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TWI848030B - Ｃｄ７０組合治療 - Google Patents

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尼古拉斯 勒平
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Abstract

本發明涉及組合治療，特別是用於治療髓性惡性腫瘤的組合治療。所述組合治療特別地可用於治療急性髓性白血病(acute myeloid leukemia,AML)的方法。所述組合治療包含與CD70結合的抗體或其抗原結合片段以及BCL-2抑制劑，優選維奈托克或其可藥用鹽。

Description

CD70組合治療
本發明涉及組合治療，特別是用於治療髓性惡性腫瘤(myeloid malignancy)的組合治療。所述組合治療特別地可用於治療急性髓性白血病(acute myeloid leukemia，AML)。所述組合治療包含與CD70結合的抗體或其抗原結合片段以及BCL-2抑制劑，例如維奈托克(venetoclax)或其可藥用鹽。所述組合治療還可包含另外的抗癌劑，例如用於治療AML的藥劑，例如阿紮胞苷(azacitidine)或地西他濱(decitabine)。
近年來，新的癌症治療的開發致力於涉及癌症進展的分子靶標，特別是蛋白質。涉及腫瘤生長、侵襲和轉移的分子靶標的列表在繼續擴大，並且包含由腫瘤細胞過表達的蛋白質以及與支持腫瘤生長的系統(例如脈管系統和免疫系統)相關的靶標。被設計為與這些分子靶標相互作用的治療劑或抗癌劑的數目也繼續增多。現在，大量靶向癌症藥物已被批准用於臨床應用，並且還有更多的藥物正在開發中。
由於CD70在許多類型的血液系統惡性腫瘤和實體癌上的組成型表達，因此其已被鑒定為特別感興趣的分子靶標(Junker et al.(2005)J Urol.173：2150-3；Sloan et al.(2004)Am J Pathol.164：315-23；Held-Feindt and Mentlein(2002)Int J Cancer 98：352-6；Hishima et al.(2000)Am J Surg Pathol.24：742-6；Lens et al.(1999)Br J Haematol.106：491-503；Boursalian et al.(2009)Adv Exp Med Biol.647：108-119；Wajant H.(2016)Expert Opin Ther Targets 20(8)：959-973)。CD70是屬於腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor，TNF)超家族的II型跨膜糖蛋白，其通過與其同源細胞表面受體CD27結合來介導其作用。CD70和CD27二者均由免疫系統的多種細胞類型表達，並且CD70-CD27信號傳導途徑已涉及免疫應答的數個不同方面的調節。這反映 在以下事實中：CD70過表達發生在多種自身免疫病中，包括類風濕關節炎和銀屑病關節炎和狼瘡(Boursalian et al.(2009)Adv Exp Med Biol.647：108-119；Han et al.(2005)Lupus 14(8)：598-606；Lee et al.(2007)J Immunol.179(4)：2609-2615；Oelke et al.(2004)Arthritis Rheum.50(6)：1850-1860)。
CD70的表達與包括B細胞淋巴瘤、腎細胞癌和乳腺癌在內的數種癌症的不良預後相關(Bertrand et al.(2013)Genes Chromosomes Cancer 52(8)：764-774；Jilaveanu et al.(2012)Hum Pathol.43(9)：1394-1399；Petrau et al.(2014)J Cancer 5(9)：761-764)。在高百分比的病例中，在轉移組織上也已發現CD70表達，表明該分子在癌症進展中的關鍵作用(Jacobs et al.(2015)Oncotarget 6(15)：13462-13475)。CD70及其受體CD27在造血系統譜系的腫瘤細胞上的組成型表達與CD70-CD27信號傳導軸在直接調節腫瘤細胞的增殖和存活中的作用相關(Goto et al.(2012)Leuk Lymphoma 53(8)：1494-1500；Lens et al.(1999)Br J Haematol.106(2)；491-503；Nilsson et al.(2005)Exp Hematol.33(12)：1500-1507；van Doorn et al(2004)Cancer Res.64(16)：5578-5586)。
在未共表達CD27的腫瘤(特別是實體瘤)上的上調的CD70表達也以多種方式促進腫瘤微環境中的免疫抑制。例如，已示出在小鼠中，在調節性T細胞上與CD27結合的CD70提高Treg的頻率，降低腫瘤特異性T細胞應答並促進腫瘤生長(Claus et al.(2012)Cancer Res.72(14)：3664-3676)。如在腎細胞癌、膠質瘤和膠質母細胞瘤細胞中所示出的，CD70-CD27信號傳導還可通過腫瘤誘導的T淋巴細胞的凋亡來抑制免疫應答(Chahlavi et al.(2005)Cancer Res.65(12)：5428-5438；Diegmann et al.(2006)Neoplasia 8(11)：933-938)；Wischusen et al.(2002)Cancer Res 62(9)：2592-2599)。最後，CD70的表達也與T細胞衰竭(T cell exhaustion)相關，從而使淋巴細胞採取更分化的表型並且無法殺傷腫瘤細胞(Wang et al.(2012)Cancer Res 72(23)：6119-6129；Yang et al.(2014)Leukemia 28(9)：1872-1884)。
鑒於CD70在癌症發生中的重要性，CD70是抗癌治療的引人注目靶標，並且靶向這種細胞表面蛋白的抗體正在臨床開發中(Jacob et al.(2015)Pharmacol Ther.155：1-10；Silence et al.(2014)mAbs 6(2)：523-532)。
本發明涉及包含與CD70結合的抗體或其抗原結合片段的組合治療。如上所述，涉及腫瘤生長的蛋白質的列表在繼續擴大，並且靶向這些蛋白質中的兩種或更多種的組合治療作為抗癌治療變得越來越引人注目。在本發明的組合治療中，與CD70結合的抗體或其抗原結合片段與BCL-2抑制劑組合，例如與維奈托克或其可藥用鹽組合。BCL-2在癌細胞中的過表達賦予針對凋亡的抗性，並且因此對該蛋白質的抑制可促進腫瘤細胞死亡。如本文中其他地方所說明的，維奈托克是BCL-2蛋白的高效的選擇性小分子抑制劑的一個實例。如本文中所報導的，與CD70結合的抗體或其抗原結合片段與BCL-2抑制劑(例如維奈托克或其可藥用鹽)的組合提供了用於治療癌症(特別是髓性惡性腫瘤，例如急性髓性白血病(AML))的有效治療。
在第一方面中，本發明提供了包含以下的組合：(i)與CD70結合的抗體或其抗原結合片段；以及(ii)BCL-2抑制劑。在某些優選的實施方案中，BCL-2抑制劑是如下所示化合物(I)或其可藥用鹽。
Figure 108146057-A0202-12-0003-1
化合物(I)在本文中也稱為維奈托克。
在某些實施方案中，與CD70結合的抗體或抗原結合片段選自：(i)包含含有以下重鏈CDR(HCDR3、HCDR2和HCDR1)和輕鏈CDR(LCDR3、LCDR2和LCDR1)的重鏈可變結構域(VH，variable heavy chain domain)和輕鏈可變結構域(VL，variable light chain domain)的抗體或抗原結合片段：包含SEQ ID NO：3或由其組成的HCDR3；包含SEQ ID NO：2或由其組成的HCDR2；包含SEQ ID NO：1或由其組成的HCDR1；包含SEQ ID NO：7或由其組成的LCDR3；包含SEQ ID NO：6或由其組成的LCDR2；以及包含SEQ ID NO：5或由其組成的LCDR1；(ii)包含VH結構域和VL結構域的抗體或抗原結合片段，所述VH結構域包含與SEQ ID NO：4具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%同一性的氨基酸序列，所述VL結構域包含與SEQ ID NO：8具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%同一性的氨基酸序列；或(iii)ARGX-110。在某些實施方案中，抗體是IgG，優選IgG1。
所述組合的CD70抗體或抗原結合片段可具有一種或更多種效應功能。在某些實施方案中，抗體或抗原結合片段具有ADCC活性；和/或包含去岩藻糖基化的(defucosylated)抗體結構域；和/或具有CDC活性；和/或具有ADCP活性。在一些優選的實施方案中，CD70抗體是ARGX-110。
在某些實施方案中，所述組合的CD70抗原結合片段獨立地選自：抗體輕鏈可變結構域(VL)；抗體重鏈可變結構域(VH)；單鏈抗體(scFv)；F(ab’)2片段；Fab片段；Fd片段；Fv片段；單臂(單價)抗體；通過這樣的抗原結合片段的組合、組裝或綴合形成的雙鏈抗體(diabody)、三鏈抗體(triabody)、四鏈抗體(tetrabody)或任何抗原結合分子。
在某些實施方案中，CD70抗體或其抗原結合片段和BCL-2抑制劑配製成分開的組合物(separate composition)。在某些實施方案中，CD70抗體或其抗原結合片段和維奈托克或其可藥用鹽配製成分開的組合物。
本發明的組合可包含一種或更多種另外的治療劑，例如至少一種另外的抗癌劑，優選用於治療髓性惡性腫瘤的藥劑。在某些實施方案中，另外的抗癌劑是用於治療急性髓性白血病(AML)的藥劑。在一些優選的實施方案中，所述組合包含低甲基化劑(hypomethylating agent)，優選阿紮 胞苷或地西他濱。
在另一方面中，本發明提供了根據本發明的第一方面的組合，其用於治療。特別地，本發明提供了根據本發明的第一方面的組合，其用於在人物件中治療惡性腫瘤，優選髓性惡性腫瘤。本發明還提供了用於在人物件中治療惡性腫瘤(優選髓性惡性腫瘤)的方法，所述方法包括向所述物件施用有效量的根據本發明的第一方面的任一種組合。
本發明還提供了與CD70結合的抗體或其抗原結合片段，其用於在人物件中治療惡性腫瘤，優選髓性惡性腫瘤，其中所述抗體分子與BCL-2抑制劑(優選與化合物(I)或其可藥用鹽)組合施用。本發明還提供了BCL-2抑制劑，優選化合物(I)或其可藥用鹽，其用於在人物件中治療髓性惡性腫瘤，其中BCL-2抑制劑(優選化合物(I)或其可藥用鹽)和與CD70結合的抗體或其抗原結合片段組合施用。
本發明的組合是特別有利的，因為它們表現出協同效力。因此，優選地，在本發明所有方面的一些實施方案中，各自選擇施用和/或在組合中提供CD70抗體或其抗原結合片段的劑量，以及施用和/或在組合中提供BCL-2抑制劑的劑量，使得組合提供協同治療。
在本發明的組合的某些優選實施方案中，CD70抗體或其抗原結合片段和BCL-2抑制劑以當與選自NOMO-1、MOLM-13、NB4和MV4-11的AML細胞系一起培養時足以提供協同細胞殺傷的量各自存在於組合中。
關於待使用本發明的組合治療的惡性腫瘤，所述惡性腫瘤可以是新診斷的髓性惡性腫瘤；復發性或難治性髓性惡性腫瘤；或選自以下的髓性惡性腫瘤：急性髓性白血病(AML)；骨髓增生異常綜合徵(myelodysplastic syndrome，MDS)；骨髓增殖性腫瘤(myeloproliferative neoplasm，MPN)；慢性髓性白血病(chronic myeloid leukemia，CML)；以及慢性髓細胞單核細胞白血病(chronic myelomonocytic leukemia，CMML)。在一些特別優選的實施方案中，本發明的組合用於治療急性髓性白血病(AML)。
在某些實施方案中，根據本發明的方法治療的物件或患者是不適合於標準強化化學治療(standard intensive chemotherapy)的新診斷的AML患者。物件可以是年齡為75歲或更年長的新診斷的AML患者或者患有排除了使用標準強化化學治療的合併症(comorbidity)的新診斷的AML患者。
在某些實施方案中，CD70抗體或其抗原結合片段以0.1至25mg/kg(優選10mg/kg)的劑量施用。作為替代或補充，BCL-2抑制劑(優選維奈托克或其可藥用鹽)可以以100mg至600mg的劑量施用。在一些優選的實施方案中，本文中所述的方法包括施用另外包含阿紮胞苷的組合，其中阿紮胞苷以75mg/m2的劑量施用。在另一些優選實施方案中，本文中所述的方法包括施用另外包含地西他濱的組合，其中地西他濱以20mg/m2的劑量施用。
在某些實施方案中，所述方法還包括監測患者的母細胞計數(blast count)。患者的外周血和/或骨髓母細胞計數可降低，例如降低至小於25%，例如降低至5%，例如降低至小於5%，例如降低至微小殘留病(minimal residual disease)水準，例如降低至不可檢出的水準。在某些實施方案中，骨髓母細胞計數降低至5%至25%，並且骨髓母細胞百分比與治療前相比降低超過50%。
