TW202330538A - 螺環化合物 - Google Patents
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Abstract
本說明書關於具有式 (I) 的化合物
Description
本說明書關於抑制蛋白質精胺酸甲基轉移酶5（PRMT5）並且因此表現出抗癌活性的某些螺環化合物及其藥學上可接受的鹽。本說明書還關於所述螺環化合物及其藥學上可接受的鹽在治療人體或動物體之方法中，例如用於預防或治療癌症中之用途。本說明書還關於在製備所述螺環化合物中所涉及的方法和中間體化合物，並且關於含有所述螺環化合物之藥物組成物。
蛋白質精胺酸甲基轉移酶5（PRMT5）係精胺酸甲基轉移酶PRMT家族之成員，該等精胺酸甲基轉移酶使用S-腺苷-L-甲硫胺酸（SAM）作為甲基供體，催化甲基基團添加至精胺酸殘基之胍模體。PRMT5係II型精胺酸甲基轉移酶，其將精胺酸殘基之胍基團對稱地二甲基化，從而將精胺酸之胍NH
2基團轉化為NMe
2基團。PRMT5甲基化許多不同的底物，包括組蛋白和非組蛋白蛋白質，這樣一來調節如RNA剪接、細胞增殖和DNA修復等過程。值得注意的是，PRMT5在許多癌症類型中過表現並且已被鑒定為候選物，藉由開發抑制PRMT5甲基轉移酶活性的小分子用於治療性干預（參見例如Kim等人, (2020) Cell Stress [細胞應激] 4(8) 199-2151）。
週期蛋白依賴型激酶抑制劑2A（CDKN2A）係在大約15%的癌症中純合性缺失的腫瘤抑制基因。9p21染色體基因座之丟失導致多個另外的基因（包括編碼甲基硫腺苷磷酸化酶（MTAP）的基因）之共缺失。MTAP係參與甲硫胺酸補救的代謝酶，並且MTAP之丟失導致MTAP底物甲基硫腺苷（MTA）在缺失CDKN2A/MTAP的癌細胞中之濃度增加。MTA本身作為弱PRMT5抑制劑並且因此MTA在缺失CDKN2A/MTAP的癌細胞系中之積累導致PRMT5活性之部分抑制。受損的PRMT5活性使得缺失CDKN2A/MTAP的癌細胞對PRMT5的進一步靶向（例如使用短髮夾RNA（shRNA））易感。已經鑒定了癌症中的「附帶易損性」，其中CDKN2A/MTAP缺失的腫瘤可以藉由PRMT5抑制來選擇性靶向（參見Marjon等人, (2016) Cell Reports [細胞報告] 15, 574-587；Mavrakis等人, (2016) Science [科學] 11;351(6278):1208-13；Kryukov等人, (2016) Science [科學] 11;351(6278):1214-8）。
需要開發用於治療癌症的「MTA增效的」PRMT5抑制劑（即在MTA存在下優先結合PRMT5的抑制劑）。這係因為「MTA增效的」PRMT5抑制劑在存在相對高濃度的MTA的環境（例如CDKN2A/MTAP缺失的腫瘤細胞）中而不是在健康組織中對PRMT5發揮更大的抑制作用。因此，「MTA增效的」PRMT5抑制劑應具有高治療指數（和低脫靶毒性），因為它們的抗增殖活性將在靶向的、CDKN2A/MTAP缺失的腫瘤細胞中選擇性地表現。迄今為止，尚無批准用於治療用途的PRMT5抑制劑，更不用說「MTA增效的」PRMT5抑制劑。因此，需要新的PRMT5抑制劑，理想地是「MTA增效的」並且具有適於臨床使用的所需藥物特性的PRMT5抑制劑，因為它們將為癌症治療提供新選擇。已經發現本說明書之化合物具有抗腫瘤活性，可用於抑制由惡性疾病引起的不受控制的細胞增殖。本說明書之該等化合物藉由（作為最低限度）充當PRMT5的抑制劑，提供抗腫瘤作用。值得注意的是，根據本說明書之PRMT5抑制劑係「MTA增效的」PRMT5抑制劑並且由於它們應實現高治療指數和低脫靶毒性的獨特的活性譜而預期示出增強的臨床效用。
根據本說明書之第一方面，提供了具有式 (I) 的化合物或其藥學上可接受的鹽：
(I)
其中：
含有X和Y的環係吡咯且X係NH且Y係CH或X係CH且Y係NH；
Z選自CH、CF、CCl，如果Q不是N，Z選自CH、CF、CCl或N；
Q選自CH、CF、CCl，如果Z不是N，Q選自CH、CF、CCl或N；
m係0、1或2；
n係0、1或2；
p係1或2；
R
1在每次出現時獨立地選自F、Cl、CN、Me、CF
3、C
1-C
3烷基、環丙基、C
1-C
3氟烷基、OMe或C
1-C
3烷氧基；
R
2在每次出現時獨立地選自F、Cl、Me、MeO和CF
3；
R
3係H、Me、C
1-C
3烷基或C
1-C
3氟烷基；
R
4係H、Me或C
1-C
3烷基；
R
5係H、Me、C
1-C
3烷基、C
1-C
3氟烷基、CH
2OMe、CH
2OCHF
2、CH
2OCF
3、CH
2O(C
1-C
3烷基)、CH
2O(C
1-C
3氟烷基)、C(CH
2CH
2)R
6、CCR
7、CH
2R
8、R
9或CH
2R
10；
R
6係H、Me、CH
2F、CHF
2、CF
3、CH
2OH或CH
2OMe；
R
7係H、Me、環丙基、C
1-C
3烷基、C
1-C
3氟烷基、C
3-C
6環烷基或視需要地被Me、C
1-C
3烷基、F或Cl取代的5員雜芳基基團；
R
8係視需要地被Me、C
1-C
3烷基、F或Cl取代的5員雜芳基；
R
9係視需要取代的苯基、5員或6員雜芳基或雙環雜芳基基團；並且
R
10係視需要取代的苯基、5員或6員雜芳基或雙環雜芳基基團。
在另一方面，提供了具有式 (I) 的化合物或其藥學上可接受的鹽，其用於作為藥物使用。
在另一方面，提供了一種藥物組成物，該藥物組成物包含具有式 (I) 的化合物或其藥學上可接受的鹽。
在另一方面，提供了一種藉由向有需要的患者投與有效量的具有式 (I) 的化合物或其藥學上可接受的鹽來治療癌症之方法。
在另一方面，提供了一種具有式 (I) 的化合物或其藥學上可接受的鹽，其用於在治療癌症中使用。
在另一方面，提供了一種具有式 (I) 的化合物或其藥學上可接受的鹽，其用於在製造藥物（例如用於治療癌症的藥物）中使用。
在另一方面，提供了包含藥物組成物的套組（kit）以及其用於治療癌症的說明書，該藥物組成物包含具有式 (I) 的化合物或其藥學上可接受的鹽。
在另一方面，提供了一種用於製造具有式 (I) 的化合物之方法。
具有式 (I) 的化合物之特徵在於螺環核心，其中2-吡咯啶酮環（在本段中稱為且在下文中示為環A）和選自2-吡咯啶酮和2-哌啶酮的第二環（在本段中稱為且在下文中示為環B）共用一個碳原子，它們藉由該碳原子連接且手性中心位於該點處。此外，環A的氮原子經由亞甲基（即CH
2）連接基連接至4-氮吲哚模體或7-氮吲哚模體。環A還與苯基或吡啶環稠合。環B的氮原子被基團CHR
4R
5取代。
已經發現，該等具有式 (I) 的化合物具有有效的抗腫瘤活性，該活性來源於它們抑制PRMT5的能力。如上文已指出，PRMT5係使用SAM作為甲基供體進行精胺酸胍基團的對稱去甲基化之酶，因此在細胞中組蛋白和非組蛋白底物之表觀遺傳修飾中發揮重要作用。PRMT5經由促進組蛋白尾部修飾而參與腫瘤生長，組蛋白之尾部修飾阻遏靶向腫瘤促進基因的miRNA。研究表明，在約15%的癌症中缺失MTAP基因，並且與沒有MTAP基因缺失的野生型細胞相比，這樣的癌症更依賴於PRMT5酶活性。這種MTAP缺失見於相當大的比例的癌症中並產生可用於其治療的基因易損性。此外，MTAP缺失導致癌細胞因MTA的磷酸化受阻而積累MTA，缺失MTAP的細胞因此相對於表現MTAP的野生型細胞表現出高MTA濃度。
與已知的PRMT5抑制劑相比，根據本說明書之化合物在MTA存在下有利地、更有效地結合並抑制PRMT5 - 它們係「MTA增效的」。這種與MTA的增效作用係特別有益的，因為相對於正常細胞，在MTAP缺陷型癌細胞中用根據本說明書之化合物觀察到的PRMT5抑制係升高的，在MTAP缺陷型癌細胞中MTA水平相對於正常野生型細胞在特徵上係高的，並且因此不希望的脫靶毒性降低。這種特徵應允許在靶細胞中實現高水平的PRMT5抑制而沒有不可接受的脫靶毒性。脫靶毒性係PRMT5抑制劑的一個特別關注點，並且脫靶毒性在臨床上對於非MTA選擇性PRMT5抑制劑（例如GSK3326595）一直係劑量限制性的。因此，根據本說明書之PRMT5抑制劑具有比早先的非MTA選擇性PRMT5抑制劑更大的治療窗，這可以很好地允許實現PRMT5抑制之最佳水平並實現增強的治療益處。
根據本說明書之化合物具有良好的物理化學特性，指示它們將適合於向人口服投與以實現治療效果。例如，根據本說明書之化合物除了其抑制PRMT5的能力外，還具有良好的溶解度曲線和相對低的分子量，指示它們適合於口服投與。如本文進一步所述，本說明書化合物之立體化學組態以及特別是它們在螺環中心處的手性係它們的PRMT5抑制活性的關鍵決定因素。
因此，本說明書之化合物作為抗腫瘤劑可為有價值的。特別地，本說明書之化合物可用作MTAP缺陷型哺乳動物癌細胞的增殖、存活、運動、傳播和侵襲之選擇性抑制劑。由於其抑制PRMT5的能力，用根據本說明書之化合物治療受試者可導致抑制腫瘤生長，觸發腫瘤消退和/或抑制轉移的形成和/或轉移性腫瘤生長。確切地說，本說明書之化合物可以具有在抑制和/或治療實體腫瘤疾病方面作為抗增殖藥劑和抗侵襲性藥劑的價值。確切地說，本說明書之化合物可以用於預防或治療對抑制PRMT5敏感並且其中PRMT5活性參與導致腫瘤細胞增殖和存活的細胞傳訊事件的那些腫瘤。
因此，還提供了一種用於在缺失MTAP的細胞中提供對PRMT5的選擇性抑制作用之方法，該方法包括向有需要的患者投與有效量的如本文所定義的具有式 (I) 的化合物或其藥學上可接受的鹽。
本文描述了在MTA存在下可以結合PRMT5的化合物。在生物化學測定和基於細胞的測定中，本說明書之化合物在MTA存在下示出為有效的PRMT5結合劑，並且因此可以用於治療由PRMT5介導的障礙，特別是治療癌症，如肺癌（例如NSCLC）、淋巴瘤（例如DLBCL）和胃部癌。特別地，根據本說明書之化合物可以用於治療缺失CDKN2A/MTAP的癌症，即其中腫瘤抑制基因週期蛋白依賴型激酶抑制劑2A（CDKN2A）純合性缺失的那些癌症。根據本說明書之化合物同樣可以在患有缺失CDKN2A/MTAP的癌症之患者之治療方法中使用。
本說明書還關於用於製造所述化合物之方法、含有該等化合物之藥物組成物、包括向有需要的患者（例如人類）投與所述化合物之治療方法、具有式 (I) 的化合物用於製造藥物（例如用於治療罹患過度增殖性疾病（如癌症）的患者）之用途。
除非另外定義，否則本文使用的所有技術和科學術語具有如本揭露所屬領域的普通技術者通常理解的相同含義。例如，
Concise Dictionary of Biomedicine and Molecular Biology[簡明生物醫學和分子生物學詞典], Juo, Pei-Show, 第2版, 2002, CRC Press [CRC出版社]；
Dictionary of Cell and Molecular Biology[細胞和分子生物學詞典], 第3版, 1999, Academic Press [學術出版社]；以及
Oxford Dictionary of Biochemistry and Molecular Biology[生物化學和分子生物學牛津詞典]，修訂版, 2000, Oxford University Press [牛津大學出版社] 為技術者提供在本揭露中使用的許多術語之通用詞典注釋。
為了使本說明書可以更容易理解，在下面明確定義了某些術語。此外，定義在整個說明書中視情況而闡述。
單位、前綴和符號係以它們的國際單位系統（Système International de Unites）（SI）接受的形式表示。數值範圍包括限定該範圍的數字。
術語「藥物組成物」係指如下製劑，該製劑處於允許活性成分的生物活性被表現的形式，並且不含有另外的、對組成物將要投與的受試者具有不可接受的毒性的組分。此類組成物可為無菌的。根據本說明書之藥物組成物將包含具有式 (I) 的化合物或其藥學上可接受的鹽，和至少一種藥學上可接受的賦形劑。
術語如「治療（treating或treatment或to treat）」或「減輕（alleviating或alleviate）」係指 (1) 使得診斷的病理性病症或障礙被治癒、減緩、減輕症狀、和/或停止進展的治療措施以及 (2) 防止和/或減緩所靶向的病理學病症或障礙的發展之預防性或防止性措施。因此，需要治療的那些包括已患有障礙的那些；傾向於患有障礙的那些；以及在他們中需要預防障礙的那些。在某些方面中，如果患者示出例如，總的、部分的、或暫態的某一類型癌症的緩解，則根據本揭露之方法成功「治療」了該受試者之癌症。
術語「受試者」係指有待成為特定治療的接受者的任何動物（例如，哺乳動物），包括但不限於人類、非人類靈長動物、齧齒類等。典型地，術語「受試者」和「患者」在本文關於人類受試者可互換地使用。
如本文所用，術語「烷基」係指具有指定碳原子數的直鏈和支鏈飽和烴基。如本文所用，術語氘烷基係指其中一或多個，視需要地所有氫被氘原子替代的烷基基團。如本文所用，術語鹵代烷基係指其中一或多個，視需要地所有氫被氯或氟原子替代的烷基基團。如本文所用，術語氟烷基係指其中一或多個，視需要地所有氫被氟原子替代的烷基基團。較佳的氟烷基基團之實例包括CH
2F、CHF
2、CF
3、CH
2CF
3、CF
2CH
3和CF
2CF
3。術語環烷基係指飽和碳環，例如環丙基、環丁基、環戊基或環己基基團。
術語乙炔基（acetylenyl）係指乙炔基團，即-CCH基團。術語炔基係指含有碳-碳三鍵的基團。
在本說明書中，如在術語（例如C
x-C
y烷基等）中所使用的前綴C
x-C
y（其中x和y係整數）指示在該基團中存在的碳原子之數值範圍。例如，C
1-C
4烷基包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、二級丁基、異丁基和三級丁基，而C
1-C
3烷基基團之實例包括甲基、乙基、正丙基和異丙基。C
1-C
4烷氧基基團包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、二級丁氧基和三級丁氧基。C
1-C
3烷氧基基團之實例包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基和異丙氧基。C
1-C
3氟烷基基團之實例包括氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、1,1-二氟乙基和2,2,2-三氟乙基。C
1-C
3氟烷氧基基團之實例包括氟甲氧基、二氟甲氧基、三氟甲氧基和2,2,2-三氟乙氧基。-O(C
1-C
3氘烷基)基團係部分或完全氘代的O-甲基、O-乙基或O-正丙基或O-異丙基基團。C
3-C
6環烷基基團係指環丙基、環丁基、環戊基或環己基基團。
除非明確說明，否則基團之鍵合原子可為該基團之任何合適的原子；例如，丙基包括丙-1-基和丙-2-基。
如本文所用，雜芳基係指含有至少一個選自N、O或S的雜原子的[4n+2]芳環。5員雜芳基基團之實例包括吡咯、咪唑、吡唑、1,2,3-三唑、1,2,4-三唑、㗁唑、異㗁唑、㗁二唑、噻唑、異噻唑、呋喃和噻唑。6員雜芳基基團之實例包括吡啶、嗒𠯤、嘧啶和吡𠯤。
如本文所用，雙環雜芳基係指包含稠合至5員或6員環的一個6員環的[6,5]或[6,6]雙環雜芳基基團，其中兩個構成環中之至少一個含有至少一個選自N、O或S的雜原子且此外其中兩個構成環中之至少一個為[4n+2]芳環。在本文背景中，雙環雜芳基基團係芳香族基團，該芳香族基團包含兩個稠合環並且含有1、2、3或4個N原子，或一個O原子，或一個S原子，或1個N原子和一個S原子，或1個N原子和一個O原子，或2個N原子和一個S原子，或2個N原子和一個O原子。雙環雜芳基基團包括其中兩個稠合環均是芳香族，或者其中一個稠合環係芳香族的而另一個稠合環係部分或完全飽和的那些基團。所述部分或完全飽和的稠合環也可以包含羰基基團。雙環雜芳基基團可為[6,5]-系統，其中苯基基團或6員雜芳基基團與吡咯、咪唑、吡唑、1,2,3-三唑、㗁唑、異㗁唑、㗁二唑、噻唑、異噻唑、呋喃和噻唑稠合。雙環雜芳基基團之實例包括吲哚基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并㗁唑基、苯并咪唑基、苯并三唑基、吲唑基、氮吲哚基、氮雜吲唑基、吡咯并[1,2-b]嗒𠯤基、吡咯并[2,3-b]吡啶基、喹啉基、異喹啉基、喹唑啉基、㖕啉基、呔𠯤基、喹㗁啉基和㖠啶基。
如上所述，具有式 (I) 的化合物可具有基團R
7，其為視需要地被Me、C
1-C
3烷基、F或Cl取代的5員雜芳基基團。在這樣的情況下，5員雜芳基基團較佳的是選自視需要取代的吡唑、吡咯、咪唑、㗁唑或噻唑，例如
N-甲基吡唑。
如上所述，具有式 (I) 的化合物可具有基團R
8，其為視需要地被Me、C
1-C
3烷基、F或Cl取代的5員雜芳基基團。在這樣的情況下，5員雜芳基基團較佳的是選自視需要取代的吡唑、吡咯、咪唑、㗁唑或噻唑，例如甲基取代的噻唑。
如上所述，具有式 (I) 的化合物可具有基團R
9或R
10，其為視需要取代的苯基、5員或6員雜芳基或雙環雜芳基基團。在此類情況下，R
9或R
10可以被1、2或3個獨立地選自F、Cl、Me、CN、CF
3、C
1-C
3烷基、C
1-C
3氟烷基或5員雜芳基基團的取代基取代。
為避免疑義，在多個取代基獨立地選自一個給定的群組的情況下，所選擇的取代基可以包括來自給定的群組中的相同的取代基或不同的取代基。僅舉例來說，在(R
1)
m且m為2的情況下，兩個R
1取代基可以相同（例如均為氟），或者可以不同（例如一個氟和一個甲基）。
為進一步避免疑義，在本說明書的式中使用的「
」表示不同基團之間的附接點。
在本說明書內的任何實施方式包括被稱為是「視需要取代的」的基團的情況下，則另一個實施方式將包括其中所述基團係未取代的實施方式。在其中基團被視需要取代的情況下，視需要的取代基可以選自Me、C
1-C
3烷基、C
3-C
6環烷基、C
1-C
3氟烷基、F或Cl、OH、OC
1-C
3烷氧基、OH、NH
2和N(C
1-C
3烷基)
2。
根據本說明書的具有式I的示例性的化合物列於下
表 1中。
[
表 1] 具有式 (I) 的化合物
| 實例 | 結構 |
| 1 | ( S)-2-((5- 胺基 -6- 氟 -1 H- 吡咯并 [3,2- b] 吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-5- 氟 -1'-(4- 氟苄基 ) 螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮 |
| 2 | ( S)-2-((5- 胺基 -6- 氟 -1 H- 吡咯并 [3,2- b] 吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-1'-( 丁 -2- 炔 -1- 基 )-5- 氟螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮 |
| 3 | ( S)-2-((5- 胺基 -6- 氟 -1 H- 吡咯并 [3,2- b] 吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-5- 氟 -1'-( 丙 -2- 炔 -1- 基 ) 螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮 |
| 4 | ( S)-2-((5- 胺基 -6- 氟 -1 H- 吡咯并 [3,2- b] 吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-5- 氟 -1'-(3-(1- 甲基 -1 H- 吡唑 -4- 基 ) 丙 -2- 炔 -1- 基 ) 螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮 |
| 5 | ( S)-4-((2-((5- 胺基 -6- 氟 -1 H- 吡咯并 [3,2- b] 吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-5- 氟 -2',3- 二側氧基螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-1'- 基 ) 甲基 )-2- 氟苯甲腈 |
