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TW202430181A - 一種靶向泛kras蛋白降解劑的化合物及其應用 - Google Patents

一種靶向泛kras蛋白降解劑的化合物及其應用 Download PDF

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TW202430181A
TW202430181A TW112147626A TW112147626A TW202430181A TW 202430181 A TW202430181 A TW 202430181A TW 112147626 A TW112147626 A TW 112147626A TW 112147626 A TW112147626 A TW 112147626A TW 202430181 A TW202430181 A TW 202430181A
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吳顥
徐人奇
楊曉峰
路淵
鄒正耀
王冬
張洪波
王澤
鄭航
譚耀明
何將旗
夏洪峰
時召濤
林遠望
李騰飛
方龍城
袁丁
許豔傑
盧路
李樹森
趙志昌
湛波
王維
周全
宏 蘭
家炳 王
丁列明
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大陸商貝達藥業股份有限公司
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Abstract

本發明屬於醫藥技術領域，具體涉及一種靶向KRAS蛋白降解劑的化合物及其應用。本發明提供了一種具有F-L-M結構的化合物，或其互變異構體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式或其可藥用的鹽，F為KRAS蛋白結合片段；L為連接F和M的連接單元；M為VHL結合片段；本發明化合物可用於治療KRAS突變或擴增引起的疾病。

Description

一種靶向泛KRAS蛋白降解劑的化合物及其應用
本發明屬於醫藥技術領域，具體涉及一種靶向KRAS蛋白降解劑的化合物及其應用。
PROTAC是一種異雙功能分子，分子的一端是結合靶蛋白的配體，另一端是E3連接酶的配體，中間透過合適的鏈相連。PROTAC降解靶蛋白是透過泛素蛋白酶體系統（UPS）實現的，其大致過程如下，PROTAC分子結合靶蛋白（POI）和E3連接酶，形成三元複合物，給靶蛋白標記上泛素分子，泛素化的蛋白被細胞內的蛋白酶體26S識別並降解。
相比傳統的小分子和抗體等都是透過“佔據驅動”的作用模式抑制靶蛋白的功能，發揮治療疾病的作用，這種作用模式需要抑制劑或單抗具備較高的濃度才能夠佔據靶點的活性位點，阻斷下游信號通路的轉導。而PROTAC是“事件驅動”，不是影響蛋白的功能，而是介導致病靶蛋白被降解。只要PROTAC介導三元複合物的形成並給靶蛋白打上泛素化的標籤，理論上是可以迴圈反復使用的，因此催化劑量即可發揮作用。其具有作用範圍更廣、活性更高、可靶向“不可成藥”靶點；提高選擇性、活性和安全性；可以克服藥物的耐藥性等特點。
KRAS的活性因與GDP或GTP的結合轉換而切換，與GDP結合時處於失活的狀態，與GTP結合時則啟動。發生突變的KRAS蛋白，GAP進入GTP受限從而阻止水解，形成持續啟動的GTP結合狀態。由於突變型KRAS對三磷酸鳥苷 (GTP) 具有較高的親和力，又存在催化位點小、蛋白表面光滑等難以靶向的因素，使小分子抑制劑的開發一直備受挑戰，造就了KRAS的“不可成藥”性。一方面，KRAS以皮莫耳濃度的親和力與GDP和GTP結合，嚴重阻礙了開發核苷酸競爭性抑制劑；另一方面KRAS蛋白缺少理想的小分子結合口袋，難以設計高親和力變構抑制劑。
RAS突變引起的癌症占所有人類癌症的25%-30%。而其中KRAS突變占3種RAS突變中的86%。在所有KRAS突變中，又存在著G12D (35%)、G12V (29%)、 G12C (21%)、G13D (6.7%)、G12R (4.3%)、G12A (4.1%)等多種突變。如果能同時靶向這些不同的KRAS 突變，在極大的滿足臨床需求的同時將具有巨大的商業價值。
然而當下的KRAS抑制劑在臨床上面臨著藥效有限，極易耐藥的困境，如能結合PROTAC的抗耐藥，高藥效等特性，開發出新型的泛KRAS PROTAC降解劑藥物，用於治療KRAS 突變或擴增引起的疾病，將具有極大的社會意義和商業價值。
本發明提供了一種新型的泛KRAS PROTAC降解劑，可用於治療KRAS 突變或擴增引起的疾病。
一方面，本發明提供了一種具有F-L-M結構的化合物，或其互變異構體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式或其可藥用的鹽，其中： F為通式(A）所示的KRAS蛋白結合片段； X選自-O-或 ； 代表獨立地選自單鍵或雙鍵； X 4為CR 8、C(R 8) 2、O、N或NR 8；R 8各自獨立選自H、羥基、氧代基、鹵素、氰基、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、-S- C 1-6烷基、-C 0-3亞烷基-C 2-4烯基、C 1-6烷氧基、C 1-6鹵代烷氧基或C 3-14環烷基；C 3-14環烷基、C 1-6烷基任選進一步被一個或多個R a取代； X 5選自C、CH或N； X 6選自CR 14、C(R 14) 2、O、N或NR 14； R 14各自獨立選自H、羥基、氧代基、鹵素、氰基、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、-S- C 1-6烷基、-C 0-3亞烷基-C 2-4烯基、C 1-6烷氧基、C 1-6鹵代烷氧基或C 3-14環烷基；C 3-14環烷基、C 1-6烷基任選進一步被一個或多個R a取代； R 6選自不存在、C 3-14環烷基或3-14元雜環基；C 3-14環烷基或3-14元雜環基任選進一步被一個或多個R a取代； R 9選自H、胺基、取代的胺基、氰基、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、鹵素、C 2-6烯基、C 3-6環烷基；C 1-6烷基、C 2-6烯基、C 3-6環烷基任選進一步被一個或多個R a取代； R 10選自不存在、-O-或-NR 11-；R 11選自H、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6羥基烷基或C 1-6胺基烷基； R 7選自C 3-14環烷基、3-14元雜環基、C 6-18芳基或5-18元雜芳基，C 3-14環烷基、3-14元雜環基、C 6-18芳基或5-18元雜芳基任選地進一步被一個或多個R a取代； K選自C 3-14環烷基或3-14元雜環基，C 3-14環烷基或3-14元雜環基為單環、稠環、螺環或橋環，任選地進一步被一個或多個R a取代，且3-14元雜環基不為 、 、 、 、 、 和 ； m，n各自獨立選自0，1，2，3，4或5； L為連接F和M的連接單元； L選自 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 或 ； 其中G環或D環各自獨立選自C 6-14芳基、5-14元雜芳基、C 3-14環烷基或3-14元雜環基，C 6-14芳基、5-14元雜芳基或3-14元雜環基任選地進一步被一個或多個R a取代； E各自獨立選自-O-、-NH-或-NCH 3-； Y 1、Y 2各自獨立選自不存在、-O-、-NH-、3-6元含N雜環基、C 1-6亞烷基、羰基、乙炔基或C 3-6環烷基； n1、n2、n3各自獨立地選自0-10的整數，優選為0，1，2，3或4； M選自通式(III)或（IV）所示的VHL結合片段； 或 X 1選自C、CH 或N； X 2選自C、CH 或N； X 3選自N、NH、O或S； R 1選自H、C 1-6烷基、鹵素或氰基，優選為甲基、乙基、F或氰基； R 2選自H或C 1-6烷基，優選為H或甲基； R 3選自H、C 1-6烷基或C 1-6羥基烷基或-（CH 2）n-CO-NH-(CH 2) n -CH 3，n選自0，1，2或3，R 3優選為H、甲基、羥基甲基、 或-CH 2-CO-NH-CH 3； R 4選自 、 或-NH-； R 5選自H、C 1-6烷基或C 1-6鹵代烷基； R 12選自 或 ； R a各自獨立地選自H、羥基、胺基、氧代基、氰基、鹵素、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、-C 0-3亞烷基-OR b、-OC(=O)C 1-6烷基、 -C 0-3亞烷基-SR b、-C 0-3亞烷基-N(R b) 2、-C 0-3亞烷基-S(=O)R b、-C 0-3亞烷基-S(=O) 2R b、-C 0-3亞烷基-SR b、-C 0-3亞烷基-S(R b) 5、-C 0-3亞烷基-C(=O)R b、-C 0-3亞烷基-C(=O)OR b、-C 0-3亞烷基-C(=O)N(R b) 2、C 2-6烯基、 、 C 2-6炔基、-C 0-3亞烷基-C 3-14環烷基、-C 0-3亞烷基-(3-14元雜環基)、-C 0-3亞烷基-C 6-18芳基或-C 0-3亞烷基-(5-18元雜芳基)，C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、-C 0-3亞烷基-C 3-14環烷基、-C 0-3亞烷基-(3-14元雜環基)、-C 0-3亞烷基-C 6-18芳基或-C 0-3亞烷基-(5-18元雜芳基) 任選地進一步被一個或多個R b取代； 每個R b各自獨立地為 H、鹵素、羥基、氰基、C 1-6烷基、C 3-6環烷基、C 1-6鹵代烷基、C 3-14環烷基、3-14元雜環基、C 6-18芳基或5-18元雜芳基，C 1-6烷基、C 3-6環烷基、C 1-6鹵代烷基、C 3-14環烷基、3-14元雜環基、C 6-18芳基或5-18元雜芳基任選地進一步被一個或多個鹵素、C 1-6烷基或C 1-6鹵代烷基所取代；或者一個原子上的兩個R b與其共同連接的原子形成C 3-14環烷基、3-14元雜環基、C 6-18芳基或5-18元雜芳基，C 3-14環烷基、3-14元雜環基、C 6-18芳基或5-18元雜芳基任選地進一步被一個或多個鹵素、胺基、羥基、氰基、C 1-6烷基、C 3-6環烷基或C 1-6鹵代烷基取代。
在本發明的一些實施方式中， L選自 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 或 ； 其中G環或D環各自獨立選自C 6-14芳基、5-14元雜芳基、C 3-14環烷基或3-14元雜環基，C 6-14芳基、5-14元雜芳基或3-14元雜環基任選地進一步被一個或多個R a取代； E各自獨立選自-O-、-NH-或-NCH 3-； n1、n2、n3各自獨立地選自0-10的整數，優選為0，1，2，3或4； M選自通式(V)或（IV）所示的VHL結合片段； 或 X 1選自C、CH 或N； X 2選自C、CH 或N； X 3選自N、NH、O或S； R 1選自H、C 1-6烷基、鹵素或氰基，優選為甲基、乙基、F或氰基； R 2選自H或C 1-6烷基，優選為H或甲基； R 3選自H、C 1-6烷基或C 1-6羥基烷基，優選為H、甲基或羥基甲基； R 4選自 、 或-NH-； R 12選自 或 。
在本發明的一些實施方式中，L選自 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 或 ； G環或D環各自獨立選自C 6-14芳基、5-14元雜芳基或3-14元雜環基，C 6-14芳基、5-14元雜芳基或3-14元雜環基任選地進一步被一個或多個R a取代； E各自獨立選自-O-、-NH-或-NCH 3-； n1、n2、n3各自獨立地選自0-10的整數，優選為0，1，2，3或4； M選自通式(V)或（IV）所示的VHL結合片段； 或 X 1選自C、CH 或N； X 2選自C、CH 或N； X 3選自N、NH、O或S； R 1選自H、C 1-6烷基、鹵素或氰基，優選為甲基、乙基、F或氰基； R 2選自H或C 1-6烷基，優選為H或甲基； R 3選自H、C 1-6烷基或C 1-6羥基烷基，優選為H、甲基或羥基甲基； R 4選自 、 或-NH-； R 12選自 或 。 R a獨立地選自H、羥基、胺基、氧代基、氰基、鹵素、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、-C 0-3亞烷基-OR b、-OC(=O)C 1-6烷基、 -C 0-3亞烷基-SR b、-C 0-3亞烷基-N(R b) 2、-C 0-3亞烷基-S(=O)R b、-C 0-3亞烷基-S(=O) 2R b、-C 0-3亞烷基-SR b、-C 0-3亞烷基-S(R b) 5、-C 0-3亞烷基-C(=O)R b、-C 0-3亞烷基-C(=O)OR b、-C 0-3亞烷基-C(=O)N(R b) 2、C 2-6烯基、C 2-6炔基、-C 0-3亞烷基-C 3-14環烷基、-C 0-3亞烷基-(3-14元雜環基)、-C 0-3亞烷基-C 6-18芳基或-C 0-3亞烷基-(5-18元雜芳基)，C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、-C 0-3亞烷基-C 3-14環烷基、-C 0-3亞烷基-(3-14元雜環基)、-C 0-3亞烷基-C 6-18芳基或-C 0-3亞烷基-(5-18元雜芳基) 任選地進一步被一個或多個R b取代； 每個R b獨立地為 H、鹵素、羥基、氰基、C 1-6烷基、C 3-6環烷基、C 1-6鹵代烷基、C 3-14環烷基、3-14元雜環基、C 6-18芳基或5-18元雜芳基，C 1-6烷基、C 3-6環烷基、C 1-6鹵代烷基、C 3-14環烷基、3-14元雜環基、C 6-18芳基或5-18元雜芳基任選地進一步被一個或多個鹵素、C 1-6烷基或C 1-6鹵代烷基所取代；或者一個原子上的兩個R b與其共同連接的原子形成C 3-14環烷基、3-14元雜環基、C 6-18芳基或5-18元雜芳基，C 3-14環烷基、3-14元雜環基、C 6-18芳基或5-18元雜芳基任選地進一步被一個或多個鹵素、胺基、羥基、氰基、C 1-6烷基、C 3-6環烷基或C 1-6鹵代烷基取代。
在本發明的一些實施方式中，F為通式(I)或（II）所示的KRAS蛋白結合片段； 或 ； 代表獨立地選自單鍵或雙鍵； X 4為CR 8、C(R 8) 2、O、N或NR 8；R 8各自獨立選自H、羥基、氧代基、鹵素、氰基、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、-S- C 1-6烷基、-C 0-3亞烷基-C 2-4烯基、C 1-6烷氧基、C 1-6鹵代烷氧基或C 3-14環烷基；C 3-14環烷基、C 1-6烷基任選進一步被一個或多個R a取代； X 5選自C、CH或N； X 6選自CR 14、C(R 14) 2、O、N或NR 14； R 14各自獨立選自H、羥基、氧代基、鹵素、氰基、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、-S- C 1-6烷基、-C 0-3亞烷基-C 2-4烯基、C 1-6烷氧基、C 1-6鹵代烷氧基或C 3-14環烷基；C 3-14環烷基、C 1-6烷基任選進一步被一個或多個R a取代； R 6選自不存在、C 3-14環烷基或3-14元雜環基；C 3-14環烷基或3-14元雜環基任選進一步被一個或多個R a取代； 該R 9選自H、胺基、取代的胺基、氰基、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、鹵素、C 2-6烯基、C 3-6環烷基；C 1-6烷基、C 2-6烯基、C 3-6環烷基任選進一步被一個或多個R a取代； R 10選自不存在、-O-或-NR 11-；R 11選自H、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6羥基烷基或C 1-6胺基烷基； R 7選自C 3-14環烷基、3-14元雜環基、C 6-18芳基或5-18元雜芳基，C 3-14環烷基、3-14元雜環基、C 6-18芳基或5-18元雜芳基任選地進一步被一個或多個R a取代； K選自C 3-14環烷基或3-14元雜環基，C 3-14環烷基或3-14元雜環基為單環、稠環、螺環或橋環，任選地進一步被一個或多個R a取代，且3-14元雜環基不為 、 、 、 、 、 和 ； m，n各自獨立選自0，1，2，3，4或5。
在本發明的一些實施方式中，R 4選自 或-NH-。
在本發明的一些實施方式中，R 4選自 。
在本發明的一些實施方式中，K選自C 3-14環烷基或3-14元雜環基，C 3-14環烷基或3-14元雜環基為單環，且任選地進一步被一個或多個R a取代。
進一步地，K選自 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 或 。
在本發明的一些實施方式中，K為C 3-14環烷基或3-14元雜環基，C 3-14環烷基或3-14元雜環基為螺環，且任選地進一步被一個或多個R a取代。
進一步地，K選自 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 或 。
在本發明的一些實施方式中，K為C 3-14環烷基或3-14元雜環基，C 3-14環烷基或3-14元雜環基為稠環，且任選地進一步被一個或多個R a取代。
進一步地，K選自 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 或 。
在本發明的一些實施方式中，K為C 3-14環烷基或3-14元雜環基，C 3-14環烷基或3-14元雜環基為橋環，且任選地進一步被一個或多個R a取代。
進一步地，K選自 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 或 。
在本發明的一些實施方式中，K選自 。
在本發明的一些實施方式中，R 7選自C 6-18芳基或5-18元雜芳基，C 6-18芳基或5-18元雜芳基任選地進一步被一個或多個R a取代；R a各自獨立地選自H、鹵素、羥基、胺基、氰基、C 2-6炔基、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基或C 2-6烯烴。
在本發明的一些實施方式中，R 7選自 、 、 、 、 、 、 、 、 、 或 ， 、 、 、 、 、 、 、 、 、 或 任選地進一步被一個或多個所R a取代；R a各自獨立地選自H、鹵素、羥基、胺基、氰基、C 2-6炔基、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基或C 2-6烯烴。
在本發明的一些實施方式中，R 7選自 、 、 、 、 、 、 、 、 、 或 。
在本發明的一些實施方式中，F選自 ； 其中R 7，R 9，R 8，R 11， R 14的定義如上述通式（I）或（II）中所定義；K選自 。
在本發明的一些實施方式中，K選自 。
在本發明的一些實施方式中，F選自 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 或 。
在本發明的一些實施方式中，F選自 、 、 或 。
在本發明的一些實施方式中，L中的G環或D環各自獨立選自C 6-14芳基、5-14元雜芳基、C 3-14環烷基或3-14元雜環基，C 6-14芳基、5-14元雜芳基、C 3-14環烷基或3-14元雜環基任選地進一步被鹵素或C 1-3烷基取代； C 6-14芳基優選為 ； 5-14元雜芳基優選自 、 、 、 、 、 、 、 、 、 或 ； 3-14元雜環基優選自 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 或 ； C 3-14環烷基優選自 或 。
在本發明的一些實施方式中，L中的G環或D環各自獨立選自C 6-14芳基、5-14元雜芳基、C 3-14環烷基或3-14元雜環基，C 6-14芳基、5-14元雜芳基、C 3-14環烷基或3-14元雜環基任選地進一步被鹵素或C 1-3烷基取代； C 6-14芳基優選為 ； 5-14元雜芳基優選自 、 、 、 、 、 、 、 或 ； 3-14元雜環基優選自 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 或 ； C 3-14環烷基優選自 或 。
在本發明的一些實施方式中，L中的G環或D環各自獨立選自C 6-14芳基、5-14元雜芳基或3-14元雜環基，C 6-14芳基、5-14元雜芳基或3-14元雜環基任選地進一步被鹵素或C 1-3烷基取代； C 6-14芳基優選為 ； 5-14元雜芳基優選自 、 、 、 或 ； 3-14元雜環基優選自 、 、 、 、 、 、 、 或 。
在本發明的一些實施方式中，L選自 、 、 、 、 、 或 ； 其中G環或D環各自獨立選自C 6-14芳基、5-14元雜芳基、C 3-14環烷基或3-14元雜環基，C 6-14芳基、5-14元雜芳基或3-14元雜環基任選地進一步被一個或多個R a取代；R a獨立地選自H、羥基、胺基、氧代基、氰基、鹵素、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基或C 1-6烷氧基； Y 1、Y 2各自獨立選自不存在、-O-、-NH-、3-6元含N雜環基、C 1-6亞烷基、羰基、乙炔基或C 3-6環烷基； E各自獨立選自-O-、-NH-或-NCH 3-； n1、n2、n3各自獨立地選自0-10的整數，優選為0，1，2，3或4。
在本發明的一些實施方式中，L選自如下所示結構： 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、或 ，其中， n1、n2各自獨立地選自0-10的整數，優選為0，1，2或3。
在本發明的一些實施方式中，L選自如下所示結構： 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 或 。
在本發明的一些實施方式中，M 選自 。
在本發明的一些實施方式中，M選自 。
在本發明的一些實施方式中，L選自 或 ； 其中G環選自C 6-14芳基、5-14元雜芳基、C 3-14環烷基或3-14元雜環基，C 6-14芳基、5-14元雜芳基或3-14元雜環基任選地進一步被一個或多個R a取代；R a各自獨立地選自H、羥基、胺基、氧代基、氰基、鹵素、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基或C 1-6烷氧基； D環為5-6元含N雜芳基，優選為 或 ； Y 1、Y 2各自獨立選自不存在、-O-、-NH-、3-6元含N雜環基、C 1-6亞烷基、羰基、乙炔基或C 3-6環烷基； n1、n2各自獨立為0，1，2，3或4。
在本發明的一些實施方式中，L選自 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 或 。
在本發明的一些實施方式中，F選自 或 ；L 選自如下所示結構： 、 、 、 、 、 、 或 ；其中G環或D環各自獨立選自C 6-14芳基、5-14元雜芳基、C 3-14環烷基或3-14元雜環基，C 6-14芳基、5-14元雜芳基、C 3-14環烷基或3-14元雜環基任選地進一步被一個或多個R a取代； Y 1、Y 2各自獨立選自不存在、-O-、-NH-、3-6元含N雜環基、C 1-6亞烷基、羰基、乙炔基或C 3-6環烷基； E各自獨立選自-O-、-NH-或-NCH 3-； n1、n2、n3各自獨立地選自0-10的整數，優選為0，1，2，3或4； M選自通式(III)所示的VHL結合片段； 其中X 1選自C、CH 或N； X 2選自C、CH 或N； X 3選自N、NH、O或S； R 1選自H、C 1-6烷基、鹵素或氰基，優選為甲基、乙基、F或氰基； R 2選自H或C 1-6烷基，優選為H或甲基； R 3選自H、C 1-6烷基、C 1-6羥基烷基或-（CH 2）n-CO-NH-(CH 2) n -CH 3，n選自0，1，2或3，R 3優選為H、甲基、羥基甲基、 或-CH 2-CO-NH-CH 3； R 4選自 、 或-NH-； R 5選自H、C 1-6烷基或C 1-6鹵代烷基； R a獨立地選自H、羥基、胺基、氧代基、氰基、鹵素、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基或C 1-6烷氧基。
在本發明的一些實施方式中，F-L-M結構的化合物選自以下化合物： 。
本發明透過大量的研究發現，本發明化合物的連接鏈對於化合物的KRAS的降解能力以及細胞增殖抑制活性都有很大的影響。當在連接鏈中，靠近VHL配體一側，加入5-6元含N雜芳基，特別是吡嗪環和吡啶環，將會大幅提升化合物對於KRAS的降解能力，同時增加了化合物細胞增殖抑制活性。我們推測，含N雜芳環所處空間位置特殊，會與VHL蛋白存在氫鍵等相互作用，增加了化合物與VHL的結合力，從而增加了化合物對於KRAS蛋白的降解能力。研究表明，將該含N雜芳環直接連結在VHL配體上，是增加化合物降解能力的關鍵因素。另外，該類帶有含N雜芳環化合物體內藥代性質優秀，成藥性高。
另一方面本發明提供了一種藥物組合物，所述藥物組合物含有本發明上述任一具有F-L-M結構的通式所示的化合物、其互變異構體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式或其可藥用的鹽，以及一種或多種藥學上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。
本發明進一步提供上述任一具有F-L-M結構的通式所示的化合物、其互變異構體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式或其可藥用的鹽，或包含其的藥物組合物在製備用於調節受試者體內的KRAS蛋白泛素化和降解的藥物中的用途。
本公開進一步提供上述任一具有F-L-M結構通式所示的化合物或其互變異構體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式或其可藥用的鹽，或包含其的藥物組合物在製備用於治療和/或預防由KRAS介導的或依賴性的病症的藥物中的用途，其中由KRAS介導的疾病優選選自腫瘤。
在某些實施方式中，所述疾病選自乳腺癌、多發性骨髓瘤、膀胱癌、子宮內膜癌、胃癌、宮頸癌、橫紋肌肉瘤、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、多形性肺癌、卵巢癌、食管癌、黑色素瘤、結腸直腸癌、肝細胞瘤、頭頸部腫瘤、肝膽管細胞癌、骨髓增生異常綜合征、惡性膠質瘤、前列腺癌、甲狀腺癌、徐旺氏細胞瘤、肺鱗狀細胞癌、苔蘚樣角化病、滑膜肉瘤、皮膚癌、胰腺癌、睾丸癌或脂肪肉瘤。
除非另有說明，所述結構通式中使用的一般化學術語具有通常的含義。
例如，除非另有說明，本發明所用的術語“鹵素”是指氟、氯、溴或碘。
本發明中基團的連接順序沒有特別的限制下，可以自左到右的連接，也可以自右到左的連接。
在本發明中，除非另有說明，“烷基”包括直鏈或支鏈的一價飽和烴基。 例如，烷基包括甲基、乙基、丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、3-(2-甲基)丁基、2-戊基、2-甲基丁基、新戊基、正己基、2-己基、2-甲基戊基等。類似的，“C 1-6烷基”中的“ 1-6”是指包含有1、2、3、4、5或6個碳原子的直鏈或支鏈形式排列的基團。
術語“烷氧基”是指前述的直鏈或支鏈烷基的氧醚形式，即-O-烷基。
術語“亞烷基”是指二價烷基連接基團。亞烷基在形式上是指兩個C-H鍵替換為亞烷基與化合物其餘部分的連接點的烷烴。類似的，C 1-3亞烷基中的“C 1-3”是指含有1、2或3個碳原子的亞烷基，包括但不限於亞甲基、1,2-亞乙基、1,3-亞丙基或1,2-亞異丙基。
術語“鹵代烷基”是指一個或多個H已經被鹵素原子置換的烷基。
術語“氧代”或“氧代基”是指呈二價取代基形式的氧原子，其與C連接時形成羰基，其與雜原子連接時形成亞碸基或碸基或N-氧化物基團。
本發明中，除另有說明，術語 “芳香環”、“芳香族環”或“芳香族雜環”即為具有芳香族特徵（具有（4n+2）個非定域π電子，其中n為整數）的多不飽和環的碳環或雜環。
術語“芳基”，在本發明中，除非另有說明，是指未取代或取代的包括碳環的原子的單環或稠環芳香基團。優選C 6-18芳基，更優選芳基為C 6-10的單環或雙環的芳香環基團。優選為苯基、萘基；最優選為萘基。所述芳基環可以稠合於雜芳基、雜環基或環烷基上，其中與母體結構連接在一起的環為芳基環，非限制性實例包括但不限於苯并環戊基。
術語“雜環基”是指具有至少一個含有雜原子的環化烷基或環化烯基的環系統，所述雜原子選自N、O和/或S。所述雜環基可以包括單環或多環（例如具有2、3或4個稠合環、螺環、橋環等）。雜環基可以經由成環碳原子或成環雜原子與化合物其他部分相連接。優選3-14元雜環基，3-14元雜環基中的“3-14元”是指含有3-14個C、N、O或S的成環原子組成的雜環基；其中氮或硫雜原子可以選擇性地被氧化，並且氮雜原子可以選擇性地被季銨化。這些雜環基的實例包括但不限於 、 、 ， 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、氮雜環丁烷基、吡咯烷基、呱啶基、呱嗪基、氧代呱嗪基、氧代呱啶基、四氫呋喃基、二氧戊環基、四氫咪唑基、四氫噻唑基、四氫惡唑基、四氫吡喃基、嗎啉基、硫代嗎啉基、硫代嗎啉基亞碸、硫代嗎啉基碸基和四氫惡二唑基。所述雜環基可以稠合於芳基、雜芳基或環烷基環上，其中與母體結構連接在一起的環為雜環基。
術語“雜芳基”，在本發明中，除非另有說明，是指具有至少一個雜原子的單環或多環（例如具有2、3或4個稠合環、螺環、橋環等）芳香族雜環，所述雜原子選自N、O和/或S，並且其中所述氮或硫雜原子可以選擇性地被氧化，所述氮雜原子可以選擇性地被季銨化。優選5-18元雜芳基，其中5-18元雜芳基中的“5-18元”是指含有5-18個C、N、O或S的成環原子組成的雜芳基。更優選的是5-10元雜芳基；更更優選的是5-6元雜芳基。雜芳基的實例包括但不限於噻吩基、呋喃基、咪唑基、異惡唑基、惡唑基、吡唑基、吡咯基、噻唑基、噻二唑基、三唑基、吡啶基、噠嗪基、吲哚基、氮雜吲哚基、吲唑基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并異惡唑基、苯并噻唑基、苯并噻唑基、苯并噻二唑基、苯并三唑基腺嘌呤、喹啉基或異喹啉基。所述雜芳基可以稠合於芳基、雜環基或環烷基環上，其中與母體結構連接在一起的環為雜芳基環。
術語“環烷基”是指具有至少一個環化烷基的環系統。優選C 3-14環烷基，其中的“C 3-14”是指環烷基可以具有3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14個成環原子。環烷基可以包括單環和多環（例如具有2、3或4個稠合環、螺環、橋環等）。一些實施例中環烷基包括但不限於環丙基、環丁基、環戊基等；所述環烷基還可以稠合於芳基、雜環基或雜芳基環上，其中與母體結構連接在一起的環為環烷基。
術語“取代的”是指基團中的一個或多個氫原子分別被相同的或者不同的取代基所取代。典型的取代基包括但不限於鹵素（F、Cl、Br或I）、C 1-8烷基、C 3-12環烷基、-OR 1、-SR 1、=O、=S、-C(O)R 1、-C(S)R 1、=NR 1、-C(O)OR 1、-C(S)OR 1、-NR 1R 2、-C(O)NR 1R 2、氰基、硝基、-S(O) 2R 1、-O-S(O 2)OR 1、-O-S(O) 2R 1、-OP(O)(OR 1)(OR 2)；其中R 1和R 2獨立地選自-H、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基或C 3-6環烷基。在一些實施例中，取代基獨立地選自包含-F、-Cl、-Br、-I、-OH、三氟甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、異丁氧基、叔丁氧基、-SCH 3、-SC 2H 5、甲醛基、-C(OCH 3)、氰基、硝基、-CF 3、-OCF 3、胺基、二甲基胺基、甲硫基、磺醯基和乙醯基的基團。
當一個連接基團的數量為0時，比如-(CH 2) 0-表示該連接基團為鍵。
術語“藥用鹽”是指從藥學上可接受的無毒的鹼或酸製備的鹽。
當本發明提供的化合物是酸時，可以從藥學上可接受的無毒的鹼，包括無機鹼和有機鹼，方便地制得其相應的鹽。從無機鹼衍生的鹽包括鋁、銨、鈣、銅（高價和低價）、三價鐵、亞鐵、鋰、鎂、錳（高價和低價）、鉀、鈉、鋅之類的鹽。特別優選銨、鈣、鎂、鉀和鈉的鹽。能夠衍生成藥學上可接受的鹽的無毒有機鹼包括伯胺、仲胺和叔胺，也包括環胺及含有取代基的胺，如天然存在的和合成的含取代基的胺。能夠成鹽的其他藥學上可接受的無毒有機鹼，包括離子交換樹脂以及精胺酸、甜菜鹼、咖啡因、膽鹼、N',N'-二苄乙二胺、二乙胺、2-二乙胺基乙醇、2-二甲胺基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基嗎啉、N-乙基呱啶、還原葡萄糖胺、胺基葡萄糖、組胺酸、異丙胺、賴胺酸，甲基葡萄糖胺、嗎啉、呱嗪、呱啶、多胺樹脂、普魯卡因、氯普魯卡因、嘌呤、可可鹼、三乙胺、三甲胺、三丙胺、胺丁三醇等。
當本發明提供的化合物是鹼時，可以從藥學上可接受的無毒的酸，包括無機酸和有機酸，方便制得其相應的鹽。這樣的酸包括，如醋酸、苯磺酸、苯甲酸、樟腦磺酸、檸檬酸、乙磺酸、甲酸、富馬酸、葡萄糖酸、谷胺酸、氫溴酸、鹽酸、羥乙磺酸、乳酸、馬來酸、蘋果酸、扁桃酸、甲磺酸、黏酸、硝酸、撲酸、泛酸、磷酸、琥珀酸、硫酸、草酸、丙酸、乙醇酸、氫碘酸、高氯酸、環己胺磺酸、水楊酸、2-萘磺酸、糖精酸、三氟乙酸、酒石酸和對甲苯磺酸等。較優地，檸檬酸、氫溴酸、甲酸、鹽酸、馬來酸、磷酸、硫酸和酒石酸。更優地，甲酸和鹽酸。
本發明化合物的藥物前體包含在本發明的保護範圍內。通常，所述藥物前體是指很容易在體內轉化成所需化合物的功能性衍生物。例如，本申請化合物的任何藥學上可接受的鹽、酯、酯的鹽或其它衍生物，其在向受體施用後能夠直接或間接地提供本申請的化合物或其具有藥學活性的代謝物或殘基。
本發明所述化合物可能含有一個或多個不對稱中心，並可能由此產生非對映異構體和光學異構體。本發明包括所有可能的非對映異構體及其外消旋混合物、其基本上純的拆分對映異構體、所有可能的幾何異構體及其藥用鹽。
當式（I）所示化合物存在互變異構體時，除非特別聲明，本發明包括任何可能的互變異構體和其藥用鹽，及它們的混合物。
術語“藥物組合物”是指一種或多種本申請的化合物或其藥用鹽與藥學上可接受的輔料組成的混合物。藥物組合物的目的是有利於對有機體給予本申請的化合物。
在本發明中，“一”、“一個”、“該”、“至少一個”和“一個或多個”可互換使用。因此，例如，包含“一種”藥學上可接受的輔料組成的混合物可以被解釋為表示該藥物組合物包括“一種或多種”藥學上可接受的輔料。
術語“藥學上可接受的輔料”是指對有機體無明顯刺激作用，而且不會損害該活性化合物的生物活性及性能的那些輔料。合適的輔料是本領域技術人員熟知的，例如碳水化合物、蠟、水溶性和/或水可膨脹的聚合物、親水性或疏水性材料、明膠、油、溶劑、水等。
本發明的藥物組合物可透過將本申請的化合物與適宜的藥學上可接受的輔料組合而製備，例如可配製成固態、半固態、液態或氣態製劑，如片劑、丸劑、膠囊劑、粉劑、顆粒劑、膏劑、乳劑、懸浮劑、栓劑、注射劑、吸入劑、凝膠劑、微球及氣溶膠等。
給予本發明化合物或其藥用鹽或其藥物組合物的典型途徑包括但不限於口服、直腸、局部、吸入、腸胃外、舌下、陰道內、鼻內、眼內、腹膜內、肌內、皮下、靜脈內給藥。
術語“治療”一般是指獲得需要的藥理和/或生理效應。該效應根據部分或完全穩定或治癒疾病和/或由於疾病產生的副作用，可以是治療性的。本文使用的“治療”涵蓋了對患者疾病的任何治療，包括：(a)抑制疾病的症狀，即阻止其發展；或(b)緩解疾病的症狀，即，導致疾病或症狀退化。
術語“有效量”意指(i)治療或預防特定疾病、病況或障礙，(ii)減輕、改善或消除特定疾病、病況或障礙的一種或多種症狀，或(iii)預防或延遲本文中所述的特定疾病、病況或障礙的一種或多種症狀發作的本申請化合物的用量。構成“治療有效量”的本申請化合物的量取決於該化合物、疾病狀態及其嚴重性、給藥方式以及待被治療的哺乳動物的年齡而改變，但可例行性地由本領域技術人員根據其自身的知識及本公開內容而確定。
為使上述內容更清楚、明確，本發明將用以下實施例來進一步闡述本發明的技術方案。以下實施例僅用於說明本發明的具體實施方式，以使本領域的技術人員能夠理解本發明，但不用於限制本發明的保護範圍。本發明的具體實施方式中，未作特別說明的技術手段或方法等為本領域的常規技術手段或方法等。
除非另有說明，本發明所有的溫度均指攝氏度。
實施例中使用了下列縮略語： DMF： N, N-二甲基甲醯胺； NIS： N-碘代丁二醯亞胺； THF：四氫呋喃； EA：乙酸乙酯； PE：石油醚； DCM：二氯甲烷； MeOH：甲醇； TBDPSCl：叔丁基二苯基氯矽烷； DPPA：疊氮磷酸二苯酯； CDI：N,N'-羰基二咪唑； DIPEA：N,N-二異丙基乙胺； CataCXium A Pd G3：甲磺酸[正丁基二(1-金剛烷基)膦](2-胺基-1,1'-聯苯-2-基)鈀(II)； LAH/ LiAlH 4：四氫鋁鋰； POCl 3：三氯氧磷； DMSO：二甲亞碸； DMF-DMA：N,N-二甲基甲醯胺二甲基縮醛； TosMIC：對甲基苯磺醯甲基異腈； DCE：1,2-二氯乙烷； DMAP：4-二甲胺基吡啶； PhN(Tf) 2：苯基雙(三氟甲烷磺醯)亞胺； PBS：磷酸緩衝液; Selectfluor: 1-氯甲基-4-氟-1,4-二氮雜環[2.2.2]辛烷雙（四氟硼酸鹽）； TsOH: 對甲基苯磺酸； (Boc) 2O：二碳酸二叔丁酯； TMSCl: 三甲基氯矽烷； Pd 2(dba) 3:三二亞苄基丙酮二鈀； HATU：2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯； TFA：三氟乙酸； DABCO：三乙烯二胺； DIBAL-H：二異丁基氫化鋁； TMSCN：三甲基氰矽烷； TMSOTf：三氟甲磺酸三甲基矽酯； LiHMDS：雙三甲基矽基胺基鋰； NaBH 3CN: 氰基硼氫化鈉； TBAF: 四丁基氟化銨； NADPH：還原型煙醯胺腺嘌呤二核苷酸磷酸； UDPGA：尿苷二磷酸葡萄糖醛酸； UGT：尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉移酶； TEA: 三乙胺。
中間體M1的合成：
將（2S，4R）-1-（（S）-2-胺基-3,3-二甲基丁醯基）-4-羥基-N-（（S）-1-（4-（4-甲基噻唑-5-基）苯基）乙基）吡咯烷-2-甲醯胺（1 g）溶於THF（10 mL）和乙腈（10 mL）中，加入TEA（1.88 mL），冰浴下滴加2-疊氮基-1,3-二甲基咪唑六氟磷酸鹽（0.64 g）的乙腈（2 mL）溶液，冰浴攪拌2 h。向反應液中加入20.0 mL水，用EA萃取3次，每次20 mL，合併有機相，硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮有機相，經柱層析分離純化得中間體M1（0.8 g）。ESI-MS m/z: 471[M+H] +。
中間體M2的合成：
步驟1：化合物M2-1的合成
在室溫下，依次加入2-氯-3-氟-吡啶-4-羧酸(54.00 g)，甲苯 (390.00 mL)，叔丁醇(390.00 mL)，三乙胺(128.27 mL)，粉末狀4A分子篩 (90.00 mL)(預活化)，氮氣保護下，保溫回流半小時（內溫87℃）。再自然冷卻至室溫，然後加入DPPA (99.44 mL)，升溫至回流，保溫反應5小時。將反應混合物冷卻至40℃以下，然後加入EA 500 mL稀釋；繼續冷卻至室溫，矽藻土助濾，將加入的分子篩過濾除去；並用EA 1500 mL多次漂洗濾渣、抽乾；收集濾液，依次用水700 mL，飽和食鹽水700 mL洗滌、分液；無水硫酸鈉乾燥有機相；過濾，除乾燥劑，濃縮，濃縮物經柱層析分離純化（PE/EA=30:1~20:1），濃縮洗脫液，最終得到產物M2-1（68.2 g，產率89.88%）。ESI-MS m/z: 247.1 [M+H] +。
步驟2：化合物M2-2的合成
在室溫下，將化合物M2-1 (65.00 g)溶於CH 3CN (82.00 mL)中，水浴冷卻，慢慢加入4M氯化氫（二氧六環溶液(264 mL )，室溫攪拌反應約16小時，白色固體析出，呈懸浮態。將反應混合物過濾，並用乙腈少量漂洗濾餅，抽乾，丟棄濾液。收集濾餅，加入到700 mL飽和碳酸氫鈉水溶液和700 mL乙酸乙酯的混合物中，鹼化，萃取、分液；水相再用乙酸乙酯350 mL萃取，分液；合併乙酸乙酯相，加入飽和氯化鈉水溶液 300 mL洗滌、分液；無水硫酸鈉乾燥有機相，過濾，除乾燥劑，濃縮得到產物M2-2（36.3 g，產率94.0%）。ESI-MS m/z: 147.1 [M+H] +。
步驟3：化合物M2-3的合成
在室溫下，將化合物M2-2 (36.00 g)溶於乙腈 ( 180.00mL )中，NIS (66.32 g)和對甲苯磺酸 (2.12 g)加入其中，氮氣保護下，加熱保溫70℃反應。反應液冷卻至50℃，加入水900 mL，有粉白色固體粉末析出，打漿半小時；過濾，並用水漂洗濾餅，抽乾。收集濾餅，加入乙酸乙酯1200 mL溶解完全，然後依次用飽和亞硫酸鈉水溶液350 mL，洗滌兩次，再用飽和食鹽水350 mL洗滌、分液，無水硫酸鈉乾燥有機相，過濾，濃縮，得到產物M2-3（63.2 g，產率94.43%）。ESI-MS m/z: 272.9 [M+H] +。
步驟4：化合物M2-4的合成
在室溫下，將化合物M2-3 (57.50 g)溶於DMF (22.00 mL)中，氰化鋅(32.22 g)、四三苯基膦鈀(12.19 g)和粉末狀4Å分子篩(20.00 mL)加入其中，在氮氣氛圍中，加熱保溫100℃反應約7小時。撤去油浴，自然冷卻至室溫，等待後處理。矽藻土助濾，將反應混合物過濾，抽乾；收集濾液，60~70℃濃縮，得到淡黃色固體粗品。濾渣用乙酸乙酯500 mL漂洗抽乾；收集漂洗液，合併到粗品中，再次濃縮至無液體被蒸餾出；加入乙酸乙酯700 mL溶解濃縮所得到固體粗品，然後用每次用飽和氯化鈉250 mL，洗滌3次，分液。無水硫酸鈉乾燥有機相，過濾，濃縮得到淡黃色固體，加入PE/EA=3/1混合物160 mL，打漿半小時，過濾、抽乾。收集濾餅，45℃水浴，濃縮，再高真空油泵抽拉至恒重；最終得到產物M2-4（36.1 g，產率99.7%）。ESI-MS m/z: 172.0 [M+H] +。
步驟5：化合物M2-5的合成
在室溫下，500 mL的單口燒瓶中，加入濃硫酸(61.37 mL)，冰水浴冷卻至10℃以下，分批加入化合物M2-4 (39.30 g)，加畢，攪拌10分鐘，在氮氣氛圍中，用油浴保溫60℃，反應約1小時。反應液冷卻至室溫，然後小心地加入到1100 mL的冰水混合物中，稀釋淬滅，有少量黃色固體析出。攪拌10分鐘後，過濾；收集濾餅，用50 mL飽和碳酸氫鈉水溶液，打漿20分鐘，再次過濾，收集兩次濾液，合併；然後慢慢加入碳酸鈉固體，調pH約等於7，有類白色固體析出。攪拌半小時，過濾、抽乾；每次用水100 mL漂洗濾餅、抽乾，共漂洗2次。收集濾餅，放入真空烘箱中，55℃烘乾至恒重得到產物M2-5（33.6 g，產率77.37%）。ESI-MS m/z: 190.0 [M+H] +。
步驟6：化合物M2-6的合成
在室溫下，加入四氫呋喃(470.00 mL)，氮氣置換後，微氮氣流保護下，加入氫化鈉(10.00 g)，用油浴加熱，保溫40~45℃，攪拌15分鐘；然後分批加入化合物M2-5 (18.95 g)，加畢，保溫機械攪拌20分鐘後，然後小心地分批加入CDI (24.31 g)，加畢，攪拌15分鐘後，油浴加熱升溫，保溫回流反應。反應液用冰水浴，冷卻至10℃以下，然後加入飽和氯化銨水溶液500 mL，有淺黃色固體析出，加入水1000 mL；然後轉移至5 L燒杯中，補加水3000 mL；攪拌1小時，過濾，抽乾；收集濾餅，放入真空烘箱中，50~55℃乾燥至恒重得到產物M2-6（18.3 g，產率84.93%）。ESI-MS m/z: 216.0 [M+H] +。
步驟7：化合物M2的合成
在室溫下，將化合物M2-6 (18.00 g)和DIPEA (36.00 mL)溶於POCl 3(180.00 mL)中，氮氣氛圍下，加熱保溫100℃反應約2.5小時。減壓濃縮除去三氯氧磷，並用DCM 100 mL帶2次；用400 mL二氯甲烷溶解濃縮殘留物，然後滴加入到500 mL的飽和碳酸氫鈉水溶液中，用冰水冷卻；攪拌15分鐘後，分液；水相，再用二氯甲烷300 mL萃取、分液；合併二氯甲烷相，用飽和氯化鈉水溶液300 mL洗滌、分液；無水硫酸鈉乾燥，過濾、濃縮，濃縮物經矽膠柱純化（PE/EA=90/10~75/25）得到產物M2（10.95 g，產率51.94%）。ESI-MS m/z: 251.9 [M+H] +。
中間體M3的合成：
步驟1：化合物M3-1的合成
將4-乙炔基呱啶-1-羧酸叔丁酯（147 mg），4-（1-（（（S）-1-（（2S，4R）-4-羥基-2-（（（（S）-1-（4-（4-甲基噻唑-5-基）苯基）乙基）胺基甲醯基）吡咯烷-1-基）-3,3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基）-1H-1,2,3-三唑-4-基）呱啶-1-甲酸叔丁酯（330 mg）溶於6 mL THF，6 mL H 2O，6 mL 叔丁醇中，然後依次加入抗壞血酸鈉（360 mg）和無水硫酸銅（100 mg），室溫反應3小時。向反應液中加入20.0 mL水，用EA萃取3次，每次20mL，合併有機相，硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮有機相，經柱層析分離純化得化合物M3-1（420 mg）。ESI-MS m/z: 680[M+H] +。
步驟2：化合物M3的合成
將M3-1（420 mg）溶於10 mL DCM中，然後加入3 mL TFA，室溫反應30 min。向反應液中加入1M NaOH水溶液游離酸。再用DCM萃取3次，每次10 mL，合併有機相並無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓蒸餾得到化合物M3（365 mg）。ESI-MS m/z: 580 [M+H] +。
中間體M4的合成：
N-叔丁氧羰基-3-甲基-3-羥基呱啶（1.0 g）加入到25 mL單口瓶中，加入3mL乙腈，0℃條件下加入3 mL鹽酸（4 M/Dioxane），0℃下反應0.5 h。反應結束後，將反應液直接濃縮即可得到中間體M4（0.7 g, 99% 產率），直接用於下一步。
中間體M5的合成：
步驟1：化合物M5-1的合成
（（2-氟-6-（甲氧基甲氧基）-8-（4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼硼烷-2-基）萘-1-基）乙炔基）三異丙基矽烷(1.0 g)加入到50 mL單口瓶中，加入6 mL DMF，然後加入氟化銫（5.9 g），室溫攪拌反應1 h。TLC監測原料反應完全，將反應液緩慢滴加到水（20 mL）中，有白色固體析出，過濾，收集濾餅，烘乾得到0.65 g白色固體，即化合物M5-1。
步驟2：化合物M5的合成
化合物M5-1(0.65 g)加入到50 mL單口瓶中，加入6 mL MeOH，Pd/C（600 mg，10% 純度），氫氣氛圍下室溫反應20 min。反應完全後，過濾，收集濾液，濃縮，濃縮物經柱層析純化得到化合物M5（496 mg,  75.5% 產率）。
1H NMR (500 MHz, Methanol- d 4) δ 7.56 (dd, J= 8.9, 5.8 Hz, 1H), 7.39 (d, J= 2.7 Hz, 1H), 7.36 (d, J= 2.7 Hz, 1H), 7.20 (t, J= 9.2 Hz, 1H), 5.27 (s, 2H), 3.50 (s, 3H), 3.12 (qd, J= 7.5, 2.5 Hz, 2H), 1.44 (s, 12H), 1.26 (t, J= 7.5 Hz, 3H)。
中間體M6的合成：
將中間體M5（1.0 g）加入到50 mL單口瓶中，加入10 mL4M氯化氫二氧六環溶液。室溫下反應半小時後，加入飽和碳酸氫鈉溶液中和反應液，EA萃取兩次，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，濃縮，濃縮物經柱層析純化（DCM : 胺甲醇 =10 : 1）得中間體M6（0.82 g）。 1H NMR (500 MHz, CDCl 3) δ 7.46 (dd, J= 8.9, 5.8 Hz, 1H), 7.27 (d, J= 2.7 Hz, 1H), 7.17 (dd, J= 12.5, 5.9 Hz, 1H), 7.12 (d, J= 2.7 Hz, 1H), 3.17 – 3.07 (m, 2H), 1.45 (s, 12H), 1.29 – 1.25 (m, 3H)。
中間體M7的合成：
步驟1：化合物M7-1的合成
4-胺基-2,6-二氯吡啶(63 g)加入到1 L三口瓶中，加入440 mL ACN和180 mL 水。升溫至45℃下加入selectfluor（164 g），反應放熱，使其在空氣中自然冷卻。反應10 min後，冰浴下加入飽和亞硫酸鈉溶液淬滅反應，EA萃取3次，收集並合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，濃縮，濃縮物經柱層析純化（PE : EA =10 : 1）得化合物M7-1（42.6 g）。ESI-MS m/z: 163.9 [M+H] +。
步驟2：化合物M7-2的合成
將化合物M7-1（54 g）加入到1 L三口瓶中，加入500 mL ACN，加入NIS（80 g）和TsOH（5.1 g）。升溫至70℃反應1h後，滴加2.5L 水，過濾，濾餅用EA溶解。分液後，濃縮有機相得化合物M7-2（94 g）。ESI-MS m/z: 307.2 [M+H] +。
步驟3：化合物M7-3的合成
將化合物M7-2（88 g）加入到1 L三口瓶中，加入500mL DMF，加入CuCN（31 g）。升溫至125℃反應16h後，滴加2L水後，加入到2L水中，過濾，濾餅用水洗，EA溶解。水相用EA萃取2次，收集並合併有機相，濃縮得到化合物M7-3（55.4 g）。ESI-MS m/z: 207.0 [M] -。
步驟4：化合物M7-4的合成
將化合物M7-3（88 g）加入到250 mL三口瓶中，加入83 mL 濃硫酸和9mL水。60℃反應16h後，補充70mL濃硫酸和5mL水，繼續反應24h。降溫至0℃，將反應液緩慢傾倒至2L冰水中，過濾，濾餅水洗後，EA溶解。濾液用EA萃取兩次，收集並合併有機相，濃縮後，PE：EA=1：1打漿。過濾，得到化合物M7-4（59 g）。ESI-MS m/z: 224.1 [M+H] +。
步驟5：化合物M7-5的合成
將化合物M7-4（58 g）加入到1 L三口瓶中，加入650mL THF，升溫至40℃後，緩慢分批次加入NaH（16 g）。攪拌10min後，升溫至60℃，緩慢加入N,N'-硫羰基二咪唑（69 g）。反應1h後，加入飽和氯化銨溶液淬滅反應，滴加稀鹽酸調整pH=4-5，旋去THF。過濾，濾餅用水洗，甲醇溶解後，濃縮有機相，得到粗品M7-5（85 g）。ESI-MS m/z: 267.0 [M+H] +。
步驟6：化合物M7的合成
將化合物M7-5（74 g）加入到1 L三口瓶中，加入750mL ACN，加入碘甲烷（22 mL），加入甲醇鈉（23g）的水溶液（100mL）。室溫下反應15min後，將反應液加入到3.5L的水中，加入稀鹽酸調整pH=4-5，過濾，濾餅用PE：EA=2：1的混合溶劑打漿。過濾，濾餅即為化合物M7（42.2 g）。ESI-MS m/z: 281.2 [M+H] +。
中間體M8的合成：
步驟1：化合物M8-1的合成
室溫下，將碳酸鉀（4.78 g）加入化合物1H-1,2,4-三唑-5-羧酸甲酯（4.00 g）和 N-叔丁氧羰基-3-胺基丙基溴（7.49 g）的乙腈（40 mL）懸浮液中, 然後將體系置於80 ℃油浴中攪拌。反應1小時後，在反應體系中加入乙酸乙酯和水進行萃取分液，水相再用乙酸乙酯萃取一次。有機相用飽和食鹽水（50 mL）洗滌一次，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮後得到粗產物M8-1（8.90 g, 99%產率）。ESI-MS m/z = 285.2[M+H] +。
步驟2：化合物M8-2的合成
在室溫下，將化合物M8-1（8.90 g）溶於4 N HCl的二氧六環溶液（40 mL），室溫下攪拌1小時。反應結束後將反應液旋乾得到M8-2（5.60 g, 97%產率）直接用於下一步。ESI-MS m/z = 185.1[M+H] +。
步驟3：化合物M8-3的合成
室溫下，將化合物M8-2（5.60 g）碳酸鈉（9.96 g）加入100mL水中，然後讓反應體系在室溫下攪拌5小時。 反應結束後用稀鹽酸將反應液調節為中性，然後濃縮除去水，得到固體殘渣經短矽膠柱用有機溶劑洗滌（DCM：MeOH=20:1），濾液濃縮後得到化合物M8-3（1.32 g，產率28%）。ESI-MS m/z = 153.2[M+H] +。
步驟4：化合物M8的合成
在室溫下，將化合物M8-3（1.20 g）加入LiAlH 4（0.75 g）的THF（24 mL）懸浮液中，然後室溫攪拌4小時。反應結束後，將反應冷卻到0攝氏度，依次加入水（0.75 mL），15%氫氧化鈉溶液（0.75 mL）和水（2.25 mL），然後將反應恢復室溫，攪拌10分鐘後加入適量無水硫酸鎂，再攪拌10分鐘後過濾，濾渣用適量有機溶劑沖洗（DCM：MeOH=10:1），所得濾液濃縮得到粗品。粗品用柱色譜純化（MeOH:DCM = 0-10%）得到產物M8（0.62 g，57%產率）。ESI-MS m/z = 139.2[M+H] +。
中間體M9的合成：
步驟1：化合物M9-1的合成
將4-乙炔苯胺（1g）溶於10 mL THF中，然後加入(Boc) 2O（2.24g），55℃反應24小時。向反應液中加入20.0 mL水，用EA萃取3次，每次20 mL，合併有機相，硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮有機相，經柱層析分離純化得到化合物M9-1（1.78 g）。ESI-MS m/z: 218[M+H] +。
步驟2：化合物M9-2的合成
將M9-1（152 mg），M1（330 mg）溶於6 mL THF，6 mL H 2O，6 mL 叔丁醇中，然後依次加入抗壞血酸鈉（360 mg）和無水硫酸銅（100 mg），室溫反應3小時。向反應液中加入20.0 mL水，用EA萃取3次，每次20 mL，合併有機相，硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮有機相，經柱層析分離純化得到化合物M9-2（450 mg）。ESI-MS m/z: 688[M+H] +。
步驟3：化合物M9的合成
將M9-2（450 mg）溶於10 mL DCM中，然後加入3 mL TFA，室溫反應30 min。向反應液中加入1M NaOH水溶液調節pH =7，再用DCM萃取3次，每次10 mL，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得化合物M9  （320 mg）。ESI-MS m/z: 588 [M+H] +。
中間體M10的合成：
將化合物M10-1 （（2-氟-6-（甲氧基甲氧基）-8-（4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼-2-基）萘-1-基）乙炔基）三異丙基矽烷（10 g）加入到100 mL單口瓶中，加入30 mL 4M氯化氫二氧六環溶液。室溫下反應半小時後，冰浴下加入飽和碳酸氫鈉溶液中和反應液，過濾，濾餅用水洗兩次，EA溶解後，無水硫酸鈉乾燥，濃縮，濃縮物經柱層析純化（PE : EA =82 : 18）得中間體M10（9.1 g）。
中間體M11的合成：
步驟1~步驟3的合成參考中間體M8的合成。
步驟4：化合物M11-4的合成
化合物M11-3（3.4 g）加入到250 mL三口瓶中，加入100 mL THF，分批加入NaBH 4（3.1 g），然後N 2氛圍0℃下緩慢滴加三氟化硼乙醚（14 mL），滴加完畢後，反應液自然升溫至室溫繼續反應過夜。反應結束後，冰浴下向反應液中緩慢加入乙醇（50 mL）淬滅反應，減壓濃縮除去THF和乙醇，然後向殘餘物中加入乙醇（70 mL），水（20 mL），10%鹽酸溶液（10 mL），繼續室溫攪拌4 h，減壓濃縮，使用飽和NaHCO 3溶液將殘餘的母液調節至pH = 8，然後使用DCM/MeOH（10：1）萃取3次，每次40 mL，合併有機相，無水硫酸鈉，乾燥，過濾,旋乾得粗產物（2.8 g）M11-4直接用於下一步。ESI-MS m/z: 196.1 [M+H] +。
步驟5：化合物M11-5的合成
化合物M11-4（2.8 g）加入到100 mL單口瓶中，加入25 mL DCM，DIPEA（5.9 mL），冰浴下加入(Boc) 2O（5.0 g），然後升溫至室溫反應3 h。反應完畢後，將反應液加入到飽和氯化銨溶液中，加入DCM，萃取，收集有機相，水相繼續使用DCM萃取2次，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，濃縮物經柱層析純化（PE : EA = 3 : 1）得到3.0 g化合物M11-5。ESI-MS m/z: 296.2 [M+H] +。
步驟6：化合物M11-6的合成
化合物M11-5（2.5 g）加入到100 mL單口瓶中，加入12 mL MeOH，12 mL THF，然後加入一水合氫氧化鋰（1.8 g，溶於12 mL H 2O），室溫攪拌反應0.5 h。反應完全後，加水（12 mL）將反應液稀釋，減壓濃縮，水相使用醋酸調節至pH = 5-6，然後使用DCM/MeOH（10：1）萃取3次，每次40 mL，合併有機相，無水硫酸鈉，過濾，濃縮得粗產物（3.1 g）直接用於下一步。ESI-MS m/z: 282.2 [M+H] +。
步驟7：化合物M11-7的合成
化合物M11-6（1.4 g）加入到100 mL單口瓶中，加入10 mL DMF，然後依次加入四氫吡咯（0.71 g），DIPEA（3.29 mL），HATU（2.84 g），室溫攪拌反應1 h。反應結束後，向反應液中加入EA和水，萃取，收集有機相，水相繼續使用EA萃取兩次，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮，濃縮物經柱層析純化（DCM : EA = 3 : 1）得到1.5 g化合物M11-7。ESI-MS m/z: 335.2 [M+H] +。
步驟8：化合物M11的合成
化合物M11-7（1.5 g）加入到50 mL單口瓶中，加入5 mL CH 3CN，加入5 mL鹽酸（4 M/Dioxane），室溫攪拌反應0.5 h。反應結束後，將反應液直接濃縮即可得到中間體M11（0.98 g）。ESI-MS m/z: 235.3 [M+H] +。
中間體M12的合成：
將中間體M2（500 mg）加入到25 mL單口瓶中，-40℃下加入中間體M4（275 mg）， N,N-二異丙基乙胺( 1.0 g)，保持-40℃繼續反應0.5 h。反應結束後，向反應液中加入二氯甲烷和水，萃取，收集有機相，水相繼續使用二氯甲烷萃取兩次，收集並合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，濃縮，濃縮物經柱層析純化（PE : EA = 3 : 2）得到化合物M12 (385 mg, 64.6%產率)。ESI-MS m/z: 331.3 [M+H] +。
中間體M13的合成：
步驟1：化合物M13-1的合成
將（2S，4R）-1-（（S）-2-胺基-3,3-二甲基丁醯基）-4-羥基-N-（（S）-1-（4-（4-甲基噻唑-5-基）苯基）乙基）吡咯烷-2-甲醯胺（304 mg），2-（叔丁氧基羰基）-2-氮雜螺[3.3]庚烷-6-羧酸（150 mg），HATU (284 mg)溶於5 mL DMF中，然後加入DIPEA（0.31 mL），室溫反應30分鐘。向反應液中加入20.0 mL水，用EA萃取3次，每次20 mL，合併有機相，硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮有機相，經柱層析分離純化得到化合物M13-1（400 mg）。ESI-MS m/z: 668[M+H] +。
步驟2：化合物M13的合成
將M13-1（135 mg）溶於3 mL DCM中，然後加入1 mL TFA，室溫反應30 min。向反應液中加入1M NaOH水溶液調節pH=7。再用氯仿：異丙醇=3：1萃取3次，每次5 mL，合併有機相並無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮得到M13（110 mg）。ESI-MS m/z: 568 [M+H] +。
中間體M14的合成：
步驟1：化合物M14-1的合成
室溫下，將4-（羥甲基）呱啶-1-羧酸叔丁酯（5.0 g）溶於DCM（50 mL）中，然後依次加入三乙胺（9.68 mL），對甲苯磺醯氯（5.31 g），室溫反應15 h，向反應液中適量水淬滅，然後加入適量乙酸乙酯萃取，收集有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓蒸出溶劑得到8.02 g產物，即化合物M14-1，直接用於下一步。
步驟2：化合物M14-2的合成
將化合物M14-1 （7.0 g）與4-羥基苯甲酸甲酯（2.6 g）溶於DMF（30.0 mL）中，加入碳酸鉀（4.72 g），60℃反應10 h。向反應液中適量水淬滅，然後加入適量乙酸乙酯萃取，收集有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓蒸出溶劑，柱層析純化得到4.02 g產物，即化合物M14-2，ESI-MS m/z: 350 [M+H] +。
步驟3：化合物M14的合成
將M14-2（3.5 g）溶於DCM（30.0 mL）中，加入三氟乙酸（10.0 mL），室溫反應0.5 h，LC-MS監控反應完畢，將反應液直接濃縮，30.0 mL DCM複溶後再次濃縮，得到2.5 g產物三氟乙酸鹽，即化合物M14，直接用於下一步。ESI-MS m/z: 250 [M+H] +。
中間體M15的合成：
步驟1：化合物M15-1的合成
將7-叔丁氧羰基-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-羧酸（200.0 mg），2S，4R-1-（S）-2-胺基-3，3-二甲基丁醯基）-4-羥基-N-（S）-1-（4-甲基噻唑-5-基）苯基）乙基）吡咯烷-2-甲醯胺（300.0 mg）溶於5.00 mL DMF中，然後加入N,N-二異丙基乙胺（0.35 mL）和N,N,N’,N’-四甲基-O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲（310.0 mg），室溫反應30分鐘，LCMS監測反應完成。向反應液中加入100.0 mL水，過濾得到體系中析出的固體，經柱層析分離純化，得淡黃色固體400.0 mg，即化合物M15-1。ESI-MS m/z: 696[M+H] +。
步驟2：化合物M15的合成
將M15-1（400.0 mg）溶於5.00 mL DCM中，然後加入2.00 mL TFA，室溫反應0.5 h，將反應液滴加至飽和碳酸氫鈉溶液中，加入適量DCM/MeOH=10/1溶液萃取，收集有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾減壓濃縮得到化合物M15。ESI-MS m/z: 596 [M+H] +。
中間體M16的合成：
步驟1：化合物M16-1的合成
將7-叔丁氧羰基-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-羧酸（500.0 mg）溶於5.0 mL THF中，加入硼烷四氫呋喃溶液（4.64 mL，1 mol/L），室溫反應1 h。向反應液中緩慢加入5 mL HCl/MeOH溶液，攪拌至無氣泡產生後，加入1 mol/L NaOH溶液調節pH至鹼性，然後加入適量乙酸乙酯萃取，收集有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾減壓濃縮得到化合物M16-1（450.0 mg）。ESI-MS m/z: 200 [M+H-56] +。
步驟2：化合物M16-2的合成
將M16-1（250.0 mg）溶於5.0 mL DCM中，加入戴斯馬丁試劑（387.0 mg），室溫反應1 h。向反應液中加入適量乙酸乙酯，析出固體過濾除去，濾液加入1 mol/L NaOH溶液調節pH至鹼性，萃取分離收集有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾減壓濃縮得到化合物M16-2（180.0 mg）。ESI-MS m/z: 198 [M+H-56] +。
步驟3：化合物M16-3的合成
N 2保護下，化合物M16-2 (180 mg)溶於3.0 mL無水甲醇中，加入無水碳酸鉀（167 mg），(1-重氮基-2-氧代丙基)膦酸二甲酯（174 mg），室溫反應3 h。反應液加入適量水和乙酸乙酯萃取，收集有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾減壓濃縮得到化合物M16-3（110 mg）。ESI-MS m/z: 194 [M+H-56] +。
步驟4：化合物M16-4的合成
N 2保護下，化合物M16-3 (110 mg)，2S，4R-1-（S）-2-疊氮基-3，3-二甲基丁醯基）-4-羥基-N-（S）-1-（4-甲基噻唑-5-基）苯基）乙基）吡咯烷-2-甲醯胺（229 mg），無水硫酸銅（63.3 mg）以及抗壞血酸鈉（227 mg）溶于4.0 mL叔丁醇，4.0 mL水和4.0 mLTHF混合溶劑中，室溫反應2h。反應液加入適量水和DCM/MeOH=10/1溶液萃取，收集有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾減壓濃縮，濃縮物經柱層析純化得到化合物M16-4（250 mg）。ESI-MS m/z: 664 [M+H-56] +。
步驟5：化合物M16的合成
N 2保護下，化合物M16-4 (250 mg)溶於5.00 mL DCM中，然後加入2.00 mL TFA，室溫反應0.5 h，將反應液滴加至飽和碳酸氫鈉溶液中，加入適量DCM/MeOH=10/1溶液萃取，收集有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾減壓濃縮得到化合物M16（150.0 mg）。ESI-MS m/z: 620 [M+H] +。
中間體M17的合成：
步驟1：化合物M17-1的合成
冰浴下，將M16-4（100.0 mg）溶於DCM（2.0 mL）中，依次加入三乙胺（0.046 mL），4-二甲胺基吡啶（1.7 mg），乙醯氯（0.019 mL），冰浴下反應1 h。向反應液中加入適量水和DCM萃取，收集有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓蒸除溶劑後柱層析純化得到產物80 mg，即化合物M17-1。ESI-MS m/z:762 [M+H] +。
步驟2：化合物M17的合成
冰浴下，將M17-1（80.0 mg）溶於DCM（2.0 mL）中，加入1.00 mL TFA，室溫反應0.5 h，將反應液直接濃縮，5.00 mL DCM複溶後再次濃縮得到產物三氟乙酸鹽80 mg，即化合物M17，直接用於下一步，ESI-MS m/z:662 [M+H] +。
中間體M18的合成：
步驟1：化合物M18-1的合成
25 mL單口瓶中加入4-氟苯甲酸甲酯 (0.15 g)，溶於DMSO中(3 mL)，加入2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷-7-甲酸叔丁酯，DIPEA(0.48 mL)，加熱至100 oC，反應過夜。冷卻至室溫，向反應液中加入10 mL水， 有固體析出，過濾，濾餅用水淋洗，濾餅烘乾得0.2 g化合物M18-1。
步驟2：化合物M18-2的合成
25 mL單口瓶中加入化合物M18-1 (0.2 g)，溶於THF(1 mL)，加入4 M NaOH溶液（1 mL），MeOH（1 mL），加熱至40 oC，反應3 h。冷卻至室溫，反應液直接濃縮，向反應液中加入5 mL水， 並用1 M HCI溶液調節溶液pH至3-4，有固體析出，過濾，濾餅用水淋洗，濾餅烘乾，得0.17 g化合物M18-2。
步驟3：化合物M18-3的合成
25 mL單口瓶中加入化合物M18-2（140.0 mg），溶於DMF（3 mL），加入(2S,4R)-1-((S)-2-胺基-3,3-二甲基丁醯基)-4-羥基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲醯胺鹽酸鹽（180.0 mg），DIPEA（0.13 mL）和HATU（231.0 mg），室溫反應2 h。向反應液中加入飽和食鹽水（5 mL）, EA萃取，取有機相無水硫酸鈉乾燥，柱層析分離產物(DCM:MeOH=12:1), 得276.0 mg化合物M18-3。
步驟4：化合物M18的合成
25 mL單口瓶中加入化合物M18-3 (276.0 mg)，溶於DCM(2 mL)，加入TFA（2 mL）,室溫反應1 h。反應液直接蒸乾，向反應液中加入5 mL DCM, 並用1 M NaOH溶液調節溶液pH至8-9, DCM萃取三次，有機相水洗，飽和食鹽水洗，蒸乾得214.0 mg化合物M18。
中間體M19的合成：
M19的合成步驟參考M18製備得到。
中間體M20的合成：
M20的合成步驟參考M18製備得到。
中間體M21的合成：
步驟1：化合物M21-1的合成
化合物（2S，4R）-1-（（S）-2-疊氮基-3-甲基丁醯基）-N-（（R）-1--（4-（1-乙基-1H-吡唑-5-基）苯基）-2-羥乙基）-4-羥基吡咯烷-2-甲醯胺 (0.08g) ，2-乙炔基-7-氮螺[3.5]壬-7-羧酸叔丁酯 (0.044 g) 的 叔丁醇（1 mL）和 THF（1 mL）中，加入硫酸銅（28 mg），抗壞血酸鈉（105 mg）的水溶液（1 mL），20 oC反應1 h。反應液加入15mL水中，加入15 mLEA，分出有機相，乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，濃縮物經prep-TLC純化（MeOH：DCM=1：20），得到78 mg化合物M21-1。ESI-MS m/z: 719.40[M+H] +。
步驟2：化合物M21的合成
化合物M21-1（78 mg）的DCM（2.0 mL）中，加入三氟乙酸 (0.4 mL)，20 oC反應0.5 h。反應液加入20mL飽和碳酸氫鈉中，氯仿/異丙醇=3：1萃取，分出有機相，有機相乾燥，過濾，濃縮，得到 65 mg化合物M21。直接投下步。ESI-MS m/z: 619.40 [M+H] +。
中間體M22的合成：
步驟1：化合物M22-1的合成
化合物2-（叔丁氧基羰基）-2-氮雜螺[3.5]壬烷-7-羧酸 (0.1g) ，（2S，4R）-1-（（S）-2-胺基-3,3-二甲基丁醯基）-4-羥基-N-（（S）-1-（4-（4-甲基噻唑-5-基）苯基）乙基）吡咯烷-2-甲醯胺 (0.178 g) 的 DMF（5 mL）中，加入HATU（169 mg），DIPEA（145 mg），20 oC反應1 h。反應液加入20 mL水中，加入15 mL EA+1 mL甲醇，分出有機相，乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到0.22g化合物M22-1。直接投下步。ESI-MS m/z: 696.40[M+H] +。
步驟2：化合物M22的合成
化合物M22-1（240mg）的DCM（6.0mL）中，加入三氟乙酸 (1.2mL)， 20 oC反應0.5 h。反應液加入20mL飽和碳酸氫鈉中，氯仿/異丙醇=3：1萃取，分出有機相，有機相乾燥，過濾，濃縮，得到 200 mg化合物M22。直接投下步。ESI-MS m/z: 596.40 [M+H] +。
中間體M23的合成：
步驟1：化合物M23-1的合成
2-氯-5-碘吡啶(1 g) 加入50 mL三口瓶，N 2保護下加入10 mL TEA，加入三甲基矽基乙炔（1.03 g），碘化亞銅（80 mg），PdCl 2(PPh 3) 2（146 mg），升溫至50 oC反應3 h。反應液過濾後收集濾液直接濃縮。濃縮物經柱層析分離純化(PE : EA = 10 : 1)得到0.85 g化合物M23-1。ESI-MS m/z: 210 [M+H] +。
步驟2：化合物M23的合成
化合物M23-1 (500 mg)加入50 mL 單口瓶，加入5 mL MeOH 溶解， 加入無水碳酸鉀（658 mg），室溫攪拌2 h。反應液過濾後收集濾液直接濃縮。濃縮物經柱層析分離純化(PE : EA = 20 : 1)，得到240 mg化合物M23。ESI-MS m/z: 138 [M+H] +。
中間體M24的合成：
步驟1：化合物M24-1的合成
將鋅粉（880 mg），80 mL無水四氫呋喃加入到250 mL三口瓶中，氮氣保護，室溫下加入二溴甲烷（200 mg），升溫至65℃反應1h， 降至室溫加入TMSCl (115 mg)，室溫反應1 h， 加入3-碘氮雜環丁烷-1-羧酸叔丁酯 (3.0g)，40℃反應1h，得到M24-1密封備用。
步驟2：化合物M24-2的合成
向上述M24-1溶液中加入，依次加入4-溴苯甲酸甲酯 (1.1g)， Pd 2（dba） 3(235mg), Johnphos （153mg），氮氣保護，40℃反應2 h。反應結束後，氯化銨淬滅反應，EA萃取，食鹽水洗滌，硫酸鈉乾燥，濃縮，濃縮物經柱層析純化（PE:EA = 10 : 1）得到化合物M24-2（660 mg）。
步驟3：化合物M24-3的合成
化合物M24-2（660 mg）加入到50 mL單口瓶中，加入10 mL MeOH和2 mL水，室溫下加入氫氧化鈉 （410mg），升溫至60℃反應2 h。反應結束後，向反應液中加入水，調節pH=6, EA萃取二次，食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，濃縮，得到化合物M24-3（550 mg）。
步驟4：化合物M24-4的合成
化合物M24-3（150 mg）加入到50 mL單口瓶中，加入3 mL DMF和HATU (250mg)，氮氣保護，0℃加入DIPEA (350mg)， 反應0.5h，加入（2S，4R）-1-（（S）-2-胺基-3,3-二甲基丁醯基）-4-羥基-N-（（S）-1-（4-（4-甲基噻唑-5-基）苯基）乙基）吡咯烷-2-甲醯胺 (290mg)，升至室溫反應1 h。反應結束後，氯化銨淬滅反應，EA萃取二次，食鹽水洗滌，硫酸鈉乾燥，濃縮，濃縮物經柱層析純化（DCM :甲醇 = 10 : 1）得化合物M24-4（340 mg）。ESI-MS m/z: 704.3 [M+H] +。
步驟5：化合物M24的合成
化合物M24-4（340 mg）加入到50 mL單口瓶中，加入5 mL DCM，1 mL TFA , 室溫反應1 h。反應結束後，濃縮，DCM稀釋，倒入碳酸氫鈉溶液中，DCM：MeOH(10:1)萃取三次，食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，濃縮，得到化合物M24（250 mg）。ESI-MS m/z: 604.3 [M+H] +。
中間體M25的合成：
步驟1：化合物M25-1的合成
將4-(1-(叔丁氧羰基)呱啶-4-基)苯甲酸 (100.0 mg)，4-(1-((( S)-1-((2 S,4 R)-4-羥基-2-(((( S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)胺基甲醯基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基)-1 H-1,2,3-三唑-4-基)呱啶-1-甲酸叔丁酯 (174.0 mg)和HATU (149.4 mg)溶解於DMF (2 mL)中，添加DIPEA (0.27 mL)，室溫反應10分鐘，LCMS監測反應完成。向反應液中加入DCM (10 mL)，飽和食鹽水洗一次，有機相無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，經柱層析分離純化，得到231.0 mg化合物M25-1。ESI-MS m/z: 732 [M+H] +。
步驟2：化合物M25的合成
將M25-1 (231.0 mg)加入DCM (5 mL)和TFA (2 mL)中，室溫反應10分鐘，LCMS監測反應完成。將反應液直接濃縮，加入1 M NaOH (2 mL)，室溫攪拌5分鐘，抽濾，得淡黃色固體181.0 mg，即化合物M25。ESI-MS m/z: 632 [M+H] +。
中間體M26的合成：
步驟1：中間體M26-1的合成
室溫下，將4-（羥甲基）呱啶-1-羧酸叔丁酯（5.0 g）溶於DCM（50 mL）中，然後依次加入三乙胺（9.68 mL），對甲苯磺醯氯（5.31 g），室溫反應15 h，向反應液中適量水淬滅，然後加入適量乙酸乙酯萃取，收集有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮得到8.02 g產物，即化合物M26-1，直接用於下一步。
步驟2：中間體M26-2的合成
將中間體M26-1（7.0 g）與4-羥基苯甲酸甲酯（2.6 g）溶於DMF（30.0 mL）中，加入碳酸鉀（4.72 g），60℃反應10 h。向反應液中適量水淬滅，然後加入適量乙酸乙酯萃取，收集有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮，濃縮物經柱層析純化得到4.02 g產物，即化合物M26-2。ESI-MS m/z: 350 [M+H] +。
步驟3：中間體M26-3的合成
將化合物M26-2（4.0 g）溶於THF（40.00 mL），MeOH（40.00 mL）混合溶液中，加入氫氧化鈉（2.29 g）的水（20.0 mL）溶液，40℃反應1h，反應液冷卻至室溫後，加入1M硫酸調節至酸性，加入適量DCM/MeOH萃取，收集有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮得到3.50 g產物，即中間體M26-3。ESI-MS m/z: 336 [M+H] +。
步驟4：中間體M26-4的合成
將中間體M26-3 (1.00 g)，2S，4R-1-（S）-2-胺基-3，3-二甲基丁醯基）-4-羥基-N-（S）-1-（4-甲基噻唑-5-基）苯基）乙基）吡咯烷-2-甲醯胺（1.59 g）溶於15.00 mL DMF中，然後依次加入N,N-二異丙基乙胺（1.56 mL）和N,N,N’,N’-四甲基-O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲（1.36 g），室溫反應30分鐘，LCMS監測反應完成。向反應液中加入100.0 mL水，過濾得到體系中析出的固體，經柱層析分離純化得到1.95 g，即中間體M26-4。ESI-MS m/z: 762[M+H] +。
步驟5：中間體M26的合成
將中間體M26-4（1.50 g）溶於20.00 mL DCM中，然後加入5.00 mL TFA，室溫反應0.5 h，將反應液滴加至飽和碳酸氫鈉溶液中，加入適量DCM/MeOH=10/1溶液萃取，收集有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾減壓蒸出溶劑得到1.20 g中間體M26。ESI-MS m/z: 662 [M+H] +。
中間體M27的合成：
步驟1：化合物M27-1的合成
向化合物M11-6（600 mg）的DMF （15 mL）溶液中依次加入二甲胺（191 mg），DIPEA（1.76 mL），HATU（973 mg），室溫攪拌反應1 h。反應結束後，向反應液中加入EA和水，萃取，收集有機相，水相繼續使用EA萃取兩次，合併有機相，有機相再用飽和食鹽水洗滌三次，無水硫酸鈉乾燥，濃縮，濃縮物經柱層析純化（DCM : EA = 3 : 1）得到580 mg化合物M27-1。ESI-MS m/z: 309.3 [M+H] +。
步驟2：化合物M27的合成
將M27-1（580 mg）溶於HCl/dioxane (4N, 5 mL)中，室溫攪拌反應0.5 h。反應結束後，將反應液直接濃縮即可得到中間體M27（390 mg）。ESI-MS m/z: 209.3 [M+H] +。
中間體M28的合成：（R）-1-（7-（8-乙基-7-氟-3-甲氧基甲氧基）萘-1-基）-8-氟-4-（3-羥基-3-甲基呱啶-1-基）吡啶并嘧啶-2-基）氧基）甲基）環丙烷-1-甲醛的合成
步驟1：化合物M28-1的合成
將中間體M2 (5.0 g)，溶於DCM (20 mL), 降溫至零下40℃左右, 加入DIPEA (7.7 g)，低溫攪拌30 min，緩慢加入(3R)-3-甲基呱啶-3-醇鹽酸鹽 (4.2 g)，繼續攪拌反應1.0 h。反應完全後，DCM和H 2O萃取, 飽和食鹽水洗, 無水硫酸鈉乾燥，過濾，旋乾，柱層析(EA:DCM 10%)，得到化合物M28-1（5.3 g）。ESI-MS m/z: 331.3 [M+H] +。
步驟2：化合物M28-2的合成
將化合物M28-1(5.3 g)，碳酸銫 (10.4 g)，DABCO (0.4 g),  1,1-環丙烷二甲醇（3.3 g）溶於DMF (20 mL)。室溫攪拌反應過夜。反應完全, EA和H 2O萃取, 飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，過濾，旋乾，柱層析(EA:DCM 18%)，得到化合物M28-2（5.0 g）。ESI-MS m/z: 397.1 [M+H] +。
步驟3：化合物M28-3的合成
將化合物M28-2(5.0 g)，M5 (9.0 g), 碳酸鉀3.5 g，CataCxium A Pd G3（1.3 g）溶於1,4-二氧六環（24 mL）和H 2O（4 mL），在氮氣保護的氛圍下，90℃氮氣保護下反應1 h。反應完全，用EA和H 2O稀釋反應液，再用EA萃取一遍，飽和食鹽水洗一遍, 無水硫酸鈉乾燥，濃縮，濃縮物經柱層析(二氯甲烷:胺甲醇)，得到M28-3（6.0 g，85%純度），直接進行下一步。ESI-MS m/z:595.2 [M+H] +。
步驟4：化合物M28的合成
向化合物M28-3(6.0 g)的DCM（50 mL）溶液中分批加入DMP（6.4 g），室溫攪拌3.0 h。反應完全後，飽和亞硫酸鈉淬滅，DCM和H 2O萃取，水相再用DCM萃取兩遍，有機相合併後經無水硫酸鈉乾燥，過濾，旋乾，柱層析（PE:EA 50%），得化合物M28（3.4 g）。ESI-MS m/z: 593.4 [M+H] +。
中間體M29的合成：化合物(2 S,4 R)-1-(( S)-2-疊氮基-3-甲基丁醯基)-4-羥基- N-(( S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基) 吡咯烷-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物M29-1的合成
將( S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙胺 (12.7 g)，Boc- L-羥脯胺酸 (13.5 g)和HATU (23.2 g)溶解於DMF (100 mL)中，添加DIPEA (38.5 mL)，室溫反應10分鐘，LCMS監測反應完成。向反應液中加入EA (100 mL)和飽和食鹽水 (100 mL)，收集有機相，有機相無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，柱層析分離純化，得白色固體22.0 g，即化合物M29-1。ESI-MS m/z: 432 [M+H] +。
步驟2：化合物M29-2的合成
將M29-1 (22.0 g)加入DCM (100 mL)中，冰水浴下加入鹽酸二氧六環溶液 (100 mL)，室溫反應60分鐘，LCMS監測反應完成。將反應液直接濃縮，加入1 M NaOH溶液至反應液pH = 8。向反應液中加入DCM (100 mL)，收集有機相，有機相飽和食鹽水洗一次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，得白色固體16.8 g，即化合物M29-2。ESI-MS m/z: 332 [M+H] +。
步驟3：化合物M29-3的合成
將M29-2 (19.0 g)，Boc- L-纈胺酸(12.5 g) 和HATU (22.9 g)溶解於DMF (100 mL)中，添加DIPEA (28.4 mL)，室溫反應10分鐘，LCMS監測反應完成。向反應液中加入EA (100 mL)和飽和食鹽水 (100 mL)，收集有機相，有機相無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，柱層析分離純化，得白色固體25.0 g，即化合物M29-3。ESI-MS m/z: 531 [M+H] +。
步驟4：化合物M29-4的合成
將M29-3 (25.0 g)加入DCM (100 mL)中，冰水浴下加入鹽酸二氧六環溶液 (100 mL)，室溫反應60分鐘，LCMS監測反應完成。將反應液直接濃縮，加入1 M NaOH溶液至反應液pH = 8。向反應液中加入DCM (100 mL)，收集有機相，有機相飽和食鹽水洗一次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，得白色固體17.0 g，即化合物M29-4。ESI-MS m/z: 431 [M+H] +。
步驟5：化合物M29的合成
將M29-4 (17.0 g)和TEA (32.9 mL)溶解於ACN (100 mL)和THF (130 mL)中，冰水浴下，2-疊氮基-1,3-二甲基咪唑六氟磷酸鹽(22.5 g) 溶解於ACN (30 mL)中並緩慢加入體系，保溫反應3小時，LCMS監測反應完成。將反應液直接濃縮，向反應液中加入DCM (100 mL)，收集有機相，有機相飽和食鹽水洗一次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，柱層析分離純化，得淡黃色粉末15.3 g，即化合物M29。ESI-MS m/z: 457 [M+H] +。
1H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.87 (s, 1H), 7.46-7.40 (m, 4H), 7.94 (q, J= 7.0 Hz, 1H), 4.64-4.60 (m, 1H), 4.45-4.44 (m, 1H), 3.75 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 3.71-3.64 (m, 2H), 2.48 (s, 3H), 2.26-2.15 (m, 2H), 1.96-1.91 (m, 1H), 1.52 (d, J= 7.0 Hz, 3H), 1.09-0.98 (m, 6H)。
中間體M30的合成
步驟1：化合物M30-1的合成
在氮氣環境-78℃溫度下，向 1-(叔丁基)2-甲基(S)-5-氧代吡咯烷-1，2-二甲酸酯（20g）在 DCM（300 mL）中的攪拌溶液中，滴加 1.0 M DIBAL-H 在正己烷中的溶液（329mL），-78℃下攪拌30min。然後轉移至室溫攪拌 2 小時，TLC確認原料消失後,冷卻至0℃，加入 MeOH (300 mL)和 1M HCl (200 mL)，混合物在室溫下攪拌 2 小時，TLC確認反應終點。反應結束後用 EtOAc萃取。合併的有機層用鹽水洗滌，無水 Na 2SO 4乾燥，濃縮。經柱層析純化得淡黃色液體 ( 13.9 g ) ，即化合物M30-1。
步驟2：化合物M30-2的合成
將M30-1（13.9g）溶於140 mL DMF中， 0℃下加入咪唑(4.5g)，隨後滴加TBDPSCl （17.2 mL），滴畢，轉移至室溫攪拌3h，TLC監測反應終點。反應結束後向反應液中加入100.0 mL水，用EA萃取3次，每次200mL，合併有機相，飽和食鹽水洗滌，硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，經柱層析純化得淡黃色液體(21.09g)，即化合物M30-2。
步驟3：化合物M30-3的合成
將M30-2（21.09g）溶於140 mL DCM中，將反應液降至-35℃，加入TMSCN (7.48 mL)，-35℃下攪拌15 min，滴加TMSOTf (0.14mL)，-35℃攪拌10 min，TLC監測反應完成後，加入飽和碳酸氫鈉：水=15mL：90mL，攪拌15min，用EA 萃取3次，每次200mL，合併有機相，飽和食鹽水洗滌，硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮有機相，經柱層析分離純化得黃色液體16.2g，即化合物M30-3。
步驟4：化合物M30-4的合成
將M30-3（16.2g）和 K 2CO 3( 7.55g ) 在 MeOH ( 120 mL ) 中的混合物在室溫下攪拌 3h。用 1M HCl水溶液將混合物酸化至 pH = 2，所得混合物在室溫下攪拌 3h，TLC確認反應完全。用 EtOAc 萃取混合物，合併的有機層用鹽水洗滌，無水 Na 2SO 4乾燥，濃縮，經柱層析純化得黃色液體( 8.5 g )，即化合物M30-4。
步驟5：化合物M30-5的合成
將M30-4（8.5g）溶於THF( 85 mL ) 中，在氮氣環境下，於-78℃下滴加LiHMDS的四氫呋喃溶液 ( 34.16 mL) 。將得到的混合物在 -78 ℃下攪拌 10 min，然後在氮氣環境下滴加3-氯-2-(氯甲基) 丙烯( 3.95 mL) ，所得混合物在室溫氮氣環境下攪拌 16 小時，LC-MS確認反應完全。在 0℃下用水淬滅混合物，然後用 EA 萃取，合併有機層用鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥並濃縮，經柱層析純化得黃色液體( 5 g ) 即化合物M30-5。
步驟6：化合物M30-6的合成
向 M30-5 (5 g)的DCM(40 mL)溶液中滴加 TFA( 20 mL )，將所得混合物攪拌 1h。反應混合物減壓濃縮，DCM帶蒸。殘留物溶於 MeOH ( 40 mL ) 並加入 K 2CO 3(10 g)。混合物在室溫下攪拌 40 分鐘，LC-MS確認反應終點，然後在室溫下用水淬滅。混合物用EA萃取，合併的有機層用鹽水洗滌，用無水 Na 2SO 4乾燥，濃縮，經柱層析純化得黃色液體( 3.04 g ) 即化合物M30-6。
步驟7：化合物M30的合成
在-20℃氮氣氛圍下向 M30-6 (3.04 g)的THF(30 mL)溶液中滴加 LiAlH 4的THF溶液( 1M, 6.8 mL )，將所得混合物在0℃下攪拌 20 min, LC-MS確認反應結束。然後在0℃下加入十水硫酸鈉，攪拌30min。過濾，EA洗滌，濃縮，經中性氧化鋁柱色譜純化得黃色液體( 2 g )， 即化合物M30。
中間體M31：化合物（R）-1-（7-（8-乙基-7-氟-3-甲氧基甲氧基）萘-1-基）-8-氟-2-（（5S，7aS）-5-羥甲基-2-亞甲基四氫-1H-吡咯裡嗪-7a（5H）-甲氧基）吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基）-3-甲基呱啶-3-醇的合成
步驟1：化合物M31-1的合成
取100 mL單口瓶，將M28-2 (2.90 g)溶於四氫呋喃（30.0 mL）,加入氫化鈉（1.40 g），攪拌10 min後加入M30（4.43 g），室溫反應0.5 h。向反應液中加入適量飽和氯化銨水溶液淬滅，二氯甲烷萃取三次，收集有機相，無水硫酸鈉乾燥後蒸出溶劑，柱層析分離產物，得5.30 g黃色固體，即化合物M31-1。
步驟2：化合物M31-2的合成
100 mL單口瓶中依次加入化合物M31-1（5.0 g）、      M5（2.62 g）、CataCXium A Pd G3（0.40 g）、磷酸鉀（3.56 g）溶於1,4-二氧六環（50.0 mL）和水（5.0 mL）中，氮氣置換2-3次，100℃反應3 h。向反應液中加入適量水, 乙酸乙酯萃取三次，收集有機相，無水硫酸鈉乾燥後蒸出溶劑，柱層析分離產物 ，得4.5 g黃色固體，即化合物M31-2。
步驟3：中間體M31的合成
冰浴下，100 mL單口瓶中加入化合物M31-2（4.50 g），溶於二氯甲烷（50.0 mL），加入三乙胺氫氟酸鹽（10.0 mL），冰浴下反應0.5 h。向反應液中加入5.0 mL 甲醇，50.0mL水萃取三次，飽和食鹽水洗後收集有機相，蒸乾柱層析分離產物，得2.3 g黃色固體，即中間體M31。
中間體M32：化合物（（3S，7aS）-7a-（（7-（8-乙基-7-氟-3-甲氧基甲氧基）萘-1-基）-8-氟-4-（R）-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基）吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基）氧基）甲基）-6-亞甲基六氫-1H-吡咯裡嗪-3-基）甲基（4-硝基苯基）碳酸酯的合成
步驟1：化合物M32的合成
化合物M31(100.0 mg )，三乙胺(30.0 mg ), DMAP(5.0 mg )和對硝基苯基氯甲酸酯加入到10mL單口瓶中，加入四氫呋喃(4.00mL)。20℃攪拌18小時。LCMS監測原料消失，反應完成，反應液M32直接用於下一步反應。
中間體M33：化合物（R）-2-（7-（8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基）-8-氟-4-（3-羥基-3-甲基呱啶-1-基）吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基）氧基）乙醛的合成
步驟1：化合物M33-1的合成
在反應瓶中加入化合物M28-1 ( 2.50g )，乙腈 ( 40.00mL) ，2,2-二甲氧基乙醇( 1.20g ) ，碳酸銫 ( 3.20g ) ，三乙烯二胺 ( 0.08g ) ，室溫反應2 h。先將溶劑濃縮，加水稀釋， EA萃取，乾燥，濃縮。柱層析分離產物（DCM:EA=3:1） ，得到黃色油狀物M33-1（2.3 g ）。ESI-MS m/z: 401.28 [M+H] +。
步驟2：化合物M33-2的合成
在反應瓶中加入2-[8-乙基-7-氟-3-甲氧基甲氧基萘-1-基]-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼烷 ( 3.24g) ，化合物M33-2 ( 2.25g ) ，甲磺酸[正丁基二(1-金剛烷基)膦](2-胺基-1,1'-聯苯-2-基)鈀(II) ( 0.61g )，磷酸鉀 ( 2.98g )，1,4-二氧六環 ( 36.00mL )，氮氣置換後氮氣保護下100℃反應3 h，加水稀釋，EA萃取，乾燥，濃縮。柱層析分離產物（DCM:EA=3:1），得到黃色油狀物M33-2（3.3 g ）。ESI-MS m/z: 599.45 [M+H] +。
步驟3：化合物M33的合成
在反應瓶中加入化合物M33-2 ( 2.50g) ，1,4-二氧六環 ( 15.00mL ) ，濃鹽酸 ( 9.00mL ) ，室溫反應1 h，冰浴下加碳酸氫鈉水溶液調pH=8，用EA和THF萃取，乾燥，濃縮，得到黃色固體M33 ( 2.15g ) 。ESI-MS m/z: 509.19 [M+H] +。
中間體M34的合成
步驟1：化合物M34-1的合成
將3-丁炔-1-醇（140g）和碳酸氫鉀（150g）邊攪拌邊加入到注有乙酸乙酯/水（1000/100 mL）的3L單口瓶中，後將原料1,1-二溴甲醛肟（100g）溶於乙酸乙酯（250 mL），並逐滴加入到3L單口瓶中，室溫攪拌16h。反應結束後，向反應液中加入水進行稀釋，分離並收集有機相，水相繼續使用乙酸乙酯萃取一次，收集並合併有機相，鹽水洗滌一次，無水硫酸鈉乾燥，濃縮，濃縮物經柱層析純化（PE : EA = 5: 1）得到化合物M34-1 (93g, 97%產率)。ESI-MS m/z: 191.9 [M+H] +。
步驟2：化合物M34-2的合成
將化合物M34-1（93g）加入到3L單口瓶中，並加入丙酮（1100 mL）,後將鐘斯試劑（450 mL）在零攝氏度下逐滴加入到反應液中，升至室溫攪拌12h。反應結束後，向反應液中加入水進行稀釋，加入乙酸乙酯萃取，收集有機相，水相繼續使用乙酸乙酯萃取一次，收集並合併有機相，鹽水洗滌一次，無水硫酸鈉乾燥，濃縮即得化合物M34-2（60g，60%產率），黃色油狀物。ESI-MS m/z: 205.9 [M+H] +。
步驟3：化合物M34-3的合成
化合物M34-2（60g）加入到1L單口瓶中，加入甲醇（500 mL），冰浴下逐滴緩慢加入5 mL濃硫酸，升溫至70度反應2h。反應結束後，減壓濃縮，加水稀釋，後加入乙酸乙酯萃取，水相繼續使用乙酸乙酯萃取兩次，收集並合併有機相，鹽水洗滌一次，經無水硫酸鈉乾燥，濃縮，濃縮物經柱層析純化（PE : EA = 10: 1）得到化合物M34-3 (49g, 76%產率)。ESI-MS m/z: 219.9 [M+H] +。
步驟4：化合物M34-4的合成
化合物M34-3（49g）加入到1L單口瓶中，加入四氫呋喃（500 mL），後加入叔丁醇鉀（45g），冰浴下逐滴加入2-碘代丙烷（49g），升至室溫反應16h。反應結束後，加冰水混合物進行淬滅，後加入乙酸乙酯萃取，水相繼續使用乙酸乙酯萃取兩次，收集並合併有機相，鹽水洗滌一次，經無水硫酸鈉乾燥，濃縮，濃縮物經柱層析純化（PE : EA = 100: 1）得到化合物M34-4 (32g, 55%產率)。ESI-MS m/z: 262.0 [M+H] +。
步驟5：化合物M34-5的合成
化合物M34-4（32g）加入到1L單口瓶中，加入甲醇（250 mL）及氫氧化鉀（73g），後加入叔丁醇鉀（45g），回流攪拌反應4h。反應結束後，冷卻至室溫，用1N HCl溶液調節pH=5，濃縮反應液，濃縮物經反向柱層析（5%-40%ACN/水（0.1%三氟乙酸））得到化合物M34-5 (21g, 86%產率)。ESI-MS m/z: 200.1 [M+H]+。
步驟6：化合物M34-6的合成
化合物M34-5（21g）加入到500 mL單口瓶中，加入乙酸（150 mL）及33%溴化氫水溶液（150mL，），升至60攝氏度攪拌10h。反應結束後，冷卻至室溫，減壓濃縮反應液，濃縮物經DCM溶解後，經無水硫酸鈉乾燥，濃縮即得化合物M34-6（15g，77%產率）。ESI-MS m/z: 186.0 [M+H]+。
步驟7：化合物M34-7的合成
化合物M34-6（15g）加入到500 mL單口瓶中，加入甲醇（150 mL），冰浴下逐滴加入二氯亞碸（75 mL），室溫攪拌反應1.5h。反應結束後，減壓濃縮反應液，後加水進行稀釋，加乙酸乙酯進行萃取，收集有機相，水相繼續使用乙酸乙酯萃取一次，收集並合併有機相，鹽水洗滌一次，無水硫酸鈉乾燥，濃縮，濃縮物經柱層析純化（DCM :MeOH = 100: 1）得到化合物M34-7 (11g, 69%產率)。ESI-MS m/z: 200.1 [M+H] +。
步驟8：化合物M34的合成
化合物M34-7（7g）加入到500 mL單口瓶中，加入乙腈（75 mL），分批加入碳酸鉀（10g），後緩慢滴加全氟丁基磺醯氟（14g），室溫攪拌反應2h。反應結束後，加水進行稀釋，後加乙酸乙酯進行萃取，收集有機相，水相繼續使用乙酸乙酯萃取一次，收集並合併有機相，鹽水洗滌一次，無水硫酸鈉乾燥，濃縮，濃縮物經柱層析純化（PE :THF = 100: 1）得到化合物M34 (14.5g, 80%產率)。ESI-MS m/z: 482.0 [M+H] +。
1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6) δ 7.02 (s, 1H), 4.01 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 3.69 (s, 3H), 2.37 (dq, J = 13.6, 6.8 Hz, 1H), 0.93 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 0.85 (d, J = 6.7 Hz, 3H).