在某些實施方案中，所述方法引起部分回應(partial response)。在某些實施方案中，所述方法引起完全回應(complete response)，任選地伴有血小板恢復和/或中性粒細胞恢復的完全回應。所述方法可引起紅細胞或血小板或這二者的輸注非依賴性(transfusion independence)，持續8周或更長時間、10周或更長時間、12周或更長時間。在某些實施方案中，所述方法降低了30天週期之後或60天週期之後的死亡率。
在某些實施方案中，所述方法延長存活。例如，相對於用於治療用所述組合進行治療的特定髓性惡性腫瘤的護理劑(care agent)的標準，所述方法可延長存活。所述方法可引起為陰性的微小殘留病狀態。
在某些實施方案中，所述方法還包括使物件進行骨髓移植的 步驟。作為替代或補充，所述方法還可包括施用一種或更多種另外的抗癌劑的步驟。所述一種或更多種另外的癌症藥劑可選自適合於治療髓性惡性腫瘤(優選AML)的任何藥劑。一些優選的藥劑可選自：選擇素(selectin)抑制劑(例如GMI-1271)；FMS樣酪氨酸激酶受體3(FLT3)抑制劑(例如米哚妥林(midostaurin))；週期素依賴性激酶(cyclin-dependent kinase)抑制劑；氨肽酶抑制劑；JAK/STAT抑制劑；阿糖胞苷；蒽環類化合物(例如柔紅黴素、伊達比星)；多柔比星；羥基脲；Vyxeos；IDH1或IDH2抑制劑，例如Idhifa(或恩西地平(Enasidenib))或Tibsovo(或艾伏尼布(ivosidenib))；Smoothened抑制劑，例如格拉德吉(Glasdegib)；BET布羅莫結構域(bromodomain)抑制劑；CD123或CD33靶向劑；HDAC抑制劑；LSC靶向劑；AML骨髓龕(bone marrow niche)靶向劑和NEDD8啟動酶抑制劑，例如佩沃塔特(Pevonedistat)。
第1圖：庫薩圖珠單抗(Cusatuzumab)和地西他濱共處理協同消除了NOMO-1 AML細胞。在羧基螢光素琥珀醯亞胺酯(CFSE)標記的NK細胞(比例為1：1)的存在下，用載劑、庫薩圖珠單抗、維奈托克或地西他濱單獨處理或以恒定的比例組合處理NOMO-1 AML細胞。在72小時之後對每孔的NOMO-1 AML細胞數目進行計數，通過膜聯蛋白V(Annexin V)染色確定活細胞的程度，並作為存活的細胞與經載劑處理的細胞的比例計算藥物處理的效果。計算合用指數(combination index，CI)值，並將0至10的值針對受影響分數(fraction affected，Fa)值作圖。示出了評估協同作用和/或拮抗作用的Fa-CI圖[Chou-Talalay圖]。0、0.5和1的Fa值對應於0、50%和100%被殺傷的細胞。<1、1、>1的CI分別表示協同作用、相加作用和拮抗作用。IC50表示在Ve/Cusa(較低的Fa)和Ve/De/Cusa(較高的Fa)組合的IC50濃度下所達到的Fa值。Ve/De：維奈托克和地西他濱；De/Cusa：地西他濱和庫薩圖珠單抗；Ve/Cusa：維奈托克和庫薩圖珠單抗；Ve/De/Cusa：維奈托克和地西他濱和庫薩圖珠單抗。
第2圖：庫薩圖珠單抗和地西他濱共處理協同消除了NOMO-1 AML細 胞。第1圖中示出了每種組合的資料的單獨CI-Fa圖。(A)維奈托克和地西他濱；(B)地西他濱和庫薩圖珠單抗；(C)維奈托克和庫薩圖珠單抗；(D)維奈托克、地西他濱和庫薩圖珠單抗。
第3圖：庫薩圖珠單抗和地西他濱共處理協同消除了NB4 AML細胞。在CFSE標記的NK細胞(比例為1：1)的存在下，用載劑、庫薩圖珠單抗、維奈托克或地西他濱單獨處理或以恒定的比例組合處理NB4 AML細胞。在72小時之後對每孔的NB4 AML細胞數目進行計數，通過膜聯蛋白V染色確定活細胞的程度，並作為存活的細胞與經載劑處理的細胞的比例計算藥物處理的效果。計算合用指數(CI)值，並將0至10的值針對受影響分數(Fa)值作圖。示出了評估協同作用和/或拮抗作用的Fa-CI圖[Chou-Talalay圖]。0、0.5和1的Fa值對應於0、50%和100%被殺傷的細胞。(A)維奈托克和地西他濱；(B)維奈托克和庫薩圖珠單抗；(C)地西他濱和庫薩圖珠單抗；(D)維奈托克、地西他濱和庫薩圖珠單抗。
第4圖：庫薩圖珠單抗和地西他濱共處理協同消除了MOLM-13 AML細胞。在CFSE標記的NK細胞(比例為1：1)的存在下，用載劑、庫薩圖珠單抗、維奈托克或地西他濱單獨處理或以恒定的比例組合處理MOLM-13 AML細胞。在72小時之後對每孔的MOLM-13 AML細胞數目進行計數，通過膜聯蛋白V染色確定活細胞的程度，並以存活的細胞與經載劑處理的細胞的比例計算藥物處理的效果。計算合用指數(CI)值，並將該值針對受影響分數(Fa)值作圖。示出了評估協同作用和/或拮抗作用的Fa-CI圖[Chou-Talalay圖]。0、0.5和1的Fa值對應於0、50%和100%被殺傷的細胞。(A)維奈托克和地西他濱；(B)維奈托克和庫薩圖珠單抗；(C)地西他濱和庫薩圖珠單抗；(D)維奈托克、地西他濱和庫薩圖珠單抗。
第5圖：庫薩圖珠單抗和地西他濱共處理協同消除了MV4-11 AML細胞。在CFSE標記的NK細胞(比例為1：1)的存在下，用載劑、庫薩圖珠單抗、維奈托克或地西他濱單獨處理或以恒定的比例組合處理MV4-11 AML細胞。在72小時之後對每孔的MV4-11 AML細胞數目進行計數，通過膜聯蛋白V染色確定活細胞的程度，並以存活的細胞與經載劑處理的細 胞的比例計算藥物處理的效果。計算合用指數(CI)值，並將該值針對受影響分數(Fa)值作圖。示出了評估協同作用和/或拮抗作用的Fa-CI圖[Chou-Talalay圖]。0、0.5和1的Fa值對應於0、50%和100%被殺傷的細胞。
第6圖：組合的維奈托克和庫薩圖珠單抗處理在體外協同消除了白血病幹細胞(leukemic stem cell，LSC)。在NK細胞(比例為1：1)的存在下，將來自患者P1至P3的CD34+CD38- AML LSC一式兩份地用庫薩圖珠單抗(Cusa：0.3μg/ml)或維奈托克(Ve：6nM)單獨或組合培養過夜，隨後在甲基纖維素中平板接種(plating)。14天之後評估集落形成。(A)對於處理之後首次平板接種的每孔的集落絕對數；(B)對從首次平板接種收穫的細胞進行再平板接種(第二次平板接種)，並在14天之後評估每孔的集落。
資料表示為平均值±S.D。統計學：單因素ANOVA；Tukey事後檢驗(Tukey’s post-test)；*，P<0.05；**，P<0.01；***，P<0.001。
第7圖：組合的維奈托克和庫薩圖珠單抗處理在體外協同消除了LSC。示出的資料對應於第6圖的資料，將其歸一化為每位患者在載劑處理之後每孔的平均集落數目。(A)首次平板接種；(B)第二次平板接種。
第8圖：組合的維奈托克和庫薩圖珠單抗處理在體外協同消除了LSC。在NK細胞(比例為1：1)的存在下，將來自患者P4和P5的CD34+CD38- AML LSC一式兩份地用庫薩圖珠單抗(Cusa：0.3μg/ml)、維奈托克(Ve：6nM)或地西他濱(0.01μM)單獨或組合培養過夜，隨後在甲基纖維素中平板接種。14天之後評估集落形成。資料表示為平均值±S.D。(A)來自單個患者的結果；(B)來自P4和P5的結果。
第9圖：用載劑(Veh)或維奈托克(Ven)處理24或48小時之後的CD70 mRNA表達(作為管家基因的百分比)。
第10圖：在存在維奈托克(灰色條)和不存在維奈托克(黑色條)的情況下，通過MOLM-13和NOMO-1細胞的CD70蛋白和mRNA表達。使用t檢驗(Student’s t-test)確定顯著性。MFI=平均螢光強度。***P<0.001。
A.定義
除非另有定義，否則本文中使用的所有技術術語和科學術語具有與本發明的技術領域中本領域技術人員通常理解的相同含義。
“組合治療”-本文中使用的術語“組合治療”是指其中給予物件(例如人物件)兩種或更多種治療劑的治療。本文中所述的“組合”用於組合治療。通常施用兩種或更多種治療劑以治療單一疾病，在本文中為癌症或惡性腫瘤。本發明的組合或組合治療包含與CD70結合的抗體或抗原結合片段以及BCL-2抑制劑，優選小分子抑制劑維奈托克或其可藥用鹽。如本文中其他地方所描述的，組合治療中包含的藥劑可被共同配製成用於施用，或者可例如作為分開的組合物分開提供用於施用於有此需要的物件或患者。
“抗體”-本文中使用的術語“抗體”旨在涵蓋全長抗體及其變體，包括但不限於經修飾的抗體、人源化抗體、種系抗體。術語“抗體”在本文中通常用於指具有兩條重鏈和兩條輕鏈的組合的免疫球蛋白多肽，其中該多肽對目標抗原(本文中為CD70)具有顯著的特異性免疫反應活性。對於IgG類的抗體，抗體包含分子量為約23,000道爾頓的兩條相同的輕多肽鏈和分子量為53,000至70,000的兩條相同的重鏈。四條鏈通過二硫鍵以“Y”構型連接，其中輕鏈將重鏈從“Y”的口部開始並繼續通過可變區並列在一起(bracket)。抗體的輕鏈被分類為kappa或lambda(κ、λ)。每個重鏈類別可與κ或λ輕鏈結合。通常來說，輕鏈和重鏈彼此共價鍵合，並且當由雜交瘤、B細胞或經遺傳改造的宿主細胞產生免疫球蛋白時，兩條重鏈的“尾”部分通過共價二硫鍵聯或非共價鍵聯而彼此鍵合。在重鏈中，氨基酸序列從Y構型的叉狀末端的N端延續至每條鏈底部的C端。
本領域技術人員將理解，重鏈被分類為gamma、mu、alpha、delta或epsilon(γ、μ、α、δ、ε)，其中有一些亞類(例如，γ1至γ4)。該鏈的性質決定了抗體的“類別”，分別為IgG、IgM、IgA、IgD或IgE。免疫球蛋白亞類(同種型)例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1等是良好表徵的，並且已知賦予功能特化性。本文中使用的術語“抗體”涵蓋來自抗體的任何類 別或亞類的抗體。
“抗原結合片段”-本文中使用的術語“抗原結合片段”是指為全長抗體或抗體鏈的部分或份的片段，其包含比完整或完全的抗體更少的氨基酸殘基，同時保留了抗原結合活性。抗體的抗原結合片段包含對與該抗體相同的抗原(例如CD70)表現出特異性免疫反應活性的肽片段。本文中使用的術語“抗原結合片段”旨在涵蓋選自以下的抗體片段：抗體輕鏈可變結構域(VL)；抗體重鏈可變結構域(VH)；單鏈抗體(scFv)；F(ab’)2片段；Fab片段；Fd片段；Fv片段；單臂(單價)抗體；通過這樣的抗原結合片段的組合、組裝或綴合形成的雙鏈抗體、三鏈抗體、四鏈抗體或任何抗原結合分子。本文中使用的術語“抗原結合片段”還可涵蓋選自以下的抗體片段：單抗體(unibody)；結構域抗體；以及奈米抗體(nanobody)。片段可例如通過對完整或完全的抗體或抗體鏈進行化學或酶處理或者通過重組方式獲得。
“特異性”和“多特異性抗體”-用於本文中所述的組合治療的抗體和抗原結合片段與特定的靶抗原(例如CD70)結合。優選的是抗體和抗原結合片段與其靶抗原“特異性結合”，其中術語“特異性結合”是指任何抗體或抗原結合片段優先與給定靶標(例如CD70)進行免疫反應的能力。本發明組合和方法的抗體和抗原結合片段可以是單特異性的，並且包含一個或更多個特異性結合特定靶標的結合位點。本發明組合和方法的抗體和抗原結合片段可併入到“多特異性抗體”形式中，例如併入到雙特異性抗體中，其中多特異性抗體與兩種或更多種靶抗原結合。為了實現多重特異性，通常將“多特異性抗體”改造成包含具有不同VH-VL對的重鏈和輕鏈多肽的不同組合或配對。可改造多特異性抗體，特別是雙特異性抗體，以採用天然抗體的整體構象，例如，具有與Fc區綴合的不同特異性的Fab臂的Y形抗體。或者，可改造多特異性抗體，例如雙特異性抗體，以採用非天然構象，例如其中具有不同特異性的可變結構域或可變結構域對被定位於Fc區的相對端。
“經修飾的抗體”-本文中使用的術語“經修飾的抗體”包含合成形式的抗體，其被改變使得它們不是天然存在的，例如，包含至少兩個重鏈部分但不包含兩條完整重鏈的抗體(例如，結構域缺失的抗體或小抗體 (minibody))；被改變以與兩種或更多種不同的抗原結合或與單一抗原上的不同表位結合的多特異性形式的抗體(例如，雙特異性抗體、三特異性抗體等)；與scFv分子結合的重鏈分子等。scFv分子是本領域中已知的，並且描述於例如美國專利5,892,019中。此外，術語“經修飾的抗體”包含多價形式的抗體(例如，三價抗體、四價抗體等，與同一抗原的三個或更多個拷貝結合的抗體)。在另一個實施方案中，本發明的經修飾的抗體是融合蛋白，其包含至少一個缺少CH2結構域的重鏈部分並且包含多肽的結合結構域，所述多肽的結合結構域包含受體配體對的一個成員的結合部分。
“人源化替換”-本文中使用的術語“人源化替換”是指這樣的氨基酸替換：其中存在於抗體的VH或VL結構域中特定位置處的氨基酸殘基被參考人VH或VL結構域中等效位置處存在的氨基酸殘基替代。所述參考人VH或VL結構域可以是人種系編碼的VH或VL結構域。可在本文中限定的抗體的框架區和/或CDR中進行人源化替換。
“人源化變體”-本文中使用的術語“人源化變體”或“人源化抗體”是指與參考抗體相比包含一個或更多個“人源化替換”的變體抗體，其中參考抗體的部分(例如VH結構域和/或VL結構域或者其包含至少一個CDR的部分)具有來源於非人物種的氨基酸，並且“人源化替換”存在於來源於非人物種的氨基酸序列內。
“種系變體”-術語“種系變體”或“種系抗體”在本文中用於特別地指“人源化變體”，在所述人源化變體中“人源化替換”導致存在於抗體的VH或VL結構域中特定位置處的一個或更多個氨基酸殘基被由人種系編碼的參考人VH或VL結構域中等效位置處存在的氨基酸殘基替代。通常來說，對於任何給定的“種系變體”，被替換成種系變體的替代氨基酸殘基是從單一人種系編碼的VH或VL結構域唯一地或主要地取得的。術語“人源化變體”和“種系變體”通常可互換使用。將一個或更多個“人源化替換”引入到駱駝科來源(例如美洲駝(llama)來源)的VH或VL結構域導致駱駝科(美洲駝)來源的VH或VL結構域的“人源化變體”的產生。如果被替換的氨基酸殘基主要地或唯一地來源於單一人種系編碼的VH或VL結構域序 列，則結果可以是駱駝科(美洲駝)來源的VH或VL結構域的“人種系變體”。