| 6 | ( S)-1'-(3-(2H-1,2,3- 三唑 -2- 基 ) 苄基 )-2-((5- 胺基 -6- 氟 -1 H- 吡咯并 [3,2- b] 吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-5- 氟螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮 |
| 7 | ( S)-2-((5- 胺基 -6- 氟 -1 H- 吡咯并 [3,2- b] 吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-1'-(2,5- 二氟苄基 )-5- 氟螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮 |
| 8 | ( S)-2-((5- 胺基 -6- 氟 -1 H- 吡咯并 [3,2- b] 吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-1'-(2,2- 二氟乙基 )-5- 氟螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮 |
| 9 | (S)-2-((5- 胺基 -6- 氟 -1 H- 吡咯并 [3,2- b] 吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-5- 氟 -1'-((1-( 氟甲基 ) 環丙基 ) 甲基 ) 螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮 |
| 10 | ( S)-2-((5- 胺基 -6- 氟 -1 H- 吡咯并 [3,2- b] 吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-5- 氟 -1'- 甲基螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮 |
| 11 | ( S)-2-((5- 胺基 -6- 氟 -1 H- 吡咯并 [3,2- b] 吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-1'-(2-( 二氟甲氧基 ) 乙基 )-5- 氟螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮 |
| 12 | ( S)-2-((5- 胺基 -6- 氟 -1 H- 吡咯并 [3,2- b] 吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-5- 氟 -1'-((3- 氟吡啶 -2- 基 ) 甲基 ) 螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮 |
| 13 | ( S)-2-((5- 胺基 -6- 氟 -1 H- 吡咯并 [3,2- b] 吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-5- 氟 -1'-( 異㗁唑 -5- 基甲基 ) 螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮 |
| 14 | ( S)-2-((5- 胺基 -6- 氟 -1 H- 吡咯并 [3,2- b] 吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-5- 氟 -1'-((5-( 三氟甲基 ) 嗒 𠯤 -3- 基 ) 甲基 ) 螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮 |
| 15 | ( S)-2-((5- 胺基 -6- 氟 -1 H- 吡咯并 [3,2- b] 吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-5- 氟 -1'-((1- 甲基 -1 H- 吲唑 -5- 基 ) 甲基 ) 螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮 |
| 16 | (S)-2-((5- 胺基 -6- 氟 -1 H- 吡咯并 [3,2- b] 吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-1'-( 苯并 [d] 㗁唑 -2- 基甲基 )-5- 氟螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮 |
| 17 | ( S)-2-((5- 胺基 -6- 氟 -1 H- 吡咯并 [3,2- b] 吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-5- 氟 -1'-(2-(4- 氟苯氧基 ) 乙基 ) 螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮 |
| 18 | ( S)-2-((5- 胺基 -6- 氟 -1 H- 吡咯并 [3,2- b] 吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-5- 氟 -1'-(2-(4- 甲基噻唑 -5- 基 ) 乙基 ) 螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮 |
| 19 | ( S)-2-((5- 胺基 -6- 氟 -1 H- 吡咯并 [3,2- b] 吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-5- 氟 -1'-((R*)-1-(1- 甲基環丙基 ) 乙基 ) 螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮 |
| 20 | ( S)-2-((5- 胺基 -6- 氟 -1 H- 吡咯并 [3,2- b] 吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-1'-(3- 環丙基丙 -2- 炔 -1- 基 )-5- 氟螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮 |
| 21 | ( S)-2-((5- 胺基 -6- 氟 -1 H- 吡咯并 [3,2- b] 吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-4- 氯 -1'-(4- 氟苄基 ) 螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮 |
| 22 | ( S)-2'-((5- 胺基 -6- 氟 -1 H- 吡咯并 [3,2- b] 吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-1-(4- 氟苄基 ) 螺 [ 吡咯啶 -3,1'- 吡咯并 [3,4- c] 吡啶 ]-2,3'(2' H)- 二酮 |
| 23 | ( S)-2-((5- 胺基 -6- 氟 -1 H- 吡咯并 [3,2- b] 吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-5- 氟 -1',7- 二甲基螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮 |
| 24 | ( S)-2-((5- 胺基 -6- 氟 -1 H- 吡咯并 [3,2- b] 吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-5- 氟 -7- 甲氧基 -1'- 甲基螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮 |
| 25 | ( S)-2'-((5- 胺基 -6- 氟 -1 H- 吡咯并 [3,2- b] 吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-1-(4- 氟苄基 ) 螺 [ 吡咯啶 -3,3'- 吡咯并 [3,4- c] 吡啶 ]-1',2(2' H)- 二酮 |
| 26 | ( S)-5- 胺基 -2-((5- 氟 -1'-((1- 甲基環丙基 ) 甲基 )-2',3- 二側氧基螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2- 基 ) 甲基 )-1 H- 吡咯并 [3,2- b] 吡啶 -7- 甲腈 |
| 27 | ( S)-2-((5- 胺基 -6- 氯 -1 H- 吡咯并 [3,2- b] 吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-5- 氟 -1'-(2-( 三氟甲氧基 ) 乙基 ) 螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮 |
| 28 | ( S)-2-((6- 胺基 -4- 甲基 -1 H- 吡咯并 [2,3- b] 吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-5- 氟 -1'-(2,4,5- 三氟苄基 ) 螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮 |
| 29 | (1 S,5' S)-2-((5- 胺基 -6- 氟 -1 H- 吡咯并 [3,2- b] 吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-5- 氟 -1',5'- 二甲基螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮 |
如從表1可以看出，季碳的立體化學總是呈現為具有
S組態。儘管每個實例的絕對立體化學尚未明確確定，但在所有可能的情況下，已經證明具有(
S)組態的化合物比相應的(
R)異構物更具活性。圖1的蛋白質晶體結構證實了這一點，並且在許多情況下已經進行了鏡像異構物合成以獲得(
S)異構物。然而，本領域的讀者將理解，兩種可能的異構物都包括在本說明書中，此外，最具活性的異構物係較佳的實施方式。本說明書的較佳的化合物具有如下所示的
S組態。
當連同MTA一起結合時，這樣的化合物與PRMT5的相互作用可見於圖1。更詳細地，實例1與PRMT5蛋白的MTA結合形式共結晶，並使用標準技術獲得蛋白質結構。蛋白質晶體結構揭示，抑制劑的氮吲哚頭基在底物活性位點結合並在「精胺酸口袋」中產生關鍵相互作用（質子化的
N-4和5-胺基基團與Glu444具有氫鍵供體相互作用，且5-胺基基團也與Glu437的骨架羰基基團產生氫鍵供體相互作用）。似乎這個5-胺基基團與也結合至PRMT5的MTA分子之硫原子也很可能有相互作用，並且這可以至少部分地解釋根據本說明書之PRMT5抑制劑化合物之「MTA增效的」性質。實例1與PRMT5蛋白之間的進一步相互作用包括氮吲哚之
N-1與Ser578之骨架羰基之間的氫鍵供體相互作用。中心異吲哚啉酮基團之羰基也與Leu312之骨架
NH發生氫鍵受體相互作用。X射線蛋白質晶體結構還表明，
S組態的四級中心對於抑制劑在PRMT5口袋中的優化配合係重要的。值得注意的是，螺內醯胺羰基在該組態中能夠與Phe580的骨架NH產生氫鍵受體相互作用。
如上所述，根據本說明書之第一方面，提供了具有式 (I) 的化合物或其藥學上可接受的鹽，
(I)
其中：
含有X和Y的環係吡咯且X係NH且Y係CH或X係CH且Y係NH；
Z選自CH、CF、CCl，如果Q不是N，Z選自CH、CF、CCl或N；
Q選自CH、CF、CCl，如果Z不是N，Q選自CH、CF、CCl或N；
m係0、1或2；
n係0、1或2；
p係1或2；
R
1在每次出現時獨立地選自F、Cl、CN、Me、CF
3、C
1-C
3烷基、環丙基、C
1-C
3氟烷基、OMe或C
1-C
3烷氧基；
R
2在每次出現時獨立地選自F、Cl、Me、MeO和CF
3；
R
3係H、Me、C
1-C
3烷基或C
1-C
3氟烷基；
R
4係H、Me或C
1-C
3烷基；
R
5係H、Me、C
1-C
3烷基、C
1-C
3氟烷基、CH
2OMe、CH
2OCHF
2、CH
2OCF
3、CH
2O(C
1-C
3烷基)、CH
2O(C
1-C
3氟烷基)、C(CH
2CH
2)R
6、CCR
7、CH
2R
8、R
9或CH
2R
10；
R
6係H、Me、CH
2F、CHF
2、CF
3、CH
2OH或CH
2OMe；
R
7係H、Me、環丙基、C
1-C
3烷基、C
1-C
3氟烷基、C
3-C
6環烷基或視需要地被Me、C
1-C
3烷基、F或Cl取代的5員雜芳基基團；
R
8係視需要地被Me、C
1-C
3烷基、F或Cl取代的5員雜芳基；
R
9係視需要取代的苯基、5員或6員雜芳基或雙環雜芳基基團；並且
R
10係視需要取代的苯基、5員或6員雜芳基或雙環雜芳基基團。
在實施方式中，具有式 (I) 的化合物係具有如下式 (Ia) 所表示的S組態的化合物。
(Ia)。
為了便於參考，下文中提及具有式 (I) 或 (Ia) 的化合物的陳述，例如下文緊接著的具有式 (Ib) 的化合物的情況，應理解為涉及具有式 (I) 的化合物，其中立體化學未指定（參考具有式 (I) 的化合物）或其中立體化學設定為S組態（參考具有式 (Ia) 的化合物）。
在實施方式中，具有式 (I) 或 (Ia) 的化合物係具有式 (Ib) 的化合物，其中p係1
(Ib)。
在實施方式中，具有式 (I) 或 (Ia) 的化合物係具有式 (Ic) 的化合物，其中p係2。
在實施方式中，具有式 (I)、(Ia)、(Ib) 或 (Ic) 的化合物係具有式 (Id) 的化合物，其中Y係N且p係1
(Id)。
在實施方式中，具有式 (I)、(Ia)、(Ib)、(Ic) 或 (Id) 的化合物係具有式 (Ie) 的化合物，其中X係N且p係1
(Ie)。
在實施方式中，具有式 (I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id) 或 (Ie) 的化合物係具有式 (If) 的化合物，其中Z係CF且Q係CH。
(If)。
在實施方式中，具有式 (I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie) 或 (If) 的化合物係具有式 (Ig) 的化合物，其中n係0。
在實施方式中，具有式 (I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If) 或 (Ig) 的化合物係具有式 (Ih) 的化合物，其中R
1係F。
在實施方式中，具有式 (I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig) 或 (Ih) 的化合物係具有式 (Ii) 的化合物，其中m係1。在這樣的實施方式中，如下所示對於其中Q係CH，Z係CF且p係1的情況，R
1基團可以在NH
2基團之鄰位。
。
在實施方式中，具有式 (I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih) 或 (Ii) 的化合物係具有式 (Ij) 的化合物，其中R
3係H。
在實施方式中，具有式 (I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)、(Ii) 或 (Ij) 的化合物係具有式 (Ik) 的化合物，其中R
4係H或Me。
在實施方式中，具有式 (I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)、(Ii)、(Ij) 或 (Ik) 的化合物係具有式 (Il) 的化合物，其中R
5係R
9且R
9選自：
在實施方式中，具有式 (I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)、(Ii)、(Ij) 或 (Ik) 的化合物係具有式 (Im) 的化合物，其中R
5係R
9且R
9選自：
在實施方式中，具有式 (I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)、(Ii)、(Ij) 或 (Ik) 的化合物係具有式 (In) 的化合物，其中R
5選自
在實施方式中，具有式 (I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)、(Ii)、(Ij) 或 (Ik) 的化合物係具有式 (Io) 的化合物，其中R
5選自
在實施方式中，具有式 (I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)、(Ii)、(Ij) 或 (Ik) 的化合物係具有式 (Ip) 的化合物，其中R
5選自
在實施方式中，具有式 (I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)、(Ii)、(Ij) 或 (Ik) 的化合物係具有式 (Iq) 的化合物，其中R
5選自
在實施方式中，具有式 (I) 化合物係具有式 (Ir) 的化合物
(Ir)
其中：
n係0、1或2；
R
2在每次出現時獨立地選自F、Cl、Me、MeO和CF
3；
R
3係H、Me、C
1-C
3烷基或C
1-C
3氟烷基；
R
4係H、Me或C
1-C
3烷基；
R
5係H、Me、C
1-C
3烷基、C
1-C
3氟烷基、CH
2OMe、CH
2OCHF
2、CH
2OCF
3、CH
2O(C
1-C
3烷基)、CH
2O(C
1-C
3氟烷基)、C(CH
2CH
2)R
6、CCR
7、CH
2R
8、R
9或CH
2R
10；
R
6係H、Me、CH
2F、CHF
2、CF
3、CH
2OH或CH
2OMe；
R
7係H、Me、環丙基、C
1-C
3烷基、C
1-C
3氟烷基、C
3-C
6環烷基或視需要地被Me、C
1-C
3烷基、F或Cl取代的5員雜芳基基團；
R
8係視需要地被Me、C
1-C
3烷基、F或Cl取代的5員雜芳基；
R
9係視需要取代的苯基、5員或6員雜芳基或雙環雜芳基基團；並且
R
10係視需要取代的苯基、5員或6員雜芳基或雙環雜芳基基團。
在實施方式中，具有式 (Ir) 的化合物係具有式 (Is) 的化合物，其中R
5選自
在實施方式中，具有式 (Ir) 的化合物係具有式 (It) 的化合物，其中R
5選自
在實施方式中，具有式 (Ir) 的化合物係具有式 (Iu) 的化合物，其中R
5選自
在實施方式中，具有式 (Ir) 的化合物係具有式 (Iv) 的化合物，其中R
5選自
在實施方式中，具有式 (Ir) 的化合物係具有式 (Iw) 的化合物，其中R
5係R
9並選自
在實施方式中，具有式 (Ir) 的化合物係具有式 (Ix) 的化合物，其中R
5係R
9並選自
在實施方式中，具有式 (I) 的化合物選自：
(S)-2-((5-胺基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1'-(4-氟苄基)螺[異吲哚啉-1,3'-吡咯啶]-2',3-二酮；
(S)-2-((5-胺基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-1'-(丁-2-炔-1-基)-5-氟螺[異吲哚啉-1,3'-吡咯啶]-2',3-二酮；
(S)-2-((5-胺基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1'-(丙-2-炔-1-基)螺[異吲哚啉-1,3'-吡咯啶]-2',3-二酮；