中間體M35的合成
步驟1：化合物M35-1的合成
將2-(3-羥基異惡唑-5-基)-3-甲基丁酸甲酯 (450.0 mg)，4-(溴甲基)呱啶-1-甲酸叔丁酯 (1.57 g)和碳酸鉀 (936.7 mg)溶解於DMF (10 mL)中，50℃反應5小時。LCMS監測反應完成，向反應液中加入DCM (10 mL)，飽和食鹽水洗一次，有機相無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，柱層析分離純化，得白色固體237.1 mg，即化合物M35-1。ESI-MS m/z: 341.5 [M+H] +。
步驟2：化合物M35-2的合成
將M35-1 (237.1 mg) 加入甲醇 (4 mL)和水 (1 mL)中，添加一水合氫氧化鋰 (125.4 mg)，室溫反應1小時，LCMS監測反應完成。將反應液pH值調節至酸性，加入EA (20 mL)，收集有機相，有機相飽和食鹽水洗一次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，得白色固體200.0 mg，即化合物M35-2。ESI-MS m/z: 283.5 [M+H] +。
步驟3：化合物M35-3的合成
將M35-2 (200.0 mg)，M29-2 (2 S, 4 R)-4-羥基- N-(( S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲醯胺 (218.4 mg) 和HATU (250.5 mg)溶解於DMF (5 mL)中，添加DIPEA (0.45 mL)，室溫反應10分鐘，LCMS監測反應完成。向反應液中加入EA (20 mL)和飽和食鹽水 (20 mL)，收集有機相，有機相無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，柱層析分離純化，得白色固體300.0 mg，即化合物M35-3。ESI-MS m/z: 696.9 [M+H] +。
步驟4：化合物M35-4的合成
將M35-3 (300.0 mg) SFC拆分，濃縮，得白色固體135.0 mg，即化合物M35-4。ESI-MS m/z: 696.9 [M+H] +。
步驟5：化合物M35的合成
將M35-4 (135.0 mg) 加入DCM (5 mL)和TFA (2 mL)中，室溫反應10分鐘，LCMS監測反應完成。將反應液直接濃縮，加入1 M NaOH溶液至反應液pH = 8。向反應液中加入DCM (20 mL)，收集有機相，有機相飽和食鹽水洗一次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，得白色固體109.0 mg，即化合物M35。ESI-MS m/z: 596.9 [M+H] +。
中間體M36的合成
步驟1：化合物M36-1的合成
化合物呱嗪-1-羧酸叔丁酯(2.55 g)加入N,N-二甲基乙醯胺(150 mL)，再加入三乙胺(5.2 mL )。反應升至145℃攪拌0.5小時。最後加入M34(6.0 g)。145℃攪拌5小時。LCMS監測反應完成。加入H 2O稀釋， EA萃取兩次，有機層用飽和食鹽水洗滌三次，再用無水硫酸鈉乾燥。經柱層析純化得淡黃色固體(4.2 g)。即化合物M36-1。ESI-MS m/z: 368.1[M+H] +。
步驟2：化合物M36-2的合成
化合物M36-1(4.2 g) 加入四氫呋喃(5 mL)，甲醇(5 mL)和水(5 mL)，一水合氫氧化鋰(1.0 g)。20℃攪拌1小時。LCMS監測反應完成。減壓濃縮，稀鹽酸調至pH=5，再用二氯甲烷/異丙醇=5/1萃取兩次，有機層用飽和食鹽水洗滌再用無水硫酸鈉乾燥。粗品直接用於下一步。得淡黃色固體(3.6 g)。即化合物M36-2。ESI-MS m/z: 354.3[M+H] +。
步驟3：化合物M36-4的合成
化合物M36-2(3.5 g)和M29-2(3.3 g )加入到25mL單口瓶中，加入N,N-二甲基乙醯胺(30.00mL)和N,N,N′,N′-四甲基-O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲(7.6 g ), N,N-二異丙基乙胺(4.9 mL )。20℃攪拌0.5小時。LCMS監測反應完成。加入H 2O稀釋， EA萃取兩次，有機層用飽和食鹽水洗滌三次，再用無水硫酸鈉乾燥。粗品M36-3經SFC拆分得淡黃色固體(3.4 g)。即化合物M36-4。ESI-MS m/z: 667.2[M+H] +。
步驟4：化合物M36的合成
化合物M36-4(80.0 mg )加入到10mL單口瓶中，加入二氯甲烷 (2.00mL)和鹽酸(4M in dioxane)(1.00mL)。20℃攪拌0.5小時。LCMS監測反應完成。減壓濃縮，再用飽和NaHCO 3溶液調至pH=8，二氯甲烷/異丙醇=5/1萃取兩次，有機層用飽和食鹽水洗滌再用無水硫酸鈉乾燥。粗品直接用於下一步。得淡黃色固體(73.0 mg)。即化合物M36。ESI-MS m/z: 567.3[M+H] +。
中間體M37的合成
步驟1：化合物M37-1的合成
50mL燒瓶中加入5-乙炔基-2-氟吡啶（500 mg），1-叔丁氧羰基-呱嗪 （922 mg），丙酮 5 mL，DIPEA （1.6 g），加熱至60℃ 反應5 h，脫溶，加EA溶解，水洗，鹽水洗，硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓脫溶，得粗品，柱層析純化得化合物M37-1（1.02g）。
步驟2：化合物M37-2的合成
50mL燒瓶中加入M37-1（200 mg），M29（250 mg），抗壞血酸鈉（226 mg），硫酸銅 （108mg），叔丁醇 3mL，THF 3mL，水 3mL，室溫反應1小時，檢測反應完全，加EA萃取，有機相水洗，鹽水洗，硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓脫溶，得粗品，柱層析純化得化合物M37-2（198 mg）。
步驟3：化合物M37的合成
50mL燒瓶中加入 M37-2（198 mg），4M 氯化氫二氧六環溶液（5mL），室溫反應1小時，減壓脫溶，得粗品M37約200mg。
中間體M38的合成
步驟1：化合物M38-1的合成
將7-叔丁氧羰基-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-羧酸（500.0 mg）溶於5.0 mL THF中，加入硼烷四氫呋喃溶液（4.64 mL，1 mol/L），室溫反應1 h。向反應液中緩慢加入5 mL HCl/MeOH溶液，攪拌至無氣泡產生後，加入1 mol/L NaOH溶液調節pH至鹼性，然後加入適量乙酸乙酯萃取，收集有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾減壓濃縮得到化合物M38-1（450.0 mg）。ESI-MS m/z: 200 [M+H-56] +。
步驟2：化合物M38-2的合成
將M38-1（250.0 mg）溶於5.0 mL DCM中，加入戴斯馬丁試劑（387.0 mg），室溫反應1 h。向反應液中加入適量乙酸乙酯，析出固體過濾除去，濾液加入1 mol/L NaOH溶液調節pH至鹼性，萃取，收集有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾減壓濃縮得到化合物M38-2（180.0 mg）。ESI-MS m/z: 198 [M+H-56] +。
步驟3：化合物M38-3的合成
N 2保護下，化合物M38-2(180 mg)溶於3.0 mL無水甲醇中，加入無水碳酸鉀（167 mg），(1-重氮基-2-氧代丙基)膦酸二甲酯（174 mg），室溫反應3 h。反應液加入適量水和乙酸乙酯萃取，收集有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾減壓濃縮得到化合物M38-3（110 mg），ESI-MS m/z: 194 [M+H-56] +。
步驟4：化合物M38-4的合成
將化合物 M29(200 mg)和化合物M38-3（131 mg）溶于叔丁醇（2 mL）、四氫呋喃（2 mL）和水（2 mL），加入無水硫酸銅(63 mg)，抗壞血酸鈉（226 mg），室溫反應2 h。將反應液旋乾，加入DCM和水，萃取，收集有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾，收集濾液，濃縮後柱層析純化（DCM/MeOH =15: 1）得到化合物M38-4（295 mg），ESI-MS m/z: 706 [M+H] +。
步驟5：化合物M38的合成
將化合物M38-4（295 mg）溶於6 mL DCM和3 mL 氯化氫二氧六環（4 mol/L）溶液中，室溫反應0.5 h。將反應液旋乾，加入DCM/異丙醇（3：1）和飽和碳酸氫鈉溶液，萃取，收集有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾，收集濾液，減壓濃縮得到化合物M38（240 mg），ESI-MS m/z: 606 [M+H] +。
中間體M39的製備參考WO2023138524A1實施例176中的176-4製備得到。
中間體M40的合成
步驟1：化合物M40-1的合成
50 mL單口瓶中加入化合物（S）-3-（4-溴苯基）-3-（（叔丁氧羰基）胺基）丙酸  (1.5 g)，溶於DMF（15 mL）,加入碘甲烷（0.74 g），碳酸鉀（1.2 g），室溫反應2 h。向反應液中加入飽和食鹽水（5 mL）, EA萃取，取有機相無水硫酸鈉乾燥, 得1.4 g黃色固體，即化合物M40-1。
步驟2：化合物M40-2的合成
50 mL單口瓶中加入化合物M40-1 (1.4 g)，溶於DMF (20 mL)，加入4-甲基噻唑（1.2 g），醋酸鉀（1.2 g），醋酸鈀（0.1 g），氮氣保護後，加熱至80 oC反應5 h。向反應液中加入飽和食鹽水（5 mL）, EA萃取，取有機相無水硫酸鈉乾燥，柱層析分離產物(PE:EA=4:1), 得0.82 g黃色固體，即化合物M40-2。
步驟3：化合物M40的合成
25 mL單口瓶中加入化合物M40-2 (0.82 g)，溶於4M的氯化氫二氧六環溶液 (20 mL)，加入甲醇(1 mL),室溫反應1 h。反應液減壓濃縮，得0.55 g黃色固體，即化合物M40。
中間體M42的合成
步驟1：化合物 M42-1的合成
把化合物4-（羥甲基）呱啶-1-甲酸叔丁酯 ( 5.00g , 23.22mmol ) 、TEA ( 6.46mL , 46.45mmol ) 、TsCl ( 6.64g , 34.84mmol ) 依次加到DCM ( 50.00mL ) 中，在室溫下反應16h。向反應液中加入冰水80mL，用 DCM ( 100.00mL ) 萃取兩遍，飽和食鹽水洗滌兩遍，無水硫酸鈉乾燥，柱層析分離（PE:EA=85%:15%）得到化合物 M 42-1 (8.00 g , 93.23% )。ESI-MS m/z: 270.16 [M+H] +。
步驟2：化合物 M 42-2的合成
把化合物 M 42-1 ( 8000.00mg , 21.65mmol ) 、對羥基苯甲醛( 2908.62mg , 23.82mmol ) 、碳酸銫 ( 21164.30mg , 64.96mmol ) 加到DMF ( 80.00mL ) 中，在80℃反應2h。向反應液中加入水，產物析出，過濾，濾餅用水洗滌，烘乾得到化合物 M42-2（6100.00 mg，88.21%）。ESI-MS m/z: 220.15 [M+H] +。
步驟3：化合物 M42-3的合成
把化合物M42-2( 3.00g , 9.39mmol ) 、碳酸鉀 ( 2.60g , 18.79mmol ) 加到甲醇 ( 30.00mL ) 中，在攪拌下，加入(1-重氮基-2-氧代丙基)膦酸二甲酯 ( 1.83mL , 12.21mmol ) ，室溫反應6 h。濃縮反應液，加50mL水，用EA( 100.00mL ) 萃取兩遍，無水硫酸鈉乾燥，柱層析分離（PE:EA=90%:10%）得化合物 M42-3 (2.30 g , 77.64% ) 。ESI-MS m/z: 216.19 [M+H] +。
步驟4：化合物 M42-4的合成
把化合物 M42-3( 276.36mg , 0.88mmol ) 、M29 ( 200.00mg , 0.44mmol ) 、硫酸銅 ( 62.93mg , 0.39mmol ) 、抗壞血酸鈉 ( 225.66mg , 1.14mmol ) 、水 ( 2.00mL ) 、叔丁醇 ( 2.00mL )依次加到四氫呋喃 ( 2.00mL ) 中，在室溫下反應2h。將反應液濃縮，加30mL水，用DCM( 80.00mL ) 萃取兩遍，無水硫酸鈉乾燥，柱層析分離（DCM:MeOH=95%:5%）得化合物M 42-4 ( 300.00mg , 88.71% ) 。ESI-MS m/z: 772.52 [M+H] +。
步驟5：化合物M42的合成
把化合物M 42-4 ( 300.00mg , 0.39mmol ) 、三氟乙酸 ( 1.00mL ) 依次加到二氯甲烷 ( 2.00mL ) 中，在室溫下反應1h。向反應液中加入飽和碳酸氫鈉水溶液調鹼，用DCM( 80.00mL ) 萃取兩遍，無水硫酸鈉乾燥，柱層析分離（DCM:MeOH=93%:7%）得化合物M 42 ( 130.00mg , 49.79% ) 。
ESI-MS m/z: 672.72 [M+H] +。
中間體M43的合成
步驟1：化合物M43-1的合成
將化合物M28-2（16.5 g）溶於DCM ( 200 mL )中，0℃分批次緩慢加入DMP（18.4 g）,自然升溫至室溫反應2小時，反應完畢後，加入水稀釋， DCM萃取，有機相用飽和食鹽水洗滌，經柱層析純化得到化合物M43-1（9.5 g）。ESI-MS m/z:395.2 [M+H] +。
步驟2：化合物M43的合成
將化合物M43-1 ( 9.5 g ) , M6 ( 15.21g ), 甲磺酸[正丁基二(1-金剛烷基)膦](2-胺基-1,1'-聯苯-2-基)鈀(II) ( 3.50 g) ,磷酸鉀 ( 15.3 g) 加入到1,4-二氧六環 ( 100.00 mL ) 和水 ( 25 mL ) 中，氮氣保護下90℃反應1.5小時，反應完畢後，加水稀釋，加入乙酸乙酯萃取，有機相用飽和食鹽水洗滌，經柱層析純化得到化合物M43（8.5 g）。ESI-MS m/z:549.1 [M+H] +。
中間體M44的合成
步驟1：化合物M44-1的合成
在反應瓶中加入商業可得的N-（（1R）-1-（4-溴苯基）-2-羥基乙基）胺基甲酸叔丁酯 ( 2.50g )，4-甲基噻唑( 1.57g  )，醋酸鈀( 0.18g)，醋酸鉀( 1.55g , 15.81mmol )，N,N-二甲基乙醯胺 ( 40.00mL )，氮氣置換後氮氣保護下100℃反應10 h。加H 2O（100mL）稀釋，EA(80mL) 萃取2次，有機層用飽和食鹽水洗滌再用無水硫酸鈉乾燥，濃縮，濃縮物經柱層析純化（DCM:胺甲醇=20:1），得黃色固體化合物M44-1（2.01 g ），ESI-MS m/z: 335.29 [M+H] +。
步驟2：化合物M44-2的合成
在反應瓶中加入化合物M44-1 ( 2.01g)，二氯甲烷 ( 20.00mL )，甲醇 ( 10.00mL )，0℃攪拌下加入4M氯化氫二氧六環溶液( 10.00mL )，室溫反應1 h，將溶劑濃縮，得到黃色固體粗品M44-2（1.85 g ）ESI-MS m/z: 218.21 [M-OH] +。
步驟3：化合物M44-3的合成
在反應瓶中加入化合物M44-2 ( 1.50g)，商業可得的（2S，4R）-4-羥基-1-[（2-甲基丙-2-基）氧羰基]吡咯烷-2-羧酸( 1.48g )，N,N-二甲基甲醯胺 ( 25.00mL )，N,N-二異丙基乙胺( 3.17mL)，攪拌下加入N,N,N′,N′-四甲基-O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲 (3.16g)，室溫反應0.5 h，加飽和食鹽水稀釋， EA萃取，水相用EA:異丙醇=9:1萃取，合併有機相，再用飽和食鹽水洗一次，無水硫酸鈉乾燥，濃縮，柱層析分離產物（DCM:胺甲醇=15:1），得到黃色固體M44-3（2.02 g ）ESI-MS m/z: 448.20 [M+H] +。
步驟4：化合物M44-4的合成
在反應瓶中加入化合物M44-3 ( 2.02g  )，二氯甲烷 ( 20.00mL )，甲醇 ( 10.00mL )，0℃攪拌下加入4M氯化氫二氧六環溶液( 10.00mL )，室溫反應1 h，將溶劑濃縮，得到黃色固體粗品M44-4（1.86 g ）。ESI-MS m/z: 348.18 [M+H] +。
步驟5：化合物M44-5的合成
在反應瓶中加入化合物M44-4 ( 1.55g)，商業可得的（2S）-3-甲基-2-(（2-甲基丙-2-基）氧羰基胺基)丁酸 ( 1.07g)， N,N-二甲基甲醯胺( 20.00mL )，N,N-二異丙基乙胺( 2.21mL)，攪拌下加入N,N,N′,N′-四甲基-O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲 ( 2.21g) ，室溫反應0.5 h，加飽和食鹽水稀釋， EA萃取，水相用EA:異丙醇=9:1萃取，合併有機相，再用飽和食鹽水洗一次，無水硫酸鈉乾燥，濃縮，柱層析分離產物（DCM:胺甲醇=15:1），得到黃色固體M44-5（2.01 g ）ESI-MS m/z: 547.30 [M+H] +。
步驟6：化合物M44-6的合成
在反應瓶中加入化合物M44-5 ( 2.01g)，二氯甲烷 ( 20.00mL )，甲醇 ( 10.00mL )，0℃攪拌下加入4M氯化氫二氧六環溶液( 10.00mL )，室溫反應1 h，將溶劑濃縮，冰浴下加碳酸氫鈉水溶液調pH=8，用反相柱純化（MeOH/H 2O=95%:5%），得到淡黃色固體M44-6（1.5 g ）ESI-MS m/z: 447.30 [M+H] +。
步驟7：化合物M44的合成
在反應瓶中加入化合物M44-6 ( 1.50g) ，四氫呋喃( 15.00mL )，乙腈( 7.50mL )，三乙胺 ( 1.87mL  )，降溫至0℃，取2-疊氮基-1,3-二甲基咪唑六氟磷酸鹽( 1.91g , 6.72mmol ) 溶於乙腈( 7.50mL )中，然後緩慢加到反應液中，加畢在該溫度下反應1 h，向反應液中加入適量飽和食鹽水，EA萃取，水相再用EA：異丙醇=9:1萃取，合併有機相，用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，濃縮，柱層析分離產物（7% 胺MeOH/DCM），得到淡黃色固體M44（0.92 g ）ESI-MS m/z: 473.20 [M+H] +。
中間體M45的合成
步驟1：化合物M45-1的合成
在反應瓶中加入商業可得的1-乙基-5-（4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼硼烷-2-基）吡唑 ( 1.83g ) ，N-（（1R）-1-（4-溴苯基）-2-羥基乙基）胺基甲酸叔丁酯( 2.00g)，碳酸鉀 ( 1.75g)，[1,1'-雙(二苯基膦)二茂鐵]二氯化鈀二氯甲烷絡合物( 0.52g)，1,4-二氧六環 ( 35.00mL)，水( 7.00mL )，氮氣置換後氮氣保護下100℃反應2 h，取樣檢測顯示原料反應完全，加水稀釋，EA萃取，有機相無水硫酸鈉乾燥，濃縮。柱層析分離產物（DCM:EA=3:1），得黃色固體化合物M45-1（1.7 g ），ESI-MS m/z: 332.29 [M+H] +。
步驟2：化合物M45-2的合成
在反應瓶中加入化合物M45-1 ( 1.7 g)，二氯甲烷 ( 20.00mL )，甲醇 ( 10.00mL )，0℃攪拌下加入4M氯化氫二氧六環溶液（10.00mL )，室溫反應1 h，將溶劑濃縮，得到黃色固體粗品M45-2（1.35 g ）ESI-MS m/z: 215.21 [M-OH] +。
步驟3：化合物M45-3的合成
在反應瓶中加入化合物M45-2 ( 1.30g )，商業可得的（2S）-3-甲基-2-（（2-甲基丙-2-基）氧羰基胺基）丁酸 ( 0.82g )， N,N-二甲基甲醯胺( 1.00mL )，N,N-二異丙基乙胺( 1.25mL)，攪拌下加入N,N,N′,N′-四甲基-O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲 ( 1.87g) ，室溫反應0.5 h，加飽和鹽水稀釋，EA萃取，水相用EA:異丙醇=9:1萃取，合併有機相，飽和鹽水洗一次，無水硫酸鈉乾燥，濃縮，柱層析分離產物（DCM:胺甲醇=20:1），得到黃色固體M45-3（1.75 g ）ESI-MS m/z: 445.20 [M+H] +。
步驟4：化合物M45-4的合成
在反應瓶中加入化合物M45-3 ( 1.75 g)，二氯甲烷 ( 20.00mL )，甲醇 ( 10.00mL )，0℃攪拌下加入4M氯化氫二氧六環溶液（10.00mL )，室溫反應1 h，將溶劑濃縮，得到黃色固體粗品M45-4（1.66 g ）。ESI-MS m/z: 345.18 [M+H] +。
步驟5：化合物M45-5的合成
在反應瓶中加入化合物M45-4 ( 1.30g)，商業可得的（2S）-3-甲基-2-（（2-甲基丙-2-基）氧羰基胺基）丁酸 ( 0.82g )， N,N-二甲基甲醯胺 ( 1.00mL )， N,N-二異丙基乙胺( 1.25mL)，攪拌下加入N,N,N′,N′-四甲基-O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲 ( 1.87g )，室溫反應0.5 h，加飽和鹽水稀釋，EA萃取，水相用EA:異丙醇=9:1萃取，合併有機相，再用飽和鹽水洗一次，無水硫酸鈉乾燥，濃縮，柱層析分離產物（DCM:胺甲醇=20:1），得到黃色固體M45-5（1.8 g ）ESI-MS m/z: 544.30 [M+H] +。
步驟6：化合物M45-6的合成
在反應瓶中加入化合物M45-5 ( 1.8 g)，二氯甲烷 ( 20.00mL )，甲醇 ( 10.00mL )，0℃攪拌下加入4M氯化氫二氧六環溶液（10.00mL )，室溫反應1 h，將溶劑濃縮，冰浴下加碳酸氫鈉水溶液調節pH=8，用反相柱純化，得到淡黃色固體M45-6（1.12 g ）ESI-MS m/z: 444.30 [M+H] +。
步驟7：化合物M45的合成
在反應瓶中加入化合物M45-6 ( 1.10g)，四氫呋喃( 10.00mL )，乙腈 ( 5.00mL )，三乙胺( 1.38mL)，降溫至0℃，取2-疊氮基-1,3-二甲基咪唑六氟磷酸鹽 ( 1.41g , 4.96mmol ) 溶於乙腈 ( 5.00mL )，然後加到反應液中，加畢，該溫度下繼續反應1 h，向反應液中加入適量飽和鹽水稀釋，加入EA萃取，水相再用EA：異丙醇=9:1萃取，合併有機相，用飽和鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，濃縮，柱層析分離產物，得到淡黃色固體M45（0.8 g）ESI-MS m/z: 470.20 [M+H] +。
中間體M46的合成
步驟1：化合物M46-1的合成
將2-氯-5-碘吡嗪（1g），三甲基矽基乙炔（0.88mL）, 雙三苯基磷二氯化鈀(0.36g)，碘化亞銅(0.1g)溶於10mL 四氫呋喃中，加入三乙胺（2.16mL），置換氮氣三次，80℃反應2h，LCMS監測反應完成。向反應液中加入10 mL水，用DCM:MeOH萃取3次，合併有機相，飽和食鹽水洗滌，硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮有機相，經柱層析分離純化得白色固體0.5g，即M46-1。ESI-MS m/z: 211[M+H] +。
步驟2：化合物M46的合成
將M46-1（0.5g）溶於2 mL ACN中，冰浴下滴加5M氫氧化鉀水溶液（1.25mL），保溫攪拌15min。LCMS監測反應完成。用EA萃取3次，每次10mL，合併有機相，飽和食鹽水洗滌，硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮有機相，經柱層析分離純化得白色固體0.17g，即M46。ESI-MS m/z: 139[M+H] +。
中間體M47的合成
步驟1：化合物M47-1的合成
將((2-氟-8-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼烷-2-基)萘-1-基)乙炔基)三異丙基矽烷（1g）溶於10mL DMF中，然後加入氟化銫（3.36g），25℃反應5h，TLC監測反應完成。加水稀釋， EA萃取3次，合併有機相，硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮有機相得白色固體0.65g，即M47-1。所得粗品不經純化直接投下一步。ESI-MS m/z: 297[M+H] +。
步驟2：化合物M47的合成
將M47-1（0.65g）溶於10 mLTHF中，然後加入10%Pd/C（0.4g），置換氫氣三次，25℃下攪拌12h。TLC監測反應完成。用矽藻土過濾，濃縮有機相，經柱層析分離純化得白色固體0.48g，即M47。ESI-MS m/z: 301[M+H] +。
中間體M48的合成
步驟1：化合物M48-1的合成
將化合物M46（0.83 g），2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷-7-甲酸叔丁酯（1.63 g）溶於15.0 mL 1,4-二氧六環，加入三乙胺（2.5 mL），N 2氛圍升溫至80℃反應2 h。反應液減壓濃縮，濃縮物經柱層析純化（PE/EA = 65: 35）得到化合物M48-1（1.6 g），ESI-MS m/z: 329.1 [M+H] +。
步驟2：化合物M48-2的合成
將化合物M48-1（300 mg）和化合物M29（459 mg）溶于叔丁醇（5 mL）、四氫呋喃（5 mL）和水（5 mL），加入無水硫酸銅（131 mg），抗壞血酸鈉（470 mg），室溫反應2 h。將反應液旋乾，加入DCM/MeOH （10: 1）和水，萃取，收集有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾，收集濾液，濾液減壓濃縮後經柱層析純化（DCM/MeOH =10: 1）得到化合物M48-2（646 mg），ESI-MS m/z: 785.3 [M+H] +。
步驟3：中間體M48的合成
將化合物M48-2（600 mg）溶於8 mL DCM和8 mL氯化氫二氧六環溶液（4 M），室溫反應0.5 h。反應完畢後，旋乾反應液，加入水稀釋，EA萃取，收集水相，加入無水碳酸鈉調節水相pH至鹼性，加入DCM/異丙醇（3:1）萃取，收集並合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾，收集濾液，減壓濃縮得到化合物M48（498 mg），ESI-MS m/z: 685.3 [M+H] +。
實施例1：化合物（2S，4R）-1-（（2S）-2-（4-）（1-（（1-）（（7-（8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基）-8-氟-4-（3-羥基-3-甲基）呱嗪基）-4-甲基-4-苯甲醯胺基-3,3-二甲基丁醯基-4-氫（4-甲基噻唑-5-基）苯基）乙基）吡咯烷-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物1-1的合成
50 mL單口瓶中加入化合物M1 (0.25 g)，溶於DMF (5 mL)和THF(5 mL)，加入1,1-環丙烷二甲醇(0.31 g)，碳酸銫(0.738 g)，DABCO（8.47 mg），N 2保護40 oC反應5 h。冷卻至室溫，向反應液中加入適量水, 分液，水相DCM萃取，合併有機相，有機相無水硫酸鈉乾燥，柱層析分離產物(DCM:MeOH=10:1),得0.278 g淡黃色固體，即化合物1-1。
步驟2：化合物1-2的合成
25 mL單口瓶中加入化合物1-1 (200.0 mg)，溶於THF（10 mL）和水（2 mL），加入M5（379.3 mg），K 3PO 4（321.0 mg），CataCXium A Pd G3 （36.7 mg），N 2保護75 oC反應2 h。反應液直接蒸乾。柱層析分離純化(DCM:MeOH=10:1)，得210.5 mg黃色固體，即化合物1-2。
步驟3：化合物1-3的合成
25 mL單口瓶中加入化合物1-2 (210.0 mg)，溶於DCM（10 mL），加入DMP（299.5 mg），室溫反應4 h。向反應液中加硫代硫酸鈉溶液淬滅， DCM萃取三次，有機相水洗，飽和食鹽水洗，蒸乾柱層析分離產物 ((DCM:MeOH=10:1))，得192gm淡黃色固體，即化合物1-3。
步驟4：化合物1-4的合成
25 mL單口瓶中加入化合物1-3 (100 mg)，溶於MeOH（3 mL），加入M26（167.5 mg）和1 M ZnCl 2/THF溶液（0.1 mL），加熱至40 oC，反應2 h後，加入NaBH 3CN（53.1 mg），反應過夜。反應液直接蒸乾。柱層析分離純化(DCM : MeOH= 8: 1)，得84.0 mg淡黃色固體，即化合物1-4。
步驟5：化合物1的合成
25 mL單口瓶中加入化合物1-4（84.0 mg），溶於DCM（2 mL），加入TFA（1 mL），室溫反應1 h。蒸乾反應液，反相色譜柱層析分離產物(CH 3CN/H 2O = 30%-55%)， 得白色固體30.6 mg，即化合物1。（純度99.14%）。LCMS：1/2[M+2H] += 598.31。
1H NMR (500 MHz, MeOD) δ 9.31 (s, 1H), 8.98 (s, 1H), 7.78 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.71 – 7.62 (m, 2H), 7.49 – 7.37 (m, 4H), 7.33 (s, 1H), 7.25 (t, J = 9.3 Hz, 1H), 7.07 (s, 1H), 6.96 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 5.03 (dd, J = 12.9, 6.2 Hz, 2H), 4.70 – 4.59 (m, 2H), 4.57 – 4.45 (m, 3H), 4.37 (t, J = 14.8 Hz, 2H), 4.05 - 3.94(m, 5H), 3.86 – 3.76 (m, 1H), 3.66 – 3.51 (m, 2H), 3.47 – 3.35 (m, 2H), 3.04 (t, J = 12.4 Hz, 2H), 2.51 – 2.39 (m, 4H), 2.28 – 2.09 (m, 7H), 1.92 – 1.80 (m, 3H), 1.77 – 1.68 (m, 2H), 1.52 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.27 (d, J = 8.3 Hz, 3H), 1.17 – 1.06 (m, 9H), 1.06 - 0.98 (m, 2H), 0.92-0.86 (m, 2H), 0.82 (q, J = 7.6 Hz, 3H).
實施例2： 化合物（（3R，7aR）-7a-(((7-（8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基）-8-氟-4-（3-羥基-3-甲基呱啶-1-基）吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基）氧基）甲基）六氫-1H-吡咯嗪-3-基）甲基2-（（（S）-1-（（2S，4R）-4-羥基-2-(((S）-1-（4-（4-甲基噻唑-5-基）苯基）乙基）胺基甲醯基）吡咯烷-1-基）-3,3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基）胺基甲醯基）-7-氮雜螺[3.5]壬-7-羧酸酯的合成
步驟1：化合物2-1的合成
25 mL單口瓶中加入（（3R，7aR）-3-（（叔丁基二甲基甲矽烷基）氧基）甲基）四氫-1H-吡咯嗪-7a（5H）-基）甲醇（100.0 mg），溶於THF(5 mL)，加入NaH（38.7 mg），室溫反應0.5 h後，加入化合物M12（82.0 mg），室溫反應2 h。向反應液中加飽和氯化銨溶液淬滅， EA萃取三次，有機相水洗，飽和食鹽水洗，減壓濃縮後柱層析分離產物 ((DCM:MeOH=10:1))，得104.0 mg淡黃色固體，即化合物2-1。
步驟2：化合物2-2的合成
25 mL單口瓶中加入化合物2-1 (104.0 mg)，溶於THF（10 mL）和水（2 mL），加入M5（124.0 mg），K 3PO 4（109.8 mg），CataCXium A Pd G3 （12.5 mg），N 2保護75 oC反應2 h。反應液減壓濃縮後柱層析分離純化(DCM:MeOH=10:1)，得106.0 mg黃色固體，即化合物2-2。
步驟3：化合物2-3的合成
25 mL單口瓶中加入化合物2-2 (106.0 mg)，溶於THF（3 mL），加入1 M 四丁基氟化銨的四氫呋喃溶液
（2 mL），室溫反應4 h。反應液減壓濃縮後柱層析分離純化(DCM:MeOH=10:1)，得67.0mg黃色固體，即化合物2-3。
步驟4：化合物2-4的合成
25 mL單口瓶中加入化合物2-3 (67.0 mg)，溶於THF（4 mL）， 加入CDI（24.6 mg），加熱至40 oC 反應2 h後，加入化合物M15（300.6 mg），加熱至80 oC，反應過夜。反應液減壓濃縮後柱層析分離純化(DCM : MeOH = 10 : 1)，得62.0 mg淡黃色固體，即化合物2-4。
步驟5：化合物2的合成
25 mL單口瓶中加入化合物2-4（62.0 mg），溶於DCM（2 mL），加入TFA（1 mL），室溫反應1 h。反應液減壓濃縮後經反相色譜柱層析分離產物(CH 3CN/H 2O = 30%-55%)，得白色固體18.5 mg，即化合物2。（純度96.48%）。LCMS：1/2[M+2H] += 621.93。
1H NMR (500 MHz, Methanol-d 4) δ 9.30 (s, 1H), 8.92 (s, 1H), 7.69 (dd, J = 8.9, 5.9 Hz, 1H), 7.43 (q, J = 8.3 Hz, 4H), 7.32 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.26 (t, J = 9.3 Hz, 1H), 7.07 (t, J = 2.8 Hz, 1H), 5.00 (dd, J = 13.8, 6.9 Hz, 2H), 4.73 (dd, J = 12.3, 4.5 Hz, 1H), 4.68-4.60 (m, 3H), 4.57 – 4.23 (m, 7H), 3.87 (d, J = 10.9 Hz, 1H), 3.75 (dd, J = 10.9, 3.7 Hz, 1H), 3.70 – 3.53 (m, 3H), 3.50 – 3.36 (m, 6H), 3.24 – 3.13 (m, 1H), 2.49 (s, 3H), 2.45 – 2.30 (m, 3H), 2.27 – 1.92 (m, 14H), 1.90 – 1.75 (m, 3H), 1.66-1.56 (m, 3H), 1.54-1.47 (m, 4H), 1.31 (d, J = 10.8 Hz, 3H), 1.07 – 0.99 (s, 9H), 0.84 – 0.78 (m, 3H).
實施例67：化合物（2S，4R）-1-（S）-2-（4-（1-（2-（7-（8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基）-8-氟-4-（（R）-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基）吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基）氧基）乙基）呱啶-4-基）甲氧基）苯基）-1H-1,2,3-三唑-1-基）-3-甲基丁醯基）-4-羥基-N-（（S）-1-（4-甲基噻唑-5-基）苯基）乙基）吡咯烷-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物67的合成
把化合物M42 ( 80.00mg ) 、化合物M33( 78.96mg ) 、乙酸 (0.05mL) 依次加到二氯甲烷 ( 2.00mL )和異丙醇 ( 0.50mL ) 中，在室溫反應0.5h後，加入2-甲基吡啶硼烷 ( 38.22mg ) ，再在室溫下反應2h。向反應液中加入飽和碳酸氫鈉水溶液30mL，用DCM萃取三遍，合併濃縮有機相，經Pre-HPLC分離純化得化合物67（42.4 mg，29.43%）。ESI-MS m/z: 583.27  1/2[M+2H] +。
1H NMR (500 MHz, Methanol-d 4) δ 9.21 (d, J = 4.1 Hz, 1H), 8.87 (s, 1H), 8.35 (s, 1H), 7.73 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.67 (dd, J = 8.8, 5.9 Hz, 1H), 7.47 – 7.36 (m, 4H), 7.30 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.24 (t, J = 9.3 Hz, 1H), 7.06 (s, 1H), 6.97 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 5.32 (d, J = 10.3 Hz, 1H), 5.04 (q, J = 6.9 Hz, 1H), 4.68 (t, J = 5.4 Hz, 2H), 4.53 (t, J = 8.3 Hz, 2H), 4.47 (s, 1H), 4.28 (t, J = 13.0 Hz, 1H), 3.93 – 3.84 (m, 4H), 3.64 (d, J = 13.3 Hz, 1H), 3.58 (d, J = 13.5 Hz, 1H), 3.45 (dd, J = 20.6, 9.8 Hz, 1H), 3.18 (d, J = 10.9 Hz, 2H), 2.93 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 2.68 – 2.57 (m, 1H), 2.48 (s, 3H), 2.45 (s, 1H), 2.29 (t, J = 11.2 Hz, 2H), 2.24 – 2.13 (m, 3H), 2.03 (s, 1H), 2.01 – 1.94 (m, 1H), 1.87 (t, J = 14.3 Hz, 4H), 1.77 (t, J = 9.4 Hz, 2H), 1.51 (dd, J = 18.2, 9.6 Hz, 5H), 1.29 (d, J = 3.5 Hz, 3H), 1.27 (s, 1H), 1.15 (t, J = 7.7 Hz, 3H), 0.84 – 0.78 (m, 6H).
實施例69 （2S，4R）-1-（（S）-2-（4-（4-（1-（1-（（（7-（8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基）-8-氟-4-（（（R）-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基）吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基）氧基）甲基）環丙基）甲基）呱啶-4-基）甲氧基）苯基）-1H-1-1,2,3-三唑-1-基）-3-甲基丁醯基）-4-羥基-N-（（（S-1-（4-（4-甲基噻唑-5-基）苯基）乙基）吡咯烷-2-甲醯胺
步驟1：化合物69-1的合成
把化合物M42 ( 62.35mg , 0.09mmol ) 、中間體化合物M28( 50.00mg , 0.08mmol ) 、氯化鋅的四氫呋喃溶液 ( 0.08mL , 1.00mol/L , 0.08mmol ) 加到甲醇 ( 2.00mL ) 和1,2-二氯乙烷 ( 2.00mL ) 中，在40℃反應1h，再加入氰基硼氫化鈉 ( 53.04mg , 0.84mmol ) ，40℃反應3h。將反應液濃縮，加30mL水，用DCM( 80.00mL ) 萃取兩遍，無水硫酸鈉乾燥，柱層析分離（DCM:MeOH=90%:10%）得化合物69-1 ( 80.00mg , 75.92% ) 。ESI-MS m/z:625.35, 1/2[M+2H] +。
步驟2：化合物69的合成
把化合物69-1 ( 80.00mg , 0.06mmol ) 、TFA/三氟乙酸 ( 1.00mL ) 加入二氯甲烷 ( 2.00mL ) 中，在室溫下反應1h。將反應液濃縮Pre-HPLC分離純化得化合物69（19.00 mg，23.75%）。ESI-MS m/z: 603.18, 1/2[M+2H] +。
1H NMR (500 MHz, MeOD) δ 9.19 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 8.86 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 8.34 (d, J = 4.2 Hz, 1H), 7.72 (dd, J = 8.8, 1.4 Hz, 2H), 7.66 (dd, J = 9.0, 5.8 Hz, 1H), 7.46 – 7.37 (m, 4H), 7.29 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.23 (t, J = 8.9 Hz, 1H), 7.06 (t, J = 2.6 Hz, 1H), 6.96 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 5.32 (d, J = 10.3 Hz, 1H), 5.05 (q, J = 7.0 Hz, 1H), 4.55 – 4.42 (m, 5H), 4.24 (t, J = 14.2 Hz, 1H), 3.88 (ddd, J = 23.4, 11.5, 4.7 Hz, 4H), 3.62 (dd, J = 34.4, 13.3 Hz, 1H), 3.50 – 3.41 (m, 1H), 3.14 (dd, J = 20.3, 7.1 Hz, 2H), 2.67 – 2.58 (m, 1H), 2.54 – 2.37 (m, 7H), 2.24 – 2.13 (m, 3H), 2.04 – 1.94 (m, 4H), 1.89 – 1.72 (m, 7H), 1.53 (d, J = 7.0 Hz, 3H), 1.45 – 1.37 (m, 2H), 1.34 (s, 2H), 1.15 (dd, J = 10.8, 4.8 Hz, 4H), 0.84 – 0.78 (m, 7H), 0.72 (s, 2H), 0.51 (s, 2H).
實施例71：化合物（2S，4R）-1-（（S）-2-（4-（1-（7-（8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基）-8-氟-4-（（R）-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基）吡啶[4,3-d]嘧啶-2-基）氧基）甲基）環丙基）甲基）-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基）-1H-1,2,3-三唑-1-基）-3-甲基丁醯基）-4-羥基-N-（（S）-1-（4-甲基噻唑-5-基）苯基）乙基）吡咯烷-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物71-1的合成
化合物M29(200.00mg) 和M16-3(142.00mg)加入四氫呋喃(4.00mL)，叔丁醇(2.00mL)和水(2.00mL)。再加入硫酸銅(62.93mg)和抗壞血酸鈉(225.67mg)。20℃攪拌6小時。LCMS監測反應完成。減壓濃縮，經柱層析純化得淡黃色固體(291.00 mg, 收率94.10%)。即化合物71-1。
步驟2：化合物71-2的合成
化合物71-2(291.00mg)加入到25mL單口瓶中，加入二氯甲烷 (5.00mL)和氯化氫的二氧六環溶液(2.00mL)。20℃攪拌0.5小時。LCMS監測反應完成。減壓濃縮，再用飽和NaHCO 3溶液調至pH=8，二氯甲烷/異丙醇=5/1萃取兩次，有機層用飽和食鹽水洗滌再用無水硫酸鈉乾燥。粗品直接用於下一步。得淡黃色固體(290.00 mg)。即化合物71-2。
步驟3：化合物71-3的合成
化合物M28(80.00mg)和71-2(98.14mg)加入到25 mL單口瓶中，加入甲醇(2.00mL)，再加入氯化鋅(0.20mL , 1.00mol/L)，反應升至40℃攪拌2小時。最後加入氰基硼氫化鈉(29.69mg)，40℃攪12小時。LCMS監測反應完成。減壓濃縮，經柱層析純化得淡黃色固體(130.00 mg , 收率81.44%)。即化合物71-3。
步驟4：化合物71的合成
化合物71-3(130.00mg)加入到25 mL單口瓶中，加入二氯甲烷 (4.00mL)，再加入三氟乙酸(2.00mL)。20℃攪拌0.5小時。LCMS監測反應完成。減壓濃縮，粗品經HPLC製備得純品，得淡黃色固體(50.00mg , 收率37.47%)。即化合物71。ESI-MS m/z: 570.23  1/2[M+2H] +。
1H NMR (500 MHz, Methanol- d 4) δ 9.11 (s, 1H), 8.77 (s, 1H), 7.81 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.57 (t, J= 7.5 Hz, 1H), 7.33 (q, J= 8.1 Hz, 4H), 7.23 – 7.10 (m, 2H), 6.96 (s, 1H), 5.15 (d, J= 10.3 Hz, 1H), 4.94 (d, J= 6.9 Hz, 1H), 4.52 – 4.29 (m, 6H), 4.16 (t, J= 13.9 Hz, 1H), 3.83 – 3.68 (m, 2H), 3.59 – 3.43 (m, 2H), 3.35 (q, J= 11.7, 11.3 Hz, 1H), 2.55 (s, 3H), 2.45 (s, 1H), 2.38 (s, 4H), 2.18 (d, J= 10.9 Hz, 2H), 2.09 (s, 2H), 1.88 (d, J= 12.2 Hz, 3H), 1.77 – 1.73 (m, 2H), 1.71 – 1.66 (m, 2H), 1.61 (s, 2H), 1.42 (d, J= 7.0 Hz, 3H), 1.28 (d, J= 23.5 Hz, 2H), 1.02 (d, J= 6.8 Hz, 3H), 0.82 – 0.75 (m, 5H), 0.70 (t, J= 9.4 Hz, 5H), 0.65 (d, J= 6.7 Hz, 3H), 0.49 (s, 2H).
實施例73：化合物（2S，4R）-1-（（S）-2-（4-（7-（（1-（（7-（8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基）-8-氟-4-（（（R）-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基）吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基）氧基）甲基）環丙基）甲基）- 7-氮雜螺[3.5]壬-2-基）氧基）苯基）-1H-1,2,3-三唑-1-基）-3-甲基丁醯基）-4-羥基-N-（（S）-1-（4-（4-甲基噻唑-5-基）苯）乙基）吡咯烷-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物73-1的合成
7-叔丁氧基羰基-7-氮雜螺[3.5]-2-壬醇（500 mg），加入6 mL DCM溶解後，加入三乙胺（0.58 mL），冰浴下加入甲磺醯氯（0.19 mL）。恢復至室溫攪拌2h後，冰浴下，加水淬滅反應。EA萃取一次，DCM萃取一次，收集並合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得到粗產物73-1（660 mg）。ESI-MS m/z: 320.1 [M+H] +。
步驟2：化合物73-2的合成
將73-1 (660 mg) 加入到50 mL單口瓶中，加入10 mL DMF，加入(4-羥苯炔基)三甲基矽烷 (511 mg) ，加入碳酸銫（2.01 g），60℃反應3h。向反應液中滴加50 mL 水，過濾後，濾餅用水洗。濾餅用DCM溶解，飽和食鹽水洗，收集並合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，濃縮，濃縮物經柱層析純化得到化合物73-2（330 mg）。ESI-MS m/z: 413.3 [M+H] +。
步驟3：化合物73-3的合成
將73-2（330 mg）加入到10 mL單口瓶中，加入3 mL DMF，加入氟化銫（500 mg），室溫下攪拌3h。向反應液中滴加20 mL水，過濾，濾餅水洗，烘乾得到化合物73-3（300 mg）。ESI-MS m/z: 342.2 [M+H] +。
步驟4：化合物73-4的合成
將73-3 (300 mg) 加入到50 mL單口瓶中，加入3 mL 四氫呋喃，3 mL叔丁醇以及3 mL水，加入M29（269 mg），硫酸銅（95 mg），抗壞血酸鈉（338 mg），室溫下反應30 min。用水稀釋反應液，EA萃取兩次，收集並合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，濃縮物經柱層析分離純化得到化合物73-4（280 mg）。ESI-MS m/z: 798.4 [M+H] +。
步驟5：化合物73-5的合成
將化合物73-4 (280 mg) 加入到10 mL單口瓶中，加入4M氯化氫的二氧六環溶液（3 Ml），室溫下反應30min。用飽和碳酸氫鈉溶液中和反應液，EA萃取兩次，收集並合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得到粗品73-5（220 mg）。ESI-MS m/z: 698.4 [M+H] +。
步驟6：化合物73-6的合成
將M28 (80 mg) 加入到10 mL單口瓶中，加入1 mL 甲醇，加入73-5（94 mg），加入1M 氯化鋅的四氫呋喃溶液（0.2mL），室溫下攪拌3h。加入氰基硼氫化鈉（25 mg），室溫下攪拌16h。用飽和氯化銨溶液淬滅反應液，EA萃取兩次，收集並合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得到粗品73-6（100 mg）。ESI-MS m/z: 638.7 1/2[M+2H] +。
步驟7：化合物73的合成
將73-6 (100 mg) 加入到10 mL單口瓶中，加入2 mL DCM，加入2 mL三氟乙酸，室溫下反應1h。旋乾後，經pre-HPLC純化得到化合物73（51.4 mg）。ESI-MS m/z: 616.4 1/2[M+2H] +。
1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6) δ 9.21 (s, 1H), 8.99 (s, 1H), 8.57 (s, 1H), 8.53 – 8.48 (m, 1H), 7.80 – 7.72 (m, 3H), 7.45 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.37 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 7.32 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 7.03 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 6.88 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 5.31 (t, J = 8.3 Hz, 1H), 5.22 – 5.10 (m, 1H), 4.93 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 4.74 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 4.40 (t, J = 8.1 Hz, 1H), 4.36 – 4.23 (m, 4H), 4.04 (dd, J = 27.4, 13.5 Hz, 1H), 3.81 – 3.69 (m, 1H), 3.70 – 3.49 (m, 1H), 2.45 (d, J = 3.9 Hz, 3H), 2.40-2.21 (m, 9H), 2.19 – 1.93 (m, 5H), 1.81 – 1.64 (m, 6H), 1.59 – 1.47 (m, 5H), 1.38 (d, J = 7.0 Hz, 3H), 1.17 (d, J = 12.1 Hz, 4H), 1.08 (d, J = 6.5 Hz, 3H), 0.85 (t, J = 6.9 Hz, 1H), 0.76 – 0.70 (m, 6H), 0.64 (s, 2H), 0.40 (s, 2H).
實施例75：化合物（2S，4R）-1-（（S）-2-（4-（4-（7-（7-（8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基）-8-氟-4-（（R）-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基）吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基）氧基）甲基）環丙基）甲基）-2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷-2-基）苯基）-1H-1,2,3-三唑-1-基）-3-甲基丁醯基）-4-羥基-N-（（S）-1-（4-（4-甲基噻唑-5-基）苯基）乙基）吡咯烷-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物75-1的合成
把2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯( 3.00g) 、（（4-溴苯基）乙炔基）三甲基矽烷( 5.03g) 、三(二亞苄基丙酮)二鈀 ( 2.43g) 、1,1'-聯萘-2,2'-雙二苯膦 ( 3.30g) 、碳酸銫 ( 12.96g) 加到甲苯 ( 30.00mL ) 中，置換氮氣，在90℃反應7h。把反應液過濾，濾餅用DCM洗滌，濃縮濾液，柱層析（PE:EA=93%:7%）分離得到化合物75-1 (1.40 g ,26.50% )。ESI-MS m/z: 398.28 [M+H] +。
步驟2：化合物75-2的合成
把化合物75-1 ( 1400.00mg) 、碳酸鉀 ( 1456.26mg) 加到甲醇 ( 20.00mL ) 中，在室溫下反應16h。將反應液濃縮，用DCM稀釋，過濾，濾餅用DCM洗滌，將濾液濃縮，柱層析分離（PE:EA=90%:10%）得到化合物75-2（650.00 mg，56.69%）。ESI-MS m/z: 327.25 [M+H] +。
步驟3：化合物75-3的合成
把化合物M29 ( 200.00mg) 、化合物75-2 ( 286.02mg) 、抗壞血酸鈉 ( 216.98mg ) 、硫酸銅 ( 69.93mg) 加到四氫呋喃 ( 2.00mL ) 、水 ( 2.00mL ) 和叔丁醇 ( 2.00mL ) 中，在室溫下反應3h。向反應液加50mL水，用DCM萃取兩遍，無水硫酸鈉乾燥，柱層析分離（DCM:MeOH=95%:5%）得化合物75-3 (230 mg , 67.05% ) 。ESI-MS m/z: 783.59 [M+H] +。
步驟4：化合物75-4的合成
把化合物75-3 ( 230.00mg) 、三氟乙酸 ( 1.00mL ) 依次加到二氯甲烷 ( 2.00mL ) 中，在室溫下反應1h。向反應液中加入飽和碳酸氫鈉水溶液40mL調鹼，用DCM萃取兩遍，無水硫酸鈉乾燥，柱層析分離（DCM:MeOH=90%:10%）得化合物75-4 ( 129.00mg , 64.32% ) 。ESI-MS m/z: 683.49 [M+H] +。
步驟5：化合物75-5的合成
把化合物75-4 ( 120.00mg)、化合物M28 ( 104.13mg)、1.0M氯化鋅的四氫呋喃溶液 ( 0.35mL) 加到甲醇 ( 3.00mL ) 和1,2-二氯乙烷 ( 3.00mL ) 中，在40℃反應2h，再加入氰基硼氫化鈉 ( 55.20mg) ， 40℃反應3h。將反應液濃縮，加30mL水，用DCM萃取兩遍，無水硫酸鈉乾燥，柱層析分離（DCM:MeOH=90%:10%）得化合物75-5 ( 110.00mg , 49.71% )。ESI-MS m/z:630.71  1/2[M+2H] +。
步驟6：化合物75-6的合成
把化合物75-5 ( 110.00mg) 、三氟乙酸 ( 1.50mL ) 加入二氯甲烷 ( 3.00mL ) 中，在室溫下反應1h。將反應液濃縮後經Pre-HPLC分離純化得化合物75（26.10 mg，23.43%）。ESI-MS m/z: 608.68 1/2[M+2H] +。
1H NMR (500 MHz, Methanol- d 4) δ 9.21 (d, J= 5.5 Hz, 1H), 8.87 (d, J= 6.9 Hz, 1H), 8.25 (s, 1H), 7.67 (dd, J= 9.0, 5.8 Hz, 1H), 7.62 (d, J= 8.5 Hz, 2H), 7.49 – 7.35 (m, 4H), 7.30 (d, J= 2.6 Hz, 1H), 7.24 (t, J= 9.3 Hz, 1H), 7.06 (t, J= 2.4 Hz, 1H), 6.51 (d, J= 8.7 Hz, 2H), 5.30 (d, J= 10.4 Hz, 1H), 5.05 (q, J= 7.0 Hz, 1H), 4.56 – 4.40 (m, 5H), 4.25 (t, J= 14.4 Hz, 1H), 3.92 (dd, J= 11.0, 3.9 Hz, 1H), 3.85 (d, J= 11.1 Hz, 1H), 3.69 – 3.52 (m, 5H), 3.51 – 3.41 (m, 1H), 2.67 – 2.36 (m, 11H), 2.25 – 2.13 (m, 3H), 2.10 – 1.94 (m, 2H), 1.89 – 1.74 (m, 7H), 1.53 (d, J= 7.0 Hz, 2H), 1.35 – 1.24 (m, 8H), 1.14 (dd, J= 15.1, 6.5 Hz, 3H), 0.83 – 0.79 (m, 5H), 0.73 (s, 2H), 0.52 (s, 2H).
實施例79：化合物（2S，4R）-1-（（R）-2-（3-（2-（1-（2-（（7-（8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基）-8-氟-4-（（R-）-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基）吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基）氧基）乙基）呱啶-4-基）乙氧基）異惡唑-5-基）-3-甲基丁醯基）-4-羥基-N-（（（S）-1-（4-（4-甲基噻唑-5-基）苯基）乙基）吡咯烷-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物79-1的合成
將2-（3-羥基異惡唑-5-基）-3-甲基丁酸甲酯（500mg）、4-（2-溴乙基）呱啶-1-甲酸叔丁酯（1.03g）、碳酸鉀 ( 1.04g )溶於N,N-二甲基甲醯胺 ( 10mL )中， 50℃反應2小時。反應完畢後，加水稀釋，乙酸乙酯萃取，有機相用飽和食鹽水洗滌三次，經柱層析（石油醚/乙酸乙酯）進行純化，得到化合物79-1（920mg）。ESI-MS m/z:433.22 [M+Na] +。
步驟2：化合物79-2的合成
將化合物79-1（920mg）溶於甲醇（10mL）和水（2mL）中，加入氫氧化鋰（268mg），25℃反應1小時。反應完畢後，加檸檬酸調至pH=4，加入二氯甲烷/異丙醇（10:1）萃取三次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，得到化合物79-2（883mg）。ESI-MS m/z:297.31 [M+H-100] +。
步驟3：化合物79-3的合成
將化合物79-2（883 mg）、M29-2（775mg）、HATU（1.27g）、N,N-二異丙基乙胺 ( 1.1mL)溶於N,N-二甲基甲醯胺 ( 10mL )中，25℃反應1小時。反應完畢後，加水稀釋，乙酸乙酯萃取，有機相用飽和食鹽水洗滌，經柱層析（二氯甲烷/甲醇）純化，手性柱拆分得到化合物79-3（263mg）。ESI-MS m/z:710.53 [M+H] +。
步驟4：化合物79-4的合成
將化合物79-3（263 mg）溶於二氯甲烷 ( 5mL )中，加入4M氯化氫的二氧六環溶液（1mL )，25℃反應20分鐘。反應完畢後，加水溶解，用碳酸氫鈉溶液中和，加入二氯甲烷/異丙醇（10:1）萃取，乾燥，濃縮，得到化合物79-4（203 mg）。ESI-MS m/z:610.41 [M+H] +。
步驟5：化合物79-的合成
將化合物79-4（ 100mg）、M33（83mg）、冰醋酸 ( 49mg )溶於二氯甲烷（5mL）和異丙醇（0.5mL）中， 25℃反應20分鐘。再加入2-甲基吡啶-N-甲硼烷（87mg），25℃反應1小時。反應完畢後，加入碳酸氫鈉溶液淬滅，用二氯甲烷/異丙醇（10:1）萃取，濃縮，經柱層析（二氯甲烷/甲醇）及Pre-TLC純化，得到化合物79（32.5mg）。ESI-MS m/z:552.18 1/2[M+2H] +。
1H NMR (500 MHz, DMSO- d 6) δ 10.00 (s, 1H), 9.26 (s, 1H), 8.99 (d, J= 2.7 Hz, 1H), 8.43 (d, J= 7.4 Hz, 1H), 7.77 (dd, J= 9.1, 6.0 Hz, 1H), 7.48 – 7.41 (m, 2H), 7.39 – 7.32 (m, 4H), 7.29 (s, 1H), 7.05 (s, 1H), 6.68 (s, 1H), 6.07 (s, 1H), 5.15 – 5.13 (m, 1H), 4.91 (p, J= 7.2 Hz, 1H), 4.82 – 4.65 (m, 3H), 4.43 – 4.31 (m, 2H), 4.30 – 4.25 (m, 1H), 4.21 – 4.17 (m, 2H), 4.10 (dd, J= 25.0, 13.4 Hz, 1H), 3.70 (dd, J= 10.6, 4.4 Hz, 1H), 3.64 (d, J= 10.0 Hz, 2H), 3.58 – 3.50 (m, 2H), 3.49 – 3.39 (m, 2H), 3.10 – 2.95 (m, 2H), 2.46 (s, 3H), 2.39 – 2.29 (m, 1H), 2.28 – 2.08 (m, 3H), 2.05 – 1.97 (m, 3H), 1.92 – 1.85 (m, 2H), 1.81 – 1.77 (m, 1H), 1.76 (s, 3H), 1.72 – 1.63 (m, 6H), 1.45 (d, J= 7.0 Hz, 1H), 1.37 (d, J= 7.0 Hz, 3H), 1.17 (d, J= 11.6 Hz, 3H), 0.95 (d, J= 6.5 Hz, 3H), 0.86 – 0.80 (m, 1H), 0.79 (d, J= 6.7 Hz, 2H), 0.74 (q, J= 7.7 Hz, 3H).
實施例80：化合物（2S，4R）-1-（R）-2-（3-（1-（7-（8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基）-8-氟-4-（（R）-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基）吡啶[4,3-d]嘧啶-2-基）氧基）乙基）呱啶-4-基）甲氧基）異惡唑-5-基）-3-甲基丁醯基）-4-羥基-N-（（S）-1-（4-（4-甲基噻唑-5-基）苯基）乙基）吡咯烷-2-甲醯胺的合成
在反應瓶中加入中間體M33( 30 mg ) ，中間體M35 ( 35.15mg) ，二氯甲烷 ( 1.00mL )，異丙醇 ( 0.10mL )，醋酸 ( 0.02mL) ，室溫反應10min後加入二甲基吡啶硼烷 ( 31.27mg ) ，室溫反應1 h。加碳酸氫鈉水溶液調pH=8，DCM萃取，乾燥，濃縮。Pre-HPLC分離，得到化合物80 (12 mg)。ESI-MS m/z: 545.19  1/2[M+2H] +。
1H NMR (500 MHz, Methanol-d 4) δ 8.99 (t, J= 75.2 Hz, 1H), 8.66 (s, 1H), 7.92 (d, J= 6.7 Hz, 1H), 7.61 – 7.46 (m, 1H), 7.35 (s, 4H), 7.28 (s, 1H), 7.18 (m, 2H), 5.73 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 5.05 (td, J= 7.1, 2.3 Hz, 1H), 4.76 – 4.37 (m, 5H), 4.35 – 4.18 (m, 2H), 3.99 (m, 3H), 3.65 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 3.45 – 3.34 (m, 2H), 3.28 – 3.05 (m, 5H), 2.85 (s, 2H), 2.49 (s, 3H), 2.38 – 2.07 (m, 8H), 2.01 (d, J= 4.5 Hz, 5H), 1.70 (d, J= 12.7 Hz, 4H), 1.52 – 1.46 (m, 4H), 0.99 (d, J= 6.3 Hz, 3H), 0.87 – 0.74 (m, 6H).
