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TW202426496A - 特異性識別cd40的抗體及其應用 - Google Patents

特異性識別cd40的抗體及其應用 Download PDF

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TW202426496A
TW202426496A TW111150502A TW111150502A TW202426496A TW 202426496 A TW202426496 A TW 202426496A TW 111150502 A TW111150502 A TW 111150502A TW 111150502 A TW111150502 A TW 111150502A TW 202426496 A TW202426496 A TW 202426496A
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張超
於德彬
李平
晏麗
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大陸商舒泰神（北京）生物製藥股份有限公司
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Abstract

本發明關於特異性識別CD40的抗體或抗原結合片段，及其製備方法和用途。

Description

特異性識別CD40的抗體及其應用
電子序列表的內容藉由整體引用併入本文。
本發明關於特異性識別CD40的抗體或抗原結合片段，及其製備方法和用途。
CD40是腫瘤壞死因子受體（TNFR）超家族的共刺激成員之一（Croft, Michael et al. Nature reviews. Drug discoveryvol. 12,2 (2013): 147-68）。CD40的功能最早在人B淋巴細胞中被鑒定，其在B淋巴細胞中組成性表達，並且CD40訊號促進B細胞的活化和增殖（Clark, E A, and J A Ledbetter. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of Americavol. 83,12 (1986): 4494-8）。已知CD40可在其他造血細胞（例如單核細胞和樹突狀細胞（DC））上表達，從而促進細胞存活和細胞因子產生（Stout, R D, and J Suttles. Immunology todayvol. 17,10 (1996): 487-92），並且還可以發出訊號以誘導表達CD40L的CD4 +T細胞的活化、增殖和細胞因子的產生（Grewal, I S, and R A Flavell. Immunology todayvol. 17,9 (1996): 410-4）。CD40訊號傳導也可對非造血細胞的細胞反應產生影響，包括內皮細胞，上皮細胞，纖維母細胞和神經元細胞（Hollenbaugh, D et al. The Journal of experimental medicinevol. 182,1 (1995): 33-40; Karmann, K et al. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of Americavol. 92,10 (1995): 4342-6; and Tan, Jun et al. The EMBO journalvol. 21,4 (2002): 643-52）。
CD40L最早是在活化的CD4 +T細胞表面被鑒定的(Hollenbaugh, D et al. The EMBO journalvol. 11,12 (1992): 4313-21)，並且B細胞和T細胞之間的CD40-CD40L相互作用顯示出其在生發中心（GC）回應和回應於T依賴性抗原的同種型類別轉換中至關重要（Kawabe, T et al. Immunityvol. 1,3 (1994): 167-78）。此外，已證明CD40L可在多種細胞中表達，包括肥大細胞、嗜鹼性粒細胞、B細胞、自然殺傷（NK）細胞、巨噬細胞、巨核細胞和血小板，這突顯了CD40途徑在細胞生物學中的廣泛作用 （Schönbeck, U, and P Libby. Cellular and molecular life sciences : CMLSvol. 58,1 (2001): 4-43; and van Kooten, C, and J Banchereau. Journal of leukocyte biologyvol. 67,1 (2000): 2-17） 。
在許多動物模型中，已經證明CD40L / CD40相互作用與許多疾病有關，包括系統性紅斑狼瘡（Davidson, Anne et al. Annals of the New York Academy of Sciencesvol. 987 (2003): 188-98）、實驗性變應性腦脊髓炎（Toubi, Elias, and Yehuda Shoenfeld. Autoimmunityvol. 37,6-7 (2004): 457-64）、膠原蛋白誘發的關節炎（Durie, F H et al. Science (New York, N.Y.)vol. 261,5126 (1993): 1328-30）、免疫排斥（Goldwater, R et al. American journal of transplantationvol. 13,4 (2013): 1040-1046）、動脈粥樣硬化介導的心血管疾病（Jansen, Matthijs F et al. Basic research in cardiologyvol. 111,4 (2016): 38）、乾燥症候群（Okimura, K et al. American journal of transplantationvol. 14,6 (2014): 1290-9）、系統性硬化症（Boleto, Gonçalo et al. Frontiers in immunologyvol. 9 2998. 18 Dec. 2018）、免疫性血小板減少性紫癜（Kuwana, Masataka et al. Bloodvol. 103,4 (2004): 1229-36）、炎性腸病（Senhaji, Nezha et al. Frontiers in immunologyvol. 6 529. 16 Oct. 2015）、糖尿病（Balasa, B et al. Journal of immunology (Baltimore, Md. : 1950)vol. 159,9 (1997): 4620-7）、RA（Gotoh, Haruhiko et al. The Journal of rheumatologyvol. 31,8 (2004): 1506-12）和癌症（Li, Rui et al. Molecular biology reportsvol. 39,9 (2012): 8741-7; and Li, Rui et al. Immunology lettersvol. 131,2 (2010): 120-5）。
因此，中和CD40與CD40L的結合，可成為治療CD40 / CD40L途徑介導的疾病和病症的方法。專利申請WO200563981A1中揭露了抗人CD40的抗體 ASKP1240（在本發明實施例部分作為對照抗體）；WO201265950A1中揭露了抗人CD40的抗體CFZ533（在本發明實施例部分作為對照抗體）。
本文提及的所有出版物、專利、專利申請和已公開的專利申請中揭露的內容，以引用方式全部併入本文中。
在一些實施例中，如上所述任一種分離的抗CD40抗體，所述分離的抗CD40抗體包含：重鏈可變結構域（V H），所述V H包含：重鏈互補決定區（HC-CDR）1，其包含GYX 1VN（ SEQ ID NO: 81），其中X 1為L、T或V；HC-CDR2，其包含X 1IX 2PX 3X 4GX 5TX 6YNQKFKG（ SEQ ID NO: 82），其中X 1為L或M，X 2為A、N或V，X 3為E、K、L、M、R、S、T或Y，X 4為H、N、S或T，X 5為G或R，X 6為A、S、T或W；和HC-CDR3，其包含SX 1X 2X 3X 4PYAX 5DY（SEQ ID NO: 83），其中X 1為G、I、L、M、P、R、S或Y，X 2為W或Y，X 3為S或V，X 4為D、K、L、N、R、T或V，X 5為A、G、M、N、Q或S；以及輕鏈可變結構域（V L），所述V L包含：輕鏈互補決定區（LC-CDR）1，其包含KASQNV HTX 1VA（ SEQ ID NO: 84），其中X 1為A、H、N或R；LC-CDR2，其包含LX 1SDRRT（ SEQ ID NO: 85），其中X 1為A或R；和LC-CDR3，其包含LQX 1WX 2X 3PLT（ SEQ ID NO: 86） ，其中X 1為A或H，X 2為N、S或T，X 3為A、Q、R、S或Y。
在一些實施例中，提供一種分離的抗CD40抗體，其包含：V H，所述V H包含：HC-CDR1，其包含SEQ ID NOs: 1-3中任一所示的胺基酸序列或其變體，所述變體包含至多約3個胺基酸的取代；HC-CDR2，其包含SEQ ID NOs: 9-26中任一所示的胺基酸序列或其變體，所述變體包含至多約3個胺基酸的取代；和HC-CDR3，其包含SEQ ID NOs: 32-52中任一所示的胺基酸序列或其變體，所述變體包含至多約3個胺基酸的取代；以及V L，所述V L包含：LC-CDR1，其包含SEQ ID NOs: 58-61中任一所示的胺基酸序列或其變體，所述變體包含至多約3個胺基酸的取代；LC-CDR2，其包含SEQ ID NOs: 65-66中任一所示的胺基酸序列或其變體，所述變體包含至多約3個胺基酸的取代；和LC-CDR3，其包含SEQ ID NOs: 70-77中任一所示的胺基酸序列或其變體，所述變體包含至多約3個胺基酸的取代。
在一些實施例中，提供一種分離的抗CD40抗體，其包含：V H，所述V H包含如SEQ ID NOs: 87-119中任一胺基酸序列所示的V H包含的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3，以及V L，所述V L包含如SEQ ID NOs: 126-138中任一胺基酸序列所示的V L包含的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些實施例中，提供一種分離的抗CD40抗體，其包含：(i) V H，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 87所示的V H包含的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V L，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 126所示的V L包含的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3；(ii) V H，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 88所示的V H包含的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V L，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 127所示的V L包含的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3；(iii) V H，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 89所示的V H包含的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V L，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 128所示的V L包含的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3；(iv) V H，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 94所示的V H包含的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V L，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 128所示的V L包含的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3；(v) V H，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 96所示的V H包含的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V L，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 132所示的V L包含的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3；(vi) V H，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 101所示的V H包含的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V L，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 128所示的V L包含的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3；(vii) V H，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 110所示的V H包含的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V L，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 128所示的V L包含的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3；(viii) V H，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 114所示的V H包含的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V L，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 128所示的V L包含的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3；(ix) V H，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 115所示的V H包含的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V L，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 129所示的V L包含的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3；或(x) V H，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 117所示的V H包含的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V L，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 129所示的V L包含的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些實施例中，提供一種分離的抗CD40抗體，包含：(i) V H，所述V H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 9，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 32，或者所述V H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及V L，所述V L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 58，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 65，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 70，或者所述V L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；(ii) V H，所述V H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 10，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 32，或者所述V H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及V L，所述V L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 59，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 65，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 70，或者所述V L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；(iii) V H，所述V H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 13，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 34，或者所述V H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及V L，所述V L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 59，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 65，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 70，或者所述V L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；(iv) V H，所述V H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 15，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 37，或者所述V H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及V L，所述V L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 59，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 65，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 73，或者所述V L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；(v) V H，所述V H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 20，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 42，或者所述V H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及V L，所述V L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 59，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 65，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 70，或者所述V L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；(vi)V H，所述V H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 14，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 43，或者所述V H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及V L，所述V L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 59，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 65，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 70，或者所述V L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；(vii)V H，所述V H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 15，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 51，或者所述V H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及V L，所述V L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 59，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 65，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 70，或者所述V L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；(viii)V H，所述V H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 11，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 48，或者所述V H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及V L，所述V L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 59，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 65，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 71，或者所述V L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；或(ix)V H，所述V H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 18，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 47，或者所述V H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及V L，所述V L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 59，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 65，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 71，或者所述V L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代。
在一些實施例中，如上所述任一種分離的抗CD40抗體，所述分離的抗CD40抗體包含：V H，其包含SEQ ID NOs: 87-119中任一所示的胺基酸序列或其變體，所述變體與SEQ ID NOs: 87-119中任一所示的胺基酸序列具有至少約90%序列同一性；以及V L，其包含SEQ ID NOs: 126-138中任一所示的胺基酸序列或其變體，所述變體與SEQ ID NOs: 126-138中任一所示的胺基酸序列具有至少約90%序列同一性。
在一些實施例中，提供一種分離的抗CD40抗體包含：(i)V H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 87或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 87具有至少約90%序列同一性；以及V L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 126或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 126具有至少約90%序列同一性；(ii)V H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 88或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 88具有至少約90%序列同一性；以及V L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 127或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 127具有至少約90%序列同一性；(iii)V H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 89或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 89具有至少約90%序列同一性；以及V L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 128或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 128具有至少約90%序列同一性；(iv)V H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 94或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 94具有至少約90%序列同一性；以及V L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 128或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 128具有至少約90%序列同一性；(v)V H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 96或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 96具有至少約90%序列同一性；以及V L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 132或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 132具有至少約90%序列同一性；(vi)V H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 101或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 101具有至少約90%序列同一性；以及V L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 128或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 128具有至少約90%序列同一性；(vii)V H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 110或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 110具有至少約90%序列同一性；以及V L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 128或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 128具有至少約90%序列同一性；(viii)V H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 114或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 114具有至少約90%序列同一性；以及V L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 128或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 128具有至少約90%序列同一性；(ix)V H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 115或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 115具有至少約90%序列同一性；以及V L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 129或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 129具有至少約90%序列同一性；或(x)V H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 117或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 117具有至少約90%序列同一性；以及V L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 129或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 129具有至少約90%序列同一性。
在一些實施例中，提供一種分離的抗CD40抗體，其包含：V H，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 120所示的V H包含的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V L，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 139所示的V L包含的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些實施例中，提供一種分離的抗CD40抗體，其包含：V H，所述V H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 4，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 27，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 53，或者所述V H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及V L，所述V L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 62，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 67，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 78，或者所述V L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代。
在一些實施例中，如上所述任一種分離的抗CD40抗體，所述分離的抗CD40抗體包含：V H，其包含SEQ ID NO: 120所示的胺基酸序列或其變體，所述變體與SEQ ID NO: 120所示的胺基酸序列具有至少約90%序列同一性；以及V L，其包含SEQ ID NO: 139所示的胺基酸序列或其變體，所述變體與SEQ ID NO: 139所示的胺基酸序列具有至少約90%序列同一性。
在一些實施例中，提供一種分離的抗CD40抗體，其包含：V H，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 121所示的V H包含的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V L，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 140所示的V L包含的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些實施例中，提供一種分離的抗CD40抗體，其包含：V H，所述V H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 5，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 27，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 54，或者所述V H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及V L，所述V L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 62，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 67，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 78，或者所述V L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代。
在一些實施例中，如上所述任一種分離的抗CD40抗體，其包含：V H，其包含SEQ ID NO: 121所示的胺基酸序列或其變體，所述變體與SEQ ID NO: 121所示的胺基酸序列具有至少約90%序列同一性；以及V L，其包含SEQ ID NO: 140所示的胺基酸序列或其變體，所述變體與SEQ ID NO: 140所示的胺基酸序列具有至少約90%序列同一性。
在一些實施例中，提供一種分離的抗CD40抗體，其包含：V H，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 122所示的V H包含的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V L，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 141所示的V L包含的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些實施例中，提供一種分離的抗CD40抗體，其包含：V H，所述V H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 6，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 28，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 55，或者所述V H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及V L，所述V L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 63，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 68，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 79，或者所述V L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代。
在一些實施例中，如上所述任一種分離的抗CD40抗體，其包含：V H，其包含SEQ ID NO: 122所示的胺基酸序列或其變體，所述變體與SEQ ID NO: 122所示的胺基酸序列具有至少約90%序列同一性；以及V L，其包含SEQ ID NO: 141所示的胺基酸序列或其變體，所述變體與SEQ ID NO: 141所示的胺基酸序列具有至少約90%序列同一性。
在一些實施例中，提供一種分離的抗CD40抗體，其包含：V H，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 123所示的V H包含的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V L，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 142所示的V L包含的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些實施例中，提供一種分離的抗CD40抗體，其包含：V H，所述V H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 7，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 29，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 56，或者所述V H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及V L，所述V L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 64，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 69，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 80，或者所述V L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代。
在一些實施例中，如上所述任一種分離的抗CD40抗體，其包含：V H，其包含SEQ ID NO: 123所示的胺基酸序列或其變體，所述變體與SEQ ID NO: 123所示的胺基酸序列具有至少約90%序列同一性；以及V L，其包含SEQ ID NO: 142所示的胺基酸序列或其變體，所述變體與SEQ ID NO: 142所示的胺基酸序列具有至少約90%序列同一性。
在一些實施例中，提供一種分離的抗CD40抗體，其包含：V H，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 124所示的V H包含的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V L，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 143所示的V L包含的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些實施例中，提供一種分離的抗CD40抗體，其包含：V H，所述V H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 8，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 30，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 57，或者所述V H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及V L，所述V L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 62，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 67，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 80，或者所述V L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代。
在一些實施例中，如上所述任一種分離的抗CD40抗體，其包含：V H，其包含SEQ ID NO: 124所示的胺基酸序列或其變體，所述變體與SEQ ID NO: 124所示的胺基酸序列具有至少約90%序列同一性；以及V L，其包含SEQ ID NO: 143所示的胺基酸序列或其變體，所述變體與SEQ ID NO: 143所示的胺基酸序列具有至少約90%序列同一性。
在一些實施例中，提供一種分離的抗CD40抗體，其包含： V H，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 125所示的V H包含的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V L，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 144所示的V L包含的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些實施例中，提供一種分離的抗CD40抗體，其包含： V H，所述V H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 4，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 31，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 53，或者所述V H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及V L，所述V L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 62，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 68，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 79，或者所述V L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代。
在一些實施例中，如上所述任一種分離的抗CD40抗體，其包含：V H，其包含SEQ ID NO: 125所示的胺基酸序列或其變體，所述變體與SEQ ID NO: 125所示的胺基酸序列具有至少約90%序列同一性；以及V L，其包含SEQ ID NO: 144所示的胺基酸序列或其變體，所述變體與SEQ ID NO: 144所示的胺基酸序列具有至少約90%序列同一性。
在一些實施例中，分離的抗CD40抗體與人CD40的結合的Kd值為0.1pM至1nM。
在一些實施例中，提供一種分離的抗CD40抗體，其與上述任一種分離的抗CD40抗體競爭與CD40的特異性結合。在一些實施例中，提供一種分離的抗CD40抗體，其與上述任一種分離的抗CD40抗體特異性地結合相同的表位。
在一些實施例中，如上所述任一種分離的抗CD40抗體，所述分離的抗CD40抗體包含Fc片段。在一些實施例中，所述分離的抗CD40抗體是全長的IgG抗體。在一些實施例中，所述分離的抗CD40抗體是全長的IgG1、IgG2、IgG3 或IgG4抗體。在一些實施例中，所述分離的抗CD40抗體是嵌合的、全人的或人源化的抗體。在一些實施例中，所述分離的抗CD40抗體是抗原結合片段，所述抗原結合片段選自Fab、Fab’、F(ab)’ 2、Fab’-SH、單鏈抗體（scFv）、Fv片段、dAb、Fd、奈米抗體（nanobody）、雙鏈抗體（diabody）和線性抗體。
在一些實施例中，提供一種分離的核酸分子，所述核酸分子編碼如上所述任一種抗CD40抗體。在一些實施例中，提供一種載體，所述載體包含如上所述任一種核酸分子。在一些實施例中，提供一種宿主細胞，所述宿主細胞包含如上所述任一種抗CD40抗體、如上所述任一種核酸分子或如上所述任一種載體。在一些實施例中，提供一種製備抗CD40抗體的方法，其包含：a) 在能有效表達抗CD40抗體的條件下培養上述任一種宿主細胞；和 b) 從所述宿主細胞中獲得所表達的抗CD40抗體。
在一些實施例中，提供一種治療所需個體疾病或病症的方法，包括向所述個體施用有效量的如上所述的任一種抗CD40抗體。在一些實施例中，提供如上所述的任一種抗CD40抗體在製備用於治療所需個體疾病或病症的藥物組合物中的用途。在一些實施例中，提供如上所述的任一種抗CD40抗體或包含抗CD40抗體的藥物組合物在製備用於治療疾病或病症的藥物中的用途。在一些實施例中，所述疾病或病症與CD40訊號通路有關，包括自身免疫性疾病和/或炎性病症和/或癌症和/或移植相關疾病或病症。在一些實施例中，所述疾病或病症選自例如，系統性紅斑狼瘡（SLE），盤狀紅斑狼瘡，狼瘡性腎炎，炎性關節炎：包括但不限於青少年關節炎、類風濕性關節炎、銀屑病關節炎、萊特爾氏症候群（Reiter's syndrome）、僵直性脊柱炎和痛風性關節炎，器官或組織移植排斥：超急性、急性或慢性排斥反應和/或移植物抗宿主病，多發性硬化症，高IgE症候群，結節性多發炎，原發性膽汁性肝硬化，炎症性腸病，克羅恩病，腹腔疾病（麩質敏感性腸病），自身免疫性肝炎，惡性貧血，自身免疫性溶血性貧血，硬皮病，重症肌無力，特發性血小板減少性紫癜，自身免疫性甲狀腺炎，格雷氏病（Grave′s disease），橋本氏甲狀腺炎（Hasimoto′s thyroiditis），免疫複合性疾病，慢性疲勞免疫功能障礙症候群（CFIDS），多發性肌炎，皮肌炎，冷球蛋白血症，血栓溶解，心肌症，尋常天皰瘡，肺間質纖維化，I型和II型糖尿病，1、2、3和4型遲發型超敏反應，過敏性或過敏性疾病，對治療性蛋白質的不必要/意外的免疫反應（例如血友病中的因子VII），哮喘，Rich-Strauss症候群（過敏性肉芽腫病），特應性皮炎，過敏性和刺激性接觸性皮炎，蕁麻疹，IgE介導的過敏，動脈粥樣硬化，血管炎，特發性炎症性肌病，溶血性疾病，阿爾茨海默氏病，慢性炎症性脫髓鞘性多發性神經病，乾燥症候群（Sjogren's disease），銀屑病，化膿性汗腺炎，化膿性尿道炎，結節病，潰瘍性結腸炎，腫瘤：包括但不限於非霍奇金淋巴瘤、慢性淋巴細胞性白血病、多發性骨髓瘤、B細胞淋巴瘤、高/中/低級B細胞淋巴瘤、急性B細胞淋巴母細胞性白血病、粒細胞性白血病和霍奇金氏病疾病，腎炎，呼吸窘迫症候群，附睾炎，腎小球腎炎和甲狀腺功能亢進症。
同時還提供包含如上所述的任一種抗CD40抗體的藥物組合物、試劑盒以及生產製品。
本發明一方面提供抗CD40抗體分子。藉由雜交瘤技術、scFv噬菌體庫篩選、人源化技術、親和力成熟以及適當設計的生物化學及生物學實驗的組合，已經鑒定出能夠結合人CD40並抑制人CD40與其受體作用的高效抗體分子。本文給出的結果表明，與已知抗CD40抗體ASKP1240相比，本發明中的抗體以高親和力結合人和/或猴CD40，並且令人驚訝地是，在各種生物學實驗中證明了本發明中的抗體甚至比ASKP1240更有效。
本發明所提供的抗CD40抗體包括，例如，全長抗CD40抗體、抗CD40單鏈抗體（scFvs）、抗CD40 Fc融合蛋白、多特異性（如雙特異性）抗CD40抗體、抗CD40免疫偶聯物以及諸如此類的。
一方面，本發明提供抗CD40抗體，其中抗CD40抗體包含：重鏈可變結構域（V H），所述V H包含：重鏈互補決定區（HC-CDR）1，其包含GYX 1VN（ SEQ ID NO: 81），其中X 1為L、T或V；HC-CDR2，其包含X 1IX 2PX 3X 4GX 5TX 6YNQKFKG（ SEQ ID NO: 82），其中X 1為L或M，X 2為A、N或V，X 3為E、K、L、M、R、S、T或Y，X 4為H、N、S或T，X 5為G或R，X 6為A、S、T或W；和HC-CDR3，其包含SX 1X 2X 3X 4PYAX 5DY（SEQ ID NO: 83），其中X 1為G、I、L、M、P、R、S或Y，X 2為W或Y，X 3為S或V，X 4為D、K、L、N、R、T或V，X 5為A、G、M、N、Q或S；以及輕鏈可變結構域（V L），所述V L包含：輕鏈互補決定區（LC-CDR）1，其包含KASQNV HTX 1VA（ SEQ ID NO: 84），其中X 1為A、H、N或R；LC-CDR2，其包含LX 1SDRRT（ SEQ ID NO: 85），其中X 1為A或R；和LC-CDR3，其包含LQX 1WX 2X 3PLT（ SEQ ID NO: 86） ，其中X 1為A或H，X 2為N、S或T，X 3為A、Q、R、S或Y。
一方面，本發明提供抗CD40抗體，其中抗CD40抗體包含：重鏈可變結構域（V H），所述V H包含：重鏈互補決定區（HC-CDR）1，其包含DAYMH （SEQ ID NO: 4）； HC-CDR2，其包含RIDPANGNTKYDPKFQG （SEQ ID NO: 27）；和HC-CDR3，其包含NYYGSRYPFAY （SEQ ID NO: 53）；以及輕鏈可變結構域（V L），所述V L包含：LC-CDR1，其包含SASSSVSYMH （SEQ ID NO: 62）； LC-CDR2，其包含STSNLAS （SEQ ID NO: 67）；和LC-CDR3，其包含QQGSSYPLT （SEQ ID NO: 78）。
一方面，本發明提供抗CD40抗體，其中抗CD40抗體包含：重鏈可變結構域（V H） 重鏈互補決定區（HC-CDR）1，所述V H包含：，其包含DSYMH （SEQ ID NO: 5）； HC-CDR2，其包含RIDPANGNTKYDPKFQG （SEQ ID NO: 27）；和HC-CDR3，其包含NYYGAAYPFAY （SEQ ID NO: 54）；以及輕鏈可變結構域（V L），所述V L包含：LC-CDR1，其包含SASSSVSYMH （SEQ ID NO: 62）； LC-CDR2，其包含STSNLAS （SEQ ID NO: 67）；和LC-CDR3，其包含QQGSSYPLT （SEQ ID NO: 78）。
一方面，本發明提供抗CD40抗體，其中抗CD40抗體包含：重鏈可變結構域（V H），所述V H包含：重鏈互補決定區（HC-CDR）1，其包含DSYIH （SEQ ID NO: 6）；HC-CDR2，其包含RIDPTNGNTNFDPKFRG （SEQ ID NO: 28）；和HC-CDR3，其包含NYYGSRYPFSY （SEQ ID NO: 55）；以及輕鏈可變結構域（V L），所述V L包含：LC-CDR1，其包含SGSSSVSYMH （SEQ ID NO: 63）； LC-CDR2，其包含FTSNLAS （SEQ ID NO: 68）；和LC-CDR3，其包含QQGSTYPLT （SEQ ID NO: 79）。
一方面，本發明提供抗CD40抗體，其中抗CD40抗體包含：重鏈可變結構域（V H），所述V H包含：重鏈互補決定區（HC-CDR）1，其包含DHGMH （SEQ ID NO: 7）； HC-CDR2，其包含VISTSYGVATYNQKFKG （SEQ ID NO: 29）；和HC-CDR3，其包含RDSKSPFDY （SEQ ID NO: 56）；以及輕鏈可變結構域（V L），所述V L包含：LC-CDR1，其包含SASSSISSNYLH （SEQ ID NO: 64）； LC-CDR2，其包含RTSNLAS （SEQ ID NO: 69）；和LC-CDR3，其包含HQYHRSPLT （SEQ ID NO: 80）。
一方面，本發明提供抗CD40抗體，其中抗CD40抗體包含：重鏈可變結構域（V H），所述V H包含：重鏈互補決定區（HC-CDR）1，其包含DHAIH （SEQ ID NO: 8）； HC-CDR2，其包含AISTNYGAATYNQKFKG （SEQ ID NO: 30）；和HC-CDR3，其包含RGSHGDWFAY （SEQ ID NO: 57）；以及輕鏈可變結構域（V L），所述V L包含：LC-CDR1，其包含SASSSVSYMH （SEQ ID NO: 62）； LC-CDR2，其包含STSNLAS （SEQ ID NO: 67）；和LC-CDR3，其包含HQYHRSPLT （SEQ ID NO: 80）。
另一方面，本發明提供抗CD40抗體，其中抗CD40抗體包含：重鏈可變結構域（V H），所述V H包含：重鏈互補決定區（HC-CDR）1，其包含DAYMH （SEQ ID NO: 4）； HC-CDR2，其包含RIDPANGYTKSDPKFQG （SEQ ID NO: 31）；和HC-CDR3，其包含NYYGSRYPFAY （SEQ ID NO: 53）；以及輕鏈可變結構域（V L），所述V L包含：LC-CDR1，其包含SASSSVSYMH （SEQ ID NO: 62）；LC-CDR2，其包含FTSNLAS （SEQ ID NO: 68）；和LC-CDR3，其包含QQGSTYPLT （SEQ ID NO: 79）。
同時還提供編碼抗CD40抗體的核酸，包含抗CD40抗體的組合物，以及製備和使用抗CD40抗體的方法。
定義
如本文所述，“治療（treatment）”或“治療（treating）是一種獲得有益的或期望的結果的方法，包括臨床結果。鑒於本發明的目的，所述有益的或期望的臨床結果，包括但不限於以下一種或多種：緩解由疾病引起的一種或多種症狀，減輕疾病程度，穩定疾病（例如，預防或延遲疾病惡化），預防或延遲疾病的擴散（例如，轉移），預防或延遲疾病復發，延遲或減緩疾病進展，改善疾病狀態，緩解疾病（部分或全部），減少治療疾病所需的一種或多種其他藥物的劑量，延遲疾病進展，改善或提高生活品質，增加體重，和/或延長生存期。同時，“治療”還包括疾病病理結果的減少（例如，對癌症而言，腫瘤體積）。本發明的方法考慮了這些治療的任何一個或多個方面。
術語“抗體”包括全長抗體及其抗原結合片段。全長抗體包括兩條重鏈和兩條輕鏈。輕鏈和重鏈的可變區負責抗原的結合。兩條鏈中的可變區通常包括3個高變的環，被稱為互補決定區（CDRs）（輕鏈（LC）CDRs包括LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3，重鏈（HC）CDRs包括HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3）。本文所揭露的抗體或抗原結合片段的CDR邊界可以藉由Kabat，Chothia或Al-Lazikani慣例來定義或識別（Al-Lazikani 1997; Chothia 1985; Chothia 1987; Chothia 1989; Kabat 1987; Kabat 1991）。重鏈或輕鏈的3個CDR區插入到被稱為框架區（FRs）的側翼區段之間，所述框架區比CDR區具有更高的保守性，並形成支撐高變環的支架。重鏈和輕鏈的恆定區並不參與抗原結合，但展示出多種效應功能。抗體是基於它們重鏈恆定區的胺基酸序列進行分類的。抗體的五種主要類別或同種型是IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，其特徵在於分別具有α、δ、ε、γ和μ型重鏈。幾種主要的抗體類別被分為亞類，如IgG1（γ1重鏈）、IgG2（γ2重鏈）、IgG3（γ3重鏈）、IgG4（γ4重鏈）、IgA1（α1重鏈）或IgA2（α2重鏈）。
如本文所述，術語“抗原結合片段”包括抗體片段，例如，雙鏈抗體（diabody）、Fab、Fab’、F(ab’) 2、Fv片段、二硫鍵穩定的Fv片段（dsFv）、(dsFv) 2、雙特異性dsFv（dsFv-dsFv’）、二硫鍵穩定的雙鏈抗體（ds雙鏈抗體）、單鏈Fv （scFv）、scFv二聚體（二價雙鏈抗體），由包含一個或多個CDRs的抗體片段組成的多特異性抗體、單域抗體、奈米抗體（nanobody）、域抗體、二價域抗體或者能夠與抗原結合但不包含完整抗體結構的任何其他抗體片段。抗原結合片段能夠與親本抗體或親本抗體片段（如親本scFv）結合相同的抗原。抗原結合片段還包括包含上述抗體片段的融合蛋白。在一些實施例中，抗原結合片段可能包括來自特定人抗體的一個或多個CDRs，該CDRs被移植到來自一個或多個不同人抗體的框架區。
如本文所述，術語“表位”是指抗體或抗體部分結合的抗原上特定的原子或胺基酸組。如果兩種抗體或抗體部分表現出與某抗原競爭性結合，則它們可能結合抗原上的相同表位。
如本文所用，當第一抗體在等莫耳濃度下抑制第二抗體與CD40靶標結合至少50%（例如至少55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%或99%）時，第一抗體與第二抗體“競爭”結合CD40靶標，反之亦然。PCT出版物WO 03/48731描述了基於交叉競爭的高通量抗體“表位歸類”方法。
如本文所述，術語“特異性地結合”、“特異性地識別”或“對..來說是特異性的”是指可測量的和可再現的相互作用，例如抗體與靶標的結合可以確定在異質分子群，包括生物分子中存在該靶標。例如，抗體能夠特異性地識別某靶標（可以是表位）是指，與其它靶標結合相比，該抗體與該靶標的結合具有更高的親和力，親合力，更容易和/或更持久。在一些實施例中，特異性地識別抗原的抗體與抗原的一個或多個抗原決定簇反應，其結合親和力是其與其它靶標結合親和力的至少10倍。
如本文所述，一種“分離的”抗CD40抗體是指一種抗CD40抗體，其（1）與天然存在的蛋白無關，（2）不含相同來源的其他蛋白，（3）由不同種屬的細胞所表達，或（4）自然界中不存在。
