..
Ілюстративні варіанти здійснення лінкерів згідно зі структурною формулою (Міа) - (МІЯ), які можуть бути включені в описані в даному документі АОС, включають лінкери, проілюстровані нижче (як проілюстровано, лінкери включають групу, яка придатна для ковалентного зв'язування лінкера з антитілом, і "й, являє собою точку приєднання до інгібітора Всі-х/): (о) (в) в) в) (9) (Мал) жовто юр (в) «А М (Міс.1) Хо ре в) зі я (Міс.2) Ж рт в) в) 9 Х (Мат) «Ко ик в) (о) о Х (Мід.2) моутктт 5ОЗн о о од (міа.3) аа
(о; 9 Х (мід.4) о; 5озЗн о
Групи, застосовувані для приєднання лінкерів до антитіл до В7-НЗ
Групи приєднання можуть бути електрофільними за своєю природою та включають малеїмідні групи, активовані дисульфідні групи, активні естерні групи, такі як естерні групи МНЗ5 і естерні групи НОВІ, галогенформіатні, галогенангідридні, алкіл- та бензилгалогенідні, такі як галогенацетамідні. Як обговорюється нижче, існують також перспективні технології, пов'язані зі "самостабілізувальними" малеіїмідними групами та "дисульфідними групами, які утворюють містковий зв'язок", які можна застосовувати відповідно до даного винаходу.
Втрата лікарського засобу-лінкера із АОС спостерігалася в результаті процесу обміну малеїімідної групи на альбумін, цистеїн або глутатіон (Аїйеу еї аї!., 2008, Віосопійдаїе СНет. 19: 759-769). Це особливо поширено щодо високогідрофільних сайтів кон'югації, при цьому сайти, які характеризуються частковою доступністю і мають позитивне заряджене оточення, сприяють гідролізу малеїмідного кільця (дипишїшіа еї аї., 2008, Маї. Віотесппої. 26: 925-932). Визнаним рішенням є гідроліз сукциніміду, який утворюється в результаті кон'югації, оскільки це забезпечує стійкість до декон'югації від антитіла, що таким чином надає АОС стабільності в сироватці крові. Раніше повідомлялося, що сукцинімідне кільце буде піддаватися гідролізу в лужних умовах (Каїїа еї а!., 2007, Віоогд. Мед. Спет. Гей. 17: 6286-6289). На наведеній нижче схемі зображений один приклад "самостабілізувальної" малеїмідної групи, яка самовільно гідролізується в умовах кон'югації антитіл з утворенням молекул АОС із покращеною стійкістю.
Див. опубліковану заявку на патент США Мо 2013/0309256, публікацію міжнародної заявки
Мо МО 2013/173337, Титеу єї аї!., 2014, Віосопіцдаїє Спет. 25: 1871-1880 і І уоп еї аї., 2014, Маї.
ВіоїесппоЇ. 32: 1059-1062. Таким чином, малеїімідну групу приєднання вводять у реакцію із сульфгідрильною групою антитіла з одержанням проміжного сукцинімідного кільця.
Гідролізована форма групи приєднання є стійкою до декон'югації за наявності білків плазми крові.
Нормальна скестема . Яо- тех 5 п: тА К; ше тА 2 ША візкне у біг З я я проходження Фо плеюеЕрев Кен -х 2 я пе й шт
А те і1мийВОдНіІВ ДО СЕРрАТН
ОСАКОЗ дном у
Сюлосівімтовний праєдиеканий фр маку дах І Ав дк с ПОМОЖЛЬНЄ ЛАВА яд бос, хх ри с нн ен ДВ ТЕС: ше шви ше сш нн сна тка Є і ! роя се і й і оч ! она Я дно над містить» мазеінізне сукивнвкциня тідра нижні форма сукиннімітного тіпражеваззні форми с суасітьвнми у плазмі крові
Як показано вище, малеїмідне кільце лінкера може реагувати з антитілом АБ з утворенням
Зо ковалентно приєднуваного фрагмента у вигляді як сукциніміду (закрита форма), так і сукцинаміду (відкрита форма).
Роїуїйтегісх розкрив спосіб утворення місткового зв'язку в парі сульфгідрильних груп, одержаних у результаті відновлення нативного дисульфідного зв'язку в шарнірі. Див. Вадезси еї аім, 2014, Віосопішдає Спет. 25:11124-1136. Реакція показана на наведеній нижче схемі.
Перевагою цієї методології є можливість синтезувати гомогенні АОС із ОАК4 шляхом повного відновлення ІдсС (із одержанням 4 пар сульфгідрильних груп) із наступною реакцією з 4 еквівалентами алкілувального засобу. АЮС, які містять "дисульфідні групи, що утворюють містковий зв'язок", також заявлені як такі, що мають підвищену стійкість. ф-з--
ДВСТЛЬЧЯЖЯ МОату, си трупа т і; В ях ян нв-с3 : Не ей о Ї 2 Ї м. а
ОК, ших ехімінування й | ше: У я туту
БА ЗК чу НН ИН З: а пен х дб м. М и и помнннаннннннннннн дети й ж
Н я о ще Зм
Уттттттттю : м МЕ ШИНИ аю Й о й "ДНеулЬьфНлва РОУМА, Ба утворює тих
Аналогічно, як показано нижче, була розроблена похідна малеїміду, яка може утворювати містковий зв'язок у парі сульфгідрильних груп. Див. опубліковану заявку США Мо 2013/0224228.
ЛШ:
М. - в)
У
8 - ,',
Пиво
І
5 ' /
Ге) ій х 5 м. що) 7 7 і)
Ше
У певних варіантах здійснення приєднуваний фрагмент передбачає структурні формули (МПа), (МІВ) або (Міс): 6) / (в)
М
(МПа) Ге) о ра оС (в) в 10
Ів) / х
М
(МИБ) о ) о
М У м
М с3 (в) / оо
М Шо (Міс) о М
ВУ або його фармацевтично прийнятну сіль, де:
В: являє собою Н або -0О-(СНгСНгО)11-СНз; х дорівнює 0 або 1; у дорівнює 0 або 1;
С являє собою -СНа.СНгСНоБОзН або -СНаСНгО-(СНаСНгО)11-СНз;
ДУ являє собою -0-СН»СН2гЗОзН або -МН(СО)-СН»СНгО-(СНаСНгО) 2-СНв; та " являє собою точку приєднання лінкера до решти.
У певних варіантах здійснення лінкер передбачає сегмент згідно зі структурними формулами (МПа), (МП) або (МПс):
У су Си ре: б З шко о і Я З ще ЧИ и ни
Ше
ЕВ ее ше о що ів шк й б та т Шо ра за де Не ітіпропимовани форма! (Міна) тек ичавани форте ве Я У і хе М «б
Ей ї : «ЖК й М чі ей 5 Їх ; ях і ін Х : в ши нш. тлі ще чш:
ММ Ж Прпдропвована ворма! (МП) я ; в сту Я ж Ян й
К- Ше - щщ щк щі Ж й щу . че п о ге ВВ ОО Об
Чи її Жов ня І х ря мА д- ик | дж й | Ве Е ще
Хе блю х і
Ми цж о ВХ ків ку сек ву М
Е5Я іх іти ована пнУма (Міс) ї о !
або його гідролізовану похідну або фармацевтично прийнятну сіль, де
В: являє собою Н або -0О-(СНгСНгО)11-СНз; х дорівнює 0 або 1; у дорівнює 0 або 1;
СЗ являє собою -СНаСНаСНоБОзН або -СНгСНгО-(СНгСНгО)11-СНз;
ДУ являє собою -0-СН»СН2гЗОзН або -МН(СО)-СН»СНгО-(СНСНгО) 2-СНз; » являє собою точку приєднання лінкера до решти, і являє собою точку приєднання лінкера до антитіла.
Ілюстративні варіанти здійснення лінкерів згідно зі структурними формулами (Міа) ї (МБ), які можуть бути включені в описані в даному документі АОС, включають лінкери, проілюстровані нижче (як проілюстровано, лінкери містять групу, яка є придатною для ковалентного зв'язування лінкера з антитілом): (0) не он
Хе Я но 5 ОН
Я о і в)
МН г і мал ух ро м ) ОО нм о
МН в
Ач о) тиИ- суго о і) і)
Мк Шк в/ в) но «он
Но, г он (в) о о Мх (о) о! М (о)
М (е) ди ит ) (Міна.г) ші (о) т то (е) (в) ШИ т
Яр в) т г (о) «С а от ач)
р ай
НМ. 20 ро ав ва о суч То нм (МПа.з) це оц ХУ
Ми Ми повара; о
Фо снів в г в т в г
У
(МПа.4) й о т
У ит тет тю н ж о ні: о
Ми М
ОУєнарева, о о оеон
Оохи ут тон он он пет тю, р й рт тотьиоитотто о на? их
М
(МІ) Мн х/ 9 йо то : ни в)
Нм о г 6) тесту
Ки ролики тот итотио ни? М
М о (МИБ.2) Мк -о ня А нн о г 6)
он о-5 ша
ХМ но: о нн М вав М- (в (МИб.3) кро о 0-0 (в олчеон о тон он бн он о-8 с) к, ної о но
МИБ.А вав - (МИб.4) кро о ої (в) о7чеон о 7 тон он он тет те оитотиитотио лм -о0
МІЬ.6 «І. М ( ) Мом м-о 9 нан о (в) олчеон о 7 он он он тот й
М. о -о (МІЬ.7) чі "КЕ г м о жо оч (в) оче о 7 он он он - 0 н І н (Ф) рок що (о) М ї . (МЬ.8) М о чеон М-М о ще Ї ро. гнити чоти о он он рода овол-ллог
Ілюстративні варіанти здійснення лінкерів згідно зі структурною формулою (Міс), які можуть бути включені в описані в даному документі АОС, включають лінкери, проілюстровані нижче (як проілюстровано, лінкери містять групу, яка є придатною для ковалентного зв'язування лінкера з антитілом): о о З
М вав з гай (е,; ве (); (о) (МіИс.1) о 9) юн о М оту В
Ге) о он т (ен! он он отити ит у чи г й Я ц кити ит ит (Мис.2г) Й
Е |) Ге) в)
Н Н
НМ А М ша а (в) (с) (о)
Ге)
Кх І
А о он отит и биту, чи и с б ит у от уинио (Мис.3)
У о Ге! в)
Нм ; М рчроде (в; (в; (в о )
І сам он
НОМ. 20 о н е (в) н о 0 (Мис. 4) А ве в м кг ів) (е); (є о о 97 о он 0,0 в інф) он но / ен ех о) (Мис. 5) о о в, о
АК о, ) нк я ит й М в) о (Ф)
- Ге) о
АЖ і
Км мак шов кро в) с) в) (Мис.6) о о МН (Ф) «ОН КИ бо й о он о 11 он он
У певних варіантах здійснення Ї вибраний із групи, яка складається з ІМа.1-ІМа.8, ІМБ.1-
ІМр.19, ІМс.1-ІМсе.7, ІмМа.1-ІмМа.4, Ма.1-Ма.12, МБ.1-МЬ.10, Ме.1-Ме.11, Ма.1-ма.6, Ме.1-Ме.2, Міал1,
МІс.1-М1с.2, МІа.1-МІЯ.4, МПа.1-МПа.4, МИПБ.1-МІІЮ.8, МПс.1-МИс.6 у закритій або у відкритій формі та їх фармацевтично прийнятної солі.
У певних варіантах здійснення І вибраний із групи, яка складається з ІМБ.2, ІМо.5, ІМос.б,
ІМо.7, їмМа.4, МЬ.9, МІа.1, МПа.3, Міс.1, МіИс.4 ії Міс.5, де малеїмід із кожного лінкера прореагував з антитілом АБ з утворенням ковалентно приєднаного фрагмента у вигляді сукциніміду (закрита форма) або сукцинаміду (відкрита форма) та їх фармацевтично прийнятної солі.
У певних варіантах здійснення І вибраний із групи, яка складається із ІМБ.2, ІМс.5, ІМо.6,
Іма.4, Міа.1, Міа.3, МіИс.1, Міс.4, Міс.5, де малеїмід кожного лінкера прореагував з антитілом Ар з утворенням ковалентного приєднання у вигляді або сукциніміду (закритої форми), або сукцинаміду (відкритої форми) і його фармацевтично прийнятної соли.
У певних варіантах здійснення І вибраний із групи, яка складається із ІМЬ.2, МІа.3, ІМс.6 і
МІб.1, де я являє собою точку приєднання до лікарського засобу 0, і (Ф являє собою точку приєднання до І К, де у випадку, якщо лінкер знаходиться у відкритій формі, показаній нижче, то (Ф може бути або в с-положенні, або в В-положенні щодо суміжної з ним карбонової кислоти:
Нове нич
Я і о» о и ТК 7 в в й б в "м я
Око -й У М ХЕ Тони 0 Ма Збкрета формі ов и Ва й ко чи гей х й М
НА мой : ке мед ої -х
НМ. и ши: - ЕЙ Ма ка У На (відкрита форм)
Кк Шо з в ї й "М хі щи ще он Ко о е- хто і б а о з
-що ех ож. й кас й я ші. я АК со я? мак : Е ш 5 БЖ дбкккннй ТК а : Кк У Ь З й де з Ко не шо Ка шу га: Є ЕЙ
В З х г щі е
Ї сно в «Н Зв УНЕЙ (закрита форма) ї і я ту й . А о он потре м он г г: й ССьМ : с М я : ча 53 я ЩЕ є «ДК ох М К" мк ух з Ка Ше ГК бує М вок ни Ж с р З б г: і. . а . є пи ва Ой пу ю «ХУ ше
ЕЕ во - й
ЕЕ А, Ів о он чт и її сдууктуи Яма ша У Пе 1 (лкрита форма) ї ї -у онОоон ! 5 Шо мое Ну х ! бери НЕ. ит на ! ! ши й МУ «А, озна «о гі тк У шт, зе М м ходу
Й : Н о і « ще і
У М ЖЕ о 7 ее че ше ние в а а І ї н й
Бе я Рос в ізакржка форма)
СОЯ
Ко:
Ї з свв 2 І: ї Б
НК, і Й в я сб ! ни не небо ї і ! ве й Ї З ! ч Ні ай зе сша ї : я Кк Ї ТУ б, о шк хм
Ж ї ій З й і і щі пло Те оіврвовну» вовма) з нн о ер М чи М ва ій М ше й Ух М «А дл ща х Ц ї в ВЕ х і КО в ша о шу М с
ТУВ Зсзакувета ферма та
МН
; ж о й ан : ше ша хе їх т й С. ве КЗ су с: ди в їй ЖЕ
ГУвлівлючта беорма).
Міркування щодо вибору лінкера для інгібітора Всі-х!.
Як відомо фахівцям у даній галузі, на лінкер, вибраний для конкретного АОС, можуть впливати багато факторів, зокрема без обмеження сайт приєднання до антитіла (наприклад, ув, суз або інші амінокислотні залишки), структурні обмеження фармакофору лікарського засобу та ліпофільність лікарського засобу. Конкретний лінкер, вибраний для АОС, повинен намагатися збалансувати ці різні фактори для конкретної комбінації антитіло/лікарський засіб. Огляд факторів, на які впливає вибір лінкерів у АОС, див. в Мойіпуд, Спаріег 5 "ГіпКег Тесппоіоаду іп
Апіїроду-ЮОгид Сопіидаїев" в: Апіїбоду-Огид Сопійдаїев5: Меїйоа5 іп Моїесшціаг Віоіоаду, мої. 1045, рр. 71-100, І аштепі Юисгу (Еа.), Зрііпдег Зсієпсе 85 Вивіпе55 Медіса, ГІ С, 2013.
Наприклад, спостерігалося, що АЮС знищують близько розташовані випадкові антиген- негативні клітини, які наявні безпосередньо поруч з антиген- позитивними пухлинними клітинами. Механізм знищення близько розташованих випадкових клітин за допомогою АС показав, що продукти метаболізму, які утворюються під час внутрішньоклітинної обробки АОС, можуть відігравати певну роль. Нейтральні цитотоксичні метаболіти, які утворюються в результаті метаболізму АЮС у антиген-позитивних клітинах, імовірно, відіграють роль у знищенні близько розташованих випадкових клітин, у той час як заряджені метаболіти не можуть дифундувати через мембрану в середовище і, як наслідок, не можуть знищувати близько розташовані випадкові клітини. У певних варіантах здійснення лінкер вибраний для ослаблення ефекту, який полягає в знищенні близько розташованих випадкових клітин, зумовленого клітинними метаболітами АОС. У певних варіантах здійснення лінкер вибраний для підсилення ефекту, який полягає в знищенні близько розташованих випадкових клітин.
Властивості лінкера можуть також впливати на агрегацію АОС в умовах застосування та/або зберігання. Як правило, згадувані в літературі АОС містять не більше 3-4 молекул лікарського засобу на молекулу антитіла (див., наприклад, СПагі, 2008, Асс Спет Кез 41:98-107). Спроби одержати вищі співвідношення лікарського засобу й антитіла ("АК") часто були невдалими, особливо якщо як лікарський засіб, так і лінкер були гідрофобними, внаслідок агрегації АОС (див. Кіпу еї аї., 2002, ) Мей Спет 45:4336-4343; НоїІапаєг еї аїІ., 2008, Віосопіддаїє Сет 19:358-361; Вие евї а!., 2009 Віосопіпдаїє Снет 20:1242-1250). У багатьох випадках САКЕ вище 3-4 можуть бути корисними як засоби збільшення активності. У випадках, якщо інгібітор Всі-х!. є гідрофобним за своєю природою, доцільним може бути вибір лінкерів, які є порівняно гідрофільними, як засобів зменшення агрегації АОС, особливо у випадках, коли необхідні ОАЄ більше 3-4. Таким чином, у певних варіантах здійснення лінкер включає хімічні фрагменти, які зменшують агрегацію АОС під час зберігання та/або застосування. Для зменшення агрегації молекул АОС лінкер може містити полярні або гідрофільні групи, такі як заряджені групи або групи, які стають зарядженими за фізіологічного значення рН. Наприклад, лінкер може містити заряджені групи, такі як солі, або групи, які депротонують, наприклад карбоксилатні, або протонують, наприклад аміни, за фізіологічного значення рн.
Ілюстративні багатовалентні лінкери, які, як повідомлялось, забезпечують значення САК до 20 включно, які можна застосовувати для зв'язування численних інгібіторів Всі-хІ з антитілом, описані в патенті США Мо 8399512; опублікованій заявці на патент США Мо 2010/0152725; патенті США Мо 8524214; патенті США Мо 8349308; опублікованій заявці на патент США
Мо 2013/189218; опублікованій заявці на патент США Мо 2014/017265; МО 2014/093379; МО 2014/093394; МО 2014/093640, зміст кожної з яких включено в даний документ за допомогою посилання в усій своїй повноті.
У конкретних варіантах здійснення агрегація АОС під час зберігання або застосування становить менше приблизно 4095, як визначено за допомогою ексклюзійної хроматографії (ЗЕС). У конкретних варіантах здійснення агрегація АОС під час зберігання або застосування становить менше 3595, наприклад, менше приблизно 3095, наприклад, менше приблизно 2595, наприклад, менше приблизно 2095, наприклад, менше приблизно 1595, наприклад, менше приблизно 1095, наприклад, менше приблизно 595, наприклад, менше приблизно 495 або навіть менше, як визначено за допомогою ексклюзійної хроматографії (ЗЕС).
ІШ.А.3. Синтони АОС з Всі-х!.
Синтони кон'югатів антитіло-лікарський засіб являють собою синтетичні проміжні сполуки, застосовні для утворення АЮС. Синтони являють собою загалом сполуки згідно зі структурною формулою (ПІ): (ПІ) р-- 2 --8х або їх фармацевтично прийнятну сіль, де О являє собою інгібітор Всі-хі,, описаний раніше, І. являє собою лінкер, описаний раніше, і Ех являє собою реакційно-здатну групу, яка є придатною для зв'язування синтону з антитілом.
У конкретних варіантах здійснення синтони, які являють собою проміжні сполуки, є сполуками згідно зі структурними формулами (Ша), (ПІБ), («Шс) і («ШЯ) нижче, або їх фармацевтично прийнятною сіллю, де різні замісники Аг", А!?, 21, и2а, 725 В, В", В, ВУ, Ва,
Зо А", В: ї КЗ визначені раніше щодо структурних формул (Па), (ПІБ), (Пс) і (Па) відповідно, 1. являє собою лінкер, описаний раніше, а Ех являє собою функціональну групу, як описано вище: 20 вах, о ОН о еф в вв
Фаї чЧр (Ша) йти й нм" Зо М 1 М
ОД о вр'а 229 о) - он (те в2 ву гат ТМ ОТАх (Ів) 4 зи Ї ве но І 1 М
ОД
Сх 'та рі хо мо ..-72 о
Но ЦИМ. дз ОН
М 2 в (Шс) | - и й но М а 1 М
Кк вл в'та
А. НЕ о вк он о був? в"? ра х за 1 (то) нм7Зо й 4 М
Кк тв
Для синтезу АЮС синтон, який являє собою проміжну сполуку згідно зі структурною формулою (ІІІ) або її сіль, приводять у контакт з антитілом, що становить інтерес, в умовах, за яких функціональна група КХ вступає в реакцію з "комплементарною" функціональною групою на антитілі, ЕХ, з утворенням ковалентного зв'язку. (І) 0-І--2Х жк | є дь --х (і) |о-і--кї дь т т
Типи груп Ех і Ех будуть залежати від хімічного способу, який застосовують для зв'язування синтону з антитілом. Загалом застосовний хімічний спосіб не повинен призводити до зміни цілісності антитіла, наприклад, його здатності зв'язувати свою мішень. Переважно властивості зв'язування кон'югованого антитіла будуть дуже нагадувати властивості зв'язування некон'югованого антитіла. Із рівня техніки відома низка хімічних способів і методик для кон'югації молекул із біологічними молекулами, такими як антитіла, і, зокрема, з антитілами.
Див., наприклад, Атоп еї аї., "Мопосіопа! Апіїбодіе5 Рог Іттипоїагдеїйпту ОЇ Огиде5 Іп Сапсег
Тпегару", в: Мопосіопа! Апіїбодієз Апа Сапсег Тнегару, ВеївіеїЇй еї аї. Ед5., Аїап В. І івв5, Іпс., 1985; Неїївігот еї аї., "Апііродіез Бог Огид Оеїїмегу" в: СопігоПейа Огид ОеєїЇїмегу, Вобіпзоп еї аї.,
Е95., Магсеї! ОеккКег, Іпс., 2па Еа. 1987; Тногре, "Апіїроду Сатієтз ОЇ Суюїохіс Адепів Іп Сапсег
Тпегару: А Кеміем/", в: Мопосіопа! Апііродієз "84: Віоіодіса! Апа Сііпіса! Арріїсайоп5, РіпсНега єї а!., Ед5., 1985; "Апаїувів, Незиїйїв5, апа Ешиге Ргозресіїме ої Ше Тнпегарешіс Ове ої Надіоїабеїєйд
Апіїбоду Іп Сапсег Тпегару", в: Мопосіопа! Апіїбодіез Бог Сапсег Оєїесіюп Апа Тнегару, ВаЇдмжіп еї аї., Ед5., Асадетіс Ргезз, 1985; ТНогре евї аї., 1982, Іттипої. Неу. 62:119-58; публікацію згідно з РСТ УМО 89/12624. Для зв'язування синтонів з антитілом можна застосовувати будь-який із цих хімічних способів.
Зазвичай синтони зв'язують із бічними ланцюгами амінокислотних залишків антитіла, у тому числі, наприклад, з первинною аміногрупою доступних лізинових залишків або сульфгідрильною групою доступних цистеїнових залишків. Вільні сульфгідрильні групи можна одержати шляхом відновлення міжланцюгових дисульфідних зв'язків. У певних варіантах здійснення ІК являє собою зв'язок, утворений з аміногрупою антитіла АБ до ПВ7-Н3З. У певних варіантах здійснення
Ко) ЇК являє собою амід, тіоеєтер або тіосечовину. У певних варіантах здійснення І К являє собою амід або тіосечовину. У певних варіантах здійснення ЇК являє собою зв'язок, утворений із сульфгідрильною групою антитіла АБ до ПВ7-Н3З. У певних варіантах здійснення І К являє собою тіоетер. У певних варіантах здійснення І К являє собою амід, тіоетер або тіосечовину; і т являє собою ціле число в діапазоні від 1 до 8.
Відома низка функціональних груп Кх і хімічних способів, придатних для зв'язування синтонів із доступними лізиновими залишками, та вони включають як приклад, а не обмеження естерні групи МНЗ та ізотіоціанатні групи.
Відома низка функціональних груп Кх та хімічних способів, придатних для зв'язування синтонів із доступними вільними сульфгідрильними групами цистеїнових залищків, і вони включають як приклад, а не обмеження галогенацетильні групи та малеїімідні групи.
Проте хімічні способи кон'югації не обмежені доступними групами бічних ланцюгів. Бічні ланцюги, такі як аміни, можна перетворювати в інші придатні групи, такі як гідроксильні, шляхом зв'язування відповідної малої молекули з аміном. Цю стратегію можна застосовувати для збільшення кількості доступних сайтів зв'язування на антитілі шляхом кон'югації багатофункціональних малих молекул з бічними ланцюгами доступних амінокислотних залишків антитіла. Потім у синтони включають функціональні групи Кх, придатні для ковалентного зв'язування синтонів із цими "перетвореними" функціональними групами.
Антитіло також можна конструювати так, щоб воно включало амінокислотні залишки для кон'югації. Підхід для конструювання антитіл так, щоб вони включали амінокислотні залишки, які кодуються не генетичним кодом, придатні для кон'югації лікарських засобів у контексті АОС, описаний у Ахир еї а!., 2003, Ргос Маї! Асай 5сі 109:16101-16106 і Тіап еї аіІ., 2014, Ргос Маї! Асай
Зсі 111:1776-1771, а також там описані хімічні способи й функціональні групи, придатні для зв'язування синтонів із не закодованими амінокислотами.
Ілюстративні синтони, використовувані для одержання АОС, описаних в даному документі, включають без обмеження наступні синтони, перелічені нижче в таблиці В.
Таблиця В
Ме Код й син- Структура синтон прикладу руктур У тону оку»
Мн о С - о ог87он нон обо
М М М а М нМ7Зо іх о М (е)
Ж у; з що мВ М
Охуимнь чн о о С -щ-- іо) Ге) Я о
М М он н А н (о) М 22. | ОН Ф Крут др
Охимна
Мн о С -
М. ИМ Ї нов, но о н обо (о) М А М 2.4 ЕР Фі і | о СТ еррия дю реч ;
М -Ф. Ге!
Мо Код прикладу тону Структура синтону
НМ. 70 ні. сек о
Н Н он слу итв М но, «ОН
ЕН о Й о оо 2.5 ЕР о З о Ї
М ге он йо АЖ
М но Жї- ск о дО.
НМ. 70 ні. око о
Н Н он
Е Н о 0 о о он 2.6 ЕС о У о І ї
М. м м
ФІ щі АХАМ
НМ Ге) ї Є (9) д чо. о о юс, о нтжЖо (в) т М т ре М он щ у т ут
М (в) Ге! М о 21 ЕН нео ак М у ме | М ; нм. 70 ні. око о Іо
М. Ж м
Е н о ит о 2.8 ЕВ о і о пошта, но Ф ск о" но у тон
Я Он дол.
Мо Код
Щ син- Структура синтону прикладу тону нам.
НМ око Н Ге) 00 Но 2.9 ЕБ5 о о. 50
М г» он ев о екон нм" Зо й см о но он
А ЧО. он 8'ЗмМ ох. .МНе
Лн но - фа М Ї о-в7оН С о нн оо 210 | ЕО ща й Ме актова нео од ша я о м о (; но - а Ї оон ної о н оно
М М М А М грон й Фі рКрри 241 ЕО нео 4 См ок о (в) ме в є. е) ої МН м то о 15 о н оно
У ОН М А М М
212 | ЕМ шо мов с Су рр
Ж І м 4 ї шк Я
Мм7С8 в) о Ге! оо, о но
Ге) те МА
Сей ше ЖК 213 | ЕМ що СА ух
А що (є)
Я о о (в)
М М р
З Он оо "ої о ва Ге нео - чі м Кия 2.14 ЕХ АХ. М юн Н ол ОМ, -о к сон У же об;
Мо Код прикладу тону Структура синтону о (в)
М.М Х : і Ї З ОН оо "с он - о - С Н 2415 | ЕМ "я о с ен
М" З /он о ОМ о з ї зу
Воон ш о МА М м. и он ЦІ пе укр 2.16 ЕХ | Ж о це нм с) Х М іа й но Бо о 00 то т н Н ра ме Й сн ть они п чер еру
Х к і,
Мм7св
НМ 2О ні.
Солити й ще й а Ї те ОО. 0. ї
М. дими ЗОН м он нм7Зо в з вщовевоВ
А Її он
М М о. АМН. де 2 но -
Ї ог он на 2 н обо
М М І М ме ОО фУвнаве в нм зо 4 ск о. и-- (в) й
Мо Код
Щ син- Структура синтону прикладу тону он но.
М КУ но М о/. чбв що ого
В оно
МИ МН пу, 2.20 ЕМ ву
НМ. о «и о ів;
М в) нан ио нм о - м й р: н 2 Н обо тт ем в ЧІ Н М А М М 221. | сс туя ую Ж ря но 5
НМ о ій о -
Тем / є М М за аа нар
М фон оо (о й 2.22 ав то ра, о у іо он но
М з нм о ЛІК; о-/ «Хв м обо
З ре мА МН нн 2.23 ЕМ обу
НМ. ро «А бе о ів;
М
(в)
НМ. 70 о, он ш-
М М Ї он р н 2, н оо
І МА М пев о, сур
А що с те й
МВ М
У і
Ме Код прикладу тону Структура синтону
НМ. 70 ї. о о - 225 | ОК | срертен С и» пн об - М ван ну о См От о ДТ Ї р ї т, -. що
У і о о - у т ге он С А о ї оно -4 ЦЕ кана гав |в і; ша І о і о
М в -. й о і ге)
Шедав о но
Ф) М е рооо ши канва за (емо С вад
АХ 5
Мм7 Св (9) ре Й й ім Х, о -м о н о Н о- о
М
З ша он наго ни чн - ко рі оно о 4-49 н
СЕ 0-Х ча бе й о
У що 229 | НС чо
МА о од -7 нм7о й мов шт : о, -- ща й Ї пн оон ної о н оно - / вав 2.30 Не ді о од ові оч а зма М
Мо Код
Щ син- Структура синтону прикладу тону -/ 9 о о он - их (в)
М ге он видає в; й 281 | НВ | нито Як г й
ХК М 0-7 Мн
Мм7 Св їн Лео
Нам
З о25-он (в; но. он ве о -/ 9 2.32 но що М ще | о у
ЩІ М жах Н а ФІ у о 4 ск о р М (в) в'Зм М МН о че -/ о (9) о о Н - и Ге! м г он ви в. й
Н
233 | НТ но ов І щ
М в М о-ИМ х -о о он Нам д г (о; ої МН но. ЯН Ан де ОН М А М нм" о См ж о Ге!
М о. о -/ о (Ф) Ге) Ге) н І их (Фе)
М ге он о в; «т
Н
2.35.) НЯ | ни о Ом у
А М 0-7 Мн
Мм7 Св У. Лео
Нм о, оон
Ме Код прикладу тону Структура синтону і ї вон
М. М і зу о
Ї » т й р рот
МВ М в; п, Ай
Му и МН ак Мн» 236. | ІА ву
НМ. ро я о о
Но;
М
(в) і кА, кон
М им Х. ст / т Й не то ЛІ о А. м в М ого
З АЙ
ЗИ МН ту нь 287. | ІБ ву
НМ. ро «ле о о
Но; м (в)
І 7 Ї Ми
М
М ге он - Ми в 288 а ща ХУ. іш; м в М ОМ М о! (у, п дрон о ес о (в) -и о
М.М о но: до в) 2.39 ІН Гор тон І й КТ о- нм7Зо йиту о Зо М 5
А ще о й 8'М М МН о но
Мо Код прикладу тону Структура синтону о МН, о ой. -
ДЕ, ши щи ла шани: аа
Мм7св М г о С он; зе о ря
М г он о Н С он оно 2.41 ІК нм" Зо кА ох МАХ мя яку о Н ові р: ж
З й: он ої МН ря м. м о НО. з0 у С оц обо и Тон 57 М щ М але н нм Зо од о. яр КІ убрри мч -. Ї в (в)
В ; ного - о ї о о ні ди о 4 Н 2.43 ІМ нм" Зо см (о кв М ОМ у и ша й з о ц о о о о они ао,
М М МН Ге! о 2.АА Гр тон МА дя но - Ск о вв вн М о чин о ша бн ої МН
Ан ї ку ще До
Му он о ЦЕ А М ом
М що Ж - т; зов) др
Ша:
Мо Код
Щ син- Структура синтону прикладу тону о АМНо с
Нн Е (є) -- тв зорю у» (9) й (о) Ге) 2.46 ІБ о
М ге ще оо нм Зо -4 см о. ит СОН мя 7 -- ф о М ноу Ч (я Мн»
Оу,
Н Ше г у о 2.47 І (в;
М ге он 96 р Те) й См о. ти Тон
МВ -К. ої МН й - ща М он р ня о н оно
З МА М
248 | М шо АХА сви ДС Сррия
См м- о і мб в М - о у в Ме о М йно
М
М.М о Ж ре Фі я нива; нм Зо См ХУ в 249. | 12) ме М аа Я: фн ор
С М Ї оон С о н оно м зи тон Ми м 2.50 чо небо й її Мт кое в ДТ ОС мя Фе. до
Мо Код
Щ син- Структура синтону прикладу | тону
Хе) (в) м-ї н но Ф М С Мне зді / гу
Н Ше о: (о) у 2.51 Ув о
М ге ще оо ді о -4 Сх ши в в. о-й-он не -/ 9 о - 252 | УК зо щ | З у 7 Н
І я дм є о - нм" о Б ло Н
А шт о вм М МН о че (о) (Фо)
М.М -кло - Ф щі ХМ 9 сур нм Зо З н в 253 «Ав щу заайни; о де
НМ тн, (о) о с мими он -ї я; (Фо) о М ; М (Фе) но См хау В 254 | кв М аа ї о дя 5 нм офтн»
Ще;
З и (в) ню й оо 2.55 ЕЕ но ч (в) (он! в) (в) он ве нм хо й /
М
Ж. 5
Мо Код прикладу тону Структура синтону о м он но-8-о х ма ко р ре о5Б | са СХ мате (е) о о з о «чинив ол" й о но он о
Тк он но-8-0 водо
Де дес
М" С5 М о 257 | СМ З мате о о о З о Кал 0,0" н о но он
Гу ще он но-8-0 х ма що; о х 258. НО ЗУ мате ІЧ о о о з о АКА ААЛ но Куох ло Н й о ної "он он о
Р. и нм Зо й Шо:
А по Де
Мм7 Св М о) 2.59 | НЗ З -оі хи а о о о з й АКА но но" "он он номрон не | , 9) М М 2.60 НМУ 8. м Те 3 , чи то
І хо 5'сМ М о «он о норов оон
Мо Код прикладу тону Структура синтону о он В ро й о мс М о) 281. | нх З ма (4 , (е) (Фо) Х о «Кай
ОЙ, Н Н (е) но он о о Го! но о
М ге ОН и дй-т но 4 Ск 1 о Н а мя М у 282. НУ - - фо юн
Бо; он но ї
М он о он -В нм" Зо Ф М. ро
Ж Ї Ме о-/ ва
МВ М о 2,63 о І , о о З о ЖАКА о.,0 "Й н о
Пе но" пон он
Го! 8-5И
М
У, в
М.М Ї о) 2.64 ІЕ що он о Мн но ше дав
З ех Ге о он
З до: в Ге) (в ь нон
Ї но Ге
М ге ОН о Ай-т нм" Зо -4 ск ІЙ й с мив М у о 2.85 З де; фо ту,
Ге он но Ї
М он
Мо Код
Щ син- Структура синтону прикладу тону й ї м М он -Ж о о, небо | м 3 -їУ о Щи 266 | КУ «А ім 5 ФІ о зни ее о фен о и у
М
Ь (о) чо
МН
2.67 ІМ Ї 9 й ра ге он и, он но 4 См у! пк м? М о-/М о : он - он он он вен (о) о 288 | їм ч/ о хх
Ге) (о) 9 Х о кл ос," н о
НО он о но- о іо, чо ее зу тон вив о 2.89. | ЗА нм" зо ке о" о вм М о «ОН о он (0) (9) но-579 8-и о тт, 5 (9) 277. | ЕА ох он щіне нМ7Зо 4 Ск /
Ж. є он (о) о-8хо
М ге он й ро -Ну 278 | в вро Сотня у
МВ М (в)
Мо Код
Щ син- Структура синтону прикладу тону о 9) о-5-ОН
М ле ОН й 279. | ЕК нм7Зо ке о-/7м оо кв со. ги,
Ге) о о-8-ОН
М ге он ре о А 2.80 ЕО нм о Ж з о-тн о ит тато м АЛ кв | ай ж о о о і, рн (о) ово
М ге он й о й 2.81 ЕВ нм о 4 (М в. чи улов чл воли мя -- Ге! Ф) о о ох5-ОН
М г ОН р
М
282. | УЕ ой о 4 См 9-7 іде 1 ГФ) Ге! 2 М й і ; -ї бе й (в Оох5-ОоН ще фе с ї; 2.83 УМ но 4 см 9-7 рт в я а
М. им - /Й 9 ох о (о) ва о но х Нн 284 | 1Е ва щу заодно; і, то
Ом оф» о (в)
М ге он о о о й уки ве - М Н нм" Зо См Ха КВ 285 |ІН| Аз М аа ї о ние ее о фун»
Мо Код
Щ син- Структура синтону прикладу тону
М.М, Ї но й 9 ві грон ви / нм7Зо 4 гм / Н а м? М ре о 286 | М о де: о А. ій уд о он он о (9) и й о
ІЙ
2.87. | МА о 03 ра. Ге он йо. он ни7о 4 ГК у ль
М? М 0-7 но я он (е) () о т 0 о (е) о 2.88 | МО ми он В нм Зо Ф З З и У.
М м в і оси КІ! юн - зних м но Є о он у он -/ 9
М. Ї 9 З Ки о й
Гр он вия в; - 289 | Ма | но Як у й мб М 0-7 Мн ще Х,
ЗУ о-В-он Нам (в) о о-ї «в-ОН я н Їх 2.90 М5 | нм То й зм їй Митним о. ти тд ЯМ Но; м в щ ї ) то й о а о (в) о АМНе ща і ! в у о он Нн Е о - 2.91 МА нм Зо й З о- и ю І Ї пе 0 до
Мо Код
Щ син- Структура синтону прикладу тону о о
М Фе) " Фі щі о о гани нм стОо ХХ М Н 292. | МО кв і зач; с!
ОА
(о) уфчн ї !
М М (в)
У ОН -йс (Фе) нм7Зо ща (м у у Щира 293 | М7 в М и д. о о ние ешИ о фчн ті а о Ох8-ОН м. им и он т Н (9) й 9-7 М 2.94. | МА нм зо Ба а Ж мл
Ба сх аа
Ге! о ох5-ОН м. им и Кон 295. | МВ ню Зо Я ТАМ риття «Єв о. Ге в оре
Лі олсон на Он оно м Ми зон я вав 2.96 МР нео Ї х ви ке о аа
Ж ром 5
М М ІЙ но (ор тон с о (в) но й
А І о-ТМ вм; 297. | ММ і ревом аа; 4
Кі. юн о. ь
Он он о
М ге он о -ї М ва у нм" Зо Я 9 У па о ге |Ммо| У. щ огучито ї Ь т, ех б» он
Го, ни ффчн
Код
Структура синтону о ЛАД пох а,
Н Н Н у вх й в) Меси Но о о-КН ообин ЗЛО-КУ. 2.101 ок геувумн еле ФУ а по шошо) 255 (в) в С од в)
М г ОН небо ї- С и и «2 ЧО (8) (в) (в) 2102. ОМ со в) Н Ге)
ААЖДЛАЛЮ
Щ МН он,
СК кА
М
НМ о -- ; 5-й ол те д п М (в) (в) 2103 РС ОЗ в) Н Ге) що МН он, о он
А »ОН но нод2»о во Л іч пов оо сте он ІФ) о 2.104 нм о ро ! зм ооо, в вм М о ом о Д-
Код
Мо син- (Ф; а синто
М
«Ж Ж грон о он " у о я ; (в)
М Тв М кощія 2.105 РУ (З о о
Н вед що МН он, 2 о
У г он нм" то 4 що Кт у чо. (в) (в) 2106 | РО ЗУ й о і /
Н
М
(в) (в) ку й об, а Ге)
У г он о
ЖК ща КК
МВ і
Ум 2107. | РМ З о о н
Ощи Мюш-о маше
Ку йо он, а ге он
М н
Ото я
МУ в М - Ї й 2.108 РМ/ о о й н
Ощи ху -о о вд й он,
Мо Код прикладу тону Структура синтону ом,
МН - 2.109 ОМ Вам ге он р ера нм ос о-7м-о о НА а: і) о. 5.он 9 ) 72 кн
М о (в)
У ТОН о7 9 у о 2.4110 ) ВМ КОХ ли Те с н М жа в) НМ о нм З р
М78 у о очно о
САН ЯИК о о нон Ше: мен у 2.111 НМ но що оон
ОА МН
Фе . МН МН
МН, о С о о М я сл о-7ч о о Н о 5 в. су 75 д --
Фа з Он в) нм" Зо їй гм оби ит ио он он (6) (в) 2113 | 8М З в) зе щ МН он,
Код
Мо
М о ж г он о нм Зо ї- м о Кит «2 чу 6) о7Зо 2114 | 5М ОЗ 9) Н Ге) Фі
ЩІ МН он, охиМн,
МН
(в) -
М. ;М : «он М М
Бр но со чо ві о Ре
МВ --. о оон озиМн,
МН
С м (6) о:8'ОН ч то че Н о 2416. | тА ва со м КУ є Й о но МО он ме он СВ о но б5-А- См ото) (9) «Аекн,
ОА ол 24117 ТМ фі оо нн -ї ду
М о оуя о с ми он
НМ о І С ол 2.118 вт ОЗ й й о7то н
М ра є Жд о о вд йо он,
Мо Код прикладу тону Структура синтону но нм о у фі М у Но-55о но н ооо з М. М зле |а ошовонаривае р Го у
М" М (в) о
Од 97 о -8. о он пан реф лак ни о че оди глго | вх | С «ії» вия . т о Кер Кт ми чи м он но-8:0 нон оо
М
2.121. | Му Фі; с юр їв нМм7о й т ді (в) в
Ж Її м о Вій іє в
Мм7С8 Мі (в) 97
Я о оон
Бий с ге он з в де ре о со, суку роз і о 5 24122 ТУ о
З це
З де
З
У, чу о ж в Огд-ОН ї о ! о
М ге он го ве мо, ьо 24123 | 57 но ек он о м в8 М он о ре о7гон
Код
Мо
СК Я
Ї 7 он ї. нм" Зо ках от ит ие ОН нав щк У во о о он в)
Ощи Мо Но и
З во: он о но
НМ
9) у
М он но-5:0 но нн оо
М х М 2125 | 5М ГГ 7 вав м нМ7о й Шдьое он о
АХ Їм о т 5 (в о : о окон ! о ; о
М ге он (й Криту 2128. | 5У но їз он о
М" 8 М оон но он ж Ї ее о
М. им о о
Ї ОН о о м 7 Щі ро со, а ван і
Ме М шк в) що до; о2р-ОН о но он о но 0 сон о о сте он о обо У о дя; нМ7то - т о в о ме М и Н о о2ВгОН о 2.128 тв ТЕ. З / (6)
Я у й Г
Сг «ДН
Код
Мо син- (Ф; а синто (8) х «65 9 - х- 9 чо о о о 2129.) ТУ о оон, це о
Ми Ми тон "7 Мртм бум
Ї м.у,о он о / нМ7о -4 7 о т (в) мб в М о, ХХ о тон он оон (9) (о) о Оз5,оН но о нн Ге) в!
М.А М М рого о фо на вве ї-- ол 2130 | тх ва о щі; г (У он р о Ан оон он он оо но он но) сою ОТ
М. и Ма о о Ге) он (в) (в) 2131 ТЕ нМ7то со Зони мав М ша й о о (У но: о:Б-оН 0 но он сор. СЕ
М М Ге! о У ! он (в в р; 2.132.| ОА нибзо со З и о я М ше
Ши Ех
Ге)
НО он о во
Ма, (в) Ге) 5
Ї р он о о о а; 2133. пу нибзо ск в а Ь ме в М я о
Ме Код прикладу тону Структура синтону но он о оо сон Оки
Фо 7 он о Ге) є, о В ре щи ЗИ й м? М от н 2434 | ук о ТЕ сдоя г 6)
Я гир ото о о но б нд о р и З о НН в; о (в; 2.135 ШО ми оц он о цу я нм о Х ОН
Х ром
Мм'"в М У но. РН о о
АС і З У о о мм 7 2.136 ОМ о о ре, га он ух бо в) нм7со в: / он
Ж зом
Мм'"в М У 6)
М М од рису нм" Зо й о он
М на М ох 2137 | 7 ф й оо
М Ї АД
АК о о й но А в)
Бо он о
Мо Код прикладу тону Структура синтону осо но он но /
Рош. тре
М о о ХМ о р он о о іх ї.
Ме в М ша Н о о
У на: огр'оН в) во Ро о рада г 2.139 Ус (в; (в; в)
І о рено ни нм7то й З і; он
Ж М я
М7С8 М отит ати отих о: ОН с (9) / ото атняи оо о Мао
С М он 0-/7 7 о. г дико лико м- з о о о
М й ЗМ 2140 | У8 ще га зу м в о н оо о пара он о о о в о он от Отут о; ОН с о / ото иа мито (в) о і с їу он о-/Т ото ит уєнио ме в ни : (в) Н оо 9 реве о о о 9) 97 оон
Мо Код прикладу тону Структура синтону но он но щу.
В обо о но і, З. он
М. им 2.142 УУ Гор он Мм"бТо о у чер У га;
М7С8 М ; М У но». он но ОН до он о ном. о й ге он с" обто нео Я о оо он 2143 | УМ А, ТВ | не
Мн
Х, он по но он (о) у що.
М. им ної-м - он г р о о Ан нм" со й во
Х Щк
С
2144 | МК
МН
Се
М. -»о
КГ о о
Ме ци улетвюло й оо их
СХ кА озуо оситотиохито 2.145 МР М он уд о хро дути нм7зо ак ол Ми оН ; 0
ВО
Мо Код й син- Структура синтон прикладу сим. руктур у 2.146 хор р вва авававинивиой еойи в я
Ії н ї ГІ | Й
ОЗ сосутсуя нео - х ай є
А Й - й ооо оо оон с (Ф) / ото О сито то о суто г
М Ми ОН 6) о) оса 2.147 ХК іч де ФІ о- нМмо М о М
ІФ) мв ін Ло 2, пруток он (Ф) ото итотяио то
Сосяо «ОН ох, (о) М-2О
СО маон о е- но 2.148 ХІ. но шо; а о ле дя ув йо т
МВ Ку того
У он о развава
Сосяо о «оч атяи Ота о Н Н о о
М.А Ху родові овья ие аа М пос (6) 0.,0 остан о то но - А ол Мои ОН ре ях о доле
Ме Код
Щ син- Структура синтон прикладу тону руктур У о фон ой ) тотибутотоо того о М-»О (о) (в) Ге) 2150 | ХО МАМ мн удо
НА (9) М | Те ; пон мМ 5 Н і ) "КК оо о н о фон (в, о о о (в; и 2-75 Нм До талии ттотх 2.151 ув іа МН чі о ну (о) М | ї С о пон
Мм'З ні А М що
У ве но но (о) нот иоН ей о но но о / он
М.М Я зе М 2152 | У5 ть м в о »- ЩщЩДд00 м (в) бе (в)
Н М
У ! но. но но" онУ, «он о ве оон - же ом 2.153 У нМ7то 4 См ооо Є Й ві ме в М У оо м
ДОВ уз й Ї он обо от о одфон он ори (в) м МИХ он "й евро 2154 | УТ нкто МАК олимуо О НИЖ о длнобототното
А Щи о) Косми
М" (в мо оброн
ОжУ"он ононН в) ожон (в) З Н г о нН ме; 7 он й нави (Фе) но - ст отеМуО (6) М 2155 | МО мб ко о Амо оон М.М
Фі ІФ) тон осот тот сто оноОн гост
Мо Код прикладу тону Структура синтону поета
М о що оон х 2.156 | УМ о у Н: он
Сх, он т ав 09
Мов т о зе
Оз уСОН онон тот утотмо тот (тон о тот ототно 9 о ОЗОН но.оні хі 2157. | УМ ФО кон р, нео нео со отим уо он це Кк о о отоНн
ОжугОн онон он о-5 о я ие,
М ,М М а М 2158 | 78 рон ве к-ио ну о со ав о бої
Мм7"8 М 0 - о он о Уттон он он он 0-5 о а: огк,ОН св
Му М, тво 21159. | 76 Ффі Її о т к-й це о кава -Я
М7С8 М
ДО о Н он он он о о о5он но бо
МоеМзи сон 7 м оо нак ї ! М. у, Н нМо й ОТИТ о (9) 2160 | 27 у См т че м о -о в о о г он щи он он
Мо Код
Щ син- Структура синтону прикладу тон у но но ноти 5 о но поь / он
ММ ; з он М ї Іа С оо ни7зо (м 09 КК. ші 2461 | 7Е нев 7 Ра М ) о ве
Н с- о- То- о о о а те о он он ре її Ме о
М М й з (в) он М-й о во; - й А сор, 9-7 о дови о 2162 | 78 ям М о А о он опр а о но о о сх оон а, о Ки нн Кн " г он Є рр 2.163 УА нм" о 4 Гм сива ай о о о ит ит о нав у й "обкл
ОЗ обу о. ут ит дитяо о) . -- вва он Он ре,
Геї пеож| 00 Об оч нм" Зо й г є є ї
ЩО Ї
В ня он но 7 он о
М чт Аа Ду 2166. | ААА мив о Оше Є ния й
ХОНн о,
У МОН он бн
Ме Код прикладу тону Структура синтону
ОН он о
М М. не Н
Ген Мо М. -о дек р-р
А | р |в) ів; МН 2.167 | ААО вм М Х ( (З -- о уеОн пух о НМ но рен с о - он он (в) ра бетон в
М (в) о7 мн - те є Що 7 о ен
А (він! 2.168 | ААЕ ( -- о (в) он ни
Ів)
С
5-Х (в)
М. им он о о
Ф с Комо лихі он ніх о | у ІЦ я М о о75о 2.169 | АВС вв аа : М
Ку шли щ й от чмн, бу-кн,
НМ о ( ц мим М 2 о о- с он А М о 2.170 | АВІ І о яко ї но т у-о о й у тв у а (0) зни: Я
Мо Код прикладу тону Структура синтону бу-кн, ни о г -
М. ОМ ЧУ о о- зи сон м-н 2.171. | АВМ І о АС А н 7 Їм у.о ша рег
Мт в зе й д он оо
ІНФ) он но (9) нон ех о
М в ОН б Го у, о Її, о 2.172 | ААЕ нм Зо - з (о) шо
Ж | ру мо Н / у, ще он у-кн,
Щі о ж
Ше: М З о о 2173 |АВО | Фф з я о "у о г но М
МВ зе о (в во о но-5-0 і о ; о й я до р вер! ни" Зо ї- С о вай о (2) о «Аа г о ря 2.174 |АВМ у р
Мо Код
Щ син- Структура синтону прикладу тону
Ге! Ше но ен о в'яв
М - он - (в) І н Е : ї М Ге! о ща г Он ДІ рова те ва 2175 |АВОЇ ню о йо вий о о оито тить к АХ, ОБ. о Своя юн о в о У тон он он о У- нон ово рр тон В ур ррууртоь 2.176 | АВМ нео ак оту о о
Ме М й о 7 тон он он о) о)
М ка / є 09
Ге! (о) 24177 (контроль) ів ге З о В но ї Мн
Ї х / --У
М в м" о К! лн но. г о он он
М ге о | М о но -4 М Х ко ол МА ою 2178 | Мо оби Мо во (контроль) о7чеон Те У о Он М ї
Он он о
Е
Ме Код прикладу тону Структура синтону : Її у о
М М
Гор тон
М МН.
НМ о о ол т 2 2 М о оо 2.179 77 о о (контроль) Н а МА о
М й в) Е й Я (є) Нщ о ча те тон це Фі у (в) но7 тротон хо ян Он го (в; ї !
М М р М в) 2.180 7т оо (контроль) о о
Н
Ди, ; т оо он но, їй он -- но о оно он ,Ф Мов оо 2.181 МУ М. о ук ий
ХМ Ма М М. (контроль) ак С он Су щь но А мм
У но
Ко неон о іо) о (в) 19) 8--И (9) огбон 2.182 ФЕ 4 (контроль) Фе о за 0 Он -к іФ) ве 9) й ї "м М м? С8 М се)
Мо Код прикладу тону Структура синтону
М (о) й Ми тон
Ф ру: нм о ! т 9 ва «Ав О- ; о. МН 21183 | св Т н (контроль) ния сиру
АХ 1 їв) о МН д
М
/ (в) то о м ие ще я ТЕХ ух 2.184 нм7о й оту о о о
Уа |ом о (контроль) М А, М (о) / (о б оон о - он он он о) (о)
М
, ай /
ЦІ г о 2.185 о й (контроль) КА йо З о В се В, м що, Р Кі он
У ние: о; он но. г о он
У певних варіантах здійснення синтон вибраний із групи, яка складається з прикладів синтону 2.1, 2.2,2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.68, 2.9, 2.10, 2.11, 2.12, 2.13, 2.14, 2.15, 2.16, 2.17, 2.18, 2.19, 2.20,2.21,2.22,2.23,2.24,2.25,2.26, 2.27, 2.28, 2.29, 2.30, 2.31, 2.32, 2.33, 2.34, 2.35, 2.36, 2.37, 2.38, 2.39, 2.40, 2.41, 2.42, 2.43, 2.44, 2.45, 2.46, 2.47, 2.48, 2.49, 2.50, 2.51, 2.52, 2.53, 2.54, 2.55, 2.56, 2.57, 2.58, 2.59, 2.60, 2.61, 2.62, 2.63, 2.64, 2.65, 2.66, 2.67, 2.68, 2.69, 2.77, 2.78, 2.79, 2.80, 2.81, 2.82, 2.83, 2.84, 2.85, 2.86, 2.87, 2.88, 2.89, 2.90, 2.91, 2.92, 2.93, 2.94, 2.95, 2.96, 2.97, 2.98, 2101, 2.102, 2.103, 2.104, 2.105, 2.106, 2.107, 2.108, 2.109, 2.110, 2.111, 2.112, 2113, 2.114, 2115, 2.116, 2.117, 2.118, 2119, 2120, 2121, 24122, 2123, 2124, 24125, 2126, 2127, 2128, 10. 2.129, 2.130, 2.131, 2.132, 24133, 2.134, 2.135, 2.136, 2.137, 2.138, 2.139, 2.140, 2141, 2.142, 2.143, 2.144, 2.145, 2.146, 2147, 2.148, 2.149, 2.150, 2151, 2152, 2.153, 2154, 2155, 2156, 2.157, 2.158, 2.159, 2.160, 2161, 2.162, 2.163, 2.164, 2.166, 2.167, 2.168, 2.169, 2.170, 2.171, 2.172, 2.173, 2.174, 2.175 і 2.176 або їх фармацевтично прийнятної солі. Назви сполук цих синтонів наведені нижче:
М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-ІЇ -валіл-М-14-(Т2-(13-((4-16-І8-(1,3- бензотіазол-2г-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н- піразол-1-іл)уметил|-5,7-диметилтрициклоїЇ3.3.1.157)дец-1-ил)окси)етилі|-(2- сульфоетил)карбамоїліокси)метилІфеніл)-М»-карбамоїл-і -орнітинамід;
М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-ІЇ -валіл-М-14-(Т2-(13-((4-16-І8-(1,3- бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н- піразол-1-іл)уметил|-5,7-диметилтрициклоїЇ3.3.1.157)дец-1-ил)окси)етил|-(3- сульфопропіл)/карбамоїліокси)метилІфеніл)-М»-карбамоїл-і -орнітинамід;
М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-Ї -валіл-М-І4-2-(2-(13-(4-16-(8-(1,3- бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н- піразол-1-ілуметил|-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.137|)дец-1-иліокси)етокси|етилу(2- сульфоетил)карбамоїл|окси)метил)феніл|-М»-карбамоїл-і -орнітинамід; метил-6-І4-(3-Т2-(13-(4-(6-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|- 2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1-ілуметил|-5,7-диметилтрицикло/3.3.1.157)дец-1- ил)окси)етилі(14-(1ч-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-І -валіл-М»-карбамоїл-ї - орнітил)аміно)бензилі|оксихкарбоніл)аміно)пропіл)-1 Н-1,2,3-триазол-1-іл|-6-дезокси-бета-і - глюкопіранозид;
М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-Ї -валіл-М-(4-( (Т2-(13-((4-16-І8-(1,3- бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н- піразол-1-іл)уметил/|-5,7-диметилтрициклоїЇ3.3.1.157дец-1-ил)окси)етилі(3-11-(бета-О- глюкопірануронозил)-1 Н-1,2,3-триазол-4-іл|Іпропілікарбамоїл)окси|метилуфеніл)-М»-карбамоїл-ї - орнітинамід;
М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-Ї -валіл-М-14-К(2А8)-1-12-(13-((4-76-І8- (1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-іл)у-5-метил- 1Н-піразол-1-ілуметил|-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.15ЛЯдец-1-иліюкси)етил|(метил)аміно)-1-оксо-
З-сульфопропан-2-ілікарбамоїл)окси)метиліфеніл)-І -аланінамід;
М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-ІЇ -валіл-М-14-(Т2-(13-((4-16-І8-(1,3- бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н- піразол-1-іл)уметил|-5,7-диметилтрициклої4.3.1.127|дец-1-ил)окси)етилі-(бета-О-
Зо глюкопіранозилокси)бензилі|-карбамоїл)окси)метиліІ|феніл)-М»-карбамоїл-ї -орнітинамід;
М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїл)|-І -валіл-М-14-((4-(бета-О- алопіранозилокси)бензилі|2-(13-(4-76-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін- 2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1-ілуметилі/д-5, 7- диметилтрицикло!ї3.3.1.157|дец-1-иліюкси)етилікарбамоїлюкси)метилі|феніл)-М»-карбамоїл-ї - орнітинамід;
М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-ІЇ -валіл-М-14-(Т2-(13-((4-16-І8-(1,3- бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н- піразол-1-іл)уметил|-5,7-диметилтрициклої|2.3.1.157)дец-1-ил)окси)етилі|-(2- фосфоноетил)карбамоїлюкси)метилі|феніл)-М-карбамоїл-І -орнітинамід;
М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-Ї -валіл-М-14-(Т2-(13-((4-16-І8-(1,3- бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н- піразол-1-іл)уметил|-5,7-диметилтрициклої|2.3.1.15Я|дец-1-ил)окси)етиліІ(2- фосфоноетил)карбамоїл)окси)метиліфеніл)-І -аланінамід;
М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-ІЇ -валіл-М-14-(Т2-(13-((4-16-І8-(1,3- бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н- піразол-1-ілуметил|-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.137|)дец-1-ил)окси)етил|-(3- фосфонопропіл)карбамоїлюкси)метиліІфеніл)-М»-карбамоїл-і -орнітинамід;
М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-Ї -валіл-М-14-К(2А8)-1-12-(13-((4-76-І8- (1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-іл)у-5-метил- 1Н-піразол-1-іл)уметил|-5, 7-диметилтрицикло!|3.3.1.127)дец-1-илюкси)етиліІаміно)-1-оксо-3- сульфопропан-2-ілікарбамоїлюкси)метиліфеніл)-І -аланінамід;
М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-Ї -валіл-М-І4-2-(2-(13-(4-16-(8-(1,3- бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н- піразол-1-іл)уметил|-5,7-диметилтрициклоїЇ3.3.1.12Ядец-1-ил)окси)етокси|етилу3- фосфонопропіл)карбамоїл|оксиуметил)феніл|-М»-карбамоїл-ї -орнітинамід;
М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-Ї -валіл-М-І4-2-(2-(13-(4-16-(8-(1,3- бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н- піразол-1-ілуметил|-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.137|)дец-1-иліокси)етокси|етилу(3- фосфонопропіл)карбамоїлі|окси)метил)феніл)|-І -аланінамід; бо М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-ІЇ -валіл-М-14-(Т2-(13-((4-16-І8-(1,3-
бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н- піразол-1-ілуметил|-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.137|)дец-1-иліокси)етил|(2- фосфонопропіл)карбамоїлоюкси)метиліфеніл)-І -аланінамід; 6-І(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-3-(1-113-(2-((25)-3- карбокси-2-((4-(25)-2-(Щ(25)-2-116-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїліаміно)-3- метилбутаноїліаміно)пропаноїліаміно)бензил)окси|карбоніл)іаміно)пропаноїл|(метил)аміно)етокс и)-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.157)дец-1-ил|Іметил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)упіридин-2-карбонова кислота;
М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-ІЇ -валіл-М-14-(Т2-(13-((4-16-І8-(1,3- бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н- піразол-1-ілуметил|-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.137|)дец-1-ил)окси)етил|-(бета-О- глюкопірануронсилокси)бензил|-карбамоїліокси)метил|феніл)-М»-карбамоїл-і -орнітинамід;
М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-Ї -валіл-М-14-(Т2-(13-((4-16-(11-(1,3- бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-1,2,3,4-тетрагідрохінолін-7-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н- піразоліл-1-іл)уметил/|-5,7-диметилтрициклоїЇ3.3.1.12Л|дец-1-иліюкси)етиліІ(2- фосфоноетил)карбамоїлюкси)метилі|феніл)-М-карбамоїл-І -орнітинамід;
М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-І -валіл-М»-карбамоїл-М-(4-(Т2-((3-(4-12- карбокси-6-(8-(П,З|гіазоло|5,4-б|Іпіридин-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|піридин-3- ілуя5-метил-1Н-піразол-1-іл)метил|-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.157|дец-1-иліокси)етилі|(2- сульфоетил)карбамоїл)іокси)метилі|феніл)-І -орнітинамід;
М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-Ї -валіл-М-14-К7(2А8)-1-12-(13-(4-16-1- (1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-1,2,3,4-тетрагідрохінолін-7-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил- 1Н-піразол-1-ілуметил|-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.15Ядец-1-иліюкси)етил|(метил)аміно)-1-оксо-
З-сульфопропан-2-ілікарбамоїліокси)метил|феніл)-М»-карбамоїл-і -орнітинамід;
М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-Ї -валіл-М-14-К7(2А8)-1-12-(13-(4-16-1- (1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-1,2,3,4-тетрагідрохінолін-7-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил- 1Н-піразол-1-іл)уметил|-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.127)дец-1-илюкси)етил)(метил)аміно)-1-оксо-
З-сульфопропан-2-ілікарбамоїл)окси)метиліфеніл)-І -аланінамід;
М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-І -валіл-М»-карбамоїл-М-(4-(Т2-((3-(4-12-
Зо карбокси-6-(8-(П,З|гіазоло|4,5-б|Іпіридин-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|піридин-3- ілуя5-метил-1Н-піразол-1-іл)метил|-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.157|дец-1-иліокси)етилі|(2- сульфоетил)карбамоїлюкси)метилі|феніл)-І -орнітинамід;
М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-Ї -валіл-М-14-(Т2-(13-((4-16-(11-(1,3- бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-1,2,3,4-тетрагідрохінолін-7-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н- піразоліл-1-іл)уметил|-5,7-диметилтрицикло|3.3.1.15Я)дец-1-иліюкси)етилі|(2- сульфоетил)карбамоїлоюкси)метиліІфеніл)-Ме-карбамоїл-і -орнітинамід;
М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-ІЇ -валіл-М-14-(Т2-(13-((4-16-І8-(1,3- бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н- піразол-1-іл)уметил|-5,7-диметилтрициклоїЇ3.3.1.157)дец-1-ил)окси)етилі|-(2- карбоксиетил)карбамоїл)окси)метиліІ|феніл)-М-карбамоїл-і -орнітинамід;
М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-ІЇ -валіл-М-14-(Т2-(13-((4-16-І8-(1,3- бензотіазол-2г-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н- піразол-1-ілуметил|-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.137|)дец-1-иліокси)етил|(2- карбоксиетил)карбамоїлюкси)метиліфеніл)-І -аланінамід; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-(1-113-(2-((28)-3- карбокси-2-((4-1(25)-2-(Щ(25)-2-116-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїліаміно)-3- метилбутаноїліаміно)пропаноїліаміно)бензил)окси|карбоніл)іаміно)пропаноїл|(метил)аміно)етокс и)-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.137|)дец-1-ил|метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)упіридин-2-карбонова кислота;
М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-ІЇ -валіл-М-14-(Т2-(13-((4-16-І8-(1,3- бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-іл)-5-метил-1 Н- піразол-1-іл)уметил/|-5,7-диметилтрициклоїЇ3.3.1.127|дец-1-ил)окси)етилі|(1- (карбоксиметил)піперидин-4-ілікарбамоїлюкси)метиліфеніл)-М-карбамоїл-І -орнітинамід; (5)-6-(2-((3-((4-(6-(8-(бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл)-2- карбоксипіридин-3-іл)-о-метил-1 Н-піразол-1-ілуметил)-5,7-диметиладамантан-1- іл)уокси)етил)(метил)аміно)-5-((((4-((5)-2-((5)-2-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1- ілугексанамідо)-3-метилбутанамідо)-5-уреїдопентанамідо)бензил)окси)карбоніл)аміно)-М, М, М- триметил-б-оксогексан-1-аміній;
М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-ІЇ -валіл-М-14-(Т2-(13-((4-16-І8-(1,3- 60 бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-
піразол-1-ілуметил|-5,7-диметилтрицикло!/3.3.1.137|)дец-1-иліокси)етил|(2- сульфоетилкарбамоїлоюкси)метиліфеніл)-іІ -аланінамід;
М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-Ї -валіл-М-(4-(11(4-Т12-(13-(4-16-18-(1,3- бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н- піразол-1-іл)уметил|-5,7-диметилтрициклоїЇ3.3.1.157|дец-1-ил)окси)етиліІ(2- сульфоетил)аміно)піперидин-1-іл)карбоніл|окси)метил)феніл|-М»-карбамоїл-і -орнітинамід;
М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-ІЇ -валіл-М-14-(Т2-(13-((4-16-І8-(1,3- бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-5-(3-фосфонопропокси)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-2- карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1-ілуметил)|-5, 7-диметилтрицикло!|3.3.1.157)дец-1- илюкси)етилі|-(2-метил)карбамоїліокси)метил|феніл)-М»-карбамоїл-і -орнітинамід;
М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-Ї -валіл-М-(4-(11(4-Т12-(13-(4-16-18-(1,3- бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н- піразол-1-ілуметил|-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.137|)дец-1-илІокси)етилі(3- фосфонопропіл)аміно)піперидин-1-іл)карбоніл|окси)метил)феніл|-М»-карбамоїл-І -орнітинамід;
М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-Ї -валіл-М-14-(Т2-(13-((4-16-І8-(1,3- бензотіазол-2г-ілкарбамоїл)нафталін-2-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1- ілуметилІ|-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.127)дец-1-ил)окси)етилі(3- фосфонопропіл)карбамоїліокси)метилІфеніл)-М»-карбамоїл-і -орнітинамід;
М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-Ї -валіл-М-(4-(11(4-Т12-(13-(4-16-18-(1,3- бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н- піразол-1-ілуметил|-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.137|)дец-1-иліокси)етил|(2- карбоксиетил)аміно)піперидин-1-іл)карбоніл|окси)уметил)феніл|-М»-карбамоїл-і -орнітинамід;
М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїл)|-І -валіл-М»-карбамоїл-М-14-(2-(13-(4-12- карбокси-6-(8-(П,З|гіазоло|4,5-б|Іпіридин-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|піридин-3- іл)б5-метил-1Н-піразол-1-іл)уметил/|-5,7-диметилтрициклої3.3.1.12Я|дец-1-иліокси)етил)(3- фосфонопропіл)карбамоїлюкси)метиліфеніл)-І -орнітинамід;
М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-І -валіл-М»-карбамоїл-М-(4-(Т2-((3-(4-12- карбокси-6-(8-(П,З|гіазоло|5,4-б|Іпіридин-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|піридин-3- ілуя5-метил-1Н-піразол-1-іл)метил|-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.127|дец-1-иліокси)етилі(3-
Зо фосфонопропіл)карбамоїл)окси)метилі|феніл)-І -орнітинамід;
М-(6-Кхлорацетил)аміно|гексаноїл)-І -валіл-М-(4-І(ЦТ2-(13-(К4-(6-І(8-(1,3-бензотіазол-2- ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1- ілуметил|-5,7-диметилтрицикло!/3.3.1.157|)дец-1-илюкси)етилі|(2- сульфоетил)карбамоїлоюкси)метиліфеніл)-І -аланінамід;
М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-Ї -валіл-М-14-(Т2-(13-((4-16-І8-(1,3- бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-5-(карбоксиметил)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-ілІ|-2-карбоксипіридин-
З-іл)б5-метил-1Н-піразол-1-іл)уметил/|-5,7-диметилтрициклої3.3.1.19Я)дец-1-ил)окси)етил|-(2- метил)карбамоїліокси)метиліІ|феніл)-М»-карбамоїл-і -орнітинамід;
М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-Ї -валіл-М-(4-(2-Т2-(13-((4-16-18-(1,3- бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н- піразол-1-іл)уметил|-5,7-диметилтрициклоїЇ3.3.1.157|дец-1-ил)окси)етиліІ(2- сульфоетил)аміно)етил)(2-карбоксиетил)карбамоїл|окси)метил)феніл|-М»-карбамоїл-ї - орнітинамід; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-ілІ-3-(1-(13-(2-((25)-2-Ц((4- 45. 25)-5-(карбамоїламіно)-2-((25)-2-1(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)гексаноїл|аміно)-3- метилбутаноїліаміно)пентаноїліамінодбензил)окси|Їкарбонілу2-карбоксиетил)аміно|-3- карбоксипропаноїл)аміно)етокси|-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.157|)дец-1-илуметил)-5-метил-1Н- піразол-4-іл|Іпіридин-2-карбонова кислота; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-ілІ|-3-(1-113-(2-(1(25)-2-(((4- 0 К25)-5-«карбамоїламіно)-2-((25)-2-1(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)гексаноїл|аміно)-3- метилбутаноїліаміно)пентаноїліаміно)дбензил)окси)карбоніл)аміно)-З-карбоксипропаноїл|(2- сульфоетил)аміно)етокси)-5, 7-диметилтрицикло!|3.3.1.127|)дец-1-ил|метил)-5-метил-1Н-піразол- 4-іл)піридин-2-карбонова кислота;
М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-Ї -валіл-М-(4-(11(4-Т12-(13-(4-16-18-(1,3- бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н- піразол-1-ілуметил|-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.137|)дец-1-иліокси)етил|(2- карбоксиетил)аміно)піперидин-1-іл)карбоніл|окси)уметил)феніл|-М»-карбамоїл-і -орнітинамід;
А-ДІ Є)-3-(2-(13-((4-(6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-5-(карбоксиметокси)-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)уметилі/д-5,7- 60 диметилтрицикло!3.3.1.15Лдец-1-иліокси)етил)(метил)карбамоїліокси)проп-1-ен-1-іл|-2-(1М-(6-
(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)угексаноїл|-бета-аланіл)іаміно)феніл-бета-О- глюкопіранозидуронова кислота;
М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-Ї -валіл-М-14-(Т2-(13-((4-16-І8-(1,3- бензотіазол-2г-ілкарбамоїл)нафталін-2-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1- ілуметилІ|-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.127)дец-1-ил)окси)етилі(2- сульфоетил)карбамоїліокси)метилІфеніл)-М»-карбамоїл-і -орнітинамід;
М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)угексаноїл|-І -валіл-М-І(4-4(2-1(8-(1,3-бензотіазол-2- ілкарбамоїл)-2-(6-карбокси-5-11-(3,5-диметил-7-(2-Іметил(2- сульфоетил)аміно|етоксиутрициклоїЇ3.3.1.157|)дец-1-ил)метилі|-5-метил-1 Н-піразол-4-іліпіридин-2- іл)-1,2,3,4-тетрагідроіїзохінолін-5-іл|!окси)етил)карбамоїл|оксиуметил)феніл|-Ме-карбамоїл-ї - орнітинамід;
М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)угексаноїл|-І -валіл-М-І(4-4(2-1(8-(1,3-бензотіазол-2- ілкарбамоїл)-2-(6-карбокси-5-11-(3,5-диметил-7-(2-Іметил(2- сульфоетил)аміно|етоксиутрициклоїЇ3.3.1.157|)дец-1-ил)метилі|-5-метил-1 Н-піразол-4-іліпіридин-2- іл)-1,2,3,4-тетрагідроізохінолін-5-іл|оксизетил)(2-сульфоетил)карбамоїл|окси)метил)феніл|-Ме- карбамоїл-їі -орнітинамід;
М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-Ї -валіл-М-(4-(2-Т2-(13-((4-16-18-(1,3- бензотіазол-2г-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н- піразол-1-іл)уметил|-5,7-диметилтрициклоїЇ3.3.1.157|дец-1-ил)окси)етиліІ(2- сульфоетил)аміно)етил)(2-сульфоетил)карбамоїл|окси)метил)феніл|-М»-карбамоїл-ї - орнітинамід;
М-(6-Кхлорацетил)аміно|гексаноїл)-І -валіл-М-(4-І(ЦТ2-(13-(К4-(6-І(8-(1,3-бензотіазол-2- ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1- ілуметил|-5,7-диметилтрицикло!/3.3.1.157|)дец-1-илюкси)етилі|(2- сульфоетил)карбамоїл)окси)метилі|феніл)-М»-карбамоїл-і -орнітинамід;
М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-Ї -валіл-М-14-(Т2-(13-((4-16-І4-(1,3- бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідро-2Н-1,4-бензоксазин-6б-іл|-2-карбоксипіридин-3-іл)-5- метил-1Н-піразоліл-1-ілуметилі|5, 7-диметилтрицикло!/3.3.1.12Лдец-1-иліюкси)етилі(2- сульфоетил)карбамоїліокси)метилІфеніл)-М»-карбамоїл-і -орнітинамід;
Зо М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)угексаноїл|-І -валіл-М-І(4-4(2-1(8-(1,3-бензотіазол-2- ілкарбамоїл)-2-(6-карбокси-5-11-(3,5-диметил-7-(2-Іметил(2- сульфоетил)аміно|етоксиутрициклоїЇ3.3.1.157|)дец-1-ил)метилі|-5-метил-1 Н-піразол-4-іліпіридин-2- іл)-1,2,3,4-тетрагідроізохінолін-5-іл|!окси)етил)(2-карбоксиетил)карбамоїл|окси)метил)феніл|-М»- карбамоїл-їі -орнітинамід;
М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-ІЇ -валіл-М-14-(Т2-(13-((4-16-І8-(1,3- бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-5-(3-сульфопропокси)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2- карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1-ілуметил)|-5, 7-диметилтрицикло!|3.3.1.157)дец-1- ил)окси)етилі|-(2-метил)карбамоїлюкси)метилі|феніл)-М»-карбамоїл-і -орнітинамід;
М-(3-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)пропаноїл|-І -валіл-М-14-(ЦЧТ2-(13-((4-76-І8-(1,3- бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н- піразол-1-іл)уметил|-5,7-диметилтрициклоїЇ3.3.1.157)дец-1-ил)окси)етилі|-(2- сульфоетил)карбамоїліокси)метилІфеніл)-М»-карбамоїл-і -орнітинамід;
М-К2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-ілулацетил/-Ї -валіл-М-14-(ЦТ2-(13-((4-16-(8-(1,3- бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н- піразол-1-ілуметил|-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.137|)дец-1-ил)окси)етил|-(2- сульфоетил)карбамоїлоюкси)метиліІфеніл)-Ме-карбамоїл-і -орнітинамід; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-ілІ|-3-(1-113-(2-(1(25)-2-(((4- (щ(25,38,45,55,65)-6-карбокси-3,4,5-тригідрокситетрагідро-2Н-піран-2-іл|окси)-3-((3-116-(2,5- діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-ілугексаноїліаміно)зупропаноїл)іаміно|бензил)окси|карбоніліаміно)-3- сульфопропаноїл|(метил)аміно)етокси)-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.127|дец-1-ил|метил)-5-метил- 1Н-піразол-4-іл)піридин-2-карбонова кислота;
А-Д Є)-3-(2-(13-(4-(2-карбокси-6-І8-(П1,3|гіазоло/5,4-б|піридин-2-ілкарбамоїл)-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|Іпіридин-3-іл)у-5-метил-1 Н-піразол-1-ілуметилі|-5, 7- диметилтрицикло!|3.3.1.12Лдец-1-иліюкси)етил|(2-сульфоетил)карбамоїлюкси)проп-1-ен-1-іл|-2- (1ч-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)угексаноїл|-бета-аланіл)іаміно)феніл-бета-О- глюкопіранозидуронова кислота;
А-Д Є)-3-(2-(13-(4-(2-карбокси-6-І8-(П1,3|гіазоло(4,5-б|піридин-2-ілкарбамоїл)-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|Іпіридин-3-іл)у-5-метил-1 Н-піразол-1-ілуметилі|-5, 7- диметилтрицикло!ї3.3.1.1257|дец-1-илюкси)етил|(2-сульфоетил)карбамоїлоюкси)проп-1-ен-1-іл|-2- 60 (1ч-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)угексаноїл|-бета-аланіл)іаміно)феніл-бета-О-
глюкопіранозидуронова кислота;
А-Д Є)-3-(2-(13-((4-(6-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1 Н)-іл|-2- карбоксипіридин-З3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)уметил)|-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.157)дец-1- илюкси)етил|(2-сульфоетил)карбамоїл)окси)проп-1-ен-1-іл|-2-(14-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н- пірол-1-іл)угексаноїл|-бета-аланілламіно)феніл-бета-О-глюкопіранозидуронова кислота;
А-Д Є)-3-(2-(13-(4-(2-карбокси-6-І8-(П1,3|гіазоло/5,4-б|піридин-2-ілкарбамоїл)-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|Іпіридин-3-іл)у-5-метил-1 Н-піразол-1-ілуметилі|-5, 7- диметилтрицикло!|3.3.1.12Лдец-1-иліюкси)етил|(З-фосфонопропіл)карбамоїліокси)проп-1-ен-1- іл)|-2-((М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-бета-аланіліаміно)феніл-бета-О- глюкопіранозидуронова кислота;
А-ДІ Є)-3-(2-(13-((4-(6-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-5-(3-фосфонопропокси) -3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)уметилі/д-5,7- диметилтрицикло!|3.3.1.12Лдец-1-иліюкси)етил|(метил)карбамоїл)іокси)проп-1-ен-1-іл|-2-(1М-(6- (2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)угексаноїл|-бета-аланіл)іаміно)феніл-бета-О- глюкопіранозидуронова кислота;
А-Д Є)-3-(2-(13-((4-(6-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1 Н)-іл|-2- карбоксипіридин-З3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)уметил)|-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.157)дец-1- илюкси)етил|(З-фосфонопропіл)карбамоїл)іокси)проп-1-ен-1-іл|-2-(1М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро- 1Н-пірол-1-іл/угексаноїл|-бета-аланілламіно)феніл-бета-О-глюкопіранозидуронова кислота;
А-2-(3-(4-16-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-2- карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1-ілуметил)|-5, 7-диметилтрицикло!|3.3.1.157)дец-1- илюкси)етилі|-(2-сульфоетил)карбамоїліокси)метилі|-3-(2-(2-113-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол- 1-іл)упропаноїліаміно)етокси)етокси|Їфеніл-бета-О-глюкопіранозидуронова кислота;
А-Д Є)-3-(2-(13-(4-(2-карбокси-6-І8-(П1,3|гіазоло(4,5-б|піридин-2-ілкарбамоїл)-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|Іпіридин-3-іл)у-5-метил-1 Н-піразол-1-ілуметилі|-5, 7- диметилтрицикло!|3.3.1.12Лдец-1-иліюкси)етил|(З-фосфонопропіл)карбамоїліокси)проп-1-ен-1- іл)|-2-((М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-бета-аланіліаміно)феніл-бета-О- глюкопіранозидуронова кислота; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-11-(3-2-К(2-
Зо карбоксиетилу( (2 Е)-3-(4-(25,38,45,55,65)-6-карбокси-3,4,5-тригідрокситетрагідро-2Н-піран-2- іл|окси)-3-((3-116-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1- ілугексаноїліаміно)пропаноїл)аміно|феніл)проп-2-ен-1-іл|Іоксизкарбоніл)аміно|етокси)-5,7- диметилтрицикло!|3.3.1.19Л)дец-1-илуметил|-5-метил-1 Н-пфразол-4-іліпіридин-2-карбонова кислота; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-11-(3-2-К(2- карбоксиетил)-(4-(25,38,45,55,65)-6-карбокси-3,4 5-тригідрокситетрагідро-2Н-піран-2- іл|окси)-2-(2-(2-(3-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1- ілупропаноїл|аміно)етокси)етокси|бензил)окси|карбоніл)аміно|етокси)-5,7- диметилтрициклоїЇ3.3.1.157)дец-1-ил)метилі|-5-метил-1 Н-піразол-4-іліпіридин-2-карбонова кислота;
М-(6-(етенілсульфоніл)гексаноїл|)-І -валіл-М-(4-((Т2-((3-К4-(6-І8-(1,3-бензотіазол-2- ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1- ілуметил|-5,7-диметилтрицикло!/3.3.1.157|)дец-1-илюкси)етилі|-(2- сульфоетил)карбамоїлоюкси)метиліІфеніл)-Ме-карбамоїл-і -орнітинамід;
А- Є)-3-1(4-Т2-(13-((4-16-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1 Н)-іл|-2- карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1-ілуметил)|-5, 7-диметилтрицикло!|3.3.1.157)дец-1- илюкси)етилі|-(3-фосфонопропіл)аміно)піперидин-1-іл/укарбоніл|оксизпроп-1-ен-1-іл|-2-((М-(6-(2,5- діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)угексаноїл|-бета-аланіліаміно)феніл-бета-О- глюкопіранозидуронова кислота; 4-1 Є)-3-1(4-2-(13-(4-12-карбокси-6-І(8-(Ц1,3|гіазоло|4,5-б|піридин-2-ілкарбамоїл)-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|Іпіридин-3-іл)у-5-метил-1 Н-піразол-1-ілуметилі|-5, 7- диметилтрициклоїЇ3.3.1.157|дец-1-ил)окси)етил|-(З-фосфонопропіл)аміно)піперидин- 1- ілукарбоніл|окси)проп-1-ен-1-іл|-2-(1М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-бета- аланіл)аміно)феніл-бета-О-глюкопіранозидуронова кислота;
А-Д Е)-3-(2-(13-((4-(6-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)нафталін-2-іл)|-2-карбоксипіридин-3- іл)б5-метил-1Н-піразол-1-іл)уметил|-5,7-диметилтрициклої3.3.1.15Я|дец-1-ил)окси)етилі-(2- сульфоетил)карбамоїл)іокси)проп-1-ен-1-іл|-2-(14-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол- 1- іл)угексаноїл|-бета-аланіліаміно)феніл-бета-О-глюкопіранозидуронова кислота; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-11-(13-(2-((М-(6-(2,5- бо діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-3-сульфо-І -аланіліаміно)етокси |-5,7-
диметилтрицикло!|3.3.1.19Л|дец-1-ил)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл|Іпіридин-2-карбонова кислота; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-ілІ-3-(1-(13-(2-(2-16-(2,5- діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїлі|-(2-сульфоетил)аміно)етокси)етокси|-5, 7- диметилтрициклоїЇ3.3.1.157)дец-1-ил)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл|Іпіридин-2-карбонова кислота; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-3-(1-(13-(2-1(6-(2,5-діоксо- 2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)угексаноїл|-(2-сульфоетил)аміно)етокси)-5,7- диметилтрицикло!|3.3.1.19Л|дец-1-ил|метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)/упіридин-2-карбонова кислота; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-3-11-(3-111-(2,5-діоксо-2,5- дигідро-1Н-пірол-1-іл)-21-оксо-22-(2-сульфоетил)-3,6,9,12,15,18-гексаокса-22-азатетракозан-24- іл|окси)-5, 7-диметилтрицикло!|3.3.1.157|)дец-1-ил)метил|-5-метил-1 Н-піразол-4-іліпіридин-2- карбонова кислота; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-3-11-(3-111-(2,5-діоксо-2,5- дигідро-1Н-пірол-1-іл)-21-оксо-22-(2-сульфоетил)-3,6,9,12,15,18,25-гептаокса-22-азагептакозан- 27-іл|окси)-5,7-диметилтрициклої3.3.1.127|дец-1-илуметилІ|-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)піридин-2- карбонова кислота; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-(1-13-(2-((6- (етенілсульфоніл)гексаноїлІ|-(2-сульфоетил)аміно)етокси)-5, 7-диметилтрицикло|3.3.1.157)дец-1- ил|метил)-5-метил-1Н-піразол-4-іл)піридин-2-карбонова кислота; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-11-((3-2-І((6-
І(хлорацетил)аміно|гексаноїл)-(2-сульфоеєетил)аміно|етокси)-5,7-диметилтрициклої3.3.1.15Л)дец- 1-ил)метил|-5-метил-1Н-піразол-4-іліпіридин-2-карбонова кислота;
М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-ІЇ -валіл-М-14-(Т2-(13-((4-16-І8-(1,3- бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н- піразол-1-іл)уметил/|-5,7-диметилтрициклоїЇ3.3.1.157)дец-1-ил)окси)етил|-(3- карбоксипропіл)/карбамоїліокси)метил|феніл)-М»-карбамоїл-і -орнітинамід;
М-(6-Коромацетил)аміно|гексаноїл)-І -валіл-М-/4-(ЦТ2-(13-(4-16-(8-(1,3-бензотіазол-2-
Зо ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1- ілуметилІ|-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.127)дец-1-ил)окси)етилі(2- сульфоетил)карбамоїлоюкси)метиліІфеніл)-Ме-карбамоїл-і -орнітинамід;
А-2-(3-(4-16-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-2- карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1-ілуметил)|-5, 7-диметилтрицикло!|3.3.1.157)дец-1- илюкси)етилі-(З-карбоксипропіл)укарбамоїл)іокси)метил|-3-(2-(2-13-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н- пірол-1-іл)упропаноїліаміно)зетокси)етокси|Їфеніл-бета-О-глюкопіранозидуронова кислота; 4-(((4-2-(13-(4-(6-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроїзохінолін-2(1 Н)-іл|-2- карбоксипіридин-З3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)уметил)|-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.157)дец-1- илюкси)етилі-(З-карбоксипропіл)аміно)піперидин-1-іл)укарбоніл|окси)метил)-3-(2-(2-113-(2,5- діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-ілупропаноїл|аміно)етокси)етокси|феніл-бета-О- глюкопіранозидуронова кислота;
А-2-(3-(4-16-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-2- карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1-ілуметил)|-5, 7-диметилтрицикло!|3.3.1.157)дец-1- илюкси)етилі|-(3-сульфопропіл)укарбамоїлюкси)метилі-3-(2-(2-113-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н- пірол-1-ілупропаноїл|аміно)етокси)етокси|феніл-бета-О-глюкопіранозидуронова кислота;
М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-ІЇ -валіл-М-(4-(1(3-Т2-(13-(4-16-18-(1,3- бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н- піразол-1-ілуметил|-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.137|)дец-1-иліокси)етил|(2- сульфоетил)аміно)зазетидин-1-іл/укарбоніл|окси)метил)феніл/|-М-карбамоїл-і -орнітинамід; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-ілІ|-3-11-(3-Ц26-(2,5-діоксо- 2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)-8,24-діоксо-3-(2-сульфоетил)-11,14,17,20-тетраокса-3,7,23- триазагексакоз-1-ил|окси)-5,7-диметилтрициклої3.3.1.127)дец-1-илуметил|-5-метил-1 Н-піразол-4- іл)піридин-2-карбонова кислота;
М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-ІЇ -валіл-М-(4-(1(3-Т2-(13-(4-16-18-(1,3- бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н- піразол-1-ілуметил|-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.137|)дец-1-ил)окси)етил|-(2- сульфоетил)аміно)пропіл)/укарбамоїліокси)метил)феніл|-М»-карбамоїл-Їі -орнітинамід;
М-(6-Кйодоацетил)аміно|гексаноїл)-І -валіл-М-(4-((Т2-(13-((4-(6-(8-(1,3-бензотіазол-2- ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1- бо ілуметил|-5,7-диметилтрицикло!/3.3.1.157)дец-1-илюкси)етилі|-(2-
сульфоетил)карбамоїлоюкси)метиліІфеніл)-Ме-карбамоїл-і -орнітинамід;
М-(6-Кетенілсульфоніл)аміно|гексаноїл)-І -валіл-М-(4-(ЦТ2-((3-((4-16-І(8-(1,3-бензотіазол-2- ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1- ілуметил)|-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.1257дец-1-ил)окси)етилі|-(2- сульфоетил)карбамоїл)окси)метил|феніл)-М»-карбамоїл-і -орнітинамід;
М-(6-Кетенілсульфоніл)аміно|гексаноїл)-І -валіл-М-(4-(ЦТ2-((3-((4-16-І(8-(1,3-бензотіазол-2- ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1- ілуметил)|-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.1257дец-1-ил)окси)етилі-(2- сульфоетил)карбамоїлоюкси)метиліІфеніл)-Ме-карбамоїл-і -орнітинамід; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-71-((3-12-((3-1(6- (етенілсульфоніл)гексаноїліаміно)пропіл)-(2-сульфоетил)аміно|етокси)-5,7- диметилтрицикло!|3.3.1.19Л|дец-1-илуметил|-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)упіридин-2-карбонова кислота;
М-(3-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)пропаноїл|-І -валіл-М-14-(Ч1Т2-(13-((4-76-11-(1,3- бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-1,2,3,4-тетрагідрохінолін-7-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н- піразоліл-1-іл)уметил/|-5,7-диметилтрициклоїЇ3.3.1.12Л|дец-1-иліюкси)етиліІ(2- сульфоетил)карбамоїліокси)метилІфеніл)-М»-карбамоїл-і -орнітинамід; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-11-(3-2-К(2- карбоксиетил)--(2-(25,38,45,55,65)-6-карбокси-3,4 5-тригідрокситетрагідро-2Н-піран-2- іл|окси)-4-(2-(2-(3-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1- ілупропаноїл|аміно)етокси)етокси|бензил)окси|карбоніл)аміно|етокси)-5,7- диметилтрицикло!|3.3.1.19Л|дец-1-илуметил|-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)упіридин-2-карбонова кислота;
М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-3-сульфо-Ї -аланіл-! -валіл-М-14-(ЦТ2-((3-
І(4-16-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроїзохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу)-
Б-метил-1Н-піразол-1-іл)метил)|-5,7-диметилтрициклої3.3.1.197|дец-1-иліокси)етилі-(2- карбоксиетил)карбамоїлюкси)метилі|феніл)-М-карбамоїл-І -орнітинамід; 6-І(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-ілІ|-3-11-(3-1(435,465)-43- (К4-(1(25)-2-1(25)-2-1(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)угексаноїл|аміно)-3-
Зо метилбутаноїліаміно)упропаноїліаміноздбензил)окси)карбоніліаміно)-46-метил-37,44,47-триоксо- 2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35-додекаокса-38,45,468-триазапентаконтан-50-іл|окси)-5, 7- диметилтрицикло!|3.3.1.19Л|дец-1-илуметил|-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)упіридин-2-карбонова кислота;
М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-Ї -валіл-М-14-(Т2-(13-((4-16-(11-(1,3- бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-1,2,3,4-тетрагідрохінолін-7-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н- піразоліл-1-іл)уметил|-5,7-диметилтрицикло|3.3.1.15Я)дец-1-иліюкси)етилі|(2- карбоксиетил)карбамоїлюкси)метиліІфеніл)-М»-карбамоїл-і -орнітинамід;
М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-Ї -валіл-М-14-(Т2-(13-((4-16-І8-(1,3- бензотіазол-2г-ілкарбамоїл)нафталін-2-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1- ілуметилІ|-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.127)дец-1-ил)окси)етилі(2- карбоксиетил)карбамоїлюкси)метилі|феніл)-М-карбамоїл-І -орнітинамід; 6-(8-(1,3-бензотіазол-2г-ілкарбамоїл)нафталін-2-іл|-3-11-(3-2-(2-карбоксиетил.(2- (Щ(28,35,48,58,6НА)-6-карбокси-3,4 5-тригідрокситетрагідро-2Н-піран-2-іл|окси)-4-(2-(2-116-(2,5- діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1- ілугексаноїл|аміно)етокси)етокси|бензил)окси|карбоніл)аміно|етокси)-5,7- диметилтрицикло!|3.3.1.19Л|дец-1-илуметил|-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)упіридин-2-карбонова кислота;
М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-Ї -валіл-М-14-(Т2-(13-((4-16-(5-(1,3- бензотіазол-2-ілкарбамоїл)хінолін-3-іл|І-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)метилі|- 5,7-диметилтрициклоїЇ3.3.1.127|дец-1-ил)окси)етил|(2-сульфоетил)карбамоїліокси)метилі|феніл)-
М»-карбамоїл-і -орнітинамід;
М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-Ї -валіл-М-14-(Т2-(13-((4-16-І4-(1,3- бензотіазол-2-ілкарбамоїл)хінолін-6-іл|І-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)метилі|- 5,7-диметилтрициклоїЇ3.3.1.12|дец-1-ил)окси)етиліІ(2- карбоксиетил)карбамоїлюкси)метилі|феніл)-М»-карбамоїл-і -орнітинамід;
М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-Ї -валіл-М-14-(Т2-(13-((4-16-І4-(1,3- бензотіазол-2-ілкарбамоїл)хінолін-6-іл|І-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)метилі|- 5,7-диметилтрицикло!/3.3.1.12|дец-1-иліокси)етил)(2-сульфоетил)карбамоїл)окси)метиліфеніл)-
Мо-карбамоїл-ї -орнітинамід; бо М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-Ї -валіл-М-14-(Т2-(13-((4-16-(5-(1,3-
бензотіазол-2-ілкарбамоїл)хінолін-3-іл|І-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)метилі|- 5,7-диметилтрицикло!3.3.1.12Л|дец-1-иліокси)етил)(2- карбоксиетил)карбамоїлюкси)метилі|феніл)-М-карбамоїл-І -орнітинамід;
М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-Ї -валіл-М-14-(Т2-(13-((4-16-(11-(1,3- бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-5,6-дигідроїмідазо|1,5-а|піразин-7(8Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-іл)-5- метил-1Н-піразол-1-іл)уметил/І-5,7-диметилтрициклоїЇ3.3.1.12Л)дец-1-ил)іокси)етилі-(2- сульфоетил)карбамоїліокси)метилІфеніл)-М»-карбамоїл-і -орнітинамід;
М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-Ї -валіл-М-14-(Т2-(13-((4-16-(7-(1,3- бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-1Н-індол-2-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1- ілуметил|-5,7-диметилтрицикло!/3.3.1.157|)дец-1-илюкси)етилі|(2- сульфоетил)карбамоїлоюкси)метиліІфеніл)-Ме-карбамоїл-і -орнітинамід;
М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїл|)-І -валіл-М-(4-(1(/3-(8-(1,3-бензотіазол-2- ілкарбамоїл)-2-(6-карбокси-5-11-(3,5-диметил-7-(2-(2- сульфоетил)аміно|етоксиутрициклоїЇ3.3.1.157|)дец-1-ил)метилі|-5-метил-1 Н-піразол-4-іліпіридин-2- іл)-1,2,3,4-тетрагідроізохінолін-б6-іл|пропіл)уметил)карбамоїл|окси)метил)феніл|-М»-карбамоїл-ї - орнітинамід;
М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)уацетилІаміно)гексаноїл)-І -валіл-М-14-(Т2-(3-((4- 16-(8-1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-іл)-5- метил-1Н-піразол-1-іл)уметил/І-5,7-диметилтрициклоїЇ3.3.1.12Л)дец-1-ил)іокси)етилі-(2- сульфоетил)карбамоїл)окси)метил|феніл)-М»-карбамоїл-і -орнітинамід;
М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-Ї -валіл-М-14-(Т2-(13-((4-16-І8-(1,3- бензотіазол-2г-ілкарбамоїл)нафталін-2-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1- ілуметил|-5,7-диметилтрицикло!/3.3.1.157|)дец-1-илюкси)етилі(3-(бета-Їі - глюкопіранозилокси)пропілікарбамоїлюкси)метиліІфеніл)-М»-карбамоїл-І -орнітинамід;
М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-Ї -валіл-М-14-(Т2-(13-((4-16-І4-(1,3- бензотіазол-2-ілкарбамоїл)ізохінолін-б-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол- 1- ілуметилІ|-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.127)дец-1-ил)окси)етилі(2- сульфоетил)карбамоїліокси)метилІфеніл)-М»-карбамоїл-і -орнітинамід;
М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-Ї -альфа-глутаміл-і! -валіл-М-14-(2-((3-
Коо) І(4-16-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроїзохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу)-
Б-метил-1Н-піразол-1-іл)метил)|-5,7-диметилтрициклої3.3.1.197|дец-1-иліокси)етилі-(2- сульфоетил)карбамоїлоюкси)метиліІфеніл)-Ме-карбамоїл-і -орнітинамід;
М-К2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-ілулуацетил/|-Ї -альфа-глутаміл-! -валіл-М-14-(112-(13-(4-(6-
ІВ-(1,93-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-іл)-5- метил-1Н-піразол-1-іл)уметил/|-5,7-диметилтрициклоїЇ3.3.1.15Лдец-1-ил)окси)етилі-(2- сульфоетил)карбамоїлоюкси)метиліІфеніл)-Ме-карбамоїл-і -орнітинамід; 1-Щ2-(13-((4-16-І(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-2- карбоксипіридин-З3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)уметил)|-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.157)дец-1- ил)окси)етилі-(14-((М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-ілугексаноїл|-О-валіл-М»-карбамоїл-О- орнітил)аміно)бензилі|оксихкарбоніл)аміно)-1,2-дідезокси-О-арабіно-гекситол;
М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-Ї -валіл-М-14-(Т2-(13-((4-16-І4-(1,3- бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-2-оксидоізохінолін-б-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н- піразоліл-1-іл)уметилі|5,7-диметилтрициклої3.3.1.157)дец-1- илюкси)етилІ(метил)ікарбамоїлюкси)метил|феніл)-М»-карбамоїл-і -орнітинамід;
М-((35,55)-3-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)-2-оксо-5-К(2- сульфоетокси)метилі|піролідин-1-іл)ацетил)-І -валіл-М-(4-(ЦТ2-((3-((4-(6-(8-(1,3-бензотіазол-2- ілкарбамоїл)нафталін-2-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)уметилі/д-5, 7- диметилтрицикло!ї3.3.1.1257|дец-1-илюкси)етил|(2-сульфоетил)карбамоїлюкси)метиліфеніл)-Мо- карбамоїл-їі -орнітинамід;
М-(25)-2-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)-3-(4-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32- ундекаоксатетратриаконтан-34-ілокси)феніл|пропаноїл)-І -валіл-М-14-(112-(13-((4-16-(8-(1,3- бензотіазол-2г-ілкарбамоїл)нафталін-2-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1- ілуметилІ|-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.127)дец-1-ил)окси)етилі(2- сульфоетил)карбамоїліокси)метилІ|феніл)-М»-карбамоїл-і -орнітинамід;
М-((35,55)-3-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)-2-оксо-5-К(2- сульфоетокси)метилі|піролідин-1-іл)ацетил)-І -валіл-М-(4-(ЦТ2-((3-((4-(6-(8-(1,3-бензотіазол-2- ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1- ілуметил|-5,7-диметилтрицикло!/3.3.1.157|)дец-1-илюкси)етилі|(2- сульфоетил)карбамоїлоюкси)метиліІфеніл)-Ме-карбамоїл-і -орнітинамід; 60 М-(25)-2-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)-3-(4-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-
ундекаоксатетратриаконтан-34-ілокси)феніл|пропаноїл)-І -валіл-М-14-(112-(13-((4-16-(8-(1,3- бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н- піразол-1-іл)уметил|-5,7-диметилтрициклоїЇ3.3.1.157|дец-1-ил)окси)етилі(2- сульфоетил)карбамоїліокси)метилІфеніл)-М»-карбамоїл-і -орнітинамід; (65)-2,6-ангідро-6-(2-12-(Ц2-(13-((4-16-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)уметилі/д-5,7- диметилтрицикло!|3.3.1.157)|дец-1-ил)окси)етил|(2-сульфоетил)карбамоїл)окси)метилі-5-(1М-((2,5- діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)ацетил|/-І -валіл-ІЇ -аланілламіно)феніл)етил)-І -гулонова кислота; 3-Ц2-((3-(4-16-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)нафталін-2-іл|-2-карбоксипіридин-З-іл)-5- метил-1Н-піразол-1-іл)уметил/|-5,7-диметилтрициклоїЇ3.3.1.15Лдец-1-иліокси)етил1(14-(4-116-(2,5- діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-ілугексаноїл|іаміно)бутил)-2-(бета-О- глюкопірануронозилокси)бензил|оксижхарбоніл)ламіно)зїпропіл-бета-О-глюкопіранозидуронова кислота;
М-1(35,55)-3-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)-5-(метоксиметил)-2-оксопіролідин- 1- ілІацетил)-І -валіл-М-14-((Т2-(13-(4-76-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін- 2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1-ілуметилі/д-5, 7- диметилтрицикло!|3.3.1.12|дец-1-иліюкси)етил|(2-сульфоетил)карбамоїліюкси)метиліфеніл)-Ме- карбамоїл-їі -орнітинамід; (65)-2,6-ангідро-6-(2-12-(Ц2-(13-((4-16-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)уметилі/д-5,7- диметилтрицикло!|3.3.1.19-Лдец-1-иліюкси)етил|(2-сульфоетил)карбамоїлюкси)метилі-5-(1М-(6- (2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-І -валіл-І -аланіліаміно)феніл)етил)-І -гулонова кислота; 2-ЩЩ2-(3-(4-16-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-2- карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1-ілуметил)|-5, 7-диметилтрицикло!|3.3.1.157)дец-1- илюкси)етил|(2-сульфоетил)карбамоїл)окси)метил|-5-(4-1І3-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1- іл)упропаноїліаміно)бутил/феніл-бета-О-глюкопіранозидуронова кислота; 2-ЩЩ2-(3-(4-16-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-2- карбоксипіридин-З3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)уметил)|-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.157)дец-1-
Зо илюкси)етил|(2-сульфоетил)карбамоїліокси)метил|-5-(4-((25)-2-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н- пірол-1-іл)-3-(4-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-ундекаоксатетратриаконтан-34- ілокси)феніл|пропаноїліаміно)бутил|феніл-бета-О-глюкопіранозидуронова кислота; (65)-2,6-ангідро-6-(2-12-(Ц2-(13-((4-16-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)уметилі/д-5,7- диметилтрициклоїЇ3.3.1.157)дец-1-илюкси)етил|(-2-сульфоетил)карбамоїл)іокси)метилі|-5-| (М- (25)-2-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)-3-(1-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32- ундекаоксатетратриаконтан-34-ілокси)феніл|пропаноїл)-І -валіл-І -аланіл)аміно|феніл)етил)-Ї - гулонова кислота; 6-(8-(бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл)-3-(1-((3-(2-(((2-(2- (25,38,48,55,65)-6-карбокси-3,4,5-тригідрокситетрагідро-2Н-піран-2-іл)етил)-4-((5)-2-((5)-2-(2- ((35,55)-3-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)-2-оксо-5-(2-сульфоетокси)метил)піролідин-1- іллуацетамідо)-3-метилбутанамідо)пропанамідо)бензил)окси)карбоніл)(2- сульфоетил)аміно)етокси)-5, 7-диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4- іл)упіколінова кислота; 6-(8-(бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл)-3-(1-((3-(2-(((2- ((25,38,45,55,65)-6-карбокси-3,4,5-тригідрокситетрагідро-2Н-піран-2-іл)окси)-4-(4-(2-((35,55)-3- (2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)-2-оксо-5-((2-сульфоетокси)метил)піролідин-1- іллуацетамідо)бутил)бензил)окси)карбоніл)(2-сульфоетил)аміно)етокси)-5,7-диметиладамантан- 1-ілуметил)-5-метил-1Н-піразол-4-іл)піколінова кислота; 2-ЩЩ2-(3-(4-16-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-2- карбоксипіридин-З3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)уметил)|-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.157)дец-1- илюкси)етил|(2-сульфоетил)карбамоїл)окси)метил|-5-(4-1І3-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1- іл)яуацетиліамінодбутил)феніл-бета-О-глюкопіранозидуронова кислота; 2-Щ2-(3-(4-16-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)нафталін-2-іл|-2-карбоксипіридин-3-іл)-5- метил-1Н-піразол-1-іл)уметил/|-5,7-диметилтрициклоїЇ3.3.1.15Лдец-1-иліокси)етилі|(2- сульфоетил)карбамоїл)окси)метил|д|-5-(4-1(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол- 1- іл)яуацетиліамінодбутил)феніл-бета-О-глюкопіранозидуронова кислота; 2-Щ2-(3-(4-16-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)нафталін-2-іл|-2-карбоксипіридин-3-іл)-5- метил-1Н-піразол-1-іл)уметил/|-5,7-диметилтрициклоїЇ3.3.1.15Лдец-1-иліокси)етил)(2- бо сульфоетил)карбамоїл)окси)метил|-5-І(4-((25)-2-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)-3-|4-
(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-ундекаоксатетратриаконтан-34- ілокси)феніл|пропаноїліаміно)бутил|феніл-бета-О-глюкопіранозидуронова кислота;
М-К2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-ілулацетил/-Ї -валіл-М-14-(ЦТ2-(13-((4-16-(8-(1,3- бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н- піразол-1-іл)уметил|-5,7-диметилтрицикло!/3.3.1.12Ядец-1-ил)окси)етиліІ(2- сульфоетил)карбамоїл)окси)метил|-3-(4-карбоксибутил)феніл)-І -аланінамід; 2-ЩЩ2-(3-(4-16-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-2- карбоксипіридин-З3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)уметил)|-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.157)дец-1- илюкси)етил|(2-сульфоетил)карбамоїл)окси)метилі|-5-(3-1(3-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1- іллуацетил|аміно)пропілуфеніл-бета-О-глюкопіранозидуронова кислота; 6-І8-(1,3-Бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-ілІ-3-11-((3-2-(КЦ2- (щ(25,38,45,55,65)-6-карбокси-3,4,5-тригідрокситетрагідро-2Н-піран-2-іл|окси)-4-(4-Щ(2,5-діоксо- 2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)уацетиліаміно)бутил)бензил|оксихкарбоніл)(3-11,З-дигідрокси-2- (гідроксиметил)пропан-2-іл|аміно)-3-оксопропіл)аміно|етокси)-5, 7- диметилтрициклоїЇ3.3.1.157)дец-1-ил)метилі|-5-метил-1 Н-піразол-4-іліпіридин-2-карбонова кислота; 6-(8-(бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)нафталін-2-іл)-3-(1-((3-(2-((2-((25,38,45,55,65)-6- карбокси-3,4,5-тригідрокситетрагідро-2Н-піран-2-іл)окси)-4-(4-(2-((35,55)-3-(2,5-діоксо-2,5- дигідро-1 Н-пірол-1-іл)-2-оксо-5-(2-сульфоетокси)метил)піролідин- 1- іллуацетамідо)бутил)бензил)окси)карбоніл)(2-сульфоетил)аміно)етокси)-5,7-диметиладамантан- 1-ілуметил)-5-метил-1Н-піразол-4-іл)піколінова кислота; 2-ЩЩ2-(3-(4-16-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-2- карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1-ілуметил)|-5, 7-диметилтрицикло!|3.3.1.157)дец-1- илюкси)етилі(З-гідрокси-2-(гідроксиметил)пропілікарбамоїлюкси)метилі-5-(3-(((2,5-діоксо-2,5- дигідро-1Н-пірол-1-іл)яуацетиліаміно)пропіл)/феніл-бета-О-глюкопіранозидуронова кислота;
М-((35,55)-3-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)-2-оксо-5-К(2- сульфоетокси)метилі|піролідин-1-іл)ацетил)-І -валіл-М-(4-(ЦТ2-((3-((4-(6-(8-(1,3-бензотіазол-2- ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1- ілуметилІ|-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.127)дец-1-ил)окси)етилі(2- сульфоетил)карбамоїл)окси)метил|-3-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50- гептадекаоксатрипентаконт-52-ин-53-іл)феніл)-І -аланінамід;
М-((35,55)-3-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)-2-оксо-5-К(2- сульфоетокси)метилі|піролідин-1-іл)ацетил)-І -валіл-М-(4-(ЦТ2-((3-((4-(6-(8-(1,3-бензотіазол-2- ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1- ілуметил|-5,7-диметилтрицикло!/3.3.1.157|)дец-1-илюкси)етилі|(2- сульфоетил)карбамоїл)окси)метил|-3-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50- гептадекаоксатрипентаконтан-53-іл)феніл)-І -аланінамід; 2-ЩЩ2-(3-(4-16-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-2- карбоксипіридин-З3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)уметил)|-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.157)дец-1- илюкси)етилі((35)-3,4-дигідроксибутилІкарбамоїліокси)метил|-5-(3-113-(2,5-діоксо-2,5-дигідро- 1Н-пірол-1-іллацетиліамінозпропіл/уфеніл-бета-О-глюкопіранозидуронова кислота; 1-Щ2-(13-((4-16-І(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-2- карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1-ілуметил)|-5, 7-диметилтрицикло!|3.3.1.157)дец-1- илюкси)етиліцІ14-(4-Щ(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іллуацетил|іаміно)бутил)-2-(бета-О- глюкопірануронозилокси)бензил|оксихкарбоніл)аміно)-1,2-дідезокси-О-арабіно-гексит; 1-Щ2-(13-((4-16-І(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-2- карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1-ілуметил)|-5, 7-диметилтрицикло!|3.3.1.157)дец-1- илюкси)етиліцІ14-(4-Щ(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іллуацетил|іаміно)бутил)-2-(бета-О- глюкопірануронозилокси)бензилі|оксижарбоніл)аміно)-1,2-дідезокси-О-еритро-пентит;
М-К2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-ілулацетил/-Ї -валіл-М-14-(ЦТ2-(13-((4-16-(8-(1,3- бензотіазол-2г-ілкарбамоїл)нафталін-2-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1- ілуметилІ|-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.127)дец-1-ил)окси)етилі(2- сульфоетил)карбамоїл)окси)метил|-3-(27-(2,5,8,11,14,17,20,23-октаоксагексакосан-26-іл)- 2,5,8,11,14,17,20,23-октаокса-27-азатриаконтан-З0-ілІфеніл)у-І -аланінамід; (65)-2,6-ангідро-6-(2-12-((2-(3-(4-16-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)уметилі/д-5,7- диметилтрицикло!|3.3.1.19-ЛЯдец-1-иліюкси)етил|(2-сульфоетил)карбамоїлюкси)метилі|-5-(1М-
МК25)-3-ІЗ,4-біс(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-ундекаоксатетратриаконтан-34-ілокси)феніл|-2-(2,5- діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)пропаноїл|)-І -валіл-І -аланіл)іаміно)феніл)етил)-І -гулонова
Гс10) кислота;
М-К2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іллуацетил/|-М-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32- ундекаоксатетратриаконтан-34-іл)-бета-аланіл-ІЇ -валіл-М-74-(Т2-(13-(4-16-(8-(1,3-бензотіазол-2- ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1- ілуметилІ|-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.127)дец-1-ил)окси)етилі(2- сульфоетил)карбамоїл)окси)метил|-3-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50- гептадекаоксатрипентаконтан-53-іл)феніл)-І -аланінамід;
М-К2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іллуацетил/|-М-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32- ундекаоксатетратриаконтан-34-іл)-бета-аланіл-ІЇ -валіл-М-74-(Т2-(13-(4-16-(8-(1,3-бензотіазол-2- ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1- ілуметил|-5,7-диметилтрицикло!/3.3.1.157|)дец-1-илюкси)етилі|(2- сульфоетил)карбамоїлоюкси)метиліІфеніл)-Ме-карбамоїл-і -орнітинамід;
М-К2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-ілулацетил/-Ї -валіл-М-14-(ЦТ2-(13-((4-16-(8-(1,3- бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н- піразол-1-ілуметил|-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.137|)дец-1-иліокси)етил|(2- сульфоетил)карбамоїл)окси)метилі-3-(27-(2,5,8,11,14,17,20,23-октаоксагексакосан-26-іл)- 2,5,8,11,14,17,20,23-октаокса-27-азатриаконтан-З0-ілІфеніл)у-І -аланінамід;
М-1(35)-3-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)-3-(1-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35- додекаоксагептатриаконтан-37-іл)-1 Н-1,2,3-триазол-4-іл|Іпропаноїл)-Ї -валіл-М-14-(Ц1Т2-(13-((4-16-
ІВ-(1,93-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-іл)-5- метил-1Н-піразол-1-іл)уметил/|-5,7-диметилтрицикло!/3.3.1.127дец-1-ил)окси)етилі(2- сульфоетил)карбамоїлоюкси)метиліІфеніл)-Ме-карбамоїл-і -орнітинамід;
М-4((3А)-3-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)-3-(1-(2,5,68,11,14,17,20,23,26,29,32,35- додекаоксагептатриаконтан-37-іл)-1 Н-1,2,3-триазол-4-іл|Іпропаноїл)-Ї -валіл-М-14-(Ц1Т2-(13-((4-16-
ІВ-(1,93-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-іл)-5- метил-1Н-піразол-1-іл)уметил/|-5,7-диметилтрициклоїЇ3.3.1.15Лдец-1-иліокси)етил)(2- сульфоетил)карбамоїліокси)метилІфеніл)-М»-карбамоїл-і -орнітинамід; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-ілІ-3-(1-(13-(2-(((2-(2-
К25,38,48,55,65)-6-карбокси-3,4,5-тригідрокситетрагідро-2Н-піран-2-іл|стил)-4-(25)-2-(Щ(25)-2- ((2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)луацетил|аміно)-3- метилбутаноїліаміно)зупропаноїліаміноздбензил)окси|Їкарбонілі(3А,45,5Н)-3,4,5,6- тетрагідроксигексил|аміно)етокси|-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.157)|дец-1-ил)метил)-5-метил-1 Н- піразол-4-іл|Іпіридин-2-карбонова кислота; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-ілІ-3-(1-(13-(2-(((2-(2-
К25,38,48,55,65)-6-карбокси-3,4,5-тригідрокситетрагідро-2Н-піран-2-іл|єстилІ-4-(25)-2-(Ц(25)-2-
ІЧ(35,55)-3-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)-2-оксо-5-(2-сульфоетокси)метил|піролідин- 1- іллуацетил)аміно|-3-метилбутаноїл)аміно)пропаноїл|іаміно)бензил)окси|карбонілу(З А45,58)- 3,4,5,6-тетрагідроксигексилІаміно)етокси|-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.137|)дец-1-ил)метил)-5- метил-1Н-піразол-4-іл|Іпіридин-2-карбонова кислота; (65)-2,6-ангідро-6-(2-12-(Ц2-(13-((4-16-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)уметилі/д-5,7- диметилтрициклоїЇ3.3.1.157)|дец-1-ил)окси)етил|(2-сульфоетил)карбамоїл)окси)метилі-5-(1М-((2,5- діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)ацетил|д|-М-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32- ундекаоксатетратриаконтан-З34-іл)-бета-аланіл-| -валіл-І -аланіліаміно)феніл)етил)-І -гулонова кислота; (65)-2,6-ангідро-6-(2-12-(Ц2-(13-((4-16-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)уметилі/д-5,7- диметилтрицикло!|3.3.1.19-Лдец-1-иліюкси)етил|(2-сульфоетил)карбамоїлюкси)метилі-5-|(М-(2- (2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)-3-(1-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35- додекаоксагептатриаконтан-37-іл)-1 Н-1,2,3-триазол-4-іл|Іпропаноїл)-І -валіл-ї - аланіл)аміно|феніл)етил)-І -гулонова кислота; (65)-2,6-ангідро-6-(2-12-(Ц2-(13-((4-16-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)уметилі/д-5,7- диметилтрициклоїЇ3.3.1.157|дец-1-ил)окси)етил|(2-сульфоетил)карбамоїл)окси)метилі-5-|(М- ((35)-3-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)-3-(1-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35- додекаоксагептатриаконтан-37-іл)-1 Н-1,2,3-триазол-4-іл|Іпропаноїл)-І -валіл-ї - аланіл)аміно|феніл)етил)-І -гулонова кислота; (65)-2,6-ангідро-6-(2-12-(Ц2-(13-((4-16-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)уметилі/д-5,7- диметилтрицикло!|3.3.1.19-ЛЯдец-1-иліюкси)етил|(2-сульфоетил)карбамоїлюкси)метилі-5-|(М- 60 ((38)-3-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)-3-(1-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35-
додекаоксагептатриаконтан-37-іл)-1 Н-1,2,3-триазол-4-іл|Іпропаноїл)-І -валіл-ї - аланіл)аміно|феніл)етил)-І -гулонова кислота; (65)-2,6-ангідро-6-(2-12-(Ц2-(13-((4-16-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)уметилі/д-5,7- диметилтрициклоїЇ3.3.1.157|дец-1-ил)окси)етил|(2-сульфоетил)карбамоїл)окси)метилі-5-|(М- ((35)-3-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)-3-11-(3-сульфопропіл)-1Н-1,2,3-триазол-4- іл|Іпропаноїл)у-І -валіл-І -аланіл)аміно|феніл)етил)-І -гулонова кислота; (65)-2,6-ангідро-6-(2-12-(Ц2-(13-((4-16-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)уметилі/д-5,7- диметилтрициклоїЇ3.3.1.157)дец-1-илюкси)етил|(2-сульфоетил)карбамоїл)іокси)метил|-5-((М- ((38)-3-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)-3-(1-(З-сульфопропіл)-1 Н-1,2,3-триазол-4- іл|Іпропаноїл)у-І -валіл-І -аланіл)аміно|феніл)етил)-І -гулонова кислота; (65)-2,6-ангідро-6-(2-12-(Ц2-(13-((4-16-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)уметилі/д-5,7- диметилтрициклоїЇ3.3.1.157)|дец-1-ил)окси)етил|(2-сульфоетил)карбамоїл)окси)метилі-5-(1М-((2,5- діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іллуацетил|-М-(2-(2-сульфоетокси)етил|-бета-аланіл-і -валіл-і - аланіліаміно)феніл)етил)-І -гулонова кислота; 6-(8-К1,3-бензотіазол-2-іл)карбамоїлі|-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл)-3-(1-((3-(2-((2-(2-
К25,38,48,55,65)-6-карбокси-3,4,5-тригідроксиоксан-2-іл|Ііетил)-4-(25)-2-(25)-2-Щ(25)-2-(2,5- діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)-3-4-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32- ундекаоксатетратриаконтан-34-іл)окси|феніл)пропаноїл|аміно)-3- метилбутаноїліаміно)упропаноїліаміноуфеніл)метокси|карбоніл)(3А,45,5Н)-3,4,5,6- тетрагідроксигексил|аміно)етокси|-5,7-диметилтрициклої3.3.1.12Л|декан-1-ілуметил)-5-метил-1 Н- піразол-4-іл|Іпіридин-2-карбонова кислота; 2-1(2-(3-14-(6-18-(1,3-бензотіазол-2-іл)укарбамоїл|-3,4-дигідроїзохінолін-2(1Н)-іл)-2- карбоксипіридин-З-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1-іл|метил)-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.197|декан-1- іл)уокси|)етил/(35)-3,4-дигідроксибутилікарбамоїл)окси|метил)-3-(2-12-(2-(2,5-діоксо-2,5-дигідро- 1Н-пірол-1-іллуацетамідо|етокси)етокси)феніл-бета-О-глюкопіранозидуронова кислота; 2,6-ангідро-8-(2-4(2-(3-Ц4-(6-18-(1,3-бензотіазол-2-іл)укарбамоїл|-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1Н)-
Зо іл)-2-карбоксипіридин-3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1-іл|метил)-5,7- диметилтрициклоїЇ3.3.1.157|декан-1-іл)уокси|їЇетилу2-сульфоетил)карбамоїл|окси)метил)-5- ((795,825)-74-((2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)уацетил|-82-метил-7 7,80,83-триоксо-79- (пропан-2-іл)-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71-тетракозаокса- 74,78,81-триазатриоктаконтан-83-іл|Іаміно)феніл)|-7,8-дидезокси-І -гліцеро-І -гулооктонова кислота; 6-18-(1,3-бензотіазол-2-іл)укарбамоїл|-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1 Н)-ілу-3-71-((3-2-Ц(4-(1(25,55)- 2-ІЗ-«карбамоїламіно)пропіл|-10-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іллуацетил|-4,7-діоксо-5- (пропан-2-іл)-15-сульфо-13-окса-3,6,10-триазапентадеканан- 1- оїл|аміно)феніл)метокси|Їкарбоніл(2-сульфоеєетил)аміно|етокси)-5,7- диметилтрициклоїЇ3.3.1.157|декан-1-іл)уметил|-5-метил-1Н-піразол-4-іл)упіридин-2-карбонова кислота; 6-(8-(бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл)-3-(1-((3-(2-(((2-(2- (25,38,48,55,65)-6-карбокси-3,4,5-тригідрокситетрагідро-2Н-піран-2-іл)етил)-4-((5)-2-((5)-2-(2- ((35,55)-3-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)-2-оксо-5-(2-сульфоетокси)метил)піролідин-1- іллуацетамідо)-3-метилбутанамідо)пропанамідо)бензил)окси)карбоніл)((5)-3,4- дигідроксибутил)аміно)етокси)-5,7-диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1Н-піразол-4- іл)упіколінова кислота; 2,6-ангідро-8-(2-1(12-((3-14-(6-(8-К(1,3-бензотіазол-2-іл)укарбамоїлі|-3,4-дигідроізохінолін- 2(1Н)-іл)у-2-карбоксипіридин-3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1-іл|метил)-5,7- диметилтрициклоїЇ3.3.1.127)декан-1-іл)уокси|)етил)(35)-3,4- дигідроксибутилікарбамоїл)окси|метил)-5-1(25)-2-((25)-2-(2-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1- іллуацетамідо|-3-метилбутаноїл)аміно)пропаноїліаміно)феніл)-7,8-дидезокси-і -гліцеро-Ї - гулооктонова кислота; 2-1(2-(3-14-(6-18-(1,3-бензотіазол-2-іл)укарбамоїл|-3,4-дигідроїзохінолін-2(1Н)-іл)-2- карбоксипіридин-3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1-іл|метил)-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.197|)декан- 1- іл)уокси|)етил/(35)-3,4-дигідроксибутилікарбамоїл)окси|метил)-5-14-(2-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н- пірол-1-іля'ацетамідо|Ібутиліуфеніл-бета-О-глюкопіранозидуронова кислота; 6-18-(1,3-бензотіазол-2-іл)укарбамоїл|-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1 Н)-ілу-3-1-((3-2-Ц(4-(1(25)-5- (карбамоїламіно)-2-((25)-2-116-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)угексаноїл|аміно)-3- бо метилбутаноїліаміно)пентаноїліаміно)феніл)метокси)їкарбоніли2-сульфоетил)аміно|ацетамідо)-
5,7-диметилтрицикло!3.3.1.12Л|декан-1-ілуметил|-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)упіридин-2-карбонова кислота;
М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-Ї -валіл-М-14-(Т2-(13-((4-16-І8-(1,3- бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н- піразол-1-іл)уметил|-5,7-диметилтрициклоїЇ3.3.1.127|дец-1-ил)сульфаніл)етил)(2- сульфоетил)карбамоїліокси)метиліІ|феніл)-М»-карбамоїл-і -орнітинамід;
М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-Ї -валіл-М-(4-(1(3-73-((4-16-(8-(1,3- бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н- піразол-1-ілуметил|-5,7-диметилтрицикло/3.3.1.137|)дец-1-ил)пропіл)(2- сульфоетил|окси)метил)феніл|-М»-карбамоїл-ї -орнітинамід; 2-ЩЩ2-(3-(4-16-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-2- карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1-ілуметил)|-5, 7-диметилтрицикло!|3.3.1.137|дец-1- илюкси)етилі((35)-3,4-дигідроксибутиліІікарбамоїліокси)метил|-5-14-(((35,55)-3-(2,5-діоксо-2,5- дигідро-1 Н-пірол-1-іл)-2-оксо-5-((2-сульфоетокси)метилі|піролідин-1- іляуацетил)аміно|бутилуфеніл-бета-О-глюкопіранозидуронова кислота; 2,6-ангідро-8-(2-4(2-(3-Ц4-(6-18-(1,3-бензотіазол-2-іл)укарбамоїл|-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1Н)- іл)-2-карбоксипіридин-3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1-іл|метил)-5,7- диметилтрициклоїЇ3.3.1.157|декан-1-іл)уокси|)етилу2-сульфоетил)карбамоїл|окси)метил)-5-1|М- ((3А,55)-3-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)-2-оксо-5-(2-сульфоетокси)метил|піролідин-1- іліацетил)-І -валіл-Ї -аланіл|Іаміно)феніл)-7,8-дідезокси-І -гліцеро-І -гуло-октонова кислота; 2,6-ангідро-8-(2-(42-((3-114-(6-(8-К1,3-бензотіазол-2-іл)укарбамоїлі|-3,4-дигідроізохінолін- 2(1Н)-іл)у-2-карбоксипіридин-3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1-іл|метил)-5,7- диметилтрицикло!|3.3.1.19Лдекан-1-іл)/окси|етилу2-сульфоетил)карбамоїл|окси)метил)-5-(М- ((38,55)-3-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)-2-оксо-5-(41-оксо- 2,5,68,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38-тридекаокса-42-азатритетраконтан-43-іл)піролідин-1- іл|Іацетил/)-І -валіл-Ї -аланіл)аміно|феніл)-7,8-дидезокси-1І -гліцеро-іІ -гуло-октонова кислота; (65)-2,6-ангідро-6-(2-12-(Ц2-(13-((4-16-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-Н-піразол-1-іл)метилі|-5,7- диметилтрициклоїЇ3.3.1.157|дец-1-ил)окси)етилі|(35)-3,4-дигідроксибутилікарбамоїлюкси)метилі|-
Зо 5-(4М-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іллуацетил|-М-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32- ундекаоксатетратриаконтан-34-іл)-р-аланіл-І! -валіл-І| -аланіліаміно)феніл)етил)-І -гулонова кислота і (65)-2,6-ангідро-6-(2-12-(Ц2-(13-((4-16-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)уметилі/д-5,7- диметилтрициклоїЇ3.3.1.157)дец-1-илюкси)етилі((35)-3,4-дигідроксибутилІікарбамоїл)окси)метилі|- 5-(4М-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іллуацетил|-М-(2-(2-сульфоетокси)етил|-р-аланіл-і -валіл-
І -аланілламіно)феніл)етил)-І -гулонова кислота.
У деяких варіантах здійснення АОС або його фармацевтично прийнятної солі
О являє собою інгібітор Всі-хї, вибраний із групи, яка складається з наступних сполук, модифікованих таким чином, атом водню, який відповідає положенню Ж у структурній формулі (Па), (ПБ), (Пс) або (Па), відсутній, при цьому утворюється монорадикал:
Мм2.01, М2.02, М/2.03, Му/2.04, Му2.05, М/2.06, М/2.07, М/2.08, М/2.09, М/2.10, М/2.11, М2.12,
Му2.13, М/2.14, Му/2.15, М/2.16, Му2.17, М/2.18, М/2.19, М2.20, Му/2.21, 2.22, М2.23, 2.24, 2.25,
М2.26, М2.27, 2.28, М2.29, М2.30, М2.31, М2.32, М2.33, 2.34, М/2.35, М2.36, М2.37, М2.38,
Му2.39, М2.40, М/2.А1, М/2.42, 2.43, М/2.44, 2.45, 2.46, М/2.47, 2.48, МУ2.49, М/2.50, М2.51,
Мм2.52, М2.53, М2.54, М2.55, М2.56, М2.57, М/2.58, М/2.59, М2.60, М2.61, М2.62, М2.63, М2.64,
Му2.65, М2.66, М2.67, М/2.68, М2.69, М/2.70, М2.71, М2.72, 2.73, 2.74, ММ2.75, 2.76, 2.77,
Му2.78, М2.79, М2.80, М/2.81, М2.82, М2.83, МУ2.84, М2.85, МУ2.86, МУ2.87, УУ2.88, МУ2.89, УМ2.90 і
УМ2.91 та їх фармацевтично прийнятна сіль;
Ї вибраний із групи, яка складається з лінкерів ІМа.1-ІМа.8, ІМБ.1-ІМБ.19, ІМс.1-ІМсо.7, Іма.1-
ІмМа.4, Ма.1-Ма.12, Мр.1-МБ.10, Мсо.1-Ме.11, мМа.1-ма.6, Ме.1-Ме.2, Міа.1, Міс.1-МІс.2, МІа.1-мІа.4,
МПа.1-МПа.4, МІр.1-МІИр.8, МІПс.1-МІс.б, де кожний лінкер прореагував з антитілом, АБ, з утворенням ковалентно приєднаного фрагмента;
ЇК являє собою тіоетер; і т являє собою ціле число в діапазоні від 1 до 8.
У деяких варіантах здійснення АОС або його фармацевтично прийнятної солі
О являє собою інгібітор Всі-хї, вибраний із групи, яка складається з наступних сполук, модифікованих таким чином, атом водню, який відповідає положенню Ж у структурній формулі (Па), (ППБ), (Пс) або (Па), відсутній, при цьому утворюється монорадикал: бо 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-3-11-(3,5-диметил-7-2-
К2-сульфоетил)аміно|етоксиутрицикло!|3.3.1.13Лдец-1-ил)метилі|-5-метил-1 Н-піразол-4- іл)піридин-2-карбонова кислота; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-11-(3-2-К(2- карбоксиетил)аміно|етокси)-5,7-диметилтрициклої3.3.1.127|дец-1-ил)метил|-5-метил-1 Н-піразол- 4-іл)упіридин-2-карбонова кислота; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)нафталін-2-іл|-3-11-(3,5-диметил-7-2-(2- сульфоетил)аміно|етоксиутрицикло!|3.3.1.157)дец-1-ил)метилі|-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)піридин-2- карбонова кислота; 1-Щ2-(13-((4-16-І(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-2- карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1-ілуметил)|-5, 7-диметилтрицикло!|3.3.1.157)дец-1- илюкси)етиліаміно)-1,2-дидезокси-О-арабіногексит; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-(1-113-(2-(З-гідрокси-2- (гідроксиметил)пропіл|іаміно)етокси)-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.15|дец-1-ил|метил)-5-метил- 1Н-піразол-4-іл)піридин-2-карбонова кислота; 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-3-(1-13-(2-((35)-3,4- дигідроксибутил|аміно)етокси)-5,7-диметилтрицикло!їЇ3.3.1.127)дец-1-ил|метил)-5-метил-1 Н- піразол-4-іл)упіридин-2-карбонова кислота; та їх фармацевтично прийнятні солі;
Ї вибраний із групи, яка складається з лінкерів ІМБ.2, ІМс.5, ІМо.6, ІМо.7, ІМа.4, Мр.9, Мс.11,
МПа.1, МПа.3, Міс.1, Міс.4 і Міс.5 у закритій формі або у відкритій формі та їх фармацевтично прийнятної солі;
ЇК являє собою тіоетер; і т являє собою ціле число в діапазоні від 2 до 4.
Для утворення АОС малеїмідне кільце синтону (наприклад, синтонів, перелічених в таблиці В) може реагувати з антитілом АБ з утворенням ковалентного приєднання у вигляді або сукциніміду (закритої форми), або сукцинаміду (відкритої форми). Аналогічно, інші функціональні групи, наприклад ацетилгалогенід або вінілсульфон, можуть вступати в реакцію з антитілом АБ з утворенням ковалентно приєднаного фрагмента.
У певних варіантах здійснення АЮС або його фармацевтично прийнятна сіль вибрані з
Зо групи, яка складається із АБА-С7, АБА-ТХ, АБА-ТМ, АБА-УУ, АрРА-АДА, АБА-ААО, АБВ-С2, АЬВ-
ТХ, АБВ-ТМ, АБВ-УУ, АЬБВ-ААО, Ара-С7, Ара-тх, Ара-гМм, Ара-муу, Ара-ААА, Ара-ААр, АБК-
С7, АБК-ТХ, АБК-ТМУ, АБК-УУ, АБК-ААДА, АБК-ААО, де С2, ТХ, ТУ, УУ, ААА і ААО являють собою синтони, розкриті в таблиці В, і при цьому кон'юговані синтони знаходяться у відкритій або закритій формі.
В одному варіанті здійснення АОС або його фармацевтично прийнятна сіль являє собою: шк у
МН ЗХ т
З С ГУ о237оН н : Ге) н о М о)
М й фонах -ї о їй Мо ши ТОН б7о тд в: нм о М
З
(І), де т дорівнює 2, Ар являє собою або антитіло до ПВ7-НЗ, де антитіло до пПВ7-НЗ містить домен СОКЗ важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО І
МО: 35, домен СОК2 важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під
ЗБЕО ІО МО: 34, і домен СОКІ важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮ МО: 33; і домен СОКЗ легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під ЗЕО ІЮ МО: 39, домен СОК2 легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під ЗЕО ІЮО МО: 38, і домен СОК'1 легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під ЗЕО ІО МО: 37; або антитіло до пПВ7-НЗ, де антитіло до ПНВ7НЗ містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮ МО: 147, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮ МО: 144; або антитіло до ПВ7-НЗ, де антитіло до ПВ7-НЗ містить важкий ланцюг, який містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮО МО: 168, і легкий ланцюг, який містить амінокислотну послідовність, викладену під БЕО ІЮО МО: 169.
В одному варіанті здійснення АОС або його фармацевтично прийнятна сіль являє собою:
МН би 2 дь
МН З т
І С ува о-Б7оН нон оч о
МА М м ван
Я ові о ві о
М. Му ТОН п о і с нм о М
З я (), де т дорівнює 2, Ар являє собою або антитіло до ПВ7-НЗ, де антитіло до пПВ7-НЗ містить домен СОКЗ важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО І
МО: 12, домен СОК2 важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під
ЗЕБЕО ІЮО МО: 140, і домен СОКІ важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮ МО: 10; ії домен СОКЗ легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під ЗЕО ІЮ МО: 15, домен СОК2 легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під зЕО ІЮ МО: 7, і домен СОКІ1 легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під ЗЕО ІЮ МО: 136; або антитіло до пВ7-НЗ, де антитіло до НВ7НЗ містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮ МО: 139, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮ МО: 135; або антитіло до ПВ7-НЗ, де антитіло до ПВ7-НЗ містить важкий ланцюг, який містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮО МО: 170, і легкий ланцюг, який містить амінокислотну послідовність, викладену під БЕО ІЮО МО: 171.
В одному варіанті здійснення АОС або його фармацевтично прийнятна сіль являє собою: о. МН ваш в дь
МН о С ною "
Х о-57оН ноз 9 н нм" Зо
М А М м вання о ( о. о в
М- ів;
М. щи ТОН пл о
М Ст нм о М ів (і),
де т дорівнює 2, Ар являє собою або антитіло до ПВ7-НЗ, де антитіло до пПВ7-НЗ містить домен СОКЗ важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО І
МО: 35, домен СОК2 важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під
ЗБЕО ІО МО: 34, і домен СОКІ важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮ МО: 33; і домен СОКЗ легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під ЗЕО ІЮ МО: 39, домен СОК2 легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під ЗЕО ІЮО МО: 38, і домен СОК'1 легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під ЗЕО ІО МО: 37; або антитіло до пПВ7-НЗ, де антитіло до ПНВ7НЗ містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮ МО: 147, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮ МО: 144; або антитіло до ПВ7-НЗ, де антитіло до ПВ7-НЗ містить важкий ланцюг, який містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮО МО: 168, і легкий ланцюг, який містить амінокислотну послідовність, викладену під БЕО ІЮО МО: 169.
В одному варіанті здійснення АОС або його фармацевтично прийнятна сіль являє собою: шк і й АВ о щ ною т о-57оН нот о н нм" то
МА М тм клани
Осн
М М. гін! пл Ге!
М я Сн нм" о М. і ї
З
(і), де т дорівнює 2, Ар являє собою або антитіло до ПВ7-НЗ, де антитіло до пПВ7-НЗ містить домен СОКЗ важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО І
МО: 12, домен СОК2 важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під
ЗЕБЕО ІЮО МО: 140, і домен СОКІ важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮ МО: 10; і домен СОКЗ легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під ЗЕО ІЮ МО: 15, домен СОК2 легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під зЕО ІЮ МО: 7, і домен СОКІ1 легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під ЗЕО ІЮ МО: 136; або антитіло до пВ7-НЗ, де антитіло до ПНВ7НЗ містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮ МО: 139, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮ МО: 135; або антитіло до ПВ7-НЗ, де антитіло до ПВ7-НЗ містить важкий ланцюг, який містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮО МО: 170, і легкий ланцюг, який містить амінокислотну послідовність, викладену під БЕО ІЮО МО: 171.
В одному варіанті здійснення АОС або його фармацевтично прийнятна сіль являє собою:
дь оон о 5 Ат т о "в но: о де дк ко й А оо (о) (в) (о)
Х що о й
МУ М и о 9- ин:
Ге! ба о он он он (Ії), де т дорівнює 2, Ар являє собою або антитіло до ПВ7-НЗ, де антитіло до пПВ7-НЗ містить домен СОКЗ важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО І
МО: 35, домен СОК2 важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під
ЗБЕО ІО МО: 34, і домен СОКІ важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮ МО: 33; і домен СОКЗ легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під ЗЕО ІЮ МО: 39, домен СОК2 легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під ЗЕО ІЮО МО: 38, і домен СОК'1 легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під ЗЕО ІО МО: 37; або антитіло до пВ7-НЗ, де антитіло до ПНВ7НЗ містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮ МО: 147, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮ МО: 144; або антитіло до ПВ7-НЗ, де антитіло до ПВ7-НЗ містить важкий ланцюг, який містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮО МО: 168, і легкий ланцюг, який містить амінокислотну послідовність, викладену під БЕО ІЮО МО: 169.
В одному варіанті здійснення АОС або його фармацевтично прийнятна сіль являє собою:
АЬ о.2 он о У Ал т о 7з но І о ще во пеФувнавиВ в нео р з отр (в) (в) (о)
Ж | р, Ге) (Ф)
М7в М и о, - ок
Ге) - - о он он он (Ії), де т дорівнює 2, Ар являє собою або антитіло до ПВ7-НЗ, де антитіло до пПВ7-НЗ містить домен СОКЗ важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО І
МО: 12, домен СОК2 важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під
ЗЕБЕО ІЮО МО: 140, і домен СОКІ важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮ МО: 10; і домен СОКЗ легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під ЗЕО ІЮ МО: 15, домен СОК2 легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під зЕО ІЮ МО: 7, і домен СОКІ1 легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під ЗЕО ІЮ МО: 136; або антитіло до пПВ7-НЗ, де антитіло до ПНВ7НЗ містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка містить амінокислотну
Ко) послідовність, викладену під 5ЕО ІЮ МО: 139, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО І МО: 135; або антитіло до ПВ7-НЗ, де антитіло до ПВ7-НЗ містить важкий ланцюг, який містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮО МО: 170, і легкий ланцюг, який містить амінокислотну послідовність, викладену під БЕО ІЮО МО: 171.
В одному варіанті здійснення АОС або його фармацевтично прийнятна сіль являє собою:
АЬ
(о) (о)
Оп,оНн 6) о 5 но: 9 н й 8 т
МА М М по Фвнари вся нм" Зо й орг
Ж |! М Ге) (е)
М М и (о) о ваше; о он о Ве он он (М), де т дорівнює 2, Ар являє собою або антитіло до ПВ7-НЗ, де антитіло до пПВ7-НЗ містить домен СОКЗ важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО 10
МО: 35, домен СОК2 важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під
ЗБЕО ІО МО: 34, і домен СОКІ важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮ МО: 33; і домен СОКЗ легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під ЗЕО ІЮ МО: 39, домен СОК2 легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під ЗЕО ІЮО МО: 38, і домен СОК'1 легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під ЗЕО ІО МО: 37; або антитіло до пВ7-НЗ, де антитіло до ПНВ7НЗ містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮ МО: 147, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність, викладену під ЗЕО ІЮ МО: 144; або антитіло до ПВ7-НЗ, де антитіло до ПВ7-НЗ містить важкий ланцюг, який містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮО МО: 168, і легкий ланцюг, який містить амінокислотну послідовність, викладену під БЕО ІЮО МО: 169.
В одному варіанті здійснення АОС або його фармацевтично прийнятна сіль являє собою:
АЬ о (о) оп,он (в! о 5 но: 9 н Мах У т
М.М Мих М М збе» ад цу ея нм Зо и че ай
Ж | М Ге) (в)
МВ М и (о) о ваш; о Сон о у Тон он он (ім), де т дорівнює 2, Ар являє собою або антитіло до ПВ7-НЗ, де антитіло до пПВ7-НЗ містить домен СОКЗ важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під ЗЕО ІЮ
МО: 12, домен СОК2 важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під
ЗЕБЕО ІЮО МО: 140, і домен СОКІ важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮ МО: 10; і домен СОКЗ легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під ЗЕО ІЮ МО: 15, домен СОК2 легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під зЕО ІЮ МО: 7, і домен СОКІ1 легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під ЗЕО ІЮ МО: 136; або антитіло до пПВ7-НЗ, де
Зо антитіло до НВ7НЗ містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮ МО: 139, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність, викладену під ЗЕО ІЮ МО: 135; або антитіло до ПВ7-НЗ, де антитіло до ПВ7-НЗ містить важкий ланцюг, який містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮО МО: 170, і легкий ланцюг, який містить амінокислотну послідовність, викладену під БЕО ІЮО МО: 171.
В одному варіанті здійснення АОС або його фармацевтично прийнятна сіль являє собою: он он о о о не (в) н І н М т й Ге Щі М. о тр о й нм Зо й Ср
Ж | р, Ге! (в) мВ М и (о) 9, я о он о у Тон он он (м), де т дорівнює 2, Ар являє собою або антитіло до ПВ7-НЗ, де антитіло до пПВ7-НЗ містить домен СОКЗ важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО 10
МО: 35, домен СОК2 важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під
ЗБЕО ІО МО: 34, і домен СОКІ важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮ МО: 33; і домен СОКЗ легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під ЗЕО ІЮ МО: 39, домен СОК2 легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під ЗЕО ІЮО МО: 38, і домен СОК'1 легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під ЗЕО ІО МО: 37; або антитіло до пВ7-НЗ, де антитіло до ПНВ7НЗ містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮ МО: 147, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність, викладену під ЗЕО ІЮ МО: 144; або антитіло до ПВ7-НЗ, де антитіло до ПВ7-НЗ містить важкий ланцюг, який містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮО МО: 168, і легкий ланцюг, який містить амінокислотну послідовність, викладену під БЕО ІЮО МО: 169.
В одному варіанті здійснення АОС або його фармацевтично прийнятна сіль являє собою: он он о о З й (о) Н Е Н М т
Мои тон ве у з фе) (о) (о) (в) нео ях орг
Ж | р, Го! (Ф)
МВ М и (в) 9, ваш; об он о Ве он он (м), де т дорівнює 2, Ар являє собою або антитіло до ПВ7-НЗ, де антитіло до пПВ7-НЗ містить домен СОКЗ важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО 10
МО: 12, домен СОК2 важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під
ЗЕБЕО ІЮО МО: 140, і домен СОКІ важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮ МО: 10; і домен СОКЗ легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під ЗЕО ІЮ МО: 15, домен СОК2 легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під зЕО ІЮ МО: 7, і домен СОКІ1 легкого ланцюга, який
Ко) містить амінокислотну послідовність, викладену під ЗЕО ІЮ МО: 136; або антитіло до пПВ7-НЗ, де антитіло до ПНВ7НЗ містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮ МО: 139, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність, викладену під ЗЕО І МО: 135; або антитіло до ПВ7-НЗ, де антитіло до ПВ7-НЗ містить важкий ланцюг, який містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮО МО: 170, і легкий ланцюг, який містить амінокислотну послідовність, викладену під БЕО ІЮО МО: 171.
В одному варіанті здійснення АОС або його фармацевтично прийнятна сіль являє собою:
он о он о У А х « Її М Мн т
М. М М ща Мо шо но нм Зо й о
Ж зм Ге) о)
МВ М и (о) о оч; о он о тон он он (мі), де т дорівнює 2, Ар являє собою або антитіло до ПВ7-НЗ, де антитіло до пПВ7-НЗ містить домен СОКЗ важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під ЗЕО ІЮ
МО: 35, домен СОК2 важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під
ЗБЕО ІО МО: 34, і домен СОКІ важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮ МО: 33; і домен СОКЗ легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під ЗЕО ІЮ МО: 39, домен СОК2 легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під ЗЕО ІЮО МО: 38, і домен СОК'1 легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під ЗЕО ІЮО МО: 37; або антитіло до пВ7-НЗ, де антитіло до ПНВ7НЗ містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮ МО: 147, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮ МО: 144; або антитіло до ПВ7-НЗ, де антитіло до ПВ7-НЗ містить важкий ланцюг, який містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮО МО: 168, і легкий ланцюг, який містить амінокислотну послідовність, викладену під БЕО ІЮО МО: 169.
В одному варіанті здійснення АОС або його фармацевтично прийнятна сіль являє собою: он о он о У А і х «е А М Мн т
М.М М ща М. о ер но нм Зо ак В
Ж | р, Ге) (Ф)
МВ М 4 (о) о о, о он о т тон он он (мі), де т дорівнює 2, Ар являє собою або антитіло до ПВ7-НЗ, де антитіло до пПВ7-НЗ містить домен СОКЗ важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під ЗЕО ІЮ
МО: 12, домен СОК2 важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під
ЗЕБЕО ІЮО МО: 140, і домен СОКІ важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮ МО: 10; і домен СОКЗ легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під ЗЕО ІЮ МО: 15, домен СОК2 легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під зЕО ІЮ МО: 7, і домен СОКІ1 легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність, викладену під ЗЕО ІО МО: 136; або антитіло до пПВ7-НЗ, де
Зо антитіло до НВ7НЗ містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮ МО: 139, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮ МО: 135; або антитіло до ПВ7-НЗ, де антитіло до ПВ7-НЗ містить важкий ланцюг, який містить амінокислотну послідовність, викладену під 5ЕО ІЮО МО: 170, і легкий ланцюг, який містить амінокислотну послідовність, викладену під БЕО ІЮО МО: 171.
Інгібітори Всі-хі, у том числі "діючі засоби" та синтони, і способи їх одержання описані в патентному документі 05 20160339117 (АррмМіє Іпс.), який включений у даний документ за допомогою посилання.
Ш.А.4. Способи синтезу інгібіторів ВсІі-хЇ АОС
Інгібітори Всі-х! і синтони, описані в даному документі, можна синтезувати із застосуванням стандартних відомих методик органічної хімії. Загальні схеми синтезу інгібіторів Всі-хі. і синтонів, які можуть застосуватися як такі або в модифікованому вигляді для синтезу в повному обсязі інгібіторів ВсіІ-хі і синтонів, описаних у даному документі, наведені нижче. Конкретні способи синтезу ілюстративних інгібіторів ВсіІ-хЇ ії синтонів, які можуть бути застосовними як настанова, наведені в розділі "приклади". Аналогічним чином, АОС можуть бути одержані за допомогою стандартних способів, таких як способи, аналогічні описаним у Натрбіей еї аї., 2004, "ЕНесів ої Огид І оадіпа оп Ше Апійштог Асіїмйу ої а Мопосіопа! Апіїбоду Огид Сопійдаїте", Сііп.
Сапсег Вез. 10:7063-7070; Рогопіпа єї аї., 2003, "ОемеІортепі ої роїєпі апа підніу ейісасіои5 топосіопа! апіїбоду ашйгівіайп соп)идаїе5 їТог сапсег Шегару," Маї. Віоїесппої. 21(7):778-784; і
Егапсівсо еї аї., 2003, Віоса 102:1458-1465. Наприклад, АОС із чотирма молекулами лікарського засобу на антитіло можна одержувати за допомогою часткового відновлення антитіла надлишком відновлювального реагенту, такого як ОТТ або ТСЕР, при 37"С протягом 30 хв, а потім заміни буфера на буфер за допомогою елюювання через смолу ЗЕРНАОЕХ? а-25 із застосуванням 1 мМ ОТРА у ОРВ5. Елюент розбавляли додатковою кількістю ОРВ5, а тіольну концентрацію антитіла можна виміряти із застосуванням 5,5'-дитіобіс(2-нітробензойної кислоти)
Іреагент Елмана)|. Додають надлишок, наприклад, 5-разовий, синтону лінкер-лікарський засіб при 4"С протягом 1 год, а реакцію кон'югації можна гасити шляхом додавання значного надлишку, наприклад, 20-разового, цистеїну. Одержану в результаті суміш АОС можна очищувати за допомогою ЗЕРНАОЕХ 0-25, урівноваженої в РВ5, для видалення синтонів, що не прореагували, знесолювати за необхідності та очищувати із застосуванням ексклюзійної хроматографії. Одержані в результаті АОС потім можна піддавати стерилізувальній фільтрації, наприклад через 0,2 мкм фільтр, і ліофілізувати за необхідності для зберігання. У деяких варіантах здійснення всі міжланцюгові цистеїнові дисульфідні зв'язки замінюють кон'югатами лінкера та лікарського засобу. Один варіант здійснення стосується способу одержання АОС, який передбачає приведення синтонів, описаних у даному документі, в контакт з антитілом в умовах, за яких синтон ковалентно зв'язується з антитілом.
Приклади вищезазначених інгібіторів Всі-хЇ, лінкерів та їх синтонів, а також способи їх одержання можна знайти в публікації патенту США Мо 05 2016/0339117, повний уміст якої включено за допомогою посилання в даному документі.
Конкретні способи синтезу ілюстративних АЮС, які можна застосовувати для синтезу повного діапазону АОС, описаних у даному документі, наведені в розділі "приклади".
ІШ.А.5. Загальні способи синтезування інгібіторів Всі-х!.
На схемах нижче різні замісники Аг, Аг, 2", ВУ, В'З, Д" а і Д""» визначені в розділі "детальний опис". 5.1.1. Синтез сполуки (6)
Схема 1 71 ) 50)
Ві Вг (С жн Вг -
Ж, он о -- 3 -- є----- 71 -т-- Яя-.5 но вів но ви См вв ва Ге; ва ГРУ Ва (3) що що щ о (9) 6) -- -- 1 ек -К о ко дод» щ- ва І ва вла ГЕ) Ме б) Ме (6)
Синтез проміжної сполуки (б) описаний на схемі 1. Сполуку (1) можна обробляти за допомогою ВНз"ТНЕ з одержанням сполуки (2). Зазвичай реакцію здійснюють за температури навколишнього середовища в розчиннику, такому як без обмеження тетрагідрофуран. Сполуку ек
С учн (3) можна одержати шляхом обробки сполуки (2) за допомогою за наявності ціанометилентрибутилфосфорану. Зазвичай реакцію здійснюють за підвищеної температури в розчиннику, такому як без обмеження толуол. Сполуку (3) можна обробити етан-1,2-діолом за наявності основи, такої як без обмеження триєтиламін, з одержанням сполуки (4). Зазвичай реакцію здійснюють за підвищеної температури, і реакцію можна здійснювати в умовах мікрохвильового випромінювання. Сполуку (4) можна обробити за допомогою сильної основи, такої як без обмеження н-бутиллітій, із наступним додаванням йодметану з одержанням сполуки (5). Додавання та реакцію, як правило, здійснюють у розчиннику, такому як без обмеження тетрагідрофуран, за зниженої температури перед нагріванням до температури навколишнього середовища з метою обробки. Сполуку (5) можна обробити М-йодсукцинімідом з одержанням сполуки (6). Зазвичай реакцію здійснюють за температури навколишнього середовища в розчиннику, такому як без обмеження М,М-диметилформамід. 5.1.2. Синтез сполуки (12)
Схема 2
Ві Ме: он он дея во речи -8-- дод вла Ва вла 2 вла (о) аб ау аз
Синтез проміжної сполуки (12) описаний на схемі 2. Сполуку (3) можна обробити за допомогою три-н-бутилалілстанану за наявності 2пСІ»-ЕСБО або М, М'-азоіїзобутиронітрилу (АІВМ) з одержанням сполуки (10) (Уататоїйо еї аї!., 1998, Неїегосусіеє5 47:765-780). Зазвичай реакцію здійснюють при -78"С в розчиннику, такому як без обмеження дихлорметан. Сполуку (10) можна обробити в стандартних умовах, відомих із рівня техніки, для гідроборування/окислення з одержанням сполуки (11). Наприклад, обробка сполуки (10) реагентом, таким як ВНз-ТНЕ у розчиннику, такому як без обмеження тетрагідрофуран, із подальшою обробкою проміжного алкілборанового адукту окиснювачем, таким як без обмеження пероксид водню, за наявності основи, такої як без обмеження гідроксид натрію, забезпечить одержання сполуки (11) (Вгом/п еї аІ., 1968, У. Ат. Спет. бос. 86:397). Як правило, додавання ВНз:ТНЕ проводять за низької температури перед нагріванням до температури навколишнього середовища, після чого
Зо додають пероксид водню й гідроксид натрію з одержанням спиртового продукту. Сполуку (12) можна одержати відповідно до схеми 1, описаної раніше для сполуки (6). 5.1.3. Синтез сполуки (15)
Схема З
Вг вн ду вит-7ОН щі о 25 ОХ свт у т. у пу Я су що кв що Сх вл ко Масв вон в; Ва що а, вия в з5 в) (аз) ал) ах
Синтез проміжної сполуки (15) описаний на схемі 3. Сполуку (3) можна вводити в реакцію з тіосечовиною в суміші розчинників із оцтової кислоти та 4895 водного розчину НВг при 100"7С з одержанням проміжної сполуки, яку можна потім обробляти гідроксидом натрію в суміші розчинників, таких як без обмеження 2095 об./06б. етанол у воді, з одержанням сполуки (13).
Сполуку (13) можна вводити в реакцію з 2-хлоретанолом у присутності основи, такої як без обмеження етоксид натрію, з одержанням сполуки (14). Зазвичай реакцію здійснюють за температури навколишнього середовища або за підвищених температур у розчиннику, такому як без обмеження етанол. Сполуку (15) можна одержати відповідно до схеми 1, описаної раніше для сполуки (б). 5.1.4. Синтез сполуки (22)
Схема 4 я ч -- їй - ве а С СУКА с ТД сш а ск а Як не лу твих мажу БИ ВИ ВАВ О реху ФПУ в Та сви вік щі ГННУ щ вит щі
Пе п НЕ! В ке ря Єх сю ща ов й Ж. вик 7 діж б х іх см ЕКЗ іх
Сом омури
Синтез сполуки (22) описаний на схемі 4. Сполуку (16) можна вводити в реакцію з йодметаном у присутності основи, такої як без обмеження карбонат калію, з одержанням сполуки (17). Зазвичай реакцію здійснюють за температури навколишнього середовища або за підвищених температур у розчиннику, такому як без обмеження ацетон або М,М- диметилформамід. Сполуку (17) можна вводити в реакцію за фотохімічних умов із тозилціанідом у присутності бензофенону з одержанням сполуки (18) (див. Капіїо еї аї., 2011,
Ог9у. Гей, 13:5928-5931). Зазвичай реакцію проводять за температури навколишнього середовища в розчиннику, такому як без обмеження ацетонітрил або бензол, із застосуванням ртутної лампи із середнім тиском КіКо 100 Вт як джерела світла. Сполуку (18) можна вводити в реакцію з гідроксидом літію в системі розчинників, такій як без обмеження суміш води та тетрагідрофурану або води та метанолу, з одержанням сполуки (19). Сполуку (19) можна обробляти за допомогою ВНа"ТНЕ з одержанням сполуки (20). Зазвичай реакцію здійснюють за температури навколишнього середовища в розчиннику, такому як без обмеження тетрагідрофуран. Сполуку (21) можна одержати шляхом обробки сполуки (20) за допомогою -х у с у присутності ціанометилентрибутилфосфорану. Зазвичай реакцію здійснюють за підвищеної температури в розчиннику, такому як без обмеження толуол. Сполуку (21) можна обробляти М-йодсукцинімідом з одержанням сполуки (22). Зазвичай реакцію здійснюють за температури навколишнього середовища в розчиннику, такому як без обмеження М,М- диметилформамід. 5.1.5. Синтез сполуки (24)
Схема 5 н
СМ МН; М. Во 1 | 1 1 ду іннінінннь ее -- - --ж Кен не не дО.
І ве 0 (223) І ва (23) І вна (8
Синтез піразольної сполуки (24) описаний на схемі 5. Сполуку (22) можна обробляти відновлювальним засобом, таким як без обмеження алюмогідрид літію, у розчиннику, такому як без обмеження діетиловий етер або тетрагідрофуран, з одержанням сполуки (23). Зазвичай
Зо реакцію здійснюють при 0"С перед нагріванням до температури навколишнього середовища або підвищеної температури. Сполуку (23) можна вводити в реакцію з ди-трет- бутилдикарбонатом у стандартних умовах, описаних у даному документі або в літературі, з одержанням сполуки (24). 5.1.6. Синтез сполуки (24а)
Схема 6 о ура
СМ сон нм о 1 1 1
Де - - - - жк ко Де - Де дО не не
І Ва 0 (22а) І вла (23а) І Ва 0 (заг)
Синтез проміжної сполуки (24а) описаний на схемі 6. Сполуку (22а) можна піддавати гідролізу із застосуванням умов, описаних у літературі, з одержанням сполуки (23а). Зазвичай реакцію проводять у присутності гідроксиду калію в розчиннику, такому як без обмеження етиленгліколь, за підвищених температур (див. Робетіз вї аї!., 1994, 3. Огуд. Спет. 59:6464-6469;
Мапа єї аії, 2013, Ог9. Ген, 15:690-693). Сполуку (24а) можна одержати зі сполуки (2За) за допомогою перегрупування Курціуса із застосуванням умов, описаних у літературі. Наприклад, сполуку (23а) можна вводити в реакцію з оазидом натрію у присутності броміду тетрабутиламонію, трифлату цинку (Ії) і ди-трет-бутилдикарбонату з одержанням сполуки (24а) (див. І ебеї еї аї., Огд. Гей, 2005, 7:4107-4110). Зазвичай реакцію проводять за підвищених температур, переважно при 40-507С, у розчиннику, такому як без обмеження тетрагідрофуран. 5.1.7. Синтез сполуки (29)
Схема 7 ї Бод яв; 65 о сн нн - 25 юф (о) о ра Се ок чо7зо (25) зо зо ст) ДОВ зо7хо - в'? с9) а
Як показано на схемі 7, сполуки формули (27) можна одержати шляхом здійснення реакції сполук формули (25) із трет-бутил-3-бром-6-фторпіколінатом (26) у присутності основи, такої як без обмеження М,М-діззопропілетгиламін або триетиламін. Зазвичай реакцію здійснюють в інертній атмосфері за підвищеної температури в розчиннику, такому як без обмеження диметилсульфоксид. Сполуки формули (27) можна вводити в реакцію з 4,4,5,5-тетраметил- 1,3,2-діоксабороланом (28) в умовах борилювання, описаних у даному документі або в літературі, з одержанням сполук формули (29). 5.1.8. Синтез сполуки (38)
Схема 8 он / у. тора
М.М йо. Тл ФО он оо 2 в/о м оо йо 977
Ї (о) У У-С Ї в | ц.
І
81) -Мо (о) (в) 34 5-6 Об
ОП | М
ОО ву ця й ото С т
М (35) М й 3
АгМНа о о й А М в. Моє
Мо у МО ного йо 977 Мно я т і Агі 28) ; (6) М в
На схемі 8 описаний спосіб одержання проміжних сполук, які містять -Ми (нуклеофіл), прив'язаний до адамантану та піколінату, захищеним у вигляді трет-бутилового естеру. Сполуку (30) можна вводити в реакцію зі сполукою (31) в умовах реакції сполучення Сузукі, описаних у даному документі або в літературі, з одержанням метильної сполуки (32). Сполуку (32) можна обробляти основою, такою як без обмеження триетиламін, потім метансульфонілхлоридом з одержанням сполуки (33). Зазвичай додавання здійснюють за низької температури перед нагріванням до температури навколишнього середовища в розчиннику, такому як без обмеження дихлорметан. Сполуку (33) можна вводити в реакцію з нуклеофілом (Ми) формули (34) з одержанням сполуки (35). Приклади нуклеофілів включають без обмеження азид натрію, метиламін, аміак і ди-трет-бутилімінодикарбонат. Сполуку (17) можна вводити в реакцію з гідроксидом літію з одержанням сполуки (36). Зазвичай реакцію здійснюють за температури навколишнього середовища в розчиннику, такому як без обмеження тетрагідрофуран, метанол, вода або їх суміші. Сполуку (36) можна вводити в реакцію зі сполукою (37) в умовах амідування, описаних у даному документі або вільно доступних у літературі, з одержанням сполук формули (38). 5.1.9. Синтез сполук (42) і (43)
Схема 9 твор, о
Ода Зо 5- охиАс Ми о МН о, ТВОР5 (е) 2 5 о о. ДАР М 4-МН д (о) ж зи со
Аг Ми | (40) | Мн
І 2 о дин КАМ С
М Ш-3ї..-- І 2 Те! (9) х (41) і) 1) свв о. ТЕА 2) ТМ5Вг о, Гон ом он () Р е) В ої ДАМ тУ о. ДАМ ТУ з | їх он МН 5 і с он МН
МН -- С Мн - С 12 1-4 й ще й ооо
М М
(42) (43)
На схемі 9 показані ілюстративні способи, застосовні для одержання солюбілізованих інгібіторів Всі-хі. Інгібітори ВсІ-хї можна синтезувати із застосуванням загального підходу модифікування первинного аміну за допомогою солюбілізувальної групи, а потім приєднання одержаного в результаті вторинного аміну до лінкера, як описано на наступних схемах.
Наприклад, сполуку (41) можна одержати шляхом здійснення реакції сполуки (39) зі сполукою (40). Зазвичай реакцію здійснюють за температури навколишнього середовища в розчиннику, такому як без обмеження М,М-диметилформамід. Сполуку (41) можна вводити в реакцію з трифтороцтовою кислотою з одержанням сполуки (43). Зазвичай реакцію здійснюють за температури навколишнього середовища в розчиннику, такому як без обмеження дихлорметан.
Інший приклад, показаний на схемі 9, являє собою реакцію сполуки (39) з діетилвінілфосфонатом із подальшою реакцією з бромтриметилсиланом і алілтриметилсиланом із одержанням сполуки (42). Інші приклади введення солюбілізувальних груп в інгібітори Всі-хі, описані в даному документі, включають без обмеження реакції відновлювального амінування, реакції алкілування та реакції амідування. 5.1.10. Синтез сполуки (47)
Схема 10
Етос (Ф) У (Ф) Нн Ге! є) МН
М--Етос о. ДАМ но з | пра А ц о ори Ми ОН ЗХ вон «НО С я С возН «ної я С х " | осо (5) | оо
М - - 7-5 М (44) (46)
МН і) Ге) 2 ок Ми ЧОН ЗХ вон --"» 1-МН й С х
Аг | Ти о
М
(47)
На схемі 10 показано введення солюбілізувальної групи за допомогою реакції амідування.
Інгібітори Всі-хї можна синтезувати із застосуванням загального підходу модифікування первинного або вторинного аміну за допомогою солюбілізувальної групи, а потім приєднання одержаного в результаті аміну до лінкера, як описано на наступних схемах. Наприклад, сполуку (45) можна послідовно обробляти за допомогою НАТИ і сполуки (44) з одержанням сполуки (46).
Сполуку (46) можна обробляти за допомогою діетиламіну в розчинниках, таких як без обмеження М,М-диметилформамід, з одержанням сполуки (47). 5.1.11. Синтез сполуки (51)
Схема 11
Вос
Вос М (9) У М |в) о ДАМ о ДАМ ра
Те | З ів) С Се Те | Кх (Ф) М, - й ; д Н
Аг їх Аг Х С о (о) (48) Га о
М -Щн-- - -» М (39) (45)
ТОВРЗ ко о 35. о ЛА М Ж
Її - ж Проте М -Х тов (40) Ач и С х- с ТЕА
І 2 (9) г - - - йтИ 65 ОО 5" М (де) -Ш28ШВБИШВШВИНООШОШОШОШОЮЖт (50)
Н
М
Ї о ої ДАМ ж | де ОН М нос С х- 1 щі ж оосо гоН
М (оде) (51)
На схемі 11 показані ілюстративні способи одержання солюбілізованих інгібіторів Всі-хі.
Інгібітори Всі-хї можна синтезувати із застосуванням загального підходу модифікування первинного аміну за допомогою спейсера з одержанням диференційно захищеного діаміну.
Незахищений вторинний амін може бути модифікований за допомогою солюбілізувальної групи.
Видалення захисної групи із захищеного аміну потім приводить до відкривання сайту для приєднання лінкера, як описано на наступних схемах. Наприклад, сполуку (39) можна піддавати відновлювальному алкілуванню за допомогою реагентів, таких як без обмеження трет-бутил-4- оксопіперидин-1-карбоксилат (48), в умовах, відомих із рівня техніки, з одержанням вторинного аміну (49). Сполуку (50) можна одержати шляхом здійснення реакції сполуки (49) із 4-(трет- бутилдифенілсиліл)окси)-2,2-диметилбутилетенсульфонатом (40). Зазвичай реакцію здійснюють за температури навколишнього середовища в розчиннику, такому як без обмеження
М,М-диметилформамід. Сполуку (40) можна вводити в реакцію з трифтороцтовою кислотою з одержанням сполуки (51). Зазвичай реакцію здійснюють за температури навколишнього середовища в розчиннику, такому як без обмеження дихлорметан. 5.1.12. Синтез сполуки (61)
Схема 12 о о о о ат» ос дою с че УК о с ль Ук рух - и о ше ма ол зи он, 5 в 54; (53) 054) Ав во ук а КУН
СІ М. СІ ,М.
Уайко, н саке, ва (58)
Ї я хи от-от ок Ще ща обо ок ре бр»об9 о ва АгоКн; ОхуАКон Її ик І Фу йо о7ииВи ої Аг де о Ге) З
Од о о (9) о. М, із он н с. ов УА рев
Аг і г 5 (61) ч-
На схемі 12 описаний спосіб синтезу солюбілізованих інгібіторів ВсіІ-хЇ. Сполуку (52) можна вводити в реакцію з метансульфонілхлоридом у присутності основи, такої як без обмеження триетиламін, з одержанням сполуки (53). Зазвичай реакцію здійснюють за низької температури в розчиннику, такому як без обмеження дихлорметан. Сполуку (53) можна обробляти аміаком у метанолі з одержанням сполуки (54). Зазвичай реакцію здійснюють за підвищеної температури, і реакцію можна здійснювати в умовах мікрохвильового випромінювання. Сполуку (56) можна одержати шляхом здійснення реакції сполуки (55) у присутності основи, такої як без обмеження
М,М-діїзопропілетиламін. Зазвичай реакцію здійснюють за температури навколишнього середовища в розчиннику, такому як без обмеження М,М-диметилформамід. Сполуку (56) можна обробляти ди-трет-бутилдикарбонатом і 4-(диметиламіно)піридином з одержанням сполуки (57). Зазвичай реакцію здійснюють за температури навколишнього середовища в розчиннику, такому як без обмеження тетрагідрофуран. Сполуку (59) можна одержати шляхом здійснення реакції сполуки (57) із боронатним естером (або еквівалентом боронової кислоти) формули (58) в умовах реакції сполучення Сузукі, описаних у даному документі або в літературі.
Біс(2,5-діоксопіролідин-1-ілукарбонат можна вводити в реакцію зі сполукою (37) із подальшою реакцією зі сполукою (59) з одержанням сполуки (60). Зазвичай реакцію здійснюють за температури навколишнього середовища в розчиннику, такому як без обмеження ацетонітрил.
Сполуку (61) можна одержати шляхом обробки сполуки (60) трифтороцтовою кислотою.
Зазвичай реакцію здійснюють за температури навколишнього середовища в розчиннику, такому як без обмеження дихлорметан. 5.1.13. Синтез сполуки (70)
Схема 13
ВІ он он Ту
Сорт Об т АТ АТ
М. 0 М. 0 (6 о Вг (63) 0 ру в
В б) чо7зо 65) 0 о хо -В. но и ще
Го) :: 9) (вв) да го) (0) о сь Си со пре оо (66) оо (в) дв оо - ! Ми (69) М он да 9) да ге с --
Того ов п
М да
На схемі 13 описаний синтез 5-гідрокситетрагідроїзохінолінових проміжних сполук. Сполуку (63) можна одержати шляхом обробки сполуки (62) за допомогою М-бромсукциніміду. Зазвичай реакцію здійснюють за температури навколишнього середовища в розчиннику, такому як без обмеження М,М-диметилформамід. Сполуку (63) можна вводити в реакцію з бензилбромідом у присутності основи, такої як без обмеження карбонат калію, з одержанням сполуки (64).
Зазвичай реакцію здійснюють за підвищеної температури в розчиннику, такому як без обмеження ацетон. Сполуку (64) можна обробляти монооксидом вуглецю та метанолом у присутності основи, такої як без обмеження триєтиламін, і каталізатора, такого як без обмеження сполука (65). Зазвичай реакцію здійснюють за підвищеної температури в інертній атмосфері. Сполуку (65) можна обробляти кислотою, такою як без обмеження хлористоводнева кислота в діоксані, з одержанням сполуки (66). Зазвичай реакцію здійснюють за температури навколишнього середовища в розчиннику, такому як без обмеження тетрагідрофуран. Сполуку (67) можна одержати шляхом здійснення реакції сполуки (66) із трет-бутил-3-бром-6- фторпіколінатом у присутності основи, такої як без обмеження триетиламін. Зазвичай реакцію здійснюють в інертній атмосфері за підвищеної температури в розчиннику, такому як без обмеження диметилсульфоксид. Сполуку (67) можна вводити в реакцію з бороновою кислотою формули (68), де Ай являє собою метиладамантановий фрагмент сполук за даним винаходом (наприклад, сполук формул (Іа) - (ПЯ)), в умовах реакції сполучення Сузукі, описаних у даному документі або в літературі, з одержанням сполуки (69). Сполуку (70) можна одержати шляхом здійснення реакції сполуки (69) із воднем у присутності РЯА(ОН)». Зазвичай реакцію здійснюють за підвищеної температури в розчиннику, такому як без обмеження тетрагідрофуран. 5.1.14. Синтез сполуки (75)
Схема 14
4 о ьо о он Ві Ві о ріс о
М ИМ, о
ФО м тр М. т ща / М. те що / зо7зо - ги 0-7 Вос о Ї М І й М, н. ---- («5 ж оо Я Ід ос ------- оо Ся, ІД Вос
М М я 2 де (72) (3) ьо Геї но. ло
В. ВІ
А--МН, о о -й-- 8: з ок фо0-я---тхт Ь А з он Ка
М, - - ни7то
Я те е-/ то ій Се о (14) (5)
На схемі 14 показані ілюстративні способи, застосовні для одержання солюбілізованих інгібіторів Всі-хі. Інгібітори ВсІ-хї можна синтезувати із застосуванням загального підходу модифікування замісника Аг- за допомогою солюбілізувальної групи, а потім приєднання аміну до лінкера, як описано на наступних схемах. Наприклад, сполуку (71) можна вводити в реакцію з трет-бутил-2-бромацетатом у присутності основи, такої як без обмеження карбонат калію, в розчиннику, такому як без обмеження М,М-диметилформамід. Сполуку (72) можна обробляти водним розчином гідроксиду літію в розчиннику, такому як без обмеження метанол, тетрагідрофуран або їх суміші, з одержанням сполуки (73). Сполуку (74) можна одержати шляхом амідування сполуки (73) за допомогою сполуки (37) в умовах, описаних раніше. Сполуку (74) можна обробляти кислотами, такими як без обмеження трифтороцтова кислота або НОСІ, з одержанням інгібітора ВсіІ-хї формули (75). Зазвичай реакцію здійснюють за температури навколишнього середовища в розчинниках, таких як без обмеження дихлорметан або 1,4- діоксан.
І.А.6. Загальні способи синтезування синтонів Всі-х!
На схемах нижче різні замісники Аг", Аг, 2", М, С, В": і Д'"» визначені в розділі "Детальний опис". 5.2.1. Синтез сполуки (89)
Схема 15 о щи и ов ді Том РЕНІ Ха рові) ач пу ка с24-------------- ж вич ет петттнннннннннннятю и зт т о ст Мои бо уюдючих я й не ху в Її я хе їх ої за З
Кон ХМ х. ї ке З З д | я г пихи у їя ах Зх Ка 3 о хм КЕ ше яко А М з Фе Хв А ЖК о вит сте ов в ЗЕ ВК М в ПИ и МИ МИ ДЯ нення їм 80 Х шк КВ й й ре БО АМОООО ок уКВ ше миши фреспеев 8 о я, их и МК потом оУцу м» з ОХ У той р. що с я па - Ку т Ж їх ще ну Її бе зве ЕК У Я дуету . зжпю г
З ПО АМЮОЖ Кт до СИ ЗА ЧИ ме ИН ОО и А
Я а ХА, або зЗибкбу у
ЕС Бек дит нлцде ся в я ІН і 5 ГІ ве
М - РУ се ц БОКУ
Як показано на схемі 15, сполуки формули (77), де РО являє собою придатну нестійку у присутності основи захисну групу, та АА(2) являє собою Сії, АІа або Гух, можна вводити в реакцію з 4-(амінофеніл)метанолом (78) в умовах амідування, описаних у даному документі або вільно доступних у літературі, з одержанням сполуки (79). Сполуку (80) можна одержати шляхом здійснення реакції сполуки (79) з основою, такою як без обмеження діетиламін.
Зазвичай реакцію здійснюють за температури навколишнього середовища в розчиннику, такому як без обмеження М,М-диметилформамід. Сполуку (81), де РО являє собою придатну нестійку у присутності основи або кислоти захисну групу, та АА(1) являє собою Ма! або Ріє, можна вводити в реакцію зі сполукою (80) в умовах амідування, описаних у даному документі або вільно доступних у літературі, з одержанням сполуки (82). Сполуку (83) можна одержати шляхом обробки сполуки (82) діетиламіном або трифтороцтовою кислотою, залежно від конкретного випадку. Зазвичай реакцію здійснюють за температури навколишнього середовища в розчиннику, такому як без обмеження дихлорметан. Сполуку (84), де 5р являє собою спейсер, можна вводити в реакцію зі сполукою (83) з одержанням сполуки (85). Зазвичай реакцію здійснюють за температури навколишнього середовища в розчиннику, такому як без обмеження
М,М-диметилформамід. Сполуку (85) можна вводити в реакцію з біс(4-нітрофеніл)укарбонатом (86) у присутності основи, такої як без обмеження М,М-діззопропілетиламін, з одержанням сполуки (87). Зазвичай реакцію здійснюють за температури навколишнього середовища в розчиннику, такому як без обмеження М,М-диметилформамід. Сполуки (87) можна вводити в реакцію зі сполукою (88) у присутності основи, такої як без обмеження М,М-діізопропілетиламін, з одержанням сполуки (89). Зазвичай реакцію здійснюють за температури навколишнього середовища в розчиннику, такому як без обмеження М,М-диметилформамід. 5.2.2. Синтез сполук (94) і (96)
Схема 16
Ї н Га о Ї бо о. М. ва М У Аа іо: отв Етос7" ій й о Оу ко, воно н ві пслшже у Си (90) Мо, у і й в) Ж 0 нн (88) чо 25302000 АА()
АА(1)-Маї, Рбе
АА(2У-СЇ, Аа, 1у8 ї 9 о х Д о. М, Ї 79 о. М ї А. он зе У
ШИВ- Гвя кв, ко, ох
Ай що о ЮК о Аг ще їв (94) н о нн
Ад(2) АКА) (9) зон (95) о М. Ї ї Х АА)
Ас М (96) н он
А) » зв.
На схемі 16 описана процедура альтернативних варіантів приєднання тАбБ-лінкера з дипептидними синтонами. Сполуку (88) можна вводити в реакцію зі сполукою (90) у присутності основи, такої як без обмеження М,М-дізопропіламін, з одержанням сполуки (91). Зазвичай
Зо реакцію здійснюють за температури навколишнього середовища в розчиннику, такому як без обмеження М,М-диметилформамід. Сполуку (92) можна одержати шляхом здійснення реакції сполуки (91) з діетиламіном. Зазвичай реакцію здійснюють за температури навколишнього середовища в розчиннику, такому як без обмеження М,М-диметилформамід. Сполуку (93), де Х' являє собою СІ, Вг або І можна вводити в реакцію зі сполукою (92), в умовах амідування, описаних у даному документі або вільно доступних у літературі, з одержанням сполуки (94).
Сполуку (92) можна вводити в реакцію зі сполуками формули (95) в умовах амідування, описаних у даному документі або вільно доступних у літературі, з одержанням сполуки (96). 5.2.3. Синтез сполуки (106)
Схема 17 т дах тк й сь їж чес Б У з Й х жо ме» де ! Х, скбоя й пе р ій і зр ще ах їх весаУя вах ЕОЗ г у шхх б тя с АСЯК ев Й Пани о бюд ау, ПТ й вся ов к. ох ой зичу 2 дае зи дез їм втру мар в а ши су слон г пев м ЗВ ша й о о; й п в ШИ пек т г т ще Но м ї й з г: а пе 2 ваш А м и и Яд льш й бор й во ї й
КЕ у м дрчсвювооу " й ще ї
На схемі 17 описаний синтез проміжних сполук і синтонів з вінілтглюкуронідним лінкером. (28,38,45,55,65)-2-Бром-6-(метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5-триїлтриацетат (97) можна обробляти оксидом срібла, а потім 4-бром-2-нітрофенолом (98) з одержанням (25,38,45,55,65)-2-(4-бром-2-нітрофенокси)-6-(метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5- триїлтриацетату (99). Зазвичай реакцію здійснюють за температури навколишнього середовища в розчиннику, такому як без обмеження ацетонітрил. (25,3Е,45,55,65)-2-(4-Бром-2- нітрофенокси)-6-(метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5-триїлтриацетат (99) можна вводити в реакцію З (Еу-трет-бутилдиметил((3-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-діоксаборолан-2- іл)яаліл)уокси)силаном (100) у присутності основи, такої як без обмеження карбонат натрію, та каталізатора, такого як без обмеження трис(дибензиліденацетон)дипаладій (Раз(аба)з), з одержанням (25,32,45,55,65)-2-(4-(Е)-3-(трет-бутилдиметилсиліл)окси)проп-1-ен-1-іл)-2- нітрофенокси)-6-(метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5-триїлтриацетату (101). Зазвичай реакцію здійснюють за підвищеної температури в розчиннику, такому як без обмеження тетрагідрофуран. (25,3К,45,55,65)-2-(2-Аміно-4-((Е)-3-гідроксипроп-1-ен-1-ілуфенокси)-6- (метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5-триїлтриацетат (102) можна одержати шляхом здійснення реакції (25,3К,45,55,65)-2-(4-(Е)-3-(трет-бутилдиметилсиліл)окси)проп-1-ен-1-іл)-2- нітрофенокси)-6-(метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5-триїлтриацетату (101) із цинком у присутності кислоти, такої як без обмеження хлористоводнева кислота. Зазвичай додавання здійснюють за низької температури перед нагріванням до температури навколишнього середовища в розчиннику, такому як без обмеження тетрагідрофуран, вода або їх суміші. (25,38,45,55,65)-2-(2-Аміно-4-((Е)-3-гідроксипроп-1-ен-1-іл)уфенокси)-6- (метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5-триїлтриацетат (102) можна вводити в реакцію з (9Н-флуорен-9-іл)метил (З3-хлор-3-оксопропіл)укарбаматом (103) у присутності основи, такої як без обмеження М,М-діїзопропілетиламін, з одержанням (25,3К,45,55,65)-2-(2-(3-((9Н-флуорен- 9-ілуметокси)карбоніл)аміно)пропанамідо)-4-((Е)-3-гідроксипроп-1-ен-1-ілуфенокси)-6- (метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5-триїлтриацетату (104). Зазвичай додавання здійснюють за низької температури перед нагріванням до температури навколишнього
Зо середовища в розчиннику, такому як без обмеження дихлорметан. Сполуку (88) можна вводити в реакцію з (25,3Е,45,55,65)-2-(2-(3-((9Н-флуорен-9-ілуметокси)карбоніл)аміно)пропанамідо)- 4-(Е)-3-гідроксипроп-1-ен-1-ілуфенокси)-6-(метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5- триілтриацетатом (104) у присутності основи, такої як без обмеження М-етил-М-ізопропілпропан- 2-амін, із наступною обробкою продукту та здійсненням реакції зі сполукою (105) у присутності основи, такої як без обмеження М,М-діїзопропілетиламін, з одержанням сполуки (106). Зазвичай реакції здійснюють за температури навколишнього середовища в розчиннику, такому як без обмеження М,М-диметилформамід. 5.2.4. Синтез сполуки (115)
Схема 18 че ша Ше: Ше ся КУ Я ок оті зу їх» а НИ в - шШшш но ух побу» и сх учи хо ву у змо яку з
Же йо Мк кб дить Кк
Ех тв Й я х рен в с кетмурття Ме пд во ме ще Як зоре их Шо їв
АКУЕ а шко У с од Мч
Св: Й щщ я й що ба ее дв коня шия чер и КІ гою ди жк од й ев боти є -Я пдня З дей др МВ тую й. що ь й й в в ус: ТЕ Я 7
Ка й ня яке | во ч «і -е ух т - 4 те У
У пе г дов ов тьн г й в їх о Веавщер ак ЩІ Зак,
Ме ке -К 5 Що
На схемі 18 описаний синтез ілюстративної проміжної сполуки та синтону з 2- етерглюкуронідним лінкером. (25,3К,45,55,65)-2-Бром-6-(метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н-піран- 3,4,5-триїлтриацетат (97) можна вводити в реакцію з 2,4-дигідроксибензальдегідом (107) у присутності карбонату срібла з одержанням (25,3Е,45,55,65)-2-(4-форміл-3-гідроксифенокси)-6- (метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5-триїлтриацетату (108). Зазвичай реакцію здійснюють за підвищеної температури в розчиннику, такому як без обмеження ацетонітрил. (25,38,45,55,65)-2-(4-Форміл-3-гідроксифенокси)-6-(метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5- триїлтриацетат (108) можна обробляти борогідридом натрію з одержанням (25,3К,45,55,65)-2- (З-гідрокси-4-«гідроксиметил)фенокси)-6-(метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5- триїлтриацетату (109). Зазвичай додавання здійснюють за низької температури перед нагріванням до температури навколишнього середовища в розчиннику, такому як без обмеження тетрагідрофуран, метанол або їх суміші. (25,3К,45,55,65)-2-(4-«(Трет- бутилдиметилсиліл)окси)метил)-3-гідроксифенокси)-6-(метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н-піран- 3,4,5-триїлтриацетат (110) можна одержати шляхом здійснення реакції (25,3К,45,55,65)-2-(3- гідрокси-4-«гідроксиметил)фенокси)-6-(метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5- триїлтриацетату (109) із трет-бутилдиметилсилілхлоридом у присутності імідазолу. Зазвичай реакцію здійснюють за низької температури в розчиннику, такому як без обмеження дихлорметан. (25,3К,45,55,65)-2-(3-(2-(2-((9Н-Флуорен-9- ілуметокси)карбоніл)аміно)етокси)етокси)-4-((трет-бутилдиметилсиліл)окси)метил)уфенокси)-6- (метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5-триїлтриацетат (111) можна одержати шляхом здійснення реакції (25,3К,45,55,65)-2-(4-((трет-бутилдиметилсиліл)окси)метил)-3- гідроксифенокси)-6-(метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5-триїлтриацетату (110) з (9Н- флуорен-9-іл)уметил(2-(2-гідроксиетокси)етил)укарбаматом у присутності трифенілфосфіну й азодикарбоксилату, такого як без обмеження ди-трет-бутилдіазен-1,2-дикарбоксилат. Зазвичай реакцію здійснюють за температури навколишнього середовища в розчиннику, такому як без обмеження толуол. (25,3К,45,55,65)-2-(3-(2-(2-(((9Н-Флуорен-9- ілуметокси)карбоніл)аміно)етокси)етокси)-4-((трет-бутилдиметилсиліл)окси)метил)уфенокси)-6-
Зо (метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5-триїлтриацетат (111) можна обробляти оцтовою кислотою З одержанням (25,3К,45,55,65)-2-(3-(2-(2-((((9Н-флуорен-9-
ілуметокси)карбоніл)аміно)етокси)етокси)-4-(гідроксиметил)фенокси)-6- (метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5-триїлтриацетату (112). Зазвичай реакцію здійснюють за температури навколишнього середовища в розчиннику, такому як без обмеження вода, тетрагідрофуран або їх суміші. (25,3К,45,55,65)-2-(3-(2-(2-((9Н-Флуорен-9- ілуметокси)карбоніл)аміно)етокси)етокси)-4-(((4-нітрофенокси)карбоніл)уокси)метил)фенокси)-6- (метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5-триїлтриацетат (113) можна одержати шляхом здійснення реакції (25,3К,45,55,65)-2-(3-(2-(2-((9Н-флуорен-9- ілуметокси)карбоніл)аміно)етокси)етокси)-4-(гідроксиметил)фенокси)-6- (метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5-триїлтриацетату (112) З біс(4- нітрофеніл)карбонатом у присутності основи, такої як без обмеження М-етил-М-ізопропілпропан- 2-амін. Зазвичай реакцію здійснюють за температури навколишнього середовища в розчиннику, такому як без обмеження М,М-диметилформамід. (25,3К,45,55,65)-2-(3-(2-(2-((9Н-Флуорен-9- ілуметокси)карбоніл)аміно)етокси)етокси)-4-(((4-нітрофенокси)карбоніл)уокси)метил)фенокси)-6- (метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5-триїлтриацетат (113) можна обробляти сполукою (88) у присутності основи, такої як без обмеження М-етил-М-ізопропілпропан-2-амін, із наступною обробкою гідроксидом літію з одержанням сполуки (114). Зазвичай реакцію здійснюють за температури навколишнього середовища в розчиннику, такому як без обмеження
М,М-диметилформамід, тетрагідрофуран метанол або їх суміші. Сполуку (115) можна одержати шляхом здійснення реакції сполуки (114) зі сполукою (84) у присутності основи, такої як без обмеження М-етил-М-ізопропілпропан-2-амін. Зазвичай реакцію здійснюють за температури навколишнього середовища в розчиннику, такому як без обмеження М,М-диметилформамід. 5.2.5. Синтез сполуки (119)
Схема 19 оо.он вон
Мн, но-(о н ге» 27 ун М
О.А ї 4 й о ФК , й дея соки чор
Аг я с У Оу пед» жк о-? г; Аг Ще 0 йо; ати В (16) бно Он то те о, б уон
НО но он о й о оо ві НА вва) - Яд 99 5 00 о
М-5 са о 4 (сі 5 7Уу ох пе оно Км -ї о дІМН с С й У
М 9) (9) (193 до 9, б уон
Моно он
На схемі 19 описано введення другої солюбілізувальної групи в лінкер на основі цукру.
Сполуку (116) можна вводити в реакцію з (К)-2-((9Н-флуорен-9-іл)метокси)карбоніл)аміно)-3- сульфопропановою кислотою (117) в умовах амідування, описаних у даному документі або
Зо вільно доступних у літературі, із наступною обробкою основою, такою як без обмеження діетиламін, з одержанням сполуки (118). Сполуку (118) можна вводити в реакцію зі сполукою (84), де 5р являє собою спейсер, в умовах амідування, описаних у даному документі або вільно доступних у літературі, з одержанням сполуки (119). 5.2.6. Синтез сполуки (129)
Схема 20 оле в я то З 5 й т хи й бе Е М бор руд
СВ кеш чик дет пт Ж,
Ї не ве ве: ж М ЕЕ ам нив ЩЕ я УдЕК гру ВК Я
В. х поеототогоєтяю тет тоєоететтг Тех : ЕК внннннннннни ї КУБКУ поттттттттттттттнтдки. и: НИ Я Ко
Ї НУ З 1
СХ Х Е
І ше зе к Е. де ке Же їх н баг о ге Код реритих пи а мб жо а ій Я удо ж й й ок ож я сви
ЗХ ЕМ Не СН ож Ав
Ей З БЕВК ! рву Ж кате с че ; 5 ше ха Шк ее
Б - ЗІ пози -
ГКУ Нр осами х ета че хе Ж жохн а а з Бод де щі Бе ІАЖ я Ж. й й ще ож х м Ме М ох ен -К м Ко -х я тю г ване са о кот ШЕ ие НЕ ШК Я і а, би бе ї т іх Е ше ке
У
«т
Ку Я: пою А в. у
Хо М и ди у я ТЗ о їн ОТО У ом є се ми и К и и я. ве АЖ КЗ ке ї дути чх че
Ши а, о Ом
Хрекненкее КК, з 2 - з їм ЕЯ гу. я йо со ек
Нж-
БУ
На схемі 20 описаний синтез проміжних сполук і синтонів з 4-етерглюкуронідним лінкером. 4- (2-(2-Брометокси)етокси)-2-гідроксибензальдегід (122) можна одержати шляхом здійснення реакції 2,4-дигідроксибензальдегіду (120) із 1-бром-2-(2-брометокси)етаном (121) у присутності основи, такої як без обмеження карбонат калію. Зазвичай реакцію здійснюють за підвищеної температури в розчиннику, такому як без обмеження ацетонітрил. 4-(2-(2-Брометокси)етокси)-2- гідроксибензальдегід (122) можна обробляти азидом натрію з одержанням 4-(2-(2- азидоетокси)етокси)-2-гідроксибензальдегіду (123). Зазвичай реакцію здійснюють за температури навколишнього середовища в розчиннику, такому як без обмеження М,М- диметилформамід. (25,3К,45,55,65)-2-(5-(2-(2-Азидоетокси)етокси)-2-формілфенокси)-6- (метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5-триїлтриацетат (125) можна одержати шляхом здійснення реакції 4-(2-(2-азидоетокси)етокси)-2-гідроксибензальдегіду (123) із (ЗК,45,55,65)-2-
бром-6-(метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5-триїлтриацетатом (124) у присутності оксиду срібла. Зазвичай реакцію здійснюють за температури навколишнього середовища в розчиннику, такому як без обмеження ацетонітрил. Гідрогенізація (25,3Е,45,55,65)-2-(5-(2-(2- азидоетокси)етокси)-2-формілфенокси)-6-(метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5- триїлтриацетату (125) у присутності Ра/С буде забезпечувати одержання (25,3К,45,55,65)-2-(5- (2-(2-аміноетокси)етокси)-2-(гідроксиметил)фенокси)-6-(метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н-піран- 3,4,5-триїлтриацетату (126). Зазвичай реакцію здійснюють за температури навколишнього середовища в розчиннику, такому як без обмеження тетрагідрофуран. (25,3Е,45,55,65)-2-(5-(2- (2-((9Н-Флуорен-9-іл)метокси)карбоніл)аміно)етокси)етокси)-2-(гідроксиметил)фенокси)-6- (метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5-триїлтриацетат (127) можна одержати шляхом обробки (25,3К,45,55,65)-2-(5-(2-(2-аміноетокси)етокси)-2-(гідроксиметил)фенокси)-6- (метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5-триїлтриацетату (126) за допомогою (9Н-флуорен-9- іл)уметилхлорформіату у присутності основи, такої як без обмеження М-етил-М-ізопропілпропан- 2-амін. Зазвичай реакцію здійснюють за низької температури в розчиннику, такому як без обмеження дихлорметан. Сполуку (88) можна вводити в реакцію з (25,3К,45,55,65)-2-(5-(2-(2- ((9Н-флуорен-9-ілуметокси)карбоніл)аміно)етокси)етокси)-2-(гідроксиметил)фенокси)-6- (метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5-триїлтриацетатом (127) у присутності основи, такої як без обмеження М-етил-М-ізопропілпропан-2-амін, з наступною обробкою гідроксидом літію з одержанням сполуки (128). Зазвичай реакцію здійснюють за низької температури в розчиннику, такому як без обмеження М,М-диметилформамід. Сполуку (129) можна одержати шляхом здійснення реакції сполуки (128) зі сполукою (84) у присутності основи, такої як без обмеження
М-етил-М-ізопропілпропан-2-амін. Зазвичай реакцію здійснюють за температури навколишнього середовища в розчиннику, такому як без обмеження М,М-диметилформамід. 5.2.7. Синтез сполуки (139)
Схема 21 якою ут тк дл жо ох х7 я КЗ ЖАХ що ке У К хе І ї йо СИХ
ЕД НИ 13 Я А ше п
ВМ Ки У вал аю Ви йо ХУ їн ї | Одарки В СИ ях рум а
МЕ луку ще
Я жов Не ШИ зу ши Н 1 Н
ЦЯ се ц «а
А тую ЩЕ щі ти с п: нс Ж що й й с КА пунк зу т а ек з т г. аж ї : й м ще шк їх ве ую ву Ке | | ТА
КМ ця
ХУ сш чу у ка ати о, яв їх во ет З і хх х Де Ки ї Н хі де мру ккд их М се МЕ ехо Що ї щі УхУ с 7 ОТАК А з тк см ! М КУ ту ах ект аж ле з роя
БУ р Жах ко: ЕЗ 4 о Мо 500 і БАШКЯЙ й жу В
Ку БУ і В, . ї й е Бас дво
ЗМ щі кр я І беж на НІ в: З он й з ДУ
ЕКО, ; Ж ВОЯКА ; їх ЗЕ зе у КАН Й її
Й дп : Ку; й г Кодях ЧЕ мит м. зх рр чих ММ несучу зн щи ва
КВ:
Кк ха , Ж
У. КЕ я я КАШКУ
ВО ри У жк Х о у Ой ду ОО ак; о ду х ек ГУ х3 фе ск Все Ще КЗ ве ай . . у ГУ ДЕ я Ж
КО КУ о | Ба ни ше в з ек а ик уя и шк кр перо щи
Ян
На схемі 21 описаний синтез карбаматглюкуронідних проміжних сполук і синтонів. 2-Аміно-5- (гідроксиметил)фенол (130) можна обробляти гідридом натрію, а потім уводити в реакцію з 2-(2- азидоетокси)етил-4-метилбензолсульфонатом (131) З одержанням (4-аміно-3-(2-(2- азидоетокси)етокси)феніл)уметанолу (132). Зазвичай реакцію здійснюють за підвищеної температури в розчиннику, такому як без обмеження М,М-диметилформамід. 2-(2-(2-
Азидоетокси)етокси)-4-«((трет-бутилдиметилсиліл)окси)метил)анілін (133) можна одержати шляхом здійснення реакції (4-аміно-3-(2-(2-азидоетокси)етокси)феніл)метанолу (132) із трет- бутилдиметилхлорсиланом у присутності імідазолу. Зазвичай реакцію здійснюють за температури навколишнього середовища в розчиннику, такому як без обмеження тетрагідрофуран. 2-(2-(2-Азидоетокси)етокси)-4-((трет-бутилдиметилсиліл)окси)метил)анілін (133) можна обробляти фосгеном у присутності основи, такої як без обмеження триєтиламін, з подальшою реакцією з (З3К,45,55,65)-2-гідрокси-6-(метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5- триїлтриацетатом (134) у присутності основи, такої як без обмеження триетиламін, з одержанням (25,3К,45,55,65)-2-((2-(2-(2-азидоетокси)етокси)-4-((трет- бутилдиметилсиліл)окси)метил)феніл)карбамоїл)окси) -6-(метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н-піран- 3,4,5-триїлтриацетат (135). Зазвичай реакцію здійснюють в розчиннику, такому як без обмеження толуол, і додавання зазвичай здійснюють за низької температури перед нагріванням до температури навколишнього середовища після додавання фосгену та нагрівання за підвищеної температури після додавання (ЗК,45,55,65)-2-гідрокси-6- (метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5-триїлтриацетату (134). (25,3Е,45,55,65)-2-((2-(2-(2-
Азидоетокси)етокси)-4-(гідроксиметил)феніл)карбамоїл)окси)-6-(метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н- піран-3,4,5-триїлтриацетат (136) можна одержати шляхом здійснення реакції (25,3К,45,55,65)- 2-((2-(2-(2-азидоетокси)етокси)-4-((трет- бутилдиметилсиліл)окси)метил)феніл)карбамоїл)окси) -6-(метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н-піран- 3,4,5-триїлтриацетату (135) із моногідратом п-толуолсульфонової кислоти. Зазвичай реакцію здійснюють за температури навколишнього середовища в розчиннику, такому як без обмеження метанол. (25,3К,45,55,65)-2-((2-(2-(2-Азидоетокси)етокси)-4- (гідроксиметил)феніл)карбамоїл)окси)-6-(метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5- триїлтриацетат (136) можна вводити в реакцію з біс(4-нітрофеніл)укарбонатом у присутності основи, такої як без обмеження М,М-діїзопропілетиламін, з одержанням (25,3Е,45,55,65)-2-((2- (2-(2-азидоетокси)етокси)-4-(((4-нітрофенокси)карбоніл)окси)метил)феніл)карбамоїл)окси)-6- (метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5-триїлтриацетату (137). Зазвичай реакцію здійснюють за температури навколишнього середовища в розчиннику, такому як без обмеження
М,М-диметилформамід. (25,3К,45,55,65)-2-((2-(2-(2-Азидоетокси)етокси)-4-((4- нітрофенокси)карбоніл)окси)метил)феніл)карбамоїл)окси)-6-(метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н- піран-3,4,5-триїлтриацетат (137) можна вводити в реакцію зі сполукою у присутності основи, такої як без обмеження М,М-діїізопропілетиламін, з наступною обробкою водним розчином гідроксиду літію з одержанням сполуки (138). Першу стадію зазвичай проводять за температури навколишнього середовища в розчиннику, такому як без обмеження М,М-диметилформамід, а другу стадію зазвичай проводять за низької температури в розчиннику, такому як без обмеження метанол. Сполуку (138) можна обробляти трис(2- карбоксиетил))фосфінгідрохлоридом із наступним здійсненням реакції зі сполукою (84) у присутності основи, такої як без обмеження М,М-діззопропілетиламін, з одержанням сполуки (139). Реакцію з трис(2-карбоксиетил)у)фосфінгідрохлоридом зазвичай здійснюють за температури навколишнього середовища в розчиннику, такому як без обмеження тетрагідрофуран, вода або їх суміші, та реакцію з М-сукцинімідил-б-малеімідогексаноатом зазвичай здійснюють за температури навколишнього середовища в розчиннику, такому як без обмеження М,М-диметилформамід. 5.2.8. Синтез сполуки (149)
Схема 22 ве ко яв ї - ям ЯМ Н Н а а: 5 2 че кбхд мин У 5 а | ї з кв ей пан нн і і п і п п о
НО ма о Тех шу кю тай Хе
Я в М фо . я с очи вч - ще 3 Т є Й о. 5 їх І й М о що » В п й
А я х я І а я я чи: ев ри й 5 й ЗЕ Як й май ря «а Й р. У пече и їх х й Мшея 0000 бревевкве з Ів ще ше
НИ в р, ню их о ке т Й и шин
ТЕХ м ІН РІКУ ня ЗІ бю
На схемі 22 описаний синтез проміжних сполук і синтонів з галактозидним лінкером. (25,38,45,55,68)-6-(Ацетоксиметил)тетрагідро-2Н-піран-2,3,4,5-тетраілтетраацетат (140) можна обробляти за допомогою НВг в ооцтовій кислоті з одержанням (2К,35,45,51,65)-2- (ацетоксиметил)-6-бромтетрагідро-2Н-піран-3,4,5-триїлтриацетату (141). Зазвичай реакцію здійснюють за температури навколишнього середовища в атмосфері азоту. (2К,35,45,5К,65)-2- (Ацетоксиметил)-6-(4-форміл-2-нітрофенокси)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5-триїлтриацетат (143) можна одержати шляхом обробки (2К,35,45,5Е,65)-2-(ацетоксиметил)-6-бромтетрагідро-2Н- піран-3,4,5-триїлтриацетату (141) оксидом срібла() у присутності 4-гідрокси-3- нітробензальдегіду (142). Зазвичай реакцію здійснюють за температури навколишнього середовища в розчиннику, такому як без обмеження ацетонітрил. (2К,35,45,5Н8,65)-2- (Ацетоксиметил)-6-(4-форміл-2-нітрофенокси)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5-триїлтриацетат (143) можна обробляти борогідридом натрію з одержанням (2К,35,45,5К,65)-2-(ацетоксиметил)-6-(4- (гідроксиметил)-2-нітрофенокси)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5-триїлтриацетату (144). Зазвичай реакцію здійснюють за низької температури в розчиннику, такому як без обмеження тетрагідрофуран, метанол або їх суміші. (2Е,35,45,5К,65)-2-(Ацетоксиметил)-6-(2-аміно-4- (гідроксиметил)фенокси)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5-триїлтриацетат (145) можна одержати шляхом обробки (2К,35,45,5К,65)-2-(ацетоксиметил)-6-(4-(гідроксиметил)-2- нітрофенокси)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5-триїлтриацетату (144) цинком у присутності хлористоводневої кислоти. Зазвичай реакцію здійснюють за низької температури в середовищі азоту в розчиннику, такому як без обмеження тетрагідрофуран. (25,3К,45,55,6К)-2-(2-(3-(((9Н-
Флуорен-9-іл)метокси)карбоніл)аміно)пропанамідо)-4-(гідроксиметил)фенокси)-6- (ацетоксиметил)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5-триїлтриацетат (146) можна одержати шляхом здійснення реакції (2К,35,45,5К,65)-2-(ацетоксиметил)-6-(2-аміно-4- (гідроксиметил)фенокси)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5-триїлтриацетату (145) з (9Н-флуорен-9- ілуметил(З-хлор-3-оксопропіл)укарбаматом (103) у присутності основи, такої як без обмеження
М,М-діїізопропілетиламін. Зазвичай реакцію здійснюють за низької температури в розчиннику, такому як без обмеження дихлорметан. (25,3К,45,55,61К)-2-(2-(3-(((9Н-Флуорен-9-
Зо ілуметокси)карбоніл)аміно)пропанамідо)-4-(гідроксиметил)фенокси)-6- (ацетоксиметил)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5-триїлтриацетат (146) можна вводити в реакцію з біс(4-нітрофенілукарбонатом у присутності основи, такої як без обмеження /-М,М- діізопропілетиламін, З одержанням (25,3К,45,55,6К)-2-(2-(3-(((9Н-флуорен-9- ілуметокси)карбоніл)аміно)пропанамідо)-4-(((4-нітрофенокси)карбоніл)окси)метилуфенокси) -6- (ацетоксиметил)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5-триїлтриацетату (147). Зазвичай реакцію здійснюють за низької температури в розчиннику, такому як без обмеження М,М-диметилформамід. (25,38,45,55,618)-2-(2-(3-(((9Н-Флуорен-9-іл)метокси)карбоніл)аміно)пропанамідо)-4-((((4- нітрофенокси)карбоніл)окси)метил)фенокси)-6-(ацетоксиметил)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5- триїлтриацетат (147) можна вводити в реакцію зі сполукою (88) у присутності основи, такої як без обмеження М,М-діїззопропілетиламін, із подальшою обробкою гідроксидом літію з одержанням сполуки (148). Першу стадію зазвичай проводять за низької температури в розчиннику, такому як без обмеження М,М-диметилформамід, а другу стадію зазвичай проводять за температури навколишнього середовища в розчиннику, такому як без обмеження метанол. Сполуку (148) можна обробляти сполукою (84), де Зр являє собою спейсер, у присутності основи, такої як без обмеження М,М-діїззопропілетиламін, з одержанням сполуки (149). Зазвичай реакцію здійснюють за температури навколишнього середовища в розчиннику, такому як без обмеження М,М-диметилформамід.
ІП.А.7. Загальні способи синтезування АОС до В7-НЗ
У даному винаході також розкривають спосіб одержання АОС до В7-НЗ згідно зі структурною формулою (1): () ( 6- Я --і к« -| ль т дер, ГК, АБ і т визначені в розділі "Детальний опис". Спосіб включає: обробку антитіла у водному розчині за допомогою ефективної кількості засобу, що відновлює дисульфідні зв'язки, при 30-40" протягом щонайменше 15 хвилин, а потім охолодження розчину антитіла до 20-27"; додавання до розчину відновленого антитіла розчину води/диметилсульфоксиду, який містить синтон, вибраний із групи 2.1-2.176 (таблиця В); регулювання рН розчину до значення рН, що становить 7,5-8,5; забезпечення протікання реакції протягом 48-80 годин з утворенням АОС; де маса змінюється на 18ж2а.0.м. для кожного випадку гідролізу сукциніміду до сукцинаміду, як виміряно за допомогою мас-спектрометрії з іонізацією розпилюванням в електричному полі; і де АОС необов'язково очищують за допомогою хроматографії гідрофобної взаємодії.
У певних варіантах здійснення антитіло являє собою антитіло до ПВ7-НЗ, де антитіло до пПВ7-НЗ містить СОК важкого і легкого ланцюгів із пиАБбЗм2.5, пиАрЗм2.6 або пиАБ1ТЗм1.
Даний винахід також спрямований на АС до В7-НЗ, одержаний за допомогою вищеописаного способу.
У певних варіантах здійснення АОС до В7-НЗ, розкритий у даній заявці, утворюється за допомогою приведення в контакт антитіла, яке зв'язує рецептор клітинної поверхні НВ7-НЗ або антиген, асоційований із пухлиною, на пухлинній клітині, із синтоном лікарський засіб-лінкер в умовах, за яких синтон лікарський засіб-лінкер, ковалентно зв'язується з антитілом через малеіїмідний фрагмент, як показано в формулах (Пе) і (І, або через ацетилгалогенід, як показано в (Ід), або через вінілсульфон, як показано в (ІЙ). о) р / в я 07. у (Пе) 9) «(ів о сон р-і-Мн р-іМн ут я (Па) о ; (ПР) о де О являє собою лікарський засіб, який являє собою інгібітором Всі-хІ відповідно до структурних формулі(Па), (ПІБ), (Пс) або (ІП), описаним вище, і Ї" являє собою частину лінкера, не утворену за рахунок малеїіміду, ацетилгалогеніду або вінілсульфону при приєднанні синтону до антитіла; і де синтон лікарський засіб-лінкер вибраний із групи, яка складається з прикладів синтонів 2.1-2.176 (таблиця В), або його фармацевтично прийнятну сіль.
У певних варіантах здійснення стадію приведення в контакт проводять за таких умов, щоб
АОС до В7-НЗ характеризувався ВАК, що становить 2, З або 4.
І.В. АОС до В7-НЗ Інші зразкові лікарські засоби для кон'югації
Антитіла до В7-НЗ в АОС можуть бути використані для націлювання одного або декількох лікарських засобів на клітину, що представляє інтерес, наприклад ракову клітину, яка експресує
В7-НЗ. АОС до В7-НЗ3 за даним винаходом забезпечують цілеспрямовану терапію, за допомогою якої можна, наприклад, зменшувати побічні ефекти, що часто спостерігаються при протираковій терапії, оскільки один або декілька лікарських засобів доставляються в певну клітину.
Ауристатини
АОС до В7-НЗ3З за даним винаходом, наприклад, антитіло пиАБбіЗмі, пиАБЗмМ2.5 або пиАБЗм2.6, можуть бути кон'юговані щонайменше з одним ауристатином. Ауристатини являють собою групу аналогів доластатину, які, як правило, проявляють протиракову активність, порушуючи динаміку мікротрубок і гідроліз (ТР, інгібуючи тим самим клітинне ділення.
Наприклад, ауристатин Е (патент США Мо 5635483) являє собою синтетичний аналог морської природної речовини доластатину 10, сполуки, яка інгібує полімеризацію тубуліну шляхом зв'язування з одним і тим же сайтом на тубуліні, як протиракового лікарського засобу вінкристину (С.В. Рейії, Ргоа. Спет. Ого. Маї. Ргод, 70: 1-79 (1997)). Доластатин 10, ауристатин
РЕ ї ауристатин Е являють собою лінійні пептиди, що мають чотири амінокислоти, три з яких є унікальними для класу сполук доластатину. Ілюстративні варіанти здійснення інгібіторів мітозу підкласу ауристатину включають без обмеження монометилауристатин Ю (ММАО або похідне ауристатину 0), монометилауристатин Е (похідне ММАЕ або ауристатину КЕ), монометилауристатин Е (ММАЕ або похідне ауристатину Е), ауристатин Е-фенілендіамін (АЕР), ауристатин ЕВ (АЕВ), ауристатин ЕЕР (АЕРР) і естер 5-бензоїлвалеріанової кислоти-АЕ (АЕМВ).
Синтез і структура похідних ауристатину описані в публікаціях заявки на патент США МоМе 2003- 0083263, 2005-0238649 і 2005-0009751; Міжнародній публікації на патент Мо М/О 04/010957,
Міжнародній публікації на патент Мо М/О 02/088172 і патентах США Мо Мо 6,323,315; 6239104; 6034065; 5780588; 5665860; 5663149; 5635483; 5599902; 5554725; 5530097; 5521284; 5504191; 5410024; 5138036; 5076973; 4986988; 4978744; 4879278; 4816444; і 4486414, кожний із яких
Зо включений у даний документ за допомогою посилання.
В одному варіанті здійснення антитіла до В7-НЗ за даним винаходом, наприклад, пиАб1ЗмМ1, пиАБЗм2.5 або пиАрЗмМ2.6, кон'юговані щонайменше з одним ММАЕ (монометилауристатин Е).
Монометилауристатин Е (ММАЕ, ведотин) інгібує поділ клітин шляхом блокування полімеризації тубуліну. Однак через свою надтоксичність ауристатин Е не може використовуватися як лікарський засіб сам по собі. Ауристатин Е може бути пов'язаний з моноклональним антитілом (тАбБ), яке розпізнає специфічну експресію маркера в ракових клітинах і направляє ММАЕ на ракові клітини. В одному варіанті здійснення лінкер, що зв'язує ММАЕ з антитілом до В7-НЗ, є стабільним у позаклітинній рідині (тобто середовищі або навколишньому середовищі, яке є зовнішньою щодо клітин), але розщеплюється за допомогою катепсину після того, як АОС зв'язується з конкретним антигеном ракової клітини і потрапляє в ракову клітину, за рахунок чого забезпечується вивільнення токсичного ММАЕ і активація потужного антимітотичного механізму.
В одному варіанті здійснення антитіло до В7-НЗ, описане в даному документі, наприклад, пПЧІАБІЗМ1, пиАбБЗмМ2.5 або пшиШАБбБЗм2.6, кон'юЮговане щонайменше з одним ММА (монометилауристатин Е). Монометилауристатин Е (ММАБР) інгібує поділ клітин шляхом блокування полімеризації тубуліну. Він має заряджений С-кінцевий фенілаланіновий залишок, який послаблює його цитотоксичну активність порівняно з його незарядженим аналогом ММАЕ.
Однак через свою надтоксичність ауристатин Е не можна використовувати як лікарський засіб сам по собі, але його можна зв'язувати з моноклональним антитілом (тАб), яке спрямовує його в ракові клітини. В одному варіанті здійснення лінкер до антитіла до В7-НЗ є стабільним у позаклітинній рідині, але розщеплюється за допомогою катепсину, коли кон'югат проникає у пухлинну клітину, за рахунок чого забезпечується активація антимітотичного механізму.
Структури ММАБЕ їі ММАЕ, представлені нижче.
ше 3 с
М. я х дн
Шк: у м ї т ж щ у ; 5-й х мб» - ще» в рани що а в нт
Ї Ку а й ча я ра а ня
І у т Я: КЕ дня - «Хі
І й Міснаметия зуристатвиу КОМПА вач ї їх -
Му я 3 с щі х
В і сну
Не у,
Я ї с щі нки оо я я од й Га а сою ик о х у Ю че з яри й хна:
Х нні В
Мовомеєвя аррзстввеу Є ГЯМАК
Приклади пиАбБ13м1, пиАрЗм2.5 або пиАрЗм2.6-«СММАЕ також представлені на фігурі 3. Слід зазначити, що на фігурі З показана ситуація, коли антитіло (наприклад, пиАбБ13мМ1, пиАБбЗм2.5 або пиАрЗм2.6) зв'язане з одним лікарським засобом, а отже характеризується САК, що становить 1. У певних варіантах здійснення АОС буде характеризуватися ЮСАК, що становить від 2 до 8 або, як альтернатива, - від 2 до 4.
Інші лікарські засоби для кон'югації
Приклади лікарських засобів, які можуть бути використані в АСС, тобто лікарські засоби, які можуть бути кон'юговані з антитілами до В7-НЗ за даним винаходом, наведені нижче і включають інгібітори мітозу, протипухлинні антибіотики, імуномодулювальні засоби, вектори генної терапії, алкілувальні засоби, антиангіогенні засоби, антиметаболіти, боровмісні засоби, хемопротективні засоби, гормональні засоби, глюкокортикоїди, фотоактивні терапевтичні засоби, олігонуклеотиди, радіонуклідні ізотопи, радіосенсибілізатори, інгібітори топоізомерази, інгібітори кінази та їх комбінації. 1. Інгібітори мітозу
В одному аспекті антитіла до В7-НЗ можуть бути кон'юговані з одним або кількома інгібіторами мітозу з одержанням АОС для лікування раку. Використовуваний у даному документі термін "інгібітор мітозу" стосується цитотоксичного та/або терапевтичного засобу, який блокує мітоз або поділ клітин, біологічний процес, особливо важливий для ракових клітин.
Інгібітор мітозу порушує мікротрубочки таким чином, що запобігає поділ клітин, часто шляхом впливу на полімеризацію мікротрубочок (наприклад, інгібування полімеризації мікротрубочок) або деполімеризацію мікротрубочок (наприклад, стабілізація цитоскелету мікротрубочок, запобігаючи деполімеризації). Таким чином, в одному варіанті здійснення антитіло до В7-НЗ за даним винаходом кон'юговане з одним або кількома інгібіторами мітозу, які порушують утворення мікротрубочок шляхом інгібування полімеризації тубуліну. В іншому варіанті здійснення антитіло до В7-НЗ3 за даним винаходом кон'юговане з одним або кількома інгібіторами мітозу, які стабілізують цитоскелет мікротрубочок, запобігаючи деполімеризації. В одному варіанті здійснення інгібітор мітозу, використовуваний в АЮС за даним винаходом,
являє собою Іхетрга (іксабепілон). Приклади інгібіторів мітозу, які можна використовувати в
АОС з антитілом до В7-НЗ за даним винаходом, наведені нижче. У рід інгібіторів мітозу включені ауристатини, описані вище. а. Доластатини
Антитіла до В7-НЗ3 за даним винаходом можуть бути кон'юговані щонайменше з одним доластатином з утворенням АОС. Доластатини являють собою короткі пептидні сполуки, виділені у морського зайця в Індійському океані ЮоіарейПа ашйгісшіагіа (див. Ренії єї аї!., 9У. Ат.
Спет. 5ос., 1976, 98, 4677). Приклади доластатинів включають доластатин 10 і доластатин 15.
Доластатин 15, депсипептид із семи субодиниць, одержаний із РоїабеїІа ашгісціала, є потужним антимітотичним засобом, структурно зв'язаним з антитубуліновим засобом доластатином 10, пептидом із п'яти субодиниць, одержаним із того ж самого організму. Таким чином, в одному варіанті здійснення АОС до В7-НЗ за даним винаходом містить антитіло до В7-НЗ, як описано в даному документі, і щонайменше один доластатин. Ауристатини, описані вище, є синтетичними похідними доластатину 10. р. Майтанзиноїди
Антитіла до В7-НЗ3 за даним винаходом можуть бути кон'юговані щонайменше з одним майтанзиноїдом з утворенням АОС. Майтанзиноїди являють собою потужні протипухлинні засоби, які початково були виділені з представників родин вищих рослин Сеїазігасєає,
Впатпасеєає і ЕЄирпотіасеа, а також деяких видів мохів (Кирспап еї аї!., У. Ат. Спет., 5ос., 94: 1354-1356 (1972 |, УМапі еї а!., У. Спет. 5ос. Спет., Соттип., 390: 11973); Ромуеї! єї аї, у. Маї.
Ргод. 46:660-666 (19831); ЗаКаї еї аїЇ, У. Маї. Ргоа. 51 :845-850 (1988) і Зимжмапбогігих еї аї,
Ехрепепійа 46:117-120 (19901). Дані свідчать про те, що майтанзиноїди інгібують мітоз за допомогою інгібування полімеризації білка мікротрубочок тубуліну, за рахунок чого запобігається утворення мікротрубочок (див., наприклад, патент США Мо 6441163 і Кетійага еї а!І., Зсіеєпсе, 189, 1002-1005 (1975)). Було показано, що майтанзиноїди інгібують ріст пухлинних клітин іп міго при використанні моделі клітинних культур і іп мімо при використанні систем лабораторних тварин. Крім того, цитотоксичність майтанзиноїдів у 1000 раз більша, ніж у традиційних хіміотерапевтичних засобів, таких як, наприклад, метотрексат, даунорубіцин і вінкристин (див., наприклад, патент США Мо 5208020).
Майтанзиноїди включають майтанзини, майтанзинол, С-3 естери майтанзинолу та інші аналоги і похідні майтанзинолу (див., наприклад, патент США Мо 5208020 і 6441163, кожний із яких включений у даний документ за допомогою посилання в повному своєму обсязі). С-3 естери майтанзинолу можуть існувати в природі або можуть бути одержані синтетично. Більш того, як природні, так і синтетичні С-3 естери майтанзинолу можна класифікувати як С-3 естер простих карбонових кислот або С-3 естер із похідними М-метил-ї -аланіну, причому останній є більш цитотоксичним, ніж попередній. Синтетичні аналоги майтанзиноїду описані, наприклад, у
Кирсеспнап еї аї., У. Мед. Спет., 21, 31-37 (1978).
Придатні майтанзиноїди для застосування в АОС за даним винаходом можуть бути виділені з природних джерел, одержані синтетичним або напівсинтетичним шляхом. Крім того, майтанзиноїд можна модифікувати будь-яким придатним способом, за умови, що в кінцевій молекулі кон'югату зберігається достатня цитотоксичність. У зв'язку з цим майтанзиноїди не мають придатних функціональних груп, з якими можуть зв'язуватися антитіла. Бажано використовувати зв'язувальний фрагмент для зв'язування майтанзиноїду з антитілом для утворення кон'югату, що більш детально описане нижче в розділі, який стосується лінкерів.
Нижче наведена структура зразкового майтанзиноїду - мертанзину (ОМ).
о вет» я в й з й - і-ї н З я й м но ; з ї жк й жу я ши й Кк м іван ПО
Типові приклади майтанзиноїдів включають без обмеження ОМ1 ((М-деацетил-М2-(1- оксопропіл)-майтанзин, який також називається мертанзином, лікарський засіб майтанзиноїд 1,
Ітітиподеп, Іпс, див. також Спагі еї аІ. (1992) Сапсег Кез 52: 127), ОМ2, ОМ3З (М--деацетил-Мег- (1-оксопентил)-майтанзин), ОМА ( 1-оксопентил)-майтанзин) і майтанзинол (синтетичний аналог майтанзиноїду). Інші приклади майтанзиноїдів описані в патенті США Мо 8142784, включеному в даним документ за допомогою посилання.
Ансамітоцини являють собою групу майтанзиноїдних антибіотиків, які були виділені з різних бактеріальних джерел. Ці сполуки мають сильну протипухлинну активність. Типові приклади включають без обмеження ансамітоцин РІ11, ансамітоцин Рг, ансамітоцин РЗ та ансамітоцин РА.
В одному варіанті здійснення даного винаходу антитіло до В7-НЗ кон'юговане щонайменше з одним ЮОМІ1. В одному варіанті здійснення антитіло до В7-НЗ кон'юговане щонайменше з одним ЮМ2. В одному варіанті здійснення антитіло до В7-НЗ кон'юговане щонайменше з одним
ОМ3. В одному варіанті здійснення антитіло до В7-НЗ кон'юговане щонайменше з одним ОМА. д. Рослинні алкалоїди
Антитіла до В7-НЗ3 за даним винаходом можуть бути кон'юговані щонайменше з одним рослинним алкалоїдом, наприклад таксановим алкалоїдом або алкалоїдом барвінку. Рослинні алкалоїди являють собою хіміотерапевтичні засоби лікування, які одержують із певних типів рослин. Алкалоїди барвінку одержують із рослини барвінок (Саїпагапійиз» гозеа), тоді як таксани одержують із кори дерева тису тихого (Тахив). Як алкалоїди барвінку, так і таксани також відомі як антимікротрубочкові засоби та описані більш детально нижче.
Таксани
Антитіла до В7-НЗ, описані в даному документі, можуть бути кон'юговані щонайменше з одним таксаном. Використовуваний у даному документі термін "таксан" стосується класу протипухлинних засобів, що характеризуються механізмом дії щодо мікротрубочок, та які мають структуру, що включає структуру таксанового кільця і стереоспецифічний бічний ланцюг, яка є необхідною для цитостатичної активності. Також термін "таксан" охоплює ряд відомих похідних, зокрема гідрофільних похідних і гідрофобних похідних. Похідні таксану включають без
Ко) обмеження похідні галактози і манози, описані в Міжнародній патентній заявці Мо УУО 99/18113; піперазинові та інші похідні, описані в У/О 99/14209; похідні таксану, описані в У/О 99/09021, МО 98/22451 і патенті США Мо Мо 5869680; б-тіопохідні, описані в МО 98/28288; сульфенамідні похідні, описані в патенті США Мо Мо 5821263; і таксолові похідні, описані в патенті США Мо 5415869, кожний із яких включено в даний документ за допомогою посилання. Таксанові сполуки також раніше були описані в патенті США Мо Мо 5641803, 5665671, 5380751, 5728687, 5415869, 5407683, 5399363, 5424073, 5157049, 5773464, 5821263, 5840929, 4814470, 5438072, 5403858, 4960790, 5433364, 4942184, 5362831, 5705503 і 5278324, кожний із яких повністю включений у даний документ за допомогою посилання. Інші приклади таксанів включають без обмеження доцетаксел (Тахоїєге; Запоїї Амепії5), паклітаксел (Абгахапе або Тахої!; АБбгахів
Опсоіоду), карбазитаксел, тезетаксел, опаксіо, ларотаксел, таксопрексин, ВМ5-184476,
Ппопдаоизнап А, попдаоизнап В і попдаоизнап С, а також паклітаксел у наночастинках (АВІ- 007/Аргахепе, Абгахів Віозсієпсе).
В одному варіанті здійснення антитіло до В7-НЗ за даним винаходом кон'юговане щонайменше з однією молекулою доцетакселу. В одному варіанті здійснення антитіло до В7-НЗ за даним винаходом кон'юговане щонайменше з однією молекулою паклітакселу.
Алкалоїди барвінку
В одному варіанті здійснення антитіло до В7-НЗ кон'юговане щонайменше з одним алкалоїдом барвінку. Алкалоїди барвінку являють собою клас специфічних щодо клітинного циклу лікарських засобів, які діють шляхом інгібування здатності ракових клітин ділитися, здійснюючи вплив на тубулін і перешкоджаючи утворенню мікротрубочок. Приклади алкалоїдів барвінку, які можуть бути використані в АОС за даним винаходом, включають без обмеження віндезину сульфат, вінкристин, вінбластин і вінорелбін. 2. Протипухлинні антибіотики
Антитіла до В7-НЗ за даним винаходом можуть бути кон'юговані з одним або кількома протипухлинними антибіотиками для лікування раку. Використовуваний у даному документі термін "протипухлинний антибіотик" означає протипухлинний лікарський засіб, який блокує ріст клітин шляхом порушення процесингу ДНК і який одержаний із мікроорганізму. Часто протипухлинні антибіотики або розривають нитки ДНК, або сповільнюють або припиняють синтез ДНК. Приклади протипухлинних антибіотиків, які можуть бути включені в АС з антитілом до В7-НЗ за даним винаходом, включають без обмеження актиноміцини (наприклад, піроло|2,1-с|П1,4|бензодіазепіни), антрацикліни, каліхеаміцини та дуокарміцини, описані більш детально нижче. а. Актиноміцини
Антитіла до В7-НЗ3 за даним винаходом можуть бути кон'юговані щонайменше з одним актиноміцином. Актиноміцини являють собою підклас протипухлинних антибіотиків, виділених із бактерій роду Бігеріотусе5. Типові приклади актиноміцинів включають без обмеження актиноміцин ОО (Созтедеп |гакож відомий як актиноміцин, дактиноміцин, актиноміцин ІМ, актиноміцин СІ, І ипареск, Інс.), антраміцин, шикаміцин А, ЮС-81, мазетраміцин, неотраміцин
Зо А, неотраміцин В, поротриміцин, протракрацин В, 50212285, сибаноміцин, сибіроміцин і томайміцин. В одному варіанті здійснення антитіло до В7-НЗ за даним винаходом кон'юговане щонайменше з одним піролобензодіазепіном (РВО). Приклади РВО включають без обмеження антраміцин, шикаміцин А, 0С-81, мазетраміцин, неотраміцин А, неотраміцин В, поротриміцин, протрациклін В, 50422000 (590-136), 502202 (720-207), 52285 (20 -423), сибаноміцин, сибіоміцин і томайміцин. Таким чином, в одному варіанті здійснення антитіла до В7-НЗ за даним винаходом кон'юговані щонайменше з одним актиноміцином, наприклад актиноміцином 0, або щонайменше з одним РВО, наприклад димером піролобензодіазепіну (РВО).
Структури РВО можна знайти, наприклад, у патентній заявці США Мо 2013/0028917 і 2013/0028919 і в МО 2011/130598 А1, кожна з яких включена в даний документ за допомогою посилання в повному своєму обсязі. Нижче наведена загальна структура РВО. 10 9 М-..11
ТееХЕ Н 8
Ге в Па : 1 1 7 М с і 6 рух 2 о 3
РВО відрізняються за числом, типом і положення замісників, як у своїх ароматичних А- кільцях, так і в пірольних С-кільцях, а також за ступенем насичення С-кільця. У положенні МІ 0-
С11 В-кільця зазвичай розташований один з іміну (М-С), карбіноламіну (МН-СН(ОН)) або карбіноламінметилового етеру (МН-СН(ОМе)), при цьому його положення є електрофільним центром, що відповідає за алкілування ДНК. Усі з відомих природних продуктів мають (5)- конфігурацію в хіральному положенні Сі1с, що забезпечує їм правосторонній повтор, якщо дивитися з боку С-кільця на А-кільце. Наведені в даному документі приклади РВО можна кон'югувати з антитілами до В7-НЗ за даним винаходом. Інші приклади РВО, які можна кон'югувати з антитілами до В7-НЗ за даним винаходом, можуть бути знайдені, наприклад, у публікаціях заявки на патент США Мо 2013/0028917 А1 і 2013/0028919 АТ, у патенті США
Мо 7741319 В2 і в МО 2011/130598 АТ, і УМО 2006/111759 АТ, кожний з яких включено у даний документ за допомогою посилання в усій своїй повноті.
Типовий димер РВО, який характеризується наступною формулою ХХХ, можна кон'югувати з антитілами до В7-НЗ за даним винаходом: ді 33 за вив я»
М Я н рах М Н 2, е
Ж М ва: ві: М взо р во (Ф) ді г (Ф) (ХХХ) де
В представпений у формулі ХХХІ: мораль ай о о (ХХХІ) де А являє собою Сеарильну групу, Х являє собою групу, кон'юговану з лінкерною одиницею, вибрану із групи, яка складається з ян ту ОВО», 000 МН і -Щ8М--, де В" вибраний із групи, яка складається з Н, Сі-лалкілу І (СНО) СН», де 5 дорівнює 1-3, атакож або: () С" являє собою одинарний зв'язок і 07 вибраний із групи, яка складається з одинарного зв'язку і -2--4 ОН), де 7 вибраний із групи, яка складається з одинарного зв'язку, 0, З І МН, а п дорівнює 1-3; або () С являє собою --ОНе«ОН-А- | СУ являє собою одинарний зв'язок; йо являє собою С5ло арильну групу, необов'язково заміщену одним або кількома замісниками, вибраними з групи, яка складається з таплогену, ціано, С-лоалкокси, Ов. гогетероциклоалкокси Свооарилокси, гетероарилокси, алюлалкокси, арипалкокси, алкіларилокси, гетероарилалкокси, алкілгетероарилокси, Сз-талкілу, бз-тетероциклілу і біс-окси-сі залкілену;
В ї ВЗ незалежно вибрані з групи, яка складається з Н, Я8хХ ОН, ОВ, ЗН, БАХ, МН», МНАХ,
МАХ», нітро, Мезоп і галогену; де В ії В незалежно вибрані з групи, яка складається з необов'язково заміщеного Сі-іг2алкілу,
Зо Сз-огетероциклілу та беооарильних груп; де вибраний із групи, яка складається з НН, ВХ, ОН, Ох, НН, 58, МН, МН!НАХ, МА;АХВХ, нітро,
Мозоп і галогену; або: (а) В являє собою Н, і В являє собою ОН, ОВ, де ВХ являє собою С «алкіл; (Б) Вр А утворюють азотно-вуглецевий подвійний зв'язок між атомами азоту і вуглецю, до яких вони приєднуються; або (с) НУ'являє собою Н, і зх являє собою 50;М, де 7 дорівнюється 2 або 3; дех являє собою групу Сз-галкіпену, ланцюг якої може перериватися одним або декількома гетероатомами, вибраними з групи, яка складається з О, 5, МН і ароматичного кільця;
УхрУух вибрані з групи, яка складається з ФО, БІ МА;
Ве, ТЗ, 8 вибрані з однакових груп, таких як В! 2 ЯЗ відповідно, а НОЯ | ВЗ являють собою такі ж Ні ВЗ, ії кожний М являє собою моновалентний фармацевтично прийнятний катіон або обидві М групи разом являють собою бівалентний Фармацевтично прийнятний катіон.