實施例88 化合物（（3R，7aR）-7a-（（（7-（8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基）-8-氟-4-（（R）-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基）吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基）氧基）甲基）六氫-1H-吡咯嗪-3-基）甲基2-（（（S）-1-（（2S，4R）-4-羥基-2-（（（（S）-1-（4-（4-甲基噻唑-5-基）苯基）乙基）胺基甲醯基）吡咯烷-1-基）-3,3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基）胺基甲醯）-7-氮雜螺[3.5]壬-7-羧酸酯的合成
步驟1：化合物88-1的合成
將（R） -1-（2,7-二氯-8-氟吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基）-3-甲基呱啶-3-醇（300mg）溶於2mL THF中，氮氣保護，加入NaH (72mg)，然後加入（（3R，7aR）-3-（（叔丁基二甲基甲矽烷基）氧基）甲基）四氫-1H-吡咯嗪-7a（5H）-基）甲醇（259mg）的THF（1mL）溶液， 25℃下攪拌2h。LC-MS監測反應完成。向反應液緩慢加入10 mL 飽和氯化銨溶液淬滅，EA萃取3次，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後經柱層析分離純化得淡黃色固體315 mg，即化合物88-1。ESI-MS m/z: 580 [M+H] +。
步驟2：化合物88-2的合成
將化合物88-1（315 mg），2-（8-乙基-7-氟-3-（甲氧基甲氧基）萘-1-基）-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼烷（187 mg），磷酸鉀(340 mg)，CataCXium A Pd G3(39 mg)溶於5 mL二氧六環和1mL 水中，抽換氮氣保護，90℃反應3 h，LCMS監測反應完成。向反應液中加入20.0 mL水，用EA萃取3次，每次30mL，合併有機相，飽和食鹽水洗滌，硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮有機相，經柱層析分離純化得淡黃色固體146 mg，即化合物88-2。ESI-MS m/z: 778[M+H] +。
步驟3：化合物88-3的合成
將化合物88-2（146 mg）溶於3 mL DCM中，然後加入1.5 mL 三乙胺三氫氟酸鹽，室溫反應2 h，LCMS監測反應完成。向反應液中加入10.0 mL水，用DCM:MeOH=10:1的萃取液萃取，合併有機相，飽和食鹽水洗滌，硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮有機相，經柱層析分離純化得淡黃色固體80 mg，即化合物88-3。
步驟4：化合物88-4的合成
將化合物88-3 (43mg）溶於3 mL THF中，然後加入14 mg CDI，40℃反應1 h，LC-MS監測中間體，然後加入M15（58 mg），80℃攪拌12h，LC-MS監測反應完成。加入5.00 mL甲醇淬滅，濃縮有機相，經柱層析分離純化得淡黃色固體29 mg，即化合物88-4。ESI-MS m/z: 643 1/2[M+2H] +。
步驟5：化合物88的合成
將化合物88-4（29 mg）溶於3 mL DCM中，然後加入1 mL TFA，室溫反應30 min，LCMS監測反應完成。LCMS監測反應完成。將反應液直接濃縮，製備液相分離，得淡黃色粉末13.6 mg，即化合物88。
ESI-MS m/z: 621 1/2[M+2H] +。 1H NMR (500 MHz, Methanol-d 4) δ 9.29 (s, 1H), 8.92 (s, 1H), 7.70-7.67 (m, 1H),7.43 (q, J= 8.2 Hz, 4H), 7.32 – 7.24 (m, 2H), 7.06-7.05 (m, 1H), 5.03 – 4.98 (m, 1H), 4.73 (d, J= 12.2 Hz, 1H), 4.67-4.60 (m, 3H), 4.57 – 4.48 (m, 2H), 4.43(s, 1H), 4.39– 4.28 (m, 3H), 3.87 (d, J= 10.9 Hz, 1H), 3.76-3.73 (m,1H), 3.67 – 3.53 (m, 2H), 3.45 – 3.40 (m, 3H), 3.17-3.16 (m, 1H), 2.48-2.35 (m, 6H), 2.24-2.17 (m, 5H), 2.14 – 2.01 (m, 7H), 1.99 – 1.86 (m, 4H), 1.82-1.80 (m, 3H), 1.61(s, 3H), 1.51-1.49(m, 5H), 1.33-1.29 (m, 7H), 1.02 (s, 9H), 0.84-0.78 (m, 3H).
實施例89  化合物5-（7-（8-乙炔基-7-氟-3-羥基萘-1-基）-8-氟-2-（1-（4-（4-（（S）-1-（（2S，4R）-4-羥基-2-（（（S）-1-（4-（4-甲基噻唑-5-基）苯基）乙基）胺基甲醯基）吡咯烷-1-基）-3,3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基）胺基甲醯基）苯氧基）甲基）呱啶-1-基）甲基環丙基）甲氧基）吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基）-N，N-二甲基-5,6,7,8-四氫-4H-吡唑[1,5-a][1,4]二氮雜-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物89-1的合成
-40 ℃下向中間體化合物M27（270 mg）的DCM（5 mL）溶液中加入DIPEA（0.83 mL）和2,4,7-三氯-8-氟吡啶并[4,3-d]嘧啶（255 mg），讓反應在該溫度下攪拌1 h。反應結束後濃縮反應體系，濃縮物經柱層析純化（0-4% MeOH/DCM）得到化合物89-1（416 mg）。ESI-MS m/z: 424.3 [M+H] +。
步驟2：化合物89-2的合成
室溫下向化合物89-1（416 mg）的DMF（5 mL）溶液中加入1,1-環丙烷二甲醇（150 mg）Cs 2CO 3（639 mg）以及DABCO（22 mg），讓反應在該溫度下攪拌12 h。反應結束後向反應體系加入EA和水，水相再用EA萃取兩次，合併有機相，有機相用飽和食鹽水洗滌三次後經無水硫酸鈉乾燥，濃縮，濃縮物經柱層析純化（0-6% MeOH/DCM）得到化合物89-2（220 mg）。ESI-MS m/z: 490.3 [M+H] +。
步驟3：化合物89-3的合成
室溫下將化合物89-2（220 mg），M10（（2-氟-6-（甲氧基甲氧基）-8-（4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧基硼烷-2-基）萘-1-基）乙炔基）三異丙基矽烷（335 mg），cataCXium A Pd G3（33 mg）以及K 3PO 4（286 mg）加入50 mL單口瓶中，然後加入THF（5 mL）和H 2O（1 mL），體系置換氮氣後,在70 ℃下攪拌1 h。反應結束後向反應體系加入EA和飽和食鹽水，水相再用EA萃取一次，合併有機相，有機相經無水硫酸鈉乾燥後濃縮，濃縮物經製備型薄層色譜純化（8% MeOH/DCM）得到化合物89-3（196 mg）。ESI-MS m/z: 840.7 [M+H] +。
步驟4：化合物89-4的合成
室溫下向化合物89-3（196 mg）的DCM（5 mL）溶液中加入DMP（148 mg），讓反應在該溫度下攪拌3 h。反應結束後向反應體系加入飽和亞硫酸鈉溶液淬滅反應，然後加入適量DCM萃取分液，水相再用DCM萃取兩次，合併有機相，有機相用飽和食鹽水洗滌一次後經無水硫酸鈉乾燥，濃縮，濃縮物經柱層析純化（0-5% MeOH/DCM）得到化合物89-4（180 mg）。ESI-MS m/z: 838.7 [M+H] +。
步驟5：化合物89-5的合成
室溫下向化合物89-4（180 mg）和M26（156 mg）的MeOH（5 mL）溶液中加入ZnCl 2（0.2 mL），讓體系在室溫下攪拌1 h。然後向體系中加入NaBH 3CN（67 mg），讓反應在40℃下攪拌過夜。反應結束後向反應體系加入飽和碳酸氫鈉溶液淬滅反應，然後加入混合溶劑（DCM/MeOH = 9:1）萃取分液，水相再用混合溶劑萃取兩次，合併有機相，有機相經無水硫酸鈉乾燥後濃縮，濃縮物經製備型薄層色譜純化（10% MeOH/DCM）得到化合物89-5（23 mg）。ESI-MS m/z: 742.5 1/2[M+2H] +。
步驟6：化合物89-6的合成
室溫下向化合物89-5（23 mg）的DCM（1 mL）溶液中加入CsF（47 mg），在該溫度下攪拌3 h。反應結束後向反應體系加入EA和飽和食鹽水進行萃取分液，有機相再飽和食鹽水洗滌三次，有機相經無水硫酸鈉乾燥，濃縮，濃縮物經製備型薄層色譜純化（11% MeOH/DCM）得到化合物89-6（17 mg）。ESI-MS m/z: 664.3 1/2[M+2H] +。
步驟7：化合物89的合成
室溫下向化合物89-6（17 mg）的DCM（2 mL）溶液中加入三氟化硼乙醚（0.4 mL），在該溫度下攪拌1 h。反應結束後將反應體系倒入冷卻的飽和碳酸鈉溶液中，然後用混合溶劑（DCM/MeOH = 9:1）萃取三次，合併有機相，有機相經無水硫酸鈉乾燥後濃縮，濃縮物經製備型薄層色譜純化（12% MeOH/DCM）得到化合物89（7 mg）。ESI-MS m/z: 642.8 1/2[M+2H] +。
1H NMR (500 MHz, Methanol-d 4) δ 9.12 (s, 1H), 8.93 – 8.83 (m, 1H), 7.85 (dd, J= 9.1, 5.7 Hz, 1H), 7.79 – 7.75 (m, 2H), 7.46 – 7.36 (m, 4H), 7.36 – 7.33 (m, 1H), 7.31 (t, J= 8.9 Hz, 1H), 7.22 – 7.19 (m, 1H), 6.97 – 6.92 (m, 2H), 6.74 (s, 1H), 5.36 – 5.28 (m, 1H), 5.20 (d, J= 16.1 Hz, 1H), 5.02 (q, J= 6.8 Hz, 1H), 4.63 – 4.53 (m, 3H), 4.51 – 4.32 (m, 5H), 3.95 (d, J= 10.9 Hz, 1H), 3.88 – 3.77 (m, 3H), 3.32 (s, 3H), 3.06 (s, 3H), 2.48 (s, 3H), 2.44 – 2.38 (m, 2H), 2.20 (dd, J= 19.4, 12.0 Hz, 2H), 2.06 – 1.94 (m, 2H), 1.91 – 1.81 (m, 3H), 1.52 (d, J= 7.0 Hz, 3H), 1.31 – 1.27 (m, 9H), 1.11 (s, 9H), 0.77 (s, 2H), 0.57 (s, 2H).
實施例90 化合物（3R，7aR）-7a-（（7-（8-乙炔基-7-氟）-3-羥基萘-1-基）-8-氟-4-（1,4-氧雜環戊烷-4-基）吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基）氧）甲基）六氫-1H-吡咯嗪-3-基）甲基2-（（（S）-1-（（2S，4R）-4-羥基-2-（（（S）-1-（4-（4-甲基噻唑-5-基）苯基）乙基）胺基甲醯基）吡咯烷-1-基）-3,3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基）胺基甲醯基）-7-氮雜螺[3.5]壬-7-羧酸酯的合成
步驟1：化合物90-1的合成
將2,4,7-三氯-8-氟吡啶并[4,3-d]嘧啶（1g）溶於10mL DCM中，加入DIPEA(1.96mL)，置於冰浴中，然後滴加入高嗎啉鹽酸鹽（1 g）的DCM（3 mL）溶液，插入氮氣球，0℃下攪拌0.5 h。LC-MS監測反應完成。向反應液加入10 mL 水，DCM萃取3次，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後經柱層析分離純化得淡黃色固體1.26 g，即化合物90-1。ESI-MS m/z: 317 [M+H] +。
步驟2：化合物90-2的合成
將（（3R，7aR）-3-（（叔丁基二甲基甲矽烷基）氧基）甲基）四氫-1H-吡咯嗪-7a（5H）-基）甲醇（1.08g）溶於4mL THF中，氮氣保護，加入NaH (230mg)，室溫攪拌0.5 h，然後加入化合物90-1（600 mg）的THF（2mL）溶液，室溫下攪拌0.5 h。LC-MS監測反應完成。向反應液緩慢加入10 mL 飽和氯化銨溶液淬滅，EA萃取3次，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後經柱層析分離純化得淡黃色固體790 mg，即化合物90-2。ESI-MS m/z: 566 [M+H] +。
步驟3：化合物90-3的合成
將化合物90-2（790 mg），（（2-氟-6-（甲氧基甲氧基）-8-（4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧基硼烷-2-基）萘-1-基）乙炔基）三異丙基矽烷（537 mg），磷酸鉀(887mg)，CataCXium A Pd G3(51 mg)溶於8 mL二氧六環和1.6mL 水中，抽換氮氣保護，90℃反應3 h，LCMS監測反應完成。向反應液中加入20.0 mL水，用EA萃取3次，每次30mL，合併有機相，飽和食鹽水洗滌，硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮有機相，經柱層析分離純化得淡黃色固體620 mg，即化合物90-3。ESI-MS m/z: 916[M+H] +。
步驟4：化合物90-4的合成
將化合物90-3（620 mg）溶於6 mL DCM中，然後加入3 mL 三乙胺三氫氟酸鹽，室溫反應2 h，LCMS監測反應完成。向反應液中加入20.0 mL水，用DCM:MeOH=10:1的萃取液萃取，合併有機相，飽和食鹽水洗滌，硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮有機相，經柱層析分離純化得淡黃色固體500 mg，即化合物90-4。
步驟5：化合物90-5的合成
將化合物90-4 (89 mg）溶於3 mL THF中，然後加入23 mg CDI，40℃反應1 h，LC-MS監測中間體，然後加入中間體化合物M15（99mg），80℃攪拌12h，LC-MS監測反應完成。加入5.00 mL甲醇淬滅，濃縮有機相，經柱層析分離純化得淡黃色固體101mg，即化合物90-5。ESI-MS m/z: 712 1/2[M+2H] +。
步驟6：化合物90-6的合成
化合物90-5 (101mg) 溶於3 mL DMF中，然後加入CsF（108mg），室溫反應1 h，LCMS監測反應完成。水和乙酸乙酯萃取，合併有機相，硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮後透過柱層析分離純化得到70 mg淡黃色固體，即化合物90-6。ESI-MS m/z: 634 1/2[M+2H] +。
步驟7：化合物90的合成
將化合物90-6（70mg）溶於3 mL DCM中，然後加入1.5 mL三氟化硼乙醚溶液，室溫反應30 min，LCMS監測反應完成。將反應液滴加入碳酸鈉水溶液，DCM:異丙醇=10：1萃取，合併有機相，硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，透過製備液相分離得黃色粉末33.2 mg，即化合物90。ESI-MS m/z: 612 1/2[M+2H] +。
1H NMR (500 MHz, Methanol-d 4)  δ 9.18 (d, J= 5.3 Hz, 1H), 8.93(s, 1H), 7.90 – 7.87 (m, 1H), 7.45 – 7.33 (m, 6H), 7.25 (d, J= 2.6 Hz, 1H), 4.99 (q, J= 6.9 Hz, 1H), 4.76 – 4.71 (m, 2H), 4.64 – 4.54 (m, 3H), 4.48-4.43 (m, 2H), 4.36 – 4.26 (m, 6H), 4.07 (t, J= 4.9 Hz, 2H), 3.89 – 3.86 (m, 3H), 3.77-3.74 (m, 1H), 3.56 (d, J= 11.9 Hz, 1H), 3.46-3.41(m, 4H), 3.16(s, 1H), 2.48(s, 3H), 2.42-2.34 (m, 2H), 2.22 – 2.11 (m, 5H), 2.09-1.93(m, 10H), 1.60(s, 3H), 1.50 (d, J= 7.4 Hz, 5H), 1.33 – 1.28 (m, 2H), 1.01 (s, 9H).
實施例92：化合物（2S，4R）-1-（(R)-2-（3-（（4-（（1-（（7-（8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基）-8-氟-4-（(R)-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基）吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基）氧基）甲基）環丙基）甲基）呱嗪-1-基）甲基）氮雜環丁烷-1-基）異噁唑-5-基）-3-甲基丁醯基）-4-羥基-N-（(S)-1-（4-（4-甲基噻唑-5-基）苯基）乙基）吡咯烷-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物92-1的合成
3-（羥甲基）氮雜環丁烷-1-羧酸苄酯（2g），加入20 mL DCM溶解後，冰浴下分批加入戴斯-馬丁氧化劑（4.6g）。恢復至室溫攪拌3h後，對反應液進行過濾，取濾液，用適量飽和碳酸氫鈉溶液洗滌，DCM萃取一次，收集並合併有機相，有機相用飽和食鹽水洗滌一次，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得到化合物92-1粗品（2.3g）。ESI-MS m/z: 220.1 [M+H] +。
步驟2：化合物92-2的合成
將化合物92-1 (2.3g) 加入到100 mL單口瓶中，加入30 mL甲苯，加入呱嗪-1-羧酸叔丁酯 (5.86g) ，加入鈦酸四異丙酯（2.98 g），60℃反應1h，後向反應液中加入氰基硼氫化鈉（1.32g），繼續反應5小時。反應結束後，向反應液中加入矽膠濃縮，濃縮物經柱層析純化得到化合物92-2（1.6g）。ESI-MS m/z: 390.2 [M+H] +。
步驟3：化合物92-3的合成
將化合物92-2（1.6g）加入到100 mL單口瓶中，加入15 mL 甲醇，加入氫氧化鈀（1g），創造氫氣環境，室溫下攪拌17h。過濾，取濾液，濃縮即得化合物92-3（850 mg）。ESI-MS m/z: 256.2 [M+H] +。
步驟4：化合物92-4的合成
將化合物92-3 (850 mg) 加入到50 mL單口瓶中，加入中間體M34(1.4g)，加入DMA(15mL)，滴加DIPEA(1.55mL), 140℃反應2h。用水稀釋反應液，EA萃取兩次，收集並合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，濃縮物經柱層析分離純化得到化合物92-4（205 mg）。ESI-MS m/z: 437.3 [M+H] +。
步驟5：化合物92-5的合成
將化合物92-4 (205 mg) 加入到25 mL單口瓶中，加入1 mL 甲醇，1 mL 四氫呋喃，1mL水，後加入氫氧化鋰（24mg），室溫下反應30min。濃縮反應液，後加水稀釋，用飽和碳酸氫鈉溶液調節pH至5，用二氯甲烷：異丙醇（5：1）溶液萃取兩次，收集並合併有機相，飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得到化合物92-5（150 mg）。ESI-MS m/z: 423.3 [M+H] +。
步驟6：化合物92-6的合成
將化合物92-5（150 mg）、M29-2（140mg）、HATU（200mg）、N,N-二異丙基乙胺 ( 0.37mL)溶於N,N-二甲基甲醯胺 ( 5.00mL )中，25℃反應1小時。反應完畢後，加入乙酸乙酯與水萃取，有機相用飽和食鹽水洗滌，經柱層析（二氯甲烷/甲醇）純化，手性柱拆分得到化合物92-6（47mg）。ESI-MS m/z:736.4 [M+H] +。
步驟7：化合物92-7的合成
將化合物92-6（43 mg）溶於二氯甲烷 ( 5mL )中，加入三氟乙酸（1mL )，25℃反應20分鐘。反應完畢後，濃縮，加水稀釋，用飽和碳酸氫鈉溶液調節pH至8~9，加入二氯甲烷/異丙醇（10:1）萃取，無水硫酸鈉乾燥，濃縮，得到化合物92-7（35 mg）。ESI-MS m/z:636.3 [M+H] +。
步驟8：化合物92-8的合成
將化合物92-7（35 mg）加入到25 mL單口瓶中，加入1 mL 甲醇，加入M28（50 mg），加入0.1 mL 氯化鋅（1 mol/L in THF），室溫下攪拌1h。加入氰基硼氫化鈉（25 mg），50℃下攪拌3h。用飽和氯化銨溶液淬滅，EA萃取兩次，收集並合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得到化合物92-8（100 mg）。ESI-MS m/z: 607.8 1/2[M+2H] +。
步驟9：化合物92的合成
將92-8 (100 mg) 加入到10 mL單口瓶中，加入2 mL DCM，加入1 mL三氟乙酸，室溫下反應1h。旋乾後，經pre-HPLC純化得到92（18.3 mg）。ESI-MS m/z: 585.3 1/2[M+2H] +。
實施例93：化合物（2S，4R）-1-（（S）-2-（4-（（1-（（1-（（7-（8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基）-8-氟-4-（（R）-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基）吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基）氧基）甲基）環丙基）甲基）呱啶-4-基）氧基）甲基）苯基）-1H-1,2,3-三唑-1-基）-3-甲基丁醯基）-4-羥基-N-（（（S）-1-（4-（4-甲基噻唑-5-基）苯基）乙基）吡咯烷-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物93-1的合成
化合物 N-叔丁氧羰基-4-羥基呱啶(300.00mg) 和1-(溴甲基)-4-乙炔基苯(377.98mg)加入四氫呋喃(5.00mL)，0℃下分批加入氫化鈉(149.06mg , 60%)。反應升至50℃攪拌3小時。LCMS監測反應完成。加入H 2O稀釋，EA萃取兩次，有機層用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥。經柱層析純化得淡黃色固體(249.00 mg, 收率52.96%)。即化合物93-1。
步驟2：化合物93-2的合成
化合物M29(280.00mg) 和93-1(251.47mg)加入四氫呋喃(6.00mL)，叔丁醇(3.00mL)和水(3.00mL)。再加入硫酸銅(88.10mg)和抗壞血酸鈉(315.91mg)。20℃攪拌4小時。LCMS監測反應完成。減壓濃縮，經柱層析純化得淡黃色固體(306.00 mg, 收率64.63%)。即化合物93-2。
步驟3：化合物93-3的合成
化合物93-2(306.00mg)加入到25mL單口瓶中，加入二氯甲烷 (5.00mL)和氯化氫的二氧六環溶液(2.00mL)。20℃攪拌0.5小時。LCMS監測反應完成。減壓濃縮，再用飽和NaHCO 3溶液調至pH=8，二氯甲烷/異丙醇=5/1萃取兩次，有機層用飽和食鹽水洗滌再用無水硫酸鈉乾燥。粗品直接用於下一步。得淡黃色固體(278.00 mg)。即化合物93-3。
步驟4：化合物93-4的合成
化合物M28(80.00mg)和93-3(108.84mg)加入到25 mL單口瓶中，加入甲醇(2.00mL)，再加入氯化鋅(0.20mL , 1.00mol/L)，反應升至40℃攪拌2小時。最後加入氰基硼氫化鈉(29.69mg)，40℃攪拌12小時。LCMS監測反應完成。減壓濃縮，經柱層析純化得淡黃色固體(77.00 mg , 收率45.68%)。即化合物93-4。
步驟5：化合物93的合成
化合物93-4(77.00mg)加入到25 mL單口瓶中，加入二氯甲烷 (3.00mL)，再加入三氟乙酸(1.50mL)。20℃攪拌0.5小時。LCMS監測反應完成。減壓濃縮，粗品經Pre-HPLC製備得純品，得白色固體(33.00mg , 收率42.19%)。即化合物93。ESI-MS m/z: 603.18 1/2[M+2H] +。
1H NMR (500 MHz, Methanol- d 4) δ 9.12 (d, J= 4.0 Hz, 1H), 8.79 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 8.39 (s, 1H), 7.73 (d, J= 7.8 Hz, 2H), 7.59 (dd, J= 9.1, 5.8 Hz, 1H), 7.34 (h, J= 8.2 Hz, 6H), 7.22 (d, J= 2.7 Hz, 1H), 7.16 (t, J= 9.3 Hz, 1H), 6.99 (t, J= 2.8 Hz, 1H), 5.28 (d, J= 10.3 Hz, 1H), 4.97 (d, J= 7.0 Hz, 2H), 4.48 (d, J= 9.5 Hz, 3H), 4.40 (s, 2H), 4.36 (s, 2H), 4.16 (t, J= 14.8 Hz, 1H), 3.87 – 3.78 (m, 2H), 3.60 – 3.48 (m, 1H), 3.39 (t, J= 11.4 Hz, 2H), 2.85 (d, J= 11.4 Hz, 2H), 2.56 (dq, J= 10.2, 6.7 Hz, 1H), 2.39 (d, J= 11.6 Hz, 4H), 2.34 (dd, J= 12.9, 5.7 Hz, 1H), 2.16 – 2.08 (m, 4H), 1.93 – 1.89 (m, 1H), 1.89 – 1.83 (m, 2H), 1.77 (d, J= 12.6 Hz, 1H), 1.69 (q, J= 10.9, 7.5 Hz, 2H), 1.61 – 1.49 (m, 3H), 1.45 (d, J= 7.0 Hz, 2H), 1.28 – 1.24 (m, 1H), 1.20 (d, J= 14.1 Hz, 4H), 1.09 (d, J= 6.8 Hz, 3H), 0.74 (t, J= 8.0 Hz, 5H), 0.64 (s, 2H), 0.42 (s, 2H).
實施例100：化合物（2S，4R）-1-（（R）-2-（3-（（1-（1-（（（（7-（8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基）-8-氟-4-（（（R-）-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基）吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基）氧基）甲基）環丙基）甲基）-4-氟呱啶-4-基）甲氧基）異惡唑-5-基）-3-甲基丁醯基）-4-羥基-N-（（S）-1-（4-（4-甲基噻唑-5-基）苯基）乙基）吡咯烷-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物100-1的合成
將2-（3-羥基異惡唑-5-基）-3-甲基丁酸甲酯（500mg）、4-氟-4-（羥甲基）呱啶-1-甲酸叔丁酯（585mg）、三苯基膦（1.32g）、DIAD（1.02g）溶於四氫呋喃（10 mL）中， 60℃反應1小時。反應完畢後，濃縮，經柱層析（石油醚/乙酸乙酯）進行純化，得到化合物100-1（786mg）。ESI-MS m/z:315.21 [M+H-100] +。
步驟2：化合物100-2的合成
將化合物100-1（786mg）溶於甲醇（10mL）和水（2mL）中，加入氫氧化鋰（227mg），25℃反應1小時。反應完畢後，加檸檬酸調至pH=4，加入二氯甲烷/異丙醇（10:1）萃取三次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，得到將化合物100-2（683mg）。ESI-MS m/z:301.22 [M+H-100] +。
步驟3：化合物100-3的合成
將化合物100-2（300 mg）、M29-2（248mg）、HATU（427mg）、N,N-二異丙基乙胺 ( 0.37mL)溶於N,N-二甲基甲醯胺 ( 5.00mL )中，25℃反應1小時。反應完畢後，加水稀釋，乙酸乙酯萃取，有機相用飽和食鹽水洗滌，經柱層析（二氯甲烷/甲醇）純化，手性柱拆分得到化合物100-3（170mg）。ESI-MS m/z:714.54 [M+H] +。
步驟4：化合物100-4的合成
將化合物100-3（170 mg）溶於二氯甲烷 ( 5mL )中，加入4M氯化氫的二氧六環溶液（1mL )，25℃反應20分鐘。反應完畢後，用碳酸氫鈉溶液中和，加入二氯甲烷/異丙醇（10:1）萃取，乾燥，濃縮，得到化合物100-4（118 mg）。ESI-MS m/z:614.50 [M+H] +。
步驟5：化合物100-5的合成
將化合物100-4（118mg）、M28（114mg）、氯化鋅 ( 0.18mL , 1.00mol/L)溶於甲醇（10mL）中， 40℃反應2小時。再加入氰基硼氫化鈉 ( 18mg)，40℃反應8小時。反應完畢後，加入氯化銨溶液淬滅，濃縮，經柱層析（二氯甲烷/甲醇）純化，得到化合物100-5（177 mg）。ESI-MS m/z:596.27 1/2[M+2H] +。
步驟6：化合物100的合成
將化合物100-5（177 mg）溶於二氯甲烷 ( 4mL )中，加三氟乙酸 ( 1mL )，25℃反應1小時。反應完畢後，濃縮，經Pre-HPLC（C18色譜柱，A：0.05%三氟乙酸水溶液，B：乙腈，濃度梯度：20%B至75%B，11min，流速：15mL/min，254nm）分離純化，濃縮，碳酸氫鈉溶液中和，產物析出，過濾，得到化合物100（29.9 mg）。
ESI-MS m/z:574.10 1/2[M+2H] +。 1H NMR (500 MHz, Methanol- d 4) δ 9.21 – 9.19 (m, 1H), 8.87 – 9.86 (m, 1H), 7.68 – 7.65 (m, 1H), 7.46 – 7.35 (m, 4H), 7.30 – 7.27 (m, 1H), 7.26 – 7.22 (m, 1H), 7.07 – 7.04 (m, 1H), 6.03 (d, J= 3.7 Hz, 1H), 5.04 – 4.98 (m, 1H), 4.52 – 4.40 (m, 5H), 4.27 – 4.16 (m, 3H), 3.82 (dd, J= 10.9, 4.2 Hz, 1H), 3.69 – 3.64 (m, 1H), 3.63 – 3.57 (m, 1H), 3.50 – 3.41 (m, 1H), 2.93 – 2.83 (m, 2H), 2.54 – 2.43 (m, 6H), 2.39 – 2.28 (m, 3H), 2.25 – 2.09 (m, 3H), 1.97 – 1.82 (m, 5H), 1.81 – 1.72 (m, 4H), 1.57 (d, J= 7.0 Hz, 1H), 1.51 (d, J= 7.0 Hz, 2H), 1.29 – 1.25 (m, 3H), 1.04 (d, J= 6.5 Hz, 3H), 0.91 – 0.87 (m, 3H), 0.83 – 0.78 (m, 3H), 0.74 – 0.70 (m, 2H), 0.54 – 0.46 (m, 2H).
實施例104： 化合物（2S，4R）-1-（（R）-2-（3-（1-（（1-（（7-（8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基）-8-氟-4-（（R）-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基）吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基）氧基）甲基）環丙基）甲基）呱啶-4-基）甲基）呱嗪-1-基）異噁唑-5-基）-3-甲基丁醯基）-4-羥基-N-（（S）-1-（4-（4-甲基噻唑-5-基）苯基）乙基吡咯烷-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物104-1的合成
將M36(80.0 mg)和1-叔丁氧羰基呱啶-4-甲醛 (30.0 mg)溶於二氯甲烷 (5 mL)中，滴加一滴醋酸，室溫反應1小時，然後加入氰基硼氫化鈉 (17.8 mg)，室溫反應10分鐘，LCMS監測反應完成。加入飽和碳酸氫鈉溶液 (5.0 mL)淬滅反應，向反應液中加入DCM (20 mL)，收集有機相，有機相飽和食鹽水洗一次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，得白色固體73.0 mg，即化合物104-1。ESI-MS m/z: 764.3 [M+H] +。
步驟2：化合物104-2的合成
將104-1 (73.0 mg) 溶於DCM (1 mL)和TFA (1 mL)中，室溫反應10分鐘，LCMS監測反應完成。將反應液直接濃縮，加入1 M NaOH溶液至反應液pH = 8。向反應液中加入DCM (20 mL)，收集有機相，有機相飽和食鹽水洗一次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，得白色固體55.0 mg，即化合物104-2。ESI-MS m/z: 664.1[M+H] +。
步驟3：化合物104-3的合成
將104-2(55.0 mg)和M28 (61.6 mg)溶於甲醇 (8 mL)中，加入1 M氯化鋅的乙醚溶液 (0.25 mL)，40 ℃反應1小時，然後加入氰基硼氫化鈉 (29.2 mg)，60 ℃反應8小時，LCMS監測反應完成。加入飽和碳酸氫鈉溶液 (5.0 mL)淬滅反應，向反應液中加入DCM(20 mL)，收集有機相，有機相飽和食鹽水洗一次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，得白色固體78.0 mg，即化合物104-3。ESI-MS m/z: 621.4 1/2[M+2H] +。
步驟4：化合物104的合成
將104-3 (78.0 mg) 溶於DCM (2 mL)和TFA (1 mL)中，室溫反應10分鐘，LCMS監測反應完成。將反應液直接濃縮，製備液相分離，得白色粉末15.3 mg，即化合物104。
ESI-MS m/z: 599.2 1/2[M+2H] +。
實施例105：化合物（2S，4R）-1-（R）-2-（3-（7-（8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基）-8-氟-4-（（R）-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基）吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基）氧基）甲基）環丙基）甲基）-2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷-2-基）異惡唑-5-基）-3-甲基丁醯基）-4-羥基-N-（（S）-1-（4-（4-甲基噻唑-5-基）苯基）乙基）吡咯烷-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物105-1的合成
在反應瓶中加入商業可得的2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(310.00mg)，中間體M34 ( 791.14mg )，N,N-二甲基乙醯胺 ( 6.00mL ) ，N,N-二異丙基乙胺 ( 0.68mL )，微波150℃反應1 h，加EA和水萃取，乾燥，濃縮。柱層析分離產物，得黃色固體化合物105-1（300 mg ），ESI-MS m/z: 408.24 [M+H] +。
步驟2：化合物105-2的合成
在反應瓶中加入化合物105-1（300 mg），甲醇 ( 4.00mL)，水 ( 1.00mL )，一水合氫氧化鋰 ( 185.35mg) ，室溫反應2 h。 先將溶劑濃縮，然後用稀鹽酸調pH=3，用DCM和甲醇萃取，乾燥，濃縮，得到黃色油狀物105-2（270 mg ）。ESI-MS m/z: 394.23 [M+H] +。
步驟3：化合物105-3的合成
在反應瓶中加入化合物105-2（260 mg），M29-2 4-羥基-N-1-4-（4-甲基1,3-噻唑-5-基）苯基]乙基]吡咯烷-2-甲醯胺(241 mg)，N,N-二甲基甲醯胺 (5 mL )， N,N-二異丙基乙胺 ( 0.33 mL )，攪拌下加入N,N,N′,N′-四甲基-O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲 (301 mg )，室溫反應0.5 h，加水稀釋， EA萃取，乾燥，濃縮，柱層析分離產物（DCM:MeOH=20:1），得到黃色固體310 mg ，然後再用SFC拆分，得到單一化合物105-3（105 mg ），ESI-MS m/z: 707.35 [M+H] +。
步驟4：化合物105-4的合成
在反應瓶中加入化合物105-3（105 mg），二氯甲烷(3 mL )，攪拌下加入4 M 氯化氫的二氧六環溶液 ( 0.5 mL )，室溫反應0.2 h，析出大量固體，傾去上清液，固體加甲醇溶解，加DCM稀釋，再加碳酸氫鈉水溶液調pH=8，萃取，乾燥，濃縮，得到黃色固體化合物105-4（70 mg），ESI-MS m/z: 707.35 [M+H] +。
步驟5：化合物105-5的合成
在反應瓶中加入中間體M28 (50 mg) ，化合物105-4 ( 56 mg) ，甲醇 ( 1.50mL ) ，1,2-二氯乙烷 ( 1.50mL ) ，1 M氯化鋅的乙醚溶液 ( 0.08mL ) ，40℃反應1 h然後加入氰基硼氫化鈉 ( 53.04mg )，40℃反應8 h，加入碳酸氫鈉水溶液稀釋， DCM萃取，乾燥，濃縮，用Pre-TLC分離，展開劑用DCM:胺甲醇=15:1，得到白色固體105-5（50 mg），ESI-MS m/z: 592.68  1/2[M+2H] +。
步驟6：化合物105的合成
在反應瓶中加入化合物105-5 ( 50.00mg )，二氯甲烷 ( 1.50mL )，三氟乙酸 ( 1.50mL ) ，室溫反應0.5 h，濃縮，然後Pre-HPLC分離，得到化合物105(21 mg)。
ESI-MS m/z: 570.62 1/2[M+2H] +。 1H NMR (500 MHz, CDCl 3) δ 9.32 – 9.01 (m, 1H), 8.75 – 8.50 (m, 1H), 7.58 – 7.47 (m, 1H), 7.33 (dt, J= 9.1, 4.7 Hz, 2H), 7.27 (d, J= 7.7 Hz, 4H), 7.21 – 7.10 (m, 2H), 6.85 (d, J= 126.4 Hz, 1H), 5.67 (d, J= 9.9 Hz, 1H), 4.99 – 4.90 (m, 1H), 4.76 – 4.68 (m, 1H), 4.55 (d, J= 4.8 Hz, 1H), 4.36 – 4.12 (m, 3H), 3.99 – 3.77 (m, 1H), 3.66 – 3.42 (m, 7H), 3.29 – 3.01 (m, 2H), 2.53 – 2.34 (m, 8H), 2.24 – 1.96 (m, 5H), 1.87 – 1.48 (m, 12H), 1.39 – 1.21 (m, 9H), 1.04 – 0.84 (m, 6H), 0.83 – 0.74 (m, 3H).
實施例110：化合物（3S，7aS）-7a-（（7-（8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基）-8-氟-4-（（R）-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基）吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基）氧基）甲基）-6-亞甲基六氫-1H-吡咯裡嗪-3-基）甲基 4-（5-（（R）-1-（（2S，4R）-4-羥基-2-（（S）-1-（4-（4-甲基噻唑-5-基）苯基）乙基胺基甲醯基）吡咯烷-1-基）-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基）異惡唑-3-基）呱嗪-1-羧酸酯的合成
步驟1：化合物110-1的合成
往中間體M32反應液中加入化合物M36 (73.0 mg )，20℃攪拌1小時。LCMS監測反應完成。加入H 2O稀釋，EA萃取兩次，有機層用飽和食鹽水洗滌三次，再用無水硫酸鈉乾燥。經柱層析純化得淡黃色固體(55.1 mg)。即化合物110-1。ESI-MS m/z: 635.2 1/2[M+2H] +
步驟2：化合物110的合成
將110-6 (55.1 mg) 加入DCM (2 mL)和TFA (1 mL)中，室溫反應10分鐘，LCMS監測反應完成。將反應液直接濃縮，製備液相分離，得白色粉末22.2 mg，即化合物110。
ESI-MS m/z: 613.2 1/2[M+2H] +。 1H NMR (500 MHz, Methanol-d 4) δ 9.22 (d, J= 9.5 Hz, 1H), 8.87 (s, 1H), 7.88 (s, 1H), 7.68-7.65 (m, 1H), 7.44-7.38 (m, 4H), 7.29 (d, J= 3.0 Hz, 1H), 7.24 (t, J= 4.0 Hz, 1H), 7.08-7.06 (m, 1H), 6.11 (d, J= 10.5 Hz, 1H), 5.03-5.01(m, 1H), 4.97-4.93 (m, 1H), 4.85-4.80(m, 1H), 4.50-4.49 (m, 2H), 4.19-4.08(m, 2H), 4.00-3.79 (m, 2H), 3.79-3.38 (m, 12H), 3.33-3.19 (m,4H), 3.10-3.00 (m, 1H), 2.65-2.71 (m, 1H), 2.50-2.41 (m, 4H), 2.40-2.30 (m, 2H), 2.29-1.90(m, 6H), 1.89-1.72 (m, 5H), 1.55-1.45(m, 3H), 1.40-1.20 (m, 2H), 1.10-0.79 (m, 9H)。
實施例111：化合物（2S，4R）-1-（R）-2-（3-（4-（4-（（1-（（7-（8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基）-8-氟-4-（（R）-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基）吡啶[4,3-d]嘧啶-2-基）氧基）甲基）環丙基）甲基）呱嗪-1-基）異惡唑-5-基）-3-甲基丁醯基）-4-羥基-N-（（S）-1-（4-（4-甲基噻唑-5-基）苯基）乙基）吡咯烷-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物111-1的合成
把4-[（呱啶-4-基）甲基]呱嗪-1-羧酸叔丁酯  ( 400.00mg) 、化合物M34 ( 815.16mg) 、DIPEA ( 0.70mL , 4.23mmol ) 加到DMA ( 3.00mL ) 中，在150℃下反應2h。加水50mL稀釋，用EA萃取兩遍，飽和食鹽水洗滌，柱層析分離（PE:EA=1：1）得化合物111-1（380.00 mg，57.95%）。ESI-MS m/z: 465.33 [M+H] +。
步驟2：化合物111-2的合成
把化合物111-1 ( 370.00mg) 、無水氫氧化鋰 ( 47.68mg) 加到水 ( 2.00mL ) 、甲醇 ( 2.00mL ) 和四氫呋喃 ( 2.00mL ) 中，在室溫下反應1h。加水稀釋，用1N的鹽酸水溶液調節pH=3,用DCM萃取三遍，無水硫酸鈉乾燥，濃縮幹得化合物111-2 (350 mg , 97.54% ) 。ESI-MS m/z: 451.35 [M+H] +。
步驟3：化合物111-3的合成
把化合物111-2 ( 340.00mg) 、DIPEA ( 0.62mL) 、HATU ( 373.01 mg) 、化合物M29-2 ( 250.10mg) 依次加到二氯甲烷 ( 8.00mL ) 中，在室溫下反應2h。加水，用DCM萃取，飽和食鹽水洗滌，乾燥，柱層析分離（DCM:MeOH=91%:9%）後經手性柱拆分得化合物111-3 (100 mg , 17.35% ) 。ESI-MS m/z: 764.55 [M+H] +。
步驟4：化合物111-4的合成
把化合物111-3 ( 100.00mg) 、三氟乙酸 ( 1.00mL ) 加到二氯甲烷 ( 2.00mL ) 中，在室溫下反應1h。向反應液中加入飽和碳酸氫鈉水溶液40mL調鹼，用DCM萃取兩遍，無水硫酸鈉乾燥，濃縮幹得化合物111-4 ( 80.00mg , 92.06% ) 。ESI-MS m/z: 664.49 [M+H] +。
步驟5：化合物111-5的合成
把化合物111-4 ( 80.00mg)、化合物M28 ( 71.41mg)、1.0M氯化鋅 四氫呋喃溶液 ( 0.24mL) 加到甲醇 ( 3.00mL ) 和1,2-二氯乙烷 ( 3.00mL ) 中，在40℃反應2h，再加入氰基硼氫化鈉 ( 75.72mg) ，在40℃反應3h。將反應液濃縮，加30mL水，用DCM萃取兩遍，無水硫酸鈉乾燥，柱層析分離（DCM:MeOH=90%:10%）得化合物111-5 (70.00mg , 46.83% )。ESI-MS m/z:621.24 1/2[M+2H] +。
步驟6：化合物111的合成
把化合物111-5 ( 70.00mg) 、三氟乙酸 ( 1.00mL ) 加入二氯甲烷 ( 2.00mL ) 中，在室溫下反應1h。將反應液濃縮Pre-HPLC分離純化得化合物111（25.40 mg，36.67%）。ESI-MS m/z: 599.17 1/2 [M+2H] +。
1H NMR (500 MHz, Methanol-d 4) δ 9.20 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.87 (s, 1H), 7.67 (dd, J = 8.8, 5.9 Hz, 1H), 7.46 – 7.36 (m, 4H), 7.30 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.24 (t, J = 9.3 Hz, 1H), 7.05 (s, 1H), 6.08 (s, 1H), 5.06 – 4.99 (m, 1H), 4.49 (dt, J = 10.1, 5.9 Hz, 3H), 4.45 – 4.38 (m, 2H), 4.28 – 4.20 (m, 1H), 3.84 (dd, J = 10.8, 4.1 Hz, 1H), 3.68 – 3.42 (m, 8H), 2.81 (t, J = 12.2 Hz, 2H), 2.66 – 2.29 (m, 15H), 2.18 (t, J = 11.9 Hz, 6H), 1.95 (ddd, J = 8.6, 6.6, 3.4 Hz, 1H), 1.89 – 1.68 (m, 7H), 1.58 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 1.52 (d, J = 7.0 Hz, 3H), 1.26 – 1.16 (m, 3H), 1.04 (d, J = 6.5 Hz, 3H), 0.92 – 0.86 (m, 4H), 0.82 (dd, J = 16.2, 7.6 Hz, 3H), 0.72 (s, 2H), 0.51 (s, 2H).
實施例112：化合物（2S，4R）-1-（R）-2-（3-（7-（8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基）-8-氟-4-（（R）-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基）吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基）氧基）甲基）環丙基）甲基）呱嗪-1-基）異惡唑-5-基）-3-甲基丁醯基）-4-羥基-N-（（S）-1-（4-（4-甲基噻唑-5-基）苯基）乙基）吡咯烷-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物112-1的合成
把化合物M36 ( 50.00mg)、化合物M28( 52.27mg)、1.0M氯化鋅, 四氫呋喃溶液 ( 0.18mL) 加到甲醇 ( 2.00mL ) 和1,2-二氯乙烷 ( 2.00mL ) 中，在40℃反應2h，再加入氰基硼氫化鈉 ( 27.71mg) ，在40℃反應3h。將反應液濃縮，加30mL水，用DCM萃取兩遍，無水硫酸鈉乾燥，柱層析分離（DCM:MeOH=90%:10%）得化合物112-1 (15.00mg , 14.87% )。ESI-MS m/z:572.74 1/2[M+2H] +。
步驟2：化合物112的合成
把化合物112-1 ( 15.00mg  ) 、三氟乙酸 ( 0.50mL ) 加入二氯甲烷 ( 1.00mL ) 中，在室溫下反應1h。將反應液濃縮Pre-HPLC分離純化得化合物112（8.50 mg，56.67%）。ESI-MS m/z: 550.57 1/2[M+2H] +。
實施例113：化合物（2S，4R）-1-（R）-2-（3-（3aR，6aS）-5-（1-（（7-（8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基）-8-氟-4-（（R）-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基）吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基）氧基）甲基）環丙基）甲基）六氫吡咯并[3,4-c]吡咯-2（1H）-基）異惡唑-5-基）-3-甲基丁醯基）-4-羥基-N-（（S）-1-（4-（4-甲基噻唑-5-基）苯基）乙基）吡咯烷-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物113-1的合成
化合物（3aR，6aS）-六氫吡咯并[3,4-c]吡咯-2（1H）-羧酸叔丁酯(242.60mg)加入N,N-二甲基乙醯胺(2.50mL)，再加入三乙胺(0.72mL)。反應升至120℃攪拌0.5小時。最後加入M34(500.00mg)。120℃攪拌5小時。LCMS監測反應完成。加入H 2O稀釋， EA萃取兩次，有機層用飽和食鹽水洗滌三次，再用無水硫酸鈉乾燥。經柱層析純化得淡黃色固體(212.00 mg, 收率51.86%)。即化合物113-1。
步驟2：化合物113-2的合成
化合物113-1(212.00mg) 加入四氫呋喃(2.00mL)，甲醇(2.00mL)和水(2.00mL)，一水合氫氧化鋰(113.04mg , 2.69mmol)。20℃攪拌1小時。LCMS監測反應完成。減壓濃縮，稀鹽酸調至pH=5，再用二氯甲烷/異丙醇=5/1萃取兩次，有機層用飽和食鹽水洗滌再用無水硫酸鈉乾燥。粗品直接用於下一步。得淡黃色固體(209.00 mg)。即化合物113-2。
步驟3：化合物113-3的合成
化合物113-2(201.53mg )和M29-2(160.00mg)加入到25mL單口瓶中，加入N,N-二甲基乙醯胺(3.00mL)和N,N,N′,N′-四甲基-O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲(238.63mg , 0.63mmol), N,N-二異丙基乙胺(0.40mL , 2.41mmol)。20℃攪拌0.5小時。LCMS監測反應完成。加入H 2O稀釋， EA萃取兩次，有機層用飽和食鹽水洗滌三次，再用無水硫酸鈉乾燥。粗品經SFC拆分得淡黃色固體(96.00 mg)。即化合物113-3。
步驟4：化合物113-4的合成
化合物113-3(96.00mg)加入到25mL單口瓶中，加入二氯甲烷 (2.00mL)和4M氯化氫二氧六環溶液 (1.00mL)。20℃攪拌0.5小時。LCMS監測反應完成。減壓濃縮，再用飽和NaHCO 3溶液調至pH=8，二氯甲烷/異丙醇=5/1萃取兩次，有機層用飽和食鹽水洗滌再用無水硫酸鈉乾燥。粗品直接用於下一步。得淡黃色固體(84.00 mg)。即化合物113-4。
步驟5：化合物113-5的合成
化合物M28(70.00mg)和113-4(83.99mg)加入到25 mL單口瓶中，加入甲醇(2.00mL)，再加入氯化鋅(0.18mL , 1.00mol/L)，反應升至40℃攪拌2小時。最後加入氰基硼氫化鈉(25.98mg , 0.41mmol)，50℃攪12小時。LCMS監測反應完成。減壓濃縮，經柱層析純化得淡黃色固體(88.00 mg , 收率63.72%)。即化合物113-5。
步驟6：化合物113的合成
化合物113-5(88.00mg)加入到25 mL單口瓶中，加入二氯甲烷 (4.00mL)，再加入三氟乙酸(1.50mL)。20℃攪拌0.5小時。LCMS監測反應完成。減壓濃縮，粗品經HPLC製備得純品，得白色固體(42.20mg , 收率48.01%)。即化合物113。ESI-MS m/z: 563.70  1/2[M+2H] +。
1H NMR (500 MHz, Methanol- d 4) δ 9.08 (dd, J= 7.3, 2.6 Hz, 1H), 8.77 (d, J= 6.3 Hz, 1H), 7.57 (dd, J= 9.1, 5.7 Hz, 1H), 7.39 – 7.23 (m, 5H), 7.20 (dt, J= 4.3, 2.6 Hz, 1H), 7.14 (td, J= 9.3, 4.7 Hz, 1H), 7.01 – 6.95 (m, 1H), 5.89 – 5.85 (m, 1H), 4.92 (d, J= 7.0 Hz, 1H), 4.50 (s, 2H), 4.39 (dt, J= 11.7, 4.1 Hz, 2H), 4.35 – 4.30 (m, 2H), 4.19 – 4.09 (m, 1H), 3.71 (dt, J= 10.7, 3.8 Hz, 1H), 3.58 – 3.48 (m, 2H), 3.38 – 3.31 (m, 1H), 3.25 (d, J= 6.3 Hz, 2H), 3.04 (q, J= 9.7, 8.3 Hz, 2H), 2.83 (s, 3H), 2.49 (d, J= 31.0 Hz, 3H), 2.37 (d, J= 2.0 Hz, 3H), 2.26 (dt, J= 9.7, 6.6 Hz, 1H), 2.12 – 2.02 (m, 3H), 1.87 – 1.80 (m, 1H), 1.77 – 1.72 (m, 1H), 1.67 (dt, J= 11.7, 7.0 Hz, 2H), 1.46 (dd, J= 7.0, 3.7 Hz, 2H), 1.40 (d, J= 7.0 Hz, 3H), 0.93 (dt, J= 6.6, 3.1 Hz, 3H), 0.80 – 0.77 (m, 4H), 0.76 (d, J= 6.3 Hz, 3H), 0.71 (d, J= 7.2 Hz, 2H), 0.63 (s, 2H), 0.45 (s, 2H).
實施例114：化合物(2S，4R)-1-((R)-2-(3-((1-((1-(((7-(8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)環丙基)甲基)呱啶-4-基)氧基)異惡唑-5-基)-3-甲基丁醯基)-4-羥基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物114-1的合成
將2-(3-羥基異惡唑-5-基)-3-甲基丁酸甲酯 (567.0 mg)，4-羥基呱啶-1-甲酸叔丁酯(573.0 mg)，三苯基磷 (1.12 g)溶解於THF (10 mL)中，氮氣保護，緩慢加入偶氮二甲酸二異丙酯（863 mg），60℃反應4小時。LCMS監測反應完成，向反應液中加入EA (20 mL)，飽和食鹽水洗一次，有機相無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，柱層析分離純化，得白色固體850.0 mg，即化合物114-1。ESI-MS m/z: 383.2 [M+H] +。
步驟2：化合物114-2的合成
將化合物114-1 (850.0 mg) 加入甲醇 (10 mL)和水 (2 mL)中，添加一水合氫氧化鋰 (467.0 mg)，室溫反應1小時，LCMS監測反應完成。將反應液pH值調節至3，加入EA (20 mL)，收集有機相，有機相飽和食鹽水洗一次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，得白色固體825.0 mg，即化合物114-2。ESI-MS m/z: 369.2 [M+H] +。
步驟3：化合物114-3的合成
將化合物114-2 (825.0 mg)，(2 S, 4 R)-4-羥基- N-(( S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲醯胺 (821 mg) 和HATU (1028 mg)溶解於DMF (10 mL)中，添加DIPEA (1.18 mL)，室溫反應10分鐘，LCMS監測反應完成。向反應液中加入EA (20 mL)和飽和食鹽水 (20 mL)，收集有機相，有機相無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，柱層析分離純化，得白色固體1291.0 mg，即化合物114-3。ESI-MS m/z: 682.3 [M+H] +。
步驟4：化合物114-4的合成
將化合物114-3 (1291 mg) SFC拆分，濃縮，得白色固體502 mg，即化合物114-4。ESI-MS m/z: 682.3 [M+H] +。
步驟5：化合物114-5的合成
將114-4 (502.0 mg) 加入DCM (5 mL)和TFA (2 mL)中，室溫反應10分鐘，LCMS監測反應完成。將反應液直接濃縮，加入1 M NaOH溶液至反應液pH = 8。向反應液中加入DCM (20 mL)，收集有機相，有機相飽和食鹽水洗一次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，得白色固體426 mg，即化合物114-5。ESI-MS m/z: 582.3 [M+H] +。
步驟6：化合物114-6的合成
將化合物114-5 (200.0 mg)和M28 (207 mg)溶於甲醇 (10 mL)中，加入1.0 M氯化鋅乙醚溶液 (0.52 mL)，40℃反應1小時，然後加入氰基硼氫化鈉 (64.8 mg)，60 ℃反應12小時，LCMS監測反應完成。加入飽和碳酸氫鈉溶液 (5.0 mL)淬滅反應，向反應液中加入DCM (20 mL)，收集有機相，有機相飽和食鹽水洗一次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，得白色固體310 mg，即化合物114-6。ESI-MS m/z: 579.8 1/2[M+2H] +。
步驟7：化合物114的合成
將114-6 (310 mg) 加入DCM (10 mL)和TFA (2 mL)中，室溫反應10分鐘，LCMS監測反應完成。將反應液直接濃縮，製備液相分離，得白色粉末48.0 mg，即化合物114。
ESI-MS m/z: 558.1 1/2[M+2H] +。 1H NMR (500 MHz, Methanol-d 4) δ 9.19 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.86 (s, 1H), 7.66 (dd, J = 9.0, 5.9 Hz, 1H), 7.47 – 7.35 (m, 4H), 7.29 (t, J = 2.5 Hz, 1H), 7.24 (dd, J = 12.5, 6.2 Hz, 1H), 7.07 (t, J = 2.4 Hz, 1H), 5.98 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 5.08 – 4.96 (m, 1H), 4.63 – 4.35 (m, 7H), 4.24 (t, J = 13.8 Hz, 1H), 3.86 – 3.78 (m, 1H), 3.67 – 3.39 (m, 4H), 2.87 (s, 2H), 2.57 – 2.29 (m, 9H), 2.25 – 2.10 (m, 3H), 2.02 (d, J = 5.6 Hz, 3H), 1.95 (ddd, J = 13.2, 8.7, 4.7 Hz, 1H), 1.82 (dd, J = 35.3, 10.7 Hz, 7H), 1.51 (d, J = 7.0 Hz, 4H), 1.27 (s, 2H), 1.03 (t, J = 15.0 Hz, 4H), 0.81 (dd, J = 16.3, 7.5 Hz, 4H), 0.72 (s, 3H), 0.50 (s, 2H).
實施例115：化合物（2S，4R）-1-（R）-2-（3-（4-（1-（（7-（8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基）-8-氟-4-（（R）-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基）吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基）氧基）甲基）環丙基）甲基）呱啶-4-基）呱嗪-1-基）異惡唑-5-基）-3-甲基丁醯基）-4-羥基-N-（（S）-1-（4-甲基噻唑-5-基）苯基）乙基）吡咯烷-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物115-1的合成
把化合物M36( 90.00mg)、4-[（呱啶-4-基）甲基]呱嗪-1-羧酸叔丁酯  ( 63.28mg)、氯化鋅,1.0M 四氫呋喃溶液 ( 0.32mL , 1.00mol/L) 加到甲醇 ( 2.00mL ) 和1,2-二氯乙烷 ( 2.00mL ) 中，在40℃反應2h，再加入氰基硼氫化鈉 ( 49.90mg) ，在40℃反應3h。將反應液濃縮，加30mL水，用DCM萃取兩遍，無水硫酸鈉乾燥，柱層析分離（DCM:MeOH=90%:10%）得化合物115-1 (87.00mg , 73.35% )。
ESI-MS m/z:750.59 [M+H] +。
步驟2：化合物115-2的合成
把化合物115-1 ( 87.00mg) 、三氟乙酸 ( 1.00mL ) 加入二氯甲烷 ( 2.00mL ) 中，在室溫下反應1h。向反應液中加入飽和碳酸氫鈉水溶液40mL調鹼，用DCM萃取兩遍，無水硫酸鈉乾燥，經柱層析（DCM:MeOH=90%:10%）分離得化合物115-2 ( 60.00mg , 79.59% ) 。ESI-MS m/z:650.48 [M+H] +。
步驟3：化合物115-3的合成
把化合物115- 2( 50.00mg)、化合物M28 ( 42.19mg)、1.0M氯化鋅 四氫呋喃溶液 ( 0.15mL) 加到甲醇 ( 2.00mL ) 和1,2-二氯乙烷 ( 2.00mL ) 中，在40℃反應2h，再加入氰基硼氫化鈉 ( 24.16mg) ，在40℃反應3h。將反應液濃縮，加30mL水，用DCM萃取兩遍，無水硫酸鈉乾燥，柱層析分離（DCM:MeOH=90%:10%）得化合物115-3 (35.00mg , 38.49% )。ESI-MS m/z:614.18 1/2[M+2H] +。
步驟4：化合物115的合成
把化合物115-3( 35.00mg) 、三氟乙酸 ( 0.50mL ) 加入二氯甲烷 ( 1.00mL ) 中，在室溫下反應1h。將反應液濃縮Pre-HPLC分離純化得化合物115（11.40 mg，33.59%）
ESI-MS m/z: 592.27 1/2[M+2H] +。
實施例116：化合物（2S，4R）-1-（R）-2-（3-（4-（1-（（7-（8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基）-8-氟-4-（R）-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基）吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基）氧基）甲基）環丙基）甲基）氮雜環丁烷-3-基）呱嗪-1-基）異惡唑-5-基）-3-甲基丁醯基）-4-羥基-N-（（（S）-1-（4-（4-甲基噻唑-5-基）苯基）乙基）吡咯烷-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物116-1的合成
把化合物M36( 80.00mg)、3-氧代氮雜環丁烷-1-羧酸叔丁酯  ( 72.52mg)、氯化鋅,1.0M 四氫呋喃溶液 ( 0.28mL , 1.00mol/L) 加到甲醇 ( 2.00mL ) 和1,2-二氯乙烷 ( 2.00mL ) 中，在40℃反應2h，再加入氰基硼氫化鈉 ( 44.37mg) ，在40℃反應3h。將反應液濃縮，加30mL水，用DCM萃取兩遍，無水硫酸鈉乾燥，柱層析分離（DCM:MeOH=90%:10%）得化合物116-1 (60.00mg , 58.56% )。ESI-MS m/z:722.57[M+H] +。
步驟2：化合物116-2的合成
把化合物116-1 ( 60.00mg) 、三氟乙酸 ( 1.00mL ) 加入二氯甲烷 ( 2.00mL ) 中，在室溫下反應1h。向反應液中加入飽和碳酸氫鈉水溶液40mL調鹼，用DCM萃取兩遍，無水硫酸鈉乾燥，經柱層析（DCM:MeOH=90%:10%）分離得化合物116-2 ( 40.00mg , 77.41% ) 。ESI-MS m/z: 622.46 [M+H] +。
步驟3：化合物116-3的合成
把化合物116-2( 40.00mg)、化合物M28 ( 45.75mg)、1.0M氯化鋅 四氫呋喃溶液 ( 0.13mL) 加到甲醇 ( 2.00mL ) 和1,2-二氯乙烷 ( 2.00mL ) 中，在40℃反應2h，再加入氰基硼氫化鈉 ( 22.20mg ) ，在40℃反應3h。將反應液濃縮，加30mL水，用DCM萃取兩遍，無水硫酸鈉乾燥，柱層析分離（DCM:MeOH=90%:10%）得化合物116-3(30.00mg , 38.93% )。ESI-MS m/z: 600.30  1/2[M+2H] +。
步驟4：化合物116的合成
把化合物116-3 ( 30.00mg) 、三氟乙酸 ( 0.50mL ) 加入二氯甲烷 ( 1.00mL ) 中，在室溫下反應1h。將反應液濃縮Pre-HPLC分離純化得化合物116（15.00mg，49.67%）。ESI-MS m/z: 578.14  1/2[M+2H] +。
1H NMR (500 MHz, Methanol- d 4) δ 9.24 (d, J= 3.7 Hz, 1H), 8.87 (d, J= 3.2 Hz, 1H), 7.67 (dt, J= 9.1, 5.5 Hz, 1H), 7.46 – 7.38 (m, 4H), 7.31 – 7.28 (m, 1H), 7.27 – 7.22 (m, 1H), 7.06 (t, J= 2.6 Hz, 1H), 6.10 – 6.00 (m, 1H), 5.07 – 4.99 (m, 1H), 4.59 – 4.48 (m, 2H), 4.45 – 4.35 (m, 3H), 4.30 (t, J= 13.4 Hz, 1H), 4.16 (s, 2H), 3.84 (dd, J= 10.8, 4.2 Hz, 1H), 3.62 (dt, J= 29.2, 9.1 Hz, 3H), 3.47 (dd, J= 17.9, 8.2 Hz, 1H), 2.50 – 2.29 (m, 10H), 2.24 – 2.10 (m, 3H), 2.03 (s, 1H), 2.00 – 1.92 (m, 2H), 1.85 (s, 1H), 1.82 – 1.74 (m, 2H), 1.58 (dd, J= 7.0, 2.9 Hz, 1H), 1.52 (d, J= 7.0 Hz, 3H), 1.31 – 1.26 (m, 10H), 1.05 (d, J= 6.5 Hz, 3H), 0.85 (ddd, J= 24.4, 15.5, 7.1 Hz, 12H).
實施例117：化合物（2S，4R）-1-（（S）-2-（4-（5-（1-（（7-（8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基）-8-氟-4-（（R）-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基）吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基）氧基）甲基）環丙基）甲基）呱啶-4-基）氧基）吡啶-2-基）-1H-1,2,3-三唑-1-基）-3-甲基丁醯基）-4-羥基-N-（（（S）-1-（4-甲基噻唑-5-基）苯基）乙基）吡咯烷-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物117-1的合成
在反應瓶中加入4-羥基呱啶-1-羧酸叔丁酯 （ 3.47g ），6-溴吡啶-3-醇( 2.00g ) ，四氫呋喃 ( 50.00mL )，三苯基膦 ( 3.92g ) ，降溫至0℃，然後緩慢加入偶氮二甲酸二異丙酯 ( 3.02g) ，加完恢復室溫反應6 h。加水稀釋， EA萃取，乾燥，濃縮。柱層析分離產物（PE:EA=4:1），得到無色液體化合物117-1（3.3 g ）。ESI-MS m/z: 301.1 [M+H-t-Bu] +。
步驟2：化合物117-2的合成
在反應瓶中加入化合物117-1 ( 1.00g )，雙三苯基磷二氯化鈀 ( 0.10g ) ，三乙胺 ( 4.67mL) ，四氫呋喃 ( 5.00mL ) ，氮氣置換後室溫反應10min，再加入碘化亞銅 ( 0.03g ) 和乙炔基三甲基矽烷 ( 0.41g) ，氮氣置換後室溫反應2.5 h，反應液直接柱層析純化（PE:EA=4:1），得到黃色固體117-2（930 mg ）。ESI-MS m/z: 375.2 [M+H] +。
步驟3：化合物117-3的合成
在反應瓶中加入化合物117-2( 930.00mg )，甲醇 ( 3.00mL )，碳酸鉀 ( 686.35mg )，室溫反應1 h，過濾，濾餅用EA洗三次，母液濃縮後柱層析純化（PE:EA=2:1），得到黃色固體117-3（702 mg ）。ESI-MS m/z: 303.4 [M+H] +。
步驟4：化合物117-4的合成
在反應瓶中加入化合物117-3 ( 99.33mg ) ，M29 ( 100.00mg )，硫酸銅 ( 31.46mg ) ，抗壞血酸鈉 ( 112.80mg )，四氫呋喃( 1.50mL )，叔丁醇 ( 1.50mL )，水 ( 1.50mL ) ，60℃反應2 h，濃縮，然後加DCM萃取，乾燥，濃縮。柱層析純化（DCM:胺甲醇=25:1），得到淡黃色固體117-4（91 mg ）。ESI-MS m/z: 759.4 [M+H] +。
步驟5：化合物117-5的合成
在反應瓶中加入117-4 ( 91.00mg )，二氯甲烷 ( 3.00mL ) ，4M氯化氫二氧六環溶液( 0.18mL) ，室溫反應0.2 h，析出大量固體，傾去反應液，固體加甲醇溶解，加DCM稀釋，再加碳酸氫鈉水溶液調pH=8，萃取，乾燥，濃縮。得到化合物117-5（72 mg ）。ESI-MS m/z: 659.4 [M+H] +。
步驟6：化合物117-6的合成
在反應瓶中加入化合物117-5 ( 61.14mg )，中間體M28( 50.00mg )，甲醇 ( 1.00mL )，1,2-二氯乙烷 ( 1.00mL ) ，氯化鋅 ( 11.50mg ) ，40℃反應1 h，然後加氰基硼氫化鈉 ( 53.04mg)，繼續反應4 h，將溶劑濃縮，加水稀釋，然後用DCM，MeOH萃取，乾燥，濃縮。Pre-TLC分離純化，得到黃色固體117-6（52 mg）。ESI-MS m/z: 618.8 1/2[M+2H] +。
步驟7：化合物117的合成
在反應瓶中加入化合物117-6 ( 51.00mg )，二氯甲烷 ( 1.00mL ) ，三氟乙酸 ( 1.00mL )，室溫反應0.6 h，濃縮，然後加DCM溶解，將反應液加到冰的碳酸氫鈉水溶液中調pH=8，DCM和甲醇萃取，乾燥，濃縮。用Pre-TLC製備，展開劑DCM:MeOH=11:1，得到化合物117 (24 mg)。
ESI-MS m/z: 596.66 1/2 [M+2H] +。 1H NMR (500 MHz, CDCl 3) δ 9.12 (d, J= 12.6 Hz, 1H), 8.65 (s, 1H), 8.52 – 8.35 (m, 1H), 8.11 (d, J= 27.8 Hz, 1H), 7.92 – 7.70 (m, 2H), 7.53 – 7.39 (m, 1H), 7.28 (m, 1H), 7.23 – 7.03 (m, 6H), 5.18 – 5.00 (m, 2H), 4.38 (m, 8H), 3.70 (m, 2H), 3.24 (d, J= 73.9 Hz, 3H), 2.77 (s, 2H), 2.49 (m, 8H), 2.33 (d, J= 8.2 Hz, 4H), 2.13 – 1.84 (m, 7H), 1.79 – 1.53 (m, 5H), 1.45 (t, J= 9.8 Hz, 3H), 1.34 – 1.17 (m, 5H), 1.06 (s, 3H), 0.75 (s, 6H).
實施例118：化合物（2S，4R）-1-（（S）-2-（4-（6-（7-（7-（8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基）-8-氟-4-（R）-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基）吡啶[4,3-d]嘧啶-2-基）氧基）甲基）環丙基）甲基）-2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷-2-基）吡啶-3-基）-1H-1,2,3-三唑-1-基）-3-甲基丁醯基）-4-羥基-N-（（S）-1-（4-甲基噻唑-5-基）苯基）乙基）吡咯烷-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物118-1的合成
把2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯  ( 280.00mg) 、5-乙炔基-2-氟吡啶  ( 224.76mg) 、碳酸銫 ( 1209.31mg) 加到DMSO ( 3.00mL ) 中，在50℃反應3h。向反應液中加入水40mL，用EA萃取兩遍，無水硫酸鈉乾燥，柱層析分離（PE:EA=75%:25%）得化合物118-1 ( 290.00mg , 71.59% ) 。 ESI-MS m/z: 328.33 [M+H] +。
步驟2：化合物118-2的合成
將化合物118-1 ( 121.90mg) 、化合物M29 ( 170.00mg) 、抗壞血酸鈉 ( 184.40mg ) 、硫酸銅 ( 59.42mg) 加到THF/四氫呋喃 ( 2.00mL ) 、水 ( 2.00mL ) 和叔丁醇 ( 2.00mL ) 中，在室溫下反應3h。向反應液加50mL水，用EA萃取兩遍，無水硫酸鈉乾燥，柱層析分離（DCM:MeOH=93%:7%）得化合物118-2 (230 mg , 78.80% ) 。ESI-MS m/z: 784.61 [M+H] +。
步驟3：化合物118-3的合成
把化合物118-2 ( 230.00mg) 、三氟乙酸 ( 1.00mL ) 依次加到二氯甲烷 ( 2.00mL ) 中，在室溫下反應1h。向反應液中加入飽和碳酸氫鈉水溶液40mL調鹼，用DCM萃取兩遍，無水硫酸鈉乾燥，濃縮幹得化合物118-3 ( 200.00mg , 99.68% ) 。ESI-MS m/z: 684.50 [M+H] +。
步驟4：化合物118-4的合成
把化合物118-3 ( 190.00mg)、化合物M28( 164.63mg)、氯化鋅, 1.0M 四氫呋喃溶液 ( 0.56mL , 1.00mol/L)  加到甲醇 ( 3.00mL ) 和1,2-二氯乙烷 ( 3.00mL ) 中，在60℃反應2h，再加入氰基硼氫化鈉 ( 87.28mg) ，在60℃反應3h。將反應液濃縮，加30mL水，用DCM萃取兩遍，無水硫酸鈉乾燥，柱層析分離（DCM:MeOH=90%:10%）得化合物118-4 ( 100.00mg , 28.56% )。ESI-MS m/z: 631.21 1/2[M+2H] +。
步驟5：化合物118的合成
把化合物118-4 ( 100.00mg) 、TFA/三氟乙酸 ( 1.00mL ) 加入二氯甲烷 (2.00mL ) 中，在室溫下反應1h。將反應液濃縮Pre-HPLC分離純化得化合物118（42.40 mg，43.40%）。ESI-MS m/z: 609.32  1/2[M+2H] +。
1H NMR (500 MHz, Methanol-d 4) δ 9.11 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 8.76 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.38 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 8.28 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 7.83 (dt, J = 6.9, 3.1 Hz, 1H), 7.57 (dd, J = 9.0, 5.8 Hz, 1H), 7.37 – 7.26 (m, 4H), 7.20 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 7.14 (t, J = 9.3 Hz, 1H), 6.97 (t, J = 2.7 Hz, 1H), 6.36 (dd, J = 8.8, 3.3 Hz, 1H), 5.23 (d, J = 10.3 Hz, 1H), 4.95 (q, J = 7.0 Hz, 1H), 4.46 – 4.29 (m, 5H), 4.15 (t, J = 13.4 Hz, 1H), 3.80 (dt, J = 25.0, 7.5 Hz, 2H), 3.65 (s, 4H), 3.55 (dd, J = 12.3, 4.8 Hz, 1H), 3.36 (q, J = 10.5 Hz, 1H), 2.60 – 2.30 (m, 11H), 2.17 – 2.01 (m, 3H), 1.93 (s, 1H), 1.87 (ddd, J = 19.5, 9.9, 5.3 Hz, 1H), 1.79 – 1.65 (m, 7H), 1.42 (d, J = 7.0 Hz, 3H), 1.22 – 1.15 (m, 6H), 1.05 (t, J = 8.2 Hz, 3H), 0.75 – 0.68 (m, 6H), 0.64 (s, 2H), 0.43 (s, 2H).
實施例119：化合物（2S，4R）-1-（（S）-2-（4-（1-（（7-（8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基）-8-氟-4-（（R）-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基）吡啶[4,3-d]嘧啶-2-基）氧基）甲基）環丙基）甲基）呱啶-4-基）苯基）-1H-1,2,3-三唑-1-基）-3,3-二甲基丁醯基）-4-羥基-N-（（S）-1-（4-（4-甲基噻唑-5-基）苯基）乙基）吡咯烷-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物119-1的合成
將M39（0.155 g），M28（0.100 g）溶於4.00 mL無水甲醇中，加入1M氯化鋅乙醚溶液（0.337 mL），40℃反應1 h後加入氰基硼氫化鈉（106 mg），40℃反應4 h。向反應液加入50 mL 飽和碳酸氫鈉水溶液猝滅，DCM/MeOH=10/1混合溶劑萃取3次，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後柱層析純化（DCM/MeOH=10/1）得0.150 g黃色固體產物，即化合物119-1。ESI-MS m/z: 617.3 1/2[M+2H] +；
步驟2：化合物119的合成
室溫下，將119-1（150 mg）溶於5.00 mL 二氯甲烷中，然後加入2.00 mL三氟乙酸，室溫反應1 h。減壓蒸出溶劑後，二氯甲烷複溶，再次蒸出溶劑，5.00 mL 四氫呋喃複溶後加入1.00 mL水，加入碳酸鈉固體攪拌20 min，然後加入無水硫酸鈉乾燥後過濾，減壓濃縮後經Pre-HPLC純化得66.5 mg白色固體產物，即化合物119。
ESI-MS m/z: 595.3 1/2[M+2H] +； 1H NMR (500 MHz, Methanol- d 4) δ 9.22 (s, 1H), 8.91 – 8.83 (m, 1H), 8.57 – 8.46 (m, 1H), 7.79 – 7.62 (m, 3H), 7.43 (td, J= 13.1, 12.4, 8.2 Hz, 3H), 7.34 – 7.18 (m, 4H), 7.05 (dt, J= 6.5, 3.2 Hz, 1H), 5.57 (s, 1H), 5.05 (p, J= 6.5, 6.0 Hz, 1H), 4.60 – 4.37 (m, 5H), 4.25 (t, J= 15.0 Hz, 1H), 3.93 – 3.77 (m, 2H), 3.63 (dd, J= 34.6, 13.4 Hz, 2H), 3.48 (t, J= 11.2 Hz, 1H), 3.22 (dd, J= 21.4, 11.5 Hz, 3H), 2.54 (s, 2H), 2.47 – 2.39 (m, 2H), 2.27 – 2.01 (m, 5H), 1.76 (dd, J= 23.1, 11.4 Hz, 5H), 1.55 (dd, J= 7.0, 1.9 Hz, 2H), 1.33 – 1.21 (m, 4H), 1.12 (s, 3H), 0.85 – 0.67 (m, 5H), 0.53 (s, 2H).
實施例120：化合物（2S，4R）-1-（（S）-2-（5-（（（3S，7aS）-7a-（（（7-（8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基）-8-氟-4-（（R）-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基）吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基）氧基）甲基）-6-亞甲基六氫-1H-吡咯烷-3-基）甲氧基）甲酯）-1H-1-1,2,3-三唑-1-基）-3-甲基丁醯基）-4-羥基-N-（（（S，-1-（4-（4-甲基噻唑-5-基）苯基）乙基）吡咯烷-2-羧酸羥肟的合成-
步驟1：化合物120-1的合成
將M31（100 mg）溶於3mL THF中，加入NaH(12 mg)，室溫攪拌30分鐘，然後加入3-溴丙炔（15 ul），插入氮氣球，25℃下攪拌2 h。LC-MS監測反應完成。向反應液緩慢加入10 mL 飽和氯化銨溶液淬滅，EA萃取3次，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓蒸除溶劑後經柱層析分離純化得淡黃色固體65 mg即化合物120-1。ESI-MS m/z: 714 [M+H] +。
步驟2：化合物120-2的合成
將化合物120-1（65 mg）和M29（50 mg）溶於2 mL THF，2 mL H 2O，2 mL 叔丁醇中，然後依次加入抗壞血酸鈉（47 mg）和無水硫酸銅（13 mg），室溫反應0.5 h，LCMS監測反應完成。向反應液中加入20.0 mL水，用DCM:MeOH=4:1萃取3次，每次20 mL，合併有機相，硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮有機相，經柱層析分離純化得淡黃色固體54mg，即化合物120-2。ESI-MS m/z: 586 1/2[M+2H] +。
步驟3：化合物120的合成
將120-2（54 mg）溶於2 mL DCM中，然後加入1 mL TFA，室溫反應30 min，LCMS監測反應完成。LCMS監測反應完成。將反應液直接濃縮，製備液相分離，得白色粉末18.4 mg，即化合物120。ESI-MS m/z: 564 1/2[M+2H] +。
1H NMR (500 MHz, Methanol- d 4) δ 9.21 – 9.20 (m, 1H), 8.87 (s, 1H), 8.14 (s, 1H), 7.68-7.65 (m, 1H), 7.44 – 7.39 (m, 4H), 7.30 – 7.29 (m, 1H), 7.26 – 7.21 (m, 1H), 7.07 – 7.06(m, 1H), 5.31 (d, J= 10.2 Hz, 1H), 4.62 – 4.60 (m, 10H), 4.54 – 4.45 (m, 4H), 4.39 – 4.17 (m, 3H), 3.90-3.80 (m, 2H), 3.73 – 3.57 (m, 2H), 3.51 – 3.39 (m, 3H), 3.02-3.01 (m, 1H), 2.57 – 2.51 (m, 1H), 2.48 – 2.39 (m, 4H), 2.29 – 2.04 (m, 6H), 1.97 – 1.91 (m, 1H), 1.89-1.85 (m, 1H), 1.78-1.71 (m, 2H), 1.69-1.62 (m, 2H), 1.53 – 1.49 (m, 2H), 1.30 – 1.27 (m, 5H), 1.14 – 1.08 (m, 3H), 0.83 – 0.73 (m, 6H).