如本文所述，術語“分離的核酸”，是指基因組、cDNA或合成來源的核酸或其組合。根據其來源，所述“分離的核酸”是指（1）與自然界中發現的“分離的核酸”中的全部或部分多核苷酸無關，（2）可與自然狀態下不與之相連的多核苷酸可操作性地連接，或（3）在自然界中不作為較長序列的一部分而存在。
如本文所用，術語“CDR”或“互補決定區”意指重鏈和輕鏈多肽的可變結構域內發現的非連續抗原結合位點。在文獻Kabat et al., J. Biol. Chem. 252:6609-6616（1977）; Kabat et al., U.S. Dept. of Health and Human Services, “Sequences of proteins of immunological interest”（1991）; Chothia et al., J. Mol. Biol. 196:901-917（1987）; Al-Lazikani B. et al., J. Mol. Biol., 273: 927-948（1997）; MacCallum et al., J. Mol. Biol. 262:732-745（1996）; Abhinandan and Martin, Mol. Immunol., 45: 3832-3839（2008）; Lefranc M.P. et al., Dev. Comp. Immunol., 27: 55-77（2003）; 和 Honegger and Plückthun, J. Mol. Biol., 309:657-670（2001）中已經描述這些特殊的區域，其中當彼此之間互相比較時，這些定義包括胺基酸殘基的重合或子集。然而，採用任何一種定義方式來指示抗體或移植抗體或其變體的CDR，均包括在本文所定義和使用的術語範圍之內。表1中列了由上述引用的各篇參考文獻所定義的CDR所包括的胺基酸殘基的位置，以示比較。CDR預測的演算法和結合介面在本領域是已知的，包括，例如Abhinandan and Martin, Mol. Immunol., 45: 3832-3839（2008）; Ehrenmann F. et al., Nucleic Acids Res., 38: D301-D307（2010）; 和Adolf-Bryfogle J. et al., Nucleic Acids Res., 43: D432-D438（2015）中均有描述。本段中所引用的參考文獻的內容以其整體引用併入本文中，以用於本發明和可能包含在本文中的一個或多個請求項中。
表 1: CDR 定義
   Kabat 1 Chothia 2 MacCallum 3 IMGT 4 AHo 5
V HCDR1 31-35 26-32 30-35 27-38 25-40
V HCDR2 50-65 53-55 47-58 56-65 58-77
V HCDR3 95-102 96-101 93-101 105-117 109-137
V LCDR1 24-34 26-32 30-36 27-38 25-40
V LCDR2 50-56 50-52 46-55 56-65 58-77
V LCDR3 89-97 91-96 89-96 105-117 109-137
1胺基酸殘基編號參照上述Kabat et al.中的命名方法 2胺基酸殘基編號參照上述Chothia et al.中的命名方法 3胺基酸殘基編號參照上述MacCallum et al.中的命名方法 4胺基酸殘基編號參照上述Lefranc et al.中的命名方法 5胺基酸殘基編號參照上述Honegger and Plückthun中的命名方法
術語“嵌合抗體”是指，重鏈和/或輕鏈的一部分與來自特定種屬或屬於特定抗體種類或亞類的抗體中的相應序列一致或具有同源性，而這個（些）鏈的剩餘部分與來自另一種屬或屬於其它抗體種類或亞類的抗體中的相應序列一致或具有同源性的抗體，以及此類抗體的片段，只要其具有本發明中的生物學活性（見U.S. Patent No. 4,816,567; and Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855（1984））。
“Fv”是包含完整抗原識別及結合位點的最小抗體片段。該片段是由一個重鏈可變結構域和一個輕鏈可變結構域緊密非共價連接形成的二聚體。藉由這兩個域的折疊衍生出6個高變環（輕鏈和重鏈中各3個環），所述高變環為抗體提供了用於結合抗原的胺基酸殘基，並且賦予抗體與抗原結合的特異性。然而，即使單個可變結構域（或Fv片段的一半，其僅包含對抗原具有特異性的3個CDRs）也具有識別和結合抗原的能力，儘管其親和力低於完整的結合位點。
“單鏈Fv”，也可簡寫成“sFv”或“scFv”，是包含被連接成單一多肽鏈的V H和V L抗體域的抗體片段。在一些實施例中，scFv多肽進一步包括V H和V L域之間的連接多肽，該連接多肽使得scFv形成抗原結合的理想結構。關於scFv的概述，見 Pluckthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 （ 1994 ）。
術語“雙鏈抗體（diabodies）”是在V H和V L域之間採用短接頭（例如5～10個殘基），構建scFv片段（見上段內容）製備而成的一種小抗體片段，這樣就使得可變結構域在鏈間而不是鏈內進行配對，產生一個雙價片段，即具有兩個抗原結合位點的片段。雙特異性的雙鏈抗體是兩個“交叉”scFv片段的異二聚體，其中兩個抗體的V H和V L域位於不同的多肽鏈上。在EP 404,097; WO 93/11161; Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:6444-6448（1993）中全面描述了雙鏈抗體。
非人源（如齧齒類）抗體的“人源化”形式是嵌合抗體，其包括最少的來自非人源抗體的序列。大多數情況下，人源化抗體是人源免疫球蛋白（受體抗體），其中受體抗體的高變區（HVR）殘基被來自非人源種屬例如小鼠、大鼠、兔或非人類哺乳動物的且具有理想的抗體特異性，親和力和性能的高變區殘基所取代（供體抗體）。在某些情況下，人源免疫球蛋白框架區中的殘基被相應的非人源殘基所取代。另外，人源化抗體可以包括在受體抗體或供體抗體中均不存在的殘基。這些修飾能夠進一步改善抗體的性能。通常，人源化抗體會包含基本上所有，至少一個，通常兩個可變結構域，其中所有或基本上所有的高變環均與非人免疫球蛋白的高變環相對應，以及所有或基本上所有的框架區均是人免疫球蛋白序列。人源抗體任選地也還包括免疫球蛋白恆定區（Fc）的至少一部分，通常是人免疫球蛋白的恆定區。具體細節可以參考Jones et al., Nature321:522-525（1986）; Riechmann et al., Nature332:323-329（1988）; 和Presta, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596（1992）。
本文所鑒定的多肽和抗體序列的“胺基酸序列同一性百分比（%）”或“同源性”被定義：在認為保守性取代屬於序列同一性的一部分的情況下進行序列對比，候選序列與待比較多肽序列中相同胺基酸殘基所占的百分比。可以藉由本領域技術範圍內的多種比對方式來確定胺基酸序列同一性百分比，例如，使用如BLAST、BLAST-2、ALIGN、Megalign（DNASTAR）、或MUSCLE軟體等可公開獲得的電腦軟體。本領域技術人員可以確定用於測量比對的合適的參數，包括在所比較序列的全長上實現最大化比對所需的任何演算法。然而，為了本文的目的，胺基酸序列同一性百分比數值是使用序列比對電腦程式MUSCLE（Edgar, R.C., Nucleic Acids Research32(5):1792-1797, 2004; Edgar, R.C., BMC Bioinformatics5(1):113, 2004）生成的。
術語“Fc受體”或“FcR”用於描述結合抗體Fc區的受體。在一些實施例中，本發明所述的FcR是結合IgG抗體（一種γ受體）的FcR，包括FcγRI、FcγRII和FcγRIII亞類的受體，包括這些受體的等位基因變體和可變剪接形式。FcγRII受體包括FcγRIIA（“啟動受體”）和FcγRIIB（“抑制受體”），它們具有相似的胺基酸序列，主要在細胞質結構域有所不同。啟動受體FcγRIIA的胞質結構域中含有免疫受體酪胺酸活化基序（ITAM）。抑制受體FcγRIIB的胞質結構域中含有免疫受體酪胺酸抑制基序（ITIM）（見M. in Daëron, Annu. Rev. Immunol. 15:203-234（1997））。所述術語還包括同種異型，例如FcγRIIIA同種異型：FcγRIIIA-Phe158、FcγRIIIA-Val158、FcγRIIA-R131和/或FcγRIIA-H131。在Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol9:457-92（1991）和Capel et al., Immunomethods4:25-34 (1994); 以及de Haas et al., J. Lab. Clin. Med. 126:330-41（1995）中對FcRs進行了描述。本發明中術語FcR涵蓋其他類型的FcRs，包括將來鑒定的FcRs。術語FcR同時還包括新生兒受體FcRn，其負責向新生兒轉移母體IgGs（Guyer et al., J. Immunol. 117:587（1976）以及Kim et al., J. Immunol. 24:249（1994））。
術語“FcRn”指新生兒Fc受體（FcRn）。FcRn與主要組織相容性複合體（MHC）在結構上相似，由α鏈非共價結合到β2微球蛋白上組成。新生兒Fc受體FcRn的多種功能在Ghetie and Ward（2000） Annu. Rev. Immunol. 18, 739-766.中進行了綜述。FcRn在免疫球蛋白IgGs從母體向新生兒的被動轉運和調控血清IgG水平中起到重要作用。FcRn作為一種救助受體，可以在細胞內和細胞間以完整的形式結合和運輸胞吞化的IgG，並使它們免於經受默認的降解途徑。
人IgG Fc區的“CH1結構域”通常從118位胺基酸延伸到215位胺基酸（EU編號系統）。
“鉸鏈區”通常被定義為從人IgG1的216位Glu延伸到230位Pro（Burton, Molec. Immunol. 22:161-206（1985））。藉由將形成重鏈間二硫鍵的第一個和最後一個半胱胺酸殘基置於與IgG1相同位置後，可以使得其他IgG同種型的鉸鏈區與IgG1序列比對。
人IgG Fc區的“CH2結構域”通常從231位胺基酸延伸到340位胺基酸。CH2結構域的獨特之處在於，它不會與另一個區域緊密配對，而是在完整的天然IgG分子的兩個CH2結構域之間插入了兩條N端連接的支鏈糖鏈。據推測，糖類可能作為域與域間配對的替代，有助於保持CH2結構域穩定。Burton, Molec. Immunol. 22:161-206（1985）。
“CH3”結構域包括在Fc區內從C末端殘基延伸到CH2結構域（從341位胺基酸到抗體序列的C末端，通常為IgG的第446或447位胺基酸殘基）。
“功能性Fc片段”具有天然Fc區序列所具有的“效應功能”。示例性的“效應功能”包括C1q結合；補體依賴的細胞毒作用（CDC）；Fc受體結合；抗體依賴的細胞介導的細胞毒作用（ADCC）；吞噬作用；細胞表面受體的下調（如B細胞受體；BCR）等。這類效應功能通常需要Fc區與結合結構域（如抗體可變區）結合，並且可以使用本領域公知的多種實驗方法進行評估。
具有“改變的”FcR結合親和力或ADCC活性的IgG Fc變體的抗體，與親本多肽或包含天然Fc序列的多肽相比，其FcR結合活性和/或ADCC活性增強或減弱。表現出與FcR“結合增強”的Fc變體與親本多肽或包含天然IgG Fc序列的多肽相比，其與至少一種FcR具有更高的結合親和力（例如更低的表觀Kd或IC 50值）。在一些實施例中，與親本多肽相比，結合能力增強3倍，例如5、10、25、50、60、100、150、200，甚至高達500倍或結合力提高25%到1000%。表現出與FcR“結合降低”的Fc變體，與親本多肽相比，其與至少一種FcR具有更低的親和力（例如更高的表觀Kd或IC 50值）。與親本多肽相比，其結合能力下降40%或更多。
“抗體依賴的細胞介導的細胞毒作用”或“ADCC”是是一種細胞毒性形式，指分泌型的Ig與存在於某些細胞毒性細胞（例如自然殺傷細胞（NK）、中性粒細胞、和巨噬細胞）上的Fc受體（FcRs）結合，使這些細胞毒性效應細胞能夠特異性結合攜帶抗原的靶細胞，隨後使用細胞毒素殺死靶細胞。抗體“武裝”細胞毒性細胞並且是這種殺傷所必需的。介導ADCC的主要細胞類型中，NK細胞只表達FcγRIII，而單核細胞表達FcγRI、FcγRII和FcγRIII。在Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol9:457-92（1991）第464頁的Table 3中總結了在造血細胞上FcR的表達。評估目標分子的ADCC活性，可以進行體外ADCC實驗，在美國專利No.5,500,362或5,821,337中進行了描述。適用於此類實驗的效應細胞包括外周血單核細胞（PBMC）和自然殺傷性細胞（NK）。可選地，或者此外，目標分子的ADCC活性也可以在體內進行評估，例如在如Clynes et al. PNAS(USA) 95:652-656（1998）中所公開的動物模型中進行了描述。
包含Fc區變體的多肽與包含野生型IgG Fc多肽或親本多肽相比，在人體效應細胞存在下表現出“增強的ADCC活性”或能夠更有效的介導ADCC效應，所述包含Fc區變體的多肽在實驗時與包含野生型IgG Fc多肽（或親本多肽）數量上基本相同時，無論在體外或體內均能更有效的介導ADCC。通常採用本領域已知的任何體外ADCC實驗方法來鑒定此類變體，例如用於鑒定ADCC活性的實驗或方法，例如在動物模型中等。在一些實施例中，此類變體與野生型Fc（或親代多肽）相比，介導ADCC的效率提高5到100倍，例如25到50倍。
“補體依賴的細胞毒作用”或“CDC”是指在補體存在的情況下裂解靶細胞。經典的補體途徑的啟動是由補體系統第一組分（C1q）與結合同源抗原的抗體（具有適宜結構的亞類）相結合而啟動的。為了評估補體啟動，可以進行CDC實驗，如Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods202:163（1996）中所描述的。在美國專利No.6,194,551B1和WO99/51642中描述了具有改變的Fc區胺基酸序列並增加或降低的C1q結合能力的多肽變體。這些專利出版物的內容藉由引用明確地併入本文中。另見Idusogie et al. J. Immunol. 164: 4178-4184（2000）。
除非另有說明，一種“編碼胺基酸序列的核苷酸序列”包括相互之間互為簡併形式且編碼相同胺基酸序列的所有核苷酸序列。編碼蛋白質或RNA的核苷酸序列也可包括內含子，例如編碼蛋白質的核苷酸序列在某些形式中包含內含子。
術語“可操作性地連接”是指調控序列與異源核苷酸序列之間的功能性連接，從而使後者表達。例如，當第一個核苷酸序列與第二個核苷酸序列處於功能性關係時，第一個核苷酸序列與第二個核苷酸序列為可操作性地連接。例如，如果啟動子影響編碼序列的轉錄或表達，該啟動子與編碼序列為可操作性地連接。通常，可操作性連接的DNA序列是連續的，並且在必要時，可以在同一個閱讀框中連接兩個蛋白質編碼區。
“同源”是指兩個多肽之間或兩個核酸分子之間的序列相似性或序列同一性。如果兩個比較序列的同一位置為相同的鹼基或胺基酸單體亞基時，例如兩個DNA分子的同一位置均為腺嘌呤，則這兩個DNA分子在該位置是同源的。兩個序列間的同源百分比是指兩個序列中共有的匹配或同源位置的數量與位置總數之比再乘以100所得函數。例如，兩個序列中如果10個位置中有6個位置是相匹配或同源的，則這兩個序列的同源性為60%。舉例來說，DNA序列ATTGCC和TATGGC具有50％的同源性。通常來說，在比對兩個序列時，以得到最大同源性為目的來進行對比。
本文所公開的抗CD40抗體或組合物的“有效量”是指足以實現特定目的的量。“有效量”可以憑經驗和藉由已知的與所述目的相關的方法確定。
術語“治療有效量”是指是指本文所公開的抗CD40抗體或其組合物能夠有效治療個體的疾病或者症狀的用量。即足以減輕或改善疾病或其一種或多種症狀的嚴重程度和/或持續時間的量；預防疾病發展，引起病症消退，預防與疾病相關的一種或多種症狀的復發、發展、發作或進展，檢測疾病，或增強/改善另一療法（例如預防劑或治療劑）的預防或治療效果的量。
如本文所用的，“藥學上可接受的”或“藥理學上相容的”是指無生物學活性或者其它不期望性質的材料，例如該材料能夠加入到給予患者的藥物組合物中，而不會引起顯著的不良生物反應，或者，不與組合物中包含的任何其它組分以有害的方式相互作用。藥學上可接受的載體或賦形劑較佳滿足毒理學或製造檢測的所需標準和/或包含在美國食品和藥品管理局編制的非活性成分指南中。
本文中描述的本發明的實施例應理解為包含“由……組成”和/或“基本上由……組成”的實施例。
本文中提及“約”為一個數值或參數，包含（和描述）針對該值或參數本身的變體。例如，涉及“約X”的描述，包括“X”的描述。
如本文所用的，提及“不是（not）”一個數值或參數，通常表示並描述“除了（other than）”某一數值或參數之外。例如，該方法不能用於治療X型癌症，意味著該方法通常用於治療除X型癌症之外的其他類型的癌症。
除非上下文另有明確說明，本文和所述請求項中所採用的單數形式“一”，“一個”和“該”包括複數物件。
抗CD40抗體
一方面，本發明提供特異性結合CD40的抗CD40抗體。所述抗CD40抗體包括，但不限於，人源化抗體，嵌合抗體，小鼠抗體，人抗體，以及本文所述的包含重鏈和/或輕鏈CDRs的抗體分子。一方面，本發明提供與CD40結合的分離的抗體。預期的抗CD40抗體包括，例如，全長抗CD40抗體（如全長IgG1或IgG4），抗CD40單鏈抗體，抗CD40 Fc融合蛋白，多特異性（如雙特異性）抗CD40抗體，抗CD40免疫偶聯物，以及諸如此類的。在一些實施例中，抗CD40抗體是全長抗體（如全長IgG1或IgG4）或其抗原結合片段，其特異性結合CD40。在一些實施例中，抗CD40抗體是Fab、Fab’、F(ab)’ 2、Fab’-SH、單鏈Fv （scFv）、Fv片段、dAb、Fd、奈米抗體（nanobody）、雙鏈抗體（diabody）或線性抗體。在一些實施例中，特異性結合CD40的抗體是指抗體與CD40結合的親和力至少是與非靶標結合親和力的10倍以上（包括例如10、10 2、10 3、10 4、10 5、10 6、或10 7倍）。在一些實施例中，非靶標是指不是CD40的抗原。結合親和力可藉由本領域已知的方法來測定，如ELISA，螢光啟動細胞分選（FACS）分析或放射免疫沉澱分析（RIA）。Kd值可以藉由本領域已知的方法來測定，如表面電漿共振（SPR）技術或生物層干涉技術（BLI）。
儘管本文廣泛地討論了包含人序列的抗CD40抗體（例如，包含人CDR序列的人重鏈和輕鏈可變結構域），但同時也考慮了非人抗CD40抗體。在一些實施例中，非人抗CD40抗體包括本文所述的抗CD40抗體的人CDR序列和非人框架區序列，在一些實施例中，非人框架區序列包括任何的用於使用如本文所述的一種或多種人CDR序列產生重鏈和/或輕鏈可變結構域的序列，包括例如哺乳動物，例如小鼠、大鼠、兔子、豬、牛（例如，牛、公牛、水牛）、鹿、綿羊、山羊、雞、貓、狗、雪貂、靈長類（例如，小猿，獼猴）等。在一些實施例中，非人抗CD40抗體包括將一種或多種本文所述的人CDR序列移植到非人框架區中（例如，鼠或雞的框架區序列）所產生的抗CD40抗體。
示例性人CD40的完整胺基酸序列包含SEQ ID NO：149所示的胺基酸序列或由SEQ ID NO：149所示的胺基酸序列組成。
在一些實施例中，本文所述抗CD40抗體特異性識別人CD40中的表位。在一些實施例中，所述抗CD40抗體與除人之外其它物種的CD40發生交叉反應。在一些實施例中，所述抗CD40抗體對人CD40是完全特異性的，並且不與其它非人物種發生交叉反應。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體與CD40蛋白（或其片段）的至少一種等位基因變體交叉反應。在一些實施例中，等位基因變體與天然存在的CD40蛋白（或其片段）相比，具有至多30個（如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或30個）的胺基酸取代（例如保守取代）。在一些實施例中，所述抗CD40抗體不與CD40蛋白（或其片段）的任何等位基因變體發生交叉反應。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體與CD40蛋白的至少一種種間變體發生交叉反應。在一些實施例中，例如，CD40蛋白（或其片段）是人CD40，並且CD40蛋白（或其片段）的種間變體是食蟹猴中的變體。在一些實施例中，所述抗CD40抗體不與CD40蛋白的任何種間變體發生交叉反應。
在一些實施例中，如本文所述的任一抗CD40抗體，所述抗CD40抗體包括抗體重鏈恆定區和抗體輕鏈恆定區。在一些實施例中，所述抗CD40抗體包括IgG1型重鏈恆定區。在一些實施例中，所述抗CD40抗體包括IgG2型重鏈恆定區。在一些實施例中，所述抗CD40抗體包括IgG3型重鏈恆定區。在一些實施例中，所述抗CD40抗體包括IgG4型重鏈恆定區。在一些實施例中，所述重鏈恆定區包含（包括由…組成或基本上由…組成）胺基酸序列SEQ ID NO: 145。在一些實施例中，所述重鏈恆定區包含（包括由…組成或基本上由…組成）胺基酸序列SEQ ID NO: 146。在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含κ輕鏈恆定區。在一些實施例中，所述輕鏈恆定區包含（包括由…組成或基本上由…組成）胺基酸序列SEQ ID NO: 147。在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含λ輕鏈恆定區。在一些實施例中，所述輕鏈恆定區包含（包括由…組成或基本上由…組成）胺基酸序列SEQ ID NO: 148。在一些實施例中，所述抗CD40抗體包括抗體重鏈可變結構域和抗體輕鏈可變結構域。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體，包含：重鏈可變結構域（V H），所述V H包含：重鏈互補決定區（HC-CDR）1，其包含GYX 1VN （SEQ ID NO: 81），其中X 1為L、T或V；HC-CDR2，其包含X 1IX 2PX 3X 4GX 5TX 6YNQKFKG （SEQ ID NO: 82），其中X 1為L或M，X 2為A、N或V，X 3為E、K、L、M、R、S、T或Y，X 4為H、N、S或T，X 5為G或R，X 6為A、S、T或W；和HC-CDR3，其包含SX 1X 2X 3X 4PYAX 5DY （SEQ ID NO: 83），其中X 1為G、I、L、M、P、R、S或Y，X 2為W或Y，X 3為S或V，X 4為D、K、L、N、R、T或V，X 5為A、G、M、N、Q或S；以及輕鏈可變結構域（V L），所述V L包含：LC-CDR1，其包含KASQNV HTX 1VA （SEQ ID NO: 84），其中X 1為A、H、N或R；LC-CDR2，其包含LX 1SDRRT （SEQ ID NO: 85），其中X 1為A或R；和LC-CDR3，其包含LQX 1WX 2X 3PLT （SEQ ID NO: 86），其中X 1為A或H，X 2為N、S或T，X 3為A、Q、R、S或Y。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含：HC-CDR1，其包含SEQ ID NOs: 1-3中任一所示的胺基酸序列或其變體，所述變體包含至多約3個（例如1、2或3個）胺基酸的取代；HC-CDR2，其包含SEQ ID NOs: 9-26中任一所示的胺基酸序列或其變體，所述變體包含至多約3個（例如1、2或3個）胺基酸的取代；和HC-CDR3，其包含SEQ ID NOs: 32-52中任一所示的胺基酸序列或其變體，所述變體包含至多約3個（例如1、2或3個）胺基酸的取代。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含：HC-CDR1，其包含SEQ ID NOs: 1-3中任一所示的胺基酸序列，HC-CDR2，其包含SEQ ID NOs: 9-26中任一所示的胺基酸序列，HC-CDR3，其包含SEQ ID NOs: 32-52中任一所示的胺基酸序列。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V L，所述V L包含：LC-CDR1，其包含SEQ ID NOs: 58-61中任一所示的胺基酸序列或其變體，所述變體包含至多約3個（例如1、2或3個）胺基酸的取代；LC-CDR2，其包含SEQ ID NOs: 65-66中任一所示的胺基酸序列或其變體，所述變體包含至多約3個（例如1、2或3個）胺基酸的取代；和LC-CDR3，其包含SEQ ID NOs: 70-77中任一所示的胺基酸序列或其變體，所述變體包含至多約3個（例如1、2或3個）胺基酸的取代。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V L，所述V L包含：LC-CDR1，其包含SEQ ID NOs: 58-61中任一所示的胺基酸序列，LC-CDR2，其包含SEQ ID NOs: 65-66中任一所示的胺基酸序列，LC-CDR3，其包含SEQ ID NOs: 70-77中任一所示的胺基酸序列。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含：HC-CDR1，其包含SEQ ID NOs: 1-3中任一所示的胺基酸序列或其變體，所述變體包含至多約3個（例如1、2或3個）胺基酸的取代；HC-CDR2，其包含SEQ ID NOs: 9-26中任一所示的胺基酸序列或其變體，所述變體包含至多約3個（例如1、2或3個）胺基酸的取代；和HC-CDR3，其包含SEQ ID NOs: 32-52中任一所示的胺基酸序列或其變體，所述變體包含至多約3個（例如1、2或3個）胺基酸的取代；以及V L，所述V L包含：LC-CDR1，其包含SEQ ID NOs: 58-61中任一所示的胺基酸序列或其變體，所述變體包含至多約3個（例如1、2或3個）胺基酸的取代；LC-CDR2，其包含SEQ ID NOs: 65-66中任一所示的胺基酸序列或其變體，所述變體包含至多約3個（例如1、2或3個）胺基酸的取代；和LC-CDR3，其包含SEQ ID NOs: 70-77中任一所示的胺基酸序列或其變體，所述變體包含至多約3個（例如1、2或3個）胺基酸的取代。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含：HC-CDR1，其包含SEQ ID NOs: 1-3中任一所示的胺基酸序列，HC-CDR2，其包含SEQ ID NOs: 9-26中任一所示的胺基酸序列，和HC-CDR3，其包含SEQ ID NOs: 32-52中任一所示的胺基酸序列；以及V L，所述V L包含：LC-CDR1，其包含SEQ ID NOs: 58-61中任一所示的胺基酸序列，LC-CDR2，其包含SEQ ID NOs: 65-66中任一所示的胺基酸序列，和LC-CDR3，其包含SEQ ID NOs: 70-77中任一所示的胺基酸序列。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 9，HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 32，或者所述V H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及V L，所述V L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 58，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 65，LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 70，或者所述V L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 9，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 32；以及V L，所述V L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 58，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 65，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 70。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 10，HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 32，或者所述V H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及V L，所述V L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 59，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 65，LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 70，或者所述V L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 10，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 32；以及V L，所述V L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 59，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 65，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 70。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 13，HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 34，或者所述V H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及V L，所述V L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 59，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 65，LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 70，或者所述V L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 13，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 34；以及V L，所述V L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 59，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 65，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 70。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 15，HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 37，或者所述V H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及V L，所述V L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 59，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 65，LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 73，或者所述V L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 15，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 37；以及V L，所述V L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 59，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 65，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 73。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 20，HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 42，或者所述V H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及V L，所述V L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 59，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 65，LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 70，或者所述V L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 20，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 42；以及V L，所述V L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 59，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 65，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 70。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 14，HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 43，或者所述V H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及V L，所述V L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 59，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 65，LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 70，或者所述V L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 14，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 43；以及V L，所述V L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 59，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 65，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 70。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 15，HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 51，或者所述V H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及V L，所述V L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 59，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 65，LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 70，或者所述V L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 15，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 51；以及V L，所述V L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 59，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 65，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 70。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 11，HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 48，或者所述V H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及V L，所述V L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 59，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 65，LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 71，或者所述V L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 11，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 48；以及V L，所述V L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 59，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 65，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 71。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 18，HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 47，或者所述V H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及V L，所述V L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 59，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 65，LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 71，或者所述V L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 18，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 47；以及V L，所述V L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 59，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 65，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 71。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含：V H，所述V H包含SEQ ID NOs:1-3, 9-26, 32-52中任一胺基酸序列或其變體，所述變體包含至多約5個胺基酸的取代；以及V L，所述V L包含SEQ ID NOs:58-61, 65-66, 70-77中任一胺基酸序列或其變體，所述變體包含至多約5個胺基酸的取代。在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含SEQ ID NOs:1-3, 9-26, 32-52中任一胺基酸序列；以及V L，所述V L包含SEQ ID NOs:58-61, 65-66, 70-77中任一胺基酸序列。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含：V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 1、9和32，或者所述V H的變體，所述變體包含至多約5個胺基酸的取代；以及V L，所述V L包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 58、65和70，或者所述V L的變體，所述變體包含至多約5個胺基酸的取代。在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 1、9和32；以及V L，所述V L包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 58、65和70。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 1、10和32，或者所述V H的變體，所述變體包含至多約5個胺基酸的取代；以及V L，所述V L包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 59、65和70，或者所述V L的變體，所述變體包含至多約5個胺基酸的取代。在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 1、10和32；以及V L，所述V L包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 59、65和70。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 1、13和34，或者所述V H的變體，所述變體包含至多約5個胺基酸的取代；以及V L，所述V L包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 59、65和70，或者所述V L的變體，所述變體包含至多約5個胺基酸的取代。在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 1、13和34；以及V L，所述V L包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 59、65和70。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 1、15和37，或者所述V H的變體，所述變體包含至多約5個胺基酸的取代；以及V L，所述V L包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 59、65和73，或者所述V L的變體，所述變體包含至多約5個胺基酸的取代。在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 1、15和37；以及V L，所述V L包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 59、65和73。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 1、20和42，或者所述V H的變體，所述變體包含至多約5個胺基酸的取代；以及V L，所述V L包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 59、65和70，或者所述V L的變體，所述變體包含至多約5個胺基酸的取代。在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 1、20和42；以及V L，所述V L包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 59、65和70。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 1、14和43，或者所述V H的變體，所述變體包含至多約5個胺基酸的取代；以及V L，所述V L包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 59、65和70，或者所述V L的變體，所述變體包含至多約5個胺基酸的取代。在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 1、14和43；以及V L，所述V L包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 59、65和70。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 1、15和51，或者所述V H的變體，所述變體包含至多約5個胺基酸的取代；以及V L，所述V L包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 59、65和70，或者所述V L的變體，所述變體包含至多約5個胺基酸的取代。在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 1、15和51；以及V L，所述V L包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 59、65和70。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 1、11和48，或者所述V H的變體，所述變體包含至多約5個胺基酸的取代；以及V L，所述V L包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 59、65和71，或者所述V L的變體，所述變體包含至多約5個胺基酸的取代。在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 1、11和48；以及V L，所述V L包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 59、65和71。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 1、18和47，或者所述V H的變體，所述變體包含至多約5個胺基酸的取代；以及V L，所述V L包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 59、65和71，或者所述V L的變體，所述變體包含至多約5個胺基酸的取代。在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 1、18和47；以及V L，所述V L包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 59、65和71。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含如SEQ ID NOs: 87-119中任一胺基酸序列所示的V H包含的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V L，所述V L包含如SEQ ID NOs: 126-138中任一胺基酸序列所示的V L包含的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 87中的1個、2個或3個HC-CDRs。在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 88中的1個、2個或3個HC-CDRs。在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 89中的1個、2個或3個HC-CDRs。在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 94中的1個、2個或3個HC-CDRs。在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 96中的1個、2個或3個HC-CDRs。在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 101中的1個、2個或3個HC-CDRs。在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 110中的1個、2個或3個HC-CDRs。在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 114中的1個、2個或3個HC-CDRs。在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 115中的1個、2個或3個HC-CDRs。在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 117中的1個、2個或3個HC-CDRs。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V L，所述V L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 126中的1個、2個或3個LC-CDRs。在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V L，所述V L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 127中的1個、2個或3個LC-CDRs。在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V L，所述V L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 128中的1個、2個或3個LC-CDRs。在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V L，所述V L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 129中的1個、2個或3個LC-CDRs。在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V L，所述V L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 132中的1個、2個或3個LC-CDRs。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 87所示的V H包含的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V L，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 126所示的V L包含的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 88所示的V H包含的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V L，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 127所示的V L包含的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 89所示的V H包含的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V L，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 128所示的V L包含的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 94所示的V H包含的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V L，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 128所示的V L包含的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 96所示的V H包含的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V L，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 132所示的V L包含的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 101所示的V H包含的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V L，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 128所示的V L包含的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 110所示的V H包含的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V L，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 128所示的V L包含的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 114所示的V H包含的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V L，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 128所示的V L包含的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 115所示的V H包含的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V L，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 129所示的V L包含的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 117所示的V H包含的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V L，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 129所示的V L包含的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含：V H，所述V H包含SEQ ID NOs: 87-119中任一所示胺基酸序列或其變體，所述變體與SEQ ID NOs: 87-119中任一所示的胺基酸序列具有至少約90%（例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性；以及V L，所述V L包含SEQ ID NOs: 126-138中任一所示的胺基酸序列或其變體，所述變體與SEQ ID NOs: 126-138中任一所示的胺基酸序列具有至少約90%（例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性。在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含SEQ ID NOs: 87-119中任一所示的胺基酸序列，以及V L，所述V L包含SEQ ID NOs: 126-138中任一所示的胺基酸序列。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含：V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 87或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 87具有至少約90%（例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性；以及V L，所述V L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 126或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 126具有至少約90%（例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性。在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 87，以及V L，所述V L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 126。