“CD70”-本文中使用的術語“CD70”或“CD70蛋白”或“CD70抗原”可互換使用，並且是指TNF配體家族的成員，其是TNFRSF7/CD27的配體。CD70也稱為CD27L或TNFSF7。術語“人CD70蛋白”或“人CD70抗原”或“人CD70”可互換使用以具體地指在人體內和/或在經培養的人細胞系表面上天然表達的人同源物(包括天然人CD70蛋白)，以及其重組形式和片段。人CD70的一些具體實例包括具有根據NCBI參考序列登錄號NP_001243所示的氨基酸序列的多肽，或其胞外結構域。
“BCL-2家族”-本文中使用的術語“BCL-2家族”或“BCL-2蛋白家族”是指與BCL-2相關的促凋亡蛋白和抗凋亡蛋白的集合，參見Delbridge et al.(2016)Nat Rev Cancer.16(2)：99-109。該家族有至少16個成員，被分為三個功能組：(i)BCL-2樣蛋白(例如BCL-2、BCL-XL/BCL2L1、BCLW BCL2L2、MCL2、BFL1/BCL2A1)；(ii)BAX和BAK；以及(iii)僅BH3蛋白質(例如BIM、PUMA、BAD、BMF、BID、NOXA、HRK、BIK)。BCL-2蛋白家族在調節內在的凋亡途徑中發揮不可或缺的作用，其中該家族的抗凋亡成員(例如BCL-2、BCL-XL)通常拮抗促凋亡成員(例如BAX和BIM)。在許多癌症中，例如通過基因易位、擴增、過表達和突變，已經觀察到BCL-2家族成員的失調。這種失調的下游效應時常具有凋亡抗性，其促進了癌症的生長。
“BCL-2”-本文中使用“BCL-2”或“BCL-2蛋白”是指人中待鑒定的BCL-2蛋白家族的第一個成員，即B細胞淋巴瘤2。編碼人BCL-2的cDNA於1986年被克隆，並且該蛋白在抑制凋亡中的關鍵作用於1988年被闡明。已發現BCL-2在數種不同類型的癌症中均上調。例如，BCL-2被濾泡性淋巴瘤中的t(14；18)染色體易位啟動。還已經報導了在包括以下的不同癌症中的BCL-2基因擴增：白血病(例如CLL)、淋巴瘤(例如B細胞淋巴瘤)和一些實體瘤(例如小細胞肺癌)。人BCL-2是由BCL2基因(UniProtKB-P10415)編碼的，並且具有根據NCBI參考序列NP_000624.2 和NP_000648.2所示的氨基酸序列。
“BCL-2抑制劑”-本文中使用的BCL-2抑制劑是指能夠特異性抑制BCL-2活性的任何藥劑、化合物或分子，特別是能夠抑制BCL-2的抗凋亡活性的藥劑、化合物或分子。適用於本文中所述組合的BCL-2抑制劑的一些實例包括B細胞淋巴瘤同源性3(BH3)模擬化合物(Merino et al.(2018)Cancer Cell.34(6)：879-891)。一些特別的BCL-2抑制劑包括但不限於：維奈托克、ABT-737(Oltersdorf,T. et al.(2005)Nature 435：677-681)、納威托克斯(navitoclax)/ABT-263(Tse,C.et al.(2008)Cancer Res.68：3421-3428)、BM-1197(Bai,L.et al.(2014)PLoS ONE 9：e99404)、S44563(Nemati,F.et al.(2014)PLoS ONE 9：e80836)、BCL2-32(Adam,A.et al.(2014)Blood 124：5304)、AZD4320(Hennessy,E.J.et al.(2015)ACS Medicinal Chemistry annual meeting https：//www.acsmedchem.org/ama/orig/abstracts/mediabstractf2015.pdf_abstr.24)和S55746(International Standard Randomised Controlled Trial Number Registry.ISRCTN http：//www.isrctn.com/ISRCTN04804337(2016))。BCL-2抑制劑的另一些實例描述於Ashkenazi,A et al.(2017)Nature Reviews Drug Discovery 16：273-284中，其通過引用併入本文。
“維奈托克”-本文中使用的術語“維奈托克”是指具有如下所示化學結構的化合物：
Figure 108146057-A0202-12-0014-2
該化合物在本文中稱為“化合物(I)”。維奈托克是BCL-2蛋白的高效的選擇性可經口生物利用的抑制劑。它的經驗式為C45H50ClN7O7S， 並且分子量為868.44。它具有非常低的水溶性。維奈托克在化學上可描述為4-(4-{[2-(4-氯苯基)-4,4二甲基環己-1-烯-1-基]甲基}呱嗪-1-基)-N-({3-硝基-4-[(四氫-2H-吡喃-4基甲基)氨基]苯基}磺醯基)-2-(1H-吡咯並[2,3-b]吡啶-5-基氧基)苯甲醯胺)。維奈托克的替代名稱包括ABT-199；化學名稱1257044-40-8；GDC-0199。
維奈托克於2015年獲得美國食品藥品監督管理局(Food and Drug Administration，FDA)的批准，用於治療患有慢性淋巴細胞白血病(chronic lymphocytic leukemia，CLL)或小淋巴細胞白血病(small lymphocytic leukemia，SLL)的已接受至少一種先前治療的成年患者。維奈托克在美國還被批准用於與阿紮胞苷或地西他濱或低劑量的阿糖胞苷組合用於在年齡為75歲或更年長或者患有排除了使用強化誘導化學治療的合併症的成人中治療新診斷的急性髓性白血病(AML)。
“髓性惡性腫瘤”-本文中使用的術語“髓性惡性腫瘤”是指造血幹細胞或祖細胞的任何克隆性疾病。髓性惡性腫瘤或髓性惡性疾病包括慢性和急性病症。慢性病症包括骨髓增生異常綜合徵(MDS)、骨髓增殖性腫瘤(MPN)和慢性髓細胞單核細胞白血病(CMML)，並且急性病症包括急性髓性白血病(AML)。
“急性髓性惡性腫瘤”-本文中使用的“急性髓性白血病”或“AML”是指涉及髓樣細胞的造血系統腫瘤(hematopoietic neoplasm)。AML的特徵在於具有降低的分化能力的髓樣前體的克隆性增殖。AML患者表現出骨髓中母細胞的積累。本文中使用的“母細胞(blast cell)”或其簡稱“母細胞(blast)”是指表現出被破壞的分化潛能的克隆性髓樣祖細胞。母細胞通常還在AML患者的外周血中積累。通常來說，如果患者表現出骨髓或外周血中20%或更多的母細胞，則診斷為AML。
“標準強化化學治療”-本文中使用的“標準強化化學治療”(在本文中也稱為“強化誘導治療”或“誘導治療”)是指以施用高劑量的阿糖胞苷7天，隨後施用蒽環類(例如柔紅黴素或伊達比星)3天為特徵的所謂的“7+3”誘導化學治療。可向合適的新診斷的AML患者給予標準強化化學 治療，目的是引起AML的完全緩解，通常旨在在成功的化學治療之後使患者經歷幹細胞移植。如本文中所說明的，並非所有新診斷的AML患者均適合於該標準強化化學治療。
“白血病幹細胞”-本文中使用的“白血病幹細胞”或“LSC”是與AML相關的母細胞的亞群。LSC是這樣的母細胞：其具有幹細胞特性，使得如果將其移植到免疫缺陷的接受者中，其能夠引發白血病。LSC可通過引起白血病而自我更新，並且也可部分地分化為與原始疾病類似但不能自我更新的非LSC常規母細胞。LSC作為原代AML母細胞的一部分以1：10,000至1：1百萬的頻率發生(Pollyea and Jordan(2017)Blood 129：1627-1635，通過引用併入本文)。LSC可被表徵為CD34+、CD38-，任選地還是CD45-和/或CD123+的細胞。LSC也可被表徵為CD45dim、SSClo、CD90+CD34+細胞。
“抗癌劑”-本文中使用的抗癌劑是指能夠直接或間接地預防、抑制或治療癌症生長的任何藥劑。這樣的藥劑包括化學治療劑、免疫治療劑、抗血管生成劑、放射性核素等，其許多實例是本領域技術人員已知的。
B.用CD70抗體和BCL-2抑制劑的組合治療
本發明提供了組合治療，其包含：(i)與CD70結合的抗體或其抗原結合片段；以及(ii)BCL-2抑制劑。
如本文中其他地方所描述的，CD70已被表徵為用於抗癌治療的引人注目的靶標。CD70在許多類型的血液系統惡性腫瘤和實體癌上組成性地表達，並且其表達與數種癌症的不良預後相關。已經開發出靶向CD70的抗體，並且一些已被推進到臨床開發中。
已經發現靶向CD70的抗體對於治療髓性惡性腫瘤、特別是治療患有急性髓性白血病(AML)的對象特別有效。來自在患有AML的患者中測試CD70抗體ARGX-110的I/II期臨床試驗的結果表明了在該適應證中，特別是在被分類為不適合於標準強化化學治療的新診斷的患者中的出乎意料的效力(參見WO2018/229303)。特別值得注意的是，在臨床研究中，當與阿紮胞苷組合使用時，CD70抗體高效地降低了AML患者中的白 血病幹細胞(LSC)。在試驗中從患者分離的LSC的測試揭示了LSC的不對稱分裂提高的證據，表明其分化為髓樣細胞。綜上所述，這些結果表明在AML患者中CD70抗體耗盡了LSC庫，從而提高了緩解和降低復發風險的前景。
本發明將CD70抗體或其抗原結合片段與BCL-2抑制劑組合。
BCL-2蛋白是BCL-2家族的成員。該家族包含多於20種蛋白質。BCL-2家族的成員涉及內在的凋亡途徑的調節，並在調節細胞存活與死亡之間的平衡中發揮根本性作用。
BCL-2蛋白是BCL-2家族的抗凋亡成員，並且在許多不同類型的癌症中上調。BCL-2的過表達允許腫瘤細胞通過隔離促凋亡蛋白來逃避凋亡。BCL-2在許多血液系統惡性腫瘤中高度表達，並且是例如慢性淋巴細胞白血病(CLL)、濾泡性淋巴瘤和套細胞淋巴瘤的疾病中佔優勢的促存活蛋白。BCL-2的抑制抑制了該蛋白的抗凋亡或促存活活性。
已經報導了包括BCL-2在內的BCL-2家族的抗凋亡成員在原代AML樣品中過表達(Bogenberger et al.(2014)Leukemia 28(2)；1657-65)。也已經報導了在從AML患者獲得的白血病幹細胞(LSC)中的BCL-2過表達(Lagadinou et al.(2013)Cell Stem Cell 12(3)；329-341)。在離體LSC群體中BCL-2的抑制導致休眠LSC(quiescent LSC)的選擇性根除(Lagadinou et al.(2013)Cell Stem Cell 12(3)；329-341)。
不希望受理論的束縛，由於CD70抗體或抗原結合片段和BCL-2抑制劑的組合治療作用，特別是LSC水準的組合作用，認為本發明的組合對AML的治療特別有效。LSC的自我更新能力意味著這些細胞的持久性是導致疾病復發的主要因素。
如在實施例中所示出的，本發明的組合表現出針對AML細胞的協同治療效力，即，由組合引起的抑制的水準大於單獨的單藥治療的相加作用。用於確定協同相互作用的方法是技術人員熟悉的，並且在實施例中描述。用於確定協同作用是否由組合產生的一種優選方法是Chou-Talalay方 法(Chou,TC.Cancer Res.(2010)70(2)；440-6，通過引用併入本文)。
本發明的組合的協同效力轉化成對來自AML患者的原代LSC細胞的強效抑制。因此，本發明的組合治療靶向母細胞和LSC區室二者，從而提高了疾病緩解的可能性，同時降低了復發的風險。
在本發明的組合的某些優選實施方案中，BCL-2抑制劑是維奈托克或其可藥用鹽。維奈托克是BCL-2的小分子抑制劑，描述於US2010/0305122(通過引用併入本文)中。
通過抑制BCL-2，維奈托克抑制了該蛋白的抗凋亡或促存活活性。維奈托克在大多數CLL細胞和BCL-2過表達的淋巴瘤細胞系中迅速誘導凋亡。
早期研究表明，維奈托克可用作針對AML的治療(Konopleva et al.(2016)Cancer Discov.6(10)；1106-17)。然而，發現其作為單藥治療的活性有限。隨後的研究調查了維奈托克與低甲基化劑(即阿紮胞苷和地西他汀)組合的效力，並且發現這些組合特別有效(Bogenberger et al.(2015)Leuk Lymphoma 56(1)：226-229)。已經進行了臨床試驗來測試維奈托克與阿紮胞苷、地西他濱或低劑量的阿糖胞苷的組合(Dinardo et al.(2018)Lancet Oncol.19(2)：216-228；Dinardo et al.(2019)Blood 133(1)；7-17)。這些試驗的結果已導致FDA批准將維奈托克與阿紮胞苷、地西他濱或低劑量的阿糖胞苷組合用於在年齡為75歲或更年長或者患有排除了使用強化誘導化學治療的合併症的成人中治療新診斷的急性髓性白血病(AML)。
在本發明的某些替代實施方案中，BCL-2抑制劑是B細胞淋巴瘤同源性3(BH3)模擬化合物。在某些實施方案中，BCL-2抑制劑選自ABT-737、納威托克斯、BM-1197、S44563、BCL2-32、AZD4320或S55746。
CD70抗體
與CD70結合並且可併入本文中所述的任一種組合的抗體或抗原結合片段包括但不限於：抑制CD70與CD27相互作用的CD70抗體或抗原結合片段；與CD27競爭CD70結合的CD70抗體或抗原結合片段；抑制CD70誘導的CD27信號傳導的CD70抗體或抗原結合片段；抑制Treg 啟動和/或增殖的CD70抗體或抗原結合片段；耗盡表達CD70的細胞的CD70抗體或抗原結合片段；誘導表達CD70的細胞裂解的CD70抗體或抗原結合片段；具有ADCC、CDC功能性和/或誘導ADCP的CD70抗體或抗原結合片段。