(S)-2-((5-胺基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1'-(3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)丙-2-炔-1-基)螺[異吲哚啉-1,3'-吡咯啶]-2',3-二酮；
(S)-4-((2-((5-胺基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-2',3-二側氧基螺[異吲哚啉-1,3'-吡咯啶]-1'-基)甲基)-2-氟苯甲腈；
(S)-1'-(3-(2H-1,2,3-三唑-2-基)苄基)-2-((5-胺基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟螺[異吲哚啉-1,3'-吡咯啶]-2',3-二酮；
(S)-2-((5-胺基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-1'-(2,5-二氟苄基)-5-氟螺[異吲哚啉-1,3'-吡咯啶]-2',3-二酮；
(S)-2-((5-胺基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-1'-(2,2-二氟乙基)-5-氟螺[異吲哚啉-1,3'-吡咯啶]-2',3-二酮；
(S)-2-((5-胺基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1'-((1-(氟甲基)環丙基)甲基)螺[異吲哚啉-1,3'-吡咯啶]-2',3-二酮；
(S)-2-((5-胺基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1'-甲基螺[異吲哚啉-1,3'-吡咯啶]-2',3-二酮；
(S)-2-((5-胺基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-1'-(2-(二氟甲氧基)乙基)-5-氟螺[異吲哚啉-1,3'-吡咯啶]-2',3-二酮；
(S)-2-((5-胺基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1'-((3-氟吡啶-2-基)甲基)螺[異吲哚啉-1,3'-吡咯啶]-2',3-二酮；
(S)-2-((5-胺基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1'-(異㗁唑-5-基甲基)螺[異吲哚啉-1,3'-吡咯啶]-2',3-二酮；
(S)-2-((5-胺基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1'-((5-(三氟甲基)嗒𠯤-3-基)甲基)螺[異吲哚啉-1,3'-吡咯啶]-2',3-二酮
(S)-2-((5-胺基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1'-((1-甲基-1H-吲唑-5-基)甲基)螺[異吲哚啉-1,3'-吡咯啶]-2',3-二酮；
(S)-2-((5-胺基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-1'-(苯并[d]㗁唑-2-基甲基)-5-氟螺[異吲哚啉-1,3'-吡咯啶]-2',3-二酮；
(S)-2-((5-胺基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1'-(2-(4-氟苯氧基)乙基)螺[異吲哚啉-1,3'-吡咯啶]-2',3-二酮；
(S)-2-((5-胺基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1'-(2-(4-甲基噻唑-5-基)乙基)螺[異吲哚啉-1,3'-吡咯啶]-2',3-二酮；
(S)-2-((5-胺基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1'-((R*)-1-(1-甲基環丙基)乙基)螺[異吲哚啉-1,3'-吡咯啶]-2',3-二酮；
(S)-2-((5-胺基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-1'-(3-環丙基丙-2-炔-1-基)-5-氟螺[異吲哚啉-1,3'-吡咯啶]-2',3-二酮；
(S)-2-((5-胺基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-4-氯-1'-(4-氟苄基)螺[異吲哚啉-1,3'-吡咯啶]-2',3-二酮；
(S)-2'-((5-胺基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-1-(4-氟苄基)螺[吡咯啶-3,1'-吡咯并[3,4-c]吡啶]-2,3'(2'H)-二酮；
(S)-2-((5-胺基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1',7-二甲基螺[異吲哚啉-1,3'-吡咯啶]-2',3-二酮；
(S)-2-((5-胺基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-7-甲氧基-1'-甲基螺[異吲哚啉-1,3'-吡咯啶]-2',3-二酮；
(S)-2'-((5-胺基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-1-(4-氟苄基)螺[吡咯啶-3,3'-吡咯并[3,4-c]吡啶]-1',2(2'H)-二酮；
(S)-5-胺基-2-((5-氟-1'-((1-甲基環丙基)甲基)-2',3-二側氧基螺[異吲哚啉-1,3'-吡咯啶]-2-基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-7-甲腈；
(S)-2-((5-胺基-6-氯-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1'-(2-(三氟甲氧基)乙基)螺[異吲哚啉-1,3'-吡咯啶]-2',3-二酮；
(S)-2-((6-胺基-4-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1'-(2,4,5-三氟苄基)螺[異吲哚啉-1,3'-吡咯啶]-2',3-二酮；以及
(1S,5'S)-2-((5-胺基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1',5'-二甲基螺[異吲哚啉-1,3'-吡咯啶]-2',3-二酮；
或其藥學上可接受的鹽。
在本說明書之實施方式中，提供了一種藥物組成物，該藥物組成物包含具有式 (I) 的化合物或其藥學上可接受的鹽，以及藥學上可接受的賦形劑；視需要地進一步包含具有式 (I) 的化合物或其藥學上可接受的鹽之一或多種其他立體異構物形式，其中具有式 (I) 的化合物或其藥學上可接受的鹽以鏡像異構物過量（ee%）≥ 90%，例如 ＞ 95%或 ＞ 99%存在於組成物中。
具有式 (I) 的化合物及其藥學上可接受的鹽可以按無定形形式、結晶形式、或半結晶形式製備、使用或提供並且任何給定的具有式 (I) 的化合物及其藥學上可接受的鹽可能能夠成為多於一種晶體/多晶形形式，包括水合的（例如半水合物、一水合物、二水合物、三水合物或其他化學計量水合物）和/或溶劑化形式。應當理解的是本說明書涵蓋了任何以及所有具有式 (I) 的化合物及其藥學上可接受的鹽之此類固體形式。
在本說明書之另外的實施方式中，提供了具有式 (I) 的化合物，該化合物藉由在以下「實例」部分中所描述的方法可獲得。
本說明書旨在包括存在於本發明化合物中的原子之所有同位素。同位素應理解為包括具有相同原子數但具有不同質量數的那些原子。例如，氫的同位素包括氚和氘。碳的同位素包括
13C和
14C。具有式 (I) 的同位素標記的化合物通常可藉由熟悉該項技術者已知的常規技術或藉由與在附隨的實例中所描述的那些類似的過程使用適當的同位素標記的試劑替代以前採用的非標記的試劑來製備。
具有式 (I) 的化合物之合適的藥學上可接受的鹽可為例如酸加成鹽。具有式 (I) 的化合物之合適的藥學上可接受的鹽可為例如具有式 (I) 的化合物之酸加成鹽，例如與無機酸或有機酸的酸加成鹽。說明書中的化合物可以作為游離化合物（即處於非鹽化狀態）來提供。
具有式 (I) 的化合物之另一種合適的藥學上可接受的鹽可為例如在向人體或動物體投與具有式 (I) 的化合物之後在所述人體或動物體內所形成的鹽。
具有式 (I) 的化合物或其藥學上可接受的鹽可以作為共晶固體形式製備。應當理解的是具有式 (I) 的化合物或其藥學上可接受的鹽之藥學上可接受的共晶體形成本說明書之一個方面。
用於在藥學背景下使用，可能較佳的是在不存在大量其他立體異構形式的情況下提供具有式 (I) 的化合物或其藥學上可接受的鹽。
具有式 (I) 的化合物、或其藥學上可接受的鹽將通常經由口服途徑投與，但是以包含活性成分或其藥學上可接受的鹽或其溶劑合物或這種鹽的溶劑合物之藥物製劑的形式、以藥學上可接受的劑型的腸胃外、靜脈內、肌肉內、皮下或其他可注射方式、經頰、直腸、陰道、經皮和/或鼻途徑和/或經由吸入的投與亦為可以的。取決於有待治療的障礙和患者以及投與途徑，可以按變化的劑量投與該等組成物，例如以從1 mg至1,000 mg或從100 mg至2,000 mg的口服劑量投與。
上面所述之具有式 (I) 的化合物之藥物配製物可以被製備例如用於腸胃外、皮下、肌肉內或靜脈內投與。
以上所述之具有式 (I) 的化合物之藥物配製物可以方便地以單位劑型投與，並且可以藉由製藥領域中熟知的任何方法，例如如Remington's Pharmaceutical Sciences [雷明頓藥物科學], 第17版, Mack Publishing Company, Easton, PA. [馬克出版公司, 伊斯頓, 賓夕法尼亞州], (1985) 中所述之製備。
適於口服投與的藥物配製物可以包含一或多種生理上可相容的載體和/或賦形劑，並且可為呈固體或液體之形式。片劑和膠囊可以用以下物質製備：黏合劑；填充劑；滑潤劑；和界面活性劑。液體組成物可以含有常規添加劑，諸如懸浮劑；乳化劑；以及防腐劑。液體組成物可以封裝在例如明膠中以提供單位劑型。固體口服劑型包括片劑、兩件式硬殼膠囊和軟彈性明膠（SEG）膠囊。示例性口服組成物包含填充到兩件式硬殼膠囊或軟彈性明膠（SEG）膠囊中的具有式 (I) 的化合物和至少一種藥學上可接受的賦形劑。
根據另外的實施方式，提供了一種如上文所定義的具有式 (I) 的化合物或其藥學上可接受的鹽，用於在如人類的溫血動物中作為藥物使用。
根據另外的實施方式，提供了一種如上文所定義的具有式 (I) 的化合物或其藥學上可接受的鹽，用於在如人類的溫血動物中產生抗增殖作用。
根據另外的實施方式，提供了一種如上文所定義的具有式 (I) 的化合物或其藥學上可接受的鹽，用於在如人類的溫血動物中作為抑制和/或治療實體腫瘤疾病（例如其中腫瘤中之MTAP基因缺失的實體腫瘤疾病）的抗侵襲性藥劑使用。
根據另外的實施方式，提供了如上文所定義的具有式 (I) 的化合物或其藥學上可接受的鹽用於在患有CDKN2A/MTAP缺失的腫瘤的如人類的溫血動物中產生抗增殖作用之用途。
根據另外的實施方式，提供了如上文所定義的具有式 (I) 的化合物或其藥學上可接受的鹽在製造用於在如人類的溫血動物中產生抗增殖作用的藥物（例如用於治療CDKN2A/MTAP缺失的腫瘤的藥物）中之用途。
根據另外的實施方式，提供了如上文所定義的具有式 (I) 的化合物或其藥學上可接受的鹽在製造用於在如人類的溫血動物中作為抑制和/或治療實體腫瘤疾病的抗侵襲性藥劑使用的藥物中之用途，視需要地其中該實體腫瘤疾病之特徵在於具有MTAP基因缺失。
根據另外的實施方式，提供了一種用於在需要這種治療的如人類的溫血動物中產生抗增殖作用之方法，該方法包括向所述動物投與有效量的如上文所定義的具有式 (I) 的化合物或其藥學上可接受的鹽。在這樣的實施方式中，需要治療的患者可能患有以缺失MTAP的癌症（即其中MTAP基因已經缺失的癌症）為特徵的癌症。
在本說明書中，除非另外說明，否則短語「有效量」意指化合物或組成物之足以顯著和積極地改變待治療的症狀和/或病症（例如，提供積極的臨床響應）之量。用於藥物組成物中的活性成分之有效量將隨所治療的特定病症、病症之嚴重程度、治療之持續時間、同步治療之性質、所利用的一或多種特定活性成分、所利用的一或多種特定藥學上可接受的賦形劑/載體、以及處於主治醫生的知識和專業知識範圍內的類似因素而變化。有效量通常在0.1 mg至1,000 mg的範圍內。
根據另外的實施方式，提供了一種用於藉由在需要這種治療的如人類的溫血動物中抑制和/或治療實體腫瘤疾病來產生抗侵襲性作用之方法，該方法包括向所述動物投與有效量的如上文所定義的具有式 (I) 的化合物或其藥學上可接受的鹽。在這樣的實施方式中，需要治療的患者可能患有以缺失MTAP的癌症（即其中MTAP基因已經缺失的癌症）為特徵的癌症。
根據另外的實施方式，提供了一種如上文所定義的具有式 (I) 的化合物或其藥學上可接受的鹽，其用於在如人類的溫血動物中預防或治療癌症。在這樣的實施方式中，癌症之特徵可以在於其缺失MTAP的狀態，即癌症係其中MTAP基因已經缺失的癌症。
根據另外的實施方式，提供了如上文所定義的具有式 (I) 的化合物或其藥學上可接受的鹽在製造用於在如人類的溫血動物中預防或治療癌症的藥物中之用途。在這樣的實施方式中，癌症之特徵可以在於其缺失MTAP的狀態，即癌症係其中MTAP基因已經缺失的癌症。
根據另外的實施方式，提供了一種用於在需要這種治療的如人類的溫血動物中預防或治療癌症之方法，該方法包括向所述動物投與有效量的如上文所定義的具有式 (I) 的化合物或其藥學上可接受的鹽。在這樣的實施方式中，需要治療的患者可能患有以缺失MTAP的癌症（即其中MTAP基因已經缺失的癌症）為特徵的癌症。
根據另外的實施方式，提供了一種如上文所定義的具有式 (I) 的化合物或其藥學上可接受的鹽，用於在如人類的溫血動物中預防或治療實體腫瘤疾病。在這樣的實施方式中，實體腫瘤疾病可為缺失MTAP基因的腫瘤。
根據另外的實施方式，提供了如上文所定義的具有式 (I) 的化合物或其藥學上可接受的鹽在製造用於在如人類的溫血動物中預防或治療實體腫瘤疾病的藥物中之用途。
根據另外的實施方式，提供了一種用於在需要這種治療的如人類的溫血動物中預防或治療實體腫瘤疾病之方法，該方法包括向所述動物投與有效量的如上文所定義的具有式 (I) 的化合物或其藥學上可接受的鹽。。在這樣的實施方式中，需要治療的患者可能患有以缺失MTAP的癌症（即其中MTAP基因已經缺失的癌症）為特徵的癌症。
根據另外的實施方式，提供了一種如上文所定義的具有式 (I) 的化合物或其藥學上可接受的鹽，其用於預防或治療對PRMT5的抑制敏感的腫瘤。在這樣的實施方式中，腫瘤之特徵可以在於具有MTAP基因缺失。
根據另外的實施方式，提供了如上文所定義的具有式 (I) 的化合物或其藥學上可接受的鹽在製造預防或治療對PRMT5的抑制敏感的那些腫瘤的藥物中之用途。在這樣的實施方式中，腫瘤之特徵可以在於具有MTAP基因缺失。
根據另外的實施方式，提供了一種用於預防或治療對PRMT5的抑制敏感的那些腫瘤之方法，該方法包括向有需要的患者投與有效量的如上文所定義的具有式 (I) 的化合物或其藥學上可接受的鹽。在這樣的實施方式中，腫瘤之特徵可以在於具有MTAP基因缺失。
根據另外的實施方式，提供了一種如上文所定義的具有式 (I) 的化合物或其藥學上可接受的鹽，用於提供對PRMT5的抑制作用。在這樣的實施方式中，抑制作用可為MTA增效的。
根據另外的實施方式，提供了如上文所定義的具有式 (I) 的化合物或其藥學上可接受的鹽在製造用於提供對PRMT5的抑制作用的藥物中之用途。
根據另外的實施方式，還提供了一種用於提供對PRMT5的抑制作用之方法，該方法包括向有需要的患者投與有效量的如上文所定義的具有式 (I) 的化合物或其藥學上可接受的鹽。
根據另外的實施方式，提供了一種如上文所定義的具有式 (I) 的化合物或其藥學上可接受的鹽，其用於提供對PRMT5的選擇性抑制作用。
根據另外的實施方式，提供了如上文所定義的具有式 (I) 的化合物或其藥學上可接受的鹽在製造用於提供對PRMT5的選擇性抑制作用的藥物中之用途。
根據另外的實施方式，還提供了一種用於提供對PRMT5的選擇性抑制作用之方法，該方法包括向有需要的患者投與有效量的具有式 (I) 的化合物或其藥學上可接受的鹽。
本文描述了可以結合PRMT5的化合物。在生物化學測定和基於細胞的測定中，本說明書之化合物示出為有效的PRMT5蛋白結合劑，並且因此可以用於治療由PRMT5介導的障礙，特別是治療其中MTAP缺失的癌症，如胰臟癌、大腸直腸癌、子宮癌、膽管癌、胃癌、膀胱癌、宮頸癌、睪丸生殖細胞癌和非小細胞肺癌和多發性骨髓瘤、彌漫型大B細胞淋巴瘤、橫紋肌肉瘤和皮膚鱗狀細胞癌。在較佳的實施方式中，該用途將用於治療肺癌（例如NSCLC）和胃部癌或淋巴瘤（例如DLBCL）。
根據另外的實施方式，提供了一種如上文所定義的具有式 (I) 的化合物或其藥學上可接受的鹽，其用於治療由PRMT5介導的障礙。
根據另外的實施方式，提供了一種用於治療由PRMT5介導的障礙之方法，該方法包括投與有效量的如上文所定義的具有式 (I) 的化合物或其藥學上可接受的鹽。
根據另外的實施方式，提供了如上文所定義的具有式 (I) 的化合物或其藥學上可接受的鹽在製造用於治療由PRMT5介導的障礙的藥物中之用途。
根據另外的實施方式，提供了一種如上文所定義的具有式 (I) 的化合物或其藥學上可接受的鹽，其用於治療胃部癌、肺癌或淋巴瘤。
根據另外的實施方式，提供了一種如上文所定義的具有式 (I) 的化合物或其藥學上可接受的鹽，其用於治療非小細胞肺癌。
根據另外的實施方式，提供了一種用於治療胃部癌、非小細胞肺癌或淋巴瘤癌症之方法，該方法包括向有需要的患者投與有效量的如上文所定義的具有式 (I) 的化合物或其藥學上可接受的鹽。
根據另外的實施方式，提供了一種用於治療非小細胞肺癌之方法，該方法包括向有需要的患者投與有效量的具有式 (I) 的化合物或其藥學上可接受的鹽。
根據另外的實施方式，提供了如上文所定義的具有式 (I) 的化合物或其藥學上可接受的鹽在製造用於治療胃部癌、非小細胞肺癌或淋巴瘤癌症的藥物中之用途。
根據本說明書之另一方面，提供了如上文所定義的具有式 (I) 的化合物或其藥學上可接受的鹽在製造用於治療非小細胞肺癌的藥物中之用途。
本文所定義的抗癌治療可以作為單獨療法投與，或除本說明書之化合物外，還可以涉及常規外科手術或放射療法或化學療法。
因此，在一個實施方式中，提供了一種具有式 (I) 的化合物或其藥學上可接受的鹽、以及一種另外的抗腫瘤物質，用於聯合治療癌症。
根據本說明書之一個實施方式，提供了一種適用於治療癌症之組合，該組合包括具有式 (I) 的化合物或其藥學上可接受的鹽和另一種抗腫瘤劑。
在本說明書之另一個實施方式中，提供了與另一種抗腫瘤劑組合的具有式 (I) 的化合物或其藥學上可接受的鹽。在一個相關實施方式中，提供了一種治療方法，其包括將具有式 (I) 的化合物與另一種抗腫瘤劑組合投與給有需要的患者，例如罹患其中缺失MTAP基因的癌症之患者。
雖然具有式 (I) 的化合物主要具有作為用於在溫血動物（包括人類）中使用的治療劑之價值，但在需要抑制PRMT5的任何時候它們亦為有用的。因此，它們有用於作為用於在開發新生物測試以及尋找新藥理學藥劑中使用的藥理學標準。
另一個實施方式係基於鑒定患者腫瘤之MTAP基因缺失狀態與對用具有式 (I) 的化合物治療的潛在易感性之間的聯繫。然後可以有利地使用MAT增效的PRMT5抑制劑，例如具有式 (I) 的化合物來治療可能對其他療法有抗性的患有其中缺失MTAP基因的腫瘤之患者。因此，這提供了機會、方法和工具用於選擇用具有式 (I) 的化合物進行治療的患者，特別是癌症患者。該選擇係基於待治療的腫瘤細胞是否具有MTAP基因缺失。MTAP基因缺失狀態因此可以被用作一種生物標記，以表明選擇用具有式 (I) 的化合物之治療可為有利的。