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含：V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 88或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 88具有至少約90%（例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性；以及V L，所述V L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 127或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 127具有至少約90%（例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性。在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 88，以及V L，所述V L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 127。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含：V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 89或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 89具有至少約90%（例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性；以及V L，所述V L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 128或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 128具有至少約90%（例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性。在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 89，以及V L，所述V L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 128。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含：V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 94或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 94具有至少約90%（例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性；以及V L，所述V L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 128或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 128具有至少約90%（例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性。在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 94，以及V L，所述V L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 128。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含：V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 96或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 96具有至少約90%（例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性；以及V L，所述V L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 132或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 132具有至少約90%（例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性。在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 96，以及V L，所述V L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 132。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含：V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 101或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 101具有至少約90%（例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性；以及V L，所述V L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 128或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 128具有至少約90%（例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性。在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 101，以及V L，所述V L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 128。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含：V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 110或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 110具有至少約90%（例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性；以及V L，所述V L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 128或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 128具有至少約90%（例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性。在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 110，以及V L，所述V L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 128。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含：V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 114或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 114具有至少約90%（例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性；以及V L，所述V L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 128或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 128具有至少約90%（例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性。在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 114，以及V L，所述V L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 128。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含：V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 115或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 115具有至少約90%（例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性；以及V L，所述V L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 129或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 129具有至少約90%（例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性。在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 115，以及V L，所述V L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 129。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含：V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 117或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 117具有至少約90%（例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性；以及V L，所述V L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 129或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 129具有至少約90%（例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性。在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 117，以及V L，所述V L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 129。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 4，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 27，HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 53，或者所述V H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及V L，所述V L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 62，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 67，LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 78，或者所述V L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 4，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 27，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 53；以及V L，所述V L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 62，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 67，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 78。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 4、27和53，或者所述V H的變體，所述變體包含至多約5個胺基酸的取代；以及V L，所述V L包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 62、67和78，或者所述V L的變體，所述變體包含至多約5個胺基酸的取代。在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 4、27和53；以及V L，所述V L包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 62、67和78。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 120中的1個、2個或3個HC-CDRs。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V L，所述V L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 139中的1個、2個或3個LC-CDRs。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 120所示的V H包含的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V L，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 139所示的V L包含的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含：V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 120或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 120具有至少約90%（例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性；以及V L，所述V L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 139或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 139具有至少約90%（例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性。在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 120，以及V L，所述V L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 139。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 5，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 27，HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 54，或者所述V H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及V L，所述V L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 62，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 67，LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 78，或者所述V L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 5，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 27，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 54；以及V L，所述V L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 62，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 67，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 78。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 5、27和54，或者所述V H的變體，所述變體包含至多約5個胺基酸的取代；以及V L，所述V L包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 62、67和78，或者所述V L的變體，所述變體包含至多約5個胺基酸的取代。在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 5、27和54；以及V L，所述V L包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 62、67和78。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 121中的1個、2個或3個HC-CDRs。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V L，所述V L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 140中的1個、2個或3個LC-CDRs。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 121所示的V H包含的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V L，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 140所示的V L包含的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含：V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 121或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 121具有至少約90%（例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性；以及V L，所述V L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 140或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 140具有至少約90%（例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性。在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 121，以及V L，所述V L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 140。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 6，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 28，HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 55，或者所述V H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及V L，所述V L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 63，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 68，LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 79，或者所述V L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 6，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 28，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 55；以及V L，所述V L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 63，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 68，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 79。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 6、28和55，或者所述V H的變體，所述變體包含至多約5個胺基酸的取代；以及V L，所述V L包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 63、68和79，或者所述V L的變體，所述變體包含至多約5個胺基酸的取代。在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 6、28和55；以及V L，所述V L包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 63、68和79。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 122中的1個、2個或3個HC-CDRs。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V L，所述V L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 141中的1個、2個或3個LC-CDRs。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 122所示的V H包含的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V L，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 141所示的V L包含的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含：V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 122或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 122具有至少約90%（例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性；以及V L，所述V L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 141或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 141具有至少約90%（例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性。在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 122，以及V L，所述V L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 141。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 7，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 29，HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 56，或者所述V H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及V L，所述V L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 64，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 69，LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 80，或者所述V L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 7，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 29，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 56；以及V L，所述V L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 64，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 69，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 80。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 7、29和56，或者所述V H的變體，所述變體包含至多約5個胺基酸的取代；以及V L，所述V L包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 64、69和80，或者所述V L的變體，所述變體包含至多約5個胺基酸的取代。在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 7、29和56；以及V L，所述V L包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 64、69和80。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 123中的1個、2個或3個HC-CDRs。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V L，所述V L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 142中的1個、2個或3個LC-CDRs。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 123所示的V H包含的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V L，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 142所示的V L包含的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含：V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 123或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 123具有至少約90%（例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性；以及V L，所述V L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 142或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 142具有至少約90%（例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性。在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 123，以及V L，所述V L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 142。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 8，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 30，HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 57，或者所述V H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及V L，所述V L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 62，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 67，LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 80，或者所述V L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 8，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 30，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 57；以及V L，所述V L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 62，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 67，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 80。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 8、30和57，或者所述V H的變體，所述變體包含至多約5個胺基酸的取代；以及V L，所述V L包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 62、67和80，或者所述V L的變體，所述變體包含至多約5個胺基酸的取代。在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 8、30和57；以及V L，所述V L包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 62、67和80。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 124中的1個、2個或3個HC-CDRs。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V L，所述V L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 143中的1個、2個或3個LC-CDRs。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 124所示的V H包含的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V L，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 143所示的V L包含的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含：V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 124或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 124具有至少約90%（例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性；以及V L，所述V L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 143或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 143具有至少約90%（例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性。在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 124，以及V L，所述V L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 143。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 4，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 31，HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 53，或者所述V H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及V L，所述V L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 62，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 68，LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 79，或者所述V L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 4，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 31，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 53；以及V L，所述V L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 62，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 68，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 79。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 4、31和53，或者所述V H的變體，所述變體包含至多約5個胺基酸的取代；以及V L，所述V L包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 62、68和79，或者所述V L的變體，所述變體包含至多約5個胺基酸的取代。在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 4、31和53；以及V L，所述V L包含胺基酸序列SEQ ID NOs: 62、68和79。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 125中的1個、2個或3個HC-CDRs。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V L，所述V L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 144中的1個、2個或3個LC-CDRs。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 125所示的V H包含的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V L，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 144所示的V L包含的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含：V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 125或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 125具有至少約90%（例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性；以及V L，所述V L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 144或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 144具有至少約90%（例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性。在一些實施例中，所述抗CD40抗體包含V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 125，以及V L，所述V L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 144。
在一些實施例中，上述胺基酸取代限於本文表4中所示的“示例性取代”。在一些實施例中，胺基酸取代限於本文表4中所示的“較佳取代”。
在一些實施例中，功能性表位可藉由組合丙胺酸掃描法來解析。在此過程中，組合丙胺酸掃描技術可用於鑒定CD40蛋白中與抗CD40抗體相互作用所必需的胺基酸。在一些實施例中，該表位是構象的，同時可以採用與CD40蛋白結合的抗CD40抗體的晶體結構來鑒定表位。
在一些實施例中，本發明提供與本文所述的任一種抗CD40抗體競爭性結合CD40的抗體。在一些實施例中，提供能夠與本文所述的任一種抗CD40抗體競爭性地結合CD40上的表位的抗體。在一些實施例中，提供抗CD40抗體，其與包含V H和V L的抗CD40抗體分子結合相同的表位，其中所述V H包含SEQ ID NOs: 87-125中任一所示的胺基酸序列，以及所述V L包含SEQ ID NOs: 126-144中任一所示的胺基酸序列。在一些實施例中，提供抗CD40抗體，其與包含V H和V L的抗CD40抗體競爭性地結合CD40，其中所述V H包含SEQ ID NOs: 87-125中任一所示的胺基酸序列，以及所述V L包含SEQ ID NOs: 126-144中任一所示的胺基酸序列。
在一些實施例中，可以利用競爭實驗來鑒定與本文所述的抗CD40抗體競爭性結合CD40的單株抗體。競爭實驗可以藉由識別相同的或空間上重疊的表位或者藉由一個抗體競爭性抑制另一抗體與抗原結合來確定兩個抗體是否結合相同的表位。在某些實施例中，這種競爭性抗體與本文所述的抗體結合相同的表位。一些示例性的競爭實驗包括，但不限於如Harlow and Lane (1988) Antibodies: A Laboratory Manual ch.14 (Cold Spring Harbor Laboratory， Cold Spring Harbor, N.Y.)中所提到的常規實驗。用於解析抗體結合的表位的詳細示例性方法如Morris (1996) "Epitope Mapping Protocols," in Methods in Molecular Biology vol. 66 (Humana Press, Totowa, N.J.)中所述。在一些實施例中，如果每種抗體阻斷另一種抗體結合的50％或更多，則稱其結合相同的表位。在一些實施例中，與本文所述的抗CD40抗體競爭的抗體是嵌合抗體、人源化抗體或全人抗體。
示例性抗CD40抗體序列如表2、表3所示，其中根據Kabat定義方式進行CDR編號。本領域技術人員將認識到有多種已知演算法（Kabat定義方式）來預測CDR的位置以及界定抗體輕、重鏈可變區。包含如本文所述抗體的CDRs、V H和/或V L序列，但基於預測演算法而非下表中所示例的抗體也在本發明的範圍內。
表2示例性抗CD40抗體CDR序列
抗體名稱 HC-CDR1 HC-CDR2 HC-CDR3
D1 GYTVN (SEQ ID NO: 1) LINPYNGGTTYNQKFKG (SEQ ID NO: 9) SYYSNPYAMDY (SEQ ID NO: 32)
D11 GYTVN (SEQ ID NO: 1) LINPYNGGTTYNQKFKG (SEQ ID NO: 9) SYYSNPYAMDY (SEQ ID NO: 32)
D21 GYTVN (SEQ ID NO: 1) LINPRNGGTTYNQKFKG (SEQ ID NO: 10) SYYSNPYAMDY (SEQ ID NO: 32)
D22 GYTVN (SEQ ID NO: 1) LINPYTGGTTYNQKFKG (SEQ ID NO: 11) SYYSKPYAMDY (SEQ ID NO: 33)
D23 GYTVN (SEQ ID NO: 1) LINPYNGGTTYNQKFKG (SEQ ID NO: 9) SYYSNPYANDY (SEQ ID NO: 34)
D24 GYTVN (SEQ ID NO: 1) LINPKNGGTTYNQKFKG (SEQ ID NO: 12) SLYSNPYAMDY (SEQ ID NO: 35)
D25 GYVVN (SEQ ID NO: 2) LINPYNGGTTYNQKFKG (SEQ ID NO: 9) SYYSNPYAMDY (SEQ ID NO: 32)
D26 GYTVN (SEQ ID NO: 1) LINPYNGRTTYNQKFKG (SEQ ID NO: 13) SYYSNPYANDY (SEQ ID NO: 34)
D27 GYTVN (SEQ ID NO: 1) LIVPYNGGTTYNQKFKG (SEQ ID NO: 14) SGYSNPYAMDY (SEQ ID NO: 36)
D28 GYTVN (SEQ ID NO: 1) LINPYSGGTTYNQKFKG (SEQ ID NO: 15) SYYSRPYAMDY (SEQ ID NO: 37)
D29 GYTVN (SEQ ID NO: 1) LINPMNGGTTYNQKFKG (SEQ ID NO: 16) SYYSNPYAGDY (SEQ ID NO: 38)
D30 GYTVN (SEQ ID NO: 1) LINPYNGGTWYNQKFKG (SEQ ID NO: 17) SMYSNPYAMDY (SEQ ID NO: 39)
D31 GYTVN (SEQ ID NO: 1) LINPYNGGTSYNQKFKG (SEQ ID NO: 18) SYYSNPYAADY (SEQ ID NO: 40)
D32 GYTVN (SEQ ID NO: 1) LINPYHGGTTYNQKFKG (SEQ ID NO: 19) SSYSNPYAMDY (SEQ ID NO: 41)
D33 GYTVN (SEQ ID NO: 1) LINPLNGGTTYNQKFKG (SEQ ID NO: 20) SYYSTPYAMDY (SEQ ID NO: 42)
D34 GYTVN (SEQ ID NO: 1) LINPYNGGTTYNQKFKG (SEQ ID NO: 9) SYYSRPYAMDY (SEQ ID NO: 37)
D35 GYLVN (SEQ ID NO: 3) LINPYNGGTTYNQKFKG (SEQ ID NO: 9) SYYSNPYAMDY (SEQ ID NO: 32)
D36 GYTVN (SEQ ID NO: 1) LINPYNGGTTYNQKFKG (SEQ ID NO: 9) SRYSNPYAMDY (SEQ ID NO: 43)
D37 GYTVN (SEQ ID NO: 1) LIAPYNGGTTYNQKFKG (SEQ ID NO: 21) SYYSNPYAMDY (SEQ ID NO: 32)
D38 GYTVN (SEQ ID NO: 1) MINPYNGGTTYNQKFKG (SEQ ID NO: 22) SYYSVPYAMDY (SEQ ID NO: 44)
D39 GYTVN (SEQ ID NO: 1) LINPYNGGTTYNQKFKG (SEQ ID NO: 9) SYYSNPYAQDY (SEQ ID NO: 45)
D40 GYTVN (SEQ ID NO: 1) LINPYTGGTTYNQKFKG (SEQ ID NO: 11) SYWSNPYAMDY (SEQ ID NO: 46)
D41 GYTVN (SEQ ID NO: 1) LINPYSGGTTYNQKFKG (SEQ ID NO: 15) SPYSNPYAMDY (SEQ ID NO: 47)
D42 GYTVN (SEQ ID NO: 1) LIVPYNGGTTYNQKFKG (SEQ ID NO: 14) SRYSNPYAMDY (SEQ ID NO: 43)
D43 GYTVN (SEQ ID NO: 1) LINPTNGGTSYNQKFKG (SEQ ID NO: 23) SYYSNPYASDY (SEQ ID NO: 48)
D44 GYTVN (SEQ ID NO: 1) LINPYNGGTTYNQKFKG (SEQ ID NO: 9) SYYSLPYAMDY (SEQ ID NO: 49)
D45 GYTVN (SEQ ID NO: 1) LINPYNGGTSYNQKFKG (SEQ ID NO: 18) SIYSNPYAMDY (SEQ ID NO: 50)
D46 GYTVN (SEQ ID NO: 1) LINPYSGGTTYNQKFKG (SEQ ID NO: 15) SYYVNPYAMDY (SEQ ID NO: 51)
D47 GYTVN (SEQ ID NO: 1) LINPYTGGTTYNQKFKG (SEQ ID NO: 11) SYYSNPYASDY (SEQ ID NO: 48)
D48 GYTVN (SEQ ID NO: 1) LINPSNGGTTYNQKFKG (SEQ ID NO: 24) SYYSNPYANDY (SEQ ID NO: 34)
D49 GYTVN (SEQ ID NO: 1) LINPYNGGTSYNQKFKG (SEQ ID NO: 18) SPYSNPYAMDY (SEQ ID NO: 47)
D50 GYTVN (SEQ ID NO: 1) LINPYNGGTAYNQKFKG (SEQ ID NO: 25) SYYSDPYANDY (SEQ ID NO: 52)
D51 GYTVN (SEQ ID NO: 1) LINPENGGTTYNQKFKG (SEQ ID NO: 26) SYYSNPYANDY (SEQ ID NO: 34)
通式1 GYX 1VN (SEQ ID NO: 81) 其中X 1為L、T或V X 1IX 2PX 3X 4GX 5TX 6YNQKFKG (SEQ ID NO: 82) 其中X 1為L或M，X 2為A、N或V，X 3為E、K、L、M、R、S、T或Y，X 4為H、N、S或T，X 5為G或R，X 6為A、S、T或W SX 1X 2X 3X 4PYAX 5DY (SEQ ID NO: 83) 其中X 1為G、I、L、M、P、R、S或Y，X 2為W或Y，X 3為S或V，X 4為D、K、L、N、R、T或V，X 5為A、G、M、N、Q或S
D2 DAYMH (SEQ ID NO: 4) RIDPANGNTKYDPKFQG (SEQ ID NO: 27) NYYGSRYPFAY (SEQ ID NO: 53)
D3 DSYMH (SEQ ID NO: 5) RIDPANGNTKYDPKFQG (SEQ ID NO: 27) NYYGAAYPFAY (SEQ ID NO: 54)
D4 DSYIH (SEQ ID NO: 6) RIDPTNGNTNFDPKFRG (SEQ ID NO: 28) NYYGSRYPFSY (SEQ ID NO: 55)
D5 DHGMH (SEQ ID NO: 7) VISTSYGVATYNQKFKG (SEQ ID NO: 29) RDSKSPFDY (SEQ ID NO: 56)
D6 DHAIH (SEQ ID NO: 8) AISTNYGAATYNQKFKG (SEQ ID NO: 30) RGSHGDWFAY (SEQ ID NO: 57)
D7 DAYMH (SEQ ID NO: 4) RIDPANGYTKSDPKFQG (SEQ ID NO: 31) NYYGSRYPFAY (SEQ ID NO: 53)
  
抗體名稱 LC-CDR1 LC-CDR2 LC-CDR3
D1 KASQNV HTAVA (SEQ ID NO: 58) LASDRRT (SEQ ID NO: 65) LQHWNYPLT (SEQ ID NO: 70)
D11 KASQNV HTAVA (SEQ ID NO: 58) LASDRRT (SEQ ID NO: 65) LQHWNYPLT (SEQ ID NO: 70)
D21 KASQNV HTRVA (SEQ ID NO: 59) LASDRRT (SEQ ID NO: 65) LQHWNYPLT (SEQ ID NO: 70)
D22 KASQNV HTRVA (SEQ ID NO: 59) LASDRRT (SEQ ID NO: 65) LQHWTYPLT (SEQ ID NO: 71)
D23 KASQNV HTAVA (SEQ ID NO: 58) LRSDRRT (SEQ ID NO: 66) LQAWNYPLT (SEQ ID NO: 72)
D24 KASQNV HTRVA (SEQ ID NO: 59) LASDRRT (SEQ ID NO: 65) LQHWNYPLT (SEQ ID NO: 70)
D25 KASQNV HTAVA (SEQ ID NO: 58) LASDRRT (SEQ ID NO: 65) LQHWNYPLT (SEQ ID NO: 70)
D26 KASQNV HTRVA (SEQ ID NO: 59) LASDRRT (SEQ ID NO: 65) LQHWNYPLT (SEQ ID NO: 70)
D27 KASQNV HTNVA (SEQ ID NO: 60) LASDRRT (SEQ ID NO: 65) LQHWNYPLT (SEQ ID NO: 70)
D28 KASQNV HTRVA (SEQ ID NO: 59) LASDRRT (SEQ ID NO: 65) LQHWNSPLT (SEQ ID NO: 73)
D29 KASQNV HTRVA (SEQ ID NO: 59) LASDRRT (SEQ ID NO: 65) LQHWNRPLT (SEQ ID NO: 74)
D30 KASQNV HTRVA (SEQ ID NO: 59) LASDRRT (SEQ ID NO: 65) LQHWNYPLT (SEQ ID NO: 70)
D31 KASQNV HTRVA (SEQ ID NO: 59) LASDRRT (SEQ ID NO: 65) LQHWNYPLT (SEQ ID NO: 70)
D32 KASQNV HTRVA (SEQ ID NO: 59) LASDRRT (SEQ ID NO: 65) LQHWNYPLT (SEQ ID NO: 70)
D33 KASQNV HTRVA (SEQ ID NO: 59) LASDRRT (SEQ ID NO: 65) LQHWNYPLT (SEQ ID NO: 70)
D34 KASQNV HTRVA (SEQ ID NO: 59) LASDRRT (SEQ ID NO: 65) LQHWSYPLT (SEQ ID NO: 75)
D35 KASQNV HTAVA (SEQ ID NO: 58) LASDRRT (SEQ ID NO: 65) LQHWNYPLT (SEQ ID NO: 70)
D36 KASQNV HTHVA (SEQ ID NO: 61) LASDRRT (SEQ ID NO: 65) LQHWNYPLT (SEQ ID NO: 70)
D37 KASQNV HTRVA (SEQ ID NO: 59) LASDRRT (SEQ ID NO: 65) LQHWNYPLT (SEQ ID NO: 70)
D38 KASQNV HTRVA (SEQ ID NO: 59) LASDRRT (SEQ ID NO: 65) LQHWNYPLT (SEQ ID NO: 70)
D39 KASQNV HTRVA (SEQ ID NO: 59) LASDRRT (SEQ ID NO: 65) LQHWNYPLT (SEQ ID NO: 70)
D40 KASQNV HTRVA (SEQ ID NO: 59) LASDRRT (SEQ ID NO: 65) LQHWNYPLT (SEQ ID NO: 70)
D41 KASQNV HTRVA (SEQ ID NO: 59) LASDRRT (SEQ ID NO: 65) LQHWNAPLT (SEQ ID NO: 76)
D42 KASQNV HTRVA (SEQ ID NO: 59) LASDRRT (SEQ ID NO: 65) LQHWNYPLT (SEQ ID NO: 70)
D43 KASQNV HTRVA (SEQ ID NO: 59) LASDRRT (SEQ ID NO: 65) LQHWNYPLT (SEQ ID NO: 70)
D44 KASQNV HTRVA (SEQ ID NO: 59) LASDRRT (SEQ ID NO: 65) LQHWNYPLT (SEQ ID NO: 70)
D45 KASQNV HTRVA (SEQ ID NO: 59) LASDRRT (SEQ ID NO: 65) LQHWNQPLT (SEQ ID NO: 77)
D46 KASQNV HTRVA (SEQ ID NO: 59) LASDRRT (SEQ ID NO: 65) LQHWNYPLT (SEQ ID NO: 70)
D47 KASQNV HTRVA (SEQ ID NO: 59) LASDRRT (SEQ ID NO: 65) LQHWTYPLT (SEQ ID NO: 71)
D48 KASQNV HTHVA (SEQ ID NO: 61) LASDRRT (SEQ ID NO: 65) LQHWNYPLT (SEQ ID NO: 70)
D49 KASQNV HTRVA (SEQ ID NO: 59) LASDRRT (SEQ ID NO: 65) LQHWTYPLT (SEQ ID NO: 71)
D50 KASQNV HTRVA (SEQ ID NO: 59) LASDRRT (SEQ ID NO: 65) LQHWNYPLT (SEQ ID NO: 70)
D51 KASQNV HTRVA (SEQ ID NO: 59) LASDRRT (SEQ ID NO: 65) LQHWNYPLT (SEQ ID NO: 70)
通式 1 KASQNV HTX 1VA (SEQ ID NO: 84) 其中X 1為A、H、N或R LX 1SDRRT (SEQ ID NO: 85) 其中X 1為A或R LQX 1WX 2X 3PLT (SEQ ID NO: 86) 其中X 1為A或H，X 2為N、S或T，X 3為A、Q、R、S或Y
D2 SASSSVSYMH (SEQ ID NO: 62) STSNLAS (SEQ ID NO: 67) QQGSSYPLT (SEQ ID NO: 78)
D3 SASSSVSYMH (SEQ ID NO: 62) STSNLAS (SEQ ID NO: 67) QQGSSYPLT (SEQ ID NO: 78)
D4 SGSSSVSYMH (SEQ ID NO: 63) FTSNLAS (SEQ ID NO: 68) QQGSTYPLT (SEQ ID NO: 79)
D5 SASSSISSNYLH (SEQ ID NO: 64) RTSNLAS (SEQ ID NO: 69) HQYHRSPLT (SEQ ID NO: 80)
D6 SASSSVSYMH (SEQ ID NO: 62) STSNLAS (SEQ ID NO: 67) HQYHRSPLT (SEQ ID NO: 80)
D7 SASSSVSYMH (SEQ ID NO: 62) FTSNLAS (SEQ ID NO: 68) QQGSTYPLT (SEQ ID NO: 79)
表3示例性序列
序列編號 簡介 序列
87 D1 V H EVQLQQSGPDLVKPGASMKISCKASVYSFTGYTVNWVKQSHGKSLEWIGLINPYNGGTTYNQKFKGKATLTIDKSSTTAYMELLSLTSEDSAVYYCASSYYSNPYAMDYWGQGTSVTVSS
88 D11 V H QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASVYSFTGYTVNWVRQAPGQRLEWMGLINPYNGGTTYNQKFKGRVTLTIDKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCASSYYSNPYAMDYWGQGTLVTVSS
89 D21 V H QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASVYSFTGYTVNWVRQAPGQRLEWMGLINPRNGGTTYNQKFKGRVTLTIDKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCAWSYYSNPYAMDYWGQGTLVTVSS
90 D22 V H QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASVYSFTGYTVNWVRQAPGQRLEWMGLINPYTGGTTYNQKFKGRVTLTIDKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCASSYYSKPYAMDYWGQGTLVTVSS