一些示例性的CD70抗體是WO2012/123586(通過引用併入本文)中描述的ARGX-110、SGN-70(WO2006/113909，以及McEarChern et al.(2008)Clin Cancer Res.14(23)：7763，二者均通過引用併入本文)以及WO2006/044643和WO2007/038637(各自通過引用併入本文)中描述的那些CD70抗體。
WO2006/044643描述了包含抗體效應結構域的CD70抗體，所述抗體效應結構域可介導ADCC、ADCP或CDC中的一種或更多種，並且所述CD70抗體在不存在與細胞抑制劑或細胞毒性劑綴合的情況下對表達CD70的癌症發揮細胞抑制作用或細胞毒性作用，或者對表達CD70的免疫病症發揮免疫抑制作用。其中例示的抗體基於表示為1F6和2F2的兩種單克隆抗體的抗原結合區。
WO2007/038637描述了與CD70結合的完全人單克隆抗體。這些抗體的特徵在於以1×10-7M或更小的KD與人CD70結合。所述抗體還與表達CD70的腎細胞癌腫瘤細胞系(例如786-O)結合並被其內化。
ARGX-110是IgG1抗CD70抗體，也被稱為庫薩圖珠單抗。已顯示ARGX-110抑制CD70與其受體CD27的相互作用(Silence et al.(2014)MAbs.Mar-Apr；6(2)：523-32，通過引用併入本文)。特別地，已顯示ARGX-110抑制CD70誘導的CD27信號傳導。CD27信號傳導的水準可通過例如如在Riether et al.(J.Exp.Med.(2017)214(2)；359-380)中描述的測量血清可溶性CD27或如在Silence et al.(MAbs(2014)6(2)：523-32)中描述的測量IL-8表達來確定。不受理論的束縛，認為抑制CD27信號傳導降低了Treg細胞的啟動和/或增殖，從而降低了對抗腫瘤效應T細胞的抑制。還已示出ARGX-110耗盡了表達CD70的腫瘤細胞。特別地，已顯示ARGX-110通過抗體依賴性細胞介導的細胞毒性(antibody dependent cell-mediated cytotoxicity，ADCC)和補體依賴性細胞毒性(complement dependent cytotoxicity，CDC)裂解表達CD70的腫瘤細胞，並且還提高表達CD70的細胞的抗體依賴性細胞吞噬作用(antibody dependent cellular phagocytosis，ADCP)(Silence et al.，同上)。
ARGX-110或庫薩圖珠單抗的CDR、VH和VL氨基酸序列在下表中示出。
Figure 108146057-A0202-12-0020-3
在某些實施方案中，與CD70結合的抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變結構域(VH)和輕鏈可變結構域(VL)，其中VH和VL結構域包含以下CDR序列：
含有SEQ ID NO：3或由其組成的HCDR3；
含有SEQ ID NO：2或由其組成的HCDR2；
含有SEQ ID NO：1或由其組成的HCDR1；
含有SEQ ID NO：7或由其組成的LCDR3；
含有SEQ ID NO：6或由其組成的LCDR2；以及
含有SEQ ID NO：5或由其組成的LCDR1。
在某些實施方案中，與CD70結合的抗體或其抗原結合片段(任選地具有上文示出的CDR序列的抗體或抗原結合片段)是IgG，優選IgG1。在某些實施方案中，與CD70結合的抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變結構域(VH結構域)和輕鏈可變結構域(VL結構域)，所述重鏈可變結構域包含與SEQ ID NO：4具有至少70%、至少80%、至少90%或至少95%同一性的序列或由其組成，所述輕鏈可變結構域包含與SEQ ID NO：8具有至少70%、至少80%、至少90%或至少95%同一性的序列或由其組成。在某些實施方案中，與CD70結合的抗體分子包含重鏈可變結構域(VH結構域)和輕鏈可變結構域(VL結構域)，所述重鏈可變結構域包含SEQ ID NO：4或由其組成，所述輕鏈可變結構域包含SEQ ID NO：8或由其組成。對於其中VH和/或VL結構域被限定為與參考序列具有特定百分比同一性的一些實施方案，VH和/或VL結構域可保留參考序列的CDR序列。特別地，本文中參考SEQ ID NO：4和8限定的CD70抗體或抗原結合片段可保留SEQ ID NO：1至3和5至7所示CDR序列。
可併入到本文中所述組合中的CD70抗體或其抗原結合片段包含抗體藥物綴合物(antibody drug conjugate，ADC)。ADC是與活性劑(例如奧瑞他汀(auristatin)和美登素(maytansine)或其他細胞毒性劑)連接的抗體。某些ADC維持抗體阻斷和/或效應功能(例如ADCC、CDC、ADCP)，同時還將綴合的活性劑遞送至表達靶標(例如CD70)的細胞。抗CD70 ADC的一些實例包括vorsetuzumab mafodotin(也稱為SGN-75，Seattle Genetics)、SGN-70A(Seattle Genetics)和MDX-1203/BMS936561(Bristol-Myers Squibb)，其中的每一個可根據本發明使用。一些合適的抗CD70 ADC也描述於WO2008074004和WO2004073656中，其各自通過引用併入本文。
維奈托克
在本發明的某些優選實施方案中，將本文中所述的CD70抗體或抗原結合片段與維奈托克或其可藥用鹽組合。維奈托克是如本文中其 他地方所描述的BCL-2的小分子抑制劑。
用於本文中所述的組合治療的維奈托克可以以任何合適的形式提供，使得其有效地抑制BCL-2蛋白。這樣的形式包括但不限於任何合適的多晶型、無定型或結晶形式或者任何同分異構或互變異構形式。在某些實施方案中，本文中所述的組合治療包含根據US2010/0305122(通過引用併入本文)中描述的方法合成的維奈托克。在一些替代實施方案中，本文中所述的組合治療包含根據以下中任一項所述的形式的維奈托克或根據以下中任一項所述的方法合成的維奈托克：EP3333167、WO2017/156398、WO2018/029711、CN107089981(A)、WO2018/069941、WO2017/212431、WO2018/009444、CN107648185(A)、WO2018/167652、WO2018/157803、CZ201769(各自通過引用併入本文)。在某些實施方案中，本文中所述的組合治療包含WO2012/071336(通過引用併入本文)中所述的任一種結晶或鹽形式的維奈托克。
根據本發明使用的可藥用鹽包括酸性或鹼性基團的鹽。可藥用酸加成鹽包括但不限於：鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、硝酸鹽、硫酸鹽、硫酸氫鹽、磷酸鹽、酸式磷酸鹽、異煙酸鹽、乙酸鹽、乳酸鹽、水楊酸鹽、檸檬酸鹽、酒石酸鹽、泛酸鹽、酒石酸氫鹽、抗壞血酸鹽、琥珀酸鹽、馬來酸鹽、龍膽酸鹽、富馬酸鹽、葡糖酸鹽、葡糖醛酸鹽、蔗糖鹽、甲酸鹽、苯甲酸鹽、谷氨酸鹽、甲磺酸鹽、乙磺酸鹽、苯磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽和撲酸鹽(pamoate)(即，1,1’-亞甲基-雙-(2-羥基-3-萘甲酸鹽)鹽。可藥用鹽可用多種氨基酸形成。合適的鹼鹽包括但不限於鋁鹽、鈣鹽、鋰鹽、鎂鹽、鉀鹽、鈉鹽、鋅鹽和二乙醇胺鹽。
用於本文中所述的組合治療的維奈托克也可以以水合物、無水物或溶劑合物的形式提供。
維奈托克由Abb Vie Inc和Genentech以商品名Venclexta®上市和銷售。在某些實施方案中，本文中所述的組合包含結合CD70的抗體或其抗原結合片段以及Venclexta®。
另外的藥劑
本發明的組合可包含一種或更多種另外的藥劑，例如一種或更多種另外的抗癌劑。
在某些實施方案中，所述組合包含一種或更多種“核苷代謝抑制劑”(nucleoside metabolic inhibitor，NMI)。NMI是干擾核苷酸(DNA和/或RNA)的表觀遺傳修飾(例如甲基化、去甲基化、乙醯化或去乙醯化)的分子。核苷代謝抑制劑的一些實例包括低甲基化劑(HMA)、異檸檬酸脫氫酶(isocitrate dehydrogenase，IDH)抑制劑、組蛋白脫乙醯酶(histone deacetylase，HDAC)抑制劑以及布羅莫結構域和末端外(bromodomain and extraterminal，BET)抑制劑。優選的核苷代謝抑制劑是低甲基化劑。低甲基化劑抑制DNA和/或RNA的正常甲基化。低甲基化劑的一些實例是阿紮胞苷、地西他濱和瓜德希他濱(guadecitabine)。
在一些優選的實施方案中，本發明的組合另外地包含阿紮胞苷(在本文中也稱為氮雜胞苷(azacytidine)、AZA或aza)。因此，在一些優選的實施方案中，本發明提供了包含以下的組合：(i)與CD70結合的抗體或其抗原結合片段；(ii)維奈托克或其可藥用鹽；以及(iii)阿紮胞苷。
在另一些優選的實施方案中，本發明的組合另外包含地西他濱。因此，在一些優選的實施方案中，本發明提供了包含以下的組合：(i)與CD70結合的抗體或其抗原結合片段；(ii)維奈托克或其可藥用鹽；以及(iii)地西他濱。
阿紮胞苷是胞苷的類似物，並且地西他濱是其去氧衍生物。阿紮胞苷和地西他濱是DNA甲基轉移酶(DNA methyltransferase，DNMT)的抑制劑，已知其通過啟動子低甲基化來上調基因表達。這樣的低甲基化破壞細胞功能，從而導致細胞毒性作用。
在某些實施方案中，本發明的組合另外包含阿糖胞苷。阿糖胞苷(也稱為“胞嘧啶阿拉伯糖”或“ara-C”)是通常用於治療AML的化學治療藥物。高劑量阿糖胞苷形成通常用於新診斷的AML患者的“7+3”標準誘導化學治療的一部分。低劑量阿糖胞苷可用於不適合於標準誘導化學治療的AML患者。例如，對於不適合於標準誘導化學治療的新診斷的AML患 者，低劑量阿糖胞苷與維奈托克組合被開具處方。本發明的組合可另外包含低劑量阿糖胞苷。
在某些實施方案中，本發明的組合包含另外的抗癌劑。一種或更多種另外的癌症藥劑可選自適合於治療髓性惡性腫瘤(優選AML)的任何藥劑。優選的藥劑可選自：選擇素抑制劑(例如GMI-1271)；FMS樣酪氨酸激酶受體3(FLT3)抑制劑(例如米哚妥林或吉列替尼)；週期素依賴性激酶抑制劑；氨肽酶抑制劑；JAK/STAT抑制劑；阿糖胞苷；氟達拉濱；蒽環類化合物(例如柔紅黴素、伊達比星)；多柔比星；羥基脲；Vyxeos；IDH1或IDH2抑制劑，例如Idhifa(或恩西地平)或Tibsovo(或艾伏尼布)；Smoothened抑制劑，例如格拉德吉；BET布羅莫結構域抑制劑；CD123或CD33靶向劑；HDAC抑制劑；LSC靶向劑；AML骨髓龕靶向劑；NEDD8啟動酶抑制劑，例如佩沃塔特；G-CSF；以及拓撲異構酶抑制劑，例如米托蒽醌、塞利尼索(selinexor)和依託泊苷。
組合的製劑
本文中所述組合的藥劑可以以允許將組合治療施用於有此需要的物件或患者(優選有此需要的人物件或患者)的任何方式組合或配製。可將組合配製為單劑量施用或多劑量施用。在某些實施方案中，可將組合的藥劑共同配製，即配製成單一藥物組合物。對於其中共同配製藥劑的一些實施方案，組合或組合物適合於同時施用藥劑。
在一些優選的實施方案中，本文中所述組合的藥劑被配製成分開的組合物或藥物組合物。對於其中分開配製藥劑的一些實施方案，存在同時或分開施用不同藥劑或組合物的可能性。如果不同的組合物單獨施用，則可以任以何優選的順序依次施用藥劑。藥劑施用之間的間隔可以是任何合適的時間間隔。不同組合物的施用可一次進行(對於單劑量施用)或重複進行(對於多劑量施用)。
本文中所述組合的CD70抗體或抗原結合片段可使用任何合適的藥物載體、佐劑和/或賦形劑進行配製。用於配製人治療用途的抗體的技術是本領域中公知的，並且例如在Wang et al.(2007)Journal of Pharmaceutical Sciences,96：1-26(其內容整體併入本文)中進行了綜述。可用於配製抗體組合物的可藥用賦形劑包括但不限於：離子交換劑；氧化鋁；硬脂酸鋁；卵磷脂；血清蛋白質，例如人血清白蛋白質；緩衝劑物質，例如磷酸鹽、甘氨酸；山梨酸；山梨酸鉀；飽和植物脂肪酸的部分甘油酯混合物；水；鹽或電解質，例如硫酸魚精蛋白、磷酸氫二鈉、磷酸氫鉀、氯化鈉、鋅鹽；膠體二氧化矽；三矽酸鎂；聚乙烯吡咯烷酮；基於纖維素的物質(例如羧甲基纖維素鈉)；聚乙二醇；聚丙烯酸酯；蠟；聚乙烯-聚氧丙烯嵌段聚合物；聚乙二醇和羊毛脂。
可使用任何合適的藥用載體、佐劑和/或賦形劑來配製BCL-2抑制劑(優選維奈托克或其可藥用鹽)。合適的藥劑包括例如包封材料或添加劑，例如吸收促進劑、抗氧化劑、黏合劑、緩衝劑、包衣劑、著色劑、稀釋劑、崩解劑、乳化劑、增量劑(extender)、填充劑、矯味劑、保濕劑、潤滑劑、香料、防腐劑、拋射劑、釋放劑、消毒劑、甜味劑、增溶劑、潤濕劑，及其混合物。
在某些實施方案中，將組合物配製成用於通過包括但不限於以下的任何合適的施用途徑施用於物件：肌內、靜脈內、皮內、腹膜內注射；皮下、硬膜外、經鼻、經口、經直腸、表面(topical)、吸入、口含(例如舌下)和經皮施用。在某些實施方案中，將組合物配製成水溶液劑、片劑、膠囊劑、散劑或任何其他合適的劑型。
