TW202432114A

TW202432114A - 可活化sting之雜環化合物

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Publication number: TW202432114A
Application number: TW112140490A
Authority: TW
Inventors: 奧理奇雷瑟爾; 賽巴斯汀卡洛他; 喬治達曼; 西德克斯格波特; 珊卓盧思漢斯屈; 赫伯特納爾; 索斯坦歐斯特; 瑪夏斯崔伍
Original assignee: 德商百靈佳殷格翰國際股份有限公司
Priority date: 2022-10-26
Filing date: 2023-10-24
Publication date: 2024-08-16
Also published as: US20240166629A1; WO2024088991A1

Abstract

本發明係關於可活化干擾素基因刺激蛋白(Stimulator of Interferon Gene；STING)之式(I)雜環化合物。

Description

可活化STING之雜環化合物

本發明係關於可活化干擾素基因刺激蛋白(Stimulator of Interferon Gene；STING)及其鹽之小分子。特定言之，本發明係關於可活化STING之雜環化合物。此外，本發明係關於包含此等化合物之醫藥組合物及組合，以及其在用於治療與STING相關或經STING調節之疾病的方法中之用途。特定言之，本發明之醫藥組合物適用於治療發炎疾病、過敏性疾病及自體免疫疾病、感染性疾病、癌症，且適用於作為疫苗佐劑。

STING為在先天免疫系統中起重要作用之模式識別受體(PRRP)之一，其藉由偵測細胞外及細胞內危險信號來辨別病原體及宿主細胞，該等危險信號包括損傷相關分子模式(damage-associated molecular pattern；DAMP)及病原體相關分子模式(pathogen-associated molecular pattern；PAMP)。此等識別過程構成針對病毒及細菌感染以及惡性細胞的第一道防線。然而，病原體以及癌細胞已演化出逃避免疫系統識別的方式。因此免疫療法之目標係啟動抗原特異性免疫反應或再活化免疫系統之某些細胞類型中預先存在的針對病原侵入者或癌細胞的反應。

在PRRP中，STING (亦稱為TMEM173、MPYS、MITA、ERIS)屬於核酸感測器家族，且為胞溶質DNA信號傳導之轉接子。在健康狀態下之哺乳動物細胞中，DNA分隔在細胞核中。在病原性情形下，諸如含DNA之病原體侵入，或在惡性細胞中，DNA存在於細胞質中。此處，STING對於偵測上文所描述之胞溶質DNA及誘導針對病原性事件之免疫反應而言係關鍵的。

STING在其基礎狀態下以二聚體形式存在，其中其N端域錨定在ER中且C端域駐存於胞溶質中。由蛋白質環GMP-AMP合成酶(cGAS)產生的環二核苷酸(CDN)為STING之天然配位體(Ablasser等人, Nature 498, 380 - 384, 2013)。CDN與STING之結合誘導構形變化，使得實現TANK結合激酶(TBK1)與干擾素調節因子3 (IRF3)之結合及活化，隨後自ER再定位至核周內體(Liu等人, Science 347, 第6227期, 2630-1 - 2630-14, 2015)。轉錄因子IRF3及NF-kB經TBK1加以磷酸化引起多種細胞介素(包括I型干擾素(IFN))之表現。

由抗原呈現細胞及其他細胞類型產生之I型IFN視為T細胞活化且藉此分化抗原特異性效應CD4及CD8 T細胞中的關鍵事件。顯示，缺乏I型IFN導致針對病毒感染或腫瘤細胞之T細胞依賴性免疫反應降低(Zitvogel等人, Nature Reviews Immunology 15, 405 - 414, 2015)。另一方面，癌症療法期間I型IFN特徵之存在與腫瘤浸潤性T細胞之數目增加及潛在有利的臨床結果相關(Sistigu等人, Nature Medicine 20, 1301 - 1309, 2014)。

腫瘤微環境中之I型IFN之有效分泌及針對癌細胞之T細胞依賴性免疫反應的誘導取決於STING之存在，如小鼠中之近期研究中所示(Woo等人, Immunity 41, 5, 830 - 842, 2014；Corrales等人, Cell Reports 11, 1018 - 1030, 2015；Deng等人, Immunity 41, 5, 843 - 852, 2014)。STING之缺失導致腫瘤微環境中I型IFN含量降低及在若干種小鼠腫瘤模型中之抗腫瘤作用降低，藉此突顯I型IFN之存在的重要性。另一方面，STING之特異性活化引起針對癌細胞之抗原特異性T細胞免疫反應提高。

I型干擾素可藉由誘導後天性及先天性免疫細胞兩者之活化來顯著增強抗腫瘤免疫反應。

鑒於I型IFN在若干惡性病(包括病毒感染)及癌症療法中之重要性，允許特異性活化STING之策略具有治療意義。STING活化可與各種經批准的化學治療劑或其他抗癌療法(諸如放射療法) (Wu等人, Med Res Rev 2020年5月;40(3):1117-1141)或感染性疾病療法產生協同效應。

在先前技術中，STING之小分子調節劑例如描述於WO2020075790中。

根據本發明之化合物為STING之新穎活化劑，此係藉由使用THP1-Blue報導細胞株之活體外報導系統證實。

在一個態樣中，本發明係關於式(I)化合物 (I) 其中 B為選自由以下組成之群的基團：含有1或2個N原子之5-7員單環雜環基，含有1個N原子之6員雙環雜環基，及含有1個N原子及1個選自由O及S組成之群之雜原子的6員單環雜環基； R ¹ 為-H或-C ₁- ₆烷基； R ² 為-H或-鹵素； R ³ 為-H或-鹵素；其限制條件為R ²及/或R ³為鹵素； R ⁴ 係選自由以下組成之群：-H、-S(O ₂)-C ₁- ₆烷基、=O、-C(O)H、-C(O)OH、-C(O)O-C ₁- ₆烷基、-C ₁- ₆伸烷基-C(O)OH 及-C(O)NH ₂； R ⁵ 不存在或係選自由-H及=O組成之群或其鹽。

如本文所定義之式(I)化合物或其鹽尤其適用於治療與STING相關或經STING調節之病理生理學過程，特定言之適用於治療發炎疾病、過敏性疾病或自體免疫疾病、感染性疾病或癌症，或適用作疫苗佐劑。

在另一態樣中，本發明係關於涉及式(I)化合物或其鹽之治療方法。在另一態樣中，本發明係關於通式(I)化合物之用途，其係用作藥劑。在另一態樣中，本發明係關於一種醫藥組合物，其包含至少一種通式(I)化合物。在另一態樣中，本發明係關於通式(I)化合物之用途，其係用於包含其他活性物質之藥劑組合中。在另一實施例中，本發明提供針對通式(I)化合物之通用合成流程，包括實例及方法。

本發明之化合物呈現若干有利特性，諸如對人類STING之有利結合親和力、藉由細胞EC50所量測之有利細胞活性(亦即，在攜帶不同人類STING對偶基因之細胞中)及如下文所描述之細胞分析中之有利滲透性。

因此，在第一態樣中，本發明提供新的式(I)化合物，包括其鹽，其活化STING且因此在活體外及/或活體內以STING依賴性方式誘導細胞介素產生，且具有用於療法(亦即，用作藥劑)的適合之藥理學及藥物動力學特性。

根據本發明之化合物通常展示對STING「HAQ」版本低於7 μM，較佳低於4 μM，更佳低於2 μM，最佳低於1 μM之細胞EC50。

此外，根據本發明之化合物亦展示對人類STING變體「H232R」 (有時亦稱為野生型，Yi等人, 2013; PLOS ONE 8(10))低於3 μM，較佳低於2 μM，更佳低於1 μM，最佳低於0.7 μM之細胞EC50。

此外，根據本發明之化合物亦展示對人類STING變體「R232H」低於3 μM，較佳低於2 μM，更佳低於1 μM，最佳低於0.7 μM之細胞EC50。

此外，根據本發明之化合物亦展示對人類STING變體「R293Q」低於10 μM，較佳低於5 μM，更佳低於3 μM，甚至更佳低於2 μM，最佳低於1 μM之細胞EC50。

此外，根據本發明之化合物亦展示對人類STING變體「AQ」低於7 μM，較佳低於3 μM，更佳低於2 μM，最佳低於1 μM之細胞EC50。

「H232R」、「R232H」及「R293Q」為在給出位置處之單一胺基取代。「AQ」為由兩個取代G230A及R293Q組成之變體，且「HAQ」為由三個取代：R71H、G230A及R293Q組成之STING變體(Yi等人, 2013; PLOS ONE 8(10))。針對人類STING之不同變體之活性為有利的，因為該活性使在具有單核苷酸多型性之患者中誘導所需藥理學反應之機率最大化。

較佳為具有對人類STING變體「AQ」、「HAQ」及「R293Q」低於1 μM以及對人類STING變體「R232H」及「H232R」低於0.7 μM之細胞EC50的化合物。

此外，本發明之化合物呈現與人類STING蛋白質之有利結合。與人類STING之有利結合親和力以及有利細胞活性及/或有利藥物動力學特性可使得能夠達到藥理學功效所需之較低劑量。較低劑量對於患者而言具有較低「載藥量」或「藥物負擔」 (母體藥物及其代謝物)之優點，從而引起可能較少副作用及降低藥品的生產成本。

化合物與蛋白質之結合可藉由已知方法，諸如表面電漿子共振、閃爍近接分析、等溫滴定量熱法或差示掃描螢光測定法來測定。在後一測試中，蛋白質去摺疊時之溫度(亦稱為解鏈溫度T _m)係藉由與蛋白質之疏水性部分結合之染料的螢光變化來量測。在小分子結合後，T _m偏移與此小分子之結合親和力相關。STING促效劑之高結合親和力係由＞10 K，較佳＞13 K，更佳＞15 K之T _m偏移反映。

在本發明之另一態樣中，本發明之化合物呈現良好的細胞滲透性，促進細胞內STING蛋白質(在Caco-2細胞株中所量測的)與P _app,AB(自細胞單層之頂側至底外側量測的)之標靶接合(Caco-2 A→B)大於5×10E-6 cm/s，較佳大於8×10E-6 cm/s，更佳大於10×10E-6 cm/s。此外，本發明之化合物展示＜8，較佳＜5，更佳＜3.5之來自Caco細胞的低流出比率(如下文所示計算)，表示細胞內部有良好滯留時間且藉此促進更長的標靶接合持續時間。

在本發明之另一態樣中，本發明之化合物呈現對人類STING變體「HAQ」低於1 μM之細胞EC50以及來自Caco細胞之流出比率＜3.5。在本發明之另一態樣中，本發明之化合物呈現對人類STING變體「H232R」低於0.7 μM之細胞EC50以及來自Caco細胞之流出比率＜3.5。較佳為具有對人類STING變體「H232R」低於0.7 μM、對人類STING變體「HAQ」低於1 μM之細胞EC50以及來自Caco細胞之流出比率＜3.5的化合物。

如本文所定義之根據通式(I)之本發明化合物 (I) 其中 B為選自由以下組成之群的基團：含有1或2個N原子之5-7員單環雜環基，含有1個N原子之6員雙環雜環基，及含有1個N原子及1個選自由O及S組成之群之雜原子的6員單環雜環基； R ¹ 為-H或-C ₁- ₆烷基； R ² 為-H或-鹵素； R ³ 為-H或-鹵素；其限制條件為R ²及/或R ³為鹵素； R ⁴ 係選自由以下組成之群：-H、-S(O ₂)-C ₁- ₆烷基、=O、-C(O)H、-C(O)OH、-C(O)O-C ₁- ₆烷基、-C ₁- ₆伸烷基-C(O)OH 及-C(O)NH ₂； R ⁵ 不存在或係選自由-H及=O組成之群；或其鹽尤其適用於治療與STING相關或經STING調節之病理生理學過程，特定言之，適用於治療發炎疾病、過敏性疾病或自體免疫疾病、感染性疾病或癌症，或適用作疫苗佐劑。因此，在另一態樣中，本發明進一步係關於如本文所定義之式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其係用作藥劑。對於熟習此項技術者，本發明之其他態樣將直接自前述及以下描述及實例而變得顯而易知。

所用術語及定義對本文未具體定義之術語應給出將由熟習此項技術者鑒於揭示內容及上下文對其給出之含義。然而，如本說明書中所使用，除非規定為相反，否則以下術語具有所指示之含義且遵守以下約定。

在下文所定義之基團(group)、基團(radical)或部分中，通常在基團之前指定碳原子數目，例如C _1-6烷基意謂具有1至6個碳原子之烷基(alkyl group)或烷基(alkyl radical)。一般而言，在如HO、H ₂N、(O)S、(O) ₂S、NC(氰基)、HOOC、F ₃C或其類似基團之基團中，熟習此項技術者可自基團自身之自由價看到基團與分子之一或多個連接點。對於包含兩個或更多個亞基之組合基團而言，最後命名之亞基為基團連接點，例如取代基「芳基-C _1-3伸烷基」意謂芳基與C _1-3烷基-基團鍵結，C _1-3烷基-基團與核心或與取代基所連接之基團鍵結。