91 D23 V H QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASVYGFTGYTVNWVRQAPGQRLEWMGLINPYNGGTTYNQKFKGRVTLTIDKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCASSYYSNPYANDYWGQGTLVTVSS
92 D24 V H QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASVYSFTGYTVNWVRQAPGQRLEWMGLINPKNGGTTYNQKFKGRVTLTIDKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCASSLYSNPYAMDYWGQGTLVTVSS
93 D25 V H QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASVYSFTGYVVNWVRQAPGQRLEWMGLINPYNGGTTYNQKFKGRVTLTIDKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCASSYYSNPYAMDYWGQGTLVTVSS
94 D26 V H QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASVYSFTGYTVNWVRQAPGQRLEWMGLINPYNGRTTYNQKFKGRVTLTIDKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCASSYYSNPYANDYWGQGTLVTVSS
95 D27 V H QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASVYSFTGYTVNWVRQAPGQRLEWMGLIVPYNGGTTYNQKFKGRVTLTIDKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCASSGYSNPYAMDYWGQGTLVTVSS
96 D28 V H QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASVYSFTGYTVNWVRQAPGQRLEWMGLINPYSGGTTYNQKFKGRVTLTIDKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCASSYYSRPYAMDYWGQGTLVTVSS
97 D29 V H QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASVYSFTGYTVNWVRQAPGQRLEWMGLINPMNGGTTYNQKFKGRVTLTIDKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCASSYYSNPYAGDYWGQGTLVTVSS
98 D30 V H QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASVYSFTGYTVNWVRQAPGQRLEWMGLINPYNGGTWYNQKFKGRVTLTIDKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCASSMYSNPYAMDYWGQGTLVTVSS
99 D31 V H QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASVYSFTGYTVNWVRQAPGQRLEWMGLINPYNGGTSYNQKFKGRVTLTIDKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCASSYYSNPYAADYWGQGTLVTVSS
100 D32 V H QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASVYSFTGYTVNWVRQAPGQRLEWMGLINPYHGGTTYNQKFKGRVTLTIDKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCASSSYSNPYAMDYWGQGTLVTVSS
101 D33 V H QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASVYSFTGYTVNWVRQAPGQRLEWMGLINPLNGGTTYNQKFKGRVTLTIDKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCASSYYSTPYAMDYWGQGTLVTVSS
102 D34 V H QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASVYSFTGYTVNWVRQAPGQRLEWMGLINPYNGGTTYNQKFKGRVTLTIDKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCASSYYSRPYAMDYWGQGTLVTVSS
103 D35 V H QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASVYSFTGYLVNWVRQAPGQRLEWMGLINPYNGGTTYNQKFKGRVTLTIDKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCASSYYSNPYAMDYWGQGTLVTVSS
104 D36 V H QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASVYSFTGYTVNWVRQAPGQRLEWMGLINPYNGGTTYNQKFKGRVTLTIDKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCASSRYSNPYAMDYWGQGTLVTVSS
105 D37 V H QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASVYSFTGYTVNWVRQAPGQRLEWMGLIAPYNGGTTYNQKFKGRVTLTIDKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCALSYYSNPYAMDYWGQGTLVTVSS
106 D38 V H QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASVYSFTGYTVNWVRQAPGQRLEWMGMINPYNGGTTYNQKFKGRVTLTIDKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCASSYYSVPYAMDYWGQGTLVTVSS
107 D39 V H QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASVYSFTGYTVNWVRQAPGQRLEWMGLINPYNGGTTYNQKFKGRVTLTIDKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCASSYYSNPYAQDYWGQGTLVTVSS
108 D40 V H QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASVYSFTGYTVNWVRQAPGQRLEWMGLINPYTGGTTYNQKFKGRVTLTIDKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCASSYWSNPYAMDYWGQGTLVTVSS
109 D41 V H QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASVYSFTGYTVNWVRQAPGQRLEWMGLINPYSGGTTYNQKFKGRVTLTIDKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCASSPYSNPYAMDYWGQGTLVTVSS
110 D42 V H QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASVYSFTGYTVNWVRQAPGQRLEWMGLIVPYNGGTTYNQKFKGRVTLTIDKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCASSRYSNPYAMDYWGQGTLVTVSS
111 D43 V H QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASVYSFTGYTVNWVRQAPGQRLEWMGLINPTNGGTSYNQKFKGRVTLTIDKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCASSYYSNPYASDYWGQGTLVTVSS
112 D44 V H QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASVYSFTGYTVNWVRQAPGQRLEWMGLINPYNGGTTYNQKFKGRVTLTIDKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCASSYYSLPYAMDYWGQGTLVTVSS
113 D45 V H QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASVYSFTGYTVNWVRQAPGQRLEWMGLINPYNGGTSYNQKFKGRVTLTIDKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCASSIYSNPYAMDYWGQGTLVTVSS
114 D46 V H QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASVYSFTGYTVNWVRQAPGQRLEWMGLINPYSGGTTYNQKFKGRVTLTIDKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCASSYYVNPYAMDYWGQGTLVTVSS
115 D47 V H QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASVYSFTGYTVNWVRQAPGQRLEWMGLINPYTGGTTYNQKFKGRVTLTIDKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCASSYYSNPYASDYWGQGTLVTVSS
116 D48 V H QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASVYSFTGYTVNWVRQAPGQRLEWMGLINPSNGGTTYNQKFKGRVTLTIDKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCASSYYSNPYANDYWGQGTLVTVSS
117 D49 V H QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASVYSFTGYTVNWVRQAPGQRLEWMGLINPYNGGTSYNQKFKGRVTLTIDKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCASSPYSNPYAMDYWGQGTLVTVSS
118 D50 V H QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASVYSFTGYTVNWVRQAPGQRLEWMGLINPYNGGTAYNQKFKGRVTLTIDKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCASSYYSDPYANDYWGQGTLVTVSS
119 D51 V H QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASVYSFTGYTVNWVRQAPGQRLEWMGLINPENGGTTYNQKFKGRVTLTIDKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCASSYYSNPYANDYWGQGTLVTVSS
120 D2 V H EV HVKQSGAELVKPGASVKLSCTASGFNIKDAYMHWVKQRPEQGLEWIGRIDPANGNTKYDPKFQGKASITTDTSSNTAYLQLSSLTSEDTAVYYCTPNYYGSRYPFAYWGQGTTVTVSS
121 D3 V H EVQLQQSGAELVKPGASVKLSCTASGFNIKDSYMHWVKQRPEQGLEWIGRIDPANGNTKYDPKFQGKATITADTSSNTAYLQLSSLTSEDTAVYYCVPNYYGAAYPFAYWGQGTTVTVSS
122 D4 V H EVMLVESGAELVRPGASVKLSCTASGFKIKDSYIHWMIQRPEQGLEWIGRIDPTNGNTNFDPKFRGKATLTTDTSSNTAYLQLSSLTSEDTAVYYCVPNYYGSRYPFSYWGQGTTVTVSS
123 D5 V H EVQLQQSGAELVSPGVSVKISCKGSGYTFTDHGMHWVKQSHAKSLEWIGVISTSYGVATYNQKFKGKATLSVDKSSSTAYLELARLTSEDSAIYYCARRDSKSPFDYWGQGTTLTVSS
124 D6 V H QVQLQQSGAELVRPGVSVKISCKGSGYTFTDHAIHWVKQSHARRLEWIGAISTNYGAATYNQKFKGKATMTVDKSSSTAYMELARLTSEDSAIYYCARRGSHGDWFAYWGQGTLVTVSA
125 D7 V H QIQLLQSGAELVKPGASVKLSCTASGFNIKDAYMHWVKQRPEQGLEWIGRIDPANGYTKSDPKFQGKATITSDTSSNTAYLQLSSLTSEDTAVYYCAPNYYGSRYPFAYWGQGTLVTVSS
  
126 D1 V L DIV LNQSQKFMSTSVGDRVSITCKASQNV HTAVAWYQQKPGQSPKALIYLASDRRTGIPDRFTGSGSGTDFTLTIDNVQSEDLADYFCLQHWNYPLTFGAGTKLELK
127 D11 V LD25 V LD35 V L EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCKASQNV HTAVAWYQQKPGQAPRLLIYLASDRRTGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCLQHWNYPLTFGQGTKVEIK
128 D21 V LD24 V LD26 V LD30 V LD31 V LD32 V LD33 V LD37 V LD38 V LD39 V LD40 V LD42 V LD44 V LD46 V LD50 V LD51 V L EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCKASQNV HTRVAWYQQKPGQAPRLLIYLASDRRTGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCLQHWNYPLTFGQGTKVEIK
129 D22 V LD47 V LD49 V L EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCKASQNV HTRVAWYQQKPGQAPRLLIYLASDRRTGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCLQHWTYPLTFGQGTKVEIK
130 D23 V L EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCKASQNV HTAVAWYQQKPGQAPRLLIYLRSDRRTGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCLQAWNYPLTFGQGTKVEIK
131 D27 V L EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCKASQNV HTNVAWYQQKPGQAPRLLIYLASDRRTGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCLQHWNYPLTFGQGTKVEIK
132 D28 V L EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCKASQNV HTRVAWYQQKPGQAPRLLIYLASDRRTGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCLQHWNSPLTFGQGTKVEIK
133 D29 V L EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCKASQNV HTRVAWYQQKPGQAPRLLIYLASDRRTGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCLQHWNRPLTFGQGTKVEIK
134 D34 V L EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCKASQNV HTRVAWYQQKPGQAPRLLIYLASDRRTGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCLQHWSYPLTFGQGTKVEIK
135 D36 V LD48 V L EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCKASQNV HTHVAWYQQKPGQAPRLLIYLASDRRTGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCLQHWNYPLTFGQGTKVEIK
136 D41 V L EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCKASQNV HTRVAWYQQKPGQAPRLLIYLASDRRTGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCLQHWNAPLTFGQGTKVEIK
137 D43 V L EIVMTQSPATLSVSPGERATMSCKASQNV HTRVAWYQQKPGQAPRLLIYLASDRRTGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCLQHWNYPLTFGQGTKVEIK
138 D45 V L EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCKASQNV HTRVAWYQQKPGQAPRLLIYLASDRRTGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCLQHWNQPLTFGQGTKVEIK
139 D2 V L DIV LTQSPAIMSASPGEKVSITCSASSSVSYMHWFQQKPGTSPKLWIYSTSNLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISRMEADDAATYYCQQGSSYPLTFGAGTKLELK
140 D3 V L DIV LIQSPAIMSASPGEKVTITCSASSSVSYMHWFQQKPGTSPKVWIYSTSNLASGVPARFGGSGSGTSYSLTISRMEAEDAATYYCQQGSSYPLTFGAGTKLELK
141 D4 V L QIV LTQSPAIMSASPGEKVTMTCSGSSSVSYMHWFQQKPGNSPKIWIYFTSNLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISRMEAGDAATYYCQQGSTYPLTFGAGTKLELK
142 D5 V L QIV LTQSPAIMSASPGEKITITCSASSSISSNYLHWYQQKPGFSPKLLIYRTSNLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISSMEAEDAATYYCHQYHRSPLTFGAGTKLELK
143 D6 V L DIELTQSPAIMSASPGEKVTITCSASSSVSYMHWFQQKPGTSPKLWIYSTSNLASGVPVRFSGSGSGTSYSLTISSMEAEDAATYYCHQYHRSPLTFGAGTKLELK
144 D7 V L QIV LTQSPAIMSASPGEKVTITCSASSSVSYMHWFQQKPGTSPKIWIYFTSNLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISRMEAEDAATYYCQQGSTYPLTFGAGTKLELK
145 IgG1 重鏈恆定區 ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGV HTFPAV LQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEV HNAKTKPREEQYNSTYRVVSV LTV LHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPV LDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
146 IgG4重鏈恆定區 ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGV HTFPAV LQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPSCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEV HNAKTKPREEQFNSTYRVVSV LTV LHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPV LDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
147 輕鏈恆定區(kappa) RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
148 輕鏈恆定區(lambda) GQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
149 天然人 CD40 MVRLPLQCV LWGCLLTAV HPEPPTACREKQYLINSQCCSLCQPGQKLVSDCTEFTETECLPCGESEFLDTWNRETHCHQHKYCDPNLGLRVQQKGTSETDTICTCEEGWHCTSEACESCV LHRSCSPGFGVKQIATGVSDTICEPCPVGFFSNVSSAFEKCHPWTSCETKDLVVQQAGTNKTDVVCGPQDRLRALVVIPIIFGILFAILLV LVFIKKVAKKPTNKAPHPKQEPQEINFPDDLPGSNTAAPVQETLHGCQPVTQEDGKESRISVQERQ
CD40
CD40是一個45-50kD的I型膜蛋白，也是TNFR超家族的成員之一。CD40不僅可在抗原呈現細胞（如B細胞、樹突狀細胞（DC）、巨噬細胞和單核細胞）上表達，也可在非免疫細胞，如上皮、內皮和間質細胞（纖維原細胞、肌成纖維細胞、滑膜細胞、星狀細胞等）、血小板和腫瘤細胞上表達（Schönbeck, U, and P Libby. Cellular and molecular life sciences : CMLSvol. 58,1 (2001): 4-43）。CD40分子作為跨膜訊號轉導因子，在細胞內導致胞內激酶和轉錄因子的啟動，參與了廣泛的分子和細胞過程的調節，包括細胞和體液適應性免疫的起始和發展。由於CD40胞內區缺乏內在的激酶活性，因此，其訊號主要藉由配體依賴性募集TNF受體相關因子（TRAF）家族的銜接蛋白來轉導。TRAF不僅將CD40偶聯至細胞內訊號轉導組分，還將引發該訊號複合物與CD40分離，並釋放至胞質中，使其作為E3泛素連接酶啟動近端蛋白激酶。它可以啟動絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）途徑，包括細胞外訊號調節蛋白激酶（ERK）、c-Jun 氨基末端激酶（JNK）和p38 MAPK、磷脂醯肌醇3-激酶（PI3K）級聯、轉錄因子核因子-kB（NF-kB）、以及訊號轉導和轉錄啟動子（STAT）（Loskog, Angelica S I, and Aristides G Eliopoulos. Seminars in immunologyvol. 21,5 (2009): 301-7; and Matsuzawa, Atsushi et al. Science (New York, N.Y.)vol. 321,5889 (2008): 663-8）。這些途徑協同作用，以細胞類型和微環境依賴性方式調節CD40活性。
CD40和CD40L之間的相互作用會引起多種免疫反應，包括細胞應激相關基因表達和B細胞活化（免疫球蛋白類別轉換，生發中心形成和細胞因子產生）(Belkhir, R et al. Scandinavian journal of immunologyvol. 79,1 (2014): 37-42; and Bensinger, William et al. British journal of haematologyvol. 159,1 (2012): 58-66)。CD40-CD40L相互作用在T細胞活化，上調慢性炎性疾病中炎症反應相關表面分子和細胞因子表達過程中也起到重要作用。這些細胞因子包括白介素（IL）-2、IL-12、TNF-α、干擾素（IFN）-α以及IL-1和IL-6(Sidiropoulos, P I, and D T Boumpas. Lupusvol. 13,5 (2004): 391-7)。
考慮到CD40–CD40L作為B細胞和T細胞之間的共同刺激分子的重要作用，人們已經對CD40–CD40L拮抗劑在炎症或自身免疫性疾病（例如牛皮癬、狼瘡性腎炎、系統性狼瘡性紅斑病（SLE）和類風濕關節炎（RA）、糖尿病、免疫排斥反應）中的作用產生了興趣。
CD40L
CD40L是32-39kDa的II型跨膜蛋白，也是TNF配體超家族（TNFSF，包括TNF、淋巴毒素、CD27L、CD30L和FasL）的成員之一。CD40L由活化的CD4 +T細胞以及活化的B細胞和血小板表達，但在炎性條件下也可誘導單核細胞、自然殺傷細胞、肥大細胞和嗜鹼性粒細胞可變表達（Elgueta, Raul et al. Immunological reviewsvol. 229,1 (2009): 152-72）。據報導可溶形式的CD40L（sCD40L）表現出類似於跨膜形式的生物活性，觸發CD40L / CD40訊號級聯反應。
因此，中和CD40與CD40L的結合，可成為治療CD40-CD40L途徑介導的疾病和病症的方法。
全長抗CD40抗體
在一些實施例中，所述抗CD40抗體是全長抗CD40抗體。在一些實施例中，所述全長抗CD40抗體是IgA、IgD、IgE、IgG或IgM。在一些實施例中，所述全長抗CD40抗體包含IgG恆定區域，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或其變體的恆定區域。在一些實施例中，所述全長抗CD40抗體包含λ輕鏈恆定區。在一些實施例中，所述全長抗CD40抗體包含κ輕鏈恆定區。在一些實施例中，所述全長抗CD40抗體是全長的人抗CD40抗體。在一些實施例中，所述全長抗CD40抗體包含小鼠免疫球蛋白Fc序列。在一些實施例中，所述全長抗CD40抗體包含已經改變的或以其他方式改變的Fc序列，使得其具有增強的抗體依賴的細胞介導的細胞毒作用（ADCC）和補體依賴的細胞毒作用（CDC）的效應功能。
因此，例如，在一些實施例中，提供一種包含IgG1恆定區的全長抗CD40抗體，所述抗CD40抗體與CD40特異性結合。在一些實施例中，所述IgG1是人IgG1。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種包含IgG2恆定區的全長抗CD40抗體，所述抗CD40抗體與CD40特異性結合。在一些實施例中，所述IgG2是人IgG2。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種包含IgG3恆定區的全長抗CD40抗體，所述抗CD40抗體與CD40特異性結合。在一些實施例中，所述IgG3是人IgG3。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種包含IgG4恆定區的全長抗CD40抗體，所述抗CD40抗體與CD40特異性結合。在一些實施例中，所述IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種包含IgG1恆定區的全長抗CD40抗體，其中所述抗CD40抗體包含：a)重鏈可變結構域，所述重鏈可變結構域包含：HC-CDR1，其包含SEQ ID NOs: 1-8中任一所示的胺基酸序列或其變體，所述變體包含至多約3個（例如1、2或3個）胺基酸的取代；HC-CDR2，其包含SEQ ID NOs: 9-31中任一所示的胺基酸序列或其變體，所述變體包含至多約3個（例如1、2或3個）胺基酸的取代；和HC-CDR3，其包含SEQ ID NOs: 32-57中任一所示的胺基酸序列或其變體，所述變體包含至多約3個（例如1、2或3個）胺基酸的取代；以及b)輕鏈可變結構域，所述輕鏈可變結構域包含：LC-CDR1，其包含SEQ ID NOs: 58-64中任一所示的胺基酸序列或其變體，所述變體包含至多約3個（例如1、2或3個）胺基酸的取代，LC-CDR2，其包含SEQ ID NOs: 65-69中任一所示的胺基酸序列或其變體，所述變體包含至多約3個（例如1、2或3個）胺基酸的取代；和LC-CDR3，其包含SEQ ID NOs: 70-80中任一所示的胺基酸序列或其變體，所述變體包含至多約3個（例如1、2或3個）胺基酸的取代。在一些實施例中，所述IgG1是人IgG1。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種包含IgG2恆定區的全長抗CD40抗體，其中所述抗CD40抗體包含：a)重鏈可變結構域，所述重鏈可變結構域包含：HC-CDR1，其包含SEQ ID NOs: 1-8中任一所示的胺基酸序列或其變體，所述變體包含至多約3個（例如1、2或3個）胺基酸的取代；HC-CDR2，其包含SEQ ID NOs: 9-31中任一所示的胺基酸序列或其變體，所述變體包含至多約3個（例如1、2或3個）胺基酸的取代；和HC-CDR3，其包含SEQ ID NOs: 32-57中任一所示的胺基酸序列或其變體，所述變體包含至多約3個（例如1、2或3個）胺基酸的取代；以及b)輕鏈可變結構域，所述輕鏈可變結構域包含：LC-CDR1，其包含SEQ ID NOs: 58-64中任一所示的胺基酸序列或其變體，所述變體包含至多約3個（例如1、2或3個）胺基酸的取代；LC-CDR2，其包含SEQ ID NOs: 65-69中任一所示的胺基酸序列或其變體，所述變體包含至多約3個（例如1、2或3個）胺基酸的取代；和LC-CDR3，其包含SEQ ID NOs: 70-80中任一所示的胺基酸序列或其變體，所述變體包含至多約3個（例如1、2或3個）胺基酸的取代。在一些實施例中，所述IgG2是人IgG2。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種包含IgG3恆定區的全長抗CD40抗體，其中所述抗CD40抗體包含：a)重鏈可變結構域，所述重鏈可變結構域包含：HC-CDR1，其包含SEQ ID NOs: 1-8中任一所示的胺基酸序列或其變體，所述變體包含至多約3個（例如1、2或3個）胺基酸的取代，HC-CDR2，其包含SEQ ID NOs: 9-31中任一所示的胺基酸序列或其變體，所述變體包含至多約3個（例如1、2或3個）胺基酸的取代；和HC-CDR3，其包含SEQ ID NOs: 32-57中任一所示的胺基酸序列或其變體，所述變體包含至多約3個（例如1、2或3個）胺基酸的取代；以及b)輕鏈可變結構域，所述輕鏈可變結構域包含：LC-CDR1，其包含SEQ ID NOs: 58-64中任一所示的胺基酸序列或其變體，所述變體包含至多約3個（例如1、2或3個）胺基酸的取代；LC-CDR2，其包含SEQ ID NOs: 65-69中任一所示的胺基酸序列或其變體，所述變體包含至多約3個（例如1、2或3個）胺基酸的取代；和LC-CDR3，其包含SEQ ID NOs: 70-80中任一所示的胺基酸序列或其變體，所述變體包含至多約3個（例如1、2或3個）胺基酸的取代。在一些實施例中，所述IgG3是人IgG3。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種包含IgG4恆定區的全長抗CD40抗體，其中所述抗CD40抗體包含：a)重鏈可變結構域，所述重鏈可變結構域包含：HC-CDR1，其包含SEQ ID NOs: 1-8中任一所示的胺基酸序列或其變體，所述變體包含至多約3個（例如1、2或3個）胺基酸的取代；HC-CDR2，其包含SEQ ID NOs: 9-31中任一所示的胺基酸序列或其變體，所述變體包含至多約3個（例如1、2或3個）胺基酸的取代；和HC-CDR3，其包含SEQ ID NOs: 32-57中任一所示的胺基酸序列或其變體，所述變體包含至多約3個（例如1、2或3個）胺基酸的取代；以及b)輕鏈可變結構域，所述輕鏈可變結構域包含：LC-CDR1，其包含SEQ ID NOs: 58-64中任一所示的胺基酸序列或其變體，所述變體包含至多約3個（例如1、2或3個）胺基酸的取代，LC-CDR2，其包含SEQ ID NOs: 65-69中任一所示的胺基酸序列或其變體，所述變體包含至多約3個（例如1、2或3個）胺基酸的取代，和LC-CDR3，其包含SEQ ID NOs: 70-80中任一所示的胺基酸序列或其變體，所述變體包含至多約3個（例如1、2或3個）胺基酸的取代。在一些實施例中，所述IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種包含IgG1恆定區的全長抗CD40抗體，其中所述抗CD40抗體包含：a)重鏈可變結構域，所述重鏈可變結構域包含：HC-CDR1，其包含SEQ ID NOs: 1-8中任一所示的胺基酸序列，HC-CDR2，其包含SEQ ID NOs: 9-31中任一所示的胺基酸序列，和HC-CDR3，其包含SEQ ID NOs: 32-57中任一所示的胺基酸序列，或者所述重鏈可變結構域的變體，其HC-CDR序列中包含至多約5個（例如1、2、3、4或5個）胺基酸的取代；以及b)輕鏈可變結構域，所述輕鏈可變結構域包含：LC-CDR1，其包含SEQ ID NOs: 58-64中任一所示的胺基酸序列，LC-CDR2，其包含SEQ ID NOs: 65-69中任一所示的胺基酸序列，和LC-CDR3，其包含SEQ ID NOs: 70-80中任一所示的胺基酸序列，或者所述輕鏈可變結構域的變體，其LC-CDR序列中包含至多約5個（例如1、2、3、4或5個）胺基酸的取代。在一些實施例中，所述IgG1是人IgG1。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種包含IgG4恆定區的全長抗CD40抗體，其中所述抗CD40抗體包含a)重鏈可變結構域，所述重鏈可變結構域包含：HC-CDR1，其包含SEQ ID NOs: 1-8中任一所示的胺基酸序列，HC-CDR2，其包含SEQ ID NOs: 9-31中任一所示的胺基酸序列，和HC-CDR3，其包含SEQ ID NOs: 32-57中任一所示的胺基酸序列，或者所述重鏈可變結構域的變體，其HC-CDR序列中包含至多約5個（例如1、2、3、4或5個）胺基酸的取代；以及b)輕鏈可變結構域，所述輕鏈可變結構域包含：LC-CDR1，其包含SEQ ID NOs: 58-64中任一所示的胺基酸序列，LC-CDR2，包含SEQ ID NOs: 65-69中任一所示的胺基酸序列，和LC-CDR3，其包含SEQ ID NOs: 70-80中任一所示的胺基酸序列，或者所述輕鏈可變結構域的變體，其LC-CDR序列中包含至多約5個（例如1、2、3、4或5個）胺基酸的取代。在一些實施例中，所述IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種包含IgG1恆定區的全長抗CD40抗體，其中所述抗CD40抗體包含：a)重鏈可變結構域，所述重鏈可變結構域包含：：HC-CDR1，其包含SEQ ID NOs: 1-8中任一所示的胺基酸序列，HC-CDR2，其包含SEQ ID NOs: 9-31中任一所示的胺基酸序列，和HC-CDR3，其包含SEQ ID NOs: 32-57中任一所示的胺基酸序列；以及b)輕鏈可變結構域，所述輕鏈可變結構域包含：LC-CDR1，其包含SEQ ID NOs: 58-64中任一所示的胺基酸序列，LC-CDR2，其包含SEQ ID NOs: 65-69中任一所示的胺基酸序列，和LC-CDR3，其包含SEQ ID NOs: 70-80中任一所示的胺基酸序列。在一些實施例中，所述IgG1是人IgG1。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種包含IgG4恆定區的全長抗CD40抗體，其中所述抗CD40抗體包含：a)重鏈可變結構域，所述重鏈可變結構域包含：HC-CDR1，其包含SEQ ID NOs: 1-8中任一所示的胺基酸序列，HC-CDR2，其包含SEQ ID NOs: 9-31中任一所示的胺基酸序列，和HC-CDR3，其包含SEQ ID NOs: 32-57中任一所示的胺基酸序列；以及b)輕鏈可變結構域，所述輕鏈可變結構域包含：LC-CDR1，其包含SEQ ID NOs: 58-64中任一所示的胺基酸序列，LC-CDR2，其包含SEQ ID NOs: 65-69中任一所示的胺基酸序列，和LC-CDR3，其包含SEQ ID NOs: 70-80中任一所示的胺基酸序列。在一些實施例中，所述IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種包含IgG1恆定區的全長抗CD40抗體，其中所述抗CD40抗體包含：a)重鏈可變結構域，所述重鏈可變結構域包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 9，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 32；以及b)輕鏈可變結構域，所述輕鏈可變結構域包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 58，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 65，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 70。在一些實施例中，所述IgG1是人IgG1。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種包含IgG1恆定區的全長抗CD40抗體，其中所述抗CD40抗體包含：a)重鏈可變結構域，所述重鏈可變結構域包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 10，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 32；以及b)輕鏈可變結構域，所述輕鏈可變結構域包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 59，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 65，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 70。在一些實施例中，所述IgG1是人IgG1。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種包含IgG1恆定區的全長抗CD40抗體，其中所述抗CD40抗體包含：a)重鏈可變結構域，所述重鏈可變結構域包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 13，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 34；以及b)輕鏈可變結構域，所述輕鏈可變結構域包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 59，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 65，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 70。在一些實施例中，所述IgG1是人IgG1。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種包含IgG1恆定區的全長抗CD40抗體，其中所述抗CD40抗體包含：a)重鏈可變結構域，所述重鏈可變結構域包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 15，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 37；以及b)輕鏈可變結構域，所述輕鏈可變結構域包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 59，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 65，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 73。在一些實施例中，所述IgG1是人IgG1。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種包含IgG1恆定區的全長抗CD40抗體，其中所述抗CD40抗體包含：a)重鏈可變結構域，所述重鏈可變結構域包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 20，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 42；以及b)輕鏈可變結構域，所述輕鏈可變結構域包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 59，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 65，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 70。在一些實施例中，所述IgG1是人IgG1。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種包含IgG1恆定區的全長抗CD40抗體，其中所述抗CD40抗體包含：a)重鏈可變結構域，所述重鏈可變結構域包含HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 14，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 43；以及b)輕鏈可變結構域，所述輕鏈可變結構域包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 59，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 65，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 70。在一些實施例中，所述IgG1是人IgG1。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種包含IgG1恆定區的全長抗CD40抗體，其中所述抗CD40抗體包含：a)重鏈可變結構域，所述重鏈可變結構域包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 15，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 51；以及b)輕鏈可變結構域，所述輕鏈可變結構域包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 59，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 65，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 70。在一些實施例中，所述IgG1是人IgG1。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種包含IgG1恆定區的全長抗CD40抗體，其中所述抗CD40抗體包含：a)重鏈可變結構域，所述重鏈可變結構域包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 11，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 48；以及b)輕鏈可變結構域，所述輕鏈可變結構域包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 59，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 65，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 71。在一些實施例中，所述IgG1是人IgG1。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種包含IgG1恆定區的全長抗CD40抗體，其中所述抗CD40抗體包含：a)重鏈可變結構域，所述重鏈可變結構域包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 18，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 47；以及b)輕鏈可變結構域，所述輕鏈可變結構域包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 59，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 65，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 71。在一些實施例中，所述IgG1是人IgG1。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種包含IgG1恆定區的全長抗CD40抗體，其中所述抗CD40抗體包含：a)重鏈可變結構域，所述重鏈可變結構域包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 4，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 27，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 53；以及b)輕鏈可變結構域，所述輕鏈可變結構域包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 62，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 67，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 78。在一些實施例中，所述IgG1是人IgG1。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種包含IgG1恆定區的全長抗CD40抗體，其中所述抗CD40抗體包含：a)重鏈可變結構域，所述重鏈可變結構域包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 5，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 27，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 54；以及b)輕鏈可變結構域，所述輕鏈可變結構域包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 62，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 67，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 78。在一些實施例中，所述IgG1是人IgG1。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種包含IgG1恆定區的全長抗CD40抗體，其中所述抗CD40抗體包含：a)重鏈可變結構域，所述重鏈可變結構域包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 6，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 28，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 55；以及b)輕鏈可變結構域，所述輕鏈可變結構域包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 63，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 68，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 79。在一些實施例中，所述IgG1是人IgG1。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種包含IgG1恆定區的全長抗CD40抗體，其中所述抗CD40抗體包含：a)重鏈可變結構域，所述重鏈可變結構域包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 7，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 29，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 56；以及b)輕鏈可變結構域，所述輕鏈可變結構域包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 64，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 69，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 80。在一些實施例中，所述IgG1是人IgG1。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種包含IgG1恆定區的全長抗CD40抗體，其中所述抗CD40抗體包含：a)重鏈可變結構域，所述重鏈可變結構域包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 8，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 30，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 57；以及b)輕鏈可變結構域，所述輕鏈可變結構域包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 62，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 67，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 80。在一些實施例中，所述IgG1是人IgG1。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種包含IgG1恆定區的全長抗CD40抗體，其中所述抗CD40抗體包含：a)重鏈可變結構域，所述重鏈可變結構域包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 4，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 31，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 53；以及b)輕鏈可變結構域，所述輕鏈可變結構域包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 62，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 68，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 79。在一些實施例中，所述IgG1是人IgG1。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種包含IgG4恆定區的全長抗CD40抗體，其中所述抗CD40抗體包含：a)重鏈可變結構域，所述重鏈可變結構域包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 9，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 32；以及b)輕鏈可變結構域，所述輕鏈可變結構域包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 58，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 65，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 70。在一些實施例中，所述IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種包含IgG4恆定區的全長抗CD40抗體，其中所述抗CD40抗體包含：a)重鏈可變結構域，所述重鏈可變結構域包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 10，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 32；以及b)輕鏈可變結構域，所述輕鏈可變結構域包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 59，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 65，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 70。在一些實施例中，所述IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種包含IgG4恆定區的全長抗CD40抗體，其中所述抗CD40抗體包含：a)重鏈可變結構域，所述重鏈可變結構域包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 13，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 34；以及b)輕鏈可變結構域，所述輕鏈可變結構域包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 59，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 65，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 70。在一些實施例中，所述IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種包含IgG4恆定區的全長抗CD40抗體，其中所述抗CD40抗體包含：a)重鏈可變結構域，所述重鏈可變結構域包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 15，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 37；以及b)輕鏈可變結構域，所述輕鏈可變結構域包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 59，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 65，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 73。在一些實施例中，所述IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種包含IgG4恆定區的全長抗CD40抗體，其中所述抗CD40抗體包含：a)重鏈可變結構域，所述重鏈可變結構域包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 20，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 42；以及b)輕鏈可變結構域，所述輕鏈可變結構域包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 59，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 65，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 70。