實施例121：化合物(2 S, 4 R)-1-(( S)-2-(4-(2-((3 S, 7a S)-7a-(((7-(7-(8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基)-8-氟-4-(( R)-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基)吡咯并[4,3- d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)-6-亞甲基六氫-1 H-吡咯嗪-3-基)甲氧基)吡啶-4-基)-1 H-1,2,3-三唑-1-基)-4-羥基- N-(( S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物121-1的合成
將氫化鈉 (26.6 mg)和M31(150.0 mg)溶解於THF (5 mL)中，室溫攪拌0.5小時。向反應液中加入4-乙炔基-2-氟吡啶(35.0 mg)，室溫反應3小時。LCMS監測反應完成，向反應液中加入DCM (10 mL)，飽和食鹽水洗一次，有機相無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，柱層析分離純化，得黃色固體23.0 mg，即化合物121-1。ESI-MS m/z: 777.9 [M+H] +。
步驟2：化合物121-2的合成
將121-1 (23.0 mg)，(2 S,4 R)-1-(( S)-2-疊氮基-3-甲基丁醯基)-4-羥基- N-(( S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基) 吡咯烷-2-甲醯胺 (13.5 mg)，無水硫酸銅 (4.3 mg)和抗壞血酸鈉 (15.3 mg)溶解于THF/叔丁醇/水 (1/1/1 mL)的混合溶劑中，室溫反應1小時。LCMS監測反應完成，向反應液中加入DCM (10 mL)，飽和食鹽水洗一次，有機相無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，柱層析分離純化，得黃色固體15.0 mg，即化合物121-2。ESI-MS m/z: 618.3 1/2[M+2H] +。
步驟3：化合物121的合成
將121-2 (15.0 mg) 加入DCM (2 mL)和TFA (1 mL)中，室溫反應10分鐘，LCMS監測反應完成。將反應液直接濃縮，製備液相分離，得白色粉末5.7 mg，即化合物121。ESI-MS m/z: 595.8 1/2[M+2H] +。
1H NMR (500 MHz, Methanol-d 4) δ 9.20 (s, 1H), 8.87 (s, 1H), 8.57 (s, 1H), 8.47 (s, 1H), 8.08-8.07 (m, 1H), 7.68-7.66 (m, 1H), 7.45-7.39 (m, 4H), 7.29 (s, 1H), 7.26-7.22 (m, 1H), 7.07 (s, 1H), 6.81 (d, J= 10.0 Hz, 1H), 5.37-5.35 (d, J= 10.0 Hz, 1H), 5.06-5.02 (m, 3H), 4.55-4.52 (m, 1H), 4.46 (s, 2H), 4.27-4.21 (m, 1H), 3.93-3.86 (m, 2H), 3.58 (s, 1H), 3.49-3.46 (m, 1H), 2.91-2.88 (m, 3H), 2.66-2.62 (m, 1H), 2.52-2.44 (m, 6H), 2.35 (s, 2H), 2.23-2.16 (m, 3H), 2.03-1.98 (m, 4H), 1.81-1.76 (m, 5H), 1.53-1.52 (d, J= 5.0 Hz, 3H), 1.31-1.27 (d, J= 15.0 Hz, 3H), 1.17-1.16 (d, J= 5.0 Hz, 3H), 0.83-0.79 (m, 6H)。
實施例122：化合物（2S，4R）-1-（（S）-2-（4-（4-（（（3S，7aS）-7a-（（（（7-（8-乙基-7-乙基-7-氟氟氟-3-羥基萘-1-基）-8-氟-4-（（R）-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基）吡咯嘧啶-2-基）氧基）甲基-4，3-d]嘧啶-2-基丁醯基）-4-羥基-N-（（S）-1-（4-（4-甲基噻唑-5-基）苯基）乙基）吡咯烷-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物122-1的合成
50mL燒瓶中加入(R)-1-(7-(8-乙基-7-氟-3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-8-氟-2-(((5S,7aS)-5-(羥甲基)-2-甲基四氫-1H-吡咯嗪-7a(5H)-基)甲氧基]吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基)-3-甲基呱啶-3-醇（M31）140mg，THF 10mL，降溫0 oC，加入NaH 41mg，升至室溫反應0.5小時，加入1-(溴甲基)-4-乙炔基苯 (80mg)，加熱至45 oC反應1小時，冷卻至0 oC，飽和氯化銨淬滅，EA萃取，有機相水洗，鹽水洗，硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓脫溶，得粗品，柱層析純化得化合物122-1（49mg）。
步驟2：化合物122-2的合成
50mL燒瓶中加入122-1（49 mg），(2 S,4 R)-1-(( S)-2-疊氮基-3-甲基丁醯基)-4-羥基- N-(( S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基) 吡咯烷-2-甲醯胺（M29）（32 mg），抗壞血酸鈉（33mg），硫酸銅（10 mg），叔丁醇 1mL，THF 1mL，水 1mL，室溫反應1小時，檢測反應完全，加EA萃取，有機相水洗，鹽水洗，硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓脫溶，得粗品，柱層析純化得化合物122-2 （32mg）。
步驟3：化合物122的合成
50mL燒瓶中加入122-2 （32mg），DCM 3mL，TFA 1mL，室溫反應0.5小時，檢測後，減壓脫溶，加DCM溶解，用飽和小蘇打水溶液調pH=7-8,攪拌，分層，鹽水洗，硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓脫溶，得粗品，Pre-HPLC純化得化合物122（13.3 mg）。ESI-MS m/z: 602.14 1/2[M+2H] +。
實施例123：化合物（2S，4R）-1-（（S）-2-（4-（1-（（（3S，7aS）-7a-（（（7-（8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基）-8-氟-4-（（R）-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基）吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基）氧基）甲基）-6-亞甲基六氫-1H-吡咯嗪-3-基）甲基呱啶-4-基）-1H-1-1，2，3-三唑-1-基）-3-甲基丁醯基）-4-羥基-N-（（（S，-1-（4-（4-甲基噻唑-5-基）苯基）乙基）吡咯烷-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物123-1的合成
10mL燒瓶中加入M31（100mg），DCM 2mL，TEA 75mg，甲磺醯氯 23uL，室溫反應2小時，加DCM稀釋，飽和小蘇打水溶液洗，分層，鹽水洗，硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓脫溶，得粗品，柱層析純化得化合物123-1（45mg）。
步驟2：化合物123-2的合成
10mL燒瓶中加入123-1（45 mg），DMF 2mL，碳酸銫（145mg），4-乙炔呱啶（43mg），加熱至60℃反應3小時，加EA稀釋，水洗，鹽水洗，硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓脫溶，得粗品，柱層析純化得化合物123-2（39mg）。
步驟3：化合物123-3的合成
10mL燒瓶中加入123-2（39 mg），M29 (2 S,4 R)-1-(( S)-2-疊氮基-3-甲基丁醯基)-4-羥基- N-(( S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基) 吡咯烷-2-甲醯胺（32mg），抗壞血酸鈉（33 mg），硫酸銅 （10 mg），叔丁醇 1mL，THF 1mL，水 1mL，室溫反應1小時，檢測反應完全，加EA萃取，有機相水洗，鹽水洗，硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓脫溶，得粗品，柱層析純化得化合物123-3（25mg）。
步驟4：化合物123的合成
10mL燒瓶中加入123-3（25mg），DCM 3mL，TFA 1mL，室溫反應0.5小時，檢測後，減壓脫溶，加DCM溶解，用飽和小蘇打水溶液調pH=7-8,攪拌，分層，鹽水洗，硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓脫溶，得粗品123，Pre-HPLC純化得化合物123（1.7mg）。ESI-MS m/z: 590.80 1/2[M+2H] +。
實施例124：化合物（2S，4R）-1-（（S）-2-（4-（6-（（（3S，7aS））-7a-（（7-（8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基）-8-氟-4-（（R）-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基）吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基）氧基）甲基）-6-亞甲基六氫-1H-吡咯嗪-3-基）甲氧基）吡啶-3-基）-1H-1，2，3-三唑-1-基）-3-甲基丁醯基）-4-羥基-N-（（S）-1-（4-（4-甲基噻唑-5-基）苯基）乙基）吡咯烷-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物124-1的合成
向M31(150.00mg,0.22mmol)的四氫呋喃 ( 6.00mL )中，冰水浴冷卻，氮氣保護,加入氫化鈉 (26.64mg, 60%, 0.67mmol)，0℃下反應0.5h，加入5-乙炔-2-氟吡啶 (53.77mg, 0.44mmol)，然後20℃下反應4h。反應液加入20mL飽和氯化銨中，加入15 mL EA，分出有機相，水相5mLEA再萃取1次，合併有機相，有機相乾燥，過濾，減壓濃縮，柱層析分離純化，得到85mg黃色泡沫固體。即化合物124-1。ESI-MS m/z: 777.30 [M+H] +。
步驟2：化合物124-2的合成
向 124-1 ( 60.00 mg ) ， M29 ( 35.25 mg) 的叔丁醇( 1.50mL ) 和四氫呋喃 ( 1.50mL ) 中，加入硫酸銅 ( 12.32mg) ，含有 抗壞血酸鈉 ( 45.88mg) 的水 ( 0.75mL ),20℃下反應1h，LCMS轉化完全。反應液加入20mL水中，EA萃取，有機相乾燥，過濾，減壓濃縮，殘留物柱層析純化（MEOH：DCM=1% to 7%），得到75.00mg黃色泡沫固體。即化合物124-2。ESI-MS m/z: 617.7 1/2[M+2H] +。
步驟3：化合物124的合成
向124-2 (80.00mg)的二氯甲烷(4.00mL )中，加入三氟乙酸 (0.96mL)， 20℃下反應0.5h。 LCMS轉化完全。反應液不加熱直接濃縮，Pre-HPLC純化，得到 31.80 mg白色粉末。即化合物124。ESI-MS m/z: 595.4 1/2[M+2H] +。
1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6)  δ 9.95 (s, 1H), 9.21 (s, 1H), 8.99 (s, 1H), 8.72 (s, 1H), 8.67 (s, 1H), 8.54-8.52 (m, 1H), 8.19-8.17 (m, 1H), 7.78-7.75 (m, 1H), 7.46-7.44 (m, 2H), 7.38-7.36 (m, 2H), 7.03 (s, 1H), 6.91-6.88 (m, 1H), 5.34 (s, 1H), 5.19-5.18 (m, 1H), 4.94-4.91 (m, 1H), 4.77-4.75 (s, 1H), 4.42-4.38 (m, 3H), 4.23-4.20 (m, 1H), 4.16-4.11 (m, 2H), 4.03-3.96 (m, 2H), 3.79-3.69 (m, 2H), 2.39-2.34 (m, 3H), 2.12-1.99 (m, 8H), 1.67-1.62 (m, 3H), 1.39-1.34 (m, 5H), 1.17 (s, 3H), 1.15 (s, 3H), 1.08 (s, 3H), 0.72 (s, 6H).
實施例125：化合物 (3S, 7aS)-7a-((7-(7-(8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基)-8-氟-4-(( R)-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基)吡咯并[4,3- d]嘧啶-2-基)嘧啶-2-基)氧基)甲基)-6-亞甲基六氫-1 H-吡咯嗪-3-基)甲基-4-(((5-( R)-1-(2 S, 4 R)-4-羥基-2-((( S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)胺基甲醯基)吡咯烷-1-基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-異惡唑-3-基)氧基)甲基)呱啶-1-甲酸酯的合成
步驟1：化合物125-1的合成
將M35 (30.0 mg)溶於THF (2 mL)中，加入CDI (10.8 mg)，40 ℃反應1小時，然後加入M31(39.7 mg)，60 ℃反應12小時，LCMS監測反應完成。加入甲醇 (5.0 mL)淬滅反應，將反應液直接濃縮，柱層析分離純化，得淡黃色固體35.0 mg，即化合物125-1。ESI-MS m/z: 650.3 1/2[M+2H] +。
步驟2：化合物125的合成
將125-1 (35.0 mg) 加入DCM (5 mL)和TFA (2 mL)中，室溫反應10分鐘，LCMS監測反應完成。將反應液直接濃縮，Pre-HPLC純化，得白色粉末15.3 mg，即化合物125。ESI-MS m/z: 627.8 1/2[M+2H] +。
1H NMR (500 MHz, Methanol-d 4) δ 9.21 (d, J= 7.0 Hz, 1H), 8.87 (s, 1H), 7.68-7.65 (m, 1H), 7.44-7.36 (m, 4H), 7.29 (d, J= 2.5 Hz, 1H), 7.24 (t, J= 4.5 Hz, 1H), 7.09-7.06 (m, 1H), 5.98-5.92 (m, 1H), 5.26 (d, J= 10.0 Hz, 1H), 5.03 (d, J= 7.0 Hz, 1H), 4.52-4.49 (m, 2H), 4.43-4.40 (m, 1H), 4.34-4.24 (m, 2H), 4.17-4.13 (m, 2H), 4.07-4.01 (m, 2H), 3.96-3.92 (m, 1H), 3.84-3.81 (m, 1H), 3.70-3.57 (m, 4H), 3.48-3.42 (m, 2H), 3.07-3.04 (m, 1H), 2.93-2.83 (m, 3H), 2.71-2.68 (m, 1H), 2.47 (s, 3H), 2.43-2.35 (m, 2H), 2.23-2.15 (m, 5H), 2.06-1.92 (m, 4H), 1.85-1.77 (m, 6H), 1.51 (d, J= 7.0 Hz, 2H), 1.33-1.23 (m, 6H), 1.05 (d, J= 6.5 Hz, 3H), 0.91-0.87 (m, 3H), 0.83-0.79 (m, 3H)。
實施例126：化合物（7-（8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基）-8-氟-4-（R）-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基）吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基）氧基）甲基）-6-亞甲基六氫-1H-吡咯烷-3-基）甲基 （（3-（1-（（S）-1-（2S，4R）-4-羥基-2-（S）-1-（4-甲基噻唑-5-基）苯基）乙基）胺基甲醯基）吡咯烷-1-基）-3-甲基-1-氧代丁-2-基）-1H-1,2,3-三唑-4-基）雙環[1.1.1]戊-1-基）甲基）胺基甲酸酯的合成
步驟1：化合物126-1的合成
0 oC下，將3-(((叔丁氧羰基)胺基)甲基)雙環[1.1.1]戊烷-1-羧酸（1.00 g）與二甲羥胺鹽酸鹽（0.510 g）溶於10.0 mL DCM中，然後依次加入N,N-二異丙基乙胺（2.17 mL），N,N,N’,N’-四甲基-O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲（2.99 g），室溫反應3h，向反應液緩慢加入50 mL 飽和碳酸氫鈉溶液淬滅，EA萃取3次，合併有機相，飽和氯化鈉洗3遍，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後得1.40 g無色油狀產物，即化合物126-1。ESI-MS m/z: 285 [M+H] +； 1H NMR (500 MHz, Chloroform- d) δ 4.51 (s, 1H), 3.66 (s, 3H), 3.18 (s, 3H), 2.80 (s, 2H), 2.02 (s, 6H), 1.44 (s, 9H).
步驟2：化合物126-2的合成
將化合物126-1 (1.40 g) 溶於20.0 mL THF中，冷卻至-40 oC，加入四氫鋁鋰（0.330 g），自然升高至室溫反應2 h，反應液降低溫度至0 oC，然後向反應液中依次逐漸滴加0.33 mL水，0.33 mL 15%NaOH溶液和0.33 mL水，攪拌30 min後矽藻土過濾除去不溶性雜質，濾餅用20.0 mL EA洗脫3次，收集濾液并無水硫酸鈉乾燥，過濾減壓濃縮後得到0.910 g淡黃色油狀產物，即化合物126-2。 1H NMR (500 MHz, Chloroform- d) δ 9.50 (s, 1H), 4.50 (s, 1H), 3.15 (s, 2H), 1.88 (s, 6H), 1.38 (s, 9H).
步驟3：化合物126-3的合成
N 2保護下，化合物126-2 (0.910 g)溶於10.0 mL無水甲醇中，然後依次加入無水碳酸鉀（0.920 g），(1-重氮基-2-氧代丙基)膦酸二甲酯（0.960 g），室溫反應2 h。反應液減壓濃縮後柱層析分離純化（PE/EA=5/1），得0.480 g 白色固體，即化合物126-3。 1H NMR (500 MHz, Chloroform- d) δ 4.47 (s, 1H), 3.16 (s, 2H), 2.09 (s, 1H), 1.97 (s, 6H), 1.44 (s, 9H).
步驟4：化合物126-4的合成
室溫下，將化合物126-3（0.400 g），M29 (2 S, 4 R)-1-(( S)-2-疊氮基-3-甲基丁醯基)-4-羥基- N-(( S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基) 吡咯烷-2-甲醯胺（0.818 g），抗壞血酸鈉（0.838 g），無水硫酸銅（0.234 g）溶于4.00 mL 叔丁醇，4.00 mL四氫呋喃和4.00 mL水的混合溶劑中，室溫反應1 h。向反應液加入50 mL 水溶液淬滅，DCM/MeOH=10/1混合溶劑萃取3次，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後柱層析純化（DCM/MeOH=10/1）得1.050 g黃色固體產物，即化合物126-4。ESI-MS m/z: 678 [M+H] +。
步驟5：化合物126-5的合成
室溫下，將化合物126-4（0.800 g）溶於10.0 mL 二氯甲烷中，然後加入3.00 mL三氟乙酸，室溫反應1 h。減壓蒸出溶劑後，二氯甲烷複溶，再次蒸出溶劑，5.00 mL 四氫呋喃複溶後加入1.00 mL水，加入碳酸鈉固體攪拌20 min，然後加入無水硫酸鈉乾燥後過濾，減壓濃縮後柱層析純化（DCM/MeOH=10/1）得0.600 g黃色固體產物，即化合物126-5。ESI-MS m/z: 578 [M+H] +；
步驟6：化合物126-6的合成
室溫下，將M31（100 mg）溶於四氫呋喃（2.00 mL）中，依次加入三乙胺（0.165 mL），對硝基氯甲酸苯酯（60.0 mg），4-二甲胺基吡啶（5.50 mg），室溫反應過夜後加入化合物126-5（103 mg），室溫反應0.5 h。向反應液中加入適量水， DCM萃取3次，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後柱層析純化（DCM/MeOH=10/1）得150 mg黃色固體產物，即化合物126-6。ESI-MS m/z: 640.7 1/2[M+2H] +。
步驟7：化合物126的合成
室溫下，將化合物126-6（150 mg）溶於5.00 mL 二氯甲烷中，然後加入2.00 mL三氟乙酸，室溫反應1 h。減壓濃縮後，二氯甲烷複溶，再次蒸出溶劑，5.00 mL 四氫呋喃複溶後加入1.00 mL水，加入碳酸鈉固體攪拌20 min，然後加入無水硫酸鈉乾燥後過濾，減壓濃縮後經Pre-HPLC純化得25.1 mg白色固體產物，即化合物126。ESI-MS m/z: 618.8 1/2[M+2H] +。
1H NMR (500 MHz, Methanol- d 4) δ 9.20 (s, 1H), 8.87 (d, J= 3.1 Hz, 1H), 7.90 (d, J= 11.8 Hz, 1H), 7.66 (dd, J= 9.1, 5.8 Hz, 1H), 7.42 (qd, J= 8.4, 7.6, 2.8 Hz, 4H), 7.29 (d, J= 2.7 Hz, 1H), 7.23 (t, J= 9.3 Hz, 1H), 7.06 (dd, J= 5.7, 2.6 Hz, 1H), 5.25 (d, J= 10.3 Hz, 1H), 5.03 (q, J= 6.5, 6.1 Hz, 1H), 4.94 (s, 2H), 4.55 – 4.40 (m, 3H), 4.36 – 4.22 (m, 2H), 4.17 (d, J= 10.6 Hz, 1H), 4.03 (d, J= 11.3 Hz, 1H), 3.93 (dd, J= 10.8, 6.0 Hz, 1H), 3.90 – 3.79 (m, 2H), 3.68 (dd, J= 29.6, 13.7 Hz, 2H), 3.51 – 3.38 (m, 2H), 3.23 (s, 2H), 3.04 (s, 1H), 2.84 (s, 1H), 2.70 (d, J= 15.5 Hz, 1H), 2.51 (d, J= 7.1 Hz, 2H), 2.41 (d, J= 15.6 Hz, 2H), 2.28 – 2.11 (m, 4H), 2.08 – 1.92 (m, 8H), 1.89 – 1.73 (m, 5H), 1.51 (d, J= 7.0 Hz, 3H), 1.28 (d, J= 13.8 Hz, 3H), 1.10 (t, J= 6.9 Hz, 3H), 0.81 (q, J= 7.2 Hz, 3H), 0.73 (d, J= 6.7 Hz, 3H).
實施例127： 化合物（（7-（8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基）-8-氟-4-（R）-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基）吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基）氧基）甲基）-6-亞甲基六氫-1H-吡咯烷-3-基）甲基 2-（1-（S）-1-（2S，4R）-4-羥基-2-（S）-1-（4-（4-甲基噻唑-5-基）苯基）乙基胺基甲醯基）吡咯烷-1-基）-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基）-1H-1,2,3-三唑-4-基）-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-羧酸酯的合成
步驟1：化合物127-1的合成
將7-叔丁氧羰基-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-羧酸（500.0 mg）溶於5.0 mL THF中，加入硼烷四氫呋喃溶液（4.64 mL，1 mol/L），室溫反應1 h。向反應液中緩慢加入5 mLHCl/MeOH溶液，攪拌至無氣泡產生後，加入1 mol/L NaOH溶液調節pH至鹼性，然後加入適量乙酸乙酯萃取，收集有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾減壓蒸除溶劑得無色油狀產物450.0 mg，即化合物127-1。ESI-MS m/z: 200 [M+H-56] +。
步驟2：化合物127-2的合成
將127-1（250.0 mg）溶於5.0 mL DCM中，加入戴斯馬丁試劑（387.0 mg），室溫反應1 h。向反應液中加入適量乙酸乙酯，析出固體過濾除去，濾液加入1 mol/L NaOH溶液調節Ph至鹼性，萃取分離收集有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾減壓蒸除溶劑得無色油狀產物180.0 mg，即化合物127-2。ESI-MS m/z: 198 [M+H-56] +。
步驟3：化合物127-3的合成
N 2保護下，化合物127-2 (180 mg)溶於3.0 mL無水甲醇中，加入無水碳酸鉀（167 mg），(1-重氮基-2-氧代丙基)膦酸二甲酯（174 mg），室溫反應3 h。反應液加入適量水,乙酸乙酯萃取，收集有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾減壓蒸除溶劑並柱層析純化得無色油狀產物110 mg，即化合物127-3，ESI-MS m/z: 194 [M+H-56] +。
步驟4：化合物127-4的合成
室溫下，將127-3（120 mg），M29 (2 S, 4 R)-1-(( S)-2-疊氮基-3-甲基丁醯基)-4-羥基- N-(( S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基) 吡咯烷-2-甲醯胺（218 mg），抗壞血酸鈉（223 mg），無水硫酸銅（62.0 mg）溶于2.00 mL 叔丁醇，2.00 mL四氫呋喃和2.00 mL水的混合溶劑中，室溫反應1 h。向反應液加入50 mL 水溶液淬滅，DCM/MeOH=10/1混合溶劑萃取3次，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓蒸除溶劑後柱層析純化（DCM/MeOH=10/1）得300 mg黃色固體產物，即化合物127-4。ESI-MS m/z: 706 [M+H] +。
步驟5：化合物127-5的合成
室溫下，將127-4（300 mg）溶於5.00 mL 二氯甲烷中，然後加入2.00 mL三氟乙酸，室溫反應1 h。減壓蒸出溶劑後，二氯甲烷複溶，再次蒸出溶劑，5.00 mL 四氫呋喃複溶後加入1.00 mL水，加入碳酸鈉固體攪拌20 min，然後加入無水硫酸鈉乾燥後過濾，減壓蒸除溶劑後柱層析純化（DCM/MeOH=10/1）得225 mg黃色固體產物，即化合物127-5。ESI-MS m/z: 606 [M+H] +。
步驟6：化合物127-6的合成
室溫下，將M31（100 mg）溶於四氫呋喃（2.00 mL）中，依次加入三乙胺（0.165 mL），對硝基氯甲酸苯酯（60.0 mg），4-二甲胺基吡啶（5.50 mg），室溫反應過夜後加入127-5（99.2 mg），室溫反應0.5 h。向反應液中加入適量水，DCM萃取3次，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓蒸除溶劑後柱層析純化（DCM/MeOH=10/1）得155 mg黃色固體產物，即化合物127-6。ESI-MS m/z: 654.8 1/2[M+2H] +。
步驟7：化合物127的合成
室溫下，將127-6（155 mg）溶於5.00 mL 二氯甲烷中，然後加入2.00 mL三氟乙酸，室溫反應1 h。減壓蒸出溶劑後，二氯甲烷複溶，再次蒸出溶劑，5.00 mL 四氫呋喃複溶後加入1.00 mL水，加入碳酸鈉固體攪拌20 min，然後加入無水硫酸鈉乾燥後過濾，減壓蒸除溶劑後經Pre-HPLC純化得26.8 mg白色固體產物，即化合物127。ESI-MS m/z: 632.9 1/2 [M+2H] +。
1H NMR (500 MHz, Methanol- d 4) δ 9.22 (d, J= 4.4 Hz, 1H), 8.87 (d, J= 3.5 Hz, 1H), 7.90 (s, 1H), 7.66 (dd, J= 9.1, 5.8 Hz, 1H), 7.42 (q, J= 8.6, 7.8 Hz, 3H), 7.34 – 7.22 (m, 2H), 7.07 (dd, J= 10.1, 2.6 Hz, 1H), 5.25 (d, J= 10.3 Hz, 1H), 5.12 – 5.01 (m, 3H), 4.94 (s, 5H), 4.59 (s, 3H), 4.52 (t, J= 8.5 Hz, 2H), 4.43 (d, J= 25.9 Hz, 1H), 4.30 (ddd, J= 29.2, 17.1, 12.1 Hz, 2H), 4.16 (d, J= 10.9 Hz, 1H), 4.06 (dd, J= 10.5, 4.9 Hz, 1H), 3.97 – 3.86 (m, 2H), 3.83 (s, 1H), 3.66 (dd, J= 24.0, 13.8 Hz, 2H), 3.61 – 3.55 (m, 1H), 3.46 (d, J= 12.2 Hz, 2H), 3.40 – 3.36 (m, 1H), 3.05 (s, 1H), 2.70 (d, J= 15.4 Hz, 1H), 2.55 (dt, J= 10.9, 6.5 Hz, 1H), 2.41 (d, J= 15.8 Hz, 1H), 2.31 – 2.14 (m, 5H), 2.10 – 1.94 (m, 4H), 1.85 (s, 1H), 1.84 – 1.74 (m, 3H), 1.69 (d, J= 5.6 Hz, 2H), 1.54 (dd, J= 25.8, 6.3 Hz, 4H), 1.30 (dd, J= 15.5, 11.4 Hz, 5H), 1.12 (d, J= 6.7 Hz, 3H), 0.86 – 0.72 (m, 5H).
實施例128：化合物 (2 S, 4 R)-1-(( S)-2-(4-((1-((1-(((7-(8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基)-8-氟-4-(( R)-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基)吡咯并[4,3- d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)環丙基)甲基)呱啶-4-基)氮雜環丁烷-3-基)-1 H-1,2,3-三唑-1-基)-3-甲基丁醯基)-4-羥基- N-(( S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物128-1的合成
將M29 (1000.0 mg)，    3-乙炔基-1-氮雜環丁烷甲酸叔丁酯 (396.9 mg)，無水硫酸銅 (314.6 mg)和抗壞血酸鈉 (1128.2 mg)溶解于THF/叔丁醇/水 (10/10/10 mL)的混合溶劑中，室溫反應3小時。LCMS監測反應完成，向反應液中加入DCM (30 mL)，飽和食鹽水洗一次，有機相無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，柱層析分離純化，得黃色固體628.0 mg，即化合物128-1。ESI-MS m/z: 638.3 [M+H] +。
步驟2：化合物128-2的合成
將128-1 (295.0 mg) 加入DCM (5 mL)和TFA (2 mL)中，室溫反應10分鐘，LCMS監測反應完成。將反應液直接濃縮，加入1 M NaOH溶液至反應液pH = 8。向反應液中加入DCM (20 mL)，收集有機相，有機相飽和食鹽水洗一次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，得白色固體165.0 mg，即化合物128-2。ESI-MS m/z: 538.3 [M+H] +。
步驟3：化合物128-3的合成
將128-2 (165.0 mg)和 N-叔丁氧羰基-4-呱啶酮 (61.2 mg)溶於甲醇 (5 mL)中，加入1M氯化鋅乙醚溶液 (0.46 mL)，40 ℃反應1小時，然後加入氰基硼氫化鈉 (57.9 mg)，40 ℃反應10分鐘，LCMS監測反應完成。加入飽和碳酸氫鈉溶液 (5.0 mL)淬滅反應，向反應液中加入DCM (20 mL)，收集有機相，有機相飽和食鹽水洗一次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，得白色固體120.0 mg，即化合物128-3。ESI-MS m/z: 721.3 [M+H] +。
步驟4：化合物128-4的合成
將128-3 (120.0 mg) 加入DCM (5 mL)和TFA (2 mL)中，室溫反應10分鐘，LCMS監測反應完成。將反應液直接濃縮，加入1 M NaOH溶液至反應液pH = 8。向反應液中加入DCM (20 mL)，收集有機相，有機相飽和食鹽水洗一次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，得白色固體80.0 mg，即化合物128-4。ESI-MS m/z: 621.3 [M+H] +。
步驟5：化合物128-5的合成
將128-4 (80.0 mg)和M28 (76.4 mg)溶於甲醇 (5 mL)中，加入1M氯化鋅乙醚溶液(0.19 mL)，40 ℃反應1小時，然後加入氰基硼氫化鈉 (24.3 mg)，60 ℃反應12小時，LCMS監測反應完成。加入飽和碳酸氫鈉溶液 (5.0 mL)淬滅反應，向反應液中加入DCM (20 mL)，收集有機相，有機相飽和食鹽水洗一次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，得白色固體84.0 mg，即化合物128-5。ESI-MS m/z: 600.3 1/2[M+2H] +。
步驟6：化合物128的合成
將128-5 (84.0 mg) 加入DCM (5 mL)和TFA (2 mL)中，室溫反應10分鐘，LCMS監測反應完成。將反應液直接濃縮，製備液相分離，得白色粉末28.9 mg，即化合物128。ESI-MS m/z: 578.2 1/2[M+2H] +。
1H NMR (500 MHz, Methanol- d 4) δ 9.20 (d, J= 2.5 Hz, 1H), 8.87 (s, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.68-7.65 (m, 1H), 7.45-7.39 (m, 4H), 7.29 (d, J= 2.5 Hz, 1H), 7.24 (t, J= 4.5 Hz, 1H), 7.06 (t, J= 2.5 Hz, 1H), 5.27 (d, J= 10.0 Hz, 1H), 5.03 (q, J= 7.0 Hz, 1H), 4.50 (t, J= 8.5 Hz, 2H), 4.47-4.44 (m, 1H), 4.42-4.39 (m, 2H), 4.25 (t, J= 14.5 Hz, 1H), 3.90-3.87 (m, 1H), 3.82-3.78 (m, 2H), 3.75-3.71 (m, 2H), 3.67-3.58 (m, 1H), 3.49-3.43 (m, 1H), 3.26 (q, J= 7.5 Hz, 2H), 3.10-3.04 (m, 2H), 2.59-2.56 (m, 1H), 2.47 (s, 1H), 2.43-2.39 (m, 1H), 2.23-2.17 (m, 2H), 2.01-1.93 (m, 2H), 1.87-1.85 (m, 1H), 1.81-1.73 (m, 4H), 1.51 (d, J= 7.0 Hz, 2H), 1.30-1.27 (m, 6H), 1.12 (d, J= 7.0 Hz, 3H), 0.90-0.86 (m, 2H), 0.84-0.79 (m, 3H), 0.75 (d, J= 6.5 Hz, 3H), 0.71 (s, 2H), 0.49 (s, 1H)。
實施例129：化合物 (2 S, 4 R)-1-(( S)-2-(4-(1-((1-((1-(((7-(8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基)-8-氟-4-(( R)-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基)吡咯并[4,3- d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)呱啶-4-基)甲基)氮雜環丁烷-3-基)-1 H-1,2,3-三唑-1-基)-3-甲基丁醯基)-4-羥基- N-(( S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物129-1的合成
將128-2 (300.0 mg)和   1-叔丁氧羰基呱啶-4-甲醛 (119.0 mg)溶於甲醇 (8 mL)中，加入1M氯化鋅乙醚溶液(0.61 mL)，40 ℃反應1小時，然後加入氰基硼氫化鈉 (105.2 mg)，40 ℃反應10分鐘，LCMS監測反應完成。加入飽和碳酸氫鈉溶液 (5.0 mL)淬滅反應，向反應液中加入DCM (20 mL)，收集有機相，有機相飽和食鹽水洗一次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，得白色固體267.0 mg，即化合物129-1。ESI-MS m/z: 735.4 [M+H] +。
步驟2：化合物129-2的合成
將129-1 (267.0 mg) 加入DCM (5 mL)和TFA (2 mL)中，室溫反應10分鐘，LCMS監測反應完成。將反應液直接濃縮，加入1 M NaOH溶液至反應液pH = 8。向反應液中加入DCM (20 mL)，收集有機相，有機相飽和食鹽水洗一次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，得白色固體230.0 mg，即化合物129-2。ESI-MS m/z: 635.4 [M+H] +。
步驟3：化合物129-3的合成
將M28（100 mg）和化合物129-2 (128.5 mg)溶於甲醇 (8 mL)中，加入1M氯化鋅乙醚溶液  (0.25 mL)，40 ℃反應1小時，然後加入氰基硼氫化鈉 (31.8 mg)，60 ℃反應12小時，LCMS監測反應完成。加入飽和碳酸氫鈉溶液 (5.0 mL)淬滅反應，向反應液中加入DCM (20 mL)，收集有機相，有機相飽和食鹽水洗一次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，得白色固體82.0 mg，即化合物129-3。ESI-MS m/z: 607.3 1/2[M+2H] +。
步驟4：化合物129的合成
將129-3 (82.0 mg) 加入DCM (5 mL)和TFA (2 mL)中，室溫反應10分鐘，LCMS監測反應完成。將反應液直接濃縮，製備液相分離，得白色粉末37.6 mg，即化合物129。ESI-MS m/z: 585.2 1/2[M+2H] +。
1H NMR (500 MHz, Methanol- d 4) δ 9.20 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 8.87 (s, 1H), 8.03 (d, J= 4.0 Hz, 1H), 7.67-7.64 (m, 1H), 7.44-7.39 (m, 4H), 7.29 (d, J= 2.5 Hz, 1H), 7.23 (t, J= 9.0 Hz, 1H), 7.06 (t, J= 2.5 Hz, 1H), 5.27 (d, J= 10.5 Hz, 1H), 5.03 (q, J= 7.0 Hz, 1H), 4.52-4.39 (m, 5H), 4.24 (t, J= 13.5 Hz, 1H), 3.90-3.87 (m, 1H), 3.82-3.78 (m, 2H), 3.74-3.71 (m, 2H), 3.66-3.56 (m, 1H), 3.49-3.41 (m, 1H), 3.26 (q, J= 7.5 Hz, 2H), 3.10-3.03 (m, 2H), 2.57-2.53 (m, 1H), 2.47 (s, 1H), 2.41-2.37 (m, 3H), 2.21-2.16 (m, 2H), 1.98-1.91 (m, 2H), 1.86-1.84 (m, 1H), 1.80-1.74 (m, 2H), 1.69-1.66 (m, 2H), 1.51 (d, J= 7.0 Hz, 2H), 1.29-1.27 (m, 6H), 1.12 (d, J= 6.5 Hz, 3H), 0.91-0.86 (m, 2H), 0.83-0.79 (m, 3H), 0.75-0.74 (m, 3H), 0.70 (s, 2H), 0.49 (s, 1H)。
實施例130：化合物 (2 S, 4 R)-1-(( S)-2-(4-(1-((1-((1-(((7-(8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基)-8-氟-4-(( R)-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基)吡咯并[4,3- d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)環丙基)甲基)呱啶-4-基)甲基呱啶-4-基)-1 H-1,2,3-三唑-1-基)-3-甲基丁醯基)-4-羥基- N-(( S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物130-1的合成
將M29 (800.0 mg)，1-叔丁氧羰基-4-乙炔基呱啶 (476.7 mg)，無水硫酸銅 (251.7 mg)和抗壞血酸鈉 (902.5 mg)溶解于THF/叔丁醇/水 (10/10/10 mL)的混合溶劑中，室溫反應3小時。LCMS監測反應完成，向反應液中加入DCM (30 mL)，飽和食鹽水洗一次，有機相無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，柱層析分離純化，得黃色固體800.0 mg，即化合物130-1。ESI-MS m/z: 666.3 [M+H] +。
步驟2：化合物130-2的合成
將130-1 (800.0 mg) 加入DCM (5 mL)和TFA (2 mL)中，室溫反應10分鐘，LCMS監測反應完成。將反應液直接濃縮，加入1 M NaOH溶液至反應液pH = 8。向反應液中加入DCM (20 mL)，收集有機相，有機相飽和食鹽水洗一次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，得白色固體577.0 mg，即化合物130-2。ESI-MS m/z: 566.3 [M+H] +。
步驟3：化合物130-3的合成
將130-2 (577.0 mg)和1-叔丁氧羰基呱啶-4-甲醛 (217.5 mg)溶於甲醇 (10 mL)中，加入1M氯化鋅乙醚溶液  (1.53 mL)，40 ℃反應1小時，然後加入氰基硼氫化鈉 (192.3 mg)，40 ℃反應10分鐘，LCMS監測反應完成。加入飽和碳酸氫鈉溶液 (5.0 mL)淬滅反應，向反應液中加入DCM (20 mL)，收集有機相，有機相飽和食鹽水洗一次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，得白色固體356.0 mg，即化合物130-3。ESI-MS m/z: 764.1 [M+H] +。
步驟4：化合物130-4的合成
將130-3 (356.0 mg) 加入DCM (5 mL)和TFA (2 mL)中，室溫反應10分鐘，LCMS監測反應完成。將反應液直接濃縮，加入1 M NaOH溶液至反應液pH = 8。向反應液中加入DCM (20 mL)，收集有機相，有機相飽和食鹽水洗一次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，得白色固體198.0 mg，即化合物130-4。ESI-MS m/z: 664.1 [M+H] +。
步驟5：化合物130-5的合成
將130-4 (100.0 mg)和M28 (134.2 mg)溶於甲醇 (10 mL)中，加入1M氯化鋅乙醚溶液  (0.25 mL)，40 ℃反應1小時，然後加入氰基硼氫化鈉 (31.8 mg)，60 ℃反應12小時，LCMS監測反應完成。加入飽和碳酸氫鈉溶液 (5.0 mL)淬滅反應，向反應液中加入DCM (20 mL)，收集有機相，有機相飽和食鹽水洗一次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，得白色固體90.0 mg，即化合物130-5。ESI-MS m/z: 621.3 1/2[M+2H] +。
步驟6：化合物130的合成
將130-5 (90.0 mg) 加入DCM (5 mL)和TFA (2 mL)中，室溫反應10分鐘，LCMS監測反應完成。將反應液直接濃縮，製備液相分離，得白色粉末41.2 mg，即化合物130。ESI-MS m/z: 599.2 1/2[M+2H] +。
1H NMR (500 MHz, Methanol- d 4) δ 9.20 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 8.87 (s, 1H), 7.89 (s, 1H), 7.67-7.64 (m, 1H), 7.44-7.39 (m, 4H), 7.29 (d, J= 3.0 Hz, 1H), 7.23 (t, J= 9.5 Hz, 1H), 7.06 (d, J= 3.0 Hz, 1H), 5.25 (d, J= 10.0 Hz, 1H), 5.04 (q, J= 6.5 Hz, 1H), 4.53-4.39 (m, 5H), 4.23 (t, J= 13.0 Hz, 1H), 3.90-3.87 (m, 1H), 3.81 (d, J= 11.0 Hz, 1H), 3.66-3.56 (m, 1H), 3.49-3.41 (m, 1H), 3.08 (q, J= 11.5 Hz, 2H), 2.93 (d, J= 11.5 Hz, 2H), 2.75-2.69 (m, 1H), 2.58-2.54 (m, 1H), 2.47 (s, 1H), 2.41-2.38 (m, 1H), 2.22-2.14 (m, 4H), 2.09-2.04 (m, 2H), 1.99-1.93 (m, 4H), 1.86-1.84 (m, 1H), 1.79-1.70 (m, 6H), 1.57-1.51 (m, 4H), 1.29-1.26 (m, 6H), 1.12 (d, J= 6.5 Hz, 3H), 0.89-0.86 (m, 2H), 0.84-0.79 (m, 3H), 0.74-0.73 (m, 3H), 0.71 (s, 2H), 0.50 (s, 1H)。
實施例131：化合物（2S，4R）-1-（（S）-2-（4-（1-（（（（7-（8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基）-8-氟-4-（（R）-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基）吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基）氧基）甲基）環丙基）甲基）呱啶-4-基）-1H-1,2,3-三唑-1-基）-3-甲基丁醯基）-4-羥基-N-（（（S）-1-（4-（4-甲基噻唑-5-基）苯基）乙基）吡咯烷-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物131-1的合成
25 mL單口瓶中加入化合物M29（100.0 mg），溶於THF（2 mL）,加入1-Boc-4-乙炔基呱啶（55.0 mg），硫酸銅（35.2 mg），水（2 mL），叔丁醇（2 mL），抗壞血酸鈉（160.0 mg），室溫反應0.5 h。反應液直接蒸乾。柱層析分離純化(DCM : MeOH = 12 : 1)，得104.2 mg淡黃色固體，即化合物131-1。ESI-MS m/z: 666 [M+H] +。
步驟2：化合物131-2的合成
25 mL單口瓶中加入化合物131-1 (104.2 mg)，溶於4M的氯化氫二氧六環溶液 (5 mL)，加入甲醇(1 mL),室溫反應1 h。反應液直接蒸乾，向反應液中加入5 mL飽和碳酸氫鈉溶液，調節溶液pH至7-8後，用二氯甲烷異丙醇混合溶液萃取，取有機相無水硫酸鈉乾燥，得79.0 mg黃色固體，即化合物131-2。ESI-MS m/z: 566 [M+H] +。
步驟3：化合物131-3的合成
25 mL單口瓶中加入化合物131-2 (79.0 mg)，溶於MeOH（3 mL），加入M28（100.0 mg）和1M氯化鋅四氫呋喃溶液（0.1 mL）, 加熱至40 oC，反應2 h後，加入NaBH 3CN（35.2 mg），反應過夜。反應液直接蒸乾。柱層析分離純化(DCM : MeOH= 10: 1)，得108.2 mg淡黃色固體，即化合物131-3。ESI-MS m/z: 572 1/2 [M+2H] +。
步驟4：化合物131的合成
25 mL單口瓶中加入化合物131-3 (108.2 mg)，溶於DCM(2 mL)，加入TFA（2 mL）,室溫反應1 h。反應液直接蒸乾, 向反應液中加入5 mL飽和碳酸氫鈉溶液，調節溶液pH至7-8後，用二氯甲烷和異丙醇的混合溶液萃取，取有機相無水硫酸鈉乾燥，經Pre-HPLC分離產物(CH 3CN/H 2O = 30%-55%), 得白色固體67.6 mg，即化合物131。ESI-MS m/z: 550.1 1/2[M+2H] +。
1H NMR (500 MHz, Methanol- d 4) δ 9.27 – 9.19 (m, 1H), 8.87 (s, 1H), 7.87 (t, J= 9.3 Hz, 1H), 7.66 (dd, J= 8.9, 5.9 Hz, 1H), 7.46 – 7.35 (m, 4H), 7.29 (d, J= 2.5 Hz, 1H), 7.23 (t, J= 9.2 Hz, 1H), 7.09 – 7.04 (m, 1H), 5.25 (d, J= 10.2 Hz, 1H), 5.08 – 4.99 (m, 1H), 4.59 – 4.41 (m, 5H), 4.25 (dd, J= 28.6, 13.2 Hz, 1H), 3.88 (dd, J= 10.9, 3.8 Hz, 1H), 3.79 (dd, J= 19.9, 9.0 Hz, 1H), 3.70 – 3.58 (m, 1H), 3.45 (d, J= 6.9 Hz, 1H), 3.22 – 3.06 (m, 2H), 2.94 (dd, J= 14.3, 7.1 Hz, 1H), 2.68 (d, J= 29.7 Hz, 2H), 2.59 – 2.35 (m, 8H), 2.14 (dd, J= 22.5, 11.5 Hz, 6H), 1.99 – 1.83 (m, 4H), 1.81 – 1.58 (m, 5H), 1.54 – 1.46 (m, 3H), 1.26 (dd, J= 17.7, 10.1 Hz, 4H), 1.11 (t, J= 8.2 Hz, 3H), 0.85 – 0.68 (m, 9H), 0.51 (s, 2H).
實施例132：化合物(2S,4R)-1-((S)-2-(4-((4-((1-((（7-（8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基）-8-氟-4-（（R）-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基）吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基）氧基）甲基）環丙基）甲基）呱嗪-1-基）甲基-1H-1,2,3-三唑-1-基）-3-甲基丁醯基）-4-羥基-N-（（S）-1-（4-（4-甲基噻唑-5-基）苯基）乙基）吡咯烷-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物132-1的合成
25 mL單口瓶中加入化合物M1 (1.0 g)，溶於DCM（10.0 mL）,加入DIPEA（1.4 mL），3-溴丙炔（0.7 g），室溫反應5 h。反應液直接蒸乾。柱層析分離純化(PE : EA= 1: 1)，得1.05 g淡黃色固體，即化合物132-1。
步驟2：化合物132-2的合成
25 mL單口瓶中加入化合物M29（100.0 mg），溶於THF（2 mL）,加入化合物132-1（55.0 mg），硫酸銅（35.2 mg），水（2 mL），叔丁醇（2 mL），抗壞血酸鈉（160.0 mg），室溫反應0.5 h。反應液直接蒸乾。柱層析分離純化(DCM : MeOH = 12 : 1)，得105.7 mg淡黃色固體，即化合物132-2。
步驟3：化合物132-3的合成
25 mL單口瓶中加入化合物132-2 (105.7 mg)，溶於4M的氯化氫二氧六環溶液 (5 mL)，加入甲醇(1 mL),室溫反應1 h。反應液直接蒸乾，向反應液中加入5 mL飽和碳酸氫鈉溶液，調節溶液pH至7-8後，用二氯甲烷以及異丙醇萃取，取有機相無水硫酸鈉乾燥，得83.2 mg黃色固體，即化合物132-3。
步驟4：化合物132-4的合成
25 mL單口瓶中加入化合物132-3(83.2 mg)，溶於MeOH（3 mL），加入M28（100.0 mg）和1M的氯化鋅四氫呋喃溶液溶液（0.1 mL）, 加熱至40 oC，反應2 h後，加入NaBH 3CN（35.2 mg），反應過夜。反應液直接蒸乾。柱層析分離純化(DCM : MeOH= 10: 1)，得94.3 mg淡黃色固體，即化合物132-4。
步驟5：化合物132的合成
25 mL單口瓶中加入化合物132-4 (94.3 mg)，溶於DCM(2 mL)，加入TFA（2 mL）,室溫反應1 h。反應液直接蒸乾, 向反應液中加入5 mL飽和碳酸氫鈉溶液，調節溶液pH至7-8後，用二氯甲烷和異丙醇的混合溶液萃取，取有機相無水硫酸鈉乾燥，經Pre-HPLC分離產物(CH 3CN/H 2O = 30%-55%)， 得白色固體36.1 mg，即化合物132。
LCMS：1/2[M+2H] += 557.57
1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6) δ 9.22 (s, 1H), 8.98 (s, 1H), 8.50 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 7.97 (d, J= 13.6 Hz, 1H), 7.81 – 7.72 (m, 1H), 7.44 (d, J= 7.9 Hz, 2H), 7.40 – 7.29 (m, 4H), 7.03 (s, 1H), 5.24 (d, J= 10.1 Hz, 1H), 5.11 (d, J= 44.3 Hz, 1H), 4.97 – 4.84 (m, 1H), 4.75 (d, J= 5.7 Hz, 1H), 4.44 – 4.23 (m, 5H), 4.04 (dd, J= 26.8, 13.5 Hz, 1H), 3.74 (d, J= 6.9 Hz, 1H), 3.65 (s, 1H), 3.52 (d, J= 15.4 Hz, 3H), 2.41 – 2.27 (m, 9H), 2.09 (d, J= 48.3 Hz, 4H), 1.83 – 1.59 (m, 5H), 1.37 (d, J= 6.8 Hz, 3H), 1.17 (d, J= 11.3 Hz, 3H), 1.02 (d, J= 6.8 Hz, 6H), 0.74 (d, J= 7.3 Hz, 3H), 0.63 (s, 5H), 0.40 (s, 2H).
實施例133：化合物（2S，4R）-1-（（S）-2-（4-（1-（（7-（8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基）-8-氟-4-（（R）-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基）吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基）氧基）甲基）環丙基）甲基）呱啶-4-基）苯基）-1H-1,2,3-三唑-1-基）-3-甲基丁醯基）-4-羥基-N-（（S）-1-（4-（4-甲基噻唑-5-基）苯基）乙基）吡咯烷-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物133-1的合成
將M29(380 mg)和4-(4-乙炔基苯基)呱啶-1-羧酸叔丁酯（310 mg）溶于叔丁醇（4 mL）、四氫呋喃（4 mL）和水（4 mL），加入無水硫酸銅(120 mg)，抗壞血酸鈉（429 mg），室溫反應2 h。將反應液旋乾，加入DCM和水，萃取，收集有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾，收集濾液，減壓濃縮後經柱層析純化（DCM/MeOH =15: 1）得到化合物133-1（560 mg）。ESI-MS m/z: 742.3 [M+H] +。
步驟2：化合物133-2的合成
將化合物133-1（300 mg）溶於6 mL DCM和4M的氯化氫二氧六環（3mL）溶液中，室溫反應0.5 h。將反應液減壓濃縮，加入飽和碳酸氫鈉溶液， DCM/異丙醇（3：1）萃取，收集有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾，收集濾液，減壓濃縮得到化合物133-2（254 mg）。ESI-MS m/z: 642.3 [M+H] +。
步驟3：化合物133-3的合成
將化合物 133-2 (60.0 mg)和M28(66.0 mg)溶於甲醇 (5 mL)中，加入氯化鋅溶液 (0.14 mL，1 M in THF)，40 ℃反應1小時，然後加入氰基硼氫化鈉 (18 mg)，保持40℃繼續反應12小時。加入飽和碳酸氫鈉溶液 (5.0 mL)淬滅反應，向反應液中加入DCM (20 mL)，萃取，收集有機相，有機相用飽和食鹽水洗一次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，收集濾液，減壓濃縮後經柱層析純化（DCM/MeOH =10: 1）得到化合物133-3（59 mg）。ESI-MS m/z: 609.7 1/2[M+2H] +。
步驟4：化合物133的合成
將化合物133-3 (59 mg)溶於3 mL DCM中，加入3 mL三氟乙酸，室溫反應1 h。將反應液直接濃縮，5.00 mL DCM複溶後再次濃縮，經製備液相分離，得到白色粉末20.9 mg，即化合物133。ESI-MS m/z: 588.2 1/2[M+2H] +。
1H NMR (500 MHz, DMSO- d 6) δ: 9.93 (d, J= 2.5 Hz, 1H), 9.23 (s, 1H), 8.98 (s, 1H), 8.63 (s, 1H), 8.52 (d, J= 7.5 Hz, 1H), 7.82 - 7.73 (m, 3H), 7.44 (d, J= 8.0 Hz, 2H), 7.39 - 7.32 (m, 4H), 7.30 - 7.25 (m, 2H), 7.03 (d, J= 2.5 Hz, 1H), 5.32 (d, J= 10.0 Hz, 1H), 5.17 (d, J = 3.5 Hz, 1H), 4.95 - 4.89 (m, 1H), 4.75 (d, J= 10.0 Hz, 1H), 4.44 - 4.27 (m, 5H), 4.09 - 4.01 (m, 1H), 3.78 (dd, J= 10.5, 4.0 Hz, 1H), 3.70 (d, J= 10.5 Hz, 1H), 3.64 - 3.51 (m, 1H), 3.41 - 3.36 (m, 1H), 3.08 (s, 2H), 2.39 - 2.36 (m, 3H), 2.18 - 2.12 (m, 1H), 2.10 – 1.93 (m, 5H), 1.85 - 1.53 (m, 9H), 1.38 (d, J = 7.0 Hz, 3H), 1.23 (s, 3H), 1.17 (d, J = 11.5 Hz, 3H), 1.08 (d, J = 6.5 Hz, 3H), 0.77 – 0.64 (m, 8H), 0.44 (s, 2H).
實施例134：化合物（2S，4R）-1-（（S）-2-（4-（5-（（1-（7-（8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基）-8-氟-4-（（R）-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基）吡啶[4,3-d]嘧啶-2-基）氧基）甲基）環丙基）甲基）呱嗪-1-基）吡嗪-2-基）-1H-1,2,3-三唑-1-基）-3-甲基丁醯基）-4-羥基-N-（（（S）-1-（4-甲基噻唑-5-基）苯基）乙基）吡咯烷-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物134-1的合成
將2-溴-5-氯吡嗪（3.0 g），三甲基矽炔（1.83 g）溶於THF（20 mL），加入碘化亞銅 （0.3 g），雙三苯基磷二氯化鈀（1.09 g），三乙胺 （6.47 mL），N 2氛圍升溫至80℃反應2 h。旋乾反應液，加入水稀釋，EA萃取，收集有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾，收集濾液，減壓濃縮後經柱層析純化（PE/EA = 10: 1）得產物134-1（2.9 g）。ESI-MS m/z: 211.0 [M+H] +。
步驟2：化合物134-2的合成
將化合物134-1（2.9 g）溶於THF（20 mL），加入1-Boc-呱嗪（6.41 g），三(二亞苄基丙酮)二鈀（0.63 g），2-二環己膦基-2'-( N,N-二甲胺)-聯苯（0.27 g），雙三甲基矽基胺基鋰 ( 27.5 mL/1 M in THF) ，N 2氛圍升溫至80℃反應2 h。旋乾反應液，加入水稀釋，EA萃取，收集有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾，收集濾液，減壓濃縮後經柱層析純化（PE/EA = 85: 15）得產物134-2（728 mg）。ESI-MS m/z: 631.2 [M+H] +。
步驟3：化合物134-3的合成
將化合物134-2（728 mg）溶於MeOH（15 mL），加入碳酸鉀（140 mg），室溫反應1 h。旋乾反應液，加入水稀釋，EA萃取，收集有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾，收集濾液，減壓濃縮後經柱層析純化（PE/EA = 4: 1）得產物134-3（525 mg）。ESI-MS m/z: 289.1 [M+H] +。
步驟4：化合物134-4的合成
將化合物134-3 (200 mg)和M29（317 mg）溶于叔丁醇（4 mL）、四氫呋喃（4 mL）和水（4 mL），加入無水硫酸銅(100 mg)，抗壞血酸鈉（357 mg），室溫反應3 h。將反應液旋乾，加水稀釋， DCM萃取，收集有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾，收集濾液，減壓濃縮後經柱層析純化（DCM/MeOH =10: 1）得到化合物134-4（440 mg）。ESI-MS m/z: 745.3 [M+H] +。
步驟5：化合物134-5的合成
將化合物134-4（440 mg）溶於6 mL DCM和3 mL 氯化氫二氧六環（4 mol/L）溶液中，室溫反應0.5 h。將反應液旋乾，加入飽和碳酸氫鈉溶液稀釋， DCM/異丙醇（3：1）和萃取，收集有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾，收集濾液，減壓濃縮得到化合物134-5（290 mg）。ESI-MS m/z: 645.3 [M+H] +。
步驟6：化合物134-6的合成
將化合物 134-5 (90.0 mg)和M28 (100.0 mg)溶於甲醇 (5 mL)中，加入1M氯化鋅四氫呋喃溶液 (0.21 mL)，40 ℃反應1小時，然後加入氰基硼氫化鈉 (27 mg)，保持40℃繼續反應12小時。加入飽和碳酸氫鈉溶液 (5.0 mL)淬滅反應，向反應液中加入DCM (20 mL)，萃取，收集有機相，有機相用飽和食鹽水洗一次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，收集濾液，減壓濃縮後經柱層析純化（DCM/MeOH =10: 1）得到化合物134-6（115 mg）。ESI-MS m/z: 611.2 1/2[M+2H] +。
步驟7：化合物134的合成
將化合物134-6 (115 mg)溶於3 mL DCM中，加入3 mL三氟乙酸，室溫反應1 h。將反應液直接濃縮，5.00 mL DCM複溶後再次濃縮，經製備液相分離，得到白色粉末68.1 mg，即化合物134。ESI-MS m/z: 589.6 1/2[M+2H] +。
1H NMR (500 MHz, DMSO- d 6) δ: 9.95 (s, 1H), 9.21 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 8.98 (s, 1H), 8.67 (d, J= 1.5 Hz, 1H), 8.52 (d, J= 7.5 Hz, 1H), 8.43 (s, 1H), 8.33 (s, 1H), 7.75 (dd, J = 9.0, 6.0 Hz, 1H), 7.46 - 7.42 (m, 2H), 7.37 - 7.35 (m, 2H), 7.34 - 7.30 (m, 2H), 7.03 (d, J= 2.5 Hz, 1H), 5.36 (d, J= 10.5 Hz, 1H), 5.18 (d, J= 4.0 Hz, 1H), 4.95 – 4.89 (m, 2H), 4.74 (d, J= 8.5 Hz, 1H), 4.42 - 4.29 (m, 5H), 4.08 - 4.00 (m, 1H), 3.81 - 3.74 (m, 1H), 3.68 (d, J= 11.0 Hz, 1H), 3.62 - 3.50 (m, 5H), 2.54 (s, 2H), 2.39 - 2.29 (m, 4H), 2.16 - 1.97 (m, 4H), 1.1.81 – 1.61 (m, 5H), 1.38 (d, J= 7.0 Hz, 3H), 1.24 (s, 3H), 1.16 (d, J= 13.0 Hz, 3H), 1.07 (d, J= 6.5 Hz, 3H), 0.73 - 0.69 (m, 8H), 0.45 (s, 2H).
實施例135：化合物（2S，4R）-1-（（S）-2-（4-（6-（1-（1-（（（7-（8-乙基-7-氟代-3-羥基萘-1-基）-8-氟-4-（（（R）-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基）吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基）氧基-氧基）甲基環丙基甲基環丙基-甲基）呱啶-4-基-4-基）氧氧基）吡啶-3-基吡啶-3-基）-1H-1,2,3-三唑-1-基吡啶并-1-氫羥基-3-甲基丁醯基）-4-羥基-N-（（S）-1-（4-（4-甲基噻唑-5-基）苯基）乙基）吡咯烷-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物135-1的合成
向N-叔丁氧羰基-4-羥基呱啶（50 mg）的四氫呋喃(1.00mL )中， 冰水浴冷卻，氮氣保護，加入氫化鈉 ( 29.81mg , 60% , 0.75mmol )， 0℃下反應0.5h， 加入 5-乙炔-2-氟吡啶 ( 36.10mg , 0.30mmol )， 20℃下反應2h。 反應液加入20mL飽和氯化銨中， 加入20mL EA，分出有機相，有機相乾燥，過濾，減壓濃縮，殘留物經柱層析純化（EA：PE=1：5），得到 60.00mg無色固體。即化合物135-1。ESI-MS m/z: 303.20 [M+H] +。
步驟2：化合物135-2的合成
向135-1 ( 60.00mg , 0.20mmol )，M29(1.50mL) 和四氫呋喃(1.50mL)中， 加入 硫酸銅 ( 31.67mg , 0.20mmol ),含有 抗壞血酸鈉 ( 117.92mg, 0.60mmol) 的水 (0.75mL) 溶液，20℃下反應1h。LCMS轉化完全。反應液加入15mL水中，EA萃取4次，有機相合併，乾燥，過濾，減壓濃縮，殘留物經柱層析純化（MeOH：DCM=1：10）, 得到 105.00mg棕黃色固體。即化合物135-2。ESI-MS m/z: 759.40 [M+H] +。
步驟3：化合物135-3的合成
向135-2( 120.00mg, 0.16mmol) 的 二氯甲烷(3.00mL)中，三氟乙酸 (0.59mL,7.91mmol)，20℃下反應0.5h。LCMS轉化完全。反應液緩慢加入20mL飽和碳酸氫鈉溶液中，DCM萃取4次，合併有機相，乾燥，過濾，減壓濃縮。得到 95.00mg 棕色固體。即化合物135-3。ESI-MS m/z: 659.30 [M+H] +。粗品直接投下一步。
步驟4：化合物135-4的合成
向135-3 ( 106.73mg , 0.16mmol ) ，M28( 80.00mg , 0.14mmol ) 的甲醇 ( 4.00mL ) 中，再加入1M的氯化鋅乙醚溶液 ( 0.27mL)，升至40℃攪拌2小時。再加入氰基硼氫化鈉 ( 33.93mg , 0.54mmol ) , 40℃攪拌4小時。加入20mL水中，DCM萃取，有機相乾燥，過濾，減壓濃縮，經柱層析純化（MeOH：DCM=1：10），得到 90.00mg無色固體。即化合物135-4。ESI-MS m/z: 618.7 1/2[M+2H] +。
步驟5：化合物135的合成
向135-4 ( 100.00mg , 0.08mmol ) 的二氯甲烷 ( 5.00mL ) 中，加入三氟乙酸(1.20mL, 16.18mmol )，20℃下反應0.5h。LCMS 轉化完全。反應液減壓濃縮，Pre-HPLC純化得到44.90mg白色粉末。即化合物135。ESI-MS m/z: 596.6 1/2[M+2H] +。
1H NMR (500 MHz, Methanol- d 4) δ 9.20 (s, 1H), 8.87 (s, 1H), 8.57 (s, 1H), 8.47 (s, 1H), 8.08-8.08 (m, 1H), 7.68-7.65 (m, 1H), 7.45-7.39 (m, 4H), 7.29 (s, 1H), 7.25-7.22 (m, 1H), 7.07 (s, 1H), 6.81 (d, J= 10.0 Hz, 1H), 5.37-5.35 (d, J= 10.0 Hz, 1H), 5.05-5.02 (m, 3H), 4.55-4.52 (m, 1H), 4.46 (s, 2H), 4.27-4.22 (m, 1H), 3.93-3.86 (m, 2H), 3.58 (s, 1H), 3.48-3.46 (m, 1H), 2.91-2.88 (m, 3H), 2.65-2.63 (m, 1H), 2.51-2.43 (m, 6H), 2.35 (s, 2H), 2.22-2.16 (m, 3H), 2.03-1.98 (m, 4H), 1.80-1.76 (m, 5H), 1.53-1.52 (d, J= 5.0 Hz, 3H), 1.30-1.27 (d, J= 15.0 Hz, 3H), 1.17-1.16 (d, J= 5.0 Hz, 3H), 0.83-0.79 (m, 6H).
實施例136：化合物（2S，4R）-1-（（S）-2-（4-（2-（1-（1-（（7-（8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基）-8-氟-4-（（R）-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基）吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基）氧基）甲基）環丙基）甲基）呱啶-4-基）氧基）吡啶-4-基）-1H-1,2,3-三唑-1-基）-3-甲基丁醯基）-4-羥基-N-（（（S）-1-（4-甲基噻唑-5-基）苯基）乙基）吡咯烷-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物136-1的合成
向N-叔丁氧羰基-4-羥基呱啶 ( 55.00mg , 0.27mmol ) 的四氫呋喃 ( 3.00mL )中，冰水浴冷卻，氮氣保護，加入氫化鈉 ( 32.80mg , 60% , 0.82mmol )，0℃下反應0.5h， 加入 4-乙炔-2-氟吡啶 ( 33.10mg , 0.27mmol )，20℃下反應2h。 反應液加入20mL飽和氯化銨中，加入20mL EA，分出有機相，有機相乾燥，過濾，減壓濃縮，殘留物經柱層析純化（EA：PE=1% to 16%），得到 38.00 mg無色固體。即化合物136-1。ESI-MS m/z: 303.20 [M+H] +。
步驟2：化合物136-2的合成
向136-1 ( 28.00mg , 0.09mmol ) ， M29 ( 46.52mg , 0.10mmol ) ， 抗壞血酸鈉 ( 55.03mg , 0.28mmol ) ，硫酸銅 ( 14.78mg , 0.09mmol ) 的 叔丁醇 ( 1.50mL ) ，四氫呋喃 ( 1.50mL ) ，水 ( 0.75mL ) 中， 20℃下反應1h。LCMS轉化完全。反應液加入15mL水中，EA萃取4次，有機相合併，乾燥，過濾，減壓濃縮，殘留物經柱層析純化（MEOH：DCM=1% to 10%）。得到 50.00mg 無色固體。即化合物136-2。ESI-MS m/z: 759.40 [M+H] +。
步驟3：化合物136-3的合成
向136-2( 45.00mg , 0.06mmol ) 的二氯甲烷 ( 2.00mL )中，加入 三氟乙酸 ( 0.44mL , 5.93mmol)，20℃下反應0.5h。LCMS轉化完全。反應液緩慢加入20mL飽和碳酸氫鈉溶液中，DCM萃取4次，合併有機相，乾燥，過濾，減壓濃縮。 得到 35.00mg棕色固體，即化合物136-3。直接投下步。ESI-MS m/z: 659.30 [M+H] +。
步驟4：化合物136-4的合成
向136-3(36.70mg, 0.06mmol )，M28(30.00mg, 0.05mmol )的甲醇 ( 2.00mL ) 中，加入1M的氯化鋅乙醚溶液 ( 0.10mL)，升至40℃攪拌2小時。再加入氰基硼氫化鈉( 12.72mg , 0.20mmol)。40℃攪拌16小時。LCMS轉化完全。反應液加入20mL水中，DCM萃取，有機相乾燥，過濾，減壓濃縮，經柱層析純化（MeOH：DCM=1：10）得到 30.00mg白色固體。即化合物136-4。ESI-MS m/z: 618.7 1/2[M+2H] +。
步驟5：化合物136的合成
向 136-4 ( 25.00mg , 0.02mmol ) 的二氯甲烷 ( 2.00mL )中，加入三氟乙酸(0.30mL, 4.04mmol )，20℃下反應0.5h。LCMS轉化完全。反應液不加熱減壓濃縮，殘留物經Pre-HPLC純化，得到10.10mg, 白色固體。即化合物136。ESI-MS m/z: 596.3 1/2[M+2H] +。
1H NMR (500 MHz, Methanol- d 4) δ 9.20-9.19 (s, J= 5.0 Hz,1H), 8.87 (s, 1H), 8.66 (s, 1H), 8.13 (s, 1H), 7.68-7.65 (m, 1H), 7.45-7.37 (m, 5H), 7.30 (s, 1H), 7.28-7.22 (m, 2H), 7.07 (s, 1H), 5.41-5.39 (d, J= 10.0 Hz, 1H), 5.05-5.02 (m, 3H), 4.55-4.52 (m, 1H), 4.46 (s, 2H), 4.27-4.22 (m, 1H), 3.93-3.86 (m, 2H), 3.58 (s, 1H), 3.48-3.46 (m, 1H), 2.91-2.88 (m, 3H), 2.65-2.63 (m, 1H), 2.51-2.43 (m, 6H), 2.35 (s, 2H), 2.22-2.16 (m, 3H), 2.03-1.98 (m, 4H), 1.80-1.76 (m, 5H), 1.53-1.51 (d, J= 10.0 Hz, 3H), 1.30-1.27 (d, J= 15.0 Hz, 3H), 1.17-1.16 (d, J= 5.0 Hz, 3H), 0.83-0.79 (m, 6H).
實施例137：化合物（2S，4R）-1-（（1-（7-（8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基）-8-氟-4-（（R）-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基）吡啶[4,3-d]嘧啶-2-基）氧基）甲基）環丙基）甲基-[1,4'-聯呱啶]-4-基）-1H-1,2,3-三唑-1-基）-3-甲基丁醯基）-4-羥基-N-（（S）-1-（4-甲基噻唑-5-基）苯基）乙基）吡咯烷-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物137-1的合成
向 4-乙炔呱啶鹽酸鹽( 200.00mg , 1.38mmol )， 4-溴呱啶-1-甲酸叔丁酯( 437.00mg , 1.65mmol)，碳酸鉀(476.34mg, 3.45mmol)，碘化鉀(45.77mg , 0.28mmol ) 的乙腈 ( 4.00mL ) 中，氮氣保護，100℃下反應16h。反應液過濾，濾液減壓濃縮後經柱層析純化（MeOH：DCM=1：20）得到90.00mg無色液體。即化合物137-1。ESI-MS m/z: 293.30 [M+H] +。
步驟2：化合物137-2的合成
向 137-1 (70.00mg , 0.24mmol)，M29 (120.21mg , 0.26mmol) ， 抗壞血酸鈉 (142.28mg , 0.72mmol)，硫酸銅(38.21mg, 0.24mmol)的叔丁醇 (2.00mL)，四氫呋喃(2.00mL) 和水(1.00mL)中，20℃下反應1h。LCMS轉化完全。反應液加入30mL清水中，DCM萃取，有少許不溶固體析出，加適量甲醇溶解。合併有機相，有機相乾燥，過濾，濃縮，殘留物經柱層析純化（MeOH：DCM=15%:85%）,得到 134.00mg棕色固體。即化合物137-2。ESI-MS m/z: 749.30 [M+H] +。
步驟3：化合物137-3的合成
向137-2(140.00 mg, 0.19mmol)的二氯甲烷(5.20 mL)中，加入三氟乙酸 (1.39 mL,18.69 mmol)，20℃下反應0.5h。反應液加入20 mL飽和碳酸氫鈉中，氯仿/異丙醇萃取5次，合併有機相，乾燥，過濾，減壓濃縮。得到 110.00mg棕色固體。即化合物137-3。直接投下步。ESI-MS m/z: 649.30 [M+H] +。
步驟4：化合物137-4的合成
向137-3 (120.43mg, 0.19mmol)，M28(100.00mg,0.17mmo)的甲醇 (5.00mL)中， 加入氯化鋅(0.34mL, 1.00mol/L, 0.34mmol)，升至40℃攪拌2小時。再加入氰基硼氫化鈉(42.40mg , 0.67mmol)。40℃攪拌16小時。反應液加入25mL水中，補加15mL DCM，分出有機相，有機相乾燥，減壓濃縮，殘留物經柱層析純化（MeOH:DCM=15% ：85%）得到 110.00mg白色固體。即化合物137-4。ESI-MS m/z: 613.7 1/2[M+2H] +。
步驟5：化合物137的合成
向137-4(80.00mg, 0.07mmol)的二氯甲烷(4.00mL)中，加入三氟乙酸 ( 0.48mL , 6.53mmol )，20℃下反應0.5h。反應液不加熱減壓濃縮，殘留物經Pre-HPLC純化得到40.00mg白色粉末。即化合物137。ESI-MS m/z: 591.8 1/2[M+2H] +。
1H NMR (500 MHz, Methanol- d 4) δ 9.21 (s, 1H), 8.87 (s, 1H), 7.90 (s, 1H), 7.68-7.65 (m, 1H), 7.45-7.40 (m, 4H), 7.30 (s, 1H), 7.28-7.22 (m, 1H), 7.06 (s, 1H), 5.27-5.25 (d, J= 10.0 Hz, 1H), 5.05-5.02 (m, 2H), 4.51-4.39 (m, 6H), 4.27-4.22 (m, 1H), 3.90-3.80 (m, 2H), 3.67-3.58 (s, 1H), 3.47-3.45 (m, 1H), 3.34-3.30 (m, 3H), 3.21-3.15 (m, 2H), 3.00-2.93 (m, 2H), 2.75 (s, 1H), 2.54-2.48 (m, 6H),2.37 (s, 4H), 2.22-2.18 (m, 1H), 2.03-1.94 (m, 4H),1.85-1.70 (m, 6H), 1.53-1.51 (d, J= 10.0 Hz, 3H), 1.30-1.27 (d, J= 15.0 Hz, 3H), 1.13-1.12 (d, J= 5.0 Hz, 3H), 0.84-0.81 (m, 2H), 0.74-0.73 (m, 6H), 0.50 (s, 2H).
實施例138：化合物（2S，4R）-1-（（1-（1-（7-（8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基）-8-氟-4-（（R）-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基）吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基）氧基）甲基）環丙基）甲基）呱啶-4-基）-1H-吡唑-4-基）-1H-1,2,3-三唑-1-基）-3-甲基丁醯基）-4-羥基-N-（（（S）-1-（4-甲基噻唑-5-基）苯基）乙基）吡咯烷-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物138-1的合成
向 4-(4-溴吡唑-1-基)呱啶-1-甲酸叔丁酯 (1000.00mg, 3.03mmol)的四氫呋喃(10.00mL)中，氮氣保護，冷卻至-78℃， 加入 正丁基鋰（1.6M in hexane） ( 1.45mL , 2.50mol/L , 3.63mmol ) ，-78℃下反應15分鐘，滴加N,N-二甲基甲醯胺( 0.28mL, 3.63mmol)，-78℃下反應0.5h。LCMS轉化完全。反應液加入20 mL飽和氯化銨中，EA萃取，有機相乾燥，過濾，減壓濃縮，殘留物經柱層析純化（EA：PE=35% ： 65%），得到680.00mg無色液體。即化合物138-1。ESI-MS m/z: 280.30 [M+H] +。
步驟2：化合物138-2的合成
向138-1(630.00mg,2.26mmol)，碳酸鉀(935.16mg,6.77mmol)的甲醇 ( 15.00mL )中，滴加 (1-重氮基-2-氧代丙基)膦酸二甲酯(649.93mg, 3.38mmol )，20℃下反應16h。反應液加入50mL水中，EA萃取，有機相乾燥，過濾，減壓濃縮，殘留物經柱層析純化（EA:PE=30% ： 70%）得到500.00mg白色固體。即化合物138-2。ESI-MS m/z: 276.30 [M+H] +。
步驟3：化合物138-3的合成
向138-2 (200.00mg, 0.73mmol)，M29(364.79mg,0.80mmol)，抗壞血酸鈉 ( 431.72mg , 2.18mmol ) ，硫酸銅(115.94mg, 0.73mmol) 的叔丁醇 ( 5.00mL ) ，四氫呋喃 ( 5.00mL ) 和水 ( 2.50 mL )中，20℃下反應1h。LCMS 轉化完全。反應液加入30mL水中，DCM萃取3次，合併有機相，乾燥，過濾，減壓濃縮，殘留物經柱層析純化（MeOH：DCM=10% ：90%）得到 430.00 mg 棕色固體。即化合物138-3。ESI-MS m/z: 732.10 [M+H] +。
步驟4：化合物138-4的合成
向 138-3 ( 430.00mg , 0.59mmol )的二氯甲烷 ( 17.00mL )中，加入三氟乙酸 ( 4.36mL , 58.75mmol )，20℃下反應0.5h。反應液加入20mL飽和碳酸氫鈉中，室溫攪拌15分鐘，氯仿/異丙醇萃取，合併有機相，乾燥，過濾，減壓濃縮。得到360.00mg  棕色固體，即化合物138-4。直接投下步。ESI-MS m/z: 632.30 [M+H] +。
步驟5：化合物138-5的合成
向M28(120.00mg, 0.17mmol)，138-4(120.92mg, 0.19mmol)的 甲醇 (6.00mL)中，再加入1M的氯化鋅乙醚溶液(0.35mL)，升至40℃攪拌2小時。再加入氰基硼氫化鈉(43.74mg , 0.70mmol)。40℃攪拌16小時。LCMS 轉化完全。反應液加入25mL清水中，補加20mLDCM，分出有機相，有機相乾燥，過濾，減壓濃縮，殘留物經柱層析純化（MeOH：DCM=10%: 90%），得到 80.00mg無色固體。即化合物138-5。ESI-MS m/z: 605 1/2[M+2H] +。
步驟6：化合物138的合成
向 138-5(60.00mg, 0.05mmol)的二氯甲烷(3.00mL)中，加入三氟乙酸 (0.74mL, 9.94mmol)，20℃下反應0.5h。LCMS轉化完全。反應液減壓濃縮，殘留物經Pre-HPLC，得到38.90mg白色粉末。即化合物138。ESI-MS m/z: 583.1 1/2[M+2H] +。
1H NMR (500 MHz, Methanol- d 4) δ 9.21 (s, 1H), 8.87 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.84 (s, 1H), 7.67-7.64 (m, 1H), 7.45-7.40 (m, 4H), 7.29 (s, 1H), 7.25-7.21 (m, 1H), 7.05 (s, 1H), 5.32-5.30 (d, J= 10.0 Hz, 1H), 5.05-5.02 (m, 3H), 4.54-4.44 (m, 6H), 4.27-4.22 (m, 2H), 3.90-3.85 (m, 2H), 3.67-3.64 (s, 1H), 3.47-3.45 (m, 1H), 3.21-3.15 (m, 2H), 2.47 (s, 3H), 2.19-2.13 (m, 6H), 2.08-1.97 (m, 5H), 1.79-1.77 (m, 2H),1.52-1.51 (d, J= 5.0 Hz, 3H), 1.29-1.27 (d, J= 10.0 Hz, 3H), 1.15-1.14 (d, J= 5.0 Hz, 3H), 0.81-0.78 (m, 6H), 0.73 (s, 2H), 0.52 (s, 2H).
實施例139：化合物（3S，7aS）-7a-（（（7-（8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基）-8-氟-4-（（R）-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基）吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基）氧基）甲基）-6-亞甲基六氫-1H-吡咯嗪-3-基）甲基2-（（（S）-3-（（2S，4R）-4-羥基-1-（3-甲基-2-（3-甲基異惡唑-5-基）-2l3-丁醯基）吡咯烷-2-甲醯胺基）-3-（4-（4-甲基噻唑-5-基）苯基）丙醯胺基）甲基）-7-氮雜螺[3.5]壬-7-羧酸酯
步驟1：化合物139-1的合成
50 mL單口瓶中加入化合物M1 (2.0 g)，溶於甲醇中(30 mL)，加入濃硫酸(1.0 mL) ，加熱至80 oC，反應過夜。反應液直接蒸乾，得淡黃色油狀物2.1 g，即化合物139-1。
步驟2：化合物139-2的合成
50 mL單口瓶中加入化合物139-1 (2.1 g)，溶於THF(20 mL)，加入2-碘代丙烷（3.45 g），叔丁醇鉀（3.34 g），室溫反應5 h。反應液直接蒸乾。柱層析分離純化(PE : EA= 5: 1)，得2.1 g淡黃色固體，即化合物139-2。
步驟3：化合物139-3的合成
50 mL單口瓶中加入化合物139-2（2.1 g），溶於甲醇（20 mL），加入氫氧化鋰（0.89 g），水（4 mL），室溫反應2 h。用稀硫酸調節溶液pH至2-3，向反應液中加入飽和食鹽水（5 mL）, EA萃取，取有機相無水硫酸鈉乾燥，得1.78 g黃色固體，即化合物139-3。
步驟4：化合物139-4的合成
50 mL單口瓶中加入化合物139-3（1.78 g），溶於DMF（20 mL），加入（2S，4R）-4-羥基吡咯烷-2-羧酸甲酯（1.69 g），DIPEA（4.82 mL）和HATU（5.54 g），室溫反應1 h。向反應液中加入飽和食鹽水（5 mL）， EA萃取，取有機相無水硫酸鈉乾燥，柱層析分離產物(PE:EA=1:1) ， 得2.21 g黃色固體，即化合物139-4。
步驟5：化合物139-5的合成
50 mL單口瓶中加入化合物139-4（2.2 g），溶於甲醇（20 mL），加入氫氧化鋰（1.5 g），水（4 mL），室溫反應2 h。用稀硫酸調節溶液pH至2-3，向反應液中加入飽和食鹽水（5 mL） ，EA萃取，取有機相無水硫酸鈉乾燥，得1.98 g黃色固體，即化合物139-5。
步驟6：化合物139-6A的合成
50 mL單口瓶中加入化合物139-5（0.98 g），溶於DMF（10 mL），加入M40（1.1 g），DIPEA（1.4 mL）和HATU（1.9 g），室溫反應1 h。向反應液中加入飽和食鹽水（5 mL），EA萃取，取有機相無水硫酸鈉乾燥，柱層析分離產物(PE:EA=1:1),手性柱拆分， 得139-6A 0.34 g，為白色固體。
步驟6：化合物139-7A的合成
25 mL單口瓶中加入化合物139-6A（0.3 g），溶於甲醇（5 mL），加入氫氧化鋰（0.1 g），水（1 mL），室溫反應2 h。用稀硫酸調節溶液pH至2-3，向反應液中加入飽和食鹽水（5 mL），EA萃取，取有機相無水硫酸鈉乾燥，得0.27 g黃色固體，即化合物139-7A。
步驟8：化合物139-8A的合成
25 mL單口瓶中加入化合物139-7A（0.27 g），溶於DMF（20 mL），加入2-胺基甲基-7-叔丁氧羰基-7-氮雜螺[3.5]壬烷（0.14 g），DIPEA（0.2 mL）和HATU（0.28 g），室溫反應1 h。向反應液中加入飽和食鹽水（5 mL）， EA萃取，取有機相無水硫酸鈉乾燥，柱層析分離產物(DCM : MeOH= 10: 1)，得0.27 g淡黃色固體，即化合物139-8A。
步驟8：化合物139-9A的合成
25 mL單口瓶中加入化合物139-8A (0.27 g)，溶於4M的氯化氫二氧六環溶液 (10 mL)，加入甲醇(1 mL),室溫反應1 h。反應液直接蒸乾，得0.16 g黃色固體，即化合物139-9A。
步驟9：化合物139-10A的合成
25 mL單口瓶中加入化合物139-9A (0.16 g)，溶於THF (10 mL)，加入M32(0.23 g),室溫反應1 h。反應液直接蒸乾，得0.11 g淡黃色固體，即化合物139-10A。
步驟10：化合物139的合成
25 mL單口瓶中加入化合物139-10A (45.0 mg)，溶於DCM(2 mL)，加入TFA（2 mL）,室溫反應1 h。反應液直接蒸乾，向反應液中加入5 mL飽和碳酸氫鈉溶液，調節溶液pH至7-8後，用二氯甲烷和異丙醇的混合溶液萃取，取有機相無水硫酸鈉乾燥，反相色譜柱分離產物(CH 3CN/H 2O = 30%-55%), 得白色固體1.2 mg，即化合物139。ESI-MS m/z: 668.28 1/2[M+2H] +。
1H NMR (500 MHz, Methanol- d 4) δ 9.21 (d, J= 4.2 Hz, 1H), 8.87 (d, J= 5.7 Hz, 1H), 7.69 – 7.63 (m, 1H), 7.39 – 7.34 (m, 5H), 7.30 (d, J= 2.5 Hz, 1H), 7.24 (t, J= 8.9 Hz, 1H), 7.06 (dd, J= 10.0, 2.7 Hz, 1H), 4.61 – 4.57 (m, 8H), 4.51 – 4.42 (m, 5H), 4.35 – 4.21 (m, 4H), 4.17 – 4.08 (m, 2H), 4.06 – 3.99 (m, 5H), 3.87-3.81 (m, 3H), 3.75 – 3.57 (m, 5H), 3.01 – 2.88 (m, 3H), 2.79 – 2.63 (m, 6H), 2.50 – 2.36 (m, 3H), 2.27 – 2.15 (m, 4H), 2.03 – 1.82 (m, 5H), 1.63 – 1.37 (m, 5H), 1.38 – 1.25 (m, 2H)，1.05 - 0.90 (m, 3H), 0.83 – 0.76 (m, 3H).