倘若本發明之化合物以化學名稱及化學式形式描繪，若有任何不一致，則應以化學式為準。波浪線在子式中可用於指示與如所定義之核心分子連接的鍵。

舉例而言，術語「3-羧基丙基-基團」表示以下取代基：其中羧基與丙基之第三個碳原子連接。術語「1-甲基丙基-」、「2,2-二甲基丙基-」或「環丙基甲基-」基團表示以下基團：波浪線在子式中可用於指示與如所定義之核心分子連接的鍵。

1.1.1.1 術語經取代如本文所使用，術語「經取代」意謂指定原子上之一或多個氫經選自取代基之定義基團的基團置換，其限制條件為不超過指定原子正常價，且取代產生穩定化合物。同樣，術語「經取代」可結合化學部分而非單個原子使用，例如「經取代之烷基」、「經取代之芳基」或其類似物。

1.1.1.2 立體化學-溶劑合物-水合物除非特別指示，否則在整個說明書及隨附申請專利範圍中，給定化學式或名稱應涵蓋互變異構物及所有立體異構物、光學異構物及幾何異構物(例如鏡像異構物、非鏡像異構物、E/Z異構物等……)，及其外消旋物，以及不同比例之個別鏡像異構物的混合物、非鏡像異構物之混合物，或其中此類異構物及鏡像異構物存在之前述形式中之任一者的混合物，以及其溶劑合物，諸如水合物。

除非特別指示，否則如下文更詳細定義之「醫藥學上可接受之鹽」亦應涵蓋其溶劑合物，諸如水合物。

1.1.1.3 立體異構物一般而言，可根據熟習此項技術者已知之合成原理來獲得實質上純的立體異構物，例如藉由分離對應混合物，藉由使用立體化學純的起始物質及/或藉由立體選擇性合成。此項技術中已知如何製備光學活性形式，諸如藉由外消旋形式之解析或藉由合成，例如自光學活性起始物質開始及/或藉由使用對掌性試劑。

可經由不對稱合成來製備本發明之鏡像異構純化合物或中間物，例如藉由對可藉由已知方法分離(例如藉由層析分離或結晶)的適當非鏡像異構化合物或中間物進行製備及後續分離，及/或藉由使用對掌性試劑(諸如對掌性起始物質、對掌性催化劑或對掌性助劑)。

此外，熟習此項技術者已知如何自對應外消旋混合物製備鏡像異構純化合物，諸如藉由在對掌性固定相上層析分離對應外消旋混合物；或藉由使用適當解析劑來解析外消旋混合物，例如藉助於外消旋化合物與光學活性酸或鹼形成非鏡像異構鹽，隨後解析該等鹽及自該鹽釋放所需化合物；或藉由進行對應外消旋化合物與光學活性對掌性輔助試劑之衍生化，隨後分離非鏡像異構物及移除對掌性輔助基團；或藉由動力學解析外消旋物(例如藉由酶解析)；藉由在適合之條件下自同形異向晶體之聚結物進行鏡像選擇性結晶；或藉由在光學活性對掌性助劑之存在下自適合溶劑進行(部分)結晶。

1.1.1.4 鹽片語「醫藥學上可接受」在本文中用於指在合理醫學判斷範疇內，適用於與人類之組織接觸而無過度毒性、刺激、過敏反應或其他問題或併發症，且與合理益處/風險比相稱的彼等化合物、材料、組合物及/或劑型。

如本文所使用，「醫藥學上可接受之鹽」係指所揭示化合物之衍生物，其中母化合物藉由製成其酸性鹽或鹼性鹽而改質。醫藥學上可接受之鹽的實例包括(但不限於)諸如胺之鹼性殘基的無機酸鹽或有機酸鹽；諸如羧酸之酸性殘基的鹼金屬鹽或有機鹽；及其類似物。

舉例而言，此類鹽包括來自以下之鹽：苯磺酸、苯甲酸、檸檬酸、乙磺酸、反丁烯二酸、龍膽酸(gentisic acid)、氫溴酸、氫氯酸、順丁烯二酸、蘋果酸、丙二酸、杏仁酸、甲磺酸、4-甲基-苯磺酸、磷酸、水楊酸、丁二酸、硫酸及酒石酸。

可與來自氨、L-精胺酸、鈣、2,2'-亞胺雙乙醇、L-離胺酸、鎂、 N-甲基-D-葡糖胺、鉀、鈉及參(羥甲基)-胺基甲烷之陽離子形成其他醫藥學上可接受之鹽。

本發明之醫藥學上可接受之鹽可藉由習知化學方法自含有鹼性或酸性部分之母化合物合成。一般而言，可藉由使此等化合物之游離酸或游離鹼形式與足夠量之適當鹼或酸在水中或在有機稀釋劑(諸如乙醚、乙酸乙酯、乙醇、異丙醇或乙腈或其混合物)中反應來製備此類鹽。

除上文所提及之鹽外，例如適用於純化或分離本發明之化合物的其他酸之鹽(例如三氟乙酸鹽)亦構成本發明之一部分。

1.1.1.5 鹵素術語鹵素指代氟、氯、溴及碘。

1.1.1.6 雜原子雜原子可以所有可能的氧化階段存在。舉例而言，硫可以亞碸(R-S(O)-R')及碸(-R-S(O) ₂-R')形式存在。

1.1.1.7 烷基術語「C _1n烷基」(其中n為選自2、3、4、5或6，較佳4、5或6之整數)單獨或與另一自由基組合表示具有1至n個C原子之非環狀飽和分支鏈或直鏈烴基。舉例而言，術語C ₁₅烷基涵蓋基團H ₃C、H ₃CCH ₂、H ₃CCH ₂CH ₂、H ₃CCH(CH ₃)、H ₃CCH ₂CH ₂CH ₂、H ₃CCH ₂CH(CH ₃)、H ₃CCH(CH ₃)CH ₂、H ₃CC(CH ₃) ₂、H ₃CCH ₂CH ₂CH ₂CH ₂、H ₃CCH ₂CH ₂CH(CH ₃)、H ₃CCH ₂CH(CH ₃)CH ₂、H ₃CCH(CH ₃)CH ₂CH ₂、H ₃CCH ₂C(CH ₃) ₂、H ₃CC(CH ₃) ₂CH ₂、H ₃CCH(CH ₃)CH(CH ₃)及H ₃CCH ₂CH(CH ₂CH ₃)。

1.1.1.8 伸烷基術語「C _1-n伸烷基」(其中n為選自2、3、4、5或6，較佳4、5或6之整數)單獨或與另一基團組合，表示含有1至n個碳原子之非環狀飽和分支鏈或直鏈二價烷基。舉例而言，術語C _1-4伸烷基包括-CH ₂-、-CH ₂-CH ₂-、-CH(CH ₃)-、-CH ₂-CH ₂-CH ₂-、-C(CH ₃) ₂-、-CH(CH ₂CH ₃)-、-CH(CH ₃)-CH ₂-、-CH ₂-CH(CH ₃)-、-CH ₂-CH ₂-CH ₂-CH ₂-、-CH ₂-CH ₂-CH(CH ₃)-、-CH(CH ₃)-CH ₂-CH ₂-、-CH ₂-CH(CH ₃)-CH ₂-、-CH ₂-C(CH ₃) ₂-、-C(CH ₃) ₂-CH ₂-、-CH(CH ₃)CH-(CH ₃)-、-CH ₂-CH(CH ₂CH ₃)-、-CH(CH ₂CH ₃)-CH ₂-、-CH(CH ₂CH ₂CH ₃)-、-CH(CH(CH ₃)) ₂-及-C(CH ₃)(CH ₂CH ₃)-。

1.1.1.9 烯基若C _2-m烷基之至少兩個碳原子藉由雙鍵彼此鍵結，則術語「C _2-m烯基」用於該基團「C _2-m烷基」，其中m為選自3、4、5或6，較佳4、5或6之整數。

1.1.1.10 伸烯基若C _2-m伸烷基之至少兩個碳原子藉由雙鍵彼此鍵結，則術語「C _2-m伸烯基」用於該基團「C _2-m伸烷基」，其中m為選自3、4、5或6，較佳4、5或6之整數。

1.1.1.11 炔基若C _2-m烷基之至少兩個碳原子藉由參鍵彼此鍵結，則術語「C _2-m炔基」用於該基團「C _2-m烷基」，其中m為選自3、4、5或6，較佳4、5或6之整數。

1.1.1.12 伸炔基若C _2-m伸烷基之彼等碳原子中之至少兩者藉由參鍵彼此鍵結，則術語「C _2-m伸炔基」用於該基團「C _2-m伸烷基」，其中m為選自3、4、5或6，較佳4、5或6之整數。

1.1.1.13 環烷基術語「C _3-k環烷基」(其中k為選自3、4、5、6、7或8，較佳4、5或6之整數)單獨或與另一基團組合表示具有3至k個C原子之環狀飽和未分支烴基。舉例而言，術語C _3-7環烷基包括環丙基、環丁基、環戊基、環己基及環庚基。

1.1.1.14 環烯基術語「C _3-k環烯基」(其中k為選自3、4、5、6、7或8，較佳4、5或6之整數)單獨或與另一基團組合表示具有3至k個C原子之環狀不飽和但非芳族的未分支烴基，其中至少兩個C原子藉由雙鍵彼此鍵結。舉例而言，術語C _3-7環烯基包括環丙烯基、環丁烯基、環戊烯基、環戊二烯基、環己烯基、環己二烯基、環庚烯基、環庚二烯基及環庚三烯基。

1.1.1.15 鹵基-(烷基、伸烷基或環烷基) 添加至「烷基」、「伸烷基」或「環烷基」(飽和或不飽和)之術語「鹵基」定義烷基、伸烷基或環烷基，其中一或多個氫原子經選自氟、氯或溴，較佳氟及氯、尤其較佳為氟之鹵素原子置換。實例包括：H ₂FC-、HF ₂C-、F ₃C-。

1.1.1.16 碳環基術語「碳環基」單獨或與另一基團組合意謂由3至14個碳原子組成之單環、二環或三環結構。術語「碳環基」係指完全飽和、部分飽和及芳族環系統。術語「碳環基」涵蓋稠合、橋聯及螺環系統。

1.1.1.17 芳基如本文所使用，術語「芳基」單獨或與另一基團組合表示含有6個碳原子之碳環芳族單環基，其視情況進一步與為芳族、飽和或不飽和之第二個五員或六員碳環基稠合。芳基包括(但不限於)苯基、二氫茚基、茚基、萘基、蒽基、菲基、四氫萘基及二氫萘基。

1.1.1.18 雜環基術語「雜環基」意謂視情況包含芳族環之飽和或不飽和單環或多環系統，其含有一或多個選自N、O、S、SO、SO ₂之雜原子且由3至14個環原子組成，其中雜原子均不為芳族環之一部分。術語「雜環基」意欲包括所有可能的異構形式。

因此，術語「雜環基」包括以下例示性結構(當各形式視情況經由共價鍵連接至任何原子時其不描繪為基團，只要維持適當價數即可)：

1.1.1.19 雜芳基術語「雜芳基」意謂包含至少一個芳族環之單環或多環系統，其含有一或多個選自N、O、S、SO或SO ₂之雜原子且由5至14個環原子組成，其中雜原子中之至少一者為芳族環之一部分，其中所得環系統必須為化學穩定的。術語「雜芳基」意欲包括所有可能的異構形式。

因此，術語「雜芳基」包括以下例示性結構(當各形式視情況經由共價鍵連接至任何原子時其不描繪為基團，只要維持適當價數即可)：

上文所給出之許多術語可反覆用於定義化學式或基團，且在各情況下彼此獨立地具有上文所給出含義中之一者。

術語「雙環系統」意謂由包括螺環、稠合及橋聯環系統之2個接合環狀子結構組成之基團。

較佳實施例本發明之一個特定實施例係關於式(I)化合物或其鹽， (I) 其中R ¹為-C ₁- ₃烷基。

本發明之另一特定實施例係關於式(I)化合物或其鹽，其中R ¹為-CH ₃。

本發明之另一特定實施例係關於式(I)化合物或其鹽，其中R ²係選自由-H、-F及-Cl組成之群。

本發明之另一特定實施例係關於式(I)化合物或其鹽，其中R ³係選自由-H、-F及-Cl組成之群。

本發明之另一特定實施例係關於式(I)化合物或其鹽，其中R ²係選自由-H、-F及-Cl組成之群，且R ³係選自由-H、-F及-Cl組成之群，其限制條件為R ²及/或R ³為-F或-Cl。

本發明之另一特定實施例係關於式(I)化合物或其鹽，其中 R ⁴ 係選自由以下組成之群：-H、-S(O ₂)-C ₁- ₆烷基、=O、-C(O)H、-C(O)OH、-C(O)O-C ₁- ₆烷基。

本發明之另一特定實施例係關於式(I)化合物或其鹽，其中 R ⁴ 係選自由以下組成之群：-H、-S(O ₂)-C ₁- ₆烷基、=O、-C(O)H、-C(O)OH。

本發明之另一特定實施例係關於式(I)化合物或其鹽，其中 R ⁴ 係選自由以下組成之群：-S(O ₂)-C ₁- ₆烷基、=O、-C(O)H、-C(O)OH。

本發明之另一特定實施例係關於式(I)化合物或其鹽，其中 R ⁴ 為-C(O)OH。

本發明之另一特定實施例係關於式(I)化合物或其鹽，其中 B為選自由以下組成之群的基團：含有1或2個N原子之5-7員單環雜環基，含有1個N原子之6員雙環雜環基，及含有1個N原子及1個選自由O及S組成之群之雜原子的6員單環雜環基。