在一些實施例中，所述IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種包含IgG4恆定區的全長抗CD40抗體，其中所述抗CD40抗體包含：a)重鏈可變結構域，所述重鏈可變結構域包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 14，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 43；以及b)輕鏈可變結構域，所述輕鏈可變結構域包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 59，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 65，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 70。在一些實施例中，所述IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種包含IgG4恆定區的全長抗CD40抗體，其中所述抗CD40抗體包含：a)重鏈可變結構域，所述重鏈可變結構域包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 15，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 51；以及b)輕鏈可變結構域，所述輕鏈可變結構域包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 59，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 65，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 70。在一些實施例中，所述IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種包含IgG4恆定區的全長抗CD40抗體，其中所述抗CD40抗體包含：a)重鏈可變結構域，所述重鏈可變結構域包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 11，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 48；以及b)輕鏈可變結構域，所述輕鏈可變結構域包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 59，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 65，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 71。在一些實施例中，所述IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種包含IgG4恆定區的全長抗CD40抗體，其中所述抗CD40抗體包含：a)重鏈可變結構域，所述重鏈可變結構域包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 18，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 47；以及b)輕鏈可變結構域，所述輕鏈可變結構域包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 59，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 65，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 71。在一些實施例中，所述IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種包含IgG4恆定區的全長抗CD40抗體，其中所述抗CD40抗體包含：a)重鏈可變結構域，所述重鏈可變結構域包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 4，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 27，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 53；以及b)輕鏈可變結構域，所述輕鏈可變結構域包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 62，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 67，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 78。在一些實施例中，所述IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種包含IgG4恆定區的全長抗CD40抗體，其中所述抗CD40抗體包含：a)重鏈可變結構域，所述重鏈可變結構域包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 5，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 27，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 54；以及b)輕鏈可變結構域，所述輕鏈可變結構域包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 62，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 67，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 78。在一些實施例中，所述IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種包含IgG4恆定區的全長抗CD40抗體，其中所述抗CD40抗體包含：a)重鏈可變結構域，所述重鏈可變結構域包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 6，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 28，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 55；以及b)輕鏈可變結構域，所述輕鏈可變結構域包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 63，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 68，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 79。在一些實施例中，所述IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種包含IgG4恆定區的全長抗CD40抗體，其中所述抗CD40抗體包含：a)重鏈可變結構域，所述重鏈可變結構域包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 7，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 29，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 56；以及b)輕鏈可變結構域，所述輕鏈可變結構域包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 64，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 69，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 80。在一些實施例中，所述IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種包含IgG4恆定區的全長抗CD40抗體，其中所述抗CD40抗體包含：a)重鏈可變結構域，所述重鏈可變結構域包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 8，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 30，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 57；以及b)輕鏈可變結構域，所述輕鏈可變結構域包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 62，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 67，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 80。在一些實施例中，所述IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種包含IgG4恆定區的全長抗CD40抗體，其中所述抗CD40抗體包含：a)重鏈可變結構域，所述重鏈可變結構域包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 4，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 31，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 53；以及b)輕鏈可變結構域，所述輕鏈可變結構域包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 62，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 68，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 79。在一些實施例中，所述IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種包含IgG1恆定區的全長抗CD40抗體，其中抗CD40抗體包含：重鏈可變結構域（V H），所述V H包含SEQ ID NOs: 87-125中任一所示的胺基酸序列或其變體，所述變體與SEQ ID NOs: 87-125中任一所示的胺基酸序列具有至少約90%（例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性；以及輕鏈可變結構域（V L），所述V L包含SEQ ID NOs: 126-144中任一所示的胺基酸序列或其變體，所述變體與SEQ ID NOs: 126-144中任一所示的胺基酸序列具有至少約90%（例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性。在一些實施例中，所述IgG1是人IgG1。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種包含IgG2恆定區的全長抗CD40抗體，其中抗CD40抗體包含：重鏈可變結構域（V H），所述V H包含SEQ ID NOs: 87-125中任一所示的胺基酸序列或其變體，所述變體與SEQ ID NOs: 87-125中任一所示的胺基酸序列具有至少約90%（例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性；以及輕鏈可變結構域（V L），所述V L包含SEQ ID NOs: 126-144中任一所示的胺基酸序列或其變體，所述變體與SEQ ID NOs: 126-144中任一所示的胺基酸序列具有至少約90%（例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性。在一些實施例中，所述IgG2是人IgG2。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種包含IgG3恆定區的全長抗CD40抗體，其中抗CD40抗體包含：重鏈可變結構域（V H），所述V H包含SEQ ID NOs: 87-125中任一所示的胺基酸序列或其變體，所述變體與SEQ ID NOs: 87-125中任一所示的胺基酸序列具有至少約90%（例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性；以及輕鏈可變結構域（V L），所述V L包含SEQ ID NOs: 126-144中任一所示的胺基酸序列或其變體，所述變體與SEQ ID NOs: 126-144中任一所示的胺基酸序列具有至少約90%（例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性。在一些實施例中，所述IgG3是人IgG3。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種包含IgG4恆定區的全長抗CD40抗體，其中抗CD40抗體包含：重鏈可變結構域（V H），所述V H包含SEQ ID NOs: 87-125中任一所示的胺基酸序列或其變體，所述變體與SEQ ID NOs: 87-125中任一所示的胺基酸序列具有至少約90%（例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性；以及輕鏈可變結構域（V L），所述V L包含SEQ ID NOs: 126-144中任一所示的胺基酸序列或其變體，所述變體與SEQ ID NOs: 126-144中任一所示的胺基酸序列具有至少約90%（例如至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%）序列同一性。在一些實施例中，所述IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種包含IgG1恆定區的全長抗CD40抗體，其中抗CD40抗體包含：重鏈可變結構域（V H），所述V H包含SEQ ID NOs: 87-125中任一所示的胺基酸序列，以及輕鏈可變結構域（V L），所述V L包含SEQ ID NOs: 126-144中任一所示的胺基酸序列。在一些實施例中，所述IgG1是人IgG1。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種包含IgG4恆定區的全長抗CD40抗體，其中抗CD40抗體包含：重鏈可變結構域（V H），所述V H包含SEQ ID NOs: 87-125中任一所示的胺基酸序列，以及輕鏈可變結構域（V L），所述V L包含SEQ ID NOs: 126-144中任一所示的胺基酸序列。在一些實施例中，所述IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種包含IgG1恆定區的全長抗CD40抗體，其中抗CD40抗體包含：V H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 87或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 87具有至少約90%序列同一性；以及V L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 126或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 126具有至少約90%序列同一性。在一些實施例中，所述IgG1是人IgG1。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種包含IgG1恆定區的全長抗CD40抗體，其中抗CD40抗體包含：V H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 88或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 88具有至少約90%序列同一性；以及V L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 127或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 127具有至少約90%序列同一性列。在一些實施例中，所述IgG1是人IgG1。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種包含IgG1恆定區的全長抗CD40抗體，其中抗CD40抗體包含：V H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 89或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 89具有至少約90%序列同一性；以及V L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 128或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 128具有至少約90%序列同一性。在一些實施例中，所述IgG1是人IgG1。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種包含IgG1恆定區的全長抗CD40抗體，其中抗CD40抗體包含：V H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 94或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 94具有至少約90%序列同一性；以及V L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 128或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 128具有至少約90%序列同一性。在一些實施例中，所述IgG1是人IgG1。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種包含IgG1恆定區的全長抗CD40抗體，其中抗CD40抗體包含：V H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 96或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 96具有至少約90%序列同一性；以及V L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 132或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 132具有至少約90%序列同一性。在一些實施例中，所述IgG1是人IgG1。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種包含IgG1恆定區的全長抗CD40抗體，其中抗CD40抗體包含：V H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 101或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 101具有至少約90%序列同一性；以及V L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 128或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 128具有至少約90%序列同一性。在一些實施例中，所述IgG1是人IgG1。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種包含IgG1恆定區的全長抗CD40抗體，其中抗CD40抗體包含：V H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 110或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 110具有至少約90%序列同一性；以及V L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 128或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 128具有至少約90%序列同一性。在一些實施例中，所述IgG1是人IgG1。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種包含IgG1恆定區的全長抗CD40抗體，其中抗CD40抗體包含：V H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 114或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 114具有至少約90%序列同一性；以及V L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 128或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 128具有至少約90%序列同一性。在一些實施例中，所述IgG1是人IgG1。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種包含IgG1恆定區的全長抗CD40抗體，其中抗CD40抗體包含：V H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 115或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 115具有至少約90%序列同一性；以及V L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 129或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 129具有至少約90%序列同一性。在一些實施例中，所述IgG1是人IgG1。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種包含IgG1恆定區的全長抗CD40抗體，其中抗CD40抗體包含：V H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 117或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 117具有至少約90%序列同一性；以及V L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 129或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 129具有至少約90%序列同一性。在一些實施例中，所述IgG1是人IgG1。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種包含IgG1恆定區的全長抗CD40抗體，其中抗CD40抗體包含：V H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 120或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 120具有至少約90%序列同一性；以及V L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 139或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 139具有至少約90%序列同一性。在一些實施例中，所述IgG1是人IgG1。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種包含IgG1恆定區的全長抗CD40抗體，其中抗CD40抗體包含：V H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 121或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 121具有至少約90%序列同一性；以及V L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 140或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 140具有至少約90%序列同一性。在一些實施例中，所述IgG1是人IgG1。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種包含IgG1恆定區的全長抗CD40抗體，其中抗CD40抗體包含：V H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 122或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 122具有至少約90%序列同一性；以及V L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 141或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 141具有至少約90%序列同一性。在一些實施例中，所述IgG1是人IgG1。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種包含IgG1恆定區的全長抗CD40抗體，其中抗CD40抗體包含：V H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 123或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 123具有至少約90%序列同一性；以及V L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 142或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 142具有至少約90%序列同一性。在一些實施例中，所述IgG1是人IgG1。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種包含IgG1恆定區的全長抗CD40抗體，其中抗CD40抗體包含：V H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 124或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 124具有至少約90%序列同一性；以及V L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 143或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 143具有至少約90%序列同一性。在一些實施例中，所述IgG1是人IgG1。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種包含IgG1恆定區的全長抗CD40抗體，其中抗CD40抗體包含：V H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 125或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 125具有至少約90%序列同一性；以及V L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 144或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 144具有至少約90%序列同一性。在一些實施例中，所述IgG1是人IgG1。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種包含IgG4恆定區的全長抗CD40抗體，其中抗CD40抗體包含：V H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 87或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 87具有至少約90%序列同一性；以及V L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 126或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 126具有至少約90%序列同一性。在一些實施例中，所述IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種包含IgG4恆定區的全長抗CD40抗體，其中抗CD40抗體包含：V H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 88或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 88具有至少約90%序列同一性；以及V L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 127或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 127具有至少約90%序列同一性。在一些實施例中，所述IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種包含IgG4恆定區的全長抗CD40抗體，其中抗CD40抗體包含：V H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 89或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 89具有至少約90%序列同一性；以及V L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 128或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 128具有至少約90%序列同一性。在一些實施例中，所述IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種包含IgG4恆定區的全長抗CD40抗體，其中抗CD40抗體包含：V H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 94或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 94具有至少約90%序列同一性；以及V L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 128或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 128具有至少約90%序列同一性。在一些實施例中，所述IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種包含IgG4恆定區的全長抗CD40抗體，其中抗CD40抗體包含：V H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 96或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 96具有至少約90%序列同一性；以及V L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 132或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 132具有至少約90%序列同一性。在一些實施例中，所述IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種包含IgG4恆定區的全長抗CD40抗體，其中抗CD40抗體包含：V H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 101或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 101具有至少約90%序列同一性；以及V L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 128或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 128具有至少約90%序列同一性。在一些實施例中，所述IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種包含IgG4恆定區的全長抗CD40抗體，其中抗CD40抗體包含：V H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 110或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 110具有至少約90%序列同一性；以及V L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 128或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 128具有至少約90%序列同一性。在一些實施例中，所述IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種包含IgG4恆定區的全長抗CD40抗體，其中抗CD40抗體包含：V H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 114或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 114具有至少約90%序列同一性；以及V L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 128或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 128具有至少約90%序列同一性。在一些實施例中，所述IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種包含IgG4恆定區的全長抗CD40抗體，其中抗CD40抗體包含：V H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 115或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 115具有至少約90%序列同一性；以及V L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 129或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 129具有至少約90%序列同一性。在一些實施例中，所述IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種包含IgG4恆定區的全長抗CD40抗體，其中抗CD40抗體包含：V H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 117或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 117具有至少約90%序列同一性；以及V L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 129或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 129具有至少約90%序列同一性。在一些實施例中，所述IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種包含IgG4恆定區的全長抗CD40抗體，其中抗CD40抗體包含：V H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 120或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 120具有至少約90%序列同一性；以及V L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 139或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 139具有至少約90%序列同一性。在一些實施例中，所述IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種包含IgG4恆定區的全長抗CD40抗體，其中抗CD40抗體包含：V H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 121或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 121具有至少約90%序列同一性；以及V L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 140或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 140具有至少約90%序列同一性。在一些實施例中，所述IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種包含IgG4恆定區的全長抗CD40抗體，其中抗CD40抗體包含：V H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 122或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 122具有至少約90%序列同一性；以及V L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 141或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 141具有至少約90%序列同一性。在一些實施例中，所述IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種包含IgG4恆定區的全長抗CD40抗體，其中抗CD40抗體包含：V H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 123或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 123具有至少約90%序列同一性；以及V L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 142或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 142具有至少約90%序列同一性。在一些實施例中，所述IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種包含IgG4恆定區的全長抗CD40抗體，其中抗CD40抗體包含：V H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 124或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 124具有至少約90%序列同一性；以及V L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 143或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 143具有至少約90%序列同一性。在一些實施例中，所述IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種包含IgG4恆定區的全長抗CD40抗體，其中抗CD40抗體包含：V H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 125或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 125具有至少約90%序列同一性；以及V L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 144或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 144具有至少約90%序列同一性。在一些實施例中，所述IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成以及輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
結合親和力
結合親和力採用Kd、Koff、Kon或Ka表示。如本文所用，術語Koff是指抗體從抗原/抗體複合物中解離的速率常數，藉由動力學選擇裝置測定。術語Kon是指抗體與抗原結合形成抗原/抗體複合物的結合速率常數。本文所用的平衡解離常數Kd是指特定抗體抗原相互作用時的解離常數，是指在抗體分子溶液中，抗原佔據所有抗體結合位點的一半並且達到平衡時所需的抗原濃度，等於Koff/Kon。Kd的測定假設所有的結合分子均在溶液中。抗體與細胞壁連接的情況，例如在酵母表達系統中，相應的平衡解離速率常數採用EC 50來表示，其是Kd的一個良好的近似值。親和結合常數Ka是解離常數Kd的倒數。
解離常數（Kd）可以作為反應抗體部分與抗原親和力的指標。例如，可以藉由Scatchard方法使用標記有各種標記物的抗體，和Biacore儀器（由Amersham Biosciences製造）進行簡單分析，根據使用者手冊或附帶試劑盒，藉由表面電漿共振來分析生物分子間的相互作用。使用這些方法得到的Kd值，用單位M來表示。與靶標特異性結合的抗體可能具有，例如≤ 10 -7M、≤ 10 -8M、≤ 10 -9M、≤ 10 -10M、≤ 10 -11M、≤ 10 -12M或≤ 10 -13M的Kd值。
抗體的結合特異性可以藉由本領域已知的方法進行實驗測定。這些方法包括，但不限於Western blots、ELISA-、RIA-、ECL-、IRMA-、EIA-、BIAcore測試和肽掃描等。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體特異性結合CD40靶標，其Kd值為10 -7M至10 -13M（例如10 -7M至10 -13M、10 -8M至10 -13M、10 -9M至10 -13M或10 -10M至10 -12M）。因此，在一些實施例中，抗CD40抗體與CD40之間結合的Kd值為10 -7M至10 -13M、1×10 -7M至5×10 -13M、10 -7M至10 -12M、10 -7M至10 -11M、10 -7M至10 -10M、10 -7M至10 -9M、10 -8M至10 -13M、1×10 -8M至5×10 -13M、10 -8M至10 -12M、10 -8M至10 -11M、10 -8M至10 -10M、10 -8M至10 -9M、5×10 -9M至1×10 -13M、5×10 -9M至1×10 -12M、5×10 -9M至1×10 -11M、5×10 -9M至1×10 -10M、10 -9M至10 -13M、10 -9M至10 -12M、10 -9M至10 -11M、10 -9M至10 -10M、5×10 -10M至1×10 -13M、5×10 -10M至1×10 -12M、5×10 -10M至1×10 -11M、10 -10M至10 -13M、1×10 -10M至5×10 -13M、1×10 -10M至1×10 -12M、1×10 -10M至5×10 -12M、1×10 -10M至1×10 -11M、10 -11M至10 -13M、1×10 -11M至5×10 -13M、10 -11M至10 -12M、10 -12M至10 -13M。在一些實施例中，抗CD40抗體與CD40之間結合的Kd值為10 -7M至10 -13M。
在一些實施例中，抗CD40抗體與非靶標之間結合的Kd值高於抗CD40抗體與靶標的Kd值，並且本文中引用的一些實施例中，抗CD40抗體與靶標（例如，CD40）的結合親和力高於抗CD40抗體與非靶標的結合親和力。一些實施例中，非靶標是指非CD40的抗原。在一些實施例中，抗CD40抗體（針對CD40）與非CD40靶標結合的Kd值間至少相差10倍，例如10-100倍、100-1000倍、10 3-10 4倍、10 4-10 5倍、10 5-10 6倍、10 6-10 7倍、10 7-10 8倍、10 8-10 9倍、10 9-10 10倍、10 10-10 11倍、10 11-10 12倍。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體與非靶標結合的Kd值為10 -1M至10 -6M（例如10 -1M至10 -6M、10 -1M至10 -5M、10 -2M至10 -4M）。在一些實施例中，所述非靶標是指非CD40的抗原。因此，在一些實施例中，抗CD40抗體與非CD40靶標之間結合的Kd值為10 -1M至10 -6M、1×10 -1M至5×10 -6M、10 -1M至10 -5M、1×10 -1M至5×10 -5M、10 -1M至10 -4M、1×10 -1M至5×10 -4M、10 -1M至10 -3M、1×10 -1M至5×10 -3M、10 -1M至10 -2M、10 -2M至10 -6M、1×10 -2M至5×10 -6M、10 -2M至10 -5M、1×10 -2M至5×10 -5M、10 -2M至10 -4M、1×10 -2M至5×10 -4M、10 -2M至10 -3M、10 -3M至10 -6M、1×10 -3M至5×10 -6M、10 -3M至10 -5M、1×10 -3M至5×10 -5M、10 -3M至10 -4M、10 -4M至10 -6M、1×10 -4M至5×10 -6M、10 -4M至10 -5M、10 -5M至10 -6M。
在一些實施例中，當提及抗CD40抗體以高結合親和力特異性地識別CD40靶標，並以低結合親和力結合非靶標時，所述抗CD40抗體與CD40靶標結合的Kd值為10 -7M至10 -13M（例如10 -7M至10 -13M、10 -8M至10 -13M、10 -9M至10 -13M、10 -10M至10 -12M），並且與非靶標結合的Kd值為10 -1M至10 -6M（例如10 -1M至10 -6M、10 -1M至10 -5M、10 -2M至10 -4M）。
在一些實施例中，當提及抗CD40抗體特異性地識別CD40時，將所述抗CD40抗體的結合親和力與對照抗CD40抗體（例如ASKP1240）的結合親和力進行比較。在一些實施例中，對照抗CD40抗體與CD40之間結合的Kd值可以是本發明所述的抗CD40抗體與CD40之間結合的Kd值的至少2倍，例如2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、10-100倍、100-1000倍、10 3-10 4倍。
核酸
編碼抗CD40抗體的核酸分子也被考慮在內。在一些實施例中，提供一種（或一組）編碼全長抗CD40抗體的核酸，包括本文所述的任一種全長抗CD40抗體。在一些實施例中，本文所述的抗CD40抗體的核酸（或一組核酸）還可以包括編碼多肽標籤的核酸序列（例如蛋白純化標籤，His標籤、HA標籤）。
同時本文還考慮了包含抗CD40抗體的分離的宿主細胞，編碼抗CD40抗體多肽組分的分離的核酸，或者包含編碼本文所述的抗CD40抗體多肽組分的核酸的載體。
本發明還包括這些核酸序列的變體。例如，變體包括至少在中等嚴格雜交條件下與編碼本發明的抗CD40抗體的核酸序列雜交的核苷酸序列。
本發明同時還提供可將本發明中核酸序列插入到其中的載體。
簡言之，將編碼抗CD40抗體的天然或合成的核酸插入到合適的表達載體中，使得核酸可操作性的連接到5’和3’端調控元件，例如包括啟動子（例如淋巴細胞特異性啟動子）和3’非翻譯區（UTR），可表達抗CD40抗體（例如全長的抗CD40抗體）。所述載體可適用於在真核宿主細胞中複製和整合。典型的選殖與表達載體包含調控目標核酸序列的表達的轉錄和翻譯終止子、起始序列和啟動子。
本發明所述的核酸也可以藉由使用標準的基因遞送方案，用於核酸免疫和基因治療。核酸遞送方法是本領域已知的。例如參見U.S.Pat.Nos.5,399,346、5,580,859、5,589,466，藉由引用其全部內容併入本文。在一些實施例中，本發明還提供基因治療載體。
可以將核酸選殖到許多類型的載體中。例如，可以將核酸選殖到載體中，所述載體包括，但不限於，質粒、噬菌粒、噬菌體衍生物、動物病毒和柯斯質粒。特別感興趣的載體包括表達載體、複製載體、探針生成載體和測序載體。
此外，表達載體可以以病毒載體的形式提供給細胞。病毒載體技術是本領域熟知的，並且描述於例如Green and Sambrook （2013, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, New York），以及其它病毒學或分子生物學手冊中。可用作載體的病毒包括，但不限於，逆轉錄病毒、腺病毒、腺相關病毒、皰疹病毒和慢病毒。通常，合適的載體包括一個在至少一種生物體中起作用的複製起點、啟動子序列、方便的限制性內切酶位點以及一個或多個選擇標記物（參見例如，WO 01/96584; WO 01/29058; 和U.S. Pat. No. 6,326,193）。
已經開發了許多基於病毒的系統，用於將基因轉移到哺乳動物細胞中。例如，逆轉錄病毒為基因遞送系統提供了便利的平台。可以應用本領域已知的技術，將選擇的基因插入載體中並包裝在逆轉錄病毒顆粒中。然後分離重組病毒，在體內或體外遞送至受試者的細胞中。許多逆轉錄病毒系統在本領域中是已知的。在一些實施例中，使用腺病毒載體。許多腺病毒載體在本領域中是已知的。在一些實施例中，使用慢病毒載體。衍生自逆轉錄病毒的載體，例如慢病毒，是實現長期基因轉移的合適工具，因為它們使得轉基因長期穩定的整合以及在子代細胞中繁殖。慢病毒載體相對於衍生自腫瘤的逆轉錄病毒例如小鼠白血病病毒具有額外的優勢，因為它們可以轉導非分裂細胞，例如肝細胞。同時，其還具有低免疫原性的額外優勢。
其它的啟動子元件，例如，增強子，調控轉錄起始頻率。通常它們位於起始位點上游30-110bp處，雖然最近發現很多啟動子也包含起始位點下游的功能元件。啟動子元件之間的間隔通常是靈活的，所以當元件彼此之間位置互換或移動時仍保持啟動子的功能。在胸苷激酶（tk）啟動子中，啟動子元件之間的間隔增加到50bp活性才會開始下降。
合適啟動子的一個示例是即時早期巨細胞病毒（CMV）啟動子序列。該啟動子序列是一個很強的組成型啟動子序列，可以驅動任何與其可操作性連接的多核苷酸序列高水平表達。合適啟動子的另一個示例是延伸因子1α（EF-1α）啟動子。然而，也可以使用其它組成型啟動子，包括但不限於猿猴病毒40（SV40）早期啟動子、小鼠乳腺腫瘤病毒（MMTV）、人免病缺陷病毒長末端重複序列（HIV-LTR）啟動子、MoMuLV啟動子、禽類白血病病毒啟動子、Epstein-Barr病毒即刻早期啟動子、勞斯氏肉瘤病毒啟動子以及人類基因啟動子，例如包括但不限於肌動蛋白啟動子、肌球蛋白啟動子、血紅蛋白啟動子和肌酸激酶啟動子。此外，不應將本發明局限在僅使用組成型啟動子，誘導型啟動子也是本發明考慮的部分。誘導型啟動子的使用提供了一種分子開關，當需要這種表達時，能啟動其與之可操作性連接的多核苷酸序列表達，當不需要時，則關閉表達。誘導型啟動子包含，但不局限於，金屬硫蛋白啟動子、糖皮質激素啟動子、孕酮啟動子和四環素啟動子。
在一些實施例中，抗CD40抗體的表達是可誘導的。在一些實施例中，編碼抗CD40抗體的核酸序列可操作的連接到誘導型啟動子上，包括本文所述的任一誘導型啟動子。
誘導型啟動子
誘導型啟動子的使用提供了一種分子開關，當需要表達時，可啟動與之可操作性連接的多核苷酸序列表達，而在不需要表達時，則關閉表達。真核細胞中適用的示例性誘導型啟動子包括，但不限於，激素調節元件（例如，參見Mader, S. and White, J. H.（1993） Proc. Natl. Acad. Sci. USA90:5603-5607）、合成配體調節元件（參見Spencer, D. M. et al （ 1993 ） Science262: 1019-1024）以及電離輻射調控元件（參見Manome, Y. et al. （ 1993 ） Biochemistry32: 10607-10613; Datta, R. et al. （ 1992 ） Proc. Natl. Acad. Sci. USA89: 1014- 10153）。其它適用於體內或體外哺乳動物系統的示例性誘導型啟動子參見Gingrich et al. （ 1998 ） Annual Rev. Neurosci21:377-405。在一些實施例中，用於表達抗CD40抗體的誘導型啟動子系統為Tet系統。在一些實施例中，用於表達抗CD40抗體的誘導型啟動子系統為大腸桿菌lac抑制系統。
本發明所採用的一個示例性誘導型啟動子系統為Tet系統。該系統是基於Gossen等（1993）描述的Tet系統。在一個示例性實施例中，目標多核苷酸由包含一個或多個Tet操縱子（TetO）位點的啟動子控制。在非啟動狀態，Tet阻遏物（TetR）與TetO位點結合並抑制啟動子的轉錄。在啟動狀態，例如，在存在誘導劑如四環素（Tc）、無水四環素、多西環素（Dox）或其活性類似物的情況下，誘導劑會使TetR從TetO上釋放，從而導致轉錄發生。多西環素是四環素抗生素家族中的一員，其化學名為1-二甲氨基-2,4a,5,7-五羥基-11-甲基-4,6-二氧基-1,4a,11,11a,12,12a-六氫四烯-3-甲醯胺。
在一個實施例中，TetR經密碼子優化適用於在哺乳動物細胞中表達，例如小鼠或人類細胞。由於遺傳密碼的簡併性，大多數胺基酸由不止一個密碼子編碼，從而使得給定核酸的序列具有大量的變體，而其編碼的胺基酸序列沒有任何改變。然而，許多生物體在密碼子使用方面存在差異，也稱為“密碼子偏好”（即，給定胺基酸使用特定密碼子的偏好）。密碼子偏好通常與特定密碼子的優勢tRNA種類的存在有關，反過來又提高了mRNA翻譯的效率。因此可以藉由密碼子優化來定制源自特定物種的編碼序列（例如，原核生物），以提高其在不同物種（例如，真核生物）中的表達。
Tet系統的其它具體變體，包括以下的“Tet-Off”和“Tet-On”系統。在Tet-off系統中，轉錄在Tc或Dox存在下是失活的。在該系統中，由TetR與單純皰疹病毒VP16強轉錄啟動結構域融合組成的四環素調控的轉錄啟動蛋白（tTA），在四環素反應啟動子元件（TRE）轉錄控制下調控靶核酸的表達。TRE元件由TetO序列串聯與啟動子（通常是來源於人巨細胞病毒即刻早期啟動子的最小啟動子序列）融合組成。在不存在Tc或Dox的情況下，tTA結合TRE並啟動靶基因的轉錄。在存在Tc或Dox的情況下，tTA不能結合TRE，靶基因不能表達。
相反，在Tet-On系統中，轉錄在Tc或Dox存在下是啟動的。Tet-On系統是基於反向四環素調控的轉錄啟動因子rtTA。與tTA一樣，rtTA是由TetR阻遏物與VP16轉錄啟動結構域組成的融合蛋白。然而，TetR的DNA結合區中4個胺基酸的變化改變了rtTA的結合特性，使其在存在Dox的情況下只能識別靶轉基因TRE上的tetO序列。所以在Tet-On系統中，只有在存在Dox的情況下，rtTA才能啟動TRE調控的靶基因的轉錄。
另一種誘導型啟動子系統是大腸桿菌的lac阻遏物系統（參見Brown et al., Cell49:603-612（1987））。Lac阻遏物系統藉由調控與包含lac操縱子（lacO）的啟動子可操作性連接的目標多核苷酸的轉錄發揮功能。Lac阻遏物（lacR）與LacO結合，進而阻止目標多核苷酸的轉錄。藉由合適的誘導劑來誘導目標多核苷酸的表達，例如，異丙基-β-D硫代半乳糖吡喃苷（IPTG）。
為了評估多肽或其部分的表達，待導入細胞的表達載體還可包含選擇標記基因或報導基因或二者都有，以便於從病毒載體轉染或感染的細胞群體中識別和選擇表達細胞。在其他方面，選擇標記可以攜帶在單獨的DNA片段上並在共轉染實驗中使用。選擇標記基因或報導基因都可側接於合適的調控序列，使其在宿主細胞中能夠表達。有用的選擇標記包括，例如，抗生素耐藥基因，如neo以及類似基因。
報導基因可用於鑒定潛在的轉染細胞和評價調控序列的功能。通常，報導基因是不存在於受體生物體或組織中或不由受體生物體或組織表達的基因，其編碼一種多肽，其表達表現為一些易於檢測的特性，例如酶活性。當DNA導入受體細胞後，在合適的時間檢測報導基因的表達。合適的報導基因可包括編碼螢光素酶、β-半乳糖苷酶、氯黴素乙醯轉移酶、分泌鹼性磷酸酶或綠色螢光蛋白的基因（參見, Ui-Tel et al., 2000 FEBS Letters479: 79-82）。合適的表達系統是公知的，可以藉由已知的技術製備或藉由商業途徑獲得。通常，把可顯示報導基因最高表達水平的最小5’側翼區的構建體認定為啟動子。此類啟動子區可以與報導基因連接，並用於評估某些物質在調節啟動子驅動的轉錄中能力。
在一些實施例中，提供編碼本文所述的任一種全長抗CD40抗體的核酸。在一些實施例中，所述核酸包括編碼全長抗CD40抗體重鏈和輕鏈的一個或多個核酸序列。在一些實施例中，所述一個或多個核酸序列中的每一個包含在單獨的載體中。在一些實施例中，至少有一些核酸序列包含在同一載體中。在一些實施例中，所有核酸序列包含在同一載體中。載體可以選自，例如，哺乳動物表達載體和病毒載體（如源自逆轉錄病毒、腺病毒、腺相關病毒、皰疹病毒和慢病毒的載體）。
將基因導入細胞並表達的方法在本領域是已知的。在表達載體的上下文中，藉由本領域的任何方法載體可以很容易地導入宿主細胞中，如哺乳動物細胞、細菌、酵母或昆蟲細胞。例如表達載體可以藉由物理、化學或生物方法導入宿主細胞。