Сілгалкіл: Використовуваний у даному документі термін "Сі-галкіл" стосується моновалентного фрагменту, отриманого за допомогою видалення атома водню від атома вуглецю у вуглеводневій сполуці, яка має від 1 до 12 атомів вуглецю, який може бути аліфатичним або аліциклічним, і який може бути насиченим або ненасиченим (наприклад, частково ненасиченим, повністю ненасиченим). Таким чином, термін "алкіл" включає підкласи алкенілів, алкінілів, циклоалкілів і тощо, обговорювані нижче.
Приклади насичених алкільних груп включають без обмеження метил (Сі), етил (Сг), пропіл (Сз), бутил (Са), пентил (Св), гексил (Св) і гептил (С7).
Приклади насичених лінійних алкільних груп включають без обмеження метил (Сі), етил (Сг), н-пропіл (Сз), н-бутил (Са), н-пентил (аміл) (Св), н-гексил (Св) і н-гептил (Ст).
Приклади насичених розгалужених алкільних груп включають без обмеження ізо-пропіл (Сз), ізо-бутил (Са), втор-бутил (Са), трет-бутил (Са), ізо-пентил (Св) і нео-пентил (Сб).
Сзгогетероцикліл: Використовуваний у даному документі термін "Сз-гогетероцикліл" стосується моновалентного фрагменту, отриманого шляхом видалення атома водню від атомів у кільці гетероциклічної сполуки, причому цей фрагмент має від З до 20 атомів у кільці, з-поміж яких від 1 до 10 є гетероатомами в кільці. Переважно кожне кільце має від З до 7 атомів у кільці, з-поміж яких від 1 до 4 є гетероатомами в кільці.
У даному контексті префікси (наприклад, Сз-го, Сз-7, Свє тощо) позначають кількість атомів у кільці або діапазон кількості атомів у кільці, будь-то атоми вуглецю або гетероатоми.
Наприклад, термін "Св-єгетероцикліл", використовуваний у даному документі, стосується гетероциклільної групи, яка містить 5 або 6 атомів у кільці.
Приклади моноциклічних гетероциклільних груп включають без обмеження одержані 3:
Мі: азиридин (Сз), азетидин (Са), піролідин (тетрагідропірол) (Св), піролін (наприклад, 3- піролін, 2, 5-дигідропірол) (Св), 2Н-пірол або ЗН-пірол (ізопірол, ізоазол) (Сх), піперидин (Св), дигідропіридин (Св), тетрагідропіридин (Св), азепін (С7); О:: оксиран (Сз), оксетан (Са), оксолан (тетрагідрофуран) (С5), оксол (дигідрофуран) (С5), оксан (тетрагідропіран) (Св), дигідропіран (Св), піран (Св), оксепін (С7); Зі: тіїран (Сз), тіетан (Са), тіолан (тетрагідротіофен) (Св), тіан (тетрагідротіопіран) (Св), тіепан (С7); Ог2: діоксолан (Св), діоксан (Сє) і діоксепан (С7); Оз: триоксан (Св); Мг: імідазолін (Св), піразолідин (діазолідин) (С5), імідазолін (Св), піразолін (дигідропіразол) (С5), піперазин (Свє); М:іО:: тетрагідрооксазол (Св), дигідрооксазол (Св), тетрагідроіїзоксазол (С5), дигідроїзоксазол (С5), морфолін (Свє), тетрагідрооксазин (Св), дигідрооксазин (Св), оксазин (Св); Мі51: тіазолін (С5), тіазолидин (С5), тіоморфолін (Св); М2Оч: оксадіазин (Св); О151: оксатіол (Св) та оксатіан (тіоксан) (Св); а також М:О:51: оксатіазин (Св).
Приклади заміщених моноциклічних гетероциклільних груп включають ті, які одержані з сахаридів, у циклічній формі, наприклад фуранози (Сб), такі як арабінофураноза, ліксофураноза,
Зо рибофураноза і ксилофураноза, і піранози (Св), такі як алопіраноза, альтропіраноза, глюкопіраноза, манопіраноза, гулопіраноза, ідопіраноза, галактопіраноза і талопіраноза.
Свгоарил: Використовуваний у даному документі термін "Свгоарил" стосується моновалентного фрагменту, отриманого за допомогою видалення атома водню від атомів в ароматичному кільці ароматичної сполуки, причому цей фрагмент має від З до 20 атомів у кільці. Переважно, кожне кільце має від 5 до 7 атомів у кільці.
У даному контексті префікси (наприклад, Сз-го, Св-7, Св тощо) позначають кількість атомів у кільці або діапазон кількості атомів у кільці, будь-то атоми вуглецю або гетероатоми.
Наприклад, термін "Св-варил", використовуваний у даному документі, стосується арильної групи, яка містить 5 або 6 атомів у кільці.
В одному варіанті здійснення антитіла до В7-НЗ за даним винаходом можна кон'югувати з димером РВО, який характеризується наступною формулою ХХХІа:
Н -М б. ин ло Ма Н то ва во р в) (в) і ОСН» (ХХХІа) де вказана вище структура описує димер РВО За2202 (270-207) і кон'югована з антитілом до
В7-НЗ за даним винаходом за допомогою лінкера І. 552202 (2С0-207) розкритий, наприклад, у публікації заявки на патент США Мо 2007/0173497, яка включена в даний документ за допомогою посилання в повному своєму обсязі.
В іншому варіанті здійснення димер РВО, 5050-1882, кон'югований з антитілом до В7-НЗ за
БО даним винаходом за допомогою лінкера лікарського засобу, як показано на фіг. 4. 5050-1882 розкрито в Зийїйпегіапа еї аІ. (2013) Віоой 122(8):1455 і в публікації заявки на патент США
Мо 2013/0028919, яка включена в даний документ за допомогою посилання в повному своєму обсязі. Як описано на фіг. 4, димер РВО 5050-1882 можна кон'югувати з антитілом за допомогою лінкера маІ-аіа-дипептиду (у сукупності позначений як 5050-1910 на фіг. 4). У певному варіанті здійснення антитіло до В7-НЗ, як описано в даному документі, кон'юговане з димером РВО,
описаним на фіг. 4. Таким чином, у додатковому варіанті здійснення даного винаходу передбачено антитіло до В7-НЗ, як описано в даному документі, кон'юговане з димером РВО за допомогою лінкера маІ-аі(а-дипептиду, як описано на фіг. 4. У певних варіантах здійснення даний винахід передбачає антитіло до В7-НЗ, яке містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка містить домен СОБЗ з амінокислотною послідовністю під ЗЕО ІЮО МО: 35, домен СОК2 з амінокислотною послідовністю під БЕО ІЮ МО: 34 і домен СОКІ з амінокислотною послідовністю під ЗЕО ІЮ МО: 33, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка містить домен СОКЗ, що містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮ МО: 39, домен СОК2, що містить амінокислотну послідовність під БЕО ІЮ МО: 38, та домен СОК/1, що містить амінокислотну послідовність під
ЗЕО ІЮ МО: 37, кон'юговане з РВО, у тому числі без обмеження димером РВО, показаним на фігурі 4. У певних варіантах здійснення даний винахід передбачає антитіло до В7-НЗ, яке містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить домен СОКЗ з амінокислотною послідовністю під зХЕО ІЮ МО: 12, домен СОК2, що містить амінокислотну послідовність під зБХЕО
ІЮО МО: 140, та домен СОМК1, що містить амінокислотну послідовність під 5ЕО ІЮО МО: 10, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка містить домен СОКЗ з амінокислотною послідовністю під 5ЕО ІЮ МО: 15, домен СОК2, що містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮ МО: 7, та домен СОМ, що містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮ МО: 136, кон'юговане з РВО, у тому числі без обмеження димером РВО, показаним на фігурі 4. У певних варіантах здійснення даний винахід передбачає антитіло до В7-НЗ, яке містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, що містить домен СОКЗ з амінокислотною послідовністю під ЗЕО ІЮ МО: 12, домен СОК2, що містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІЮ МО: 140, та домен СОКІ, що містить амінокислотну послідовність під 5ЕО ІЮ МО: 10, і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка містить домен СОКЗ з амінокислотною послідовністю під 5ЕО ІЮ МО: 15, домен СОК2, що містить амінокислотну послідовність під ЗЕО ІО МО: 7, та домен СОКІ, що містить амінокислотну послідовність під 5ЕО ІЮ МО: 138, кон'юговане з РВО, у тому числі без обмеження димером РВО, показаним на фігурі 4. У певних варіантах здійснення даний винахід передбачає антитіло до В7-НЗ, яке містить варіабельну ділянку важкого ланцюга пиАбр1З3мМ1, як визначено амінокислотною послідовністю, викладеною під ЗЕО ІЮО МО: 147 або пиАбЗм2.5, або пиАбБЗмУ2.6, як визначено амінокислотною послідовністю, викладеною під 5ЕО ІЮО МО: 139, ії
Зо варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка містить амінокислотну послідовність під «ЕС ІЮ МО: 144, 135 або 137, згідно з пиАБбІ1Змі, пиАБбЗм2.5 або ПпПиАБЗм2.6, відповідно, де антитіло кон'югують із РВО, із таким як без обмеження ілюстративний димер РВО, показаний на фігурі 4. р. Антрацикліни
Антитіла до В7-НЗ3 за даним винаходом можуть бути кон'юговані щонайменше з одним антрацикліном. Антрацикліни являють собою підклас протипухлинних антибіотиків, виділених із бактерій роду Бігеріотусез. Типові приклади включають без обмеження даунорубіцин (Сегибідіпе, Веста Іарогаюгієв), доксорубіцин (Айгіатусіп, Веаїога Іарогаюгіев; також називаний доксорубіцину гідрохлориду, дигідроксидаунорубіцин і Вибех), епірубіцин (ЕїІПепсе,
Ріїгеї) та ідарубіцин (Ідатусіп; Рії2ег Іпс.). Таким чином, в одному варіанті здійснення антитіло до В7-НЗ за даним винаходом кон'юговане щонайменше з одним антрацикліном, наприклад доксорубіцином. с. Каліхеаміцини
Антитіла до В7-НЗ3 за даним винаходом можуть бути кон'юговані щонайменше з одним каліхеаміцином. Каліхеаміцини являють собою родину енедеїїнових антибіотиків, одержаних із організму грунту Місготопозрога еспіпозрога. Каліхеаміцини зв'язуються з малою борозною
ДНК і спричиняють двониткові розриви ДНК, що призводить до загибелі клітин з ефективністю в 100 раз вище порівняно з іншими хіміотерапевтичними засобами (Обатіє сеї аї!. (2003) Сит Оріп
Рпагтасої 3:386). Одержання каліхеаміцинів, які можна використовувати як кон'югати лікарських засобів за даним винаходом, описане в патентах США МеМе5712374; 5714586; 5739116; 5767285; 5770701; 5770710; 5773001 ї 5877296. Структурні аналоги каліхеаміцину, які можна використовувати, включають без обмеження у, сг, аз, М-ацетил-уї, РБАС і 61; (Ніптап 6ї аї.,
Сапсег Везєатгси 53:3336-3342 (1993), їоде еї аІЇ., Сапсег Везеєагси 58:2925-2928 (1998) і вищезгадані патенти СШАМоМо 5712374, 5714586, 5739116, 5767285, 5770701, 5770710, 5773001 ї 5877296). Таким чином, в одному варіанті здійснення антитіло до В7-НЗ за даним винаходом кон'юговане щонайменше з одним каліхеаміцином. а. Дуокарміцини
Антитіла до В7-НЗ3 за даним винаходом можуть бути кон'юговані щонайменше з одним дуокарміцином. Дуокарміцини являють собою підклас протипухлинних антибіотиків, виділених із бактерій роду Бігеріотусез. (див. Мадатига апа Зайо (1998) СПпетівігу ої Неїегосусіїс бо Сотроипах5, Мої. 34, Мо. 12). Дуокарміцини зв'язуються з малою борозною ДНК та алкілують аденінову нуклеотидну основу в положенні МЗ3 (Водег (1993) Риге апа Аррі Спет 65(6):1123; і
Водег апа донп5оп (1995) РМАБ О5А 92:3642). Синтетичні аналоги дуокарміцинів включають без обмеження адозелезин, бізелезин і карцелезин. Таким чином, в одному варіанті здійснення антитіло до В7-НЗ за даним винаходом кон'юговане щонайменше з одним дуокарміцином. е. Інші протипухлинні антибіотики
Додатково до вищезазначеного, додаткові протипухлинні антибіотики, які можна використовувати в АЮС з антитілом до В7-НЗ3 за даним винаходом, включають блеоміцин (Вієпохапе, ВгізіоІ-Муєгв5 Запірб), мітоміцин і плікаміцин (також відомий як мітраміцин). 3. Імуномодулювальні засоби
В одному аспекті антитіла до В7-НЗ за даним винаходом можуть бути кон'юговані щонайменше з одним імуномодулювальним засобом. Використовуваний у даному документі термін "імуномодулювальний засіб" стосується засобу, який може стимулювати або модифікувати імунну відповідь. В одному варіанті здійснення імуномодулювальний засіб являє собою імуностимулятор, який підсилює імунну відповідь суб'єкта. В іншому варіанті здійснення імуномодулювальний засіб являє собою імунодепресант, який послабляє імунну відповідь суб'єкта. Імуномодулювальний засіб може модулювати мієлоїдні клітини (моноцити, макрофаги, дендритні клітини, мегакаріоцити і гранулоцити) або лімфоїдні клітини ( Т-клітини, В-клітини і клітини природні клітини-кілери (МК)) та будь-яку іншу їхню диференційовану клітину. Типові приклади включають без обмеження бацилу Кальмета-Герена (ВС) і левамізол (ергамізол).
Інші приклади імуномодулювальних засобів, які можна використовувати в АОС за даним винаходом, включають без обмеження протиракові вакцини, цитокіни та імуномодулювальну генну терапію. а. Протиракові вакцини
Антитіла до В7-НЗ за даним винаходом можуть бути кон'юговані з протираковою вакциною.
Використовуваний у даному документі термін "протиракова вакцина" стосується композиції (наприклад, пухлинного антигену та цитокіну), яка спричиняє пухлиноспецифічну імунну відповідь. Відповідь виникає завдяки власній імунній системі суб'єкта при введенні протипухлинної вакцини або, у випадку даного винаходу, при введенні АОС, який містить антитіло до В 7-НЗ і протиракову вакцину. У переважних варіантах здійснення імунна відповідь
Зо призводить до знищення пухлинних клітин в організмі (наприклад, первинних або метастатичних пухлинних клітин). Застосування протиракових вакцин зазвичай включає введення певного антигену або групи антигенів, які, наприклад, присутні на поверхні конкретної ракової клітини або присутні на поверхні конкретного інфекційного агента, що сприяють утворенню раку. У деяких варіантах здійснення застосування протиракових вакцин призначене з метою профілактики, тоді як в інших варіантах здійснення застосування призначене для з метою терапії. Необмежувальні приклади протипухлинних вакцин, які можна використовувати в
АРрС з антитілом до В7-НЗ за даним винаходом, включають рекомбінантну бівалентну вакцину проти вірусу папіломи людини (НРУ) типів 16 і 18 (Сегмагіх, СіахозтйнНКіїпе), рекомбінантну чотиривалентну вакцину проти вірусу папіломи людини (НРУ) типів 6, 11, 16 і 18 (Сагаавії, МетгеКк а Сотрапу) і сипулейцел-т (Ргохепде, ЮОепагеоп). Таким чином, в одному варіанті здійснення антитіло до В7-НЗ за даним винаходом кон'юговане щонайменше з однієї протиракової вакциною, яка є або імуномодулятором, або імундепресантом. р. Цитокіни
Антитіла до В7-НЗ3 за даним винаходом можуть бути кон'юговані щонайменше з одним цитокіном. Термін "цитокін", як правило, стосується білків, що вивільняються однієї популяцією клітин, які діють на іншу клітину як міжклітинні медіатори. Цитокіни безпосередньо стимулюють імунні ефекторні клітини та стромальні клітини в місці локалізації пухлини і підсилюють розпізнавання пухлинних клітин цитотоксичними ефекторними клітинами (ее апа Магодоїїп (2011) Сапсегз 3:3856). Численні дослідження пухлин на тваринних моделях продемонстрували, що цитокіни мають широкий спектр протипухлинної активності, і це було використано в низці підходів протиракової терапії на основі цитокінів (І ее апа Магооїї вище). В останні роки низка цитокінів, зокрема СМ-С5Е, 1-7, 1-12, 11-15, 11-18 ї ІІ -21, входить у клінічні випробування для пацієнтів з раком на пізній стадії (І еє апа Магооїї вище).
Приклади цитокінів, які можна використовувати в АОС за даним винаходом, включають без обмеження паратиреоїдний гормон, тироксин, інсулін, проінсулін, релаксин, прорелаксин, глікопротеїнові гормони, такі як фолікулостимулювальний гормон (Е5Н), тиреотропний гормон (ТОН) і лютеїнізувальний гормон (ІН), фактор росту печінки, фактор росту фібробластів, пролактин, плацентарний лактоген, фактор некрозу пухлини, мюлерів інгібувальний фактор, пептид, зв'язаний з гонадотропіном миші, інгібін, активін, фактор росту ендотелію судин; 60 інтегрин, тромбопоетин (ТРО); фактори росту нервів, такі як МСЕ, фактор росту тромбоцитів,
трансформувальні фактори росту (ТОР), інсуліноподібний фактор росту-ї і -І, еритропоетин (ЕРО), остеоіндуктивні фактори, інтерферони, такі як інтерферон а, В, у, колонієстимулювальні фактори (С5Е); гранулоцитарно-макрофагальний-С-5Е (24М-С5Е) та гранулоцитарно-С5Е (а-
С5РБ), інтерлейкіни (І), такі як І -1, П/-Та, 1-2, 1-3, 11 -4, 11 -5, 11 -6, 1-7, 1-8, 1-9, 1-11, 11-12, фактор некрозу пухлини та інші поліпептидні фактори, зокрема ІБ і Кії-ліганд (КІ).
Використовуваний у даному документі термін цитокін включає білки з природних джерел або з культури рекомбінантних клітин і біологічно активні еквіваленти цитокінів із нативною послідовністю. Таким чином, в одному варіанті здійснення даного винаходу передбачено АОС, який містить антитіло до В 7-НЗ, описане в даному документі, і цитокін. с. Колонієстимулювальні фактори (С5Е)
Антитіла до В7-НЗ3 за даним винаходом можуть бути кон'юговані щонайменше з одним колонієсєтимулювальним фактором (С5РЕ). Колонієстимулювальні фактори (С5Е), являють собою фактори росту, які сприяють продукуванню лейкоцитів у кістковому мозку. Деякі види лікування раку (наприклад, хіміотерапія) можуть впливати на лейкоцити (які допомагають боротися з інфекцією); у зв'язку з цим можна вводити колонієстимулювальні фактори, які допомагають підтримувати рівні лейкоцитів і зміцнюють імунну систему. Колонієстимулювальні фактори також можна використовувати після трансплантації кісткового мозку, щоб допомогти новому кістковому мозку почати продукувати білі клітини крові. Типові приклади С5БЕ, які можна використовувати в АОС з антитілом до В7-НЗ за даним винаходом, включають без обмеження еритропоетин (Ероеєїїп), філграстим (Меородеп (також відомий як гранулоцитарний колонієстимулювальний фактор (С-С5Е), Атаеп, Іпс.), сарграмостим (лейкін (гранулоцитарно- макрофагальний колонієстимулювальний фактор і (аМ-С5Е) Сеплуте Согрогаїйоп), промегапоетин і ОргеїмеКіп (рекомбінантний ІІ -11, Рії2ег, Іпс.). Таким чином, в одному варіанті здійснення даного винаходу передбачено АЮС, який містить антитіло до В7-НЗ, описане в даному документі, і СОР. 4. Генна терапія
Антитіло до В7-НЗ за даним винаходом може бути кон'юговане щонайменше з однією нуклеїновою кислотою (прямо або опосередковано за допомогою носія) для генної терапії.
Генна терапія зазвичай стосується введення генетичного матеріалу в клітину, де генетичний
Зо матеріал призначений для лікування захворювання. Оскільки це стосується імуномодулювальних засобів, то генну терапію використовують для стимуляції природної здатності суб'єкта інгібувати проліферацію ракових клітин або знищувати ракові клітини. В одному варіанті здійснення АОС з антитілом до В7-НЗ за даним винаходом містить нуклеїнову кислоту, що кодує функціональний терапевтичний ген, який використовується для заміни мутованого або іншим способом нефункціональноздатного (наприклад, усіченого) гена, асоційованого з раком. В інших варіантах здійснення АОС з антитілом до В7-НЗ за даним винаходом містить нуклеїнову кислоту, яка кодує або іншим способом забезпечує одержання терапевтичного білка для лікування раку. Нуклеїнову кислоту, яка кодує терапевтичний ген, можна безпосередньо кон'югувати з антитілом до В7-НЗ або альтернативно можна кон'югувати з антитілом до В7-НЗ за допомогою носія. Приклади носіїв, які можна використовувати для доставки нуклеїнової кислоти для генної терапії, включають без обмеження вірусні вектори або ліпосоми. 5. Алкілувальні засоби
Антитіла до В7-НЗ за даним винаходом можуть бути кон'юговані з одним або кількома алкілувальними засобами. Алкілувальні засоби являють собою клас протипухлинних сполук, які приєднують алкільну групу до ДНК. Приклади алкілувальних засобів, які можна використовувати в АОС за даним винаходом, включають без обмеження алкілсульфонати, етиленіміни, похідні метиламіну, епоксиди, азотисті іприти, нітрозосечовини, триазини та гідразини. а. Алкілсоульфонати
Антитіла до В7-НЗ3 за даним винаходом можуть бути кон'юговані щонайменше з одним алкілсоульфонатом. Алкілсоульфонати являють собою підклас алкілувальних засобів загальної формули: А-502-0-В', де А і В' являють собою типові алкільні або арильні групи. Типові приклади алкілсульфонатів включають без обмеження бусульфан (Муїегап, СіаховзтЙНКІїпе;
Визиїгех ІМ, РОГ. Віорпатта, Іпс.). р. Азотисті іприти
Антитіла до В7-НЗ3 за даним винаходом можуть бути кон'юговані щонайменше з одним азотистим іпритом. Типові приклади цього підкласу протипухлинних сполук включають без обмеження хлорамбуцил (І єиКегап, СпіахозтіїнКіпє), циклофосфамід (Суїохап, ВгівіоІ-Муеєтв запціЇбр; Меозаг, Рії2ег, Іпс.), естрамустин (естрамустин фосфат натрію або Евігасуї), Ріїгег, Іпс.), бо іфосфамід (ІМех, ВгівіоІ-Муєтв 5ацібр), мехлоретамін (Мивгіагдеп, І ипабеск Іпс.) і мелфалан
(АІКегап, або І -Рат, або фенілаланіновий іприт; СіахозтіНКІЇїпе). с. Нітрозосечовини
Антитіло до В7-НЗ за даним винаходом можна кон'югувати щонайменше з однією нітрозосечовиною. Нітрозосечовини являють собою підклас алкілувальних засобів, які є розчинними в ліпідах. Типові приклади включають без обмеження, кармустин (ВСМИО (також відомий як о Віспи, /М.М-біс(2-хлоретил)-М-нітрозосечовину або 1,3-біс(2-хлоретил)-І- нітрозосечовина)!, ВгізіоІ-Муєтз баці), фотемустин (також відомий як Мирпогап), ломустин (ССМ або 1-(2-хлоретил)-1-нітрозосечовина, ВгізіоІ-Муєтв Запібр), німустин (також відомий як
АСМІ) і стрептозоцин (7апозаг, Тема РНнаптасеціїіса!5). й. Триазини і гідразини
Антитіло до В7-НЗ за даним винаходом можна кон'югувати щонайменше з одним триазином або гідразином. Триазини і гідразини являють собою підклас азотовмісних алкілувальних засобів. У деяких варіантах здійснення дані сполуки спонтанно розкладаються або можуть бути метаболізовані з одержанням проміжних продуктів алкілдіазонію, які полегшують перенесення алкільної групи в нуклеїнові кислоти, пептиди та/або поліпептиди, за рахунок чого забезпечуються мутагенні, канцерогенні або цитотоксичні ефекти. Типові приклади включають без обмеження дакарбазин (Оіїс-доте, Вауег Неайнсаге РНаптасеціїса!в Іпс.), прокарбазин (Мілаіапе, б5ідта-Таи Рнаптасеціїіса!5, Іпс.) і темозоломід (Тетодаг, ЗсНегіпа Ріоцдн). е. Інші алкілувальні засоби
Антитіла до В7-НЗ3 за даним винаходом можуть бути кон'юЮговані щонайменше з одним етиленіміном, похідною метиламіну або епоксидом. Етиленіміни являють собою підклас алкілувальних засобів, які зазвичай містять щонайменше одне азиридинове кільце. Епоксиди являють собою підклас алкілувальних засобів, які характеризуються як циклічні етери тільки з трьома атомами в кільці.
Типові приклади етиленімінів включають без обмеження тіопету (Пнпіорієх, Атаеєп), діазикон (також відомий як азиридинілбензохінон (АО))) і мітоміцин С. Мітоміцин з являє собою природний продукт, який містить азиридинове кільце та, ймовірно, спричиняє цитотоксичність за рахунок зшивання ДНК (Согт ВТ, еї аІ. Сапсег Рез. 1985:45:3510; Кеппеду КА, єї а! Сапсег Вев. 1985;45:3541). Типовими прикладами похідних метиламіну та їх аналогів є без обмеження альтретамін (НехаіІєп, МО РНапта, Іпс.), який також відомий як гексаметиламін і гексастат.
Типові приклади епоксидів цього класу протиракових сполук включають без обмеження діангідрогалактит. Діангідрогалактит (1,2:5,6-діангідродульцит) хімічно пов'язаний з азиридинами та, як правило, полегшує перенесення алкільної групи за допомогою аналогічного механізму, як описано вище. Дибромдульцит гідролізують до діангідрогалактиту і, таким чином, він являє собою проліки для епоксиду (5еїЇІвї С, єї аЇ. Сапсег Спетоїнег Вер. 1969;53:377). 6. Антиангіогенні засоби
В одному аспекті антитіла до В7-НЗ, описані в даному документі, кон'югують щонайменше з одним антиангіогенним засобом. Антиангіогенні засоби інгібують ріст нових кровоносних судин.
Антиангіогенні засоби виявляють свою дію різними шляхами. У деяких варіантах здійснення такі засоби перешкоджають здатності фактора росту досягати своєї мети. Наприклад, фактор росту ендотелію судин (МЕСЕ) є одним із первинних білків, залучених до ініціювання ангіогенезу шляхом зв'язування з конкретними рецепторами на поверхні клітин. Таким чином, деякі антиангіогенні засоби, які перешкоджають взаємодії МЕСЕ з його родинним рецептором, не дозволяють МЕСЕ ініціювати ангіогенез. В інших варіантах здійснення такі засоби перешкоджають внутрішньоклітинним сигнальним каскадам. Наприклад, у випадку ініціювання конкретного рецептора на поверхні клітини, ініціюється каскад інших хімічних сигналів, щоб сприяти росту кровоносних судин. Таким чином, деякі ферменти, наприклад деякі тирозинкінази, які, як відомо, беруть участь у внутрішньоклітинних сигнальних каскадах, які сприяють, наприклад, проліферації клітин, є мішенями при лікуванні раку. В інших варіантах здійснення такі засоби перешкоджають внутрішньоклітинним сигнальним каскадам. У ще інших варіантах здійснення такі засоби блокують конкретні мішені, що активує і сприяє росту клітин, або безпосередньо перешкоджають росту клітин кровоносних судин. Властивості інгібування ангіогенезу були виявлені у більше ніж 300 речовинах з численними прямими і непрямими інгібуючими ефектами.
Типові приклади антиангіогенних засобів, які можна використовувати в АЮС за даним винаходом, включають без обмеження ангіостатин, АВХ ЕСЕ, С1-1033, РКІ-166, Еді-вакцину,
ЕКВ-569, СМУ2016, ІСН-62, ЕМО 55900, СРЗБ58, РО153035, АСа1478, ІМО-С225 (Етйих, 201839 (Іезза), О51І-774, ерлотиніб (тарцева), ангіостатин, арестин, ендостатин, ВАМ 12-9566 і фторурацил або доксорубіцин, канстатин, карбоксиамідотриозол з паклітакселом, ЕМО121974, 60 5-24, вітаксин, диметилксантенону оцтова кислота, ІМ862, інтерлейкін-12, інтерлейкін-2, ММ-3,
Нимм833, РТК787, ВНитакб, ангіозим (рибозим), ІМО-1С11, Меомазіаї, маримстат, приномастат,
ВМ5 -275291, СОІ-3, ММ1270, 50101, 506668, 5011248, 505416, із паклітакселом, із гемцитабином і цисплатином, із іринотеканом і цисплатином і з опромінюванням, текогалан, темозоломід і РЕС-інтерферон агро, тетратіомолібдат, ТМР-470, талідомід, СОС-5013 і з таксотером, тумстатин, 2-метоксиестрадіол, МЕСЕ-Тгтар, інгібітори ттТоОА (дефоролімус, еверолімус (Аййпіог, Момапів РНаптасешіса! Согрогайоп) і темзиролімус (Тогівзєї, Р'ії2ег,
Іпс.)), інгібітори кіназ (наприклад, ерлотиніб (Тагсема, Ссепепіеси, Іпс.), іматиніб (Сівєемес, Момапів
Ріпаптасецшііса! Согрогаїйоп), гефітиніб (Ігез5за, Авіга7епеса Рпаптасеціїса!в5), дазатиніб (Зргусеї,
ВгузіоІ-Муеєтв Запцібр), сунітиніб (5йщіепі, Рії2ег, Іпс.), нілотиніб (Тазідпа, Момапів РНаптасеціісаї!
Согрогаїоп), лапатиніб (Тукего, СіахозтіїнКіпе РНаптасеціїсаІ5), сорафеніб (Мехамаг, Ваує" і
Опух), фосфоінозитід З-кінази (РІЗК), озимертиніб, кобіметиніб, траметиніб, дафрафеніб, динацикліб). 7. Антиметаболіти
Антитіла до В7-НЗ3 за даним винаходом можуть бути кон'юговані щонайменше з одним антиметаболітом. Антиметаболіти являють собою види хіміотерапевтичних речовин, які дуже схожі на нормальні речовини всередині клітини. Під час вбудовування антиметаболіту в клітинний метаболізм, результат для клітини виявляється негативним, наприклад, клітина виявляється нездатною до поділу. Антиметаболіти класифікують згідно з речовинами, дії яких вони перешкоджають. Приклади антиметаболітів, які можна використовувати в АОС за даним винаходом, включають без обмеження антагоніст фолієвої кислоти (наприклад, метотрексат), антагоніст піримідину (наприклад, 5-фторурацил, фосфуридин, цитарабін, капецитабін і гемцитабін), пуриновий антагоніст (наприклад, б-меркаптопурин і б-тіогуанін) та інгібітор аденозиндезамінази (наприклад, кладрибін, флударабін, неларабін і пентостатин), як більш докладно описане нижче. а. Антифолати
Антитіла до В7-НЗ3 за даним винаходом можуть бути кон'юЮговані щонайменше з одним антифолатом. Антифолати являють собою підклас антиметаболітів, структурно подібних до фолатів. Типові приклади включають без обмеження метотрексат, аміно-фолієву кислоту (також відому як аміноптерин і 4-аміноптерова кислота), лометрексол (І МТХ), пеметрексед (Аїїтріа, ЕЇї
Зо Шу апа Сотрапу) і триметрексат (Мецігехіп, Веп Мепие І арогайогієв, Іпс.) р. Антагоністи пурину
Антитіла до В7-НЗ3 за даним винаходом можуть бути кон'юговані щонайменше з одним антагоністом пурину. Аналоги пурину є підкласом антиметаболітів, які структурно подібні до групи сполук, відомих як пурини. Типові приклади пуринових антагоністів включають без обмеження азатіоприн (Алазап, зЗаїїх; Ітигап, СТІахозтійнКіпе), кладрибін (І еивіайп Ігакож відомий як 2-СаА)Ї, дапезеп Віоїеси, Іпс.), меркаптопурин (Ригіпеїйо! (гакож відомий як 6- меркаптоетанолі|, СіахобтійНКІїпе), флударабін (Рішдага, Сепгуте Согрогаїйоп), пентостатин (Мірепі, також відомий як 2'--дезоксикоформіцин (ОСЕ)), б-тіогуанін (Іапмі5 (також відомий як тіогуаніні, СІахобтЙНКІЇпе). с. Антагоністи пиримідину
Антитіла до В7-НЗ3 за даним винаходом можуть бути кон'юговані щонайменше з одним антагоністом піримідину. Аналоги піримідину є підкласом антиметаболітів, які структурно подібні до групи сполук, відомих як пурини. Типові приклади антагоністів піримідину включають без обмеження азацитидин (Уідага, СеІдепе Согрогаїйоп), капецитабін (Хеіода, Росне І абогайюгієв), цитарабін (також відомий як цитозин-арабінозид і арабінозилцитозин, Весагога І арогарюгієв), децитабін (Юасодеп, Еізаі Рнаптасеціїса!5), 5-фторурацил (Аайгисії, Тема Рнаптасецііса!5; Етаех,
Маїєапі РНнаптасецігсаї!5, Іпс), фтор-2'-дезоксиуридин 5-фосфат (РаОМР), 5- фторудинтрифосфат і гемцитабін Сеттхаг, Еїї І Шу апа Сотрапу). 8. Боровмісні засоби
Антитіло до В7-НЗ за даним винаходом можна кон'югувати щонайменше з одним боровмісним засобом. Боровмісні засоби включають клас терапевтичних сполук для лікування раку, які перешкоджають проліферації клітин. Типові приклади боровмісних засобів включають без обмеження борофіцин і бортезоміб (Уєісаде, Міепішт Рнаптасеціїса!5). 9. Хемопротекторні засоби
Антитіла до В7-НЗ за даним винаходом можна кон'югувати щонайменше з одним хемопротекторним засобом. Хемопротекторні лікарські засоби являють собою клас сполук, які допомагають захистити організм від специфічних токсичних ефектів хіміотерапії.
Хемопротекторні засоби можна вводити з різними хіміотерапевтичними засобами для захисту здорових клітин від токсичних ефектів хіміотерапевтичних лікарських засобів з одночасним бо забезпеченням лікування ракових клітин за допомогою хіміотерапевтичного засобу, що вводиться. Типові хемопротекторні засоби включають без обмеження аміфостин (Ещнуоі,
Медіттипе, Іпс.), який використовують для зниження нефротоксичності, пов'язаної з кумулятивними дозами цисплатину, дексразоксану (Тоїесі, Аргісиє РНагта, 7/іІпесаг) для лікування екстравазації, спричиненої введенням антрацикліну (Тоїес), і для лікування ускладнень, пов'язаних із серцево-судинними захворюваннями, спричинених уведенням протипухлинного антибіотику доксорубіцину (7іпесага) і месни (Мезпех, ВгізіоІ-Муєгз Запїрб), який використовують для запобігання геморагічного циститу протягом хіміотерапії з використанням іфосфаміду. 10. Гормональні засоби
Антитіло до В7-НЗ за даним винаходом можна кон'югувати щонайменше з одним гормональним засобом. Гормональний засіб (зокрема синтетичні гормони) являє собою сполуку, яка перешкоджає продукуванню або активності ендогенно продукованих гормонів ендокринної системи. У деяких варіантах здійснення такі сполуки перешкоджають росту клітин або спричиняють цитотоксичний ефект. Необмежувальні приклади включають андрогени, естрогени, медроксипрогестерону ацетат (Ргомега, Ріїі2ег, Іпс.) і прогестини. 11. Антигормональні засоби
Антитіла до В7-НЗ за даним винаходом можна кон'югувати щонайменше з одним антигормональним засобом. "Антигормональним" засобом є засіб, яку пригнічує продукування та/або запобігає функції деяких ендогенних гормонів. В одному варіанті здійснення антигормональний засіб перешкоджає активності гормону, вибраного з групи, що включає андрогени, естрогени, прогестерон і гонадотропін-рилізинг гормон, за рахунок чого забезпечується перешкоджання росту різних ракових клітин. Типові приклади антигормональних засобів включають без обмеження аміноглютетимід, анастрозол (Агітідех, Авіга7гепеса
РіпаптасеціісаІвє), бікалютамід (Сазодех, Авіга/епеса РНаптасеціїсаІ5), ципротерону ацетат (Сургозіаї, Вауєг РІ С), дегарелікс (Ріппадоп, ЕРегтіпуд РіНаптасеціісаІвє), екземестан (Аготавіп,
Ріїгег Іпс.), флутамід (Огодепії, 5спегіпа-Ріошай 14), фулвестрант (Разіодех, Авіга/епеса
Рпаптасецшііса!5), госерелін (7оі0дех, Азіга/епеса Ріпагтасеціїса!5), летрозол (Ретага, Момапів
Ріпаптасешіісаіє Согрогайоп), лейпролід (Ргозіар), люпрон, медроксипрогестерону ацетат (Ргомега, Ріїгег Іпс.), мегестролу ацетат (Медасе, ВгівіоІ-Муєтв ЗдиЇрЬ Сотрапу), тамоксифен
Зо (Моїмадех, Азіга/епеса Рпагтасеціїса!5) і трипторелін (Оєсарецуї, Реттіпд). 12. Кортикостероїди
Антитіла до В7-НЗ3 за даним винаходом можуть бути кон'юговані щонайменше з одним кортикостероїдом. Кортикостероїди можна використовувати в АОС за даним винаходом для зменшення запалення. Прикладом кортикостероїду є без обмеження глюкокортикоїд, наприклад, преднізон (Оеназопе, Рпаптасіа 4 Оріопп Сотрапу, підрозділ Рії2ег, Іпс.). 13. Фотоактивні терапевтичні засоби
Антитіла до В7-НЗ за даним винаходом можна кон'югувати щонайменше з одним фотоактивним терапевтичним засобом. Фотоактивні терапевтичні засоби включають сполуки, які можна використовувати для знищення оброблених клітин під час впливу електромагнітного випромінювання певної довжини хвилі. Терапевтично релевантні сполуки поглинають електромагнітне випромінювання з довжинами хвиль, які проникають через тканину. У переважних варіантах здійснення сполуку вводять у нетоксичній формі, яка здатна продукувати фотохімічний ефект, який є токсичним для клітин або тканини при достатній активації. В інших переважних варіантах здійснення ці сполуки утримуються в раковій тканині і легко виводяться з нормальних тканин. Необмежувальні приклади включають різні хромагени та барвники. 14. Олігонуклеотиди
Антитіла до В7-НЗ3 за даним винаходом можуть бути кон'юговані щонайменше з одним олігонуклеотидом. Олігонуклеотиди одержують із коротких ланцюгів нуклеїнових кислот, і принцип їх активності полягає в запобіганні процесингу генетичної інформації. У деяких варіантах здійснення олігонуклеотиди для застосування в АОС являють собою немодифіковані однониткові та/або двониткові молекули ДНК або РНК, тоді як в інших варіантах здійснення ці терапевтичні олігонуклеотиди являють собою хімічно модифіковані однониткові та/або двониткові ДНК- або РНК-молекули. В одному варіанті здійснення, олігонуклеотиди, використовувані в АОС, є відносно короткими (19-25 нуклеотидів) і гібридизуються з унікальною послідовністю нуклеїнової кислоти в загальному пулі нуклеїнових кислот, що наявні в клітинах.
Деякі з важливих олігонуклеотидних технологій включають антисенсові олігонуклеотиди (у тому числі РНК-інтерференцію (ВМАЇ)), аптамери, олігонуклеотиди Сра і рибозими. а. Антисенсові олігонуклеотиди
Антитіло до В7-НЗ за даним винаходом можна кон'югувати щонайменше з одним бо антисенсовим олігонуклеотидом. Антисенсові олігонуклеотиди розроблені для зв'язування з
РНК шляхом гібридизації Уотсона-Крика. У деяких варіантах здійснення антисенсовим олігонуклеотидом є комплементарним нуклеотиду, що кодує область, домен, частину або сегмент В7-НЗ. У деяких варіантах здійснення антисенсовий олігонуклеотид містить від приблизно 5 до приблизно 100 нуклеотидів, від приблизно 10 до приблизно 50 нуклеотидів, від приблизно 12 до приблизно 35 нуклеотидів, від приблизно 18 до приблизно 25 нуклеотидів. У деяких варіантах здійснення олігонуклеотид є на щонайменше 5095, на щонайменше 6095, на щонайменше 7095, на щонайменше 8095, на щонайменше 9095, на щонайменше 9595, на щонайменше 9695, на щонайменше 9795, на щонайменше 98 95, на щонайменше 9995 або на щонайменше 10095 гомологічним ділянці, частині, домену або сегменту гена В7-НЗ. У деяких варіантах здійснення існує значна гомологія послідовності у щонайменше 15, 20, 25, 30, 35, 40, 50 або 100 послідовних нуклеотидах гена В7-НЗ. У переважних варіантах здійснення розмір таких антисенсових олігонуклеотидів становить від 12 до 25 нуклеотидів у довжину, причому більшість антисенсових олігонуклеотидів мають у довжину від 18 до 21 нуклеотидів. Існує безліч механізмів, які можуть бути використані для інгібування функції РНК після зв'язування олігонуклеотиду з цільовою РНК (СтооКе 57. (1999). Віоспіт. Віорпуз. Асіа, 1489, 30-42). У найбільш охарактеризованому антисенсовому механізмі відбувається розщеплювання цільової
РНК ендогенними клітинними нуклеазами, такими як РНКаза Н або нуклеаза, асоційована з механізмом інтерференції РНК. Однак олігонуклеотиди, які інгібують експресію цільового гена за допомогою некаталітичних механізмів, таких як модуляція сплайсингу або припинення перенесення, також можуть бути потужними та селективними модуляторами функції генів.
Іншим незалежним від РНКази антисенсовим механізмом, якому нещодавно почали приділяти увагу, є ВМАЇ (Ріге єї а!. (1998). Мате, 391, 806-811.; 7атоге РО. (2002). Зсієпсе, 296, 1265-1269). РНК-інтерференція (АМАї) являє собою посттранскрипційний процес, де двониткова РНК інгібує експресію гена специфічним щодо послідовності чином. У деяких варіантах здійснення ефект ВМАЇ досягається за рахунок уведення відносно довгої двониткової
РНК (а5А!МА), тоді як у переважних варіантах здійснення цей ефект НМАЇї досягається за рахунок уведення більш коротких двониткових РНК, наприклад малої інтерферувальної РНК (бівМА) та/або мікроРНК (тійМА). У ще одному варіанті здійснення АМАі також може бути досягнута шляхом уведення плазміди, яка утворює а58МА, комплементарну цільовому гену. У кожному з вищенаведених варіантів здійснення двониткова РНК призначена для перешкоджання генній експресії конкретної цільовою послідовності в клітинах. Як правило, цей механізм включає перетворення а5АМА у короткі РНК, які спрямовують рибонуклеази до гомологічних цільових мРНК (підсумовано, КиУКип, бсіепсе 2294:797 (2001)), які потім руйнують відповідну ендогенну МРНК, що в результаті призводить до модуляції генної експресії. Варте уваги те, що азАМА, як повідомляється, має антипроліферативні властивості, що дозволяє також передбачити терапевтичні застосування (А!йбреї єї аї., Ргос. Маї!. Асайд. 5сі., ОБА 88:906 (1991)). Наприклад, синтетична а5АМА, яка, як було показано, інгібує ріст пухлини у мишей (І ему єї а). Ргос. Маї. Асад. сі. ОБА, 62:357-361 (1969)), є активною під час лікування лейкемії мишей (7еїІегпісК єї аї., Ргос. бос. Ехр. Віої. Мед. 130:126-128 (1969)), а також інгібує хімічно- індуковане утворення пухлин шкіри у мишей (Сеї|їроїп єї а)І., 5сіепсе 167:205-207 (1970)). Таким чином, у переважному варіанті здійснення даного винаходу передбачено застосування антисенсових олігонуклеотидів у АОС для лікування раку молочної залози. В інших варіантах здійснення даний винахід передбачає композиції та способи ініціювання лікування за допомогою антисенсового олігонуклеотиду, де а5АМА перешкоджає експресії В7-НЗ у цільових клітинах на рівні МРНК. О5АМА, описана вище, стосується природної РНК, частково очищеної
РНК, рекомбінантно продукованої РНК, синтетичної РНК, а також зміненої РНК, яка відрізняється від природної РНК за рахунок включення нестандартних нуклеотидів, матеріалу, відмінного від нуклеотидного, нуклеотидних аналогів (наприклад, замкнутої нуклеїнової кислоті (ІМА)), дезоксирибонуклеотидів і будь-якої їх комбінації. РНК за даним винаходом повинна бути достатньо схожою з природною РНК для того, щоб мати здатність опосередковувати описану в даному документі модуляцію на основі антисенсових олігонуклеотидів. р. Аптамери
Антитіла до В7-НЗ3 за даним винаходом можуть бути кон'юговані щонайменше з одним аптамером. Аптамер являє собою молекулу нуклеїнової кислоти, яка вибрана з випадкових пулів на основі її здатності зв'язувати інші молекули. Подібно до антитіл, аптамери можуть зв'язувати цільові молекули з надзвичайної афінністю й специфічністю. У багатьох варіантах здійснення аптамери приймають складні, що залежать від послідовності тривимірні форми, які дозволяють їм взаємодіяти з цільовим білком, що приводить у результаті до утворення щільно зв'язаного комплексу, аналогічного взаємодії антитіло-антиген, що перешкоджає таким чином бо функції вказаного білка. Конкретна здатність аптамерів зв'язуватися щільно та специфічно з їх цільовим білком вказує на їх потенціал як видів цільової молекулярної терапії. с. Олігонуклеотиди Сраї
Антитіла до В7-НЗ за даним винаходом можна кон'югувати щонайменше з одним олігонуклеотидом Сра. Відомо, що бактеріальна та вірусна ДНК є потужними активаторами як уродженого, так і набутого імунітету в людей. Такі імунологічні характеристики пов'язані з неметильованими мотивами СпСі-динуклеотиду, виявленими в бактеріальній ДНК. У зв'язку з тим, що в людей такі мотиви зустрічаються рідко, в імунної системи людини розвинулася здатність розпізнавати ці мотиви як рання ознака інфекції і згодом ініціювати імунні реакції.
Тому олігонуклеотиди, які містять такий мотив Сро, можна застосовувати для ініціювання протипухлинної імунної відповіді. й. Рибозими
Антитіло до В7-НЗ за даним винаходом можна кон'югувати щонайменше з одним рибозимом. Рибозими являють собою каталітичні молекули РНК у діапазоні від приблизно від 40 до 155 нуклеотидів у довжину. Здатність рибозимів розпізнавати й розрізати певні молекули
РНК робить їх потенційними кандидатами для терапії. Типовий приклад включає ангіозим. 15. Радіонуклідні засоби (радісактивні ізотопи)
Антитіла до В7-НЗ за даним винаходом можна кон'югувати щонайменше з одним радіонуклідним засобом. Радіонуклідні засоби включають засоби, які характеризується нестабільним ядром, що здатне піддаватися радіоактивному розпаду. Основа успішного лікування радіонуклідами залежить від достатньої концентрації та тривалого втримання радіонукліду ракової клітиною. Інші фактори, які слід ураховувати, включають період напівжиття радіонуклідів, енергію випромінюваних частинок і максимальний діапазон, протягом якого випромінювана частка може переміщуватися. У переважних варіантах здійснення терапевтичний засіб являє собою радіонуклід, вибраний із групи, що складається з "п, "7 у, главі, 213Ві, 211ді, 62Сбу, бу, 67, у, і25|, І81І|, зар, ззр, 4756с, пд, 67(За, меру, 15351, 11Тр, іввру, 166Но, "86Де, 188Де, 189Де, 2'2рр, 223Да, 225Дс, 59Ее, 7596, 77ДАв, 895, 99Мо, 105ДН, с9ра, 1зру, м9рт, 169, т94у 98, 199Д у і 21 рр. Також переважними є радіонукліди, які по суті розпадаються з оже- випромінюваними частинками. Наприклад, Со-58, Сіаа-67, ВІі-80, То-99, Вр-103, РІ-109, Іп-111 1,
ЗБ-119, І-125, Но-161, О5-189 і Іг-192. Енергії розпаду застосовних нуклідів, що випромінюють бета-частинки, переважно являють собою ру-152, Аї-211, Ві-212, Ва-223, Вп-219, Ро-215, Ві-21 1, Ас-225, Рі-221, Аї -217, Ві-213 і Ет-255. Енергії розпаду застосовних радіонуклідів, що випромінюють альфа-частинки, становлять переважно 2000-10000 кеВ, більш переважно 3000- 8000 кеВ і найбільш переважно 4000-7000 кеВ. Додаткові потенційні для застосування радіоїзотопи включають "С, ЗМ, 150, 75Вг, 198Ду, 221ДАс, 126), 193|, 77Вуг, зт, 5Ви, 97Ви, озВи, 15Виу,
З5 197На, 203Н, 121т7Те,22т7Те, 125т7Те, 1657т, 67Тт, 1в8Тт, 197рі, 109рд, 15ВН, 12ру, 13ру, е1Тр, іввНо, 199Ду, 57Со, 58Со, 5Ст, 59Еє, 7556, 201Т|, 225Дс, 76Ву, 69Ур тощо. 16. Радіосенсибілізатори
Антитіла до В7-НЗ3 за даним винаходом можуть бути кон'юговані щонайменше з одним радіосенсибілізатором. Використовуваний у даному документі термін "радіосенсибілізатор" визначається як молекула, переважно молекула з низькою молекулярною масою, що вводиться тваринам у терапевтично ефективних кількостях для підвищення чутливості клітин, що підлягають радіосенсибілізації, до електромагнітного випромінювання, та/"або для сприяння лікуванню захворювань, які піддаються лікуванню електромагнітним випромінюванням.
Радіосенсибілізатори являють собою засоби, які роблять ракові клітини більш чутливими до променевої терапії, хоча зазвичай набагато менше впливають на нормальні клітини. Таким чином, радіосенсибілізатор можна використовувати в комбінації з радіоактивно міченим антитілом або АС. Додавання радіосенсибілізатора може призвести до підвищення ефективності порівняно з лікуванням за допомогою радіоактивно міченого антитіла або фрагмента антитіла. Радіосенсибілізатори описані в Ю. М. соїЇдрегод (еа.), Сапсег Тпегару м/йп
Кадіоіареіей Апіродіе5, СЕС Ргез5 (1995). Приклади радіосенсибілізаторів включають гемцитабін, 5-фторурацил, таксан і цисплатин.
Радіосенсибілізатори можуть бути активовані електромагнітним випромінюванням рентгенівських променів. Типовими прикладами активованих рентгенівськими променями радіосенсибілізаторів Є без обмеження наступні: метронідазол, мізонідазол, дезметилмізонідазол, пімонідазол, етанідазол, німоразол, митоміцин С, КО 1069, 5К 4233,
ЕбО9, КВ 6145, нікотинамід, 5-бромдезоксиуридин (ВОК), 5-йоддезоксиуридин (ШК), бромдезоксицитидин, фтордезоксиуридин (Рак), гідроксисечовина, цисплатин і терапевтично ефективні аналоги та їх похідні. Альтернативно радіосенсибілізатори можна активувати з використанням фотодинамічної терапії (РОТ). Типові приклади фотодинамічних 60 радіосенсибілізаторів включають без обмеження похідні гематопорфірину, фотофрин (г), похідні бензопорфіринів, МРеб, олово-етіопорфірин (ЗпЕТ2), феоборбід а, бактеріохлорофіл а, нафталоціаніни, фталоціаніни, фталоціанін цинку та їхні терапевтично ефективні аналоги і похідні. 16. Інгібітори топоіїзомерази
Антитіла до В7-НЗ3 за даним винаходом можуть бути кон'юговані щонайменше з одним інгібітором топоізомерази. Інгібітори топоїзомерази являють собою хіміотерапевтичні засоби, призначені для порушення дії ферментів топоіїзомераз (топоїзомераз І і Ії), які є ферментами, що контролюють змінювання структури ДНК, шляхом каталізу руйнування та відновлення фосфодіестерного остова ниток ДНК протягом нормального клітинного циклу. Типові приклади інгібіторів ДНК-топоіїзомерази І включають без обмеження камптотецини та їх похідні іринотекан (СРТ-11, Сатрюзаїг, Рії2ег, Іпс.) і топотекан (Нусатіїйп, СіахозтіНКіїпе Рпаптасеціїса!в5). Типові приклади інгібіторів ДНК-топоіїзомерази Ії включають без обмеження амсакрин, даунорубіцин, доксорубіцин, епіподофілотоксини, еліптицини, епірубіцин, етопозид, разоксан і теніпозид. 17. Інгібітори кіназ
Антитіла до В7-НЗ3 за даним винаходом можуть бути кон'юговані щонайменше з одним інгібітором кіназ. Ріст пухлини можна інгібувати шляхом блокування здатності протеїнкіназ функціонувати. Приклади інгібіторів кіназ, які можна використовувати в АОС за даним винаходом, включають без обмеження акситиніб, бозутиніб, цедираніб, дазатиніб, ерлотиніб, гефітиніб, іматиніб, лапатиніб, лестауртиніб, нілотиніб, семаксаніб, сунітиніб, осимертиніб, кобіметиніб, траметиніб, дабрафеніб, динацикліб і вандетаніб. 18. Інші засоби
Приклади інших засобів, які можна використовувати в АОС за даним винаходом, включають без обмеження абрин (наприклад, ланцюг А абрину), альфа-токсин, білки АїЇІешпйев "огаїї, аматоксин, кротин, курцин, діатинові білки, дифтерійний токсин (наприклад, ланцюг А дифтерійного токсину і незв'язувальні активні фрагменти дифтерійного токсину), дезоксирибонуклеазу (ЮОпазе), гелонін, мітогелін, ланцюг А модесину, інгібітор Мотогаїса сНагапіїа, неоміцин, онконазу, феноміцин, білки Рпуюіаса атегісапа (РАРІ, РАРІЇ ї РАР-5), противірусний білок лаконосу, ендотоксин Рзендотопав, екзотоксин Рзепдотопах (наприклад, ланцюг А екзотоксину (Рзепдотопаб5 аегидіпобза)), рестриктоцин, ланцюг А рицину,
Зо рибонуклеазу (Нпазе), інгібітор Зараопагіа опйісіпаій5, сапорин, альфа-сарцин, стафілококовий ентеротоксин-А, правцевий токсин, цисплатин, карбоплатин та оксаліплатин (ЕІохаїйп, Запоїї
Аумепіїв), протеасомні інгібітори (наприклад РБ-341 |бортезоміб або Уеїсаде)), інгібітори НАС (вориностат (70їіпла, МетгкК 8 Сотрапу, Іпс.)), беліностат, ентиностат, моцетиностат і панобіностат), інгібітори СОХ-2, заміщені сечовини, інгібітори білків теплового шоку (наприклад, гелданаміцин і його численні аналоги), адренокортикальні супресанти і трикотецени. (див., наприклад, УУО 93/21232). Інші засоби також включають аспарагіназу (Езраг, І ипабеск Іпс.), гідроксисечовину, левамізол, мітотан (ІГузоадгеп, ВгібіоІ-Муєг5 зацірЬ) і третиноїн (Вепома,
МаїІвапі Рпаптасешііса!5 Іпс.).
І.С. АОС до В7-НЗ Інші зразкові лінкери
Додатково до лінкерів, згаданих вище, інші ілюстративні лінкери включають без обмеження б-малеїмідокапроїл, малеіїмідопропаноїл ("МР"), валін-цитрулін ("маІ-с" або "ус"), аланін- фенілаланін Саїіа-рпе"), р-амінобензилоксикарбоніл С РАВ"), М-сукцинімідил-4-(2- піриділтіо)упентаноат ("5РР") і 4-(М-малеімідометил)циклогексан-1-карбоксилат ("МОСС").
В одному аспекті антитіло до В7-НЗ кон'югують із лікарським засобом (таким як ауристатин, наприклад, ММАЕ), за допомогою лінкера, який містить малеімідокапроїл ("тс"), валін-цитрулін (маІ-сїї або "мсе") і РАВА (згадується як "лінкер тсо-мс-РАВА"). Малеімідокапроїл діє як лінкер до антитіла В7-НЗ і є нерозщеплюваним. МаЇ-сї являє собою дипептид, який є амінокислотною ланкою лінкера і забезпечує розщеплення лінкера протеазою, зокрема протеазою катепсину В.
Таким чином, компонент лінкера ма1І!-сїї забезпечує засіб для вивільнення ауристатину з АОС при впливі внутрішньоклітинного середовища. У лінкері р-амінобензиловий спирт (РАВА) діє як спейсер і є самовідщеплюваним, що забезпечує вивільнення ММАЕ. Структура лінкера то-мс-
РАВА-ММАЕ наведена на фігурі 3.
Як описано вище, придатні лінкери включають, наприклад, розщеплювані й нерозщеплювані лінкери. Лінкер може являти собою "розщеплюваний лінкер", що полегшує вивільнення лікарського засобу. Необмежувальні ілюстративні розщеплювані лінкери включають нестабільні в кислих умовах лінкери (наприклад, які містять гідразон), чутливі до протеази (наприклад, чутливі до пептидази) лінкери, фотолабільні лінкери або дисульфідовмісні лінкери (Спагі еї аї.,
Сапсег Везеагсп 52: 127-131 (1992); патент США Мо 5208020). Розщеплюваний лінкер зазвичай чутливий до розщеплювання у внутрішньоклітинних умовах. Придатні розщеплювані лінкери бо включають, наприклад, пептидний лінкер, розщеплюваний внутрішньоклітинною протеазою,
такий як лізосомальна протеаза або ендосомальна протеаза. В ілюстративних варіантах здійснення лінкером може бути дипептидний лінкер, такий як валін-цитруліновий (маЇ-сі) або фенілаланін-лізиновий (рпе-іув) лінкери.
Лінкери переважно стабільні у позаклітинному середовищі в достатньому ступені, щоб бути терапевтично ефективними. Перед транспортуванням або доставкою в клітину АОС переважно є стабільним і залишається інтактним, тобто антитіло залишається кон'югованим (із фрагментом-лікарським засобом. Лінкери, які є стабільними за межами цільової клітини, можна розщеплювати один раз із деякою ефективною швидкістю всередині клітини. Таким чином, ефективний лінкер буде: (Її підтримувати специфічні властивості зв'язування антитіла; (ії) створювати можливість для доставки, наприклад, внутрішньоклітинної доставки фрагмента у вигляді лікарського засобу; і (ії) підтримувати терапевтичний ефект, наприклад, цитотоксичний ефект фрагмента у вигляді лікарського засобу.
В одному варіанті здійснення лінкер є розщеплюваним у внутрішньоклітинних умовах таким чином, що розщеплення лінкера забезпечує вивільнення лікарського засобу від зв'язку з антитілом у внутрішньоклітинному середовищі у достатньому ступені для його терапевтичної ефективності. У деяких варіантах здійснення розщеплюваний лінкер є рН-чутливим, тобто чутливим до гідролізу за певних значень рН. Як правило, рН-чутливий лінкер гідролізується в кислих умовах. Наприклад, можна застосовувати нестабільний у кислих умовах лінкер, який зазнає гідролізу в лізосомі (наприклад, гідразон, семікарбазон, тіосемікарбазон, амід цис- аконітової кислоти, ортоестер, ацеталь, кеталь або подібні до них). (Див., наприклад, патенти
США МоМо 5122368, 5824805, 5622929; Виром/спік апа УмаїКег, 1999, Рнагт. ТНегарешісв 83:67- 123; МеміМе еї а!., 1989, Віої. Спет. 264:14653-14661.) Ці линкери є відносно стабільними в умовах показника нейтрального рН, наприклад таких, що спостерігаються в крові, але є нестабільними при рН нижче від 5,5 або 5,0, що являє собою приблизним показником рН у лізосомі. У певних варіантах здійснення гідролізовний лінкер являє собою тіоетерний лінкер (такий як, наприклад, тіоетер, приєднаний до терапевтичного засобу за допомогою ацилгідразонового зв'язку (див., наприклад, патент США Мо 5622929).
В інших варіантах здійснення лінкер є розщеплюваним у відновлюваних умовах (наприклад, дисульфідний лінкер). Ціла низка дисульфідних лінкерів відома з рівня техніки, зокрема,
Зо наприклад, лінкери, які можуть бути утворені із застосуванням 5АТА (сукцинімідил-5- ацетилтіоацетат), ЗРОР (М-сукцинімідил-3-(2-піридилдитіо)пропіонат), 5РОВ (М-сукцинімідил-3- (г-піридилдитіо)бутират) і «МРТ (альфа-метил-альфа-(2-піридилдитіо)толуол), 5РОВ і 5МРТ. (див. наприклад, ТПпогре єї аї., 1987, Сапсег Вев5. 47:5924-5931; М/аумтлупсгак еї аї., Іп
Іттипосопійдаїев: Апіїбоду Сопійдаїез іп Вадіоітадегу апа ТНегару ої Сапсег (С. М. Модеї! єд., Охога у. Ргев55, 1987. див. також патент США Мо 4880935).
У деяких варіантах здійснення лінкер є розщеплюваним під дією розщеплюваного засобу, наприклад, ферменту, який присутній у внутрішньоклітинному середовищі (наприклад, усередині лізосоми, або ендосоми, або кавеоли). Лінкер може являти собою, наприклад, пептидильний лінкер, який розщеплюється внутрішньоклітинним ферментом пептидазою або протеазою, у тому числі без обмеження лізозомальною або ендосомальною протеазою. У деяких варіантах здійснення пептидильний лінкер складається щонайменше з двох амінокислот або щонайменше з трьох амінокислот. Розщеплювальні засоби можуть включати катепсини В і
О, а також плазмін, кожний з яких, як відомо, гідролізує дипептидні похідні лікарського засобу, що приводить до вивільнення активного лікарського засобу всередині клітин-мішеней (див., наприклад, ЮиБомуспік апа УмаїКеї, 1999, РНапт. ТНегарешісв 83:67-123). Найтиповішими є пептидильні лінкери, які розщеплюються ферментами, що присутні в клітинах, які експресують
В7-НУЗ. Приклади таких лінкерів описані, наприклад, у патенті США Мо 6214345, включеному в даний документ за допомогою посилання в повному обсязі і для всіх цілей). У конкретному варіанті здійснення пептидильним лінкером, розщеплюваним під дією внутрішньоклітинної протеази, є лінкер Ма!-Сії або лінкер Рпе-Г уз (див., наприклад, патент США Мо 6214345, в якому описаний синтез доксорубіцину з лінкером маІ-сі)й. Одна перевага застосування внутрішньоклітинного протеолітичного вивільнення терапевтичного засобу полягає в тому, що засіб зазвичай послаблюється під час кон'югації, а стабільність кон'югатів у сироватці крові зазвичай висока.
В інших варіантах здійснення лінкер являє собою малонатний лінкер (оппзоп еї аї., 1995,
Апіісапсег Вев. 15:1387-93), малеімідобензоїльний лінкер (Іа еї аї., 1995, Віоога-Меда-Снет..
З(10)1299-1304) або 3-М-амідний аналог (Іа еї аї., 1995, Віоогау-Мед-Спет.. 3(10):1305-12): 1305-12).
В інших варіантах здійснення лінкерна одиниця не розщеплюється, і лікарський засіб бо вивільняється, наприклад, шляхом руйнування антитіла. Див. публ. заявки на патент США
Мо 20050238649, включену в даний документ за допомогою посилання в своєму повному обсязі.
АБС, який містить нерозщеплюваний лінкер, може бути сконструйований таким чином, що АОС залишається фактично поза клітиною та взаємодіє з певними рецепторами на поверхні цільовою клітини так, що зв'язування АОС ініціює конкретний клітинний сигнальний шлях (або
Б запобігає йому).
У деяких варіантах здійснення лінкер являє собою по суті гідрофільний лінкер (наприклад,
РЕСАМаї ії сульфо-5РОВ). Гідрофільний лінкер можна використовувати для зменшення ступені, з якою лікарський засіб може виходити з резистентних ракових клітин за допомогою МОЄ (множинна лікарська стійкість) або функціонально подібних транспортерів.
В інших варіантах здійснення при розщепленні лінкер, функціонує для прямого або опосередкованого інгібування росту клітин та/(або проліферації клітин. Наприклад, у деяких варіантах здійснення лінкер при розщепленні може функціонувати як інтеркалювальний засіб, за рахунок чого інгібується біосинтез макромолекул (наприклад, реплікація ДНК, транскрипція
РНК та/або синтез білка).
В інших варіантах здійснення лінкер призначений для полегшення знищення прилеглих випадкових клітин (знищення сусідніх клітин) шляхом дифузії лінкера з лікарським засобом та/або тільки лікарського засобу до сусідніх клітин. В інших варіантах здійснення лінкер сприяє клітинній інтерналізації.
Наявність стерично утрудненого дисульфіду може підвищити стабільність конкретного дисульфідного зв'язку, за рахунок чого підвищується ефективність АОС. Таким чином, в одному варіанті здійснення лінкер включає стерично утруднений дисульфідний зв'язок. Стерично утруднений дисульфід стосується дисульфідного зв'язку, що наявний у певному молекулярному оточенні, де оточення характеризується конкретним просторовим розташуванням або орієнтацією атомів, як правило, усередині тієї ж молекули або сполуки, які запобігають або щонайменше частково інгібують відновлення дисульфідного зв'язку. Таким чином, наявність об'ємних (або стерично утруднених) хімічних фрагментів та/або об'ємних бічних ланцюгів амінокислот, найближчих до дисульфідного зв'язку, запобігає або щонайменше частково інгібує потенційні взаємодії дисульфідного зв'язку, які приводять до відновлення дисульфідного зв'язку.
Зо Примітно, що вищезгадані типи лінкерів не є взаємовиключними. Наприклад, в одному варіанті здійснення лінкер, використовуваний в описаних у даному документі АОС з антитілом до В7-НЗ, являє собою нерозщеплюваний лінкер, який сприяє клітинній інтерналізації.
У деяких варіантах здійснення компонент лінкера містить "вставну ланку", яка зв'язує антитіло з іншим компонентом лінкера або з фрагментом у вигляді лікарського засобу. Приклад вставної ланки описаний у патенті США Мо 8309093, який включено за допомогою посилання в даний документ. У деяких варіантах здійснення вставна ланка з'єднана з антитілом до В7-НЗ за допомогою дисульфідного зв'язку між атомом сірки ланки антитіла до В7-НЗ і атомом сірки вставної ланки. Ілюстративна вставна ланка за даним варіантом здійснення описана в патенті
США Мо 8309093, який включено в даний документ за допомогою посилання. В інших варіантах здійснення вставна ланка містить реакційноздатний сайт, який може утворювати зв'язок із первинною або вторинною аміногрупою антитіла. Приклади таких реакційноздатних сайтів включають без обмеження активовані естери, такі як естери сукциніміду, 4-нітрофенілові естери, пентафторфенілові естери, тетрафторфенілові естери, ангідриди, хлорангідриди, сульфонілхлориди, ізоціанати та ізотіоціанати. Ілюстративні вставні ланки за даним варіантом здійснення описані в патенті США Мо 8309093, який включено в даний документ за допомогою посилання.
У деяких варіантах здійснення носій містить реакційноздатний сайт, який вступає в реакцію з модифікованою групою вуглеводів (-СНО), яка може бути присутньою на антитілі. Наприклад, вуглевод може бути слабко окиснений із використанням реагенту, такого як періодат натрію, і отримана (-СНО) ланка окисненого вуглеводу може бути конденсована за допомогою вставної ланки, яка містить такі функціональні групи, як гідразид, оксим, первинний або вторинний амін, гідразин, тіосемікарбазон, гідразинкарбоксилат і арилгідразид, такі як описані Капеко еї аї., 1991, Віосопіцдаїє Спет. 2: 133-41. Ілюстративні вставні ланки за даним варіантом здійснення описані в патенті США Мо 8309093, який включено в даний документ за допомогою посилання.
У деяких варіантах здійснення лінкерний компонент містить "амінокислотну ланку". У деяких таких варіантах здійснення амінокислотна ланка забезпечує розщеплення лінкера протеазою, за рахунок чого забезпечується полегшення вивільнення лікарського засобу з імунокон'югату під впливом внутрішньоклітинних протеаз, таких як лізосомальні ферменти (Оогопіпа еї аї. (2003)
Маї. ВіоїєснпоїЇ. 21:778-784). Ілюстративні амінокислотні ланки включають без обмеження 60 дипептиди, трипептиди, тетрапептиди та пентапептиди. Ілюстративні дипептиди включають без обмеження валін-цитрулін (мус або маї1!-сі), аланін-фенілаланін (аї або аіа-рпе); фенілаланін-лізин (ЖК або рПе-уз); фенілаланін-гомолізин (рпе-потоїу5) і М-метил-валін-цитрулін (Ме-маї-сію.
Ілюстративні трипептиди включають без обмеження гліцин-валін-цитрулін (діу-маЇІ-сі) і гліцин- гліцин-гліцин (діу-діу-діу). Амінокислотна ланка може містити природні амінокислотні залишки, та/або мінорні амінокислоти, та/або відмінні від природних амінокислотні аналоги, такі як цитрулін. Амінокислотні ланки можна сконструювати та оптимізувати для ферментативного розщеплення за допомогою конкретного ферменту, наприклад, за допомогою асоційованої з пухлиною протеази, катепсину В, С і О або плазмінової протеази.
В одному варіанті здійснення амінокислотна ланка являє собою валін-цитрулін (мс або маї!- сід). В іншому аспекті амінокислотна ланка являє собою фенілаланін-лізин (тобто Ж). У ще іншому аспекті амінокислотної ланки, амінокислотна ланка являє собою М-метилвалін-цитрулін.
У ще іншому аспекті амінокислотна ланка являє собою 5-аміновалеріанову кислоту, гомофенілаланін-лізин, тетраїзохінолінкарбоксилат-лізин, циклогексилаланін-лізин, ізоніпекотинову кислоті лізіну, бета-аланін-лізин, гліцин-валін-глутамін та ізоніпекотинову кислоту.
Альтернативно, в деяких варіантах здійснення амінокислотну ланку замінюють на глюкуронідну ланку, яка зв'язує вставну ланку зі спейсерною ланкою, якщо наявні вставні та спейсерні ланки, зв'язує вставну ланку з фрагментом у вигляді лікарського засобу, якщо відсутня спейсерна ланка, і зв'язує лінкерну ланку з лікарським засобом, якщо вставна ланка та спейсерна ланка відсутні. Глюкуронідна ланка включає сайт, який може бути розщеплений ферментом В-глюкуронідазою (див. також 05 2012/0107332, включений у даний документ за допомогою посилання). У деяких варіантах здійснення глюкуронідна ланка містить цукровий фрагмент (5и), зв'язаний за допомогою глікозидного зв'язку (--0--) із самовідщеплюваною групою (27) формули, як показано нижче (див. також 05 2012/0107332, включений у даний документ за допомогою посилання). - ви-о--2-4-
Глікозидний зв'язок (-3-) зазвичай являє собою сайт розщеплення В-глюкуронідази,
Зо такий як зв'язок, що розщеплюється лізосомальною рВ-глюкуронідазою людини. У контексті глюкуронідної ланки термін "самовідщеплювана група" стосується ди- або трифункціонального хімічного фрагмента, який здатний ковалентно зв'язувати два або три розмежовані хімічні фрагменти (тобто цукровий фрагмент (за допомогою глікозидного зв'язку), фрагмент у вигляді лікарського засобу (прямо або опосередковано за допомогою спейсерної ланки), а в деяких варіантах здійснення - лінкер (прямо або опосередковано за допомогою вставної ланки) у стабільну молекулу. Самовідщеплювана група буде спонтанно відокремлюватися від першого хімічного фрагмента (наприклад, спейсера або лікарської одиниці), якщо її зв'язок із цукровим фрагментом розщеплюється.
У деяких варіантах здійснення цукровий фрагмент (Зи) являє собою циклічну гексозу, таку як піраноза, або циклічну пентозу, таку як фураноза. У деяких варіантах здійснення піраноза являє собою глюкуронід або гексозу. Цукровий фрагмент зазвичай перебуває в рВ-О- конформації. У конкретному варіанті здійснення піраноза являє собою В-ЮО-глюкуронідний фрагмент (тобто В-О-глюкуронову кислоту, зв'язану із самовідщеплюваною групою --2-- за допомогою глікозидного зв'язку, яка розщеплюється В-глюкуронідазою). У деяких варіантах здійснення цукровий фрагмент є незаміщеним (наприклад, природна циклічна гексоза або циклічна пентоза). В інших варіантах здійснення цукровий фрагмент може бути заміщеним В-О- глюкуронідом (тобто глюкуроновою кислотою, заміщеною однією або декількома групами, такими як водень, гідроксил, галоген, сірка, азот або нижчий алкіл. У деяких варіантах здійснення глюкуронідна ланка характеризується однією з формул, описану в 05 2012/0107332, включеному в даний документ за допомогою посилання.
У деяких варіантах здійснення лінкер містить спейсерну ланку (-х-), яка, якщо наявна, зв'язує амінокислотну ланку (або глюкуронідну ланку, див. також О5 2012/0107332, включений у даний документ за допомогою посилання) із фрагментом у вигляді лікарського засобу, у тому випадку, якщо амінокислотна ланка є наявною. Альтернативно, спейсерна ланка з'єднує вставну ланку із фрагментом у вигляді лікарського засобу, якщо амінокислотна ланка відсутня.
Спейсерна ланка також може зв'язувати ланку лікарського засобу з ланкою антитіла, якщо відсутні і амінокислотна ланка, і вставна ланка.
Спейсерні ланки мають два основних типи: який не є самовідщеплюваним або є самовідщеплюваним. Спейсерна ланка, яка не є самовідщеплюваною, являє собою ланку, в бо якій частина або вся спейсерна ланка залишаються зв'язаними з фрагментом у вигляді лікарського засобу після розщеплювання, зокрема ферментативного, амінокислотної ланки (або глюкуронідної ланки) із кон'югату антитіло-лікарський засіб. Приклади спейсерної ланки, яка не є самовідщдеплюваною, включають без обмеження (гліцин-гліцин)-спейсерна ланка і гліцин- спейсерна ланка (див. 5 8309093, включений в даний документ за допомогою посилання)).
Інші приклади самовідщеплюваних спейсерів включають без обмеження ароматичні сполуки, які електронно подібні до групи РАВ, такі як похідні 2-аміноімідазол-5-метанолу (Нау еї аї., 1999,
Віоогд, Мей. Спет. Генй., 9: 2237) та оорто- або пара-амінобензилацеталі. Можна використовувати спейсери, які зазнають циклізації при гідролізі амідного зв'язку, такі як заміщені і незаміщені аміди 4-аміномасляної кислоти (Коагідцнез еї а!., 1995, Спетівігу Віоіоду 2: 223), відповідно заміщені біциклої|2.2.11 і біцикло|2.2.2| кільцеві системи (5іогт еї аї., 1972, у). Атег.
Спет. 5ос. 94:5815) та аміди 2-амінофенілпропіонової кислоти (Атвзреї!гту еї аї., 1990, 9. Ога.
Спет. 55:5867). Елімінація аміновмісних лікарських засобів, які заміщені в а-положенні гліцином (Кіпозбигу єї аї., 1984, 9). Мед. Спет., 27: 1447), також є прикладом самовідщеплюваних спейсерів. .
Інші приклади самовідщеплюваних спейсерів включають без обмеження ароматичні сполуки, які електронно подібні до групи РАВ, такі як похідні 2-аміноіїмідазол-5-метанолу (див., наприклад, Нау еї аї.,, 1999, Віоогд. Мей. Спет. Гей. 9:2237) та орто- або пара- амінобензилацеталі. Можна використовувати спейсери, які зазнають циклізації при гідролізі амідного зв'язку, такі як заміщені і незаміщені аміди 4-аміномасляної кислоти (див., наприклад,
Воагіднез еї а!., 1995, Спетівігу Віоіоду 2:223), відповідно заміщені біцикло|2.2.1| і біциклої|2.2.21 кільцеві системи (див., наприклад, 50огт еї аї., 1972, У. Атег.. Спет. Боб. 94:5815) та аміди 2- амінофенілпропіонової кислоти (див., наприклад, Атб5регїгту еї аї., 1990, У. Ога. Спет. 55:5867).
Елімінація аміновмісних лікарських засобів, які заміщені в с-положенні гліцином (див., наприклад, Кіпуд5бигу ей а)., 1984, 9. Мей. Спет. 27:1447), також є прикладом самовідщеплюваних спейсерів.
Інші придатні спейсерні ланки описані в опублікованій заявці на патент США Мо 2005- 0238649, розкриття якої включено в даному документі за допомогою посилання.
Інший підхід для одержання АОС включає застосування гетеробіфункціональних зшивальних засобів, які зв'язують антитіло до В7-НЗ із фрагментом у вигляді лікарського
Зо засобу. Приклади зшивальних засобів, які можна використовувати, включають М-сукцинімідил-4- (2-піридилдитіо)-пентаноат або високорозчинний у воді аналог М-сульфосукцинімідил-4-(2- піридилдитіо)-пентаноат, М-сукцинімідил-4-(2-піридилдитіо)бутират (5РОВ), М-сукцинімідил-4-(5- нітро-2-піридилдитіо)бутират (ЗМРВ) і М-сульфосукцинімідил-4-(5-нітро-2-піридилдитіо)бутират (55МРВ), М-сукцинімідил-4-метил-4-(5-нітро-2-піридилдитіо)упентаноат (ЗММР), М-сукцинімідил- 4-(5-М,М-диметилкарбоксамідо-2-піридилдитіо)бутират (ЗСРВ) або М-сульфосукцинімідил-4-(5-
М,М-диметилкарбоксамідо-2-піридилдитіо)бутират (З5СРВ)). Антитіла за даним винаходом можна модифікувати за допомогою наступних зшивальних засобів: (5-нітро-2-піридилдитіо)- пентаноат, М-сульфосукцинімідил-4-(5-нітро-2-піридилдитіо)-пентаноат, 5Р0ОВ, 5МРВ, 5ЗМРВ,
ЗММР, 5СРВ або 55СРВ можуть потім вступати в реакцію з невеликим надлишком конкретного лікарського засобу, який містить тісльний фрагмент, з одержанням високих виходів АОС.
Переважно зшивальні засоби являють собою сполуки формули, показані в патенті США
Мо 6913748, включеному в даний документ за допомогою посилання.
В одному варіанті здійснення заряджені лінкери (також називані прозарядженими лінкерами) використовуються для кон'югації антитіл до В7-НЗ із лікарськими засобами з утворенням АОС.
Заряджені лінкери включають лінкери, які стають зарядженими після обробки клітин. Наявність зарядженої групи(груп) у лінкері конкретного АЮС або лікарського засобу після клітинної обробки дає декілька переваг, таких як (ї) більша розчинність АОС у воді, (ії) здатність діяти за більш високої концентрації у водних розчинах, (іїї) здатність зв'язувати більшу кількість молекул лікарського засобу на антитіло, що потенційно приводить у результаті до більш високої ефективності, (ім) потенціал збереження заряджених кон'югатів у цільовій клітині, що приводить у результаті до більш високої ефективності, і (м) поліпшена чутливість клітин із стійкістю до багатьох лікарських засобів, які не здатні експортувати заряджені частинки лікарського засобу з клітини. Приклади деяких придатних заряджених або прозаряджених зшивальних засобів та їх синтез показані на фіг. 1-40 у патенті США МоМо 8236319 і включені в даний документ за допомогою посилання. Переважно заряджені або прозаряджені зшивальні засоби являють собою сполуки, які містять сульфонатні, фосфатні, карбоксильні або четвертинні амінні замісники, що значно збільшують розчинність АЮС, зокрема АОС із 2-20 кон'югованими лікарськими засобами. Кон'югати, одержані за допомогою лінкерів, які містять прозаряджений фрагмент, будуть продукувати один або декілька заряджених фрагментів після того, як кон'югат бо метаболізується в клітині.
Додаткові приклади лінкерів, які можна використовувати у композиціях і способах, включають валін-цитрулін; малеїімідокапроїл; амінобензойні кислоти; п-амінобензилкарбамоїл (РАВ); лізосомально-розщеплювані лінкери; малеімідокапроїл-поліетиленгліколь (МС(РЕС)б6-
ОН); М-метилвалін-цитрулін; М-сукцинімідил-4-(М-малеіїмідометил)циклогексан-1-карбоксилат (5МОС); М-сукцинімідил-4-(2-піридилдитіо)бутаноат (5РОВ); і М-сукцинімідил-4-(2- піридилдитіол)пентаноат (5РР) (дивись також 05 2011/0076232). Інший лінкер для застосування за даним винаходом передбачає зв'язок авідин-біотин для одержання авідин-біотинвмісного містить АС (див. також патент США Мо 4676980, публікації згідно з РСТ
МоМо.М/01992/022332А2, УМО1994/016729А1, УМО1995/015770А1, УМО1997/031655А2,
М/О1998/035704А1, М/01999/019500А1, МО2001/09785А2, М О2001/090198А1,
МО2003/093793А2, М О2004/050016А2, М О2005/081898А2, мО2006/083562А2,
МО2006/089668А1, М О2007/150020А1, М О2008/135237А1, МО2010/111198А1,
УМО2011/057216А1, УМО2011/058321А1, УМО2012/027494А1 і ЕР776718В1), де деякі такі лінкери стійкі до розщеплення біотинідазою. Додаткові лінкери, які можна використовувати за даним винаходом, включають пару когезин/докерин, для забезпечення АОС, які містять когезин- докерин (див. публікацію згідно з РСТ Мо У/О2008/097866А2, УМО2008/097870А2,
УМО2008/103947А2 і ММО2008/103953А2).
Додаткові лінкери для застосування за даним винаходом можуть містити непептидні полімери (приклади включають без обмеження поліетиленгліколь, поліпропіленгліколь, поліоксиетильовані поліоли, полівініловий спирт, полісахариди, декстран, полівінілетиловий етер, РІА (полі(молочна кислота)), РІ ЗА (полі(молочна кислота-гліколева кислота)) та їх комбінації, де переважним полімером є поліетиленгліколь) (див. також публікацію згідно з РСТ
Мо МУО2011/000370). Додаткові лінкери також описані у УУО 2004-010957, публікації заявки на патент США Мо 20060074008, публікації заявки на патент США Мо 20050238649 і публікації заявки на патент США Мо 20060024317, кожна з яких включена в даний документ за допомогою посилання в повному своєму обсязі).
Для АОС, який містить майтанзиноїд, багато положень на майтанзиноїдах можуть слугувати як положення для хімічного зв'язування зв'язувального фрагмента. В одному варіанті здійснення майтанзиноїди, що містять зв'язувальний фрагмент, який містить реакційноздатну
Зо хімічну групу, являють собою естери С-3 майтанзинолу та його аналогів, де зв'язувальний фрагмент містить дисульфідний зв'язок, а хімічна реакційноздатна група містить М- сукцинімідиловий або М-сульфосукцинімідиловий естер. Наприклад, застосовними є всі положення 0-3 із гідроксильною групою, положення С-14, модифікованого гідроксиметилом, положення 0-15, модифікованого гідроксильною групою, і положення 0-20 із гідроксильною групою. Зв'язувальний фрагмент найбільш переважно зв'язаний із положенням С-3 майтанзинолу.
Кон'югацію лікарського засобу з антитілом за допомогою лінкера можна здійснити за допомогою будь-якого способу, відомого з рівня техніки. Існує низка різних реакцій для ковалентного приєднання лікарських засобів і лінкерів до антитіл. Цього можна досягнути шляхом здійснення реакції амінокислотних залишків антитіла, зокрема аміногруп лізину, вільних карбоксильних груп глутамінової та аспарагінової кислот, сульфгідрильних груп цистеїну та різноманітних фрагментів ароматичних амінокислот. Одним із найчастіше використовуваних неспецифічних способів ковалентного приєднання є карбодіїмідна реакція зі зв'язуванням карбокси- (або аміно-) групи сполуки з аміно- (або карбокси-) групами антитіла. Крім того, біфункціональні засоби, такі як діальдегіди або імідоестери, використовують для зв'язування аміногрупи сполуки з аміногрупами антитіла. Також для приєднання лікарських засобів до антитіл доступна реакція основи Шиффа. Даний спосіб передбачає окиснення перйодатом лікарського засобу, який містить глікольні групи або гідроксигрупи, з утворенням таким чином альдегіду, який потім піддають реакції зі зв'язувальним засобом. Приєднання відбувається шляхом утворення основи Шиффа з аміногрупами антитіла. Ізотіоціанати також можна використовувати як зв'язувальні засоби для ковалентного приєднання лікарських засобів до антитіл. Інші методики відомі фахівцю в даній галузі техніки і вони перебувають у межах обсягу даного винаходу.
У деяких варіантах здійснення здійснюють реакцію проміжної сполуки, яка є попередником лінкера, із лікарським засобом у відповідних умовах. У деяких варіантах здійснення використовують реакційноздатні групи на лікарському засобі або на проміжній сполуці. Продукт реакції між лікарським засобом і проміжною сполукою або дериватизованим лікарським засобом потім піддають реакції з антитілом до В7-НЗ у відповідних умовах. Синтез і структура ілюстративних лінкерів, вставних ланок, амінокислотних ланок, самовідщеплюваних спейсерних бо ланок описані в публікаціях заявки на патент США МоМо 20030083263, 20050238649 і
20050009751, кожна з яких включена в даний документ за допомогою посилання.
Стабільність АОС може бути виміряна за допомогою стандартних аналітичних методик, таких як мас-спектроскопія, НРІ С і методика відокремлення/аналізу за допомогою І С/М5.
ІМ. Очищення АОС до В7-НЗ
Очищення АОС можна здійснювати таким чином, що будуть одержані АОС, які характеризуються певними значеннями ВАВ. Наприклад, можна застосовувати смолу для НІС для відокремлювання АОС із високим навантаженням лікарським засобом від АОС, які характеризуються оптимальними значеннями співвідношення лікарського засобу й антитіла (значення БАК), наприклад, , АВ 4 або менше. В одному варіанті здійснення гідрофобну смолу додають до суміші АОС так, щоб небажані АОС, тобто АОС із більш високим навантаженням лікарським засобом, зв'язувалися зі смолою та їх можна було селективно видалити із суміші. У певних варіантах здійснення відокремлення АЮС можна досягти шляхом приведення в контакт суміші АОС (наприклад, суміші, яка містить форми АОС, навантажені 4 або менше молекулами лікарського засобу, та форми АОС, навантажені 6 або більше молекулами лікарського засобу) із гідрофобною смолою, де кількість смоли є достатньою для забезпечення зв'язування форм, навантажених лікарським засобом, які необхідно видалити із суміші АОС. Смолу і суміш АОС змішують разом таким чином, щоб форми АОС, які необхідно видалити (наприклад, форми, навантажені б або більше молекулами лікарського засобу), зв'язувалися зі смолою та могли бути відокремлені від інших форм АОС у суміші АОС. Кількість смоли, яку застосовують відповідно до способу, залежить від вагового співвідношення форм, які необхідно видалити, та смоли, де кількість застосовуваної смоли не допускає значного зв'язування форм, навантажених лікарським засобом, які є необхідними. Таким чином, можна застосовувати способи для зменшення середнього значення ВАВ до менше 4. Крім того, для виділення АОС, що характеризуються навантаженням лікарським засобом у будь-якому необхідному діапазоні, наприклад, форм, навантажених 4 або менше молекулами лікарського засобу, форм, навантажених З або менше молекулами лікарського засобу, форм, навантажених 2 або менше молекулами лікарського засобу, форм, навантажених 1 або менше молекулами лікарського засобу, можна застосувати способи очищення, описані в даному документі.
Певні форми молекули(молекул) зв'язуються з поверхнею завдяки гідрофобним взаємодіям між формами та гідрофобною смолою. В одному варіанті здійснення спосіб відповідно до даного винаходу стосується способу очищення, який базується на перемішуванні гідрофобної смоли та суміші АОС, де кількість смоли, що додається до суміші, визначає те, які форми (наприклад, АОС із ОАВ 6 або більше) будуть зв'язуватися. Після одержання й очищення антитіла із системи експресії (наприклад, системи експресії ссавця) антитіло відновлюють і зв'язують із лікарським засобом за допомогою реакції кон'югації. Одержана в результаті суміш
АОС часто містить АОС, які характеризуються діапазоном значень САВ, наприклад, від 1 до 8. В одному варіанті здійснення суміш АОС містить форми, навантажені 4 або менше молекулами лікарського засобу, і форми, навантажені б або більше молекулами лікарського засобу.
Відповідно до способів за даним винаходом суміш АЮС можна очищувати за допомогою способу, такого як без обмеження періодичний спосіб, таким чином, щоб АОС, які характеризуються навантаженням 4 або менше молекулами лікарського засобу, були вибрані та відокремлені від АОС, які характеризуються більш високим навантаженням лікарським засобом (наприклад, АОС, які характеризуються навантаженням 6 або більше молекулами лікарського засобу). Слід зазначити, що способи очищення, описані в даному документі, можуть застосовуватися для виділення АЮС, що характеризуються будь-яким потрібним діапазоном значень САВ, наприклад, САВ, що становить 4 або менше, САН, що становить З або менше,
РАВ, що становить 2 або менше.
Таким чином, в одному варіанті здійснення суміш АОС, яка містить форми, навантажені 4 або менше молекулами лікарського засобу, і форми, навантажені 6 або більше молекулами лікарського засобу, можна приводити в контакт із гідрофобною смолою з утворенням суміші зі смолою, де кількість гідрофобної смоли, приведеної в контакт із сумішшю АОС, є достатньою для забезпечення зв'язування форм, навантажених б або більше молекулами лікарського засобу, зі смолою, але при цьому не допускає значного зв'язування форм, навантажених 4 або менше молекулами лікарського засобу; і забезпечувати видалення гідрофобної смоли із суміші
АС з одержанням таким чином композиції, яка містить АОС, де композиція містить менше 1595 форм, навантажених 6 або більше молекулами лікарського засобу, і де АОС містить антитіло, кон'юговане з інгібітором Всі-хЇ. В окремому варіанті здійснення спосіб відповідно до даного винаходу включає приведення суміші АОС, яка містить форми, навантажені 4 або менше молекулами лікарського засобу, і форми, навантажені б або більше молекулами лікарського бо засобу, у контакт із гідрофобною смолою з утворенням суміші зі смолою, де кількість гідрофобної смоли, приведеної в контакт із сумішшю АОС, є достатньою для забезпечення зв'язування форм, навантажених 6 або більше молекулами лікарського засобу, зі смолою, але при цьому не допускає значного зв'язування форм, навантажених 4 або менше молекулами лікарського засобу; і видалення гідрофобної смоли із суміші АОС з одержанням таким чином композиції, що містить АОС, де композиція містить менше 1595 форм, навантажених 6 або більше молекулами лікарського засобу, і де АОС містить антитіло, кон'юговане з інгібітором Всі- хі, де вага гідрофобної смоли перевищує у 3-12 раз вагу форм, навантажених 6 або більше молекулами лікарського засобу, в суміші АОС.
Спосіб відокремлення АОС, описаний у даному документі, можна здійснювати за допомогою періодичного способу очищення. Періодичний спосіб очищення загалом включає додавання суміші АОС до гідрофобної смоли в посудині, змішування та наступне відокремлення смоли від супернатанту. Наприклад, у контексті періодичного очищення гідрофобну смолу можна одержувати в необхідному буфері для врівноваження або врівноважувати за його допомогою.
Таким чином, можна одержувати завись гідрофобної смоли. Потім суміш АОС можна приводити в контакт із зависсю для адсорбції конкретних форм АОС, які необхідно відокремити, за допомогою гідрофобною смоли. Потім розчин, що містить необхідні АОС, які не зв'язалися з матеріалом, що являє собою гідрофобну смолу, можна відокремити від зависі, наприклад, за допомогою фільтрації або забезпечення осадження зависі та видалення супернатанту.
Одержану в результаті завись можна піддати одній або декільком стадіям промивання. З метою елюювання зв'язаних АОС концентрація солі може бути зменшена. В одному варіанті здійснення спосіб, застосовний відповідно до даного винаходу, передбачає не більше 50 г гідрофобної смоли.
Таким чином, можна застосовувати періодичний спосіб із приведенням суміші АОС, що містить форми, навантажені 4 або менше молекулами лікарського засобу, і форми, навантажені 6 або більше молекулами лікарського засобу, в контакт із гідрофобною смолою з утворенням суміші зі смолою, де кількість гідрофобної смоли, приведеної в контакт із сумішшю АОС, є достатньою для забезпечення зв'язування форм, навантажених б або більше молекулами лікарського засобу, зі смолою, але при цьому не допускає значного зв'язування форм, навантажених 4 або менше молекулами лікарського засобу; та видаленням гідрофобної смоли із суміші АОС з одержанням таким чином композиції, яка містить АОС, де композиція містить менше 1595 форм, навантажених 6 або більше молекулами лікарського засобу, і де АОС містить антитіло, кон'юговане з інгібітором Всі-хї. В окремому варіанті здійснення застосовується періодичний спосіб із приведенням суміші АОС, яка містить форми, навантажені 4 або менше молекулами лікарського засобу, і форми, навантажені 6 або більше молекулами лікарського засобу, у контакт із гідрофобною смолою з утворенням суміші зі смолою, де кількість гідрофобної смоли, приведеної в контакт із сумішшю АОС, є достатньою для забезпечення зв'язування форм, навантажених 6 або більше молекулами лікарського засобу, зі смолою, але при цьому не допускає значного зв'язування форм, навантажених 4 або менше молекулами лікарського засобу; і видаленням гідрофобної смоли із суміші АОС з одержанням таким чином композиції, яка містить АОС, де композиція містить менше 1595 форм, навантажених 6 або більше молекулами лікарського засобу, і де АОС містить антитіло, кон'юговане з інгібітором Всі- хі, де вага гідрофобної смоли перевищує в 3-12 раз вагу форм, навантажених 6 або більше молекулами лікарського засобу, у суміші АОС.
Як альтернатива в окремому варіанті здійснення очищення можна проводити (із застосуванням циркуляційного способу, де смолу упаковують у контейнер, і суміш АОС пропускають через шар гідрофобної смоли доти, доки конкретні форми АОС, які необхідно відокремити, не будуть видалені. Потім супернатант (що містить необхідні форми АОС) відкачують із контейнера, а шар смоли можна піддати стадіям промивання.
Можна застосовувати циркуляційний спосіб із приведенням суміші АОС, яка містить форми, навантажені 4 або менше молекулами лікарського засобу, і форми, навантажені 6 або більше молекулами лікарського засобу, у контакт із гідрофобною смолою з утворенням суміші зі смолою, де кількість гідрофобної смоли, приведеної в контакт із сумішшю АОС, є достатньою для забезпечення зв'язування форм, навантажених б або більше молекулами лікарського засобу, зі смолою, але при цьому не допускає значного зв'язування форм, навантажених 4 або менше молекулами лікарського засобу; і видаленням гідрофобної смоли із суміші АОС з одержанням таким чином композиції, яка містить АОС, де композиція містить менше 1595 форм, навантажених б або більше молекулами лікарського засобу, і де АОС містить антитіло, кон'юговане з інгібітором Всі-х!. В окремому варіанті здійснення застосовується циркуляційних спосіб із приведенням суміші АОС, яка містить форми, навантажені 4 або менше молекулами 60 лікарського засобу, і форми, навантажені 6 або більше молекулами лікарського засобу, у контакт із гідрофобною смолою з утворенням суміші зі смолою, де кількість гідрофобної смоли, приведеної в контакт із сумішшю АОС, є достатньою для забезпечення зв'язування форм, навантажених б або більше молекулами лікарського засобу, зі смолою, але при цьому не допускає значного зв'язування форм, навантажених 4 або менше молекулами лікарського засобу; і видаленням гідрофобної смоли із суміші АОС з одержанням таким чином композиції, яка містить АОС, де композиція містить менше 1595 форм, навантажених б або більше молекулами лікарського засобу, і де АОС містить антитіло, кон'юговане з інгібітором Всі-хі, де вага гідрофобної смоли перевищує в 3-12 раз вагу форм, навантажених б або більше молекулами лікарського засобу, у суміші АОС.
Як альтернатива може застосуватися проточний спосіб очищення суміші АОС для одержання композиції, яка містить здебільшого АОС, які характеризуються певним необхідним рАВ. У проточному способі смолу упаковують у контейнер, наприклад колонку, і суміш АОС пропускають через упаковану смолу таким чином, що необхідні форми АОС практично не зв'язуються зі смолою та проходять через смолу, а небажані форми АОС зв'язуються зі смолою.
Проточний спосіб можна здійснювати в однопрохідному режимі (де форми АОС, що становлять інтерес, одержують у результаті одного проходження через смолу в контейнері) або в багатопрохідному режимі (де форми АОС, що становлять інтерес, одержують у результаті декількох проходів через смолу в контейнері). Проточний спосіб здійснюють таким чином, що вага вибраної смоли забезпечує зв'язування популяції небажаних АОС, а бажані АОС (наприклад, з САВ 2-4) проходять через смолу, та їх збирають у вигляді елюату після одного або декількох проходів.
Проточний спосіб можна застосовувати із приведенням суміші АОС, що містить форми, навантажені 4 або менше молекулами лікарського засобу, і форми, навантажені 6 або більше молекулами лікарського засобу, у контакт із гідрофобною смолою, де кількість гідрофобної смоли, приведеної в контакт із сумішшю АОС, є достатньою для забезпечення зв'язування форм, навантажених 6 або більше молекулами лікарського засобу, зі смолою, але при цьому не допускає значного зв'язування форм, навантажених 4 або менше молекулами лікарського засобу, де форми, навантажені 4 або менше молекулами лікарського засобу, проходять через смолу, а потім їх збирають після одного або декількох проходів, завдяки чому одержують композицію, яка містить необхідні АОС (наприклад, з САВ 2-4), де композиція містить менше 1595 форм, навантажених б або більше молекулами лікарського засобу, і де АОС містить антитіло, кон'юговане з інгібітором Всі-хї. В окремому варіанті здійснення застосовують проточний спосіб із приведенням суміші АОС, що містить частинки з навантаженням лікарським засобом, що становить 4 або менше, і частинки з навантаженням лікарським засобом, що становить 6 або більше, у контакт із гідрофобною смолою за допомогою пропускання суміші
Арс через смолу, де кількість гідрофобної смоли, приведеної у контакт із сумішшю АОС є достатньою для забезпечення зв'язування частинок із навантаженням лікарським засобом, що становить б або більше, зі смолою, але не допускає значного зв'язування частинок із навантаженням лікарським засобом, що становить 4 або менше, де частинки з навантаженням лікарським засобом, що становить 4 або менше, проходять через смолу, та їх згодом збирають після одного або декількох проходжень, за рахунок чого одержують композицію, яка містить
АОС, де композиція містить менше 1595 частинок із навантаженням лікарським засобом, що становить б або більше, і де АОС містить антитіло, кон'юговане з лікарським засобом, наприклад інгібітором Всі-х!,, при цьому кількість за вагою гідрофобної смоли перевищує в 3-12 разів вагу частинок із навантаженням лікарським засобом, що становить 6 або більше, в суміші
Ар.
Після здійснення проточного способу смолу можна промивати за допомогою одного або декількох промивань, які виконують одне за одним, з метою додаткового виділяння АОС, що характеризуються необхідним діапазоном АВ (перебуває в опромивному фільтраті).
Наприклад, можна застосовувати багато промивань, які характеризуються провідністю, яка зменшується, для додаткового виділялння АОС, що характеризуються ОАВ, яке становить інтерес. Елюйований матеріал, одержаний у результаті промивання смоли, можна потім об'єднувати з фільтратом, одержаним із проточного способу, для поліпшення виділяння АОС, що характеризуються АВ, яке становить інтерес.
Вищезазначені способи очищення, які являють собою періодичний спосіб, циркуляційний спосіб і проточний спосіб, базуються на застосуванні гідрофобної смоли для відокремлення форм АОС із високим навантаженням лікарським засобом від форм із низьким навантаженням лікарським засобом. Гідрофобна смола містить гідрофобні групи, які взаємодіють з АОС завдяки їхнім гідрофобним властивостям. Гідрофобні групи АОС взаємодіють із гідрофобними групами 60 гідрофобної смоли. Чим більш гідрофобним є білок, тим активніше він буде взаємодіяти з гідрофобною смолою.
Гідрофобна смола, як правило, містить основну матрицю (наприклад, зшиту агарозу або матеріал, який являє собою синтетичний співполімер), з якою зв'язуються гідрофобні ліганди (наприклад, алкільні або арильні групи). Багато гідрофобних смол є комерційно доступними.
Приклади включають без обмеження Рієпу! Зерпагозе"М 6 ГРаві Ріожм/ із низьким або високим ступенем заміщення (Ріагтасіа КВ Віоїєсппоіоду, АВ, Швеція); Рпепу! берпагозе"М Нідн
Репогтапсе (РНнагтасіа І КВ Віоїесппоіоду, АВ, Швеція); Осіу! Зерпагозе"М Нідп Репогтапсе (Ріпаттасіа І КВ Віоїесппоіоду, АВ, Швеція); колонки Егасіоде!"М ЕМО Ргоруї або Ргасіоде!"М ЕМО
Рпеєпуї! (Е. МегскК, Німеччина); метилові Масго-Ргер'"М або трет-бутилові Мастго-Ргер"М підкладки (Віо-Вай, Каліфорнія); МУР. НІ-Ргору! (Сз)"М (У. Т. Вакег, Нью-Джерсі); і Тоуореап"М для етеру, гексилу, фенілу або бутилу (ТозоНаав, Пенсильванія). В одному варіанті здійснення гідрофобна смола являє собою бутилвмісну гідрофобну смолу. В іншому варіанті здійснення гідрофобна смола являє собою фенілвмісну гідрофобну смолу. В іншому варіанті здійснення гідрофобна смола являє собою гексилвмісну гідрофобну смолу, октилвмісну гідрофобну смолу або децилвмісну гідрофобну смолу. В одному варіанті здійснення гідрофобна смола являє собою метакриловий полімер, що містить н-бутил-ліганди (наприклад ТОМОРЕАВІ 92 ВиїщміІ-6ООМ).
Додаткові способи очищення сумішей АОС для одержання композиції, що характеризується необхідним САВА, описані в заявці США Мо 14/210602 (публікація заявки на патент США
Мо 05 2014/0286968), включеній у всій своїй повноті за допомогою посилання.
У певних варіантах здійснення даного винаходу описані в даному документі АОС, що характеризуються РАВ 2, очищують від АОС, що характеризуються більш високими або більш низькими значеннями РАВ. Такі очищені АОС з ЮСАВ 2 називаються в даному документі "Ег".
Способи очищення для одержання композиції, що містить АОС Е2 до В7-НЗ. В одному варіанті здійснення даного винаходу передбачена композиція, яка містить суміш АОС, де щонайменше 759. АС являють собою АС до В7-НЗ (як такі, які описані в даному документі), що характеризуються БАН 2. В одному варіанті здійснення в даному винаході передбачена композиція, яка містить суміш АОС, де щонайменше 8095 АОС являють собою АОС до В7-НЗ (як такі, які описані в даному документі), що характеризуються БАНК 2. В одному варіанті здійснення в даному винаході передбачена композиція, яка містить суміш АОС, де щонайменше 8595 АОС
Зо являють собою АОС до В7-НЗ (як такі, які описані в даному документі), що характеризуються
РАВ 2. В одному варіанті здійснення в даному винаході передбачена композиція, яка містить суміш АОС, де щонайменше 9095 АВС являють собою АОС до В7-НЗ (як такі, які описані в даному документі), що характеризуються САН 2.
М. Застосування антитіл до В7-НЗ ії АОС до В7-НЗ
Антитіла та АОС за даним винаходом переважно здатні до нейтралізації активності В7-НЗ людини як іп мімо, так і іп міго. Відповідно, такі антитіла та АОС за даним винаходом можна застосовувати для інгібування активності пВ7-НЗ, наприклад, у культурі клітин, які містять пПВ7-
НУ, у суб'єктів-людей або в інших суб'єктів-ссавців, які мають В7-НЗ, з яким перехресно реагує антитіло за даним винаходом. В одному варіанті здійснення даний винахід передбачає спосіб інгібування активності НВ7-НЗ, що включає приведення ПВ7-НЗ у контакт з антитілом або АОС за даним винаходом, внаслідок чого активність пПВ7-НЗ інгібується. Наприклад, у випадку культури клітин, які містять або які ймовірно містять пВ7-НЗ, антитіло або частину антитіла за даним винаходом можна додавати в середовище для культивування, щоб інгібувати активність
НПВ7-НЗ у культурі.
В іншому варіанті здійснення даного винаходу передбачений спосіб зниження активності
ПВ7-НЗ у суб'єкта, переважно у суб'єкта, що страждає від захворювання або порушення, при яких активність В7-НЗ чинить негативний вплив. Даний винахід передбачає способи зниження активності В7-НЗ у суб'єкта, що страждає від такого захворювання або порушення, при цьому спосіб передбачає введення суб'єкту антитіла або АОС за даним винаходом, внаслідок чого активність В7-НЗ у суб'єкта знижується. Переважно, В7-НЗ являє собою В7-НЗ людини, а суб'єкт являє собою суб'єкта-людину. Як альтернатива, суб'єкт може являти собою ссавця, що експресує В7-НЗ, з яким здатні зв'язуватись антитіла за даним винаходом. До того ж суб'єкт може являти собою ссавця, в якого В7-НЗ було впроваджено (наприклад, шляхом введення В7-
НЗ або шляхом експресії трансгена В7-НЗ). Антитіла або АОС за даним винаходом можна вводити суб'єктуу/людині в терапевтичних цілях. Крім того, антитіла або АОС за даним винаходом можна вводити ссавцю, відмінному від людини, що експресує В7-НЗ, з яким дане антитіло здатне зв'язуватися, з ветеринарною метою або як тваринна модель захворювання людини. Щодо останнього такі тваринні моделі можуть бути придатні для оцінки терапевтичної ефективності антитіл за даним винаходом (наприклад, тестування доз і періодів часу введення). бо Мається на увазі, що термін "порушення, при якому експресія В7-НЗ чинить негативний вплив", використовуваний у даному документі, включає захворювання та інші порушення, при яких присутність В7-НЗ у суб'єкта, що страждає від порушення, як було показано, при його експресії, є або ймовірно є або відповідальною за патофізіологію порушення, або фактором, який робить внесок у погіршення порушення. Наприклад, АОС за даним винаходом можна використовувати для націлювання на пухлинні клітини, які експресують В7-НЗ. Необмежувальні приклади порушень, які можна піддавати лікуванню за допомогою АЮС за даним винаходом, наприклад АОС, які містять пиАб1З3Мм1, включають без обмеження різноманітні види раку, зокрема без обмеження дрібноклітинний рак легенів, недрібноклітинний рак легенів (МЗС С), рак молочної залози, рак яєчника, рак легенів, гліому, рак передміхурової залози, рак підшлункової залози, рак товстої кишки, рак голови та шиї, лейкоз, наприклад гострий мієлоїдний лейкоз (АМІ), лімфому, наприклад неходжкінську лімфому (МНІ) і рак нирки. Інші приклади раку, який можна лікувати із застосуванням композицій і способів, розкритих у даному документі, включають плоскоклітинну карциному (наприклад, плоскоклітинний рак легенів або плоскоклітинний рак голови та шиї), тричі негативний рак молочної залози, недрібноклітинний рак легенів, колоректальний рак і мезотеліому. В одному варіанті здійснення антитіла або АОС, розкриті в даному документі, застосовують для лікування солідної пухлини, наприклад, інгібування росту або зменшення розміру солідної пухлини, що надекспресує В7-НЗ, або яка є
В7-НЗ-позитивною. В одному варіанті здійснення даний винахід спрямований на лікування плоскоклітинного раку легенів, пов'язаного з експресією В7-НЗ.ії В іншому варіанті здійснення антитіла та АОС, розкриті в даному документі, застосовуються для лікування тричі негативного раку молочної залози (ТМВС). Захворювання і порушення, описані в даному документі, можна піддавати лікуванню за допомогою антитіл до В7-НЗ або АОС за даним винаходом, а також за допомогою фармацевтичних композицій, які містять такі антитіла до В7-НЗ або АОС.
У певних варіантах здійснення рак може характеризуватись надекспресією ЕСЕК. В одному варіанті здійснення АЮС за даним винаходом можна використовувати для лікування раку, пов'язаного з мутацією, яка призводить до активації ЕСЕК. Приклади таких мутацій включають без обмеження мутацію, що являє собою делецію в екзоні 19, одноточкову мутацію за типом заміни І 858К в екзоні 21, точкову мутацію Т790М і їх комбінації.
У певних варіантах здійснення антитіла або АОС, розкриті в даному документі, вводять
Зо суб'єкту, що потребує цього, з метою лікування типів солідних пухлин на пізній стадії, які ймовірно виявляють підвищені рівні В7-НЗ. Приклади таких пухлин включають без обмеження дрібноклітинний рак легенів, рак молочної залози, рак яєчника, плоскоклітинну карциному голови та шиї, недрібноклітинний рак легенів, тричі негативний рак молочної залози, колоректальну карциному і мультиформну гліобластому.
У певних варіантах здійснення даний винахід передбачає спосіб пригнічування або зменшення росту солідної пухлини в суб'єкта, який має солідну пухлину, при цьому вказаний спосіб передбачає введення антитіла до В7-НЗ або АСС, описаних у даному документі, суб'єкту, який має солідну пухлину, за рахунок чого ріст солідної пухлини інгібується або зменшується. У певних варіантах здійснення солідна пухлина являє собою недрібноклітинну карциному легенів або гліобластому. У додаткових варіантах здійснення солідна пухлина являє собою солідні пухлини, що експресують В7-НЗ3. У додаткових варіантах здійснення солідна пухлина являє собою солідні пухлини, що надекспресують В7-НЗ. У певних варіантах здійснення антитіла до
В7-НЗ або АОС, описані в даному документі, вводять суб'єкту, що має мультиформну форму гліобластоми, окремо або в комбінації з додатковим засобом, наприклад опромінюванням та/або темозоломідом.
У певних варіантах здійснення описані в даному документі АОС з антитілами до В7-НЗ вводять суб'єкту, що має дрібноклітинний рак легенів, окремо або в комбінації з додатковим засобом, наприклад АВТ-199 (венетоклакс).
У певних варіантах здійснення описані в даному документі АОС з антитілами до В7-НЗ вводять суб'єкту, що має недрібноклітинний рак легені, окремо або в комбінації з додатковим засобом, наприклад таксаном. У певних варіантах здійснення описані в даному документі антитіла до В7-НЗ або АЮС вводять суб'єкту, що має рак молочної залози, окремо або в комбінації з додатковим засобом, наприклад таксаном. У певних варіантах здійснення описані в даному документі антитіла до В7-НЗ або АОС вводять суб'єкту, що має рак яєчника, окремо або в комбінації з додатковим засобом, наприклад таксаном.
Інші види комбінованої терапії, передбачені за даним винаходом, являють собою введення
АОС до В7-НЗ із засобом, вибраним із групи, яка складається з антитіла до РО1 (наприклад, пембролізумаб), антитіла до РО-І 1 (наприклад,атезолізумаб), антитіла до СТІ А-4 (наприклад, іпілімумаб), інгібітора МЕК (наприклад, траметиніб), інгібітора ЕКК, інгібітора ВЕАЕ (наприклад, 60 дабрафеніб), осимертинібу, ерлотинібу, гефітинібу, сорафенібу, інгібітора СОКУ (наприклад,
динацикліб), інгібітора МСІ-1, темозоломіду, інгібітора Всі-хі, інгібітора Всі-2 (наприклад, венетоклакс), ібрутинібу, інгібітора ттТоОкК (наприклад, еверолімус), інгібітора РІЗК (наприклад, бупарлісиб), дувелісибу, іделалісибу, інгібітора АКТ, інгібітора НЕКЗ2 (наприклад, лапатиніб), таксану (наприклад, доцетаксел, паклітаксел, наб-паклітаксел), венетоклакс, АОС, який містить ауристатин, АОС, який містить РВО (наприклад, ровалпітузумаб тесирин), АОС, який містить майтанзиноїд (наприклад, ТОМІ), агоніста ТКАЇ,,, інгібітора протеасом (наприклад, бортезоміб) і інгібітора нікотинамідфосфорибозилтрансферази (МАМРТ).
Види комбінованої терапії передбачають введення АОС за даним винаходом одночасно зі введенням додаткового терапевтичного засобу, зокрема описаних вище, до нього або після нього.
У певних варіантах здійснення даний винахід передбачає спосіб інгібування або зменшення росту солідної пухлини в суб'єкта, який має солідну пухлину, що ідентифікована як пухлина, яка експресує В7-НЗ або надекспресує В7-НЗ, при цьому вказаний спосіб передбачає введення антитіла до В7-НЗ або АРС, описаних у даному документі, суб'єкту, що має солідну пухлину, так що ріст солідної пухлини інгібується або зменшується. Способи ідентифікації пухлин, що експресують В7-НЗ (наприклад, пухлин, що надекспресують В7-НЗ) відомі з рівня техніки та включають дослідження, ухвалені ЕВА, і підтверджувальні аналізи. Наприклад, аналіз щодо виявлення експресії В7-НЗ являє собою набір, що являє собою систему якісного імуногістохімічного (ІНС) дослідження, який застосовують для визначення експресії В7-НЗ у нормальних і неопластичних тканинах, фіксованих звичайним способом для гістологічної оцінки.
Крім того, для ідентифікації пухлин що надекспресують В7-НЗ, також можна застосовувати аналізи на основі ПЦР. Ампліфіковані продукти ПЛР можна потім аналізувати, наприклад, за допомогою гель-електрофорезу, із застосуванням стандартних способів, відомих із рівня техніки, для визначення розміру продуктів ПЛР. Такі тести можна застосовувати для ідентифікації пухлин, які можна обробляти із застосуванням способів і композицій, описаних у даному документі.
Будь-який зі способів генної терапії, доступних із рівня технікию, можна застосовувати відповідно до даного винаходу. Загальні огляди способів генної терапії див. у соїдзрієї еї аї., 1993, Сііпіса! Рнаптасу 12:488-505; Ми апа Ми, 1991, Віоштегару 3:87-95; ТоІвіозПем, 1993, Апп.
Коо) Веум. Рпаптасої. Тохісої. 32:573-596; Миїйїдап, 5сіепсе 260:926- 932 (1993) і Могдап апа Ападегзоп, 1993, Апп. Аем. Віоспет. 62:191-217; Мау, 1993, ТІВТЕСН 11(5)1155-215. Способи, загальновідомі в галузі техніки технології рекомбінантної ДНК, які можна застосовувати, описані в А!й5ибеї еї аї. (ед5.), Ситепі Ргоїосоїв іп Моїесшіаг Віоіоду, допп УУйеу а5оп5, ММ (1993) ії
Кіїєдієї, СбСепе Ттапеїег ап Ехргеззіоп, А Іарогаюгту Мапиа!Ї, 5іосКіоп Ргез5, МУ (1990).
Докладний опис різних способів генної терапії наведено в Ш5З20050042664 А1, який включено у даний документ за допомогою посилання.
В іншому аспекті в даній заявці описано спосіб лікування (наприклад, вилікування, пригнічення, полегшення тяжкості, відстрочки або попередження виникнення або попередження повторної появи або рецидиву) або попередження порушення, асоційованого з В7-НЗ, у суб'єкта. Спосіб передбачає введення суб'єкту В7-НЗ-зв'язувального засобу, наприклад антитіла до В7-НЗ або його фрагмента, описаних у даному документі, у кількості, достатній для лікування або попередження порушення, асоційованого з В7-НЗ. Антагоніст В7-НЗ, наприклад, антитіло до В7-НЗ або його фрагмент, можна вводити суб'єкту окремо або в комбінації з іншими терапевтичними способами впливу, описаними в даному документі.
Антитіла або АЮС за даним винаходом або їхні антиген-зв'язувальні частини можуть застосовуватись окремо або в комбінації для лікування таких захворювань. Слід розуміти, що антитіла за даним винаходом або їхню антигензв'язувальну частину можна застосовувати окремо або в комбінації з додатковим засобом, наприклад, терапевтичним засобом, причому вказаний додатковий терапевтичний засіб вибирає фахівець у даній галузі техніки, виходячи з його цільового призначення. Наприклад, додатковий засіб може являти собою терапевтичний засіб, що вважається в даній галузі техніки придатним для лікування захворювання або стану, які лікують за допомогою антитіла за даним винаходом. Додатковий засіб також може являти собою засіб, який надає корисну властивість терапевтичній композиції, наприклад засіб, який впливає на в'язкість композиції.
Також слід розуміти, що комбінації, які повинні бути включені в даний винахід, являють собою комбінації, придатні для їхнього цільового призначення. Засоби, викладені нижче, наведені з метою ілюстрації та не маються на увазі як такі, що обмежують. Комбінації, які являють собою частину даного винаходу, можуть являти собою антитіла за даним винаходом і щонайменше один додатковий засіб, вибраний із переліку нижче. Комбінація також може 60 включати більше одного додаткового засобу, наприклад два або три додаткових засоби, якщо комбінація є такою, що сформована композиція здатна виконувати передбачену для неї функцію.
Комбінована терапія може передбачати один або декілька антагоністів В7-НЗ, наприклад антитіла до В7-НЗ або їхні фрагменти, які складені та/або вводяться спільно з одним або декількома додатковими терапевтичними засобами, наприклад, одним або кількома інгібіторами цитокінів і факторів росту, імуносупресорами, протизапальними засобами (наприклад, системними протизапальними засобами), протифіброзними засобами, інгібіторами метаболізму, інгібіторами ферментів та/або цитотоксичними або цитостатичними засобами, інгібіторами мітозу, протипухлинними антибіотиками, імуномодулювальними засобами, векторами для генної терапії, алкілувальними засобами, антиангіогенними засобами, антиметаболітами, боровмісними засобами, хемопротекторними засобами, гормонами, антигормональними засобами, кортикостероїдами, фотоактивними терапевтичними засобами, олігонуклеотидами, радіонуклідними засобами, інгібіторами топоіїзомерази, інгібіторами кінази або радіосенсибілізаторами, як описано більш докладно в даному документі.
У конкретному варіанті здійснення В7-НЗ-зв'язувальні білки, описані в даному документі, наприклад, антитіла до В7-НЗ, використовуються в комбінації з протираковим засобом або антинеопластичним засобом. Терміни "протираковий засіб" і "антинеопластичний засіб" стосуються лікарських засобів, застосовних для лікування злоякісних новоутворень, таких як ракові утворення. Терапію лікарськими засобами можна застосувати окремо або в комбінації з іншими засобами лікування, такими як хірургічне втручання або променева терапія. Декілька класів лікарських засобів можуть застосуватися в лікуванні раку залежно від природи залученого органа. Наприклад, у різновидах раку молочної залози зазвичай відбувається стимуляція естрогенами, та їх можна лікувати за допомогою лікарських засобів, які інактивують статеві гормони. Аналогічно рак передміхурової залози можна лікувати за допомогою лікарських засобів, які інактивують андрогени, чоловічі статеві гормони. Протиракові засоби, які можна використовувати в комбінації з антитілами до В7-НЗ або АОС за даним винаходом, включають, серед інших, антитіла до РОЇ (наприклад, пембролізумаб), антитіла до РО-І1 (наприклад, атезолізумаб), антитіла до СТІ А-4 (наприклад, іпілімумаб), інгібітор МЕК (наприклад, траметиніб), інгібітор ЕКК, інгібітор ВКАЕ (наприклад, дабрафеніб), осимертиніб (А209291),
Зо ерлотиніб, гефітиніб, сорафеніб, інгібітор СОКУ (наприклад, динацикліб), інгібітор МСЇІ-1, темозоломід, інгібітор Всі-хі., інгібітор ВсіІ-2 (наприклад, венетоклакс), ібрутиніб, інгібітор ттОокК (наприклад, еверолімус), інгібітор РІЗК (наприклад, бупарлісиб), дувелісиб, іделалісиб, інгібітор
АКТ, інгібітор НЕКЗ2 (наприклад, лапатиніб), таксан (наприклад, доцетаксел, паклітаксел, наб- паклітаксел), АОС, який містить ауристатин, АОС, який містить РВО (наприклад, ровалпітузумаб тесирин), АОС, який містить майтанзиноїд (наприклад, ТОМІ), агоніст ТЕАЇ, інгібітор протеасом (наприклад, бортезоміб) та інгібітор нікотинамідфосфорибозилтрансферази (МАМРТ), а також наступні засоби:
Протираковий засіб
А12 (повністю гуманізоване ІттАб)
Антитіла. які зв'язують ІСЕ-ІВ 19012 (повністю гуманізоване тдАб) "7, язують Ср751-871 (повністю гуманізоване тАбБ) (рецептор інсуліноподібного . фактора росту типу 1), який Н?7СТ10 (гуманізоване тАбБ) експресується на пове хні аірпа!К З (мишаче) спресує поверхні. ЗСЕМ/ЕС (химера миші/людини) клітин у більшості різновидів ЕМ/164 (мишаче) раку людини . з , Матузумаб (ЕМО72000) пнтигга, ок ОплиВАютЬ сОгн; ЕгрйихФуцетуксимаб (Ітсіопе)
Антитіла: утації, щ й Месііріхеу/панітумумаб (Атдеп) експресію ЕСЕК або активність, тАЬ 806 можуть призводити до раку Німотуксумаб (Тпегасім)
Антитіла, які зв'язують СМЕТ (фактор мезенхімно- КАН (АУЕО) епітеліального переходу); (Атодеп) ' 5О5 (ОА-545) (депепіесі) представник родини МЕТ Н2г44с11 (Рієїте Бабге) рецепторних тирозинкіназ) . АБ Мо 14 (ММ 1121-14)
Антитіла до ЕГоВЗ НегсеріїпФ (трастузумаб; Сепепієсні) 18403; 201012 (ОЗ Рнагта АС)
ММР-АЕМУ541-А
Рецептор інсуліноподібного вВМ5-536924 (1Н-бензоімідазол-2-іл)-1 Н- . фактора росту типу 1, який піридин-2-он)
Малі молекули, що експресується на поверхні вМ5-554417 націлюються на . . .
ІСЕІВ клітин у багатьох різновидах Циклоліган раку людини ТАЕ226
РО4О1
Ігеззавугефітиніб (Авіга/епеса)
СІ-1033 (РО 183805) (Р'Іі2ег)
Лапатиніб (СМУ-572016) (СіахозтЙНКІЇїпе) , ТукегьФфу/лапатинібу дитозилат (Зтіїй
ЕСЕВ; і
Малі молекули, що |надекспресія або мутації, що Кіїпе Вееспат) . ' пра Тагсема Ф/ерлотиніб НС. (051-774) (О51І націлюються на впливають на експресію або Рпагта) аг активність ЕСЕК, можуть РКІ-166 (Момапів) призводити до раку РО-158780
ЕКВ-569
Тирфостин Да 1478 (4-(З-хлораніліно)- б,7-диметоксихіназолін
СМЕТ (фактор мезенхімально-
Малі молекули, що |епітеліального переходу); РНАб65752 націлюються на представник родини МЕТ - АНО 197
СМЕТ рецепторних тирозинкіназ)
Фторурацил (5-ЕІ)
Капецитабін/ХЕ! ОБАФ (НІ ЕК Коспе) 5-Трифторметил-2'-дезоксиуридин
Метотрексат натрію (Тгехаї)) (Ватт)
Ралтитрексед/ГотидехФ (Азігагепеса)
Пеметрексед/АїйтіаФф (І Шу)
Тегафур
Цитозину арабінозид (Цитарабін, Ага-
С)/лтіогуанін? (сІахозтійНКІЇїпе) й 5-Азацитидин
Антиметаболіти б-Меркаптопурин (меркаптопурин, 6-МР)
Азатіоприн/А7азапФ (ААІРНАКМА ГГ С) 6-Тіогуанін (6-Те)У/Ригіпевтоке (ТЕМА)
Пентостатин/МірепіФ (Нозріга Іпс.)
Флударабіну фосфат/РІсдагаф (Вауег
Неайй Саге)
Кладрибін (2-СаА, 2- хлордезоксиаденозин)/ ейзіайпе (Ого
Віоїтесі)
Інгібітор рибонуклеотидредуктази (КМЕК)
Циклофосфамід/цитоксан (ВМ5)
Неосар (ТЕМА)
Іфосфамід/Міїохапаф (АЗТА Меаіса)
Тіотепа (Весгога, Абгахів, Тема)
Алкілувальний вВСМи-» 1,3-біс(2-хлоретил)-1- антинеопластичний засіб являє | нітрозосечовина собою алкілувальний засіб, який! ССМИО-» 1,-(2-хлоретил)-3-циклогексил-1- забезпечує приєднання нітрозосечовина (метил-ССМИ) алкільної групи до ДНК. Гексаметилмеламін (Алтретамін,
Оскільки ракові клітини, як нНММ)/НехаїепФф (МОЇ РВагта Іпс.) . й правило, розмножуються у Бусульфан/мілеран (СіахозтйЙНКіІЇїпе)
Алкілувальні засоби необмежено більшій кількості, | Прокарбазин НСі /матулан (Зідта Тай ніж нормальні клітини, вони є РНаптасеціїгсаї!5, Іпс.) чутливішими до пошкоджень Дакарбазин (ОТІС)
ДНК, тому алкілувальні засоби |Хлорамбуцил/і еикагатФф (ЗтіййКіїпе застосовуються у клінічній Вееспат) практиці для лікування різних Мелфалан/АїІКегапфФ (сСіахозтіййКіїпе) пухлин. Цисплатин (цисплатин, СООР)/платинол (Вгівю! Муег5)
Карбоплатин/параплатин (ВМ5)
Оксаліплатин/ЕІохйапф (Запоїї-Амепіїв
Б)
Інгібітори топоізомерази являють собою Доксорубіцин НС /ЮохіїФ (Ага) хіміотерапевтичні засоби, Даунорубіцину цитрат/ОаипохотефФ призначені для порушення дії | (Сіїєайа) мітоксантрон НСІ /новантрон ферментів, які являють собою |(ЕМО 5егопо) топоїзомеразу (топоіїзомерази І ії Актиноміцин Ю
Інгібітори І), які являють собою Етопозид//ерезій? (ВМ5УЄрорпоб5е топоїзомерази ферменти, що контролюють (Нозріга, Ведіога, Тема Рагепівга! тощо) зміни в структурі ДНК шляхом )|Топотекан НСІ /ЛусатіїпФ каталізування руйнування та (СіахобтЙНКІЇїпе) відновлення фосфодієтерного | Теніпозид (ММ-26)/Митопф (ВМ5) каркаса ниток ДНК протягом Іринотекан НОСІ (СРТ-11)/Сатріозаго нормального клітинного циклу. |(РПаптасіа 5 Оріонп)
Мікротрубочки є одним із компонентів цитоскелету. Вони |Вінкристин/ОпсоміпФ) (І Шу) мають діаметр «24 нм і Вінбластину сульфат/л/еІрапФ довжину, яка варіює від (виробництво припинене) (І Шу) декількох мікрометрів до, Вінорелбіну тартрат/МамеїЇбіпет
Засоби, що можливо, міліметрів в аксонах | (РієїтеРаргє) націлюються на нервових клітин. Мікротрубочки | Віндезину сульфат/ЕїЇаізіпефФ (Шу) мікротрубочки слугують як структурні Паклітаксел/Тахоке (ВМ5) компоненти в клітинах і беруть | Доцетаксел/Тахоїегеф (Запоїї Амепії5 ОБ) участь у багатьох клітинних Паклітаксел у вигляді наночастинок (АВІ- процесах, у тому числі мітоз, 007)/Абгахапеф (Абгахів Віозсієпсе, Іпс.) цитокінез і везикулярний Іксабепілон/ЛХЕМРКА "м (ВМ5) транспорт.
Кінази являють собою ферменти, які каталізують перенесення фосфатних груп Іматинібу мезилат/ЗіІеемес (Момагіів) від високоенергетичних Сунітинібу малат/5шепю (Рії7ег) фосфатно-донорних молекул на) Сорафеніб тозилат/МехамагФ (Вауег)
Інгібітори кіназ специфічні субстрати й Нілотинібу гідрохлориду використовуються для моногідрат/ТазідпатФ (Момагіів), передавання сигналів і регуляції| осимертиніб, кобіметиніб, траметиніб, комплексних процесів у дабрафеніб, динацикліб клітинах.
Інгібітори синтезу білків Індукують клітинний апоптоз | -аспарагіназа/ЕіІзраге (МегскК 4 Со.)
Альфа-інтерферон
Індукують у пацієнтів із раком Інгібітор ангіогенезу/Амазіїпе (Сепепіесй) проявлення імунологічної Па Інтерлейкін 2 . . реактивності (Альдеслейкін)/РгоЇеиКіпе (Спігоп)
І/-12-- Інтерлейкін 12
Імунотерапевтичні засоби Засоби терапії на основі антитіл до СТІ А- . 414 і РЕ-1
Антитіло/низькомолекулекулярні Уегмоуф (іпілімумаб; ВгізіоІ-Муєгз Зап) модулятори імунних . . Ши . контрольних точок ОраїмоФ (ніволумаб; ВгівіоІ!-Муєтв Запірр)
Кеуїгадаф (пембролізумаб; Мегск)
Протираковий засіб
Тореміфену цитрат/РагевіопФф (СТУ, Іпс.)
Фулвестрант/Разіодехб (Азігалепеса)
Ралоксифен НС /Емітаф (І Шу)
Гормональні засоби терапії Анастразол/АгітідехФ (Авіга/епеса) рмо й рапі, Летрозол/Ретагаф (Момапгіів) асоційовані з менопаузою і Фадрозол (СО5 16949А) старінням, які, як було о. Ексеместан/АготавіпФ (Ріаптасіа 8 виявлено, підвищують кількість Оріопп) певних гормонів в організмі Лейпроліду ацетат/ЕїїдагатФ (ОтІ. БА) пацієнта із врівноваженням Іі иргоп (ТАР Рпагт)
Гормони повязаних ва Гозереліну ацетат/2оіадехФ (Абігалепеса)
Р Триптореліну памоат/Ігеїбїаге (М/аї5оп захворюванням. Гормональна Іабв) терапія як засіб лікування раку Бузерелін/зиргетасію (Запоїї Амепії5) забезпечує або зниження рівня |, 4фарелін/Зупагек» (Ріїег) конкретних гормонів, або зміну Цетрорелікс/СеїгоїідеФ (ЕМО Зегопо) вико истання таких го монів Бікалутамід/СазодехФф (Авіга/епеса) ля ост т поши ення Нілутамід/МііапагопФ (Амепіїз Рпагт.) для росту Р І Мегестролу ацетат/МедасефФ (ВМ5)
Аналоги соматостатину (октреотиду ацетат/ зЗападозіайпФ (Момагів)
Протизапальні лікарські засоби, які застосовують для Преднізолон
Глюкокортикоїди зменшення набряку, яки Дексаметазон/ОесайгопФ (Умуеїй) ри раку. до с. Кетоконазол
Інгібітори ароматази| Включають імідазоли
Шлях передавання сигналу за допомогою ттТОокК початково був виявлений під час дослідження імунодепресивного засобу рапаміцину. Цей висококонсервативний шлях передавання сигналу - | Сиролімус (рапаміцин)у/Каратипе? забезпечує регуляцію клітинної (М/уеїй)
Інгібітори ТТОВ. ові фа У | Темсиролімус (ССІ-779)/Тогізекю (Умуегй) дпоВІД ці Дефоролімус (АР23573(Агіай Рнагт.) навколишнього середовища й і . ; Еверолімус (КАрООВ/Сепісапф (Момагії5) шляхом зв'язування передавання сигналу від рецепторів факторів клітинного росту за допомогою фосфоінозитид-3-кінази (РІ-ЗК) із клітинним ростом, проліферацією й ангіогенезом.
Додатково до вищевказаних протиракових засобів, антитіла до В7-НЗ і АОС, описані в даному документі, можна вводити у комбінації з описаними в даному документі засобами. Крім того, вищезазначені протиракові засоби також можна застосовувати в АОС за даним винаходом.
У конкретних варіантах здійснення антитіла до В7-НЗ або АОС можна вводити окремо або з іншим протираковим засобом, який діє спільно з або синергетично з антитілом, для лікування захворювання, асоційованого з активністю В7-НЗ. Такі протиракові засоби включають, наприклад, засоби, широко відомі з рівня техніки (наприклад, цитотоксини, химіотерапевтичні засоби, низькомолекулярні засоби та опромінення). Приклади протиракових засобів включають без обмеження панорекс (Сіахо-МУеІсоте), ритуксан (ІСЕСЗепепіесп/Нойтап іа Коспе), мілотарг (Мууеїй), кампат (Мійеппішт), зевалін ІОЕС та бспегіпд Ас), бексар (Согіха/о5К),
ербітукс (Ітсіопе/ВМ5), авастин (Сепепіесі) і герцептин (Сепепіесп/Нойтап Іа Коспе). Інші протиракові засоби включають без обмеження розкриті в патенті США Мо 7598028 і міжнародній публікації Ме ММО2008/100624, зміст яких включено в даний документ за допомогою посилання.
Один або декілька протиракових засобів можна вводити або одночасно з антитілом або його антигензв'язувальною частиною за даним винаходом, або до або після їх введення.
У конкретних варіантах здійснення даного винаходу антитіла до В7-НЗ або АОС, описані в даному документі, можна застосовувати в комбінованій терапії з апоптотичним засобом, таким як інгібітор Всі-х!. або інгібітор ВсіІ-2 (В-клітинна лімфома 2) (наприклад, АВТ-199 (венетоклакс)) для лікування раку, такого як лейкоз, у суб'єкта. В одному варіанті здійснення антитіла до В7-НЗ або АС, описані в даному документі, можна застосовувати в комбінованій терапії з інгібітором
Всі!-хІ. для лікування раку. В одному варіанті здійснення антитіла до В7-НЗ або АОС, описані в даному документі, можна застосовувати в комбінованій терапії з венетоклаксом для лікування раку.
У конкретних варіантах здійснення даного винаходу антитіла до В7-НЗ або АОС, описані в даному документі, можна застосовувати в комбінованій терапії з інгібітором МАМРТ (див. приклади інгібіторів у 05 2013/0303509; Аррміє, Іпс., включеному в даний документ за допомогою посилання) для лікування суб'єкта, який потребує цього. МАМРТ (також відомий як попередник В-клітинного колонієстимулювального фактора (РВЕР) і вісфатин) являє собою фермент, який каталізує фосфорибозилювання нікотинаміду, і являє собою фермент, що обмежує швидкість в одному з двох шляхів, у яких реутилізується МАЮ. В одному варіанті здійснення даного винаходу антитіла до В7-НЗ і АОС, описані в даному документі, вводять у комбінації з інгібітором МАМРТ для лікування раку у суб'єкта.
У конкретних варіантах здійснення даного винаходу антитіла до В7-НЗ або АОС, описані в даному документі, можна застосовувати в комбінованій терапії з 5М-38, що являє собою активний метаболіт інгібітора топоіїзомерази іринотекану.
В інших варіантах здійснення даного винаходу антитіла до В7-НЗ або АС, описані в даному документі, можна застосовувати в комбінованій терапії з інгібітором РАКР (полі-АОР- рибозополімерази), наприклад велипарибом, для лікування раку, в тому числі раку молочної залози, яєчника та недрібноклітинного раку легені.
Додаткові приклади додаткових терапевтичних засобів, які можна спільно вводити або складати з антитілами до В7-НЗ або АОС з антитілами до В7-НЗ, описаними в даному документі, включають без обмеження одне або декілька з наступного: інгаляційні стероїди; бета-агоністи, наприклад, бета-агоністи короткої або тривалої дії; антагоністи лейкотриєнів або рецепторів лейкотриєнів; комбінація лікарських засобів, така як АОМАЇК; інгібітори ІОЧЕ, наприклад, антитіла до ІДЕ (наприклад, ХО АЇІКФ), омалізумаб); інгібітори фосфодиестерази (наприклад, інгібітори РОЕ4); ксантини; антихолінергічні лікарські засоби; засоби, що стабілізують тучні клітини, такі як кромолін; інгібітори 1-4; інгібітори 1-5; інгібітори еотаксину/ССКЗ; антагоністи гістаміну або його рецепторів, у тому числі НІ, Н2, НЗ і Н4, а також антагоністи простогландину Ю або його рецепторів (ОРІ і СКТН2). Такі комбінації можна застосовувати для лікування, наприклад, астми та інших респіраторних порушень. Інші приклади додаткових терапевтичних засобів, які можна спільно вводити та/або складати з антитілами до В7-НЗ або АОС з антитілами до В7-НЗ, описаними в даному документі, включають без обмеження одне або декілька з антитіла до РО1 (наприклад, пембролізумаб), антитіла до РО-І/1 (наприклад, атезолізумаб), антитіла до СТІ А-4 (наприклад, іпілімумаб), інгібітора МЕК (наприклад, траметиніб), інгібітора ЕК, інгібітора ВКАЕ (наприклад, дабрафеніб), осимертинібу (А20ОЯ291), ерлотинібу, гефітинібу, сорафенібу, інгібітора СОКУ (наприклад, динацикліб), інгібітора МС -1, темозоломіду, інгібітора Всі-хі, інгібітора Всі-2 (наприклад, венетоклакс), ібрутинібу, інгібітора ттТоК (наприклад, еверолімус), інгібітора РІЗК (наприклад, бупарлісиб), дувелісибу, іделалісибу, інгібітора АКТ, інгібітора НЕКЗ2 (наприклад, лапатиніб), таксану (наприклад, доцетаксел, паклітаксел, наб-паклітаксел), АОС, який містить ауристатин, АОС, який містить РВО (наприклад, ровалпітузумаб тесирин), АОС, який містить майтанзиноїд (наприклад, ТОМІ), агоніста ТКАЇ, інгібітора протеасом (наприклад, бортезоміб) та інгібітора нікотинамідфосфорибозилтрансферази (МАМРТ). Додаткові приклади терапевтичних засобів, які можна вводити спільно та/"або складати з одним або декількома антитілами до В7-НЗ або їхніми фрагментами, включають одне або декілька з: антагоністів ТМЕ (наприклад, розчинний фрагмент ТМЕ-рецептора, наприклад, рецептор р55 або р75 ТМЕ людини або його похідні, наприклад, ТМЕК-Іде розміром 75 кДа (злитий білок рецептор ТМЕ-Іа розміром 75 кДа, ЕМВРЕЇ)); антагоністів ферментів ТМЕ, наприклад, інгібіторів ТМЕ- перетворювального ферменту (ТАСЕ); антагоністів мускаринових рецепторів; антагоністів ТОБЕ- бо бета; інтерферону-гамма; перфенідону; хіміотерапевтичних засобів, наприклад, метотрексату,
лефлуноміду або сиролімусу (рапаміцину) або їхнього аналога, наприклад, інгібіторів ССІ-779;
СОХЗ2 та сРІ А2; МЗАЇО; імуномодуляторів; інгібіторів р38, ТРІ -2, МК-2 та інгібіторів МЕКВ.
Інші переважні комбінації являють собою протизапальний(протизапальні) лікарський(лікарські) засіб(засоби), що супресує(супресують) цитокіни (СЗАЇІО); антитіла до інших цитокінів або факторів росту людини, наприклад, 1І--1, ІІ -2, І -3, 1-4, 1 -5, 1-6, 1-7, ІІ -8,
І-15, 11-16, 11-18, 21, ІІ -31, інтерферонів, ЕМАР-ЇЇ, СМ-С5Е, ЕСЕ, ЕСЕ, РОС і ендотеліну-1, а також до рецепторів цих цитокінів і факторів росту, або їх антагоністи. Антитіла за даним винаходом або їхні антигензв'язувальні частини можна комбінувати з антитілами до молекул клітинної поверхні, таких як СО2, СОЗ, С04, 208, 2025, 2028, С030, 2040, 2045, С0О69, СОв8О0 (87.1), С086 (87.2), С0О0О, СТІ А, СТІ А-4, РО-1, або їхніх лігандів, у тому числі СО154 (др39 або
СО).
Переважні комбінації терапевтичних засобів можуть забезпечувати порушення в різних точках запального каскаду; переважні приклади включають антагоністи ТМЕ, такі як химерні, гуманізовані або людські антитіла до ТМЕ, адалімумаб (НОМІКА; 02Е7; публікація згідно з РСТ
Мо МО 97/29131) і патент США Мо 6090382, включені у даний документ за допомогою посилання), СА2 (Кетісаде ТМ), СОР 571 ї розчинні рецептори ТМЕ р55 або р?75, їхні похідні (р"У5ТМЕКтТоо (Епобге! ТМ) або раОЗтМЕКтдо (І епегсері), а також інгібітори ТМЕ-перетворюючого ферменту (ТАСЕ); аналогічно інгібітори 1І--1 (інгібітори інтерлейкін-1-перетворюючого ферменту,
І/-1КА і т. д.) можуть бути ефективними з тієї ж причини. Інші переважні комбінації включають інтерлейкін 4.
Фармацевтичні композиції за даним винаходом можуть включати "терапевтично ефективну кількість" або "профілактично ефективну кількість" антитіла або частини антитіла за даним винаходом. "Терапевтично ефективна кількість" стосується кількості, яка за необхідних доз і періодів часу є ефективною для досягнення потрібного терапевтичного результату.
Терапевтично ефективну кількість антитіла або частини антитіла може визначити фахівець у даній галузі техніки, і вона може варіювати згідно з факторами, такими як стадія захворювання, вік, стать і вага індивідуума і здатність антитіла або частини антитіла викликати потрібну відповідь в індивідуума. Терапевтично ефективна кількість також є такою, за якої будь-які токсичні або шкідливі ефекти антитіла або частини антитіла переважаються терапевтично
Зо корисними ефектами. "Профілактично ефективна кількість" стосується кількості, яка за необхідних доз і періодів часу є ефективною для досягнення потрібного профілактичного результату. Як правило, оскільки профілактичну дозу застосовують у суб'єктів до прояву захворювання або на його ранній стадії, то профілактично ефективна кількість буде меншою, ніж терапевтично ефективна кількість.
Схеми прийому доз можна регулювати, щоб забезпечити оптимальну потрібну відповідь (наприклад, терапевтичну або профілактичну відповідь). Наприклад, можна вводити одну болюсну дозу, декілька розділених доз можна вводити протягом деякого часу або дозу можна пропорційно знижувати або підвищувати відповідно до потреб терапевтичної ситуації. Особливо доцільно складати парентеральні композиції в одиничну лікарську форму для простоти введення й однорідного дозування. "Одинична лікарська форма", як використовується в даному документі, стосується фізично дискретних одиниць, придатних як разові дози для суб'єктів- ссавців, що підлягають лікуванню; причому кожна одиниця містить попередньо визначену кількість активної сполуки, розраховану для одержання потрібного терапевтичного ефекту, в поєднанні з необхідним фармацевтичним носієм. Специфікація для одиничної лікарської форми за даним винаходом зумовлена і безпосередньо залежить від (а) унікальних характеристик активної сполуки і конкретного терапевтичного або профілактичного ефектів, яких потрібно досягти, та (б) обмежень, властивих для галузі техніки, яка стосується складання цієї активної сполуки для лікування чутливості в індивідуумів.
Ілюстративний необмежувальний діапазон терапевтично або профілактично ефективної кількості АОС, антитіла або частини антитіла за даним винаходом становить 0,1-20 мг/кг, більш переважно 1-10 мг/кг. В одному варіанті здійснення доза антитіла або АОС, описаних у даному документі, становить від 1 до б мг/кг, у тому числі окремі дози, вказані в даному документі, наприклад, 1 мг/кг, 2 мг/кг, З мг/кг, 4 мг/кг, 5 мг/кг і 6 мг/кг. В іншому варіанті здійснення доза антитіла або АОС, описаних у даному документі, становить від 1 до 200 мкг/кг, у тому числі індивідуальні дози, зазначені в них, наприклад, 1 мкг/кг, 2 мкг/кг, З мкг/кг, 4 мкг/кг, 5 мкг/кг, 10 мкг/кг, 20 мкг/кг, 30 мкг/кг, 40 мкг/кг, 50 мкг/кг, 60 мкг/кг, 80 мкг/кг, 100 мкг/кг, 120 мкг/кг, 140 мкг/кг, 160 мкг/кг, 180 мкг/кг і 200 мкг/кг. Слід зазначити, що величини дози можуть варіюватися залежно від типу та тяжкості стану, який потрібно полегшити. Також слід розуміти, що для будь- якого конкретного суб'єкта певні схеми прийому доз слід коригувати з урахуванням часу 60 відповідно до індивідуальних потреб і професійної думки особи, яка здійснює введення або контролює введення композицій, і що діапазони доз, викладені у даному документі, є тільки ілюстративними і не призначені для обмеження обсягу або застосування заявленої композиції на практиці.
В одному варіанті здійснення АЮС з антитілом до В7-НЗ, зокрема АОС, який містить антитіло ПпиАБр13м1, пиАБЗм2.5 або пиАрЗм2.6, вводять суб'єкту, що потребує цього, наприклад суб'єкту, який має рак, у дозі 0,1-30 мг/кг. В іншому варіанті здійснення антитіло до В7-НЗ, наприклад пиАбБ13м1, пиАбБЗм2.5, пиАБЗм2.6 або його антигензв'язувальну частину, вводять суб'єкту, який потребує цього, наприклад суб'єкту, що має рак, у вигляді АОС у дозі 1-15 мг/кг. В іншому варіанті здійснення антитіло до В7-НЗ, наприклад пиАбр13м1, пиАрЗм2.5, пиАрЗм2.6 або його антигензв'язувальну частину, вводять суб'єкту, що потребує цього, наприклад суб'єкту, що має рак, у вигляді АОС у дозі 1-10 мг/кг. В іншому варіанті здійснення антитіло до В7-НЗ, наприклад пиАбБ13м1, пиАбБЗм2.5, пиАБЗм2.6 або його антигензв'язувальну частину, вводять суб'єкту, що потребує цього, наприклад суб'єкту, що має рак, у вигляді АОС у дозі 2-3. В іншому варіанті здійснення антитіло до В7-НЗ, наприклад пиАбБ1З3м1, пиАбБЗм2.5, пиАБЗм2.6 або його антигензв'язувальну частину, вводять суб'єкту, що потребує цього, наприклад суб'єкту, що має рак, у вигляді АОС у дозі 1-4 мг/кг.
В одному варіанті здійснення антитіло до В7-НЗ3 або АОС, описані в даному документі, наприклад, пиАБр13м1, пиАБЗм2.5, пиАБЗм2.6, вводять суб'єкту, що потребує цього, наприклад суб'єкту, що має рак, у вигляді АОС у дозі від 1 до 200 мкг/кг. В іншому варіанті здійснення антитіло до В7-НЗ, наприклад пиАб1З3м1, пиАрЗм2.5, пиАБЗмМ2.6 або його антигензв'язувальну частину, вводять суб'єкту, що потребує цього, наприклад суб'єкту, що має рак, у вигляді АОС у дозі 5-150 мкг/кг. В іншому варіанті здійснення антитіло до В7-НЗ, наприклад пиАбБІТЗмМ, пПичАБЗм2.5, пиІАБЗм2.6 або його антигензв'язувальну частину, вводять суб'єкту, що потребує цього, наприклад суб'єкту, що має рак, у вигляді АОС у дозі 5-100 мкг/кг. В іншому варіанті здійснення антитіло до В7-НЗ, наприклад ПшАбБІ1З3м!, пиАБЗм2.5, пиАрЗм2.6 або його антигензв'язувальну частину, вводять суб'єкту, що потребує цього, наприклад суб'єкту, що має рак, у вигляді АОС у дозі 5-90 мкг/кг. В іншому варіанті здійснення антитіло до В7-НЗ, наприклад пПичАбІ13М1, пиАбЗм2.5, пиАрЗм2.6 або його антигензв'язувальну частину, вводять суб'єкту, що потребує цього, наприклад суб'єкту, що має рак, у вигляді АОС у дозі 5-80 мкг/кг. В іншому варіанті здійснення антитіло до В7-НЗ, наприклад пиАбБ1З3м1, пиАбБЗм2.5, пиАрЗм2.6 або його антигензв'язувальну частину, вводять суб'єкту, що потребує цього, наприклад суб'єкту, що має рак, у вигляді АОС у дозі 5-70 мкг/кг. В іншому варіанті здійснення антитіло до В7-НЗ, наприклад пПичАбІ13М1, пиАбЗм2.5, пиАрЗм2.6 або його антигензв'язувальну частину, вводять суб'єкту, що потребує цього, наприклад суб'єкту, що має рак, у вигляді АОС у дозі 5-60 мкг/кг. В іншому варіанті здійснення антитіло до В7-НЗ, наприклад пиАбБ1З3м1, пиАбБЗм2.5, пиАрЗм2.6 або його антигензв'язувальну частину, вводять суб'єкту, що потребує цього, наприклад суб'єкту, що має рак, у вигляді АОС у дозі 10-80 мкг/кг.
Дози, описані вище, можуть бути корисні для введення або АОС з антитілом до В7-НЗ, або антитіл, розкритих у даному документі.
В іншому аспекті даної заявки передбачений спосіб виявлення присутності В7-НЗ у зразку іп міїго (наприклад, біологічному зразку, такому як сироватка крові, плазма, тканина і біоптат).
Заявлений спосіб можна застосовувати для діагностики порушення, наприклад раку. Спосіб передбачає: (ї) приведення зразка або контрольного зразка в контакт із антитілом до В7-НЗ або його фрагментом, описуваними в даному документі; і (ії) виявлення утворення комплексу між антитілом до В7-НЗ або його фрагментом і зразком або контрольним зразком, де статистично значущу зміну в утворенні комплексу у зразка відносно контрольного зразка вказує на присутність В7-НЗ у зразку.
Виходячи з їхньої здатності до зв'язування з В7-НЗ людини, антитіла до В7-НЗ людини або їхні частини за даним винаходом (а також їхні АОС) можна застосовувати для виявлення В7-НЗ людини (наприклад, у біологічному зразку, такому як сироватка крові або плазма) із застосуванням традиційного імунологічного аналізу, такого як твердофазні імуноферментні аналізи (ЕГІЗА), радіоімунологічний аналіз (КІА) або імуногістохімія тканин. В одному аспекті даний винахід передбачає спосіб виявлення В7-НЗ людини в біологічному зразку, який передбачає приведення біологічного зразка в контакт з антитілом або частиною антитіла за даним винаходом і виявлення або антитіла (або частини антитіла), зв'язаного з В7-НЗ людини, або незв'язаного антитіла (або частини антитіла), з виявленням таким чином В7-НЗ людини в біологічному зразку. Антитіло безпосередньо або опосередковано мітять за допомогою виявлюваної речовини для того, щоб полегшити виявлення зв'язаного або незв'язаного антитіла. Придатні детектовні речовини включають різні ферменти, простетичні групи, бо флуоресцентні матеріали, люмінесцентні матеріали та радіоактивні матеріали. Приклади придатних ферментів включають пероксидазу хрону, лужну фосфатазу, р-галактозидазу або ацетилхолінестеразу; приклади придатних комплексів простетичних груп включають стрептавідин/біотин і авідин/біотин; приклади придатних флуоресцентних матеріалів включають умбеліферон, флуоресцеїн, флуоресцеїну ізотіоціанат, родамін, дихлортриазиніламін- флуоресцеїн, дансилхлорид або фікоеритрин; приклад люмінесцентного матеріалу включає люмінол; і приклади придатного радіоактивного матеріалу включають УН, 770, 555, 50, 99Тсо, п, 125, 191), 177) у, 96Но або 1535111.
Як альтернатива, мічення антитіла В7-НЗ людини можна кількісно оцінювати в біологічних рідинах за допомогою конкурентного імунологічного аналізу з використанням стандартів "пВ7-
НЗ, мічених детектованою речовиною, і неміченого антитіла до В7-НЗ людини. У даному аналізі поєднують біологічний зразок, мічені стандарти /п8В7-НЗ і антитіло до В7-НЗ3З людини і визначають кількість міченого стандарту "пВ7-НЗ, що зв'язався з неміченим антитілом. Кількість
В7-НЗ людини в біологічному зразку обернено пропорційна кількості міченого стандарту гпВ7-
НЗ, що зв'язалася з антитілом до В7-НЗ. Аналогічно, В7-НЗ людини також можна кількісно оцінювати в біологічних рідинах за допомогою конкурентного імунологічного аналізу з використанням стандартів "п87-НЗ, мічених детектованою речовиною, і неміченого антитіла до
В7-НЗ людини.
У ще одному аспекті даної заявки передбачений спосіб виявлення присутності В7-НЗ іп мімо (наприклад, іп мімо візуалізація у суб'єкта). Заявлений спосіб можна застосовувати для діагностики порушення, наприклад В7-НЗ-асоційованого порушення. Спосіб передбачає: (Її) введення антитіла до В7-НЗ або його фрагмента, описуваних у даному документі, суб'єкту або контрольному суб'єкту в умовах, які забезпечують можливість зв'язування антитіла або фрагмента з В7-НЗ; і (і) виявлення утворення комплексу між антитілом або фрагментом і В7-НЗ, де статистично значуща зміна в утворенні комплексу в суб'єкта відносно контрольного суб'єкта вказує на присутність В7-НЗ.
МІ. Фармацевтичні композиції
У даному винаході також передбачені фармацевтичні композиції, які містять антитіло або його антигензв'язувальну частину або АОС за даним винаходом і фармацевтично прийнятний носій. Фармацевтичні композиції, які містять антитіла або АОС за даним винаходом, призначені
Зо без обмеження для застосування в діагностиці, виявленні або спостереженні за порушенням, у попередженні, лікуванні, контролі або полегшенні тяжкості порушення або одного або декількох його симптомів та/або в дослідженні. У конкретному варіанті здійснення композиція містить одне або декілька антитіл за даним винаходом. В іншому варіанті здійснення фармацевтична композиція містить одне або декілька антитіл або АОС за даним винаходом і один або декілька профілактичних або терапевтичних засобів, відмінних від антитіл або АОС за даним винаходом, для лікування порушення, за якого активність В7-НЗ3 чинить негативний вплив. Переважно відомо, що профілактичні або терапевтичні засоби є придатними для застосування або вже застосовувалися або на сьогодні застосовуються в запобіганні, лікуванні, контролі або полегшенні порушення або одного або декількох його симптомів. Згідно з цими варіантами здійснення композиція може додатково містити носій, розріджувач або наповнювач.
Антитіла і частини антитіл або АОС за даним винаходом можна включати у фармацевтичні композиції, що підходять для введення суб'єкту. Як правило, фармацевтична композиція містить антитіло або частину антитіла за даним винаходом і фармацевтично прийнятний носій.
Термін "фармацевтично прийнятний носій", використовуваний у даному документі, включає будь-які можливі розчинники, дисперсійні середовища, покриття, антибактеріальні та протигрибкові засоби, ізотонічні засоби і засоби, що уповільнюють всмоктування, тощо, які є фізіологічно сумісними. Приклади фармацевтично прийнятних носіїв включають одне або декілька з води, сольового розчину, фосфатно-сольового буфера, декстрози, гліцерину, етанолу тощо, а також їхні комбінації. У багатьох випадках буде переважно включати в композицію ізотонічні засоби, наприклад, цукри, багатоатомні спирти, такі як маніт, сорбіт або хлорид натрію. Фармацевтично прийнятні носії можуть також містити незначні кількості допоміжних речовин, таких як змочувальні або емульгувальні засоби, консерванти або буфери, які збільшують термін зберігання або ефективність антитіла, або частини антитіла, або АОС.
Відомі різні системи доставки, та їх можна застосовувати для введення одного або декількох антитіл або АОС за даним винаходом або комбінації з одного або декількох антитіл за даним винаходом і профілактичного засобу або терапевтичного засобу, придатних для попередження, контролю, лікування або полегшення тяжкості порушення або одного або декількох його симптомів, наприклад, інкапсуляція в ліпосоми, мікрочастинки, мікрокапсули, рекомбінантні клітини, здатні до експресії антитіла або фрагмента антитіла, опосередкований рецепторами бо ендоцитоз (див., наприклад, Ми апа Уми, у). Віої. Снет. 262:4429-4432 (1987)), конструювання нуклеїнової кислоти як частини ретровірусного або іншого вектора тощо. Способи введення профілактичного або терапевтичного засобу за даним винаходом включають без обмежень парентеральне введення (наприклад, інтрадермальне, внутрішньом'язове, внутрішньочеревинне, внутрішньовенне і підшкірне), епідуральне введення, внутрішньопухлинне введення і введення через слизові оболонки (наприклад, інтраназальний і пероральний шляхи). Крім того, можна використовувати легеневе введення, наприклад, за допомогою застосування інгалятора або аерозольного інгалятора і складу із засобом для утворення аерозолю. Див., наприклад, патенти США МоМо 6019968, 5985320, 5985309, 5934272, 5874064, 5855913, 5290540 і 4880078; і публікації згідно з РСТ МоМо МО 92/19244, МО 97/32572,
МО 97/44013, МО 98/31346 і М/О 99/66903, кожний з яких включений у даний документ за допомогою посилання в усій своїй повноті. В одному варіанті здійснення антитіло за даним винаходом, комбіновану терапію або композицію за даним винаходом вводять із застосуванням технології для легеневої доставки лікарського засобу АІКепте5 АІНФ (АїКегтезв, Іпс., Кембрідж,
Массачусетс). У конкретному варіанті здійснення профілактичні або терапевтичні засоби за даним винаходом вводять внутрішньом'язово, внутрішньовенно, внутрішньопухлинно, перорально, інтраназально, в легені або підшкірно. Профілактичні або терапевтичні засоби можна вводити за допомогою будь-якого традиційного шляху введення, наприклад за допомогою інфузії або болюсної ін'єкції, шляхом всмоктування через епітеліальні або шкірно- слизові вистилання (наприклад, слизову оболонку рота, слизову оболонку прямої кишки і кишечника тощо) і можна вводити разом з іншими біологічно активними засобами. Введення може бути системним або місцевим.
У конкретному варіанті здійснення може бути бажаним вводити профілактичні або терапевтичні засоби за даним винаходом місцево в ділянку, яка потребує лікування; цього можна досягти, наприклад і не для обмеження, шляхом місцевої інфузії, шляхом ін'єкції або за допомогою імпланту, причому вказаний імплант являє собою пористий або непористий матеріал, який включає мембрани і матриці, такі як мембрани б5іаїавзіїс, полімери, волокнисті матриці (наприклад, Тіззиє!в) або колагенові матриці. В одному варіанті здійснення ефективну кількість одного або декількох антитіл-антагоністів за даним винаходом уводять місцево в уражену ділянку суб'єкта для попередження, лікування, контролю та/або полегшення
Зо порушення або його симптому. В іншому варіанті здійснення ефективну кількість одного або декількох антитіл за даним винаходом вводять суб'єкту місцево в уражену ділянку в комбінації з ефективною кількістю одного або декількох терапевтичних засобів (наприклад, одного або декількох профілактичних або терапевтичних засобів), відмінних від антитіла за даним винаходом, для попередження, лікування, контролю та/або полегшення порушення або одного або декількох його симптомів.
В іншому варіанті здійснення профілактичний або терапевтичний засоби за даним винаходом можуть доставлятися в системі з контрольованим вивільненням або пролонгованим вивільненням. В одному варіанті здійснення для досягнення контрольованого або пролонгованого вивільнення можна застосовувати насос (див. І апдег, вище; Зейоп, 1987, СКС
Сії. Неї. Віотед. Епд. 14:20; Виспмаїа еї аї., 1980, Зигдегу 88:507; Зацаек еї а!., 1989, М. Епа). у.
Мей. 321:574). В іншому варіанті здійснення для досягнення контрольованого або пролонгованого вивільнення терапевтичних засобів за даним винаходом можна застосовувати полімерні матеріали (див. наприклад, Меадісаї! Арріїсайнопв5 ої СопігоПей Кеїеавзе, І апдег апа М/ізе (ед5.), СВО Ргез., Воса Вашюп, Ріа. (1974); Сопігоїїед Огид Віоамайаріїйу, Огид Ргодисі ЮОевідп апа
Репогптапсе, Зтоїеп апа Ваї! (едв.), ММпєу, Мем Моїк (1984); Вапдег апа Рерраз, 1983, .4.,
Масготої. 5сі. Кеу. Масготої. Спет. 23:61; див. також Г ему еї а!., 1985, 5сіепсе 228:190; Бигіпд еї аїІ,, 1989, Апп. МеигоїЇ. 25:351; Ноуага еї аїІ., 1989, 9). Меиго5зигу. 7 1:105); патент США
Мо 5679377; патент США Мо 5916597; патент США Мо 5912015; патент США Мо 5989463; патент
США Мо 5128326; публікацію згідно з РОСТ Мо М/О 99/15154 і публікацію згідно з РСТ
Мо М/О 99/20253. Приклади полімерів, що застосовуються у складах із пролонгованим вивільненням, включають без обмежень полі(2-гідроксиетилметакрилат), полі(метилметакрилат), полі(акрилова кислота), співполімер(етилену і вінілацетату), полі(метакрилова кислота), полігліколіди (РІ С), поліангідриди, полі(М-вінілпіролідон), полі(вініловий спирт), поліакриламід, полі(етиленгліколь), полілактиди (РГА), співполімер(лактиду і гліколідів) (РІ СА) і поліортоестери. У переважному варіанті здійснення полімер, який застосовується у складі з пролонгованим вивільненням, є інертним, не містить домішок, що вимиваються, стабільний під час зберігання, стерильний і біорозкладаний. У ще одному варіанті здійснення систему для контрольованого або пролонгованого вивільнення можна помістити поблизу профілактичної або терапевтичної мішені, у зв'язку з цим потрібна
Ге) лише частина системної дози (див., наприклад, Соойзоп, у Меадіса! Арріїсайоп5 ої Сопігоїєа
КеїІєазе, вище, мої. 2, рр. 115-138 (1984)).
Системи для контрольованого вивільнення обговорюються в огляді Іапдег (1990, бсіепсе 249:1527-1533). Будь-яка методика, відома фахівцю в даній галузі техніки, може застосовуватися для одержання складів з пролонгованим вивільненням, що містять один або декілька терапевтичних засобів за даним винаходом. Див., наприклад, патент США Мо 4526938, публікацію згідно РСТ УМО 91/05548, публікацію згідно РСТ УМО 96/20698, Міпд еї аї., 1996, "Іпігаїштога! НадіоїттипоїНегарну ої а Нитап Соїоп Сапсег Хеподгай Овіпд а 5ивіаіпед-ВеїЇєазе
Се!" Вадіоїпегару 5 Опсоіоду 39:179-189, бопа еї а!., 1995, "Апіїроду Меадіаїед І ипд Тагдеїіпо ої
Гопа- Сіксшанпуд Етиївіопв," РОА Шошгпа! ої Рпаптасешіса! Зсіепсе є Тесппоіоду 50:372-397,
Сієек еї аї., 1997, "Віодедгадабіє Роїутегіс Сагтієтз ог а БЕРСЕ Апіїбоду їог Сагаіомазсшціаг
Арріїсайоп," Рго. Ії. Бутр. СопігоЇ. Неї. Віоасі. Маїеїг. 24:853-854 і їат еї аї., 1997, "Містоепсарзшайоп ої Несотбріпапі Нитапігей Мопосіопа! Апііроду ог І оса! Оєїїмегу," Ргос. Іпг1.
Зутр. Сопіго! Неї. Віоасі. Маїег. 24:759-760, кожний з яких включений у даний документ за допомогою посилання в повному обсязі.
У конкретному варіанті здійснення, де композиція за даним винаходом являє собою нуклеїнову кислоту, яка кодує профілактичний або терапевтичний засоби, нуклеїнову кислоту можна вводити іп мімо для забезпечення експресії закодованого в ній профілактичного або терапевтичного засобів, шляхом конструювання її як частини відповідного вектора для експресії нуклеїнової кислоти і введення її таким чином, що вона потрапляє всередину клітини, наприклад за допомогою застосування ретровірусного вектора (див. патент США Мо 4980286), або за допомогою прямої ін'єкції або за допомогою застосування бомбардування мікрочастинками (наприклад, генна гармата; біолістика, биропі), або покриття ліпідами, або рецепторами клітинної поверхні, або трансфікуючими засобами, або за допомогою введення Її в поєднанні з гомеобоко-подібним пептидом, який, як відомо, проникає в ядро (див., наприклад,
Чщоїйої еї аї., 1991, Ргос. Маї). Асад. сі. ОБА 88:1864-1868). Як альтернатива, нуклеїнова кислота може бути введена всередину клітини і вбудована в ДНК клітини-хазяїна для експресії за допомогою гомологічної рекомбінації.
Фармацевтичну композицію за даним винаходом складають так, щоб вона була сумісна з її можливим шляхом введення. Приклади шляхів уведення включають без обмежень
Зо парентеральне, наприклад, внутрішньовенне, інтрадермальне, підшкірне, пероральне, інтраназальне (наприклад, інгаляційне), трансдермальне (наприклад, місцеве), трансмукозальне та ректальне введення. У конкретному варіанті здійснення композицію складають згідно з традиційними процедурами як фармацевтичну композицію, призначену для внутрішньовенного, підшкірного, внутрішньом'язового, перорального, інтраназального або місцевого введення людям. Як правило, композиції для внутрішньовенного введення являють собою розчини у стерильному фізіологічному водному буфері. У разі необхідності композиція також може містити солюбілізуючий засіб і місцевий анестетик, такий як лігнокаїн, для полегшення болю в місці ін'єкції.
Якщо спосіб за даним винаходом передбачає інтраназальне введення композиції, то композиція може бути складена в аерозольній формі, спреї, дрібнодисперсній формі або у формі крапель. Зокрема, профілактичні або терапевтичні засоби для застосування згідно з даним винаходом для зручності можуть доставлятися у формі випуску аерозольного спрею з упаковок або аерозольного інгалятора, що перебувають під тиском, із застосуванням придатного пропеленту (наприклад, дихлордифторметану, трихлорфторметану, дихлортетрафторетану, вуглекислого газу або іншого придатного газу). У випадку аерозолю, який знаходиться під тиском, одиниця дозування може визначатися шляхом забезпечення клапана для доставки відмірюваної кількості. Капсули і картриджі (наприклад, складені з желатину) для застосування в інгаляторі або інсуфляторі можуть бути складені так, щоб містити порошкову суміш сполуки і придатної порошкової основи, такої як лактоза або крохмаль.
Якщо спосіб за даним винаходом передбачає пероральне введення, то композиції можна складати для перорального введення у формі таблеток, капсул, саше, желатинових капсул, розчинів, суспензій тощо. Таблетки або капсули можна одержувати за допомогою традиційних способів із фармацевтично прийнятними наповнювачами, такими як зв'язувальні засоби (наприклад, прежелатинізований кукурудзяний крохмаль, полівінілпіролідон або гідроксипропілметилцелюлоза); заповнювачі (наприклад, лактоза, мікрокристалічна целюлоза або гідрофосфат кальцію); змащувальні речовини (наприклад, стеарат магнію, тальк або діоксид кремнію); розпушувачі (наприклад, картопляний крохмаль або натрію крохмальгліколят); або змочувальні засоби (наприклад, лаурилсульфат натрію). Таблетки можуть бути покриті за допомогою способів, добре відомих із рівня техніки. Рідкі препарати для перорального введення 60 без обмежень можуть бути у формі розчинів, сиропів або суспензій, або вони можуть бути представлені як сухий продукт для розбавляння водою або іншим придатним середовищем перед застосуванням. Ці рідкі препарати можуть бути одержані за допомогою традиційних способів із фармацевтично прийнятними добавками, такими як суспендуючі засоби (наприклад, сорбітовий сироп, похідні целюлози або гідрогенізовані харчові жири); емульгувальні засоби (наприклад, лецитин або аравійська камедь); неводні середовища (наприклад, мигдальне масло, олійні естери, етиловий спирт або фракціоновані рослинні олії) і консерванти (наприклад, метил або пропіл-пара-гідроксибензоати або сорбінова кислота). Препарати також можуть містити буферні солі, смакоароматичні, фарбувальні та підсолоджувальні засоби, залежно від обставин. Препарати для перорального введення можуть бути відповідно складені для повільного вивільнення, контрольованого вивільнення або пролонгованого вивільнення профілактичного(профілактичних) або терапевтичного(терапевтичних) засобу(засобів).
Спосіб за даним винаходом може передбачати легеневе введення композиції, складеної із засобом для утворення аерозолю, наприклад, шляхом застосування інгалятора або аерозольного інгалятора. Див., наприклад, патенти США МоМо 6019968, 5985320, 5985309, 5934272, 5874064, 5855913, 5290540 і 4880078 і публікації згідно з РОСТ МоМо МО 92/19244, МО 97/32572, МО 97/44013, МО 98/31346 і М/О 99/66903, кожний з яких включено в даний документ за допомогою посилання в усій своїй повноті. У конкретному варіанті здійснення антитіло за даним винаходом, комбіновану терапію та/або композицію за даним винаходом вводять із застосуванням технології для легеневої доставки лікарського засобу АІКеттез АІВФ (АїІКептев,
Іпс., Кембрідж, Массачусетс).
Спосіб за даним винаходом може передбачати введення композиції, складеної для парентерального введення шляхом ін'єкції (наприклад, шляхом болюсної ін'єкції або тривалої інфузії). Склади для ін'єкції можуть бути представлені у вигляді одиничної лікарської форми (наприклад, в ампулах або багатодозових контейнерах) із доданим консервантом. Композиції можуть набувати таких форм, як суспензії, розчини або емульсії в маслянистих або водних середовищах, і можуть містити засоби для складання, такі як засоби, що сприяють суспендуванню, стабілізації та/"або диспергуванню. Як альтернатива, активний інгредієнт може перебувати у формі порошку для розбавляння за допомогою придатного середовища (наприклад, стерильної води, яка не містить пірогени) перед застосуванням.
Способи за даним винаходом можуть додатково передбачати введення композицій, складених як препарати-депо. Такі склади тривалої дії можна вводити шляхом імплантації (наприклад, підшкірно або внутрішньом'язово) або за допомогою внутрішньом'язової ін'єкції.
Таким чином, наприклад, композиції можуть бути складені з придатними полімерними або гідрофобними матеріалами (наприклад, як емульсія в прийнятній олії) або іонообмінними смолами або як помірно розчинні похідні (наприклад, як помірно розчинні солі).
Способи за даним винаходом охоплюють уведення композицій, складених як нейтральні або сольові форми. Фармацевтично прийнятні солі включають солі, які утворені з аніонами, такими як ті, що походять від соляної, фосфорної, оцтової, щавлевої, винної кислот тощо, їі солі, які утворені з катіонами, такими як ті, що походять від натрію, калію, амонію, кальцію, гідроксидів тривалентного заліза, ізопропіламіну, триетиламіну, 2-етиламіноетанолу, гістидину, прокаїну тощо.
Загалом, інгредієнти композицій поставляються або окремо, або змішаними разом в одиничну лікарську форму, наприклад у вигляді сухого ліофілізованого порошку або безводного концентрату в герметично закритому контейнері, такому як ампула або саше, які показують кількість активного засобу. Якщо способом введення є інфузія, то композицію можна розподілити в інфузійний флакон, який містить стерильну воду фармацевтичного ступеня чистоти або сольовий розчин. Якщо способом уведення є ін'єкція, то може бути забезпечена ампула зі стерильною водою для ін'єкції або сольовим розчином, так що інгредієнти можуть бути змішані перед уведенням.
БО Зокрема, у даному винаході також передбачено, що один або декілька профілактичних або терапевтичних засобів або фармацевтичних композицій за даним винаходом упаковані в герметично закритий контейнер, такий як ампула або саше, які показують кількість засобу. В одному варіанті здійснення один або декілька профілактичних або терапевтичних засобів або фармацевтичних композицій за даним винаходом постачаються у вигляді сухого стерилізованого ліофілізованого порошку або безводного концентрату в герметично закритому контейнері і можуть бути розбавлені (наприклад, за допомогою води або сольового розчину) до концентрації що є придатною для введення суб'єкту. Переважно, один або декілька профілактичних або терапевтичних засобів або фармацевтичних композицій за даним винаходом постачаються у вигляді сухого стерильного ліофілізованого порошку в герметично бо закритому контейнері з розрахунку одиничної дози, що становить щонайменше 5 мг,
щонайменше 10 мг, щонайменше 15 мг, щонайменше 25 мг, щонайменше 35 мг, щонайменше 45 мг, щонайменше 50 мг, щонайменше 75 мг або щонайменше 100 мг. Ліофілізовані профілактичні або терапевтичні засоби або фармацевтичні композиції за даним винаходом слід зберігати при температурах від 270 до 870 в їхньому оригінальному контейнері і профілактичні або терапевтичні засоби або фармацевтичні композиції за даним винаходом слід вводити в межах 1 тижня, у межах 5 днів, у межах 72 годин, у межах 48 годин, у межах 24 годин, у межах 12 годин, у межах б годин, у межах 5 годин, у межах З годин або в межах 1 години після розбавляння. В альтернативному варіанті здійснення один або декілька із профілактичних або терапевтичних засобів або фармацевтичних композицій за даним винаходом постачають у рідкій формі в герметично закритому контейнері, який показує кількість і концентрацію засобу.
Переважно, рідка форма композиції, що вводиться, постачається в герметично закритому контейнері з розрахунку щонайменше 0,25 мг/мл, щонайменше 0,5 мг/мл, щонайменше 1 мг/мл, щонайменше 2,5 мг/мл, щонайменше 5 мг/мл, щонайменше 8 мг/мл, щонайменше 10 мг/мл, щонайменше 15 мг/кг, щонайменше 25 мг/мл, щонайменше 50 мг/мл, щонайменше 75 мг/мл або щонайменше 100 мг/мл. Рідку форму слід зберігати при значеннях температури від 2"С до 870 в її оригінальному контейнері.
Антитіла і частини антитіл за даним винаходом можна включати у фармацевтичну композицію, яка є придатною для парентерального введення. Переважно, антитіло або частини антитіла будуть одержані у вигляді ін'єкційного розчину, який містить 0,1-250 мг/мл антитіла.
Ін'єкційний розчин може бути складений у вигляді або рідкої, або ліофілізованої лікарської форми в посудині з флінтового або бурштинового скла, ампули або заздалегідь заповненого шприца. Буфер може являти собою І -гістидин (1-50 мМ), оптимально 5-10 мМ, при рН 5,0-7,0 (оптимально рН 6,0). Інші придатні буфери включають без обмежень сукцинат натрію, цитрат натрію, фосфат натрію або фосфат калію. Хлорид натрію можна застосовувати для модифікування токсичності розчину при концентрації, що становить 0-300 мм (оптимально 150
ММ у разі рідкої лікарської форми). У разі ліофілізованої лікарської форми можуть бути включені кріопротектори, передусім 0-1095 сахарози (оптимально 0,5-1,095). Інші придатні кріопротектори включають трегалозу і лактозу. У разі ліофілізованої лікарської форми можуть бути включені об'ємоутворювальні засоби, передусім 1-1095 маніт (оптимально 2-495). Стабілізатори можна
Зо застосовувати як у рідкій, так і в ліофілізованій лікарських формах, передусім 1-50 мМ І- метіоніну (оптимально 5-10 мМ). Інші придатні об'ємоутворювальні засоби включають гліцин, аргінін, при цьому можна включати 0-0,0595 полісорбату-80 (оптимально 0,005-0,019б5).
Додаткові поверхнево-активні речовини включають без обмежень полісорбат 20 і поверхнево- активні речовини ВКІ). Фармацевтична композиція, яка містить антитіла і частини антитіл за даним винаходом, одержана у вигляді ін'єкційного розчину для парентерального введення, може додатково містити засіб, придатний як ад'ютант, як наприклад, застосовувані для підвищення всмоктування або поширення терапевтичного білка (наприклад, антитіла).
Особливо придатним оад'ювантом є гіалуронідаза, така як НуЇепех?б (рекомбінантна гіалуронідаза людини). Додавання гіалуронідази в ін'єкційний розчин поліпшує біодоступність для людини після парентерального введення, зокрема підшкірного введення. Воно також робить можливим збільшення об'єму в місці ін'єкції (тобто більше 1 мл) зі зменшенням болю і дискомфорту і зведенням до мінімуму випадків реакцій у місці ін'єкції. (Див. УМО2004078140, 052006104968, включені в даний документ за допомогою посилання).
Композиції за даним винаходом можуть бути у вигляді багатьох різних форм. Вони включають, наприклад, рідкі, напівтверді і тверді лікарські форми, такі як рідкі розчини (наприклад, ін'єкційні та інфузійні розчини), дисперсії або суспензії, таблетки, пігулки, порошки, ліпосоми і супозиторії. Переважна форма залежить від можливого способу введення і терапевтичного застосування. Типові переважні композиції перебувають у формі ін'єкційних або інфузійних розчинів, таких як композиції, аналогічні тим, які застосовуються при пасивній імунізації людей за допомогою інших антитіл. Переважним способом введення є парентеральне (наприклад, внутрішньовенне, підшкірне, внутрішньочеревинне, внутрішньом'язове). У переважному варіанті здійснення антитіло вводять за допомогою внутрішньовенної інфузії або ін'єкції. В іншому переважному варіанті здійснення антитіло вводять за допомогою внутрішньом'язової або підшкірної ін'єкції.
Як правило, терапевтичні композиції повинні бути стерильними і стабільними в умовах виробництва і зберігання. Композиція може бути складена у вигляді розчину, мікроемульсії, дисперсії, ліпосоми або іншої впорядкованої структури, придатної для високої концентрації лікарського засобу. Стерильні ін'єкційні розчини можна одержати шляхом включення активної сполуки (тобто антитіла або частини антитіла) у потрібній кількості в придатний розчинник з 60 одним або комбінацією перелічених вище інгредієнтів за необхідності після стерилізації фільтруванням. Загалом, дисперсії одержують шляхом включення активної сполуки у стерильне середовище, яке містить основне дисперсійне середовище та інші необхідні інгредієнти з вищеперелічених. У разі стерильних, ліофілізованих порошків для одержання стерильних ін'єкційних розчинів переважними способами одержання є вакуумне висушування та висушування розпиленням, які забезпечують порошок активного інгредієнта з будь-яким додатковим необхідним інгредієнтом з їхнього розчину, попередньо простерилізованого фільтруванням. Належну текучість розчину можна підтримувати, наприклад, за допомогою застосування покриття, такого як лецитин, за допомогою підтримки необхідного розміру частинок у разі дисперсії і за допомогою застосування поверхнево-активних речовин.
Пролонгованого всмоктування ін'єкційних композицій можна досягати шляхом включення в композицію засобу, який уповільнює всмоктування, наприклад солей моностеаратів і желатину.
Антитіла і частини антитіл або АЮС за даним винаходом можна вводити за допомогою різних способів, відомих із рівня технікию, хоча для багатьох терапевтичних застосувань переважним шляхом/способом введення є підшкірна ін'єкція, внутрішньовенна ін'єкція або інфузія. Як буде зрозуміло фахівцю у даній галузі техніки, шлях та/або спосіб введення будуть варіювати, залежно від потрібних результатів. У певних варіантах здійснення активну сполуку можна одержувати з носієм, який буде захищати сполуку від швидкого вивільнення, як, наприклад, склади з контрольованим вивільненням, у тому числі імпланти, трансдермальні пластирі та мікроінкапсульовані системи доставки. Можна застосовувати біорозкладані, біосумісні полімери, такі як етиленвінілацетат, поліангідриди, полігліколева кислота, колаген, поліортоестери і полімолочна кислота. Багато способів для одержання таких складів є запатентованими або в цілому відомими фахівцям у даній галузі техніки. Див., наприклад, зЗивіаіпей апа Сопігоїїєд Реієазе Огид Оеєїїмегу Зузіетв, У.В. Вобіпзоп, єд., Магсеї! Оеккег, Іпс.,
Мем Могк, 1978.
У певних варіантах здійснення антитіло або частину антитіла або АОС за даним винаходом можна вводити перорально, наприклад, з інертним розріджувачем або засвоюваним харчовим носієм. Сполука (та інші інгредієнти, за потреби) також можуть бути заключені у тверду або м'яку желатинову капсулу, спресовані у таблетки або введені безпосередньо в харчовий раціон суб'єкта. У разі перорального введення терапевтичного засобу сполуки можуть бути об'єднані з
Зо допоміжними речовинами і застосовуватися у формі таблеток, що проковтуються, букальних таблеток, пастилок, капсул, еліксирів, суспензій, сиропів, облаток тощо. Щоб ввести сполуку за даним винаходом за допомогою введення, відмінного від парентерального, може бути необхідним покрити сполуку за допомогою матеріалу для запобігання її інактивації або ввести сполуку спільно з ним.
В інших варіантах здійснення антитіло, або частину антитіла, або АОС за даним винаходом можна кон'югувати з молекулою на основі полімеру, так що вказана молекула на основі полімеру може надавати вказаному антитілу або частині антитіла за даним винаходом відповідний розмір, так що вказані антитіло або частина антитіла за даним винаходом мають переваги від поліпшеного ефекту проникності та утримування (ЕРК-ефект) (див. також публікацію згідно з РСТ Мо М/О 2006/042146 А2 і публікації заявок на патент США
МоМо 2004/0028687 АТ, 2009/0285757 А1 ії 2011/0217363 АТ, а також патент США Ме 7695719 (кожний з яких включено в даний документ за допомогою посилання в повному обсязі і для всіх цілей).
У композиції також можна включати допоміжні активні сполуки. У певних варіантах здійснення антитіло, або частину антитіла, або АОС за даним винаходом складають та/або вводять спільно з одним або кількома додатковими терапевтичними засобами, які придатні для лікування порушень, за яких активність В7-НЗ чинить негативний вплив. Наприклад, антитіло до
ПВ7-НЗ, або частину антитіла, або АОС за даним винаходом можна складати та/або вводити спільно з одним або кількома додатковими антитілами, які зв'язують інші мішені (наприклад, антитілами, які зв'язують цитокіни або які зв'язують молекули клітинної поверхні). До того ж одне або декілька антитіл за даним винаходом можна застосовувати в комбінації з двома або більше з вищеописаних терапевтичних засобів. У таких видах комбінованої терапії можна з успіхом використовувати більш низькі дози терапевтичних засобів, що вводяться, уникаючи таким чином можливих проявів токсичності або ускладнень, асоційованих із різними видами монотерапії.
У певних варіантах здійснення антитіло або АОС з антитілом до В7-НЗ або його фрагмент пов'язані із середовищем, що подовжує час напівжиття, відомим із рівня техніки. Такі середовища включають без обмежень Ес-домен, поліетиленгліколь і декстран. Такі середовища описані, наприклад, у заявці на патент США з порядковим Мо 09/428082 і опублікованій заявці 60 згідно з РСТ Мо УМО 99/25044, які цим включені за допомогою посилання для будь-якої мети.
Фахівці в даній галузі легко зрозуміють, що інші відповідні модифікації та адаптації способів за даним винаходом, описаним у даному документі, є очевидними та їх можна проводити із застосуванням придатних еквівалентів без відступу від обсягу винаходу або варіантів здійснення, розкритих у даному документі. Після наведеного докладного опису даний винахід можна буде більш ясно зрозуміти за допомогою посилання на наступні приклади, які включені тільки для ілюстрації і не призначені обмежувати даний винахід.
Приклади
Приклад 1. Синтез ілюстративних інгібіторів Всі-х!.
У даному прикладі передбачені способи синтезу ілюстративних сполук УМ2.01-У/2.91, які інгібують Всі-хі.. Інгібітори Всі-х! (М/2.01-Му2.91) і синтони (приклади 2.1-2.176) були названі із використанням АСО/Мате 2012 року випуску (версія 56084, 5 квітня 2012 р., Адмапсей Спетівігу
ОемеІюртепі Іпс., Торонто, Онтаріо), АСО/Мате 2014 року випуску (версія 66687, 25 жовтня 2013 р., Адмапсей Спетівзігу ЮемеІюортепі Іпс., Торонто, Онтаріо), СпетОгам/в, версія 9.0.7 (Сатрьгіддезоїй, Кембридж, Массачусетс), СпетОгам«ю ШКга, версія 12.0 (Сатрьгіддезоїй,
Кембридж, Массачусетс) або СпетОгам«юЮ Рготеззіопа!, версія 15.0.0.106. Інгібітор Всі-хі. і проміжні сполуки синтонів називали з використанням АСО/Мате 2012 року випуску (версія 56084, 5 квітня 2012 р., Адмапсей Спетізігу ОемеІюртепі Іпс., Торонто, Онтаріо), АСО/Мате 2014 року випуску (версія 66687, 25 жовтня 2013 р., Адмапсейа Спетізігу ЮОемеІюортепі Іпс.,
Торонто, Онтаріо), СПпетагамлх?ж, версія 9.0.7 (Сатрьгіддебой, Кембридж, Массачусетс),
СпетОгамю ОНга, версія 12.0 (Сатргіддезой, Кембридж, Массачусетс) або СпетОгажме
Ргоїеззіопаї, версія 15.0.0.106. 1.1 Синтез 6-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-3-(1-(13-(2-(12- (г-(карбоксиметокси)етокси|етил)аміно)етокси)|-5,7-диметилтрицикло!/|3.3.1.13Л)дец-1-ил)метил)-
Б-метил-1Н-піразол-4-іл|піридин-2-карбонової кислоти (сполука М/2.01) 1.1.1 3-Бром-5,7-диметиладамантанкарбонова кислота
В 50 мл круглодонну колбу при 0"С додавали бром (16 мл). Додавали залізний порошок (/г) та перемішували реакційну суміш при 0"С протягом 30 хвилин. Додавали 3,5- диметиладамантан-1-карбонову кислоту (12 г). Суміш нагрівали до кімнатної температури та перемішували протягом З днів. Суміш льоду та концентрованої НСІ виливали в реакційну суміш.
Одержану в результаті суспензію двічі обробляли Маг5Оз (50г в 200 мл води) й тричі екстрагували дихлорметаном. Об'єднані органічні речовини промивали 1 н. водним розчином
НОСІ, висушували над сульфатом натрію, фільтрували й концентрували з одержанням указаної в заголовку сполуки. 1.1.2 3-Бром-5,7-диметиладамантанметанол
До розчину речовини із прикладу 1.1.1 (15,4 г) в тетрагідрофурані (200 мл) додавали ВНз (1 М в тетрагідрофурані, 150 мл) й суміш перемішували при кімнатній температурі протягом ночі. Потім реакційну суміш обережно гасили за допомогою додавання по краплях метанолу.
Після цього суміш концентрували під вакуумом і залишок зрівноважували між етилацетатом (500 мл) і 2 н. водним розчином НСІ (100 мл). Водний шар додатково двічі екстрагували етилацетатом і об'єднані органічні екстракти промивали водою та сольовим розчином, висушували над сульфатом натрію й фільтрували. Після випарювання розчинника одержували вказану в заголовку сполуку. 1.1.3 1-((3-Бром-5,7-диметилтрицикло!/3.3.1.137|дец-1-ил)метил)-1 Н-піразол
До розчину речовини із прикладу 1.1.2 (8,0 г) у толуолі (60 мл) додавали 1Н-піразол (1,55 г) і ціанометилентрибутилфосфоран (2,0 г), і суміш перемішували при 909С протягом ночі.
Реакційну суміш концентрували й залишок очищували за допомогою колонкової хроматографії на силікагелі (10:11 гептан:'етилацетат) з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (Е5І) т/е 324,2 (МАН). 1.1.4 2-І3,5-Диметил-7-(1Н-піразол-1-ілметил)трицикло!|3.3.1.157)дец-1-ил|окси)етанол
До розчину речовини із прикладу 1.1.3 (4,0 г) в етан-1,2-діолі (12 мл) додавали триетиламін (З мл). Суміш перемішували при 15020 в умовах мікрохвильового випромінювання (Віоїаде
Іпйіаєог) протягом 45 хвилин. Суміш виливали у воду (100 мл) й тричі екстрагували етилацетатом. Об'єднані органічні екстракти промивали водою та сольовим розчином, висушували над сульфатом натрію й фільтрували. Після випарювання розчинника одержували залишок, який очищували за допомогою хроматографії на силікагелі з елююванням 2090 етилацетатом в гептані, потім 595 метанолом в дихлорметані, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕІ) т/е 305,2 (МАН). 1.1.5 2-(13,5-Диметил-7-((5-метил-1 Н-піразол-1-іл)уметилігрициклоїЇ3.3.1.15Л)дец-1- илюкси)етанол бо До охолодженого (-782С) розчину речовини із прикладу 1.1.4 (6,05 г) в тетрагідрофурані
(100 мл) додавали н-Виї і (40 мл, 2,5 М у гексані) й суміш перемішували при -782С протягом 1,5 години. Йодметан (10 мл) додавали за допомогою шприца й суміш перемішували при -789С протягом З годин. Реакційну суміш потім гасили за допомогою водного розчину МНАСІ й двічі екстрагували етилацетатом і об'єднані органічні екстракти промивали водою й сольовим розчином. Після висушування над сульфатом натрію розчин фільтрували й концентрували, залишок очищували за допомогою колонкової хроматографії на силікагелі, з елююванням 590 метанолу в дихлорметані, з одержанням указаної в заголовку сполуки. Ме (Е5І) т/е 319,5 (МАН). 1.1.6 1-43,5-Диметил-7-(2-(гідрокси)етоксиЇгрицикло!|3.3.1.19Я)дец-1-ил)метил)-4-йод-5- метил-1Н-піразол
До розчину речовини із прикладу 1.1.5 (3,5 г) в М,М-диметилформаміді (30 мл) додавали М- йодсукцинімід (3,2 г) і суміш перемішували при кімнатній температурі протягом 1,5 години.
Реакційну суміш розбавляли етилацетатом (600 мл) і промивали водним розчином Манзоз, водою та сольовим розчином. Органічний шар висушували над сульфатом натрію, фільтрували та концентрували за зниженого тиску. Залишок очищували за допомогою хроматографії на силікагелі, з елююванням 2095 етилацетатом у дихлорметані, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕІ) т/е 445,3 (МАН). 1.1.7..1-((3-(2-(трет-Бутилдиметилсиліл)окси)етокси)-5,7-диметиладамантан-1-іл)метил)-4- йод-5-метил-1 Н-піразол
Трет-бутилдиметилсилілу трифторметансульфонат (5,34 мл) додавали до розчину речовини із прикладу 1.1.6 (8,6 г) і 2,6-лутидину (3,16 мл) в дихлорметані (125 мл) при 409С й забезпечували нагрівання реакційної суміші до кімнатної температури протягом ночі. Суміш концентрували й залишок очищували за допомогою хроматографії на силікагелі, з елююванням від 5 до 2095 етилацетату в гептанах, із одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (Е5І) т/е 523,4 (М.-АН)». 1.1.8..1-((3-(2-(трет-Бутилдиметилсиліл)окси)етокси)-5,7-диметиладамантан-1-іл)уметил)-5- метил-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-діоксаборолан-2-іл)-1 Н-піразол н-Бутиллітій (8,42 мл, 2,5 М у гексанах) додавали до речовини із прикладу 1.1.7 (9,8 г) в 120 мл тетрагідрофурану при -78"С й реакційну суміш перемішували протягом 1 хвилини.
Зо Додавали триметилборат (3,92 мл) та перемішували реакційну суміш протягом 5 хвилин.
Додавали опінакол (6,22 г), забезпечували нагрівання реакційної суміші до кімнатної температури та перемішували 2 години. Реакцію гасили буфером із рН 7 і суміш виливали в етер. Шари розділяли й органічний шар концентрували за зниженого тиску. Залишок очищували за допомогою хроматографії на силікагелі, з елююванням від 1 до 2595 етилацетату в гептанах, з одержанням указаної в заголовку сполуки. 1.1.9 6-Фтор-3-бромпіколінова кислота
Завись б-аміно-3-бромпіколінової кислоти (25 г) в 400 мл дихлорметану/хлороформу 1:1 додавали до тетрафторборату нітрозонію (18,2 г) у дихлорметані (100 мл) при 52С протягом 1 години. Одержану суміш перемішували протягом ще 30 хвилин, потім нагрівали до 359С та перемішували протягом ночі. Реакційну суміш охолоджували до кімнатної температури, а потім регулювали рН до 4 за допомогою водного розчину МанНегРО»х. Одержаний розчин тричі екстрагували дихлорметаном і об'єднані екстракти промивали сольовим розчином, висушували над сульфатом натрію, фільтрували й концентрували з одержанням указаної в заголовку сполуки. 1.1.10 Трет-бутил-3-бром-6-фторпіколінат
Пара-толуолсульфонілхлорид (27,6 г) додавали до розчину речовини із прикладу 1.1.9 (14,5 г) і піридину (26,7 мл) у дихлорметані (100 мл) й трет-бутанолі (80 мл) при 0"С. Реакційну суміш перемішували протягом 15 хвилин, а потім нагрівали до кімнатної температури та перемішували протягом ночі. Розчин концентрували й розподіляли між етилацетатом і водним розчином МагбОз. Шари розділяли й водний шар екстрагували етилацетатом. Органічні шари об'єднували, ополіскували водним розчином МагСОз і сольовим розчином, висушували над сульфатом натрію, фільтрували й концентрували з одержанням указаної в заголовку сполуки. 1.1.11 Метил-2-(5-бром-6-(трет-бутоксикарбоніл)піридин-2-іл)-1,2,3,4-тетрагідроізохінолін-8- карбоксилат
До розчину гідрохлориду метил-1,2,3,4-тетрагідроізохінолін-З-карбоксилату (12,37 г) і речовини із прикладу 1.1.10 (15 г) в диметилсульфоксиді (100 мл) додавали М,М- діізопропілетиламін (12 мл) і перемішували суміш при 509С протягом 24 годин. Потім суміш розбавляли етилацетатом (500 мл) і промивали водою та сольовим розчином. Органічний шар висушували над сульфатом натрію, фільтрували та концентрували за зниженого тиску. Залишок бо очищували за допомогою хроматографії на силікагелі, з елююванням 2090 етилацетатом у гексані, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (Е5І) т/е 448,4 (МАН) ». 1.1.12. Метил-2-(6-(трет-бутоксикарбоніл)-5-(1-((3-(2-(трет-бутилдиметилсиліл)окси)етокси)- 5,7-диметиладамантан-1-іл)уметил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)піридин-2-іл)-1,2,3,4- тетрагідроізохінолін-8-карбоксилат
Суміш речовини із прикладу 1.1.11 (3,08 г), речовини із прикладу 1.1.8 (5 г), трис(дибензиліденацетон)дипаладію(0) (126 мг), 1,3,5,7-тетраметил-8-тетрадецил-2,4,6- триокса-8-фосфоадамантану (170 мг) й КзРО»- (3,65 г) в 1,4-діоксані (25 мл) та воді (25 мл) нагрівали до 909Сб протягом 2 годин. Суміш охолоджували й виливали в діетиловий етер:етилацетат 1:1. Шари розділяли й органічний шар промивали насиченим водним розчином
МанНегРО», водою (х2) та сольовим розчином. Органічний шар висушували над сульфатом натрію, фільтрували та концентрували. Залишок очищували за допомогою хроматографії на силікагелі, з елююванням від 1 до 2595 етилацетату в гептанах, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕІ) т/е 799,6 (МАН). 11.13 2-(6-(трет-Бутоксикарбоніл)-5-(1-((3-(2-(трет-бутилдиметилсиліл)окси)етокси)-5,7- диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)піридин-2-іл)-1,2,3,4- тетрагідроізохінолін-8-карбонова кислота
Речовину із прикладу 1.1.12 (5 г) й моногідрат гідроксиду літію (0,276 г) перемішували разом у суміші розчинників із тетрагідрофурану (50 мл), метанолу (5 мл) й води (15 мл) при 7096 протягом 2 днів. Реакційну суміш охолоджували, підкисляли за допомогою 1 М водного розчину
НСІ й двічі екстрагували етилацетатом. Об'єднані органічні шари промивали сольовим розчином, висушували над сульфатом натрію, фільтрували й концентрували. Залишок розчиняли у дихлорметані (100 мл), охолоджували до -40"С й додавали 2,6-лутидин (1,8 мл) і трет-бутилдиметилсилілу трифторметансульфонат (3,28 г). Забезпечували нагрівання реакційної суміші до кімнатної температури і її перемішували протягом 2 годин. Суміш розбавляли етером і шари розділяли. Органічний шар концентрували. Залишок розчиняли в тетрагідрофурані й обробляли насиченим водним розчином К»аСОз протягом 1 години. Дану суміш підкисляли концентрованою НеЇІ і двічі екстрагували етилацетатом. Об'єднані органічні шари висушували над сульфатом натрію, фільтрували й концентрували за зниженого тиску.
Залишок очищували за допомогою хроматографії на силікагелі, з елююванням від 10 до 100905
Зо етилацетату в гептанах, потім 595 метанолу в етилацетаті, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕБІ) т/е 785,6 (МАН). 1.1.14 трет-Бутил-6-(8-(бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл)-3-(1-((3- (2-гідроксиетокси)-5,7-диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)піколінат
Речовину із прикладу 1.1.13 (970 мг), М,М-діїзопропілетиламін (208 мг) і 2-(ЗН-
П1,2,3Ігриазоло|4,5-б|піридин-3-іл)-1,1,3,3-тетраметилізоуронію гексафторфосфат (НАТО) (970 мг) перемішували в 7 мл М,М-диметилформаміду при 09С протягом 10 хвилин. Додавали бензо|д|гіазол-2-амін (278 мг) і суміш перемішували протягом 24 годин при 507С. Суміш охолоджували й розбавляли етилацетатом. Органічний шар промивали водою та сольовим розчином, висушували над сульфатом натрію, фільтрували й концентрували. Залишок розчиняли в тетрагідрофурані (50 мл) й додавали фторид тетрабутиламонію (10 мл, 1 М в тетрагідрофурані). Реакційну суміш перемішували протягом 1 години, виливали в етилацетат і промивали буфером із рН 7 та сольовим розчином. Органічний шар висушували над сульфатом натрію, фільтрували й концентрували за зниженого тиску. Залишок очищували за допомогою хроматографії на силікагелі, з елююванням від 10 до 10095 етилацету в гептанах, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕБ5І) т/е 803,7 (М.Н). 1.1.15 трет-Бутил-6-(8-(бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл)-3-(1- ((3,5-диметил-7-(2-оксоетокси)адамантан-1-іл)уметил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)піколінат
До розчину речовини із прикладу 1.1.14 (100 мг) кімнатної температури у дихлорметані (1,3 мл) додавали однією порцією перйодат Десса-Мартіна (58,1 мг). Реакційну суміш перемішували протягом 0,5 години й додавали додатковий перйодат Десса-Мартіна (8 мг).
Реакційну суміш перемішували протягом 1 години й гасили за допомогою додавання «1090 водного розчину МаоОН й дихлорметану. Шари розділяли й органічний шар промивали «1095 водним розчином Маон. Органічний шар висушували за допомогою безводного сульфату натрію, фільтрували й концентрували за зниженого тиску до твердої речовини, яку застосовували в наступній реакції без додаткового очищення. М5 (ЕБІ) т/е 801,3 (МАН). 11.16. 2-(2-(2-(2-((3-(4-(6-(8-("Бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл)-2- (трет-бутоксикарбоніл)піридин-3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)метил)-5,7-диметиладамантан- 1- іл)уокси)етил)аміно)етокси)етокси)оцтова кислота
До розчину 2-(2-(2-аміноетокси)етокси)оцтової кислоти (22 мг) кімнатної температури й 60 речовини із прикладу 1.1.15 (100 мг) в метанолі (1,3 млу додавали МР-СМВН:»: (65 мг,
навантаження 2,49 ммоль/г-. Реакційну суміш обережно струшували протягом ночі й фільтрували через 0,4-мікронний фільтр. Неочищений матеріал очищували за допомогою НРІ С з оберненою фазою із застосуванням системи (іїбоп, з елююванням від 20 до 8095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./о0б. трифтороцтової кислоти. Необхідні фракції об'єднували й висушували сублімацією з одержанням указаної в заголовку сполуки. М (ЕІ) т/е 948,3 (М.Н). 1.1.17 6-(8-(Бензо|дЧ|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1Н)-іл)-3-(1-((3-(2-(2-(2- (карбоксиметокси)етокси)етил)аміно)етокси)-5,7-диметиладамантан-1-ілуметил)-5-метил-1 Н- піразол-4-іл)піколінова кислота
До розчину речовини із прикладу 1.62.16 (15 мг) кімнатної температури у дихлорметані (1 мл) додавали трифтороцтову кислоту (1 мл). Реакційну суміш перемішували протягом 16 годин, а потім концентрували за зниженого тиску. Залишок очищували за допомогою НРІС з оберненою фазою із застосуванням системи сіїзоп, з елююванням від 20 до 8095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./06б. трифтороцтової кислоти. Необхідні фракції об'єднували та висушували сублімацією з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (400МГЦц, диметилсульфоксид-ав) б ррт 12,70 (р5, 2Н), 8,29 (5, 1Н), 8,03 (0, 1), 7,79 (а, 1), 7,62 (а, 1Н), 7,53-7,42 (т, ЗН), 7,40-7,32 (т, 2Н), 7,29 (5, 1Н), 6,96 (й, 1Н), 4,96 (р, 2Н), 4,03 (5, 2Н), 3,90 (ї, 2Н), 3,84 (5, 2Н), 3,68 (І, 2Н), 3,63-3,54 (т, 6Н), 3,17-3,04 (т, 4Н), 3,00 (ї, 2Н), 2,10 (5, ЗН), 1,45- 1,40 (т, 2Н), 1,36-1,20 (т, 4Н), 1,21-0,96 (т, 7Н), 0,91-0,81 (т, 6Н). М5 (ЕБІ) т/е 892,3 (М.Н). 1.2 Синтез 6-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-71-(3,5- диметил-7-(2-(2-сульфоетил)аміно|етокси)трицикло!|3.3.1.157)дец-1-ил)метилі|-5-метил-1 Н- піразол-4-іліпіридин-2-карбонової кислоти (сполука М/2.02) 1.2.1 Метил-2-(6-(трет-бутоксикарбоніл)-5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-діоксаборолан-2- іл)піридин-2-іл)-1,2,3,4-тетрагідроізохінолін-8-карбоксилат
До розчину речовини із прикладу 1.1.11 (2,25 г) Й І1,1- бісідифенілфосфіно)фероценідихлорпаладію(!!) (205 мг) в ацетонітрилі (30 мл) додавали триетиламін (З мл) і пінаколборан (2 мл) і суміш перемішували зі зворотним холодильником протягом З годин. Суміш розбавляли етилацетатом (200 мл) і промивали водою та сольовим розчином. Органічний шар висушували над сульфатом натрію, фільтрували та концентрували
Зо за зниженого тиску. Залишок очищували за допомогою хроматографії на силікагелі, з елююванням 2095 етилацетату в гексані, з одержанням указаної в заголовку сполуки. 1.2.2 Метил-2-(6-(трет-бутоксикарбоніл)-5-(1-((3-(2-гідроксиетокси)-5,7-диметиладамантан- 1- ілуметил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)піридин-2-іл)-1,2,3,4-тетрагідроізохінолін-8-карбоксилат
До розчину речовини із прикладу 1.2.1 (2,25 г) в тетрагідрофурані (30 мл) й воді (10 мл) додавали речовину із прикладу 1.1.6 (2,0 г), 1,3,5,7-тетраметил-б6-феніл-2,4,8-триокса-6- фосфоадамантан (329 мг), трис(дибензиліденацетон)дипаладій(0) (206 мг) і трьеохосновний фосфат калію (4,78 г) Суміш нагрівали зі зворотним холодильником протягом ночі, охолоджували й розбавляли етилацетатом (500 мл). Одержану суміш промивали водою та сольовим розчином й органічний шар висушували над сульфатом натрію, фільтрували та концентрували. Залишок очищували за допомогою флеш-хроматографії, з елююванням 2090 етилацетату в гептанах, потім 595 метанолу в дихлорметані, з одержанням указаної в заголовку сполуки. 1.2.3 Метил-2-(6-(трет-бутоксикарбоніл)-5-(1-((3,5-диметил-7-(2- ((метилсульфоніл)окси)етокси)адамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)піридин-2-іл)- 1,2,3,4-тетрагідроізохінолін-8-карбоксилат
До холодного розчину речовини із прикладу 1.2.2 (3,32 г) в дихлорметані (100 мл) на крижаній бані послідовно додавали триєтиламін (З мл) і метансульфонілхлорид (1,1 г).
Реакційну суміш перемішували при кімнатній температурі протягом 1,5 години, розбавляли етилацетатом і промивали водою та сольовим розчином. Органічний шар висушували над сульфатом натрію, фільтрували та концентрували з одержанням указаної в заголовку сполуки. 1.2.4 Метил-2-(5-(1-((3-(2-азидоетокси)-5,7-диметиладамантан-1-іл)уметил)-5-метил-1 Н- піразол-4-іл)-6-(трет-бутоксикарбоніл)піридин-2-іл)-1,2,3,4-тетрагідроізохінолін-8-карбоксилат
До розчину речовини із прикладу 1.2.3 (16,5 г) в М,М-диметилформаміді (120 мл) додавали азид натрію (4,22 г). Суміш нагрівали при 802С протягом З годин, охолоджували, розбавляли етилацетатом і промивали водою та сольовим розчином. Органічний шар висушували над сульфатом натрію, фільтрували та концентрували. Залишок очищували за допомогою флеш- хроматографії, з елююванням 2095 етилацетату в гептанах, з одержанням указаної в заголовку сполуки. 1.2.5. 2-(5-(1-((3-(2-Азидоетокси)-5,7-диметиладамантан-1-іл)уметил)-5-метил-1 Н-піразол-4- 60 іл)-6-(трет-бутоксикарбоніл)піридин-2-іл)-1,2,3,4-тетрагідроізохінолін-8-карбонова кислота
До розчину речовини із прикладу 1.2.4 (10 г) в суміші з тетрагідрофурану (60 мл), метанолу (30 мл) й води (30 мл) додавали моногідрат гідроксиду літію (1,2 г). Суміш перемішували при кімнатній температурі протягом ночі й нейтралізували за допомогою 295 водного розчину НОЇ.
Одержану суміш концентрували, а залишок розчиняли в етилацетаті (800 мл) й промивали сольовим розчином. Органічний шар висушували над сульфатом натрію, фільтрували та концентрували з одержанням указаної в заголовку сполуки. 1.2.6 трет-Бутил-3-(1-((3-(2-азидоетокси)-5,7-диметиладамантан-1-іл)уметил)-5-метил-1 Н- піразол-4-іл)-6-(8-(бензо|д9|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл)піколінат
Суміш речовини із прикладу 1.2.5 (10 г), бензо|д4|гіазол-2-аміну (3,24 г), фтор-М,М,М'М'- тетраметилформамідинію гексафторфосфату (5,69 г) й М,М-діззопропілетиламіну (5,57 г) в М,М- диметилформаміді (20 мл) нагрівали при 60"С протягом З годин, охолоджували й розбавляли етилацетатом. Одержану суміш промивали водою та сольовим розчином. Органічний шар висушували над сульфатом натрію, фільтрували та концентрували. Залишок очищували за допомогою флеш-хроматографії з елююванням 2095 етилацетату в дихлорметані, з одержанням указаної в заголовку сполуки. 1.2.7 трет-Бутил-3-(1-((3-(2-аміноетокси)-5,7-диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н- піразол-4-іл)-6-(8-(бензо|д9|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл)піколінат
До розчину речовини із прикладу 1.2.6 (2,0 г) в тетрагідрофурані (30 мл) додавали Ра/сС (1096, 200 мг). Суміш перемішували в атмосфері водню протягом ночі. Нерозчинний матеріал відфільтровували й фільтрат концентрували з одержанням указаної в заголовку сполуки. 1.2.8 трет-Бутил-6-І(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-(1- (3,5-диметил-7-(2,2,7,7-тетраметил-10,10-діоксидо-3,3-дифеніл-4,9-діокса-1 0Хб-тіа-13-аза-3- силапентадекан-15-іл)/окси|Їгрицикло!/3.3.1.157|)дец-1-илуметил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл|піридин- 2-карбоксилат
До розчину речовини із прикладу 1.2.7 (500 мг) в М,М-диметилформаміді (8 мл) додавали 4- ((трет-бутилдифенілсиліл)окси)-2,2-диметилбутилетенсульфонат (334 мг). Реакційну суміш перемішували при кімнатній температурі протягом ночі й додавали метиламін (0,3 мл) для гасіння реакції. Одержану суміш перемішували протягом 20 хвилин й очищували за допомогою хроматографії з оберненою фазою із застосуванням системи АпаЇодіх (колонка С18), з
Зо елююванням від 50 до 10095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./0б. трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки. 1.2.9. 6-І(8-(1,3-Бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1 Н)-іл|-3-11-(3,5-диметил- 7-2-(2-сульфоетил)аміно|етоксиутрицикло!|3.3.1.157|дец-1-ил)метил|-5-метил-1 Н-піразол-4- іл)піридин-2-карбонова кислота
Речовину із прикладу 1.2.8 (200 мг) в дихлорметані (5 мл) обробляли трифтороцтовою кислотою (2,5 мл) протягом ночі. Реакційну суміш концентрували й очищували за допомогою хроматографії з оберненою фазою (колонка С18), з елююванням від 20 до 6095 ацетонітрилом у воді, що містила 0,195 об./06б. трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (500 МГц, диметилсульфоксид-ав) б ррт 12,86 (5, 1Н), 8,32 (5, 2Н), 8,02 (й, 1Н), 7,78 (а, 1), 7,60 (а, 1), 7,51 (а, 1), 7,40-7,49 (т, 2Н), 7,31-7,39 (т, 2Н), 7,27 (5, 1Н), 6,95 (а, 1Н), 4,94 (5, 2Н), 3,87 (І, 2Н), 3,81 (5, 2Н), 3,15-3,25 (т, 2Н), 3,03-3,13 (т, 2Н), 3,00 (І, 2Н), 2,79 (ї, 2Н), 2,09 (в, ЗН), 1,39 (5, 2Н), 1,22-1,34 (т, 4Н), 0,94-1,18 (т, 6Н), 0,85 (5, 6Н). М5 (ЕБІ) т/е 854,1 (МАН. 1.3 Синтез 2-((2-Ц2-(3-((4-16-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)- іл|-2-карбоксипіридин-3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)метилі|-5,7-диметилтрицикло/|3.3.1.127|дец-1- иліокси)етил|аміно)етил)сульфоніл|аміно)-2-дезокси-О-глюкопіранози (сполука М/2.03) 1.3.1. 3-(1-((3-(2-Аміноетокси)-5,7-диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)-6- (8-(бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл)піколінова кислота
Речовину із прикладу 1.2.7 (200 мг) у дихлорметані (2,5 мл) обробляли трифтороцтовою кислотою (2,5 мл) протягом ночі. Реакційну суміш концентрували й залишок очищували за допомогою хроматографії з оберненою фазою (колонка С18), з елююванням від 20 до 6095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./об. трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕБІ) т/е 746,2 (М.Н). 1.3.2 (З38,48,55,68)-6-"Ацетоксиметил)-3-(вінілсульфонамідо)тетрагідро-2Н-піран-2,4,5- триїлтриацетат
До суспензії (ЗК,4К,55,6К)-6-(ацетоксиметил)-3-амінотетрагідро-2Н-піран-2,4,5- триїлтриацетату (7,7 г) у дихлорметані (100 мл) при 09С додавали 2-хлоретансульфонілхлорид (4,34 г). Суміш перемішували при 09С протягом 15 хвилин і додавали триетиламін (12,1 мл).
Суміш перемішували при 09С протягом 1 години, нагрівали до кімнатної температури та бо перемішували протягом 2 днів. Суміш розбавляли дихлорметаном і промивали водою та сольовим розчином. Органічний шар висушували над сульфатом натрію, фільтрували та концентрували з одержанням указаної в заголовку сполуки. 1.3.3 М-(ЗА,48,55,6Н)-2,4,5-тригідрокси-6-(гідроксиметил)тетрагідро-2Н-піран-3- іл)у'етенсульфонамід
До розчину речовини із прикладу 1.3.2 (6,74 г) в метанолі (150 мл) додавали триетиламін (10 мл). Суміш перемішували протягом 4 днів і концентрували. Залишок розчиняли в метанолі й обробляли Юомжех НОСК-5, допоки розчин не став нейтральним. Суміш фільтрували й фільтрат концентрували. Залишок очищували за допомогою хроматографії із застосуванням колонки зЗерпадех І Н-20 (100 г), із елююванням метанолом, з одержанням указаної в заголовку сполуки. 1.3.4...2-Щ(2-12-(3-((4-(6-(8-(1,3-Бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2- карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1-ілуметил)|-5, 7-диметилтрицикло!|3.3.1.157)дец-1- илюкси)етиліаміно)етил)сульфоніл|Іаміно)-2-дезокси-О-глюкопіраноза
Суміш речовини із прикладу 1.3.1 (23,5 мг), речовини із прикладу 1.3.3 (42,4 мг) й М,М- дііззопропілетиламіну (55 мкл) в М,М-диметилформаміді (1 мл) та воді (0,3 мл) перемішували протягом 5 днів. Суміш очищували за допомогою хроматографії з оберненою фазою (колонка
С18), з елююванням від 20 до 6095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./06. трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-вв) б ррт 12,85 (5, 1Н), 8,42 (5, 1Н), 8,42 (5, 1Н), 8,03 (9, 1Н), 7,79 (а, 1Н), 7,55-7,66 (т, 1Н), 7,46- 7,54 (т, 2Н), 7,42-7,47 (т, 1Н), 7,33-7,40 (т, 2Н), 7,29 (5, 1Н), 6,96 (а, 1Н), 4,96 (5, 2Н), 3,89 (ї, 2Н), 3,83 (5, 2Н), 2,97-3,14 (т, 6Н), 2,10 (5, ЗН), 1,44 (в, 2Н), 1,22-1,39 (т, 4Н), 0,97-1,20 (т, 6Н), 0,87 (5, 6Н). М5 (ЕБІ) т/е 1015,3 (М-А-Н)». 1.4 Даний абзац був навмисне залишений незаповненим 1.5 Синтез 6-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-71-(3,5- диметил-7-2-((4-((З3А,48,55,68)-3,4,5-тригідрокси-6-(гідроксиметил)тетрагідро-2Н-піран-2- іл|метилубензил)аміно|етоксиутрицикло!|3.3.1.13,7|дец-1-ил)метил|-5-метил-1 Н-піразол-4- ілупіридин-2-карбонової кислоти (сполуки М/2.05) 1.5.1. 14-(35,48,58,68)-3,4,5-Трис-метоксиметокси-6-метоксиметоксиметилтетрагідропіран- 2-ілметил)феніл|метанол
Вказану в заголовку сполуку одержували згідно 9. К. УмаїКег еї а!., Віосогд. Мед. Спет. 2006,
Коо) 14, 3038-3048. М5 (ЕБІ) т/е 478 (МАМН»а)". 1.5.2 4-((35,48,58,68)-3,4,5-Трис-метоксиметокси-6б-метоксиметоксиметилтетрагідропіран-2- ілметил)бензальдегід
Розчиняли речовину із прикладу 1.5.1 (1,000 г) у дихлорметані (25 мл) і додавали перйодинан Десса-Мартіна (1,013 г). Розчин перемішували 16 годин за кімнатної температури.
Розчин розбавляли діетиловим етером (25 мл) і додавали 2 М водний розчин карбонату натрію (25 мл). Суміш тричі екстрагували діетиловим етером. Органічні екстракти об'єднували, промивали сольовим розчином і висушували над безводним сульфатом натрію. Після фільтрування розчин концентрували за зниженого тиску та очищували за допомогою хроматографії на силікагелі, з елююванням від 50 до 7095 етилацетату в гептанах. Розчинник випарювали за зниженого тиску з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕБ5І) т/е 476 (МаАМН»а)». 1.5.3 (28,38,48,55)-3,4,5-Триацетокси-6-(4-формілбензил)тетрагідропіран-2-ілметиловий естер оцтової кислоти
Розчиняли речовину із прикладу 1.5.2 (660 мг) в метанолі (145 мл). Додавали 6 М хлористоводневу кислоту (8 мл) й розчин перемішували за кімнатної температури протягом двох днів. Розчинники видаляли за зниженого тиску за допомогою азеотропної перегонки з етилацетатом три рази. Матеріал висушували під вакуумом протягом чотирьох днів. Матеріал розчиняли в М,М-диметилформаміді (50 мл). Додавали послідовно оцтовий ангідрид (12 мл), піридин (б мл) ії М,М-диметилпіридин-4-амін (10 мг) та перемішували розчин за кімнатної температури протягом 16 годин. Розчин розбавляли водою (150 мл) і тричі екстрагували етилацетатом (50 мл). Органічні речовини об'єднували, промивали водою, промивали сольовим розчином і висушували над безводним сульфатом натрію. Після фільтрування розчин концентрували за зниженого тиску та очищували за допомогою хроматографії на силікагелі, з елююванням від 40 до 5095 етилацетату в гептанах. Розчинник випарювали за зниженого тиску з одержанням указаної в заголовку сполуки. 1.5.4. (28,38,48,55)-2-(Ацетоксиметил)-6-(4-((2-((3-((4-(6-(8-(бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)- 3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл)-2-(трет-бутоксикарбоніл)піридин-3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1- ілуметил)-5,7-диметиладамантан-1-іл)уокси)етил)аміно)метил)бензил)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5- триїлтриацетат бо Речовину із прикладу 1.5.7 (40 мг) й прикладу 1.5.3 (22,5 мг) перемішували у дихлорметані
(1 мл) за кімнатної температури протягом 10 хвилин. Додавали триацетоксиборогідрид натрію (14 мг) та перемішували розчин за кімнатної температури протягом 16 годин. Матеріал очищували за допомогою хроматографії на силікагелі з елююванням 1095 метанолом у дихлорметані. Розчинник випарювали за зниженого тиску з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕБІ) т/е 1236 (М.Н). 1.5.5. 6-І(8-(1,3-Бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1 Н)-іл|-3-11-(3,5-диметил- 7-2-(4-Ц(3А8,4А,55,68)-3,4,5-тригідрокси-6-(гідроксиметил)утетрагідро-2Н-піран-2- іл|метилібензил)аміно|етокси)утрицикло!Ї3.3.1.157)дец-1-ил)метилі|-5-метил-1 Н-піразол-4- іл)піридин-2-карбонова кислота
Розчиняли речовину із прикладу 1.5.4 (68 мг) в метанолі (0,5 мл). Додавали водний розчин гідроксиду літію (2 М, 1 мл) та перемішували розчин за кімнатної температури протягом 4,5 години. Додавали оцтову кислоту (0,1 мл) й видаляли розчинники під вакуумом. Потім матеріал розчиняли в трифтороцтовій кислоті (2 мл) та перемішували за кімнатної температури протягом 16 годин. Розчин концентрували під вакуумом. Залишок очищували за допомогою НРІС з оберненою фазою із застосуванням РІС 2020 (зйбоп із колонкою С18, 150х30 мм, з елююванням від 20 до 7095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./06. трифтороцтової кислоти. Необхідні фракції об'єднували й висушували сублімацією з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (400МГц, диметилсульфоксид-адв) б ррт 12,86 (р5, 1Н), 8,68 (5, 2Н), 8,04 (а, 1), 7,80 (а, 1Н), 7,62 (9, 1Н), 7,51-7,43 (т, ЗН), 7,39-7,24 (т, 6Н), 6,96 (а, 1Н), 5,23 (ї, 1Н), 4,96 (5, 2Н), 4,56 (а, 1Н), 4,42 (аа, 1Н), 4,11 (т, 2Н), 3,89 (І, 2Н), 3,83 (5, 2Н), 3,61-3,56 (т,
ЗН), 3,39 (ад, 1Н), 5,22 (ї, 1Н), 3,15 (І, 1Н), 3,09 (а, 1Н), 3,01 (т, 6Н), 2,89 (І, 1Н), 2,60 (т, 1Н), 2,10 (в, ЗН), 1,43 (в, 2Н), 1,30 (ад, 4Н), 1,14 (т, 4Н), 1,03 (9, 2Н), 0,86 (5, 6Н). М5 (Е5І) т/е 1012 (МАН. 1.6 Синтез 6-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-71-(3,5- диметил-7-(2-((З-сульфопропіл)аміно|етокси)трицикло!|3.3.1.157)дец-1-ил)метил|-5-метил-1 Н- піразол-4-іліпіридин-2-карбонової кислоти (сполуки М/2.06) 1.6.1... 3-((2-((3-((4-(6-(8-(Бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл)-2-(трет- бутоксикарбоніл)піридин-3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)метил)-5,7-диметиладамантан- 1- іл)окси)етил)аміно)пропан-1-сульфонова кислота
Зо Суміш речовини із прикладу 1.2.7 (100 мг), 1,2-оксатіолан-2,2-діоксиду (13 мг) й М,М- дііззопропілетиламіну (19,07 мкл) в М,М-диметилформаміді (2 мл) нагрівали до 507"С протягом ночі. Реакційну суміш охолоджували та очищували за допомогою НРІ С з оберненою фазою (колонка С18), з елююванням від 20 до 6095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./об. трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки. Ме (Е5І) т/е 9241 (МАН)». 1.6.2... 6-І(8-(1,3-Бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1 Н)-іл|-3-11-(3,5-диметил- 7-2-(З-сульфопропіл)аміно|етоксиутрициклоїЇ3.3.1.157)дец-1-ил)метил|-5-метил-1 Н-піразол-4- іл)піридин-2-карбонова кислота
Речовину із прикладу 1.6.1 (40 мг) у дихлорметані (2,5 млу обробляли трифтороцтовою кислотою (2,5 мл) протягом ночі. Реакційну суміш концентрували й залишок очищували за допомогою хроматографії з оберненою фазою (колонка С18), з елююванням від 20 до 6095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./об. трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-дв) б ррт 12,86 (в, 1Н), 8,52 (5, 2Н), 8,04 (а, 1), 7,79 (а, 1Н), 7,61 (а, 1), 7,41-7,55 (т, ЗН), 7,32-7,39 (т, 2Н), 7,29 (5, 1Н), 6,96 (а, 1Н), 4,96 (5, 2Н), 3,89 (І, 2Н), 3,49-3,58 (т, 2Н), 2,94-3,12 (т, 6Н), 2,56-2,64 (т, 2Н), 1,88-1,99 (т, 2Н), 1,41 (5, 2Н), 1,22-1,36 (т, 4Н), 0,96-1,20 (т, 6Н), 0,86 (з, 6Н). М5 (ЕІ) т/е 868,3 (М--Н)». 1.7 Синтез 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-11-((3-Т2- (2,З-дигідроксипропіл)аміно|етокси)-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.157|дец-1-ил)метилі|-5-метил- 1Н-піразол-4-іл)іпіридин-2-карбонової кислоти (сполуки М/2.07)
У розчин речовини із прикладу 1.2.7 (30 мг) у дихлорметані (З мл) додавали 2,3- дигідроксипропаналь (3,6 мг) і МасмМВнН»з на смолі (200 мг). Суміш перемішували протягом ночі, фільтрували й випарювали розчинник. Залишок розчиняли в диметилсульфоксиді/метанолі (1:1,
З мл) та очищували за допомогою НРІ С з оберненою фазою із застосуванням системи о1іЇ5оп, З елююванням від 10 до 8595 ацетонітрилу у 0,195 розчині трифтороцтової кислоти у воді, з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-дв) б ррт 12,85 (5, 1Н), 8,27 (5, 2Н), 8,03 (а, 1Н), 7,79 (9, 1), 7,61 (1, 1Н), 7,33-7,54 (т, 6Н), 7,29 (5, 1Н), 6,96 (9, 1Н), 4,96 (5, ЗН), 3,72-3,89 (т, 8Н), 3,25-3,64 (т, 6Н), 2,99-3,10 (т, 4Н), 2,11 (5, ЗН), 1,00- 1,52 (т, 8Н), 0,86 (в, 6Н). М5 (ЕБІ) т/е 820,3 (М.Н) У. 1.8 Синтез 2-(Ц4-(Т2-(13-((4-16-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)- (510) іл|-2-карбоксипіридин-3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)метилі|-5,7-диметилтрицикло/|3.3.1.127|дец-1-
иліокси)етил|аміноїметил)феніл|сульфоніл)аміно)-2-дезокси-бета-О-глюкопіранози (сполуки М/2.08) 1.8.1 (28,35,45,58,65)-6--(Ацетоксиметил)-3-(4-формілфенілсульфонамідо)тетрагідро-2Н- піран-2,4,5-триїлтриацетат
Додавали 4-формілбензол-1-сульфонілхлорид (100 мг) і (25,3К,4К,55,6К)-6- (ацетоксиметил)-3-амінотетрагідро-2Н-піран-2,4,5-триїлтриацетату гідрохлорид (563 мг) до 1,2- дихлоретану (4 мл). Додавали М,М-діззопропілетиламін (0,51 мл) і нагрівали розчин при 5570 протягом трьох днів. Розчин концентрували за зниженого тиску та очищували за допомогою колонкової флеш-хроматографії на силікагелі, з елююванням 7095 етилацетатом в гептанах.
Розчинник випарювали за зниженого тиску й матеріал розчиняли в ацетоні (4 мл). Додавали хлористоводневу кислоту (1 М, 4 мл) й перемішували розчин за кімнатної температури протягом 16 годин. Потім розчин екстрагували 7090 етилацетатом в гептанах (20 мл). Органічний шар промивали сольовим розчином і висушували над безводним сульфатом натрію. Після фільтрування розчинник випарювали за зниженого тиску з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕБІ) т/е 514 (МАН). 1.8.2 (28,35,45,58,65)-6-(Ацетоксиметил)-3-(4-((2-((3-(4-(6-(8-(бензо|д9|гіазол-2- ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл)-2-(трет-бутоксикарбоніл)піридин-3-іл)-5--метил-1 Н- піразол-1-іл)уметил)-5,7-диметиладамантан-1- іл)уокси)етил)аміно)метил)фенілсульфонамідо)тетрагідро-2Н-піран-2,4,5-триїлтриацетат
Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 1.8.1 речовиною із прикладу 1.5.3 в прикладі 1.5.4. М5 (ЕІ) т/е 1301 (МАН). 1.8.3... 2-(Щ4-(12-(13-К4-(6-(8-(1,3-Бензотіазол-2г-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-2- карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1-ілуметил)|-5, 7-диметилтрицикло!|3.3.1.157)дец-1- илюкси)етиліаміно)метил)феніл|Ісульфоніл)аміно)-2-дезокси-бета-О-глюкопіраноза
Указану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 2.8.1 на речовину з прикладу 1.5.4 у прикладі 1.5.5. "Н ЯМР (400МГц, диметилсульфоксид-йвє) б ррт 12,86 (р5, 1Н), 8,87 (р5, 2Н), 8,04 (9, 1Н), 7,91 (а, 2Н), 7,79 (а, 1Н), 7,70-7,55 (т, ЗН), 7,52-7,42 (т,
ЗН), 7,39-7,33 (т, 2Н), 7,29 (т, 1Н), 6,96 (й, 1Н), 4,96 (р5, 2Н), 4,85 (да, 1Н), 4,62-4,52 (т, 2Н), 4,32 (т, 2Н), 3,89 (І, 2Н), 3,83 (5, 2Н), 3,70-3,35 (т, ТОН), 3,02 (т, 4Н), 2,91 (т, 1Н), 2,10 (в, ЗН),
Зо 1,44 (65, 2Н), 1,37-1,22 (т, 4Н), 1,18-0,98 (т, 6Н), 0,93-0,82 (т, 6Н). М5 (ЕБ5І) т/е 1075 (М.-НУХ. 1.9 Синтез 8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-2-(6-карбокси-5-(1-(13-(2-(2-(1-(бета-О- глюкопірануронозил)-1 Н-1,2,3-триазол-4-іл|Істиліаміно)етокси|-5,7- диметилтрицикло!|3.3.1.19|дец-1-иліметил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл|піридин-2-іл)-1,2,3,4- тетрагідроізохіноліну (сполуки М/2.09) 1.9.1 (28,38,45,55,65)-2-(4-(2-Гідроксиетил)-1 Н-1,2,3-триазол-1-іл)-6- (метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5-триїлтриацетат
У розчин (2Е,3К,45,55,65)-2-азидо-6-(метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5- триїлтриацетату (720 мг) в трет-бутанолі (8 мл) й воді (4 мл) додавали бут-3-ин-1-ол (140 мг), пентагідрат сульфату мідік(І!) (5,0 мг) та аскорбат натрію (40 мг). Суміш перемішували 20 хвилин при 100"Сб за умов мікрохвильового випромінювання (Віоїаде Іпйіафг). Реакційну суміш розбавляли етилацетатом (300 мл), промивали водою й сольовим розчином та висушували над сульфатом натрію. Після фільтрування й випарювання розчинника одержували вказану в заголовку сполуку. М5 (ЕБІ) т/е 430,2 (М.Н). 1.9.2 (25,35,45,58,68)-2-(Метоксикарбоніл)-6-(4-(2-оксоетил)-1Н-1,2,3-триазол-1- іл)утетрагідро-2Н-піран-3,4,5-триїлтриацетат
У розчин диметилсульфоксиду (0,5 мл) у дихлорметані (10 мл) при -78"С додавали оксалілхлорид (0,2 мл). Суміш перемішували 20 хвилин при -78"С та додавали розчин (28,38,45,55,65)-2-(4-(2-гідроксиетил)-1Н-1,2,3-триазол-1-іл)-6-(метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н- піран-3,4,5-триїлтриацетату (233 мг) в дихлорметані (10 мл) за допомогою шприца. Через 20 хвилин у суміш додавали триєетиламін (1 мл) і суміш перемішували протягом 30 хвилин, при цьому забезпечували підвищення температури до кімнатної температури. Реакційну суміш розбавляли етилацетатом (300 мл), промивали водою й сольовим розчином та висушували над сульфатом натрію. Після фільтрування й випарювання розчинника одержували неочищений продукт, який застосовували в наступній реакції без додаткового очищення. М5 (Е5І) т/е 429,2 (МАН. 1.9.3 8-(1,3-Бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-2-(6-карбокси-5-(1-(13-(2-(12-11-(бета-О- глюкопірануронозил)-1Н-1,2,3-триазол-4-іл|еєтиліаміно)етокси|-5,7- диметилтрицикло!|3.3.1.19Л|дец-1-ил)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл|піридин-2-іл)-1,2,3,4- тетрагідроізохінолін бо У розчин речовини із прикладу 1.3.1 (150 мг) в дихлорметані (10 мл) додавали речовину із прикладу 1.9.2 (86 мг) й МавнНз3смМ на смолі (2,49 ммоль/г, 200 мг) та перемішували суміш протягом ночі. Потім реакційну суміш фільтрували та концентрували. Залишок розчиняли в тетрагідрофурані/метанолі/НгО (2:11, 12 мл) й додавали моногідрат гідроксиду літію (50 мг).