本發明之另一特定實施例係關於式(I)化合物或其鹽，其中 B係選自由以下組成之群：、、、、、及。

本發明之另一特定實施例係關於式(I)化合物或其鹽，其中B係選自由以下組成之群：、、及。

本發明之另一特定實施例係關於式(I)化合物或其鹽，其中B係選自由以下組成之群：、、、及。

本發明之另一特定實施例係關於式(I)化合物或其鹽，其中 B係選自由以下組成之群：、、及。

本發明之另一特定實施例係關於式(I)化合物或其鹽，其中B係選自由以下組成之群：、、及，且其中 R ⁴ 係選自由以下組成之群：-H、-S(O ₂)-C ₁- ₆烷基、=O、-C(O)H、-C(O)OH，且其中 R ⁵ 不存在或係選自由-H及=O組成之群。

本發明之另一特定實施例係關於式(I)化合物或其鹽，其中B係選自由以下組成之群：、、及；且其中R ¹為-CH ₃且R ²係選自由-H、-F及-Cl組成之群；且其中R ³係選自由-H、-F及-Cl組成之群，其限制條件為R ²及/或R ³為-F或-Cl；且其中R ⁴係選自由以下組成之群：-S(O ₂)-C ₁- ₆烷基、=O、-C(O)H、-C(O)OH；且其中R ⁵不存在或係選自由-H及=O組成之群。

本發明之另一特定實施例係關於選自由以下組成之群的化合物或其醫藥學上可接受之鹽：、、、、、、、、、、、及。

本發明之另一特定實施例係關於選自由以下組成之群的化合物或其醫藥學上可接受之鹽：、、、、、、、及。

本發明之另一特定實施例係關於選自由以下組成之群的化合物或其醫藥學上可接受之鹽：、、、、、、，及。

本發明之另一特定實施例係關於選自由以下組成之群的化合物或其醫藥學上可接受之鹽：、、、、及。

本發明之另一特定實施例係關於選自由以下組成之群的化合物或其醫藥學上可接受之鹽：、、、，及。

本發明之另一特定實施例係關於選自由以下組成之群的化合物或其醫藥學上可接受之鹽：、、、、、及。

本發明之另一特定實施例係關於選自由以下組成之群的化合物或其醫藥學上可接受之鹽：、、、、。

本發明之另一特定實施例係關於選自由以下組成之群的化合物或其醫藥學上可接受之鹽：、、、、、。

本發明之另一特定實施例係關於或其醫藥學上可接受之鹽。

B、R ¹、R ²、R ³、R ⁴、R ⁵之定義中之任一者及各者可彼此組合。

在一個態樣中，本發明係關於呈其無鹽形式之式(I)化合物。

在一個態樣中，本發明係關於式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其係用作藥劑。在一個態樣中，本發明係關於式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其係用於治療選自由以下組成之群的疾病：發炎疾病、過敏性疾病或自體免疫疾病、感染性疾病及癌症，或用作疫苗佐劑。在一個態樣中，本發明係關於式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽及醫藥學上可接受之載劑。在一個態樣中，本發明係關於式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽作為其他活性物質，其係選自由以下組成之群的物質：細胞生長抑制物質、細胞毒性物質、細胞增殖抑制劑、抗血管生成物質、類固醇、病毒、免疫原性細胞死亡誘導劑、癌症靶向劑、免疫調節劑、抗體及奈米抗體。

治療方法在本發明之另一態樣中，發現通式(I)化合物或其鹽可適用於預防及/或治療其中STING之調節具有治療益處的疾病及/或病狀。另外，本發明之化合物由於其活性而適用作疫苗佐劑。

與STING相關或經STING調節之疾病及病狀涵蓋(但不限於)發炎、過敏性或自體免疫疾病(例如過敏性鼻炎或哮喘)、感染性疾病或癌症。

自體免疫疾病包括(但不限於)全身性紅斑狼瘡、牛皮癬、胰島素依賴型糖尿病(IDDM)、皮肌炎及休格連氏症候群(Sjogren's syndrome；SS)。

本發明之化合物可用於治療身體之任何組織及器官之發炎，包括(但不限於)肌肉骨胳發炎、血管發炎、神經發炎、消化系統發炎、眼部發炎、生殖系統發炎及其他發炎。

可用本發明之化合物治療之肌肉骨胳發炎之實例包括：關節炎(包括例如骨關節炎、類風濕性關節炎、牛皮癬性關節炎、僵直性脊椎炎、急性及慢性感染性關節炎、與痛風及假性痛風相關之關節炎及幼年特發性關節炎)、肌腱炎、滑膜炎、腱鞘炎、滑囊炎、纖維組織炎(肌肉纖維疼痛)、上髁炎、肌炎及骨炎(包括例如佩吉特氏病(Paget's disease)、恥骨骨炎及囊性纖維性骨炎)。可用本發明之化合物治療之眼部發炎之實例包括：瞼緣炎、眼瞼鬆弛(blepharochalasis)、結膜炎、淚腺炎、角膜炎、乾燥性角膜結膜炎(乾眼)、鞏膜炎、倒睫及眼色素層炎。可用本發明之化合物治療之神經系統發炎之實例包括：腦炎、格-巴二氏症候群(Guillain-Barre syndrome)、腦膜炎、神經性肌強直、發作性睡病、多發性硬化症、脊髓炎及精神分裂症。可用本發明之化合物治療的血管結構或淋巴系統之發炎之實例包括：關節僵硬、關節炎、靜脈炎、脈管炎及淋巴管炎。可用本發明之化合物治療的消化系統之發炎病狀之實例包括：膽管炎、膽囊炎、腸炎、小腸結腸炎、胃炎、胃腸炎、發炎性腸病(諸如克羅恩氏病(Crohn's disease)及潰瘍性結腸炎)、回腸炎及直腸炎。可用本發明之化合物治療的生殖系統之發炎病狀之實例包括：子宮頸炎、絨毛膜羊膜炎(chorioamnionitis)、子宮內膜炎、附睾炎、臍炎、卵巢炎、睪丸炎、輸卵管炎、輸卵管卵巢膿腫、尿道炎、陰道炎、外陰炎及外陰疼痛。

該等化合物可用於治療具有發炎組分之自體免疫病狀。此類病狀包括急性播散性普禿、白塞氏病(Behcet's disease)、蔡格司氏病(Chagas'disease)、慢性疲勞症候群、自主神經障礙、腦脊髓炎、僵直性脊椎炎、再生不良性貧血、化膿性汗腺炎、自體免疫肝炎、自體免疫卵巢炎、乳糜瀉、克羅恩氏病、1型糖尿病、巨大細胞動脈炎、古巴斯德氏症候群(Goodpasture's syndrome)、格雷氏病(Grave's disease)、格-巴二氏症候群、橋本氏病(Hashimoto's disease)、亨偌-絲奇恩賴紫癜(Henoch-Schonlein purpura)、川崎氏病(Kawasaki's disease)、紅斑狼瘡、顯微鏡下結腸炎、微觀多動脈炎、混合型結締組織疾病、多發性硬化症、重症肌無力、眼陣攣肌陣攣症候群、視神經炎、奧德氏甲狀腺炎(Ord's thyroiditis)、天疱瘡、結節性多動脈炎、多肌痛、類風濕性關節炎、萊特爾氏症候群(Reiter's syndrome)、休格連氏症候群、顳動脈炎、韋格納氏肉芽腫病(Wegener's granulomatosis)、溫自體免疫溶血性貧血、間質性膀胱炎、萊姆病(lyme disease)、硬斑病、牛皮癬、類肉瘤病、硬皮病、潰瘍性結腸炎及白斑病。

該等化合物可用於治療具有發炎組分之T細胞介導之超敏性疾病。此類病狀包括接觸性超敏、接觸性皮膚炎(包括因野葛引起之接觸性皮膚炎)、蕁麻疹、皮膚過敏、呼吸道過敏(乾草熱、過敏性鼻炎)及麩質敏感性腸病(乳糜瀉)。

可用化合物治療之其他發炎病狀包括例如闌尾炎、皮膚炎、皮肌炎、心內膜炎、纖維組織炎、齒齦炎、舌炎、肝炎、化膿性汗腺炎、虹膜炎、喉炎、乳房炎、心肌炎、腎炎、耳炎、胰臟炎、腮腺炎、心包炎、腹膜炎、咽炎、胸膜炎、肺炎、前列腺炎、腎盂腎炎及口炎、移植排斥(涉及諸如腎臟、肝臟、心臟、肺、胰臟(例如胰島細胞)、骨髓、角膜、小腸之器官、皮膚同種異體移植、皮膚同種移植及心臟瓣膜異種移植、血清病及移植物抗宿主病)、急性胰臟炎、慢性胰臟炎、急性呼吸窘迫症候群、塞紮里氏症候群(Sexary's syndrome)、先天性腎上腺增生、非化膿性甲狀腺炎、癌症相關高鈣血症、天疱瘡、大皰性疱疹樣皮膚炎、重度多形性紅斑、剝脫性皮膚炎、脂漏性皮膚炎、季節性或常年性過敏性鼻炎、支氣管哮喘、接觸性皮膚炎、異位性皮膚炎、藥物超敏性反應、過敏性結膜炎、角膜炎、眼部帶狀疱疹、虹膜炎及虹膜睫狀體炎、脈絡膜視網膜炎、視神經炎、症狀性類肉瘤病、暴發性或播散性肺結核化學療法、成人特發性血小板減少性紫癜、成人繼發性血小板減少症、獲得性(自體免疫)溶血性貧血、成人白血病及淋巴瘤、兒童急性白血病、區域性腸炎、自體免疫脈管炎、多發性硬化症、慢性阻塞性肺病、實體器官移植排斥、敗血症。較佳治療包括移植排斥、類風濕性關節炎、牛皮癬性關節炎、多發性硬化症之治療。1型糖尿病、哮喘、發炎性腸病、全身性紅斑狼瘡、牛皮癬、慢性肺病及伴隨感染性病狀之發炎(例如敗血症)。

在一個態樣中，待使用本發明之化合物治療之疾病或病狀係癌症。其中式(I)化合物或其鹽或溶劑合物可具有潛在有益抗腫瘤作用的癌症疾病及病狀之實例包括(但不限於)：肺癌、骨癌、胰臟癌、皮膚癌、腦癌、頭癌、頸癌、子宮癌、卵巢癌、胃癌、結腸癌、結腸直腸癌、乳癌、食道癌、小腸癌、腸癌、內分泌系統癌、甲狀腺癌、副甲狀腺癌、腎上腺癌、尿道癌、前列腺癌、陰莖癌、睪丸癌、輸尿管癌、膀胱癌、腎臟癌或肝癌、膽管癌；尿道上皮癌；直腸癌；肛門區癌；輸卵管癌、子宮內膜癌、子宮頸癌、陰道癌、外陰癌、腎盂癌、腎細胞癌；肉瘤；軟組織肉瘤；黏液瘤；橫紋肌瘤；纖維瘤；脂肪瘤；畸胎瘤；膽管癌；肝母細胞瘤；血管肉瘤；血管瘤；肝癌；纖維肉瘤；軟骨肉瘤；骨髓瘤；慢性或急性白血病；淋巴球性淋巴瘤；原發性CNS淋巴瘤；CNS贅瘤；脊椎軸腫瘤；鱗狀細胞癌；滑膜肉瘤；惡性胸膜間皮瘤；腦幹神經膠質瘤；垂體腺瘤；支氣管腺瘤；軟骨瘤性錯構瘤；間皮瘤；霍奇金氏病(Hodgkin's Disease)或前述癌症中之一或多者之組合。

可用根據本發明之化合物治療之較佳的癌症為皮膚癌、肺癌(例如小細胞肺癌、非小細胞肺癌)、肝癌、胰臟癌、結腸癌、結腸直腸癌、腦癌、乳癌、卵巢癌、前列腺癌、腎臟癌、膀胱癌、膽管癌、子宮內膜癌、甲狀腺癌、子宮頸癌、胃癌、頭癌、頸癌、肉瘤、軟組織肉瘤、食道癌、頭頸癌、直腸及尿道上皮癌，以及淋巴瘤。

新化合物可用於預防、姑息性、治癒性或半治癒性、短期或長期治療上文所提及之疾病，視情況亦與手術、放射療法或其他「當前最新技術」化合物，諸如細胞生長抑制或細胞毒性物質、細胞增殖抑制劑、抗血管生成物質、類固醇、抗體、奈米抗體、癌症靶向劑、病毒(包括(但不限於)溶瘤病毒)或免疫原性細胞死亡誘導劑組合。

新化合物亦可用於藉由組合以下來預防、姑息性、治癒性或半治癒性、短期或長期治療上文所提及之疾病：化合物之不同投與途徑(例如靜脈內、瘤內、皮下、吸入、經口等)，視情況亦與手術、放射療法或其他「當前最新技術」化合物，諸如細胞生長抑制或細胞毒性物質、細胞增殖抑制劑、抗血管生成物質、類固醇、抗體、奈米抗體、癌症靶向劑、病毒(包括(但不限於)溶瘤病毒)或免疫原性細胞死亡誘導劑組合。僅作為手術之實例，部分或完全腫瘤切除可與本發明之化合物組合。僅作為放射療法之實例，外束放射療法可與本發明之化合物組合。