將多核苷酸導入宿主細胞的物理方法包括磷酸鈣沉澱、脂質體轉染、基因槍法、顯微注射、電穿孔法以及諸如此類。製備包含載體和/或外源核酸的細胞的方法在本領域是熟知的。參見例如Green and Sambrook (2013, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, New York)。在一些實施例中，藉由磷酸鈣轉染法將多核苷酸導入宿主細胞。
將目標多核苷酸導入宿主細胞的生物學方法包括使用DNA和RNA載體。病毒載體，特別是逆轉錄病毒載體，已成為將基因插入哺乳動物細胞，例如人類細胞中的最廣泛使用的方法。其它病毒載體可以源自慢病毒、痘病毒、單純皰疹病毒1型、腺病毒和腺相關病毒等。參見如U.S. Pat. Nos. 5,350,674 和5,585,362。
將多核苷酸導入宿主細胞的化學方法包括膠體分散系統，例如高分子複合物、奈米膠囊、微球、磁珠和以脂質為基礎的系統，其包括水包油乳劑、膠團、混合膠團和脂質體。一種在體內和體外被用作遞送載體的示例性膠體系統是脂質體（例如，人工膜囊）。
在使用非病毒遞送系統的情況下，示例性的遞送載體是脂質體。考慮使用脂質製劑將核酸導入宿主細胞（體外、離體或體內）。在另一方面，所述核酸可以與脂質結合。與脂質結合的核酸可被包裹進脂質體的水性內部，散佈在脂質體的脂質雙層內，藉由與脂質體和寡核苷酸結合的連接分子連接在脂質體，包埋在脂質體中，與脂質體形成複合物，分散在含有脂質的溶液中，與脂質混合，與脂質結合，懸浮在脂質中，包含在膠束中或與膠束混合，或以其它方式與脂質結合。脂質、脂質/DNA或脂質/表達載體相關的組合物在溶液中不限於任何特定結構。例如，它們可能以雙分子層結構、以膠束或以“塌陷”結構存在。它們也可以簡單的分散在溶液中，可能形成大小或形狀不均勻的聚集體。脂質是脂肪物質，可以是天然存在的或是合成的脂質。例如，脂質包括天然存在於細胞質中的脂肪滴，以及含有長鏈脂肪烴及其衍生物的一類化合物，例如脂肪酸、醇、胺、氨基醇和醛。
無論採用何種方法將外源核酸導入宿主細胞中或以其他方式將細胞暴露於本發明的抑制劑中，為了確認重組DNA序列存在於宿主細胞中，可以進行多種實驗。這類實驗包括例如本領域技術人員熟知的“分子生物學”實驗。例如Southern和Northern blotting，RT-PCR和PCR；“生物化學”實驗，例如檢測某一特定多肽存在或不存在，例如藉由免疫學方法（ELISAs和Western blots）或者藉由本文所述的實驗來進行鑒定均落入本發明範圍內。
抗CD40抗體的製備
在一些實施例中，所述抗CD40抗體是單株抗體或源於單株抗體。在一些實施例中，所述抗CD40抗體包括來自單株抗體的V H和V L，或者其變體。在一些實施例中，所述抗CD40抗體進一步包括來自單株抗體的CH1和CL區域，或者其變體。單株抗體可以應用例如本領域已知的方法製備，包括雜交瘤細胞法、噬菌體展示方法或應用重組DNA法。此外，示例性的噬菌體展示法在本文及以下的實施例中進行了描述。
在雜交瘤細胞法中，通常採用免疫劑免疫倉鼠、小鼠或其他適合的宿主動物，以引發產生或能夠產生與免疫劑特異性結合的抗體的淋巴細胞。或者，可以在體外免疫淋巴細胞。免疫劑可包括目標蛋白的多肽或融合蛋白。通常，如果需要人源細胞，採用外周血淋巴細胞（PBLs），而如果需要非人哺乳動物來源細胞，則會使用脾細胞或淋巴結細胞。使用適當的融合劑將淋巴細胞與永生細胞系進行融合，例如聚乙二醇，以形成雜交瘤細胞。永生細胞系通常是轉化的哺乳動物細胞，尤其是齧齒類、牛科和人源的骨髓瘤細胞。通常採用大鼠或小鼠骨髓瘤細胞系。雜交瘤細胞可以在合適的培養基中進行培養，所述培養基較佳含有一種或多種抑制未融合永生細胞生長或存活的物質。例如，如果親本細胞缺乏次黃嘌呤-鳥嘌呤磷酸核糖轉移酶(HGPRT or HPRT)，則雜交瘤細胞培養基通常包括次黃嘌呤、氨蝶呤和胸苷(HAT培養基)，該培養基能阻止HGPRT缺陷細胞生長。
在一些實施例中，永生化細胞系有效融合，藉由所選擇的抗體生產細胞保證抗體高水平穩定表達，並且對某些培養基敏感，例如HAT培養基。在一些實施例中，永生細胞系是小鼠骨髓瘤細胞系，可以從例如，加利福尼亞聖地牙哥的索爾克細胞保藏中心和維吉尼亞馬納薩斯的美國典型培養物保藏中心獲得。同時還描述了人骨髓瘤和鼠-人雜交骨髓瘤細胞系用於製備人源單株抗體。
然後可以測定培養雜交瘤細胞的培養基中是否存在針對多肽的單株抗體。由雜交瘤細胞產生的單株抗體的結合特異性可以藉由免疫沉澱法或體外結合實驗確定，如放射性免疫測定法（RIA）或酶聯免疫吸附法（ELISA）。此類技術或分析方法在本領域是已知的。單株抗體的結合親和力可以藉由例如Munson and Pollard, Anal. Biochem., 107:220（1980）中所述的斯卡查德（Scatchard）分析確定。
在鑒定出所需的雜交瘤細胞後，可以藉由有限稀釋法對目標選殖進行亞選殖，並藉由標準方法進行培養。基於此目的適合的培養基包括，例如改良Eagle培養基（DMEM）和RPMI-1640培養基。或者，雜交瘤細胞可以在哺乳動物體內以腹水的形式生長。
亞選殖分泌的單株抗體可以藉由常規免疫球蛋白純化方法從培養基或腹水中分離或純化，例如蛋白A-瓊脂糖凝膠、羥基磷灰石色譜層析、凝膠電泳、透析或親和層析。
在一些實施例中，根據本文所述的任一抗CD40抗體，所述抗CD40抗體包含選自抗體文庫（例如展示scFv或Fab片段的噬菌體文庫）的選殖的序列。所述選殖可以藉由篩選具有所需活性的抗體片段組合文庫的方法進行鑒定。例如，本領域已知多種方法用於產生噬菌體展示文庫以及篩選這些文庫來獲得所需結合特性的抗體。這些方法在例如Hoogenboom et al., Methods in Molecular Biology178:1-37 （O'Brien et al., ed., Human Press, Totowa, N.J., 2001）中進行了綜述，並且在例如McCafferty et al., Nature348:552-554; Clackson et al., Nature352: 624-628（1991）; Marks et al., J. Mol. Biol. 222: 581-597（1992）; Marks and Bradbury, Methods in Molecular Biology248:161-175 （Lo, ed., Human Press, Totowa, N.J., 2003）; Sidhu et al., J. Mol. Biol. 338(2): 299-310（2004）; Lee et al., J. Mol. Biol. 340(5): 1073-1093（2004）; Fellouse, Proc. Natl. Acad. Sci. USA101(34): 12467-12472（2004）; and Lee et al., J. Immunol. Methods284(1-2): 119-132（2004）中進行了進一步描述。
在某些噬菌體展示方法中，藉由聚合酶鏈式反應（PCR）分別選殖V H和V L基因的所有組成成分，並在噬菌體文庫中隨機重組，然後篩選能夠結合抗原的噬菌體，如Winter et al., Ann. Rev. Immunol., 12: 433-455 (1994)中所述。噬菌體通常以scFv片段或以Fab片段形式展示抗體片段。免疫來源的文庫噬菌體提供針對免疫原的高親和力抗體而不需要構建雜交瘤細胞。或者，可以選殖天然庫（例如來自人），來提供針對多種非自身抗原和自身抗原的單一抗體來源，而不需任何免疫，如Griffiths et al., EMBO J, 12: 725-734（1993）中所述。最後，天然文庫也可以藉由選殖來自幹細胞的非重排V-gene片段，並使用包含隨機序列的PCR引物編碼CDR3高變區並且在體外完成重排的方法進行製備，如Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol., 227: 381-388（1992）中所述。描述人抗體噬菌體文庫的專利出版物包括，例如U.S. Pat. No. 5,750,373和 US Patent Publication Nos. 2005/0079574、2005/0119455、2005/0266000、2007/0117126、2007/0160598、2007/0237764、2007/0292936和2009/0002360。
藉由噬菌體展示篩選文庫中能夠特異性結合靶標CD40的抗CD40抗體部分的方法來製備所述的抗CD40抗體。該文庫可以是人scFv噬菌體展示文庫，具有至少1×10 9（例如至少1 × 10 9、2.5 × 10 9、5 × 10 9、7.5 × 10 9、1 × 10 10、2.5 × 10 10、5 × 10 10、7.5 × 10 10或1 × 10 11）種多樣性的獨特的人抗體片段。在一些實施例中，所述文庫是人天然文庫，藉由從健康受試者的PMBCs和脾臟中提取的DNA構建，包含所有人重鏈和輕鏈亞家族。在一些實施例中，所述文庫是人天然文庫，藉由從各種疾病患者體內分離的PMBCs中提取的DNA構建，例如自身免疫病的患者、癌症患者和感染性疾病的患者。在一些實施例中，所述文庫是半合成的人文庫，其中重鏈CDR3完全是隨機的，所有胺基酸（除了半胱胺酸）以相同的概率存在於任何給定的位置。（參見例如, Hoet, R.M. et al., Nat. Biotechnol. 23(3):344-348, 2005）。在一些實施例中，半合成的人文庫的重鏈CDR3長度在5到24個（例如5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24個）胺基酸之間。在一些實施例中，所述文庫是全合成的噬菌體展示文庫。在一些實施例中，所述文庫是非人噬菌體展示文庫。
與靶標CD40具有高親和力的噬菌體選殖可以藉由噬菌體與靶標CD40的反覆運算結合進行篩選，所述靶標CD40與固相支持物結合（例如用於溶液淘選的珠子或用於細胞淘選的哺乳動物細胞），接下來去除未結合的噬菌體，並洗脫特異性結合噬菌體。隨後，洗脫結合的噬菌體選殖並用於感染合適的宿主細胞，例如E. coli XL1-Blue，進行表達和純化。可以藉由多輪淘選（例如，2、3、4、5、6或更多輪），例如溶液淘選、細胞淘選或兩者結合以富集特異性結合CD40的噬菌體選殖。富集的噬菌體選殖與靶標CD40的特異性結合可以藉由本領域已知的任何方法進行檢測，包括例如ELISA和FACS。
篩選抗體文庫的另一種方法是在酵母細胞表面展示蛋白質。Wittrup等（美國專利6,699,658和6,696,251）開發了一種酵母細胞展示文庫的方法。在此酵母展示系統中，一個組分包括錨定在酵母細胞壁上的酵母凝集素蛋白（Aga1），另一個組分包括凝集素蛋白Aga2的第二個亞基，該亞基可以藉由二硫鍵與Aga1蛋白結合進而展示在酵母細胞表面上。藉由將Aga1基因整合到酵母染色體中來表達Aga1蛋白。將單鏈可變片段（scFv）文庫與酵母展示質粒中的Aga2基因融合，將其轉化後，該文庫由於附加的營養標記的存在可保留在酵母中。Aga1和Aga2蛋白均在半乳糖誘導型啟動子的控制下表達。
人抗體V基因庫（V H和V K片段）是使用一組簡併引物藉由PCR方法獲得（Sblattero，D. and Bradbury, A. Immunotechnology3, 271-278 1998）。PCR範本來自可商購的RNA或cDNA，包括PBMC，脾臟，淋巴結，骨髓和扁桃體。將獨立的V H和V KPCR文庫合併後，藉由重疊延伸PCR將其組裝成scFv形式（Sheets，M.D. et al, Proc. Natl. Acad. Sci. USA95, 6157–6162 1998）。為了構建酵母scFv展示文庫，藉由同源重組將所得的scFv PCR產物選殖到酵母中的酵母展示質粒中。（Chao, G, et al, Nat Protoc. 2006;1(2):755-68. Miller KD, et al. Current Protocols in Cytometry4.7.1-4.7.30, 2008）。
可以利用哺乳動物細胞展示系統來篩選抗CD40抗體，其中抗體部分展示在細胞表面上並藉由抗原導向的篩選方法分離出特異性靶向CD40的抗體（如U.S. patent No. 7,732,195B2中所述）。可以建立展示大量人類IgG抗體基因的中國倉鼠卵巢（CHO）細胞文庫，並將其用於發現表達高親和力抗體基因的選殖。已開發出另一種展示系統，該系統藉由可變剪接使同一蛋白同時在細胞表面展示和分泌，其中展示的蛋白表型保持與基因型相關，使得可同時在生物物理和基於細胞功能的分析中表徵該分泌的可溶性抗體。該方法克服了先前哺乳動物細胞展示的許多局限性，能夠直接篩選和成熟化全長的、糖基化的IgGs形式的抗體（Peter M.Bowers, et al, Methods2014,65：44-56）。暫態表達系統適用於在抗體基因恢復之前進行的單輪抗原選擇，因此對於從較小文庫中選擇抗體最有用。穩定的外顯體載體提供了一種有吸引力的選擇。外顯體載體可以高效轉染並穩定地維持在低拷貝數，從而允許多輪淘選以及更複雜抗體庫的解析。
IgG文庫是基於分離自一群人類供體的種系序列V基因片段與重排的（D）J區域的連接構建而成。將從2000個人體血液樣本中收集的RNA反轉錄為cDNA，使用V H和V K特異性引物擴增V H和V K片段，並藉由凝膠提取純化。將V H和V K片段分別亞選殖到包含IgG1或K恆定區的展示載體中，然後電穿孔或轉導293T到細胞，從而製備IgG文庫。為了製備scFv抗體展示文庫，連接V H和V K以產生scFv，然後亞選殖到展示載體中，再將其電穿孔或轉導293T細胞。眾所周知，IgG文庫是基於分離自一群供體的種系序列V基因片段與重排的（D）J區域構建而成，供體可以是小鼠，大鼠，兔或猴。
單株抗體也可以藉由重組DNA方法進行製備，例如U.S. Patent No. 4,816,567中所述。編碼本發明中所述單株抗體的DNA可以藉由常規方法（例如藉由能特異性結合編碼鼠源抗體輕鏈和重鏈基因的寡聚核苷酸探針）輕易的分離和測序。如上所述的雜交瘤細胞或本發明的CD40特異性噬菌體克隆可以作為這種DNA的來源。分離後，可將DNA置於表達載體中，然後該載體轉染入宿主細胞，例如猿猴COS細胞、中華倉鼠卵巢癌（CHO）細胞或不產生免疫球蛋白的骨髓瘤細胞中，獲得在重組宿主細胞中合成的單株抗體。所述DNA也可以被修飾，例如用編碼序列取代人重鏈和輕鏈恆定區和/或用框架區替換同源非人序列（U.S. Patent No. 4,816,567; Morrison et al., supra)，或藉由共價鍵連接免疫球蛋白的編碼序列的全部或部分非免疫球蛋白多肽的編碼序列。這種非免疫球蛋白多肽可以取代本發明中抗體的恆定區，或可以取代本發明中抗體可變結構域中的一個抗原結合位點，形成嵌合的二價抗體。
所述抗體可以是單價抗體。製備單價抗體的方法是本領域已知的。例如，一種涉及免疫球蛋白輕鏈和修飾重鏈的重組表達方法。通常在Fc區的任意位置截短重鏈，以阻止重鏈相互交聯。或者，相關的半胱胺酸殘基被其它胺基酸殘基取代或被缺失以防止交聯。
體外方法也適用於製備單價抗體。消化抗體產生抗體片段，特別是Fab片段，可以使用任何本領域已知的方法完成。
具有所需結合特異性（抗體-抗原結合位點）的抗體可變結構域可以與免疫球蛋白恆定區融合。較佳與免疫球蛋白重鏈恆定區進行融合，其包括至少部分鉸鏈，CH2和CH3區。在一些實施例中，包含輕鏈結合必要位點的第一重鏈恆定區（CH1）至少出現在一種融合體中。編碼免疫球蛋白重鏈融合體的DNA，如果需要，還可以包括編碼免疫球蛋白輕鏈的DNA，被插入進獨立的表達載體中，並共轉染至合適的宿主生物中。
全人和人源化抗體
所述抗CD40抗體（如全長的抗CD40抗體）可以是全人抗體或人源化抗體。非人（如小鼠）抗體部分的人源化形式是嵌合的免疫球蛋白、免疫球蛋白鏈或其片段（例如Fv、Fab、Fab’、F(ab’) 2、scFv或抗體的其他抗原結合子序列），其通常包括最少的源於非人免疫球蛋白的序列。人源化抗體包括人免疫球蛋白、免疫球蛋白鏈或其片段（受體抗體），其中受體CDR的殘基被具有所需特異性、親和力和性能的非人源（供體抗體）CDR殘基取代，例如小鼠、大鼠或兔子的CDR。在一些實施例中，人免疫球蛋白Fv框架區殘基被相應的非人源殘基取代。人源化抗體還可以包含既不屬於受體抗體也不在引入的CDR或框架區序列中的胺基酸殘基。通常，人源化抗體包含至少一個，通常兩個可變結構域，其中全部或基本上全部CDR區對應於非人免疫球蛋白的CDR區，全部或基本上全部框架區是人免疫球蛋白共有序列。
通常，人源化抗體含有一個或多個從非人源引入的胺基酸殘基。那些非人源胺基酸殘基通常被稱為“移入”殘基，通常來自“移入”可變結構域。根據一些實施例，人源化基本上可以按照Winter和其同事的如下方法進行（Jones et al., Nature, 321: 522-525（1986）; Riechmann et al., Nature, 332: 323-327（1988）; Verhoeyen et al., Science, 239: 1534-1536（1988）），藉由用齧齒動物CDRs或CDR序列取代人源抗體的相應序列。因此，這種“人源化”抗體部分（U.S. Patent No. 4,816,567），其基本上少於完整的人源抗體，其可變結構域已被來自非人源的相應序列所取代。在實際中，人源化抗體部分是典型的人源抗體部分，其中一些CDR殘基和可能的一些框架區殘基被來自齧齒類抗體中類似位點的殘基所取代。
全人抗體是人源化的一種替代方式。例如，目前可以製備在免疫後能夠產生完整的全人抗體文庫而不產生內源性免疫球蛋白的轉基因動物（例如，小鼠）。例如，已有報導，嵌合和種系突變小鼠中抗體重鏈連接區（JH）基因的純合子缺失，完全抑制了內源性抗體的產生。將人種系免疫球蛋白基因陣列轉移到這種種系突變小鼠體內，可在抗原刺激下產生人源抗體，參見，例如akobovits et al., PNAS USA, 90:2551（1993）; Jakobovits et al., Nature, 362:255-258（1993）; Bruggemann et al., Year in Immunol., 7:33（1993）; U.S. Patent Nos. 5,545,806, 5,569,825, 5,591,669, 5,545,807; 和WO 97/17852。或者，可以藉由將人類免疫球蛋白基因座引入轉基因動物中（例如內源性免疫球蛋白基因已經被部分或全部沉默的小鼠）來製備全人抗體。抗原刺激後，可以發現全人抗體的產生在各個方面都與其在人類中的產生非常相似，包括基因重排、組裝和抗體文庫。這種方法在例如U.S. Patent Nos. 5,545,807; 5,545,806; 5,569,825; 5,625,126; 5,633,425; and 5,661,016, and Marks et al., Bio/Technology, 10: 779-783（1992）; Lonberg et al., Nature, 368: 856-859（1994）; Morrison, Nature, 368: 812-813（1994）; Fishwild et al., Nature Biotechnology, 14: 845-851（1996）; Neuberger, Nature Biotechnology, 14: 826（1996）; Lonberg and Huszar, Intern. Rev. Immunol., 13: 65-93（1995）中進行了描述。
全人抗體也以藉由體外活化B細胞（見U.S. Patents 5,567,610 and 5,229,275）或藉由使用本領域已知的各種技術來產生，包括噬菌體展示文庫。Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol., 227:381（1991）; Marks et al., J. Mol. Biol., 222:581（1991）. Cole et al.和Boerner et al.等人的技術也可以用於製備全人單株抗體。見Cole et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, p.77（1985） and Boerner et al., J. Immunol., 147(1): 86-95（1991）。
抗CD40抗體變體
在一些實施例中，本文提供的抗CD40抗體變體（例如，全長的抗CD40抗體）的胺基酸序列也在考慮中。例如，可能需要改善抗體的結合親和力和/或其它生物學活性。抗體變體的胺基酸序列可以藉由在編碼抗體的核苷酸序列中引入適當的修飾或藉由肽合成來製備。此類修飾包括例如，抗體胺基酸序列中殘基的缺失和/或插入和/或取代。可以藉由胺基酸殘基缺失、插入和取代的任一組合來完成最終的構建，使其具有所需的特徵。例如，抗原結合性。
在一些實施例中，提供具有一個或多個胺基酸取代的抗CD40抗體變體。取代突變的目標位點包括高變區（HVRs）和框架區（FRs）。可以在目標抗體中引入胺基酸取代，篩選所需活性的產物，例如，改善的生物活性，保持/改善抗原結合能力，降低的免疫原性，或改善的ADCC或CDC。
保守取代如下表4所示。
表4 保守取代
原始殘基 示例性取代 較佳取代
Ala (A) Val; Leu; Ile Val
Arg (R) Lys; Gln; Asn Lys
Asn (N) Gln; His; Asp, Lys; Arg Gln
Asp (D) Glu; Asn Glu
Cys (C) Ser; Ala Ser
Gln (Q) Asn; Glu Asn
Glu (E) Asp; Gln Asp
Gly (G) Ala Ala
His (H) Asn; Gln; Lys; Arg Arg
Ile (I) Leu; Val; Met; Ala; Phe; Norleucine Leu
Leu (L) Norleucine; Ile; Val; Met; Ala; Phe Ile
Lys (K) Arg; Gln; Asn Arg
Met (M) Leu; Phe; Ile Leu
Phe (F) Trp; Leu; Val; Ile; Ala; Tyr Tyr
Pro (P) Ala Ala
Ser (S) Thr Thr
Thr (T) Val; Ser Ser
Trp (W) Tyr; Phe Tyr
Tyr (Y) Trp; Phe; Thr; Ser Phe
Val (V) Ile; Leu; Met; Phe; Ala; Norleucine Leu
根據側鏈性質將胺基酸分為不同類別： a、疏水胺基酸：正白胺酸Norleucine、甲硫胺酸Met、丙胺酸Ala、纈胺酸Val、白胺酸Leu、異白胺酸Ile； b、中性親水性胺基酸：半胱胺酸Cys、絲胺酸Ser、蘇胺酸Thr、天冬醯胺Asn、麩醯胺酸Gln； c、酸性胺基酸：天冬胺酸Asp、麩胺酸Glu； d、鹼性胺基酸：組胺酸His、賴胺酸Lys、精胺酸Arg； e、含有影響鏈方向的胺基酸：甘胺酸Gly、脯胺酸Pro； f、芳香族胺基酸：色胺酸Trp、酪胺酸Tyr、苯丙胺酸Phe。
非保守胺基酸的取代包含將以上一種類別取代為另一種類別。
一種示例性的取代變體是親和力成熟的抗體，可採用例如以噬菌體展示為基礎的親和力成熟技術而方便地產生。簡言之，將一個或多個CDR殘基進行突變，變體抗體部分展示在噬菌體上，並篩選具有特定生物活性（例如，基於HEK-Blue TMCD40L NF-κB啟動試驗的生物學活性或結合親和力）的變體。可以在HVRs區進行改變（例如，取代）來獲得改善的基於HEK-Blue TMCD40L NF-κB啟動試驗的生物學活性或抗體親和力。可以在HVR的“熱點區”產生改變，即在體細胞成熟過程中發生高頻突變的密碼子編碼的殘基（參見，例如Chowdhury, Methods Mol. Biol. 207:179-196（2008）），和/或在特異的決定性殘基（SDRs），檢測所得變體V H和V L的結合親和力。從二級文庫中構建和重新選擇親和力成熟的方法已經在一些文獻中進行描述，例如，Hoogenboom et al. in Methods in Molecular Biology178:1-37 (O'Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ,（2001））。
在一些親和力成熟的實施例中，藉由多種方法中的任一種（例如易錯PCR，鏈改組或寡核苷酸定向突變），將多樣性引入選擇的用於親和力成熟的可變基因中。然後創建二級文庫。對該文庫進行篩選，鑒定出具有所需親和力的抗體變體。另一種引入多樣性的方法包括HVR介導的方式，其中幾個HVR殘基（例如，一次4-6個殘基）被隨機化。涉及抗原結合的HVR殘基被特異性地識別，例如，採用丙胺酸掃描誘變或建模。通常CDR-H3和CDR-L3區域尤其是重點靶標。
在一些實施例中，取代、插入或缺失可能發生在一個或多個HVRs內，只要這種改變基本上不降低抗體結合抗原的能力。例如，可以在HVRs中產生基本上不降低結合親和力的保守性改變（例如，本文中提供的保守性取代）。這些改變可能發生在HVR“熱點區”或SDRs區域之外。在一些實施例中上文提供的變體V H和V L序列，每一個HVR或者是未發生改變，或者包含不超過1個、2個或3個胺基酸取代。
一種有用的可以鑒定出抗體中能被靶向性突變的胺基酸殘基或區域的方法稱為“丙胺酸掃描突變”，如Cunningham and Wells（1989） Science, 244:1081-1085中所述。在該方法中，一個或一組目標殘基（例如，帶電殘基如精胺酸、天冬胺酸、組胺酸、賴胺酸和麩胺酸）被中性或帶負電荷胺基酸（例如，丙胺酸或麩胺酸）取代，以此來確定抗體與抗原相互作用是否受到影響。可以在胺基酸的位置進一步引入取代，來證明該位置對初始取代具有功能敏感性。或者/另外，藉由抗原-抗體複合物的晶體結構來鑒定抗體和抗原之間的接觸位點。這些接觸位點殘基和鄰近殘基可作為取代候選物而被靶向或消除。篩選變體，確定它們是否具有所需要的性質。
胺基酸序列的插入，包括在氨基端和/或羧基末端的融合，長度範圍從1個殘基到包含100個或更多個殘基的多肽，還包括在序列內插入1個或多個胺基酸殘基。末端插入的例子包括N末端具有甲硫氨醯殘基的抗體。抗體分子的其它插入變體，包括在抗體分子N-末端或C-末端融合一個酶（例如，ADEPT）或增加抗體血清半衰期的多肽。
Fc區變體
在一些實施例中，將一個或多個胺基酸修飾引入本文所述的抗體（例如，全長抗CD40抗體或抗CD40抗體融合蛋白）的Fc區，從而產生Fc區變體。在一些實施例中，Fc區變體具有增強的ADCC效能，通常與結合Fc的受體（FcRs）有關。在一些實施例中，Fc區變體具有降低的ADCC效能。有很多關於Fc序列的改變或突變影響其效能的例子，例如，WO 00/42072 和 Shields et al. J Biol. Chem. 9(2):6591-6604（2001）描述了與FcRs的結合增強或減弱的抗體變體。這些出版物的內容藉由引用併入本文。
抗體依賴的細胞介導的細胞毒作用（ADCC）是治療性抗體針對腫瘤細胞的作用機制。ADCC是細胞介導的免疫防禦，當靶細胞膜表面的抗原被特異性抗體（例如，抗CD40抗體）結合，免疫系統的效應細胞主動裂解靶細胞（例如，癌細胞）。通常ADCC效應涉及由抗體啟動的NK細胞。NK細胞表達Fc受體CD16。該受體識別並結合與靶細胞表面相結合的抗體分子的Fc部分。NK細胞表面最常見的Fc受體為CD16或FcγRIII。Fc受體與抗體Fc區的結合導致NK細胞的活化，釋放細胞裂解顆粒，隨後靶細胞凋亡。ADCC對腫瘤細胞的殺傷作用可以藉由轉染高親和力FcR的NK-92細胞的特異性實驗來測定。其結果與不表達FcR的野生型NK-92進行比較。
在一些實施例中，本發明還提供抗CD40抗體變體（例如全長抗CD40抗體變體），其包含具有部分但不是全部的效應功能Fc區，使得其在體內具有延長的半衰期，然而特定的效應功能（例如CDC或ADCC）是非必需的或有害的，這種抗CD40抗體成為本發明理想的候選。藉由在體外和/或體內進行細胞毒性檢測來確認CDC和/或ADCC活性的減少/消除。例如，藉由Fc受體（FcR）結合試驗來確認抗體缺乏FcγR結合能力（因此可能缺乏ADCC活性）但依然保留FcRn的結合能力。介導ADCC的主要細胞中，NK細胞僅表達FcγRIII，而單核細胞表達FcγRI、FcγRII和FcγRIII。Ravetch and Kinet Annu. Rev. Immunol. 9:457-492（1991）第464頁的表3中總結了FcR在造血細胞上的表達。在體外評估目標分子的ADCC活性的非限制性實例在U.S. Pat. No. 5,500,362中進行了描述（參見例如 Hellstrom, I. et al. Proc. Nat'l Acad. Sci. USA83:7059-7063 (1986) and Hellstrom, I et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA82:1499-1502 (1985); U.S. Pat. No. 5,821,337 (see Bruggemann, M. et al., J. Exp. Med. 166:1351-1361（1987））。或者，可以採用非放射性檢測方法（參見，例如ACTI™流式細胞術非放射性細胞毒性檢測（CellTechnology, Inc. Mountain View, Calif.）和CYTOTOX 96™非放射性細胞毒性檢測（Promega, Madison, Wis.））。此類檢測實驗採用的效應細胞包括外周血單核細胞（PBMC）和自然殺傷細胞（NK）。或者，另外地，目標分子的ADCC活性在體內進行檢測，例如，在動物模型中，如Clynes et al. Proc. Nat'l Acad. Sci. USA95:652-656（1998）中所述。同時還可以進行C1q結合試驗來確認抗體不能與C1q結合，從而缺乏CDC活性。參見，例如WO 2006/029879和WO 2005/100402中C1q和C3c結合ELISA。為了評估補體啟動情況，可進行CDC檢測（參見，例如Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods202:163（1996）; Cragg, M. S. et al., Blood101:1045-1052（2003）; 和Cragg, M. S. and M. J. Glennie, Blood103:2738-2743（2004））。使用本領域已知的方法來測定FcRn結合和體內清除/半衰期 （參見，例如，Petkova, S. B. et al., Int'l. Immunol. 18(12):1759-1769（2006））。
具有降低的效應功能的抗體，包括在Fc區殘基238、265、269、270、297、327和329位進行一個或多個殘基的取代（U.S. Pat. No. 6,737,056）。這些Fc變體包括在265、269、270、297和327位進行兩個或多個殘基的取代的Fc變體，包括被稱為“DANA”的Fc變體，其在265和297位殘基取代為丙胺酸（U.S. Pat. No. 7,332,581）。
這類與FcRs結合能力提高或降低的抗體變體已有描述（參見例如U.S. Pat. No. 6,737,056; WO 2004/056312，和Shields et al., J. Biol. Chem. 9(2):6591-6604（2001））。
在一些實施例中，提供一種抗CD40抗體（例如全長的抗CD40抗體）變體，其包含具有一個或多個能夠增強ADCC效應的胺基酸取代的Fc區變體。在一些實施例中，Fc區變體包含一個或多個能夠增強ADCC效應的氨基取代，這些取代的位置在Fc區的298、333和/或334位（EU殘基編號）。在一些實施例中，所述抗CD40抗體（例如，全長的抗CD40抗體）變體包括在Fc區的S298A，E333A和K334A位胺基酸取代。
在一些實施例中，Fc區的改變導致C1q結合和/或補體依賴性細胞毒作用（CDC）的改變（即增強或減弱），參見U.S. Pat. No. 6,194,551, WO 99/51642，和Idusogie et al., J. Immunol. 164:4178-4184（2000）中所述。
在一些實施例中，提供一種抗CD40抗體（例如全長的抗CD40抗體）變體，其包含具有一個或多個胺基酸取代的Fc區變體，能夠延長半衰期或增強與Fc受體（FcRn）的結合。具有延長半衰期和改善FcRn結合的抗體在US 2005/0014934A1（Hinton等）中有所描述。這些抗體Fc區包含一個或多個胺基酸取代，增強了Fc區與FcRn的結合。這些Fc變體在Fc區包含238、256、265、272、286、303、305、307、311、312、317、340、356、360、362、376、378、380、382、413、424 或434位的殘基中的一個或多個取代，例如Fc區434位殘基的取代（U.S. Pat. No. 7,371,826）。
同時參見Duncan & Winter, Nature322:738-40（1988）; U.S. Pat. No. 5,648,260; U.S. Pat. No. 5,624,821和WO 94/29351中提供其它Fc區變體的例子。
本發明考慮了包括本文所述的任一種Fc變體或其組合的抗CD40抗體（例如全長抗CD40抗體）。
糖基化變體
在一些實施例中，對本文所提供的抗CD40抗體（例如全長抗CD40抗體）進行改變，以增加或降低抗NGF抗體糖基化的程度。藉由改變抗NGF抗體或其多肽部分的胺基酸序列以此來增加或去除一個或多個糖基化位點，可以方便地實現添加或刪除抗CD40抗體上的糖基化位點。
其中抗CD40抗體包含Fc區，可以改變與其連接的糖。由哺乳動物細胞產生的天然抗體通常包含分支的雙觸角寡糖，該寡糖通常藉由N-連接與Fc區CH2結構域Asn297連接，參見例如Wright et al. ， TIBTECH15:26-32（1997）。所述寡糖可包含多種糖類，例如甘露糖、N-乙醯氨基葡萄糖苷（GlcNAc）、半乳糖和唾液酸，以及與雙觸角寡糖結構“莖”部的GlcNAc相連接的海藻糖。在一些實施例中，可對本發明的抗CD40抗體進行寡糖修飾，從而產生具有某些改進特性的抗CD40抗體變體。
與Fc區的CH2結構域連接的N-聚糖是異質的。CHO細胞中產生的抗體或Fc融合蛋白藉由岩藻糖基轉移酶活性被岩藻糖基化，參見Shoji-Hosaka et al., J. Biochem. 2006, 140:777-83。通常，可以在人血清中檢測出一小部分天然存在的非岩藻糖基化IgGs。Fc區的N-糖基化對於其與FcγR結合很重要；而非岩藻糖基化的N-聚糖增強了Fc與FcγRIIIa的結合能力。與FcRIIIa結合能力增強使得ADCC效應增強，這在需要細胞毒性的某些抗體治療應用中是有利的。
在一些實施例中，當不需要Fc介導的細胞毒作用時，增強的效應功能可能是有害的。在一些實施例中，Fc片段或CH2結構域是非糖基化的。在一些實施例中，藉由對CH2結構域中的N-糖基化位點進行突變以阻止其糖基化。
在一些實施例中，提供抗CD40抗體（例如全長的抗CD40抗體）變體，其包含Fc區，其中連接於Fc區的糖類結構具有減少的岩藻糖或缺乏岩藻糖，這可能會增強ADCC功能。具體地，本文提供抗CD40抗體，其相對於野生型CHO細胞產生的相同抗CD40抗體具有減少的岩藻糖。也就是說，它們的特徵在於，與天然CHO細胞（例如，產生天然糖基化形式的CHO細胞，含有天然FUT8基因的CHO細胞）產生的抗體相比，具有更少量的岩藻糖。在一些實施例中，所述抗CD40抗體的N-連接聚糖具有少於50%、40%、30%、20%、10%或 5%的岩藻糖。例如，該抗CD40抗體的岩藻糖含量可能是1%-80%、1%-65%、5%-65%或20%-40%。在一些實施例中，所述抗CD40抗體的N-連接聚糖不包含岩藻糖，即，其中抗CD40抗體完全不含岩藻糖，或沒有岩藻糖或是去岩藻糖基化。岩藻糖的含量是藉由計算連接到Asn297上的糖鏈內岩藻糖平均含量相對於藉由MALDI-TOF質譜測量的所有連接在Asn297上的糖結構（如複合、雜交或甘露糖結構）的總量來確定的，如WO 2008/077546所述。Asn297是指位於Fc區297位的天冬醯胺殘基（EU Fc區殘基編號體系）。然而，由於抗體的微小序列變化，Asn297也可位於297位的上游或下游±3個胺基酸，即在294和300位之間。這些岩藻糖基化變體可能具有增強的ADCC功能。參見例如US Patent Publication Nos. US 2003/0157108 （Presta, L.），US 2004/0093621 (Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd)。與“去岩藻糖基化”或“岩藻糖缺乏”的抗體變體相關的出版物的實例包括，US 2003/0157108；WO 2000/61739；WO 2001/29246；US 2003/0115614；US 2002/0164328；US 2004/0093621；US 2004/0132140；US 2004/0110704；US 2004/0110282；US 2004/0109865；WO 2003/085119；WO 2003/084570；WO 2005/035586；WO 2005/035778；WO 2005/053742；WO 2002/031140；Okazaki et al. J. Mol. Biol. 336:1239-1249（2004）；Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87:614（2004）。能夠產生去岩藻糖基化抗體的細胞系包括缺乏蛋白岩藻糖基化功能的Lec13 CHO細胞（Ripka et al. Arch. Biochem. Biophys. 249:533-545（1986）；US Pat Appl No US 2003/0157108 A1, Presta, L；和WO 2004/056312 A1, Adams et al., 尤其是實施例11），和基因敲除細胞系，例如α-1,6-岩藻糖基轉移酶基因，FUT8基因敲除的CHO細胞（參見Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87:614（2004）；Kanda, Y. et al., Biotechnol. Bioeng., 94(4):680-688（2006）；和 WO2003/085107）。
抗CD40抗體（例如全長抗CD40抗體）變體進一步提供二等分寡糖，例如，其中連接於抗CD40抗體Fc區的雙觸角寡糖被GlcNAc等分。這種抗CD40抗體（例如全長的抗CD40抗體）變體可能具有減少的岩藻糖基化和/或增強的ADCC功能。這類抗體變體的實例在WO 2003/011878 (Jean-Mairet et al.)；U.S. Pat. No. 6,602,684 （Umana et al.）；US 2005/0123546 （Umana et al.），和Ferrara et al., Biotechnology and Bioengineering, 93(5):851-861 （2006）中有所描述。還提供抗CD40抗體（例如全長的抗CD40抗體）變體，其在與Fc區連接的寡糖中具有至少一個半乳糖殘基。這類抗CD40抗體變體可能具有增強的CDC功能。這類變體在例如WO 1997/30087 (Patel et al.); WO 1998/58964 (Raju, S.)；和WO 1999/22764 (Raju, S.)中有所描述。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體（例如全長抗CD40抗體）變體包含能與FcγRIII結合的Fc區。在一些實施例中，包含Fc區的所述抗CD40抗體（例如全長抗CD40抗體）變體在人效應細胞（例如T細胞）存在下具有ADCC活性，或者與具有人野生型IgG1 Fc區的其他相同抗CD40抗體（例如全長抗CD40抗體）相比，在人效應細胞存在下，具有增強的ADCC活性。
半胱胺酸工程變體
在一些實施例中，需要製備半胱胺酸工程化的抗CD40抗體（例如全長抗CD40抗體），在該抗體中一個或多個胺基酸殘基被半胱胺酸殘基取代。在一些實施例中，取代殘基出現在抗CD40抗體的可及位點。藉由用半胱胺酸取代那些殘基，具有活性的巰基基團位於抗CD40抗體的可及位點，可以用於將該抗CD40抗體與其它部分偶聯，例如藥物部分或接頭-藥物部分，來製備如本文中進一步描述的抗CD40免疫偶聯物。半胱胺酸工程化的抗CD40抗體（例如，全長抗CD40抗體）可以按照例如U.S. Pat. No. 7,521,541所述進行製備。
衍生物
在一些實施例中，本文所提供的抗CD40抗體（例如全長抗CD40抗體）可進一步修飾以包含本領域已知並且容易獲得的其它非蛋白部分。適用於衍生化抗CD40抗體的部分包括，但不限於，水溶性聚合物。水溶性聚合物的非限制性實例包括，但不限於，聚乙二醇（PEG）、乙二醇/丙二醇共聚物、羧甲基纖維素、右旋糖酐、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚-1,3-二氧戊烷、聚-1,3,6-三氧雜環已烷、乙烯/馬來酸酐共聚物、聚胺基酸（均聚物或無規共聚物）、右旋糖酐或聚（n-乙烯基吡咯烷酮）聚乙二醇、丙二醇均聚物、環氧丙烷/環氧乙烷共聚物、聚氧乙基化多元醇（例如甘油）、聚乙烯醇及其混合物。聚乙二醇丙醛由於其在水中的穩定性，在製造中具有優勢。聚合物可以具有任意分子量，可以是支鏈或非支鏈的。連接在抗CD40抗體上的聚合物數量可以變化，並且如果連接多於一個多聚物，它們可以是相同的或不同的分子。通常，用於衍生化的聚合物的數量和/或類型可基於以下考慮因素來確定，包括但不限於，需要改進抗CD40抗體的特性或功能，抗CD40抗體衍生物是否用於特定條件下的治療等。
藥物組合物
本文還提供包含任一種抗CD40抗體（例如全長抗CD40抗體）、編碼抗體的核酸、包含編碼抗體的核酸的載體或者包含本文所述的核酸或載體的宿主細胞的組合物（例如藥物組合物，在這裡也稱為製劑）。在一些實施例中，提供一種藥物組合物，包含本文所述的任一種抗CD40抗體和藥學上可接受的載體。
可藉由混合具有所需純度的抗CD40抗體與任選的藥學上可接受的載體、賦形劑或穩定劑（ Remington's Pharmaceutical Sciences16th edition, Osol, A. Ed. (1980)）獲得合適的抗CD40抗體製劑，製備成凍乾製劑或液體製劑形式。可接受的載體、賦形劑或穩定劑在所用劑量和濃度下對接受者無毒，包括緩衝劑如：磷酸鹽、檸檬酸和其它有機酸；抗氧化劑，包括抗壞血酸和甲硫胺酸；防腐劑（例如十八烷基二甲基苄基氯化銨；六甲基氯化銨；苯紮氯銨；苄索氯銨；苯酚；丁醇或苄醇；對羥基苯甲酸烷基酯，如對羥基苯甲酸甲酯或對羥基苯甲酸丙酯；鄰苯二酚；間苯二酚；環己醇；3-戊醇和間甲酚）；低分子量（少於10個殘基）多肽；蛋白質，例如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水性聚合物，如聚乙烯吡咯烷酮；胺基酸，例如甘胺酸、麩醯胺酸、天冬醯胺、組胺酸、精胺酸或賴胺酸；單糖、二糖和其它碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑如EDTA；糖類，如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨糖醇；成鹽反離子如鈉；金屬複合物（如鋅-蛋白複合物）；和/或非離子表面活性劑如TWEEN™，PLURONICS™或聚乙二醇（PEG）；示例性製劑如WO98/56418中所述，並藉由引用明確併入本文。適合皮下給藥的凍乾製劑在WO97/04801中有所描述。這類凍乾製劑可藉由合適的稀釋劑重構成高蛋白濃度的製劑，並且重構的製劑可以藉由皮下給藥的方式給予本文中待治療個體。陽離子脂質體或脂質體可以用於將本發明中的抗CD40抗體遞送至細胞。
本文所述的製劑除包含抗CD40抗體（例如全長抗CD40抗體）之外，還可以包含一種或多種治療特定病症所必要的其它活性物質，較佳具有活性互補且彼此無不良反應的物質。例如，除了抗CD40抗體之外，可能需要進一步包含免疫抑制劑、免疫調節劑或抗炎劑。這些分子以對預期目的有效的量組合存在。其它物質的有效量取決於製劑中的抗CD40抗體的含量，疾病或病症或治療的類型，以及如上所述的其它因素。這些藥物通常以與本文描述的相同劑量和給藥途徑使用，或者以目前應用劑量的1%至99%使用。
所述抗CD40抗體（例如，全長抗CD40抗體）也可以包埋在例如藉由凝聚技術和介面聚合製備的微膠囊中，例如分別在膠體藥物遞送系統（例如，脂質體、白蛋白微球、微乳液、奈米顆粒和奈米膠囊）中或粗乳液中的羥甲基纖維素或明膠-微膠囊和聚（甲基丙烯酸甲酯）微膠囊。可以製備緩釋製劑。
可以製備抗CD40抗體（例如，全長抗CD40抗體）的緩釋製劑。緩釋製劑的適合的實例包括含有抗體(或其片段)的固體疏水聚合物半透性基質，這些基質是成型製品的形式，例如，薄膜或微膠囊。緩釋基質的實例包括聚酯、水凝膠（例如，聚（2-羥乙基甲基丙烯酸酯）或聚（乙烯醇））、聚乳酸（U.S. Pat. No. 3,773,919），L-麩胺酸和L-麩胺酸乙酯共聚物，不可降解的乙烯-醋酸乙烯酯，可降解的乳酸-乙醇酸共聚物如LUPRON DEPOTTM（由乳酸-乙醇酸共聚物和醋酸亮丙瑞林組成的可注射微球）以及聚-D(-)-3-羥基丁酸。雖然諸如乙烯-醋酸乙烯酯和乳酸-乙醇酸之類的聚合物可以使分子的釋放超過100天，某些水凝膠可以在更短的時間內釋放蛋白質。當包封的抗體在體內長時間停留時，它們會因暴露於37°C的潮濕環境中發生變性或聚集，可能導致生物活性的喪失或免疫原性的改變。可以根據相應的機制，設計合理的策略來穩定抗CD40抗體。例如，如果發現聚集機制是藉由硫代二硫化物交換形成分子間S-S鍵，則可以藉由修飾巰基殘基、在酸性溶液中凍乾、控制含水量、使用適當的添加劑、以及開發特定的聚合物基質組合物來實現穩定化。
在一些實施例中，所述抗CD40抗體（例如全長抗CD40抗體）配製在含有檸檬酸鹽、氯化鈉、乙酸鹽、琥珀酸鹽、甘胺酸、聚山梨酯80（吐溫80）或上述任何組合的緩衝液中。
用於體內給藥的製劑必須是無菌的。這可以藉由例如應用無菌過濾膜過濾而容易地實現。
使用抗CD40抗體的治療方法
抗CD40抗體（例如，全長的抗CD40抗體）和/或本發明所述的組合物可以施用於個體（例如，哺乳動物，如人類）來治療與CD40訊號通路失調導致的疾病和/或病症（例如，自身免疫性疾病和/或炎性病症和/或癌症和/或移植相關疾病），這些疾病包括但不限於系統性紅斑狼瘡（SLE），盤狀紅斑狼瘡，狼瘡性腎炎，炎性關節炎：包括但不限於青少年關節炎、類風濕性關節炎、銀屑病關節炎、萊特爾氏症候群（Reiter's syndrome）、僵直性脊柱炎和痛風性關節炎，器官或組織移植排斥：超急性、急性或慢性排斥反應和/或移植物抗宿主病，多發性硬化症，高IgE症候群，結節性多發炎，原發性膽汁性肝硬化，炎症性腸病，克羅恩病，腹腔疾病（麩質敏感性腸病），自身免疫性肝炎，惡性貧血，自身免疫性溶血性貧血，硬皮病，重症肌無力，特發性血小板減少性紫癜，自身免疫性甲狀腺炎，格雷氏病（Grave′s disease），橋本氏甲狀腺炎（Hasimoto′s thyroiditis），免疫複合性疾病，慢性疲勞免疫功能障礙症候群（CFIDS），多發性肌炎，皮肌炎，冷球蛋白血症，血栓溶解，心肌症，尋常天皰瘡，肺間質纖維化，I型和II型糖尿病，1、2、3和4型遲發型超敏反應，過敏性或過敏性疾病，對治療性蛋白質的不必要/意外的免疫反應（例如血友病中的因子VII），哮喘，Rich-Strauss症候群（過敏性肉芽腫病），特應性皮炎，過敏性和刺激性接觸性皮炎，蕁麻疹，IgE介導的過敏，動脈粥樣硬化，血管炎，特發性炎症性肌病，溶血性疾病，阿爾茨海默氏病，慢性炎症性脫髓鞘性多發性神經病，乾燥症候群（Sjogren's disease），銀屑病，化膿性汗腺炎，化膿性尿道炎，結節病，潰瘍性結腸炎，腫瘤：包括但不限於非霍奇金淋巴瘤、慢性淋巴細胞性白血病、多發性骨髓瘤、B細胞淋巴瘤、高/中/低級B細胞淋巴瘤、急性B細胞淋巴母細胞性白血病、粒細胞性白血病和霍奇金氏病疾病，腎炎，呼吸窘迫症候群，附睾炎，腎小球腎炎和甲狀腺功能亢進症。因此，本發明在一些實施例中提供一種治療CD40訊號通路失調導致的疾病和/或病症（例如，自身免疫性疾病和/或炎性病症和/或癌症和/或移植相關疾病）的方法，包括向個體施用有效量的包含抗CD40抗體（例如，全長的抗CD40抗體）的組合物（例如，藥物組合物），例如本文所述的任一種抗CD40抗體（例如，全長的抗CD40抗體），在一些實施例中，所述個體是人類。
例如，在一些實施例中，提供一種用於治療與CD40訊號通路相關的疾病（例如，自身免疫性疾病和/或炎性病症和/或癌症和/或移植相關疾病）的個體的方法，包括向所述個體施用有效量的包含特異性結合人CD40上表位的CD40抗體（例如，全長抗CD40抗體）的藥物組合物，其中所述表位包含人CD40的位胺基酸殘基。在一些實施例中，所述抗CD40抗體是全長抗體。在一些實施例中，所述全長抗CD40抗體是IgG1或IgG4抗體。在一些實施例中，所述疾病或病症選自例如，系統性紅斑狼瘡（SLE），盤狀紅斑狼瘡，狼瘡性腎炎，炎性關節炎：包括但不限於青少年關節炎、類風濕性關節炎、銀屑病關節炎、萊特爾氏症候群（Reiter's syndrome）、僵直性脊柱炎和痛風性關節炎，器官或組織移植排斥：超急性、急性或慢性排斥反應和/或移植物抗宿主病，多發性硬化症，高IgE症候群，結節性多發炎，原發性膽汁性肝硬化，炎症性腸病，克羅恩病，腹腔疾病（麩質敏感性腸病），自身免疫性肝炎，惡性貧血，自身免疫性溶血性貧血，硬皮病，重症肌無力，特發性血小板減少性紫癜，自身免疫性甲狀腺炎，格雷氏病（Grave′s disease），橋本氏甲狀腺炎（Hasimoto′s thyroiditis），免疫複合性疾病，慢性疲勞免疫功能障礙症候群（CFIDS），多發性肌炎，皮肌炎，冷球蛋白血症，血栓溶解，心肌症，尋常天皰瘡，肺間質纖維化，I型和II型糖尿病，1、2、3和4型遲發型超敏反應，過敏性或過敏性疾病，對治療性蛋白質的不必要/意外的免疫反應（例如血友病中的因子VII），哮喘，Rich-Strauss症候群（過敏性肉芽腫病），特應性皮炎，過敏性和刺激性接觸性皮炎，蕁麻疹，IgE介導的過敏，動脈粥樣硬化，血管炎，特發性炎症性肌病，溶血性疾病，阿爾茨海默氏病，慢性炎症性脫髓鞘性多發性神經病，乾燥症候群（Sjogren's disease），銀屑病，化膿性汗腺炎，化膿性尿道炎，結節病，潰瘍性結腸炎，腫瘤：包括但不限於非霍奇金淋巴瘤、慢性淋巴細胞性白血病、多發性骨髓瘤、B細胞淋巴瘤、高/中/低級B細胞淋巴瘤、急性B細胞淋巴母細胞性白血病、粒細胞性白血病和霍奇金氏病疾病，腎炎，呼吸窘迫症候群，附睾炎，腎小球腎炎和甲狀腺功能亢進症組成的組中。在一些實施例中，所述個體是人類。
例如，在一些實施例中，提供一種用於治療與CD40訊號通路相關的疾病（例如，自身免疫性疾病和/或炎性病症和/或癌症和/或移植相關疾病）的個體的方法，包括向所述個體施用有效量的包含抗CD40抗體（例如，全長抗CD40抗體）的藥物組合物，重鏈可變結構域（V H），所述V H包含：重鏈互補決定區（HC-CDR）1，其包含GYX 1VN （SEQ ID NO: 81），其中X 1為L、T或V；HC-CDR2，其包含X 1IX 2PX 3X 4GX 5TX 6YNQKFKG （SEQ ID NO: 82），其中X 1為L或M，X 2為A、N或V，X 3為E、K、L、M、R、S、T或Y，X 4為H、N、S或T，X 5為G或R，X 6為A、S、T或W；和HC-CDR3，其包含SX 1X 2X 3X 4PYAX 5DY （SEQ ID NO: 83），其中X 1為G、I、L、M、P、R、S或Y，X 2為W或Y，X 3為S或V，X 4為D、K、L、N、R、T或V，X 5為A、G、M、N、Q或S；以及輕鏈可變結構域（V L），所述V L包含：LC-CDR1，其包含KASQNV HTX 1VA （SEQ ID NO: 84），其中X 1為A、H、N或R；LC-CDR2，其包含LX 1SDRRT （SEQ ID NO: 85），其中X 1為A或R；和LC-CDR3，其包含LQX 1WX 2X 3PLT （SEQ ID NO: 86），其中X 1為A或H，X 2為N、S或T，X 3為A、Q、R、S或Y。在一些實施例中，所述抗CD40抗體是全長抗體。在一些實施例中，所述全長抗CD40抗體是IgG1或IgG4抗體。在一些實施例中，所述疾病或病症選自例如，系統性紅斑狼瘡（SLE），盤狀紅斑狼瘡，狼瘡性腎炎，炎性關節炎：包括但不限於青少年關節炎、類風濕性關節炎、銀屑病關節炎、萊特爾氏症候群（Reiter's syndrome）、僵直性脊柱炎和痛風性關節炎，器官或組織移植排斥：超急性、急性或慢性排斥反應和/或移植物抗宿主病，多發性硬化症，高IgE症候群，結節性多發炎，原發性膽汁性肝硬化，炎症性腸病，克羅恩病，腹腔疾病（麩質敏感性腸病），自身免疫性肝炎，惡性貧血，自身免疫性溶血性貧血，硬皮病，重症肌無力，特發性血小板減少性紫癜，自身免疫性甲狀腺炎，格雷氏病（Grave′s disease），橋本氏甲狀腺炎（Hasimoto′s thyroiditis），免疫複合性疾病，慢性疲勞免疫功能障礙症候群（CFIDS），多發性肌炎，皮肌炎，冷球蛋白血症，血栓溶解，心肌症，尋常天皰瘡，肺間質纖維化，I型和II型糖尿病，1、2、3和4型遲發型超敏反應，過敏性或過敏性疾病，對治療性蛋白質的不必要/意外的免疫反應（例如血友病中的因子VII），哮喘，Rich-Strauss症候群（過敏性肉芽腫病），特應性皮炎，過敏性和刺激性接觸性皮炎，蕁麻疹，IgE介導的過敏，動脈粥樣硬化，血管炎，特發性炎症性肌病，溶血性疾病，阿爾茨海默氏病，慢性炎症性脫髓鞘性多發性神經病，乾燥症候群（Sjogren's disease），銀屑病，化膿性汗腺炎，化膿性尿道炎，結節病，潰瘍性結腸炎，腫瘤：包括但不限於非霍奇金淋巴瘤、慢性淋巴細胞性白血病、多發性骨髓瘤、B細胞淋巴瘤、高/中/低級B細胞淋巴瘤、急性B細胞淋巴母細胞性白血病、粒細胞性白血病和霍奇金氏病疾病，腎炎，呼吸窘迫症候群，附睾炎，腎小球腎炎和甲狀腺功能亢進症組成的組中。在一些實施例中，所述個體是人類。
在一些實施例中，提供一種用於治療與CD40訊號通路相關的疾病（例如，自身免疫性疾病和/或炎性病症和/或癌症和/或移植相關疾病）的個體的方法，包括向所述個體施用有效量的包含抗CD40抗體的組合物，其中所述抗體包含V H，所述V H包含：HC-CDR1，其包含SEQ ID NOs: 1-3中任一所示的胺基酸序列，HC-CDR2，其包含SEQ ID NOs: 9-26中任一所示的胺基酸序列，和HC-CDR3，其包含SEQ ID NOs: 32-52中任一所示的胺基酸序列，或者所述V H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及V L，所述V L包含：LC-CDR，其包含SEQ ID NOs: 58-61中任一所示的胺基酸序列1，LC-CDR2，其包含SEQ ID NOs: 65-66中任一所示的胺基酸序列，和LC-CDR3，其包含SEQ ID NOs: 70-77中任一所示的胺基酸序列，或者所述V L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代。
在一些實施例中提供一種用於治療與CD40訊號通路相關的疾病（例如，自身免疫性疾病和/或炎性病症和/或癌症和/或移植相關疾病）的個體的方法，包括向所述個體施用有效量的包含抗CD40抗體的組合物，其中所述抗體包含：V H，所述V H包含SEQ ID NOs: 87-119中任一所示的胺基酸序列或其變體，所述變體與SEQ ID NOs: 87-119中任一所示的胺基酸序列具有至少約90%序列同一性；以及V L，所述V L包含SEQ ID NOs: 126-138中任一所示的胺基酸序列或其變體，所述變體與SEQ ID NOs: 126-138中任一所示的胺基酸序列具有至少約90%序列同一性。
在一些實施例中，本文所述抗CD40抗體是包含IgG1或IgG4恆定區的全長抗CD40抗體。在一些實施例中，所述IgG1是人IgG1。在一些實施例中，所述IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種用於治療與CD40訊號通路相關的疾病（例如，自身免疫性疾病和/或炎性病症和/或癌症和/或移植相關疾病）的個體的方法，包括向所述個體施用有效量的包含抗CD40抗體的組合物，其中所述抗體包含：V H，所述V H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 9，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 32，或者所述V H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及V L，所述V L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 58，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 65，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 70，或者所述V L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代。
在一些實施例中，本文所述抗CD40抗體包含：V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 87或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 87具有至少約90%序列同一性；以及V L，所述V L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 126或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 126具有至少約90%序列同一性。在一些實施例中，本文所述抗CD40抗體是包含IgG1或IgG4恆定區的全長抗CD40抗體。在一些實施例中，所述IgG1是人IgG1。在一些實施例中，所述IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，本文所述抗CD40抗體包含：V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 88或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 88具有至少約90%序列同一性；以及V L，所述V L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 127或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 127具有至少約90%序列同一性。在一些實施例中，本文所述抗CD40抗體是包含IgG1或IgG4恆定區的全長抗CD40抗體。在一些實施例中，所述IgG1是人IgG1。在一些實施例中，所述IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種用於治療與CD40訊號通路相關的疾病（例如，自身免疫性疾病和/或炎性病症和/或癌症和/或移植相關疾病）的個體的方法，包括向所述個體施用有效量的包含抗CD40抗體的組合物，其中所述抗體包含：V H，所述V H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 10，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 32，或者所述V H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及V L，所述V L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 59，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 65，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 70，或者所述V L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代。