用於製備待以固體劑型經口施用的包含BCL-2抑制劑(優選維奈托克)的組合物的賦形劑包括例如：瓊脂、藻酸、氫氧化鋁、苄醇、苯甲酸苄酯、1,3-丁二醇、卡波姆(carbomer)、蓖麻油、纖維素、乙酸纖維素、可哥豆脂、玉米澱粉、玉米油、棉籽油、交聯聚維酮(cross-povidone)、甘油二酯、乙醇、乙基纖維素、月桂酸乙酯、油酸乙酯、脂肪酸酯、明膠、胚芽油、葡萄糖、甘油、花生油(groundnut oil)、羥丙基甲基纖維素、異丙醇、等張鹽水、乳糖、氫氧化鎂、硬脂酸鎂、麥芽、甘露醇、甘油單酯、橄欖油、花生油(peanut oil)、磷酸鉀鹽、馬鈴薯澱粉、聚維酮、丙二醇、林格液(Ringer’s solution)、紅花油、芝麻油、羧甲基纖維素鈉、磷酸鈉鹽、 月桂基硫酸鈉、山梨糖醇鈉、大豆油、硬脂酸、富馬酸硬脂酯、蔗糖、表面活性劑、滑石、西黃蓍膠、四氫糠醇、甘油三酯、水，及其混合物。用於製備待以液體劑型經口施用的包含BCL-2抑制劑(優選維奈托克)的組合物的賦形劑包括例如：1,3-丁二醇、蓖麻油、玉米油、棉籽油、乙醇、脫水山梨糖醇的脂肪酸酯、胚芽油、花生油、甘油、異丙醇、橄欖油、聚乙二醇、丙二醇、芝麻油，水，及其混合物。用於製備待滲透施用的包含BCL-2抑制劑(優選維奈托克)的組合物的賦形劑包括例如：氯氟烴、乙醇、水，及其混合物。用於製備待腸胃外施用的包含BCL-2抑制劑(優選維奈托克)的組合物的賦形劑包括例如：1,3-丁二醇、蓖麻油、玉米油、棉籽油、右旋糖、胚芽油、花生油、脂質體、油酸、橄欖油、花生油、林格液、紅花油、芝麻油、大豆油(U.S.P.)或等張氯化鈉溶液、水，及其混合物。
對於其中組合的藥劑分開配製(即作為分開的組合物配製)的一些實施方案，可將分開的組合物配製成用於相同的施用途徑。對於其中組合的藥劑分開配製(即作為分開的組合物配製)的一些實施方案，可將分開的組合物配製成用於不同的施用途徑。例如，可將CD70抗體或抗原結合片段配製成用於靜脈內施用，並且可將BCL-2抑制劑(優選維奈托克)配製成用於經口施用。
如上所述，本發明的組合治療可包含Venclexta®。Venclexta®是由Abb Vie Inc和Genentech上市和銷售的維奈托克產品。用於經口施用的Venclexta®片作為包含10、50或100mg作為活性成分的維奈托克的淡黃色或米色片劑提供。每片還包含以下非活性成分：共聚維酮、膠體二氧化矽、聚山梨酯80、硬脂富馬酸鈉(sodium stearyl fumarate)和磷酸氫鈣(calcium phosphate dibasic)。此外，10mg和100mg包衣片包含以下：鐵氧化物黃、聚乙烯醇、聚乙二醇、滑石和二氧化鈦。50mg包衣片還包含以下：鐵氧化物黃、鐵氧化物紅、鐵氧化物黑、聚乙烯醇、滑石、聚乙二醇和二氧化鈦。對於其中CD70抗體或其抗原結合片段與Venclexta®組合的一些實施方案，可將CD70抗體或抗原結合片段配製成用於靜脈內施用，而Venclexta®作用一種或更多種上述片劑形式提供。
對於包含除CD70抗體或抗原結合片段和BCL-2抑制劑(優選維奈托克)之外的藥劑或由其組成的本發明組合，可配製一種或更多種另外的藥劑用於通過與其他藥劑相比相同的途徑或通過不同的途徑施用。例如，在一些優選的實施方案中，其中所述組合包含：(i)與CD70結合的抗體或其抗原結合片段；(ii)維奈托克或其可藥用鹽；以及(iii)阿紮胞苷，抗體或抗原結合片段可靜脈內施用，維奈托克或其可藥用鹽可經口施用，而阿紮胞苷可通過注射皮下施用。在一些優選的實施方案中，其中所述組合包含：(i)與CD70結合的抗體或其抗原結合片段；(ii)維奈托克或其可藥用鹽；以及(iii)地西他濱，抗體或抗原結合片段可靜脈內施用，維奈托克或其可藥用鹽可經口施用，而地西他濱可通過注射皮下施用。
C.治療方法
根據本發明的第一方面描述的組合治療可用於在人物件中治療惡性腫瘤(特別是髓性惡性腫瘤)的方法。
本發明提供了與CD70結合的抗體或其抗原結合片段，其用於在人物件中治療惡性腫瘤，特別是髓性惡性腫瘤，其中所述抗體或其抗原結合片段與BCL-2抑制劑組合施用。本發明還提供了用於在人物件中治療惡性腫瘤(特別是髓性惡性腫瘤)的BCL-2抑制劑，其中所述BCL-2抑制劑和與CD70結合的抗體或抗原結合片段組合施用。
在一些優選的實施方案中，BCL-2抑制劑是維奈托克或其可藥用鹽。
本發明還提供了根據本發明的第一方面的組合，其用於在人物件中治療惡性腫瘤，特別是髓性惡性腫瘤。
在另一方面中，本發明提供了用於在人物件中治療惡性腫瘤(特別是髓性惡性腫瘤)的方法，所述方法包括向物件施用根據本發明的第一方面的組合。本發明還提供了用於在人物件中治療惡性腫瘤(特別是髓性惡性腫瘤)的方法，所述方法包括以下步驟：(i)向物件施用與CD70結合的抗體或其抗原結合片段；以及(ii)向物件施用BCL-2抑制劑，優選維奈托克或其可藥用鹽。所述方法的步驟(i)和(ii)可以以任何順序進行。
上面關於本發明的第一方面的組合所描述的所有實施方案同樣可適用於本文中所述的方法。
術語“惡性腫瘤”涵蓋其中異常細胞以不受控制的方式增殖並侵襲周圍組織的疾病。已經進入身體的血液和淋巴系統的惡性細胞能夠行進至體內的遠處部位，並且在第二部位處播散(seeding)。在某些實施方案中，本文中所述的方法用於治療包含產生表達CD70、CD27或這二者的癌症祖細胞或幹細胞的惡性腫瘤。如本文中其他地方所述，已經在包括腎細胞癌、轉移性乳腺癌、腦腫瘤、白血病、淋巴瘤和鼻咽癌在內的不同類型的癌症中檢測到上調的CD70表達。還已經在包括急性淋巴細胞白血病和T細胞淋巴瘤在內的造血系統譜系的惡性腫瘤中檢測到CD70和CD27的共表達。在某些實施方案中，本文中所述方法用於治療與CD70表達、CD27表達或這二者相關的任一種上述惡性腫瘤。
在一些特別的實施方案中，本文中所述的方法用於治療髓性惡性腫瘤，其中髓性惡性腫瘤是指造血幹細胞或祖細胞的任何克隆性疾病。根據本發明的方法治療的髓性惡性腫瘤可以是新診斷的髓性惡性腫瘤或復發性/難治性髓性惡性腫瘤。
在某些實施方案中，髓性惡性腫瘤選自：急性髓性白血病(AML)；骨髓增生異常綜合徵(MDS)；骨髓增殖性腫瘤(MPN)；慢性髓性白血病(CML)；以及慢性髓細胞單核細胞白血病(CMML)。在一些優選的實施方案中，髓性惡性腫瘤是急性骨髓性白血病(AML)。
可根據WHO 2008分類，與2016年對該分類的更新組合地對髓性惡性腫瘤進行分類和診斷，特別地參見Arber et al.(2016)Blood 127(20)：2391-2405，其通過引用併入本文。
急性髓性白血病(AML)是指涉及髓樣細胞的造血系統腫瘤。AML的特徵在於具有降低的分化能力的髓樣前體的克隆性增殖。AML患者表現出骨髓中母細胞的積累。母細胞還在AML患者的外周血中積累。通常來說，如果患者表現出骨髓或外周血中20%或更多的母細胞，則診斷為AML。
根據WHO分類，AML通常涵蓋以下亞型：AML伴復發性遺傳異常；AML伴骨髓發育不良相關變化；治療相關的髓性腫瘤；髓性肉瘤；與唐氏綜合徵(Down syndrome)相關的髓性增生；成漿細胞樣樹突狀細胞腫瘤(blastic plasmacytoid dendritic cell meoplasm)；以及未另外分類的AML(例如，急性原巨核細包白血病、急性嗜鹼性粒細胞白血病)。
AML也可根據法國-美國-英國(French-American-British，FAB)分類進行分類，涵蓋以下亞型：M0(最低分化的急性粒細胞白血病(acute myeloblastic leukemia))；M1(未成熟的急性粒細胞白血病)；M2(粒細胞成熟的急性粒細胞白血病)；M3(早幼粒細胞白血病或急性早幼粒細胞白血病(acute promyelocytic leukemia，APL))；M4(急性粒單核細胞白血病)；M4eo(粒單核細胞連同骨髓嗜酸性粒細胞增多症)；M5(急性單核細胞白血病(acute monoblastic leukemia，M5a)或急性單核細胞白血病(acute monocytic leukemia，M5b))；M6(急性紅白血病(acute erythroid leukemia)，包括紅白血病(M6a)和非常罕見的純紅白血病(M6b))；或M7(急性原始巨核細胞白血病(acute megakaryoblastic leukemia))。
除非另有說明，否則本文中使用的“AML”是指WHO和/或FAB分類所涵蓋的任一種病症。某些AML亞型被認為是更有利預後的，一些是中等預後的，並且一些是不良預後的。技術人員知曉哪些亞型落入哪種風險類別。
骨髓增生異常綜合徵(MDS)的特徵在於不典型增生(dysplasia)、血細胞減少症(cytopenia)和/或骨髓細胞性和/或髓樣分化的異常改變，例如提高的母細胞浸潤。根據WHO分類，MDS通常涵蓋以下亞型：MDS伴單一譜系不典型增生(先前被稱為“難治性血細胞減少症伴單一譜系不典型增生(refractory cytopenia with unilineage dysplasia)”，其包括難治性貧血、難治性中性粒細胞減少症和難治性血小板減少症)；環鐵粒幼細胞MDS(MDS with ring sideroblast)，其包括單一譜系不典型增生和多譜系不典型增生的亞組(先前被稱為“環鐵粒幼細胞難治性貧血”)；MDS伴多譜系不典型增生(先前被稱為“難治性血細胞減少症伴多譜系不典型增生”)； MDS伴母細胞增多(MDS with excess blast)(MDS-EB，先前被稱為“難治性貧血伴母細胞增多”)，其可基於母細胞百分比進一步分為MDS-EB-1和MDS-EB-2；分離的del(5q)MDS；以及未分類的MDS。
MDS也可根據法國-美國-英國(FAB)分類進行分類，涵蓋以下亞型：M9980/3(難治性貧血(refractory anaemia，RA))；M9982/3(環鐵粒幼細胞難治性貧血(refractory anaemia with ring sideroblast，RARS))；M9983/3(難治性貧血伴母細胞增多(refractory anaemia with excess blast，RAEB))；M9984/3(轉化型難治性貧血伴母細胞增多(refractory anaemia with excess blasts in transformation，RAEB-T))；以及M9945/3(慢性髓細胞單核細胞白血病(CMML))。
除非另有說明，否則本文中使用的“MDS”是指WHO和/或FAB分類所涵蓋的任一種病症。對於AML和MDS二者，在本文中優選WHO分類。
骨髓增殖性腫瘤(MPN)與MDS相似，但根據WHO分類，MPN通常涵蓋以下亞型：慢性髓性白血病(CML)；慢性中性粒細胞白血病(chronic neutrophilic leukemia，CNL)；真性紅細胞增多症(polycythemia vera，PV)；原發性骨髓纖維化(primary myelofibrosis，PMF)；原發性血小板增多症(Essential thrombocythemia，ET)；未另外說明的慢性嗜酸性粒細胞白血病；以及不能分類的MPN。
根據WHO分類，慢性髓細胞單核細胞白血病(CMML)和非典型慢性髓性白血病(atypical chronic myeloid leukemia，aCML)落入MDS/MPN病症的類別，原因是它們代表具有在MDS與MPN之間重疊的臨床、實驗室和形態學特徵的髓性腫瘤。
患者特徵
根據本文中所述的方法治療的患者或物件(特別是患有AML的患者或物件)可患有新診斷的疾病、復發性疾病或原發性難治性疾病。
治療新診斷的AML患者的標準方法是“標準7+3強化化學 治療”方法，其特徵在於施用高劑量的阿糖胞苷7天，隨後施用蒽環類(例如柔紅黴素或伊達比星)3天。給予強化化學治療，目的是引起AML的完全緩解，通常旨在在成功的化學治療之後使患者經歷幹細胞移植。
標準強化化學治療與顯著的毒性和副作用相關，這意味著其不適合於不能耐受這些作用的患者。這些患者被稱為“不適合於標準強化化學治療”。由於例如患者表現出表明他們將不能耐受毒性的一種或更多種合併症，或者表徵患者疾病的預後因素表明標準強化化學治療的不利結局，該患者可以不適合於標準強化化學治療。由臨床醫生考慮個體患者的病史和臨床指南(例如，國立綜合癌症網路(National Comprehensive Cancer Network，NCCN)指南，通過引用併入本文)來確定個體患者對於標準強化化學治療的合適性。在考慮其他因素(包括正在治療的AML的細胞遺傳學和/或分子異常)的情況下，通常將年齡超過60歲的AML患者評估為不適合於標準強化化學治療。
不適合於標準強化化學治療的患者可替代地接受降低強度的化學治療，例如低劑量的阿糖胞苷(low dose cytarabine，LDAC)。不適合於標準強化化學治療並且LDAC也不合適的患者可接受最佳支持性護理(best supportive care，BSC)，包括羥基脲(hydroxyurea，HU)和輸血支持。
根據本文中所述方法治療的患者或物件可以是分類為“不適合於標準強化化學治療”的患者或物件。本發明的組合包括可被預測為具有較少副作用的靶向治療。如此，由於任一種以上鑒定的原因，被認為不適合於標準強化化學治療的患者可用根據本發明的組合進行治療。
如上所討論的，維奈托克在美國被批准與阿紮胞苷、地西他濱或低劑量的阿糖胞苷組合用於在年齡為75歲或更年長或者患有排除了使用強化誘導化學治療的合併症的成人中治療新診斷的AML。因此，在某些實施方案中，特別是在其中BCL抑制劑是維奈托克或其可藥用鹽的一些實施方案中，根據本文中所述的方法治療的患者或物件是年齡為75歲或更年長的新診斷的AML患者。在另一些實施方案中，根據本文中所述的方法治療的患者或物件是患有排除了使用強化誘導治療的合併症的新診斷的AML 患者。可像這樣基於至少一項以下標準對患有排除了使用強化誘導化學治療的合併症的患者進行分類：2至3的基線東部腫瘤協作組(Eastern Cooperative Oncology Group，ECOG)表現狀態、嚴重的心臟或肺合併症、中度肝病損或CLcr<45ml/分鐘。當根據本發明的組合中BCL-2抑制劑是維奈托克或其可藥用鹽時，這樣的實施方案是特別優選的。