在其作為佐劑之作用中，在某些實施例中本發明化合物及組合物可在採用一或多種疫苗之治療性或預防性策略中用作佐劑。因此，本發明之化合物或其鹽可與一或多種經選擇用於刺激針對一或多種預定抗原之免疫反應的疫苗一起使用。本發明之化合物或其鹽可與此類疫苗一起提供或除了此類疫苗之外提供。

此類一或多種疫苗可包含不活化或減毒細菌或病毒，其包含相關抗原、經純化之抗原、為表現及/或分泌抗原而以重組方式工程改造之活性病毒或細菌遞送載體、包含負載有抗原或經包含編碼抗原之核酸的組合物轉染之細胞的抗原呈現細胞(APC)載體、脂質體抗原遞送媒劑或編碼抗原之裸核酸載體。此清單不意欲為限制性。舉例而言，此類一或多種疫苗亦可包含表現且分泌GM-CSF、CCL20、CCL3、IL-12p70、FLT-3配位體、細胞介素中之一或多者的不活化腫瘤細胞或溶瘤病毒。

因此，本發明係關於一種通式(I)化合物，其係用作藥劑或疫苗佐劑。

在另一態樣中，本發明提供新的式(I)化合物，包括其鹽，其係用於治療與STING相關或經STING調節之疾病或病狀的方法中。

在另一態樣中，本發明提供新的式(I)化合物或其鹽，其係用於治療發炎疾病、過敏性疾病或自體免疫疾病，例如過敏性鼻炎或哮喘，用於治療感染性疾病或癌症，或用於用作疫苗佐劑。

此外，本發明係關於通式(I)化合物之用途，其係用於治療及/或預防與STING相關或經STING調節之疾病及/或病狀。與STING相關或經STING調節之疾病及病狀涵蓋(但不限於)發炎疾病、過敏性疾病或自體免疫疾病(例如過敏性鼻炎或哮喘)、感染性疾病或癌症，包括(但不限於)如上文所提及之特定疾病。此外，由於本發明化合物之活性，其適用作疫苗佐劑，包括(但不限於)如上文所提及之特定應用。

此外，本發明係關於通式(I)化合物之用途，其係用於治療及/或預防上文所提及之疾病及病狀。

在另一態樣中，本發明係關於一種通式(I)化合物，其係用於治療及/或預防上文所提及之疾病及病狀。

在另一態樣中，本發明係關於一種通式(I)化合物，其係用於在腫瘤切除及/或放射療法之前或之後治療及/或預防上文所提及之癌症。

在另一態樣中，本發明係關於通式(I)化合物之用途，其係用於製備用以治療及/或預防上文所提及之疾病及病狀的藥劑。

在另一態樣中，本發明係關於治療或預防上文所提及之疾病及病狀的方法，該方法包含向人類投與有效量之通式(I)化合物。

每天可用之通式(I)化合物的劑量範圍通常為每公斤體重0.00001至100 mg，例如每公斤患者體重0.00001至10 mg。各劑量單元適宜含有0.001至1000 mg，例如0.001至100 mg。

當然實際治療有效量或治療劑量將視熟習此項技術者已知之因素而定，諸如患者之年齡及體重、投與途徑及疾病之嚴重程度。在任何情況下，化合物或組合物以允許基於患者之獨特病狀遞送治療有效量之劑量及方式投與。

在一個相關態樣中，本發明係關於在個體中誘導、刺激或輔助免疫反應之方法。此等方法包含向個體投與本發明之化合物。

在另一態樣中，本發明提供通式(I)化合物之用途，其係用於製造用以治療或預防疾病之包含抗原或抗原組合物的免疫原性組合物。

在另一態樣中，本發明提供一種治療或預防疾病之方法，其包含向患有或易患疾病之人類個體投與包含抗原或抗原組合物以及通式(I)化合物的免疫原性組合物。

在另一態樣中，本發明提供包含抗原或抗原組合物以及通式(I)化合物的疫苗組合物，其係用於治療或預防疾病。

在另一態樣中，本發明提供通式(I)化合物之用途，其係用於製造用以治療或預防疾病之包含抗原或抗原組合物的疫苗組合物。

在另一態樣中，本發明提供一種治療或預防疾病之方法，其包含向患有或易患疾病之人類個體投與包含抗原或抗原組合物以及通式(I)化合物的疫苗組合物。

醫藥組合物在本發明之另一態樣中，發現上文所提及之化合物之醫藥組合物可經調配適合於投與治療有效量之該等化合物。用於投與式(I)化合物之適合製劑對於一般技術者而言將為顯而易知的，且包括例如錠劑、丸劑、膠囊、栓劑、口含錠、糖衣錠、溶液、糖漿、酏劑、藥囊、可注射溶液(皮下、靜脈內、肌肉內、腹膜內、瘤內及瘤周)、吸入劑、輸注液、酏劑、乳液及散劑。此外，本發明之化合物可經由靶向遞送平台投與，例如此類靶向遞送平台可為抗體-藥物結合物、奈米抗體-藥物結合物、肽-藥物結合物、病毒樣粒子或奈米粒子調配物。

可例如藉由將一或多種根據式I之化合物與已知賦形劑(例如惰性稀釋劑、載劑、崩解劑、佐劑、界面活性劑、黏合劑及/或潤滑劑)混合來獲得適合之錠劑。

出於本發明之目的，醫藥組合物可藉由多種手段投與，包括以含有醫藥學上可接受之載劑、佐劑及媒劑之調配物形式非經腸、經腸、藉由吸入噴霧、局部、經鼻、經口或經直腸投與。本發明之醫藥組合物可以無菌可注射製劑，諸如無菌可注射水性或油性懸浮液形式投與。

根據另一實施例，提供一種疫苗，其包含一或多種通式(I)化合物。在另一態樣中，本發明提供一種疫苗佐劑，其包含通式(I)化合物。在另一態樣中，本發明提供一種免疫原性組合物，其包含抗原或抗原組合物以及通式(I)化合物。

在另一態樣中，本發明提供一種免疫原性組合物，其包含抗原或抗原組合物以及通式(I)化合物，其係用於治療或預防疾病。

組合療法本發明之化合物可以足以誘導、調節或刺激適當免疫反應之量獨立使用或可與醫藥學上可接受之賦形劑組合使用。免疫反應可包含(但不限於)特異性免疫反應、非特異性免疫反應、特異性及非特異性反應、先天性反應、初級免疫反應、繼承免疫性、二次免疫反應、記憶免疫反應、免疫細胞活化、免疫細胞增殖、免疫細胞分化及細胞介素表現。

在某些實施例中，本文所描述之化合物及其組合物與一或多種額外組合物結合投與，該一或多種額外組合物包括意欲刺激針對一或多種預定抗原之免疫反應的疫苗；佐劑；CTLA-4及PD-1路徑拮抗劑、脂質、脂質體、化學治療劑、免疫調節細胞株、癌症靶向劑、免疫原性細胞死亡誘導劑、免疫調節劑，其中一般而言，免疫調節劑可理解為一般活化調節類型之藥劑，以及調節及/或增加某一免疫細胞亞型之頻率的藥劑等。

本文所描述之化合物及其組合物可在額外治療性或預防性組合物或模態之前、之後及/或同時投與。

根據本發明之化合物、組合物(包括與一或多種額外治療劑之任何組合)可藉由黏膜(例如經口、舌下、陰道、經鼻、子宮頸等)、瘤內、腹膜內、瘤周、經皮、吸入或非經腸(例如皮下、靜脈內、肌肉內、動脈內、皮內、鞘內及硬膜外投藥)途徑投與。

此外，根據本發明之化合物、組合物(包括與一或多種額外治療劑之任何組合)可經由靶向遞送平台投與，例如此類靶向遞送平台可為抗體-藥物結合物、奈米抗體-藥物結合物、肽-藥物結合物、病毒樣粒子或奈米粒子。

在可能的投與方法中，腹膜內、瘤內、瘤周、皮下、吸入或靜脈內投與為較佳的。根據本發明之化合物、組合物(包括與一或多種額外治療劑之任何組合)亦可在藉由不同投與方法之組合之前、之後及/或同時投與。僅作為一實例，瘤內或瘤周投與可在吸入或靜脈內投與之後，或吸入或靜脈內投與可在瘤內或瘤周投與之後。此外，經由不同途徑對化合物之此類投與可在額外治療性步驟(諸如腫瘤切除或放射療法)之前或之後。僅作為一實例，本發明之化合物可在放射療法之後投與。此外，本發明之化合物可在放射療法之後藉由靜脈內投與提供。此外，本發明之化合物可在腫瘤切除之後藉由靜脈內投與提供。此外，本發明之化合物可在放射療法之後藉由瘤內投與提供。此外，本發明之化合物可在放射療法之後藉由瘤周投與提供。此外，本發明之化合物可在腫瘤切除之後藉由吸入投與提供。此外，本發明之化合物可藉由靜脈內投與，隨後瘤內投與提供，且兩種投與均在放射療法之後進行。此外，本發明之化合物可藉由瘤內投與，隨後靜脈內投與提供，且兩種投與均在放射療法之後進行。此外，本發明之化合物可藉由靜脈內投與，隨後瘤周投與提供，且兩種投與均在放射療法之後進行。此外，本發明之化合物可藉由瘤周投與，隨後靜脈內投與提供，且兩種投與均在放射療法之後進行。

用於與額外治療劑共同投與之方法為此項技術中熟知。

由於本發明之化合物之佐劑特性，其亦可與其他治療模態(包括其他疫苗、佐劑、抗原、抗體及免疫調節劑)組合使用。

除了本文所描述之本發明之化合物及其組合物之外，本發明之組合物或方法可進一步包含一或多種額外物質，由於其性質，該一或多種額外物質可用以刺激或以其他方式利用免疫系統對一或多個經靶向之腫瘤細胞上存在的癌症抗原作出反應。

本發明之化合物可與免疫檢查點抑制劑，諸如選自由以下組成之群的免疫檢查點抑制劑：CTLA-4路徑拮抗劑、PD-1路徑拮抗劑、Tim-3路徑拮抗劑、Vista路徑拮抗劑、BTLA路徑拮抗劑、LAG-3路徑拮抗劑或TIGIT路徑拮抗劑組合使用。

本發明之化合物可與免疫致癌促效劑組合、與T細胞受體促效劑組合或與TNF受體超家族促效劑或拮抗劑組合使用。

本發明之化合物可與治療性抗體或治療性奈米抗體組合使用。在一些實施例中，治療性抗體之作用機制為抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC)。

在本文所描述之方法之其他實施例中，本發明之化合物與如熟習此項技術者已知之化學治療劑(例如小分子醫藥化合物)組合使用。因此，方法進一步涉及向個體投與有效量之一或多種化學治療劑作為額外治療或組合治療。