Суміш перемішували протягом ночі. Суміш концентрували й залишок очищували за допомогою
НРІС з оберненою фазою із застосуванням системи сіїбоп, з елююванням від 10 до 8595 ацетонітрилу у 0,195 розчині трифтороцтової кислоти у воді, з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-дв) б ррт 12,84 (5, 1Н), 8,48 (5, 2Н), 8,20 (5, 1Н), 8,03 (а, 1), 7,79 (а, 1н), 7,62 (9, 1Н), 7,32-7,53 (т, 5Н), 7,29 (5, 1Н), 6,96 (а, 1Нн), 5,66 (а, 1Н), 4,96 (5, 2Н), 4,00 (а, 1Н), 3,76-3,92 (т, 6Н), 5,22-3,26 (т, 2Н), 2,96-3,15 (т, 8Н), 2,10 (5, ЗН), 0,99- 1,52 (т, 14Н), 0,87 (5, 6Н). М5 (Е5БІ) т/е 1028,3 (МАН). 110 Синтез 3-11-((3-(2-(2-Ц4-(бета-О-алопіранозилокси)бензилі|аміно)етокси)етокси|-5, 7- диметилтрицикло!Ї3.3.1.157|дец-1-ил)метил)-5-метил-1Н-піразол-4-іл|-6-(8-(1,3-бензотіазол-2- ілкарбамоїл)-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1Н)-іл|Іпіридин-2-карбонової кислоти (сполуки М/2.10) 1.10.1 2-(2-((3-(1Н-Піразол-1-ілуметил)-5,7-диметиладамантан-1-іл)окси)етокси)етанол
Вказану в заголовку сполуку одержували як в прикладі 1.1.4 шляхом заміни етан-1,2-діолу 2,2-оксидіетанолом. М5 (Е5І) т/е 349,2 (МАН). 110.2 2-(2-(3,5-Диметил-7-((5-метил-1 Н-піразол-1-ілуметил)адамантан-1- іл)уокси)етокси)етанол
Вказану в заголовку сполуку одержували як в прикладі 1.1.5 шляхом заміни речовини із прикладу 1.1.4 речовиною із прикладу 1.10.1. М5 (ЕБ5І) т/е 363,3 (МАН). 1103 2-(2-(3-(4-Йод-5-метил-1Н-піразол-1-іл)метил)-5,7-диметиладамантан-1- іл)уокси)етокси)етанол
Вказану в заголовку сполуку одержували як в прикладі 1.1.6 шляхом заміни речовини із прикладу 1.1.5 речовиною із прикладу 1.10.2. М5 (Е5І) т/е 489,2 (МА-Н)». 110.4 2-(2-(3-(4-Йод-5-метил-1Н-піразол-1-іл)метил)-5,7-диметиладамантан-1- іл)уокси)етокси)етилметансульфонат
В охолоджений розчин речовини із прикладу 1.10.3 (6,16 г) у дихлорметані (100 мл) додавали триетиламін (4,21г) з подальшим додаванням метансульфонілхлориду (1,6г) і перемішували суміш за кімнатної температури протягом 1,5 години. Потім реакційну суміш
Зо розбавляли етилацетатом (600 мл) та промивали водою й сольовим розчином. Після висушування над сульфатом натрію розчин фільтрували та концентрували, а залишок застосовували в наступній реакції без додаткового очищення. М5 (Е5І) т/е 567,2 (МАН) ». 110.5 2-(2-(3-(4-Йод-5-метил-1Н-піразол-1-іл)метил)-5,7-диметиладамантан-1- іл)уокси)етокси)етанамін
Розчин речовини із прикладу 1.10.4 (2,5 г) в 7 н. аміаку в метанолі (15 мл) перемішували при 1007С протягом 20 хвилин за умов мікрохвильового випромінювання (Віоїаде Іпйацог). Реакційну суміш концентрували під вакуумом і залишок розбавляли етилацетатом (400 мл) і промивали водним розчином МансСоОз, водою та сольовим розчином. Після висушування над сульфатом натрію розчин фільтрували та концентрували, а залишок застосовували в наступній реакції без додаткового очищення. М5 (ЕБІ) т/е 488,2 (МАН). 1.10.6. трет-Бутил-(2-(2-((3-(4-йод-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)метил)-5,7-диметиладамантан- 1- іл)уокси)етокси)етил)карбамат
У розчин речовини із прикладу 1.10.5 (2,2 г) в тетрагідрофурані (30 мл) додавали ди-трет- бутилдикарбонат (1,26 г) і 4-диметиламінопіридин (100 мг). Суміш перемішували за кімнатної температури протягом 1,5 години й розбавляли етилацетатом (300 мл). Розчин промивали насиченим водним розчином Мансо»з, водою (60 мл) та сольовим розчином (60 мл). Органічний шар висушували за допомогою сульфату натрію, фільтрували та концентрували. Залишок очищували за допомогою хроматографії на силікагелі з елююванням 2095 етилацетатом у дихлорметані, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕБІ) т/е 588,2 (МАН). 1.10.7 Метил-2-(6-(трет-бутоксикарбоніл)-5-(1-((3-(2-(2-(трет- бутоксикарбоніл)аміно)етокси)етокси)-5,7-диметиладамантан-1-іл)уметил)-5-метил-1Н-піразол-4- іл)упіридин-2-іл)-1,2,3,4-тетрагідроізохінолін-8-карбоксилат
Вказану в заголовку сполуку одержували як в прикладі 1.2.2 шляхом заміни речовини із прикладу 1.1.6 речовиною із прикладу 1.10.6. М5 (ЕІ) т/е 828,5 (МАН). 1.10.8 2-(6-(«трет-Бутоксикарбоніл)-5-(1-((3-(2-(2-(трет-бутоксикарбоніл)аміно)етокси)етокси)- 5,7-диметиладамантан-1-іл)уметил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)піридин-2-іл)-1,2,3,4- тетрагідроізохінолін-8-карбонова кислота
Вказану в заголовку сполуку одержували як в прикладі 1.2.5 шляхом заміни речовини із прикладу 1.2.4 речовиною із прикладу 1.10.7. М5 (ЕІ) т/е 814,5 (МА-Н)». бо 1.10.10 трет-Бутил-6-(8-(бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл)-3-(1-((3-
(2-(2-«(трет-бутоксикарбоніл)аміно)етокси)етокси)-5,7-диметиладамантан-1-іл)уметил)-5-метил- 1Н-піразол-4-іл)піколінат
Вказану в заголовку сполуку одержували як в прикладі 1.2.6 шляхом заміни речовини із прикладу 1.2.5 речовиною із прикладу 1.10.8. М5 (Е5І) т/е 946,2 (МН): . 1.10.11 3-(1-(3-(2-(2-Аміноетокси)етокси)-5,7-диметиладамантан-1-іл)уметил)-5-метил-1 Н- піразол-4-іл)-6-(8-(бензо(д9|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл)піколінова кислота
Вказану в заголовку сполуку одержували як в прикладі 1.1.17 шляхом заміни речовини із прикладу 1.1.16 речовиною із прикладу 1.10.9. 110.12 3-11-((3-(2-(2-Ц4-(бета-О-Алопіранозилокси)бензилі|аміно)етокси)етокси|-5,7- диметилтрицикло!|3.3.1.19Л|дец-1-ил)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл|-6-(8-(1,3-бензотіазол-2- ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|Іпіридин-2-карбонова кислота
У розчин речовини із прикладу 1.10.10 (88 мг) у триетиламіну (0,04 мл) в дихлорметані (1,5 мл) додавали 4-((25,38,48,55,6Н8)-3,4,5-тригідрокси-6-(гідроксиметил)тетрагідро-2Н-піран- 2-іл)уокси)бензальдегід (27,7 мг), метанол (1 мл), МР-СМВН: (2,49 ммоль/г, 117 мг) та оцтову кислоту (18 мкл). Реакційну суміш перемішували протягом ночі. Реакційну суміш фільтрували й фільтрат концентрували. Залишок очищували за допомогою хроматографії з оберненою фазою (колонка С18), з елююванням від 20 до 6095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./об. трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-сав) б ррт 7,99 (а, 1), 7,77 (а, 1Н), 7,60 (а, 1), 7,40-7,50 (т, 2Н), 7,29-7,39 (т, 6Н), 6,96 (9, 2Н), 6,76 (а, 1Н), 5,11 (а, 2Н), 4,92 (5, 2Н), 3,83-3,96 (т, АН), 3,77 (5, 2Н), 3,60- 3,72 (т, 4Н), 3,01 (а, 2Н), 2,80 (ї, 2Н), 2,09 (в, ЗН), 0,98-1,32 (т, 14Н), 0,82 (5, 6Н). М5 (Е5І) т/е 1058,3 (М.Н). 1111 Синтез 6-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-(1-119,5- диметил-7-(2-2-(2-сульфоетил)аміно|етокси)етокси)трицикло!Ї3.3.1.127)дец-1-ил|метил)-5- метил-1Н-піразол-4-іл)піридин-2-карбонової кислоти (сполуки М/2.11) 111.1 трет-Бутил-3-(1-((3-(2-(2-аміноетокси)етокси)-5,7-диметиладамантан-1-іл)метил)-5- метил-1Н-піразол-4-іл)-6-(8-(бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)- іл)піколінат
Зо Розчиняли речовину із прикладу 1.10.9 (6,8 г) в 5095 розчині трифтороцтової кислоти у дихлорметані (10 мл) та перемішували протягом 20 хвилин і розчинники видаляли під вакуумом.
Залишок очищували за допомогою хроматографії з оберненою фазою, з елююванням від 20 до 8095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕІ) т/е 790,2(МАН)». 1.11.2 трет-Бутил-6-(8-(бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл)-3-(1- ((3,5-диметил-7-(2-(2-(2-(феноксисульфоніл)етил)аміно)етокси)етокси)адамантан-1-іл)метил)-5- метил-1 Н-піразол-4-іл)піколінат
У розчин речовини із прикладу 1.11.1 (200 мг) й М,М-діїзопропілетиламіну (146 мкл) в тетрагідрофурані (З мл) при 0"С додавали фенілетенсульфонат (46 мг). Реакційну суміш перемішували при 0"С протягом 30 хвилин, поступово нагрівали до кімнатної температури, перемішували протягом ночі й концентрували з одержанням указаної в заголовку сполуки. 111.3 6-(8-(Бензо|Ч|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл)-3-(1-((3,5-диметил- 7-(2-(2-(2-(феноксисульфоніл)етил)аміно)етокси)етокси)адамантан-1-ілуметил)-5-метил-1 Н- піразол-4-іл)піколінова кислота
Розчин речовини із прикладу 1.11.2 (100 мг) у дихлорметані (5 мл) обробляли трифтороцтовою кислотою (2,5 мл) протягом ночі і концентрували з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (АРСІ) т/е 974,9 (МАН) ». 1.11.4. 6-(8-(1,3-Бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1 Н)-іл|-3-(1-(І3,5-диметил- 7-(2--2-(2-сульфоетил)аміно|етокси)етокси)трицикло!Ї3.3.1.19Л|дец-1-ил|метил)-5-метил-1 Н- піразол-4-іл)піридин-2-карбонова кислота
У розчин речовини із прикладу 1.11.3 (195 мг) в тетрагідрофурані (З мл) і метанолі (2 мл) повільно додавали 1 М водний розчин гідроксиду натрію (2 мл). Суміш перемішували протягом ночі й додавали пелети Маон (0,5 г). Одержану суміш нагрівали при 40"С протягом З годин, охолоджували й концентрували. Концентрат очищували за допомогою хроматографії з оберненою фазою (колонка С18), з елююванням від 10 до 7095 ацетонітрилу в 10 мМ водному розчині МНАСОАс, з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-сав) б ррт 8,04 (а, 1), 7,79 (а, 1Н), 7,61 (а, 1), 7,41-7,51 (т, ЗН), 7,32-7,39 (т, 2Н), 7,29 (5, 1Н), 6,88 (й, 1Н), 4,93 (5, 2Н), 3,89 (ї, 2Н), 3,81 (5, 2Н), 3,60-3,66 (т, 4Н), 3,13- 3,19 (т, 2Н), 3,05-3,10 (т, 2Н), 3,01 (ї, 2Н), 2,79 (ї, 2Н), 2,11 (5, ЗН), 1,34 (5, 2Н), 1,26 (5, 4Н), (510) 0,96-1,22 (т, 6Н), 0,85 (5, 6Н). М5 (ЕБІ) т/е 898,2 (МАН).
1112 Синтез 6-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-71-(3,5- диметил-7-(2-(2-фосфоноетил)аміно|етокси)трицикло!|3.3.1.157)дец-1-ил)метил|-5-метил-1 Н- піразол-4-іліпіридин-2-карбонової кислоти (сполуки М/2.12) 1.12.1 трет-Бутил-6-(8-(бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл)-3-(1-((3- (2-(2-(діетоксифосфорил)етил)аміно)етокси)-5,7-диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н- піразол-4-іл)піколінат
У розчин речовини із прикладу 1.2.7 (307 мг) в тетрагідрофурані (5 мл) додавали діетилвінілфосфонат (176 мг) у воді (2 мл). Реакційну суміш перемішували при 707С протягом З днів та додавали декілька крапель оцтової кислоти. Суміш очищували за допомогою хроматографії з оберненою фазою (колонка С18), з елююванням від 20 до 7095 ацетонітрилу у воді, що містить 0,195 06./06б. трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (АРСІ) т/е 966,8 (МАН). 1.12.2. 6-І(8-(1,3-Бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1 Н)-іл|-3-11-(3,5-диметил- 7-2-К2-фосфоноетил)аміно|етоксиутрицикло!3.3.1.15Я|дец-1-ил)метил|-5-метил-1 Н-піразол-4- ілупіридин-2-карбонова кислота
У розчин речовини із прикладу 1.12.1 (170 мг) у дихлорметані (2,5 мл) додавали бромтриметилсилан (82 мкл) і алілтриметилсилан (50,4 мкл). Реакційну суміш перемішували протягом ночі й додавали воду (0,02 мл). Одержану суміш перемішували протягом ночі й концентрували. Залишок очищували за допомогою хроматографії з оберненою фазою (колонка
С18), з елююванням від 20 до 6б09о ацетонітрилу у воді, що містила 0,196 трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (500 МГц, диметилсульфоксид-ав) б ррт 8,35 (в, 2Н), 8,03 (0, 1Н), 7,79 (а, 1Н), 7,62 (а, 1Н), 7,41-7,53 (т, ЗН), 7,33-7,40 (т, 2Н), 7,29 (5, 1Н), 6,96 (а, 1Н), 4,96 (5, 2Н), 3,89 (І, 2Н), 3,83 (5, 2Н), 3,09 (5, 4Н), 3,01 (П, 2Н), 2,10 (5, ЗН), 1,85-2,00 (т, 2Н), 1,43 (в, 2Н), 1,19-1,37 (т, 4Н), 1,14 (з, 6Н), 0,87 (5, 6Н). М5 (АРСІ) т/е 854,4 (МАН. 1113 Синтез 6-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-71-(3,5- диметил-7-(2-Іметил-(3-сульфо-І -аланіл)аміно|етокси)трициклої|3.3.1.127|дец-1-ил)метилі/|-5- метил-1Н-піразол-4-іліпіридин-2-карбонової кислоти (сполуки М/2.13) 113.1 2-(3-((4-Йод-5-метил-1Н-піразол-1-іл)метилі|-5,7-диметилтрицикло|3.3.1.137|дец-1-
Зо иліокси)етилметансульфонат
В охолоджений розчин речовини із прикладу 1.1.6 (6,16 г) у дихлорметані (100 мл) додавали триетиламін (4,21г) з подальшим додаванням метансульфонілхлориду (1,г) і суміш перемішували за кімнатної температури протягом 1,5 години. Реакційну суміш розбавляли етилацетатом (600 мл) і промивали водою та сольовим розчином. Після висушування над сульфатом натрію розчин фільтрували та концентрували, а залишок застосовували в наступній реакції без додаткового очищення. М5 (ЕІ) т/е 523,4 (МН). 1.13.2..1-(3,5-Диметил-7-(2-(метиламіно)етокси|грициклоїЇ3.3.1.157)дец-1-илу)метил)-4-йод-5- метил-1 Н-піразол
Розчин речовини із прикладу 1.13.1 (2,5 г) в 2 М метиламіні в метанолі (15 мл) перемішували при 100"С протягом 20 хвилин за умов мікрохвильового випромінювання (Віоїаде Іпійасог).
Реакційну суміш концентрували під вакуумом і залишок розбавляли етилацетатом (400 мл) і промивали водним розчином МансСоОз, водою та сольовим розчином. Після висушування над сульфатом натрію розчин фільтрували та концентрували, а залишок застосовували в наступній реакції без додаткового очищення. М5 (Е5І) т/е 458,4 (МН). 113.3 трет-Бутил-(2-((3-(4-йод-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)метил/-5, 7- диметилтрицикло!ї3.3.1.127дец-1-илюкси)етил|метилкарбамат
У розчин речовини із прикладу 1.13.2 (2,2 г) в тетрагідрофурані (30 мл) додавали ди-трет- бутилдикарбонат (1,26 г) і каталітичну кількість 4-диметиламінопіридину. Суміш перемішували за кімнатної температури протягом 1,5 години й розбавляли етилацетатом (300 мл). Розчин промивали насиченим водним розчином Мансо», водою (60 мл) та сольовим розчином (60 мл).
Органічний шар висушували за допомогою сульфату натрію, фільтрували та концентрували.
Залишок очищували за допомогою хроматографії на силікагелі, з елююванням 20905 етилацетатом у дихлорметані, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕБ5І) т/е 558,5 (МАН). 1.13.4 Метил-2-(6-(трет-бутоксикарбоніл)-5-(1-((3-(2-(трет- бутоксикарбоніл)(метил)аміно)етокси)-5, 7-диметилтрицикло!|3.3.1.157)дец-1-ил)метил)-5-метил- 1Н-піразол-4-іл)піридин-2-іл)-1,2,3,4-тетрагідроіїзохінолін-8-карбоксилат
У розчин речовини із прикладу 1.2.1 (4,94 г) в тетрагідрофурані (60 мл) й воді (20 мл) додавали речовину із прикладу 1.13.3 (5,57 г), 1,3,5,7-тетраметил-8-тетрадецил-2,4,6-триокса-8- 60 фосфоадамантан (412 мг), трис(ідибензиліденацетон)дипаладій(0) (457 мг) і КзРОх4 (11 г) та перемішували суміш зі зворотним холодильником протягом 24 годин. Реакційну суміш охолоджували й розбавляли етилацетатом (500 мл), промивали водою та сольовим розчином.
Органічний шар висушували над сульфатом натрію, фільтрували та концентрували за зниженого тиску. Під час очищення залишку за допомогою хроматографії на силікагелі, з елююванням 2095 етилацетатом в гептані, одержували вказану у заголовку сполуку. М5 (Е5І) т/е 799,1 (МАН). 113.5 2-(6-(трет-Бутоксикарбоніл)-5-(1-((3-(2-(трет-бутоксикарбоніл)(метил)аміно)етокси)- 5,7-диметилтрициклоїЇ3.3.1.127|дец-1-ил)метил)-5-метил-1Н-піразол-4-іл)піридин-2-іл)-1,2,3,4- тетрагідроізохінолін-8-карбонова кислота
У розчин речовини із прикладу 1.13.4 (10 г) в тетрагідрофурані (60 мл), метанолі (30 мл) й воді (30 мл) додавали моногідрат гідроксиду літію (1,2 г) та перемішували суміш за кімнатної температури протягом 24 годин. Реакційну суміш нейтралізували 295 водним розчином НеСІ і концентрували під вакуумом. Залишок розбавляли етилацетатом (800 мл), промивали водою й сольовим розчином та висушували над сульфатом натрію. Після фільтрування й випарювання розчинника одержували вказану в заголовку сполуку. М5 (ЕІ) т/е 785,1 (МАН) ». 1.13.6 трет-Бутил-6-І(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-ілІ|-3-11-((3-
Т2-Ктрет-бутоксикарбоніл)(метил)аміно|етокси)-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.157дец-1-ил)метилі-
Б-метил-1Н-піразол-4-іліпіридин-2-карбоксилат
У розчин речовини із прикладу 1.13.5 (10 г) в М,М-диметилформаміді (20 мл) додавали бензо|Ч|гіазол-2-амін (3,24 7), фтор-М,М,М';М'-тетраметилформамідинію гексафторфосфат (5,69 г) ї М,М-діїзопропілетиламін (5,57 г) та перемішували суміш при 60"С протягом З годин.
Реакційну суміш розбавляли етилацетатом (800 мл), промивали водою й сольовим розчином та висушували над сульфатом натрію. Після фільтрування й випарювання розчинника, а також очищення залишку на силікагелі, з елююванням 2095 етилацетатом в дихлорметані, одержували указану в заголовку сполуку. М5 (Е5І) т/е 915,5 (МАН). 1.13.7. 6-І(8-(1,3-Бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1 Н)-іл|-3-(1-(/3,5-диметил- 7-(2-(метиламіно)етоксиІгрицикло!|3.3.1.157)дец-1-ил)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл|Іпіридин-2- карбонова кислота
У розчин речовини із прикладу 1.13.6 (5 г) у дихлорметані (20 мл) додавали трифтороцтову
Зо кислоту (10 мл) та перемішували суміш протягом ночі. Розчинник випарювали під вакуумом і залишок розчиняли в диметилсульфоксиді/метанолі (1:11, 10 мл). Суміш очищували за допомогою хроматографії з оберненою фазою із застосуванням системи Апаїйодіх й колонки С18 (300 г) та з елююванням від 10 до 8595 ацетонітрилу і 0,195 розчину трифтороцтової кислоти у воді, з одержанням указаної в заголовку сполуки. 1.13.8. 6-(8-(1,3-Бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1 Н)-іл|-3-11-(3,5-диметил- 7-2-Іметил-(3-сульфо-І -аланіл)аміно|етоксиутрициклої3.3.1.15Лдец-1-ил)метил|-5-метил-1 Н- піразол-4-іл)упіридин-2-карбонова кислота
Розчин /(К)-2-((9Н-флуорен-9-іл)метокси)карбоніл)аміно)-3-сульфопропанової кислоти (0,020 г), М,М-діїзопропілетиламіну (0,045 мл) Й О-(7-азабензотриазол-1-іл)-М,М,М'М'- тетраметилуронію гексафторфосфату (НАТО, 0,020г) перемішували разом в М,М- диметилформаміді (0,75 мл) за кімнатної температури. Після перемішування протягом
З0 хвилин додавали речовину із прикладу 1.13.7 (0,039 г) та перемішували реакційну суміш протягом додаткової 1 години. У реакційну суміш додавали діеєтиламін (0,027 мл) та продовжували перемішування протягом З годин. Реакційну суміш розбавляли водою (0,75 мл) й
М,М-диметилформамідом (1 мл), нейтралізували трифтороцтовою кислотою (0,039 мл) та очищували за допомогою НРІС з оберненою фазою із застосуванням системи оїіїЇ5оп, з елююванням від 20 до 8095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./06. трифтороцтової кислоти. Необхідні фракції об'єднували й висушували сублімацією з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-ав) б ррт 12,89 (5, 1Н), 8,11-8,02 (т,
АН), 7,84 (а, 1Н), 7,66 (а, 1Н), 7,60-7,45 (т, ЗН), 7,45-7,36 (т, 2Н), 7,34 (а, 1Н), 7,00 (ад, 1), 5,00 (5, 2Н), 4,57-4,40 (т, 1Н), 3,93 (І, 2Н), 3,90-3,84 (т, 2Н), 3,58-3,43 (т, 2Н), 3,41-3,21 (т, 2Н), 3,18- 3,02 (т, ЗН), 2,95-2,85 (т, 2Н), 2,76 (9, 2Н), 2,14 (й, ЗН), 1,51-0,85 (т, 18Н). М5 (ЕБІ) т/е 911,2 (МАН). 1.14 Синтез 6-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-71-(3,5- диметил-7-(2-((З-фосфонопропіл)аміно|етокси)трицикло!|3.3.1.137|)дец-1-ил)метилі|-5-метил-1 Н- піразол-4-іліпіридин-2-карбонової кислоти (сполуки М/2.14) 1.14.1 Ди-трет-бутил-(З3-гідроксипропіл)фосфонат
Додавали Ман (6095 в мінеральному маслі, 400 мг) до ди-трет-бутилфосфонату (1,93 г) в
М,М-диметилформаміді (30 мл) і реакційну суміш перемішували за кімнатної температури бо протягом 30 хвилин. Додавали (3-бромпропокси)(трет-бутилудиметилсилан й (2,1г) і перемішували реакційну суміш протягом ночі. Суміш розбавляли діетиловим етером (300 мл) і розчин тричі промивали водою та сольовим розчином, потім висушували над сульфатом натрію, фільтрували та концентрували. Залишок розчиняли в 20 мл тетрагідрофурану й додавали тетрабутиламонію фторид (ТВАБ, 1М в тетрагідрофурані, 9 мл). Розчин перемішували протягом 20 хвилин і потім додавали буфер із рН 7 (50 мл). Суміш поглинали діетиловим етером і розділяли та органічний шар промивали сольовим розчином і потім концентрували. Неочищений продукт піддавали хроматографії на силікагелі із застосуванням від 10 до 10095 етилацетату в гептанах, потім 595 метанолу в етилацетаті, з одержанням указаної в заголовку сполуки. 1.14.2 Ди-трет-бутил-(З-оксопропілуфосфонат
Речовину із прикладу 1.14.1 (200 мг) й перйодинан Десса-Мартіна (370 мг) перемішували у дихлорметані (5 мл) протягом 2 годин. Суміш поглинали етилацетатом і двічі промивали 1 М водним розчином Маон та сольовим розчином і потім концентрували. Неочищений продукт піддавали хроматографії на силікагелі із застосуванням від 50 до 10095 етилацетату в гептанах, потім 1095 метанолу в етилацетаті, з одержанням указаної в заголовку сполуки. 1.14.3 трет-Бутил-6-(8-(бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл)-3-(1-((3- (2-(3-(діетоксифосфорил)пропіл)аміно)етокси)-5,7-диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н- піразол-4-іл)піколінат
Указану в заголовку сполуку одержували, як описано в прикладі 1.10.11, шляхом заміни речовини із прикладу 1.104110 і 4-((25,38,48,55,6Н8)-3,4,5-тригідрокси-6- (гідроксиметил)тетрагідро-2Н-піран-2-іл)уокси)бензальдегіду речовиною з прикладу 1.2.7 і речовиною з прикладу 1.14.2 відповідно. М5 (АРСІ) т/е 980,9 (МАН). 1.14.5. 6-(8-(1,3-Бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1 Н)-іл|-3-11-(3,5-диметил- 7-2-(3-фосфонопропіл)аміно|етоксиутрицикло!|3.3.1.137|)дец-1-илуметил|-5-метил-1 Н-піразол-4- ілупіридин-2-карбонова кислота
Вказану в заголовку сполуку одержували, як описано в прикладі 1.12.2, шляхом заміни речовини із прикладу 1.12.1 речовиною із прикладу 1.14.3. "Н ЯМР (400 МГЦ, диметилсульфоксид-авє) б ррт 8,37 (5, 2Н), 8,03 (0, 1Н), 7,79 (й, 1Н), 7,62 (а, 1Н), 7,42-7,53 (т,
ЗН), 7,33-7,40 (т, 2Н), 7,29 (5, 1Н), 6,96 (а, 1Н), 4,96 (5, 2Н), 3,86-3,93 (т, 2Н), 3,52-3,59 (т, 2Н), 2,93-3,06 (т, 6Н), 2,10 (5, ЗН), 1,71-1,89 (т, 2Н), 1,53-1,65 (т, 2Н), 1,43 (5, 2Н), 1,23-1,37 (т, 4Н), 0,96-1,19 (т, 6Н), 0,87 (5, 6Н). М5 (АРСІ) т/е 868,3 (МАН). 1115 Синтез 6-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-71-(3,5- диметил-7-(2-((З-сульфо-І -аланіл)аміно|етокси)трицикло!|3.3.1.127)дец-1-ил)метил|-5-метил-1 Н- піразол-4-іліпіридин-2-карбонової кислоти (сполуки М/2.15)
Розчиняли розчин (К)-2-((9Н-флуорен-9-іл)метокси)карбоніл)аміно)-3-сульфопропанової кислоти (0,050 г) й О-(7-азабензотриазол-1-іл)-М,М,М';М'-тетраметилуронію гексафторфосфату (0,049 г) в М,М-диметилформаміді (1 мл) та додавали М,М-діїзопропілетиламін (0,102 мл). Після перемішування протягом 15 хвилин додавали речовину із прикладу 1.3.1 (0,100 г) та перемішували реакційну суміш протягом додаткових З годин. У реакційну суміш додавали діетиламін (0,061 мл) та продовжували перемішування протягом ночі. Реакційну суміш нейтралізували 2,2,2--рифтороцтовою кислотою (0,090 мл) Й розбавляли М,М- диметилформамідом (1 мл) і водою (1 мл). Суміш очищували за допомогою НРІ С з оберненою фазою із застосуванням системи оіЇзоп, з елююванням від 20 до 8095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./06б. трифтороцтової кислоти. Необхідні фракції об'єднували й висушували сублімацією з одержанням указаної в заголовку сполуки. "НН ЯМР (500 МГц, диметилсульфоксид-авє) б ррт 12,86 (5, 1Н), 8,63 (ї, 1Н), 8,15-8,01 (т, 4Н), 7,79 (а, 1), 7,62 (а, 1Н), 7,56-7,41 (т, ЗН), 7,40-7,33 (т, 2Н), 7,30 (5, 1Н), 6,96 (й, 1Н), 4,96 (5, 2Н), 4,08-3,97 (т, 1Н), 3,89 (ї, 2Н), 3,82 (5, 2Н), 3,42-3,91 (т, 2Н), 3,28-3,17 (т, 1Н), 3,16-3,06 (т, 1Н), 3,01 (ї, 2Н), 2,97 (ад, 1Н), 2,76 (да, 1Н), 2,10 (5, ЗН), 1,39 (в, 2Н), 1,32-1,20 (т, 4Н), 1,19-1,07 (т, 4Н), 1,07-0,95 (т, 2Н), 0,85 (5, 6Н). М5 (ЕБ5І) т/е 897,2 (М.Н). 1116 Синтез 6-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-(1-119,5- диметил-7-(2-(2-(3-фосфонопропіл)аміно|етокси)етокси)трицикло!|3.3.1.127|дец-1-ил|метил)-5- метил-1Н-піразол-4-іл)піридин-2-карбонової кислоти (сполуки М/2.16) 1.16.1 трет-Бутил-6-(8-(бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл)-3-(1-((3- (2-(2-(3-(ди-трет-бутоксифосфорил)пропіл)аміно)етокси)етокси)-5,7-диметиладамантан- 1- ілуметил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)піколінат
Розчиняли речовину із прикладу 1.10.10 (338 мг) і речовину із прикладу 1.14.2 (120 мг) в етанолі (20 мл) і розчин концентрували. Залишок знову поглинали етанолом (20 мл) та концентрували. Потім залишок розчиняли у дихлорметані (10 мл), додавали до нього бо триацетоксиборогідрид натрію (119 мг) та перемішували реакційну суміш протягом ночі.
Неочищену суміш піддавали хроматографії на силікагелі із застосуванням 195 триетиламіну в етилацетаті/метанолі 95:5 з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕБ5І) 1080,3 (МАН) ». 1.16.2. 6-І(8-(1,3-Бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1 Н)-іл|-3-(1-(І3,5-диметил- 7-(2--2-(З-фосфонопропіл)аміно|етокси)етокси)трициклоїЇ3.3.1.12Л)дец-1-ил|Іметил)-5-метил-1 Н- піразол-4-іл)піридин-2-карбонова кислота
Речовину із прикладу 1.16.1 (22 мг) перемішували у дихлорметані (З мл) й трифтороцтовій кислоті (З мл) протягом 2 днів. Суміш концентрували та піддавали хроматографії з оберненою фазою на системі ІзоЇега Опе від Віоїаде із застосуванням колонки С18, 40 г, з елююванням від до 9095 ацетонітрилу в 0,195 трифтороцтовій кислоті/воді, з одержанням указаної в заголовку 10 сполуки у вигляді солі трифтороцтової кислоти. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-дв) б ррт 18,62 (Б5, 1Н), 8,10 (а, 1Н), 7,86 (а, 1Н), 7,68 (а, 1Н), 7,57 (а, 1Н), 7,54 (аа, 1Н), 7,50 (а, 1Н), 7,42 (т, 2Н), 7,35 (в, 1Н), 7,02 (й, 1Н), 5,02 (5, 2Н), 3,94 (т, 2Н), 3,97 (т, 2Н), 3,68 (т, 2Н), 3,55 (т, 2Н), 3,15 (т, 1Н), 3,09 (т, 4Н), 2,55 (т, 4Н), 2,15 (5, ЗН), 1,86 (т, 1Н), 1,66 (т, 2Н), 1,45 (т, 2Н), 1,91 (т, 4Н), 1,19 (т, 4Н), 1,08 (т, 2Н), 0,90 (5, 6Н). М5 (ЕБІ) 912,2 (МАН). 117 Синтез 3-11-(3-2-(Ї -альфа-аспартил(метил)аміно|етокси)-5,7- диметилтрицикло!|3.3.1.12Л|дец-1-ил)метил|-5-метил-1Н-піразол-4-іл)-6-(8-(1,3-бензотіазол-2- ілкарбамоїл)-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1Н)-іл|Іпіридин-2-карбонової кислоти (сполуки М/2.17) 1.17.1.. 6-(8-(1,3-Бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-ілІ|-3-11-(3-(2-Ц(25)-4- трет-бутокси-2-|((трет-бутоксикарбоніл)аміно|-4-оксобутаноїл)(метил)аміно|етокси)-5,7- диметилтрицикло!3.3.1.127|дец-1-ил)метилі|-5-метил-1Н-піразол-4-іліпіридин-2-карбонова кислота
Розчин речовини із прикладу 1.13.7 (0,060 г), (5)-4-трет-бутил-1-(2,5-діоксопіролідин-1-іл)-2- ((трет-бутоксикарбоніл)аміно)сукцинат (0,034 г) і М,М-дізопропілетиламін перемішували разом у дихлорметані (1 мл). Після перемішування протягом ночі реакційну суміш завантажували на силікагель та застосовували градієнт елюювання метанол/дихлорметан, від 0,5 до 595, З одержанням указаної в заголовку сполуки. 1.17.2 3-41-(3-(2-(Ї -альфа-Аспартил(метил)аміно|етокси)-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.1»Лдец- 1-ил)метил|-5-метил-1Н-піразол-4-іл)-6-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін- 2(1Н)-іл|Іпіридин-2-карбонова кислота
Зо Розчин речовини із прикладу 1.17.1 (0,049г) у дихлорметані (1 мл) обробляли трифтороцтовою кислотою (0,5 мл) та перемішували реакційну суміш протягом ночі. Реакційну суміш концентрували, розчиняли в М,М-диметилформаміді (2 мл) і воді (0,5 мл), потім очищували за допомогою НРІС з оберненою фазою із застосуванням системи оїіїЇ5оп, з елююванням від 20 до 8095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./06. трифтороцтової кислоти. Необхідні фракції об'єднували й висушували сублімацією з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-адв) б рріт 12,85 (5, 1Н), 8,15 (й, ЗН), 8,03 (а, 1), 7,79 (9, 1Н), 7,62 (а, 1Н), 7,55-7,41 (т, ЗН), 7,36 (4, 2Н), 7,29 (а, 1Н), 6,95 (а, 1Н), 4,96 (5, 2Н), 4,55 (5, 1Н), 3,92-3,86 (т, 2Н), 3,60-3,47 (т, 2Н), 3,47-3,37 (т, 2Н), 3,32-3,21 (т, 1Н), 3,09-2,97 (т, 4Н), 2,92-2,72 (т, ЗН), 2,67-2,53 (т, 1Н), 2,10 (5, ЗН), 1,46-0,94 (т, 12Н), 0,85 (5, 6Н). М5 (ЕБІ) т/е 875,2 (МаАН)». 118 Синтез 6-(4-((2-(2-(2-аміноетокси)етокси|етил)-(2-(13-((4-16-І(8-(1,3-бензотіазол-2- ілкарбамоїл)-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-З3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1- ілуметил|-5,7-диметилтрицикло!/3.3.1.157)дец-1-иліокси)етил|аміно)метилібензил)-2,6-ангідро-Ї1 - гулонової кислоти (сполуки М/2.18) 118.1 Метиловий естер (25,35,48,55)-3,4,5-триацетокси-6-(4- бромметилбензил)тетрагідропіран-2г-карбонової кислоти
Вказану в заголовку сполуку одержували, як описано в .). К. УмМаїКег еї аї., Вісогд. Мед. Спет. 2006, 14, 3038-3048. М5 (ЕБІ) т/е 518, 520 (М-А-МНа4)». 1.18.2 Метиловий естер (25,35,48,55)-3,4,5-триацетокси-6-(4- формілбензил)тетрагідропіран-2-карбонової кислоти
Додавали речовину із прикладу 1.18.1 (75 мг) ії М-оксид піридину (14 мг) в ацетонітрил (0,75 мл). У розчин додавали оксид срібла(І) (24 мг) і розчин перемішували за кімнатної температури протягом 16 годин. Додавали безводний сульфат натрію (5 мг) й розчин перемішували протягом п'яти хвилин. Розчин фільтрували та концентрували. Неочищений матеріал очищували за допомогою колонкової флеш-хроматографії на силікагелі, з елююванням від 50 до 7095 етилацетату в гептанах. Розчинник випарювали за зниженого тиску з одержанням указаної в заголовку сполуки. 118.3 (38,45,58,68)-2-(4-((2-((3-((4-(6-(8-(Бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл)-2-(трет-бутоксикарбоніл)піридин-3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1- бо ілуметил)-5,7-диметиладамантан-1-іл)уокси)етил)аміно)метил)бензил)-6-
(метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5-триїлтриацетат
Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 1.18.2 на речовину із прикладу 1.5.3 в прикладі 1.5.4. М5 (Е5І) т/е 1222 (МАН). 1.18.4 Трет-бутиловий естер 12-(2-(2-оксоетокси)етокси|етил)карбамінової кислоти
Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни трет-бутилового естеру 42-(2-(2- гідроксиетокси)етокси|етил)карбамінової кислоти речовиною із прикладу 1.5.1 в прикладі 1.5.2. 1.18.5 (38,45,58,6Н)-2-(4-(2-(2-((3-((4-(6-(8-(Бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл)-2-(трет-бутоксикарбоніл)піридин-3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1- ілуметил)-5,7-диметиладамантан-1-іл)окси)етил)-14,14-диметил-12-оксо-5,8,13-триокса-2,11- діазапентадецил)бензил)-6-(метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5-триїлтриацетат
Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 1.18.3 речовиною із прикладу 1.2.7 й речовини із прикладу 1.18.4 речовиною із прикладу 1.5.3 в прикладі 1.5.4. М5 (ЕІ) т/е 1453 (М.Н). 1.18.6. 6-4-((2-(2-(2-Аміноетокси)етокси|етил)-(2-(13-(4-16-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)- 3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-ілІ-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)метил/-5,7- диметилтрициклоїЇ3.3.1.157)|дец-1-ил)окси)етил|аміно)метилібензил)-2,6б-ангідро-! -гулонова кислота
Указану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 1.18.5 на речовину з прикладу 1.5.4 у прикладі 1.5.5. "Н ЯМР (400МГцЦ, диметилсульфоксид-ав) б ррт 9,38 (р5, 1Н), 8,05 (ад, 1), 7,90-7,68 (т, 6Н), 7,62 (т, 2Н), 7,53-7,27 (т, 8Н), 6,94 (а, 1Н), 4,96 (65, 1Н), 4,38 (р5, 4Н), 3,91-3,57 (т, 11Н), 3,37-3,11 (т, 14Н), 2,98 (т, 6Н), 2,61 (т, 1Н), 2,10 (5, ЗН), 1,44 (р5, 2Н), 1,26 (т, 4Н), 1,18-0,90 (т, 6Н), 0,87 (рев, 6Н). М5 (ЕБІ) т/е 1157 (М.АН)-. 1.19 Синтез 4-(Ц2-((3-(4-(6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|- 2-карбоксипіридин-3-іл)-о-метил-1 Н-піразол-1-іл)метил|-5, 7-диметилтрицикло|3.3.1.157|)дец-1- иліокси)етил|аміно)метил)фенілгексопіранозидуронової кислоти (сполуки М/2.19) 119.1 (28,355.48,58,68)-2-(4-Формілфенокси)-6-(метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5- триїлтриацетат
У розчин (2Е,3К,45,55,65)-2-бром-6-(метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5- триїлтриацетату (2,42г) в ацетонітрилі (30 мл) додавали оксид срібла(І) (1,4г) й 4-
Зо гідроксибензальдегід (620 мг). Реакційну суміш перемішували протягом 4 годин і фільтрували.
Фільтрат концентрували і залишок очищували за допомогою хроматографії на силікагелі, з елююванням від 5 до 5095 етилацетату в гептанах, з одержанням указаної в заголовку сполуки.
М5 (ЕБІ) т/е 439,2 (МАН): 119.2 4-Ц2-(3-(4-16-І8-(1,3-Бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2- карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1-ілуметил)|-5, 7-диметилтрицикло!|3.3.1.157)дец-1- илюкси)етилІіаміно)метил)фенілгексопіранозидуронова кислота
У розчин речовини із прикладу 1.2.7 (36 мг) в тетрагідрофурані (2 мл) й оцтовій кислоті (0,2 мл) додавали речовину із прикладу 1.19.1 (21 мг) з подальшим додаванням МдзО5 (60 мг).
Суміш перемішували протягом 1 години перед додаванням Мавнзосм на смолі (153 мг). Потім суміш перемішували протягом З годин. Суміш фільтрували і до фільтрату додавали моногідрат гідроксиду літію (20 мг). Суміш перемішували протягом 2 годин, підкислювали трифтороцтовою кислотою та очищували за допомогою НРІС з оберненою фазою (система оіїЇб5оп), з елююванням від 10 до 8595 ацетонітрилу в 0,195 розчині трифтороцтової кислоти у воді, з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-дв) б ррт 12,86 (5, 1Н), 8,57-8,72 (т, 2Н), 8,03 (а, 1), 7,79 (а, 1н), 7,62 (а, 1Н), 7,34-7,53 (т, 6Н), 7,08 (ї, 2Н), 6,95 (а, 1Н), 5,10 (9,, 1Н), 4,96 (5, 2Н), 4,06-4,15 (т, АН), 3,83-3,97 (т, 6Н), 3,26-3,42 (т, 8Н), 2,93-3,10 (т, 6Н), 2,10 (в, ЗН), 1,43 (в, 2Н), 1,24-1,38 (т, 6Н), 0,97-1,16 (т, 4Н), 0,86 (5, 6Н). М5 (ЕБІ) т/е 10283 (М.-АН)». 1.20 Синтез 6-(1-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-1,2,3,4-тетрагідрохінолін-7-іл|-3-11-(3,5- диметил-7-2-(2-фосфоноетил)аміно|етокси)трицикло!|3.3.1.137)дец-1-ил)метил|-5-метил-1 Н- піразол-4-іліпіридин-2-карбонової кислоти (сполуки М/2.20) 1.20.1 2-(3,5-Диметил-7-((5-метил-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-діоксаборолан-2-іл)-1 Н- піразол-1-ілуметил)адамантан-1-іл)уокси)етанол
У розчин речовини із прикладу 1.1.6 (9 г) Й 1,1- бісідифенілфосфіно)фероцен|дихлорпаладію(Ії) дихлорметану (827 мг) в ацетонітрилі (60 мл) додавали триєтиламін (10 мл) і пінаколборан (б мл). Суміш перемішували зі зворотним холодильником протягом ночі, охолоджували та застосовували безпосередньо на наступній стадії. М5 (ЕБІ) т/е 445,4 (Ма-Н)». 1.20.2 трет-Бутил-6б-хлор-3-(1-((3-(2-гідроксиетокси)-5,7-диметиладамантан-1-іл)уметил)-5- бо метил-1Н-піразол-4-іл)піколінат
У розчин трет-бутил-3-бром-б-хлорпіколінату (5,92 г) в тетрагідрофурані (60 мл) й воді (30 мл) додавали неочищену речовину із прикладу 1.20.1 (4,44 г), 1,3,5,7-тетраметил-6-феніл- 2,4,8-триокса-6-фосфоадамантан (1,5 г), трис(дибензиліденацетон)дипаладій(0) (927 мг) і
КзРОд22 г). Суміш перемішували зі зворотним холодильником протягом ночі, охолоджували, розбавляли етилацетатом (800 мл) і промивали водою й сольовим розчином. Органічний шар висушували над сульфатом натрію, фільтрували та концентрували. Залишок очищували за допомогою флеш-хроматографії з елююванням 2095 етилацетатом в гептані, потім 5905 метанолом в дихлорметані, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (Е5І) т/е 531,1 (МАН. 1.20.3 трет-Бутил-3-(1-((3-(2-(трет-бутилдиметилсиліл)окси)етокси)-5,7-диметиладамантан- 1-ілуметил)-5-метил-1Н-піразол-4-іл)-б-хлорпіколінат
У розчин речовини із прикладу 1.20.2 (3,2 г) в М.М-диметилформаміді (20 мл) додавали імідазол (0,62 г) і хлор-трет-бутилдиметилсилан (1,37 г). Суміш перемішували протягом ночі, розбавляли етилацетатом (300 мл) і промивали водою й сольовим розчином. Органічний шар висушували над сульфатом натрію, фільтрували та концентрували. Залишок очищували за допомогою флеш-хроматографії, з елююванням 2095 етилацетатом в гептанах, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕБІ) т/е 645,4 (МаН)». 1.20.4 трет-Бутил-3-(1-((3-(2-(трет-бутилдиметилсиліл)окси)етокси)-5,7-диметиладамантан- 1-ілуметил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)-6-(1,2,3,4-тетрагідрохінолін-7-іл)піколінат
У розчин 7-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-діоксаборолан-2-іл)-1,2,3,4-тетрагідрохіноліну (507 мг) в 1,4-діоксані (10 мл) й воді (5 мл) додавали речовину із прикладу 1.20.3 (1,25 г), біс(трифенілфосфін)паладію(іІ) дихлорид (136 мг) і фторид цезію (884 мг). Суміш нагрівали при 120"С в мікрохвильовому синтезаторі (Віоїаде, Іпйіаг) протягом 20 хвилин. Суміш розбавляли етилацетатом (500 мл) та промивали водою і сольовим розчином. Органічний шар висушували над сульфатом натрію, фільтрували, концентрували та очищували за допомогою флеш- хроматографії з елююванням 2095 етилацетатом в гептанах і потім 595 метанолом в дихлорметані, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕБІ) т/е 741,5 (МАН). 120.5 трет-Бутил-6-(1-(бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-1,2,3,4-тетрагідрохінолін-7-іл)-3-(1-(3- (2-«(трет-бутилдиметилсиліл)окси)етокси)-5,7-диметиладамантан-1-іл)уметил)-5-метил-1 Н-
Зо піразол-4-іл)піколінат
У суспензію біс(2,5-діоксопіролідин-1-іл)карбонату (295 мг) в ацетонітрилі (10 мл) додавали бензо|д|гіазол-2-амін (173 мг) і суміш перемішували протягом 1 години. Додавали розчин речовини із прикладу 1.20.4 (710 мг) в ацетонітрилі (10 мл) й суспензію перемішували протягом ночі. Суміш розбавляли етилацетатом (300 мл), промивали водою й сольовим розчином та висушували над сульфатом натрію. Після фільтрування органічний шар концентрували та очищували за допомогою хроматографії на силікагелі, з елююванням 2095 етилацетатом в гептанах, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (Е5І) т/е 917,2 (МАН)». 1.20.6 трет-Бутил-6-(1-(бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-1,2,3,4-тетрагідрохінолін- 7-іл)-3-(1-((3- (2-гідроксиетокси)-5,7-диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)піколінат
У розчин речовини із прикладу 1.20.5 (1,4 г) в тетрагідрофурані (10 мл) додавали тетрабутиламонію фторид (1,0 М в тетрагідрофурані, б мл). Суміш перемішували протягом
З годин, розбавляли етилацетатом (300 мл) та промивали водою й сольовим розчином.
Органічний шар висушували над сульфатом натрію, фільтрували та концентрували з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (Е5І) т/е 803,4 (МН). 1.20.7 трет-Бутил-6-(1-(бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-1,2,3,4-тетрагідрохінолін-7-іл)-3-(1- ((3,5-диметил-7-(2-(метилсульфоніл)окси)етокси)адамантан-1-іл)уметил)-5-метил-1 Н-піразол-4- іл)піколінат
В охолоджений (0"С) розчин речовини із прикладу 1.20.6 (1,2 г) у дихлорметані (20 мл) й триєтиламіні (2 мл) додавали метансульфонілхлорид (300 мг). Суміш перемішували протягом 4 годин, розбавляли етилацетатом (200 мл) та промивали водою й сольовим розчином.
Органічний шар висушували над сульфатом натрію, фільтрували та концентрували з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (Е5І) т/е 881,3 (МАН). 1.20.8 трет-Бутил-3-(1-((3-(2-азидоетокси)-5,7-диметиладамантан-1-іл)уметил)-5-метил-1 Н- піразол-4-іл)-6-(1-(бензо|д9|гіазол-2-ілкарбамоїл)-1,2,3,4-тетрагідрохінолін-7-іл)піколінат
У розчин речовини із прикладу 1.20.7 (1,5 г) в М,М-диметилформаміді (20 мл) додавали азид натрію (331 мг). Суміш перемішували протягом 48 годин, розбавляли етилацетатом (20,0 мл) та промивали водою й сольовим розчином. Органічний шар висушували над сульфатом натрію, фільтрували, концентрували та очищували за допомогою хроматографії на силікагелі, з елююванням 2095 етилацетатом у дихлорметані, з одержанням указаної в заголовку сполуки. (510) М5 (ЕБІ) т/е 828,4 (М.-Н)-.
1.20.9 трет-Бутил-3-(1-(3-(2-аміноетокси)-5,7-диметиладамантан-1-іл)уметил)-5-метил-1 Н- піразол-4-іл)-6-(1-(бензо|д9|гіазол-2-ілкарбамоїл)-1,2,3,4-тетрагідрохінолін-7-іл)піколінат
У розчин речовини із прикладу 1.20.8 (1,5 г) в тетрагідрофурані (30 мл) додавали Ра/сС (1095, 200 мг). Суміш перемішували в атмосфері водню протягом ночі. Реакційну суміш фільтрували та концентрували фільтрат з одержанням указаної в заголовку сполуки. МБ (ЕБІ) п/е 802,4 (МАН). 1.20.10 трет-Бутил-6-(1-(бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-1,2,3,4-тетрагідрохінолін- 7-іл)-3-(1-((3- (2-(2-(діетоксифосфорил)етил)аміно)етокси)-5, 7-диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н- піразол-4-іл)піколінат
Вказану в заголовку сполуку одержували, як описано в прикладі 1.12.1, шляхом заміни речовини із прикладу 1.2.7 речовиною із прикладу 1.20.9. 1.20.11 6-(1-(1,3-Бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-1,2,3,4-тетрагідрохінолін- 7-іл|-3-11-((3,5- диметил-7-2-(2-фосфоноетил)аміно|етоксиутрицикло!|3.3.1.137|)дец-1-ил)уметил|-5-метил-1 Н- піразол-4-іл)упіридин-2-карбонова кислота
Вказану в заголовку сполуку одержували, як описано в прикладі 1.12.2, шляхом заміни речовини із прикладу 1.12.1 речовиною із прикладу 11.20.10. "Н ЯМР (500 МГЦ, диметилсульфоксид-сє) б ррт 8,40 (5, 2Н), 8,02 (0, 1), 7,74-7,89 (т, ЗН), 7,47 (в, 2Н), 7,38 (ї, 1Н), 7,30 (а, 1Н), 7,23 (І, 1Н), 3,96 (5, 2Н), 3,90 (5, 2Н), 3,53-3,64 (т, 2Н), 3,03-3,18 (т, 2Н), 2,84 (ї, 2Н), 2,23 (5, ЗН), 1,87-2,02 (т, 4Н), 1,46 (в, 2Н), 1,26-1,38 (т, 4Н), 1,12-1,23 (т, 4Н), 0,99-1,11 (т, 2Н), 0,89 (5, 6Н). М5 (ЕБІ) т/е 854,1 (МАН). 1.21 Синтез 6-(1-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-1,2,3,4-тетрагідрохінолін-7-іл|-3-11-(3,5- диметил-7-(2-Іметил-(3З-сульфо-Ї -аланіл)аміно|етокси)трицикло!|3.3.1.127)дец-1-ил)метилі|-5- метил-1Н-піразол-4-іліпіридин-2-карбонової кислоти (сполуки М/2.21) 1.21.1. трет-Бутил-(2-((3,5-диметил-7-((5-метил-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-діоксаборолан-2- іл)-1 Н-піразол-1-ілуметил)адамантан-1-іл)окси)етил)(метил)карбамат
У розчин речовини із прикладу 1.13.3 (1,2 г) в 1,4-діоксані додавали хлорид біс(бензонітрил)паладію(Ії) (0,04 г), 4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-діоксаборолан (0,937 мл) (|і триетиламін (0,9 мл). Суміш нагрівали зі зворотним холодильником протягом ночі, розбавляли етилацетатом та промивали водою (60 мл) й сольовим розчином (60 мл). Органічний шар
Зо висушували над сульфатом натрію, фільтрували та концентрували з одержанням указаної в заголовку сполуки. 1.21.2 трет-Бутил-3-(1-((3-(2-(трет-бутоксикарбоніл)3(метил)аміно)етокси)-5,7- диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)-6-хлорпіколінат
Указану в заголовку сполуку одержували, як описано в прикладі 1.1.12, шляхом заміни речовини із прикладу 1.1.11 і речовини із прикладу 1.1.8 трет-бутил-3-бром-б-хлорпіколінатом і речовиною з прикладу 1.21.1 відповідно. М5 (АРСІ) т/е 643,9 (МАН). 1.21.3 трет-Бутил-3-(1-((3-(2-(трет-бутоксикарбоніл)3(метил)аміно)етокси)-5,7- диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)-6-(1,2,3,4-тетрагідрохінолін- 7 - іл)піколінат
Суміш речовини із прикладу 1.21.2 (480 мг), 7-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-діоксаборолан-2-іл)- 1,2,3,4-тетрагідрохіноліну (387 мг), дихлорбіс(трифенілфосфін)паладію(І!) (78 мг) й фториду цезію (340 мг) в 1,4-діоксані (12 мл) та воді (5 мл) нагрівали при 1007С протягом 5 годин.
Реакційну суміш охолоджували й розбавляли етилацетатом. Одержану суміш промивали водою й сольовим розчином та органічний шар висушували над сульфатом натрію, фільтрували та концентрували. Залишок очищували за допомогою флеш-хроматографії, з елююванням 5090 етилацетатом в гептанах, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (АРСІ) пт/е 740,4 (МАН. 1.21.4 трет-Бутил-6-(1-(бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-1,2,3,4-тетрагідрохінолін- 7-іл)-3-(1-((3- (2-«(трет-бутоксикарбоніл)(метил)аміно)етокси)-5,7-диметиладамантан-1-ілуметил)-5-метил-1 Н- піразол-4-іл)піколінат
У розчин бензо|Ч|гіазол-2-аміну (114 мг) в ацетонітрилі (5 мл) додавали біс(2,5- діоксопіролідин-1-іл/укарбонат (194 мг). Суміш перемішували протягом 1 години й додавали речовину із прикладу 1.21.3 (432 мг) в ацетонітрилі (5 мл). Суміш перемішували протягом ночі, розбавляли етилацетатом, промивали водою й сольовим розчином. Органічний шар висушували над сульфатом натрію, фільтрували та концентрували. Залишок очищували за допомогою хроматографії на силікагелі з елююванням 5095 етилацетатом в гептанах, з одержанням указаної в заголовку сполуки. 121.5. 6-(1-(Бензо|Ч|гіазол-2-ілкарбамоїл)-1,2,3,4-тетрагідрохінолін- 7-іл)-3-(1-((3,5-диметил- 7-(2--«метиламіно)етокси)адамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)піколінова кислота бо Речовину із прикладу 1.2.4 (200 мг) у дихлорметані (5 мл) обробляли трифтороцтовою кислотою (2,5 мл) протягом ночі. Суміш концентрували з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-дв) б ррт 8,40 (в, 1Н), 8,30 (5, 2Н), 8,02 (а, 1Н), 7,85 (9, 1), 7,74-7,83 (т, 2Н), 7,42-7,53 (т, 2Н), 7,38 (ї, 1Н), 7,30 (а, 1Н), 7,23 (І, 1Н), 3,93-4,05 (т, 2Н), 3,52-3,62 (т, 2Н), 2,97-3,10 (т, 2Н), 2,84 (ї, 2Н), 2,56 (ї, 2Н), 2,23 (в, ЗН), 1,88-2,00 (т, 2Н), 1,45 (5, 2Н), 1,25-1,39 (т, 4Н), 1,12-1,22 (т, 4Н), 1,00-1,09 (т, 2Н), 0,89 (5, 6Н). М5 (ЕБІ) т/е 760,1 (МАН). 1.21.6 6-(1-(Бензо|д4|гіазол-2-ілкарбамоїл)-1,2,3,4-тетрагідрохінолін- 7-іл)-3-(1-((3-(2-((А)-2- ((трет-бутоксикарбоніл)аміно)-М-метил-3-сульфопропанамідо)етокси)-5,7-диметиладамантан- 1- ілуметил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)піколінова кислота
Охолоджували (К)-2-(трет-бутоксикарбоніл)аміно)-3-сульфопропанову кислоту (70,9 мг) й
О-(7-азабензотриазол-1-іл)-М,М,М',М'-тетраметилуронію гексафторфосфат (НАТИ, 65 мг) в М,М- диметилформаміді (1,5 мл) на крижаній бані та додавали М,М-діїззопропілетиламін (68,9 мкл).
Суміш перемішували при 0"С протягом 15 хвилин і за кімнатної температури протягом 8 годин.
Додавали речовину із прикладу 1.21.5 (100 мг) в М,М-диметилформаміді (1 мл) та М,М- діізопропілетиламін (60 мкл). Одержану суміш перемішували протягом ночі, концентрували та очищували за допомогою хроматографії з оберненою фазою (колонка С18), з елююванням від до 6095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки. 1.21.7. 6-(1-(1,3-Бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-1,2,3,4-тетрагідрохінолін-7-іл|-3-11-(3,5-диметил- 20 7-(2-Іметил-(3З-сульфо-І -аланіл)аміно|етоксиутрицикло!3.3.1.12Л)дец-1-ил)метил/|-5-метил-1 Н- піразол-4-іл)упіридин-2-карбонова кислота
Речовину із прикладу 1.21.6 (80 мг) у дихлорметані (3 млу обробляли трифтороцтовою кислотою (1,5 мл) протягом 20 хвилин. Реакційну суміш концентрували та очищували за допомогою хроматографії з оберненою фазою (колонка С18), з елююванням від 0 до 5095 ацетонітрилу у 4 мМ водному розчині ацетату амонію, з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (500 МГц, диметилсульфоксид-ав) б ррт 8,57 (5, 1Н), 7,59-7,67 (т, ЗН), 7,54 (й, 1Н), 7,46-7,51 (т, 1Н), 7,30 (а, 1Н), 7,08-7,17 (т, 2Н), 6,90 (І, 1Н), 3,91-4,10 (т, ЗН), 3,84 (5, 2Н), 3,04 (5, 2Н), 2,75-2,83 (т, 4Н), 2,59-2,70 (т, 2Н), 2,27-2,39 (т, 2Н), 2,26 (5, ЗН), 1,81-1,93 (т, 2Н), 1,74 (в, 9Н), 1,42 (5, 2Н), 0,96-1,33 (т, 1ОН), 0,86 (5, ЗН). М5 (ЕБІ) т/е 909,2 (М-Н).
Зо 1.22 Синтез 3-1-(3,5-диметил-7-2-(2-сульфоетил)аміно|етокси)трицикло|3.3.1.127|)дец-1- ил)метилі|-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)-6-І8-(11,9|гіазоло(5,4-б|піридин-2-ілкарбамоїл)-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|Іпіридин-2-карбонової кислоти (сполуки М2.22) 122.1. трет-Бутил-3-(1-((3-(2-азидоетокси)-5,7-диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н- піразол-4-іл)-6-(8-(тіазоло|5,4-б|піридин-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл)піколінат
Розчиняли Речовину із прикладу 1.2.5 (560 мг) і тіазоло|5,4-б|піридин-2-амін (135 мг) у дихлорметані (12 мл). Додавали М,М-диметилпіридин-4-амін (165 мг) і М-етил-М'-(3- диметиламінопропіл)карбодіїміду гідрохлорид (260 мг) та перемішували реакційну суміш за кімнатної температури протягом ночі. Реакційну суміш концентрували та очищували неочищений залишок за допомогою хроматографії на силікагелі, з елююванням дихлорметаном/етилацетатом, 65/35, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕБІ) т/е 829,1 (МАН). 122.2. трет-Бутил-3-(1-(3-(2-аміноетокси)-5,7-диметиладамантан-1-іл)уметил)-5-метил-1 Н- піразол-4-іл)-6-(8-(тіазоло|5,4-б|піридин-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл)піколінат
Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 1.22.1 речовиною із прикладу 1.2.6 в прикладі 1.2.7. М5 (ЕБ5І) т/е 803,2 (М.Н). 1.22.3 трет-Бутил-3-(1-(3,5-диметил-7-|((2,2,7,7-тетраметил-10,10-діоксидо-3,3-дифеніл-4,9- діокса-10Х6-тіа-13-аза-3-силапентадекан-15-іл)окси|ЇгрициклоїЇ3.3.1.15Л)дец-1-ил)метил)-5-метил- 1Н-піразол-4-іл|-6-І8-«Ф1,3)гіазоло|5,4-б|Іпіридин-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)- іл|Іпіридин-2-карбоксилат
У розчин речовини із прикладу 1.22.2 (70 мг) й 4-(трет-бутилдифенілсиліл)окси)-2,2- диметилбутилетенсульфонату (48 мг) в дихлорметані (1 мл) додавали М,М-діззопропілетиламін (0,06 мл) та перемішували реакційну суміш за кімнатної температури протягом ночі. Реакційну суміш концентрували та очищували неочищений залишок за допомогою хроматографії на силікагелі, з градієнтом елюювання від 1 до 495 метанолу в дихлорметані, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕБІ) т/е 12492 (М.Н). 122.4. 2-(2-(3-(4-(2-(трет-Бутоксикарбоніл)-6-(8-(тіазоло|5,4-б|піридин-2-ілкарбамоїл)-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл)піридин-3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)уметил)-5,7-диметиладамантан- 1-іл)уокси)етил)аміно)етансульфонова кислота
До розчину речовини із прикладу 1.22.3 (70 мг) у тетрагідрофурані (0,25 мл) додавали бо тетрабутиламонію фторид (60 мкл, 1,0 М розчин у тетрагідрофурані) і реакційну суміш перемішували за кімнатної температури протягом двох днів. Реакційну суміш концентрували й залишок очищували за допомогою хроматографії з оберненою фазою (колонка С18), з елююванням від 10 до 9095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки у вигляді солі трифтороцтової кислоти. МО (ЕБІ) т/е 9111 (МАН). 1.22.5 3-11-(3,5-Диметил-7-(2-(2-сульфоетил)аміно|етокси)утрициклоїЇ3.3.1.127|дец-1- ил)метилі|-5-метил-1Н-піразол-4-іл)-6-І8-(Ф1,3)гіазоло|5,4-б|піридин-2-ілкарбамоїл)-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|Іпіридин-2-карбонова кислота
Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 1.22.4 речовиною із прикладу 1.2.8 в прикладі 1.2.9. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-йв) б ррт 13,00 (5, 1Н), 8,52 (аа, 2Н), 8,33 (Біг 5, 2Н), 8,16 (аа, 1Н), 7,62 (т, 1Н), 7,53 (т, 2Н), 7,45 (а, 1Н), 7,38 (т, 1Н), 7,29 (5, 1Н), 6,98 (а, 1Н), 4,96 (5, 2Н), 3,88 (т, 2Н), 3,83 (5, 2Н), 3,54 (т, 2Н), 3,22 (т, 2Н), 3,10 (т, 2Н), 3,02 (І, 2Н), 2,80 (ї, 2Н), 2,11 (5, ЗН), 1,41 (5, 2Н), 1,28 (т, 4Н), 1,14 (т, 4Н), 1,02 (т, 2Н), 0,86 (в, 6Н). М5 (ЕБІ) т/е 855,2 (М.Н). 123 Синтез 3-1-((3,5-диметил-7-2-(2-сульфоетил)аміно|етокси)трицикло|3.3.1.127|)дец-1- ил)метилі|-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)-6-І8-(11,9|гіазоло|4,5-б|піридин-2-ілкарбамоїл)-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|Іпіридин-2-карбонової кислоти (сполуки М/2.23) 123.1. трет-Бутил-3-(1-((3-(2-азидоетокси)-5,7-диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н- піразол-4-іл)-6-(8-(тіазоло|4,5-б|піридин-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл)піколінат
Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни тіазоло|4,5-б|піридин-2-аміну на тіазоло|5,4-б|Іпіридин-2-амін в прикладі 1.22.1. М5 (Е5І) т/е 855,2 (М.Н). 123.2. трет-Бутил-3-(1-(3-(2-аміноетокси)-5,7-диметиладамантан-1-іл)уметил)-5-метил-1 Н- піразол-4-іл)-6-(8-(тіазоло|4,5-б|піридин-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл)піколінат
Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 1.23.1 речовиною із прикладу 1.2.6 в прикладі 1.2.7. М5 (ЕБ5І) т/е 803,2 (М.Н). 1.23.3 трет-Бутил-3-(1-(3,5-диметил-7-|((2,2,7,7-тетраметил-10,10-діоксидо-3,3-дифеніл-4,9- діокса-10А6-тіа-13-аза-3-силапентадекан-15-іл)окси|грициклоЇ3.3.1.12Л)дец-1-ил)метил)-5-метил- 1Н-піразол-4-іл|-6-І8-«Ф1,3)гіазоло|4,5-б|Іпіридин-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)- іл|Іпіридин-2-карбоксилат
Зо Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 1.23.2 речовиною із прикладу 1.22.2 в прикладі 1.22.3. М5 (ЕІ) т/е 12492 (МАН). 1.23.4 3-1-(3,5-Диметил-7-(2-(2-сульфоетил)аміно|етоксиутрициклоїЇ3.3.1.157)дец-1- ил)метилі|-5-метил-1Н-піразол-4-іл)-6-І8-(Ф1,3)гіазоло|4,5-б|піридин-2-ілкарбамоїл)-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|Іпіридин-2-карбонова кислота
Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 1.23.3 речовиною із прикладу 1.2.8 в прикладі 1.2.9. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-йв) б ррт 13,20 (рі 5, 1Н), 8,61 (аа, 1Н), 8,56 (аа, 1Н), 8,33 (рег 5, 2Н), 7,56 (а, 1Н) 7,52 (а, 1Н), 7,46 (а, тн), 7,39 (т, 2Н), 7,29 (5, 1Н), 6,98 (а, 1Н), 4,98 (5, 2Н), 3,88 (т, 2Н), 3,83 (5, 2Н), 3,54 (т, 2Н), 3,22 (т, 2Н), 3,10 (т, 2Н), 3,02 (І, 2Н), 2,80 (ї, 2Н), 2,10 (5, ЗН), 1,41 (5, 2Н), 1,30 (т, 4Н), 1,12 (т, 4Н), 1,02 (т, 2Н), 0,86 (в, 6Н). М5 (ЕБІ) т/е 855,1 (М.Н). 1.24 Синтез 6-(1-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-1,2,3,4-тетрагідрохінолін-7-іл|-3-11-(3,5- диметил-7-2-(2-сульфоетил)аміно|етокси)трицикло!|3.3.1.127)дец-1-ил)метил|-5-метил-1 Н- піразол-4-іліпіридин-2-карбонової кислоти (сполуки М/2.24) 1.24.1 трет-Бутил-6-11-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-1,2,3,4-тетрагідрохінолін- 7-іл|-3-(1- (3,5-диметил-7-(2,2,7,7-тетраметил-10,10-діоксидо-3,3-дифеніл-4,9-діокса-1 0Хб-тіа-13-аза-3- силапентадекан-15-іл)окси|Їгрицикло/3.3.1.157)дец-1-ил)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл|піридин- 2-карбоксилат
Вказану в заголовку сполуку одержували, як описано в прикладі 1.2.8, шляхом заміни речовини із прикладу 1.2.7 речовиною із прикладу 1.20.9. 124.2. 6-(1-(1,3-Бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-1,2,3,4-тетрагідрохінолін-7-іл|-3-11-(3,5-диметил- 7--2-(2-сульфоетил)аміно|етоксиутрицикло!|3.3.1.197|дец-1-ил)метилі|-5-метил-1 Н-піразол-4- іл)піридин-2-карбонова кислота
Вказану в заголовку сполуку одержували, як описано в прикладі 1.2.9, шляхом заміни речовини із прикладу 1.2.8 речовиною із прикладу 1.24.1. "Н ЯМР (500 МгГу, диметилсульфоксид-сав) б ррт 8,26-8,46 (т, ЗН), 8,02 (а, 1Н), 7,89 (а, 1Н), 7,82 (а, 1), 7,75-7,79 (т, 1Н), 7,47 (5, 2Н), 7,37 (І, 1Н), 7,30 (9, 1Н), 7,22 (ї, 1Н), 3,96 (5, 2Н), 3,90 (в, 2Н), 3,54-3,61 (т, 2Н), 3,18-3,29 (т, 2Н), 3,07-3,15 (т, 2Н), 2,78-2,92 (т, 4Н), 2,23 (5, ЗН), 1,87-2,02 (т, 2Н), 1,44 (5, 2Н), 1,32 (а, 4Н), 1,12-1,25 (т, 4Н), 1,00-1,11 (т, 2Н), 0,88 (5, 6Н). М5 (ЕІ) т/е 854,0 (Ма-Н)». 1.25 Синтез 6-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-3-11-(3-12-К(2- (510) карбоксиетил)аміно|етокси)-5,7-диметилтрицикло!/3.3.1.127|дец-1-ил)метил|-5-метил-1 Н-піразол-
4-іл/піридин-2-карбонової кислоти (М/2.25) 1.25.1 трет-Бутил-6-(8-(бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл)-3-(1-((3- (2-(3-(трет-бутокси)-3-оксопропіл)аміно)етокси)-5,7-диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н- піразол-4-іл)піколінат
Указану в заголовку сполуку одержували, як описано в прикладі 1.12.1, шляхом заміни діетилвінілфосфонату трет-бутилакрилатом. М5 (АРСІ) т/е 930,6 (МАН). 125.2 6-(8-(1,3-Бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-3-11-((3-12-К2- карбоксиетил)аміно|етокси)-5,7-диметилтрициклої3.3.1.127|дец-1-ил)метил|-5-метил-1 Н-піразол- 4-ілупіридин-2-карбонова кислота
Вказану в заголовку сполуку одержували, як описано в прикладі 1.6.2, шляхом заміни речовини із прикладу 1.6.1 речовиною із прикладу 1.25.1. "Н ЯМР (400 МГуц, диметилсульфоксид-ав) б ррт 8,03 (а, 1), 7,78 (а, 1Н), 7,61 (а, 1Н), 7,39-7,50 (т, 2Н), 7,32-7,38 (т, ЗН), 7,23 (5, 1Н), 6,73 (9, 1Н), 4,88 (5, 2Н), 3,88 (І, 2Н), 3,79 (5, 2Н), 2,99 (ї, 2Н), 2,86-2,93 (т, 2Н), 2,50-2,58 (т, 2Н), 2,08 (5, ЗН), 1,35 (9, 2Н), 1,01-1,30 (т, ТОН), 0,86 (в, 6Н). М5 (АРСІ) т/е 819,0 (МАН). 1.26 Синтез 6-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-71-(3,5- диметил-7-(2-|(3З-фосфонопропіл) (піперидин-4-іл)аміно|етокси)трицикло/3.3.1.137)дец-1- ил)метилі|-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)іпіридин-2-карбонової кислоти (сполуки М/2.26) 1.26.1 трет-Бутил-6-(8-(бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл)-3-(1- ((17,3г)-3-(2-(1-(трет-бутоксикарбоніл)піперидин-4-іл)аміно)етокси)-5,7-диметиладамантан- 1- ілуметил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)піколінат
Розчин речовини із прикладу 1.2.7 (0,020 г), трет-бутил-4-оксопіперидин-1-карбоксилату (4,79 мг) й триацетоксиборогідриду натрію (7 мг) перемішували у дихлорметані (0,5 мл) за кімнатної температури. Реакційну суміш перемішували протягом ночі та очищували без обробки за допомогою хроматографії на силікагелі з елююванням від 0 до 1095 метанолу в дихлорметані, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕІ 50) т/е 985,4 (МАН). 1.26.2. 6-І(8-(1,3-Бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1 Н)-іл|-3-11-(3,5-диметил- 7-(2-І(З-фосфонопропіл) (піперидин-4-іл)аміно|етоксиутрицикло!|3.3.1.12)дец-1-ил)метил|-5- метил-1Н-піразол-4-ілупіридин-2-карбонова кислота
Зо Розчин речовини із прикладу 1.26.1 (0,108 г), речовини із прикладу 1.14.2 (0,030 г) й триацетоксиборогідриду натрію (0,035 г) у дихлорметані (1 мл) перемішували за кімнатної температури протягом 1 години. У реакційну суміш додавали трифтороцтову кислоту (1 мл) та продовжували перемішування протягом ночі. Реакційну суміш концентрували, розчиняли в М,М- диметилформаміді (2 мл) й воді (0,5 мл) та очищували за допомогою НРІ С з оберненою фазою із застосуванням системи с1іЇ5зоп, з елююванням від 10 до 7595 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./06. трифтороцтової кислоти. Необхідні фракції об'єднували й висушували сублімацією з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-йв) б ррт 8,83 (5, 1Н), 8,50 (5, 1Н), 8,04 (а, 2Н), 7,80 (а, 2Н), 7,63 (9, 2Н), 7,56-7,42 (т, 5Н), 7,37 (Н, ЗН), 7,30 (5, 1Н), 6,96 (а, 1Н), 4,96 (в, 2Н), 3,89 (її, 2Н), 3,44 (а, 6Н), 3,31-3,16 (т, 6Н), 3,09-2,98 (т, 2Н), 2,98-2,85 (т, 1Н), 2,18 (а, 2Н), 2,10 (5, ЗН), 2,00-1,74 (т, 4Н), 1,71-1,57 (т, 2Н), 1,51-0,97 (т, 12Н), 0,87 (5, 6Н). М5 (ЕБІ) т/е 951,2 (М.Н). 1.27 Синтез 3-11-(3--2-(ЮО-альфа-аспартил(метил)аміно|етокси)-5,7- диметилтрицикло!Ї3.3.1.157|дец-1-ил)метил|-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)-6-І8-(1,3-бензотіазол-2- ілкарбамоїл)-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1Н)-іл|Іпіридин-2-карбонової кислоти (сполуки М/2.27) 1.27. трет-Бутил-6-(8-(бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл)-3-(1- ((3,5-диметил-7-(2-(метиламіно)етокси)адамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)піколінат
Вказану в заголовку сполуку одержували, як описано в прикладі 1.11.1, шляхом заміни речовини із прикладу 1.10.9 речовиною із прикладу 1.13.6. 1.27.2 3-11-К(3-2-(ІО-альфа-Аспартил(метил)аміно|етокси)-5,7- диметилтрициклоїЇ3.3.1.157)дец-1-ил)метилі|-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)-6-(8-(1,3-бензотіазол-2- ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|Іпіридин-2-карбонова кислота
Розчин речовини із прикладу 1.27.1 (0,074 г), 2-(ЗН-0П1,2,3|)триазолої|4,5-5|піридин-З-іл)- 1,1,3,3-тетраметилізоуронію гексафторфосфата(м) (0,038 г), М,М-діїізопропілетиламіну (0,048 мл) й (К)-4-(трет-бутокси)-2-(трет-бутоксикарбоніл)аміно)-4-оксобутанової кислоти (0,029 г) у дихлорметані (1 мл) перемішували протягом 2 годин. Додавали трифтороцтову кислоту (0,5 мл) та продовжували перемішування протягом ночі. Реакційну суміш концентрували, розчиняли в М,М-диметилформаміді (1,5 мл) й воді (0,5 мл) та очищували за допомогою НРІ С з оберненою фазою із застосуванням системи сіїзоп, з елююванням від 10 до 7595 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./06. трифтороцтової кислоти. Необхідні фракції бо об'єднували й висушували сублімацією з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР
(500 МГц, диметилсульфоксид-ав) б ррт 12,88 (5, 1Н), 8,16 (5, ЗН), 8,04 (й, 1Н), 7,80 (а, 1Н), 7,62 (а, 1), 7,55-7,42 (т, ЗН), 7,41-7,33 (т, 2Н), 7,33-7,27 (т, 1Н), 6,96 (й, 1Н), 4,96 (5, 2Н), 4,63-4,49 (т, 1Н), 3,89 (І, 2Н), 3,82 (5, 2Н), 3,61-3,37 (т, 4Н), 3,10-2,97 (т, 4Н), 2,89-2,73 (т, 2Н), 2,67-2,52 (т, 1Н), 2,10 (5, ЗН), 1,45-0,95 (т, 12Н), 0,85 (5, 6Н). М5 (ЕБІ) т/е 875,3 (М.Н). 1.28 Синтез 6-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-3-(1-413-(2-(11- (карбоксиметил)піперидин-4-ілІаміно)етокси)-5,7-диметилтрицикло|3.3.1.127|дец-1-ил|метил)-5- метил-1Н-піразол-4-іл)піридин-2-карбонової кислоти (сполуки М/2.28)
Розчин речовини із прикладу 1.2.7 (0,055 г), трет-бутил-2-(4-оксопіперидин-1-іл)ацетату (0,014 г) й триацетоксиборогідриду натрію (0,019 г) перемішували у дихлорметані (0,5 мл) за кімнатної температури. Після перемішування протягом 2 годин у реакційну суміш додавали трифтороцтову кислоту (0,5 мл) та перемішування продовжували протягом ночі. Реакційну суміш концентрували, розчиняли в М,М-диметилформаміді (1,5 мл) й воді (0,5 мл) та очищували за допомогою НРІ С з оберненою фазою із застосуванням системи оіЇзоп, з елююванням від 10 до 8095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./о06. трифтороцтової кислоти. Необхідні фракції об'єднували й висушували сублімацією з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (501 МГц, диметилсульфоксид-ав) б ррт 12,85 (5, 1Н), 8,80 (5, 2Н), 8,03 (й, 1Н), 7,80 (а, 1Н), 7,62 (9, 1Н), 7,55-7,41 (т, ЗН), 7,36 (д, 2Н), 7,29 (5, 1Н), 6,96 (9, 1Н), 4,96 (5, 2Н), 4,07 (5, 2Н), 3,89 (ї, 2Н), 3,83 (5, 2Н), 3,66-3,55 (т, 4Н), 3,30 (5, 1Н), 3,08 (5, 4Н), 3,02 (ї, 2Н), 2,22 (а, 2Н), 2,10 (5, ЗН), 1,97-1,78 (т, 2Н), 1,44 (в, 2Н), 1,31 (9, 4Н), 1,20-0,96 (т, 6Н), 0,87 (5, 6Н). М5 (Е5І) т/е 887,3 (МАН). 1.29 Синтез М-К55)-5-аміно-6-Ц2-(13-((4-(6-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)метилі/д-5,7- диметилтрицикло!Ї3.3.1.157)дец-1-ил)окси)етил|(метил)аміно)-6-оксогексил|-М, М- диметилметанамінію (сполуки М/2.29)
Розчин /Етос-М-є-(триметил)-І-лізину гідрохлориду (0,032 г), 2-(ЗН-П,2,3)|гриазолої|4,5-
Б|піридин-3-іл)-1,1,3,3-тетраметилізоуронію гексафторфосфату(м) (0,028 г) Й М,М- дііззопропілетиламіну (0,034 мл) в М,М-диметилформаміді (0,5 мл) перемішували протягом 5 хвилин. Реакційну суміш додавали до речовини із прикладу 1.13.7 (0,050 г) та перемішування продовжували за кімнатної температури протягом ночі. У реакційну суміш додавали діетиламін
Зо (0,069 мл) та продовжували перемішування протягом додаткових 2 годин. Реакційну суміш розбавляли М,М-диметилформамідом (1 мл), водою (0,5 мл) й трифтороцтовою кислотою (0,101 мл). Суміш очищували за допомогою НРІС з оберненою фазою із застосуванням системи біїбоп, з елююванням від 10 до 9095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./о06. трифтороцтової кислоти. Необхідні фракції об'єднували й висушували сублімацією з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (500 МГц, диметилсульфоксид-дв) б ррт 12,87 (5, 1Н), 8,13 (5, ЗН), 8,04 (а, 1Н), 7,60 (а, 1), 7,62 (а, 1), 7,54-7,42 (т, ЗН), 7,42-7,34 (т, 2Н), 7,29 (5, 1Н), 6,96 (й, 1Н), 4,96 (в, 2Н), 4,42-4,24 (т, 1Н), 3,89 (ї, 2Н), 3,82 (5, 2Н), 3,29-3,16 (т, 2Н), 3,08-3,00 (т, 15Н), 2,87 (5, 2Н), 2,10 (5, ЗН), 1,84-1,60 (т, 4Н), 1,42-0,97 (т, 15Н), 0,85 (5, 6Н). М5 (ЕБІ) т/е 930,3 (М.Н). 1.30 Синтез 6-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-71-(3,5- диметил-7-(2-Іпіперидин-4-іл-(2-сульфоетил)аміно|етокси)трицикло!|3.3.1.127|дец-1-ил)метилі/|-5- метил-1Н-піразол-4-іліпіридин-2-карбонової кислоти (сполуки М/2.30) 1.30.1 трет-Бутил-6-І(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-(1-(3-
Ц13-П1-(трет-бутоксикарбоніл)піперидин-4-ілІ|-2,2,7,7-тетраметил-10,10-діоксидо-3,3-дифеніл- 4,9-діокса-10А6-тіа-13-аза-3-силапентадекан-15-іліокси)-5,7-диметилтрициклої|3.3.1.157)дец-1- ил|метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)піридин-2-карбоксилат
Розчин речовини із прикладу 1.2.8 (0,111 г), трет-бутил-4-оксопіперидин-1-карбоксилату (0,021 г) й триацетоксиборогідриду натрію (0,028 г) в дихлорметані (1 мл) перемішували за кімнатної температури протягом 1 години. Додавали оцтову кислоту (7,63 мкл) та продовжували перемішування протягом ночі. У реакційну суміш додавали додаткову кількість трет-бутил-4- оксопіперидин-1-карбоксилату (0,021 г), триацетоксиборогідриду натрію (0,028 г) й оцтової кислоти (8 мкл) та продовжували перемішування протягом додаткових 4 годин. Реакційну суміш завантажували безпосередньо на силікагель та застосовували градієнт елюювання від 0,5 до 495 метанолу в дихлорметані, з одержанням указаної в заголовку сполуки. 1.30.2. 6-(8-(1,3-Бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1 Н)-іл|-3-11-(3,5-диметил- 7-2-Іпіперидин-4-іл-(2-сульфоетил)аміно|етоксиутрициклоїЇ3.3.1.157)дец-1-ил)метил|-5-метил-1 Н- піразол-4-іл)упіридин-2-карбонова кислота
У розчин речовини із прикладу 1.30.1 (0,078г) у дихлорметані (1 мл) додавали трифтороцтову кислоту (0,5 мл) та перемішували реакційну суміш за кімнатної температури бо протягом ночі. Реакційну суміш концентрували та розчиняли в М,М-диметилформаміді (1,5 мл) й воді (0,5 мл). Суміш очищували за допомогою НРІС з оберненою фазою із застосуванням системи біїбоп, з елююванням від 10 до 7595 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./о0б. трифтороцтової кислоти. Необхідні фракції об'єднували й висушували сублімацією з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-сйв) б ррт 12,89 (5, 1Н), 9,91 (в, 1Н), 8,75 (а, 1Н), 8,36-8,19 (т, 1Н), 8,08 (9, 1Н), 7,84 (а, 1Н), 7,66 (а, 1), 7,58 (а, 1), 7,55-7,45 (т, 2Н), 7,40 (19, 2Н), 7,34 (5, 1Н), 6,99 (а, 1Н), 5,00 (5, 2Н), 3,93 (ї, 2Н), 3,87 (5, 2Н), 3,49 (9, 6Н), 3,39-3,91 (т, 2Н), 3,01 (т, 6Н), 2,15 (5, 6Н), 1,94 (5, 2Н), 1,58-0,99 (т, 12Н), 0,91 (5, 6Н). М5 (ЕБІ) т/е 937,3 (М.Н). 1.31 Синтез 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-5-(3-фосфонопропокси )-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-(1-((3,5-диметил-7-(2-(метиламіно)етокси|грицикло!/3.3.1.13Л)дец-1- ил)метил)-5-метил-1Н-піразол-4-іл|піридин-2-карбонової кислоти (сполуки М/2.31) 1.31.1 трет-Бутил-8-бром-5-гідрокси-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1Н)-карбоксилат
У розчин трет-бутил-5-гідрокси-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-карбоксилату (9г) в М,М- диметилформаміді (150 мл) додавали М-бромсукцинімід (6,43 г). Суміш перемішували протягом ночі й гасили водою (200 мл). Суміш розбавляли етилацетатом (500 мл), промивали водою й сольовим розчином та висушували над сульфатом натрію. Після випарювання розчинника одержували вказану в заголовку сполуку, яку застосовували в наступній реакції без додаткового очищення. М5(Е5І) т/е 329,2 (МАН). 1.31.2 трет-Бутил-5-(бензилокси)-8-бром-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-карбоксилат
У розчин речовини із прикладу 1.31.1 (11,8 г) в ацетоні (200 мл) додавали бензилбромід (7,42 г) і К»СОз (5 г) та перемішували суміш зі зворотним холодильником протягом ночі. Суміш концентрували та розподіляли залишок між етилацетатом (600 мл) і водою (200 мл). Органічний шар промивали водою та сольовим розчином, висушували над сульфатом натрію, фільтрували та концентрували. Залишок очищували за допомогою хроматографії на силікагелі, з елююванням 1095 етилацетатом у гептані, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (Е5І) т/е 418,1 (МАН). 1.31.3 2-трет-Бутил-8-метил-5-(бензилокси)-3,4-дигідроізохінолін-2,8(1 Н)-дикарбоксилат
Додавали метанол (100 мл) і триетиламін (9,15 мл) до речовини із прикладу 1.31.2 (10,8 г) й
П,1-бісідифенілфосфіно)фероцені|дихлорпаладіюці!) (0,48 г) в 500 мл реактор високого тиску з
Зо нержавіючої сталі. Посудину декілька разів барботували аргоном. У реакторі підвищували тиск за допомогою монооксиду вуглецю та здійснювали перемішування протягом 2 годин при 1007С за тиску монооксиду вуглецю 60 фунтів/кв. дойм. Після охолодження неочищену реакційну суміш концентрували під вакуумом. Залишок додавали в етилацетат (500 мл) і воду (200 мл).
Органічний шар додатково промивали водою та сольовим розчином, висушували над сульфатом натрію, фільтрували та концентрували. Залишок очищували за допомогою хроматографії на силікагелі, з елююванням від 10 до 2095 етилацетату у гептані, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕІ) т/е 398,1 (Ма-Н)». 1.31.4 Метил-5-(бензилокси)-1,2,3,4-тетрагідроізохінолін-8-карбоксилату гідрохлорид
У розчин речовини із прикладу 1.31.3 (3,78 г) в тетрагідрофурані (20 мл) додавали 4 н. НСІ в 1,4-діоксані (20 мл) і суміш перемішували протягом ночі. Суміш концентрували під вакуумом з одержанням указаної в заголовку сполуки, яку застосовували в наступній реакції без додаткового очищення. М5(Е5І) т/е 298,1 (МАН). 1.31.5 Метил-5-(бензилокси)-2-(5-бром-6-(трет-бутоксикарбоніл)піридин-2-іл)-1,2,3,4- тетрагідроізохінолін-8-карбоксилат
У розчин речовини із прикладу 1.31.4 (3,03 г) в диметилсульфоксиді (50 мл) додавали речовину із прикладу 1.1.10 (2,52 г) й триетиламін (3,8 мл) та суміш перемішували при 60"С протягом ночі в атмосфері азоту. Реакційну суміш розбавляли етилацетатом (500 мл), промивали водою та сольовим розчином, висушували над сульфатом натрію, фільтрували та концентрували. Залишок очищували за допомогою хроматографії на силікагелі, з елююванням 2090 етилацетатом у гептані, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (Е5І) т/е 553,1 (МАН). 1.31.6. трет-Бутил-(2-((3,5-диметил-7-((5-метил-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-діоксаборолан-2- іл)-1Н-піразол-1-іл)уметил)адамантан-1-іл)уокси)етил)(метил)карбамат
У розчин речовини із прикладу 1.13.3 (2,6 г) Й І1,1- бісідифенілфосфіно)фероцен|дихлорпаладію(Ії) дихлорметану (190 мг) в ацетонітрилі (30 мл) додавали триетиламін (2,0 мл) і пінаколборан (1,4 мл) та перемішували суміш зі зворотним холодильником протягом ночі. Суміш застосовували безпосередньо в наступній реакції без обробки. М5 (ЕІ) т/е 558,4 (МАН)». 1.31.7 Метил-5-(бензилокси)-2-(6-(трет-бутоксикарбоніл)-5-(1-((3-(2-(трет- бо бутоксикарбоніл)(метил)аміно)етокси)-5, 7-диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-
іл)упіридин-2-іл)-1,2,3,4-тетрагідроізохінолін-8-карбоксилат
У розчин речовини із прикладу 1.31.5 (2,58 г) в тетрагідрофурані (40 мл) й воді (20 мл) додавали речовину із прикладу 1.31.6 (2,66 г), 1,3,5,7-тетраметил-б6-феніл-2,4,8-триокса-6- фосфоадамантан (341 мг), трис(ідибензиліденацетон)дипаладій(0) (214 мг) і КзРОх (4,95 г) та перемішували суміш зі зворотним холодильником протягом 4 годин. Суміш розбавляли етилацетатом (500 мл), промивали водою та сольовим розчином, висушували над сульфатом натрію, фільтрували та концентрували. Залишок очищували за допомогою хроматографії на силікагелі, з елююванням 2095 етилацетатом у дихлорметані, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕІ) т/е 904,5 (МАН). 1.31.6 Метил-2-(6-(трет-бутоксикарбоніл)-5-(1-((3-(2-(трет- бутоксикарбоніл)(метил)аміно)етокси)-5, 7-диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4- іл)упіридин-2-іл)-5-гідрокси-1,2,3,4-тетрагідроіїзохінолін-8-карбоксилат
Додавали речовину із прикладу 1.31.7 (3,0 г) в тетрагідрофурані (60 мл) до РЯ(ОН)» (0,6 г,
Оедизза ЖЕ1О1МЕЛЛУ, 2095 на вуглеці, вміст води 4995) в посудині із нержавіючої сталі для роботи під тиском об'ємом 250 мл. Суміш струшували протягом 16 годин за тиску водню
ЗО фунтів/кв. дойм при 50"С. Суміш фільтрували через нейлонову мембрану й випарювали розчинник під вакуумом з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕБІ) т/е 815,1(МАН)». 1.31.9 Метил-2-(6-(трет-бутоксикарбоніл)-5-(1-((3-(2-(трет- бутоксикарбоніл)(метил)аміно)етокси)-5, 7-диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4- іл)упіридин-2-іл)-5-(3-(ди-трет-бутоксифосфорил)пропокси)-1,2,3,4-тетрагідроізохінолін-8- карбоксилат
У розчин речовини із прикладу 1.31.8 (163 мг) в тетрагідрофурані (10 мл) додавали речовину із прикладу 1.14.1 (50,5 мг), трифенілфосфін (52,5 мг) і ди-трет- бутилазодикарбоксилат (46,2 мг) та перемішували суміш протягом З годин. Суміш розбавляли етилацетатом (200 мл), промивали водою та сольовим розчином, висушували над сульфатом натрію, фільтрували та концентрували. Залишок очищували за допомогою хроматографії на силікагелі, з елююванням 2095 етилацетатом в гептанах, потім 595 метанолом у дихлорметані, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (Е5І) т/е 1049,2 (МАН). 131.10. 2-(6-(трет-Бутоксикарбоніл)-5-(1-((3-(2-(трет-бутоксикарбоніл)(метил)аміно)етокси)-
Зо 5,7-диметиладамантан-1-іл)уметил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)піридин-2-іл)-5-(3-(ди-трет- бутоксифосфорил)пропокси)-1,2,3,4-тетрагідроізохінолін-8-карбонова кислота
У розчин речовини із прикладу 1.31.9 (З г) в тетрагідрофурані (20 мл), метанолі (10 мл) й воді (10 мл) додавали моногідрат гідроксиду літію (30 мг) та перемішували суміш за кімнатної температури протягом 24 годин. Реакційну суміш нейтралізували 295 водним розчином НеСІ і концентрували під вакуумом. Залишок розбавляли етилацетатом (800 мл), промивали водою й сольовим розчином та висушували над сульфатом натрію. Після фільтрування й випарювання розчинника одержували вказану в заголовку сполуку. М5 (Е5І) т/е 10345 (МАН) ». 1.31.11 6-(8-(1,3-Бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-5-(3-фосфонопропокси)-3,4-дигідроізохінолін- 2(1Н)-ілІ-3-11-(3,5-диметил-7-(2-(метиламіно)етокси|грицикло!Ї3.3.1.12|дец-1-илуметил)-5- метил-1Н-піразол-4-іл|Іпіридин-2-карбонова кислота
У розчин речовини із прикладу 1.31.10 (207 мг) в М,М-диметилформаміді (4 мл) додавали бензо|д|гіазол-2-амін (45,1 мг, 0,3 ммоль), фтор-М,М,М',М'-тетраметилформамідинію гексафторфосфат (79 мг) і М.М-діззопропілетиламін (150 мг) та перемішували суміш при 60"С протягом З годин. Реакційну суміш розбавляли етилацетатом (200 мл), промивали водою та сольовим розчином, висушували над сульфатом натрію, фільтрували та концентрували.
Залишок очищували за допомогою хроматографії на силікагелі, з елююванням 2090 етилацетатом у гептані, потім 596 метанолом у дихлорметані. Після концентрування матеріал розчиняли в суміші дихлорметану й трифтороцтової кислоти (1:1, б мл) та забезпечували осадження одержаного за кімнатної температури протягом ночі. Розчинник випарювали і залишок розчиняли в диметилсульфоксиді/метанолі (1:1, 9 мл). Суміш очищували за допомогою
НРІС з оберненою фазою із застосуванням системи сіїбоп, з елююванням від 10 до 8595 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./об. трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (501 МГц, диметилсульфоксид-йвє) б ррт 8,27 (5, 2Н), 8,02 (й, 1Н), 7,76 (аа, 2Н), 7,43-7,56 (т, 2Н), 7,32-7,37 (т, 1Н), 7,29 (5, 1Н), 7,00 (ад, 2Н), 5,02 (5, 2Н), 4,15 (ї,
ОН), 3,88-3,93 (т, 2Н), 3,83 (5, ЗН), 3,50-3,59 (т, 4Н), 2,95-3,08 (т, 2Н), 2,78-2,87 (т, 2Н), 2,51- 2,55 (т, ЗН), 2,11 (5, ЗН), 1,90-2,01 (т, 2Н), 1,65-1,75 (т, 2Н), 1,41 (5, 2Н), 1,22-1,36 (т, 6Н), 0,98- 1,18 (т, 6Н), 0,87 (5, 6Н). М5 (ЕБІ) т/е 898,2 (М.Н). 1.32 Синтез 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-(1-(13-(2-
ЦМ-(2-карбоксиетил)-І -альфа-аспартилі|аміно)етокси)-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.157|дец-1- бо ил|метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)піридин-2-карбонової кислоти (сполуки М/2.32)
1.32.1 трет-Бутил-6-(8-(бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл)-3-(1-((3- (2-((5)-4-(трет-бутокси)-2-((трет-бутоксикарбоніл)аміно)-4-оксобутанамідо)етокси)-5,7- диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)піколінат
У холодний (02) розчин (5)-4-(трет-бутокси)-2-(трет-бутоксикарбоніл)аміно)-4- оксобутанові кислоти (136 мг) й О-(7-азабензотриазол-1-іл)-М,М,М',М'-тетраметилуронію гексафторфосфату (НАТО, 179мг) в М,М-диметилформаміді (З мл) додавали М,М- діізопропілетиламін (165 мкл). Реакційну суміш перемішували протягом 10 хвилин та додавали речовину із прикладу 1.2.7 (252 мг) в М,М-диметилформаміді (1 мл). Суміш перемішували за кімнатної температури протягом 1,5 години та очищували за допомогою хроматографії з оберненою фазою (колонка С18), з елююванням від 50 до 10095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./06. трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки. 1.32.2 3-(1-((3-(2-((5)-2-Аміно-3-карбоксипропанамідо)етокси)-5,7-диметиладамантан- 1- ілуметил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)-6-(8-(бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін- 2(1Н)-іл)піколінова кислота
Речовину із прикладу 1.32.1 (100 мг) у дихлорметані (3 мл) обробляли трифтороцтовою кислотою (2,5 мл) протягом ночі. Реакційну суміш концентрували з одержанням указаної в заголовку сполуки. 1.32.3 6-(8-(Бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл)-3-(1-((3-(2-((5)-2-((3- (трет-бутокси)-3-оксопропіл)аміно)-3-карбоксипропанамідо)етокси)-5,7-диметиладамантан- 1- іл)уметил)-5-метил-1Н-піразол-4-іл)піколінова кислота
У суміш речовини із прикладу 1.32.2 (102 мг) й М,М-діізопропілетиламіну (0,21 мл) в М,М- диметилформаміді (1,5 мл) додавали трет-бутилакрилат (80 мг") і воду (1,5 мл). Суміш нагрівали при 509 протягом 24 годин та очищували за допомогою хроматографії з оберненою фазою (колонка С18), з елююванням від 20 до 6095 ацетонітрилу у воді, що містить 0,195 об./о6б. трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (АРСІ) т/е 989,1 (МАН). 1.32.4.. 6-І8-(1,3-Бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-3-(1-1г3-(2-М-(2- карбоксиетил)-І -альфа-аспартиліІаміно)етокси)-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.19Л)дец-1-ил|метил)у-
Б-метил-1Н-піразол-4-іл)піридин-2-карбонова кислота
Зо Вказану в заголовку сполуку одержували, як описано в прикладі 1.6.2, шляхом заміни речовини із прикладу 1.6.1 речовиною із прикладу 1.32.3. "НН ЯМР (400 МГу, диметилсульфоксид-авє) б ррт 12,86 (5, ЗН), 8,62-9,21 (т, 2Н), 8,52 (Ї, 1Н), 8,03 (4, 1), 7,79 (а, 1Н), 7,62 (а, 1Н), 7,42-7,53 (т, ЗН), 7,33-7,41 (т, 2Н), 7,29 (5, 1Н), 6,95 (й, 1Н), 4,96 (в, 2Н), 4,04- 4,19 (т, 1Н), 3,89 (ї, 2Н), 3,81 (5, 2Н), 3,32-3,41 (т, 2Н), 3,16-3,27 (т, 2Н), 3,10 (її, 2Н), 3,01 (ї, 2Н), 2,83 (а, 2Н), 2,66 (ї, 2Н), 2,10 (5, ЗН), 1,39 (5, 2Н), 1,20-1,32 (т, 4Н), 0,94-1,16 (т, 6Н), 0,85 (5, 6Н). М5 (ЕБІ) т/е 933,2 (М.--Н)». 1.33 Синтез 3-11-(3--2-К(2-аміноетил)-(2-сульфоетил)аміно|етокси)-5,7- диметилтрицикло!|3.3.1.12Л|дец-1-ил)метил|-5-метил-1Н-піразол-4-іл)-6-(8-(1,3-бензотіазол-2- ілкарбамоїл)-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1Н)-іл|Іпіридин-2-карбонової кислоти (сполуки М/2.33) 1.33.1 6-(8-(Бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл)-3-(1-((3-(2-(2-(трет- бутоксикарбоніл)аміно)етил)-(2-сульфоетил)аміно)етокси)-5,7-диметиладамантан-1-іл)метил)-5- метил-1Н-піразол-4-іл)піколінова кислота
У розчин речовини із прикладу 1.2.9 (188 мг), трет-бутил-(2-оксоетил)карбамату (70,1 мг) й
М,М-діїізопропілетиламіну (384 мкл) додавали триацетоксиборогідрид натрію (140 мг) та перемішували суміш протягом ночі Додавали МасмМВНз (13,83 мг) Одержану суміш перемішували протягом 1 години і додавали метанол (1 мл). Суміш перемішували протягом 10 хвилин, розбавляли етилацетатом і промивали сольовим розчином. Органічний шар висушували над сульфатом натрію, фільтрували та концентрували. Залишок очищували за допомогою хроматографії з оберненою фазою (колонка С18), з елююванням від 20 до 8095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./об. трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки. 1.33.2 3-11-(3-2-(2-Аміноетил)-(2-сульфоетил)аміно|етокси)-5, 7- диметилтрициклоїЇ3.3.1.157)дец-1-ил)метилі|-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)-6-(8-(1,3-бензотіазол-2- ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|Іпіридин-2-карбонова кислота
Вказану в заголовку сполуку одержували, як описано в прикладі 1.6.2, шляхом заміни речовини із прикладу 1.6.1 речовиною із прикладу 11.33.14. "Н ЯМР (400 МгГуц, диметилсульфоксид-авє) б ррт 12,85 (5, 1Н), 8,03 (0, 1Н), 7,87 (в, 2Н), 7,79 (а, 1Н), 7,62 (а, 1), 7,А1-7,56 (т, ЗН), 7,33-7,40 (т, 2Н), 7,29 (5, 1Н), 6,96 (а, 1Н), 4,96 (5, 2Н), 3,89 (ї, 2Н), 3,50 (5, 2Н), 3,29-3,40 (т, АН), 3,19 (5, 2Н), 3,01 (ї, 2Н), 2,94 (ї, 2Н), 2,11 (5, ЗН), 1,43 (5, 2Н), 1,25-1,37 (т, 60 АН), 0,98-1,19 (т, 6Н), 0,87 (5, 6Н). М5 (ЕБІ) т/е 897,2 (М.Н).
1.34 Синтез 6-(5-(2-аміноетокси)-8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін- 2(1Н)-іл|-3-11-(3,5-диметил-7-(2-(метиламіно)етокси|грицикло!/3.3.1.157|дец-1-ил)метил)-5- метил-1Н-піразол-4-іл|Іпіридин-2-карбонової кислоти (сполуки М/2.34) 1.34.1 Метил-5-(2-((бензилокси)карбоніл)аміно)етокси)-2-(6-(трет-бутоксикарбоніл)-5-(1-((3- (2-(трет-бутоксикарбоніл) метил)аміно)етокси)-5,7-диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н- піразол-4-іл)піридин-2-іл)-1,2,3,4-тетрагідроіїзохінолін-8-карбоксилат
У суміш речовини із прикладу 1.31.8 (500 мг), бензил-(2-гідроксиетил)карбамату (180 мг) й трифенілфосфіну (242 мг) в тетрагідрофурані (9 мл) додавали (Е)-ди-трет-бутилдіазен-1,2- дикарбоксилат (212 мг). Суміш перемішували протягом 2 годин, розбавляли етилацетатом та промивали водою й сольовим розчином. Органічний шар висушували над сульфатом натрію, фільтрували та концентрували. Залишок очищували за допомогою хроматографії на силікагелі, з елююванням від 50 до 8095 етилацетату в гептанах, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (АРСІ) т/е 991,1 (Ма-Н)». 1.34.2 5-(2-«(Бензилокси)карбоніл)аміно)етокси)-2-(6-(трет-бутоксикарбоніл)-5-(1-((3-(2- ((трет-бутоксикарбоніл)(метил)аміно)етокси)-5,7-диметиладамантан-1-ілуметил)-5-метил-1 Н- піразол-4-іл)піридин-2-іл)-1,2,3,4-тетрагідроіїзохінолін-8-карбонова кислота
У розчин речовини із прикладу 1.34.1 (480 мг) в тетрагідрофурані (10 мл) й метанолі (5 мл) додавали 1 М гідроксид літію (1,94 мл). Суміш нагрівали при 507С протягом ночі, охолоджували, підкислювали 1095 водним розчином НСІ до рН З і концентрували. Залишок очищували за допомогою хроматографії з оберненою фазою (колонка С18), з елююванням від 40 до 9995 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./об. трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕІ) т/е 977,4 (МАН). 1.34.3 трет-Бутил-6-(8-(бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-5-(2- ((бензилокси)карбоніл)аміно)етокси)-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1Н)-іл)-3-(1-((3-(2-(трет- бутоксикарбоніл)(метил)аміно)етокси)-5, 7-диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4- іл)піколінат
У суміш речовини із прикладу 1.34.2 (245 мг), бензо|дІгіазол-2-аміну (151 мг) й фтор-
М,М,М',М'-тетраметилформамідинію гексафторфосфату (ТЕРЕН) (132 мг) в М,М- диметилформаміді (З мл) додавали М,М-дізопропілетиламін (876 мкл). Реакційну суміш
Зо нагрівали при 657С протягом 24 годин, охолоджували, розбавляли етилацетатом і промивали водою та сольовим розчином. Органічний шар висушували над сульфатом натрію, фільтрували та концентрували. Залишок очищували за допомогою хроматографії на силікагелі, з елююванням від 0 до 8095 етилацетату в гептанах, з одержанням указаної в заголовку сполуки.
М5 (АРСІ) т/е 1109,5 (М--НУХ. 1.34.4.. 6-(5-(2-Аміноетокси)-8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-ілі|- 3-11-(3,5-диметил-7-(2-(метиламіно)етокси|грициклоїЇ3.3.1.157)дец-1-ил)метил)-5-метил-1 Н- піразол-4-іл|Іпіридин-2-карбонова кислота
Речовину із прикладу 1.34.3 (100 мг) у дихлорметані (0,5 мл) обробляли трифтороцтовою кислотою (10 мл) протягом ночі. Реакційну суміш концентрували та очищували за допомогою хроматографії з оберненою фазою (колонка С18), з елююванням від 20 до 6095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./06б. трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-ав) б ррт 12,75 (5, 2Н), 8,27 (5, 2Н), 7,89-8,09 (т, 4Н), 7,77 (в, 2Н), 7,44-7,53 (т, 2Н), 7,35 (І, 1Н), 7,29 (5, 1Н), 7,02 (а9, 2Н), 5,02 (5, 2Н), 4,27 (ї, 2Н), 3,87-3,97 (т, 2Н), 3,83 (5, 2Н), 3,50-3,58 (т, 2Н), 9,00 (5, 2Н), 2,88-2,96 (т, 2Н), 2,52-2,60 (т, 2Н), 2,10 (5, ЗН), 1,42 (5, 2Н), 1,23-1,36 (т, 4Н), 0,98-1,19 (т, 6Н), 0,87 (5, 6Н). М5 (ЕБІ) т/е 819,3 (МАН. 1.35 Синтез 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)нафталін-2-іл|-3-11-(3,5-диметил-7-(2-|(3- сульфопропіл)аміно|етокси)трицикло!3.3.1.127)дец-1-ил)метилі|-5-метил-1 Н-піразол-4-іліпіридин- 2-карбонової кислоти (сполуки М/2.35) 1.35.1 трет-Бутил-б-хлор-3-(1-((3,5-диметил-7-(2-оксоетокси)адамантан-1-іл)уметил)-5-метил- 1Н-піразол-4-іл)піколінат
У розчин оксалілхлориду (8 мл, 2,0 М у дихлорметані) в дихлорметані (20 мл) при -787С додавали краплями диметилсульфоксид (1 мл) у дихлорметані (10 мл) протягом 20 хвилин.
Розчин перемішували протягом 30 хвилин в атмосфері аргону і додавали речовину із прикладу 1.20.2 (3,68 г) у вигляді розчину в дихлорметані (30 мл) протягом 10 хвилин. Реакційну суміш перемішували при -787"С протягом додаткових 60 хвилин. Додавали триетиламін (2 мл) при -18"7С та перемішували реакційну суміш протягом 60 хвилин. Охолоджувальну баню видаляли і забезпечували нагрівання реакційної суміші до кімнатної температури протягом ночі. Додавали воду (60 мл). Водний шар підкислювали 195 водним розчином НСіІ та екстрагували 60 дихлорметаном. Об'єднані органічні шари промивали 195 водним розчином НСЇ, водним розчином МанНсо»з і сольовим розчином. Органічний шар висушували над сульфатом натрію і концентрували з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕБІ) т/е 527,9 (М.Н). 1.35.2 2,2,2-Трифтор-1-(п-толіл)/'етил-З-йодпропан-1-сульфонат
Вказану в заголовку сполуку одержували згідно процедури, викладеної в У. Огд. Спет., 2013, 78, 711-716. 1.35.3 2,2,2-Трифтор-1-(п-толіл)/'етил-3-амінопропан-1-сульфонат
Розчин речовини із прикладу 1.35.2 (2,0 г) в 7 н. аміаку в метанолі (20 мл) нагрівали до 807С за умов мікрохвильового випромінювання (Віоїаде Іпйіаог) протягом 45 хвилин. Суміш концентрували і залишок розчиняли в етилацетаті (300 мл). Органічний шар промивали водою та сольовим розчином, висушували над сульфатом натрію, фільтрували та концентрували з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (Е5І) т/е 312,23 (МА-Н)». 1.35.4 трет-Бутил-6б-хлор-3-(1-((3,5-диметил-7-(2-((3-(2,2,2-трифтор-1-(п- толіл)етокси)сульфоніл)пропіл)аміно)етокси)адамантан-1-іл)уметил)-5-метил-1 Н-піразол-4- іл)піколінат
У розчин речовини із прикладу 1.35.3 (1,96 г) в дихлоретані (30 мл) додавали речовину із прикладу 1.35.1 (3,33 г). Реакційну суміш перемішували за кімнатної температури протягом 1 години та додавали суспензію Мавна (1,2 г) в метанолі (8 мл). Суміш перемішували за кімнатної температури протягом З годин і розбавляли етилацетатом (300 мл). Органічний шар промивали 2 н. водним розчином Маон, водою та сольовим розчином, висушували над сульфатом натрію, фільтрували та концентрували. Залишок розчиняли в тетрагідрофурані (30 мл) й додавали ди- трет-бутилдикарбонат (2г) з подальшим додаванням каталітичної кількості /-4- диметиламінопіридину. Суміш перемішували за кімнатної температури протягом ночі. Суміш розбавляли етилацетатом (300 мл) і промивали водою та сольовим розчином. Органічний шар висушували над сульфатом натрію, фільтрували та концентрували з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕБ5І) т/е 924,42 (МАН) ». 1.35.5 7-(6-(трет-Бутоксикарбоніл)-5-(1-((3-(2-(трет-бутоксикарбоніл)-(3-(2,2,2-трифтор-1-(п- толіл)етокси)сульфоніл)пропіл)аміно)етокси)-5,7-диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н- піразол-4-іл)піридин-2-іл)-1-нафтойна кислота
У розчин метил-7-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-діоксаборолан-2-іл)-і-нафтоату (203 мг). в
Зо суміші 1,4-діоксану (10 мл) й води (5 мл) додавали речовину із прикладу 1.35.4 (600 мг), біс(трифенілфосфін)паладію(ії) дихлорид (45,6 мг) та фторид цезію (296 мг). Суміш нагрівали при 120"С за умов мікрохвильового випромінювання (Віоїаде Іпйіаг) протягом 30 хвилин, розбавляли етилацетатом (200 мл) і промивали водою та сольовим розчином. Органічний шар висушували над сульфатом натрію, фільтрували та концентрували. Залишок очищували за допомогою хроматографії на силікагел, з елююванням 2095 етилацетатом у гептані, з одержанням проміжної сполуки у вигляді естеру. Залишок розчиняли в суміші тетрагідрофурану (8 мл), метанолу (4 мл) й води (4 мл) та обробляли моногідратом гідроксиду літію (200 мг) протягом З годин. Реакційну суміш підкислювали 1 н. водним розчином НСІ до рН 4 та розбавляли етилацетатом (400 мл). Одержану суміш промивали водою та сольовим розчином.
Органічний шар висушували над сульфатом натрію, фільтрували та концентрували з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕІ) т/е 1060,24 (МАН). 1.35.6 6-І(8-(1,3-Бензотіазол-2-ілкарбамоїл)нафталін-2-іл|-3-11-(3,5-диметил-7-і2-|(3- сульфопропіл)аміно|етоксиутрицикло!ї3.3.1.13-Лдец-1-ил)метил|-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)іпіридин- 2-карбонова кислота
У розчин речовини із прикладу 1.35.5 (405 мг) у дихлорметані (10 мл) додавали бензо|Ч|гіазол-2-амін (57,4 мг), 1-етил-3-ІЗ-(диметиламіно)пропілікарбодіїміду гідрохлорид (146 мг) і 4-(диметиламіно)піридин (93 мг). Суміш перемішували за кімнатної температури протягом ночі, розбавляли етилацетатом (200 мл) і промивали водою та сольовим розчином.
Органічний шар висушували над сульфатом натрію, фільтрували та концентрували. Залишок розчиняли у дихлорметані (З мл) й обробляли трифтороцтовою кислотою (3 мл) протягом ночі.
Реакційну суміш концентрували й залишок очищували за допомогою НРІ С з оберненою фазою (система ОіЇ5оп), з градієнтом елюювання від 10 до 8595 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./об. трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (400 МГЦ, диметилсульфоксид-авє) б ррт 13,08 (5, 1Н), 9,00 (5, 1Н), 8,53 (5, 2Н), 8,36 (аа, 1Н), 8,26-8,13 (т, ЗН), 8,06 (ад, 1Н), 8,04-7,97 (т, 1Н), 7,94 (а, 1Н), 7,80 (а, 1), 7,69 (аа, 1Н), 7,51-7,43 (т, 2Н), 7,40-7,31 (т, 1Н), 7,19 (а, ОН), 3,88 (5, 2Н), 3,54 (І, 2Н), 3,16-2,91 (т, 4Н), 2,68-2,55 (т, 2Н), 2,29 (5, ОН), 2,22 (5, ЗН), 1,93 (р, 2Н), 1,43 (в, 2Н), 1,38-1,23 (т, 4Н), 1,10 (да, 6Н), 0,87 (5, 6Н). М5 (ЕБІ) т/е 863,2 (М-А-Н)». 1.36 Синтез 6-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-3-11-(3-12-К(2- бо карбоксиетил)(піперидин-4-іл)аміно|етокси)-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.157)дец-1-ил)метил|-5-
метил-1Н-піразол-4-іліпіридин-2-карбонової кислоти (сполуки М/2.36) 1.36.1 трет-Бутил-6-(8-(бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл)-3-(1- ((17,3г)-3-(2-((3-(трет-бутокси)-З-оксопропіл)-(1-(трет-бутоксикарбоніл)піперидин-4- іл)аміно)етокси)-5,7-диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)піколінат
Розчин речовини із прикладу 1.25.1 (0,086 г), трет-бутил-4-оксопіперидин-1-карбоксилату (0,037 г), триацетоксиборогідриду натрію (0,039 г) та оцтової кислоти (11 мкл) у дихлорметані (1 мл) перемішували за кімнатної температури. Після перемішування протягом ночі реакційну суміш завантажували на силікагель та застосовували градієнт елюювання від 0,5 до 590 метанолу в дихлорметані, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕІ 50) т/е 1113,5 (МАН. 1.36.2 6-(8-(1,3-Бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-3-11-((3-12-К2- карбоксиетил)(піперидин-4-ілламіно|етокси)-5,7-диметилтрициклої3.3.1.12|дец-1-ил)метил|-5- метил-1Н-піразол-4-ілупіридин-2-карбонова кислота
Розчин речовини із прикладу 1.36.1 (0,050) у дихлорметані (0,5 мл) обробляли трифтороцтовою кислотою (0,5 мл) та перемішували реакційну суміш протягом ночі. Реакційну суміш концентрували та розчиняли в диметилсульфоксиді й метанолі (1:1). Суміш очищували за допомогою НРІ С з оберненою фазою із застосуванням системи сіїзоп, з елююванням від 10 до 7595 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./о0б6. трифтороцтової кислоти. Необхідні фракції об'єднували й висушували сублімацією з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-йв) б ррт 12,84 (5, 1Н), 9,38 (5, 1Н), 8,78 (5, 1Н), 8,42 (5, 1Н), 8,03 (9, 1Н), 7,80 (а, 1), 7,63 (а, 1Н), 7,55-7,42 (т, ЗН), 7,41-7,33 (т, 2Н), 7,30 (в, 1Н), 6,96 (а, 1Н), 4,96 (5, 2Н), 3,89 (ї, 2Н), 3,83 (в, 2Н), 3,73-3,54 (т, ЗН), 3,53-3,34 (т, 4Н), 3,34-3,25 (т, 2Н), 3,02 (, 2Н), 2,99-2,85 (т, 2Н), 2,78 (ї, 2Н), 2,23-2,04 (т, 5Н), 1,92-1,76 (т, 2Н), 1,43 (5, 2Н), 1,39-1,23 (т, 4Н), 1,23-0,96 (т, 6Н), 0,87 (5, 6Н). М5 (Е5І) т/е 901,3 (М.-Н)». 1.37 Синтез 6-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-71-(3,5- диметил-7-(2-|(3З-сульфо-1І -аланіл)-(2-сульфоетил)аміно|етокси)грицикло!|3.3.1.15Ядец-1- ил)метилі|-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)іпіридин-2-карбонової кислоти (сполуки М/2.37)
Розчин (К)-2-((9Н-флуорен-9-ілуметокси)карбоніл)аміно)-3-сульфопропанової кислоти (0,011 г) Й 2-(ЗН-11,2,3)|)триазолої|4,5-Б|піридин-3-іл)-1,1,3,3-тетраметилізоуронію
Зо гексафторфосфату(м) (10,80 мг) в М,М-диметилформаміді (0,5 мл) перемішували протягом
Бхвилин. Даний розчин додавали до речовини із прикладу 1.2.9 (0,025г) й М,М- дііззопропілетиламіну (0,014 мл). Після перемішування протягом 2 годин у реакційну суміш додавали діетиламін (0,013 мл) і перемішування продовжували протягом додаткової 1 години.
Реакційну суміш розбавляли М,М-диметилформамідом і водою та гасили трифтороцтовою кислотою. Суміш очищували за допомогою НРІ С з оберненою фазою із застосуванням системи
Сібоп, з елююванням від 10 до 7595 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./06. трифтороцтової кислоти. Необхідні фракції об'єднували й висушували сублімацією з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-сйв) б ррт 12,84 (5, 1Н), 8,03 (аа, АН), 7,79 (а, 1Н), 7,62 (а, 1), 7,54 (да, 1Н), 7,51-7,А41 (т, 2Н), 7,36 (а, 2Н), 7,33 (5, 1Н), 6,98 (ай, 1Н), 4,96 (5, 2Н), 4,42 (да, 2Н), 3,89 (ї, 2Н), 3,83 (5, 2Н), 3,73 (ада, 2Н), 3,57- 3,38 (т, 2Н), 3,91 (аї, 1Н), 3,08 (аа, 1Н), 3,02 (, 2Н), 2,87 (Н. 1Н), 2,81-2,54 (т, 2Н), 2,10 (9, ЗН), 1,51-0,91 (т, 12Н), 0,85 (5, 6Н). М5 (Е5БІ) т/е 10052 (М.Н). 1.38 Синтез 6-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-3-11-(3-(2-Ц2- (2г-карбоксиетил)аміно|етил)-(2-сульфоетил)аміно|етокси)-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.197)дец-1- ил)метилі|-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)іпіридин-2-карбонової кислоти (сполуки М/2.38) 1.38.1 6-(8-(Бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл)-3-(1-((3-(2-(2-((3- (трет-бутокси)-3З-оксопропіл)аміно)етил)-(2-сульфоетил)аміно)етокси)-5,7-диметиладамантан-1- ілуметил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)піколінова кислота
Вказану в заголовку сполуку одержували, як описано в прикладі 1.32.3, шляхом заміни речовини із прикладу 1.32.2 речовиною із прикладу 1.33.2. 1.38.2 . 6-І8-(1,3-Бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-ілІ-3-11-((3-2-Ц2-(2- карбоксиетил)аміно|етил)-(2-сульфоетил)аміно|етокси)-5,7-диметилтрицикло!Ї3.3.1.127)дец-1- ил)метилі|-5-метил-1Н-піразол-4-іліпіридин-2-карбонова кислота
Вказану в заголовку сполуку одержували, як описано в прикладі 1.6.2, шляхом заміни речовини із прикладу 1.6.1 речовиною із прикладу 11.38.14. "Н ЯМР (501 МГу, диметилсульфоксид-ав) б ррт 12,87 (5, 1Н), 8,68 (5, 2Н), 8,04 (а, 1Н), 7,79 (а, 1Нн), 7,62 (а, 1), 7,53 (а, 1), 7,42-7,50 (т, 2Н), 7,33-7,40 (т, 2Н), 7,29 (5, 1Н), 6,96 (й, 1Н), 4,96 (5, ЗН), 3,89 (ї, 2Н), 3,83 (5, 2Н), 3,66 (ї, 2Н), 3,31-3,53 (т, 8Н), 3,18 (1, 2Н), 3,02 (І, 2Н), 2,95 (І, 2Н), 2,67 (ї, 2Н), 2,11 (в, ЗН), 1,43 (в, 2Н), 1,22-1,37 (т, 6Н), 0,98-1,19 (т, 6Н), 0,87 (в, 6Н). М5 (АРСІ) т/е 971,0 (510) (МАН.
Зоо
1.39 Синтез 3-11-((3,5-диметил-7-(2-(З-фосфонопропіл)аміно|етокси)трицикло!|3.3.1.157Лдец- 1-ил)метил)|-5-метил-1Н-піразол-4-іл)-6-І8-(11,3|гіазоло|4,5-б|піридин-2-ілкарбамоїл)-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|Іпіридин-2-карбонової кислоти (сполуки М/2.39) 1.39.1 трет-Бутил-3-(1-((3-(2-((3-(ди-трет-бутоксифосфорил)пропіл)аміно)етокси)-5,7- диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)-6-(8-(тіазоло|4,5-Б|піридин-2- ілкарбамоїл)-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1Н)-іл)піколінат
Розчиняли речовину із прикладу 1.23.2 (520 мг) і речовину із прикладу 1.14.2 (175 мг) у дихлорметані (6 мл) та перемішували за кімнатної температури протягом двох годин. Додавали суспензію натрію борогідриду (32 мг) в метанолі (1 мл) та перемішували суміш протягом
З0 хвилин. Реакційну суміш додавали у насичений водний розчин МансСоОз та екстрагували етилацетатом. Органічний шар промивали сольовим розчином і висушували над сульфатом натрію. Після фільтрування й концентрування, а також очищення за допомогою хроматографії на силікагелі, з градієнтом елюювання від 0,5 до 5,095 метанолу в дихлорметані, одержували вказану в заголовку сполуку. М5 (Е5БІ) т/е 1037,3 (М.Н). 1.39.2 3-11-(3,5-Диметил-7-(2-((3З-фосфонопропіл)аміно|етокси)трицикло!|3.3.1.157)дец-1- ил)метилі|-5-метил-1Н-піразол-4-іл)-6-І8-(Ф1,3)гіазоло|4,5-б|піридин-2-ілкарбамоїл)-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|Іпіридин-2-карбонова кислота
Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 1.39.1 речовиною із прикладу 1.2.8 в прикладі 1.2.9. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-дв) б ррт 8,60 (аа, 1), 8,52 (аа, 1Н), 8,41 (ре 5, 2Н), 7,65 (а, 1Н) 7,48 (а, 1Н), 7,46 (а, 1Н), 7,38 (т, 2Н), 7,29 (5, 1Н), 6,97 (й, 1Н), 4,97 (5, 2Н), 3,89 (т, 2Н), 3,83 (5, 2Н), 3,56 (т, 2Н), 3,02 (т, 6Н), 2,11 (5, ЗН), 1,81 (т, 2Н), 1,61 (т, 2Н), 2,11 (5, ЗН), 1,43 (5, 2Н), 1,30 (т, 4Н), 1,14 (т, 4Н), 1,04 (т, 2Н), 0,687 (5, 6Н). М5 (ЕБІ) т/е 869,2 (МАН) У. 1.40 Синтез 3-11-(3,5-диметил-7-(2-(З-фосфонопропіл)аміно|етокси)трицикло!|3.3.1.157Лдец- 1-ил)метил)|-5-метил-1Н-піразол-4-іл)-6-І8-(11,3|гіазоло|5,4-б|Іпіридин-2-ілкарбамоїл)-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|Іпіридин-2-карбонової кислоти (сполуки М/2.40) 1.40.1 трет-Бутил-3-(1-((3-(2-((3-(ди-трет-бутоксифосфорил)пропіл)аміно)етокси)-5,7- диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)-6-(8-(тіазоло(5,4-б|піридин-2- ілкарбамоїл)-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1Н)-іл)піколінат
Зо Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 1.22.2 речовиною із прикладу 1.23.2 в прикладі 1.39.1. М5 (ЕБІ) т/е 1037,3 (М.Н). 1.40.2 3-1-(3,5-Диметил-7-2-((3-фосфонопропіл)аміно|етоксиутрициклоїЇ3.3.1.157)дец-1- ил)метилі|-5-метил-1Н-піразол-4-іл)-6-І8-(Ф1,3)гіазоло(5,4-б|піридин-2-ілкарбамоїл)-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|Іпіридин-2-карбонова кислота
Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 1.40.1 речовиною із прикладу 1.2.8 в прикладі 1.2.9. "Н ЯМР (500 МГц, диметилсульфоксид-йв) б ррт 8,52 (ад, 2Н), 8,41 (Біг 5, 2Н), 8,17 (да, 1Н), 7,63 (т, 1Н), 7,53 (т, 2Н), 7,46 (9, 1Н), 7,38 (ї, 1Н), 7,30 (5, 1Н), 6,98 (а, 1Н), 4,96 (5, 2Н), 3,88 (т, 2Н), 3,83 (5, 2Н), 3,56 (ї, 2Н), 3,00 (т, 6Н), 2,11 (5,
ЗН), 1,81 (т, 2Н), 1,60 (т, 2Н), 1,43 (5, 2Н), 1,91 (т, 4Н), 1,14 (т, 4Н), 1,04 (т, 2Н), 0,87 (5, 6Н).
М5 (ЕБІ) т/е 869,2 (М.Н). 1.41 Синтез 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-5-(карбоксиметокси)-3,4-дигідроізохінолін- 2(1Н)-ілІ|-3-11-(33,5-диметил-7-(2-(метиламіно)етокси|грициклої|3.3.1.12|дец-1-ил)метил)-5- метил-1Н-піразол-4-іл|Іпіридин-2-карбонової кислоти (сполуки М/2.41) 1.41.1 Метил-5-(2-(трет-бутокси)-2-оксоетокси)-2-(6-(трет-бутоксикарбоніл)-5-(1-((3-(2-(трет- бутоксикарбоніл)(метил)аміно)етокси)-5,7-диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4- іл)піридин-2-іл)-1,2,3,4-тетрагідроізохінолін-8-карбоксилат
У розчин речовини із прикладу 1.31.8 (163 мг) в М,М-диметилформаміді (10 мл) додавали трет-бутил-2-бромацетат (58,6 мг) і КаСОз (83 мг) та перемішували реакційну суміш протягом ночі. Суміш розбавляли етилацетатом (200 мл), промивали водою й сольовим розчином та висушували над сульфатом натрію. Після фільтрування й випарювання розчинника одержували залишок, який очищували за допомогою хроматографії на силікагелі, з елююванням 2090 етилацетатом у гептані, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (Е5І) т/е 929,2 (МАН). 1.41.2 5-(2-(трет-Бутокси)-2-оксоетокси)-2-(6-(трет-бутоксикарбоніл)-5-(1-((3-(2-(трет- бутоксикарбоніл)(метил)аміно)етокси)-5, 7-диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4- іл)упіридин-2-іл)-1,2,3,4-тетрагідроізохінолін-8-карбонова кислота
У розчин речовини із прикладу 1.41.1 (З г) в тетрагідрофурані (20 мл), метанолі (10 мл) й воді (10 мл) додавали моногідрат гідроксиду літію (300 мг). Суміш перемішували за кімнатної температури протягом 24 годин. Реакційну суміш нейтралізували 295 водним розчином НеСІ і концентрували під вакуумом. Залишок розбавляли етилацетатом (800 мл), промивали водою й бо сольовим розчином та висушували над сульфатом натрію. Після фільтрування й випарювання розчинника одержували вказану в заголовку сполуку. М5 (Е5І) т/е 914,5 (МАН) ». 1.41.3.. 6-І(8-(1,3-Бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-5-(карбоксиметокси)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)- ілІ-3-11-((3,5-диметил-7-(2-(метиламіно)етокси|грицикло!|3.3.1.157)дец-1-илуметил)-5-метил-1 Н- піразол-4-іл|Іпіридин-2-карбонова кислота
У розчин речовини із прикладу 1.41.2 (183 мг) в М,.М-диметилформаміді (4 мл) додавали бензо|д|гіазол-2-амін (45,1 мг), фтор-М,М,М',М'-тетраметилформамідинію гексафторфосфат (79 мг) ї М,М-діїзопропілетиламін (0,203 мл). Суміш перемішували при 60"С протягом ночі. Суміш розбавляли етилацетатом (300 мл), промивали водою й сольовим розчином та висушували над сульфатом натрію. Після фільтрування й випарювання розчинника одержували залишок, який розчиняли у дихлорметані/трифтороцтовій кислоті (1:11, 10 мл) та перемішували протягом ночі.
Суміш концентрували й залишок очищували за допомогою НРІС з оберненою фазою із застосуванням системи сіЇзоп, з елююванням від 10 до 8595 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./06. трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (400
МГц, диметилсульфоксид-йв) б ррт 12,73 (5, 1Н), 8,30 (5, 2Н), 7,99-8,07 (т, 1Н), 7,75-7,79 (т, 1Н), 7,70 (а, 1Н), 7,44-7,56 (т, 2Н), 7,30-7,39 (т, 2Н), 7,30 (5, 1Н), 7,03 (ї, 1Н), 6,87-6,93 (т, 1Н), 4,98-5,18 (т, 4Н), 4,84 (5, ЗН), 3,78-4,01 (т, 4Н), 3,55 (її, 2Н). 2,77-3,07 (т, 4Н), 2,53-2,61 (т, ЗН), 2,04-2,16 (т, ЗН), 1,41 (5, 2Н), 1,02-1,34 (т, 6Н), 0,83-0,91 (т, 6Н). М5 (ЕБІ) т/е 834,2 (М.Н). 1.42 Синтез 6-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-3-11-(3-2-((3- карбоксипропіл)(піперидин-4-іл)аміно|етокси)-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.12)дец-1-ил)метил/|-5- метил-1Н-піразол-4-іліпіридин-2-карбонової кислоти (сполуки М/2.42) 1.42.1 трет-Бутил-6-(8-(бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл)-3-(1- ((173г)-3-(2-((1-(трет-бутоксикарбоніл)піперидин-4-іл)-(4-метокси-4-оксобутил)аміно)етокси)-5,7- диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)піколінат
Розчин речовини із прикладу 1.26.1 (0,169 г), метил-4-оксобутаноату (0,024 г) та триацетоксиборогідриду натрію (0,055 г) перемішували у дихлорметані (2 мл) за кімнатної температури. Через 2 години реакційну суміш розбавляли дихлорметаном (50 мл) і промивали насиченим водним розчином бікарбонату натрію (10 мл). Органічний шар відділяли, висушували над сульфатом магнію, фільтрували та концентрували. Під час проведення хроматографії на силікагелі, з градієнтом елюювання від 0,5 до 595 метанолу/дихлорметану, що містив аміак,
Зо одержували вказану у заголовку сполуку. М5 (ЕІ. 5О) т/е 1085,5 (МН). 1.42.2 6-(8-(1,3-Бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-3-11-((3-12-((3- карбоксипропіл)(піперидин-4-іл)аміно|етокси)-5,7-диметилтрицикло|3.3.1.15Я)дец-1-илуметил/д|-5- метил-1Н-піразол-4-ілупіридин-2-карбонова кислота
Розчин речовини із прикладу 1.42.1 (0,161г) у дихлорметані (0,5 мл) обробляли трифтороцтовою кислотою (0,5 мл) та перемішували реакційну суміш протягом ночі. Реакційну суміш концентрували, розчиняли в метанолі (0,6 мл) та обробляли моногідратом гідроксиду літію (0,124 г) у вигляді розчину у воді (0,5 мл). Після перемішування протягом 1,5 години реакцію гасили трифтороцтовою кислотою (0,229 мл) й розбавляли М,М-диметилформамідом (0,5 мл). Суміш очищували за допомогою НРІ С з оберненою фазою із застосуванням системи
Сібоп, з елююванням від 10 до 6095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./06. трифтороцтової кислоти. Необхідні фракції об'єднували й висушували сублімацією з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-сйв) б ррт 12,84 (5, 1Н), 9,40 (5, 1Н), 8,89-8,79 (т, 1Н), 8,57-8,41 (т, 1Н), 8,03 (9, 1Н), 7,80 (а, 1Н), 7,62 (а, 1Н), 7,55-7,41 (т, ЗН), 7,41-7,32 (т, 2Н), 7,30 (5, 1Н), 6,96 (й, 1Н), 4,96 (5, 2Н), 3,89 (ї, 2Н), 3,83 (5, 2Н), 3,44 (а, 2Н), 3,26 (5, 2Н), 3,22-3,11 (т, 2Н), 3,09-2,85 (т, 6Н), 2,34 (І, 2Н), 2,19 (а, 2Н), 2,10 (в, ЗН), 1,95-1,71 (т, 5Н), 1,44 (5, 2Н), 1,39-1,27 (т, АН), 1,22-0,96 (т, 6Н), 0,87 (5, 6Н). М5 (ЕБІ) т/е 915,3 (М-А-Н)». 1.43 Синтез 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)нафталін-2-іл|-3-11-(3,5-диметил-7-(2-((2- сульфоетил)аміно|етокси)трицикло!|3.3.1.157дец-1-ил)метил|-5-метил-1Н-піразол-4-іл)іпіридин-2- карбонової кислоти (сполуки М/2.43) 1.43.1 трет-Бутил-3-(1-((3-(2-гідроксиетокси)-5,7-диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н- піразол-4-іл)-6-(8-(метоксикарбоніл)нафталін-2-іл)піколінат
У розчин метил-7-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-діоксаборолан-2-іл)-1-нафтоату (2,47 г) в 1,4- діоксані (40 мл) й воді (20мл) додавали речовину із прикладу 1.20.2 (4,2), біс(трифенілфосфін)паладію(І) дихлорид (556 мг) і фторид цезію (3,61 г) та перемішували реакційну суміш зі зворотним холодильником протягом ночі. Суміш розбавляли етилацетатом (400 мл), промивали водою й сольовим розчином та висушували над сульфатом натрію. Після фільтрування й випарювання розчинника одержували залишок, який очищували за допомогою хроматографії на силікагелі, з елююванням 2095 етилацетатом у гептані, потім 595 метанолом у бо дихлорметані, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (Е5І) т/е 680,7 (МАН).
1.43.2 трет-Бутил-3-(1-((3,5-диметил-7-(2-(метилсульфоніл)окси)етокси)адамантан-1- ілуметил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)-6-(8-(метоксикарбоніл)нафталін-2-іл)піколінат
В охолоджений (0"С) розчин речовини із прикладу 1.43.1 (725 мг) в дихлорметані (10 мл) й триетиламіні (0,5 мл) додавали метансульфонілхлорид (0,249 мл) і суміш перемішували протягом 4 годин. Реакційну суміш розбавляли етилацетатом (200 мл) і промивали водою й сольовим розчином та висушували над сульфатом натрію. Після фільтрування й випарювання розчинника одержували вказаний у заголовку продукт, який застосовували в наступній реакції без додаткового очищення. М5 (ЕБІ) т/е 759,9 (МАН). 1.43.3 / трет-Бутил-3-(1-((3-(2-азидоетокси)-5,7-диметиладамантан-1-ілуметил)-5-метил-1 Н- піразол-4-іл)-6-(8-(метоксикарбоніл)нафталін-2-іл)піколінат
У розчин речовини із прикладу 1.43.2 (4,2 г) в М,М-диметилформаміді (30 мл) додавали азид натрію (1,22) і суміш перемішували протягом 96 годин. Реакційну суміш розбавляли етилацетатом (600 мл), промивали водою й сольовим розчином та висушували над сульфатом натрію. Після фільтрування й випарювання розчинника одержували вказану в заголовку сполуку. М5 (ЕЗІ) т/е 705,8 (МАН) ». 1.43.4..7-(5-(1-((3-(2-Азидоетокси)-5,7-диметиладамантан-1-іл)уметил)-5-метил-1 Н-піразол-4- іл)-6-(трет-бутоксикарбоніл)піридин-2-іл)-1-нафтойна кислота
У розчин речовини із прикладу 1.43.3 (3,5 г) в тетрагідрофурані/метанолі/воді (2:1:1, 30 мл) додавали моногідрат гідроксиду літію (1,2 г) та перемішували суміш протягом ночі. Реакційну суміш підкислювали 1 н. водним розчином НСЇ і розбавляли етилацетатом (600 мл), промивали водою та сольовим розчином та висушували над сульфатом натрію. Після фільтрування й випарювання розчинника одержували вказану в заголовку сполуку. М5 (ЕІ) т/е 691,8 (МАН) ». 1.43.5 трет-Бутил-3-(1-((3-(2-азидоетокси)-5,7-диметиладамантан-1-іл)уметил)-5-метил-1 Н- піразол-4-іл)-6-(8-(бензо|д9|гіазол-2-ілкарбамоїл)нафталін-2-іл)піколінат
У розчин речовини із прикладу 1.43.4 (870 мг) в М,М-диметилформаміді (10 мл) додавали бензо|д|гіазол-2-амін (284 мг), фтор-М,М,М',М'-тетраметилформамідинію гексафторфосфат (499 мг) і М.М-діїзопропілетиламін (488 мг). Суміш перемішували при 60"С протягом З годин.
Реакційну суміш розбавляли етилацетатом (200 мл) і промивали водою й сольовим розчином та висушували над сульфатом натрію. Після фільтрування й випарювання розчинника одержували
Зо вказану в заголовку сполуку. М5 (Е5І) т/е 824,1 (МАН) У. 1.43.6 // трет-Бутил-3-(1-(3-(2-аміноетокси)-5,7-диметиладамантан-1-іл)уметил)-5-метил-1 Н- піразол-4-іл)-6-(8-(бензо|д9|гіазол-2-ілкарбамоїл)нафталін-2-іл)піколінат
У розчин речовини із прикладу 1.43.5 (890 мг) в тетрагідрофурані (30 мл) додавали Ра/сС (90 мг). Суміш перемішували при 1 атмосфері водню протягом ночі. Реакційну суміш фільтрували й каталізатор промивали етилацетатом. Розчинник випарювали з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕІ) т/е 798,1 (Ма-Н)». 1.43.7 6-І(8-(1,3-Бензотіазол-2-ілкарбамоїл)нафталін-2-іл|-3-11-(3,5-диметил-7-12-(2- сульфоетил)аміно|етоксиутрицикло!|3.3.1.157)дец-1-ил)метилі|-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)піридин-2- карбонова кислота
У розчин речовини із прикладу 1.43.6 (189 мг) в М,М-диметилформаміді (6 мл) додавали 4- ((трет-бутилдифенілсиліл)окси)-2,2-диметилбутилетенсульфонат (106 мг). Суміш перемішували протягом 4 днів. Суміш розбавляли етилацетатом (300 мл) і промивали водою й сольовим розчином та висушували над сульфатом натрію. Після фільтрування й випарювання розчинника залишок розчиняли в трифтороцтовій кислоті (10 мл) та відстоювали протягом ночі.
Трифтороцтову кислоту випарювали під вакуумом і залишок розчиняли в диметилсульфоксиді/метанолі (1:11, 6 мл). Суміш очищували за допомогою НРІ С з оберненою фазою (система сіЇзоп), з елююванням від 10 до 8595 ацетонітрилу у воді, що містила 0,190 об./о06б. трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-йє) б рріт 13,09 (5, 1Н), 9,02 (5, 1Н), 8,31-8,43 (т, ЗН), 8,16-8,26 (т, ЗН), 7,93-8,08 (т, ЗН), 7,82 (а, 1Н), 7,66-7,75 (т, 1Н), 7,46-7,55 (т, 2Н), 7,37 (І, 1Н), 3,90 (5, ЗН), 3,17- 3,28 (т, 2Н), 3,07-3,16 (т, 2Н), 2,82 (І, 2Н), 2,24 (5, ЗН), 1,44 (5, 2Н), 0,99-1,37 (т, 12Н), 0,67 (5, 6Н). М5 (ЕБІ) т/е 849,1 (МаАН)». 1.44 Синтез 3-11-(3-12-(Ї -альфа-аспартил-(2-сульфоетил)аміно|етокси)-5, 7- диметилтрицикло!|3.3.1.12Л|дец-1-ил)метил|-5-метил-1Н-піразол-4-іл)-6-(8-(1,3-бензотіазол-2- ілкарбамоїл)-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1Н)-іл|Іпіридин-2-карбонової кислоти (сполуки М/2.44) 1.441 6-(8-(Бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл)-3-(1-((3-(2-((5)-4- (трет-бутокси)-2-(трет-бутоксикарбоніл)аміно)-4-оксо-М-(2-сульфоетил)бутанамідо)етокси)-5,7- диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)піколінова кислота
В охолоджений (072) розчин /(5)-4-(трет-бутокси)-2-(трет-бутоксикарбоніл)аміно)-4- 60 оксобутанової кислоти (40,7 мг) й О-(7-азабензотриазол-1-іл)-М,М,М',М'-тетраметилуронію
ЗОЗ гексафторфосфату (НАТО, 40,1мг) в М,М-диметилформаміді (З мл) додавали М,М- діізопропілетиламін (98 мкл). Реакційну суміш перемішували за кімнатної температури протягом 1 години та додавали речовину із прикладу 1.2.9 (60 мг) в М,М-диметилформаміді (1 мл). Суміш перемішували протягом 1,5 години та очищували за допомогою хроматографії з оберненою фазою (колонка С18), з елююванням від 20 до 9095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./о6. трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕІ) т/е 1123,4 (М-Н): 1.44.2 3-11-К(3-2-(-альфа-Аспартил-(2-сульфоетил)аміно|етокси)-5, 7- диметилтрицикло!|3.3.1.19Л|дец-1-илуметил|-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)-6-(8-(1,3-бензотіазол-2- ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|Іпіридин-2-карбонова кислота
Речовину із прикладу 1.44.1 (100 мг) у дихлорметані (5 мл) обробляли трифтороцтовою кислотою (1,5 мл) протягом ночі. Реакційну суміш концентрували та очищували за допомогою хроматографії з оберненою фазою (колонка С18), з елююванням від 20 до 6095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./06б. трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (500 МГц, диметилсульфоксид-ав) б ррт 12,85 (5, 2Н), 8,11-8,22 (т, ЗН), 8,04 (а, тн), 7,79 (а, 1), 7,62 (а, 1Н), 7,41-7,54 (т, ЗН), 7,32-7,39 (т, 2Н), 7,29 (5, 1Н), 6,95 (а, тн), 4,95 (5, 2Н), 4,80 (5, 1Н), 3,89 (І, 2Н), 3,81 (5, 2Н), 3,55-3,71 (т, 2Н), 3,01 (ї, 4Н), 2,74-2,86 (т, 1Н), 2,57-2,13 (т, 2Н), 2,09 (в, ЗН), 0,91-1,46 (т, 1ЗН), 0,84 (5, 6Н). М5 (ЕІ) т/е 969,2 (М.Н). 1.45 Синтез 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-11-((3-Т2-
І1,З-дигідроксипропан-2-іл)аміно|етокси)-5,7-диметилтрициклої|3.3.1.127|дец-1-ил)метилі/-5- метил-1Н-піразол-4-іліпіридин-2-карбонової кислоти (сполуки М/2.45) 1.45.1 трет-Бутил-6-(8-(бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл)-3-(1- ((3,5-диметил-7-(2-(оксетан-3-іламіно)етокси)адамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4- іл)піколінат
Розчин речовини із прикладу 1.2.7 (0,095 г), оксетан-3-он (10 мг) і триацетоксиборогідрид натрію (0,038 г) перемішували у дихлорметані (1 мл) за кімнатної температури. Після перемішування протягом ночі реакційну суміш завантажували безпосередньо на силікагель та застосовували градієнт елюювання від 0,5 до 595 метанолу в дихлорметані, що містив аміак, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕІ ЗО) т/е 858,4 (МАН).
Зо 1.45.2 6-(8-(1,3-Бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-11-(3-(2-(1,3- дигідроксипропан-2-іл)аміно|етокси)-5,7-диметилтрициклої|3.3.1.157)дец-1-ил)метилі|-5-метил- 1Н-піразол-4-ілупіридин-2-карбонова кислота
Розчиняли речовину із прикладу 1.45.1 у дихлорметані (0,5 мл) і обробляли трифтороцтовою кислотою (0,5 мл) та перемішували протягом ночі. Реакційну суміш очищували за допомогою НРІ С з оберненою фазою із застосуванням системи сіЇ5оп, з елююванням від 10 до 6095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./о06. трифтороцтової кислоти. Необхідні фракції об'єднували й висушували сублімацією з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-дв) б ррт 12,84 (5, 1Н), 8,19 (5, 2Н), 8,02 (0, 1Н), 7,78 (а, 1Н), 7,61 (ад, 1), 7,53-7,40 (т, ЗН), 7,40-7,31 (т, 2Н), 7,28 (5, 1Н), 6,94 (й, 1Н), 4,95 (в, 2Н), 3,87 (І, 2Н), 3,82 (5, 2Н), 3,67-3,62 (т, 4Н), 3,22-3,14 (т, 1Н), 3,14-3,06 (т, 2Н), 3,00 (1, 4Н), 2,09 (5, ЗН), 1,41 (5, 2Н), 1,37-1,20 (т, 4Н), 1,20-0,95 (т, 6Н), 0,85 (в, 6Н). М5 (ЕБІ) т/е 820,2 (М.Н). 1.46 Синтез 6-(5-(2-аміноетокси)-8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін- 2(1Н)-іл|-3-11-(3,5-диметил-7-(2-Іметил-(2-сульфоетил)аміно|етокси)трицикло!|3.3.1.157дец-1- ил)метилі|-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)іпіридин-2-карбонової кислоти (сполуки М/2.46) 1.46.1 6-(8-(1,3-Бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-5-(2-((бензилокси)карбоніл|аміно)етокси)-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-(1-(13,5-диметил-7-((2,2,7,7,13-пентаметил-10,10-діоксидо-3,3- дифеніл-4,9-діокса-10А6-тіа-13-аза-3-силапентадекан-15-іл)оксиЇгрициклої3.3.1.157)дец-1- ил)метил)-5-метил-1Н-піразол-4-іл|піридин-2-карбонова кислота
Вказану в заголовку сполуку одержували, як описано в прикладі 1.2.8, шляхом заміни речовини із прикладу 1.2.7 речовиною із прикладу 1.35. 1.46.2.. 6-(5-(2-Аміноетокси)-8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-ілі|- 3-11-(3,5-диметил-7-(2-(метил-(2-сульфоетил)аміно|етоксиутрицикло!|3.3.1.197|дец-1-ил)метилі-
Б-метил-1Н-піразол-4-іл)іпіридин-2-карбонова кислота
Вказану в заголовку сполуку одержували, як описано в прикладі 1.34.4, шляхом заміни речовини із прикладу 1.34.3 речовиною із прикладу 11.46.14. "Н ЯМР (500 МгГу, диметилсульфоксид-сав) б ррт 12,74 (5, 2Н), 8,96 (5, 1Н), 8,03 (9, 1Н), 7,94 (в, ЗН), 7,72-7,81 (т, 2Н), 7,53 (9, 1Н), 7,47 (І, 1Н), 7,35 (І, 1Н), 7,28 (5, 1Н), 7,02 (І, 2Н), 5,03 (5, 2Н), 4,26 (І, 2Н), 3,92 (ї, 2Н), 3,83 (5, 2Н), 3,23-3,38 (т, 4Н), 3,13-3,25 (т, 1Н), 2,82-3,00 (т, АН), 2,78 (а, ЗН), 2,11 (5, ЗН), 1,23-1,50 (т, 6Н), 0,95-1,21 (т, 6Н), 0,86 (5, 6Н). М5 (ЕБІ) т/е 927,2 (М.-Н)». (510) 1.47 Синтез 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-5-2-(2-сульфоетил)аміно|етокси)-3,4-
дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-11-((3,5-диметил- 7-і2-|метил-(2- сульфоетил)аміно|етокси)трицикло!|3.3.1.157|)дец-1-ил)метил|-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)піридин-2- карбонової кислоти (сполуки М/2.47) 1.47.1 6-(8-(1,3-Бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-5-((2,2,7,7-тетраметил-10,10-діоксидо-3,3- дифеніл-4,9-діокса-10/6-тіа-13-аза-3-силапентадекан-15-іл)окси|-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-ілі|- 3-1-(3,5-диметил-7-(2-(метил-(2-сульфоетил)аміно|етокси)трицикло!Ї3.3.1.137)дец-1-ил)метилі-
Б-метил-1Н-піразол-4-іліпіридин-2-карбонова кислота
Вказану в заголовку сполуку одержували, як описано в прикладі 1.2.8, шляхом заміни речовини із прикладу 1.2.7 речовиною із прикладу 1.46.2. 1.47.2 6-І(8-(1,3-Бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-5-2-(2-сульфоетил)аміно|етокси)-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-11-((3,5-диметил- 7-12-|метил-(2- сульфоетил)аміно|етоксиутрицикло!|3.3.1.157|)дец-1-ил)метилі|-5-метил-1 Н-піразол-4-іліпіридин-2- карбонова кислота
Речовину із прикладу 1.47.1 (100 мг) у дихлорметані (5 мл) обробляли трифтороцтовою кислотою (5 мл) протягом ночі. Реакційну суміш концентрували та очищували за допомогою хроматографії з оберненою фазою (колонка С18), з елююванням від 20 до 6095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./06б. трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-сйв) б ррт т 12,74 (5, 1Н), 8,96 (й, 1Н), 8,64 (5, 2Н), 8,02 (9, 1Н), 7,76 (аа, 2Н), 7,41-7,57 (т, 2Н), 7,24-7,40 (т, 2Н), 7,02 (ї, 2Н), 5,03 (5, 2Н), 4,23- 4,42 (т, 2Н), 3,90 (ї, 2Н), 3,83 (5, 2Н), 3,25-3,40 (т, 6Н), 3,12-3,24 (т, 2Н), 2,81-3,01 (т, 6Н), 2,78 (а, ЗН), 2,10 (5, ЗН), 1,22-1,47 (т, 6Н), 0,97-1,21 (т, 6Н), 0,86 (5, 6Н). М5 (Е5І) т/е 1035,3 (М.-Н)». 1.48 Синтез 6-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-71-(3,5- диметил-7-2-(2-сульфоетил)-2-((2- сульфоетил)аміно|етил)аміно|етокси)трицикло!|3.3.1.157)дец-1-ил)метилі|-5-метил-1 Н-піразол-4- іл)іпіридин-2-карбонової кислоти (сполуки М/2.48) 1.48.1. 6-(8-(1,3-Бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1 Н)-іл|-3-11-(3,5-диметил- 7-Це2,2,7,7-тетраметил-10,10-діоксидо-3,3-дифеніл-16-(2-сульфоетил)-4,9-діокса-10/6-тіа-13,16- діаза-З-силаоктадекан-1 8-іл|Іоксиїутрицикло/3.3.1.127)дец-1-ил)метил|-5-метил-1 Н-піразол-4- іліпіридин-2-карбонова кислота
Зо Вказану в заголовку сполуку одержували, як описано в прикладі 1.2.8, шляхом заміни речовини із прикладу 1.2.7 речовиною із прикладу 1.33.2. 1.48.2. 6-І(8-(1,3-Бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1 Н)-іл|-3-11-(3,5-диметил- 7-2-(2-сульфоетил)-2-(2-сульфоеєетил)аміно|етил)аміно|етоксиутрицикло!3.3.1.12Лдец-1- ил)метилі|-5-метил-1Н-піразол-4-іліпіридин-2-карбонова кислота
Вказану в заголовку сполуку одержували, як описано в прикладі 1.47.2, шляхом заміни речовини із прикладу 1.47.1 речовиною із прикладу 11.48.14. "Н ЯМР (400 МгГуц, диметилсульфоксид-авє) б ррт 12,87 (5, ЗН), 8,55 (5, 4Н), 8,04 (а, 2Н), 7,79 (а, 2Н), 7,62 (а, 1), 7,40-7,56 (т, ЗН), 7,32-7,40 (т, 2Н), 7,29 (5, 1Н), 6,96 (а, 2Н), 4,96 (5, ЗН), 3,89 (ї, 2Н), 3,83 (5, 2Н), 3,47 (9, 2Н), 3,36 (5, 2Н), 3,18-3,30 (т, 2Н), 3,01 (ї, 2Н), 2,94 (ї, 2Н), 2,82 (, 2Н), 2,11 (5, ЗН), 1,26-1,49 (т, 6Н), 0,96-1,20 (т, 6Н), 0,87 (5, 6Н). М5 (ЕІ) т/е 10052 (М.Н). 1.49 Синтез 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-5-(2-(2-карбоксиетил)аміно|етокси)-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-11-((3,5-диметил- 7-і2-|метил-(2- сульфоетил)аміно|етокси)трицикло!|3.3.1.157|)дец-1-ил)метил|-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)піридин-2- карбонової кислоти (сполуки М/2.49) 1.49.1 6-(8-(Бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-5-(2-((3-(трет-бутокси)-3-оксопропіл)аміно)етокси)- 3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл)-3-(1-(3,5-диметил-7-(2-(метил-(2- сульфоетил)аміно)етокси)адамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)піколінова кислота
Вказану в заголовку сполуку одержували, як описано в прикладі 1.32.3, шляхом заміни речовини із прикладу 1.32.2 речовиною із прикладу 1.46.2. 1.49.2 6-(8-(1,3-Бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-5-2-К(2-карбоксиетил)аміно|етокси)-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-11-((3,5-диметил- 7-12-|метил-(2- сульфоетил)аміно|етоксиутрицикло!|3.3.1.157)дец-1-ил)метилі|-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)піридин-2- карбонова кислота
Вказану в заголовку сполуку одержували, як описано в прикладі 1.6.2, шляхом заміни речовини із прикладу 1.6.1 речовиною із прикладу 1.494141. "Н ЯМР (400 МгГу, диметилсульфоксид-сав) б ррт 12,75 (5, 1Н), 8,96 (5, 1Н), 8,59 (5, 2Н), 8,03 (й, 1Н), 7,72-7,82 (т, 2Н), 7,54 (9, 1Н), 7,43-7,51 (т, 2Н), 7,35 (І, 1Н), 7,28 (5, 1Н), 7,02 (ад, 2Н), 5,02 (5, 2Н), 4,34 (5, 2Н), 3,93 (5, 2Н), 3,83 (5, 2Н), 3,62 (5, 2Н), 2,84-3,01 (т, 4Н), 2,78 (а, ЗН), 2,65-2,75 (т, 2Н), 2,11 (5, ЗН), 1,20-1,45 (т, 7Н), 0,95-1,21 (т, 6Н), 0,86 (в, 6Н). М5 (ЕБІ) т/е 999,2 (М.Н). бо 1.50 Синтез 3-11-((3,5-диметил-7-2-(З-фосфонопропіл)(піперидин-4-
іл)аміно|етокси)трицикло|3.3.1.197|)дец-1-ил)метилі|-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)-6-|8- (П,9)гіазоло|4,5-В|піридин-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|Іпіридин-2-карбонової кислоти (сполуки М/2.50) 1.50.1 трет-Бутил-3-(1-((3-(2-(1-(трет-бутоксикарбоніл)піперидин-4-іл)аміно)етокси)-5,7- диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)-6-(8-(тіазоло|4,5-Б|піридин-2- ілкарбамоїл)-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1Н)-іл)піколінат
Розчиняли речовину із прикладу 1.23.2 (205 мг) у дихлорметані (2,4 мл) та додавали трет- бутил-4-оксопіперидин-1-карбоксилат (51 мг) і триацетоксиборогідрид натрію (75 мг). Реакційну суміш перемішували за кімнатної температури протягом двох годин. Додавали додаткову кількість дихлорметану і реакційну суміш виливали у насичений водний розчин Мансоз.
Органічний шар промивали сольовим розчином і висушували над сульфатом натрію. Після фільтрації і концентрації залишок очищували за допомогою хроматографії на силікагелі на амінному картриджі від Сгасе КемеїегізФ), з елююванням градієнтом від 0,5 до 5,095 метанолу в дихлорметані, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕБІ) т/е 986,3(М--Н)». 1.50.2 3-11-((3,5-Диметил-7-12-((З3-фосфонопропіл)(піперидин-4- іл)аміно|)етоксиутрицикло!|3.3.1.197)дец-1-ил)метилі|-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)-6-|8- (П,ЗІгіазоло|4,5-б|піридин-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|Іпіридин-2-карбонова кислота
Розчиняли речовину із прикладу 1.50.1 (94 мг) у дихлорметані (1 мл), потім додавали речовину із прикладу 1.14.2 (25 мг) і триацетоксиборогідрид натрію (30 мг). Реакційну суміш перемішували за кімнатної температури протягом чотирьох годин. Додавали трифтороцтову кислоту (1,5 мл) та перемішували реакційну суміш за кімнатної температури протягом ночі.
Реакційну суміш концентрували та очищували за допомогою хроматографії з оберненою фазою (колонка С18), з елююванням від 10 до 9095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./о6. трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки у вигляді солі трифтороцтової кислоти. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-сів) б ррт 8,82 (Брі 5, 1Н) 8,60 (аа, 1Н), 8,52 (ад, 1Н), 8,50 (Бі 5, 1Н), 7,66 (а, 1Н), 7,50 (а, 1Н), 7,46 (9, 1Н), 7,38 (т, 2Н), 7,30 (5, 1Н), 6,97 (й, 1Н), 4,98 (5, 2Н), 3,89 (ї, 2Н), 3,83 (5, 2Н) 3,69 (т, 2Н), 3,61 (т, 1Н), 3,44 (т, 2Н) 3,23 (т, 4Н), 3,02 (ї, 2Н), 2,93 (т, 2Н), 2,18 (т, 2Н), 2,10 (5, ЗН), 1,92 (т, 2Н), 1,83 (т, 2Н), 1,64 (т, 2Н), 1,44 (5, 2Н), 1,91 (т, 4Н), 1,14 (т, 4Н), 1,04 (т, 2Н), 0,87 (5, 6Н). М5 (ЕБІ) т/е 952,3 (МАН). 1.51 Синтез 6-І4-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідро-2Н-1,4-бензоксазин-б-іл|-3-11-
І(3,5-диметил-7-(2-(2-сульфоетил)аміно|етокси)трицикло!|3.3.1.127|дец-1-ил)метил|-5-метил-1 Н- піразол-4-іліпіридин-2-карбонової кислоти (сполуки М/2.51) 1.51.1. трет-Бутил-3-(1-((3-(2-(трет-бутилдиметилсиліл)окси)етокси)-5,7-диметиладамантан- 1-ілуметил)-5-метил-1Н-піразол-4-іл)-б-хлорпіколінат
У розчин речовини із прикладу 1.20.2 (3,2 г) в М,М-диметилформаміді (20 мл) додавали імідазол (0,616 г) і хлор-трет-бутилдиметилсилан (1,37 г). Суміш перемішували протягом ночі.
Реакційну суміш розбавляли етилацетатом (300 мл), промивали водою й сольовим розчином та висушували над сульфатом натрію. Після фільтрування й випарювання розчинника одержували неочищений продукт, який очищували за допомогою хроматографії на силікагелі, з елююванням 20965 етилацетатом у гептані, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (Е5І) т/е 645,4 (МАН). 1.51.2. трет-Бутил-3-(1-((3-(2-(трет-бутилдиметилсиліл)окси)етокси)-5, 7-диметиладамантан- 1-ілуметил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)-6-(3,4-дигідро-2Н-бензо|б1ІП1,Аоксазин-б-іл)піколінат
У розчин 6-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-діоксаборолан-2-іл)-3,4-дигідро-2Н- бензо|бІП1,4оксазину (507 мг) в 1,4-діоксані (10 мл) й воді (5 мл) додавали речовину із прикладу 1.51.1 (1,25 г), біс(трифенілфосфін)паладію(іІ!) дихлорид (136 мг) і фторид цезію (884 мг). Суміш перемішували при 120"С за умов мікрохвильового випромінювання (Віоїаде, Іпйацсог) протягом 20 хвилин. Суміш розбавляли етилацетатом (500 мл), промивали водою й сольовим розчином та висушували над сульфатом натрію. Після фільтрування й випарювання розчинника одержували залишок, який очищували за допомогою хроматографії на силікагелі, з елююванням 2095 етилацетатом у гептані, потім 590 метанолом у дихлорметані, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕІ) т/е 744,1 (МаН)». 1.51.3 трет-Бутил-6-(4-(бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідро-2Н-бензоГб|/1,оксазин-6- іл)-3-(1-((3-(2-(трет-бутилдиметилсиліл)окси)етокси)-5,7-диметиладамантан- 1-ілуметил)-5- метил-1 Н-піразол-4-іл)піколінат
У суспензію біс(2,5-діоксопіролідин-1-ілукарбонату (295 мг) в ацетонітрилі (10 мл) за температури навколишнього середовища додавали бензо|д|гіазол-2-амін (173 мг) і суміш перемішували протягом 1 години. Додавали розчин речовини із прикладу 1.51.2 (710 мг) в бо ацетонітрилі (10 мл) та енергійно перемішували суспензію протягом ночі. Суміш розбавляли етилацетатом (300 мл), промивали водою й сольовим розчином та висушували над сульфатом натрію. Після фільтрування й випарювання розчинника одержували залишок, який очищували за допомогою хроматографії на силікагелі, з елююванням 2095 етилацетатом у гептані, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (Е5І) т/е 920,2 (МАН). 1.51.4 трет-Бутил-6-(4-(бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідро-2Н-бензоГб1|/1,оксазин-6- іл)-3-(1-((3-(2-гідроксиетокси)-5,7-диметиладамантан-1-іл)уметил)-5-метил-1 Н-піразол-4- іл)піколінат
У розчин речовини із прикладу 1.51.3 (1,4 г) в тетрагідрофурані (10 мл) додавали тетрабутиламонію фторид (1,0 М в тетрагідрофурані, б мл). Суміш перемішували протягом
З годин. Суміш розбавляли етилацетатом (300 мл), промивали водою й сольовим розчином та висушували над сульфатом натрію. Після фільтрування й випарювання розчинника одержували вказаний у заголовку продукт, який застосовували в наступній реакції без додаткового очищення. М5 (Е5І) т/е 806,0 (МН). 1.51.5 трет-Бутил-6-(4-(бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідро-2Н-бензоГб|/1,оксазин-6- іл)-3-(1-((3,5-диметил-7-(2-((метилсульфоніл)окси)етокси)адамантан- 1-іл)уметил)-5-метил-1 Н- піразол-4-іл)піколінат
В охолоджений (0"С) розчин речовини із прикладу 1.51.4 (1,2 г) у дихлорметані (20 мл) й триєтиламіні (2 мл) додавали метансульфонілхлорид (300 мг). Суміш перемішували протягом 4 годин. Реакційну суміш розбавляли етилацетатом (200 мл), промивали водою й сольовим розчином та висушували над сульфатом натрію. Після фільтрування й випарювання розчинника одержували вказаний у заголовку продукт, який застосовували в наступній реакції без додаткового очищення. М5 (Е5І) т/е 884,1 (МАН). 1.51.6 трет-Бутил-3-(1-((3-(2-азидоетокси)-5,7-диметиладамантан-1-іл)уметил)-5-метил-1 Н- піразол-4-іл)-6-(4-(бензо|д9|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідро-2Н-бензо|р111,оксазин-6- іл)піколінат
У розчин речовини із прикладу 1.51.5 (1,5 г) в М.М-диметилформаміді (20 мл) додавали азид натрію (331 мг). Суміш перемішували протягом 48 годин. Реакційну суміш розбавляли етилацетатом (200 мл), промивали водою й сольовим розчином та висушували над сульфатом натрію. Після фільтрування й випарювання розчинника одержували залишок, який очищували
Зо за допомогою хроматографії на силікагелі, з елююванням 20905 етилацетатом у дихлорметані, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (Е5І) т/е 831,1 (МАН). 1.51.7 трет-Бутил-3-(1-(3-(2-аміноетокси)-5,7-диметиладамантан-1-іл)уметил)-5-метил-1 Н- піразол-4-іл)-6-(4-(бензо|д9|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідро-2Н-бензо|р111,оксазин-6- іл)піколінат
У розчин речовини із прикладу 1.51.6 (1,5 г) в тетрагідрофурані (30 мл) додавали Ра/С (1096, 200 мг). Суміш перемішували при 1 атмосфері водню протягом ночі. Реакційну суміш фільтрували й фільтрат концентрували під вакуумом з одержанням неочищеного продукту. МО (ЕБІ) т/е 805,1 (МАН). 1.51.8 6-(4-(1,3-Бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідро-2Н-1,4-бензоксазин-б-іл|-3-11-К(3,5- диметил-7-(2-(2-сульфоетил)аміно|етоксиутрицикло!|3.3.1.157)дец-1-ил)метилі|-5-метил-1 Н- піразол-4-іл)упіридин-2-карбонова кислота
У розчин речовини із прикладу 1.51.7 (164 мг) в М,М-диметилформаміді (10 мл) й М,М- діізопропілетиламіні (0,5 мл) додавали 4-((трет-бутилдифенілсиліл)окси)-2,2- диметилбутилетенсульфонат (91 мг). Суміш перемішували протягом ночі. Реакційну суміш розбавляли етилацетатом (200 мл), промивали водою й сольовим розчином та висушували над сульфатом натрію. Після фільтрування й випарювання розчинника одержували залишок, який розчиняли в тетрагідрофурані (2 мл). Додавали тетрабутиламонію фторид (1 мл, 1М в тетрагідрофурані) і суміш перемішували протягом ночі. Суміш концентрували під вакуумом і залишок розчиняли у дихлорметані/трифтороцтовій кислоті (1:11, б мл), при цьому забезпечували осадження одержаного протягом ночі. Після випарювання розчинника залишок очищували за допомогою НРІ С з оберненою фазою (система сбіїЇбхоп), з елююванням від 10 до 8595 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./0б. трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-ав) б ррт 8,74 (5, 1Н), 8,35 (5, 2Н), 7,94-8,00 (т, 1Н), 7,86 (5, 1Н), 7,71-7,82 (т, 2Н), 7,46 (5, 1Н), 7,34-7,44 (т, 2Н), 7,24 (ї, 1Н), 7,02 (9, 1Н), 4,28-4,39 (т, 2Н), 4,10-4,19 (т, 2Н), 3,90 (5, ЗН), 3,55-3,61 (т, 4Н), 3,21-3,30 (т,
ЗН), 3,07-3,16 (т, ЗН), 2,23 (в, ЗН), 1,44 (5, 2Н), 0,98-1,37 (т, 9Н), 0,89 (5, 6Н). М5 (ЕБІ) т/е 856,1 (М.АН)». 1.52 Синтез 6-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-5-(3-сульфопропокси)-3,4-дигідроізохінолін- 2(1Н)-іл|-3-11-(3,5-диметил-7-(2-(метиламіно)етокси|грицикло!/3.3.1.157|дец-1-ил)метил)-5- бо метил-1Н-піразол-4-іл|Іпіридин-2-карбонової кислоти (сполуки М2.52)
1.52.1 Метил-2-(6-(трет-бутоксикарбоніл)-5-(1-((3-(2-(трет- бутоксикарбоніл)(метил)аміно)етокси)-5,7-диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4- іл)піридин-2-іл)-5-(3-(2,2,2-трифтор-1-(п-толіл)етокси)сульфоніл)пропокси)-1,2,3,4- тетрагідроізохінолін-8-карбоксилат
У розчин речовини із прикладу 1.31.8 (460 мг) в М,М-диметилформаміді (10 мл) додавали 2,2,2-трифтор-1-(п-толіл)уетил-З3-йодпропан-1-сульфонат (239 мг, одержаний згідно 5). Яга.
Спет., 2013, 78, 711-716) ї К»бОз (234 мг) та перемішували суміш протягом ночі. Суміш розбавляли етилацетатом (200 мл), промивали водою й сольовим розчином та висушували над сульфатом натрію. Після фільтрування й випарювання розчинника одержували залишок, який очищували за допомогою хроматографії на силікагелі, з елююванням 2090 етилацетатом у гептані, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (Е5І) т/е 1018,5 (Ме-Н)». 152.2... 2-(6-(трет-Бутоксикарбоніл)-5-(1-((3-(2-(трет-бутоксикарбоніл)(метил)аміно)етокси)- 5,7-диметиладамантан-1-іл)уметил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)піридин-2-іл)-5-(3-(2,2,2-трифтор-1- (п-толіл/етокси)усульфоніл)пропокси)-1,2,3,4-тетрагідроізохінолін-8-карбонова кислота
У розчин речовини із прикладу 1.52.1 (176 мг) в тетрагідрофурані (4 мл), метанолі (З мл) й воді (З мл) додавали моногідрат гідроксиду літію (60 мг) та перемішували суміш протягом ночі.
Потім суміш розбавляли етилацетатом (200 мл), промивали 1 н. водним розчином НСІ, водою та сольовим розчином і висушували над сульфатом натрію. Після фільтрування й випарювання розчинника одержували вказаний у заголовку продукт, який застосовували в наступній реакції без додаткового очищення. М5 (ЕЗІ) т/е 10952 (МАН). 1.52.3 трет-Бутил-6-(8-(бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-5-(3-(2,2,2-трифтор-1-(п- толіл)етокси)сульфоніл)пропокси)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл)-3-(1-((-(2-(трет- бутоксикарбоніл)(метил)аміно)етокси)-5, 7-диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4- іл)піколінат
У розчин речовини із прикладу 1.52.2 (117 мг) в дихлорметані (б мл) додавали бензо|Ч|гіазол-2-амін (19,27 мг), 1-етил-3-ІЗ-(диметиламіно)пропілІкарбодіїміду гідрохлорид (37 мг) і 4-(диметиламіно)піридин (23,5 мг) та перемішували суміш протягом ночі. Реакційну суміш розбавляли етилацетатом (200 мл), промивали водою й сольовим розчином та висушували над сульфатом натрію. Після фільтрування й випарювання розчинника одержували
Зо вказаний у заголовку продукт. М5 (ЕБІ) т/е 12261 (МАН). 1.52.4 6-І(8-(1,3-Бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-5-(3-сульфопропокси)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)- іл|-3-(1-33,5-диметил-7-(2-(метиламіно)етокси|грициклоїЇ3.3.1.157)дец-1-илуметил)-5-метил-1 Н- піразол-4-іл|Іпіридин-2-карбонова кислота
Розчиняли речовину із прикладу 1.52.3 (130 мг) у дихлорметані/трифтороцтовій кислоті (1:1, б мл) та перемішували протягом ночі. Після випарювання розчинника залишок розчиняли в М,М- диметилформаміді/воді (111, 12 мл) та очищували за допомогою НРІС з оберненою фазою (сСіїєоп), з елююванням від 10 до 8595 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./об. трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-авє) б ррт 12,68 (5, 1Н), 8,13-8,32 (т, 2Н), 8,01 (а, 1), 7,75 (а9, 2Н), 7,42- 7,56 (т, 2Н), 7,29 (5, 1Н), 7,28-7,34 (т, 1Н), 7,00 (аа, 2Н), 5,03 (5, 2Н), 4,19 (ї, 2Н), 3,83 (5, ЗН), 3,50-3,57 (т, 4Н), 2,95-3,05 (т, 2Н), 2,81 (ї, 2Н), 2,52-2,65 (т, АН), 1,39 (5, 2Н), 0,96-1,32 (т, 12Н), 0,87 (5, 6Н). М5 (ЕІ) т/е 898,3 (М.Н). 1.53 Синтез 3-1-(3,5-диметил-7-(2-(2-сульфоетил)аміно|етокси)трицикло!/3.3.1.127|дец-1- ил)метилі|-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)-6-11-(11,9)гіазоло|4,5-б|піридин-2-ілкарбамоїл)-1,2,3,4- тетрагідрохінолін-7-іл|Іпіридин-2-карбонової кислоти (сполуки М/2.53) 1.53.1 трет-Бутил-6б-хлор-3-(1-((3-(2-гідроксиетокси)-5,7-диметиладамантан-1-іл)метил)-5- метил-1Н-піразол-4-іл)піколінат
Вказану в заголовку сполуку одержували, як описано в прикладі 1.51.4, шляхом заміни речовини із прикладу 1.51.3 речовиною із прикладу 1.51.1. 1.53.2. трет-Бутил-б-хлор-3-(1-(3,5-диметил-7-(2-((метилсульфоніл)окси)етокси)адамантан- 1-ілуметил)-5-метил-1Н-піразол-4-іл)піколінат
В охолоджений (0"С) розчин речовини із прикладу 1.53.1 (1,89 г) у дихлорметані (30 мл) й триєтиламіні (З мл) додавали метансульфонілхлорид (1,03 г) та перемішували суміш протягом 4 годин. Реакційну суміш розбавляли етилацетатом (200 мл), промивали водою й сольовим розчином та висушували над сульфатом натрію. Після фільтрування й випарювання розчинника одержували вказаний у заголовку продукт, який застосовували в наступній реакції без додаткового очищення. 1.53.4 ./ трет-Бутил-3-(1-(3-(2-аміноетокси)-5,7-диметиладамантан-1-іл)уметил)-5-метил-1 Н- піразол-4-іл)-6-хлорпіколінат бо Розчиняли речовину із прикладу 1.53.2 (2,2 г) в 7 н. аміаку в метанолі (40 мл) і суміш
Зо8 перемішували при 807"С за умов мікрохвильового випромінювання (Віоїаде Іпйіасг) протягом 2 годин. Суміш концентрували під вакуумом і залишок розчиняли в етилацетаті, промивали водою й сольовим розчином та висушували над сульфатом натрію. Після фільтрування й випарювання розчинника одержували вказану в заголовку сполуку. 1.53.5 трет-Бутил-6б-хлор-3-(1-(3,5-диметил-7-|((2,2,7,7-тетраметил-10,10-діоксидо-3,3- дифеніл-4,9-діокса-10/6-тіа-13-аза-3-силапентадекан-15-іл)оксиЇгрицикло!|3.3.1.15Л)дец-1- ил)метил)-5-метил-1Н-піразол-4-іл|Іпіридин-2-карбоксилат
У розчин речовини із прикладу 1.53.3 (1,59 г) в М,М-диметилформаміді (30 мл) додавали 4- ((трет-бутилдифенілсиліл)окси)-2,2-диметилбутилетенсульфонат (1,6 г) і М,М- діізопропілетиламін (1 мл) та перемішували суміш протягом 4 днів. Реакційну суміш розчиняли в етилацетаті (400 мл), промивали водою й сольовим розчином та висушували над сульфатом натрію. Після фільтрування й випарювання розчинника одержували вказаний у заголовку продукт, який застосовували в наступній реакції без додаткового очищення. М5 (ЕБ5І) т/е 976,8 (МАН. 1.53.6. трет-Бутил-3-11-(3-(113-(трет-бутоксикарбоніл)-2,2,7,7-тетраметил-10,10-діоксидо-3,3- дифеніл-4,9-діокса-10А6-тіа-13-аза-3-силапентадекан-15-іл|окси)-5,7- диметилтрицикло!їЇ3.3.1.127|дец-1-ил)метилі|-5-метил-1Н-піразол-4-іл)-б-хлорпіридин-2- карбоксилат
У розчин речовини із прикладу 1.53.4 (2,93 г) в тетрагідрофурані (50 мл) додавали ди-трет- бутилдикарбонат (0,786 г) і 4-(диметиламіно)піридин (100 мг) та перемішували суміш протягом ночі. Суміш концентрували під вакуумом і залишок розчиняли в етилацетаті (300 мл), промивали 1н. водним розчином НСіІ, водою та сольовим розчином і висушували над сульфатом натрію. Після фільтрування й випарювання розчинника одержували залишок, який очищували за допомогою хроматографії на силікагелі, з елююванням 2095 етилацетатом у гептані, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕІ) т/е 1076,9 (МАН). 1.53.7. трет-Бутил-3-11-(3-(113-(трет-бутоксикарбоніл)-2,2,7,7-тетраметил-10,10-діоксидо-3,3- дифеніл-4,9-діокса-10А6-тіа-13-аза-3-силапентадекан-15-іл|окси)-5,7- диметилтрициклоїЇ3.3.1.157)дец-1-ил)метил/|-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)-6-(1,2,3,4- тетрагідрохінолін-7-іл/упіридин-2-карбоксилат
У розчин 7-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-діоксаборолан-2-іл)-1,2,3,4-тетрагідрохіноліну (65 мг) в 1,4-діоксані (10 мл) й воді (5 мл) додавали речовину із прикладу 1.53.5 (220 мг), біс(трифенілфосфін)паладію(іІ) дихлорид (7 мг) і фторид цезію (45,6 мг). Суміш перемішували при 120"С протягом 30 хвилин за умов мікрохвильового випромінювання (Віоїаде Іпйіацог).
Суміш розбавляли етилацетатом (200 мл), промивали водою й сольовим розчином та висушували над сульфатом натрію. Після фільтрування й випарювання розчинника одержували залишок, який очищували за допомогою хроматографії на силікагелі з елююванням 20905 етилацетатом у гептані, з одержанням указаної в заголовку сполуки. МБ (Е5І) т/е 1173,9 (МАН). 1.53.8 3-11-(3,5-Диметил-7-(2-(2-сульфоетил)аміно|етокси)утрициклоїЇ3.3.1.127|дец-1- ил)метил|-5-метил-1Н-піразол-4-іл)-6-(11-(П1,3)гіазоло|4,5-б|піридин-2-ілкарбамоїл)-1,2,3,4- тетрагідрохінолін-7-іл|Іпіридин-2-карбонова кислота
У суспензію біс(2,5-діоксопіролідин-1-ілукарбонату (48,2 мг) в ацетонітрилі (10 мл) за температури навколишнього середовища додавали тіазоло|4,5-б|піридин-2-амін (34 мг) і суміш перемішували протягом 1 години. Додавали розчин речовини із прикладу 1.53.6 (220 мг) в ацетонітрилі (5 мл) та енергійно перемішували суспензію протягом ночі. Суміш розбавляли етилацетатом (200 мл), промивали водою й сольовим розчином та висушували над сульфатом натрію. Після фільтрування й випарювання розчинника одержували залишок, який розчиняли в трифтороцтовій кислоті (10 мл) та перемішували протягом ночі. Після випарювання розчинника залишок очищували за допомогою НРІ С з оберненою фазою (система оіЇзоп), з елююванням від 10 до 8595 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./06б. трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (500 МГц, диметилсульфоксид-сйв) б ррт 8,42-8,48 (т, 1Н), 8,31-8,40 (т, 4Н), 8,03 (а, 1), 7,89 (а, 1Н), 7,80 (а, 1), 7,47 (5, 1Н), 7,26-7,37 (т, 2Н), 3,93-4,02 (т, ЗН), 3,90 (в5, ЗН), 3,52-3,60 (т, ЗН), 3,17-3,26 (т, 2Н), 3,05-3,14 (т, 2Н), 2,76-2,89 (т, 5Н), 2,23 (5, ЗН), 1,90-2,01 (т, 2Н), 1,44 (5, 2Н), 1,27-1,37 (т, 4Н), 0,99-1,22 (т, 5Н), 0,88 (5, 6Н). М5 (ЕІ) т/е 855,1 (М.Н) ». 1.54 Синтез 3-1-(3,5-диметил-7-(2-(2-сульфоетил)аміно|етокси)трицикло!/3.3.1.127|дец-1- ил)метилі|-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)-6-І8-(11,9|гіазоло|4,5-б|піридин-2-ілкарбамоїл)нафталін-2- іл|піридин-2-карбонової кислоти (сполуки М/2.54) 1.54.1 трет-Бутил-3-11-(3-(113-(трет-бутоксикарбоніл)-2,2,7,7-тетраметил-10,10-діоксидо-3,3- 60 дифеніл-4,9-діокса-10А6-тіа-13-аза-3-силапентадекан-15-іл|окси)-5,7-
диметилтрицикло!Ї3.3.1.157|дец-1-ил)метил|-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)-6-|(8- (метоксикарбоніл)нафталін-2-іл|піридин-2-карбоксилат
Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни метил-7-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2- діоксаборолан-2-іл)-1-нафтоату 7-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-діоксаборолан-2-іл)-1,2,3,4- тетрагідрохіноліном в прикладі 1.53.6. М5 (ЕБ5І) т/е 1226,6 (М.Н). 1.54.2 7-І6-(трет-Бутоксикарбоніл)-5-11-(3-13-(трет-бутоксикарбоніл)-2,2,7,7-тетраметил- 10,10-діоксидо-3,3-дифеніл-4,9-діокса-10А6-тіа-13-аза-3-силапентадекан-15-іл|окси)-5,7- диметилтрициклоїЇ3.3.1.157|дец-1-ил)метилі|-5-метил-1Н-піразол-4-іл)піридин-2-іл|Інафталін- 1- карбонова кислота
У розчин речовини із прикладу 1.54.1 (79 мг) в тетрагідрофурані (4 мл), метанолі (З мл) й воді (З мл) додавали моногідрат гідроксиду літію (60 мг) та перемішували суміш протягом ночі.
Реакційну суміш розбавляли етилацетатом (200 мл), промивали 1 н. водним розчином НСІ, водою та сольовим розчином і висушували над сульфатом натрію. Після фільтрування й випарювання розчинника одержували вказаний у заголовку продукт, який застосовували на наступній стадії без додаткового очищення. М5 (ЕБІ) т/е 1211,6 (МН). 1.54.3 3-11-(3,5-Диметил-7-(2-(2-сульфоетил)аміно|етокси)утрициклоїЇ3.3.1.127|дец-1- ил)метил|-5-метил-1Н-піразол-4-іл)-6-І8-(Ф1,3)гіазоло|4,5-б|піридин-2-ілкарбамоїл)нафталін-2- іл|Іпіридин-2-карбонова кислота
У розчин речовини із прикладу 1.54.2 (60 мг) у дихлорметані (4 мл) додавали тіазоло!|4,5-
ВІ|Іпіридин-2-амін (7,56 мг), 1-етил-3-ІЗ-(диметиламіно)пропілікарбодіїміду гідрохлорид (19 му) і 4- (диметиламіно)піридин (12,2 мг) та перемішували суміш протягом ночі. Реакційну суміш розбавляли етилацетатом (200 мл), промивали водою й сольовим розчином та висушували над сульфатом натрію. Після фільтрування й випарювання розчинника одержували вказаний у заголовку продукт, який розчиняли у дихлорметані/трифтороцтовій кислоті (1:11, б мл) та перемішували протягом ночі. Після випарювання розчинника залишок розчиняли в М,М- диметилформаміді/воді (111, 12 мл) та очищували за допомогою НРІС з оберненою фазою (система сіїзоп), з елююванням від 10 до 8595 ацетонітрилу у воді, що містила 0,190 трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-сйвє) б ррт 13,42 (5, 1Н), 9,05 (5, 1Н), 8,51-8,69 (т, 2Н), 8,31-8,41 (т, 2Н),
Зо 8,18-8,26 (т, 4Н), 8,06 (а, 1Н), 7,97 (а, 1Н), 7,68-7,79 (т, 1Н), 7,49 (в, 1Н), 7,40 (ад, 1), 3,90 (в,
ЗН), 3,18-3,29 (т, ЗН), 3,07-3,15 (т, 2Н), 2,82 (І, ЗН), 2,24 (5, ЗН), 1,44 (5, 2Н), 0,97-1,37 (т, ТОН), 0,88 (5, 6Н). М5 (ЕБІ) т/е 850,1 (М.Н). 1.55 Синтез (18)-1-(12-(5-(1-13-(2-аміноетокси)-5,7-диметилтрициклоїЇ3.3.1.127|дец-1- ил|метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)-6-карбоксипіридин-2-іл|-8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)- 1,2,3,4-тетрагідроізохінолін-5-іл)іметил)-1,5-ангідро-Ю-глюцитолу (сполуки М/2.55) 1.55.1 (28,38,45,58)-3,4,5-Трис(метоксиметокси)-2-(метоксиметокси)метил)-6- метилентетрагідро-2Н-піран
Вказану в заголовку сполуку одержували згідно .). К. УмМаїКег еї аї., Вісогд. Мед. Спет. 2006, 14, 3038-3048. М5 (ЕБІ) т/е 370 (М-АМНа4)". 1.55.2 Метиловий естер 4-бром-3-ціанометилбензойної кислоти
У розчин триметилсиланкарбонітрилу (3,59 мл) в тетрагідрофурані (б мл) додавали краплями 1 М тетрабутиламонію фторид (26,8 мл, 1 М в тетрагідрофурані) протягом 30 хвилин.
Розчин перемішували за кімнатної температури протягом 30 хвилин. Розчиняли метил-4-бром-
З3-(бромметил)бензоат (7,50 г) в ацетонітрилі (30 мл) і додавали краплями у перший розчин протягом 30 хвилин. Розчин нагрівали до 807"С протягом 30 хвилин й охолоджували. Розчин концентрували за зниженого тиску і залишок очищували за допомогою хроматографії на силікагелі, з елююванням від 20 до 3095 етилацетату в гептанах, з одержанням указаної в заголовку сполуки. 1.55.3 Метиловий естер 3-(2-аміноетил)-4-бромбензойної кислоти
Розчиняли речовину із прикладу 1.55.2 (5,69 г) в тетрагідрофурані (135 мл) і додавали 1 М боран (в тетрагідрофурані, 24,6 мл). Розчин перемішували за кімнатної температури протягом 1бгодин і повільно гасили метанолом і 1 М водним розчином хлористоводневої кислоти.
Додавали 4 М водний розчин хлористоводневої кислоти (150 мл) і розчин перемішували за кімнатної температури протягом 16 годин. Суміш концентрували за зниженого тиску й регулювали рН до 11-12 із застосуванням твердого карбонату калію. Потім розчин екстрагували дихлорметаном (З х 100 мл). Органічні екстракти об'єднували й висушували над безводним сульфатом натрію. Розчин фільтрували та концентрували за зниженого тиску і очищували залишок за допомогою хроматографії на силікагелі, з елююванням від 10 до 2095 метанолу в дихлорметані, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕІ) т/е 258, 260 (М--Н)». бо 1.55.4 Метиловий естер 4-бром-3-(2-(2,2,2-трифторацетиламіно)етил|бензойної кислоти
Розчиняли речовину із прикладу 1.55.2 (3,21г) у дихлорметані (60 мл). Розчин охолоджували до 0"С і додавали триетиламін (2,1 мл). Додавали краплями трифтороцтовий ангідрид (2,6 мл). Розчин перемішували при 0"С протягом десяти хвилин і приймали охолоджувальну баню. Через 1 годину додавали воду (50 мл) і розчин розбавляли етилацетатом (100 мл). Додавали 1 М водний розчин хлористоводневої кислоти (50 мл) і органічний шар відділяли, промивали 1 М водним розчином хлористоводневої кислоти та промивали сольовим розчином. Розчин висушували безводним сульфатом натрію, фільтрували та концентрували за зниженого тиску з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕБІ) т/е 371, 373 (МАН). 1.55.5 Метиловий естер 5-бром-2-(2,2,2-трифторацетил)-1,2,3,4-тетрагідроізохінолін-8- карбонової кислоти
У колбу поміщали речовину із прикладу 1.55.4 (4,40 г) і параформальдегід (1,865 г) та додавали концентровану сірчану кислоту (32 мл). Розчин перемішували за кімнатної температури протягом однієї години. Додавали холодну воду (120 мл) та екстрагували розчин етилацетатом (3 х100 мл). Екстракти об'єднували, промивали насиченим водним розчином бікарбонату натрію (100 мл) та водою (100 мл) і висушували над безводним сульфатом натрію.
Суміш фільтрували та концентрували за зниженого тиску. Залишок очищували за допомогою хроматографії на силікагелі, з елююванням від 20 до 3095 етилацетату в гептанах, із одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (Е5І) т/е 366, 368 (МАН). 1.55.6 Метил-2-(2,2,2-трифторацетил)-5-((35,48,58,6Н)-3,4,5-трис(метоксиметокси)-6- ((метоксиметокси)метил)тетрагідро-2Н-піран-2-іл)метил)-1,2,3,4-тетрагідроізохінолін-8- карбоксилат
Розчиняли речовину із прикладу 1.55.1 (242 мг) в тетрагідрофурані (7 мл) і додавали краплями 9-борабіцикло/3.3.1|нонан (3,0 мл). Розчин нагрівали зі зворотним холодильником протягом 4,5 години і забезпечували його охолодження до кімнатної температури. Додавали фосфат калію (3 М, 0,6 мл) й розчин перемішували протягом 10 хвилин. Потім розчин дегазували й тричі продували азотом. Окремо речовину із прикладу 1.55.5 (239 мг) й адукт дихлорі1,1-бісідифенілфосфіно)фероцені|паладію(Ії) дихлорметан (39 мг) розчиняли в М,М- диметилформаміді (7 мл) і потім розчин дегазували і три рази продували азотом. У розчин
Зо тетрагідрофурану додавали краплями розчин М,М-диметилформаміду й суміш перемішували протягом 18 годин. Додавали розчин НСІ (водний 0,1 М, 25 мл) і розчин три рази екстрагували етилацетатом (30 мл). Органічні екстракти об'єднували, промивали сольовим розчином, висушували над безводним сульфатом натрію, фільтрували та концентрували. Залишок очищували за допомогою хроматографії на силікагелі з елююванням від 30 до 50905 етилацетату в гептанах, із одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (Е5І) т/е 710 (МаАМН»а). 1.55.7 Метил-5-(35,48,58,68)-3,4,5-трис(метоксиметокси)-6- ((метоксиметокси)метил)тетрагідро-2Н-піран-2-іл)метил)-1,2,3,4-тетрагідроізохінолін-8- карбоксилат
Розчиняли речовину із прикладу 1.55.6 (247 мг) в метанолі (1 мл), тетрагідрофурані (1 мл) й воді (0,5 мл). Додавали карбонат калію (59 мг) й розчин перемішували за кімнатної температури протягом 16 годин. Розчин розбавляли етилацетатом (10 мл) і промивали насиченим водним розчином бікарбонату натрію (1 мл). Органічний шар висушували над безводним сульфатом натрію, фільтрували та концентрували за зниженого тиску з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕБІ) т/е 600 (МН). 1.55.68 Метил-2-(5-бром-6-(трет-бутоксикарбоніл)піридин-2-іл)-5-((35,48,58,6Н)-3,4,5- трис(метоксиметокси)-6-((метоксиметокси)метил)тетрагідро-2Н-піран-2-іл)метил)-1,2,3,4- тетрагідроізохінолін-8-карбоксилат
Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 1.55.7 метил- 1,2,3,4-тетрагідроізохінолін-8-карбоксилатом в прикладі 1.1.11. М5 (ЕБ5І) т/е 799, 801 (М-трет- бутил)». 1.55.9 Метил-2-(6-(трет-бутоксикарбоніл)-5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-діоксаборолан-2- іл)упіридин-2-іл)-5-((35,48,58,6Н)-3,4,5-трис(метоксиметокси)-6- ((метоксиметокси)метил)тетрагідро-2Н-піран-2-іл)метил)-1,2,3,4-тетрагідроізохінолін-8- карбоксилат
Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 1.55.8 речовиною із прикладу 1.1.11 в прикладі 1.2.1. М5 (ЕЗІ) т/е 903 (МН), 933 (М-МеОнН-Н). 1.55.10 2-((3-((4-Йод-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)метил)-5,7-диметиладамантан-1- іл)уокси)етанамін бо Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 1.13.1 речовиною із прикладу 1.10.4 в прикладі 1.10.5. М5 (Е5І) т/е 444 (МАН). 1.55.11 / трет-Бутил-(2-((3-(4-йод-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)метил)-5,7-диметиладамантан- 1- іл)уокси)етил)/карбамат
Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 1.55.10 речовиною із прикладу 1.10.5 в прикладі 1.10.6. М5 (ЕБ5І) т/е 544 (МАН), 488 (М-трет-бутил)», 542 (М-Н). 1.55.12 / Метил-2-(6-(трет-бутоксикарбоніл)-5-(1-((3-(2-(трет-бутоксикарбоніл)аміно)етокси)- 5,7-диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1Н-піразол-4-іл)піридин-2-іл)-5-((3А,45,55,65)- 3,4,5-трис(метоксиметокси)-6-((метоксиметокси)метил)тетрагідро-2Н-піран-2-іл)уметил)-1,2,3,4- тетрагідроізохінолін-8-карбоксилат
Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 1.55.9 речовиною із прикладу 1.2.1 й речовини із прикладу 11.55.11 речовиною із прикладу 1.13.3 в прикладі 1.13.4. М5 (Е5І) т/е 1192 (МаАНУ. 1.55.13 2-(6-(трет-Бутоксикарбоніл)-5-(1-((3-(2-(трет-бутоксикарбоніл)аміно)етокси)-5,7- диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)піридин-2-іл)-5-((38,45,55,65)-3,4,5- трис(метоксиметокси)-6-((метоксиметокси)метил)тетрагідро-2Н-піран-2-іл)метил)-1,2,3,4- тетрагідроізохінолін-8-карбонова кислота
Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 1.55.12 речовиною із прикладу 1.2.4 в прикладі 1.2.5. М5 (Е5І) т/е 1178 (Ма-Н)», 1176 (М-Н). 1.55.14 Трет-бутил-6-(8-(бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-5-(3А8,45,55,65)-3,4,5- трис(метоксиметокси)-6-((метоксиметокси)метил)тетрагідро-2Н-піран-2-іл)метил)-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл)-3-(1-((3-(2-(трет-бутоксикарбоніл)аміно)етокси)-5,7- диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)піколінат
Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 1.55.13 речовиною із прикладу 1.52.2 в прикладі 1.52.3. М5 (Е5І) т/е 1310 (МАН), 1308 (М-Н). 1.55.15.. (18)-1-((2-(5-(1-13-(2-Аміноетокси)-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.157)дец-1-ил|метил)-5- метил-1Н-піразол-4-іл)-6-карбоксипіридин-2-іл|-8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-1,2,3,4- тетрагідроізохінолін-5-ілуметил)-1,5-ангідро-Ю-глюцит
Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 1.55.14
Зо речовиною із прикладу 1.52.3 і 4 М водного розчину хлористоводневої кислоти трифтороцтовою кислотою в прикладі 1.52.4. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-св) б ррт 7,96 (й, 1Н), 7,73 (а, тн), 7,58 (р5, ЗН), 7,46 (а, 1Н), 7,43-7,39 (т, 2Н), 7,30 (а, 1), 7,27-7,25 (т, 2Н), 6,88 (9, 1), 4,90 (д, 2Н), 3,76 (т, 4Н), 3,51 (т, 1Н), 53,21 (й, 2Н), 3,18 (9, 1Н), 3,12 (т, 2Н), 3,02 (т, 4Н), 2,93 (т, 4Н), 2,83 (т, 2Н), 2,59 (т 2Н), 2,03 (5, ЗН), 1,44 (5, 1Н), 1,34 (5, 2Н), 1,23 (9, 4Н), 1,07 (т, 4Н), 0,97 (9, 2 Н), 0,80 (5, 6Н). М5 (ЕІ) т/е 922 (МАН), 920 (М-НУ. 1.56 Синтез 6-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-3-11-(3-2-((3- карбоксипропіл)аміно|етокси)-5,7-диметилтрицикло|3.3.1.157)дец-1-ил)метил|-5-метил-1 Н- піразол-4-іліпіридин-2-карбонової кислоти (сполуки М/2.56) 1.56.1 трет-Бутил-6-(8-(бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл)-3-(1-((3- (2-(4-(трет-бутокси)-4-оксобутил)аміно)етокси)-5,7-диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н- піразол-4-іл)піколінат
У розчин речовини із прикладу 1.2.7 (0,103 г) й трет-бутил-4-бромбутаноату (0,032 г) в дихлорметані (0,5 мл) додавали протягом ночі М,М-діїізопропілетиламін (0,034 мл) при 507С в закупореній посудині з темного скла. Реакційну суміш концентрували, розчиняли в диметилсульфоксиді/метанолі (1:11, 2 мл) та очищували за допомогою НРІС з оберненою фазою із застосуванням системи сіїзоп, з елююванням від 5 до 7595 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./0б. трифтороцтової кислоти. Необхідні фракції об'єднували й висушували сублімацією з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕБІ) т/е 944,6 (М'-1). 1.56.1 6-(8-(1,3-Бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-3-11-((3-12-((3- карбоксипропіл)аміно|етокси)-5,7-диметилтрицикло|3.3.1.157)дец-1-ил)метилі|-5-метил-1 Н- піразол-4-іл)упіридин-2-карбонова кислота
Розчин речовини із прикладу 1.56.1 (0,049 г) розчиняли у дихлорметані (1 мл) й обробляли трифтороцтовою кислотою (0,5 мл) та перемішували суміш протягом ночі. Реакційну суміш концентрували, розчиняли в суміші (2 мл) М,М-диметилформамід/вода (1:1) та очищували за допомогою НРІ С з оберненою фазою із застосуванням системи сбіЇб5оп, з елююванням від 5 до 7595 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./о0б6. трифтороцтової кислоти. Необхідні фракції об'єднували й висушували сублімацією з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-ав) б ррт 13,09- 12,32 (т, 2Н), 8,91 (в5, 2Н), 8,03 (а, 1Н), 7,79 (а, 1Н), 7,62 (й, 1), 7,54- 7,40 (т, ЗН), 7,40- 7,32 (т, 2Н), 7,29 (5, 1Н), 6,96 (й, 1Н), 4,96 (5, 2Н), 3,89 (510) (І, 2Н), 3,83 (5, 2Н), 3,55 (9, 2Н), 3,02 (а, АН), 2,92 (а, 2Н), 2,33 (І, 2Н), 2,10 (5, ЗН), 1,80 (р, 2Н),
1,43 (5, 2Н), 1,30 (а, 4Н), 1,21- 0,95 (т, 6Н), 0,87 (5, 6Н). М5 (Е5І) т/е 832,3 (М.Н). 1.57 Синтез 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)нафталін-2-іл|-3-11-(3,5-диметил-7-(2-|(3- фосфонопропіл)аміно|етокси)трицикло!/3.3.1.157дец-1-ил)метил|-5-метил-1Н-піразол-4- іл)іпіридин-2-карбонової кислоти (сполуки М/2.57) 1.57.1 трет-Бутил-3-(1-((3-(2-гідроксиетокси)-5,7-диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н- піразол-4-іл)-6-(8-(метоксикарбоніл)нафталін-2-іл)піколінат
У розчин метил-7-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-діоксаборолан-2-іл)-1-нафтоату (2,47 г) в 1,4- діоксані (40 мл) й воді (20мл) додавали речовину із прикладу 1.20.2 (4,2), біс(трифенілфосфін)паладію(і!) дихлорид (556 мг) і фторид цезію (3,61 г). Суміш нагрівали зі зворотним холодильником протягом ночі, розбавляли етилацетатом (400 мл) і промивали водою та сольовим розчином. Органічний шар висушували над сульфатом натрію, фільтрували та концентрували. Залишок очищували за допомогою хроматографії на силікагелі, з елююванням 2095 етилацетатом у дихлорметані і потім 5956 метанолом у дихлорметані, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (Е5І) т/е 680,84 (МАН). 1.57.2 трет-Бутил-3-(1-((3,5-диметил-7-(2-(метилсульфоніл)окси)етокси)адамантан-1- ілуметил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)-6-(8-(метоксикарбоніл)нафталін-2-іл)піколінат
В охолоджений (0"С) розчин речовини прикладу 1.57.1 (725 мг) у дихлорметані (10 мл) й триетиламіні (0,5 мл) додавали метансульфонілхлорид (0,249 мл). Суміш перемішували за кімнатної температури протягом 4 годин, розбавляли етилацетатом та промивали водою і сольовим розчином. Органічний шар висушували над сульфатом натрію, фільтрували та концентрували з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (Е5І) т/е 758,93 (М'-Н)». 1.57.3 трет-Бутил-3-(1-((3-(2-азидоетокси)-5,7-диметиладамантан-1-іл)уметил)-5-метил-1 Н- піразол-4-іл)-6-(8-(метоксикарбоніл)нафталін-2-іл)піколінат
У розчин речовини із прикладу 1.57.2 (4,2 г) в М,М-диметилформаміді (30 мл) додавали азид натрію (1,22 г). Суміш перемішували за кімнатної температури протягом 96 годин, розбавляли етилацетатом (600 мл) та промивали водою і сольовим розчином. Органічний шар висушували над сульфатом натрію, фільтрували та концентрували з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕБІ) т/е 704,86 (МАН). 1.57.4.7-(5-(1-((3-(2-Азидоетокси)-5,7-диметиладамантан-1-іл)уметил)-5-метил-1 Н-піразол-4-
Зо іл)-6-(трет-бутоксикарбоніл)піридин-2-іл)-1-нафтойна кислота
У розчин речовини із прикладу 1.57.3 (3,5 г) в тетрагідрофурані/метанолі/НгО (2:1:1, 30 мл) додавали моногідрат гідроксиду літію (1,2 г) та перемішували суміш за кімнатної температури протягом ночі. Реакційну суміш підкислювали 1 н. водним розчином НСЇ, розбавляли етилацетатом (600 мл) та промивали водою і сольовим розчином. Органічний шар висушували над сульфатом натрію, фільтрували та концентрували з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕБІ) т/е 691,82 (МАН). 1.57.5 трет-Бутил-3-(1-((3-(2-азидоетокси)-5,7-диметиладамантан-1-іл)уметил)-5-метил-1 Н- піразол-4-іл)-6-(8-(бензо|д9|гіазол-2-ілкарбамоїл)нафталін-2-іл)піколінат
У розчин речовини із прикладу 1.57.4 (870 мг) в М,М-диметилформаміді (10 мл) додавали бензо|Ч|гіазол-2-амін (284 мг), фтор-М,М,М'М'-тетраметилформамідинію гексафторфосфат (499 мг) і М.,М-діїізопропілетиламін (488 мг). Суміш перемішували при 60"С протягом З годин, розбавляли етилацетатом (200 мл) та промивали водою і сольовим розчином. Органічний шар висушували над сульфатом натрію, фільтрували та концентрували з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕІ) т/е 824,02 (МАН) ». 1.57.6 / трет-Бутил-3-(1-(3-(2-аміноетокси)-5,7-диметиладамантан-1-іл)уметил)-5-метил-1 Н- піразол-4-іл)-6-(8-(бензо|д9|гіазол-2-ілкарбамоїл)нафталін-2-іл)піколінат
У розчин речовини із прикладу 1.57.5 (890 мг) в тетрагідрофурані (30 мл) додавали Ра/сС (90 мг, 595). Суміш перемішували в атмосфері водню за кімнатної температури протягом ночі й фільтрували. Фільтрат концентрували з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (Е5І) т/е 798,2 (МАН). 1.57.7 6-І(8-(1,3-Бензотіазол-2-ілкарбамоїл)нафталін-2-іл|-3-11-(3,5-диметил-7-і2-|(3- фосфонопропіл)аміно|етоксиутрицикло!Ї3.3.1.127)дец-1-илуметилі|-5-метил-1 Н-піразол-4- іл)піридин-2-карбонова кислота
У розчин речовини із прикладу 1.57.6 (137 мг) у дихлорметані (6 мл) додавали речовину із прикладу 1.14.2 (43 мг). Суміш перемішували за кімнатної температури протягом 1,5 години й додавали розчин МавВвВНа (26 мг) в метанолі (2 мл). Суміш перемішували за кімнатної температури протягом 2 годин, розбавляли етилацетатом (200 мл) і промивали 2 н. водним розчином Маон, водою та сольовим розчином. Органічний шар висушували над сульфатом натрію, фільтрували та концентрували. Залишок розчиняли у дихлорметані (5 мл) й обробляли бо трифтороцтовою кислотою (5 мл) протягом ночі. Реакційну суміш концентрували. Залишок очищували за допомогою НРІ С з оберненою фазою (система сбіїЇзоп), з градієнтом елюювання від 10 до 8595 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./06. розчину трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (500 МГц, диметилсульфоксид-ав) б 9,03 (5, 1Н), 8,48-8,35 (т, ЗН), 8,29-8,16 (т, ЗН), 8,08 (ад, 1Н), 8,03 (аа, 1), 7,94 (а, 1), 7,82 (9, 1Н), 507,71 (ад, тн), 7,53-7,47 (т, 2Н), 7,38 (а, 1Н), 4,81-0,53 (т, 89Н). М5 (ЕБІ) т/е 863,2 (М.Н). 1.58 Синтез 6-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-3-(1-413-(2-Ц4- (бета-О-глюкопіранозилокси)бензилі|аміно)етокси)-5, 7-диметилтрицикло!/3.3.1.12Лдец-1- ил|метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)піридин-2-карбонової кислоти (сполуки М/2.58)
У розчин речовини із прикладу 1.3.1 (44,5 мг) в тетрагідрофурані (2 мл) й оцтовій кислоті (0,2 мл) додавали 4-((25,38,48,55,6Н8)-3,4,5-тригідрокси-6-(гідроксиметил)тетрагідро-2Н-піран- 2-іл)уокси)бензальдегід (17 мг) і МозО» (300 мг). Суміш перемішували за кімнатної температури протягом 1 години перед додаванням ціаноборогідриду натрію на смолі (300 мг). Суміш перемішували за кімнатної температури протягом ночі й фільтрували. Фільтрат концентрували і залишок очищували за допомогою НРІ С з оберненою фазою (система осіїбзоп), з градієнтом елюювання від 10 до 8595 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./06. розчину трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕБІ) т/е 1015,20 (МаН) У. 1.59 Синтез 3-(1-193-(2-(Ц4-(бета-О-алопіранозилокси)бензилі|аміно)етокси)-5,7- диметилтрициклоїЇ3.3.1.157)дец-1-ил|метил)-5-метил-1Н-піразол-4-іл)-6-(8-(1,3-бензотіазол-2- ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|Іпіридин-2-карбонової кислоти (сполуки М/2.59)
У розчин речовини із прикладу 1.3.1 (44,5 мг) в тетрагідрофурані (2 мл) й оцтовій кислоті (0,2 мл) додавали 4-((25,38,45,55,6Н8)-3,4,5-тригідрокси-6-(гідроксиметил)тетрагідро-2Н-піран- 2-іл)уокси)бензальдегід (17 мг) і МазО» (300 мг) та перемішували суміш за кімнатної температури протягом 1 години перед додаванням ціаноборогідриду натрію на смолі (300 мг). Суміш перемішували за кімнатної температури протягом ночі й фільтрували. Фільтрат концентрували і залишок очищували за допомогою НРІ С з оберненою фазою (система сіЇ5оп), з градієнтом елюювання від 10 до 8595 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./об. трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (Е5І) т/е 1015,20 (МАН). 1.60 Синтез 3-11-К(3-2-(азетидин-3-іл-(2-сульфоетил)аміно|етокси)-5,7- диметилтрициклоїЇ3.3.1.157)дец-1-ил)метилі|-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)-6-(8-(1,3-бензотіазол-2-
Зо ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|Іпіридин-2-карбонової кислоти (сполуки М/2.60) 160.1 трет-Бутил-6-(8-(бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл)-3-(1-((3- (2-((1-«трет-бутоксикарбоніл)азетидин-3-іл)-(2-(4-(трет-бутилдифенілсиліл)гідрокси-2,2- диметилбутокси)сульфоніл)етил)аміно)етокси)-5,7-диметиладамантан-1-ілуметил)-5-метил-1 Н- піразол-4-іл)піколінат
Розчин речовини із прикладу 1.2.8 (0,075 г), трет-бутил-3-оксоазетидин-1-карбоксилату (0,021 г) й триацетоксиборогідриду натрію (0,025 г) в дихлорметані (0,5 мл) перемішували за кімнатної температури протягом ночі. Реакційну суміш завантажували на силікагель і застосовували елюювання від О до 1095 метанолу в дихлорметані, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕІ) т/е 1403,9 (М--1). 1.60.2 3-11-(3-2-(Азетидин-3-іл-(2-сульфоеєтил)аміно|етокси)-5, 7- диметилтрициклоїЇ3.3.1.157)дец-1-ил)метилі|-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)-6-(8-(1,3-бензотіазол-2- ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|Іпіридин-2-карбонова кислота
Розчин речовини із прикладу 11.60.11 (0,029г) в дихлорметані (1 мл) обробляли трифтороцтовою кислотою (1 мл) та перемішували протягом ночі. Реакційну суміш концентрували, розчиняли в диметилсульфоксиді/метанолі 1:1 (2 мл) та очищували суміш за допомогою НРІ С з оберненою фазою із застосуванням системи сіїзоп, з елююванням від 10 до 8095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./о0б6. трифтороцтової кислоти. Необхідні фракції об'єднували й висушували сублімацією з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-ав) б ррт 12,86 (5, 1Н), 8,81 (5, 2Н), 8,04 (й, 1), 7,79 (а, 1Н), 7,62 (а, 1), 7,52 (9, 1), 7,50- 7,46 (т, 1Н), 7,44 (а, 1Н), 7,40- 7,33 (т, 2Н), 7,30 (в, 1Н), 6,96 (а, 1Н), 4,96 (5, 2Н), 4,37 (д, 1Н), 4,27 (5, 2Н), 4,11 (5, 2Н), 3,89 (І, 2Н), 3,83 (5, 2Н), 3,58- 3,54 (т, 2Н), 3,32 (І, 2Н), 3,24 (5, 2Н), 3,01 (ї, 2Н), 2,85 (І, 2Н), 2,10 (в, ЗН), 1,48- 0,97 (т, 12Н), 0,87 (5, 6Н). М5 (ЕІ) т/е 909,2 (М.-Н)У. 1.61 Синтез 3-11-(3-2-(З-амінопропіл)-(2-сульфоетил)аміно|етокси)-5,7- диметилтрицикло!Ї3.3.1.1257)дец-1-ил)метил)|-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)-6-(8-(1,3-бензотіазол-2- ілкарбамоїл)-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1Н)-іл|Іпіридин-2-карбонової кислоти (сполуки М/2.61) 1.61.1 6-(8-(Бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл)-3-(1-((3-(2-((3-(трет- бутоксикарбоніл)аміно)пропіл)-(2-сульфоетил)аміно)етокси)-5,7-диметиладамантан-1-іл)метил)-
Б-метил-1Н-піразол-4-іл)піколінова кислота бо Вказану в заголовку сполуку одержували із застосуванням процедури для прикладу 1.33.1 шляхом заміни трет-бутил-(2-оксоетил)карбамату трет-бутил-(З-оксопропіл)укарбаматом. М5 (ЕБІ) т/е 1011,5 (М--Н). 1.61.2 3-11-(3-2-((3-Амінопропіл)-(2-сульфоетил)аміно|етокси)-5,7- диметилтрициклоїЇ3.3.1.157)дец-1-ил)метилі|-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)-6-(8-(1,3-бензотіазол-2- ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|Іпіридин-2-карбонова кислота
Вказану в заголовку сполуку одержували, як описано в прикладі 1.6.2, шляхом заміни речовини із прикладу 1.6.1 речовиною із прикладу 11.61.41. "Н ЯМР (400 МГЦ, диметилсульфоксид-ав) б ррт 12,87 (5, 1Н), 9,10 (5, 1Н), 8,04 (а, 1Н), 7,88-7,67 (т, 4Н), 7,62 (й, 1Н), 7,57-7,40 (т, ЗН), 7,36 (Ю, 2Н), 6,96 (а, 1Н), 4,96 (5, 2Н), 4,05-3,78 (т, 4Н), 3,41-3,08 (т, ЗН), 102,94 (й, 6Н), 2,11 (5, ЗН), 1,92 (її, 2Н), 1,53-0,95 (т, 11Н), 0,87 (5, 6Н). М5 (ЕБІ) т/е 911,3 (М--Н). 1.62 Синтез 6-(1-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-1,2,3,4-тетрагідрохінолін-7-іл|-3-11-(3-(2-(2- карбоксиетил)аміно|етокси)-5,7-диметилтрицикло!/3.3.1.127|дец-1-ил)метил|-5-метил-1 Н-піразол- 4-іл/піридин-2-карбонової кислоти (сполуки М/2.62) 1.62.1 трет-Бутил-3-(1-((3-(2-((3-(трет-бутокси)-3З-оксопропіл)аміно)етокси)-5,7- диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)-б-хлорпіколінат
У розчин речовини із прикладу 1.53.3 (521 мг) в етанолі (10 мл) за температури навколишнього середовища додавали триєтиламін (З мл) з подальшим додаванням трет- бутилакрилату (2 мл). Суміш перемішували за кімнатної температури протягом З годин і потім концентрували до сухого стану. Залишок розчиняли в етилацетаті (200 мл) й розчин промивали водою та сольовим розчином. Органічний шар висушували над сульфатом натрію, фільтрували та концентрували за зниженого тиску з одержанням указаної в заголовку сполуки, яку застосовували в наступній реакції без додаткового очищення. М5 (Е5І) т/е 657,21 (Ма-Н)». 1.62.2 трет-Бутил-3-(1-((3-(2-((3-(«трет-бутокси)-3З-оксопропіл)(трет- бутоксикарбоніл)аміно)етокси)-5,7-диметиладамантан-1-іл)уметил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)-6- хлорпіколінат
У розчин речовини із прикладу 1.62.1 (780 мг) в тетрагідрофурані (10 мл) додавали ди-трет- бутилдикарбонат (259мг) з подальшим додаванням каталітичної кількості /-4- диметиламінопіридину. Реакційну суміш перемішували за кімнатної температури протягом
З годин і потім концентрували до сухого стану. Залишок розчиняли в етилацетаті (200 мл) і
Зо розчин промивали насиченим водним розчином МанНсСОз, водою та сольовим розчином.
Органічний шар висушували над сульфатом натрію, фільтрували та концентрували за зниженого тиску. Залишок очищували за допомогою хроматографії на силікагелі, з елююванням 2096 етилацетатом у гептані, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (Е5І) т/е 757,13 (МАН. 1.62.3 трет-Бутил-3-(1-((3-(2-((3-(«трет-бутокси)-3З-оксопропіл)(трет- бутоксикарбоніл)аміно)етокси)-5,7-диметиладамантан-1-іл)уметил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)-6- (1,2,3,4-тетрагідрохінолін-7-іл)піколінат
У розчин 7-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-діоксаборолан-2-іл)-1,2,3,4-тетрагідрохіноліну (234 мг) в 1,4-діоксані (10 мл) й воді (5 мл) додавали речовину із прикладу 1.62.2 (685 мГг), біс(трифенілфосфін)паладію(ії) дихлорид (63,2 мг) і фторид цезію (410 мг). Суміш нагрівали до 120"С протягом 30 хвилин в умовах мікрохвильового випромінювання (Віоїаде Іпійацйог).
Реакційну суміш гасили додаванням етилацетату й води. Шари розділяли й органічний шар промивали сольовим розчином, висушували над сульфатом натрію, фільтрували та концентрували за зниженого тиску. Залишок очищували за допомогою хроматографії на силікагелі, з елююванням 2095 етилацетатом у гептані, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕБІ) т/е 854,82 (М.Н). 162.4 трет-Бутил-6-(1-(бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-1,2,3,4-тетрагідрохінолін- 7-іл)-3-(1-((3- (2-(3-(трет-бутокси)-3-оксопропіл)(трет-бутоксикарбоніл)аміно)етокси)-5,7-диметиладамантан- 1-ілуметил)-5-метил-1Н-піразол-4-іл)піколінат
У суспензію біс(2,5-діоксопіролідин-1-іл)укарбонату (150 мг) в ацетонітрилі (10 мл) за температури навколишнього середовища додавали бензо|Ч|гіазол-2-амін (88 мг) і суміш перемішували протягом 1 години. Додавали розчин речовини із прикладу 1.62.3 (500 мг) в ацетонітрилі (2 мл) та енергійно перемішували суспензію протягом ночі. Реакційну суміш гасили додаванням етилацетату й води. Шари розділяли й органічний шар промивали сольовим розчином, висушували над сульфатом натрію, фільтрували та концентрували за зниженого тиску. Залишок очищували за допомогою хроматографії на силікагелі, з елююванням 2095 етилацетатом у дихлорметані, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕІ) т/е 1030,5 (МАН. 1.62.5 6-(1-(1,3-Бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-1,2,3,4-тетрагідрохінолін-7-іл|-3-11-(3-(2-(2- 60 карбоксиетил)аміно|етокси)-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.137)дец-1-ил)метил|-5-метил-1 Н-піразол-
4-ілупіридин-2-карбонова кислота
У розчин речовини із прикладу 1.62.4 (110 мг) у дихлорметані (0,53 мл) за температури навколишнього середовища додавали трифтороцтову кислоту (0,53 мл). Реакційну суміш перемішували протягом ночі й концентрували до в'язкого масла. Залишок розчиняли в диметилсульфоксиді/метанолі (1:11, 2 мл) та очищували за допомогою НРІС з оберненою фазою (система сіїзоп), з елююванням від 10 до 5595 ацетонітрилу в 0,195 розчині трифтороцтової кислоти у воді, з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-авє) б ррт 13,10 (5, ЗН), 8,37 (5, 1Н), 8,26 (5, 2Н), 7,98 (а, 1Н), 7,86-7,71 (т,
ЗН), 7,44 (5, 1Н), 7,39-7,31 (т, 1Н), 7,26 (а, 1Н), 7,19 (ї, 1Н), 3,92 (0, 2Н), 3,87 (5, 2Н), 3,55 (ї, 2Н), 10. 3,17-3,00 (т, 4Н), 2,80 (ї, 2Н), 2,62 (І, 2Н), 2,19 (5, ЗН), 1,95-1,88 (т, 2Н), 1,43 (5, 2Н), 1,33-1,25 (т, 4Н), 1,18-1,11 (т, 4Н), 1,09-0,97 (т, 2Н), 0,85 (з, 6Н). М5 (Е5БІ) т/е 818,0 (М-А-Н)». 1.63 Синтез 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-11-((3-Т2-
І(Мб,Мб-диметил-ї -лізил)(метил)аміно|етокси)-5,7-диметилтрицикло|3.3.1.127|дец-1-ил)метил/|-5- метил-1Н-піразол-4-іліпіридин-2-карбонової кислоти (М/2.63) 15 Розчин (5)-2-(((9Н-флуорен-9-іл)уметокси)карбоніл)аміно)-6-(диметиламіно)гексанової кислоти (0,029г) й 1-(Біс(диметиламіно)метилені-13-1,5,3-триазолої4,5-біпіридиній-З-оксиду гексафторофосфату (0,028 г) перемішували разом у М,М-диметилформаміді (0,5 мл) з М,М- діізопропіламіном (0,035 мл). Після перемішування протягом 5 хвилин розчин додавали до речовини із прикладу 1.13.7 (0,051 г) і перемішування продовжували за кімнатної температури 20 протягом ночі. У реакційну суміш додавали діетиламін (0,070 мл) та перемішували реакційну суміш протягом 2 годин. Реакційну суміш розбавляли М,М-диметилформамідом (1 мл), водою (0,5 мл) й 2,2,2-трифтороцтовою кислотою (0,103 мл), потім очищували за допомогою НРІС з оберненою фазою із застосуванням градієнта ацетонітрил/вода від 1095 до 9095. Фракції, які містили продукт, збирали й ліофілізували з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР 25 (500 МГц, диметилсульфоксид-ав) б 9,59 (5, 1Н), 8,41 (5, 1Н), 8,12 (ї, ЗН), 8,01 (а, 1Н), 7,85 (аа, 1Н), 7,81 (й, 1), 7,77 (ад, 1), 7,47 (5, 1Н), 7,38 (1, 1Н), 7,30 (й, 1Н), 7,22 (І, 1Н), 3,97 (ї, 2Н), 3,89 (5, 2Н), 3,49 (аї, 4Н), 3,06 (в, 2Н), 2,99 (д, 2Н), 2,88 (5, 2Н), 2,84 (І, 2Н), 2,75 (9, 6Н), 2,22 (5, ЗН), 2,00 - 1,90 (т, 2Н), 1,84 - 1,52 (т, 4Н), 1,48 - 0,95 (т, 14Н), 0,87 (а, 6Н). М5 (ЕБ5І) т/е 916,2 (МАН).
Зо 1.64 Синтез 3-11-(3-2-(З-амінопропіл)(метил)аміно|етокси)-5,7- диметилтрицикло!|3.3.1.12Л|дец-1-ил)метил|-5-метил-1Н-піразол-4-іл)-6-11-(1,3-бензотіазол-2- ілкарбамоїл)-1,2,3,4-тетрагідрохінолін-7-іл|Іпіридин-2-карбонової кислоти (М/2.64) 1.64.1 6-(1-(Бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-1,2,3,4-тетрагідрохінолін-7-іл)-3-(1-((3-(2-((3-(трет- бутоксикарбоніл)аміно)пропіл)(метил)аміно)етокси)-5,7-диметиладамантан- 1 -іл)метил)-5-метил- 35 1Н-піразол-4-іл)піколінова кислота
Перемішували розчин речовини із прикладу 1.21.5 (100 мг), М,М-діїзопропілетиламіну (68,9 мкл) і трет-бутил-(З-оксопропілукарбамату (68,4 мг) в дихлорметані (З мл) за температури навколишнього середовища протягом 2 годин і додавали МасмМВна (8,27 мг). Реакційну суміш перемішували за температури навколишнього середовища протягом ночі. Додавали метанол 40 (1 мл) і воду (0,2 мл). Одержану суміш перемішували протягом 10 хвилин і концентрували.
Залишок розчиняли в диметилсульфоксиді та очищували за допомогою НРІС з оберненою фазою на системі Сіїзоп (колонка С18), з елююванням від ЗО до 8095 ацетонітрилу у 0,190 водному розчині трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки у вигляді солі трифтороцтової кислоти. М5 (ЕБІ) т/е 459,4 (М2Н) 2. 45 1.64.2.. 3-41-(3-2-((3-Амінопропіл)у/метил)аміно|етокси)-5, 7-диметилтрицикло|3.3.1.157дец-1- ил)метилі|-5-метил-1Н-піразол-4-іл)-6-(1-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-1,2,3,4- тетрагідрохінолін-7-іл|Іпіридин-2-карбонова кислота
Речовину із прикладу 1.64.1 (100 мг) у дихлорметані (4 мл) при 0"С обробляли трифтороцтовою кислотою (1 мл) протягом 1години й суміш концентрували. Залишок 50 очищували за допомогою НРІ С з оберненою фазою (колонка С18), з градієнтом елюювання від до 6095 ацетонітрилу у 0,195 водному розчині трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки у вигляді солі трифтороцтової кислоти. "Н ЯМР (400 МГЦ, диметилсульфоксид-ав) б 9,38 (5, 1Н), 8,37 (5, 1Н), 7,98 (а, 1Н), 7,90 - 7,69 (т, 6Н), 7,44 (5, 2Н), 7,35 (9, 1Н), 7,27 (а, 1Н), 7,22 - 7,16 (т, 1Н), 3,94 (й, 2Н), 3,87 (5, 2Н), 3,64 (І, 2Н), 3,28 - 2,98 (т,
АН), 2,87 - 2,70 (т, 8Н), 2,19 (5, ЗН), 1,90 (ар, 4Н), 1,43 (5, 2Н), 1,36 - 1,22 (т, 4Н), 1,15 (5, 4Н), 1,08 - 0,95 (т, 2Н), 0,86 (5, 6Н). М5 (ЕБІ) т/е 817,6 (МАН). 1.65 Синтез 3-11-(3-2-(азетидин-З-іл(іметил)аміно|етокси)-5,7- диметилтрицикло!Ї3.3.1.157|дец-1-ил)метил|-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)-6-11-(1,3-бензотіазол-2- ілкарбамоїл)-1,2,3,4-тетрагідрохінолін-7-іл|Іпіридин-2-карбонової кислоти (М/2.65) бо 1.65.1. 6-(1-(Бензо|4|гіазол-2-ілкарбамоїл)-1,2,3,4-тетрагідрохінолін-7-іл)-3-(1-((3-(2-(1-(трет-
бутоксикарбоніл)азетидин-3-іл)(метил)аміно)етокси)-5,7-диметиладамантан-1-іл)метил)-5- метил-1Н-піразол-4-іл)піколінова кислота
Вказану в заголовку сполуку одержували із застосуванням процедури, описаної в прикладі 164.1, шляхом заміни трет-бутил-(З-оксопропіл)укарбамату трет-бутил-3-оксоазетидин-1- карбоксилатом. М5 (Е5І) т/е 915,3 (МАН). 165.2. 3-11-(3-2-(Азетидин-3-іл(метил)аміно|етокси)-5,7-диметилтрицикло!Ї3.3.1.127)дец-1- ил)метилі|-5-метил-1Н-піразол-4-іл)-6-(1-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-1,2,3,4- тетрагідрохінолін-7-іл|Іпіридин-2-карбонова кислота
Вказану в заголовку сполуку одержували із застосуванням процедури в прикладі 1.64.2 шляхом заміни речовини із прикладу 1.64.1 речовиною із прикладу 1.65.1. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-ав) б 9,01 (в, 2Н), 8,37 (5, 1Н), 7,98 (а, 1Н), 7,86 - 7,70 (т, ЗН), 7,44 (5, 2Н), 7,34 (а, 1), 7,27 (а, 1н), 7,23 - 7,15 (т, 1Н), 4,22 (5, АН), 4,07 (в5, 2Н), 3,93 (І, 2Н), 3,58 (І, 2Н), 3,11 (5, 2Н), 2,80 (ї, 2Н), 2,68 (5, ЗН), 2,19 (в, ЗН), 1,92 (р, 2Н), 1,42 (5, 2Н), 1,30 (в, 4Н), 1,15 (в,
АН), 1,09 - 0,96 (т, 2Н), 0,85 (з, 6Н). М5 (Е5БІ) т/е 815,5 (МаН)-. 1.66 Синтез Мб6-(37-оксо-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35-додекаоксагептатриаконтан-37-іл)-
І -лізил-М-(2-(13-((4-16-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроїзохінолін-2(1 Н)-іл|-2- карбоксипіридин-З3-ілІі-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)метил)|-5,7-диметилтрициклоїЇ3.3.1.157|дец-1- иліокси)етил|-І -аланінаміду (М/2.66) 1.66.1 (5)-6-((((9Н-Флуорен-9-іл)метокси)карбоніл)аміно)-2-(трет- бутоксикарбоніл)аміно)гексанова кислота
У розчин (5)-6-аміно-2-(трет-бутоксикарбоніл)аміно)гексанової кислоти (8,5 г) в суміші 590 водного розчину МанНсСоО:з (300 мл) і діоксану (40 мл), охолодженій на крижаній бані, додавали краплями розчин (9Н-флуорен-9-іл)метилпіролідин-1-ілкарбонату (11,7 г) в діоксані (40 мл).
Забезпечували нагрівання реакційної суміші до кімнатної температури та її перемішували протягом 24 годин. Підготовлювали, як описано вище, три додаткові флакони. Після завершення реакції всі чотири реакційні суміші об'єднували та видаляли органічний розчинник під вакуумом. Водний залишок підкислювали до рН З водним розчином хлористоводневої кислоти (1 н.) і потім екстрагували етилацетатом (3 х 500 мл). Об'єднані органічні шари промивали сольовим розчином, висушували над сульфатом магнію, фільтрували (і
Зо концентрували під вакуумом з одержанням неочищеної сполуки, яку перекристалізовували з метил-трет-бутилового етеру з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (400МГЦц, хлороформч-а) б 11,05 (Бу. 5., 1Н), 7,76 (а, 2Н), 7,59 (а, 2Н), 7,45 - 7,27 (т, 4Н), 6,52 -6,17 (т, 1Н), 5,16 - 4,687 (т, 1Н), 4,54 - 4,17 (т, 4Н), 3,26 - 2,98 (т, 2Н), 1,76 - 1,64 (т, 1Н), 1,62 - 1,91 (т, 14Н). 1.66.2 трет-Бутил-17-гідрокси-3,6,9,12,15-пентаоксагептадекан-1-оат
У розчин 3,6,9,12-тетраоксатетрадекан-1,14-діолу (40 г) в толуолі (800 мл) додавали порціями калію трет-бутоксид (20,7 г). Суміш перемішували за кімнатної температури протягом
ЗО хвилин. У суміш додавали краплями трет-бутил-2-бромацетат (36 г). Реакційну суміш перемішували за кімнатної температури протягом 16 годин. Підготовлювали, як описано вище, два додаткові флакони. Після завершення реакцій всі три реакційні суміші об'єднували. В об'єднану суміш додавали воду (500 мл) і суміш концентрували до 1 л. Суміш екстрагували дихлорметаном і промивали 1 н. водним розчином трет-бутоксиду калію (1 л). Органічний шар висушували над Маг50О5, фільтрували і концентрували з одержанням неочищеного продукту, який очищували колонковою хроматографією на силікагелі, з елююванням сумішшю дихлорметан:метанол 50:11, з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (400МГЦц, хлороформ-а) 6 4,01 (5, 2Н), 3,75 - 3,58 (т, 21Н), 1,46 (5,9Н). 1.66.3 трет-Бутил-17-(тозилокси)-3,6,9,12,15-пентаоксагептадекан-1-оат
У розчин речовини із прикладу 1.66.2 (30 г) у дихлорметані (500 мл) додавали краплями розчин 4-метилбензол-1-сульфонілхлориду (19,5г) й триєтиламіну (10,3 г) в дихлорметані (500 мл) при 0"С в атмосфері азоту. Суміш перемішували за кімнатної температури протягом 18годин і виливали у воду (100 мл). Розчин екстрагували дихлорметаном (3 х 150 мл) і органічний шар промивали хлористоводневою кислотою (б н., 15 мл), потім за допомогою
МансСо:з (595 водний розчин, 15 мл), потім водою (20 мл). Органічний шар висушували над
Ма?5О», фільтрували і концентрували з одержанням залишку, який очищували колонковою хроматографією на силікагелі, з елююванням сумішшю від петролейний етер:етилацетат 10:1 до дихлорметан:метанол 5:1, з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (400МГЦц, хлороформч-а) б 7,79 (а, 2Н), 7,34 (ад, 2Н), 4,18 - 4,13 (т, 2Н), 4,01 (5, 2Н), 3,72 - 3,56 (т, 18Н), 2,44 (5, ЗН), 1,47 (5, 9Н). 1.66.4 2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35-Додекаоксагептатриаконтан-37-ова кислота
У розчин 2,5,8,11,14,17-гексаоксанонадекан-19-олу (32,8 г) в тетрагідрофурані (300 мл) бо додавали натрію гідрид (1,6 г) при 0"С. Суміш перемішували за кімнатної температури протягом
4 годин. У реакційну суміш додавали краплями розчин речовини із прикладу 1.66.3 (16 г) в тетрагідрофурані (300 мл) за кімнатної температури. Одержану в результаті реакційну суміш перемішували за кімнатної температури протягом 16 годин і потім додавали воду (20 мл). Суміш перемішували за кімнатної температури протягом ще З годин для завершення гідролізу трет- бутилового естеру. Кінцеву реакційну суміш концентрували під вакуумом з видаленням органічного розчинника. Водний залишок екстрагували дихлорметаном (2 х 150 мл). Водний шар підкислювали до рН З і потім екстрагували етилацетатом (2 х 150 мл). Водний шар концентрували з одержанням неочищеного продукту, який очищували колонковою хроматографією на силікагелі, з елююванням градієнтом від петролейний етер'єтилацетат 1:1 до дихлорметан:метанол 5:11 з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (400МГЦц, хлороформч-а) б 4,19 (5, 2Н), 3,80 - 3,75 (т, 2Н), 3,73 - 3,62 (т, 40Н), 3,57 (ад, 2Н), 3,40 (5, ЗН). 1.66.5 (435,465)-43-(трет-Бутоксикарбоніл)аміно)-46-метил-37,44-діоксо- 2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35-додекаокса-38,45-діазагептатетраконтан-47-ова кислота
Речовину із прикладу 1.66.5 синтезували із застосуванням стандартних процедур пептидного синтезу Етос в твердій фазі й 2-хлортритилової смоли. 2-Хлортритилову смолу (12 г, 100 ммоль), (5)-2-(((9Н-флуорен-9-іл)уметокси)карбоніл)аміно)дупропанову кислоту (10 г, 32,1 ммоль) й М,М-діззопропілетиламін (44,9 мл, 257 ммоль) в безводному, висушеному просіюванням дихлорметані (100 мл) струшували при 14"С протягом 24 годин. Суміш фільтрували й осад промивали дихлорметаном (3 х 500 мл), диметилформамідом (2 х 250 мл) і метанолом (2 х 250 мл) (протягом 5 хвилин на кожній стадії). До вищевказаної смоли додавали 2095 піперидину/диметилформаміду (100 мл) з видаленням Еітос-групи. Суміш барботували азотом протягом 15 хвилин і потім фільтрували. Смолу промивали піперидином/диметилформамідом, 2095 (100 мл), ще п'ять разів (5 хвилин кожна стадія) і промивали диметилформамідом (5 х 100 мл) з одержанням незахищеної, навантаженої І -Аїа смоли.