根據本文中所述方法治療的患者或物件可適合於其他治療，例如標準強化化學治療，但可接受本文中所述的組合治療作為替代治療選擇。例如，根據本文中所述的方法治療的患者或物件可以是以別的方式適合於標準強化化學治療的新診斷的AML患者。
用於治療的另外的藥劑
本文中所述的方法可包括施用一種或更多種另外的治療劑，例如另外的抗癌劑。在某些實施方案中，所述方法包括施用一種或更多種用於治療髓性惡性腫瘤的藥劑，例如適合用於治療AML的藥劑。這樣的藥劑包括但不限於：選擇素抑制劑(例如GMI-1271)；FMS樣酪氨酸激酶受體3(FLT3)抑制劑(例如米哚妥林或吉列替尼)；週期素依賴性激酶抑制劑；氨肽酶抑制劑；JAK/STAT抑制劑；阿糖胞苷；氟達拉濱；蒽環類化合物(例如柔紅黴素、伊達比星)；多柔比星；羥基脲；Vyxeos；IDH1或IDH2抑制劑，例如Idhifa(或恩西地平)或Tibsovo(或艾伏尼布)；Smoothened抑制劑，例如格拉德吉；BET布羅莫結構域抑制劑；CD123或CD33靶向劑；HDAC抑制劑；LSC靶向劑；AML骨髓龕靶向劑；NEDD8啟動酶抑制劑，例如佩沃塔特；G-CSF；以及拓撲異構酶抑制劑，例如米托蒽醌、塞利尼索和依託泊苷。
在一些優選的實施方案中，本文中所述的方法包括施用作為核苷代謝抑制劑的另外的藥劑，優選低甲基化劑。特別優選的低甲基化劑是阿紮胞苷和地西他濱。如本文中上文所述，在某些實施方案中，包含(i)CD70抗體或其抗原結合片段；以及(ii)BCL-2抑制劑(優選維奈托克或可藥用鹽)的本發明的組合可被配製成包含另外的藥劑，例如阿紮胞苷或地西他濱。
或者，對於一些實施方案，其中所述組合由(i)與CD70結合的抗體或抗原結合片段和(ii)BCL-2抑制劑(優選維奈托克或其可藥用鹽)組成，其中將組合施用於物件的方法可包括施用另外的藥劑(例如阿紮胞苷或地西他濱)的另外的步驟。因此，在一個優選的實施方案中，本發明提供了用於在人物件中治療髓性惡性腫瘤(優選AML)的方法，所述方法包括向物件施用：(i)與CD70結合的抗體或其抗原結合片段；(ii)BCL-2抑制劑，優選維奈托克或其可藥用鹽；以及(iii)阿紮胞苷或地西他濱。本文中還提供了用於在人物件中治療髓性惡性腫瘤(優選AML)的組合，所述組合包含：(i)與CD70結合的抗體或其抗原結合片段；(ii)BCL-2抑制劑，優選維奈托克或其可藥用鹽；以及(iii)阿紮胞苷或地西他濱。
給藥
如在實施例中所示的，本發明的組合表現出針對AML細胞的協同治療效力，即，由組合引起的抑制的水準大於單獨的單藥治療的相加作用。
用於確定協同相互作用的方法是技術人員熟悉的，並且在實施例中描述。用於確定協同作用是否由組合產生的優選方法是Chou-Talalay方法(Chou,TC.Cancer Res.2010 Jan 15；70(2)：440-6，通過引用併入本文)。
根據Chou-Talalay方法，CI<1表示協同作用，CI=1表示相加作用，並且CI>1表示拮抗作用。如第1圖中所示，由本發明的組合產生的協同作用的存在和程度根據組合的抑制作用的強度而變化。組合的抑制作用的強度本身取決於組合的總濃度。
因此，優選地，在本發明所有方面的一些實施方案中，各自選擇施用和/或在組合中提供CD70抗體或其抗原結合片段的劑量，和/或施用和/或在組合中提供BCL-2抑制劑的劑量，使得組合提供協同治療──即，如通過Chou-Talalay方法所確定的，組合表現出小於1的CI。優選地，劑量使得組合表現出小於0.5的CI。
優選地，在某些實施方案中，各自選擇施用和/或在組合中提供CD70抗體或其抗原結合片段的劑量，和/或施用和/或在組合中提供 BCL-2抑制劑的劑量，使得如通過Chou-Talalay方法所確定的，組合表現出小於1的CI和>0.5的Fa。
如在實施例中所示的，對於抗CD70抗體(ARGX-110)、BCL-2抑制劑(維奈托克)和HMA(地西他濱)的組合，也觀察到協同作用。因此，在組合包含HMA的本發明的一些方面的某些優選實施方案中，各自選擇施用和/或在組合中提供CD70抗體或其抗原結合片段的劑量、施用和/或在組合中提供BCL-2抑制劑的劑量，以及施用和/或在組合中提供HMA的劑量，使得組合在治療中提供協同效力。
已經發現CD70抗體，特別是ARGX-110，在相對低的劑量下，對於治療髓性惡性腫瘤(特別是AML)是有效的。因此，在本發明所有方法的某些實施方案中，以每劑量0.1mg/kg至25mg/kg的劑量(例如以0.1mg/kg至20mg/kg的劑量)施用CD70抗體或其抗原結合片段。在某些實施方案中，以每劑量1mg/kg至20mg/kg的劑量施用CD70抗體或其抗原結合片段。除非另有說明，否則本文中所描述的範圍包括該範圍的端點──例如，以0.1mg/kg至25mg/kg的劑量施用包括以0.1mg/kg的劑量施用和以25mg/kg的劑量施用以及以在兩個端點之間的所有劑量施用。
在本發明方法的某些實施方案中，CD70抗體或其抗原結合片段以0.1mg/kg至15mg/kg的劑量施用。在某些實施方案中，CD70抗體或其抗原結合片段以0.5mg/kg至2mg/kg的劑量施用。在某些實施方案中，CD70抗體或其抗原結合片段以1mg/kg、3mg/kg、10mg/kg或20mg/kg的劑量施用。在某些優選的實施方案中，CD70抗體或其抗原結合片段以1mg/kg的劑量施用。在某些優選的實施方案中，CD70抗體或其抗原結合片段以10mg/kg的劑量施用。
在某些實施方案中，施用多劑量的CD70抗體或抗原結合片段。在某些這樣的實施方案中，CD70抗體或其抗原結合片段的每個劑量間隔10至20天，任選地12至18天。在某些實施方案中，抗CD70抗體的每個劑量間隔14至17天。
組合的BCL-2抑制劑(優選維奈托克或其可藥用鹽)可根 據被確定為對於該化合物有效的任何方案給藥。FDA規定的關於Venclexta®在治療AML中的用途的資訊提出了給藥方案，該給藥方案具有上升階段，隨後是維持階段。在將Venclexta®與阿紮胞苷或地西他濱組合開處方的情況下，推薦給藥方案由以下組成：第1天時100mg Venclexta®；第2天時200mg Venclexta®；第3天時400mg Venclexta®；以及此後每天400mg Venclexta®與75mg/m2阿紮胞苷或20mg/m2地西他濱組合，直至觀察到疾病進展或不可接受的毒性。在將Venclexta®與低劑量阿糖胞苷組合開處方的情況下，推薦給藥方案由以下組成：第1天時100mg Venclexta®；第2天時200mg Venclexta®；第3天時400mg Venclexta®；以及此後每天600mg Venclexta®與20mg/m2阿糖胞苷組合，直至觀察到疾病進展或不可接受的毒性。
在某些實施方案中，維奈托克或其可藥用鹽的每個劑量(例如經口劑量)為100mg至600mg。在某些實施方案中，維奈托克或其可藥用鹽以400mg每天給藥。在某些實施方案中，維奈托克或其可藥用鹽以600mg每天給藥。如上所述，在維奈托克的每天固定給藥之前可以是上升期(例如3天)，在這段時間內向患者施用提高的劑量的維奈托克直至達到維持每日劑量。
對於其中組合包含核苷代謝抑制劑或所述方法包括施用核苷代謝抑制劑的本發明的一些實施方案，可以每天20至100mg/m2的劑量施用核苷代謝抑制劑。如已所述，除非另有指明，否則本文中所描述的範圍包括該範圍的端點──例如，以每天20至100mg/m2的劑量施用包括以每天20mg/m2的劑量施用和以每天100mg/m2的劑量施用以及以在兩個端點之間的所有劑量施用。
在某些實施方案中，核苷代謝抑制劑是阿紮胞苷，並且以每天70至80mg/m2的劑量施用。在某些優選的實施方案中，核苷代謝抑制劑是阿紮胞苷，並且以每天75mg/m2的劑量施用。
在某些實施方案中，核苷代謝抑制劑是地西他濱，並且以每天15至25mg/m2的劑量施用。在某些優選的實施方案中，核苷代謝抑制劑 是地西他濱，並且以每天20mg/m2的劑量施用。
對於其中本發明的組合包含核苷代謝抑制劑或所述方法涉及施用核苷代謝抑制劑的一些實施方案，核苷代謝抑制劑可在每日劑量的給藥期間中施用，持續5至10天。即，每天施用核苷抑制劑的劑量，持續時長為5、6、7、8、9或10天的時間。在某些優選的實施方案中，核苷代謝抑制劑在每日劑量的給藥期間中施用，持續7天。優選的核苷代謝抑制劑是阿紮胞苷。
在某些實施方案中，核苷代謝抑制劑根據重複給藥期的劑量方案來施用，其中一個給藥期的結束與下一給藥期的開始間隔18至25天。即，該給藥方案包括至少2個給藥期，在給藥期中每天施用核苷抑制劑的劑量(例如持續時長為5、6、7、8、9或10天的時間)，其中一個給藥期的結束與下一個給藥期的開始間隔18、19、20、21、22、23、24或25天。在某些實施方案中，一個給藥期的結束與下一個給藥期的開始間隔21天。
在某些實施方案中，每個給藥期是相同的長度(例如7天)。在某些實施方案中，每個給藥期的結束與下一個給藥期的開始間隔相同的天數(例如21天)。
在某些實施方案中，在CD70抗體或其抗原結合片段的第一劑量之後7至21天施用核苷代謝抑制劑的第一劑量。在某些實施方案中，在CD70抗體或其抗原結合片段的第一劑量之後10至17天施用核苷代謝抑制劑的第一劑量。在某些實施方案中，在CD70抗體或其抗原結合片段的第一劑量之後14天施用核苷代謝抑制劑的第一劑量。
在某些實施方案中，核苷代謝抑制劑的每日劑量之一與CD70抗體或其抗原結合片段的劑量在同一天施用。即，在其中物件施用CD70抗體(或其抗原結合片段)和核苷代謝抑制劑二者的本發明方法的一些實施方案中，CD70抗體和核苷代謝抑制劑二者的劑量方案使得CD70抗體的預定劑量中的至少一個與核苷代謝抑制劑的預定每日劑量之一在同一天。該天可以是核苷代謝抑制劑的給藥期的第一天、第二天、第三天、第四天、第五天、第六天或第七天。
在某些實施方案中，CD70抗體或其抗原結合片段的劑量每14至17天施用，並且核苷代謝抑制劑根據每日劑量的重複給藥期的劑量方案施用持續7天，其中一個給藥期的結束與下一個給藥期的開始間隔21天，並且其中第一給藥期的第一每日劑量在抗CD70抗體或其抗原結合片段的第一劑量之後14天施用。
在某些實施方案中，一個患者治療週期由28天組成，並且從週期的第1天開始，每天施用核苷代謝抑制劑，優選阿紮胞苷或地西他濱，持續5、6、7、8、9或10天的時間。本文中所述治療的方法可包含多個治療週期。每個治療週期可重複先前的治療週期。在某些實施方案中，根據由28天組成的週期來治療用CD70抗體、BCL抑制劑(優選維奈托克或其可藥用鹽)和阿紮胞苷治療的患者，其中阿紮胞苷在28天週期的前7天每天施用。在某些實施方案中，根據由28天組成的週期來治療用CD70抗體、BCL抑制劑(優選維奈托克或其可藥用鹽)和地西他濱治療的患者，其中地西他濱在28天週期的前5天每天施用。對於其中根據28天週期用CD70抗體、BCL抑制劑(優選維奈托克或其可藥用鹽)和核苷代謝抑制劑(優選阿紮胞苷或地西他濱)來治療患者的一些實施方案，CD70抗體可在28天週期的第3天和/或第17天施用。在一些優選的實施方案中，CD70抗體是ARGX-110。在另一些優選的實施方案中，CD70抗體(例如ARGX-110)以10mg/kg的劑量施用。
本發明的另一個優點是，在組合治療的初始期之後，可逐漸降低或停止NMI(例如阿紮胞苷)的施用。延長的NMI治療期可能引起積累的毒性，例如NMI對非母細胞類型的影響引起的血細胞減少症。因此，通過在初始期之後逐漸降低或停止NMI的劑量，將降低這樣的毒性的風險，並且可恢復非母細胞類型。在某些實施方案中，根據本發明的治療包括在第一階段(誘導治療)中根據上述任一種實施方案向患者施用CD70抗體、BCL-2抑制劑(例如維奈托克)和NMI作為組合治療，並且在隨後的第二階段中向患者施用CD70抗體、BCL-2抑制劑(例如維奈托克)和NMI作為組合治療，但其中在第二階段(維持治療)中NMI的劑量低於在第一階段中施用的NMI的劑量。在第二階段中NMI的劑量可為零。
在這樣的一些實施方案中，在第二階段(即維持治療)中施用的CD70抗體的劑量是根據已經描述的實施方案的任何劑量。即，在某些實施方案中，劑量為0.1mg/kg至25mg/kg，例如0.1mg/kg至20mg/kg，例如1mg/kg至20mg/kg。在某些實施方案中，劑量為每劑量0.1mg/kg至15mg/kg。在某些實施方案中，劑量為0.5mg/kg至2mg/kg。在某些實施方案中，劑量為1mg/kg、3mg/kg、10mg/kg或20mg/kg。在某些實施方案中，劑量為1mg/kg。在某些實施方案中，劑量為10mg/kg。
第一階段(即誘導治療)的持續時間、過渡至第二階段(即維持治療)的時機以及NMI劑量逐漸降低或完全停止的程度是將針對個體患者而改變的因素，並且由患者的臨床醫生根據個體患者對治療的回應和他們的病史來確定。因此，以非限制性實例的方式提供以下實施方案。在某些實施方案中，向患者施用誘導治療，直至他們的骨髓和/或外周血母細胞百分比小於10%，任選地小於5%。在某些實施方案中，施用誘導治療持續至少5個NMI給藥期，任選地至少6、7、8、9或至少10個NMI給藥期。