亦可與式 (I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽(包括化合物 (I)之所有單獨實施例或通用子集)一起/組合使用，或在如本文中(上文及下文)所揭示之醫療用途、用途、治療及/或預防之方法中使用的一或多種額外藥理學上活性物質包括(但不限於此)：激素、激素類似物及抗激素(例如他莫昔芬(tamoxifen)、托瑞米芬(toremifene)、雷洛昔芬(raloxifene)、氟維司群(fulvestrant)、乙酸甲地孕酮、氟他胺(flutamide)、尼魯米特(nilutamide)、比卡魯胺(bicalutamide)、胺麩精(aminoglutethimide)、乙酸環丙孕酮、非那雄胺(finasteride)、乙酸布舍瑞林(buserelin acetate)、氟氫可的松(fludrocortisone)、氟羥甲基睾酮(fluoxymesterone)、甲羥孕酮(medroxyprogesterone)、奧曲肽(octreotide))；芳香酶抑制劑(例如阿那曲唑(anastrozole)、來曲唑(letrozole)、利阿唑(liarozole)、伏羅唑(vorozole)、依西美坦(exemestane)、阿他美坦(atamestane))；LHRH促效劑及拮抗劑(例如乙酸戈舍瑞林(goserelin acetate)、魯普利德(luprolide))；生長因子及/或其相應受體之抑制劑(生長因子例如為：血小板衍生之生長因子(PDGF)、纖維母細胞生長因子(FGF)、血管內皮生長因子(VEGF)、表皮生長因子(EGF)、胰島素樣生長因子(IGF)、人類表皮生長因子(HER，例如HER2、HER3、HER4))及/或其相應受體；抑制劑例如為(抗)生長因子抗體、(抗)生長因子受體抗體及酪胺酸激酶抑制劑，諸如阿法替尼(afatinib)、達可替尼(dacomitinib)、卡奈替尼(canertinib)、來那替尼(neratinib)、阿維替尼(avitinib)、波齊奧替尼(poziotinib)、AV 412、PF-6274484、HKI 357、奧莫替尼(olmutinib)、奧希替尼(osimertinib)、阿美替尼(almonertinib)、那紮替尼(nazartinib)、拉澤替尼(lazertinib)、培利替尼(pelitinib)、埃羅替尼(erlotinib)、吉非替尼(gefitinib)、埃克替尼(icotinib)、沙匹替尼(sapitinib)、拉帕替尼(lapatinib)、伐利替尼(varlitinib)、凡德他尼(vandetanib)、TAK-285、AEE788、BMS599626/AC-480、GW 583340、耐昔妥珠單抗(necitumumab)、帕尼單抗(panitumumab)、西妥昔單抗(cetuximab)、埃萬妥單抗(amivantanab)、帕妥株單抗(pertuzumab)、曲妥珠單抗(trastuzumab)、曲妥珠單抗美坦新(trastuzumab emtansine)或突變型EGFR之抑制劑、具有外顯子20突變之HER2抑制劑及肝細胞生長因子(HGF，c-MET，例如依米特珠單抗(emibetuzumab)、埃萬妥單抗、薩沃替尼(savolitinib)、卡博替尼(cabozantinib)、弗雷替尼(foretinib))；抗代謝物(例如胺甲喋呤、雷替曲塞(raltitrexed)、5-氟尿嘧啶(5-FU)、卡培他濱(capecitabine)、氟尿苷、吉西他濱(gemcitabine)、巰基嘌呤、硫鳥嘌呤、克拉屈濱(cladribine)、噴司他丁(pentostatin)、阿糖胞苷(cytarabine；阿糖C)、氟達拉濱(fludarabine)、曲氟尿苷及替吡嘧啶之組合(=TAS102))；抗腫瘤抗生素(例如蒽環素(anthracyclin)，諸如阿黴素(doxorubicin)、多希(doxil) (聚乙二醇化鹽酸阿黴素脂質體)、莫西特(myocet) (非聚乙二醇化阿黴素脂質體)、道諾黴素(daunorubicin)、表柔比星(epirubicin)及艾達黴素(idarubicin)、絲裂黴素-C (mitomycin-C)、博萊黴素(bleomycin)、更生黴素(dactinomycin)、普卡黴素(plicamycin)、鏈脲佐菌素(streptozocin))；鉑衍生物(例如順鉑(cisplatin)、奧沙利鉑(oxaliplatin)、卡鉑(carboplatin))；烷基化劑(例如雌莫司汀(estramustin)、氮芥(meclorethamine)、美法侖(melphalan)、氯芥苯丁酸(chlorambucil)、白消安(busulphan)、達卡巴𠯤(dacarbazin)、環磷醯胺、異環磷醯胺(ifosfamide)、替莫唑胺(temozolomide)、亞硝基脲，諸如卡莫司汀(carmustin)及洛莫司汀(lomustin)、噻替派(thiotepa))；抗有絲分裂劑(例如長春花生物鹼(Vinca alkaloid)，例如長春鹼(vinblastine)、長春地辛(vindesin)、長春瑞濱(vinorelbin)及長春新鹼(vincristine)；及紫杉烷(taxane)，諸如紫杉醇(paclitaxel)、多西他賽(docetaxel)、白蛋白結合型紫杉醇(Abraxane))；血管生成抑制劑(例如他喹莫德(tasquinimod)、貝伐單抗(bevacizumab))、微管蛋白抑制劑；DNA合成抑制劑、PARP抑制劑、拓樸異構酶(topoisomerase)抑制劑(例如表鬼臼毒素(epipodophyllotoxin)，諸如依託泊苷(etoposide)及凡畢複(etopophos)、替尼泊苷(teniposide)、安吖啶(amsacrin)、拓朴替康(topotecan)、伊立替康(irinotecan)、米托蒽醌(mitoxantrone))；絲胺酸/蘇胺酸激酶抑制劑(例如PDK 1抑制劑、Raf抑制劑、A-Raf抑制劑、B-raf抑制劑、C-Raf抑制劑、mTOR抑制劑(例如雷帕黴素(rapamycin)、坦羅莫司(temsirolimus)、依維莫司(everolimus)、地磷莫司(ridaforolimus)、佐他莫司(zotarolimus)、賽泮替布(sapanisertib)、托林1 (Torin 1)、達克托西利布(dactosilib)、GDC-0349、vs-5584；維塞替布(vistusertib)；AZD8055)、mTORC1/2抑制劑、PI3K抑制劑、PI3Kα抑制劑(例如阿吡利塞(alpelisib)、塞雷利司(serabelisib)、GDC-0077、HH-CYH33、AMG 511、布帕利塞(buparlisib)、達托里昔布(dactolisib)、皮克立西(pictilisib)、他司利塞(taselisib))、雙重mTOR/PI3K抑制劑、STK 33抑制劑、AKT抑制劑、PLK 1抑制劑、CDK4/6之抑制劑(例如帕柏西利(palbociclib)、利波西利(ribociclib)、阿貝力布(abemaciclib)、曲拉西利(trilaciclib)、PF-06873600)、極光激酶抑制劑)；酪胺酸激酶抑制劑(例如PTK2/FAK抑制劑)；蛋白質-蛋白質相互作用抑制劑(例如IAP抑制劑/SMAC模擬物、MCL-1 (例如AZD-5991、AMG-176、AMG-397、S64315、S63845、A-1210477)、MDM2、MDM2/MDMX)；MEK抑制劑(例如曲美替尼(trametinib)、考比替尼(cobimetinib)、貝美替尼(binimetinib)、司美替尼(selumetinib)、瑞法美替尼(refametinib))；SOS1-抑制劑(亦即，例如藉由與SOS1結合且防止SOS1與(突變型) Ras蛋白，例如KRAS之間的蛋白質-蛋白質相互作用來調節/抑制SOS1之GEF功能的化合物；例如BAY-293)、GDP負載或GTP負載之RAS及/或其任何突變體之抑制劑(亦即，藉由例如與GDP負載或GTP負載(突變型)之RAS蛋白，例如KRAS、NRAS及/或HRAS，較佳KRAS結合來調節/抑制(突變型) RAS蛋白之功能的化合物)；KRAS G12C之不可逆抑制劑(AMG-510、MRTX849、ARS-324、GDC-6036)；針對GDP負載(突變型) KRAS之可逆或不可逆黏合劑；針對GTP負載(突變型) KRAS之可逆或不可逆黏合劑；ALK抑制劑(例如克卓替尼(crizotinib)、阿來替尼(alectinib)、恩曲替尼(entrectinib)、布加替尼(brigatinib)、塞利替尼(ceritinib))；ERK抑制劑；FLT3抑制劑；BRD4抑制劑；IGF-1R抑制劑；TRAILR2促效劑；Bcl-xL抑制劑；Bcl-2抑制劑(例如維納妥拉(venetoclax)、奧巴克拉(obatoclax)、納維托克(navitoclax)、奧利默森(oblimersen))；Bcl-2/Bcl-xL抑制劑；ErbB受體抑制劑；BCR-ABL抑制劑；ABL抑制劑；Src抑制劑(例如達沙替尼(dasatinib)、普納替尼(ponatinib)、伯舒替尼(bosutinib)、凡德他尼、KX-01、塞卡替尼(saracatinib)、KX2-391、SU 6656、WH-4-023)；雷帕黴素類似物(例如依維莫司、坦羅莫司、地磷莫司、西羅莫司(sirolimus))；雄性激素合成抑制劑；雄性激素受體抑制劑；DNMT抑制劑；HDAC抑制劑；ANG1/2抑制劑；組蛋白脫乙醯基酶抑制劑；IL6之抑制劑；JAK及/或其任何突變體之抑制劑；A-Raf及/或B-Raf及/或C-Raf及/或其任何突變體之抑制劑(恩拉非尼(encorafenib)、達拉非尼(dabrafenib)、維羅非尼(vemurafenib)、PLX-8394, RAF-709 (= WO 2014/151616中之實例131)、LXH254、索拉非尼(sorafenib)、LY-3009120 (=WO 2013/134243中之實例1)、力法芬尼(lifirafenib)、TAK-632、格拉芬尼(agerafenib)、CCT196969、RO5126766、RAF265)；受體酪胺酸激酶(RTK)及/或其任何突變體之抑制劑；SHP2及/或其任何突變體之抑制劑(例如SHP099、TNO155、RMC-4550、RMC-4630、IACS-13909)；CYP17抑制劑；放射性藥品；蛋白酶體抑制劑(例如卡非佐米(carfilzomib))；免疫治療劑，諸如免疫檢查點抑制劑(例如CTLA4、PD1、PD-L1、PD-L2、LAG3、SIRPα-抗體及TIM3結合分子/免疫球蛋白(伊匹單抗(ipilimumab)、納武單抗(nivolumab)、派姆單抗(pembrolizumab)、替雷利珠單抗(tislelizumab)、阿特珠單抗(atezolizumab)、阿維魯單抗(avelumab)、度伐利尤單抗(durvalumab)、匹地利珠單抗(pidilizumab)、PDR-001 (=斯巴達珠單抗(spartalizumab))、AMG-404、埃本利單抗(ezabenlimab)、信迪利單抗(sintilimab)、卡瑞利珠單抗(camrelizumab)、特瑞巴利單抗(toribalimab)、替雷利珠單抗(tislelizumab))；ADCC (抗體依賴性細胞介導之細胞毒性)增強劑(例如抗CD33抗體、抗CD37抗體、抗CD20抗體)；T細胞接合劑，例如PSMA×CD3、B7H6/CD3 (如例如WO2021/064137中所揭示)、DLL3/CD3 (如例如WO2019/234220中所揭示)，例如雙特異性T細胞接合劑(BiTEs ^®) (如例如CD3×BCMA、CD3×CD33、CD3×CD19)、癌症疫苗、MDM2抑制劑、溶瘤病毒及各種化學治療劑，諸如阿米福汀(amifostin)、阿那格雷(anagrelid)、氯膦酸鹽(clodronat)、非格司亭(filgrastin)、干擾素、干擾素α、甲醯四氫葉酸(leucovorin)、甲基苄肼(procarbazine)、左旋咪唑(levamisole)、美司鈉(mesna)、米托坦(mitotane)、帕米膦酸鹽(pamidronate)及卟吩姆(porfimer)。本發明之化合物可與以下組合使用：OX40促效劑、ICOS配位體、CD27促效劑、GITR促效劑、Toll樣受體促效劑。

在一個較佳實施例中，亦可與式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽(包括化合物(I)之所有單獨實施例或通用子集)一起/組合使用，或在如本文中(上文及下文)所揭示之醫療用途、用途、治療及/或預防之方法中使用的一或多種額外藥理學上活性物質包括：檢查點抑制劑(伊匹單抗、納武單抗、派姆單抗、替雷利珠單抗、阿特珠單抗、阿維魯單抗、度伐利尤單抗、匹地利珠單抗、PDR-001 (=斯巴達珠單抗)、AMG-404、埃本利單抗、信迪利單抗、卡瑞利珠單抗、特瑞巴利單抗、替雷利珠單抗)、紫杉烷(紫杉醇、多西他賽、白蛋白結合型紫杉醇(Abraxane))、T細胞接合劑(例如PSMA×CD3、B7H6/CD3 (如例如WO2021/604137中所揭示)、DLL3/CD3 (如例如WO2019/234220中所揭示)，例如雙特異性T細胞接合劑(BiTEs®) (如例如CD3×BCMA、CD3×CD33、CD3×CD19)、癌症疫苗、MDM2抑制劑及溶瘤病毒。

在本文所描述之方法之其他實施例中，本發明之化合物與化學治療劑及/或用於治療如本文方法中所描述之適應症的額外藥劑(例如靶向癌症之療法)組合使用。因此，方法進一步涉及向個體投與有效量之一或多種癌症靶向劑作為額外治療或組合治療。

在本文所描述之方法之其他實施例中，本發明化合物與化學治療劑及/或用於治療如本文方法中所描述之適應症的額外藥劑及/或額外療法(諸如放射療法及/或腫瘤切除)組合使用。

在另一態樣中，本發明係關於一種用於在患者中治療與STING相關或經STING調節之疾病或病狀的方法，其包括向需要此類治療之人類患者投與治療有效量之本發明化合物以及治療有效量之一或多種上文所描述之額外治療劑的步驟。

根據本發明之化合物與額外治療劑之組合使用可同時進行或以錯開的時間進行。

根據本發明之化合物及一或多種額外治療劑可一起存在於一個調配物中或獨立地在兩個相同或不同調配物中，例如作為所謂的分裝部分之套組(kit-of-parts)。

因此，在另一態樣中，本發明提供一種組合，其包含通式(I)化合物及至少一種其他治療劑。

本發明之另一態樣提供一種醫藥組合物，其包含式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽及至少一種其他治療劑及一或多種醫藥學上可接受之賦形劑。

在另一態樣中，本發明提供一種用於療法中之組合，其包含式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽及至少一種其他治療劑。

在另一態樣中，本發明提供一種用於治療其中STING之調節係有益的疾病或病狀的組合，其包含式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽及至少一種其他治療劑。

在另一態樣中，本發明提供包含式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽及至少一種其他治療劑之組合，其係用於治療發炎疾病、過敏性疾病及自體免疫疾病、感染性疾病及癌症。

在另一態樣中，本發明提供一種在患者中治療其中STING之調節為有益的疾病或病狀之方法，其包含投與治療有效量之包含式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽及至少一種其他治療劑的組合。

在另一態樣中，本發明提供一種在患者中治療發炎疾病、過敏性疾病或自體免疫疾病、感染性疾病或癌症之方法，其包含投與治療有效量之包含式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽及至少一種其他治療劑的組合。

當然實際醫藥學上有效量或治療劑量將視熟習此項技術者已知之因素而定，諸如患者之年齡及體重、投與途徑及疾病之嚴重程度。在任何情況下，該組合將以允許基於患者之獨特病狀遞送醫藥學上有效量之劑量及方式投與。