實施例140：化合物((3S,7aS)-7a-(((7-(8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)-6-亞甲基六氫-1H-吡咯烷-3-基)甲基 2-(((S)-1-((2S、 4R)-4-羥基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)胺基甲醯基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基)胺基甲醯基)-7-氮雜螺[3. 5]壬烷-7-甲酸酯的合成-
步驟1：化合物140-1的合成
將M31（28mg）溶於3 mL THF中，然後加入9mg CDI，40℃反應1 h，LC-MS監測中間體，然後加入M15  N-((S)-1-((2S,4R)-4-羥基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)胺基甲醯基)吡咯烷-1-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基)-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-甲醯胺（37 mg），80℃攪拌12h，LC-MS監測反應完成。加入5.00 mL甲醇淬滅，濃縮有機相，經柱層析分離純化得淡黃色固體24 mg，即化合物140-1。ESI-MS m/z: 650，1/2[M+2H] +。
步驟2：化合物140的合成
將140-1（24mg）溶於1.5 mL DCM中，然後加入0.5 mL TFA，室溫反應30 min，LCMS監測反應完成。LCMS監測反應完成。將反應液直接濃縮，製備液相分離，得白色粉末6 mg，即化合物140。ESI-MS m/z: 628，1/2[M+2H] +。
1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6) δ 9.93 (s, 1H), 9.22 (d, J= 3.6 Hz, 1H), 8.98 (s, 1H), 8.38 (d, J= 7.7 Hz, 1H), 7.76 (s, 1H), 7.63 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 7.44 – 7.20 (m, 6H), 7.04 – 7.02 (m, 1H), 5.11 (d, J= 2.8 Hz, 1H), 4.95– 4.91 (m, 3H), 4.75 (d, J= 11.4 Hz, 1H), 4.50 (d, J= 9.2 Hz, 1H), 4.41 (t, J= 8.0 Hz, 1H), 4.32 – 4.21 (m, 2H), 4.11 – 4.00 (m, 2H), 3.96 – 3.90 (m, 2H), 3.82-3.78 (m, 1H), 3.63-3.51 (m, 4H), 3.28-3.17 (m, 5H), 2.94 (s, 1H), 2.64 – 2.53 (m, 1H), 2.45 (s, 4H), 2.34 (d, J= 16.4 Hz, 2H), 2.12– 1.87 (m, 8H), 1.80 – 1.65 (m, 8H), 1.49 (s, 2H), 1.41-1.30(m, 5H), 1.16 (d, J= 11.6 Hz, 3H), 0.92 (s, 9H), 0.73 (q, J= 7.3 Hz, 3H).
實施例141：化合物 (3 S, 7a S)-7a-((7-(7-(8-乙基-7-氟代-3-羥基萘-1-基)-8-氟代-4-((( R)-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基甲基吡咯并嘧啶-2-基嘧啶-2-基)氧基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)胺基甲醯基)吡咯烷-1-基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-1 H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)呱啶-1-甲酸酯的合成
步驟1：化合物141-1的合成
將M29 (100.0 mg)，4-(丙-2-炔-1-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯 (97.8 mg)，無水硫酸銅 (31.5 mg)和抗壞血酸鈉 (112.8 mg)溶解于THF/叔丁醇/水 (2/2/2 mL)的混合溶劑中，室溫反應3小時。LCMS監測反應完成，向反應液中加入DCM (10 mL)，飽和食鹽水洗一次，有機相無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，柱層析分離純化，得黃色固體95.0 mg，即化合物141-1。ESI-MS m/z: 680 [M+H] +。
步驟2：化合物141-2的合成
將141-1 (95.0 mg) 加入DCM (5 mL)和TFA (2 mL)中，室溫反應10分鐘，LCMS監測反應完成。將反應液直接濃縮，加入1 M NaOH溶液至反應液pH = 8。向反應液中加入DCM (20 mL)，收集有機相，有機相飽和食鹽水洗一次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，得白色固體80.0 mg，即化合物141-2。ESI-MS m/z: 580 [M+H] +。
步驟3：化合物141-3的合成
將M31(30.0 mg)溶於THF (2 mL)中，加入CDI (10.8 mg)，40 ℃反應1小時，然後加入141-2 (38.6 mg)，80 ℃反應4小時，LCMS監測反應完成。加入甲醇 (5.0 mL)淬滅反應，將反應液直接濃縮，柱層析分離純化，得淡黃色固體29.0 mg，即化合物141-3。ESI-MS m/z: 1282 [M+H] +。
步驟4：化合物141的合成
將141-3 (29.0 mg) 加入DCM (5 mL)和TFA (2 mL)中，室溫反應10分鐘，LCMS監測反應完成。將反應液直接濃縮，製備液相分離，得白色粉末11.3 mg，即化合物141。ESI-MS m/z: 620 1/2[M+2H] +。
1H NMR (500 MHz,  Methanol- d 4) δ 9.22 (d, J= 9.5 Hz, 1H), 8.87 (s, 1H), 7.88 (s, 1H), 7.68-7.65 (m, 1H), 7.44-7.38 (m, 4H), 7.30 (d, J= 3.0 Hz, 1H), 7.24 (t, J= 4.0 Hz, 1H), 7.08-7.06 (m, 1H), 5.26 (d, J= 10.5 Hz, 1H), 5.03 (d, J= 7.0 Hz, 1H), 4.30-4.24 (m, 3H), 4.17-4.07 (m, 5H), 3.94-3.79 (m, 3H), 3.69-3.56 (m, 3H), 3.47-3.42 (m, 2H), 3.07-2.98 (m, 3H), 2.81-2.63 (m, 6H), 2.47 (s, 1H), 2.23-2.18 (m, 5H), 2.05-2.03 (m, 2H), 1.98-1.93 (m, 1H), 1.85-1.78 (m, 5H), 1.67-1.61 (m, 3H), 1.51 (d, J= 7.0 Hz, 2H), 1.30-1.28 (m, 6H), 1.12 (d, J= 6.5 Hz, 3H), 0.83-0.79 (m, 3H), 0.74 (d, J= 6.5 Hz, 3H)。
實施例142：化合物 (2S,4R)-1-((S)-2-(4-(6-(4-((1-(((7-(8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基)) -8-氟-4-((R)-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)環丙基)甲基)呱嗪-1-基)吡啶-3-基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-3-甲基丁醯基)-4-羥基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-) 5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物142-1的合成
50mL燒瓶中加入M28（100mg），M37（100mg），MeOH 5mL，1M的 氯化鋅乙醚溶液 0.3uL，加熱至45 oC反應1小時，加入氰基硼氫化鈉（100mg），繼續45 oC反應12小時，加DCM稀釋，水洗，鹽水洗，硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓脫溶，得粗品，柱層析純化得化合物142-1（85mg）。
步驟2：化合物142的合成
50mL燒瓶中加入142-1 （70 mg），DCM 3mL，TFA 1mL，室溫反應0.5小時，檢測後，減壓脫溶，加DCM溶解，用飽和小蘇打水溶液調pH=7-8,攪拌，分層，鹽水洗，硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓脫溶，得粗品，Pre-HPLC純化得化合物142（33.5mg）。ESI-MS m/z: 589.28 1/2[M+2H] +。
1H NMR (500 MHz, DMSO -d 6 ) ppm 9.94 (s, 1H), 9.22 (s, 1H), 8.99 (s, 1H), 8.68-8.46 (m, 1H), 8.00 (dd, J =8.77, 2.07 Hz, 1H), 7.76 (dd, J =9.07, 6.03 Hz, 1H), 7.52-7.27 (m, 1H), 7.04 (d, J =2.51 Hz, 1H), 6.88 (d, J =8.89 Hz, 1H), 5.80-5.72 (m, 1H), 5.32 (d, J =10.26 Hz, 1H), 5.25-4.69 (m, 1H), 4.48-4.23 (m, 1H), 4.14-3.95 (m, 1H), 3.86-3.17 (m, 1H), 2.63-2.25 (m, 1H), 2.23-1.91 (m, 1H), 1.87-1.51 (m, 1H), 1.48-0.60 (m, 1H), 0.46 (s, 1H)。
實施例143 化合物（（7-（8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基）-8-氟-4-（（R）-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基）吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基）氧基）甲基）-6-亞甲基六氫-1H-吡咯烷-3-基）甲基 2-（1-（（S）-1-（2S，4R）-4-羥基-2-（（S）-1-（4-（4-甲基噻唑-5-基）苯基）乙基胺基甲醯基）吡咯烷-1-基）-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基）-1H-1，2，3-三唑-4-基）-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-羧酸酯的合成
步驟1：化合物143-1的合成
將化合物M38(70 mg)溶於5 mL THF中，加入三乙胺 ( 0.12 mL) ，4-二甲胺基吡啶 ( 4 mg) ，對硝基苯基氯甲酸酯 ( 32 mg) ，室溫攪拌反應12 h，然後加入化合物（R） -1-（7-（8-乙基-7-氟-3-（甲氧基甲氧基）萘-1-基）-8-氟-2-（（（5R，7aS）-5-（羥甲基）-2-甲基四氫-1H-吡咯嗪-7a（5H）-基）甲氧基]吡啶并[4，3-d]嘧啶-4-基）-3-甲基呱啶-3-醇 (88 mg)，繼續反應0.5 h。向反應液中加入甲醇淬滅反應，減壓濃縮後柱層析純化（DCM/胺甲醇 = 20：1）得到化合物143-1 (96 mg)，ESI-MS m/z: 654 1/2[M+2H] +。
步驟2：化合物143的合成
將化合物143-1(96 mg)溶於4 mL DCM中，加入4 mL三氟乙酸，室溫反應1 h。將反應液直接濃縮，5.00 mL DCM複溶後再次濃縮，經製備液相分離，得到白色粉末24.6 mg，即化合物143。ESI-MS m/z: 632 1/2[M+2H] +。
1H NMR (500 MHz, DMSO- d 6) δ: 9.93 (d, J= 2.5 Hz, 1H), 9.22 (d, J= 4.0 Hz, 1H), 8.99 (s, 1H), 8.50 (d, J= 7.5 Hz, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.76 (dd, J= 9.0, 6.0 Hz, 1H), 7.44 (d, J= 8.0 Hz, 2H), 7.39 - 7.30 (m, 4H), 7.03 (d, J= 2.5 Hz, 1H), 5.21 (d, J= 10.4 Hz, 1H), 5.16 (d, J= 3.5 Hz, 1H), 4.96 - 4.84 (m, 3H), 4.75 (d, J= 11.0 Hz, 1H), 4.40 - 4.26 (m, 3H), 4.20 - 4.00 (m, 5H), 3.75 (d, J= 10.5 Hz, 4.0 Hz, 1H), 3.64 (d, J= 11.2 Hz, 1H), 3.62 - 3.48 (m, 3H), 3.40 - 3.34 (m, 4H), 3.27 - 3.22 (s, 2H), 2.65 - 2.62 (m, 1H), 2.46 (s, 3H), 2.43 - 2.31 (m, 4H), 2.21 - 2.10 (m, 3H), 2.08 - 1.97 (m, 2H), 1.96 - 1.83 (m, 4H), 1.82 - 1.55 (m, 8H), 1.51 - 1.45 (m, 2H), 1.37 (d, J = 7.0 Hz, 3H), 1.17 (d, J = 10.5 Hz, 3H), 1.04 (d, J = 6.5 Hz, 3H), 0.75 - 0.70 (m, 3H), 0.64 (d, J = 6.5 Hz, 3H) 。
實施例144：化合物（2S，4R）-1-（（S）-2-（4-（5-（1-（（（（7-（8-乙基-7-氟代-3-羥基萘-1-基）-8-氟-4-（（（R）-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基）吡咯并吡啶[4,3-d]嘧啶-2-基）氧基）甲基環丙基甲基環丙基）甲基）呱啶-4-基）氧）吡嗪-2-基吡嗪-2-甲基-1,2,3-三唑-1-基吡唑嗪2-1-2-3-3-三唑1-基吡唑-3-甲基丁醯基）-4-羥基-N-（（S）-1-（4-（4-甲基噻唑-5-基）苯基）乙基）吡咯烷-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物144-1的合成
25 mL單口瓶中加入化合物N-叔丁氧羰基-4-羥基呱啶（1.0 g），溶於THF（10 mL）,加入NaH（300.0 mg），2,5-二溴吡嗪（1.18 g），加熱至50 oC反應5 h。反應液直接蒸乾。柱層析分離純化(PE : EA= 6 : 1)，得1.38 g淡黃色固體，即化合物144-1。
步驟2：化合物144-2的合成
25 mL單口瓶中加入化合物144-1 (690.0 mg)，溶於DMF（10 mL），加入三甲基乙炔基矽（283.7 mg），CuI（73.3 mg），PdCl 2(PPh 3) 2（135.2 mg），DIPEA（0.95 mL），氮氣保護後，加熱至50 oC反應3 h。向反應液中加入飽和食鹽水（5 mL）, EA萃取，取有機相無水硫酸鈉乾燥，柱層析分離產物(PE:EA=6:1)， 得522.2 mg淡黃色固體，即化合物144-2。
步驟3：化合物144-3的合成
25 mL單口瓶中加入化合物144-2 (522.2 mg)，溶於THF（10 mL）,加入1 M TBAF 的四氫呋喃溶液（2.2 mL）, 室溫反應2 h。反應液直接蒸乾。柱層析分離純化(PE : EA= 4 : 1)，得378.2 mg淡黃色固體，即化合物144-3。
步驟4：化合物144-4的合成
25 mL單口瓶中加入化合物M29（100.0 mg），溶於THF（2 mL）,加入化合物144-3（80.2 mg），硫酸銅（35.2 mg），水（2 mL），叔丁醇（2 mL），抗壞血酸鈉（160.0 mg），室溫反應0.5 h。反應液直接蒸乾。柱層析分離純化(DCM : MeOH = 12 : 1)，得132.3 mg淡黃色固體，即化合物144-4。
步驟5：化合物144-5的合成
25 mL單口瓶中加入化合物144-4 (132.3 mg)，溶於4M的氯化氫二氧六環溶液 (5 mL)，加入甲醇(1 mL),室溫反應1 h。反應液直接蒸乾，向反應液中加入5 mL飽和碳酸氫鈉溶液，調節溶液pH至7-8後，用二氯甲烷和異丙醇的混合溶劑萃取，取有機相無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得92.2 mg黃色固體，即化合物144-5。
步驟6：化合物144-6的合成
25 mL單口瓶中加入化合物144-5 (92.2 mg)，溶於MeOH（5 mL）,加入M28（100.0 mg）和1 M ZnCl 2/THF溶液（0.1 mL）, 加熱至40 oC，反應2 h後，加入NaBH 3CN（35.2 mg），反應過夜。反應液直接蒸乾。柱層析分離純化(DCM : MeOH= 10: 1)，得84.6 mg淡黃色固體，即化合物144-6。
步驟7：化合物144的合成
25 mL單口瓶中加入化合物144-6 (84.6 mg)，溶於DCM(2 mL)，加入TFA（2 mL）,室溫反應1 h。反應液直接蒸乾, 向反應液中加入5 mL飽和碳酸氫鈉溶液，調節溶液pH至7-8後，用二氯甲烷和異丙醇的混合溶液萃取，取有機相無水硫酸鈉乾燥，經Pre-HPLC分離產物(CH 3CN/H 2O = 55%-45%), 得白色固體29.3 mg，即化合物144。（純度99.38%）。LCMS：1/2[M+2H] += 597.17。
1H NMR (500 MHz, Methanol- d 4) δ 9.20 (d, J= 5.0 Hz, 1H), 8.86 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 8.72 (s, 1H), 8.54 (d, J= 12.7 Hz, 1H), 8.17 (s, 1H), 7.71 – 7.62 (m, 1H), 7.48 – 7.35 (m, 4H), 7.29 (s, 1H), 7.23 (t, J= 9.2 Hz, 1H), 7.07 (s, 1H), 5.39 (d, J= 10.0 Hz, 1H), 5.12 – 5.00 (m, 3H), 4.58 – 4.41 (m, 5H), 4.24 (t, J= 13.5 Hz, 1H), 3.88 (dd, J= 27.5, 9.3 Hz, 2H), 3.61 – 3.54 (m, 2H), 2.90 (s, 2H), 2.61 (d, J= 6.5 Hz, 1H), 2.53 – 2.42 (m, 6H), 2.35 (s, 2H), 2.24 – 2.11 (m, 3H), 2.08 – 1.94 (m, 3H), 1.89 – 1.71 (m, 5H), 1.52 (d, J= 6.9 Hz, 3H), 1.36 – 1.24 (m, 4H), 1.16 (d, J= 6.5 Hz, 3H), 0.88 – 0.77 (m, 5H), 0.72 (s, 2H), 0.51 (s, 2H).
實施例147：化合物（2S，4R）-1-（（R）-2-（3-（1-（（1-（（7-（8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基）-8-氟-4-（（R）-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基）吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基）氧基）甲基）環丙基）甲基）呱啶-4-基）甲基）呱啶-1-基）異噁唑-5-基）-3-甲基丁醯基）-4-羥基-N-（（S）-1-（4-（4-甲基噻唑-5-基）苯基）乙基吡咯烷-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物147-1的合成
將4-（呱啶-4-基甲基）呱啶-1-羧酸叔丁酯 (270 mg) 加入到25 mL單口瓶中，加入中間體M3(550mg)，加入DMA(6mL)，滴加DIPEA(0.5mL), 140℃反應2h。用水稀釋反應液，EA萃取兩次，收集並合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，濃縮物經柱層析分離純化得到化合物147-1（234 mg）。ESI-MS m/z: 434.3 [M+H] +。
步驟2：化合物147-2的合成
將化合物147-1 (234 mg) 加入到25 mL單口瓶中，加入2 mL 甲醇，2 mL 四氫呋喃，2mL水，後加入氫氧化鋰（105mg），室溫下反應30min。濃縮反應液，後加水稀釋，用飽和碳酸氫鈉溶液調節pH至5，用二氯甲烷：異丙醇（5：1）溶液萃取兩次，收集並合併有機相，飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得到化合物147-2（210 mg）。ESI-MS m/z: 450.3 [M+H] +。
步驟3：化合物147-3的合成
將化合物147-2（210 mg）、M29-2（180mg）、HATU（250mg）、N,N-二異丙基乙胺 ( 0.3mL)溶於N,N-二甲基甲醯胺 ( 5.00mL )中，25℃反應1h。反應完畢後，加水稀釋，加入乙酸乙酯萃取，有機相用飽和食鹽水洗滌，經柱層析（二氯甲烷/甲醇）純化，手性柱拆分得到化合物147-3（160mg）。ESI-MS m/z:763.4 [M+H] +。
步驟4：化合物147-4的合成
將化合物147-3（160 mg）溶於二氯甲烷 ( 5mL )中，加入三氟乙酸（1mL )，25℃反應20分鐘。反應完畢後，濃縮，加水稀釋，用飽和碳酸氫鈉溶液調節pH至8~9，加入二氯甲烷/異丙醇（10:1）萃取，無水硫酸鈉乾燥，濃縮，得到化合物147-4（110 mg）。ESI-MS m/z:663.4 [M+H] +。
步驟5：化合物147-5的合成
將化合物147-4（110 mg）加入到50 mL單口瓶中，加入3 mL 甲醇，加入M28（120 mg），加入1M的 氯化鋅的四氫呋喃溶液（0.1mL），室溫下攪拌1h。加入氰基硼氫化鈉（40 mg），50℃下攪拌3h。用飽和氯化銨溶液淬滅反應液，EA萃取兩次，收集並合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得到化合物147-5（190 mg）。ESI-MS m/z: 598.3 1/2[M+2H] +。
步驟6：化合物147的合成
將化合物147-5 (190 mg) 加入到25 mL單口瓶中，加入2 mL DCM，加入1 mL三氟乙酸，室溫下反應1h。減壓濃縮後，經pre-HPLC純化得到147（95.5 mg）。ESI-MS m/z: 585.3 1/2[M+2H] +。
實施例148：化合物（2S，4R）-1-（（S）-2-（4-（3-（（4-（（1-（（7-（8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基）-8-氟-4-（（R）-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基）吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基）氧基）甲基）環丙基）甲基）呱嗪-1-基）甲基）雙環[1.1.1]戊-1-基）-1H-1,2,3-三唑-1-基）-3-甲基丁醯基）-4-羥基-N-（（S）-1-（4-（4-甲基噻唑-5-基）苯基）乙基）吡咯烷-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物148-1的合成
25 mL單口瓶中加入化合物（3-乙基雙環[1.1.1]戊烷-1-基）甲醇 (840.0 mg)，溶於DCM（10 mL），加入DMP（3.52 g），室溫反應3 h。向反應液中加入飽和碳酸氫鈉（10 mL），DCM萃取，取有機相無水硫酸鈉乾燥，柱層析分離產物(PE:EA=6:1)， 得到634.2 mg淡黃色固體，即化合物148-1。
步驟2：化合物148-2的合成
25 mL單口瓶中加入化合物148-1 (634.2 mg)，溶於MeOH（5 mL），加入N-叔丁氧羰基-呱嗪（1.2 g）和1 M 的氯化鋅四氫呋喃溶液（0.1 mL），加熱至40 oC，反應2 h後，加入NaBH 3CN（908.7 mg），反應過夜。反應液直接蒸乾，析分離純化(PE : EA= 1: 1)，得845.8 mg淡黃色固體，即化合物148-2。
步驟3：化合物148-3的合成
25 mL單口瓶中加入化合物M29（100.0 mg），溶於THF（2 mL），加入化合物148-2（70.0 mg），硫酸銅（35.2 mg），水（2 mL），叔丁醇（2 mL），抗壞血酸鈉（160.0 mg），室溫反應0.5 h。反應液直接蒸乾，柱層析分離純化(DCM : MeOH = 12 : 1)，得101.2 mg淡黃色固體，即化合物148-3。
步驟5：化合物148-4的合成
25 mL單口瓶中加入化合物148-3 (101.2 mg)，溶於4M的氯化氫二氧六環溶液 (5 mL)，加入甲醇(1 mL),室溫反應1 h。反應液直接蒸乾，向反應液中加入5 mL飽和碳酸氫鈉溶液，調節溶液pH至7-8後，用二氯甲烷和異丙醇的混合溶液萃取，取有機相無水硫酸鈉乾燥，得76.7 mg黃色固體，即化合物148-4。
步驟8：化合物148的合成
25 mL單口瓶中加入化合物148-4 (76.7 mg)，溶於MeOH（5 mL），加入M43（71.4 mg）和1 M ZnCl 2/THF溶液（0.1 mL）, 加熱至40 oC，反應2 h後，加入NaBH 3CN（29.8 mg），反應過夜。反應液直接蒸乾，經Pre-HPLC分離產物(CH 3CN/H 2O = 55%-45%), 得白色固體18.9 mg，即化合物148。（純度98.43%）。LCMS：1/2[M+2H] += 590.72。
1H NMR (500 MHz, Methanol- d 4) δ 9.20 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 8.87 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 7.91 (d, J = 11.5 Hz, 1H), 7.66 (dd, J = 8.4, 5.9 Hz, 1H), 7.48 – 7.35 (m, 4H), 7.33 – 7.17 (m, 2H), 7.06 (t, J = 2.7 Hz, 1H), 5.26 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 5.12 – 4.94 (m, 1H), 4.59 (s, 1H), 4.55 – 4.38 (m, 5H), 4.32 – 4.18 (m, 1H), 3.88 (dd, J = 11.0, 3.9 Hz, 1H), 3.81 (d, J = 11.1 Hz, 1H), 3.63 (dd, J = 32.6, 13.3 Hz, 1H), 3.53 – 3.41 (m, 1H), 2.96 (s, 1H), 2.61 – 2.51 (m, 5H), 2.47 (d, J = 3.5 Hz, 5H), 2.40 (d, J = 12.7 Hz, 2H), 2.25 – 2.12 (m, 3H), 2.09 (d, J = 1.3 Hz, 6H), 1.95 (ddd, J = 9.1, 6.8, 3.6 Hz, 1H), 1.90 – 1.82 (m, 1H), 1.79 (d, J = 10.6 Hz, 2H), 1.52 (d, J = 7.0 Hz, 3H), 1.29 (d, J = 13.6 Hz, 5H), 1.15 – 1.05 (m, 3H), 0.82 (dd, J = 16.3, 7.5 Hz, 3H), 0.76 – 0.68 (m, 5H), 0.50 (d, J = 7.1 Hz, 2H).
化合物149：化合物（2S，4R）-1-（（S）-2-（4-（3-（4-（（1-（（（7-（8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基）-8-氟-4-（（R）-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基）吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基）氧基）甲基）環丙基）甲基）呱嗪-1-基）雙環[1.1.1]戊-1-基）-1H-1,2,3-三唑-1-基）-3-甲基丁醯基）-4-羥基-N-（（S）-1-（4-（4-甲基噻唑-5-基）苯基）乙基）吡咯烷-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物149-1的合成
將 N, N-雙(2-氯乙基)胺基甲酸叔丁酯（1.2 g）和3-胺基雙環[1.1.1]戊烷-1-羧酸甲酯（0.7 g）溶於15 mL DMF中，加入K 2CO 3（2.0 g），KI（1.65 g），N 2氛圍升溫至70℃反應12 h。將反應液加入到水中，加入EA，萃取，收集有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾，收集濾液，減壓濃縮後經柱層析純化（PE/EA = 3: 2）得到化合物149-1（167 mg）。ESI-MS m/z: 311.1 [M+H] +。
步驟2：化合物149-2的合成
將化合物149-1（167 mg）溶於5 mL THF中，冰浴下加入LiAlH 4（31 mg），保持冰浴條件下反應0.5 h。反應完畢後，向反應液中加入適量EA稀釋，加入十水合硫酸鈉（173 mg），攪拌10 min淬滅反應，加入無水硫酸鈉乾燥，過濾，收集濾液，旋乾得到化合物149-2（151 mg）。ESI-MS m/z: 283.1 [M+H] +。
步驟3：化合物149-3的合成
將化合物149-2（151 mg）溶於6 mL DCM中，冰浴下加入DMP（261 mg），然後轉移至室溫反應1 h。過濾，除去不溶性固體，向濾液中加入DCM和水，萃取，收集有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾，收集濾液，減壓濃縮後經柱層析純化（PE/EA = 3: 2）得到化合物149-3（131 mg）。ESI-MS m/z: 281.1 [M+H] +。
步驟4：化合物149-4的合成
將化合物149-3（131 mg）溶於6 mL MeOH，加入(1-重氮基-2-氧代丙基)膦酸二甲酯 （0.10 mL），碳酸鉀（128 mg），室溫反應3 h。將反應液加入水中，加入EA，萃取，收集有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾，收集濾液，減壓濃縮後經柱層析純化（PE/EA = 3: 2）得到化合物149-4（90 mg）。ESI-MS m/z: 277.1 [M+H] +。
步驟5：化合物149-5的合成
將化合物149-4（90 mg）和化合物M29（164 mg）溶于叔丁醇（3 mL）、四氫呋喃（3 mL）和水（3 mL），加入無水硫酸銅（47 mg），抗壞血酸鈉（168 mg），室溫反應3 h。將反應液旋乾，加入DCM和水，萃取，收集有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾，收集濾液，減壓濃縮後經柱層析純化（DCM/MeOH =10: 1）得到化合物149-5（231 mg）。ESI-MS m/z: 732.3 [M+H] +。
步驟6：化合物149-6的合成
將化合物149-5溶於5 mL DCM和5 mL氯化氫二氧六環溶液（4M），室溫反應0.5 h。反應完畢後，旋乾反應液，加入EA和水，萃取，收集水相，加入無水碳酸鈉調節水相pH至鹼性，加入DCM/異丙醇（3：1）萃取，收集並合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾，收集濾液，旋乾得到化合物149-6（177 mg）。ESI-MS m/z: 633.3 [M+H] +。
步驟7：化合物149的合成
將化合物 149-6（80 mg）和化合物M43（85 mg）溶於甲醇（5 mL）中，加入氯化鋅溶液（0.2 mL / 1 M in THF），40℃反應1小時，然後加入氰基硼氫化鈉（24 mg），升溫至60℃繼續反應6小時。加入飽和氯化銨溶液淬滅反應，向反應液中加入DCM，萃取，收集有機相，有機相用飽和食鹽水洗一次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，收集濾液，旋乾得粗產物，進一步經製備液相分離，得到白色粉末27.8 mg，即149。ESI-MS m/z: 583.2 1/2[M+2H] +。
1H NMR (500 MHz, DMSO- d 6) δ: 9.93 (d, J= 2.5 Hz, 1H), 9.22 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 8.99 (s, 1H), 8.51 (d, J= 7.5 Hz, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.76 (dd, J= 9.0, 6.0 Hz, 1H), 7.44 (d, J= 8.5 Hz, 2H), 7.40 - 7.31 (m, 4H), 7.03 (d, J= 2.5 Hz, 1H), 5.23 (d, J= 10.5 Hz, 1H), 5.17 (d, J= 3.5 Hz, 1H), 4.91 (t, J= 7.5 Hz, 1H), 4.75 (d, J= 9.5 Hz, 1H), 4.40 - 4.24 (m, 5H), 4.08 - 4.00 (m, 1H), 4.76 - 3.73 (m, 1H), 3.68 - 3.50 (m, 2H), 3.43 - 3.37 (m, 1H), 2.46 - 2.26 (m, 14H), 2.19 - 1.96 (m, 10H), 1.80 - 1.62 (m, 4H), 1.37 (d, J= 7.0 Hz, 3H), 1.17 (d, J= 12.0 Hz, 3H), 1.03 (d, J= 6.5 Hz, 3H), 0.76 - 0.71 (m, 3H), 0.65 - 0.63 (m, 5H), 0.41 (s, 2H).
實施例150：化合物（2S，4R）-1-（（R）-2-（3-（（7-（（1-（（7-（（7-（8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基）-8-氟-4-（（R）-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基）吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基）氧基）甲基）環丙基）甲基）-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基）氧基）異噁唑-5-基）-3-甲基丁醯基）-4-羥基-N-（（S）-1-（4-（4-甲基噻唑-5-基）苯基）乙基）吡咯烷-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物150-1的合成
將化合物2-羥基-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯（500 mg）、（R）-2-（3-羥基異噁唑-5-基）-3-甲基丁酸甲酯（412 mg）、三苯基膦（1.08 g）、DIAD（0.84 g）溶於四氫呋喃（10 mL）中，60℃反應1小時。反應完畢後，濃縮，經柱層析（PE:EA=10:1）進行純化，得到化合物150-1（710 mg）。ESI-MS m/z:423.21 [M+H] +。
步驟2：化合物150-2的合成
將化合物150-1（710 mg）溶於甲醇（10 mL）和水（10 mL）中，加入氫氧化鋰（140 mg），室溫反應1小時。反應完畢後，加稀鹽酸調至pH=2，加入二氯甲烷/異丙醇（10:1）萃取三次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，得到將化合物150-2（550 mg）。ESI-MS m/z:409.22 [M+H] +。
步驟3：化合物150-3的合成
將化合物150-2（550 mg）、M29-2（491 mg）、HATU（1.1 g）、N,N-二異丙基乙胺 (900 mg)溶於N,N-二甲基甲醯胺 ( 5 mL )中，室溫反應1小時。反應完畢後，加水稀釋，乙酸乙酯萃取3次，有機相用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鎂乾燥，過濾，旋乾，濃縮物經柱層析（純乙酸乙酯）純化，後經手性拆分（色譜柱：CHIRAL ART IB (20.0 mm×250 mm，5µm)；柱溫：35℃；波長：254 nm；流速：25 mL/min；流動相：0.1%二乙胺的正己烷：0.1%二乙胺的乙醇（75：25））得到化合物150-3（280 mg）。ESI-MS m/z:722.14 [M+H] +。
步驟4：化合物150-4的合成
將化合物150-3（150 mg）溶於二氯甲烷 ( 6 mL )中，加入4M的氯化氫二氧六環溶液（2 mL )，室溫攪拌反應30分鐘。反應完畢後，旋乾溶劑，加水稀釋，加入二氯甲烷/異丙醇（10:1）萃取，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，得到化合物150-4（105 mg）。ESI-MS m/z:622.40 [M+H] +。
步驟5：化合物150-5的合成
將化合物150-4（105 mg）、M28（98 mg）、1M的氯化鋅四氫呋喃溶液 ( 0.5 mL)溶於甲醇（10 mL）中，40℃反應1小時。再加入氰基硼氫化鈉 (25 mg)，60℃攪拌反應過夜。反應完畢後，加入氯化銨溶液淬滅，二氯甲烷/甲醇（10:1）萃取3次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，經柱層析（二氯甲烷/甲醇）純化，得到化合物150-5（100 mg）。ESI-MS m/z:600.27 1/2[M+2H] +。
步驟6：化合物150的合成
將化合物150-5（100 mg）溶於二氯甲烷 ( 5 mL )中，加三氟乙酸 ( 2 mL )，室溫攪拌反應1小時。反應完畢後，濃縮，經Pre-HPLC（SunFire C18色譜柱(19.0 mm×250 mm，5µm)；A：0.05%三氟乙酸水溶液，B：乙腈，濃度梯度：20%B至60%B；8.03-8.45 min；流速：20 mL/min，254nm）製備得到化合物150（37.8 mg）。ESI-MS m/z:578.20 1/2[M+2H] +。
1H NMR (500 MHz, DMSO- d 6 ) δ 9.21 (d, J = 3.4 Hz, 1H), 8.99 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 8.32 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 7.78 – 7.71 (m, 1H), 7.46 (q, J = 8.4 Hz, 1H), 7.40 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 7.35 (d, J = 9.6 Hz, 2H), 7.31 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 7.07 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 6.06 (s, 1H), 5.19 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 4.92 – 4.83 (m, 1H), 4.83 – 4.71 (m, 2H), 4.41 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 4.30 (dd, J = 22.0, 10.0 Hz, 5H), 4.09 – 3.95 (m, 1H), 3.74 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 3.62 (d, J = 13.3 Hz, 1H), 3.60 – 3.48 (m, 2H) ,2.45 (d, J = 3.9 Hz, 3H), 2.40-2.21 (m, 9H), 2.19 – 1.93 (m, 5H), 1.81 – 1.64 (m, 6H), 1.59 – 1.47 (m, 5H), 1.38 (d, J = 7.0 Hz, 3H), 1.17 (d, J = 12.1 Hz, 4H), 1.08 (d, J = 6.5 Hz, 3H), 0.85 (t, J = 6.9 Hz, 1H), 0.76 – 0.70 (m, 6H), 0.64 (s, 2H), 0.40 (s, 2H).
實施例152：化合物（2S，4R）-1-（(S)-2-（4-（6-（1-（（1-（（7-（8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基）-8-氟-4-（(R)-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基）吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基）氧基）甲基）環丙基）甲基）呱啶-4-基）胺基）吡啶-3-基）-1H-1，2，3-三唑-1-基）-3-甲基丁醯）-4-羥基-N-（(S)-1-（4-羥基-N-（4-（4-甲基噻唑-5-基）（苯基）乙基）吡咯烷-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物152-1的合成
1-叔丁氧羰基-4-胺基呱啶（1550 mg），加入10 mL N,N-二甲基甲醯胺溶解後，加入5-乙炔基-2-氟吡啶（625 mg），再加入N,N-二異丙基乙胺（3.41 mL）。100℃攪拌8小時。LCMS監測反應完成。用水稀釋反應液，乙酸乙酯萃取兩次，有機相用飽和食鹽水洗滌三次，收集並合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，經柱層析純化得到化合物152-1（411 mg）。ESI-MS m/z: 302.2 [M+H] +。
步驟2：化合物152-2的合成
將化合物152-1 (103 mg) 加入到50 mL單口瓶中，加入4 mL 四氫呋喃，2 mL叔丁醇以及2 mL水，加入M1（120 mg），硫酸銅（38 mg），抗壞血酸鈉（135 mg），20℃攪拌12小時。LCMS監測反應完成。減壓濃縮，經柱層析純化得到化合物152-2（102 mg）。ESI-MS m/z: 758.4 [M+H] +。
步驟3：化合物152-3的合成
將化合物152-2 (102 mg) 加入到10 mL單口瓶中，加入3 mL二氯甲烷，1 mL 4M的氯化氫二氧六環溶液，20℃攪拌0.5小時。用飽和碳酸氫鈉溶液中和反應液，二氯甲烷/異丙醇（10:1）萃取兩次，收集並合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得到化合物152-3（88 mg）。ESI-MS m/z:658.3 [M+H] +。
步驟4：化合物152-4的合成
將M28 (70 mg) 加入到50 mL單口瓶中，加入3 mL 甲醇，加入152-3（88 mg），加入1M的氯化鋅四氫呋喃溶液（0.18 mL），40℃攪拌2小時。加入氰基硼氫化鈉（30 mg），50℃攪拌12小時。LCMS監測反應完成，減壓濃縮，經柱層析純化得到化合物152-4（62 mg）。ESI-MS m/z:617.8 1/2[M+2H] +。
步驟5：化合物152的合成
將化合物152-4 (62 mg) 加入到10 mL單口瓶中，加入2 mL DCM，加入1 mL三氟乙酸，室溫下反應0.5小時。LCMS監測反應完成。減壓濃縮，經pre-HPLC純化得到化合物152（11.1 mg）。ESI-MS m/z: 596.32 1/2[M+2H] +。
1H NMR (500 MHz, Methanol-d 4) δ 9.10 (d, J = 1.1 Hz, 1H), 8.77 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 8.30 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 8.23 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 7.72 (dt, J = 8.7, 2.6 Hz, 1H), 7.57 (dd, J = 9.0, 5.7 Hz, 1H), 7.36 – 7.29 (m, 4H), 7.20 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 7.14 (t, J = 9.4 Hz, 1H), 6.96 (t, J = 2.6 Hz, 1H), 6.48 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 5.26 – 5.19 (m, 1H), 4.95 (t, J = 6.9 Hz, 1H), 4.43 (t, J = 8.3 Hz, 1H), 4.38 – 4.33 (m, 2H), 4.17 (t, J = 14.4 Hz, 1H), 3.85 – 3.72 (m, 2H), 3.68 – 3.53 (m, 2H), 3.48 (dd, J = 17.5, 11.3 Hz, 1H), 3.36 (d, J = 10.6 Hz, 1H), 2.98 (s, 2H), 2.56 – 2.49 (m, 1H), 2.43 (d, J = 13.5 Hz, 1H), 2.38 (s, 3H), 2.36 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 2.14 – 2.05 (m, 5H), 1.93 – 1.86 (m, 3H), 1.76 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 1.68 (t, J = 11.2 Hz, 3H), 1.48 (d, J = 14.4 Hz, 3H), 1.43 (d, J = 7.0 Hz, 3H), 1.06 (d, J = 6.7 Hz, 2H), 0.82 – 0.78 (m, 6H), 0.72 (d, J = 2.2 Hz, 2H), 0.71 (d, J = 3.2 Hz, 2H), 0.63 (s, 2H), 0.43 (s, 2H).
實施例154：化合物（2S，4R）-1-（(S)-2-（4-（6-（1-（（1-（（7-（8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基）-8-氟-4-（(R)-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基）吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基）氧基）甲基）環丙基）甲基）呱啶-4-基）（甲基）胺基）吡啶-3-基）-1H-1，2，3-三唑-1-基）-3-甲基丁醯基）-4-羥基- N-（(S)-1-（4-（4-甲基噻唑-5-基）苯基）乙基）吡咯烷-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物154-1的合成
1-叔丁氧羰基-4-胺基呱啶（1550 mg），加入10 mL N,N-二甲基甲醯胺溶解後，加入5-乙炔基-2-氟吡啶（625 mg），再加入N,N-二異丙基乙胺（3.41 mL）。100℃攪拌8小時。LCMS監測反應完成。用水稀釋反應液，乙酸乙酯萃取兩次，有機相用飽和食鹽水洗滌三次，收集並合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，經柱層析純化得到化合物154-1（411 mg）。ESI-MS m/z: 302.2 [M+H] +。
步驟2：化合物154-2的合成
將化合物154-1（140 mg）加入3 mL 四氫呋喃溶解後，加入氫化鈉（56 mg），再加入碘甲烷（132 mg）。50℃攪拌12小時。LCMS監測反應完成。用水稀釋反應液，乙酸乙酯萃取兩次，收集並合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，經柱層析純化得到化合物154-2（122 mg）。ESI-MS m/z: 316.2 [M+H] +。
步驟3：化合物154-3的合成
將化合物154-2 ( 122 mg) 加入到50 mL單口瓶中，加入4 mL 四氫呋喃，2 mL叔丁醇以及2 mL水，加入M29（130 mg），硫酸銅（41 mg），抗壞血酸鈉（147 mg），20℃攪拌12小時。LCMS監測反應完成。減壓濃縮，經柱層析純化得到化合物154-3（118 mg）。ESI-MS m/z: 772.4 [M+H] +。
步驟4：化合物154-4的合成
將化合物154-3 ( 118 mg) 加入到10 mL單口瓶中，加入3 mL二氯甲烷，1 mL 4M的氯化氫二氧六環溶液，20℃攪拌0.5小時。用飽和碳酸氫鈉溶液中和反應液，二氯甲烷/異丙醇（10:1）萃取兩次，收集並合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得到粗品化合物154-4（103 mg）。ESI-MS m/z:672.3 [M+H] +。
步驟5：化合物154-5的合成
將M28 (80 mg) 加入到50 mL單口瓶中，加入3 mL 甲醇，加入154-4（103 mg），加入1M的氯化鋅四氫呋喃溶液（0.20 mL），40℃攪拌2小時。加入氰基硼氫化鈉（34 mg），50℃攪拌12小時。LCMS監測反應完成。減壓濃縮，經柱層析純化得到化合物154-5（112 mg）。ESI-MS m/z:624.8 1/2[M+2H] +。
步驟6：化合物154的合成
將化合物154-5 ( 112 mg) 加入到10 mL單口瓶中，加入2 mL二氯甲烷，0℃下加入1 mL三氟化硼乙醚。20℃攪拌1小時。LCMS監測反應完成。用飽和碳酸氫鈉溶液中和反應液，二氯甲烷/異丙醇（5:1）萃取兩次，收集並合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後經pre-HPLC純化得到化合物154（41.7 mg）。ESI-MS m/z:603.39 1/2[M+2H] +。
1H NMR (500 MHz, Methanol-d 4) δ 9.22 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 8.86 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 8.52 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.35 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 7.92 (dt, J = 9.0, 3.2 Hz, 1H), 7.67 (dd, J = 9.0, 5.7 Hz, 1H), 7.48 – 7.38 (m, 4H), 7.30 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 7.24 (t, J = 9.3 Hz, 1H), 7.06 (t, J = 2.6 Hz, 1H), 6.72 (dd, J = 9.1, 3.2 Hz, 1H), 5.33 (d, J = 10.3 Hz, 1H), 5.05 (q, J = 7.2 Hz, 1H), 4.63 – 4.39 (m, 7H), 4.27 (t, J = 13.6 Hz, 1H), 3.95 – 3.83 (m, 2H), 3.69 – 3.57 (m, 1H), 3.48 (t, J = 11.3 Hz, 1H), 2.89 (d, J = 1.4 Hz, 3H), 2.71 – 2.52 (m, 3H), 2.47 (d, J = 11.7 Hz, 4H), 2.34 – 2.11 (m, 5H), 2.01 – 1.83 (m, 6H), 1.79 (d, J = 10.4 Hz, 2H), 1.73 – 1.64 (m, 2H), 1.53 (d, J = 7.1 Hz, 3H), 1.33 – 1.25 (m, 4H), 1.16 (d, J = 6.8 Hz, 2H), 0.85 – 0.80 (m, 5H), 0.78 (d, J = 9.8 Hz, 2H), 0.58 (s, 2H).
實施例155：化合物（2S，4R）-1-（（R）-2-（3-（9-（（1-（（7-（8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基）-8-氟-4-（（R）-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基）吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基）氧基）甲基）環丙基）甲基）-3，9-二氮雜螺 [5.5]十一烷-3-基）異噁唑-5-基）-3-甲基丁醯基）-4-羥基-N-（（S）-1-（4-（4-（4-甲基噻唑-5-基）苯基）乙基）吡咯烷-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物155-1的合成
將化合物3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯（1.15 g）、化合物M34（0.61 g）、三乙胺（1 mL）溶於N,N-二甲基乙醯胺（3 mL）中， 145℃反應3小時。反應完畢後，加入水稀釋，乙酸乙酯萃取三次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，得到粗品經柱層析純化得到化合物155-1（240 mg）。ESI-MS m/z:436.2 [M+H] +。
步驟2：化合物155-2的合成
將化合物155-1（240 mg）溶於甲醇（10mL）和水（2mL）中，加入氫氧化鋰（227 mg），25℃反應1小時。反應完畢後，加檸檬酸調至pH=4，加入二氯甲烷/異丙醇（10:1）萃取三次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，得到將化合物155-2（210 mg）。ESI-MS m/z:422.1 [M+H] +。
步驟3：化合物155-3的合成
將化合物155-2（210 mg）、M29-2（170 mg）、HATU（230 mg）、N,N-二異丙基乙胺 ( 0.25 mL)溶於N,N-二甲基甲醯胺 ( 5.00mL )中，25℃反應1小時。反應完畢後，加入乙酸乙酯與水萃取，有機相用飽和食鹽水洗滌，經柱層析（二氯甲烷/甲醇）純化，手性柱拆分得到化合物155-3（80 mg）。ESI-MS m/z:735.3 [M+H] +。
步驟4：化合物155-4的合成
將化合物155-3（80 mg）溶於二氯甲烷 ( 5mL )中，加入4M的氯化氫二氧六環溶液（1mL )，25℃反應20分鐘。反應完畢後，用飽和碳酸氫鈉溶液中和，加入二氯甲烷/異丙醇（10:1）萃取，乾燥，濃縮，得到155-4（65 mg）。ESI-MS m/z:635.40 [M+H] +。
步驟5：化合物155-5的合成
將化合物155-4（ 65 mg）、M28（90 mg）、1M的氯化鋅四氫呋喃溶液 ( 0.32mL)溶於甲醇（5mL）中，40℃反應2小時。再加入氰基硼氫化鈉 ( 50mg)，40℃反應8小時。反應完畢後，加入氯化銨溶液淬滅，濃縮，經柱層析（二氯甲烷/甲醇）純化，得到化合物155-5（86 mg）。ESI-MS m/z:606.27 1/2[M+2H] +。
步驟6：化合物155的合成
將化合物155-5（86 mg）溶於二氯甲烷 ( 4mL )中，加三氟乙酸 ( 1mL )，25℃反應1小時。反應完畢後，濃縮，經Pre-HPLC（C18色譜柱，A：0.05%三氟乙酸水溶液，B：乙腈，濃度梯度：20%B至75%B，11min，流速：15mL/min，254nm）分離純化，濃縮，碳酸氫鈉溶液中和，產物析出，過濾，得到化合物155（30.7 mg）。ESI-MS m/z:584.10 1/2[M+2H] +。
實施例156：化合物(2S，4R)-1-((R)-2-(3-(3-(4-((1-((7-(8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)環丙基)甲基)呱嗪-1-基)氮雜環丁烷-1-基)異噁唑-5-基)-3-甲基丁醯基)-4-羥基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲醯胺的合成 步驟1：化合物156-1的合成
將3-甲基-2-(3-(全氟丁氧基)異惡唑-5-基)丁酸甲酯 M34（2.75 g）、4-(氮雜環丁烷-3-基)呱嗪-1-羧酸叔丁酯 92-3（1.00 g）溶於DMA（15 mL）中，緩慢加入TEA（1.73 mL），140℃條件下反應2h。LC-MS監測反應完成，向反應液中加入飽和氯化銨（5 mL）淬滅反應，加入EA萃取，飽和食鹽水洗一次，有機相無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，柱層析分離純化，得白色固體450.0 mg，即化合物156-1。ESI-MS m/z: 423.3 [M+H] +。
步驟2：化合物156-2的合成
將化合物156-1（450 mg）溶於MeOH（10 mL）和水（3 mL）中，緩慢加入氫氧化鋰一水合物（230 mg），室溫條件下反應2h。LC-MS監測反應完成。向反應液中加入DCM萃取，飽和食鹽水洗一次，有機相無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，得白色固體435 mg，即化合物156-2。ESI-MS m/z: 409.2 [M+H] +。
步驟3：化合物156-3的合成
稱取化合物156-2（435 mg）、化合物M29-2（468 mg），HATU（614 mg），加入DMF（10 mL）溶解，冰浴條件下緩慢加入DIPEA（0.70 mL），緩慢升至室溫反應1h。LC-MS監測反應完成。向反應液中加入DCM萃取，飽和食鹽水洗一次，有機相無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，柱層析分離純化，得白色固體690 mg，即化合物156-3。ESI-MS m/z: 722.4 [M+H] +。
步驟4：化合物156-4的合成
將化合物156-3 (690 mg) SFC拆分，濃縮，得白色固體275 mg，即化合物156-4。ESI-MS m/z: 722.3 [M+H] +。
步驟5：化合物156-5的合成
將156-4 (275 mg) 加入DCM (5 mL)和1M的氯化氫二氧六環溶液(5 mL)中，室溫反應10分鐘，LCMS監測反應完成。將反應液直接濃縮，加入飽和碳酸鈉溶液至反應液pH = 8。向反應液中加入DCM (20 mL)，收集有機相，有機相飽和食鹽水洗一次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，得白色固體237 mg，即化合物156-5。ESI-MS m/z: 622.3 [M+H] +。
步驟6：化合物156-6的合成
將化合物156-5 (237 mg)和化合物M28（237 mg）溶於甲醇 (10 mL)中，加入1M的氯化鋅四氫呋喃溶液 (0.69 mL)，40℃反應1小時，然後加入氰基硼氫化鈉 (87 mg)，60 ℃反應12小時，LCMS監測反應完成。加入飽和碳酸氫鈉溶液（5.0 mL）淬滅反應，向反應液中加入DCM (20 mL)，收集有機相，濃縮，柱層析分離純化，得白色粉末345 mg，即化合物156-6。ESI-MS m/z: 600.5 1/2[M+2H] +。
步驟7：化合物156的合成
將化合物156-6 (310 mg) 加入DCM (10 mL)和TFA (2 mL)中，室溫反應10分鐘，LCMS監測反應完成。將反應液直接濃縮，製備液相分離，得白色粉末88.4 mg，即化合物156。ESI-MS m/z: 578.1 1/2[M+2H] +。
1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6) δ 9.96 (s, 1H), 9.22 (s, 1H), 8.99 (s, 1H), 8.42 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 7.77 (dd, J= 9.0, 6.1 Hz, 1H), 7.44 (d, J= 8.2 Hz, 2H), 7.36 (dd, J= 12.5, 8.9 Hz, 4H), 7.04 (d, J= 2.3 Hz, 1H), 5.84 (s, 1H), 5.12 (d, J= 3.6 Hz, 1H), 4.95 – 4.86 (m, 1H), 4.76 (d, J= 7.1 Hz, 1H), 4.42 – 4.24 (m, 5H), 4.05 (dd, J= 26.0, 13.1 Hz, 1H), 3.87 (t, J= 6.0 Hz, 2H), 3.69 (dt, J= 14.7, 7.4 Hz, 1H), 3.62 (d, J= 12.8 Hz, 3H), 3.58 (d, J= 9.7 Hz, 1H), 3.56 – 3.44 (m, 1H), 3.43 – 3.38 (m, 2H), 3.34 – 3.30 (m, 1H), 3.21 (d, J= 5.8 Hz, 1H), 2.46 (s, 3H), 2.38 – 2.10 (m, 10H), 2.05 – 1.97 (m, 2H), 1.82 – 1.62 (m, 4H), 1.41 (dd, J= 32.6, 7.0 Hz, 3H), 1.17 (d, J= 11.7 Hz, 4H), 0.95 (t, J= 7.4 Hz, 3H), 0.87 – 0.70 (m, 7H), 0.65 (s, 2H), 0.41 (s, 2H).
實施例157：化合物（2S，4R）-1-（（S）-2-（4-（6-（（3R，7aR）-7a-（（（7-（8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基）-8-氟-4-（（R）-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基）吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基）氧基）甲基）六氫-1H-吡咯嗪-3-基）甲氧基）吡啶-3-基）-1H-1-1，2，3-三唑-1-基）-3-甲基丁醯基）-4-羥基-N-（（（S）-1-（4-（4-甲基噻唑-5-基）苯基）乙基）吡咯烷-2-羧醯胺的合成
步驟1：化合物157-1的合成
將化合物88-3 （R）-1-（7-（8-乙基-7-氟-3-（甲氧基-甲氧基）萘-1-基）-8-氟-2-（（（3R，7aR）-3-（羥甲基）四氫-1H-吡咯嗪-7a（5H）-基）甲氧基吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基）-3-甲基呱啶-3-醇（130mg）溶於3mLTHF中，氮氣保護下加入NaH(21mg)，室溫攪拌30分鐘，然後加入5-乙炔基-2-氟吡啶（31mg），25℃下攪拌2h。LC-MS監測反應完成。向反應液緩慢加入10 mL 飽和氯化銨溶液淬滅，EA萃取3次，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓蒸除溶劑後經柱層析分離純化得淡黃色固體80mg即化合物157-1。ESI-MS m/z: 765 [M+H] +。
步驟2：化合物157-2的合成
將化合物157-1（60mg）和M29（2S，4R）-1-（（S）-2-疊氮基-3-甲基丁醯基）-4-羥基-N-（（S）-1-（4-（4-甲基噻唑-5-基）苯基）乙基）吡咯烷-2-甲醯胺（57mg）溶於2 mL THF，2 mL H 2O，2 mL 叔丁醇中，然後依次加入抗壞血酸鈉（54mg）和無水硫酸銅（15mg），室溫反應0.5小時，LCMS監測反應完成。向反應液中加入20.0 mL水，用DCM:異丙醇=4:1萃取3次，每次20mL，合併有機相，硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮有機相，經柱層析分離純化得淡黃色固體85mg，即化合物157-2。ESI-MS m/z: 611 1/2[M+2H] +。
步驟3：化合物157的合成
將化合物157-2（85mg）溶於2 mL DCM中，然後加入1 mL TFA，室溫反應30 min，LCMS監測反應完成。LCMS監測反應完成。將反應液直接濃縮，製備液相分離，得白色粉末22.3 mg，即化合物157。ESI-MS m/z: 589 1/2[M+2H] +。
1H NMR (500 MHz, Methanol-d 4) δ 9.20 (s, 1H), 8.87 (d, J= 6.1 Hz, 1H), 8.62 (d, J= 2.3 Hz, 1H), 8.49 (s, 1H), 8.12 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.65 (d, J= 5.7 Hz, 1H), 7.48 – 7.37 (m, 4H), 7.28-7.22 (m, 2H), 7.05 (s, 1H), 6.93 (d, J= 8.7 Hz, 1H), 5.36 (d, J= 10.2 Hz, 1H), 4.62-4.48 (m, 7H), 4.41 (d, J= 10.5 Hz, 1H), 4.30 (d, J= 10.5 Hz, 2H), 3.93-.3.86 (m, 2H), 3.71 – 3.64 (m, 2H), 3.60-3.57( m, 1H), 3.44 (s, 3H), 3.16 (s, 1H), 2.97-2.90 (m, 3H), 2.63-2.60 (m, 1H), 2.20-2.19 (m, 5H), 2.07-2.00 (m, 1H), 2.01 – 1.89 (m, 6H), 1.79 – 1.75 (m, 4H), 1.53 (d, J= 7.0 Hz, 3H), 1.35 – 1.24 (m, 6H), 1.17-1.14 (m, 3H), 0.86 – 0.76 (m, 4H).
實施例158：化合物(2S，4R)-1-（（S）-2-（4-（2-（（（3R，7aR）-7a-（（（7-（8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基）-8-氟-4-（（R）-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基）吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基）氧基）甲基）六氫-1H-吡咯嗪-3-基）甲氧基）嘧啶-5-基）-1H-1-1,2,3-三唑-1-基）-3-甲基丁醯基）-4-羥基-N-（（（S，-1-（4-（4-甲基噻唑-5-基）苯基）乙基）吡咯烷2-羧醯胺的合成
步驟1：化合物158-1的合成
將化合物88-3（R）-1-（7-（8-乙基-7-氟-3-（甲氧基-甲氧基）萘-1-基）-8-氟-2-（（（3R，7aR）-3-（羥甲基）四氫-1H-吡咯嗪-7a（5H）-基）甲氧基吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基）-3-甲基呱啶-3-醇（100mg）溶於3mLTHF中，氮氣保護下加入NaH(16mg)，室溫攪拌30分鐘，然後加入2-氯-5-乙炔基嘧啶（28mg），25℃下攪拌2h。LC-MS監測反應完成。向反應液緩慢加入10 mL 飽和氯化銨溶液淬滅，EA萃取3次，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓蒸除溶劑後經柱層析分離純化得淡黃色固體60mg即化合物158-1。ESI-MS m/z: 766 [M+H] +。
步驟2：化合物158-2的合成
將化合物158-1（60mg）和M29（2S，4R）-1-（（S）-2-疊氮基-3-甲基丁醯基）-4-羥基-N-（（S）-1-（4-（4-甲基噻唑-5-基）苯基）乙基）吡咯烷-2-甲醯胺（43mg）溶於2 mL THF，2 mL H 2O，2 mL 叔丁醇中，然後依次加入抗壞血酸鈉（40mg）和無水硫酸銅（12mg），室溫反應0.5小時，LCMS監測反應完成。向反應液中加入20.0 mL水，用DCM:異丙醇=4:1萃取3次，每次20mL，合併有機相，硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮有機相，經柱層析分離純化得淡黃色固體74mg，即化合物158-2。ESI-MS m/z: 612 1/2[M+2H] +。
步驟3：化合物158的合成
將化合物158-2（74mg）溶於2 mL DCM中，然後加入1 mL TFA，室溫反應30 min，LCMS監測反應完成。LCMS監測反應完成。將反應液直接濃縮，製備液相分離，得白色粉末39.6 mg，即化合物158。ESI-MS m/z: 590 1/2[M+2H] +。
實施例159：化合物（2S，4R）-1-（（S）-2-（4-（5-（（（3R，7aR）-7a-（（7-（8-乙基-7-乙基7-氟氟氟-3-羥基萘-1-基）-8-氟-4-（（R）-3-羥基-3-甲基呱啶-1-甲基）吡咯并吡啶[4,3-d]嘧啶-2-基）氧基）甲基）甲基六氫-1H-吡咯并嗪-3-基）甲氧基）吡嗪-1-1,2,3-三唑唑-4-羥基-N-（（（S）-1-（4-（4-甲基噻唑-5-基）苯基）乙基）吡咯烷-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物159-1的合成
將化合物88-3 （R）-1-（7-（8-乙基-7-氟-3-（甲氧基-甲氧基）萘-1-基）-8-氟-2-（（（3R，7aR）-3-（羥甲基）四氫-1H-吡咯嗪-7a（5H）-基）甲氧基吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基）-3-甲基呱啶-3-醇（90mg）溶於3mLTHF中，氮氣保護下加入NaH(15mg)，室溫攪拌30分鐘，然後加入M46 2-氯-5-乙炔吡嗪（25mg），25℃下攪拌2h。LC-MS監測反應完成。向反應液緩慢加入10 mL 飽和氯化銨溶液淬滅，EA萃取3次，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓蒸除溶劑後經柱層析分離純化得淡黃色固體58mg即化合物159-1。ESI-MS m/z: 766 [M+H] +；
步驟2：化合物159-2的合成
將化合物159-1（58mg）和M29（2S，4R）-1-（（S）-2-疊氮基-3-甲基丁醯基）-4-羥基-N-（（S）-1-（4-（4-甲基噻唑-5-基）苯基）乙基）吡咯烷-2-甲醯胺（42mg）溶於1.5 mL THF，1.5 mL H 2O，1.5 mL 叔丁醇中，然後依次加入抗壞血酸鈉（39mg）和無水硫酸銅（11 mg），室溫反應0.5小時，LCMS監測反應完成。向反應液中加入20.0 mL水，用DCM:異丙醇=4:1萃取3次，每次20mL，合併有機相，硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮有機相，經柱層析分離純化得淡黃色固體25mg，即化合物159-2。ESI-MS m/z: 612 1/2[M+2H] +。
步驟3：化合物159的合成
將化合物159-2（25mg）溶於2 mL DCM中，然後加入1 mL TFA，室溫反應30 min，LCMS監測反應完成。LCMS監測反應完成。將反應液直接濃縮，製備液相分離，得白色粉末18.4 mg，即化合物159。ESI-MS m/z: 590 1/2[M+2H] +。
實施例160 化合物（2S，4R）-N-（(R)-1-（4-（1-乙基-1H-吡唑-5-基）苯基）-2-羥乙基）-1-（(S)-2-（4-（1-（（7-（8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基）-8-氟-4-（(R)-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基）吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基）氧基）甲基環丙基）甲基呱啶-4-基氧基）吡啶-3-基）-1H-1，2，3-三唑-1-基）-3-甲基丁醯基）-4-羥基吡咯烷-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物160-1的合成
在反應瓶中加入中間體M45( 100.00mg)，化合物135-1( 96.61mg )，硫酸銅 ( 30.60mg)，抗壞血酸鈉( 109.71mg  )，四氫呋喃( 1.50mL )，叔丁醇 ( 1.50mL )，水( 1.50mL )，氮氣置換後室溫反應2 h，濃縮，加水稀釋，然後用DCM和甲醇萃取，無水硫酸鈉乾燥，濃縮。柱層析分離產物（DCM:胺甲醇=20:1），得到白色固體160-1（114 mg ）。ESI-MS m/z: 772.4 [M+H] +。
步驟2：化合物160-2的合成
在反應瓶中加入化合物160-1 ( 114 mg)，二氯甲烷 ( 2.00mL ) ，4M的鹽酸二氧六環溶液 ( 0.40mL )，室溫反應0.5 h，反應結束後傾去上清液，不溶物加甲醇溶解，然後用碳酸氫鈉水溶液調pH=8，DCM和甲醇萃取，無水硫酸鈉乾燥，濃縮，得到化合物160-2（85 mg ）。ESI-MS m/z: 672.4 [M+H] +。
步驟3：化合物160-3的合成
在反應瓶中加入化合物160-2 ( 62.34mg)，M28( 50.00mg)，甲醇 ( 2.00mL )，1,2-二氯乙烷 ( 2.00mL )，氯化鋅( 11.50mg)，40℃反應1 h，再加氰基硼氫化鈉( 53.04mg , 0.84mmol ) ，60℃反應3 h，加水稀釋， DCM萃取，無水硫酸鈉乾燥，濃縮。用Pre-TLC製備（DCM:胺甲醇=18:1），得到黃色固體160-3（56 mg）。ESI-MS m/z: 625.3 1/2[M+2H] +。
步驟4：化合物160的合成
在反應瓶中加入化合物160-3 ( 56.00mg )，二氯甲烷 ( 1.00mL )，三氟乙酸 ( 1.00mL )，室溫反應0.6 h，濃縮，然後加DCM溶解，將反應液加到冰的碳酸氫鈉水溶液中調pH=8，DCM和甲醇萃取，無水硫酸鈉乾燥，濃縮。用Pre-TLC製備（DCM:胺甲醇=10:1），得到化合物160(35.5 mg)。ESI-MS m/z: 603.25 1/2[M+2H] +。
1H NMR (500 MHz, Methanol-d 4) δ 9.20 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 8.57 (d, J= 2.2 Hz, 1H), 8.50 (d, J= 12.8 Hz, 1H), 8.06 (dd, J= 8.6, 2.4 Hz, 1H), 7.65 (dd, J= 8.9, 5.9 Hz, 1H), 7.53 – 7.37 (m, 5H), 7.30 (d, J= 2.6 Hz, 1H), 7.23 (t, J= 9.0 Hz, 1H), 7.08 (dd, J= 4.9, 2.6 Hz, 1H), 6.81 (d, J= 8.7 Hz, 1H), 6.28 (dd, J= 8.6, 1.9 Hz, 1H), 5.38 (d, J= 10.2 Hz, 1H), 5.07 (t, J= 6.0 Hz, 2H), 4.73 (s, 1H), 4.61 (t, J= 8.3 Hz, 1H), 4.46 (t, J= 8.9 Hz, 4H), 4.19 (m, 3H), 3.95 – 3.82 (m, 3H), 3.67 – 3.53 (m, 1H), 3.43 (dd, J= 25.9, 11.7 Hz, 1H), 3.31 (m, 1H), 3.00 (s, 2H), 2.69 – 2.52 (m, 6H), 2.18 – 2.04 (m, 6H), 1.77 (m, 5H), 1.36 – 1.24 (m, 6H), 1.16 (d, J= 6.6 Hz, 3H), 0.81 (t, J= 7.2 Hz, 6H), 0.75 (s, 2H), 0.56 (s, 2H).
實施例164：化合物（2S，4R）-1-（(R)-2-（3-（4-（（1-（（7-（8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基）-8-氟-4-（(R)-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基）吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基）氧基）甲基）環丙基）甲基）呱嗪-1-基）呱啶-1-基）異噁唑-5-基）-3-甲基丁醯基）-4-羥基-N-（(R)-1-（（4-（4-甲基噻唑-5-基）苯基）乙基）吡咯烷-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物164-1的合成
將4-（呱啶-4-基）呱嗪-1-羧酸叔丁酯（0.30 g）、化合物M34（0.54 g）、三乙胺（0.47 mL）溶於N,N-二甲基乙醯胺（3 mL）中， 145℃反應3小時。反應完畢後，加入水稀釋，EA萃取三次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，粗品經柱層析純化得到化合物164-1（190 mg）。ESI-MS m/z:451.2[M+H-100] +。
步驟2：化合物164-2的合成
將化合物164-1（190 mg）溶於甲醇（10mL）和水（2mL）中，加入氫氧化鋰（40 mg），25℃反應1小時。反應完畢後，加檸檬酸調至pH=4，加入二氯甲烷/異丙醇（10:1）萃取三次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，得到將化合物164-2（180 mg）。ESI-MS m/z:437.1 [M+H-100] +。
步驟3：化合物164-3的合成
將化合物164-2（180 mg）、M29-2（150 mg）、HATU（190 mg）、N,N-二異丙基乙胺 ( 0.20 mL)溶於N,N-二甲基甲醯胺 ( 5.00mL )中，25℃反應1小時。反應完畢後，加入水稀釋，乙酸乙酯萃取，有機相用飽和食鹽水洗滌，經柱層析（二氯甲烷/甲醇）純化，手性柱拆分得到化合物164-3（81 mg）。ESI-MS m/z:750.3 [M+H] +。
步驟4：化合物164-4的合成
將化合物164-3（81 mg）溶於二氯甲烷 ( 5mL )中，加入4M的氯化氫二氧六環溶液（1mL )，25℃反應20分鐘。反應完畢後，用碳酸氫鈉溶液中和，加入二氯甲烷/異丙醇（10:1）萃取，乾燥，濃縮，得到化合物164-4（55 mg）。ESI-MS m/z:650.4 [M+H] +。
步驟5：化合物164-5的合成
將化合物164-4（55mg）、M28（62 mg）、1M的氯化鋅四氫呋喃溶液 ( 0.19 mL )溶於甲醇（5mL）中， 40℃反應2小時。再加入氰基硼氫化鈉 (34 mg)，40℃反應8小時。反應完畢後，加入氯化銨溶液淬滅，濃縮，經柱層析（二氯甲烷/甲醇）純化，得到化合物164-5（43mg）。ESI-MS m/z:613.7 1/2[M+2H] +。
步驟6：化合物164的合成
將化合物164-5（43 mg）溶於二氯甲烷 ( 4mL )中，加三氟乙酸 ( 1mL )，25℃反應1小時。反應完畢後，濃縮，經Pre-HPLC（C18色譜柱，A：0.05%三氟乙酸水溶液，B：乙腈，濃度梯度：20%B至75%B，11min，流速：15mL/min，254nm）分離純化，濃縮，碳酸氫鈉溶液中和，產物析出，過濾，得到化合物164（7.1 mg）。ESI-MS m/z:591.70 1/2[M+2H] +。
實施例165：化合物（2S，4R）-1-（（S）-2-（4-（3-（4-（（1-（（（7-（8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基）-8-氟-4-（（R）-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基）吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基）氧基）甲基）環丙基）甲基）呱嗪-1-基）環丁基）-1H-1,2,3-三唑-1-基）-3-甲基丁醯基）-4-羥基-N-（（S）-1-（4-（4-甲基噻唑-5-基）苯基）乙基）吡咯烷-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物165-1的合成
3-氧代環丁烷-1-羧酸甲酯（10.0 g）, 呱嗪-1-羧酸苄酯（20.63 g）加入100 mL 二氯乙烷溶解後，加入冰乙酸（8 mL），室溫攪拌30 min後，加入三乙醯氧基硼氫化鈉，室溫攪拌過夜。反應完全後，加水稀釋，DCM萃取3次，收集並合併有機相，飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，柱層析純化（PE:EA=10:7)得到化合物165-1（13.0 g）。ESI-MS m/z: 333.2 [M+H] +。
步驟2：化合物165-2的合成
將化合物165-1 (13.0 g) 加入到250 mL單口瓶中，加入100 mL 四氫呋喃，降溫0℃以下，分批緩慢加入氫化鋁鋰 (2.9 g)，緩慢移至室溫攪拌反應3小時。反應完全，降溫0℃以下，反應液中緩慢滴加2.9 mL水，緩慢滴加2.9 mL氫氧化鈉水溶液（品質分數15%），攪拌10 min，再向反應液中緩慢滴加9 mL水，加入無水硫酸鈉攪拌1 h。過濾，濾液濃縮，濃縮物經柱層析純化得到化合物165-2（10.0 g）。ESI-MS m/z: 305.3 [M+H] +。
步驟3：化合物165-3的合成
將化合物165-2（10.0 g）加入到250 mL單口瓶中，加入100 mL DCM，分批加入DMP（20.0 g mg），室溫下攪拌3小時。飽和硫代硫酸鈉水溶液淬滅，過濾，DCM萃取2次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液濃縮，濃縮物經柱層析純化得到化合物165-3（12.0 g）。ESI-MS m/z: 303.4 [M+H] +。
步驟4：化合物165-4的合成
將化合物165-3（12.0 g）和(1-重氮基-2-氧代丙基)膦酸二甲酯 ( 9.93mL )依次加入到100 mL單口瓶中，加入30 mL甲醇溶解，緩慢加入碳酸鉀（22.3g），室溫攪拌過夜。用水稀釋反應液，EA萃取兩次，收集並合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，濃縮物經柱層析分離純化得到化合物165-4（1.4 g）。ESI-MS m/z:299.4 [M+H] +。
步驟5：化合物165-5的合成
將化合物165-4（140 mg），抗壞血酸鈉（280 mg），硫酸銅（70 mg）和M29 (260 mg)依次加入到50 mL單口瓶中，加入甲醇，四氫呋喃和水各3 mL，室溫下反應30 min。旋乾溶劑，EA萃取兩次，收集並合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，濃縮物經柱層析分離純化得到化合物165-5（100 mg）。ESI-MS m/z: 755.4 [M+H] +。
步驟6：化合物165-6的合成
將化合物165-5（100 mg）加入到50 mL單口瓶中，加入10 mL乙醇溶解，加入氫氧化鈀（20 mg），氫氣置換5次，室溫下攪拌過夜。反應完全後，矽藻土過濾，濾液旋乾，濃縮得到粗品165-6（50 mg），直接進行下一步。ESI-MS m/z: 621.3 [M+H] +。
步驟7：化合物165的合成
將化合物165-6（50 mg）、M43（44 mg）、1M的氯化鋅四氫呋喃溶液 ( 0.25 mL)溶於甲醇（8 mL）中，40℃反應1小時。再加入氰基硼氫化鈉 (16 mg)，70℃攪拌反應4小時。反應完畢後，加入氯化銨溶液淬滅，濃縮，經柱層析（二氯甲烷/甲醇）純化，濃縮物經Pre-HPLC純化（色譜柱：SunFire C18色譜柱，A：0.05%三氟乙酸水溶液，B：乙腈，濃度梯度：20%B至70%B，6.36-6.71 min，流速：20 mL/min，254nm）得到化合物165（23.0 mg）。
1H NMR (500 MHz, DMSO- d 6 ) ) δ 9.94 (s, 1H), 9.22 (s, 1H), 8.98 (s, 1H), 8.49 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.76 (s, 1H), 7.44 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 7.36 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.33 (s, 1H), 7.03 (s, 1H), 5.19 (d, J = 24.9 Hz, 2H), 4.91 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 4.74 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 4.33 (d, J = 34.8 Hz, 5H), 4.05 (s, 1H), 3.74 (s, 1H), 3.64 (s, 1H), 2.64 (s, 1H), 2.36 (s, 6H), 2.12 (s, 3H), 2.01 (s, 4H), 1.91 (s, 1H), 1.74 (t, J = 25.2 Hz, 5H), 1.49 (d, J = 36.2 Hz, 2H), 1.37 (d, J = 7.0 Hz, 3H), 1.27 – 1.14 (m, 11H), 1.03 (d, J = 6.2 Hz, 3H), 0.85 (s, 1H), 0.74 (d, J = 7.5 Hz, 3H), 0.64 (d, J = 6.5 Hz, 5H), 0.42 (s, 2H).
實施例166：化合物（2S，4R）-1-（（2R）-2-（3-（3-（4-（（1-（（7-（8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基）-8-氟-4-（（R）3-羥基-3-甲基呱啶-1-基）吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基）氧基）甲基）環丙基）甲基）呱嗪-1-基）吡咯烷-1-基）異噁唑-5-基）-3-甲基丁醯基）-4-羥基-N-（（S）-1-（4-（4-甲基噻唑-5-基）苯基）乙基）吡咯烷-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物166-1的合成
3-氧代吡咯烷-1-羧酸苄酯（1.5 g）, 呱嗪-1-羧酸苄酯（1.53 g）加入30 mL 二氯乙烷溶解後，加入冰乙酸（0.82 g），室溫攪拌30 min後，加入三乙醯氧基硼氫化鈉（3.6 g），室溫攪拌過夜。反應完全後，加水稀釋，DCM萃取3次，合併有機相，飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，柱層析（PE:EA=4:6)得到化合物166-1（3.0 g）。ESI-MS m/z: 390.2 [M+H] +。
步驟2：化合物166-2的合成
將化合物166-1（3.0 g）加入到50 mL單口瓶中，加入15 mL乙醇溶解，加入氫氧化鈀（220 mg），氫氣置換5次，室溫攪拌過夜。反應完全後，矽藻土過濾，濾液旋乾，濃縮得到粗品166-2（2.1 g），直接進行下一步。ESI-MS m/z: 256.3 [M+H] +。
步驟3：化合物166-3的合成
將化合物166-2（2.1 g）、M34（3.3 g）、DIPEA（4.3 g）溶於DMF（8 mL）中，140℃攪拌反應1小時。反應完畢後，冷卻至室溫，加水稀釋，乙酸乙酯萃取3次，收集並合併有機相，飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，柱層析得到化合物166-3（1.4 g）。ESI-MS m/z: 437.1 [M+H] +。
步驟4：化合物166-4的合成
將化合物166-3（1.4 g）溶於甲醇（10 mL）和水（10 mL）中，加入氫氧化鋰（260 mg），室溫反應1小時。反應完畢後，加稀鹽酸調至pH=2，加入二氯甲烷/異丙醇（10:1）萃取三次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，得到化合物166-4（800 mg）。ESI-MS m/z:423.3 [M+H] +。
步驟5：化合物166-5的合成
將化合物166-4（800 mg）、M29-2（720 mg）、HATU（1.4 g）、N,N-二異丙基乙胺 (800 mg) 溶於N,N-二甲基甲醯胺 ( 10 mL )中，室溫反應1小時。反應完畢後，加水稀釋，乙酸乙酯萃取3次，有機相用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，旋乾，濃縮物經柱層析純化，經手性拆分（色譜柱：CHIRAL PAK IE (20.0 mm×250 mm，5µm)；柱溫：35℃；波長：254 nm；流速：25 mL/min；流動相：0.1%二乙胺的正己烷：0.1%二乙胺的乙醇（15：85））得到化合物166-5（100 mg）。ESI-MS m/z:736.1 [M+H] +。
步驟6：化合物166-6的合成
將化合物166-5（100 mg）溶於二氯甲烷 ( 5 mL )中，加入4M的氯化氫二氧六環溶液（2 mL )，室溫攪拌反應20分鐘。反應完畢後，旋乾溶劑，用二氯甲烷洗滌旋乾2次，加水溶解，用碳酸氫鈉溶液中和，加入二氯甲烷/異丙醇（10:1）萃取，乾燥，濃縮，得到化合物166-6（80 mg）。ESI-MS m/z:636.4 [M+H] +。
步驟7：化合物166的合成
將化合物166-6（80 mg）、M43（69 mg）、1M的氯化鋅四氫呋喃溶液 ( 0.5 mL)溶於甲醇（10 mL）中，40℃反應1小時。再加入氰基硼氫化鈉 (32 mg)，70℃攪拌反應5小時。反應完畢後，冷卻至室溫，加入氯化銨溶液淬滅，二氯甲烷和甲醇（10：1）萃取，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，經柱層析（DCM:MeOH=85:15）純化，粗品經Pre-HPLC（C18色譜柱，A：0.05%二乙胺水溶液，B：乙腈，濃度梯度：30%B至80%B，6.52-7.40 min，流速：20 mL/min，254nm）製備得到化合物166（42.4 mg）。ESI-MS m/z:585.2 1/2[M+2H] +。
1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6)  δ 9.94 (s, 1H), 9.22 (s, 1H), 8.98 (s, 1H), 8.49 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.76 (s, 1H), 7.44 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 7.36 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.33 (s, 1H), 7.03 (s, 1H), 5.93 (s, 1H), 5.10 (s, 1H), 4.96 (s, 1H), 4.86 (s, 1H), 4.74 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 4.54 – 4.21 (m, 5H), 4.10 – 3.98 (m, 1H), 3.65 (dd, J = 22.6, 10.8 Hz, 1H), 3.54 (s, 2H), 2.92 (s, 2H), 2.74 (s, 2H), 2.64 (s, 1H), 2.34 (d, J = 27.3 Hz, 10H), 2.13 (s, 2H), 2.01 (s, 3H), 1.79 (s, 1H), 1.75 (s, 1H), 1.67 (s, 3H), 1.45 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 1.33 (s, 3H), 1.24 (s, 3H), 1.16 (d, J = 11.5 Hz, 3H), 1.12 – 1.03 (m, 1H), 0.95 (d, J = 6.3 Hz, 2H), 0.81 (d, J = 6.2 Hz, 4H), 0.73 (d, J = 7.4 Hz, 4H), 0.64 (s, 2H), 0.40 (s, 2H).