在一些實施例中，本文所述抗CD40抗體包含：V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 89或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 89具有至少約90%序列同一性；以及V L，所述V L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 128或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 128具有至少約90%序列同一性。在一些實施例中，本文所述抗CD40抗體是包含IgG1或IgG4恆定區的全長抗CD40抗體。在一些實施例中，所述IgG1是人IgG1。在一些實施例中，所述IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種用於治療與CD40訊號通路相關的疾病（例如，自身免疫性疾病和/或炎性病症和/或癌症和/或移植相關疾病）的個體的方法，包括向所述個體施用有效量的包含抗CD40抗體的組合物，其中所述抗體包含：V H，所述V H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 13，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 34，或者所述V H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及V L，所述V L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 59，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 65，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 70，或者所述V L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代。
在一些實施例中，本文所述抗CD40抗體包含：V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 94或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 94具有至少約90%序列同一性；以及V L，所述V L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 128或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 128具有至少約90%序列同一性。在一些實施例中，本文所述抗CD40抗體是包含IgG1或IgG4恆定區的全長抗CD40抗體。在一些實施例中，所述IgG1是人IgG1。在一些實施例中，所述IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種用於治療與CD40訊號通路相關的疾病（例如，自身免疫性疾病和/或炎性病症和/或癌症和/或移植相關疾病）的個體的方法，包括向所述個體施用有效量的包含抗CD40抗體的組合物，其中所述抗體包含V H，所述V H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 15，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 37，或者所述V H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及V L，所述V L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 59，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 65，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 73，或者所述V L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代。
在一些實施例中，本文所述抗CD40抗體包含：V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 96或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 96具有至少約90%序列同一性；以及V L，所述V L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 132或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 132具有至少約90%序列同一性。在一些實施例中，本文所述抗CD40抗體是包含IgG1或IgG4恆定區的全長抗CD40抗體。在一些實施例中，所述IgG1是人IgG1。在一些實施例中，所述IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種用於治療與CD40訊號通路相關的疾病（例如，自身免疫性疾病和/或炎性病症和/或癌症和/或移植相關疾病）的個體的方法，包括向所述個體施用有效量的包含抗CD40抗體的組合物，其中所述抗體包含：V H，所述V H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 20，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 42，或者所述V H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及V L，所述V L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 59，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 65，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 70，或者所述V L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代。
在一些實施例中，本文所述抗CD40抗體包含：V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 101或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 101具有至少約90%序列同一性；以及V L，所述V L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 128或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 128具有至少約90%序列同一性。在一些實施例中，本文所述抗CD40抗體是包含IgG1或IgG4恆定區的全長抗CD40抗體。在一些實施例中，所述IgG1是人IgG1。在一些實施例中，所述IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種用於治療與CD40訊號通路相關的疾病（例如，自身免疫性疾病和/或炎性病症和/或癌症和/或移植相關疾病）的個體的方法，包括向所述個體施用有效量的包含抗CD40抗體的組合物，其中所述抗體包含：V H，所述V H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 14，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 43，或者所述V H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及V L，所述V L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 59，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 65，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 70，或者所述V L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代。
在一些實施例中，本文所述抗CD40抗體包含：V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 110或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 110具有至少約90%序列同一性；以及V L，所述V L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 128或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 128具有至少約90%序列同一性。在一些實施例中，本文所述抗CD40抗體是包含IgG1或IgG4恆定區的全長抗CD40抗體。在一些實施例中，所述IgG1是人IgG1。在一些實施例中，所述IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種用於治療與CD40訊號通路相關的疾病（例如，自身免疫性疾病和/或炎性病症和/或癌症和/或移植相關疾病）的個體的方法，包括向所述個體施用有效量的包含抗CD40抗體的組合物，其中所述抗體包含：V H，所述V H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 15，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 51，或者所述V H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及V L，所述V L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 59，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 65，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 70，或者所述V L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代。
在一些實施例中，本文所述抗CD40抗體包含：V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 114或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 114具有至少約90%序列同一性；以及V L，所述V L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 128或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 128具有至少約90%序列同一性。在一些實施例中，本文所述抗CD40抗體是包含IgG1或IgG4恆定區的全長抗CD40抗體。在一些實施例中，所述IgG1是人IgG1。在一些實施例中，所述IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種用於治療與CD40訊號通路相關的疾病（例如，自身免疫性疾病和/或炎性病症和/或癌症和/或移植相關疾病）的個體的方法，包括向所述個體施用有效量的包含抗CD40抗體的組合物，其中所述抗體包含：V H，所述V H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 11，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 48，或者所述V H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及V L，所述V L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 59，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 65，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 71，或者所述V L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代。
在一些實施例中，本文所述抗CD40抗體包含：V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 115或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 115具有至少約90%序列同一性；以及V L，所述V L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 129或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 129具有至少約90%序列同一性。在一些實施例中，本文所述抗CD40抗體是包含IgG1或IgG4恆定區的全長抗CD40抗體。在一些實施例中，所述IgG1是人IgG1。在一些實施例中，所述IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，提供一種用於治療與CD40訊號通路相關的疾病（例如，自身免疫性疾病和/或炎性病症和/或癌症和/或移植相關疾病）的個體的方法，包括向所述個體施用有效量的包含抗CD40抗體的組合物，其中所述抗體包含：V H，所述V H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 18，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 47，或者所述V H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及V L，所述V L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 59，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 65，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 71，或者所述V L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代。
在一些實施例中，本文所述抗CD40抗體包含：V H，所述V H包含胺基酸序列SEQ ID NO: 117或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 117具有至少約90%序列同一性；以及V L，所述V L包含胺基酸序列SEQ ID NO: 129或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 129具有至少約90%序列同一性。在一些實施例中，本文所述抗CD40抗體是包含IgG1或IgG4恆定區的全長抗CD40抗體。在一些實施例中，所述IgG1是人IgG1。在一些實施例中，所述IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
例如，在一些實施例中，提供一種用於治療與CD40訊號通路相關的疾病（例如，自身免疫性疾病和/或炎性病症和/或癌症和/或移植相關疾病）的個體的方法，包括向所述個體施用有效量的包含抗CD40抗體（例如，全長抗CD40抗體）的藥物組合物，重鏈可變結構域（V H），所述V H包含：：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 4，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 27，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 53，或者所述V H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及輕鏈可變結構域（V L），所述V L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 62，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 67，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 78，或者所述V L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代。在一些實施例中，所述抗CD40抗體是全長抗體。在一些實施例中，所述全長抗CD40抗體是IgG1或IgG4抗體。在一些實施例中，所述疾病或病症選自例如，例如，系統性紅斑狼瘡（SLE），盤狀紅斑狼瘡，狼瘡性腎炎，炎性關節炎：包括但不限於青少年關節炎、類風濕性關節炎、銀屑病關節炎、萊特爾氏症候群（Reiter's syndrome）、僵直性脊柱炎和痛風性關節炎，器官或組織移植排斥：超急性、急性或慢性排斥反應和/或移植物抗宿主病，多發性硬化症，高IgE症候群，結節性多發炎，原發性膽汁性肝硬化，炎症性腸病，克羅恩病，腹腔疾病（麩質敏感性腸病），自身免疫性肝炎，惡性貧血，自身免疫性溶血性貧血，硬皮病，重症肌無力，特發性血小板減少性紫癜，自身免疫性甲狀腺炎，格雷氏病（Grave′s disease），橋本氏甲狀腺炎（Hasimoto′s thyroiditis），免疫複合性疾病，慢性疲勞免疫功能障礙症候群（CFIDS），多發性肌炎，皮肌炎，冷球蛋白血症，血栓溶解，心肌症，尋常天皰瘡，肺間質纖維化，I型和II型糖尿病，1、2、3和4型遲發型超敏反應，過敏性或過敏性疾病，對治療性蛋白質的不必要/意外的免疫反應（例如血友病中的因子VII），哮喘，Rich-Strauss症候群（過敏性肉芽腫病），特應性皮炎，過敏性和刺激性接觸性皮炎，蕁麻疹，IgE介導的過敏，動脈粥樣硬化，血管炎，特發性炎症性肌病，溶血性疾病，阿爾茨海默氏病，慢性炎症性脫髓鞘性多發性神經病，乾燥症候群（Sjogren's disease），銀屑病，化膿性汗腺炎，化膿性尿道炎，結節病，潰瘍性結腸炎，腫瘤：包括但不限於非霍奇金淋巴瘤、慢性淋巴細胞性白血病、多發性骨髓瘤、B細胞淋巴瘤、高/中/低級B細胞淋巴瘤、急性B細胞淋巴母細胞性白血病、粒細胞性白血病和霍奇金氏病疾病，腎炎，呼吸窘迫症候群，附睾炎，腎小球腎炎和甲狀腺功能亢進症組成的組中。在一些實施例中，所述個體是人類。
在一些實施例中提供一種用於治療與CD40訊號通路相關的疾病（例如，自身免疫性疾病和/或炎性病症和/或癌症和/或移植相關疾病）的個體的方法，包括向所述個體施用有效量的包含抗CD40抗體的組合物，其中所述抗體包含：V H，所述V H包含SEQ ID NO: 120所示的胺基酸序列或其變體，所述變體與SEQ ID NO: 120所示的胺基酸序列具有至少約90%序列同一性；以及V L，所述V L包含SEQ ID NO: 139所示的胺基酸序列或其變體，所述變體與SEQ ID NO: 139所示的胺基酸序列具有至少約90%序列同一性。
在一些實施例中，本文所述抗CD40抗體是包含IgG1或IgG4恆定區的全長抗CD40抗體。在一些實施例中，所述IgG1是人IgG1。在一些實施例中，所述IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
例如，在一些實施例中，提供一種用於治療與CD40訊號通路相關的疾病（例如，自身免疫性疾病和/或炎性病症和/或癌症和/或移植相關疾病）的個體的方法，包括向所述個體施用有效量的包含抗CD40抗體（例如，全長抗CD40抗體）的藥物組合物，重鏈可變結構域（V H），所述V H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 5，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 27，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 54，或者所述V H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及輕鏈可變結構域（V L），所述V L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 62，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 67，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 78，或者所述V L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代。在一些實施例中，所述抗CD40抗體是全長抗體。在一些實施例中，所述全長抗CD40抗體是IgG1或IgG4抗體。在一些實施例中，所述疾病或病症選自例如，例如，系統性紅斑狼瘡（SLE），盤狀紅斑狼瘡，狼瘡性腎炎，炎性關節炎：包括但不限於青少年關節炎、類風濕性關節炎、銀屑病關節炎、萊特爾氏症候群（Reiter's syndrome）、僵直性脊柱炎和痛風性關節炎，器官或組織移植排斥：超急性、急性或慢性排斥反應和/或移植物抗宿主病，多發性硬化症，高IgE症候群，結節性多發炎，原發性膽汁性肝硬化，炎症性腸病，克羅恩病，腹腔疾病（麩質敏感性腸病），自身免疫性肝炎，惡性貧血，自身免疫性溶血性貧血，硬皮病，重症肌無力，特發性血小板減少性紫癜，自身免疫性甲狀腺炎，格雷氏病（Grave′s disease），橋本氏甲狀腺炎（Hasimoto′s thyroiditis），免疫複合性疾病，慢性疲勞免疫功能障礙症候群（CFIDS），多發性肌炎，皮肌炎，冷球蛋白血症，血栓溶解，心肌症，尋常天皰瘡，肺間質纖維化，I型和II型糖尿病，1、2、3和4型遲發型超敏反應，過敏性或過敏性疾病，對治療性蛋白質的不必要/意外的免疫反應（例如血友病中的因子VII），哮喘，Rich-Strauss症候群（過敏性肉芽腫病），特應性皮炎，過敏性和刺激性接觸性皮炎，蕁麻疹，IgE介導的過敏，動脈粥樣硬化，血管炎，特發性炎症性肌病，溶血性疾病，阿爾茨海默氏病，慢性炎症性脫髓鞘性多發性神經病，乾燥症候群（Sjogren's disease），銀屑病，化膿性汗腺炎，化膿性尿道炎，結節病，潰瘍性結腸炎，腫瘤：包括但不限於非霍奇金淋巴瘤、慢性淋巴細胞性白血病、多發性骨髓瘤、B細胞淋巴瘤、高/中/低級B細胞淋巴瘤、急性B細胞淋巴母細胞性白血病、粒細胞性白血病和霍奇金氏病疾病，腎炎，呼吸窘迫症候群，附睾炎，腎小球腎炎和甲狀腺功能亢進症組成的組中。在一些實施例中，所述個體是人類。
在一些實施例中提供一種用於治療與CD40訊號通路相關的疾病（例如，自身免疫性疾病和/或炎性病症和/或癌症和/或移植相關疾病）的個體的方法，包括向所述個體施用有效量的包含抗CD40抗體的組合物，其中所述抗體包含：V H，所述V H包含SEQ ID NO: 121所示的胺基酸序列或其變體，所述變體與SEQ ID NO: 121所示的胺基酸序列具有至少約90%序列同一性；以及V L，所述V L包含SEQ ID NO: 140所示的胺基酸序列或其變體，所述變體與SEQ ID NO: 140所示的胺基酸序列具有至少約90%序列同一性。
在一些實施例中，本文所述抗CD40抗體是包含IgG1或IgG4恆定區的全長抗CD40抗體。在一些實施例中，所述IgG1是人IgG1。在一些實施例中，所述IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
例如，在一些實施例中，提供一種用於治療與CD40訊號通路相關的疾病（例如，自身免疫性疾病和/或炎性病症和/或癌症和/或移植相關疾病）的個體的方法，包括向所述個體施用有效量的包含抗CD40抗體（例如，全長抗CD40抗體）的藥物組合物，重鏈可變結構域（V H），所述V H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 6，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 28，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 55，或者所述V H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及輕鏈可變結構域（V L），所述V L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 63，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 68，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 79，或者所述V L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代。在一些實施例中，所述抗CD40抗體是全長抗體。在一些實施例中，所述全長抗CD40抗體是IgG1或IgG4抗體。在一些實施例中，所述疾病或病症選自例如，例如，系統性紅斑狼瘡（SLE），盤狀紅斑狼瘡，狼瘡性腎炎，炎性關節炎：包括但不限於青少年關節炎、類風濕性關節炎、銀屑病關節炎、萊特爾氏症候群（Reiter's syndrome）、僵直性脊柱炎和痛風性關節炎，器官或組織移植排斥：超急性、急性或慢性排斥反應和/或移植物抗宿主病，多發性硬化症，高IgE症候群，結節性多發炎，原發性膽汁性肝硬化，炎症性腸病，克羅恩病，腹腔疾病（麩質敏感性腸病），自身免疫性肝炎，惡性貧血，自身免疫性溶血性貧血，硬皮病，重症肌無力，特發性血小板減少性紫癜，自身免疫性甲狀腺炎，格雷氏病（Grave′s disease），橋本氏甲狀腺炎（Hasimoto′s thyroiditis），免疫複合性疾病，慢性疲勞免疫功能障礙症候群（CFIDS），多發性肌炎，皮肌炎，冷球蛋白血症，血栓溶解，心肌症，尋常天皰瘡，肺間質纖維化，I型和II型糖尿病，1、2、3和4型遲發型超敏反應，過敏性或過敏性疾病，對治療性蛋白質的不必要/意外的免疫反應（例如血友病中的因子VII），哮喘，Rich-Strauss症候群（過敏性肉芽腫病），特應性皮炎，過敏性和刺激性接觸性皮炎，蕁麻疹，IgE介導的過敏，動脈粥樣硬化，血管炎，特發性炎症性肌病，溶血性疾病，阿爾茨海默氏病，慢性炎症性脫髓鞘性多發性神經病，乾燥症候群（Sjogren's disease），銀屑病，化膿性汗腺炎，化膿性尿道炎，結節病，潰瘍性結腸炎，腫瘤：包括但不限於非霍奇金淋巴瘤、慢性淋巴細胞性白血病、多發性骨髓瘤、B細胞淋巴瘤、高/中/低級B細胞淋巴瘤、急性B細胞淋巴母細胞性白血病、粒細胞性白血病和霍奇金氏病疾病，腎炎，呼吸窘迫症候群，附睾炎，腎小球腎炎和甲狀腺功能亢進症組成的組中。在一些實施例中，所述個體是人類。
在一些實施例中提供一種用於治療與CD40訊號通路相關的疾病（例如，自身免疫性疾病和/或炎性病症和/或癌症和/或移植相關疾病）的個體的方法，包括向所述個體施用有效量的包含抗CD40抗體的組合物，其中所述抗體包含：V H，所述V H包含SEQ ID NO: 122所示的胺基酸序列或其變體，所述變體與SEQ ID NO: 122所示的胺基酸序列具有至少約90%序列同一性；以及V L，所述V L包含SEQ ID NO: 141所示的胺基酸序列或其變體，所述變體與SEQ ID NO: 141所示的胺基酸序列具有至少約90%序列同一性。
在一些實施例中，本文所述抗CD40抗體是包含IgG1或IgG4恆定區的全長抗CD40抗體。在一些實施例中，所述IgG1是人IgG1。在一些實施例中，所述IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
例如，在一些實施例中，提供一種用於治療與CD40訊號通路相關的疾病（例如，自身免疫性疾病和/或炎性病症和/或癌症和/或移植相關疾病）的個體的方法，包括向所述個體施用有效量的包含抗CD40抗體（例如，全長抗CD40抗體）的藥物組合物，重鏈可變結構域（V H），所述V H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 7，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 29，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 56，或者所述V H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及輕鏈可變結構域（V L），所述V L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 64，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 69，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 80，或者所述V L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代。在一些實施例中，所述抗CD40抗體是全長抗體。在一些實施例中，所述全長抗CD40抗體是IgG1或IgG4抗體。在一些實施例中，所述疾病或病症選自例如，例如，系統性紅斑狼瘡（SLE），盤狀紅斑狼瘡，狼瘡性腎炎，炎性關節炎：包括但不限於青少年關節炎、類風濕性關節炎、銀屑病關節炎、萊特爾氏症候群（Reiter's syndrome）、僵直性脊柱炎和痛風性關節炎，器官或組織移植排斥：超急性、急性或慢性排斥反應和/或移植物抗宿主病，多發性硬化症，高IgE症候群，結節性多發炎，原發性膽汁性肝硬化，炎症性腸病，克羅恩病，腹腔疾病（麩質敏感性腸病），自身免疫性肝炎，惡性貧血，自身免疫性溶血性貧血，硬皮病，重症肌無力，特發性血小板減少性紫癜，自身免疫性甲狀腺炎，格雷氏病（Grave′s disease），橋本氏甲狀腺炎（Hasimoto′s thyroiditis），免疫複合性疾病，慢性疲勞免疫功能障礙症候群（CFIDS），多發性肌炎，皮肌炎，冷球蛋白血症，血栓溶解，心肌症，尋常天皰瘡，肺間質纖維化，I型和II型糖尿病，1、2、3和4型遲發型超敏反應，過敏性或過敏性疾病，對治療性蛋白質的不必要/意外的免疫反應（例如血友病中的因子VII），哮喘，Rich-Strauss症候群（過敏性肉芽腫病），特應性皮炎，過敏性和刺激性接觸性皮炎，蕁麻疹，IgE介導的過敏，動脈粥樣硬化，血管炎，特發性炎症性肌病，溶血性疾病，阿爾茨海默氏病，慢性炎症性脫髓鞘性多發性神經病，乾燥症候群（Sjogren's disease），銀屑病，化膿性汗腺炎，化膿性尿道炎，結節病，潰瘍性結腸炎，腫瘤：包括但不限於非霍奇金淋巴瘤、慢性淋巴細胞性白血病、多發性骨髓瘤、B細胞淋巴瘤、高/中/低級B細胞淋巴瘤、急性B細胞淋巴母細胞性白血病、粒細胞性白血病和霍奇金氏病疾病，腎炎，呼吸窘迫症候群，附睾炎，腎小球腎炎和甲狀腺功能亢進症組成的組中。在一些實施例中，所述個體是人類。
在一些實施例中提供一種用於治療與CD40訊號通路相關的疾病（例如，自身免疫性疾病和/或炎性病症和/或癌症和/或移植相關疾病）的個體的方法，包括向所述個體施用有效量的包含抗CD40抗體的組合物，其中所述抗體包含：V H，所述V H包含SEQ ID NO: 123所示的胺基酸序列或其變體，所述變體與SEQ ID NO: 123所示的胺基酸序列具有至少約90%序列同一性；以及V L，所述V L包含SEQ ID NO: 142所示的胺基酸序列或其變體，所述變體與SEQ ID NO: 142所示的胺基酸序列具有至少約90%序列同一性。
在一些實施例中，本文所述抗CD40抗體是包含IgG1或IgG4恆定區的全長抗CD40抗體。在一些實施例中，所述IgG1是人IgG1。在一些實施例中，所述IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
例如，在一些實施例中，提供一種用於治療與CD40訊號通路相關的疾病（例如，自身免疫性疾病和/或炎性病症和/或癌症和/或移植相關疾病）的個體的方法，包括向所述個體施用有效量的包含抗CD40抗體（例如，全長抗CD40抗體）的藥物組合物，重鏈可變結構域（V H），所述V H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 8，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 30，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 57，或者所述V H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及輕鏈可變結構域（V L），所述V L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 62，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 67，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 80，或者所述V L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代。在一些實施例中，所述抗CD40抗體是全長抗體。在一些實施例中，所述全長抗CD40抗體是IgG1或IgG4抗體。在一些實施例中，所述疾病或病症選自例如，例如，系統性紅斑狼瘡（SLE），盤狀紅斑狼瘡，狼瘡性腎炎，炎性關節炎：包括但不限於青少年關節炎、類風濕性關節炎、銀屑病關節炎、萊特爾氏症候群（Reiter's syndrome）、僵直性脊柱炎和痛風性關節炎，器官或組織移植排斥：超急性、急性或慢性排斥反應和/或移植物抗宿主病，多發性硬化症，高IgE症候群，結節性多發炎，原發性膽汁性肝硬化，炎症性腸病，克羅恩病，腹腔疾病（麩質敏感性腸病），自身免疫性肝炎，惡性貧血，自身免疫性溶血性貧血，硬皮病，重症肌無力，特發性血小板減少性紫癜，自身免疫性甲狀腺炎，格雷氏病（Grave′s disease），橋本氏甲狀腺炎（Hasimoto′s thyroiditis），免疫複合性疾病，慢性疲勞免疫功能障礙症候群（CFIDS），多發性肌炎，皮肌炎，冷球蛋白血症，血栓溶解，心肌症，尋常天皰瘡，肺間質纖維化，I型和II型糖尿病，1、2、3和4型遲發型超敏反應，過敏性或過敏性疾病，對治療性蛋白質的不必要/意外的免疫反應（例如血友病中的因子VII），哮喘，Rich-Strauss症候群（過敏性肉芽腫病），特應性皮炎，過敏性和刺激性接觸性皮炎，蕁麻疹，IgE介導的過敏，動脈粥樣硬化，血管炎，特發性炎症性肌病，溶血性疾病，阿爾茨海默氏病，慢性炎症性脫髓鞘性多發性神經病，乾燥症候群（Sjogren's disease），銀屑病，化膿性汗腺炎，化膿性尿道炎，結節病，潰瘍性結腸炎，腫瘤：包括但不限於非霍奇金淋巴瘤、慢性淋巴細胞性白血病、多發性骨髓瘤、B細胞淋巴瘤、高/中/低級B細胞淋巴瘤、急性B細胞淋巴母細胞性白血病、粒細胞性白血病和霍奇金氏病疾病，腎炎，呼吸窘迫症候群，附睾炎，腎小球腎炎和甲狀腺功能亢進症組成的組中。在一些實施例中，所述個體是人類。
在一些實施例中提供一種用於治療與CD40訊號通路相關的疾病（例如，自身免疫性疾病和/或炎性病症和/或癌症和/或移植相關疾病）的個體的方法，包括向所述個體施用有效量的包含抗CD40抗體的組合物，其中所述抗體包含：V H，所述V H包含SEQ ID NO: 124所示的胺基酸序列或其變體，所述變體與SEQ ID NO: 124所示的胺基酸序列具有至少約90%序列同一性；以及V L，所述V L包含SEQ ID NO: 143所示的胺基酸序列或其變體，所述變體與SEQ ID NO: 143所示的胺基酸序列具有至少約90%序列同一性。
在一些實施例中，本文所述抗CD40抗體是包含IgG1或IgG4恆定區的全長抗CD40抗體。在一些實施例中，所述IgG1是人IgG1。在一些實施例中，所述IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
例如，在一些實施例中，提供一種用於治療與CD40訊號通路相關的疾病（例如，自身免疫性疾病和/或炎性病症和/或癌症和/或移植相關疾病）的個體的方法，包括向所述個體施用有效量的包含抗CD40抗體（例如，全長抗CD40抗體）的藥物組合物，重鏈可變結構域（V H），所述V H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 4，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 31，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 53，或者所述V H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及輕鏈可變結構域（V L），所述V L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 62，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 68，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 79，或者所述V L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代。在一些實施例中，所述抗CD40抗體是全長抗體。在一些實施例中，所述全長抗CD40抗體是IgG1或IgG4抗體。在一些實施例中，所述疾病或病症選自例如，例如，系統性紅斑狼瘡（SLE），盤狀紅斑狼瘡，狼瘡性腎炎，炎性關節炎：包括但不限於青少年關節炎、類風濕性關節炎、銀屑病關節炎、萊特爾氏症候群（Reiter's syndrome）、僵直性脊柱炎和痛風性關節炎，器官或組織移植排斥：超急性、急性或慢性排斥反應和/或移植物抗宿主病，多發性硬化症，高IgE症候群，結節性多發炎，原發性膽汁性肝硬化，炎症性腸病，克羅恩病，腹腔疾病（麩質敏感性腸病），自身免疫性肝炎，惡性貧血，自身免疫性溶血性貧血，硬皮病，重症肌無力，特發性血小板減少性紫癜，自身免疫性甲狀腺炎，格雷氏病（Grave′s disease），橋本氏甲狀腺炎（Hasimoto′s thyroiditis），免疫複合性疾病，慢性疲勞免疫功能障礙症候群（CFIDS），多發性肌炎，皮肌炎，冷球蛋白血症，血栓溶解，心肌症，尋常天皰瘡，肺間質纖維化，I型和II型糖尿病，1、2、3和4型遲發型超敏反應，過敏性或過敏性疾病，對治療性蛋白質的不必要/意外的免疫反應（例如血友病中的因子VII），哮喘，Rich-Strauss症候群（過敏性肉芽腫病），特應性皮炎，過敏性和刺激性接觸性皮炎，蕁麻疹，IgE介導的過敏，動脈粥樣硬化，血管炎，特發性炎症性肌病，溶血性疾病，阿爾茨海默氏病，慢性炎症性脫髓鞘性多發性神經病，乾燥症候群（Sjogren's disease），銀屑病，化膿性汗腺炎，化膿性尿道炎，結節病，潰瘍性結腸炎，腫瘤：包括但不限於非霍奇金淋巴瘤、慢性淋巴細胞性白血病、多發性骨髓瘤、B細胞淋巴瘤、高/中/低級B細胞淋巴瘤、急性B細胞淋巴母細胞性白血病、粒細胞性白血病和霍奇金氏病疾病，腎炎，呼吸窘迫症候群，附睾炎，腎小球腎炎和甲狀腺功能亢進症組成的組中。在一些實施例中，所述個體是人類。
在一些實施例中提供一種用於治療與CD40訊號通路相關的疾病（例如，自身免疫性疾病和/或炎性病症和/或癌症和/或移植相關疾病）的個體的方法，包括向所述個體施用有效量的包含抗CD40抗體的組合物，其中所述抗體包含：V H，所述V H包含SEQ ID NO: 125所示的胺基酸序列或其變體，所述變體與SEQ ID NO: 125所示的胺基酸序列具有至少約90%序列同一性；以及V L，所述V L包含SEQ ID NO: 144所示的胺基酸序列或其變體，所述變體與SEQ ID NO: 144所示的胺基酸序列具有至少約90%序列同一性。
在一些實施例中，本文所述抗CD40抗體是包含IgG1或IgG4恆定區的全長抗CD40抗體。在一些實施例中，所述IgG1是人IgG1。在一些實施例中，所述IgG4是人IgG4。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 145組成。在一些實施例中，重鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 146組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 147組成。在一些實施例中，輕鏈恆定區包含或由胺基酸序列SEQ ID NO: 148組成。
在一些實施例中，所述個體是哺乳動物（例如人、非人靈長類、大鼠、小鼠、牛、馬、豬、綿羊、山羊、狗、貓等）。在一些實施例中，所述個體是人類。在一些實施例中，所述個體是臨床患者、臨床試驗志願者、實驗動物等。在一些實施例中，所述個體年齡小於60歲（包括例如小於50、40、30、25、20、15或10歲）。在一些實施例中，所述個體年齡大於60歲（包括例如大於70、80、90或100歲）。在一些實施例中，所述個體是被診斷為或在遺傳角度上易患本文所描述的一種或多種疾病或病症（例如自身免疫性疾病和/或炎性病症和/或癌症和/或移植相關疾病）。在一些實施例中，所述個體具有一種或多種與本文所述的一種或多種疾病或病症相關的風險因子。
在一些實施例中，本發明提供一種向個體中在其表面表達CD40的細胞遞送抗CD40抗體（例如本文所述的任一種抗CD40抗體，例如分離的抗CD40抗體）的方法，所述方法包括向該個體施用包含抗CD40抗體的組合物。
自身免疫性疾病和/或炎性病症和/或癌症和/或移植相關疾病或其它任何表現出CD40異常表達的疾病的許多診斷方法和這些疾病的臨床描述在本領域是已知的。這類方法包括，但不限於，例如免疫組化、PCR以及螢光原位雜交（FISH）。
在一些實施例中，本發明所述抗CD40抗體（例如全長抗CD40抗體）和/或組合物與第二、第三或第四藥劑（包括例如免疫抑制劑和/或免疫調節劑和/或抗炎劑）聯合使用來治療與CD40訊號通路相關的疾病。
評估抗CD40抗體的免疫抑制活性的方法是本領域已知的。 例如，在有/無藥物干預的情況下，以體內移植器官的存活時長定量評價免疫反應的抑制效果。 也可以使用體外測定，例如混合淋巴細胞反應（MLR）測定（參見，例如，Fathman等人，J. Immunol. 118:1232-8, 1977）； CD3 測定（藉由抗 CD3 抗體（例如 OKT3）特異性啟動免疫細胞）（參見，例如 Khanna 等人，移植 67：882-9，1999 年；Khanna 等人（1999）移植 67： S58）; 和 IL-2R 測定（外源添加的細胞因子 IL-2 對免疫細胞的特異性啟動）（參見，例如 Farrar 等人，J. Immunol. 126:1120-5, 1981）.
評估抗CD40抗體治療自身免疫病和/或炎性疾病效果的方法是本領域已知的。有益的治療效果包括在接受治療的受治療者中,炎性細胞因子、粘附分子、蛋白酶、免疫球蛋白、它們的組合的水平降低,抗炎蛋白質的產生增加,自身反應性細胞的數目減少,免疫耐受性增大,自身反應性細胞存活的抑制,和/或由CD154對表達CD40的細胞刺激而介導的一種或多種症狀的減輕。抗CD40抗體的施用不受限於給藥途徑，並且可以包括向供體、供體組織(例如器官灌注)、宿主、其任意組合等施用。
可以使用篩選技術評估臨床反應： 磁共振成像(MRI)掃描、x射線照相成像、電腦斷層攝影(CT)掃描、流式細胞術或螢光活化細胞分選器(FACS)分析、組織學、宏觀病理學和血液化學,包括但不限於可由ELISA、RIA、色譜法等檢測到的變化。
抗CD40抗體的給藥劑量和方法
施用於個體（例如人）的抗CD40抗體（例如分離的抗CD40抗體）組合物的劑量可能因特定組合物、給藥方式和治療疾病類型的不同而不同。在一些實施例中，組合物（例如，包含抗CD40抗體的組合物）的量可在自身免疫性疾病和/或炎性病症和/或癌症和/或移植相關疾病治療中有效產生客觀回應（例如，部分回應或完全回應）。在一些實施例中，抗CD40抗體組合物的量足以在個體中產生完全回應。在一些實施例中，抗CD40抗體組合物的量足以在個體中產生部分響應。在一些實施例中，抗CD40抗體組合物的給藥劑量（例如當單獨施用時）足以在使用抗CD40抗體組合物治療的個體群體中產生高於20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、64%、65%、70%、75%、80%、85%或90%的總回應率。個體對本文所述治療方法的回應可藉由，例如，炎性細胞因子的降低來確定。
在一些實施例中，組合物（例如包含分離的抗CD40抗體的組合物）的量足以延長個體的無進展生存期。在一些實施例中，組合物的量足以延長個體的總體生存期。在一些實施例中，在使用抗CD40抗體組合物治療的個體群體中，組合物的量（例如當單獨施用時）足以產生高於50%、60%、70%或77%的臨床益處。
在一些實施例中，組合物（例如包含分離的抗CD40抗體的組合物）的量，單獨使用或與第二，第三、和/或第四藥劑聯合使用時，與同一受試者治療前相比或與未接受治療的其它受試者的相應疾病參數相比，其足以緩解或減輕症狀的嚴重程度、症狀的數量或復發的頻率至少為10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%或100%。可以採用標準方法來測量該療效的大小，例如體外檢測、基於細胞的檢測、動物模型或人體試驗。
在一些實施例中，當將組合物施用於個體時，組合物中抗CD40抗體（例如全長的抗CD40抗體）的量低於引起毒性效應（即，一種高於臨床可接受毒性水平的效應）的水平，或者處於潛在副作用可以控制或耐受的水平。
在一些實施例中，遵循相同的給藥方案，組合物的量接近的組合物的最大耐受劑量(MTD)。在一些實施例中，組合物的量高於MTD的80%、90%、95%或98%。
在一些實施例中，組合物中抗CD40抗體（例如全長的抗CD40抗體）的含量在0.001 µg到1000 µg的範圍之內。
在如上所述任一個實施例中，組合物中的抗CD40抗體（例如全長的抗CD40抗體）的有效量，按照體重時計算，為0.1 µg/kg到100 mg/kg的範圍之內。
抗CD40抗體組合物可藉由多種途徑施用於個體（如人類），包括，例如靜脈注射、動脈內給藥、腹腔注射、肺內給藥、口服給藥、吸入給藥、血管內給藥、肌肉注射、氣管內給藥、皮下注射、眼內給藥、鞘內給藥、粘膜給藥或經皮給藥。在一些實施例中，使用組合物的緩釋製劑。在一些實施例中，組合物藉由靜脈給藥。在一些實施例中，組合物藉由動脈給藥。在一些實施例中，組合物藉由腹膜內給藥。在一些實施例中，組合物藉由肝內給藥。在一些實施例中，組合物藉由肝動脈輸注給藥。在一些實施例中，組合物施用於遠離第一病灶的部位。
製品及試劑盒
在本發明的一些實施例中，提供一種製品，所述製品包含一種物質，所述物質能夠用於治療與CD40訊號通路相關的疾病（例如，自身免疫性疾病和/或炎性病症和/或癌症和/或移植相關疾病），或者用於遞送抗CD40抗體（例如一種全長抗CD40抗體）到表面表達CD40的細胞。所述製品可以包括一種容器以及在容器上或隨該容器附帶的標籤或包裝說明書。合適的容器包括，例如瓶子、小瓶、注射器等。容器可以由多種材料製成，例如玻璃或塑膠。通常，該容器內裝有能夠有效治療本文所述疾病或病症的組合物，並且具有一個無菌埠（例如該容器可以是一個靜脈輸液袋或是一個具有皮下注射針頭可刺穿蓋子的小瓶）。組合物中的至少一種活性物質即為本發明所述的抗CD40抗體。標籤或包裝說明書標示了該組合物可以用於治療的特定病症。標籤或包裝說明書進一步包含給患者施用抗CD40抗體組合物的說明書。包括聯合治療的製品和試劑盒均在本文的考慮範圍之內。
包裝說明書是指通常包含在治療產品的商業包裝內的說明書，其包含關於與這些治療產品使用有關的適應症、用法、劑量、施用、禁忌症和/或警告資訊。在一些實施例中，包裝說明書標明該組合物可以用於治療與CD40訊號通路相關的疾病（例如自身免疫性疾病和/或炎性病症和/或癌症和/或移植相關疾病）。在一些實施例中，包裝說明書標明該組合物可以用於治療以下的疾病，包括系統性紅斑狼瘡（SLE），盤狀紅斑狼瘡，狼瘡性腎炎，炎性關節炎：包括但不限於青少年關節炎、類風濕性關節炎、銀屑病關節炎、萊特爾氏症候群（Reiter's syndrome）、僵直性脊柱炎和痛風性關節炎，器官或組織移植排斥：超急性、急性或慢性排斥反應和/或移植物抗宿主病，多發性硬化症，高IgE症候群，結節性多發炎，原發性膽汁性肝硬化，炎症性腸病，克羅恩病，腹腔疾病（麩質敏感性腸病），自身免疫性肝炎，惡性貧血，自身免疫性溶血性貧血，硬皮病，重症肌無力，特發性血小板減少性紫癜，自身免疫性甲狀腺炎，格雷氏病（Grave′s disease），橋本氏甲狀腺炎（Hasimoto′s thyroiditis），免疫複合性疾病，慢性疲勞免疫功能障礙症候群（CFIDS），多發性肌炎，皮肌炎，冷球蛋白血症，血栓溶解，心肌症，尋常天皰瘡，肺間質纖維化，I型和II型糖尿病，1、2、3和4型遲發型超敏反應，過敏性或過敏性疾病，對治療性蛋白質的不必要/意外的免疫反應（例如血友病中的因子VII），哮喘，Rich-Strauss症候群（過敏性肉芽腫病），特應性皮炎，過敏性和刺激性接觸性皮炎，蕁麻疹，IgE介導的過敏，動脈粥樣硬化，血管炎，特發性炎症性肌病，溶血性疾病，阿爾茨海默氏病，慢性炎症性脫髓鞘性多發性神經病，乾燥症候群（Sjogren's disease），銀屑病，化膿性汗腺炎，化膿性尿道炎，結節病，潰瘍性結腸炎，腫瘤：包括但不限於非霍奇金淋巴瘤、慢性淋巴細胞性白血病、多發性骨髓瘤、B細胞淋巴瘤、高/中/低級B細胞淋巴瘤、急性B細胞淋巴母細胞性白血病、粒細胞性白血病和霍奇金氏病疾病，腎炎，呼吸窘迫症候群，附睾炎，腎小球腎炎和甲狀腺功能亢進症。
此外，所述製品還可以包括第二容器，其包含藥學上可接受的緩衝液，例如抑菌性注射用水（BWFI）、磷酸鹽緩衝液、格林氏溶液或葡萄糖溶液。還可以包括從商業和用戶角度而言所需的其他材料，包括其他緩衝液、稀釋液、篩檢程式、針頭和注射器。
同時還涉及可用於各種目的的試劑盒，例如用於治療與CD40訊號通路相關的疾病（例如自身免疫性疾病和/或炎性病症和/或癌症和/或移植相關疾病），或者用於遞送抗CD40抗體（例如全長抗CD40抗體）到表面表達CD40的細胞中，任選與製品組合。本發明的試劑盒包括一個或多個容器，其包含抗CD40抗體組合物（或單劑量形式和/或製品），並且在一些實施例中，進一步包含另一種藥劑（例如本文所述的藥劑）和/或與本文所述任一方法相一致的使用說明書。該試劑盒可進一步包括選擇適合治療個體的描述。本發明中試劑盒中所附帶的使用說明書通常是標籤或包裝說明書上的書面說明（例如包含在試劑盒內的紙頁），機器可讀的說明（例如，磁性或光學儲存光碟上的說明）也是可以接受的。
例如，在一些實施例中，試劑盒包括一種包含抗CD40抗體（例如全長的抗CD40抗體）的組合物。在一些實施例中，試劑盒包括：a)包含本文所述的任一種抗CD40抗體的組合物，和b)至少一種有效量的其它藥劑，其能夠增強抗CD40抗體的效果（如治療效果、檢測效果）。在一些實施例中，試劑盒包括：a)包含本文所述的任一種抗CD40抗體的組合物，和b)向個體施用抗CD40抗體組合物用於治療與CD40訊號通路相關的疾病（例如自身免疫性疾病和/或炎性病症和/或癌症和/或移植相關疾病）的使用說明書。在一些實施例中，試劑盒包括：a)包含本文所述的任一種抗CD40抗體的組合物，和b)至少一種有效量的其它藥劑，其能夠增強抗CD40抗體的效果（如治療效果、檢測效果）和c)向個體施用抗CD40抗體組合物和其它物質用於治療與CD40訊號通路相關的疾病（例如自身免疫性疾病和/或炎性病症和/或癌症和/或移植相關疾病）的使用說明書。所述抗CD40抗體和其他物質可以存在於獨立的容器或同一個容器中。例如，該試劑盒可以包括一種特定組合物或兩種或更多種組合物，其中一種組合物包括抗CD40抗體，另一種組合物包括另一種藥劑。
在一些實施例中，試劑盒包含一種（或一組）編碼抗CD40抗體（例如全長的抗CD40抗體）的核酸。在一些實施例中，試劑盒包含：a)一種（或一組）編碼抗CD40抗體（例如全長的抗CD40抗體）的核酸，和b)一種表達核酸（或一組核酸）的宿主細胞。在一些實施例中，試劑盒包含：a)一種（或一組）編碼抗CD40抗體（例如全長的抗CD40抗體）的核酸，和b)使用說明書，適用於：i)在宿主細胞中表達抗CD40抗體，ii)製備包含抗CD40抗體的組合物，和iii)向個體施用包含抗CD40抗體的組合物來治療與CD40訊號通路相關的疾病（例如自身免疫性疾病和/或炎性病症和/或癌症和/或移植相關疾病）。在一些實施例中，試劑盒包括：a)一種（或一組）編碼抗CD40抗體（例如全長的抗CD40抗體）的核酸，b)一種表達核酸（或一組核酸）的宿主細胞，和c)使用說明書，適用於：i)在宿主細胞中表達抗CD40抗體，ii)製備包含抗CD40抗體的組合物，和iii)向個體施用包含抗CD40抗體的組合物來治療與CD40訊號通路相關的疾病（例如自身免疫性疾病和/或炎性病症和/或癌症和/或移植相關疾病）。
本發明所述的試劑盒以合適的形式進行包裝。合適的包裝包括，但不限於，小瓶、瓶子、廣口瓶、軟包裝（例如密封的聚酯薄膜或塑膠袋）等。試劑盒可以任選地提供其它的組分，例如緩衝液和說明資訊。因此，本發明還提供製品，其包括小瓶、瓶子、廣口瓶、軟包裝（例如密封的聚酯薄膜或塑膠袋）等。
關於抗CD40抗體組合物的使用說明書，通常包括一些資訊，諸如，劑量，給藥週期和給藥途徑等。容器可以是單位劑量的，大包裝的（如，多劑量包裝）或亞單位劑量的。例如，提供一種包含足夠劑量的如本文所述的抗CD40抗體（例如全長的抗CD40抗體）的試劑盒以對個體進行長期有效的治療，例如一周、8天、9天、10天、11天、12天、13天、2周、3周、4周、6周、8周、3個月、4個月、5個月、7個月、8個月、9個月或更長時間。試劑盒還可包含多單位劑量的抗CD40抗體、藥物組合物和使用說明書，並且以足夠在藥房中儲存和使用的量進行包裝，例如，醫院藥房和複方藥房。
本領域的技術人員將認識到在本發明的範圍和宗旨內可能的若干實施例。現在將藉由參考以下非限制性實施例來更詳細地描述本發明。以下實施例進一步闡明本發明，但不應解釋為以任何方式進行限制其範圍。
具體實施方式
在下述公開的實施例中，適用如下縮寫：CD40 （Clusters of differentiation 40，分化簇40）; Bavih-hCD40（Biotin-hCD40-Avi-10His）
實施例1：製備重組CD40/CD40L並且篩選抗CD40的單鏈抗體（scFv）
製備重組CD40胞外區 /CD40L抗原
藉由亞克隆將人CD40（human CD40，hCD40）胞外區（由上海捷瑞生物工程有限公司合成）構建到哺乳動物細胞表達載體中，並在293F細胞中進行表達。在人CD40胞外區上分別添加His標籤、鼠Fc標籤、人Fc標籤、Avi標籤或其它的本領域技術人員常用標籤，構建並表達出以上幾種形式的含有重組CD40胞外區抗原的融合蛋白，包括CD40-His、 CD40-Avi-His、CD40-mFc和CD40-hFc。其中，“his或His”代表His標籤，“mFc” 代表鼠Fc標籤，“hFc”代表人Fc標籤，“Avi”代表親和素標籤。
同上述方法，構建重組表達恆河猴CD40（Rhesus monkey CD40，RheCD40）胞外區的載體並在293F細胞中進行表達。
另外，藉由亞選殖將人全長CD40L（由南京金斯瑞生物科技有限公司合成）構建到哺乳動物細胞表達載體中，並在293F細胞中進行表達。在人CD40L上添加Fc標籤或其它的本領域技術人員常用標籤。構建產生二聚體形式的重組Fc-CD40L融合蛋白（在此被命名為Fc-3*G4S-CD40L）。
按照製造商的操作說明書，對重組CD40胞外區或CD40L融合蛋白，包括人或恆河猴CD40-His、CD40-Avi-His、CD40-mFc、CD40-hFc以及Fc-3*G4S-CD40L，進行表達和純化。簡言之，將含有上述融合蛋白基因的表達載體分別轉染293F細胞，並將上述細胞在37℃、5%CO 2、120rpm條件下培養5天。分別收集細胞培養液。
根據製造商的操作說明，採用鎳柱（Ni）純化具有His標籤的重組蛋白。具體操作如下：採用QIAGEN公司的Ni-NTA進行固定化金屬親和層析（IMAC）。首先採用緩衝液A1 （50mM Na 3PO 4、0.15M NaCl、pH 7.2）平衡鎳柱，流速150cm/h，將培養液上清的pH調整至7.2，室溫上樣，流速150cm/h。隨後，採用6倍柱體積的A1緩衝液再次平衡該柱，流速150cm/h。最後採用10倍柱體積的50mM的PB溶液（包含0.15M NaCl和0.2M咪唑，pH 7.2）進行洗脫，收集洗脫液。
根據操作說明書，採用蛋白A樹脂純化具有Fc標籤的融合蛋白。具體操作如下：首先採用6倍柱體積的PBS緩衝液（包含50mM PBS和0.15M NaCl，pH7.2）平衡蛋白A柱，流速150cm/h。將培養液上清的pH調整至7.2，室溫上樣，流速150cm/h。至完全平衡後，加入50mM的檸檬酸鈉（pH3.5）進行洗脫，收集洗脫液。
製備生物素化標記的CD40胞外區抗原
按照操作說明書，採用生物素化連接酶B0101A（GeneCopoeia）對hCD40-Avi-His進行生物素化標記。簡言之，向hCD40-Avi-His中加入BufferA/B和BirA連接酶後在30℃下培養2小時。生物素化的hCD40-Avi-His被命名為Bavih-hCD40。藉由ELISA方法檢測生物素化效率，確定生物素化標記效率至少為70%。
篩選抗CD40單鏈抗體（scFv）
構建 scFv 抗體噬菌體展示文庫：使用人CD40胞外區作為抗原，和佐劑一起免疫Balb/c小鼠，取免疫後的動物血清，ELISA檢測IgG滴度。幾輪免疫後，使用外周血、淋巴結和脾臟，建立噬菌體展示庫。簡言之，取免疫後的小鼠的外周血、淋巴結和脾臟，並提取RNA，經逆轉錄獲得cDNA。採用V H和V K特異性引物擴增V H和V K片段，經過膠回收純化後，連接V H和V K，構建scFv，並將其選殖到噬菌體展示質粒pDAN5中。採用電轉法將表達scFv的質粒導入到TGl感受態細胞中，以獲得scFv抗體噬菌體展示文庫。