У розчин речовини із прикладу 1.66.1 (9,0 г) в М,М-диметилформаміді (50 мл) додавали гідроксибензотриазол (3,5 г), 2-(6-хлор-1Н-бензотриазол-1-іл)-1,1,3,3-тетраметиламінію гексафторфосфат (9,3 г) ії М,М-діізопропілетиламін (8,4 мл). Суміш перемішували при 20"С протягом 30 хвилин. Вищевказану суміш додавали до завантаженої О-Аіа смоли й змішували
Зо шляхом барботування азотом за кімнатної температури протягом 90 хвилин. Суміш фільтрували й смолу промивали диметилформамідом (кожна стадія по 5 хвилин). До вищевказаної смоли додавали піперидин/М,М-диметилформамід, близько 2095 (100 мл), з видаленням Еітос-групи. Суміш барботували азотом протягом 15 хвилин і фільтрували. Смолу промивали піперидином/диметилформамідом, 2095 (100 мл), ще п'ять разів (5 хвилин кожна стадія) і нарешті промивали диметилформамідом (5 х 100 мл).
У розчин речовини із прикладу 1.66.4 (11,0 г) в М,М-диметилформаміді (50 мл) додавали гідроксибензотриазол (3,5 г), 2-(6-хлор-1Н-бензотриазол-1-іл)-1,1,3,3-тетраметиламінію гексафторфосфат (9,3 г) ії М,М-дізопропілетиламін (8,4 мл), суміш додавали до смоли й змішували шляхом барботування азотом за кімнатної температури протягом З годин. Суміш фільтрували і залишок промивали диметилформамідом (5 х 100 мл), дихлорметаном (8 х 100 мл) (на кожній стадії по 5 хвилин).
До кінцевої смоли додавали 195 трифтороцтову кислоту/дихлорметан (100 мл) і барботували азотом протягом 5 хвилин. Суміш фільтрували й збирали фільтрат. Операцію розщеплення повторювали чотири рази. Об'єднаний фільтрат доводили до рН 7 за допомогою
МансСОз і промивали водою. Органічний шар висушували над Маг5О»., фільтрували і концентрували з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (400МГЦ, метанол-дяі) б 4,44 - 4,33 (т, 1Н), 4,08 - 4,00 (т, 1Н), 3,98 (5, 2Н), 3,77 - 3,57 (т, 42Н), 3,57 - 3,51 (т, 2Н), 3,36 (5,
ЗН), 3,25 (І, 2Н), 1,77 (Бг. 5., 1Н), 1,70 - 1,51 (т, 4Н), 1,44 (5, 9Н), 1,42 - 1,39 (т, ЗН). 1.66.6 трет-Бутил-6-(8-(бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл)-3-(1-((3- ((435,465)-43-(трет-бутоксикарбоніл)аміно)-46-метил-37,44,47-триоксо- 2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35-додекаокса-38,45,468-триазапентаконтан-50-іл)окси)-5,7- диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)піколінат
Змішували речовину із прикладу 1.66.5 (123 мг, 0,141 ммоль) З 1-
Ібіс(диметиламіно)метилен|-1Н-1,2,3-триазоло|4,5-5|Іпіридиній-3-оксиду гексафторфосфатом (58,9 мг) їі М,М-дізопропілетиламіном (0,049 мл) в М-метил-2-піролідоні (1 мл) протягом 10 хвилин і потім додавали у розчин речовини із прикладу 1.2.7 (142 мг) і М,М- діізопропілетиламіну (0,049 мл) в М-метил-2-піролідоні (1,5 мл). Реакційну суміш перемішували за кімнатної температури протягом двох годин. Неочищену реакційну суміш очищували за допомогою НРІС з оберненою фазою із застосуванням системи (Сзізоп і колонки С18 60 25х100 мм, з елююванням від 5 до 8595 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./об.
трифтороцтової кислоти. Фракції продукту ліофілізували з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (І.С/М5) т/е 1695,5 (МН). 1.66.7 3-(1-((3-((435,465)-43-Аміно-46-метил-37,44,47-триоксо- 2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35-додекаокса-38,45,468-триазапентаконтан-50-іл)окси)-5,7- диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)-6-(8-(бензо|д9|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл)піколінова кислота
Речовину із прикладу 1.66.6 (82 мг) обробляли 1 мл трифтороцтової кислоти за кімнатної температури протягом 30 хвилин. Розчинник випарювали в слабкому потоці азоту та очищували залишок за допомогою НРІ С з оберненою фазою із застосуванням системи сіїбоп та колонки
С18 25 х 100 мм, з елююванням від 5 до 8595 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./о06б. трифтороцтової кислоти. Фракції продукту ліофілізували з одержанням указаної в заголовку сполуки у вигляді солі трифтороцтової кислоти. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-дв) б ррт 12,86 (5, 1Н), 8,04 (да, 4Н), 7,64 (аї, 2Н), 7,55 - 7,41 (т, ЗН), 7,36 (9, 2Н), 6,95 (й, 1Н), 4,96 (5, 2Н), 4,40 - 4,27 (т, 1Н), 3,93 - 3,72 (т, 7Н), 3,59 - 3,47 (т, 42Н), 3,33 - 3,27 (т, ЗН), 3,23 (5,
БН), 3,05 (1, 5Н), 2,10 (5, ЗН), 1,72 - 1,64 (т, 2Н), 1,48 - 1,36 (т, 4Н), 1,35 -1,16 (т, 10Н), 1,16 - 0,94 (т, 6Н), 0,84 (й, 6Н). М5 (ЕБІ) т/е 751,8 (2М-ААН) 2. 1.67 Синтез метил-6-(4-(3-Т2-(13-(4-16-І(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)метилі/д-5,7- диметилтрицикло!Ї3.3.1.127|дец-1-иліокси)етиліІаміно)пропіл)-1 Н-1,2,3-триазол-1-іл|-б-дезокси- бета-І -глюкопіранозиду (М/2.67) 1.67.1 6-(8-(Бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл)-3-(1-(3,5-диметил- 7-(2-(пент-4-ин-1-іламіно)етокси)адамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)піколінова кислота
У розчин трет-бутил-3-(1-((3-(2-аміноетокси)-5,7-диметиладамантан-1-ілуметил)-5-метил- 1Н-піразол-4-іл)-6-(8-(бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл)піколінату (85 мг) в тетрагідрофурані (2 мл) додавали пент-4-иналь (8,7 мг), оцтову кислоту (20 мг, 0,318) й безводний сульфат натрію (300 мг). Суміш перемішували за кімнатної температури протягом 1 години. У реакційну суміш додавали триацетоксиборогідрид натрію (45 мг). Суміш перемішували за кімнатної температури протягом ночі. Реакційну суміш розбавляли
Зо етилацетатом (200 мл), промивали водою й сольовим розчином та висушували над безводним сульфатом натрію. Після фільтрування й випарювання розчинника одержували неочищений продукт, який розчиняли у дихлорметані (5 мл) та трифтороцтовій кислоті (З мл). Суміш перемішували за кімнатної температури протягом ночі. Після випарювання розчинника залишок розчиняли в диметилсульфоксиді/метанолі (1:11, З мл)у та очищували за допомогою НРІС з оберненою фазою на системі сіїзоп (колонка С18), з елююванням від 20 до 8095 ацетонітрилу у воді, що містить 0,195 трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (АРСІ) т/е 812,2 (МаАН)-. 1.67.2 Метил-6-(4-(3-Ц2-(13-(4-16-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін- 2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1-ілуметилі/д-5, 7- диметилтрициклоїЇ3.3.1.157)дец-1-ил)окси)етилі|аміно)пропіл)-1 Н-1,2,3-триазол-1-іл|-6-дезокси- бета-І -глюкопіранозид
У розчин (2Е,3К,45,55,65)-2-азидо-6-(метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5- триїлтриацетату (8,63 мг) в 1-ВиОН (2 мл) і воді (1 мл) додавали речовину із прикладу 1.67.1 (20 мг), пентагідрат сульфату міді(І) (2,0 мг) та аскорбат натрію (5 мг). Суміш нагрівали протягом 20 хвилин при 100"С за умов мікрохвильового випромінювання (Віоїаде Іпіцайог).
Додавали ГІОН НО (50 мг) у суміш, яку перемішували за кімнатної температури протягом ночі.
Суміш нейтралізували трифтороцтовою кислотою та очищували за допомогою НРІС з оберненою фазою на системі сіїбхоп (колонка С18), з елююванням від 20 до 8095 ацетонітрилу у воді, що містить 0,195 трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (АРСІ) т/е 10322 (МАН). 1.68 Синтез 6-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)нафталін-2-іл|-3-11-(3-2-((2- карбоксиетил)аміно|етокси)-5,7-диметилтрициклої3.3.1.127|дец-1-ил)метил|-5-метил-1 Н-піразол- 4-ілупіридин-2-карбонової кислоти 1.68.1 2-(3,5-Диметил-7-((5-метил-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-діоксаборолан-2-іл)-1 Н- піразол-1-ілуметил)адамантан-1-іл)уокси)етанол (УМ2.68)
У розчин 2-((3-((4-йод-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)уметил)-5,7-диметиладамантан- 1- іл)окси)етанолу (8,9 у і адукту Расіхаррід)-СНесіг (П,1- бісідифенілфосфіно)фероцен|дихлорпаладіюці!) (1:1), 818 мг) в ацетонітрилі (120 мл) додавали триметиламін (10 мл) і 4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-діоксаборолан (12,8 мл). Суміш перемішували зі бо зворотним холодильником протягом ночі. Суміш охолоджували до кімнатної температури та застосовували в наступній реакції без додаткової обробки. М5 (Е5І) т/е 467,3 (М'Ма)». 1.68.2 трет-Бутил-6б-хлор-3-(1-((3-(2-гідроксиетокси)-5,7-диметиладамантан-1-іл)уметил)-5- метил-1 Н-піразол-4-іл)піколінат
У розчин трет-бутил-3-бром-б-хлорпіколінату (6,52 г) в тетрагідрофурані (100 мл) й воді (20 мл) додавали речовину із прикладу 1.68.1 (9,90 г), (15,3К,5К,75)-1,3,5,7-тетраметил-8- тетрадецил-2,4,6-триокса-8-фосфоадамантан (0,732 г), трис(дибензиліденацетонідипаладійо) (Раг(ава)», 1,02 г) і КзРО» (23,64 г). Суміш перемішували зі зворотним холодильником протягом ночі. Суміш концентрували за зниженого тиску, залишок розчиняли в етилацетаті (500 мл), промивали водою й сольовим розчином та висушували над безводним сульфатом натрію. Після фільтрування й випарювання розчинника одержували неочищений продукт, який очищували за допомогою хроматографії на силікагелі, з елююванням від 20 до 4095 етилацетату в дихлорметані, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕБ5І) т/е 530,3 (МаН)». 1.68.3 трет-Бутил-б-хлор-3-(1-(3,5-диметил-7-(2-((метилсульфоніл)окси)етокси)адамантан- 1-ілуметил)-5-метил-1Н-піразол-4-іл)піколінат
В охолоджений (0"С) розчин речовини із прикладу 1.68.2 (3,88 г) в дихлорметані (30 мл) й триєтиламіні (6 мл) додавали метансульфонілхлорид (2,52 г). Суміш перемішували за кімнатної температури протягом 4 годин. Реакційну суміш розбавляли етилацетатом (400 мл), промивали водою й сольовим розчином та висушували над безводним сульфатом натрію. Після фільтрування й випарювання розчинника одержували неочищений продукт (4,6 г), який застосовували в наступній реакції без додаткового очищення. М5 (ЕБІ) т/е 608,1 (МАН). 1.68.4 трет-Бутил-3-11-((3-(2-(біс(трет-бутоксикарбоніл)аміно|етокси)-5,7- диметилтрицикло!|3.3.1.19-Л)дец-1-илуметил|-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)-б-хлорпіридин-2- карбоксилат
У розчин речовини із прикладу 1.68.3 (151 мг) в М,М-диметилформаміді (З мл) додавали ди- трет-бутилімінодикарбоксилат (54 мг). Суміш перемішували за кімнатної температури протягом ночі. Реакційну суміш розбавляли етилацетатом (200 мл), промивали водою й сольовим розчином та висушували над безводним сульфатом натрію. Після фільтрування й випарювання розчинника одержували вказану в заголовку сполуку, яку застосовували на наступній стадії без додаткового очищення. М5 (Е5І) т/е 729,4 (МАН).
Зо 1.68.5 7-(6-(трет-Бутоксикарбоніл)-5-(1-((3-(2-(трет-бутоксикарбоніл)аміно)етокси)-5,7- диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)/піридин-2-іл)-1-нафтойна кислота
У розчин метил-7-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-діоксаборолан-2-іл)-1-нафтоату (257 мг) в 1,4- діоксані (10 мл) й воді (5 мл) додавали речовину із прикладу 1.68.4 (600 мг"), біс(трифенілфосфін)паладію(І!) дихлорид (57,8 мг) і С5Е (375 мг). Суміш перемішували при 1207"С протягом 30 хвилин за умов мікрохвильового випромінювання (Віоїаде Іпйаюг). Суміш розбавляли етилацетатом (200 мл), промивали водою й сольовим розчином та висушували над безводним сульфатом натрію. Після фільтрування й випарювання розчинника одержували неочищений продукт, який очищували за допомогою хроматографії на силікагелі, з елююванням 20956 етилацетатом у гептані, з одержанням проміжної сполуки у вигляді діестеру. Залишок розчиняли в тетрагідрофурані (10 мл), метанолі (5 мл) й воді (5 мл) та додавали ГІОН НО (500 мг), і суміш перемішували за кімнатної температури протягом ночі. Суміш підкислювали 2 н. водним розчином НС, розчиняли в 400 мл етилацетату, промивали водою та сольовим розчином і висушували над безводним сульфатом натрію. Після фільтрування та випарювання розчинника одержували указану в заголовку сполуку. М5 (АРСІ) т/е 765,3 (МАН). 1.68.6 /3-(1-((3-(2-Аміноетокси)-5,7-диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)- 6-(8-(бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)нафталін-2-іл)піколінова кислота
У розчин речовини із прикладу 1.68.5 (500 мг) у дихлорметані (10 мл) додавали бензо|Ч|гіазол-2-амін (98 мг), -етил-3-(3-диметиламінопропілжарбодімід (251мг) і «4 диметипамінопіридин (160 мг). Суміш перемішували за кімнатної температури протягом ночі.
Реакційну суміш розбавляли етилацетатом (400 мл), промивали водою й сольовим розчином та висушували над безводним сульфатом натрію. Після фільтрування й випарювання розчинника одержували залишок, який розчиняли у дихлорметані й трифтороцтовій кислоті (10 мл, 1:1).
Після перемішування протягом ночі розчин концентрували за зниженого тиску. Залишок розчиняли в М,М-диметилформаміді (12 мл) та очищували за допомогою НРІ С з оберненою фазою (із застосуванням системи (зізоп і колонки С18, з елююванням від 20 до 8095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 трифтороцтової кислоти) з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕІ) т/е 741,2 (МА-Н)». 1.68.7 6-І(8-(1,3-Бензотіазол-2-ілкарбамоїл)нафталін-2-іл|-3-11-(3-2-(2- карбоксиетил)аміно|етокси)-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.137)дец-1-ил)метил|-5-метил-1 Н-піразол- бо 4-іл)упіридин-2-карбонова кислота
У розчин речовини із прикладу 1.68.6 (35 мг) в М,М-диметилформаміді (4 мл) додавали трет-бутилакрилат (120 мг) ії Н2гО (138 мг). Суміш перемішували за кімнатної температури протягом ночі. Реакційну суміш розбавляли етилацетатом (400 мл), промивали водою й сольовим розчином та висушували над безводним сульфатом натрію. Після фільтрування й випарювання розчинника одержували залишок, який розчиняли у дихлорметані й трифтороцтовій кислоті (10 мл, 1:1). Через 16 годин суміш концентрували за зниженого тиску.
Залишок розчиняли в М,М-диметилформаміді (2 мл) та очищували за допомогою НРІС з оберненою фазою на системі сіїбхоп (колонка С18), з елююванням від 20 до 8095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н
ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-дв) б ррт 13,08 (5, 1Н), 8,99 (й, 1Н), 8,43 - 8,24 (т, АН), 8,24 - 8,11 (т, ЗН), 8,04 (а, 1Н), 7,99 (9, 1), 7,90 (а, 1), 7,78 (а, 1Н), 7,74 - 7,62 (т, 1Н), 7,53 - 7,43 (т, 2Н), 7,35 (д, 1Н), 3,67 (5, 2Н), 3,08 (др, 4Н), 2,62 (ї, 2Н), 2,20 (5, ЗН), 1,43 (в, 2Н), 1,29 (ад, 4Н), 1,14 (5, 4Н), 1,03 (9, 2Н), 0,85 (5, 6Н). 1.69 Синтез 6-(5-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)хінолін-3-іл|-3-11-(3,5-диметил-7-(2-((2- сульфоетил)аміно|етоксиутрицикло!|3.3.1.157)дец-1-ил)метилі|-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)піридин-2- карбонової кислоти 1.69.1 Метил-3-бромхінолін-5-карбоксилат (М/2.69)
У розчин 3-бромхінолін-5-карбонової кислоти (2г) в метанолі (30 мл) додавали концентровану Не50О5х (5 мл). Розчин перемішували зі зворотним холодильником протягом ночі.
Суміш концентрували за зниженого тиску. Залишок розчиняли в етилацетаті (300 мл) і промивали водним розчином Маг2СбОз, водою та сольовим розчином. Після висушування над безводним сульфатом натрію, фільтрування й випарювання розчинника одержували вказану в заголовку сполуку. М5 (ЕБІ) т/е 266 (М.Н)». 1.69.2 Метил-3-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-діоксаборолан-2-іл)хінолін-5-карбоксилат
У розчин речовини із прикладу 1.69.1 (356 мг) в М,М-диметилформаміді (5 мл) додавали адукт Расіх(арр)-СНесСіІ» (П,1"-бісідифенілфосфіно)фероцені|дихлорпаладій(Ії) (1:1), 55 мг), калію ацетат (197 мг) і біс(пінаколато)дибор (510 мг). Суміш перемішували при 60"С протягом ночі. Суміш охолоджували до кімнатної температури та застосовували в наступній реакції без додаткової обробки. М5 (ЕБІ) т/е 339,2 (Ма-Ма)».
Зо 1.69.3 Метил-3-(5-11-(3-(2-Ібіс(трет-бутоксикарбоніл)аміно|етокси)-5,7- диметилтрициклоїЇ3.3.1.157)дец-1-ил)метилі|-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)-6-(трет- бутоксикарбоніл)піридин-2-іл)хінолін-о-карбоксилат
У розчин речовини із прикладу 1.69.2 (626 мг) в 1,4-діоксані (10 мл) й воді (5 мл) додавали речовину із прикладу 1.68.4 (1,46 г), біс(трифенілфосфін)паладію(іІї) дихлорид (140 мг) і СЕ (911 мг). Суміш перемішували при 120"С протягом 30 хвилин за умов мікрохвильового випромінювання (Віоїаде Іпйіаюг). Суміш розбавляли етилацетатом (200 мл), промивали водою та сольовим розчином, висушували над безводним сульфатом натрію, фільтрували та концентрували. Залишок очищували за допомогою хроматографії на силікагелі, з елююванням 2096 етилацетатом у гептані (1 л), з одержанням указаної в заголовку сполуки. МО (Е5І) т/е 880,3 (М.Н). 1.69.4 3-(6-(трет-Бутоксикарбоніл)-5-(1-((3-(2-(трет-бутоксикарбоніл)аміно)етокси)-5,7- диметиладамантан-1-іл)уметил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)піридин-2-іл)хінолін-5-карбонова кислота
У розчин речовини із прикладу 1.69.3 (1,34 г) в тетрагідрофурані (10 мл), метанолі (5 мл) й воді (5 мл) додавали ГІОН НО (120 мг) та перемішували суміш за кімнатної температури протягом ночі. Суміш підкислювали 2 н. водним розчином НСІЇ, розбавляли етилацетатом (400 мл), промивали водою та сольовим розчином і висушували над безводним сульфатом натрію. Після фільтрування й випарювання розчинника одержували указану в заголовку сполуку. М5 (АРСІ) т/е 766,3 (Ма-Н)». 1.69.5 /3-(1-((3-(2-Аміноетокси)-5,7-диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)- 6-(5-(бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)хінолін-3-іл)піколінова кислота
У розчин речовини із прикладу 1.69.4 (200 мг) у дихлорметані (10 мл) додавали бензо|Ч|гіазол-2-амін (39,2 мг), 1-етил-3-(З-диметиламінопропіл)укарбодімід (50мг) і 4- диметиламінопіридин (32 мг). Суміш перемішували за кімнатної температури протягом ночі.
Реакційну суміш розбавляли етилацетатом (200 мл), промивали водою та сольовим розчином, висушували над безводним сульфатом натрію, фільтрували та концентрували. Залишок розчиняли у дихлорметані й трифтороцтовій кислоті (10 мл, 1:1) та перемішували реакційну суміш протягом ночі. Суміш концентрували і залишок розчиняли у М,М-диметилформаміді (12 мл) та очищували за допомогою НРІ С з оберненою фазою на системі сіїзоп (колонка С18), бо з елююванням від 20 до 8095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕІ) т/е 742,1 (Ма-Н)». 1.69.6 6-(5-(1,3-Бензотіазол-2-ілкарбамоїл)хінолін-3-іл|-3-11-(3,5-диметил-7-2-((2- сульфоетил)аміно|етоксиутрицикло!|3.3.1.157)дец-1-ил)метилі|-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)піридин-2- карбонова кислота
У розчин речовини із прикладу 1.69.5 (36 мг) в М,М-диметилформаміді (2 мл) додавали 4- ((трет-бутилдифенілсиліл)окси)-2,2-диметилбутилетенсульфонат (22 мг) і Н2О (0,3 мл)). Суміш перемішували за кімнатної температури протягом З годин. Реакційну суміш розбавляли дихлорметаном і трифтороцтовою кислотою (10 мл, 1:1) та перемішували протягом ночі. Суміш концентрували і залишок розчиняли в М,М-диметилформаміді (4 мл) та очищували за допомогою НРІ С з оберненою фазою на системі сіїзоп (колонка С18), з елююванням від 20 до 8095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-адв) б ррт 13,19 (в, 2Н), 9,70 (й, 1Н), 9,40 (5, 1Н), 8,91 (а, 2Н), 8,16 (9, 1Н), 8,06 (а, 1Н), 8,01 (а, 1), 7,98 - 7,88 (т, 1Н), 7,80 (а, 1Н), 7,52 - 7,43 (т, 2Н), 7,37 (ад, 1Н), 3,89 (5, 2Н), 3,22 (р, 2Н), 3,10 (9, 2Н), 2,60 (ї, 2Н), 2,23 (5, ЗН), 1,43 (5, 2Н), 1,30 (а, 4Н), 1,23 -1,10 (т, 4Н), 1,04 (д, 2Н), 0,87 (5, 6Н). М5 (ЕБІ) т/е 850,2 (М.Н). 1.70 Синтез 6-(4-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)хінолін-б-іл|-3-11-(3,5-диметил-7-(2-((2- сульфоетил)аміно|етокси)трицикло!|3.3.1.157дец-1-ил)метил|-5-метил-1Н-піразол-4-іл)іпіридин-2- карбонової кислоти (М/2.70) 1.70.1 Етил-6-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-діоксаборолан-2-іл)хінолін-4-карбоксилат
У розчин етил-6-бромхінолін-4-карбоксилату (140 мг) в М,М-диметилформаміді (2 мл) додавали адукт Расіх(арр)-СНесСі» (П,1"-бісідифенілфосфіно)фероцені|дихлорпаладій(І!). (11), 20,42 мг), калію ацетат (147 мг) і біс(пінаколато)дибор (190 мг). Суміш перемішували при 607 протягом ночі. Суміш охолоджували до кімнатної температури та застосовували в наступній реакції без додаткової обробки. М5 (ЕБІ) т/е 328,1(М'Н)». 1.70.2 Етил-6-(5-11-(3-(2-Ібіс(трет-бутоксикарбоніл)аміно|етокси)-5,7- диметилтрицикло!|3.3.1.157)дец-1-ил)метилі|-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)-6-(трет- бутоксикарбоніл)піридин-2-ілі|хінолін-4-карбоксилат
У розчин речовини із прикладу 1.70.1 (164 мг) в 1,4-діоксані (10 мл) й воді (5 мл) додавали речовину із прикладу 1.68.4 (365 мг), бісс(трифенілфосфін)паладію(Ії) дихлорид (35 мг) і С5Е
Зо (228 мг). Суміш перемішували при 120"С протягом 30 хвилин за умов мікрохвильового випромінювання (Віоїаде Іпйіаюг). Суміш розбавляли етилацетатом (200 мл), промивали водою та сольовим розчином, висушували над безводним сульфатом натрію, фільтрували та концентрували. Залишок очищували за допомогою хроматографії на силікагелі, з елююванням 2096 етилацетатом у гептані (1 л), з одержанням указаної в заголовку сполуки. МО (Е5І) т/е 894,3 (М.Н). 1.70.3 6-(6-(трет-Бутоксикарбоніл)-5-(1-((3-(2-(трет-бутоксикарбоніл)аміно)етокси)-5,7- диметиладамантан-1-іл)уметил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)піридин-2-іл)хінолін-4-карбонова кислота
У розчин речовини із прикладу 1.70.2 (3,1 г) в тетрагідрофурані (20 мл), метанолі (10 мл) й воді (10 мл) додавали СОН НО (240 мг). Суміш перемішували за кімнатної температури протягом ночі. Суміш підкислювали 2 н. водним розчином НСІ та розбавляли етилацетатом (400 мл). Органічний шар промивали водою й сольовим розчином та висушували над безводним сульфатом натрію. Після фільтрування й випарювання розчинника одержували вказану в заголовку сполуку. М5 (ЕІ) т/е 766,3 (М'-Н)». 1.70.4..3-(1-((3-(2-Аміноетокси)-5,7-диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)- 6-(4-(бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)хінолін-б-іл)піколінова кислота
У розчин речовини із прикладу 1.70.3 (4,2г) у дихлорметані (30 мл) додавали бензо|Ч|гіазол-2-амін (728 мг), 1-етил-3-(З-диметиламінопропіл)карбодіїмід (1,40) і 4- диметиламінопіридин (890 мг) та перемішували суміш за кімнатної температури протягом ночі.
Реакційну суміш розбавляли етилацетатом (500 мл), промивали водою й сольовим розчином та висушували над безводним сульфатом натрію. Після фільтрування й випарювання розчинника одержували залишок, який розчиняли у дихлорметані й трифтороцтовій кислоті (10 мл, 1:1) та перемішували протягом ночі. Суміш концентрували і залишок розчиняли в М,М- диметилформаміді (4 мл) та очищували за допомогою НРІ С з оберненою фазою на системі
Сіївоп (колонка С18), з елююванням від 20 до 8095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,190 трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки. Ме (Е5І) т/е 742,2 (МАН. 1.70.5 6-(4-(1,3-Бензотіазол-2-ілкарбамоїл)хінолін-6-іл|-3-11-(3,5-диметил-7-2-((2- сульфоетил)аміно|етоксиутрициклоїЇ3.3.1.157|)дец-1-ил)метилі|-5-метил-1 Н-піразол-4-іліпіридин-2- 60 карбонова кислота
У розчин речовини із прикладу 1.70.4 (111 мг) в М,М-диметилформаміді (4 мл) додавали 4- ((трет-бутилдифенілсиліл)окси)-2,2-диметилбутилетенсульфонат (67 мг), М,М- дізопропілетиламін (0,2 мл) і НгО (0,3 мл). Суміш перемішували за кімнатної температури протягом З годин. Реакційну суміш розбавляли дихлорметаном і трифтороцтовою кислотою (10 мл, 171) та перемішували протягом ночі. Суміш концентрували і залишок розчиняли в М,М- диметилформаміді (4 мл) та очищували за допомогою НРІ С з оберненою фазою на системі сСіїБоп (колонка С18), з елююванням від 20 до 8095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-авє) б ррт 13,31 (5, 1Н), 9,10 (ад, 1Н), 8,91 (5, 1Н), 8,58 (аа, 1Н), 8,47 - 8,16 (т, 4Н), 8,06 (аа, 1Н), 7,99 - 7,89 (т, 2Н), 7,79 (а, 1), 7,53 - 7,43 (т, 2Н), 7,42 - 7,31 (т, 1Н), 3,67 (5, 2Н), 3,53 (а, 1Н), 3,20 (р, 2Н), 3,07 (р, 2Н), 2,78 (І, 2Н), 2,20 (5, ЗН), 1,40 (5, 2Н), 1,28 (а,
АН), 1,21 - 1,07 (т, 4Н), 1,02 (д, 2Н), 0,84 (в, 6Н). М5 (Е5БІ) т/е 850,1 (М-А-Н)». 1.71 Синтез 6-(5-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)хінолін-З3-іл|-3-11-(3-2-((2- карбоксиетил)аміно|етокси)-5,7-диметилтрицикло!/3.3.1.127|дец-1-ил)метил|-5-метил-1 Н-піразол- 4-іл/піридин-2-карбонової кислоти (М/2.71)
У розчин речовини із прикладу 1.69.5 (140 мг) в М,М-диметилформаміді (10 мл) додавали трет-бутилакрилат (242 мг) і НО (0,3 мл) та перемішували суміш за кімнатної температури впродовж вихідних днів. Реакційну суміш розбавляли дихлорметаном і трифтороцтовою кислотою (10 мл, 1:11) та перемішували протягом ночі. Суміш концентрували і залишок розчиняли в М,М-диметилформаміді (4 мл) та очищували за допомогою НРІС з оберненою фазою на системі біїбоп (колонка С18), з елююванням від 20 до 8095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (400
МГц, диметилсульфоксид-йв) б ррт 13,17 (5, 2Н), 9,69 (а, 1Н), 9,37 (а, 1Нн), 8,30 (аа, ЗН), 8,15 (да, 1н), 8,04 (ад, 1), 7,99 - 7,88 (т, 2Н), 7,79 (а, 1Н), 7,53 - 7,40 (т, 2Н), 7,34 (19, 1Н), 3,88 (5, 2Н), 3,55 (Ї, 2Н), 3,08 (й, АН), 2,62 (ї, 2Н), 2,21 (5, ЗН), 1,43 (5, 2Н), 1,29 (9, 4Н), 1,14 (5, 4Н), 1,03 (а, 2Н), 0,85 (з, 6Н). М5 (Е5БІ) т/е 814,2 (М.Н). 1.72 Синтез 6-(11-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-5,6-дигідроімідазо|(1,5-а|піразин-7(8Н)-іл|-3- 11-(3,5-диметил-7-2-(2-сульфоетил)аміно|етокси)трицикло!|3.3.1.127|дец-1-ил)метил)|-5-метил- 1Н-піразол-4-іл)іпіридин-2-карбонової кислоти (М/2.72)
Ко) 1.72.1 Етил-7-(5-бром-6-(трет-бутоксикарбоніл)піридин-2-іл)-5,6,7 ,8-тетрагідроїмідазо|1,5- а|піразин-1-карбоксилат
Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни етил-5,6,7,8-тетрагідроімідазо|1,5- а|Іпіразин-1-карбоксилату гідрохлориду 1,2,3,4-тетрагідроіїзохінолін-8-карбоксилату гідрохлоридом в прикладі 1.1.11. М5 (ЕБІ) т/е 451, 453 (М.--Н)", 395, 397 (М-трет-бутил)". 1.72.2 Етил-7-(6-(трет-бутоксикарбоніл)-5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-діоксаборолан-2- іл)упіридин-2-іл)-5,6,7 ,8-тетрагідроіїмідазо|1,5-а|піразин-1-карбоксилат
Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 1.72.1 речовиною із прикладу 1.1.11 в прикладі 1.2.1. М5 (ЕБ5І) т/е 499 (М.-Н)", 443 (М- трет-бутил)", 529 (МАСНЗОН-Н). 1.72.3 Етил-7-(6-(трет-бутоксикарбоніл)-5-(1-((3-(2-(трет-бутоксикарбоніл)аміно)етокси)-5,7- диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)піридин-2-іл)-5,6,7,8- тетрагідроїмідазо|1,5-а|піразин-1-карбоксилат
Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 1.72.2 речовиною із прикладу 1.2.1 та речовини із прикладу 1.55.11 речовиною із прикладу 1.13.3 в прикладі 1.13.4. М5 (ЕІ) т/е 760 (МН), 758 (М-Н). 1.72.4 7-(6-(трет-Бутоксикарбоніл)-5-(1-((3-(2-(трет-бутоксикарбоніл)аміно)етокси)-5,7- диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)піридин-2-іл)-5,6,7,8- тетрагідроїмідазо|1,5-а|піразин-1-карбонова кислота
Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 1.72.3 речовиною із прикладу 1.1.12 в прикладі 1.1.13. М5 (Е5І) т/е 760 (М--Н)», 758 (М-Н). 1.72.5 трет-Бутил-6-(1-(бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-5,6-дигідроімідазо|1,5-а|піразин-7(8Н)- іл)-3-(1-((3-(2-(трет-бутоксикарбоніл)аміно)етокси)-5,7-диметиладамантан-1-іл)уметил)-5-метил- 1Н-піразол-4-іл)піколінат
Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 1.72.4 речовиною із прикладу 1.52.2 в прикладі 1.52.3. М5 (Е5І) т/е 892 (М--Н)», 890 (М-Н)-. 1.72.6 3-(1-13-(2-Аміноетокси)-5,7-диметилтрициклої|3.3.1.12|дец-1-ил|метил)-5-метил-1 Н- піразол-4-іл)-6-(1-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-5,6-дигідроіїмідазо|1,5-а|піразин-7(8Н)- іл|Іпіридин-2-карбонова кислота
Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 1.72.5 бо речовиною із прикладу 1.1.16 в прикладі 1.1.17. М5 (Е5І) т/е 736 (МАН), 734 (М-Н).
1.72.7 6-(1-(Бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-5,6-дигідроіїмідазо|1,5-а|піразин-7(8Н)-іл)-3-(1-((3- (2-(2-((4-(«трет-бутилдифенілсиліл)окси)-2-метилбутан-2-іл)уокси)сульфоніл)етил)аміно)етокси)- 5,7-диметиладамантан-1-іл)уметил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)піколінова кислота
Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 1.72.6 речовиною із прикладу 1.2.7 в прикладі 1.2.8. 1.72.8 6-(1-(1,3-Бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-5,6-дигідроімідазо(1,5-а|піразин-7(8Н)-іл|-3-71-
І(3З,5-диметил-7-(2-(2-сульфоетил)аміно|етокси)трициклоїЇ3.3.1.127|дец-1-ил)метил|-5-метил-1 Н- піразол-4-іл)упіридин-2-карбонова кислота
Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 1.72.7 речовиною із прикладу 1.2.8 в прикладі 1.2.9. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-йв) б ррт 8,36 (р5, 2Н), 8,03 (р5, 1Н), 7,99 (а, 1Н), 7,76 (а, 1Н), 7,64 (й, 1), 7,46 (ї, 1), 7,34 (5, 1Н), 7,33 (ї, 1Н), 7,17 (9, 1Н), 5,12 (5, 2Н), 4,28 (ї, 2Н), 4,11 (ї, 2Н), 3,86 (5, 2Н), 3,56 (Ї, 2Н), 3,24 (т, 2Н), 3,11 (т, 2Н), 2,82 (І, 2Н), 2,15 (5, ЗН), 1,42 (5, 2Н), 1,32 (ад, 4Н), 1,17 (9, 4, Н), 1,03 (т, 2Н), 0,88 (5, 6Н).
М5 (ЕБІ) т/е 844 (МН), 842 (М-НУ. 1.73 Синтез 8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-2-(6-карбокси-5-(1-(13-(2-(13-(1-(бета-О- глюкопірануронозил)-1 Н-1,2,3-триазол-4-іл|пропіліаміно)етокси|-5, 7- диметилтрицикло!3.3.1.127|дец-1-ил)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл|Іпіридин-2-іл)-1,2,3,4- тетрагідроіїзохіноліну (МУ2.73)
У розчин (2Е,3К,45,55,65)-2-азидо-6-(метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5- триїлтриацетату (8,63 мг) в -СНЗзОН (2 мл) й воді (1 мл) додавали речовину із прикладу 1.67.1 (20 мг), пентагідрат сульфату міді(Ії) (2,0 мг) й аскорбат натрію (5 мг). Суміш перемішували протягом 20 хвилин при 100"С за умов мікрохвильового випромінювання (Віоїаде Іпйайог). У суміш додавали ІОН Н2О (50 мг) та продовжували перемішування протягом ночі. Суміш нейтралізували трифтороцтовою кислотою та очищували за допомогою НРІС з оберненою фазою на системі сіїзоп (колонка С18), з елююванням від 20 до 8095 ацетонітрилу у воді, що містить 0,195 трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (АРСІ) т/е 987,3 (М.Н). 1.74 Синтез 6-І(7-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-1 Н-індол-2-іл|-3-11-(3,5-диметил-7-(2-((2- сульфоетил)аміно|етоксиутрицикло!|3.3.1.157)дец-1-ил)метилі|-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)піридин-2-
Зо карбонової кислоти (М/2.74) 1.74.1 Метил-2-(5-11-(3-(2-Ібіс(трет-бутоксикарбоніл)аміно|етокси)-5,7- диметилтрицикло!|3.3.1.19Я)дец-1-илуметил|-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)-6-(трет- бутоксикарбоніл)піридин-2-іл|-1 Н-індол-7-карбоксилат
Речовину із прикладу 1.74.1 одержували шляхом заміни метил-2-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2- діоксаборолан-2-іл)-1Н-індол-7-карбоксилату речовиною із прикладу 1.2.1 та шляхом заміни речовини із прикладу 1.68.4 речовиною із прикладу 1.1.6 в прикладі 1.1.12. М5 (Е5І) т/е 866,3 (М-НУ. 1.74.2 2-(6-(трет-Бутоксикарбоніл)-5-(1-((3-(2-(трет-бутоксикарбоніл)аміно)етокси)-5,7- диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)піридин-2-іл)-1Н-індол-7-карбонова кислота
Речовину із прикладу 1.74.2 одержували шляхом заміни речовини із прикладу 1.74.1 речовиною із прикладу 1.1.12 в прикладі 1.1.13. М5 (Е5І) т/е 754,4 (МАН). 1.74.3 трет-Бутил-6-(7-(бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-1Н-індол-2-іл)-3-(1-((3-(2-(трет- бутоксикарбоніл)аміно)етокси)-5,7-диметиладамантан-1-іл)уметил)-5-метил-1 Н-піразол-4- іл)піколінат
Речовину із прикладу 1.74.3 одержували шляхом заміни речовини із прикладу 1.74.2 речовиною із прикладу 1.1.13 в прикладі 1.1.14. М5 (Е5І) т/е 886,5 (МА-Н)». 1.74.4.. 3-(1-(3-(2-Аміноетокси)-5,7-диметиладамантан-1-іл)уметил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)- 6-(7-(бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-1 Н-індол-2-іл)піколінова кислота
Речовину із прикладу 1.74.4 одержували шляхом заміни речовини із прикладу 1.74.3 речовиною із прикладу 1.1.16 в прикладі 1.1.17. М5 (ЕІ) т/е 730,2 (МАН). 1.74.5 6-(7-(1,3-Бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-1 Н-індол-2-іл|-3-(1-(3,5-диметил-7-(2,2,7,7- тетраметил-10,10-діоксидо-3,3-дифеніл-4,9-діокса-1016-тіа-13-аза-3-силапентадекан-15- іл)уокси|Їгрицикло!|3.3.1.127)дец-1-ил)метил)-5-метил-1Н-піразол-4-іл|Іпіридин-2-карбонова кислота
Речовину із прикладу 1.74.5 одержували шляхом заміни речовини із прикладу 1.74.4 речовиною із прикладу 1.2.7 в прикладі 1.2.8. М5 (ЕБ5І) т/е 1176,7 (Ма-Н)». 1.74.6 6-(7-(1,3-Бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-1Н-індол-2-іл|-3-11-(3,5-диметил-7-2-((2- сульфоетил)аміно|етоксиутрициклоїЇ3.3.1.157|)дец-1-ил)метилі|-5-метил-1 Н-піразол-4-іліпіридин-2- 60 карбонова кислота
Речовину із прикладу 1.74.6 одержували шляхом заміни речовини із прикладу 1.74.5 речовиною із прикладу 1.2.8 в прикладі 1.2.9. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-йв) б ррт 11,32 (9, 1Н), 8,23 (да, 1Н), 8,18 (9, 1Н), 7,93 - 7,82 (т, ЗН), 7,71 (а, 1Н), 7,62 (5, ЗН), 7,57 - 7,51 (т, 1Н), 7,47 (в, 1Н), 7,40 (0, 1Н), 7,35 (Ї, 1Н), 7,22 (І, 1Н), 4,86 (ї, 2Н), 3,85 (5, 2Н), 3,47 (ї, 2Н), 3,08 (І, 2Н), 2,88 (р, 2Н), 2,21 (5, ЗН), 1,37 (5, 2Н), 1,32 - 1,20 (т, 4Н), 1,14 (9, 4Н), 1,07 - 0,94 (т, 2Н), 0,84 (5, 6Н). М5 (ЕБІ) т/е 838,2 (М.--Н)». 1.75 Синтез 6-І(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-6-ІЗ-(метиламіно)пропіл|-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-11-((3,5-диметил- 7-і12-((2- сульфоетил)аміно|етокси)трицикло!|3.3.1.157|)дец-1-ил)метил|-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)піридин-2- карбонової кислоти (М/2.75) 1.75.1 Метил-3-бром-5-(бромметил)бензоат
Додавали азо-біс-ізобутиронітрил (1,79 г) до метил-3-бром-5-метилбензоату (50г) й М- бромсукциніміду (44,7 г) в 350 мл ацетонітрилу та нагрівали суміш зі зворотним холодильником протягом ночі. Додавали додаткові 11 г М-бромсукциніміду й 0,5 г азо-біс-ізобутиронітрилу та продовжували нагрівання зі зворотним холодильником протягом З годин. Суміш концентрували, поглинали в 500 мл діетилового етеру та перемішували протягом 30 хвилин. Суміш фільтрували та концентрували одержаний розчин. Неочищений продукт піддавали хроматографії на силікагелі із застосуванням 1095 етилацетату в гептанах з одержанням указаної в заголовку сполуки. 1.75.2 Метил-3-бром-5-(ціанометил)бензоат
Додавали ціанід тетрабутиламонію (50 г) до речовини із прикладу 1.75.1 (67,1 г) в 300 мл ацетонітрилу та нагрівали суміш до 707"С протягом ночі. Суміш охолоджували, виливали в діетиловий етер і ополіскували водою та сольовим розчином. Потім суміш концентрували й піддавали хроматографії на силікагелі із застосуванням від 2 до 2095 етилацетату в гептанах, з одержанням указаної в заголовку сполуки. 1.75.3 Метил-3-(2-аміноетил)-5-бромбензоат
Додавали комплекс боран-ТНЕ (126 мл, 1 М розчин) у розчин речовини із прикладу 1.75.2 (16г) в 200 мл тетрагідрофурану та перемішували суміш протягом ночі. Реакційну суміш обережно гасили метанолом (50 мл), і потім концентрували до об'єму 50 мл. Суміш поглинали в
Зо 120 мл метанолу / 120 мл 4 М НСЇ / 120 мл діоксану та перемішували протягом ночі. Органічні речовини видаляли за зниженого тиску і залишок двічі екстрагували діетиловим етером.
Екстракти видаляли. Основність органічного шару підвищували за допомогою твердого К2СОз і потім його екстрагували етилацетатом і дихлорметаном (2х). Екстракти об'єднували, висушували над Ма»5О:, фільтрували та концентрували з одержанням указаної в заголовку сполуки. 1.75.4 Метил-3-бром-5-(2-(2,2,2-трифторацетамідо)етил)бензоат
Додавали краплями трифтороцтовий ангідрид (9,52 мл) у суміш речовини із прикладу 1.75.3 (14,5 г) й триметиламіну (11,74 мл) в 200 мл дихлорметану при 0"С. Після додавання забезпечували нагрівання суміші до кімнатної температури та її перемішували протягом трьох днів. Суміш виливали в діетиловий етер та промивали розчином Мансо»з і сольовим розчином.
Суміш концентрували й піддавали хроматографії на силікагелі із застосуванням від 5 до 3090 етилацетату в гептанах, з одержанням указаної в заголовку сполуки. 1.75.5 Метил-6-бром-2-(2,2,2-трифторацетил)-1,2,3,4-тетрагідроізохінолін-8-карбоксилат
Додавали сірчану кислоту до речовини із прикладу 1.75.4 (10 г)до її розчинення (40 мл), і в цей час додавали параформальдегід (4,24 г) і суміш перемішували протягом 2 годин. Потім розчин виливали на 400 мл льоду та перемішували 10 хвилин. Суміш екстрагували етилацетатом (Зх) та промивали об'єднані екстракти розчином Мансоз і сольовим розчином і потім концентрували. Неочищений продукт піддавали хроматографії на силікагелі із застосуванням від 2 до 1595 етилацетату в гептанах, з одержанням указаної в заголовку сполуки. 1.75.6 Метил-6-(3-(трет-бутоксикарбоніл)(метил)аміно)проп-1-ін-1-іл)-2-(2,2,2- трифторацетил)-1,2,3,4-тетрагідроізохінолін-8-карбоксилат
Розчин речовини із прикладу 1.75.5 (5,1 г), трет-бутилметил(проп-2-ін-1-ілукарбамат (2,71 г), бісстрифенілфосфін)паладію(!) дихлорид (Расі(РРНз)г, 0,49 г), Си! (0,106 г) і триєтиламін (5,82 мл) перемішували в 50 мл діоксану при 507"С протягом ночі. Суміш концентрували й піддавали хроматографії на силікагелі із застосуванням від 10 до 5095 етилацетату в гептанах, з одержанням указаної в заголовку сполуки. 1.75.7 Метил-6-(3-(трет-бутоксикарбоніл)(метил)аміно)пропіл)-2-(2,2,2-трифторацетил)- 1,2,3,4-тетрагідроізохінолін-8-карбоксилат бо Додавали речовину із прикладу 1.75.6 (4,2 г), тетрагідрофуран (20 мл) і метанол (20,00 мл)
до вологого 2095 РА(ОН)2/С (З г) в посудині для роботи під тиском об'ємом 250 мл і струшували за тиску, що становив 50 фунтів/кв. дюйм, та 507"С протягом 12 годин. Розчин фільтрували та концентрували з одержанням указаної в заголовку сполуки. 1.75.6 Метил-2-(5-бром-6-(трет-бутоксикарбоніл)піридин-2-іл)-6-(3-(трет- бутоксикарбоніл)(метил)аміно)пропіл)-1,2,3,4-тетрагідроізохінолін-8-карбоксилат
Речовину із прикладу 1.75.7 (4,22) й калію карбонат (1,53 г) перемішували в 60 мл тетрагідрофурану, 25 мл метанолу та 10 мл води протягом ночі. Суміш концентрували і додавали 60 мл М,М-диметилформаміду. Потім до одержаного додавали речовину із прикладу 1.1.9 (3,05 г) і триетиламін (5 мл) та реакційну суміш перемішували при 60"С протягом ночі.
Суміш охолоджували до кімнатної температури, виливали в етилацетат (600 мл), промивали водою (3х) й сольовим розчином, висушували над Ма»5О»:, фільтрували та концентрували.
Залишок піддавали хроматографії на силікагелі із застосуванням від 5 до 5095 етилацетату в гептанах, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (Е5І) т/е 618,2 (МАН)». 1.75.9 Метил-6-(3-(трет-бутоксикарбоніл)(метил)аміно)пропіл)-2-(6-(трет-бутоксикарбоніл)- 5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-діоксаборолан-2-іл)піридин-2-іл)-1,2,3,4-тетрагідроізохінолін-8- карбоксилат
У розчин речовини із прикладу 1.75.8 (3,7 г), триетиламіну (2,50 мл) й Расіх(арр) (П,1- бісідифенілфосфіно)фероцені|дихлорпаладіюці!) (1:11), 0,29 г) в 25 мл ацетонітрилу додавали 4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-діоксаборолан (1,74 мл) і реакційну суміш нагрівали до 757С протягом
Бгодин, потім перемішували при 60"С протягом ночі. Суміш концентрували й піддавали хроматографії на силікагелі із застосуванням від 5 до 5095 етилацетату в гептанах, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (Е5І) т/е 666,4 (МАН). 1.75.10 4-(трет-Бутилдифенілсиліл)окси)-2,2-диметилбутил-2-((2-((3-(4-йод-5-метил-1 Н- піразол-1-ілуметил)-5,7-диметиладамантан-1-іл)/окси)етил)аміно)етансульфонат
Речовину із прикладу 1.55.10 (2,39 г), 4-((трет-бутилдифенілсиліл)окси)-2,2- диметилбутилетенсульфонат (2,41 г) і триетиламін (1,51 мл) перемішували в 30 мл М,М- диметилформаміду при 45"С протягом З годин. Суміш охолоджували й виливали в діетиловий етер (400 мл), розчин діетилового етеру промивали водою (Зх) й сольовим розчином та концентрували. Неочищений продукт піддавали хроматографії на силікагелі із застосуванням від 2 до 5095 етилацетату в гептанах, із додаванням 195 триетиламіну, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕІ) т/е 890,6 (МАН). 1.75.11 6-(6-(3-(трет-Бутоксикарбоніл)(метил)аміно)пропіл)-8-(метоксикарбоніл)-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл)-3-(1-((3-(2-(2-(4-(трет-бутилдифенілсиліл)окси)-2,2- диметилбутокси)сульфоніл)етил)аміно)етокси)-5,7-диметиладамантан-1-ілуметил)-5-метил-1 Н- піразол-4-іл)піколінова кислота
Додавали речовину із прикладу 1.75.9 (1,777 г), речовину із прикладу 1.75.10 (1,98 г), трисідибензиліденацетонідипаладій(о) (0,102 г), 1,3,5,7-тетраметил-8-тетрадецил-2,4,6- триокса-8-фосфоадамантан (0,918 г) ії фосфат калію (1,889 г) в 25 мл діоксану / 10 мл води, і розчин декілька разів вакуумували/насичували азотом. Реакційна суміш була прозорою, і її перемішували при 70"С протягом ночі. Суміш охолоджували й виливали в етилацетат (200 мл), промивали водою та сольовим розчином. Суміш концентрували й піддавали хроматографії на силікагелі із застосуванням від 5 до 5095 етилацетату в гептанах, потім 1095 метанолу в етилацетаті з 195 триетиламіну, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М (Е5І) т/е 1301,4 (М.-АН)». 1.75.12 6-(3-(трет-Бутоксикарбоніл)(метил)аміно)пропіл)-2-(5-(1-((3-(2-(2-(4-((трет- бутилдифенілсиліл)окси)-2,2-диметилбутокси)сульфоніл)етил)аміно)етокси)-5,7- диметиладамантан-1-іл)уметил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)-6-карбоксипіридин-2-іл)-1,2,3,4- тетрагідроізохінолін-8-карбонова кислота
Речовину із прикладу 11.75.11 (1,5г) й ГОН-Нг2О (0,096 г) перемішували в 15 мл тетрагідрофурану та З мл води при 45"С протягом 10 днів. Суміш виливали в розчин 200 мл етилацетату / 20 мл МанНегРох і додавали концентрований розчин НСІ до досягнення рН 3. Шари розділяли і водний шар двічі екстрагували етилацетатом. Об'єднані органічні шари промивали сольовим розчином і концентрували. Залишок піддавали хроматографії на силікагелі із застосуванням від 0 до 595 метанолу в етилацетаті, з одержанням указаної в заголовку сполуки.
М5 (ЕБІ) т/е 12873 (М.-НУХ. 1.75.13 6-(8-(Бензо|Ч|гіазол-2г-ілкарбамоїл)-6-(3-(трет-бутоксикарбоніл)(метил)аміно)пропіл)- 3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл)-3-(1-((3-(2-(2-(4-(трет-бутилдифенілсиліл)окси)-2,2- диметилбутокси)сульфоніл)етил)аміно)етокси)-5,7-диметиладамантан-1-ілуметил)-5-метил-1 Н- піразол-4-іл)піколінова кислота бо Вказану в заголовку сполуку одержували, як описано в прикладі 1.2.6, шляхом заміни речовини із прикладу 1.2.5 речовиною із прикладу 1.75.12. М5 (ЕБІ) т/е 1419,5 (МАН) ». 1.75.14 6-І(8-(1,3-Бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-6-(З-(метиламіно)пропіл|-3,4-дигідроізохінолін- 2(1Н)-ілІ-3-11-(3,5-диметил-7-(2-(2-сульфоетил)аміно|етоксиутрицикло!Ї3.3.1.127|дец-1- ил)метилі|-5-метил-1Н-піразол-4-іліпіридин-2-карбонова кислота
Вказану в заголовку сполуку одержували, як описано в прикладі 1.2.9, шляхом заміни речовини із прикладу 1.2.8 речовиною із прикладу 11.75.13. "Н ЯМР (400 МГЦ, диметилсульфоксид-ав) б ррт 12,90 (р5, 1Н), 8,33 (т, 2Н), 8,02 (й, 1Н), 7,78 (9, 1Н), 7,66 (т, 1Н), 7,47 (т, ЗН), 7,35 (т, ЗН), 7,25 (5, 2Н), 6,95 (0, 1Н), 4,95 (5, 2Н), 4,28 (, 2Н), 4,11 (І, 2Н), 3,95 (т, 2Н), 3,20 (т, 2Н), 3,08 (т, 2Н), 2,96 (т, 2Н), 2,89 (т, 2Н), 2,78 (т, 2Н), 2,65 (т, 2Н), 2,55 (І, 2Н), 102,12 (5, ЗН), 1,95 (т, 2Н), 1,39 (в, 2Н), 1,25 (т, 6Н), 1,12 (т, 6Н), 0,93 (в, ЗН), 0,85 (в, 6Н). М5 (ЕІ) т/е 926,8 (М.Н) ». 1.76 Синтез 5-Ц2-((3-(4-(6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|- 2-карбоксипіридин-3-іл)-о-метил-1 Н-піразол-1-іл)метил|-5, 7-диметилтрицикло|3.3.1.157|)дец-1- ил)окси)етил|аміно)-5-дезокси-О-арабінітолу (М/2.76) 1.76.1 трет-Бутил-6-(8-(бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл)-3-(1- ((3,5-диметил-7-(2-((48,2В8,5Н8)-2,2,2,2'-тетраметил-І4,4-6і(1,3-діоксолан)|-5- іл)уметил)аміно)етокси)адамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)піколінат
Розчиняли речовину із прикладу 1.2.7 (75 мг) і (4К.АК,55)-2,2,2,2'-тетраметил-|4,4-6і(1,3- діоксолан)|-о-карбальдегід (22 мг) у дихлорметані (1 мл). Додавали триацетоксиборогідрид натрію (40 мг) і розчин перемішували протягом 16 годин за кімнатної температури. Розчин концентрували за зниженого тиску й матеріал очищували за допомогою колонкової флеш- хроматографії на силікагелі, з елююванням від 5 до 1095 метанолу у дихлорметані. Розчинник випарювали за зниженого тиску з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕІ) т/е 1016 (М-еАН)У, 1014 (М-Н)У. 1.76.2 5-Ц2-(3-(4-16-І(8-(1,3-Бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-2- карбоксипіридин-З3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)уметил)|-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.157)дец-1- илюкси)етилі|аміно)-5-дезокси-О-арабінітол
Розчиняли речовину із прикладу 1.76.1 (45 мг) в трифтороцтовій кислоті (1 мл) й воді (0,2 мл). Розчин змішували за кімнатної температури протягом п'яти днів. Розчинники видаляли
Зо за зниженого тиску й матеріал поглинали в метанолі (2 мл). Матеріал очищували за допомогою
НРІ С з оберненою фазою із застосуванням від 25 до 7595 ацетонітрилу у воді (вага/0,195 ТЕА) протягом 30 хвилин на системі Сгасе Кемеїегіх, обладнаній колонкою І па: С18(2), 100 А, 250 х 30 мм. Фракції продукту об'єднували, заморожували й ліофілізували з одержанням указаної в заголовку сполуки у вигляді солі бісстрифтороцтової) кислоти. "Н ЯМР (400 МГц,
З5 диметилсульфоксид-йдв) б ррт 12,85 (р5, 2Н), 8,91 (т, 1Н), 8,16 (т, 1Н), 8,04 (а, 1), 7,80 (а, 1Н), 7,62 (9, 1Н), 7,51-7,43 (т, ЗН), 7,37 (ад, 2Н), 7,29 (5, 1Н), 6,69 (а, 1Н), 4,96 (5, 2Н), 4,04 (І, 2Н), 3,89 (т, 2Н), 3,59 (т, ЗН), 3,49 (т, 4Н), 3,42 (ад, 2Н), 3,22 (ад, 2Н), 3,06 (т, 2Н), 3,02 (т, 4Н), 2,10 (5,
ЗН), 1,43 (5, 2Н), 1,30 (ад, 4Н), 1,14 (ї, 4Н), 1,04 (д, 2Н), 0,87 (5, 6Н). М5 (ЕБІ) т/е 880 (М.Н), 878 (М-НУ. 1.77 Синтез 1-Ц2-((3-М4-(6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|- 2-карбоксипіридин-3-іл)-5-метил-1Н-піразол-1-іл)метилІ|-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.12Лдец-1- иліокси)етилІаміно)-1,2-дидезокси-О-арабіно-гекситолу (М/2.77) 1.77. трет-Бутил-6-(8-(бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл)-3-(1- ((3,5-диметил-7-(2-((3Н,45,5Н8)-3,4,5,6-тетрагідроксигексил)аміно)етокси)адамантан-1-іл)метил)-
Б-метил-1Н-піразол-4-іл)піколінат (48,55,6Н8)-6-«"Гідроксиметил)тетрагідро-2Н-піран-2,4,5-тріол (15 мг) розчиняли в диметилсульфоксиді (0,5 мл). Додавали речовину із прикладу 1.2.7 (88 мг) з подальшим додаванням ціаноборогідриду натрію (27 мг). Додавали краплями оцтову кислоту (82 мг) й розчин нагрівали при 60"С протягом 16 годин. Реакційну суміш охолоджували, розбавляли 1 мл метанолу та очищували за допомогою НРІ С з оберненою фазою із застосуванням від 20 до 7595 ацетонітрилу у воді (вага/0,195 ТЕА) протягом 60 хвилин на системі Сгасе Кемеїегів, обладнаній колонкою іипа: С18(2), 100 А, 150 х30 мм. Фракції продукту об'єднували, заморожували й ліофілізували з одержанням указаної в заголовку сполуки у вигляді солі біс(трифтороцтової) кислоти. М5 (ЕІ) т/е 950 (М-Н)", 948 (М-НУ. 1.77.2 1-Щ2-(13-(4-16-(8-(1,3-Бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1Н)-іл|-2- карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1-ілуметил)|-5, 7-диметилтрицикло!|3.3.1.157)дец-1- илюкси)етиліаміно)-1,2-дидезокси-О-арабіно-гекситол
Розчиняли речовину із прикладу 1.77.1 (39 мг) у дихлорметані (0,5 мл). Додавали трифтороцтову кислоту (740 мг) й розчин перемішували за кімнатної температури протягом 60 1бгодин. Розчинники видаляли за зниженого тиску. Залишок розчиняли в М,М-
диметилформаміді (0,5 мл) і додавали 1 М водний розчин гідроксиду натрію (0,5 мл). Розчин перемішували за кімнатної температури протягом однієї години. Додавали трифтороцтову кислоту (0,25 мл) і матеріал очищували за допомогою НРІС з оберненою фазою із застосуванням від 20 до 7595 ацетонітрилу у воді (вага/0,195 ТЕА) протягом 60 хвилин на системі Сгасе Кемеїегі5, обладнаній колонкою І ипа: С18(2), 100 А, 150 х 30 мм. Фракції продукту об'єднували, заморожували й ліофілізували з одержанням указаної в заголовку сполуки у вигляді солі біс(трифтороцтової) кислоти. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-двє) б ррт 12,86 (5, 1Н), 12,74 (р, 1Н), 8,28 (р5, 1Н), 8,20 (р5, 1Н), 8,04 (а, 1), 7,80 (а, 1Нн), 7,62 (а, тн), 7,51-7,43 (т, ЗН), 7,37 (ад, 2Н), 7,29 (5, 1Н), 6,96 (9, 1Н), 4,96 (5, 2Н), 4,53 (рез, ЗН), 3,89 (ї, 2Н), 3,83 (5, 2Н), 3,77 (9, 1Н), 3,60 (ад, 2Н), 3,56 (Її, 2Н), 3,48 (т, 2Н), 3,15 (а, 1Н), 3,02 (т, 6Н), 2,10 (5,
ЗН), 1,84 (т, 1Н), 1,69 (т, 1Н), 1,43 (в, 2Н), 1,91 (9, 4Н), 1,14 (1, 4Н), 1,05 (9, 2Н), 0,87 (5, 6Н). М5 (ЕБІ) т/е 894 (М.Н), 892 (М-Н)У. 1.78 Синтез 6-І(4-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)ізохінолін-б-іл|-3-11-(3,5-диметил-7-(2-((2- сульфоетил)аміно|етокси)трицикло!|3.3.1.157|)дец-1-ил)метил|-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)піридин-2- карбонової кислоти (М/2.78) 1.768.1 Метил-6-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-діоксаборолан-2-іл)ізохінолін-4-карбоксилат
У розчин метил-б6-бромізохінолін-4-карбоксилату (1,33 г) в М,М-диметилформаміді (30 мл) додавали адукт Расіх(арр)-СНесСі» (П,1"-бісідифенілфосфіно)фероцені|дихлорпаладій(І!). (11), 204 мг), калію ацетат (1,48 г) і біс(пінаколато)дибор (1,92 г). Суміш перемішували при 60"7С протягом ночі. Суміш охолоджували до кімнатної температури та застосовували в наступній реакції без додаткової обробки. М5 (АРСІ) т/е 313,3 (МН). 1.768.2 Метил-6-(5-11-(3-(2-Ібіс(трет-бутоксикарбоніл)аміно|етокси)-5,7- диметилтрицикло!|3.3.1.19Я)дец-1-илуметил|-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)-6-(трет- бутоксикарбоніл)піридин-2-іліізохінолін-4-карбоксилат
У розчин речовини із прикладу 1.68.4 (1,2 г) в 1,4-діоксані (20 мл) й воді (10 мл) додавали речовину із прикладу 1.78.1 (517 мг), бісс(трифенілфосфін)паладію(І!) дихлорид (58 мг) і С5Е (752 мг). Суміш перемішували зі зворотним холодильником протягом ночі. За допомогою І С/М5 встановили очікуваний продукт як основний пік. Суміш розбавляли етилацетатом (200 мл), промивали водою та сольовим розчином, висушували над безводним сульфатом натрію,
Зо фільтрували та концентрували. Залишок очищували за допомогою хроматографії на силікагелі, з елююванням 2095 етилацетатом у дихлорметані, з одержанням указаної в заголовку сполуки.
М5 (ЕІ) т/е 880,8 (М.Н). 1.78.3 6-(6-(трет-Бутоксикарбоніл)-5-(1-((3-(2-(трет-бутоксикарбоніл)аміно)етокси)-5,7- диметиладамантан-1-іл)уметил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)піридин-2-іл)ізохінолін-4-карбонова кислота
У розчин речовини із прикладу 1.78.2 (3,1 г) в тетрагідрофурані (20 мл), метанолі (10 мл) й воді (10 мл) додавали СОН НО (240 мг). Суміш перемішували за кімнатної температури протягом ночі. Суміш підкислювали 2 н. водним розчином НСІ і розбавляли етилацетатом (400 мл). Органічний шар промивали водою й сольовим розчином та висушували над безводним сульфатом натрію. Після фільтрування й випарювання розчинника одержували вказану в заголовку сполуку. М5 (ЕБ5І) т/е 766,4 (МАН). 1.78.4..3-(1-((3-(2-Аміноетокси)-5,7-диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)- 6-(4-(бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)ізохінолін-б-іл)піколінова кислота
У розчин речовини із прикладу 1.78.3 (1,2г) у дихлорметані (20 мл) додавали бензо|Ч|гіазол-2-амін (0,236 г), 1-етил-3-(З-диметиламінопропіл)карбодіїмід (451мг) і 4- диметиламінопіридин (288 мг) та перемішували суміш за кімнатної температури протягом ночі.
Реакційну суміш розбавляли етилацетатом (500 мл), промивали водою й сольовим розчином та висушували над безводним сульфатом натрію. Після фільтрування й випарювання розчинника одержували залишок, який розчиняли у дихлорметані й трифтороцтовій кислоті (10 мл, 1:1) та перемішували протягом ночі. Суміш концентрували і залишок розчиняли в М,М- диметилформаміді (4 мл) та очищували за допомогою НРІ С з оберненою фазою на системі сСіїБоп (колонка С18), з елююванням від 20 до 8095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки. МБ (Е5І) т/е 742,1 (МАН). 1.78.5 6-(4-(1,3-Бензотіазол-2-ілкарбамоїл)ізохінолін-6-іл|-3-11-(3,5-диметил-7-(2-((2- сульфоетил)аміно|етоксиутрициклоїЇ3.3.1.157|)дец-1-ил)метилі|-5-метил-1 Н-піразол-4-іліпіридин-2- карбонова кислота
У розчин речовини із прикладу 1.78.4 (55 мг) в М,М-диметилформаміді (6 мл) додавали 4- ((трет-бутилдифенілсиліл)окси)-2,2-диметилбутилетенсульфонат (34 мг), М.М- 60 дізопропілетиламін (0,6 мл) і Нг2О (0,6 мл). Суміш перемішували за кімнатної температури протягом ночі. Реакційну суміш розбавляли дихлорметаном і трифтороцтовою кислотою (10 мл, 11) та перемішували протягом ночі. Суміш концентрували і залишок розчиняли в М,М- диметилформаміді (4 мл) та очищували за допомогою НРІ С з оберненою фазою на системі сСіїБоп (колонка С18), з елююванням від 20 до 8095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,190 трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (400 МГЦ, диметилсульфоксид-авє) б ррт 139,25 (5, 2Н), 9,58 (5, 1Н), 9,06 (5, 1Н), 9,00 (5, 1Н), 8,52 (ад, 1), 8,42 (9, 1н), 8,35 (а, 2Н), 8,26 (а, 1Н), 8,11 - 8,03 (т, 1Н), 8,01 (а, 1Н), 7,80 (а, 1Н), 7,52 - 7,44 (т, 2Н), 7,41 - 7,28 (т, 1Н), 3,89 (5, 2Н), 3,55 (І, 2Н), 5,22 (І, 2Н), 3,09 (5, 2Н), 2,80 (І, 2Н), 2,23 (5, ЗН), 1,43 (в, 2Н), 1,30 (9, 4Н), 1,23 - 1,11 (т, 4Н), 1,04 (д, 2Н), 0,86 (5, 6Н). М5 (Е5І-) т/е 850,1 (МАН. 1.79 Синтез 6-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-3-(1-413-(2-(3- гідрокси-2-(гідроксиметил)пропіл|аміно)етокси)-5,7-диметилтрицикло!/3.3.1.15-Я)дец-1-ил|метил)-
Б-метил-1Н-піразол-4-іл)піридин-2-карбонової кислоти (М/2.79) 1.79.1 2,2-Диметил-1,3-діоксан-5-карбальдегід
У перемішувану суспензію хлорхромату піридинію (1,1 г) й діатомової землі (10 г) у дихлорметані (10 мл) додавали краплями (2,2-диметил-1,3-діоксан-5-іл)уметанол (0,5 г) у вигляді розчину в дихлорметані (З мл). Суміш перемішували за кімнатної температури протягом 2 годин. Суспензію фільтрували через діатомову землю і промивали етилацетатом.
Неочищений продукт фільтрували через силікагель і концентрували з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (501 МГц, хлороформ-а) б 9,89 (5, 1Н), 4,28 - 4,17 (т, 4Н), 2,42 - 2,32 (т, 1Н), 1,49 (в, ЗН), 1,39 (в, ЗН). М5 (ЕБІ) т/е 305,9 (2М-А-МНА)». 1.79.2. трет-Бутил-6-(8-(бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл)-3-(1-((3- (2-((2,2-диметил-1,3-діоксан-5-іл)метил)аміно)етокси)-5,7-диметиладамантан-1-іл)метил)-5- метил-1Н-піразол-4-іл)піколінат
У розчин речовини із прикладу 1.2.7 (100 мг) й речовини із прикладу 1.79.1 (20 мг) у дихлорметані (1 мл) додавали триацетоксиборогідрид натрію (40 мг) і суміш перемішували за кімнатної температури протягом 2 годин. Реакційну суміш розбавляли дихлорметаном і промивали насиченим розчином бікарбонату натрію. Водний шар знову екстрагували дихлорметаном. Об'єднані органічні шари висушували над сульфатом натрію, фільтрували та
Зо концентрували. Під час очищення залишку за допомогою хроматографії на силікагелі, з елююванням від 2095 до 10095 етилацетату/етанолу (3:1) в гептані, одержували вказану у заголовку сполуку. М5 (Е5І) т/е 930,3 (МАН). 1.79.3 6-(8-(1,3-Бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-3-(1-113-(2-((3- гідрокси-2-(гідроксиметил)пропіл|аміно)етокси)-5,7-диметилтрицикло!ї3.3.1.15Л)дец-1-ил|метил)-
Б-метил-1Н-піразол-4-іл)піридин-2-карбонова кислота
Речовину із прикладу 1.79.3 одержували шляхом заміни речовини із прикладу 1.79.2 речовиною із прикладу 1.2.8 в прикладі 1.2.9. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-йв) б ррт 12,82 (5, 1Н), 8,13 (5, 2Н), 8,00 (аа, 1Н), 7,76 (а, 1Н), 7,59 (а, 1н), 7,49 - 7,38 (т, ЗН), 7,37 - 7,29 (т, 2Н), 7,25 (5, 1Н), 6,92 (й, 1Н), 4,92 (5, АН), 3,85 (І, 2Н), 3,79 (5, 2Н), 3,53 (ї, 2Н), 3,47 (да, 2Н), 3,00 (а, 7Н), 2,07 (5, ЗН), 1,93 (р, 1Н), 1,38 (5, 2Н), 1,32 - 1,19 (т, 4Н), 1,16 - 0,91 (т, 6Н), 0,83 (5, 7Н). М5 (ЕБІ) т/е 834,3 (МН). 1.80 Синтез 1-Ц2-((3-М4-(6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|- 2-карбоксипіридин-3-іл)-о-метил-1 Н-піразол-1-іл)метил|-5, 7-диметилтрицикло|3.3.1.157|)дец-1- иліокси)етил|аміно)-1,2-дидезокси-О-еритро-пентитолу (М/2.80)
Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни (45,5К)-тетрагідро-2Н-піран-2,4,5- тріолу (4К,55,6К)-6-(гідроксиметил)тетрагідро-2Н-піран-2,4,5-тріолом і речовини із прикладу 1.3.1 речовиною із прикладу 1.2.7 в прикладі 1.77.1. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-абв) б ррт 12,85 (р5, 1Н), 12,72 (р5, 1Н), 8,21 (р5, 2Н), 8,04 (а, 1Н), 7,79 (а, 1Н), 7,62 (а, 1Нн), 7,52-7,42 (т, ЗН), 7,37 (ад, 2Н), 7,29 (5, 1Н), 6,95 (й, 1Н), 4,96 (5, 2Н), 3,89 (ї, 2Н), 3,83 (5, 2Н), 3,65 (т, 2Н), 3,56 (т, 2Н), 3,38 (т, 2Н), 3,92 (т, 2Н), 3,24 (т, 2Н), 3,03 (т, 5Н), 2,10 (5, ЗН), 1,89 (т, 1Н), 1,67 (т, 1Н), 1,44 (5, 2Н), 1,31 (9, 4Н), 1,14 (ї, 4Н), 1,05 (д, 2Н), 0,86 (з, 6Н). М5 (ЕБІ) т/е 864 (М.Н), 862 (М-Н). 1.81 Синтез 6-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-(1-119,5- диметил-7-(2-((25,35)-2,3,4-тригідроксибутил|аміно)етокси)трицикло!|3.3.1.157)дец-1-ил|метил)-
Б-метил-1Н-піразол-4-іл)піридин-2-карбонової кислоти (М/2.81) 1.81.1 трет-Бутиловий естер-(45,55)-5-гідроксиметил-2,2-диметил-|1,3З|діоксолан-4- ілметиловий естер вугільної кислоти ((45,55)-2,2-Диметил-1,3З-діоксолан-4,5-діл)удиметанол (1000 мг) розчиняли в М,М- диметилформаміді (50 мл). Додавали натрію гідрид (6095 в мінеральному маслі, 259 мг). Розчин бо змішували за кімнатної температури протягом 15 хвилин. Повільно додавали ди-трет-
бутилдикарбонат (1413 мг). Розчин змішували протягом 30 хвилин і реакційну суміш гасили насиченим водним розчином хлориду амонію. Розчин розбавляли водою (150 мл) та двічі екстрагували із застосуванням 7095 етилацетату в гептанах. Порції органічних речовин об'єднували та екстрагували водою (100 мл), екстрагували сольовим розчином (50 мл) і висушували на безводному сульфаті натрію. Розчин концентрували за зниженого тиску й матеріал очищували за допомогою колонкової флеш-хроматографії на силікагелі, з елююванням 3095 етилацетатом в гептанах. Розчинник випарювали за зниженого тиску з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (Е5І) т/е 284 (Ма-Ма)». 1.81.2 трет-Бутиловий естер-(45,5Н8)-5-форміл-2,2-диметил-|1,З|діоксолан-4-ілметиловий естер вугільної кислоти
Розчиняли речовину із прикладу 1.81.1 (528 мг) у дихлорметані (20 мл). Додавали перйодинан Десса-Мартіна (896 мг) й перемішували розчин за кімнатної температури протягом чотирьох годин. Розчин концентрували за зниженого тиску й матеріал очищували за допомогою колонкової флеш-хроматографії на силікагелі, з елююванням від 20956 до 5095 етилацетату в гептанах. Розчинник випарювали за зниженого тиску з одержанням указаної в заголовку сполуки. 1.81.3 трет-Бутил-6-(8-(бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл)-3-(1- ((15,35,58,75)-3-(2-(((45,55)-5-((трет-бутоксикарбоніл)окси)метил)-2,2-диметил-1,3-діоксолан- 4-ілуметил)аміно)етокси)-5, 7-диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)піколінат
Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 1.81.2 (48 Н,55)-2,2,22-тетраметил-|4,4-6і(1,3-діоксолан)|-5-карбальдегідом у прикладі 1.76.1. 1.81.4. 6-(8-(1,3-Бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1 Н)-іл|-3-(1-(І3,5-диметил- 7-(2-(25,35)-2,3,4-тригідроксибутил|аміно)етокси)трицикло!|3.3.1.157)дец-1-ил|метил)-5-метил- 1Н-піразол-4-іл)піридин-2-карбонова кислота
Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 1.81.3 речовиною із прикладу 1.76.1 в прикладі 1.76.2. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-айв) б ррт 12,86 (Б5, 2Н), 8,28 (р5, 1Н), 8,18 (65, 1Н), 8,04 (а, 1Н), 7,80 (а, 1Н), 7,63 (9, 1Н), 7,51-7,43 (т, ЗН), 7,36 (ад, 2Н), 7,29 (5, 1Н), 6,96 (а, 1Н), 4,96 (5, 2Н), 3,89 (ї, 2Н), 3,83 (т, ЗН), 3,46 (т, 4Н), 3,40 (т, 4Н), 3,08-2,96 (т, 6Н), 2,10 (5, ЗН), 1,43 (5, 2Н), 1,30 (ад, 4Н), 1,14 (І, 4Н), 1,04 (9, 2Н),
Коо) 0,87 (5, 6Н). М5 (ЕБІ) т/е 850 (М.-НН)», 848 (М-Н). 1.82 Синтез 6-(8 -(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-(1-(13-(2- ((25,35,48,58,6Н8)-2,3,4,5,6,7-гексагідроксигептил|аміно)етокси)-5,7- диметилтрицикло!|3.3.1.19|дец-1-ил|метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)піридин-2-карбонової кислоти (М/2.82)
Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни (2К,ЗК,45,5К,6Н8)-2,3,4,5,6,7- гексагідроксигептаналю (4К,55,6К)-6-(гідроксиметил)тетрагідро-2Н-піран-2,4,5-тріолом і речовини із прикладу 1.3.1 речовиною із прикладу 1.2.7 в прикладі 1.77.1. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-айвє) б ррт 12,86 (р5, 1Н), 8,34-8,08 (т, 2Н), 8,05 (9, 1Н), 7,79 (а, 1Н), 7,54- 7,АЗ (т, ЗН), 7,37 (т, 2Н), 7,30 (5, 1Н), 6,95 (9, 1Н), 4,96 (5, 2Н), 3,93 (т, 2Н), 3,90 (т, АН), 3,83 (5, 2Н), 3,47 (т, 4Н), 3,41 (т, 4Н), 3,18-3,08 (т, 7Н), 3,03 (І, 2Н), 2,12 (5, ЗН), 1,46 (5, 2Н), 1,28 (а,
АН), 1,15 (ї, 4Н), 1,05 (а, 2Н), 0,89 (в, 6Н). М5 (ЕБІ) т/е 940 (М.Н). 1.83 Синтез 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-11-((3-Т2-
І(9-(01,З-дигідроксипропан-2-іл)аміно|пропіл)усульфоніл)аміно|етокси)-5, 7- диметилтрицикло!|3.3.1.19|дец-1-ил)метилі|-5-метил-1 Н-піразол-4-іліпіридин-2-карбонової кислоти (М/2.83) 1.83.1 трет-Бутил-6-(8-(бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл)-3-(1-((3- (2-(3-((1,3-дигідроксипропан-2-іл)аміно)пропілсульфонамідо )етокси)-5,7-диметиладамантан-1- ілуметил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)піколінат
В охолоджений (на крижаній бані) розчин речовини із прикладу 1.2.7 (31 мг) й М,М- діізопропілетиламіну (60 мкл) в дихлорметані (1 мл) додавали З-хлорпропан-1-сульфонілхлорид (5 мкл). Суміш перемішували за кімнатної температури протягом 2 годин. Реакційну суміш концентрували, розчиняли в М,М-диметилформаміді (1 мл), переносили в 2 мл пробірку для мікрохвильового реактора й додавали 2-амінопропан-1,3-діол (70 мг). Суміш нагрівали при 130"С за умов мікрохвильового випромінювання (Віоїаде Іпйагг) протягом 90 хвилин. Реакційну суміш концентрували й залишок очищували за допомогою НРІС з оберненою фазою із застосуванням системи сіїзоп, з елююванням від 20 до 10095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./06. трифтороцтової кислоти. Необхідні фракції об'єднували й висушували сублімацією з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (Е5І) т/е 997,2 (МАН) ». 1.83.2 6-І(8-(1,3-Бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-71-(3-2-((3-(К1,3- бо дигідроксипропан-2-іл)ламіно|Іпропіл)усульфоніл)аміно|етокси)-5,7-диметилтрициклої|3.3.1.15Лудец-
1-ил)метил|-5-метил-1Н-піразол-4-іліпіридин-2-карбонова кислота
Речовину із прикладу 1.83.2 одержували шляхом заміни речовини із прикладу 1.83.1 речовиною із прикладу 1.2.8 в прикладі 1.2.9. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-дв) б ррт 12,84 (5, 1Н), 8,40 (5, 2Н), 8,05 - 7,98 (т, 1Н), 7,77 (9, 1Н), 7,60 (а, 1Н), 7,51 - 7,39 (т, ЗН), 7,38 - 7,30 (т, 2Н), 7,27 (5, 1Н), 7,13 (ї, 1Н), 6,93 (9, 1Н), 4,94 (5, 2Н), 3,61 (да, 4Н), 3,36 (І, 2Н), 3,16 - 2,93 (т, 1ОН), 2,08 (5, ЗН), 2,00 (р, 2Н), 1,38 (5, 2Н), 1,25 (9, 4Н), 1,15 - 0,92 (т, 6Н), 0,84 (5, 6Н).
М5 (ЕБІ) т/е 941,2 (МАН). 1.84 Синтез 6-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-3-11-(3-2-((3- (П1,9З-дигідрокси-2-(гідроксиметил)пропан-2-іл|аміно)-3З-оксопропіл)аміно|етокси)-5, 7- диметилтрицикло!|3.3.1.157)дец-1-ил)метил|-5-метил-1 Н-піразол-4-іліпіридин-2-карбонової кислоти (М/2.84)
У розчин трет-бутил-3-(1-((3-(2-аміноетокси)-5,7-диметиладамантан-1-ілуметил)-5-метил- 1Н-піразол-4-іл)-6-(8-(бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл)піколінату (55 мг) в М,.М-диметилформаміді (б мл) додавали М-(1,3-дигідрокси-2-(гідроксиметил)пропан-2- іллуакриламід (73,4 мг), М,М-дізопропілетиламін (0,2 мл) і Нг2О (0,2 мл). Суміш перемішували за кімнатної температури 4 дні. За допомогою І С/М5 встановили очікуваний продукт як основний пік. Реакційну суміш розбавляли етилацетатом (500 мл), промивали водою й сольовим розчином та висушували над безводним сульфатом натрію. Після фільтрування й випарювання розчинника одержували залишок, який розчиняли у дихлорметані й трифтороцтовій кислоті (10 мл, 171) та перемішували протягом ночі. Суміш концентрували і залишок розчиняли в М,М- диметилформаміді (8 мл) і очищували за допомогою НРІС з оберненою фазою на системі сСіїБоп (колонка С18), із елююванням від 20 до 8095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-савє) б ррт 12,84 (5, 1Н), 8,45 (5, 2Н), 8,01 (а, 4Н), 7,78 (а, 1), 7,60 (а, тн), 7,53 - 7,39 (т, ЗН), 7,39 - 7,30 (т, 2Н), 7,27 (5, 1Н), 6,94 (й, 1Н), 4,94 (в, 2Н), 4,14 (5, 2Н), 3,87 (Її, 2Н), 3,81 (5, 2Н), 3,52 (49, АН), 3,19 (5, ЗН), 3,13 - 2,97 (т, 5Н), 2,75 (І, 2Н), 2,08 (5, ЗН), 1,42 (5, 2Н), 1,29 (а, 4Н), 1,12 (5, 4Н), 1,09 - 0,99 (т, 2Н), 0,85 (5, 7Н). М5 (ЕБІ) т/е 921,2 (М.Н). 1.05 Синтез 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-(1-(13-(2-
І(35)-3,4-дигідроксибутил|аміно)етокси)-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.127|дец-1-ил|метил)-5-
Зо метил-1Н-піразол-4-іл)піридин-2-карбонової кислоти (М/2.85)
У розчин речовини із прикладу 1.2.7 (213 мг) у дихлорметані (2 мл) додавали (5)-2-(2,2- диметил-1,3-діоксолан-4-іл)ацетальдегід (42 мг). Після перемішування за кімнатної температури протягом 30 хвилин додавали триацетоксиборогідрид натрію (144 мг). Реакційну суміш перемішували за кімнатної температури протягом ночі. Додавали трифтороцтову кислоту (2 мл) та продовжували перемішування протягом ночі. Реакційну суміш концентрували й залишок очищували за допомогою НРІС з оберненою фазою із застосуванням системи оїіїЇ5оп, з елююванням від 5 до 8595 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 06б./06. трифтороцтової кислоти. Необхідні фракції об'єднували й висушували сублімацією з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-ав) б ррт 12,86 (5, 1Н), 8,22 (а, 2Н), 8,05 - 8,01 (т, 1Н), 7,79 (а, 1Н), 7,61 (а, 1Н), 7,53 - 7,41 (т, ЗН), 7,36 (19, 2Н), 7,28 (5, 1Н), 6,95 (9, 1Н), 4,95 (5, 2Н), 3,88 (І, 2Н), 3,82 (5, 2Н), 3,26 - 2,94 (т, 7Н), 2,10 (5, ЗН), 1,84 - 1,75 (т, 1Н), 1,52-1,63 (т, 1Н), 1,45 - 1,23 (т, 6Н), 1,19 - 0,96 (т, 7Н), 0,86 (5, 6Н). М5 (ЕІ) т/е 834,3 (М--Н)». 1.86 Синтез 4-(Ц2-((3-(4-(6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|- 2-карбоксипіридин-3-іл)-о-метил-1 Н-піразол-1-іл)метил|-5, 7-диметилтрицикло|3.3.1.157|)дец-1- ил)окси)етил|аміно)метил)феніл-бета-О-глюкопіранозидуронової кислоти (У/2.86)
У розчин 3-(1-((3-(2-аміноетокси)-5,7-диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4- іл)-6-(8-(бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1 Н)-іл)піколінової кислоти (36 мг) в тетрагідрофурані (2 мл) й оцтовій кислоті (0,2 мл) додавали (25,3К,45,55,65)-2-(4- формілфенокси)-6-(метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5-триїлтриацетат (21 мг) З подальшим додаванням Ма5зО.4 (60 мг). Суміш перемішували за кімнатної температури протягом 1 години перед додаванням МР-ціаноборогідриду (Віоїаде, 153 мг, 2,49 ммоль/г).
Потім суміш перемішували за кімнатної температури протягом З годин. Суміш фільтрували і до фільтрату додавали ГІОН НгО (20 мг). Суміш перемішували за кімнатної температури протягом 2 годин і потім підкислювали трифтороцтовою кислотою. Розчин очищували за допомогою
НРІС з оберненою фазою на системі Сіївоп (колонка С18), з елююванням від 20 до 8095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕІ) т/е 1028,3 (МАН) ». 1.87 Синтез 3-Ц2-((3-(4-16-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)нафталін-2-іл|-2- карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1-ілуметил)|-5, 7-диметилтрицикло!|3.3.1.157)дец-1- бо илюкси)етиліаміно)пропіл-бета-О-глюкопіранозидуронової кислоти (М/2.87)
1.87.1 .(28,38,55,65)-2-(3-Гідроксипропокси)-6-(метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5- триїлтриацетат
У перемішуваний розчин (2Е,3К,55,65)-2-бром-6-(метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н-піран- 3,4,5-триїлтриацетату (3,98 г) в толуолі (60 мл) додавали пропан-1,3-діол (15,22 г). Суміш перемішували при 757"С й додавали трьома порціями Ад2гСОз (5,52 г) впродовж періоду З години. Суміш перемішували за кімнатної температури протягом ночі, після чого суспензію фільтрували. Фільтрат концентрували і залишок очищували за допомогою хроматографії на силікагелі, з елююванням 5095 етилацетатом у гептані, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕБІ) т/е 409,9 (МАМН».)». 1.87.2 (25,35,58,68)-2-(Метоксикарбоніл)-6-(З-оксопропокси)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5- триїлтриацетат
У розчин диметилсульфоксиду (0,5 мл) в дихлорметані (10 мл) при -78"С додавали оксалілхлорид (0,2 мл). Суміш перемішували 20 хвилин при -78"С і додавали розчин речовини із прикладу 1.87.1 (393 мг) у дихлорметані (10 мл) за допомогою шприца. Через 20 хвилин додавали триєтиламін (1 мл). Суміш перемішували протягом 30 хвилин і забезпечували підвищення температури до кімнатної температури. Реакційну суміш розбавляли етилацетатом (300 мл), промивали водою й сольовим розчином та висушували над безводним сульфатом натрію. Після фільтрування й випарювання розчинника одержували вказану в заголовку сполуку, яку застосовували без додаткового очищення. М5 (ОСІ) т/е 408,1 (МАМН».)». 1.87.3...3-Щ2-(3-((4-16-І(8-(1,3-Бензотіазол-2-ілкарбамоїл)нафталін-2-іл|-2-карбоксипіридин-3- іл)б5-метил-1Н-піразол-1-іл)уметил|-5,7-диметилтрициклої3.3.1.15Я)дец-1- илюкси)етиліаміно)пропіл-бета-О-глюкопіранозидуронова кислота
У розчин речовини із прикладу 1.68.6 (171 мг) у дихлорметані (10 мл) додавали речовину із прикладу 1.87.2 (90 мг) і Мавн(оОдс)з (147 мг). Суміш перемішували за кімнатної температури протягом ночі. Реакційну суміш розбавляли етилацетатом (200 мл), промивали 295 водним розчином НОСІЇ, водою та сольовим розчином, висушували над безводним сульфатом натрію, фільтрували та концентрували. Залишок розчиняли в тетрагідрофурані (6 мл), метанолі (З мл) й воді (З мл) та додавали ГІОН НО (100 мг). Суміш перемішували за кімнатної температури протягом 2 годин, підкислювали трифтороцтовою кислотою й концентрували за зниженого
Зо тиску. Залишок розчиняли в суміші диметилсульфоксид/метанол (1:1, 12 мл) та очищували за допомогою НРІ С з оберненою фазою на системі сіїбоп (колонка С18), з елююванням від 20 до 8095 ацетонітрилу у воді, що містить 0,195 трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-дв) б ррт 13,07 (в, 2Н), 8,99 (в, 1Н), 8,34 (аа, 1), 8,29 - 8,11 (т, 5Н), 8,06 - 8,02 (т, 1Н), 7,99 (а, 1Н), 7,90 (а, 1), 7,78 (а, 1Н), 7,68 (аа, 1Н), 7,55 - 7,40 (т, 2Н), 7,34 (4, 1Н), 4,23 (а, 1Н), 3,87 (5, 2Н), 3,76 (а, 1Н), 3,60 (а, 1Н), 3,53 (91, ЗН), 3,29 (І, 1Н), 3,15 (1, 1Н), 3,06 - 2,91 (т, 6Н), 2,20 (5, ЗН), 1,83 (р, 2Н), 1,44 (5, 2Н), 1,30 (ад,
АН), 1,14 (5, 4Н), 1,03 (д, 2Н), 0,85 (5, 7Н). М5 (ЕБІ) т/е 975,2(М-Н)-. 1.88 Синтез 6-(4-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-2-оксидоізохінолін-б-іл|-3-(/1-(3,5-диметил- 7-(2-(метиламіно)етокси|грицикло!/3.3.1.157)дец-1-ил)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл|піридин-2- карбонової кислоти (М/2.88) 1.88.1 Метил-6-(6-(трет-бутоксикарбоніл)-5-(1-((3-(2-(трет- бутоксикарбоніл)(метил)аміно)етокси)-5,7-диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4- іл)піридин-2-іл)ізохінолін-4-карбоксилат
У розчин речовини із прикладу 1.78.1 (0,73 г) в 1,4-діоксані (20 мл) й воді (10 мл) додавали трет-бутил-3-(1-((3-(2-(трет-бутоксикарбоніл)(метил)аміно)етокси)-5,7-диметиладамантан- 1- іл)уметил)-5-метил-1Н-піразол-4-іл)-6-хлорпіколінат (1,5 г), біс(трифенілфосфін)паладіюці!) дихлорид (82 мг) і С5Е (1,06 г) та перемішували реакційну суміш зі зворотним холодильником протягом ночі. Суміш розбавляли етилацетатом (200 мл), промивали водою та сольовим розчином, висушували над безводним сульфатом натрію, фільтрували та концентрували.
Залишок очищували за допомогою хроматографії на силікагел, з елююванням 2090 етилацетатом у гептані (1 л), з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕІ) т/е 794,8 (МАН). 1.88.2.. 6-(6-(трет-Бутоксикарбоніл)-5-(1-((3-(2-(трет-бутоксикарбоніл)(метил)аміно)етокси)- 5,7-диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1Н-піразол-4-іл)піридин-2-іл)ізохінолін-4-карбонова кислота
У розчин речовини із прикладу 1.88.1 (300 мг) в тетрагідрофурані (6 мл), метанолі (З мл) й воді (З мл) додавали ПОН Н2гО (100 мг). Суміш перемішували за кімнатної температури протягом 2 годин. Суміш підкислювали 2 н. водним розчином НСІ, розбавляли етилацетатом (300 мл), промивали водою та сольовим розчином, висушували над безводним сульфатом 60 натрію, фільтрували та концентрували з одержанням указаної в заголовку сполуки, яку застосовували без додаткового очищення. М5 (ЕБІ) т/е 781,2 (МН). 1.88.3 трет-Бутил-6-(4-(бензо|ч|гіазол-2г-ілкарбамоїл)ізохінолін-б-іл)-3-(1-((3-(2-(трет- бутоксикарбоніл)(метил)аміно)етокси)-5, 7-диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4- іл)піколінат
У розчин речовини із прикладу 1.88.2 (350 мг) в дихлорметані (10 мл) додавали бензо|Ч|гіазол-2-амін (67,5 мг), 1-етил-3-(З-диметиламінопропіл)карбодіїмід (129мг) і 4- диметиламінопіридин (82 мг). Суміш перемішували за кімнатної температури протягом ночі.
Суміш розбавляли етилацетатом (300 мл), промивали водою й сольовим розчином та висушували над безводним сульфатом натрію. Після фільтрації й випарювання розчинника одержували залишок, який очищували за допомогою хроматографії на силікагелі, з елююванням 595 метанолу в дихлорметані, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (АРСІ) т/е 912,3 (МеА-Н)». 1.88.4 4-(Бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-6-(6-карбокси-5-(1-(3,5-диметил-7-(2- (метиламіно)етокси)адамантан-1-іл)уметил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)піридин-2-іл)ізохінолін-2- оксид
У розчин речовини із прикладу 1.88.3 (100 мг) у дихлорметані (б мл) додавали т- хпорпероксибензойну киспоту (19 мг). Суміш перемішували за кімнатної температури протягом 4 годин. Суміш розбавляли етилацетатом (200 мл), промивали насиченим водним розчином
Мансо», водою та сольовим розчином і висушували над безводним сульфатом натрію. Після фільтрування й випарювання розчинника одержували залишок, який розчиняли у дихлорметані/трифтороцтовій кислоті (10 мл, 1:11) та перемішували за кімнатної температури протягом ночі. Розчинники випарювали і залишок очищували за допомогою НРІ С з оберненою фазою на системі біїбоп (колонка С18), з елююванням від 20 до 8095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (501
МГЦ, диметилсульфоксид-ав) б ррт 13,32 (5, 2Н), 9,21 (0, 1), 8,71 (а, 1Н), 8,49 (аа, 1Н), 8,36 - 8,19 (т, 4Н), 8,12 (ад, 1Н), 8,07 (9, 1Н), 7,96 (ад, 1н), 7,82 (а, 1), 7,56 - 7,46 (т, ЗН), 7,42 - 7,35 (т, 1Н), 3,90 (а, ЗН), 3,56 (14, ЗН), 3,02 (р, ЗН), 2,55 (І, 4Н), 2,29 - 2,19 (т, 4Н), 1,45 (0, ЗН), 1,37 - 1,26 (т, 5Н), 1,16 (90, 6Н), 1,10 - 1,01 (т, ЗН), 0,88 (а, 8Н). М5 (ЕБІ) т/е 772,1 (МАН). 1.89 Синтез 6-(8-(1,3-бензотіазол-2-іл)укарбамоїл|-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1 Н)-іл)-3-11-((3,5- диметил-7-2-(2-сульфоетил)аміно|ацетамідо)трицикло|3.3.1.127|)декан-1-іл)уметил|-5-метил-1 Н- піразол-4-іліпіридин-2-карбонової кислоти (М/2.89) 1.89.1 1-(3-Бром-5,7-диметиладамантан-1-іл)уметил)-5-метил-1 Н-піразол
В охолоджений (-307"С) розчин речовини із прикладу 1.1.3 (500 мг) в тетрагідрофурані (30 мл) додавали н-бутиллітій (9,67 мл) і суміш перемішували при -307С протягом 2 годин.
Додавали краплями метилиодид (1,934 мл) при -30"С. Після завершення додавання суміш перемішували при -30"С протягом додаткових 2 годин. Повільно додавали 1 н. водний розчин
НСЇ в крижаній воді так, що температура підтримувалась нижче 0"С, до отримання рН 6. Суміш перемішували за кімнатної температури протягом 10 хвилин і розбавляли крижаною водою (10 мл) й етилацетатом (20 мл). Шари розділяли і водний шар двічі екстрагували етилацетатом.
Об'єднані органічні фази промивали сольовим розчином, висушували над Мао5О», фільтрували та концентрували. Залишок очищували за допомогою флеш-хроматографії на силікагелі, з елююванням петролейним етером/етилацетатом, від 15/1 до 10/1, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (СО-М5) т/е 337, 339 (М.Н). 1.89.2 1-(3,5-Диметил-7-((5-метил-1 Н-піразол-1-ілуметил)адамантан-1-іл)сечовина
Речовину із прикладу 1.89.1 (2,7 г) й сечовину (4,81 г) змішували та перемішували при 1407С протягом 16 годин. Суміш охолоджували до кімнатної температури й суспендували в метанолі (200 мл х 2). Нерозчинний матеріал видаляли шляхом фільтрування. Фільтрат концентрували з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (.С-М5) т/е 317,3 (М.Н) з». 1.89.3 3,5-Диметил-7-((5-метил-1 Н-піразол-1-іл)уметил)адамантан-1-амін
У розчин речовини із прикладу 1.40.2 (2,53 г) в 2090 етанолі у воді (20 мл) додавали натрію гідроксид (12,79 г). Суміш перемішували при 120"С протягом 16 годин і при 140"С протягом ще 16 годин. Додавали 6 н. водний розчин НСІ до отримання рН 6. Суміш концентрували і залишок суспендували в метанолі (200 мл). Нерозчинний матеріал відфільтровували. Фільтрат концентрували з одержанням указаної в заголовку сполуки у вигляді солі НСІ. М5 (ІС-М5) т/е 273,9 (МАН)». 1.89.4 трет-Бутил-(2-(3,5-диметил-7-((5-метил-1 Н-піразол-1-ілуметил)адамантан-1-іл)аміно)- 2-оксоетил)карбамат
У розчин речовини із прикладу 1.89.3 (2,16 г) в М,М-диметилформаміді (100 мл) додавали триетиламін (3,30 мл), 2-((трет-бутоксикарбоніл)амінодоцтову кислоту (1,799г) й 1- бо ібісїідиметиламіно)метилені-1Н-1 2,д-триазолої4,5-Біпіридиній-З-оксиду тексафторфостфат
(3,90 г). Суміш перемішували за кімнатної температури протягом 2 годин. Додавали воду (40 мл) і суміш екстрагували етилацетатом (70 мл х 2). Об'єднані органічні фази промивали сольовим розчином, висушували над сульфатом натрію, фільтрували та концентрували.
Залишок очищували за допомогою хроматографії на силікагелі, з елююванням петролейним етером/етилацетатом, від З/1 до 2/1, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (І С-М5) т/е 430,8 (МАН). 1.89.5 трет-Бутил-(2-((3-(4-йод-5-метил-1Н-піразол-1-іл)уметил)-5,/-диметиладамантан-1- іл)аміно)-2-оксоетил)карбамат
У розчин речовини із прикладу 1.89.4 (1,7г) в М,М-диметилформаміді (20 мл) за температури навколишнього середовища порціями додавали МІЗ (М-йодсукцинімід, 1,066 г) та перемішували суміш за кімнатної температури протягом 16 годин. Додавали крижану воду (10 мл) і насичений водний розчин Маг52Оз (10 мл). Суміш екстрагували етилацетатом (30 мл х 2). Об'єднані органічні фази промивали сольовим розчином, висушували над сульфатом натрію, фільтрували та концентрували. Залишок очищували за допомогою хроматографії на силікагелі, з елююванням петролейним етером/етилацетатом, від 3/1 до 2/1, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (І С-М5) т/е 556,6 (МАН). 1.89.6./ Метил-2-(5-бром-6-(трет-бутоксикарбоніл)піридин-2-іл)-1,2,3,4-тетрагідроізохінолін-8- карбоксилат
До розчину гідрохлориду метил-1,2,3,4-тетрагідроізохінолін-8-карбоксилату (12,37 г) й речовини із прикладу 1.1.140 (15г) в диметилсульфоксиді (100 мл) додавали М,М- діізопропілетиламін (12 мл) та перемішували суміш при 507"С протягом 24 годин. Потім суміш розбавляли етилацетатом (500 мл) і промивали водою та сольовим розчином. Органічний шар висушували над сульфатом натрію, фільтрували та концентрували за зниженого тиску. Залишок очищували за допомогою хроматографії на силікагелі з елююванням 2095 етилацетатом у гексані, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (Е5І) т/е 448,4 (МН). 1.89.7 Метил-2-(6-(трет-бутоксикарбоніл)-5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-діоксаборолан-2- іл)упіридин-2-іл)-1,2,3,4-тетрагідроізохінолін-8-карбоксилат
У розчин речовини із прикладу 1.89.6 (2,25 г) Й 1,1- бісідифенілфосфіно)фероцені|дихлорпаладію(!І!) (205 мг) в ацетонітрилі (30 мл) додавали
Зо триетиламін (З мл) і пінаколборан (2 мл) та перемішували суміш зі зворотним холодильником протягом З годин. Суміш розбавляли етилацетатом (200 мл) і промивали водою та сольовим розчином. Органічний шар висушували над сульфатом натрію, фільтрували та концентрували за зниженого тиску. Під час очищення залишку за допомогою флеш-хроматографії, з елююванням 2095 етилацетатом в гексані, одержували указану в заголовку сполуку. 1.89.68 Метил-2-(6-(трет-бутоксикарбоніл)-5-(1-((3-(2-(трет- бутоксикарбоніл)аміно)дацетамідо)-5,7-диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4- іл)упіридин-2-іл)-1,2,3,4-тетрагідроізохінолін-8-карбоксилат
Вказану в заголовку сполуку одержували із застосуванням процедури в прикладі 1.2.2 шляхом заміни речовини із прикладу 1.1.6 речовиною із прикладу 1.89.5. М5 (Е5І) т/е 797,4 (МАН). 189.9... 2-(6-(трет-Бутоксикарбоніл)-5-(1-((3-(2-(трет-бутоксикарбоніл)аміно)дацетамідо)-5,7- диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)піридин-2-іл)-1,2,3,4- тетрагідроізохінолін-8-карбонова кислота
Вказану в заголовку сполуку одержували із застосуванням процедури в прикладі 1.2.5 шляхом заміни речовини із прикладу 1.2.4 речовиною із прикладу 1.89.8. М5 (Е5І) т/е 783,4 (МАН. 1.89.10 трет-Бутил-6-(8-(бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл)-3-(1-((3- (2-«(трет-бутоксикарбоніл)аміно)ацетамідо)-5,7-диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н- піразол-4-іл)піколінат
Вказану в заголовку сполуку одержували із застосуванням процедури в прикладі 1.2.6 шляхом заміни речовини із прикладу 1.2.5 речовиною із прикладу 1.89.9. М5 (Е5І) т/е 915,3 (МАН). 1.89.11 3-(1-713-(2-Аміноацетамідо)-5,7-диметилтрицикло!ї3.3.1.197|декан-1-іл|метил)-5- метил-1Н-піразол-4-іл)-6-8-(1,3-бензотіазол-2-іл)укарбамоїл|-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)- ілупіридин-2-карбонова кислота
Указану в заголовку сполуку одержували із застосуванням процедури в прикладі 1.2.9 шляхом заміни речовини із прикладу 1.2.8 речовиною з прикладу 1.89.10. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-ав) б 12,82 (5, 1Н), 8,00 (аа, 1), 7,90 - 7,79 (т, 4Н), 7,76 (а, 1нН), 7,59 (аа, 1Н), 7,49 - 7,38 (т, ЗН), 7,37 - 7,29 (т, 2Н), 7,25 (5, 1Н), 6,92 (й, 1Н), 4,92 (5, 2Н), 3,85 (І, 2Н), 60 3,77 (5, 2Н), 3,40 (а, 2Н), 2,98 (ї, 2Н), 2,07 (5, ЗН), 1,63 (в5, 2Н), 1,57 - 1,38 (т, 4Н), 1,15 - 0,93 (т,
6Н), 0,80 (5, 6Н). М5 (ЕБІ) т/е 759,2 (М.Н)». 1.89.12 6-18-(1,3-Бензотіазол-2-іл)карбамоїл|-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл)-3-11-К(3,5- диметил-7-2-((2-сульфоетил)аміно|ацетамідо)грицикло!|3.3.1.127|декан-1-іл)уметил|-5-метил-1 Н- піразол-4-іліпіридин-2-карбонова кислота
У розчин речовини із прикладу 1.89.11 (102 мг) в М,М-диметилформаміді (6 мл) додавали 4- ((трет-бутилдифенілсиліл)окси)-2,2-диметилбутилетенсульфонат (60 мг) та перемішували суміш за кімнатної температури впродовж вихідних днів. Суміш розбавляли етилацетатом (300 мл), промивали водою й сольовим розчином та висушували над безводним сульфатом натрію. Після фільтрування й випарювання розчинника одержували залишок, який розчиняли у дихлорметані/трифтороцтовій кислоті (10 мл, 1:11) та перемішували за кімнатної температури протягом ночі. Розчинники випарювали і залишок очищували за допомогою НРІ С з оберненою фазою на системі біїбоп (колонка С18), з елююванням від 20 до 8095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (501
МГцу, диметилсульфоксид-ав) б 12,83 (5, 1Н), 8,57 (5, 2Н), 8,02 (0, 1Н), 7,95 (5, 1Н), 7,77 (а, 1Н), 7,60 (а, 1), 7,52 - 7,37 (т, ЗН), 7,39 - 7,29 (т, 2Н), 7,26 (5, 1Н), 6,94 (0, 1Н), 4,94 (5, 2Н), 3,87 (ї, 2Н), 3,79 (5, 2Н), 3,16 (д, 2Н), 2,99 (ї, 2Н), 2,77 (І, 2Н), 2,08 (5, ЗН), 1,64 (в, 2Н), 1,55 (9, 2Н), 1,45 (ОА, 2Н), 1,21 - 0,95 (т, 6Н), 0,82 (5, 6Н). М5 (ЕБІ) т/е 867,2 (МАН). 1.30 Синтез 6-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-(1-119,5- диметил-7-((2-(2-сульфоетил)аміно|етил)ісульфаніл)трицикло|3.3.1.127|)дец-1-ил|метил)-5- метил-1Н-піразол-4-іл)піридин-2-карбонової кислоти (М/2.90) 1.90.1 3-41 Н-Піразол-1-іл)метил)-5,7-диметиладамантан- 1-тіол
Суміш речовини із прикладу 1.1.3 (2,8 г) й тіосечовини (15,82 г) в 3395 (вага/вага) НВг в оцтовій кислоті (50 мл) перемішували при 110"С протягом 16 годин і концентрували за зниженого тиску з одержанням залишку. Залишок розчиняли в 2095 етанолі у воді (об./об.: 200 мл) і додавали гідроксид натрію (19,06 г). Одержаний розчин перемішували за кімнатної температури протягом 1б годин і концентрували. Залишок розчиняли у воді (60 мл) і підкислювали б н. водним розчином НСІ до рН 5 - рН 6. Суміш екстрагували етилацетатом (200 мл х 2). Об'єднані органічні шари промивали сольовим розчином, висушували над Ма5О», фільтрували та концентрували з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕБІ) т/е 319,1
Коо) (МАН). 1.90.2 2-(-3-(1 Н-Піразол-1-іл)метил)-5,7-диметиладамантан-1-іл)тіо)етанол
У розчин речовини із прикладу 1.90.1 (3,3 г) в етанолі (120 мл) додавали етоксид натрію (2,437 г). Суміш перемішували протягом 10 хвилин і додавали краплями 2-хлоретанол (1,80 мл).
Суміш перемішували за кімнатної температури протягом 6 годин і нейтралізували 1 н. водним розчином НСІ до рН 7. Суміш концентрували і залишок екстрагували етилацетатом (200 мл х 2).
Об'єднані органічні шари промивали сольовим розчином, висушували над Мо5О5, фільтрували та концентрували. Залишок очищували за допомогою колонкової хроматографії на силікагелі, з елююванням петролейним етером/етилацетатом, від 6/1 до 2/1, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕБІ) т/е 321,2 (М.Н) ». 1.90.3 2-((-3,5-Диметил-7-((5-метил-1Н-піразол-1-іл)метил)адамантан-1-іл)тіо)етанол
У розчин речовини із прикладу 1.90.2 (2,3 г) в тетрагідрофурані (60 мл) додавали краплями н-бутиллітій (14,35 мл, 2 М у гексані) при -207С в атмосфері азоту. Суміш перемішували при даній температурі протягом 2 годин. В одержану суміш додавали метилйиодид (4,49 мл) при -20700 ії суміш перемішували при -207"С протягом 2 годин. Реакційну суміш гасили шляхом додавання краплями насиченого водного розчину МНаАСІ при -20"Сб. Одержану суміш перемішували протягом 10 хвилин і підкислювали 1 н. водним розчином НСІ до рН 5. Суміш двічі екстрагували етилацетатом. Об'єднані органічні шари промивали сольовим розчином, висушували над Мо950О»5, фільтрували та концентрували з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕБІ) т/е 335,3 (М.Н). 1.90.4 2-((-3-((4-Йод-5-метил-1Н-піразол-1-іл)метил)-5,7-диметиладамантан-1-іл)тіо)детанол
У розчин речовини із прикладу 1.90.3 (3,65 г) в М,М-диметилформаміді (90 мл) додавали М- йодсукцинімід (3,68 г). Суміш перемішували за кімнатної температури протягом 16 годин.
Реакційну суміш гасили шляхом додавання крижаної води (8 мл) і насиченого водного розчину
МабгОз (8 мл). Суміш перемішували протягом додаткових 10 хвилин і екстрагували етилацетатом (30 мл х 2). Об'єднані органічні шари промивали сольовим розчином, висушували над М950О5, фільтрували та концентрували за зниженого тиску. Залишок очищували за допомогою хроматографії на силікагелі, з елююванням петролейним етером/етилацетатом (від 6/1 до 3/1), з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕБІ) т/е 461,2 (МАН): 1.90.5 Ди-трет-бутил-(2-((3-(4-йод-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)метил|-5,7- 60 диметилтрицикло!3.3.1.15-Лдекан-1-іл)усульфаніл)етил|-2-імідодикарбонат
У холодний розчин (баня 0"С) речовини із прикладу 1.90.4 (З г) в дихлорметані (100 мл) додавали триетиламін (1,181 мл) і мезилхлорид (0,559 мл). Суміш перемішували за кімнатної температури протягом 4 годин і реакційну суміш гасили шляхом додавання крижаної води (30 мл). Суміш перемішували протягом додаткових 10 хвилин та екстрагували дихлорметаном (50 мл х 2). Об'єднані органічні шари промивали сольовим розчином, висушували над Мда5Ох4, фільтрували та концентрували за зниженого тиску. Залишок розчиняли в ацетонітрилі (100 мл) й додавали МН(Вос)2 (1,695 г) і С52СбОз (4,24г). Суміш перемішували при 857С протягом 16 годин і реакційну суміш гасили шляхом додавання води (20 мл). Суміш перемішували протягом 10 хвилин та екстрагували етилацетатом (40 мл х 2). Об'єднані органічні шари промивали сольовим розчином, висушували над М95О»х, фільтрували та концентрували.
Залишок очищували за допомогою хроматографії на силікагелі, з елююванням петролейним етером/етилацетатом, від 10/1 до 6/1, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕБІ) т/е 660,1 (М.АН)». 1.90.6 Метил-2-(5-(1-113-(2-Ібіс(трет-бутоксикарбоніл)аміно|Іетил)ісульфаніл)-5,7- диметилтрициклоїЇ3.3.1.127|декан-1-іл|метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)-6-(трет- бутоксикарбоніл)піридин-2-іл|-1,2,3,4-тетрагідроізохінолін-8-карбоксилат
Вказану в заголовку сполуку одержували із застосуванням процедури в прикладі 1.2.2 шляхом заміни речовини із прикладу 1.1.6 речовиною із прикладу 1.90.5. М5 (ЕБ5І) т/е 900,2 (МАН). 1.90.7А 2-(6-(трет-Бутоксикарбоніл)-5-(1-((3-(2-(трет-бутоксикарбоніл)аміно)етил)тіо)-5,7- диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)піридин-2-іл)-1,2,3,4- тетрагідроізохінолін-8-карбонова кислота
Вказану в заголовку сполуку одержували, як описано в прикладі 1.2.5, шляхом заміни речовини із прикладу 1.2.4 речовиною із прикладу 1.90.6. М5 (ЕБІ) т/е 786,2 (М.Н). 1.90.78 Ю // трет-Бутил-6-(8-(бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл)-3-(1- (3-(2-(трет-бутоксикарбоніл)аміно)етил)тіо)-5,7-диметиладамантан-1-іл)уметил)-5-метил-1 Н- піразол-4-іл)піколінат
Вказану в заголовку сполуку одержували, як описано в прикладі 1.2.6, шляхом заміни речовини із прикладу 1.2.5 речовиною із прикладу 1.90.7А. М5 (ЕБІ) т/е 918,8 (МАН).
Зо 1.90.8 трет-Бутил-3-(1-((3-(2-аміноетил)тіо)-5,7-диметиладамантан-1-іл)уметил)-5-метил-1 Н- піразол-4-іл)-6-(8-(бензо|д9|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл)піколінат
У розчин речовини із прикладу 1.90.78 (510 мг) в дихлорметані (5 мл) додавали трифтороцтову кислоту (5 мл) та перемішували реакційну суміш за кімнатної температури протягом 30 хвилин. Реакційну суміш гасили шляхом додавання насиченого водного розчину бікарбонату натрію і тричі екстрагували дихлорметаном. Об'єднані органічні речовини висушували безводним сульфатом натрію, фільтрували та концентрували за зниженого тиску.
Залишок очищували за допомогою НРІ С з оберненою фазою на системі сіїзоп (колонка С18), з елююванням від 20 до 8095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 трифтороцтової кислоти, з одержанням указаного в заголовку продукту. М5 (Е5І) т/е 818,1 (МАН). 1.90.9... 3-(1-4(3-(2-Аміноетил)тіо)-5,7-диметиладамантан-1-іл)уметил)-5-метил-1 Н-піразол-4- іл)-6-(8-(бензо|д|Ігіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1 Н)-іл)піколінова кислота
Речовину із прикладу 1.90.9 виділяли під час одержання речовини із прикладу 1.90.8. М5 (ЕБІ) 762,2 (МАН). 1.90.10 трет-Бутил-6-(8-(бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл)-3-(1-((3- (2-(2-(4-(трет-бутилдифенілсиліл)окси)-2,2-диметилбутокси)сульфоніл)етил)аміно)етил)тіо)- 5,7-диметиладамантан-1-іл)уметил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)піколінат
Розчиняли речовину із прикладу 1.90.8 (235 мг) і 4-(трет-бутилдифенілсиліл)окси)-2,2- диметилбутилетенсульфонат (150 мг) у дихлорметані (1 мл), додавали М,М-діїізопропілетиламін (140 мкл) і суміш перемішували за кімнатної температури протягом шести днів. Реакційну суміш безпосередньо очищували за допомогою хроматографії на силікагелі, з градієнтом елюювання від 0,5 до 3,095 метанолу в дихлорметані, з одержанням указаної в заголовку сполуки. 1.90.11 6-(8-(Бензо|Ч|гіазол-2г-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл)-3-(1-((3,5-диметил- 7-(2-(2-сульфоетил)аміно)етил)тіо)дадамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)піколінова кислота
Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 1.90.10 речовиною із прикладу 1.2.8 в прикладі 1.2.9. "Н ЯМР (500 МГц, диметилсульфоксид-йв) б ррт 8,39 (рг 5, 2Н), 8,03 (9, 1Н), 7,79 (а, 1), 7,62 (а, 1Н), 7,51 (а, 1Н),7,47 (ада, 1н), 7,43 (а, 1), 7,37 (а, 1Н), 7,35 (ада, 1Н), 7,30 (5, 1Н), 6,96 (а, 1Н), 4,96 (5, 2Н), 3,89 (І, 2Н), 3,81 (в, 2Н), 3,22 (т, 2Н), 3,06 (р т, 2Н), 3,01 (І, 2Н), 2,79 (І, 2Н), 2,74 (т, 2Н), 2,10 (в, ЗН), 1,51 (5, 2Н), 1,37 (т, 4Н), 1,15 (510) (т, 4Н), 1,05 (т, 2Н), 0,83 (5, 6Н). М5 (ЕІ) т/е 870,1 (М-А-Н)».
1.91 Синтез 6-(8-(1,3-бензотіазол-2-іл)укарбамоїл|-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1 Н)-іл)-3-11-((3,5- диметил-7-(3-(2-сульфоетил)аміно|пропілутрицикло!Ї3.3.1.157|декан-1-іл)метил|-5-метил-1 Н- піразол-4-іліпіридин-2-карбонової кислоти (М/2.91) 1.91.1 1-((3-Аліл-5,7-диметиладамантан-1-іл)уметил)-1Н-піразол
У розчин речовини із прикладу 1.1.3 (0,825 г, 2,55 ммоль) у толуолі (5 мл) додавали М,М'- азоїзобутиронітрил (АЇВМ, 0,419 г, 2,55 ммоль) і алілтрибутилстанан (2,039 мл, 6,38 ммоль).
Суміш продували потоком Ме протягом 15 хвилин, нагрівали при 80"С протягом 8 годин і концентрували. Залишок очищували за допомогою флеш-хроматографії, з елююванням 590 етилацетатом в петролейному етері, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕІ) т/е 285,2 (МАН). 1.91.2 1-((3-Аліл-5,7-диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н-піразол
У розчин речовини із прикладу 1.91.1 (200 мг, 0,703 ммоль) в тетрагідрофурані (5 мл) при -7187С в атмосфері М2 додавали н-бутиллітій (2,81 мл, 7,03 ммоль). Суміш перемішували протягом 2 годин, доки температура не підвищувалась до -20"С, і потім її перемішували при -207С протягом 1 години. Додавали йодметан (0,659 мл, 10,55 ммоль) і одержану суміш перемішували протягом 0,5 години при -20"С. Реакційну суміш гасили насиченим МНАСІ та двічі екстрагували етилацетатом. Об'єднаний органічний шар промивали сольовим розчином і концентрували з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕБІ) т/е 299,2 (М.Н) х. 1.91.3 3-(3,5-Диметил-7-((5-метил-1 Н-піразол-1-іл)уметил)адамантан-1-іл)пропан-1-ол
В атмосфері азоту розчин речовини із прикладу 1.91.2 (2,175 г, 7,29 ммоль) в безводному тетрагідрофурані (42,5 мл) охолоджували до 0"С. Додавали краплями ВНз"ТНЕ (15,30 мл, 15,30 ммоль). Реакційну суміш перемішували за кімнатної температури протягом 2 годин і охолоджували до 0"С. У реакційну суміш додавали краплями 10 н. водний розчин Ммаон (5,03 мл, 50,3 ммоль) з подальшим додаванням З30-процентного водного розчину НгО2 (16,52 мл, 146 ммоль). Одержану суміш нагрівали до кімнатної температури та перемішували протягом 90 хвилин. Реакційну суміш гасили 10-процентною хлористоводневою кислотою (35 мл). Органічний шар відділяли і водний шар екстрагували етилацетатом (2 х 60 мл).
Об'єднані органічні шари промивали сольовим розчином (З х 60 мл) і охолоджували на крижаній бані. Обережно додавали насичений водний розчин сульфіту натрію (15 мл) і суміш
Зо перемішували протягом декількох хвилин. Органічний шар висушували над сульфатом натрію, фільтрували та концентрували іп масио. Залишок очищували за допомогою флеш- хроматографії, з елююванням петролейним етером/етилацетатом (від 3:1 до 1:1), з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕБІ) т/е 317,3 (М.Н) ». 1.91.4 3-(3-((4-Йод-5-метил-1Н-піразол-1-іл)метил)-5,7-диметиладамантан-1-іл)упропан-1-ол
Суміш речовини із прикладу 1.91.3 (1,19 г, 3,76 ммоль) та 1-йодпіролідин-2,5-діону (1,015 г, 4,51 ммоль) в М,М-диметилформаміді (7,5 мл) перемішували протягом 16 годин за кімнатної температури. Реакційну суміш гасили насиченим Маг25Оз. Суміш розбавляли етилацетатом і промивали насиченим Ма»5Оз, насиченим МагСОз, водою та сольовим розчином. Органічний шар висушували над безводним Маг5О5, фільтрували та концентрували. Залишок очищували за допомогою флеш-хроматографії, з елююванням петролейним етером/етилацетатом (від 3:1 до 1:1), з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (Е5І) т/е 443,1 (МАН) 7. 1.91.5 3-(3-((4-Йод-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)метил)-5,7-диметиладамантан-1- іл)упропілметансульфонат
У розчин речовини із прикладу 1.91.4 (1,55 г, 3,50 ммоль) в СНесСіг (20 мл) при 0"С повільно додавали (СНзСНг)зМ (0,693 мл, 4,98 ммоль) і мезилхлорид (0,374 мл, 4,80 ммоль). Суміш перемішували протягом 3,5 години при 207С і розбавляли за допомогою СНесСі», промивали насиченим МНАСІ, МанНСОз та сольовим розчином. Органічний шар висушували над Маг50О4, фільтрували та концентрували з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (Е5І) т/е 521,1 (МАН) х. 1.91.6 Ди-трет-бутил-(3-13-(4-йод-5-метил-1Н-піразол-1-іл)уметил|-5,7- диметилтрицикло!|3.3.1.12Лдекан-1-ілупропіл)-2-імідодикарбонат
У розчин речовини із прикладу 1.91.5 (1,92 г, 3,69 ммоль) в СНзСМ (40 мл) при 20" додавали ди-трет-бутилімінодикарбонат (0,962 г, 4,43 ммоль) і С52бОз (2,404 г, 7,38 ммоль).
Суміш перемішували протягом 16 годин при 80"С, розбавляли етилацетатом і промивали водою та сольовим розчином. Органічний шар висушували над Маг25О»:, фільтрували та концентрували. Залишок очищували за допомогою флеш-хроматографії, з елююванням петролейним етером/етилацетатом (10:1), з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (Е5І) т/е 642,3 (М.Н) 7. 1.91.7 Метил-2-(5-11-((3-(3-Ібіс(трет-бутоксикарбоніл)аміно|пропіл)-5,7- бо диметилтрицикло!|3.3.1.19-Л|декан-1-іл)метил|-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)-6-(трет-
бутоксикарбоніл)піридин-2-іл|-1,2,3,4-тетрагідроізохінолін-8-карбоксилат
Вказану в заголовку сполуку одержували із застосуванням процедури в прикладі 1.2.2 шляхом заміни речовини із прикладу 1.1.6 речовиною із прикладу 1.91.6. М5 (ЕБ5І) т/е 8822 (МАН). 1.91.8 2-І6-«трет-Бутоксикарбоніл)-5-11-((3-3-Ктрет-бутоксикарбоніл)аміно|пропіл)-5, 7- диметилтрициклоїЇ3.3.1.127|декан-1-іл)уметил|-5-метил-1Н-піразол-4-іл)піридин-2-іл|-1,2,3,4- тетрагідроізохінолін-8-карбонова кислота
Вказану в заголовку сполуку одержували із застосуванням процедури в прикладі 1.2.5 шляхом заміни речовини із прикладу 1.2.4 речовиною із прикладу 1.91.7. М5 (ЕБ5І) т/е 768,4 (МАН. 1.91.9. трет-Бутил-6-(8-(бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл)-3-(1-((3- (3-«(трет-бутоксикарбоніл)аміно)пропіл)-5, 7-диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н-піразол- 4-іл)піколінат
Вказану в заголовку сполуку одержували із застосуванням процедури в прикладі 1.2.6 шляхом заміни речовини із прикладу 1.2.5 речовиною із прикладу 1.91.8. М5 (ЕБ5І) т/е 901,1 (МАН). 1.91.10 / трет-Бутил-3-(1-((3-(З-амінопропіл)-5,7-диметиладамантан-1-іл)уметил)-5-метил-1 Н- піразол-4-іл)-6-(8-(бензо|д9|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл)піколінат
У розчин речовини із прикладу 1.91.9 (500 мг) у дихлорметані (5 мл) додавали трифтороцтову кислоту (5 мл) та перемішували реакційну суміш за кімнатної температури протягом 30 хвилин. Реакційну суміш гасили шляхом додавання насиченого водного розчину бікарбонату натрію і тричі екстрагували дихлорметаном. Об'єднані органічні речовини висушували безводним сульфатом натрію, фільтрували та концентрували за зниженого тиску.
Залишок очищували за допомогою НРІ С з оберненою фазою на системі сіїбхоп (колонка С18), з елююванням від 20 до 809о ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 трифтороцтової кислоти, з одержанням указаного в заголовку продукту. 1.91.11. 3-(1-((3-(3-Амінопропіл)-5,7-диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)- 6-(8-(бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл)піколінова кислота
У розчин речовини із прикладу 1.91.9 (350 мг) у дихлорметані (5 мл) додавали
Зо трифтороцтову кислоту (5 мл). Суміш перемішували протягом ночі. Суміш концентрували й залишок очищували за допомогою НРІ С з оберненою фазою із застосуванням системи о1іЇ5оп, з елююванням від 20 до 8095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./06. трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (500 МГц, ОМ50О-ав) 6 ррт 12,86 (5, 1Н), 68,03 (а, 1Н), 7,79 (а, 1Н), 7,62 (а, 4Н), 7,47 (а, ЗН), 7,36 (ад, 2Н), 7,27 (в, 1Н), 6,95 (а, 1),
З5 4,95 (5, 2Н), 3,77 (85, 2Н), 3,01 (І, 2Н), 2,72 (ад, 2Н), 2,09 (5, ЗН), 1,45 (І, 2Н), 1,18 - 1,05 (т, 9Н), 1,00 (а, 6Н), 0,80 (5, 6Н). М5 (ЕБІ) т/е 744,2 ( М.Н)». 1.91.12 трет-Бутил-6-(8-(бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл)-3-(1-((3- (3-(2-(4-(трет-бутилдифенілсиліл)окси)-2,2-диметилбутокси)сульфоніл)етил)аміно)пропіл)-5,7- диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)піколінат
Вказану в заголовку сполуку одержували із застосуванням процедури в прикладі 1.2.8 шляхом заміни речовини із прикладу 1.2.7 речовиною із прикладу 1.91.10. 1.91.13 6-18-(1,3-Бензотіазол-2-іл)укарбамоїл|-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл)-3-11-К(3,5- диметил-7-(3-(2-сульфоетил)аміно|пропілутрициклоїЇ3.3.1.157декан-1-іл)уметил|-5-метил-1 Н- піразол-4-іл)упіридин-2-карбонова кислота
Вказану в заголовку сполуку одержували із застосуванням процедури в прикладі 1.2.9 шляхом заміни речовини із прикладу 1.2.8 речовиною із прикладу 1.91.12. "Н ЯМР (501 МГц,
ОМ50-дв) б 12,85 (5, 1Н), 8,02 (аа, 1Н), 7,77 (а, 1Н), 7,60 (а, 1), 7,54 - 7,39 (т, ЗН), 7,38 - 7,31 (т, 2Н), 7,26 (5, 1Н), 6,94 (й, 1Н), 4,94 (5, 2Н), 3,87 (І, 2Н), 3,15 (р, 2Н), 3,00 (ї, 2Н), 2,86 (ад, 2Н), 2,16 (ї, 2Н), 2,08 (5, ЗН), 1,47 (19, 2Н), 1,08 (а, 9Н), 0,99 (й, 7Н), 0,79 (в, 7Н). М5 (ЕІ) т/е 852,2 (МАН).
Приклад 2. Синтез ілюстративних синтонів
У даному прикладі передбачені способи синтезу ілюстративних синтонів, придатних для одержання АОС. 2.1 Синтез ІМ-І6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-І -валіл-М-14-(ЦТ2-(13-((4-76-(8- (1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-іл)у-5-метил- 1Н-піразол-1-ілуметил|-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.15ЛЯдец-1-илІкси)етил|-(2- сульфоетил)карбамоїл)іокси)метил|феніл)-М»-карбамоїл-і! -орнітинаміду (синтону С2)
Охолоджували речовину із прикладу 1.2.9 (100 мг) і 4-((5)-2-((5)-2-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро- бо 1Н-пірол-1-ілугексанамідо)-3-метилбутанамідо)-5-уреїдопентанамідо)бензил-(4-
нітрофеніл)карбонат (придбаний у Зупспет, 114 мг) в М.М-диметилформаміді (7 мл) на бані з водою та льодом і додавали М,М-дізопропілетиламін (0,15 мл). Суміш перемішували при 0"С протягом 30 хвилин і потім за кімнатної температури протягом ночі. Реакційну суміш очищували за допомогою НРІ С з оберненою фазою із застосуванням системи сбіЇбхоп, з елююванням від 20 до 6095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./06. трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-сйвє) б ррт 12,85 (в, 1Н), 9,99 (5, 1Н), 8,04 (І, 2Н), 7,75-7,82 (т, 2Н), 7,40-7,63 (т, 6Н), 7,32-7,39 (т, 2Н), 7,24-7,29 (т, ЗН), 6,99 (5, 2Н), 6,95 (9, 1Н), 6,01 (5, 1Н), 4,83-5,08 (т, 4Н), 4,29-4,48 (т, 1Н), 4,19 (1, 1Н), 3,84-3,94 (т, 2Н), 3,80 (й, 2Н), 3,14-3,29 (т, 2Н), 2,87-3,06 (т, 4Н), 2,57-2,69 (т, 2Н), 2,03-2,24 (т, 5Н), 1,89-2,02 (т, 1Н), 1,53-1,78 (т, 2Н), 1,26-1,53 (т, 8Н), 0,89-1,27 (т, 12Н), 0,75-0,88 (т, 12Н). М5 (ЕБІ) т/е 1452,2 (МАН): 2.2 Синтез М-І6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-І -валіл-М-14-(ЦТ2-(13-((4-76-(8- (1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-іл)-5-метил- 1Н-піразол-1-іл)метил|-5,7-диметилтрицикло|3.3.1.127|дец-1-иліокси)етил|-(3- сульфопропіл)карбамоїліокси)метилі|феніл)-М»-карбамоїл-І! -орнітинаміду (синтону ОН)
Вказану в заголовку сполуку одержували, як описано в прикладі 2.1, шляхом заміни речовини із прикладу 1.2.9 речовиною із прикладу 1.6.2. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид- дв) б ррт 12,83 (5, 1Н), 9,98 (5, 1Н), 8,04 (ї, 2Н), 7,75-7,81 (т, 2Н), 7,54-7,64 (т, ЗН), 7,40-7,54 (т,
ЗН), 7,32-7,39 (т, 2Н), 7,24-7,31 (т, ЗН), 6,93-7,01 (т, ЗН), 4,86-5,03 (т, 4Н), 4,32-4,А48 (т, 2Н), 20. 4,13-4,26 (т, 2Н), 3,31-3,45 (т, 4Н), 3,24 (а, 4Н), 2,88-3,07 (т, 4Н), 2,30-2,39 (т, 2Н), 2,04-2,24 (т, 5Н), 1,86-2,03 (т, 1Н), 0,89-1,82 (т, 27Н), 0,74-0,88 (т, 13Н). М5 (ЕБІ) т/е 14663 (М--Н)У». 2.3 Даний абзац був навмисне залишений незаповненим. 2.4 Синтез ІМ-І6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-І -валіл-М-(4-(1(2-(2-(13-(4-16-
ІВ-(1,93-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-іл)-5- 25 метил-1Н-піразол-1-іл)уметил/|-5,7-диметилтрициклоїЇ3.3.1.15Лдец-1-иліокси)етокси|етил)-(2- сульфоетил)карбамоїл|окси)метил)феніл/|-М»-карбамоїл-І -орнітинаміду (синтону ЕР)
Вказану в заголовку сполуку одержували, як описано в прикладі 2.1, шляхом заміни речовини із прикладу 1.2.9 речовиною із прикладу 1.11.4. "Н ЯМР (500 МгГу, диметилсульфоксид-авє) б ррт 12,85 (5, 1Н), 10,00 (в, 1Н), 8,01-8,10 (т, 2Н), 7,79 (аа, 2Н), 7,55-
Зо 7,65 (т, ЗН), 7,41-7,53 (т, ЗН), 7,32-7,38 (т, 2Н), 7,25-7,30 (т, ЗН), 6,97-7,02 (т, 2Н), 6,96 (а, 1Н), 6,03 (5, 1Н), 4,90-5,03 (т, 4Н), 4,31-4,46 (т, 1Н), 4,20 (5, 1Н), 3,88 (І, 2Н), 3,82 (5, 2Н), 2,97- 3,06 (т, 2Н), 2,88-2,98 (т, 1Н), 2,58-2,68 (т, 2Н), 2,05-2,22 (т, 5Н), 1,92-2,02 (т, 1Н), 0,89-1,75 (т, 2З3Н), 0,77-0,87 (т, 12Н). М5 (ЕБІ) т/е 14963 (М.Н). 2.5 Синтез метил-6-(4-(3-Т2-(13-(4-16-І(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-
З5 дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-2-карбоксипіридин-З3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)метилі/д-5,7- диметилтрицикло!Ї3.3.1.127|дец-1-ил)окси)етилі|-((4-((М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1- іл)угексаноїл|)-І -валіл-М»-карбамоїл-І -орнітиліаміно)бензил|окси)карбоніл)аміно)пропіл)-1 Н-1,2,3- триазол-1-іл|-6б-дезокси-бета-| -глюкопіранозиду (синтону ЕЕ) 2.5.1 Пент-4-иналь 40 У розчин оксалілхлориду (9,12 мл), розчиненого у дихлорметані (200 мл), при -7870 додавали диметилсульфоксид (14,8 мл), розчинений у дихлорметані (40 мл), протягом хвилин. Після перемішування розчину протягом додатково 30 хвилин додавали 4-пентинол (8,0 г), розчинений у дихлорметані (80 мл), протягом 10 хвилин. Реакційну суміш перемішували при -787"С протягом додаткових 60 хвилин. Додавали триєтиламін (66,2 мл) при -787С та перемішували реакційну суміш протягом 60 хвилин і потім забезпечували її нагрівання до 107 протягом додатково години. Додавали воду (200 мл) й два шари розділяли. Водний шар підкислювали 195 водним розчином НІ і потім знову екстрагували дихлорметаном (З х 100 мл).
Об'єднані органічні шари промивали 195 водним розчином НСІ і водним розчином Мансоз.
Водні екстракти знову екстрагували дихлорметаном (2 х 100 мл) і об'єднані органічні екстракти промивали сольовим розчином і висушували над сульфатом натрію. Після фільтрування розчинник видаляли шляхом ротаційного випарювання (водяна баня 30"С) з одержанням указаної в заголовку сполуки. 2.5.2. 6-(8-(Бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл)-3-(1-(3,5-диметил-7- (2-(пент-4-ин-1-іламіно)етокси)адамантан-1-іл)уметил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)піколінова кислота
У розчин речовини із прикладу 1.2.7 (85 мг) в тетрагідрофурані (2 мл) додавали пент-4-аніл (8,7 мг), оцтову кислоту (20 мг) й натрію сульфат (300 мг). Суміш перемішували протягом ігодини та у реакційну суміш додавали триацетоксиборогідрид натрію (45 мг). Суміш перемішували протягом ночі, потім розбавляли етилацетатом (200 мл), промивали водою й бо сольовим розчином та висушували над сульфатом натрію. Після фільтрування й випарювання розчинника одержували залишок, який розчиняли в диметилсульфоксиді/метанолі (1:1, З мл).
Суміш очищували за допомогою НРІ С з оберненою фазою на системі сіїбзоп, з елююванням від 10 до 8595 ацетонітрилу в 0,195 розчині трифтороцтової кислоти у воді, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕІ) т/е 8121 (МАН). 2.5.3 6-(8-(Бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл)-3-(1-(3,5-диметил-7- (2-(3-(1-((25,38,48,55,65)-3,4,5-тригідрокси-6-метокситетрагідро-2Н-піран-2-іл)метил)-1 Н-1,2,3- триазол-4-іл)пропіл)аміно)етокси)адамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)піколінова кислота
У розчин (25,35,4К,55,65)-2-(азидометил)-б-метокситетрагідро-2Н-піран-3,4,5- триїлтриацетату (8,63 мг) в трет-бутанолі (2 мл) й воді (1 мл) додавали речовину із прикладу 2.5.2 (20 мг), пентагідрат сульфату міді(І!) (2,0 мг) і аскорбат натрію (5 мг). Суміш перемішували 20 хвилин при 100"С за умов мікрохвильового випромінювання (Віоїаде Іпйайг). У суміш додавали моногідрат гідроксиду літію (50 мг) та перемішували її протягом ночі. Суміш нейтралізували трифтороцтовою кислотою та очищували за допомогою НРІС з оберненою фазою (система (іїзоп), з елююванням від 10 до 8595 ацетонітрилу в 0,195 розчині трифтороцтової кислоти у воді, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕІ) т/е 10322 (МАН). 2.5.4 Метил-6-(4-(3-Ц2-(13-(4-16-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін- 2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1-ілуметилі/д-5, 7- диметилтрициклоїЇ3.3.1.157)дец-1-ил)окси)етилі-((4-(1М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1- іл)угексаноїл|-І -валіл-М»-карбамоїл-І -орнітиліаміно)бензил|окси)карбоніл)аміно)пропіл)-1 Н-1 2,3- триазол-1-іл|-6-дезокси-бета-і| -глюкопіранозид
У розчин 4-((5)-2-((5)-2-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)угексанамідо)-3- метилбутанамідо)-5-уреїдопентанамідо)бензил-4-нітрофенілкарбонату (7,16 мг) й речовини із прикладу 2.5.3 (10 мг) в М,М-диметилформаміді (2 мл) додавали М,М-дізопропілетиламін (0,1 мл). Суміш перемішували протягом ночі, потім підкислювали трифтороцтовою кислотою та очищували за допомогою НРІ С з оберненою фазою (система сбіїЇбхоп), з елююванням від 10 до 8595 ацетонітрилу в 0,195 розчині трифтороцтової кислоти у воді, з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-ав) б ррт 9,65 (5, 1Н), 7,97 (й, 1Н),
Коо) 7,76 (а, 1), 7,64-7,72 (т, 2Н), 7,53-7,63 (т, ЗН), 7,38-7,51 (т, 4Н), 7,30-7,37 (т, 2Н), 7,22-7,27 (т, ЗН), 6,84-6,98 (т, ЗН), 4,97 (а, 4Н), 4,65 (да, 1Н), 4,50 (ад, 1Н), 4,36-4,46 (т, 1Н), 4,25-4,32 (т, 1Н), 4,10-4,20 (т, 1Н), 3,85-3,95 (т, 2Н), 3,79 (5, 2Н),, 3,66-3,73 (т, 2Н), 2,99-3,03 (т, 7Н), 2,57 (Ї,
ЗН), 2,12-2,22 (т, ЗН), 2,08 (5, ЗН), 1,99-2,05 (т, 2Н), 1,70-1,88 (т, 4Н), 1,39-1,67 (т, 8Н), 1,35 (5,
ЗН), 0,92-1,28 (т, 14Н), 0,80-0,88 (т, 16Н). М5 (Е5БІ) т/е 1629,5 (М.-Н)». 2.6 Синтез М-І6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-І -валіл-М-(4-717(Т2-(13-((4-76-(8- (1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-іл)-5-метил- 1Н-піразол-1-іл)метил|-5,7-диметилтрицикло|3.3.1.127|дец-1-иліокси)етилі-(3-11-(бета-О- глюкопірануронозил)-1 Н-1,2,3-триазол-4-іл|Іпропілікарбамоїл)окси|метил)феніл)-М-карбамоїл-ї - орнітинаміду (синтону ЕС) 2.8.1 6-(8-(Бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1Н)-іл)-3-(1-((3-(2-((3-(1- (28,38,45,55,65)-6-карбокси-3,4,5-тригідрокситетрагідро-2Н-піран-2-іл)-1Н-1,2,3-триазол-4- іл)пропіл)аміно)етокси)-5,7-диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)піколінова кислота
У розчин (2Е,3К,45,55,65)-2-азидо-6-(метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5- триїлтриацетату (8,63 мг) в трет-бутанолі (2 мл) й воді (1 мл) додавали речовину із прикладу 2.5.2 (20 мг), пентагідрат сульфату мідікІ!) (2,0 мг) й аскорбат натрію (5 мг). Суміш перемішували 20 хвилин при 100"С за умов мікрохвильового випромінювання (Віоїаде Іпйайог). У суміш додавали моногідрат гідроксиду літію (50 мг) та перемішували її протягом ночі. Суміш нейтралізували трифтороцтовою кислотою та очищували за допомогою НРІ С з оберненою фазою (система (іїзоп), з елююванням від 10 до 8595 ацетонітрилу в 0,195 розчині трифтороцтової кислоти у воді, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕІ) т/е 10321 (МАН). 2.6.2. М-І6-(2,5-Діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-І -валіл-М-(4-Ц1((2-(13-((4-16-І8-(1,3- бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н- піразол-1-ілуметил|-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.137|)дец-1-иліокси)етил|-(3-П1-(бета-О- глюкопірануронозил)-1 Н-1,2,3-триазол-4-іл|Іпропілікарбамоїл)окси|метилуфеніл)-М»-карбамоїл-ї - орнітинамід
Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 2.6.1 речовиною із прикладу 2.5.3 в прикладі 2.5.4. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-йв) б ррт (510) 9,64 (5, 1Н), 7,98 (а, 1Н), 7,90 (5, 1Н), 7,76 (а, 1), 7,68 (5, 1Н), 7,52-7,62 (т, ЗН), 7,20-7,50 (т,
9Н), 6,84-6,98 (т, ЗН), 5,56 (й, 1Н), 4,98 (а, 4Н), 4,36-4,49 (т, 2Н), 4,11-4,23 (т, 2Н), 3,96 (9, 2Н), 3,74А-3,91 (т, 7Н), 3,51-3,58 (т, 5Н), 3,35-3,49 (т, ТОН), 2,97-3,02 (т, 6Н), 2,57-2,66 (т, ЗН), 2,12- 2,24 (т, 2Н),, 2,08 (5, ЗН), 1,69-2,01 (т, ЗН), 1,35-1,65 (т, 9Н), 0,93-1,28 (т, ТОН), 0,81-0,89 (т,
ТОН). М5 (ЕБІ) т/е 1629,4 (МАН. 2.7 Синтез М-І(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-І -валіл-М-14-К(28)-1-Т2-(13-
І(4-16-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроїзохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-З-іл)-
Б-метил-1Н-піразол-1-іл)метил/|-5,7-диметилтрицикло|3.3.1.137Л)дец-1- ил)окси)етилі|(метил)аміно)-1-оксо-3-сульфопропан-2-ілІкарбамоїліокси)метилі|феніл)-І - аланінаміду (синтону ЕН)
У розчин речовини із прикладу 1.13.8 (0,018 г) й 4-((5)-2-((5)-2-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н- пірол-1-ілугексанамідо)-3-метилбутанамідо)пропанамідо)бензил-(4-нітрофеніл)укарбонатау (0,015 г, 0,023 ммоль) в М,М-диметилформаміді (0,75 мл) додавали М,М-дізопропілетиламін (0,015 мл). Після перемішування протягом ночі реакційну суміш розбавляли /-М,М- диметилформамідом (0,75 мл) і водою (0,5 мл). Суміш очищували за допомогою НРІС з оберненою фазою із застосуванням системи біїЇзоп, з елююванням від 10 до 7095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./0б. трифтороцтової кислоти. Необхідні фракції об'єднували й висушували сублімацією з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (500 МГц, диметилсульфоксид-авє) б ррт 12,86 (5, 1Н), 9,93 (5, 1Н), 8,14 (а, 1Н), 8,04 (а, 1Н), 7,84-7,76 (т, 2Н), 7,61 (а, тн), 7,57 (а, 2Н), 7,53 (ад, 1Н), 7,47 (1, 1Н), 7,43 (а, 1Н), 7,39-7,30 (т, 4Н), 7,26 (а, 2Н), 6,99 (5, 2Н), 6,97 (ай, 1Н), 4,96 (5, 2Н), 4,90 (І, 2Н), 4,75-4,65 (т, 1Н), 4,46-4,33 (т, 2Н), 4,17 (аа, 2Н), 3,66-3,47 (т, АН), 3,36 (І, 4Н), 3,12 (5, 2Н), 3,01 (ї, 2Н), 2,85-2,60 (т, 4Н), 2,25-2,05 (т,
БН), 2,05-1,90 (т, 1Н), 1,58-0,76 (т, З2Н). М5 (ЕБІ) т/е 1423,2 (М.Н) ». 2.8 Синтез ІМ-І6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-І -валіл-М-14-(ЦТ2-(13-((4-76-(8- (1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-іл)-5-метил- 1Н-піразол-1-іл)метил|-5,7-диметилтрицикло|3.3.1.127|дец-1-иліокси)етилі-(4-(бета-О- глюкопіранозилокси)бензилікарбамоїліокси)метиліІфеніл)-М»-карбамоїл-І -орнітинаміду (синтону
ЕВ) 2.8.1. 6-(8-(Бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл)-3-(1-((3,5-диметил-7- (2-(4-(25,38,45,55,68)-3,4,5-тригідрокси-6-(гідроксиметил)тетрагідро-2Н-піран-2-
Зо іл)уокси)бензил)аміно)етокси)адамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)піколінова кислота
У розчин речовини із прикладу 1.2.7 (44,5 мг) в тетрагідрофурані (2 мл) й оцтовій кислоті (0,2 мл) додавали 4-((25,38,45,55,6Н8)-3,4,5-тригідрокси-6-(гідроксиметил)тетрагідро-2Н-піран- 2-іл)уокси)бензальдегід (17 мг) і Ма5О»Х (300 мг). Суміш перемішували протягом 1 години перед додаванням ціаноборогідриду натрію на смолі (300 мг). Суміш перемішували протягом ночі.
Суміш фільтрували Й випарювали розчинник. Залишок розчиняли в диметилсульфоксиді/метанолі (1:11, 4 мл) та очищували за допомогою НРІС з оберненою фазою (система іїзоп), з елююванням від 10 до 8595 ацетонітрилу в 0,195 розчині трифтороцтової кислоти у воді, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕІ) т/е 10152 (МАН). 2.8.2... ч-І6-(2,5-Діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-І -валіл-М-(4-(ЦТ2-((3-((4-16-І8-(1,3- бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н- піразол-1-іл)уметил|-5,7-диметилтрициклоїЇ3.3.1.127|дец-1-ил)окси)етилі-(4-(бета-О- глюкопіранозилокси)бензилікарбамоїлюкси)метил|феніл)-М»-карбамоїл-і -орнітинамід
Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 2.8.1 речовиною із прикладу 2.5.3 в прикладі 2.5.4. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-йв) б ррт 12,87 (5, 1Н), 10,00 (5, 1Н), 7,96-8,14 (т, 2Н), 7,79 (9, 2Н), 7,55-7,68 (т, ЗН), 7,09-7,52 (т, 11Н), 6,91-7,01 (т, 5Н), 5,09 (а, 1Н), 4,95 (ад, 4Н) , 4,35-4,47 (т, АН), 4,14-4,23 (т, ЗН), 3,86-3,94 (т, бН), 3,31-3,46 (т, 8Н), 3,16-3,25 (т, ЗН), 2,90-3,04 (т, 4Н), 2,59 (5, 1Н), 1,88-2,24 (т, 6Н), 0,88- 1,75 (т, 24Н), 0,76-0,90 (т, 12Н). М5 (ЕБІ) т/е 1613,7 (М.Н). 2.9 Синтез /М-І6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-І -валіл-М-(4-(((Ц4-(бета-О- алопіранозилокси)бензилі-(2-(13-(К4-(6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін- 2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-іл)-5-метил-1Н-піразол-1-іл)метилі|-5,7- диметилтрицикло!Ї|3.3.1.127)дец-1-иліокси)етилІкарбамоїліокси)метилі|феніл)-Ме-карбамоїл-ї - орнітинаміду (синтону ЕБ) 2.9.1. 6-(8-(Бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл)-3-(1-((3,5-диметил-7- (2-(4-((25,38,48,55,6Н8)-3,4,5-тригідрокси-6-(гідроксиметил)тетрагідро-2Н-піран-2- іл)уокси)бензил)аміно)етокси)адамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)піколінова кислота
У розчин речовини із прикладу 1.2.7 (44,5 мг) в тетрагідрофурані (2 мл) й оцтовій кислоті (0,2 мл) додавали 4-((25,38,48,55,6Н8)-3,4,5-тригідрокси-6-(гідроксиметил)тетрагідро-2Н-піран- 60 2-іл)уокси)бензальдегід (17 мг) і Ма5О»Х (300 мг). Суміш перемішували протягом 1 години перед додаванням ціаноборогідриду натрію на смолі (300 мг). Суміш перемішували протягом ночі.
Суміш фільтрували Й випарювали розчинник. Залишок розчиняли в диметилсульфоксиді/метанолі (1:11, 4 мл) та очищували за допомогою НРІС з оберненою фазою (система іїзоп), з елююванням від 10 до 8595 ацетонітрилу в 0,195 розчині трифтороцтової кислоти у воді, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (Е5І) т/е 1015,2 (МАН). 2.9.2 М-(6-(2,5-Діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-І -валіл-М-(4-((Ц4-(бета-О- алопіранозилокси)бензилі-(2-(13-(4-(6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін- 2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1-ілуметилі/д-5, 7- диметилтрициклоїЇ3.3.1.157)дец-1-илюкси)етилікарбамоїл)окси)метилі|феніл)-М»-карбамоїл-ї - орнітинамід
Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 2.9.1 речовиною із прикладу 2.5.3 в прикладі 2.5.4. "Н ЯМР (500 МГц, диметилсульфоксид-йв) б ррт 12,86 (5, 1Н), 10,00 (5, 1Н), 7,96-8,11 (т, 2Н), 7,79 (а, 2Н), 7,53-7,65 (т, ЗН), 7,08-7,52 (т, 10ОН), 15. 6,91-7,00 (т, 5Н), 5,09 (а, 1Н), 4,99 (9, 4Н), 4,35-4,48 (т, ЗН), 4,13-4,23 (т, 2Н), 3,82-3,96 (т, 8Н), 3,32-3,50 (т, ТОН), 3,12-3,25 (т, ЗН), 2,90-3,06 (т, 5Н), 1,89-2,19 (т, 6Н), 0,88-1,75 (т, 22Н), 0,76-0,88 (т, 11Н). М5 (ЕБІ) т/е 1612,5 (М.Н). 2.10 Синтез М-І6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-І -валіл-М-14-(ЦТ2-(13-((4-16-
ІВ-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-З-іл)-5- метил-1Н-піразол-1-іл)метил)|-5,7-диметилтрицикло!/3.3.1.127|)дец-1-иліокси)етиліц-(2- фосфоноетил)карбамоїліокси)метилі|фенілІ-М»-карбамоїл-І -орнітинаміду (синтону ЕО)
Вказану в заголовку сполуку одержували, як описано в прикладі 2.1, шляхом заміни речовини із прикладу 1.2.9 речовиною із прикладу 1.12.2. "НН ЯМР (500 МгГу, диметилсульфоксид-ав) б ррт 9,99 (5, 1Н), 8,01-8,09 (т, 2Н), 7,76-7,81 (т, 2Н), 7,56-7,64 (т, ЗН), 7,А1-7,53 (т, ЗН), 7,36 (д, 2Н), 7,25-7,30 (т, ЗН), 6,99 (в, 2Н), 6,94 (й, 1Н), 5,98 (5, 1Н), 4,89-5,07 (т, 4Н), 4,38 (5, 1Н), 4,19 (1, 1Н), 3,88 (І, 2Н), 3,80 (а, 2Н), 2,89-3,08 (т, 5Н), 2,04-2,24 (т, 5Н), 1,89-2,02 (т, 1Н), 1,76-1,87 (т, 2Н), 0,89-1,72 (т, 2ЗН), 0,78-0,88 (т, 12Н). М5 (ЕБ5І) т/е 14522 (МАН). 2.11 Синтез М-І6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-І -валіл-М-14-(ЦТ2-(13-((4-16-
Коо) ІВ-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-З-іл)-5- метил-1Н-піразол-1-іл)метил)|-5,7-диметилтрицикло!/3.3.1.127|)дец-1-иліокси)етиліц-(2- фосфоноетил)карбамоїл)окси)метилі|феніл)-І -аланінаміду (синтону Е))
Вказану в заголовку сполуку одержували, як описано в прикладі 2.1, шляхом заміни речовини із прикладу 1.2.9 й 4-((5)-2-((5)-2-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)гексанамідо)-
З-метилбутанамідо)-5-уреїдопентанамідо)бензил-(4-нітрофеніл)укарбонату речовиною із прикладу 112.2 й 4-((5)-2-((5)-2-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)угексанамідо)-3- метилбутанамідо)пропанамідо)бензил-(4-нітрофеніл)укарбонатом відповідно. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-авє) б ррт 9,93 (5, 1Н), 8,12 (9, 1Н), 8,03 (9, 1Н), 7,72-7,83 (т, 2Н), 7,54-7,65 (т, ЗН), 7,41-7,54 (т, ЗН), 7,31-7,40 (т, 2Н), 7,24-7,30 (т, ЗН), 6,99 (в, 2Н), 6,94 (9, 1Н), 4,87-5,11 (т, ЗН), 4,11-4,45 (т, 1Н), 3,88 (І, 2Н), 3,79 (а, 2Н), 2,97-3,05 (т, 2Н), 2,63-2,70 (т, 1Н), 2,29-2,37 (т, 1Н), 2,03-2,20 (т, 5Н), 1,73-2,00 (т, 5Н), 1,39-1,55 (т, 4Н), 0,88-1,38 (т, 19Н), 0,72-0,89 (т, 12Н). М5 (ЕБІ) т/е 13645 (М-Н). 2.12 Синтез М-І6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-І -валіл-М-14-(ЦТ2-(13-((4-16-
ІВ-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-З-іл)-5- метил-1Н-піразол-1-іл)уметил|-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.12Л)дец-1-иліокси)етил|-(3- фосфонопропіл)карбамоїл)окси)метилі|феніл)-М»-карбамоїл-Ї! -орнітинаміду (синтону ЕМ)
Вказану в заголовку сполуку одержували, як описано в прикладі 2.1, шляхом заміни речовини із прикладу 1.2.9 речовиною із прикладу 1.14.4. "Н ЯМР (400 МГуц, диметилсульфоксид-ав) б ррт 9,98 (5, 1Н), 8,04 (1, 2Н), 7,78 (1, 2Н), 7,61 (І, ЗН), 7,39-7,54 (т, ЗН), 007,32-7,39 (т, 2Н), 7,25-7,30 (т, ЗН), 6,99 (в, 2Н), 6,95 (9, 1Н), 6,01 (5, 1Н), 4,97 (а, 4Н), 4,29-4,47 (т, 2Н), 4,14-4,23 (т, 2Н), 3,85-3,93 (т, 2Н), 3,32-3,42 (т, 2Н), 9,24 (5, 2Н), 2,88-3,09 (т, ЗН), 1,87-2,23 (т, 6Н), 0,91-1,74 (т, 27Н), 0,72-0,89 (т, 12Н). М5 (ЕБІ) т/е 1466,3 (М.Н). 2.13 Синтез М-І6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-І -валіл-М-14-(((28)-1-Щ2- ((3-К4-(6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3- іл)у-5-метил-1Н-піразол-1-іл)метил/|-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.157)дец-1-иліокси)етил|аміно)- 1- оксо-3-сульфопропан-2-іл|карбамоїл)окси)метиліфеніл)-І -аланінаміду (синтону ЕМУ)
У розчин речовини із прикладу 1.15 (0,020 г) й 4-((5)-2-((5)-2-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н- пірол-1-ілугексанамідо)-3-метилбутанамідо)пропанамідо)бензил-(4-нітрофеніл)укарбонату (0,017 г) в М,М-диметилформаміді (0,5 мл) додавали М,М-діїзопропілетиламін (0,017 мл). бо Реакційну суміш перемішували протягом ночі й розбавляли М,М-диметилформамідом (1 мл),
водою (0,5 мл). Суміш очищували за допомогою НРІ С з оберненою фазою із застосуванням системи біїбоп, з елююванням від 10 до 7095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./о0б. трифтороцтової кислоти. Необхідні фракції об'єднували й висушували сублімацією з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-сйв) б ррт 12,85 (5, 1Н), 9,93 (5, 1Н), 8,12 (а, 1Н), 8,04 (а, 1Н), 7,86-7,76 (т, ЗН), 7,63-7,41 (т, 7Н), 7,39-7,32 (т, 2Н), 7,30 (5, 1Н), 7,30-7,21 (т, 2Н), 6,99 (5, 2Н), 6,97 (а, 1Н), 4,96 (5, 2Н), 4,93 (5, 2Н), 4,49- 4,33 (т, 2Н), 4,18 (ад, 2Н), 4,15-4,08 (т, 2Н), 3,90-3,86 (т, 2Н), 3,96 (І, 2Н), 3,34-3,27 (т, 1Н), 3,18-3,04 (т, 2Н), 3,04-2,96 (т, 2Н), 2,89-2,61 (т, 2Н), 2,27-2,05 (т, 5Н), 2,03-1,87 (т, 1Н), 1,59- 1,42 (т, 4Н), 1,42-0,91 (т, 18Н), 0,91-0,76 (т, 11Н). М5 (-ЕБІ) т/е 1407,5 (М-Н). 2.14 Синтез М-І6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-Ї -валіл-М-(А4-(((2-(2-(13-(4- 16-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-іл)-5- метил-1Н-піразол-1-іл)метил|-5,7-диметилтрицикло|3.3.1.157)дец-1-ил)окси)етокси|етил)-(3- фосфонопропіл)карбамоїл|оксиїметил)феніл|-М»-карбамоїл-І -орнітинаміду (синтону ЕХ)
Суміш речовини із прикладу 1.16.2 (59 мг), 4-((5)-2-((5)-2-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол- 1-ілугексанамідо)-3-метилбутанамідо)-5-уреїдопентанамідо)бензил-(4-нітрофеніл)укарбонату (48 мг) й М,М-діззопропілетиламіну (0,056 мл) в 2 мл М,М-диметилформаміду перемішували протягом 24 годин. Суміш очищували за допомогою хроматографії з оберненою фазою на системі ІзоЇега Опе від Віоїаде із застосуванням колонки С18 на 40 г, з елююванням від 10 до 9095 ацетонітрилу в 0,195 трифтороцтовій кислоті/воді. Необхідні фракції концентрували й продукт ліофілізували із води та 1,4-діоксану з одержанням указаної в заголовку сполуки у вигляді солі трифтороцтової кислоти. "Н ЯМР (400МГц, диметилсульфоксид-дв) б ррт 9,97 (рв, 1Н), 8,04 (т, 2Н), 7,79 (а, 2Н), 7,59 (т, ЗН), 7,46 (т, ЗН), 7,36 (т, 2Н), 7,27 (т, 2Н), 6,99 (5, 2Н), 6,94 (9, 1Н), 4,97 (т, АН), 4,40 (т, 2Н), 4,17 (ад, 2Н), 3,50-4,10 (т, 6Н), 3,45 (т, 2Н), 3,40 (т, 2Н), 3,26 (т, 2Н), 3,01 (т, 2Н), 2,95 (5, 2Н), 2,79 (5, 2Н), 2,15 (т, 2Н), 2,09 (5, 2Н), 1,68 (т, 2Н), 1,60 (т, 1-2Н), 1,35-1,50 (т, 6Н), 1,25 (т, 4Н), 1,17 (т, 2Н), 1,10 (т, 2Н), 0,97 (т, 1-2Н), 0,84 (т, 12Н).
М5 (ЕБІ) т/е 1510,4 (М.Н). 2.15 Синтез М-І6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-Ї -валіл-М-(А4-(((2-(2-(13-(4- 16-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-іл)-5- метил-1Н-піразол-1-іл)метил/|-5,7-диметилтрициклої|3.3.1.127)дец-1-иліокси)етокси|етил)-(3-
Зо фосфонопропіл)карбамоїл|окси)метил) феніл/)-І -аланінаміду (синтону ЕХ)
Суміш речовини із прикладу 1.16.2 (59 мг), 4-((5)-2-((5)-2-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол- 1-ілугексанамідо)-3-метилбутанамідо)пропанамідо)бензил-(4-нітрофеніл)карбонату (42 мг) і М,М- діізопропілетиламіну (0,042 мг) в 2 мл М,М-диметилформаміду перемішували протягом 24 годин.
Суміш очищували за допомогою хроматографії з оберненою фазою на системі ІзоЇега Опе від
Віоїаде із застосуванням колонки С18 на 40 г, з елююванням від 10 до 9095 ацетонітрилу в 0,190 трифтороцтовій кислоті/воді. Фракції концентрували й продукт ліофілізували із води та 1,4- діоксану з одержанням указаної в заголовку сполуки у вигляді солі трифтороцтової кислоти. М5 (ЕБІ) т/е 1422,6 (М-Н).. 2.16 Синтез М-І6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-ілугексаноїл|-І -валіл-М-14-(ЦТ2-(13-((4-16-
ІВ-(1,93-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-іл)-5- метил-1Н-піразол-1-іл)уметил/І-5,7-диметилтрициклоїЇ3.3.1.12Л)дец-1-ил)іокси)етилі|-(3- фосфонопропіл)карбамоїл)іокси)метиліфеніл)-І -аланінаміду (синтону Е7)
Суміш речовини із прикладу 1.14.4 (50 мг), 4-((5)-2-((5)-2-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол- 1-ілугексанамідо)-3-метилбутанамідо)пропанамідо)бензил-(4-нітрофенілукарбонату (38 мг). й
М,М-діїзопропілетиламіну (0,050 мл) в 2 мл М,М-диметилформаміду перемішували протягом 24 годин. Суміш очищували за допомогою хроматографії з оберненою фазою на системі ІзоїЇега
Опе від Віоїаде із застосуванням колонки С18 на 40г, з елююванням від 10 до 9095 ацетонітрилу в 0,195 трифтороцтовій кислоті/воді. Необхідні фракції концентрували й продукт ліофілізували із води та 1,4-діоксану з одержанням указаної в заголовку сполуки у вигляді солі
БО трифтороцтової кислоти. "Н ЯМР (400МГЦц, диметилсульфоксид-ав) б ррт 9,94 (ре, 1Н), 8,12 (й, 1Н), 8,04 (9, 1Н), 7,80 (9, 2Н), 7,61 (т, ЗН), 7,47 (т, ЗН), 7,36 (т, 2Н), 7,29 (т, 2Н), 6,99 (5, 2Н), 6,95 (9, 1Н), 4,97 (т, АН), 4,40 (т, 2Н), 4,16 (ад, 2Н), 3,50-4,10 (т, 6Н), 3,68 (т, 2Н), 3,55 (т, 2Н), 3,25 (т, АН), 3,02 (т, 2Н), 2,94 (5, 2Н), 2,79 (5, 2Н), 2,15 (т, 1Н), 2,08 (5, 2Н), 1,65 (т, 2Н), 1,40- 1,50 (т, 6Н), 1,20-1,30 (т, 6Н), 1,08-1,19 (т, 4Н), 0,97 (т, 1-2Н), 0,76-0,89 (т, 12Н). М5 (ЕІ) т/е 1380,3 (М-ААН)». 2.17 Синтез 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-(1-((3-(2- ((25)-3-карбокси-2-(((4-(25)-2-(25)-2-116-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол- 1- іл)угексаноїл|аміно)-3- метилбутаноїл|аміно)пропаноїліаміно)бензил)окси|карбоніліаміно)пропаноїлі|(метил)аміно)етокс (510) и)-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.157)дец-1-ил|метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)піридин-2-карбонової кислоти (синтону ЕЮ)
У розчин речовини із прикладу 1.17 (0,040 г) й 4-((5)-2-((5)-2-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н- пірол-1-ілугексанамідо)-3-метилбутанамідо)пропанамідо)бензил-(4-нітрофеніл)укарбонату (0,034 г) в М,М-диметилформаміді (1 мл) додавали М,М-діїззопропілетиламін (0,035 мл).
Реакційну суміш перемішували протягом ночі й розбавляли М,М-диметилформамідом (1 мл) і водою (0,5 мл). Суміш очищували за допомогою НРІ С з оберненою фазою із застосуванням системи біїбоп, з елююванням від 10 до 7095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./о0б. трифтороцтової кислоти. Необхідні фракції об'єднували й висушували сублімацією з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-дв) б ррт 12,84 (5, 1Н), 9,92 (5, 1Н), 8,13 (9, 1Н), 8,03 (9, 1Н), 7,79 (а, 2Н), 7,62 (а, 1Н), 7,57 (а, 2Н), 7,54- 7,А1 (т, ЗН), 7,40-7,32 (т, 2Н), 7,31-7,23 (т, АН), 6,99 (5, 2Н), 6,95 (ай, 1Н), 5,01-4,89 (т, 4Н), 4,78 (д49, 1Н), 4,45-4,30 (т, 1Н), 4,23-4,11 (т, 1Н), 3,88 (1, 2Н), 3,80 (5, 2Н), 3,42-3,26 (т, 6Н), 3,06 (5, 1Н), 3,01 (ї, 2Н), 2,80 (5, 2Н), 2,76-2,62 (т, 1Н), 2,46-2,36 (т, 1Н), 2,25-2,05 (т, 5Н), 2,05-1,92 (т, 1Н), 1,58-1,42 (т, АН), 1,42-0,91 (т, 2ОН), 0,91-0,78 (т, 9Н). М5 (ЕБІ) т/е 1387,4 (М.Н). 2.18 Синтез М-І6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-І -валіл-М-14-(ЦТ2-(13-((4-16-
ІВ-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-З-іл)-5- метил-1Н-піразол-1-іл)метил/|-5,7-диметилтрициклоЇ|3.3.1.127)дец-1-иліокси)етилі-(4-(бета-О- глюкопірануронозилокси)бензилІкарбамоїліокси)метиліфеніл)-М»-карбамоїл-І -орнітинаміду (синтону Е5)
Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 1.19.2 речовиною із прикладу 2.5.3 в прикладі 2.5.4. "Н ЯМР (500 МГц, диметилсульфоксид-йв) б ррт 12,86 (5, 1Н), 10,00 (5, 1Н), 7,97-8,14 (т, 2Н), 7,79 (а, 2Н), 7,07-7,65 (т, 1З3Н), 6,87-7,01 (т, 4Н), 5,92-6,08 (т, 1Н), 4,87-5,07 (т, 4Н), 4,33-4,48 (т, ЗН), 4,13-4,26 (т, 1Н), 3,74-3,94 (т, 6Н), 3,14- 3,34 (т, 8Н), 2,84-3,05 (т, 6Н), 1,87-2,25 (т, 6Н), 0,89-1,73 (т, 21Н), 0,76-0,87 (т, 12Н). М5 (Е5І) т/е 1626,4 (МАН). 2.19 Синтез М-І6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-І -валіл-М-14-(ЦТ2-(13-((4-16-
І1-41,93-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-1,2,3,4-тетрагідрохінолін-7-іл|-2-карбоксипіридин-3-іліІ-5- метил-1Н-піразол-1-іл)метил)|-5,7-диметилтрицикло!/3.3.1.127|)дец-1-иліокси)етиліц-(2- фосфоноетил)карбамоїл)окси)метилі|феніл)-М-карбамоїл-і -орнітинаміду (синтону РІ)
Зо Вказану в заголовку сполуку одержували, як описано в прикладі 2.1, шляхом заміни речовини із прикладу 1.2.9 речовиною із прикладу 11.20.11. "Н ЯМР (500 МГЦ, диметилсульфоксид-авє) б ррт 10,00 (в, 1Н), 8,40 (5, 1Н), 8,07 (а, 1Н), 8,00 (а, 1Н), 7,84-7,90 (т, 1Н), 7,79 (аа, ЗН), 7,55-7,66 (т, 2Н), 7,46 (5, 2Н), 7,37 (І, 1Н), 7,29 (ї, ЗН), 7,18-7,25 (т, 1Н), 6,99 (5, 2Н), 5,99 (5, 1Н), 5,00 (а, 1Н), 4,38 (5, 1Н), 4,13-4,24 (т, 1Н), 3,96 (5, 2Н), 3,87 (а, 2Н), 2,88-3,08 (т, 4Н), 2,84 (ад, 2Н), 2,04-2,26 (т, 5Н), 1,89-2,01 (т, ЗН), 1,75-1,88 (т, 2Н), 1,63-1,74 (т, 1Н), 0,91-1,63 (т, 21Н), 0,76-0,89 (т, 12Н). М5 (Е5І) т/е 1450,5 (М-Н). 2.20 Синтез М-І6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1 -іл)гексаноїл|-І -валіл-М»-карбамоїл-М-/4-
ІЧ2-Ч3-(К4-(2-карбокси-6-І8-(П1,З|гіазоло(5,4-б|піридин-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін- 2(1Н)-іл|Іпіридин-3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)метилі|-5,7-диметилтрицикло/|3.3.1.127дец-1- ил)окси)етил|-(2-сульфоетил)карбамоїліокси)метиліфеніл)-І -орнітинаміду (синтону ЕМ)
Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 1.22.5 речовиною із прикладу 1.2.9 в прикладі 2.1. "Н ЯМР (500 МГц, диметилсульфоксид-йв) б ррт 13,00 (м Біг 5, 1Н), 10,00 (5, 1Н), 8,52 (да, 1Н), 8,16 (да, 1), 8,06 (а, 1), 7,78 (а, 1н), 7,62 (а, тн), 7,59 (ріг т, 2Н), 7,53 (т, 2Н), 7,45 (а, 1Н), 7,37 (Ї, 1Н), 7,30 (в, 1Н) 7,27 (а, 2Н), 6,99 (5, 2Н), 6,97 (9, 1Н), 4,98 (т, 4Н), 4,39 (т, 1Н), 4,19 (ріг т, 1Н), 3,88 (ї, 2Н), 3,80 (Бг а, 2Н), 3,44, 3,36 (ріг т, т, в цілому 6Н), 3,24 (т, 2Н), 2,94-3,01 (т, 4Н), 2,63 (рг т, 2Н), 2,14 (т, 2Н), 2,10 (в, ЗН), 1,97 (рг т, 1Н), 1,68 (бе т, 1Н), 1,58 (Біг т, 1Н), 1,34-1,47 (т, 8Н), 1,08-1,23 (т ТОН), 0,95 (Бг т, 2Н), 0,85- 0,80 (т, 12Н). М5 (ЕБІ) т/е 1451,4 (М-Н). 2.21 Синтез М-І6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-І -валіл-М-14-((28)-1-Щ2- ((3-К4-(6-(1-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-1,2,3,4-тетрагідрохінолін-7-іл|-2-карбоксипіридин-3- іл)-5-метил-1Н-піразол-1-іл)метил|-5,7-диметилтрицикло|3.3.1.127|дец-1- иліокси)етил)(метил)аміно)-1-оксо-3-сульфопропан-2-ілІкарбамоїліокси)метилі|феніл)-Мо- карбамоїл-І -орнітинаміду (синтону (10)
Вказану в заголовку сполуку одержували, як описано в прикладі 2.1, шляхом заміни речовини із прикладу 1.2.9 речовиною із прикладу 1.21.7. "Н ЯМР (500 МгГу, диметилсульфоксид-авє) б ррт 9,98 (5, 1Н), 8,40 (5, 1Н), 8,07 (й, 1Н), 8,01 (ад, 1), 7,89 (1, 1), 7,74-7,84 (т, ЗН), 7,58 (а, 2Н), 7,47 (5, 2Н), 7,37 (І, 1Н), 7,19-7,33 (т, 5Н), 7,00 (5, 2Н), 4,91 (д, 2Н), 4,64-4,76 (т, 2Н), 4,33-4,43 (т, 2Н), 4,15-4,24 (т, 2Н), 3,92-4,03 (т, 2Н), 3,88 (в, 2Н), 3,32- 3,50 (т, 6Н), 3,10-3,22 (т, 2Н), 2,89-3,07 (т, 2Н), 2,70-2,89 (т, 4Н), 2,60-2,70 (т, 1Н), 2,05-2,28 (510) (т, 5Н), 1,90-2,03 (т, ЗН), 1,64-1,77 (т, 1Н), 1,53-1,65 (т, 1Н), 0,92-1,53 (т, 21Н), 0,77-0,92 (т,
12Н). М5 (ЕБІ) т/е 1507,3 (М-Н). 2.22 Синтез М-І6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-І -валіл-М-14-((28)-1-Щ2- ((3-К4-(6-(1-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-1,2,3,4-тетрагідрохінолін-7-іл|-2-карбоксипіридин-3- іл)-5-метил-1Н-піразол-1-іл)метил|-5,7-диметилтрицикло|3.3.1.127|дец-1- ил)окси)етилі|(метил)аміно)-1-оксо-3-сульфопропан-2-ілІкарбамоїліокси)метилі|феніл)-І - аланінаміду (синтону СВ)
Вказану в заголовку сполуку одержували, як описано в прикладі 2.1, шляхом заміни речовини із прикладу 1.2.9 й 4-((5)-2-((5)-2-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)гексанамідо)-
З-метилбутанамідо)-5-уреїдопентанамідо)бензил-(4-нітрофеніл)укарбонату речовиною із прикладу 1.21.7 й 4-((5)-2-((5)-2-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)угексанамідо)-3- метилбутанамідо)пропанамідо)бензил-(4-нітрофеніл)укарбонатом відповідно. "Н ЯМР (500 МГц, диметилсульфоксид-сє) б ррт 9,93 (5, 1Н), 8,39 (5, 1Н), 8,13 (й, 1Н), 8,01 (аа, 1), 7,88 (ї, 1Н), 7,714-7,84 (т, ЗН), 7,57 (0, 2Н), 7,46 (5, 2Н), 7,37 (І, 1Н), 7,17-7,33 (т, 5Н), 6,99 (в, 2Н), 4,91 (а, 2Н), 4,65-4,76 (т, 1Н), 4,30-4,51 (т, 1Н), 4,13-4,21 (т, 1Н), 3,92-4,00 (т, 2Н), 3,88 (в, 2Н), 5,29- 153,46 (т, АН), 2,93-3,21 (т, ЗН), 2,68-2,88 (т, 4Н), 2,58-2,68 (т, 1Н), 2,04-2,26 (т, 5Н), 1,89-2,02 (т, ЗН), 1,37-1,54 (т, 6Н), 0,92-1,34 (т, 15Н), 0,75-0,91 (т, 12Н). М5 (ЕБІ) т/е (МАН). 2.23 Синтез М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1 -іл)гексаноїл|-І -валіл-М»-карбамоїл-М-(4-
ІЧ2-Ч3-(К4-(2-карбокси-6-І8-(П1,З|гіазоло|4,5-б|піридин-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін- 2(1Н)-іл|Іпіридин-3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)метилі|-5,7-диметилтрицикло/|3.3.1.127дец-1- ил)окси)етил|-(2-сульфоетил)карбамоїліокси)метиліфеніл)-І -орнітинаміду (синтону ЕМ)
Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 1.23.4 речовиною із прикладу 1.2.9 в прикладі 2.1. "Н ЯМР (500 МГц, диметилсульфоксид-йв) б ррт 13,38 (м Біг 5, 1Н), 10,00 (5, 1Н), 8,66 (т, 2Н), 8,06 (а, 1), 7,78 (а, 1Н), 7,65 (9, 1Н), 7,59 (Бі т, 2Н), 7,53 (т, 1Н), 7,47 (т 2Н), 7,37 (Ї, 1Н), 7,30 (5, 1Н) 7,27 (0, 2Н), 6,99 (в, 2Н), 6,97 (а, 1Н), 4,98 (т, 4Н), 4,39 (т, 1Н), 4,19 (рі т, 1Н), 3,88 (І, 2Н), 3,80 (Бг а, 2Н), 3,40 (рі т, 6Н), 3,24 (т, 2Н), 2,98 (т, 4Н), 2,63 (т, 2Н), 2,16 (т, 2Н), 2,10 (5, ЗН), 1,97 (рг т, 1Н), 1,68 (рг т, 1Н), 1,58 (бг т, 1Н), 1,34-1,47(т, 8Н), 1,08-1,23 (т, ТОН), 0,95 (рг т, 2Н), 0,85-0,80 (т, 12Н). М5 (ЕБІ) т/е 1451,5 (М-
Ну. 2.2А Синтез М-І6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-І -валіл-М-14-(ЦТ2-(13-((4-16-
Ко) І1-41,93-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-1,2,3,4-тетрагідрохінолін-7-іл|-2-карбоксипіридин-3-іліІ-5- метил-1Н-піразол-1-іл)метил)|-5,7-диметилтрицикло!/3.3.1.127|)дец-1-иліокси)етиліц-(2- сульфоетил)карбамоїліокси)метилі|феніл)-М»-карбамоїл-Ї! -орнітинаміду (синтону С10))
Вказану в заголовку сполуку одержували, як описано в прикладі 2.1, шляхом заміни речовини із прикладу 1.2.9 речовиною із прикладу 1.24.2. "НН ЯМР (500 МгГу,
З5 диметилсульфоксид-йв) б ррт 10,00 (5, 1Н), 8,38 (5, 1Н), 8,07 (а, 1Н), 8,00 (а, 1Н), 7,85-7,92 (т, 1Н), 7,73-7,85 (т, ЗН), 7,55-7,65 (т, 2Н), 7,46 (5, 2Н), 7,37 (І, 1Н), 7,28 (1, ЗН), 7,22 (Ї, 1Н), 6,99 (5, 2Н), 6,00 (5, 1Н), 4,99 (д, 1Н), 4,28-4,50 (т, 1Н), 4,19 (в, 1Н), 3,77-4,03 (т, 4Н), 3,31-3,41 (т, 2Н), 3,20-3,29 (т, 2Н), 2,87-3,08 (т, ЗН), 2,83 (ї, 2Н), 2,63 (а, 2Н), 2,05-2,25 (т, 5Н), 1,88-2,01 (т, ЗН), 1,69 (ї, 1Н), 1,53-1,63 (т, 1Н), 1,931-1,53 (т, 8Н), 1,04-1,29 (т, 11Н), 0,89-1,02 (т, 2Н), 0,77-0,88 (т, 12Н). М5 (ЕБІ) т/е 1450,4 (М-Н). 2.25 Синтез М-І6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-І -валіл-М-14-(ЦТ2-(13-((4-16-
ІВ-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-З-іл)-5- метил-1Н-піразол-1-іл)уметил|-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.12Л)дец-1-иліокси)етил|-(2- карбоксиетил)карбамоїл)окси)метилі|феніл)-М»-карбамоїл-І -орнітинаміду (синтону СК)
Вказану в заголовку сполуку одержували, як описано в прикладі 2.1, шляхом заміни речовини із прикладу 1.2.9 речовиною із прикладу 1.25.2. "НН ЯМР (400 МГуц, диметилсульфоксид-сйвє) б ррт 12,85 (5, 1Н), 9,98 (5, 1Н), 8,04 (, 2Н), 7,75-7,82 (т, 2Н), 7,60 (ї,
ЗН), 7,41-7,53 (т, ЗН), 7,32-7,39 (т, 2Н), 7,24-7,29 (т, ЗН), 6,99 (5, 2Н), 6,94 (а, ЗН), 5,97 (5, 1Н), 4,88-5,04 (т, 4Н), 4,38 (й, 1Н), 4,12-4,24 (т, 1Н), 3,88 (Її, 2Н), 3,75-3,84 (т, 2Н), 3,32-3,40 (т, 2Н), 3,28 (й, 2Н), 2,90-3,05 (т, 4Н), 2,42-2,49 (т, 2Н), 2,05-2,22 (т, 5Н), 1,87-2,01 (т, 1Н), 0,90-1,76 (т, 22Н), 0,74-0,88 (т, 12Н). М5 (ЕБІ) т/е 14145 (М-Н). 2.26 Синтез М-І6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-І -валіл-М-14-(ЦТ2-(13-((4-16-
ІВ-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-З-іл)-5- метил-1Н-піразол-1-іл)метил)|-5,7-диметилтрицикло!/3.3.1.127|)дец-1-иліокси)етиліц-(2- карбоксиетил)карбамоїл)окси)метилі|феніл)-І -аланінаміду (синтону СХ)
Вказану в заголовку сполуку одержували, як описано в прикладі 2.1, шляхом заміни речовини із прикладу 1.2.9 й 4-((5)-2-((5)-2-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)гексанамідо)-
З-метилбутанамідо)-5-уреїдопентанамідо)бензил-(4-нітрофеніл)укарбонату речовиною із прикладу 1.25.2 і 4-((5)-2-((5)-2-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)угексанамідо)-3- 60 метилбутанамідо)пропанамідо)бензил-(4-нітрофеніл)укарбонатом відповідно. "Н ЯМР (400 МГц,
диметилсульфоксид-ав) б ррт 12,78 (5, 1Н), 9,93 (5, 1Н), 8,12 (а, 1Н), 8,03 (й, 1Н), 7,75-7,83 (т, 2Н), 7,54-7,65 (т, ЗН), 7,41-7,52 (т, ЗН), 7,32-7,40 (т, 2Н), 7,24-7,29 (т, ЗН), 6,98 (5, 2Н), 6,94 (а, 1Н), 4,90-5,04 (т, 4Н), 4,32-4,45 (т, 2Н), 4,12-4,21 (т, 2Н), 3,88 (І, 2Н), 3,79 (а, 2Н), 3,31-3,46 (т,
АН), 3,23-3,31 (т, 2Н), 3,01 (ї, 2Н), 2,46 (І, 2Н), 2,04-2,22 (т, 5Н), 1,87-2,02 (т, 1Н), 1,40-1,60 (т, 4Н), 0,91-1,37 (т, 17Н), 0,76-0,88 (т, 12Н). М5 (ЕБІ) т/е 1328,4 (М-Н). 2.27 Синтез 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-(1-((3-(2- (Щ(28)-3-карбокси-2-((4-Д(25)-2-((25)-2-116-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1- іл)угексаноїл|аміно)-3- метилбутаноїл|аміно)пропаноїліаміно)бензил)окси|карбоніліаміно)пропаноїлі|(метил)аміно)етокс и)-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.157)дец-1-ил|метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)піридин-2-карбонової кислоти (синтону СІМУ)
У розчин речовини із прикладу 1.27 (0,043 г) в М,М-диметилформаміді (0,5 мл) додавали 4- ((5)-2-((5)-2-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-ілугексанамідо)-3- метилбутанамідо)пропанамідо)бензил-(4-нітрофеніл)укарбонат (0,042 г) З подальшим додаванням М,М-діззопропілетиламіну (0,038 мл), і реакційну суміш перемішували за кімнатної температури. Після перемішування протягом 16 годин реакційну суміш розбавляли водою (0,5 мл) й М,М-диметилформамідом (1 мл). Суміш очищували за допомогою НРІ С з оберненою фазою із застосуванням системи оіЇзоп, з елююванням від 10 до 7095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./06б. трифтороцтової кислоти. Необхідні фракції об'єднували й висушували сублімацією з одержанням указаної в заголовку сполуки. "НН ЯМР (400 МГу, диметилсульфоксид-савє) б рріт 13,05 (5, 1Н), 10,15 (5, 1Н), 8,36 (0, 1), 8,26 (9, 1Нн), 8,02 (9, 2Н), 7,95-7,77 (т, 4Н), 7,77-7,63 (т, ЗН), 7,63-7,54 (т, 2Н), 7,54-7,46 (т, ЗН), 7,22 (5, 2Н), 7,18 (да, 1Н), 5,17 (а, 4Н), 5,01 (ад, 1Н), 4,61 (р, 1Н), 4,39 (1, 1Н), 4.11 (1, 2Н), 4,03 (5, 2Н), 3,64-3,49 (т, 2Н), 93,29 (5, 1Н), 9,24 (ї, 2Н), 3,03 (5, 2Н), 2,92 (а, 1Н), 2,73-2,61 (т, АН), 2,35 (а, АН), 2,18 (а, 1Н), 1,71 (н, 4Н), 1,65-1,13 (т, 18Н), 1,13-1,01 (т, 13Н). М5 (ЕБІ) т/е 1387,3 (МАН). 2.28 Синтез М-І6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-І -валіл-М-14-(ЦТ2-(13-((4-16-
ІВ-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-З-іл)-5- метил-1Н-піразол-1-іл)метил)|-5,7-диметилтрицикло!/3.3.1.127|)дец-1-иліокси)етилі-|1- (карбоксиметил)піперидин-4-ілІікарбамоїліокси)метил|феніл)-М»-карбамоїл-І -орнітинаміду
Зо (синтону НЕ)
Розчин речовини із прикладу 1.28 (0,0449 г), 4-((5)-2-((5)-2-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н- пірол-1-ілугексанамідо)-3-метилбутанамідо)-5-уреїдопентанамідо)бензил-(4- нітрофеніл)карбонату (0,049 г) й М,М-діззопропілетиламіну (0,044 мл) перемішували разом в
М,М-диметилформаміді (0,5 мл) за кімнатної температури. Реакційну суміш перемішували протягом ночі й розбавляли М,М-диметилформамідом (1 мл) і водою (0,5 мл). Суміш очищували за допомогою НРІ С з оберненою фазою із застосуванням системи сіЇзоп, з елююванням від 10 до 9095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./о06. трифтороцтової кислоти. Необхідні фракції об'єднували й висушували сублімацією з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-ав) б ррт 12,85 (5, 1Н), 9,99 (в, 1Н), 8,04 (1, 2Н), 7,78 (ї, 2Н), 7,65- 7,58 (т, ЗН), 7,54-7,41 (т, ЗН), 7,38 (а, 1Н), 7,34 (а, 1Н), 7,32-7,24 (т, ЗН), 6,99 (5, 2Н), 6,95 (а, 1Н), 5,97 (5, 1Н), 5,01 (5, 2Н), 4,96 (5, 2Н), 4,38 (9, 1Н), 4,23-4,14 (т, 1Н), 4,05 (5, 2Н), 3,88 (ї, 2Н), 3,80 (5, 2Н), 3,36 (І, 2Н), 3,26-2,86 (т, 8Н), 2,27-2,02 (т, 6Н), 2,02-1,86 (т, 2Н), 1,86-1,75 (т, 2Н), 1,75-1,54 (т, 2Н), 1,54-0,90 (т, 24Н), 0,89-0,72 (т, 14Н). М5 (ЕБІ) т/е 14852 (МАН). 2.29 Синтез солі (5)-6-((2-((3-((4-(6-(8-(бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін- 2(1Н)-іл)-2-карбоксипіридин-3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)метил)-5,7-диметиладамантан- 1- іл)уокси)етил)(метил)аміно )-5-((((4-((5)-2-((5)-2-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1- іл)угексанамідо)-3-метилбутанамідо)-5-уреїдопентанамідо)бензил)окси)карбоніл)аміно)-М, М, М- триметил-6-оксогексан-1-амінію (синтону НО)
Розчин речовини із прикладу 1.29 (8 мг), 4-((5)-2-((5)-2-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1- ілугексанамідо)-3-метилбутанамідо)-5-уреїдопентанамідо)бензил-(4-нітрофеніл/укарбонату (8,24 мг) й М,М-діїзопропілетиламіну (7,50 мкл, 0,043 ммоль) в М,М-диметилформаміді (0,250 мл) перемішували за кімнатної температури. Через З години реакційну суміш розбавляли М,М- диметилформамідом (1,25 мл) і водою (0,5 мл). Суміш очищували за допомогою НРІС з оберненою фазою із застосуванням системи сіїзоп, з елююванням від 10 до 9095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./0б. трифтороцтової кислоти. Необхідні фракції об'єднували й висушували сублімацією з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (400 МГЦ, диметилсульфоксид-ав) б ррт 12,85 (5, 1Н), 9,96 (5, 1Н), 8,04 (ї, 2Н), 7,683-7,76 (т, 2Н), 7,66-7,56 (т, ЗН), 7,53-7,42 (т, 4Н), 7,41-7,32 (т, 2Н), 7,31-7,23 (т, ЗН), 6,99 (5, 2Н), 6,95 (й, 1Н), 5,99 (5, 1Н), 5,04-4,87 (т, АН), 4,44-4,33 (т, 2Н), 424-412 (т, 2Н), 3,88 (ї, 2Н), 3,81 (5, 2Н), 3,50-3,13 (т, (510) 9Н), 3,11-2,92 (т, 14Н), 2,80 (5, 1Н), 2,25-2,04 (т, 5Н), 2,03-1,89 (т, 1Н), 1,75-0,91 (т, 28Н), 0,91-
0,77 (т, 12Н). М5 (ЕБІ) т/е 1528,5 (МАН). 2.30 Синтез М-І6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-І -валіл-М-14-(ЦТ2-(13-((4-16-
ІВ-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-З-іл)-5- метил-1Н-піразол-1-іл)метил)|-5,7-диметилтрицикло!/3.3.1.127|)дец-1-иліокси)етиліц-(2- сульфоетил)карбамоїл)окси)метилі|феніл)-І -аланінаміду (синтону НР)
Вказану в заголовку сполуку одержували, як описано в прикладі 2.1, шляхом заміни 4-((5)-2- ((5)-2-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-ілугексанамідо)-3-метилбутанамідо)-5- уреїдопентанамідо)бензил-(4-нітрофеніл)карбонату 4-((5)-2-((5)-2-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н- пірол-1-ілугексанамідо)-3-метилбутанамідо)пропанамідо)бензил-(4-нітрофеніл)укарбонатом. 'Н
ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-йв) б ррт 12,83 (5, 1Н), 9,94 (5, 1Н), 8,12 (й, 1), 8,04 (а, 1Н), 7,79 (а, 2Н), 7,40-7,63 (т, 6Н), 7,32-7,39 (т, 2Н), 7,24-7,30 (т, ЗН), 6,99 (в, 2Н), 6,95 (а, 1Н), 4,90-5,03 (т, 4Н), 4,31-4,47 (т, 1Н), 4,09-4,24 (т, 1Н), 3,84-3,93 (т, 2Н), 3,81 (5, 2Н), 3,30-3,39 (т, 2Н), 3,20-3,28 (т, 2Н), 3,01 (, 2Н), 2,57-2,65 (т, 2Н), 2,05-2,22 (т, 5Н), 1,87-2,02 (т, 2Н), 1,41-1,58 (т, 4Н), 1,22 (й, 18Н), 0,74-0,89 (т, 12Н). М5 (ЕБІ) т/е 1364,5 (М-Н). 2.31 Синтез М-І6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-І -валіл-М-І(4-(1(4-Т2-(13-(4- 16-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-іл)-5- метил-1Н-піразол-1-іл)метил)|-5,7-диметилтрицикло!/3.3.1.127|)дец-1-иліокси)етиліц-(2- сульфоетил)аміно)піперидин-1-іл)карбоніл|окси)метил)феніл|-М-карбамоїл-І -орнітинаміду (синтону НА)
Розчин речовини із прикладу 1.30.2 (0,038 г), 4-((5)-2-((5)-2-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н- пірол-1-ілугексанамідо)-3-метилбутанамідо)-5-уреїдопентанамідо)бензил-(4- нітрофеніл)карбонату (0,035 г) й М,М-діізопропілетиламіну (0,032 мл) в М,М-диметилформаміді (0,5 мл) перемішували за кімнатної температури. Після перемішування протягом З годин реакційну суміш розбавляли М,М-диметилформамідом (1,25 мл) і водою (0,5 мл). Суміш очищували за допомогою НРІС з оберненою фазою із застосуванням системи оіїЇ5оп, з елююванням від 10 до 9095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./06б. трифтороцтової кислоти. Необхідні фракції об'єднували й висушували сублімацією з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-йвє) б ррт 9,98 (в, 1Н), 9,02 (5, 1Н), 8,10-8,00 (т, 2Н), 7,79 (а, 2Н), 7,64-7,56 (т, ЗН), 7,53 (й, 1Н), 7,47 (ї, 1Н), 7,43 (9, 1Н), 7,39-7,32
Коо) (т, 2Н), 7,29 (а, ЗН), 6,99 (5, 2Н), 6,95 (9, 1Н), 6,00 (5, 1Н), 4,99 (5, 2Н), 4,96 (5, 2Н), 4,48-4,32 (т, 2Н), 4,27-4,15 (т, 2Н), 4,11 (а, 2Н), 3,88 (ї, 2Н), 3,82 (5, 2Н), 3,40-3,33 (т, 4Н), 3,24-3,11 (т, 2Н), 3,11-2,72 (т, 8Н), 2,26-2,04 (т, 4Н), 2,04-1,80 (т, ЗН), 1,80-0,92 (т, 26Н), 0,92-0,77 (т, 12Н). М5 (ЕБ5І) т/е 1535,4 (М.Н). 2.32 Синтез М-І6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-І -валіл-М-14-(ЦТ2-(13-((4-16-
ІВ-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-5-(3-фосфонопропокси)-3,4-дигідроїзохінолін-2(1 Н)-іл|-2- карбоксипіридин-3-іл)-5о-метил-!1 Н-піразол-1-іл)метил)|-5, 7-диметилтрициклоїЇ3.3.1.197|дец-1- ил)окси)етилі|(метил)карбамоїл)окси)метилі|феніл)-М»-карбамоїл-І -орнітинаміду (синтону НІ)
Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 1.31.11 речовиною із прикладу 2.5.3 в прикладі 2.5.4. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-дв) б ррт 9,98 (5, 1Н), 8,03 (аа, 2Н), 7,70-7,84 (т, ЗН), 7,59 (а, 2Н), 7,48 (да, 2Н), 7,23-7,37 (т, 4Н) , 6,93- 7,02 (т, АН), 4,99 (9, 4Н), 4,12-421 (т, 8Н), 3,88-3,96 (т, 4Н), 3,75-3,84 (т, 4Н), 3,23-3,49 (т, 7Н), 2,73-3,07 (т, 8Н), 1,89-2,21 (т, 9Н), 0,91-1,77 (т, 25Н), 0,77-0,91 (т, 12Н). М5 (Е5І) т/е 1496,3 (М.-Н)». 2.33 Синтез М-І6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-І -валіл-М-І(4-(1(4-Т2-(13-(4- 16-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-З-іл)-5- метил-1Н-піразол-1-іл)уметил|-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.12Л)дец-1-иліокси)етил|-(3- фосфонопропіл)аміно)піперидин-1-іл)карбоніл|окси)метил)феніл|-М»-карбамоїл-І -орнітинаміду (синтону НТ)
Розчин речовини із прикладу 1.26.2 (0,040 г), 4-((5)-2-((5)-2-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н- пірол-1-ілугексанамідо)-3-метилбутанамідо)-5-уреїдопентанамідо)бензил-(4- нітрофеніл)карбонату (0,030 г) й М,М-діїізопропілетиламіну (0,020 мл) в М,М-диметилформаміді (0,5 мл) перемішували за кімнатної температури. Після перемішування протягом З годин реакційну суміш розбавляли М,М-диметилформамідом (1,25 мл) і водою (0,5 мл). Суміш очищували за допомогою НРІС з оберненою фазою із застосуванням системи оїіїЇ5оп, з елююванням від 10 до 9095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./06. трифтороцтової кислоти. Необхідні фракції об'єднували й висушували сублімацією з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (500 МГц, диметилсульфоксид-йвє) б ррт 9,98 (5, 1Н), 9,26 (5, 1Н), 8,06 (а, 1Н), 8,05-8,01 (т, 1Н), 7,79 (а, 2Н), 7,62 (а, 1Н), 7,61-7,57 (т, 2Н), 7,52-7,42 (т, ЗН), 7,38 (9, 1Н), 7,35 (а, 1Н), 7,32-7,26 (т, ЗН), 6,99 (5, 2Н), 6,95 (а, 1Н), 6,01 (5, 1Н), 4,99 (5, 2Н), 4,96 (5, 60 ЗН), 4,44-4,33 (т, 2Н), 4,18 (да, 2Н), 3,88 (ї, 2Н), 3,83 (5, 2Н), 3,71-3,61 (т, 2Н), 3,53 (І, 2Н), 3,36
(, 2Н), 3,07-2,66 (т, 8Н), 2,28-2,06 (т, 6Н), 2,05-1,92 (т, 2Н), 1,92-1,80 (т, 2Н), 1,78-0,95 (т,
За), 0,92-0,77 (т, 14Н). М5 (ЕБІ) т/е 1549,5 (М.-Н)». 2.34 Синтез М-І6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-І -валіл-М-14-(ЦТ2-(13-((4-16-
ІВ-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)нафталін-2-іл|-2-карбоксипіридин-3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1- іл)метил|-5,7-диметилтрицикло!/3.3.1.15Ядец-1-иліокси)етил|-(3- фосфонопропіл)карбамоїліокси)метилІфеніл)-М»-карбамоїл-І! -орнітинаміду (синтону НМ)
Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 1.14.4 речовиною із прикладу 2.5.3 в прикладі 2.5.4. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-дв) б ррт 9,98 (5, 1Н), 9,02 (5, 1Н), 8,32-8,45 (т, 1Н), 8,12-8,27 (т, ЗН), 7,98-8,09 (т, ЗН), 7,93 (а, 1Н), 7,66- 107,83 (т, АН), 7,54-7,64 (т, 2Н), 7,46-7,50 (т, 2Н), 7,24-7,40 (т, ЗН), 6,99 (5, 2Н), 5,93-6,09 (т, 1Н), 4,99 (5, ЗН), 4,33-4,49 (т, ЗН), 4,15-4,20 (т, ЗН), 3,19-3,50 (т, ТОН), 2,86-3,07 (т, ЗН), 1,87-2,27 (т, 7Н), 0,91-1,77 (т, 26Н), 0,76-0,89 (т, ТОН). М5 (ЕБІ) т/е 14611 (МАН). 2.35 Синтез М-І6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-І -валіл-М-І(4-(1(4-Т2-(13-(4- 16-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-іл)-5- метил-1Н-піразол-1-іл)метил)|-5,7-диметилтрицикло!/3.3.1.127|)дец-1-иліокси)етиліц-(2- карбоксиетил)аміно)піперидин-1-іл)карбоніл|оксиїметил)феніл|-М»-карбамоїл-І -орнітинаміду (синтону ГЦ)
Розчин речовини із прикладу 1.36.2 (0,031 г), 4-((5)-2-((5)-2-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н- пірол-1-ілугексанамідо)-3-метилбутанамідо)-5-уреїдопентанамідо)бензил-(4- нітрофеніл)укарбонату (0,025 г) й М,М-діїзопропілетиламіну (0,016 мл) в М,М-диметилформаміді (0,5 мл) перемішували за кімнатної температури. Після перемішування протягом З годин реакційну суміш розбавляли М,М-диметилформамідом (1,25 мл) і водою (0,5 мл). Суміш очищували за допомогою НРІС з оберненою фазою із застосуванням системи оіїЇ5оп, з елююванням від 10 до 9095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./06. трифтороцтової кислоти. Необхідні фракції об'єднували й висушували сублімацією з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-дв) б ррт 12,84 (5, 1Н), 9,98 (в, 1Н), 8,82 (5, 1Н), 8,05 (аа, 2Н), 7,79 (а, 2Н), 7,70-7,53 (т, 2Н), 7,53-7,24 (т, 6Н), 6,99 (в, 2Н), 6,95 (а, 1Н), 6,00 (5, 1Н), 4,99 (5, 2Н), 4,96 (5, 2Н), 4,37 (9, 2Н), 4,25-4,15 (т, 2Н), 3,88 (І, 2Н), 3,83 (5, 2Н), 3,69-3,61 (т, 2Н), 3,44-3,30 (т, 4Н), 3,08-2,90 (т, 4Н), 2,90-2,72 (т, АН), 2,27-2,04 (т, 5Н), 2,04-
Коо) 1,89 (т, 2Н), 1,77-0,94 (т, 28Н), 0,91-0,78 (т, 14Н). М5 (ЕБІ) т/е 1499,5 (М.Н). 2.36 Синтез М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1 -іл)гексаноїл|-І -валіл-М»-карбамоїл-М-(4-
ІЧ2-Ч3-(К4-(2-карбокси-6-І8-(П1,З|гіазоло|4,5-б|піридин-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін- 2(1Н)-іл|Іпіридин-3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)метил)|-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.157)дец-1- ил)окси)етил|-(З-фосфонопропіл)карбамоїл)окси)метилі|феніл)-І -орнітинаміду (синтону ІА)
Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 1.39.2 речовиною із прикладу 1.2.9 в прикладі 2.1. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-йв) б ррт 9,98 (5, 1Н), 8,60 (аа, 1Н), 8,52 (да, 1Н), 8,06 (а, 1н), 7,78 (а, 1Н), 7,65 (9, 1Н), 7,59 (Ббг т, 2Н), 7,50 (т, 1Н), 7,45 (9, 1Н), 7,38 (т, 2Н), 7,28 (5, 1Н), 7,27 (а, 2Н), 6,99 (5, 2Н), 6,97 (а, 1Н), 5,98 (Ббг 5, 1Н), 4,98 (5, АН), 4,39 (т, 1Н), 4,19 (рі т, 1Н), 3,88 (1, 2Н), 3,80 (Бг а, 2Н), 3,36 (бг т, ЗН), 3,24
Бі (т, 4Н), 2,98 (т, 4Н), 2,16 (т, 2Н), 2,12 (5, ЗН), 1,95 (Біг т, 1Н), 1,67 (Біг т, ЗН), 1,34-1,47 (т,
ОН), 1,08-1,23 (т, 11 НН), 0,95 (Бг т, 2Н), 0,85-0,80 (т, 12Н). М5 (Е5І) т/е 1465,5 (М-Н). 2.37 Синтез М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1 -іл)гексаноїл|-І -валіл-М»-карбамоїл-М-(4-
ІЧ2-Ч3-(К4-(2-карбокси-6-І8-(П1,З|гіазоло(5,4-б|піридин-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін- 2(1Н)-іл|Іпіридин-3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)метил)|-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.157)дец-1- ил)окси)етил|-(З-фосфонопропіл)карбамоїл)окси)метилі|феніл)-І -орнітинаміду (синтону ІРЕ)
Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 1.40.2 речовиною із прикладу 1.2.9 в прикладі 2.1. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-йв) б ррт 9,98 (5, 1Н), 8,52 (ад, 1Н), 8,16 (а9, 1Н), 8,05 (Бк а, 1), 7,78 (Бг а, 1Н), 7,62 (т, 1Н), 7,58 (бі т, 2Н), 7,52 (т, 2Н), 7,44 (9, 1Н), 7,38 (її, 1Н), 7,29 (5, 1Н) 7,27 (9, 2Н), 6,99 (5, 2Н), 6,97 (а, 1Н), 4,98 (5, 2Н), 4,96 (5, 2Н), 4,39 (т, 1Н), 4,19 (ріг т, 1Н), 3,88 (ї, 2Н), 3,80 (Бг а, 2Н), 3,36 (бі т, ЗН), 3,24
Бг (т, АН), 2,98 (т, АН), 2,16 (т, 2Н), 2,12 (5, ЗН), 1,95 (Бі т, 1Н), 1,67 (Бі т, ЗН), 1,47-1,34 (т,
ОН), 1,08-1,23 (т, 11 НН), 0,95 (Бг т, 2Н), 0,85-0,80 (т, 12Н). М5 (Е5І) т/е 1451,5 (М-Н). 2.38 Синтез М-16-Кхлорацетил)аміно|гексаноїл)-І -валіл-М-14-(112-(13-((4-16-(8-(1,3- бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-іл)-5-метил-1 Н- піразол-1-іл)метил|-5,7-диметилтрицикло!/3.3.1.157)дец-1-ил)окси)етилі|-(2- сульфоетил)карбамоїл)окси)метиліфеніл)-І -аланінаміду (синтону ІСх) 2.38.1 3-(1-((3-(2-((((4-((5)-2-((5)-2-Аміно-3- метилбутанамідо)пропанамідо)бензил)окси)карбоніл)-(2-сульфоетил)аміно)етокси)-5,7- диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)-6-(8-(бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4- 60 дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл)піколінова кислота
Розчин речовини із прикладу 1.2.9 (0,050 г), (ЗН-флуорен-9-іл)метил-((5)-3-метил-1-(((5)-1- (4-(((4-нітрофенокси)карбоніл)окси)метил)феніл)аміно)-1-оксопропан-2-іл)аміно)-1-оксобутан- 2-ілукарбамату (0,039 г) й М,М-діїізопропілетиламіну (0,027 мл) в М.М-диметилформаміді (1 мл) перемішували за кімнатної температури. Після перемішування протягом ночі у реакційну суміш додавали дієтиламін (0,027 мл) і перемішування продовжували протягом 2 годин. Реакційну суміш гасили трифтороцтовою кислотою і суміш очищували за допомогою НРІ С з оберненою фазою із застосуванням системи сіїзоп, з елююванням від 5 до 7595 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./0б. трифтороцтової кислоти. Необхідні фракції об'єднували й висушували сублімацією з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕБІ) т/е 1499,5 (МАН). 2.38.2.. М-(6-КХлорацетил)аміно|гексаноїл)-І -валіл-М-4-(2-(13-(4-16-І(8-(1,3-бензотіазол-2- ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1- ілуметил|-5,7-диметилтрицикло!/3.3.1.157)дец-1-илюкси)етилі|-(2- сульфоетил)карбамоїлюкси)метиліфеніл)-І -аланінамід
У розчин 6-(2-хлорацетамідо)гексанонової кислоти (б мг) й 2-(3Н-П1,2,3|триазоло|4,5-
Б|піридин-3-іл)-1,1,3,3-тетраметилізоуронію гексафторфосфату(м) (0,011 г) в М,М- диметилформаміді (1 мл) додавали М,М-дізопропілетиламін (0,015 мл) та перемішували реакційну суміш протягом 5 хвилин. Даний розчин додавали до речовини із прикладу 2.38.1 (0,022) та перемішували протягом 1 години. Реакційну суміш розбавляли /М,М- диметилформамідом (1 мл) і водою (0,5 мл). Суміш очищували за допомогою НРІС з оберненою фазою із застосуванням системи біїЇзоп, з елююванням від 10 до 9095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./06б. трифтороцтової кислоти. Необхідні фракції об'єднували й висушували сублімацією з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (400 МГЦ, диметилсульфоксид-ав) б ррт 12,83 (5, 1Н), 9,93 (5, 1Н), 8,20-8,10 (т, 2Н), 8,04 (а, 1Н), 7,83-7,76 (т, 2Н), 7,64-7,55 (т, ЗН), 7,55-7,50 (т, 1Н), 7,50-7,41 (т, 2Н), 7,40-7,32 (т, 2Н), 7,32-7,24 (т,
ЗН), 6,96 (а, 1Н), 5,07-4,92 (т, ЗН), 4,39 (р, 1Н), 4,18 (аа, 2Н), 4,01 (5, 2Н), 3,92-3,76 (т, 6Н), 93,54- 3,32 (т, 4Н), 3,25 (І, 2Н), 3,13-2,93 (т, 4Н), 2,72-2,58 (т, 2Н), 2,29-212 (т, 2Н), 2,09 (5, ЗН), 2,05- 1,92 (т, 1Н), 1,58-0,89 (т, 18Н), 0,89-0,77 (т, 12Н). М5 (ЕБІ) т/е 13622 (М.Н) ». 2.39 Синтез М-І6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-І -валіл-М-14-(ЦТ2-(13-((4-16-
ІВ-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-5-(карбоксиметокси)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-2-
Зо карбоксипіридин-З3-ілІі-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)метил)|-5,7-диметилтрициклоїЇ3.3.1.157|дец-1- иліокси)етил)(метил)карбамоїліокси)метил|феніл)-Мо-карбамоїл-І -орнітинаміду (синтону І)
Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 1.41.3 речовиною із прикладу 2.5.3 в прикладі 2.5.4. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-йв) б ррт 10,03 (5, 1Н), 9,96 (5, 1Н), 8,26-8,34 (т, 1Н), 7,95-8,11 (т, 2Н), 7,73-7,82 (т, 2Н), 7,22-7,70 (т, 11Н), 6,95-7,05 (т, ЗН), 6,89 (а, 1Н), 5,23 (5, 1Н), 4,98 (а, ЗН), 4,83 (5, 1Н), 4,33-4,43 (т, 1Н), 4,11-4,23 (т, 1Н), 3,74-3,95 (т, ЗН), 3,22-3,39 (т, ТОН), 2,78-3,06 (т, 12Н), 1,91-2,22 (т, 8Н), 0,93-1,68 (т, 2ОН), 0,77-0,88 (т, ТОН). М5 (ЕБІ) т/е 1492,2 (М.НН)». 2.40 Синтез М-І6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-І-валіл-М-І(4-((2-Щ2-(3-(4- 16-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-іл)-5- метил-1Н-піразол-1-іл)метил)|-5,7-диметилтрицикло!/3.3.1.127|)дец-1-иліокси)етиліц-(2- сульфоетил)аміно)етил)-(2-карбоксиетил)карбамоїл|окси)метил)феніл/|-М»-карбамоїл-ї - орнітинаміду (синтону І)
Вказану в заголовку сполуку одержували, як описано в прикладі 2.1, шляхом заміни речовини із прикладу 1.2.9 речовиною із прикладу 1.38.2. "НН ЯМР (400 МГу, диметилсульфоксид-йв) б ррт 12,86 (5, 1Н), 9,99 (5, 1Н), 9,10 (5, 1Н), 8,04 (ї, 2Н), 7,73-7,85 (т, 2Н), 7,61 (ї, ЗН), 7,41-7,55 (т, ЗН), 7,26-7,39 (т, 5Н), 6,99 (5, 2Н), 6,95 (а, 1Н), 6,00 (в, 1Н), 4,99 (9, 4Н), 4,34-4,45 (т, 2Н), 4,19 (а9, 2Н), 3,88 (ї, 2Н), 3,82 (5, 2Н), 3,36 (І, 4Н), 2,85-3,09 (т, 5Н), 2,06-2,22 (т, АН), 1,89-2,02 (т, 1Н), 0,94-1,77 (т, 2ОН), 0,77-0,90 (т, 11Н). М5 (ЕБ5І) т/е 1567,4 (МАН). 2.41 Синтез 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-3-(1-(73-(2- (ф25)-2-ЦК4-((25)-5-(карбамоїламіно)-2-(25)-2-116-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол- 1- іл)угексаноїл|аміно)-З-метилбутаноїліаміно)пентаноїл|іаміно)бензил)окси|карбоніл)-(2- карбоксиетил)аміно|-3-карбоксипропаноїл)аміно)етокси|-5,7-диметилтрицикло!/3.3.1.12Лдец-1- ил)метил)-5-метил-1Н-піразол-4-іл|піридин-2-карбонової кислоти (синтону ІК)
Вказану в заголовку сполуку одержували, як описано в прикладі 2.1, шляхом заміни речовини із прикладу 1.2.9 речовиною із прикладу 1.32.4. М5 (Е5І) т/е 15924 (М-Н). 2.42 Синтез 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-(1-((3-(2- ((25)-2-0((4-1(25)-5-(карбамоїламіно)-2-1(25)-2-116-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1- ілугексаноїл|іаміно)-З-метилбутаноїліаміно)пентаноїліаміно)дбензил)окси|карбоніл)аміно)-3- 60 карбоксипропаноїл|-(2-сульфоеєетил)аміно)етокси)-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.19Я|дец-1-
ил|метил)-5-метил-1Н-піразол-4-іл)піридин-2-карбонової кислоти (синтону ЇЇ)
Вказану в заголовку сполуку одержували, як описано в прикладі 2.1, шляхом заміни речовини із прикладу 1.2.9 речовиною із прикладу 1.44.2. "НН ЯМР (400 МГу, диметилсульфоксид-савє) б ррт 12,82 (5, 1Н), 9,96 (5, 1Н), 8,03 (ї, 2Н), 7,77 (а, 2Н), 7,39-7,62 (т, 50 7Н), 7,30-7,39 (т, 2Н), 7,22-7,29 (т, ЗН), 6,98 (5, 2Н), 6,92-6,96 (т, 1Н), 5,97 (5, 1Н), 4,83-5,05 (т,
ЗН), 3,83-3,92 (т, 1Н), 3,79 (5, 1Н), 3,00 (5, 2Н), 2,03-2,22 (т, 8Н), 1,94 (5, 2Н), 1,34 (9, ЗОН), 0,69- 0,90 (т, 13Н). М5 (ЕБІ) т/е 1565,5 (М-Н). 2.43 Синтез М-І6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-І -валіл-М-І(4-(1(4-Т2-(13-(4- 16-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-іл)-5- метил-1Н-піразол-1-іл)уметил|-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.12Л)дец-1-иліокси)етил|-(3- карбоксипропіл)аміно)піперидин-1-іл)укарбоніл|окси)метил)феніл|-М»-карбамоїл-Ї -орнітинаміду (синтону ІМ)
Розчин речовини із прикладу 1.42.2 (0,045 г), 4-((5)-2-((5)-2-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н- пірол-1-ілугексанамідо)-3-метилбутанамідо)-5-уреїдопентанамідо)бензил-(4- нітрофеніл)укарбонату (0,035 г) й М,М-діїзопропілетиламіну (0,038 мл) в М,М-диметилформаміді (0,5 мл) перемішували за кімнатної температури. Після перемішування протягом З годин реакційну суміш розбавляли М,М-диметилформамідом (1,25 мл) і водою (0,5 мл). Суміш очищували за допомогою НРІС з оберненою фазою із застосуванням системи оіїЇ5оп, з елююванням від 10 до 9095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./06. трифтороцтової кислоти. Необхідні фракції об'єднували й висушували сублімацією з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-дв) б ррт 12,76 (в, 1Н), 9,91 (5, 1Н), 8,79 (5, 1Н), 7,98 (аа, 2Н), 7,72 (а, 2Н), 7,68-7,47 (т, ЗН), 7,47-7,00 (т, 7Н), 6,96-6,83 (т, ЗН), 5,93 (5, 1Н), 4,91 (а, ЗН), 4,30 (9, 1Н), 4,17-3,97 (т, АН), 3,96-3,53 (т, 4Н), 3,34-2,65 (т, 12Н), 2,25 (ї, 2Н), 2,16-1,67 (т, 12Н), 1,67-0,88 (т, 26Н), 0,84-0,70 (т, 12Н). М5 (ЕБІ) т/е 1513,6 (М.Н). 2.44 Синтез 4-Щ(1Е)-3-(Ц2-((3-(4-(6-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-5-(карбоксиметокси)- 3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)метилі|-5,7- диметилтрицикло!Ї3.3.1.12Лдец-1-иліокси)етилІ|(метил)карбамоїліокси)проп-1-ен-1-іл|-2-(1М-І(6- (2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-бета-аланіліаміно)феніл-бета-О- глюкопіранозидуронової кислоти (синтону І) 2.441 (Е)-трет-Бутилдиметил-((3-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-діоксаборолан-2- іл)уаліл)уокси)силан
У колбу, в яку завантажували трет-бутилдиметил(проп-2-ін-1-ілокси)силан (5г) і дихлорметан (14,7 мл), в атмосфері азоту додавали краплями 4,4,5,5-тетраметил-1,9,2- діоксаборолан (3,94 г). Суміш перемішували за кімнатної температури протягом однієї хвилини, потім переносили за допомогою канюлі у барботовану азотом колбу, що містила СргагСІН (хлоридобіс(п5-циклопентадієніл)гідридоцирконій, реагент Шварца) (379 мг). Одержану в результаті реакційну суміш перемішували за кімнатної температури протягом 16 годин. Суміш обережно гасили водою (15 мл) і потім екстрагували діетиловим етером (3 х 30 мл). Об'єднані органічні фази промивали водою (15 мл), висушували над Мд5О»4, фільтрували й очищували за допомогою хроматографії на силікагелі, із градієнтом елюювання етилацетатом/гептанами від 0 до 895, із одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕБІ) маса/заряд 316,0 (МАМН».)". 2.44.2. (25,38,45,55,65)-2-(4-Бром-2-нітрофенокси)-6-(метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н-піран- 3,4,5-триїлтриацетат (28,38,45,55,65)-2-Бром-6-(метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5-триїлтриацетат (5 г) розчиняли в ацетонітрилі (100 мл). У розчин додавали АдгО (2,92 г) та перемішували реакційну суміш протягом 5 хвилин за кімнатної температури. Додавали 4-бром-2-нітрофенол (2,74 г) та перемішували реакційну суміш за кімнатної температури протягом 4 годин. Залишок у вигляді солі срібла фільтрували через діатомову землю й фільтрат концентрували за зниженого тиску.
Залишок очищували за допомогою хроматографії на силікагелі, із градієнтом елюювання від 10 до 7095 етилацетату в гептанах, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (Е5ік) маса/заряд 550,9 (МАМН.)". 2.44.3 (25,38,45,55,65)-2-(4-(Е)-3-(трет-Бутилдиметилсиліл)окси)проп-1-ен-1-іл)-2- нітрофенокси)-6-(метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5-триїлтриацетат
Речовину із прикладу 2.44.2 (1 г), натрію карбонат (0,595 г), трис(дибензиліденацетон)дипаладій (Раг(ара)з) (0,086 г) і 1,3,5,7-тетраметил-б-феніл-2,4,8- триокса-6-фосфоадамантан (0,055 г) об'єднували в 3-горлій круглодонній колбі об'ємом 50 мл, обладнаній зворотним холодильником, і систему дегазували азотом. Окремо розчин речовини із прикладу 2.44.1 (0,726 г) в тетрагідрофурані (15 мл) дегазували азотом протягом 30 хвилин.
Останній одержаний розчин переносили за допомогою канюлі у колбу, що містила тверді бо реагенти і потім додавали дегазовану воду (З мл) за допомогою шприца. Реакційну суміш нагрівали до 60"С протягом двох годин. Реакційну суміш розподіляли між етилацетатом (З х 30 мл) і водою (30 мл). Об'єднані органічні фази висушували (Ма»5О4), фільтрували та концентрували. Залишок очищували за допомогою хроматографії на силікагелі, із градієнтом елюювання від 0 до 3595 етилацетату в гептанах, з одержанням указаної в заголовку сполуки.
М5 (ЕБІЖк) маса/заряд 643,1 (МеАМН».)". 2.4А.А (25,38,45,55,65)-2-(2-Аміно-4-((Е)-3-гідроксипроп-1-ен-1-іл)уфенокси)-6- (метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5-триїлтриацетат
В трьохгорлу, продуту азотом колбу об'ємом 500 мл, обладнану крапельною лійкою для вирівнювання тиску, вносили цинковий пил (8,77 г). Додавали дегазований розчин речовини із прикладу 2.44.3 (8,39 г) в тетрагідрофурані (67 мл) за допомогою канюлі. Одержану в результаті суспензію охолоджували на крижаній бані й додавали краплями 6 н. НСІ (22,3 мл) за допомогою крапельної лійки з такою швидкістю, що внутрішня температура реакційної суміші не перевищувала 35"С. Після завершення додавання реакційну суміш перемішували протягом двох годин за кімнатної температури й фільтрували через шар діатомової землі, при цьому прополіскували водою та етилацетатом. Фільтрат обробляли насиченим водним розчином
МансСо:з, доки водний шар не перестав бути кислотним, і суміш фільтрували з видаленням одержаних твердих речовин. Фільтрат переносили в ділильну лійку й розділяли шари. Водний шар екстрагували етилацетатом (3 х 75 мл) і об'єднані органічні шари промивали водою (100 мл), висушували над Маг5О.:, фільтрували та концентрували. Залишок розтирали в порошок за допомогою діетилового етеру і твердої речовини, зібраної шляхом фільтрації, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕБІ т) маса/заряд 482,0 (МАН). 2.44.5 (ЗН-Флуорен-9-іл)уметил-(З-хлор-3-оксопропіл)/укарбамат
У розчин 3-((9Н-флуорен-9-іл)уметокси)карбоніллуамінодупропанової кислоти (50г) у дихлорметані (53,5 мл) додавали тіонілхлорид (0,703 мл). Суміш перемішували при 60"С протягом однієї години. Суміш охолоджували й концентрували із одержанням указаної в заголовку сполуки, яку застосовували на наступній стадії без додаткового очищення. 2.44.6 (25,38,45,55,65)-2-(2-(3-((9Н-Флуорен-9-іл)метокси)карбоніл)аміно)пропанамідо)-4- (Е)-З-гідроксипроп-1-ен-1-ілуфенокси)-6-(метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5- триїлтриацетат
Зо Розчиняли речовину із прикладу 2.44.4 (6,78г) у дихлорметані (50 мл) й розчин охолоджували до 0"С на крижаній бані. Додавали М,М-дізопропілетиламін (3,64 г), потім додавали краплями розчин речовини із прикладу 2.44.5 (4,88 г) у дихлорметані (50 мл).
Реакційну суміш перемішували протягом 16 годин, забезпечуючи набуття крижаною банею кімнатної температури. Додавали насичений водний розчин Мансоз (100 мл) і шари розділяли.
Водний шар додатково екстрагували дихлорметаном (2 х 50 мл). Екстракти висушували над
Маг5О», фільтрували, концентрували та очищували за допомогою хроматографії на силікагелі, з градієнтом елюювання етилацетатом/гептаном, від 5 до 9595, з одержанням нероздільної суміші вихідного аніліну й необхідного продукту. Суміш розділяли між 1 н. водним розчином НС (40 мл) і сумішшю діетилового етеру та етилацетату,1:1 (40 мл) і потім водну фазу додатково екстрагували етилацетатом (2 х25 мл). Органічні фази об'єднували, промивали водою (2 х 25 мл), висушували над Маг5О.:, фільтрували й концентрували з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕБІк) маса/заряд 774,9 (М-АН)». 2.44.7 (25,38,45,55,65)-2-(2-(3-((9Н-Флуорен-9-іл)метокси)карбоніл)аміно)пропанамідо)-4- (Е)-3-((4-нітрофенокси)карбоніл)окси)проп-1-ен-1-ілуфенокси)-6-(метоксикарбоніл)тетрагідро- 2Н-піран-3,4,5-триїлтриацетат
Розчиняли речовину із прикладу 2.44.6 (3,57 г) у дихлорметані (45 мл) й додавали біс(4- нітрофеніл)карбонат (2,80 г), потім додавали краплями М,М-діїзопропілетиламін (0,896 г).
Реакційну суміш перемішували за кімнатної температури протягом двох годин. У розчин реакційної суміші додавали силікагель (20г) і суміш концентрували до сухого стану за зниженого тиску, підтримуючи температуру бані на рівні 25"С або нижче. Залишок силікагелю завантажували у верхню частину колонки і очищували продукт за допомогою хроматографії на силікагелі, з градієнтом елюювання етилацетатом-гептаном, від 0 до 10095, з одержанням частково очищеного продукту, який був забруднений нітрофенолом. Матеріал розтирали з метил-трет-бутиловим етером (250 мл) і забезпечували осадження одержаної зависі протягом 1 години. Продукт збирали шляхом фільтрації. Три наступні партії збирали подібним чином з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (Е5І т) маса/заряд 939,8 (МАН). 2.44.8 3-(1-((3-(2-((((Е)-3-(3-(3-Амінопропанамідо)-4-((25,38,45,55,65)-6-карбокси-3,4,5- тригідрокситетрагідро-2Н-піран-2-іл)уокси)феніл)аліл)/окси)карбоніл)(метил)аміно)етокси)-5,7- диметиладамантан-1-іл)уметил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)-6-(8-(бензо|д9|гіазол-2-ілкарбамоїл)-5- бо (карбоксиметокси)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл)піколінова кислота
У холодний (0"7С) розчин речовини із прикладу 2.44.7 (19,7 мг) й речовини із прикладу 1.41.3 (18,5 мг) в М,М-диметилформаміді (2 мл) додавали М,М-дізопропілетиламін (0,054 мл).
Реакційну суміш повільно нагрівали до кімнатної температури та перемішували протягом ночі. У реакційну суміш додавали воду (2 мл) й моногідрат гідроксиду літію (50 мг) та перемішували суміш протягом ночі. Суміш підкислювали трифтороцтовою кислотою й фільтрували. Суміш очищували за допомогою НРІС з оберненою фазою (система сіїзоп), з елююванням 10-8595 ацетонітрилу в 0,195 розчині трифтороцтової кислоти у воді, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕБІ) т/е 1273,2 (МАН). 2.44.9 А-К1 Є)-3-ЦТ2-(13-((4-16-(І8-(1,3-Бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-5-(карбоксиметокси)-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)уметилі/д-5,7- диметилтрицикло!|3.3.1.19-Лдец-1-иліюкси)етил|(метил)карбамоїл)іокси)проп-1-ен-1-іл|-2-(1М-(6- (2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)угексаноїл|-бета-аланіл)іаміно)феніл-бета-О- глюкопіранозидуронова кислота
У розчин речовини із прикладу 2.44.8 (10 мг) й 2,5-діоксопіролідин-1-іл-6-(2,5-діоксо-2,5- дигідро-1Н-пірол-1-іл)угексаноату (2,3 мг) в М,М-диметилформаміді (2 мл) додавали М,М- діізопропілетиламін (0,054 мл). Реакційну суміш перемішували протягом ночі. Реакційну суміш розбавляли метанолом (2 мл) і підкислювали трифтороцтовою кислотою. Суміш очищували за допомогою НРІС з оберненою фазою (система сіївоп), з елююванням від 10 до 8595 ацетонітрилу в 0,195 розчині трифтороцтової кислоти у воді, з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-ав) б ррт 12,70 (5, 1Н), 9,03 (5, 1Н), 8,25 (5, 1Н), 8,01 (а, 1Н), 7,87 (1, 1), 7,77 (а, 1), 7,69 (9, 1), 7,41-7,55 (т, 2Н), 7,23-7,38 (т, 2Н), 6,79- 7,16 (т, 7Н), 6,56 (9, 1Н), 6,09-6,25 (т, 1Н), 4,96-5,07 (т, ЗН), 4,84 (5, ЗН), 4,64 (а, ЗН), 3,87-3,97 (т, 5Н), 3,24-3,47 (т, 12Н), 2,77-2,95 (т, 6Н), 1,94-2,08 (т, 6Н), 0,92-1,56 (т, 2ОН), 0,74-0,86 (т, 6Н). М5 (ЕБІ) т/е 1487,3 (М--Ма)». 2.А5 Синтез М-І6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-І -валіл-М-14-(ЦТ2-(13-((4-16-
ІВ-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)нафталін-2-іл|-2-карбоксипіридин-3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1- іл)метил|-5,7-диметилтрицикло!/3.3.1.15Ядец-1-иліокси)етил|-(2- сульфоетил)карбамоїл)окси)метилі|феніл)-М»-карбамоїл-і -орнітинаміду (синтону ІР)
Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 1.43.7
Зо речовиною із прикладу 2.5.3 в прикладі 2.5.4. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-дв) б ррт 13,09 (5, 1Н), 9,99 (5, 1Н), 9,02 (5, 1Н), 8,30-8,40 (т, ЗН), 7,93-8,25 (т, 6Н), 7,23-7,86 (т, ТОН), 6,92-7,05 (т, 2Н), 4,99 (ад, 2Н), 4,36-4,44 (т, 2Н), 4,14-4,23 (т, 2Н), 2,87-3,35 (т, 12Н),, 2,81 (ї, 2Н), 2,59-2,70 (т, 2Н), 1,84-2,28 (т, 8Н), 0,97-1,77 (т, 2ОН), 0,77-0,88 (т.10Н). М5 (Е5І) т/е 1448,3 (М--Ма)». 2.46 Синтез М-І6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-І -валіл-М-І4--1(2-118-(1,3- бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-2-(6-карбокси-5-11-(3,5-диметил-7-(2-Іметил-(2- сульфоетил)аміно|етокси)трицикло!|3.3.1.157|)дец-1-ил)метил|-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)піридин-2- іл)-1,2,3,4-тетрагідроізохінолін-5-іл|окси)етил)карбамоїл|окси)метил)феніл|-Мо-карбамоїл-ї - орнітинаміду (синтону ІБ)
Вказану в заголовку сполуку одержували, як описано в прикладі 2.1, шляхом заміни речовини із прикладу 1.2.9 речовиною із прикладу 1.46.2. "Н ЯМР (400 МГу, диметилсульфоксид-ав) б ррт 12,69 (5, 1Н), 9,97 (5, 1Н), 8,97 (5, 1Н), 8,04 (да, 2Н), 7,78 (а, 2Н), 7,71 (а, тн), 7,59 (а, 2Н), 7,44-7,54 (т, ЗН), 7,26-7,37 (т, 4Н), 6,96-7,03 (т, 4Н), 5,97 (5, 1Н), 4,99 (9, 4Н), 4,31-4,45 (т, 1Н), 4,18 (аа, 1Н), 4,09 (5, 2Н), 3,85-3,93 (т, 2Н), 3,83 (5, 2Н), 3,39-3,47 (т, 2Н), 3,24-3,39 (т, 4Н), 3,12-3,24 (т, 2Н), 2,75-3,07 (т, 9Н), 2,06-2,23 (т, 5Н), 1,90-2,01 (т, 1Н), 1,54-1,75 (т, 2Н), 1,24-1,52 (т, 12Н), 0,91-1,24 (т, 8Н), 0,77-0,88 (т, 12Н). М5 (ЕБІ) т/е 15254 (МАН. 2.47 Синтез М-І6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-І -валіл-М-І4--1(2-118-(1,3- бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-2-(6-карбокси-5-11-(3,5-диметил-7-(2-Іметил-(2- сульфоетил)аміно|етокси)трицикло!|3.3.1.157дец-1-ил)метил|-5-метил-1Н-піразол-4-іл)іпіридин-2- іл)-1,2,3,4-тетрагідроізохінолін-5-іл|окси)етил)-(2-сульфоетил)карбамоїл|окси)метил)феніл|-Мо- карбамоїл-І -орнітинаміду (синтону 10)
Вказану в заголовку сполуку одержували, як описано в прикладі 2.1, шляхом заміни речовини із прикладу 1.2.9 речовиною із прикладу 1.47.2. "Н ЯМР (400 МГу, диметилсульфоксид-ав) б ррт 12,70 (5, 1Н), 9,99 (5, 1Н), 8,97 (5, 1Н), 8,04 (да, 2Н), 7,78 (а, 2Н), 7,71 (9, тн), 7,59 (а, 2Н), 7,43-7,55 (т, 2Н), 7,28-7,37 (т, 4Н), 6,94-7,07 (т, 4Н), 6,05 (5, 1Н), 4,93- 5,11 (т, 4Н), 4,31-4,46 (т, 2Н), 4,12-4,26 (т, АН), 3,80-3,95 (т, 4Н), 3,40-3,50 (т, 2Н), 3,24-3,40 (т, 6Н), 3,13-3,24 (т, 2Н), 2,74-3,08 (т, 9Н), 2,63-2,73 (т, 2Н), 2,05-2,23 (т, 5Н), 1,96 (5, 1Н), 1,52-1,77 (т, 2Н), 1,23-1,53 (т, 12Н), 0,97-1,22 (т, 8Н), 0,77-0,89 (т, 12Н). М5 (ЕБІ) т/е 1631,5 (510) (М-НУ.