在另一態樣中，本發明係關於一種醫藥組合物，其包含根據本發明之化合物及一或多種上下文所描述之額外治療劑，視情況連同一或多種惰性載劑及/或稀釋劑。

本發明之其他特徵及優點將自以下更詳細實例而變得顯而易見，該等實例以舉例方式說明本發明之原理。

化學合成縮寫之清單：

ACN	乙腈
A.M.	分析方法
Bu	丁基
conc.	經濃縮
d	天數
DCM	二氯甲烷
DIPEA	二異丙基乙基胺
DMA	N,N-二甲基乙醯胺
DMAP	N,N-二甲基吡啶-4-胺
DMF	N,N-二甲基甲醯胺
DMSO	二甲亞碸
Et	乙基
EtOAc	乙酸乙酯
h	小時
HATU	N-[(二甲基胺基)-(1 H-1,2,3-三唑并[4,5- b]吡啶-1-基)-亞甲基]- N-甲基甲烷-六氟磷酸銨 N-氧化物
HPLC	高效液相層析
iPr	異丙基
M	莫耳
m.p.	熔點
Me	甲基
min	分鐘
mL	毫升
MS	質譜法
N	當量濃度
NMP	N-甲基吡咯啶酮
NMR	核共振光譜法
NP	正相
ppm	百萬分之一
prep	製備型
R _f	滯留因子
RP	逆相
RT	室溫
tert	三級
TBDMS	三級丁基二甲基矽烷基
TFA	三氟乙酸
THF	四氫呋喃
TLC	薄層層析
tR	滯留時間

本發明之其他特徵及優點將自以下更詳細實例而變得顯而易見，該等實例例示性說明本發明之原理而不限制其範疇。

綜述除非另外陳述，否則所有反應均使用化學實驗室中常用方法在商業上可獲得之設備中進行。對空氣及/或水分敏感之起始物質儲存在保護氣體下，且與此對應的反應及操作在保護氣體(氮氣或氬氣)下進行。

根據本發明之化合物根據IUPAC指南命名。若化合物由結構式及由其名稱表示，則在存在衝突之情況下，以結構式為準。

層析薄層層析在由Merck製造之玻璃(具有螢光指示劑F-254)上之矽膠60的現成TLC板上進行。

Biotage Isolera Four設備與Interchim Puri Flash管柱(50 μm，12-300 g)或填充有Millipore製造之矽膠(顆粒二氧化矽Si-60A 35-70 μm)之玻璃管柱一起用於自動化製備型NP層析。

用Waters製造之管柱(Sunfire C18，10 μm，30×100 mm部件號186003971或X-Bridge C18，10 μm，30×100 mm部件號186003930)進行製備型RP HPLC。使用不同梯度之H ₂O/乙腈或H ₂O/MeOH (其中將0.2% HCOOH添加至水中)，或使用鹼性緩衝水溶液(1 L水含有5 mL碳酸氫銨溶液(158 g/1 L H ₂O)及2 mL氨(7 mol/l於MeOH中之溶液))代替水-HCOOH-混合物以不同梯度溶離化合物。

用由Waters及Phenomenex製造之管柱進行中間化合物之 分析型 HPLC ( 反應監測 )。在各情況下，分析設備亦具備質量偵測器。

HPLC 質譜分析 /UV 光譜測定法使用例如由Agilent製造之HPLC-MS設備(具有質量偵測器之高效液相層析)測定表徵根據本發明之實例化合物的滯留時間/MS-ESI ⁺。給出在注射峰處溶離之化合物滯留時間tR = 0。

分析型 HPLC 方法 (A.M.) 方法 _1HPLC： Agilent 1100/1200系列 MS： Agilent LC/MSD SL 管柱： Waters X-Bridge BEH C18，2.5 μm，2.1×30 mm XP 溶離劑： A：含5 mM NH ₄HCO ₃/19 mM NH ₃之H ₂O；B：ACN (HPLC級) 偵測： MS：正模式及負模式質量範圍： 100 - 800 m/z 流速： 1.4毫升/分鐘管柱溫度： 45℃ 梯度： 0.00-0.01分鐘： 5% B 0.01-1.00分鐘： 5% 100% B 1.00-1.37分鐘： 100% B 1.37-1.40分鐘： 100% 5% B

方法 _2 HPLC： Agilent 1100/1200系列 MS： Agilent LC/MSD (API-ES +/- 3000 V，Quadrupol，G6140) 管柱： Waters，XBridge C18，2.5 μm，2.1×20 mm管柱溶劑： A：含20 mM NH ₄HCO ₃/NH ₃之H ₂O pH 9；B：ACN (HPLC級) 偵測： MS：正模式及負模式質量範圍： 120 - 900 m/z 流速： 1.00毫升/分鐘管柱溫度： 60℃ 梯度： 0.00-1.50分鐘：10% 95% B 1.50-2.00分鐘：95% B 2.00-2.10分鐘：95% 10% B

方法 _3UPLC/MS： Waters Acquity-UPLC-SQ偵測器-2 管柱： AQUITY UPLC BEH C18 1.7 μm，2.1×50 mm 溶劑： A：含0.07% HCOOH之ACN；B：H ₂O + 0.07% HCOOH 偵測： MS：正模式及負模式質量範圍： 100 - 1500 m/z 流速： 0.6毫升/分鐘管柱溫度： 35℃ 梯度： 0.00-0.30分鐘：97% B 0.30-2.20分鐘：97% 2% B 2.20-3.30分鐘：2% B 3.30-4.50分鐘：2% B 97% B 4.50-4.51分鐘：97% B

方法 _4UPLC/MS： Waters Acquity-UPLC-SQ偵測器-2 管柱： AQUITY UPLC BEH C18 1.7 μm，2.1×50 mm 溶劑： A：H ₂O + 0.07% HCOOH B：含0.07% HCOOH之ACN 偵測： MS：正模式及負模式質量範圍：100 - 1500 m/z 流速： 0.6毫升/分鐘管柱溫度： 35℃ 梯度： 0.00-0.30分鐘：97% A 0.30-2.70分鐘：97% 2% A 2.70-3.50分鐘：2% A 3.50-3.51分鐘：2% 97% A

方法 _5UPLC/MS： Waters Acquity-二元溶劑管理器-UPLC-SQ偵測器-2 管柱： AQUITY UPLC BEH C18 1.7 μm，2.1×50 mm 溶劑： A：含0.07% HCOOH之ACN；B：H ₂O + 0.07% HCOOH 偵測： MS：正模式及負模式質量範圍：100 - 1500 m/z 流速： 0.6毫升/分鐘管柱溫度： 35℃ 梯度： 0.00-0.40分鐘：97% B 0.40-2.50分鐘：97% 2% B 2.50-3.40分鐘：2% B 3.40-3.50分鐘：2% B 97% B 3.50-4.51分鐘：97% B

製備根據本發明之化合物可使用熟習此項技術者已知且描述於有機合成文獻中之合成方法來獲得根據本發明之化合物及其中間物。此等方法意欲作為本發明之說明，而不限制其標的物及此等實例所主張之化合物的範疇。較佳地，以與下文更充分解釋(特定言之如實驗部分中所描述)之製備方法類似的方式來獲得化合物。在一些情況下，進行反應步驟之次序可變化。亦可使用熟習此項技術者已知但在此處未詳細描述的反應方法之變型。

用於製備根據本發明之化合物的通用製程對於研究以下流程之熟習此項技術者將變得顯而易見。可藉由文獻或本文中所描述之方法製備或可以類似或相似方式來製備起始物質。可使用習知保護基來保護起始物質或中間物中之任何官能基。此等保護基可使用熟習此項技術者熟悉之方法在反應序列內之適合階段裂解。

用於製備式( I)化合物之一種方法例示於流程I中：吲唑 B可由鄰甲基苯胺衍生物 A合成。後續碘化產生3-碘-吲唑 C。中間物 D可例如藉由Chan-Lam偶合，利用(6-氟吡啶-3-基)硼酸(boronic acid)獲得。轉化為中間物 E可例如經由鈴木偶合(Suzuki coupling)來實現。化合物 F例如藉由親核芳族取代來合成。產物藉由習知手段分離且較佳地藉由層析來純化。

流程I：

製備 中間物 B B1) 7- 溴 -6- 氟 -1H- 吲唑向2-溴-3-氟-6-甲基-苯胺(11 g，53.9 mmol)及甲苯(176 ml)之攪拌混合物中添加乙酸鉀(6.35 g，64.7 mmol)。在室溫下30分鐘之後，添加乙酸(9.7 g，161.7 mmol)且將混合物加熱至40℃。添加亞硝酸三級丁酯(11.11 g，107.8 mmol)且繼續攪拌6小時。添加水(150 ml)且用EtOAc萃取混合物。將合併之有機層用鹽水(100 ml)洗滌，經Na ₂SO ₄乾燥且真空濃縮。藉由NP層析純化7-溴-6-氟-1H-吲唑。產量：5 g (43%)。HPLC-MS：M+H = 215/217；tR = 1.89分鐘(方法_3)

以下中間物由相應的經取代之苯胺類似地製備：

#	結構	IUPAC 名稱	tR [分鐘]	[M+H]	A.M.
B2		6-氯-7-甲基-1H-吲唑	1.98	167	方法_3
B3		7-溴-6-氯-5-氟-1H-吲唑	2.10	249/251	方法_3
B4		5-氟-7-甲基-1H-吲唑	1.84	151	方法_3

B5) 5- 氯 -7- 甲基 -1H- 吲唑在15℃下，向4-氯-2,6-二甲基-苯胺(5 g，32 mmol)於乙酸(60 ml)中之攪拌混合物中添加含亞硝酸鈉(2.44 g，35 mmol)之水(30 ml)。在室溫下攪拌混合物19小時。將混合物倒入水中且用EtOAc萃取。將合併之有機層經Na ₂SO ₄乾燥且真空濃縮。藉由NP層析純化產物。產量：2.6 g (49%)。HPLC-MS：M+H = 167；tR=1.76分鐘(方法_4)。

B6) 6- 氟 -7- 甲基 -1H- 吲唑在氬氣氛圍下在120℃下，攪拌7-溴-6-氟-1H-吲唑 B1(5 g，23.25 mmol)、碳酸鉀(12.9 g，93 mmol)、三甲基環三硼氧烷(50%於THF中，23.4 g，93 mmol)、肆(三苯基膦)鈀(2.7 g，2.3 mmol)及DMF (50 ml)之混合物48小時。在室溫下添加水(100 ml)且用EtOAc萃取混合物。將合併之有機層經Na ₂SO ₄乾燥，真空濃縮，且藉由NP HPLC純化產物。產量：2.4 g (69%)。HPLC-MS：M+H = 151；tR = 1.58分鐘(方法_5)。

以下中間物由 B3類似地製備：

#	結構	IUPAC 名稱	tR [分鐘]	[M+H]	A.M.
B7		6-氯-5-氟-7-甲基-1H-吲唑	1.77	185	方法_5

製備 中間物 C C1) 6- 氟 -3- 碘 -7- 甲基 -1H- 吲唑在0℃下，向含6-氟-7-甲基-1H-吲唑 B6(3 g，20 mmol)之DMF (35 ml)中添加碘(10.1 g，40 mmol)及K ₂CO ₃(8.3 g，60 mmol)。在室溫下攪拌混合物12小時。在用冰冷卻下，將混合物倒入10% Na ₂S ₂O ₃水溶液中。將沉澱物過濾，用水洗滌且乾燥。藉由NP層析純化產物。產量：4 g (73%)。HPLC-MS：M+H = 2.77；tR = 1.90分鐘(方法_5)。

以下中間物由相應的中間物 B類似地製備：

#	結構	IUPAC 名稱	tR [分鐘]	[M+H]	A.M.
C2		6-氯-3-碘-7-甲基-1H-吲唑	2.14	293	方法_4
C3		5-氟-3-碘-7-甲基-1H-吲唑	2.167	277	方法_3
C4		5-氯-3-碘-7-甲基-1H-吲唑	2.37	293	方法_3
C5		6-氯-5-氟-3-碘-7-甲基-1H-吲唑	2.11	311	方法_5

製備 中間物 D D1) 6- 氟 -1-(6- 氟吡啶 -3- 基 )-3- 碘 -7- 甲基 -1H- 吲唑在室溫下暴露於空氣中，攪拌6-氟-3-碘-7-甲基-1H-吲唑 C1(4 g，14.5 mmol)、(6-氟吡啶-3-基)硼酸(4.08 g，29 mmol)、乙酸銅(II) (3.95 g，21.75 mmol)及吡啶(3.5 ml，43.5 mmol)於DCM (40 ml)中之混合物16小時。真空濃縮混合物且藉由NP層析純化產物。產量：2.5 g (47%)。HPLC-MS：M+H = 372；tR = 2.45分鐘(方法_3)。

以下中間物由相應的3-碘-吲唑(中間物 C)類似地製備：

#	結構	IUPAC 名稱	tR [分鐘]	[M+H]	A.M.
D2		6-氯-1-(6-氟吡啶-3-基)-3-碘-7-甲基-1H-吲唑	2.47	388	方法_4
D3		5-氟-1-(6-氟吡啶-3-基)-3-碘-7-甲基-1H-吲唑	1.03	372	方法_1
D4		5-氯-1-(6-氟吡啶-3-基)-3-碘-7-甲基-1H-吲唑	1.12	388	方法_1
D5		6-氯-5-氟-1-(6-氟吡啶-3-基)-3-碘-7-甲基-1H-吲唑	2.35	406	方法_5