實施例167：化合物(2S，4R)-1-((S)-2-(4-(6-((1-((1-((7-(8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)環丙基)甲基)呱啶-4-基)氧基)噠嗪-3-基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)-3-甲基丁醯基)-4-羥基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物167-1的合成
稱取4-羥基呱啶-1-羧酸叔丁酯（2.50 g）溶於THF（20 mL），冰浴條件下緩慢加入NaH（745 mg），升至室溫反應0.5h，加入3，6-二氯噠嗪（1.85 g），緩慢加熱至50℃反應3h。LCMS監測反應完成。加入飽和氯化銨溶液淬滅反應，向反應液中加入EA (50 mL)，收集有機相，濃縮，柱層析分離純化，得白色粉末3.80 g，即化合物167-1。ESI-MS m/z: 314.1 [M+H] +。
步驟2：化合物167-2的合成
25 mL單口瓶中加入化合物167-1 (1.0 g)，溶於THF（10 mL），加入乙炔基三甲基矽烷（907 mL），CuI（121 mg），Pd(PPh 3) 2Cl 2（224 mg），DIPEA（1.67 mL），氮氣保護後，加熱至60 oC反應3 h。向反應液中加入飽和食鹽水（5 mL）, EA萃取，取有機相無水硫酸鈉乾燥，柱層析分離純化，得560 mg淡黃色固體，即化合物167-2。ESI-MS m/z: 376.2 [M+H] +。
步驟3：化合物167-3的合成
25 mL單口瓶中加入化合物167-2 (560 mg)，溶於MeOH（10 mL）,加入碳酸鉀（763 mg），室溫反應1h。矽藻土濾除不溶物，濾液直接蒸乾。柱層析分離純化，得200 mg淡黃色固體，即化合物167-3。ESI-MS m/z: 304.2 [M+H] +。
步驟4：化合物167-4的合成
25 mL單口瓶中加入化合物M29（271 mg），溶於THF（5 mL）,加入化合物167-3（180 mg），硫酸銅（85 mg），水（5 mL），叔丁醇（5 mL），抗壞血酸鈉（306 mg），室溫反應0.5h。反應液直接蒸乾。柱層析分離純化，得199 mg淡黃色固體，即化合物167-4。ESI-MS m/z: 760.4 [M+H] +。
步驟5：化合物167-5的合成
25 mL單口瓶中加入化合物167-4(199 mg)，溶於4M的氯化氫二氧六環溶液 (5 mL)，加入DCM（3 mL）、MeOH（3 mL），室溫反應1h。反應液直接蒸乾，向反應液中加入5 mL飽和碳酸氫鈉溶液，調節溶液pH至7-8後，用二氯甲烷/異丙醇萃取，取有機相無水硫酸鈉乾燥，得175 mg黃色固體，即化合物167-5。ESI-MS m/z: 660.3 [M+H] +。
步驟6：化合物167-6的合成
25 mL單口瓶中加入化合物167-5(175 mg)，溶於MeOH（5 mL）,加入M28（157 mg）和1 M 的氯化鋅四氫呋喃溶液（0.53 mL）, 加熱至40 oC，反應2 h後，加入NaBH 3CN（50.0 mg），反應過夜。反應液直接蒸乾。柱層析分離純化，得153 mg淡黃色固體，即化合物167-6。ESI-MS m/z: 618.3 1/2[M+H] +。
步驟7：化合物167的合成
25 mL單口瓶中加入化合物167-6 （153 mg），溶於DCM(2 mL)，加入TFA（2 mL）,室溫反應1 h。反應液直接蒸乾, 向反應液中加入5 mL飽和碳酸氫鈉溶液，調節溶液pH至7-8後，用10%二氯甲烷/異丙醇萃取，取有機相無水硫酸鈉乾燥，經Pre-HPLC分離產物(CH 3CN/H 2O = 30%-55%), 得白色固體40.4 mg，即化合物167。ESI-MS m/z: 597.3 1/2[M+2H] +。
1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6) δ 9.94 (s, 1H), 9.23 (s, 1H), 8.98 (d, J= 12.4 Hz, 1H), 8.72 (d, J= 9.6 Hz, 1H), 8.55 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 8.19 – 8.12 (m, 1H), 7.77 (dd, J= 9.0, 6.0 Hz, 1H), 7.48 – 7.43 (m, 2H), 7.36 (dt, J= 8.3, 7.3 Hz, 5H), 7.26 (d, J= 9.3 Hz, 1H), 7.05 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 5.43 (d, J= 10.1 Hz, 1H), 5.18 (t, J= 9.4 Hz, 2H), 4.94 (dd, J= 14.2, 7.1 Hz, 1H), 4.76 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 4.37 (ddd, J= 26.1, 16.0, 9.6 Hz, 5H), 4.05 (dd, J= 26.4, 13.3 Hz, 1H), 3.80 – 3.52 (m, 3H), 2.83 (s, 2H), 2.46 (s, 3H), 2.31 (d, J= 52.0 Hz, 5H), 2.09 – 1.97 (m, 4H), 1.67 (dd, J= 22.6, 13.1 Hz, 5H), 1.39 (d, J= 7.0 Hz, 3H), 1.19 – 1.14 (m, 4H), 1.10 (d, J= 6.4 Hz, 3H), 0.88 – 0.82 (m, 1H), 0.78 – 0.65 (m, 9H), 0.44 (s, 2H).
實施例168：化合物（2S，4R）-1-（（S）-2-（4-（5-（7-（（7-（8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基）-8-氟-4-（（R）-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基）吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基）氧基）甲基）環丙基）甲基）-2，7-二氮雜螺[3.5]壬烷-2-基）吡嗪-2-基）-1H-1，2，3-三唑-1-基）-3-甲基丁醯）-4-羥基-N-（（S）-1-（4-甲基基噻唑-5-基）苯基）乙基）吡咯烷-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物168-1的合成
2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯（212 mg），加入3 mL二氧六環溶解後，加入2-氯-5-乙炔基吡嗪（100 mg），再加入三乙胺（0.30 mL）。60℃攪拌2h。LCMS監測反應完成。減壓濃縮，經柱層析純化得到化合物168-1（180 mg）。ESI-MS m/z: 329.2 [M+H] +。
步驟2：化合物168-2的合成
將168-1 (180 mg) 加入到50 mL單口瓶中，加入6 mL 四氫呋喃，3 mL叔丁醇以及3 mL水，加入M29（215 mg），硫酸銅（68 mg），抗壞血酸鈉（243 mg），20℃攪拌12小時。LCMS監測反應完成。減壓濃縮，經柱層析純化得到化合物168-2（173 mg）。ESI-MS m/z: 785.4 [M+H] +。
步驟3：化合物168-3的合成
將化合物168-2 (173 mg) 加入到10 mL單口瓶中，加入3 mL二氯甲烷， 4M的氯化氫二氧六環溶液（1 mL），20℃攪拌0.5小時。用飽和碳酸氫鈉溶液中和反應液，二氯甲烷/異丙醇（10:1）萃取兩次，收集並合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得到粗品168-3（150 mg）。ESI-MS m/z:685.3 [M+H] +。
步驟4：化合物168-4的合成
將M28 (105 mg) 加入到50 mL單口瓶中，加入4 mL 甲醇，加入化合物168-3（146 mg），加入1M 的氯化鋅四氫呋喃溶液（0.27 mL），40℃攪拌2小時。加入氰基硼氫化鈉（46 mg），50℃攪拌12小時。LCMS監測反應完成。減壓濃縮，經柱層析純化得到化合物168-4（201 mg）。ESI-MS m/z:631.3 1/2[M+2H] +。
步驟5：化合物168的合成
將化合物168-4 (201 mg) 加入到10 mL單口瓶中，加入2 mL二氯甲烷，0℃下加入1 mL三氟化硼乙醚。20℃攪拌1小時。LCMS監測反應完成。用飽和碳酸氫鈉溶液中和反應液，二氯甲烷/異丙醇（5:1）萃取兩次，收集並合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後經pre-HPLC純化得到化合物168（28.2 mg）。ESI-MS m/z:609.86 1/2[M+2H] +。
1H NMR (500 MHz, Methanol-d 4) δ 9.21 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 8.86 (d, J = 6.3 Hz, 1H), 8.61 (dd, J = 7.4, 1.5 Hz, 1H), 8.43 (s, 1H), 7.85 (dd, J = 4.5, 1.5 Hz, 1H), 7.67 (dd, J = 9.1, 5.8 Hz, 1H), 7.48 – 7.40 (m, 4H), 7.30 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 7.24 (t, J = 9.4 Hz, 1H), 7.06 (t, J = 2.4 Hz, 1H), 5.36 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 5.05 (t, J = 7.1 Hz, 1H), 4.58 (s, 1H), 4.53 (t, J = 8.3 Hz, 1H), 4.46 (dt, J = 7.2, 4.5 Hz, 2H), 4.26 (t, J = 14.1 Hz, 1H), 3.91 (td, J = 10.2, 9.6, 5.6 Hz, 1H), 3.85 (s, 4H), 3.63 (dd, J = 32.7, 13.4 Hz, 1H), 3.52 – 3.43 (m, 1H), 2.65 – 2.53 (m, 4H), 2.48 (s, 4H), 2.24 – 2.15 (m, 3H), 1.97 (ddd, J = 13.3, 9.0, 4.5 Hz, 1H), 1.87 (d, J = 9.0 Hz, 4H), 1.79 (t, J = 10.5 Hz, 2H), 1.66 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 1.53 (d, J = 7.0 Hz, 3H), 1.15 (dd, J = 6.4, 2.1 Hz, 3H), 0.92 – 0.85 (m, 9H), 0.83 – 0.80 (m, 5H), 0.75 (s, 2H), 0.54 (s, 2H).
實施例169：化合物（2S，4R）-1-（(S)-2-（4-（5-（1-（（1-（（7-（8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基）-8-氟-4-（(R)-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基）吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基）氧基）甲基）環丙基）甲基）呱啶-4-基）氧基）嘧啶-2-基）-1H-1，2，3-三唑-1-基）-3-甲基丁醯）-4-羥基-N-（(S)-1-（4-羥基-N-（4-（4-甲基噻唑-5）-基）苯基）乙基）吡咯烷-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物169-1的合成
2-氯-5-羥基嘧啶（500 mg），加入10 mL甲苯溶解後，加入1-叔丁氧羰基-4-羥基呱啶（771 mg），再加入三苯基膦（2009 mg）和偶氮二甲酸二叔丁酯（1.66 mL）。氮氣置換三次，氮氣氛圍保護。85℃攪拌1小時。LCMS監測反應完成。減壓濃縮，經柱層析純化得到化合物169-1（915 mg）。 ESI-MS m/z: 314.1 [M+H] +。
步驟2：化合物169-2的合成
將化合物169-1 (835 mg) 加入到100 mL單口瓶中，加入10 mL 四氫呋喃。再加入0.75 mL三甲基乙炔基矽，碘化亞銅（51 mg），加入雙三苯基磷二氯化鈀（187 mg）和1.85 mL三乙胺。氮氣置換三次，氮氣氛圍保護。90℃攪拌12小時。LCMS監測反應完成。減壓濃縮，經柱層析純化得到化合物169-2（611 mg）。ESI-MS m/z: 376.2 [M+H] +。
步驟3：化合物169-3的合成
將化合物169-2 (561 mg) 加入到50 mL單口瓶中，加入6 mL四氫呋喃。0℃下加入1M的四丁基氟化銨四氫呋喃溶液（2.24 mL），20℃攪拌1小時。LCMS監測反應完成。減壓濃縮，經柱層析純化得到化合物169-3（73 mg）。ESI-MS m/z: 304.2 [M+H] +。
步驟4：化合物169-4的合成
將化合物169-3 (76 mg) 加入到50 mL單口瓶中，加入3 mL 四氫呋喃，1.5 mL叔丁醇以及1.5 mL水，加入M29（95 mg），硫酸銅（30 mg），抗壞血酸鈉（107 mg），20℃攪拌12小時。LCMS監測反應完成。減壓濃縮，經柱層析純化得到化合物169-4（155 mg）。ESI-MS m/z: 760.4 [M+H] +。
步驟5：化合物169-5的合成
將化合物169-4 (155 mg) 加入到10 mL單口瓶中，加入3 mL二氯甲烷， 4M的氯化氫二氧六環溶液（1 mL），20℃攪拌0.5小時。用飽和碳酸氫鈉溶液中和反應液，二氯甲烷/異丙醇（10:1）萃取兩次，收集並合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得到粗品169-5（79 mg）。ESI-MS m/z:660.3 [M+H] +。
步驟6：化合物169的合成
將M43 (65 mg) 加入到50 mL單口瓶中，加入3 mL 甲醇，加入169-5（78 mg），加入1M的氯化鋅四氫呋喃溶液（0.18 mL），40℃攪拌2小時。加入氰基硼氫化鈉（30 mg），50℃攪拌12小時。LCMS監測反應完成。用飽和氯化銨溶液淬滅反應，再用飽和碳酸氫鈉溶液中和反應液，二氯甲烷/異丙醇（5:1）萃取兩次，收集並合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後經pre-HPLC純化得到化合物169（45 mg）。ESI-MS m/z:597.16 1/2[M+2H] +。
1H NMR (500 MHz, Methanol-d 4) δ 9.20 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 8.86 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 8.65 (d, J = 13.0 Hz, 1H), 8.53 (d, J = 3.2 Hz, 2H), 7.66 (dd, J = 9.1, 5.8 Hz, 1H), 7.43 (q, J = 8.4 Hz, 4H), 7.30 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 7.24 (t, J = 9.3 Hz, 1H), 7.07 (t, J = 2.6 Hz, 1H), 5.42 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 5.05 (q, J = 7.0 Hz, 1H), 4.60 (s, 2H), 4.56 – 4.44 (m, 5H), 4.26 (t, J = 13.5 Hz, 1H), 3.94 – 3.84 (m, 2H), 3.62 (dd, J = 32.1, 13.3 Hz, 1H), 3.45 (q, J = 11.5 Hz, 1H), 2.99 (s, 2H), 2.61 (ddt, J = 16.5, 13.3, 6.6 Hz, 3H), 2.48 (s, 3H), 2.45 (s, 1H), 2.26 – 2.03 (m, 6H), 1.97 (ddd, J = 13.3, 9.1, 4.4 Hz, 1H), 1.89 – 1.74 (m, 5H), 1.53 (d, J = 7.0 Hz, 3H), 1.28 (d, J = 13.1 Hz, 3H), 1.16 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 0.82 (dd, J = 9.8, 7.0 Hz, 6H), 0.77 (d, J = 9.4 Hz, 2H), 0.57 (s, 2H).
實施例170：化合物（2S，4R）-1-（（S）-2-（4-（5-（7-（（7-（8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基）-8-氟-4-（（R）-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基）吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基）氧基）甲基）環丙基）甲基）-2，7-二氮雜螺[3.5]壬烷-2-基）吡嗪-2-基）-1H-1，2，3-三唑-1-基）-3-甲基丁醯基）-4-羥基-N-（（R）-2-羥基-1-（4-（4-甲基噻唑-5-基）苯基）乙基）吡咯烷-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物170-1的合成
2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯（212 mg），加入3 mL二氧六環溶解後，加入2-氯-5-乙炔基吡嗪（100 mg），再加入三乙胺（0.30 mL）。60℃攪拌2h。LCMS監測反應完成。減壓濃縮，經柱層析純化得到化合物170-1（193 mg）。ESI-MS m/z: 329.2 [M+H] +。
步驟2：化合物170-2的合成
將化合物170-1 (193 mg) 加入到50 mL單口瓶中，加入6 mL 四氫呋喃，3 mL叔丁醇以及3 mL水，加入M44（223 mg），硫酸銅（68 mg），抗壞血酸鈉（243 mg），20℃攪拌12小時。LCMS監測反應完成。減壓濃縮，經柱層析純化得到化合物170-2（219 mg）。ESI-MS m/z: 801.4 [M+H] +。
步驟3：化合物170-3的合成
將化合物170-2 (219 mg) 加入到10 mL單口瓶中，加入3 mL二氯甲烷， 4M的氯化氫二氧六環溶液（1mL），20℃攪拌0.5小時。用飽和碳酸氫鈉溶液中和反應液，二氯甲烷/異丙醇（10:1）萃取兩次，收集並合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得到粗品170-3（112 mg）。ESI-MS m/z:701.3 [M+H] +。
步驟4：化合物170的合成
將M43 (75 mg) 加入到50 mL單口瓶中，加入3 mL 甲醇，加入170-3（110 mg），加入1M的氯化鋅四氫呋喃溶液（0.21 mL），40℃攪拌2小時。加入氰基硼氫化鈉（34 mg），50℃攪拌12小時。LCMS監測反應完成。用飽和氯化銨溶液淬滅反應，再用飽和碳酸氫鈉溶液中和反應液，二氯甲烷/異丙醇（5:1）萃取兩次，收集並合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮後經pre-HPLC純化得到化合物170（40.3 mg）。ESI-MS m/z:617.93 1/2[M+2H] +。
1H NMR (500 MHz, Methanol-d 4) δ 9.20 (d, J = 4.1 Hz, 1H), 8.87 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 8.60 (s, 1H), 8.44 (s, 1H), 7.85 (s, 1H), 7.67 (dd, J = 9.1, 5.8 Hz, 1H), 7.46 (s, 4H), 7.30 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 7.24 (t, J = 9.3 Hz, 1H), 7.06 (t, J = 2.3 Hz, 1H), 5.38 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 5.05 (t, J = 6.1 Hz, 1H), 4.59 (s, 1H), 4.52 – 4.47 (m, 2H), 4.45 (dd, J = 7.1, 5.2 Hz, 2H), 4.25 (t, J = 14.1 Hz, 1H), 3.93 (dd, J = 11.0, 3.8 Hz, 1H), 3.87 (d, J = 11.1 Hz, 1H), 3.85 – 3.82 (m, 5H), 3.63 (dd, J = 33.7, 13.3 Hz, 1H), 3.52 – 3.42 (m, 1H), 2.84 (q, J = 7.3 Hz, 1H), 2.65 – 2.59 (m, 1H), 2.47 (d, J = 6.9 Hz, 6H), 2.41 (d, J = 12.8 Hz, 1H), 2.20 (tdd, J = 11.6, 9.3, 6.0 Hz, 3H), 2.01 (ddd, J = 13.3, 9.1, 4.6 Hz, 1H), 1.85 (q, J = 9.2, 6.0 Hz, 5H), 1.79 (dp, J = 12.0, 4.3 Hz, 2H), 1.29 (d, J = 13.3 Hz, 4H), 1.21 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 1.15 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 0.81 (dd, J = 10.4, 6.9 Hz, 6H), 0.72 (s, 2H), 0.51 (s, 2H).
實施例171 化合物（2S，4R）-1-（(S)-2-（4-（6-（1-（（1-（（7-（8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基）-8-氟-4-（(R)-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基）吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基）氧基）甲基）環丙基）甲基）呱啶-4-基）氧基）吡啶-3-基）-1H-1，2，3-三唑-1-基）-3-甲基丁醯基）-4-羥基-N-（(R)-2-羥基-1-（4-甲基硫唑-5-基）苯基）乙基）吡咯烷-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物171-1的合成
在反應瓶中加入中間體M44( 100.00mg )，化合物135-1 ( 95.97mg)，硫酸銅( 30.39mg )，抗壞血酸鈉( 109.00mg)，四氫呋喃 ( 1.20mL )，叔丁醇 ( 1.20mL )，水 ( 1.20mL )，氮氣置換後氮氣保護下室溫反應1 h，濃縮，加水稀釋，然後用二氯甲烷和甲醇萃取，無水硫酸鈉乾燥，濃縮，柱層析分離產物（DCM:胺甲醇=18:1），得到白色固體化合物171-1（124 mg ）。ESI-MS m/z: 775.4 [M+H] +。
步驟2：化合物171-2的合成
在反應瓶中加入化合物171-1 ( 124.0mg ) ，二氯甲烷 ( 3.00mL ) ，4M的氯化氫二氧六環溶液 ( 1.00mL )，室溫反應0.5 h，反應結束後傾去上層液，不溶物加甲醇溶解，然後用碳酸氫鈉水溶液調pH=8，二氯甲烷和甲醇萃取，無水硫酸鈉乾燥，濃縮，得到化合物171-2（84 mg ）。ESI-MS m/z: 675.5 [M+H] +。
步驟3：化合物171-3的合成
在反應瓶中加入化合物171-2 ( 71.91mg) ，中間體M28 (50.00mg)，甲醇 ( 2.00mL )， 1,2-二氯乙烷 ( 2.00mL ) ，1M的氯化鋅四氫呋喃溶液 (0.08mL )，40℃反應1 h，然後加氰基硼氫化鈉( 53.04mg , 0.84mmol )，60℃反應2 h，加水稀釋，DCM萃取，無水硫酸鈉乾燥，濃縮。Pre-TLC製備（DCM:胺甲醇=18:1），得到淡黃色固體化合物171-3（56 mg）。ESI-MS m/z: 626.7 1/2[M+2H] +。
步驟4：化合物171的合成
在反應瓶中加入化合物171-3 ( 56.00mg )，二氯甲烷 ( 1.00mL )，三氟乙酸 ( 1.00mL )，室溫反應0.6 h，濃縮，然後加DCM溶解，將反應液加到冰的碳酸氫鈉水溶液中調節pH=8，二氯甲烷和甲醇萃取，無水硫酸鈉乾燥，濃縮。Pre-TLC製備（DCM:胺甲醇=10:1），得到化合物171(25.5 mg)。ESI-MS m/z: 604.8 1/2[M+2H] +。
1H NMR (500 MHz, Methanol-d 4) δ 9.19 (d, J= 7.4 Hz, 1H), 8.86 (d, J= 6.3 Hz, 1H), 8.56 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 8.48 (d, J= 6.3 Hz, 1H), 8.06 (dd, J= 8.6, 2.3 Hz, 1H), 7.65 (dd, J= 8.8, 5.8 Hz, 1H), 7.43 (d, J= 11.2 Hz, 4H), 7.31 – 7.19 (m, 2H), 7.10 – 7.05 (m, 1H), 6.81 (d, J= 8.6 Hz, 1H), 5.37 (d, J= 10.2 Hz, 1H), 5.05 (t, J= 6.1 Hz, 2H), 4.60 (t, J= 8.3 Hz, 1H), 4.47 (m, 3H), 4.23 (t, J= 11.6 Hz, 1H), 3.89 (m, 3H), 3.65 – 3.42 (m, 2H), 3.31 (dt, J= 3.3, 1.6 Hz, 2H), 2.91 (s, 2H), 2.68 – 2.59 (m, 1H), 2.53 – 2.32 (m, 8H), 2.23 – 1.98 (m, 6H), 1.81 (m, 5H), 1.31 – 1.23 (m, 4H), 1.15 (d, J= 6.6 Hz, 3H), 0.85 – 0.78 (m, 6H), 0.72 (s, 2H), 0.51 (s, 2H).
實施例172：化合物（2S，4R）-N-（(R)-1-（4-（1-乙基-1H-吡唑-5-基）苯基）-2-羥乙基）-1-（(S)-2-（4-（1-（（7-（8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基）-8-氟-4-（(R)-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基）吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基）氧基）甲基環丙基）甲基呱啶-4-基）氧基）吡嗪-2-基）-1H-1，2，3-三唑-1-基）-3-甲基丁醯基）-4-羥基吡咯烷-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物172-1的合成
在反應瓶中加入中間體M45( 105.00mg)，化合物144-3( 88.2mg)，硫酸銅 ( 32.60mg)，抗壞血酸鈉( 115.1mg)，四氫呋喃( 1.50mL )，叔丁醇 ( 1.50mL )，水( 1.50mL )，氮氣置換後室溫反應1 h，濃縮，加水稀釋，然後用DCM和甲醇萃取，無水硫酸鈉乾燥，濃縮。柱層析分離產物（DCM:胺甲醇=18:1），得到淡黃色固體化合物172-1（115 mg ）。ESI-MS m/z: 773.4 [M+H] +。
步驟2：化合物172-2的合成
在反應瓶中加入化合物172-1 ( 115.0mg)，二氯甲烷 ( 2.00mL ) ，4M的氯化氫二氧六環溶液 (0.40mL)，室溫反應0.5 h，反應結束後傾去上清液，不溶物加甲醇溶解，然後用碳酸氫鈉水溶液調節pH=8，DCM和甲醇萃取，無水硫酸鈉乾燥，濃縮，得到化合物172-2（84 mg）。ESI-MS m/z: 673.5 [M+H] +。
步驟3：化合物172-3的合成
在反應瓶中加入化合物172-2 ( 82.3mg)，中間體M28( 65.00mg)，甲醇 ( 2.00mL )，1,2-二氯乙烷 ( 2.00mL )，1M的氯化鋅四氫呋喃溶液(0.1 mL)，40℃反應1 h，再加氰基硼氫化鈉( 69.04mg) ，60℃反應3 h，加水稀釋，DCM萃取，無水硫酸鈉乾燥，濃縮。用Pre-TLC製備（DCM:胺甲醇=18:1），得到黃色固體化合物172-3（66 mg）。ESI-MS m/z: 625.8 1/2[M+2H] +。
步驟4：化合物172的合成
在反應瓶中加入化合物172-3 ( 66.00mg )，二氯甲烷 ( 1.00mL )，三氟乙酸 ( 1.00mL )，室溫反應0.6 h，濃縮，然後加DCM溶解，將反應液加到冰的碳酸氫鈉水溶液中調pH=8，DCM和甲醇萃取，無水硫酸鈉乾燥，濃縮。用製備液相分離，得到化合物172(19.5 mg)。ESI-MS m/z: 603.7 1/2[M+2H] +。
1H NMR (500 MHz, Methanol-d 4) δ 9.20 (d, J= 6.1 Hz, 1H), 8.72 (d, J= 1.4 Hz, 1H), 8.56 (d, J= 22.8 Hz, 1H), 8.17 (d, J= 1.3 Hz, 1H), 7.65 (dt, J= 14.7, 7.4 Hz, 1H), 7.51 (dd, J= 5.8, 1.9 Hz, 1H), 7.49 – 7.39 (m, 4H), 7.29 (d, J= 2.6 Hz, 1H), 7.23 (t, J= 9.2 Hz, 1H), 7.07 (t, J= 2.8 Hz, 1H), 6.29 (dd, J= 9.9, 1.9 Hz, 1H), 5.41 (d, J= 10.1 Hz, 1H), 5.07 (dd, J= 12.8, 6.8 Hz, 2H), 4.60 (t, J= 8.3 Hz, 1H), 4.50 – 4.44 (m, 3H), 4.24 (t, J= 12.9 Hz, 1H), 4.16 (q, J= 7.2 Hz, 2H), 3.89 (m, 3H), 3.62 (dd, J= 33.7, 13.3 Hz, 1H), 3.46 (dd, J= 22.1, 10.7 Hz, 1H), 3.31 (dt, J= 3.3, 1.6 Hz, 3H), 2.90 (s, 2H), 2.66 – 2.58 (m, 1H), 2.46 (t, J= 9.3 Hz, 2H), 2.35 (s, 2H), 2.22 – 2.01 (m, 6H), 1.79 (m, 4H), 1.33 (m, 4H), 1.30 – 1.26 (m, 4H), 1.16 (d, J= 6.6 Hz, 3H), 0.81 (dd, J= 14.7, 7.1 Hz, 6H), 0.72 (s, 2H), 0.51 (s, 2H).
實施例173：化合物(2S，4R)-1-((S)-2-(4-(5-(4-((1-((7-(8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)環丙基)甲基)呱嗪-1-羰基)吡嗪-2-基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)-3-甲基丁醯基)-4-羥基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物173-1的合成
稱取5-溴-2-吡嗪羧酸（2.50 g）、1-叔丁氧羰基呱嗪（2.75 g）、HATU（5.62 g）、DIPEA（6.44 mL），溶於DMF（20 mL），室溫反應1h。LC-MS監測反應完成。加入飽和氯化銨溶液淬滅反應，EA萃取，水洗，濃縮有機相，柱層析分離純化，得3.62 g白色固體，即化合物173-1。ESI-MS m/z: 371.1 [M+H] +。
步驟2：化合物173-2的合成
稱取化合物173-1（2.0 g），溶於THF（30 mL），加入乙炔基三甲基矽烷（1.52 mL），CuI（204 mg），Pd(PPh 3) 2Cl 2（378 mg），DIPEA（2.82mL），氮氣保護後，加熱至60 oC反應3h。向反應液中加入飽和食鹽水（5 mL），EA萃取，取有機相無水硫酸鈉乾燥，柱層析分離純化，得1.03 g淡黃色固體，即化合物173-2。ESI-MS m/z: 389.2 [M+H] +。
步驟3：化合物173-3的合成
稱取化合物173-2（200 mg）、化合物M29（235 mg），溶於THF（5 mL）， 加入硫酸銅（74 mg），水（5 mL），叔丁醇（5 mL），抗壞血酸鈉（265 mg），碳酸鉀（569 mg），室溫反應12h。LC-MS監測反應完成。DCM萃取，濃縮有機相，柱層析分離純化，得316 mg淡黃色固體，即化合物173-3。ESI-MS m/z: 773.4 [M+H] +。
步驟4：化合物173-4的合成
稱取化合物173-3（316 mg），溶於4M的氯化氫二氧六環溶液 (8 mL)，加入DCM（6 mL）、MeOH（2 mL），室溫反應1h。反應液直接蒸乾，向反應液中加入5 mL飽和碳酸氫鈉溶液，調節溶液pH至7-8後，用二氯甲烷/異丙醇（10：1）萃取，取有機相無水硫酸鈉乾燥，得290 mg黃色固體，即化合物173-4。ESI-MS m/z: 673.3 [M+H] +。
步驟5：化合物173的合成
稱取化合物173-4 (153 mg)，溶於MeOH（10 mL） ，加入M43（100 mg）和1.0 M的 氯化鋅四氫呋喃溶液（0.37 mL），加熱至40 oC，反應2h後，加入NaBH 3CN（34.3 mg），反應過夜。LC-MS監測反應完成。調節溶液pH至7-8後，用二氯甲烷/異丙醇萃取，取有機相無水硫酸鈉乾燥，經Pre-HPLC分離產物(CH 3CN/H 2O = 55%:45%)，得白色固體86.2 mg，即化合物173。ESI-MS m/z: 603.6 1/2[M+2H] +。
1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6) δ 9.96 (s, 1H), 9.24 (s, 2H), 8.99 (s, 1H), 8.87 (s, 2H), 8.54 (d, J= 7.4 Hz, 1H), 7.79 – 7.74 (m, 1H), 7.48 – 7.31 (m, 6H), 7.05 (s, 1H), 5.48 (d, J= 9.9 Hz, 1H), 5.20 (d, J= 3.2 Hz, 1H), 4.99 – 4.91 (m, 1H), 4.75 (d, J= 8.6 Hz, 1H), 4.44 (t, J= 7.9 Hz, 1H), 4.36 (d, J= 3.7 Hz, 5H), 4.06 (dd, J= 22.9, 13.2 Hz, 1H), 3.77 (dt, J= 21.1, 10.5 Hz, 3H), 3.64 (d, J= 21.9 Hz, 2H), 3.54 – 3.45 (m, 2H), 2.54 (d, J= 29.2 Hz, 4H), 2.39 (s, 3H), 2.20 – 1.96 (m, 3H), 1.82 (s, 1H), 1.76 – 1.62 (m, 3H), 1.40 (d, J= 6.8 Hz, 2H), 1.18 (d, J= 11.4 Hz, 2H), 1.11 (d, J= 6.1 Hz, 2H), 1.05 (d, J= 6.0 Hz, 8H), 0.75 (dd, J= 13.7, 6.8 Hz, 5H), 0.68 (s, 2H), 0.44 (s, 2H).
實施例174：化合物(2S，4R)-1-((S)-2-(4-(5-(2-(4-((1-((7-(8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)環丙基)甲基)呱嗪-1-基)-2-氧乙基)吡嗪-2-基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)-3-甲基丁醯基)-4-羥基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物174-1的合成
稱取丙二酸叔丁基乙酯（4.35 g）溶於THF（30 mL），冰浴條件下緩慢加入NaH（1261 mg），升至室溫反應0.5h，加入2,5-二溴吡嗪（5.00 g），緩慢加熱至80 oC反應2h。LC-MS監測反應完成。冰浴條件下加入飽和氯化銨溶液淬滅反應，向反應液中加入EA (50 mL)，收集有機相，濃縮，柱層析分離純化，得白色粉末5.60 g，即化合物174-1。ESI-MS m/z: 345.0 [M+H] +。
步驟2：化合物174-2的合成
稱取化合物174-1（5.60 g）溶於DCM（20 mL），冰浴條件下加入三氟乙酸（20 mL），升至室溫反應2h。LC-MS監測反應完成。濃縮反應體系，EA萃取，水洗，收集有機相，濃縮，柱層析分離純化，得淡黃色油狀物2.41 g，即化合物174-2。ESI-MS m/z: 245.0 [M+H] +。
步驟3：化合物174-3的合成
稱取化合物174-2（800 mg），溶於THF（10 mL），加入乙炔基三甲基矽烷（0.92 mL），CuI（124 mg），Pd(PPh 3) 2Cl 2（229 mg），DIPEA（1.71 mL），氮氣保護後，加熱至60 oC反應3h。向反應液中加入飽和食鹽水（5 mL）， EA萃取，取有機相無水硫酸鈉乾燥，柱層析分離純化，得560 mg淡黃色固體，即化合物174-3。ESI-MS m/z: 263.1 [M+H] +。
步驟4：化合物174-4的合成
稱取化合物174-3 (415 mg)，溶於MeOH（10 mL），加入碳酸鉀（820 mg），室溫反應1h。矽藻土濾除不溶物，濾液直接蒸乾。柱層析分離純化，得340 mg淡黃色固體，即化合物174-4。
步驟5：化合物174-5的合成
稱取化合物174-4（340 mg）、化合物M29（642 mg），溶於THF（5 mL）, 加入硫酸銅（225 mg），水（5 mL），叔丁醇（5 mL），抗壞血酸鈉（805 mg），室溫反應1h。反應液直接蒸乾。柱層析分離純化，得646 mg淡黃色固體，即化合物174-5。ESI-MS m/z: 647.3 [M+H] +。
步驟6：化合物174-6的合成
稱取化合物174-5（646 mg），氫氧化鋰一水合物（208 mg），溶於MeOH（9 mL）和H2O（3 mL）中，室溫條件下反應2h。LC-MS監測反應完成。稀鹽酸調節pH至3，DCM萃取，水洗，濃縮，得612 mg淡黃色固體，即化合物174-6。ESI-MS m/z: 619.3 [M+H] +。
步驟7：化合物174-7的合成
稱取化合物174-6（511 mg）、1-叔丁氧羰基呱嗪（184 mg）、HATU（471 mg）、DIPEA（0.430 mL），溶於DMF（10 mL），室溫反應1h。LC-MS監測反應完成。加入飽和氯化銨溶液淬滅反應，EA萃取，水洗，濃縮有機相，柱層析分離純化，得333 mg淡黃色固體，即化合物174-7。ESI-MS m/z: 787.4 [M+H] +。
步驟8：化合物174-8的合成
稱取化合物174-7（333 mg），溶於4M的氯化氫二氧六環溶液 (8 mL)，加入DCM（6 mL）、MeOH（2 mL），室溫反應1h。反應液直接蒸乾，向反應液中加入5 mL飽和碳酸氫鈉溶液，調節溶液pH至7-8後，用二氯甲烷/異丙醇（10：1）萃取，取有機相無水硫酸鈉乾燥，得258 mg黃色固體，即化合物174-8。ESI-MS m/z: 687.3 [M+H] +。
步驟9：化合物174的合成
稱取化合物174-8 (125 mg)，溶於MeOH（10 mL），加入M43（99 mg）和1.0 M 的氯化鋅四氫呋喃溶液（0.37 mL）， 加熱至40 oC，反應2h後，加入NaBH 3CN（34.3 mg），反應過夜。LC-MS監測反應完成。調節溶液pH至7-8後，用10%二氯甲烷/異丙醇萃取，取有機相無水硫酸鈉乾燥，經Pre-HPLC分離產物(CH 3CN/H 2O = 55%:45%)，得白色固體58.6 mg，即化合物174。ESI-MS m/z: 610.8 1/2[M+2H] +。
1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6) δ 9.93 (s, 1H), 9.22 (s, 1H), 9.14 (t, J= 3.1 Hz, 1H), 8.99 (s, 1H), 8.75 (s, 1H), 8.59 (d, J= 1.4 Hz, 1H), 8.53 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 7.76 (dd, J= 9.1, 6.0 Hz, 1H), 7.47 – 7.32 (m, 6H), 7.04 (d, J= 2.6 Hz, 1H), 5.44 (d, J= 10.1 Hz, 1H), 5.19 (d, J= 3.8 Hz, 1H), 4.93 (t, J= 7.2 Hz, 1H), 4.74 (d, J= 8.6 Hz, 1H), 4.42 (t, J= 8.1 Hz, 1H), 4.38 – 4.27 (m, 4H), 4.09 – 3.96 (m, 3H), 3.82 – 3.70 (m, 2H), 3.63 (dd, J= 23.3, 10.2 Hz, 1H), 3.53 (d, J= 12.9 Hz, 2H), 3.42 (d, J= 24.6 Hz, 2H), 2.56 (ddd, J= 10.1, 9.3, 3.9 Hz, 1H), 2.46 (d, J= 4.1 Hz, 4H), 2.36 (dd, J= 18.9, 10.4 Hz, 4H), 2.20 – 1.98 (m, 3H), 1.83 – 1.76 (m, 1H), 1.74 – 1.62 (m, 3H), 1.46 (d, J= 20.7 Hz, 1H), 1.39 (d, J= 7.0 Hz, 3H), 1.18 (dd, J= 12.0, 7.3 Hz, 4H), 1.09 (t, J= 6.0 Hz, 3H), 0.85 (dd, J= 9.2, 4.6 Hz, 1H), 0.78 – 0.70 (m, 6H), 0.66 (d, J= 11.8 Hz, 2H), 0.43 (s, 2H).
實施例175：化合物(2S，4R)-1-((R)-2-(3-(2-(4-((1-((7-(8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基)-8-氟-4-((R)-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基)吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)環丙基)甲基) 呱嗪-1-基)乙氧基)異惡唑-5-基)-3-甲基丁醯基)-4-羥基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物175-1的合成
稱取叔丁基-4-(2-羥乙基)呱嗪-1-羧酸酯（1.16 g）、化合物2-（3-羥基異惡唑-5-基）-3-甲基丁酸甲酯（1.00 g）、三苯基膦（1.98 g）、DIAD（1.48 mL），溶於THF（20 mL），氮氣保護，60℃反應4h。LC-MS監測反應完成。加入飽和氯化銨溶液淬滅反應，EA萃取，水洗，濃縮有機相，柱層析分離純化，得1.50 g白色固體，即化合物175-1。ESI-MS m/z: 412.3 [M+H] +。
步驟2：化合物175-2的合成
將化合物175-1（1.50 g）溶於MeOH（20 mL）和水（5 mL）中，緩慢加入氫氧化鋰一水合物（459 mg），室溫條件下反應2h。LC-MS監測反應完成。向反應液中加入DCM萃取，飽和食鹽水洗一次，有機相無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，得白色固體200 mg，即化合物175-2。ESI-MS m/z: 398.2 [M+H] +。
步驟3：化合物175-3的合成
稱取化合物175-2（200 mg）、化合物M29-2（175 mg），HATU（229 mg），加入DMF（10 mL）溶解，冰浴條件下緩慢加入DIPEA（0.31 mL），緩慢升至室溫反應1h。LC-MS監測反應完成。向反應液中加入DCM萃取，飽和食鹽水洗一次，有機相無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，柱層析分離純化，得白色固體186 mg，即化合物175-3。ESI-MS m/z: 711.4 [M+H] +。
步驟4：化合物175-4的合成
將化合物175-3 (186 mg) SFC拆分，濃縮，得白色固體55 mg，即化合物175-4。ESI-MS m/z: 711.4 [M+H] +。
步驟5：化合物175-5的合成
將化合物175-4 (55 mg) 加入DCM (2 mL)和4M的氯化氫二氧六環溶液 (2 mL)中，室溫反應10分鐘，LC-MS監測反應完成。將反應液直接濃縮，加入飽和碳酸鈉溶液至反應液pH = 8。向反應液中加入DCM (20 mL)，收集有機相，有機相飽和食鹽水洗一次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，得白色固體47 mg，即化合物175-5。ESI-MS m/z: 611.3 [M+H] +。
步驟6：化合物175的合成
稱取化合物175-5 (47 mg)，溶於MeOH（10 mL），加入M43（47 mg）和1.0 M 的氯化鋅四氫呋喃溶液（0.23 mL），加熱至40 oC，反應2h後，加入NaBH 3CN（14.5 mg），反應過夜。LC-MS監測反應完成。調節溶液pH至7-8後，用10%二氯甲烷/異丙醇萃取，取有機相無水硫酸鈉乾燥，Pre-HPLC分離產物(CH 3CN/H 2O = 55%:45%)，得白色固體21.0 mg，即化合物175。ESI-MS m/z: 572.5 1/2[M+2H] +。
1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6) δ 9.93 (s, 1H), 9.22 (s, 1H), 8.99 (s, 1H), 8.43 (d, J= 7.7 Hz, 1H), 7.77 (dd, J= 8.9, 6.1 Hz, 1H), 7.48 – 7.42 (m, 2H), 7.35 (dd, J= 16.2, 5.3 Hz, 4H), 7.03 (d, J= 2.5 Hz, 1H), 6.08 (s, 1H), 5.11 (d, J= 3.7 Hz, 1H), 4.91 (p, J= 7.1 Hz, 1H), 4.76 (d, J= 6.8 Hz, 1H), 4.40 – 4.25 (m, 5H), 4.21 (t, J= 5.4 Hz, 2H), 4.04 (dd, J= 26.7, 13.2 Hz, 1H), 3.82 – 3.41 (m, 4H), 2.60 (d, J= 17.5 Hz, 2H), 2.46 (s, 4H), 2.38 – 2.10 (m, 8H), 2.06 – 1.95 (m, 3H), 1.80 – 1.62 (m, 4H), 1.48 – 1.42 (m, 1H), 1.37 (d, J= 7.0 Hz, 2H), 1.17 (d, J= 11.8 Hz, 4H), 1.04 (d, J= 6.1 Hz, 2H), 0.95 (d, J= 6.6 Hz, 2H), 0.87 – 0.69 (m, 8H), 0.64 (s, 2H), 0.40 (s, 2H).
實施例176：化合物(2S,4R)-1-((S)-2-(4-(6-((1-((1-(((7-(8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基)-8-氟-4-(( R)-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基)吡啶并[4,3- d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)環丙基)甲基)-4-甲基呱啶-4-基)氧)呱啶-3-基)-1 H-1,2,3-三唑-1-基)-3-甲基丁醯基)-4-羥基- N-(( S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物176-1的合成
將4-羥基-4-甲基呱啶-1-羧酸叔丁酯 (500.0 mg)，5-溴-2-氟吡啶 (610.0 mg)和氫化鈉 (170.0 mg)溶解於DMF (10 mL)中，氮氣保護，70 ℃反應2 h，LCMS監測反應完成。將反應液直接濃縮，向反應液中加入EA (10 mL)，飽和食鹽水洗一次，有機相無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，柱層析分離純化，得白色固體480.0 mg，即化合物176-1。ESI-MS m/z: 371 [M+H] +。
步驟2：化合物176-2的合成
將化合物176-1 (480.0 mg)，雙三苯基膦二氯化鈀 (90.7 mg)和碘化亞銅 (49.4 mg)溶解於TEA (25 mL)中，氮氣保護，添加三甲基矽基乙炔 (0.55 mL)，50 ℃反應過夜，LCMS監測反應完成。將反應液直接濃縮，向反應液中加入EA (10 mL)，飽和食鹽水洗一次，有機相無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，柱層析分離純化，得棕色固體478.0 mg，即化合物176-2。ESI-MS m/z: 192 [M+H] +。
步驟3：化合物176-3的合成
將化合物176-2 (478.0 mg)，M29 (2 S,4 R)-1-(( S)-2-疊氮基-3,3-二甲基丁醯基)-4-羥基- N-(( S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲醯胺 (560.9 mg)，碳酸鉀 (300.0 mg), 硫酸銅 (170.2 mg)和抗壞血酸鈉 (640.2 g)溶解於混合溶劑THF (10 mL)/ MeOH (10 mL)/ H 2O (10 mL)中，氮氣保護，室溫反應3小時， LCMS監測反應完成。向反應液中加入DCM (10 mL)，飽和食鹽水洗一次，有機相無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，柱層析分離純化，得淡黃色固體144.0 mg，即化合物176-3。ESI-MS m/z: 773 [M+H] +。
步驟4：化合物176-4的合成
將化合物176-3 (100.2 mg) 加入DCM (3 mL)和TFA (1 mL)中，室溫反應20分鐘，LCMS監測反應完成。將反應液直接濃縮，加入1 M NaOH溶液至pH = 10，加入DCM (10 mL)和MeOH (1 mL)萃取，飽和食鹽水洗一次，有機相無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，得白色粉末45.1 mg，即化合物176-4。ESI-MS m/z: 673 [M+H] +。
步驟5：化合物176的合成
將化合物176-4 (45.1 mg)和M43 ( R)-1-(((7-(8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基)-8-氟-4-(3-羥基-3-甲基呱啶-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)環丙烷-1-甲醯胺 (39.7 mg)溶解於MeOH (5 mL)中，添加1M的氯化鋅四氫呋喃溶液 (0.10 mL)，40 ℃反應1.5小時。向反應液中加入氰基硼氫化鈉 (13.0 mg)，60 ℃繼續反應過夜，LCMS監測反應完成。向反應液中加入飽和氯化銨溶液 (5 mL)，有機相濃縮，加入DCM (10 mL)，飽和食鹽水洗一次，有機相無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，製備液相分離，得白色固體20.1 mg，即化合物176。ESI-MS m/z: 603.8 1/2[M+2H] +。
1H NMR (500 MHz, Methanol-d 4) δ 9.21 (d, J= 5.0 Hz, 1H), 8.85 (d, J= 7.0 Hz, 1H), 8.71 (s, 1H), 8.53 (d, J= 12.5 Hz, 1H), 8.18 (s, 1H), 7.70-7.63 (m, 1H), 7.49-7.36 (m, 4H), 7.28 (s, 1H), 7.24 (t, J= 9.0 Hz, 1H), 7.09 (s, 1H), 5.41 (d, J= 10.0 Hz, 1H), 5.11-5.01 (m, 3H), 4.54-4.40 (m, 5H), 4.25 (t, J= 13.5 Hz, 1H), 3.84 (dd, J= 27.5, 9.5 Hz, 2H), 3.60-3.55 (m, 2H), 2.91 (s, 2H), 2.63 (d, J= 6.5 Hz, 1H), 2.54-2.43 (m, 6H), 2.36 (s, 2H), 2.25-2.12 (m, 3H), 2.09-1.92 (m, 3H), 1.87-1.70 (m, 5H), 1.54 (d, J= 7.0 Hz, 3H), 1.45 (s, 3H), 1.38-1.25 (m, 4H), 1.15 (d, J= 6.5 Hz, 3H), 0.89-0.79 (m, 5H), 0.73 (s, 2H), 0.52 (s, 2H)。
實施例177：化合物(2 S,4 R)-1-(( S)-2-(4-(5-((4-((1-(((7-(8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基)-8-氟-4-(( R)-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基)吡啶并[4,3- d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)環丙基)甲基)呱嗪-1-基)甲基)呱嗪-3-基)-1 H-1,2,3-三唑-1-基)-3-甲基丁醯基)-4-羥基- N-(( S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物177-1的合成
將2-氯-5-2-氯甲基吡嗪(500.0 mg)，N-叔丁氧羰基呱嗪 (685.6 mg)和DIPEA (1.52 mL)溶解於DCM (15 mL)中，氮氣保護，60 ℃反應24 h，LCMS監測反應完成。將反應液直接濃縮，向反應液中加入EA (10 mL)，飽和食鹽水洗一次，有機相無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，柱層析分離純化，得白色固體841.3 mg，即化合物177-1。ESI-MS m/z: 313 [M+H] +。
步驟2：化合物177-2的合成
將化合物177-1 (841.3 mg)，雙三苯基膦二氯化鈀 (188.7 mg)和碘化亞銅 (102.4 mg)溶解於TEA (25 mL)中，氮氣保護，添加三甲基矽基乙炔 (1.14 mL)，50 ℃反應過夜，LCMS監測反應完成。將反應液直接濃縮，向反應液中加入EA (10 mL)，飽和食鹽水洗一次，有機相無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，柱層析分離純化，得棕色固體602 mg，即化合物177-2。ESI-MS m/z: 375 [M+H] +。
步驟3：化合物177-3的合成
將化合物177-2 (60.0 mg)，M29 (2 S,4 R)-1-(( S)-2-疊氮基-3,3-二甲基丁醯基)-4-羥基- N-(( S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲醯胺 (302.9 mg)，碳酸鉀 (400.6 mg), 硫酸銅 (95.2 mg)和抗壞血酸鈉 (340.7 mg)溶解於混合溶劑THF (5 mL)/ MeOH (5 mL)/ H 2O (5 mL)中，氮氣保護，室溫反應3小時， LCMS監測反應完成。向反應液中加入DCM (10 mL)，飽和食鹽水洗一次，有機相無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，柱層析分離純化，得淡黃色固體220.2 mg，即化合物177-3。ESI-MS m/z: 380 [M+H] +。
步驟4：化合物177-4的合成
將化合物177-3 (100.2 mg) 加入DCM (3 mL)和TFA (1 mL)中，室溫反應20分鐘，LCMS監測反應完成。將反應液直接濃縮，加入1 M NaOH溶液至pH = 10，加入DCM (10 mL)和MeOH (1 mL)萃取，飽和食鹽水洗一次，有機相無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，得白色粉末171.1 mg，即化合物177-4。ESI-MS m/z: 330 [M+H] +。
步驟5：化合物177的合成
將化合物177-4 (171.1 mg)和M43 ( R)-1-(((7-(8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基)-8-氟-4-(3-羥基-3-甲基呱啶-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)環丙烷-1-甲醯胺 (154.5 mg)溶解於MeOH (5 mL)中，添加1M的氯化鋅四氫呋喃溶液 (0.30 mL，40 ℃反應1.5小時。向反應液中加入氰基硼氫化鈉 (50.0 mg)，60 ℃繼續反應過夜，LCMS監測反應完成。向反應液中加入飽和氯化銨溶液 (5 mL)，有機相濃縮，加入DCM (10 mL)，飽和食鹽水洗一次，有機相無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，製備液相分離，得白色固體42.1 mg，即化合物177。ESI-MS m/z: 596.8 1/2[M+2H] +。
1H NMR (500 MHz, Methanol-d 4) δ 9.20 (s, 1H), 9.19 (t, J= 1.5 Hz, 1H), 8.87 (s, 1H), 8.71 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 8.68 (d, J= 1.5 Hz, 1H), 7.68-7.65 (m, 1H), 7.59-7.58 (m, 1H), 7.45-7.38 (m, 4H), 7.29 (t, J= 2.0 Hz, 1H), 7.26-7.22 (m, 1H), 7.07 (t, J= 3.0 Hz, 1H), 5.44 (d, J= 10.0 Hz, 1H), 5.07-5.02 (m, 1H), 4.58-4.40 (m, 5H), 4.27-4.19 (m, 2H), 3.93-3.86 (m, 2H), 3.73 (s, 2H), 3.67-3.58 (m, 2H), 3.49-3.44 (m, 1H), 2.66-2.57 (m, 7H), 2.50-2.45 (m, 5H), 2.43-2.39 (m, 1H), 2.22-2.12 (m, 3H), 2.03-1.94 (m, 2H), 1.87-1.85 (m, 1H), 1.80-1.75 (m, 2H), 1.67 (d, J= 7.0 Hz, 1H), 1.59 (d, J= 7.5 Hz, 1H), 1.53-1.51 (m, 3H), 1.29 (s, 3H), 1.17 (d, J= 7.0 Hz, 1H), 0.84-0.80 (m, 6H), 0.70 (s, 2H), 0.49 (s, 2H)。
實施例178：化合物（2S，4R）-1-（（S）-2-（4-（5-（（1-（（1-（（7-（8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基）-8-氟-4-（（R）-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基）吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基）氧基）甲基）環丙基）甲基）呱啶-4-基）氧基）吡嗪-2-基）-1H-1,2,3-三唑-1-基）-3-甲基丁醯基）-4-羥基-N-（（R）-2-羥基-1-（4-（4-甲基噻唑-5-基）苯基）乙基）吡咯烷-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物178-1的合成
25 mL單口瓶中加入化合物M44（100.0 mg），溶於THF（2 mL），加入化合物4-（（5-乙炔基吡嗪-2-基）氧基）呱啶-1-甲酸叔丁酯（70.6 mg），硫酸銅（33.6 mg），水（2 mL），叔丁醇（2 mL），抗壞血酸鈉（152.0 mg），室溫反應1 h。反應液直接蒸乾。柱層析分離純化(DCM : MeOH = 12 : 1)，得106.4 mg淡黃色固體，即化合物178-1。
步驟2：化合物178-2的合成
25 mL單口瓶中加入化合物178-1 (103.4 mg)，溶於4M的氯化氫二氧六環溶液 (5 mL)，加入甲醇(1 mL),室溫反應1 h。反應液直接蒸乾，向反應液中加入5 mL飽和碳酸氫鈉溶液，調節溶液pH至7-8後，用二氯甲烷/異丙醇萃取，取有機相無水硫酸鈉乾燥，得79.3 mg黃色固體，即化合物178-2。
步驟3：化合物178的合成
25 mL單口瓶中加入化合物178-2 (79.3 mg)，溶於MeOH（5 mL），加入M43（71.8 mg）和1 M 的氯化鋅四氫呋喃溶液（0.1 mL）, 加熱至40 oC，反應2 h後，加入NaBH 3CN（32.7 mg），反應過夜。反應液直接蒸乾。Pre-HPLC分離產物(CH 3CN/H 2O = 55%:45%), 得白色固體30.1 mg，即化合物178。（純度98.52%）。LCMS m/z: 605.3 1/2[M+2H] +。
1H NMR (500 MHz, Methanol-d 4) δ 9.20 (d, J = 4.9 Hz, 1H), 8.87 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 8.73 (s, 1H), 8.54 (s, 1H), 8.18 (s, 1H), 7.70 – 7.63 (m, 1H), 7.44 (d, J = 12.8 Hz, 4H), 7.30 (s, 1H), 7.24 (t, J = 9.3 Hz, 1H), 7.07 (s, 1H), 5.41 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 5.06 (dd, J = 18.5, 12.6 Hz, 3H), 4.59 (t, J = 8.1 Hz, 2H), 4.54 – 4.40 (m, 5H), 4.25 (t, J = 14.1 Hz, 1H), 3.99 – 3.81 (m, 4H), 3.57 (ddd, J = 47.8, 27.2, 12.3 Hz, 3H), 2.95 (s, 2H), 2.68 – 2.35 (m, 8H), 2.27 – 1.98 (m, 6H), 1.91 – 1.74 (m, 5H), 1.35 – 1.23 (m, 4H), 1.16 (d, J = 6.4 Hz, 4H), 0.91 – 0.77 (m, 6H), 0.75 (s, 2H), 0.54 (s, 2H).
實施例179：化合物 (2 S,4 R)-1-(( S)-2-(4-(6-((4-((1-(((7-(8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基)-8-氟-4-(( R)-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基)吡啶并[4,3- d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)環丙基)甲基)呱啶-1-基)甲基)呱啶-3-基)-1 H-1,2,3-三唑-1-基)-3-甲基丁醯基)-4-羥基- N-(( S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物179-1的合成
將2-氯-5-2-氯甲基吡啶(500.0 mg)，N-叔丁氧羰基呱嗪 (685.6 mg)和DIPEA (1.52 mL)溶解於DCM (15 mL)中，氮氣保護，60 ℃反應24 h，LCMS監測反應完成。將反應液直接濃縮，向反應液中加入EA (10 mL)，飽和食鹽水洗一次，有機相無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，柱層析分離純化，得白色固體840.0 mg，即化合物179-1。ESI-MS m/z: 312 [M+H] +。
步驟2：化合物179-2的合成
將179-1 (840.0 mg)，雙三苯基膦二氯化鈀 (188.7 mg)和碘化亞銅 (102.4 mg)溶解於TEA (25 mL)中，氮氣保護，添加三甲基矽基乙炔 (1.14 mL)，50 ℃反應過夜，LCMS監測反應完成。將反應液直接濃縮，向反應液中加入EA (10 mL)，飽和食鹽水洗一次，有機相無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，柱層析分離純化，得棕色固體600.0 mg，即化合物179-2。ESI-MS m/z: 374 [M+H] +。
步驟3：化合物179-3的合成
將179-2 (60.0 mg)，M29 (2 S,4 R)-1-(( S)-2-疊氮基-3,3-二甲基丁醯基)-4-羥基- N-(( S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲醯胺 (302.9 mg)，碳酸鉀 (400.6 mg), 硫酸銅 (95.2 mg)和抗壞血酸鈉 (340.7 mg)溶解於混合溶劑THF (5 mL)/ MeOH (5 mL)/ H 2O (5 mL)中，氮氣保護，室溫反應3小時， LCMS監測反應完成。向反應液中加入DCM (10 mL)，飽和食鹽水洗一次，有機相無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，柱層析分離純化，得淡黃色固體200.0 mg，即化合物179-3。ESI-MS m/z: 379 [M+H] +。
步驟4：化合物179-4的合成
將179-3 (70.0 mg) 加入DCM (5 mL)和TFA (2 mL)中，室溫反應10分鐘，LCMS監測反應完成。將反應液直接濃縮，加入1 M NaOH溶液至反應液pH = 8。向反應液中加入DCM (20 mL)，收集有機相，有機相飽和食鹽水洗一次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，得白色固體60.0 mg，即化合物179-4。ESI-MS m/z: 658.3 [M+H] +。
步驟5：化合物179的合成
將179-4 (60.0 mg)和M43 ( R)-1-(((7-(8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基)-8-氟-4-(3-羥基-3-甲基呱啶-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)環丙烷-1-甲醯胺 (54.0 mg)溶於甲醇 (10 mL)中，加入1M的氯化鋅乙醚溶液 (0.14 mL)，40 ℃反應1小時，然後加入氰基硼氫化鈉 (17.2 mg)，60 ℃反應12小時，LCMS監測反應完成。加入飽和碳酸氫鈉溶液 (5.0 mL)淬滅反應，向反應液中加入DCM (20 mL)，收集有機相，有機相飽和食鹽水洗一次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，製備液相分離，得白色粉末20.7 mg，即化合物179。ESI-MS m/z: 595.8 1/2[M+2H] +。
1H NMR (500 MHz, Methanol-d 4) δ 9.19 (d, J= 1.5 Hz, 1H), 8.98 (t, J= 1.5 Hz, 1H), 8.87 (s, 1H), 8.64 (d, J= 1.5 Hz, 1H), 8.25-8.23 (m, 1H), 7.68-7.65 (m, 1H), 7.59-7.58 (m, 1H), 7.45-7.37 (m, 4H), 7.30-7.18 (m, 3H), 7.07 (t, J= 2.5 Hz, 1H), 5.40 (d, J= 10.0 Hz, 1H), 5.06-5.02 (m, 1H), 4.55-4.39 (m, 5H), 4.26-4.20 (m, 2H), 3.93-3.87 (m, 2H), 3.68-3.58 (m, 4H), 3.45-3.44 (m, 1H), 2.68-2.53 (m, 7H), 2.53-2.45 (m, 5H), 2.41-2.38 (m, 1H), 2.22-2.13 (m, 3H), 2.03-1.94 (m, 2H), 1.87-1.84 (m, 1H), 1.79-1.75 (m, 2H), 1.66 (d, J= 7.0 Hz, 1H), 1.59 (d, J= 7.5 Hz, 1H), 1.53-1.51 (m, 3H), 1.29 (s, 3H), 1.17 (d, J= 6.5 Hz, 1H), 0.84-0.80 (m, 6H), 0.70 (s, 2H), 0.49 (s, 2H)。
實施例180：化合物（2S，4R）-1-（（S）-2-（4-（3-（（1-（（1-（（7-（8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基）-8-氟-4-（（R）-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基）吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基）氧基）甲基）環丙基）甲基）呱啶-4-基）（甲基）胺基）雙環[1.1.1]戊-1-基）-1H-1,2,3-三唑-1-基）-3-甲基丁醯基）-4-羥基-N-（（S）-1-（4-（4-甲基噻唑-5-基）苯基）乙基）吡咯烷-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物180-1的合成
25 mL單口瓶中加入化合物3-（（叔丁氧羰基）胺基）雙環[1.1.1]戊烷-1-羧酸甲酯（1.0 g），溶於THF（10 mL）,加入LAH（236.0 mg），室溫反應3 h。向反應液中分批加入水（0.5 mL），15% NaOH溶液（0.5 mL），水（1.5 mL），向反應液中加入飽和食鹽水（5 mL）, EA萃取，取有機相無水硫酸鈉乾燥，柱層析分離產物(PE:EA=5:1)， 得786.8 mg淡黃色固體，即化合物180-1。
步驟2：化合物180-2的合成
25 mL單口瓶中加入化合物180-1 (786.8 mg)，溶於DCM（10 mL），加入DMP（1.88 g），室溫反應3 h。向反應液中加入飽和碳酸氫鈉（5 mL）, DCM萃取，取有機相無水硫酸鈉乾燥，柱層析分離產物(PE:EA=6:1)， 得538.2 mg淡黃色固體，即化合物180-2。
步驟3：化合物180-3的合成
25 mL單口瓶中加入化合物180-2 (538.2 mg)，溶於MeOH（10 mL），加入K 2CO 3（705.1 mg）, (1-重氮-2-氧代丙基)膦酸二甲酯（734.6 mg），室溫反應3 h。反應液直接蒸乾。柱層析分離純化(PE : EA= 47: 1)，得394.2 mg淡黃色固體，即化合物180-3。
步驟4：化合物180-4的合成
25 mL單口瓶中加入化合物M29（100.0 mg），溶於THF（2 mL）,加入化合物180-3（54.5 mg），硫酸銅（35.2 mg），水（2 mL），叔丁醇（2 mL），抗壞血酸鈉（160.0 mg），室溫反應0.5 h。反應液直接蒸乾。柱層析分離純化(DCM : MeOH = 12 : 1)，得114.6 mg淡黃色固體，即化合物180-4。
步驟5：化合物180-5的合成
25 mL單口瓶中加入化合物180-4 (114.6 mg)，溶於4M的氯化氫二氧六環溶液 (5 mL)，加入甲醇(1 mL),室溫反應1 h。反應液直接蒸乾，向反應液中加入5 mL飽和碳酸氫鈉溶液，調節溶液pH至7-8後，用二氯甲烷/異丙醇萃取，取有機相無水硫酸鈉乾燥，得84.7 mg黃色固體，即化合物180-5。
步驟6：化合物180-6的合成
25 mL單口瓶中加入化合物180-5 (84.7 mg)，溶於MeOH（5 mL）,加入N-叔丁氧羰基-4-呱啶酮（33.1 mg）和1 M 的氯化鋅的四氫呋喃溶液（0.1 mL）, 加熱至40 oC，反應2 h後，加入NaBH 3CN（24.1 mg），反應過夜。反應液直接蒸乾。柱層析分離純化(DCM : MeOH= 10: 1)，得98.4 mg淡黃色固體，即化合物180-6。
步驟7：化合物180-7的合成
25 mL單口瓶中加入化合物180-6 (98.4 mg)，溶於4M的氯化氫二氧六環溶液 (5 mL)，加入甲醇(1 mL),室溫反應1 h。反應液直接蒸乾，向反應液中加入5 mL飽和碳酸氫鈉溶液，調節溶液pH至7-8後，用二氯甲烷/異丙醇萃取，取有機相無水硫酸鈉乾燥，得69.5 mg黃色固體，即化合物180-7。
步驟8：化合物180的合成
25 mL單口瓶中加入化合物180-7 (69.5 mg)，溶於MeOH（5 mL）,加入M43(64.2 mg）和1 M 的氯化鋅的四氫呋喃溶液（0.1 mL）, 加熱至40 oC，反應2 h後，加入NaBH 3CN（27.1 mg），反應過夜。向反應液中加入37%甲醛水溶液（0.2 mL）,冰醋酸（0.1 mL），室溫反應0.5 h後，加入NaBH 3CN（27.1 mg），室溫反應1 h。反應液直接蒸乾。Pre-HPLC分離產物(CH 3CN/H 2O = 55%:45%), 得白色固體23.7 mg，即化合物180（純度97.84%）。LCMS：1/2[M+2H] += 597.84。
1H NMR (500 MHz, Methanol-d 4) δ 9.21 (s, 1H), 8.87 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.93 (s, 1H), 7.67 (dd, J = 8.9, 5.8 Hz, 1H), 7.47 – 7.36 (m, 4H), 7.30 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 7.26 – 7.21 (m, 1H), 7.05 (t, J = 2.7 Hz, 1H), 5.27 (d, J = 10.3 Hz, 1H), 5.08 – 4.99 (m, 1H), 4.55 – 4.37 (m, 5H), 4.31 – 4.18 (m, 1H), 3.90 – 3.76 (m, 2H), 3.63 (dd, J = 33.3, 13.3 Hz, 1H), 3.51 – 3.41 (m, 1H), 3.34 (s, 4H), 3.17 (dd, J = 11.1, 9.6 Hz, 3H), 2.71 (s, 1H), 2.63 – 2.36 (m, 6H), 2.24 (s, 3H), 2.17 – 2.10 (m, 5H), 2.07 – 1.93 (m, 3H), 1.89 – 1.75 (m, 3H), 1.71 – 1.60 (m, 4H), 1.51 (d, J = 7.0 Hz, 3H), 1.36 – 1.24 (m, 5H), 1.15 – 1.05 (m, 3H), 0.81 (dd, J = 16.7, 7.5 Hz, 3H), 0.76 – 0.67 (m, 5H), 0.51 (s, 2H).
實施例181：化合物（2S，4R）-1-（（S）-2-（4-（2-（（1-（（1-（（7-（8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基）-8-氟-4-（（R）-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基）吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基）氧基）甲基）環丙基）甲基）呱啶-4-基）氧基）噻唑-5-基）-1H-1,2,3-三唑-1-基）-3-甲基丁醯基）-4-羥基-N-（（S）-1-（4-（4-甲基噻唑-5-基）苯基）乙基）吡咯烷-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物181-1的合成
25 mL單口瓶中加入化合物2,5-二溴噻唑（1.0 g），溶於THF（10 mL）,加入NaH（330.0 mg），N-叔丁氧羰基-4-羥基呱啶（0.91 g），加熱至50 oC反應5 h，反應液直接蒸乾。柱層析分離純化(PE : EA= 8 : 1)，得0.96 g淡黃色固體，即化合物181-1。
步驟2：化合物181-2的合成
25 mL單口瓶中加入化合物181-1 (848.0 mg)，溶於DMF（10 mL），加入三甲基乙炔基矽（457.8 mg），CuI（82.3 mg），PdCl 2(PPh 3) 2（148.2 mg），DIPEA（1.1 mL），氮氣保護後，加熱至50 oC反應3 h。向反應液中加入飽和食鹽水（5 mL）, EA萃取，取有機相無水硫酸鈉乾燥，柱層析分離產物(PE:EA=6:1) ，得594.7 mg淡黃色固體，即化合物181-2。
步驟3：化合物181-3的合成
25 mL單口瓶中加入化合物181-2 (594.7 mg)，溶於MeOH（10 mL），加入K 2CO 3（432.2 mg）, 室溫反應2 h。反應液直接蒸乾。柱層析分離純化(PE : EA= 4 : 1)，得390.2 mg淡黃色固體，即化合物181-3。
步驟4：化合物181-4的合成
25 mL單口瓶中加入化合物M29（100.0 mg），溶於THF（2 mL）,加入化合物181-3（74.3 mg），硫酸銅（35.2 mg），水（2 mL），叔丁醇（2 mL），抗壞血酸鈉（160.0 mg），室溫反應1 h。反應液直接蒸乾。柱層析分離純化(DCM : MeOH = 12 : 1)，得103.4 mg淡黃色固體，即化合物181-4。
步驟5：化合物181-5的合成
25 mL單口瓶中加入化合物181-4 (103.4 mg)，溶於4M的氯化氫二氧六環溶液 (5 mL)，加入甲醇(1 mL),室溫反應1 h。反應液直接蒸乾，向反應液中加入5 mL飽和碳酸氫鈉溶液，調節溶液pH至7-8後，用二氯甲烷/異丙醇萃取，取有機相無水硫酸鈉乾燥，得74.6 mg黃色固體，即化合物181-5。
步驟6：化合物181的合成
25 mL單口瓶中加入化合物181-5 (68.2 mg)，溶於MeOH（5 mL）,加入M43（61.9 mg）和1 M的氯化鋅四氫呋喃溶液（0.1 mL）, 加熱至40 oC，反應2 h後，加入NaBH 3CN（28.3 mg），反應過夜。反應液直接蒸乾。Pre-HPLC分離產物(CH 3CN/H 2O = 55%:45%), 得白色固體17.4 mg，即化合物181。（純度97.81%）。LCMS：1/2[M+2H] += 599.8。
1H NMR (500 MHz, Methanol-d 4) δ 9.20 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 8.87 (s, 1H), 8.38 (s, 1H), 7.66 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 7.48 – 7.36 (m, 5H), 7.29 (s, 1H), 7.24 (t, J = 9.2 Hz, 1H), 7.07 (s, 1H), 5.35 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 5.04 (dd, J = 13.6, 6.7 Hz, 2H), 4.61 (s, 1H), 4.55 – 4.37 (m, 5H), 4.25 (t, J = 14.8 Hz, 1H), 3.87 (dd, J = 25.1, 9.4 Hz, 2H), 3.74 – 3.52 (m, 2H), 3.47 (s, 1H), 3.02 (dd, J = 14.5, 7.3 Hz, 1H), 2.87 (s, 2H), 2.67 – 2.38 (m, 4H), 2.25 – 2.01 (m, 4H), 2.00 –1.83 (m, 3H), 1.52 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.43 (s, 1H), 1.37 – 1.23 (m, 5H), 1.15 (d, J = 6.5 Hz, 3H), 0.87 – 0.76 (m, 6H), 0.73 (s, 2H), 0.52 (s, 2H).
實施例182：化合物 (2 S, 4 R)-1-(( S)-2-(4-(1-((1-((1-(((7-(8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基)-8-氟-4-(( R)-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基)吡咯并[4,3- d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)環丙基)甲基)呱啶-4-基)甲基) 1 H-吡唑-4-基）-1 H-1,2,3-三唑-1-基)-3-甲基丁醯基)-4-羥基- N-(( S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物182-1的合成
將4-[((4-溴-1 H-吡唑-1-基)甲基]呱啶-1-甲酸叔丁酯 (1.0 g)溶於THF (10 mL)中，氮氣保護，置於-78 ℃低溫反應器中，加入2.5M的正丁基鋰正己烷溶液 (1.74 mL)，-78 ℃攪拌反應1小時，然後加入DMF (0.34 mL)，-78 ℃攪拌反應1小時，LCMS監測反應完成。加入飽和碳酸氫鈉溶液 (5.0 mL)淬滅反應，向反應液中加入DCM (20 mL)，收集有機相，有機相飽和食鹽水洗一次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，柱層析純化得白色固體450.0 mg，即化合物182-1。ESI-MS m/z: 294.4 [M+H] +。
步驟2：化合物182-2的合成
將化合物182-1 (450.0 mg), (1-重氮基-2-氧代丙基)膦酸二甲酯 (884.1 mg)和碳酸鉀 (1.27 g)加入MeOH (30 mL)中，室溫反應1小時，LCMS監測反應完成。將反應液過濾，有機相直接濃縮，柱層析純化得白色固體373.0 mg，即化合物182-2。ESI-MS m/z: 290.4 [M+H] +。
步驟3：化合物182-3的合成
將M29 (2 S, 4 R)-1-(( S)-2-疊氮基-3-甲基丁醯基)-4-羥基- N-(( S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基) 吡咯烷-2-甲醯胺 (131.5 mg)，化合物182-2 (100.0 mg)，無水硫酸銅 (49.7 mg)和抗壞血酸鈉 (178.1 mg)溶解于THF/叔丁醇/水 (3/3/3 mL)的混合溶劑中，室溫反應3小時。LCMS監測反應完成，向反應液中加入DCM (10 mL)，飽和食鹽水洗一次，有機相無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，柱層析純化得黃色固體250.0 mg，即化合物182-3。ESI-MS m/z: 746.9 [M+H] +。
步驟4：化合物182-4的合成
將化合物182-3 (250.0 mg) 加入DCM (5 mL)和TFA (2 mL)中，室溫反應10分鐘，LCMS監測反應完成。將反應液直接濃縮，加入1 M NaOH溶液至反應液pH = 8。向反應液中加入DCM (20 mL)，收集有機相，有機相飽和食鹽水洗一次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，得白色固體153.1 mg，即化合物182-4。ESI-MS m/z: 646.9 [M+H] +。
步驟5：化合物182-5的合成
將化合物182-4 (153.1 mg)和M28 ( R)-1-(((7-(8-乙基-7-氟-3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-8-氟-4-(3-羥基-3-甲基呱啶-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)環丙烷-1-甲醯胺 (168.5 mg)溶於甲醇 (8 mL)中，加入1M的氯化鋅乙醚溶液 (0.36 mL)，40 ℃反應1小時，然後加入氰基硼氫化鈉 (44.7 mg)，60 ℃反應12小時，LCMS監測反應完成。加入飽和碳酸氫鈉溶液 (5.0 mL)淬滅反應，向反應液中加入DCM (20 mL)，收集有機相，有機相飽和食鹽水洗一次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，得白色固體171.0 mg，即化合物182-5。ESI-MS m/z: 612.8 1/2[M+2H] +。
步驟6：化合物182的合成
將化合物182-5 (20.0 mg) 加入DCM (5 mL)和TFA (2 mL)中，室溫反應10分鐘，LCMS監測反應完成。將反應液直接濃縮，製備液相分離，得白色粉末7.6 mg，即化合物182。ESI-MS m/z: 590.2 1/2[M+2H] +。
1H NMR (500 MHz, Methanol-d 4) δ 9.20 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 8.87 (s, 1H), 8.03 (d, J= 4.0 Hz, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.92 (s, 1H), 7.67-7.64 (m, 1H), 7.44-7.39 (m, 4H), 7.29 (d, J= 2.5 Hz, 1H), 7.23 (t, J= 9.0 Hz, 1H), 7.06 (t, J= 2.5 Hz, 1H), 5.27 (d, J= 10.5 Hz, 1H), 5.03 (q, J= 7.0 Hz, 1H), 4.52-4.39 (m, 5H), 4.24 (t, J= 13.5 Hz, 1H), 3.90-3.87 (m, 1H), 3.66-3.56 (m, 1H), 3.49-3.41 (m, 1H), 3.26 (q, J= 7.5 Hz, 2H), 3.10-3.03 (m, 2H), 2.57-2.53 (m, 1H), 2.47 (s, 1H), 2.41-2.37 (m, 3H), 2.21-2.16 (m, 2H), 1.98-1.91 (m, 2H), 1.86-1.84 (m, 1H), 1.80-1.74 (m, 2H), 1.69-1.66 (m, 2H), 1.51 (d, J= 7.0 Hz, 2H), 1.29-1.27 (m, 6H), 1.12 (d, J= 6.5 Hz, 3H), 0.91-0.86 (m, 2H), 0.83-0.79 (m, 3H), 0.75-0.74 (m, 3H), 0.70 (s, 2H), 0.49 (s, 1H)。
實施例183：化合物（2S，4R）-1-（（S）-2-（4-（5-（3-（4-（（1-（（7-（8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基）-8-氟-4-（（R）-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基）吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基）氧基）甲基）環丙基）甲基）呱嗪-1-基）氮雜環丁烷-1-基）吡嗪-2-基）-1H-1,2,3-三唑-1-基）-3-甲基丁醯基）-4-羥基-N-（（S）-1-（4-（4-甲基噻唑-5-基）苯基）乙基）吡咯烷-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物183-1的合成
將4-（氮雜環丁烷-3-基）呱嗪-1-羧酸叔丁酯（200 mg）溶於5.00 mL 1,4-二氧六環中，依次加入TEA（0.576 mL），2-氯-5-乙炔基吡嗪（0.138 mg），80 oC反應3 h。反應液冷卻至室溫，減壓蒸除溶劑並柱層析純化得無色油狀產物180 mg，即化合物183-1。ESI-MS m/z: 344 [M+H] +。
步驟2：化合物183-2的合成
室溫下，將化合物183-1（180 mg），M29（230 mg），抗壞血酸鈉（216 mg），無水硫酸銅（60.2 mg）溶于2.00 mL 叔丁醇，2.00 mL四氫呋喃和2.00 mL水的混合溶劑中，室溫反應1 h。向反應液加入50 mL 水溶液淬滅，DCM/MeOH=10/1混合溶劑萃取3次，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓蒸除溶劑後柱層析純化（DCM/MeOH=10/1）得300 mg黃色固體產物，即化合物183-2。ESI-MS m/z: 800 [M+H] +。
步驟3：化合物183-3的合成
室溫下，將化合物183-2（300 mg）溶於5.00 mL 二氯甲烷中，然後加入4M的氯化氫二氧六環溶液（2.00 mL），室溫反應0.5 h。減壓蒸出溶劑後，二氯甲烷複溶，再次蒸出溶劑，5.00 mL 四氫呋喃複溶後加入1.00 mL水，加入碳酸鈉固體攪拌20 min，然後加入無水硫酸鈉乾燥後過濾，減壓蒸除溶劑後柱層析純化（DCM/MeOH=10/1）得208 mg黃色固體產物，即化合物183-3。ESI-MS m/z: 700 [M+H] +。
步驟4：化合物183的合成
室溫下，將M43（72.4 mg），183-3（77.0）溶于無水甲醇（3.00 mL）中，加入1M氯化鋅四氫呋喃溶液（0.220 mL），55 oC反應1.0 h，加入氰基硼氫化鈉（34.6 mg），70 oC反應3.0 h。向反應液中加入適量飽和氯化銨水溶液淬滅反應，加入DCM/MeOH=10/1萃取三次，每次20mL，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓蒸除溶劑後,Pre-HPLC純化得52.5 mg白色固體產物，即化合物183。ESI-MS m/z: 617 1/2[M+2H] +。
1H NMR (500 MHz, Methanol- d 4) δ 9.21 (d, J= 6.3 Hz, 1H), 8.87 (d, J= 3.4 Hz, 1H), 8.64 (d, J= 6.6 Hz, 1H), 8.44 (s, 1H), 7.88 (s, 1H), 7.67 (dd, J= 8.8, 5.9 Hz, 1H), 7.47 – 7.37 (m, 4H), 7.30 (d, J= 2.6 Hz, 1H), 7.24 (t, J= 9.2 Hz, 1H), 7.06 (t, J= 2.4 Hz, 1H), 5.36 (d, J= 10.2 Hz, 1H), 5.04 (q, J= 7.1 Hz, 1H), 4.59 (s, 3H), 4.49 (ddd, J= 35.9, 16.3, 9.3 Hz, 4H), 4.24 (dd, J= 25.4, 11.2 Hz, 3H), 3.99 (s, 2H), 3.96 – 3.83 (m, 2H), 3.70 – 3.59 (m, 1H), 3.48 (s, 1H), 3.37 (s, 1H), 2.62 (dt, J= 10.1, 6.5 Hz, 3H), 2.51 (d, J= 13.1 Hz, 3H), 2.47 – 2.39 (m, 3H), 2.20 (dd, J= 14.8, 7.2 Hz, 4H), 1.98 (td, J= 8.9, 4.5 Hz, 1H), 1.91 – 1.74 (m, 3H), 1.53 (d, J= 7.0 Hz, 2H), 1.38 – 1.23 (m, 7H), 1.15 (d, J= 6.7 Hz, 3H), 0.90 (t, J= 6.8 Hz, 1H), 0.86 – 0.79 (m, 5H), 0.72 (s, 2H), 0.50 (s, 2H).