根據一個實施方式，提供了一種用於選擇用具有式 (I) 的化合物進行治療的患者之方法，該方法包括提供來自患者之含有腫瘤細胞的樣本；確定患者之含腫瘤細胞的樣本中之MTAP基因是否已被缺失；以及基於以上來選擇用具有式 (I) 的化合物治療的患者。
該方法可以包括或不包括實際患者樣本分離步驟。因此，根據一個實施方式，提供了一種用於選擇用具有式 (I) 的化合物進行治療的患者之方法，該方法包括確定先前從該患者分離的含有腫瘤細胞的樣本中之MTAP基因是否已被缺失；以及基於以上來選擇用具有式 (I) 的化合物治療的患者。
在實施方式中，如果腫瘤細胞缺失了MTAP基因，則選擇患者用具有式 (I) 的化合物治療。
根據另一個實施方式，提供了一種具有式 (I) 的化合物或其藥學上可接受的鹽，其用於治療具有缺失了MTAP基因或有積累MTA傾向的腫瘤細胞之癌症。
根據另一個實施方式，提供了一種具有式 (I) 的化合物或其藥學上可接受的鹽，其用於治療具有被鑒定為積累MTA的腫瘤細胞之癌症。
根據另一個實施方式，提供了一種包含具有式 (I) 的化合物之藥物組成物，用於預防和治療具有被鑒定為缺失了MTAP基因的腫瘤細胞之癌症。
應瞭解，提供了以下實例以使得可以完全理解本發明之性質。還應瞭解，以下實例不旨在以任何方式限制描述的範圍。
實例 生物學測定
使用以下測定來測量本說明書之化合物的作用。
MTase-Glo™ PRMT5 發光測定（ PRMT5 酶測定）
使用Mtase-Glo
TM甲基轉移酶發光測定監測在存在或不存在5´-甲基硫腺苷（MTA）下，藉由重組PRMT5:MEP50酶複合物將S-腺苷甲硫胺酸（SAM）轉化為S-腺苷高半胱胺酸（SAH）。在白色1536孔微孔盤（格瑞納公司（Greiner），#782075）中進行酶促反應。反應緩衝液含有20 mM的N,N-二(羥乙基)甘胺酸（pH 7.60）、25 mM NaCl、1 mM DTT和0.1%（w/v）CHAPS。
對於抑制測定，在最高濃度為100 μM的十二點重複半對數化合物濃度-響應之後，使用Labcyte Echo 555聲學分配器，將DMSO中的目的化合物和參考對照分配到微板中。用適當體積的DMSO回填所有孔以在3 µl最終測定體積中實現1%v/v的最終濃度。所有測定準備板包括中性對照（無抑制，1%v/v DMSO）和抑制劑對照（100%抑制，30 µM測定特異性化合物）。
藉由將抑制劑與含有1 nM人異八聚體PRMT5:MEP50酶複合物、2.5 µM H41-21組蛋白肽（開曼化學品公司（Cayman Chemical Co.），#10854）和2.5 µM S-腺苷甲硫胺酸（SAM）（普洛麥格公司（Promega），A120A）的3 µL反應混合物在反應緩衝液中一起孵育來進行不含MTA的抑制測定。同樣地，藉由將抑制劑與由2 nM酶複合物、1.5 µM MTA（西格瑪公司（Sigma），D5011）、2.5 µM H41-21肽和2.5 µM SAM組成的3 µL酶混合物一起孵育來進行在MTA存在下的測定。在室溫下孵育5 h後，將1 µL的0.5%（v/v）TFA添加至各孔中以淬滅甲基化反應。隨後向各孔中添加一微升的5x濃縮的MTase-GloTM試劑（普洛麥格公司，CS175601A）並在室溫下孵育以將反應中產生的SAH轉化為ADP。10分鐘後，向各孔中添加2.5 µL預過濾的Mtase-GloTM檢測溶液（普洛麥格公司，CS175601B），並在室溫下再孵育30 min以確保ADP轉化為發光，這使用Evision 2101多標記讀板器測量。
分析數據並且使用Genedata Screener®軟體計算IC
50值。
PRMT5 細胞 SDMA 測定：
HCT116 WT細胞和KO-MTAP細胞在由McCoys培養基（西格瑪公司，#M8403）、10%（v/v）胎牛血清和1%（v/v）L-麩醯胺組成的細胞培養基中培養。收穫後，將細胞分配到黑色384孔Costar板（#3712，康寧公司（Corning））中，得到2000個細胞/孔，總體積為40 µl細胞培養基。在最高濃度為30 μM的十二點半對數化合物濃度-響應之後，使用Labcyte Echo 555聲學分配器，將測試化合物和參考對照直接添加到細胞板中。
然後將細胞板在37°C下孵育48小時，然後藉由添加40 µl的8%多聚甲醛的PBS/A溶液（4%終濃度）固定，然後在室溫下孵育10分鐘，然後使用BioTek ELx406板洗滌器將板用150 µl的PBS洗滌兩次，用20 ul/孔0.1%皂苷的PBS溶液滲透10 min，再次洗滌並用20 ul/孔2% BSA的PBS-T（西格瑪公司，#A8022）溶液在室溫下封閉1小時。
將初級抗體，即抗SDMA組蛋白4抗體（密理博公司（Milipore），#07-947）在PBS-T + 0.05% BSA中按1 : 1000稀釋，每孔添加20 µl，並將板在4°C下孵育過夜。將細胞板用200 µl PBS/T洗滌3x，然後向每孔中添加20 µl在Alexa Fluor® 488山羊抗兔IgG二級抗體（賽默科技公司（Thermo），#A11008）的測定緩衝液中的1 : 500稀釋液，以及Hoechst 33342的1 : 1000稀釋液。在室溫下孵育1小時後，將板用200 µl PBS/T洗滌3x，並將40 µl無碳酸氫鉀、碳酸氫鎂以及碳酸氫鈉的PBS（吉博科公司（Gibco），#14190-094）添加至每孔中。
將染色的細胞板用黑色密封件覆蓋，並且然後在Cell Insight成像平臺（賽默科技公司）上用10x物鏡讀數。使用主要通道（Hoechst藍色螢光405 nM，BGRFR_386_23）自動對焦並計數事件數目（這將提供關於所測試的化合物的細胞毒性之資訊）。第二通道（綠色488 nM，BGRFR_485_20）測量SDMA染色。
分析數據並且使用Genedata Screener®軟體計算IC
50。在Genedata中藉由定量最大訊息/頂部（媒介物對照）和最小訊息/底部（30 mM的已知標準強抑制劑化合物）來確定測定視窗，並且使用希爾模型計算IC
50。
細胞增殖測定：
HCT116 WT細胞和KO-MTAP細胞在由McCoys培養基（西格瑪公司，#M8403）、10%（v/v）胎牛血清和1%（v/v）L-麩醯胺組成的細胞培養基中培養。收穫後，將細胞分配到黑色384孔Costar板（#3712，康寧公司）中，得到400個細胞/孔，總體積為40 µl細胞培養基。在最高濃度為30 μM的十二點重複半對數化合物濃度-響應之後，使用Labcyte Echo 555聲學分配器，將測試化合物和參考對照直接添加到細胞板中。
在鋪板4 ml阿爾瑪藍（賽默科技公司，#DAL1100）後，平行產生第0天的板但不添加測試化合物和參考對照，將其在37C、5% CO
2下孵育3 h。孵育後，用螢光激發波長為540-570 nm（峰值激發為570 nm），螢光發射為580-610 nm（峰值發射為585 nm）的EnVision讀板器讀板。
然後將添加的細胞板在37°C下孵育5天，然後添加阿爾瑪藍並按照與第一板相同的方案在Envision中讀板。分析數據並使用Genedata Screener®軟體藉由歸一化至板0計算IG50。
在前述測定中獲得的數據呈現於下表2中。
[
表 2] 實例1至29在MTAP野生型（WT）細胞和MTAP敲除（KO）細胞中抑制PRMT5蛋白的活性以及在MTAP野生型（WT）細胞和MTAP敲除（KO）細胞中抑制細胞增殖的活性
| 實例 | PRMT5酶IC 50（µM）（+ MTA形式） | PRMT5酶IC 50（µM）（無MTA形式） | 細胞SDMA IC 50（µM）（MTAP KO） | 細胞SDMA IC 50（µM）（MTAP WT） | 細胞增殖IC 50（µM）（MTAP KO） | 細胞增殖IC 50（µM）（MTAP WT） |
| 1 | 0.0038 | 0.025 | 0.0053 | 0.29 | 0.16 | ＞ 30 |
| 2 | 0.006 | 0.027 | 0.0059 | 0.2 | 0.24 | 6.1 |
| 3 | 0.0085 | 0.061 | 0.013 | 0.56 | 0.32 | ＞ 30 |
| 4 | 0.0077 | 0.038 | 0.0094 | 0.19 | ||
| 5 | 0.0041 | 0.04 | 0.0057 | 0.17 | ||
| 6 | 0.0046 | 0.025 | 0.0017 | 0.054 | ||
| 7 | 0.0081 | 0.03 | 0.0017 | 0.036 | ||
| 8 | 0.0064 | 0.063 | 0.025 | ＞ 1.5 | 1.9 | ＞ 30 |
| 9 | 0.017 | 0.14 | 0.015 | 0.53 | ||
| 10 | 0.0092 | 0.091 | 0.023 | 1.7 | 1.6 | ＞ 30 |
| 11 | 0.012 | 0.09 | 0.02 | 0.81 | ||
| 12 | 0.0085 | 0.065 | 0.0088 | 0.43 | ||
| 13 | 0.009 | 0.05 | 0.0084 | 0.34 | ||
| 14 | 0.022 | 0.14 | 0.006 | 0.088 | ||
| 15 | 0.0082 | 0.016 | 0.0036 | 0.12 | ||
| 16 | 0.0039 | 0.023 | 0.0051 | 0.23 | ||
| 17 | 0.015 | 0.15 | 0.0068 | 0.42 | ||
| 18 | 0.0043 | 0.049 | 0.0066 | 0.37 | ||
| 19 | 0.0086 | 0.21 | 0.032 | 0.86 | ||
| 20 | 0.063 | 0.034 | 0.0029 | 0.16 | ||
| 21 | 0.0095 | 0.14 | 0.086 | 3.2 | ||
| 22 | 0.0069 | 0.061 | 0.011 | 0.51 | ||
| 23 | 0.026 | 0.26 | 0.16 | 12 | ||
| 24 | 0.0065 | 0.055 | 0.032 | 1.2 | ||
| 25 | 0.0087 | 0.09 | 0.014 | 0.44 | ||
| 26 | 0.011 | 0.021 | 0.0031 | 0.093 | 0.29 | 2.3 |
| 27 | 0.012 | 0.044 | 0.0047 | 0.17 | 0.36 | ＞ 30 |
| 28 | 0.0071 | 0.015 | 0.0028 | 0.071 | 0.13 | 1.4 |
| 29 | 0.0067 | 0.083 | 0.018 | 0.81 |
如從表2中呈現的結果可以看出，根據本說明書的實例都是「MTA增效的」PRMT5抑制劑，並且此活性譜在缺失MTAP的細胞中提供增強的抗增殖活性。更詳細地，對第2列和第3列的檢查揭示，當MTA存在於測定系統中時，對分離的蛋白質（即PRMT5酶）造成50%抑制所需的PRMT5抑制劑之濃度大大減小，與當MTA不存在時的數十至數百nM範圍（第3列）相比，當MTA存在時觀察到的在MTA存在下的IC
50在個位數或數十nM範圍中（第2列）。實例1、2和3的數據清楚地說明了在MTA存在下這種增強的活性，在MTA存在下觀察到的IC
50分別為3.8、6.0和8.5 nM，而在MTA不存在下它們的活性為25、27和61 nM。
如從對表2的第4列和第5列的檢查可以容易地看出，在HCT116細胞測定中觀察到相同的、毫無爭議更明顯的「MTA增效的」抑制作用。再次比較實例1、2和3之結果（分別在第4列和第5列中，5.3、5.9和13 nM的IC
50相比於290、200和560 nM的IC
50），根據本說明書之PRMT5抑制劑之活性在敲除MTAP的HCT116細胞中大得多，敲除MTAP的HCT116細胞因為它們缺乏MTAP而積累MTA。相反，在HCT116野生型細胞（第5列）中，PRMT5抑制大大降低，並且觀察到更適度的IC
50值。最後，將PRMT5抑制活性翻譯為MTAP敲除和野生型HCT116人癌細胞的體外抗增殖作用由第6列和第7列中呈現的數據證實。如從它們的「MTA增效的」PRMT5抑制活性所預期的，根據本說明書之PRMT5抑制劑在MTAP缺陷型細胞（第6列）中比在MTAP野生型細胞中發揮大得多的抗增殖作用，與MTAP WT細胞中已進入微莫耳範圍內的IC
50（＞ 30、6.1和 ＞ 30 mM）相比，MTAP KO細胞中對於實例1、2和3的IC
50（160、240和320 nM）在數百奈米莫耳範圍內。可以容易地理解，根據本說明書之PRMT5抑制劑具有活性譜，該活性譜使它們成為了用於治療攜帶MTAP基因缺失並因此積累MTA的約15%的實體腫瘤之有希望的候選物。
實例
本說明書中所描述的該等化合物進一步在以下實例中闡明。化合物使用Chemdraw版本20.0.2.51命名。該等實例僅是藉由說明的方式給出並且是非限制性的。通常：
(i) 操作在環境溫度下進行，即在17°C至25°C的範圍內並且在惰性氣體如氮氣氣氛下進行，除非另行說明；
(ii) 藉由旋轉蒸發或利用Genevac設施或拜泰齊（Biotage）v10蒸發器在真空中進行蒸發且在藉由過濾去除殘餘固體之後進行處理程序；
(iii) 在自動化Teledyne Isco CombiFlash® Rf或Teledyne Isco CombiFlash® Companion®上使用預填充的RediSep Rf Gold™二氧化矽柱（20-40 μm，球形粒子）、GraceResolv™柱（Davisil®二氧化矽）或Silicycle柱（40-63 μm）進行急速層析法純化。
(iv) 製備型逆相HPLC在配備有SQ MS檢測器（多模式ESI/APCI源）的Agilent 1290 Infinity II製備系統上進行，該系統具有沃特斯（Waters）CSH C18 OBD柱（5微米二氧化矽，30 mm直徑，100 mm長度，流速50 mL/min），使用水（含有0.1%-0.3%銨水）或水（含有0.1%甲酸）和乙腈之極性遞減的混合物作為洗脫液。在配備有QDa MS檢測器的Sepiatec P100 SFC系統或沃特斯Prep 100 SFC系統上進行製備型SFC純化，使用如相應實驗數據中詳述的層析條件。
(v) 產率（當存在時）不必是可達到的最大值；
(vi) 通常，具有式I的終產物之結構藉由核磁共振（NMR）光譜法確認；NMR化學位移值係以δ級測量的[質子磁共振光譜使用Bruker Avance 500（500 MHz）或Bruker Avance 400（400 MHz）儀測定]；除非另外說明，否則在環境溫度下進行測量；使用了以下縮寫：s，單峰；d，二重峰；t，三重峰；q，四重峰；m，多重峰；dd，雙二重峰；ddd，雙二重峰的雙重峰；dt，雙三重峰；bs，寬訊息
(vii) 通常，具有式I的終產物在液相層析法之後還藉由質譜法（LCMS或UPLC）來表徵；以1 mL/min的流速使用逆相C18二氧化矽，並且藉由電灑質譜法以及藉由記錄220-320 nm的波長範圍的UV吸光度進行檢測。使用尺寸為2.1 x 50 mm，並且粒度為1.7微米的沃特斯Acquity UPLC CSH C18柱，在CSH C18逆相二氧化矽上進行分析性UPLC。使用極性遞減混合物作為洗脫液，例如使用水（含有0.1%甲酸或0.1%氨）作為溶劑A和乙腈作為溶劑B之極性遞減的混合物進行梯度分析。典型的2分鐘UPLC分析方法將採用經1.3分鐘的溶劑梯度，以大約1 mL/min，分別從溶劑A和B之97 : 3混合物到溶劑A和B之3 : 97混合物。除非另外說明，否則報告的分子離子對應於[M+H]+；對於具有多個同位素模式的分子（Br、Cl等），除非另有說明，否則報告的值係對於最低同位素質量獲得的值。
(viii) 通常使用SCX-2（拜泰齊（Biotage），丙磺酸官能化的二氧化矽，使用三官能矽烷製造，未封端的）柱進行離子交換純化。
(ix) 中間體純度藉由薄層層析、質譜的、HPLC（高效液相層析法）和/或NMR分析來評估；
(x) 除非另有說明，否則製備中使用的分子篩尺寸為4Å
(xi) 使用了以下縮寫：
aq. 水性
Boc 三級丁氧基羰基
Brettphos 2-(二環己基膦基)3,6-二甲氧基-2′,4′,6′-三異丙基-1,1′-聯苯
CataCXium
®A 二(1-金剛烷基)-正丁基膦
Conc. 濃縮的
CCl
4四氯化碳
DCM 二氯甲烷
DIBAL 氫化二異丁基鋁
DIPEA/DIEA 二異丙基乙胺
DMAP 二甲基胺基吡啶
DMA
N,
N-二甲基乙醯胺
DMF
N,
N-二甲基甲醯胺
DMSO 二甲亞碸
EPhos 二環己基(3-異丙氧基-2′,4′,6′-三異丙基-[1,1'-聯苯基]-2-基)磷烷
EtOAc 乙酸乙酯
h 小時
HATU 1-[雙(二甲基胺基)亞甲基]-1
H-1,2,3-三唑并[4,5-
b]吡啶陽離子3-氧化物六氟磷酸鹽
HPLC 高效液相層析法
m-CPBA 3-氯過苯甲酸
MeCN 乙腈
MeOH 甲醇
MgSO
4硫酸鎂
MTBE 甲基三級丁基醚
NaHCO
3碳酸氫鈉
Na
2SO
4硫酸鈉
NH
4Cl 氯化銨
NBS
N-溴代琥珀醯亞胺
NIS
N-碘代琥珀醯亞胺
外消旋-BINAP (±)-2,2'-雙(二苯基膦基)-1,1'-聯萘
rt/RT 室溫
RockPhos第3代預催化劑
[(2-二-三級丁基膦基-3-甲氧基-6-甲基-2′,4′,6′-三異丙基-1,1′-聯苯基)-2-(2-胺基聯苯基)]甲磺酸鈀(II)
Ruphos 2-二環己基膦基-2',6'-二異丙氧基-1,1'-聯苯
sat. 飽和的
SEM 三甲矽乙氧基甲基
SFC 超臨界流體層析法
sol. 溶液
SPhos 2-二環己基膦基-2′,6′-二甲氧基聯苯
TBAF 四正丁基氟化銨
TEA 三乙胺
TES 三乙基矽烷
TFA 三氟乙酸
TFAA 三氟乙酸酐
THF 四氫呋喃
THP 四氫哌喃
Tr 三苯甲基
Xantphos 4,5-雙(二苯基膦基)-9,9-二甲基𠮿口星
中間體 AA ： 2-(2- 溴 -4- 氟苯基 ) 乙酸甲酯
在rt下，將亞硫醯氯（31.3 mL，429.1 mmol）小心地逐滴添加到在MeOH（400 mL）中的2-(2-溴-4-氟苯基)乙酸（CAS號61150-59-2）（100 g，429.1 mmol）中。將反應混合物在60°C下攪拌4小時，冷卻並真空除去溶劑。將殘餘物在EtOAc（250 mL）和飽和NaHCO
3（200 mL）之間分配。有機相用水（100 mL）、鹽水（100 mL）洗滌，通過相分離濾紙並真空除去溶劑，以提供呈無色油狀物的標題化合物（105 g，99%）。
1 HNMR (400 MHz, DMSO-d6, 30°C) 3.64 (3H, s), 3.83 (2H, s), 7.25 (1H, td), 7.48 (1H, dd), 7.58 (1H, dd) )；
m/zMH
+未觀察到。
中間體 AB ： 5- 氟 -2-(2- 甲氧基 -2- 側氧基乙基 ) 苯甲酸甲酯
將2-(2-溴-4-氟苯基)乙酸甲酯（45.0 g，182.14 mmol）和三乙胺（27.90 mL，200.35 mmol）置於具有MeOH（300 mL）的鋼製壓力容器中。添加[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀(II)（與二氯甲烷複合）（4.46 g，5.46 mmol）並將容器密封。將容器用一氧化碳吹掃，然後用一氧化碳填充至7巴。將壓力容器加熱至100°C並攪拌2小時。使反應混合物冷卻、排氣並過濾以除去催化劑。真空除去溶劑並將殘餘物溶於EtOAc（250 mL）中，用水（2 x 200 mL）和鹽水（100 mL）洗滌。將有機相通過相分離濾紙並真空除去溶劑。將粗產物藉由急速二氧化矽層析法（洗脫梯度為庚烷中的0至50% EtOAc）進行純化。將純級分蒸發至乾燥，以提供呈淡黃色油狀物的標題化合物（38.40 g，93%）。
1 HNMR (400 MHz, DMSO-d6, 30°C) 3.60 (3H, s), 3.80 (3H, s), 3.99 (2H, s), 7.42 - 7.49 (2H, m), 7.66 (1H, ddd)；