製備 中間物 E E1) 6- 氟 -1-(6- 氟吡啶 -3- 基 )-2',7- 二甲基 -1H,2'H-3,4'- 聯吲唑 在氬氣氛圍下在100℃下，攪拌6-氟-1-(6-氟吡啶-3-基)-3-碘-7-甲基-1H-吲唑 D1(2.5 g，6.7 mmol)、2-甲基-4-(四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊-2-基)-2H-吲唑(2.1 g，8.1 mmol)、1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II) (0.28 g，0.34 mmol)、K ₂CO ₃(1.6 g，20.2 mmol)於二㗁烷(20 ml)及水(5 ml)中之混合物6小時。在室溫下添加水(100 ml)且用EtOAc萃取混合物。將合併之有機層經MgSO ₄乾燥，真空濃縮且藉由NP HPLC純化產物。產量：1.2 g (48%)。HPLC-MS：M+H = 376；tR = 2.15分鐘(方法_5)。

以下中間物由相應的中間物 D類似地製備：

#	結構	IUPAC 名稱	tR [分鐘]	[M+H]	A.M.
E2		6-氯-1-(6-氟吡啶-3-基)-2',7-二甲基-1H,2'H-3,4'-聯吲唑	1.49	392	方法_2
E3		5-氟-1-(6-氟吡啶-3-基)-2',7-二甲基-1H,2'H-3,4'-聯吲唑	1.39	376	方法_2
E4		5-氯-1-(6-氟吡啶-3-基)-2',7-二甲基-1H,2'H-3,4'-聯吲唑	1.04	392	方法_1
E5		6-氯-5-氟-1-(6-氟吡啶-3-基)-2',7-二甲基-1H,2'H-3,4'-聯吲唑	2.28	410	方法_5

實例在以下部分中，描述了用於製備實例#1-#13及中間物 F之一種方法： F1) 1-(5-(6- 氟 -2',7- 二甲基 -1H,2'H-[3,4'- 聯吲唑 ]-1- 基 ) 吡啶 -2- 基 ) 哌啶 -4- 甲酸乙酯 在110℃下攪拌6-氟-1-(6-氟吡啶-3-基)-2',7-二甲基-1H,2'H-3,4'-聯吲唑 E1(250 mg，670 μmol)、哌啶-4-甲酸乙酯(520 mg，3.3 mmol)及DIPEA (110 μl，650 mmol)於DMSO (1 ml)中之混合物16小時。將混合物用水稀釋且用EtOAc萃取。將合併之有機層經MgSO ₄乾燥且真空濃縮。藉由RP層析純化標題化合物。產量：248 mg (73%)。HPLC-MS：M+H = 513；tR = 1.62分鐘(方法_2)。

以下中間物 F2 至 F14以與 F1類似之方式由中間物 E利用相應的胺來製備。在胺之鹽(例如鹽酸鹽)的情況下，使用各別當量之額外鹼。

#	結構	IUPAC 名稱	tR [分鐘]	[M+H]	A.M.
F2		1-(5-(6-氟-2',7-二甲基-1H,2'H-[3,4'-聯吲唑]-1-基)吡啶-2-基)哌啶-4-甲酸甲酯	1.55	499	方法_2
F3		(1R,5S,6r)-3-(5-(6-氟-2',7-二甲基-1H,2'H-[3,4'-聯吲唑]-1-基)吡啶-2-基)-3-氮雜雙環[3.1.0]己烷-6-甲酸甲酯	1.50	497	方法_2
F4		1-(5-(6-氯-2',7-二甲基-1H,2'H-[3,4'-聯吲唑]-1-基)吡啶-2-基)哌啶-4-甲酸乙酯	1.71	529	方法_2
F5		1-(5-(6-氯-2',7-二甲基-1H,2'H-[3,4'-聯吲唑]-1-基)吡啶-2-基)哌啶-4-甲酸甲酯	1.65	515	方法_2
F6		(1R,5S,6r)-3-(5-(6-氯-2',7-二甲基-1H,2'H-[3,4'-聯吲唑]-1-基)吡啶-2-基)-3-氮雜雙環[3.1.0]己烷-6-甲酸甲酯	1.59	513	方法_2
F7		1-(5-(5-氟-2',7-二甲基-1H,2'H-[3,4'-聯吲唑]-1-基)吡啶-2-基)哌啶-4-甲酸乙酯	1.66	513	方法_2
F8		1-(5-(5-氟-2',7-二甲基-1H,2'H-[3,4'-聯吲唑]-1-基)吡啶-2-基)哌啶-4-甲酸甲酯	1.52	499	方法_2
F9		(1R,5S,6r)-3-(5-(5-氟-2',7-二甲基-1H,2'H-[3,4'-聯吲唑]-1-基)吡啶-2-基)-3-氮雜雙環[3.1.0]己烷-6-甲酸甲酯	1.47	497	方法_2
F10		1-(5-(5-氯-2',7-二甲基-1H,2'H-[3,4'-聯吲唑]-1-基)吡啶-2-基)哌啶-4-甲酸乙酯	1.61	529	方法_2
F11		(1R,5S,6r)-3-(5-(5-氯-2',7-二甲基-1H,2'H-[3,4'-聯吲唑]-1-基)吡啶-2-基)-3-氮雜雙環[3.1.0]己烷-6-甲酸甲酯	1.57	513	方法_2
F12		1-(5-(6-氯-5-氟-2',7-二甲基-1H,2'H-[3,4'-聯吲唑]-1-基)吡啶-2-基)哌啶-4-甲酸乙酯	1.59	547	方法_2
F13		(1R,5S,6r)-3-(5-(6-氯-5-氟-2',7-二甲基-1H,2'H-[3,4'-聯吲唑]-1-基)吡啶-2-基)-3-氮雜雙環[3.1.0]己烷-6-甲酸甲酯	1.48	531	方法_2
F14		4-(5-(5-氟-2',7-二甲基-1H,2'H-[3,4'-聯吲唑]-1-基)吡啶-2-基)哌𠯤-1-甲酸三級丁酯	1.17	542	方法_1

以下實例 #1 至 #2以與 F1類似之方式由中間物 E利用相應的胺來製備。在胺之鹽(例如鹽酸鹽)的情況下，使用各別當量之額外鹼。

#	結構	IUPAC 名稱	tR [分鐘]	[M+H]	A.M.
#1		4-(5-(5-氟-2',7-二甲基-1H,2'H-[3,4'-聯吲唑]-1-基)吡啶-2-基)硫代𠰌啉1,1-二氧化物	1.34	491	方法_2
#2		6-氯-2',7-二甲基-1-(6-(4-(甲磺醯基)哌啶-1-基)吡啶-3-基)-1H,2'H-3,4'-聯吲唑	1.47	535	方法_2

製備中間物F15： F15) 5- 氟 -2',7- 二甲基 -1-(6-( 哌𠯤 -1- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-1H,2'H-3,4'- 聯吲唑 在室溫下在DCM (2 ml)及TFA (400 μl)中，攪拌4-(5-(5-氟-2',7-二甲基-1H,2'H-[3,4'-聯吲唑]-1-基)吡啶-2-基)哌𠯤-1-甲酸三級丁酯 F14(39 mg，72 μmol) 16小時。添加甲苯(10 ml)，真空濃縮混合物且粗產物(32 mg)未經進一步純化即直接用於下一步驟中。

製備實例 #3： #3) 4-(5-(5- 氟 -2',7- 二甲基 -1H,2'H-[3,4'- 聯吲唑 ]-1- 基 ) 吡啶 -2- 基 ) 哌𠯤 -1- 甲醛在室溫下攪拌粗5-氟-2',7-二甲基-1-(6-(哌𠯤-1-基)吡啶-3-基)-1H,2'H-3,4'-聯吲唑 F15(32 mg，72 μmol)及N-甲醯基糖精(23.4 mg，109 μmol)於THF (200 μl)中之混合物16小時。真空濃縮混合物且藉由RP層析純化產物。產量：16 mg (47%)。HPLC-MS：M+H = 470；tR = 1.32分鐘(方法_2)

製備實例 #4至 #13： #4) 1-(5-(5- 氟 -2',7- 二甲基 -1H,2'H-[3,4'- 聯吲唑 ]-1- 基 ) 吡啶 -2- 基 ) 哌啶 -4- 甲酸向1-(5-(5-氟-2',7-二甲基-1H,2'H-[3,4'-聯吲唑]-1-基)吡啶-2-基)哌啶-4-甲酸乙酯 F7(350 mg，690 μmol)中添加THF (7 ml)、水(7 ml)及KOH (390 mg；6.9 mmol)。在室溫下攪拌混合物3小時。在用1 N HCl水溶液中和之後，用DCM萃取混合物。將合併之有機層經MgSO ₄乾燥，真空濃縮且藉由RP HPLC純化產物。產量：163 mg (49%)。HPLC-MS：M+H = 485；tR = 1.06分鐘(方法_2)。

以下實例可由相應的乙酯或甲酯 F1-F6及 F9-F13類似地製備：

#	結構	IUPAC 名稱	tR [分鐘]	[M+H]	A.M.
#5		(1R,5S,6r)-3-(5-(5-氟-2',7-二甲基-1H,2'H-[3,4'-聯吲唑]-1-基)吡啶-2-基)-3-氮雜雙環[3.1.0]己烷-6-甲酸	1.09	483	方法_2
#6		(1R,5S,6r)-3-(5-(6-氟-2',7-二甲基-1H,2'H-[3,4'-聯吲唑]-1-基)吡啶-2-基)-3-氮雜雙環[3.1.0]己烷-6-甲酸	1.06	483	方法_2
#7		1-(5-(6-氟-2',7-二甲基-1H,2'H-[3,4'-聯吲唑]-1-基)吡啶-2-基)哌啶-4-甲酸	1.06	485	方法_2
#8		(1R,5S,6r)-3-(5-(6-氯-2',7-二甲基-1H,2'H-[3,4'-聯吲唑]-1-基)吡啶-2-基)-3-氮雜雙環[3.1.0]己烷-6-甲酸	1.11	499	方法_2
#9		1-(5-(6-氯-2',7-二甲基-1H,2'H-[3,4'-聯吲唑]-1-基)吡啶-2-基)哌啶-4-甲酸	1.13	501	方法_2
#10		1-(5-(5-氯-2',7-二甲基-1H,2'H-[3,4'-聯吲唑]-1-基)吡啶-2-基)哌啶-4-甲酸	1.18	501	方法_2
#11		(1R,5S,6r)-3-(5-(5-氯-2',7-二甲基-1H,2'H-[3,4'-聯吲唑]-1-基)吡啶-2-基)-3-氮雜雙環[3.1.0]己烷-6-甲酸	1.16	499	方法_2
#12		1-(5-(6-氯-5-氟-2',7-二甲基-1H,2'H-[3,4'-聯吲唑]-1-基)吡啶-2-基)哌啶-4-甲酸	1.06	519	方法_2
#13		(1R,5S,6r)-3-(5-(6-氯-5-氟-2',7-二甲基-1H,2'H-[3,4'-聯吲唑]-1-基)吡啶-2-基)-3-氮雜雙環[3.1.0]己烷-6-甲酸	1.04	517	方法_2

藥理學活性 藉由差示掃描螢光測定法 (DSF) 所測定的與 hSTING 之相互作用，

在DSF中，蛋白質去摺疊時之溫度(亦稱為解鏈溫度T _m)係藉由與蛋白質之疏水性部分結合之染料的螢光變化來量測。在小分子結合後，T _m偏移與此小分子之結合親和力相關。使用人類STING (hSTING，UNIPROT條目Q86WV6，殘基155-341，MW：21578.4 Da；蛋白質儲備溶液：c = 1302 μM於20 mM Tris、100 mM NaCl、2 mM TCEP pH 8.8中之儲備溶液)作為標靶蛋白，在必要時，添加20 mM Tris、150 mM NaCI pH7.5作為分析緩衝液。

分析中組分之最終濃度：100 μM測試化合物，5 μM標靶蛋白，「5×」SYPR橙(來自儲備溶液含SYPRO橙溶液之DMSO (invitrogen目錄號S6650-500 μl)，濃度「5000×」)

分析程序： 1)在分析緩衝液(20 mM Tris，150 mM NaCl；pH7.5)中製備化合物儲備溶液(10 mM於DMSO中)之稀釋液。 2)將5 μl螢光染料儲備溶液(5000×含SYPRO橙之DMSO)與19 μl標靶蛋白(1302 μM)及976 μl分析緩衝液混合。 3)將2 μl此蛋白質-染料-混合物(25×SYPRO橙及25 μM蛋白質)添加至8 μl如步驟1中製備的經稀釋之化合物溶液。最終體積為10 μl。 4)對於每20種化合物，量測兩種陰性對照。 5)製備盤用於重複量測且以1000 g離心2分鐘。 6)對於量測而言，使用CFX384即時系統(Bio-Rad)。該運行由以下組成：140個循環，以0.5℃/循環(溫度斜線變化15秒/循環，25℃至95℃)。