ЗБ2
2.А8 Синтез М-І6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-І-валіл-М-І(4-((2-Щ2-(3-(4- 16-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-іл)-5- метил-1Н-піразол-1-іл)метил)|-5,7-диметилтрицикло!/3.3.1.127|)дец-1-иліокси)етиліц-(2- сульфоетил)аміно)етил)-(2-сульфоетил)карбамоїл|окси)метил)феніл|-М-карбамоїл-ї - орнітинаміду (синтону ІМ)
Вказану в заголовку сполуку одержували, як описано в прикладі 2.1, шляхом заміни речовини із прикладу 1.2.9 речовиною із прикладу 1.48.2. "Н ЯМР (400 МГу, диметилсульфоксид-авє) б ррт 12,82 (5, 1Н), 10,00 (5, 1Н), 9,29-9,57 (т, 1Н), 8,05 (її, 2Н), 7,79 (а, 2Н), 7,51-7,63 (т, 4Н), 7,40-7,50 (т, 2Н), 7,27-7,39 (т, 5Н), 6,93-7,02 (т, ЗН), 4,99 (9, ЗН), 4,30- 104,47 (т, 1Н), 4,19 (1, 1Н), 3,79-3,92 (т, ЗН), 3,60-3,74 (т, 2Н), 3,01 (5, 9Н), 2,70 (а, 4Н), 2,05-2,23 (т, 6Н), 1,96 (а, 2Н), 1,53-1,78 (т, ЗН), 1,22-1,54 (т, 1ЗН), 0,89-1,22 (т, 9Н), 0,75-0,89 (т, 1ЗН).
М5 (ЕБІ) т/е 1603,3 (М.Н). 2.49 Синтез М-16-Кхлорацетил)аміно|гексаноїл)-І -валіл-М-14-(112-(13-((4-16-(8-(1,3- бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-іл)-5-метил-1 Н- піразол-1-іл)уметил|-5,7-диметилтрицикло!/3.3.1.137)дец-1-иліокси)етил|-(2- сульфоетил)карбамоїл)окси)метилі|феніл)-М-карбамоїл-і -орнітинаміду (синтону 17) 2.49.1 3-(1-(417531)-3-(2-((4-((5)-2-((5)-2-Аміно-3-метилбутанамідо)-5- уреїдопентанамідо)бензил)окси)карбоніл)-(2-сульфоетил)аміно)етокси)-5,7-диметиладамантан- 1-іл)уметил)-5-метил-1Н-піразол-4-іл)-6-(8-(бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін- 2(1Н)-іл)піколінова кислота
Розчин речовини із прикладу 1.2.9 (0,045 г), (ЗН-флуорен-9-іл)метил-((5)-3-метил-1-(((5)-1- (4-(((4-нітрофенокси)карбоніл)окси)метил)феніл)аміно)-1-оксо-5-уреїдопентан-2-іл)аміно)-1- оксобутан-2-іл)укарбамату (0,043 г) й М,М-діїізопропілетиламіну (0,041 мл) перемішували разом в
М,М-диметилформаміді (1 мл) за кімнатної температури. Після перемішування протягом ночі у реакційну суміш додавали дієтиламін (0,024 мл) та перемішування продовжували протягом 2 годин. Реакційну суміш гасили трифтороцтовою кислотою, потім очищували за допомогою
НРІС з оберненою фазою із застосуванням системи сіїбоп, з елююванням від 10 до 7595 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./0б. трифтороцтової кислоти. Необхідні фракції об'єднували й висушували сублімацією з одержанням указаної в заголовку сполуки.
Зо 2.49.2... М-(6-КХлорацетил)аміно|гексаноїл)-І -валіл-М-4-(2-(13-(4-16-І(8-(1,3-бензотіазол-2- ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1- ілуметил|-5,7-диметилтрицикло!/3.3.1.157)дец-1-илюкси)етилі|-(2- сульфоетил)карбамоїлоюкси)метиліІфеніл)-Мо-карбамоїл-і -орнітинамід
У розчин 6-(2-хлорацетамідо)гексанової кислоти (6,43 мг) й 2-(З3Н-П1,2,3|Ігриазолої|4,5-
Б|піридин-3-іл)-1,1,3,3-тетраметилізоуронію гексафторфосфату(м) (0,012 г) в М,М- диметилформаміді (0,5 мл) додавали М,М-діїззопропілетиламін (0,019 мл) та перемішували реакційну суміш протягом 5 хвилин. Даний розчин додавали до речовини із прикладу 2.49.1 (0,026 г) та перемішували протягом 1 години. Реакційну суміш розбавляли /М,М- диметилформамідом (1 мл) і водою (0,5 мл). Суміш очищували за допомогою НРІС з оберненою фазою із застосуванням системи біїЇзоп, з елююванням від 10 до 6095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./0б. трифтороцтової кислоти. Необхідні фракції об'єднували й висушували сублімацією з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (500 МГц, диметилсульфоксид-авє) б ррт 12,85 (5, 1Н), 9,99 (5, 1Н), 8,18 (9, 1Н), 8,08 (а, 1), 8,04 (а, 1Н), 7,84-7,76 (т, 2Н), 7,64-7,56 (т, ЗН), 7,56-7,50 (т, 1Н), 7,47 (Її, 1Н), 7,43 (а, 1Н), 7,37 (а, 1Н), 7,35 (9, 1Н), 7,29 (5, 1Н), 7,27 (9, 2Н), 6,95 (9, 1Н), 6,05 (5, 1Н), 5,05-4,91 (т, 4Н), 4,48-4,33 (т, 1Н), 4,26-4,14 (т, 1Н), 4,02 (5, 2Н), 3,88 (ї, 2Н), 3,81 (а, 2Н), 5,25 (І, 2Н), 3,14-2,98 (т, 6Н), 2,98-2,87 (т, 2Н), 2,74-2,59 (т, 2Н), 2,27-2,05 (т, 6Н), 2,04-1,92 (т, 1Н), 1,78-1,65 (т, 1Н), 1,65-1,53 (т, 1Н), 1,53-0,90 (т, 22Н), 0,90-0,73 (т, 12Н). М5 (ЕБІ) т/е 14482 (М.Н) ». 2.50 Синтез М-І6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-І -валіл-М-14-(ЦТ2-(13-((4-16-
БО ІД-(1,93-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідро-2Н-1 ,4-бензоксазин-б-іл|-2-карбоксипіридин-3З-іл)-
Б-метил-1Н-піразол-1-іл)метилі|-5,7-диметилтрицикло|3.3.1.13Л)дец-1-ил)окси)етил|-(2- сульфоетил)карбамоїл)окси)метил|феніл)-М»-карбамоїл-І -орнітинаміду (синтону 90)
Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 1.51.8 речовиною із прикладу 2.5.3 в прикладі 2.5.4. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-дв) б ррт 9,56 (5, 1Н), 8,51-8,59 (т, 1Н), 7,89 (а, 1Н), 7,82 (а, 1Н), 7,69-7,77 (т, 2Н), 7,34-7,62 (т, 7Н), 7,16- 7,34 (т, АН), 6,95 (аа, 1Н), 5,95-6,05 (т, 1Н), 4,95 (5, 2Н) , 4,06-4,44 (т, 6Н), 3,85 (5, ЗН), 3,39- 3,59 (т, 7Н), 2,61-2,74 (т, ЗН), 2,19 (5, ЗН), 1,88-2,16 (т, ЗН), 0,96-1,75 (т, 22Н), 0,71-0,89 (т, 1З3Н). М5 (ЕБІ) т/е 14542 (М.-Ма)». 2.51 Синтез М-І6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-І -валіл-М-І4--1(2-118-(1,3- 60 бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-2-(6-карбокси-5-(1-((3,5-диметил-7-(2-І(метил-(2-
сульфоетил)аміно|етокси)трицикло!|3.3.1.157|)дец-1-ил)метил|-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)піридин-2- іл)-1,2,3,4-тетрагідроізохінолін-5-іл|окси)етил)-(2-карбоксиетил)карбамоїл|окси)метил)феніл|-Ме- карбамоїл-І -орнітинаміду (синтону Е)
Вказану в заголовку сполуку одержували, як описано в прикладі 2.1, шляхом заміни речовини із прикладу 1.2.9 речовиною із прикладу 1.49.2. "НН ЯМР (500 МГу, диметилсульфоксид-ав) б ррт 12,71 (5, 1Н), 10,00 (5, 1Н), 8,97 (5, 1Н), 8,08 (а, 1Н), 8,02 (а, 1Н), 7,78 са, 2н), 7,72 (а, 1н), 7,60 (а, 2н), 7,52 (а, 1н), 7,44-7,50 (т, 1Н), 7,27-7,39 (т, 4Н), 6,96-7,06 (т, ЗН), 5,98 (5, 1Н), 5,01 (а, 4Н), 4,31-4,46 (т, 1Н), 4,18 (5, ЗН), 3,79-3,95 (т, 4Н), 3,67-3,76 (т, 2Н), 3,12-3,39 (т, 6Н), 2,73-3,07 (т, 8Н), 2,04-2,24 (т, 4Н), 1,87-2,02 (т, 1Н), 1,22-1,75 (т, 12Н), 0,96-1,20 (т, 7Н), 0,76-0,90 (т, 10Н). М5 (ЕБІ) т/е 15974 (М.Н) ». 2.52 Синтез М-І6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-І -валіл-М-14-(ЦТ2-(13-((4-16-
ІВ-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-5-(3-сульфопропокси)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-2- карбоксипіридин-3-іл)-5о-метил-!1 Н-піразол-1-іл)метил)|-5, 7-диметилтрициклоїЇ3.3.1.197|дец-1- ил)окси)етилі|(метил)карбамоїл)окси)метилі|феніл)-М»-карбамоїл-І -орнітинаміду (синтону УК)
Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 1.52.4 речовиною із прикладу 2.5.3 в прикладі 2.5.4. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-дв) б ррт 9,97 (5, 1Н), 7,96-8,11 (т, 2Н), 7,67-7,82 (т, ЗН), 7,59 (а, 2Н), 7,42-7,52 (т, 2Н), 7,23-7,36 (т, 4Н), 6,91-7,08 (т, АН), 4,99 (а, 4Н), 4,33-4,47 (т, 1Н), 4,14-4,23 (т, АН), 3,86-3,95 (т, 6Н), 3,21-3,45 (т, 15Н), 2,75-3,07 (т, 9Н), 2,56-2,69 (т, 2Н), 1,93-2,20 (т, 8Н), 0,88-1,72 (т, 2ОН), 0,74-0,89 (т, 11). М5 (Е5І) т/е 1496,3 (М--Ма) ». 2.53 Синтез М-І3-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)упропаноїл|-І -валіл-М-14-(ЦТ2-(13-((4-16-
ІВ-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-З-іл)-5- метил-1Н-піразол-1-іл)уметил|-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.12Л)дец-1-иліокси)етил|-(2- сульфоетил)карбамоїліокси)метилі|феніл)-М»-карбамоїл-і! -орнітинаміду (синтону У)
Розчин речовини із прикладу 2.49.1 (0,030 г), 2,5-діоксопіролідин-1-іл-3-(2,5-діоксо-2,5- дигідро-1Н-пірол-1-ілупропаноату (6,34 мг) й М,М-дізопропілетиламіну (0,012 мл) в М,М- диметилформаміді (0,5 мл) перемішували за кімнатної температури. Через 1 годину реакційну суміш гасили сумішшю М,М-диметилформамід:вода 3:1 (1,5 мл). Суміш очищували за допомогою НРІ С з оберненою фазою із застосуванням системи сіїзоп, з елююванням від 10 до
Зо 8595 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./о0б. трифтороцтової кислоти. Необхідні фракції об'єднували й висушували сублімацією з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (500 МГц, диметилсульфоксид-йвє) б ррт 12,85 (5, 1Н), 9,99 (5, 1Н), 8,18 (д, 1Н), 8,12-8,00 (т, 2Н), 7,86-7,75 (т, 2Н), 7,65-7,55 (т, ЗН), 7,53 (аа, 1Н), 7,47 (1, 1Н), 7,43 (а, 1Н), 7,36 (ад, 2Н), 7,33- 7,23 (т, ЗН), 6,95 (а, 1Н), 6,05 (5, 1Н), 5,03-4,92 (т, 4Н), 4,39 (д, 1Н), 4,24-4,14 (т, 1Н), 4,02 (5, 2Н), 3,88 (ї, 2Н), 3,81 (а, 2Н), 3,39-3,16 (т, 2Н), 3,14-2,86 (т, ТОН), 2,68-2,60 (т, 2Н), 2,25-2,04 (т, 6Н), 2,03-1,90 (т, 1Н), 1,78-1,65 (т, 1Н), 1,64-1,54 (т, 1Н), 1,54-0,90 (т, 2ОН), 0,89-0,75 (т, 12Н). М5 (Е5І) т/е 14101 (МаАН)». 2.54 Синтез М-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)уацетил|)-Ї -валіл-М-14-((Т2-(13-((4-16-(8- (1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-іл)-5-метил- 1Н-піразол-1-іл)метил/|-5,7-диметилтрицикло!/3.3.1.12Лдец-1-ил)окси)етил|-(2- сульфоетил)карбамоїл)окси)метил|феніл)-М»-карбамоїл-І -орнітинаміду (синтону І.)
Розчин речовини із прикладу 2.49.1 (0,039 г), 2,5-діоксопіролідин-1-іл-2-(2,5-діоксо-2,5- дигідро-1Н-пірол-1-іллацетату (7,81 мг) й М,М-діїзопропілетиламіну (0,016 мл) в М,М- диметилформаміді (0,5 мл) перемішували за кімнатної температури. Через 1 годину реакційну суміш гасили сумішшю М,М-диметилформамід:вода 3:1 (1,5 мл). Суміш очищували за допомогою НРІ С з оберненою фазою із застосуванням системи сіїзоп, з елююванням від 10 до 8595 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./о0б6. трифтороцтової кислоти. Необхідні фракції об'єднували й висушували сублімацією з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (400 МГу, диметилсульфоксид-ав) б ррт 12,85 (5, 1Н), 10,00 (а, 1Н), 8,24 (а, 2Н), 8,04 (а, тн), 7,79 (9, 1Н), 7,59 (д, ЗН), 7,53 (ад, 1Н), 7,47 (її, 1Н), 7,43 (а, 1Н), 7,36 (4, 2Н), 7,30 (5, 1Н), 7,27 (й, 2Н), 7,07 (5, 2Н), 6,96 (а, 1Н), 5,04-4,85 (т, АН), 4,39 (д, 2Н), 4,26 (ад, 2Н), 4,13 (5, 2Н), 3,86-3,17 (т, 8Н), 3,07-2,81 (т, АН), 2,63 (1, 2Н), 2,09 (5, ЗН), 2,03-1,79 (т, 1Н), 1,75-1,51 (т, 2Н), 1,51-1,03 (т, 12Н), 1,01-0,76 (т, 16Н). М5 (ЕБІ) т/е 13944 (М-Н). 2.55 Синтез 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-(1-((3-(2- 550 2г5)-2-3(4-Д(25,38,45,55,65)-6-карбокси-3,4,5-тригідрокситетрагідро-2Н-піран-2-іл|окси)-3-((3- (Ц6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1- іл)угексаноїл|аміно)пропаноїл)аміно|бензил)окси|карбоніл)аміно )-3- сульфопропаноїл|(метил)аміно)етокси)-5,7-диметилтрицикло|3.3.1.127|)дец-1-ил|метил)-5-метил- 1Н-піразол-4-іл)піридин-2-карбонової кислоти (синтону ЕЕ) (510) 2.55.1 (25,38,45,55,65)-2-(4-Форміл-2-нітрофенокси)-6-(метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н-
піран-3,4,5-триїлтриацетат
У розчин (2Е,3К,45,55,65)-2-бром-6-(метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5- триїлтриацетату (4 г) в ацетонітрилі (100 мл)) додавали оксид срібла(І) (10,04 г) й 4-гідрокси-3- нітробензальдегід (1,683 г). Реакційну суміш перемішували протягом 4 годин за кімнатної температури й фільтрували. Фільтрат концентрували і залишок очищували за допомогою хроматографії на силікагелі, з елююванням від 5 до 5095 етилацетату в гептанах, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕБІ) т/е (М--18)7. 2.55.2 (25,38,45,55,65)-2-(4-(Гідроксиметил)-2-нітрофенокси)-6- (метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5-триїлтриацетат
У розчин речовини із прикладу 2.55.1 (6 г) в суміші хлороформу (75 мл) й ізопропанолу (18,75 мл) додавали 0,87 г силікагелю. Одержану суміш охолоджували до 0"С, додавали Мавна (0,470 г) ії одержану суспензію перемішували при 0"С протягом 45 хвилин. Реакційну суміш розбавляли дихлорметаном (100 мл) і фільтрували через діатомову землю. Фільтрат промивали водою та сольовим розчином і концентрували з одержанням неочищеного продукту, який застосовували без додаткового очищення. М5 (ЕІ) т/е (МеАМНа)": 2.55.3 (25,38,45,55,65)-2-(2-Аміно-4-(гідроксиметилуфенокси)-6- (метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5-триїлтриацетат
Гідрували перемішуваний розчин речовини із прикладу 2.55.2 (7 г) в етилацетаті (81 мл) при 2070 за тиску 1 атмосфери Не, із застосуванням 1095 Ра/С (1,535 г) як каталізатора протягом 12 годин. Реакційну суміш фільтрували через діатомову землю та випарювали розчинник за зниженого тиску. Залишок очищували за допомогою хроматографії на силікагелі, з елююванням дихлорметаном/метанолом, 95/5, з одержанням указаної в заголовку сполуки. 2.55.4 3-((9Н-Флуорен-9-іл)метокси)карбоніл)аміно)пропанова кислота
Розчиняли З-амінопропанову кислоту (4,99 г) в 1095 водному розчині МагбОз (120 мл) в колбі об'ємом 500 мл та одержане охолоджували на крижаній бані. В одержаний розчин поступово додавали (9Н-флуорен-9-ілуметилхлорформіат (14,5 г) в 1,4-діоксані (100 мл).
Реакційну суміш перемішували за кімнатної температури протягом 4 годин і потім додавали воду (800 мл). Шар водної фази відділяли від реакційної суміші та промивали діетиловим етером (З х 750 мл). Водний шар підкислювали 2 н. водним розчином НСІ до значення рн 2 та
Зо екстрагували етилацетатом (3 х750 мл). Органічні шари об'єднували й концентрували з одержанням неочищеного продукту. Неочищений продукт перекристалізовували у змішаному розчиннику етилацетат:гексан 1:2 (300 мл) з одержанням указаної в заголовку сполуки. 2.55.5 (ЗН-Флуорен-9-іл)метил-(З-хлор-3-оксопропіл)/укарбамат
У розчин речовини із прикладу 2.55.4 у дихлорметані (160 мл) додавали тіонілхлорид (50 мл). Суміш перемішували при 6б0"С протягом 1години. Суміш оохолоджували й концентрували з одержанням указаної в заголовку сполуки. 2.55.6. (25,38,45,55,65)-2-(2-(3-((9Н-Флуорен-9-іл)метокси)карбоніл)аміно)пропанамідо)-4- (гідроксиметил)фенокси)-6-(метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5-триїлтриацетат
У розчин речовини із прикладу 2.55.3 (бг) у дихлорметані (480 мл) додавали М,М- діізопропілетиламін (4,60 мл). Додавали речовину із прикладу 2.55.5 (5,34г) і суміш перемішували за кімнатної температури протягом 30 хвилин. Суміш виливали у насичений водний розчин бікарбонату натрію та екстрагували етилацетатом. Об'єднані екстракти промивали водою й сольовим розчином та висушували над сульфатом натрію. Після фільтрування й концентрування одержували залишок, який очищували за допомогою радіальної хроматографії із застосуванням від 0 до 10095 етилацетату в петролейному етері як рухомої фази, з одержанням указаної в заголовку сполуки. 2.55.7. (25,38,45,55,65)-2-(2-(3-((9Н-Флуорен-9-іл)метокси)карбоніл)аміно)пропанамідо)-4- ((4-нітрофенокси)карбоніл)уокси)метил)фенокси)-6-(метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5- триїлтриацетат
У суміш речовини із прикладу 2.55.6 (5,1 г) в М,М-диметилформаміді (200 мл) додавали біс(4-нітрофеніл)карбонат (4,14 г) і М,М-діізопропілетиламін (1,784 мл). Суміш перемішували протягом 16 годин за кімнатної температури й концентрували за зниженого тиску. Неочищений матеріал розчиняли у дихлорметані, аспірували безпосередньо на 1 мм планшет Спготацоїгоп для радіальної хроматографії та застосовували елюювання від 50 до 10095 етилацетату в гексанах, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕБІ) т/е (М--Н)». 2.55.8 3-(1-((3-(2-(8)-2-((3-(3-Амінопропанамідо)-4-((25,38,45,55,65)-6-карбокси-3,4,5- тригідрокситетрагідро-2Н-піран-2-іл)уокси)бензил)окси)карбоніл)аміно)-М-метил-3- сульфопропанамідо)етокси)-5,7-диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)-6-(8- (бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл)піколінова кислота бо Перемішували розчин речовини із прикладу 1.13.7 (0,055 г) і речовини із прикладу 2.55.7
(0,055г) разом в М,М-диметилформаміді (1,5 мл) та додавали М,М-дізопропілетиламін (0,053 мл). Після перемішування протягом З годин реакційну суміш розбавляли етилацетатом (75 мл) і промивали водою (20 мл) й сольовим розчином (25 мл), висушували над сульфатом магнію, фільтрували та концентрували. Залишок розчиняли в метанолі (1 мл) й обробляли гідратом гідроксиду літію (0,025 г) у воді (0,6 мл). Після перемішування протягом 2 годин реакційну суміш гасили трифтороцтовою кислотою (0,047 мл) й розбавляли /-М,М- диметилформамідом (1 мл). Суміш очищували за допомогою НРІС з оберненою фазою із застосуванням системи сіїзоп, з елююванням від 10 до 8095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./06. трифтороцтової кислоти. Необхідні фракції об'єднували й висушували сублімацією з одержанням указаної в заголовку сполуки у вигляді солі трифтороцтової кислоти. 2.55.9. 6-І8-(1,3-Бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-(1-13-(2-1(25)-2- (К4-((25,38,45,55,65)-6-карбокси-3,4,5-тригідрокситетрагідро-2Н-піран-2-іл|окси)-3-|(3-116-(2,5- діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-ілугексаноїліамінозпропаноїл)аміно|бензил)окси|карбоніліаміно) -3- сульфопропаноїл)(метил)аміно)етокси)-5,7-диметилтрицикло|3.3.1.15Ядец-1-ил|метил)-5-метил- 1Н-піразол-4-іл)піридин-2-карбонова кислота
Перемішували розчин речовини із прикладу 2.55.8 (0,013 г) й 2,5-діоксопіролідин-1-іл-6-(2,5- діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)угексаноату (3,07 мг) в М,М-диметилформаміді (1 мл) та додавали М,М-діїзопропілетиламін (7,90 мкл). Реакційну суміш перемішували протягом 1 години й розбавляли М,М-диметилформамідом і водою. Суміш очищували за допомогою НРІС з оберненою фазою із застосуванням системи біїЇзоп, з елююванням від 10 до 7595 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./06б. трифтороцтової кислоти. Необхідні фракції об'єднували й висушували сублімацією з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (400 МГЦ, диметилсульфоксид-авє) б ррт 12,84 (5, 1Н), 9,07 (5, 1Н), 8,15 (5, 1Н), 8,04 (й, 1Н), 7,89 (І, 1Н), 7,79 (а, 1), 7,61 (а, 1Н), 7,56-7,50 (т, 1Н), 7,47 (Її, 1Н), 7,43 (а, 1Н), 7,39-7,32 (т, 2Н), 7,91 (в, 1Н), 7,28 (а, 1Н), 7,06 (а, 1Н), 7,04-6,92 (т, 4Н), 5,00-4,79 (т, 5Н), 4,73-4,64 (т, 1Н), 3,94-3,78 (т,
АН), 3,57-2,84 (т, 12Н), 2,84-2,56 (т, 6Н), 2,14-1,73 (т, 5Н), 1,57-0,89 (т, 22Н), 0,84 (5, 6Н). М5 (ЕБІ) т/е 15162 (М-НУ. 2.56 Синтез 4-(1Е)-3-(Ц2-((3-(4-(2-карбокси-6-(8-(11,3|гіазоло(5,4-б|Іпіридин-2-ілкарбамоїл)- 3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|піридин-З-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)метил/-5, 7- диметилтрицикло|3.3.1.12Лдец-1-иліокси)етилі|-(2-сульфоетил)карбамоїл)окси)проп-1-ен-1-іл|-2- ((М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-бета-аланіліаміно)феніл-бета-О- глюкопіранозидуронової кислоти (синтону 10) 2.56.1 3-(1-((3-(2-((((Е)-3-(3-(3-Амінопропанамідо)-4-((25,38,45,55,65)-6-карбокси-3,4,5- тригідрокситетрагідро-2Н-піран-2-іл)окси)феніл)аліл)окси)карбоніл)-(2- сульфоетил)аміно)етокси)-5, 7-диметиладамантан-1 -іл)уметил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)-6-(8- (тіазоло|5,4-б|піридин-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл)піколінова кислота
Розчиняли речовину із прикладу 1.22.5 (48 мг) в диметилформаміді (0,5 мл) та додавали речовину із прикладу 2.44.7 (55 мг) й М,М-діїзопропілетиламін (90 мкл). Реакційну суміш перемішували за кімнатної температури протягом ночі. Реакційну суміш концентрували, і залишок розчиняли в метанолі (1 мл) та додавали 1,94 н. водний розчин ІОН (0,27 мл). Суміш перемішували за кімнатної температури протягом однієї години. Під час очищення суміші за допомогою хроматографії з оберненою фазою (колонка С18), з елююванням від 10 до 9095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./06. трифтороцтової кислоти, одержували вказану в заголовку сполуку у вигляді солі трифтороцтової кислоти. М5 (Е5І-) т/е 12914 (М-Н). 2.56.2 АТ Е)-3-(12-(3-(4-(2-Карбокси-6-І8-(1,3гіазоло|5,4-б|Іпіридин-2-ілкарбамоїл)-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|Іпіридин-3-іл)у-5-метил-1 Н-піразол-1-ілуметилі|-5, 7- диметилтрицикло!|3.3.1.19-Ядец-1-иліокси)етил|-(2-сульфоетил)карбамоїл)окси)проп-1-ен-1-іл|-2- (1ч-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)угексаноїл|-бета-аланіл)іаміно)феніл-бета-О- глюкопіранозидуронова кислота
Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 1.56.1 речовиною із прикладу 1.2.9 в прикладі 2.1. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-йв) б ррт 13,00 (м Бі 5, 1Н), 9,03 (5, 1Н), 8,53 (ай, 1Н), 8,24 (5, 1Н), 8,16 (ад, 1Н), 7,90 (Бе 5, 1Н), 7,61 (а, 1Н), 7,54 (9, 1) 7,52 (а, 1Н), 7,44 (9, 1Н), 7,37 (І, 1), 7,30 (5, 1Н), 7,11 (ра, 1Н), 7,03 (9, 1Н), 6,98 (5, 2Н), 6,97 (а, 1Н), 6,58 (т, 1Н), 6,15 (т,1Н), 4,96 (5, 2Н), 4,88 (Бі т, 1 Н), 4,64 (рі т, 2Н), 3,88 (т,
ЗН), 3,79 (рг т, 2Н), 3,27-3,48 (т, 14Н), 3,01 (т, 2Н), 2,67 (рг т, 2Н), 2,54 (т, 2Н), 2,09 (5, ЗН), 2,03 (, 2Н), 1,45 (т, 6Н), 1,37 (рг т, 2Н), 1,28-0,90 (т, ТОН), 0,77-0,82 (т, 6Н). М5 (Е5І) т/е 1484,4 (М-Н). 2.57 Синтез 4-К1Е)-3-(Ц2-((3-(4-(2-карбокси-6-(8-(11,3|гіазоло|4,5-В|Іпіридин-2-ілкарбамоїл)- 3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|піридин-З-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)метил/-5, 7- 60 диметилтрицикло!|З3.3.1.19Л|дец-1-иліокси)етил|-(2-сульфоетил)карбамоїл)окси)проп-1-ен- 1-іл|-2-
((М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-бета-аланіліаміно)феніл-бета-О- глюкопіранозидуронова кислота (синтону СІМ) 2.57 3-(1-((3-(2-(((Е)-3-(3-(3-Амінопропанамідо)-4-((25,38,45,55,65)-6-карбокси-3,4,5- тригідрокситетрагідро-2Н-піран-2-іл)окси)феніл)аліл)окси)карбоніл)-(2- сульфоетил)аміно)етокси)-5, 7-диметиладамантан-1 -іл)уметил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)-6-(8- (тіазоло(4,5-б|Іпіридин-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл)піколінова кислота
Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 1.23.4 речовиною із прикладу 1.22.5 в прикладі 2.56.1. М5 (ЕІ) т/е 1291,4 (М-Н). 2.57.2 А-К1Т Е)-3-ЦТ12-(3-(4-12-Карбокси-6-І8-(1,3)гіазоло|4,5-б|Іпіридин-2-ілкарбамоїл)-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|Іпіридин-3-іл)у-5-метил-1 Н-піразол-1-ілуметилі|-5, 7- диметилтрицикло!|3.3.1.19-Ядец-1-иліокси)етил|-(2-сульфоетил)карбамоїл)окси)проп-1-ен-1-іл|-2- (1ч-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)угексаноїл|-бета-аланіл)іаміно)феніл-бета-О- глюкопіранозидуронова кислота
Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 1.57.1 речовиною із прикладу 1.2.9 в прикладі 2.1. "Н ЯМР (500 МГц, диметилсульфоксид-йв) б ррт 9,03 (5, 1Н), 8,72 (а, 1Н), 8,66 (а, 1Н), 8,25 (5, 1Н), 7,89 (Біг т, 1Н), 7,65 (а, 1Н), 7,52 (Ббг т, 2Н), 7,Аб (9, 1), 7,39 (1, 1Н), 7,30 (5, 1Н), 7,11 (Ба, 1Н), 7,03 (а, 1Н), 6,98 (5, 2Н), 6,97 (9, 1Н), 6,58 (т, 1Н), 6,15 (т,1Н), 4,96 (5, 2Н), 4,88 (рг т, 1 Н), 4,64 (рі т, 2Н), 3,88 (т, ЗН), 3,79 (Бг т, 2Н), 3,27-3,48 (т, 14Н), 3,01 (т, 2Н), 2,67 (Біг т, 2Н), 2,54 (т, 2Н), 2,09 (5, ЗН), 2,03 (ї, 2Н), 1,45 (т, 6Н), 1,37 (рт, 2Н), 1,28-0,90 (т, ТОН), 0,77-0,82 (т, 6Н). М5 (ЕБІ) т/е 14844 (М-Н). 2.58 Синтез 4-(1Е)-3-(Ц2-(13-(4-(6-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін- 2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-іл)-5-метил-1Н-піразол-1-іл)метилі|-5,7- диметилтрицикло!3.3.1.157|дец-1-ил)іокси)етил|-(2-сульфоетил)карбамоїліокси)проп-1-ен-1-іл|-2- ((М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-бета-аланіліаміно)феніл-бета-О- глюкопіранозидуронова кислота (синтону НО) 2.58.1 3-(1-((3-(2-(((Е)-3-(3-(3-Амінопропанамідо)-4-((25,38,45,55,65)-6-карбокси-3,4,5- тригідрокситетрагідро-2Н-піран-2-іл)окси)феніл)аліл)окси)карбоніл)-(2- сульфоетил)аміно)етокси)-5, 7-диметиладамантан-1 -іл)уметил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)-6-(8- (бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл)піколінова кислота
Зо Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 1.2.9 речовиною із прикладу 1.22.5 в прикладі 2.56.1. М5 (Е5І-) т/е 1290,2 (М-Н). 2.58.2...4-Щ1 Є)-3-(Ц2-(13-К4-16-І(8-(1,3-Бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)- іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1-ілуметил)|-5, 7-диметилтрицикло!|3.3.1.137|)дец-1- илюкси)етилі|-(2-сульфоетил)карбамоїл)юокси)проп-1-ен-1-іл|-2-(14-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н- пірол-1-іл/угексаноїл|-бета-аланілламіно)феніл-бета-О-глюкопіранозидуронова кислота
Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 1.58.1 речовиною із прикладу 1.56.1 в прикладі 2.56.2. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-дв) б ррт 9,03 (5, 1Н), 8,25 (5, 1Н), 8,03 (а, 1Н), 7,89 (Б т, 1Н), 7,79 (а, 1Н), 7,61 (а, 1Н), 7,53 (біг т, 1Н), 7,46 (т, 2Н), 7,37 (т, 2Н), 7,32 (5, 1Н), 7,11 (ра, 1нН), 7,03 (а, 1Н), 6,98 (5, 2Н), 6,97 (а, 1Н), 6,58 (т, 1Н), 6,15 (т,1Н), 4,96 (5, 2Н), 4,88 (р т, 1 Н), 4,64 (ріг т, 2Н), 3,88 (т, ЗН), 3,79 (Біг т, 2Н), 3,27-3,48 (т, 14Н), 3,01 (т, 2Н), 2,67 (р т, 2Н), 2,54 (т, 2Н), 2,09 (5, ЗН), 2,03 (ї, 2Н), 1,45 (т, 6Н), 1,37 (бг т, 2Н), 1,28-0,90 (т, ТОН), 0,77-0,82 (т, 6Н). М5 (ЕБІ-) т/е 1483,3 (М-Н). 2.59 Синтез 4-(1Е)-3-(Ц2-((3-(4-(2-карбокси-6-(8-(11,3|гіазоло(5,4-б|Іпіридин-2-ілкарбамоїл)- 3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|піридин-З-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)метил/-5, 7- диметилтрицикло!Ї3.3.1.1257)дец-1-иліокси)етил|-(З-фосфонопропіл)карбамоїл)окси)проп-1-ен-1- іл|-2-((М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-бета-аланіліаміно)феніл-бета-О- глюкопіранозидуронова кислота (синтону Н5) 2.59.1 3-(1-((3-(2-(((Е)-3-(3-(3-Амінопропанамідо)-4-((25,38,45,55,65)-6-карбокси-3,4,5- тригідрокситетрагідро-2Н-піран-2-іл)окси)феніл)аліл)окси)карбоніл)-(3- фосфонопропіл)аміно)етокси)-5,7-диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)-6-(8- (тіазоло|5,4-б|піридин-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл)піколінова кислота
Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 1.40.2 речовиною із прикладу 1.22.5 в прикладі 2.56.1. М5 (Е5І-) т/е 1305,4 (М-Н). 2.59.2 А-К1Т Е)-3-ЦТ12-(3-(4-12-Карбокси-6-І8-(1,3)гіазоло|5,4-б|Іпіридин-2-ілкарбамоїл)-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|Іпіридин-3-іл)у-5-метил-1 Н-піразол-1-ілуметилі|-5, 7- диметилтрицикло!|3.3.1.19-Лдец-1-иліокси)етил|-(3-фосфонопропіл)карбамоїл)окси)проп-1-ен-1- іл)|-2-((М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-бета-аланіліаміно)феніл-бета-О- глюкопіранозидуронова кислота
Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 1.59.1 60 речовиною із прикладу 1.56.1 в прикладі 2.56.2. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-дв) б ррт 9,03 (5, 1Н), 8,53 (а9, 1Н), 8,24 (5, 1Н), 8,16 (аа, 1Н), 7,90 (Біг 5, 1Н), 7,61 (а, 1Н), 7,54 (9, 1Н) 7,52 (9, 1Н), 7,44 (а, 1Н), 7,37 (1, 1Н), 7,28 (5, 1Н), 7,11 (Ба, 1Н), 7,03 (а, 1Н), 6,98 (5, 2Н), 6,97 (а, 1Н), 6,56 (т, 1Н), 6,16 (т,1Н), 4,96 (5, 2Н), 4,86 (ре т, 1 Н), 4,64 (рг а, 2Н), 3,88 (т, ЗН), 3,79 (Бг т, 2Н), 3,27-3,44 (т, 14Н), 3,01 (т, 2Н), 2,54 (т, 2Н), 2,08 (5, ЗН), 2,03 (ї, 2Н), 1,46 (т, 6Н), 1,37 (бг т, 2Н), 1,28-0,90 (т, 1ОН), 0,77-0,82 (т, 6Н). М5 (ЕБІ) т/е 1498,4 (М-Н). 2.60 Синтез А-Д Е)-3-(2-(13-((4-(6-І(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-5-(3- фосфонопропокси)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-іл/-о-метил-1Н-піразол-1- іл)метил/|-5,7-диметилтрицикло!/3.3.1.157)дец-1-иліокси)етилі|(метил)карбамоїл)окси)проп-1-ен-1- іл|-2-((М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-бета-аланіліаміно)феніл-бета-О- глюкопіранозидуронова кислота (синтону НМУ) 2.60.1 3-(1-(((3-(2-((((Е)-3-(3-(3-Амінопропанамідо)-4-((25,38,45,55,65)-6-карбокси-3,4,5- тригідрокситетрагідро-2Н-піран-2-іл)окси)феніл)аліл)окси)карбоніл) (метил)аміно)етокси)-5,7- диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)-6-(8-(бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-5- (З-фосфонопропокси)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл)піколінова кислота
Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 1.31.11 речовиною із прикладу 1.22.5 в прикладі 2.56.1. М5 (Е5І) т/е 1336,2 (Ма-Ма). 2.60.2.. 4-1 Е)-3-Ц2-((3-((4-(6-І8-(1,3-Бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-5-(3-фосфонопропокси)-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)уметилі/д-5,7- диметилтрициклоїЇ3.3.1.157)|дец-1-ил)окси)етил|(метил)карбамоїлоюкси)проп-1-ен-1-ілІ|-2-(1М-І(6- (2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)угексаноїл|-бета-аланіл)іаміно)феніл-бета-О- глюкопіранозидуронова кислота
Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 1.60.1 речовиною із прикладу 1.56.1 в прикладі 2.56.2. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-дв) б ррт 9,03 (5, 1Н) 8,25 (5, 1Н), 8,01 (а, 1Н), 7,83-7,91 (т, 1Н), 7,75 (аа, 2Н), 7,42-7,58 (т, 2Н), 7,34 (І, 1), 7,28 (5, 1Н), 6,93-7,15 (т, 6Н), 6,56 (а, 1Н), 6,09-6,24 (т, 1Н), 5,01 (5, ЗН), 4,80-4,92 (т, 2Н), 4,57-4,69 (т, ЗН), 4,12-4 21 (т, 6Н), 3,86-3,94 (т, 7Н), 3,28-3,47 (т, 12Н), 2,77-2,96 (т, 6Н), 2,52-2,58 (т, 2Н), 2,09 (5, ЗН), 1,90-2,05 (т, АН), 1,65-1,78 (т, 2Н), 0,90-1,53 (т, 16Н), 0,80 (т, 6Н). М5 (ЕБІ) т/е 1529,5 (М.Н). 2.61 Синтез 4-(1Е)-3-(Ц2-(13-(4-(6-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-
Зо 2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-іл)-5-метил-1Н-піразол-1-іл)метилі|-5,7- диметилтрицикло!Ї3.3.1.12Лдец-1-иліокси)етил/|-(3З-фосфонопропіл)карбамоїл)окси)проп-1-ен-1- іл|-2-((М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-бета-аланіліаміно)феніл-бета-О- глюкопіранозидуронова кислота (синтону НХ) 2.81.1 3-(1-((3-(2-(((Е)-3-(3-(3-Амінопропанамідо)-4-((25,38,45,55,65)-6-карбокси-3,4,5- тригідрокситетрагідро-2Н-піран-2-іл)окси)феніл)аліл)окси)карбоніл)-(3- фосфонопропіл)аміно)етокси)-5,7-диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)-6-(8- (бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл)піколінова кислота
Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 1.14.4 речовиною із прикладу 1.22.5 в прикладі 2.56.1. М5 (ЕІ) т/е 13043 (М-Н). 2.61.2... 4-1 Є)-3-(12-(13-К4-(6-(8-(1,3-Бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)- іл|І-2-карбоксипіридин-3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)метилі|-5,7-диметилтрициклоїЇ3.3.1.127|дец-1- илюкси)етилі|-(3-фосфонопропіл)карбамоїліокси)проп-1-ен-1-іл|-2-(14-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро- 1Н-пірол-1-іл)угексаноїл|-бета-аланілламіно)феніл-бета-О-глюкопіранозидуронова кислота
Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 1.61.1 речовиною із прикладу 1.56.1 в прикладі 2.56.2. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-дв) б ррт 9,03 (5, 1Н), 8,25 (Бі 5, 1Н), 8,03 (а, 1Н), 7,89 (Бі т, 1Н), 7,79 (а, 1Н), 7,61 (9, 1Н), 7,53 (бі т, 1Н), 7,46 (т, 2Н), 7,37 (т, 2Н), 7,28 (5, 1Н), 7,11 (ра, 1нН), 7,03 (а, 1Н), 6,98 (5, 2Н), 6,97 (а, 1Н), 6,56 (т, 1Н), 6,17 (тн), 4,96 (5, 2Н), 4,86 (Бі т, 1 Н), 4,64 (Бг а, 2Н), 3,88 (т, ЗН), 3,79 (Біг т, 2Н), 3,27-3,44 (т, 14Н), 3,01 (т, 2Н), 2,54 (т, 2Н), 2,08 (5, ЗН), 2,03 (І, 2Н), 1,46 (т, 6Н), 1,37 (Бі т, 2Н), 1,28-0,90 (т, ТОН), 0,77-0,82 (т, 6Н). М5 (Е5І-) т/е 1497,4 (М-Н). 2.62 Синтез 4-((2-((3-(4-(6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|- 2-карбоксипіридин-3-іл)-5-метил-1Н-піразол-1-іл)метилІ|-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.12Лдец-1- ил)окси)етил|-(2-сульфоетил)карбамоїліокси)метил!|-3-(2-(2-113-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол- 1-іл)упропаноїл|аміно)етокси)етокси|феніл-бета-О-глюкопіранозидуронова кислота (синтону НУ) 2.62.1. (25,38,45,55,65)-2-(4-Форміл-3-гідроксифенокси)-6-(метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н- піран-3,4,5-триїлтриацетат
Розчиняли 2,4-дигідроксибензальдегід (15 і (25,3К,45,55,65)-2-бром-6- (метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5-триїлтриацетат (10 г) в ацетонітрилі, потім додавали карбонат срібла (10 г) й реакційну суміш нагрівали до 497С. Після перемішування протягом бо 4 годин реакційну суміш охолоджували, фільтрували та концентрували. Неочищену вказану в заголовку сполуку суспендували у дихлорметані, фільтрували через діатомову землю й концентрували. Залишок очищували за допомогою хроматографії на силікагелі, з елююванням етилацетатом/гептаном, від 1 до 10095, з одержанням указаної в заголовку сполуки. 2.62.2 (25,38,45,55,65)-2-(3-Гідрокси-4-(гідроксиметил)фенокси)-6- (метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5-триїлтриацетат
Охолоджували розчин речовини із прикладу 2.62.1 (16,12 г) в тетрагідрофурані (200 мл) й метанолі (200 мл) до 0"С і додавали порціями борогідрид натрію (1,476 г). Реакційну суміш перемішували протягом 20 хвилин і гасили сумішшю вода:водний насичений розчин бікарбонату натрію, 1:11 (400 мл). Одержані тверді речовини відфільтровували та ополіскували етилацетатом. Фази розділяли і водний шар чотири рази екстрагували етилацетатом. Об'єднані органічні шари висушували над сульфатом магнію, фільтрували та концентрували. Неочищену вказану в заголовку сполуку очищували за допомогою хроматографії на силікагелі, з елююванням етилацетатом/гептанами, від 1 до 10095, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕБІ) т/е 473,9 (МАМН»а)». 2.62.3 . (25,38,45,55,65)-2-(4-«(Трет-бутилдиметилсиліл)окси)метил)-3-гідроксифенокси)-6- (метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5-триїлтриацетат
До речовини із прикладу 2.62.2 (7,66 г) і трет-бутилдиметилсилілхлориду (2,78г) в дихлорметані (168 мл) при -57С додавали імідазол (2,63 г) і реакційну суміш перемішували протягом ночі, при цьому забезпечували підвищення внутрішньої температури реакційної суміші до 12"С. Реакційну суміш виливали у насичений водний розчин хлориду амонію та чотири рази екстрагували дихлорметаном. Об'єднані органічні речовини промивали сольовим розчином, висушували над сульфатом магнію, фільтрували та концентрували. Неочищену вказану в заголовку сполуку очищували за допомогою хроматографії на силікагелі, з елююванням етилацетатом/гептанами, від 1 до 5095, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (Е5І) т/е 593,0 (М--Ма)». 2.62.4 (25,38,45,55,65)-2-(3-(2-(2-((9Н-Флуорен-9- ілуметокси)карбоніл)аміно)етокси)етокси)-4-((трет-бутилдиметилсиліл)окси)метил)уфенокси)-6- (метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5-триїлтриацетат
До речовини із прикладу 2.62.3 (5,03 г) й трифенілфосфіну (4,62 г) в толуолі (88 мл)
Зо додавали ди-трет-бутилазодикарбоксилат (4,06 г) і реакційну суміш перемішували протягом
ЗО хвилин. Додавали (9Н-флуорен-9-іл)метил-(2-(2-гідроксиетокси)етил)карбамат і реакційну суміш перемішували додатково протягом 1,5 години. Реакційну суміш завантажували безпосередньо на силікагель і застосовували елюювання етилацетат/гептани, від 1 до 5095, з одержанням указаної в заголовку сполуки. 2.82.5 (25,38,45,55,65)-2-(3-(2-(2-((9Н-Флуорен-9- ілуметокси)карбоніл)аміно)етокси)етокси)-4-(гідроксиметил)фенокси)-6- (метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5-триїлтриацетат
Речовину (із прикладу /2.62.4 (4,29 г) перемішували у розчині оцтова кислота:вода:тетрагідрофуран 3:1:11 (100 мл) протягом ночі. Реакційну суміш виливали у насичений водний розчин бікарбонату натрію та екстрагували етилацетатом. Органічний шар висушували над сульфатом магнію, фільтрували та концентрували. Неочищену вказану в заголовку сполуку очищували за допомогою хроматографії на силікагелі з елююванням етилацетатом/гептанами, від 1 до 5095, з одержанням указаної в заголовку сполуки. 2.62.6 (25,38,45,55,65)-2-(3-(2-(2-((9Н-Флуорен-9- ілуметокси)карбоніл)аміно)етокси)етокси)-4-(((4-нітрофенокси)карбоніл)уокси)метил)фенокси)-6- (метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5-триїлтриацетат
У розчин речовини із прикладу 2.62.5 (0,595 г) і біс(4-нітрофеніл)карбонату (0,492 г) в М,М- диметилформаміді (4 мл) додавали М-етил-М-ізопропіллпропан-2-амін (0,212 мл). Через 1,5 години реакційну суміш концентрували під високим вакуумом. Реакційну суміш завантажували безпосередньо на силікагель і застосовували елюювання етилацетат/гептани, від 1 до 5095, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕІ) т/е 922,9 (Ма-Ма)». 2.62.7 3-(1-((3-(2-(((2-(2-(2-Аміноетокси)етокси)-4-(25,38,45,55,65)-6-карбокси-3,4,5- тригідрокситетрагідро-2Н-піран-2-іл)уокси)бензил)окси)карбоніл)-(2-сульфоетил)аміно)етокси)- 5,7-диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1Н-піразол-4-іл)-6-(8-(бензо|4|гіазол-2г-ілкарбамоїл)-
З,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл)піколінова кислота
У розчин речовини із прикладу 1.2.9 (0,073 г) й речовини із прикладу 2.62.6 (0,077 г) в М,М- диметилформаміді (0,5 мл)у додавали М,М-дізопропілетиламін (0,066 мл) і реакційну суміш перемішували протягом ночі. Реакційну суміш концентрували і залишок розчиняли в тетрагідрофурані (0,5 мл) й метанолі (0,5 мл) та обробляли моногідратом гідроксиду літію бо (0,047 г) у вигляді розчину у воді (0,5 мл). Через 1 годину реакційну суміш розбавляли М,М-
диметилформамідом і водою та гасили шляхом додавання трифтороцтової кислоти (0,116 мл).
Суміш очищували за допомогою НРІ С з оберненою фазою із застосуванням системи о1їїЇ5оп, з елююванням від 10 до 7595 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./06. трифтороцтової кислоти. Необхідні фракції об'єднували й висушували сублімацією з одержанням указаної в заголовку сполуки. 2.682.8 4-(2-(3-((4-16-І(8-(1,3-Бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1 Н)-іл|-2- карбоксипіридин-З3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)уметил)|-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.157)дец-1- илюкси)етилі|-(2-сульфоетил)карбамоїл)окси)метилі-3-(2-(2-113-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол- 1-іл)упропаноїліаміно)зетокси)етокси|Їфеніл-бета-О-глюкопіранозидуронова кислота
Перемішували розчин речовини із прикладу 2.62.7 (0,053 г), 2,5-діоксопіролідин-1-іл-3-(2,5- діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)упропаноату (0,012 г) й М,М-діізопропілетиламіну (0,033 мл) в
М,М-диметилформаміді (0,75 мл) за кімнатної температури. Після перемішування протягом 1 години реакційну суміш розбавляли М,М-диметилформамідом і водою. Суміш очищували за допомогою НРІ С з оберненою фазою із застосуванням системи сіїзоп, з елююванням від 10 до 7595 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./0б. трифтороцтової кислоти. Необхідні фракції об'єднували й висушували сублімацією з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-ав) б ррт 12,85 (5, 1Н), 8,04 (а, 2Н), 7,79 (0, 1Н), 7,61 (а, 1Н), 7,54 (9, 1), 7,51-7,40 (т, 2Н), 7,40-7,31 (т, ЗН), 7,20 (а, 1Н), 7,00-6,94 (т, ЗН), 6,73-6,57 (т, 2Н), 5,06 (І, 1Н), 5,01-4,91 (т, 4Н), 3,96-3,85 (т, 2Н), 3,85-3,78 (т, 2Н), 3,78-3,69 (т, 2Н), 3,59 (І, 2Н), 3,53- 203,34 (т, 6Н), 3,34-3,21 (т, 4Н), 3,17 (94, 2Н), 3,02 (І, 2Н), 2,66 (, 2Н), 2,33 (ї, 2Н), 2,10 (5, ЗН), 1,44- 0,90 (т, 16Н), 0,83 (а, 6Н). М5 (-Е5І) т/е 14324 (М-Н). 2.63 Синтез 4-(1Е)-3-(Ц2-((3-(4-(2-карбокси-6-(8-(11,3|гіазоло|4,5-В|Іпіридин-2-ілкарбамоїл)- 3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|піридин-З-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)метил/-5, 7- диметилтрицикло!3.3.1.157|дец-1-ил)окси)етил|-(З-фосфонопропіл)карбамоїл)окси)проп-1-ен-1- іл|-2-((М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-бета-аланіліаміно)феніл-бета-О- глюкопіранозидуронової кислоти (синтону ІВ) 2.63.1 3-(1-((3-(2-(((Е)-3-(3-(3-Амінопропанамідо)-4-((25,38,45,55,65)-6-карбокси-3,4,5- тригідрокситетрагідро-2Н-піран-2-іл)окси)феніл)аліл)окси)карбоніл)-(3- фосфонопропіл)аміно)етокси)-5,7-диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)-6-(8-
Зо (тіазоло(4,5-б|Іпіридин-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл)піколінова кислота
Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 1.39.2 речовиною із прикладу 1.22.5 в прикладі 2.56.1. 2.63.2 АТ Е)-3-(12-(3-(4-(2-Карбокси-6-І8-(1,3гіазоло|4,5-б|Іпіридин-2-ілкарбамоїл)-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|Іпіридин-3-іл)у-5-метил-1 Н-піразол-1-ілуметилі|-5, 7- диметилтрициклоїЇ3.3.1.157)дец-1-илюкси)етилі|І-(3З-фосфонопропіл)укарбамоїл)окси)проп-1-ен-1- іл)|-2-((М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-бета-аланіліаміно)феніл-бета-О- глюкопіранозидуронова кислота
Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 2.63.1 речовиною із прикладу 1.56.1 в прикладі 2.56.2. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-айв) б ррт 9,03 (5, 1Н), 8,61 (а, 1Н), 8,55 (а, 1Н), 8,25 (Бі 5, 1Н), 7,89 (Біг т, 1Н), 7,65 (а, 1Н), 7,50 (Бг а, 1Н), 7,46 (а, 1Н), 7,39 (т, 2Н), 7,28 (5, 1Н), 7,11 (Бк а, 1Н), 7,03 (9, 1Н), 6,98 (5, 2Н), 6,97 (а, 1Н), 6,56 (т, 1Н), 6,17 (т/1Н), 4,97 (5, 2Н), 4,86 (Бг т, 1 Н), 4,64 (рг а, 2Н), 3,88 (т, ЗН), 3,79 (ріг т, 2Н), 3,27-3,44 (т, 14Н), 3,01 (т, 2Н), 2,54 (т, 2Н), 2,08 (5, ЗН), 2,03 (І, 2Н), 1,46 (т, 6Н), 1,37 (Бі т, 2Н), 1,28-0,90 (т, ТОН), 0,77-0,82 (т, 6Н). М5 (ЕБІ) т/е 1498,3 (М-Н). 2.64 Синтез 6-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-3-11-((3-12-К2- карбоксиетилу (2 Е)-3-(4-І(25,38,45,55,65)-6-карбокси-3,4,5-тригідрокситетрагідро-2Н-піран-2- іл|окси)-3-((3-116-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1- іл)угексаноїл|аміно)пропаноїл)аміно|феніл)проп-2-ен-1-іл|окси)карбоніл)аміно|етокси)-5,7- диметилтрицикло!3.3.1.127дец-1-ил)метилі|-5-метил-1Н-піразол-4-іліпіридин-2-карбонової кислоти (синтону ІЕ) 2.64.1 3-(1-((3-(2-(((Е)-3-(3-(3-Амінопропанамідо)-4-((25,38,45,55,65)-6-карбокси-3,4,5- тригідрокситетрагідро-2Н-піран-2-іл)окси)феніл)аліл)окси)карбоніл)-(2- карбоксиетил)аміно)етокси)-5,7-диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)-6-(8- (бензо(д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроїзохінолін-2(1Н)-ил)піколінова кислота, соль трифтороцтової кислоти
У розчин речовини із прикладу 1.25.2 (0,050 г) і речовини із прикладу 2.44.7 (0,061 г) в М,М- диметилформаміді (1 мл) додавали М,М-діззопропілетиламін (0,047 мл) і реакційну суміш перемішували за кімнатної температури протягом ночі. Реакційну суміш концентрували і залишок розчиняли в метанолі (0,5 мл) та тетрагідрофурані (0,5 мл) і обробляли розчином бо гідрату гідроксиду літію (0,034 г) у воді (0,5 мл). Реакційну суміш перемішували за кімнатної збо температури протягом 1 години. Реакційну суміш гасили трифтороцтовою кислотою (0,083 мл) й розбавляли М,М-диметилформамідом (1 мл). Суміш очищували за допомогою НРІС з оберненою фазою із застосуванням системи сіїзоп, з елююванням від 10 до 7595 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./06б. трифтороцтової кислоти. Необхідні фракції об'єднували й висушували сублімацією з одержанням указаної в заголовку сполуки 2.684.2 6-(8-(1,3-Бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-3-11-((3-12-К2- карбоксиетилу( (2 Е)-3-(4-(25,38,45,55,65)-6-карбокси-3,4,5-тригідрокситетрагідро-2Н-піран-2- іл|окси)-3-((3-116-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1- ілугексаноїліаміно)пропаноїл)аміно|Їфеніл)проп-2-ен-1-іл|Іоксизкарбоніл)аміно|етокси)-5,7- диметилтрициклоїЇ3.3.1.157)дец-1-ил)метил|-5-метил-1 Н-піразол-4-іліпіридин-2-карбонова кислота
У розчин речовини із прикладу 2.64.1 (0,042 г) й 2,5-діоксопіролідин-1-іл-6-(2,5-діоксо-2,5- дигідро-1Н-пірол-1-ілугексаноату (10 мг) в М,М-диметилформаміді (0,5 мл) додавали М,М- діізопропілетиламін (0,027 мл) і реакційну суміш перемішували за кімнатної температури протягом 2 годин. Реакційну суміш розбавляли М,М-диметилформамідом (1 мл) і водою (0,5 мл).
Суміш очищували за допомогою НРІ С з оберненою фазою із застосуванням системи о1їїЇ5оп, з елююванням від 10 до 7595 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./06б. трифтороцтової кислоти. Необхідні фракції об'єднували й висушували сублімацією з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-дв) б ррт 12,85 (5, 1Н), 9,04 (в, 1Н), 8,25 (5, 1Н), 8,03 (й, 1Н), 7,87 (1, 1), 7,79 (а, 1), 7,61 (а, 1Н), 7,54-7,40 (т, ЗН), 7,40-7,31 (т, 2Н), 7,28 (5,1Н), 7,10 (а, 1Н), 7,04 (а, 1Н), 6,98 (5, 2Н), 6,95 (а, 1Н), 6,57 (9, 1Н), 6,24-6,11 (т, 1Н), 4,96 (5, 2Н), 4,86 (ї, 1Н), 4,65 (й, 2Н), 3,95-3,84 (т, 2Н), 3,84-3,75 (т, 4Н), 3,44-3,24 (т, 1ОН), 3,01 (, 2Н), 2,62-2,52 (т, 4Н), 2,09 (5, ЗН), 2,03 (ї, 2Н), 1,46 (п, 4Н), 1,40-1,31 (т, 2Н), 1,30-0,88 (т, 14Н), 0,87-0,75 (т, 6Н). М5 (ЕБІ) т/е 14475 (М-НУ. 2.65 Синтез 6-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-3-11-((3-12-К2- карбоксиетил)-(4-(25,38,45,55,65)-6-карбокси-3,4 5-тригідрокситетрагідро-2Н-піран-2- іл|окси)-2-(2-(2-113-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1- іл)упропаноїл|аміно)етокси)етокси|бензил)окси|карбоніліаміно|етокси)-5,7- диметилтрицикло!|3.3.1.127дец-1-ил)метилі|-5-метил-1Н-піразол-4-іліпіридин-2-карбонової
Зо кислоти (синтону ЇЇ) 2.65.1 3-(1-((3-(2-(((2-(2-(2-Аміноетокси)етокси)-4-(25,38,45,55,65)-6-карбокси-3,4,5- тригідрокситетрагідро-2Н-піран-2-іл)окси)бензил)окси)карбоніл)-(2-карбоксиетил)аміно)етокси)- 5,7-диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1Н-піразол-4-іл)-6-(8-(бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-
З,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл)піколінова кислота
Перемішували розчин речовини із прикладу 1.25.2 (0,055 г), речовини із прикладу 2.62.6 (0,060 г) й М,М-діїзопропілетиламіну (0,052 мл) в М,М-диметилформаміді (0,4 мл) протягом ночі.
Реакційну суміш концентрували і залишок розчиняли в тетрагідрофурані (0,5 мл), метанолі (0,5 мл), а потім обробляли гідратом гідроксиду літію (0,037 г) у вигляді розчину у воді (0,5 мл).
Після перемішування протягом 1 години реакційну суміш гасили трифтороцтовою кислотою (0,091 мл) й розбавляли М,М-диметилформамідом (1 мл). Суміш очищували за допомогою
НРІС з оберненою фазою із застосуванням системи сіївоп, з елююванням від 10 до 7595 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./о0б. трифтороцтової кислоти. Необхідні фракції об'єднували й висушували сублімацією з одержанням указаної в заголовку сполуки у вигляді солі трифтороцтової кислоти. 2.655.2 6-(8-(1,3-Бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-3-11-((3-12-К2- карбоксиетил)-(4-(25,38,45,55,65)-6-карбокси-3,4 5-тригідрокситетрагідро-2Н-піран-2- іл|окси)-2-(2-(2-(3-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1- ілупропаноїл|аміно)етокси)етокси|бензил)окси|карбоніліаміно|етокси)-5,7- диметилтрициклоїЇ3.3.1.157)дец-1-ил)метилі|-5-метил-1 Н-піразол-4-іліпіридин-2-карбонова кислота
Розчин солі трифтороцтової кислоти із прикладу 2.65.1 (0,043), 2,5-діоксопіролідин-1-іл-3- (2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-ілупропаноату (10 мг) й М,М-діїзопропілетиламіну (0,028 мл) перемішували разом в М,М-диметилформаміді (1 мл) за кімнатної температури. Після перемішування протягом 1 години реакційну суміш розбавляли М,М-диметилформамідом (0,5 мл) і водою (0,5 мл). Суміш очищували за допомогою НРІС з оберненою фазою із застосуванням системи сіЇзоп, з елююванням від 5 до 7595 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./06. трифтороцтової кислоти. Необхідні фракції об'єднували й висушували сублімацією з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-йв) б ррт 12,84 (5, 1Н), 8,03 (й, 1Н), 8,00 (її, 1), 7,79 (а, 1), 7,62 (й, 1), 7,54-7,41 (т, ЗН), 7,36 (4, 2Н), (510) 7,29 (5, 1Н), 7,19 (а, 1Н), 6,97 (5, 2Н), 6,95 (а, 1Н), 6,67 (9, 1Н), 6,60 (ад, 1Н), 5,14-5,03 (т, 1Н),
4,96 (а, АН), 4,08 (її, АН), 3,89 (ад, 4Н), 3,84-3,77 (т, 2Н), 3,71 (І, 2Н), 3,59 (І, 2Н), 3,52-3,35 (т, 6Н), 3,28 (ад, 4Н), 3,17 (9, 2Н), 3,01 (ї, 2Н), 2,46 (9, 1Н), 2,33 (ї, 2Н), 2,09 (5, ЗН), 1,45-0,90 (т, 12Н), 0,82 (9, 6Н). М5 (ЕБІ) т/е 1396,4 (М-Н). 2.66 Синтез М-І(б-(етенілсульфоніл)гексаноїл|)-І -валіл-М-(4-(2-((3-((4-16-І(8-(1,3-бензотіазол- 2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-З3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1- іл)метил|-5,7-диметилтрицикло!/3.3.1.15Ядец-1-иліокси)етил|-(2- сульфоетил)карбамоїл)окси)метилі|феніл)-М»-карбамоїл-І -орнітинаміду (синтону КУ) 2.66.1 3-(1-((3-(2-(((4-((5)-2-(5)-2-Аміно-3-метилбутанамідо)-5- уреїдопентанамідо)бензил)окси)карбоніл)-(2-сульфоетил)аміно)етокси)-5,7-диметиладамантан- 1-іл)уметил)-5-метил-1Н-піразол-4-іл)-6-(8-(бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін- 2(1Н)-іл)піколінова кислота
У суміш речовини із прикладу 1.2.9 (57 мг) й (ЗН-флуорен-9-іл)уметил-((5)-3-метил-1-(((5)-1- (4-(((4-нітрофенокси)карбоніл)окси)метил)феніл)аміно)-1-оксо-5-уреїдопентан-2-іл)аміно)-1- оксобутан-2-іл)укарбамату (54 мг) в М,М-диметилформаміді (2 мл) додавали /-М,М- діізопропілетиламін (103 мкл). Суміш перемішували протягом ночі й додавали діетиламін (61,5 мкл). Одержану суміш перемішували протягом 4 годин і очищували за допомогою НРІ С з оберненою фазою із застосуванням системи біїбоп та колонки С18, з елююванням від 10 до 7095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./0б. трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (Е5І) т/е 1257,4 (М-Н). 2.656.2 М-(6-«Етенілсульфоніл)гексаноїл|-І -валіл-М-(4-((ЦТ2-((3-(К4-(6-(8-(1,3-бензотіазол-2- ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1- ілуметил|-5,7-диметилтрицикло!/3.3.1.157)дец-1-илюкси)етилі|-(2- сульфоетил)карбамоїлоюкси)метилі|феніл)-Мо-карбамоїл-і -орнітинамід
Вказану в заголовку сполуку одержували із застосуванням процедури в прикладі 2.83, шляхом заміни речовини із прикладу 1.2.9 Й 2,5-діоксопіролідин-1-іл-6-(2- хлорацетамідо)гексаноату речовиною із прикладу 2.66.1 і речовиною із прикладу 2.82.5 відповідно. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-ав) б ррт 12,88 (5, ОН), 9,99 (5, 1Н), 8,05 (Її, 2Н), 7,80 (І, 2Н), 7,60 (ад, ЗН), 7,36 (пд, 2Н), 7,28 (а, ЗН), 7,01-6,89 (т, 2Н), 6,29-6,15 (т, 2Н), 6,02 (5, 1Н), 4,97 (9, 4Н), 4,40 (9, 1Н), 4,20 (І, 1Н), 4,00-3,77 (т, 4Н), 3,55-3,33 (т, 4Н), 9,25 (9, 2Н), 3,14-2,88 (т, 6Н), 2,62 (ї, 2Н), 2,09 (в, АН), 1,82-0,90 (т, ТОН), 0,84 (аа, 13Н). М5 (ЕБІ) т/е 14472 (МАН). 2.67 Синтез А- Є)-3-(4-Т2-(13-((4-16-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)метилі/д-5,7- диметилтрицикло!3.3.1.157|дец-1-ил)окси)етил|-(З-фосфонопропіл)аміно)піперидин- 1- іл)укарбоніл|окси)проп-1-ен-1-іл|-2-((М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-бета- аланіліаміно)феніл-бета-О-глюкопіранозидуронової кислоти (синтону ІМУ) 267.1. 3-(1-((3-(2-(1-(((Е)-3-(3-(3-Амінопропанамідо)-4-((25,38,45,55,65)-6-карбокси-3,4,5- тригідрокситетрагідро-2Н-піран-2-іл)окси)феніл)аліл)окси)карбоніл)піперидин-4-іл)-(3- фосфонопропіл)аміно)етокси)-5,7-диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)-6-(8- (бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл)піколінова кислота
У розчин речовини із прикладу 1.26.2 (0,045 г) й речовини із прикладу 2.44.7 (0,053 г) в М,М- диметилформаміді (1 мл) додавали М,М-діззопропілетиламін (0,041 мл) і реакційну суміш перемішували за кімнатної температури протягом ночі. Реакційну суміш концентрували, а залишок розчиняли в метанолі (0,5 мл) й тетрагідрофурані (0,5 мл)у та обробляли розчином моногідрату гідроксиду літію (0,030 г) у воді (0,5 мл) за кімнатної температури. Після перемішування протягом 1 годин реакційну суміш гасили трифтороцтовою кислотою (0,073 мл) й розбавляли М,М-диметилформамідом (1 мл). Суміш очищували за допомогою НРІС з оберненою фазою із застосуванням системи сіїзоп, з елююванням від 10 до 6095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./0б. трифтороцтової кислоти. Необхідні фракції об'єднували й висушували сублімацією з одержанням указаної в заголовку сполуки. 2.67.2 АТ Є)-3-0(4-12-(13-((4-16-І(8-(1,3-Бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін- 2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1-ілуметилі/д-5, 7- диметилтрициклоїЇ3.3.1.157|дец-1-ил)окси)етил|-(З-фосфонопропіл)аміно)піперидин- 1- ілукарбоніл|окси)проп-1-ен-1-іл|-2-(1М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-бета- аланіл)іаміно)феніл-бета-О-глюкопіранозидуронова кислота
У розчин речовини із прикладу 2.67.1 (0,040 г) й 2,5-діоксопіролідин-1-іл-6-(2,5-діоксо-2,5- дигідро-1Н-пірол-1-ілугексаноату (9,84 мг) в М,М-диметилформаміді (1 мл) додавали М,М- дііззопропілетиламін (0,023 мл) і реакційну суміш перемішували за кімнатної температури протягом 2 годин. Реакційну суміш розбавляли М,М-диметилформамідом (1 мл) і водою (1 мл). бо Суміш очищували за допомогою НРІ С з оберненою фазою із застосуванням системи оіЇ5оп, з
Зб2 елююванням від 10 до 6095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./06. трифтороцтової кислоти. Необхідні фракції об'єднували й висушували сублімацією з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-йв) б ррт 9,28 (5, 1Н), 9,04 (5, 1Н), 8,25 (5, 1Н), 8,03 (а, 1Н), 7,87 (І, 1Н), 7,79 (а, 1Н), 7,62 (аа, 1Нн), 7,55-7,40 (т, ЗН), 7,36 (4, 2Н), 7,29 (5, 1Н), 7,11 (ад, 1Н), 7,05 (9, 1Н), 6,98 (5, 2Н), 6,95 (а, 1Н), 6,59 (а, 1Н), 6,20 (1, 1Н), 6,16 (ї,
ОН), 4,96 (5, 2Н), 4,88 (9, 1Н), 4,66 (а, 2Н), 4,14 (а, 2Н), 3,96-3,86 (т, 2Н), 3,83 (5, 2Н), 3,54 (ї, 7Н), 3,48-3,28 (т, 12Н), 3,01 (І, 2Н), 2,84 (5, 2Н), 2,55 (Її, 2Н), 2,10 (5, ЗН), 2,07-1,95 (т, АН), 1,88 (5, 2Н), 1,73-1,54 (т, 4Н), 1,54-1,38 (т, 6Н), 1,39-1,26 (т, 4Н), 1,26-0,93 (т, 8Н), 0,86 (в, 6Н). М5 (ЕБ5І) т/е 1582,4 (МАН) ». 2.68 Синтез А- Є)-3-1(4-Щ2-(13-(4-12-карбокси-6-І8-(11,З|гіазоло(4,5-б|піридин-2- ілкарбамоїл)-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1Н)-іл|Іпіридин-3-іл)-5-метил-1Н-піразол-1-іл)метил|-5,7- диметилтрицикло!3.3.1.157|дец-1-ил)окси)етил|-(З-фосфонопропіл)аміно)піперидин- 1- іл)укарбоніл|окси)проп-1-ен-1-іл|-2-((М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-бета- аланіліаміно)феніл-бета-О-глюкопіранозидуронової кислоти (синтону ІМ) 2.68.1...3-(1-((3-(2-(1-(((Е)-3-(3-(3-Амінопропанамідо)-4-((25,38,45,55,65)-6-карбокси-3,4,5- тригідрокситетрагідро-2Н-піран-2-іл)окси)феніл)аліл)окси)карбоніл)піперидин-4-іл)-(3- фосфонопропіл)аміно)етокси)-5,7-диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)-6-(8- (тіазоло(4,5-б|Іпіридин-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл)піколінова кислота
Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 1.50.2 речовиною із прикладу 1.44.7 в прикладі 2.56.1. М5 (ЕІ) т/е 1388,5 (М-Н). 2.68.2..4-Ц1 Є)-3-4(4-12-((3-(4-(2-Карбокси-6-І8-(Ц1,3гіазоло|4,5-б|Іпіридин-2-ілкарбамоїл)-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|Іпіридин-3-іл)у-5-метил-1 Н-піразол-1-ілуметилі|-5, 7- диметилтрицикло!|3.3.1.19-Лдец-1-илІокси)етил|-(3-фосфонопропіл)аміно)піперидин-1- ілукарбоніл|окси)проп-1-ен-1-іл|-2-(1М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-бета- аланіл)іаміно)феніл-бета-О-глюкопіранозидуронова кислота
Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 1.68.1 речовиною із прикладу 1.56.1 в прикладі 2.56.2. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-айв) б ррт 9,03 (5, 1Н), 8,61 (9, 1Н), 8,50 (9, 1Н), 8,25 (Біг 5, 1Н), 7,89 (І, 1Н), 7,65 (а, 1Н), 7,49 (а, тн), 7,Аб (а, 1), 7,36 (т, 2Н), 7,29 (5, 1Н), 7,11 (Бк а, 1Н), 7,03 (а, 1Н), 6,98 (5, 2Н), 6,97 (а, 1Н), 6,58
Коо) (т, 1Н), 6,17 (т,1Н), 4,97 (5, 2Н), 4,88 (й, 1 Н), 4,65 (Бг а, 2Н), 3,88 (т, ЗН), 3,79 (Бг т, 2Н), 3,66 (біт, 2Н), 3,27-3,44, (т, 14Н), 3,01 (т, 2Н), 2,85 (біг т, 2Н), 2,54 (т, 2Н), 2,10 (5, ЗН), 2,03 (, 2Н), 1,98 (бг т, 2Н), 1,89 (т, 1Н), 1,62 (т, 4Н), 1,46 (т, 6Н), 1,91 (т, 4Н), 1,15 (т, 6Н), 1,04 (т, 2Н), 0,86 (5, 6Н). М5 (ЕБІ) т/е 1581,4 (М-Н). 2.59 Синтез А-ДІ Е)-3-ЦТ2-((3-((4-(6-І(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)нафталін-2-іл|-2- карбоксипіридин-3-іл)-5о-метил-!1 Н-піразол-1-іл)метил)|-5, 7-диметилтрициклоїЇ3.3.1.197|дец-1- ил)окси)етил|-(2-сульфоетил)карбамоїліокси)проп-1-ен-1-іл|-2-(1М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н- пірол-1-іл)гексаноїл|-бета-аланіліаміно)феніл-бета-О-глюкопіранозидуронової кислоти (синтону
УА) 2.689.1 3-(1-((3-(2-(((Е)-3-(3-(3-Амінопропанамідо)-4-((25,38,45,55,65)-6-карбокси-3,4,5- тригідрокситетрагідро-2Н-піран-2-іл)окси)феніл)аліл)окси)карбоніл)-(2- сульфоетил)аміно)етокси)-5, 7-диметиладамантан-1 -іл)уметил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)-6-(8- (бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)нафталін-2-іл)піколінова кислота вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 1.43.7 речовиною із прикладу 2.44.7 в прикладі 2.56.1. М5 (ЕІ) т/е 13091 (Ма-Ма)». 2.659.2 АТ Е)-3-(12-(13-((4-(6-(8-(1,3-Бензотіазол-2-ілкарбамоїл)нафталін-2-іл|-2- карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1-ілуметил)|-5, 7-диметилтрицикло!|3.3.1.157)дец-1- илюкси)етилі|-(2-сульфоетил)карбамоїл)юокси)проп-1-ен-1-іл|-2-(14-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н- пірол-1-іл)гексаноїл|-бета-аланіліламіно)уфеніл-бета-О-глюкопіранозидуронова кислота вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 2.69.1 речовиною із прикладу 2.56.1 в прикладі 2.56.2. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-айв) б ррт 13,09 (5, 1Н), 9,02 (5, 2Н), 8,35 (9, 1Н), 8,13-8,29 (т, 4Н), 7,86-8,09 (т, 5Н), 7,81 (а, тн), 7,66-7,75 (т, 1Н), 7,44-7,55 (т, 1Н), 7,37 (І, 1Н), 7,09-7,18 (т, 1Н), 7,03 (а, 1Н), 6,98 (5, 1Н), 6,48- 6,62 (т, 1Н), 6,07-6,22 (т, 1Н), 4,81-4,92 (т, 1Н), 4,58-4,74 (т, 2Н), 3,80-3,93 (т, ЗН), 3,27-3,37 (т, 5Н), 2,53-2,68 (т, 4Н), 2,15-2,23 (т, ЗН), 2,03 (І, 2Н), 1,36-1,53 (т, 6Н), 0,97-1,33 (т, 24Н), 0,81 (9, 6Н). М5 (ЕБІ) т/е 1478,3(М-Н). 2.10 Даний абзац був навмисне залишений незаповненим. 2.11 Даний абзац був навмисне залишений незаповненим. 2.12 Даний абзац був навмисне залишений незаповненим. 2.13 Даний абзац був навмисне залишений незаповненим. 60 2.14 Даний абзац був навмисне залишений незаповненим.
2.15 Даний абзац був навмисне залишений незаповненим. 2.16 Даний абзац був навмисне залишений незаповненим. 2.17 Синтез 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-3-(1-(13-(2- (/М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)угексаноїл|-3-сульфо-І -аланіл)аміно)етокси|-5,7- диметилтрицикло!|3.3.1.157)дец-1-ил)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл|Іпіридин-2-карбонової кислоти (синтону ЕА)
У розчин речовини із прикладу 1.15 (0,023 г) й 2,5-діоксопіролідин-1-іл-6-(2,5-діоксо-2,5- дигідро-1Н-пірол-1-іл)угексаноату (9,12 мг) в М,М-диметилформаміді (0,5 мл) додавали М,М- діізопропілетиламін (0,012 мл) і реакційну суміш перемішували протягом ночі. Реакційну суміш розбавляли М,М-диметилформамідом (1 мл) і водою (0,5 мл). Суміш очищували за допомогою
НРІС з оберненою фазою із застосуванням системи сСіїбоп, з елююванням від 10 до 8595 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./о0б. трифтороцтової кислоти. Необхідні фракції об'єднували й висушували сублімацією з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-йв) б ррт 12,84 (5, 1Н), 8,04 (а, 1), 7,90 (а, 1), 7,79 (а, тн), 7,65-7,57 (т, 2Н), 7,54 (й, 1Н), 7,51-7,41 (т, 2Н), 7,40-7,31 (т, ЗН), 7,01-6,96 (т, ЗН), 4,96 (5, 2Н), 4,34-4,28 (т, ЗН), 3,89 (ї, 2Н), 3,83 (5, 2Н), 3,937 (І, 2Н), 5,29 (ї, 2Н), 3,16-2,95 (т, АН), 2,80 (аа, 1Н), 2,70 (ад, 1Н), 2,11 (5, ЗН), 2,06 (ї, 2Н), 1,47 (НН, 4Н), 1,40-0,92 (т, 12Н), 0,84 (5, 6Н). М5 (ЕБІ) т/е 1090,3 (МАН). 2.18 Синтез 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-ілІ|-3-(1-((3-(2-(2- (Ц6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-(2-сульфоеєтил)аміно)етокси)етокси|-5, 7- диметилтрицикло!|3.3.1.19|дец-1-иліметил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл|Іпіридин-2-карбонової кислоти (синтону БУ)
Вказану в заголовку сполуку одержували, як описано в прикладі 2.1, шляхом заміни речовини із прикладу 1.2.9 й 4-((5)-2-((5)-2-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)гексанамідо)-
З-метилбутанамідо)-5-уреїдопентанамідо)бензил-(4-нітрофеніл)укарбонату речовиною із прикладу 1.11.4 й перфторфеніл-6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)угексаноатом відповідно.
ІН ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-ав) б ррт 12,84 (5, 1Н), 8,04 (а, 1Н), 7,79 (а, 1Н), 7,61 (а, 1Н), 7,52 (да, 1Н), 7,42-7,49 (т, 2Н), 7,33-7,39 (т, 2Н), 7,30 (5, 1Н), 6,98 (5, 2Н), 6,96 (й, 1Н), 4,95 (5, 2Н), 3,89 (ї, 2Н), 3,82 (5, 2Н), 3,46-3,56 (т, 4Н), 3,31-3,46 (т, 10ОН), 3,01 (ї, 2Н), 2,61-2,68 (т,
Зо 1Н), 2,55-2,60 (т, 1Н), 2,21-2,32 (т, 2Н), 2,10 (5, ЗН), 1,40-1,51 (т, 4Н), 1,37 (й, 2Н), 0,91-1,30 (т, 12Н), 0,83 (5, 6Н). М5 (ЕБІ) т/е 10912 (М.Н). 2.19 Синтез 6-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-3-(1-4(3-(2-(6- (2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-(2-сульфоетил)аміно)етокси)-5, 7- диметилтрицикло!|3.3.1.19|дец-1-ил|метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)піридин-2-карбонової кислоти (синтону ЕК)
Вказану в заголовку сполуку одержували, як описано в прикладі 2.1, шляхом заміни 4-((5)-2- ((5)-2-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-ілугексанамідо)-3-метилбутанамідо)-5- уреїдопентанамідо)бензил-(4-нітрофеніл)укарбонату перфторфеніл-6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н- пірол-1-іл)угексаноатом. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-йв) б ррт 12,85 (5, 1Н), 8,04 (а, 1Н), 7,79 (а, 1Н), 7,61 (а, 1Н), 7,52 (аа, 1Н), 7,41-7,49 (т, 2Н), 7,32-7,39 (т, 2Н), 7,28 (5, 1Н), 6,93- 6,98 (т, ЗН), 4,95 (в, 2Н), 3,89 (ї, 2Н), 3,81 (5, 2Н), 3,32-3,38 (т, 2Н), 3,21-3,27 (т, 2Н), 3,01 (ї, 2Н), 2,61-2,67 (т, 2Н), 2,53-2,58 (т, 2Н), 2,33-2,39 (т, 1Н), 2,20-2,29 (т, 2Н), 2,09 (в, ЗН), 1,40- 1,51 (т, 4Н), 1,34 (5, 2Н), 0,93-1,27 (т, 1З3Н), 0,83 (5, 6Н). М5 (ЕБІ) т/е 10472 (МаАН)». 2.80 Синтез 6-І(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-ілІ|-3-11-(3-111- (2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)-21-оксо-22-(2-сульфоетил)-3,6,9,12,15,18-гексаокса-22- азатетракозан-24-іл|окси)-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.157|)дец-1-ил)метилі|-5-метил-1 Н-піразол-4- іліпіридин-2-карбонової кислоти (синтону ЕО)
Вказану в заголовку сполуку одержували, як описано в прикладі 2.1, шляхом заміни 4-((5)-2- ((5)-2-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-ілугексанамідо)-3-метилбутанамідо)-5- уреїдопентанамідо)бензил-(4-нітрофеніл)укарбонату перфторфеніл-1-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н- пірол-1-іл)-3,9,12,15,18-пентаоксагенікозан-21-оатом. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-вв) б ррт 12,84 (5, 1Н), 8,04 (9, 1Н), 7,79 (а, 1Н), 7,61 (а, 1), 7,42-7,54 (т, ЗН), 7,33-7,38 (т, 2Н), 7,28 (5, 1Н), 6,95 (ад, 1Н), 4,95 (5, 2Н), 3,89 (І, 2Н), 3,81 (5, 2Н), 3,07-3,53 (т, 24Н), 3,01 (ї, 2Н), 2,61-2,69 (т, 1Н), 2,54-2,60 (т, 1Н), 2,09 (в, ЗН), 1,96 (а, 2Н), 0,92-1,39 (т, 1ЗН), 0,84 (в, 6Н). М5 (ЕБІ) т/е 1269,4 (МАН): 2.81 Синтез 6-І(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-ілІ|-3-11-(3-111- (2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)-21-оксо-22-(2-сульфоетил)-3,6,9,12,15,18,25-гептаокса-22- азагептакозан-27-іл|окси)-5,7-диметилтрициклоЇ3.3.1.127|дец-1-ил)метил|-5-метил-1 Н-піразол-4- іліпіридин-2-карбонової кислоти (синтону ЕВ) бо Вказану в заголовку сполуку одержували, як описано в прикладі 2.1, шляхом заміни речовини із прикладу 1.2.9 й 4-((5)-2-((5)-2-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)гексанамідо)-
З-метилбутанамідо)-5-уреїдопентанамідо)бензил-(4-нітрофеніл)укарбонату речовиною із прикладу 1.11.4 Й перфторфеніл-1-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)-3,6,9,12,15,18- гексаоксагенікозан-21-оатом відповідно. "Н ЯМР (500 МГц, диметилсульфоксид-дв) б ррт 12,84 (5, 1Н), 8,04 (а, 1), 7,79 (а, 1Н), 7,61 (а, 1Н), 7,52 (й, 1), 7,41-7,50 (т, 2Н), 7,33-7,39 (т, 2Н), 7,31 (5, 1Н), 7,01 (а, 2Н), 6,97 (й, 1Н), 4,96 (5, 2Н), 3,89 (ї, 2Н), 3,83 (5, 2Н), 3,31-3,60 (т, ЗОН), 3,01 (ї, 2Н), 2,64-2,71 (т, 1Н), 2,53-2,61 (т, ЗН), 2,10 (5, ЗН), 1,38 (5, 2Н), 1,20-1,91 (т, 4Н), 1,12- 1,18 (т, 2Н), 0,91-1,12 (т, 4Н), 0,84 (5, 6Н). 2.82 Синтез 6-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-3-(1-4(3-(2-(6- (етенілсульфоніл)гексаноїл|-(2-сульфоетил)аміно)етокси)-5, 7-диметилтрициклоїЇ3.3.1.157)дец-1- ил|метил)-5-метил-1Н-піразол-4-іл)піридин-2-карбонової кислоти (синтону УЕ) 2.82.1 Етил-6-(2-гідроксиетил)тіо)гексаноат
Перемішували суміш етил-б6-бромгексаноату (З г), 2-меркаптоетанолу (0,947 мл) й К2СОз (12 г) в етанолі (100 мл) протягом ночі та фільтрували. Фільтрат концентрували. Залишок розчиняли в дихлорметані (100 мл) та промивали водою й сольовим розчином. Органічний шар висушували над сульфатом натрію, фільтрували та концентрували з одержанням указаної в заголовку сполуки. 2.82.2 6-(2-Гідроксиетил)тіо)гексанова кислота
Перемішували суміш речовини із прикладу 2.82.1 (12 г) та З М водного розчину МАаАОН (30 мл) в етанолі (30 мл) протягом ночі. Органічні речовини видаляли за зниженого тиску.
Залишкову водну фазу промивали етилацетатом, підкислювали за допомогою НСІ до рН 5 та екстрагували дихлорметаном. Екстракти об'єднували, висушували над сульфатом натрію, фільтрували та концентрували з одержанням указаної в заголовку сполуки. 2.82.3 6-(2-Гідроксиетил)сульфоніл)гексанова кислота
В перемішуваний розчин речовини із прикладу 2.82.2 (4 г) в суміші води (40 мл) й 1,4- діоксану (160 мл) додавали ОхопеФ (38,4 г) і суміш перемішували протягом ночі. Суміш фільтрували й фільтрат концентрували. Залишковий водний шар екстрагували дихлорметаном.
Екстракти об'єднували й висушували над сульфатом натрію, фільтрували та концентрували з одержанням указаної в заголовку сполуки.
Зо 2.82.4 6-(Вінілсульфоніл)гексанова кислота
В холодний (0"С) розчин речовини із прикладу 2.82.3 (1 г) в дихлорметані (10 мл) додавали триетиламін (2,8 мл) з подальшим додаванням метансульфонілхлориду (1,1 мл) в атмосфері аргону. Суміш перемішували протягом ночі й промивали водою та сольовим розчином.
Органічний шар висушували над сульфатом натрію, фільтрували та концентрували з одержанням указаної в заголовку сполуки. 2.82.5 2,5-Діоксопіролідин-1-іл-6-(вінілеоульфоніл)гексаноат
В перемішуваний розчин речовини із прикладу 2.82.4 (0,88 г) в дихлорметані (10 мл) додавали 1-гідроксипіролідин-2,5-діон (0,54 г) і М,М'-метандіілідендициклогексанамін (0,92 г).
Суміш перемішували протягом ночі та фільтрували. Фільтрат концентрували та очищували за допомогою флеш-хроматографії, з елююванням від 10 до 2595 етилацетату в петролейному етері, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕБІ) т/е 304,1 (М.-1). 2.82.6 6-(8-(1,3-Бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-3-(1-413-(2-(6- (етенілсульфоніл)гексаноїл|-(2-сульфоетил)аміно)етокси)-5, 7-диметилтрициклоїЇ3.3.1.157)дец-1- ил|метил)-5-метил-1Н-піразол-4-іл)упіридин-2-карбонова кислота
Вказану в заголовку сполуку одержували, як описано в прикладі 2.83, шляхом заміни 2,5- діоксопіролідин-1-іл-6-(2-хлорацетамідо)гексаноату речовиною із прикладу 2.82.5. "Н ЯМР (400
МГц, диметилсульфоксид-ав) б ррт 12,86 (5, 1Н), 8,04 (а, 1Н), 7,79 (а, 1Н), 7,61 (9, 1), 7,53 (аа, 1Н), 7,42-7,49 (т, 2Н), 7,33-7,40 (т, 2Н), 7,28 (5, 1Н), 6,88-7,00 (т, 2Н), 6,17-6,25 (т, 2Н), 4,95 (в, 2Н), 3,89 (І, 2Н), 3,81 (5, 2Н), 3,38 (ай, 2Н), 5,25 (І, 2Н), 3,04-3,12 (т, 2Н), 3,01 (І, 2Н), 2,62-2,69 (т, 1Н), 2,56 (аа, 1Н), 2,27 (а, 2Н), 2,09 (5, ЗН), 1,53-1,62 (т, 2Н), 1,43-1,51 (т, 2Н), 1,28-1,38 (т,
АН), 1,20-1,27 (т, 4Н), 0,92-1,19 (т, 6Н), 0,84 (в, 6Н). М5 (Е5БІ) т/е 10422 (МАН). 2.83 Синтез 6-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-3-11-((3-(2-((6-
І(хлорацетил)аміно|гексаноїл)-(2-сульфоетил)аміно|етокси)-5,7-диметилтрицикло|3.3.1.127|)дец- 1-ил)метил)|-5-метил-1Н-піразол-4-іліпіридин-2-карбонової кислоти (синтону УМ)
В суміш речовини із прикладу 1.2.9 (12,5 мг) й 2,5-діоксопіролідин-1-іл-6-(2- хлорацетамідо)гексаноату (6,7 мг) в М,М-диметилформаміді (1,5 мл) додавали / М,М- діізопропілетиламін (26 мкл). Суміш перемішували протягом 10 днів і очищували за допомогою
НРІ С з оберненою фазою із застосуванням системи оіїЇбзоп та колонки С18, з елююванням від 20 до 6095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./06. трифтороцтової кислоти, з одержанням 60 указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (500 МГц, диметилсульфоксид-сйвє) б ррт 12,83 (в, МН),
8,15-8,21 (т, 1Н), 8,04 (а, 1Н), 7,79 (а, 1Н), 7,61 (а, 1), 7,52 (аа, 1), 7,41-7,49 (т, 2Н), 7,32-7,39 (т, 2Н), 7,28 (5, 1Н), 6,96 (ад, 1Н), 4,95 (5, 2Н), 4,01 (а, 2Н), 3,89 (ї, 2Н), 3,81 (в, 2Н), 3,39 (а, 2Н), 3,25 (І, 2Н), 2,98-3,10 (т, 5Н), 2,62-2,70 (т, 1Н), 2,56-2,61 (т, 1Н), 2,23-2,30 (т, 2Н), 2,09 (5, ЗН), 1,33-1,52 (т, 5Н), 1,19-1,30 (т, 6Н), 0,91-1,18 (т, 6Н), 0,84 (5, 6Н). М5 (Е5І) т/е 10432 (МАН). 2.84 Синтез М-І6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-І -валіл-М-14-(ЦТ2-(13-((4-16-
ІВ-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-З-іл)-5- метил-1Н-піразол-1-іл)метил)|-5,7-диметилтрицикло!/3.3.1.127|)дец-1-иліокси)етил|ц-(3- карбоксипропіл)карбамоїліокси)метиліІфеніл)-М»-карбамоїл-І! -орнітинаміду (синтону ГЕ)
Суміш речовини із прикладу 1.56 (0,020 г), 4-((5)-2-((5)-2-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол- 1-ілугексанамідо)-3-метилбутанамідо)-5-уреїдопентанамідо)бензил-(4-нітрофеніл)укарбонату (0,022 г) й М,М-діізопропілетиламіну (0,018 мл) перемішували разом в М,М-диметилформаміді (0,4 мл) за кімнатної температури. Після перемішування протягом 5 годин реакційну суміш розбавляли сумішшю М,М-диметилформаміду й води 1:1 (2 мл). Суміш очищували за допомогою НРІ С з оберненою фазою із застосуванням системи сіїзоп, з елююванням від 10 до 8595 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./о0б. трифтороцтової кислоти. Необхідні фракції об'єднували й висушували сублімацією з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-йв) б ррт 12,82 (5, 1Н), 9,97 (в, 1Н), 8,10-7,98 (т, 2Н), 7,84-7,72 (т, 2Н), 7,67-7,54 (т, ЗН), 7,54-7,А41 (т, ЗН), 7,40-7,32 (т, 2Н), 7,30-7,23 (т, ЗН), 6,99 (в, 2Н), 6,94 (9, 1Н), 5,99 (5, 1Н), 4,98 (5, 2Н), 4,95 (5, 2Н), 4,45-4,35 (т, 2Н), 4,19 (да, 2Н), 3,88 (ї, 2Н), 3,82- 203,76 (т, 2Н), 3,47-3,31 (т, 4Н), 3,28-3,19 (т, 4Н), 3,07-2,89 (т, 4Н), 2,21-2,11 (т, АН), 2,09 (5, 2Н), 2,02-1,89 (т, 1Н), 1,77-1,63 (т, 2Н), 1,62-1,27 (т, 10Н), 1,27-0,90 (т, 1ЗН), 0,88-0,78 (т, 12Н); М5 (ЕБІ) т/е 1430,3 (М--1)7. 2.85 Синтез М-16-Коромацетил)аміно|гексаноїл)-І -валіл-М-4-(Т2-(13-((4-(6-І8-(1,3- бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н- піразол-1-ілуметил|-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.137|)дец-1-ил)окси)етил|-(2- сульфоетил)карбамоїл)окси)метил|феніл)-М»-карбамоїл-І -орнітинаміду (синтону І Н) 2.85.1 1Н-Бензої91(11,2,3)гриазол-1-іл-6-(2-бромацетамідо)гексаноат
У розчин 6-(2-бромацетамідо)гексанової кислоти (105 мг) й бензотриазол-1- ілокси)утрипіролідинофосфонію гексафторфосфату (РУВОР, 325 мг) в М,М-диметилформаміді
Зо (З мл) додавали триєтиламін (87 мкл). Суміш перемішували протягом 1 години та очищували за допомогою НРІ С на системі біїб5оп (колонка С18), з елююванням від 20 до 6095 ацетонітрилу в 0,195 водному розчині ТЕА, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕІ) т/е 368,7 (МАН). 2.85.2 / М-(6-КБромацетил)аміно|гексаноїл)-І -валіл-М-4-((2-(13-(4-16-І(8-(1,3-бензотіазол-2- ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1- ілуметил|-5,7-диметилтрицикло!/3.3.1.157)дец-1-илюкси)етилі|-(2- сульфоетил)карбамоїлоюкси)метиліІфеніл)-Мо-карбамоїл-і -орнітинамід
В суміш речовини із прикладу 2.66.1 (6,6 мг) й речовини із прикладу 2.85.2 (3,6 мг) в М.,М- диметилформаміді (0,3 мл) додавали М,М-діїзопропілетиламін (2,52 мкл). Суміш перемішували протягом 5 хвилин, розбавляли диметилсульфоксидом і очищували за допомогою НРІС з оберненою фазою із застосуванням системи біїбоп та колонки С18, з елююванням від 20 до 6095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./06б. трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (500 МГц, диметилсульфоксид-ав) б 9,99 (в, 1Н), 8,24 (в, 1Н), 8,08 (9, 1Н), 8,04 (а, 1Н), 7,80 (аа, 2Н), 7,60 (ад, ЗН), 7,56-7,50 (т, 1Н), 7,50-7,41 (т, 2Н), 7,36 (а, 2Н), 7,32-7,25 (т, ЗН), 6,96 (а, 1Н), 4,98 (й, 4Н), 4,39 (ад, 1Н), 4,20 (аа, 1Н), 3,92-3,68 (т, 6Н), 3,42 (аа, 1Н), 3,25 (ї, 2Н), 3,09-2,87 (т, 6Н), 2,64 (5, 2Н), 2,25-1,87 (т, 5Н), 1,79-0,89 (т, 17Н), 0,88-0,67 (т, 12Н). М5 (ЕБІ) т/е 14925 (М-Н). 2.86 Синтез 4-((2-((3-(4-(6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|- 2-карбоксипіридин-3-іл)-5-метил-1Н-піразол-1-іл)метилІ|-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.12Лдец-1- ил)окси)етил|і|-(З-карбоксипропіл)карбамоїліокси)метил|-3-(2-(2-113-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н- пірол-1-іл)упропаноїліаміноїетокси)етокси|феніл-бета-О-глюкопіранозидуронової кислоти (синтону Г./) 2.86.1 3-(1-((3-(2-(((2-(2-(2-Аміноетокси)етокси)-4-(25,38,45,55,65)-6-карбокси-3,4,5- тригідрокситетрагідро-2Н-піран-2-іл)окси)бензил)окси)карбоніл)-(3- карбоксипропіл)аміно)етокси)-5,7-диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)-6-(8- (бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл)піколінова кислота
У розчин речовини із прикладу 1.56 (0,024 г) й речовини із прикладу 2.62.6 (0,030 г) в М,М- диметилформаміді (0,4 мл) додавали М,М-дізопропілетиламін (0,025 мл) і реакційну суміш перемішували протягом ночі. Реакційну суміш концентрували і залишок розчиняли в бо тетрагідрофурані (0,5 мл) та метанолі (0,5 мл) та обробляли гідратом гідроксиду літію (0,018 г) у вигляді розчину у воді (0,5 мл). Після перемішування протягом 1 години реакційну суміш розбавляли М,М-диметилформамідом (1 мл)у і очищували за допомогою НРІС з оберненою фазою із застосуванням системи оіЇзоп, з елююванням від 10 до 7595 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./0б. трифтороцтової кислоти. Необхідні фракції об'єднували й висушували сублімацією з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (Е5І) т/е 1262,7 (МН). 2.86.2 4-(2-(3-((4-16-І(8-(1,3-Бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1 Н)-іл|-2- карбоксипіридин-З3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)уметил)|-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.157)дец-1- илюкси)етилі-(З-карбоксипропіл)укарбамоїл)іокси)метил|-3-(2-(2-13-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н- пірол-1-іл)упропаноїліаміно)етокси)етокси|феніл-бета-О-глюкопіранозидуронова кислота
У розчин речовини із прикладу 2.86.1 (0,0173 г) й 2,5-діоксопіролідин-1-іл-3-(2,5-діоксо-2,5- дигідро-1Н-пірол-1-ілупропаноату (4,38 мг) в М,М-диметилформаміді (0,8 мл)у додавали 2,5- діоксопіролідин-1-іл-3-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)/пропаноат (4,38 мг) і реакційну суміш перемішували протягом 2годин. Реакційну суміш розбавляли сумішшю /- М,М- диметилформамід':вода, 1:1 (1 мл), і суміш очищували за допомогою НРІ С з оберненою фазою із застосуванням системи с1іЇ5зоп, з елююванням від 10 до 8095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./06. трифтороцтової кислоти. Необхідні фракції об'єднували й висушували сублімацією з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-адв) б ррт 12,77 (в, 1Н), 8,03 (0, 1), 7,99 (її, 1Н), 7,77 (1), 7,62 (а, 1Н), 7,55-7,41 (т, ЗН), 7,40-7,32 (т, 2Н), 8,28 (5, 1Н), 7,23-7,17 (т, 1Н), 6,97 (5, 2Н), 6,94 (а, 1Н), 6,66 (5, 1Н), 6,60 (ад, 1Н), 5,07 (т, 1Н), 5,00-4,91 (т, 4Н), 4,17-4,02 (т, 2Н), 3,96-3,85 (т, 2Н), 3,85-3,76 (т, 2Н), 3,71 (ї, 2Н), 3,64- 3,56 (т, 4Н), 3,34-3,12 (т, 1ОН), 3,01 (, 2Н), 2,33 (ї, 2Н), 2,24-2,12 (т, 2Н), 2,09 (в, ЗН), 1,70 (р, 2Н), 1,45-0,88 (т, 12Н), 0,88-0,77 (т, 6Н); М5 (ЕБІ) т/е 14342 (МаМа)». 2.87 Синтез 4-(1(4-Ц2-(13-(4-(6-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін- 2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1-ілуметилі/д-5, 7- диметилтрициклоїЇ3.3.1.157)дец-1-илюкси)етиліІ-(З-карбоксипропіл)аміно)піперидин-1- ілукарбоніл|окси)метил)-3-(2-(2-113-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1- ілупропаноїл|аміно)етокси)етокси|феніл-бета-О-глюкопіранозидуронової кислоти (синтону МА) 2.87 1 3-(1-((3-(2-(1-((2-(2-(2-Аміноетокси)етокси)-4-((25,38,45,55,65)-6-карбокси-3,4,5- тригідрокситетрагідро-2Н-піран-2-іл)уокси)бензил)окси)карбоніл)піперидин-4-іл)-(3-
Зо карбоксипропіл)аміно)етокси)-5,7-диметиладамантан-1-ілуметил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)-6-(8- (бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл)піколінова кислота
Розчин речовини із прикладу 1.42 (0,050 г) й речовини із прикладу 2.62.6 (0,050 г) в М,М- диметилформаміді (0,5 мл) обробляли М,М-діїізопропілетиламіном (0,042 мл) і реакційну суміш перемішували за кімнатної температури протягом 2 годин. Реакційну суміш концентрували, і залишок розчиняли в метанолі (0,5 мл) і тетрагідрофурані (0,5 мл), і обробляли гідратом гідроксиду літію (0,031 г) у вигляді розчину у воді (0,5 мл). Реакційну суміш перемішували протягом 1,5години й розбавляли М,М-диметилформамідом (1 мл). Суміш очищували за допомогою НРІ С з оберненою фазою із застосуванням системи сіїзоп, з елююванням від 10 до 8095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./о0б6. трифтороцтової кислоти. Необхідні фракції об'єднували й висушували сублімацією з одержанням указаної в заголовку сполуки. МЗ5 (ЕІ) т/е 1345,7 (МАН). 2.87.2. 4-0(4-12-(13-К4-(6-(8-(1,3-Бензотіазол-2г-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2- карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1-ілуметил)|-5, 7-диметилтрицикло!|3.3.1.157)дец-1- илюкси)етилі-(З-карбоксипропіл)аміно)піперидин-1-іл)укарбоніл|окси)метил)-3-(2-(2-113-(2,5- діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-ілупропаноїл|аміно)етокси)етокси|феніл-бета-О- глюкопіранозидуронова кислота
Розчин речовини із прикладу 2.87.1 (0,047 г) й 2,5-діоксопіролідин-1-іл-3-(2,5-діоксо-2,5- дигідро-1Н-пірол-1-ілупропаноату (0,011 г) в М,М-диметилформаміді (0,5 мл)у обробляли М,М- дііззопропілетиламіном (0,031 мл) і реакційну суміш перемішували за кімнатної температури протягом 2 годин. Реакційну суміш розбавляли сумішшю М,М-диметилформамід:вода, 1:1 (2 мл). Суміш очищували за допомогою НРІ С з оберненою фазою із застосуванням системи
Сібоп, з елююванням від 10 до 8595 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./об. трифтороцтової кислоти. Необхідні фракції об'єднували й висушували сублімацією з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-сйв) б ррт 12,67 (5, 1Н), 8,96 (5, 1Н), 8,15-8,07 (т, 2Н), 7,88 (а, 9 - 68,1 Гц, 1Н), 7,71 (а, У - 7,5 Гц, 1Н), 7,62- 7,50 (т, ЗН), 7,50-7,45 (т, 1Н), 7,45-7,42 (т, 1Н), 7,37 (5, 1Н), 7,33-7,27 (т, 1Н), 7,07 (в, 2Н), 7,07- 7,02 (т, 1Н), 6,80-6,74 (т, 1Н), 6,72-6,66 (т, 1Н), 5,23-5,14 (т, 1Н), 5,13-5,00 (т, 4Н), 4,27-4,12 (т, 4Н), 4,06-3,95 (т, 4Н), 3,92 (в, 2Н), 3,83-3,78 (т, 2Н), 3,57-3,32 (т, ТОН), 3,32-3,14 (т, 4Н), 3,14-3,06 (т, 2Н), 2,90 (5, 2Н), 2,49-2,37 (т, АН), 2,19 (5, ЗН), 2,12-2,01 (т, 2Н), 2,02-1,88 (т, 2Н), 60 1,74-1,57 (т, 2Н), 1,52 (в, 2Н), 1,45-1,30 (т, 4Н), 1,30-1,05 (т, 6Н), 0,95 (5, 6Н); М5 (Е5І) т/е
1495,4 (М.АН)». 2.88 Синтез 4-((2-((3-(4-(6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-ілі|- 2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1Н-піразол-1-ілуметил/|-5,7-диметилтрициклоїЇ3.3.1.12Л)дец-1- илюкси)етилі|-(3-сульфопропіл)укарбамоїлюкси)метилі-3-(2-(2-113-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н- пірол-1-ілупропаноїл|аміно)етокси)етокси|феніл-бета-О-глюкопіранозидуронової кислоти (синтону МО) 2.88.1 3-(1-((3-(2-(((2-(2-(2-Аміноетокси)етокси)-4-(25,38,45,55,65)-6-карбокси-3,4,5- тригідрокситетрагідро-2Н-піран-2-іл)уокси)бензил)окси)карбоніл)-(3-сульфопропіл)аміно)етокси)- 5,7-диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1Н-піразол-4-іл)-6-(8-(бензо|4|гіазол-2г-ілкарбамоїл)-
З,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл)піколінова кислота
Розчин речовини із прикладу 1.6 (0,039 г) й речовини із прикладу 2.62.6 (0,041 г) в М,М- диметилформаміді (0,5 мл) обробляли М,М-діїзопропілетиламіном (0,035 мл) і реакційну суміш перемішували за кімнатної температури протягом 2 годин. Реакційну суміш концентрували, і залишок розчиняли в метанолі (0,5 мл) і тетрагідрофурані (0,5 мл), і обробляли гідратом гідроксиду літію (0,025 г) у вигляді розчину у воді (0,5 мл). Реакційну суміш перемішували протягом 1,5години й розбавляли М,М-диметилформамідом (1 мл). Суміш очищували за допомогою НРІ С з оберненою фазою із застосуванням системи сіїзоп, з елююванням від 10 до 8095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./о0б6. трифтороцтової кислоти. Необхідні фракції об'єднували й висушували сублімацією з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕБІ) т/е 1297,8 (М.Н). 2.88.2 4-(2-(3-((4-16-І(8-(1,3-Бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1 Н)-іл|-2- карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1-ілуметил)|-5, 7-диметилтрицикло!|3.3.1.157)дец-1- илюкси)етилі|-(3-сульфопропіл)укарбамоїл)окси)метилі-3-(2-(2-113-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н- пірол-1-іл)упропаноїліаміно)етокси)етокси|феніл-бета-О-глюкопіранозидуронова кислота
У розчин речовини із прикладу 2.88.1 (0,024 г) й 2,5-діоксопіролідин-1-іл-3-(2,5-діоксо-2,5- дигідро-1Н-пірол-1-ілупропаноату (6,40 мг) в М,М-диметилформаміді (0,5 мл) додавали М,М- дііззопропілетиламін (0,016 мл) і реакційну суміш перемішували за кімнатної температури протягом 1 години. Реакційну суміш розбавляли сумішшю М,М-диметилформамід:вода, 1:1 (2 мл). Суміш очищували за допомогою НРІС з оберненою фазою із застосуванням системи
Ко) Сібоп, з елююванням від 10 до 8095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./06. трифтороцтової кислоти. Необхідні фракції об'єднували й висушували сублімацією з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (500 МГц, диметилсульфоксид-дв) б ррт 12,87 (5, 1Н), 8,09-8,02 (т, 2Н), 7,79 (а, 1Н), 7,61 (а, 1), 7,52 (аа, 1Н), 7,50-7,42 (т, 2Н), 7,40- 7,33 (т, 2Н), 7,91 (5, 1Н), 7,20 (І, 1Н), 6,98 (5, ЗН), 6,66 (5, 1Н), 6,60 (ад, 1Н), 5,06 (І, 1Н), 4,96 (5, 4Н), 410 (ад, 4Н), 3,81 (й, 4Н), 3,71 (ї, 2Н), 3,59 (І, 2Н), 3,51-3,35 (т, 4Н), 3,26 (Пд, 6Н), 3,17 (ад, 2Н), 3,01 й, 2Н), 2,35 (а, 4Н), 2,10 (9, ЗН), 1,75 (д, 2Н), 1,44-0,88 (т, 12Н), 0,82 (й, 6Н); М5 (ЕБІ) т/е 1446,4 (М-Н). 2.89 Синтез М-І6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-ілугексаноїл|-І -валіл-М-І4-(1(3-Т2-(3-(4- 16-(8-1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-іл)-5- метил-1Н-піразол-1-іл)уметил/І-5,7-диметилтрициклоїЇ3.3.1.12Л)дец-1-ил)іокси)етилі|ц-(2- сульфоетил)аміно)зазетидин-1-іл/укарбоніл|окси)метил)феніл/|-М-карбамоїл-і -орнітинаміду (синтону МО)
Розчин речовини із прикладу 1.60 (0,026 г), 4-((5)-2-((5)-2-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н- пірол-1-ілугексанамідо)-3-метилбутанамідо)-5-уреїдопентанамідо)бензил-(4- нітрофеніл)укарбонату (0,024 г) й М,М-діїзопропілетиламіну (0,022 мл) перемішували разом в
М,М-диметилформаміді (0,8 мл) за кімнатної температури протягом З годин. Реакційну суміш розбавляли сумішшю М,М-диметилформамід'вода, 1:1 (2 мл). Суміш очищували за допомогою
НРІС з оберненою фазою із застосуванням системи сСіїбоп, з елююванням від 10 до 8095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./о0б. трифтороцтової кислоти. Необхідні фракції об'єднували й висушували сублімацією з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-ав) б ррт 12,85 (5, 1Н), 9,99 (5, 1Н), 8,06 (ад, 1Н), 8,03 (й, 1Н), 7,79 (аа, 2н), 7,60 (аа, ЗН), 7,55-7,41 (т, ЗН), 7,36 (9, 2Н), 7,29 (1, ЗН), 6,99 (5, 2Н), 6,95 (а, 1Н), 5,99 (5, 1Н), 5,04-4,92 (т, 4Н), 4,37 (д, 1Н), 4,34-4,24 (т, 1Н), 4,24-4,10 (т, 4Н), 3,88 (ї, 2Н), 3,82 (5, 2Н), 3,40-3,29 (т, 4Н), 3,01 (ї, 2Н), 2,99-2,91 (т, 1Н), 2,687 (1, 2Н), 2,25-2,06 (т, 5Н), 1,95 (а, 1), 1,68 (5, 1Н), 1,60 (5, 1Н), 1,54-1,24 (т, 12Н), 1,24-0,94 (т, 9Н), 0,90-0,78 (т, 12Н); М5 (Е5І) т/е 1507,4 (М.-АН)». 2.90 Синтез 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1Н)-ілІ|-3-11-(3-Ц26- (2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)-8,24-діоксо-3-(2-сульфоетил)-11,14,17,20-тетраокса-3,7,23- триазагексакоз-1-илі|окси)-5, 7-диметилтрициклоїЇ3.3.1.157|)дец-1-ил)метилі|-5-метил-1 Н-піразол-4- 60 ілупіридин-2-карбонової кислоти (синтону М5)
У суміш речовини із прикладу 1.61.2 (15 мг) й 2,5-діоксопіролідин-1-іл-1-(2,5-діоксо-2,5- дигідро-1Н-пірол-1-іл)-3-оксо-7,10,13,16б-тетраокса-4-азанонадекан-19-оату (16,91 мг) в М,М- диметилформаміді (0,8 мл) додавали М,М-дізопропілетиламін (28,8 мкл) при 0"С. Суміш перемішували протягом З годин і очищували за допомогою НРІС з оберненою фазою, із застосуванням системи сіїзоп та колонки С18, з елююванням від 20 до 6095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н
ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-ав) б ррт 12,87 (5, 1Н), 8,98 (5, 1Н), 8,08-7,92 (т, ЗН), 7,79 (а, 1Н), 7,62 (9, 1Н), 7,57-7,41 (т, ЗН), 7,36 (9, 2Н), 7,29 (5, 1Н), 7,04-6,92 (т, ЗН), 4,96 (5, 2Н), 3,89 (ї, 2Н), 3,83 (5, 2Н), 3,48 (а, 4Н), 3,44-3,17 (т, ЗН), 3,18-2,83 (т, ТОН), 2,38-2,24 (т, 4Н), 2,11 (5, ЗН), 1,78 (т, 2Н), 1,50-0,94 (т, 12Н), 0,86 (5, 6Н). М5 (ЕБІ) т/е 1309,3 (М-Н). 2.91 Синтез М-І6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-І -валіл-М-І4-(1(3-Т2-(3-(4- 16-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-іл)-5- метил-1Н-піразол-1-іл)уметил|-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.12Л)дец-1-иліокси)етил|-(2- сульфоетил)аміно)пропіл)карбамоїл|окси)метил)феніл|-М»-карбамоїл-І -орнітинаміду (синтону
МЕ)
У суміш речовини із прикладу 1.61.2 (12,8 мг) й 4-((5)-2-((5)-2-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н- пірол-1-ілугексанамідо)-3-метилбутанамідо)-5-уреїдопентанамідо)бензил-(4- нітрофеніл)укарбонату (10,4 мг) в М,М-диметилформаміді (0,5 мл) при 0"С додавали М,М- діізопропілетиламін (24,54 мкл). Суміш перемішували протягом З годин і очищували за допомогою НРІС з оберненою фазою із застосуванням системи сіїбоп та колонки С18, з елююванням від 20 до 6095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-дв) б ррт 12,85 (5, 1Н), 9,97 (5, 1Н), 8,97 (5, 1Н), 8,04 (ї, 2Н), 7,79 (ад, 2Н), 7,65-7,40 (т, 7Н), 7,36 (19, ЗН), 7,28 (а, ЗН), 6,99 (5, 2Н), 6,95 (а, 1Н), 5,98 (5, 1Н), 4,95 (а, 4Н), 4,49-4,30 (т, 1Н), 4,24-411 (т, 1Н), 3,88 (ї, 2Н), 3,82 (5, 2Н), 3,36 (І, ЗН), 3,18-2,84 (т, 9Н), 2,25-1,88 (т, 5Н), 1,85-0,90 (т, 14Н), 0,91-0,75 (т, 13Н). М5 (ЕБІ) т/е (М--Н). 2.92 Синтез М-(6-(йодацетил)аміно)|гексаноїл)-І -валіл-М-74-((2-(13-((4-(6-І8-(1,3-бензотіазол- 2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1- іл)метил|-5,7-диметилтрициклої/3.3.1.15Ядец-1-иліокси)етил|-(2-
Зо сульфоетил)карбамоїл)окси)метилі|феніл)-М»-карбамоїл-Іі -орнітинаміду (синтону МО)
В суміш речовини із прикладу 1.2.9 (8,2 мг) й 2,5-діоксопіролідин-1-іл-6-(2- йодацетамідо)гексаноату (4,7 мг) в М.М-диметилформаміді (0,3 мл) на крижаній бані додавали
М,М-діїізопропілетиламін (З мкл). Суміш перемішували при 0"С протягом 1,5 години. Реакційну суміш розбавляли диметилсульфоксидом і суміш очищували за допомогою НРІ С з оберненою фазою із застосуванням системи сСіїзоп та колонки С18, з елююванням від 20 до 6095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-ав) б ррт 12,87 (5, 1Н), 10,00 (5, 1Н), 8,21 (9, 1н), 8,06 (ад, 2Н), 7,81 (аа, 2Н), 7,60 (1, ЗН), 7,48 (ада, ЗН), 7,36 пд, 2Н), 7,28 (9, ЗН), 6,95 (9, 1Н), 4,97 (а, 4Н), 4,39 (д, 1Н), 4,19 (ї, 1н), 3,88 (ї, 2Н), 3,80 (а, 2Н), 5,25 (а, 2Н), 2,97 (да, 6Н), 2,63 (5, 2Н), 2,25-1,88 (т, 5Н), 1,78-0,70 (т, 29Н). М5 (ЕБІ) т/е 1538,4 (М-Н). 2.93 Синтез М-16-Кетенілсульфоніл)аміно|гексаноїл)-І -валіл-М-14-(12-(13-((4-16-(8-(1,3- бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-іл)-5-метил-1 Н- піразол-1-іл)метил|-5,7-диметилтрицикло!/3.3.1.157)дец-1-ил)окси)етилі|-(2- сульфоетил)карбамоїліокси)метилі|феніл)-М»-карбамоїл-Ї! -орнітинаміду (синтону М2) 2.93.1 Метил-6-(вінілсульфонамідо)гексаноат
У розчин б6-метокси-6-оксогексан-1-амінію хлориду (0,3г) й триетиламіну (1,15 мл) в дихлорметані при 0"С додавали краплями етенсульфонілхлорид (0,209 г). Реакційну суміш нагрівали до кімнатної температури й перемішували протягом 1 години. Суміш розбавляли дихлорметаном і промивали сольовим розчином. Органічний шар висушували над сульфатом натрію, фільтрували та концентрували з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (Е5І) т/е 471,0 (2М.-Н)У. 2.93.2 6-(Вінілсульфонамідо)гексанова кислота
Розчин речовини із прикладу 2.93.1 (80 мг) та моногідрат гідроксиду літію (81 мг) в суміші тетрагідрофурану (1 мл) і води (1 мл) перемішували протягом 2 годин, потім розбавляли водою (20 мл) і промивали дієтиловим етером (10 мл). Водний шар підкислювали до рн 4 1 н. водним розчином НОСІ і екстрагували дихлорметаном (3 х 10 мл). Органічний шар промивали сольовим розчином (5 мл), висушували над сульфатом натрію, фільтрували та концентрували з одержанням указаної в заголовку сполуки. 2.93.3 2,5-Діоксопіролідин-1-іл-6-(вінілсульфонамідо)гексаноат бо Суміш речовини із прикладу 2.93.2 (25 мг), 1-етил-3-ІЗ-(диметиламіно)пропілікарбодіїміду гідрохлориду (43,3 мг) й 1-гідроксипіролідин-2,5-діону (15,6 мг) в дихлорметані (8 мл) перемішували протягом ночі, промивали насиченим водним розчином хлориду амонію і сольовим розчином та концентрували з одержанням указаної в заголовку сполуки. 2.93.4 М-16-КЕЄтенілсульфоніл)аміно|гексаноїл)-І -валіл-М-14-(ЦТ2-(13-((4-76-І(8-(1,3- бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н- піразол-1-ілуметил|-5,7-диметилтрициклоїЇ3.3.1.13,7|дец-1-илюкси)етилі-(2- сульфоетил)карбамоїліокси)метил|феніл)-М5-карбамоїл-і -орнітинамід
Вказану в заголовку сполуку одержували, як описано в прикладі 2.83, шляхом заміни речовини із прикладу 1.2.9 й 2,5-діоксопіролідин-1-іл-6-(2-хлорацетамідо)гексаноату речовиною із прикладу 2.66.1 й речовиною із прикладу 2.93.3 відповідно. "НН ЯМР (400 МГЦ, диметилсульфоксид-авє) б ррт 12,85 (5, 1Н), 9,98 (5, 1Н), 8,05 (аа, 2Н), 7,79 (а, 2Н), 7,60 (ї, ЗН), 7,55-7,40 (т, ЗН), 7,36 (4, 2Н), 7,27 (9, ЗН), 7,19 (ї, 1Н), 6,95 (9, 1Н), 6,66 (ад, 1Н), 6,09-5,90 (т, 2Н), 4,97 (0, 4Н), 4,39 (д, 1Н), 4,20 (1, 1Н), 3,88 (І, 2Н), 3,80 (й, 2Н), 5,25 (9, 2Н), 2,97 (а, 4Н), 2,78 (а, 2Н), 2,64 (9, 2Н), 2,22-1,86 (т, 6Н), 1,77-0,89 (т, 16Н), 0,89-0,72 (т, 12Н). М5 (ЕБІ) т/е 1460,6 (М-Н). 2.94 Синтез 6-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-3-(1-4(3-(2-(Ї3- (6-Киодацетил)аміно|гексаноїліаміно)пропіл|-(2-сульфоетил)аміно)етокси)-5, 7- диметилтрицикло!3.3.1.127дец-1-ил|метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)піридин-2-карбонової кислоти (синтону МА)
Вказану в заголовку сполуку одержували із застосуванням процедури в прикладі 2.83, шляхом заміни речовини із прикладу 1.2.9 Й 2,5-діоксопіролідин-1-іл-6-(2- хлорацетамідо)гексаноату речовиною із прикладу 2.61.2 й 2,5-діоксопіролідин-1-іл-6-(2- йодацетамідо)гексаноатом відповідно. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-йвє) б ррт 12,87 (5, 1Н), 8,98 (5, 1Н), 8,20 (ї, 1Н), 8,04 (9, 1Н), 7,91 (ї, 1Н), 7,79 (а, 1Н), 7,62 (9, 1Н), 7,53 (9, 1Н), 7,50-7,А41 (т, 2Н), 7,36 (9, 2Н), 7,29 (5, 1Н), 6,96 (й, 1Н), 4,96 (5, 2Н), 3,89 (І, 2Н), 3,83 (5, 2Н), 3,06 (аї, 8Н), 2,89 (ї, 2Н), 2,17-1,99 (т, 5Н), 1,76 (5, 2Н), 1,56-0,93 (т, 14Н), 0,86 (5, 6Н). М5 (Е5І) т/е 1190,3 (М-Н). 2.95 Синтез 6-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-3-11-((3-12-((3- (Ц6-(етенілсульфоніл)гексаноїл|аміно)пропіл)-(2-сульфоетил)аміно|етокси)-5, 7-
Зо диметилтрицикло!3.3.1.127дец-1-ил)метилі|-5-метил-1Н-піразол-4-іліпіридин-2-карбонової кислоти (синтону МВ)
Вказану в заголовку сполуку одержували із застосуванням процедури в прикладі 2.83, шляхом заміни речовини із прикладу 1.2.9 Й 2,5-діоксопіролідин-1-іл-6-(2- хлорацетамідо)гексаноату речовиною із прикладу 1.61.2 й речовиною із прикладу 2.82.5 відповідно. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-ав) б ррт 12,87 (5, 1Н), 8,98 (в, 1Н), 8,04 (й, 1Н), 7,92 (1), 7,79 (а, 1Нн), 7,62 (9, 1Н), 7,53 (9, 1Н), 7,51-7,41 (т, 2Н), 7,36 (4, 2Н), 7,29 (5, 1Н), 7,01-6,90 (т, 2Н), 6,29-6,16 (т, 2Н), 4,96 (5, 2Н), 3,89 (ї, 2Н), 3,83 (5, 2Н), 3,45-3,19 (т, 2Н), 3,19-2,95 (т, 8Н), 2,89 (ї, 2Н), 2,16-1,98 (т, 5Н), 1,84-1,66 (т, 2Н), 1,64-1,21 (т, 1ЗН), 1,08 (ад,
ЄН), 0,86 (5, 6Н). М5 (ЕБІ) т/е 1199,3 (М.Н). 2.96 Синтез М-І3-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)упропаноїл|-І -валіл-М-14-(ЦТ2-(13-((4-16-
І1-41,93-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-1,2,3,4-тетрагідрохінолін-7-іл|-2-карбоксипіридин-3-іліІ-5- метил-1Н-піразол-1-іл)метил)|-5,7-диметилтрицикло!/3.3.1.127|)дец-1-иліокси)етиліц-(2- сульфоетил)карбамоїліокси)метилі|феніл)-М»-карбамоїл-І! -орнітинаміду (синтону МР) 2.96.1 (5)-(9Н-Флуорен-9-іл)метил-(1-((4-(«гідроксиметил)феніл)аміно)-1-оксо-5-уреїдопентан- 2-іл)укарбамат (5)-2-(((9Н-флуорен-9-іл)уметокси)карбоніл)аміно)-5-уреїдопентанову кислоту (40 г) розчиняли в дихлорметані (1,3 л). У розчин додавали (4-амінофеніл)метанол (13,01 г), 2-(ЗН-
П1,2,3Ігриазоло|4,5-б|піридин-3-іл)-1,1,3,3-тетраметилізоуронію гексафторфосфат(м) (421г) і
М,М-діїізопропілетиламін (0,035 л) та одержану суміш перемішували за кімнатної температури протягом 16 годин. Продукт збирали шляхом фільтрування та ополіскували дихлорметаном.
Об'єднані тверді речовини висушували під вакуумом з одержанням указаної в заголовку сполуки, яку застосовували на наступній стадії без додаткового очищення. МО (ЕБ5І) т/е 503,3 (МАН). 2.96.2 (5)-2-Аміно-М-(4-(гідроксиметил)феніл)-5-уреїдопентанамід
Розчиняли речовину із прикладу 2.96.1 (44 г) в М,.М-диметилформаміді (300 мл). Розчин обробляли диетиламіном (37,2 мл) і перемішували протягом однієї години за кімнатної температури. Реакційну суміш фільтрували й розчинник концентрували за зниженого тиску.
Неочищений продукт очищували за допомогою хроматографії на лужному оксиді алюмінію, з градієнтом елюювання від 0 до 3095 метанолу в етилацетаті, з одержанням указаної в заголовку 60 сполуки. М5 (ЕБІ) т/е 281,2 (МН).
2.96.3 трет-Бутил-((5)-1-((5)-1-(4-(гідроксиметил)феніл)аміно)-1-оксо-5-уреїдопентан-2- ілламіно)-3-метил-1-оксобутан-2-іл)укарбамат (5)-2-(Трет-бутоксикарбоніламіно)-3-метилбутанову кислоту (9,69 г) розчиняли в М,М- диметилформаміді (200 мл). У розчин додавали 2-(ЗН-(11,2,3|Ігриазоло|4,5-б|Іпіридин-3-іл)-1,1,3,3- тетраметилізоуронію гексафторфосфат(мМ) (18,65 г) і реакційну суміш перемішували протягом однієї години за кімнатної температури. Додавали речовину із прикладу 2.96.2 (12,5 г) ії М.,М- діізопропілетиламін (15,58 мл) і реакційну суміш перемішували протягом 16 годин за кімнатної температури. Розчинник концентрували за зниженого тиску, а залишок очищували за допомогою хроматографії на силікагелі, з елююванням 1095 метанолом в дихлорметані, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕБІ) т/е 480,2 (М.Н). 2.96.4 (5)-2-(5)-2-Аміно-3-метилбутанамідо)-М-(4-(гідроксиметил)феніл)-5-уреїдопентанамід
Розчиняли речовину із прикладу 2.96.3 (31,8 г) в дихлорметані (650 мл) і в розчин додавали трифтороцтову кислоту (4,85 мл). Реакційну суміш перемішували протягом трьох годин за кімнатної температури. Розчинник концентрували за зниженого тиску з одержанням суміші неочищеної вказаної в заголовку сполуки й 4-((5)-2-((5)-2-аміно-З3-метилбутанамідо)-5- уреїдопентанамідо)бензил-2,2,2-трифторацетату. Неочищений матеріал розчиняли в розчині діоксан/вода, 1:1 (300 мл), та додавали у розчин гідроксид натрію (5,55 г). Суміш перемішували протягом трьох годин за кімнатної температури. Розчинник концентрували під вакуумом і неочищений продукт очищували за допомогою НРІС з оберненою фазою із застосуванням системи СотрівіІаз!п, з градієнтом елюювання від 5 до 6095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,0595 об./об. гідроксиду амонію, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (Е5І) т/е 380,2 (МАН. 2.96.5 (5)-2-((5)-2-(3-(2,5-Діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)упропанамідо)-3-метилбутанамідо)-
М-(4-«гідроксиметил)феніл)-5-уреїдопентанамід
У розчин речовини із прикладу 2.96.4 (38 мг) в М,М-диметилформаміді (1 мл) додавали 2,5- діоксопіролідин-1-іл-3-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-ілупропаноат (26,7 мг). Реакційну суміш перемішували за кімнатної температури протягом ночі та очищували за допомогою НРІС з оберненою фазою із застосуванням системи сіїзоп, з градієнтом елюювання від 10 до 8595 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./об. трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в
Зо заголовку сполуки. М5 (ЕБ5І) т/е 531,06 (МАН) ». 2.96.6 4-((5)-2-((5)-2-(3-(2,5-Діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-ілупропанамідо)-3- метилбутанамідо)-5-уреїдопентанамідо)бензил-(4-нітрофеніл)укарбонат
У розчин речовини із прикладу 2.96.5 (53,1 мг) в М,М-диметилформаміді (З мл) додавали біс(4-нітрофеніл)карбонат (60,8 мг). Реакційну суміш перемішували за кімнатної температури протягом ночі та очищували за допомогою НРІ С з оберненою фазою із застосуванням системи сіїзоп, з градієнтом елюювання від 10 до 8595 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./о6. трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки. Ме (Е5І) т/е 696,2 (МАН). 2.96.7 М-І(3-(2,5-Діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)упропаноїл|)-І -валіл-М-14-(12-«13-К4-16-11-(1,3- бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-1,2,3,4-тетрагідрохінолін-7-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н- піразол-1-ілуметил|-5,7-диметилтрициклоїЇ3.3.1.13,7|дец-1-илюкси)етилі-(2- сульфоетил)карбамоїліокси)метил|феніл)-М5-карбамоїл-і -орнітинамід
Вказану в заголовку сполуку одержували, як описано в прикладі 2.1, шляхом заміни речовини із прикладу 1.2.9 й 4-((5)-2-((5)-2-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)гексанамідо)-
З-метилбутанамідо)-5-уреїдопентанамідо)бензил-(4-нітрофеніл)укарбонату речовиною із прикладу 1.24.2 й речовиною із прикладу 2.96.6 відповідно. "Н ЯМР (400 МГЦ, диметилсульфоксид-сє) б ррт 9,91 (в, 1Н), 9,80 (5, 2Н), 8,33 (5, 2Н), 7,96 (в, 2Н), 7,81 (й, 4Н), 7,81 (5, 2Н), 7,43 (а, ТОН), 7,34-7,02 (т, 14Н), 5,92 (в, 8Н), 4,94-4,70 (т, 6Н), 4,18 (й, 11), 3,85 (5, 8Н), 3,05-2,66 (т, 8Н), 2,30-2,13 (т, 14Н), 2,03-1,49 (т, 2Н), 0,92-0,63 (т, 40Н). М5 (ЕБ5І) т/е 1408,3 (М-Н)». 2.97 Синтез 6-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-3-11-((3-12-К2- карбоксиетил)--(2-(25,38,45,55,65)-6-карбокси-3,4 5-тригідрокситетрагідро-2Н-піран-2- іл|окси)-4-(2-(2-113-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1- іл)упропаноїл|аміно)етокси)етокси|бензил)окси|карбоніліаміно|етокси)-5,7- диметилтрицикло|3.3.1.157)дец-1-ил)метил|-5-метил-1 Н-піразол-4-іліпіридин-2-карбонової кислоти (синтону ММ) 2.97.1 4-(2-(2-Брометокси)етокси)-2-гідроксибензальдегід
Розчин 2,4-дигідроксибензальдегіду (1,0 г), 1-бром-2-(2-брометокси)етану (34г) й карбонату калію (1,0 г) в ацетонітрилі (30 мл) нагрівали до 75"С протягом 2 днів. Реакційну бо суміш охолоджували, розбавляли етилацетатом (100 мл), промивали водою (50 мл) й сольовим розчином (50 мл), висушували над сульфатом магнію, фільтрували та концентрували. Під час очищення залишку за допомогою хроматографії на силікагелі, з градієнтом елюювання від 5 до 3095 етилацетату в гептані, одержували вказану в заголовку сполуку. М5 (ЕЇ ЗО) т/е 290,4 (МАН). 2.97.2 4-(2-(2-Азидоетокси)етокси)-2-гідроксибензальдегід
У розчин речовини із прикладу 2.97.1 (1,26 г) в М,М-диметилформаміді (10 мл) додавали азид натрію (0,43 г) і реакційну суміш перемішували за кімнатної температури протягом ночі.
Реакційну суміш розбавляли діеєтиловим етером (100 мл), промивали водою (50 мл) й сольовим розчином (50 мл), висушували над сульфатом магнію, фільтрували та концентрували. При очищенні залишку за допомогою хроматографії на силікагелі, з градієнтом елюювання від 5 до 3095 етилацетату в гептані, одержували вказану в заголовку сполуку. М5 (ЕІ ЗО) т/е 251,4 (МАН. 2.97.3 (25,38,45,55,65)-2-(5-(2-(2-Азидоетокси)етокси)-2-формілфенокси)-6- (метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5-триїлтриацетат
Перемішували розчин речовини із прикладу 2.97.2 (0,84 г), (3Е,45,55,65)-2-бром-6- (метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5-триїлтриацетату (1,99 г) та оксиду срібла(І) (1,16 г) разом в ацетонітрилі (15 мл). Після перемішування протягом ночі реакційну суміш розбавляли дихлорметаном (20 мл). Додавали діатомову землю й реакційну суміш фільтрували та концентрували. При очищенні залишку за допомогою хроматографії на силікагелі, з градієнтом елюювання від 5 до 7595 етилацетату в гептані, одержували вказану в заголовку сполуку. 2.97.4 (25,38,45,55,65)-2-(5-(2-(2-Азидоетокси)етокси)-2-(гідроксиметил)фенокси)-6- (метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5-триїлтриацетат
Охолоджували розчин речовини із прикладу 2.97.3 (0,695г) в метанолі (5 мл) й тетрагідрофурані (2 мл) до 0"С. Додавали борогідрид натрію (0,023 г) й реакційну суміш нагрівали до кімнатної температури. Після перемішування в цілому протягом 1 години реакційну суміш виливали у суміш етилацетату (75 мл) і води (25 мл) та додавали насичений водний розчин бікарбонату натрію (10 мл). Органічний шар відділяли, промивали сольовим розчином (50 мл), висушували над сульфатом магнію, фільтрували та концентрували. При очищенні залишку за допомогою хроматографії на силікагелі, з градієнтом елюювання від 5 до 85905
Зо етилацетату в гептані, одержували вказану в заголовку сполуку. М5 (ЕІ 50) т/е 551,8 (М-НгО). 2.97.5 (25,38,45,55,65)-2-(5-(2-(2-Аміноетокси)етокси)-2-(гідроксиметил)фенокси)-6- (метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5-триїлтриацетат
До речовини із прикладу 2.97.4 (0,465 г) в тетрагідрофурані (20 мл) додавали 595 Ра/сС (0,1 г) в посудині для роботи під тиском об'ємом 50 мл й струшували суміш протягом 16 годин за тиску водню 30 фунтів/кв. дюйм. Реакційну суміш фільтрували та концентрували з одержанням указаної в заголовку сполуки, яку застосовували без додаткового очищення. М5 (ЕІ 50) т/е 5441 (М.-АН)». 2.97.6 (25,38,45,55,65)-2-(5-(2-(2-((9Н-Флуорен-9- ілуметокси)карбоніл)аміно)етокси)етокси)-2-(гідроксиметил)фенокси)-6- (метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5-триїлтриацетат
Охолоджували розчин речовини із прикладу 2.97.5 (0,443 г) в дихлорметані (8 мл) до 0"С, потім додавали М,М-діззопропілетиламін (0,214 мл) і (9Н-флуорен-9-іл)уметилхлорформіат (0,190 г). Через 1 годину реакційну суміш концентрували. При очищенні залишку за допомогою хроматографії на силікагелі, з градієнтом елюювання від 5 до 9595 етилацетату в гептані, одержували вказану в заголовку сполуку. М5 (ЕІ 50) т/е 748,15 (М-ОН). 2.97.7 (25,38,45,55,65)-2-(5-(2-(2-((9Н-Флуорен-9- ілуметокси)карбоніл)аміно)етокси)етокси)-2-(((4-нітрофенокси)карбоніл)уокси)метил)фенокси)-6- (метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5-триїлтриацетат
У розчин речовини із прикладу 2.97.6 (0,444 г) в М,М-диметилформаміді (5 мл) додавали
М,М-діїзопропілетиламін (0,152 мл) і біс(4-нітрофеніл)укарбонат (0,353 г) та перемішували реакційну суміш за кімнатної температури. Через 5 годин реакційну суміш концентрували. При очищенні залишку за допомогою хроматографії на силікагелі, з градієнтом елюювання від 5 до 9095 етилацетату в гептані, одержували вказану в заголовку сполуку. 2.97.8 3-(1-((3-(2-(((4-(2-(2-Аміноетокси)етокси)-2-(25,38,45,55,65)-6-карбокси-3,4,5- тригідрокситетрагідро-2Н-піран-2-іл)окси)бензил)окси)карбоніл)-(2-карбоксиетил)аміно)етокси)- 5,7-диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1Н-піразол-4-іл)-6-(8-(бензо|4|гіазол-2г-ілкарбамоїл)-
З,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл)піколінова кислота, сіль трифтороцтової кислоти
У розчин речовини із прикладу 1.25 (0,070 г) й речовини із прикладу 2.97.7 (0,070 г) в М,М- диметилформаміді (0,4 мл) додавали М,М-діїзопропілетиламін (0,066 мл). Після перемішування бо протягом ночі реакційну суміш концентрували. Залишок розчиняли в тетрагідрофурані (0,75 мл)
та метанолі (0,75 мл) і додавали моногідрат гідроксиду літію (0,047 г) у вигляді розчину у воді (0,75 мл). Через З години реакційну суміш розбавляли М,М-диметилформамідом (1 мл) і гасили трифтороцтовою кислотою (0,116 мл). Суміш очищували за допомогою НРІС з оберненою фазою із застосуванням системи оіЇзоп, з елююванням від 10 до 7595 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./0б. трифтороцтової кислоти. Необхідні фракції об'єднували й висушували сублімацією з одержанням указаної в заголовку сполуки. 2.97.9 6-(8-(Бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл)-3-(1-((3-(2-(((2- ((25,38,45,55,65)-6-карбокси-3,4,5-тригідрокситетрагідро-2Н-піран-2-іл)окси)-4-(2-(2-(3-(2,5- діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-ілупропанамідо)етокси)етокси)бензил)окси)карбоніл)-(2- карбоксиетил)аміно)етокси)-5, 7-диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4- ілупіколінова кислота
Перемішували розчин речовини із прикладу 2.97.8 (0,027 г), 2,5-діоксопіролідин-1-іл-3-(2,5- діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)упропаноату (7,92 мг) й М,М-діїзопропілетиламіну (0,017 мл) разом в М,М-диметилформаміді (0,4 мл) протягом 1 години. Реакційну суміш гасили сумішшю води й М,М-диметилформаміду, 1:1 (2 мл). Суміш очищували за допомогою НРІ С з оберненою фазою із застосуванням системи оіЇзоп, з елююванням від 10 до 7595 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./06б. трифтороцтової кислоти. Необхідні фракції об'єднували й висушували сублімацією з одержанням указаної в заголовку сполуки. "НН ЯМР (400 МГЦ, диметилсульфоксид-авє) б ррт 12,81 (5, 1Н), 8,03 (4, 2Н), 7,79 (а, 1Н), 7,62 (й, 1Н), 7,54-7,40 (т,
ЗН), 7,36 (Ю, 2Н), 7,28 (5, 1Н), 7,18 (а, 1Н), 6,98 (5, 2Н), 6,95 (9, 1Н), 6,69 (а, 1Н), 6,60 (а, 1Н), 5,03 (9, ЗН), 4,96 (5, 2Н), 4,05 (5, 2Н), 3,93 (й, 2Н), 3,88 (ї, 2Н), 3,80 (9, 2Н), 3,75-3,67 (т, 2Н), 3,59 (1, б6Н), 3,29 (а, 6Н), 3,17 (д, 2Н), 3,01 (ї, 2Н), 2,47 (0, 2Н), 2,33 (ї, 2Н), 2,09 (5, ЗН), 1,44-0,88 (т, 12Н), 0,82 (9, 6Н); М5 (ЕІ) т/е 1396,5 (М-НУ. 2.98 Синтез М-І6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-3-сульфо-І -аланіл-І -валіл-
М-(4-І(2-(3-((4-16-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1 Н)-іл|-2- карбоксипіридин-З3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)уметил)|-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.157)дец-1- ил)окси)етилі-(2-карбоксиетил)карбамоїл)іокси)метиліІфеніл)-М»-карбамоїл-І -орнітинаміду (синтону МО) 2.98.1 3-(1-((3-(2-(((4-((5)-2-(5)-2-Аміно-3-метилбутанамідо)-5-
Зо уреїдопентанамідо)бензил)окси)карбоніл)-(2-карбоксиетил)аміно)етокси)-5,7- диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)-6-(8-(бензо|д9|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл)піколінова кислота
Розчин речовини із прикладу 1.25.2 (0,059 г), (ОІН-флуорен-9-іл)метил-((5)-3-метил-1-(((5)-1- (4-(((4-нітрофенокси)карбоніл)окси)метил)феніл)аміно)-1-оксо-5-уреїдопентан-2-іл)аміно)-1- оксобутан-2-іл)укарбамату (0,053г) й М,М-діззопропілетиламіну (00055 мл) в М,М- диметилформаміді (0,5 мл) перемішували за кімнатної температури протягом ночі. В реакційну суміш додавали діетиламін (0,066 мл) і перемішування продовжували протягом 30 хвилин.
Реакційну суміш розбавляли сумішшю М,М-диметилформаміду й води, 1:1 (2 мл), і гасили шляхом додавання трифтороцтової кислоти (0,073 мл). Суміш очищували за допомогою НРІ С з оберненою фазою із застосуванням системи біїЇзоп, з елююванням від 10 до 7595 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./06б. трифтороцтової кислоти. Необхідні фракції об'єднували й висушували сублімацією з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕБ5І) т/е 1223,8 (МАН. 2.98.2. 3-(1-((3-(2-((((4-((5)-2-((5)-2-(8)-2-Аміно-3-сульфопропанамідо)-3-метилбутанамідо)-5- уреїдопентанамідо)бензил)окси)карбоніл)-(2-карбоксиетил)аміно)етокси)-5,7- диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)-6-(8-(бензо|д9|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл)піколінова кислота, сіль трифтороцтової кислоти
Розчин (К)-2-((9Н-флуорен-9-ілуметокси)карбоніл)аміно)-3-сульфопропанової кислоти (0,021 г), О-(7-азабензотриазол-1-іл)-М,М,М',М'-тетраметилуронію гексафторфосфату (0,020 г) й
М,М-діїзопропілетиламіну (0,031 мл) в М,М-диметилформаміді (0,4 мл) перемішували протягом
З хвилин. Розчин додавали до речовини із прикладу 2.98.1 (0,043 г) у вигляді розчину в М,М- диметилформаміді (0,4 мл). Після перемішування протягом 30 хвилин додавали розчин моногідрату гідроксиду літію (0,022 г) у воді (0,5 мл) й реакційну суміш перемішували протягом 1 години. Реакційну суміш розбавляли сумішшю М,М-диметилформаміду й води, 1:71 (2 мл), та гасили шляхом додавання трифтороцтової кислоти (0,054 мл). Суміш очищували за допомогою
НРІС з оберненою фазою із застосуванням системи сіїбоп, з елююванням від 10 до 7595 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./06б. трифтороцтової кислоти. Необхідні фракції об'єднували й висушували сублімацією з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕІ) т/е 1376,5 (М-н1). бо 2.98.3 6-(8-(Бензо|Ч|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроїзохінолін-2(1 Н)-іл)-3-(1-((3-(2-(2-
карбоксиетил)-(((4-((5)-2-((5)-2-(Н)-2-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-ілугексанамідо)-3- сульфопропанамідо)-3-метилбутанамідо)-5- уреїдопентанамідо)бензил)окси)карбоніл)аміно)етокси)-5,7-диметиладамантан- 1-іл)метил)-5- метил-1 Н-піразол-4-іл)піколінова кислота
Перемішували розчин речовини із прикладу 2.98.2 (0,025 г), 2,5-діоксопіролідин-1-іл-6-(2,5- діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)угексаноату (7,77 мг) й М,М-діізопропілетиламіну (0,015 мл) в
М,М-диметилформаміді (0,4 мл) протягом 1 години. Реакційну суміш розбавляли сумішшю води й М,М-диметилформаміду, 1:11 (2 мл). Суміш очищували за допомогою НРІС з оберненою фазою із застосуванням системи оіЇзоп, з елююванням від 10 до 7595 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./0б. трифтороцтової кислоти. Необхідні фракції об'єднували й висушували сублімацією з одержанням указаної в заголовку сполуки. "НН ЯМР (400 МГЦ, диметилсульфоксид-авє) б ррт 12,85 (5, 1Н), 9,46 (5, 1Н), 8,20 (9, 1Н), 8,07 (а, 1Н), 8,03 (й, 1), 8,00 (а, 1), 7,79 (а, 1Нн), 7,69 (а, 2Н), 7,61 (а, 1), 7,51 (а, 1Н), 7,49-7,45 (т, 1Н), 7,43 (0, 1Н), 7,36 (Ю, 2Н), 7,29 (5, 1Н), 7,25 (9, 2Н), 6,97 (5, 2Н), 6,95 (й, 1Н), 4,98 (5, 2Н), 4,96 (5, 2Н), 4,73 (5, 15.2Н), 4,16 (5, 2Н), 4,03 (ад, 2Н), 3,88 (ї, 2Н), 3,81 (5, 2Н), 3,51-3,32 (т, 6Н), 9,28 (І, 2Н), 3,09 (аа, 1Н), 3,06-2,94 (т, 4Н), 2,89 (ад, 1н), 2,46 (а, 2Н), 2,16 (ад, 1н), 2,09 (ад, 4Н), 1,74 (в, 2Н), 1,62-1,29 (т, 8Н), 1,29-0,92 (т, 12Н), 0,92-0,78 (т, 12Н). М5 (ЕБІ) т/е 1566,6 (М-Н). 2.99 Синтез контрольного синтону, 4-((Ц2-((3-К4-16-І(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)метилі/д-5,7- диметилтрицикло|3.3.1.125Лдец-1-иліокси)етилі|(метил)карбамоїліокси)метил)-2-(1М-І(6-(2,5- діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-бета-аланіліаміно)феніл-бета-О- глюкопіранозидуронової кислоти (синтону Н) 2.99.1 (25,38,45,55,65)-2-(4-Форміл-2-нітрофенокси)-6-(метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н- піран-3,4,5-триїлтриацетат
У розчин (2Е,3К,45,55,65)-2-бром-6-(метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5- триїлтриацетату (4 г) в ацетонітрилі (100 мл)) додавали оксид срібла(І) (10,04 г) й 4-гідрокси-3- нітробензальдегід (1,683 г). Реакційну суміш перемішували протягом 4 годин за кімнатної температури й фільтрували. Фільтрат концентрували і залишок очищували за допомогою хроматографії на силікагелі, з елююванням від 5 до 5095 етилацетату в гептанах, з одержанням
Зо указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕБІ) т/е (М--18)7. 2.99.2 (25,38,45,55,65)-2-(4-(Гідроксиметил)-2-нітрофенокси)-6- (метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5-триїлтриацетат
У розчин речовини із прикладу 2.99.1 (6 г) в суміші хлороформу (75 мл) й ізопропанолу (18,75 мл) додавали 0,87 г силікагелю. Одержану суміш охолоджували до 0"С, додавали Мавна (0,470 г) ії одержану суспензію перемішували при 0"С протягом 45 хвилин. Реакційну суміш розбавляли дихлорметаном (100 мл) і фільтрували через діатомову землю. Фільтрат промивали водою та сольовим розчином і концентрували з одержанням неочищеного продукту, який застосовували без додаткового очищення. М5 (ЕІ) т/е (МеАМНа)": 2.99.3 (25,38,45,55,65)-2-(2-Аміно-4-(гідроксиметилуфенокси)-6- (метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5-триїлтриацетат
Гідрували перемішуваний розчин речовини із прикладу 2.99.2 (7 г) в етилацетаті (81 мл) при 20"С за тиску 1 атмосфери Ну», із застосуванням 1095 Ра/сС (1,535 г) як каталізатора, протягом 12 годин. Реакційну суміш фільтрували через діатомову землю та випарювали розчинник за зниженого тиску. Залишок очищували за допомогою хроматографії на силікагелі, з елююванням дихлорметаном/метанолом, 95/5, з одержанням указаної в заголовку сполуки. 2.99.4 3-((9Н-Флуорен-9-іл)метокси)карбоніл)аміно)пропанова кислота
Розчиняли З-амінопропанову кислоту (4,99 г) в 1095 водному розчині МагбОз (120 мл) в колбі об'ємом 500 мл та одержане охолоджували на крижаній бані. В одержаний розчин поступово додавали (9Н-флуорен-9-ілуметилхлорформіат (14,5 г) в 1,4-діоксані (100 мл).
Реакційну суміш перемішували за кімнатної температури протягом 4 годин і потім додавали воду (800 мл). Шар водної фази відділяли від реакційної суміші та промивали діетиловим етером (З х 750 мл). Водний шар підкислювали 2 н. водним розчином НСІ до значення рн 2 та екстрагували етилацетатом (3 х750 мл). Органічні шари об'єднували й концентрували з одержанням неочищеного продукту. Неочищений продукт перекристалізовували у змішаному розчиннику етилацетат:гексан 1:2 (300 мл) з одержанням указаної в заголовку сполуки. 2.99.5 (9Н-Флуорен-9-іл)метил-(З-хлор-3-оксопропіл)/укарбамат
У розчин речовини із прикладу 2.99.4 в дихлорметані (160 мл) додавали тіонілхлорид (50 мл). Суміш перемішували при 6б0"С протягом 1 години. Суміш оохолоджували й концентрували з одержанням указаної в заголовку сполуки. 60 2.99.6 . (25,38,45,55,65)-2-(2-(3-((9Н-Флуорен-9-іл)метокси)карбоніл)аміно)пропанамідо)-4-
(гідроксиметил)фенокси)-6-(метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5-триїлтриацетат
У розчин речовини із прикладу 2.99.3 (б г) в дихлорметані (480 мл) додавали М,М- діізопропілетиламін (4,60 мл). Додавали речовину із прикладу 2.99.5 (5,34 г) й перемішували суміш за кімнатної температури протягом 30 хвилин. Суміш виливали у насичений водний розчин бікарбонату натрію та екстрагували етилацетатом. Об'єднані екстракти промивали водою й сольовим розчином та висушували над сульфатом натрію. Після фільтрування й концентрування одержували залишок, який очищували за допомогою радіальної хроматографії із застосуванням від 0 до 10095 етилацетату в петролейному етері як рухомої фази, з одержанням указаної в заголовку сполуки. 2.99.7. (25,38,45,55,65)-2-(2-(3-((9Н-Флуорен-9-іл)метокси)карбоніл)аміно)пропанамідо)-4- ((4-нітрофенокси)карбоніл)окси)метил)фенокси)-6-(метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5- триїлтриацетат
В суміш речовини із прикладу 2.99.6 (5,1 г) в М,.М-диметилформаміді (200 мл) додавали біс(4-нітрофеніл)карбонат (4,14 г) і М,М-діізопропілетиламін (1,784 мл). Суміш перемішували протягом 16 годин за кімнатної температури й концентрували за зниженого тиску. Неочищений матеріал розчиняли у дихлорметані, аспірували безпосередньо на 1 мм планшет Спготацоїгоп для радіальної хроматографії та застосовували елюювання від 50 до 10095 етилацетату в гексанах, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕБІ) т/е (М.Н). 2.99.8 3-(1-((3-(2-((3-(3-Амінопропанамідо)-4-((25,38,45,55,65)-6-карбокси-3,4,5- тригідрокситетрагідро-2Н-піран-2-іл)уокси)бензил)окси)карбоніл)(метил)аміно)етокси)-5,7- диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)-6-(8-(бензо|д9|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл)піколінова кислота
У розчин речовини із прикладу 1.13.7 (325 мг) й речовини із прикладу 2.99.7 (382 мг) в М,М- диметилформаміді (ЗУ мл) при 0"С додавали М,М-дізопропіламін (49,1 мг). Реакційну суміш перемішували при 0"С протягом 5 годин й додавали оцтову кислоту (22,8 мг). Одержану суміш розбавляли етилацетатом і промивали водою й сольовим розчином. Органічний шар висушували над Маг5О.:, фільтрували та концентрували. Залишок розчиняли в суміші тетрагідрофурану (10 мл) й метанолу (5 мл). В даний розчин при 0"С додавали 1 М водний розчин гідроксиду літію (3,8 мл). Одержану суміш перемішували при 0"С протягом 1 години,
Зо підкислювали оцтовою кислотою та концентрували. Концентрат ліофілізували із одержанням порошку. Порошок розчиняли в М,М-диметилформаміді (10 мл), охолоджували на крижаній бані й додавали піперидин (1 мл) при 0"С. Суміш перемішували при 0"С протягом 15 хвилин і додавали 1,5 мл оцтової кислоти. Розчин очищували за допомогою НРІ С з оберненою фазою із застосуванням системи сіїзоп, з елююванням від ЗО до 8095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./об. трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (Е5І) т/е 11722 (МАН). 2.99.9 4-(2-(3-((4-16-І(8-(1,3-Бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1 Н)-іл|-2- карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1-ілуметил)|-5, 7-диметилтрицикло!|3.3.1.13,7|дец-1- илюкси)етил|(метил)карбамоїл)іокси)метилі|-2-((М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1- ілугексаноїл|-бета-аланіліаміно)феніл-бета-О-глюкопіранозидуронова кислота
До речовини із прикладу 2.99.8 (200 мг) в М,М-диметилформаміді (5 мл) при 0"С додавали 2,5-діоксопіролідин-1-іл-6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)угексаноат (105 мг) і М,М- діізопропілетиламін (0,12 мл). Суміш перемішували при 0"С протягом 15 хвилин, нагрівали до кімнатної температури та очищували за допомогою НРІ С з оберненою фазою на системі біїЇ5оп із застосуванням колонки С18 на 100 г, з елююванням від 30 до 8095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./06б. трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н
ЯМР (500 МГц, диметилсульфоксид-ав) б ррт 12,85 (5, 2Н) 9,07 (5, 1Н) 8,18 (5, 1Н) 8,03 (а, 1Н) 7,687 (Б 1) 7,79 (а, 1Н) 7,61 (а, 1Н) 7,41-7,53 (т, ЗН) 7,36 (9, 2Н) 7,28 (5, 1Н) 7,03-7,09 (т, 1Н) 6,96-7,03 (т, ЗН) 6,94 (а, 1Н) 4,95 (5, АН) 4,82 (І, 1Н) 3,88 (ї, ЗН) 3,80 (9, 2Н) 3,01 (ї, 2Н) 2,86 (а,
ЗН) 2,54 (І, 2Н) 2,08 (5, ЗН) 2,03 (Її, 2Н) 1,40-1,53 (т, 4Н) 1,34 (а, 2Н) 0,90-1,28 (т, 12Н) 0,82 (а, 6Н). М5 (ЕБІ) т/е 1365,3 (М.Н). 2.100 Синтез контрольного синтону, 4-((Ц2-((3-(К4-(6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-ил|-2-карбоксипіридин-3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)метилі-5,7- диметилтрицикло!Ї3.3.1.127|дец-1-иліокси)етилІ|(метил)карбамоїл)окси)метилі/-2-((М-(119-(2,5- діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)-17-оксо-4,7,10,13-тетраокса-16-азанонадекан-1-оїл|-бета- аланіліаміно)феніл-бета-О-глюкопіранозидуронової кислоти (синтону І)
Указану в заголовку сполуку одержували із застосуванням процедури в прикладі 2.99.9, шляхом заміни 2,5-діоксопіролідин-1-іл-6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)угексаноату 2,5- діоксопіролідин-1-іл-1-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)-3-оксо-7,10,13,16-тетраокса-4- 60 азанонадекан-19-осатом. "Н ЯМР (500 МГц, диметилсульфоксид-дв) б ррт 8,95 (5, 1Н) 8,16 (5,
1Н) 7,99 (а, 1Н) 7,57-7,81 (т, 4Н) 7,38-7,50 (т, ЗН) 7,34 (д, 2Н) 7,27 (5, 1Н) 7,10 (а, 1Н) 7,00 (а, 1Н) 6,88-6,95 (т, 2Н) 4,97 (а, 4Н) 4,76 (а, 2Н) 3,89 (ї, 2Н) 3,84 (а, 2Н) 3,80 (5, 2Н) 3,57-3,63 (т,
АН) 3,44-3,50 (т, 4Н) 3,32-3,43 (т, 6Н) 3,29 (1, 2Н) 3,16 (9, 2Н) 35,02 (І, 2Н) 2,87 (5, ЗН) 2,52-2,60 (т, 2Н) 2,29-2,39 (т, ЗН) 2,09 (5, ЗН) 1,37 (5, 2Н) 1,20-1,29 (т, 4Н) 1,06-1,18 (т, 4Н) 0,92-1,05 (т, 2Н) 0,83 (5, 6Н). М5 (ЕБІ) т/е 1568,6 (М-Н). 2.101 Синтез 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-11-((3- 1((435,465)-43-41(4-((25)-2-1(25)-2-116-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)гексаноїл|аміно)-3- метилбутаноїл|аміно)пропаноїл|аміно)бензил)окси|карбоніліаміно)-46-метил-37,44,47-триоксо- 2,5,68,11,14,17,20,23,26,29,32,35-додекаокса-38,45,48-триазапентаконтан-5О-іл|окси)-5, 7- диметилтрицикло!|3.3.1.157)дец-1-ил)метил|-5-метил-1 Н-піразол-4-іліпіридин-2-карбонової кислоти (синтону ОК)
Вказану в заголовку сполуку одержували, як описано в прикладі 2.7, шляхом заміни речовини із прикладу 1.13.8 речовиною із прикладу 1.66.7. "НН ЯМР (400 МгГуц, диметилсульфоксид-сйвє) б ррт 12,85 (5, 1Н), 8,21 - 7,97 (т, 4Н), 7,79 (а, 4Н), 7,71 - 7,32 (т, 15Н), 7,28 (ї, 4Н), 7,02 - 6,91 (т, ЗН), 4,95 (9, 5Н), 4,933 - 4,12 (т, ЗН), 3,98 - 3,76 (т, 11Н), 3,41 - 3,21 (т, 22Н), 3,21 - 2,90 (т, 12Н), 2,24 - 2,05 (т, 7/Н), 1,81 - 0,90 (т, 46Н), 0,90 - 0,78 (т, 17Н).
М5 (ЕБІ) т/е 2014,0 (М.-Н)», 1007,5 (Ма2Н) 2», 672,0 (МАЗН)У. 2.102 Синтез ІМ-І6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-І -валіл-М-14-(ЦТ2-(13-((4-16-
І1-41,93-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-1,2,3,4-тетрагідрохінолін-7-іл|-2-карбоксипіридин-3-іліІ-5- метил-1Н-піразол-1-іл)метил)|-5,7-диметилтрицикло!/3.3.1.127|)дец-1-иліокси)етиліц-(2- карбоксиетил)карбамоїл)окси)метил|феніл)-Мо-карбамоїл-Іі -орнітинаміду (синтону ОМ)
Вказану в заголовку сполуку одержували, як описано в прикладі 2.1, шляхом заміни речовини із прикладу 1.2.9 речовиною із прикладу 1.62.5 "НН ЯМР (400 МГу, диметилсульфоксид-авє) б ррт 9,95 (5, 1Н), 8,36 (5, 1Н), 8,02 (а, 1Н), 7,96 (а, 1Н), 7,88 - 7,68 (т,
АН), 7,57 (0, 2Н), 7,42 (5, 2Н), 7,34 (Ї, 1Н), 7,25 (ад, ЗН), 7,19 (І, 1Н), 6,95 (5, 2Н), 5,96 (в, 1Н), 4,96 (5, 2Н), 4,95 (д, 1Н), 4,15 (да, 1Н), 3,93 (1, 2Н), 3,83 (а, 2Н), 3,32 (І, 2Н), 3,27 (а, 1Н), 2,93 (аю, 1), 2,80 (І, 2Н), 2,47 (р, 19Н), 2,24 - 2,02 (т, 5Н), 1,91 (р, ЗН), 1,74 - 1,25 (т, 8Н), 1,27 - 0,89 (т,
ТОН), 0,79 (да, 13Н). М5 (ЕБІ) т/е 14144 (М.Н) ». 2103 Синтез ІМ-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-І -валіл-М-14-(ЦТ2-(13-((4-16-
Коо) ІВ-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)нафталін-2-іл|-2-карбоксипіридин-3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1- іл)метил|-5,7-диметилтрицикло!/3.3.1.15Ядец-1-иліокси)етил|-(2- карбоксиетил)карбамоїл)окси)метилі|феніл)-М»-карбамоїл-І -орнітинаміду (синтону РОС)
Указану в заголовку сполуку одержували, як описано в прикладі 2.1, шляхом заміни речовини із прикладу 1.2.9 речовиною з прикладу 1.68.7. "НН ЯМР (400 МГу, диметилсульфоксид-ав) б ррт 13,07 (5, 1Н), 9,95 (5, 1Н), 8,99 (5, 1Н), 8,33 (аа, 1Н), 8,25 - 8,09 (т, ЗН), 8,12 - 7,95 (т, ЗН), 7,90 (а, 1Нн), 7,76 (аа, 2Н), 7,73 - 7,63 (т, 1Н), 7,56 (5, ЗН), 7,41 - 7,29 (т, 1Н), 6,95 (5, 2Н), 5,97 (5, 1Н), 4,96 (5, 2Н), 4,35 (9, 2Н), 4,15 (д9, 1Н), 3,50 - 3,22 (т, 1ОН), 2,92 (аю, зн), 2,29 - 2,00 (т, 6Н), 1,92 (д, 1Н), 1,75 - 0,88 (т, 24Н), 0,79 (да, 15Н). М5 (Е5І) т/е 1409,5 (МАН). 2.104 Синтез 6-І(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)нафталін-2-іл|-3-11-(3-(2-К2-карбоксиетил)- ((2-((28,35,48,58,68)-6-карбокси-3,4,5-тригідрокситетрагідро-2Н-піран-2-іл|окси)-4-(2-(2-116- (2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1- іл)угексаноїл|аміно)етокси)етокси|бензил)окси|карбоніліаміно|етокси)-5, 7- диметилтрицикло!|3.3.1.19|дец-1-ил)метилі|-5-метил-1 Н-піразол-4-іліпіридин-2-карбонової кислоти (синтону РІ) 21041 3-(1-((3-(2-(((4-(2-(2-Аміноетокси)етокси)-2-(28,35,48,5Н8,68)-6-карбокси-3,4,5- тригідрокситетрагідро-2Н-піран-2-іл)окси)бензил)окси)карбоніл)-(2-карбоксиетил)аміно)етокси)- 5,7-диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1Н-піразол-4-іл)-6-(8-(бензо|4|гіазол-2- ілкарбамоїл)нафталін-2-іл)піколінової кислоти
У холодну (0"С) суміш речовини з прикладу 2.97.7 (26,9 мг) та речовини з прикладу 1.68.7 (23,5 мг) в М,М-диметилформаміді (2 мл) додавали М-етил-М-ізопропілпропан-2-амін (0,043 мл).
Реакційну суміш повільно нагрівали до кімнатної температури та перемішували протягом ночі.
За допомогою І С/М5 встановили очікуваний продукт як основний пік. У реакційну суміш додавали воду (1 мл) та ІОН НО (20 мг). Суміш перемішували за кімнатної температури протягом З годин. Суміш розбавляли М,М-диметилформамідом (2 мл), фільтрували та очищували за допомогою НРІС з оберненою фазою на системі Сіїоп (колонка С18), з елююванням від 20 до 8095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕІ) т/е 1242,2 (М-Н). 2.104.2.. 6-І8-(1,3-Бензотіазол-2-ілкарбамоїл)нафталін-2-ілІ|-3-11-(3-2-К2-карбоксиетил)-((2- 60 (Щ(28,35,48,58,6НА)-6-карбокси-3,4 5-тригідрокситетрагідро-2Н-піран-2-іл|окси)-4-(2-(2-116-(2,5-
діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1- ілугексаноїл|іаміно)етокси)етокси|бензил)окси|карбоніл)іаміно|етокси)-5,7- диметилтрицикло!|3.3.1.13,7|дец-1-ил)метил|-5-метил-1 Н-піразол-4-іліпіридин-2-карбонова кислота
Указану в заголовку сполуку одержували, як описано в прикладі 2.97.9, шляхом заміни речовини із прикладу 2.97.8 речовиною з прикладу 2.104.1 і заміни 2,5-діоксопіролідин-1-іл-3- (2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)упропаноату 2,5-діоксопіролідин-1-іл-6-(2,5-діоксо-2,5- дигідро-1Н-пірол-1-іл)угексаноатом. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-йє) б ррт 13,06 (в, 2Н), 8,99 (5, 1Н), 8,34 (да, 1Н), 8,25 - 8,10 (т, ЗН), 8,04 (9, 1Н), 7,98 (а, 1Н), 7,90 (а, 1Н), 7,78 (а, 10. 2Н), 7,72 - 7,63 (т, 1Н), 7,50 - 7,42 (т, 2Н), 7,34 (І, 1Н), 7,16 (а, 1Н), 6,94 (5, 2Н), 6,65 (а, 1Н), 6,56 (а9, 1), 4,02 (ї, 2Н), 3,90 (а, 1Н), 3,83 (5, 2Н), 3,66 (І, ЗН), 3,28 (ад, 4Н), 3,15 (д, 2Н), 2,19 (5,
ЗН), 1,99 ( 2Н), 1,51 - 1,30 (т, 6Н), 1,28 - 0,88 (т, 11Н), 0,81 (4, 6Н). М5 (ЕБІ) т/е 1433,4 (МАН. 2105 Синтез ІМ-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-І -валіл-М-14-(ЦТ2-(13-((4-16-
І5-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)хінолін-3-іл|-2-карбоксипіридин-3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1- іл)метил|-5,7-диметилтрицикло!/3.3.1.15Ядец-1-иліокси)етил|-(2- сульфоетил)карбамоїл)окси)метилі|феніл)-М»-карбамоїл-І -орнітинаміду (синтону РУ)
Указану в заголовку сполуку одержували, як описано в прикладі 2.1, шляхом заміни речовини із прикладу 1.2.9 речовиною з прикладу 01.69.65. "Н ЯМР (500 МГЦ, диметилсульфоксид-йв) б ррт 13,23 (5, 1Н), 9,99 (5, 1Н), 9,73 (а, 1Н), 9,45 (5, 1Н), 8,33 (ї, 2Н), 8,18 (9, 1Н), 8,07 (да, 2Н), 8,02 (аа, 1нН), 7,97 (да, 1нН), 7,80 (її, 2Н), 7,65 - 7,55 (т, 2Н), 7,53 - 7,44 (т, 2Н), 7,37 (І, 1Н), 7,27 (9, 2Н), 6,98 (5, 2Н), 4,98 (а, 2Н), 4,38 (а, 1Н), 4,18 (а, 1Н), 3,56 - 3,31 (т, ЗН), 3,26 (9, 2Н), 3,08 - 2,89 (т, 2Н), 2,64 (ї, 2Н), 2,23 (9, ЗН), 2,12 (ар, 2Н), 1,95 (5, 1Н), 1,68 (5, 1Н), 1,62 - 1,29 (т, 7Н), 1,29 - 0,90 (т, 9Н), 0,90 - 0,74 (т, 12Н). М5 (ЕБІ) т/е 14463 (М-Н). 2.106 Синтез ІМ-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-І -валіл-М-14-(ЦТ2-(13-((4-16-
І4-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)хінолін-6-іл|-2-карбоксипіридин-3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1- іл)метил|-5,7-диметилтрицикло!/3.3.1.15Ядец-1-иліокси)етил|-(2- карбоксиетил)карбамоїл)окси)метил|феніл)-М-карбамоїл-І -орнітинаміду (синтону РО)
Указану в заголовку сполуку одержували, як описано в прикладі 2.1, шляхом заміни
Зо речовини із прикладу 1.2.9 речовиною з прикладу 1.70. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид- дв) 6 ррт 9,97 (5, 1Н), 9,12 (а, 1Н), 8,93 (5, 1Н), 8,60 (ад, 1Н), 8,24 (ад, 2Н), 8,05 (ад, 2Н), 7,99 - 7,87 (т, 2Н), 7,78 (аа, 2Н), 7,67 - 7,51 (т, ЗН), 7,43 - 7,31 (т, 1Н), 7,26 (а, 2Н), 6,97 (5, 2Н), 5,98 (5, 1Н), 4,97 (5, 2Н), 4,37 (9, 2Н), 4,17 (аа, 1Н), 3,49 - 3,22 (т, 11Н), 2,95 (ааа, ЗН), 2,20 (5, 4Н), 2,19 - 1,86 (т, ЗН), 1,74 - 0,89 (т, 22Н), 0,81 (да, 15Н). М5 (ЕБІ) т/е 1410,4 (М-Н). 2.107 Синтез ІМ-І6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-І -валіл-М-14-(ЦТ2-(13-((4-16-
І4-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)хінолін-6-іл|-2-карбоксипіридин-3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1- ілуметил|-5,7-диметилтрицикло!/3.3.1.157|дец-1-ил)окси)етилі|-(2- сульфоетил)карбамоїліокси)метилі|феніл)-М»-карбамоїл-І -орнітинаміду (синтону РМ)
Указану в заголовку сполуку одержували, як описано в прикладі 2.1, шляхом заміни речовини із прикладу 1.2.9 речовиною з прикладу 1.70.5. "НН ЯМР (400 МГу, диметилсульфоксид-ав) б ррт 9,96 (5, 1Н), 9,11 (а, 1Н), 8,92 (5, 1Н), 8,60 (а9, 1), 8,23 (ад, 2Н), 812 - 7,97 (т, 2Н), 7,98 - 7,92 (т, 2Н), 7,77 (ад, 2Н), 7,56 (ї, 2Н), 7,51 - 7,42 (т, 2Н), 7,42 - 7,31 (т, 1Н), 7,24 (а, 2Н), 6,95 (5, 2Н), 4,95 (а, 2Н), 4,36 (д, 1Н), 3,90 - 3,80 (т, ЗН), 3,52 - 3,27 (т,
ЗН), 3,23 (І, 2Н), 3,06 - 2,83 (т, 2Н), 2,67 - 2,58 (т, 2Н), 2,19 (5, ЗН), 2,09 (ар, 2Н), 1,93 (а, 1Н), 1,72 -1,25 (т, 7Н), 1,27 - 0,88 (т, ТОН), 0,88 - 0,70 (т, 13Н). М5 (ЕБІ) т/е 14463 (М-Н). 2.108 Синтез ІМ-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-І -валіл-М-14-(ЦТ2-(13-((4-16-
І5-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)хінолін-3-іл|-2-карбоксипіридин-3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1- ілуметил|-5,7-диметилтрицикло!/3.3.1.157|дец-1-ил)окси)етилі|-(2- карбоксиетил)карбамоїл)іокси)метилі|феніл)-М»-карбамоїл-і -орнітинаміду (синтону РМ/)
Указану в заголовку сполуку одержували, як описано в прикладі 2.1, шляхом заміни речовини із прикладу 1.2.9 речовиною з прикладу 1.71. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид- дв) 6 ррт 9,97 (5, 1Н), 9,70 (а, 1Н), 9,40 (а, 1Н), 8,31 (да, 2Н), 8,16 (а, 1Н), 8,05 (ї, 2Н), 8,01 - 7,91 (т, 2Н), 7,78 (да, 2Н), 7,59 (а, ЗН), 7,52 - 7,44 (т, 2Н), 7,36 (І, 1Н), 7,26 (а, 2Н), 6,96 (5, 2Н), 5,99 (5, 1Н), 4,97 (5, 2Н), 4,37 (а, 2Н), 4,16 (аа, 1Н), 3,53 - 3,20 (т, 9Н), 2,94 (а, 2Н), 2,21 (5, ЗН), 2,17 - 1,85 (т, ЗН), 1,71 - 0,89 (т, 22Н), 0,81 (да, 14Н). М5 (ЕБІ) т/е 1410,4 (М-Н). 2.109 Синтез ІМ-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-І -валіл-М-14-(ЦТ2-(13-((4-16-
І1-(1,93-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-5,6-дигідроіїмідазо(|1,5-а|піразин-7(8Н)-іл|-2-карбоксипіридин-
З-іл)-5-метил-1Н-піразол-1-іл)уметил/|-5,7-диметилтрициклоїЇ3.3.1.12)дец-1-ил)окси)етилі|-(2- сульфоетил)карбамоїліокси)метилі|феніл)-М»-карбамоїл-Ї! -орнітинаміду (синтону ОМУ) бо Указану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 1.72.8 речовиною з прикладу 1.2.9 у прикладі 2.1. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид дв) б ррт 11,07 (65, 1Н), 10,00 (р5, 1Н), 8,27 (р5, 1Н), 8,12 (т, 2Н), 8,07 (а, 1Н), 7,99 (а, 1Н), 7,84-7,74 (т, 2Н), 7,65 (0, 1Н), 7,59 (т, 2Н), 7,54-7,44 (т, 1Н), 7,42-7,31 (т, 2Н), 7,28 (т, 2Н), 7,21 (а, 1Н), 7,00 (т, 1Н) 6,94-6,92 (т, 2Н), 6,04 (р5, 1Н), 5,14 (в, 2Н), 4,99 (т, ЗН), 4,39 (т, 2Н), 4,30 (р5, 2Н), 4,20 (т, 2Н), 4,12 (65, 2Н), 3,70-3,64 (т, 2Н), 3,50 (т, 2Н), 3,44-3,35 (т, 2Н), 3,27 (т, 2Н), 3,02 (т, 2Н), 2,95 (т, 2Н), 2,68 (Її, 2Н), 2,14 (т, 4Н), 1,96 (т, 1Н), 1,69 (т, 1Н), 1,58 (т, 1Н), 1,47 (т, 4Н), 1,36 (т, 2Н), 1,30-1,02 (т, 8Н), 0,98 (т, 2Н), 0,85-0,80 (т, 16 Н). 2.110 Синтез ІМ-І6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-ілугексаноїл|-І -валіл-М-14-(ЦТ2-(13-((4-16-
І(7-(1,93-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-1 Н-індол-2-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1- ілуметил|-5,7-диметилтрицикло!/3.3.1.157дец-1-илюкси)етилі|-(2- сульфоетил)карбамоїліокси)метил|феніл)-М»-карбамоїл-І -орнітинаміду (синтону ВМ)
Речовину із прикладу 2.110 одержували шляхом заміни речовини із прикладу 1.74.6 речовиною з прикладу 1.2.9 у прикладі 2.1. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-дв) б ррт 11,30 (5, 1Н), 9,93 (5, 1Н), 8,26 (9, 1Н), 8,17 (а, 1Н), 8,02 (а, 1Н), 7,92 - 7,84 (т, ЗН), 7,76 (а, 1Н), 7,69 (а, 1нН), 7,54 (а, ЗН), 7,47 (5, 1Н), 7,35 (аа, 2Н), 7,22 (І, ЗН), 7,08 (ї, 1Н), 6,93 (5, 2Н), 4,90 (5, 2Н), 4,84 (, 2Н), 4,33 (д, 1Н), 4,16 - 4,09 (т, 1Н), 3,32 (І, 4Н), 2,99 (т, 6Н), 2,21 (5, ЗН), 2,09 (т, 2Н), 1,91 (т, 1Н), 1,71 - 0,71 (т, 25Н). М5 (ЕБІ) т/е 14344 (М-Н). 2.111 Синтез М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-ІЇ -валіл-М-(4-(1(3-І8-(1,3- бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-2-(6-карбокси-5-11-(3,5-диметил-7-(2-(2- сульфоетил)аміно|етокси)трицикло!|3.3.1.157дец-1-ил)метил|-5-метил-1Н-піразол-4-іл)іпіридин-2- іл)-1,2,3,4-тетрагідроізохінолін-6-іл|пропіл)/уметил)карбамоїл|окси)метил)феніл|-Ме-карбамоїл-ї - орнітинаміду (синтону АК)
Указану в заголовку сполуку одержували, як описано в прикладі 2.1, шляхом заміни речовини із прикладу 1.2.9 речовиною з прикладу 11.75.14. "Н ЯМР (400 МГу, диметилсульфоксид-ав) б ррт 12,60 (ре, 1Н), 9,98 (5, 1Н), 8,33 (т, 2Н), 8,02 (а, 2Н), 7,75 (й, 2Н), 7,55 (9, 2Н), 7,49 (т, ЗН), 7,29 (т, 1Н), 7,25 (5, АН), 6,99 (а, 2Н), 6,95 (9, 1Н), 5,90 (т, 1Н), 5,42 (т, 2Н), 4,95 (5, 2Н), 4,90 (т, 2Н), 4,95 (І, 1Н), 4,18 (ї, 1Н), 3,85 (т, 2Н), 3,80 (5, ЗН), 9,55 (5, ЗН), 3,52 (т, 2Н), 3,35 (т, АН), 3,22 (т, АН), 3,08 (т, 2Н), 2,99 (т, 2Н), 2,92 (т, 2Н), 2,85 (т, 2Н), 2,79 (, 2Н), 2,52 (т, 1Н), 2,15 (т, 1Н), 2,09 (5, ЗН), 1,94 (т, 1Н), 1,88 (т, 1Н), 1,68 (т, 1Н), 1,54 (т, 1Н), 1,42 (т, 4Н), 1,38 (т, 4Н), 1,27 (т, 4Н), 1,13 (т, 4Н), 1,02 (т, 2Н), 0,85 (5, 6Н), 0,78 (т, 6Н).
М5 (ЕБІ) т/е 1523,3 (М.-Н)»У, 1521,6 (М-Н). 2.112 Синтез ІМ-(6-Щ(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іллуацетил|аміно)гексаноїл)-І -валіл-М- 1А-1412-(3-((4-(6-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1 Н)-іл|-2- карбоксипіридин-3-іл)-5о-метил-!1 Н-піразол-1-іл)метил)|-5, 7-диметилтрициклоїЇ3.3.1.197|дец-1- ил)окси)етил|-(2-сульфоетил)карбамоїліокси)метилі|феніл)-М»-карбамоїл-І -орнітинаміду (синтону 5) 24124 6-(8-(Бензо|4|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл)-3-(1-((3-(2-(((4- ((5)-2-((5)-2-(трет-бутоксикарбоніл)аміно)-3-метилбутанамідо )-5- уреїдопентанамідо)бензил)окси)карбоніл)-(2-сульфоетил)аміно)етокси)-5,7-диметиладамантан- 1-ілуметил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)піколінова кислота
Охолоджували речовину із прикладу 1.2.9, сіль трифтороцтової кислоти (390 мг), трет- бутил-((5)-3-метил-1-(((5)-1-(4-((4-нітрофенокси)карбоніл)окси)метил)феніл)аміно)-1-оксо-5- уреїдопентан-2-іл)аміно)-1-оксобутан-2-іл)укарбамат (286 мг) та гідрат 1-гідроксибензотриазолу (185 мг) в М.М-диметилформаміді (5 мл) на крижаній бані та додавали М,М-діїзопропілетиламін (0,35 мл). Суміш перемішували при 0"С протягом 30 хвилин та за кімнатної температури протягом ночі. Реакційну суміш розбавляли диметилсульфоксидом до 10 мл та очищували за допомогою НРІ С з оберненою фазою на системі сіїзоп (колонка С18), з елююванням від 20 до 8095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕБІ) т/е 680,1 (Ма2Н) 2». 2.441122 3-(1-((3-(2-(((4-((5)-2-(5)-2-Аміно-3-метилбутанамідо)-5- уреїдопентанамідо)бензил)окси)карбоніл)-(2-сульфоеєетил)аміно)етокси)-5,7-диметиладамантан- 1-ілуметил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)-6-(8-(бензо|ч|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін- 2(1Н)-іл)піколінова кислота
Обробляли речовину із прикладу 2.112.1 (300 мг) в 10 мл дихлорметану при 0"С трифтороцтовою кислотою (4 мл) протягом 30 хвилин і суміш концентрували. Залишок розчиняли в суміші ацетонітрилу та води й ліофілізували з одержанням необхідного продукту у вигляді солі ТРА. М5 (ЕБІ) т/е 1257,4 (М-НУ. 2.411233 6-(8-(Бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл)-3-(1-((3-(2-(((4- (135,165)-13-ізопропіл-2,2-диметил-4,11,14-триоксо-16-(3-уреїдопропіл)-3-окса-5,12,15- бо триазагептадеканамідо)бензил)окси)карбоніл)-(2-сульфоетил)аміно)етокси)-5,7-
диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)піколінова кислота
Охолоджували речовину із прикладу 2.112.2 (сіль трифтороцтової кислоти, 385 мг, та гідрат 1-гідроксибензотриазолу (140 мг) в М,М-диметилформаміді (З мл) на бані з крижаною водою. Додавали краплями М,М-дізопропілетиламін (226 мкл), з подальшим додаванням 2,5- діоксопіролідин-1-іл-6-(трет-бутоксикарбоніл)аміно)гексаноату (127 мг) і суміш перемішували протягом ночі. Суміш очищували за допомогою НРІ С з оберненою фазою на системі сіїЇб5оп (колонка С18), з елююванням від 20 до 7595 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕБІ) т/е 14702 (М-Н): 2.4112А 3-(1-((3-(2-(((4-((5)-2-((5)-2-(6-Аміногексанамідо)-3-метилбутанамідо)-5- уреїдопентанамідо)бензил)окси)карбоніл)-(2-сульфоеєетил)аміно)етокси)-5,7-диметиладамантан- 1-ілуметил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)-6-(8-(бензо|ч|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін- 2(1Н)-іл)піколінова кислота
Вказану в заголовку сполуку одержували із застосуванням процедури в прикладі 2.112.2, шляхом заміни речовини із прикладу 2.112.1 речовиною із прикладу 2.112.3. М5 (Е5І) т/е 1370,5 (М-Н). 2.4112.5 М-(6-((2,5-Діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)луацетиліаміно)гексаноїл)-І -валіл-М-14-(12- ((3-К4-(6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3- ілу-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)метил|-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.13,7 |дец-1-илікси)етилі|-(2- сульфоетил)карбамоїліокси)метил|феніл)-М5-карбамоїл-і -орнітинамід
Речовину із прикладу 2.112.4 (25 мг) і 2,5-діоксопіролідин-1-іл-2-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н- пірол-1-іл)уацетат (9,19 мг) в М,М-диметилформаміді (0,3 мл) обробляли М,М- діізопропілетиламіном (25,4 мкл) протягом 30 хвилин при 0"С. Реакційну суміш очищували за допомогою НРІ С з оберненою фазою на системі сіїзоп (колонка С18), з елююванням від 35 до 6595 ацетонітрилу в 4 мМ водного розчину ацетату амонію, з одержанням указаної в заголовку сполуки у вигляді солі амонію. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-ав) б 12,81 (5, 1Н), 9,94 (5, 1Н), 8,01 (аа, 2Н), 7,75 (а, 2Н), 7,56 (5, ЗН), 7,51 - 7,45 (т, 1Н), 7,45 - 7,37 (т, 2Н), 7,36 - 7,28 (т, 2Н), 7,24 (І, ЗН), 7,17 (5, 2Н), 7,05 (5, ЗН), 7,04 (5, 2Н), 6,92 (5, ЗН), 5,93 (5, 1Н), 5,36 (5, 2Н), 5,05 - 4,85 (т, 4Н), 4,36 (д, 1Н), 4,16 (ад, 1Н), 3,95 (5, 2Н), 3,85 (ї, 2Н), 3,76 (а, 2Н), 3,22 (а, 1Н), 3,05- 2,81 (т, 6Н), 2,68 - 2,53 (т, 2Н), 2,09 (й, 4Н), 1,76 - 0,86 (т, 14Н), 0,86 - 0,71 (т, 12Н). М5 (ЕІ) т/е 1507,5 (М-Н). 2.4113 Синтез М-І6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-І -валіл-М-14-(ЦТ2-(13-((4-16-
ІВ-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)нафталін-2-іл|-2-карбоксипіридин-3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1- ілуметил|-5,7-диметилтрицикло!Ї3.3.1.127)дец-1-иліокси)етилі-(3-(бета-І1 - глюкопірануронозилокси)пропілікарбамоїліокси)метил|феніл)-М»-карбамоїл-і -орнітинаміду (синтону 5М)
Указану в заголовку сполуку одержували, як описано в прикладі 2.1, шляхом заміни речовини із прикладу 1.2.9 речовиною з прикладу 1.87.3. "НН ЯМР (501 МГЦ, диметилсульфоксид-ає) б ррт 13,08 (5, 1Н), 9,96 (5, 1Н), 9,00 (5, 1Н), 8,35 (ад, 1Н), 8,24 - 8,13 (т, ЗН), 8,09 - 8,02 (т, 2Н), 8,00 (0, 1Н), 7,91 (а, 1Н), 7,77 (аа, 2Н), 7,71 - 7,64 (т, 1Н), 7,58 (ї, 2Н), 7,49 - 7,44 (т, 2Н), 7,39 - 7,32 (т, 1Н), 7,26 (а, 2Н), 6,96 (5, 2Н), 5,97 (в, 1Н), 4,96 (5, 2Н), 4,37 (ад, 1Н), 422-412 (т, 2Н), 3,84 (5, 1Н), 3,37 - 3,20 (т, 6Н), 3,15 (ї, 1Н), 3,04 - 2,81 (т, 2Н), 2,20 (в, ЗН), 2,11 (ар, 2Н), 1,99 - 1,88 (т, 1Н), 1,71 (9, 2Н), 1,62 - 1,26 (т, 8Н), 1,29 - 0,88 (т, 11), 0,80 (аа, 14Н). М5 (ЕБІ) т/е 1571,4 (М-НУ. 2.114 Синтез ІМ-І6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-І -валіл-М-14-(ЦТ2-(13-((4-16-
І4-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)ізохінолін-6-іл|-2-карбоксипіридин-3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1- ілуметил|-5,7-диметилтрицикло!/3.3.1.157|дец-1-ил)окси)етилі|-(2- сульфоетил)карбамоїліокси)метилі|феніл)-М»-карбамоїл-І! -орнітинаміду (синтону 5М)
Указану в заголовку сполуку одержували, як описано в прикладі 2.1, шляхом заміни речовини із прикладу 1.2.9 речовиною з прикладу 1.78.5. "НН ЯМР (400 МГу, диметилсульфоксид-авє) б ррт 9,95 (5, 1Н), 9,61 (5, 1Н), 9,08 (5, 1Н), 9,00 (5, 1Н), 8,54 (аа, тн), 8,43 (а, 1), 8,24 (а, 1Н), 8,08 - 7,95 (т, ЗН), 7,77 (ад, 2Н), 7,63 - 7,51 (т, 2Н), 7,50 - 7,42 (т, 2Н), 7,40 - 7,31 (т, 1Н), 7,24 (а, 2Н), 6,95 (5, 2Н), 6,00 (5, 1Н), 4,95 (0, 2Н), 4,36 (д, 1Н), 4,15 (ї, 1Н), 3,27 (1, 4Н), 3,10 - 2,79 (т, 2Н), 2,68 - 2,56 (т, 2Н), 2,20 (5, ЗН), 1,98 - 1,84 (т, 1Н), 1,72 - 0,87 (т, 19Н), 0,79 (ад, 13Н). М5 (ЕБІ) т/е 1446,4 (М-Н). 2.115 Синтез М-І6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-І -альфа-глутаміл-їі -валіл-
М-(4-І(2-(3-((4-16-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1 Н)-іл|-2- карбоксипіридин-3-іл)-5о-метил-!1 Н-піразол-1-іл)метил)|-5, 7-диметилтрициклоїЇ3.3.1.197|дец-1- ил)окси)етил|-(2-сульфоетил)карбамоїліокси)метил|феніл)-М»-карбамоїл-і -орнітинаміду (510) (синтону 55)
24151 6-(8-(Бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл)-3-(1-((3-(2-((4- (65,95,125)-6-(3-(трет-бутокси)-З-оксопропіл)-9-ізопропіл-2,2-диметил-4,7,10-триоксо-12-(3- уреїдопропіл)-3-окса-5,8,11-триазатридеканамідо)бензил)окси)карбоніл)-(2- сульфоетил)аміно)етокси)-5,7-диметиладамантан-1 -іл)уметил)-5-метил-1 Н-піразол-4- іл)піколінова кислота
У суміш з прикладу 2.112.2 (85 мг), гідрату 1-гідроксибензотриазолу (41,3 мг), та (5)-5-трет- бутил-1-(2,5-діоксопіролідин-1-іл)-2-(трет-бутоксикарбоніл)аміно)упентандіоату (54,0 мг) в М,М- диметилформаміді (З мл) при 0"С додавали краплями М,М-діїззопропілетиламін (118 мкл), і суміш перемішували при 0"С протягом 1 години. Суміш очищували за допомогою НРІС з оберненою фазою на системі сіїзоп (колонка С18), з елююванням від 35 до 10095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки.
М5 (ЕБІ) т/е 773,4 (МА2Н) 2». 21152. 3-(1-((3-(2-(((4-((5)-2-((5)-2-((5)-2-Аміно-4-карбоксибутанамідо)-3З-метилбутанамідо)- 5-уреїдопентанамідо)бензил)окси)карбоніл)-(2-сульфоеєетил)аміно)етокси)-5,7- диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)-6-(8-(бензо|д9|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл)піколінова кислота
Речовину із прикладу 2.115.1 (100 мг) у дихлорметані (11 мл) при 0"С обробляли трифтороцтовою кислотою (4 мл). Суміш перемішували при 0"С протягом 3,5 годин та концентрували. Залишок очищували за допомогою НРІ С з оберненою фазою, з елююванням від 5 до 6095 ацетонітрилу в суміші води і 0,190 трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки. 2.115.3 М-І6-(2,5-Діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-Ї -альфа-глутаміл-ї -валіл-М-(4-
ІЧ2-3-(4-16-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1Н)-іл|-2- карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1-ілуметил)|-5, 7-диметилтрицикло!|3.3.1.13,7|дец-1- илюкси)етилі|-(2-сульфоетил)карбамоїл)окси)метил|феніл)-М5-карбамоїл-І -орнітинамід
У суміш гідрату 1-гідроксибензотриазолу (2,87 мг), 2,5-діоксопіролідин-1-іл-6-(2,5-діоксо-2,5- дигідро-1Н-пірол-1-іл)угексаноату (5,77 мг) та речовини із прикладу 2.115.2 (13 мг) при 0С додавали М,М-діїзопропілетиламін (13,08 мкл) і суміш перемішували при 0"С протягом 1 години.
Реакційну суміш очищували за допомогою НРІ С з оберненою фазою на системі біїЇбоп (колонка
Зо С18), з елююванням від 20 до 75950 ацетонітрилу у воді, що містила 0,196 трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (501 МГц, диметилсульфоксид-вв) б 12,83 (5, 1Н), 9,99 (5, 1Н), 8,13 (9, 1Н), 8,02 (аа, 1Н), 7,97 (а, 1н), 7,80 - 7,74 (т, 1Н), 7,64 (ї, 1Н), 7,61 - 7,48 (т, 4Н), 7,47 - 7,38 (т, 2Н), 7,38 - 7,30 (т, 2Н), 7,29 - 7,23 (т, ЗН), 6,96 (5, 2Н), 6,93 (й, 1Н), 5,99 (в, 1Н), 5,06 - 4,88 (т, 5Н), 4,37 (9, 1Н), 4,28 (9, 1Н), 4,18 (да, 1н), 3,86 (ї, 2Н), 3,78 (9, 2Н), 3,34 (І, ЗН), 3,23 (9, 2Н), 2,99 (ї, ЗН), 2,97 - 2,85 (т, 1Н), 2,62 (аї, 1Н), 2,26 - 2,15 (т, 2Н), 2,16 - 2,00 (т, 5Н), 2,01 - 1,79 (т, 1Н), 1,75 - 1,50 (т, ЗН), 1,50 - 0,687 (т, 17Н), 0,81 (аа, 14Н). М5 (ЕБІ) т/е 1579,6 (М-НУ. 2.4116 Синтез М-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)ацетил/)-Ї -альфа-глутаміл-І -валіл-М-(4-
ІЧ2-3-(4-16-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1Н)-іл|-2- карбоксипіридин-З3-ілІі-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)метил)|-5,7-диметилтрициклоїЇ3.3.1.157|дец-1- ил)окси)етилі|-(2-сульфоетил)карбамоїліокси)метиліІфеніл)-М»-карбамоїл-І -орнітинаміду (синтону ТА)
Указану в заголовку сполуку одержували із застосуванням процедури в прикладі 2.115.3 шляхом заміни 2,5-діоксопіролідин-1-іл-6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)угексаноату 2,5- діоксопіролідин-1-іл-2-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-!Н-пірол-1-іллацетатом. "НН ЯМР (400 МГЦ, диметилсульфоксид-ав) б 10,02 (5, 1Н), 8,38 (а, 1Н), 8,14 (а, 1Н), 8,03 (9, 1), 7,682 (аа, 2Н), 7,60 (І, ЗН), 7,55 - 7,40 (т, ЗН), 7,35 (4, 2Н), 7,91 - 7,24 (т, ЗН), 7,07 (5, 2Н), 6,95 (а, 1Н), 4,97 (а, 4Н), 4,37 (ааа, 2Н), 4,23 - 4,05 (т, ЗН), 3,88 (ї, 6Н), 3,80 (9, 2Н), 5,25 (а, 2Н), 3,09 - 2,88 (т, АН), 2,64 (5, 2Н), 2,22 (да, 2Н), 2,09 (5, ЗН), 2,02 - 1,49 (т, 5Н), 1,47 - 0,89 (т, 12Н), 0,83 (ад, 12Н). М5 (ЕБ5І) т/е 1523,5 (М-Н). 2.117 Синтез 1-(Ц2-((3-(4-(6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|- 2-карбоксипіридин-3-іл)-5-метил-1Н-піразол-1-іл)метилІ|-5,7-диметилтрицикло|3.3.1.12Лдец-1- иліокси)етилі|-(14-(1М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-О-валіл-М»-карбамоїл-О- орнітил)аміно)бензиліокси)карбоніл)аміно)-1,2-дидезокси-О-арабіно-гекситолу (синтону ТМУ/)
Указану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 1.77.2 речовиною з прикладу 1.2.9 у прикладі 2.1. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-дв) б ррт 12,85 (р5, 1Н), 9,98 (5, 1Н), 8,06 (а, 1Н), 8,03 (а, 1Н), 7,78 (ї, 2Н), 7,60 (т, ЗН), 7,52-7,42 (т, АН), 7,36 (9, 2Н), 7,28 (5, 1Н), 7,27 (а, 2Н), 6,99 (5, 1Н), 6,95 (9, 1Н), 5,97 (р5, 1Н), 5,00 (т, 2Н), 4,95 (5, 2Н), 4,39 (т, 1Н), 4,19 (т, 2Н), 3,88 (, 2Н), 3,79 (т, 4Н), 3,58 (т, 4Н), 3,46-3,33 (т, ТОН), 5,26 (т, 60 АН), 3,01 (т, 2Н), 2,94 (т, 1Н), 2,14 (т, 2Н), 2,09 (в, ЗН), 1,96 (т, 1Н), 1,69 (т, 2Н), 1,59 (т, 1Н),
З8о0
1,47 (т, 4Н), 1,35 (т, 4Н), 1,28-1,03 (т, 1ОН), 0,95 (т, 2Н), 0,82 (т, 12Н). М5 (Е5І) т/е 1493 (М-АН)»У, 1491 (М-Н)У. 2.118 Синтез ІМ-І6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-І -валіл-М-14-(ЦТ2-(13-((4-16-
І4-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-2-оксидоізохінолін-6-іл|-2-карбоксипіридин-3-іл)-5-метил-1 Н- піразол-1-іл)уметил|-5,7-диметилтрицикло|3.3.1.157дец-1- иліокси)етил)(метил)карбамоїл)окси)метил|феніл)-М-карбамоїл-І -орнітинаміду (синтону 51)
Указану в заголовку сполуку одержували, як описано в прикладі 2.1, шляхом заміни речовини із прикладу 1.2.9 речовиною з прикладу 1.88.4. "Н ЯМР (400 МГЦ, диметилсульфоксид-авє) б ррт 13,29 (5, 2Н), 9,95 (5, 1Н), 9,18 (5, 1Н), 8,67 (5, 1Н), 8,57 - 8,36 (т, 1Н), 8,29 - 7,87 (т, 4Н), 7,77 (да, 2н), 7,56 (а, 2Н), 7,53 - 7,41 (т, 2Н), 7,24 (а, 2Н), 6,95 (5, 2Н), 5,95 (5, 1Н), 4,94 (5, 2Н), 4,35 (д, 1Н), 4,15 (да, 1Н), 3,84 (5, ЗН), 3,28 (а, 4Н), 3,06 - 2,77 (т, ЗН), 2,19 (а, ЗН), 2,17 - 1,80 (т, ЗН), 1,74 - 0,88 (т, 22Н), 0,79 (ад, 13Н). М5 (ЕБІ) т/е 1368,4 (М-Н). 2.119 Синтез М-((35,55)-3-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)-2-оксо-5-(2- сульфоетокси)метил|піролідин-1-іл)іацетил)-І -валіл-М-(4-(ЦТ2-((3-((4-(6-(8-(1,3-бензотіазол-2- ілкарбамоїл)нафталін-2-іл|-2-карбоксипіридин-3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)метилі|д-5,7- диметилтрицикло!Ї3.3.1.12Л|дец-1-иліокси)етил|-(2-сульфоетил)карбамоїл)іокси)метилІ|феніл)-Мо- карбамоїл-І -орнітинаміду (синтону 71) 2.119711 (ЗА,7а5)-3-Фенілтетрагідропіроло|(1,2-с|оксазол-5(ЗН)-он
Нагрівали суміш (5)-5-(гідроксиметил)піролідин-2-ону (25 г), бензальдегіду (25,5 г) та моногідрату пара-толуолсульфонової кислоти (0,50 г) і толуолі (300 мл) зі зворотним холодильником із застосуванням насадки Діна-Старка в осушувальній трубці протягом 16 годин.
Реакційну суміш охолоджували до кімнатної температури та розчинник декантували із нерозчинних матеріалів. Органічний шар промивали насиченою водною сумішшю бікарбонату натрію (2х) і сольовим розчином (їх). Органічний шар висушували над сульфатом натрію, фільтрували та концентрували за зниженого тиску. Залишок очищували за допомогою флеш- хроматографії на силікагелі, з елююванням гептаном/етилацетатом 35/65, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ОСІ) т/е 204,0 (М.Н) к. 2.119.2 (38,68, 7а5)-6-Бром-3-фенілтетрагідропіроло|(1,2-с|оксазол-5(ЗН)-он
У холодну (-77"С) суміш речовини із прикладу 2.119.1 (44,6 г) в тетрагідрофурані (670 мл)
Зо додавали краплями біс(триметилсиліл)амід літію (1,0 М у гексанах, 250 мл) протягом 40 хвилин з підтримкою температури реакції« -737С. Реакційну суміш перемішували при -77"С протягом 2 годин і додавали краплями бром (12,5 мл) протягом 20 хвилин з підтримкою температури реакції « -64"С. Реакційну суміш перемішували при -77"С протягом 75 хвилин і гасили шляхом додавання 150 мл холодної 1095 водної суміші на основі тіосульфату натрію у реакційну суміш при -77"С. Реакційну суміш нагрівали до кімнатної температури та розділяли між напівнасиченою водною сумішшю на основі хлориду амонію та етилацетатом. Шари розділяли й органічний шар промивали водою та сольовим розчином, висушували над сульфатом натрію, фільтрували та концентрували за зниженого тиску. Залишок очищали за допомогою хроматографії на силікагелі, із градієнтом елюювання 80/20, 75/25 і 70/30 гептану/етилацетату, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ОСІ) п/е 299,0 та 301,0 (МАМНз--Н)». 2.119.3 (38,65,7а5)-6-Бром-3-фенілтетрагідропіроло|1,2-с|оксазол-5(ЗН)-он
Вказану в заголовку сполуку виділяли у вигляді побічного продукту з прикладу 2.119.2. М5 (ОСІ) т/е 299,0 та 301,0 (МеАМНз--Н)". 2.119.4 (38,65,7а5)-6-Азидо-3-фенілтетрагідропіроло|1,2-с|оксазол-5(ЗН)-он
У суміш речовини із прикладу 2.119.2 (19,3 г) в М.М-диметилформаміді (100 мл) додавали азид натрію (13,5 г). Реакційну суміш нагрівали до 60"С протягом 2,5 годин. Реакційну суміш охолоджували до кімнатної температури і гасили шляхом додавання води (500 мл) і етилацетату (200 мл). Шари розділяли й органічний шар промивали сольовим розчином.
Об'єднані водні шари знову екстрагували етилацетатом (50 мл). Об'єднані органічні шари висушували за допомогою сульфату натрію, фільтрували та концентрували за зниженого тиску.
Залишок очищували за допомогою хроматографії на силікагелі, 3 елююванням гептаном/етилацетатом, 78/22, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ОСІ) т/е 262,0 (МаАМНзН)». 2.119.5 (38,65,7а5)-6-Аміно-3-фенілтетрагідропіроло|1,2-с|оксазол-5(ЗН)-он
У суміш речовини із прикладу 2.119.4 (13,5 г) в тетрагідрофурані (500 мл) й воді (50 мл) додавали трифенілфосфін вна полімерній підкладці (55 г). Реакційну суміш механічно перемішували протягом ночі за кімнатної температури. Реакційну суміш фільтрували через діатомову землю, з елююванням етилацетатом і толуолом. Суміш концентрували за зниженого тиску, розчиняли у дихлорметані (100 мл), висушували за допомогою сульфату натрію, потім 60 фільтрували та концентрували з одержанням указаної в заголовку сполуки, яку застосовували на наступній стадії без додаткового очищення. М5 (ОСІ) т/е 219,0 (М-А-Н)». 2.119.6 (38,65,7а5)-6-(Дибензиламіно)-3-фенілтетрагідропіроло|1,2-с|оксазол-5(ЗН)-он
У суміш речовини із прикладу 2.119.5 (11,3 г) в М,М-диметилформаміді (100 мл) додавали карбонат калію (7,0г), йодид калію (4,2г) і бензилбромід (14,5 мл). Реакційну суміш перемішували за кімнатної температури протягом ночі й гасили шляхом додавання води і етилацетату. Шари розділяли й органічний шар промивали сольовим розчином. Об'єднані водні шари знову екстрагували етилацетатом. Об'єднані органічні шари висушували за допомогою сульфату натрію, фільтрували та концентрували за зниженого тиску. Залишок очищували за допомогою хроматографії на силікагелі, з градієнтом елюювання від 10 до 1595 етилацетату в гептані, з одержанням твердої речовини, яку розтирали з гептаном з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ОСІ) т/е 399,1 (М.Н). 2.119.7 (35,55)-3-(Дибензиламіно)-5-(гідроксиметил)піролідин-2-он
У суміш речовини із прикладу 2.119.6 (13 г) в тетрагідрофурані (130 мл) додавали моногідрат пара-толуолсульфонової кислоти (12,4г) та воду (50 мл) й реакційну суміш нагрівали до 65"С протягом 6 днів. Реакційну суміш охолоджували до кімнатної температури і гасили шляхом додавання насиченого водного розчину бікарбонату натрію та етилацетату.
Шари розділяли й органічний шар промивали сольовим розчином. Об'єднані водні шари знову екстрагували етилацетатом. Об'єднані органічні шари висушували за допомогою сульфату натрію, фільтрували та концентрували за зниженого тиску. Воскоподібні тверді речовини розтирали з гептаном (150 мл) з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ОСІ) т/е 311,1 (МАН. 2.119.8 (35,55)-5-((трет-Бутилдиметилсиліл)окси)метил)-3-(дибензиламіно)піролідин-2-он
У суміш речовини із прикладу 2.119.7 (9,3 г) та 1Н-імідазолу (2,2 г) в М,М-диметилформаміді додавали трет-бутилхлордиметилсилан (11,2 мл, 50 мас.9о у толуолі) та перемішували реакційну суміш протягом ночі. Реакційну суміш гасили шляхом додавання води і етилового етеру. Шари розділяли й органічний шар промивали сольовим розчином. Об'єднані водні шари знову екстрагували діетиловим етером. Об'єднані органічні шари висушували за допомогою сульфату натрію, фільтрували та концентрували за зниженого тиску. Залишок очищували за допомогою хроматографії на силікагелі з елююванням 3595 етилацетатом в гептані, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ОСІ) т/е 425,1 (М.Н). 2.119.9 Трет-бутил-2-((35,55)-5-((трет-бутилдиметилсиліл)окси)метил)-3-(дибензиламіно)-2- оксопіролідин-1-ілілацетат
У холодну (0"С) суміш речовини із прикладу 2.119.8 (4,5 г) в тетрагідрофурані (45 мл) додавали 9595 гідрид натрію (320 мг) двома порціями. Холодну суміш перемішували протягом хвилин і додавали трет-бутил-2-бромацетат (3,2 мл). Реакційну суміш нагрівали до кімнатної температури та перемішували протягом ночі. Реакційну суміш гасили шляхом додавання води і етилацетату. Шари розділяли й органічний шар промивали сольовим розчином. Об'єднані водні шари знову екстрагували етилацетатом. Об'єднані органічні шари висушували за допомогою сульфату натрію, фільтрували та концентрували за зниженого тиску. Залишок очищували за 40 допомогою хроматографії на силікагелі, з градієнтом елюювання від 5 до 1295 етилацетату в гептані, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ОСІ) т/е 539,2 (М.Н). 2.119110 Трет-бутил-2-((35,55)-3-(дибензиламіно)-5-(гідроксиметил)-2-оксопіролідин-1- іл)уацетат
У суміш речовини із прикладу 2.119.9 (5,3 г) в тетрагідрофурані (25 мл) додавали фторид тетрабутиламонію (11 мл, 1,0 М в 95/5 тетрагідрофуран/вода). Реакційну суміш перемішували за кімнатної температури протягом однієї години і потім гасили шляхом додавання насиченої водної суміші хлориду амонію, води та етилацетату. Шари розділяли й органічний шар промивали сольовим розчином. Об'єднані водні шари знову екстрагували етилацетатом.
Об'єднані органічні шари висушували за допомогою сульфату натрію, фільтрували та концентрували за зниженого тиску. Залишок очищували за допомогою хроматографії на силікагелі, з елююванням 3595 етилацетатом в гептані, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ОСІ) т/е 425,1 (М.Н). 2.119.11 Трет-бутил-2-((35,55)-5-(2-(4-(трет-бутилдиметилсиліл)окси)-2,2- диметилбутокси)сульфоніл)етокси)метил)-3-(дибензиламіно)-2-оксопіролідин-1-іл)ацетат
У суміш речовини із прикладу 2.119.10 (4,7 г) в диметилсульфоксиді (14 мл) додавали суміш 4-((трет-бутилдифенілсиліл)окси)-2,2-диметилбутилетенсульфонату (14,5 г) в диметилсульфоксиді (14 мл). Додавали карбонат калію (2,6 г) та воду (28 мкл) й реакційну суміш нагрівали при бО0"С в атмосфері азоту протягом одного дня. Реакційну суміш охолоджували до кімнатної температури і потім гасили шляхом додавання суміші сольового бо розчину, води та діетилового етеру. Шари розділяли й органічний шар промивали сольовим розчином. Об'єднані водні шари знову екстрагували діетиловим етером. Об'єднані органічні шари висушували за допомогою сульфату натрію, фільтрували та концентрували за зниженого тиску. Залишок очищували за допомогою хроматографії на силікагелі, з градієнтом елюювання від 15 до 2595 етилацетату в гептані, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (Е5БІ--) т/е 871,2 (МАН). 2.119112 Трет-бутил-2-((35,55)-3-аміно-5-(2-((4-(трет-бутилдиметилсиліл)окси)-2,2- диметилбутокси)сульфоніл)етокси)метил)-2-оксопіролідин-1-іл)лацетат
Розчиняли речовину із прикладу 2.119.11 (873 мг) в етилацетаті (5 мл) та метанолі (15 мл) і додавали гідроксид паладію на вугіллі, 2095 за вагою (180 мг). Реакційну суміш перемішували в атмосфері водню (30 фунтів/кв. дюйм) за кімнатної температури протягом 30 годин, потім при 50"С протягом однієї години. Реакційну суміш охолоджували до кімнатної температури, фільтрували та концентрували з одержанням необхідного продукту. М5 (ЕІ) т/е 691,0 (М--Н)». 2.119713 4-((35,55)-1-(2-(трет-Бутокси)-2-оксоетил)-5-((2-(4-(трет- бутилдиметилсиліл)окси)-2,2-диметилбутокси)сульфоніл)етокси)метил)-2-оксопіролідин-3- ілламіно)-4-оксобут-2-енова кислота
Малеїновий ангідрид (100 мг) розчиняли в дихлорметані (0,90 мл) і по краплях додавали суміш речовини із прикладу 2.119.12 (650 мг) у дихлорметані (0,90 мл), потім нагрівали при 407С протягом 2 годин. Реакційну суміш безпосередньо очищували за допомогою хроматографії на силікагелі, з градієнтом елюювання від 1,0 до 2,595 метанолу в дихлорметані, що містив 0,290 оцтової кислоти. Після концентрації фракцій, що містили продукт, додавали толуол (10 мл) і суміш знову концентрували з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕБІ-) т/е 787,3 (М- ну. 2.119.14 Трет-бутил-2-((35,55)-5-(2-(4-(трет-бутилдиметилсиліл)окси)-2,2- диметилбутокси)сульфоніл)етокси)метил)-3-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)-2- оксопіролідин-1-іл)ацетат
Суспендували речовину із прикладу 2.119.13 (560 мг) у толуолі (7 мл) і додавали триетиламін (220 мкл) і сульфат натрію (525 мг). Реакційну суміш нагрівали зі зворотним холодильником в атмосфері азоту протягом б годин, та перемішували реакційну суміш за кімнатної температури протягом ночі. Реакційну суміш фільтрували й тверді речовини
Зо ополіскували етилацетатом. Елюент концентрували за зниженого тиску й залишок очищували за допомогою хроматографії на силікагелі, 3 елююванням гептаном/етилацетатом, 45/55, з одержанням указаної в заголовку сполуки. 2.411915 2-((35,55)-3-(2,5-Діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)-2-оксо-5-((2- сульфоетокси)метил)піролідин-1-іл)/оцтова кислота
Розчиняли речовину із прикладу 2.119.14 (1,2 г) в трифтороцтовій кислоті (15 мл) і нагрівали до 65-70"С в атмосфері азоту протягом ночі. Трифтороцтову кислоту видаляли за зниженого тиску. Залишок розчиняли в ацетонітрилі (2,5 мл) та очищували за допомогою препаративної рідинної хроматографії з оберненою фазою на колонці Гипа С18(2) АХІА (250х50 мм, з розміром частинок 10 мкм) із застосуванням градієнта від 5 до 7590 ацетонітрилу, який містить 0,196 трифтороцтової кислоти, у воді протягом 30 хвилин з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕЗІ-) т/е 375,2 (М-Н). 2.119.16 3-(1-((3-(2-(((4-((5)-2-(5)-2-Аміно-3-метилбутанамідо)-5- уреїдопентанамідо)бензил)окси)карбоніл)-(2-сульфоеєетил)аміно)етокси)-5,7-диметиладамантан- 1-ілуметил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)-6-(8-(бензо|ч|гіазол-2-ілкарбамоїл)нафталін-2-іл)піколінова кислота
Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 1.43.7 речовиною із прикладу 1.2.9 в прикладі 2.49.1. М5 (Е5І-) т/е 12524 (М-Н). 2.411917 М-((35,55)-3-(2,5-Діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)-2-оксо-5-((2- сульфоетокси)метилі|піролідин-1-іл)ацетил)-І -валіл-М-(4-(ЦТ2-((3-((4-(6-(8-(1,3-бензотіазол-2- ілкарбамоїл)нафталін-2-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)уметилі/д-5, 7- диметилтрицикло!|3.3.1.13,7|дец-1-илюкси)етилі|-(2-сульфоетил)карбамоїл)окси)метилі|феніл)-
М5о-карбамоїл-і -орнітинамід
Речовину з прикладу 2.119.15 (7 мг) розчиняли в М,М-диметилформаміді (0,15 мл) і додавали О-(7-азабензотриазол-1-іл)-М,М,М'М'-тетраметилуронію гексафторфосфат (9 мі) і
М,М-діїзопропілетиламін (7 мкл). Суміш перемішували протягом З хвилин за кімнатної температури й додавали у суміш речовини із прикладу 2.119.16 (28мг) і М,М- діззопропілетиламіну (15 мклу в М,М-диметилформаміді (0,15 мл). Через 1 годину реакційну суміш розбавляли М,М-диметилформамідом/водою 1/1 (1,0 мл) та очищували за допомогою хроматографії з оберненою фазою (колонка С18), з елююванням від 5 до 7595 ацетонітрилу в бо 0,195 водному розчині ТРА, з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (500 МГЦ,
диметилсульфоксид-савє) б ррт 9,95 (5, 1Н), 9,02 (5, 1Н), 8,37 (9, 1Н), 8,22 (т, 2Н), 8,18 (т, 2Н), 8,08 (т, 2Н), 8,03 (т, 1Н), 7,96 (рг а, 1Н), 7,81 (а, 1), 7,70 (, 1Н), 7,61 (рг т, ЗН), 7,48 (т, 2Н), 7,37 (Б 1Н), 7,27 (рі т, 2Н), 7,08 (5, 2Н), 4,99 (рг а, ЗН), 4,68 (Ії, 1Н), 4,39 (т, 1Н), 4,20 (т, 2Н), 4,04 (т, 1Н), 3,87 (рг а, 2Н), 3,74 (ріг т, 1Н) 3,65 (рії, 2Н), 3,48 (рег т, 4Н), 3,43 (ріг т, 2Н), 3,26 (рі т, 2Н), 3,00 (рг т, 2Н), 2,80 (т, 1Н), 2,76 (т, 1Н), 2,66 (рг т, 2Н), 2,36 (рг т, 1Н), 2,22 (5, ЗН), 2,00 (т, 1Н), 1,87 (т, 1Н), 1,69 (р т, 1Н), 1,62 (р т, 1Н), 1,40 (рег т, 4Н), 1,31-1,02 (т, 10 Н), 0,96 (т, 2Н), 0,85 (т, 12Н). М5 (Е5І-) т/е 1610,3 (М-НУ. 2.4120 Синтез М-(25)-2-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)-3-|4- (2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-ундекаоксатетратриаконтан-34-ілокси)феніл|пропаноїл)-І -валіл-М- 10. 14-ІЦ12-(3-(4-16-І(І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)нафталін-2-ілІ|-2-карбоксипіридин-З-іл)-5- метил-1Н-піразол-1-іл)уметил|-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.12Л)дец-1-иліокси)етил|-(2- сульфоетил)карбамоїліокси)метилі|феніл)-М»-карбамоїл-і! -орнітинаміду (синтону 5Х) 24201 (5)-Метил-3-(4-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-ундекаоксатетратриаконтан-34- ілокси)феніл)-2-(трет-бутоксикарбоніл)аміно)упропаноат
У суміш 2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-ундекаоксатетратриаконтан-З4-іл-4- метилбензолсульфонату (82,48 г) та карбонату калію (84,97 г) в ацетонітрилі (1,5 л) додавали (5)-метил-2-(трет-бутоксикарбоніл)аміно)-3-(4-гідроксифеніл)пропаноат (72,63 г) та перемішували реакційну суміш при 30"С протягом 12 годин. Після того, як за допомогою І С/М5 встановили, що вихідний матеріал витрачався, та основний продукт являв собою необхідний продукт, реакційну суміш фільтрували й фільтрат концентрували з одержанням неочищеного продукту, який очищували за допомогою Ргер-НРІС з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕБІ): т/е 811 (Манго). 2.411202. 3-(4-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-Ундекаоксатетратриаконтан-3З4-ілокси)феніл)-2- ((трет-бутоксикарбоніл)аміно)пропанова кислота
У суміш речовини із прикладу 2.120.1 (90,00 г) в тетрагідрофурані (1,5 л) й воді (500 мл) додавали моногідрат гідроксиду літію (14,27 г). Реакційну суміш перемішували при З0"С протягом 12 годин, і за допомогою І С/М5 встановили, що вихідний матеріал витрачався, та основний продукт являв собою необхідний продукт. Реакційну суміш регулювали із застосуванням водної НСІ до значення рн-б і суміш концентрували з одержанням неочищеної
Коо) вказаної в заголовку сполуки. М5 (ЕБІ): т/е 778,3 (М-Н). 2.4120.3 3-(4-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-Ундекаоксатетратриаконтан-3З4-ілокси)феніл)-2- амінопропанова кислота
У суміш речовини із прикладу 2.120.2 (88,41г) у дихлорметані (1,5л) додавали трифтороцтову кислоту (100 мл) при 25"С в атмосфері М» та перемішували реакційну суміш при 40"С протягом 12 годин. За допомогою І С/М5 встановили, що вихідний матеріал витрачався, та основний продукт являв собою необхідний продукт. Суміш концентрували з одержанням неочищеного продукту, який очищували за допомогою Ргер-НРІ С Е з одержанням указаної у заголовку сполуки у вигляді солі трифтороцтової кислоти. "Н ЯМР (400 МГц, СОСІз») б ррт 7,20 (а, 9-8,6 Гц, 2Н), 6,93 (й, 9-8,2 Гу, 2Н), 4,22 (аа, 9Ю-5,5, 7,4 Гц, 1Н), 4,14-4,06 (т, 2Н), 3,84 - 3,79 (т, 2Н), 3,68-3,50 (т, 40Н), 3,33 (5,3Н), 3,21 (й, 9-5,5 Гц, 1Н), 3,12-3,05 (т,1Н). М5 (Е5І) т/е 680,1 (М.Н) к. 2.120.4. 4-((2-(4-(2,5,68,11,14,17,20,23,26,29,32-Ундекаоксатетратриаконтан-34-ілокси)феніл)- 1-карбоксиетил)аміно)-4-оксобут-2-енова кислота
У суміш речовини із прикладу 2.120.3 (80,00 г) в діоксані (1 лу додавали фуран-2,5-діон (35 г) та перемішували реакційну суміш при 1207"С протягом 4 годин. За допомогою І С/М5 встановили, що вихідний матеріал витрачався, та основний продукт являв собою необхідний продукт. Суміш концентрували з одержанням неочищеної вказаної у заголовку сполуки, яку застосовували без очищення на наступній стадії. М5 (ЕІ) т/е 795,4 (М.Н). 2.120.5 (5)-3-(4-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-Ундекаоксатетратриаконтан-34-ілокси)феніл)- 2-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-ілупропанова кислота
У суміш речовини із прикладу 2.120.4 (96г, неочищена) у толуолі (1,5 л) додавали триетиламін (35,13 г) та перемішували реакційну суміш при 120"С протягом 4 годин. За допомогою І С/М5 встановили, що вихідний матеріал витрачався, та основний продукт являв собою необхідний продукт. Реакційну суміш фільтрували для виділення органічної фази та органічні речовини концентрували з одержанням неочищеного продукту, який очищували за допомогою Ргер-НРІС (прилад: Зпітаай?и ГС-20АР для препаративної НРІС, колонка:
РпепотепехФ І ипаФ (2) С18 250750 мм, внутр. діам. 10 мкм, рухома фаза: А означає НгО (0,0995 трифтороцтової кислоти), і В означає СНЗСМ, градієнт: В от 1595 до 43905 за 20 хвилин, витрата: 80 мл/хвилина, довжина хвилі: 220 і 254 нм, кількість, яку вводять: 1 грам на введення), бо потім за допомогою 5ЕС-НРІ С, з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (400 МГц,
СОСІз) б ррт 6,98 (й, 2Н), 6,74 (0, 2Н), 6,56 (5, 2Н), 4,85 (да, 1Н), 4,03 (І, 2Н), 3,84 - 3,76 (т, 2Н), 3,71 - 3,66 (т, 2Н), 3,65 - 3,58 (т, З9Н), 3,55 - 3,50 (т, 2Н), 3,41 - 3,30 (т, 4Н). М5 (ЕБІ) т/е 760,3 (МАН). 2.4120.6 М-(25)-2-(2,5-Діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)-3-(4-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32- ундекаоксатетратриаконтан-34-ілокси)феніл|пропаноїл)-І -валіл-М-14-(112-(13-((4-16-(8-(1,3- бензотіазол-2г-ілкарбамоїл)нафталін-2-іл|-2-карбоксипіридин-3-іл)/-о-метил-1 Н-піразол-1- ілуметил|-5,7-диметилтрицикло!Ї3.3.1.13,7|дец-1-иліокси)етил|-(2- сульфоетил)карбамоїліокси)метилі|феніл)-М5-карбамоїл-і -орнітинамід
Указану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 2.120.5 речовиною з прикладу 2.119.15 у прикладі 2.119.17. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-дв) б ррт 10,03 (5, 1Н), 9,02 (5, 1Н), 8,37 (9, 1Н), 8,22 (т, ЗН), 8,16 (а, 1Н), 8,12 (Біг т, 1Н), 8,07 (а, 1Н), 8,01 (9, 1), 7,96 (Бк а, 1Н), 7,81 (а, 1Н), 7,70 (, 1Н), 7,59 (рег т, 2Н), 7,48 (т, 2Н), 7,37 (І, 1Н), 7,28 (а, 2Н), 7,02 (а, 2Н), 6,89 (5, 2Н), 6,77 (9, 2Н), 4,98 (Бг а, 2Н), 4,79 (ад, 1Н), 4,39 (рг т, 1Н), 4,23 (Бі т, 2Н), 3,99 (Бі т, 2Н), 3,88 (Бі т, 2Н), 3,69 (Бг т, 4Н), 9,55 (т, 4Н), 3,50 (5, З2Н), 3,42 (т, 4Н), 15. 3,27 (т, АН), 3,23 (5, ЗН), 3,20 (т, 1Н), 3,03 (Б т, 1Н), 2,98 (т, 1Н), 2,65 (Би, 2Н), 2,22 (5, ЗН), 1,97 (Бг т, 1Н), 1,69 (Бе т, 1Н), 1,61 (ріг т, 1Н), 1,39 (т, 4Н), 1,31-0,91 (т, 12Н), 0,85 (т, 9Н), 0,77 (а, ЗН). М5 (ЕБІ) т/е 1993,7 (М-Н). 2421 Синтез М-((35,55)-3-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)-2-оксо-5-(2- сульфоетокси)метил|піролідин-1-іл)іацетил)-І -валіл-М-(4-(ЦТ2-((3-((4-(6-(8-(1,3-бензотіазол-2- ілкарбамоїл)-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-З3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1- ілуметил|-5,7-диметилтрицикло!/3.3.1.157|дец-1-ил)окси)етилі|-(2- сульфоетил)карбамоїліокси)метилі|феніл)-М»-карбамоїл-Ї! -орнітинаміду (синтону ЗМУ)
Указану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 2.120.1 речовиною з прикладу 2.119.16 у прикладі 2.119.17. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-дв) б ррт 9,96 (5, 1Н), 8,17 (бБг а, 1н), 8,03 (а, 2Н), 7,79 (а, 1Н), 7,61 (т, ЗН), 7,55 (9, 1Н), 7,45 (т, 2Н), 7,37 (т, ЗН), 7,27 (а, 2Н), 7,08 (5, 2Н), 6,98 (а, 1Н), 4,97 (т, АН), 4,68 (Її, 1Н), 4,37 (ріг т, 1Н), 4,22 (Бі 5, 1Н), 4,17 (а, 1Н), 4,03 (а, 1Н), 3,89 (ри, 2Н), 3,83 (Бг а, 2Н), 3,74 (ріг т, 1Н), 3,65 (І, 2Н), 3,49 (т, ЗН), 3,40 (Бі т, 4Н), 3,25 (рг т, 2Н), 3,02 (Бі т, 4Н), 2,80 (т, 2Н), 2,67 (Біг т, 2Н), 2,37 (Бі т, 1Н), 2,10 (5, ЗН), 1,99 (т, 1Н), 1,86 (т, 1Н), 1,69 (Бг т, 1Н), 1,61 (Бг т, 1Н), 1,52-0,91 (т, 16Н),
Коо) 0,85 (т, 12Н). М5 (ЕБІ) т/е 1615,4 (М-Н). 2.4122 Синтез М-(25)-2-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)-3-|4- (2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-ундекаоксатетратриаконтан-34-ілокси)феніл|пропаноїл)-І -валіл-М- 1А-1412-(3-((4-(6-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1 Н)-іл|-2- карбоксипіридин-3-іл)-5о-метил-!1 Н-піразол-1-іл)метил)|-5, 7-диметилтрициклоїЇ3.3.1.197|дец-1- ил)окси)етил|-(2-сульфоетил)карбамоїліокси)метилі|феніл)-М»-карбамоїл-І -орнітинаміду (синтону ТМ)
У суміш речовини із прикладу 2.120.5 (19,61 мг) ії О-(7-азабензотриазол-1-іл)-М,М,М"М'- тетраметилуронію гексафторфосфату (9,81 мг) в М,М-диметилформаміді (0,8 мл) додавали М,М- діізопропілетиламін (27,7 мкл). Суміш перемішували протягом 5 хвилин і додавали в холодну суміш речовини із прикладу 2.112.2 в М,М-диметилформаміді (0,5 мл) при 0"С. Реакційну суміш перемішували при 0"С протягом 40 хвилин і очищували за допомогою НРІС з оберненою фазою на системі біїбоп (колонка С18), з елююванням від 20 до 8095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (400
МГц, диметилсульфоксид-ав) б 9,99 (в, 1Н), 8,19 (а, 1Н), 8,14 - 8,04 (т, 1Н), 8,00 (аа, 1Н), 7,75 (а, 1Н), 7,62 - 7,52 (т, ЗН), 7,49 (а, 1Н), 7,46 - 7,37 (т, 2Н), 7,36 - 7,29 (т, 2Н), 7,28 - 7,21 (т,
ЗН), 6,99 (а, 2Н), 6,92 (а, 1Н), 6,85 (5, 2Н), 6,79 - 6,71 (т, 2Н), 4,94 (а, ЗН), 4,76 (да, 1Н), 4,35 (а, 1Н), 4,20 (1, 1Н), 3,96 (аа, 2Н), 3,85 (П, 2Н), 3,77 (а, 2Н), 3,66 (ас, 2Н), 3,52 (ад, 2Н), 3,50 - 3,47 (т, 2Н), 3,39 (аа, 2Н), 3,20 (5, АН), 2,97 (І, ЗН), 2,60 (її, 2Н), 2,13 - 2,01 (т, ЗН), 1,93 (5, 1Н), 1,61 (а, 2Н), 1,49 - 0,88 (т, 1ОН), 0,87 - 0,59 (т, 12Н). М5 (ЕБ5І) т/е 1998,7 (М-Н). 2.123 Синтез (65)-2,6-ангідро-6-(2-12-((Ц2-(13-(4-16-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)метилі/д-5,7- диметилтрицикло!Ї3.3.1.12Л)дец-1-иліокси)етил|-(2-сульфоетил)карбамоїл)окси)метил|-5-(/М-
М2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)ацетил|-І -валіл-І| -аланіл)іаміно)феніл)етил)-І -гулонової кислоти (синтону 52) 2.411231 (38,45,58,68)-3,4,5- Трис(бензилокси)-6-(бензилоксиметил)утетрагідропіран-2-он
У суміш (З3Е,45,5К,6К)-3,4,5-трис(бензилокси)-6-(бензилокси)метил)тетрагідро-2Н-піран-2- олу (75 г) в диметилсульфоксиді (400 мл) при 0"С додавали оцтовий ангідрид (225 мл). Суміш перемішували протягом 16 годин за кімнатної температури, після чого її охолоджували до 0"С.
Додавали велику кількість води та припиняли перемішування так, що забезпечували осадження бо реакційної суміші протягом З годин (неочищений лактон переміщувався на дно колби).
Надосадову рідину видаляли та неочищену суміш розбавляли етилацетатом і З рази промивали водою, нейтралізували насиченою водною сумішшю на основі Мансоз і знову двічі промивали водою. Потім органічний шар висушували над сульфатом магнію, фільтрували та концентрували з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕІ) т/е 561 (М--Ма)". 2.411232 (3845,58,6Н)-3,4,5-Трис(бензилокси)-6-(бензилоксиметил)-2-етинілтетрагідро-2Н- піран-2-ол
У суміш етинілтриметилсилану (18,23 г) в тетрагідрофурані (400 мл) в атмосфері азоту, охолоджену на бані із сухого льоду/ацетону (внутрішня темп. -65"7С), додавали краплями 2,5 М
Ви і у гексані (55,7 мл), з підтримкою температури нижче -60"С. Суміш перемішували на холодній бані протягом 40 хвилин, потім на бані з крижаною водою (внутрішня темп. підвищувалася до 0,4"С) протягом 40 хвилин, і нарешті знову охолоджували до -75"С. Додавали краплями суміш речовини із прикладу 2.123.1 (50 г) в тетрагідрофурані (50 мл) з підтримкою внутрішньої температури нижче -707"С. Суміш перемішували на бані із сухого льоду/ацетону протягом додаткових З годин. Реакційну суміш гасили насиченою водною сумішшю на основі
Мансо:з (250 мл). Забезпечували нагрівання суміші до кімнатної температури, екстрагували етилацетатом (З х 300 мл), висушували над Мд5О», фільтрували та концентрували іп масио з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕБ5І) т/е 659 (Ма-Ма)». 2.123.3 Триметил((35,48,58,6Н)-3,4,5-трис(бензилокси)-6-(бензилоксиметил)тетрагідро-2Н- піран-2-іл)етиніл)силан
У перемішану суміш речовини із прикладу 2.123.2 (60 г) в ацетонітрилі (450 мл) та дихлорметані (150 мл) при -157С на бані з льодом і сіллю додавали краплями триетилсилан (81 мл) з подальшим додаванням комплексу трифториду бору з діетиловим етером (40,6 мл) зі швидкістю, за якої внутрішня температура не перевищувала -107С. Потім суміш перемішували за температури від -157С до -107С протягом 2 годин. Реакційну суміш гасили насиченою водною сумішшю на основі МансСоОз (275 мл) і перемішували протягом 1 години за кімнатної температури. Потім суміш екстрагували етилацетатом (З х 550 мл). Екстракти висушували над
Ма5О., фільтрували та концентрували. Залишок очищували за допомогою флеш- хроматографії, з градієнтом елюювання етилацетатом/петролейним етером, від 095 до 7905, З одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕІ) т/е 643 (М--Ма)».