m/zMH
+227。
中間體 AC ：外消旋 -2-(1- 溴 -2- 甲氧基 -2- 側氧基乙基 )-5- 氟苯甲酸甲酯
將5-氟-2-(2-甲氧基-2-側氧基乙基)苯甲酸甲酯（47.0 g，207.8 mmol）溶解在氯仿（450 mL）中。添加1-溴吡咯啶-2,5-二酮（55.5 g，311 mmol），然後添加2,2'-偶氮雙(2-甲基丙腈)（3.41 g，20.8 mmol），並將反應混合物在回流下攪拌72小時。冷卻反應混合物，用水（2 x 250 mL）、鹽水（100 mL）洗滌，通過相分離濾紙並真空除去溶劑。將粗產物藉由急速二氧化矽層析法（洗脫梯度為庚烷中的0至40% EtOAc）進行純化。將純級分蒸發至乾燥，以提供呈無色油狀物的標題化合物（50.50 g，80%）。
1 HNMR (400 MHz, DMSO-d6, 30°C) 3.71 (3H, s), 3.86 (3H, s), 6.51 (1H, s), 7.56 (1H, td), 7.66 (1H, dd), 7.81 (1H, dd)；
m/zMH
+未觀察到。
中間體 AD ：外消旋 -5- 氟 -2-(4- 甲氧基苄基 )-3- 側氧基異吲哚啉 -1- 甲酸甲酯
將4-甲氧基苄胺（23.5 g，171 mmol）置於具有MeCN（300 mL）的燒瓶中並添加碳酸氫鈉（23.9 g，285 mmol）。藉由滴液漏斗緩慢添加溶於MeCN（100 mL）中的外消旋-2-(1-溴-2-甲氧基-2-側氧基乙基)-5-氟苯甲酸甲酯（43.5 g，142 mmol），同時使反應混合物達到80°C。將反應混合物在80°C下攪拌3小時。使反應混合物冷卻，真空除去大部分MeCN並將殘餘物在EtOAc（400 mL）和水（400 mL）之間分配。將水相用EtOAc（100 mL）再萃取，將有機物合併並用鹽水（50 mL）洗滌。將有機相通過相分離濾紙並真空除去溶劑。將粗產物藉由急速二氧化矽層析法（洗脫梯度為庚烷中的0至50% EtOAc）進行純化。將純級分蒸發至乾燥，以提供呈淡黃色油狀物的標題化合物（45.3 g，96%）。
1 HNMR (400 MHz, DMSO-d6, 30°C) 3.69 (3H, s), 3.73 (3H, s), 4.31 (1H, d), 5.04 (1H, d), 5.18 (1H, s), 6.87 - 6.94 (2H, m), 7.17 - 7.24 (2H, m), 7.50 (1H, ddd), 7.57 (1H, dd), 7.62 (1H, dd)；
m/zMH
+330。
中間體 AE ：外消旋 -1- 烯丙基 -5- 氟 -2-(4- 甲氧基苄基 )-3- 側氧基異吲哚啉 -1- 甲酸甲酯
在5°C下，在氮氣下，將外消旋-5-氟-2-(4-甲氧基苄基)-3-側氧基異吲哚啉-1-甲酸甲酯（24.0 g，72.9 mmol）、乙酸烯丙酯（11.8 mL，109 mmol）、三(二苯亞甲基丙酮)二鈀(0)（1.67 g，1.82 mmol）和
N,N'-((1
R,2
R)-環己烷-1,2-二基)雙(2-(二苯基磷烷基)苯甲醯胺)（2.52 g，3.64 mmol）在THF（400 mL）中攪拌。然後逐滴添加1,1,3,3-四甲基胍（13.7 mL，109 mmol）。將反應混合物在5°C下攪拌5分鐘。真空除去THF。將反應混合物在EtOAc（400 mL）和水（400 mL）之間分配並將有機相通過相分離濾紙。真空除去溶劑，以提供橙色油狀物。將粗產物藉由急速二氧化矽層析法（洗脫梯度為庚烷中的0至50% EtOAc）進行純化。將純級分蒸發至乾燥，以提供呈膏狀固體之標題化合物（25.8 g，96%）。
1 HNMR (400 MHz, DMSO-d6, 30°C) 3.04 - 3.20 (2H, m), 3.26 (3H, s), 3.73 (3H, s), 4.52 (1H, d), 4.71 (1H, d), 4.74 - 4.94 (3H, m), 6.82 - 6.96 (2H, m), 7.28 - 7.39 (2H, m), 7.45 - 7.58 (2H, m), 7.63 (1H, dd)；
m/zMH
+370。
中間體 AF ： (
S)-1-
烯丙基 -5- 氟 -2-(4- 甲氧基苄基 )-3- 側氧基異吲哚啉 -1- 甲酸甲酯
外消旋-1-烯丙基-5-氟-2-(4-甲氧基苄基)-3-側氧基異吲哚啉-1-甲酸甲酯（約70 : 30，有利於所希望的（
S）鏡像異構物）（25.8 g，69.7 mmol）藉由SFC層析法（柱：Phenomenex C1，30 x 250 mm，5微米，流動相：10% IPA + 0.1% DEA / 90% scCO
2，流速：90 ml/min，BPR：120巴，柱溫：40°C UV最大值210 nm）進行純化。將純級分蒸發至乾燥，以提供呈白色固體之標題化合物（15.1 g，56%）。
1 HNMR (400 MHz, DMSO-d6, 30°C) 3.04 - 3.20 (2H, m), 3.26 (3H, s), 3.73 (3H, s), 4.52 (1H, d), 4.71 (1H, d), 4.74 - 4.94 (3H, m), 6.82 - 6.96 (2H, m), 7.28 - 7.39 (2H, m), 7.45 - 7.58 (2H, m), 7.63 (1H, dd)；
m/zMH
+370
（基於使用中間體之該鏡像異構物製備的生物活性化合物之生物活性（與使用其他鏡像異構物製備的那些相比），以及
S鏡像異構物係較佳的並且比
R鏡像異構物更具活性的X射線結構證據，推測的該中間體之立體化學分配）。
中間體 AG ： (
S)-5-
氟 -2-(4- 甲氧基苄基 )-3- 側氧基 -1-(2- 側氧基乙基 ) 異吲哚啉 -1- 甲酸甲酯
向(
S)-1-烯丙基-5-氟-2-(4-甲氧基苄基)-3-側氧基異吲哚啉-1-甲酸甲酯（60.0 g，162 mmol）在1,4-二㗁𠮿（800 mL）和水（200 mL）中之溶液中添加氧化鋨（VIII）（4%水溶液）（5.16 mL，0.81 mmol）、高碘酸鈉（87.0 g，406 mmol）和2,6-二甲基吡啶（37.8 mL，324 mmol）。將該反應混合物在rt下攪拌18小時。將反應混合物過濾以除去鹽並用DCM（500 mL）徹底沖洗。將濾液置於裝有水（500 mL）的分液漏斗中並分配。將水相用DCM（300 mL）再萃取，將有機相合併，通過相分離濾紙並真空除去溶劑。將粗產物藉由急速二氧化矽層析法（洗脫梯度為庚烷中的0至50% EtOAc）進行純化。將純級分蒸發至乾燥，以提供呈白色結晶固體之標題化合物（50.1 g，83%）。
1 HNMR (400 MHz, DMSO-d6, 30°C) 3.40 (3H, s), 3.42 - 3.56 (2H, m), 3.72 (3H, s), 4.58 (1H, d), 4.74 (1H, d), 6.80 - 6.92 (2H, m), 7.19 - 7.27 (2H, m), 7.52 (1H, ddd), 7.60 (1H, dd), 7.69 (1H, dd), 9.07 (1H, t)；
m/zMH
+372。
中間體 AH ：外消旋 -5- 氟 -2-[(4- 甲氧基苯基 ) 甲基 ]-3- 側氧基 -1-(2- 側氧基乙基 ) 異吲哚啉 -1- 甲酸甲酯
根據
中間體 AG：
(
S)-5-
氟 -2-(4- 甲氧基苄基 )-3- 側氧基 -1-(2- 側氧基乙基 ) 異吲哚啉 -1- 甲酸甲酯的方法，使用
中間體 AE ： 外消旋 -(
R)-1-
烯丙基 -5- 氟 -2-(4- 甲氧基苄基 )-3- 側氧基異吲哚啉 -1- 甲酸甲酯製備標題化合物。
1 HNMR (400 MHz, CDCl3) 3.06 - 3.15 (1H, m), 3.19 - 3.29 (1H, m), 3.58 (3H, s), 3.78 (3H, s), 4.46 (1H, d), 5.11 (1H, d), 6.78 - 6.87 (2H, m), 7.18 - 7.25 (2H, m), 7.25 - 7.34 (1H, m), 7.44 - 7.52 (1H, m), 7.57 - 7.64 (1H, m), 9.06 (1H, t)
中間體 AI ：甲基 (
S)-1-
烯丙基 -5- 氟 -3- 側氧基異吲哚啉 -1-
將(
S)-1-烯丙基-5-氟-2-(4-甲氧基苄基)-3-側氧基異吲哚啉-1-甲酸甲酯（20.0 g，54.1 mmol）置於具有MeCN（200 mL）和水（100 mL）的燒瓶中。添加硝酸鈰(IV)銨（74.2 g，135 mmol）並將反應混合物在rt下攪拌30分鐘。真空除去MeCN並將反應混合物在DCM（400 mL）和水（250 mL）之間分配。將水相用DCM（200 mL）萃取。合併有機相，用鹽水（100 mL）洗滌，通過相分離濾紙並真空除去溶劑。將粗產物藉由急速二氧化矽層析法（洗脫梯度為庚烷中的0至50% EtOAc）進行純化。將純級分蒸發至乾燥，以提供呈膏狀結晶固體之標題化合物（12.5 mg，93%）。
1 HNMR (400 MHz, DMSO-d6, 27°C) 2.79 (1H, dd), 2.94 (1H, dd), 3.68 (3H, s), 4.93 - 5.15 (2H, m), 5.35 - 5.57 (1H, m), 7.37 - 7.46 (1H, m), 7.50 (1H, ddd), 7.63 - 7.79 (1H, m), 9.32 (1H, s)；
m/zMH
+250。
中間體 AJ ： 3- 溴 -2-( 溴甲基 )-5- 氟苯甲酸甲酯
在rt下，在氮氣下，將2,2’-偶氮雙(2-甲基丙腈)（1.66 g，10.1 mmol）一次性添加到在CCl
4（400 mL）中的3-溴-5-氟-2-甲基苯甲酸甲酯（CAS號1187318-53-1）（25.0 g，101 mmol）和NBS（18.9 g，106 mmol）中。將反應混合物在90°C下攪拌16小時。將反應混合物冷卻並真空除去溶劑。將粗產物藉由急速二氧化矽層析法（洗脫梯度為石油醚（60°C-90°C）中的0至4% EtOAc）進行純化。將純級分蒸發至乾燥，以提供呈無色油狀物的標題化合物（28.0 g，85%）。
1 HNMR (400 MHz, CDCl
3, 30°C) 3.98 (3H, s), 5.12 (2H, s), 7.51 - 7.58 (1H, m), 7.61 - 7.68 (1H, m)；
m/zMH
+無質量離子。
中間體 AK ： 3- 溴 -2-( 氰基甲基 )-5- 氟苯甲酸甲酯
在rt下，將三甲矽氰化物（19.7 mL，147 mmol）逐滴添加到在MeCN（200 mL）中的3-溴-2-(溴甲基)-5-氟苯甲酸甲酯（24.0 g，73.6 mmol）和碳酸鉀（20.4 g，147 mmol）中。將反應混合物在60°C下攪拌16小時，然後冷卻至rt。將反應混合物傾倒入水（200 mL）中，並用EtOAc(2 x 200 mL)萃取。將有機相經MgSO
4乾燥，過濾並真空除去溶劑。將粗產物藉由急速二氧化矽層析法（洗脫梯度為石油醚（60°C-90°C）中的0至20% EtOAc）進行純化。將純級分蒸發至乾燥，以提供呈白色固體之標題化合物（16.5 g，82%）。
1 HNMR (400 MHz, CDCl
3) 4.00 (3H, s), 4.36 (2H, s), 7.57 - 7.64 (1H, m), 7.72 - 7.79 (1H, m)；
m/zMH
+272。
中間體 AL ： 3- 溴 -5- 氟 -2-(2- 甲氧基 -2- 側氧基乙基 ) 苯甲酸甲酯
在0°C下，將濃硫酸（3.33 mL，62.5 mmol）逐滴添加到在MeOH（100 mL）中的3-溴-2-(氰基甲基)-5-氟苯甲酸甲酯（17.0 g，62.5 mmol）中。將反應混合物在80°C下攪拌5天，冷卻並真空除去溶劑。將殘餘物傾倒入冰（200 mL）中，用氫氧化銨（28%-30%水溶液）鹼化並用EtOAc（3 x 150 mL）萃取。合併有機相，經MgSO
4乾燥，過濾並真空除去溶劑。將粗產物藉由急速二氧化矽層析法（洗脫梯度為石油醚（60°C-90°C）中的0至30% EtOAc）進行純化。將純級分蒸發至乾燥，以提供呈無色油狀物的標題化合物（15.0 g，79%）。
1 HNMR (400 MHz, CDCl
3) 3.74 (3H, s), 3.91 (3H, s), 4.28 (2H, s), 7.52 - 7.59 (1H, m), 7.65 - 7.73 (1H, m)；
m/zMH
+305。
中間體 AM ：外消旋 -7- 溴 -5- 氟 -2-(4- 甲氧基苄基 )-3- 側氧基異吲哚啉 -1- 甲酸甲酯
在rt下，將2,2'-偶氮雙(2-甲基丙腈)（1.82 g，11.1 mmol）一次性添加到在1,2-二氯乙烷（150 mL）中的3-溴-5-氟-2-(2-甲氧基-2-側氧基乙基)苯甲酸甲酯（11.3 g，37.0 mmol）和NBS（7.25 g，40.7 mmol）中。將反應混合物在80°C下攪拌2天，冷卻並真空除去溶劑。將粗產物藉由急速二氧化矽層析法（洗脫梯度為石油醚（60°C-90°C）中的0至5% EtOAc）進行純化。將級分蒸發至乾燥，以提供呈無色液體之外消旋-3-溴-2-(1-溴-2-甲氧基-2-側氧基乙基)-5-氟苯甲酸甲酯（12.0 g，84%）。在rt下，將碳酸氫鈉（10.5 g，125 mmol）一次性添加到在MeCN（100 mL）中的外消旋-3-溴-2-(1-溴-2-甲氧基-2-側氧基乙基)-5-氟苯甲酸甲酯（12.0 g，31.3 mmol）和4-甲氧基苄胺（2.14 g，15.6 mmol）中。將反應混合物在80°C下攪拌16小時並冷卻至rt。將反應混合物通過Celite®過濾，並真空除去溶劑。將粗產物藉由急速二氧化矽層析法（洗脫梯度為石油醚（60
oC-90
oC）中的0至20% EtOAc）進行純化。將純級分蒸發至乾燥，以提供呈無色膠狀物的標題化合物（2.56 g，20%）。
1 HNMR (300 MHz, CDCl3) 3.67 (3H, s), 3.82 (3H, s), 4.26 (1H, d), 4.87 (1H, s), 5.12 (1H, d), 6.89 (2H, d), 7.27 (2H, d), 7.44 (1H, dd), 7.57 (1H, dd)；
m/zMH
+408。
中間體 AN ：外消旋 -1- 烯丙基 -7- 溴 -5- 氟 -2-[(4- 甲氧基苯基 ) 甲基 ]-3- 側氧基 - 異吲哚啉 -1- 甲酸甲酯
將3-溴丙-1-烯（4.03 g，33.29 mmol）添加到在DMF（55 mL）中的外消旋-7-溴-5-氟-2-(4-甲氧基苄基)-3-側氧基異吲哚啉-1-甲酸甲酯（4.53 g，11.10 mmol）和碳酸銫（10.9 g，33.3 mmol）中。將反應混合物在80°C下攪拌1小時。使反應混合物冷卻並在EtOAc（250 mL）和水（250 mL）之間分配。將有機相用水（2 x 100 mL）、鹽水（100 mL）洗滌，經MgSO
4乾燥，過濾並真空除去溶劑。將粗產物藉由急速二氧化矽層析法（洗脫梯度為石油醚（60°C-90°C）中的0至20% EtOAc）進行純化。將純級分蒸發至乾燥，以提供呈白色固體之標題化合物（4.17 g，84%）。
1 HNMR (300 MHz, DMSO-d6) 3.09 (s, 2H), 3.25 - 3.41 (m, 3H), 3.73 (d, 3H), 4.34 (d, 1H), 4.75 - 5.12 (m, 4H), 6.83 - 6.92 (m, 2H), 7.17 - 7.29 (m, 2H), 7.69 (dd, 1H), 7.91 (dd, 1H)；
m/zMH
+448。
中間體 AO ：外消旋 -7- 溴 -5- 氟 -2-[(4- 甲氧基苯基 ) 甲基 ]-3- 側氧基 -1-(2- 側氧基乙基 ) 異吲哚啉 -1- 甲酸甲酯
將鋨酸鉀(VI)二水合物（0.07 g，0.19 mmol）添加到在二㗁𠮿（90 mL）和水（30 mL）中的外消旋-1-烯丙基-7-溴-5-氟-2-[(4-甲氧基苯基)甲基]-3-側氧基-異吲哚啉-1-甲酸甲酯（4.17 g，9.30 mmol）、2,6-二甲基吡啶（1.99 g，18.6 mmol）和高碘酸鈉（5.97 g，27.9 mmol）中。將該反應混合物在rt下攪拌3小時。將反應混合物用乙酸乙酯（200 ml）和水（200 mL）稀釋。將有機相經Na
2SO
4乾燥，過濾並真空除去溶劑。將粗產物藉由急速二氧化矽層析法（洗脫梯度為石油醚（60°C-90°C）中的0至30% EtOAc）進行純化。將純級分蒸發至乾燥，以提供呈白色固體之標題化合物（3.31 g，79%）。
1 HNMR (400 MHz, DMSO-d6) 3.12 (3H, s), 3.71 (3H, s), 3.73 - 3.78 (2H, m), 4.41 (1H, d), 4.88 (1H, d), 6.83 - 6.91 (2H, m), 7.18 - 7.25 (2H, m), 7.69 - 7.76 (1H, m), 7.85 - 7.93 (1H, m), 9.16 (1H, d)；
m/zMH
+450。
中間體 AP ：外消旋 4- 溴 -6- 氟 -2-[(4- 甲氧基苯基 ) 甲基 ]-1'- 甲基 - 螺 [ 異吲哚啉 -3,3'- 吡咯啶 ]-1,2'- 二酮
在rt下，將乙酸鈉（2.58 g，31.5 mmol）添加到在1,2-二氯乙烷（70 mL）中的鹽酸甲胺（1.06 g，15.7 mmol）和外消旋-7-溴-5-氟-2-[(4-甲氧基苯基)甲基]-3-側氧基-1-(2-側氧基乙基)異吲哚啉-1-甲酸甲酯（3.54 g，7.86 mmol）中。1小時後，添加三乙醯氧基硼氫化鈉（5.00 g，23.59 mmol），將反應混合物在60°C下攪拌16小時並使其冷卻至rt。將反應混合物用飽和NH
4Cl（100 mL）淬滅，並用EtOAc（200 mL）萃取。將有機相經Na
2SO
4乾燥，過濾並真空除去溶劑。將粗產物藉由急速二氧化矽層析法（洗脫梯度為石油醚（60°C-90°C）中的0至70% EtOAc）進行純化。將純級分蒸發至乾燥，以提供呈白色固體之標題化合物（1.20 g，35%）。
1 HNMR (400 MHz, DMSO-d6) 2.16 - 2.29 (1H, m), 2.51 (1H, d), 2.71 (3H, s), 3.56 (2H, t), 3.73 (3H, s), 4.45 (1H, d), 4.62 (1H, d), 6.83 - 6.91 (2H, m), 7.20 - 7.29 (2H, m), 7.65 (1H, dd), 7.87 (1H, dd),
m/zMH
+433
中間體 AQ ： (6- 氯 -5- 氟吡啶 -3- 基 ) 胺基甲酸三級丁酯
向在二㗁𠮿（1 L）中的5-溴-2-氯-3-氟吡啶（100 g，475.22 mmol）中添加胺基甲酸三級丁酯（61.20 g，522.74 mmol）和碳酸銫（310.00 g，950.43 mmol）。將溶液在真空下脫氣並用氮氣的惰性氣氛吹掃5分鐘，然後添加三(二苯亞甲基丙酮)二鈀(0)（13.06 g，14.26 mmol）和(9,9-二甲基-9
H-𠮿口星-4,5-二基)雙(二苯基磷烷)（Xantphos）（11.00 g，19.01 mmol）。將反應混合物在氮氣下加熱至85°C，持續16小時，然後冷卻至rt。濾出固體並用過量二㗁𠮿洗滌。真空除去溶劑，以提供呈深橙色膠狀物的粗標題化合物（179 g，153%），其在靜置時固化。粗膠狀物不經進一步純化直接用於下一步驟。
1 HNMR (400 MHz, DMSO-d6, 30°C) 1.49 (9H, s), 7.98 (1H, dd), 8.29 (1H, d), 9.98 (1H, s)；
m/zMH
+247。
中間體 AR ： 6- 氯 -5- 氟吡啶 -3- 胺