資料分析：在Bio-Rad CFX管理器中處理解鏈曲線。峰類型設定為「負」。對TM (解鏈溫度)量測之兩個重複求平均值，且計算標準差。

TM之變化(「熱偏移」)展示於表1中。表1：藉由DSF所測定的與hSTING之相互作用

實例	#1	#2	#3	#4	#5	#8	#10	#11
TM [K]	21	22	21	24	26	22	19	24

經由干擾素調節因子誘導性報導基因之活化所量測之活體外細胞介素誘導根據本發明之化合物之細胞介素誘導活性已藉由使用THP1報導細胞株得到證實，藉此產生細胞EC50值。在細胞株中表現的STING蛋白質之活化導致干擾素產生增加。藉由干擾素調節因子(IRF)-誘導性分泌性胚胎鹼性磷酸酶(secreted embryonic alkaline phosphatase；SEAP)基因報導構築體之穩定整合，可以監測功能性干擾素信號傳導路徑。使用Invivogen之THP1-Blue™ ISG比色酶分析及適合之光學密度(OD)讀取器，可偵測且定量SEAP之活性。此技術可用於表徵STING路徑之藥理學修飾。

已在人類STING基因中鑑別出若干單核苷酸多型性。為測定上述化合物之活性，已生成表現不同人類STING變體之THP1-Blue™ ISG報導細胞株。為此，首先使用CRISPR/CAS9系統使內源性人類STING缺失：用靶向STING基因之一體式CRISPR質體(購自Sigma，編碼gRNA且GFP作為成功轉導之報導基因)電穿孔THP1-Blue ISG細胞。隨後，在轉染及擴增24小時後分選出GFP陽性細胞。接著將細胞分散於半固體甲基纖維素培養基中以使單細胞純系分離。接著使用Quanti-Blue ^TM 報導分析針對cGAMP反應篩檢純系。隨後藉由西方墨點法(western blotting)及STING基因座之定序針對STING損失分析非反應性純系。

對於人類STING變體之過度表現，用編碼hSTING之對偶基因變體(WT (H232R)、HAQ、R232H、AQ及R293Q)之個別反轉錄病毒質體(MSCV-ires-GFP-Blasti)轉導經確認的THP1-Blue™ ISG hSTING KO純系。針對不同的GFP螢光含量分選轉導細胞，且藉由西方墨點法分析STING對偶基因表現。選擇表現異位STING蛋白質(WT、HAQ、R232H、AQ及R293Q)之群體(其含量與來自親本未經修飾之THP1-Blue ISG細胞株之內源性STING含量相當)且用於化合物表徵。

在穩定表現不同人類STING同功異型物及IRF誘導性SEAP報導構築體之THP1-Blue™ ISG細胞中進行SEAP活性之量測。在37℃、95%濕度及5% CO ₂培育箱中，在具有10%胎牛血清、50 μg/ml青黴素-鏈黴素(Penicillin-Streptomycin)、100 μg/ml吉歐黴素(Zeocin)及100 μg/ml諾黴素(Normocin)之RPMI1640培養基中培養細胞。

在用於分析之製備中，以10000個細胞/15微升/孔之密度將細胞分配至分析盤中。藉由在50% DMSO水溶液中進行8點連續稀釋且在培養基中進行最終稀釋步驟來製備化合物，以確保分析中之最終DMSO濃度為0.5%。將5 μL經稀釋之化合物添加至盤中，隨後在37℃下培育24小時。

在分析當天，將每孔75 μl之Quanti-Blue ^TM試劑添加至盤之所有孔中，且將盤在37℃下再培育30分鐘。在EnVision讀取器(PerkinElmer)上量測在620 nm下之OD。

EC ₅₀值及Hill斜率係自用Megalab軟體(Boehringer Ingelheim)，使用在620 nM下之OD的8點四參數非線性曲線擬合推導出。

EC ₅₀值之資料可見於表2a至表2e中。

STING HAQ變體之EC ₅₀值的資料可見於表2a中。以下所顯示資料係源自親本THP1-Blue™ ISG細胞株(其內源性表現HAQ)或源自其中如上文所描述已剔除第一STING且已再引入HAQ特異性STING同功異型物之基因工程改造的THP1-Blue™ ISG細胞株。

STING HAQ變體之EC ₅₀值的資料可見於表2a中：

實例	#1	#2	#3	#4	#5	#6
EC ₅₀[μM]	2.3	0.9	1.9	0.7	0.6	0.3

實例	#7	#8	#9	#10	#11	#12
EC ₅₀[μM]	0.8	0.1	0.7	6.6	3.9	0.7

實例	#13
EC ₅₀[μM]	0.3

STING H232R變體之EC ₅₀值的資料可見於表2b中：

實例	#1	#2	#3	#4	#5	#6
EC ₅₀[μM]	0.8	0.3	0.6	0.3	0.6	0.2

實例	#7	#8	#10	#11	#12
EC ₅₀[μM]	0.2	0.1	2.2	0.8	0.3

STING R232H變體之EC ₅₀值的資料可見於表2c中：

實例	#1	#2	#3	#4	#5	#8
EC ₅₀[μM]	0.7	0.3	0.6	0.3	0.3	0.1

實例	#10	#11	#12
EC ₅₀[μM]	2.2	0.9	0.3

STING R293Q變體之EC ₅₀值的資料可見於表2d中：

實例	#1	#2	#3	#4	#5	#8
EC ₅₀[μM]	2.2	0.7	1.8	0.5	0.6	0.1

實例	#10	#11	#12
EC ₅₀[μM]	7.8	3.0	0.6

STING AQ變體之EC ₅₀值的資料可見於表2e中：

實例	#1	#2	#3	#4	#5	#8
EC ₅₀[μM]	1.8	0.6	1.0	0.3	0.4	0.1

實例	#10	#11	#12
EC ₅₀[μM]	5.6	2.4	0.6

細胞滲透性量測Caco-2細胞係獲自Leibniz Institute DSMZ-German Collection of Microorganisms and Cell Cultures (Braunschweig, Germany)，且將其在含有(最終濃度) 10%胎牛血清(fetal calf serum；FCS)、1%非必需胺基酸(non-essential amino acid；NEAA)、2 mM麩醯胺酸、100 U/mL青黴素及100 μg/mL鏈黴素之杜爾貝科改良的伊格爾培養基(Dulbecco's modified Eagle medium；DMEM)中培養。將Caco-2細胞以160,000個細胞/cm ²之密度接種至24孔Transwell插入物(Corning，#3379)上用於雙向滲透性分析且培養3週，每隔一天更換培養基。

對於雙向滲透性分析，在含有0.25%牛血清白蛋白之輸送緩衝液(最終濃度：128.13 mM NaCl、5.36 mM KCl、1 mM MgSO ₄、1.8 mM CaCl ₂、4.17 mM NaHCO ₃、1.19 mM Na ₂HPO ₄、0.41 mM NaH ₂PO ₄、15 mM 2-[4-(2-羥基乙基)哌𠯤-1-基]乙磺酸(HEPES)、20 mM葡萄糖，pH 7.4)中將10 mM DMSO儲備溶液稀釋至最終濃度為10 μM之測試化合物且添加至頂側或底側隔室中。將細胞與化合物一起培育至多2小時。在不同時間點採集來自相對隔室之樣品。

使用根據完全自動化及可撓性平台(稱為RIAS)定製的基於RapidFire之高通量HPLC/MS/MS系統(高效液相層析/質譜法；BioCius)來定量隔室中之化合物濃度。在此經改良之裝置中，藉由真空泵將樣品抽吸至10 μL樣品環中持續250毫秒，且用水性移動相(99.9%水，0.09%甲酸，及0.01% TFA；流動速率1.5毫升/分鐘)沖洗至C4濾筒(3.8 μL床體積；BioCius)上。在生物分析之前，向樣品外加內標溶液且用乙腈(ACN)稀釋以用於蛋白質沉澱。以多重反應監測(MRM)模式進行量測。使用外部校準進行定量。固相萃取步驟保留分析物3000毫秒，同時移除干擾基質(例如緩衝液組分)。藉由簡單的階段梯度(simple step gradient)，用有機移動相(99.9%乙腈/甲醇[1:1，v:v]，0.09%甲酸及0.01% TFA)將分析物自濾筒反溶離3,000毫秒，且以1.25毫升/分鐘之流動速率沖洗至質譜儀中。隨後，濾筒用水性移動相再平衡500毫秒(流動速率1.5毫升/分鐘)。RapidFire軟體及定製化控制軟體係獲自BioCius。QuickQuan 2.3、Xcalibur 2.0.7及XDK 2.1.0.25用於運作整合至RapidFire系統之TSQ Vantage質譜儀(ThermoFisher, San Jose, CA)。質譜資料處理軟體QuickCalc 7.1.9係購自ThermoFisher。RIAS之主控軟體係使用LabVIEW (版本8.6.1；National Instruments，Austin，TX)進行內部程式化。在AssayExplorer 3.2 (Symyx，Sunnyvale，CA)中進行資料分析，且在Spotfire 2.2.0版(TIBCO，Palo Alto，CA)中觀測相關性圖。

如下計算頂側至底側方向(P _app,AB)及底側至頂側方向(P _app,BA)之表觀滲透係數以及流出比率： P _app,AB= Q _AB/ (C ₀• s • t) P _app,BA= Q _BA/ (C ₀• s • t) 流出比率=P _app,BA/ P _app,AB其中Q為在培育時間t之後，在接受體隔室中回收之化合物的量，C ₀為向供體隔室提供之初始化合物濃度，且s為Transwell插入物之表面積。作為品質對照，每個分析盤中包括一種參考P-gp受質(阿帕泛(apafant))及一種低滲透性化合物(BI內部參考，P _app約3 •10 ^-7cm/s，無流出)。另外，在滲透性分析之前，量測各盤之經上皮電阻(TEER)值，且測定各化合物之供體及接受體隔室中的總回收。結果可見於表3a及表3b中。表3a：細胞滲透性量測- P _app,AB：

實例編號	3	4	5	6	7
Caco A→B [10 ^-6cm/s]	15	19	8	9	13

實例編號	8	9	12	13
Caco A→B [10 ^-6cm/s]	11	10	4	2

細胞滲透性量測-流出比率：

實例編號	3	4	5	6	7
流出比率	1.7	1.0	2.6	2.4	1.8

實例編號	8	9	12	13
流出比率	1.4	1.5	6.4	3.6

Claims

一種式(I)化合物 (I) 其中 B為選自由以下組成之群的基團：含有1或2個N原子之5-7員單環雜環基，含有1個N原子之6員雙環雜環基，及含有1個N原子及1個選自由O及S組成之群之雜原子的6員單環雜環基； R ¹ 為-H或-C ₁- ₆烷基； R ² 為-H或-鹵素； R ³ 為-H或-鹵素；其限制條件為R ²及/或R ³為鹵素； R ⁴ 係選自由以下組成之群：-H、-S(O ₂)-C ₁- ₆烷基、=O、-C(O)H、-C(O)OH、-C(O)O-C ₁- ₆烷基、-C ₁- ₆伸烷基-C(O)OH 及-C(O)NH ₂； R ⁵ 不存在或係選自由-H及=O組成之群或其鹽。
如請求項1之化合物，其中R ¹為-C ₁- ₃烷基；或其鹽。
如請求項1至2中任一項之化合物，其中 B係選自由以下組成之群：、、、、、及；或其鹽。
如請求項1至3中任一項之化合物，其中 B係選自由以下組成之群：、、、及；或其鹽。
如請求項1至4中任一項之化合物，其中 R ⁴ 係選自由以下組成之群：-S(O ₂)-C ₁- ₆烷基、=O、-C(O)H 及-C(O)OH；或其鹽。
如請求項1至5中任一項之化合物，其中 R ² 係選自由以下組成之群：-H、-F及-Cl； R ³ 係選自由以下組成之群：-H、-F及-Cl；或其鹽。
如請求項1至6中任一項之化合物，其中 R ² 為-F或-Cl； R ³ 係選自由以下組成之群：-H、-F及-Cl；或其鹽。
如請求項1至6中任一項之化合物，其中 R ² 係選自由以下組成之群：-H、-F及-Cl； R ³ 為-F或-Cl；或其鹽。
如請求項1至6中任一項之化合物，其係選自由以下組成之群：、、、、、、、、、、、及；或其醫藥學上可接受之鹽。
如請求項1至6及9中任一項之化合物，其係選自由以下組成之群：、、、、、、、、及；或其醫藥學上可接受之鹽。
如請求項1至10中任一項之化合物，其呈其無鹽形式。
如請求項1至11中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其係用作藥劑。
如請求項1至11中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其係用於治療選自由以下組成之群的疾病：發炎疾病、過敏性疾病及自體免疫疾病、感染性疾病及癌症，或用作疫苗佐劑。
如請求項1至11中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其係用於治療癌症，其中該化合物係在放射療法之後投與。
一種醫藥組合物，其包含至少一種如請求項1至11中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽及醫藥學上可接受之載劑。
一種藥劑組合，其除了包含一或多種如請求項1至11中之一或多項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽作為其他活性物質以外，亦包含選自由以下組成之群的物質：細胞生長抑制物質、細胞毒性物質、細胞增殖抑制劑、抗血管生成物質、類固醇、病毒、免疫原性細胞死亡誘導劑、癌症靶向劑、免疫調節劑、抗體及奈米抗體。