實施例184：化合物（2S，4R）-1-（（S）-2-（4-（5-（1-（（（（7-（8-乙基-7-氟代-3-羥基萘-1-基）-8-氟-4-（（（R）-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基）吡咯并吡啶[4,3-d]嘧啶-2-基）氧基）甲基環丙基甲基環丙基）甲基）呱啶-4-基）氧）吡嗪-2-基吡嗪-2-甲基-1,2,3-三唑-1-基吡唑嗪2-1-2-3-3-三唑1-基吡唑-3-甲基丁醯基）-4-羥基-N-（（1R，2R）-2-羥基-3-甲基-1-（4-（4-甲基噻唑-5-基）苯基）丁基）吡咯烷-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物184-1的合成
向（R）-（1-（4-溴苯基）-2-羥乙基）胺基甲酸叔丁酯  (4.00g, 12.65mmol)，4-甲基噻唑 (2.51g, 25.30mmol)，醋酸鈀(0.28g, 1.27mmol)，醋酸鉀(2.48g,25.30mmol)的N,N-二甲基甲醯胺(60.00mL)中，氮氣保護，升溫至100℃下反應12h。反應液加入50mL水中，EA萃取2次，每次30mL，合併有機相，飽和食鹽水洗，乾燥，過濾，濃縮，柱層析純化（EA：PE=1% to 60%）。得到 2.10g無色固體。即化合物184-1。ESI-MS m/z: 335.1 [M+H] +。
步驟2：化合物184-2的合成
向化合物184-1(1.00g,2.99mmol)的四氫呋喃(30.00mL)中，加入DMP (1.40g,3.29mmol)，20℃下反應1h。LCMS轉化完全，過濾，得到184-2的THF溶液。直接投下步。ESI-MS m/z: 351.1 [M+H+18] +。
步驟3：化合物184-3的合成
向化合物184-2(1000.00mg, 3.01mmol)的 四氫呋喃(33.00mL)中，0℃下冷卻，氮氣保護，加入異丙基氯化鎂 (9.02mL,2.00mol/L，18.05mmol)，0℃下反應2h。反應液加入100mL飽和氯化銨中，EA萃取，有機相乾燥，過濾，減壓濃縮，殘留物柱層析純化。得到250.00mg泡沫固體。即化合物184-3。ESI-MS m/z: 377.2 [M+H] +。
步驟4：化合物184-4的合成
向化合物184-3(474.00mg,1.26mmol)的四氫呋喃(4.80mL) 中，加入4M的氯化氫二氧六環溶液 ( 1.57mL)，60℃下反應2h。LCMS原料轉化，反應液加入20mL飽和碳酸氫鈉溶液中，氯仿/異丙醇萃取3次，有機相乾燥，過濾，減壓濃縮。得到 330.00mg黃色液體。即化合物184-4。ESI-MS m/z: 277.2 [M+H] +。
步驟5：化合物184-5的合成
向化合物184-4(330.00mg, 1.19mmol)，（2S，4R）-4-羥基-1-[（2-甲基丙-2-基）氧羰基]吡咯烷-2-羧酸 (303.69mg, 1.31mmol)的N,N-二甲基甲醯胺(4.00mL)中，冰水浴冷卻至0℃，加入 HATU (499.36mg,1.31mmol)，DIPEA (0.83mL,4.78mmol)，0℃下反應1h，然後20℃下反應2h。反應液加入30mL清水中，EA萃取3次，有機相乾燥，過濾，減壓濃縮，殘留物柱層析純化（MeOH:DCM=1% to 17%）得到 250.00mg淡黃色泡沫固體。即化合物184-5。ESI-MS m/z: 490.2 [M+H] +。
步驟6：化合物184-6的合成
向 184-5 (250.00mg, 0.51mmol)的二氯甲烷(1.50mL) 和 甲醇 (1.50mL)中，0℃下冷卻，加入4M的氯化氫二氧六環溶液（ 1.28mL  )，0℃下反應1h，20℃下再反應1h。反應液加入20mL飽和碳酸溶液中，氯仿/異丙醇萃取8次，有機相乾燥，過濾，減壓濃縮。得到 175.00mg淡黃色泡沫固體。即化合物184-6。ESI-MS m/z: 390.1 [M+H] +。
步驟7：化合物184-7的合成
向184-6(180.00mg, 0.46mmol)，（2S）-3-甲基-2-[（2-甲基丙-2-基）氧羰基胺基]丁酸( 110.43mg , 0.51mmol )，HATU ( 193.27mg , 0.51mmol ) 的 DMF (4.00mL)中，加入DIPEA (0.32mL,1.85mmol)， 20℃下反應2h。原料轉化完全，反應液加入30mL水中，EA萃取2次，每次15mL，合併有機相，飽和食鹽水洗，乾燥，過濾，減壓濃縮，殘留物柱層析純化（MeOH：DCM=1：13），得到 195.00mg淡黃色泡沫固體。即化合物184-7。ESI-MS m/z: 589.2 [M+H] +。
步驟8：化合物184-8的合成
向184-7 (190.00mg,0.32mmol) 的 甲醇(2.00mL)，二氯甲烷 ( 2.00mL ) 中， 0℃下加入 4M的氯化氫二氧六環溶液( 0.81mL ) ，然後20℃下反應1h。反應液不加熱，直接減壓濃縮。得到 130.00mg, 白色固體。即化合物184-8，直接投下步。ESI-MS m/z: 489.2 [M+H] +。
步驟9：化合物184-9的合成
向化合物184-8( 150.00mg , 0.31mmol )，三乙胺 (0.17mL, 1.23mmol) 的四氫呋喃(1.50mL) 和乙腈(1.50mL) 中，冰水浴冷卻，氮氣保護，滴加含有2-疊氮基-1,3-二甲基咪唑六氟磷酸鹽(175.07mg, 0.61mmol) 的乙腈(0.75mL) 溶液，然後0℃下反應2h。反應液加入20mL水中，DCM萃取，有機相乾燥，過濾，減壓濃縮，殘留物柱層析純化（MeOH:DCM=1：16）得到 120.00mg 棕色泡沫固體，即化合物184-9。ESI-MS m/z: 515.20 [M+H] +。
步驟10：化合物184-10的合成
向化合物184-9(80.00mg, 0.16mmol)，化合物144-3(51.84mg, 0.17mmol)的叔丁醇(2.50mL) 和四氫呋喃(2.50mL)中，加入硫酸銅(24.80mg, 0.16mmol)，含有 抗壞血酸鈉 (92.36mg, 0.47mmol)的水(1.25mL)，20℃下反應1h。反應液加入20mL清水中，DCM萃取，有機相乾燥，過濾，減壓濃縮，殘留物柱層析純化（MeOH:DCM=1：16），得到 80.00mg棕色固體。即化合物184-10。ESI-MS m/z: 818.10 [M+H] +。
步驟11：化合物184-11的合成
向184-10 (70.00mg , 0.09mmol ) 的 二氯甲烷(2.50mL) 中，0℃下加入三氟乙酸 (0.48mL , 6.42mmol)，0℃反應1h。反應液加入20mL飽和碳酸氫鈉溶液中，氯仿/異丙醇萃取，有機相乾燥，過濾，減壓濃縮，得到 55.00mg無色油狀物。即化合物184-11，直接投下步。ESI-MS m/z: 718.30 [M+H] +。
步驟12：化合物184的合成
向 184-11 (70.00mg,0.10mmol)，M43(58.86mg,0.11mmol)的甲醇 ( 2.50mL ) 中，加入 1M的氯化鋅四氫呋喃溶液(0.20mL )，40℃下反應1h，加入 氰基硼氫化鈉(24.51mg, 0.39mmol)，40℃下反應16h。反應液加入20mL水中，氯仿/異丙醇萃取，合併有機相，乾燥，過濾，減壓濃縮，殘留物pre-HPLC純化得到 20.00mg白色粉末。即化合物184。ESI-MS m/z: 625.8 1/2[M+2H] +。
1H NMR (500 MHz, Methanol- d 4) δ 9.20 (s, 1H), 8.87 (s, 1H), 8.74 (s, 1H), 8.58 (s, 1H), 8.19 (s, 1H), 7.68-7.65 (m, 1H), 7.47-7.41 (m, 4H), 7.30 (s, 1H), 7.26-7.22 (m, 1H), 7.07 (s, 1H),5.41-5.39 (d, J= 10.0 Hz, 1H), 5.10-5.14 (m, 2H), 4.63-4.58 (m, 5H), 4.47 (s, 4H), 4.29-4.22 (m, 1H), 3.95-3.85 (m, 2H), 3.69-3.52 (m, 4H), 2.66-2.63 (m, 1H), 2.48 (s, 6H), 2.22-2.19 (m, 3H), 2.06-1.99 (m, 3H), 1.81-1.77 (m, 6H), 1.30 (m, 3H), 1.28 (m, 3H), 1.18-1.15 (m, 3H), 1.04-1.02 (m, 6H), 0.84-0.79 (m, 6H),
實施例185：化合物（2S，4R）-1-（（S）-2-（4-（5-（（1-（（1-（（7-（8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基）-8-氟-4-（（R）-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基）吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基）氧基）甲基）環丙基）甲基）呱啶-4-基）氧基）吡嗪-2-基）-1H-1,2,3-三唑-1-基）-3-甲基丁醯基）-4-羥基-N-（（S）-1-（2-甲基-4-（4-甲基噻唑-5-基）苯基）乙基）吡咯烷-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物185-1的合成
將4-溴-2-甲基苯乙酮（3.0 g），叔丁基亞磺醯胺（6.9 g）溶於30.00 mL 無水四氫呋喃，加入鈦酸乙酯（31.0 mL），80℃反應3.0 h。反應液冷卻至室溫後滴加冰水中淬滅，乙酸乙酯萃取3次，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓蒸除溶劑後柱層析純化（PE/EA=5/1）得3.0產物，即化合物185-1。ESI-MS m/z: 316 [M+H] +。
步驟2：化合物185-2的合成
將化合物185-1（3.0 g），溶於30.00 mL 無水四氫呋喃中，加入三仲丁基硼氫化鋰（28.46 mL），室溫反應2.0 h。反應液滴加至冰水中淬滅，乙酸乙酯萃取3次，合併有機相無水硫酸鈉乾燥，減壓蒸除溶劑得3.0g粗品，直接用於下一步，即化合物185-2。ESI-MS m/z: 318 [M+H] +。
步驟3：化合物185-3的合成
將化合物185-2（3.0 g），溶於4M的氯化氫二氧六環溶液（35.00 Ml）中，室溫反應2.0 h。反應液減壓蒸除溶劑，EA打漿後過濾得2.0 g白色產物，即化合物185-3。ESI-MS m/z: 214 [M+H] +。
步驟4：化合物185-4的合成
將化合物185-3（2.0 g），溶於20.0 mL 無水二氯甲烷中，依次加入三乙胺（5.57 mL），二碳酸二叔丁酯（2.76 mL），室溫反應1.0 h。反應液減壓蒸除溶劑，柱層析純化後得2.0 g類白色產物，即化合物185-4。ESI-MS m/z: 314 [M+H] +。
步驟5：化合物185-5的合成
將化合物185-4（2.0 g），4-甲基噻唑（0.95 g），醋酸鈀（0.29 g），碳酸鉀（2.64 g）溶於20.0 mL DMA中，120℃反應2.0 h。反應液冷卻至室溫後滴加水淬滅，乙酸乙酯萃取3次，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓蒸除溶劑後柱層析純化得2.0產物，即化合物185-5。ESI-MS m/z: 333 [M+H] +。
步驟6：化合物185-6的合成
將化合物185-5（2.0 g），溶於4M的氯化氫二氧六環溶液中（10.00 mL），室溫反應1.0 h。反應液減壓蒸除溶劑，甲醇複溶後再次減壓蒸除溶劑得1.1 g黃色產物，直接用於下一步，即化合物185-6。ESI-MS m/z: 233[M+H] +；
步驟7：化合物185-7的合成
將化合物185-6（1.1 g），(2S,4R)-1-叔丁氧羰基-2-胺基甲醯基-4-羥基吡咯烷（1.31 g），DIPEA（2.47 mL）溶於10.00 mL DMF中，加入HATU（1.98 g），室溫反應1.0 h。反應液加水淬滅，乙酸乙酯萃取3次，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓蒸除溶劑後柱層析純化得2.0產物，即化合物185-7。ESI-MS m/z: 446 [M+H] +。
步驟8：化合物185-8的合成
將化合物185-7（2.0 g），溶於4M的氯化氫二氧六環溶液（15.00 mL）與3.0 mL甲醇中，室溫反應1.0 h。反應液中加入50 mL EA，體系中有黃色固體析出，過濾得1.1 g黃色產物，直接用於下一步，即化合物185-8。ESI-MS m/z: 346[M+H] +。
步驟9：化合物185-9的合成
將化合物185-8（1.1 g），叔丁氧羰基-L-纈胺酸（0.76 g），DIPEA（2.77 mL）溶於15.00 mL DMF中，加入HATU（1.98 g），室溫反應1.0 h。反應液加水淬滅，乙酸乙酯萃取3次，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓蒸除溶劑後柱層析純化得1.4 g產物，即化合物185-9。ESI-MS m/z: 545 [M+H] +。
步驟10：化合物185-10的合成
將化合物185-9（1.4 g），溶於4M的氯化氫二氧六環溶液（15.00 mL）中，室溫反應1.0 h。反應液冰浴下滴加4M NaOH溶液調節pH至12，加入DCM/MeOH=10/1混合溶劑萃取3次，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾並減壓蒸出溶劑得到1.1 g產物，即化合物185-10。ESI-MS m/z: 445[M+H] +。
步驟11：化合物185-11的合成
將化合物185-10（1.1 g）溶于無水乙腈（15.00 mL）和四氫呋喃（8.0 mL）混合溶劑中，加入三乙胺（2.06 mL），冰浴下加入2-疊氮基-1,3-二甲基咪唑六氟磷酸鹽（1.41 g），室溫反應1.5 h。反應液加水淬滅，乙酸乙酯萃取3次，合併有機相，無水酸鈉乾燥，減壓蒸除溶劑後柱層析純化得1.1 g產物，即化合物185-11。ESI-MS m/z: 471[M+H] +。
步驟12：化合物185-12的合成
室溫下，將185-11（500 mg），化合物144-3（482 mg），抗壞血酸鈉（546 mg），無水硫酸銅（152 mg）溶于2.00 mL 叔丁醇，2.00 mL四氫呋喃和2.00 mL水的混合溶劑中，室溫反應1 h。向反應液加入50 mL 水溶液淬滅，DCM/MeOH=10/1混合溶劑萃取3次，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓蒸除溶劑後柱層析純化（DCM/MeOH=10/1）得800 mg黃色固體產物，即化合物185-12。ESI-MS m/z: 774 [M+H] +。
步驟13：化合物185-13的合成
將185-12（800 mg）送樣製備拆分，拆分條件為色譜柱：CHIRAL ART Cellulose-SB (20×250mm，5µm)；流動相：0.1%DEA in HEX ：0.1%DEA in EtOH =85：15 ；流速 20mL/min；樣品保留時間：目標化合物A：16.33min ，目標化合物B：21.85min。收集化合物B得到320 mg產物，即化合物185-13。ESI-MS m/z: 774 [M+H] +。
步驟14：化合物185-14的合成
將化合物185-13（320 mg），溶於3.0 mL甲醇中，加入4M的氯化氫二氧六環溶液（4.00 mL），室溫反應1.0 h。反應液冰浴下滴加4M NaOH溶液調節pH至12，加入DCM/MeOH=10/1混合溶劑萃取3次，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾並減壓蒸出溶劑得到180 mg產物，即化合物185-14。ESI-MS m/z: 674[M+H] +。
步驟15：化合物185的合成
室溫下，將M43（48.8 mg），化合物185-14（50.0 mg）溶于無水甲醇（2.00 mL）中，加入1M的氯化鋅四氫呋喃溶液（0.15 mL），55 oC反應1.0 h，加入氰基硼氫化鈉（23.3 mg），70 oC反應3.0 h。向反應液中加入適量飽和氯化銨水溶液淬滅反應，加入DCM/MeOH=10/1萃取3次，每次20mL，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓蒸除溶劑後經Pre-HPLC純化得23.2 mg白色固體產物，即化合物185。ESI-MS m/z: 604.2 1/2[M+2H] +。
1H NMR (500 MHz, Methanol- d 4) δ 9.21 (d, J= 4.3 Hz, 1H), 8.85 (d, J= 7.3 Hz, 1H), 8.74 (dd, J= 4.3, 1.4 Hz, 1H), 8.54 (d, J= 4.7 Hz, 1H), 8.19 (d, J= 1.5 Hz, 1H), 7.67 (dd, J= 9.1, 5.7 Hz, 1H), 7.39 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 7.32 – 7.21 (m, 4H), 7.06 (t, J= 2.6 Hz, 1H), 5.39 (d, J= 10.1 Hz, 1H), 5.24 (q, J= 7.1 Hz, 1H), 5.16 (d, J= 10.0 Hz, 1H), 4.58 (s, 1H), 4.55 – 4.49 (m, 2H), 4.49 – 4.46 (m, 2H), 4.27 (t, J= 14.5 Hz, 1H), 3.95 – 3.82 (m, 2H), 3.63 (dd, J= 33.1, 13.3 Hz, 2H), 3.47 (d, J= 11.3 Hz, 2H), 3.02 (s, 2H), 2.62 (dt, J= 10.1, 6.5 Hz, 3H), 2.45 (d, J= 16.8 Hz, 6H), 2.26 – 2.07 (m, 6H), 2.00 – 1.92 (m, 2H), 1.80 (dd, J= 27.5, 17.6 Hz, 5H), 1.61 (d, J= 6.9 Hz, 1H), 1.49 (d, J= 7.0 Hz, 3H), 1.32 – 1.26 (m, 5H), 1.15 (d, J= 6.5 Hz, 3H), 0.85 – 0.74 (m, 7H), 0.58 (s, 2H).
實施例186 化合物（2S，4R）-1-（（S）-2-（4-（5-（7-（1-（（7-（8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基）-8-氟-4-（（（R）-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基）喹唑啉-2-基））氧)甲基)環丙基)甲基)-2,7-二氮雜螺[3.5]壬-2-基吡嗪-2-基-1H-1,2,3-三唑-1-基）-3-甲基丁醯基）-4-羥基-N-（（S）-1-（4-（4-甲基噻唑-5-基）苯基）乙基）吡咯烷-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物186-1的合成
將7-溴-8-氟喹唑啉-2,4-二醇（7.2 g）溶於60 mL三氯氧磷，加入 N,N-二異丙基乙胺（13.8 mL），N 2氛圍升溫至100℃反應1 h。減壓旋蒸除去三氯氧磷，粗品直接柱層析純化（PE/EA = 3: 2）得到化合物186-1（7.5 g）。ESI-MS m/z: 294.8 [M+H] +。
步驟2：化合物186-2的合成
將化合物186-1（0.5 g）溶於15.0 mL二氯甲烷，-40℃下加入 N,N-二異丙基乙胺（0.84 mL）和(3R)-3-甲基呱啶-3-醇鹽酸鹽（0.27 g），保持-40℃反應1 h。將反應液加入到飽和氯化銨溶液中，加入EA，萃取，收集有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾，旋乾柱層析純化（PE/EA = 1：1）得到化合物186-2（0.55 g）。ESI-MS m/z: 374.0 [M+H] +。
步驟3：化合物186-3的合成
將化合物186-2（300 mg），1,1-環丙烷二甲醇（164 mg）溶於8.0 mL DMF，加入碳酸銫（522 mg），三乙烯二胺（18 mg），升溫至40℃反應3 h。將反應液加入水中，加入EA，萃取，收集有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮後柱層析純化（DCM/EA = 3: 2）得到化合物186-3（340 mg）。ESI-MS m/z: 440.1 [M+H] +。
步驟4：化合物186-4的合成
化合物186-3（200 mg）加入到50 mL單口瓶中，加入8 mL 1,4-二氧六環和2 mL水，中間體M5（327 mg），CataCXium A Pd G3（66 mg），磷酸鉀（289 mg），N 2置換3次，升溫至90℃反應1 h。反應結束後，向反應液中加入EA和水，萃取，水相繼續使用EA萃取2次，收集並合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，濃縮，濃縮物經柱層析純化（DCM : EA = 3 : 2）得到化合物186-4（205 mg）。ESI-MS m/z: 594.2 [M+H] +。
步驟5：化合物186-5的合成
將化合物186-4（200 mg）溶於8.0 mL二氯甲烷中，加入戴斯-馬丁氧化劑（214 mg），室溫反應0.5 h。過濾除去不溶性雜質，向濾液中加入DCM和飽和碳酸氫鈉溶液，萃取，收集有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮後柱層析純化（DCM/EA = 3: 2）得到化合物186-5（142 mg）。ESI-MS m/z: 592.2 [M+H] +。
步驟6：化合物186-6的合成
將化合物 186-5（142 mg）和化合物M48（145 mg）溶於甲醇（5 mL）中，加入1M的氯化鋅四氫呋喃溶液（0.29 mL），40℃反應1小時，然後加入氰基硼氫化鈉（45 mg），升溫至60℃繼續反應6小時。加入飽和氯化銨溶液淬滅反應，向反應液中加入DCM，萃取，收集有機相，有機相用飽和食鹽水洗一次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，收集濾液，濃縮後柱層析純化（DCM/MeOH = 8: 1）得到化合物186-6（138 mg）。ESI-MS m/z: 630.7 1/2[M+2H] +。
步驟7：化合物186的合成
將化合物186-6溶於5 mL二氯甲烷和5 mL乙腈，冰浴下加入2.0 mL三氟化硼乙醚溶液（1 M），保持冰浴反應15 min。將反應液加入到冰的飽和碳酸氫鈉溶液中，加入DCM/MeOH（10: 1）萃取，收集有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾，旋乾，進一步HPLC製備得到化合物186（8.8 mg）。ESI-MS m/z: 608.7 1/2[M+2H] +。
實施例187：化合物（2S，4R）-1-（（S）-2-（4-（5-（（4-（（1-（（7-（8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基）-8-氟-4-（（R）-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基）吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基）氧基）甲基）環丙基）甲基）呱嗪-1-基）甲基）噻唑-2-基）-1H-1,2,3-三唑-1-基）-3-甲基丁醯基）-4-羥基-N-（（S）-1-（4-（4-甲基噻唑-5-基）苯基）乙基）吡咯烷-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物187-1的合成
25 mL單口瓶中加入化合物2-溴噻唑-5-甲醛（1.0 g），溶於MeOH（10 mL）,加入N-叔丁氧羰基-4-羥基呱啶（1.1 g）和1M的氯化鋅四氫呋喃溶液（1.0 mL），加熱至40 oC，反應2 h後，加入NaBH 3CN（0.62 g），反應過夜。反應液直接蒸乾。柱層析分離純化(PE : EA= 4 : 1)，得1.2 g淡黃色固體，即化合物187-1。
步驟2：化合物187-2的合成
25 mL單口瓶中加入化合物187-1 (1.2 g)，溶於DMF（10 mL），加入三甲基乙炔基矽（487.8 mg），CuI（96.7 mg），PdCl 2(PPh 3) 2（178.2 mg），DIPEA（2.1 mL），氮氣保護後，加熱至50 oC反應3 h。向反應液中加入飽和食鹽水（5 mL）, EA萃取，取有機相無水硫酸鈉乾燥，柱層析分離產物(PE:EA=4:1)，得475.2 mg淡黃色固體，即化合物187-2。
步驟3：化合物187-3的合成
25 mL單口瓶中加入化合物187-2 (475.2 mg)，溶於MeOH（10 mL）,加入K 2CO 3（412.5 mg）, 室溫反應2 h。反應液直接蒸乾。柱層析分離純化(PE : EA= 4 : 1)，得239.65 mg淡黃色固體，即化合物187-3。
步驟4：化合物187-4的合成
25 mL單口瓶中加入化合物M29（100.0 mg），溶於THF（2 mL）,加入化合物1-3（74.0 mg），硫酸銅（35.2 mg），水（2 mL），叔丁醇（2 mL），抗壞血酸鈉（188.0 mg），室溫反應1 h。反應液直接蒸乾。柱層析分離純化(DCM : MeOH = 12 : 1)，得94.3 mg淡黃色固體，即化合物187-4。
步驟5：化合物187-5的合成
25 mL單口瓶中加入化合物187-4 (94.3 mg)，溶於HCl in dioxane (5 mL)，加入甲醇(1 mL),室溫反應1 h。反應液直接蒸乾，向反應液中加入5 mL飽和碳酸氫鈉溶液，調節溶液pH至7-8後，用二氯甲烷/異丙醇萃取，取有機相無水硫酸鈉乾燥，得63.1 mg黃色固體，即化合物187-5。
步驟6：化合物187的合成
25 mL單口瓶中加入化合物187-5 (63.1 mg)，溶於MeOH（5 mL）,加入M43（52.2 mg）和1M的氯化鋅四氫呋喃溶液（0.1 mL）, 加熱至40 ℃，反應2 h後，加入NaBH 3CN（24.8 mg），反應過夜。反應液直接蒸乾。Pre-HPLC分離產物(CH 3CN/H 2O = 55%:45%), 得白色固體12.4 mg，即化合物187（純度96.63%）。LCMS：1/2[M+2H] += 599.2
1H NMR (500 MHz, Methanol-d 4) δ 9.18 (d, J = 10.7 Hz, 1H), 8.87 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 8.61 (dd, J = 17.1, 2.9 Hz, 1H), 7.67 (dd, J = 9.7, 6.5 Hz, 2H), 7.41 (dq, J = 16.2, 8.2 Hz, 4H), 7.29 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.26 – 7.19 (m, 1H), 7.06 (dd, J = 5.1, 2.7 Hz, 1H), 5.43 (dd, J = 10.0, 2.6 Hz, 1H), 5.08 – 4.99 (m, 1H), 4.60 (s, 1H), 4.55 – 4.36 (m, 6H), 4.22 (dd, J = 23.3, 13.2 Hz, 1H), 3.94 – 3.78 (m, 4H), 3.69-3.51 (m, 1H), 3.44 (s, 1H), 2.63 – 2.52 (m, 4H), 2.46 - 2.40 (m, 7H), 2.21- 2.16 (m, 3H), 1.96 (dd, J = 17.5, 8.6 Hz, 1H), 1.83 (s, 1H), 1.77 (d, J = 11.0 Hz, 2H), 1.64 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 1.51 (dd, J = 7.0, 2.0 Hz, 3H), 1.28 – 1.21 (m, 4H), 1.15 (d, J = 6.5 Hz, 3H), 0.86 – 0.76 (m, 6H), 0.70 (s, 2H), 0.49 (s, 2H).
實施例188：化合物（2S，4R）-1-（（S）-2-（4-（5-（（（（3R，7aR）-7a-（（（7-（8-乙基-7-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基）-8-氟-4-（（R）-3-羥基-3-甲基呱啶-1-甲基呱啶-2-基）吡咯并嘧啶-2-基）氧基）甲基）甲基六氫-1H-吡咯嗪-3-吡咯并嗪-3-甲氧基）甲酯吡嗪-2-基1-1,2,3,3-三唑-1-基）-3-甲基丁醯基）-4-羥基-N-（（S）-1-（4-（4-甲基噻唑-5-基）苯基）乙基）吡咯烷-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物188-1的合成
將(5-氯吡嗪-2-基)甲醇（1g），三甲基矽基乙炔（1.16mL）, 雙三苯基磷二氯化鈀(0.48g)，碘化亞銅(0.13g)溶於10mL DMF中，加入三乙胺（2.88mL），置換氮氣三次，50℃反應2h，LCMS監測反應完成。向反應液中加入30 mL水，用EA萃取三次，每次50mL，合併有機相，飽和食鹽水洗滌，硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮有機相，經柱層析分離純化得白色固體1g，即188-1。ESI-MS m/z: 207 [M+H] +。
步驟2：化合物188-2的合成
將化合物188-1（1g）溶於10mL DCM中，0℃下滴加PBr 3（0.68mL），保溫反應1小時，LCMS監測反應完成。向反應液中加入20.0 mL水，用DCM:MeOH=10:1萃取三次，每次20mL，合併有機相，硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮有機相，經柱層析分離純化得白色固體0.61g，即化合物188-2。ESI-MS m/z: 269 [M+H] +。
步驟3：化合物188-3的合成
將化合物88-3 （R）-1-（7-（8-乙基-7-氟-3-（甲氧基-甲氧基）萘-1-基）-8-氟-2-（（（3R，7aR）-3-（羥甲基）四氫-1H-吡咯嗪-7a（5H）-基）甲氧基吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基）-3-甲基呱啶-3-醇（200mg）溶於4mLTHF中，加入NaH(32mg)，室溫攪拌30分鐘，然後加入188-2（106mg），插入氮氣球，50℃下攪拌1h。LC-MS監測反應完成。向反應液緩慢加入10 mL 飽和氯化銨溶液淬滅，EA萃取3次，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓蒸除溶劑後經柱層析分離純化得淡黃色固體70mg即化合物188-3。ESI-MS m/z: 780[M+H] +；
步驟4：化合物188-4的合成
將化合物188-3（70mg）和M29（2S，4R）-1-（（S）-2-疊氮基-3-甲基丁醯基）-4-羥基-N-（（S）-1-（4-（4-甲基噻唑-5-基）苯基）乙基）吡咯烷-2-甲醯胺（41mg）溶於1.5 mL THF，1.5 mL H 2O，1.5 mL 叔丁醇中，然後依次加入抗壞血酸鈉（39mg）和無水硫酸銅（11 mg），室溫反應0.5小時，LCMS監測反應完成。向反應液中加入20.0 mL水，用DCM:異丙醇=4:1萃取3次，每次20mL，合併有機相，硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮有機相，經柱層析分離純化得淡黃色固體40mg，即化合物188-4。ESI-MS m/z: 619 1/2[M+2H] +。
步驟5：化合物188的合成
將化合物188-4（40mg）溶於2 mL DCM中，然後加入1 mL TFA，室溫反應30 min，LCMS監測反應完成。LCMS監測反應完成。將反應液直接濃縮，製備液相分離，得白色粉末11mg，即化合物188。ESI-MS m/z: 597 1/2[M+2H] +。
實施例189  化合物（2S，4R）-1-（（S）-2-（4-（5-）（7-（1-（7-（8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基）-8-氟-4-（（R）-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基）吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基）氧基）甲基）環丙基）甲基）-2,7-二氮雜螺[3.5]壬-2-基）甲基]吡嗪-2-基）-1H-1,2,3-三唑-1-基）-3-甲基丁醯基）-4-羥基-N-（（S）-1-（4-（4-甲基噻唑-5-基）苯基）乙基）吡咯烷-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物189-1的合成
將5-氯吡嗪-2-甲醛（1. 0 g），2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷-7-甲酸叔丁酯 （1.59 g），溶於甲醇（10 mL）中， 室溫反應1小時後分批次加入氰基硼氫化鈉，反應完畢後，加入乙酸乙酯和水，萃取三次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，得到粗品，經柱層析純化得到化合物189-1（480 mg）。ESI-MS m/z:353.2 [M+H] +。
步驟2：化合物189-2的合成
將化合物189-1（480 mg），雙三苯基膦二氯化鈀 (85 mg)和碘化亞銅 (46 mg)溶解於TEA (0.84 mL)中，氮氣保護，添加三甲基矽基乙炔 (0.33 mL)，60℃反應過夜，LCMS監測反應完成。將反應液直接濃縮，向反應液中加入EA (10 mL)，飽和食鹽水洗一次，有機相無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，柱層析分離純化，得化合物189-2（210 mg）。ESI-MS m/z:415.1 [M+H] +。
步驟3：化合物189-3的合成
將化合物189-2 (200.0 mg)，M29 (2 S,4 R)-1-(( S)-2-疊氮基-3,3-二甲基丁醯基)-4-羥基- N-(( S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲醯胺 (220 mg)，碳酸鉀 (333 mg)，硫酸銅 (70 mg)和抗壞血酸鈉 (249 mg)溶解於混合溶劑THF (2 mL)/ t BuOH (1 mL)/MeOH(1 mL)/ H 2O (2 mL)中，氮氣保護，室溫反應3小時， LCMS監測反應完成。向反應液中加入DCM (10 mL)，飽和食鹽水洗一次，有機相無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，柱層析分離純化，得化合物189-3（274 mg）。ESI-MS m/z: 799.1 [M+H] +。
步驟4：化合物189-4的合成
將化合物189-3（274 mg）溶於二氯甲烷 ( 5mL )中，加入三氟乙酸（1mL )，25℃反應20分鐘。反應完畢後，用碳酸氫鈉溶液中和，加入二氯甲烷/異丙醇（10:1）萃取，乾燥，濃縮，得到化合物189-4（164 mg）。ESI-MS m/z:699.2 [M+H] +。
步驟5：化合物189的合成
將化合物189-4（164 mg），M43（208 mg），1M的氯化鋅四氫呋喃溶液 ( 0.60 mL)溶於甲醇（5mL）中， 40℃反應2小時。再加入氰基硼氫化鈉 (95mg)，40℃反應8小時。反應完畢後，加入氯化銨溶液淬滅，濃縮，經柱層析（二氯甲烷/甲醇）純化，得到化合物189(82 mg）。ESI-MS m/z:616.6 1/2[M+2H] +。
實施例190 化合物（2S，4R）-1-（（S）-2-（4-（5-（1-（（（（7-（8-乙基-7-氟代-3-羥基萘-1-基）-8-氟-4-（（（R）-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基）吡咯并吡啶[4,3-d]嘧啶-2-基）氧)甲基)環丙基)甲基)呱啶-4-基）氧）-2-基吡嗪-1H-1,2,3-三唑-1-基）-3-甲基丁醯基）-4-羥基-N-（（S）-3-（甲胺基）-1-（4-（4-甲基噻唑-5-基）苯基）-3-乙基）吡咯烷-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物190-1的合成
將(3S)-3-(4-溴苯基)-3- (叔丁氧基羰基)胺（2.5 g），甲胺鹽酸鹽（0.58 g）溶於15.0 mL DMF，加入DIPEA（6.0 mL），HATU（3.3 g），室溫反應0.5 h。將反應液加入水中，加入EA，萃取，收集有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾，旋乾過柱（DCM/MeOH = 10: 1）得到化合物190-1（2.4 g）。ESI-MS m/z: 357.0 [M+H] +。
步驟2：化合物190-2的合成
將化合物190-1 （2.4 g），4-甲基噻唑（1.0 g）溶於15.0 mL DMA，加入Pd(OAc) 2（0.3 g），K 2CO 3（2.8 g），N 2氛圍升溫至120℃反應1.5 h。將反應液加入水中，加入EA，萃取，收集有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮後經柱層析純化（DCM/MeOH = 10: 1）得到化合物190-2（1.75 g），ESI-MS m/z: 376.1 [M+H] +。
步驟3：化合物190-3的合成
將化合物190-2（1.75 g）加入10 mL DCM中，冰水浴下加入4 M的氯化氫二氧六環溶液（10 mL），室溫反應1 h。將反應液直接濃縮，加入1 M NaOH溶液至反應液pH = 8。向反應液中加入DCM，萃取，收集有機相，有機相飽和食鹽水洗一次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮得到化合物190-3（1.33 g）。ESI-MS m/z: 276.1 [M+H] +。
步驟4：化合物190-4的合成
將化合物190-3（1.33 g），叔丁氧羰基- L-羥脯胺酸（1.12 g）溶於12.0 mL DMF，加入DIPEA（4.0 mL），HATU（2.2 g），室溫反應0.5 h。將反應液加入水中，加入DCM/異丙醇（3：1）萃取，收集有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮後經柱層析純化（DCM/MeOH = 10：1）得到化合物190-4（2.28 g）。ESI-MS m/z: 489.2 [M+H] +。
步驟5：化合物190-5的合成
將化合物190-4（2.28 g）加入10 mL DCM中，冰水浴下加入4 M的氯化氫二氧六環溶液（10 mL），室溫反應1 h。將反應液直接濃縮，加入1 M NaOH溶液至反應液pH = 8。向反應液中加入DCM/異丙醇（3：1），萃取，收集有機相，有機相飽和食鹽水洗一次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮得到化合物190-5（2.0 g）。ESI-MS m/z: 389.1 [M+H] +。
步驟6：化合物190-6的合成
將化合物190-5（2.0 g），叔丁氧羰基- L-纈胺酸（1.12 g）溶於15.0 mL DMF，加入DIPEA（8.5 mL），HATU（2.35 g），室溫反應0.5 h。將反應液加入水中，加入DCM/MeOH（10：1），萃取，收集有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮後經柱層析純化（DCM/MeOH = 10：1）得到化合物190-6（2.05 g）。ESI-MS m/z: 588.2 [M+H] +。
步驟7：化合物190-7的合成
將化合物190-6（2.05 g）加入10 mL DCM中，冰水浴下加入4 M的氯化氫二氧六環溶液（10 mL），室溫反應1 h。將反應液直接濃縮，加入1 M NaOH溶液至反應液pH = 8。向反應液中加入DCM/異丙醇（3：1），萃取，收集有機相，有機相飽和食鹽水洗一次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮得到化合物190-7（1.6 g）。ESI-MS m/z: 488.2 [M+H] +。
步驟8：化合物190-8的合成
將化合物190-7（200 mg）和TEA （0.35 mL）溶於ACN （5 mL）和THF （5 mL）中，冰水浴下加入2-疊氮基-1,3-二甲基咪唑六氟磷酸鹽（234 mg），自然升溫至室溫反應3 h。將反應液加入水中，加入DCM/MeOH（10：1）萃取，收集有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾，收集有機相，濃縮後經柱層析純化（DCM/MeOH=10：1）得到化合物190-8（150 mg）。ESI-MS m/z: 514.2 [M+H] +。
步驟9：化合物190-9的合成
將化合物190-8（100 mg）和化合物144-3（66 mg）溶于叔丁醇（4 mL）、四氫呋喃（4 mL）和水（4 mL），加入無水硫酸銅（28 mg），抗壞血酸鈉（100 mg），室溫反應2 h。將反應液旋乾，加入DCM/MeOH （10: 1）和水，萃取，收集有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾，收集濾液，濃縮後經柱層析純化（DCM/MeOH =8: 1）得到化合物190-9（132 mg）。ESI-MS m/z: 817.3 [M+H] +。
步驟10：化合物190-10的合成
將化合物190-9（132 mg）加入4 mL DCM中，冰水浴下加入4 M的氯化氫二氧六環溶液（4 mL），室溫反應1 h。將反應液直接濃縮，加入1 M NaOH溶液至反應液pH = 8。向反應液中加入DCM/異丙醇（3：1），萃取，收集有機相，有機相飽和食鹽水洗一次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮得到化合物190-10（105 mg）。ESI-MS m/z: 717.3[M+H] +。
步驟11：化合物190的合成
將化合物 190-10（105 mg）和化合物M43（96 mg）溶於甲醇（8 mL）中，加入1M氯化鋅四氫呋喃溶液（0.22 mL），40℃反應1小時，然後加入氰基硼氫化鈉（28 mg），升溫至60℃繼續反應6小時。加入飽和氯化銨溶液淬滅反應，向反應液中加入DCM/MeOH （10: 1），萃取，收集有機相，有機相用飽和食鹽水洗一次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，收集濾液，旋乾得粗產物，進一步Pre-HPLC製備得到化合物190（33.4 mg）。ESI-MS m/z: 625.2 1/2[M+2H] +。
實施例191：化合物（2S，4R）-1-（（S）-2-（4-（5-（2-（4-（（1-（（（7-（8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基）-8-氟-4-（（R）-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基）吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基）氧基）甲基）環丙基）甲基）呱嗪-1-基）乙基）吡嗪-2-基）-1H-1,2,3-三唑-1-基）-3-甲基丁醯基）-4-羥基-N-（（S）-1-（4-（4-甲基噻唑-5-基）苯基）乙基）吡咯烷-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物191-1的合成
在0℃下，N 2保護下，將NaH（1.0 g）分批加入到丙二酸叔丁基乙酯（3.5 g）的乾燥DMF溶液（30 mL）。混合物繼續在0℃下攪拌30 min後，加入2,5-二溴吡嗪（3.0 g），然後升溫80℃攪拌3.0 h後。反應完全後，反應液加水淬滅，EA萃取3次，合併有機相，飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮得到化合物191-1（3.0 g）。ESI-MS m/z: 345.2 [M+H] +。
步驟2：化合物191-2的合成
將化合物191-1（3.0 g）加入到50 mL單口瓶中，加入二氯甲烷（10 mL）溶解，冰浴降溫0℃左右，加入TFA（10 mL），室溫攪拌2.5 h。反應完全後，反應液濃縮，加水稀釋，乙酸乙酯萃取3次，收集並合併有機相，飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，柱層析（PE:EA=5:1）得到化合物191-2（1.3 g）。ESI-MS m/z: 245.1 [M+H] +。
步驟3：化合物191-3的合成
將化合物191-2（500 mg）溶於MeOH（20 mL）中，分批加入硼氫化鈉（1.0 g）室溫攪拌反應5.0 h。反應完畢後，飽和氯化銨溶液淬滅，加入二氯甲烷/甲醇（10:1）萃取三次，合併有機相，飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，柱層析（DCM:MeOH=50:1）得到化合物191-3（130 mg）。ESI-MS m/z: 203.4 [M+H] +。
步驟4：化合物191-4的合成
將化合物191-3（130 mg）、三甲基矽基乙炔（188 mg）、Pd(PPh 3) 2Cl 2（45 mg）、CuI（25 mg）、TEA (648 mg) 溶於THF ( 10 mL )中，升溫80℃攪拌反應2.0 h。反應完畢後，矽藻土過濾，旋乾，柱層析（DCM:MeOH=50:1）得到化合物191-4（75 mg）。ESI-MS m/z: 221.4 [M+H] +。
步驟5：化合物191-5的合成
將化合物191-4（75 mg）溶於二氯甲烷 ( 5 mL )中，加入TEA (102 mg )降溫0℃以下，加入甲基磺醯氯（78 mg），室溫攪拌反應20分鐘。反應完畢後，加水淬滅，乙酸乙酯萃取3次，合併有機相，飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮得到粗品化合物191-5（130 mg）。ESI-MS m/z: 299.2 [M+H] +。
步驟6：化合物191-6的合成
將化合物191-5（130 mg）溶於乙腈( 10 mL )中，加入N-叔丁氧羰基呱嗪 ( 200 mg )和K 2CO 3( 500 mg )，升溫80℃攪拌反應4.0 h。反應完畢後，加水稀釋，乙酸乙酯萃取3次，合併有機相，飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，柱層析（PE:EA=1:1）得到化合物191-6（55 mg）。ESI-MS m/z: 389.2 [M+H] +。
步驟7：化合物191-7的合成
將化合物191-6（55 mg）溶於乙腈( 10 mL )中，加入K 2CO 3( 500 mg )，升溫80℃攪拌反應3.0 h。反應完畢後，加水稀釋，乙酸乙酯萃取3次，合併有機相，飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，柱層析（PE:EA=1:1）得到化合物191-7（30 mg）。ESI-MS m/z: 317.2 [M+H] +。
步驟8：化合物191-8的合成
將化合物191-7（30 mg），抗壞血酸鈉（40 mg），硫酸銅（15 mg）和M29 ( 45 mg)依次加入到25 mL單口瓶中，加入甲醇，四氫呋喃和水各3 mL，室溫下反應30 min。旋乾溶劑，柱層析（DCM:MeOH=10:1）分離純化得到化合物191-8（40 mg）。ESI-MS m/z: 773.4 [M+H] +。
步驟9：化合物191-9的合成
將化合物191-8（40 mg）加入到25 mL單口瓶中，加入10 mL二氯甲烷溶解，加入TFA（5 mL），室溫下攪拌1.0 h。反應完全後，反應液旋乾，飽和碳酸氫鈉溶液調pH =10.0，加入二氯甲烷/異丙醇（10:1）萃取三次，合併有機相，飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮得到粗品化合物191-9（30 mg）。ESI-MS m/z: 673.4 [M+H] +。
步驟10：化合物191的合成
將化合物191-9（30 mg）、M43（25 mg）、1M的氯化鋅四氫呋喃溶液 ( 0.5 mL)溶於甲醇（10 mL）中，40℃反應1小時。再加入氰基硼氫化鈉 (10 mg)，70℃攪拌反應5小時。反應完畢後，冷卻至室溫，加入氯化銨溶液淬滅，二氯甲烷和甲醇（10：1）萃取，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，經柱層析（DCM:MeOH=85:15）純化，粗品經Pre-HPLC（C18色譜柱，A：0.05%TFA水溶液，B：乙腈，濃度梯度：20%B至55%B，6.45-6.90 min，流速：20 mL/min，254nm）製備得到化合物191（10.6 mg）。ESI-MS m/z:603.7 1/2[M+2H] +。
1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6) δ 9.21 (s, 1H), 9.12 (s, 1H), 8.98 (s, 1H), 8.71 (s, 1H), 8.60 (s, 1H), 8.53 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.44 (d, J = 7.1 Hz, 2H), 7.34 (dd, J = 20.2, 8.8 Hz, 4H), 7.03 (s, 1H), 5.43 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 4.93 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 4.74 (s, 1H), 4.41 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 4.31 (d, J = 12.1 Hz, 4H), 4.04 (dd, J = 27.4, 13.5 Hz, 1H), 3.84 – 3.65 (m, 2H), 3.58 (dd, J = 51.2, 14.2 Hz, 1H), 3.17 (s, 1H), 2.95 (s, 3H), 2.65 (s, 3H), 2.46 (s, 5H), 2.29 (s, 2H), 2.04 (d, J = 31.8 Hz, 4H), 1.68 (s, 3H), 1.38 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.23 (s, 4H), 1.17 (d, J = 12.8 Hz, 3H), 1.09 (d, J = 6.1 Hz, 4H), 0.86 (s, 2H), 0.73 (d, J = 6.7 Hz, 7H), 0.64 (s, 2H), 0.40 (s, 2H).
實施例192：化合物（2S，4R）-1-（（S）-2-（4-（5-（3-（4-（（1-（（7-（8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基）-8-氟-4-（（R）-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基）吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基）氧基）甲基）環丙基）甲基）呱嗪-1-基）氮雜環丁烷-1-基）吡嗪-2-基）-1H-1,2,3-三唑-1-基）-3-甲基丁醯基）-4-羥基-N-（（R）-2-羥基-1-（4-（4-甲基噻唑-5-基）苯基）乙基）吡咯烷-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物192-1的合成
室溫下，將化合物183-1（190 mg），M44（230 mg），抗壞血酸鈉（228 mg），無水硫酸銅（64.0 mg）溶于2.00 mL 叔丁醇，2.00 mL四氫呋喃和2.00 mL水的混合溶劑中，室溫反應1 h。向反應液加入50 mL 水溶液猝滅，DCM/MeOH=10/1混合溶劑萃取3次，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓蒸除溶劑後柱層析純化（DCM/MeOH=10/1）得298 mg黃色固體產物，即化合物192-1。ESI-MS m/z: 816 [M+H] +。
步驟2：化合物192-2的合成
室溫下，將192-1（298 mg）溶於5.00 mL 無水甲醇中，然後加入4M的氯化氫二氧六環溶液（2.00 mL），室溫反應0.5 h。減壓濃縮後，經柱層析純化得224 mg黃色固體產物，即化合物192-2。ESI-MS m/z: 716 [M+H] +。
步驟3：化合物192的合成
室溫下，將M43（64.4 mg），192-2（70.0 mg）溶于無水甲醇（3.00 mL）中，加入1M氯化鋅四氫呋喃溶液（0.196 mL），55 oC反應1.0 h，加入氰基硼氫化鈉（30.7 mg），70 oC反應3.0 h。向反應液中加入適量飽和氯化銨水溶液淬滅反應，加入DCM/MeOH=10/1萃取三次，每次20mL，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓蒸除溶劑後經Pre-HPLC純化得20.0 mg白色固體產物，即化合物192。ESI-MS m/z: 625.35 1/2[M+2H] +。
1H NMR (500 MHz, Methanol- d 4) δ 9.21 (d, J= 6.1 Hz, 1H), 8.87 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 8.63 (d, J= 1.5 Hz, 1H), 8.45 (s, 1H), 7.88 (d, J= 1.5 Hz, 1H), 7.67 (dd, J= 9.0, 5.8 Hz, 1H), 7.49 – 7.41 (m, 3H), 7.29 (d, J= 2.6 Hz, 1H), 7.24 (t, J= 9.3 Hz, 1H), 7.06 (t, J= 2.5 Hz, 1H), 5.38 (d, J= 10.1 Hz, 1H), 5.05 (t, J= 6.1 Hz, 1H), 4.59 (t, J= 8.3 Hz, 2H), 4.55 – 4.41 (m, 5H), 4.31 – 4.18 (m, 4H), 4.05 – 3.97 (m, 2H), 3.93 (dd, J= 11.0, 3.9 Hz, 2H), 3.87 – 3.81 (m, 2H), 3.63 (dd, J= 33.1, 13.3 Hz, 2H), 3.47 (s, 2H), 3.37 (s, 1H), 2.61 (dq, J= 12.5, 6.4 Hz, 4H), 2.52 (s, 2H), 2.41 (dd, J= 12.7, 4.2 Hz, 2H), 2.20 (dd, J= 15.0, 7.8 Hz, 4H), 2.08 – 2.00 (m, 2H), 1.85 (s, 1H), 1.79 (d, J= 11.1 Hz, 2H), 1.36 – 1.25 (m, 8H), 1.15 (d, J= 6.6 Hz, 3H), 0.90 (d, J= 6.5 Hz, 1H), 0.81 (dd, J= 9.4, 6.9 Hz, 5H), 0.72 (s, 2H), 0.50 (s, 2H).
實施例193：化合物(2 S,4 R)-1-(( S)-2-(4-(5-((1-((1-(((7-(8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基)-8-氟-4-(( R)-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基)吡啶并[4,3- d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)環丙基)甲基)呱啶-4-基)甲基)呱嗪-2-基)-1 H-1,2,3-三唑-1-基)-3-甲基丁醯基)-4-羥基- N-(( S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物193-1的合成
將5-溴吡嗪-2-羧酸甲酯(4.0 g)，4-[(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜環戊硼烷-2-基)亞甲基]呱啶-1-甲酸叔丁酯 (7.2 g)，四三苯基膦鈀 (2.1 g)和碳酸鈉 (3.9 g)溶解於DME (40 mL)和水 (10 mL)的混合溶劑中，氮氣保護，80 ℃反應6 h，LCMS監測反應完成。將反應液直接濃縮，向反應液中加入DCM (30 mL)，飽和食鹽水洗一次，有機相無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，柱層析分離純化，得黃色固體1.9 g，即化合物193-1。ESI-MS m/z: 234 [M+H] +。
步驟2：化合物193-2的合成
將化合物193-1 (1.9 g)和氫氧化鈀/碳 (240.0 mg)溶解於MeOH (30 mL)中，氫氣氛圍下室溫反應12 h，LCMS監測反應完成。將反應液直接抽濾，濃縮，柱層析分離純化，得黃色固體760.0 mg，即化合物193-2。ESI-MS m/z: 236 [M+H] +。
步驟3：化合物193-3的合成
將化合物193-2 (760.0 mg)溶解於THF (40 mL)中，氮氣保護，冰水浴下加入四氫鋁鋰 (430.0 mg)，保溫反應10 min，LCMS監測反應完成。向反應液中加入水/氫氧化鈉溶液/水(1/1/3 mL)，抽濾，加入DCM (30 mL)，飽和食鹽水洗一次，有機相無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，柱層析分離純化，得黃色固體126.0 mg，即化合物193-3。ESI-MS m/z: 208 [M+H] +。
步驟4：化合物193-4的合成
將化合物193-3 (126.0 mg)和DMP (173.8 mg)溶解於DCM (10 mL)中，室溫反應1 h，LCMS監測反應完成。向反應液中加入飽和碳酸氫鈉溶液 (10 mL)，抽濾，加入DCM (10 mL)，飽和食鹽水洗一次，有機相無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，柱層析分離純化，得黃色固體75.0 mg，即化合物193-4。ESI-MS m/z: 206 [M+H] +。
步驟5：化合物193-5的合成
將化合物193-4 (70.0 mg)，(1-重氮基-2-氧代丙基)膦酸二甲酯 (0.11 mL)和碳酸鉀 (203.7 mg)溶解於MeOH (5 mL)中，室溫反應1 h，LCMS監測反應完成。將反應液直接濃縮，向反應液中加入DCM (10 mL)，飽和食鹽水洗一次，有機相無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，柱層析分離純化，得白色固體50.0 mg，即化合物193-5。ESI-MS m/z: 202 [M+H] +。
步驟6：化合物193-6的合成
將化合物193-5 (50.0 mg)，M29 (2 S,4 R)-1-(( S)-2-疊氮基-3,3-二甲基丁醯基)-4-羥基- N-(( S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲醯胺 (75.7 mg)，硫酸銅 (23.8 mg)和抗壞血酸鈉 (85.5 mg)溶解於混合溶劑THF (2 mL)/ tBuOH (2 mL)/ H 2O (2 mL)中，氮氣保護，室溫反應1 h， LCMS監測反應完成。向反應液中加入DCM (10 mL)，飽和食鹽水洗一次，有機相無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，柱層析分離純化，得淡黃色固體66.0 mg，即化合物193-6。ESI-MS m/z: 758 [M+H] +。
步驟7：化合物193-7的合成
將化合物193-6 (66.0 mg) 加入DCM (3 mL)和TFA (1 mL)中，室溫反應20分鐘，LCMS監測反應完成。將反應液直接濃縮，加入1 M NaOH溶液至pH = 10，加入DCM (10 mL)和MeOH (1 mL)萃取，飽和食鹽水洗一次，有機相無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，得白色粉末55.0 mg，即化合物193-7。ESI-MS m/z: 658 [M+H] +。
步驟8：化合物193的合成
將193-7 (55.0 mg)和M43 ( R)-1-(((7-(8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基)-8-氟-4-(3-羥基-3-甲基呱啶-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)環丙烷-1-甲醯胺 (55.1 mg)溶解於MeOH (5 mL)中，添加1 M的氯化鋅四氫呋喃溶液 (0.13 mL)，40 ℃反應1.5小時。向反應液中加入氰基硼氫化鈉 (15.8 mg)，60 ℃繼續反應過夜，LCMS監測反應完成。向反應液中加入飽和氯化銨溶液 (5 mL)，有機相濃縮，加入DCM (10 mL)，飽和食鹽水洗一次，有機相無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，製備液相分離，得白色固體16.5 mg，即化合物193。ESI-MS m/z: 596 1/2[M+2H] +。
1H NMR (500 MHz, Methanol-d 4) δ 9.21 (d, J= 2.5 Hz, 1H), 9.14 (d, J= 1.5 Hz, 1H), 8.87 (s, 1H), 8.68 (d, J= 1.5 Hz, 1H), 8.49 (d, J= 1.5 Hz, 1H), 7.68-7.65 (m, 1H), 7.45-7.37 (m, 5H), 7.32-7.29 (m, 2H), 7.27-7.22 (m, 2H), 7.06 (t, J= 2.5 Hz, 1H), 5.43 (d, J= 10.0 Hz, 1H), 5.07-5.02 (m, 1H), 4.58-4.40 (m, 5H), 4.28-4.21 (m, 2H), 3.94-3.85 (m, 2H), 3.68-3.59 (m, 2H), 3.50-3.44 (m, 2H), 3.09 (s, 2H), 2.77 (d, J= 7.0 Hz, 2H), 2.67-2.61 (m, 2H), 2.48-2.41 (m, 4H), 2.21-2.13 (m, 3H), 2.03-1.93 (m, 4H), 1.89-1.76 (m, 4H), 1.66 (d, J= 7.0 Hz, 1H), 1.60 (d, J= 7.5 Hz, 1H), 1.53-1.50 (m, 3H), 1.29 (s, 3H), 1.18 (d, J= 7.0 Hz, 1H), 0.85-0.81 (m, 6H), 0.71 (s, 2H), 0.48 (s, 2H)。
實施例194：化合物(2 S,4 R)-1-((2 S)-2-(4-(5-(1-(4-((1-(((7-(8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基)-8-氟-4-(( R)-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基)吡啶并[4,3- d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)環丙基)甲基)呱啶-1-基)乙基)呱啶-2-基)-1 H-1,2,3-三唑-1-基)-3-甲基丁醯基)-4-羥基- N-(( S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物194-1的合成
將    1-(5-氯-2-吡嗪)乙酮 (5.0 g)，雙三苯基膦二氯化鈀 (2.2 g)和碘化亞銅 (1.2 g)溶解於TEA (44 mL)和THF (150 mL)中，氮氣保護，添加三甲基矽基乙炔 (13.5 mL)，80 ℃反應過夜，LCMS監測反應完成。將反應液直接濃縮，向反應液中加入EA (10 mL)，飽和食鹽水洗一次，有機相無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，柱層析分離純化，得棕色固體6.4 g，即化合物194-1。ESI-MS m/z: 219 [M+H] +。
步驟2：化合物194-2的合成
將194-1 (2.0 g)，N-叔丁氧羰基呱嗪 (1.9 g)和鈦酸四異丙酯 (4.1 mL)溶解於MeOH (50 mL) 和THF (50 mL)中，氮氣保護，80 ℃反應2 h，添加氰基硼氫化鈉 (1.7 g)，80 ℃反應1 h，LCMS監測反應完成。將反應液直接濃縮，向反應液中加入DCM (100 mL)，飽和食鹽水洗一次，有機相無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，柱層析分離純化，得棕色固體2.1 g，即化合物194-2。ESI-MS m/z: 333 [M+H] +。
步驟3：化合物194-3的合成
將化合物194-2 (300.0 mg)，M29 (2 S,4 R)-1-(( S)-2-疊氮基-3,3-二甲基丁醯基)-4-羥基- N-(( S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲醯胺 (235.0 mg)，碳酸鉀 (426.8 mg), 硫酸銅 (73.9 mg)和抗壞血酸鈉 (265.1 mg)溶解於混合溶劑THF (5 mL)/ iPrOH (5 mL)/MeOH (10 mL)/ H 2O (10 mL)中，氮氣保護，室溫反應3小時， LCMS監測反應完成。向反應液中加入DCM (10 mL)，飽和食鹽水洗一次，有機相無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，柱層析分離純化，得淡黃色固體201.0 mg，即化合物194-3。ESI-MS m/z: 773 [M+H] +。
步驟4：化合物194-4的合成
將化合物194-3 (100.0 mg) 加入DCM (10 mL)和TFA (3 mL)中，室溫反應20分鐘，LCMS監測反應完成。將反應液直接濃縮，加入1 M NaOH溶液至pH = 10，加入DCM (10 mL)和MeOH (1 mL)萃取，飽和食鹽水洗一次，有機相無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，得白色粉末70.1 mg，即化合物194-4。ESI-MS m/z: 673 [M+H] +。
步驟5：化合物194的合成
將化合物194-4 (70.1 mg)和M43 ( R)-1-(((7-(8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基)-8-氟-4-(3-羥基-3-甲基呱啶-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)環丙烷-1-甲醯胺 (68.5 mg)溶解於MeOH (5 mL)中，添加1M的氯化鋅四氫呋喃溶液 (0.16 mL)，40 ℃反應1.5小時。向反應液中加入氰基硼氫化鈉 (19.6 mg)，60 ℃繼續反應過夜，LCMS監測反應完成。向反應液中加入飽和氯化銨溶液 (5 mL)，有機相濃縮，加入DCM (10 mL)，飽和食鹽水洗一次，有機相無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，製備液相分離，得白色固體22.7 mg，即化合物194。ESI-MS m/z: 603.8 1/2[M+2H] +。
1H NMR (500 MHz, Methanol-d 4) δ 9.20-9.17 (m, 2H), 8.87 (s, 1H), 8.72-8.70 (m, 1H), 8.65 (t, J= 1.5 Hz, 1H), 7.68-7.65 (m, 1H), 7.45-7.32 (m, 4H), 7.30-7.29 (m, 1H), 7.26-7.21 (m, 1H), 7.08-7.06 (m, 1H), 5.45-5.42 (m, 1H), 5.06-5.01 (m, 1H), 4.58-4.52 (m, 2H), 4.47-4.34 (m, 4H), 4.23-4.14 (m, 2H), 3.93-3.86 (m, 2H), 3.78-3.75 (m, 1H), 3.62-3.55 (m, 1H), 3.45-3.40 (m, 1H), 2.66-2.56 (m, 4H), 2.42-2.33 (m, 2H), 2.20-2.15 (m, 3H), 2.07-1.93 (m, 2H), 1.89-1.59 (m, 8H), 1.52-1.50 (m, 3H), 1.46 (d, J= 7.0 Hz, 3H), 1.33-1.32 (m, 5H), 1.23 (d, J= 1.5 Hz, 2H), 1.17-1.16 (m, 3H), 0.91-0.77 (m, 13H), 0.69 (s, 2H), 0.48 (s, 2H)。
實施例195：化合物（2S，4R）-1-（（S）-2-（4-（5-（1'-）（1-（7-（8-乙基-7-氟）-3-羥基萘-1-基）-8-氟-4-（（R）-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基）吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基）氧）甲基）環丙基）甲基）-[1,4'-二呱啶]-4-基）吡嗪-2-基）-1H-1,2,3-三唑-1-基）-3-甲基丁醯基）-4-羥基-N-（（S）-1-（4-（4-甲基噻唑-5-基）苯基）乙基）吡咯烷-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物195 -1的合成
將5-溴吡嗪-2-羧酸甲酯(5.0 g)，N-叔丁氧羰基-1,2,5,6-四氫吡啶-4-硼酸頻哪醇酯(8.6 g)，三苯基膦（1.2 g）,醋酸鈀 (1.0 g)和碳酸鈉 (4.9 g)溶解於DME (100 mL)和水 (20 mL)的混合溶劑中，氮氣保護，80 ℃反應3 h，LCMS監測反應完成。將反應液直接濃縮，向反應液中加入DCM (30 mL)，飽和食鹽水洗一次，有機相無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，柱層析分離純化得化合物195 -1（3.4 g）。ESI-MS m/z: 320.3 [M+H] +。
步驟2：化合物195 -2的合成
將化合物195 -1 (3.4 g)和鈀/碳 (680.0 mg)溶解於MeOH (30 mL)中，氫氣氛圍下室溫反應12 h，LCMS監測反應完成。將反應液直接抽濾，濃縮，柱層析分離純化得化合物195 -2(1.6 g)。ESI-MS m/z: 322.2 [M+H] +。
步驟3：化合物195 -3的合成
將化合物195 -2（1.6 g）溶於二氯甲烷 ( 10mL )中，加三氟乙酸 ( 10mL )，25℃反應1小時。反應完畢後反應完畢後，倒出溶劑，用二氯甲烷洗滌2次倒出，加水溶解，用碳酸氫鈉溶液中和，加入二氯甲烷/異丙醇（10:1）萃取，乾燥，濃縮，得到化合物195 -3（0.9 g）。ESI-MS m/z:222.2 [M+H] +。
步驟4：化合物195 -4的合成
將化合物195 -3（0.9 g）， N-叔丁氧羰基-4-呱啶酮 （0.7 g），鈦酸四異丙酯（1.9 mL），溶於甲醇（10 mL）中，60℃反應1小時後分批次加入氰基硼氫化鈉（1 g），反應完畢後，加入乙酸乙酯和水，萃取三次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，得到粗品經柱層析純化得到將化合物195 -4（670 mg）。ESI-MS m/z:433.2[M+H] +。
步驟5：化合物195 -5的合成
將化合物195 -4(630.0 mg)溶解於THF (10 mL)中，氮氣保護，冰水浴下加入四氫鋁鋰 (120.0 mg)，保溫反應10 min，LCMS監測反應完成。向反應液中加入水/氫氧化鈉溶液/水(0.12/0.12/0.36 mL)，抽濾，加入DCM (30 mL)，飽和食鹽水洗一次，有機相無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，柱層析分離純化得到將化合物195 -5(380.0 mg) 。 ESI-MS m/z: 377.3 [M+H] +。
步驟6：化合物195 -6的合成
將化合物195 -5(355 mg)和DMP (355 mg)溶解於DCM (10 mL)中，室溫反應1 h，LCMS監測反應完成。向反應液中加入飽和碳酸氫鈉溶液 (10 mL)，抽濾，加入DCM (10 mL)，飽和食鹽水洗一次，有機相無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，柱層析分離純化化合物195-6（121 mg）。ESI-MS m/z: 375.1 [M+H] +。
步驟7：化合物195 -7的合成
將化合物195 -6(121.0 mg)，(1-重氮基-2-氧代丙基)膦酸二甲酯 (93 mg)和碳酸鉀 (134 mg)溶解於MeOH (5 mL)中，室溫反應1 h，LCMS監測反應完成。將反應液直接濃縮，向反應液中加入DCM (10 mL)，飽和食鹽水洗一次，有機相無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，柱層析分離純化化合物195 -7（63 mg）。ESI-MS m/z: 371.1 [M+H] +。
步驟8：化合物195 -8的合成
將化合物195 -7 (46 mg)，M29(2 S,4 R)-1-(( S)-2-疊氮基-3,3-二甲基丁醯基)-4-羥基- N-(( S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲醯胺 (57 mg)，硫酸銅 (18 mg)和抗壞血酸鈉 (64 mg)溶解於混合溶劑THF (1mL)/ tBuOH (1 mL)/ H 2O (1 mL)中，氮氣保護，室溫反應1 h，LCMS監測反應完成。向反應液中加入DCM (10 mL)，飽和食鹽水洗一次，有機相無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，柱層析分離純化，化合物195-8（53mg）。ESI-MS m/z: 827.2[M+H] +。
步驟9：化合物195 -9的合成
將化合物195 -8 (53 mg) 加入DCM (3 mL)和TFA (1 mL)中，室溫反應20分鐘，LCMS監測反應完成。將反應液直接濃縮，加入1 M NaOH溶液至pH = 10，加入DCM (10 mL)和MeOH (1 mL)萃取，飽和食鹽水洗一次，有機相無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，化合物195 -9（35 mg）。ESI-MS m/z:727.1 [M+H] +。
步驟10：化合物195的合成
將化合物195 -9 (35.0 mg)和M43( R)-1-(((7-(8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基)-8-氟-4-(3-羥基-3-甲基呱啶-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)環丙烷-1-甲醯胺 (26 mg)溶解於MeOH (5 mL)中，添加1M的氯化鋅四氫呋喃溶液 (0.13 mL)，40 ℃反應1.5小時。向反應液中加入氰基硼氫化鈉 (15.8 mg)，60 ℃繼續反應8小時，LCMS監測反應完成。向反應液中加入飽和氯化銨溶液 (5 mL)，有機相濃縮，加入DCM (10 mL)，飽和食鹽水洗一次，有機相無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，製備液相分離，得白色固體4.1 mg，即化合物195。ESI-MS m/z:630.6 1/2[M+2H] +。
實施例196：化合物（2S，4R）-1-（（S）-2-（4-（5-（4-（1-（（（7-（8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基）-8-氟-4-（（（R）-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基）吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基）氧基）甲基）環丙基）甲基）呱啶-4-基）呱嗪-1-基）吡嗪-2-基）-1H-1,2,3-三唑-1-基）-3-甲基丁醯基）-4-羥基-N-（（（S，-1-（4-（4-甲基噻唑-5-基）苯基）乙基）吡咯烷-2-羧醯胺的合成
步驟1：化合物196-1的合成
向化合物134-5(75.00mg, 0.12mmol)，4-氧代呱啶-1-甲酸叔丁酯(34.77mg, 0.17mmol)的 甲醇 (2.50mL)中，加入1M氯化鋅四氫呋喃溶液(0.23mL)，40℃下反應0.5h。然後加入氰基硼氫化鈉(29.23mg,0.47mmol)，40℃下反應6h。反應液加入20mL水中，氯仿/異丙醇萃取，有機相乾燥，過濾，減壓濃縮，殘留物柱層析純化（MeOH：DCM=1：11）得到70.00mg棕色固體。即化合物196-1。ESI-MS m/z: 828.30 [M+H] +。
步驟2：化合物196-2的合成
向化合物196-1(75.00mg, 0.09mmol)的二氯甲烷(1.50mL)中，加入三氟乙酸(0.34mL, 4.53mmol)，20℃下反應0.5h。反應液加入20mL飽和碳酸氫鈉中，氯仿/異丙醇萃取，有機相乾燥，過濾，減壓濃縮。得到 63.00mg ,無色油狀物。即化合物196-2。ESI-MS m/z: 728.20 [M+H] +。
步驟3：化合物196的合成
向化合物196-2(65.00mg, 0.09mmol)，M43 (53.87mg, 0.10mmol) 的甲醇 (2.50mL)中，加入1M氯化鋅四氫呋喃溶液(0.18mL)，40℃下反應1h, 加入 氰基硼氫化鈉(22.45mg,0.36mmol),40℃下反應16h。反應液加入20mL水中，氯仿/異丙醇萃取，合併有機相，乾燥，過濾，減壓濃縮，Pre-HPLC純化得到 34.00mg 白色固體。即化合物196。ESI-MS m/z: 630.7 1/2[M+2H] +。
1H NMR (500 MHz, Methanol-d 4) δ 9.09 (s, 1H), 8.77 (s, 1H), 8.58 (s, 1H), 8.35 (s, 1H), 8.11 (s, 1H), 7.51-7.49 (m, 1H), 7.33-7.28 (m, 4H), 7.12 (s, 1H), 7.10-7.08 (m, 1H), 6.94 (s, 1H), 5.28-5.26 (d, J= 10.0 Hz, 1H), 4.95-4.94 (m, 1H), 4.44-4.30 (m, 5H), 4.16-4.11 (m, 1H), 3.82-3.74 (m, 2H), 3.56 (s, 2H), 3.47-3.35 (m, 2H), 3.06-3.02 (m, 2H), 2.57 (s, 6H), 2.17-2.08 (m, 6H), 1.83-1.67 (m, 8H),1.42 (s, 6H),1.23-1.17 (m, 5H),1.05 (s, 3H), 0.73-0.72 (m, 3H).
實施例197：化合物（2S，4R）-1-（(S)-2-（4-（5-（4-（4-（1-（（7-（8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基）-8-氟-4-（(R)-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基）吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基）氧基）甲基）環丙基）甲基）呱嗪-1-基）呱啶-1-基）吡嗪-2-基）-1H-1，2，3-三唑-1-基）-3-甲基丁醯基）-4-羥基-N-（(S)-1-（4-（（4-）甲基噻唑-5-基）苯基）乙基）吡咯烷-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物197-1的合成
向 2-氯-5-乙基吡嗪(200.00mg, 1.44mmol)，4-（4-呱啶基）呱嗪-1-羧酸叔丁酯 (466.63mg, 1.73mmol)的 N,N-二甲基乙醯胺(5.00mL)中，加入 三乙胺(1.00mL , 7.22mmol)，100℃下反應2h。反應液冷卻至室溫，加入30mL水中，EA萃取，有機相乾燥，過濾，減壓濃縮，柱層析純化得到 100.00mg棕色固體。即化合物197-1。ESI-MS m/z: 372.3 [M+H] +。
步驟2：化合物197-2的合成
向化合物197-1(100.00mg, 0.27mmol), M29(135.19mg, 0.30mmol)的叔丁醇 (3.00mL) 和四氫呋喃(3.00mL) 中，加入硫酸銅(42.97mg, 0.27mmol)，含有抗壞血酸鈉 ( 159.99mg , 0.81mmol )的 水(1.50mL)，20℃下反應1h。反應液加入30mL水中，DCM萃取，合併有機相乾燥，過濾，減壓濃縮，柱層析純化得到110.00mg棕色固體。即化合物197-2。ESI-MS m/z: 828.3 [M+H] +。
步驟3：化合物197-3的合成
向化合物197-2(105.00mg, 0.13mmol)的二氯甲烷(2.50mL)中，加入三氟乙酸 (0.47mL , 6.34mmol)，20℃下反應0.5h。反應液加入30mL飽和碳酸氫鈉中，DCM萃取，合併有機相乾燥，過濾，減壓濃縮。得到 80.00mg棕色固體。即化合物197-3。直接投下步。ESI-MS m/z: 728.1 [M+H] +。
步驟4：化合物197的合成
向 化合物197-3 (90.00mg, 0.12mmol)，M43(74.61mg, 0.14mmol)的甲醇(3.00mL)中，加入1M氯化鋅四氫呋喃溶液(0.25mL)，40℃下反應1h，加入 氰基硼氫化鈉(31.07mg, 0.49mmol)，40℃下反應16h。反應液加入20mL水中，氯仿/異丙醇萃取，合併有機相，乾燥，過濾，減壓濃縮，Pre-HPLC純化得到 60.00mg ，白色固體。即化合物197。ESI-MS m/z: 630.7 1/2[M+2H] +。
1H NMR (500 MHz, Methanol-d 4) δ 9.21 (s, 1H), 8.87 (s, 1H), 8.66 (s, 1H), 8.44 (s, 1H), 8.22 (s, 1H), 7.67-7.64 (m, 1H), 7.45-7.38 (m, 4H), 7.29 (s, 1H), 7.25-7.21 (m, 1H), 7.06 (s, 1H), 5.38-5.36 (d, J= 10.0 Hz, 1H), 4.95-4.94 (m, 1H), 4.44-4.30 (m, 5H), 4.16-4.11 (m, 1H), 3.82-3.74 (m, 2H), 3.56 (s, 2H), 3.47-3.35 (m, 2H), 3.06-3.02 (m, 2H), 2.57 (s, 6H), 2.17-2.08 (m, 6H), 1.83-1.67 (m, 8H),1.42 (s, 6H),1.23-1.17 (m, 5H),1.05 (s, 3H), 0.73-0.72 (m, 3H).
實施例198：化合物（2S，4R）-1-（（S）-2-（4-（5-（（（1-（（1-（（7-（8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基）-8-氟-4-（（R）-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基）吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基）氧基）甲基）環丙基）甲基）呱啶-4-基）氧基）甲基）吡嗪-2-基）-1H-1,2,3-三唑-1-基）-3-甲基丁醯基）-4-羥基-N-（（S）-1-（4-（4-甲基噻唑-5-基）苯基）乙基）吡咯烷-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物198-1的合成
25 mL單口瓶中加入化合物（5-氯吡嗪-2-基）甲醇(2.0 g)，溶於DMF（10 mL），加入三甲基乙炔基矽（2.1 g），CuI（383.8 mg），PdCl 2(PPh 3) 2（708.1 mg），DIPEA（4.5 mL），氮氣保護後，加熱至50 oC反應3 h。向反應液中加入飽和食鹽水（5 mL）, EA萃取，取有機相無水硫酸鈉乾燥，柱層析分離產物(PE:EA=3:1)， 得1.49 g淡黃色固體，即化合物198-1。
步驟2：化合物198-2的合成
25 mL單口瓶中加入化合物198-1（1.0 g），溶於DCM（10 mL）,加入PBr 3（0.68 mL），室溫反應2 h。反應液直接蒸乾。柱層析分離純化(PE : EA= 4 : 1)，得565.4 mg淡黃色固體，即化合物198-2。
步驟3：化合物198-3的合成
25 mL單口瓶中加入化合物198-2（565.4 mg），溶於THF（10 mL）,加入NaH（252.2 mg），N-叔丁氧羰基-4-羥基呱啶（464.7 mg），加熱至50 oC反應5 h。反應液直接蒸乾。柱層析分離純化(PE : EA= 5 : 1)，得351.8 mg淡黃色固體，即化合物198-3。
步驟4：化合物198-4的合成
25 mL單口瓶中加入化合物M29（100.0 mg），溶於THF（2 mL）,加入化合物198-3（76.7 mg），硫酸銅（35.2 mg），水（2 mL），叔丁醇（2 mL），抗壞血酸鈉（188.0 mg），室溫反應1 h。反應液直接蒸乾。柱層析分離純化(DCM : MeOH = 12 : 1)，得105.6 mg淡黃色固體，即化合物198-4。
步驟5：化合物198-5的合成
25 mL單口瓶中加入化合物198-4 (105.6 mg)，溶於4M的氯化氫二氧六環溶液 (5 mL)，加入甲醇(1 mL),室溫反應1 h。反應液直接蒸乾，向反應液中加入5 mL飽和碳酸氫鈉溶液，調節溶液pH至7-8後，用二氯甲烷/異丙醇萃取，取有機相無水硫酸鈉乾燥，得60.1 mg黃色固體，即化合物198-5。
步驟6：化合物198的合成
25 mL單口瓶中加入化合物198-5 (60.1 mg)，溶於MeOH（5 mL）,加入M43（54.6 mg）和1 M 氯化鋅四氫呋喃溶液（0.1 mL）, 加熱至40 oC，反應2 h後，加入NaBH 3CN（25.2 mg），反應過夜。反應液直接蒸乾。Pre-HPLC分離產物(CH 3CN/H 2O = 55%:45%), 得白色固體11.4 mg，即化合物198。（純度96.63%）。LCMS：1/2[M+2H] += 604.09
1H NMR (500 MHz, Methanol-d 4) δ 9.20 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.86 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 8.72 (s, 1H), 8.54 (d, J = 12.7 Hz, 1H), 8.17 (s, 1H), 7.71–7.62 (m, 1H), 7.48–7.35 (m, 4H), 7.29 (s, 1H), 7.23 (t, J = 9.2 Hz, 1H), 7.07 (s, 1H), 5.39 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 5.12–5.00 (m, 3H), 4.58–4.41 (m, 5H), 4.24 (t, J = 13.5 Hz, 1H), 4.11 – 3.96 (m, 2H), 3.88 (dd, J = 27.5, 9.3 Hz, 2H), 3.61–3.54 (m, 2H), 2.90 (s, 2H), 2.61 (d, J = 6.5 Hz, 1H), 2.53 – 2.42 (m, 6H), 2.35 (s, 2H), 2.24–2.11 (m, 3H), 2.08–1.94 (m, 3H), 1.89–1.71 (m, 5H), 1.52 (d, J = 6.9 Hz, 3H), 1.36–1.24 (m, 4H), 1.16 (d, J = 6.5 Hz, 3H), 0.88–0.77 (m, 5H), 0.72 (s, 2H), 0.51 (s, 2H).