在20°C下，將在1,4-二㗁𠮿（137 mL，547.3 mmol）中的4 M HCl一次性添加到(6-氯-5-氟吡啶-3-基)胺基甲酸三級丁酯（36 g，109.5 mmol）在1,4-二㗁𠮿（20 mL）中之溶液中。將所得懸浮液在20°C下攪拌3天。將反應混合物用水（250 mL）和EtOAc（100 mL）稀釋。分離有機相並用2 M HCl（3 x 100 mL）萃取，直到有機相中不再留有產物。將合併的水相攪拌並在冰浴中冷卻至0°C。用50%的NaOH溶液將反應混合物鹼化至pH 14。然後將反應混合物用EtOAc（2 x 250 mL）萃取，將合併的有機物用飽和鹽水（50 mL）洗滌，經MgSO
4乾燥，過濾並真空除去溶劑，以提供呈棕色固體之標題化合物（12.4 g，77%）。不經進一步純化直接用於下一步驟。
1 HNMR (400 MHz, CDCl
3, 27°C) 3.88 (s, 2H), 6.80 (dd, J = 9.6, 2.5 Hz, 1H), 7.68 (d, J = 2.5 Hz, 1H)。
中間體 AS 2- 溴 -6- 氯 -5- 氟吡啶 -3- 胺
將在MeCN（250 mL）中的6-氯-5-氟吡啶-3-胺（56.8 g，379.3 mmol）冷卻至5°C並經15分鐘添加NBS（67.50 g，379.3 mmol）在MeCN（500 mL）中之溶液。將反應混合物溫熱至rt並攪拌45分鐘。添加水（2 L）並將反應混合物攪拌30分鐘。將所得固體濾出並用水（400 mL）洗滌。將固體真空乾燥，以提供呈棕色固體之標題化合物（76 g，89%）。
1 HNMR (400 MHz, DMSO-d6, 30°C) 6.01 (2H, s), 7.12 (1H, d)；
m/zMH
+225
中間體 AT ： 5- 氯 -6- 氟 -1
H-
吡咯并 [3,2-
b]
吡啶 -2- 甲酸
將乙酸鈀（3.35 g，14.93 mmol）、三苯膦（3.92 g，14.93 mmol）、2-溴-6-氯-5-氟吡啶-3-胺（18.0 g，74.65 mmol）和丙酮酸（15.57 mL，224 mmol）置於具有1,4-二㗁𠮿（88 mL）的燒瓶中。添加三乙胺（45.80 mL，328.5 mmol）並將反應在氮氣下在100°C下加熱2.5小時。將反應混合物冷卻至rt並過濾以除去不需要的固體。將濾液用2 M NaOH（200 mL）稀釋並添加MTBE（200 mL）。然後將反應混合物劇烈攪拌並分離。有機相用2 M NaOH（100 mL）洗滌。將合併的鹼性水相用濃HCl（水溶液）小心酸化，並藉由過濾收集沈澱的棕色固體並乾燥。將深棕色固體懸浮於MeOH（90 mL）中並在rt下攪拌2小時。將固體過濾並真空乾燥，以提供呈米色固體之標題化合物（14.60 g，91%）。
1 HNMR (400 MHz, DMSO-d6, 30°C) 7.16 (1H, dd), 7.84 (1H, dd), 12.36 (1H, s), 13.46 (1H, s)；
m/zMH
+214。
中間體 AU ： 5- 氯 -6- 氟 -1
H-
吡咯并 [3,2-
b]
吡啶 -2- 甲酸甲酯
在rt下，將硫酸（3.08 mL，57.83 mmol）小心地逐滴添加到在MeOH（113 mL）中的5-氯-6-氟-1
H-吡咯并[3,2-
b]吡啶-2-甲酸（14.60 g，57.83 mmol）中。將反應混合物在回流下攪拌18小時。使反應混合物冷卻並真空除去溶劑。將飽和NaHCO
3（400 mL）小心地添加到殘餘物中並將所得沈澱濾出，用水洗滌並真空乾燥以提供呈棕色固體之標題化合物（14.20 g，107%）。
1 HNMR (400 MHz, DMSO-d6, 30°C) 3.91 (3H, s), 7.24 (1H, dd), 7.88 (1H, dd), 12.56 (1H, s)；
m/zMH
+229
中間體 AV ： 5- 氯 -6- 氟 -1-((2-( 三甲矽 ) 乙氧基 ) 甲基 )-1
H-
吡咯并 [3,2-b] 吡啶 -2- 甲酸甲酯
在5°C下，在氮氣下，將雙(三甲矽)醯胺鉀（1 M於THF中）（101 mL，100.9 mmol）經15分鐘逐滴添加到5-氯-6-氟-1
H-吡咯并[3,2-
b]吡啶-2-甲酸甲酯（21.74 g，77.60 mmol）和(2-(氯甲氧基)乙基)三甲基矽烷（18.83 mL，100.9 mmol）在THF（419 mL）中之溶液中。將反應混合物在5°C下攪拌30分鐘。添加雙(三甲矽)醯胺鉀（1 M於THF中）（15.52 mL，15.52 mmol）並將反應混合物在5°C下再攪拌30分鐘。添加(2-(氯甲氧基)乙基)三甲基矽烷（1.88 mL，10.09 mmol）並在5°C下再攪拌15分鐘。將反應混合物用飽和NH
4Cl（400 mL）淬滅並用EtOAc（400 mL）稀釋。將水相用EtOAc（250 mL）再萃取。將合併的有機相經MgSO
4乾燥，過濾並真空除去溶劑。將粗物質懸浮於庚烷（450 mL）中並攪拌5分鐘。濾出不需要的固體並用庚烷（50 mL）洗滌。真空除去溶劑，以提供呈棕色膠狀物的標題化合物（32.50 g，117%），其在靜置時固化。該膠狀物不經進一步純化直接用於下一步驟。
1 HNMR (400 MHz, DMSO-d6, 30°C) -0.13 (9H, s), 0.70 - 0.80 (2H, m), 3.38 - 3.51 (2H, m), 3.89 (3H, s), 5.95 (2H, s), 7.41 (1H, d), 8.40 - 8.54 (1H, m)；
m/zMH
+359
中間體 AW ： (5- 氯 -6- 氟 -1-((2-( 三甲矽 ) 乙氧基 ) 甲基 )-1
H-
吡咯并 [3,2-
b]
吡啶 -2- 基 ) 甲醇
在5°C下，經15分鐘將二異丁基氫化鋁（1 M於甲苯中）（170 mL，170.42 mmol）逐滴添加到5-氯-6-氟-1-((2-(三甲矽)乙氧基)甲基)-1
H-吡咯并[3,2-
b]吡啶-2-甲酸甲酯（27.80 g，77.47 mmol）在DCM（333 mL）中之攪拌溶液中。將反應混合物在rt下攪拌30分鐘。將反應混合物小心地傾倒入2 M NaOH（500 mL）中，用DCM（500 mL）稀釋並攪拌1小時。將有機相分離並且將水相用DCM（2 x 200 mL）萃取。將合併的有機物用MgSO
4乾燥，過濾並真空除去溶劑。將粗產物藉由急速二氧化矽層析法（洗脫梯度為庚烷中的0至40% EtOAc）進行純化。將純級分蒸發至乾燥，以提供呈淡橙色油狀物的標題化合物（17.60 g，68%），其在靜置時固化。
1 HNMR (400 MHz, DMSO-d6, 30°C) -0.10 (9H, s), 0.75 - 0.83 (2H, m), 3.36 - 3.56 (2H, m), 4.72 (2H, d), 5.50 (1H, t), 5.60 (2H, s), 6.57 (1H, d), 8.24 (1H, dd)；
m/zMH
+331
中間體 AX ： 5- 氯 -2-( 氯甲基 )-6- 氟 -1-((2-( 三甲矽 ) 乙氧基 ) 甲基 )-1
H-
吡咯并 [3,2-
b]
吡啶
在rt下，將亞硫醯氯（13.2 mL，181.4 mmol）小心地逐滴添加到在DCM（200 mL）中的(5-氯-6-氟-1-((2-(三甲矽)乙氧基)甲基)-1
H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲醇（20.0 g，60.45 mmol）中。將反應混合物在rt下攪拌1小時。然後緩慢添加飽和NaHCO
3（500 mL）。一旦氣體逸出停止，分離相並將水相用DCM（300 mL）再萃取。合併有機相，用鹽水（200 mL）洗滌，通過相分離濾紙並真空除去溶劑，以提供呈棕色結晶固體之標題化合物（19.2 g，91%）。
1 HNMR (400 MHz, DMSO-d6, 27°C) -0.10 (9H, s), 0.75 - 0.9 (2H, m), 3.43 - 3.53 (2H, m), 5.07 (2H, s), 5.66 (2H, s), 6.7 - 6.9 (1H, m), 8.32 (1H, dd)；
m/zMH
+349
中間體 AY ： 5- 氯 -2-( 溴甲基 )-6- 氟 -1-((2-( 三甲矽 ) 乙氧基 ) 甲基 )-1
H-
吡咯并 [3,2-
b]
吡啶
在rt下，將三溴化磷（2.57 mL，27.20 mmol）添加到在THF（30 mL）中的(5-氯-6-氟-1-((2-(三甲矽)乙氧基)甲基)-1
H-吡咯并[3,2-
b]吡啶-2-基)甲醇（3.00 g，9.07 mmol）中。將反應混合物在rt下攪拌1小時。將反應混合物用飽和NaHCO
3（150 mL）淬滅，並用EtOAc（3 x 125 mL）萃取。將有機相經Na
2SO
4乾燥，過濾並真空除去溶劑。將粗產物藉由急速二氧化矽層析法（洗脫梯度為石油醚（60
oC-90
oC）中的0至30% EtOAc）進行純化。將純級分蒸發至乾燥，以提供呈淡黃色固體之標題化合物（3.00 g，84%）。
1 HNMR (300 MHz, CDCl
3) -0.02 (9H, s), 0.84 - 1.01 (2H, m), 3.44 - 3.61 (2H, m), 4.74 (2H, s), 5.58 (2H, s), 6.73 - 6.79 (1H, m), 7.51 - 7.63 (1H, m)；
m/zMH
+395。
中間體 AZ ： 1
H-
吡咯并 [2,3-
b]
吡啶 -2- 甲酸甲酯
在rt下，將亞硫醯氯（11.25 mL，154.2 mmol）小心地逐滴添加到在甲醇（200 mL）中的1
H-吡咯并[2,3-
b]吡啶-2-甲酸（CAS號136818-50-3）（25.0 g，154.2 mmol）中。將反應混合物在60°C下攪拌18小時。使反應混合物冷卻並真空除去溶劑。將殘餘物用飽和NaHCO
3（250 mL）研磨。將所得沈澱濾出，用水（2 x 200 mL）洗滌，然後用醚（200 mL）洗滌並真空乾燥，以提供呈米色固體之標題化合物（24.3 g，90%）。
1 HNMR (400 MHz, DMSO-d6, 30°C) 3.89 (3H, s), 7.12 - 7.22 (2H, m), 8.12 (1H, dd), 8.42 (1H, dd), 12.48 (1H, s)；
m/zMH
+177
中間體 BA ： 2-( 甲氧基羰基 )-1
H-
吡咯并 [2,3-
b]
吡啶 7- 氧化物
將1
H-吡咯并[2,3-
b]吡啶-2-甲酸甲酯（24.30 g，137.93 mmol）懸浮於二乙醚（500 mL）中。添加3-氯過氧苯甲酸（61.80 g，275.86 mmol）並將反應混合物在rt下攪拌5小時。真空除去溶劑，並將固體在飽和NaHCO
3（200 mL）中研磨。濾出沈澱，用水洗滌並乾燥，以提供呈膏狀固體之標題化合物（20.23 g，76%）。
1 HNMR (400 MHz, DMSO-d6, 30°C) 3.87 (3H, s), 7.16 (1H, dd), 7.30 (1H, s), 7.75 (1H, dd), 8.31 (1H, dd) (NH在水訊息下丟失)；
m/zMH
+193。
中間體 BB ： 4- 溴 -1
H-
吡咯并 [2,3-
b]
吡啶 -2- 甲酸甲酯
將2-(甲氧基羰基)-1
H-吡咯并[2,3-
b]吡啶7-氧化物（20.0 g，104.1 mmol）和四丁基溴化銨（50.3 g，156.1 mmol）置於具有1,2-二甲氧基乙烷（75 mL）的燒瓶中並冷卻至0°C。緩慢添加甲磺酸酐（36.30 g，208.1 mmol）並將反應混合物在rt下攪拌3小時。真空除去溶劑，將殘餘物在冰上冷卻並用飽和NaHCO
3（40 mL）淬滅/研磨。將固體過濾，用水洗滌並乾燥，以提供呈橙色固體之標題化合物（22.80 g，86%）。
1 HNMR (400 MHz, DMSO-d6, 30°C) 3.91 (3H, s), 7.07 (1H, d), 7.48 (1H, d), 8.29 (1H, d), 12.95 (1H, s)；
m/zMH
+255
中間體 BC ： 4- 甲基 -1
H-
吡咯并 [2,3-
b]
吡啶 -2- 甲酸甲酯
將4-溴-1
H-吡咯并[2,3-
b]吡啶-2-甲酸甲酯（10.0 g，39.2 mmol）、2,4,6-三甲基-1,3,5,2,4,6-三氧雜三硼雜環己烷（borinane）（16.44 mL，117.6 mmol）和磷酸鉀（16.64 g，78.41 mmol）置於具有二㗁𠮿（100 mL）的燒瓶中。添加Pd 118（0.64 g，0.98 mmol）並將反應混合物加熱至100°C，持續2小時。使反應混合物冷卻，濾出固體且用EtOAc（2 x 100 mL）洗滌。合併濾液並真空除去溶劑。將殘餘物用EtOAc（100 mL）研磨，並濾出固體，用少量EtOAc（20 mL）洗滌並乾燥，以提供呈米色固體之標題化合物（5.58 g，74%）。
1 HNMR (400 MHz, DMSO-d6, 30°C) 2.48 - 2.51 (3H, m), 3.83 (3H, s), 6.92 (1H, dd), 7.20 (1H, s), 8.22 (1H, d), 12.34 (1H, s)；
m/zMH
+191。
中間體 BD ： 2-( 甲氧基羰基 )-4- 甲基 -1
H-
吡咯并 [2,3-
b]
吡啶 7- 氧化物
將4-甲基-1
H-吡咯并[2,3-
b]吡啶-2-甲酸甲酯（5.05 g，26.55 mmol）懸浮於二乙醚（100 mL）中。添加3-氯過氧苯甲酸（11.90 g，53.10 mmol）並將反應混合物在rt下攪拌2小時。真空除去溶劑並將固體在飽和NaHCO
3（50 mL）中研磨。濾出沈澱，用水洗滌並乾燥，以提供呈膏狀固體之標題化合物（4.64 g，85%）。
1 HNMR (400 MHz, DMSO-d6, 30°C) 2.57 (3H, s), 3.92 (3H, s), 7.03 (1H, dd), 7.41 (1H, s), 8.19 - 8.37 (1H, m) (NH在水峰下)；
m/zMH
+207。
中間體 BE ： 6- 氯 -4- 甲基 -1
H-
吡咯并 [2,3-
b]
吡啶 -2- 甲酸甲酯
將2-(甲氧基羰基)-4-甲基-1
H-吡咯并[2,3-
b]吡啶7-氧化物（4.35 g，21.10 mmol）懸浮於THF（80 mL）中並添加雙(三甲矽)胺（4.42 mL，21.10 mmol）。逐滴添加2,2,2-三氯乙醯氯（5.65 mL，50.63 mmol）並將反應混合物在rt下攪拌1小時。將反應混合物在EtOAc（200 mL）和飽和碳酸氫鈉溶液（200 mL）之間分配。將有機相通過相分離濾紙並真空除去溶劑。將粗產物藉由急速二氧化矽層析法（洗脫梯度為庚烷中的0至50% EtOAc）進行純化。將級分蒸發至乾燥，以提供呈白色固體之標題化合物（5.50 g，116%），其含有50%的三氯乙醯胺雜質。將粗化合物不經進一步純化即用於下一反應。
1 HNMR (400 MHz, DMSO-d6, 30°C) 2.55 (3H, d), 3.89 (3H, s), 7.08 (1H, d), 7.30 (1H, d), 12.66 (1H, s)；
m/zMH
+225。
中間體 BF ： 6- 氯 -4- 甲基 -1-((2-( 三甲矽 ) 乙氧基 ) 甲基 )-1
H-
吡咯并 [2,3-
b]
吡啶 -2- 甲酸甲酯
將6-氯-4-甲基-1
H-吡咯并[2,3-
b]吡啶-2-甲酸甲酯（5.00 g，22.26 mmol）置於具有DMF（25 mL）的燒瓶中。添加氫化鈉（60%於礦物油中）（1.33 g，33.39 mmol）並將反應混合物在rt下攪拌5分鐘。然後添加(2-(氯甲氧基)乙基)三甲基矽烷（5.12 mL，28.93 mmol）並將反應混合物在rt下攪拌1小時。將反應混合物在EtOAc（150 mL）與水（100 mL）之間分配。將有機相用水（3 x 100 mL）和鹽水（100 mL）洗滌，通過相分離濾紙並真空除去溶劑。將粗產物藉由急速二氧化矽層析法（洗脫梯度為庚烷中的0至50% EtOAc）進行純化。將純級分蒸發至乾燥，以提供呈無色油狀物的標題化合物（4.80 g，60%），其在靜置時結晶。
1 HNMR (400 MHz, DMSO-d6, 30°C) -0.14 (9H, s), 0.75 - 0.82 (2H, m), 2.57 (3H, d), 3.41 - 3.49 (2H, m), 3.88 (3H, s), 5.92 (2H, s), 7.19 (1H, d), 7.49 (1H, s)；
m/zMH
+未觀察到。
中間體 BG ： (6- 氯 -4- 甲基 -1-((2-( 三甲矽 ) 乙氧基 ) 甲基 )-1
H-
吡咯并 [2,3-
b]
吡啶 -2- 基 ) 甲醇
在rt下，將在甲苯（29.8 mL，29.75 mmol）中的二異丁基氫化鋁1 M逐滴添加到6-氯-4-甲基-1-((2-(三甲矽)乙氧基)甲基)-1
H-吡咯并[2,3-
b]吡啶-2-甲酸甲酯（4.80 g，13.52 mmol）在DCM（100 mL）中之攪拌溶液中。將反應混合物攪拌30分鐘，然後在2 M NaOH（50 mL）和DCM（100 mL）之間分配。分離有機相並用DCM（100 mL）萃取水相。將合併的有機物通過相分離濾紙並真空除去溶劑。將粗產物藉由急速二氧化矽層析法（洗脫梯度為庚烷中的0至40% EtOAc）進行純化。將純級分蒸發至乾燥，以提供呈黃色油狀物的標題化合物（3.30 g，74%）。
1 HNMR (400 MHz, DMSO-d6, 30°C) -0.11 (9H, s), 0.83 (2H, dd), 2.49 (3H, d), 3.42 - 3.51 (2H, m), 4.65 - 4.75 (2H, m), 5.38 (1H, t), 5.62 (2H, s), 6.55 (1H, s), 7.02 (1H, d)；
m/zMH
+327。
中間體 BH ： 6- 氯 -2-( 氯甲基 )-4- 甲基 -1-((2-( 三甲矽 ) 乙氧基 ) 甲基 )-1
H-
吡咯并 [2,3-
b]
吡啶
在rt下，將亞硫醯氯（0.67 mL，9.18 mmol）小心地逐滴添加到在DCM（20 mL）中的(6-氯-4-甲基-1-((2-(三甲矽)乙氧基)甲基)-1
H-吡咯并[2,3-
b]吡啶-2-基)甲醇（1.00 g，3.06 mmol）中。將反應混合物在rt下攪拌1小時。將反應混合物用飽和NaHCO
3淬滅，將有機相通過相分離器並真空除去溶劑。將粗產物藉由急速二氧化矽層析法（洗脫梯度為庚烷中的0至50% EtOAc）進行純化。將純級分蒸發至乾燥，以提供呈淡黃色油狀物的標題化合物（0.71 g，67%），其緩慢結晶，得到膏狀固體。
1 HNMR (400 MHz, DMSO-d6, 30°C) -0.11 (9H, s), 0.83 - 0.87 (2H, m), 2.51 (3H, s), 3.46 - 3.54 (2H, m), 5.04 (2H, s), 5.67 (2H, s), 6.82 (1H, s), 7.09 (1H, d)。
中間體 BI ： 7- 氯 -2-( 乙氧基羰基 )-1
H-
吡咯并 [3,2-
b]
吡啶 4- 氧化物
經5分鐘的時間段將3-氯過氧苯甲酸（5.76 g，33.39 mmol）添加到在DCM（120 mL）中的7-氯-1
H-吡咯并[3,2-
b]吡啶-2-甲酸乙酯（5.00 g，22.26 mmol）中。將反應混合物在rt下攪拌16小時。將反應混合物用DCM（50 mL）稀釋，用飽和Na
2SO
3（100 mL）、飽和NaHCO
3（100 mL）和飽和鹽水（100 mL）洗滌。真空除去溶劑。將粗產物藉由急速二氧化矽層析法（洗脫梯度為DCM中的0至10% MeOH）進行純化。將純級分蒸發至乾燥，以提供呈黃色固體之標題化合物（5.27 g，98%）。
1 HNMR (400 MHz, CDCl