篩選抗 CD40 單鏈抗體（ scFv ）：經過一系列重複篩選步驟，從噬菌體展示庫中分離獲得特異性結合人CD40的scFv抗體。簡言之，取2x10 11PFU的噬菌體scFv文庫加入到Bavih-hCD40中，37℃培養2小時。結合hCD40的噬菌體被包被了鏈黴親和素的磁珠捕獲，而未結合的噬菌體被洗掉。採用TBST溶液洗滌8-15遍（隨著篩選輪數增加，洗滌次數增加）之後，用Glycine-HCl 溶液（pH2.2）洗脫特異性結合hCD40的噬菌體。用這些噬菌體感染指數生長期的TG1細胞，加入氨苄西林培養1小時後，加入輔助噬菌體，28°C、200rpm搖床培養過夜。次日收集培養液，離心後獲得上清，進入下一輪篩選，直至獲得陽性scFv抗體文庫。
採用 ELISA 篩選 CD40 單鏈抗體（ scFv ）：將MACS淘選後富集的噬菌體進行ELISA篩選。簡言之，將人CD40抗原溶解在PBS溶液中，按照0.1µg/孔包被96孔板，4°C過夜。在加入抗體之前，用PBST溶液洗滌96孔板。每孔中加入90μL 含有4%脫脂奶粉的PBS，隨後向對應的孔中加入10μL phage-scFv表達上清，37℃培養1-2小時。用PBST溶液洗滌後，加入HRP標記的抗 M13單抗（Sino Biological， 11973-MM05T-H），100μL/孔，37℃培養 1 h。PBST 洗板3 次，加 TMB 顯色液，100 μL/孔 ，室 溫避光培養10min。用2M H 2SO 4終止顯色反應，用酶標儀讀取450nm處的吸光度值。挑選陽性選殖菌進行測序，測序正確的陽性選殖菌擴大培養後，提取噬菌體展示質粒，備用。在篩選過程結束後，獲得一系列陽性scFv抗體。
實施例2：製備和表徵全長的CD40嵌合抗體
製備全長的抗CD40嵌合抗體
將獲得的陽性scFv抗體重構成具有人IgG1或IgG4的重鏈恆定區和人kappa輕鏈恆定區的嵌合抗體分子。從噬菌體表達載體中擴增 V L和V H，分別構建入真核表達載體pTT5-L（包含kappa輕鏈恆定區）和pTT5-H1（包含IgG1重鏈恆定區）或pTT5-H4（包含IgG4重鏈恆定區）中。將分別提取的表達輕鏈或重鏈的質粒，共轉染293F細胞，37℃、8% CO 2、120rpm培養5天，用Protein A親和層析柱純化培養液。簡言之，首先採用6倍柱體積50mM PBS緩衝液（包含0.15M NaCl，pH7.2）以150cm/h的流速平衡蛋白A柱。培養液上清（調節pH至7.2）以150cm/h流速流穿柱子。進一步平衡該柱後，採用50mM檸檬酸鈉緩衝液（pH3.5）洗脫，收集洗脫液。將獲得的全長抗體進行進一步的生化和生物活性分析。
HEK-BlueTM CD40L NF-κB 啟動試驗：HEK-Blue TMCD40L細胞系（InvivoGen）穩定表達人CD40和NF-κB誘導的分泌型胚胎鹼性磷酸酶（SEAP）。 HEKBlue TMCD40L細胞上CD40的活化誘導了下游訊號的轉導，導致NF-κB的啟動，從而分泌SEAP，其可藉由QUANTI-Blue TM底物轉化率來測定。簡言之，根據製造商的操作說明書，培養HEK-Blue TMCD40L細胞，並接種到96孔培養板中，每孔接種100μL（1x10 5個細胞/mL）；之後將50μL Fc-3*G4S-CD40L（0.32μg/mL）和起始濃度為1.2μg/mL的CD40抗體梯度稀釋液預先混合，加入96孔培養板中，37℃、5%CO 2培養24小時。然後，將40μL上清與160μL預熱的QUANTI-Blue TM（Invivogen）溶液混合，培養60-90分鐘，讀取650nm處的吸光值。經PRISM計算IC 50值。
結果如表5所示，篩選出最有潛力的抗CD40抗體D1-D7，其可抑制人CD40L誘導的NF-κB啟動，並且其抑制效果比對照抗體ASKP1240（抗CD40抗體，協和麒麟）更優或與之相當。
表5
樣品名稱 IC 50值（μg /mL）
D1 0.02150
D2 0.01707
D3 0.02243
D4 0.01672
D5 0.01418
D6 0.00712
D7 0.01702
ASKP1240 0.01108
ELISA結合試驗: 將篩選得到的全長單株抗體D1、D2、D3、D5、D6、D7分別與不同種屬的CD40胞外區抗原進行結合試驗，該試驗用於鑒定抗體與不同種屬CD40的交叉反應。簡言之，將實施例1製備的人或恆河猴CD40胞外區抗原溶解在PBS溶液中，按照0.1µg/孔包被96孔板，4°C過夜。在加入抗體之前，用TBST溶液洗滌96孔板，用5%牛奶37℃封閉1-2小時，再用TBST溶液洗滌。首先將每個抗體樣品稀釋至10 µg/mL，隨後以1：3比例進行梯度稀釋。將梯度稀釋後的樣品分別加入96孔板中，每孔100μL，37℃培養1小時。隨後用TBST溶液洗滌6次。向各孔中加入100µL二抗（山羊抗人IgG- HRP（Sigma公司，A8667）），37℃培養1小時。用TBST溶液洗滌3次。每孔加入100µL TMB，37℃培養10-20分鐘，用2M H 2SO 4終止反應，讀取450nm處的吸光值。分析ELISA結果，並藉由PRISM生成結合曲線。
結果如表6所示，所選的抗CD40抗體和對照抗體ASKP1240均都能較好的結合人CD40和恆河猴CD40。
表6
樣品名稱 結合hCD40的EC 50值（μg/mL） 結合RheCD40的EC 50值（μg/mL）
D1 0.2359 0.2274
D2 0.1929 0.4732
D3 0.2236 0.0743
D5 0.2740 0.6266
D6 0.1760 0.2435
D7 0.2606 0.1328
ASKP1240 0.2107 0.1813
抗CD40抗體抑制Ramos細胞中CD95的表達
Ramos細胞是一種衍生自人伯基特氏淋巴瘤的細胞系，且在其細胞表面表達CD40和CD95（Fas）。CD40L可誘導Ramos細胞表面CD95的表達量增加。按以下方案，確定抗CD40抗體D1、D6、D7或對照抗體ASKP1240在Ramos細胞中對Fc-3*G4S-CD40L誘導的CD95表達的抑制能力。
將濃度為1.0x10 6個細胞/mL的Ramos細胞懸液接種到96孔板中，每孔接種100μL。將50μL Fc-3*G4S-CD40L（4μg/mL）和以1μg/mL為起始濃度的CD40抗體梯度稀釋液分別預先混合，加入含有細胞的96孔測定板中，37℃，5%CO 2培養24小時。然後，收集細胞。利用APC標記的抗CD95抗體（BioLegend，305612）對收集的細胞進行標記，隨後進行FACS分析，獲得不同抗體濃度所對應的平均螢光強度（MFI）。
結果如圖1A所示，抗CD40抗體D1、D6、D7能夠抑制人CD40L誘導的CD95表達，且抑制效果比對照抗體ASKP1240更優或與之相當。
抗免疫球蛋白抗體交聯的效果
CD40是TNF受體超家族的一員，其在細胞表面的多聚化可導致CD40途徑啟動。為了檢測本發明中的抗體是否會產生抗體交聯啟動的副作用，採用抗人IgG抗體處理，以交聯抗CD40抗體。若人IgG抗體與本發明的抗CD40抗體共同處理後引起Ramos細胞表面CD95的表達量增加，表明細胞中CD40途徑被啟動，即說明抗CD40抗體存在抗體交聯啟動的副作用。按下述方案，確定Ramos細胞中CD95的表達。
將濃度為1.0x10 6個細胞/mL的Ramos細胞懸液接種到96孔板中，每孔接種100μL。 將50μL抗人IgG抗體（4μg/mL）（Sigma，A8667）和以10μg/mL為起始濃度的CD40抗體D1、D7、ASKP1240或CFZ533）梯度稀釋液分別預先混合，加入含有細胞的96孔測定板中，37℃、5%CO 2培養24小時。然後，收集細胞。利用APC標記的抗CD95抗體（BioLegend，305612）對收集的細胞進行標記，隨後進行FACS分析，獲得不同抗體濃度所對應的平均螢光強度（MFI）。
結果如圖1B所示，即使交聯後，抗CD40抗體D1、D7或ASKP1240也幾乎不顯示CD40激動活性，但對照抗體CFZ533展示出一定的激動活性。
抗CD40抗體抑制PBMCs中CD23的表達
人外周血單個核細胞（PBMC）中包含B細胞，可用於表徵抗CD40抗體對B細胞活化的影響。CD40L可誘導CD23的表達，且CD23的表達被認為是B細胞活化的標誌。按下述方案，確定抗CD40抗體D1、D6、D7和ASKP1240在B細胞中對Fc-3 * G4S-CD40L誘導的CD23表達的抑制能力。
將濃度為8.0x10 6個細胞/mL的PBMCs細胞接種到96孔板中，每孔接種100μL。 將50 μL Fc-3*G4S-CD40L（4μg/mL）和以1.2μg/mL為起始濃度的抗CD40抗體D1、D6 、D7或ASKP1240梯度稀釋液分別預先混合，加入含有細胞的96孔測定板中。37℃，5%CO 2培養48小時。然後，收集細胞，利用APC標記的抗CD19抗體（Biolegend，302212）和FITC標記的抗CD23抗體（Biolegend，338506）分別對收集的細胞進行標記，隨後進行FACS分析，獲得不同抗體濃度所對應的平均螢光強度（MFI）。
結果如圖2所示，CD40抗體D1、D6和D7在B細胞中抑制CD40L誘導的CD23表達方面，展示出與對照抗體ASKP1240相當的效果。
ELISA方法測定IL12p40和TNF-α
按照Manual EasySep™（STEMCELL，加拿大溫哥華）的操作說明書，從PBMC中分離出單核細胞。將分離的單核細胞放入含有IL-4（100ng/mL）和GM-CSF（50ng/mL）的完全培養基中，37℃、5%CO 2培養6天，每隔一天更換培養基，新鮮的培養基中含有相同濃度的細胞因子。在第6天收穫iDCs（未成熟樹突狀細胞）。CD40L刺激24小時後，iDC細胞可分泌IL12 p40和TNF-α。按下述方案，確定在iDCs中，抗CD40抗體D1、D6、D7或ASKP1240對Fc-3 * G4S-CD40L誘導的IL12p40和TNF-α分泌的抑制能力。
將濃度為1.0x10 7個/mL 的iDC細胞懸液接種到96孔板中，每孔接種100μL。將50μL Fc-3*G4S-CD40L（4μg/mL）和以40μg/mL為起始濃度的抗CD40抗體梯度稀釋液分別預先混合，加入含有細胞的96孔測定板中。37℃、5%CO 2培養24小時。然後收集上清。採用人IL-12 （p40） ELISA試劑盒（biolegend, 430704）和人TNF-α ELISA 試劑盒（biolegend, 430204）分別進行ELISA檢測，隨後讀取OD450處的吸光度值。其中以不相關的抗體AMG157（TSLP抗體，Amgen）作為陰性對照，以ASKP1240作為陽性對照。
結果顯示，抗CD40抗體D1、D6和D7均能夠抑制IL12p40（圖3A）和TNF-α（圖3B）的產生，且抑制效果與對照抗體ASKP1240的抑制效果相當，而陰性對照抗體AMG157無相關的抑制活性。
實施例3: 抗CD40抗體的人源化
以獲得的小鼠抗體D1的V H/V LCDR典型結構為基礎，將重、輕鏈可變區序列與抗體種系資料庫中的序列進行比較，獲得同源性高的人種系範本。將小鼠抗體的CDR區移植到選定的人種系範本上以產生人源化的可變區，再與相應的人IgG恆定區（較佳為IgG4重鏈和κ輕鏈）重組。隨後，以小鼠抗體的三維結構為基礎，對包埋殘基、與CDR區有直接相互作用的殘基以及對V L和V H的構象有重要影響的殘基進行回復突變，並優化CDR區化學不穩定的胺基酸殘基，從而得到最終的人源化分子D11。D11的重鏈可變區序列如SEQ ID NO：88所示，輕鏈可變區序列如SEQ ID NO：127所示。
實施例 4: 人源化抗體的表徵
採用實施例2中的相應的試驗方案，檢測人源化抗CD40抗體D11的生物活性，包括HEK-Blue TMCD40L NF-κB啟動試驗、抗CD40抗體在Ramos細胞中對CD95表達的抑制試驗。
結果表明，人源化的抗CD40抗體D11與其母本抗體D1相比，生物活性、親和力和解離常數略有下降（結果未展示）。
實施例5：提高抗體的親和力和生物學活性
為了提高人源化後抗CD40抗體的親和力和活性，選擇D11作為起始抗體進行親和力成熟。 使用D11的scFv，在其CDR區進行突變，產生相應的噬菌體scFv展示文庫，篩選獲得以高親和力和低解離速率結合人CD40的抗體，並藉由HEK-Blue TMCD40L NF-κB啟動試驗評估其生物活性。按照實施例2所述方法，將顯示出高親和力或良好生物活性的scFv抗體重構成全長抗體，採用HEK-Blue TMCD40L NF-κB啟動試驗篩選全長抗體，選出優化後的抗體（D21-D51），並進一步進行生化和生物活性分析。
HEK-Blue TMCD40L NF-κB啟動試驗
採用實施例2所述方案，對人源化抗體親和力成熟後的全長抗體進行HEK-Blue TMCD40L NF-κB啟動試驗，以檢測優化後的抗體（重構成人IgG4形式）抑制NF-κB 啟動的能力。
結果如表7和圖4所示，優化後的抗體均展示出良好的抑制CD40L誘導的NF-κB 啟動的能力，並且其抑制效果比對照抗體ASKP1240更優或與之相當。
表7
樣品名稱 IC 50(μg/mL) 樣品名稱 IC 50(μg/mL)
D21 0.01023 D37 0.02111
D22 0.02185 D38 0.01558
D23 0.01687 D39 0.02995
D24 0.01641 D40 0.01421
D25 0.02726 D41 0.01944
D26 0.00908 D42 0.00962
D27 0.02982 D43 0.01677
D28 0.01241 D44 0.02009
D29 0.03421 D45 0.01568
D30 0.01802 D46 0.01118
D31 0.01393 D47 0.01140
D32 0.01638 D48 0.03069
D33 0.01222 D49 0.01118
D34 0.03375 D50 0.01418
D35 0.02328 D51 0.01837
D36 0.02120 ASPK1240 0.01336
抗CD40抗體的親和力
表徵優化後的抗CD40抗體的結合親和力和解離常數（Kd）： 採用Biacore 8K（GE）表徵優化後的抗CD40抗體與人CD40的結合親和力。將抗CD40抗體固定於感測器晶片CM5上，檢測不同濃度下的抗體與人CD40的親和力，用SPR技術測量抗體的結合速率和解離速率，並確定結合親和力。
結果如表8所示，優化後的抗CD40抗體的解離速率顯著降低，並且D21、D26、D33、D42、D47、D49與人CD40的結合親和力優於對照抗體ASKP1240，或與對照抗體ASKP1240相當。
表8
抗體名稱 Kon (1/Ms) Koff (1/s) Kd(M)
D21 2.384 E+5 6.055 E-04 2.540 E-09
D26 2.175 E+5 5.960 E-04 2.740 E-09
D33 3.035 E+5 4.935 E-04 1.626 E-09
D42 2.207 E+5 2.773 E-04 1.256 E-09
D47 1.907 E+5 3.026 E-04 1.587 E-09
D49 1.961 E+5 2.950 E-04 1.505 E-09
ASKP1240 2.976 E+5 6.169 E-04 2.073 E-09
CD40 ELISA 結合試驗
按照實施例2中所述的方案，採用ELISA試驗評估優化後的全長抗CD40抗體與人或恆河猴CD40的親和力，以ASKP1240作為對照。
結果如圖5A-5B所示，人源化抗體D11經親和力成熟後產生的優化抗體D21、D26、D33、D42、D47、D49（重構成人IgG4形式）與人CD40（圖5A）或恆河猴CD40（圖5B）的親和力與對照抗體ASKP1240相當。
抗CD40抗體抑制Ramos細胞中CD95的表達
按照實施例2中所述的方案，採用FACS確定優化後的抗CD40抗體D21、D26、D33、D42、D47、D49或對照抗體ASKP1240（重構成人IgG4形式）在Ramos細胞中對Fc-3 * G4S-CD40L誘導的CD95表達的抑制能力。
結果如圖6所示，優化後的抗CD40抗體D21、D26、D33、D42、D47或D49在抑制人CD40L誘導CD95表達的方面，顯示出優於對照抗體ASKP1240的效果。
抗免疫球蛋白抗體交聯的效果
按照實施例2中所述的方案，採用FACS確定優化後的抗CD40抗體D33、D42或D47（重構成人IgG4形式）是否會產生抗體交聯啟動的副作用。
結果表明，經抗人IgG抗體交聯後，優化後的抗CD40抗體D33、D42、D47或ASKP1240未顯示出CD40激動活性（結果未展示）。
抗CD40抗體的交叉反應性
抗CD40抗體與CD40同源蛋白的交叉反應性：眾所周知，TNFR超家族成員之間的同源性較高，將其與CD40序列進行同源比對，同源性最高的為TNFRSF11A（同源性為38.95%）和TNFR2（同源性為37.20%）。 採用ELISA方法檢測抗CD40抗體與它們之間的交叉反應性。 簡言之，將人TNFRSF11A（Sino Biological，16078-H08H）、人TNFR2（Sino Biological，10417-H08H）或實施例1中製備的人CD40胞外區蛋白包被在ELISA板上，4℃過夜。將優化後的全長抗CD40抗體倍比稀釋後，分別加入96孔板中培養，TBST洗滌後，加入抗人IgG-HRP抗體。室溫培養，TBST洗滌後， 孔中加入TMB顯色，隨後讀取450nm處的吸光度值。
結果表明，即使在10μg/mL的高濃度下，優化後的抗體D33、D42或D47（重構成人IgG4形式）也不會與TNFRSF11A或TNFR2產生交叉反應。（結果未展示）
抗CD40抗體抑制PBMCs中CD23的表達
按照實施例2中所述的方案，採用FACS確定優化後的抗CD40抗體D33、D42或D47（重構成人IgG4形式）在PBMCs中抑制Fc-3 * G4S-CD40L誘導的CD23表達的能力。
結果如圖7所示，優化後的抗CD40抗體D33、D42或D47在抑制人CD40L誘導B細胞CD23表達的方面，顯示出與對照抗體ASKP1240相當的效果。
實施例6：人CD40轉基因小鼠中的T細胞依賴性抗體反應
在人CD40轉基因小鼠中執行T細胞依賴性抗體反應（TDAR）分析。在第0天，將甘露聚糖結合凝集素關聯絲胺酸蛋白酶2（MASP2）在弗氏完全佐劑中乳化，每隻動物施用100μg。在第0、7、 14天，各實驗組小鼠以3mpk的劑量藉由靜脈注射抗CD40抗體（例如，D33、D42或D47），對照組小鼠注射等體積PBS。 在第7、14和21天（相對於施用MASP2），取各動物的血清樣品，藉由ELISA試驗分析抗MASP2 IgM和IgG抗體的效價，以血清滴度表示。
結果表明，優化後的抗CD40抗體D33、D42、D47在3mpk的劑量下均幾乎完全阻斷了抗MASP2 IgG（圖8A）和IgM（圖8B）抗體的產生。
為進一步評估在1mpk的劑量下，抗CD40抗體D33、D42或D47是否仍然可以抑制T細胞依賴性抗體反應，進行如下實驗。在第0天，將鑰孔血藍蛋白（KLH）在弗氏完全佐劑中乳化，每隻動物施用100μg。在第0、7、 14天，各實驗組小鼠以1mpk的劑量藉由靜脈輸注抗CD40抗體（例如，D33、D42、D47或ASKP1240），對照組小鼠注射等體積PBS。 在第7、14、21天（相對於施用KLH），取各動物的血清樣品，藉由ELISA分析抗KLH IgM和IgG抗體的效價，以血清滴度表示。
結果表明，優化後的抗CD40抗體D33、 D42、D47在1mpk的劑量下阻斷了抗KLH IgG（圖8C）和IgM（圖8D）抗體產生，且阻斷效果與對照抗體ASKP1240相當。
實施例7： 抗CD40抗體的藥代動力學
SD 大鼠體內 的 PK 值：將12隻雌性的SD大鼠隨機分為四組，每組三隻。各組大鼠分別靜脈注射10mpk的D33、D42、D47或ASKP1240。首先在注射前採集血液，隨後依次在注射後的5min、1h、5h、1d、3d、7d、10d、14d和17d採集血液，並離心獲取血漿。用ELISA法分析抗體濃度。使用WinNonlin®軟體6.0版，藉由非房室模型（NCA）確定藥代動力學參數。使用各抗體各自的平均濃度值，用線性梯形法則以及線性內插法和均勻加權測定所有PK參數，包括血清最大濃度（Cmax）、半衰期（T 1/2）、表觀分佈容積（Vd）、清除率（Cl）、平均駐留時間（MRTlast）和從給藥時間開始至最後可測量濃度的曲線下面積（AUClast）。
結果顯示，試驗期間，未見給藥相關的異常臨床表現。優化後的抗CD40抗體D33、D42、D47和ASKP1240在動物體內，呈現出相似的藥物血清濃度曲線（圖9）。其他藥代動力學參數均無顯著的統計學差異（結果未展示）。
無
圖1A所示結果為與對照抗體ASKP1240相比，抗CD40抗體D1、D6或D7在Ramos細胞中抑制人CD40L誘導的CD95表達。圖1B所示結果為經抗免疫球蛋白抗體交聯後，抗CD40抗體D1、D7及對照抗體ASKP1240幾乎不存在啟動CD40通路的副作用，但對照抗體CFZ533展示出一定的激動活性。
圖2所示結果為與對照抗體ASKP1240相比，抗CD40抗體D1、D6或D7在PBMCs中抑制CD40L誘導的CD23表達。
圖3A-3B所示結果為與對照抗體ASKP1240相比，抗CD40抗體D1、D6或D7在iDCs中抑制CD40L誘導的細胞因子的分泌。圖3A所示結果為抗CD40抗體D1、D6或D7在iDCs中抑制CD40L誘導的IL12p40的分泌。圖3B所示結果為抗CD40抗體D1、D6或D7在iDCs中抑制CD40L誘導的TNF-α的分泌。
圖4所示結果為與對照抗體ASKP1240相比，優化後的抗CD40抗體D21、D26、D33、D42、D47、D49抑制人CD40L誘導的NF-κB訊號通路啟動。
圖5A-5B所示結果為與對照抗體ASKP1240相比，優化後的抗CD40抗體與不同種屬CD40的結合親和力。圖5A所示為優化後的抗CD40抗體D21、D26、D33、D42、D47、D49與人CD40的結合曲線。圖5B所示為優化後的抗CD40抗體D21、D26、D33、D42、D47、D49與恆河猴CD40的結合曲線。
圖6所示結果為與對照抗體ASKP1240相比，優化後的抗CD40抗體D21、D26、D33、D42、D47、D49在Ramos細胞中抑制人CD40L誘導的CD95表達。
圖7所示結果為與對照抗體ASKP1240相比，優化後的抗CD40抗體D33、D42、D47在PBMCs中抑制CD40L誘導的CD23表達。
圖8A-8D所示結果為與對照抗體ASKP1240相比，抗CD40抗體對T細胞依賴性抗體反應的阻斷作用。圖8A所示結果為優化後的抗CD40抗體D33、D42或D47在3mpk的劑量下均幾乎完全阻斷了特異於MASP2抗原的IgG的產生。圖8B所示結果為優化後的抗CD40抗體D33、D42或D47在3mpk的劑量下均幾乎完全阻斷了特異於MASP2抗原的IgM的產生。圖8C所示結果為優化後的抗CD40抗體D33、D42或D47在1mpk的劑量下均幾乎完全阻斷了特異於KLH抗原的IgG的產生。圖8D所示結果為優化後的抗CD40抗體D33、D42或D47在1mpk的劑量下均幾乎完全阻斷了特異於KLH抗原的IgM的產生。
圖9所示結果為與對照抗體ASKP1240相比，優化後的抗CD40抗體D33、D42或D47在大鼠體內的藥物血清濃度曲線。
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Claims (38)

  1. 一種分離的抗CD40抗體或抗原結合片段，所述抗CD40抗體或抗原結合片段包含： 重鏈可變結構域（V H），所述V H包含： 重鏈互補決定區（HC-CDR）1，其包含GYX 1VN（ SEQ ID NO: 81），其中X 1為L、T或V； HC-CDR2，其包含X 1IX 2PX 3X 4GX 5TX 6YNQKFKG（ SEQ ID NO: 82），其中X 1為L或M，X 2為A、N或V，X 3為E、K、L、M、R、S、T或Y，X 4為H、N、S或T，X 5為G或R，X 6為A、S、T或W；和 HC-CDR3，其包含SX 1X 2X 3X 4PYAX 5DY（SEQ ID NO: 83），其中X 1為G、I、L、M、P、R、S或Y，X 2為W或Y，X 3為S或V，X 4為D、K、L、N、R、T或V，X 5為A、G、M、N、Q或S；以及 輕鏈可變結構域(V L)，所述V L包含： 輕鏈互補決定區（LC-CDR）1，其包含KASQNVHTX 1VA（ SEQ ID NO: 84），其中X 1為A、H、N或R； LC-CDR2，其包含LX 1SDRRT（ SEQ ID NO: 85），其中X 1為A或R；和 LC-CDR3，其包含LQX 1WX 2X 3PLT（ SEQ ID NO: 86），其中X 1為A或H，X 2為N、S或T，X 3為A、Q、R、S或Y。
  2. 一種分離的抗CD40抗體或抗原結合片段，其包含： V H，所述V H包含： HC-CDR1，其包含SEQ ID NOs: 1-3中任一所示的胺基酸序列或其變體，所述變體包含至多約3個胺基酸的取代； HC-CDR2，其包含SEQ ID NOs: 9-26中任一所示的胺基酸序列或其變體，所述變體包含至多約3個胺基酸的取代；和 HC-CDR3，其包含SEQ ID NOs: 32-52中任一所示的胺基酸序列或其變體，所述變體包含至多約3個胺基酸的取代；以及 V L，所述V L包含： LC-CDR1，其包含SEQ ID NOs: 58-61中任一所示的胺基酸序列或其變體，所述變體包含至多約3個胺基酸的取代； LC-CDR2，其包含SEQ ID NOs: 65-66中任一所示的胺基酸序列或其變體，所述變體包含至多約3個胺基酸的取代；和 LC-CDR3，其包含SEQ ID NOs: 70-77中任一所示的胺基酸序列或其變體，所述變體包含至多約3個胺基酸的取代。
  3. 一種分離的抗CD40抗體或抗原結合片段，其包含V H，所述V H包含如SEQ ID NOs: 87-119中任一胺基酸序列所示的V H包含的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V L，所述V L包含如SEQ ID NOs: 126-138中任一胺基酸序列所示的V L包含的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
  4. 如請求項1至3中任一項所述之分離的抗CD40抗體或抗原結合片段，其包含： (i) V H，所述V H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 9，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 32，或者所述V H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及V L，所述V L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 58，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 65，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 70，或者所述V L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代； (ii) V H，所述V H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 10，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 32，或者所述V H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及V L，所述V L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 59，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 65，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 70，或者所述V L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代； (iii) V H，所述V H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 13，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 34，或者所述V H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及V L，所述V L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 59，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 65，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 70，或者所述V L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代； (iv) V H，所述V H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 15，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 37，或者所述V H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及V L，所述V L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 59，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 65，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 73，或者所述V L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代； (v) V H，所述V H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 20，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 42，或者所述V H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及V L，所述V L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 59，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 65，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 70，或者所述V L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代； (vi) V H，所述V H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 14，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 43，或者所述V H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及V L，所述V L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 59，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 65，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 70，或者所述V L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代； (vii) V H，所述V H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 15，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 51，或者所述V H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及V L，所述V L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 59，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 65，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 70，或者所述V L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代； (viii) V H，所述V H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 11，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 48，或者所述V H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及V L，所述V L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 59，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 65，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 71，或者所述V L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；或 (ix) V H，所述V H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 1，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 18，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 47，或者所述V H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及V L，所述V L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 59，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 65，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 71，或者所述V L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代。
  5. 如請求項1至4中任一項所述之分離的抗CD40抗體或抗原結合片段，其包含： V H，其包含SEQ ID NOs: 87-119中任一所示的胺基酸序列或其變體，所述變體與SEQ ID NOs: 87-119中任一所示的胺基酸序列具有至少約90%序列同一性；以及V L，其包含SEQ ID NOs: 126-138中任一所示的胺基酸序列或其變體，所述變體與SEQ ID NOs: 126-138中任一所示的胺基酸序列具有至少約90%序列同一性 。
  6. 如請求項5所述之分離的抗CD40抗體或抗原結合片段，其包含： (i) V H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 87或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 87具有至少約90%序列同一性；以及V L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 126或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 126具有至少約90%序列同一性； (ii) V H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 88或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 88具有至少約90%序列同一性；以及V L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 127或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 127具有至少約90%序列同一性； (iii) V H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 89或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 89具有至少約90%序列同一性；以及V L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 128或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 128具有至少約90%序列同一性； (iv) V H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 94或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 94具有至少約90%序列同一性；以及V L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 128或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 128具有至少約90%序列同一性； (v) V H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 96或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 96具有至少約90%序列同一性；以及V L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 132或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 132具有至少約90%序列同一性； (vi) V H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 101或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 101具有至少約90%序列同一性；以及V L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 128或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 128具有至少約90%序列同一性； (vii) V H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 110或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 110具有至少約90%序列同一性；以及V L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 128或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 128具有至少約90%序列同一性； (viii) V H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 114或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 114具有至少約90%序列同一性；以及V L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 128或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 128具有至少約90%序列同一性； (ix) V H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 115或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 115具有至少約90%序列同一性；以及V L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 129或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 129具有至少約90%序列同一性；或 (x) V H，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 117或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 117具有至少約90%序列同一性；以及V L，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 129或其變體，所述變體與胺基酸序列SEQ ID NO: 129具有至少約90%序列同一性。
  7. 一種分離的抗CD40抗體或抗原結合片段，其包含： V H，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 120所示的V H包含的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V L，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 139所示的V L包含的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
  8. 如請求項7所述之分離的抗CD40抗體或抗原結合片段，其包含： V H，所述V H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 4，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 27，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 53，或者所述V H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及V L，所述V L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 62，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 67，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 78，或者所述V L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代。
  9. 如請求項7或8所述之分離的抗CD40抗體或抗原結合片段，其包含： V H，其包含SEQ ID NO: 120所示的胺基酸序列或其變體，所述變體與SEQ ID NO: 120所示的胺基酸序列具有至少約90%序列同一性；以及V L，其包含SEQ ID NO: 139所示的胺基酸序列或其變體，所述變體與SEQ ID NO: 139所示的胺基酸序列具有至少約90%序列同一性。
  10. 一種分離的抗CD40抗體或抗原結合片段，其包含： V H，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 121所示的V H包含的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V L，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 140所示的V L包含的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
  11. 如請求項10所述之分離的抗CD40抗體或抗原結合片段，其包含： V H，所述V H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 5，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 27，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 54，或者所述V H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及V L，所述V L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 62，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 67，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 78，或者所述V L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代。
  12. 如請求項10或11所述之分離的抗CD40抗體或抗原結合片段，其包含： V H，其包含SEQ ID NO: 121所示的胺基酸序列或其變體，所述變體與SEQ ID NO: 121所示的胺基酸序列具有至少約90%序列同一性；以及V L，其包含SEQ ID NO: 140所示的胺基酸序列或其變體，所述變體與SEQ ID NO: 140所示的胺基酸序列具有至少約90%序列同一性。
  13. 一種分離的抗CD40抗體或抗原結合片段，其包含： V H，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 122所示的V H包含的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V L，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 141所示的V L包含的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
  14. 如請求項13所述之分離的抗CD40抗體或抗原結合片段，其包含： V H，所述V H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 6，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 28，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 55，或者所述V H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及V L，所述V L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 63，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 68，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 79，或者所述V L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代。
  15. 如請求項13或14所述之分離的抗CD40抗體或抗原結合片段，其包含： V H，其包含SEQ ID NO: 122所示的胺基酸序列或其變體，所述變體與SEQ ID NO: 122所示的胺基酸序列具有至少約90%序列同一性；以及V L，其包含SEQ ID NO: 141所示的胺基酸序列或其變體，所述變體與SEQ ID NO: 141所示的胺基酸序列具有至少約90%序列同一性。
  16. 一種分離的抗CD40抗體或抗原結合片段，其包含： V H，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 123所示的V H包含的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V L，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 142所示的V L包含的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
  17. 如請求項16所述之分離的抗CD40抗體或抗原結合片段，其包含： V H，所述V H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 7，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 29，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 56，或者所述V H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及V L，所述V L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 64，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 69，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 80，或者所述V L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代。
  18. 如請求項16或17所述之分離的抗CD40抗體或抗原結合片段，其包含：V H，其包含SEQ ID NO: 123所示的胺基酸序列或其變體，所述變體與SEQ ID NO: 123所示的胺基酸序列具有至少約90%序列同一性；以及V L，其包含SEQ ID NO: 142所示的胺基酸序列或其變體，所述變體與SEQ ID NO: 142所示的胺基酸序列具有至少約90%序列同一性。
  19. 一種分離的抗CD40抗體或抗原結合片段，其包含： V H，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 124所示的V H包含的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V L，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 143所示的V L包含的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
  20. 如請求項19所述之分離的抗CD40抗體或抗原結合片段，其包含： V H，所述V H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 8，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 30，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 57，或者所述V H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及V L，所述V L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 62，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 67，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 80，或者所述V L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代。
  21. 如請求項19或20所述之分離的抗CD40抗體或抗原結合片段，其包含： V H，其包含SEQ ID NO: 124所示的胺基酸序列或其變體，所述變體與SEQ ID NO: 124所示的胺基酸序列具有至少約90%序列同一性；以及V L，其包含SEQ ID NO: 143所示的胺基酸序列或其變體，所述變體與SEQ ID NO: 143所示的胺基酸序列具有至少約90%序列同一性。
  22. 一種分離的抗CD40抗體或抗原結合片段，其包含： V H，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 125所示的V H包含的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；以及V L，其包含如胺基酸序列SEQ ID NO: 144所示的V L包含的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。
  23. 如請求項22所述之分離的抗CD40抗體或抗原結合片段，其包含： V H，所述V H包含：HC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 4，HC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 31，和HC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 53，或者所述V H的變體，其HC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代；以及V L，所述V L包含：LC-CDR1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 62，LC-CDR2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 68，和LC-CDR3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO: 79，或者所述V L的變體，其LC-CDRs中包含至多約5個胺基酸的取代。
  24. 如請求項22或23所述之分離的抗CD40抗體或抗原結合片段，其包含： V H，其包含SEQ ID NO: 125所示的胺基酸序列或其變體，所述變體與SEQ ID NO: 125所示的胺基酸序列具有至少約90%序列同一性；以及V L，其包含SEQ ID NO: 144所示的胺基酸序列或其變體，所述變體與SEQ ID NO: 144所示的胺基酸序列具有至少約90%序列同一性。
  25. 如請求項1至24中任一項所述之分離的抗CD40抗體或抗原結合片段，其中所述抗CD40抗體或抗原結合片段包含Fc片段。
  26. 如請求項25所述之分離的抗CD40抗體或抗原結合片段，其中所述抗CD40抗體或抗原結合片段是全長的IgG抗體。
  27. 如請求項26所述之分離的抗CD40抗體或抗原結合片段，其中所述抗CD40抗體或抗原結合片段是全長的IgG1、IgG2、IgG3或IgG4抗體。
  28. 如請求項1至27中任一項所述之分離的抗CD40抗體或抗原結合片段，其中所述抗CD40抗體或抗原結合片段是嵌合的、人源化的或全人的抗體。
  29. 如請求項1至24中任一項所述之分離的抗CD40抗體或抗原結合片段，其中所述抗原結合片段選自Fab、Fab’、F(ab)’ 2、Fab’-SH、單鏈抗體 (scFv)、Fv片段、dAb、Fd、奈米抗體、雙鏈抗體和線性抗體。
  30. 一種核酸分子，其編碼如請求項1至29中任一項所述之分離的抗CD40抗體或抗原結合片段。
  31. 一種包含如請求項30所述之核酸分子的載體。
  32. 一種分離的宿主細胞，其包含如請求項1至29中任一項所述之分離的抗CD40抗體或抗原結合片段、如請求項30所述之核酸分子或如請求項31所述之載體。
  33. 一種製備抗CD40抗體或抗原結合片段的方法，其包含： a) 在能有效表達抗CD40抗體或抗原結合片段的條件下培養如請求項32所述之分離的宿主細胞；以及 b) 從所述宿主細胞中獲得所表達的抗CD40抗體或抗原結合片段。
  34. 一種藥物組合物，其包含如請求項1至29中任一項所述之分離的抗CD40抗體或抗原結合片段、如請求項30所述之核酸分子、如請求項31所述之載體或如請求項32所述之分離的宿主細胞；以及藥學上可接受的載體。
  35. 一種如請求項1至29中任一項所述之分離的抗CD40抗體或抗原結合片段、如請求項30所述之核酸分子、如請求項31所述之載體、如請求項32所述之分離的宿主細胞、由如請求項33所述之方法製備得到的抗CD40抗體或抗原結合片段、或如請求項34所述之藥物組合物在製備治療所需個體疾病或病症的藥物中的用途。
  36. 一種治療疾病或病症的方法，所述方法包括向所需個體施用有效劑量的如請求項1至29中任一項所述之分離的抗CD40抗體或抗原結合片段、如請求項 30所述之核酸分子、如請求項31所述之載體、如請求項32所述之分離的宿主細胞、由如請求項33所述之方法製備得到的抗CD40抗體或抗原結合片段、或如請求項34所述之藥物組合物。
  37. 如請求項35所述之用途或如請求項36所述之方法，其中所述疾病或病症為自身免疫性疾病、炎性病症、癌症和/或移植相關疾病。
  38. 如請求項35所述之用途或如請求項36所述之方法，其中所述疾病或病症選自系統性紅斑狼瘡（SLE），盤狀紅斑狼瘡，狼瘡性腎炎，炎性關節炎：包括但不限於青少年關節炎、類風濕性關節炎、銀屑病關節炎、萊特爾氏症候群、僵直性脊柱炎和痛風性關節炎，器官或組織移植排斥：超急性、急性或慢性排斥反應和/或移植物抗宿主病，多發性硬化症，高IgE症候群，結節性多發炎，原發性膽汁性肝硬化，炎症性腸病，克羅恩病，腹腔疾病（麩質敏感性腸病），自身免疫性肝炎，惡性貧血，自身免疫性溶血性貧血，硬皮病，重症肌無力，特發性血小板減少性紫癜，自身免疫性甲狀腺炎，格雷氏病，橋本氏甲狀腺炎，免疫複合性疾病，慢性疲勞免疫功能障礙症候群（CFIDS），多發性肌炎，皮肌炎，冷球蛋白血症，血栓溶解，心肌症，尋常天皰瘡，肺間質纖維化，I型和II型糖尿病，1、2、3和4型遲發型超敏反應，過敏性或過敏性疾病，對治療性蛋白質的不必要/意外的免疫反應（例如血友病中的因子VII），哮喘，Rich-Strauss症候群（過敏性肉芽腫病），特應性皮炎，過敏性和刺激性接觸性皮炎，蕁麻疹，IgE介導的過敏，動脈粥樣硬化，血管炎，特發性炎症性肌病，溶血性疾病，阿爾茨海默氏病，慢性炎症性脫髓鞘性多發性神經病，乾燥症候群，銀屑病，化膿性汗腺炎，化膿性尿道炎，結節病，潰瘍性結腸炎，腫瘤：包括但不限於非霍奇金淋巴瘤、慢性淋巴細胞性白血病、多發性骨髓瘤、B細胞淋巴瘤、高/中/低級B細胞淋巴瘤、急性B細胞淋巴母細胞性白血病、粒細胞性白血病和霍奇金氏病疾病，腎炎，呼吸窘迫症候群，附睾炎，腎小球腎炎和甲狀腺功能亢進症。
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