Зо 241234 (28,38,48,55)-3,4,5-Трис(бензилокси)-2-(бензилоксиметил)-6-етинілтетрагідро-2Н- піран
У перемішану суміш речовини із прикладу 2.123.3 (80 г) у дихлорметані (200 мл) і метанолі (1000 мл) додавали 1 н. водну суміш на основі Маон (258 мл). Суміш перемішували за кімнатної температури протягом 2 годин. Розчинник видаляли. Потім залишок розділяли між водою і дихлорметаном. Екстракти промивали сольовим розчином, висушували над Маг50О, фільтрували та концентрували з одержанням указаної в заголовку сполуки. МО (ЕБІ) т/е 571 (М--Ма)». 2.4123.5 (28,38,4Н8,55)-2-(Ацетоксиметил)-6-етинілтетрагідро-2Н-піран-3,4,5-триїлтриацетат
У суміш речовини із прикладу 2.123.4 (66 г) в оцтовому ангідриді (500 мл), охолоджену за допомогою бані з льодом/водою, додавали краплями комплекс трифториду бору з діетиловим етером (152 мл). Суміш перемішували за кімнатної температури протягом 16 годин, охолоджували за допомогою бані з льодом/водою та нейтралізували насиченою водною сумішшю на основі МанНсСОз. Суміш екстрагували етилацетатом (3х500 мл), висушували над
Маг5О», фільтрували та концентрували іп масио. Залишок очищували за допомогою флеш- хроматографії, з градієнтом елюювання етилацетатом/петролейним етером, від 09о до 3090, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕБІ) т/е 357 (М.Н). 2.123.6 (38,48,55,68)-2-Етиніл-6-(гідроксиметил)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5-триол
У суміш речовини із прикладу 2.123.5 (25 г) в метанолі (440 мл) додавали метанолат натрію (21 г). Суміш перемішували за кімнатної температури протягом 2 годин, а потім нейтралізували 4М НСІ у діоксані. Розчинник видаляли та залишок адсорбували на силікагелі та завантажували в колонку з силікагелю. На колонці застосовували градієнт елюювання етилацетат/петролейний етер, від 0 до 10095, потім метанол/етилацетат, від О до 1295, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕІ) т/е 211 (М--Ма)». 2.4123.7 (25,35,48,5Н8)-6-Етиніл-3,4,5-тригідрокситетрагідро-2Н-піран-2-карбонова кислота
У трьохгорлу круглодонну колбу завантажували речовину із прикладу 2.123.6 (6,00 г), КВг (0,30 г), бромід тетрабутиламонію (0,41 г) та 60 мл насиченої водної суміші на основі МансСо»з.
Додавали ТЕМРО ((2,2.0,6-тетраметилпіперидин-і-іп)оксил, 0,15г) в 60 мл дихлорметану.
Суміш енергійно перемішували та охолоджували на бані з льодом і сіллю до внутрішньої температури -27С. Додавали краплями суміш сольового розчину (12 мл), водну суміш МаНнСоО»з бо (24 мл) і МаосСі!І (154 мл) так, що внутрішня температура підтримувалася нижче 2"с.
Підтримували рН реакційної суміші в діапазоні 8,2-8,44 шляхом додавання твердого МагСОз.
Через в цілому б годин реакційну суміш охолоджували до внутрішньої температури 3"С та додавали краплями етанол (520 мл). Суміш перемішували протягом - 30 хвилин. Суміш переносили в ділильну лійку і шар на основі дихлорметану відкидали. Регулювали рН водного шару до 2-3 за допомогою 1 М водного розчину НСІ. Потім водний шар концентрували до сухого стану з одержанням твердої речовини. До сухої твердої речовини додавали метанол (100 мл) і завись перемішували протягом «30 хвилин. Суміш фільтрували крізь шар діатомової землі і залишок в лійці промивали за допомогою «100 мл метанолу. Фільтрат концентрували за зниженого тиску з одержанням указаної в заголовку сполуки. 2.123.8 (25,35,48,58)-Метил-б-етиніл-3,4,5-тригідрокситетрагідро-2Н-піран-2-карбоксилат
У трьохгорлу круглодонну колбу об'ємом 500 мл завантажували суспензію з прикладу 2.123.7 (6,45 г) в метанолі (96 мл) і охолоджували на бані з льодом і сіллю при внутрішній температурі, що становила -17"С. Обережно додавали чистий тіонілхлорид (2,79 мл). Внутрішня температура продовжувала підвищуватися протягом додавання, але не перевищувала 107с.
Забезпечували повільне нагрівання реакційної суміші до 15-207С протягом 2,5 години. Через 2,5 години реакційну суміш концентрували з одержанням указаної в заголовку сполуки. 2.123.9 (35,48,55,65)-2-Етиніл-6-(метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н-піран-3,4, 5-триїлтриацетат
До речовини із прикладу 2.123.8 (6,9 г) у вигляді суміші в М,М-диметилформаміді (75 мл) додавали 4-(диметиламіно)піридин (0,17 г) та оцтовий ангідрид (36,1 мл). Суспензію охолоджували на крижаній бані та додавали піридин (18,04 мл) за допомогою шприца протягом 15 хвилин. Забезпечували нагрівання реакційної суміші до кімнатної температури протягом ночі.
Додавали додатковий оцтовий ангідрид (12 мл) і піридин (6 мл) і продовжували перемішування протягом додаткових б годин. Реакційну суміш охолоджували на крижаній бані та додавали 250 мл насиченої водної суміші на основі МанСОЗ і перемішували протягом 1 години. Додавали воду (100 мл) і суміш екстрагували етилацетатом. Органічний екстракт двічі промивали насиченою сумішшю на основі Си5О5, висушували, фільтрували та концентрували. Залишок очищували за допомогою флеш-хроматографії з елююванням етилацетатом/петролейним етером, 5095, з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (500 МГЦ, метанол-ада) б ррт 5,29 (Ї, 1Н), 5,08 (с, 2Н), 4,48 (ад, 1Н), 4,23 (9, 1Н), 3,71 (5, ЗН), 3,04 (а, 1Н), 2,03 (5, ЗН), 1,99 (5,
Коо) ЗН), 1,98 (5, АН). 2.412310 2-Йод-4-нітробензойна кислота
В колбу з повною сорочкою об'ємом З л, обладнану механічною мішалкою, температурним датчиком і крапельною лійкою в атмосфері азоту, завантажували 2-аміно-4-нітробензойну кислоту (69,1 г, Сотбрі-Віоск5) та сірчану кислоту, 1,5 М, водний розчин (696 мл). Одержану суспензію охолоджували до внутрішньої температури, що становить 0"С, і додавали краплями суміш нітриту натрію (28,8 г) у воді (250 мл) протягом 43 хвилин, при цьому температуру підтримували нижче 1"С. Реакційну суміш перемішували при приблизно 0"С протягом 1 години.
Додавали краплями суміш йодиду калію (107 г) у воді (250 мл) протягом 44 хвилин, при цьому температуру підтримували нижче 1"С (спочатку додавання було екзотермічним і спостерігалося виділення газу). Реакційну суміш перемішували протягом 1 години при 0"С. Температура підвищувалася до 20"7С і потім суміш перемішували за температури навколишнього середовища протягом ночі. Реакційна суміш ставала суспензією. Реакційну суміш фільтрували і зібрану тверду речовину промивали водою. Вологу тверду речовину (7 108 г) перемішували в 10905 сульфіті натрію (350 мл, при цьому - 200 мл води застосовували для промивки твердої речовини) протягом 30 хвилин. Суспензію підкислювали концентрованою хлористоводневою кислотою (35 мл) та тверду речовину збирали шляхом фільтрації та промивали водою. Тверду речовину суспендували у воді (1 л) та повторно фільтрували, і забезпечували висихання твердої речовини в лійці протягом ночі. Потім тверду речовину висушували у вакуумній печі протягом 2 годин при 60"С. Одержану тверду речовину розтирали з дихлорметаном (500 мл) і суспензію фільтрували та промивали за допомогою додаткової кількості дихлорметану. Тверду речовину висушували на повітрі з одержанням указаної в заголовку сполуки. 212311 (2-Йод-4-нітрофеніл)метанол
В висушену в полум'ї З-горлу колбу об'ємом З л завантажували речовину із прикладу 2.412310 (51,9 г) і тетрагідрофуран (700 мл). Суміш охолоджували на крижаній бані до 0,57С і додавали краплями боран-тетрагідрофурановий комплекс (443 мл, 1 М в ТНЕ) (виділення газу) протягом 50 хвилин, з досягненням кінцевої внутрішньої температури, що становила 1,3"С.
Реакційну суміш перемішували протягом 15 хвилин і крижану баню видаляли. Забезпечували нагрівання реакційної суміші до температури навколишнього середовища протягом 30 хвилин.
Встановлювали колбонагрівач і реакційну суміш нагрівали до внутрішньої температури, що 60 становила 65,57"С, протягом З годин і потім забезпечували її охолодження до кімнатної температури під час перемішування протягом ночі. Реакційну суміш охолоджували на крижаній бані до 0"С і гасили шляхом додавання краплями метанолу (400 мл). Після короткого періоду інкубації температура швидко підвищувалася до 2,5"С з виділенням газу. Після додавання перших 100 мл протягом « 30 хвилин додавання більше не було екзотермічним, і виділення газу припинялося. Крижану баню видаляли та суміш перемішували за температури навколишнього середовища в атмосфері азоту протягом ночі. Суміш концентрували до твердої речовини, розчиняли у дихлорметані/уметанолі та адсорбували на силікагелі (- 150 г). Залишок завантажували на шар силікагелю (3000 мл) і застосовували елюювання дихлорметаном, з одержанням указаної в заголовку сполуки. 2.4123.12 (4-Аміно-2-йодфеніл)метанол
В колбу об'ємом 5 л, обладнану механічною мішалкою, колбонагрівачем, контрольованим температурним датчиком УКЕМ, та зворотним холодильником, завантажували речовину із прикладу 2.123.11 (98,83 г) та етанол (2 л). Реакційну суміш швидко перемішували і додавали залізо (99г) з подальшим додаванням суміші хлориду амонію (20,84 г) у воді (500 мл).
Реакційну суміш нагрівали протягом 20 хвилин до внутрішньої температури, що становила 80,3"С, при якій суміш починала енергійно нагріватися зі зворотним холодильником.
Колбонагрівач видаляли до зменшення інтенсивності нагріву зі зворотним холодильником.
Після цього суміш нагрівали до 807"С протягом 1,5 години. Реакційну суміш фільтрували в гарячому стані через мембранний фільтр, і залишок заліза промивали гарячим 5095 етилацетатом/метанолом (800 мл). Елюент пропускали крізь шар діатомової землі і фільтрат концентрували. Залишок розподіляли між 5096 сольовим розчином (1500 мл) та етилацетатом (1500 мл). Шари розділяли та водний шар екстрагували етилацетатом (400 мл х 3). Об'єднані органічні шари висушували над сульфатом натрію, фільтрували та концентрували з одержанням указаної в заголовку сполуки, яку застосовували без додаткового очищення. 2.412313 4-«(Трет-бутилдиметилсиліл)окси)метил)-3-йоданілін
В колбу об'ємом 5 л із механічною мішалкою завантажували речовину із прикладу 2.123.12 (88г) і дихлорметан (2 л). Суспензію охолоджували на крижаній бані до внутрішньої температури, що становила 2,5"С, і порціями додавали трет-бутилхлордиметилсилан (53,3 г) протягом 8 хвилин. Через 10 хвилин порціями додавали 1Н-імідазол (33,7г) у холодну
Зо реакційну суміш. Реакційну суміш перемішували протягом 90 хвилин, при цьому внутрішня температура підвищувалася до 15"С. Реакційну суміш розбавляли водою (3 л) і дихлорметаном (1 л). Шари розділяли й органічний шар висушували над сульфатом натрію, фільтрували та концентрували до масла. Залишок очищували за допомогою хроматографії на силікагелі (1600 г, силікагель), з градієнтом елюювання від 0 до 2595 етилацетату в гептані, з одержанням указаної в заголовку сполуки у вигляді масла. 2.412314 (5)-2-((5)-2-(((9Н-Флуорен-9-іл)метокси)карбоніл)аміно)-3- метилбутанамідо)пропанова кислота
У суміш (5)-2-(((9Н-флуорен-9-іл)уметокси)карбоніл)аміно)-З-метилбутанової кислоти (6,5 г) в диметоксиетані (40 мл) додавали (5)-2-амінопропанову кислоту (1,393 г) та бікарбонат натрію (1,314 г) у воді (40 мл). Додавали тетрагідрофуран (20 мл) для забезпечення розчинності.
Одержану суміш перемішували за кімнатної температури протягом 16 годин. Додавали водний розчин лимонної кислоти (1595, 75 мл) і суміш екстрагували 1095 2-пропанолом в етилацетаті (2 х 100 мл). В органічному шарі утворювався осад. Об'єднані органічні шари промивали водою (2 х 150 мл). Органічний шар концентрували за зниженого тиску і потім розтирали з діетиловим етером (80 мл). Після короткої обробки ультразвуком указану в заголовку сполуку збирали шляхом фільтрації. М5 (Е5І) т/е 411 (М.--Н)х. 2.412315 (9Н-Флуорен-9-іл)уметил-((5)-1-(((5)-1-(4-((трет-бутилдиметилсиліл)окси)метил)-3- йодфеніл)аміно)-1-оксопропан-2-іл)аміно)-3-метил-1-оксобутан-2-ілукарбамат
У суміш речовини із прикладу 2.123.13 (5,44 г) і речовини із прикладу 2.123.14 (6,15 г) в суміші дихлорметану (70 мл) та метанолу (35,0 мл) додавали етил-2-етоксихінолін-1(2Н)- карбоксилат (4,08г) і реакційну суміш перемішували протягом ночі. Реакційну суміш концентрували та завантажували на силікагель, з градієнтом елюювання від 1095 до 9590 гептану в етилацетаті, потім 595 метанолом в дихлорметані. Фракції, що містять продукт, концентрували, розчиняли в 0,295 розчині метанолу в дихлорметані (50 мл), завантажували на силікагель і застосовували градієнт елюювання від 0,295 до 295 метанолу в дихлорметані.
Фракції, що містять продукт, збирали з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕБІ) т/е 756,0 (М.Н). 2.412316 (25,35,48,55,65)-2-((5-(5)-2-((5)-2-((9Н-Флуорен-9-іл)метокси)карбоніл)аміно)-3- метилбутанамідо)пропанамідо)-2-«(трет-бутилдиметилсиліл)окси)метил)феніл)етиніл)-6- бо (метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5-триїлтриацетат
Суміш речовини із прикладу 2.123.9 (4,500 г), речовини із прикладу 2.123.15 (6,62 г), йодиду міді(І) (0,083 г) та бісс(трифенілфосфін)паладіюції) дихлориду (0,308 г) об'єднували у флаконі та дегазували. Додавали М,М-диметилформамід (45 мл) та М-етил-М-ізопропілпропан-2-амін (4,55 мл), і реакційну посудину продували азотом та перемішували за кімнатної температури протягом ночі. Реакційну суміш розподіляли між водою (100 мл) та етилацетатом (250 мл).
Шари розділяли й органічний шар висушували над сульфатом магнію, фільтрували та концентрували. Залишок очищували за допомогою хроматографії на силікагелі, з градієнтом елюювання від 595 до 9595 етилацетату в гептані. Фракції, що містять продукт, збирали, концентрували і очищували за допомогою хроматографії на силікагелі, з градієнтом елюювання від 0,2595 до 2,595 метанолу в дихлорметані, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕБІ) т/е 970,4 (МАН)». 2.412317 (25,35,48,55,65)-2-(5-((5)-2-((5)-2-((9Н-Флуорен-9-іл)метокси)карбоніл)аміно)-3- метилбутанамідо)пропанамідо)-2-«(трет-бутилдиметилсиліл)окси)метил)фенетил)-6- (метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5-триїлтриацетат
Додавали речовину із прикладу 2.123.16 (4,7 г) і тетрагідрофуран (95 мл) до 595 РУС (2,42 г, вологий) в посудину для роботи під тиском об'ємом 50 мл і струшували протягом 90 хвилин за кімнатної температури за тиску водню 50 фунтів/кв. дойм. Реакційну суміш фільтрували та концентрували з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (Е5І) т/е 974,6 (МАН). 2.412318 (25,35,48,55,65)-2-(5-((5)-2-((5)-2-((9Н-Флуорен-9-іл)уметокси)карбоніл)аміно)-3- метилбутанамідо)пропанамідо)-2-(гідроксиметил)фенетил)-6-(метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н- піран-3,4,5-триїлтриацетат
Суміш речовини із прикладу 2.123.17 (5,4 г) в тетрагідрофурані (7 мл), воді (7 мл) та крижаній оцтовій кислоті (21 мл) перемішували протягом ночі за кімнатної температури.
Реакційну суміш розбавляли етилацетатом (200 мл) і промивали водою (100 мл), насиченою водною сумішшю на основі МансСоОз (100 мл), сольовим розчином (100 мл), висушували над сульфатом магнію, фільтрували та концентрували. Залишок очищували за допомогою хроматографії на силікагелі, з градієнтом елюювання від 0,595 до 595 метанолу в дихлорметані, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (Е5І) т/е 860,4 (МАН). 2.412319 (25,35,48,55,65)-2-(5-((5)-2-((5)-2-((9Н-Флуорен-9-іл)уметокси)карбоніл)аміно)-3-
Зо метилбутанамідо)пропанамідо)-2-(((4-нітрофенокси)карбоніл)окси)метилуфенетил)-6- (метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5-триїлтриацетат
У суміш речовини із прикладу 2.123.18 (4,00 г) і біс(4-нітрофеніл)укарбонату (2,83 г) в ацетонітрилі (80 мл) додавали М-етил-М-ізопропіллпропан-2-амін (1,22 мл) за кімнатної температури. Після перемішування протягом ночі реакційну суміш концентрували, розчиняли у дихлорметані (250 мл) та промивали насиченою водною сумішшю на основі МансСоОз (4х 150 мл). Органічний шар висушували над сульфатом магнію, фільтрували та концентрували. Одержану піну очищували за допомогою хроматографії на силікагелі, з градієнтом елюювання від 595 до 75956 етилацетату у гексанах, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕІ) т/е 1025,5 (МАН). 2.423.20 3-(1-((3-(2-(((4-(8)-2-(В8)-2-Аміно-3-метилбутанамідо)пропанамідо)-2-(2- (25,38,48,55,65)-6-карбокси-3,4,5-тригідрокситетрагідро-2Н-піран-2- іл)/етил)бензил)окси)карбоніл)-(2-сульфоетил)аміно)етокси)-5,7-диметиладамантан-1-іл)метил)-
Б-метил-1Н-піразол-4-іл)-6-(8-(бензо|д4|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)- іл)упіколінова кислота
У холодну (0"С) суміш речовини із прикладу 2.123.19 (70 мг) і речовини із прикладу 1.2.9 (58,1 мг) в М,М-диметилформаміді (4 мл) додавали М-етил-М-ізопропілпропан-2-амін (0,026 мл).
Реакційну суміш повільно нагрівали до кімнатної температури та перемішували протягом ночі. У реакційну суміш додавали воду (1 мл) та ГІОН НгО (20 мг). Суміш перемішували за кімнатної температури протягом З годин. Суміш підкислювали трифтороцтовою кислотою, фільтрували та очищували за допомогою НРІС з оберненою фазою на системі Сіївоп (колонка С18), з елююванням від 20 до 8095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕІ) т/е 1564,4 (М-Н). 2.А4123.21 (65)-2,6-Ангідро-6-(2-12-((Ц2-(13-((4-16-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)уметилі/д-5,7- диметилтрицикло!|3.3.1.13,7|дец-1-илюкси)етилі|-(2-сульфоетил)карбамоїлюоюкси)метил|-5-(1М- (2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)ацетил|-І -валіл-Ї -аланіліаміно)феніл)етил)-І -гулонова кислота
Указану в заголовку сполуку одержували, як описано в прикладі 2.54, шляхом заміни речовини із прикладу 2.49.1 речовиною з прикладу 2.123.20. "НН ЯМР (500 МгГу, 60 диметилсульфоксид-ав) б ррт 12,86 (5, 1Н), 9,92 (й, 1Н), 8,35 - 8,19 (т, 2Н), 8,04 (0, 1Н), 7,80 (а,
1Н), 7,61 (а, 1), 7,57 - 7,32 (т, 8Н), 7,28 (5, 1Н), 7,22 (й, 1Н), 7,08 (5, 2Н), 6,95 (а, 1Н), 5,12 - 4,91 (т, 5Н), 4,39 (ї, 1Н), 4,32 - 4,19 (т, 1Н), 4,12 (5, 2Н), 3,89 (І, 2Н), 3,80 (й, 2Н), 3,14 (1, 1Н), 3,06 - 2,687 (т, АН), 2,69 - 2,58 (т, 4Н), 2,37 (р, 1Н), 2,09 (а, 4Н), 2,04 - 1,91 (т, 4Н), 1,54 (а, 1), 1,40 - 0,99 (т, 2ОН), 0,99 - 0,74 (т, 16Н). М5 (ЕБІ) т/е 1513,5 (М-Н). 2.4124 Синтез 3-Ц2-((3-(4-16-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)нафталін-2-іл|-2- карбоксипіридин-З3-ілІі-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)метил)|-5,7-диметилтрициклоїЇ3.3.1.157|дец-1- ил)окси)етил|-(14-(4-116-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)угексаноїл|аміно)бутил)-2-(бета-О- глюкопірануронозилокси)бензилі|оксиїкарбоніл)аміно)пропіл-бета-О-глюкопіранозидуронової кислоти (синтону 2М) 2.124ЛА (9Н-Флуорен-9-іл)метилбут-3-ин-1-ілкарбамат
Перемішували суміш бут-З-ин-1-аміну гідрохлориду (9г) та М,М-дізопропілетиламіну (44,7 мл) у дихлорметані (70 мл) і охолоджували до 0"С. Додавали суміш (9Н-флуорен-9- іл)уметилхлорформіату (22,06 г) у дихлорметані (35 мл) та перемішували реакційну суміш протягом 2 годин. Реакційну суміш концентрували й залишок очищували за допомогою хроматографії на силікагелі, з елююванням петролейним етером в етилацетаті (від 1095 до 25965), з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (Е5І) т/е 314 (М-а-Ма)». 2.412418 (38,45,55,65)-2-(2-Форміл-5-йодфенокси)-6-(метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н-піран- 3,4,5-триїлтриацетат
У перемішуваний розчин 2-гідрокси-4-йодбензальдегіду (0,95 г) в ацетонітрилі (10 мл) додавали /(З3К,45,55,65)-2-бром-6-(метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5-триїлтриацетат (2,5 г) та оксид срібла (2). Суміш накривали алюмінієвою фольгою та перемішували за кімнатної температури протягом ночі. Після фільтрування через діатомову землю фільтрат промивали етилацетатом, розчин концентрували. Реакційну суміш очищували за допомогою флеш-хроматографії із застосуванням системи ІЗСО СотрБрігБіає!, колонки 5Е40-809, з елююванням етилацетатом/гептаном, від 15 до 3095 (витрата: 60 мл/хв.), з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕІ) т/е 586,9 (Ма-Ма)». 2.4124.2 (25,35,45,58,65)-Метил-6-(5-(4-((9Н-флуорен-9-іл)уметокси)карбоніламіно)бут-1- иніл)-2-формілфенокси)-3,4,5-триацетокситетрагідро-2Н-піран-2-карбоксилат
Речовину із прикладу 2.124.18 (2,7 г), речовину із прикладу 2.124.1А (2,091 г),
Зо біс(трифенілфосфін)паладіюц(ії) хлорид (0,336 г) і йодид меди) (0,091 г) зважували у флаконі та продували потоком азоту. Додавали триетиламін (2,001 мл) і тетрагідрофуран (45 мл) та перемішували реакційну суміш за кімнатної температури. Після перемішування протягом 16 годин реакційну суміш розбавляли етилацетатом (200 мл) і промивали водою (100 мл) і сольовим розчином (100 мл). Органічний шар висушували над сульфатом магнію, фільтрували та концентрували. Залишок очищували за допомогою хроматографії на силікагелі, з елююванням петролейним етером в етилацетаті (від 1095 до 5095), з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕІ) т/е 750 (Ма-Ма)». 2.412433 (25,35,45,58,65)-Метил-6-(5-(4-((9Н-флуорен-9-іл)уметокси)карбоніламіно)бутил)-2- формілфенокси)-3,4,5-триацетокситетрагідро-2Н-піран-2-карбоксилат
Додавали речовину із прикладу 2.124.2 (1,5 г) і тетрагідрофуран (45 мл) до 1095 Ра-с (0,483 г) в посудину для роботи під тиском об'ємом 100 мл та перемішували протягом 16 годин за тиску Н»е 1 атм. за кімнатної температури. Реакційну суміш фільтрували та концентрували з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (Е5І) т/е 754 (Ма-Ма)». 2.124.4 (25,35,45,58,65)-Метил-6-(5-(4-((9Н-флуорен-9-іл)уметокси)карбоніламіно)бутил)-2- (гідроксиметил)фенокси)-3,4,5-триацетокситетрагідро-2Н-піран-2-карбоксилат
Охолоджували суміш речовини із прикладу 2.124.3 (2,0 г) в тетрагідрофурані («7,00 мл) та метанолі (7 мл) до 0"С та додавали МавВна (0,052 г) однією порцією. Через 30 хвилин реакційну суміш розбавляли етилацетатом (150 мл) і водою (100 мл). Органічний шар відділяли, промивали сольовим розчином (100 мл), висушували над сульфатом магнію, фільтрували та концентрували. Залишок очищували за допомогою хроматографії на силікагелі, з елююванням петролейним етером в етилацетаті (від 1095 до 4095), з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕБІ) т/е 756 (МаМа)". 2.124.5 (25,35,45,58,65)-Метил-6-(5-(4-((9Н-флуорен-9-іл)уметокси)карбоніламіно)бутил)-2- ((4-нітрофенокси)карбонілокси)метилуфенокси)-3,4,5-триацетокситетрагідро-2Н-піран-2- карбоксилат
У суміш речовини із прикладу 2.124.4 (3,0 г) і біс(4-нітрофеніл)карбонату (2,488 г) у сухому ацетонітрилі (70 мл) при 0"С додавали М,М-діззопропілетиламін (1,07 мл). Після перемішування за кімнатної температури протягом 16 годин реакційну суміш концентрували з одержанням залишку, який очищували за допомогою хроматографії на силікагелі з елююванням бо петролейним етером в етилацетаті (від 1095 до 5095), з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕБІ) т/е 921 (МаМа)». 2.4124.6 3-(1-((3-(2-(((4-(4-Амінобутил)-2-(28,35,48,58,62)-6-карбокси-3,4,5- тригідрокситетрагідро-2Н-піран-2-іл)уокси)бензил)окси)карбоніл)-(3-((25,35,48,58,6Н)-6- карбокси-3,4,5-тригідрокситетрагідро-2Н-піран-2-іл)уокси)пропіл)аміно)етокси)-5,7- диметиладамантан-1-іл)уметил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)-6-(8-(бензо|д9|гіазол-2- ілкарбамоїл)нафталін-2-іл)піколінова кислота
У холодну (0"С) суміш речовини із прикладу 2.124.5 (44 міг) і речовини із прикладу 1.87.3 (47,4 мг) в М,М-диметилформаміді (4 мл) додавали М-етил-М-ізопропілпропан-2-амін (0,026 мл).
Реакційну суміш повільно нагрівали до кімнатної температури та перемішували протягом ночі. У реакційну суміш додавали воду (1 мл) та ГІОН НгО (20 мг). Суміш перемішували за кімнатної температури протягом З годин. Суміш підкислювали трифтороцтовою кислотою, фільтрували та очищували за допомогою НРІС з оберненою фазою на системі Сіїоп (колонка С18), з елююванням від 20 до 8095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕІ) т/е 1564,4 (М-Н). 2.124.7. 3-Ц2-(3-((4-16-І(8-(1,3-Бензотіазол-2-ілкарбамоїл)нафталін-2-іл|-2-карбоксипіридин-3- ілу-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)метил|-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.13,7|дец-1-илюкси)етил|-((4-(4-
Ч6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)угексаноїламіно)бутил)-2-(бета-О- глюкопірануронозилокси)бензил|оксижхарбоніл)ламіно)зїпропіл-бета-О-глюкопіранозидуронова кислота
Указану в заголовку сполуку одержували, як описано в прикладі 2.5.4, шляхом заміни речовини із прикладу 2.5.3 речовиною з прикладу 2.124.6. "Н ЯМР (400 МГу, диметилсульфоксид-авє) б рріт 13,06 (5, 2Н), 8,99 (5, 1Н), 8,34 (аа, 1Н), 8,25 - 8,09 (т, ЗН), 8,08 - 8,02 (т, 1Н), 7,98 (а, 1Н), 7,89 (а, 1), 7,78 (а, 1Н), 7,66 (ад, 2Н), 7,50 - 7,41 (т, 2Н), 7,37 - 7,31 (т, 1Н), 7,14 (Ї, 1Н), 6,94 (в, 2Н), 6,90 (5, 1Н), 6,82 (0, 1Н), 5,14 - 5,02 (т, 2Н), 4,97 (а, 1Н), 4,19 (9, 1Н), 3,85 (а49, ЗН), 3,37 - 3,23 (т, 9Н), 3,14 (ї, 1Н), 3,04 - 2,92 (т, АН), 2,19 (5, ЗН), 1,96 (І, 2Н), 1,73 (в, 2Н), 1,55 - 0,87 (т, 21Н), 0,81 (а, 6Н). М5 (ЕБІ) т/е 15644 (М-НУ. 2.125 Синтез М-((35,55)-3-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)-5-(метоксиметил)-2- оксопіролідин-1-іл|Іацетил)-І -валіл-М-(4-(Т2-((3-((4-(6-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4- дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)метилі/д-5,7- диметилтрицикло|3.3.1.12Лдец-1-иліокси)етил/|-(2-сульфоетил)карбамоїліокси)метилі|феніл)-Мо- карбамоїл-І -орнітинаміду (синтону ЗМ) 2.125.4 Трет-бутил-2-((35,55)-3-(дибензиламіно)-5-(метоксиметил)-2-оксопіролідин-1- іл)уацетат
У суміш речовини із прикладу 2.119.10 (1,4 г) в М,М-диметилформаміді (5 мл) додавали йодметан (0,8 мл). Реакційну суміш охолоджували до 0"С та додавали 9595 гідрид натрію (80 мг). Через п'ять хвилин охолоджувальну баню видаляли та перемішували реакційну суміш за кімнатної температури протягом 2,5 годин. Реакційну суміш гасили додаванням води (20 мл) та етилацетату (40 мл). Шари розділяли й органічний шар промивали сольовим розчином.
Об'єднані водні шари знову екстрагували етилацетатом (10 мл). Об'єднані органічні шари висушували за допомогою сульфату натрію, фільтрували та концентрували за зниженого тиску.
Залишок очищували за допомогою хроматографії на силікагелі, 3 елююванням гептаном/етилацетатом, 80/20, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ОСІ) т/е 439,2 (МАН. 2.125.2 Трет-бутил-2-((35,55)-3-аміно-5-(метоксиметил)-2-оксопіролідин-1-іл)ацетат
У суміш речовини із прикладу 2.125.1 (726 мг) в 2,2,2-трифторетанолі (10 мл) додавали гідроксид паладію на вугіллі (2095 за вагою, 150 мг). Реакційну суміш перемішували в атмосфері водню (50 фунтів/кв. дюйм) за кімнатної температури протягом двох годин. Реакційну суміш фільтрували та концентрували з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ОСІ) т/е 259,0 (МАН). 2.441253 4-((35,55)-1-(2-(трет-Бутокси)-2-оксоетил)-5-(метоксиметил)-2-оксопіролідин-3- іл)аміно)-4-оксобут-2-енова кислота
Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 2.125.2 речовиною із прикладу 2.119.12 в прикладі 2.119.13. М5 (ОСІ) т/е 374,0 (МАМНз--Н)». 2.125.4 Трет-бутил-2-((35,55)-3-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)-5-(метоксиметил)-2- оксопіролідин-1-іл)ацетат
Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 2.125.3 речовиною із прикладу 2.119.13 в прикладі 2.119.14. М5 (ОСІ) т/е 356,0 (М-АМНз--Н)». 2.4125.5 2-((35,55)-3-(2,5-Діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)-5-(метоксиметил)-2-оксопіролідин- 1-іл)уоцтова кислота бо У суміш речовини із прикладу 2.125.4 (120 мг) у дихлорметані (8 мл) додавали трифтороцтову кислоту (4 мл). Реакційну суміш перемішували за кімнатної температури протягом 90 хвилин і потім концентрували за зниженого тиску. Залишок розчиняли в ацетонітрилі (4 мл) та очищували за допомогою препаративної НРІ С з оберненою фазою за допомогою колонки Гипа С18(2) АХІА, 250х50мм, з розміром частинки 10 мкм, із застосуванням градієнта від 5 до 7595 ацетонітрилу в 0,195 розчині трифтороцтової кислоти у воді, протягом 30 хвилин, з одержанням указаної в заголовку сполуки. Ме (ОСІ) т/е 300,0 (МаАМНзН)». 2.4125.6 М-1(35,55)-3-(2,5-Діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)-5-(метоксиметил)-2- оксопіролідин-1-іл|іацетил)у-І -валіл-М-(4-(Т2-((3-((4-(6-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)уметилі/д-5,7- диметилтрицикло!|3.3.1.13,7|дец-1-илюкси)етилі|-(2-сульфоетил)карбамоїл)окси)метилі|феніл)-
М5о-карбамоїл-і -орнітинамід
Указану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 2.125.5 речовиною з прикладу 2.119.15 і речовини із прикладу 2.49.1 речовиною з прикладу 2.119.16 у прикладі 2.119.17. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-ав) б ррт 9,98 (з, 1Н), 8,19 (рг а, тн), 8,03 (а, 1Н), 7,96 (а, 1Н), 7,79 (а, 1Н), 7,61 (т, ЗН), 7,55 (й, 1Н), 7,45 (т, 2Н), 7,37 (т, 2Н), 7,32 (5, 1Н), 7,27 (9, 2Н), 7,08 (5, 2Н), 6,96 (а, 1Н), 5,00 (т, 2Н), 4,96 (5, 2Н), 4,69 (ї, 1Н), 4,39 (р т, 1Н), 4,28 (т, 1Н), 4,20 (а, 1Н), 3,88 (ї, ЗН), 3,81 (Бг т, ЗН), 3,46 (т, ЗН), 3,40 (т, 2Н), 3,26 (Біг т, 2Н), 3,25 (5, ЗН), 3,01 (т, ЗН), 2,96 (т,1Н), 2,65 (І, 2Н), 2,36 (Бі т, 1Н), 2,10 (5, ЗН), 2,00 (т, 1Н), 1,94 (т, 1Н), 1,69 (рг т, 1Н), 1,59 (рг т, 1Н), 1,49-0,92 (т, 16Н), 0,88 (а, ЗН), 0,83 (т, 9Н). М5 (ЕІ) т/е 1521,5 (М-Н). 2.126 Синтез (65)-2,6-ангідро-6-(2-12-(ЦЦ2-(13-(4-16-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)метилі/д-5,7- диметилтрицикло!Ї3.3.1.157)дец-1-ил)іокси)етилі|-(2-сульфоетил)карбамоїліокси)метилі|-5-((М-(6- (2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)гексаноїл|)-І -валіл-Ї -аланіліаміно)феніл)етил)-І -гулонової кислоти (синтону ЗУ)
Указану в заголовку сполуку одержували, як описано в прикладі 2.123.21, шляхом заміни 2,5-діоксопіролідин-1-іл-2-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)яацетату 2,5-діоксопіролідин-1-іл- 6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-ілугексаноатом. "Н ЯМР (501 МГц, диметилсульфоксид-св) б
Коо) ррт 12,83 (5, 1Н), 9,87 (5, 1Н), 8,09 (а, 1Н), 8,05 - 7,95 (т, 1Н), 7,77 (а, 2Н), 7,59 (9, 1), 7,55 - 7,31 (т, 7Н), 7,28 (5, 1Н), 7,20 (й, 1Н), 6,97 (в, 2Н), 6,94 (й, 1Н), 5,08 - 4,84 (т, 5Н), 4,36 (р, 1Н), 3,78 (9, 2Н), 3,54 (І, 1Н), 3,48 - 3,28 (т, 9Н), 5,21 (5, 2Н), 3,12 (І, 2Н), 3,02 - 2,84 (т, АН), 2,81 - 2,54 (т, 6Н), 2,19 - 1,84 (т, 9Н), 1,63 - 1,39 (т, 6Н), 1,35 (5, 1Н), 1,29 - 0,86 (т, 18Н), 0,80 (9, 15Н). М5 (Е5І) т/е 1568,4 (М-НУ. 2.127 Синтез 2-((Ц2-(3-((4-16-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)- іл|-2-карбоксипіридин-3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)метилі|-5,7-диметилтрицикло/|3.3.1.127|дец-1- ил)окси)етил|-(2-сульфоетил)карбамоїліокси)метил|-5-(4-113-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1- іл)упропаноїл|аміно)бутил)феніл-бета-О-глюкопіранозидуронової кислоти (синтону ТК) 24274 3-(1-((3-(2-(((4-(4-Амінобутил)-2-(25,38,45,55,65)-6-карбокси-3,4,5- тригідрокситетрагідро-2Н-піран-2-іл)окси)бензил)окси)карбоніл)-(2-сульфоетил)аміно)етокси)- 5,7-диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1Н-піразол-4-іл)-6-(8-(бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-
З,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл)піколінова кислота
У суміш речовини із прикладу 1.2.9 (0,030 г), речовини із прикладу 2.124.5 (0,031 г) та 1Н- бензо|д4|11,2,3|гриазол-1-олу гідрату (5 мг) в М,М-диметилформаміді (0,5 мл) додавали М-етил-М- ізопропіллропан-2-амін (0,017 мл) та перемішували реакційну суміш протягом З годин.
Реакційну суміш концентрували, розчиняли в тетрагідрофурані (0,4 мл) та метанолі (0,4 мл) й обробляли гідратом гідроксиду літію (0,020 г) у вигляді суміші у воді (0,5 мл). Через 1 годину реакційну суміш гасили 2,2,2-трифтороцтовою кислотою (0,072 мл), розбавляли /М,М- диметилформамідом:водою (1:11) (1 мл)у та очищували за допомогою препаративної НРІС з оберненою фазою із застосуванням системи Сіївоп РІС 2020, з градієнтом елюювання ацетонітрилом/водою, від 595 до 7595. Фракції, що містять продукт, об'єднували та ліофілізували з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (Е5І) т/е 1251,7 (М.Н). 24272 2-(Щ(2-(3-(4-(6-(8-(1,3-Бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1Н)-іл|-2- карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1-ілуметил)|-5, 7-диметилтрицикло!|3.3.1.13,7|дец-1- илюкси)етилі|-(2-сульфоетил)карбамоїл)окси)метилід-5-(4-113-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол- 1- іл)упропаноїліаміно)дбутил)/феніл-бета-О-глюкопіранозидуронова кислота
У суміш речовини із прикладу 2.127.1 (0,027 г) та 2,5-діоксопіролідин-1-іл-3-(2,5-діоксо-2,5- дигідро-1Н-пірол-1-ілупропаноату (6,32 мг) в М,М-диметилформаміді (0,4 мл) додавали М-етил-
М-ізопропілпропан-2-амін (0,017 мл) та перемішували реакційну суміш протягом 1 години за бо кімнатної температури. Реакційну суміш гасили сумішшю 2,2,2-трифтороцтової кислоти
(0,038 мл), води (1,5 мл) та М,М-диметилформаміду (0,5 мл) та очищували за допомогою препаративної НРІС з оберненою фазою на системі сіїбоп 2020 із застосуванням градієнта ацетонітрил/вода від 595 до 7595. Фракції, що містять продукт, ліофілізували з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (501 МГц, диметилсульфоксид-ав) б 12,84 (5, 1Н), 8,03 (аа, 1Н), 7,91 - 7,85 (т, 1Н), 7,78 (а, 1Н), 7,61 (аа, 1Н), 7,52 (аа, 1Н), 7,50 - 7,40 (т, 2Н), 7,39 - 7,31 (т, 2Н), 7,91 (5, 1Н), 7,17 (да, 1Нн), 6,99 - 6,90 (т, 4Н), 6,83 (а, 1Н), 5,15 - 5,04 (т, 2Н), 5,05 - 4,96 (т, 1Н), 4,95 (5, 2Н), 3,91 - 3,83 (т, 4Н), 3,81 (а, ЗН), 3,58 (ї, 2Н), 3,42 (4, ЗН), 3,933 - 3,24 (т, 5Н), 3,00 (д, 4Н), 2,68 (аї, 2Н), 2,29 (ї, 2Н), 2,09 (а, ЗН), 1,49 (9, ЗН), 1,34 (14, 5Н), 1,21 (аа,
БН), 1,15- 1,07 (т, 2Н), 1,07 (5, 4Н), 0,95 (9, 1Н), 0,82 (9, 6Н). М5 (ЕБІ) т/е 14021 (МАН). 2.128 Синтез 2-((Ц2-(3-((4-16-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)- іл|-2-карбоксипіридин-3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)метилі|-5,7-диметилтрицикло/|3.3.1.127|дец-1- ил)окси)етил|-(2-сульфоетил)карбамоїліокси)метил|-5-І4-((25)-2-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н- пірол-1-іл)-3-(4-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-ундекаоксатетратриаконтан-34- ілокси)феніл|пропаноїліаміно)бутил|феніл-бета-О-глюкопіранозидуронової кислоти (синтону
ТВ)
Суміш речовини із прикладу 2.120.5 (0,035 г), О-(7-азабензотриазол-1-іл)-М,М,М'М'- тетраметилуронію гексафторфосфату (0,015 г) та М-етил-М-ізопропілпропан-2-аміну (0,015 мл) перемішували в М,М-диметилформаміді (0,4 мл) протягом 5 хвилин. Суміш додавали у суміш речовини із прикладу 2.127.1 (0,030 г) та М-етил-М-ізопропілпропан-2-аміну (0,015 мл) в М,М- диметилформаміді (0,4 мл) та перемішували за кімнатної температури протягом З годин.
Реакційну суміш розбавляли сумішшю води (1,5 мл), М,М-диметилформаміду (0,5 мл) та 2,2,2- трифтороцтової кислоти (0,034 мл) та очищували за допомогою препаративної НРІС з оберненою фазою на системі сіїбоп 2020 із застосуванням градієнта ацетонітрил/вода від 595 до 8595. Фракції, що містять продукт, ліофілізували з одержанням указаної в заголовку сполуки.
І"Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-ав) б 12,83 (в, 1Н), 8,04 - 7,93 (т, 2Н), 7,76 (а, 1Н), 7,58 (аа, 1Нн), 7,53 - 7,36 (т, ЗН), 7,37 - 7,25 (т, ЗН), 7,15 (а, 1Н), 6,97 - 6,88 (т, 4Н), 6,687 (9, 2Н), 6,85 - 6,77 (т, 1Н), 6,76 - 6,69 (т, 2Н), 5,13 - 4,96 (т, ЗН), 4,92 (5, 2Н), 3,95 (ас, 2Н), 3,84 (а, 2Н), 3,78 (5, 8Н), 3,69 - 3,60 (т, 2Н), 3,47 (а, З8Н), 3,48 - 3,35 (т, 6Н), 3,20 (5, 8Н), 3,10 (ай, 2Н), 2,98 (ї, 2Н), 2,69 - 2,60 (т, 2Н), 2,50 (9, 1Н), 2,06 (5, ЗН), 1,49 (ї, 2Н), 1,35 (5, 4Н), 1,21 (а, 4Н),
Коо) 1,05 (в, 6Н), 0,79 (а, 6Н). М5 (ЕБІ) т/е 1991,6 (М-Н). 2.129 Синтез (65)-2,6-ангідро-6-(2-12-((Ц2-(13-(4-16-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)метилі/д-5,7- диметилтрицикло!3.3.1.127|дец-1-ил)окси)етил|-(2-сульфоетил)карбамоїліокси)метилі|-5-((М- (25)-2-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)-3-(4-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32- ундекаоксатетратриаконтан-34-ілокси)феніл|пропаноїл)-І -валіл-І -аланіл)аміно|феніл)етил)-І - гулонової кислоти (синтону ТУ)
Суміш речовини із прикладу 2.120.5 (0,033 г), О-(7-азабензотриазол-1-іл)-М,М,М'М'- тетраметилуронію гексафторфосфату (0,014 г) та М-етил-М-ізопропілпропан-2-аміну (0,015 мл) перемішували в М,М-диметилформаміді (0,4 мл) протягом 5 хвилин. Дану суміш додавали у суміш речовини із прикладу 2.123.20 (0,032 г) та М-етил-М-ізопропілпропан-2-аміну (0,015 мл) в
М,М-диметилформаміді (0,4 мл) та перемішували за кімнатної температури протягом З годин.
Реакційну суміш розбавляли сумішшю води (1,5 мл), М,М-диметилформаміду (0,5 мл) та 2,2,2- трифтороцтової кислоти (0,033 мл) та очищували за допомогою препаративної НРІС з оберненою фазою на системі сіїбоп 2020 із застосуванням градієнта ацетонітрил/вода від 595 до 8595. Фракції, що містять продукт, ліофілізували з одержанням указаної в заголовку сполуки.
ІН ЯМР (501 МГц, диметилсульфоксид-ав) б 9,90 (а, 1Н), 8,25 (а, 1Н), 8,12 (т, 1), 8,01 (т, 1Н), 1,78 (т, 1Н), 7,59 (а, 1Н), 7,53 - 7,40 (т, 4Н), 7,43 - 7,30 (т, 4Н), 7,27 (5, 1Н), 7,18 (а, 2Н), 7,06 (5, 1Н), 7,00 (а, 2Н), 6,97 - 6,91 (т, 2Н), 6,87 (5, 2Н), 6,76 (а, 2Н), 5,02 - 4,92 (т, АН), 4,77 (аа, 1Н), 4,20 (І, 1Н), 3,98 (аа, 2Н), 3,86 (І, 2Н), 3,78 (а, 2Н), 3,70 - 3,65 (т, 2Н), 3,54 (5, 2Н), 3,55 - 3,45 (т, З8Н), 3,45 - 3,37 (т, 2Н), 3,35 - 3,25 (т, 2Н), 3,21 (5, 4Н), 3,17 - 3,06 (т, 2Н), 2,99 (ї, 2Н), 2,73 (5, 2Н), 2,61 (5, 4Н), 2,07 (9, 4Н), 2,01 (5, 2Н), 1,94 (5, 2Н), 1,54 (5, 2Н), 1,27 (0, 4Н), 1,22 (5, 2Н), 1,11 (5, 6Н), 1,08 - 0,99 (т, 2Н), 0,90 - 0,79 (т, 6Н), 0,76 (й, 6Н). М5 (ЕБІ) т/е 705,6 (М- зн). 2.130 Синтез 6-(8-(бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл)-3-(1-((3-(2- ((2-(2-(25,38,48,55,65)-6-карбокси-3,4,5-тригідрокситетрагідро-2Н-піран-2-іл)етил)-4-((5)-2- ((5)-2-(2-(35,55)-3-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)-2-оксо-5-((2- сульфоетокси)метил)піролідин-1-іл)іацетамідо)-3- метилбутанамідо)пропанамідо)бензил)окси)карбоніл)-(2-сульфоетил)аміно)етокси)-5,7- диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)піколінової кислоти (синтону ТХ) бо Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 2.123.20 речовиною із прикладу 2.119.16 в прикладі 2.119.17. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-адв) б ррт 9,85 (5, 1Н), 8,17 (бБг а, 1Н), 8,01 (а, 2Н), 7,77 (а, 1Н), 7,59 (а, 1Н), 7,53 (а, 1Н), 7,43 (т, 4Н), 7,34 (т, ЗН), 7,19 (а, 1Н), 7,06 (5, 2Н), 6,96 (й, 1Н), 4,99 (т, 2Н), 4,95 (5, 2Н), 4,63 (І, 1Н), 4,36 (ї, 1Н), 4,19 (Би т, 1Н), 4,16 (а, 1Н), 3,98 (а, 1Н), 3,87 (Би ї, 2Н), 3,81 (рг а, 2Н), 3,73 (бит, 1Н), 3,63 (ї, 2Н), 3,53 (т, 2Н), 3,44 (т, 4Н), 3,91 (І, 2Н), 3,21 (рг т, 2Н), 3,17 (т, 2Н), 3,00 (т, 2Н), 2,92 (Біг т, 1Н), 2,75 (т, ЗН), 2,65 (Ббг т, ЗН), 2,35 (біг т, 1Н), 2,07 (5, ЗН), 1,98 (Бі т, 2Н), 1,85 (т, 1Н), 1,55 (б т, 1Н), 1,34 (р т, 1Н), 1,26 (Ббг т, 6Н), 1,09 (Бе т, 7Н), 0,93 (р т, 1Н), 0,87, 0,83, 0,79 (усі й, всього 12Н). М5 (ЕБІ) т/е 17334 (М-Н). 2.131 Синтез 6-(8-(бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл)-3-(1-((3-(2- ((2-((25,38,45,55,65)-6-карбокси-3,4,5-тригідрокситетрагідро-2Н-піран-2-іл)окси)-4-(4-(2- ((35,55)-3-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)-2-оксо-5-(2-сульфоетокси)метил)піролідин-1- іллуацетамідо)бутил)бензил)окси)карбоніл)-(2-сульфоеєетил)аміно)етокси)-5,7-диметиладамантан- 1-ілуметил)-5-метил-1Н-піразол-4-іл)піколінової кислоти (синтону 172)
Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 2.127.1 речовиною із прикладу 2.119.16 в прикладі 2.119.17. "Н ЯМР (500 МГц, диметилсульфоксид-вв) б ррт 8,02 (а, 1Н), 7,82 (бгІ, 1Н), 7,77 (9, 1Н), 7,60 (9, 1Н), 7,53 (Ббг а, 1Н), 7,45 (ада, тн), 7,42 (а, 1Н), 7,36 (а, 1Н), 7,35 (5, 1Н), 7,33 (т, 1Н), 7,15 (а, 1Н), 7,05 (5, 2Н), 6,97 (9, 1Н), 6,94 (5, 1Н), 6,83 (9, 1Н), 5,07 (Біг т, 2Н), 5,00 (а, 1Н), 4,95 (5, 2Н), 4,69 (ї, 1Н), 4,04 (а, 2Н), 3,87 (т, ЗН), 3,82 (т,
ЗН), 3,73 (бг т, 1Н), 3,61 (т, 2Н), 3,47 (Ббг т, ЗН), 3,40 (т, АН), 5,29 (т, АН), 3,06 (рг т, 2Н), 3,00 (, 2Н), 2,73 (рг т, 2Н) 2,69 (ріг т, 2Н), 2,52 (р, 2Н), 2,35 (Біг т, 1Н), 2,08 (5, ЗН), 1,81 (т, 1Н), 1,53 (ріг т, 2Н), 1,40 (т, 2Н), 1,35 (Бг т, 2Н), 1,29-0,88 (рг т, ТОН), 0,82, 0,80 (обидва 5, в цілому 6Н). М5 (ЕБІ-) т/е 1607,5 (М-Н). 2.132 Синтез 2-((Ц2-(3-((4-16-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)- іл|-2-карбоксипіридин-3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)метилі|-5,7-диметилтрицикло/|3.3.1.127|дец-1- ил)окси)етил|-(2-сульфоетил)карбамоїліокси)метил|д|-5-(4-((2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1- іл)яацетил|аміно)бутил)феніл-бета-О-глюкопіранозидуронової кислоти (синтону ОА)
У суміш речовини із прикладу 2.127.1 (0,032 г) в М,М-диметилформаміді (0,4 мл) додавали
М-етил-М-ізопропілпропан-2-амін (0,025 мл) і суміш охолоджували до 0"С. Додавали 2,5- діоксопіролідин-1-іл-2-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)яацетат (8,86 мг) однією порцією та
Зо перемішували при 0"С протягом 45 хвилин. Реакційну суміш розбавляли сумішшю води (1,5 мл),
М,М-диметилформаміду (0,5 мл) та 2,2,2-трифтороцтової кислоти (0,036 мл) та очищували за допомогою препаративної НРІ С з оберненою фазою на системі біїбоп 2020 із застосуванням градієнта ацетонітрил/вода від 595 до 7595. Фракції, що містять продукт, ліофілізували з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (501 МГц, диметилсульфоксид-ав) б 12,86 (5, 1Н), 8,06 (5, 1Н), 8,02 (аа, 1Н), 7,77 (а, 1Н), 7,60 (аа, 1), 7,51 (аа, 1Н), 7,49 - 7,39 (т, 2Н), 7,38 - 7,28 (т, ЗН), 7,17 (аа, 1Н), 7,06 (а, 2Н), 6,98 - 6,89 (т, 2Н), 6,83 (9, 1Н), 5,13 - 5,03 (т, 2Н), 5,04 - 4,96 (т, 1Н), 4,94 (5, 2Н), 3,97 (5, 2Н), 3,90 - 3,77 (т, 6Н), 3,50 (5, 1Н), 3,50 - 3,41 (т, 2Н), 3,41 (91, ЗН), 3,28 (аї, 4Н), 3,06 - 2,96 (т, АН), 2,66 (ад, 2Н), 2,51 (5, 2Н), 2,08 (9, ЗН), 1,52 (5, 2Н), 1,42 -1,32 (т, 4Н), 1,23 (д, 4Н), 1,11 (д, 2Н), 1,06 (5, 4Н), 0,81 (9, 6Н). М5 (ЕБІ) т/е 1388,0 (М.Н) ». 2.133 Синтез 2-ЩЩ2-(3-(4-16-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)нафталін-2-іл|-2- карбоксипіридин-З3-ілІі-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)метил)|-5,7-диметилтрициклоїЇ3.3.1.157|дец-1- ил)окси)етил|-(2-сульфоетил)карбамоїліокси)метил|д|-5-(4-((2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1- іляацетил|аміно)бутил)феніл-бета-О-глюкопіранозидуронової кислоти (синтону 2) 241331 3-(1-((3-(2-(((4-(4-Амінобутил)-2-(25,38,45,55,65)-6-карбокси-3,4,5- тригідрокситетрагідро-2Н-піран-2-іл)окси)бензил)окси)карбоніл)-(2-сульфоетил)аміно)етокси)- 5,7-диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1Н-піразол-4-іл)-6-(8-(бензо|4|гіазол-2- ілкарбамоїл)нафталін-2-іл)піколінова кислота
У суміш речовини із прикладу 2.124.5 (0,060 г), речовини із прикладу 1.43.7 (0,056 г) та 1Н- бензо|д4|11,2,3|Ігриазол-1-олу (8 мг) в диметилсульфоксиді (0,5 мл) додавали М-етил-М- ізопропілпропан-2-амін (0,056 мл) та перемішували реакційну суміш за кімнатної температури протягом З годин. Реакційну суміш обробляли сумішшю гідрату гідроксиду літію (0,026 г) у воді (1 мл) та перемішували протягом 30 хвилин. У реакційну суміш додавали метанол (0,5 мл) та перемішування продовжували протягом 30 хвилин. У реакційну суміш додавали діетиламін (0,033 мл) та перемішування продовжували протягом ночі. Реакційну суміш гасили 2,2,2- трифтороцтовою кислотою (0,120 мл) та очищували за допомогою препаративної НРІС з оберненою фазою на системі сіїбоп 2020 із застосуванням градієнта ацетонітрил/вода від 595 до 7595. Фракції, що містять продукт, ліофілізували з одержанням указаної в заголовку сполуки.
М5 (ЕБІ) т/е 1247,7 (МАНУ. 2.133532... 2-І(2-(3-((4-16-(8-(1,3-Бензотіазол-2-ілкарбамоїл)нафталін-2-іл|-2-карбоксипіридин- бо З-іл)-5-метил-1Н-піразол-1-іл)метил|-5,7-диметилтрициклої3.3.1.13,7|дец-1-илюкси)етилі/-(2-
сульфоетил)карбамоїл)окси)метил|д|-5-(4-1(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол- 1- іл)яуацетиліамінодбутил)феніл-бета-О-глюкопіранозидуронова кислота
У суміш речовини із прикладу 2.133.1 (0,030 г) в М,М-диметилформаміді (0,400 мл) додавали М-етил-М-ізопропілпропан-2-амін (0,023 мл) і суміш охолоджували до 0"С. Додавали 2,5-діоксопіролідин-1-іл-2-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)ацетат (8,34 мг) однією порцією та суміш перемішували при 0"С протягом 30 хвилин. Реакційну суміш розбавляли сумішшю води (1,5 мл), М,М-диметилформаміду (0,5 мл) та 2,2,2-трифтороцтової кислоти (0,034 мл) та очищували за допомогою препаративної НРІ С з оберненою фазою на системі сіївоп 2020 із застосуванням градієнта ацетонітрил/'вода від 595 до 7595. Фракції, що містять продукт, ліофілізували з одержанням указаної в заголовку сполуки. "НН ЯМР (400 МГЦ, диметилсульфоксид-ав) б 13,08 (5, 1Н), 9,01 (5, 1Н), 8,39 - 8,91 (т, 1Н), 8,25 - 8,11 (т, ЗН), 8,06 (а, 2Н), 7,99 (а, 1Н), 7,94 (а, 1), 7,79 (а, 1Н), 7,68 (1, 1), 7,51 - 7,42 (т, 1Н), 7,46 (5, 1Н), 7,35 (ї, 1Н), 7,22 - 7,13 (т, 1Н), 7,06 (9, 2Н), 6,93 (9, 1Н), 6,83 (9, 1Н), 5,15 - 5,00 (т, 2Н), 4,99 (9, 1), 3,97 (5, 2Н), 3,86 (а, ЗН), 3,42 (а, 4Н), 3,29 (а, 5Н), 3,03 (р, 2Н), 2,72 - 2,62 (т, 2Н), 2,51 (9, ЗН), 15..2,21 (в, ЗН), 1,51 (д, 2Н), 1,37 (а, 4Н), 1,24 (й, 4Н), 1,10 (5, 5Н), 0,83 (9, 6Н), 0,61 (5, 2Н). М5 (ЕБІ) т/е 1383,0 (МАН). 2.134 Синтез 2-ЩЩ2-(3-(4-16-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)нафталін-2-іл|-2- карбоксипіридин-З3-ілІі-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)метил)|-5,7-диметилтрициклоїЇ3.3.1.157|дец-1- ил)окси)етил|-(2-сульфоетил)карбамоїліокси)метил|-5-І4-((25)-2-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н- пірол-1-іл)-3-(4-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-ундекаоксатетратриаконтан-34- ілокси)феніл|пропаноїліаміно)бутил|феніл-бета-О-глюкопіранозидуронової кислоти (синтону
Ок)
Суміш речовини із прикладу 2.120.5 (0,028 г), О-(7-азабензотриазол-1-іл)-М,М,М'М'- тетраметилуронію гексафторфосфату (0,013 г) та М-етил-М-ізопропілпропан-2-аміну (0,015 мл) перемішували в М,М-диметилформаміді (0,4 мл) протягом 5 хвилин. Суміш додавали у суміш речовини із прикладу 2.133.1 (0,030 г) та М-етил-М-ізопропілпропан-2-аміну (0,015 мл) в М,М- диметилформаміді (0,4 мл) та перемішували за кімнатної температури протягом 1 години.
Реакційну суміш розбавляли сумішшю води (1,5 мл), М,М-диметилформаміду (0,5 мл) та 2,2,2- трифтороцтової кислоти (0,042 мл) та очищували за допомогою препаративної НРІС з
Зо оберненою фазою на системі біїзоп 2020 із застосуванням градієнта ацетонітрил/вода від 595 до 7595. Фракції, що містять продукт, ліофілізували з одержанням указаної в заголовку сполуки.
І"Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-ав) б 9,01 (5, 1Н), 8,35 (аа, 1Н), 8,27 - 8,13 (т, ЗН), 8,06 (а, 1Н), 8,00 (а, 1), 7,94 (9, 1), 7,79 (9, 1Н), 7,73 - 7,64 (т, 1Н), 7,53 - 7,43 (т, 2Н), 7,42 - 7,32 (т, 1Н), 7,17 (9, 1Н), 7,06 (5, 1Н), 7,04 - 6,91 (т, ЗН), 6,89 (а, 2Н), 6,83 (а, 1Н), 6,74 (а, 1Н), 5,16 - 4,93 (т, АН), 4,63 (да, 2Н), 3,96 (ї, 2Н), 3,86 (а, 4Н), 3,66 (5, 4Н), 3,55 - 3,46 (т, З6Н), 3,45 - 3,35 (т, 8Н), 3,35 - 3,24 (т, 6Н), 3,21 (5, 2Н), 3,11 (в, 2Н), 2,99 (а, 2Н), 2,83 - 2,59 (т, ЗН), 2,52 (а, 2Н), 2,21 (в, ЗН), 1,57 - 0,86 (т, 14Н), 0,83 (9, 4Н). М5 (ЕБ5І) т/е 1986,6 (М-Н). 2.135 Синтез М-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)уацетил/)-Ї -валіл-М-14-((Т2-(13-((4-16-(8- (1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-іл)-5-метил- 1Н-піразол-1-іл)метил/|-5,7-диметилтрицикло!/3.3.1.12Лдец-1-ил)окси)етил|-(2- сульфоетил)карбамоїл)окси)метилі|-3-(4-карбоксибутил)феніл)-І -аланінаміду (синтону ОО) 2.135.1 Метил-4-((трет-бутоксикарбоніл)аміно)-2-йодбензоат
Розчиняли 3-йод-4-(метоксикарбоніл)бензойну кислоту (9 г) в трет-бутанолі (100 мл) і додавали дифенілфосфоразидат (7,6 мл) і триетиламін (4,9 мл). Суміш нагрівали до 837 (внутрішня температура) протягом ночі. Суміш концентрували до сухого стану та очищували за допомогою флеш-хроматографії, з градієнтом елюювання від 095 до 2095 етилацетату в гептані, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (Е5І) т/е 377,9 (МАН). 2.135.2 Метил-4-аміно-2-йодбензоат
Речовину із прикладу 2.135.1 (З г) перемішували у дихлорметані (30 мл) та трифтороцтовій кислоті (10 мл) за кімнатної температури протягом 1,5 години. Реакційну суміш концентрували до сухого стану та розподіляли між водою (регулювали рН до 1 за допомогою хлористоводневої кислоти) та діетиловим етером. Шари розділяли та водний шар промивали водною сумішшю на основі бікарбонату натрію, висушували над сульфатом натрію, фільтрували та концентрували до сухого стану. Одержану тверду речовину розтирали з толуолом з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (Е5І) т/е 278,0 (МАН). 2.135.3 Метил-4-((5)-2-((5)-2-(((9Н-флуорен-9-іл)метокси)карбоніл)аміно)-3- метилбутанамідо)пропанамідо)-2-йодбензоат
В колбу завантажували речовину із прикладу 2.135.2 (337 мг) та речовину із прикладу 2.123.14 (500 мг). Додавали етилацетат (18 мл) з подальшим додаванням піридину (0,296 мл). бо Одержану суспензію охолоджували на крижаній бані та додавали краплями 2,4,6-трипропіл-
1,3,5,2,4,6-триоксатрифосфінан-2,4,6-триоксид (50960 суміш в етилацетаті, 1,4 мл).
Перемішування продовжували при 0"С протягом 45 хвилин та реакційну суміш поміщали в морозильну камеру при -20"С протягом ночі. Забезпечували нагрівання реакційної суміші до кімнатної температури та гасили водою. Шари розділяли і водний шар ще два рази екстрагували етилацетатом. Об'єднані екстракти висушували за допомогою безводного сульфату натрію, фільтрували та концентрували. Залишок розчиняли у дихлорметані та розбавляли діетиловим етером до осадження вказаної у заголовку сполуки, яку збирали шляхом фільтрації. М5 (Е5І) т/е 669,7 (МАН). 2.135.4 (9Н-Флуорен-9-іл)метил-((5)-1-((5)-1-(4-(гідроксиметил)-З-йодфеніл)аміно)- 1- оксопропан-2-іл)аміно)-3-метил-1-оксобутан-2-ілукарбамат
Розчиняли речовину із прикладу 2.54.3 (1г) в тетрагідрофурані (15 мл) та суміш охолоджували до -15"С на бані з льодом та ацетоном. Потім додавали краплями алюмогідрид літію (1 н. в тетрагідрофурані, З мл), з підтримкою температури нижче -10"С. Реакційну суміш перемішували протягом 1 години та обережно гасили 1095 лимонною кислотою (25 мл). Шари розділяли і водний шар тричі екстрагували етилацетатом. Об'єднані органічні шари промивали водою та сольовим розчином, висушували над безводним сульфатом натрію, фільтрували та концентрували. Залишок адсорбували на силікагелі та очищували за допомогою флеш- хроматографії, з градієнтом елюювання від 595 до 695 метанолу в дихлорметані, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕБІ) т/е 664,1 (МаН)». 2.135.5 Метил-5-(5-((5)-2-((5)-2-((9Н-флуорен-9-іл)метокси)карбоніл)аміно)-3- метилбутанамідо)пропанамідо)-2-(гідроксиметил)феніл)пент-4-иноат
У перемішану суміш метилпент-4-иноату (50 мг), речовини із прикладу 2.135.4 (180 мг) і
М,М-діїзопропілетиламіну (0,15 мл) в М,М-диметилформаміді (2 мл) додавали бісстрифенілфосфін)паладію(і!) дихлорид (20 мг) та йодид міді (5 мг). Суміш три рази продували азотом та перемішували за кімнатної температури протягом ночі. Реакційну суміш розбавляли етилацетатом і промивали водою та сольовим розчином. Водні шари знову екстрагували етилацетатом. Об'єднані органічні шари висушували над сульфатом натрію, фільтрували та концентрували. Залишок очищували за допомогою НРІ С з оберненою фазою на системі сіЇ5оп, з елююванням від 20 до 9095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 об./06б. трифтороцтової
Зо кислоти. Необхідні фракції об'єднували й висушували сублімацією з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕЗІ) т/е 608,0 (М-НгО). 2.135.6 Метил-5-(5-((5)-2-((5)-2-((9Н-флуорен-9-іл)метокси)карбоніл)аміно)-3- метилбутанамідо)пропанамідо)-2-(гідроксиметил)феніл)пентаноат
Суміш речовини із прикладу 2.135.5 (0,084 г) та 1095 Ра/С (0,02 г) в тетрагідрофурані (5 мл) перемішували при 20"С в атмосфері Но з тиском 50 фунтів/кв. дойм протягом 1 години.
Реакційну суміш фільтрували через діатомову землю та розчинник випарювали за зниженого тиску з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕЗІ) т/е 612,0 (М-Н2гО)-. 2.135.7 Метил-5-(5-((5)-2-((5)-2-((9Н-флуорен-9-іл)метокси)карбоніл)аміно)-3- метилбутанамідо)пропанамідо)-2-(((4-нітрофенокси)карбоніл)окси)метил)феніл)пентаноат
Речовину із прикладу 2.135.7 одержували шляхом заміни речовини із прикладу 2.135.7 речовиною із прикладу 2.55.6 в прикладі 2.55.7. М5 (Е5І) т/е 795,4 (МАН). 2.135.8 3-(1-((3-(2-(((4-((5)-2-((5)-2-Аміно-3-метилбутанамідо)пропанамідо)-2-(4- карбоксибутил)бензил)окси)карбоніл)-(2-сульфоетил)аміно)етокси)-5,7-диметиладамантан- 1- ілуметил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)-6-(8-(бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін- 2(1Н)-іл)піколінова кислота
Речовину із прикладу 2.135.8 одержували шляхом заміни речовини із прикладу 2.135.7 (9Н- флуорен-9-іл)уметил-((5)-3-метил-1-(((5)-1-((4-(((4- нітрофенокси)карбоніл)окси)метил)феніл)аміно)-1-оксо-5-уреїдопентан-2-іл)аміно)-1-оксобутан- 2-іл)укарбаматом в прикладі 2.49.1. М5 (ЕБІ) т/е 1271,4 (М-Н). 2.135.9 М-К2,5-Діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)ацетил/-І -валіл-М-(4-((2-(13-((4-16-(8-(1,3- бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н- піразол-1-ілуметил|-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.13,7 |дец-1-илюкси)етилі-(2- сульфоетил)карбамоїл)окси)метил|-3-(4-карбоксибутил)феніл)-І -аланінамід
Речовину із прикладу 2.135.9 одержували шляхом заміни речовини із прикладу 2.135.8 речовиною з прикладу 2.49.1 у прикладі 2.54. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-йв) б ррт 9,88 (й, 1Н), 8,3 - 86,2 (т, 2Н), 8,01 (да, 1), 7,77 (а, 1Н), 7,59 (аа, 1Н), 7,52 (аа, 1), 7,47 - 7,29 (т, 8Н), 7,23 - 7,18 (т, 1Н), 7,05 (5, 2Н), 6,95 (й, 1Н), 5,00 (й, 2Н), 4,94 (5, 2Н), 4,37 (р, 1Н), 3,51 - 3,28 (т, 5Н), 3,26 - 3,14 (т, 2Н), 2,99 (ї, 2Н), 2,65 (І, 2Н), 2,57 (5, 2Н), 2,26 - 2,17 (т, ЗН), 2,07 (й,
ЗН), 1,94 (ад, 1Н), 1,61 - 0,69 (т, З5Н). М5 (ЕБІ) т/е 1408,5 (М-Н)». бо 2.136 Синтез 2-((Ц2-(3-((4-16-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-
іл|-2-карбоксипіридин-3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)метилі|-5,7-диметилтрицикло/|3.3.1.127|дец-1- ил)окси)етил|-(2-сульфоетил)карбамоїліокси)метил|д|-5-(3-((2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1- іл)яацетил|аміно)пропіл)/феніл-бета-О-глюкопіранозидуронової кислоти (синтону ОМ) 2.136.1. (38,45,55,65)-2-(5-(3-((9Н-Флуорен-9-іл)метокси)карбоніл)аміно)проп-1-ін-1-іл)-2- формілфенокси)-6-(метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5-триїлтриацетат
Речовину із прикладу 2.136.1 одержували шляхом заміни (9ЗН-флуорен-9-ілуметилпроп-2-ін- 1-ілкарбамату речовиною із прикладу 2.124.1А в прикладі 2.124.2. М5 (Е5І) т/е 7141 (МЕАН)». 2.136.2 (25,38,45,55,65)-2-(5-(3-(((9Н-Флуорен-9-ілуметокси)карбоніл)аміно)пропіл)-2- формілфенокси)-6-(метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5-триїлтриацетат
Речовину із прикладу 2.136.2 одержували шляхом заміни речовини із прикладу 2.136.1 речовиною із прикладу 2.124.2 в прикладі 2.124.3. М5 (Е5І) т/е 718,5 (МА-Н)». 2.136.3 (25,38,45,55,65)-2-(5-(3-(((9Н-Флуорен-9-ілуметокси)карбоніл)аміно)пропіл)-2- (гідроксиметил)фенокси)-6-(метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5-триїлтриацетат
Речовину із прикладу 2.136.3 одержували шляхом заміни речовини із прикладу 2.136.2 речовиною із прикладу 2.124.3 в прикладі 2.124.4. М5 (Е5І) т/е 742,2 (М.-Ма)». 2.136.4. (25,3Н8,45,55,65)-2-(5-(3-(((9Н-Флуорен-9-іл)метокси)карбоніл)аміно)пропіл)-2-(((4- нітрофенокси)карбоніл)окси)метил)фенокси)-6-(метоксикарбоніл)тетрагідро-2Н-піран-3,4,5- триїлтриацетат
Речовину із прикладу 2.136.4 одержували шляхом заміни речовини із прикладу 2.136.3 речовиною із прикладу 2.124.4 в прикладі 2.124.5. М5 (Е5І) т/е 885,2 (М.-Ма)». 2.136.5 3-(1-((3-(2-(((4-(3-Амінопропіл)-2-((38,45,55,65)-6-карбокси-3,4,5- тригідрокситетрагідро-2Н-піран-2-іл)уокси)бензил)окси)карбоніл)-(2-сульфоетил)аміно)етокси)- 5,7-диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1Н-піразол-4-іл)-6-(8-(бензо|4|гіазол-2г-ілкарбамоїл)-
З,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл)піколінова кислота
Речовину із прикладу 2.136.5 одержували шляхом заміни речовини із прикладу 2.136.4 (9Н- флуорен-9-іл)уметил-((5)-3-метил-1-(((5)-1-((4-(((4- нітрофенокси)карбоніл)окси)метил)феніл)аміно)-1-оксо-5-уреїдопентан-2-іл)аміно)-1-оксобутан- 2-ілукарбаматом в прикладі 2.49.1. М5 (ЕБІ) т/е 1237,7 (МАН) У. 2.136.6 2-((412-(3-(4-(6-(8-(1,3-Бензотіазол-2г-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2-
Зо карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1-ілуметил)|-5, 7-диметилтрицикло!|3.3.1.13,7|дец-1- илюкси)етилі|-(2-сульфоетил)карбамоїл)окси)метилі-5-(3-((2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1- іл)яуацетиліамінозупропіл)феніл-бета-О-глюкопіранозидуронова кислота
Речовину із прикладу 2.136.6 одержували шляхом заміни речовини із прикладу 2.136.5 речовиною з прикладу 2.49.1 у прикладі 2.54. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-йв) б ррт 8,14 (9, 1Н), 8,01 (9, 1Н), 7,59 (а, 1Н), 7,53 - 7,39 (т, 4Н), 7,38 - 7,28 (т, ЗН), 7,22 - 7,15 (т, 2Н), 7,13 - 6,91 (т, 5Н), 6,84 (9, 1Н), 5,17 - 4,91 (т, 5Н), 3,95-3,2 (т, 4Н), 3,10-2,90 (т, 4Н), 2,75-2,65 (т, 2Н), 2,08 (в, ЗН), 1,65 (в, 2Н), 1,39 - 0,71 (т, 21Н). М5 (ЕБІ) т/е 19372,3 (М-Н). 2.137 Синтез 6-І(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-11-((3-12-
ІЧ2-(25,38,45,55,65)-6-карбокси-3,4,5-тригідрокситетрагідро-2Н-піран-2-іл|окси)-4-(4-((2,5- діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)іуацетиліІаміно)бутил)бензил|окси)карбоніл)-(3-(11,3-дигідрокси-2- (гідроксиметил)пропан-2-іл|аміно)-З-оксопропіл)аміно|етокси)-5, 7- диметилтрицикло!3.3.1.127дец-1-ил)метилі|-5-метил-1Н-піразол-4-іліпіридин-2-карбонової кислоти (синтону 2) 24374 3-(1-((3-(2-(((4-(4-Амінобутил)-2-(28,35,48,58,62)-6-карбокси-3,4,5- тригідрокситетрагідро-2Н-піран-2-іл)окси)бензил)окси)карбоніл)-(3-((1,3-дигідрокси-2- (гідроксиметил)пропан-2-іл)аміно)-3-оксопропіл)аміно)етокси)-5,7-диметиладамантан- 1- ілуметил)-5-метил-1Н-піразол-4-іл)-6-(8-(бензо|4|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін- 2(1Н)-іл)піколінова кислота
Вказану в заголовку сполуку одержували, як описано в прикладі 2.124.6, шляхом заміни речовини із прикладу 1.87.3 речовиною із прикладу 1.84. М5 (Е5І) т/е 1319,4 (М-Н). 2.137.2 6-І(І8-(1,3-Бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-ілІ|-3-71-((3-(2-(К2- (щ(25,38,45,55,65)-6-карбокси-3,4,5-тригідрокситетрагідро-2Н-піран-2-іл|окси)-4-(4-Щ(2,5-діоксо- 2,5-дигідро-1Н-пірол-1-ілуацетиліаміно)бутил)бензилі|окси)карбоніл)-(3-111,З-дигідрокси-2- (гідроксиметил)пропан-2-іл|аміно)-3-оксопропіл)аміно|етокси)-5, 7- диметилтрицикло!|3.3.1.13,7|дец-1-ил)метил|-5-метил-1 Н-піразол-4-іліпіридин-2-карбонова кислота
Указану в заголовку сполуку одержували, як описано в прикладі 2.54, шляхом заміни речовини із прикладу 2.49.1 речовиною з прикладу 2.137.1. "НН ЯМР (501 МГуц, диметилсульфоксид-ав) б ррт 12,83 (5, 2Н), 8,12 (5, ОН), 8,06 (5, 1Н), 8,03 - 7,99 (т, 1Н), 7,77 (й, (510) 1Н), 7,72 (5, ОН), 7,60 (а, 1), 7,52 - 7,39 (т, ЗН), 7,34 (пд, 2Н), 7,26 (5, 1Н), 7,21 - 7,11 (т, 2Н),
7,05 (5, 2Н), 6,93 (а, 2Н), 6,83 (а, 1Н), 5,09 (9, 2Н), 5,00 (а, 1Н), 4,94 (5, 2Н), 4,12 (І, 1Н), 3,97 (5, 2Н), 3,687 (а, 4Н), 3,79 (а, 2Н), 3,29 (ад, 2Н), 3,12 - 2,93 (т, 5Н), 2,47 - 2,23 (т, 1Н), 2,07 (а, ЗН), 1,50 (4, ЗН), 1,36 (9, 5Н), 1,31 - 0,85 (т, 9Н), 0,81 (а, 7Н). М5 (ЕБ5І) т/е 15684 (М-Н). 2.138 Синтез 6-(8-(бензо(д|гіазол-2-ілкарбамоїл)нафталін-2-іл)-3-(1-((3-(2-(((2- ((25,38,45,55,65)-6-карбокси-3,4,5-тригідрокситетрагідро-2Н-піран-2-іл)окси)-4-(4-(2-((35,55)-3- (2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)-2-оксо-5-((2-сульфоетокси)метил)піролідин-1- ілуацетамідо)бутил)бензил)окси)карбоніл)-(2-сульфоетил)аміно)етокси)-5,7-диметиладамантан- 1-ілуметил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)піколінової кислоти (синтону МВ)
Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 2.133.1 речовиною із прикладу 2.119.16 в прикладі 2.119.17. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-адв) б ррт 8,99 (5, 1Н), 8,34 (ай, 1Н), 8,19 (а, 1Н), 8,17 (а, 1Н), 8,13 (9, 1Н), 8,04 (а, 1Н), 7,97 (9, 1), 7,93 (а, 1Н), 7,80 (Б, 1), 7,77 (а, 1Н), 7,67 (ад, 1), 7,45 (5, 1Н), 7,45 (аа, 1Н), 7,34 (да, тн), 7,14 (9, 1Н), 7,03 (5, 2Н), 6,93 (5, 1Н), 6,82 (Бг а, 1Н), 5,06 (Ббг т, 2Н), 4,98 (а, 1Н), 4,67 (1, 1Н), 4,02 (9, 2Н), 3,85 (т, ЗН), 3,71 (Бг т, 1Н), 3,59 (ї, 2Н), 3,45 (Ббг т, ЗН), 3,41 (т, 4Н), 3,27 (т, 4Н), 3,03 (т, 2Н), 2,70 (т, 2Н) 2,65 (Біг т, 2Н), 2,50 (ри, 2Н), 2,91 (рт, 1Н), 2,19 (5, ЗН), 1,80 (т, 1Н), 1,52 (орг т, 2Н), 1,38 (т, 2Н), 1,35 (Бг т, 2Н), 1,29-0,88 (рг т, ТОН), 0,82 (в, ЗН), 0,80 (5, ЗН). М5 (ЕІ) т/е 16024 (М-Н). 2.139 Синтез 2-((Ц2-(3-((4-16-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)- іл|-ге-карбоксипіридин-3-ілі-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)уметил|-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.137)дец-1- ил)окси)етилі|-(З-гідрокси-2-(гідроксиметил)пропілІікарбамоїліокси)метилід-5-(3-(2,5-діоксо-2,5- дигідро-1Н-пірол-1-іл)уацетил|аміно)пропіл)/феніл-бета-О-глюкопіранозидуронової кислоти (синтону МС) 2.411391 3-(1-((3-(2-((((4-(3-Амінопропіл)-2-((25,38,45,55,65)-6-карбокси-3,4,5- тригідрокситетрагідро-2Н-піран-2-іл)окси)бензил)окси)карбоніл)-(З-гідрокси-2- (гідроксиметил)пропіл)аміно)етокси)-5,7-диметиладамантан-1-іл)уметил)-5-метил-1 Н-піразол-4- іл)-6-(8-(бензо|(д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл)піколінова кислота
Речовину із прикладу 2.139.1 одержували шляхом заміни речовини із прикладу 2.136.4 (9Н- флуорен-9-іл)уметил-((5)-3-метил-1-(((5)-1-((4-(((4- нітрофенокси)карбоніл)окси)метил)феніл)аміно)-1-оксо-5-уреїдопентан-2-іл)аміно)-1-оксобутан-
Зо 2-ілукарбаматом і шляхом заміни речовини із прикладу 1.79.3 речовиною із прикладу 1.2.9 в прикладі 2.49.1. М5 (Е5І) т/е 1217,7 (МАН). 21392. 2-І(12-(3-(4-(6-(8-(1,3-Бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2- карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1-ілуметил)|-5, 7-диметилтрицикло!|3.3.1.13,7|дец-1- илюкси)етилі-(З-гідрокси-2-(гідроксиметил)пропілІкарбамоїл)окси)метил|-5-(3-(2,5-діоксо-2,5- дигідро-1Н-пірол-1-іл)яуацетиліаміно)пропіл)/феніл-бета-О-глюкопіранозидуронова кислота
Речовину із прикладу 2.139.1 одержували шляхом заміни речовини із прикладу 2.139.1 речовиною з прикладу 2.49.1 у прикладі 2.54. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-йв) б ррт 12,84 (5, 2Н), 8,11 (ї, 1Н), 8,00 (аа, 1Н), 7,76 (а, 1н), 7,62 - 7,56 (т, 1Н), 7,50 - 7,37 (т, ЗН), 7,37 -7,29 (т, 2Н), 7,25 (5, 1Н), 7,16 (а, 1Н), 7,04 (5, 2Н), 6,96 - 6,88 (т, 2Н), 6,82 (9, 1Н), 5,06 (5, 2Н), 4,98 (9, 1Н), 4,92 (5, 2Н), 3,97 (в, 2Н), 3,44 - 3,18 (т, 11Н), 3,07 - 2,90 (т, АН), 2,05 (5, ЗН), 1,80 (5, 1Н), 1,64 (р, 2Н), 1,38 - 0,67 (т, 19Н). (т, 21Н). М5 (ЕБІ) т/е 1352,5 (М-Н). 2.140 Синтез М-((35,55)-3-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)-2-оксо-5-(2- сульфоетокси)метил|піролідин-1-іл)іацетил)-І -валіл-М-(4-(ЦТ2-((3-((4-(6-(8-(1,3-бензотіазол-2- ілкарбамоїл)-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-З3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1- ілуметил|-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.157|дец-1-ил)окси)етилі|-(2- сульфоетил)карбамоїл)окси)метил|-3-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50- гептадекаоксатрипентаконт-52-ин-53-іл)феніл)-І -аланінаміду (синтону У5) 2.140.1 2-Йод-4-нітробензойна кислота
Додавали 2-аміно-4-нітробензойну кислоту (50 г) у суміш концентрованої Не5Ох (75 мл) та води (750 мл) при 0"С ії суміш перемішували протягом 1 години. У суміш додавали краплями суміш нітриту натрію (24,62 г) у воді (300 мл) при 0"С. Одержану суміш перемішували при 07С протягом З годин. У вищевказану суміш повільно додавали суміш йодиду натрію (65,8 г) у воді (300 мл). Після завершення додавання одержану суміш перемішували при 0"С протягом 2 годин, потім за кімнатної температури протягом 16 годин і при 60"С протягом 2 годин.
Одержану суміш охолоджували до кімнатної температури та розбавляли крижаною водою (300 мл). Тверду речовину збирали шляхом фільтрації, промивали водою (100 млх5) й висушували на повітрі протягом 16 годин з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (І С-
М5) т/е 291,9 (М-Н). 2.140.2 Метил-2-йод-4-нітробензоат бо Суміш речовини із прикладу 2.140.1 (130 г) в суміші метанолу (1000 мл) та сірчаної кислоти
(23,65 мл) перемішували при 857С протягом 16 годин і концентрували до сухого стану. Залишок розтирали з метанолом (100 мл) і суспензію перемішували протягом 10 хвилин. Тверду речовину збирали шляхом фільтрації, промивали водою (200 мл х 3) та метанолом (20 мл) й висушували на повітрі протягом 16 годин з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (І С-
М5) т/е 308,0 (МАН). 2.140.3 Метил-4-аміно-2-йодбензоат
У суміш хлориду амонію (122 г) та заліза (38,2 г) в етанолі (1000 мл) й воді (100 мл) додавали речовину із прикладу 2.140.2 (70 г) за кімнатної температури. Суміш перемішували при 807"С протягом 4 годин й фільтрували для видалення нерозчинного матеріалу. Фільтрат концентрували за зниженого тиску. Залишок розчиняли в етилацетаті (1000 мл) та промивали водою (500 мл). Водну фазу екстрагували етилацетатом (1000 мл х 2). Об'єднану органічну фазу промивали сольовим розчином, висушували над Мо5О5, фільтрували та концентрували з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (І С-М5) т/е 278,0 (М--НУ. 2.140.4 (4-Аміно-2-йодфеніл)метанол
У суміш речовини із прикладу 2.140.3 (40 г) в тетрагідрофурані (800 мл) додавали краплями 1 М гідрид діїізобутилалюмінію (505 мл) при -507С. Суміш перемішували при -507С протягом
Згодин та охолоджували до -20"С. У суміш додавали краплями крижану воду (180 мл) (з підтриманням температури нижче 0"С). Після додавання крижаної води суміш перемішували протягом 10 хвилин й фільтрували. Фільтрат концентрували та залишок розчиняли в етилацетаті (800 мл) й воді (200 мл). Водну фазу екстрагували етилацетатом (300 мл х 2).
Об'єднані органічні фази промивали сольовим розчином, висушували над Мао5О», фільтрували та концентрували з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (С-М5) т/е 250,0 (М-А-Н)». 2.140.5 4-(«(«Трет-бутилдиметилсиліл)окси)метил)-3-йоданілін
У суміш речовини із прикладу 2.140.4 (40 г) та імідазолу (21,87 г) у дихлорметані (600 мл) та тетрагідрофурані (150 мл) додавали трет-бутилдиметилхлорсилан (29,0г). Суміш перемішували за кімнатної температури протягом 1б годин й фільтрували для видалення твердої речовини. До фільтрату додавали крижану воду (50 мл). Суміш перемішували протягом 10 хвилин і додавали воду (100 мл). Суміш екстрагували дихлорметаном (500 мл х 2). Об'єднані органічні фази промивали сольовим розчином, висушували над М95зО», фільтрували та
Зо концентрували. Залишок очищували за допомогою хроматографії на силікагелі, з елююванням петролейним етером/етилацетатом, від 15/1 до 10/1, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (СО-М5) т/е 364,0 (М.Н). 2.140.6 (5)-трет-Бутил-(1-(4-«(трет-бутилдиметилсиліл)окси)метил)-З-йодфеніл)аміно)-1- оксопропан-2-ілукарбамат
У перемішану суміш (5)-2-(трет-бутоксикарбоніл)аміно)пропанової кислоти (15,62 г) та речовини із прикладу 2.140.5 (30 г) у дихлорметані (600 мл) при 0"С додавали краплями РОСІ»з (15,39 мл). Суміш перемішували при 0"С протягом 2 годин. У суміш обережно додавали краплями крижану воду (60 мл) (з підтриманням температури нижче 5"7С). Суміш перемішували протягом 30 хвилин і концентрували для видалення дихлорметану. Залишок суспендували в етилацетаті (500 мл) й воді (100 мл). Суспензію фільтрували. Органічну фазу промивали водою (200 мл х 2) та сольовим розчином, висушували над Мд5О5, фільтрували та концентрували з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (І С-М5) т/е 533,0 (М-Н) 7. 2.140.7 (5)-трет-Бутил-(1-(4-(гідроксиметил)-3-йодфеніл)аміно)-1-оксопропан-2-іл/укарбамат
У суміш речовини із прикладу 2.140.6 (60 г) в тетрагідрофурані (600 мл) додавали фторид тетрабутиламонію (28,2 г) в тетрагідрофурані (120 мл) при 0"С. Суміш перемішували за кімнатної температури протягом 16 годин й фільтрували. До фільтрату додавали воду (100 мл).
Суміш перемішували протягом 10 хвилин і потім концентрували. Залишок розбавляли етилацетатом (800 мл) і водою (300 мл). Водну фазу екстрагували етилацетатом (200 мл х 3).
Об'єднані органічні фази промивали сольовим розчином, висушували над Мао5О», фільтрували та концентрували. Залишок очищували за допомогою хроматографії на силікагелі, з елююванням петролейним етером/етилацетатом, від 3/1 до 1/1, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (І С-М5) т/е 443,0 (Ма-Ма)". 2.140.8 (5)-2-Аміно-М-(4-(гідроксиметил)-3-йодфеніл)пропанамід
Суміш речовини із прикладу 2.140.7 (20 г) в суміші дихлорметану (80 мл) та трифтороцтової кислоти (40 мл) перемішували за кімнатної температури протягом 2 годин і концентрували.
Залишок розчиняли у дихлорметані (80 мл) та додавали триетиламін (16,95 мл) для регулювання рН до 8. Вказану в заголовку сполуку одержували у вигляді вільної основи у дихлорметані, яку застосовували на наступній стадії без додаткового очищення. М5 (І С-М5) т/е 321,1 (М.-АН)». (510) 2.140.9 Трет-бутил-((5)-1-((5)-1-(4-(гідроксиметил)-3-йодфеніл)аміно)-1-оксопропан-2-
іллуаміно)-3З-метил-1-оксобутан-2-іл)укарбамат
Суміш (5)-2-(трет-бутоксикарбоніл)аміно)-3-метилбутанової кислоти (6,79 г), триетиламіну (9,58 мл) та гідрату 1-гідроксибензотриазолу (5,26 г) у дихлорметані (250 мл) перемішували протягом 20 хвилин. Одержану суміш додавали краплями у суміш речовини із прикладу 2.140.8 (10 г) та 1-етил-3-(З-(диметиламіно)пропілікарбодіїміду гідрохлориду (6,59 г) у дихлорметані (100 мл) при 0"С. Після завершення додавання суміш перемішували при 0"С протягом 2 годин.
Додавали крижану воду (200 мл) та одержану суміш перемішували протягом 20 хвилин.
Органічну фазу промивали насиченою водною сумішшю на основі бікарбонату натрію (100 мл х 2), водою (100 млх2) та сольовим розчином (100 мл), висушували над Мозох, фільтрували та концентрували. Залишок очищували за допомогою хроматографії на силікагелі, з елююванням петролейним етером/етилацетатом від 3/1 до 1/1, з одержанням указаної в заголовку сполуки. І! С-М5 маса/електрон 542,1 (Мае-Ма)». 2.414010 Трет-бутил-((5)-1-(((5)-1-(4-(гідроксиметил)-3- (2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50-гептадекаоксатрипентаконт-52-ин-53- іл/уфеніл)аміно)-1-оксопропан-2-іл)аміно)-3-метил-1-оксобутан-2-ілукарбамат
У суміш речовини із прикладу 2.140.9 (50 мг), 2,5,68,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50-гептадекаоксатрипентаконт-52-ину (149 му"), біс(трифенілфосфін)паладію(іІ) дихлориду (27,0 мг) і М,М-діїізопропілетиламіну (0,05 мл) в М,М- диметилформаміді (1 мл) додавали йодид мідікІ) (3,67 мг). Реакційну суміш продували потоком газоподібного азоту протягом 10 хвилин та перемішували протягом ночі. Реакційну суміш розбавляли диметилсульфоксидом, очищували за допомогою НРІ С з оберненою фазою на системі сіїзоп (колонка С18), з елююванням від 20 до 7095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки. МО (І 0-М5) т/е 11642 (М-НУ. 2.140.11 Трет-бутил-((5)-3-метил-1-(((5)-1-(4-(4-нітрофенокси)карбоніл)окси)метил)-3- (2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50-гептадекаоксатрипентаконт-52-ин-53- іл)/феніл)аміно)-1-оксопропан-2-іл)аміно)-1-оксобутан-2-іл)укарбамат
У суміш речовини із прикладу 2.140.10 (80 мг) та біс(4-нітрофеніл)карбонату (31,3 мг) в М,М- диметилформаміді (0,2 мл) додавали М,М-дізопропілетиламін (0,06 мл). Суміш перемішували
Зо протягом З годин та очищували за допомогою НРІС з оберненою фазою на системі сіЇ5оп (колонка С18), з елююванням від 35 до 7595 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки. 2.414012 6-(8-(Бензо|Ч|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл)-3-(1-((3-(2-(((4- ((5)-2-((5)-2-(трет-бутоксикарбоніл)аміно)-3-метилбутанамідо)пропанамідо)-2- (2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50-гептадекаоксатрипентаконт-52-ин-53- іл/бензил)окси)карбоніл)-(2-сульфоетил)аміно)етокси)-5,7-диметиладамантан-1-ілуметил)-5- метил-1 Н-піразол-4-іл)піколінова кислота
У суміш речовини із прикладу 1.2.9 (95 мг), речовини із прикладу 2.140.11 (148 мг) та гідрату 1-гідроксибензотриазолу (68,1 мг) в М,М-диметилформаміді (2,5 мл) додавали /-М,М- діізопропілетиламін (97 мкл). Суміш перемішували протягом 3,5 годин та очищували за допомогою НРІ С з оберненою фазою на системі сіїзоп (колонка С18), з елююванням від 35 до 8095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки. 2.414013 3-(1-((3-(2-(((4-((5)-2-((5)-2-Аміно-3-метилбутанамідо)пропанамідо)-2- (2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50-гептадекаоксатрипентаконт-52-ин-53- іл/бензил)окси)карбоніл)-(2-сульфоетил)аміно)етокси)-5,7-диметиладамантан-1-ілуметил)-5- метил-1Н-піразол-4-іл)-6-(8-(бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)- ілупіколінова кислота
Холодну (0"С) суміш речовини із прикладу 2.140.12 (135 мг) у дихлорметані (4 мл) обробляли трифтороцтовою кислотою (1 мл) протягом 5 годин. Суміш концентрували та очищували за допомогою НРІС з оберненою фазою на системі Сіїоп (колонка С18), з елююванням від 20 до 6095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕБІ) т/е 973,4 (МН). 2.140114 М-((35,55)-3-(2,5-Діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)-2-оксо-5-((2- сульфоетокси)метилі|піролідин-1-іл)ацетил)-І -валіл-М-(4-(ЦТ2-((3-((4-(6-(8-(1,3-бензотіазол-2- ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1- іл)уметил)|-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.13,7|дец-1-ил)окси)етил|-(2- сульфоетил)карбамоїл)окси)метил|-3-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50- гептадекаоксатрипентаконт-52-ин-53-іл)феніл)-І -аланінамід 60 Обробляли суміш речовини із прикладу 2.119.15 (20,88 мг) та О-(7-азабензотриазол-1-іл)-
М,М,М',М'-тетраметилуронію гексафторфосфату (21,1 мг) в М,М-диметилформаміді (0,4 мл) М,М- дііззопропілетиламіном (16,2 мкл) протягом 7 хвилин і повільно додавали суміш речовини із прикладу 2.140.13 (60 мг) і М,М-діізопропілетиламіну (32,3 мклу в М,М-диметилформаміді (0,6 мл). Реакційну суміш перемішували протягом 10 хвилин та очищували за допомогою НРІ С з оберненою фазою на системі сіїбоп (колонка С18), з елююванням від 20 до 7095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки. 1Н ЯМР (500 МГу, диметилсульфоксид-аб6) б 10,01 (4, 1Н), 8,22 (а, 1Н), 8,02 (ї, 2Н), 7,90 - 7,75 (т, 2Н), 7,66 - 7,50 (т, ЗН), 7,50 - 7,39 (т, ЗН), 7,35 (д, ЗН), 7,05 (5, 2Н), 7,00 (а, 1Н), 5,08 (а, 2Н), 4,97 (5, 2Н), 4,65 (І, 1Н), 4,47 - 4,31 (т, 4Н), 4,23 - 4,14 (т, 2Н), 3,90 - 3,69 (т, 5Н), 3,68 - 103,58 (т, 4Н), 3,57 - 3,53 (т, 2Н), 3,52 - 3,43 (т, 57Н), 3,42 - 3,33 (т, 4Н), 3,22 (5, 5Н), 3,01 (ї, 2Н), 2,49 (р, ЗН), 2,09 (а, ЗН), 2,04 - 1,77 (т, 1Н), 1,40 - 1,17 (т, 6Н), 1,06 (аа, 6Н), 0,97 - 0,63 (т, 11Н). М5 (ЕБ5І) т/е 1153,3 (Ма2Н)2». 2141 Синтез М-((35,55)-3-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)-2-оксо-5-(2- сульфоетокси)метил|піролідин-1-іл)іацетил)-І -валіл-М-(4-(ЦТ2-((3-((4-(6-(8-(1,3-бензотіазол-2- ілкарбамоїл)-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-З3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1- іл)метил|-5,7-диметилтрицикло!/3.3.1.15Ядец-1-иліокси)етил|-(2- сульфоетил)карбамоїл)окси)метил|-3-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50- гептадекаоксатрипентаконтан-53-іл)феніл)-І -аланінаміду (синтону МТ) 24411 Трет-бутил-((5)-1-(((5)-1-((3-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50- гептадекаоксадопентаконтан-52-іл)-4-(гідроксиметил)феніл)аміно)-1-оксопропан-2-іл)аміно)-3- метил-1-оксобутан-2-іл)укарбамат
Суміш речовини із прикладу 2.140.10 (304 мг) та 1095 Ра/С (90 мг, сухий) в тетрагідрофурані (20 мл) струшували в посудині для роботи під тиском протягом 2 годин за тиску газоподібного водню 50 фунтів/кв. дюйм. Нерозчинний матеріал відфільтровували та фільтрат концентрували з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (Е5І) т/е 1168,3 (М-Н). 2.141.2 Трет-бутил-((5)-1-(((5)-1-((3-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50- гептадекаоксадопентаконтан-52-іл)-4-(4-нітрофенокси)карбоніл)окси)метил)феніл)аміно)-1- оксопропан-2-іл)аміно)-3-метил-1-оксобутан-2-ілукарбамат
Вказану в заголовку сполуку одержували із застосуванням процедури в прикладі 2.140.11
Зо шляхом заміни речовини із прикладу 2.140.10 речовиною із прикладу 2.141.1. 2.411413 6-(8-(Бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл)-3-(1-((3-(2-(((4- ((5)-2-((5)-2-(трет-бутоксикарбоніл)аміно)-3-метилбутанамідо)пропанамідо)-2- (2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50-гептадекаоксатрипентаконтан-53- іл/бензил)окси)карбоніл)-(2-сульфоетил)аміно)етокси)-5,7-диметиладамантан-1-ілуметил)-5- метил-1Н-піразол-4-іл)піколінова кислота
Вказану в заголовку сполуку одержували із застосуванням процедури в прикладі 2.140.12 шляхом заміни речовини із прикладу 2.140.11 речовиною із прикладу 2.141.2. 21414 3-(1-((3-(2-(((4-((5)-2-((5)-2-Аміно-3-метилбутанамідо)пропанамідо)-2- (2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50-гептадекаоксатрипентаконтан-53- іл/бензил)окси)карбоніл)-(2-сульфоетил)аміно)етокси)-5,7-диметиладамантан-1-ілуметил)-5- метил-1Н-піразол-4-іл)-6-(8-(бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)- ілупіколінова кислота
Вказану в заголовку сполуку одержували із застосуванням процедури в прикладі 2.140.13 шляхом заміни речовини із прикладу 2.140.12 речовиною із прикладу 2.141.3. М5 (Е5І) т/е 1948,8 (М-Н). 2.4141.5 М-((35,55)-3-(2,5-Діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол- 1-іл)-2-оксо-5-((2- сульфоетокси)метилі|піролідин-1-іл)ацетил)-І -валіл-М-(4-(ЦТ2-((3-((4-(6-(8-(1,3-бензотіазол-2- ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1- іл)уметил)|-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.13,7|дец-1-ил)окси)етил|-(2- сульфоетил)карбамоїл)окси)метил|-3-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50- гептадекаоксатрипентаконтан-53-іл)феніл)-І -аланінамід
Указану в заголовку сполуку одержували із застосуванням процедури в прикладі 2.140.14 шляхом заміни речовини із прикладу 2.140.13 речовиною з прикладу 2.141.4. "Н ЯМР (501 МГц, диметилсульфоксид-ав) б 12,87 (5, 1Н), 9,84 (5, 1Н), 8,18 (9, 1Н), 8,03 (ад, 2Н), 7,78 (а, 1Н), 7,61 (а, 1Н), 7,52 (а, 1Н), 7,45 (адада, 4Н), 7,40 - 7,32 (т, 2Н), 7,30 (в, 1Н), 7,22 (а, 1Н), 7,07 (5, 2Н), 6,96 (9, 1Н), 5,01 (9, 2Н), 4,95 (5, 2Н), 4,64 (, 1Н), 4,938 (І, 1Н), 4,24 - 4,12 (т, 2Н), 4,00 (а, 1Н), 3,88 (ї, 2Н), 3,78 (І, ЗН), 3,64 (ас, 2Н), 3,49 (аа, 62Н), 3,43 - 3,37 (т, 6Н), 3,23 (5, ЗН), 3,01 (, 2Н), 2,84 - 2,68 (т, 1,5Н), 2,63 (ад, 4Н), 2,36 (а, 0,5Н), 2,08 (а, ЗН), 1,74 (її, 2Н), 1,25 (аї, 6Н), 1,17 - 1,00 (т, 6Н), 0,99 - 0,72 (т, 11Н). М5 (ЕБІ) т/е 1153,0 (М-2Н)У. бо 2.142 Синтез 2-((Ц2-(3-((4-16-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-
іл|-2-карбоксипіридин-3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)метилі|-5,7-диметилтрицикло/Ї3.3.1.127|дец-1- ил)окси)етилі|((35)-3,4-дигідроксибутилІкарбамоїліокси)метилі-5-(3-((2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н- пірол-1-іля'ацетиліаміноїпропіл)феніл-бета-О-глюкопіранозидуронової кислоти (синтону УУ) 2.414241 3-(1-((3-(2-((((4-(3-Амінопропіл)-2-((25,38,45,55,65)-6-карбокси-3,4,5- тригідрокситетрагідро-2Н-піран-2-іл)окси)бензил)окси)карбоніл)((5)-3,4- дигідроксибутил)аміно)етокси)-5,7-диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)-6-(8- (бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл)піколінова кислота
Речовину із прикладу 2.142.1 одержували шляхом заміни речовини із прикладу 2.136.4 (9Н- флуорен-9-іл)уметил-((5)-3-метил-1-(((5)-1-((4-(((4- нітрофенокси)карбоніл)окси)метил)феніл)аміно)-1-оксо-5-уреїдопентан-2-іл)аміно)-1-оксобутан- 2-ілукарбаматом і шляхом заміни речовини із прикладу 1.85 речовиною із прикладу 1.2.9 в прикладі 2.49.1. М5 (Е5І) т/е 1217,3 (МААН)». 21422. 2-І(12-(3-(4-(6-(8-(1,3-Бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2- карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1-ілуметил)|-5, 7-диметилтрицикло!|3.3.1.13,7|дец-1- илюкси)етилі((35)-3,4-дигідроксибутилІкарбамоїліокси)метил|-5-(3-((2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н- пірол-1-іля'ацетиліаміно)упропіл)уфеніл-бета-О-глюкопіранозидуронова кислота
Речовину із прикладу 2.142.2 одержували шляхом заміни речовини із прикладу 2.142.1 речовиною з прикладу 2.49.1 у прикладі 2.54. 1Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-а6) б ррт 8,14 (9, 1Н), 8,03 (ак 1), 7,81 - 7,76 (т, 1Н), 7,61 (аа, 1), 7,53 - 7,41 (т, ЗН), 7,38 - 7,32 (т, 20. 2Н), 7,28 (5, 1Н), 7,18 (9, 1Н), 7,06 (а, 2Н), 6,97 - 6,92 (т, 2Н), 6,85 (ад, 1Н), 5,10 (д, 2Н), 5,01 (а, 1Н), 4,96 (5, 2Н), 3,48 - 3,18 (т, 12Н), 3,06 (9, 2Н), 3,00 (ї, 2Н), 2,08 (5, ЗН), 1,77 - 0,66 (т, 16Н).
М5 (ЕБІ) т/е 1352,5 (М-Н).. 2.143 Синтез 1-(Ц2-((3-(4-(6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|- 2-карбоксипіридин-3-іл)-о-метил-1 Н-піразол-1-іл)метил|-5, 7-диметилтрицикло|3.3.1.157|)дец-1- ил)окси)етилі-(14-(4-((2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)уацетилІаміно)бутил)-2-(бета-О- глюкопірануронозилокси)бензилі|оксиїкарбоніл)аміно)-1,2-дидезокси-О-арабіно-гекситолу (синтону МІ/І) 2.414311 3-(1-((3-(2-(((4-(4-Амінобутил)-2-((25,38,45,55,65)-6-карбокси-3,4,5- тригідрокситетрагідро-2Н-піран-2-іл)окси)бензил)окси)карбоніл)(ЗА,45,5Н)-3,4,5,6-
З0 тетрагідроксигексил)аміно)етокси)-5,7-диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)- 6-(8-(бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл)піколінова кислота
Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 1.77.2 речовиною із прикладу 1.25 і речовини із прикладу 2.124.5 речовиною із прикладу 2.97.7 в прикладі 2.97.8. М5 (Е5І) т/е 1291 (Ма-Н)», 1289 (М-НУ. 2.143.2 1-Щ2-(13-((4-16-(8-(1,3-Бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-2- карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1-ілуметил)|-5, 7-диметилтрицикло!|3.3.1.13,7|дец-1- илюкси)етилі|-(14-(4-1(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іллуацетилІаміно)бутил)-2-(бета-О- глюкопірануронозилокси)бензилі|окси)жкарбоніл)аміно)-1,2-дидезокси-О-арабіно-гекситол
Указану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 2.143.1 речовиною з прикладу 2.49.1 у прикладі 2.54. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-дв) б ррт 8,04 (9, 1), 7,81 (9, 1Н), 7,61 (а, 1Н), 7,54-7,43 (т, ЗН), 7,41-7,35 (т, 2Н), 7,29 (5, 1Н), 7,18 (т, 1Н), 7,03 (5, 2Н), 6,97 (а, 1Н), 6,93 (5, 1Н), 6,86 (9, 1Н), 5,18-5,05 (т, ЗН), 5,03 (й, 1Н), 4,97 (5, 2Н), 4,01 (5, 2Н), 3,91 (9, 1Н), 3,87 (І, 2Н), 3,83 (т, 2Н), 3,72 (5, 2Н), 3,67 (т, 2Н), 3,59 (аа, 2Н), 3,50- 3,27 (т, 16Н), 3,14 (а, 2Н), 3,04 (т, АН), 2,09 (5, ЗН), 1,68 (т, 2Н), 1,52 (т, 2Н), 1,44-1,91 (т, 4Н), 1,26-1,14 (т, 4Н), 1,10 (т, 4Н), 0,98 (д, 2Н), 0,85 (т, 6Н). М5 (ЕБІ) т/е 1428 (М.НН)», 1426 (М-Н). 2.144 Синтез 1-(Ц2-((3-(4-(6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|- 2-карбоксипіридин-3-іл)-о-метил-1 Н-піразол-1-іл)метил|-5, 7-диметилтрицикло|3.3.1.157|)дец-1- ил)окси)етилі-(14-(4-((2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)уацетилІаміно)бутил)-2-(бета-О- глюкопірануронозилокси)бензил|окси) карбоніл)аміно)-1,2-дидезокси-О-еритро-пентитолу (синтону МУК) 2.414441 3-(1-((3-(2-(((4-(4-Амінобутил)-2-((25,38,45,55,65)-6-карбокси-3,4,5- тригідрокситетрагідро-2Н-піран-2-іл)окси)бензил)окси)карбоніл)(35,4Н8)-3,4,5- тригідроксипентил)аміно)етокси)-5,7-диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)-6- (8-(бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл)піколінова кислота
Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 1.80 речовиною із прикладу 1.25 та речовини із прикладу 2.124.5 речовиною із прикладу 2.97.7 в прикладі 2.97.8. М5 (Е5І) т/е 1261 (Ма-Н)», 1259 (М-НУ. 2.1442 1-Щ2-(13-((4-16-(8-(1,3-Бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-2- карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1-ілуметил)|-5, 7-диметилтрицикло!|3.3.1.13,7|дец-1- бо илюкси)етилі|-(14-(4-1(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іллуацетилІаміно)бутил)-2-(бета-О-
глюкопірануронозилокси)бензилі|окси)жкарбоніл)аміно)-1,2-дидезокси-О-еритро-пентитол
Указану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 2.144.1 речовиною з прикладу 2.49.1 у прикладі 2.54. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-дв) б ррт 8,08 (ї, 1Н), 8,03 (а, 1), 7,79 (а, 1Н), 7,62 (а, 1), 7,53-7,42 (т, ЗН), 7,38-7,33 (т, 2Н), 7,20 (5, 1Н), 7,17 (т, 1Н), 7,07 (5, 2Н), 6,97-6,93 (т, 2Н), 6,85 (й, 1Н), 5,17-5,05 (т, ЗН), 5,02 (а, 1Н), 4,96 (5, 2Н), 3,98 (5, 2Н), 3,88 (т, 4Н), 3,80 (т, 4Н), 3,67 (т, 2Н), 3,42 (т, 4Н), 3,36-3,23 (т, 1ЗН), 3,08- 2,99 (т, 5Н), 2,09 (5, ЗН), 1,86 (т, 1Н), 1,53 (т, 2Н), 1,38 (т, 4Н), 1,25 (т, 4Н), 1,11 (т, 4Н), 0,96 (т, 2Н), 0,83 (т, 6Н). М5 (ЕБІ) т/е 1398 (М.--Н)", 1396 (М-НУ. 2.145 Синтез М-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)уацетил/)-Ї -валіл-М-14-((Т2-(13-((4-16-(8- (1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)нафталін-2-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілі-5-метил-1 Н-піразол-1- ілуметил|-5,7-диметилтрицикло!/3.3.1.157|дец-1-ил)окси)етилі|-(2- сульфоетил)карбамоїліокси)метил|-3-(27-(2,5,8,11,14,17,20,23-октаоксагексакозан-26-іл)- 2,5,8,11,14,17,20,23-октаокса-27-азатриаконтан-30-іл|Іфеніл)-І -аланінаміду (синтону М/Р) 2.414511 Трет-бутил-((5)-1-(((5)-1-((3-(3-«((бензилокси)карбоніл)аміно)проп-1-ін-1-іл)-4- (гідроксиметил)феніл)аміно)-1-оксопропан-2-іл)аміно)-З-метил-1-оксобутан-2-іл)укарбамат
У суміш трет-бутил((5)-1-(((5)-1-(4-(гідроксиметил)-3-йодфеніл)аміно)-1-оксопропан-2- іллуаміно)-З-метил-1-оксобутан-2-іл)укарбамату (0,5 г) в М,М-диметилформаміді (6 мл) додавали бензилпроп-2-ін-1-ілкарбамат (0,182 г), Си! (9,2 мг), біс(трифенілфосфін)паладію(ІІ) дихлорид (З5 мг) і М,М-діїзопропілетиламін (1,0 мл). Суміш перемішували за кімнатної температури протягом ночі. Суміш концентрували під вакуумом. Залишок розчиняли в етилацетаті (300 мл), промивали водою, сольовим розчином, висушували над безводним сульфатом натрію, фільтрували та концентрували. Після випарювання розчинника та очищення залишку за допомогою хроматографії на силікагелі, з елююванням 3095 етилацетату в дихлорметані, одержували вказану у заголовку сполуку. М5 (АРСІ) т/е 581,2 (М-НУ. 2.145.2 Трет-бутил-((5)-1-(((5)-1-((3-(З-амінопропіл)-4-«гідроксиметил)феніл)аміно)- 1- оксопропан-2-іл)аміно)-3-метил-1-оксобутан-2-ілукарбамат
У суміш речовини із прикладу 2.145.1 (1,7 г) в етанолі (30 мл) додавали 595 Ра/сС (0,3 г) та циклогексен (великий надлишок). Реакційну суміш перемішували при 1007С протягом 45 хвилин.
Реакційну суміш фільтрували та концентрували за зниженого тиску. Залишок розчиняли в М,М-
Зо диметилформаміді та очищували за допомогою НРІ С з оберненою фазою на системі сіЇбоп (колонка С18), з елююванням від 20 до 8095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕБІ) т/е 451,1(М-НУ. 2.145.3 Трет-бутил-((5)-1-(((5)-1-((3-(27-(2,5,8,11,14,17 20 ,23-октаоксагексакозан-2б-іл)- 2,5,8,11,14,17,20,23-октаокса-27-азатриаконтан-З30-іл)-4-«гідроксиметил)феніл)аміно)-1- оксопропан-2-іл)аміно)-3-метил-1-оксобутан-2-ілукарбамат
У суміш речовини із прикладу 2.145.2 (45мг) у дихлорметані (4 мл) додавали 2,5,8,11,14,17,20,23-октаоксагексакосан-2б6-ал (79 мг) з подальшим додаванням Ман(оОАс)з (63,5 мг). Суміш перемішували за кімнатної температури протягом Згодин і потім концентрували за зниженого тиску. Залишок розчиняли в М,М-диметилформаміді та очищували за допомогою НРІ С з оберненою фазою на системі біЇзоп (колонка С18), з елююванням від 20 до 8095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (Е5І) т/е 12121 (М-НУ. 2.145.4 Трет-бутил-((5)-1-(((5)-1-((3-(27-(2,5,8,11,14,17 20 ,23-октаоксагексакозан-2б-іл)- 2,5,8,11,14,17,20,23-октаокса-27-азатриаконтан-30-іл)-4-((((4- нітрофенокси)карбоніл)окси)метил)феніл)аміно)-1-оксопропан-2-іл)аміно)-3-метил-1-оксобутан- 2-ілукарбамат
У суміш речовини із прикладу 2.145.3 (80 мг) в М,М-диметилформаміді (2 мл) додавали біс(4-нітрофеніл)карбонат (26 мг) з подальшим додаванням М,М-діззопропіламіну (0,012 мл).
Суміш перемішували за кімнатної температури протягом ночі та очищували безпосередньо за допомогою НРІ С з оберненою фазою на системі сіїзоп (колонка С18), з елююванням від 20 до 8095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕБІ) т/е 1376,97 (М-Н). 2.145.5 3-(1-((3-(2-((((2-(27-(2,5,8,11,14,17,20,23-Октаоксагексакозан-26-іл)- 2,5,8,11,14,17,20,23-октаокса-27-азатриаконтан-З30-іл)-4-((5)-2-((5)-2-аміно-3- метилбутанамідо)пропанамідо)бензил)окси)карбоніл)-(2-сульфоетил)аміно)етокси)-5,7- диметиладамантан-1-іл)уметил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)-6-(8-(бензо|д9|гіазол-2- ілкарбамоїл)нафталін-2-іл)піколінова кислота
У суміш речовини із прикладу 2.145.4 (30 мг) в М,М-диметилформаміді (4 мл) додавали речовину із прикладу 1.43 (18,68 мг) з подальшим додаванням гідрату 1-гідроксибензотриазолу бо (34 мг) і М,М-діїзопропіламіну (3,84 мкл). Суміш перемішували за кімнатної температури протягом ночі. У суміш додавали трифтороцтову кислоту (0,55 мл) та перемішували за кімнатної температури протягом З годин. Суміш очищували за допомогою НРІ С з оберненою фазою на системі сіїзоп (колонка С18), з елююванням від 20 до 8095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,190 трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕБІ) т/е 1986,6 (М-Н)- 5 . 2.145.6 М-К2,5-Діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)ацетил/-І -валіл-М-(4-((2-(13-((4-16-(8-(1,3- бензотіазол-2г-ілкарбамоїл)нафталін-2-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1- іл)уметил)|-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.13,7|дец-1-ил)окси)етил|-(2- сульфоетил)карбамоїл)окси)метилі-3-(27-(2,5,8,11,14,17,20,23-октаоксагексакозан-26-іл)- 2,5,8,11,14,17,20,23-октаокса-27-азатриаконтан-З0-ілІіфеніл)-І -аланінамід
Указану в заголовку сполуку одержували, як описано в прикладі 2.123.21, шляхом заміни речовини із прикладу 2.123.20 речовиною з прикладу 2.145.5. "Н ЯМР (400 МГу, диметилсульфоксид-авє) б ррт 13,10 (5, 1Н), 9,92 (5, 1Н), 9,43 (5, 1Н), 9,02 (в, 1Н), 8,37 (аа, 1Н), 8,30 - 8,14 (т, 5Н), 8,07 (а, 1Н), 8,02 (а, 1Н), 7,96 (а, 1Н), 7,81 (9, 1), 7,74 - 7,68 (т, 1Н), 7,57 (5, 1Н), 7,52 - 7,45 (т, 2Н), 7,42 - 7,34 (т, 2Н), 7,28 (й, 1), 7,08 (5, 2Н), 5,05 (й, 2Н), 4,39 (І, 1Н), 4,21 (да, 1), 4,12 (5, 2Н), 3,88 (5, 2Н), 3,49 (й, 55Н), 3,34 (5, 200ОН), 3,23 (5, 5Н), 3,13 (й, 4Н), 2,79 - 2,65 (т, 5Н), 2,23 (5, ЗН), 1,94 (0, 8Н), 1,47 - 0,94 (т, 15Н), 0,92 - 0,76 (т, 12Н). 2.146 Синтез (65)-2,6-ангідро-6-(2-12-(ЦЦ2-(13-(4-16-(8-(1,3-бензотіазол-2г-ілкарбамоїл)-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)уметилі/д-5,7- диметилтрициклоїЇ3.3.1.157)дец-1-ил)окси)етиліІ-(2-сульфоетил)карбамоїлюкси)метилі|-5-(1М-
МК25)-3-ІЗ,4-біс(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-ундекаоксатетратриаконтан-34-ілокси)феніл|-2-(2,5- діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)пропаноїл|)-І -валіл-І -аланіл)іаміно)феніл)етил)-І -гулонової кислоти (синтону ХО) 2.146.1 (5)-2-((Бензилокси)карбоніл)аміно)-3-(3,4-дигідроксифеніл)пропанова кислота
У суміш (5)-2-аміно-3-(3,4-дигідроксифеніл)пропанової кислоти (1,00 кг) ії Мансо»з (1,28 кг) в діоксані (5,00 л) й воді (5,00 л) додавали краплями бензилхлорформіат (1,04 к). Реакційну суміш перемішували при 25"С протягом 12 годин. Реакційну суміш регулювали до рН - 3,0 - 4,0 шляхом додавання 6 н. водного розчину НСІ та екстрагували етилацетатом (25 л). Органічний шар висушували над Маг5О», фільтрували і концентрували іп масо з одержанням указаної в
Зо заголовку сполуки. "Н ЯМР (400МГц, диметилсульфоксид-сйв) б рріт 8,73 (5, 1Н), 7,54-7,26 (т, 8Н), 6,64-6,45 (т, ЗН), 4,98 (5, 2Н), 4,49 (5, 1Н), 2,87 (9, У - 9,60 Гу, 1Н), 2,68-2,62 (т, 1Н). 2.146.2 (5)-Бензил-2-((бензилокси)карбоніл)аміно)-3-(3,4-дигідроксифеніл)пропаноат
У суміш речовини із прикладу 2.146.1 (800,00) і С520Оз (1,18 кг) додавали бромметилбензол (259,67 г) при 20"С. Реакційну суміш перемішували протягом 1 години, і за допомогою ТІ С встановили завершення реакції. Залишок розбавляли за допомогою НО (5 л) та екстрагували етилацетатом (три рази по 5 л). Об'єднані органічні шари промивали сольовим розчином (5 л), висушували над Маг5О»4 (150 г), фільтрували та концентрували за зниженого тиску. Залишок двічі очищали за допомогою колонкової хроматографії (5іОг, петролейним етер/етилацетат - від 100:1 до 1:1) з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (400
МГу, СОСІз») 6 ррт 2,77 - 3,02 (т, 2 Н), 4,47 (ріг. 5., 1 Н), 4,61 (9, 9-7,94 Гц, 1 Н), 5,01 - 5,17 (т, 4
Н), 5,35 - 5,47 (т, 1 Н), 6,32 (Бі. 5., 1 Н), 6,38 (а, 9-7,94 Гу, 1 Н), 6,51 (5, 1 Н), 6,65 (а, У-7,94 Гц, 1
Н), 7,17 - 7,42 (т, 9 Н). 2.146.3 (5)-Бензил-2-((бензилокси)карбоніл)аміно)-3-(3,4-біс(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32- ундекаоксатетратриаконтан-34-ілокси)феніл)пропаноат
У суміш К»СОз (27,04 г) і КІ (5,95 г) в М,М-диметилформаміді (150 мл) додавали речовину із прикладу 2.146.2 (8,12 г) і 2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-ундекаоксатетратриаконтан-З34-іл-4- метилбензолсульфонат (27,00 г) в диметилформаміді (150 мл). Суміш перемішували при 757С протягом 12 годин в атмосфері М2. Підготовлювали, як описано вище, два додаткові флакони.
Всі три реакційні суміші об'єднували для очистки. Суміш виливали у водну суміш на основі
МНАСІ (9 л) та екстрагували етилацетатом (п'ять разів по 900 мл). Об'єднані органічні шари промивали сольовим розчином (1500 мл), висушували над Ма»5О4 (150 г), фільтрували та концентрували за зниженого тиску з одержанням неочищеного залишку. Залишок очищали за допомогою колонкової хроматографії (5102, дихлорметан/метанол-від 100/1 до 2071) з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (400 МГц, СОСІ») б ррт 2,95 - 3,08 (т, 2 Н), 3,38 (5,6 Н), 3,57 - 3,68 (т, 80 Н), 3,78 (І, 9У-4,85 Гц, 2 Н), 3,83 (ї, 9-5,29 Гц, 2 Н), 4,01 (ї, 90-5,07
Гц, 2 Н), 4,10 (Її, 9-5,07 Гц, 2 Н), 4,58 - 4,70 (т, 1 Н), 5,09 (5, 2 Н), 5,14 (0, 9-3,53 Гц, 2 Н), 6,55 (а, 98,38 Гу, 1 Н), 6,62 (а, 9-1,76 Гу, 1 Н), 6,74 (й, У-7,94 Гц, 1 Н), 7,27 - 7,49 (т, 10 Н). 2.146.4. (5)-2-Аміно-3-(3,4-біс(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-ундекаоксатетратриаконтан-34- ілокси)феніл)пропанова кислота бо У суміш речовини із прикладу 2.146.3 (16,50 г) в метанолі (200 мл) додавали Ра/с (9,00 г) та суміш перемішували при 50"С в атмосфері Не (50 фунтів/кв. дюйм) протягом 16 годин.
Підготовлювали додаткову реакційну суміш, як описано вище. За допомогою І С/М5 встановили завершення реакції та обидві реакційні суміші об'єднували для очистки. Суміш фільтрували та концентрували. Неочищену вказану в заголовку сполуку застосовували на наступній стадії без додаткового очищення. 2.146.5 (5)-3-(3,4-біс(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-Ундекаоксатетратриаконтан-34- ілокси)феніл)-2-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл/упропанова кислота
У суміш речовини із прикладу 2.146.4 (5,94 г) в НгО (60,00 мл) додавали МагСО:з (790,67 мг) та метил-2,5-діоксопірол-1-карбоксилат (1,19 г). Суміш перемішували при 25"С протягом
З годин. Підготовлювали чотири додаткові реакційні суміші, як описано вище. Всі п'ять реакційних сумішей об'єднували для очистки. Додавали 4 М водний розчин НСіІ для регулювання рН до 2. Об'єднану суміш очищували за допомогою препаративної НРІС з оберненою фазою (середовище трифтороцтової кислоти) з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (400 МГц, СОСІз) б ррт 3,35 - 3,40 (т, 6 Н), 3,51 - 3,58 (т, 4 Н), 3,58 - 3,75 (т, 78 Н), 3,81 (ад, 94,70 Гу, 4 Н), 4,11 (41, 9У-10,14, 5,07 Гу, 4 Н), 4,91 (да, У-11,47, 5,29 Гц, 1 Н), 6,53 - 6,69 (т, З Н), 6,71 - 6,89 (т, 2 Н). М5 (ЕБІ) т/еб 38,0 (МАН). 2.146.6 (65)-2,6-Ангідро-6-(2-(2-((2-(3-((4-(6-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)метилі/д-5,7- диметилтрицикло!3.3.1.13,7|дец-1-иліокси)етил|-(2-сульфоетил)карбамоїл)окси)метилі|-5-(1М-
МК25)-3-ІЗ,4-біс(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-ундекаоксатетратриаконтан-34-ілокси)феніл|-2-(2,5- діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)пропаноїл|)-І -валіл-І -аланіліаміно)феніл)етил)-І -гулонова кислота
Суміш речовини із прикладу 2.146.5 (0,020 мл), О-(7-азабензотриазол-1-іл)-М,М,М'М'- тетраметилуронію гексафторфосфату (0,014 г) та М-етил-М-ізопропілпропан-2-аміну (0,020 мл) перемішували в М,М-диметилформаміді (0,4 мл) протягом 5 хвилин. Суміш додавали у суміш речовини із прикладу 2.123.20 (0,042 г) та М-етил-М-ізопропілпропан-2-аміну (0,020 мл) в М,М- диметилформаміді (0,4 мл) та її перемішували за кімнатної температури протягом З годин.
Реакційну суміш розбавляли сумішшю води (1,5 мл), М,М-диметилформаміду (0,5 мл) та 2,2,2- трифтороцтової кислоти (0,054 мл) та очищували за допомогою препаративної НРІС з
Зо оберненою фазою на системі біїзоп 2020 із застосуванням градієнта ацетонітрил/вода від 595 до 8595. Фракції, що містять продукт, ліофілізували з одержанням указаної в заголовку сполуки.
ІН ЯМР (501 МГц, диметилсульфоксид-ав) б 12,86 (5, АН), 9,92 (в, 2Н), 8,26 (0, 1Н), 8,10 (5, 1Н), 8,02 (ад, 1н), 7,77 (а, 1Н), 7,64 (5, 1Н), 7,54 - 7,49 (т, 1Н), 7,49 - 7,39 (т, 2Н), 7,39 - 7,91 (т, 2Н), 7,28 (5, 1Н), 7,20 (й, 1), 6,94 (а, 1Н), 6,87 (5, 2Н), 6,77 (а, 1Н), 6,60 - 6,53 (т, 1Н), 5,05 - 4,91 (т, 5Н), 4,80 (ад, 2Н), 4,37 (1, 2Н), 4,21 (ї, 2Н), 3,97 (а, ЗН), 3,86 (І, ЗН), 3,78 (а, ЗН), 3,68 (а,
АН), 3,65 - 3,28 (т, 102Н), 3,20 - 3,08 (т, 2Н), 2,99 (ї, 2Н), 2,92 (а, 2Нн), 2,68 (аа, 2Н), 2,07 (а, 4Н), 1,54 (5, 2Н), 1,37 - 0,71 (т, 16Н). М5 (ЕІ) т/е 26312 (М-НУ. 2.147 Синтез М-К2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)ацетил/|-М- (2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-ундекаоксатетратриаконтан-34-іл)-бета-аланіл-І! -валіл-М-(4-((2- ((3-К4-(6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3- іл)-5-метил-1Н-піразол-1-іл)метил/|-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.157|дец-1-иліокси)етил|-(2- сульфоетил)карбамоїл)окси)метил|-3-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50- гептадекаоксатрипентаконтан-53-іл)феніл)-І -аланінаміду (синтону ХК) 2.147.1 Бензил-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-ундекаокса-35-азаоктатриаконтан-38-оат
У суміш 2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-ундекаоксатетратриаконтан-34-аміну (1 г) в М,М- диметилформаміді (4 мл) й воді (З мл) додавали краплями бензилакрилат (0,377 г). Реакційну суміш перемішували протягом ночі, очищували за допомогою НРІС з оберненою фазою на системі сіїзоп (колонка С18), з елююванням від 20 до 7095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,190 трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки. Ме (ЕБІ) т/е 678,4 (МАН). 2.147.2 2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-Ундекаокса-35-азаоктатриаконтан-38-ова кислота
Речовину із прикладу 2.147.1 (220 мг) та 1095 Ра/С (44 мг, сухий) в тетрагідрофурані (10 мл) струшували в посудині для роботи під тиском протягом 1 години за тиску газоподібного водню 50 фунтів/кв. дюйм. Реакційну суміш фільтрували й фільтрат концентрували. Залишок висушували під високим вакуумом з одержанням указаної в заголовку сполуки. МБ (ЕБ5І) т/е 588,3 (М.Н). 2.1473 2,5-Діоксопіролідин-1-іл-35-(2-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)ацетил)- 2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-ундекаокса-35-азаоктатриаконтан-38-оат
Холодну (0"С) суміш 2,5-діоксопіролідин-1-іл-2-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іллуацетату бо (566 мг), гідрату 1-гідроксибензотриазолу (229 мг), 1-гідроксипіролідин-2,5-діону (86 мг) та речовини із прикладу 2.147.2 (440 мг) в М,М-диметилформаміді (З мл)у обробляли М,М- діззопропілетгиламіном (785 мкл) протягом 25 хвилин. Реакційну суміш розбавляли диметилсульфоксидом та очищували за допомогою НРІ С з оберненою фазою на системі сіїЇб5оп (колонка С18), з елююванням від 5 до 5595 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки. Ме (ЕБІ) т/е 822,3 (МАН). 2.147 4 М-К2,5-Діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іллуацетил|-М-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32- ундекаоксатетратриаконтан-34-іл)-бета-аланіл-ІЇ -валіл-М-74-(Т2-(13-(4-16-(8-(1,3-бензотіазол-2- ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1- іл)уметил)|-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.13,7|дец-1-ил)окси)етил|-(2- сульфоетил)карбамоїл)окси)метил|-3-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50- гептадекаоксатрипентаконтан-53-іл)феніл)-І -аланінамід
У холодну (0"С) суміш речовини із прикладу 2.141.4 (28 мг), речовини із прикладу 2.147.3 (27,1 мг) та гідрату 1-гідроксибензотриазолу (6,6 мг) в М,М-диметилформаміді (0,8 мл) додавали
М,М-діїзопропілетиламін-2 (20,1 мкл). Суміш перемішували протягом 10 хвилин та очищували за допомогою НРІ С з оберненою фазою на системі сіїбзоп (колонка С18), з елююванням від 30 до 7095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-ав) б 12,81 (в, 1Н), 9,84 (5, 1Н), 8,21 - 7,86 (т, 2Н), 7,75 (а, 1), 7,57 (а, 1Н), 7,52 - 7,28 (т, 7Н), 7,27 - 7,15 (т, 2Н), 7,04 (а, 2Н), 6,91 (9, 1Н), 4,94 (а, 4Н), 4,36 (1, ЗН), 4,19 (а, 1), 3,84 (І, 2Н), 3,75 (а, 2Н), 3,63 (9, 1Н), 3,46 (да, 104Н), 3,36 (5, 2Н), 3,19 (в, 5Н), 2,97 (І, 2Н), 2,57 (І, 5Н), 2,42 - 2,26 (т, 1Н), 2,03 (5, 7Н), 2,00 - 1,83 (т, 1Н), 1,70 (, 2Н), 1,38 - 0,96 (т, 1ЗН), 0,96 - 0,69 (т, 13Н). М5 (ЕБІ) т/е 1327,7 (М-2Н)У. 2.148 Синтез М-К2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)ацетил/|-М- (2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-ундекаоксатетратриаконтан-34-іл)-бета-аланіл-І! -валіл-М-(4-((2- ((3-К4-(6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3- іл)-5-метил-1Н-піразол-1-іл)метил/|-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.157|дец-1-иліокси)етил|-(2- сульфоетил)карбамоїл)окси)метил|феніл)-М»-карбамоїл-І -орнітинаміду (синтону ХІІ)
Указану в заголовку сполуку одержували із застосуванням процедури в прикладі 2.147.4 шляхом заміни речовини із прикладу 2.141.4 речовиною з прикладу 2.112.2. "Н ЯМР (400 МГЦ,
Ко) диметилсульфоксид-ав) б 12,83 (5, 1Н), 9,96 (а, 1Н), 8,18 - 7,85 (т, ЗН), 7,75 (а, 1Н), 7,64 - 7,37 (т, 7Н), 7,32 (9, 2Н), 7,28 - 7,20 (т, ЗН), 7,04 (5, 2Н), 6,92 (0, 1Н), 5,17 - 4,79 (т, 4Н), 4,59 - 4,31 (т, ЗН), 4,21 (а, 1Н), 3,84 (ї, 2Н), 3,77 (9, 2Н), 3,52 (5, 4Н), 3,39 (й, 2Н), 3,19 (5, 5Н), 2,94 (ді, 4Н), 2,60 (ї, ЗН), 2,43 - 2,27 (т, 1Н), 2,05 (в, 4Н), 1,60 (а, 2Н), 1,44 - 0,57 (т, 22Н). М5 (Е5І) т/е 1964,8 (М-Н). 2.149 Синтез М-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)уацетил|)-Ї -валіл-М-14-((Т2-(13-((4-16-(8- (1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-іл)-5-метил- 1Н-піразол-1-іл)метил|-5,7-диметилтрицикло|3.3.1.127|дец-1-иліокси)етил|-(2- сульфоетил)карбамоїліокси)метил|-3-(27-(2,5,8,11,14,17,20,23-октаоксагексакозан-26-іл)- 2,5,8,11,14,17,20,23-октаокса-27-азатриаконтан-30-іл|феніл)-І -аланінаміду (синтону У.) 2.414941 3-(1-((3-(2-((((2-(27-(2,5,8,11,14,17,20,23-Октаоксагексакозан-26-іл)- 2,5,8,11,14,17,20,23-октаокса-27-азатриаконтан-З30-іл)-4-((5)-2-((5)-2-аміно-3- метилбутанамідо)пропанамідо)бензил)окси)карбоніл)-(2-сульфоетил)аміно)етокси)-5,7- диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)-6-(8-(бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл)піколінова кислота
Вказану в заголовку сполуку одержували, як описано в прикладі 2.145.5, шляхом заміни речовини із прикладу 1.43 речовиною із прикладу 1.2.9. М5 (ЕБІ) т/е 1991,4 (М-Н). 2.149.2 М-К2,5-Діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)ацетил/-І -валіл-М-(4-((2-(13-((4-16-(8-(1,3- бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н- піразол-1-ілуметил|-5,7-диметилтрициклоїЇ3.3.1.13,7|дец-1-илюкси)етилі-(2- сульфоетил)карбамоїл)окси)метилі-3-(27-(2,5,8,11,14,17,20,23-октаоксагексакозан-26-іл)- 2,5,8,11,14,17,20,23-октаокса-27-азатриаконтан-З0-ілІіфеніл)-І -аланінамід
Указану в заголовку сполуку одержували, як описано в прикладі 2.145, шляхом заміни речовини із прикладу 2.145.5 речовиною з прикладу 2.149411. "Н ЯМР (400 МГЦ, диметилсульфоксид-авє) б ррт 12,83 (5, 1Н), 9,90 (5, 1Н), 9,41 (в, 1Н), 8,24 (а, 2Н), 8,01 (0, тн), 7,77 (8, 1), 7,67 - 7,29 (т, 8Н), 7,26 (5, 2Н), 7,06 (5, 2Н), 6,93 (й, 1Н), 5,03 (9, 2Н), 4,93 (5, 2Н), 4,37 (, 1Н), 4,19 (да, 1), 4,11 (5, 2Н), 3,86 (ї, 2Н), 3,79 (в, 2Н), 3,70 - 3,26 (т, 226Н), 3,21 (5, 6Н), 3,11 (5, 5Н), 2,99 (ї, 2Н), 2,66 (й, 4Н), 2,08 (5, ЗН), 1,89 (5, 8Н), 1,44 - 0,90 (т, 14Н), 0,89 - 0,68 (т, 1тНн). 2.150 Синтез М-1(35)-3-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)-3-(11- 60 (2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35-додекаоксагептатриаконтан-37-іл)-1 Н-1,2,3-триазол-4-
іл|пропаноїл)-І -валіл-М-(4-(ЦТ2-(3-(4-16-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін- 2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1-ілуметилі/д-5, 7- диметилтрициклоїЇ3.3.1.157|дец-1-ил)окси)етил|-(2-сульфоетил)карбамоїлюкси)метил|феніл)-М»- карбамоїл-І -орнітинаміду (синтону МО) 2.150.1 3-(2,5-Діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)пент-4-инова кислота
У суміш солі трифтороцтової кислоти та З-амінопент-4-инової кислоти (1,9г) в тетрагідрофурані (30 мл) додавали метил-2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-карбоксилат (1946 г) з подальшим швидким додаванням М,М-діїзопропілетиламіну (8,04 мл). Одержану суміш перемішували при 60"С протягом 16 годин. Суміш концентрували до сухого стану.
Залишок очищували за допомогою НРІ С з оберненою фазою на системі біїЇзоп (колонка С18), з елююванням від 20 до 8095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки. Ме (Г0-М5) т/е 194 (МАН). "Н-ЯМР (диметилсульфоксид-св, 400 МГц) б 2,92-3,07 (т, 2Н), 3,38 (й, 1Н), 5,07-5,12 (т, 1Н), 7,08 (5, 2Н), 12,27 (р5, 0,6Н). 2.150.2 3-(1-(2,5,68,11,14,17,20,23,26,29,32,35-Додекаоксагептатриаконтан-37-іл)-1 Н-1,2,3- триазол-4-іл)-3-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)упропанова кислота
До речовини із прикладу 2.150.1 (700 мг) в суміші трет-бутанол/НгО, (2:71, 15 мл) додавали 37-азидо-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35-додекаоксагептатриаконтан (2123 мг). У суміш послідовно додавали (К)-2-((5)-1,2-дигідроксиетил)-4-гідрокси-5-оксо-2,5-дигідрофуран-З-олат натрію (71,8 мг) та сульфат міді(Ії) (28,9 мг). Одержану суміш перемішували за кімнатної температури протягом 16 годин і концентрували. Залишок очищували за допомогою НРІС з оберненою фазою на системі сіїбхоп (колонка С18), з елююванням від 20 до 8095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н
ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-ав) б 3,24 (5, ЗН), 3,15-3,28 (т, 2Н), 3,41-3,52 (т, 44Н), 3,79 ( 2Н), 4,48 (І, 2Н), 5,56-5,60 (т, 1Н), 7,05 (5, 2Н), 8,03 (в, 1Н). М5 (ГО-М5) т/е 779 (М.Н). 2.150353. М-(35)-3-(2,5-Діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)-3-(1-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35- додекаоксагептатриаконтан-37-іл)-1Н-1,2,3-триазол-4-іл|пропаноїл)-І -валіл-М-14-(Ц1Т2-(13-((4-16-
ІВ-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-З-іл)-5- метил-1Н-піразол-1-іл)метил/|-5, 7-диметилтрицикло!|3.3.1.13,7|дец-1-иліокси)етилі/|-(2-
Зо сульфоетил)карбамоїліокси)метилі|феніл)-М5-карбамоїл-і -орнітинамід
У суміш 0-(7-азабензотриазол-1-іл)-М,М,М'М'-тетраметилуронію гексафторфосфату (8,45 мг) та речовини із прикладу 2.150.2 (20 мг) в М,М-диметилформаміді (0,3 мл) при 0'С повільно додавали М,М-дізопропілетиламін (22,19 мкл) та перемішували реакційну суміш протягом 1 хвилини. Додавали холодну (0"С) Суміш речовини із прикладу 2.112.2 (20 мг) і М,М- діізопропілетиламіну (22 мкл) в М,М-диметилформаміді (0,4 мл). Одержану суміш перемішували протягом 10 хвилин та очищували за допомогою НРІ С з оберненою фазою на системі сіЇб5оп (колонка С18), з елююванням від 20 до 8095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки. (Абсолютну конфігурацію в З положенні задавали довільно.) "Н ЯМР (501 МГц, диметилсульфоксид-св) б 9,95 (5, 1Н), 8,07 (а, ЗН), 8,04 - 7,96 (т, 2Н), 7,77 (а, 1Н), 7,64 - 7,53 (т, ЗН), 7,50 (5, 1Н), 7,48 - 7,39 (т, 2Н), 7,34 (а, 2Н), 7,30 - 7,23 (т, ЗН), 6,98 (5, 2Н), 6,93 (0, 1Н), 5,61 (ї, 1Н), 4,96 (а, 4Н), 4,54 - 4,27 (т, ЗН), 4,14 (1, 1Н), 3,86 (ї, 2Н), 3,77 (9, 4Н), 3,43 (9, 71Н), 5,21 (5, 6Н), 3,00 (й, 5Н), 2,61 (5, 2Н), 2,07 (й,
ЗН), 1,92 (5, 1Н), 1,60 (ад, 2Н), 1,47 - 0,86 (т, ТОН), 0,85 - 0,67 (т, 12Н). М5 (ЕБ5І) т/е 1010,6 (М- 2гн)х. 24151 Синтез М-((3Н)-3-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)-3-(11- (2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35-додекаоксагептатриаконтан-37-іл)-1 Н-1,2,3-триазол-4- іл|пропаноїл)-І -валіл-М-(4-(ЦТ2-(3-(4-16-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін- 2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-іл)-5-метил-1Н-піразол-1-іл)метилі|-5,7- диметилтрицикло!Ї3.3.1.12Л|дец-1-иліокси)етил|-(2-сульфоетил)карбамоїл)іокси)метилІ|феніл)-Мо- карбамоїл-їІ -орнітинаміду (синтону УА)
Речовину із прикладу 2.151 виділяли при одержанні речовини із прикладу 2.150.3. (Абсолютну конфігурацію в З положенні задавали довільно.) "Н ЯМР (501 МГу, диметилсульфоксид-ав) б 9,91 (5, 1Н), 8,11 (ас, 2Н), 8,04 - 7,99 (т, 1Н), 7,96 (5, 1Н), 7,77 (а, 1Н), 7,58 (І, ЗН), 7,54 - 7,39 (т, 2Н), 7,39 - 7,31 (т, 2Н), 7,31 - 7,24 (т, ЗН), 7,00 (в, 2Н), 6,94 (й, 1Н), 5,61 (аа, 1), 5,08 - 4,79 (т, АН), 4,40 (аї, ЗН), 4,16 (в, 1Н), 3,86 (ї, 2Н), 3,82 - 3,73 (т, 4Н), 3,51 - 3,30 (т, 46Н), 3,21 (5, /Н), 3,05 - 2,87 (т, ЗН), 2,62 (ї, 2Н), 2,07 (а, ЗН), 1,95 (5, 2Н), 1,69 (в, 1Н), 1,51 - 0,86 (т, ТОН), 0,88 - 0,70 (т, 13Н). М5 (ЕБІ) т/е 1010,6 (М-2Н)У. 2.152 Синтез 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-3-(1-(73-(2- (К2-2-(25,38,48,55,65)-6-карбокси-3,4,5-тригідрокситетрагідро-2Н-піран-2-іл|етил)-4-((25)-2- бо ((25)-2-((2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)ацетилі|аміно)-3-
метилбутаноїл|аміно)пропаноїл|аміно)бензил)окси|карбоніл (ЗА, 45,5Н8)-3,4,5,6- тетрагідроксигексилі|аміно)етокси|-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.157)|дец-1-ил)метил)-5-метил-1 Н- піразол-4-іл|піридин-2-карбонової кислоти (синтону 5) 241524 3-(1-((3-(2-(((4-((5)-2-((5)-2-Аміно-3-метилбутанамідо)пропанамідо)-2-(2- (25,38,48,55,65)-6-карбокси-3,4,5-тригідрокситетрагідро-2Н-піран-2- іл)етил)бензил)окси)карбоніл)(З3А,45,5Н)-3,4,5,6-тетрагідроксигексил)аміно)етокси)-5,7- диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)-6-(8-(бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл)піколінова кислота
Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 1.77.2 речовиною із прикладу 1.25 та речовини із прикладу 2.123.19 речовиною із прикладу 2.97.7 в прикладі 2.97.8. М5 (ЕБІ) т/е 1417 (Ма-Н)», 1415 (М-НУ. 2.152.2. 6-І8-(1,3-Бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-3-(11-(13-(2-(4(2-2-
К25,38,48,55,65)-6-карбокси-3,4,5-тригідрокситетрагідро-2Н-піран-2-іл|стил)-4-(25)-2-(Щ(25)-2- ((2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)луацетил|аміно)-3- метилбутаноїліамінозупропаноїліаміноздбензил)окси|Їкарбоніл) (ЗА, 45,5Н)-3,4,5,6- тетрагідроксигексил|аміно)етокси|-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.13,7|дец-1-илуметил)-5-метил-1 Н- піразол-4-іл|Іпіридин-2-карбонова кислота
Указану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 2.152.1 речовиною з прикладу 2.49.1 у прикладі 2.54. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-дв) б ррт 9,85 (т, 1Н), 8,18 (ї, 2Н), 7,96 (а, 1Н), 7,73 (9, 1Н), 7,55 (а, 1Н), 7,46-7,25 (т, 8Н), 7,21 (5, 1Н), 7,15 (9, 1Н), 7,00 (5, 1Н), 6,99 (а, 1Нн), 6,88 (9, 1Н), 4,95 (р5, 2Н), 4,88 (5, 2Н), 4,32 (т, 1Н), 415 (ї, 1Н), 4,05 (5, 2Н), 3,82 (І, 2Н), 3,72 (т, АН), 3,58-3,29 (т, 6Н), 3,19 (т, 4Н), 3,11-3,00 (т, 6Н), 2,97 (І, 2Н), 2,91 (, 2Н), 2,72 (т, 2Н), 2,55 (т, 2Н), 2,04 (5, ЗН), 2,02-1,85 (т, ЗН), 1,54 (т, АН), 1,44 (5, 1Н), 1,933 (65, 1Н), 1,22 (т, 6Н), 1,04 (т, 6Н), 0,86 (т, 2Н), 0,77 (т, 12Н). М5 (ЕІ) т/е 1554 (МАН)», 1552 (М-НУ. 2.153 Синтез 6-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-3-(1-(73-(2- (К2-2-(25,38,48,55,65)-6-карбокси-3,4,5-тригідрокситетрагідро-2Н-піран-2-іл|етил)-4-((25)-2- ((25)-2-((4(35,55)-3-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)-2-оксо-5-((2- сульфоетокси)метил|іпіролідин-1-іліацетил)аміно|-3- метилбутаноїл)аміно)пропаноїл|аміно)бензил)окси|карбоніл)(ЗА,45,5Н)-3,4,5,6- тетрагідроксигексил|аміно)етокси)|-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.127дец-1-иліметил)-5-метил-1 Н- піразол-4-іл|піридин-2-карбонової кислоти (синтону У)
Розчиняли речовину із прикладу 2.119.15 (11 мг) в М,М-диметилформаміді (0,1 мл).
Додавали 2-(ЗН-11,2,3)|)триазолої|4,5-б|піридин-3-іл)-1,1,3,3-тетраметилізоуронію гексафторфосфат(мМ) (11 мг) і М,М-дізопропілетиламін (7,4 мг). Суміш перемішували за кімнатної температури протягом п'яти хвилин. Потім суміш додавали в іншу суміш речовини із прикладу 2.152.1 (34 мг) і М,М-діїізопропілетиламіну (16,3 мг) в М,М-диметилформаміді (0,2 мл).
Реакційну суміш перемішували протягом 60 хвилин за кімнатної температури та гасили трифтороцтовою кислотою (36 мг). Суміш розбавляли водою (0,75 мл) та диметилсульфоксидом (0,75 мл) та очищували за допомогою НРІС з оберненою фазою із застосуванням від 10 до 7595 ацетонітрилу у воді (мас./0,195 ТЕА) протягом 30 хвилин на системі Сгасе Кемеїегі5, обладнаній колонкою І ипа: С18(2), 100 А, 150 х 30 мм. Фракції продукту об'єднували, заморожували й ліофілізували з одержанням указаної в заголовку сполуки у вигляді солі трифтороцтової кислоти. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-ав) б ррт 9,85 (т, 1Н), 8,18 (а, 1Н), 8,05 (а, 1Н), 8,04 (9, 1Н), 7,79 (а, 1Н), 7,53-7,39 (т, 8Н), 7,36 (а, 2Н), 7,29 (5, 1Н), 7,22 (9, 1Н), 7,07 (5, 1Н), 6,96 (а, 1Н),5,18 (65, 2Н), 4,96 (5, 2Н), 4,65 (І, 1Н), 4,37 (, 1Н), 4,19 (І, 1Н), 4,16 (5, 1Н), 4,01 (а, 2Н), 3,89 (ї, 2Н), 3,78 (т, 4Н), 3,73 (т, 2Н), 3,49-3,44 (т, АН), 3,40- 3,20 (т, 8Н), 3,24 (т, 4Н), 3,17-3,07 (т, 4Н), 3,02 (І, 2Н), 2,95 (ї, 2Н), 2,76 (т, АН), 2,62 (т, 1Н), 2,37 (т, 1Н), 2,09 (5, ЗН), 1,99 (т, 2Н), 1,86 (ад, 1Н), 1,62 (т, АН), 1,38 (Б5, 2Н), 1,28 (т, 6Н), 1,18- 1,02 (т, 6Н), 0,96 (т, 2Н), 0,91-0,79 (т, 12Н). М5 (ЕБІ) т/е 1773 (М-Н). 2.154 Синтез (65)-2,6-ангідро-6-(2-(2-(Ц2-((3-(4-16-І8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)метилі/д-5,7- диметилтрицикло!Ї3.3.1.12Лдец-1-иліокси)етил|-(2-сульфоетил)карбамоїл)окси)метил|-5-(/М- (2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)ацетил|д|-М-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32- ундекаоксатетратриаконтан-34-іл)-бета-аланіл-І -валіл-Ї -аланіл)іаміно)феніл)етил)-І -гулонової кислоти (синтону УТ) 2.415441 3-(1-((3-(2-(((4-((5)-2-((5)-2-Аміно-3-метилбутанамідо)пропанамідо)-2-(2- (25,38,48,55,65)-6-карбокси-3,4,5-тригідрокситетрагідро-2Н-піран-2- іл)етил)бензил)окси)карбоніл)-(2-сульфоетил)аміно)етокси)-5,7-диметиладамантан-1-іл)метил)- бо Б-метил-1Н-піразол-4-іл)-6-(8-(бензо|4|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1Н)-
іл)піколінова кислота
Охолоджували суміш речовини із прикладу 1.2.9 (200 мг), речовини із прикладу 2.123.19 (288 мг) та гідрату 1-гідроксибензотриазолу (50,2 мг) в М,М-диметилформаміді (2 мл) на крижаній бані та додавали М,М-діїзопропілетиламін (143 мкл). Реакційну суміш перемішували за кімнатної температури протягом 2,5годин і концентрували. До залишку додавали тетрагідрофуран (0,5 мл) і метанол (0,5 мл). Одержану суміш охолоджували на крижаній бані та повільно додавали гідрат гідроксиду літію (147 мг) у воді (2,5 мл). Суміш перемішували за кімнатної температури протягом 1,5 години та охолоджували на крижаній бані. Додавали краплями трифтороцтову кислоту (361 мкл) до досягнення рН б. Суміш очищували за допомогою НРІ С з оберненою фазою на системі сіїбоп (колонка С18), з елююванням від 35 до 45965 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (Е5І) т/е 1375,5 (М-Н). 2.154.2 (65)-2,6-Ангідро-6-(2-(2-((2-(3-((4-(6-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)уметилі/д-5,7- диметилтрицикло!|3.3.1.13,7|дец-1-илюкси)етилі|-(2-сульфоетил)карбамоїлюоюкси)метил|-5-(1М- (2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)ацетил|д|-М-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32- ундекаоксатетратриаконтан-З34-іл)-бета-аланіл-| -валіл-І -аланіліаміно)феніл)етил)-І -гулонова кислота
У суміш гідрату 1-гідроксибензотриазолу (5,22 мг), речовини із прикладу 2.154.1 (23,5 мг) та речовини із прикладу 2.147.3 (24 мг) в М,М-диметилформаміді (1 мл) при 0"С повільно додавали
М,М-діїзопропілетиламін (23,84 мкл). Реакційну суміш перемішували за кімнатної температури протягом 15 хвилин та очищували за допомогою НРІС з оберненою фазою на системі сіїЇб5оп (колонка С18), з елююванням від 35 до 5095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (501 МГц, диметилсульфоксид-сав) б 12,83 (5, 1Н), 9,88 (5, 1Н), 8,23 - 8,04 (т, 2Н), 8,02 (ай, 1Н), 7,92 (5, 1Н), 7,77 (а, 1Н), 7,59 (а, 1Н), 7,55 - 7,30 (т, 7Н), 7,27 (5, 1Н), 7,20 (а, 1Н), 7,07 (а, 2Н), 6,93 (а, 1Н), 5,07 - 4,88 (т, 4Н), 4,47 - 4,32 (т, ЗН), 4,22 (й, 1Н), 3,97 - 3,73 (т, 4Н), 3,62 - 3,45 (т,
З5Н), 3,91 (І, ЗН), 3,21 (5, ЗН), 3,06 (а, 2Н), 2,83 - 2,54 (т, 5Н), 2,47 - 2,29 (т, 1Н), 2,13 - 1,84 (т,
БН), 1,52 (д, 1Н), 1,43 - 0,69 (т, 26Н). М5 (Е5І) т/е 1043,0 (М-2Н)».
Зо 2.155 Синтез (65)-2,6-ангідро-6-(2-12-(ЦЦ2-(13-(4-16-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)метилі/д-5,7- диметилтрицикло!Ї3.3.1.157)дец-1-ил)іокси)етилі|-(2-сульфоетил)карбамоїліокси)метил|-5-((М-(2- (2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)-3-(1-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35- додекаоксагептатриаконтан-37-іл)-1 Н-1,2,3-триазол-4-іл|Іпропаноїл)-І -валіл-ї - аланіл)аміно|феніл)етил)-І -гулонової кислоти (синтону М) 24551 3-(1-(2,5,68,11,14,17,20,23,26,29,32,35-Додекаоксагептатриаконтан-37-іл)-1 Н-1,2,3- триазол-4-іл)-2-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)упропанова кислота
Вказану в заголовку сполуку одержували із застосуванням процедури в прикладі 2.150.2 шляхом заміни речовини із прикладу 2.150.1. 2-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)пент-4- иновою кислотою. 2.155.2 (65)-2,6-Ангідро-6-(2-(2-((2-(3-((4-(6-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)уметилі/д-5,7- диметилтрицикло!|3.3.1.13,7|дец-1-илюкси)етилі|-(2-сульфоетил)карбамоїл)окси)метилі|-5-((М-(2- (2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)-3-(1-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35- додекаоксагептатриаконтан-37-іл)-1 Н-1,2,3-триазол-4-іл|Іпропаноїл)-І -валіл-ї - аланіл)аміно|феніл)етил)-І -гулонова кислота
Указану в заголовку сполуку одержували із застосуванням процедури в прикладі 2.150.3 шляхом заміни речовини із прикладу 2.150.2 і речовини із прикладу 2.112.2 речовиною з прикладу 2.155.1 і речовиною з прикладу 2.154.1, відповідно. "НН ЯМР (400 МГЦ, диметилсульфоксид-абв) б 12,83 (5, 1Н), 9,87 (а, 1Н), 8,25 - 8,06 (т, 2Н), 8,00 (9, 1Н), 7,75 (а, 1), 7,71 (85, 1Н), 7,57 (а, 1Н), 7,54 - 7,28 (т, 6Н), 7,25 (5, 1Н), 7,18 (а, 1Н), 6,98 - 6,85 (т, ЗН), 5,09 - 4,89 (т, 4Н), 4,76 (ада, 1), 4,36 (ада, ЗН), 4,17 (д, 1Н), 3,84 (ї, 2Н), 3,76 (а, 2Н), 3,72 - 3,66 (т, 2Н), 3,49 - 3,44 (т, З7Н), 3,20 (в, 5Н), 3,01 - 2,82 (т, ЗН), 2,13 - 1,81 (т, 5Н), 1,52 (5, 1Н), 1,39 - 0,50 (т, 2З3Н). М5 (ЕБІ) т/е 1069,7 (МА2Н) 2». 2.156 Синтез (65)-2,6-ангідро-6-(2-12-(ЦЦ2-(13-(4-16-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)метилі/д-5,7- диметилтрицикло!Ї3.3.1.157|дец-1-ил)окси)етил|-(2-сульфоетил)карбамоїліокси)метилі|-5-((М- ((35)-3-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)-3-(1-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35- додекаоксагептатриаконтан-37-іл)-1 Н-1,2,3-триазол-4-іл|Іпропаноїл)-І -валіл-ї - бо аланіл)аміно|феніл)етил)-І -гулонової кислоти (синтону УМ)
Речовину із прикладу 2.156 виділяли у вигляді чистого діастереомеру при одержанні з прикладу 2.155.2. (Визначення абсолютної конфігурації при З положенні є довільним.) "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-ав) б 12,82 (5, 1Н), 9,85 (5, 1Н), 8,08 (9, 2Н), 8,03 - 7,95 (т, 2Н), 7,75 (а, 1Н), 7,57 (а, 1Н), 7,51 - 7,29 (т, 6Н), 7,24 (5, 1Н), 7,18 (9, 1Н), 6,95 (5, 2Н), 6,91 (а, тн), 5,59 (ад, 1Н), 5,06 - 4,86 (т, 4Н), 4,43 (аї, 2Н), 4,92 (І, 1Н), 4,11 (її, 1Н), 3,84 (1, 2Н), 3,75 (І, ЗН), 3,55 - 3,41 (т, 4З3Н), 3,41 - 3,36 (т, 2Н), 3,19 (5, 5Н), 3,10 (ї, 1Н), 3,03 - 2,86 (т, ЗН), 2,59 (5, ЗН), 2,13 - 1,82 (т, 6Н), 1,52 (5, 1Н), 1,37 - 0,65 (т, 26Н). М5 (ЕБІ) т/е 1067,8 (М-2Н)»У. 2.157 Синтез (65)-2,6-ангідро-6-(2-12-((Ц2-(13-(4-16-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)метилі/д-5,7- диметилтрицикло!Ї3.3.1.127)дец-1-иліокси)етил|-(2-сульфоетил)карбамоїліокси)метилі|-5-(М- ((38)-3-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)-3-(1-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35- додекаоксагептатриаконтан-37-іл)-1 Н-1,2,3-триазол-4-іл|Іпропаноїл)-І -валіл-ї - аланіл)аміно|феніл)етил)-І -гулонової кислоти (синтону УМ)
Речовину із прикладу 2.157 виділяли у вигляді чистого діастереомеру при одержанні з прикладу 2.155.2. (Визначення абсолютної конфігурації при З положенні є довільним.) "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-ав) б 12,81 (5, 1Н), 9,81 (5, 1Н), 8,10 (а, 2Н), 8,00 (4, 1Н), 7,94 (5, 1Н), 7,75 (9, 1), 7,57 (а, 1Н), 7,51 - 7,28 (т, 6Н), 7,24 (5, 1Н), 7,18 (9, 1Н), 6,98 (5, 2Н), 6,91 (а, 1Н), 5,59 (, 1Н), 5,06 - 4,87 (т, 4Н), 4,46 - 426 (т, 2Н), 4,12 (9, 1Н), 3,84 (ї, 2Н), 3,75 (а, ЗН), 3,46 (а, 27Н), 3,40 - 3,36 (т, 2Н), 3,19 (5, 5Н), 3,01 - 2,85 (т, ЗН), 2,60 (5, ЗН), 1,99 (а, АН), 1,52 (5, 1Н), 1,35 - 0,65 (т, 2З3Н). М5 (Е5І) т/е 1067,8 (М-2Н)2У. 2.158 Синтез (65)-2,6-ангідро-6-(2-12-((Ц2-(13-(4-16-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)метилі/д-5,7- диметилтрицикло!Ї3.3.1.157|дец-1-ил)окси)етил|-(2-сульфоетил)карбамоїліокси)метилі|-5-((М- ((35)-3-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)-3-П1-(3-сульфопропіл)-1Н-1 2,3-триазол-4- іл|пропаноїл)-І -валіл-І -аланіл)аміно|феніл)етил)-І -гулонової кислоти (синтону 28) 2.158.1 3-Азидопропан-1-сульфонат натрію
У суміш азиду натрію (3,25 г) у воді (25 мл) додавали 1,2-оксатиолан-2,2-діоксид (6,1 г) в ацетоні (25 мл). Одержану суміш перемішували за кімнатної температури протягом 24 годин і концентрували до сухого стану. Тверду речовину суспендували в діетиловому етері (100 мл) та
Зо перемішували зі зворотним холодильником протягом 1 години. Суспензію охолоджували до кімнатної температури та тверду речовину збирали шляхом фільтрації, промивали ацетоном і діетиловим етером й висушували під вакуумом з одержанням указаної в заголовку сполуки. МО (ГО-М5) т/е 164 (М-Н). 2.158.2 Ізопропіл-з3-азидопропан-1-сульфонат
Суміш речовини із прикладу 2.158.1 (6,8 г) в концентрованій НСІ (90 мл) перемішували за кімнатної температури протягом 1 години. Суміш концентрували до сухого стану. Залишок розчиняли у дихлорметані (350 мл) і у суміш додавали триїзопропоксиметан (42,0 мл) однією порцією. Одержану суміш перемішували при 50"С протягом 2 годин і концентрували до сухого стану. Неочищений залишок очищували за допомогою хроматографії на силікагелі, з елююванням петролейним етером/етилацетатом, 10/1, з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н-ЯМР (СОСІз», 400 МГц): 1,42 (5, ЗН), 1,44 (5, ЗН), 2,08-2,15 (т, 2Н), 3,17 (Ї, 2Н), 3,51 (Її, 2Н), 4,95-5,01 (т, 1Н). 2.158.3 3-(2,5-Діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)-3-(1-(3-сульфопропіл)-1 Н-1,2,3-триазол-4- іл)упропанова кислота
У суміш речовини із прикладу 2.150.1 (450 мг) в трет-бутанолі/НгО (2-1, 9 мл) додавали речовину із прикладу 2.158.2 (483 мг) з подальшим додаванням сульфату мідік(Ії) (18,59 мг) ї (К)- 2-((5)-1,2-дигідроксиетил)-4-гідрокси-5-оксо-2,5-дигідрофуран-З-олату натрію (46,2 мг).
Одержану суміш перемішували за кімнатної температури протягом 1бгодин і суміш концентрували до сухого стану. Залишок очищували за допомогою НРІ С з оберненою фазою на системі біЇзоп (колонка С18), з елююванням від 20 до 8095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н-ЯМР (диметилсульфоксид-йв, 400 МГц): 2,06-2,10 (т, 2Н), 2,45-2,48 (т, 2Н), 3,21-3,23 (т, 2Н), 4,40- 4,44 (т, 2Н), 5,55-5,59 (т, 1Н), 7,05 (5, 2Н), 8,10 (в, 1Н). М5 (ГОМ5) т/е 359 (М.Н). 2.158.4 (65)-2,6-Ангідро-6-(2-(2-((2-(3-((4-(6-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4- дигідроізохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-З3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)метилі/д-5,7- диметилтрицикло!3.3.1.13,7|дец-1-иліокси)етил|-(2-сульфоетил)карбамоїліокси)метилі)|-5-((М- ((35)-3-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)-3-П1-(3-сульфопропіл)-1Н-1 2,3-триазол-4- іл|Іпропаноїл)-І -валіл-І -аланіл)аміно|феніл)етил)-І-гулонова кислота
Вказану в заголовку сполуку одержували із застосуванням процедури в прикладі 2.150.3 бо шляхом заміни речовини із прикладу 2.150.2 та речовини із прикладу 2.112.2 речовиною із до прикладу 2.158.3 та речовиною із прикладу 2.154.1 відповідно. Сполуку виділяли у вигляді чистого діастереомеру. (Абсолютну конфігурацію в З положенні задавали довільно.) "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-ав) б 10,14 - 9,66 (т, 1Н), 8,07 (а, 2Н), 8,04 - 7,96 (т, 2Н), 7,75 (й, 1Н), 7,57 (а, 1Н), 7,52 - 7,29 (т, 7Н), 7,26 (5, 1Н), 7,18 (9, 1Н), 6,92 (а, ЗН), 5,58 (ї, 1Н), 5,09 - 4,84 (т, 4Н), 4,35 (91, ЗН), 4,15 - 4,02 (т, 1Н), 3,89 - 3,65 (т, 4Н), 3,28 (9, 1Н), 3,21 (ад, 2Н), 3,14 - 3,02 (т, 2Н), 3,01 - 2,86 (т, АН), 2,62 (а, ЗН), 2,37 (І, 2Н), 2,29 (5, ОН), 2,02 (а, 5Н), 1,52 (5, 1Н), 1,40 - 0,59 (т, 24Н). М5 (ЕБІ) т/е 17153 (М-Н). 2.159 Синтез (65)-2,6-ангідро-6-(2-12-(ЦЦ2-(13-(4-16-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)метилі/д-5,7- диметилтрицикло!Ї3.3.1.127)дец-1-иліокси)етил|-(2-сульфоетил)карбамоїліокси)метилі|-5-(М- (3)-3-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)-3-11-(3-сульфопропіл)-1Н-1,2,3-триазол-4- іл|пропаноїл)-І -валіл-І -аланіл)аміно|феніл)етил)-І -гулонової кислоти (синтону 2С)
Речовину із прикладу 2.159 виділяли у вигляді чистого діастереомеру при одержанні з прикладу 2.158. (Абсолютну конфігурацію в З положенні задавали довільно.) "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-ав) б 9,97 (й, 1Н), 8,21 (а, 1Н), 8,13 (а, 1Н), 8,04 - 7,96 (т, 2Н), 7,75 (9, 1), 7,57 (9, 1Н), 7,55 - 7,37 (т, 4Н), 7,36 - 7,25 (т, ЗН), 7,17 (а, 1Н), 6,98 (5, 2Н), 6,93 (й, 1Н), 5,58 (ї, 1Н), 4,94 (а, 4Н), 4,50 - 4,26 (т, ЗН), 4,10 (5, 1Н), 3,98 - 3,73 (т, ЗН), 3,51 (а, 1Н), 3,42 (5, ЗН), 3,34 - 3,01 (т, 6Н), 3,01 - 2,83 (т, 4Н), 2,63 (а, 4Н), 2,42 (9, 1Н), 2,18 - 1,80 (т, 8Н), 1,53 (5, 1Н), 1,39 - 0,68 (т, 27Н). М5 (ЕБІ) т/е 17154 (М-НУ. 2.160 Синтез (65)-2,6-ангідро-6-(2-12-((Ц2-(13-(4-16-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)метилі/д-5,7- диметилтрицикло!3.3.1.127)дец-1-ил)іокси)етилі|-(2-сульфоетил)карбамоїліокси)метилі|-5-((М-
М2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)уацетил|-М-(2-(2-сульфоетокси)етил|-бета-аланіл-і -валіл-і - аланіл)іаміно)феніл)етил)-І -гулонової кислоти (синтону 2У) 2.411601 4-(Трет-бутилдифенілсиліл)окси)-2,2-диметилбутил-2-(2-((трет- бутоксикарбоніл)аміно)етокси)етансульфонат
У суміш трет-бутил-(2-гідроксиетил/укарбамату (433 мг) в диметилсульфоксиді (0,9 мл) при 207"С додавали 4-((трет-бутилдифенілсиліл)/окси)-2,2-диметилбутилетенсульфонат (500 мг) і
К»бОз (210 мг). Суміш нагрівали до 60"С та перемішували протягом 16 годин в посудині з
Зо кришкою. Суміш розбавляли етилацетатом, промивали водою та сольовим розчином.
Органічний шар висушували над безводним сульфатом натрію, фільтрували та концентрували.
Залишок очищували за допомогою флеш-хроматографії на силікагелі з елююванням петролейним етером/етилацетатом (від 10:11 до «-2:1), з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (І 0-М5) т/е 630,3 (М--Ма) 7. 2.160.2 4-((Трет-бутилдифенілсиліл)окси)-2,2-диметилбутил-2-(2- аміноетокси)етансульфонат
У суміш речовини із прикладу 2.160.1 (1,5 г) в безводному дихлорметані (100 мл) при 207С додавали бромід цинку(Ії) (0,445 г). Суміш перемішували за кімнатної температури протягом 16бгодин. У вищевказану суміш додавали додаткову кількість броміду цинку(І!) (278 м/) і реакційну суміш перемішували протягом додатково 16 годин. Реакційну суміш гасили 1 М водною сумішшю на основі МагСОз (5 мл) і водний шар три рази екстрагували етилацетатом.
Об'єднані органічні шари висушували над сульфатом натрію, фільтрували та концентрували.
Залишок очищували за допомогою колонкової хроматографії на силікагелі, з елююванням дихлорметаном/метанолом (10:1), з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (І С-М5) т/е 508,2 (М.АН)». 2.160.3 Трет-бутил-3-((2-(2-(4-(трет-бутилдифенілсиліл)окси)-2,2- диметилбутокси)сульфоніл)етокси)етил)аміно)пропаноат
У суміш речовини із прикладу 2.160.2 (0,365 г) в М,М-диметилформаміді (5,5 мл) й воді (0,55 мл) додавали трет-бутилакрилат (0,105 мл) і триетиламін (10,02 мкл). Суміш перемішували при 60"С протягом 30 годин. Суміш концентрували. Залишок змішували з сумішшю 1 М водною сумішшю на основі Маг6СОз (5 мл). Водний шар три рази екстрагували етилацетатом. Об'єднані органічні шари висушували над сульфатом натрію, фільтрували та концентрували. Залишок очищували за допомогою колонкової хроматографії на силікагелі, з елююванням дихлорметаном/етилацетатом (3:11) і дихлорметаном/метанолом (10:1), з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (І С-М5) т/е 636,3 (М--Н)У». 2.160.4 Трет-бутил-3-(М-(2-(2-(4-(трет-бутилдифенілсиліл)окси)-2,2- диметилбутокси)сульфоніл)етокси)етил)-2-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол- 1- іллуацетамідо)пропаносат
У суміш речовини із прикладу 2.160.3 (557,5 мг), 2-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1- бо іл)оцтової кислоти (272 мг) і О-(7-азабензотриазол-1-іл)-М,М,М',М'-тетраметилуронію гексафторфосфату (667 мг) в М,М-диметилформаміді (1,75 мл) при 0"С додавали М,М- діізопропілетиламін (0,459 мл). Одержану суміш перемішували при 0"С протягом 1 години.
Реакційну суміш змішували з насиченою водною сумішшю на основі МН:СІ, екстрагували етилацетатом і промивали сольовим розчином. Органічний шар висушували над сульфатом натрію, фільтрували та концентрували. Залишок очищували за допомогою колонкової хроматографії на силікагелі, з елююванням петролейним етером/етилацетатом (2/1), з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (І 0-М5) т/е 795,3 (М--Ма) 7. 2.160.5 3-(2-(2,5-Діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)-М-(2-(2- сульфоетокси)етил)ацетамідо)пропанова кислота
У суміш речовини із прикладу 2.160.4 (230 мг) у дихлорметані (4 мл) додавали трифтороцтову кислоту (З мл). Суміш перемішували при 20"С протягом 16 годин і концентрували. Залишок очищували за допомогою НРІ С з оберненою фазою на системі біїЇ5оп (колонка С18), з елююванням від 20 до 8095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (І10-М5) т/е 379,0 (М--Ма)". 2.160.6 2-(2-(2-(2,5-Діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)-М-(3-(2,5-діоксопіролідин-1-іл)окси)-3- оксопропіл)уацетамідо)етокси)етан-1-сульфонова кислота
Суміш 1-гідроксипіролідин-2,5-діону (16,43 мг), речовини із прикладу 2.160.5 (30 мг), 1-етил- 3-ІЗ-(диметиламіно)пропілікарбодіїміду гідрохлориду (45,6 мг) в М,М-диметилформаміді перемішували протягом ночі. Реакційну суміш очищували за допомогою НРІС з оберненою фазою на системі сіїзоп (колонка С18), з елююванням від 2 до 3095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,195 трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки. МО (Е5БІ) т/е 475,9(М.Н)-. 2.160.7 (65)-2,6-Ангідро-6-(2-(2-((2-(3-((4-(6-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)уметилі/д-5,7- диметилтрицикло!|3.3.1.13,7|дец-1-илюкси)етилі|-(2-сульфоетил)карбамоїлюоюкси)метил|-5-(1М- (2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)уацетил|-М-(2-(2-сульфоетокси)етил|-бета-аланіл-і| -валіл-ї - аланіліаміно)феніл)етил)-І -гулонова кислота
У суміш гідрату 1-гідроксибензотриазолу (4,45 мг), речовини із прикладу 2.160.6 (8,97 мг) та
Зо речовини із прикладу 2.154.1 (20 мг) в М,М-диметилформаміді (0,8 мл) при 0"С додавали М,М- дііззопропілетиламін (20 мкл, краплями). Реакційну суміш перемішували за кімнатної температури протягом 1 години та очищували за допомогою НРІС з оберненою фазою на системі сіїзоп (колонка С18), з елююванням від 30 до 5595 ацетонітрилу у воді, що містила 0,190 трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (500 МГц,
З5 диметилсульфоксид-абв) б 12,87 (5, 1Н), 9,88 (а, 1Н), 8,28 -8,10 (т, 1Н), 8,03 (9, 1Н), 7,95 (а, 1), 7,78 (а, тн), 7,60 (а, 1), 7,56 - 7,91 (т, 7Н), 7,28 (5, 1Н), 7,21 (а, 1Н), 7,06 (а, 2Н), 6,95 (а, 1Н), 5,06 - 4,90 (т, АН), 4,38 (9, ЗН), 4,28 - 4,11 (т, 1Н), 3,87 (1, 2Н), 3,79 (а, 2Н), 3,71 - 3,49 (т, 5Н), 3,21 (а, 2Н), 3,12 (а, 2Н), 2,97 (а, ЗН), 2,84 - 2,57 (т, 6Н), 2,38 (аа, 1Н), 2,13 - 1,86 (т, 5Н), 1,55 (5, 1Н), 1,39 - 0,64 (т, 25Н). М5 (Е5І) т/е 867,6 (М-2Н)». 2.161 Синтез 6-18-(1,3-бензотіазол-2-іл)карбамоїл|-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл)-3-(1-(13-(2-
Ч2-2-(25,38,48,55,65)-6-карбокси-3,4,5-тригідроксиоксан-2-іл|етил)-4-(25)-2-(25)-2-(25)-2- (2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)-3-14-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32- ундекаоксатетратриаконтан-34-іл)іокси|феніліпропаноїл|аміно )-3- метилбутаноїл|аміно)пропаноїл|аміно)феніл)метокси|карбоніл)(ЗА,45,5Н)-3,4,5,6- тетрагідроксигексилі|аміно)етокси|-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.157)декан-1-іліметил)-5-метил-1 Н- піразол-4-іл|піридин-2-карбонової кислоти (синтону 2Е)
Указану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 2.120.5 речовиною з прикладу 2.119.15 у прикладі 2.153. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-дв) б ррт 12,84 (5, 2Н), 9,92 (т, 1Н), 8,26 (а, 1Н), 8,13 (а, 1н), 8,03 (а, 1Н), 7,79 (а, 1н), 7,61 (а, тн), 7,52-7,41 (т, 4Н), 7,36 (т, ЗН), 7,27 (в, 1Н), 7,21 (а, 1Н), 7,02 (а, 2Н), 6,95 (9, 1), 6,89 (5, 2Н), 6,78 (9, 2Н), 5,02 (65, АН), 4,96 (5, 2Н), 4,59 (ад, 1Н), 4,38 (т, 2Н), 4,21 (І, 1Н), 3,99 (ї, 2Н), 3,88 (ї, 2Н), 3,79 (т, 2Н), 3,69 (І, 2Н), 3,64 (т, 1Н), 3,57 (т, 4Н), 3,53 (т, 4Н), 3,50 (5, 40Н), 3,42 (т, 2Н), 3,38 (т, 1Н), 3,30 (т, 2Н), 5,23 (5, 6Н), 3,20-3,08 (т, 6Н), 3,01 (ї, 2Н), 2,94 (І, 1Н), 2,76 (т, 1Н), 2,61 (т, 1Н), 2,08 (5, ЗН), 2,06-1,92 (т, 2Н), 1,67-1,52 (т, ЗН), 1,38 (т, 1Н), 1,32-1,22 (т, 6Н), 1,18-1,01 (т, 6Н), 0,92 (т, 2Н), 0,84 (т, 6Н), 0,78 (т, 6Н). М5 (ЕБІ) т/е 1078 (М-2Н). 2.162 Синтез 4-1 (2-(3-14-(6-18-К1,3-бензотіазол-2-іл)карбамоїл|-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)- іл/у-г-карбоксипіридин-3-іл)-5-метил-1Н-піразол-1-іл|метил)-5,7- диметилтрицикло!Ї3.3.1.157|декан-1-іл)окси|етил)|(35)-3,4- дигідроксибутилікарбамоїл)окси|метил)-3-(2-(2-(2-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1- бо іллуацетамідо|етокси)етокси)феніл-бета-О-глюкопіранозидуронової кислоти (синтону 25)
2.411621 3-(1-((3-(2-(((2-(2-(2-Аміноетокси)етокси)-4-(25,38,45,55,65)-6-карбокси-3,4,5- тригідрокситетрагідро-2Н-піран-2-іл)окси)бензил)окси)карбоніл)((5)-3,4- дигідроксибутил)аміно)етокси)-5,7-диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)-6-(8- (бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл)піколінова кислота
Речовину із прикладу 2.162.1 одержували шляхом заміни речовини із прикладу 2.62.6 (9Н- флуорен-9-іл)уметил-((5)-3-метил-1-(((5)-1-((4-(((4- нітрофенокси)карбоніл)окси)метил)феніл)аміно)-1-оксо-5-уреїдопентан-2-іл)аміно)-1-оксобутан- 2-ілукарбаматом і шляхом заміни речовини із прикладу 1.85 речовиною із прикладу 1.2.9 в прикладі 2.49.1. М5 (Е5І) т/е 1261,4 (М-НУ. 2.162.2.. 4-Ц(2-((3-Ц4-(6-18-(1,3-Бензотіазол-2-іл)укарбамоїлі|-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1Н)-іл)-2- карбоксипіридин-3-іл)-о-метил-1 Н-піразол-1-іл|метил)-5,7-диметилтрицикло|3.3.1.13,7|декан-1- іл)уокси|)етил/(35)-3,4-дигідроксибутилікарбамоїл)окси|метил)-3-(2-12-(2-(2,5-діоксо-2,5-дигідро- 1Н-пірол-1-іллуацетамідо|етокси)етокси)феніл-бета-О-глюкопіранозидуронова кислота
Речовину із прикладу 2.162.2 одержували шляхом заміни речовини із прикладу 2.162.1 речовиною з прикладу 2.49.1 у прикладі 2.54. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-ав) б 8,18 (І, 1Н), 8,00 (аа, тн), 7,76 (а, 1Н), 7,58 (аа, 1Н), 7,50 - 7,29 (т, 6Н), 7,26 (5, 1Н), 7,17 (а, 1Н), 7,03 (5, 2Н), 6,92 (а, 1Н), 6,64 (а, 1н), 6,57 (аа, 1Н), 4,94 (а, АН), 4,08 (пері, 2Н), 4,00 (5, 2Н), 3,92 - 3,68 (т, 8Н), 3,51 - 3,13 (т, 12Н), 2,98 (ї, 2Н), 2,06 (в, ЗН), 1,65 (5, 1Н), 1,43 - 0,66 (т, 18Н). М5 (ЕІ) т/е 1398,5 (М-Н). 2.163 Синтез 2,6-ангідро-8-(2-4(2-(3-Ц4-(6-18-К1,3-бензотіазол-2-іл)карбамоїл|-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл)-2-карбоксипіридин-3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1-іл|метил)-5,7- диметилтрицикло!Ї3.3.1.157)декан-1-іл)окси|етил)-(2-сульфоетил)карбамоїл|окси) метил) -5- ((795,825)-74-((2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)ацетил|-82-метил-7 7,80,83-триоксо-79- (пропан-2-іл)-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71-тетракозаокса- 74,78,81-триазатриоктаконтан-83-іл|аміно;)феніл|-7,8-дидезокси-І -гліцеро-І -гуло-октонової кислоти (синтону 2М/) 2.411631 Бензил-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71- тетракозаокса-74-азагептагептаконтан-77-оат
Вказану в заголовку сполуку одержували із застосуванням процедури в прикладі 2.147.1 шляхом заміни 2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-ундекаоксатетратриаконтан-34-аміну 2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71- тетракозаоксатригептаконтан-73-аміном. М5 (ЕБІ) т/е 625,9 (Ма2Н) 2. 2.163.2. 2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71-Тетракозаокса- 74-азагептагептаконтан-7 7-ова кислота
Вказану в заголовку сполуку одержували із застосуванням процедури в прикладі 2.147.2 шляхом заміни речовини із прикладу 2.147.1 речовиною із прикладу 2.163.1. М5 (Е5І) т/е 1160,7 (М.-АН)». 2.163.3 2,5-Діоксопіролідин-1-іл-74-(2-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)ацетил)- 2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44, 47,50,53, 56,59,62,65,68, 71 -тетракозаокса-74- азагептагептаконтан-77-оат
Вказану в заголовку сполуку одержували із застосуванням процедури в прикладі 2.147.3 шляхом заміни речовини із прикладу 2.147.2 речовиною із прикладу 2.163.2. М5 (Е5І) т/е 698,1(Ма2Н) 2. 2.163.4 2,6-Ангідро-8-(2-4Ц2-(3-Ц4-(6-18-(1,3-бензотіазол-2-іл)укарбамоїл|-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-ілу-2-карбоксипіридин-3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1-іл|метил)-5,7- диметилтрицикло!|3.3.1.13,7|декан-1-іл)окси|етил)-(2-сульфоетил)карбамоїл|окси)метил)-5- ((795,825)-74-((2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)уацетил|-82-метил-7 7,80,83-триоксо-79- (пропан-2-іл)-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71-тетракозаокса- 74,78,81-триазатриоктаконтан-83-іл|іаміно)феніл)|-7,8-дидезокси-1 -гліцеро-Ї -гуло-октонова кислота
Указану в заголовку сполуку одержували із застосуванням процедури в прикладі 2.147.4 шляхом заміни речовини із прикладу 2.147.3 і речовини із прикладу 2.141.4 речовиною з прикладу 2.163.3 і речовиною з прикладу 2.154.1, відповідно. "НН ЯМР (400 МГЦ, диметилсульфоксид-ав) б 9,86 (5, 1Н), 8,23 - 7,87 (т, ЗН), 7,76 (а, 1), 7,58 (да, 1), 7,53 - 7,25 (т, 7Н), 7,19 (а, 1Н), 7,05 (а, 2Н), 6,92 (а, 1Н), 5,07 - 4,85 (т, АН), 4,49 - 4,30 (т, ЗН), 4,20 (а, 1Н), 3,52 (а, 8Н), 3,46 - 3,26 (т, 7Н), 3,20 (5, 4Н), 3,15 - 2,82 (т, АН), 2,61 (5, ЗН), 2,38 (ад, 1Н), 2,11 - 1,82 (т, 5Н), 1,53 (5, 1Н), 1,39 - 0,66 (т, 24Н). М5 (Е5БІ) т/е 1326,9 (М-2Н)»У. 2.164 Синтез 6-(8-(1,3-бензотіазол-2-іл)укарбамоїл|-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл)-3-11-((3-Т2-
К(КА-(25,55)-2-І3-(карбамоїламіно)пропіл|-10-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)ацетил)-4,7- 60 діоксо-5-(пропан-2-іл)-15-сульфо-13-окса-3,6,10-триазапентадеканан-1-
оїл|аміно)феніл)метокси|карбоніл)-(2-сульфоетил)аміно|етокси)-5,7- диметилтрицикло!3.3.1.13,7|декан-1-іл)уметил|-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)іпіридин-2-карбонової кислоти (синтону 2Х)
Суміш 1-гідроксипіролідин-2,5-діону (2,74 мг), 1-етил-3-ІЗ-(диметиламіно)пропілікарбодіїміду гідрохлориду (4,26 мг) і речовини із прикладу 2.160.5 (9,01 мг) в М,М-диметилформаміді (0,3 мл) перемішували за кімнатної температури протягом ночі. Суміш охолоджували на крижаній бані.
Додавали гідрат 1-гідроксибензотриазолу (3,65 мг) та суміш речовини із прикладу 2.112.2 (20 мг) ії М,М-діізопропілетиламіну (22,19 мкл). Одержану суміш перемішували при 0"С протягом хвилин та очищували за допомогою НРІ С з оберненою фазою, з елююванням від 3095 до 10 5595 ацетонітрилу в 0,196 водному розчині трифтороцтової кислоти, з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-ав) б 9,95 (а, 1Н), 8,18 - 7,89 (т, ЗН), 7,76 (а, 1), 7,57 (а, ЗН), 7,52 - 7,21 (т, 8Н), 7,04 (а, 2Н), 6,92 (й, 1Н), 4,94 (а, 4Н), 4,37 (а, 2Н), 4,19 (9, 1), 3,85 (ї, 2Н), 3,77 (а, 2Н), 3,22 (а, 2Н), 2,96 (її, 4Н), 2,73 (а, 2Н), 2,66 - 2,55 (т, 2Н), 2,36 (5, 1Н), 2,06 (5, ЗН), 1,91 (5, 1Н), 1,61 (а, ЗН), 1,47 - 0,86 (т, 11), 0,80 (ада, 12Н). М5 (ЕБІ) т/е 1617,5 (М-Н). 2.165 Даний параграф був навмисне залишений незаповненим. 2.166 Синтез 6-(8-(бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл)-3-(1-((3-(2- ((2-(2-(25,38,48,55,65)-6-карбокси-3,4,5-тригідрокситетрагідро-2Н-піран-2-іл)етил)-4-((5)-2- ((5)-2-(2-(35,55)-3-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)-2-оксо-5-((2- сульфоетокси)метил)піролідин-1-іл)ацетамідо)-3- метилбутанамідо)пропанамідо)бензил)окси)карбоніл)((5)-3,4-дигідроксибутил)аміно)етокси)-5,7- диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)піколінової кислоти (синтону ААА)
Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 2.167.1 речовиною із прикладу 2.119.16 в прикладі 2.119.17. "Н ЯМР (500 МГц, диметилсульфоксид-адв) б ррт 9,86 (бга, 1Н), 8,17 (рг а, 1), 8,04 (т, 2Н), 7,78 (й, 1Н), 7,61 (а, 1Н), 7,51 (рг а, 1), 7,49- 7,39 (т, 4Н), 7,36 (т, 2Н), 7,29 (5, 1Н), 7,21 (9, 1Н), 7,07 (5, 2Н), 6,95 (й, 1Н), 5,00 (5, 2Н), 4,96 (5, 2Н), 4,64 (І, 1Н), 4,36 (т, 1Н), 4,19 (т, 1Н), 4,16 (а, 1), 4,01 (а, 1Н), 3,88 (рії, 2Н), 3,82 (Бі т,
ЗН), 3,75 (р т, 1Н), 3,64 (І, 2Н), 3,54 (ай, 2Н), 3,47 (т, 4Н), 3,43 (рг т, 4Н), 3,23 (рг т, 5Н), 3,13 (ї, 1Н), 3,10 (рег т, 1Н), 3,01 (ре т, 2Н), 2,93 (ї, 1Н), 2,83-2,68 (т, ЗН), 2,37 (т, 1Н), 2,08 (5, ЗН), 1,99
Зо (рг т, 2Н), 1,85 (т, 1Н), 1,55 (рг т, 1Н), 1,37 (рг т, 1Н), 1,28 (ре т, 6Н), 1,10 (рг т, 7Н), 0,93 (Бг т, 1Н), 0,88-0,69 (т, 12Н). М5 (Е5І) т/е 1713,6 (М-НУ.
Альтернативний синтез 6-(8-(бензо|д4|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл)-3- (1-((3-(2-(((2-(2-(25,38,48,55,65)-6-карбокси-3,4,5-тригідрокситетрагідро-2Н-піран-2-іл)етил)-4- ((5)-2-((5)-2-(2-(35,55)-3-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)-2-оксо-5-((2- сульфоетокси)метил)піролідин-1-іл)ацетамідо)-3- метилбутанамідо)пропанамідо)бензил)окси)карбоніл)((5)-3,4-дигідроксибутил)аміно)етокси)-5,7- диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)піколінової кислоти (синтону ААА) 2.166.1 3-(1-((3-(2-(((4-((5)-2-((5)-2-Аміно-3-метилбутанамідо)пропанамідо)-2-(2- (25,38,48,55,65)-6-карбокси-3,4,5-тригідрокситетрагідро-2Н-піран-2- іл)/етил)бензил)окси)карбоніл)((5)-3,4-дигідроксибутил)аміно)етокси)-5,7-диметиладамантан- 1- ілуметил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)-6-(8-(бензо|4|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін- 2(1Н)-іл)піколінова кислота
У перемішуваний розчин речовини із прикладу 1.85 (0,065 г), 1-гідроксибензотриазолу (0,013 г) ї М,М-діїзопропілетиламіну (0,06 мл) в М,М-диметилформаміді (0,5 мл) додавали речовину із прикладу 2.123.19 (0,085 г) і суміш перемішували за кімнатної температури протягом 2 годин. Реакційну суміш концентрували за зниженого тиску. Залишок розчиняли в суміші розчинників із метанолу (0,5 мл) та тетрагідрофурану (0,5 мл) й додавали моногідрат гідроксиду літію (30 мг). Реакційну суміш перемішували протягом 1 години за температури навколишнього середовища, після чого реакційну суміш концентрували за зниженого тиску.
Залишок розчиняли в метанолі/воді (1:11, 1 мл), що містила 0,1 мл трифтороцтової кислоти.
Зразок очищували за допомогою НРІ С з оберненою фазою (колонка РпепотепехФф І ипа? С18 250 х 50 мм, 100 мл/хв.), з елююванням від 20 до 10095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,0190о трифтороцтової кислоти, протягом 40 хвилин. Фракції, що містять продукт, ліофілізували з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕБІ) маса/заряд 1357,5 (МАН). 2.166.2. 6-(8-(Бензо|д4|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл)-3-(1-((3-(2-(((2-(2- (25,38,4Н8,55,65)-6-карбокси-3,4,5-тригідрокситетрагідро-2Н-піран-2-іл)етил)-4-((5)-2-((5)-2-(2- ((35,55)-3-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)-2-оксо-5-(2-сульфоетокси)метил)піролідин-1- іллуацетамідо)-3-метилбутанамідо)пропанамідо)бензил)окси)карбоніл)((5)-3,4- дигідроксибутил)аміно)етокси)-5,7-диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1Н-піразол-4- бо іл)піколінова кислота (синтон ААА)
У розчин речовини із прикладу 2.119.15 (16 мг) в М,М-диметилформаміді (200 мкл) додавали 1-Ібіс(диметиламіно)метилені|-ї Н-1,2,3-триазоло|4,5-5|Іпіридиній-3-оксиду гексафторфосфат (16 мг, НАТО) і М,М-діїзопропілетиламін (17 мкл). Реакційну суміш перемішували протягом хвилин і додавали розчин речовини із прикладу 2.166.1 (48 мг) і М,М-діізопропілетиламін 5 (20 мкл) в М,М-диметилформаміді (200 мкл). Реакційну суміш перемішували протягом однієї години та розбавляли сумішшю М,М-диметилформамід/вода (1/1, 1,5 мл). Зразок очищували за допомогою НРІС з оберненою фазою (колонка РПпепотепехб ІпаФ о С18 250 х 50 мм, 100 мл/хв.), з елююванням від 20 до 7095 ацетонітрилу у воді, що містила 0,0195 трифтороцтової кислоти, протягом 40 хвилин. Фракції, що містять продукт, ліофілізували з одержанням указаної в заголовку сполуки. "Н ЯМР (500 МГц, диметилсульфоксид-ав) б рріт 9,86 (Бг а, 1Н), 8,17 (Брг а, 1Н), 8,04 (т, 2Н), 7,78 (а, 1Н), 7,61 (а, 1Н), 7,51 (Бк а, 1Н), 7,49-7,39 (т, 4Н), 7,36 (т, 2Н), 7,29 (5, 1Н), 7,21 (а, 1Н), 7,07 (5, 2Н), 6,95 (а, 1Н), 5,00 (5, 2Н), 4,96 (5, 2Н), 4,64 (1, 1Н), 4,36 (т, 1Н), 4,19 (т, 1Н), 4,16 (9, 1Н), 4,01 (а, 1Н), 3,88 (Бгї, 2Н), 3,82 (Брг т, ЗН), 3,75 (Бі т, 1Н), 3,64 (І, 2Н), 3,54 (9, 2Н), 3,47 (т, АН), 3,43 (рі т, 4Н), 3,23 (біг т, 5Н), 3,13 (І, 1Н), 3,10 (Б т, 1Н), 5,01 (бг т, 2Н), 15.2,93 (І, 1Н), 2,83-2,68 (т, ЗН), 2,37 (т, 1Н), 2,08 (5, ЗН), 1,99 (рг т, 2Н), 1,85 (т, 1Н), 1,55 (бі т, 1Н), 1,37 (р т, 1Н), 1,28 (рг т, 6Н), 1,10 (бг т, 7Н), 0,93 (рг т, 1Н), 0,88 - 0,69 (т, 12Н). М5 (ЕБІ) маса/заряд 1713,6 (М-Н)-. 2.167 Синтез 2,6-ангідро-8-(2-((12-((3-Ц4-(6-(8-К1,3-бензотіазол-2-іл)укарбамоїл|-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл)-2-карбоксипіридин-3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1-іл|метил)-5,7- диметилтрицикло!Ї3.3.1.13,7|декан-1-іл)окси|етил)((35)-3,4- дигідроксибутиліІікарбамоїл)окси|метил)-5-1(25)-2-((25)-2-(2-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1- ілуацетамідо|-3-метилбутаноїл)аміно)пропаноїл|аміно)феніл)-7,8-дидезокси-і -гліцеро-1і -гуло- октонової кислоти (синтону ААЮ) 2.416741 3-(1-((3-(2-(((4-((5)-2-((5)-2-Аміно-3-метилбутанамідо)пропанамідо)-2-(2- (25,38,48,55,65)-6-карбокси-3,4,5-тригідрокситетрагідро-2Н-піран-2- іл)етил)бензил)окси)карбоніл)((5)-3,4-дигідроксибутил)аміно)етокси)-5,7-диметиладамантан-1- ілуметил)-5-метил-1Н-піразол-4-іл)-6-(8-(бензо|4|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін- 2(1Н)-іл)піколінова кислота
Речовину із прикладу 2.167.1 одержували шляхом заміни речовини із прикладу 2.123.19
Коо) (9Н-флуорен-9-іл)уметил-((5)-3-метил-1-(((5)-1-((4-(((4- нітрофенокси)карбоніл)окси)метил)феніл)аміно)-1-оксо-5-уреїдопентан-2-іл)аміно)-1-оксобутан- 2-ілукарбаматом і шляхом заміни речовини із прикладу 1.85 речовиною із прикладу 1.2.9 в прикладі 2.49.1. М5 (Е5І) т/е 1355,5 (М-Н). 2.167.2 2,6-Ангідро-8-(2-1((2-((3-Ц4-(6-18-(1,3-бензотіазол-2-ілукарбамоїл|-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-ілу-2-карбоксипіридин-3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1-іл|метил)-5,7- диметилтрицикло!|3.3.1.13,7|декан-1-іл)окси|)етилу(35)-3,4- дигідроксибутилікарбамоїл)окси|метил)-5-1(25)-2-((25)-2-(2-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1- іллуацетамідо|-3-метилбутаноїл)аміно)пропаноїл|іаміно)феніл)-7,8-дидезокси-і -гліцеро-Ї -гуло- октонова кислота
Речовину із прикладу 2.167.2 одержували шляхом заміни речовини із прикладу 2.167.1 речовиною з прикладу 2.49.1 у прикладі 2.54. "Н ЯМР (501 МГц, диметилсульфоксид-ав) б 9,90 (9, 1Н), 8,25 (т, 2Н), 8,01 (а, 1Н), 7,77 (9, 1Н), 7,59 (а, 1Н), 7,51 - 7,40 (т, 4Н), 7,40 - 7,31 (т,
ЗН), 7,26 (5, 1Н), 7,20 (а, 1Н), 7,05 (5, 2Н), 6,93 (а, 1Н), 4,96 (а, АН), 4,36 (І, 1Н), 4,22 - 4,06 (т,
ЗН), 3,85 (І, 2Н), 3,26 - 3,17 (т, 4Н), 3,14 - 2,88 (т, 5Н), 2,78 - 2,55 (т, 2Н), 2,10 - 1,88 (т, 5Н), 1,69 - 1,49 (т, 2Н), 1,39 - 0,73 (т, 28Н). М5 (ЕІ) т/е 1492,5 (М-Н). 2.168 Синтез 2-1(2-(3-14-(6-8-К1,3-бензотіазол-2-іл)карбамоїл|-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)- іл/у-г-карбоксипіридин-3-іл)-5-метил-1Н-піразол-1-іл|метил)-5,7- диметилтрицикло!3.3.1.13,7|декан-1-іл)окси|етил)(35)-3,4- дигідроксибутилІкарбамоїл)окси|метилі-5-14-(2-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1- іл)яацетамідо|бутилІіфеніл-бета-О-глюкопіранозидуронової кислоти (синтону ААЕ) 2.168.1 3-(1-((3-(2-(((4-(4-Амінобутил)-2-((25,38,45,55,65)-6-карбокси-3,4,5- тригідрокситетрагідро-2Н-піран-2-іл)окси)бензил)окси)карбоніл)((5)-3,4- дигідроксибутил)аміно)етокси)-5,7-диметиладамантан-1-іл)метил)-5-метил-1 Н-піразол-4-іл)-6-(8- (бензо|д|гіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1Н)-іл)піколінова кислота
Речовину із прикладу 2.168.1 одержували шляхом заміни речовини із прикладу 2.124.5 (9Н- флуорен-9-іл)уметил-((5)-3-метил-1-(((5)-1-((4-(((4- нітрофенокси)карбоніл)окси)метил)феніл)аміно)-1-оксо-5-уреїдопентан-2-іл)аміно)-1-оксобутан- 2-ілукарбаматом і шляхом заміни речовини із прикладу 1.85 речовиною із прикладу 1.2.9 в прикладі 2.49.1. М5 (Е5І) т/е 1229,5 (М-НУ. (510) 2.168.2.. 2-Ц(2-((3-Ц4-(6-18-(1,3-Бензотіазол-2-іл)укарбамоїлі|-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1Н)-іл)-2-
карбоксипіридин-3-іл)-о-метил-1 Н-піразол-1-іл|метил)-5,7-диметилтрицикло|3.3.1.13,7|декан-1- іл)уокси|)етил/(35)-3,4-дигідроксибутилікарбамоїл)окси|метил)-5-14-(2-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н- пірол-1-іля'ацетамідо|Ібутиліуфеніл-бета-О-глюкопіранозидуронова кислота
Речовину із прикладу 2.168.2 одержували шляхом заміни речовини із прикладу 2.168.1 речовиною з прикладу 2.49.1 у прикладі 2.54. "Н ЯМР (501 МГц, диметилсульфоксид-ав) б 8,07 (5, 1Н), 8,01 (а, 1), 7,77 (а тн), 7,63 - 7,57 (т, 1Н), 7,51 - 7,39 (т, ЗН), 7,38 - 7,31 (т, 2Н), 7,26 (5, 1Н), 7,16 (9, 1Н), 7,05 (5, 2Н), 6,93 (9, 2Н), 6,84 - 6,80 (т, 1Н), 5,14 - 4,98 (т, ЗН), 4,94 (5, 2Н), 3,79 (а, 2Н), 3,48 - 3,19 (т, ТОН), 3,08 - 2,96 (т, АН), 2,52 (5, АН), 2,07 (5, 2Н), 1,77 - 0,72 (т, 14Н). М5 (Е5І) т/е 1366,5 (М-Н). 2.169 Синтез 6-(8-(1,3-бензотіазол-2-іл)укарбамоїл|-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл)-3-11-((3-Т2-
К(КА-(25)-5-(карбамоїламіно)-2-1(25)-2-116-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1- іл)угексаноїл|аміно)-З-метилбутаноїліаміно)пентаноїліаміно)феніл)метокси|карбоніл)-(2- сульфоетил)аміно|ацетамідо)-5, 7-диметилтрицикло!Ї3.3.1.197|декан-1-іл)уметил|-5-метил-1 Н- піразол-4-іліпіридин-2-карбонової кислоти (синтону АВС)
Указану в заголовку сполуку одержували, як описано в прикладі 2.54, шляхом заміни речовини із прикладу 02.49.11 речовиною з прикладу 11.89.12. "НН ЯМР (501 МГу, диметилсульфоксид-авє) б ррт 9,95 (й, 1Н), 8,10 - 7,96 (т, 1Н), 7,75 (І, 2Н), 7,57 (аа, ЗН), 7,51 - 7,18 (т, 8Н), 6,95 (а, ЗН), 6,92 (5, ОН), 5,03 - 4,86 (т, 4Н), 4,36 (9, 1Н), 3,85 (ї, 2Н), 3,78 - 3,67 (т,
АН), 3,42 (5, 2Н), 3,33 (І, 2Н), 3,04 - 2,86 (т, 4Н), 2,63 (а, 2Н), 2,13 (аа, 1Н), 2,07 (5, ЗН), 1,98 - 1,87 (т, ОН), 1,71 -1,23 (т, ТОН), 1,24 - 0,85 (т, 6Н), 0,78 (І, 11Н). М5 (ЕБІ) т/е 1463,5 (М-Н). 2.170 Синтез ІМ-І6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-І -валіл-М-14-(ЦТ2-(13-((4-16-
ІВ-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-З-іл)-5- метил-1Н-піразол-1-іл)метил/|-5, 7-диметилтрицикло!|3.3.1.13,7|дец-1-илісульфаніл)етил|-(2- сульфоетил)карбамоїліокси)метилі|феніл)-М5о-карбамоїл-і -орнітинаміду (синтону АВІ)
Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 11.90.11 речовиною із прикладу 1.2.9 в прикладі 2.1. "Н ЯМР (500 МГц, диметилсульфоксид-йв) б ррт 10,0 (5, 1Н), 8,08 (Бі 5, 1Н), 8,03 (а, 1Н), 7,81 (Бі 5, 1Н) 7,78 (а, 1Н), 7,60 (т, ЗН) 7,52 (ї, 1Н), 7,47 (І, 1), 7,43 (9, 1Н), 7,37 (а, 1Н), 7,34 (а, 1Н) 7,32 (5, 1Н), 7,28 (9, 2Н), 6,99 (5, 1Н), 6,96 (а, 2Н), 5,00 (5, 2Н), 4,96 (5, 2Н), 4,39 (т, 1Н), 4,18 (т, 2Н), 3,88 (т, 2Н), 3,82 (5, 1Н), 3,77 (5, 1Н), 3,46 (Бі
Коо) т, 2Н), 3,58 (І, 2Н), 3,29 (м Ббг т, 2Н), 3,01 (ріг т, ЗН), 2,95 (Бг т, 1Н), 2,47 (т, 2Н), 2,61 (рг т, 2Н) 2.16 (т, 1Н), 2,10 (т, 4Н), 1,96 (рі т, 1Н), 1,69 (м бг т, 1Н), 1,59 (м Бі т, 1Н), 1,53-1,40 (т, 7Н), 1,39-1,22 (т, 5Н), 1,17 (т, ЗН), 1,13-0,88 (т, 6Н), 0,87-0,77 (т, 9Н), 0,75 (5, ЗН). М5 (ЕБІ) т/е 1466,5 (М-НУ. 2.171 Синтез М-(6-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)гексаноїл|-Ї -валіл-М-(4-Ц1(3-13-((4-16-
ІВ-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроіїзохінолін-2(1Н)-іл|-2-карбоксипіридин-З-іл)-5- метил-1Н-піразол-1-іл)метил/|-5, 7-диметилтрициклої|3.3.1.13,7|дец-1-илІіпропіл)-(2- сульфоетил)карбамоїл|оксиїметил)феніл|-М5-карбамоїл-і! -орнітинаміду (синтону АВМ)
Вказану в заголовку сполуку одержували, як описано в прикладі 2.1, шляхом заміни речовини із прикладу 1.2.9 речовиною із прикладу 11.91.13. "Н ЯМР (501 МГц, ОМ5О-дв) б ррт 12,83 (5, 1Н), 9,96 (5, 1Н), 8,03 (1, 2Н), 7,77 (а, 2Н), 7,64 - 7,52 (т, ЗН), 7,45 (даа, ЗН), 7,34 (9, 2Н), 7,29 - 7,21 (т, ЗН), 7,03 - 6,91 (т, ЗН), 4,95 (9, 4Н), 4,37 (д, 1Н), 4,17 (5, 1Н), 3,86 (ї, 2Н), 3,45 - 3,29 (т, 4Н), 3,10 (1, 2Н), 2,95 (4, 4Н), 2,61 (9, 2Н), 2,15 (ід, 2Н), 2,07 (5, ЗН), 2,00 - 1,89 (т, 1Н), 1,74 - 1,24 (т, 10Н), 1,25 - 0,87 (т, 1ЗН), 0,88 - 0,70 (т, 12Н). М5 (ЕБ5І) т/е 14502 (МАН. 2.172 Синтез 2-((Ц2-(3-((4-16-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4-дигідроізохінолін-2(1 Н)- іл|-2-карбоксипіридин-3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)метилі|-5,7-диметилтрицикло!|3.3.1.13,7 |дец- 1-ил)окси)етил|(35)-3,4-дигідроксибутиліІкарбамоїліокси)метил|д|-5-14-((35,55)-3-(2,5-діоксо-2,5- дигідро-1Н-пірол-1-іл)-2-оксо-5-(2-сульфоетокси)метил|піролідин-1- іліацетил)аміно|бутилІіфеніл-бета-О-глюкопіранозидуронової кислоти (синтону ААЕ)
Указану в заголовку сполуку одержували, як описано в прикладі 2.119.17, шляхом заміни речовини із прикладу 2.168.1 речовиною з прикладу 2.119.16. "Н ЯМР (400 МГЦ, диметилсульфоксид-свє) б ррт 8,03 (9, 1Н), 7,84 (р, 1), 7,78 (а, 1), 7,61 (а, 1Н), 7,50 (Бг а, 1Н), 7,45 (ад, 1Н), 7,43 (9, 1Н), 7,36 (т, 2Н), 7,29 (5, 1Н), 7,17 (Біг т, 1Н), 7,06 (5, 2Н), 6,95 (т, 2Н), 6,85 (9, 1Н), 5,08 (5, 2Н), 5,02 (й, 1Н), 4,96 (5, 2Н), 4,70 (І, 1Н), 4,06 (а, 2Н), 3,88 (т, 4Н), 3,81 (т, -2Н), 3,73 (Бі т, 1Н), 3,62 (т, 2Н), 3,47 (Бг т, 4Н), 3,40 (т, АН), 3,95 (т, 2Н), 3,29 (т, АН), 3,07 (т, 2Н), 3,00 (ї, 2Н), 2,73 (т, 2Н), 2,54 (т, 2Н), 2,36 (рг т, 1Н), 2,09 (5, ЗН), 1,83 (т, 1Н), 1,71 (Біг т, 1Н), 1,55 (бе т, 2Н), 1,40 (ріг т, 5Н), 1,24 (Бі т, 4Н), 1,10 (ріг т, 5Н), 0,94 (ре т, 1Н), 0,83, 0,81 (оба 5, всего 6Н). М5 (ЕБІ) т/е 1587,5 (М-Н). 24173 Синтез 2,6-ангідро-8-(2-4(2-(3-Ц4-(6-18-К1,3-бензотіазол-2-іл)карбамоїл|-3,4- 60 дигідроізохінолін-2(1Н)-іл)-2-карбоксипіридин-3-іл)-5-метил-1Н-піразол-1-іл|метил)-5,7-
диметилтрицикло!3.3.1.13,7|декан-1-іл)окси|етил)-(2-сульфоетил)карбамоїл|окси) метил) -5-4(М- ((3А,55)-3-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)-2-оксо-5-(2-сульфоетокси)метил|іпіролідин- 1- іліацетил)-І -валіл-І -аланіл|Іаміно)феніл|-7,8-дидезокси-і -гліцеро-Ї -гуло-октонової кислоти (синтону АВО) 2.173.1 (ЗА,68,7а5)-6-Азидо-3-фенілтетрагідропіроло|(1 ,2-с|оксазол-5(ЗН)-он
Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 2.119.3 речовиною із прикладу 2.119.2 в прикладі 2.119.4. М5 (ОСІ) т/е 262,0 (М.-АМНа4)». 2.173.2 (38,6В,7а5)-6-Аміно-3-фенілтетрагідропіроло|1,2-с|оксазол-5(ЗН)-он
Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 2.173.1 речовиною із прикладу 2.119.4 в прикладі 2.119.5. М5 (ОСІ) т/е 219,0 (М.НН)». 2173.3 (38,68, 7а5)-6-(Дибензиламіно)-3-фенілтетрагідропіроло|1,2-с|оксазол-5(ЗН)-он
Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 2.173.2 речовиною із прикладу 2.119.5 в прикладі 2.119.6. М5 (ОСІ) т/е 399,1 (М.НН)». 2.173.4 (38,55)-3-(Дибензиламіно)-5-(гідроксиметил)піролідин-2-он
Указану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 2.173.3 речовиною з прикладу 2.119.16 у прикладі 2.119.7, за винятком того, що реакційну суміш нагрівали до 65"С протягом одного дня, а не 6 днів. МО (ОСІ) т/е 311,1 (М.--Н)к. 2.173.5 (38,55)-5-((трет-Бутилдиметилсиліл)окси)метил)-3-(дибензиламіно)піролідин-2-он
Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 2.173.4 речовиною із прикладу 2.119.7 в прикладі 2.119.8. Вказану в заголовку сполуку переносили на наступну стадію без очищення. М5 (ОСІ) т/е 425,2 (М.Н). 2.173.6 Трет-бутил-2-((38,55)-5-((трет-бутилдиметилсиліл)окси)метил)-3-(дибензиламіно)-2- оксопіролідин-1-ілілацетат
Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 2.173.5 речовиною із прикладу 2.119.8 в прикладі 2.119.9. Вказану в заголовку сполуку переносили на наступну стадію без очищення. М5 (ОСІ) т/е 539,3 (М.-Н)». 2.173.7 Трет-бутил-2-((38,55)-3-(дибензиламіно)-5-(гідроксиметил)-2-оксопіролідин-1- іл)уацетат
Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 2.173.6
Зо речовиною із прикладу 2.119.9 в прикладі 2.119.10. М5 (ОСІ) т/е 425,2 (М.Н). 2.173.6 Трет-бутил-2-(38,55)-5-((2-(4-(трет-бутилдифенілсиліл)окси)-2,2- диметилбутокси)сульфоніл)етокси)метил)-3-(дибензиламіно)-2-оксопіролідин-1-іл)ацетат
Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 2.173.7 речовиною із прикладу 2.119.10 в прикладі 2.119.11. 2.173.9 Трет-бутил-(5)-2-(2-(2-(4-(трет-бутилдифенілсиліл)окси)-2,2- диметилбутокси)сульфоніл)етокси)метил)-5-оксопіролідин-1-іл)луацетат
Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 2.173.8 речовиною із прикладу 2.119.11 в прикладі 2.119.12. М5 (ЕБІ) т/е 691,1 (Ме-Н)». 2.417310 4-((38,55)-1-(2-(трет-Бутокси)-2-оксоетил)-5-(2-((4-(трет-бутилдифенілсиліл)окси)- 2,2-диметилбутокси)сульфоніл)етокси)метил)-2-оксопіролідин-3-іл)ламіно)-4-оксобут-2-енова кислота
Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 2.173.9 речовиною із прикладу 2.119.12 в прикладі 2.119.13. М5 (ЕБІ) т/е 789,0 (М.Н). 2.173.11 Трет-бутил-2-(38,55)-5-((2-(4-(трет-бутилдифенілсиліл)окси)-2,2- диметилбутокси)сульфоніл)етокси)метил)-3-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)-2- оксопіролідин-1-ілілацетат
Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 2173.10 речовиною із прикладу 2.119.13 в прикладі 2.119.14. 2.417312 2-(38,55)-3-(2,5-Діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)-2-оксо-5-((2- сульфоетокси)метил)піролідин-1-іл)уоцтова кислота
Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 2.173.11 речовиною із прикладу 2.119.14 в прикладі 2.119.15. М5 (ЕІ) т/е 377,0 (М.Н). 2.417313 2,6-Ангідро-8-(2-4Ц2-(3-Ц4-(6-18-(1,3-бензотіазол-2-іл)укарбамоїл|-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-ілу-2-карбоксипіридин-3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1-іл|метил)-5,7- диметилтрицикло!|3.3.1.13,7|декан-1-іл)окси|етил)-(2-сульфоетил)карбамоїл|окси)метил)-5-((М- ((3А,55)-3-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)-2-оксо-5-(2-сульфоетокси)метил|піролідин-1- іліацетил)-І -валіл-Ї -аланіл|Іаміно)феніл)|-7,8-дидезокси-І -гліцеро-Ї -гуло-октонова кислота
Указану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 2.123.20 речовиною з прикладу 2.119.16 і речовини із прикладу 2.173.12 речовиною з прикладу 2.119.15 60 у прикладі 2.119.17. "Н ЯМР (400 МГц, диметилсульфоксид-дв) б ррт 9,94 (й, 1Н), 8,28 (Брг а,
1Н), 8,01 (а, 2Н), 7,77 (9, 1Н), 7,59 (й, 1), 7,53 (й, 1Н), 7,43 (т, 4Н), 7,34 (т, ЗН), 7,19 (0, 1Н), 7,06 (5, 2Н), 6,96 (0, 1Н), 4,99 (т, 2Н), 4,95 (5, 2Н), 4,78 (Ї, 1Н), 4,36 (Ї, 1Н), 4,19 (ри т, 1Н), 4,16 (ад, тн), 3,98 (а, 1Н), 3,687 (ри, 2Н), 3,81 (рег а, 2Н), 3,73 (рит, 1Н), 3,63 (Її, 2Н), 3,53 (т, 2Н), 3,44 (т, 4Н), 3,91 (ї, 2Н), 3,21 (ріг т, 2Н), 3,17 (т, 2Н), 3,00 (т, 2Н), 2,92 (рг т, 1Н), 2,75 (т, ЗН), 2,65 (бг т, ЗН), 2,35 (біг т, 1Н), 2,16 (т, 1Н), 2,07 (5, ЗН), 1,98 (рг т, 2Н), 1,55 (р т, 1Н), 1,34 (ріг т, 1Н), 1,26 (рг т, 6Н), 1,09 (рг т, 7Н), 0,93 (Бг т, 1Н), 0,87, 0,83, 0,79 (все д, всего 12Н). М5 (Е5І) т/е 1733,3 (М-Н). 2.174 Синтез 2,6-ангідро-8--2-((2-(3-14-(6-18-(1,3-бензотіазол-2-іл)укарбамоїл|-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-ілу-2-карбоксипіридин-3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1-іл|метил)-5,7- диметилтрицикло!|3.3.1.13,7|декан-1-іл)окси|етил)-(2-сульфоетил)карбамоїл|окси)метил)-5-|(М- ((38,55)-3-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)-2-оксо-5-(41-оксо- 2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38-тридекаокса-42-азатритетраконтан-43-іл)піролідин-1- іл|Іацетил)-І -валіл-ІЇ -аланіл)аміно|феніл)-7,8-дидезокси-1І -гліцеро-І -гуло-октонової кислоти (синтону АВМ) 2.174.1 Трет-бутил-(ЗА,55)-5-Цбіс(трет-бутоксикарбоніл)аміно|метил)-3-(дибензиламіно)-2- оксопіролідин-1-іліацетат
У холодний (0"С) розчин речовини із прикладу 2.173.7 (1,6 г) у дихлорметані (15 мл) додавали краплями триетиламін (0,70 мл) і метансульфонілхлорид (0,39 мл). Крижану баню видаляли та перемішували реакційну суміш за кімнатної температури протягом двох годин.
Реакційну суміш гасили шляхом додавання насиченого водного розчину бікарбонату натрію.
Шари розділяли й органічний шар промивали сольовим розчином. Об'єднані водні шари знову екстрагували дихлорметаном. Об'єднані органічні шари висушували за допомогою безводного сульфату натрію, фільтрували та концентрували за зниженого тиску з одержанням проміжної сполуки, яка являє собою мезилат (1,9г). Залишок розчиняли в ацетонітрилі (15 мл) та додавали ди-трет-бутилімінодикарбоксилат (1,0 г) і карбонат цезію (2,4 г). Реакційну суміш нагрівали зі зворотним холодильником в атмосфері азоту протягом одного дня. Реакційну суміш охолоджували й гасили шляхом додавання води та діетилового етеру. Шари розділяли й органічний промивали сольовим розчином. Об'єднані водні шари знову екстрагували діетиловим етером. Об'єднані органічні шари висушували за допомогою безводного сульфату
Зо натрію, фільтрували та концентрували за зниженого тиску. Залишок очищували за допомогою хроматографії на силікагелі, з елююванням 2095 етилацетатом в гептанах, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ОСІ) т/е 624,3 (М.Н). 2.174.2 Трет-бутил-(ЗА,55)-3-аміно-5-Цбіс(трет-бутоксикарбоніл)аміно|метил)-2- оксопіролідин-1-іліацетат
У розчин речовини із прикладу 2.174.1 (1,0 г) в етилацетаті (б мл) та метанолі (18 мл) додавали гідроксид паладію на вугіллі (100 мг, 2095 за вагою). Реакційну суміш перемішували за кімнатної температури в атмосфері балону водню протягом одного дня. Реакційну суміш фільтрували через діатомову землю, з елююванням етилацетатом. Фільтрат концентрували за зниженого тиску, розчиняли у дихлорметані (10 мл) й фільтрували через фільтр канюлі шприца
ТеПоп, 40 мікронів. Фільтрат концентрували за зниженого тиску з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ОСІ) т/е 444,1 (М.Н). 2.174.3 А-((38,55)-5-ПТбіс(трет-Бутоксикарбоніл)аміно|метил)-1-(2-трет-бутокси-2-оксоетил)- 2-оксопіролідин-3-іл|аміно)-4-оксобут-2-енова кислота
Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 2.174.2 речовиною із прикладу 2.119.12 в прикладі 2.119.13. М5 (Е5І) т/е 540,2 (М-Н). 2.174.4 Трет-бутил-(З3А,55)-5-ПЦбіс(трет-бутоксикарбоніл)аміно|метил)-3-(2,5-діоксо-2,5- дигідро-1Н-пірол-1-іл)-2-оксопіролідин-1-ілІацетат
Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 2.174.3 речовиною із прикладу 2.119.13 в прикладі 2.119.14. М5 (ОСІ) т/е 541,1 (М-АМНа)». 2.174.5. 2-(38,55)-5--(Амінометил)-3-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)-2-оксопіролідин-1- іл)уоцтова кислота
У розчин речовини із прикладу 2.174.4 (284 мг) у дихлорметані (10 мл) додавали трифтороцтову кислоту (5 мл). Реакційну суміш перемішували за кімнатної температури протягом двохгодин і оконцентрували за зниженого тиску. Залишок розчиняли у воді/ацетонітрилі 7/3 (5 мл), заморожували та ліофілізували з одержанням указаної в заголовку сполуки, яку застосовували на наступній стадії без додаткового очищення. МО (ЕБ5І) т/е 266,1 (М-НУ. 2.174.6 2-(38,55)-3-(2,5-Діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)-2-оксо-5-(41-оксо- 2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38-тридекаокса-42-азатритетраконтан-43-іл)піролідин-1- бо іл)уоцтова кислота
У розчин 2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38-тридекаоксагентетраконтан-41-ової кислоти (160 мг) в М,М-диметилформаміді (1,0 мл) додавали О-(7-азабензотриазол-1-іл)-М,М,М'М'- тетраметилуронію гексафторфосфат (85 мг) і М,М-діїзопропілетиламін (130 мкл). Реакційну суміш перемішували протягом трьох хвилин за кімнатної температури і додавали розчин з прикладу 2.174.5 (70 мг) і М.,М-діїзопропілетиламін (130Ї мкл) у М,М-диметилформаміді (1,0 мл).
Реакційну суміш перемішували за кімнатної температури протягом однієї години та розбавляли
М,М-диметилформамідом/водою 1/1 (3,5 мл). Розчин очищували за допомогою НРІС з оберненою фазою на системі сіїбхоп (колонка С18), з елююванням від 20 до 7095 ацетонітрилу в 0,195 водному розчині ТЕА, з одержанням указаної в заголовку сполуки. М5 (ЕБІ) т/е 880,4 (М- ну. 2.174.7 2,6-Ангідро-8-(2-4((2-((3-Ц4-(6-18-(1,3-бензотіазол-2-ілукарбамоїл|-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-ілу-2-карбоксипіридин-3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1-іл|метил)-5,7- диметилтрицикло!|3.3.1.19Лдекан-1-іл)уокси|етил)-(2-сульфоетил)карбамоїл|окси)метил)-5-|(М- ((38,55)-3-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1Н-пірол-1-іл)-2-оксо-5-(41-оксо- 2,5,68,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38-тридекаокса-42-азатритетраконтан-43-іл)піролідин-1- іл|Іацетил)-І -валіл-ІЇ -аланіл)аміно|феніл)-7,8-дидезокси-1І -гліцеро-І -гуло-октонова кислота
Вказану в заголовку сполуку одержували шляхом заміни речовини із прикладу 2.174.6 речовиною із прикладу 2.119.15 і речовини із прикладу 2.123.20 речовиною із прикладу 2.119.16 в прикладі 2.119.17 "Н ЯМР (500 МГц, диметилсульфоксид-адв) б ррт 9,93 (Бг а, 1Н), 8,28 (а, 1), 8,03 (9, 1Н), 8,02 (ріг 5, 1Н), 7,91 (ра, тн), 7,79 (а, 1), 7,61 (а, 1), 7,51 (рг а, 1Н), 7,49-7,42 (т,
ЗН), 7,40 (рг а, 1), 7,36 (т, 2Н), 7,28 (5, 1Н), 7,22 (0, 1Н), 7,06 (5, 2Н), 6,95 (а, 1Н), 5,00 (Бг а, 2Н), 4,95 (5, 2Н), 4,70 (І, 1Н), 4,39 (т, 1Н), 4,28 (т, 1Н), 4,00 (ад, 2Н), 3,88 (рг т, 2Н), 3,85 (ріг т, 1Н), 3,80 (ре т, 2Н), 3,62 (І, 2Н), 3,50 (в, 44Н), 3,48 (й, 4Н), 3,43 (рг т, 2Н), 3,34 (ріг т, 2Н), 3,23 (5,
ЗН), 3,21 (м б т, 2Н), 3,14 (1, 2Н), 3,10 (м біг т, 1Н), 3,00 (ї, 2Н), 2,94 (ріг т, 1Н), 2,76 (мб т, 1Н), 2,64 (м ріг т, ЗН), 2,34 (р, 2Н), 2,32 (т, 1Н), 2,17 (т, 1Н), 2,09 (рг а, ЗН), 2,00 (рг т, 1Н), 1,56 (ре т, 1ТН), 1,39-1,19 (рг т, 8Н), 1,19-0,92 (рг т, 8Н), 0,88 (Ббг а, ЗН), 0,87 (рі т, 1Н), 0,82 (рег а, 6Н), 0,79 (ріг 5, ЗН). М5 (ЕБІ) т/е 11192 (М-2НУ2І. 2.175 Синтез (65)-2,6-ангідро-6-(2-12-((Ц2-(13-(4-16-(8-(1,3-бензотіазол-2-ілкарбамоїл)-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-іл)-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)метилі/д-5,7- диметилтрицикло!Ї3.3.1.13,7|дец-1-иліокси)етилІ|((35)-3,4- дигідроксибутиліІікарбамоїліокси)метилі/|-5-(1М-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іл)ацетил(|-М- (2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-ундекаоксатетратриаконтан-34-іл)-б-аланіл-і! -валіл-ї - аланіліаміно)феніл)етил)-І -гулонової кислоти (синтону АВ)
Вказану в заголовку сполуку одержували із застосуванням процедури в прикладі 2.147.4 шляхом заміни речовини із прикладу 2.141.4 речовиною із прикладу 2.167.1. М5 (Е5І) т/е 1033,4 (Ма2Н) 2». 2.176 Синтез (65)-2,6-ангідро-6-(2-12-(ЦЦ2-(13-(4-16-(8-(1,3-бензотіазол-2г-ілкарбамоїл)-3,4- дигідроізохінолін-2(1 Н)-іл|-2-карбоксипіридин-3-ілу-5-метил-1 Н-піразол-1-іл)уметилі/д-5,7- диметилтрицикло!|3.3.1.13,7|дец-1-илюкси)етилі||(35)-3,4- дигідроксибутилікарбамоїліокси)метил|д|-5-((М-(2,5-діоксо-2,5-дигідро-1 Н-пірол-1-іллуацетил|-М-(2- (2-сульфоетокси)етил/|-р-аланіл-І! -валіл-І -аланіл)іаміно)феніл)етил)-І -гулонової кислоти (синтону АВМ)
Вказану в заголовку сполуку одержували із застосуванням процедури в прикладі 2.160.7 шляхом заміни речовини із прикладу 2.154.1 речовиною із прикладу 2.167.1. М5 (ЕБІ) т/е 859,4 (Маг).
Приклад 3. Одержання моноклональних антитіл миші до В7-НЗ за допомогою технології мишачої гібридоми
Кількість специфічних до В7-НЗ антитіл підвищували з використанням технології мишачих гібридом. Зокрема, як імуногени використовували лінію клітин фібробластів миші (3712), яка експресує повнорозмірний В7-НЗ людини, а також злиті білки Ес людини з рекомбінантним ЕСО від В7-НЗ3 людини або миші, послідовності яких наведені в таблиці 1. Лінії клітин людини
НСТІ116, які експресують В7-НЗ людини, застосовували для визначення антисироваткових титрів і для скринінгу антиген-специфічних антитіл. Лінії клітин до імунізації піддавали впливу приблизно 3000 мбер гамма-випромінювання. Два різних різновиди мишей імунізували в зону колінного сухожилля дозами, що містили 5 х 106 клітин/миша/ін'єкція або 10 мкг білка/мишал/н'єкція, в присутності ад'юванту Сегри ММ (Соорег-Сазеу Согрогайоп, МаїЇІєу Сепівєг,
Каліфорнія, США), у рамках як первинної, так і бустерної імунізації. Для підсилення імунної відповіді на В7-НЗ миші, мишам проводили додаткову бустерну імунізацію сумішшю білків Ес бо людини з ЕСО від В7-НЗ людини та миші у рамках процедур заключної бустерної імунізації.
Стисло, антигени одержували в РВЗ у такий спосіб: 200 х 105 клітин/мл або 400 мкг/мл білка.
Розрахований об'єм антигена переносили в стерильну мікроцентрифужну пробірку, а потім додавали рівний об'єм Сегри ММ. Розчин акуратно перемішували на вортексі протягом 1 хвилини. Потім розчин ад'ювант-антиген набирали у відповідний шприц для ін'єкції тварині.
Усього 25 мкл суміші вводили в зону колінного сухожилля кожної лапи миші. Кожну тварину піддавали бустерній імунізації З рази до визначення сироваткового титру для груп. Усіх тварин піддавали 2 додатковим бустерним імунізаціям рівним об'ємом суміші білків В7-НЗ-ЕСО миші-Ес людини і білків В7-НЗ-ЕСО людини-Ес людини в ад'юванті перед злиттям.
Таблиця 1
Амінокислотні послідовності рекомбінантних білків, застосовуваних для імунізації або скринінгу
МІ ВАВаЗРЕМОИаМУНнНМсСААІ СА МЕССІ ТА ЕМОМРЕОРУМАЇ МАТОАТІ С
СЗЕЗРЕРОЕБІ АОЇ МПУУОСТОТКОЇ МНЗЕАЕСОРОСЗАМАМАТАЇ ЕРОЇГ.