3) 1.43 (3H, t), 4.41 - 4.51 (2H, m), 7.20 (1H, d), 7.61 (1H, s), 8.19 (1H, d), 9.94 (1H, s)；
m/zMH
+241
中間體 BJ ： 5- 溴 -7- 氯 -1
H-
吡咯并 [3,2-
b]
吡啶 -2- 甲酸乙酯
在rt下，將磷醯基三溴化物（12.56 g，43.80 mmol）添加到在THF（160 mL）中的7-氯-2-(乙氧基羰基)-1
H-吡咯并[3,2-
b]吡啶4-氧化物（5.27 g，21.90 mmol）中。將反應混合物在rt下攪拌16小時。將反應混合物用飽和NaHCO
3中和並用EtOAc（100 mL）和水（100 mL）稀釋。將水相用EtOAc（2 x 100 mL）萃取。合併有機物，經Na
2SO
4乾燥，過濾並真空除去溶劑。將粗產物藉由急速二氧化矽層析法（洗脫梯度為石油醚（60°C-90°C）中的0至25% EtOAc）進行純化。將純級分蒸發至乾燥，以提供呈白色固體之標題化合物（4.20 g，63%）。
1 HNMR (300 MHz, DMSO-d6) 1.34 (3H, t), 2.52 (1H, s), 4.31 - 4.44 (2H, m), 7.27 (1H, d), 7.69 (1H, s)；
m/zMH
+303
中間體 BK ： 5- 溴 -7- 氯 -1-((2-( 三甲矽 ) 乙氧基 ) 甲基 )-1
H-
吡咯并 [3,2-
b]
吡啶 -2- 甲酸乙酯
在0°C下，經5分鐘的時間段，將氫化鈉（60%於礦物油中）（0.719 g，17.99 mmol）添加到在THF（70 mL）中的5-溴-7-氯-1
H-吡咯并[3,2-
b]吡啶-2-甲酸乙酯（4.20 g，13.84 mmol）中。將反應混合物在rt下攪拌1小時。添加(2-(氯甲氧基)乙基)三甲基矽烷（0.60 mL，3.38 mmol）並將反應混合物攪拌16小時。將反應混合物用飽和NH
4Cl（20 mL）淬滅，並且用EtOAc（3 x 20 mL）萃取。將有機相經Na
2SO
4乾燥，過濾並真空除去溶劑。將粗產物藉由急速二氧化矽層析法（洗脫梯度為石油醚（60°C-90°C）中的0至12% EtOAc）進行純化。將純級分蒸發至乾燥，以提供呈無色油狀物的標題化合物（5.40 g，90%）。
1 HNMR (300 MHz, DMSO-d6) -0.16 (9H, s), 0.74 (2H, t), 1.34 (3H, t), 3.37 - 3.49 (2H, m), 4.30 - 4.46 (2H, m), 6.19 (2H, s), 7.42 (1H, s), 7.77 (1H, s)；
m/zMH
+433。
中間體 BL ： (5- 溴 -7- 氯 -1-((2-( 三甲矽 ) 乙氧基 ) 甲基 )-1
H-
吡咯并 [3,2-
b]
吡啶 -2- 基 ) 甲醇
在0°C下，將二異丁基氫化鋁（1 M於甲苯中）（20.75 mL，20.75 mmol）添加到在THF（20 mL）中的5-溴-7-氯-1-((2-(三甲矽)乙氧基)甲基)-1
H-吡咯并[3,2-
b]吡啶-2-甲酸乙酯（3.00 g，6.92 mmol）中。將所得溶液在rt下攪拌1小時。將反應混合物用飽和羅雪鹽（酒石酸鉀鈉四水合物）（15 mL）淬滅並用EtOAc（3 x 20 mL）萃取。將有機相經Na
2SO
4乾燥，過濾並真空除去溶劑，以提供呈黃色油狀物的標題化合物（2.60 g，96%）。
1 HNMR (300 MHz, DMSO-d6) -0.12 (9H, s), 0.78 (2H, t), 3.51 (2H, t), 4.74 (2H, d), 5.76 (2H, s), 6.58 - 6.66 (1H, m), 7.47 (1H, s)；
m/zMH
+391。
中間體 BM ： 5- 溴 -2-( 溴甲基 )-7- 氯 -1-((2-( 三甲矽 ) 乙氧基 ) 甲基 )-1
H-
吡咯并 [3,2-
b]
吡啶
在0°C下，將三溴化磷（0.65 mL，6.89 mmol）逐滴添加到在THF（40 mL）中的(5-溴-7-氯-1-((2-(三甲矽)乙氧基)甲基)-1
H-吡咯并[3,2-
b]吡啶-2-基)甲醇（2.25 g，5.74 mmol）中。將反應混合物在rt下攪拌2小時。將反應混合物用飽和NaHCO
3（20 mL）淬滅，並且用EtOAc（3 x 25 mL）萃取。將有機相經Na
2SO
4乾燥，過濾並真空除去溶劑。將粗產物藉由急速二氧化矽層析法（洗脫梯度為石油醚（60°C-90°C）中的0至10% EtOAc）進行純化。將純級分蒸發至乾燥，以提供呈無色油狀物的標題化合物（2.15 g，82%）。
1 HNMR (300 MHz, DMSO-d6) -0.12 (9H, s), 0.72 - 0.85 (2H, m), 3.54 (2H, t), 5.01 (2H, s), 5.80 (2H, s), 6.91 (1H, s), 7.55 (1H, s)；
m/zMH
+455。
中間體 BN ： 5- 氯 -1- 甲苯磺醯基 -1
H-
吡咯并 [3,2-
b]
吡啶 -2- 甲酸乙酯
在0°C下，將氫化鈉（60%於礦物油中）（0.21 g，5.34 mmol）添加到在DMF（12 mL）中的5-氯-1
H-吡咯并[3,2-
b]吡啶-2-甲酸乙酯（1.00 g，4.45 mmol）中。30分鐘後，添加4-甲苯磺醯氯（1.02 g，5.34 mmol）。將該反應混合物在rt下攪拌3小時。將反應混合物用NH
4Cl淬滅並真空除去溶劑。將粗產物藉由急速二氧化矽層析法（洗脫梯度為石油醚（60°C-90°C）中的0至30% EtOAc）進行純化。將純級分蒸發至乾燥，以提供呈白色固體之標題化合物（0.90 g，53%）。
1 HNMR (300 MHz,DMSO-d6) 1.33 (3H, t), 2.38 (3H, s), 4.30 - 4.46 (2H, m), 7.42 - 7.53 (3H, m), 7.58 (1H, d), 7.91 - 8.02 (2H, m), 8.47 - 8.56 (1H, m)；
m/zMH
+379
中間體 BO ： (5- 氯 -1- 甲苯磺醯基 -1
H-
吡咯并 [3,2-
b]
吡啶 -2- 基 ) 甲醇
將5-氯-1-甲苯磺醯基-1
H-吡咯并[3,2-
b]吡啶-2-甲酸乙酯（0.90 g，2.38 mmol）添加到在THF（6 mL）中的二異丁基氫化鋁（1 M於甲苯中）（7.13 mL，7.13 mmol）中。將反應混合物在rt下攪拌2小時。將反應混合物用飽和鹽水（100 mL）淬滅，並且用EtOAc（3 x 50 mL）萃取。將有機相經Na
2SO
4乾燥，過濾並真空除去溶劑，以提供呈白色固體之標題化合物（0.78 g，97%）。
1 HNMR (300 MHz,DMSO-d6) 2.34 (3H, s), 4.90 (2H, d), 5.75 (1H, t), 6.78 - 6.85 (1H, m), 7.34 - 7.46 (3H, m), 7.83 - 7.94 (2H, m), 8.37 - 8.46 (1H, m)；
m/zMH
+337。
中間體 BP ： 2-( 溴甲基 )-5- 氯 -1- 甲苯磺醯基 -1
H-
吡咯并 [3,2-
b]
吡啶
將三溴化磷（0.33 mL，3.47 mmol）添加到在THF（12 mL）中的(5-氯-1-甲苯磺醯基-1
H-吡咯并[3,2-
b]吡啶-2-基)甲醇（780 mg，2.32 mmol）中。將反應混合物在rt下攪拌1小時。將反應混合物傾倒入飽和NaHCO
3（25 mL）中，並用EtOAc（3 x 15 mL）萃取。將有機相經Na
2SO
4乾燥，過濾並真空除去溶劑。將粗產物藉由急速矽膠層析法（洗脫梯度為EtOAc中0至20%石油醚）進行純化。將純級分蒸發至乾燥，以提供呈白色固體之標題化合物（0.76 g，82%）。
1 HNMR (300 MHz,DMSO-d6) 2.34 (3H, s), 5.19 (2H, s), 7.21 (1H, d), 7.35 - 7.44 (2H, m), 7.47 (1H, d), 7.86 - 7.97 (2H, m), 8.37 - 8.50 (1H, m)；
m/zMH
+399
中間體 BQ ： (
S)-1-
烯丙基 -2-((5- 氯 -6- 氟 -1-((2-( 三甲矽 ) 乙氧基 ) 甲基 )-1
H-
吡咯并 [3,2-
b]
吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-5- 氟 -3- 側氧基異吲哚啉 -1- 甲酸甲酯
將(
S)-1-烯丙基-5-氟-3-側氧基異吲哚啉-1-甲酸甲酯（11.80 g，47.34 mmol）和5-氯-2-(氯甲基)-6-氟-1-((2-(三甲矽)乙氧基)甲基)-1
H-吡咯并[3,2-
b]吡啶（16.9 g，48.3 mmol）置於具有無水DMF（60 mL）的燒瓶中。添加碳酸銫（38.60 g，118.4 mmol）並將反應混合物在60°C下攪拌2小時。將反應混合物冷卻並在水（300 mL）和EtOAc（300 mL）之間分配。將水相用EtOAc（200 mL）再萃取。合併有機相，用水（3 x 200 mL）、鹽水（200 mL）洗滌，通過相分離濾紙並真空除去溶劑。將粗產物藉由急速二氧化矽層析法（洗脫梯度為庚烷中的0至100% EtOAc）進行純化。將純級分蒸發至乾燥，以提供呈黃色膠狀物的標題化合物（22.2 g，83%），其緩慢固化/結晶，得到黃色固體。
1 HNMR (400 MHz, DMSO-d6, 27°C) -0.09 (9H, s), 0.79 - 0.88 (2H, m), 3.03 (3H, s), 3.16 - 3.29 (2H, m), 3.46 - 3.60 (2H, m), 4.73 (1H, d), 4.89 (1H, dd), 4.94 - 5.10 (2H, m), 5.26 (1H, d), 5.59 (1H, d), 5.68 (1H, d), 6.76 (1H, s), 7.49 - 7.56 (1H, m), 7.58 - 7.68 (2H, m), 8.25 (1H, dd)；
m/zMH
+562
中間體 BR ： (
S)-1-
烯丙基 -2-((5-(( 三級丁氧基羰基 ) 胺基 )-6- 氟 -1-((2-( 三甲矽 ) 乙氧基 ) 甲基 )-1
H-
吡咯并 [3,2-
b]
吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-5- 氟 -3- 側氧基異吲哚啉 -1- 甲酸甲酯
將(
S)-1-烯丙基-2-((5-氯-6-氟-1-((2-(三甲矽)乙氧基)甲基)-1
H-吡咯并[3,2-
b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-3-側氧基異吲哚啉-1-甲酸甲酯（15 g，26.69 mmol）、碳酸銫（21.74 g，66.72 mmol）、BrettPhos Pd G3（2.42 g，2.67 mmol）、二環己基(2',4',6'-三異丙基-3,6-二甲氧基-[1,1'-聯苯基]-2-基)磷烷（1.43 g，2.67 mmol）和胺基甲酸三級丁酯（6.25 g，53.37 mmol）置於具有脫氣的2-甲基四氫呋喃（150 mL）的燒瓶中。將氮氣鼓泡通過反應混合物10分鐘，然後將反應混合物回流3小時。將反應混合物冷卻，用水（400 mL）稀釋並用EtOAc（2 x 300 mL）萃取。將合併的有機相用飽和鹽水（200 mL）洗滌，通過相分離濾紙並真空除去溶劑。將粗產物藉由急速二氧化矽層析法（洗脫梯度為庚烷中的0至50% EtOAc）進行純化。將純級分蒸發至乾燥，以提供呈淡黃色泡沫的標題化合物（11.68 g，68%）。
1 HNMR (400 MHz, DMSO-d6, 27°C) -0.08 (9H, s), 0.82 - 0.86 (2H, m), 1.42 (9H, s), 2.99 (3H, s), 3.15 - 3.30 (2H, m), 3.52 (2H, dtd), 4.71 (1H, d), 4.88 (1H, dd), 4.94 - 5.10 (2H, m), 5.26 (1H, d), 5.55 (1H, d), 5.64 (1H, d), 6.69 (1H, s), 7.46 - 7.56 (1H, m), 7.57 - 7.66 (2H, m), 7.99 (1H, d), 9.18 (1H, s)；
m/zMH
+643
中間體 BS ： (
S)-2-((5-((
三級丁氧基羰基 ) 胺基 )-6- 氟 -1-((2-( 三甲矽 ) 乙氧基 ) 甲基 )-1
H-
吡咯并 [3,2-
b]
吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-5- 氟 -3- 側氧基 -1-(2- 側氧基乙基 ) 異吲哚啉 -1- 甲酸甲酯
向(
S)-1-烯丙基-2-((5-((三級丁氧基羰基)胺基)-6-氟-1-((2-(三甲矽)乙氧基)甲基)-1
H-吡咯并[3,2-
b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-3-側氧基異吲哚啉-1-甲酸甲酯（11.50 g，17.89 mmol）在1,4-二㗁𠮿（240 mL）和水（60 mL）中之溶液中添加氧化鋨（VIII）（4%水溶液）（1.14 mL，0.18 mmol）、高碘酸鈉（9.57 g，44.73 mmol）和2,6-二甲基吡啶（4.17 mL，35.78 mmol）。將該反應混合物在rt下攪拌18小時。將反應混合物在DCM（200 mL）與水（100 mL）之間分配。將水相用DCM（100 mL）再萃取，合併有機相，通過相分離濾紙並真空除去溶劑。將粗產物藉由急速二氧化矽層析法（洗脫梯度為庚烷中的0至50% EtOAc）進行純化。將純級分蒸發至乾燥，以提供呈米色泡沫的標題化合物（8.70 mg，75%）。
1 HNMR (400 MHz, DMSO-d6, 27°C) -0.07 (9H, s), 0.82 (2H, ddd), 1.42 (9H, s), 3.25 (3H, s), 3.46 - 3.54 (2H, m), 3.67 (2H, s), 4.92 (1H, d), 5.06 (1H, d), 5.52 (1H, d), 5.61 (1H, d), 6.57 (1H, s), 7.48 - 7.57 (1H, m), 7.64 (1H, dd), 7.68 (1H, dd), 8.00 (1H, d), 9.16 (1H, s), 9.25 (1H, s)；
m/zMH
+645
（通用方法 A ）： 實例 1 ： (
S)-2-((5-
胺基 -6- 氟 -1
H-
吡咯并 [3,2-
b]
吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-5- 氟 -1'-(4- 氟苄基 ) 螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮 步驟 1 ； (
S)-5-
氟 -1'-(4- 氟苄基 )-2-(4- 甲氧基苄基 ) 螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮
將
(S)-5-氟-2-(4-甲氧基苄基)-3-側氧基-1-(2-側氧基乙基)異吲哚啉-1-甲酸甲酯（45 g，121.2 mmol）和4-氟苄胺（22.75 g，181.8 mmol）置於具有1,2-二氯乙烷（600 mL）的燒瓶中並攪拌1小時。將反應混合物置於冰浴中並添加乙酸（13.87 mL，242.4 mmol），然後添加三乙醯氧基硼氫化鈉（51.4 g，242.4 mmol）。將該反應混合物在rt下攪拌18小時。將反應混合物用2 M NaOH中和，用水（200 mL）稀釋，並用DCM（2 x 200 mL）萃取。將合併的有機相通過相分離濾紙並真空除去溶劑，以提供呈淡黃色油狀物的標題化合物。在下一反應中使用粗製品，假定100%產率。
m/zMH
+449
步驟 2 ； (
S)-5-
氟 -1'-(4- 氟苄基 ) 螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮
將(
S)-5-氟-1'-(4-氟苄基)-2-(4-甲氧基苄基)螺[異吲哚啉-1,3'-吡咯啶]-2',3-二酮（54.30 g，121.08 mmol）置於具有MeCN（500 mL）和水（250 mL）的燒瓶中。添加硝酸鈰(IV)銨（199.0 g，363.2 mmol）並將反應混合物在rt下攪拌1小時。將反應混合物在DCM（500 mL）和水（500 mL）之間分配。將有機相用水（200 mL）和鹽水（200 mL）洗滌，通過相分離濾紙並真空除去溶劑。將粗產物藉由急速二氧化矽層析法（洗脫梯度為庚烷中的0至100%（10%MeOH於EtOAc中））進行純化。將純級分蒸發至乾燥，以提供呈膏狀固體之標題化合物（30.50 g，77%）。
1 HNMR (400 MHz, DMSO-d6, 30°C) 2.37 - 2.44 (1H, m), 2.45 - 2.49 (1H, m), 3.48 (1H, ddd), 3.60 (1H, dt), 4.49 (2H, s), 7.19 - 7.25 (2H, m), 7.32 - 7.37 (2H, m), 7.46 (3H, d), 9.11 (1H, s)；
m/zMH
+329
步驟 3 ； (
S)-2-((5-
氯 -6- 氟 -1-((2-( 三甲矽 ) 乙氧基 ) 甲基 )-1
H-
吡咯并 [3,2-
b]
吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-5- 氟 -1'-(4- 氟苄基 ) 螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮
將(
S)-5-氟-1'-(4-氟苄基)螺[異吲哚啉-1,3'-吡咯啶]-2',3-二酮（27 g，82.24 mmol）和5-氯-2-(氯甲基)-6-氟-1-((2-(三甲矽)乙氧基)甲基)-1
H-吡咯并[3,2-
b]吡啶（30.20 g，86.35 mmol）置於具有無水DMF（120 mL）的燒瓶中。添加碳酸銫（67.00 g，205.6 mmol）並將反應混合物在50°C下攪拌1小時。將反應混合物在水（500 mL）和EtOAc（500 mL）之間分配並將水相用EtOAc（250 mL）再萃取。合併有機相，用水（3 x 250 mL）、鹽水（200 mL）洗滌，通過相分離濾紙並真空除去溶劑。將殘餘物用二乙醚（200 mL）研磨，並將所得固體過濾，用醚洗滌並乾燥，以提供呈膏狀固體之標題化合物（42.20 g，80%）。
1 HNMR (400 MHz, DMSO-d6, 30°C) -0.13 (9H, s), 0.55 - 0.80 (2H, m), 2.32 - 2.41 (1H, m), 2.52 (1H, d), 3.30 - 3.38 (1H, m), 3.41 - 3.51 (2H, m), 3.57 - 3.69 (1H, m), 4.22 - 4.36 (2H, m), 4.75 (1H, d), 5.11 (1H, d), 5.53 (1H, d), 5.61 (1H, d), 6.53 (1H, s), 7.13 - 7.23 (4H, m), 7.45 - 7.54 (2H, m), 7.57 - 7.64 (1H, m), 8.28 (1H, dd)；
m/zMH
+641
步驟 4 ； (
S)-2-((5-((
二苯基亞甲基 ) 胺基 )-6- 氟 -1-((2-( 三甲矽 ) 乙氧基 ) 甲基 )-1
H-
吡咯并 [3,2-
b]
吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-5- 氟 -1'-(4- 氟苄基 ) 螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮
將(