在某些實施方案中，在維持期中NMI的劑量不超過每天50mg/m2，任選地不超過每天40mg/m2，任選地不超過每天30mg/m2，任選地不超過每天20mg/m2。在某些實施方案中，在維持期中NMI的劑量為零。
如本文中其他地方所說明的，可將組合的藥劑配製成用於通過任何合適的施用途徑施用。因此，根據本發明的方法的藥劑的施用可通過任何合適的途徑進行，並且對於單個藥劑，不需要通過相同的途徑進行。例如，CD70抗體或其抗原結合片段可靜脈內施用，而BCL-2抑制劑(例如維奈托克)經口施用。對於其中患者或對象接受低甲基化劑例如阿紮胞苷或地西他濱的一些實施方案，這樣的藥劑可通過注射靜脈內或皮下施用。
治療結局
在某些實施方案中，本文中所述的方法包括監測患者的母細胞計數，即母細胞的數量。本文中使用的“母細胞”是指原粒細胞(myeloblast)或髓樣母細胞，其是骨髓內的髓樣祖細胞。在健康的個體中，在外周血循環中未發現母細胞，並且骨髓中的母細胞應小於5%。在患有髓性惡性腫瘤(尤 其是AML和MDS)的物件中，具有被破壞的分化潛能的異常母細胞的產生增多，並且可通過監測患者外周血循環或骨髓或這二者中的母細胞計數來檢測這些異常母細胞的過量產生。
骨髓或外周血中母細胞的比例可通過本領域中已知的方法來評估，例如，通過對從物件的骨髓活檢或從外周血塗片獲得的細胞進行流式細胞術或細胞形態學評估來評估。相對於樣品中的總細胞來確定母細胞的比例。例如，流式細胞術可用於使用CD45dim、SSClow細胞數目來確定相對於總細胞數目的母細胞的比例。作為另外的實例，細胞形態學評估可用於確定相對於所檢查的視野中的細胞總數的形態學鑒定的母細胞的數目。
在某些實施方案中，提供了用於將骨髓中母細胞的比例降低至小於25%、小於20%、例如小於10%的方法。在某些實施方案中，提供了用於將骨髓中母細胞的比例降低至小於5%的方法。在某些實施方案中，提供了用於將骨髓中母細胞的比例降低至約5%至約25%的方法，其中與在進行所述方法之前(或治療前)骨髓母細胞百分比相比，骨髓母細胞百分比同樣降低了超過50%。
在某些實施方案中，提供了用於將外周血中母細胞的比例降低至小於25%、小於20%，例如小於10%的方法。在某些實施方案中，提供了用於將外周血中母細胞的比例降低至小於5%的方法。在某些實施方案中，提供了用於將外周血中母細胞的比例降低至約5%至約25%的方法，其中與在進行所述方法之前(或治療前)外周血母細胞百分比相比，外周血母細胞百分比也降低了超過50%。
為了臨床確定母細胞百分比，通常細胞形態學(也稱為細胞形態學(cytomorphology))評估是優選的。
在一些具體的實施方案中，本文中所述的方法引起完全回應。在AML治療的背景下，完全回應或“完全緩解”被定義為：骨髓母細胞<5%；沒有迴圈母細胞和具有棒狀小體(Auer rod)的母細胞；沒有髓外疾病；ANC
Figure 108146057-A0202-12-0039-21
1.0×109個/L(1000μL)；血小板計數
Figure 108146057-A0202-12-0039-22
100×109個/L(100,000μL)，參見Döhner et al.(2017)Blood 129(4)：424-447。
所述方法可實現伴有血小板恢復的完全回應，即其中血小板計數
Figure 108146057-A0202-12-0040-23
100×109個/L(100,000個/μL)的回應。所述方法可實現伴有中性粒細胞恢復的完全回應，即其中中性粒細胞計數
Figure 108146057-A0202-12-0040-24
1.0×109個/L(1000個/μL)的回應。作為替代或補充，所述方法可引起紅細胞或血小板或這二者的輸注非依賴性，持續8周或更長時間、10周或更長時間、12周或更長時間。
在一些特別的實施方案中，本文中所述的方法引起為陰性的微小殘留病或可測量殘留病(measurable residual disease，或MRD)狀態，參見Schuurhuis et al.(2018)Blood.131(12)：1275-1291。
在某些實施方案中，本文中所述的方法引起完全回應而沒有微小殘留病(CRMRD-)，參見Döhner et al.，同上。
所述方法可實現部分回應或引起部分緩解。在AML治療的情況下，部分回應或部分緩解包括將骨髓母細胞百分比降低5%至25%，並將治療前骨髓母細胞百分比降低至少50%，參見Döhner et al.，同上。
本文中所述的方法可延長存活。本文中使用的術語“存活”可指總體存活、1年存活、2年存活、5年存活、無事件存活、無進展存活。與針對待治療的特定疾病或病症的金標準治療相比，本文中所述的方法可延長存活。金標準治療也可被鑒定為最佳實踐、護理標準、標準醫學護理或標準治療。對於任何給定的疾病，根據不同的臨床實踐(例如在不同的國家中)，可存在一種或更多種金標準治療。已經可用於髓性惡性腫瘤的治療是多樣化的，並且包括化學治療、放射治療、幹細胞移植和某些靶向治療。此外，美國和歐洲的臨床指南均規定了髓性惡性腫瘤(例如AML)的標準治療，參見O’Donnell et al.(2017)Journal of the National Comprehensive Cancer Network 15(7)：926-957和Döhner et al.(2017)Blood_129(4)：424-447，二者均通過引用併入。
相對於經歷針對髓性惡性腫瘤的任一種標準治療的患者，本發明的方法可提高或改善存活。
本文中所述的方法可包括使患者或物件進行骨髓移植的另外的步驟。本文中所述的方法還可用於使患有髓性惡性腫瘤的患者或對象 準備進行骨髓移植。如上所述，可實施本發明的方法以降低骨髓或外周血中母細胞的絕對數或相對數。在某些實施方案中，實施所述方法以降低移植之前骨髓和/或外周血中的母細胞計數。所述方法可用於將母細胞計數降低至小於5%，以使患者或物件準備進行骨髓移植。
D.藥盒(kit)
本文中所述的本發明的組合可以以被包裝以包含使用說明書的藥盒的形式提供。
通過引用併入
在前面的描述中和在以下的實施例通篇引用了多種出版物，其各自通過引用整體併入本文。
實施例
在最近的1期臨床試驗中，用與HMA組合的ADCC增強的人源化單克隆抗CD70抗體(mAb)庫薩圖珠單抗(在本文中也稱為ARGX-110)對較年長且體格不佳(unfit)的AML患者進行的治療示出了有前景的臨床活性和良好的耐受性譜(tolerability profile)。
BCL-2拮抗劑維奈托克靶向白血病幹細胞(LSC)並通過抑制氧化磷酸化作用來消除白血病幹細胞，並在與標準護理組合在臨床I期和II期研究中在較年長的AML患者中示出非常有前景的活性(Pollyea et al.,Nature Medicine(2018)24；1859-1866)。然而，即便用新的藥劑(例如維奈托克)，仍然存在變得難治或復發的患者。推測將維奈托克和庫薩圖珠單抗以獨特但互補的作用機制組合可成功消除LSC。
方法
為了檢驗該推測，在體外在表達CD70的AML細胞系(例如MOLM-13、NB-4和NOMO-1細胞)中，根據Chou-Talalay方法(Chou TC,Cancer Research(2010)70(2)；440-6)進行藥物組合研究。MOLM-13 AML細胞表達FLT3-ITD，而NOMO-1細胞表達t(9；11)(p22；q23)。這些遺傳畸變中的每一個都傳達著患者結局的預後不良。NB-4是急性早幼粒細胞白血病 (APL)細胞系，其中APL是AML患者的亞群。值得注意的是，如以mRNA和蛋白質水準所測量的，NOMO-1和MOLM-13細胞表達高水準的CD70。MOLM-13 AML細胞還表達BCL-2，並且對BCL-2抑制敏感(Lin et al.Scientific Reports(2016)6；27696)。
MOLM-13(Matsuo et al.,Leukemia(1997)11(9)：1469-77)、NOMO-1(Kato et al.,Acta Haematol Jpn,1986)、MV4-11和NB4(Lanotte et al.,Blood(1991)77(5)；1080-86)細胞購自ATCC。細胞系是經測試無支原體的，並且在含有GlutaMAX補充劑、100U/mL青黴素和100μg/mL鏈黴素的由ATCC推薦的含FCS培養基中在95%空氣和5% CO2的濕潤氣氛中於37℃下培養。
最初，將來自每種AML細胞系的細胞用地西他濱、庫薩圖珠單抗或維奈托克單獨處理以確定每種處理的IC50。在來源於健康個體的CFSE標記的NK細胞(比例為1：1)的存在下，用一定濃度範圍的庫薩圖珠單抗(0.1、1.0和10μg/ml)、維奈托克(0.5和200nM)、地西他濱(0.01至1μM)或載劑處理105個AML細胞。一式三份地進行該測定。
IC50確定鑒定了以下工作濃度用於隨後的協同實驗：
1)IC50，MOLM-13：(地西他濱：0.01nM，維奈托克：0.42nM，庫薩圖珠單抗：0.68μg/ml)
2)IC50，NOMO-1：(地西他濱：0.001nM，維奈托克：3.4nM，庫薩圖珠單抗：0.14μg/ml)
3)IC50，NB4：(地西他濱：4.8nM，維奈托克：17.3nM，庫薩圖珠單抗：0.3μg/ml)
4)IC50，MV4-11：(地西他濱：2.36nM，維奈托克：5nM，庫薩圖珠單抗：1.2μg/ml)
為了確定協同作用，以等能比(equipotency ratio)(IC501/IC502或IC501/IC502/IC503)進行了恒定組合比例實驗，使得每種藥物對細胞殺傷的貢獻均等。如先前所描述的(Riether et al.,Sci Transl Med (2015)7(298)；298ra119)，對每種劑量/劑量組合以兩次技術重複評估組合藥物劑量回應。
將NOMO-1、MOLM-13、NB-4或MV4-11 AML細胞系用單獨的載劑、地西他濱、庫薩圖珠單抗或維奈托克，用維奈托克和地西他濱、地西他濱和庫薩圖珠單抗或維奈托克和庫薩圖珠單抗的雙組合，或用地西他濱、庫薩圖珠單抗和維奈托克的三組合進行處理。所有組合均在三個高濃度和三個低濃度(高於和低於確定的IC50)下並且以恒定的比例進行測試。將細胞在CFSE標記的NK細胞(比例為1：1)的存在下進行培養。在72小時之後，通過膜聯蛋白V染色評估活的AML細胞數目，並作為存活的細胞與經載劑處理的細胞的比例計算藥物處理的效果。
計算合用指數(CI)，並使用CompuSyn軟體將其對受影響分數(Fa)作圖。所有組合的合用指數(CI)針對受影響分數(Fa)的結果圖在第1圖中示出，單個組合在第2圖中示出。
0、0.5和1的Fa值對應於0、50%和100%被殺傷的細胞。<1、1、>1的CI分別表示協同作用、相加作用和拮抗作用。IC50表示對於相應的IC50濃度的組合所達到的Fa值。評估協同作用的Fa-CI圖方法的原理和優點在例如Chou TC,Cancer Research(2010)70(2)；440-6和Zhao et al.Front Biosci(Elite Ed).(2010)2；241-249(其各自通過引用整體併入本文)中提供。
此外，測試了庫薩圖珠單抗/維奈托克和庫薩圖珠單抗/維奈托克/HMA組合對來自AML患者的原代LSC的作用。從新診斷的AML患者中分離原代CD34+CD38-白血病幹細胞(LSC)，並將其用庫薩圖珠單抗、地西他濱或維奈托克單藥治療或組合進行處理。然後評估對LSC的集落形成和重新平板接種能力的影響。
具體地，在NK細胞(比例為1：1)的存在下，將來自三位AML患者(P1、P2和P3)的CD34+CD38- AML LSC一式兩份地用庫薩圖珠單抗(Cusa：0.3μg/ml)或維奈托克(Ve：6nM)作為單藥治療或組合培養過夜，隨後在甲基纖維素中平板接種。在NK細胞(比例為1：1)的存在 下，將來自另外兩名AML患者(P4和P5)的CD34+CD38- AML LSC用庫薩圖珠單抗(Cusa：0.3μg/ml)、地西他濱(0.01μM)或維奈托克(Ve：6nM)作為單藥治療或組合培養過夜。14天之後評估集落形成。
結果
1.與維奈托克和/或地西他濱組合使用的庫薩圖珠單抗在體外消除AML細胞系中示出協同作用
與庫薩圖珠單抗組合的維奈托克和/或地西他濱以寬的劑量範圍協同消除了表達CD70的NOMO-1 AML細胞(參見第1圖和第2B圖至第2D圖)。
在較高的作用水準(Fa>0.7)(其與腫瘤殺傷更相關)(Chou,2010)下，組合示出強的協同作用。重要的是，維奈托克和庫薩圖珠單抗(Ven/Cusa)以及維奈托克、庫薩圖珠單抗和地西他濱(Ven/Cusa/Dec)的CI接近0.1，表明了非常強的協同作用。維奈托克和地西他濱(Ven/Dec)以及庫薩圖珠單抗和地西他濱(Cusa/Dec)在較高的作用水準下也實現了協同作用，其中最大的CI為約0.5。Ven/Cusa組合的協同作用類似於對於Ven/Cusa/Dec組合觀察到的協同作用。
在NB4和MV4-11 AML細胞系中觀察到了相似的結果，其中所有庫薩圖珠單抗組合在高的作用水準(Fa>0.5)下均表現出強效的協同作用(參見第3圖和第5圖)。
在MOLM-13細胞系中，所有的雙組合在較低的作用水準下均表現出協同作用。維奈托克/地西他濱和cusatutzumab/地西他濱僅分別在低於0.4和0.6的Fa的藥物濃度下顯示出協同作用。在較高的作用水準(約0.7至0.8的Fa)(其與腫瘤殺傷更相關)下，儘管在最高作用水準下觀察到了一些拮抗作用，但cusatutzumab/維奈托克的組合仍示出強的協同作用(參見第4圖)。維奈托克、地西他濱和庫薩圖珠單抗的三組合在所有作用水準下均顯示出低水準的拮抗作用。
2.與維奈托克和/或地西他濱組合使用的庫薩圖珠單抗在體外消除原代人 AML白血病幹細胞(LSC)中示出協同作用