ГАОСМАБІ ВГ ОВМАМАРЕС,ЗЕТСЕМ5ІВОРИаЗААМУБІ ОМААРУЗКРОМТІ
ЕРМКОІ АВРЕОЮТМТІТО550ли00МРЕАЕМЕМОраОСУРІ ТаММ ТП ЗОМАМЕ
ОСІ ЕОМНО ВУМІ ОАМатиСЇ МАМРМІ ООВАНЗЗМУТІТРОВЗРТОАМЕМ
Повнорозмірний | ОМРЕОРУМАЇ МЕТОАТІ ВСЗЕЗРЕРСЕБІ АОЇ МИМО ТОТКОЇ МНОЗЕТЕС
В7-НЗ людини | ВРОСЗАМАМАТАЇГ ЕРОГІ АОСІМАБІ ВІ ОАВМАМАЕаЗЕТСЕМБІНОРавзА
АМ5І ОМААРУБКРОМТІ ЕРМКОЇ АРЕОТМУТІТС55УВаМРЕАЕМЕМОДС,О
СУРІ ТОМУТТ5ОМАМЕОСИГ гЕЮУН5ЗМІ ВУМІ ОАМаИТУЗСІ МАМРМІ ООБАН а5МТІТаОРМТЕРРЕАГМУТМаї ЗМСПАГІ МАГАЕМСМ ВКІКОЗБСЕЕЕМАС
АЕРОРСЕСЕС,ЗКТАГ ОРІ КНІЗОЗКЕВОСОБІА (ЗЕО ІО МО: 149)
МІ ВАВаЗРЕМОИаМУНнНМСсСААІ СА МЕССІ ТА ЕМОУМРЕОРУМАЇ МАТОАТІ СС
ЗЕЗРЕРОЕБІ АОЇ МИМО ТОТКОЇ МНЗЕАЕСОРОСЗАМАМАТАЇ ЕРОГГ А
СМАБІ ВІОВУАМАВЕСЗЕТСЕМ5ІВНОРаЗААМБІ ОМААРУЗКРОМТІ ЕРМКО
ГАРИаОТУТІТС55МОСУРЕАЕМЕМОрааОСаМУРІ ТаММТТ5ОМАМЕОСаЇ ЕОМ
НУ АУМІ аАМаИтуУЗСІ МАМРМ ООБАНЗЗМТІТРОВЗРТЯАМЕМОУРЕОРУМ
А МАОТОАТІ ВСЗЕЗРЕРОЕБІ ОЇ МПУМО ТОТКОЇ МУНЗЕТЕСНРОСБЗАМАМ
В7-НЗ-ЕСО ВТАГЕРОП АОСМАБІ ВІ ОВУВМАРЕСЗЕТСЕМ5ІВОРаЗААМБІ ОМААРУБЗК людини (злиття з| РОМТ ЕРМКОЇ АРИЮТУТІТС554иВаМРЕАЕМЕМОраОсСуУРІ ТОМУТТЗОМ
Ес) АМЕОСГГЕОУН5ЗМІ ВУМІ ОАМатТУЗСІ МАМРМІ ОСОВАНИаЗМУТІТООРМТЕААА
ОКТНТОРРСОРАРЕАЕСАРБЗУРБІ ЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕУТСУММОУЗНЕОРЕМК
ЕМУМУУрамЕМНМАКТКРАЕЄОММЗТУАУММІ ТМ НОБУУЛІ МЕКЕУКСКУЗМК
АЇ РАРІЕКТІЗКАКИОРАЕРОММУТІ РРОВЕЕМТКМОМУБІ ТОЇ УКЕЕМРЗОІАМЕМУ
ЕЗМСООРЕММУКТТРРМІ ОБООаЗЕРІ ЗК ТМОКЗАМООСММЕЗСЗУМНЕАЇ НМ
НУТОК5БІ 5І 5РОК (5ЕО І МО: 150)
МІ ВСУУСааРБУМаМУСУВТАГСМІ СІ СІ ТОАМЕМОМЗЕОРМУМАЇ МОТОАТІ ВСЕ
РЕРЕБЕБІАОЇ МЛУМО ТОТКОЇ УНЗЕТЕВВООСБЗАМ5МАТАЇ ЕРОГІ МОСМАБІ
АВГОВУМАУТОЕаЗУТСЕМБІОЮРОБААМБІ ОМААРУЗКРОМТІ ЕРМКОЇ АРСММУ
ТІТО55МОСУРЕАЕМЕУКОСОСУРІ ТаМуТТЗОМАМЕНИЇ ЕОМН5МІ ВУМІ аАМ
В7-НЗ-ЕСО миші | аТУ5СІ МАМРМІ ФОВАНИаЗМУТІТаОРІ ТЕАААДОКТНТОРРСОРАРЕАЕСАРБЗМУРНІ Е (злиття з Ес). | РРКРКОТІ МІЗАТРЕМУТСУММОУЗНЕОРЕУМКЕМУ У раМЕМНМАКТКРАЕЄЕОММ
ЗГУВУУБМІ ТМ НОМ МЕ КЕУКСКУЗМКАЇ РАРІЕКТІЗКАКООРАЕЕРОММТІ РР
ЗВЕЕМТКМОМУБІ ТС УКОЕМРЗОІАМЕМ ЕБМССОРЕММУКТТРРМІ О5БОСЗЕРІ 5
КТМОКЗАУМООаММЕЗСЗУМНЕАЇІ НМНУТОКБІ 51 РОК (5ЕО ІЮ МО: 151)
МЕРІ ЗМІ РІ МА КамМОСсАГЕМОУМРЕОРУМАЇ МЕТРАТІ ССЗЕЗРЕРСОЕБІ.
АОЇГМУМО ТОТКОЇ МНЗЕАЕСОВОСЗАМАМВАТАЇГ ЕРОГ Г АОСОСМАБІ ВІ ОВУ
МАРЕСЗЕТСЕМ5ІВОРаБЗААМВІ ОМААРУЗКРОМТІ ЕРМКОЇ АВРООТМТІТО55У
В7-НЗ-ЕСО ОСУРЕАЕМЕМОДССОСМУРІ. ТММ ЗОМАМЕОСІ РОМНБЗІ-ВУМІ САМИТМБО. людини (3 МАМРМІ ООВБАНОЗЗМУТІТРОВЗРТОАМЕМОМРЕОРУМАІЇ МОТОАТІ ВСЗЕЗРЕРИЕ міткою Нів) ЗГАС МОМОТ ОТКОЇ МНЗЕТЕЕВрОСЗАМАМАТАЇ ЕРОГІ АОСІМАБІ НГОВУВ
МАРЕСЗЕТСЕМ5ІВОРаБЗААМВІ ОМААРУЗКРОМТІ ЕРМКОЇ ВРОЮТМТІТО5БУВ
СМРЕАЕМЕМОрСОСМУРІ ТаМмММ ГП ЗОМАМЕОСІ ЕОУМНОМІ ВУМІ ЧаАМО ТТ УСІ УА
МРМІ ООБАНИаЗМТІТаОРМТНННННН (5ЕО ІО МО: 152)
МЕРИ ЗУ РІ МА КаМОСМЕМОМ5ЗЕОРММАЇ МОТОАТІ АВСЗЕЗРЕРИЕБІ АОЇІ МІ.
МО ТОТКОЇ МНЗЕТЕСНрОСЗАУЗМАТАЇ ЕРОЇ І МОСМАБІ В ОВУВУТрЕСБУ
В7-НЗ-ЕСО миші ТСЕМБІОВЕРОБААМ5І ОМААРУЗКРОМТІ ЕРМКОЇ АРОММУТІТС5ЗМОСМРЕАЄМ ; й РєРУКраосуУРІ ТаМуУТТ5ОМАМЕВИЇ ЕОУНОЗМІ УМ АМОИаТУ5 (з міткою Ні). |! сі УВМРМ ОО
АНазмтТІТОаОРІ ТЕНННННН (5ЕО І МО: 153)
МІ НАВа5РЕИМОИаМУНМСААІ СА МЕССІ ТА ЕМОМРЕОРУМАЇ МАТОАТІ ВСЕ
ЗРЕРОЕБІ ОЇ МЛУО ТОТКОЇ МНЗЕТЕСНРОСБЗАМАМЕАТАЇ РІ ОГ ГГ АООСМАБ
ГАГОВМАМАВЕЯЗЕТСЕМ5ІВОРаЗААМУБІ ОМААРУЗКРОМТІ ЕРМКОЇ ВРО ОТ
В7-НЗ-ЕСО МТІТО557УВаУРЕАЕМЕМОраОСсСАРІ ТаМУТТ5ОМАМЕОІ ЕОУНЗМІ ВУМІ СХ макака-крабоїда АМОаТУЗСІ МАМРМ ООВАНазпІТРОАВЗРТаАМЕМОМРЕОРМУМАГ! МаТОАТІ ВС (з міткою Нів) ЗЕЗРЕРОЕБІ АОЇ МИУУОЇ ТОТКОЇ МНЗЕТЕСАРОСЗАМАМЕАТАЇ РІ ОГГАСОСМА
ЗІ ВГОВУАВМАВЕСЗЕТСЕУ5ІВОРаЗААМБІ ОМААРУЗКРУОМТІ ЕРМКОЇ РОЮ
ТУМТІТО55УВаУРЕАЕМЕМОраОсСАРІ ТаММТТЗОМАМЕОИаГ ЕЮУН5ЗМІ УМ а
АМатТуУЗСІ МАМРМІ ООБВАНИазмМТтІтаоРМТЕАААНННННННН (5ЕО ІО МО: 154)
Примітка: лідерна послідовність, послідовності Ес і Ні5 підкреслені
Злиття з утворенням гібридом і скринінг
Клітини з лінії клітин мієломи миші (М5-0, ЕСАСС Мо 85110503) культивували до досягнення стадії лог-фази безпосередньо перед злиттям. У кожної миші видаляли підколінні і пахові лімфатичні вузли і в стерильних умовах одержували суспензії окремих клітин. Лімфоцити зливали із клітинами мієломи (Е. Напом, 0. Іапе, Апіїбоду: А І арогаїюгу Мапиаї, Со 5ргіпд
Нарог І арогаїогу Ргезв, Соїй 5ргіпд Наог, ММ, 1998); Копіег сх. апа Міївівїп С., "Сопіїпиои5 сийиге5 ої Тибей сеї! зесгеїйпуд апібоду ої ргедеїпей 5ресіїсйу," Маїшге, 256:495-497 (1975); технічний посібник до приладу ВТХ Нагмагі ЕСМ 2001 (Холлістон, Массачусетс, США). Злиті гібридні клітини розподіляли в 96-лункові планшети в середовище ОМЕМ/1095 ЕВ5/НАТ. Зразки надосадової рідини колоній гібридом, що вижили, піддавали клітинному скринінгу з використанням ліній клітин людини, які експресують рекомбінантний В7-НЗ людини. Стисло, лінію клітин людини, яка експресує В7-НЗ людини, розморожували і безпосередньо розподіляли в 9б-лункові (чорні із прозорим дном для одержання зображення) планшети у кількості 50000 клітин/лунка в живильне середовище й інкубували протягом 2 днів при 37"С до досягнення 5095 конфлюентності. Супернатанти гібридоми (50 мкл/лунка) переносили у відповідні планшети й інкубували за кімнатної температури протягом 30 хвилин. Середовище видаляли з кожної лунки й антитіло кози до ІдС(-АР488 миші (Іпмйгодеп, Мо А11029, Гранд-
Айленд, Нью-Йорк, США) використовували для виявлення з використанням аналізатора Іпсеї! 2000 (СЕ). Хіти розмножували і зв'язування підтверджували за допомогою ЕАС5 з використанням відмінної лінії клітин людини або лінії клітин миші, яка експресує В7-НЗ людини, та антитіла кози до ІдДС2-РЕ миші для виявлення. Видову специфічність визначали з використанням формату ЕГІЗА за наступною методикою. Планшети для ЕГІЗА покривали білками В7-НЗ-ЕСО людини-Ес людини, Ніх-міченим білком В7-НЗ-ЕСО яванського макака, білками В7-НЗ-ЕСО миші-єс людини протягом ночі за кімнатної температури. Планшети промивали й у кожну лунку додавали мікропробу гібридоми (100 мкл) та інкубували за кімнатної температури протягом 1 години. Планшети промивали, для виявлення використовували антитіло віслюка до (ДС-НКР миші (даскбзоп Іттипоспетісаіє, Мо 115-035-071, М/еві Сгоме,
Зо Пенсильванія, США), ї ОО зв'язування спостерігали за 650 нм.
Відібрані хіти субклонували за допомогою МоРіо (ВесКтап, Індіанаполіс, Індіана, США) шляхом поміщення однієї клітини на лунку в 9б-лункові культуральні планшети для забезпечення клональності лінії клітин. Одержані в результаті колонії піддавали скринінгу на специфічність за допомогою РГАСЗ5 з використанням ліній клітин фібробластів 3712 миші, які експресують В7-НЗ людини, В7-НЗ яванського макака або В7-НЗ миші. Ізотип кожного моноклонального антитіла визначали з використанням набору Моизхе Мопосіопаї Ізов5іуріпд Кії (Коспе, Мо 11-493-027-001, Індіанаполіс, Індіана, США). Клони гібридоми, що виробляють антитіла, які проявляли високу активність специфічного зв'язування щодо антигена В7-НЗ людини і макака-крабоїда, субклонували й очищували (таблиця 2).
Таблиця 2
Перелік антитіл до В7-НЗ, одержаних з використанням технології гібридоми миші яванського макака відсутнє відсутнє
Приклад 4. Визначення характеристик іп міго моноклональних антитіл миші до В7-НЗ.
Афінність зв'язування очищених моноклональних антитіл до В7-НЗ визначали за допомогою поверхневого плазмонного резонансу. У таблиці З наведені константи швидкості асоціації (Ка), константи швидкості дисоціації (Ка) і константи рівноважної дисоціації (Ко) для зв'язування серії моноклональних антитіл (тАбБ) до В7-НЗ, одержаних з гібридоми миші, з розчинними ЕСО В7-НЗ людини і В7-НЗ макака-крабоїда. Кінетику зв'язування одержували з вимірювань 5РЕК з використанням приладу Віасоге 1200 ї підходу із захопленням тАб (як описано в матеріалах і способах нижче).
Таблиця З
Кінетика за Віасоге зв'язування антитіл до В7-НЗ з гібридоми миші з В7-НЗ людини і мавпи макака-крабоїда 1111 пивЯА НУ, 77177171 супов?НУЇГ///СО
Назва мишачого Кап1/Мс) Ка (1/с) Ко (М) Ка (1/Мс) Ка (1/с) Ко (М) антитіла ле (ван лю | зле Ди пен с кінетики
Зв'язування ;
АрІ1 . спостеріга- спостеріга- ється ється - | ші | ше зв'язування зв'язування
Парні аналізи зв'язування, виконані на приладах Віасоге Т200 5РЕ, використовували для визначення відносного групування епітопів для мишачих тАб до В7-НЗ, як описано в наведених нижче способах. На фіг.1 показане зображення групування епітопів, за допомогою якого описують відносну різноманітність епітопів В7-НЗ людини і перекривання для ряду тАб до В7-
НЗ, ідентифікованих у даному документі. Епітопні групи представлені у вигляді окремих овалів, деякі з яких перекриваються один з одним. Антитіла з різних груп епітопів можуть одночасно зв'язуватися з В7-НЗ і, ймовірно, зв'язуватися з різними епітопами, тоді як антитіла в межах даної групи епітопів не можуть одночасно зв'язуватися з В7-НЗ і, ймовірно, зв'язуватися з епітопами, що перекриваються. Інформацію про групування одержували з аналізу одночасного зв'язування, як описано в матеріалах і способах. Групування АБЗ, АБ4, АБ5, АБІ11, АБрІ12 і АВ були невизначеними.
Матеріали і способи Кінетика зв'язування
Прилади Віасоге Т200 5РК використовували для вимірювання кінетики зв'язування В7-НЗ людини (аналіту) з різними тАБ (лігандами). Формат аналізу являв собою захоплення на основі
Ес за допомогою іммобілізованого антитіла до (Ес) миші (Ріегсе 31170) або іммобілізованого антитіла до (с) людини (Ріегсе 31125). Стандартний протокол з'єднання з аміном використовували для іммобілізації реагентів захоплення за допомогою первинних амінів на поверхні, вкритій карбоксиметил (СМ)-декстраном, сенсорних чипів СМ5 (Віасоге); захоплювальні антитіла зв'язували до рівня приблизно 5000 КО. Для вимірювання кінетики зв'язування використовували буфер для аналізу НВЗ-ЕР-- (Віасоге): 10 мМ Неревх, рН 7,4, 150 мМ Масі, З мМ ЕОТА, 0,0595 полісорбат 20. Під час аналізу всі вимірювання звіряли тільки з поверхнею захоплення. Кожний цикл аналізу полягав у наступних стадіях: 1) захоплення ліганду приблизно до 50 КИ; 2) ін'єкція аналіту як на еталонну, так і на тестову поверхню, 240 мкл при 80 мкл/хв., після чого контролювали дисоціацію протягом 900 секунд при 80 мкл/хв.; 3) відновлення поверхні захоплення гліцином з низьким значенням рН. Для визначень кінетики ін'єкції аналіту являли собою 3-крапкові, 9-кратні серії розбавлень 900 НМ, 100 НМ і 11,11 нм, ін'єкції тільки буферу включали для вторинного порівняння з еталоном. Дані обробляли і підганяли до моделі зв'язування 1:1 з використанням програмного забезпечення Віасоге Т200
ЕмаїІцайоп для визначення кінетичних констант швидкості зв'язування Ка (швидкість асоціації) і Ка (швидкість дисоціації) і рівноважної константи дисоціації (афінність, Ко).
Матеріали і способи Групування епітопів
Парні аналізи зв'язування, виконані на приладах Віасоге 1200 5РЕ, використовували для визначення відносного групування епітопів для серії тАб до В7-НЗ. Формат аналізу являв собою захоплення на основі Ес за допомогою іммобілізованого антитіла до (Ес) миші (Ріегсе 31170) або іммобілізованого антитіла до (Ес) людини (Ріегсе 31125). Стандартний протокол з'єднання з аміном використовували для іммобілізації реагентів захоплення за допомогою первинних амінів на поверхні, вкритій карбоксиметил (СМ)-декстраном, сенсорних чипів СМ5 (Віасоге); захоплювальні антитіла зв'язували до рівня приблизно 2000 КО. Вимірювання щодо групування епітопів проводили при 127"С (низька температура забезпечує інформацію про групування високої швидкості дисоціації тАб), буфером для аналізу був НВЗ-ЕР-- (Віасогеє): 10 мМ Неревх, рН 7,4, 150 мМ Масі, З мМ ЕОТА, 0,0595 полісорбат 20. Кожний цикл аналізу полягав у наступних стадіях у системі з чотирма проточними гніздами: 1) окремі тестові тАб захоплювали в проточні гнізда 2, З і 4 (проточне гніздо 1 було контрольним, тестові тАБб були відсутні); 2) усі 4 проточних гнізда потім блокували за допомогою ін'єкції тАб ізотипового контролю або тАБб ізотипового коктейлю в концентрації 50 мкг/мл; 3) в усі 4 проточні гнізда потім вводили тільки антиген або буфер (тільки буфер призначений для подвійного порівняння з еталоном, робиться для кожної пари тАб окремо); 4) в усі 4 проточні гнізда потім вводили 2-ге тестове тАБ в кількості 10 мкг/мл; 5) усі 4 проточні клітини потім відновлювали гліцином, рн 1,5.
Аналіз проводили для кожної тестової пари тАб у зворотному напрямку. Одночасне зв'язування оцінювали, вивчаючи співвідношення відповіді 2-го тестового тАБб і відповіді Ад (КИтаьг/НА до); якщо це співвідношення дорівнювало 0,2 або було більше, взаємодію оцінювали як одночасне зв'язування. Із цих даних аналізу парного зв'язування вручну була побудована діаграма стилю "Венна" для відображення відносних групувань епітопів.
Приклад 5. Одержання химерних антитіл до пПВ7-НЗ
Після ідентифікації антитіл до В7-НЗ з гібридоми миші визначали варіабельні ділянки важкого і легкого ланцюгів (МН і М), що відповідають антитілам, які секретуються, з клітин з використанням полімеразної ланцюгової реакції зі зворотною транскриптазою (КТ-РСВ).
Мишачі варіабельні ділянки експресувались у клітинах-хазяїнах ссавців, зважаючи на константну ділянку імуноглобуліну людини для забезпечення химерних антитіл. У наведеній нижче таблиці 4 представлені амінокислотні послідовності варіабельної ділянки для химеризованих мишачих гібридом.
Таблиця 4
Амінокислотні послідовності варіабельної ділянки антитіл до В7-НЗ з мишачих гібридом
ЗЕО .
ІО Клон Ллянка Залишки Амінокислотна послідовність
МО: ілка
ОМОГ ООРСОАЕЇ МКРОАБЗУКІ 5СКАБИОаМТЕ
Т5УММНУМУКОАРООСІТ ЕУММОИМІНРОВЗИТ 1 |спАр2 УН ТМУМЕКЕВЗКАТІ ТМОКЗЗЗТАММОЇ 55І Т
ЗЕОБАУУУСАУУУазГУМУгрумататт
ТУ55
СОВ-НІ |Залишки 26-35 ог С 0оввотмої (етно
СОВ-Н2 |Залишки 50-66 оз |ве С |оввотмоя 0 (Мнеовоттумяє
СОВ-НЗ |Залишки 99-109 оз |вке Сббввваттмої (ее
ОМУМТОТРІ ЗІ РУБ а рОАМІЗСНЗВЗО во |спдь? М ЗІ УНІМЕМТ МІ НУ МВОКРООБРК МК
У5МАЕЗзамМмРовЕЗзазавзатоЕТтІКІЗАМ
ЕАЕОЇ ЯСУМЕСЗОЗТГТНЕРЕТРазЗатТкКІ ЕК
ЗЕО .
ІО Клон Ллянка Залишки Амінокислотна послідовність
МО: ілка
СОВ-11 |Залишки 24-39 в спАраг сов із УЕО ІЮ МО АББОБІ МНІМИМТ МІ Н
СОВ-12 |Залишки 55-61 спАБо сова Залишки ББ'БЇ КУЗМВЕ5
СОВ-13 |Залишки 94-102
Що спАБо сов Залишки 94710 О5ТНЕРЕТ
ОМОЇ ООРОАЕЇ МУКРОАБУКІ 5СКАба
УТЕ5ББУМ МНУ УКОВ РОСС ЕЛ ІН сСпАБЗ УН РОБаЗБТМУМЕМЕКМКАТІ ТМОВНО5ЗЗТА
ММОЇ 55І Т6ЕОБАМУЕСАСИЦсВІ МЕ соті тУ55
СОВ-НІ |Залишки 26-35 спПАБЗ сов Залишки 26-55 СУТЕ55УММН
СОВ-Н2 |Залишки 50-66 сСпАБЗ сова із «ЄЕО ІЮ МО9 ГІНРОБаЗТМММЕМЕКМ стАБЗ Ссов-НЗ Залишки 99-106 із ЗЕОЇ 58 гру
ОМУМТОТРІ 5І РУБІ арОАБІЗСВ
ЗОБІ УНОМартмі АММІ окРаю 13 | спАБЗ МІ ЗРК МКМ ЗМАЕЗаМРОВЕЗИбав
ОСТОЕТІ КІТАМЕАЕОІ аМуМЕС5О5тТ
НУМРУТЕРааатТткКіІ БІК
СОВ-11 |Залишки 24-39 спПАБЗ сов Залишки 23, В55О5ІУНеМООТМ В
СОВ-12 |Залишки 55-61 спПАБЗ сова Залишки Б5-61, КУЗМАЕВ
СОВ-13 |Залишки 94-102 спПАБЗ совв далишки За-108 ЗО5ТНУРУТ
ОМОЇ СООРОАЕЇ МКРОАБЗУКІ 5СКА5
СУБЕТ5УММНУУКОВРООСІ ЕМО 16 |снАБА УН МІНРМЗаЗММУМЕКЕКОКАТІ ТМОКЗ5
МТАММОЇ 55І ТЄЕОБАМУМУСАННІ СІ.
НЕОМУсСОСаТТ ТУ
СОВ-НІ |Залишки 26-35
СПА сов із ЗЕО ІЮ МО-16 СМ5ЕТ5УМУМН
СОВ-Н2 |Залишки 50-66
СПА сова із ЗЕО ІЮ МО-16 МІНРМБаЗММУМЕКЕКЬ
СОВ-НЗ |Залишки 99-106
СПА сова із «ЕО ІЮ МО-16 ВІСІ НЕрУ
РІММТОБОКЕМ5ТРУЧОВМБІТСКАБОМ пАБА М УатАМАМУОСООКРООЗРКИ ІМ5АЗМАУ с ТОУРОВЕТавЗБаватО ЕТ ТІЗММОЗЕЮО
ГАОМЕСООМ5ЗУРМУТЕаСИТКІ ЕК
СОВ-11 |Залишки 24-34
СПА сов із ЗЕО ІЮ МО2О КАБОММОаТАМА
СОВ-12 |Залишки 50-56 спАБА сова Залишки вО-56. 5АБМВУТ
СОВ-13 |Залишки 89-97
СПА сов із ЗЕО ІЮ МО2О ООМ5БУРУТ
ОМОЇ ООБААЕЇ ААРОАБЗБУКМЗСКАЗа
М5ЕТ5УТІНУУКОВРООСІ ЕУМЛИМІМР 24 |спАБІ18 УН МЗАМТОММОКЕКОЕТТІ ТАОВ555ТАУ
МОГ ІІ ТЗЕОБАУУУСАНУВавзтРУМУ
ЕрумадаттУтУзо
СОВ-НІ |Залишки 26-35 сСпАБІ18 сов із ЄЕО ІЮ МО-2А СМУ5ЕТ5МТІН
ЗЕО .
ІО Клон Ллянка Залишки Амінокислотна послідовність
МО: ілка
СОВ-Н2 |Залишки 50-66 сСпАБІ18 сова із ЄЕО ІЮ МО-24 МІМРМ5АМТОММОКЕКО
СОВ-НЗ |Залишки 99-110 сСпАБІ18 сова із ЄЕО ІЮ МО-24 УБавтРУММЕОМ
ОМ ТОБ5РАЇЇ БАБРИЕКМТМТСНА5бВОМ 28 пАВІВ8 М ЗУМММУМООКРИаБОРКРУЛМУАТ5МІ АБИ с МРАНЕ5УБУВБато5нН5БіІ ТІЗАМЕАЕВААТУ
УСООМ5ЗМРІ ТЕСЧАСТКІ ЕІ К
СОВ-11 |Залишки 24-33 сСпАБІ18 сов із ЗЕО ІЮ МО 28 ВАБООУБУММ
СОВ-12 |Залишки 49-55 сСпАБІ18 сова із ЗЕО ІЮ МО-28 АТОМІ АБ
СОВ-13 |Залишки 88-96 спАБТВ сов Валики 88-96. ООМУ5УМРІ т
РОМОГОЕБОРОЇ МКРБОБІ 5І ТСТУТИаМБІ 32 пАВІЗ УН Т5ОаУБМНУМАОГРОМКІ ЕуМИаМмІНВЗВИ5 с ТМММРБІ КЗВІБІМАОТ5ОКМОЕРНІ ОЇ МТ
ЕОТАТУУСАаМООМЕЕУ М СОСТТІ ТУ
СОВ-НІ |Залишки 26-36 сСпАБІ1З сов із ЗЕО ІЮ МО-32 сУБІТЗаМБМун
СОВ-Н2 |Залишки 51-66 сСпАБІ1З сова із ЗЕО ІЮ МО-32 МІНББаТМУМРБІ КК
СОВ-НЗ |Залишки 99-105 сСпАБІ1З сова із «ЕО ІЮ МО:32 МООМЕЕХ
РІММТО5ОКЕМ5Т5Уа ОВУ МТ СКАБОММ 36 пАВІЗ М СЕММАМУООКРИООЗРКАІМБАБУВУВБОМ с РОВЕТавзаватовтІТІЗММО5ЕОІ АЕМЕС
ОООММЗМРЕТЕРазаткіІ ЕК
СОВ-11 |Залишки 24-34 сСпАБІ1З сов із ЗЕО ІЮ МО-36 КАБОММОаєММА
СОВ-12 |Залишки 50-56
СПА сова далишки 5056. 5АБУВУ5
СОВ-13 |Залишки 89-97 спАБІЗ сов Валики 89-97. ООУМБУРЕТ
ЕМОЇ МЕССІ МКРОаСІБІ КІ БЄСААБИЕТЕ
З5УАМОУМУНКОТРЕКАЇ ЕММАТІЗБИТММтТ 40 | спАБІ12 УН ХУУРОБУКОаНЕТІЗБАОМАКМТІ МІ ОМТ5І 5
ЕОТАМУУСАНОСВУЗУЛАУМ ОСТІ МТУ
А
СОВ-НІ |Залишки 26-35 сСПАБІ12 сов із «ЕО ІЮ МО-40 СЕТЕЗБ5УАМ5
СОВ-Н2 |Залишки 50-66 сСПАБІ12 сова із «ЕО ІЮ МО-40 тІЗБЗатМУТУМРОБУКОИ
СОВ-НЗ |Залишки 99-107 сСПАБІ12 сова із «ЕО ІЮ МО-40 оОаВвВУБУЛАУ
РІМГТО5РАБІ АУМ5І ЧОВАТІЗБСНАБКОМ5 да | спАЬі? М Т5ОУ5УМНУМООКРООРРКИ МІ АБМІ Е с ЗаМРАНЕЗИабБазатОвЕтТІ МІНРМЕЕЕВАА
ТУМСОНЗАЕЇ І ТЕсАатТткКіІ ЕІ К
СОВ-11 |Залишки 24-38 сСПАБІ12 сов із ЄЕО ІЮ МО 44 ВАБКОЗУЗТЗОУЗУМН
СОВ-12 |Залишки 54-60 сСПАБІ12 сова із ЄЕО ІЮ МО 44 І АБМІ Е5
СОВ-13 |Залишки 93-100 сСПАБІ12 сов із ЄЕО ІЮ МО4А ОНЗВЕЇ ІТ
ЗЕО .
ІО Клон Ллянка Залишки Амінокислотна послідовність
МО: ілка
ЕМКІ МЕБОЯ СИ! МКРОааБІ КІ БСААБОа ЕТ
ЕЗ5БМаМОММУВОТРЕКВІ ЕМУМАТІЗСС,С 48 | спАБ14 УН ТУТ УМРОБМЕСВЕТІЗВОМАКМЕРЇ МІ ОМ 5І В5ЕОТАЇ УУСАВНУаЗОТмМОУУ,Ося т5УТУ55
СОВ-НІ |Залишки 26-35 спдЬтА сов далишки 26-85. СЕТЕ5БУСМ5
СОВ-Н2 |Залишки 50-66 сСпАБ14 сон | із ЗЕО ІЮ МО48 твасватмМТУУРгрвмМЕа
СОВ-НЗ |Залишки 99-107 спдЬтА сонна Залишки 997107 нНУСВОТМОУ
РІОМТО5РАБІ БАБМИаЄЕТМТІ ТСВТОаМІНМ
Бо пАЬІА М М ТУ УСОКОСКОРОЇ І МУМАКТІ АРОМРО с ВЕЗО5О5ОТОЕВІ КІМБІ ОРЕОГОЗУХСО
НЕМ5ЗІММИ/ТЕРаСИТКІ БІК
СОВ-11 |Залишки 24-34 сСпАБ14 сов із ЗЕО Ір МО52 ВТ5амІНММІ Т
СОВ-12 |Залишки 50-56 сСпАБ14 сова із ЗЕО Ір МОБ? МАКТІ АЮ
СОВ-13 |Залишки 89-97 сСпАБ14 сов із ЗЕО ІЮ МО 52 ОНЕМ/5ІМУУТ
ОМО! ООБОАЕЇ МКРОАБУКІЗСКАТОСУ
ТЕЗА ЕМ УКОВРИаНнаї ЕУМІСЕЇ РО 56 |спАБб УН За5ТМУМЕКЕКОКАТЕТАОЮТЗ5МТАУМ
ОМ55І ТЗЕОБАУНУСАВВИамамуУРМАЇ. рушати
СОВ-НІ |Залишки 26-35 сСпАБб сов із ЗЕО ІЮ МО 56 СУТЕЗВУУЛЕ
СОВ-Н2 |Залишки 50-66 сСпАБб сова із ЗЕО ІЮ МО 56 ЕП РАБаЗТМУМЕКЕКОИ
СОВ-НЗ |Залишки 99-110 сСпАБб сова із ЗЕО ІЮ МО 56 вамамуРмХАІ ПУ
ЕІОМТОТТ55І 5АБІ СОВМТІЗСВАЗО пАЬб М РІБМБІ МУ МООКРОоаИТтУМП ІМТ с УЗСОУРОВЕЗО5О5СТОУВІ ТІЗМІ ЕО
ЕОІАТУЕСООСМТІ РИТЕаСсаИткіІ БІК
СОВ-11 |Залишки 24-34 спАБЄ сов Залишки вКЗЕ. ВАБОСІЗМВІМ
СОВ-12 |Залишки 50-56 спАБЄ сова Залишки БО56, УТ5ВІ У
СОВ-13 |Залишки 89-97 спАБЄ сов Валики 89-97. ООСМТІ РУТ
ЕМКІ МЕЗО, МОРССБІ ВІ 5САТВОЕ
ТЕТММУМ5УМВОРРОКАГ ЕМ СРІВМК 64 |снАБІ11 УН АМОУТТЕМ5БАБУКОаВЕТІЗАОМ5ОБІІ МІ.
ОММТІ ВАЕОЗБАТУУСАВЕЗРИМРЕАДУМІ
СОСТІ ММА
СОВ-НІ |Залишки 26-35
СПАБІ11 сов із ЗЕО Ір МО-6А СЕТЕТМУУМ5
СОВ-Н2 |Залишки 50-68 вв. СПАБІ1 сова із ЗЕО Ір МО-64 ЕІВМКАМОМТТЕУЗАБУКОА
СОВ-НЗ |Залишки 101-109
СПАБІ11 сова із ЗЕО Ір МО-64 ЕБРОМРЕАУ
ЗЕО .
ІО Клон Ллянка Залишки Амінокислотна послідовність
МО: ілка
РІММТО5РБУБІ ТУТАСЕКУТМТСКООО
ЗИ МБатокмМЕІ ТУМООКРООРРКІ І І
СПАБІ11 МІ УМ АБТВЕЗБОУРОВЕТаЗаватонвті ТІ 5ЗЗМОАЕОЇ АММЕСОМОМІМРІ ТЕРАС ТК
І ЕК
СОВ-11 |Залишки 24-40 ве СПАБІ11 сов із ЗЕО Ір МО-68 кББОБИЇМБатоОкКМЕ т
СОВ-12 |Залишки 56-62
СПАБІ11 соня | із ЗЕО ІЮ МО-68 МА5БТВЕ5
СОВ-13 |Залишки 95-103
СПАБІ11 сові із «ЕО ІЮ МО-68 ОМОМІМРІ Т
ЕМК ЕБИОСИЇ МОРОСБІ КІ БСААБИа
ОЕЗБАММУ МОМ МКОАРаИкаї ЕМЛавєІМе 72 | спАр16 УН О5БТІММТРБОІ КОКЕПЗАОМАКМТІ МІ СО
М5КУВ5ЗЕОТАЇ УУСАВРИБИамММІМАМ ружмаостеУТУ55
СОВ-НІ |Залишки 26-35 сСпАБ16 сов із ЗЕО ІЮ МО-72 СЕЄЕОєБВУМУМ5
СОВ-Н2 |Залишки 50-66 сСпАБ16 сова із ЗЕО ІЮ МО-72 ЕІМРОБЗТІММТРОІЇ КО
СОВ-НЗ |Залишки 99-110 сСпАБ16 сова із ЗЕО ІЮ МО-72 РаБаММІМАМОУ
РОМТОТТ55І БАБІ СОВМТІМСНАБОЮ
ІЗМЕЇ МУ МООКРОС,ТУКИ МУТНІ МІ 76 |спльі6 М СУРЗВЕ5О5О5СТОУВІ ТІЗМІ ЕОЄОІА
ТУЕСООСМТІ РРТРаСаткіІ БІК
СОВ-11 |Залишки 24-34 сСпАБ16 сов із ЗЕО ІЮ МО-76 ВАБОЮВІБМЕЇ М
СОВ-12 |Залишки 50-56 сСпАБ16 сова із ЗЕО ІЮ МО-76 МТ5ВІМІ.
СОВ-13 |Залишки 89-97 сСпАБ16 сов із ЗЕО ІЮ МО-76 ООСМТІ РРТ
РМУМОГОЕБОаРИІЇ УКРООВБІ І ТСТМУТ
СУ5БІТ5ОМАМММІАВОЕБЕРОМАГ ЕМ М сСпАБІО УН СНІМУБСІТМУМРБІ КЗВІБІТВОТОК
МОЄ ОЇ М56МТТЕОТАТУЕСАВН5БІ Е уча мМАМОУМСсОСТОУТУ5о
СОВ-НІ |Залишки 26-36 сСпАБІО сов із ЗЕО ІЮ МО-80 СУ5ІТ5ОМАМУ/М
СОВ-Н2 |Залишки 51-66 сСпАБІО сова із «ЕО ІЮ МО-80 НІМУБИа! ТМММРБОІ Кк
СОВ-НЗ |Залишки 99-114 сСпАБІО сова із «ЕО ІЮ МО:80 В5І ЕМУМа55І МАМО У
ОМУМТО5РЕБІ РУБІ ЧБОАБІЗСНЬ 5ОБІ МНОМамМтмІ НИМ ОКРООЗР 84 |спАБІО МІ КГЛИКУ5МАЕЗамМРОВЕБОа5азат
РАРТКІБАМЕАБЕОЇ ЯСУМЕС5ОБТНУР
МТгРасаткі ЕІК
СОВ-11 |Залишки 24-39 сСпАБІО сов із ЄЕО ІЮ МО-84 ЗОБІ УНОМаТмМтТмІ НН
СОВ-12 |Залишки 55-61 сСпАБІО сова із ЄЕО ІЮ МО-84 КУМ5МАЕ5
СОВ-13 |Залишки 94-102 вв. спАБТО сов Залишки 9А-102 ЗО5ТНУРМТ
ЗЕО .
ІО Клон Ллянка Залишки Амінокислотна послідовність
МО: ілка
ЕМОЇ МЕБОЕМІ МКРОСІБІ КІ БСААБ
СЕБЕВОМамМ5УМУВОТРОКВІ ЕМ М 87 | спАб7 УН АЛХІЗТОСМУТУМРОБМОСАЕТІЗНО
МАММТІ МІ ОМ55І КЗЕОТАМУМСАВ
ВасмМмуАСЕАММаОСтТІ МТМ5А
СОВ-НІ |Залишки 26-35
СОВ-Н2 |Залишки 50-66 ве |спь СОНЯ О Залишки Боб, АІБТОСМУТУУРОЗМОС
СОВ-НЗ |Залишки 99-108
ІОМТО5РАБІ БМОМОЕТМТІТСВАРБЗЕ 91 ПА М МІМ5МІ А МООКОСКОРОЇ ЇЇ ММААТМ с І АРОУРЗВЕЗО5О5СТОУВІ КІМ5Г О
ЗЕОБаТУМСОНнНЕМаИтРЕТЕРазаткі БІК
СОВ-11 |Залишки 24-34 ов |спйьу А із ЗО 10 МО ВРБЕМУБМ А
СОВ-12 |Залишки 50-56 оз |сптйьу А? | із ВЕО 0 МОВІ лАтМло
СОВ-13 |Залишки 89-97 ва |спяьу ОН | із ЗО 10 МОІ онруатРи
ЕМУМКІ МЕЗО СИ МКРОСІБЇ КІ 5САА5
СЕТЕЗ5УаМ5УМУВОТРЕКАГ ЕММА 95 |спАБВ УН тІБООСамМмуУТиСРОБУКОаВЕТІЗВОМА
КММІ МІ ОМ55І В5ЕОТАЇ СТВО аМОМнМАМОЕМмСОСТ5УТУ55
СОВ-НІ |Залишки 26-35 спАБВ сов Залишки 26-35, СЕТЕЗ5УСМУ
СОВ-Н2 |Залишки 50-66
КЕ сСпАБВ сова із ЗЕО ІЮ МО95 тІОсСОаМУТУСсРОБУКа
СОВ-НЗ |Залишки 99-110 сСпАБВ сова із ЗЕО ІЮ МО95 ОваТмОоУнНУАМОЕ
ІОМТО5РАБІ БМОМОЕТМТІТСВАЗЕ
МІМ5МІ А НООКОСК5ОРОЇ І ММААТМ сСпАБВ МІ. ГАВРаМРОНЕЗОаМавБОТОМОІ КІМ5 О
ЗЕОБО5МЕСОМЕМмИатОМТва,асваТтк
І ЕІК
СОВ-11 |Залишки 24-34 99. сСпАБВ сов із ЗЕО Ір МО 98 ВАБЕМІМОМІ А
СОВ-12 |Залишки 50-56 сСпАБВ сова із ЗЕО Ір МО98 ААТМІ АЮ
СОВ-13 |Залишки 89-97 спАБВ сов Залишки 88-57. ОМЕМИСТеМУТ
ЕМКІ МЕЗО, МОРССБІ КІ БСААБОЕТ
ЕЗББМІМБУУВОТРЕКВІ ЕМУМАБІУЗОЗМІТ
101 | спАбІ17 УН МУ РОБМКОИВЕТІЗВОМАВМІЇ МІ ОМ55І К
ЗЕОТАМУУСАВЗатВвВАМЕАММ,СОСТІ.
МТУ5А
СОВ-НІ |Залишки 26-35
СПАБІ17 сов із ЗЕО ІЮ МО-101 СЕТЕЗ5МІМ5
СОВ-Н2 |Залишки 50-65
СПАБІ17 сова із ЗЕО ІЮ МО-101 5ІМ55МІТУРОЗМКа
СОВ-НЗ |Залишки 98-106
СПАБІ17 сова із ЗЕО ІЮ МО-101 ЗатТВАМ/ЕАДУ
ЗЕО .
ІО Клон Ллянка Залишки Амінокислотна послідовність
МО: ілка
РІМ ТОЗРАБІ АМ5І ЧСОВАТІЗСВАЗКОМУ
ЗТЗАУЗУМНМУМООКРООРРКІ ІМ АБ
105 |спАрти Мо МІ ЕЗСУРАВЕЗСЗСОЗСТОЕТІ МІНРУЕЕ
ЕОААТУМСОНОЗАЕГ РУТРССИТтКІ ЕК
СОВ-І1 |Залишки 24-38 спАбІ17 сов із ЗЕО ІЮ МО-105 ВАБКОУЗТЗАУЗУМН
СОВ-12 |Залишки 54-60 спдьт? (СОН? Залишки в 5 0 ІАЄМІЕЄ
СОВ-ІЗ |Залишки 93-101 спдьт СОНЯ Залишки 970 00 ОНеВЕГРУТ
ОМОГ ООРООЕЇ МКРОАБЗУКІ БСКТбО
УТЕТТОМ/ МНУУМКОВ РООСІ ЕУММІОМІ 108 | спАрЬ УН НРМЗаТТтМУМЕКЕКЗКААІ ТОК
АСМОЇ 551 Т5ЕОБАМУУСАВЗУМ КМУ
УЕрушататтУтУзо
СОВ-НІ |Залишки 26-35
СПАД сов із ЗЕО ІЮ МО-108 еиТЕТТОМУМНн
СОВ-Н2 |Залишки 50-66 спАБ5 сова із ЗЕО ІЮ МО-108 МІНРМЗаТТтМУМЕКЕКЬ
СОВ-НЗ |Залишки 99-107
СПАД сова із ЗЕО ІЮ МО-108 ЗМ КУМ
ОІМГТО5РАЇМ5ЗАБІ СЕЕЇІТІ ТОБАБЗЗ5
УБУМНУМООКЗатОРКІІМЗТОМІ А 112 |спльв М ЗСУРЗВЕ5О5О5ОТЕУВІ ТІЗ5УЕАЕ рзАрУУснОоМТЗзУМУТРасаТткКІ ЕК
СОВ-І1 |Залишки 24-33 спдьв СОНЛЛО|Залишки м 8 АЄЗБУБУМН
СОВ-12 |Залишки 49-55 спАро сова із ЗЕО І МОХ12 ЗТЗМІАЗ
СОВ-ІЗ |Залишки 88-96 спдьв о |СОНТЗ Залишки 9600 |НОМТеУМУт
Приклад 6. Визначення характеристик зв'язування химерних антитіл до В7-НЗ
Для одержання очищених химерних антитіл вектори експресії тимчасово трансфікували в суспензійні клітинні культури НЕК293 бЕ у співвідношенні 6095 і 4095 конструкцій легкого і важкого ланцюгів. Для трансфекції клітин використовували 1 мг/мл поліетиленіміну (РЕЇ) або 2,6 мкл/мл експіфектаміну. Супернатанти клітин збирали через п'ять днів у колби, що струшуються, центрифугували до осадження клітин і фільтрували за допомогою фільтрів 0,22 мкм для відділення Ід від забруднюючих речовин у культурі. Супернатанти, які містять антитіла, очищували на АКіа Риге з використанням білка А тАБ Зеїесібиге. Колонки врівноважували в РВ5, рН 7,4, потім через колонку пропускали супернатанти і здійснювали промивання за допомогою РВ5, рН 7,4. ЇД3о елюювали 0,1 М оцтовою кислотою рн 3,5 і збирали в кілька аліквот. Фракції, які містять Ід, поєднували і піддавали діалізу в РВ5 протягом ночі при 4"С. Химерні антитіла до В7-НЗ, які успішно експресувалися, охарактеризували за здатністю зв'язувати лінію клітин, яка надекспресує В7-НЗ, недрібноклітинного раку легенів людини МСІ-
НІТ650 (АТССе Мо СКІ-5883) за ЕАС5 з використанням нижчеописаних способів. У таблиці 5 підсумовані зв'язувальні властивості химерних антитіл до В7-НЗ.
Таблиця 5
Визначення характеристик іп міго химерних антитіл до В7-НЗ спАБа поїде т/к спАБЗ поїде т/к спАБА пиде/к
Таблиця 5
Визначення характеристик іп міго химерних антитіл до В7-НЗ
Способи ЕАС5 для визначення зв'язування
Клітини збирали з колб при конфлюентності приблизно 8095 з використанням буфера для дисоціації клітин сірсо-. Клітини промивали один раз в РВ5/195 ЕВ5 (буфер для ЕАСЗ5), потім ресуспендували при 2,5 х 105 клітин/мл у буфері для ЕАС5. 100 мкл клітин/лунка додавали в круглодонний 96б-лунковий планшет. 10 мкл 10-кратної концентрації тАБ/АОС (кінцеві концентрації вказані на фігурах). Лунки двічі промивали буфером для ГАСЗ і ресуспендували в 50 мкл вторинного АБ (АІехайцог 488), розбавленого в буфері для ЕАС5. Планшети інкубували при 4"С протягом однієї години, двічі промивали буфером для ЕАС5. Клітини ресуспендували в 100 мкл РВБ/195 формальдегіду та аналізували на проточному цитометрі ГЗК! від Весіоп ріскіпзоп. Дані аналізували з використанням програмного забезпечення для аналізу проточної цитометрії Уміпіїві.
Приклад 7. Визначення характеристик химерних антитіл до В7-НЗ як кон'югатів антитіла і лікарського засобу, що пригнічують Всі-хі.
Дев'ять химерних антитіл до В7-НЗ кон'югували із синтоном С2 (приклад 2.1), який пригнічує
Всі-х!, (Всі-хі ї), із застосуванням способу А кон'югації, описаного нижче. Одержані АОС (антитіла до В7-НЗ, кон'юговані із синтоном С2) досліджували щодо зв'язування з В7-НЗ людини на клітинній поверхні за допомогою ЕАСЗ (як описано в прикладі б) і на цитотоксичність щодо клітин у лініях клітин, які експресують В7-НЗ. Із дев'яти антитіл три антитіла (СпАбБ2, спАБб і сСПАБІ6) випадали в осад після кон'югації із синтоном С і демонстрували слабку цитотоксичність клітин, які експресують В7-НЗ3 людини. У таблиці 6 представлена активність зв'язування клітинної поверхні і цитотоксичність химерних АОС до В7-НЗ проти ракових клітин молочної залози НССЗ8, які експресують В7-НЗ людини.
Таблиця 6
Визначення характеристик іп міго химерних кон'югатів С2 до В7-НЗ
Зв'язування за .
Назвадос | Спостереження ГАСЗ (пін клітин НССЗВ Спосіб | РАВ | 75 або кон'югації В7-НЗ людини ІСво НМ кон'югації | за М5)| за ЗЕС
ЕСво нм 5о НМ) спАБІ6-С27 |Осади | 062 | 2189 |А /|09| 23
Матеріали і способи Кон'югація Всі-хі -інгібіторних АОС
АОС синтезували з використанням одного зі способів, описаних нижче. Ілюстративні АОС синтезували із застосуванням одного з дев'яти ілюстративних способів, описаних нижче.
Спосіб А. До розчину антитіла (10 мг/мл, 1 мл), попередньо нагрітого до 37"С, додавали
Зо розчин трис(2-карбоксиетилуфосфіну (ТСЕР) Вопа-ВгеаКег "м (10 мМ, 0,017 мл). Реакційну суміш витримували при 37"С протягом 1 години. Розчин відновленого антитіла додавали до розчину синтону (3,3 мМ, 0,160 мл в ОМ5О) і обережно перемішували протягом 30 хвилин. Реакційний розчин завантажували в колонку для знесолення (РО10, промиту фосфатно-сольовим буфером
Дульбекко ІЮРВ5Ї| З рази перед використанням), а потім вносили ОРВ5 (3 мл). Очищений розчин АОС фільтрували через шприц-фільтр із низьким зв'язуванням білків з розміром пор 0,2 мікрона і діаметром 13 мм і зберігали при 47с.
Спосіб В. До розчину антитіла (10 мг/мл, 1 мл), попередньо нагрітого до 37"С, додавали розчин трис(2-карбоксиетил)фосфіну (ТСЕР) Вопа-Вгеакег "м (10 мМ, 0,017 мл). Реакційну суміш витримували при 37"С протягом 1 години. Розчин відновленого антитіла доводили до рн-в шляхом додавання боратного буфера (0,05 мл, 0,5 М, рн 8), додавали до розчину синтону (3,3 мМ, 0,160 мл у ОМ5О) і обережно перемішували протягом 4 годин. Реакційний розчин завантажували в колонку для знесолення (РО10, промиту Зх ОРВ5З перед застосуванням), а потім вносили ОРВ5 (1,6 мл) та елюювали додатковою кількістю ОРВ5 (З мл). Очищений розчин
АС фільтрували через шприц-фільтр із низьким зв'язуванням білків з розміром пор 0,2 мікрона й діаметром 13 мм і зберігали за 4"с.
Спосіб С. Процедури кон'югації проводили з використанням роботизованої системи для маніпуляцій з рідинами Регкіпеїтег дапив (частина АЛІ МО), оснащеної одноразовою голівкою
Моашіаг Різрепзе Тесппоїоду (МОТ) 1235 із 96 наконечниками (частина 70243540), що містить захоплювальну руку (частина 7400358), і піпетувальною рукою Магізрап із 8 наконечниками (частина 7002357), на подовженій платформі. Система РегКіпеітег ЧУдапи5 знаходилась під керуванням програмного забезпечення М/іпргер версії 4.8.3.315.
Фільтрувальний планшет Ра! 5052 попередньо зволожували 100 мкл їх ОРВ5 з використанням МОТ. Щодо фільтрувального планшета застосовували вакуум протягом 10 секунд із наступною вентиляцією протягом 5 секунд для видалення ОРВ5 з фільтрувального планшета. 5095 завись смоли на основі біль»а А (ЗЕ Марзеїесі Зиге) в ОРВ5 виливали в резервуар із 8 лунками, оснащений магнітною кулькою, і смолу перемішували шляхом пропускання магніту, що рухається, під пластиною резервуара. Руку Магізрап із 8 наконечниками, оснащену провідними наконечниками об'ємом 1 мл, використовували для аспірації смоли (250 мкл) і перенесення на 9б-лунковий фільтрувальний планшет. Вакуум застосовували протягом 2 циклів для видалення більшої частини буфера. Із використанням
МОТ 150 мкл їх РВ5 аспірували і розливали в 9б-лунковий фільтрувальний планшет, що
Зо містить смолу. Застосовували вакуум, видаляючи буфер зі смоли. Цикл прополіскування/застосування вакууму повторювали З рази. 9б-лунковий планшет для збору матеріалу з об'ємом лунки 2 мл встановлювали на платформу Чапи5, і за допомогою МОТ переносили 450 мкл 5х ОРВЗ у планшет для збору матеріалу для подальшого застосування.
Відновлене антитіло (2 мг) у вигляді розчину в (200 мкл)у ОРВ5 одержували, як описано вище для умов А, і попередньо завантажували в 9б-лунковий планшет. Розчини відновленого антитіла переносили в лунки фільтрувального планшета, що містять смолу, і суміш перемішували за допомогою МОТ шляхом повторних операцій аспірації/розливання об'єму 100 мкл у лунці протягом 45 секунд на цикл. Цикл аспірації/розливання повторювали в цілому 5 разів протягом 5 хвилин. Вакуум застосовували щодо фільтрувального планшета протягом 2 циклів, видаляючи таким чином надлишок антитіла. Накінечники МОТ прополіскували водою протягом 5 циклів (200 мкл, загальний об'єм 1 мл). За допомогою МОТ аспірували і розливали 150 мкл ОРВЗ у лунки фільтрувального планшета, що містить зв'язане зі смолою антитіло, і застосовували вакуум протягом двох циклів. Послідовність операцій промивання і застосування вакууму повторювали ще два рази. Після останнього циклу застосування вакууму 100 мкл 1х
ОРВ5З розливали в лунки, що містили зв'язане зі смолою антитіло. Потім за допомогою МОТ збирали 30 мкл кожного з розчинів синтонів у 3,3 мМ диметилсульфоксиді, внесених у планшет у 96-лунковому форматі, і розливали їх у фільтрувальний планшет, що містить зв'язане зі смолою антитіло в ЮОРВ5. Кон'югаційну суміш, що містилася в лунках, перемішували за допомогою МОТ шляхом повторних операцій аспірації/розливання об'єму 100 мкл у лунці протягом 45 секунд на цикл. Послідовність операцій аспірації/розливання повторювали в цілому 5 разів протягом 5 хвилин. Вакуум застосовували протягом 2 циклів для видалення надлишку синтону у відходи. Накінечники МОТ прополіскували водою протягом 5 циклів (200 мкл, загальний об'єм 1 мл). За допомогою МОТ аспірували і розливали ОРВ5 (150 мкл) у кон'югаційну суміш і застосовували вакуум протягом двох циклів. Послідовність операцій промивання і застосування вакууму повторювали ще два рази. Потім захоплювальне обладнання МОТ переміщало фільтрувальний планшет і ізолюючий комір на станцію очікування. За допомогою МОТ поміщали планшет для збору матеріалу з об'ємом лунки 2 мл, що містить 450 мкл 10х ОРВ5, усередину вакуумної камери. За допомогою МОТ повторно збирали вакуумну камеру, розміщуючи там фільтрувальний планшет і ізолюючий комір. бо Накінечники МОТ прополіскували водою протягом 5 циклів (200 мкл, загальний об'єм 1 мл). За допомогою МОТ аспірували і розливали 100 мкл елюювального буфера 3,75 для до (Ріегсе) у кон'югаційну суміш. Через одну хвилину застосовували вакуум протягом 2 циклів, і елюент захоплювали в приймальному планшеті, що містить 450 мкл 5х ОРВ5. Послідовність операцій аспірації/розливання повторювали ще З рази для одержання зразків АОС з концентраціями в діапазоні 1,5-2,5 мг/мл за рН 7,4 в ОРВ5.
Спосіб Ю. Процедури кон'югації проводили з використанням роботизованої системи для маніпуляцій з рідинами РегкКіпеїтег дапив (частина АДІ.8МО1), оснащеної одноразовою голівкою
Модшаг Оізрепзе Тесппоіоду (МОТ) І235 із 96 наконечниками (частина 70243540), що містить захоплювальну руку (частина 7400358), і піпетувальною рукою Магізрап із 8 наконечниками (частина 7002357), на подовженій платформі. Система РегКіпеітег ЧУдапи5 знаходилась під керуванням програмного забезпечення М/іпргер версії 4.8.3.315.
Фільтрувальний планшет Ра! 5052 попередньо зволожували 100 мкл їх ОРВ5 з використанням МОТ. Щодо фільтрувального планшета застосовували вакуум протягом 10 секунд із наступною вентиляцією протягом 5 секунд для видалення ОРВ5 з фільтрувального планшета. 5095 завись смоли на основі білка А (ЗЕ Маббзеїесі Зиге) в ОРВЗ виливали в резервуар із 8 лунками, оснащений магнітною кулькою, і смолу перемішували шляхом пропускання магніту, що рухається, під пластиною резервуара. Руку Магізрап із 8 наконечниками, оснащену провідними наконечниками об'ємом 1 мл, використовували для аспірації смоли (250 мкл) і перенесення на 9б-лунковий фільтрувальний планшет. Щодо фільтрувального планшета застосовували вакуум протягом 2 циклів для видалення більшої частини буфера. За допомогою МОТ аспірували й розливали 150 мкл ОРВ5 у лунки фільтрувального планшета, що містять смолу. Послідовність операцій промивання і застосування вакууму повторювали ще два рази. 9б-лунковий планшет для збору матеріалу з об'ємом лунки 2 мл встановлювали на платформу дапи5, і за допомогою МОТ переносили 450 мкл 5х ОРВ5З у планшет для збору матеріалу для подальшого застосування. Відновлене антитіло (2 мг) у вигляді розчину в (200 мкл)у ОРВЗ одержували, як описано вище для умов А, і розливали в 96-лунковий планшет. Потім за допомогою МОТ збирали 30 мкл кожного з розчинів синтонів у 3,3 мМ диметилсульфоксиді, внесених у планшет у 9б-лунковому форматі, і розливали їх у планшет, завантажений відновленим антитілом у ОРВ5. Суміш перемішували за
Зо допомогою МОТ шляхом дворазово повторюваних операцій аспіраці/розливання об'єму 100 мкл у лунці. Через п'ять хвилин кон'югаційну реакційну суміш (230 мкл) переносили в 96- лунковий фільтрувальний планшет, що містить смолу. Кон'югаційну суміш і смолу, що міститься в лунках, перемішували за допомогою МОТ шляхом повторних операцій аспірації/розливання об'єму 100 мкл у лунці протягом 45 секунд на цикл. Послідовність операцій аспірації/розливання повторювали в цілому 5 разів протягом 5 хвилин. Вакуум застосовували протягом 2 циклів для видалення надлишку синтону й білка у відходи. Наконечники МОТ промивали водою протягом 5 циклів (200 мкл, загальний об'єм 1 мл). За допомогою МОТ аспірували і розливали ОРВ5З (150 мкл) у кон'югаційну суміш і застосовували вакуум протягом двох циклів. Послідовність операцій промивання і застосування вакууму повторювали ще два рази. Потім захоплювальне обладнання МОТ переміщало фільтрувальний планшет і ізолюючий комір на станцію очікування. За допомогою МОТ поміщали планшет для збору матеріалу з об'ємом лунки 2 мл, що містить 450 мкл 10х ОРВ5, усередину вакуумної камери. За допомогою МОТ повторно збирали вакуумну камеру, розміщуючи там фільтрувальний планшет і ізолюючий комір.
Накінечники МОТ прополіскували водою протягом 5 циклів (200 мкл, загальний об'єм 1 мл). За допомогою МОТ аспірували й розливали 100 мкл елюювального буфера для Ідс 3,75 (Р) у кон'югаційну суміш. Через одну хвилину застосовували вакуум протягом 2 циклів, і елюент захоплювали в приймальному планшеті, що містить 450 мкл 5х ОРВ5. Послідовність операцій аспірації/розливання повторювали ще З рази для одержання зразків АОС з концентраціями в діапазоні 1,5-2,5 мг/мл за рН 7,4 в ОРВ5.
Спосіб Е. До розчину антитіла (10 мг/мл, 1 мл) за кімнатної температури додавали розчин трис(2-карбоксиетил)фосфіну Вопа-Вгеакегм (ТСЕР) (10 мМ, 0,017 мл). Реакційну суміш нагрівали до 37"С протягом 75 хвилин. Розчин відновленого антитіла охолоджували до кімнатної температури і додавали до розчину синтону (10 мМ, 0,040 мл в ОМ50О) з наступним додаванням боратного буфера (0,1 мл, 1 М, рН 8). Реакційний розчин відстоювали протягом
З днів за кімнатної температури, завантажували в колонку для знесолення (РО10, промиту
Зх5 мл ОРВ5 перед застосуванням), а потім вносили ОРВЗ (1,6 мл) та елюювали додатковою кількістю ЮОРВ5 (З мл). Очищений розчин АОС фільтрували через шприц-фільтр із низьким зв'язуванням білків з розміром пор 0,2 мікрона й діаметром 13 мм і зберігали при 47С.
Спосіб Р. Кон'югацію проводили з використанням роботизованої системи обробки рідини (510) Тесап Ггеєдот Емо.
Розчин антитіла (10 мг/мл) попередньо нагрівали до 37"С і розділяли на аліквоти у нагрітий планшет з 96 глибокими лунками у кількості З мг на лунку (0,3 мл) і зберігали при 377С. До антитіл додавали розчин трис(2-карбоксиетил)уфосфіну (ТСЕР) Вопа-ВгеаКкег"мМ (1 мМ, 0,051 мл/лунка) і реакційну суміш витримували при 37"С протягом 75 хвилин. Розчин відновленого антитіла переносили в не нагрітий планшет з 96 глибокими лунками. Відповідні розчини синтонів (5 мМ, 0,024 мл в ОМ5О) додавали в лунки з відновленими антитілами та обробляли протягом 15 хвилин. Реакційні розчини завантажували на платформу (8 х 12) колонок для знесолення (МАР5, промивали ОРВ5З 4 рази перед використанням), потім ОРВ5 (0,3 мл) та елюювали додатковим ОРВ5З (0,8 мл). Очищені розчини АОС далі розділяли на аліквоти для аналітики і зберігали при 4"7С.
Спосіб з. Кон'югацію проводили з використанням роботизованої системи обробки рідини
Тесап Ггеєдот Емо.
Розчин антитіла (10 мг/мл) попередньо нагрівали до 37"С і розділяли на аліквоти у нагрітий планшет з 96 глибокими лунками у кількості З мг на лунку (0,3 мл) і зберігали при 377С. До антитіл додавали розчин трис(2-карбоксиетил)фосфіну (ТСЕР) Вопа-ВгеаКег"мМ (1 мМ, 0,051 мл/лунка) і реакційну суміш витримували при 37"С протягом 75 хвилин. Розчини відновленого антитіла переносили в не нагрітий планшет з 96 глибокими лунками. Відповідні розчини синтонів (5 мМ, 0,024 мл/лунка в ОМ5О) додавали в лунок з відновленими антитілами з наступним додаванням борного буфера (рН-8, 0,03 мл/лунка) і обробляли протягом З днів.
Реакційні розчини завантажували на платформу (8 х 12) колонок для знесолення (МАРБ, промивали ОРВ5 4 рази перед використанням), потім ОРВ5 (0,3 мл) та елюювали додатковим
ОРВ5 (0,8 мл). Очищені розчини АОС далі розділяли на аліквоти для аналітики і зберігали при 47б.
Спосіб Н.До розчину антитіла (10 мг/мл, 10 мл) за кімнатної температури додавали розчин трис(2-карбоксиетилуфосфіну (ТСЕР) Вопа-Вгеакегм (10 мМ, 0,17 мл). Реакційну суміш нагрівали до 37"С протягом 75 хвилин. Розчин синтону (10 мМ, 0,40 мл в ОМ5О) додавали до розчину відновленого антитіла, охолодженого до кімнатної температури. Реакційний розчин відстоювали протягом 30 хвилин за кімнатної температури. Розчин АОС обробляли насиченим розчином сульфату амонію (-2-2,5 мл) до утворення злегка мутного розчину. Цей розчин
Зо завантажували в колонку з бутилсефарозою (5 мл бутилсефарози), урівноважену 3095 фази В у фазі А (фаза А: 1,5 М сульфат амонію, 25 мМ фосфат; фаза В: 25 мМ фосфат, 2595 ізопропанол об./06.). Окремі фракції з ОАК2 (також називані "Е2") і АКА (також називані "Е4") елюювали при застосуванні градієнта А/В до 7595 фази В. Кожний розчин АОС концентрували, і заміняли буфер за допомогою центрифужних концентраторів або ТЕЕ для більших масштабів. Очищені розчини АОС фільтрували через шприц-фільтр із низьким зв'язуванням білків з розміром пор 0,2 мікрона і діаметром 13 мм і зберігали при 4"С.
Спосіб І. До розчину антитіла (10 мг/мл, 10 мл) за кімнатної температури додавали розчин трис(2-карбоксиетил)фосфіну (ТСЕР) Вопа-Вгеакегм (10 мМ, 0,17 мл). Реакційну суміш нагрівали до 37"С протягом 75 хвилин. Розчин синтону (10 мМ, 0,40 мл в ОМ5О) додавали до розчину відновленого антитіла, охолодженого до кімнатної температури. Реакційний розчин відстоювали протягом 30 хвилин за кімнатної температури. Розчин АОС обробляли насиченим розчином сульфату амонію (-2-2,5 мл) до утворення злегка мутного розчину. Цей розчин завантажували в колонку з бутилсефарозою (5 мл бутилсефарози), урівноважену 3095 фази В у фазі А (фаза А: 1,5 М сульфат амонію, 25 мМ фосфат; фаза В: 25 мМ фосфат, 2595 ізопропанол об./06.). Окремі фракції з САКЗ2 (також називані "Е2") і БАК 4 (також називані "Е4") елюювали при застосуванні градієнта А/В до 7595 фази В. Кожний розчин АОС концентрували і заміняли буфер за допомогою центрифужних концентраторів або ТЕЕ для більших масштабів. Розчини
АОС обробляли боратним буфером (0,1 мл, 1 М, рН 8). Реакційний розчин відстоювали протягом З днів за кімнатної температури, потім завантажували в колонку для знесолення (РО10, промиту З3х5 мл ОРВ5 перед застосуванням), а потім вносили ОРВЗ5 (1,6 мл) і елюювали додатковою кількістю ОРВ5З (З мл). Очищений розчин АОС фільтрували через шприц-фільтр із низьким зв'язуванням білків з розміром пор 0,2 мікрона і діаметром 13 мм і зберігали при 47С.
БАК і агрегація АОС рАК і процентну величину агрегації синтезованих АОС визначали за допомогою І С-М5 й ексклюзійної хроматографії (ЗЕС), відповідно.
Загальна методика І С-М5
Аналіз ЇС-М5 проводили з використанням системи для НРІ С Адіїепі 1100, з'єднаної з мас- спектрометром Адіїепі ГС/М5О ТОЕ 6220 Е5І. АОС відновлювали за допомогою 5 мМ (кінцева концентрація) розчину ТСЕР Вопа-ВгеаКет (Тпепто Зсіепіййс, Рокфорд, Іллінойс), бо завантажували в картридж для знесолення Ргоїєеіп Місгоїгар (Міспгот Віогезоигсе5, Оберн,
Каліфорнія) та елюювали градієнтом від 1095 В до 7595 В протягом 0,2 хвилини за температури навколишнього середовища. Рухома фаза А являла собою НО з 0,195 мурашиної кислоти (РЕА), рухома фаза В являла собою ацетонітрил з 0,195 РА, і швидкість потоку становила 0,2 мл/хв.
Мас-спектри легкого і важкого ланцюгів, що спільно елююють, одержували шляхом вимірювання часу проходження в режимі електророзпилювальної іонізації з використанням програмного забезпечення для збору даних Адіїепі Маззпипіе! М. Одержаний спектр, що являє собою залежність інтенсивності від співвідношення маса/заряд, піддавали деконволюції з використанням функції максимальної ентропії програмного забезпечення Маз5Нипіег для визначення маси кожного відновленого фрагмента антитіла. ОАК розраховували за підданим деконволюції спектром шляхом підсумовування значень інтенсивності голих і модифікованих піків для легкого ланцюга й важкого ланцюга, нормалізованих шляхом множення інтенсивності на кількість приєднаних молекул лікарських засобів. Сумарні нормалізовані значення інтенсивності ділили на суму значень інтенсивності, а результати додавання для двох легких ланцюгів і двох важких ланцюгів давали кінцеве середнє значення БАК для повного АОС.
Гідроліз тіосукцинімідів біокон'югату можна відслідковувати за допомогою мас-спектрометрії з електророзпилюванням, оскільки додавання води до кон'югату приводить до збільшення спостережуваної молекулярної маси кон'югату на 18 дальтонів. У випадках, коли кон'югат одержують шляхом повного відновлення міжланцюгових дисульфідних зв'язків антитіла Ідсе1 людини і кон'югації похідної малеіміду з кожним з одержаних цистеїнових залишків, кожний легкий ланцюг антитіла буде містити одну малеімідну модифікацію, а кожний важкий ланцюг буде містити три малеїімідні модифікації, як описано на фігурі 2. Після повного гідролізу одержаних тіосукцинімідів маса легкого ланцюга буде, таким чином, збільшуватися на 18 дальтонів, тоді як маса кожного важкого ланцюга буде збільшуватися на 54 дальтони. Це проілюстровано на фігурі 5, де показана кон'югація повністю відновленого антитіла пПиАб1ТЗмМ1 з ілюстративною структурою лікарський засіб-малеїмідний лінкер (синтон ТХ, молекулярна маса 1736 Да) і наступним її гідролізом.
Загальна методика ексклюзійної хроматографії
Ексклюзійну хроматографію проводили з використанням колонки Зподех КУУ802.5 у 0,2 М фосфаті калію, рН 6,2, з 0,25 мМ хлориду калію і 1595 ІРА за швидкості потоку 0,75 мл/хв. Для
Зо кожного з високомолекулярних і мономерних елюентів визначали площу піка поглинання за 280 нм шляхом інтегрування площі під кривою. 95 частку агрегатів у зразку кон'югату визначали шляхом ділення площі піка поглинання за 280 нм для високомолекулярного елюента на суму площ піків поглинання за 280 нм для високомолекулярних і мономерних елюентів і множення на 10096.
Способи аналізу життєздатності клітин іп міго
Лінії пухлинних клітин НССЗ8 (рак молочної залози), МСІ-Н1650 (МЗС С) і МСІ-Н847 (лінія клітин дрібноклітинного раку легенів) одержували з Американської колекції типових культур (АТСС). Клітини вирощували в 9б-лункових культуральних планшетах з використанням рекомендованого живильного середовища протягом ночі за щільності 5 х 103 (НССЗ38) або 20 х 103 (МОСІ-Н8В47) або 40 х 103 (МСІ-Н1650) на лунку. Наступного дня засоби для обробки додавали у свіже середовище в лунки у трьох повторностях. Життєздатність клітин визначали через 5 днів з використанням набору для аналізу життєздатності люмінесцентних клітин Сеїйннег-С1о (Рготеда), як вказано в протоколі виробника. Життєздатність клітин оцінювали як відсоток від контрольних необроблених клітин.
Приклад 8. Ефективність кон'югатів антитіла до В7-НЗ і лікарського засобу іп мімо
Із дев'яти химерних антитіл, протестованих іп міо, кон'югованих із С7-синтонами, чотири продемонстрували субнаномолярну цитотоксичність (таблиця 6). спАБЗ-С7, спАБІТ8-С72 і спПАбБ13-С7 досягали ЮАК5 у діапазоні від 2,6 до 4,2 (див. таблицю 7) і були оцінені щодо протипухлинної активності в мишачій ксенотрансплантатній моделі клітин дрібноклітинного раку легенів МСІ-Н146, походження від людини, із застосуванням способів, описаних нижче. Антитіло
М51109 (антитіло Ідс1, яке зв'язується із глікопротеїном Н цитомегаловірусу (СММ)) використовували як контроль у вигляді як голого антитіла, так і АОС (кон'югованого з тим самим синтоном (С2), що й антитіла СПАБЗ, спАбІ18 і спАбБ13). М5І 109 являє собою ізотипово подібний нецільовий контроль. Способи такого аналізу із застосуванням ксенотрансплантату описані нижче. Результати представлені в таблиці 7. Результати показують, що кожний з АЮС, який націлюється на В7-НЗ, який пригнічує ВсіІ-х!,, здатний значно пригнічувати ріст пухлини відносно контролю з голим антитілом (М5І 109) або контролю з нецільовим специфічним до ВсіІ-хЇ АОС (М5І 109-072).
Таблиця 7
Ефективність химерного антитіла до В7-НЗ у вигляді кон'югатів з лікарським засобом інгібітором
Всі-х!. іп мімо
Спосіб Дозаг/шлях уведення/| Кількість мБІЛОЯ 177777 - 01 - | лОмукиРрю | 8 | 0 | о
М5ІЛ09-С2 ТА | 42 | ЧОмгклРЛОЮхї | 8 | 34 | то спАр3-С2 ТА | 35 | ЧОмг/киЛРЛОрхї | 8 | 87 | 109 спАрі8-С2 ТА | 26 | Омг/кийРЛОЮх! | 8 | 90 2 | 100
ІспАрі3-62 |А | 37 | ЧлОмгкилРЛОрхї | 8 | 81 2 | 104 і доза наведена в мг/кг/день
Оцінка ефективності способів із ксенотрансплантатними моделями
Клітини МСІ-НІ146, клітини МСІ-1650 і клітини ЕВОС-1 одержані з Американської колекції типових культур (АТСС, Манассас, Віргінія). Клітини культивували як моношари у культуральних середовищах КРМІ-1640 (МСІ-НІ1І46, МСІ-НІ650) або МЕМ (ЕВС-1) (Іпмйгодеп, Карсбад,
Каліфорнія), у які додавали 1095 фетальної бичачої сироватки (ЕВ5, Нусіопе, Логан, Юта). Для одержання ксенотрансплантатів 5х106 життєздатних клітин відповідно інокулювали підшкірно в правий бік самкам мишей ЗСІЮО/б9д з імунодефіцитом (Спагіе5 Кімег І арогайюгіє5, Вілмінгтон,
Массачусетс). Об'єм ін'єкції становив 0,2 мл і складався із суміші 1:11 5-МЕМ і матригелю (ВО,
Франклін Лейкс, Нью-Джерсі). Пухлини приводили у відповідність за розміром приблизно 200 мм. Антитіла і кон'югати складали в 0,995 хлориді натрію для ін'єкцій і вводили як ін'єкцію внутрішньочеревинно. Об'єм ін'єкції не перевищував 200 мкл. Терапію починали протягом 24 годин після приведення пухлин у відповідність за розміром. На початку терапії миші важили приблизно 22 г. Об'єм пухлини оцінювали два-три рази на тиждень. За допомогою електронного штангенциркуля одержували виміри довжини (І) і ширини (М/) пухлини, і об'єм розраховували відповідно до наступного рівняння: М - І. х МУг/2. Мишей піддавали евтаназії, коли об'єм пухлини досягав 3000 мм3 або з'являлися виразкові ураження шкіри. Мишей розміщали по вісім на клітку. Їжа й вода були доступні в необмеженій кількості. Проводили акліматизацію мишей до віваріїв протягом періоду щонайменше одного тижня до початку експериментів. Тварин тестували у світловій фазі в умовах режиму 12 годин світла: 12 годин темряви (освітлення включали о 06:00 годині). Як описано вище, контрольне антитіло (дб людини (М5І 109) використовували як негативний контроль.
Для вказання ефективності терапевтичних засобів використовували параметри амплітуди (ТОІтах), тривалості (ТО) терапевтичної відповіді. ТОітлах означає максимальне інгібування росту пухлини в ході експерименту. Пригнічення росту пухлини розраховували як 1005(1-ГП/Су), де Ту і Су являють собою відповідно середні об'єми пухлин у групі обробки і контрольній групі.
ТО або затримка росту пухлини являє собою додатковий час, необхідний обробленій пухлині для досягнення об'єму 1 смуУ, порівняно із контрольною групою. ТО розраховують як 100ч(ТуУСь- 1), де Ті і Сх являють собою відповідно медіанні періоди часу для досягнення 1 см3 у групі
Зо обробки та контрольній групі.
Приклад 9. Гуманізація антитіла до В7-НЗ спАр18
Химерне антитіло до В7-НЗ спАбІ18 вибирали для гуманізації, виходячи з його характеристик зв'язування і сприятливих властивостей як АОС, зокрема його властивостей за кон'югації з інгібітором Всі-хІ. (описаним вище як зразковий кон'югат С2).
Гуманізовані антитіла одержували на основі послідовностей СОК варіабельної ділянки важкого ланцюга (МН) і варіабельної ділянки легкого ланцюга (МІ) з спАБІ18. Зокрема, послідовності зародкового типу людини відбирали для конструювання СОмБ-прищеплених гуманізованих антитіл на основі СПАБ18, у яких домени СОК з МН- і МІ -ланцюгів прищеплювали на різноманітні акцепторні послідовності важкого і легкого ланцюгів людини. На основі вирівнювань послідовностей МН і МІ. моноклонального антитіла СпПАБбІ18 наступні послідовності людини були відібрані як акцептори: - ІАНМ1-69706 і ІЄНОЄМО1 для конструювання акцепторних послідовностей важкого ланцюга; - І2КМ1-9501 і ІКО2701 для конструювання акцепторних послідовностей легкого ланцюга; - ІАКМ6-21701 і ІБКО2701 як альтернативний акцептор для конструювання легкого ланцюга.
Таким чином, СОЕЄ МН і МІ. спАбБІ18 були прищеплені на вказані акцепторні послідовності.
Для одержання гуманізованих антитіл зворотні мутації каркасної ділянки ідентифікували й уводили в послідовності СОК-прищеплених антитіл за допомогою синтезу варіабельного домену де помо або мутагенних олігонуклеотидних праймерів і полімеразних ланцюгових реакцій або обох за допомогою способів, добре відомих з рівня техніки. Для кожного із СОК- прищеплених антитіл конструювали різноманітні комбінації зворотних мутацій та інших мутацій, як описано нижче. Номери залишків для таких мутацій базуються на системі нумерації Кабраї.
У випадку важких ланцюгів пиАб18УН.1 піддавали зворотному мутуванню один або декілька з наступних залишків у межах зони Мегпіег і на стику МН/Л/І, які наведені далі: І 46Р, І 47МУ,
Оо64У, Е71Н. Додаткові мутації включають наступні: ОТЕ, МбОА, Кб40), 0656. У випадку легких ланцюгів пПиАб18МІ..1 піддавали зворотному мутуванню один або декілька з наступних залишків у межах зони Мегппіег і на стику УНЛ/Л/Л,, які наведені далі: А435, І 46Р, І 47М/, 64, 566М, Е71Н.
У випадку легких ланцюгів пиАб18М1.2 піддавали зворотному мутуванню один або декілька з наступних залишків у межах зони Мегпіег і на стику МН//Л,, які наведені далі: І 46Р, І 47МУ, К49У, саваУ, авбм, ЕН.
Амінокислотні послідовності варіабельної ділянки і СОР. гуманізованих антитіл описані в таблиці 8 нижче.
Таблиця 8.
Амінокислотні послідовності МН і МІ. гуманізованих версій спАр18
ЗЕО Іо Клон Ділянка Залишки Амінокислотна послідовність
МО: білка 116 пПчАВІВМН.1 | УН ЕМО МОБСАЕЄУККРОЗБЗУКУЗСКАВСИОУ
ЗЕТ5УТІНМУУВОАРООСІ ЕУМИамІМРМ
ЗАМТОУМОКЕКОВМУТІТАОКЗТЗТАУМ
ЕГ55І АВАЗБЕОТАУУУСАВУБавзтРУММЕ рума,7оаттУТУзо пиАБІ8МН.І | СОВ-НІ | Залишки 26-35 | СУЗЕТЗУТІН із Ф«»ЕО І МО-116 26 пПОАБІ8УН.1 | СОВ-Н2 | Залишки 50-66. | ІМРМЗАМТОУМОКЕеКО із Ф«»ЕО І МО-116 27 ПИАБІВМН.1 | СОВ-НЗ ) Залишки 99-110 | УЗаЗТРУМ УРОМ із Ф«»ЕО І МО-116 117 пчІАВІ8МНа| УНН ЕМО МОБСАЕЄУККРОЗБЗУКУЗСКАВСИОУ
ЗЕТ5УТІНМУУВОАРООСІ ЕМО МІМРМО
АМТОМУМОКЕКОВТТІ ТАОВЗТЗТАММЕЇ.
ЗІ АВЗЕОТАУУУСАНУЗаЗТРИМ ЕОМ соаТтУТУЗо 25 ПиАБІВМН.ла) СОВ-НІ | Залишки 26-35 | СУЗЕТЗУТІН із ФЕО ІЮ МО:117 26 пиАв18МН.та| СОВ-НО2 | Залишки 50-66 МІМРМ5АМТОММОКЕКО із ФЕО ІЮ МО:117 27 пиАБІ8УН.та| СОВ-НЗ ) Залишки 99-110. | У0ЗТРУМУРОМ із ФЕО ІЮ МО:117 118 пПчІАВІ8МНЬІ ун ЕМО МОБСАЕЄУККРОЗБЗУКУЗСКАВСИОУ
ЗЕТ5УТІНМУУВОАРООСІ ЕУМИамІМРМ
ЗАМТОМАОКРОСАМТІ ТАОКЗТЗТАММ
ЕГ55І АВАЗБЕОТАУУУСАВУБавзтРУММЕ рума,7оаттУТУзо 25 пиАБІ8МН.ТЬ, СОВ-НІ | Залишки 26-35 | СУЗЕТЗУТІН із Ф«ЕО І МО-118 119.) пчАБІ8МНЬ| СОВ-Н2 | Залишки 50-66 | МІМРМЗАМТОМАОКРОС із Ф«ЕО І МО-118 27 пПІАБІ8УНТЬ СОВ-НЗ | Залишки 99-110 | УЗСЗТРУМУРОМ із Ф«ЕО І МО-118
Таблиця 8.
Амінокислотні послідовності МН і МІ. гуманізованих версій спАр18
ЗЕО Іо Клон Ділянка Залишки Амінокислотна послідовність
МО: білка 120 пиАБІ8МІ1 | М РІОГТО5РОЗЕЇ БАЗБМаОВМТІТСВАБОБМ
ЗУММММООКРОКАРКІ МАТОМІ АБИ М
РОНЕБОабБаватЕНТІ ТІЗБІ ОРЕОБАТУ
УСООМ5ЗМРІТЕСОСТКІ БІК 29 пИАБІВМІ.1 СОВА | Залишки 24-33 ВАЗБЗБЗУБУММ із ФБЕО І МО7120 20) пИАБІВМІ. 1) СОВ-І2 | Залишки 49-55 АТОМІ А5 із ФБЕО І МО7120 31 пиАБІВ8МІ. 1 | СОВ-ІЗ3 | Залишки 88-96 | ООМ/ЗБЗМРІТ із ФБЕО І МО7120 121 ПИІАБІВМІ та! МІ. РІОГТО5РОЗЕЇ БАЗБМаОВМТІТСВАБОБМ 5БУММММООКРОаКЗРКРУЛМУАТОМІ АБО
МРБОВЕБУБУ5ОатЕНТІ ТІЗББІ ОРЕОЕБАТУ
УСООМ5БМРІ ТЕСОСТКІ БІК 29 пПиИТ8АБМІ.та| СОВ-Ї1 | Залишки 24-33 | ВАБІЗУЗУММ із ФБЕО І МО7121 20) пИАБІВМІ та) СОВ-І2 | Залишки 49-55 АТ5МІ А5 із ФБЕО І МО7121 31 пПЧАБІВМІ та| СОВ-ІЗ | Залишки 88-96 | ООМ/ЗБЗМРІТ із ФБЕО І МО7121 122 пиАБІТВМІ ЛЬ М РІОГТО5РУОЕЇ БАЗБМОаОВМТІТСВАБО5
УМ5БУММММООКРИаКАРКРУЛМАТОМІ А
БОМРБОВЕБУБВаватТЕНТІ ТІЗ5І ОРЕ
ОРгАТУМСООМ/55МРІ ТЕИОСІТКІ БІК 23 пчАБІ8МІ ть! СОВ-І1 | Залишки 24-33 ВАБ55З5УБУММ із ФБЕО І МО7122 20) пИАБІВМІ в) СОВ-12 | Залишки 49-55 АТОМІ А5 із ФБЕО І МО7122 31 пчАБІВМІ тЬ| СОВ-ІЗ | Залишки 88-96 | ООМ/ЗБЗМРІТ із ФБЕО І МО7122 123 пчАрІВМІ.2 | МІ. ЕІМГТО5РОБОБМТРКЕКМТІТСНА5
ЗЗМ5УМММУУООКРООБРКІ ПІКАТ5
МІ АБМРОНЕЗОЗОаБаИто ТІ ТІМ
ГЕАЕСААТУУСООМЗЗМРІ ТЕИЮОС
ТК БІК
29 пИАБІВМІ.2 | СОВА | Залишки 24-33 ВАБЗБЗЗУБУММ із ФБЕО ІЮ МО7Л23
ЗО пиАБІ8МІ.2 | СОВ-І2 | Залишки 49-55 АТОМІ АБ із ФБЕО ІЮ МО7Л23 31 пиАБІ8МІ.2 | СОВ-ІЗ | Залишки 88-96 | ООМ/ЗБЗМРІТ із ФБЕО ІЮ МО7Л23 124 пиАБІТВМІ га! М. ЕІМГТО5РОБОБМТРКЕКМТІТСНА5
ЗЗУМ5УМММУ УООКРООЗБРКРУЛУАТ
ЗМІ АБМРОВЕЗУ5ЗМУЗаИтОнтТі ТІ
МО ЕАЕСААТУМСОСМУБОМРІ ТЕ
СОСТКІ БІК
29 пиАБІВМІ га| СОВ-І 1 | Залишки 24-33 ВАБ5ЗУЗУММ із ФЕО ІЮ МО:124
Таблиця 8.
Амінокислотні послідовності МН і МІ. гуманізованих версій спАр18
МО: білка 30 пПИАБІ8МІ. га) СОВ-І2 | Залишки 49-55 |АТЗМІ АБ із ФЕО ІЮ МО:124 31 ПИАБІВМІ.2а| СОВ-ІЗ | Залишки 88-96... | ООМУЗЗМРІТ із ФЕО ІЮ МО:124
Гуманізовані варіабельні ділянки мишачого моноклонального АБр18 (описаного вище) клонували у вектори експресії | для визначення функціональних характеристик. - Гуманізована АБТ8МН.1 (пчІАБІ8МН.1) являє собою МН СОм-прищепленого гуманізованого
АБрІ8, яка містить послідовності каркасних ділянок ЗНМ1-69706 і ІЗН.б"01. Воно також містить зміну О1ТЕ для попередження утворення ппіроглутамату. Варіабельні послідовності і послідовності СОК пиІАрІТ8МУН.1 описані в таблиці 8. - Гуманізована АБІТ8МНІ.а (пиАБІ18МН.Та) являє собою гуманізований формат на основі пПиАБІТ8МН.1 їі містить 4 запропонованих зворотних мутації в каркасній ділянці: М4А81І, М67Т, І 691,
К7ЗЕ. Варіабельні послідовності і послідовності СОК пиАБ18УН.Та описані в таблиці 8. - Гуманізована АБІТ8МНІ.р (пиАБІ8МН.Тр) являє собою гуманізований формат на основі
ПиАБІТ8МН.1 і пПиАр18МН.1а і містить 1 запропоновану зворотну мутацію в каркасній ділянці І 691
З зміни в напрямку зародкового типу в НСОК2, МбОА, Кб40, 0656. Варіабельні послідовності і послідовності СОМ пиАрІТ8МН.16р описані в таблиці 8. - Гуманізована АБ18МІ 1 (пиАБІтТ8МІ.1) являє собою МІ СОК-прищепленого гуманізованого
АБ18, яка містить послідовності каркасних ділянок ІЗКМ1-9701 і ІБК.О2"01. Варіабельні послідовності і послідовності СОК пиАбрІ18МІ..1 описані в таблиці 8. - Гуманізована АБІ8МІ.1а (пиАБрІ18МІ.1а) являє собою гуманізований формат на основі
ПиАрІ18МІ.1 ї містить 6 запропонованих зворотних мутації в каркасній ділянці: А435, І 46Р,
ІГ47М, 64, 66, Е71Н. Варіабельні послідовності і послідовності СОК пиАбБІТ8МІ..11 описані в таблиці 8. - Гуманізована АБІТ8МІ.16 (пиАрІ8МІ.15) являє собою гуманізований формат на основі
ПиАрІ18МІ.1 ії пІАБІТ8МІ та і містить 4 запропонованих зворотних мутацій каркасної ділянки:
І 46Р, 1 47, 64, Е71Н. Варіабельні послідовності і послідовності СОМ пиАр18МІ..15 описані в таблиці 8. - Гуманізована АБ18МІ.2 (пиАр18МІ..2) являє собою МІ СОм-прищепленого гуманізованого
АБІ18, яка містить послідовності каркасних ділянок І5КМб-21701 ії ІСКО2"01. Варіабельні послідовності і послідовності СОК пиАбБІ18МІ..2 описані в таблиці 8. - Гуманізована АБІ8МІ.2а (пиАр18МІ.2а) являє собою гуманізований формат на основі
Зо пчАБІ18МІ.2 ії містить 6 запропонованих зворотних мутації в каркасній ділянці: І46Р, 147,
К49У, 64, О66У, Е71Н. Варіабельні послідовності і послідовності СОМ пиАбр18МІ..2а описані в таблиці 8.
Таким чином, у результаті гуманізації СПАВ18 одержали 10 гуманізованих антитіл, зокрема пиАрІтТ8м1, пиАБтТ8м2, пиАБІтТ8У3, пиАб18м4, пиАрт18м5, пиАб18мб, пиАБІ8м7, пиАрІ8м8, пиАБ18Мо і пнАБ18м10. Варіабельні ділянки важкого і легкого ланцюгів для кожної з цих гуманізованих версій АБ18 представлені нижче.
Таблиця 9
Гуманізовані антитіла до В7-НЗ на основі АбБ18
Таблиця 9
Гуманізовані антитіла до В7-НЗ на основі АбБ18
Приклад 10. Визначення характеристик іп міго гуманізованих варіантів антитіл до В7-НЗ на основі СПАБІТ8
У результаті гуманізації СПАБВ18 було одержали 10 варіантів (описаних вище в таблиці 9), які зберігали зв'язування з В7-НЗ людини і макака-крабоїда, яке оцінювали за допомогою ГАС5 (спосіб якого описаний вище в прикладі 6). Ці варіанти додатково характеризували щодо зв'язування за допомогою 5РЕ, і успішно кон'югували із синтоном С2-інгібітором Всі-хЇ. з використанням способу А (описаного вище), і оцінювали щодо клітинної цитотоксичності, як описано в прикладі 7. У таблиці 10 підсумовані характеристики іп міго різних гуманізованих варіантів АБ1І8. Джерело спАБ18, з якого були одержані варіанти, також досліджували як антитіло порівняння. Усі гуманізовані варіанти мали схожі властивості зв'язування, як було оцінено за допомогою Віасоге, і зберігали активність зв'язування з поверхнею клітини за експресії як кон'югатів з С2-синтоном. Цитотоксичність усіх варіантів як С2-синтонів була подібною такій СПАбБ18, з якого вони були одержані.
Таблиця 10
Визначення характеристик іп міго гуманізованих варіантів антитіл до В7-НЗ на основі АБ18 о. Цитотоксич-
Н . Номери рАК за!| 95 ада , ГАС : Афінність ність (лінія азва варіанта й - (зв'язування із| голих тАб : послідовностей М5 (за 5ЕС Н й клітин НССЗ8 и В7-НЗ) |/|(Віасоге, Ко) ІСво о оспАБі8-С2 | 24,28 | 23 | | 114 | 170ЕлЛО | 028 о пчАрІВУд-СЯ | 1186121 | 25 | 55 | 090 / 5ЛОЕЛО | 029 о пчАрІВУЯ-СИ | 117,124 | 24 | 3,8 | 158 | З80ЕЛО | 09
Гуманізовані варіанти спАБбБІ1І8 окон'югували із Сл-синтоном і досліджували щодо цитотоксичності в лінії клітин НСС38. Як описано в таблиці 10, більшість гуманізованих антитіл показала сильну цитотоксичність, подібну з такою самою, спостережуваною у контрольного антитіла СПАБ18.
Приклад 11. Ефективність іп мімо гуманізованих варіантів АБ18 як АОС з інгібітором Всі-х!.
Шість із гуманізованих варіантів СПАБб18 відбирали на основі результатів цитотоксичності іп міго, описаних у прикладі 10. А саме, кожне з антитіл пиАБ18м1!, пиАБр18м3, пиАБ1Т8м4, пиАр18м6,
ПиАрІ18м7 ї пПиАр18м9 кон'югували із С7-синтоном (для утворення АОС із С7, який націлюється на В7-НЗ) для оцінки в ксенотрансплантатній моделі іп мімо дрібноклітинного раку легенів (із застосуванням клітин МСІ-НІ146), як описано в прикладі 8. Обробка однократною дозою мишей з пухлинами приводила до пригнічення росту пухлини і затримці росту пухлини, і результати підсумовані в таблиці 11. АЬБО95 використовували як негативний контроль ефекту введення Ідас, тому що він являє собою ізотипово подібне нецільове специфічне антитіло, створене до стовбнякового анатоксину. См. І аггіск еї а!., 1992, Іттипоїодіса! Кеміеєм5 69-85. Мишам вводили б мг/кг АОС внутрішньочеревинно О0Х1.
Таблиця 11
Ефективність іп мімо АОС, який націлюється на В7-НЗ (гуманізовані варіанти СпПАБ18-С2) . Дозаїг//шлях є,
АВОЯ5 | - |Нод. | бмужиРЛОЮх | 8 | 0 | 0 пиАрІ8МІ-С2 ТА | 2,6 | бмукилР/Орх! | 8 | 79 |МБЮюБК 45 пиАрІ8У3-С2 ТА | 24 | бмуюлР/Орх! | 8 | 81 | Ююж 39 пиАВІЯ8УЯ-С7 ТА | 2,5 | бмуклРЛОрх! | 8 | 85 ЮБюБ 48 пиАВІ8У6-С2 А | 34 | бмуклРЛОрх! | 8 | 86 | ющ 45 пиАрІ8у7-Си ТА | 4,3 | бмукилР/Орх! | 8 | 87 | 42 пиАрі8М9-С2 ІА | 24 | бмуюлР/Орхі! | 8 | 83 | з5 і доза наведена в мг/кг/день
Як описано в таблиці 11, кожне з досліджуваних гуманізованих антитіл було здатне пригнічувати ріст пухлини на мишачій ксенотрансплантатній моделі.
Приклад 12. Гуманізація антитіла до В7-НЗ спАБЗ
Химерне антитіло до В7-НЗ спАбБЗ відбирали для гуманізації, виходячи з його сприятливих властивостей як кон'югата, який пригнічує Всі-х!. (Всі-х/ї). Гуманізовані антитіла одержували на основі послідовностей СОК варіабельної ділянки важкого ланцюга (МН) і варіабельної ділянки легкого ланцюга (МІ) з СПАВЗ. Зокрема, послідовності зародкового типу людини відбирали для конструювання СОК-прищеплених гуманізованих антитіл на основі СПАБЗ, у яких домени СОК з
УН- ї М-ланцюгів СПАБЗ прищеплювали на різноманітні акцепторні послідовності важкого і легкого ланцюгів людини. На основі вирівнювань послідовностей УН і МІ. моноклонального антитіла СПАБЗ наступні послідовності людини були відібрані як акцептори: - ІАНМ1-69706 і ІЄНОЄМО1 для конструювання акцепторних послідовностей важкого ланцюга; - ІКМ2-28701 і ІКО4701 для конструювання акцепторних послідовностей легкого ланцюга;
ІаНМ1-69706 ІСНУЄ
ОМОЇ МОБаАЕЄМУККРИаЗЗУКУЗСКАЗО9И5ЗУуУаїв М МВОАРООСІ ЕУУМеаіїрідїапуаак"д9АМТІТАОК
ЗТЗТАММЕЇ 551 В5ЕОТАУМУУСАВХХХХххХ М СЮСТТ УТ (5ЕО ІЮ МО: 174); де хххххххх являє собою ділянку СОВ-НЗ.
Іакм2-28701 12КО4
РІММТО5РІ ЗІ РИМТРОЕРАБІЗСТвзаві!йзпдупу!йм М ОКРОСОЗРОЇ ГІМІдДвпгаза МРОНЕЗОВИ
СТОР КІЗАУМЕАЕОУаУМУУСххххххххх ас ТКМЕЇК (ЗЕО ІЮ МО: 175); де ххххххххх являє собою ділянку СОВ-Ї 3.
За допомогою прищеплювання відповідних СОЯ МН ії МІ спАБЗ у зазначені акцепторні послідовності одержували СОВ-прищеплені, гуманізовані і модифіковані послідовності МН і МІ.
Для одержання гуманізованих антитіл з можливими зворотними мутаціями у каркасній ділянці, мутації ідентифікували та вводили в послідовності СОРВ-прищеплених антитіл за допомогою синтезу варіабельного домену де помо або мутагенних олігонуклеотидних праймерів і полімеразних ланцюгових реакцій або обох. Для кожного із СОВ-прищеплених антитіл
Зо конструювали різноманітні комбінації зворотних мутацій та інших мутацій, як описано нижче.
Номери залишків для таких мутацій базуються на системі нумерації Кабаї.
Амінокислотні послідовності різних гуманізованих варіабельних ділянок важкого і легкого ланцюгів описані нижче в таблиці 12.
У випадку важких ланцюгів ПиАБЗУН.1 піддавали зворотному мутуванню один або декілька з наступних залишків у межах зони Меппіег і на стику МНЛ/І, які наведені далі: М481І, М67А, ІбОЇ,
А71М, К7ЗЕ, М8ОМ, У91єг, К940. У випадку легких ланцюгів пиАбБЗ1 МІ.1 піддавали зворотному мутуванню один або декілька з наступних залишків у межах зони Меппієг і на стику МНЛ/І: І2М,
У87Е;
Наступні гуманізовані варіабельні ділянки мишиного моноклонального антитіла спАБЗ клонували у вектори експресії ІД для визначення функціональних характеристик. - Гуманізований АБЗ МН.1 (пчІАБЗМУН.1) являє собою МН СОК-прищепленого гуманізованого
АБрЗ, яка містить послідовності каркасних ділянок ІЗНМ1-69706 і ІЗНОЄ"01. Воно також містить зміну СТЕ для попередження утворення піроглутамату. - Гуманізований АБЗ МН.Та (пиАБбБЗМН.Та) являє собою гуманізований формат на основі
ПиАВБЗУН.1 і містить 8 запропонованих зворотних мутацій у каркасній ділянці: М481І, М67А, ІбОЇ,
А71У, К7ЗА, М8ОМ, 91, НО4а. - Гуманізований АБЗ МН.165 (пиАБЗМУН.16Б) являє собою гуманізований формат між ПиАБЗМУН.1 і пчАБЗМН Та і містить 6 запропонованих зворотних мутацій у каркасній ділянці: М481І, М67А,
ІБ9Ї, А7ТУ, К7ЗА, 94. - Гуманізований АБЗ МІ.1 (пиАБЗМІ.1) являє собою МІ СОК-прищепленого гуманізованого
АБЗ, яка містить послідовності каркасних ділянок ІЗКМ2-28701 і ІЗКО4701. - Гуманізований АБЗ МІ .1а (пиАБЗМІ.1а) являє собою гуманізований формат на основі
ПиАБЗМІ..1 і містить 2 запропоновані зворотні мутації у каркасній ділянці: І2М, У87Е; - Гуманізований АБЗ МІ .1р (пиАрЗМІ..1р) являє собою гуманізований формат і містить тільки 1 запропоновану зворотну мутацію у каркасній ділянці: І2М.
Амінокислотні послідовності варіабельної ділянки і СОК вищенаведених гуманізованих антитіл описано в таблиці 12 нижче.
Таблиця 12
Послідовності УН і МІ. гуманізованих версій спПАБЗ
ЗЕО .
ІО Клон Ллянка Залишки Амінокислотна послідовність
МО: ілка
ЕМО МОБОАЕЄЕУККРОБЗУКУЗСКАВИОМТЕ5
З'УМУМНУУВОАРИОСИЇ ЕУМа ІнНРОЗОБТМ 125) пидрзУНни ГУН УМЕМЕКМВУТІТАОКУТОТАУМЕЇ 551 85ЕОТ
АУУУСАНОСВІ ХЕ МУСсОСТУТУ55
Залишки 26-35 пиАБЗУН.1 СОоВв-НІ1 із ЗЕО ІЮ МО-125 СУТЕ55УМУМН
Залишки 50-66 пиАБЗУН.1 Сов-на2 із ЗЕО ІЮ МО-125 ІНРОБаЗТМУМЕМЕКМ
Залишки 99-106 пиАБЗУН.1 СОов-нЗ із ЗЕО ІЮ МО-125 саві меру
ЕМО МОБОАЕЄЕУККРОБЗУКУЗСКАВИОМТЕ5
ЗУМУМНУУВОАРИаСаИї ЕМІСИ ІНРОЗИаЗТМУ 126) пидрзунла | УН МЕМЕКМВАТІ ТУОАЗТ5ТАУМЕЇ 551. 85ЕОТА
МУЕСАсСОааві гри сОосТ ТУ
Залишки 26-35 пПІАВБЗМУН.Та | СОВ-НІ із ЗЕО ІЮ МО-126 СУТЕ55УМУМН 11 | подЬЗуНла | СОВ-Но Залишки 5066 |) ІНРОЗО5ТМУМЕМЕКМ
І із ЗЕО ІЮ МО:126
Залишки 99-106 пПІАВБЗМУН.Та | СОВ-НЗ із ЗЕО ІЮ МО-126 саві меру
ЕМО МОБОАЕУККРОБЗУКУЗСКАБИМТЕ55У
МУМНУУВОАРИОСИ ЕУЛаИа ІНРОБИЗТМММЕМ 127 | пидрзунль ГУН ЕКМВАТІ ТУОВУТУТАУМЕЇ 5581 ВЗЕОТАУУУС
АдсасавімгриУусосттУТУ5о
Залишки 26-35 пчАВЗУН.ТЬ | СОВ-НІ із ЗЕО ІЮ МО 127 СУТЕ55УМУМН 11 | пндьзунль | сов-но Залишки 5066 ||| НРОБО5ТМУМЕМЕКМ
І із ЗЕО ІЮ МО:127
Залишки 99-106 пиАВЗУНТЬ | СОВ-НЗ із ЗО ІЮ МО-127 саві меру
РІММТО5РІ 5І РУТРІЕРАБІЗСНЗБЗОБІ УНН
Март АМУМ ОКРООБЗРОСЦ ІМКУЗМАЕБИМ 128 подьЗУст | М РОВЕЗО5О5ОТОЕТІ КІЗВУЕАЕОУСУУУСВО
ЗГТНУРУТРСаСсаИткУєїКк
Таблиця 12
Послідовності УН і МІ. гуманізованих версій спПАБЗ
ЗЕО . , ілка
МО:
Залишки 24-39 пПиЧАВБЗМІ. 1 СОоВв-І1 із ЗЕО ІЮ МО-128 в5ЗЗОБІ УнНЗМартмІ В
Залишки 55-61 пПиЧАВБЗМІ. 1 Ссов-І2 із ЗЕО І МО-128 КУБМАЕ5
Залишки 94-102 пПиЧАВБЗМІ. 1 СсОов-І З із ЗО ІЮ МО-128 ЗОЗТНУРУТ
ОМУМТО5РІ ЗІ РУТРОЕРАБІЗСНЗБЗОБІ УНЗ
Ма
ОТ АМУМ ОКРОІОБРОГСІМКУМАЕЗамМРОВ 129 | пиАБЗМІ ла | МІ. Е5 ававзатовЕТтКІЗВМЕАЕОМамуЕС5ОЗТНУР
УТ ба,асаткМєїКк 14 | пидьзмі ла сова | Залишки24739 Ж |в55051УНеМсОоТМВ
І із ЗЕО ІЮ МО:129
Залишки 55-61 пПИАБЗМІ ла | СОВ-І2 із ЗЕО ІЮ МО-129 КУБМАЕ5
Залишки 94-102 пПЧІАБЗМІ Ла | СОВ-І З із ЗО ІЮ МО-129 ЗОЗТНУРУТ
ОМУМТО5РІ ЗІ РУТРОЕРАБІЗСНЗБЗОБІ УНЗ
Март АМУМ ОКРООБЗРОСЦ ІМКУЗМАЕБИМ 130 поль ть | М. РОВЕЗОЗСО5СТОЕТІКІЗВУЕАЕОУСУУУСВ
ОЗТНУРУТРСаССИаткКМев Кк
Залишки 24-39 пПиАБЗМІ ЛЬ | СОВ-1 1 із ЗЕО ІЮ МО-130 в5ЗЗОБІ УнНЗМартмІ В
Залишки 55-61 пПиАБЗМІ ЛЬ | СОВ-І2 із ЗЕО ІЮ МО-130 КУБМАЕ5
Залишки 94-102 пчАБЗМІ ль | СОВ-І З із ЗО ІЮ МО-130 ЗОЗТНУРУТ
У результаті гуманізації СПАБЗ одержували 6 гуманізованих антитіл, зокрема пиАбБЗм, пПиАбБЗм2, пиАВЗУЗ, пиАрЗма4, пиАБІ1 85 і пиАбЗУб. Варіабельні ділянки важкого і легкого ланцюгів для кожної з цих гуманізованих версій АБ18 представлені нижче в таблиці 13.
Таблиця 13
Гуманізовані антитіла АБЗ пиАрЗм1 пиАВБЗ УНІ / пиАВрЗ МІ пиАрЗма пиАрЗ УНІ / пиАбЗ МІ-1 пиАрЗУЗ пиАрЗ УНТа / пиАБЗ МІта пиАрЗм4 пиАрЗ УНІ / пиАБЗ М 1р пиАрЗмМо5 пичАрЗ УНІ / пиАВЗ Мр пиАрЗУб пиАрЗ УНТа / пиАБЗ МІ 1р
Приклад 13. Визначення характеристик іп міго гуманізованих варіантів антитіла СПАБЗ
У результаті гуманізації СПАБЗ було одержано 6 варіантів (описаних у таблиці 13), які зберігали зв'язування з В7-НЗ людини, яке оцінювали за допомогою БАС5З (як описано в прикладі 6). Ці варіанти додатково характеризували щодо зв'язування за допомогою 5РК і як
АОС, кон'югованих із синтоном (лінкер-діюча речовина) С2-інгібітором Всі-х. Гуманізовані антитіла АБЗ також оцінювали щодо цитотоксичності для клітин (з використанням аналізу, описаного вище в прикладі 7). У таблиці 14 підсумовані характеристики іп міго гуманізованих варіантів СПАВБЗ. Як контроль використовували АОС, що містить СспПАбБЗ, кон'юговане із синтоном
С7.
Таблиця 14
Визначення характеристик іп міго гуманізованих варіантів СПАБЗ
Цитоток- (зв'язуван- Афінність "пінія.
Ід. номер Спосіб рАК за | 95 адд : голих тАб .
Адрес Номе кон'югації М5 за ЕС Я 8 пи В7- (Віасоге КЛІТИН й В НЗ) Ко) 0 НОСЗВ
ЕСтво (НМ) ІСво) (нм) спар3-С2 | 8,13 | --.|А | 38 | | 061 | 190Е-08 подЬЗмІ-С2 | 125, 128 5,20Е-10 подЬЗмМ2-СЯ | 127, 128 6,90Е-10 подЬЗуЗ-С2 | 126, 129 2,30Е-10 пидЬЗу4-С2 | 125, 130 5,70Е-10 поАЬЗУ5-СЯ | 127, 130 2,30Е-10 подьЗув-СЯ | 126, 130 2,00Е-10
Приклад 14. Ефективність іп мімо гуманізованих варіантів СПАБЗ як АОС з інгібітором Всі-х!.
Відбирали два гуманізованих варіанта (пиАбБЗм2 і пПиАБЗмб) на основі сильної цитотоксичності іп мійго як С2-кон'югатів і прийнятних властивостей агрегації для оцінки на мишачій ксенотрансплантатній моделі іп мімо клітин дрібноклітинного раку легенів (клітин МСІ-
НІ146), як описано в матеріалах і способах у прикладі 8. Обробка однократною дозою мишей з пухлинами приводила до пригнічення росту пухлини і затримці росту пухлини для обох гуманізованих антитіл, кон'югованих з типовим інгібітором Всі-хі, і результати підсумовані в таблиці 15.
Таблиця 15
Ефективність іп мімо гуманізованих варіантів СПАБ3-С2 . Дозаїгі/шлях є,
Спосіб Кількість о о
АрС кон'югації рАВН уведення! мишей Таїтах (У) | ТО (Ов)
АВОЗ95 171-..| . | бмижиРОЮЮ | 8 | 0 | 0 пидрЗМ2-С2 бмг/клРлрх! | 8 | 83 | 52 пидрЗУв-С бмг/клРлрх! | 8 | 9 | 88
І(а|Ї доза наведена в мг/кг/день
Приклад 15. Модифікації СОК гуманізованого варіантного антитіла пиАбЗм2 пПиАрЗУ2 продемонструвало сприятливі властивості зв'язування і знищення клітин. Однак вивчення амінокислотних послідовностей варіабельних ділянок ПиАбЗмМ2 виявило можливі сайти дезамідування та/або ізомеризації.
Амінокислотні послідовності варіабельних ділянок пиАбБЗ описані нижче, зокрема легкий ланцюг (пиАБЗМІ1) і важкий ланцюг (пиАБЗМНІр). Можливі сайти дезамідування та/або ізомеризації в СОК МН (СОК2 в амінокислоті "аб" ії МІ (СОКІ1 в амінокислоті "пд") виділені курсивом і, таким чином, сконструйовані для поліпшення виробництва антитіл. СОК описані малими літерами в послідовностях нижче.
Щоб одержати варіанти пиАбЗм2, у яких відсутні ці можливі сайти дезамідування та/або ізомеризації, кожну з амінокислот, вказаних нижче (х і 7; що представляють можливі сайти в
СО МІ ї СОК2 МН), піддавали мутагенезу. Одержані 30 варіантів МІ. спаровували з вихідною
Зо МН пПиАрЗмМ2 і досліджували щодо зв'язування. Одержані 29 варіантів МН спаровували з вихідною МІ ПпиАрЗм2 і досліджували щодо зв'язування. Вдалі варіанти МН поєднували і досліджували із продуктивними варіантами Мі, що несуть зміни в ЇСОРМ1, щоб у кінцевих гуманізованих варіантах були відсутні можливі сайти дезамідування та/або ізомеризації в СОВ.
Амінокислотні послідовності варіантів представлені в таблиці 16 нижче. Амінокислотні послідовності повної довжини важкого ланцюга і легкого ланцюга варіанта пиАБЗм2, пиАБЗм2.5, представлені в ЗЕО ІЮ МО: 170 та 171, відповідно. Амінокислотні послідовності повної довжини важкого ланцюга і легкого ланцюга варіанта пиАБбЗм2, пиАБЗм2.6, представлені в 5ЕО ІЮ МО: 172 та 173, відповідно.
ПиАБЗ МІ
ОІММТОЗРІ БІ РМТРЕИЕРАБІЗСтв5азімизпоафу ПММ ОКРООБРОЇ ГІМКУзпизаУРєРОопЕЗаБОЗВОТО
АЕКІЗАУМЕАЕОУМамМУмСзавіпуруїг ас ТКМЕЇїК (ЗЕ ОО МО: 128) ха (15 варіантів) (ФЕО ІО МО: 178) п: (15 варіантів) (ЗЕО ІО МО: 179)
ПиАВЗ УНІТЬ
ЕМО МОБСАЄЕУККРОЗЗУКУЗСКАБунвзумтиУМ МАОАРООСІ ЕУМІСНраздзіпупетікпП ВАТ.
ТМОВЗТЗТАММЕЇ 551 В5ЕОТАМУМСАСадпуаумаспзО,ваттмтмьь5 (5ЕО І МО: 127) (15 варіантів) хв (ЗЕО ІО МО: 180) (14 варіантів) а2 (ЗЕО ІЮ МО: 181) де (для МІ і МН), х усі амінокислоти, за винятком: М, С, М, О або 0. 7 Е усі амінокислоти, за винятком: М, С, б, 5, М або Р.
Запропоновані зворотні мутації у каркасній ділянці підкреслені (див. приклад 12).
Таблиця 16
Послідовності варіабельних ділянок варіантів антитіл пиАбЗмМ2 зЕО Іо Клон Ділянка Залишки Амінокислотна послідовність
МО: білка
ЕМО МОБСОАЕУККРОБОЗУКУВСКАБИУТЕ5
ЗУММНУМВОАРИОСІ ЕММСГ ІНРМУБОаТМ 181 пидрамг 1 | УН УМЕМЕКМВАТІ ТУОВУТОТАУМЕЇ 551 85ЕО
ТАУМУУСАсСОСаВІ МЕМ УгУ5о5
Залишки 26-35 пиАБЗм2,1 | СОВ-НІ із ЗЕО І МО-131 СУТЕ5Б5УМ МН 132 Залишки 50-66
Б пиАБЗм2,1 | СОВ-Н2 із ЗЕО І МО-131 НРУ БОаЗТМУМЕМЕКМ
Залишки 99-106 пиАБЗм2,1 | СОВ-НЗ із ЄЕО ІЮ МО-131 асавВІМБрУ
РІММТО5РІ 5І РМТРЕЕРАБІЗСН5ЗБОБІ МН арт вм ОокКРООБРОЇ МКУ5МАЕ5 133. | полози | М. СУРОВЕ5О5О5СТОЕТІКІЗВУЕАЕСУСУУ
УС5ОЗТНУРУТРОССаИТткмМЕїКк
Залишки 24-39 пиАБЗм2,1 | СОВ-Ї 1 із ЗЕО Ір МО-133 воБ5ОБІ УнОБартмі
Залишки 55-61 пиАБЗм2,1 | СОВ-І2 із ЗЕО Ір МО-133 КМ5МАЕ5
Залишки 94-102 пиАБЗм2,1| СОВ-І З із ЄЕО ІЮ МО-1З3З ЗОБТНУРУТ
ЕМО МОБСОАЕУККРОБОЗУКУВСКАБИУТЕ5
ЗУММНУМВОАРИОСІ ЕММСГ ІНРМУБОаТМ 181 пидрзма,2 | МН УМЕМЕКМВАТІ ТУОВУТОТАУМЕЇ 551 85ЕО
ТАМУУСАСсСОССВІ МЕ МмУсОаТтУТУ5о
Залишки 26-35 пиАБЗм2,2 | СОВ-НІ із ЗЕО І МО-131 СУТЕ5Б5УМ МН 132 пидьзу2,2| СОВ-но | Залишки 5066 Ж) ІНРМУЗС5ТМУМЕМЕКМ ' із ФЕО ІЮ МО:131
Таблиця 16
Послідовності варіабельних ділянок варіантів антитіл пиАбЗмМ2
ЗЕО Іо Клон Ділянка Залишки Амінокислотна послідовність
МО: білка
Залишки 99-106 пиАБЗм2,2| СОВ-НЗ із ЗЕО ІЮ МО-131 ваВІМЕрУ
РІММТО5РІ ЗІ РУТРаЕРАБІЗБСНОЬУВОВБІ М
НОЗМАОТМІ В/М ОКРИОБРОЇ МКМ МАЕ 135 | пиАрЗмг,2 | МІ. ЗСУРОВЕЗО9С5СТОЕТІКІЗВУЕАЕОУСУ
УУСБОБТНУРУТРаСаткМвїКк
Залишки 24-39 пиАБЗм2,2| СОВ-І 1 із ЄЕО ІЮ МО" 135 вББЗОБІ МНОМАОТМІ В
Залишки 55-61 пиАрЗМ22 СО ев р МО 135 | КУЗМАЕ5
Залишки 94-102 пиАБЗм2,2 | СОВ-І З із ЗЕО ІЮ МО-135 ЗОБТНУРУТ
ЕМОЇ МОБОАЕУККРИаБЗУКУЗСКАБИаМТЕ
З5УММНИУМАОАРИОсСІ ЕУМСГ ІНРМУ/ ЗО 131 ПиАБЗмМ2,3 | МН ЗТМУМЕМЕКМВАТІ ТМОА5ЗТ5О5ТАММЕЇ 55
І АБЕОТАМУУСАсаТсаснві Ер адаТаттМ тУ55
Залишки 26-35 пиАБЗм2,3 | СОВ-НІ із ЗЕО ІЮ МО-131 СаУТЕ55ММ МН 132 пиАЬЗуг,з | СОвВ-но | Залишки 50-66 Ю)) НРМУЗО5ТМУМЕМЕКМ ' із ЗЕО ІЮ МО:131
Залишки 99-106 пиАБЗм2,3 | СОВ-НЗ із ЗЕО ІЮ МО-131 ваВІМЕрУ
РІММТО5РІ 5І РУТРаЕРАБІЗБСНЬЗВЗОБ
І МУНОМООТМІ ММ ОКРИаОБРОЦИ ІМК 137 пидрЗмаг, З М. М5МАВЕЗСУРОВЕЗС5СО5СТОЕТІКІВВ
МЕАЕОМамМмУУС5ОЗТНУРУТЕ,СааТткКМЕїК
Залишки 24-39 пиАБЗм2,3 | СОВ-1 1 із ЄЕО ІЮ МО-137 в5БЗОБІ МНОМОЮТМІ В
Залишки 55-61 пиАрЗМ2і3 СОН бЕО р МО 137 | КУЗМАЕ5
Залишки 94-102 пидЬЗм2,3| СОНАЗ | У евО Ю МО-137 ЗО8ТНУРУТ
ЕМО МОБСАЕУККРОЗБЗУКУЗСКАВОСУ
ТЕ55УММНМУУВОАРООСІ ЕМО ІНРЕБ 139 ПиАБЗм2,4 | МН а5ТМММЕМЕКМААТІ ТМОВ5ТЗТАУМЕЇ 5
ЗІ АВБЕОТАУУУСАсИааТвВвІ МЕр УМ аоатТТ
УТтУБ5
Залишки 26-35 пиАБЗм2,4 | СОВ-НІ із ЗЕО Ір МО-139 СаУТЕ55ММ МН 140 пиАЬЗуг,А | сОв-но | Залишки 5066 Ж | ІНРЕЗ5СО5ТМУМЕМЕКМ ' із ЗЕО ІЮ МО:139
Залишки 99-106 пидЬЗм2,4| СОВ-НЗ | У евО 0 МО-139. ЗОВ УРОУ
РІММТО5РІ 5І РУТРаЕРАБІЗБСНЬЗВЗОБ
І УНЗЗартмі АММ ОКРИООБРОЇ УК 133 пидрЗмаг, я М. М5МАЕЗСУРОВЕЗСО5С5СТОЕТІКІЗВМ
ЕАЕОМамМмУУС5ОЗТНУРУТЕаааТткМЕ Кк
Таблиця 16
Послідовності варіабельних ділянок варіантів антитіл пиАбЗмМ2
ЗЕО Іо Клон Ділянка Залишки Амінокислотна послідовність
МО: білка
Залишки 24-39 пиАБЗм2,4 | СОВ-Ї 1 із ЗЕО І МО-133 855051 УНЗБартмІ В
Залишки 55-61 пиАБЗм2,4| СОВ-І 2 із ЗЕО І МО-133 КУБМАВЕ5
Залишки 94-102 пиАБЗм2,4| СОВ-І З із ЗЕО ІЮ МО-13З 5ОБТНУРУТ
ЕМО МОБОАЕУККРИаЗБОЗУКУЗСКАВИ У
ТЕ5ББУММ МН МАОА РОСІЇ ЕМО ІНРЕ 139 пПиАБЗм2,5 | МН 5БавтТМУМЕМЕКМВАТІ ТМОВЗТЗТАХУМЕ
І 55І ВБЕОТАУУУСАСИаИТВІ МЕ ММС аттМТУ55
Залишки 26-35 пиАБЗм2,5 | СОВ-НІ із ЗЕО І МО-139 СУТЕ55МУМУ МН 140 пиАБЗУг,5 СОВ-Но | Залишки 5066 |) ІНРЕ5О5ТМУМЕМЕКМ ' із ЗЕО ІЮ МО:139
Залишки 99-106 пиАБЗм2,5| СОВ-НЗ із ЗЕО ІЮ МО-139 аавІ мери
РІММТОБ5РІ 5І РУТРОЕРАБІЗСН5ОЗОБІ.
МНОМАОТМІ АММІ ОКРООБРОЦПІ МКМ
135 пидоЗма,Б | МІ. МВЕ5ОУРОВЕ5О5О5СТОЕТІКІЗВУЕАЕ рмамУиУУсС5О5ТНУРУТЕаСсаИткмвїКк
Залишки 24-39 пиАБЗм2,5| СОВ-1 1 з ЗЕО ІЮ МО-135 855051 УНЗМВОТМІ В
Залишки 55-61 пиАБЗм2,5| СОВ-І 2 із ЗЕО 10 МО-135 КУБМАВЕ5
Залишки 94-102 пиАБЗм2,5| СОВ-І З із ЗЕО ІЮ МО-135 5ОБТНУРУТ
ЕМО МОБОАЕУККРИаЗБОЗУКУЗСКАВИ У
ТЕ5ББУММ МН МАОА РОСІЇ ЕМО ІНРЕ 139 пиАБЗм2,6 | МН 5БавтТМУМЕМЕКМВАТІ ТМОВЗТ5ОТАХУМЕЇ. 55І АВБЕОТАУУУСАсСИасВІ УХЕрУМм аа
ТТМТУ55
Залишки 26-35 пиАБЗм2,6 | СОВ-НІ із ЗЕО І МО-139 СУТЕ55МУМУ МН 140 пиАБЗУг, в СОвВ-Но | Залишки 5066 |) ІНРЕ5О5ТМУМЕМЕКМ ' із ЗЕО ІЮ МО:139
Залишки 99-106 пиАБЗм2,6 | СОВ-НЗ із ЗЕО ІЮ МО-139 аавІ мери
РІММТОБ5РІ БІ РУИТРОЕРАБІЗСН5ЗБЗОБІ М
НОМОЮТМІ В/М ОКРООБРОЇ ППУИКУЗМА 187 у пидрзмг,в І М. ЕЗСУРОВЕЗО5О5СТОЕТІКІЗВУЕАЕОМ
СУУУС5ОЗТНУРУТЕаааТткмМЕ Кк
Залишки 24-39 пиАБЗм2,6 | СОВ-1 1 з ЗЕО ІЮ МО-137 855051 УНОМОЮТМІ В
Залишки 55-61 пиАБЗм2,6| СОВ-І 2 з ЗЕО ІЮ МО-137 КУБМАВЕ5
Залишки 94-102 пиАБЗм2,6| СОВ-І З із ЗЕО ІЮ МО-137 5ОБТНУРУТ
Таблиця 16
Послідовності варіабельних ділянок варіантів антитіл пиАбЗмМ2
ЗЕО Іо Клон Ділянка Залишки Амінокислотна послідовність
МО: білка
ЕМОЇ МОБОАЕУККРИАЗБЗУКУЗСКА5ВИ
УТЕБ5БУМУ МНУ МВОАРОаССИГЕМЛаИИІнР 141 пиАВЗМг,7 ІЗОЗТМУМЕМЕКМВАТІ ТМОВЗТЗТАММЕ
І 55І В5БЕОТАУУУСАсасВві Мер мМусО атТтУТУ55
Залишки 26-35 пиАБЗм2,7 | СОВ-НІ із ЗЕО ІЮ МО-141 СаУТЕ55ММ МН 142. | пиАьзуг2,| СОв-но Залишки 5066 Ю |; ІНРІЗО5ТМУМЕМЕКМ " із ЗЕО ІЮ МО:141
Залишки 99-106 пиАБЗм2,7 | СОВ-НЗ із ЗЕО ІЮ МО-141 ваВІМЕрУ
РІММТО5РІ ЗІ РУТРаЕРАБІЗБСНОВОБІ
УМНБУБартмі ВМУМІ окРООБРО МКУ 133 пидрЗмг,7 МВЕ5ОУРОВЕ5О5О5СТОЕТІКІЗВУЕАЕ рУуаУСВОЗТНУРУТРаСсаткМЕїКк
Залишки 24-39 пиАБЗм2,7 | СОВ-І 1 із ЄЕО ІЮ МО-13З взЗОБІ УнНЗЗартмІв
Залишки 55-61 пиАрЗМ2,7 СО ев р МО 133 | СУМА
Залишки 94-102 пиАБЗм2,7 | СОВ-І З із ЗЕО ІЮ МО-133 ЗОБТНУРУТ
ЕМОЇ МОБОАЕУККРИАЗБЗУКУЗСКА5ВИ
УТЕБ5БУМУ МНУ МВОАРОаССИГЕМЛаИИІнР 141 ПиАБЗмМ2,8 | УНН ІЗОЗТМУМЕМЕКМВАТІ ТМОВЗТЗТАММЕ
І 55І В5БЕОТАУУУСАсасВві Мер мМусО атТтУТУ55
Залишки 26-35 пиАБЗм2,8 | СОВ-НІ із ЄЕО ІЮ МО-141 СаУТЕ55ММ МН 142 пиАБЗуУг,я СОвВ-но Залишки 5066 0) НРІБОЗТМУМЕМЕКМ " із ЗЕО ІЮ МО:141
Залишки 99-106 пидЬЗм2,8 | СОВ-НЗ | У евО Ю МО-141 ЗОВ УРОУ
РІММТО5РІ ЗІ РУТРаЕРАБІЗБСНОЬУВОВБІ М
НЗМАОТМІ АМ/МІ ОКРООБРОЇ МКУ МА 135 |пиАрЗМ2,В | МІ. ЕЗСУРОВЕ5О5О5СТОЕТІ КІЗВУЕАЕОУС
УУУСБОЗТНУРУТРаСаИткМЕїКк
Залишки 24-39 пиАБЗм2,8 | СОВ-Ї 1 із ЄЕО ІЮ МО" 135 вББЗОБІ МНОМАОТМІ В
Залишки 55-61
ПиАрЗМ2,8 СО его р МО 135 | КУЗМАЕ5
Залишки 94-102
ПиАрЗМ2,8 СО его р МО-135 | ЗО5ТНУРУТ
ЕМО МОБСАЕУККРОЗ5УКУЗСКАВ
СУТЕ5Б5УММНУУВОАРСОСІ ЕМІСІ. 141 пиАБЗМ2,9 МН ІНРІЗОЗТМУМЕМЕКМВАТІ ТМОВ5Т5Т
АУМЕ! 551. ВЗЕОТАМУУСАСООВІ УЕО ужма7араттУтУз5 пиАЬЗуг,.я | СОВ-ні | Залишки 26735 Ж |Зуте55УМуМН " із ЗЕО ІЮ МО:141
Таблиця 16
Послідовності варіабельних ділянок варіантів антитіл пиАбЗмМ2
ЗЕО Іо Клон Ділянка Залишки Амінокислотна послідовність
МО: білка
Залишки 50-66 пПиАБЗм2,9 | СОВ-Н2 із ЗЕО ІЮ МО-141 ІНРІБОЗТМУМЕМЕКМ
Залишки 99-106 пПиАБЗм2,9 | СОВ-НЗ із ЄЕО ІЮ МО-141 саві меру
РІММТО5РІ 5І РУТРІЕРАБІЗСНЗБЗОБІ
МНЗМООТМІ АММ ОКРИОБРОЇЛТМКМ
137. |пиАрЗмг,9 | МІ. ЗМАРЗСУРОВЕ5О5С5СТОЕТІ КІЗВУЕ
АЕОУСУУУСЗОЗТНУРУТРССИтКкМЕКк
Залишки 24-39 пПиАБЗм2,9 | СОВ-Ї1 із ЗЕО ІЮ МО-137 вА5БЗОБІ МУНОМООТМІ В
Залишки 55-61 пиАЬЗм2,9 | СОВ-І 2 із ЗЕО І МО 137 КУБМАЕ5
Залишки 94-102 пПиАБЗм2,9 | СОВ-І З із ЄЕО ІЮ МО-137 ЗОЗТНУРУТ
Приклад 16. Визначення характеристик іп міго варіантів пПиАБЗмМ2
Видалення можливих сайтів дезамідування та/або ізомеризації (описаних у прикладі 15) дало тільки 6 варіантів, які зберігали зв'язування як з В7-НЗ людини, так і В7-НЗ макака- крабоїда, які екзогенно експресуються на фібробластах 3Т12 миші, яке оцінювали за допомогою
ЕАСЗ (як описано в способах прикладу 6).
Такі нові антитіла до В7-НЗ додатково характеризували щодо зв'язування за допомогою
ЗРЕ, і кон'югували із синтоном С2-Всі-хі ії, та оцінювали щодо цитотоксичності для клітин (з використанням способів, описаних у прикладі 7). У таблиці 17 наведені характеристики іп міго шести гуманізованих варіантів пПиАБЗма.
Таблиця 17
Визначення характеристик іп міїго гуманізованих варіантів пПиАбБЗмаг, зокрема голих антитіл і АОС
ЕПІЗА| ЕГАС5 (ЕСво Цитотоксич-
Номер | Спосіб оАВ то адд| пВ7- НМ) Афінність | ність (лінія
АОС послідов- |кон'юга- за МУ за нЗ сувт- голих тАб |/клітин Н8Ві47 ності ції 5ЕС | ЕСоо | нВ7-НЗ3 ня (Віасоге, Ко) ІСво)
НМ (НМ) пиАрЗмМа-С2 |127,128| А /35| /044| 51 |287| 230Е-09 показник показник пидьЗмг,5-С7 | 139, 135 5,30Е-09 пидьЗм2,6-С2|139,137| А /33| 15 /009| 5,64 |3,31| 580Е-08
Недостатній показник
Як описано в таблиці 17, результати показали, що всі шість варіантів пиАБЗмМ2 мали подібні властивості зв'язування з клітинами, які експресують В7-НЗ людини або макака-крабоїда, порівняно із джерелом пиАБЗм2. Із шести варіантів пиАБбБЗм2 чотири антитіла (пиАБЗм2.5,
ПиАрЗм2.6, пиАБЗм2.8, пиАБбЗмМ2.9) показали сильну цитотоксичність у клітинах Н8В47 при кон'югації з типовим синтоном С2-Всі-хі і.
Приклад 17. Гуманізація антитіла до В7-НЗ спАб1З
Химерне антитіло до В7-НЗ спАбБ13 вибрали для гуманізації на основі його характеристик зв'язування і сприятливих властивостей як АОС (при кон'югації з інгібітором Всі-хі.).
До гуманізації СПАВБ1З3 модифікували з метою мінімізації можливого дезамідування в СОКЗ легкого ланцюга (ФОУМЗУРЕТ (5ЕО ІЮ МО:182); можливий сайт дезамідування зазначений у вигляді залишків "Ме" (виділені курсивом)). Вводили точкові мутації в положення амінокислоти, що відповідає "М" та/або "5" в СОКЗ легкого ланцюга СпПАбІ13, у результаті чого було отримано 30 варіантів. Антитіла, які містять такі варіанти СОКЗ легкого ланцюга, потім піддавали скринінгу на їх здатність зберігати характеристики зв'язування спАбІ13. Варіанти, які містять
СОМКЗ з точковою мутацією триптофану (МУ) замість серину "5" у мотиві "М5" (тобто
ООУМУМУРЕТ (5ЕО ІЮО МО: 39)) зберігали властивості зв'язування вихідного антитіла спАб13.
Заміна залишку 5 залишком УМ в СОКЗ була неочікуваною, враховуючи структурні відмінності між серином і триптофаном, а також значну роль, яку СОКЗ відіграє у зв'язуванні антигена.
Гуманізовані антитіла одержували на основі послідовностей СОМ варіабельної ділянки важкого ланцюга (МН) і варіабельної ділянки легкого ланцюга (МІ) спАБ13, зокрема СОКЗ легкого ланцюга з "ММУ". Зокрема, послідовності зародкового типу людини відбирали для конструювання СОК-прищеплених гуманізованих антитіл на основі СПАБІ13, у яких домени СОК з МН- і Мі -ланцюгів прищеплювали на різноманітні акцепторні послідовності важкого і легкого ланцюгів людини. На основі вирівнювань послідовностей МН і Мі моноклонального антитіла
СпПАБІ3З наступні послідовності людини були відібрані як акцептори: - 14НМ4-р"01(0-1) ї ІЗНОбЄ"ОЇ для конструювання акцепторних послідовностей важкого ланцюга; - ІАКМ1-39701 і ІЗКО2701 для конструювання акцепторних послідовностей легкого ланцюга;
ІанМа4-6 їсНОб
ОМОГ ОЕБаРОИЇУКРБЗЕТІ БІ ТСАМ5ДУузіззауучЧУМ ОРРаКаї ЕУМавіунздзіуупроікК АМТІЗМОТ5
КМОРГБІ КІ ЗБМТААОТАМУУСАВНХХХххххМ СОСТТУТУ55 (ЗЕО І МО: 176); де ххххххх являє собою ділянку СОМ-НЗ.
ІакМм1-39 1аКО2
РІОМТО5РББІ БАБМОаОВМТІТ СтаздазіззупУу МООКРОКАРКИ ІМааззідза У РЗОВЕЗОЗИЗаИатТОтІ.
ТІББГОРЕОРАТУУСххХхххххххРООСТКІ БІК (ЗЕО 10 МО: 177); де ххххххххх являє собою ділянку СОБ-Ї 3.
За допомогою прищеплювання СОКЗ легкого ланцюга з "ММУ" та інших п'яти відповідних
СОК МН ої Мі спАБбБ13 у вказані акцепторні послідовності одержували СОК-прищеплені, гуманізовані і модифіковані послідовності МН ії ММ. Для одержання гуманізованих антитіл з можливими зворотними мутаціями каркасної ділянки, мутації ідентифікували та вводили в послідовності СОВ-прищеплених антитіл за допомогою синтезу варіабельного домену де помо або мутагенних олігонуклеотидних праймерів і полімеразних ланцюгових реакцій або обох за допомогою способів, добре відомих з рівня техніки. Для кожного із СОМК-прищеплених антитіл конструювали різноманітні комбінації зворотних мутацій та інших мутацій, як описано нижче.
Номери залишків для таких мутацій базуються на системі нумерації Кабаї.
Наступні гуманізовані варіабельні ділянки мишачих моноклональних антитіл до спАб13 клонували у вектори експресії | для визначення функціональних характеристик. - Гуманізований АБбБІЗ3 МН.1 (пшиАБбБІЗМН.!1) являє собою МН СОК-прищепленого гуманізованого АБІ3, який містить послідовності каркасних ділянок ІЗНМ4-Б701 (0-1) ії ІЗНОЄ"О1.
Воно також містить зміну О1Е для попередження утворення піроглутамату. - Гуманізований АВБ13 МН.1 (пиАб13 МН.Та) являє собою гуманізований формат на основі
ПиАБІЗМУН.1 ї містить 9 запропонованих зворотних мутацій у каркасній ділянці: 525Т, Р4АОЕ,
КаЗМ, І48М, М671І, 685, М718, 579г, НУ4а. - Гуманізований АБ13 МН.16 (пиАБІТЗУН.16р) являє собою проміжний формат між пиАБ1ТЗМУН.1 і пиАБІЗМН Та і містить 4 запропоновану зворотню мутацію у каркасній ділянці: КАЗМ, І48М,
М671, М718. - Гуманізований АБ13З МІ.1 (пиАБ1ЗМІ..1) являє собою МІ. СОК-прищепленого гуманізованого
АБрТІ3, яка містить послідовності каркасних ділянок ІЗКМ1-39701 і ІЗНУОЄ"О1. - Гуманізований АБ1ІЗ3 МІ Ла (пиАБІТЗМІ.Та) являє собою гуманізований формат на основі пПиАБІ ЗМІ. 1 і містить 4 запропонованих зворотних мутації у каркасній ділянці: А435, І 46А, Т85Е,
У87н. - Гуманізований АБ13З МІ.16 (пиАБ13МІ..1р) являє собою проміжний формат між пиАбБІТЗМІ.1 ї
ПиАБІТЗМІ.1а і містить 1 запропоновану зворотню мутацію у каркасній ділянці: 87. 60 Амінокислотні послідовності варіабельних ділянок і СОЕ. згаданих вище описані в таблиці 18 нижче.
Таблиця 18
Амінокислотні послідовності варіабельних ділянок гуманізованого АБ1З3
ЗЕО .
ІО Клон Ділянка Залишки Амінокислотна послідовність
МО: білка
ІОМТО5РБУБІ БАБМОаОВМТІТСКАБО
ММаєЕмМмМАМУМООкКРИаКАРКІ ІМ5АБУ 143 | подріЗМІ 1 М. ВУЗСУРЗВЕ5О5О5СТОЕТІ ТІЗ5І ОР
ЕОРБАТУМСООММУМРЕТЕСОСТКІ ЕК
Залишки 24-34
ПиАБІЗМІ..1 СоВв-І1 із ЗЕО 10 МО-143 КАБОММИаєЕММА
Залишки 50-56
ПиАБІЗМІ..1 СсОоВв-І2 із ЗЕО ІЮ МО-143 5АБУВУ5
Залишки 89-97
ПиАБІЗМІ..1 СсОоВв-ІЗ із ЗЕО Ір МО-143 ООММУМУРЕТ
РІОМТО5РББІ БАБМИаОВМТІТСКАБОМ
МаЕММАМ УООКРОКОРКАЇ ІМ5АБУВ 144 |поАрІЗМіла |М. УЗСУРЗВЕ5О5С5СТОЕТІ ТІ ОРЕО
ЕАЕМЕСООММУУРЕТЕСОСТКІ БІК
Залишки 24-34
ПиАБІЗМІ Ла СОов-11 із ЗЕО 10 МО-144 КАБОММИаєЕММА
Залишки 50-56
ПиАБІЗМІ Ла СсОоВв-І2 із ЗЕО ІЮ МО-144 5АБУВУ5
Залишки 89-97
ПиАБІЗМІ Ла СсОоВв-ІЗ із ЗЕО ІЮ МО-144 ООММУМУРЕТ
ЕМОГ ОЕБаОаРОЇІ МКРБЕТІ 5І ТСАМ5ИаУ5І
Т5ам5УМУНУМВОРРОаКаї ЕУМІаМІНЬЗО5 146. | пшІАРІЗУН УН тМеВіКвНупвуртВкМОг Віку
ААОТАМУУСАВХОВОУРЕУМИЦСОСТТМТМ
Залишки 26-36
ПчАБІЗМН.1 СОВв-НІ із ЗЕО ІЮ МО-146 аУБІТЗаУБМН
Залишки 51-66
ПчАБІЗМН.1 СсОов-Н2 із ЗЕО ІЮ МО-146 МІНББаБТМУМРБІ КК
Залишки 99-105
ПчАБІЗМН.1 СсОов-нЗ із ЗЕО Ір МО-146 авівин ий
РІОМТО5РББІ БАБМИаОВМТІТСКАБОМ уп
ЕММА УОСОКРОКАРКІ І ІМ5АБУНУВИаМ 145 | пиАВІЗМІ 16 МІ. Р
ЗНЕБавБОаБатовТІ ТІЗБІ ОРЕОБАТУЕС (Ф.
ОММУММРЕТЕСОСТКІ ЄІК
Залишки 24-34
ПиАБІЗМІ ЛЬ СоВв-І1 із ЗЕО ІЮ МО-145 КАБОММИаєЕММА
Залишки 50-56
ПиАБІЗМІ ЛЬ СсОоВв-І2 із ЗЕО ІЮ МО-145 5АБУВУ5
Залишки 89-97
ПиАБІЗМІ ЛЬ СсОоВв-ІЗ із ЗЕО Ір МО-145 ООММУМУРЕТ
Таблиця 18
Амінокислотні послідовності варіабельних ділянок гуманізованого АБ1З3
ЗЕО .
ІО Клон Лелянка Залишки Амінокислотна послідовність
МО: ілка
ЕМОГ ОЕБОа РОЇ МКРБЗЕТІ 5І ТСАМУТОИаУ5І т
ЗаУБМУНУАОгєРОМа ЕУМИаМмІНЗбЗО5 147 | пюАБІЗУНла УН т
М'УМРБІ КЗВІЗІЗАОТ5ОКМОЕРІ КІ 55МТ
АА
ОТАУУМСАСУООМЕгЕММУСОСТТМТУ55
Залишки 26-36 пчІАрІЗУНТа СОоВв-НІ1 із ЗЕО ІЮ МО147 суУвБІтзахвмн 34 | поАБІЗМНла | сов-но | Залишки 5166 юю У Не5ОБТМУМРБІ К5
І із ФЕО ІЮ МО:147
Залишки 99-105 пчІАрІЗУНТа СОов-нЗ із ЄЕО ІЮ МО-147 МООМЕЕУ
ЕМОГ ОЕБОаРОЇ МКРБЗЕТІ БІ ТСАУБИаМБІ т5
СУБМУНУМІВОРРОМа! ЕУУМаМІНЬЗВЗИаЗТ 148 | пАбІЗУН.ТЬ УН МУ
МРБЇ КЗАВІТІЗАОТОКМОЕ5І КІ 55МТАА
ОТА
МУУСАВМООУЕЕ УМ СОС,СТТУ ТУ
Залишки 26-36 пПчІАрІЗУН.ТЬ СОоВв-НІ1 із ЗЕО Ір МО-148 суУвБІтзахвмн
Залишки 51-66 пПчІАрІЗУН.ТЬ Сов-на2 із ЗЕО Ір МО-148 УноЗавзтМУМРБІК5
Залишки 99-105 пПчІАрІЗМН.ТЬ СОов-нЗ із ЄЕО ІЮ МО-148 МООМЕЕУ
Приклад 18. Одержання варіантів пиАБбБ1З3
Амінокислотні послідовності З МН і З МІ. ділянок гуманізованих варіантів АБ13, описані в таблиці 18, спаровували разом для одержання 9 варіантів пиАбБ13, описаних у таблиці 19.
Амінокислотні послідовності повної довжини важкого ланцюга і легкого ланцюга варіанта
ПиАБІ1ТЗ3М, пиАБ13М1, представлені в ЗЕО ІО МО: 168 та 169, відповідно.
Таблиця 19
Послідовності варіабельних ділянок сконструйованих варіантів ПиИАБІ1З
ЗЕО .
ІО Клон Ллянка Залишки Амінокислотна послідовність
МО: ілка
ЕМО ОББОаРОЇ МКРБЕТІ 5І ТСАМТ аУБІТБамЗМНУМІВОгРаТмаї ЕМ 147 | пиАБрІт Змі УН МмамІіНвЗавтТмМУМРБІ КЗВІВІЗНО
ТЗКМОРЕНРІ КІ 55МТААОТАМУМСА сМООМгЕУмУуСсСОаТТУТУ5о
Залишки 26-36 пПиАрІт Зм СОоВв-НІ1 із ЗЕО ІЮ МО147 ахУувІітБаммМн 34 |пидьіЗ3м1 | сов-на | Залишки 51766 УІНЗЗО5ТМУМРІІ К5 із ФЕО ІЮ МО:147
Таблиця 19
Послідовності варіабельних ділянок сконструйованих варіантів ПиИАБІ1З
ЗЕО .
ІО Клон Ллянка Залишки Амінокислотна послідовність
МО: ілка
Залишки 99-105 пПИЧАБІ Зм СсОов-нЗ із ЗЕО ІЮ МО-147 МОрУЕЕУ
РІОМТО5РБОБІ БАБМООВМТІТСКА5
ОММагММАММООКРОКОРКА ІМ 144 | пиАБ1Зм1 МІ. АБУВУБаМУРЗНЕЗОЗавБатовтіІ ТІВ
ЗІ ОРЕОРБАЕУЕСООУМУМУМРЕТРОаОС
ТКІ ЕІК
Залишки 24-34 пПИЧАБІ Зм СсоВв-І1 із ЗЕО 10 МО-144 КАБОММИаєЕММА
Залишки 50-56 пПИЧАБІ Зм сов-І2 із ЗЕО ІЮ МО-144 5АБУВУ5
Залишки 89-97 пПИЧАБІ Зм СсОоВв-ІЗ із ЗЕО ІЮ МО-144 ООУМММРЕТ
ЕМОГОЕБОаРОЇ МКРБОЕТІ 5І ТСАУБаУ
БІТЗаМБМНУМІВОРРИаКаї ЕУМОМІНО 146 пшАБІЗм2 УН БОаБТМУМРБІ КЗАМТІЗМОТ5КМОБІ.
КІ 5БМТААОТАМУУСАВМООМЕЕМ М С ес А ДА
Залишки 26-36 пПЧчАБІ Зм СсОоВв-НІ1 із ЗЕО ІЮ МО-146 аУБІТЗаху5Бмн 34 |пиАрІіЗу2 | сов-но | Залишки 51-66 УІНЗЗО5ТМУМРІІ К5 із ЗЕО ІЮ МО:146
Залишки 99-105 пПЧчАБІ Зм СсОов-нЗ із ЗЕО ІЮ МО-146 МОрУЕЕУ
РІОМТОБРБОБІ БАБМООВМТІТСКАБОМ
УВЕММАММООКРОаКАРКІИ ІМ5АБУВУ
ТаЗ|пиАрІіЗМа М ЗСУРЗВЕ5С5О9СТОЕТІ ТІЗ5І ОРЕОЄ
АТУМСООММУМРЕТЕРСОСТКІ БІК
Залишки 24-34 пПЧчАБІ Зм СсоВв-І1 із ЗЕО 10 МО-143 КАБОММИаєЕММА
Залишки 50-56 пПЧчАБІ Зм сов-І2 із ЗЕО ІЮ МО-143 5АБУВУ5
Залишки 89-97 пПЧчАБІ Зм СсОоВв-ІЗ із ЗЕО Ір МО-143 ООУМММРЕТ
ЕМОГ ОЕБОаРОЇІЇ МКРБОЕТІ 5І ТСАУБахо
ІТЄаУБУНУМВОРРОаКаї ЕМЛОМІНОВО 146| пшАБІЗУЗ УН ЗТМУМРБІ КЗАМТІЗМОТ5КМОБІ КІ 55
МТААОТАМУУСАВМООМЕЕ УМ СИСТТМТ
У
Залишки 26-36 пПИЧАБІТЗУЗ СсОоВв-НІ1 із ЗЕО ІЮ МО-146 аУБІТЗаху5Бмн 34 |пшАрІ3уЗ | сов-но | Залишки 51-66 УІНЗ5О5ТМУМРУІ КО із ЗЕО ІЮ МО:146
Залишки 99-105 пПИЧАБІТЗУЗ СсОов-нЗ із ЗЕО ІЮ МО-146 МОрУЕЕУ
Таблиця 19
Послідовності варіабельних ділянок сконструйованих варіантів ПиИАБІ1З
ЗЕО .
ІО Клон Ллянка Залишки Амінокислотна послідовність
МО: ілка
РІОМТО5РБОБІ БАБМООВМТІТСКАБОММ (Є) 144 | НнАБІТЗУЗ МІ. ЕММАМУМУОСОКРОаКОРКАЇ ІУ5АБУНУВБИОаМ
РОНЕБаЗавБатовТтІ ТІЗБІ ОРЕОБАЕМЕС
ООУМУМ МРЕТЕРСОСТКІ БІК
Залишки 24-34 пПИЧАБІТЗУЗ СОоВв-І1 із ЗЕО 10 МО-144 КАБОММО ЕММА
Залишки 50-56 пПИЧАБІТЗУЗ СОоВв-І2 із ЗЕО І МО-144 5АБУВУ5
Залишки 89-97 пПИЧАБІТЗУЗ СоВв-І З із ЗЕО ІЮ МО-144 ООУМММРЕТ
ЕМО! ОББОаРОЇ МКРБОЕТІ 5І ТСАУБИаУБІ
Т5аУБМУНУМВОРРИаКаї ЕУЛИамМІНЬЗИа 146 | пиАБ1Зу4 УН ТМУМРБІ КЗАМТІЗМОТ5КМОБІ КІ 55МТ
ААОТАМУУСАВУООМЕЕУ МУ СОСТТМТМУ5
Залишки 26-36 пПИЧАБІЗм4 СсОоВв-НІ1 із ЗЕО ІЮ МО-146 аУБІТЗаху5Бмн 34 |нидьї3м4 | СОв-но Залишки 51766 УІНБЗОЗТМУМРБЗІ КВ із ФЕО ІЮ МО:146
Залишки 99-105 пПИЧАБІЗмй Ссов-нЗ із ЗЕО ІЮ МО-146 МООУБЕУ
РІОМТО5РБОБІ БАБМООВМТІТСКАБОММ аг
ММА МООКРОКАРКИ ІУЗАБУНУВИаМРБ 1а5|пилрт3ма М ВЕ5С5СО5СТОЕТІ ТІЗБІ ОРЕОРАТУРСО
СОУ
МУ МРЕТЕРСОСТКІ ЕК
Залишки 24-34 пПИЧАБІЗмй СОоВв-І1 із ЗЕО 10 МО-145 КАБОММО ЕММА
Залишки 50-56 пПИЧАБІЗмй сов-І2 із ЗЕО 10 МО-145 5АБУВУ5
Залишки 89-97 пПИЧАБІЗмй СОоВв-І З із ЗЕО Ір МО-145 ООУМММРЕТ
ЕМО! ОББОаРОЇ МКРБОЕТІ 5І ТСАМТОаУБІТ за
УМ НМ ВОгРОаМаї ЕМ МОамМІНЗБОЗТМУ 147 | пиАВ1ЗУу5 УН МР
ЗІ КОВІБІЗНОТ5ОКМОЄРНІ КІ ББМТААОТАМ
У
САаМООМЕЕ УМ СОС
Залишки 26-36 пПЧАБВІТЗУ5 СОоВв-НІ1 із ЗЕО ІЮ МО147 аУБІТЗаху5Бмн 34 |ниАБіЗуБ | сов-но | Залишки 51766 УІНЗЗС5ТМУМРІІ К5 із ФЕО ІЮ МО:147
Залишки 99-105 пПЧАБВІТЗУ5 Ссов-нЗ із ЗЕО ІЮ МО-147 МООУБЕУ
Таблиця 19
Послідовності варіабельних ділянок сконструйованих варіантів ПиИАБІ1З
ЗЕО .
ІО Клон Ллянка Залишки Амінокислотна послідовність
МО: ілка
РІОМТО5РБОБІ БАБМООВМТІТСКАБОММ
СЕМ
МАМУООКРОКАРКИ ІМ5АБУВУБаМРЗА 143 | пиАбІ1ЗУ5 МІ. Е5 аБаБатТОЕТІТІ5БІ ОРЕОБАТУМСОСУМ
МУ
РЕТРСОСТКІ ЕК
37 |нидЬіЗуБ | сова | Залишки 24734 КАБОМУСЕМУА із ЗЕО ІЮ МО:143
Залишки 50-56 пПЧАБВІТЗУ5 СсОоВв-І2 із ЗЕО ІЮ МО-143 5АБУВУ5
Залишки 89-97 пПЧАБВІТЗУ5 СсОоВв-ІЗ із ЗЕО Ір МО-143 ООУМММРЕТ
ЕМО! ОББОаРОЇ МКРБОЕТІ 5І ТСАМТОаУБІТ за
УМ НМ ВОгРОаМаї ЕМ МОамМІНЗБОаЗТМУ 147 | пиАВ1ЗУб УН МР
ЗІ КОВІБІЗНОТ5ОКМОЄРНІ КІ ББМТААОТАМ
У
САаМООМЕЕ УМ СОС
Залишки 26-36 пПЧАБВІ1ЗУб СОВв-НІ із ЗЕО ІЮ МО-147 аУБІТЗаху5Бмн 34 |пшАрІ3уб | сов-но | Залишки 51-66 УІНЗЗС5ТМУМРІІ К5 із ФЕО ІЮ МО:147
Залишки 99-105 пПЧАБВІ1ЗУб СсОов-нЗ із ЗЕО ІЮ МО-147 МОрУЕЕУ
РІОМТО5РБОБІ БАБМООВМТІТСКАБОММ
СвЕММ
АМУООКРОКАРКІ ПУБАБУНУВаИмМРБЗАВЕ 145 | пиАб1ЗУб МІ. за5 абБатовЕТІТІЗ5І ОРЕОБАТУЄСООУММ У
РЕТЕ
СОСТКІ ЕК
Залишки 24-34 пПЧАБВІ1ЗУб СОов-11 із ЗЕО 10 МО-145 КАБОММО ЕММА
Залишки 50-56 пПЧАБВІ1ЗУб СсОоВв-І2 із ЗЕО ІЮ МО-145 5АБУВУ5
Залишки 89-97 пПЧАБВІ1ЗУб СсОоВв-ІЗ із ЗЕО Ір МО-145 ООУМММРЕТ
ЕМО! ОББОаРОЇ МКРБОЕТІ 5І ТСАУБамМБІТ 5ах5
МНУВОРРОаМИа ЕМ МОамІНОЗаЗТМУМР 148 | пиАб13м7 УН 5ІК5
ВІТІЗВОТ5КМОЕ5І КІ БВМТААОТАМУУС
АВХОО
МЕЕУМмСОСТТУТУЗ
Залишки 26-36 пПиАБІ1З3м7 СсОоВв-НІ1 із ЗЕО ІЮ МО-148 аУБІТЗаху5Бмн
Таблиця 19
Послідовності варіабельних ділянок сконструйованих варіантів ПиИАБІ1З
ЗЕО .
ІО Клон Ллянка Залишки Амінокислотна послідовність
МО: ілка
Залишки 51-66 пПиАБІ1З3м7 СсОов-Н2 із ЗЕО 10 МО-148 МІНББаЗТМУМРБІ Кк
Залишки 99-105 пПиАБІ1З3м7 СсОов-нЗ із ЗЕО ІЮ МО-148 МОрУЕЕУ
РІОМТО5РБОБІ БАБМООВМТІТСКАБОММ
СвЕММ
АМУООКРОКАРКІ ПУБАБУНУВаИмМРБЗАВЕ 143 | пиАБб1З3мМ7 МІ. за5 авБатоЕТІТІЗ5І ОРЕОБАТУУСООУММУ У
РЕТРО
ОСТКІ БІК
Залишки 24-34 пПиАБІ1З3м7 СОов-11 із ЗЕО 10 МО-143 КАБОММО ЕММА
Залишки 50-56 пПиАБІ1З3м7 сов-І2 із ЗЕО ІЮ МО-143 5АБУВУ5
Залишки 89-97 пПиАБІ1З3м7 СсОоВв-ІЗ із ЗЕО Ір МО-143 ООУМММРЕТ
ЕМО! ОББОаРОЇ МКРБОЕТІ 5І ТСАУБамМБІТ за
УМ НУМІКОРРОМаї ЕУМИаМІНЗБОаЗТМУ 148 | пиАб1ЗУ8 УН МР
ЗІ КОАВІТІЗАОТ5КМОВ5І КІ 65МТААОТАМ
У
САВУМООМЕЕУМСОСТТМТУ55
Залишки 26-36 пПЧАБІТЗУВ8 СОВв-НІ із ЗЕО ІЮ МО-148 аУБІТЗаху5Бмн 34 |пшАрІ3ув | сов-но | Залишки 51-66 УІНЗЗС5ТМУМРІІ К5 із ЗЕО ІЮ МО:148
Залишки 99-105 пПЧАБІТЗУВ8 СсОов-нЗ із ЗЕО ІЮ МО-148 МОрУЕЕУ
РІОМТО5РБОБІ БАБМООВМТІТСКАБОММ
СЕМ
МАМ УООКРОаКУЗРКАППУЗАБУВУБОаМРОНА 144 | пІиАВ1ЗУв8 МІ. Е вБавБавзатОвЕТІТІЗ5І ОРЕОБЕАЕМЕСОСУ
ММУУ
МУРЕТЕРСОСТКІ ЕК
37 |пшАБІ3ув | Сов | Залишки 24734 КАЗОМУСЕММА із ЗЕО ІЮ МО:144
Залишки 50-56 пПЧАБІТЗУВ8 СсОоВв-І2 із ЗЕО ІЮ МО-144 5АБУВУ5
Залишки 89-97 пПЧАБІТЗУВ8 СсОоВв-ІЗ із ЗЕО ІЮ МО-144 ООУМММРЕТ
Таблиця 19
Послідовності варіабельних ділянок сконструйованих варіантів ПиИАБІ1З
ЗЕО .
ІО Клон Ллянка Залишки Амінокислотна послідовність
МО: ілка
ЕМО ОББОаРОЇ МКРБЗЕТІ 5І ТСАУЗИаМБІТ
З
С,МБМУНУМІВОРРОМаї ЕУУуМСсаМІНЗЗИаТМ 148 | пиАртТЗУ9 УН У
МРБІ КЗАІТІЗАОТЗКМО5БІ КІ ЗМ ТААОТ
АМ
УУСАВУООУгЕУМСОСТТУТУЗ
Залишки 26-36 пПичАрІТЗМЗ СОоВв-НІ1 із ЗЕО Ір МО-148 ахУувІітБаммМн 34 |нидьї3м9 | СОв-но Залишки 51766 УІНЗБО5ТМУМРБЗІ КО із ФЕО ІЮ МО:148
Залишки 99-105 пПичАрІТЗМЗ СсОов-НнЗ із ЄЕО ІЮ МО-148 МООМЕЕУ
РІОМТО5РББІ БАБМАОВМТІТСКАБОМУ аЕМ
МАМ УОСООКРОКАРКІ ПУЗАБУВУВИаМУРЗА 145 | пнАВІТ ЗМО МІ. Е зававатТое ТІ ТІЗБГОРЕОБАТУЄСООСУ
МУ
УРЕТЕСОСТКІ ЕК
Залишки 24-34 пПичАрІТЗМЗ СОоВв-І1 із ЗЕО Ір МО-145 КАБОММИагмММА
Залишки 50-56 пПичАрІТЗМЗ СОов-І2 із ЗЕО Ір МО-145 ЗАБУВУ5
Залишки 89-97 пПичАрІТЗМЗ СсОов-І З із ЄЕО ІЮ МО-145 ООММУУУРЕТ
Приклад 19. Визначення характеристик гуманізованих варіантів пиАбБ1З МІ Ла
Дев'ять варіантів пиАбІ13, описаних у прикладах 17 і 18, одержували і досліджували щодо зв'язування з В7-НЗ за допомогою ЕАСЗ5 (відповідно до способів, описаних в прикладі 6). Шість варіантів не зв'язувалися з В7-НЗ3 людини. Для інших трьох варіантів додатково визначали характеристики щодо зв'язування за допомогою 5РК і кон'югували (за допомогою способу А) з інгібітором Всі-хЇ (зокрема, лінкерною діючою речовиною (або синтоном) С7) та оцінювали цитотоксичність для клітин (відповідно до способів, описаних в прикладі 7). У таблиці 20 наведені характеристики іп міїго таких варіантів.
Таблиця 20
Визначення характеристик іп міго варіантів пиАбБІ13 МІ..1а, кон'югованих із синтоном (або лінкерним навантаженням) С2
ЕАС5 (ЕСво нМ) Цитотоксич-
Номер РАВ за то адда| ЕБИПЗА Афінність ність
Назва варіанта| послідов- Ме за пв7-НЗ нв7-НЗ в7-НЗ голих тАб | Лінія клітин ності 5ЕС | ЕСво нм су (Віасоге, Ко) |. НВА7 ІСво)
НМ спАрі3-С2 | 32,36 | - | - | 026 | бе | 18955 | 57-09 | -
ПподЬІЗМ1-С2 | 147, 144 62Е-09 | 009 (« 11111111 0ив7нзісувеаняЇЇ// її
Таблиця 20
Визначення характеристик іп міго варіантів пиАбБІ13 МІ..1а, кон'югованих із синтоном (або лінкерним навантаженням) С2
Цитотоксич-
Номер РАВ за то адда| ЕБИПЗА Афінність ність
Назва варіанта| послідов- Ме за пв7-НЗ нв7-НЗ | суву-НЗ голих тАб | Лінія клітин ності 5ЕС | ЕСво нм У (Віасоге, Ко) |. НВ47 ІСво) (нм) показник
НиАбБ1З3у1 відбирали для подальшого вивчення, частково завдяки його сильній і надзвичайній цитотоксичності щодо клітин Н847 і характеристикам зв'язування, аналогічним сСпПАБ13, з якого воно було одержано. Навпаки, пиАбБ1З3м5 і пиАб13уУб показали недостатні показники кінетики в експериментах Віасоге, що дає можливість припустити, що їх властивості зв'язування значно відрізняються від вихідного СПАБІ13З, ніж пиАБбБ1ТЗ3М1, і вони мають знижену активність в аналізі знищення клітин.
Приклад 20. Ефективність іп мійго відібраних гуманізованих антитіл до В7-НЗ3З з ілюстративними лінкерними діючими речовинами-інгібіторами Всі-х!. (синтонами)
Гуманізовані антитіла пиАб13м1, пиАбБЗм2.5 і пиАБЗм2.6 відбирали для кон'югації з кількома корисними навантаженнями-інгібіторами Всі-хІ. (або синтонами) в об'ємі З мг із застосуванням способів А, Е або С, як описано в прикладі 7. Протипухлинну активність таких АОС досліджували в аналізах цитотоксичності із застосуванням лінії клітин МСІ-НІ650 недрібноклітинного раку легенів, як описано в прикладі 7. Як контроль також оцінювали іп міїго протипухлинну активність АОС, які містять антитіло М51109, яке не націлюється (моноклональне антитіло, яке зв'язується із глікопротеїном Н СМУ, кон'юговане з корисними навантаженнямич-інгібіторами Всі-х!. (або синтонами)). Результати представлені в таблиці 21.
Таблиця 21
Цитотоксичність іп міго щодо пухлинних клітин відібраних гуманізованих АС, який націлюється на В7-НЗ, з ілюстративними лінкерними діючими речовинамич-інгібіторами Всі-х!. (синтонами) о
АОС Спосіб Й ОАЄ за М5 допо Концентрація АОС! /ЕСво нМ кон'югації 9ЕС (мг/мл) НтТ65о опиАрЗМ25-ТХ | а 77/77/7533 17/89 | р рр29 1062
Таблиця 21
Цитотоксичність іп міго щодо пухлинних клітин відібраних гуманізованих АС, який націлюється на В7-НЗ, з ілюстративними лінкерними діючими речовинамич-інгібіторами Всі-х!. (синтонами) о
АОС Спосіб Й ОАЄ за М5 допо Концентрація АОС! /ЕСво нМ кон'югації 9ЕС (мг/мл) НтТ65о опиАрЗУао-уУЯ | ЕЕ | 4 17786 | 33 | ол о пиАр3ЗМа6-УЯ | ЕЕ | 37 | 99 | 48 | 068 о мещлоетМ | а (| 36 | 0 1 26 | зи о м8ІЛОЄУМ | а 7.29 2 щ| 0 1 4 юьК ф 78 | 2653 о Мм5щлое-мО | в | 29 | 0 | 706 | 822 о мМ8щл094В | А | 718 177770 17777742 | 988 о М5БІЛОЯ-ЗЕ, | А | 36 | 334 | (60 7 щЩ | 2956
На відміну від низької протипухлинної активності, яку проявляє АОС, що містять антитіло
М5І 109, яке не націлюється, кон'юговане з корисним навантаженням-інгібітором Всі-х!, АОС, націлені на В7-НЗ, демонстрували більший ступінь знищення пухлинних клітин, що відображає антиген-залежну доставку АОС, націлених на В7-НЗ, у пухлинні клітини, які експресують В7-НЗ.
Протипухлинну активність двох таких АОС досліджували в аналізах цитотоксичності із застосуванням лінії клітин МСІ-Н146 дрібноклітинного раку легенів, як описано в прикладі 7.
Результати представлені в таблиці 22.
Таблиця 22
Цитотоксичність іп міго щодо пухлинних клітин відібраних гуманізованих АОС, які націлюються на В7-НЗ, з ілюстративними синтонамич-інгібіторами Всі-хі..
Спосіб У аддза Концентрація АОС! ЕС»5о нм дос кон'югації рАН ЗЕС (мг/мл) НІ146 поАріЗМІ-АААв2 | 1 Ї777717л271 133 | 1116 | 2 поАріЗМІ Мов | 177 17717171712 | 45 | 45 | 2 / пПиАБрІтТЗмМ1-ААА Е2З2 ії пПиАбБ13м1-ММО Е2 досліджували щодо цитотоксичності із застосуванням клітин Н146. Обидва кон'югати проявляють сильну і порівнянну цитотоксичність.
Приклад 21. Аналіз іп мімо АОС, які націлюються на В7-НЗ
Гуманізовані антитіла до В7-НЗ пиАБб13м1, пиАБЗм2.5 і пиАБЗм2.6 відбирали для кон'югації з кількома корисними навантаженнями-інгібіторами Всі-хі та оцінювали за допомогою ксенотрансплантатних моделей дрібноклітинного раку легенів (НІ146б) як кон'югатів з використанням ряду діючих речовин-інгібіторів Всі-хЇ (синтонів) з використанням способів, описаних у прикладі 7 і прикладі 8. Результати підсумовані в таблиці 23 і таблиці 24.
Таблиця 23
Ефективність іп мімо АОС з гуманізованими антитілами до В7-НЗ . Дозаїгіушлях с,
Спосіб Кількість о о
АОС кон'югації рАВ уведення! мишей Таїтах (95)|. ТОЮ (о)
АВОЗ95 1-1 п/а | бмуклРОЮхІ | 8 | 0 | о пидЬЗМ2,5-С7 бмг/клРлрх! | 8 92 | 122 пидЬЗмг,6-С7 бмг/клРлорх! | 8 / 93 | 130 пидЬЗмг,9-С7 бмг/клРлОрх! | 8 / 94 | 1955 пидЬЗмг,9-ТХ бмг/клРлОрх! | 8 / 93 | 709 пидьЗмг,6-ТХ бмг/клРлОрх! | 8 / 92 | 130 пидЬЗмг,5-ТХ бмг/клР/лорх! | 8 | 86 | 89
Із доза наведена в мг/кг/день
Таблиця 24
Ефективність іп мімо АОС з гуманізованими антитілами до В7-НЗ . Дозаїгі/шлях є,
АОС Спосіб АВ уведення/ Кількість | Тарах (96) кон'югації мишей
Схема
АВОЗ5 17 -...Щ| ща | бмиклРОЮСІ | 8 | 0 пидЬЗМ2,5-ААА бмг/клРрх! | 8 | 65 пидЬЗмг, 5-Х бмг/клРрх! | 8 | 5 пидЬЗм2,6-ААА бмг/клРрх! | 8 | 4 пидьЗм2,6-ХУу бмг/клРлрх! | 8 | 43 пидБІ1ЗУ1-ААА бмг/клРрх! | 8 | 76 поді ЗУ1-ХМу бмг/клРЛЮх! | 8 | 935 поАБіЗМі-ТХЕ2 | 17/12 | бмиРЮЮСВ | 8 | 88
Із доза наведена в мг/кг/день
Гуманізоване антитіло до В7-НЗ пиАбБ13м1 кон'югували із синтоном М/О-інгібітором Всі-х!. та оцінювали на ксенотрансплантатній моделі В7-НЗ-позитивного дрібноклітинного раку легенів (НІ1650) як кон'югатів із застосуванням способів, описаних у прикладі 7 і прикладі 8. Як контроль також оцінювали протипухлинну активність іп мімо антитіла відповідного ізотипу Ддс, яке не націлюється (АВО95). Результати підсумовані в таблиці 25.
Таблиця 25
Ефективність іп мімо АОС з гуманізованим антитілом до В7-НЗ пиАб1З3м1-МО щодо НІ650
АНІ Доза шлях уведення/
Арс Спосіб увед Твіїтах (96) то (96) ; ш мг/кг/ день схема кон'югації
АВО9Бе) ІРЛЮЮХІ 177010 пидр1ЗУ1-МО-Е2 ІР/ОЮХІ пидр1ЗУ1-МО-Е2 ІР/ОЮХІ пидр13У1-МО-Е2 ІР/ОЮХІ (2) тАБ ІДС хх р«0,05 порівняно з контрольною обробкою (АВО95) хх р.« 0,05 порівняно з найбільш активним партнером у комбінації лікарського засобу
Н. 3. - не застосовується
На відміну від відсутності активності, спостережуваній при використанні антитіла відповідного ізотипу ДС, яке не націлюється, АБО95, АОС, що націлюються на В7-НЗ, з інгібітором Всі-х, демонстрували пригнічення росту пухлини (ТОЇ) і затримку росту пухлини (ТО0), як показано в таблицях 24 і 25, що відображає антиген-залежну доставку АОС, що націлюються на В7-НЗ, які доставляють інгібітор Всі-хІ. до пухлинних клітин, що експресують В7-
НЗ, у даній мишачій ксенотрансплантатній моделі. Протипухлинну активність іп мімо АОС, які містять антитіло М51 109, яке не націлюється, кон'юговане із синтонами-інгібіторами Всі-хі, оцінювали як додатковий контроль у ксенотрансплантатній моделі В7-НЗ-позитивного дрібноклітинного раку легенів (НІ1650). Активність таких АОС порівнювали з активністю антитіла відповідного ізотипу дО, яке не націлюється, АВОЗ95, як контролю. Як показано в таблиці 26,
АОС, які містять антитіло М5І 109, що не націлюється, кон'юговане із синтонами-інгібіторами
Всі!-х, демонструють дуже помірне пригнічення росту пухлини і низьку затримку росту пухлини або її відсутність взагалі. Навпаки, АОС, що націлюються на В7-НЗ, з інгібітором Всі-хі (як показано в таблиці 25) демонстрували значно більшу ступінь пригнічення росту пухлини (ТОЇ) і затримку росту пухлини (ТОЮ), що відображає антиген-залежну доставку таких АОС в клітини, які експресують В7-НЗ, даної ксенотрансплантатної моделі миші.
Таблиця 26
Ефективність, (М5І 109) АБС, що не забезпечують націлювання, які інгібують Всі-хі., іп мімо в моделі М5СІ С з МСІ-Н1Т650 00000001 інгібування росту
Обробка Тіт) | тов
МБіТовен ЗЛР/ОЯОхе ле 16
Міто91-Н ТОЛР/ОМОХВ местовен ЗОЛРІОЗОх ле 771770
М8І-1091-С2 ЗЛР/ОЗОХВ 2 | 0
М8І-1091-С2 ЗЛР/ОТОХВ 18 | 0
М8І-1091-С2 ТОЛР/О4ОХ6
М8І-1091-С2 ЗОЛР/О4ОХ6
Ї Антитіло, що не забезпечує націлювання і доза наведена в мг/кг/день хх р«0,05 порівняно з контрольною обробкою (АВО95) о4рх6 вказує на одну дозу кожні 4 дні, у цілому 6 доз
Приклад 22. Комбінована терапія щодо В7-НЗ
Оцінювали протипухлинну активність ПиАБб13м1 кон'югатів С2 або ТХ як очищених кон'югатів рАКЗ2 (Е2) на ксенотрансплантатних моделях недрібноклітинного раку легенів (НІ1650, Н1299,
НІ1975 ії ЕВС1) походження від людини з використанням способів, описаних у прикладі 8.
Протипухлинну активність оцінювали у вигляді монотерапії і у комбінації з доцетакселом (НІТ650, НІ1299, НІ1975 і ЕВСТ). Результати представлені в таблиці 27.
Таблиця 27
Ефективність іп мімо кон'югатів гуманізованих пиАб13м1 антитіл до В7-НЗ у вигляді монотерапії та у комбінації з доцетакселом рАВ/ Доза шлях
Ар Спосіб уведення/ | ТСїтах (96) | ТОО (95) ,; ш мг/кг/день кон'югації Схема
ЕВСІ1
АВОЗ95 1-70 (о4рохбиР | 0 | 0 пидр1ЗУ1-ТХ Ег сдОхблР
Доцетаксел.ї//-/-/-// | 7777-11 |171111775 0 фО0ХИМ 1777 85. ЮДЩ | 80 пПиАрІТЗм1-ТХ Е2 О4рхв/РО
МСІ-Н1299
АВОЗ95 711111 Ї171111710 до4охбиР | 0 | 0 пидр1ЗУ1-ТХ Ег сархблР | 80 | 24
Доцетаксел.ї/// | -1111 11111175 0 ГО0хИМ пПиАрІТЗм1-ТХ Е2 О4рхв/РО
МСІ-НІ1975
АВОЗ95 711111 Ї171111710 до4охбиР | 0 | 0 пидр1ЗУ1-ТХ Ег сдОхблР
Доцетаксел.ї/// | 1111175 0 ГО0ХИМ пПиАрІТЗм1-ТХ Е2 О4рхв/РО нини шити ши ки
МСІ-Н1650
АВОЗ95 7-1 8 О7охиР | 0 | о пидр13У1-С2 сОрхіле | 80 | 100
Доцетаксел.ї//// | 777777 -1111 11111175 0 ГО0ХИМ пиАБІТ13м1-07 ОбОХ/ЛРАОЮ
МСІ-НІ650
АВО9БЕе) ІР/ст4рх3 | о | 0
ІМ/О140х3 подЬ1Зм1-МО Е2 ІР/ О140Х3 пПиАрІ1Зм1-МО Е2 2 10 ІР/ О140Х3 не не я и я «ім/старх3| 038 "77 ртх Н. з. 7,5 пидр1ЗУ1-МО Е2 ІР/ СМ АХ пПиАрІ1Зм1-МО Е2 2 З ІР/ О140Х3 щ - я и я «ім/старх3| ССЗ "77 ртх Н. з. 7,5 пидр1ЗУ1-МО Е2 ІР/ СМ АХ пПиАрІ1Зм1-МО Е2 2 1 ІР/ О140Х3 щ - я и я «ім/старх3| 88 167 ртх Н. з. 7,5 пПиАрІ1ЗУ1-ААА Е2 ІР/ СМ АХ пПиАрІТЗм1-ААА Е2 2 10 ІР/ О140Х3 - - я и я «ім/старх3| ССЗ "77 ртх Н. з. 7,5
Таблиця 27
Ефективність іп мімо кон'югатів гуманізованих пиАб13м1 антитіл до В7-НЗ у вигляді монотерапії та у комбінації з доцетакселом рАВ/ шлях ,; ш мг/кг/день кон'югації Схема пПиАрІТЗм1-ААА Е2 2 З ІР/ О140Х3 - - м я м зім/старх3 039 "п ртх Н. з. 7,5 пПиАрІТЗм1-ААА Е2 2л 1 ІР/ ОТ14ОХЗ щ щ я и я зім/дтархз| 02 "7 ртх Н. з. 7,5 (2) тАБ ІДС хх р«0,05 порівняно з контрольною обробкою (АВО95) хх р.« 0,05 порівняно з найбільш активним партнером у комбінації лікарського засобу
Н. 3. - не застосовується
Результати, представлені в таблиці 27, показують, що пиАріЗмі у вигляді С7, ТХ, МО або
АДА очищених кон'югатів ЮСАН2 (Ег2) інгібували ріст усіх чотирьох ксенотрансплантатних моделей М5СЇІ С у вигляді монотерапії. Крім того, пиАБб13м1 у вигляді очищених С2, ТХ, УМО або
ААА кон'югатів ОАК2 (Е2) ефективно комбінували з доцетакселом для одержання більш стійкого пригнічення росту пухлини. Це найбільш яскраво проілюстровано на ксенотрансплантатній моделі НІ650, де комбінована терапія приводила до ТОЮ між 46795 і 271796, тоді як окрема монотерапія приводила до ТО у діапазоні 6795 - 15895. Ці результати підтверджують клінічну застосовуваність АОС з інгібітором Всі-х! (Всі-хі ї), які слід дозувати в комбінації з хіміотерапією.
Стислий опис переліку послідовностей
ЗЕО
ІО Опис Амінокислотна послідовність
МО:
Амінокислотна |ОМО ООРСАЕЇ УКРОАБЗУКІ БСКАБИУТЕТЗУМУМНУУКОВРИООІ ЕУЛаА 1 послідовність МНІ МІНРОБО ТТ ТМММЕКЕВЗКАТІ ТМОКОЗЗТАММОЇ 551 Т5ЕОБАМУУСАУУМа спАбБа2 згиумЕрумататуУузо
Амінокислотна 2 послідовність СМТЕТ5УММУМН
СОМ МН спАБ2
Амінокислотна
З послідовність МІНРОЗБаИТтТтМУМЕКЕН5
СОК2 МН спАБ2
Амінокислотна 4 послідовність УчУавБТтУММЕОМ
СОКЗ МН спАБ2
Амінокислотна | ОМУМТОТРІ БІГ РУБ аиООАМІЗСАЗБЗОБІ МУНІМОМТ МІ НУМВОКРООБРК 5 |послідовність М | ПП ИКУЗМАЕЗамРовЕЗазаза Товт КІЗАМЕАЕОЇ аУМЕСЗОЗТНЕРЕТ спАбБа2 газаткКі ЕК
Амінокислотна послідовність вЗЗОБІ МнНІМАМТ МІН
СОВІ1 МІ. спАр2
ЗЕ
ІО Опис Амінокислотна послідовність
МО:
Амінокислотна послідовність
СОН МІ. спАБ2,
СПАБЗ, СПАбІТО,
ПЧАБЗМІ 1, пПЧАБЗМІ Та,
ПчАБЗМІ 16, пПиАрЗМ2.1, 7 | пидьзуг 2, КУЗМАЕВ пПиАрЗМ2.3, пПиАрЗМаг.4, пПиАрЗМ2.5, пПиАрЗМ2.6, пПиАрЗМ2.7, пПиАрЗма2.8 і пиАрЗм2.9
Амінокислотна послідовність 5ОБТНЕРЕТ
СОВЗ МІ. спАБ2
Амінокислотна |ОМО ООРСОАЕЇ МКРОАБУКІ БСКАБИаМ ТЕ5БММУ МНУ УКОВРООСІ. послідовність МНІ ЕУЛаі ІНРОБавтТМиМЕМЕКМКАТІ ТМОВ55ЗТАММОЇІ 55І Т5ЕОБАМУ сСПАБЗ ЕСАССССВІ МЕ МУ пОСстТТІ ТУ
Амінокислотна послідовність
СОНВІ1 МН спАБЗ,
ПчАВБЗМУН.1, пПЧАВБЗМУН Та, пПчАБЗМУН.1Ь, пПиАрЗМ2.1, | пйАБЗМ2 2, СМТЕ5БУМ МН пПиАрЗМ2.3, пПиАрЗМаг.4, пПиАрЗМ2.5, пПиАрЗМ2.6, пПиАрЗМ2.7, пПиАрЗма2.8 і пиАрЗм2.9
Амінокислотна послідовність
СОВ2 МН спАБЗ, 11 РОАБЗУН 1, ІНРОБаЗТМММЕМЕКМ пПиАБЗУН а і пПчАВБЗУН.16
ЗЕ
ІО Опис Амінокислотна послідовність
МО:
Амінокислотна послідовність
СОВЗ МН спАБЗ,
ПчАВБЗМУН.1, пПЧАВБЗУН Та, пПчАБЗМУН.1Ь, пПиАрЗМ2.1, 12 | пнАБЗМ2 2, вав МЕОУ пПиАрЗМ2.3, пПиАрЗМаг.4, пПиАрЗМ2.5, пПиАрЗМ2.6, пПиАрЗМ2.7, пПиАрЗма2.8 і пиАрЗм2.9
Амінокислотна | ЮОМУМТОТРІ БІГ РИБІ ЧаРОАБІЗСНЗБЗОБІ МНОМОаОТМІ В/М ОК 13 |послідовність МІ | РИОЗБРК МКМ МАЕБаУРОВЕЗавзаватТОвЕТІ КІТАМЕАЕОІ С спАБЗ МУЕСБОЗТНУРМТЕРСаСИТКІ БІК
Амінокислотна послідовність
СОН МІ спАБЗ, 14 ПИАЬЗМІ 1, 8550511 УНОМаОТмІ А пПиИАБЗМІ. Ла ї пПчАБЗМІ ЛЬ
Амінокислотна послідовність
СОВЗ МІ. спАБЗ,
ПЧАБЗМІ 1, пПЧАБЗМІ Та,
ПчАБЗМІ 16, пПиАрЗМ2.1, | пнАБЗМ22, ЗОБТНУРУТ пПиАрЗМ2.3, пПиАрЗМаг.4, пПиАрЗМ2.5, пПиАрЗМ2.6, пПиАрЗМ2.7, пПиАрЗма2.8 і пиАрЗм2.9
Амінокислотна |ОМО ООРСОАЕЇ МКРОАБУКІ БСКАБИа МЕТУ МНУУУКОВРа 16 |послідовність МНІ ОСІ ЕМО МІНРМЗавзмММММЕКЕК5ОКАТІ ТМОКО5МТАММОЇ 551. сСпАБА Т5ЕОБАМУМСАВНІ СІ НЕО СОСТТІ ТУЗ5
Амінокислотна 17 |послідовність СУБЕТ5УМУМН
СОВ1 МН спАБіА
Амінокислотна 18 |послідовність МІНРМ5а5ММУМЕКЕКО
СОВ2 МН спАБіА
Амінокислотна 19 |послідовність в'СгнЕрУ
СОВЗ МН спАБіА
Амінокислотна | ОІММТО5БОКЕМ5З5ТРУЧОВУ5БІ ТСКАБОММаТАМАМУ МОКРОЮ |послідовність МІ | БРКОИ ІМ5АЗМВУТаМРОВЕТававаТОЕТІ ТІЗММО5ЕОІ АСУ сСпАБА ЕСООМ5БЗУРМТЕаСИТКІ БІК
Амінокислотна 21 |послідовність КАБОММатАМА
СОВІ1 МІ. спАБА
ЗЕ
ІО Опис Амінокислотна послідовність
МО:
Амінокислотна 22 | послідовність ЗАБМАУТ
СОН МІ. спАБА
Амінокислотна 23 | послідовність ООУББУРУТ
СОВЗ МІ. спдБА
Амінокислотна |ООМО О0О5БААЕЇ АВРИАЗУКМОЗСКАБИаИмМЕТОМТІНМУУКОВРОО 24 | послідовність МНІ СГЕУММОМІМРМЗАМТОММОКЕКОЕТТІ ТАОВА5ЗООТАММО ІІ ТЕ спАр18 ОЗАМУУСАВУЗавТРУМУМУЕОУМСсАССТТУТУ55
Амінокислотна послідовність
СОоВІ1 ун |сСпАБІ8, СМ5ЕТ5МТІН пПчАБІ8УН.1, пПиАБІТ8МН а ї пчАрІ8УН.1Ь
Амінокислотна послідовність
СсОовг ун 26 СПАБІВ, МІМРМЗАМТОММОКЕКО пПиАБІТ8МН.1 пиАрІ8УНла
Амінокислотна послідовність
СОовЗ УН 27 |спАБІ8, УБаБТРУММЕОМ пПчАБІ8УН.1, пПиАБІТ8МН а ї пчАрІ8УН.1Ь
Амінокислотна |ОІМІ ТО5РАЇЇ БАБРОЕКМУТМТСВАЗООЗУЗУММУМ УООКРаБОРК 28 |послідовність МІ | РРЛМАТОМІ АБИМРАВЕБУБУВИаИтН5І ТІЗВМЕАЕОААТУМСОЮ спАрІ18 М/55МРІ ТЕСАСТКІ ЕІ К
Амінокислотна послідовність
СОоВІ мМ.
СпПАБІ8, 29 | пшАБІ8МІ 1, ВАБ5БООУБУММ пПЧАБІТВ8МІ Ла, пПчАБІ8МІ 160, пПиАБІТ8МІ. 2 і пиАБІ8МІ .2а
Амінокислотна послідовність сов мМ.
СпПАБІ8,
ЗО | пшАБІВМІ 41, АТОМІ А5 пПЧАБІТВ8МІ Ла, пПчАБІ8МІ 160, пПиАБІТ8МІ. 2 і пиАБІ8МІ .2а
ЗЕ
ІО Опис Амінокислотна послідовність
МО:
Амінокислотна послідовність
СОовЗ М
СПАБІ8,
З1 | пйШАБІВ8МІ 41, ООМ/55МРІ Т пПЧАБІТВ8МІ Ла, пПчАБІ8МІ 160, пПиАБІТ8МІ. 2 і пиАБІ8МІ .2а
Амінокислотна |ОМО ОЕБОаРОЇ МКРБОБІ БІ ТО УТаМБІТБамУ5МУНУМІВОЕгРОМ 32 | послідовність МНІ КЕ МОамМІНЗЗавтМММРБІ КОВІБІМАОТ5КМОЕНР ОЇ МОМТТЕО сСПАВІ1З ТАТУМСАСМООМЕЕММСОСТТІ ТУ55
Амінокислотна послідовність
СОоВІ1 ун
СПАБВІ3,
ПчАБВБІТЗМП.1, пПчАБВІЗМП ла,
ПчАбБІТЗМПп.16, пПчАВІТЗ3М1,
ЗЗ пОАБІЗУ, аУБІТЗаУБМН пПчАБІЗУЗ, пПичАрІЗма, пПчАБІЗм5, пПчАБІЗмб, пПчАБбБІЗ3м, пПиАбІЗУв і пПчАрІЗмУЗ
Амінокислотна послідовність
СсОовг ун
СПАБВІ3,
ПчАБВБІТЗМП.1, пПчАБВІЗМП ла,
ПчАбБІТЗМПп.16, пПчАВІТЗ3М1, 34 ПАБ ЗУ, МІНББаБТМУМРБІ КК пПчАБІЗУЗ, пПичАрІЗма, пПчАБІЗм5, пПчАБІЗмб, пПчАБбБІЗ3м, пПиАбІЗУв і пПчАрІЗмУЗ
ЗЕ
ІО Опис Амінокислотна послідовність
МО:
Амінокислотна послідовність
СОовЗ УН
СПАБІ3,
ПчАБВБІТЗМП.1, пПчАБВІЗМП ла,
ПчАбБІТЗМПп.16, пПчАВІТЗ3М1,
ПАБ ЗУ, МООМЕЕХ пПчАБІЗУЗ, пПичАрІЗма, пПчАБІЗм5, пПчАБІЗмб, пПчАБбБІЗ3м, пПиАбІЗУв і пПчАрІЗмУЗ
Амінокислотна | ОІММТО5БОКЕМЗТЗУаОВУ5МТСКАЗБОММО ЕММА МООКРООБ 36 | послідовність МІ | РКАППУБАБУВУБаМРОВЕТаБаваИатОовЕТІ ТІЗММОЗЕОІ АЕМЕСО сПАВІ1З ОММОУРЕТЕаЗИткКі ЕК
Амінокислотна послідовність
СОоВІ мМ.
СПАБВІ3, пПчАБбБІЗМІ 1, пПЧАБІЗМІ Ла,
ПчАБІТЗМІ 16, пПчАВІТЗ3М1, 37 ПАБ ЗУ, КАБОММИаєЕММА пПчАБІЗУЗ, пПичАрІЗма, пПчАБІЗм5, пПчАБІЗмб, пПчАБбБІЗ3м, пПиАбІЗУв і пПчАрІЗмУЗ
Амінокислотна послідовність сов мМ.
СПАБВІ3, пПчАБбБІЗМІ 1, пПЧАБІЗМІ Ла,
ПчАБІТЗМІ 16, пПчАВІТЗ3М1, 38 ПАБ ЗУ, 5АБУВУ5 пПчАБІЗУЗ, пПичАрІЗма, пПчАБІЗм5, пПчАБІЗмб, пПчАБбБІЗ3м, пПиАбІЗУв і пПчАрІЗмУЗ
ЗЕ
ІО Опис Амінокислотна послідовність
МО:
Амінокислотна послідовність
СОовЗ М пПчАБбБІЗМІ 1, пПЧАБІЗМІ Ла,
ПчАБІТЗМІ 16, пПчАВІТЗ3М1, 39 | пиАБІЗМ2, ООУМММРЕТ
ПиАБІТЗмЗ, пПичАрІЗма,
ПиАБІТЗм5,
ПиАБІТЗмб, пПчАБбБІЗ3м, пПиАбІЗУв і пПчАрІЗмУЗ
Амінокислотна | ЕМОЇ МЕЗО СІ МКРОСБІ КІ БСААЗИаєТЕЗБМАМОМУНОТРЕ |послідовність МНІ КАГЕМУМАТІБЗа ТМ ТИМ РОБУКОаВЕТІЗАОМАКМТІ МІОМІ. сСпПАВрІ12 В5ЕОТАМУУСАВОСВУЗУЛАУМ ОСТІ МТМ5А
Амінокислотна послідовність 41 СОВІ МН СЕТЕ55МАМ5 сСпПАВрІ12
Амінокислотна послідовність 42 Сов? МН тІББОТММТУМРОБУКОа сСпПАВрІ12
Амінокислотна послідовність 43 СОвЗ МН ООЯВУБУАУ сСпПАВрІ12
Амінокислотна | БІМ ТО5РАБІ АМ5І ЧФООВАТІЗСВАЗКОУЗТЗОМЗУМНУМООК 44 |послідовність МІ | РООРРКІ МІ АБМІ ЕБМРАВЕЗОа5ЗОаЗОаТОЕТІ МІНРМЕЕЕО сСпПАВрІ12 ААТУМСОНОАЕГ І ТЕСАИТКІ ЕІ К
Амінокислотна | послідовність ВАЗБКбОУЗТООУЗУМН
СОВІ1 МІ. спАБІ12
Амінокислотна послідовність 46 Сов Мі. спдьі2) З МЕЗ і сСпАб17
Амінокислотна 47 | послідовність ОНЗВАЕЇ ІТ
СОВЗ МІ. спАБ12
Амінокислотна | ЕМКІ МЕССІ МКРОСБІ КІ 6ХСААБаєТЕЗ5У,МОУМУМНО 48 |послідовність МНІ ТРЕКВГЕУ/МАТІЗХСаТтМ г иМРОБМЕСВЕТІЗВОМАКМЕЇ М сСпПАрІ14 ГОМ55І В5ЕОТАЇ МСА внУаЗОотМмОо им сОопстТеУТМи55
Амінокислотна послідовність 49 СОВІ МН сЕТЕ55УаМ5
СПАбІ1І4 і спАБВ8
Амінокислотна послідовність 5о0 Сов УН тІБВОСИаТМТММРОБМЕСЯ сСпПАрІ14
ЗЕ
ІО Опис Амінокислотна послідовність
МО:
Амінокислотна послідовність 51 СОвЗ МН нУаБОТМоОУ сСпПАрІ14
Амінокислотна | ОІЮОМТОЗРАБІ БАБМОЕТМТІТОВТ5аМІНММІ ТУ МООКОС 52 | послідовність МІ | КОРОП МУМАКТІ АРОМРОВЕБИаБаБОаТОгв5І КІМ5І ОРЕОЕ сСпПАрІ14 Са5УМСОНЕМ5БІМУМУТЕсСИСТКІ ЕК
Амінокислотна 53 |послідовність ВТБаМІНММІ Т
СОВІ1 МІ. спАБ14
Амінокислотна 54 |послідовність МАКТІ АО
СОН МІ. спАБ14
Амінокислотна |послідовність ОНР 5ІМУУТ
СОВЗ МІ. спАБ14
Амінокислотна |ООМО О0О5САЕЇ МКРОАБУКІБСКАТаИМТЕЗАМУМЛЕМУКОВ 56 |послідовність УНІ РЕНО ЕУМЛСОЕЇ РЕОЗБОЗТМУМЕКЕКОКАТЕТАОТ55МТАММ спАБб ОМ55І Т5ЕОБАУНУСАВВНОМИамУРМАЇ ОМ СОСТОМТУ55
Амінокислотна 57 |послідовність СМТЕЗБАМУЛЕ
СОВ1 МН спАБб
Амінокислотна 58 |послідовність ЕІПГРОБаЗТМУМЕКЕКИ
СОВ2 МН спАБб
Амінокислотна 59 |послідовність вВамамуУРМУАЇ ВУ
СОВЗ МН спАБб
Амінокислотна | ЕІОМТОТТ55І БАБІ аИОВМТІЗСВАБОВІЗМ5ОІ МУМООКРОС послідовність МІ! ТММ ТИМ БамРОАЕБававиатомМ5іІ ТІМ ЕОЕОІАТУ спАБб ЕСООСМТІ РУТЕаСИТКІ БІК
Амінокислотна 61 |послідовність ВАБООІБЗМ5І М
СОВІ1 МІ. спАЬб
Амінокислотна 62 |послідовність УТ5ВІ У5
СОН МІ. спАБЬб
Амінокислотна 63 |послідовність ОООСМТІ РУТ
СОВЗ МІ. спАЬб
Амінокислотна | ЕМК МЕССІ МОРОСБІ ВІ БСАТЗаЄТЕТММУМ5УММВОР 64 | послідовність УНІ РОКАЇЕМ/І СРІАМКАМОМТТЕУ5АЗБУКОаВЕТІЗАОМ5ОБІІ МІ. сСПАБІ11 ОММТІ ВАЕОБАТУУСАВЕЗРЕАМРЕАММСОСТІ МТА
Амінокислотна послідовність 65 СОВІ МН СЕТЕТММУМ5
СПАВІ11
Амінокислотна послідовність
Сов? МН ЕРІВМКАМОМТТЕУБАБУКО сСПАБІ11
Амінокислотна послідовність 67 СОвЗ МН ЕБРОМРЕАУ сСПАБІ11
ЗЕ
ІО Опис Амінокислотна послідовність
МО:
Амінокислотна | ОІММТО5РБУБІ ТМТАСЕКМТМТСКОЗОБИЇ МБаТтОКмМеЕСтТУу послідовність МІ. | МООКРООРРКІИ ММ АЗТВЕЗОаМРОВЕТаБИаБаИтовтіІ ТІ сСПАБІ11 ЗМОАЕОЇ АМУЕСОМОМІМРІ ТЕСАСІТКІ ЕІ К
Амінокислотна послідовність ко МБатоОкКМе т
СОНВІ1 МІ. спАБІ11
Амінокислотна 70 |послідовність МАБТВЕ5
СОН МІ. спАБІ11
Амінокислотна 71 | послідовність ОМОМІМРІ Т
СОВЗ МІ. спАБІ11
Амінокислотна | ЕМКІП ЕБССОЇ МОРІ КІ БСААБаБєОєЗА УМ МЗУМУУВОА 72. | послідовність МНІ РОКОЇ ЕМІСЕІМРОБ5ТІММТРБОІ КОКЕПЗАОМАКМТІ МІ ОМ5 сПАВ16 КУМА5ЕОТАЇ УХСАВРОБаММІМАМОМУМУСЮСТОУТУ55
Амінокислотна послідовність 73 СОВІ МН СЕОєБАУМУМ5 сСПАВ16
Амінокислотна послідовність 74 Сов? МН ЕІМРОБ5ТІММТРБІ КО сСПАВ16
Амінокислотна послідовність 75 Сов МН РОБОММІМАМОМУ сСПАВ16
Амінокислотна | ОІЮОМТОТТ55І БАБІ аОВМТІМСВАБООІЗМЕІ МУ МООКРєРОИ,Т 76 | послідовність МІ | МК МУ 5АГ М ФМРОВЕБИаЗИа5БаИтоОмУ5І ТІМ ЕОЕОСІАТУЕС спАр16 ООСМТІ РРТЕСИСТКІ ЕК
Амінокислотна 77 | послідовність ВАБООІБМРЕЇ М
СОВІ1 МІ. спАБ16
Амінокислотна 78 |послідовність УТІМ.
СОВа2 МІ. спАБ16
Амінокислотна 79 |послідовність ООСМТІ РРТ
СОВЗ МІ. спАБ16
Амінокислотна | МОЇ ОББОРОЇ МКРБОБОБІ БІ ТОСТИ БОМАММУМВОЕ послідовність МНІ РОМАГЕМ МаНІММ СІ ТММ МРОЇ КОАІБІТАОТОКМОНІ ОЇ М сСпПАБІО ЗМТТЕОТАТУЕСАВН5ОІЇ ЕУУУС5З5І МАМО МУСОСТОУТУБо
Амінокислотна послідовність 81 СОВІ МН СУБІТ5ОМАМ/М сСпПАБІО
Амінокислотна послідовність 82 Сов? МН НІММ5СІТМММРБІ Ко сСпПАБІО
Амінокислотна послідовність 83 СОвЗ МН В5І ЕМУМОа55І МАМОУ сСпПАБІО
Амінокислотна | ОМУМТО5РЕБІ РИБІ арОАБІЗСНОЗОВІ УНОМОаМТ МІ ну 84 |послідовність МИ | М ОКРООЗРК УКУ5МАЕБамМРОВЕЗОБаБаИтовТтІ КІВ сСпПАБІО ВМЕАЕОЇ ЯМУ ЕСБОЗТНУРМТЕССИИТКІ ЕК
ЗЕ
ІО Опис Амінокислотна послідовність
МО:
Амінокислотна 85 |послідовність во УнНеОМмаТмтміІ НН
СОВІ1 МІ. спАБ10
Амінокислотна послідовність 5ОБТНУРМТ
СОВЗ МІ. спАб10
Амінокислотна | ЕМОЇ МЕБОЕМІ МКРОСБІ КІ БСААБИєБЕ НДО Мамо 87 |послідовність МНІ ТРОКВІ ЕМ/МААІЗТИаСМУ ГТУМРОБМОСАЕТІЗАВОМАММТІ М спПАБ7 ГОМ55І КЗЕОТАМУУСАВВИасСМуАСЕА ММ СОСТІ МТУБА
Амінокислотна 88 |послідовність СЕБЕНОаМОаМ5
СОВ1 МН спАБ7
Амінокислотна послідовність АІЗТОСМУТУУРОБМОС
СОВ2 МН спАБб7
Амінокислотна послідовність вВасМуУАСЕАУ
СОВРЗ МН спАБ7
Амінокислотна | ОІОМТО5РАБІ БМОМОЕТМТІТСОВАВРОЕМІМ5МІ А МОЮКОС 91 |послідовність МІ | КОРОГ І МУААТМІ АРОМРОВЕБИаБИаБИатТОМУ5БІ КІМ5Г О5ЕО сСпПАБ7 ЕаТУМСОнНЕМаИТтРЕТЕРаЗОткіІ ЕК
Амінокислотна 92 |послідовність ВРБОЕМІМОМІ А
СОВІ1 МІ. спАБб7
Амінокислотна послідовність 93 |сов2 Мі спдьті А ТМІлО спАБВ
Амінокислотна 94 |послідовність ОНЕМИТРЕТ
СОВЗ МІ. спАб7
Амінокислотна | ЕМКІ МЕССІ МКРОСБІ КІ 6ХСААБаєТЕЗ5У,МОУМУМНО 95 |послідовність УНІ ТРЕКАВЕМУМАТІБССО ММ ТМСРОБУКОаВЕТІЗВОМАКММІ М спАБВ ГОМ55І В5ЕОТАЇ МУСТВОВаМОМНУАМОогМ соте
Амінокислотна послідовність тіБаСамММтУСРОоБУКОа
СОВ2 МН спАБ8
Амінокислотна 97 |послідовність ОвВаХОМнНМАМОЕ
СОРЗ МН спАБ8
Амінокислотна | ОІОМТОЗРАБІ БМОМОЕТМТІТОВАБЕМІМ5МІ АНОСКОСК послідовність МІ. | РОГ МУААТМІ АРОМРОНЕБаМОаБОТОМ5І КІМ5І О5БЕОБС спАБВ ЗУЕСОМЕМ атом ТваааИткі ЕК
Амінокислотна послідовність ВАБЕМІМОМІ А
СОВІ1 МІ. снАЬВ
Амінокислотна 100 | послідовність ОМЕМаТ5МуТ
СОВЗ МІ. спАБ8
Амінокислотна | ЕМК МЕБСОСЗИІ МОРОСБІ КІ БСААБОБЄТЕЗЗМІМЗУУВОТР 101 | послідовність МНІ ЕКВІ ЕМ/МАБІМЗ5МІ ТУ РОБМКОВЕТІБАОМАВМІІ МІ ОМ55
СПАБІ17 ІЇКЗЕОТАМУМСАВЗаТВАМЕАУМ СОСТІ МТУБА
Амінокислотна послідовність 102 СОВІ МН СЕТЕББМІМ5 сСПАВ17
ЗЕ
ІО Опис Амінокислотна послідовність
МО:
Амінокислотна послідовність 103 Сов? МН 5ІМ55МТУУРОоЗМКа
СПАБІ17
Амінокислотна послідовність 104 Сов ун 5атТВААМЕАДУ
СпПАбІ17
Амінокислотна | ІМ ТО5РАБІ АМ5І ЧФОВАТІЗСВАЗКОУЗТЗАУЗУМНУУСОК 105| послідовність МІ | РООРРКІ ІМ АЗМІ ЕС МРАВЕЗаЗабзатТОЕтТІ МІНРМЕЕЕВСА
СПАБІ17 АТУМСОН5АЕЇ РУТЕССИИТКІ ЕК
Амінокислотна 106 | послідовність ВАБКОУЗБТЗАУЗУМН
СОВІ1 МІ. спАБІ17
Амінокислотна 107 | послідовність ОНЗВЕГ РУТ
СОВЗ МІ. спАБІ17
Амінокислотна |ОМО ООРООЕЇ МКРИАБУКІ БСКТЗаИмМТЕТТОМ/МНУУКОВ Р 108| послідовність МНІ ЧОСТІ ЕМО МІНРМЗСОСТТМММЕКЕКОЗКАА ТМОКЗ5о5ТАСМОЇ 5 сПАБ5 ЗІ ТЗЕОБАУМУСАНЗУМКУУЕрУМмататтМТУ5о
Амінокислотна 109 | послідовність СМТЕТТОМУМН
СОВ1 МН спАБо
Амінокислотна 110 | послідовність МІНРМЗаТТтМУМЕКЕК5
СОВ2 МН спАББ
Амінокислотна 111 | послідовність ЗУМКМУЕОМ
СОВРЗ МН спАББ
Амінокислотна |ОІМІ ТО5РАЇМ5АБІ СЕЕІТ ТС5БАЗООУЗУМНИУМООКВИто КІ. 112 | послідовність МІ | ІМТ 5МІ АБаМРБНЕБавБаватЕм5і ТІЗ5МЕАЕОБАЮММСНОМУ спАр5 Т5УМУТЕссаТтКІ ЕК
Амінокислотна 113)| послідовність БАБООУБУМН
СОВІ1 МІ. спАЬ5
Амінокислотна 114) послідовність ЗТЗМІ АБ
СОН МІ. спАБ5
Амінокислотна 115) послідовність НнНОМУТ5УМУТ
СОВЗ МІ. спАБ5
Амінокислотна послідовність МНІ ЕМОЇ МОБЕИАЕУККРОБОУКУЗСКАБаУ5ЗЕТОУТІНУУВОАРОО 116| пшАбБ18МН.1, СГЕМУ/МОаМмІМРМЗАМТОММОКЕКОАМТІТАОКОТОТАММЕЇ 551 В
НиАБІВ8м1 їі ЗЕОТАМУУСАВУБаЗТРУМУЕОУМССОоаТТМТУ55 пПчАрІ18У5
Амінокислотна посілоенють МН ЕМО УО5САЕУККРО55УКУЗСКАВОУЕТУТІНМУВОАРООС 117 ПИАРІВ8УЗ, " ГЕУЛОамМІМРМЗАМТОММОКЕКОВТТІ ТАОВОТОТАММЕЇ 551 А5ЕО й ТАМУУСАНУБавтТРУМУєЮУМСаОСсТТУТМ55
ПиАбІ8мв і пПчАрІ8УЗ
ЗЕ
ІО Опис Амінокислотна послідовність
МО:
Амінокислотна послідовність МН пор в В, | ЕМО! УО5САЕУККРОЗ5УКУЗСКАБСУЗЕТВУТІНМУВОАРООС 118 пИАБІ вуй. ГЕММОМІМРМЗАМТОМАОКЕОС ВМТ ТАОКОТОЗТАУМЕЇ 551 БЕ " ОТАУУУСАВУЗа5БТРУМУєОУМССОСТТУТУ55
ПиАБрІТ8мб,
ПиАБІ18У і пиАр18м10
Амінокислотна послідовність 119 Сов? МН МІМРМЗА!АМТОМАОКЕОС пчАрІ8УН.1Ь
Амінокислотна послідовність МІ. | ОІЮО ТОЗРУОБЇ БАБЄМООВМТІТСВАЗО5УБУММУМУ УООКРОКАРКІ. 120 | пиАБбІ18МІ 41, ПМАТ5ОМІ АБСМРОНЕЗабБавзатЕНТІ ТІ ОРЕОБАТУМСОСМУ пПиАБІ8М1 їі З5МРІ ТЕИОСТКІ БІК пчАрівм2
Амінокислотна послідовність МІ. | ОІОЇ ТОЗРУОБІ БАБЄМООВМТІТСВАЗОЗУБУММУМ УООКРОаКОРКР 121 | пшАБІТ8МІ Та, МИМАТ5ОМІ АБМРОНЕБУ5БУБИтЕНТІ ТІЗ55І ОРЕОБАТУУСОСМУ пПиАБІ8УЗ і З5МРІ ТЕИОСТКІ БІК пиАріВвм4
Амінокислотна послідовність МІ | ОС ТОЗРУОБІ БАБЄМООВМТІТСВАЗОЗУБУММУМ УООКРОКАРКР 122 | пиАБ18МІ. 16, МУАТ5ОМІ АБМРОНЕБУБИаБатЕНТІ ТІ ОРЕОБАТУУСОСМУ пПиАб18мв і З5МРІ ТЕИОСТКІ БІК пиАр18м10
Амінокислотна послідовність МІ. | ЕІМ ТО5РОБЄО5БМУМТРКЕКМТІ ТСВАЗО55УЗУМММ МООКРООЗБРКГІ. 123 | пнІАБІВ8МІ 2, ІКАТ5МІ АБИМРУОВЕЗа5бБаб5затоОвЕ ТІМ ЕАДЕОААТУУСООМу55 пПиАБ1 8 і МРІ ТЕРЕИОСТКІ ЕК пПиАБІ18Уб
Амінокислотна послідовність МІ! ЕІМГТО5РОБОБМТРКЕКМТІТСВАБЗЗБ5УЗУММУ МООКР 124 | ппАБІ18МІ .2а, РОБРКРУЛМАТОМІ АБИМРОВЕБУМБУБаИтОнНТтІ ТІМ5І ЕА
ПиАБІ18У і ЕСААТУУСООСМ55МРІ ТЕРООСТКІ БІК пПчАрІ8УЗ
Амінокислотна послідовність МНІ ЕМОЇ МОБСАЕУККРОЗОЗУКУЗСКАБЗахУТЕ5БЗУММНУМУА 125) пнАБЗМУН.1, ОАРИОСС ЕМ Ма ІНРОЗаЗТМУМЕМЕКМАМТІТАОКоТ5
ПиАБЗМІ і ТАУМЕЇ! 55І АВА5ЕОТАУУУСАВНИСВІ МЕО МУ аОСТТУТУБо пиАрЗм4
Амінокислотна послідовність МНІ ЕМОЇ МО5БЕАЕУККРОЗББУКУЗСКАБОМТЕЗ5УММНУМУНО 126 | пнАБЗМУН Та, АРЕОСІ ЕУЛО ІНРОБОЗТМУМЕМЕКМААТІ ТМОВОТОТАУ
ПиАБЗУЗ і МЕ! 55І АЗБЕОТАМУЕСАСИаСВІ МЕО МУ СИС ТУТМ55 пПиАБЗУуб
Амінокислотна послідовність МНІ ЕМОЇ МОБЕАЕУККРОЗБОУКУЗСКАБЗахУТЕ55УММНУМВОА 127 | пнАБЗМН.165, РОСС ЕМЛаі ІНРОБИаЗТМИМЕМЕКМААТІ ТМОВЗТЗТАММЕ пПиАбЗма2 і І 55ІІ В5ЕОТАМУУСАсСИасВвІ МЕ муаОостТТУТУ55 пПиАБЗм5
Амінокислотна послідовність МІ. | ОІММТО5РІ 5 РМТРОЕРАБІЗСНОЗБОВІ УНОМОаОЮТМІ В/М О 128 | пнАБЗМІ 1, КРИОБРОЇ ПИКМ5МАЕЗамРОВЕЗазаватТОвЕТІ КІЗАМЕАЕ
ПиАБЗМІ і рУаУМУСБОВТНУРМУТЕаСатТкКМЕїК пиАрЗМ2
ЗЕ
ІО Опис Амінокислотна послідовність
МО: посидовністЬ М. ОМУУМТОРІ І РУТРСЕРАБЗІЗСАЗ5О5І УНЗМООТМІ ВМ О 129 ПИАВЗМІ Ла КРИООБРОЇ ПИКМ5МАВЕЗамМРОВЕЗа5азатТОвЕТІ КІЗАМЕАЕЮО
І МамуУєСБОБТНУРМУТРОаатТКМЕїК пПиАБЗУуЗ
Амінокислотна посидивнить М руУМтТО5РІ І РУТРОЕРАВІЗСВ55О5І УНЗМООТХІ В/М ОК 130 ПИАБЗМА, й РООБРОГШІМКУМ5МАЕЗаУРОВЕЗаьЗабато ТІ КІЗАМЕАЕОМОа , МУУСБОБТНУРУТРОааТтТКкМвїК
ПиАБЗУ?; і пПиАБЗУуб
Амінокислотна послідовність МНІ ЕМОЇ МОБЕАЕУККРОЗЗУКУЗСКАБИахУТЕ5ЗУММНУМНОАР 131 | пнАБЗМ2 1, СОСГЕМаіІНнРМУЗаЗТМММЕМЕКМААТІ ТМОВОТ5ОТАММЕЇ 5 пПиАБЗМ2.2 і 9ЗІ АБЕОТАУМУСАсасВІ МЕ УМ сОос,тТТУТУ55
НПиАрЗм2.З
Амінокислотна послідовність
СсОовг ун 132 ПИАБЗУ 1, НРУ БОаЗТМУМЕМЕКМ пПиАБЗМ2.2 і
НиАрЗм2.З
Амінокислотна послідовність МІ. | ОІММТО5РІ 5БГРМТРОЕРАБІЗБСНОБОВІ УНЬЗООЮТМІ ВМ. 133 | пнАБЗМ2 1, ОКРООБРОЦП ІМКУМЗМАЕБамМРОВЕЗазавато ТІ КІБАМЕ пПиАБЗма2.4 і АЕВУСУМУС5ЗОЗТНУРУТРаСаИТткКМвїК
ПиАВрЗм2.7
Амінокислотна послідовність
СОоВІ мМ. 134 ПИАБЗУ 1, ЗОБІ УнНОБартмІ пПиАБЗма2.4 і
ПиАВрЗм2.7
Амінокислотна послідовність МІ. | ОІММТО5РІ 5БГРМТРОЕРАБІЗБСНОБОВІ УНЬМАОТМІ ВМ. 135 пйАБЗМ2г 2, ОКРООБРОЦП ІМКУМЗМАЕБаМРОВЕЗазавато ТІ КІБАМЕ пПиАБЗм2.5 і АЕВУСаУМУС5ЗО5ТНУРУТРаСОаИтТкКМЕїК
ПиАБрЗм2.8
Амінокислотна послідовність
СОоВІ мМ. 136 ПиАЬЗУ 2, 855051 УНОМАОТМІ В пПиАБЗм2.5 і
ПиАБрЗм2.8
Амінокислотна послідовність МІ. | ОІММТО5РІ БГРМТРОЕРАБІЗБСНОБОВІ УНЬМОЮТМІ ВМ. 137 | пнАБЗМ2.3, ОКРООБРОЦП ІМКУМЗМАЕЗаМРОВЕЗазаваИтоЕТІКІБАМЕ пПиАБЗма2.6 і АЕВУСаУМУС5ЗО5ТНУРУТРаСОаИтТкКМЕїК
НПиАрЗм2.9
Амінокислотна послідовність
СОоВІ мМ. 138 ПиАБЗУ? 3, 855051 МНОМООТМІ В пПиАБЗма2.6 і
НПиАрЗм2.9
5ЕО
ІО Опис Амінокислотна послідовність
МО:
Амінокислотна послідовність УН ЕМО МОЗСАЄУККРОЗ5УКУЗСКАЗСУТЕЗ5УММНИМУВОА 139 пиАБЗУ2.4, РООСІ ЕУМІСІІНРЕЗО5ЗТМУМЕМЕКМВАТІ ТУОВОТОТАУМЕ
ПидБЗу? Б І 551 85ЕОТАУУУСАСОСВІ УГРУМ СОСсТТУТУЄ5 пидЬЗм? 6
Амінокислотна послідовність
У
140| Ам 4, ПНРЕЗСУТМУМЕМЕКМ
ПидБЗу? Б пидЬЗм? 6
Амінокислотна послідовність УН ЕМО УОЗСАЄУККРОЗ5УКУЗСКАЗСУТЕЗ5УММНУУВО 141. пюАБЗУО.7, АРСОСІ ЕМО ІНРІЗСЗТМУМЕМЕКМВАТІ ТУОВОТеТАУМ
ПидБЗу? 8 ЕІ 551 ВЗЕОТАУУУСАСССВІ УЕОУМ СОСТТУТУЗ5 пидЬЗм? 9
Амінокислотна послідовність
Сов УН 142| ПАЬЗУо т. ПИНРІЗОЗТМУМЕМЕКМ
ПидБЗу? 8 пидЬЗм? 9
Амінокислотна пику М ріоМтТо5РУЗІ ЗАЗУСОВУТІТСКАЗОМУСЕМУАМ УООКРО 143 пдріЗмо 7 00/ КАРКШШУЗАВУВУВОУРЗВРВО8О5О ТОРТІ ТІВ ОРЕОРА повзе ТУУСООУММУРЕТЕСОСТКІ ЕІК пшАБбБІЗмМ7
Амінокислотна пику М ріоМтоОо5РУЗІ ЗАЗУСОВУТІТСКАЗОМУСЕММАМ УООКРОК за одріз 00 ЗРКАПУЗАБУВУЗОУРОВРВО5О8СТОТІ ТІВ ОРЕОРАЕ
М, УЕСООУММУРЕТЕСОСТКІ ЕІК
ПиАБІЗУВ
Амінокислотна посліловність М-| пІоМтТО5РУ8І ЗАЗУСОВУТІТСКАЗОМУСЕММАМ УООКРОК 1аБІпдрі3м 0 АРКШШУВАБУВУВЗОУРОВЕВО5О8СТОТІ ТІВ ОРЕОРАТУ поз ЕСООУММУРЕТЕСОСТКІ БІК пидБі змо
Амінокислотна пику МНІ Бус! оє5ОРСІ УКРБЕТІ 8І ТСАУЗСУВІТбУЗМІНУЛВОРРС тав рі3 00 КОГЕМСХІНЗВОВТМУМРВІ КВУТІЗУОТВКМО ВІКІ 58УТА
З АОТАУУУСАВУООУРЕУМ СОСТТУТМУ5
ПидБІЗуЗ ї пИАБ ЗА
Амінокислотна пику МНІ Бус! оє5ОРСІ УКРОІЕТІ 8І ТСАУТОУВІТЗСУ М НМЛВОЕРС таті З 00 МОГЕМУМОХІНВВОВТМУМРВІ КЗВІВІЗВОТеКМОРРІКІ 85УТА
З АОТАМУУУСАСУООУЄЕУМСОСТТУТУЗВ пичАБбІТЗУ5 і пПиАБІ Зуб
ЗЕ
ІО Опис Амінокислотна послідовність
МО:
Амінокислотна послоенть МН ЕМО! ОЕБОРСІ УКРОЕТІ 8І ТСАУ5СУВІТЗСУЗМІНУЛВОРРО 148 ПИАБІЗУТ ' МагЕММаТмІНВЗавтмМмМРБІ КОВІТІЗАОТКМОГБІ КІ 55МТА , АОТАМУУСАНУООМЕЕУУСОСТТУТМ55
ПиАБІТЗмв і пПЧАВІ Зм
МІ АВКОа5БРОаМИамМНМаААЇ САЇ М ЕСІ ТОАЕМОМРЕОРМУМАЇ М
СТОАТІ СС5Е5РЕРОЕБІ АОЇ МИПУМОЇ ТОТКОЇ МНОЕАЕСОГОС
ЗАМАМЕАТАЇ ЕРОГ І АССМАБІ ВІ ОВМАМАВЕСБЕТСЕМ5ІВОБО
ЗААМ5І ОМААРУЗБКРОМТІ ЕРМКОЇ АРОЮТМТІТС5БЗМОСМРЕ
АЕМЕМЖОрООСМУРІ ТММ Т5ОМАМЕОСИІ ЕОМУНБІЇ АУМІ САМ
Амінокислотна | аТУ5СІ МАМРМІ ООБАНЗЗМТІТРОНКЗРТЯАМЕМОМРЕОРМУМАЇ. 149 | послідовність МатОрАТІ АС5ЕЗРЕРОЕБІ АОЇ МЛУМОЇ ТОТКОЇ УНЗЕТЕа НО
В7-НЗ (людини). | О5АМАМВАТАЇ ЕРОЇ І АССМАБІ ВІ ОКМАМАВСЕСЗЕТСЕМ5ІВОБ
СБААМ5І ОМААРУЗКРОМТІ ЕРМКОЇ АРИОЮТМТІТС55УВОаМРЕ
АЕМЕЖМОрИОСУРІ ТММ Т5ОМАМЕОССІ ЕОМУН5МІ ВУМІ САМ
С,ТУБСІ МАМРМ ООВВАНОаЗМТІТаОРМТЕРРЕАЇ МУТМИІ 5МС
ПАТ МАГАЄЕМСМУВКІКОЗСЕЕЕМАВАЕРОССЕСЕСБКТАГ ОРІ.
КНЗОБКЕООСОБЇІА
МІ АВКа5БРОаМИаМНМСААЇ СА МЕССІ ТОАГЕМОМРЕОРМУМАЇ М
СТОАТІ СС5ЕЗБРЕРОЕБІ АОЇ МИМО ТОТКОЇ МНЕЕАЕСОГО
СБАМАМАТАЇ ЕРОГ І АОСМАБбБІ В ОКУАМАВЕСЯЗЕТСЕМ5ІВОБ
СБААМ5І ОМААРУЗКРОМТІ ЕРМКОЇ АРОЮТМТІТС5БМОСМРЕ
В7-НЗ-ЕСО АЕЄЕУМЕМОраоОсУРІ ТаМуМ ГТ ЗОМАМЕОСИІ ЕОМУНБІЇ ВУМІ ЧаАМа людини (злиття зі ТУ5СІ МАМРМІ ООВБАНЗЗМТІТРОВЗРТОАМЕМОМРЕОРУМАЇ МО
Ес) ТОАТІ ВСБЕБРЕРСОЕБІ АОЇ МУМОЇ ТОТКОЇ МНОЕТЕС РОСА 150 ХАМАТАЇ ЕРОЇ ГГ АСОСМАБІ ВІ ОВМАМАОЕСЗЕТСЕМ5ІНОБОа5АА
МБ ОМААРУЗКРОМТІ ЕРМКОЇ ВРИЮТМТІТС55УВКаМРЕАЕЄМЕМ
Примітка: ОрСПОСУРІ ТаМУТТ5ОМАМЕОСІ ЕОМНОМІ ВНУМІ САМИатТУСїІ. послідовність Ес | МАМРМІ ООБАНИаЗМТІТЯОРМТЕАААОКТНТОРРСОРАРЕАЕСАР підкреслена ЗМЕГЕРРКРКОТІ МІЗВТРЕМТСМУУМОМЗНЕОРЕУМКЕММ УМО, МЕ
МНМАКТКРАЕЕЄОУМОТУНММУ5МІ ТМ НООУМІ МОКЕУКСКУВМКА
ІГРАРІЕКТІЗКАКООРВЕРОМУТІ РРОНЕЕМТКМОМ5І ТСІ МКОа БУ
РБВІАМЕЖМЕБМООРЕММУКТТРРМІ О5РОБЕРІ КІ ТМОоКВАУМО
ОСОММЕЗСВМУМНЕАІ НМНУТОКОБІ 5І 5РОК
МІ ВОМ ЧИаРБМОаМСМУВТтАЇ СМІ СІ СІ ТОАМЕМОМЗЕОРММАЇ М
ОТОАТІ АВС5ЕБРЕРОЕБІ АХОЇ МІУМОЇ ТОТКОЇ МНЗЕТЕС рос
В7-НЗ-ЕСО миші | БАУ5МАТАЇ ЕРОЇ І МОСІМАБІ ВІ ОВМАМТОЕаБМТСЕМБІОСЕО (злиття з Ес) ЗААМ5І ОМААРУЗКРОМТІ ЕРМКОЇ АВРЕМММУТІТС55МОСМРЕ
АЕМЕМУКОРИ,адамУРІ ТОМУТТ5ОМАМЕНВНСОЇ ЕОМНОМІ ВУМІ САМ 151 С,ТУБСІ МАМРМІ ООВАНОа5ЗМТІТаОРІ ТЕАААОКТНТСРРСРАР
Примітка: ЕАЕСАРБМНРІ ЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМТСМУМОМЗНЕОРЕМКЕМ послідовність Ес | МУМВСМЕМНМАКТКРАЕЄЕОУМОТУВУМ5МІ ТМ НОСУМІ МОКЕ підкреслена МКСКМУ5МКАЇ РАРІЕКТІЗКАКИООРАЕРОМУТІ РРОВЕЕМТКМО
М5І ТС УКОЕМРБОВІАМЕМЕЗМООРЕММУКТТРРМІ ОБОСБЕРІ.
УК ТМОКЗАУМОСаММЕЗС5ММНЕАІ НМНУТОКОІ 5І РОК
МЕРСІ БУМ РІ МА! КИОМОСОАЇЕМОУМРЕОРУМАЇ МОТОАТІ СС
ЗЕЗРЕРОЕБІ ХО МІУМОЇ ТОТКОЇ МНОЕАЕСОВОСЗАМАМАТ
АІЇ ЕРОГ І АОСМАБІ ВІ ОВМАМАРЕСЗЕТСЕМБІВОРОа5БААМ5БІ ОО
МААРУЗБКРОМТІ ЕРМКОЇ ВРОЮТМТІТ С55МОСМРЕАЕМЕМОЮ
В7-НЗ-ЕСО СОСМРІ ТаМУТТ5ОМАМЕОІ ЕОМН5І КУМ аАМатУсі МА 152 | людини (з МРМІ ФОВАНЗЗМТІТРОНЗРТЯаАМЕМОМРЕОРМУМАЇ МОТОАТІ В міткою Нів) СБЕБРЕРОЕБІ АОЇ МИМО ТОТКОЇ МНЗЕТЕВНРОС5АМАМА
ТА ЕРОЇ ГАОСМАБІ ВІ ОВМАМАВСЕОЗЕТСЕМБІВОБГО5ААМБІ.
ОМААРУБКРОМТІ ЕРМКОЇ АРИЮТМТІТС55УВОаМУРЕАЕЄЕМЕМО раосцйуУРІ ТОМУТТ5ОМАМЕОСІ ЕОМНОМІ ВУМІ ЧаАМОаТУБСІ М
ВМРМІ ООВАНИОаЗМТІТаОРМТНННННН
ЗЕ
ІО Опис Амінокислотна послідовність
МО:
МЕРСІ ЗУ РІ МАІ/'-КИаМОСМЕМОМ5ЕОРММАЇ МОТОАТІ ВСЕ
ЗРЕРОЕБІАОЇ МЛУМО ТОТКОЇ МНОЕЄЕТЕСВРОСЗАМОМАТАЇ. 153 В7-НЗ-ЕСО миші! ЕРОГГМОСМАБІ АГОВУАМТОЕСВУТСЕМБІОЮЕОБААМ5І ОМ (з міткою Нів) ААРМБКРОМТІ ЕРМКОГАРЕМММУТІТ С55ОСУРЕАЕМЕМУКО
СсОСМРІ ТОМУТТ5ОМАМЕНОСЇ ЕОМНОМІ ВУМІ ЧаАМИаТУСЇ М
ВМРМІ ФОВАНИОИЗМТІТИОРІСТЕНННННН
МІ-НАВО5РИЕИМОаМУНМСААІ СА М/ЕСІ ТА ЕМОМРЕОРМУМАЇ.
У,аТрАТІ ВС5ЕЗБРЕРСОЕБІ АОЇ МОУ ОСТОТКОЇ МНОєТЕа ВО
ОСОО5БАМАМЕАЕТАЇ РІ ОЇ АОСМАБІ ВІ ОВУМАМАВЕСБЕТСЕМБІВ
РЕ,аБААМ5І ОМААРУЗБКРОМТІ ЕРМКОЇ ВРОЮТМТІТС5Б5УВНаИ
В7-НЗ-ЕСО МРЕАЕМЕЖМ ОВВИ,ОСАРІ ТаММТТ5ОМАМЕОСІ ЕЮОМНОМІ УМ. 154 | макака-крабоїда | САМИТ УСІ МАМРМІ ОССАНИавзПТІТРОВОЗРТОАМЕМОМУРЕОР (з міткою Нів) МУАЇ МЕТОАТІ ВС5Е 5РЕРСОЕБІ АДОЇ МИМО ТОТКОЇ МНОЕТЕ аАООСБАМАМЕАТАЇ РІ ОЇ ГГ АОСМАБІ ВІ ОВМАМАСЕОЗЕТСЕМ
ЗІВОРО5ААМ5І ОМААРУЗБКРУОМТІ ЕРМКОЇ ВРООТМТІТС55У
ВаМРЕАЕМЕЖМ ОВСОСАРІ ТОММТТЗОМАМЕОСІ ЕОМНОМІ В
УММІ ОАМаИТУСІЇ МАМРМІ ОЮВАНИЗМТІТЕОРМТЕАААНННННННН
Амінокислотна | ОМОЇ МОБСАЕУМККРИББЗУКУЗСКАВБОСТЕЗОЗУАІЗМУВОАРа 155| послідовність ОС ЕУМОааИПРІБЄЕТАММАОКЕОСАМТІТАОКОТОТАМУМЕЇ 551. аНнМм1-69706 В5ЕОТАМУМСАВ
Амінокислотна 156 | послідовність жаоаттУтМи55
ІШН.Об"О1
Амінокислотна |СІОГ ТО5РОБІ БАБМООВМТІТСВАБОСІЗОМІ А МООКРОаК 157 | послідовність АРК ІМААБТІ ОБОМРОВЕЗИаБабБатЕНТІ ТІ55І ОРЕОБАТ аКкмМ1-9701 УУСООІ МУР
Амінокислотна 158 | послідовність ЕСОСТКІ БІК
ІакОаго1
АБТКОаРБОМЕРІ АРЗОБКОТ5ИаастТААГасСІ МКОМЕРЕРУТУБМУ
Мала Т5аУНтТЕРАМІ 055 М5І 55ММТМРБЗББІ ТОМІ
МУММНКРОЬМТКУОККМЕРКЗСОКТНТСРРСОРАРЕЇ ааРОМЕ
Константна ГЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМТСУУМОМЗНЕОРЕМКЕМУ УМВС М 159 | ділянка гамма-1-| ЕМУНМАКТКРАЕЕОУМОТ У ВММБМІ ТМ НОСМ/І МЕОКЕМКОК ланцюга Ід М5МКАЇ РАРІЕКТІЗКАКООРВЕРОМУТІ РРОЕВЕЕМТКМОМ
ЗІ ТС МКОЕУРБОІАМЕЖМЕЗМОСОРЕММУКТТРРМІ ОБОСЬ
ЕРГМЗКІ ТМОКЗВУМООСаММЕЗСОММНЕАЇ НМНУТОКОІ 51.
РОК
АБТКОаРБОМЕРІ АРЗБКОТ5ИаастТААГасСІ МКОМЕРЕРМТМ
ЗМУМБаАІТ5аТмНТЕРАМІ 05501 М5І 55УМТМРБУББІ СТ
Мутантна ОТМІСМУМНКРОЬМТКМОККМЕРКЗСОКТНТСРРОРАРЕАА константна СОаРБМУЕГЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМТСММУМОМЗНЕОРЕМК 160 ділянка гамма-1- ЕМУУМраМЕМНМАКТКРЕЕєОСУМОТ УВУ ТМ НОЮ ланцюга Ід МІ МаКкКЕМКСКМУ5МКАЇ РАРІЕКТІЗКАКСОРАЕРОМУТІ.
РРОВЕЕМТКМОМ5І ТС МКОЕМРБОІАМЕЖМ ЕМО РЕМ
МУКТТРРМГО5БОС5БЕБ МК ТМОКВАМООСММЕБСВМ
МНЕАЇ НМНУТОКБІ 5І РОК
Константна ВТМААРБМРІЕРРРБОЕБОЇ К5ИатАБМУМСІ І ММЕМРВЕАКМ 161 | ділянка каппа- |! ОМКМОМАЇ ОБОМЗОЕЗМТЕООБКОБТМУБІ 55ТІ ТІ ЗК ланцюга Ід АОХЕКНКУММАСЕМТНОСІ 55РУТКОЗЕМАСЕС
Константна ОРКААРБОМТІ ЕРРОБЕЕЇ ОАМКАТІ МСГПІЗО ЕМ РОАМТМ 162 | ділянка лямбда- | АМКАОБОРУКАСМЕТТТРОЬКОЗММКУААБОМІ ЗІ ТРЕ ланцюга Ід ОМ КЗНАЗУЗСОУТНЕСЗТМЕКТМАРТЕС5
Амінокислотна | ЕІМГТО5РОБГОБМТРКЕКМТІТСВАБОБІСЗ5І НУМО 163 | послідовність КРООБРКІ ПІКМАБОВЕБаМРОВЕЗИаБОаБОИТОЕТІ ТІМ
ІаКкмМб6-21701 ЗІ ЕАЕОААТУМСНОВОБІ РХ
ЗЕО
ІО Опис Амінокислотна послідовність
МО:
Амінокислотна | ОІММТО5РІ БІ РУТРОЕРАБІБСНОЗЗОБІИ ЇЇ НІМОаУМУ 164 | послідовність ГОММІ ОКРООБРОЇ МІ О5МААЗаМРОНЕбИБОа5
ІаКкм2-28701 СТОЕТІКІЗВМЕАЕОМа УМ УСМОАІ ОТРР
Амінокислотна 165 | послідовність гсвааткМЕКк аКкОг4701
Амінокислотна |ОМОЇ ОББИРИЇ МКРОЕТІ БІ ТСАУБамМ5ІЗБИМ УМ 166 | послідовність СУЛВОРРОКаИЇ ЕУМТИаБІУНОЗаВТУУМРБІ КОАМТІ5 а НнмМ-р6701(0-1 МОТ5КМОВ5І КІ 6ББМТААОТАМУУСАН
Амінокислотна | ОІЮМТО5РБОБІ БАЄМООВМТІТСВАБОБІЗВУЇ МУ/У 167 | послідовність ОСООКРОКАРКІИ ІМААБЗБІ ОБИУРОНЕЗОВОВИаТОБ
ІаКм1 -39701 ТІ ТІЗБІ ОРЕОЕАТУУСОО5У5ТРР посил нть ЕМО! ОЕБЗОРСІ МКРОЕТІ І ТСАУТОУВІТЗСУ ЗМ НМУ важкого ланцюга ІВОЕРОМИа ЕМ МамінвБавтмМУМРБІ КОВАІБІЗНАОТО пИдЬІ ЗУ КМОЕРІ КІ 55МТААОТАМУУСАСМООМЕЕ УМ а,ОСТТ
МТУ55АБТКОаРБОМЕРІ АРОЗ5КОТ5ИаСТтТААІ СІ УКбУ
ЕРЕРМТУМБММ5ОАІ ТЗОМНТЕРАМІ 055 51 55УМ 168 | Примітка: ТУРБББІ атТОТМІСМУМНКРОМТКМОККМЕРКЗСОКТН послідовність ТСРРСРАРЕААСОРБУРІ ЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМТСМ мутантної МУМОМ5НЕОРЕМКЕММ УМО МЕМНМАКТКРАЕЕОУ МО константної ТУВММ5МІ ТМ НОМ МОКЕМКСКУ5МКАЇ РАРІЕКТІ ділянки гамма-1- ЗКАКООРВЕРОМУТІ РРОВЕЕМТКМОМ5І ТС УКаЕМУ ланцюга Ід РЗВІАМЕЖМЕЗМИОРЕММУКТТРРМІ ОБООБЕРБІ У5КІ. й ТУМОКБАУМОСаММЕЗСЗУМНЕАЇІ НМНУТОКОБІ 5І РОК підкреслена
Амінокислотна послідовність легкого ланцюга пПИЧАБІ Зм РІОМТОБРБОБІ БАБМООЮОВМТІТСКАБОММИаЕММАМ/ МО
ОКРОКОЗРКАПУ5БАБУНУВБОаМРОЗАЕЗИаБазатонті ТІ 169 З5І ОРЕОЕАЕМЕСООУММУРЕТЕРС,ОСТКІ ЕІКАТМААР
Примітка: ЗМЕІЕРРБОЕОЇ КЗаТАБУМСІ І ММЕМРАЕАКМОМУКМО послідовність МАГОБамМООєВМТЕООБКОБТУВІ 551ТІ ТІ ЄКАОМЕКН константної КМУАСЕМТНОІ 55РУТК5ЕМВИЕС ділянки каппа- ланцюга Ід підкреслена посил нть ЕМО МОЗСАЄУККРОЗ5УКУЗСКАЗСУТЕЗЗУМ МНУУ важкого ланцюга МАОАРИаОСІ ЕМІСІЇ ІНРЕЗаЗТМУМЕМЕКМААТІ ТОВ
ПИАБЗУ? 5 ЗТЗ5ТАХУМЕЇ 55І АБЕОТАУУУСАсСИаснвВІі МЕрУмаОс
І ТТУТУ55АЗБТКОРБЗУМЕРІ АРЗБКОТ5ОСТАА аСІ КО
МЕРЕРМТУБМ/М5ИаАЇ ТЗаМНТЕРАМІ 05501 БІ 55ММ 170 Примітка: ТУРБББІ аТОТМІСМУМНКРОМТКМОККМЕРКЗСОКТНТ послідовність СРРСОРАРЕААСОРБ5БМРЕЇ ЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМТСУММ мутантної ОМ5НЕОРЕМКЕММ УМОСМ ЕМУНМАКТКРАЕЕєОУМОТУ В константної МУБМІ ТМ НОРМІ МОКЕУКСКМУ5МКАЇ РАРІЕКТІЗКАК ділянки гамма-1- СОРВЕРОМУТІ РРОВЕЕМТКМОМ5І ТСІ УКаЕМРБОІА ланцюга Ід МЕЖЕБВБМСООРЕММУКТТРРМІ БОБЕР УК ТМОКоА підкреслена М ОССММУЕЗСЗ5УМНЕАЇ НМНУТОКОІ 5І РОК
ЗЕО
ІО Опис Амінокислотна послідовність
МО:
Амінокислотна послідовність подруг оо ОІММТОБРІ ЗІ РУТРОЕРАВІЗСА58ОВІ УНЗМАОТІ.