實施例199： 化合物（2S，4R）-1-（（S）-2-（4-（5-（（（1-（（1-（（7-（8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基）-8-氟-4-（（R）-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基）吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基）氧基）甲基）環丙基）甲基）呱啶-4-基）甲基）胺基）吡嗪-2-基）-1H-1,2,3-三唑-1-基）-3-甲基丁醯基）-4-羥基-N-（（S）-1-（4-（4-甲基噻唑-5-基）苯基）乙基）吡咯烷-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物199-1的合成
50 mL單口瓶中加入化合物2,5-二溴吡嗪（1.0 g），溶於DMF（20 mL），加入1-叔丁氧羰基-4-胺甲基呱啶（0.99 g）和Cs 2CO 3（3.4 g），加熱至90 oC，反應5 h。向反應液中加入飽和食鹽水（5 mL）, EA萃取，取有機相無水硫酸鈉乾燥，柱層析分離產物(PE:EA=4:1)， 得1.2 g淡黃色固體，即化合物199-1。
步驟2：化合物199-2的合成
25 mL單口瓶中加入化合物199-1 (1.2 g)，溶於DMF（10 mL），加入三甲基乙炔基矽（633.4 mg），CuI（108.3 mg），PdCl 2(PPh 3) 2（197.6 mg），DIPEA（2.4 mL），氮氣保護後，加熱至50 oC反應3 h。向反應液中加入飽和食鹽水（5 mL）, EA萃取，取有機相無水硫酸鈉乾燥，柱層析分離產物(PE:EA=4:1)， 得891.6 mg淡黃色固體，即化合物199-2。
步驟3：化合物199-3的合成
25 mL單口瓶中加入化合物199-2 (891.6 mg)，溶於MeOH（10 mL），加入K 2CO 3（517.2 mg）, 室溫反應2 h。反應液直接蒸乾。柱層析分離純化(PE : EA= 4 : 1)，得563.4 mg淡黃色固體，即化合物199-3。
步驟4：化合物199-4的合成
25 mL單口瓶中加入化合物M29（100.0 mg），溶於THF（2 mL），加入化合物199-3（76.3 mg），硫酸銅（35.2 mg），水（2 mL），叔丁醇（2 mL），抗壞血酸鈉（188.0 mg），室溫反應1 h。反應液直接蒸乾, 柱層析分離純化(DCM : MeOH = 12 : 1)，得103.7 mg淡黃色固體，即化合物199-4。
步驟5：化合物199-5的合成
25 mL單口瓶中加入化合物199-4 (103.7 mg)，溶於4M的氯化氫二氧六環溶液 (5 mL)，加入甲醇(1 mL) ，室溫反應1 h。反應液直接蒸乾，向反應液中加入5 mL飽和碳酸氫鈉溶液，調節溶液pH至7-8後，用二氯甲烷/異丙醇萃取，取有機相無水硫酸鈉乾燥，得64.3 mg黃色固體，即化合物199-5。
步驟6：化合物199的合成
25 mL單口瓶中加入化合物199-5 (64.3 mg)，溶於MeOH（5 mL），加入M43（50.7 mg）和1 M 氯化鋅四氫呋喃溶液（0.1 mL）, 加熱至40 oC，反應2 h後，加入NaBH 3CN（25.1 mg），反應過夜。反應液直接蒸乾。Pre-HPLC分離產物(CH 3CN/H 2O = 55%:45%), 得白色固體22.9 mg，即化合物199。（純度96.63%）。LCMS：1/2[M+2H] +=603.70
1H NMR (500 MHz, Methanol-d 4) δ 9.20 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.86 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 8.72 (s, 1H), 8.54 (d, J = 12.7 Hz, 1H), 8.17 (s, 1H), 7.71–7.62 (m, 1H), 7.48–7.35 (m, 4H), 7.29 (s, 1H), 7.23 (t, J = 9.2 Hz, 1H), 7.07 (s, 1H), 5.39 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 5.12–5.00 (m, 3H), 4.58–4.41 (m, 5H), 4.24 (t, J = 13.5 Hz, 1H), 3.88 (dd, J = 27.5, 9.3 Hz, 2H), 3.61–3.54 (m, 2H), 2.90 (s, 2H), 2.84 – 2.73 (m, 2H), 2.61 (d, J = 6.5 Hz, 1H), 2.53 – 2.42 (m, 6H), 2.35 (s, 2H), 2.24–2.11 (m, 3H), 2.08–1.94 (m, 3H), 1.89–1.71 (m, 5H), 1.52 (d, J = 6.9 Hz, 3H), 1.36–1.24 (m, 4H), 1.16 (d, J = 6.5 Hz, 3H), 0.88–0.77 (m, 5H), 0.72 (s, 2H), 0.51 (s, 2H).
實施例200：化合物(2S，4R)-1-((S)-2-(4-(5-(3-)(1-(((7-(8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基)-8-氟-4- ((R)-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)-3-甲基丁醯基)-4-羥基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物200-1的合成
將4-羥基吡啶（1g）溶於10mLTHF中，依次加入3-羥基氮雜環丁烷-1-甲酸叔丁酯 (2.26g) ,三苯基膦 (3.5g) ，最後滴加入偶氮二甲酸二異丙酯 ( 2.6g ) ，55℃攪拌15h。LC-MS監測反應完成。反應液濃縮後經柱層析分離純化得淡黃色液體2g，即化合物200-1。ESI-MS m/z: 251 [M+H] +。
步驟2：化合物200-2的合成
將化合物200-1（1g）溶於乙醇 ( 10mL ) 中，然後依次加入對甲苯磺酸 ( 0.61g) ，二氧化鉑 ( 0.27g ) ，抽換H 2三次，40℃下攪拌16h。LCMS監測反應完成。加入冰的氫氧化鈉水溶液(3M)，矽藻土過濾，旋乾乙醇，剩餘水相用DCM:NH 3-MeOH=4：1萃取，合併有機相用硫酸鈉乾燥，濃縮後經柱層析分離純化得淡黃色固體0.35g，即化合物200-2。ESI-MS m/z: 257 [M+H] +。
步驟3：化合物200-3的合成
將化合物200-2(84mg)，M43 1-[[9-（8-乙基-7-氟-3-羥基-萘-1-基）-10-氟-5-（3-羥基-3-甲基-1-呱啶基）-2,4,8-三氮雜雙環[4.4.0]十碳-2,4,6,8,10-戊烯-3-基]氧甲基]環丙烷-1-甲醯胺（180.00mg）溶於甲醇（2mL）中，加入1M氯化鋅正己烷溶液ZnCl 2(0.49mL)，加熱至40℃反應1 h，然後加入氰基硼氫化鈉（62mg），40℃反應12h， LCMS監測反應完成。向反應液緩慢加入5mL 水淬滅，DCM：異丙醇=3：1萃取3次，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓蒸除溶劑後經柱層析分離純化得180mg白色固體，即化合物200-3。ESI-MS m/z: 789 [M+H] +。
步驟4：化合物200-4的合成
將化合物200-3（180mg）溶於3 mL DCM中，然後加入1 mL TFA，室溫反應30 min。LCMS監測反應完成。濃縮反應液，加水溶解，用碳酸鈉水溶液調鹼性，DCM:異丙醇萃取，合併有機相，硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮後經柱層析分離純化得淡黃色固體170mg，即化合物200-4。ESI-MS m/z: 689 [M+H] +。
步驟5：化合物200-5的合成
將化合物200-4（150mg），2-氯-5-乙炔基吡嗪(30mg)溶於3 mL 二氧六環中，然後加入TEA（0.09mL），80℃反應3h。LCMS監測反應完成。向反應液中加入10.0 mL水，用EA萃取三次，每次10mL，合併有機相，硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮有機相，經柱層析分離純化得淡黃色固體84mg，即化合物200-5。ESI-MS m/z: 791 [M+H] +。
步驟6：化合物200的合成
將化合物200-5（54mg）和M29（2S，4R）-1-（（S）-2-疊氮基-3-甲基丁醯基）-4-羥基-N-（（S）-1-（4-（4-甲基噻唑-5-基）苯基）乙基）吡咯烷-2-甲醯胺（37mg）溶於1.5 mL THF，1.5 mL H 2O，1.5 mL 叔丁醇中，然後依次加入抗壞血酸鈉（35mg）和無水硫酸銅（9.8 mg），室溫反應0.5小時，LCMS監測反應完成。向反應液中加入20.0 mL水，用DCM:異丙醇=4:1萃取三次，每次20mL，合併有機相，硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮有機相，經柱層析分離純化得白色固體14mg，即化合物200。ESI-MS m/z: 624 1/2[M+2H] +。
實施例201：化合物（2S,4R）-1-（（S）-2-（4-（5-（1-（1-（（7-（8-乙基-7-氟萘-1-基）-8-氟-4-（（R）-((R)-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)環丙基)甲基)呱啶-4-基)氧基)吡嗪-2-基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-3-甲基丁醯基)-4-羥基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物201-1的合成
將（R） -1-（2,7-二氯-8-氟吡啶并[4,3-d]嘧啶-4-基）-3-甲基呱啶-3-醇（0.5 g）, 1,1-環丙烷二甲醇（0.31 g），碳酸銫（0.98 g），DABCO（0.03g）溶於5 mL DMF中，抽換N 2三次，25℃下反應12h，LCMS監測反應完成。向反應液中加入20.0 mL水，用EA萃取三次，每次20mL，合併有機相，硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮有機相，經柱層析分離純化得淡黃色固體0.39 g，即化合物201-1。ESI-MS m/z: 397[M+H] +。
步驟2：化合物201-2的合成
將化合物201-1（ 0.39g），M47 2-(8-乙基-7-氟萘-1-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼烷（0.32g）,磷酸鉀(0.62g)，CataCXium A Pd G3(71 mg)溶於4mL二氧六環和0.4mL 水中，90℃反應3 h，LCMS監測反應完成。向反應液中加入20.0 mL水，用EA萃取三次，每次30mL，合併有機相，飽和食鹽水洗滌，硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮有機相，經柱層析分離純化得淡黃色固體0.39g，即化合物201-2。ESI-MS m/z: 535[M+H] +。
步驟3：化合物201-3的合成
將化合物201-2(0.39g) 溶於5 mL DCM中，然後加入戴斯-馬丁氧化劑（037g），室溫反應1 h，LC-MS監測反應完成。矽藻土過濾反應液，濾餅用10 mL DCM洗脫3次，收集濾液，減壓蒸出溶劑後經柱層析分離純化得到0.27g白色固體，即化合物201-3。ESI-MS m/z: 533[M+H] +。
步驟4：化合物201的合成
將化合物201-3(57mg)，化合物144-5 (2S,4R)-4-羥基-1-((S)-3-甲基-2-(4-(5-(呱啶-4-基氧基)吡嗪-2-基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)丁醯基)-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲醯胺（70mg）溶於甲醇（2mL）中，加入1M氯化鋅正己烷溶液(0.16mL)，加熱至40℃反應1 h，然後加入氰基硼氫化鈉（20mg），40℃反應12h, LCMS監測反應完成。向反應液緩慢加入5mL 水淬滅，DCM：異丙醇=3：1萃取3次，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓蒸除溶劑後經柱層析分離純化得41.3mg白色固體，即化合物201。ESI-MS m/z: 589 1/2 [M+2H] +。
實施例202：化合物（2S，4R）-1-（（2S）-2-（4-（3-（（4-（（1-（（7-（8-乙基-7-氟-3-羥基萘-1-基）-8-氟-4-（3-羥基-3-甲基呱啶-1-基）吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基）氧基）甲基）環丙基）甲基）呱嗪-1-基）甲基）-1-甲基-1H-吡唑-5-基）-1H-1,2,3-三唑-1-基）-3-甲基丁醯基）-4-羥基-N-（（S）-1-（4-（4-甲基噻唑-5-基）苯基）乙基）吡咯烷-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物202-1的合成
將化合物1-甲基-1H-吡唑-3,5-二羧酸二甲酯（5.0 g）溶於MeOH（100 mL）中，冰浴降溫至0℃以下，分批加入硼氫化鈉（1.9 g），0℃以下攪拌反應2.0 h。反應完畢後，飽和氯化銨溶液淬滅，乙酸乙酯萃取3次，合併有機相，飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，柱層析得到化合物202-1（300 mg）。ESI-MS m/z: 171.4 [M+H] +。
步驟2：化合物202-2的合成
將化合物202-1（300 mg）加入到50 mL三口瓶中，加入二氯甲烷（10 mL）溶解，冰浴降溫0℃左右，緩慢滴加氯化亞碸（0.5 mL），室溫攪拌2.0 h。反應完全後，反應液濃縮，加水稀釋，乙酸乙酯萃取3次，收集並合併有機相，飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，柱層析（PE:EA=5:1）得到化合物202-2（260 mg）。ESI-MS m/z: 189.1 [M+H] +。
步驟3：化合物202-3的合成
將化合物202-2（260 mg）、N-叔丁氧羰基呱嗪（290 mg）和DIPEA（535 mg）依次加入到50 mL三口瓶中，加入乙腈（10 mL）溶解，60℃升溫攪拌4.0 h。反應完全後，反應液濃縮，加水稀釋，乙酸乙酯萃取3次，收集並合併有機相，飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，柱層析（PE:EA=2:1）得到化合物202-3（400 mg）。ESI-MS m/z: 339.1 [M+H] +。
步驟4：化合物202-4的合成
將202-3（400 mg）加入到100 mL單口瓶中，加入四氫呋喃（20 mL），降溫0℃以下，分批緩慢加入氫化鋁鋰 (134 mg)，緩慢移至室溫攪拌反應1.0 h。反應完全，降溫0℃以下，反應液中緩慢滴加0.2 mL水，緩慢滴加0.2 mL氫氧化鈉水溶液（品質分數15%），攪拌10 min，再反應液中緩慢滴加0.6 mL水，加入無水硫酸鈉攪拌1.0 h。過濾，濾液旋乾，濃縮物經柱層析（DCM:MeOH=10:1）純化得到化合物202-4（300 mg）。ESI-MS m/z: 311.3 [M+H] +。
步驟5：化合物202-5的合成
將化合物202-4（300 mg）加入到100 mL單口瓶中，加入二氯甲烷（10 mL），分批加入DMP（615 mg），室溫下攪拌1.0 h。飽和硫代硫酸鈉水溶液淬滅，過濾，DCM萃取2次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液旋乾，濃縮得到粗品化合物202-5（300 mg）。ESI-MS m/z: 309.4 [M+H] +。
步驟6：化合物202-6的合成
將化合物202-5（300 mg）和(1-重氮基-2-氧代丙基)膦酸二甲酯 ( 374 mg )依次加入到100 mL單口瓶中，加入甲醇（20 mL）溶解，緩慢加入碳酸鉀（673 mg），室溫攪拌過夜。用水稀釋反應液，EA萃取兩次，收集並合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，濃縮物經柱層析（PE:EA=3:1）分離純化得到化合物202-6（200 mg）。ESI-MS m/z:205.4 [M+H] +。
步驟7：化合物202-7的合成
將化合物202-6（200 mg），抗壞血酸鈉（260 mg），硫酸銅（105 mg）和M1 (300 mg)依次加入到50 mL單口瓶中，加入甲醇，四氫呋喃和水各3 mL，室溫下反應30 min。旋乾溶劑，EA萃取兩次，收集並合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，濃縮物經柱層析（DCM:MeOH=10:1）分離純化得到化合物202-7（230 mg）。ESI-MS m/z: 761.3 [M+H] +。
步驟8：化合物202-8的合成
將化合物202-7（230 mg）加入到25 mL單口瓶中，加入10 mL二氯甲烷溶解，加入TFA（5 mL），室溫下攪拌1.0 h。反應完全後，反應液旋乾，飽和碳酸氫鈉溶液調pH =10.0，加入二氯甲烷/異丙醇（10:1）萃取三次，合併有機相，飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮得到粗品化合物202-8（180 mg）。ESI-MS m/z: 661.4 [M+H] +。
步驟9：化合物202的合成
將化合物202-8（90 mg）、M43（74 mg）、1M的氯化鋅四氫呋喃溶液 ( 0.6 mL)溶於甲醇（10 mL）中，40℃反應1小時。再加入氰基硼氫化鈉 (26 mg)，70℃攪拌反應5小時。反應完畢後，冷卻至室溫，加入氯化銨溶液淬滅，二氯甲烷和甲醇（10：1）萃取，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，經柱層析（DCM:MeOH=85:15）純化，粗品經Pre-HPLC（C18色譜柱，A：0.05%二乙胺水溶液，B：乙腈，濃度梯度：30%B至50%B，6.3-7.5 min，流速：20 mL/min，254nm）製備得到化合物202（36 mg）。ESI-MS m/z:597.72 1/2[M+2H] +。
1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6) δ 9.21 (s, 1H), 8.99 (s, 1H), 8.65 (s, 1H), 8.54 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.76 (dd, J = 8.9, 6.1 Hz, 1H), 7.48 – 7.42 (m, 2H), 7.40 – 7.29 (m, 4H), 7.04 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 6.52 (d, J = 3.9 Hz, 1H), 5.41 – 5.30 (m, 1H), 5.34 – 5.12 (m, 1H), 4.91 (t, J = 7.1 Hz, 1H), 4.77 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 4.40 (t, J = 8.1 Hz, 1H), 4.36 – 4.23 (m, 4H), 4.09 – 3.97 (m, 4H), 3.79 – 3.74 (m, 1H), 3.72 (d, J = 11.0 Hz, 1H), 3.64 – 3.58 (m, 1H), 3.52 (d, J = 13.2 Hz, 1H), 2.46 (d, J = 3.2 Hz, 4H), 2.38 – 2.25 (m, 6H), 2.19 – 2.04 (m, 3H), 1.99 (dd, J = 12.6, 6.9 Hz, 2H), 1.82 – 1.75 (m, 1H), 1.74 – 1.61 (m, 3H), 1.57 – 1.42 (m, 1H), 1.37 (d, J = 7.0 Hz, 3H), 1.24 (s, 3H), 1.17 (d, J = 12.4 Hz, 3H), 1.08 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 0.99 (t, J = 7.1 Hz, 1H), 0.85 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 0.74 (dd, J = 14.8, 7.1 Hz, 6H), 0.63 (s, 2H), 0.40 (s, 2H).
化合物203 （2S，4R）-1-（（S）-2-（4-（6-（1-（1-（7-（8-乙基-7-氟））-3-羥基萘-1-基）-8-氟-4-（（R）-3-羥基-3-甲基呱啶-1-基）吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基）氧基）甲基）環丙基）甲基）呱啶-4-基）吡啶-3-基）-1H-1,2,3-三唑-1-基）-3-甲基丁醯基）-4-羥基-N-（（S）-1-（4-（4-甲基噻唑-5-基）苯基）乙基）吡咯烷-2-甲醯胺的合成
步驟1：化合物203-1的合成
250 mL的單口燒瓶中，依次加入4-（5-溴吡啶-2-基）呱啶-1-甲酸叔丁酯  ( 3.22 g , 9.44 mmol ) ，TEA ( 60.00 mL ) ，乙炔基三甲基矽烷 ( 1.02 g , 10.38 mmol ) ，PdCl 2(PPh 3) 2( 0.33 g , 0.47 mmol ) ，PPh 3( 0.12 g , 0.47 mmol ) ，CuI ( 0.13 g , 0.66 mmol ) ，氮氣置換，保氮氣氛圍，室溫攪拌反應過夜。LCMS監測反應完成。濃縮反應液，50 mL的乙酸乙酯溶解濃縮殘留物，然後依次50 mL飽和氯化銨水溶液，50 mL飽和食鹽水，洗滌、分液，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮得到粗品，經柱層析分離純化（PE~PE/EA=97/3），得到微黃色粘稠物，為化合物203-1（3.3 g）。ESI-MS m/z: 359.3 [M+H] +。
步驟2：化合物203-2的合成
250 mL的三口燒瓶中，依次加入K 2CO 3( 1.27 g , 9.20 mmol ) ，MeOH ( 70.00 mL ) ，水浴冷卻，加入203-1( 3.30 g , 9.20 mmol ) 的MeOH ( 30.00 mL ) ，室溫攪拌反應。LCMS監測反應完成。反應液加入到280 g的冰水混合物中，攪拌10分鐘；然後用乙酸乙酯萃取100 Ml ×3，合併有機相，飽和食鹽水洗滌、分液；無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮得到粗品，經柱層析分離純化（PE~PE/EA=95/5），得到微黃色固體，為化合物203-2（860 mg）。ESI-MS m/z: 287.2 [M+H] +。
步驟3：化合物203-3的合成
化合物203-2 ( 410 mg , 1.43 mmol )和M29 ( 653.66 mg , 0.15 mmol )，CuSO 4( 228.51 mg , 1.43 mmol ) ，抗壞血酸鈉 ( 737.45 mg , 3.72 mmol ) ，THF/四氫呋喃 ( 10.00 mL ) ，t-BuOH/叔丁醇 ( 10.00 mL ) ，H 2O ( 10.00 mL ) ，加入到100 mL單口瓶中，室溫攪拌反應1.0小時。LCMS監測反應完成。100 mL水稀釋反應液，然後用DCM/MeOH=4/1混合物萃取、分液，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮得到粗品，經柱層析分離純化（PE~PE/EA=1/1），得到淡黃色泡沫狀固體粉末，為化合物203-3（840 mg）。ESI-MS m/z: 743.6 [M+H] +。
步驟4：化合物203-4的合成
50 mL的單口燒瓶中，依次加化合物203-3( 840.00 mg , 1.13 mmol ) ，DCM ( 3.50 mL ) ，水浴冷卻，再加入TFA ( 1.50 mL ) ，室溫攪拌反應半小時。LCMS監測反應完成。濃縮反應液至幹，加入DCM/MeOH=4/1混合物溶解濃縮殘留物，用飽和碳酸氫鈉水溶液中和至鹼性，萃取、分液，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮得到粗品，得到化合物203-4（660 mg），淡黃色泡沫狀固體。ESI-MS m/z: 643.48，[M+H] +。
步驟5：化合物203-5的合成
氮氣保護下，25 mL的單口燒瓶中，依次加入M28 ( 109.99 mg , 0.19 mmol ) ，203-4 ( 108.44 mg , 0.17 mmol ) ，MeOH ( 5.00 mL ) ，ZnCl 2( 0.25 mL , 1.00 mol/L , 0.25 mmol ) ，油浴加熱保溫45℃反應1小時，加入NaBH 3CN ( 106.01 mg , 1.69 mmol ) ，繼續保溫反應。LCMS監測反應完成。二氯甲烷稀釋反應液，加入碳酸氫鈉水溶液，淬滅、萃取、分液；水相再用DCM/MeOH=4/1混合物萃取3遍，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥。過濾、濃縮，柱層析分離純化（DCM~DCM: MeOH=87：13）得化合物203-5（118 mg）。ESI-MS m/z: 610.80 1/2[M+2H] +。
步驟6：化合物203的合成
10 mL 的單口燒瓶中，依次加入化合物203-5 ( 118.00  mg , 0.10 mmol ) ，DCM ( 3.00 mL ) ，水浴冷卻，滴加入TFA ( 1.50 mL ) ，室溫攪拌反應。LCMS監測反應完成。與另一批次反應液（投料：98-5：40 mg）合併一起處理，減壓濃縮，用DCM/MeOH=4/1混合物、飽和碳酸氫鈉水溶液溶解濃縮殘留物，萃取、分液，再經水洗，硫酸鈉乾燥，濃縮得到粗品，經柱層析分離純化（DCM~DCM/MeOH=80/20），得化合物203（64.6 mg）。ESI-MS m/z: 588.73 1/2[M+2H] +。
1H NMR (500 MHz, Methanol-d4) δ 9.22 (d, J = 4.9 Hz, 1H), 8.94 (s, 1H), 8.86 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 8.60 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 8.14 (s, 1H), 7.66 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.41 (dq, J = 24.2, 9.5, 8.8 Hz, 6H), 7.30 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 7.22 (td, J = 9.5, 3.3 Hz, 1H), 7.06 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 5.49 (s, 1H), 5.41 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 5.05 (q, J = 7.2 Hz, 1H), 4.50 (td, J = 22.6, 21.0, 10.0 Hz, 6H), 4.28 (t, J = 12.2 Hz, 1H), 4.00 – 3.84 (m, 2H), 3.69 – 3.50 (m, 3H), 3.42 (q, J = 11.7 Hz, 2H), 2.93 (s, 1H), 2.70 – 2.60 (m, 2H), 2.46 (d, J = 14.3 Hz, 4H), 2.24 – 2.17 (m, 2H), 2.11 – 2.04 (m, 3H), 1.98 (ddd, J = 12.9, 8.7, 4.4 Hz, 2H), 1.84 (d, J = 13.1 Hz, 1H), 1.76 (d, J = 13.6 Hz, 1H), 1.73 (s, 2H), 1.52 (d, J = 7.0 Hz, 3H), 1.27 (dd, J = 16.1, 8.2 Hz, 6H), 1.18 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 0.83 (dp, J = 22.8, 8.1, 7.4 Hz, 9H), 0.72 (s, 1H).
生物學實驗
實施例1：細胞增殖實驗
表1
細胞系 KRAS 突變類型 培養基 鋪板密度
AGS G12D 1640+10%FBS 1000 cells/well
PK-59 G12D 1640+10%FBS 3000 cells/well
H358 G12C 1640+10%FBS 1000 cells/well
SW620 G12V 1640+10%FBS 1000cells/well
HCT116 G13D 1640+10%FBS 2000 cells/well
H1975 WT 1640+10%FBS 1000 cells/well
將不同突變的細胞按照表1鋪板密度鋪於低吸附透明96孔板中，置於細胞培養箱過夜培養。待細胞貼壁後，將待測化合物按照終濃度20000、5000、1250、312.5、78.13、19.53、4.88、1.22、0.31、0 nM（DMSO終濃度均為0.25 %）加入96孔板中，37℃培養96 h後向各孔加入50 μL Cell-titer Glo工作液，震盪混勻後室溫孵育10 min，轉移混合液到 96 孔白底不透明板中，在多功能酶標儀讀取Luminescence發光值，將發光值資料計算轉換為抑制百分數。並根據以下公式，計算細胞增殖抑制百分數：
抑制百分數=(1-(所測值-Blank)/(最大值-Blank))*100%
（“最大值”來自0.25 % DMSO對照孔，“Blank”來自空白培養基對照孔，“所測值”來自化合物處理孔）。
利用GraphPad Prism軟體進行曲線擬合併獲取IC 50(nM)值，結果見表2。
表2
化合物名稱 IC 50(nM)
AGS PK59 HCT116 SW620 H358 H1975
化合物1 109 1082
化合物2 44 501 143
化合物67 40 1721
化合物69 14 34 42
化合物71 18 85 39
化合物73 22 81
化合物75 11 122 40
化合物77 356
化合物79 44
化合物80 63
化合物88 33 199 90
化合物89 193 1420 635
化合物90 83
化合物93 6.8 86 20
化合物100 11 38
化合物104 39
化合物105 12
化合物110 52
化合物111 20
化合物112 57
化合物113 8.3 49
化合物114 13
化合物115 29
化合物116 27
化合物117 13 18.5 47
化合物118 13 12.2 37 26 ＞10000
化合物119 37
化合物120 12 102
化合物121 40
化合物122 28 87
化合物123 82
化合物124 15 135
化合物125 52
化合物126 32 246
化合物127 47 223
化合物128 33
化合物129 37
化合物130 17
化合物131 34
化合物132 25
化合物133 13 74 48
化合物134 10 58
化合物135 5.2 14.7 33 39 7.3 ＞10000
化合物136 10 53 6.6
化合物137 37
化合物138 14 102
化合物139 84 2035
化合物140 28 167
化合物141 31 250
化合物142 10
化合物143 16 58 24
化合物144 3 4.4 13 8.4 5 ＞10000
化合物145 6.9 66
化合物146 6.9 37
化合物147 16
化合物148 15
化合物149 15 57
化合物150 11
化合物151 43
化合物152 30
化合物154 13
化合物155 23
化合物156 9.6
化合物157 19
化合物158 18
化合物159 6.2
化合物160 14 19.5 88 17
化合物164 38
化合物165 9.2
化合物166 4.9 33 21
化合物167 8.8
化合物168 5.6
化合物169 20
化合物170 3.6 19 8.5
化合物171 13
化合物172 3.6
化合物173 6 35
化合物174 8 59
化合物175 26 70
化合物176 33
化合物177 4.2
化合物178 2.5 9.4 5.7
化合物179 27
化合物180 20
化合物181 11
化合物182 24
化合物183 3 11 12
化合物184 2.7 11 15
化合物185 3.4 12 10
化合物186 20
化合物187 7.5
化合物188 12
化合物189 2.9 13 15
化合物190 11 38
化合物191 3.1 12
化合物192 3.2 17
化合物193 7.3 24
化合物194 5.5 26
化合物195 4.4 18
化合物196 4 15
化合物197 6.1 32
化合物198 6.9 21
化合物200 4.6 20
化合物201 13 46
化合物202 15 54
化合物203 11 47
化合物204 15 115
化合物205 5 44
化合物206 8.2 37
化合物207 4.6 10
“空白”表示未測定。
實施例2. In Cell Western Blotting 實驗
試劑與儀器
表3
儀器名稱 廠家 型號
生物安全櫃 ESCO AC2-4S1
顯微鏡 Olympus CKX-41
CO 2培養箱 Thermo 3111
移液器 Eppendorf
細胞計數儀 Thermo AMQAF1000
臺式離心機 Thermo Heraeus Megafuge 8
酶標儀 PerkinElmer Envision
Nunc 96 孔板 In vitro scientific 060096
RPMI 1640 Gibco Cat.NO.A10491-01  2192387
FBS Gibco Cat.NO.10099-141C  2158737CP
胰酶 Gibco Cat.NO.25200-072  2185855
P/S Solarbio Cat.NO.P1400  20200828
PBS Solarbio Cat.NO.p1070-500  20200821
DMSO Sigma Cat.NO.D8370  821D036
rabbit anti KRAS G12D CST  14429
mouse anti GAPDH Proteintech  60004-1-Ig
IRDye 800CW標記的二抗1 LI-COR 5151
IRDye 680CW標記的二抗2 LI-COR 5470
封閉液 LI-COR 927-40000
4%甲醛 碧雲天 P0099
Triton X-100 碧雲天 P0096-100ml
細胞培養鋪板
表4
細胞株 來源 培養基
AGS ATCC RPMI1640 + 10% FBS+1% PS
1）顯微鏡下觀察，細胞狀態良好，處於對數生長期，細胞密度80-90%。
2）胰酶消化細胞1-2 min，5 mL新鮮培養液終止消化，輕輕吹打使細胞成為單個
細胞懸液，1000 rpm / 3 min離心。
3）加入新鮮的培養液重懸細胞，吸取10 μL細胞液，用台盼藍染色後透過細胞計
數儀統計細胞液密度。
4）取新鮮培養基配製細胞液，調整細胞密度為2.78×10 5個/mL (5×10 4個/180μL)。
將細胞液加入96孔透底黑板，180 μL/孔，37°C，5% CO 2培養箱孵育過夜。
加藥化合物配製：取 10mM 的化合物母液 20μL，加 30μL DMSO，稀釋成 4mM，並以此為最高濃度，四倍梯度稀釋，得到9 個濃度化合物；然後轉移 5μL到 195μL 培養液中，混勻，得到化合物工作液；並轉移 20μL 工作液到細胞內。
實驗準備：將分裝凍存的4%多聚甲醛置於室溫消融。
細胞固定：棄培養液，將準備好的4%多聚甲醛沿著孔壁輕輕加到板中（150 μL/well），室溫固定20 min。
期間用PBS配置0.5%的Triton X-100打孔液，0.5% 吐溫20的清洗液，棄固定液，用含0.5% 吐溫20的PBS，在搖床上洗5 min/4次。
打孔：用上述0.5% Triton X-100 150μL/well 固定20 min。
棄打孔液，用含0.5% 吐溫20的PBS，在搖床上洗5 min/4次。
封閉：150 μL/well 封閉液室溫封閉1.5 h。
一抗：50 μL/well，4℃ 孵育過夜或室溫孵育2 hr （最後一列加封閉液作為背景；KRAS G12D-1:200，GAPDH-1:400）。
棄一抗，用含0.5% 吐溫20的PBS，在搖床上洗5 min/4次。
二抗：50 μL/well室溫孵育1.5 h (anti-Rb 800:1/500; anti-Ms 680:1/500) 。
棄二抗，用含0.5% 吐溫20的PBS，在搖床上洗5 min/4次，倒置離心1000 rpm/1 min ，並在室溫晾乾 3 小時後, 上機。
將測定得到的 Relative ICW800 信號值導入 Prism 軟體，進行擬合，並計算 DC 50，結果見表5。
表5 化合物在AGS細胞系In Cell Western Blotting 降解活性
化合物名稱 DC 50(nM) Dmax (%)
化合物2 316 95
化合物67 22 78
化合物69 25 95
化合物71 20 95
化合物73 17 95
化合物75 24 95
化合物79 44 95
化合物80 40 95
化合物93 11 95
化合物100 9.5 95
化合物104 27 95
化合物105 8.9 95
化合物111 21 95
化合物112 5 95
化合物113 9.3 95
化合物114 18 95
化合物115 21 95
化合物116 30 95
化合物117 7.5 95
化合物118 11 95
化合物120 11 95
化合物121 30 95
化合物122 22 95
化合物123 122
化合物124 21 95
化合物126 23 95
化合物128 84 95
化合物131 18 95
化合物132 19 95
化合物133 17 95
化合物134 5.9 95
化合物135 14 95
化合物136 14 95
化合物137 37 95
化合物138 13 95
化合物139 31 95
化合物142 6.3 95
化合物143 12 95
化合物144 1.1 95
化合物145 59 95
化合物146 27 95
化合物147 24 95
化合物148 13 95
化合物149 7.6 95
化合物150 14 95
化合物151 30 95
化合物152 27 95
化合物154 5.5 95
化合物155 8.7 95
化合物156 9.6 95
化合物157 7.7 95
化合物158 4.1 95
化合物159 2.3 95
化合物160 2 95
化合物203 14 95
實施例3：化合物對不同KRAS降解作用
將生長狀況良好，處於對數生長期的AGS細胞以3×10 5鋪到12孔板內，37℃，5% CO 2培養過夜。第二日，將化合物稀釋到相應的濃度，給藥，使化合物的最終濃度分別為 0.2，1，5 μM。37℃，5% CO 2孵育24 h後，棄培養液，加入 PBS 清洗一次，50 μl/孔裂解液冰上裂解 10min，離心，收集總蛋白。BCA蛋白定量後，統一將樣品按20 μg/孔上樣到SDS-PAGE膠，電泳程式設置為80V, 0.5 h，然後120V, 1 h。電泳結束後，將PAGE膠轉印到0.22 μm PVDF膜上，5% BSA封閉1 h，在35 kD marker處將PVDF膜剪開，分別孵育KRAS (Sigma  SAB1404011-100UG)、β-肌動蛋白(CST  5057S)一抗，4℃ 孵育過夜。第二日，將 PVDF 膜從一抗液中取出，TBST 洗 4 次，每次 5 min，之後室溫孵育對應二抗 1.5 hr，TBST 清洗4 次之後，在iBright FL1000上進行曝光，其結果見圖1。
實施例4. Western Blotting 實驗
細胞鋪板
取處於對數生長期，且生長狀況良好的AGS細胞，棄掉培養液，PBS 清洗一次後，加入 0.25 % Trypsin 消化細胞。
加入培養液終止消化，收集細胞於 15 mL 離心管中，1000 rpm 離心 3 min，棄掉培養液，加入 2mL 培養液重懸，計數，並使用培養液稀釋至 3.33x10 5cells / mL (3x10 5cells/0.9mL/well) 。
將細胞按照每孔0.9 mL 鋪在 12 孔板中，37℃，5 % CO 2過夜培養。
加藥處理
化合物工作液配製：吸取一定體積的儲存液，使用 DMSO 稀釋成 1000x 的中間液，之後使用 DMSO 梯度稀釋，得到各個濃度的中間液；然後吸取3 uL 的各個濃度的中間液到300 uL 培養液中，吹打混勻，製成 10x 的工作液。
加藥：分別吸取對應的工作液 100 uL 到每個孔中，混勻後將 12 孔板置於37℃，5 % CO 2培養 24 hr。
蛋白質收集和定量
配製細胞裂解液：將配製好的 10x RIPA 裂解液，10x 磷酸酶抑制劑， 25x 蛋白酶抑制劑提前從 -20℃ 取出，室溫溶解後，按照每毫升 760 uL ddH 2O，100 uL 10x RIPA 裂解液，100 uL 10x 磷酸酶抑制劑，40 uL 25 蛋白酶抑制劑配製細胞裂解液，混勻，備用。
裂解細胞：藥物處理時間結束後，小心吸掉孔內的培養液，每孔加入 500 uL PBS 輕輕潤洗，吸去 PBS，從孔的中央緩慢加入 50 uL 細胞裂解液，於冰上裂解 10 ~ 15 min後，將裂解液收集到 1.5 mL 離心管內，4 ℃，15000 rpm 離心 15 min，吸取上清液到另一乾淨離心管內。
定蛋白：取一乾淨的透明 96 孔板，在每孔內加入 20 uL PBS，之後分別加入收集好的蛋白上清液 5 uL，單孔測試，之後將 BCA 溶液的A液和 B 液按照50：1進行預混，每孔加入200 uL混合好的 BCA 顯色液，用錫紙包裹 96 孔板，置於37℃孵育 30 min 後，使用 Evisin 儀器測定 OD 值 (562nM)，帶入標準曲線，計算蛋白質濃度。
進行 WB 實驗
1）調整蛋白質濃度：按照計算公式，使用PBS調整每孔蛋白質上樣量為 30 ug，最終體積為 10 uL，每份樣品加入2 uL 6 x SDS loading buffer，於100 ℃ 煮5 min，之後離心，冷卻至室溫。
2）組裝電泳槽，加入電泳液，每孔上樣 12 uL，並於樣品左右兩次分別加 marker 2.5 uL 和 1.5 uL，marker 孔和其餘孔均用 1 x loading buffer 補齊至 12 uL，90 V 電泳大約 30 min，待樣品在膠內壓縮成一條帶之後，增加到 120 V 電泳，直到藍色 loading buffer 條帶到達膠的最底端。
3）提前按照 7：2：1 (ddH 2O：甲醇：10 x 轉膜液) 配製2 ~3 L轉膜液並置於4℃冷卻。
4）跑膠結束後，小心拆開膠板，將膠取出，裁去無用的部分，置於墊好濾紙的轉膜夾上，輕輕沿著一次蓋上裁剪好的 PVDF 膜 (PVDF膜需要提前用甲醇浸泡活化，並浸泡在轉膜液中)，用滾輪小心來回滾壓，去掉膠與膜之間的氣泡，然後覆蓋一次濾紙，小心將轉膜夾加緊，插入轉膜槽內，加入轉膜液，並將轉膜槽放置到一個稍大的容器內，周圍填滿碎冰，400 mA 轉膜 120 ~ 150 min (需要根據蛋白質分子量決定)。
5）配製 5 % BSA 封閉液：稱取 2.5 g BSA，加入 TBS-T溶解，定容到 50 mL。
6）轉膜結束後，小心取出 PVDF 膜，浸泡在 5 % BSA 溶液內，於搖床上，室溫封閉 1 hr。
7）配製一抗：將 5 % BSA 稀釋到2 %，用來稀釋抗體；按照抗體說明書建議比例，稀釋一抗。
8）將封閉好的 PVDF 膜轉移到一抗溶液中，4℃孵育過夜。
孵育二抗
1）將 PVDF 膜從一抗溶液中取出，使用 TBS-T 在搖床上清洗三次，每次10 min，使用過的一抗可以保存在-20℃，重複使用。
2）按照一抗說明書，使用2 % BSA 稀釋對應的兔抗或者鼠抗，稀釋比例為 4000：1，將 PVDF 膜置於二抗溶液內，室溫孵育 1 ~ 2 hr。
3）二抗孵育結束後，TBS-T 清洗三次，每次10 min。
發光步驟
1）打開發光儀，選擇BioSense 模式。
2）將發光液A 液和 B 液等比例在容器內混合，將PVDF膜用無塵紙擦乾後，置於容器內，使用移液槍吸取發光液，反復澆在PVDF 膜上，待PVDF 膜被發光液充分浸潤後，將膜置於儀器內，進行曝光；其餘兩個細胞系H358及SW620參考上述測試方法得到，結果見圖2。
實施例5. 化合物在人、大鼠、小鼠、犬肝微粒體中的代謝穩定性研究
實驗方法：配製含有K-buffer、MgCl 2的0.5 mg/mL肝微粒體稀釋液：
試劑 儲備液濃度 加入體積 終濃度
MgCl 2溶液 50 mM 40 μL 5 mM
K-buffer 100 mM 302 μL 75.5 mM
肝微粒體 20 mg/mL 10 μL 0.5 mg/mL
表6
取上表6中配製的肝微粒體稀釋液352 μL加入到孵育板預設的孔內，標記為孵育板。取88 μL上述孵育液加入含有400 μL內標的沉澱劑，振盪後冰箱內放置至少10 min後加入2 μL待測化合物的工作液（50 μM）（DMSO終濃度≤0.5%）和10 μL NADPH，振盪器室溫下600 rpm振盪5 min，作為 0 min 樣品。將孵育板放入37℃ 恒溫振盪器中預孵5-10 min。再向孵育板中加入6 μL待測化合物的工作液（50 μM）和預熱的30 μL NADPH啟動反應，開始計時。分別在預定的各時間點，從孵育板中取出50 μL樣品加入到含有200 μL內標的沉澱板內，後續步驟與0 min樣品處理一樣。樣品混勻，於4℃ 5000 rpm下離心10分鐘，取離心後上清加入到預先加有合適比例的超純水中，室溫下振盪器上混勻，進行LC-MS/MS分析。
資料處理：分別測得不同時間點樣品中的分析物的峰面積及內標的峰面積，採用非零時間點分析物和內標的峰面積比值與0 min樣品中分析物和內標的峰面積比值來計算原藥的剩餘百分比，再以剩餘百分比的自然對數值為縱坐標，孵育時間為橫坐標作圖，線性擬合。
計算公式：消除速率常數 k= -slope；半衰期T 1/2= 0.693 / k；體外肝微粒體內在清除率CL int ， in vitro= k/ C protein；備註：C protein表示孵育終體系中肝微粒體蛋白的濃度。各化合物所得體外肝微粒體的結果如下表7所示。
表7
化合物編號 體外肝微粒體內在清除率 （CL int, in vitro，μL/min/mg蛋白）
人 大鼠 小鼠 犬
化合物2 31.0 11.6 16.6 0.0
化合物69 9.8 4.6 7.9 16.4
化合物71 5.9 1.1 9.8 6.5
化合物73 13.8 9.8 7.1 18.9
化合物75 1.0 20.7 8.6 22.1
化合物88 13.4 10.1 24.5 13.3
化合物93 23.5 10.9 8.3 28.5
化合物100 47.0 7.9 3.2 57.5
化合物105 9.9 5.9 13.3 28.5
化合物111 21.7 15.7 10.6 8.4
化合物114 46.5 25.2 18.9 50.5
化合物115 32.1 13.8 15.9 18.3
化合物117 8.8 11.3 10.1 6.6
化合物118 21.3 3.4 11.4 17.2
化合物119 6.1 9.1 10.4 14.9
化合物120 128 9.3 48.5 113
化合物122 46.4 8.5 24.8 53
化合物124 49.7 9.1 18.6 88
化合物127 52.8 15.6 42.4 31.5
化合物133 7.4 7.2 8.0 9.3
化合物134 28.4 3.0 6.4 5.5
化合物135 11.3 1.5 13.2 26.9
化合物136 19.6 8.0 22.1 20.8
化合物138 11.2 5.7 13.6 25.5
化合物141 21.2 3.9 12.1 12.9
化合物142 11.1 0.0 17.7 14.2
化合物144 18.8 6.2 10.9 7.4
備註：人肝微粒體中CL int, in vitro＜8.6時，屬於慢代謝；當人肝微粒體中CL int, in vitro＞47時，屬於快代謝。
結果表明，化合物71、化合物75、化合物119、化合物133在人肝微粒體中均屬於慢代謝。對於成藥性來說，有利於降低藥物給藥劑量。
實施例6. 化合物在人、大鼠、小鼠、犬肝微粒體中的二相代謝穩定性研究
實驗方法：配製含有K-buffer、MgCl 2的0.5 mg/mL肝微粒體稀釋液：
表8
試劑 儲備液濃度 加入體積 終濃度
MgCl 2溶液 100 mM 40 μL 10 mM
K-buffer 100 mM 306 μL 76.5 mM
丙甲菌素 5 mg/mL 2 μL 25 μg/mL
肝微粒體 20 mg/mL 10 μL 0.5 mg/mL
取上表8中配製的肝微粒體稀釋液358 μL加入到孵育板預設的孔內，標記為孵育板。加入2 μL化合物工作液（400 μM）（DMSO終濃度≤0.5%），將孵育板放入37℃ 恒溫振盪器中預孵5-10 min。再向孵育板中加入40 μL UDPGA（20 mM）啟動反應，開始計時。分別在預定的各時間點（0，5，15，60分鐘），從孵育板中取出50 μL樣品加入到含有200 μL內標的沉澱板內，樣品混勻，於4℃ 5000 rpm下離心10分鐘，取離心後上清加入到預先加有合適比例的超純水中，室溫下振盪器上混勻，進行LC-MS/MS分析。
資料處理：分別測得不同時間點樣品中的分析物的峰面積及內標的峰面積，採用非零時間點分析物和內標的峰面積比值與0 min樣品中分析物和內標的峰面積比值來計算原藥的剩餘百分比。各化合物所得孵育60分鐘後原藥剩餘百分比結果如下表9所示。
表9
化合物編號 60分鐘剩餘百分比%
人 大鼠 小鼠 犬
化合物69 98.4 99 92 90.6
化合物71 94.6 75.4 93 108
化合物122 76.9 96.5 105 99.4
備註：當60分鐘剩餘百分比%＞ 80%時，認為化合物代謝很慢，利於後期開發。
結果表明：化合物69和化合物71在人肝微粒體中不經由或者很少由UGT代謝。
實施例7. 化合物2在Balbc小鼠中的PK考察
實驗方法和結果：
將化合物與溶媒10%DMSO/5%Solutol/85%生理鹽水混合，渦旋並超聲，製備得到0.2 mg/mL 澄清溶液。選取6至7周齡的Balbc 雌性小鼠，不禁食，靜脈給化合物2，收集一定時間的全血，以LC-MS/MS方法分析藥物濃度，並用Phoenix WinNolin 軟體（美國Pharsight 公司）計算藥代參數，結果如表10所示。
表10 靜脈化合物2單藥小鼠PK數據
化合物 2
Route IV
Dosing Level (mg/kg) 1
Formulation 10%DMSO/5%Solutol/85%生理鹽水
Sex Female
Cl_obs (mL/min/kg) 3.77
t1/2 (h) 6.49
C 0(ng/mL) 8791
AUC last(h*ng/mL) 4379
Vss_obs  (L/kg) 0.586
實施例8. 化合物在ICR小鼠中的PK考察（全血）
實驗方法和結果：
將化合物與溶媒10%DMSO/5%Solutol/85%生理鹽水混合，渦旋並超聲，製備得到0.2 mg/mL 澄清溶液。選取6至7周齡的ICR雌性小鼠，不禁食，靜脈給化合物，收集一定時間的全血，以LC-MS/MS方法分析藥物濃度，並用Phoenix WinNolin 軟體（美國Pharsight 公司）計算藥代參數，結果如表11所示。
表11 靜脈化合物單藥小鼠PK數據
化合物 71 73 88 133
Route IV
Dosing Level (mg/kg) 1
Formulation 10%DMSO/5%Solutol/85%生理鹽水
Sex Female
Cl_obs (mL/min/kg) 16.3 7.97 4.03 14.2
t 1/2(h) 6.08 5.07 5.61 5.77
C 0(ng/mL) 5562 3008 5003 2838
AUC last(h*ng/mL) 1032 2051 4109 1203
Vss_obs  (L/kg) 1.45 1.91 0.780 2.49
實施例9. 化合物在ICR小鼠中的PK考察（血漿）
實驗方法和結果：
將化合物與溶媒10%DMSO/5%Solutol/85%生理鹽水混合，渦旋並超聲，製備得到0.2 mg/mL 澄清溶液。選取6至7周齡的ICR雌性小鼠，不禁食，靜脈給化合物，收集一定時間的血漿，以LC-MS/MS方法分析藥物濃度，並用Phoenix WinNolin 軟體（美國Pharsight 公司）計算藥代參數，結果如表12所示。
表12 靜脈化合物單藥小鼠PK數據
化合物 135 142 144
Route IV
Dosing Level (mg/kg) 1
Formulation 10%DMSO/5%Solutol/85%生理鹽水
Sex Female
Cl_obs (mL/min/kg) 5.80 7.32 5.81
t 1/2(h) 6.92 4.10 9.34
C 0(ng/mL) 5844 9464 5530
AUC last(h*ng/mL) 2747 2295 2728
Vss_obs  (L/kg) 1.61 0.854 1.54
實施例10. 化合物135比格犬中的PK考察
實驗方法和結果：
將化合物與溶媒10%DMSO/5%Solutol/85%生理鹽水混合，渦旋並超聲，製備得到0.5 mg/mL 澄清溶液。選取約10 kg比格犬（雌雄各半），不禁食，靜脈給化合物，收集一定時間的血漿，以LC-MS/MS方法分析藥物濃度，並用Phoenix WinNolin 軟體（美國Pharsight 公司）計算藥代參數，結果如表13所示。
表13 靜脈化合物單藥比格犬PK數據
化合物 135 144
Route IV
Dosing Level (mg/kg) 1
Formulation 10%DMSO/5%Solutol/85%生理鹽水
Sex Female
Cl_obs (mL/min/kg) 5.74 6.19
t 1/2(h) 21.4 20.5
C 0(ng/mL) 10967 9889
AUC last(h*ng/mL) 2779 2522
Vss_obs  (L/kg) 2.23 3.46
實施例11化合物在攜帶 KRAS G12D突變的人胰腺癌模型上的抗腫瘤作用評價
PK-59 細胞（南京科佰生物科技有限公司，CBP61184）復蘇後培養於RPMI1640+10%FBS+1% 雙抗的培養基中，3 天傳代一次。待細胞生長到足夠數量後，將細胞使用 PBS 重懸，並與基質膠 1:1 混合，按照 2 x10 6cells/100 μL每只小鼠，接種於 4-6 周齡的 BALB/c Nude Crlj 雄性免疫缺陷小鼠（北京維通利華實驗動物技術有限公司）背部的皮下組織。待小鼠背部腫瘤生長達到 200-300mm 3後，將小鼠分為 11 組，每組 6 只，分別按照表14所示，給於對應的化合物和劑量。測試化合物使用 80% 生理鹽水/10%(50% SBECD)/10% RH40 溶解後，透過尾靜脈進行給藥，並在首次給藥後的第 3、7、10、14、17、21、24 和 28 天進行腫瘤體積的測量，計算腫瘤抑制率（TGI）；
腫瘤體積（mm 3）=0.5*腫瘤長徑 D*腫瘤短徑 d 2；
TGI（%）=(1-RVT 實驗組/RVT 對照組)*100，其中 RVT 為相對腫瘤體積，RVT=V t-V 0；
表 14
分組 化合物編號 每組數量 劑量 (mg/kg) 給藥頻次
G1 對照組 6 / QW
G2 化合物 135 6 1 QW
G3 6 3 QW
G4 6 10 QW
G5 6 20 Q2W
G6 化合物 144 6 1 QW
G7 6 3 QW
G8 6 10 QW
注：QW 為每週給藥一次；Q2W 為每兩周給藥一次
表 15
化合物編號 劑量 (mg/kg)，給藥頻次 給藥 4 周後的 TGI (%)
化合物 135 1, QW 70
3, QW 92
10, QW 106
20, Q2W 101
化合物 144 1, QW 82
3, QW 93
10, QW 113
在給藥 4 周後，結果見表14-15，圖3-圖4，結果表明：測試化合物1mg/kg，每週給藥一次的 TGI 在 70% - 87% 之間，均實現了腫瘤抑制的效果；給藥劑量增加到 10mg/kg，每週一次給藥後，所有測試化合物均可以實現腫瘤消退，TGI 在 106% - 118% 之間。其中，化合物 135每次給藥的劑量增加到 20mg/kg，並延長給藥時間到兩週一次後，可以實現與 10mg/kg，每週給藥一次相近的 TGI。各給藥組均沒有看到小鼠體重的降低，顯示各化合物均具有良好的安全性。
實施例9：化合物144在不同突變細胞內對 KRAS 降解作用研究
將生長狀況良好，處於對數生長期的AGS, SW620, HCT116細胞以3×10 5鋪到12孔板內，37℃，5% CO 2培養過夜。第二日，取 10mM的待測化合物儲存液，使用 DMSO 按照 0.5mM 起始，五倍梯度稀釋，最後一個濃度為 DMSO，得到工作液；工作液按照 1/1000 的比例，加入到細胞培養液內（每孔 1mL 培養液，對應加入 1 μL 工作液），37℃，5% CO 2孵育 3 h。處理結束後，棄培養液，加入 PBS 清洗一次，50 μl/孔裂解液冰上裂解 10min，離心，收集總蛋白。BCA蛋白定量後，統一將樣品按20 μg/孔上樣到 SDS-PAGE 膠，電泳程式設置為80V, 0.5 h，然後120V, 1 h。電泳結束後，將PAGE膠轉印到0.22 μm PVDF膜上，5% 脫脂奶粉封閉1 h，在35 kD marker處將PVDF膜剪開，分別孵育KRAS (Sigma SAB1404011-100UG)、β-肌動蛋白 (CST 5057S)一抗，4℃ 孵育過夜。第二日，將 PVDF 膜從一抗液中取出，TBST 洗 4 次，每次 5 min，之後室溫孵育對應二抗 1.5 hr，TBST 清洗4 次之後，在iBright FL1000上進行曝光。
實驗結果見圖5，化合物 144 在 3 小時即可有效的降解 KRAS G12D/G12V 和 G13D 蛋白。
雖然本發明已透過其實施方式進行了全面的描述，但是值得注意的是，各種變化和修改對於本領域技術人員都是顯而易見的。這樣的變化和修改都應該包括在本發明所附申請專利範圍的範圍內。
圖1為生物學實驗中化合物2對不同KRAS降解作用圖。
圖2為生物學實驗中化合物135在不同細胞系上對KRAS蛋白降解Western Blotting實驗結果。
圖3為生物學實驗中化合物135對小鼠異體移植瘤模型的藥效考察圖。
圖4為生物學實驗中化合物144對小鼠異體移植瘤模型的藥效考察圖。
圖5為生物學實驗中化合物144在不同細胞系上對KRAS蛋白降解Western Blotting實驗結果。

Claims (37)

  1. 一種具有F-L-M結構的化合物，或其互變異構體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式或其可藥用的鹽，其中該F為以下通式(A）所示的KRAS蛋白結合片段； X選自-O-或 ； 代表獨立地選自單鍵或雙鍵； X 4為CR 8、C(R 8) 2、O、N或NR 8；R 8各自獨立選自H、羥基、氧代基、鹵素、氰基、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、-S- C 1-6烷基、-C 0-3亞烷基-C 2-4烯基、C 1-6烷氧基、C 1-6鹵代烷氧基或C 3-14環烷基；該C 3-14環烷基、該C 1-6烷基任選進一步被一個或多個R a取代； X 5選自C、CH或N； X 6選自CR 14、C(R 14) 2、O、N或NR 14； R 14各自獨立選自H、羥基、氧代基、鹵素、氰基、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、-S- C 1-6烷基、-C 0-3亞烷基-C 2-4烯基、C 1-6烷氧基、C 1-6鹵代烷氧基或C 3-14環烷基；該C 3-14環烷基、該C 1-6烷基任選進一步被一個或多個R a取代； R 6選自不存在、C 3-14環烷基或3-14元雜環基；該C 3-14環烷基或該3-14元雜環基任選進一步被一個或多個R a取代； R 9選自H、胺基、取代的胺基、氰基、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、鹵素、C 2-6烯基、C 3-6環烷基；該C 1-6烷基、該C 2-6烯基、該C 3-6環烷基任選進一步被一個或多個R a取代； R 10選自不存在、-O-或-NR 11-；R 11選自H、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6羥基烷基或C 1-6胺基烷基； R 7選自C 3-14環烷基、3-14元雜環基、C 6-18芳基或5-18元雜芳基，該C 3-14環烷基、該3-14元雜環基、該C 6-18芳基或該5-18元雜芳基任選地進一步被一個或多個R a取代； K選自C 3-14環烷基或3-14元雜環基，該C 3-14環烷基或該3-14元雜環基為單環、稠環、螺環或橋環，任選地進一步被一個或多個R a取代，且該3-14元雜環基不為 、 、 、 、 、 和 ； m，n各自獨立選自0，1，2，3，4或5； 該L為連接該F和該M的連接單元； 該L選自 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 或 ； 其中G環或D環各自獨立選自C 6-14芳基、5-14元雜芳基、C 3-14環烷基或3-14元雜環基，該C 6-14芳基、該5-14元雜芳基或該3-14元雜環基任選地進一步被一個或多個R a取代； E各自獨立選自-O-、-NH-或-NCH 3-； Y 1、Y 2各自獨立選自不存在、-O-、-NH-、3-6元含N雜環基、C 1-6亞烷基、羰基、乙炔基或C 3-6環烷基； n1、n2、n3各自獨立地選自0-10的整數，優選為0，1，2，3或4； 該M選自通式(III)或（IV）所示的VHL結合片段； 或 X 1選自C、CH 或N； X 2選自C、CH 或N； X 3選自N、NH、O或S； R 1選自H、C 1-6烷基、鹵素或氰基，優選為甲基、乙基、F或氰基； R 2選自H或C 1-6烷基，優選為H或甲基； R 3選自H、C 1-6烷基或C 1-6羥基烷基或-(CH 2) n-CO-NH-(CH 2) n-CH 3，n選自0，1，2或3，該R 3優選為H、甲基、羥基甲基、 或-CH 2-CO-NH-CH 3； R 4選自 、 或-NH-； R 5選自H、C 1-6烷基或C 1-6鹵代烷基； R 12選自 或 ； R a各自獨立地選自H、羥基、胺基、氧代基、氰基、鹵素、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、-C 0-3亞烷基-OR b、-OC(=O)C 1-6烷基、 -C 0-3亞烷基-SR b、-C 0-3亞烷基-N(R b) 2、-C 0-3亞烷基-S(=O)R b、-C 0-3亞烷基-S(=O) 2R b、-C 0-3亞烷基-SR b、-C 0-3亞烷基-S(R b) 5、-C 0-3亞烷基-C(=O)R b、-C 0-3亞烷基-C(=O)OR b、-C 0-3亞烷基-C(=O)N(R b) 2、C 2-6烯基、 、 C 2-6炔基、-C 0-3亞烷基-C 3-14環烷基、-C 0-3亞烷基-(3-14元雜環基)、-C 0-3亞烷基-C 6-18芳基或-C 0-3亞烷基-(5-18元雜芳基)，該C 1-6烷基、該C 1-6鹵代烷基、該C 1-6烷氧基、該C 2-6烯基、該C 2-6炔基、該-C 0-3亞烷基-C 3-14環烷基、該-C 0-3亞烷基-(3-14元雜環基)、該-C 0-3亞烷基-C 6-18芳基或該-C 0-3亞烷基-(5-18元雜芳基) 任選地進一步被一個或多個R b取代； 每個R b各自獨立地為 H、鹵素、羥基、氰基、C 1-6烷基、C 3-6環烷基、C 1-6鹵代烷基、C 3-14環烷基、3-14元雜環基、C 6-18芳基或5-18元雜芳基，該C 1-6烷基、該C 3-6環烷基、該C 1-6鹵代烷基、該C 3-14環烷基、該3-14元雜環基、該C 6-18芳基或該5-18元雜芳基任選地進一步被一個或多個鹵素、該C 1-6烷基或該C 1-6鹵代烷基所取代；或者一個原子上的兩個R b與其共同連接的原子形成C 3-14環烷基、3-14元雜環基、C 6-18芳基或5-18元雜芳基，該C 3-14環烷基、該3-14元雜環基、該C 6-18芳基或該5-18元雜芳基任選地進一步被一個或多個鹵素、胺基、羥基、氰基、C 1-6烷基、C 3-6環烷基或C 1-6鹵代烷基取代。
  2. 如請求項1所述的化合物，或其互變異構體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式或其可藥用的鹽，其中該L選自 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 或 ； 其中G環或D環各自獨立選自C 6-14芳基、5-14元雜芳基、C 3-14環烷基或3-14元雜環基，該C 6-14芳基、該5-14元雜芳基或該3-14元雜環基任選地進一步被一個或多個R a取代； E各自獨立選自-O-、-NH-或-NCH 3-； n1、n2、n3各自獨立地選自0-10的整數，優選為0，1，2，3或4； M選自通式(V)或（IV）所示的VHL結合片段； 或 X 1選自C、CH 或N； X 2選自C、CH 或N； X 3選自N、NH、O或S； R 1選自H、C 1-6烷基、鹵素或氰基，優選為甲基、乙基、F或氰基； R 2選自H或C 1-6烷基，優選為H或甲基； R 3選自H、C 1-6烷基或C 1-6羥基烷基，優選為H、甲基或羥基甲基； R 4選自 、 或-NH-； R 12選自 或 。
  3. 根據請求項2所述的化合物，或其互變異構體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式或其可藥用的鹽， 其中該L選自 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 或 ； G環或D環各自獨立選自C 6-14芳基、5-14元雜芳基或3-14元雜環基，該C 6-14芳基、該5-14元雜芳基或該3-14元雜環基任選地進一步被一個或多個R a取代； E各自獨立選自-O-、-NH-或-NCH 3-； n1、n2、n3各自獨立地選自0-10的整數，優選為0，1，2，3或4； 該M選自通式(V)或（IV）所示的VHL結合片段； 或 X 1選自C、CH 或N； X 2選自C、CH 或N； X 3選自N、NH、O或S； R 1選自H、C 1-6烷基、鹵素或氰基，優選為甲基、乙基、F或氰基； R 2選自H或C 1-6烷基，優選為H或甲基； R 3選自H、C 1-6烷基或C 1-6羥基烷基，優選為H、甲基或羥基甲基； R 4選自 、 或-NH-； R 12選自 或 ； R a獨立地選自H、羥基、胺基、氧代基、氰基、鹵素、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、-C 0-3亞烷基-OR b、-OC(=O)C 1-6烷基、 -C 0-3亞烷基-SR b、-C 0-3亞烷基-N(R b) 2、-C 0-3亞烷基-S(=O)R b、-C 0-3亞烷基-S(=O) 2R b、-C 0-3亞烷基-SR b、-C 0-3亞烷基-S(R b) 5、-C 0-3亞烷基-C(=O)R b、-C 0-3亞烷基-C(=O)OR b、-C 0-3亞烷基-C(=O)N(R b) 2、C 2-6烯基、C 2-6炔基、-C 0-3亞烷基-C 3-14環烷基、-C 0-3亞烷基-(3-14元雜環基)、-C 0-3亞烷基-C 6-18芳基或-C 0-3亞烷基-(5-18元雜芳基)，該C 1-6烷基、該C 1-6鹵代烷基、該C 1-6烷氧基、該C 2-6烯基、該C 2-6炔基、該-C 0-3亞烷基-C 3-14環烷基、該-C 0-3亞烷基-(3-14元雜環基)、該-C 0-3亞烷基-C 6-18芳基或該-C 0-3亞烷基-(5-18元雜芳基) 任選地進一步被一個或多個R b取代； 每個R b獨立地為 H、鹵素、羥基、氰基、C 1-6烷基、C 3-6環烷基、C 1-6鹵代烷基、C 3-14環烷基、3-14元雜環基、C 6-18芳基或5-18元雜芳基，該C 1-6烷基、該C 3-6環烷基、該C 1-6鹵代烷基、該C 3-14環烷基、該3-14元雜環基、該C 6-18芳基或該5-18元雜芳基任選地進一步被一個或多個鹵素、C 1-6烷基或C 1-6鹵代烷基所取代；或者一個原子上的兩個R b與其共同連接的原子形成C 3-14環烷基、3-14元雜環基、C 6-18芳基或5-18元雜芳基，該C 3-14環烷基、該3-14元雜環基、C 6-18芳基或該5-18元雜芳基任選地進一步被一個或多個鹵素、胺基、羥基、氰基、C 1-6烷基、C 3-6環烷基或C 1-6鹵代烷基取代。
  4. 根據請求項1-3中任一項所述的化合物，或其互變異構體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式或其可藥用的鹽， 其中該F為通式(I)或（II）所示的KRAS蛋白結合片段； 或 該 代表獨立地選自單鍵或雙鍵； 該X 4為CR 8、C(R 8) 2、O、N或NR 8；該R 8各自獨立選自H、羥基、氧代基、鹵素、氰基、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、-S- C 1-6烷基、-C 0-3亞烷基-C 2-4烯基、C 1-6烷氧基、C 1-6鹵代烷氧基或C 3-14環烷基；該C 3-14環烷基、該C 1-6烷基任選進一步被一個或多個R a取代； X 5選自C、CH或N； X 6選自CR 14、C(R 14) 2、O、N或NR 14； R 14各自獨立選自H、羥基、氧代基、鹵素、氰基、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、-S- C 1-6烷基、-C 0-3亞烷基-C 2-4烯基、C 1-6烷氧基、C 1-6鹵代烷氧基或C 3-14環烷基；該C 3-14環烷基、該C 1-6烷基任選進一步被一個或多個R a取代； R 6選自不存在、C 3-14環烷基或3-14元雜環基；該C 3-14環烷基或該3-14元雜環基任選進一步被一個或多個R a取代； R 9選自H、胺基、取代的胺基、氰基、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、鹵素、C 2-6烯基、C 3-6環烷基；該C 1-6烷基、該C 2-6烯基、該C 3-6環烷基任選進一步被一個或多個R a取代； R 10選自不存在、-O-或-NR 11-；R 11選自H、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6羥基烷基或C 1-6胺基烷基； R 7選自C 3-14環烷基、3-14元雜環基、C 6-18芳基或5-18元雜芳基，該C 3-14環烷基、該3-14元雜環基、該C 6-18芳基或該5-18元雜芳基任選地進一步被一個或多個R a取代； 該K選自C 3-14環烷基或3-14元雜環基，該C 3-14環烷基或該3-14元雜環基為單環、稠環、螺環或橋環，任選地進一步被一個或多個R a取代，且該3-14元雜環基不為 、 、 、 、 、 和 ； m，n各自獨立選自0，1，2，3，4或5。
  5. 根據請求項1-4中任一項所述的化合物，或其互變異構體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式或其可藥用的鹽，其中該R 4選自 或-NH-。
  6. 根據請求項1-4中任一項所述的化合物，或其互變異構體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式或其可藥用的鹽，其中該R 4選自 。
  7. 根據請求項1-6中任一項所述的化合物，或其互變異構體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式或其可藥用的鹽，其中該K選自C 3-14環烷基或3-14元雜環基，該C 3-14環烷基或3-14元雜環基為單環，且任選地進一步被一個或多個R a取代。
  8. 根據請求項7所述的化合物，或其互變異構體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式或其可藥用的鹽，其中該K選自 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 或 。
  9. 根據請求項1-6中任一項所述的化合物，或其互變異構體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式或其可藥用的鹽，其中該K為C 3-14環烷基或3-14元雜環基，該C 3-14環烷基或該3-14元雜環基為螺環，且任選地進一步被一個或多個R a取代。
  10. 根據請求項9所述的化合物，或其互變異構體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式或其可藥用的鹽，其中該K選自 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 或 。
  11. 根據請求項1-6中任一項所述的化合物，或其互變異構體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式或其可藥用的鹽，其中該K為C 3-14環烷基或3-14元雜環基，該C 3-14環烷基或該3-14元雜環基為稠環，且任選地進一步被一個或多個R a取代。
  12. 根據請求項11所述的化合物，或其互變異構體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式或其可藥用的鹽，其中該K選自 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 或 。
  13. 根據請求項1-6中任一項所述的化合物，或其互變異構體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式或其可藥用的鹽，其中該K為C 3-14環烷基或3-14元雜環基，該C 3-14環烷基或該3-14元雜環基為橋環，且任選地進一步被一個或多個R a取代。
  14. 根據請求項13所述的化合物，或其互變異構體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式或其可藥用的鹽，其中該K選自 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 或 。
  15. 根據請求項1-14中任一項所述的化合物，或其互變異構體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式或其可藥用的鹽，其中該K選自 。
  16. 根據請求項1-15中任一項所述的化合物，或其互變異構體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式或其可藥用的鹽，其中該R 7選自C 6-18芳基或5-18元雜芳基，該C 6-18芳基或該5-18元雜芳基任選地進一步被一個或多個R a取代；該R a各自獨立地選自H、鹵素、羥基、胺基、氰基、C 2-6炔基、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基或C 2-6烯烴。
  17. 根據請求項1-16中任一項所述的化合物，或其互變異構體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式或其可藥用的鹽，其中該R 7選自 、 、 、 、 、 、 、 、 、 或 ，該 、該 、該 、該 、該 、該 、該 、該 、該 、該 或該 任選地進一步被一個或多個所R a取代；該R a各自獨立地選自H、鹵素、羥基、胺基、氰基、C 2-6炔基、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基或C 2-6烯烴。
  18. 根據請求項1-17中任一項所述的化合物，或其互變異構體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式或其可藥用的鹽，其中該R 7選自 、 、 、 、 、 、 、 、 、 或 。
  19. 根據請求項1-18中任一項所述的化合物，或其互變異構體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式或其可藥用的鹽，其中該F選自 其中，該R 7、該R 9、該R 8、該R 11、該R 14的定義如請求項1所定義； 該K選自 。
  20. 根據請求項1-19中任一項所述的化合物，或其互變異構體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式或其可藥用的鹽，其中該K選自 。
  21. 根據請求項1-20中任一項所述的化合物，或其互變異構體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式或其可藥用的鹽，其中該F選自 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 或 。
  22. 根據請求項1-21中任一項所述的化合物，或其互變異構體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式或其可藥用的鹽，其中該F選自 、 、 或 。
  23. 根據請求項1-22中任一項所述的化合物，或其互變異構體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式或其可藥用的鹽，其中該L中的G環或D環各自獨立選自C 6-14芳基、5-14元雜芳基、C 3-14環烷基或3-14元雜環基，該C 6-14芳基、該5-14元雜芳基、該C 3-14環烷基或該3-14元雜環基任選地進一步被鹵素或C 1-3烷基取代； 該C 6-14芳基優選為 ； 該5-14元雜芳基優選自 、 、 、 、 、 、 、 、 、 或 ； 該3-14元雜環基優選自 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 或 ； 該C 3-14環烷基優選自 或 。
  24. 根據請求項1-23中任一項所述的化合物，或其互變異構體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式或其可藥用的鹽，其中該L中的G環或D環各自獨立選自C 6-14芳基、5-14元雜芳基、C 3-14環烷基或3-14元雜環基，該C 6-14芳基、該5-14元雜芳基、該C 3-14環烷基或該3-14元雜環基任選地進一步被鹵素或C 1-3烷基取代； 該C 6-14芳基優選為 ； 該5-14元雜芳基優選自 、 、 、 、 、 、 、 或 ； 該3-14元雜環基優選自 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 或 ； 該C 3-14環烷基優選自 或 。
  25. 根據請求項1-24中任一項所述的化合物，或其互變異構體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式或其可藥用的鹽，該L中的G環或D環各自獨立選自C 6-14芳基、5-14元雜芳基或3-14元雜環基，該C 6-14芳基、該5-14元雜芳基或該3-14元雜環基任選地進一步被鹵素或C 1-3烷基取代； 該C 6-14芳基優選為 ； 該5-14元雜芳基優選自 、 、 、 或 ； 該3-14元雜環基優選自 、 、 、 、 、 、 、 或 。
  26. 根據請求項1-25中任一項所述的化合物，或其互變異構體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式或其可藥用的鹽，該L選自 、 、 、 、 、 或 ； 其中該G環或D環各自獨立選自C 6-14芳基、5-14元雜芳基、C 3-14環烷基或3-14元雜環基，該C 6-14芳基、該5-14元雜芳基或該3-14元雜環基任選地進一步被一個或多個R a取代；該R a獨立地選自H、羥基、胺基、氧代基、氰基、鹵素、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基或C 1-6烷氧基； 該Y 1、Y 2各自獨立選自不存在、-O-、-NH-、3-6元含N雜環基、C 1-6亞烷基、羰基、乙炔基或C 3-6環烷基； 該E各自獨立選自-O-、-NH-或-NCH 3-； n1、n2、n3各自獨立地選自0-10的整數，優選為0，1，2，3或4。
  27. 根據請求項1-26中任一項所述的化合物，或其互變異構體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式或其可藥用的鹽，其中該L選自如下所示結構： 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、或 ，其中n1、n2各自獨立地選自0-10的整數，優選為0，1，2或3。
  28. 根據請求項1-27中任一項所述的化合物，或其互變異構體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式或其可藥用的鹽，其中該L選自如下所示結構： 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 或 。
  29. 根據請求項1-28中任一項所述的化合物，或其互變異構體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式或其可藥用的鹽，其中該M選自 。
  30. 根據請求項1-29中任一項所述的化合物，或其互變異構體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式或其可藥用的鹽，其中該L選自 或 ； G環選自C 6-14芳基、5-14元雜芳基、C 3-14環烷基或3-14元雜環基，該C 6-14芳基、該5-14元雜芳基或該3-14元雜環基任選地進一步被一個或多個R a取代；該R a各自獨立地選自H、羥基、胺基、氧代基、氰基、鹵素、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基或C 1-6烷氧基； 該D環為5-6元含N雜芳基，優選為 或 ； 該Y 1、Y 2各自獨立選自不存在、-O-、-NH-、3-6元含N雜環基、C 1-6亞烷基、羰基、乙炔基或C 3-6環烷基； n1、n2各自獨立為0，1，2，3或4。
  31. 根據請求項30所述的化合物，或其互變異構體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式或其可藥用的鹽，其中該L選自 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 或 。
  32. 根據請求項1-31中任一項所述的化合物，或其互變異構體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式或其可藥用的鹽， 其中該F選自 或 ， 該L選自如下所示結構： 、 、 、 、 、 、 或 ； 其中G環或D環各自獨立選自C 6-14芳基、5-14元雜芳基、C 3-14環烷基或3-14元雜環基，該C 6-14芳基、該5-14元雜芳基、該C 3-14環烷基或該3-14元雜環基任選地進一步被一個或多個R a取代； Y 1、Y 2各自獨立選自不存在、-O-、-NH-、3-6元含N雜環基、C 1-6亞烷基、羰基、乙炔基或C 3-6環烷基； 該E各自獨立選自-O-、-NH-或-NCH 3-； 該n1、n2、n3各自獨立地選自0-10的整數，優選為0，1，2，3或4； 該M選自通式(III)所示的VHL結合片段； 其中X 1選自C、CH 或N； X 2選自C、CH或N； X 3選自N、NH、O或S； R 1選自H、C 1-6烷基、鹵素或氰基，優選為甲基、乙基、F或氰基； R 2選自H或C 1-6烷基，優選為H或甲基； R 3選自H、C 1-6烷基、C 1-6羥基烷基或-（CH 2）n-CO-NH-(CH 2) n -CH 3，n選自0，1，2或3，該R 3優選為H、甲基、羥基甲基、 或-CH 2-CO-NH-CH 3； R 4選自 、 或-NH-； R 5選自H、C 1-6烷基或C 1-6鹵代烷基； R a獨立地選自H、羥基、胺基、氧代基、氰基、鹵素、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基或C 1-6烷氧基。
  33. 根據請求項1-32中任一項所述的化合物，或其互變異構體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式或其可藥用的鹽，其中該F-L-M結構的化合物選自以下化合物： 。
  34. 一種藥物組合物，該藥物組合物含有根據請求項1-33中任一項所述的化合物，或其互變異構體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式或其可藥用的鹽。
  35. 根據請求項1-33中任一項所述的化合物，或其互變異構體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式或其可藥用的鹽，或根據請求項33所述的藥物組合物，在製備用於調節受試者體內的KRAS蛋白泛素化和降解的藥物中的用途。
  36. 根據請求項1-33中任一項所述的化合物，或其互變異構體、外消旋體、對映異構體、非對映異構體、或其混合物形式或其可藥用的鹽，或根據請求項33所述的藥物組合物，在製備用於治療和/或預防由KRAS蛋白介導的或依賴性的病症的藥物中的用途，其中由KRAS蛋白介導的疾病優選為腫瘤。
  37. 根據請求項36所述的用途，其特徵在於，該疾病選自乳腺癌、多發性骨髓瘤、膀胱癌、子宮內膜癌、胃癌、宮頸癌、橫紋肌肉瘤、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、多形性肺癌、卵巢癌、食管癌、黑色素瘤、結腸直腸癌、肝細胞瘤、頭頸部腫瘤、肝膽管細胞癌、骨髓增生異常綜合征、惡性膠質瘤、前列腺癌、甲狀腺癌、徐旺氏細胞瘤、肺鱗狀細胞癌、苔蘚樣角化病、滑膜肉瘤、皮膚癌、胰腺癌、睾丸癌或脂肪肉瘤。
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