為了評估庫薩圖珠單抗/維奈托克組合對原代人AML LSC的作用，將來自5名AML患者(P1至P5)的CD34+CD38- LSC進行處理。患者特徵如下所示。
Figure 108146057-A0202-12-0045-4
患者P1、P2和P3的結果示於第6圖和第7圖中。第6圖示出了在處理之後每孔形成的集落的絕對數，指示了LSC的數目。第7圖示出了相同的資料，其表示為每位患者的載劑處理組的每孔平均集落的比例。
第6圖和第7圖示出了與任一單獨的處理相比，在AML細胞系中觀察到的庫薩圖珠單抗與維奈托克之間的協同作用轉化成LSC數目的強效且顯著的降低(第6A圖和第7A圖)。
第6B圖和第7B圖示出了當在不存在處理分子的情況下重新平板接種第一集落時，維持了降低LSC數目的效果。
患者P4和P5的結果示於第8圖中。在這些患者中，庫薩圖珠單抗、地西他濱和維奈托克的三組合示出了與庫薩圖珠單抗和維奈托克的雙組合等效的效力。這與這樣的事實相符：與Ven/Cusa組合相比，對於三組合未觀察到協同作用的提高(第1圖)。
3.維奈托克提高了CD70表達
評估了維奈托克在mRNA和蛋白質水準二者上對CD70表達的影響。結果示於第9圖和第10圖中，並且清楚地證明在存在維奈托克的情況下CD70表達在AML細胞中上調。
結論
進行本實驗以確定用庫薩圖珠單抗和維奈托克和/或低甲基化劑(例如阿紮胞苷或地西他濱)的組合治療是否可提供比單獨的每種單藥治療更有效的針對AML的治療。進一步探討了組合治療是否可表現出協同治療作用。
Chou-Talalay方法提供的合用指數(CI)是確定藥物組合是否以協同、相加或拮抗的方式相互作用的公認手段。推測維奈托克和庫薩圖珠單抗可以以協同的方式發揮作用，因為從機理上可表明，用維奈托克進行的處理導致AML細胞上CD70的上調(第9圖和第10圖)。這可意味著維奈托克使LSC更易於受用庫薩圖珠單抗進行的細胞溶解型殺傷的影響。然而，如在Chou 2010(Chou Cancer Res.(2010)Jan 15；70(2)：440-6，通過引用併入本文)中所述，即使在有每種單個藥物發揮作用的機理的一些知識的情況下，也難以預測藥物之間的協同作用。
第1圖至第5圖中示出的資料表明，Ven/Cusa組合對AML細胞表現出強的協同作用，尤其是在高作用水準下。對於還包含地西他濱作為低甲基化劑的三組合，維持了強效的協同作用。
這種協同作用是特別有利的，因為這表明，當藥物組合時，與實現與單藥治療相同的效果所需的濃度相比，可使用每種藥物的顯著較低的濃度。
由於細胞系實驗顯示了維奈托克/庫薩圖珠單抗組合的強協同作用，因此對原代AML LSC測試該組合。原代LSC提供了對潛在治療益處的嚴格且更臨床相關的評估，因為這些細胞驅動AML的異常增生特徵。
在細胞系中觀察到的Ven/Cusa組合治療的協同作用轉化成來自人患者的原代AML白血病幹細胞(LSC)的強效降低(第6圖至第8圖)。這些資料表明，對於所有患者樣品，組合治療抑制LSC集落形成至顯著大於單獨的任一種治療的程度。資料看來顯示出Ven/Cusa組合的組分之間的協同作用。(由於可用的原代細胞數目少，使用Chou-Talalay方法測試協同作用是不可行的)。
當通過體外系列重新平板接種實驗以更嚴格的方式分析了庫薩圖珠單抗/維奈托克處理對LSC功能的影響時，在隨後的重新平板接種期間維持了在第一次平板接種之後觀察到的在組合處理之後的受損的集落形成。即便在重新平板接種中不存在庫薩圖珠單抗和維奈托克，情況仍然如此，表明LSC及其增殖潛力的有效降低。
三組合庫薩圖珠單抗/維奈托克/地西他濱降低原代人LSC的集落和再平板接種能力至與庫薩圖珠單抗/維奈托克組合處理相同的程度。因此，可使用庫薩圖珠單抗和維奈托克而無需包含HMA(例如地西他濱)的組合來實現AML的有效治療，從而降低患者對毒性治療的暴露。
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Figure 108146057-A0305-02-0054-11

Claims (48)

  1. 一種包含以下的組合：(i)與CD70結合的抗體或其抗原結合片段；以及(ii)BCL-2抑制劑，其中所述BCL-2抑制劑是維奈托克或其可藥用鹽，並且其中所述與CD70結合的抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變結構域(VH)和輕鏈可變結構域(VL)，其中所述VH和VL結構域包含以下CDR序列：含有SEQ ID NO：3或由其組成的HCDR3；含有SEQ ID NO：2或由其組成的HCDR2；含有SEQ ID NO：1或由其組成的HCDR1；含有SEQ ID NO：7或由其組成的LCDR3；含有SEQ ID NO：6或由其組成的LCDR2；以及含有SEQ ID NO：5或由其組成的LCDR1。
  2. 如請求項1所述的組合，其中所述與CD70結合的抗體或其抗原結合片段包含VH結構域和VL結構域，所述VH結構域包含與SEQ ID NO：4具有至少70%同一性的胺基酸序列，所述VL結構域包含與SEQ ID NO：8具有至少70%同一性的胺基酸序列。
  3. 如請求項2所述的組合，其中所述與CD70結合的抗體或其抗原結合片段包含VH結構域和VL結構域，所述VH結構域包含SEQ ID NO：4所示胺基酸序列，所述VL結構域包含SEQ ID NO：8所示胺基酸序列。
  4. 如請求項1所述的組合，其中所述抗體是IgG。
  5. 如請求項1所述的組合，其中所述抗體具有ADCC活性、CDC活性或ADCP活性，任選地其中所述抗體包含去岩藻糖基化的抗體結構域。
  6. 如請求項1所述的組合，其中所述抗體是ARGX-110(庫薩圖珠單抗)。
  7. 如請求項1所述的組合，其中所述抗原結合片段選自：抗體輕鏈可變結構域(VL)；抗體重鏈可變結構域(VH)；單鏈抗體(scFv)；F(ab’)2 片段；Fab片段；Fd片段；Fv片段；單臂(單價)抗體；通過這樣的抗原結合片段的組合、組裝或綴合形成的雙鏈抗體、三鏈抗體、四鏈抗體和任何抗原結合片段。
  8. 如請求項1所述的組合，其中所述抗體或其抗原結合片段和所述BCL-2抑制劑配製成分開的組合物。
  9. 如請求項1所述的組合，其中所述組合包含至少一種另外的抗癌劑。
  10. 如請求項9所述的組合，其中所述抗癌劑為用於治療髓性惡性腫瘤的藥劑。
  11. 如請求項10所述的組合，其中所述抗癌劑是用於治療急性髓性白血病(AML)的藥劑。
  12. 如請求項1所述的組合，其中所述組合另外包含低甲基化劑。
  13. 如請求項12所述的組合，其中所述低甲基化劑是阿紮胞苷或地西他濱。
  14. 如請求項1所述的組合，其由(i)與CD70結合的抗體或其抗原結合片段；以及(ii)維奈托克或其可藥用鹽組成。
  15. 如請求項12所述的組合，其由(i)與CD70結合的抗體或其抗原結合片段；(ii)維奈托克或其可藥用鹽；以及(iii)低甲基化劑組成。
  16. 如前述請求項1所述的組合，其中CD70抗體或其抗原結合片段和所述BCL-2抑制劑以當施用於患有急性髓性白血病的人物件時足以提供協同治療的量各自存在於所述組合中。
  17. 如請求項1所述的組合，其中所述CD70抗體或其抗原結合片段和所述BCL-2抑制劑以當與選自NOMO-1、MOLM-13、NB4和MV4-11的AML細胞系一起培養時足以提供協同細胞殺傷的量各自存在於所述組合中。
  18. 如請求項1至17中任一項所述的組合，其用於治療。
  19. 如請求項1至17中任一項所述的組合，其用於在人物件中治療惡性腫瘤。
  20. 如請求項19所述的組合，其中所述惡性腫瘤為髓性惡性腫瘤。
  21. 一種與CD70結合的抗體或其抗原結合片段，其用於在人物件中治療惡性腫瘤，其中所述治療包括施用與維奈托克或其可藥用鹽組合的所述抗體或其抗原結合片段，並且其中所述與CD70結合的抗體或抗原結合片段包含重鏈可變結構域(VH)和輕鏈可變結構域(VL)，其中所述VH和VL結構域包含以下CDR序列：含有SEQ ID NO：3或由其組成的HCDR3；含有SEQ ID NO：2或由其組成的HCDR2；含有SEQ ID NO：1或由其組成的HCDR1；含有SEQ ID NO：7或由其組成的LCDR3；含有SEQ ID NO：6或由其組成的LCDR2；以及含有SEQ ID NO：5或由其組成的LCDR1。
  22. 如請求項21所述應用的抗體或抗原結合片段，其中所述惡性腫瘤為髓性惡性腫瘤。
  23. 一種BCL-2抑制劑，其用於在人物件中治療惡性腫瘤，其中所述BCL-2抑制劑和與CD70結合的抗體或其抗原結合片段組合施用，其中所述BCL-2抑制劑是維奈托克或其可藥用鹽，並且其中所述與CD70結合的抗體或抗原結合片段包含重鏈可變結構域(VH)和輕鏈可變結構域(VL)，其中所述VH和VL結構域包含以下CDR序列：含有SEQ ID NO：3或由其組成的HCDR3；含有SEQ ID NO：2或由其組成的HCDR2；含有SEQ ID NO：1或由其組成的HCDR1；含有SEQ ID NO：7或由其組成的LCDR3；含有SEQ ID NO：6或由其組成的LCDR2；以及含有SEQ ID NO：5或由其組成的LCDR1。
  24. 如請求項23所述應用的抗BCL-2抑制劑，其中所述惡性腫瘤為髓性惡性腫瘤。
  25. 如請求項21所述應用的與CD70結合的抗體或其抗原結合片段或如請求項23所述應用的BCL-2抑制劑，其中所述物件另外地施用阿紮胞苷或地西他濱。
  26. 如請求項1至17中任一項所限定的組合，其用於在人物件中治療惡性腫瘤的方法，所述方法包括向所述物件施用有效量的所述組合。
  27. 如請求項26所述應用的組合，其中所述惡性腫瘤為髓性惡性腫瘤。
  28. 如請求項27所述應用的組合，其中所述髓性惡性腫瘤選自新診斷的或復發性/難治性髓性惡性腫瘤。
  29. 如請求項27所述應用的組合，其中所述髓性惡性腫瘤選自：急性髓性白血病(AML)；骨髓增生異常綜合徵(MDS)；骨髓增殖性腫瘤(MPN)；慢性髓性白血病(CML)；以及慢性髓細胞單核細胞白血病(CMML)。
  30. 如請求項29所述應用的組合，其中所述髓性惡性腫瘤是急性髓性白血病(AML)。
  31. 如請求項30所述應用的組合，其中所述髓性惡性腫瘤選自是急性髓性白血病(AML)，並且其中所述物件是不適合於標準強化化學治療的新診斷的AML患者，和/或其中所述物件是年齡為75歲或更年長的新診斷的AML患者或者患有排除了使用標準強化化學治療的合併症的新診斷的AML患者。
  32. 如請求項26所述應用的組合，其中CD70抗體或其抗原結合片段以0.1至25mg/kg的劑量施用。
  33. 如請求項32所述應用的組合，其中所述劑量為10mg/kg。
  34. 如請求項26所述應用的組合，其中所述BCL-2抑制劑以100mg至600mg的劑量施用。
  35. 如請求項26所述應用的組合，其中所述組合另外地包含阿紮胞苷，或者所述方法包括另外的步驟，其中所述物件施用阿紮胞苷，任選地其中所述阿紮胞苷以70至80mg/m2的劑量施用。
  36. 如請求項35所述應用的組合，其中所述劑量為75mg/m2。
  37. 如請求項26所述應用的組合，其中所述組合另外地包含地西他濱，或者所述方法包括另外的步驟，其中所述物件施用地西他濱，任選地其中所述地西他濱以15至25mg/m2的劑量施用。
  38. 如請求項37所述應用的組合，其中所述劑量為20mg/m2。
  39. 如請求項26所述應用的組合，其中各自選擇施用所述CD70抗體或其抗原結合片段的劑量和施用所述BCL-2抑制劑的劑量，使得所述組合提供協同治療。
  40. 如請求項30所述應用的組合，其還包括監測所述患者的母細胞計數，任選地其中所述患者的骨髓母細胞計數降低至小於5%，或者其中所述患者的骨髓母細胞計數降低至5%至25%，並且骨髓母細胞百分比與治療前相比降低超過50%。
  41. 如請求項26所述應用的組合，其引起部分回應或完全回應，任選地其引起伴有血小板恢復，和/或中性粒細胞恢復的完全回應。
  42. 如請求項26所述應用的組合，其引起紅細胞或血小板或這二者的輸注非依賴性，持續8周或更長時間。
  43. 如請求項26所述應用的組合，其延長存活。
  44. 如請求項26所述應用的組合，相對於用於治療髓性惡性腫瘤的護理劑的標準，所述方法延長存活，和/或所述方法引起為陰性的微小殘留病狀態。
  45. 如請求項26所述應用的組合，其還包括使所述物件進行骨髓移植。
  46. 如請求項26所述應用的組合，其還包括施用適合於治療惡性腫瘤的一種或更多種另外的抗癌劑。
  47. 如請求項46所述應用的組合，其中所述惡性腫瘤為髓性惡性腫瘤。
  48. 如請求項46所述應用的組合，其中所述一種或更多種另外的抗癌劑選自適合於治療AML的藥劑，其中所述一種或更多種另外的抗癌劑選自：選擇素抑制劑(例如GMI-1271)；FMS樣酪氨酸激酶受體3(FLT3)抑制劑(例如米哚妥林或吉列替尼)；週期素依賴性激酶抑制劑；氨肽酶抑制劑；JAK/STAT抑制劑；阿糖 胞苷；氟達拉濱；蒽環類化合物(例如柔紅黴素、伊達比星)；多柔比星；羥基脲；Vyxeos；IDH1或IDH2抑制劑，例如Idhifa(或恩西地平)或Tibsovo(或艾伏尼布)；Smoothened抑制劑，例如格拉德吉；BET布羅莫結構域抑制劑；CD123或CD33靶向劑；HDAC抑制劑；LSC靶向劑；AML骨髓龕靶向劑；NEDD8啟動酶抑制劑，例如佩沃塔特；G-CSF；以及拓撲異構酶抑制劑，例如米托蒽醌、塞利尼索和依託泊苷。
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