І ВММГОКРООБРОЇ ІМК У5МАЕЗОМРОВЕЗОбЗОБИТ 171. Примітка: РЕ ТКІЗАМЕАЕОМаУУУС5ОЗТНУРУТРаСИтТкКМЕЇ послідовність КАТМААРБУРІЕРРБЗОЕОЇ Ка ТАБЗУМСІЇ ММЕМРАВЕА константної КМОМ/КМОМАГОБаМ5ОЕВМТЕООБКОБЗТУБІ 55271 Т : ІЇ ЗКАОМЕКНКУМАСЕМТНОІ 55РУТКЗЕМАСаЕС ділянки каппа- ланцюга Ід підкреслена
Амінокислотна ЕМО МОБОАЕЄЕУККРОЗБЗУКУЗСКАБОМ ТЕЗУ МН послідовність МУВОАРООСІ ЕС ІНРЕЗЕЗТМУМЕМЕКМВАТІ Т важкого ланцюга урнЗтЗтТАУМ
ПИАБЗУ? 6 ЕГ55І ВБЕОТАМУУСАсСОааВІ Мер им аоатТтУтМ
І ЗЗАБТКОаРБОЗМЕРІ АРЗЗ5КОТЗОаСТАА аСІ МКОХЕ
РЕРУТУБУУМЗИАІ ТИ МНТЕРАМІ 0550121. 51 55М 172. Примітка: МТУРБББІ атТОТМІСМУМНКРОМТКМОККМЕРКВОСО послідовність КТНТОРРСОРАРЕДАСОРБМУРІ ЕРРКРКОТІ МІЗАТР мутантної ЕМТСУУММОМ5НЕОРЕМКЕММ УМО МЕМНМАКТКРАЕ константної ЕОУМОТУВМУМУБМІ ТМІ НОБУМІ МЕКЕУКСКУМКАЇ Р ділянки гамма-1- АРІЕКТІЗКАКООРВЕРОМУТІ РРОВЕЕМТКМОМ5І Т ланцюга Ід СІ УКОЕУРБОІАМЕМ ЕБМЕОРЕММУКТТРРМІ ОБОЄ підкреслена ЗЕРГУЗКІТМОКБАМООСММЕЗСЗУМНЕАЇНМНУТО
КІ ЗІ РОК
Амінокислотна послідовність легкого ланцюга пиАрЗма2 6 РІММТО5РІ 5І РУТРІЕРАБІЗСНЗЗОБІ УНОМОЮТ
МУ ВМ ОКРООБРОЇ ІМКУМЗМАЕБОаМРОВЕЗОаБа 173 ЗатТОРТІКІЗВУЕАЕОМа УУУС5ОЗТНУРУТРОССТ
Примітка: КУЕІКАТМААРБЗМУРІЕРРБЗОЕОЇ К5атАБМУМСІ І ММЕМУ послідовність РВАВЕАКМОМУКМОМАГ ОБаМЗОЕЗУТЕООЗКОЗТУБІ. константної ЗОЗТІ ТІ БКАОМЕКНКУУАСЕМТНОСІ 55РУТК5ЕМАСЕС ділянки каппа- ланцюга Ід підкреслена
Амінокислотна послідовність ОМОЇ МОБИАЕМККРИИББЗУКУЗСКАЗзООИьЗУаї МУНО 174 Па НМ1- АРИОСІ ЕМ Меаіїрідіапуаак"(давВМТІТАОКеТ5ТАУМ 69706 ІСНОбЄ ЕГ55І В5БЕОТАУУУСАНХХхххххх СОС ТУТ
Амінокислотна послідовність РІММТО5РІ БІ. РУИТРИаєЕРАБІЗСт5завіІйзпдупуйУм о 175 ПаКМг- КРООБРОЇ ПМІдзпгагхаМРОВЕЗазОаБаИтТоОнТтІ КІЗАМ 28701 ІСКО4 ЕАЕОУаУУУСХХхххххххх гаСаткМїІКк
Амінокислотна |ОМОГ ОЕБаРИЇ МКРЗЕТІ ЗІ ТСАМ5дузізздуумумів 176| послідовність ОРРОКа ЕУММСвіупздвіуупрзік ВМТІЗМОТЗКМО БІ.
ІЯСНМ4-р І2НУб |КІ 55М4ТААОТАМУУСАВХххххххУ СОСТ ТУТ
Амінокислотна | ОІЮОМТО5РБЗБІ БАБМООВМТІТОтазадавівзуі пу МООКР 177 | послідовність СКАРКИ ІмМааззідза МРОНЕЗОЗИЗаИтТОвТтІ ТІЗБГО
ІШКМ1-39 1ІЯКО2 | РЕОГАТУУСхххххххххгсОдаткКІ ЕК
ЗЕО
ІО Опис Амінокислотна послідовність
МО:
Амінокислотна послідовність
МІ1 варіантів пПиАБЗ
РІММТО5РІ БІ РУМТРИаЕРАБІЗСтТ5За5іМиЗХхЯтУМ МІ. 178 | Примітка: Х ОКРООБРОЦП ІМКУзпиізаМРОВЕБЗаЗаБаИтогТІ КІ може являти ЗАМЕАЕОМамУмСвазіпурутрасаткмМвїКк собою будь-яку амінокислоту, за винятком: М, С,
М, О або О
Амінокислотна послідовність
МІ1 варіантів пПиАБЗ
РІММТО5РІ БІ РУМТРЕИаЕРАБІЗСТ5За5ІіМиЗпХаИУ М. 179 | Примітка: Х ОКРООБРОЦП ІМКУзпиізаМРОВЕБЗаЗаБаИтогТІ КІ може являти ЗАМЕАЕОМамУмСвазіпурутрасаткмМвїКк собою будь-яку амінокислоту, за винятком: М, С,
С, 5, Мабо Р
Амінокислотна послідовність
МНТІЬ варіантів пПиАБЗ
ЕМО МОБОАЕУККРИаЗЗУКУЗСКАБДУунЬЗУМТИМУ М 180 | Примітка: Х ВОАРСОСІ ЕУМархздвіпупетіки КАТІ МО ВТ може являти ТАУМЕЇ 55І ВБЕОТАУУУСАСсцяапувумаоа!ттУТУ5о собою будь-яку амінокислоту, за винятком: М, С,
М, О або О
Амінокислотна послідовність
МНТІЬ варіантів пПиАБЗ
ЕМО МОБОАЕУККРИаЗЗУКУЗСКАБДУунЬЗУМТИМУ М 181 | Примітка: Х ВОАРСОСІ ЕУЛаїрахдзіпупетіки ВАТ ТМОВ5тТ5 може являти ТАУМЕЇ 55І ВБЕОТАУУУСАСсаапу ум а,аоаттУгУо собою будь-яку амінокислоту, за винятком: М, С,
С, 5, Мабо Р
Амінокислотна 182 | послідовність ООУМОУРЕТ
СОВЗ МІ. спАрІЗ
Включення за допомогою посилання
Зміст усіх посилань, патентів, заявок на патенти, що перебувають на розгляді, і опублікованих патентів, які процитовані в даній заявці, таким чином явно включені за допомогою посилання.
Еквіваленти
Фахівцям у даній галузі буде зрозуміло, або вони будуть здатні визначити із застосуванням лише звичайних експериментів наявність багатьох еквівалентів конкретних варіантів здійснення даного винаходу, розкритого в даному документі. Мається на увазі, що такі еквіваленти охоплені наведеною нижче формулою винаходу.
ПЕРЕЛІК ПОСЛІДОВНОСТЕЙ
«110» АВВМІЕ ІМС.
ВАМСКО, МІГАМ «1205 АНТИТІЛА ДО В7-НЗ І КОН'ЮГАТИ АНТИТІЛА ТА ЛІКАРСЬКОГО ЗАСОБУ «1305 117813-12620 «140» «1415 «1505 |и5 62/347,476 «1515 2016-06-08 «1505 !и5 62/366,511 «1515 2016-07-25 «1605» 182 «1705 РакепсІп версія 3.5 «2105 1 «2115 120 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність МН сСНАБ2 «4005 1 сіп ма! сіп ге сіп сіп Рго сіу АЇа сій ге ма! Гуз Рго сІу АїЇа 1 5 10 15 5зег маЇ Гуз Гей 5ег Су5 Гуз АЇа бек сіу туг Тйг РМПе тТиг 5ег туг 20 25 30
Тер мес ніх Тер ма! Гуз сп Агд Рго су сЇп сІу гГеи сіи Тгр Пе 35 40 45 сіу мес ІЇе Ні Рго Азр б5ег сіу Тийг Тис о АЗп Туг А5п си Гуз РБе 50 55 60
Аг бек Гуз Аїа Ттйгоїеи Тиск ма! дор Гуз бег 5ег 5ег ТИг Аїа туг 65 70 75 80 мес сіп Гей 5ег б5ег ге Тиг о б5ег сі Азр 5ег АЇїа ма! Туг туг су 85 90 95
АІїа ма! туг туг сіу б5ег Тйг отТуг Тгр туг Ре А5Зр ма! Тер сіу тег 100 105 110 с1іу тис отигома!ї тег о маї 5ег 5ег 115 120 «2105» 2 «2115 10 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОК1 МН спАБ2 «4005» 2 сіу туг Тиг Ре тТиг о5ег о Ттуг тер мет нів 1 5 10 «210» З «2115 17 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОК2 МН спПАБ2 «4005» З мес ІЇе Ні Рго А5р 5ег сіу Тиск тиг Ап Туг Ап сій Гуз Ре Ага 1 5 10 15 зег бо «210» 4 «2115 11 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» 65 «2235 Синтетична: амінокислотна послідовність СОКЗ3 МН сПАБ2 «400» 4 туг туг сіу б5ег Тис туго Тгр туг Ре дор маї 1 5 10 «2105». 5
«2115 112 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність мі. спАБ2 «4005 5
Азр ма! ма! мес тийг осіп Тйг РгОо Гей 5ег Гей Рго Ммаї 5ег Гей сІу 1 5 10 15
Азр сіп АТа туг ІЇе бек Су5 Агуд 5ег 5ег сіп 5ег Геу маї ніх Пе 20 25 30
Азп сіу Азп о Ттиг о туго Гей Ні Тер Туг Агдуд сіп Гуз Рго сІу сіп 5ег 35 40 45
Рго Гуз Гей Гей ІїІе туг Гуз ма! 5ег АЗзп Аг Ре б5ег сіу ма! Рго 50 55 60 А5р Агу Ре 5ег сіу б5ег сіу 5ег сіу Тийг А5Зр Ре тйг гей Гуз Пе 65 70 75 80 5зег Агд ма! си Аїа сій А5р Ге сіу ма! туг Ре Суз 5ег сіп 5ег 85 90 95
ТВг Ні Ре Рго Ре Тйг РПе сіу 5ег сІіу ТНг Гуз Гей сім Пе Гуз 100 105 110 «2105» 6 «2115 16 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОКІ1 мі спАБ2 «4005» 6
Аг бег б5ег сіп 5ег о їеи ма! Ні ІЇе А5п сіу А5п тТиг Туг Геи Ні 1 5 10 15
Зо «2105 7 «2115 7 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОК2 МІ сСпАБ?, сНАБЗ,
СРАБІО, ПиАБЗМІ .1, ПиИАБЗМІ .1а, ПиАБЗМІ.15, ПиАБЗм2.1, ПиАБЗм2.2,
ПиАБЗ3мМ2.3, НиАЬЗм2.4, ПиАбБЗ3ЗмМ2.5, ПмАБЗ3м2.6, йиАбБЗ3Зм2.7, пиАБЗ3мМ2.8 1
ПиАБЗм2.9 «4005 7
Гуз ма! 5ег Азп Аг Ріпе 5ег 1 5 «210» 8 «2115 9 «212» Білок «2135» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОКЗ3 мі спАБ2 «400» 8 5зег сіп 5ег Тиг ні Ре Рго РНе ТЕг 1 5 «210» 9 «2115 117 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність МН СНАБЗ «4005 9 сіп ма! сіп ге сіп сіп Рго сіу АЇа сій ге ма! Гуз Рго сІу АїЇа 1 5 10 15 60 зег ма! Гуз Ге б5ег Суз Гуз АЇїа б5ег сіу Туг ТНг РМНе 5ег 5ег туг 20 25 30
Тер мес ніх Тер ма! Гуз сп Агд Рго су сЇп сІу гГеи сіи Тгр Пе 35 40 45 с1іу Ге ІІе Ні Рго Ар 5ег сіу 5ег ТИйг о А5Зп Туг АЗзп сій Мет РНе 65 50 55 60
Гуз АЗзп Гуз АїЇа ТийгоГеи Тйг о ма! А5р Агуд 5ег б5ег б5ег Ттиг Аа туг 65 70 75 80 ма! сіп Ге б5ег б5ег ге Тиг об5ег сі А5р 5ег АЇа ма! Туг РПе сСуз 85 90 95 70 Аїа сІу сіу сіу Агуд Геи Туг Рпе Азр Ттуг Тгр сіу сіп су тНг тег
100 105 110
Ге тиг маї 5ег 5ег 115 «2105» 10 «2115 10 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОК1І МН сСПАБЗ, ПиАБЗМН.1,
ПИАБЗМН.Та, пиАБЗМнН.15, ПиАБЗм2.1, ПиАбБЗ3мМ2.2, пиАБЗ3мМ2.3, НиАБЗмМ2.4,
ПиАБЗ3мМ2.5, пиАБЗ3мМ2.6, ПиАБЗ3мМ2.7, ПИАБЗ3мМ2.8 1 ПиАбЗм2.9 «400» 10 сіу туг Тиг Ре 5ег 5ег Туг Тгр мет Ні 1 5 10 «2105 11 «2115 17 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОК2 МН спАБЗ, ПиАБЗМН.1,
ПиАБЗМН.Та ї пиАБЗМН.1Б6 «4005 11
Гей ІІе Ні5 Рго А5р 5ег сІіу бек ТИг о АЗп Туг Азп сіи Мес РНе Гуз 1 5 10 15
АЗп «2105» 12 «2115 8 «212» Білок «2135» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОКЗ3 МН спАБЗ, ПиАБЗМН.1,
ПИАБЗМН.Та, пиАБЗМнН.15, ПиАБЗм2.1, ПиАЬЗ3мМ2.2, ПмАБЗ3мМ2.3, НиАЬЗм2.4,
ПиАБЗ3мМ2.5, пиАБЗ3мМ2.6, ПиАБЗ3мМ2.7, ПИАБЗ3мМ2.8 1 ПиАЬЗм2.9 «4005 12 со1у с1у Агд Гей туг Ре д5р туг 1 5 «2105» 13 «2115 112 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність мі сСНАБЗ «4005» 13 А5зр ма! ма! мес тс сіп ТИг о Рго Гей 5ег Гей Рго Ма! 5ег гей с1у 1 5 10 15
Азр сіп АТа б5ег ІЇе бек Су5 Агуд 5ег 5ег сіп 5ег Геу ма! нів 5ег 20 25 30
Азп сіу Ар Ттиг туг гей Агуд Тер Туг Геи сіп Гуз Рго сІу сіп 5ег 35 40 45
Рго Гуз Гей Гей ІїІе туг Гуз ма! 5ег А5зп Агуд Ре б5ег су ма! Рго 50 55 60
А5Зр Агу Ре 5ег сіу бек сіу 5ег сіу Тйг А5Зр Ре тиг Геи Гуз Пе 65 70 75 80
Тс Агуд ма! сій Аїа сій А5р о Геи сіу ма! туг Ре сСуз 5ег сіп 5ег 85 90 95
ТВгоніб мМмаїЇ Рго Туг Тйг Ре Ссіу сІу СсСІу ТНг Гуз Гей сіи Пе Гуз 100 105 110 «2105» 14 бо «2115 16 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОКІ1 МІ спАБЗ, НиАБЗМІ.1, 65 ПиАБЗМІ та ї ПиАЬЗМІ.1Б «400» 14
Аг бег б5ег сіп 5ег о їеи ма! Ні 5ег д5п сіу А5р тТиг Туг Геи Агд 1 5 10 15 «2105» 15 70 «2115 9
«212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОКЗ3 МІ сСПАБЗ, НПиАБЗМІ.1,
ПиАБЗМІ .1а, ПиАБЗМІ.15, НиАБЗм2.1, ПиАВБЗ3ЗмМ2.2, ПиАБЗ3м2.3, ПиИАБЗмМ2.4,
ПиАБЗ3мМ2.5, пиАБЗ3мМ2.6, ПиАБЗ3мМ2.7, ПИАБЗ3мМ2.8 1 ПиАЬЗ3м2.9 «400» 15 5зег сіп 5ег Тиск Ні ма! Рго Туг тис 1 5 «210» 16 «2115 117 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність МН сСНАБА «400» 16 сіп ма! сіп ге сіп сіп Рго сіу АЇа сій ге ма! Гуз Рго сІу АїЇа 1 5 10 15 5зег маЇ Гуз Гей 5ег Су5 Гуз АЇа 5ег сіу Туг 5ег Ре Тиг 5ег туг 20 25 30
Тер мес ніх Тер ма! Гуз сп Агд Рго су сЇп сІу гГеи сіи Тгр Пе 35 40 45 сіу мет ІІе Ні Рго Ап 5ег сіу 5ег А5зп АЗпП Туг А5Зп си Гуз РНе 50 55 60
Гуз б5ег Гуз АїЇа Тийг о Ге Тйг о ма! А5р Гуз 5ег бег Ап Ттиг Аа туг 65 70 75 80 мес сіп Гей 5ег б5ег ге Тиг о 5ег сій Ар 5ег АЇа ма! Ттуг туг су 85 90 95
Аїа Агд Агд Ге сІіу Гей Ні Ре д5р Туг Тгр оЇу сЇп сіу тис тег 100 105 110
Ге тиг ма! 5ег 5ег 115 «2105 17 «2115 10 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОК1 МН спАБ4А «4005 17 сіу туг 5ег РМПе ТИг б5ег Ттуг Тгр мМмеє нів 1 5 10 «210» 18 «2115 17 «212» Білок «2135» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОК2 МН спАБ4А «400» 18 мес ч1Їе НІі5 Рго АЗзп б5ег сІіу 5ег А5п Ап Туг АЗп сі Гуз РВе Гуз 1 5 10 15 зег «210» 19 «2115 8 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОКЗ3 МН спАБ4А «400» 19 60 Агуд Ге сІу Гей Ні РіПе Ад5р Туг 1 5 «2105» 20 «2115 107 «212» Білок 65 «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність мі сСНАБА «4005» 20
Азр ІІе ма! мес тйг осіп 5ег о сіп Гуз Ре Мет 5ег Тиг Рго маї сІу 70 1 5 10 15
А5Зр Агуд Ма! 5ег ІЇе тТийг Суз Гуз АТа 5ег сіп Азп мМаї сІу тйг Аїа 20 25 30 ма! Аїа тер туг сіп сіп Гуз Рго сіу сіп 5ег Рго Гуз Ге Гей ІїЇе 35 40 45 тТуг 5ег АТа 5ег д5п Агуд Туг Тийг су ма! Рго А5зр Ага Ре Ттиг су 50 55 60 5ег сіу 5ег сіу ТИг о А5р Ре Тиг гей Тиг о ІЇе 5ег Ап Мет сіп 5ег 65 70 75 80 сі А5р гей АЇа А5р тТуг Ре Суб5 сіп сіп туг б5ег 5ег Туг Рго туг 85 90 95
Тиг Ре сіу сІу сіу тйг Гуз Ге сіи ІІе Гуз 100 105 «2105» 21 «2115 11 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОК1 мі спАБА «400» 21
Гуз Аїа бек сіп Азп Ма! сіу тийг АїТа ма! Аїа 1 5 10 «2105» 22 «2115 7 «212» Білок «2135» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОК2 МІ спАБ4 «4005» 22 5зег АїЇа 5ег Азп Аг туго тиг зо 1 5 «2105» 23 «2115 9 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОКЗ3 мі спАБА «4005» 23 сіп сіп туг 5ег о бег Туг Рго Туг ТЕГ 1 5 «2105» 24 «2115 121 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність МН СспПАБІ18 «4005» 24 оп ма! сіп гей сп сіп 5ег АїЇа АТа сЇи гГеи АїЇа Агуд Рго су Аїа 1 5 10 15 5зег ма! Гуз Мет 5ег Су5 Гуз АЇа б5ег сіу туг 5ег Ре Тиг 5ег туг 20 25 30
Тк ше ніх Тер ма! Гуз сп Агд Рго сЇу сЇп сІу гГеи сіи Тер Іе 35 40 45 сІ1у туг ІЇе А5п РГО А5п 5ег Агу АЗп о ТИг др отТуг Ап о сЇп Гуз РВе 50 55 60
Гуз Азр сій Тс отвгобеи Тис Аїа А5р Агу 5ег бег б5ег ТИг Аа туг 65 70 75 80 мес сіп Гей ІЇе 5ег Ге Тиг о б5ег сі Азр 5ег АЇїа ма! Туг туг су 85 90 95
АТїа Агд туг б5ег сіу бек Тис о РгГо Туг Тгр Туг Ре А5р ма! Тер с1Уу бо 100 105 110
АТїа сіу тйг о тийг ма! тиг ма! 5ег 5ег 115 120 «2105» 25 «2115 10 65 «2125 Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОКІ МН сСпАБІ8, ПиАБІВМН.1,
ПиАБ18МН.Та 1 пиАБІВМН. 16 70 «4005» 25 сіу туг 5ег Ре Тиг 5ег Туг Типг Іе Ні 1 5 10 «210» 26 «2115 17 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОК2 МН СсСПАБІ18, пПиАБІВМН.1 1
ПиАБІ8МН.1а «400» 26 тукг ІТе А5пП РГО А5п 5ег Аг АбЗп о ТИйг Ар о туг АбЗп о сіп Гуз Рве Гуз 1 5 10 15
А5р «2105 27 «2115 12 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОКЗ3 МН сСпАБІ8, ПиАБІВМН.1,
ПиАБ18МН.Та 1 пиАБІВМН. 16 «4005 27 туг 5ег сіу б5ег Тис о Рго Туг Тгр Туг РПе д5р маї 1 5 10 «2105» 28 «2115 106 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність МІ СПАБІ18 «400» 28 сіп 1Іе ма!їЇ ге тиг сіп 5ег Рго АЇа ІЇе Ге 5ег АЇа 5ег Рго с1у 1 5 10 15 сіи гГуз ма! Тийг Мет тийг Ссуз Агуд Аїа 5ег 5ег б5ег ма! 5ег туг мес 20 25 30
Азп Тер туг сіп сіп Гуз Рго сіу б5ег 5ег Рго Гу5 Рго Тгр Іе туг 35 40 45
АТа Тис 5ег Азп Ге АЇїа бек сІу ма! Рго АЇа Агу Ре 5ег ма! 5ег 50 55 60
Ма! 5ек сіу ТНг 5ег Ні 5ег Ге Тийг Іїе 5ег Агд ма! сім Аїа си 65 70 75 80
Азр АЇа Аїа тТийг отуг туг Суз сіп сіп Тер б5ег 5ег Азп Рго Гей Тег 85 90 95
Рпе СІу АТа сіу ТНг Гуз Гей си гГеи Гуз 100 105 «2105» 29 «2115 10 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОКІ мі сСпАБІ8, ПиАБІВМІ.1,
ПиАБІВМІ.1а, МПиАБ18МІ.15, НиАБ18МІ.2 ї пПиАБІ8МІ.2а «400» 29
Аг Аїа 5ег 5ег 5ег ма! бег туг Меє дп 5Б 1 5 10 «2105» 30 «2115 7 «212» Білок «2135 Штучна послідовність бо «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОК2 МІ сСпАБІ8, ПиАБІВМІ.1,
ПиИАБІВМІ.1а, МПиАБ18МІ.15, НиАБ18МІ.2 ї пПиАБІ8МІ.2а «4005 30
АТїа тиг 5ег АЗп Ге АїЇа 5ег 65 1 5 «210» 31 «2115 9 «212» Білок «2135 Штучна послідовність 70 «220»
«223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОКЗ3 мі сСпАБІ8, ПиАБІВМІ.1,
ПиИАБІВМІ.1а, МПиАБ18МІ.15, НиАБ18МІ.2 ї пПиАБІ8МІ.2а «400» 31 сіп сіп Тер 5ег 5ег Азп Рго Гей Тег 1 5 «2105» 32 «2115 116 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність МН СПАБбБІЗ «4005 32
Азр ма! сіп гей сіп сій 5ег СсІу Рго А5Зр Гей ма! Гу5 Рго 5ег сіп 1 5 10 15 зег Гей б5ег Гей Тийг о Суз Тк ма! тийг о сіу туг 5ег ІІе тиг 5ег су тукг 5ег Тер ніх Тгр Іїе Агуд сіп Ре Рго Оу А5п Гуз Гей си Тгр мес сіу туг ІЇе Ні5 5ег б5ег сіу 5ег ТИПг А5Зп тТуг АЗзп РгОо 5ег Гей 20 50 55 60
Гуз 5ег Агуд ІІе 5ег ІЇе А5п Агуд АЗр Тиг 5ег уз Ап сЇп Ре РПе 65 70 75 80
Гей сіп Гей А5п о б5ег ма! Тийг отийг сій Азр Тс АТа твг туго туг су 85 90 95 25 Аїа сіу туг А5р А5р Туг Ре сіи Туг Тер с1у сіп сіу Тис тег Ге 100 105 110
Тиг ма! 5ег 5ег 115 «2105» 33
Зо «2115 11 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОКІ МН сСпАБІЗ, ПиАБІЗМН.1, 35 ПиАБІЗМи.Т1а, ПиАБ13Ми.15, МйиАбБ13м1, пиАБ13м2, пиАБ13м3, ПиАбБ13м4, ПиАБІ13м5,
ПиАБ13м6, пиАЬ13м7, пиАБ13м8 ї ПиАбБ13м9 «4005 33 сіу туг 5ег ІІе ТиПг 5екг сІу туг 5ег Тер Ні 1 5 10 40 «2105» 34 «2115 16 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» 45 «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОК2 МН сСпАБІ1ІЗ3, ПиАБІЗМН.1,
ПиАБІЗМи.Т1а, ПиАБ13Ми.15, МйиАбБ13м1, пиАБ13м2, пиАБ13м3, ПиАБ13м4, ПиАБІ13м5,
ПиАБ13м6, пиАЬ13м7, пиАБ13м8 ї ПиАбБ13м9 «4005» 34 туг шІІе Ні 5ег б5ег сіу 5ег ТИг АЗпП Туг А5ЗпП РГО 5ег Гей Гуз 5ег 1 5 10 15 «2105» 35 «2115 7 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОКЗ3 МН сСпАБІ13, ПиАБІЗМН.1,
ПиАБІЗМи.Т1а, пиАБ13Ми.15, МПиАбБ13м1, пиАБ13м2, пиАБ13м3, ПиАБ13м4, ПиАБІ13м5,
ПиАБ13м6, пиАЬ13м7, пиАБ13м8 ї ПиАбБ13м9 «4005 35 60 тТуг А5р А5р Туг Рпе си туг 1 5 «2105» 36 «2115 107 «212» Білок 65 «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність мі СсСНАБбБІЗ «4005 36
Азр ІІе ма! мес тйг осіп 5ег о сіп Гуз Ре Мет 5ег ТИг 5ег маї сіу 70 1 5 10 15
А5Зр Агуд ма! б5ег ма! Тийг сСуз Гуз АЇїа 5ег сіп А5п Ма! сіу РПе А5п 20 25 30 ма! Аїа тер туг сіп сіп Гуз Рго сіу сіп 5ег Рго Гуз АїЇа гей ІїЇє 35 40 45 тТуг 5ег Аїа 5ег Туг Агуд Туг 5ег сіу ма! Рго А5р Ага Ре тиг су 50 55 60 5ег сіу 5ег сіу ТИг о А5р Ре Тиг Гей Тиг о ІЇе 5ег Азп ма! сіп 5ег 65 70 75 80 сій А5р гей АЇїа сій ТтТуг Ре Суб сіп сіп тТуг АЗзп 5ег Туг Рго Ре 85 90 95
ТИг Ре сіу 5ег сіу тиг Гуз Ге сіи ІІе Гуз 100 105 «2105» 37 2115 11 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОКІ мі сСпАБІ1ІЗ3, МПиАБІЗМІ.1,
ПИАБІЗМІ.1а, МПиАБ13МІ.15, МПиАБ13м1, пиАбБ13м2, пиАБ13м3, ПиАБ13м4, ПиАБІ13м5,
ПиАБ13м6, пиАЬ13м7, пиАБ13м8 ї ПиАбБ13м9 «4005 37
Гуз АЇа 5ег сіп Азп Маї сІу Ре А5п маї АїЇа 1 5 10 «2105» 38 «2115 7 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОК2 МІ сСпАБ13, МПиАБІЗМІ.1,
ПИАБІЗМІ.Т1а, МПиАБ13МІ.15, МйиАбБ13м1, пиАбБ13м2, пиАБ13м3, ПиАБ13м4, ПиАБІ13м5,
ПиАБ13м6, пиАЬ13м7, пиАБ13м8 ї ПиАбБ13м9 «4005 38 5зег АїЇа 5ег туг Агд Туг 5ег 1 5 «2105» 39 «2115 9 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОКЗ3 МІ ПиАБІЗМІ.1,
ПиАБІЗМІ.1а, ПиАБ13МІ.15, МйиАбБ13м1, пиАбБ13м2, пиАБ13м3, ПиАБ13м4, ПиАБІ13м5,
ПиАБ13м6, пиАЬ13м7, пиАБ13м8 ї ПиАбБ13м9 «4005 39 сіп сіп туго АбЗп Тер отуг Рго Ре ТЕГ 1 5 «2105» 40 «2115 118 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність МН СПАБІ12 «4005» 40 сіи ма! сіп ге ма! сій 5ег сіу сіу сіу Гей маїЇ Гуз Рго сІу сі1у 1 5 10 15 зег Гей Гуз Гей 5ег Суз АЇа Аїа 5ег сіу Ре ТНг РМБе 5ег 5ег туг 20 25 30
АТа мес б5ег Тгр ма! Агуд сіп тиг Рго сіи Гуз Агуд Геи сім Тер маї 35 40 45
АТїа тик ІЇе бек б5ег сіу ТИйг о Азп Туг Тиготуг туго Рго А5р б5ег маї бо 50 55 60
Гуз с1у Агуд Рпе тТийг ІЇе 5ег Агуд Азр Азп АЇа Гуз Ап Тиг Геи туг 65 70 75 80
Гей сіп Меє Тис 5ег Ге Агд бек сі АЗзр Тйг Аїа мес туг туг су 85 90 95 65 АїЇа Ага сіп сіу Агуд Туг 5ег Тгр ІЇе АТа туг Тер сіу сіп су тЕг 100 105 110
Гей ма! тиг ма! 5ег Аїа 115 «210» 41 70 «2115 10
«212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОК1 МН СспАБІ12 «400» 41 с1Уу Ре Тиг Ре 5ег 5ег Ттуг АЇа Мет 5ег 1 5 10 «2105» 42 «2115 17 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОК2 МН СспАБІ12 «4005» 42
Тс Іїе 5ег 5ег сіу Тийг о АЗп Туг ТйгоТукг туг Рго дор б5ег маї Гуз 1 5 10 15 с1у «2105» 43 «2115 9 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОКЗ3 МН спАБІ12 «400» 43 сп с1у Агдуд Туг 5ег Тгр ІІе АїЇа туг 1 5 «2105» 44 «2115 110 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність мі СсНАБбІ12 «400» 44 А5р ІчІЇе ма!їЇ Геи Тк сіп 5ег Рго АЇа 5ег Гей Аїа ма! 5ег їеи с1у 1 5 10 15 сп Аг Аїа Тс о ІЇе б5ег сСуз Агуд Аїа 5ег Гуз бег ма! 5ег тТНг 5ег 20 25 30
Азр туг 5ег Туг Мет Ні Тер АЗп сіп сіп Гуз Рго сіу сіп Рго Рго 35 40 45
Гуз Ге Гей ІІе Ттуг Гей АЇїа 5ег А5п Ге сіи 5ег сіу ма! Рго АїЇа 50 55 60
Аг Рпе б5ег сІу б5ег сіу бек сІ1у ТИйг Ар Ре тНг Ге А5п ІЇе Ні 65 70 75 80
Рго ма! сіи сій сій А5р АЇїа Аїа тийг отуг туго Суз сіп Ні 5ег Ага 85 90 95 сій Ге Гей Тйг Ріе сіу АТа сіу тйг Гуз Ге сіи Геи Гуз 100 105 110 «2105» 45 «2115 15 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОК1 МІ спАБІ12 «4005» 45
Аг Аїа б5ег Гуз 5ег ма! бек Тиг 5ег Ад5р Туг 5ег Ттуг Меє нів 1 5 10 15 «210» 46 «2115 7 60 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОК2 МІ сСпАБІ12 ї СсНАБбБІ17 «400» 46 65 Гей АЇїа 5ег А5п Гей сіи 5ег 1 5 «2105» 47 «2115 8 «212» Білок 70 «2135 Штучна послідовність
«223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОКЗ3 МІ СспАБІ12 «4005» 47 сп ніх б5ег Агуд соЇи Гей Гей тпг 1 5 «2105» 48 «2115 118 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність МН СсНАБбІ14 «400» 48 сіи ма! Гуз Ге ма! сій 5ег сіу сіу сіу Ге ма!Ї Гуз Рго сІу с1У 1 5 10 15 зег Гей Гуз Гей 5ег Суз АЇа Аїа 5ег сіу Ре ТНг РМБе 5ег 5ег туг сІ1у Мет б5ег Тгр ма! Агд сіп Ттйг Рго сЇи Гуз Агд Гей сім Тгр маї
АТїа тк ІЇїе 5екг сіу сіу сіу Тиг о А5зп Тиготуг туг Рго А5р б5ег маї 20 50 55 60 сій с1у Агуд Рпе тТийг ІЇе 5ег Агуд А5р Азп АЇа Гуз Азп РНе Геи Туг 65 70 75 80 ей сіп Меє бег 5ег Ге Агд бег сі А5р Тйг АЇїа геи туг туг суз 85 90 95 25 Аїа Агуд Ні Туг сіу б5ег сіп Ттийг мех А5р туг Тер с1у сіп су тНг 100 105 110 5ег ма! тиИг маї 5ег 5ег 115 «2105» 49
Зо «2115 10 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОК1 МН СспАБІ14 ї сНАБВ 35 «400» 49 с1Уу Ре Тиг РМПе 5ег 5ег Туг сіу Мет 5ег 1 5 10 «2105» 50 «2115 17 40 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОК2 МН СспАБІ14 «4005 50 45 Тс ІІе 5ег сіу сіу сіу Тийг о Адб5п Тс туго туг Рго А5р 5ег маї си 1 5 10 15 с1у «210» 51 «2115 9 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОКЗ3 МН спАБІ14 «4005» 51
Ні Ттуг сіу 5ег сіп Ттиг мет д5р туг 1 5 «2105 ч352 «2115 107 60 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність мі сСНАБІ14 «4005 52 65 Ар ІІе сіп Меє тТийг о сіп 5ег Рго АЇїа 5ег Ге 5ег АЇа 5ег маї су 1 5 10 15 сіи тис ома! тс оІТе тйг о сСуз Агуд Тигоб5ег с1у Ап ІЇе Ні5 А5п Туг 20 25 30
Ге Ттйг тер туг сп сіп гГу5 сіп сіу Гуз 5ег Рго сіп Гей Геи ма! 70 35 40 45 туг Азп АЇа Гуз Тис оГеи АТа А5р сіу ма! Рго 5ег Агуд Ре 5ег О1У 50 55 60 5ег сіу 5ег сіу Ттйг сіп РПе 5ег ей Гуз ІЇе А5п 5ег їеи сіп Рго 65 70 75 80 сім А5р Ре сЇу б5ег Туг Туг Суз сіп ніх Ре Тгр 5ег ІІе меє тгр 85 90 95
Тиг Ре сіу су сіу тйг Гуз Ге сіи ІІе Гуз 100 105 «2105 53 «2115 11 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОКІ1 мі сСПАБ14 «4005» 53
Аг Тис об5ег о1у А5п ІЇе Ні А5п Туг Гей тпг 1 5 10 «2105» 54 «2115 7 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОК2 МІ сСПАБ14 «4005» 54
А5зп АЇа Гуз тТНг Геи Аїа д5р 1 5 «2105 1055 «2115 9 «212» Білок «2135» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОКЗ3 мі сСПАБ14 «4005 155 сіп Ні РБе Тгр 5ег ІЇе Меє Тер тег з5 1 5 «2105» 56 «2115 121 «212» Білок «2135 Штучна послідовність 40 «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність МН сСНАБб «4005 156 сіп ма! сіп ге сіп сіп 5ег сіу АЇїа сій Ге Мет Гуз Рго сІу АїЇа 1 5 10 15 45 5зег ма! Гуз ІІе 5ег Суз Гуз АЇїа ТтТйг о сіу туг ТтНг РМНе 5ег Ага туг 20 25 30
Тер те сіи Тер ма! Гуз сп Агд Рго сіу Ні5 сІу гГеи сіЇи Тгр Пе сіу сім І1ІІе Ге Рго сіу 5ег сіу 5ег ТИг А5Зп Туг А5Зп си Гуз РНе 50 55 60
Гуз сіу Гуз АЇїа Тийг Ре Тиг Аїа А5р Ттийг о б5ег о б5ег Ап Тиг Аа туг 65 70 75 80 мес сіп ма! 5ег б5ег ге Тиг о б5ег сі Ар 5ег АЇїа ма! ні Ттуг су 85 90 95 АЇа Агуд Ага сіу Туг сіу Ттуг ма! Рго Туг АїТа Гей А5р Туг тгр О1У 100 105 110 сіп сіу Ттийг о б5ег ма! тиг маї 5ег 5ег 115 120 «2105 57 бо «2115 10 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОК1 МН спАБб 65 «4005 57 с1у туг ТК Рпе 5ег Агд Туг Тгр Пе си 1 5 10 «2105» 58 «2115 17 70 «2125 Білок
«2135 Штучна послідовність «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОК2 МН спАБб «4005 58 сім ІЇе Гей Рго сіу бек сіу б5ег Тйг Абоп Туг А5Зп си Гуз РПе Гуз 1 5 10 15 с1у «2105» 59 «2115 12 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОКЗ3 МН спАБб «4005» 59
Агд сіу туг сІ1у туг ма! Рго туг АЇа Геи А5р ТтТуг 1 5 10 «2105» 60 «2115 107 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність мі сНАБб «4005» 60 сім ІчІїе сбіп Метє Тс о сіп тТиг о Тг б5ег б5ег Гей 5ег АЇа 5ег гей с1у 1 5 10 15
А5Зр Агуд Ма! тиг о ІЇе бек сСу5 Аг АЇїа 5ег сіп А5р ІЇе 5ег А5Зп 5ег 20 25 30
Гей Азп Тер Туг сіп сіп губ Рго А5Зр сіу тВг маї Азп гей їГеи Пе
Ко) 35 40 45 тТукг туг Ттийг 5ег Агуд Ге Туг б5ег сіу ма! Рго 5ег Агуд Ре 5ег су 50 55 60 5ег сіу 5ег сіу ТИг Азр Туг 5ег Гей Тиг ІЇе 5ег Азп Ге си сіп 65 70 75 80 сій Азр ч1ІІ1е АЇа Тйг о туг Ре Су5з сіп сіп с1у Азп тТАг огГеи Рго туг 85 90 95
Тиг Ре сіу су сіу тйг Гуз Ге сіи ІІе Гуз 100 105 «210» 61 «2115 11 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОК1 мі спАБб «400» 61
Аг Аїа 5ег сп А5р ІЇе 5ег Азп 5ег Геи А5бп 1 5 10 «2105» 62 «2115 7 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОК2 МІ спАБб «4005» 62 Туг Тиг 5ег Ага Геи Туг 5ег 1 5 «2105» 63 «2115 9 «212» Білок 60 «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОКЗ3 МІ спАБб «4005 63 сіп сіп с1у А5п о тг гей Рго Туг Тиг 65 1 5 «2105» 64 «2115 120 «212» Білок «2135 Штучна послідовність 70 «220»
«223» Синтетична: амінокислотна послідовність МН СПАБІ11 «4005» 64 сіи ма! Гуз Ге ма! сій 5ег сіу сіу сіу Ге маїЇ сіп Рго сІу с1У 1 5 10 15 5ег Гей Агуд Гей 5ег Суз АЇа Тийг о б5ег сіу Ре ТНг РМПе Тйг А5п туг 20 25 30 туг Мет 5ег Тгр ма! Агду сп Рго Рго СсІу Гуз АїЇа гГеи сіи Тер Ге 35 40 45
О1У Ре ІЇе Агуд Азп Гуз АЇа А5п АЗр тТуг Тйг тс сій туг 5ег Аїа 50 55 60 5зег ма! Гуз сО1у Аг Рпе Тийг ІЇе 5ег Аг Ар АЗп 5ег сіп 5ег ІЇе 65 70 75 80
Ге туг Гей сіп Мет доп Тийг о гГеи Агуд АТа сі Азр б5ег Аїа тиг туг 85 90 95 Туг су5 АТїа Ага сіи 5ег Рго сіу Азп Рго Ріє АЇа Туг Тгр с1у сп 100 105 110 сіу тйг Ге ма! тиг маї 5ег Аїа 115 120 «2105» 65 «2115 10 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОКІ МН сСПАБІ11 «4005» 65 с1Уу Ре Тиг Ре Тиг о АЗзп туго туг Мет 5ег 1 5 10 «210» 66 «2115 19 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОК2 МН сСПАБІ11 «4005» 66
Ре ІЇе Агд Азп Гуз АЇа Ад5п Ар Туг Тиг о тиг сі Ттуг 5ег Аа 5ег 1 5 10 15 ма! Гуз с1у «2105» 67 «2115 9 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОКЗ3 МН сСпАБІ11 «4005» 67 сій 5ег Рго сіу АЗзп РгГо Ре АїЇа туг 1 5 «210» 68 «2115 113 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність МІ СПАБІ11 «4005» 68 А5зр ІчІІе ма! Мет Тс сіп 5ег Рго 5ег б5ег Гей Тиг ма! тйг Аїа с1у 1 5 10 15 сій Гуз ма! тиг оМес тийг Су Гуз 5ег б5ег сіп 5ег їеу Геи Азбп 5ег 20 25 30 сіу тйг сій Гуз АЗп Ре Гей Тиг Тер туг сп сіп Гуз Рго су сп бо 35 40 45
Рго Рго Гуз Гей Гей ІІе Туг Тгр АТа 5ег Тийг Агд сіи 5ег су маї 50 55 60
Рго А5р Агу Рпе тТийг о сіу б5ег сіу бек сІу Тиг дор Ре типг Ге тАг 65 70 75 80 65 ІІе 5ег 5ег ма! сіп АТа сі А5р гей АїЇа Ма! туг Ре Су сп А5п 85 90 95
Азр туг чІІе Туг Рго Гец Тйг Ре СІу АТа сіу тТНг Гуз гей си Гей 100 105 110
Гуз 70
«210» 69 «2115 17 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОК1 МІ СспАБІ11 «4005 69
Гуз 5ег б5ег сіп 5ег Гей Гей Ап 5ег сіу Тйг сіп Гуз Азп РНе Гей 1 5 10 15 тАе «2105 70 «2115 7 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОК2 МІ сСпАБІ11 «4005 70
Тер АТа 5ег Ттйг Аг си 5ег 1 5 «2105 71 «2115 9 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОКЗ3 МІ СспАБІ11 «4005 71 сіп А5п о АЗр о Ттуг те туг Рго Гей ТЕГ 1 5
Зо «2105 72 «2115 121 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність МН СсСПАБІ16 «4005 72 сіи ма! Гуз Ге Гей сій 5ег сіу сіу сіу Ге маї сіп Рго сІу с1У 1 5 10 15 зег Гей Гуз Гей 5ег Суз АЇа Аїа 5ег сіу Ре А5р РіПе 5ег Ага туг 20 25 30
Тер Меїс 5ег Тгр ма! Агу сп АїЇа Рго сіу Гуз сІу гГеи сіЇи Тгр Пе 35 40 45 сіу сі ІчІЇе А5п о РгГОо Ар б5ег б5ег ТИг о ІЇе Аб5п Туг Тиг РгОо 5ег Гей 50 55 60
Гуз А5р Гуз Рпе ІЇїе ІЇе 5ег Агуд А5р Азп АЇа Гуз А5зп тТиг Геи туг 65 70 75 80
Гей сіп Меє бек Гуз ма! Агд бек си А5р Тйг АЇїа геи туг туг суз 85 90 95
Аїа Агуд Рго с1у Ре сіу Азп туг ІчІІе туг АЇа мех А5р Туг Тгр с1у 100 105 110 сіп сіу Ттийг о б5ег ма! тиг маї 5ег 5ег 115 120 «2105 73 «2115 10 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОК1 МН СспАБІ16 «4005 73 60 с1Уу Ре дор Ре б5ег Ага туг Тгр Меє 5ег 1 5 10 «2105 74 «2115 17 «212» Білок 65 «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОК2 МН СспАБІ16 «4005 174 сій т11е А5п РгОо А5р 5ег б5ег ТИг о ІЇе Азп Туг ТИг Рго 5ег Геи Гуз 70 1 5 10 15
А5р «2105 75 «2115 12 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОКЗ3 МН спАБІ16 «4005 75
Рго сіу Рпе сіу Азп Туг ІІе туг Аїа мет д5р туг 1 5 10 «2105» 76 «2115 107 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність мі СсСНАБбБІ16 «4005 76
Азр ІІе сіп Меє тйг осіп тс о тг 5ег о б5ег ге б5ег АїЇа 5ег Гей сі1у го 1 5 10 15
А5Зр Агуд Ма! тиг о чІЇе Азп Су5 Аг АЇїа 5ег сіп А5р ІЇе 5ег А5Зп РІе
Гей Азп Тер Туг сіп сіп губ Рго А5зр сіу тВг маїЇ Гуз Гей їГеи Пе 25 Туг туг ТНг 5ег Агуд Гей Туг Геи сіу ма! Рго 5ег Агуд Ре 5ег О1У 60 5ег сіу 5ег сіу ТИг Азр Туг 5ег Гей Тиг ІЇе 5ег Азп Ге си сіп 65 70 75 80 сій А5р ч1Іе АЇїа тТийг отуг Ре Су5 сіп сіп сіу Ап Ттйг огГеи Рго РгО
Ко) 85 90 95
Тиг Ре сіу сІу сіу тйг Гуз Ге сіи ІІе Гуз 100 105 «2105 77 «2115 11 35 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОК1 МІ спАБІ16 «4005 77 40 Агуд Аїа бек сіп А5р ІЇе 5ег А5зп РПе Геи А5Пп 1 5 10 «2105 78 «2115 7 «212» Білок 45 «2135» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОК2 МІ спАБІ16 «4005 78 тукг тиг 5ег Аг Гей туг Геи 50 1 5 «2105 79 «2115 9 «212» Білок «2135 Штучна послідовність 55 «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОКЗ3 МІ спАБІ16 «4005 79 сіп сіп с1у А5п о тг огей Рго РгГО Тег 1 5 60 «2105» 80 «2115 125 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» 65 «223» Синтетична: амінокислотна послідовність МН СПАБІ10 «4005» 80
Азр ма! сіп гей сіп сій 5ег сІу Рго сСІу Гей ма! Гу5 Рго 5ег сіп 1 5 10 15 5зег Гей 5ег гей Тиг о Суз Тиг Ома! тиг о сІіу туг 5ег ІЇе тТНг 5ег др 70 20 25 30 туг АТа Тер А5Зп Тер ІЇе Агуд сіп Ре Рго О1У А5ПпП Ага Гей си Тгр 35 40 45 мес сіу НІі5 ІІе А5п Туг б5ег сіу І1Іе ТПг Азп Туг Азп РгГО 5ег Гей 50 55 60
Гуз 5ег Агуд ІІе 5ег ІЇе Тйг Агуд Азр тТиг 5ег о їу5 Ап сЇп РБе РПе 65 70 75 80
Гей сіп Гей Туг б5ег ма! тТийг отийг сі Ар о Тг о Аїа тс тує РВе су 85 90 95
АТїа Агд Агуд б5ег Ге Ре Туг туг Туг сіу бег 5ег Геу Туг АЇїа мес 100 105 110
Азр туг Тер сіу сіп сіу Тс об5ег ма! тиг ма! 5ег 5ег 115 120 125 «210» 81 «2115 11 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОК1 МН сСпАБІ10 «400» 81 сІіу туг 5ег ІІе тТйг 5ег Азр туг АЇа Тер д5п 1 5 10 «2105» 82 «2115 16 «212» Білок «2135» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОК2 МН сСПАБІ10 «4005» 82
Ні ІЇе А5п о Туг б5ег сіу ІчІЇ1е ТНг о А5зп Туг Ап Рго 5ег їеи Гуз 5ег з30 1 5 10 15 «2105» 83 «2115 16 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОКЗ3 МН сСпАБІ10 «4005 83
Аг бег Ге Ре Туг Туг Туг о1у 5ег 5ег їеи Ттуг Аїа Мет до5р туг 1 5 10 15 «2105» 84 «2115 112 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність мі спАБІО0 «4005» 84
Азр ма! ма! мес тийг осіп 5ег Рго Ре 5ег Ге Рго МаїЇ 5ег Гей Сс1У 1 5 10 15
Азр сіп АТа б5ег ІЇе бек Су5 Агуд 5ег 5ег сіп 5ег Геу ма! нів 5ег 20 25 30
Азп с1у А5зп о Тйг туго Гей Ні Тер Ттуг Гей сіп Гуз Рго су сіп 5ег 35 40 45
Рго Гуз Гей Гей ІїІе туг Гуз ма! 5ег А5зп Агуд Ре б5ег су ма! Рго 50 55 60 А5зр Агу Ре 5ег сіу б5ег сіу 5ег сіу ТИйг А5зр РіПе тТйг Геи Гуз Пе 65 70 75 80 5зег Агд ма! си Аїа сій А5р Ге сіу ма! Туг Ре сСуз 5ег сіп 5ег 85 90 95
ТВгоніб маїЇ Рго Тгр Ттйг Ре СсСіу сіу сіу Ттиг Гуз Гей сіи Пе Гуз бо 100 105 110 «2105» 85 «2115 16 «212» Білок «2135 Штучна послідовність 65 «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОКІ1 мі СсПАБІ10 «4005» 85
Аг бег б5ег сЇп 5ег Ге ма! Ні 5ег д5п сіу Ап тТиг Туг Геи Ні 1 5 10 15 70 «2105» 86
«2115 9 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОКЗ3 МІ спАБІ0 «400» 86 5зег сіп 5ег Тиск Ні ма! Рго Тер тис 1 5 «2105 87 «2115 119 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність МН СсСНАБб7 «4005 87 сіи ма! сіп ге ма! сіи б5ег сіу сі Азп Ге ма!Ї Гуз Рго сІу сі1у 1 5 10 15 зег Гей Гуз Гей 5ег Суз АЇа Аїа 5ег сіу Ре 5ег РіПе Агд сіІу туг 20 сІу мес 5ег Тгр маїЇ Агуд сіп тТйг Рго А5р Гуз Аг Геи сіи тТгр ма!
Аїа Аїа ч1Ііе б5екг Тис сІіу сіу А5зп Туг Тиготуг туг Рго А5р б5ег маї 60 сіп с1у Агуд Ре тТийг ІЇе 5ег Агуд А5р Азп діа Аб5п Ап о Тиг о Геи туг 25. 65 70 75 80 ей сіп Мес 5ег 5ег гей Гуз б5ег сі Азр ТИг АїТа Мет Туг туг су 85 90 95
Аїа Агд Агуд с1у сіу Азп Туг АТа сіу Ре АїЇа туг тгр о1у сіп сІу 100 105 110 30 тс огеи ма! тиг ма! 5ег Аїа 115 «2105» 88 «2115 10 «212» Білок 35 «2135» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОК1 МН спАБ7 «4005» 88
О1У Ре б5ег РПе Агуд сіу Туг сіу мес 5ег 434 1 5 10 «2105» 89 «2115 17 «212» Білок «2135 Штучна послідовність 45 «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОК2 МН спАБ7 «4005 89
Аїа ІІе 5ег Ттийг сіу сІіу А5п Туг Тийг оТуг туг Рго Азр 5ег Маї сіп 1 5 10 15
БО с1у «2105» 90 «2115 10 «212» Білок 55 «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОКЗ3 МН спАБ7 «4005 90
Агуд сіу о1у Азп Ттуг АЇа сіу Ре АїЇа Туг во 1 5 10 «210» 91 «2115 107 «212» Білок «2135 Штучна послідовність 65 «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність мі СсНАБб7 «400» 91
Азр ІІе сіп Меє тйг осіп 5ег Рго АЇа 5ег їеу 5ег мМа!ї 5ег маї сіу 1 5 10 15 70 сіи те ома!ї тс о їІТе тиг о сСуз Агуд Рго 5ег сім Азп ІЇе туг 5ег дзп
20 25 30
Гей АЇа Тер туг сіп сіп Гу5 сіп сІу Гуз 5ег Рго сіп Геи Геи маї 35 40 45 туг АТа Аїа Тийг Ап Ге АЇїа Ад5р сіу ма! Рго 5ег Агуд Ре 5ег О1У 50 55 60 5ег сіу 5ег сіу тйг сіп туг 5ег Ге Гу5 ІЇе Азп 5ег Ге сіп 5ег 65 70 75 80 сі! А5р Ре сіу Ттийготуг туго Суб сіп Ні Ре Тер сіу Тиг Рго Ре 85 90 95 тс Ре су 5ег сІу тйг гу5з Ге сіи ІЇе Гуз 100 105 «2105» 92 «2115 11 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОК1 мі спАБ7 «4005» 92
Аг Рго 5ег си А5п ІЇе Туг 5ег А5п Геи АїЇа го 1 5 10 «2105» 93 «2115 7 «212» Білок «2135 Штучна послідовність 25 «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОК2 МІ сСпАБ7 ї спАБВ «4005 93
Аїа Аїа тйг Атп Ге АїЇа дор 1 5 30 «2105» 94 «2115 9 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» 35 0«2235» Синтетична: амінокислотна послідовність СОКЗ3 МІ. спАБбБ7 «4005» 94 сіп Ні Ре Тер сіу Тйг о Рго РПе ТЕГ 1 5 «2105» 95 40 «2115» 121 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність МН сСНАБВ 45 «4005» 95 сіи ма! Гуз Ге ма! сій 5ег сіу сіу сіу Ге ма!Ї Гуз Рго сІу с1У 1 5 10 15 5ег Гей Гуз Гей 5ег Су5з АЇа АЇа 5ег сІіу Ре Тиг Ре 5ег 5ег туг 50 сіу мес 5ег Тгр маїЇ Агуд сіп тйг Рго сіи Гуз Агд Геи сіи тТгр ма!
АТїа тк ІЇїе 5екг сіу сіу сіу А5зп Туг ТиИг о туг Суб Рго А5р 5ег маї 60
Гуз с1у Агуд Рпе тТийг ІЇе 5ег Агуд Азр АЗп АЇа губ А5п А5п о Геи тТуг 55 565 70 75 80 ей сіп Меє бег 5ег Ге Агд бег сій А5р ТИг АЇа геи Туг туг сСуз 85 90 95
Тк Агуд сіп Агд сіу туг А5р Туг Ні Туг АТа Мет дор Ре тТгр ОС1У 100 105 110 60 сіп с1у тс об5ег ма! тиг ма! 5ег 5ег 115 120 «210» 96 «2115 17 «212» Білок 65 «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОК2 МН спАБВ «4005 96
Тиг о ІІе б5ек сІу сіу сіу Азп Туг ТиИг отТуг Суб РгОо А5Зр 5ег маї Гуз 70 1 5 10 15 с1у «2105» 97 «2115 12 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОКЗ3 МН спАБВ «4005» 97 сп Агуд сїу туг А5р Туг Ні туг Аїа Мет Азр РІНе 1 5 10 «2105» 98 «2115 107 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність мі сНАБ8В «4005 98
Азр ІІе сіп Меє тийг осіп 5ег Рго АЇа 5ег Ге 5ег мМа!Ї 5ег маї сіу го 1 5 10 15 сіи тис Ома! тйг о ІТе тйг сСуз Агуд АТа 5ег сім Азп ІЇе туг 5ег дзп
Гей АЇа Тер Ні сіп сіп гГу5 сіп сіу Гуз 5ег Рго сіп Гей Геи ма! 25 Туг Аїа Аїа Тиг А5Зп Гей АЇїа А5р сіу ма! Рго 5ег Агуд Ре 5ег О1У 60
Азп сіу 5ег Азр ТИг сіп Туг 5ег ей Гу5 ІЇе А5зп 5ег їеи сіп 5ег 65 70 75 80 сі А5р Ре сіу б5ег Туг Ре Суб сіп Азп Ре Тгр сіу Тиг 5ег тгр
Ко) 85 90 95
Тиг Ре сіу су сіу тйг Гуз Ге сіи ІІе Гуз 100 105 «2105» 99 «2115 11 35 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОК1 мі спАБВ «4005 99 40 Агуд Аїа 5екг сім А5зп ІЇе Туг 5ег Ап Гей Аїа 1 5 10 «210» 100 «2115 9 «212» Білок 45 «2135» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОКЗ3 мі спАБВ «400» 100 сіп Аб5п Ре Тгр сіу тТийг об5ег Тер тег 50 1 5 «2105 101 «2115 117 «212» Білок «2135 Штучна послідовність 55 «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність МН СПАБІ17 «4005 101 сіи ма! Гуз Ге ма! сій 5ег сіу сіу сіу Ге маїЇ сіп Рго сІу с1У 1 5 10 15 60 зег Гей Гуз Гей 5ег Суз АЇа Аїа 5ег сіу Ре Тийг РМБе 5ег 5ег туг 20 25 30
ІІе Мес 5ег Тгр ма! Агуд сп тйг Рго сЇи Гуз Агд Геи сіи тТгр ма! 35 40 45
АТїа 5екг ІЇе маї 5ег 5ег А5п ІЇе Тйг отТуг тТуг Рго Ар 5ег Меї Гуз 65 50 55 60
О1Уу Аг Рпе Тийг ІЇе 5ег Аг А5р Азп АЇа Агд Ап ІЇе Геи туг Геи 65 70 75 80 сіп Мет б5ег 5ег ге Гуз 5ег сі АЗр Тйг АЇа Меє Ттуг Туг Суз АїЇа 85 90 95 70 Агуд 5ег сіу ТПг Агуд Аїа Тер Рпе АТа туг Тер сіу сіп су тНг гГеи
100 105 110 ма! тик ма! 5ег АїЇа 115 «2105 102 «2115 10 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОК1 МН СспАБІ17 «4005» 102 с1Уу Ре Тиг РМПе 5ег 5ег Туг ІІе мет 5ег 1 5 10 «2105» 103 «2115 16 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОК2 МН СспАБІ17 «400» 103 5зег ІІе ма! 5ег 5ег А5п ІЇе тТийг отуг туг Рго А5р 5ег Мет Гуз су 1 5 10 15 «2105 104 «2115 9 «212» Білок «2135» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОКЗ3 МН спАБІ17 «4005 104 5зег сіу тТиг Аг Аїа Тгр Ре Аїа туг зо 1 5 «2105» 105 «2115 111 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність мі СсСВАБбБІ7 «4005» 105
Азр ІІе ма! Гей тйг сіп 5ег Рго АЇа 5ег Геи АЇа маї 5ег Гей сІу 1 5 10 15 сіп Аг Аїа Тг оІЇе б5ег су5з Агуд діа бек Гуз бег Ма! 5ег Тиг 5ег 20 25 30
АТїа туг 5ег Туг Мет нНі5 Тгр Ттуг сіп сіп Гу5 Рго сіу сіп Рго Рго 35 40 45
Гуз Ге Гей ІІе Ттуг Гей АЇїа 5ег АЗзп Гей сі 5ег сіу маїЇ Рго АїЇа 60
Аг Рпе б5ег сІу 5ег сіу бек сІ1у Тйг А5р Ре тНг Ге А5п ІЇе Ні 65 70 75 80
Рго ма! сіи сій сій А5р АЇа Аїа тТйг отуг туг Суз сіп Ні 5ег Ага 85 90 95 50 сі Гей Рго Туг Тс Ре су сіу сіу тик Гуз Геи сіи Іїе Гуз 100 105 110 «210» 106 «2115 15 «212» Білок 55 «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОК1 МІ спАБІ17 «400» 106
Аг Аїа 5ег Гуз 5ег ма! бек ТтиПг 5ег АЇа Ттуг 5ег Ттуг Меє нів во 1 5 10 15 «2105 107 «2115 9 «212» Білок «2135 Штучна послідовність 65 «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОКЗ3 МІ сСпАБІ17 «4005 107 сіп ні б5ег Агуд сії Гей Рго Туг ТЕГ 1 5 70 «210» 108
«2115 118 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність МН спПАБ5 «400» 108 сіп ма! сіп ге сіп сіп Рго сіу А5р сій ге ма!Ї Гуз Рго сІу АїЇа 1 5 10 15 5зег маЇ Гуз Гей 5ег Су5з Гуз ТИг бек сІіу туг ТИг Ре Тиг тигр 20 25 30
Тер мес ніх Тер ма! Гуз сп Агд Рго су сЇп сІу гГеи сіи Тгр Пе 35 40 45 сіу мет ІІе Ні Рго Ап 5ег сіу Тйг о Тйг Ап о Туг АбЗп си Гуз Ре 50 55 60
Гуз б5ег Гуз АїЇа АїТа Геи Тийг ма! А5р Гуз 5ег б5ег б5ег Тиг Аа су 65 70 75 80 мес сіп Гей 5ег б5ег гей Тиг о б5ег сі Ар 5ег АЇа ма! Ттуг туг су 85 90 95
Аїа Агд б5ег туг Тер Гуз Тер о туг Ре А5р ма! тер сІу тйг сТу тпг 100 105 110
Тк ма! тиг ма! 5ег 5ег 115 «210» 109 «2115 10 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОК1 МН спАБ5 «400» 109 сіу тує Тиг о РНе тТийг тс Азр тер Ммеє нів 1 5 10 «2105 110 «2115 17 «212» Білок «2135» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОК2 МН спАБ5 «4005 110 мес ч1Їе НІі5 Рго А5зп б5ег сіу Тийг о ТтВйг о АЗп о тТуг АЗп сій Гуз РВе Гуз 434 1 5 10 15 зег «2105 111 «2115 9 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОКЗ3 МН спАБ5 «4005 111 5зег о Туг Тгр Гуз Тгр Туг РПе А5р маї 1 5 «2105 112 «2115 106 «212» Білок «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність мі сСНАБ5 «4005 112 сіп 1Іе ма!ї ге тиг о сіп 5ег Рго АЇа ІІе мет 5ег АЇа 5ег Ге СсС1У во 1 5 10 15 сій сі І1Іе тТйг огГеи тис о сСуз 5ег АЇа б5ег б5ег б5ег ма! 5ег Ттуг мес 20 25 30
Ні5 Тер туг сіп сіп Гуз 5ег сіу Тийг б5ег Рго Гуз Гей їеи ІЇе туг 35 40 45 65 5зег ТИг о б5ег Азп Ге АїЇа бек сІіу ма! Рго 5ег Агу Ре 5ег сІу 5ег 50 55 60 сіу 5ег сІіу Тиг Ре Туг 5ег Ге Тиг ІЇе 5ег 5ег ма! си Аїа си 65 70 75 80
Азр 5ег АЇа Азр Туг Туг Суз Ні сіп Тер тс об5ег тує Меє Туг тег 70 85 90 95
Рпе сіу сІу сіу тТНг Гуз Гей сіи че Гуз 100 105 «2105 113 «2115 10 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОКІ1 мі спАБ5 «4005 113 5зег АїЇа 5ег 5ег 5ег ма! бег туг мМмеє нів 1 5 10 «2105 114 «2115 7 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОК2 МІ спАБ5 «4005 114 5ег ТИг 5ег Азп Геи АїЇа 5ег 1 5 «2105 115 «2115 9 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОКЗ3 мі спАБ5 «4005 115
Ні сіп Тер тс об5ег тує Мет туго тег 1 5 «210» 116 «2115 121 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність МН пПиАБІвМнН.1, НиАБІ18м1 1
ПиАЬІ18м5 «4005 116 сіи ма! сіп ге ма! сіп 5ег сіу АїЇа сіи ма! Гу5 Гуз Рго сіу 5ег 1 5 10 15 5зег ма! Гуз ма! 5ег сСуз Гуз АЇїа 5ег сіу Туг 5ег РіПе ТИг 5ег туг 20 25 30
Тк ІТе ніх Тер ма! Агу сп Аїа Рго сіу сіп сЇу ге сіи Ттгр мес 35 40 45 сІ1у туг ІЇе А5п РГО А5п 5ег Агу АЗп о ТИг др отТуг Ап о сЇп Гуз РВе 60
Гуз А5р Агуд ма! тТийг о чІЇе тТйг АЇїа А5р Гуз 5ег ТИг б5ег Ттиг Аїа туг 65 70 75 80 мес сі їеи бек б5ег Ге Агд бег сі Азр Тйг АЇїа ма! туг туг суз 85 90 95 50 Аїа Агуд туг б5ег сіу б5ег Тийг оРго Туг Тер Туг Ре А5р ма! тер О1У 100 105 110 сіп сіу Ттийг тс ма! тис маї 5ег 5ег 115 120 «2105 117 55 «2115» 121 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність МН ПиАБІ8МнН.1Та, пПиАБІ8м3, 60 ПиАЬ18м8 ї пПиАдЬ18м9 «4005 117 сіи ма! сіп Ге ма! сіп 5ег сіу АЇїа сіи ма! Гу5 Гуз Рго сіу 5ег 1 5 10 15 5зег ма! Гуз мМмаЇ 5ег Су5 Гуз АЇа 5ег сіу Ттуг 5ег Ре Тиг 5ег туг 65 20 25 30
Тк те ніх Тер ма! Агу сп АїЇа Рго сіу сЇп сІу гГеи сіи Тгр Пе 35 40 45 сІ1у туг ІЇе А5п РГО А5п 5ег Агу Ап о ТИг Ар о Туг Ап о сіп Гуз РВе 50 55 60 70 Гуз АЗр Аг Тс о тигогГеи Тйг Аїа А5р Аг 5ег о Тиг о б5ег тиг Аа туг
65 70 75 80 мес сі їеи бек б5ег Ге Агд бег сій А5р Тиг АЇа ма! туг туг суз 85 90 95
АТїа Агд туг б5ег сіу бек Тис о РгГо Туг Тгр Туг Ре А5р ма! Тер с1у 100 105 110 сіп сіу Ттийг тс ма! тег маї 5ег 5ег 115 120 «2105 118 «2115 121 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність МН ПиАБІ8МнН.15, пПиАБІ18м2,
ПиАБ18м4, пПиАЬ18м6, пиАБ18м7 ії ПиАБ18м10 «400» 118 сіи ма! сіп Ге ма! сіп 5ег сіу АЇїа сіи ма! Гу5 Гуз Рго сІу 5ег 1 5 10 15 5зег ма! Гуз маЇ 5ег сСу5 Гуз АЇа 5ег сіу туг 5ег Ре Тиг 5ег туг 20 Тс пе ніх Тер маї Агу сіп Аїа Рго сіу сіп сіу гГеи сіи тер мес сІ1у туг ІЇе А5п РГО А5п 5ег Агу АЗп о Тиг о д5р тТуг АЇа сіп Гуз РВе 60 сіп с1у Агуд ма! тийгогеи тТйг Аїа А5р Гуз 5ег Тиг о б5ег тиг АїТа туг 25. 65 70 75 80 мес сі їеи бек б5ег Ге Агд бег сі А5р Тйг АЇїа ма! туг туг суз 85 90 95
АТїа Агд туг б5ег сіу бек Тис о РгГо Туг Тгр Туг Ре А5р ма! Тер с1у 100 105 110 30 сіп с1іу тс о тег ма! тег ма! 5ег 5ег 115 120 «2105 119 «2115 17 «212» Білок 35 «2135» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОК2 МН пПиИАБІВМН.16 «4005 119 тукг ІТе А5п РГгО А5п 5ег Аг АбЗп о ТИг А5р туг АЇа сіп Гуз Рпе сп 434 1 5 10 15 с1у «2105 120 «2115 106 45 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність мі ПшиАБІ8МІ.1, НиАБІ18м1 1
ПиАБІ18м2 50 «400» 120
АЗр ІЇе сіп Гей Тйг осіп 5ег Рго 5ег Рпе Гей 5ег АЇа 5ег ма! сІу 1 5 10 15
А5Зр Агуд Ма! тиг о ч1Їе тТийг сСуз Агуд АЇїа 5ег бег 5ег ма! 5ег Туг мес 20 25 30 55 А5зп Тгр Ттуг сіп сіп Гу5 Рго с1у Гу5 АїЇа Рго Гуз Гей їеи ІЇе туг 35 40 45
АТа Тис 5ег Азп Ге АїЇа бек сІу ма! Рго б5ег Агу Ре 5ег сІу 5ег 50 55 60 сіу 5ег сІіу Ттйг сій Ре тТиг гей Тйг ІЇе 5ег 5ег їеи сп Рго сій 6065 70 75 80
Азр Ре АЇїа Тийг туго туг Суз сіп сіп Тер 5ег 5ег Азп Рго Гей Тег 85 90 95
Рпе СсІу сіп сіу тТНг Гуз Гей сіи че Гуз 100 105 65 «2105 121 «2115 106 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220»
«223» Синтетична: амінокислотна послідовність мі! ПиАБІ8МІ.1а, НПиАБІ18У3 1
ПиАЬІ18м4 «4005 121
АЗр ІЇе сіп Гей Тйг осіп 5ег Рго 5ег Рпе Гей 5ег АЇа 5ег ма! сІу 1 5 10 15
А5Зр Агуд Ма! тиг о ч1Їе тТийг сСуз Агуд АЇїа 5ег бег 5ег ма! 5ег Туг мес 20 25 30
Азп Тер Туг сіп сіп губ Рго сіу Гуз 5ег Рго Гу5 Рго Тгр Іе туг 35 40 45
АїТа Тис 5ег Азп Ге АЇїа б5ег сіу ма! Рго 5ег Агуд Ре 5ег ма! 5ег 50 55 60 ма! 5ек сіу тик сіи Ні Тйг огГеи Тс ІІе 5ег 5ег ей сіп Рго си 65 70 75 80
Азр Ре АЇїа Тийг туго туг Суз сіп сіп Тер б5ег 5ег Азп Рго Гей Тег 85 90 95
Рпе СсІу сіп сіу тТНг Гуз Гей сіи че Гуз 100 105 «2105 122 «2115 106 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність мі ПиАБІ8МІ.15, НиАБІ18м8 1
ПиАЬ18м10 «4005» 122
АЗр ІЇе сіп Гей Тйг осіп 5ег Рго 5ег Рпе Гей 5ег АЇа 5ег ма! сІу 1 5 10 15
А5Зр Агуд Ма! тиг о ч1Їе тТийг сСуз Агуд АЇїа 5ег бег 5ег ма! 5ег Туг мес 20 25 30
А5Зп тер туг сп сіп губ Рго с1Їу Гу5 АЇа Рго Гуз Рго Тгр ІЇе туг
АТа Тис 5ег Азп Ге АїЇа бек сІіу ма! Рго б5ег Агу Ре 5ег ма! 5ег 60 сіу 5ег сІ1у тйг сій Ні тТигогГеи Тйг о ІЇе 5ег 5ег їеи сп Рго сій 35 65 70 75 80
Азр Ре АЇїа Тийг туго туг Суз сіп сіп Тер 5ег 5ег Азп Рго Гей Тег 85 90 95
Рпе СсІу сіп сіу тТНг Гуз Гей сіи ІЇе Гуз 100 105 40 «2105» 123 «2115 106 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» 45 «223» Синтетична: амінокислотна послідовність мі ПиАБІ8МІ.2, НиАБ18м5 1
ПиАЬ18у6 «4005 123 сій т1Іе маї Ге тТийг о сіп б5ег Рго А5р Ре сіп 5ег ма! тТиг Рго Гуз 1 5 10 15 50 сій Гуз ма! тТиг о І1Іе тиг о су5 Агуд Аїа б5ег 5ег 5ег Ма! б5ег Ттуг мес 20 25 30
Азп Тер Ттуг сіп сіп губ Рго А5Зр сіп 5ег Рго Гуз Гей їеи ІїЇе Гуз 35 40 45
АТа Тис 5ег Азп Ге АїЇа бек сІу ма! Рго б5ег Агу Ре 5ег сІу 5ег 55 50 55 60 сіу 5ег сІу ТИг А5р Ре тТиг Гей Тйг ІЇе А5зп 5ег Ге Си АїЇа Си 65 70 75 80
Азр АЇа Аїа тТийг отуг туг Суз сіп сіп Тер б5ег 5ег Азп Рго Гей Тег 85 90 95 60 Ре су сіп сіу тиг Гуз ем сіи ІІе Гуз 100 105 «2105 124 «2115 106 «212» Білок 65 «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність мі ПиАБІ8МІ.2а, НПиАБ18м7 1
ПиАЬ18м9 «4005 124 70 сій ІІе маїЇ Гей тийг осіп б5ег о Рго А5зр Ре сіп б5ег ма! тНг Рго Гуз
1 5 10 15 сіи гГуз ма! Тк ІЇТе тйг сСуз Агуд АЇїа 5ег 5ег бег ма! 5ег туг мес 20 25 30
Азп Тер Ттуг сіп сіп губ Рго А5р сіп 5ег Рго Гуз Рго Тгр Іе туг 35 40 45
АТа Тис 5ег Азп Ге АїЇа бек сІіу ма! Рго б5ег Агу Ре 5ег ма! 5ег 50 55 60 ма! бек сіу Ттийг А5Зр НнНі5 Тийг гей Тпг Те Азп 5ег Гей сім АїЇа сіи 65 70 75 80
А5р Аїа АТа тиг отуг туг сСу5 сіп сіп Тер б5ег б5ег дА5п РгГО Гей ТЕГ 85 90 95
Рпе СсІу сіп сіу тТНг Гуз Гей сіи че Гуз 100 105 «2105 125 «2115 117 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність мн ПшАБЗМН.1, иАБЗмМ1 1
ПиАЬЗм4 «4005 125 сіи ма! сіп Ге ма! сіп 5ег сіу АЇїа сіи ма! Гу5 Гуз Рго сІу 5ег 1 5 10 15 5зег ма! Гуз маЇ 5ег Су5 Гуз АЇа бек сіу туг ТИг РІПе 5ег 5ег туг 20 25 30
Тер мес ніх Тер ма! Агу сп АїЇа Рго сіу сЇп сіу гГеи сіи Ттгр мес 35 40 45 с1іу Ге ІІе Ні Рго Ар 5ег сіу 5ег ТИйг о А5Зп Туг АЗзп сій Мет РНе 50 55 60
Гуз А5зп Агуд Ма! Тийг о ІЇе тТйг АЇїа А5р Гуз 5ег Тиг о б5ег тиг Аа туг 65 70 75 80 мес сі їеи бек б5ег Ге Агд бег сі А5р Тйг АЇїа ма! туг туг суз 85 90 95
Аїа Агд сї1у с1Уу Агд Гей Туг Ре Ад5р Туг Тгр оЇу сп сіу Ттйг тег 100 105 110 ма! Тк ма! 5ег 5ег 115 «2105 126 «2115 117 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність МН ПиАБЗМН.Та, ПиАБЗмМ3 1
ПиАБЗмб «4005» 126 сіи ма! сіп ге ма! сіп 5ег сіу Аїа сіи ма! Гу5 Гуз Рго сІу 5ег 1 5 10 15 5зег ма! Гуз маЇ 5ег Су5 Гуз АЇа бек сіу туг ТИг РІПе 5ег 5ег туг 20 25 30
Тер мес ніх Тгр маїЇ Агуд сіп АїЇа Рго сіу сіп су Ге сіи тер Пе 35 40 45 с1іу Ге ІІе Ні Рго Ар 5ег сіу 5ег ТИйг о А5Зп Туг АЗзп сій Мет РНе 50 55 60
Гуз А5зп Аг Аїа тТийгогеи Тйгома!ї А5р Аг 5ег Ттиг о б5ег тиг Аа туг 565 70 75 80 ма! сіи Ге б5ег 5ег Гей Агуд 5ег сі А5зр Тйг Аїа ма! Туг РПе су 85 90 95
Аїа сіу сїу с1у Агд Ге Туг Ре д5р Туг Тгр оЇу сЇп сіу тис тег 100 105 110 60 ма! тиг ма! 5ег 5ег 115 «2105 127 «2115 117 «212» Білок 65 «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність МН ПиАБЗМН.15, ПиАБЗ3ЗмМ2 1
ПиАЬЗмМ5 «4005 127 70 сіи ма! сіп Ге ма! сіп 5ег сіу АТа сіи ма! гу5 Гуз Рго су 5ег
1 5 10 15 5зег ма! Гуз ма!Ї 5ег Су5 Гуз АЇа бек сіу туг ТИг РІПе 5ег 5ег туг 20 25 30
Тер мес ніх Тер ма! Агу сп АїЇа Рго сіу сЇп сІу гГеи сіи Тгр Пе 35 40 45 с1іу Ге ІІе Ні Рго Ар 5ег сіу 5ег ТИйг о А5Зп Туг АЗзп сій Мет РНе 50 55 60
Гуз А5зп Аг Аїа Тийгогеи Тйгомаї А5р Аг 5ег Тиг о б5ег тиг Аа туг 65 70 75 80
Мес сіи Ге 5ег 5ег Гей Агуд 5ег сій А5р Тийг АЇїа ма! Туг туг су 85 90 95
Аїа сіу сїу с1Уу Агд Гей Туг Ре Ад5р Туг Тгр оЇу сЇп сіу тТйг тег 100 105 110 ма! Тк ма! 5ег 5ег 115 «2105 128 «2115 112 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність мі шАБЗМІ.1, иАБЗмМ1 1
ПиАБЗм2 «4005 128
Азр ІІе ма! Меє тйг о сіп 5ег Рго Гей 5ег Гей Рго Ма! Ттйг Рго сІу 1 5 10 15 си Рго АЇїа бек ІЇе 5ег сСуз5з Агуд 5ег 5ег сіп 5ег їеи маї ні 5ег 20 25 30
А5зп сіу Ар Ттиг туго гей Агуд Тер Туг Геи сіп Гуз Рго сІу сіп 5ег 35 40 45
Рго сіп Гей Гей Іїе туг Гуз ма! 5ег А5зп Аг Ре б5ег су ма! Рго 50 55 60
А5Зр Агу Ре 5ег сіу бек сіу 5ег сіу Тйг А5Зр Ре тНг гГеи Гуз Пе 65 70 75 80 5зег Агд ма! си Аїа сій Азр ма! сіу ма! туг туг Суз5 5ег сіп 5ег 85 90 95
ТВгоніб мМмаїЇ Рго Туг Тйг Ре сіу сіу сіу тиг Гуз ма! сіи Пе Гуз 100 105 110 «2105 129 «2115 112 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність МІ пПиАБЗМІ.Та ї ПидЬЗм3 «4005 129 А5зр ма! ма! Мес тис сіп 5ег Рго Гей бег Гей Рго Ма! Тиг Рго О1У 1 5 10 15 си Рго АЇїа бек ІЇе 5ег сСуз5з Агуд 5ег 5ег сіп 5ег їеи маї ні 5ег 20 25 30
А5зп сіу Ар Ттиг туго гей Агуд Тер Туг Геи сіп Гуз Рго сІу сіп 5ег 35 40 45
Рго сіп Гей Гей Іїе туг Гуз ма! 5ег А5зп Аг Ре б5ег су ма! Рго 50 55 60
А5Зр Агу Ре 5ег сіу бек сіу 5ег сіу Тйг А5Зр Ре тиг гГеи Гуз Пе 65 70 75 80 5зег Агд ма! сії Аїа сій Азр ма! сіу ма! Ттуг Ре су 5ег сіп 5ег 85 90 95
ТВгоніб мМмаїЇ Рго Туг Тйг Ре сіу сіу сіу тиг Гуз ма! сіи Пе Гуз 100 105 110 «210» 130 60 «2115 112 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність МІ ПиАБЗМІ.15, ПиАБЗм4, 65 ПиАЬЗмМ5 1 пиАбЗмб «400» 130
Азр ма! ма! мес тйг о сіп 5ег Рго Ге 5ег Гей Рго Ма! Ттйг Рго сІу 1 5 10 15 си Рго АЇїа бек ІЇе 5ег сСуз5з Агуд 5ег 5ег сіп 5ег їеи Ммаї ні 5ег 70 20 25 30
А5зп сіу Ар Ттиг туго гей Агуд Тер Туг Геи сіп Гуз Рго сІу сіп 5ег 35 40 45
Рго сіп Гей Гей Іїе туг Гуз ма! 5ег А5зп Аг Ре б5ег су ма! Рго 50 55 60 А5Зр Агу Ре 5ег сіу б5ег сіу 5ег сіу Тйг А5Зр Ре тиг гГеи Гуз Пе 65 70 75 80 5зег Агд ма! си Аїа сій Азр ма! сіу ма! туг туг Суз5 5ег сіп 5ег 85 90 95
ТВгоніб мМмаїЇ Рго Туг Тйг Ре сіу сіу сіу тиг Гуз ма! сіи Пе Гуз 100 105 110 «2105 131 «2115 117 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність МН пПиАбБЗ3мМ2.1, пПиАБЗм2.2 1
ПиАЬЗмМ2. З «4005 131 сіи ма! сіп Ге ма! сіп 5ег сіу АЇїа сіи ма! Гу5 Гуз Рго сІу 5ег го 1 5 10 15 5зег ма! Гуз маЇ 5ег Су5 Гуз АЇа бек сіу туг ТИг РІПе 5ег 5ег туг
Тер мес ніх Тер ма! Агу сп АїЇа Рго сіу сЇп сІу гГеи сіи Тгр Пе 25 с1у Гей ІІе Ні Рго Тгр б5ег сіу бек ТПг Азп Туг А5п си Меє Ре 60
Гуз А5зп Аг Аїа тТийгогеи Тйгома!ї А5р Аг 5ег Тиг о б5ег тиг Аа туг 65 70 75 80 мес сі їеи бек б5ег Ге Агд бег сі А5р Тйг АЇїа ма! туг туг суз
Ко) 85 90 95
Аїа сіу сїу с1Уу Агд Гей Туг Ре Ад5р Туг Тгр оЇу сЇп сіу тТйг тег 100 105 110 ма! Тк ма! 5ег 5ег 115 35 «210» 132 «2115 17 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» 40 «223» Синтетична: амінокислотна послідовність С0ОК2 МН пПиАбБЗм2.1, ПиАБЗм2.2 1 ПиАБЗм2.3 «4005 132
Гей ІІе Ні5 Рго Тер 5ег сІіу бек ТИг о А5зп Туг Азп сіи Мес РНе Гуз 1 5 10 15 45 АЗп «210» 133 «2115 112 «212» Білок 50 «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність мі ПиАбБЗ3м2.1, ПиАБЗм2.4 1
ПиАБЗмМ2. 7 «400» 133 55 А5зр ІІе ма! Мет Ттйг сіп 5ег Рго Гей бег Гей Рго Ма! Тиг Рго О1У 1 5 10 15 си Рго АЇїа бек ІЇе 5ег сСуз5з Агуд 5ег 5ег сіп 5ег їеи Ммаї ні 5ег 20 25 30 5зег сіу А5р тТиг туг Гей Агуд Тер Туг Геи сіп гГу5 Рго сІу сіп 5ег бо 35 40 45
Рго сіп Гей Гей Іїе туг Гуз ма! 5ег А5зп Аг Ре б5ег су ма! Рго 50 55 60
А5Зр Агу Ре 5ег сіу бек сіу 5ег сіу Тйг А5зр Ре тНг Геи Гуз Пе 65 70 75 80 65 5зег Агд ма! си Аїа сій Азр ма! сіу ма! туг туг Суз5 5ег сіп 5ег 85 90 95
ТВгоніб мМмаїЇ Рго Туг Тйг Ре сіу сіу сіу тиг Гуз ма! сіи Пе Гуз 100 105 110 «2105 134 70 «2115 16
«212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОКІ мі пПиАбБЗм2.1, ПиАБЗм2.4 1 ПиАБЗм2.7 «4005 134
Аг бег б5ег сіп 5ег о їеи ма! Ні 5ег 5ег сіу Азр тТиг Ттуг Геи Агд 1 5 10 15 «2105» 135 «2115 112 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність МІ ПиАбБЗ3м2.2, пПиИАБЗм2.5 1
ПиАЬЗм2. 8 «400» 135
Азр ІІе ма! Меє тйг о сіп 5ег Рго Гей 5ег Гей Рго Ма! Ттйг Рго сІу 1 5 10 15 си Рго АЇїа бек ІЇе 5ег сСуз5з Агуд 5ег 5ег сіп 5ег їеи Ммаї ні 5ег 20 25 30
АЗп Агуд АЗр тТиг туго гей Агуд Тер Туг Геи сіп Гуз Рго сІу сіп 5ег 35 40 45
Рго сіп Гей Гей Іїе туг Гуз ма! 5ег А5зп Аг Ре б5ег су ма! Рго 50 55 60 А5зр Агу Ре 5ег сіу б5ег сіу б5ег сіу Тис А5Зр Ре тТйг їеи Гуз Пе 65 70 75 80 5зег Агд ма! си Аїа сій Азр ма! сіу ма! туг туг Суз5 5ег сіп 5ег 85 90 95
ТВгоніб маїЇ Рго Туг Тйг Ре сіу сіу сіу тиг Гуз ма! сіи Пе Гуз 100 105 110 «210» 136 «2115 16 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОБІ мі пПиАбБЗм2.2, ПиАБЗм2.5 1 ПиАЬЗм2.8 «400» 136
Аг бег б5ег сіп 5ег о їеи ма! Ні 5ег А5п Агу АЗр Ттиг Туг Геи Агд 434 1 5 10 15 «2105 137 «2115 112 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність мі ПиАбБЗ3м2.3, пПиАБЗм2.6 1
ПиАБЗм2.9 «4005 137
Азр ІІе ма! Меє тйг о сіп 5ег Рго Гей 5ег Гей Рго Ма! Ттйг Рго сІу 1 5 10 15 си Рго АЇїа бек ІЇе 5ег сСуз Агуд бег 5ег сп 5ег Гей Ммаї ні 5ег 20 25 30
А5зп о сіп АЗр тТиг туго гей Агуд Тер Туг Геи сіп Гуз Рго сІу сіп 5ег 35 40 45
Рго сіп Гей Гей ІЇїе туг Гуз ма! бек А5зп Аг Ре б5ег сіу ма! Рго 50 55 60
А5Зр Агу Ре 5ег сіу бек сіу 5ег сіу Тйг А5зр Ре тНг Геи Гуз Пе 65 70 75 80 5зег Агд ма! си Аїа сіи Азр ма! сіу ма! Туг туг Суз5 5ег сіп 5ег бо 85 90 95
ТВгоніб мМмаїЇ Рго Туг Тйг Ре сіу сіу сіу тиг Гуз ма! сіи Пе Гуз 100 105 110 «210» 138 «2115 16 65 «2125 Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОКІ мі пПиАбБЗм2.3, ПиАБЗм2.6 1 ПиАЬЗм2.9 70 «4005 138
Аг бег б5ег сіп 5ег о їеи ма! Ні 5ег д5п сіп АЗр тиг Ттуг Геи Агд 1 5 10 15 «210» 139 «2115 117 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність МН пПиАбЗ3мМ2.4, пПиАБЗм2.5 1
ПиАЬЗм2.6 «400» 139 сіи ма! сіп Ге ма! сіп 5ег сіу АЇїа сіи ма! Гу5 Гуз Рго сіу 5ег 1 5 10 15 5зег ма! Гуз маЇ 5ег Су5 Гуз АЇа бек сіу туг ТИг РІПе 5ег 5ег туг 20 25 30
Тер мес ніх Тгр маїЇ Агу сіп Аїа Рго сіу сЇп с1у гГеи сіи Тер Іе 35 40 45 сіу Ге ІІе Ні Рго сі б5ег сіу 5ег ТИйг А5Зп Туг АЗзп сій Мет РНе 50 55 60
Гуз А5п Аг Аїа тТийгогеи Тйг омаї А5р Аг 5ег Тиг о б5ег тиг АїТа туг 65 70 75 80 мес сі їеи бек б5ег Ге Агд бег сі Азр Тйг АЇїа ма! туг туг суз 85 90 95
Аїа сіу сїу с1у Агд Гей Туг Ре А5р Туг Тгр оЇу сЇп сІу тйг тег 100 105 110 ма! тик ма! 5ег 5ег 115 «2105 140 «2115 17 «212» Білок «2135» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність С0ОК2 МН пПиАбЗ3м2.4, ПиАБЗм2.5 1 ПиАБЗм2 «4005 140 ем ІІе Ні Рго сіи б5ег сіу бек ТиПг А5п Туг Азп сіи Мет РНе Гуз 1 5 10 15
А5П «2105 141 «2115 117 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність МН пПиАбБЗ3мМ2.7, пПИиАБЗм2.8 1
ПиАЬЗм2.9 «4005 141 сіи ма! сіп Ге ма! сіп 5ег сіу АЇїа сіи ма! Гу5 Гуз Рго сіу 5ег 1 5 10 15 5зег ма! Гуз маЇ 5ег Су5 Гуз АЇа бек сіу туг ТИг РІПе 5ег 5ег туг 20 25 30
Тер мес ніх Тер ма! Агу сп АїЇа Рго сіу сЇп сІу гГеи сіи Тгр Пе 35 40 45 сіу Ге ІІе Ні Рго ІЇе 5ег сіу 5ег ТИйг А5п Туг АЗзп сі Мет РНе 50 55 60
Гуз А5зп Аг Аїа тТийгогеи Тйгома!ї А5р Аг 5ег Тиг о б5ег тиг Аа туг 65 70 75 80 мес сі їеи бег б5ег Ге Агд бег сі Азр ТНг АЇа ма! туг туг су 85 90 95
Аїа сіу сїу с1Уу Агд Гей Туг Ре А5р Туг Тгр оЇу сЇп сіу тТйг тег бо 100 105 110 ма! Тк ма! 5ег 5ег 115 «2105 142 «2115 17 65 «2125 Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОК2 МН пПиАБбЗ3м2.7, ПиАБЗм2.8 1 ПиАЬЗм2.9 70 «4005 142
Гей ІІе Ні5 Рго ІІе 5ег сІіу бек ТИг о А5зп Туг Азп сіи Мес РНе Гуз 1 5 10 15
А5П «210» 143 «2115 107 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність мі йшиАБІЗМІ.1, ПиАБІ13м2,
ПиАБ13Мм5 ї пиАЬ13м7 «4005 143
Азр ІІе сіп Меє тТийг осіп 5ег Рго 5ег 5ег їГеу 5ег АЇа 5ег маї сіу 1 5 10 15 А5зр Агуд Ма! Тс ої11е тиг суб Гуз Аїа б5ег сіп А5п Ма! сіу РНе дп ма! Аїа тер туг сіп сіп Гуз Рго су Гуз АїЇа Рго Гуз Гей Гей ІїЇе туг 5ег Аїа 5ег Туг Агуд туг 5ег сіу ма! Рго 5ег Агуд Ре 5ег О1У 20 50 55 60 5ег сіу 5ег сіу Тйг А5зр Ре Тиг о їеи Тиг ІЇе 5ег 5ег ей сп Рго 65 70 75 80 сі А5р Ре АЇїа тТийг о туго туг Су5 сіп сіп туг АЗп Тер о туг Рго Ре 85 90 95 25 ТПВг Ре сТу сп сіу тйг Гуз Ге сіи ІЇе Гуз 100 105 «2105 144 «2115 107 «212» Білок 30 «2135» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність мі шйАБІЗМІ.1а, пиАБІЗМ1,
ПиАБ13м3 ї пиАЬ13м8 «4005 144 35 А5р ІчІЇе сіп Мет Тийг о сіп б5ег Рго 5ег 5ег Геу 5ег АЇа 5ег ма! ос1у 1 5 10 15
А5Зр Агуд ма! тиг о ч1Їе тик сСуз Гуз АЇїа 5ег сіп А5п Ма! сіу РПе А5п 20 25 30 ма! Аїа тер туг сіп сіп Гуз Рго сіу Гуз 5ег Рго Гуз АїЇа гей ІїЇє 40 35 40 45 туг 5ег Аїа 5ег Туг Агуд туг 5ег сіу ма! Рго 5ег Агуд Ре 5ег О1У 60 5ег сіу 5ег сіу ТИг А5р Ре Тиг Гей Тиг ІЇе 5ег 5ег їеи сіп Рго 65 70 75 80 45 сім А5зр Ре АЇа сіи Туг Ре Су5з сіп сіп туг А5п Тер о Туг Рго Ре 85 90 95
Тиг Ре сіу сіп сіу тйг Гуз їГеи сіи ІІе Гуз 100 105 «2105 145 50 «2115» 107 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність мі ийАВІЗМІ.15, НПиАБІ13м4, 55 ПиАЬ13м6 ї пПидЬ13м9 «4005 145
Азр ІІе сіп Меє тТийг осіп 5ег Рго 5ег 5ег Ге 5ег АЇа 5ег маї сіу 1 5 10 15
А5Зр Агуд ма! тиг о ч1Їе тик сСуз Гуз АЇїа 5ег сіп А5п Ма! сіу РПе А5п бо 20 25 30 ма! Аїа тер туг сіп сіп Гуз Рго сІу Гуз АїЇа Рго Гуз Гей Гей ІїЇе 35 40 45 туг 5ег Аїа 5ег Туг Агуд туг 5ег сіу ма! Рго 5ег Агуд Ре 5ег О1У 50 55 60 65 5зег сіу б5ег сТ1у Тйг А5р Ре тТийг Ге Тийг ІЇе 5ег 5ег Гей сіп РгОо 65 70 75 80 сі А5р Ре АЇїа Ттийг о туг Ре Су5 сіп сіп туг АЗзп Тер туго Рго Ре 85 90 95
Тиг Ре сіу сіп сіу тйг Гуз їГеи сіи ІІе Гуз 70 100 105
«2105 146 «2115 116 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність мн йПшиАБІЗМН.1, пиАБІ13м2,
ПиАБ13м3 ї пидЬ13м4 «4005 146 сіи ма! сіп ге сіп сій б5ег сіу Рго сіу Ге ма!Ї Гуз Рго 5ег Си 1 5 10 15
ТИг Ге бек ге Тис о Суз АїЇа ма! б5ег сіу туг 5ег те тиг 5ег сі1у 20 25 30 тукг 5ег Тер ніх Тгр ІЇе Агду сіп Рго Рго су Гуз СсІу Гей си Тер 35 40 45
ІІе сїу туг ІІе Ні 5ег 5ег сіу бек ТИг АЗзп Туг А5зп РГО 5ег Геи 50 55 60
Гуз 5ег Агуд ма! тТиг ІЇе 5ег ма! А5р тиг 5ег їу5 АЗп сЇп Ре 5ег 65 70 75 80
Гей Гуз Гей 5ег б5ег ма! Тиг Аїа Аїа А5зр Ттйг АТа ма! Ттуг туг су 85 90 95
АТа Агд туг А5р А5р Туг Ре сЇи Туг Тер сіЇу сіп сІу тис тег ма! 100 105 110
Тк ма! 5ег 5ег 115 «210» 147 «2115 116 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність МН ПиАБІЗМН.Та, пПиАБІЗМ1,
ПиАБ13м5 ї пиАЬ13м6 «4005 147 сіи ма! сіп ге сіп сій б5ег сіу Рго сіу Ге ма!Ї Гуз Рго 5ег Си 1 5 10 15
Тис огеи 5егогеи Тийг о сСуз Аїа ма! тис сіу туг 5ег ІІе тиг 5ег с1у 20 25 30 тукг 5ег Тер ніх Тгр Іїе Агуд сіп Ре Рго ОоТу А5Зп СсІУу Гей си Тер 35 40 45 мес сіу туг ІЇе Ні5 5ег б5ег сіу 5ег ТИПг А5Зп тТуг АЗзп РгОо 5ег Гей 50 55 60
Гуз 5ег Агуд ІІе 5ег ІЇе 5ег Агуд А5зр Тиг 5ег уз Ап сЇп Ре РПе 65 70 75 80
Гей Гуз Гей 5ег б5ег ма! Тиг Аїа Аїа А5зр Ттйг АТа ма! Ттуг туг су 85 90 95 АїЇа сіу туг А5р А5р Туг Ре сіи Туг Тгр о1у сіп сіу тйг тнг ма! 100 105 110
Тк ма! 5ег 5ег 115 «2105 148 «211» 116 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність МН ПиАБІЗМН.15, пПиАБІ13м7,
ПиАЬБ13м8 ї пиАЬ13м9 «4005 148 сіи ма! сіп ге сіп сій б5ег сіу Рго сіу Гей маїЇ Гуз Рго 5ег СсЇи 1 5 10 15
ТИг Ге бек ге Тис о Суз АїЇа ма! б5ег сіу туг 5ег те тиг 5ег сі1у бо 20 25 30 тукг 5ег Тер ніх Тгр ІЇе Агду сіп Рго Рго сІу Азп су Геи сіи тер 35 40 45 мес сіу туг ІЇе Ні5 5ег б5ег сіу 5ег ТИПг А5Зп тТуг АЗзп РгОо 5ег Гей 50 55 60 65 Гуз 5ег Агуд ІІе Тийг ІЇе 5ег Агуд Ар ТИг 5ег Гуз Ап сіп Ре 5ег 65 70 75 80
Гей Гуз Гей 5ег б5ег ма! Тиг Аїа Аїа А5зр Ттйг АТа ма! Ттуг туг су 85 90 95
АТа Агд туг А5р А5р Туг Ре сЇи туг Тер сІу сіп сІу тиг тег ма! 70 100 105 110
Тк ма! 5ег 5ег «2105 149 «2115 534 «212» Білок «2135 Ното з5аріеп5 «220» «2215» інша ознака «222» (13..(534) «223» Амінокислотна послідовність В7-НЗ (людини) «4005 149 мес Ге Агуд Агуд Агуд сіу 5ег Рго сіу Мет сіу ма! ніх ма! су Аїа 1 5 10 15
АЇїа гей сІіу Аїа ге Тер Ре сСуз Гей Тиг с1у АїЇа гей сіи маїЇ сіп ма! Рго сі Азр Рго ма! ма! Аїа Гей ма! сіу тйг Азр АЇа тТНг ге
Суз Суз 5ег Ре 5ег Рго сі Рго сіу Ре 5ег ей АїЇа сіп Геи дп 60 20 Гей ІІе Тер сіп Гей Тийг дор тс Гуз сп ге ма! ні 5ег РНе АїЇа 65 70 75 80 соми сіу сіп А5р сп сіу 5ег АЇа туг АЇїа доп Агуд Тиг АТа Ге РПе 85 90 95
Рго А5Зр гей гей АїТа сіп сІіу Азп АЇа 5ег Геи Агд Гей сп Ага маї 25 100 105 110
Агд ма! АТа А5р сіи сіу бек РіПе Тийг Суз Ре ма! 5ег ІЇе Агд А5р 115 120 125
Рпе сіу 5ег АЇїа Аїа маЇ 5ег гей сіп маїЇ АЇїа Аїа Рго Туг 5ег Гуз 130 135 140 30 Рго бег Меє ТИйг Гей сім Рго Ап Гуз Азр Геи Агдуд Рго су А5зр тТАг 145 150 155 160 ма! тик ІІе тиск Суз 5ег о б5ег тТуг сіп сІу туг Рго сЇи АїЇа сіи маї 165 170 175
Рпе Тгр сІп А5Зр о сіу сіп сіу маїЇ Рго Гей Тйг сІу Азп ма! тиг тег 35 180 185 190 5ег сіп мет АїЇа А5п сій сіп сіу Гей Ре Азр ма! Ні 5ег ІЇе Ге 195 200 205
Агд ма! ма!ї ге сІіу Аїа А5п сіу Ттйг тТуг б5ег су5 Геу маї Агд А5бп 210 215 220 40 Рго ма! Гей сіп сіп Ад5р АЇа Ні 5ег 5ег ма! Тиг ІЇе тНг Рго сіІп 225 230 235 240
Аг бег Рго Тиг сІіу Аїа ма! сЇи ма! сіп ма! Рго си А5р Рго маї 245 250 255 ма! Аїа гГеи ма! сіу Тиск Ар АТа тТйг Ге Агуд Суз 5ег Ре 5ег РгО 45 260 265 270 сі Рго сіу Ре 5ег Гей АїЇа сіп Ге Ахзп Ге ІЇе Тегр сіп гГеи тиг 275 280 285
Азр Тис огуз соЇп Ге ма! ні 5ег Ре Ттйг сіи сТУу Аго А5р сп су 290 295 з00 50 5зег АЇїа туг АТа Ад5п Агуд Тийг АїТа Ге Ре Рго А5р Геи Геи АїЇа сіп 305 310 315 320
О1У А5п АЇа 5ег Гей Агд Ге сіп Агуд ма! Агд ма! АїЇа А5р си с1у 325 330 335 5зег Рпе Тиг Суз Ре ма! б5ег ІЇїе Агд Азр Ре су 5ег АїЇа Аїа маї 55 340 345 350 5ег Гей сіп маї Аїа АЇїа Рго Туг 5ег Гу5 Рго 5ег Меї ТЕГ Гей си 355 360 365
Рго А5п Гуз Ар Гей Агуд Рго сіу Азр Тийг ма! Тис о ІЇе тик су 5ег 370 375 380 60 5ег Ттуг Агд су Туг Рго сій АТа сіи ма! Ре тгр сп д5р сту сіп 385 390 395 400 сіу ма! Рго Ге Тиг о сіу А5зп Ма! тТйг тис 5ег сіп мет Аїа А5п си 405 410 415 сіп сіу Гей Ре Азр ма! Ні бек ма!ї Геи Агд ма! ма! ге с1у Аїа 65 420 425 430
АЗзп сіу тийг о туг б5ег сСуз Гей маї Агд А5зп Рго маї Ге сп сіп А5р 435 440 445
АТа ні сіу бек ма! тТийг о ІЇе тийг о сіу сіп Рго Мет Тийг Ре Рго Рго 450 455 460 70 сій АТа гей Тер ма! тиг ма! сіу Гей 5ег ма! суз Гей Пе АїТа гГеи
465 470 475 480
Геи ма! Аїа гей АТа Рпе ма! Су5 тер Агд Гуз ІЇе гу5 сп 5ег су 485 490 495 сім сім си А5п АЇа сіу АїТа сій А5р сіп А5р сіу сі с1у сі су 500 505 510 5ег Гуз ТИг Аїа ге сіп Рго Гей Гуз Ні5 5ег А5р 5ег уз си дор 515 520 525
Азр с1Їу сіп сій че АїЇа 530 «2105» 150 «2115 692 «212» Білок «2135 Ното з5аріеп5 «220» «2215» інша ознака «222» (13..(692) «223» В7-НЗ-ЕСО людини (злиття з Ес) «400» 150 мес Ге Агуд Агуд Агуд сіу 5ег Рго сіу Мет сіу ма! ніх ма! су Аїа го 1 5 10 15
АЇїа гей сІіу Аїа ге Тер Ре сут Гей Тиг с1у АїЇа гей сіи маїЇ сіп ма! Рго сі Азр Рго ма! ма! Аїа Гей ма! сіу тйг А5р АЇа тТНг ге 25 Суз Суз 5ег Ре 5ег Рго сі Рго сіу Рпе 5ег їГеи АїЇа сіп гГеи А5п 60
Гей чІІе Тер сіп Гей ТПг о А5р ТИйг Гуз сіп Ге маї Ні 5ег Ре АїЇа 65 70 75 80 соми сіу сіп А5р соЇп сіу 5ег АЇа туг АЇїа д5п Аг Тиг АТа Ге РПе
Ко) 85 90 95
Рго А5Зр гей гей АїТа сіп сІіу Азп АЇа 5ег Геи Агд Гей сп Ага маї 100 105 110
Агд ма! АТа А5р сіи сіу бек РіПе Тийг Суз Ре ма! 5ег ІЇе Агд А5р 115 120 125 35 Ре сіу 5ег АїЇа АїТа ма! 5ег їеи сіп ма! Аїа АЇа Рго туг 5ег Гуз 130 135 140
Рго бег Меє ТИйг Гей сім Рго Ап Гуз Азр Геи Агдуд Рго су А5зр тТАг 145 150 155 160 ма! тик ІІе тиск Суз 5ег о б5ег тТуг сіп сІу туг Рго сЇи АїЇа сіи маї 40 165 170 175
Рпе Тгр сІп А5р о сіу сіп сіу маїЇ Рго Гей Тйг сІу Азп ма! тиг тег 180 185 190 5ег сіп мет АЇїа А5п сій сіп сіу Гей Ре Азр ма! Ні 5ег ІЇе Гей 195 200 205 45 Агд ма! ма! Геи сіу Аїа Азп сіу Тийг Туг б5ег Су5з Ге ма! Агд А5п 210 215 220
Рго ма! Гей сіп сіп Азр АЇїа Ні 5ег 5ег ма! Тиск ІЇе тНг Рго сп 225 230 235 240
Аг бек Рго Тиг сІіу Аїа ма! сЇи ма! сіп ма! Рго си А5р Рго ма! 50 245 250 255 ма! Аїа гГеи ма! сіу Тк Ар АТа тТйг Ге Агуд Суз 5ег Ріе 5ег Рго 260 265 270 сі Рго сіу Ре 5ег Гей АїЇа сіп Ге Ахзп Ге ІЇе Тер сіп Геи тНг 275 280 285 55 А5зр Тйг Гуз сіп Гей ма! Ні 5ег Рпе Тпг си с1у Агд А5р сіп с1у 290 295 з00 5зег Аїа туг АТа д5п Агуд Тийг АїТа Ге Ріе Рго А5р Геи Геми Аїа сіп 305 310 315 320
О1У А5п АЇа 5ег Геи Агд Ге сіп Агуд ма! Агд ма! Аїа А5р си с1Уу бо 325 330 335 5зег Рпе Тиг Суз Ре ма! 5ег ІЇїе Агд Азр Ре су 5ег АїЇа Аїа ма! 340 345 350 5ег Гей сіп маї Аїа АЇїа Рго Туг 5ег Гу5 Рго 5ег Меї ТНг Гей си 355 360 365 65 Рго А5погуз Ар Гей Аг Рго сіу Азр Тийг ма! Тийг о ІЇе тиг су 5ег 370 375 380 5ег Ттуг Агд су Туг Рго сій АТа сіи ма! Ре тТгр сп Аз5р су сп 385 390 395 400 сіу ма! Рго Ге Тиг о сіу А5зп Ма! тТйг тис 5ег сп мет Аїа А5п си 70 405 410 415 сіп с1у Гей Ре А5зр ма! Ні бек ма! Геи Агд ма! ма! геи су Аїа 420 425 430
Азп сіу тийг о туг б5ег сСуз Гей маї Агд А5зп Рго Ма! Ге сіп сіп А5р 435 440 445 АЇїа Ні сІ1у 5ег ма! Тк ІЇе тийг сїу сіп Рго Меє тиг Ріе АїЇа Аїа 450 455 460
АТа Ар Гуз Тийг Ні ТигосСуз Рго Рго Су5 Рго АїЇа Рго сіЇи АїЇа си 465 470 475 480 с1у АЇа Рго 5ег ма! Ре Гей РПе Рго РГО Гу5 Рго Гуз А5зр ТЕГ Гей 485 490 495 мес ІЇе бек Агуд Тийг о Рго сіи ма! тийг сСуз ма! ма! ма! А5р ма! 5ег 500 505 510
Ні сій А5р о Рго сіи мМаїЇ Гуз Ре А5Зп Тгр Туг ма! Азр сІу маї сим 515 520 525 ма! Ніб5 А5п Аа гу5 Тиг губ Рго Агдуд сій сої сіп туг АЗзп о б5ег тег 530 535 540 туг Агд ма! ма! бек ма! Ге тйг ма! гей ніх сіп А5р тер геи дп 545 550 555 560 с1у Гуз сі Туг Гуз Су5з Гуз Маї 5ег Ап Гуз АЇа Ге Рго АЇа РгОо 565 570 575 ч11е си Гуз Тийг ІЇе 5ег уз АЇа уз с1у сп Рго Аг си Рго сп 580 585 590 ма! Тук тиг Ге Рго Рго бег Агд сім сіи Меє тТиг Гуз Азп сіп ма! 595 600 605 зег Гей тТиг сСуз Геи ма! уз со1у Ре Туг Рго 5ег А5р ІЇе Аїа ма! 610 615 620 сіи Тер сій 5ег Ап сіу сіп Рго сій Ап АбЗп о Туг Гуз ТВг тс РгО 625 630 635 640
Рго ма! Гей А5р б5ег Ар сіу 5ег Ре Ре Геи Туг 5ег Гуз Ге тЕиг 645 650 655 ма! Азр Гуз 5ег Агд Тгр сіп сіп сІіу Азп ма! РіБе 5ег Су 5ег ма! 660 665 670 мес ніх сій АЇїЇа Гей Ні Азп Ні5 Туг Тг сіп Гуз 5ег Гей 5ег гей 675 680 685 зег Рго су Гуз 690 «2105 151 «2115 474 «212» Білок «2135 Ми5 тизси1и5 «220» «2215» інша ознака «222» («13..(474) «223» В7-НЗ-ЕСО миші (злиття з Ес) «400» 151
Меє гей Агд сіу тер сіу сіу Рго 5ег ма! сіу ма! Су5 ма! Ага тЕг 1 5 10 15
Аїа ге сіу маЇ Ге сСу5з Геу Су5з Ге Тиг сіу АЇа маї сіи маї сіп 20 25 30 Ммаї б5ег сім А5р Рго ма! ма! Аїа гей маї А5р тТйг дор Аїа тиг гГеи 35 40 45
Агд Суз б5ег Ре 5ег Рго сіи Рго сіу Ре 5ег Гей АїЇа сіп Геи А5бп 50 55 60
Гей чІІе Тер сіп Гей ТПг о А5р ТИйг огГуз сіп Ге маї Ні 5ег Ре ТЕГ 565 70 75 80 си с1у Агуд А5р сіп сіу б5ег АїЇа туг 5ег А5п Аг Тиг Аа Ге РПе 85 90 95
Рго А5р Гей Гей ма! сіп сІіу Азп АїЇа 5ег Геи Агд Гей сп Ага маї 100 105 110 60 Агуд ма! тб А5російи сіу б5ег о Туг Тийг о сСуз Ре ма! 5екг Іе сп дор 115 120 125
Рпе А5зр 5ег АЇїа АЇїа маЇ 5ег гей сіп маїЇ АЇїа Аїа Рго Туг 5ег Гуз 130 135 140
Рго бег Меє ТИйг Гей сім Рго Ап Гуз Азр Геи Агдуд Рго сІ1у Азп Мет 65 145 150 155 160 ма! тик ІІе тиск Суз 5ег о б5ег тТуг сіп сІу туг Рго сЇи АїЇа сіи маї 165 170 175
Рпе Тер Гуз А5зр сіу сіп сіу маїЇ Рго Гей Тйг сІу Азп ма! тйг о тиг 180 185 190 70 5зег сіп Мет АТа доп сій Агуд с1у Ге Ре Азр ма! Ні5 5ег маї гГеи
195 200 205
Агд ма! ма!ї ге сіу Аїа А5п сіу Ттйг тТуг бек су5 Геу маї Агд А5п 210 215 220
Рго ма! Гей сіп сіп Азр АЇїа Ні сіу 5ег ма! тг ІІе тиг сТу сп (225 230 235 240
Рго Ге Тийг Ре АЇїа Аїа АЇїа Ар Гуз Тийг Ні Тийг о Суз Рго Рго су 245 250 255
Рго АЇа Рго сі АїЇа сіи сіу АїЇа Рго 5ег ма! Ре Ге Ре Рго РгО 260 265 270
Гуз Рго Гуз Азр ТИг о Геи Мет ІЇе 5ег Аг ТНг о Рго сіи ма! тиг су» 275 280 285 ма! ма! ма! Азр ма! 5ег Ні сій Ар Рго сіи ма! Гуз Ре Азп Тгр 290 295 00 тукг ма! А5зр сіу ма! си ма! ніх А5п АЇа Гуз тТНг Гуз Рго Аг си 305 310 315 320 сі сіп тТуг А5п о б5ег Тйг о тТуг Агуд ма! ма! 5ег ма! геи тиг маї гГеи 325 330 335
Ні5 сіІп А5р тер ге АбЗп сіу Гуз сіи Туг Гуз Суз Гуз ма! 5ег дзп 340 345 350
Гуз АЇїа Гей Рго АЇїЇа Рго ІЇе сіи Гуз Тиг ІЇе 5ег їуз АїЇа Гуз Сс1у 355 360 365 сій Рго Агуд сій Рго сіп ма! Тукг Тйг о Ге Рго Рго 5ег Аг си си 370 375 380
Ммеє тийг Гуз АЗзп о сіп мМмаї 5ег гей Тйг о Суз Ге маїЇ Гуз сІіу Ре туг 385 390 395 400
Рго 5ег А5Зр ІЇе АЇа ма!їЇ сіи тер сЇи 5ег А5Зп сіу сіп Рго си А5ПпП 405 410 415
Азпотуг Гуз Тс Тс о Рго Рго ма Гей А5р б5ег Ар сіу 5ег РПе РІе 420 425 430
Гей туг бек Гуз Ге Тиг ма! Азр Гуз 5ег Аг Тгр сіп сіп с1У А5П 435 440 445 ма! Ре 5ег Су5 5ег ма! мет нНі5 сій АТа гей Ні Азп Ні Туг тег 450 455 460 сіп Гуз 5ег Ге б5ег Ге 5ег Рго СУ Гуз 465 470 «2105 152 «2115 460 «212» Білок «2135 Ното з5аріеп5 «220» «2215» інша ознака «222» (13..(460) «223» В7-НЗ-ЕСО людини (з міткою Н15) «4005 152 Меє сій Ріе су Гей 5ег Тгр Геи Рпе Гей ма! АТа ІЇе гГеи Гуз с1у 1 5 10 15 ма! сіп Ссу5з сіу АЇїа гей сіи ма! сіп ма! Рго сій Азр Рго мМмаї ма! 20 25 30
Аїа гей ма! сіу тйг А5р АЇїа тТиг о гей Суз Суз 5ег Ре 5ег Рго Си 35 40 45
Рго сіу Ре 5ег їеий АїЇа сіп Гей Ап Гей ІчІЇе Тер сіп Гей ТЕГ дзр 50 55 60
Тис огГуз сіп Ге маї Ні 5ег Ріє АЇа сіи сіу сіп А5зр сіп сІу 5ег 65 70 75 80 АїЇа туг АЇїа А5п Агуд Тиг АїЇа Ге Рпе Рго А5р Гей Геи АїЇа сіп с1Уу 85 90 95
А5п АЇа 5ег Геи Агд Гей сіп Агуд ма! Агд ма! Аїа А5р си су 5ег 100 105 110
Рпе тТийг Суз Рпе ма! 5ег ІЇе Агуд Ар РіПе сІіу 5ег АЇа Аїа ма! 5ег бо 115 120 125
Гей сіп ма! Аїа АЇїа Рго Туг 5ег Гуз Рго 5ег Мет ТИг Гей сіи РгОо 130 135 140
АЗп Гуз АЗр Гей Аг Рго сіу Азр Тйг ма! Тис ІТе тНг су 5ег 5ег 145 150 155 160 65 тТуг соЇп сіу Туг Рго сім АЇа сіи ма! Ре тгр сіп Азр сЇу сп сІу 165 170 175 ма! Рго Ге Тк сіу Азп ма! Тиг о тйг 5ег сіп мес Аїа А5п си сіп 180 185 190 о1Уу Ге Рпе Ар ма! Ні 5ег ІЇе Гей Агд Ма! ма! гГеи с1у Аїа д5п 70 195 200 205 с1у тийг о тТуг бек суз Ге ма! Агуд Азп Рго Ма! гГеи сіп сп А5р Аїа 210 215 220
Ні б5ег бег ма! Ттийг о ІЇе Тис Рго сіп Агд 5ег Рго ТНг су Аїа ма! 225 230 235 240 сіи маї сіп маї Рго сій А5р Рго ма! ма! АїЇа гей ма! сіу тйг А5р 245 250 255
АТа Тис Ге Агуд Суз 5ег Рпе 5ег Рго сіи Рго сЇу Ре 5ег Геи АїЇа 260 265 270 сіп ге АЗп ге ІЇе Тгр сіп Гей Тйг Ар Ттйг губ сіп Гей маї н1і5 275 280 285 5зег Рпе тТийг си с1у Агуд Ар сп сіу 5ег АЇа туг АЇа д5п Ага тпг 290 295 300
Аїа гей РПе Рго А5р гей гей АїТа сіп сІіу Азп АїЇа 5ег Геи Ага гГеи 305 310 315 320 сп Агуд ма! Агод маї АїТа А5р сій сіу бек РіПе Тийг Суз Ре маї 5ег 325 330 335 че Агуд А5р Ре сіу 5ег АїЇа АЇа ма! 5ег ге сіп ма! АїЇа Аїа Рго 340 345 350 туг бег Гуз Рго бег Мет Тиг Геи сіи Рго А5п Гуз А5р гей Аг РгОо 355 360 365 о1у А5р Тс ма! тийг о ї1Те тийг Суз 5ег 5ег Туг Агд сіу туг Рго си 370 375 380
Аїа сіи ма! Ре Тер сіп А5р су сіп сІу маЇ Рго Гей Тйг су А5П 385 390 395 400 ма! тийг тиг о5ег о сіп Мет АїТа д5п сіи сіп с1у Ге Ре Азр маї НІі5 405 410 415 зег ма! Гей Агуд Ма! ма! гей с1у АЇїа А5п сіу тиг туг 5ег суз гей 420 425 430
Уа! Агд Азп Рго ма! Гей сіп сіп Ад5р АЇїа Ні с1у 5ег ма! тйг Пе 435 440 445
Тег о сІу сіп Рго Меє тТийг Ні Ні Ні5 Ні НІі5 Ні 450 455 460 «210» 153 «2115 241 «212» Білок «2135 Ми5 ти5сии5 «220» «2215» інша ознака «222» («13..(241) «223» В7-НЗ-ЕСО миші (з міткою НІ15) «4А00» 153 мес сі Ре СсІу Гей 5ег Тер Гей Ріє Геци маїЇ АїТа ІЇе Гей Гуз СсС1У 1 5 10 15 ма! сіп Ссуз ма!ї сіи ма! сіп ма! 5ек сі Ар Рго маї ма! Аїа ге 20 25 30 ма! Азр ТиИг АЗр АЇа Тис оїеи Агуд Суз 5ег Ре 5ег Рго сіи Рго су 35 40 45
Рпе 5ег Гей АїЇа сіп Гей АЗп Гей ІчІЇе Тгр сіп Гей ТЕГ о А5Зр тег Гуз 60 50 сіп Гей ма! ніх 5екг Ріпе Тиг сім сіу Агуд Азр сіп сіу 5ег АїЇа туг 65 70 75 80 зег А5п Агу ТИг АЇїа Гей РПе Рго А5р Геи Гей ма! сп сІу А5Зп АїЇа 85 90 95 зег Гей Агд Гей сіп Агуд ма! Агд ма! Тйг Ар сій с1у б5ег Туг тиг 55 100 105 110
Суз Ре ма! 5ег ІІе сіп А5р Ре А5р 5ег АЇа АЇїа ма! 5ег їеи сп 115 120 125 ма! Аїа АЇїа Рго Туг 5ег Гуз Рго б5ег Меї ТИПг Гей си Рго Ап Гуз 130 135 140 60 А5зр Ге Агуд Рго сіу А5п Мет ма! Тийг о ІТе тийг Су б5ег 5ег Ттуг сіп 145 150 155 160 сіу туг Рго сі Аїа сіи ма! Ре Тер Гу5 А5зр с1у сіп сІу ма!Ї Рго 165 170 175
Гей Ттийг о сіу Азп ма! тТийг о твйг бек сп мес Аїа Ап сіи Ага су Геи 65 180 185 190
Рпе А5р ма! Ні 5ег ма! Ге Агуд ма! ма! геи сіу АїЇа д5п су тЕг 195 200 205 туг 5ег Суз Ге ма! Агуд Азп Рго маї гей сп сіп д5р Аїа ніх Ос1Уу 210 215 220 70 5зег ма! тТийг о ІТе тйг сіу сіп Рго Ге Тйг РПе Ні5 НІі5 Ні Ні Ні
225 230 235 240 нів «2105 154 «211» 473 «212» Білок «2135 Масаса Тазсісшатів «220» «2215» інша ознака «222» (13..(473) «223» В7-НЗ-ЕСО макака-крабоїда (з міткою Н15) «4005 154 мес Ге Ніб Агуд Агуд сіу 5ег Рго сіу Мет сіу ма! ніх ма! су Аїа 1 5 10 15 АїЇа гей с1у Аїа гей Тгр Ре Суз Гей Тпг сТу Аїа гГеи сіи ма! сіп ма! Рго сі Азр Рго ма! ма! Аїа Гей ма! сіу тйг А5р АЇа тТНг ге
Агд Суз б5ег Ре 5ег Рго сіи Рго сіу Ре 5ег Гей АїЇа сіп Геи дп 20 50 55 60
Гей чІІе Тер сіп Гей ТПг о А5р ТИйг огГуз сіп Ге маї Ні 5ег Ре ТЕГ 65 70 75 80 си с1у Агуд Ар сЇп сіу 5ег АЇа туг АЇїа доп Аг Тпг Аїа Ге Ре 85 90 95 25 Гей Азр Геи Гей Аїа сіп сіу доп Аїа 5ег Гей Ага Гей сп Ага ма! 100 105 110
Агд ма! АТа А5р сіи сіу бек РМПе Тийг Суз Ре ма! 5ег ІЇе Аг А5р 115 120 125
Рпе сіу 5ег АЇїа Аїа маЇ 5ег гей сіп маїЇ АЇїа Аїа Рго Туг 5ег Гуз 30 130 135 140
Рго бег Меє ТИйг Гей сі Рго А5зп Гуз Ар Геи Агд Рго сіу А5зр ТтАг 145 150 155 160 ма! Тк ІТе тиг сСуз бек б5ег туг Агд сіу туг Рго сЇмМи Аїа сіи ма! 165 170 175 35 Рпе Тгр сіп Ар су сіп сіу Аїа Рго Ге Тиг сіу Азп ма! тиго тег 180 185 190 5ег сіп мет АЇїа Аб5п сій сіп сіу Гей Ре Азр ма! Ні 5ег маї Геи 195 200 205
Агд ма! ма!ї ге сіу Аїа А5п сіу тиг туг 5ег сСу5 Геу маї Агд А5бп 40 210 215 220
Рго ма! Гей сіп сіп Ар АЇа Ні сіу 5ег Іч1Їе Тиск ІЇе тТНг Рго сп 225 230 235 240
Аг бек Рго Тиг сІу АЇїа ма! сЇи ма! сіп ма! Рго си А5р Рго ма! 245 250 255 45 ма! Аїа гГеи ма! сіу тТийг А5зр АЇїа Типг оїеи Агуд Суз 5ег Ре 5ег Рго 260 265 270 сі Рго сіу Ре 5ег їеи АїЇа сіп Гей Ахзп Гей ІЇе Тер сіп Геи тНг 275 280 285
Азр Тис огуз соЇп Ге ма! ні 5ег Ре Ттйг сіи сТУу Аго А5р сп су 290 295 з00 5зег Аїа туг АТа Ад5п Агуд Тпг Аїа гГеи РПе гей А5р Геи Геми Аїа сіп 305 310 315 320
О1У А5п АЇа 5ег Гей Агд Ге сіп Агуд ма! Агд ма! АїЇа А5р си с1у 325 330 335 5зег Рпе Тиг Суз Ре ма! б5ег ІЇїе Агд Азр Ре су 5ег АїЇа Аїа ма! 340 345 350 5ег Гей сіп маї Аїа АЇїа Рго Туг 5ег Гу5 Рго 5ег Меє ТЕГ Гей си 355 360 365
Рго А5п губ Ар Гей Агд Рго сіу Азр Тийг ма! Тийг о ІЇе тиг су 5ег бо 370 375 380 5ег Ттуг Агд су Туг Рго сій АТа сіи ма! Ре тгр сп д5р сту сіп 385 390 395 400 с1Уу АЇа Рго Ге Тиг о сіу А5зп Ма! Тйг тис 5ег сп мет Аїа А5п си 405 410 415 65 сіп с1у гей Рпе Азр ма!Ї Ні 5ег ма! Гей Агд ма! ма! ге с1у Аїа 420 425 430
Азп сіу тийг о туг б5ег сСуз Гей маї Агд А5зп Рго Ма! Ге сіп сіп А5р 435 440 445
АТа ні сіу бек ма! Ттийг ІЇе тийг сіу сіп Рго Мес Ттийг Ріе Аїа АїЇа 70 450 455 460
АТа нів Ні Ні Ні Ні Ні Ні5 Ні 465 470 «2105» 155 «2115 98 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність ІОНМ1-69:06 «4005» 155 сіп ма! сіп Ге маї сіп 5ег су Аїа сіи ма! Гуз Гуз Рго су 5ег 1 5 10 15 5зег ма! Гуз маЇ 5ег Су5 Гуз АЇа 5ег сіу сіу Тйг РИПе 5ег 5ег туг 20 25 30
Аїа ІІе 5ег Тгр ма! Агуд сіп АТа Рго сІу сіп сіу Ге сЇи Тер мес 35 40 45 сіу сіу ч1ІІе ІЇе Рго ІЇе Ре сіу тТйг АїЇа А5Зп Туг АЇа сіп Гуз РНе 50 55 60 сіп сіу Агуд ма! тийг о ч1Те тйг Аїа А5р Гуз 5ег ТИг б5ег Ттиг Аа туг 65 70 75 80 Меє сіи Ге 5ег 5ег Гей Агуд 5ег сій А5р Тийг Аїа ма! Туг туг су 85 90 95
Аїа Агд «2105» 156 «2115 11 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: Атіпо асій зедиепсе ої ІСНОб:О1 «4005» 156
Тер с1у сіп сіу тс тс омаї тис маї 5ег 5ег 1 5 10 «2105 157 «2115 96 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність тІсОКМ1-9:01 «4005 157
А5зр ІчІЇе сіп Геи Тис о сіп б5ег Рго б5ег Рпе Гей 5ег АЇа 5ег ма! ос1у 1 5 10 15
А5Зр Агуд ма! тиг о ч1Їе тТийг сСу5 Агуд Аїа 5ег сіп сіу ІЇїе 5ег 5ег туг 20 25 30
Гей АЇа Тер туг сіп сіп Гуз Рго сІу Гуз АЇа Рго Гуз Гей їГеи Пе 35 40 45 туг АТа Аїа 5ег Тк Ге сіп б5ег сіу ма! Рго 5ег Агуд Ре 5ег О1У 60 5ег сіу 5ег сіу Ттйг сій Ре тТиг гей Тиг ІЇе 5ег 5ег їеи сіп Рго 65 70 75 80 50 сій А5зр Ре Аіа Тийг о туг туг Суз сіп сіп гей Азп 5ег Туг Рго РГгГО 85 90 95 «210» 158 «2115 10 «212» Білок 55 «213» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: Атіпо асій зедиепсе ої ІСК22701 «4А00» 158
Рпе СсІу сіп сіу ТНг їГуз Гей сіи Пе Гуз во 1 5 10 «210» 159 «2115 330 «212» Білок «2135 Штучна послідовність 65 «220» «223» Синтетична: Константна ділянка гамма-1-ланцюга І9д «400» 159
АТїа бек ТтиИг Гуз сіу Рго 5ег ма! РПе Рго Гей АЇа Рго 5ег 5ег Гуз 1 5 10 15 70 5ег Тиг о б5ег сТу сіу Ттйг Аїа АТа ге сіу Су5з Гей ма! Гуз А5р туг
20 25 30
Ре Рго сій Рго ма! тик ма! бек Тер Азп 5ег С1Уу АЇа Гей ТЕГ 5ег 35 40 45 сіу ма! ні Тийг РМПе Рго АЇїа маЇ Ге сіп 5ег б5ег сіу Геи Туг 5ег 50 55 60
Ге 5ег б5ег ма! ма! тик омаїЇ Рго 5ег 5ег 5ег їеи сіу тТпг сіп тиг 65 70 75 80 тукг шІІе Суб Азп мМмаЇ А5зп Ні Гуз Рго 5ег АЗзп ТИг Гуз маї А5р Гуз 85 90 95
Гуз ма! сій Рго Гуз 5ег Суз Азр Гуз ТИг Ні ТИйг о сСу5 Рго Рго су» 100 105 110
Рго АЇа Рго сіи Гей Гей сіу сіу Рго 5ег ма! Ре Ге Ре Рго РгО 115 120 125
Гуз Рго Гуз Азр ТИг о Геи Мет ІЇе 5ег Аг ТНг о Рго сіи ма! тиг су» 130 135 140 ма! ма! ма! Азр ма! 5ег Ні сій Ар Рго сіи ма! Гуз Ре Азп Тгр 145 150 155 160 тукг ма! А5зр сіу ма! оси ма! ніх А5п АЇа губ тТНг Гуз Рго Аг си 165 170 175 сім сіп туг А5п о 5ег Тиг о туг Агуд ма! ма! 5ег ма! Ге тис маї Ге 180 185 190
Ні5 сіІп А5р тер ге АбЗп сіу Гуз сіи Туг Гуз Суз Гуз ма! 5ег дзп 195 200 205
Гуз АЇа Гей Рго АЇа Рго ІЇІе сій Гуз Тийг ІЇе 5ег уз АїЇа Гуз СсС1У 210 215 220 сій Рго Агуд сій Рго сіп Ма! Тукг Тйг Ге Рго Рго 5ег Аг си си 225 230 235 240
Ммеє тийг Гуз АЗзп о сіп мМмаї 5ег гей Тйг о Суз Ге маїЇ Гуз сІіу Ре туг 245 250 255
Рго 5ег Азр ІЇе АТа ма! сіи Тер сіи 5ег А5зп сІу сіп Рго си А5П 260 265 270
Азпотуг Гуз Тс Тс о Рго Рго ма! Гей А5р б5ег Ар сіу 5ег РПе РІе 275 280 285
Гей туг бек Гуз Ге Тиг ма! Азр Гуз 5ег Аг Тер сіп сЇп с1уУ А5Пп 290 295 з00 ма! Ре 5ег Су5 5ег ма! мет нНі5 сій АТа гей Ні Азп Ніз Туг тег 305 310 315 320 сіп Гуз 5ег Ге б5ег ге б5ег Рго С1У Гуз 325 330 «210» 160 «2115 330 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: Мутантна константна ділянка гамма-1-ланцюга І9д «400» 160
АТїа бек ТтиИг Гуз сіу Рго 5ег ма! РПе Рго Гей АЇа Рго 5ег 5ег Гуз 1 5 10 15 5ег Тиг 5ег сіу сіу ТНг АїЇа Аїа гей сІу Су5 Гей маїЇ Гуз Азр туг 20 25 30
Ре Рго сій Рго ма! тик ма! бек Тер Азп 5ег с1у АЇа Гей ТЕГ 5ег 35 40 45 сіу ма! ні Тийг РМПе Рго АЇїа маЇ Ге сіп 5ег б5ег сіу Геи Туг 5ег 50 55 60 ей б5ег бег ма! Ма! тийг ма! Рго 5ег 5ег 5ег Ге сіу тс сп тНг 65 70 75 80 тукг шІІе Суб Азп мМаЇ А5зп Ні Гуз Рго 5ег АЗзп ТИг Гуз маї А5р Гуз 85 90 95
Гуз ма! сі Ргкго Гуз 5ег Су5з Азр Гуз ТИйг о Ні Тйг оСуз Рго Рго сСузв бо 100 105 110
Рго АЇа Рго сі АЇїа Аїа сіу сіу Рго 5ег ма! Ре Ге Ре Рго РгО 115 120 125
Гуз Рго Гуз Азр ТИг о Геи Мет ІЇе бек Аг Тиг о Рго сіи ма! тНг су 130 135 140 65 ма! ма! маї А5р ма! 5ег Ні сій А5зр Рго сіи ма! Гу5 РіПе А5Зп Тер 145 150 155 160 тукг ма! А5зр сіу ма! оси ма! ніх д5п АЇа гу5 тНг Гуз Рго Аг си 165 170 175 сі сіп тТуг АЗп о б5ег Тйг о тТуг Агуд ма! Ма! 5ег ма! гей тиг маї геи 70 180 185 190
Ні5 сіп А5р тер ге Ап сіу Гуз сіи Туг Гуз Суз Гуз ма! 5ег дп 195 200 205
Гуз АЇа Гей Рго АЇа Рго ІЇІе сій Гуз Тийг ІЇе 5ег уз АїЇа Гуз СсС1У 210 215 220 сбіп Рго Агуд сій Рго сіп Ма! Тукг Тиг Ге Рго Рго 5ег Ага сіи си 225 230 235 240
Ммеє тийг Гуз АЗзп о сіп мМмаї 5ег гей Тйг о Суз Ге маїЇ Гуз сІіу Ре туг 245 250 255
Рго 5ег А5Зр ІЇе АЇа ма! сіи Тер сіи 5ег А5Зп СІу сіп Рго Си А5ПпП 260 265 270
Азпотуг Гуз Тс Тс о Рго Рго ма! Гей А5р б5ег Ар сіу 5ег РПе РІе 275 280 285
Гей туг бек Гуз Ге Тийг ма! Азр Гуз 5ег Агд Тер сіп сп с1У А5П 290 295 з00
Ма! Рійе 5ег сСу5 5ег ма! Ммес ніх сій Аїа Гей Ні А5п Ні Ттуг тНг 305 310 315 320 сіп Гуз 5ег Ге 5ег гей 5ег Рго СсІу Гуз 325 330 «2105 161 «2115» 107 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: Константна ділянка каппа-ланцюга Ід «400» 161
Агд Тис ома!ї АТа діа Рго бек ма! Ре ІЇе РПе Рго Рго 5ег А5р си 1 5 10 15 сіп ге Гуз 5ег сіу Тйг АТа 5ег ма! маї Суз Гей Ге А5Зп А5п Ре 20 25 30 туг Рго Ага сім Аїа Гу5 ма! сіп Тер Гуз маї А5р д5п Аа гей сп 5ег с1у А5п 5ег сіп сій 5ег ма! тпг си сіп д5р 5ег уз Азр 5ег 60
Тиг о туг б5ег Ге б5ег б5ег ТИг о їеи Тиг Ге 5ег уз АЇа А5р Ттуг сим 35 65 70 75 80
Гуз Ніз Гуз ма! туг Аїа Су5 сіи ма! тийг ніх сіп сіу Гей 5ег 5ег 85 90 95
Рго ма! Тис Гуз 5ег Ре А5п Агуд сіу си су 100 105 40 «210» 162 «2115 105 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» 45 «223» Синтетична: Константна ділянка лямбда-ланцюга Ід «4005 162 сій Рго Гуз АЇїа АЇїа Рго 5ег ма! Тийг Ге Ре Рго Рго 5ег 5ег Си 1 5 10 15 сій Ге сіп АЇїа А5п о Гу5 АЇїа тТийг оїеи маї Суз Гей ІІе 5ег А5р РНе 50 20 25 30 туг Рго сіу АТа ма! тйг маїЇ АїЇа Тер Гуз АЇа Ар 5ег 5ег Рго маї 35 40 45
Гуз АЇа сіу ма! сіи тТйг о тиг Тс Рго 5ег уз сіп 5ег А5ЗП А5П Гу 50 55 60 55 Туг АїЇа Аїа 5ег 5ег Туг Ге 5ег Гей Тийг Рго сім сіп Тер Гуз 5ег 65 70 75 80
Ні Агд б5ег туг 5ег Суз сіп ма! тйг ніх сій сїу 5ег тиг ма! си 85 90 95
Гуз Тийгомаї Аїа Рго Тийг сіи сСу5 5ег бо 100 105 «210» 163 «2115 96 «212» Білок «2135 Штучна послідовність 65 «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність ІОКМ6б-21701 «220» «2215» інша ознака «222» (96)..(96) 70 «223» Хаа може бути будь-якою амінокислотою, яка зустрічається в природі
«400» 163 сій т1Іе маї Ге тТийг о сіп б5ег Рго А5р Ре сіп 5ег ма! тТиг Рго Гуз 1 5 10 15 сіи гГуз ма! Тк ІЇїе тйг сСуз Агуд Аїа 5ег сіп 5ег ІЇе су 5ег 5ег 20 25 30
Ге Ні Тер Ттуг сіп сіп Гу5 Рго А5р сіп 5ег Рго Гуз Гей їГеи Пе 35 40 45
Гуз туг Аїа бек сіп 5ег Ре б5ег сІу ма! Рго 5ег Агуд Ре 5ег Сс1Уу 50 55 60 5зег сіу б5ег сТ1у Тйг А5р РПе тТиг Геи Тйг ІЇе Азп 5ег Геи сіи Аїа 65 70 75 80 сій А5р Аїа АЇїа тТийготуг туго Суб5 Ні сіп 5ег б5ег 5ег Гей Рго Хаа 85 90 95 «2105 164 «2115 101 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність ІОКМ2-28701 «400» 164
Азр ІІе ма! Меє тйг о сіп 5ег Рго Гей 5ег Гей Рго Ма! Ттйг Рго сІу 1 5 10 15 си Рго АЇїа бек ІЇе 5ег сСуз5з Агуд 5ег 5ег сіп б5ег їеи Ге Ні 5ег 20 25 30 А5зп сіу туг А5Зп Туг Гей Азр Тгр Туг Гей сп Гуз Рго сіу сіп 5ег 35 40 45
Рго сіп Гей Гей Іїе туг Ге сіу 5ег Азп Агуд АЇа б5ег су ма! Рго 50 55 60
А5Зр Агу Ре 5ег сіу бек сіу 5ег сіу Тйг А5Зр Ре тНг гГеи Гуз Пе 65 70 75 80 5зег Агд ма! си Аїа сій Азр ма! сіу ма! туг туг Суз Меє сіп Аїа 85 90 95
Гей сіп Тис Рго РГгО 100 «210» 165 «2115 10 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: Атіпо асій зедиепсе ої ІсК24701 «400» 165
Рпе сіу сІу сіу тиг Гуз ма! сіи че Гуз 1 5 10 «210» 166 «2115 98 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: Амінокислотна послідовність чІ9пМ-6501(0-1) «4005 166 сіп ма! сіп ге сіп сій б5ег сіу Рго сіу Ге ма!Ї Гуз Рго 5ег Си 1 5 10 15
ТИг Ге бек ге Тис о Суз АїЇа ма! б5ег сіу туг 5ег Ше 5ег 5ег сі1у 20 25 30 Туг туг Тер о1у Тегр ІТе Агуд сіп Рго Рго ОсТу Гуз СсІ1у Гей си тер 35 40 45
ІІе сІу 5екг ІІе Туг Ні 5ег сіу б5ег ТиИг о тТуг туг Азп Рго 5ег Ге 50 55 60
Гуз 5ег Агуд ма! тТиг ІЇе 5ег ма! А5р тиг 5ег їу5 АЗп сЇп Ре 5ег 6065 70 75 80
Гей Гуз Гей 5ег б5ег ма! Тиг Аїа АЇїа А5зр Ттйг АТа ма! Ттуг туг су 85 90 95
Аїа Агд 65 «2105» 167 «2115 96 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» 70 «223» Синтетична: Амінокислотна послідовність І9КМм1-397:01
«4005 167
Азр ІІе сіп Меє тТийг о сіп 5ег Рго 5ег 5ег їГеу 5ег АЇа 5ег маї сіу 1 5 10 15
А5Зр Агуд Ма! тиг о ч1Їе Тиск сСу5з Агуд Аїа 5ег сіп 5ег ІЇе 5ег 5ег туг 20 25 30
Гей Азп Тер Туг сіп сіп Гуз Рго СсІу Гу5 АїЇа Рго Гуз Гей їГеи Пе 35 40 45 туг АТа Аіїа 5ег бек ге сіп 5ег сіу ма! Рго 5ег Агуд Ре 5ег О1У 50 55 60 5зег сіу б5ег сТу Тйг Ад5р Ре тТийг Ге Тийг ІЇе 5ег 5ег Гей сіп РгОо 65 70 75 80 сі А5р Ре АЇїа Ттийг отуг туг Суб сіп сіп 5ег о Туг 5ег ТИг РгОо РГО 85 90 95 «210» 168 «211» 446 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: Амінокислотна послідовність важкого ланцюга пиАбБ13м1 «400» 168 сіи ма! сіп ге сіп сій б5ег сіу Рго сіу Ге ма!Ї Гуз Рго 5ег Си 1 5 10 15
ТИг Ге бек гей Тиг о сСуз АїЇа ма! тТиг сіу туг 5ег те тиг 5ег су 20 25 30 Туг бег Тер Ні Тер Іїе Агуд сіп Рпе Рго ОсТу А5п су Гей си Тер 35 40 45 мес сіу туг ІЇе Ні5 5ег б5ег сіу 5ег ТИПг А5Зп тТуг АЗзп РгОо 5ег Гей 50 55 60
Гуз 5ег Агуд ІІе 5ег ІЇе 5ег Агуд А5зр Тиг 5ег уз Ап сЇп Ре РПе 65 70 75 80
Гей Гуз Гей 5ег б5ег ма! Тиг Аїа Аїа А5зр Ттйг АТа ма! Ттуг туг су 85 90 95
АТїа сіу туг Азр А5р Туг Ре сіи Туг Тер сіу сіп сіу тйг тег ма! 100 105 110
Тис ома! 5ег об5ег Аїа б5ег Тиг Гуз сіу Рго 5ег ма! Ре Рго Гей АїЇа 115 120 125
Рго 5ег б5ег Гуз 5ег ТИг 5ег сіу сіу ТПг АЇа АТа ге сІу сСуз Гей 130 135 140 ма! Гуз Азр Туг Ре Рго сі Рго Ма! тТиг маїЇ 5ег Тер Азп 5ег су 145 150 155 160
АТїа гей тТиг бек сіу ма! Ні тТиг РМПе Рго АїЇа ма! Гей сіп 5ег 5ег 165 170 175 с1у гїеи туг 5ег Ге б5ег б5ег ма! ма! тис ма! Рго 5ег 5ег 5ег гей 180 185 190 с1іу тйг о сіп тис тує че сСу5 АЗп о маї А5Зп Ні Гуз Рго бег А5зп ТЕГ 195 200 205
Гуз ма! А5р Гуз Гуз маї сі Рго Гуз 5ег Суз А5Зр Гуз Тиг Ні тиг 210 215 220
Суз Рго Рго Суз Рго АЇа Рго сій АЇїа Аїа сіу сІіу Рго 5ег ма! РНе 225 230 235 240
Гей Ре Рго Рго Гуз Рго Гуз Азр ТИг Ге Мет ІчІ1е б5ег Ага тТиг РгОо 245 250 255 сіи ма! тийг о Суз ма! маї ма! Азр ма! 5ек Ні си А5р Рго сім маї 260 265 270
Гуз Ре Азп Тгр туг ма! Азр сіу ма! соЇи ма! Ні А5п АТа Гуз тЕг 275 280 285
Гуз Рго Агд сій сій сбіп Туг Абзп о б5ег о Тиг отТуг Агдуд ма! ма! 5ег маї 290 295 з00
Ге тйг маїЇ ге ніх сіп А5р Тер ге Ап сіу Гуз сіи туг Гуз Су бо 305 310 315 320
Гуз ма! 5ег А5зп Гуз АЇа Гей Рго АЇа Рго ІЇе сій Гуз ТИг ІІе 5ег 325 330 335
Гуз Аїа Гуз сіу сЇп Рго Агуд сій Рго сіп ма! Туг Ттйг о Ге Рго РгОо 340 345 350 65 зег Агуд сім сіи Меє Тис о їу5 Ап сіп ма! бег Гей тТНг су Геим ма! 355 360 365
Гуз сІіу Ре Туг Рго 5ег А5Зр ІЇе АЇа ма! сіи Тер сіи 5ег А5Зп су 370 375 380 сій Рго сій Аб5п о АЗп о Туг Гуз Тс Тс Рго Рго ма!Ї Ге А5зр 5ег дьр 70 385 390 395 400 со1у б5ег Рпе РПе Геи Туг 5ег уз Ге Тиг ма! Азр Гуз 5ег Ага Тгр 405 410 415 сіп сіп с1у А5п ма! Ре 5ег Су5 5ег Ма! мет нНі5 сіи Аїа гГеи Ні 420 425 430 А5зп Ні Туг Тиг сіп Гуз бег Геу 5ег Гей б5ег Рго су Гуз 435 440 445 «210» 169 «2115 214 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: Амінокислотна послідовність легкого ланцюга пиАбБ13м1 «400» 169
Азр ІІе сіп Меє тТийг осіп 5ег Рго 5ег 5ег Ге 5ег АЇа 5ег маї сіу 1 5 10 15
А5Зр Агуд ма! тийг оч1Їе тик сСуз Гуз АЇїа б5ег сіп А5Зп Ма! с1у РПе дп ма! Аїа тер туг сіп сіп Гуз Рго сіу Гуз 5ег Рго Гуз АїЇа гей ІїЇє 20 Туг 5ег Аїа 5ег Туг Агуд туг 5ег сіу ма! Рго 5ег Агуд Ре 5ег су 60 5ег сіу 5ег сіу ТИг А5р Ре Тиг Гей Тиг ІЇе 5ег 5ег їеи сіп Рго 65 70 75 80 сі А5р Ре АЇїа сіи Ттуг Ре Су5 сіп сіп туг Азп Тер о туг Рго РВе 25 85 90 95
Тис Ре сТ1у сіп сіу тиг Гуз Ге сій ІчІЇе Гуз Агд тйг ма! Аїа Аїа 100 105 110
Рго 5ег ма! Ре ІІе Ре Рго Рго 5ег А5р сім сіп Ге Гуз 5ег С1У 115 120 125 30 тб Аїа 5ег ма! маї сСу5 Гей Ге А5п А5п РіПе Туг Рго Аг сіи Аїа 130 135 140
Гуз ма! сіп Тер Гуз маїЇ А5Зр Азп АЇа Гей сіп 5ег сіу Азп 5ег сп 145 150 155 160 сій 5ег ма! тийг сій сіп др б5ег уз Азр 5ег Тиг Туг 5ег їеи 5ег 35 165 170 175 5ег ТИг Ге Тийг Ге б5ег уз АЇа А5р Туг сіи Гуз Ні Гуз ма!ї туг 180 185 190
АТїа Субз сіи ма! тис о ні5 сіп сіу Гей б5ег б5ег Рго ма! Ттиг Гуз 5ег 195 200 205 40 Ре А5Зп Агу сіу соЇи сСуз 210 «2105 170 «2115 447 «212» Білок 45 «2135» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: Амінокислотна послідовність важкого ланцюга пПиАбЗм2.5 «4005 170 сіи ма! сіп Ге ма! сіп 5ег сіу АЇїа сіи ма! Гу5 Гуз Рго сІу 5ег 50 1 5 10 15 5зег ма! Гуз маЇ 5ег Су5 Гуз АЇа бек сіу туг ТИг РІПе 5ег 5ег туг 20 25 30
Тер мес ніх Тер ма! Агу сп АїЇа Рго сіу сЇп сІу гГеи сіи Тгр Пе 35 40 45 55 сІіу Гей ІІе Ні Рго сіи бег сіу бек ТИйг АЗзп Туг АЗп си Меє РНе 50 55 60
Гуз А5зп Аг Аїа тТийгогеи Тйгома!ї А5р Аг 5ег Тиг о б5ег тиг Аа туг 65 70 75 80 мес сі їеи бек б5ег Ге Агд бег сі А5р Тйг АЇїа ма! туг туг суз бо 85 90 95
Аїа сіу сїу с1у Агд Гей Туг Ре А5р Туг Тгр оЇу сЇп сіу тс тег 100 105 110 ма! тик ма! 5ег 5ег АЇїа 5ег Тиг оГу5 сС1у Рго 5ег мМа!Ї Ре РГгГО Ге 115 120 125 65 АїЇа Рго 5ег 5ег Гу5 5ег ТиИг 5ег су су тйг АїЇа Аїа ге су су 130 135 140
Гей ма! Гуз Азр Туг Ре Рго сі Рго ма! Ттйг ма!ї 5ег Тер А5зп 5ег 145 150 155 160 с1Уу Аїа Гей Тйг об5ег сіу ма! ніх тйг РНе Рго АїЇа маїЇ Гей сіп 5ег 70 165 170 175
5зег сіу Ге Туг 5ег Ге 5ег б5ег ма! ма! тис ма! Рго 5ег 5ег 5ег 180 185 190
Гей сіу Тийг о сіп Тийготуєс ІІе Суб Азп маЇ А5зп НІі5 Гуз Рго 5ег А5Пп 195 200 205
Тис огуз ма! А5р Гуз Гуз ма! сЇи Рго Гуз бег сСу5 А5Зр Гуз ТЕИг Ні 210 215 220
ТВг Су Рго Рго Су5 Рго АїЇа Рго сій АЇа АЇїа сіу сІу Рго 5ег маї 225 230 235 240
Ре Геи РПе Рго Рго Гуз Рго Гуз Азр ТИг Геи Мет ІЇе 5ег Ага тиг 245 250 255
Рго сіи ма! тйг сСуз маїЇ ма! маї А5зр маїЇ 5ег Ні5 сіи Азр Рго си 260 265 270 ма! Гуз Ре Азп Тгр Туг ма! Азр сіу ма! сіи ма! Ні5 А5п Аїа Гуз 275 280 285 ТВг губ Рго Ага сій сій сій туг А5п о бег Тс о туг Агдуд ма! ма! 5ег 290 295 300 ма! Ге тиг маї ге ні5 сіп А5р Тер Гей Ап сіу Гуз сім туг Гуз 305 310 315 320 сСу5з Гуз ма! 5ег А5Зп Гу5 АЇа Гей Рго АЇа Рго ІЇе сіи Гуз Ттйг Пе 325 330 335 5ег Гуз Аїа Гуз сіу сіп Рго Агд сій Рго сіп Ма! туг тйг Геи Рго 340 345 350
Рго 5ег Агуд сіи сіи Мет Тйг оїу5 Азп сЇп Маї 5ег о їеи Тиг суз Геи 355 360 365 ма! Гуз с1у Ре Туг Рго 5ег А5р ІЇе Аїа ма! сіи Тер сіи 5ег двп 370 375 380 сіу сіп Рго сі АЗп Ап о Туг Гуз ТВг Тс РгОо РгГо маїЇ Гей А5р 5ег 385 390 395 400
Азр сіу 5ег РіПе Ре їеи Туг б5ег Гуз Ге Тиг ма! А5р Гуз 5ег Агад 405 410 415
Тер сп сіп сіу Азп ма! Ре 5ег Су5 5ег Ма! мет ні5 сім АїТа гГеи 420 425 430
Ні Ап Ні Туг Тйг сій Гуз 5ег Гей б5ег гей 5ег РгГо сіІу Гуз 435 440 445 «2105» 171 «2115 219 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: Амінокислотна послідовність легкого ланцюга пПиАбЗм2.5 «4005 171
Азр ІІе ма! Меє тйг о сіп 5ег Рго Гей 5ег Гей Рго Ма! Ттйг Рго сІу 1 5 10 15 си Рго АЇїа бек ІЇе 5ег сСуз5з Агуд 5ег 5ег сіп 5ег їеи маї ні 5ег 20 25 30
АЗп Агуд АЗр тТиг туго гей Агуд Тер Туг Геи сіп Гуз Рго сІу сіп 5ег 35 40 45
Рго сіп Гей Гей Іїе туг Гуз ма! 5ег А5зп Аг Ре б5ег су ма! Рго 60 50 А5р Агу Ре 5ег сіу б5ег сіу б5ег сіу ТИйг А5Зр Ре тТйг їеи Гуз Пе 65 70 75 80 5зег Агд ма! си Аїа сій Азр ма! сіу ма! туг туг Суз5 5ег сіп 5ег 85 90 95
ТВгоніб мМмаїЇ Рго Туг Тйг Ре сіу сіу сіу тиг Гуз ма! сіи Пе Гуз 55 100 105 110
Агд Тис ома!ї АТа діа Рго бек ма! Ре ІЇе РПе Рго Рго 5ег А5р си 115 120 125 сіп ге Гуз 5ег сіу Тйг АТа 5ег ма! маї Суз Гей Ге А5Зп А5п Ре 130 135 140 60 туг Рго Агуд сій Аїа Гуз ма! сіп тгр Гуз ма! Азр А5Зп Аїа гГеи сіІп 145 150 155 160 5ег с1у А5п 5ег сіп сій 5ег ма! тийг си сіп д5р 5ег уз Азр 5ег 165 170 175
Тиг о туг б5ег Ге б5ег б5ег ТИг о їГеи Тиг Ге 5ег Гуз АЇа Азр Туг си 65 180 185 190
Гуз Ніз Гуз ма! туг Аїа Су5 сіи ма! тийг ніх сіп сіу Гей 5ег 5ег 195 200 205
Рго ма! Тиск Гуз 5ег Ре А5п Агуд су си сСуз 210 215 70 «2105 172
«2115 447 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: Амінокислотна послідовність важкого ланцюга ПиАбЗм2.6 «4005 172 сіи ма! сіп Ге ма! сіп 5ег сіу АЇїа сіи ма! Гу5 Гуз Рго сІу 5ег 1 5 10 15 5зег ма! Гуз маЇ 5ег Су5 Гуз АЇа бек сіу туг ТИг РІПе 5ег 5ег туг 20 25 30
Тер мес ніх Тер ма! Агу сп АїЇа Рго сіу сЇп сІу гГеи сіи Тгр Пе 35 40 45 сіу Ге ІІе Ні Рго сі б5ег сіу 5ег ТИйг о А5Зп Туг АЗзп сій Мет РНе 50 55 60
Гуз А5зп Аг Аїа тТийгогеи Тйгома!ї А5р Аг 5ег Тиг о б5ег тиг Аа туг 65 70 75 80 мес сі їеи бек б5ег Ге Агд бег сі А5р Тйг АЇїа ма! туг туг суз 85 90 95
Аїа сіу сїу с1Уу Агд Гей Туг Ре Ад5р Туг Тгр оЇу сЇп сіу тТйг тег 100 105 110 ма! тик ма! 5ег 5ег АЇїа 5ег Тиг оГу5 сС1у Рго 5ег мМа!Ї Ре РГгГО Ге 115 120 125
Аїа Рго 5ег 5ег Гуз 5ег ТиИг 5ег сіу с1у Ттпг АїЇа АїЇа ге сіу су 130 135 140
Геи ма! Гуз Азр Ттуг Ре Рго сій Рго Ма! Ттйг ма! б5ег тгр Азп 5ег 145 150 155 160 с1Уу Аїа Гей Тйг об5ег сіу ма! Ні тйг РНПе Рго АїЇа маїЇ Гей сіп 5ег 165 170 175 5зег сіу Ге Туг 5ег Ге 5ег б5ег ма! ма! тис ма! Рго 5ег 5ег 5ег 180 185 190
Гей сіу Тийг о сіп Тйготуєс ІІе Суб Азп маЇ А5зп НІі5 Гуз Рго 5ег дзп 195 200 205
Тиг Гуз маїЇ А5р Гуз Гуз маЇ сі Рго Гуз 5ег Суз А5Зр Гуз Тиг Ні 210 215 220 0 Те Суб Рго Рго Су5 Рго АЇа Рго сій АЇа АТїа сіу сІу Рго 5ег маї 225 230 235 240
Ре Геи РПе Рго Рго Гуз Рго Гуз Азр ТИг Геи Мет ІЇе 5ег Ага тиг 245 250 255
Рго сіи ма! тйг сСуз ма!їЇ ма! маї А5р маїЇ 5ег нНі5 си А5Зр Рго сій 260 265 270 ма! Гуз Ре Азп Тгр Туг ма! Азр сіу ма! сіи ма! Ні5 А5п Аїа Гуз 275 280 285
Тк Гуз Рго Агд сій сій сій Ттуг Ап обег Тиг о туг Агдуд ма! ма! 5ег 290 295 00 МмаїЇ Геи тиг маї гей Ні5 сіп А5р Тер Гей Ап сіу Гуз сіи Ттуг Гуз 305 310 315 320 сСу5з Гуз ма! 5ег Ап Гуз АЇа Гей Рго АЇа Рго ІІе сіи Гуз тйг Пе 325 330 335 5ег Гуз Аїа Гуз сіу сіп Рго Агд сій Рго сіп Ма! туг тйг Геи Рго 340 345 350
Рго 5ег Агд сіи сіи Мет тТйг оїу5 Азп сЇп Ма! бег о їеи тиг суз Геи 355 360 365 ма! Гуз сіу Ре Туг Рго 5ег А5Зр ІЇе Аїа ма! сіи тер сіи 5ег дп 370 375 380 сІу сіп Рго сій А5п Ази Туг Гуз Тс Тс РгГОо Рго Маї Гей А5р 5ег 385 390 395 400
Азр сіу 5ег РіПе Ре їеи Туг б5ег Гуз Ге Тиг ма! А5р Гуз 5ег Агад 405 410 415
Тер сп сіп сіу Азп ма! Ре 5ег Суб 5ег ма! Мет ні5 сЇи АїТа гГеи бо 420 425 430
Ні Ап Ні Туг Тйг сій Гуз 5ег Гей б5ег гей 5ег РгГо сіІу Гуз 435 440 445 «2105 173 «2115 219 65 «2125 Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: Амінокислотна послідовність легкого ланцюга пПидЬЗм2.6 «4005 173 70 Ар ІІе ма! Меє тийг сіп 5ег Рго Гей 5ег Ге Рго ма! Тийг Рго Ос1У
1 5 10 15 си Рго АЇїа бек ІЇе 5ег сСуз5з Агуд 5ег 5ег сіп 5ег їеи маї ні 5ег 20 25 30
Азп о сіп АЗр тТиг о туг гей Агуд Тер Туг гГеи сіп губ Рго су сіп 5ег 35 40 45
Рго сіп Гей Гей Іїе туг Гуз ма! 5ег А5зп Аг Ре б5ег су ма! Рго 50 55 60
А5Зр Агу Ре 5ег сіу бек сіу 5ег сіу Тйг дор Ре тиг Геи Гуз Пе 65 70 75 80 5зег Агд ма! си Аїа сій Азр ма! сіу ма! туг туг Суз5 5ег сіп 5ег 85 90 95
ТВгоніб мМмаїЇ Рго Туг Тйг Ре сіу сіу сіу тиск Гуз ма! сіи Пе Гуз 100 105 110
Агд Тис ома!ї АТа діа Рго бек ма! Ре ІЇе РПе Рго Рго 5ег А5р си 115 120 125 сіп ге Гуз 5ег сіу Тйг АТа 5ег ма! маї сут Гей Ге АЗзп А5Зп РНе 130 135 140 туг Рго Агуд сім АЇїа Гуз ма! сіп Тер Гуз маї д5р доп АїЇа гей сп 145 150 155 160 5зег сіу Азп 5ег сіп сій бек ма! тийг сім сіп Ар 5ег Гуз А5р 5ег 165 170 175
Тиг о туг б5ег Ге б5ег б5ег ТИг о їГеи Тиг Ге 5ег Гуз АЇа Азр Туг си 180 185 190
Гуз Ніз Гуз ма! туг Аїа Су5 сіи ма! тийг ні5 сіп сіу Гей 5ег 5ег 195 200 205
Рго ма! Тиск Гуз 5ег Ре А5п Агуд су си сСуз 210 215 «2105 174 «2115 117 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: ІсСНМІ1-69и06 ІСНОІОб «220» «2215» інша ознака «222» (993)..(106) «223» Хаа може являти собою будь-яку амінокислоту, яка зустрічається в природі; дана частина являє собою ділянку СОК-НЗ3 «4005 174 сіп ма! сіп Ге маї сіп 5ег сіу Аїа сіи ма! Гуз Гуз Рго сіу 5ег 1 5 10 15 5зег ма! Гуз маЇ 5ег Су5 Гуз АЇа 5ег сіу сіу Тйг РИПе 5ег 5ег туг 20 25 30
Аїа ІІе 5ег Тгр ма! Агуд сіп АТа Рго сІу сіп сіу Ге сіи Тер мес 35 40 45 сіу сіу ч1ІІе ІЇе Рго ІЇе Ре сіу тТйг АїЇа А5Зп Туг АЇа сіп Гуз РНе 60 сіп сіу Агуд ма! тийг о ч1Те тйг Аїа А5р Гуз 5ег Тиг б5ег тиг АїТа туг 65 70 75 80 50 Меє сіи Ге 5ег 5ег Гей Агуд 5ег сій А5р Тийг АЇїа ма! Туг туг су 85 90 95
АІїа Агуд Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа тгр сіу сіп сіу тис тпг 100 105 110 ма! Тк ма! 5ег 5ег 55 115 «2105 175 «2115 112 «212» Білок «2135 Штучна послідовність бо «220» «223» Синтетична: ІчІо0КМ2-287501 10К74 «220» «2215» інша ознака «222» (94)..(102) 65 «223» Хаа може являти собою будь-яку амінокислоту, яка зустрічається в природі; дана частина являє собою ділянку СОК-13 «4005 175
Азр ІІе ма! Меє тйг о сіп 5ег Рго Гей 5ег Гей Рго Ма! Ттйг Рго сІу 1 5 10 15 70 си Рго Аїа 5екг ІЇе 5ег сСуз5з Агд б5ег 5ег сіп 5ег Геи Геи Ні 5ег
20 25 30
Азп сіу Ттуг Азп Туг Гей А5Зр Тер Туг Гей сіп Гуз Рго сіу сіп 5ег 35 40 45
Рго сіп Гей Гей Іїе туг Ге сіу 5ег Азп Агуд АЇа б5ег су ма! Рго 50 55 60
А5Зр Агу Ре 5ег сіу бек сіу 5ег сіу Тйг А5зр Ре тНг Геи Гуз Пе 65 70 75 80 5зег Агуд ма! си Аїа сій А5р ма! сіу ма! туг туг суз5 Хаа Хаа Хаа 85 90 95 Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Ре сіу сіу сіу тиг Гуз ма! сіи Пе Гуз 100 105 110 «2105 176 «2115 116 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: ІсНнМ4-Б ІСНОІб «220» «2215» інша ознака «222» (993..(105) «223» Хаа може являти собою будь-яку амінокислоту, яка зустрічається в природі; дана частина являє собою ділянку СОК-НЗ3 «4005 176 сіп ма! сіп ге сіп сій б5ег сіу Рго сіу Ге ма!Ї Гуз Рго 5ег Си 1 5 10 15
ТИг Ге бек ге Тис о Суз АїЇа ма! б5ег сіу туг 5ег Те 5ег 5ег су 20 25 30 туг туг Тер су Тгр ІТе Агу сіп Рго Рго су Гуз СсІу Гей си Тер 35 40 45
ІІе с1у б5ег ІЇе Тукг Ні 5ег сіу бег Тийг Туг туг А5зп Рго 5ег Геи 50 55 60
Гуз 5ег Агуд ма! тТиг ІЇе 5ег ма! А5р тиг 5ег їу5 АЗп сЇп Ре 5ег 65 70 75 80
Гей Гуз Гей 5ег б5ег ма! Тиг Аїа АТа Ар Тиг Аїа ма! Ттуг туг су 85 90 95
АТїа Агуд Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Тгр сіу сіп сІу тис тис ма! 100 105 110
Тк ма! 5ег 5ег 115 «210» 177 «2115 107 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: чІОКМ1-39 10К22 «220» «2215» інша ознака «222» (89)..(97) «223» Хаа може являти собою будь-яку амінокислоту, яка зустрічається в природі; дана частина являє собою ділянку СОК-13 «4005 177
Азр ІІе сіп Меє тТийг осіп 5ег Рго 5ег 5ег Ге 5ег АЇа 5ег маї сіу 1 5 10 15
А5Зр Агуд Ма! тиг о ч1Їе Тиск сСу5 Агуд Аїа 5ег сіп 5ег ІЇе 5ег 5ег туг 20 25 30
Гей Азп Тер Туг сп сіп Гуз Рго сІу Гуз АїЇа Рго Гуз Гей їГеи Пе 35 40 45 туг АТа Аїа 5ег бек ге сіп 5ег сіу ма! Рго 5ег Агуд Ре 5ег О1У 50 55 60 60 5зег сіу б5ег сІ1у Тйг А5р РПе тТийг Ге Тийг ІЇе 5ег 5ег Гей сіп РгОо 65 70 75 80 сі А5р Ре АЇїа Ттийг о тТуг туг Суб Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа 85 90 95
Хаа Ре СсСІу сіп сіу тТНг їГуз Гей сіи Пе Гуз 65 100 105 «2105 178 «2115 112 «212» Білок «2135 Штучна послідовність 70 «220»
«223» Синтетична: Амінокислотна послідовність МІ1 варіантів ПидАБЗ «2215» інша ознака «222» (33)..(33) «223» Х може являти собою будь-яку амінокислоту, яка зустрічається в природі, за винятком М, С, М, ОО або о «4005 178
Азр ІІе ма! Меє тйг о сіп 5ег Рго Гей 5ег Гей Рго Ма! Ттйг Рго сІу 1 5 10 15 си Рго Аіїа б5ег ІІе бег сСу5з Агуд 5ег 5ег сіп 5ег Ге ма! Ні 5ег 20 25 30
Хаа сіу Азр тиг туг Гей Агуд Тер Туг Геи сіп гГу5 Рго сІу сіп 5ег 35 40 45
Рго сіп Гей Гей Іїе туг Гуз ма! 5ег А5зп Аг Ре б5ег су ма! Рго 50 55 60
А5Зр Агу Ре 5ег сіу бек сіу 5ег сіу Тйг А5зр Ре тНг Геи Гуз Пе 65 70 75 80 5зег Агд ма! си Аїа сій Азр ма! сіу ма! туг туг Суз5 5ег сіп 5ег 85 90 95
Те нів ма! Рго Туг Тийг Ре сіу сіу сіу тиг Гуз ма! сіи Іе Гуз 100 105 110 «2105 179 «2115 112 «212» Білок «2135» Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: Амінокислотна послідовність МІ1 варіантів ПидАБЗ «220» «2215» інша ознака «222» (34)..(34) «223» Х може являти собою будь-яку амінокислоту, яка зустрічається в природі, за винятком М, С, с, 5, М або Р «4005 179
Азр ІІе ма! Меє тйг о сіп 5ег Рго Гей 5ег Гей Рго Ма! Ттйг Рго сІу 1 5 10 15 си Рго АЇїа бек ІЇе 5ег сСуз Агуд бег 5ег сп 5ег Гей Ммаї ні 5ег 20 25 30
АЗзп Хаа Ар тТиг тТуг Гей Агуд Тер Туг Геи сіп гГу5 Рго сІу сіп 5ег 35 40 45
Рго сіп Гей Гей ІЇїе туг Гуз ма! 5ег А5зп Аг Ре б5ег су ма! Рго 50 55 60
А5Зр Агу Ре 5ег сіу бек сіу 5ег сіу Тйг А5зр Ре тНг Геи Гуз Пе 65 70 75 80 5зег Агд ма! си Аїа сіи Азр ма! сіу ма! туг туг Суз5 5ег сіп 5ег 85 90 95
ТВгоніб мМмаїЇ Рго Туг Тйг Ре сіу сіу сіу тиг Гуз ма! сіи Пе Гуз 100 105 110 «2105» 180 «2115 117 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: Амінокислотна послідовність МНІБ варіантів ПидЬЗ «220» «221» інша ознака «222» (54)..(54) «223» Х може являти собою будь-яку амінокислоту, яка зустрічається в природі, за винятком М, С, М, ОО або о «400» 180 60 сіи ма! сіп Гей ма! сіп 5ег сіу АТа сіи ма! гу5 Гуз Рго су 5ег 1 5 10 15 5зег ма! Гуз ма!Ї 5ег Су5 Гуз АЇа бек сіу туг ТИг РІПе 5ег 5ег туг 20 25 30
Тер мес ніх Тер ма! Агу сп АїЇа Рго сіу сЇп сІу гГеи сіи Тгр Пе 65 35 40 45 с1іу Ге ІІе Ні Рго Хаа 5ег сіу 5ег ТИйг А5Зп Туг АЗзп сіи Мет РНе 50 55 60
Гуз А5зп Аг Аїа Тийгогеи Тйгомаї А5р Аг 5ег Тиг о б5ег тиг Аа туг 65 70 75 80 70 Ммекс сіи Ге б5ег б5ег Ге Агд б5ег сій АЗр Ттйг АЇїа ма! туг туг суз
85 90 95
Аїа сіу сїу с1Уу Агд Гей Туг Ре А5р Туг Тгр оЇу сЇп сіу тТйг тег 100 105 110 ма! тик ма! 5ег 5ег 115 «2105 181 «2115 117 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: Амінокислотна послідовність МНІБ варіантів ПидЬЗ «220» «221» інша ознака «222» (55)..(55) «2235» Х може являти собою будь-яку амінокислоту, яка зустрічається в природі, за винятком М, С, с, 5, М або Р «4005 181 сіи ма! сіп Ге ма! сіп 5ег сіу АЇїа сіи ма! Гу5 Гуз Рго сІу 5ег 1 5 10 15 5зег ма! Гуз ма! 5ег сСуз Гуз АЇїа б5ег сіу Туг ТНг РМНе 5ег 5ег туг 20 25 30
Тер мес ніх Тер ма! Агу сп АїЇа Рго сіу сЇп сІу гГеи сіи Тгр Пе 35 40 45 сіу Ге ІІе Ні Рго Ар Хаа сіу 5ег ТИйг А5Зп Туг АЗзп сіи Мет РНе 50 55 60
Гуз А5зп Аг Аїа Тийгогеи Тйгомаї А5р Аг 5ег Тиг о б5ег тиг Аа туг 65 70 75 80 мес сі їеи бек б5ег Ге Агд бег сі Азр Тйг АЇїа ма! туг туг суз 85 90 95
Аїа сіу сіу сІіу Агд Гей Туг Ре А5р Туг Тгр сІЇу сіп сіу тс тег 100 105 110 ма! тик ма! 5ег 5ег 115 «2105 182 «2115 9 «212» Білок «2135 Штучна послідовність «220» «223» Синтетична: амінокислотна послідовність СОКЗ3 мі СсПАБІЗ «4005» 182 сіп сіп туг АбЗп обег Туг Рго Ре ТЕГ

Claims (3)

1 5 ФОРМУЛА ВИНАХОДУ
1. Кон'югат анти-НВ7-НЗ антитіло/лікарський засіб, що містить наступну структуру: он о он о й
М. М М ошеФувнавав и: ни7о ЯЗ ер Ж | М Ге) (9) МВ М 4 (в) о он о у тон он он де АБ являє собою анти-пВ7-НЗ антитіло ДС1, що містить варіабельну ділянку важкого ланцюга, яка містить: домен СОКЗ важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮО МО: 35, домен СОКЗ2 важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність зЗЕО ІЮО МО: 34, і домен СОК1 важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 33; і варіабельну ділянку легкого ланцюга, яка містить домен СОКЗ легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 39, домен СОК2 легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮО МО: 38, і домен СОКІ легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ МО: 37; і де т дорівнює 2.
2. Кон'югат анти-НВ7-НЗ антитіло/лікарський засіб, що містить наступну структуру: он о А он (о) У Ї « Ї М Мн т М поошеФнари ві нм Зо й СКК Ж | р, Го! (Ф) Мм7С5 М И (о) у, виш. о он о т сТон он он де АБ являє собою анти-пВ7-НЗ антитіло ЇдсС1, що містить: варіабельний домен важкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮО МО: 147, і варіабельний домен легкого ланцюга, який містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮО МО: 144; і де т дорівнює 2.
3. Кон'югат анти-пНВ7-НЗ антитіло/лікарський засіб, що містить наступну структуру: он о он о й (в Н ШТ Н дув т М АЖ ДИ ее ни7о ЯЗ ер Ж | М Ге) (Ф) МВ М 4 (о) о виш. о он о т сТон он он де АБ являє собою анти-пВ7-НЗ антитіло Їдс1, що містить: важкий ланцюг, який містить амінокислотну послідовність зХЕО ІЮ МО: 168, і легкий ланцюг, який містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ МО: 169; і де т дорівнює 2.
ра М «о х КУ у й: у ча У Й ня СЯ Ка ЧК З вв Е г Її у и 1 ї Ка » : | й звлиї ІЙ й ї. і Ей ИН ЯН КУ ї ББЖ АВ с, Я ї і АБ Я. пн А ї да дречннюх ; ; їх ЯКУ : рми КЗ я х К б Є, ; хо ше / ; с б й а "чн НІ як й
Фіг. ск ЖКЕКА ДЕМКМНИЮ я се КЕ дан КВ зи. кактрв я га ЛЕК о ох МВА дан тк ре ВЕК ПНЕЕНАИХ я де ВЕК ДИЗВКВІ не І ї І с С с м ш-ої г. її і х Її фе ня КЕ КЕ КЕ ду У бе ї. Ек ММ КИ Ї ка бо) ке пеки чи ни не; ШО Мак, Ка: Я ке паній а Етя ; й С но ее щу а й ке я уко ах ї нх ; ї-у Е СУ ай оса ще Пожих й ї жа ГЯсяй «я ее С и «Й Е Уа знлнх си ВВ и о Не кА а ТЕЖ ОНА к Вокной 1 рр в ДА з коли щі 3 БА, у С ПУ М і ВН
У 1. гм їх Е Мі МТК м куДкаааНиХ ТЯ Ка иа 4 і : зі їх ун це ца зір ца ох ве що У Ж с ве че Бо . а В ВЕЖІ ВЕБНЕ БЕЗИ МОЖУ вва лани
Фіг. 2
Ма амвевк в коаненяю ЗВУ ТВ АХ МЕ ен кн нн нн ння Зп нн и мде вт Ме не я ; че ще 5 КА із т Що ак окт во р х. 5 Зако щі я те х з М ся з х І : де З й не ом: ни и не й ак ЩО, см ся У х х ї Ї : ! КЕ : БК Ї ї й те ще. шк, Ше В КЗ ож й УЖ би: В у днини зу й ши ше НН й щи я ШЕ Й Мо і ртееетютюььх ще КД Її ве : с: НИ Е ово беонюмдоних мутеневу : шо т фо ВЕ неНяя хо са ее пк, ке зи со не ЧИ що "й Ї шах НИ Ж За й а АХ Е і 3 і Й и ви рибять г пн, К щі нн п їТ й й БУ сх мк Кк Мои ож НА Кен й 7 ЗОМ ХМК вки зиожиеьневія зве Ї спннння длчно? п и в й г. ЕЕ ор? Б вки им жи й М Віва УВЕВ т гЗ Ї я Ж. ща ще еще | і Ве ск руч па Й. вий ши и и зе М а кон и Ши п я я ЩІ Ем й Ж ім не нн в М шо Ії Еш; КОЗГЕНККУ (хана ЕНОВ . їЕ ек я кокони - Хлннннннн кни кни к нин кн Аля АлАТ АЛ ЛК АЛЛА АК АМАЖАМААНМАНАХКАММААХАААХХАААХААНАТАМАКАААМАААМАКККАКККААВ, КЕ макет КВК Е нн ЗКНЕЕТХ Совйкеворк свв ук ннсвв іх оо;
денне нн нт пла нти АКА АКА АКА АКТ АТ АНТ АВ ТАТА тини ее : : Н мн ; : син Б КІ Мк Векмаза знов с ШІ Кокуве некаюкни ще: й «3 КУ Н зд, ЩЕ НИ В ів І Н ЧК, ! і з ЕЙ й ; в ії і це й : ехо ЕЖН хАтер : С її Н ЩЕ Бе хЗ і З 1 х и Я їх ст св КУ ря Я М що Щи Ж зіжях і | за не: дб свютов я ВО Ал, їжа ВЕ ни и а НН а ї жх в в в ВІШИНИЬ Во МАК а В ХАН фуги ж ее ЗЕККОРК ЗНЕВЯЧВ; ЗКК смс З ія ЇХ ЖЕ ВЕК ВЕДУЧА НЕ ЗАЖКЕ ВЕДЯ. КК ВЕК Еко с г ж Бе Я ие Я дк яв ТУ й ще КК КЗ З щи : хі Не: еще нов й пу НИ елжннУввя о А Ша ЗНУ Ж дев 5 А оп шХ тя і М щи Я УК ТЕ вва 8 шк ї. Н ї -- ЕЯ й 1 ще с й Н тк Її рен Я з ТЯ, В ! БК ий «КЕ ки і «В Й ! хуй р ЕВ Е У НЕ і Я МИ З 1 Її 1: : 3 пи її Н пах Де Н ж Еш Но :
Та. М : Ка ОО ГТ ОН 1 Ул ШЕ я і т Кон Ж Ж м М її ГО я мне ннхекакккєвкиєтня жк це ПК щу Ок ооо я ек М и ММ г с З ж ль У С з ооо ТЯМ учи сушя тах поко с емкуку Но ій зе й мк й т Кз ВКУСИВ ЗЕБОЖІУЕ ЗІНК УК ЯКІМКК ЗМК ОВЕН Я З В Жідктю Мавулькв вчу и ща ДЖЕМУ Кая цк їстівне іх З се і БУ ех пив не ин о, «0. ШЕ лхвн я хо ДУ ок гл х ч ох ПІНУ пох . . ї ЗД уж КАН вон пав я ж ее БК Ж зпісяв. поцвеенях З ще Х ; е І і щи її : й ЩЕ лЗМКУ і о її ІЗ МОВ БУ КУ І ї ПЕЖО. 1: ІЗ У ЕН М ї Ба їх : й в кх ЦИ : Сн У х Зх хх т Ко ки жк НЕЯЩНЯ і ОС дшнк и - Х ТО КК для В й С ши ШО Стжукнито М НУ КО МО ВВ В СЕУ КВ ВЗ КН В А ДО Же імнекзан пукУкт жу: СпКН де Ві кві ЗА ВЕЖ УВА ВИТ Я МУКУ кв К НЯ и «КркЗее сем енх Мане ни занне .
Фіг. 5
UAA201900138A 2016-06-08 2017-06-07 Кон'югат антитіла до в7-н3 та лікарського засобу UA124198C2 (uk)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201662347476P 2016-06-08 2016-06-08
US201662366511P 2016-07-25 2016-07-25
PCT/US2017/036445 WO2017214335A1 (en) 2016-06-08 2017-06-07 Anti-b7-h3 antibodies and antibody drug conjugates

Publications (1)

Publication Number Publication Date
UA124198C2 true UA124198C2 (uk) 2021-08-04

Family

ID=59153289

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UAA201900138A UA124198C2 (uk) 2016-06-08 2017-06-07 Кон'югат антитіла до в7-н3 та лікарського засобу

Country Status (34)

Country Link
US (2) US10640563B2 (uk)
EP (3) EP4364754A3 (uk)
JP (2) JP6751165B2 (uk)
KR (1) KR102434626B1 (uk)
CN (2) CN116284404A (uk)
AU (2) AU2017279550A1 (uk)
BR (1) BR112018075626A2 (uk)
CA (1) CA3027045A1 (uk)
CL (2) CL2018003520A1 (uk)
CO (1) CO2018013471A2 (uk)
CR (1) CR20180603A (uk)
CY (1) CY1123783T1 (uk)
DK (1) DK3458479T3 (uk)
DO (1) DOP2018000276A (uk)
EC (1) ECSP19000282A (uk)
ES (1) ES2861499T3 (uk)
HR (1) HRP20210170T1 (uk)
HU (1) HUE053356T2 (uk)
IL (2) IL300274A (uk)
LT (1) LT3458479T (uk)
MX (2) MX2018015271A (uk)
PE (1) PE20190177A1 (uk)
PH (1) PH12018502601A1 (uk)
PL (1) PL3458479T3 (uk)
PT (1) PT3458479T (uk)
RS (1) RS61828B1 (uk)
RU (1) RU2764651C2 (uk)
SG (2) SG11201811193TA (uk)
SI (1) SI3458479T1 (uk)
TW (2) TW202304996A (uk)
UA (1) UA124198C2 (uk)
UY (1) UY37278A (uk)
WO (1) WO2017214335A1 (uk)
ZA (1) ZA201900059B (uk)

Families Citing this family (44)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2017279539A1 (en) * 2016-06-08 2019-01-03 Abbvie Inc. Anti-B7-H3 antibodies and antibody drug conjugates
TW201909926A (zh) * 2017-08-04 2019-03-16 大陸商江蘇恆瑞醫藥股份有限公司 Ｂ７ｈ３抗體－藥物偶聯物及其醫藥用途
WO2019225787A1 (ko) * 2018-05-24 2019-11-28 에이비엘바이오 주식회사 항-b7-h3 항체 및 그 용도
CA3101601A1 (en) 2018-05-29 2019-12-05 Bristol-Myers Squibb Company Modified self-immolating moieties for use in prodrugs and conjugates and methods of using and making
WO2020033702A1 (en) * 2018-08-08 2020-02-13 Dragonfly Therapeutics, Inc. Proteins binding nkg2d, cd16 and a tumor-associated antigen
CN114957475B (zh) 2018-09-26 2023-06-20 福州拓新天成生物科技有限公司 抗b7-h3的单克隆抗体及其在细胞治疗中的应用
EP3873523A4 (en) * 2018-10-26 2022-08-10 Janssen Biotech, Inc. TYPE I INTERFERON SIGNATURES AND METHODS OF USE
US20220010018A1 (en) * 2018-11-16 2022-01-13 Albert Einstein College Of Medicine MONOCLONAL ANTIBODIES AGAINST IgV DOMAIN OF B7-H3 AND USES THEREOF
AU2018449846B2 (en) * 2018-11-22 2023-12-14 Beijing Kanova Biopharmaceutical Co., Ltd. An anti-B7-H3 antibody
WO2020140094A1 (en) * 2018-12-27 2020-07-02 Gigagen, Inc. Anti-b7-h3 binding proteins and methods of use thereof
CN109912718B (zh) * 2019-03-20 2020-12-11 北京善科生物科技有限公司 B7-h3抗原结合结构域的分离的结合蛋白、核酸、载体、car-t细胞及其应用
CN111808057B (zh) * 2019-04-10 2023-05-09 四川大学 利用α-O-烯基砜作为亲电试剂的铃木反应及其应用
EP3972651A2 (en) 2019-05-20 2022-03-30 Novartis AG Mcl-1 inhibitor antibody-drug conjugates and methods of use
US20220298246A1 (en) * 2019-07-03 2022-09-22 Crystal Bioscience Inc. Anti-b7-h3 antibody and methods of use thereof
KR102732027B1 (ko) * 2019-07-09 2024-11-20 주식회사 와이바이오로직스 B7-h3(cd276)에 특이적으로 결합하는 항체 및 그의 용도
CN111454357B (zh) * 2019-08-14 2022-03-15 康诺亚生物医药科技（成都）有限公司 一种含有抗体的肿瘤治疗剂的开发和应用
CN110893236A (zh) * 2019-10-09 2020-03-20 中山大学 溶酶体靶向的抗体药物偶联物及其应用
JP2023502990A (ja) * 2019-11-18 2023-01-26 ボード オブ リージェンツ，ザ ユニバーシティ オブ テキサス システム 抗ｂ７－ｈ３モノクローナル抗体およびその使用方法
WO2021150792A1 (en) 2020-01-21 2021-07-29 Micurx Pharmaceuticals, Inc. Novel compounds and composition for targeted therapy of kidney-associated cancers
CN113527487A (zh) * 2020-04-22 2021-10-22 复星凯特生物科技有限公司 抗人b7-h3的单克隆抗体及其应用
AU2021297036A1 (en) 2020-06-26 2023-01-19 Intocell, Inc. Antibody-drug conjugates comprising anti-b7-h3 antibodies
WO2022104692A1 (en) * 2020-11-20 2022-05-27 Bliss Biopharmaceutical (Hangzhou) Co., Ltd. Engineered antibody, antibody-drug conjugate, and use thereof
WO2022115477A1 (en) 2020-11-24 2022-06-02 Novartis Ag Bcl-xl inhibitor antibody-drug conjugates and methods of use thereof
WO2022126569A1 (zh) * 2020-12-18 2022-06-23 上海复旦张江生物医药股份有限公司 一种靶向b7-h3的抗体药物偶联物、其制备方法及应用
CA3203257A1 (en) * 2020-12-23 2022-06-30 Li Li Anti-b7-h3 antibody and uses thereof
CN114763382B (zh) * 2021-01-13 2024-12-17 博生吉医药科技(苏州)有限公司 靶向人cd276的单克隆抗体及其应用
CN114763381B (zh) * 2021-01-13 2025-01-28 博生吉医药科技(苏州)有限公司 B7-h3嵌合抗原受体修饰的t细胞及其应用
CN114763388B (zh) * 2021-01-13 2024-12-17 博生吉医药科技(苏州)有限公司 靶向b7-h3的car-t细胞及其在急性髓系白血病治疗中的应用
AR124681A1 (es) 2021-01-20 2023-04-26 Abbvie Inc Conjugados anticuerpo-fármaco anti-egfr
CA3206117A1 (en) * 2021-02-09 2022-08-18 Medilink Therapeutics (Suzhou) Co., Ltd. Bioactive substance conjugate, preparation method therefor and use thereof
CN113358866B (zh) * 2021-04-22 2023-06-23 四川大学华西医院 基于三重并联杂交链式反应的破伤风抗原的均相超灵敏二维可视化和荧光分析方法及应用
US20240197904A1 (en) * 2021-04-26 2024-06-20 The Regents Of The University Of California Combination therapy for treating glioblastoma
CN113274502B (zh) * 2021-05-05 2023-01-03 中山大学肿瘤防治中心（中山大学附属肿瘤医院、中山大学肿瘤研究所） 用于特定型三阴乳腺癌免疫治疗的组合物
US20240400690A1 (en) * 2021-09-30 2024-12-05 Bio-Thera Solutions, Ltd. Anti-b7-h3 antibody and application thereof
CN116178553B (zh) * 2022-02-25 2023-11-17 南京蓬勃生物科技有限公司 针对人b7-h3的抗体及其变体
CN115073311B (zh) * 2022-03-23 2023-05-23 河南大学 一种高效制备n,n′-二（2羟乙基）苯胺的合成方法
AU2023253796A1 (en) * 2022-04-14 2024-10-17 Debiopharm Research & Manufacturing S.A. Ligand-drug-conjugates with improved pharmacokinetic and drug release properties
AR129380A1 (es) 2022-05-20 2024-08-21 Novartis Ag Conjugados de anticuerpo-fármaco de compuestos antineoplásicos y métodos de uso de los mismos
IL316653A (en) 2022-05-20 2024-12-01 Novartis Ag Antibody drug conjugates
WO2024036961A1 (zh) * 2022-08-19 2024-02-22 北京三秀生物医药科技有限公司 一种抗衰老相关疾病的前药及其使用方法
WO2024114318A1 (zh) * 2022-11-29 2024-06-06 四川科伦博泰生物医药股份有限公司 药物连接子化合物及其制备方法和用途
WO2024163499A1 (en) * 2023-01-30 2024-08-08 Board Of Regents, The University Of Texas System Antibodies with selectivity for the 4ig isoform of b7-h3 and methods of use thereof
WO2024189481A1 (en) 2023-03-10 2024-09-19 Novartis Ag Panras inhibitor antibody-drug conjugates and methods of use thereof
WO2024217922A1 (en) 2023-04-18 2024-10-24 Astrazeneca Ab Conjugates comprising cleavable linkers

Family Cites Families (264)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US1726514A (en) 1926-11-01 1929-08-27 Firm Ferd Liebschner & Sohn Picker for looms
US4444887A (en) 1979-12-10 1984-04-24 Sloan-Kettering Institute Process for making human antibody producing B-lymphocytes
US5179017A (en) 1980-02-25 1993-01-12 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials
US4399216A (en) 1980-02-25 1983-08-16 The Trustees Of Columbia University Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials
US4634665A (en) 1980-02-25 1987-01-06 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials
US4434150A (en) 1981-10-19 1984-02-28 Ortho Diagnostic Systems, Inc. Immunological reagents employing polymeric backbone possessing reactive functional groups
EP0092918B1 (en) 1982-04-22 1988-10-19 Imperial Chemical Industries Plc Continuous release formulations
US4716111A (en) 1982-08-11 1987-12-29 Trustees Of Boston University Process for producing human antibodies
US4510245A (en) 1982-11-18 1985-04-09 Chiron Corporation Adenovirus promoter system
US4486414A (en) 1983-03-21 1984-12-04 Arizona Board Of Reagents Dolastatins A and B cell growth inhibitory substances
GB8308235D0 (en) 1983-03-25 1983-05-05 Celltech Ltd Polypeptides
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US5807715A (en) 1984-08-27 1998-09-15 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods and transformed mammalian lymphocyte cells for producing functional antigen-binding protein including chimeric immunoglobulin
US5128326A (en) 1984-12-06 1992-07-07 Biomatrix, Inc. Drug delivery systems based on hyaluronans derivatives thereof and their salts and methods of producing same
US5168062A (en) 1985-01-30 1992-12-01 University Of Iowa Research Foundation Transfer vectors and microorganisms containing human cytomegalovirus immediate-early promoter-regulatory DNA sequence
DE3588239T3 (de) 1985-03-30 2007-03-08 Kauffman, Stuart A., Santa Fe Verfahren zum Erhalten von DNS, RNS, Peptiden, Polypeptiden oder Proteinen durch DMS-Rekombinant-Verfahren
US4980286A (en) 1985-07-05 1990-12-25 Whitehead Institute For Biomedical Research In vivo introduction and expression of foreign genetic material in epithelial cells
US4676980A (en) 1985-09-23 1987-06-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Target specific cross-linked heteroantibodies
US5618920A (en) 1985-11-01 1997-04-08 Xoma Corporation Modular assembly of antibody genes, antibodies prepared thereby and use
US4968615A (en) 1985-12-18 1990-11-06 Ciba-Geigy Corporation Deoxyribonucleic acid segment from a virus
DE3600905A1 (de) 1986-01-15 1987-07-16 Ant Nachrichtentech Verfahren zum dekodieren von binaersignalen sowie viterbi-dekoder und anwendungen
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
GB8607679D0 (en) 1986-03-27 1986-04-30 Winter G P Recombinant dna product
US4880935A (en) 1986-07-11 1989-11-14 Icrf (Patents) Limited Heterobifunctional linking agents derived from N-succinimido-dithio-alpha methyl-methylene-benzoates
FR2601675B1 (fr) 1986-07-17 1988-09-23 Rhone Poulenc Sante Derives du taxol, leur preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent
US5763192A (en) 1986-11-20 1998-06-09 Ixsys, Incorporated Process for obtaining DNA, RNA, peptides, polypeptides, or protein, by recombinant DNA technique
DE3883899T3 (de) 1987-03-18 1999-04-22 Sb2, Inc., Danville, Calif. Geänderte antikörper.
US4880078A (en) 1987-06-29 1989-11-14 Honda Giken Kogyo Kabushiki Kaisha Exhaust muffler
US4816444A (en) 1987-07-10 1989-03-28 Arizona Board Of Regents, Arizona State University Cell growth inhibitory substance
US5606040A (en) 1987-10-30 1997-02-25 American Cyanamid Company Antitumor and antibacterial substituted disulfide derivatives prepared from compounds possessing a methyl-trithio group
US5770701A (en) 1987-10-30 1998-06-23 American Cyanamid Company Process for preparing targeted forms of methyltrithio antitumor agents
FI102355B (fi) 1988-02-11 1998-11-30 Squibb Bristol Myers Co Menetelmä yhdistävän välikappaleen omaavien antrasykliini-immunokonjug aattien valmistamiseksi
US5157049A (en) 1988-03-07 1992-10-20 The United States Of America As Represented By The Department Of Health & Human Services Method of treating cancers sensitive to treatment with water soluble derivatives of taxol
US4942184A (en) 1988-03-07 1990-07-17 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Water soluble, antineoplastic derivatives of taxol
AU631802B2 (en) 1988-06-14 1992-12-10 Cetus Oncology Corporation Coupling agents and sterically hindered disulfide linked conjugates prepared therefrom
US5076973A (en) 1988-10-24 1991-12-31 Arizona Board Of Regents Synthesis of dolastatin 3
KR0184860B1 (ko) 1988-11-11 1999-04-01 메디칼 리써어치 카운실 단일영역 리간드와 이를 포함하는 수용체 및 이들의 제조방법과 이용(법)
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US4978744A (en) 1989-01-27 1990-12-18 Arizona Board Of Regents Synthesis of dolastatin 10
US4960790A (en) 1989-03-09 1990-10-02 University Of Kansas Derivatives of taxol, pharmaceutical compositions thereof and methods for the preparation thereof
CA2016841C (en) 1989-05-16 1999-09-21 William D. Huse A method for producing polymers having a preselected activity
US4879278A (en) 1989-05-16 1989-11-07 Arizona Board Of Regents Isolation and structural elucidation of the cytostatic linear depsipeptide dolastatin 15
CA2016842A1 (en) 1989-05-16 1990-11-16 Richard A. Lerner Method for tapping the immunological repertoire
CA2057923A1 (en) 1989-05-16 1990-11-17 William D. Huse Co-expression of heteromeric receptors
US4986988A (en) 1989-05-18 1991-01-22 Arizona Board Of Regents Isolation and structural elucidation of the cytostatic linear depsipeptides dolastatin 13 and dehydrodolastatin 13
US5413923A (en) 1989-07-25 1995-05-09 Cell Genesys, Inc. Homologous recombination for universal donor cells and chimeric mammalian hosts
AU6430190A (en) 1989-10-10 1991-05-16 Pitman-Moore, Inc. Sustained release composition for macromolecular proteins
US5208020A (en) 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
CA2071867A1 (en) 1989-11-06 1991-05-07 Edith Mathiowitz Method for producing protein microspheres
US5138036A (en) 1989-11-13 1992-08-11 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Isolation and structural elucidation of the cytostatic cyclodepsipeptide dolastatin 14
GB8928874D0 (en) 1989-12-21 1990-02-28 Celltech Ltd Humanised antibodies
ES2284161T3 (es) 1990-01-12 2007-11-01 Amgen Fremont Inc. Generacion de anticuerpos xenogenicos.
US5124471A (en) 1990-03-26 1992-06-23 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Bifunctional dtpa-type ligand
US5407683A (en) 1990-06-01 1995-04-18 Research Corporation Technologies, Inc. Pharmaceutical solutions and emulsions containing taxol
GB9015198D0 (en) 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
WO1992003461A1 (en) 1990-08-24 1992-03-05 Ixsys, Inc. Methods of synthesizing oligonucleotides with random codons
US5278324A (en) 1990-08-28 1994-01-11 Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. Water soluble derivatives of taxol
US5633425A (en) 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5814318A (en) 1990-08-29 1998-09-29 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5661016A (en) 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5625126A (en) 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
ATE300615T1 (de) 1990-08-29 2005-08-15 Genpharm Int Transgene mäuse fähig zur produktion heterologer antikörper
NZ241119A (en) 1990-12-20 1993-06-25 Ixsys Inc Manipulating nucleic acid to optimize the binding characteristics of the encoded binding protein
US5399363A (en) 1991-01-25 1995-03-21 Eastman Kodak Company Surface modified anticancer nanoparticles
EP0583356B1 (en) 1991-05-01 2002-07-31 Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine A method for treating infectious respiratory diseases
DE69233482T2 (de) 1991-05-17 2006-01-12 Merck & Co., Inc. Verfahren zur Verminderung der Immunogenität der variablen Antikörperdomänen
US6287792B1 (en) 1991-06-17 2001-09-11 The Regents Of The University Of California Drug delivery of antisense oligonucleotides and peptides to tissues in vivo and to cells using avidin-biotin technology
FR2678833B1 (fr) 1991-07-08 1995-04-07 Rhone Poulenc Rorer Sa Nouvelles compositions pharmaceutiques a base de derives de la classe des taxanes.
IE922437A1 (en) 1991-07-25 1993-01-27 Idec Pharma Corp Recombinant antibodies for human therapy
JP3540315B2 (ja) 1991-09-23 2004-07-07 メディカル リサーチ カウンシル キメラ抗体の製造−組合せアプローチ
US5565332A (en) 1991-09-23 1996-10-15 Medical Research Council Production of chimeric antibodies - a combinatorial approach
WO1993011236A1 (en) 1991-12-02 1993-06-10 Medical Research Council Production of anti-self antibodies from antibody segment repertoires and displayed on phage
GB9126094D0 (en) 1991-12-09 1992-02-12 Immune Systems Ltd In vitro antibody production
CA2507749C (en) 1991-12-13 2010-08-24 Xoma Corporation Methods and materials for preparation of modified antibody variable domains and therapeutic uses thereof
US5622929A (en) 1992-01-23 1997-04-22 Bristol-Myers Squibb Company Thioether conjugates
GB9201755D0 (en) 1992-01-28 1992-03-11 British Bio Technology Compounds
US5714350A (en) 1992-03-09 1998-02-03 Protein Design Labs, Inc. Increasing antibody affinity by altering glycosylation in the immunoglobulin variable region
US5912015A (en) 1992-03-12 1999-06-15 Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. Modulated release from biocompatible polymers
CA2132711C (en) 1992-03-23 2005-02-08 Aquilar Rahman Liposome encapsulated paclitaxel and a method of using the same
ZA932522B (en) 1992-04-10 1993-12-20 Res Dev Foundation Immunotoxins directed against c-erbB-2(HER/neu) related surface antigens
GB9213077D0 (en) 1992-06-19 1992-08-05 Erba Carlo Spa Polymerbound taxol derivatives
CA2086874E (en) 1992-08-03 2000-01-04 Renzo Mauro Canetta Methods for administration of taxol
US5639641A (en) 1992-09-09 1997-06-17 Immunogen Inc. Resurfacing of rodent antibodies
FR2696458B1 (fr) 1992-10-05 1994-11-10 Rhone Poulenc Rorer Sa Procédé de préparation de dérivés du taxane.
FR2697752B1 (fr) 1992-11-10 1995-04-14 Rhone Poulenc Rorer Sa Compositions antitumorales contenant des dérivés du taxane.
FR2698543B1 (fr) 1992-12-02 1994-12-30 Rhone Poulenc Rorer Sa Nouvelles compositions à base de taxoides.
US5635483A (en) 1992-12-03 1997-06-03 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Tumor inhibiting tetrapeptide bearing modified phenethyl amides
US6034065A (en) 1992-12-03 2000-03-07 Arizona Board Of Regents Elucidation and synthesis of antineoplastic tetrapeptide phenethylamides of dolastatin 10
US5380751A (en) 1992-12-04 1995-01-10 Bristol-Myers Squibb Company 6,7-modified paclitaxels
US5410024A (en) 1993-01-21 1995-04-25 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Human cancer inhibitory pentapeptide amides
US5780588A (en) 1993-01-26 1998-07-14 Arizona Board Of Regents Elucidation and synthesis of selected pentapeptides
US5750106A (en) 1993-01-28 1998-05-12 Novartis Ag Human monoclonal antibodies to cytomegalovirus
WO1994016729A1 (en) 1993-01-28 1994-08-04 Neorx Corporation Targeted nitric oxide pathway or nitric oxide synthase modulation
US5934272A (en) 1993-01-29 1999-08-10 Aradigm Corporation Device and method of creating aerosolized mist of respiratory drug
WO1994018219A1 (en) 1993-02-02 1994-08-18 The Scripps Research Institute Methods for producing antibody libraries using universal or randomized immunoglobulin light chains
US5433364A (en) 1993-02-19 1995-07-18 Dynetics Engineering Corporation Card package production system with burster and carrier verification apparatus
US6214345B1 (en) 1993-05-14 2001-04-10 Bristol-Myers Squibb Co. Lysosomal enzyme-cleavable antitumor drug conjugates
US5415869A (en) 1993-11-12 1995-05-16 The Research Foundation Of State University Of New York Taxol formulation
WO1995015770A1 (en) 1993-12-09 1995-06-15 Neorx Corporation Pretargeting methods and compounds
US5773001A (en) 1994-06-03 1998-06-30 American Cyanamid Company Conjugates of methyltrithio antitumor agents and intermediates for their synthesis
IT1275043B (it) 1994-07-21 1997-07-29 Agerbioss Snc Di Zanin R & C Metodo e relativo prodotto per la difesa delle piante dai parassiti vegetali
US5521284A (en) 1994-08-01 1996-05-28 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Human cancer inhibitory pentapeptide amides and esters
US5530097A (en) 1994-08-01 1996-06-25 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Human cancer inhibitory peptide amides
US5504191A (en) 1994-08-01 1996-04-02 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Human cancer inhibitory pentapeptide methyl esters
US5554725A (en) 1994-09-14 1996-09-10 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Synthesis of dolastatin 15
US5599902A (en) 1994-11-10 1997-02-04 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Cancer inhibitory peptides
US5663149A (en) 1994-12-13 1997-09-02 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Human cancer inhibitory pentapeptide heterocyclic and halophenyl amides
DE69630514D1 (de) 1995-01-05 2003-12-04 Univ Michigan Oberflächen-modifizierte nanopartikel und verfahren für ihre herstellung und verwendung
US5840929A (en) 1995-04-14 1998-11-24 Bristol-Myers Squibb Company C4 methoxy ether derivatives of paclitaxel
US6019968A (en) 1995-04-14 2000-02-01 Inhale Therapeutic Systems, Inc. Dispersible antibody compositions and methods for their preparation and use
ATE390933T1 (de) 1995-04-27 2008-04-15 Amgen Fremont Inc Aus immunisierten xenomäusen stammende menschliche antikörper gegen il-8
US5705503A (en) 1995-05-25 1998-01-06 Goodall; Brian Leslie Addition polymers of polycycloolefins containing functional substituents
US5714586A (en) 1995-06-07 1998-02-03 American Cyanamid Company Methods for the preparation of monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates
US5712374A (en) 1995-06-07 1998-01-27 American Cyanamid Company Method for the preparation of substantiallly monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates
US6127977A (en) 1996-11-08 2000-10-03 Cohen; Nathan Microstrip patch antenna with fractal structure
WO1997007788A2 (en) 1995-08-31 1997-03-06 Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. Composition for sustained release of an agent
US6090382A (en) 1996-02-09 2000-07-18 Basf Aktiengesellschaft Human antibodies that bind human TNFα
US6331431B1 (en) 1995-11-28 2001-12-18 Ixsys, Inc. Vacuum device and method for isolating periplasmic fraction from cells
DE69626849T2 (de) 1995-12-22 2003-12-24 Bristol-Myers Squibb Co., Princeton Verzweigte hydrazongruppen enthaltende kuppler
PL193499B1 (pl) 1996-02-09 2007-02-28 Abbott Biotech Ltd Izolowane ludzkie przeciwciało, rekombinowane ludzkie przeciwciało, kompozycja farmaceutyczna, sposób hamowania aktywności ludzkiego TNFalfa in vitro, zastosowanie tych izolowanych ludzkich przeciwciał i izolowany kwas nukleinowy
US6440733B1 (en) 1996-02-15 2002-08-27 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Monoclonal antibodies recognizing antigens on the surface of endothelial cells of tumor vessel
IT1282692B1 (it) 1996-02-27 1998-03-31 San Raffaele Centro Fond Citochine modificate per l'uso in terapia
US5985320A (en) 1996-03-04 1999-11-16 The Penn State Research Foundation Materials and methods for enhancing cellular internalization
US5714352A (en) 1996-03-20 1998-02-03 Xenotech Incorporated Directed switch-mediated DNA recombination
US5855913A (en) 1997-01-16 1999-01-05 Massachusetts Instite Of Technology Particles incorporating surfactants for pulmonary drug delivery
US5985309A (en) 1996-05-24 1999-11-16 Massachusetts Institute Of Technology Preparation of particles for inhalation
US5874064A (en) 1996-05-24 1999-02-23 Massachusetts Institute Of Technology Aerodynamically light particles for pulmonary drug delivery
AU3740997A (en) 1996-08-26 1998-03-19 Bristol-Myers Squibb Company Sulfenamide taxane derivatives
US5773464A (en) 1996-09-30 1998-06-30 Bristol-Myers Squibb Company C-10 epoxy taxanes
US5916771A (en) 1996-10-11 1999-06-29 Abgenix, Inc. Production of a multimeric protein by cell fusion method
AU4966597A (en) 1996-11-19 1998-06-10 Daiichi Pharmaceutical Co., Ltd. Taxol derivatives
KR100643058B1 (ko) 1996-12-03 2006-11-13 아브게닉스, 인크. 복수의 Ｖн 및 Ｖк 영역을 함유하는 인간 면역글로불린 유전자좌를 갖는 트랜스제닉 포유동물 및 이로부터 생성된 항체
US5977386A (en) 1996-12-24 1999-11-02 Bristol-Myers Squibb Company 6-thio-substituted paclitaxels
ES2236832T3 (es) 1997-01-16 2005-07-16 Massachusetts Institute Of Technology Preparacion de particulas para inhalacion.
EP0981376A1 (en) 1997-02-13 2000-03-01 Bone Care International, Inc. Targeted therapeutic delivery of vitamin d compounds
CA2282504A1 (en) 1997-02-25 1998-08-27 Jun-Ping Xu Isolation and structural elucidation of the cytostatic linear and cyclo-depsipeptides dolastatin 16, dolastatin 17, and dolastatin 18
EP0970126B1 (en) 1997-04-14 2001-04-18 Micromet AG Novel method for the production of antihuman antigen receptors and uses thereof
US6235883B1 (en) 1997-05-05 2001-05-22 Abgenix, Inc. Human monoclonal antibodies to epidermal growth factor receptor
EP1007967A2 (en) 1997-08-04 2000-06-14 Ixsys, Incorporated Methods for identifying ligand specific binding molecules
US7288665B1 (en) 1997-08-18 2007-10-30 Florida State University Process for selective derivatization of taxanes
JPH1192468A (ja) 1997-09-17 1999-04-06 Yakult Honsha Co Ltd 新規なタキサン誘導体
US5989463A (en) 1997-09-24 1999-11-23 Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. Methods for fabricating polymer-based controlled release devices
WO1999018113A1 (fr) 1997-10-08 1999-04-15 Bio Research Corporation Of Yokohama Derives taxoides et leur procede de production
US6555367B1 (en) 1997-10-10 2003-04-29 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Complex of biotinylated viral vector and ligand for targeted gene delivery
SE512663C2 (sv) 1997-10-23 2000-04-17 Biogram Ab Inkapslingsförfarande för aktiv substans i en bionedbrytbar polymer
DK2180007T4 (da) 1998-04-20 2017-11-27 Roche Glycart Ag Glycosyleringsteknik for antistoffer til forbedring af antistofafhængig cellecytotoxicitet
JP2002518432A (ja) 1998-06-24 2002-06-25 アドバンスト インハレーション リサーチ，インコーポレイテッド 吸入器から放出される大多孔性粒子
AU2472400A (en) 1998-10-20 2000-05-08 City Of Hope CD20-specific redirected T cells and their use in cellular immunotherapy of CD20+ malignancies
US6660843B1 (en) 1998-10-23 2003-12-09 Amgen Inc. Modified peptides as therapeutic agents
EP2270148A3 (en) 1999-04-09 2011-06-08 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Method for controlling the activity of immunologically functional molecule
CN1269087C (zh) 1999-07-31 2006-08-09 朴奎珍 使用数字音频和字幕数据的学习方法和装置
US6323315B1 (en) 1999-09-10 2001-11-27 Basf Aktiengesellschaft Dolastatin peptides
AU2001271273A1 (en) 2000-05-24 2001-12-03 Ludwig Institute For Cancer Research Multicomponent conjugates which bind to target molecules and stimulate cell lysis
US7449308B2 (en) 2000-06-28 2008-11-11 Glycofi, Inc. Combinatorial DNA library for producing modified N-glycans in lower eukaryotes
MXPA03000105A (es) 2000-06-28 2004-09-13 Glycofi Inc Metodo para producir glicoproteinas modificadas.
EP1243276A1 (en) 2001-03-23 2002-09-25 Franciscus Marinus Hendrikus De Groot Elongated and multiple spacers containing activatible prodrugs
US6884869B2 (en) 2001-04-30 2005-04-26 Seattle Genetics, Inc. Pentapeptide compounds and uses related thereto
US20030083263A1 (en) 2001-04-30 2003-05-01 Svetlana Doronina Pentapeptide compounds and uses related thereto
US20100056762A1 (en) 2001-05-11 2010-03-04 Old Lloyd J Specific binding proteins and uses thereof
US6441163B1 (en) 2001-05-31 2002-08-27 Immunogen, Inc. Methods for preparation of cytotoxic conjugates of maytansinoids and cell binding agents
US20040192898A1 (en) 2001-08-17 2004-09-30 Jia Audrey Yunhua Anti-abeta antibodies
HUP0600342A3 (en) 2001-10-25 2011-03-28 Genentech Inc Glycoprotein compositions
US20040028687A1 (en) 2002-01-15 2004-02-12 Waelti Ernst Rudolf Methods and compositions for the targeted delivery of therapeutic substances to specific cells and tissues
US6867007B2 (en) 2002-05-01 2005-03-15 Trellis Bioscience, Inc. Binary or polynary targeting and uses thereof
US7527969B2 (en) 2002-06-19 2009-05-05 Raven Biotechnologies, Inc. RAAG10 cell surface target and a family of antibodies recognizing that target
SI1545613T1 (sl) 2002-07-31 2011-11-30 Seattle Genetics Inc Avristatinski konjugati in njihova uporaba za zdravljenje raka avtoimunske bolezni ali infekcijskebolezni
CA2495795C (en) 2002-08-16 2011-12-13 Immunogen, Inc. Cross-linkers with high reactivity and solubility and their use in the preparation of conjugates for targeted delivery of small molecule drugs
WO2004019993A1 (en) 2002-08-30 2004-03-11 Ramot At Tel Aviv University Ltd. Self-immolative dendrimers releasing many active moieties upon a single activating event
AU2003282624A1 (en) 2002-11-14 2004-06-03 Syntarga B.V. Prodrugs built as multiple self-elimination-release spacers
US7388079B2 (en) 2002-11-27 2008-06-17 The Regents Of The University Of California Delivery of pharmaceutical agents via the human insulin receptor
AU2004213053C1 (en) 2003-02-20 2009-07-16 Seagen Inc. Anti-CD70 antibody-drug conjugates and their use for the treatment of cancer and immune disorders
US20060104968A1 (en) 2003-03-05 2006-05-18 Halozyme, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminogly ycanases
ES2335005T5 (es) 2003-03-05 2013-04-17 Halozyme, Inc. Glicoproteína hialuronidasa soluble (shasegp), proceso para prepararla, usos y composiciones farmacéuticas que la comprenden
EP1660534A2 (en) 2003-08-22 2006-05-31 MedImmune, Inc. Humanization of antibodies
EP2478912B1 (en) 2003-11-06 2016-08-31 Seattle Genetics, Inc. Auristatin conjugates with anti-HER2 or anti-CD22 antibodies and their use in therapy
ATE536367T1 (de) 2004-02-20 2011-12-15 Univ Pennsylvania Bindende peptidomimetika und deren verwendungen
EP1718667B1 (en) 2004-02-23 2013-01-09 Genentech, Inc. Heterocyclic self-immolative linkers and conjugates
US7741319B2 (en) 2004-03-01 2010-06-22 Spirogen Limited 11-hydroxy-5h-pyrrolo[2,1-c][1,4] benzodiazepin-5-one derivatives as key intermediates for the preparation of c2 substituted pyrrolobenzodiazepines
US20050226882A1 (en) 2004-04-08 2005-10-13 Awdalla Essam T Method and multicomponent conjugates for treating cancer
AU2005233387B2 (en) 2004-04-15 2011-05-26 Glycofi, Inc. Production of galactosylated glycoproteins in lower eukaryotes
US7691962B2 (en) 2004-05-19 2010-04-06 Medarex, Inc. Chemical linkers and conjugates thereof
AU2005249490B2 (en) 2004-06-01 2010-07-29 Genentech, Inc. Antibody drug conjugates and methods
WO2006042146A2 (en) 2004-10-07 2006-04-20 Emory University Multifunctional nanoparticles conjugates and their use
US7632497B2 (en) 2004-11-10 2009-12-15 Macrogenics, Inc. Engineering Fc Antibody regions to confer effector function
EP1695717A1 (en) 2005-02-23 2006-08-30 Ludwig-Maximilians-Universität Transport of nano-and macromolecular structures into cytoplasm and nucleus of cells
US7964089B2 (en) 2005-04-15 2011-06-21 Agamatrix, Inc. Analyte determination method and analyte meter
PT1879901E (pt) 2005-04-21 2010-03-29 Spirogen Ltd Pirrolobenzodiazepinas
EP4026840A1 (en) 2005-07-18 2022-07-13 Seagen Inc. Beta-glucuronide-linker drug conjugates
US7612181B2 (en) 2005-08-19 2009-11-03 Abbott Laboratories Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof
EP1800695A1 (en) 2005-12-21 2007-06-27 Fraunhofer-Gesellschaft zur Förderung der angewandten Forschung e.V. Immuno-RNA-constructs
US8940784B2 (en) 2006-02-02 2015-01-27 Syntarga B.V. Water-soluble CC-1065 analogs and their conjugates
EP2041175A4 (en) 2006-06-23 2011-03-16 Augmenta Biolog Llc TARGETED IMMUNOJUGATE
GB0615662D0 (en) 2006-08-07 2006-09-13 Affitech As Antibody
WO2008066691A2 (en) 2006-11-08 2008-06-05 Macrogenics West, Inc. Tes7 and antibodies that bind thereto
US7598028B2 (en) 2006-11-28 2009-10-06 The Regents Of The University Of Michigan Compositions and methods for detecting and treating prostate disorders
TWI422594B (zh) 2007-02-02 2014-01-11 Baylor Res Inst 經由樹狀細胞去唾液酸糖蛋白受體（ｄｃ-ａｓｇｐｒ）接合抗原呈現細胞之藥劑
US8057798B2 (en) 2007-02-02 2011-11-15 Baylor Research Institute Vaccines based on targeting antigen to DCIR expressed on antigen-presenting cells
PL2716301T3 (pl) 2007-02-16 2017-10-31 Merrimack Pharmaceuticals Inc Przeciwciała przeciw ERBB3 i ich zastosowania
BRPI0807563A2 (pt) 2007-02-23 2014-07-01 Baylor Res Inst Ativação de células apresentando antígeno humano através de receptor-1 (lox-1) de ldl oxidado semelhante a lectina de célula dendrítica
CN102586186A (zh) 2007-02-23 2012-07-18 贝勒研究院 通过clec-6激活人抗原呈递细胞
PT2856876T (pt) 2007-03-30 2018-03-28 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Expressão constitutiva de ligantes co-estimulatórios em linfócitos t adotivamente transferidos
JP2010526528A (ja) 2007-05-03 2010-08-05 メディツィニーチェ ウニベルシタット インスブルック 補体因子ｈ由来ショートコンセンサスリピート−抗体構築物
JP5557746B2 (ja) 2007-11-28 2014-07-23 メルサナ セラピューティックス，インク． 生体適合性生分解性フマギリンアナログ複合体
JP5470817B2 (ja) 2008-03-10 2014-04-16 日産自動車株式会社 電池用電極およびこれを用いた電池、並びにその製造方法
AU2009241589B2 (en) 2008-04-29 2013-10-10 Abbvie Inc. Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
MX347442B (es) 2008-04-30 2017-04-25 Immunogen Inc Entrelazadores y sus usos.
CN102083461B (zh) 2008-04-30 2014-09-17 伊缪诺金公司 有效的偶联物和亲水性连接体
US20090285757A1 (en) 2008-05-16 2009-11-19 Northeastern University Methods of targeting cells for diagnosis and therapy
JP2012501180A (ja) 2008-08-26 2012-01-19 シティ・オブ・ホープ Ｔ細胞の抗腫瘍エフェクター機能増進のための方法および組成物
US20100152725A1 (en) 2008-12-12 2010-06-17 Angiodynamics, Inc. Method and system for tissue treatment utilizing irreversible electroporation and thermal track coagulation
BRPI0918360A8 (pt) 2008-12-19 2017-12-05 Genentech Inc Composto, composição farmacêutica e usos de um composto
EP2403524A4 (en) 2009-03-06 2012-09-26 Agensys Inc CONJUGATES ANTIBODY-DRUG (ADC) BINDING PROTEINS 24P4C12
CN102378766A (zh) 2009-03-23 2012-03-14 夸克医药公司 治疗癌症和纤维化疾病的化合物组合物和方法
CA2762877A1 (en) 2009-05-28 2010-12-02 Mersana Therapeutics, Inc. Polyal drug conjugates comprising variable rate-releasing linkers
DE102009026075A1 (de) 2009-06-30 2011-01-05 Röhm Gmbh Bohrvorrichtung
US20110076232A1 (en) 2009-09-29 2011-03-31 Ludwig Institute For Cancer Research Specific binding proteins and uses thereof
WO2011057216A1 (en) 2009-11-06 2011-05-12 The Pennsylvania State Research Foundation Bioconjugation of calcium phosphosilicate nanoparticles for selective targeting of cells in vivo
GB0919751D0 (en) 2009-11-11 2009-12-30 King S College Hospital Nhs Fo Conjugate molecule
AU2010324757C1 (en) * 2009-11-24 2018-05-17 Medimmune Limited Targeted binding agents against B7-H1
SG183847A1 (en) * 2010-03-04 2012-10-30 Macrogenics Inc Antibodies reactive with b7-h3, immunologically active fragments thereof and uses thereof
PH12012501751A1 (en) * 2010-03-04 2012-11-12 Macrogenics Inc Antibodies reactive with b7-h3, immunologically active fragments thereof and uses thereof
US20110217363A1 (en) 2010-03-05 2011-09-08 Bionanox Two-step targeted tumor therapy with prodrug encapsulated in nanocarrier
WO2011120053A1 (en) 2010-03-26 2011-09-29 Mersana Therapeutics, Inc. Modified polymers for delivery of polynucleotides, method of manufacture, and methods of use thereof
JP5870400B2 (ja) 2010-04-15 2016-03-01 シアトル ジェネティクス，インコーポレーテッド 標的化ピロロベンゾジアゼピンコンジュゲート
MA34277B1 (fr) 2010-04-15 2013-06-01 Spirogen Developments Sarl Pyrrolobenzodiazépines et conjugués de celles-ci
WO2012027494A1 (en) 2010-08-24 2012-03-01 Regents Of The University Of Minnesota Bispecific targeting reagents
PH12013501201A1 (en) 2010-12-09 2013-07-29 Univ Pennsylvania Use of chimeric antigen receptor-modified t cells to treat cancer
DE102010064282B4 (de) 2010-12-28 2012-09-06 GLOBALFOUNDRIES Dresden Module One Ltd. Liability Company & Co. KG Transistor mit eingebetteten sigma-förmigen sequenziell hergestellten Halbleiterlegierungen
CN103687945B (zh) * 2011-04-25 2016-10-12 第一三共株式会社 抗-b7-h3抗体
TWI571466B (zh) 2011-10-14 2017-02-21 艾伯維有限公司 用於治療癌症及免疫與自體免疫疾病之細胞凋亡誘發劑
JP2015501639A (ja) 2011-11-23 2015-01-19 アイジェニカ バイオセラピューティクス インコーポレイテッド 抗ｃｄ９８抗体およびその使用方法
CA2857398A1 (en) 2011-12-05 2013-06-13 Igenica Biotherapeutics, Inc. Antibody-drug conjugates and related compounds, compositions, and methods
EP2794582A1 (en) 2011-12-23 2014-10-29 Mersana Therapeutics, Inc. Pharmaceutical formulations for fumagillin derivative-phf conjugates
TW201350478A (zh) 2012-05-11 2013-12-16 Abbvie Inc Ｎａｍｐｔ抑制劑
CA2869777C (en) 2012-05-15 2021-11-16 Seattle Genetics, Inc. Self-stabilizing linker conjugates
US9504756B2 (en) 2012-05-15 2016-11-29 Seattle Genetics, Inc. Self-stabilizing linker conjugates
WO2014008375A1 (en) 2012-07-05 2014-01-09 Mersana Therapeutics, Inc. Terminally modified polymers and conjugates thereof
EP3632471A1 (en) * 2012-10-11 2020-04-08 Daiichi Sankyo Company, Limited Antibody-drug conjugate
EP2928504B1 (en) 2012-12-10 2019-02-20 Mersana Therapeutics, Inc. Protein-polymer-drug conjugates
EP2928503B1 (en) 2012-12-10 2019-02-20 Mersana Therapeutics, Inc. Conjugates of auristatin compounds
US9872918B2 (en) 2012-12-12 2018-01-23 Mersana Therapeutics, Inc. Hydroxyl-polymer-drug-protein conjugates
WO2014093786A1 (en) 2012-12-14 2014-06-19 Abbvie, Inc. Methods for increasing the efficiency of hybridoma generation
KR20150119848A (ko) 2012-12-21 2015-10-26 바이오얼라이언스 씨.브이. 친수성 자기-희생 링커 및 그것의 포합체
JP6136279B2 (ja) 2013-01-15 2017-05-31 株式会社ジェイテクト 転がり軸受装置
KR102313997B1 (ko) 2013-02-20 2021-10-20 노파르티스 아게 인간화 항-EGFRvIII 키메라 항원 수용체를 사용한 암의 치료
KR20150132864A (ko) 2013-03-15 2015-11-26 애브비 인코포레이티드 항체 약물 접합체(adc) 정제
TWI503850B (zh) 2013-03-22 2015-10-11 Polytronics Technology Corp 過電流保護元件
TWI510996B (zh) 2013-10-03 2015-12-01 Acer Inc 控制觸控面板的方法以及使用該方法的可攜式電腦
RU2020124944A (ru) 2014-03-21 2020-08-27 Эббви Инк. Антитела против egfr и конъюгаты антитело-лекарственное средство
JP2017114763A (ja) 2014-03-26 2017-06-29 第一三共株式会社 抗ｃｄ９８抗体−薬物コンジュゲート
US20190209704A1 (en) 2014-10-20 2019-07-11 Igenica Biotherapeutics, Inc. Novel antibody-drug conjugates and related compounds, compositions and methods of use
CN113209306A (zh) * 2014-12-09 2021-08-06 艾伯维公司 具有细胞渗透性的bcl-xl抑制剂的抗体药物缀合物
KR20170093943A (ko) 2014-12-09 2017-08-16 애브비 인코포레이티드 낮은 세포 투과성을 갖는 bcl xl 억제 화합물 및 이를 포함하는 항체 약물 접합체
JP2018502839A (ja) 2014-12-09 2018-02-01 アッヴィ・インコーポレイテッド Ｂｃｌ−ｘＬ阻害性化合物およびこれを含む抗体薬物コンジュゲート
JP2019521106A (ja) 2016-06-08 2019-07-25 アッヴィ・インコーポレイテッド 抗ｅｇｆｒ抗体薬物コンジュゲート
AU2017279539A1 (en) * 2016-06-08 2019-01-03 Abbvie Inc. Anti-B7-H3 antibodies and antibody drug conjugates
MX2018015280A (es) 2016-06-08 2019-08-12 Abbvie Inc Conjugados de anticuerpo y farmaco anti-egfr.
MX2018015285A (es) 2016-06-08 2019-09-18 Abbvie Inc Anticuerpos anti-b7-h3 y conjugados de anticuerpo y farmaco.
AU2017277920A1 (en) 2016-06-08 2019-01-03 Abbvie Inc. Anti-CD98 antibodies and antibody drug conjugates
MX2018015284A (es) 2016-06-08 2019-09-18 Abbvie Inc Conjugados de anticuerpo anti-egfr y fármaco.
US20200147235A1 (en) 2016-06-08 2020-05-14 Abbvie Inc. Anti-cd98 antibodies and antibody drug conjugates
AU2017277914A1 (en) 2016-06-08 2019-01-03 Abbvie Inc. Anti-CD98 antibodies and antibody drug conjugates
US9816280B1 (en) 2016-11-02 2017-11-14 Matthew Reitnauer Portable floor

Also Published As

Publication number Publication date
EP3458479B1 (en) 2020-11-04
HUE053356T2 (hu) 2021-06-28
PT3458479T (pt) 2021-03-01
RU2018146948A (ru) 2020-07-14
SG11201811193TA (en) 2019-01-30
RU2018146948A3 (uk) 2021-06-17
PL3458479T4 (pl) 2021-07-26
US20210171637A1 (en) 2021-06-10
CY1123783T1 (el) 2022-05-27
JP2021006527A (ja) 2021-01-21
WO2017214335A4 (en) 2018-03-08
CL2018003520A1 (es) 2019-03-15
RS61828B1 (sr) 2021-06-30
CA3027045A1 (en) 2017-12-14
EP3835322A3 (en) 2021-10-06
BR112018075626A2 (pt) 2019-03-19
CL2019002250A1 (es) 2019-10-25
CO2018013471A2 (es) 2018-12-28
AU2017279550A1 (en) 2019-01-03
SG10201914119TA (en) 2020-02-27
EP3835322A2 (en) 2021-06-16
IL263600B2 (en) 2023-07-01
CN116284404A (zh) 2023-06-23
PL3458479T3 (pl) 2021-07-26
EP4364754A2 (en) 2024-05-08
SI3458479T1 (sl) 2021-08-31
IL263600B1 (en) 2023-03-01
ZA201900059B (en) 2022-11-30
JP6751165B2 (ja) 2020-09-02
DK3458479T3 (da) 2021-02-08
DOP2018000276A (es) 2018-12-31
HRP20210170T1 (hr) 2021-03-19
TWI762487B (zh) 2022-05-01
MX2024001190A (es) 2024-02-27
ES2861499T3 (es) 2021-10-06
EP4364754A3 (en) 2025-02-12
MX2018015271A (es) 2019-08-12
AU2024205665A1 (en) 2024-10-31
EP3458479A1 (en) 2019-03-27
CN109963870B (zh) 2023-07-28
TW201809003A (zh) 2018-03-16
PH12018502601A1 (en) 2019-09-30
UY37278A (es) 2018-01-31
CR20180603A (es) 2019-07-29
KR20190015755A (ko) 2019-02-14
LT3458479T (lt) 2021-02-25
PE20190177A1 (es) 2019-02-01
IL263600A (en) 2019-01-31
ECSP19000282A (es) 2019-01-31
WO2017214335A1 (en) 2017-12-14
RU2764651C2 (ru) 2022-01-19
KR102434626B1 (ko) 2022-08-24
TW202304996A (zh) 2023-02-01
US20170355769A1 (en) 2017-12-14
JP2019528240A (ja) 2019-10-10
US10640563B2 (en) 2020-05-05
CN109963870A (zh) 2019-07-02
IL300274A (en) 2023-04-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
UA124198C2 (uk) Кон'югат антитіла до в7-н3 та лікарського засобу
US20230135723A1 (en) Anti-cd98 antibodies and antibody drug conjugates
EP3468996B1 (en) Anti-egfr antibody drug conjugates
JP2020143062A (ja) 低細胞透過性を有するＢｃｌ−ｘＬ阻害性化合物およびこれを含む抗体薬物コンジュゲート
JP2018506509A (ja) 細胞透過性Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤との抗体薬物コンジュゲート
JP2019526529A (ja) 抗ｂ７−ｈ３抗体及び抗体薬物コンジュゲート
JP2019524651A (ja) 抗ｃｄ９８抗体及び抗体薬物コンジュゲート
NZ788873A (en) Anti-B7-H3 antibodies and antibody drug conjugates