S)-2-((5-氯-6-氟-1-((2-(三甲矽)乙氧基)甲基)-1
H-吡咯并[3,2-
b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1'-(4-氟苄基)螺[異吲哚啉-1,3'-吡咯啶]-2',3-二酮（41.80 g，65.19 mmol）、二苯基甲亞胺（14.18 g，78.23 mmol）和2-甲基丙-2-醇鈉（12.53 g，130.4 mmol）置於具有甲苯（300 mL）的燒瓶中，並藉由使氮氣鼓泡通過混合物10分鐘使反應混合物脫氣。添加tBuXPhos（2.77 g，6.52 mmol）和三(二苯亞甲基丙酮)二鈀(0)（2.99 g，3.26 mmol），然後將反應混合物在65°C下攪拌30分鐘。使反應混合物冷卻並在EtOAc（600 mL）和水（600 mL）之間分配。將有機相用鹽水（200 mL）洗滌，通過相分離濾紙並真空除去溶劑。將粗產物藉由急速二氧化矽層析法（洗脫梯度為庚烷中的0至100% EtOAc）進行純化。將純級分蒸發至乾燥，以提供呈黃色固體之標題化合物（49.50 g，97%）。
1 HNMR (400 MHz, DMSO-d6, 30°C) -0.15 (9H, s), 0.57 - 0.76 (2H, m), 2.29 - 2.39 (1H, m), 2.39 - 2.48 (1H, m), 3.26 - 3.29 (1H, m), 3.34 - 3.45 (2H, m), 3.53 - 3.66 (1H, m), 4.24 (2H, s), 4.67 (1H, d), 5.04 (1H, d), 5.44 (2H, q), 6.32 (1H, s), 7.11 (2H, dd), 7.17 - 7.26 (7H, m), 7.43 - 7.54 (4H, m), 7.55 - 7.61 (2H, m), 7.68 - 7.76 (2H, m), 7.81 (1H, d)；
m/zMH
+786
步驟 5 ； (
S)-2-((5-
胺基 -6- 氟 -1
H-
吡咯并 [3,2-
b]
吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-5- 氟 -1'-(4- 氟苄基 ) 螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮
將(
S)-2-((5-((二苯基亞甲基)胺基)-6-氟-1-((2-(三甲矽)乙氧基)甲基)-1
H-吡咯并[3,2-
b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1'-(4-氟苄基)螺[異吲哚啉-1,3'-吡咯啶]-2',3-二酮（49.50 g，62.98 mmol）置於具有2,2,2-三氟乙酸（96 mL，1259.63 mmol）的燒瓶中。添加0.50 mL水並將反應混合物在40°C下攪拌4小時。真空除去2,2,2-三氟乙酸並將殘餘物溶於MeCN（75 mL）中。添加氫氧化銨（28%-30%水溶液）（73.60 mL，1889.45 mmol）且將反應混合物在40°C下攪拌4小時，然後在rt下攪拌過夜。濾出所得固體並用MeCN（100 mL）洗滌，以提供約20 g所希望的化合物。將濾液減少至約200 mL並藉由逆相層析法（Interchim C18-HP快速柱，2 x 415 g，100 mL載入溶液/運行）進行純化，使用水（含有按體積計1% NH
4OH（28%-30% H
2O溶液））和MeCN的極性遞減的混合物作為洗脫液（30%-60%梯度）。合併含有所希望的化合物的級分並添加先前獲得的固體（約20 g）。將漿液攪拌1小時，然後真空除去MeCN，導致形成淡黃色沈澱。濾出固體並真空乾燥2小時。然後將固體懸浮在MeCN（150 mL）中，並將漿液溫和回流2小時，然後使其冷卻過夜。濾出固體並真空乾燥，以提供呈膏狀結晶固體之標題化合物（19.54 g，63%）。
1 HNMR (400 MHz, DMSO-d6, 30°C) 2.34 - 2.40 (2H, m), 3.36 (1H, ddd), 3.60 (1H, dt), 4.29 (1H, d), 4.39 - 4.52 (2H, m), 5.03 (1H, d), 5.48 (2H, s), 6.02 (1H, d), 7.18 - 7.27 (2H, m), 7.27 - 7.39 (3H, m), 7.46 - 7.55 (2H, m), 7.59 (1H, ddd), 10.69 (1H, d)；
m/zMH
+492
通用方法 B ： 實例 2 ： (
S)-2-((5-
胺基 -6- 氟 -1
H-
吡咯并 [3,2-
b]
吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-1'-( 丁 -2- 炔 -1- 基 )-5- 氟螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮 步驟 1 ； (
S)-(2-((1'-(
丁 -2- 炔 -1- 基 )-5- 氟 -2',3- 二側氧基螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2- 基 ) 甲基 )-6- 氟 -1-((2-( 三甲矽 ) 乙氧基 ) 甲基 )-1
H-
吡咯并 [3,2-
b]
吡啶 -5- 基 ) 胺基甲酸三級丁酯
將(
S)-2-((5-((三級丁氧基羰基)胺基)-6-氟-1-((2-(三甲矽)乙氧基)甲基)-1
H-吡咯并[3,2-
b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-3-側氧基-1-(2-側氧基乙基)異吲哚啉-1-甲酸甲酯（9.50 g，14.73 mmol）和丁-2-炔-1-胺鹽酸鹽（2.33 g，22.10 mmol）置於具有1,2-二氯乙烷（100 mL）的燒瓶中。添加三乙胺（3.08 mL，22.10 mmol）並將反應混合物在rt下攪拌30分鐘。添加三乙醯氧基硼氫化鈉（6.25 g，29.47 mmol）並將反應混合物在rt下攪拌過夜。將反應混合物用DCM（250 mL）稀釋並用飽和NaHCO
3（100 mL）、水（100 mL）和鹽水（100 mL）洗滌。將有機相通過相分離濾紙並真空除去溶劑，以提供標題化合物。粗製化合物不經進一步純化即用於下一反應，假定100%產率。
m/zMH
+666。
步驟 2 ； (
S)-2-((5-
胺基 -6- 氟 -1
H-
吡咯并 [3,2-
b]
吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-1'-( 丁 -2- 炔 -1- 基 )-5- 氟螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮
將(
S)-(2-((1'-(丁-2-炔-1-基)-5-氟-2',3-二側氧基螺[異吲哚啉-1,3'-吡咯啶]-2-基)甲基)-6-氟-1-((2-(三甲矽)乙氧基)甲基)-1
H-吡咯并[3,2-
b]吡啶-5-基)胺基甲酸三級丁酯（9.81 g，14.73 mmol）置於具有2,2,2-三氟乙酸（22.55 mL，294.7 mmol）的燒瓶中並將溶液在rt下攪拌2小時。真空除去2,2,2-三氟乙酸並將殘餘物溶於MeCN（20 mL）中。添加氫氧化銨（28%-30%水溶液）（22.95 mL，589.4 mmol）並將反應混合物在40°C下攪拌2小時。將粗產物藉由逆相層析法（Interchim C18-HP快速柱，415 g）進行純化，使用水（含有按體積計1% NH
4OH（28%-30% H
2O溶液））和MeCN的極性遞減的混合物作為洗脫液（30%-60%梯度）。將含有所希望的化合物的級分合併，真空除去MeCN，將所得固體濾出並乾燥，以提供呈膏狀結晶固體之標題化合物（3.74 g，58%）。
1 HNMR (400 MHz, DMSO-d6, 27°C) 1.88 (3H, t), 2.36 - 2.44 (2H, m), 3.54 (1H, ddd), 3.76 (1H, dt), 4.08 (2H, qq), 4.24 (1H, d), 5.03 (1H, d), 5.49 (2H, s), 6.11 (1H, d), 7.36 (1H, dd), 7.49 - 7.64 (3H, m), 10.69 (1H, d)；
m/zMH
+436
通用方法 C ： 實例 3 ： (
S)-2-((5-
胺基 -6- 氟 -1
H-
吡咯并 [3,2-
b]
吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-5- 氟 -1'-( 丙 -2- 炔 -1- 基 ) 螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮 步驟 1 ； (
S)-(6-
氟 -2-((5- 氟 -2',3- 二側氧基 -1'-( 丙 -2- 炔 -1- 基 ) 螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2- 基 ) 甲基 )-1-((2-( 三甲矽 ) 乙氧基 ) 甲基 )-1
H-
吡咯并 [3,2-
b]
吡啶 -5- 基 ) 胺基甲酸三級丁酯
將丙-2-炔-1-胺（0.10 g，1.87 mmol）添加到在1,2-二氯乙烷（5 mL）中的(
S)-2-((5-((三級丁氧基羰基)胺基)-6-氟-1-((2-(三甲矽)乙氧基)甲基)-1
H-吡咯并[3,2-
b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-3-側氧基-1-(2-側氧基乙基)異吲哚啉-1-甲酸甲酯（0.40 g，0.62 mmol）中並在rt下攪拌1小時。然後添加三乙醯氧基硼氫化鈉（0.40 g，1.87 mmol）並且將反應混合物在rt下攪拌16小時。將反應混合物用水（20 mL）淬滅，並且用EtOAc（3 x 25 mL）萃取。將合併的有機物經Na
2SO
4乾燥，過濾並真空除去溶劑。將粗產物藉由急速二氧化矽層析法（洗脫梯度為石油醚（60°C-90°C）中的0至50% EtOAc）進行純化。將純級分蒸發至乾燥，以提供呈黃色固體之標題化合物（0.37 g，90%）。
1 HNMR (400 MHz, DMSO-d6) 0.12 (9H, s), 0.61 - 0.78 (2H, m), 1.43 (9H, s), 2.36 - 2.48 (2H, m), 3.37 - 3.47 (2H, m), 3.48 - 3.56 (1H, m), 3.78 (1H, q), 3.99 (2H, d), 4.62 (1H, d), 5.17 (1H, d), 5.44 - 5.63 (2H, m), 5.77 (1H, s), 6.55 (1H, s), 7.43 - 7.69 (3H, m), 8.03 (1H, d), 9.18 (1H, s)；
m/zMH
+652
步驟 2 ； (
S)-2-((5-
胺基 -6- 氟 -1
H-
吡咯并 [3,2-
b]
吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-5- 氟 -1'-( 丙 -2- 炔 -1- 基 ) 螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮
將2,2,2-三氟乙酸（3.00 mL）添加到在DCM（3 mL）中的(
S)-(6-氟-2-((5-氟-2',3-二側氧基-1'-(丙-2-炔-1-基)螺[異吲哚啉-1,3'-吡咯啶]-2-基)甲基)-1-((2-(三甲矽)乙氧基)甲基)-1
H-吡咯并[3,2-
b]吡啶-5-基)胺基甲酸三級丁酯（50 mg，0.08 mmol）中。將反應混合物在rt下攪拌1小時。真空除去溶劑。將粗產物藉由離子交換層析法（使用SCX柱）進行純化。使用7 M NH
3/MeOH將所希望的產物從柱上洗脫，將純級分蒸發至乾燥，以提供粗產物。將粗產物藉由快速C18-急速層析法（洗脫梯度為水（0.1% NH
4HCO
3）中的0至100% MeCN）進行純化。將級分蒸發至乾燥，以提供粗產物。將產物進一步藉由製備型HPLC進行純化。將含有所希望的化合物的級分蒸發至乾燥，以提供呈白色固體之標題化合物（15 mg，46%）。
1 HNMR (300 MHz, DMSO-d6) 2.34 - 2.43 (2H, m), 3.38 (1H, m), 3.47 - 3.58 (1H, m), 3.70 - 3.81 (1H, m), 4.07 - 4.26 (3H, m), 5.00 (1H, d), 5.49 (2H, s), 6.09 (1H, s), 7.29 - 7.40 (1H, m), 7.45 - 7.62 (3H, m), 10.68 (1H, s)；
m/zMH
+422
通用方法 D ： 實例 4 ： (
S)-2-((5-
胺基 -6- 氟 -1
H-
吡咯并 [3,2-
b]
吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-5- 氟 -1'-(3-(1- 甲基 -1
H-
吡唑 -4- 基 ) 丙 -2- 炔 -1- 基 ) 螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮
將3-(1-甲基-1
H-吡唑-4-基)丙-2-炔-1-胺（42 mg，0.31 mmol）添加在1,2-二氯乙烷（2 mL）中的(
S)-2-((5-((三級丁氧基羰基)胺基)-6-氟-1-((2-(三甲矽)乙氧基)甲基)-1
H-吡咯并[3,2-
b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-3-側氧基-1-(2-側氧基乙基)異吲哚啉-1-甲酸甲酯（100 mg，0.16 mmol）中並在rt下攪拌1小時。添加三乙醯氧基硼氫化鈉（66 mg，0.31 mmol），並且將反應混合物在40°C下攪拌16小時。將反應混合物冷卻，添加2,2,2-三氟乙酸（2.00 mL）並將反應混合物在rt下攪拌1小時。將粗產物藉由離子交換層析法（使用SCX柱）進行純化。將所希望的產物使用7 M NH
3/MeOH從柱上洗脫並且將級分蒸發至乾燥。將產物進一步藉由製備型HPLC進行純化。將含有所希望的化合物的級分蒸發至乾燥，以提供呈白色固體之標題化合物（30 mg，38%）。
1 HNMR (400 MHz, DMSO-d6) 2.35 - 2.45 (1H, m), 2.51 - 2.68 (1H, m), 3.52 - 3.64 (1H, m), 3.82 (4H, d), 4.19 - 4.41 (3H, m), 5.04 (1H, d), 5.51 (2H, s), 6.10 (1H, d), 7.35 (1H, d), 7.47 - 7.56 (1H, m), 7.56 - 7.63 (2H, m), 7.65 (1H, s), 8.04 (1H, s), 10.70 (1H, d)；
m/zMH
+502
通用方法 E ： 實例 5 ： (
S)-4-((2-((5-
胺基 -6- 氟 -1
H-
吡咯并 [3,2-
b]
吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-5- 氟 -2',3- 二側氧基螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-1'- 基 ) 甲基 )-2- 氟苯甲腈
在rt下，將4-(胺基甲基)-2-氟苯甲腈鹽酸鹽（58 mg，0.31 mmol）和乙酸鈉（25 mg，0.31 mmol）添加到在1,2-二氯乙烷（1.50 mL）中的(
S)-2-((5-((三級丁氧基羰基)胺基)-6-氟-1-((2-(三甲矽)乙氧基)甲基)-1
H-吡咯并[3,2-
b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-3-側氧基-1-(2-側氧基乙基)異吲哚啉-1-甲酸甲酯（100 mg，0.16 mmol）中。1小時後，添加三乙醯氧基硼氫化鈉（66 mg，0.31 mmol）並將反應混合物在rt下攪拌16小時。添加2,2,2-三氟乙酸（1.50 mL）並將反應混合物在rt下攪拌1小時。在減壓下除去溶劑並將粗產物藉由離子交換層析法（使用SCX柱）進行純化。使用7 M NH
3/MeOH將所希望的產物從柱上洗脫並將級分蒸發至乾燥，以提供粗產物。將粗產物藉由製備型HPLC進行純化。將含有所希望的化合物的級分蒸發至乾燥，以提供呈白色固體之標題化合物（49 mg，61%）。
1 HNMR (400 MHz, DMSO-d6) 2.35 - 2.50 (2H, m), 3.44 (1H, td), 3.65 - 3.76 (1H, m), 4.35 (1H, d), 4.53 (1H, d), 4.59 (1H, d), 5.01 (1H, d), 5.51 (2H, s), 6.07 (1H, d), 7.28 (1H, dd), 7.36 (1H, d), 7.44 (1H, dd), 7.52 (1H, td), 7.57 - 7.65 (2H, m), 7.95 (1H, dd), 10.71 (1H, d)；
m/zMH
+517
實例 6 ： (
S)-1'-(3-(2H-1,2,3-
三唑 -2- 基 ) 苄基 )-2-((5- 胺基 -6- 氟 -1
H-
吡咯并 [3,2-
b]
吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-5- 氟螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮
根據
通用方法 E，使用(
S)-2-((5-((三級丁氧基羰基)胺基)-6-氟-1-((2-(三甲矽)乙氧基)甲基)-1
H-吡咯并[3,2-
b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-3-側氧基-1-(2-側氧基乙基)異吲哚啉-1-甲酸甲酯和3-(2
H-1,2,3-三唑-2-基)苄胺鹽酸鹽製備標題化合物（27 mg，32%，白色固體）。
1 HNMR (400 MHz, DMSO-d6) 2.39 (2H, t), 3.43 (1H, dt), 3.67 (1H, dt), 4.30 (1H, d), 4.55 (1H, d), 4.66 (1H, d), 5.09 (1H, d), 5.51 (2H, s), 6.03 (1H, d), 7.30 - 7.38 (2H, m), 7.49 (1H, td), 7.54 - 7.65 (3H, m), 7.95 (1H, t), 8.01 (1H, dt), 8.17 (2H, s), 10.72 (1H, d)；
m/zMH
+541
實例 7 ： (
S)-2-((5-
胺基 -6- 氟 -1
H-
吡咯并 [3,2-
b]
吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-1'-(2,5- 二氟苄基 )-5- 氟螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮
根據
通用方法 D，使用(
S)-2-((5-((三級丁氧基羰基)胺基)-6-氟-1-((2-(三甲矽)乙氧基)甲基)-1
H-吡咯并[3,2-
b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-3-側氧基-1-(2-側氧基乙基)異吲哚啉-1-甲酸甲酯和2,5-二氟苄胺製備標題化合物（33 mg，42%，淡黃色固體）。
1 HNMR (400 MHz, DMSO) 2.39 (2H, t), 3.36 - 3.46 (1H, m), 3.60 - 3.71 (1H, m), 4.25 (1H, d), 4.47 (1H, d), 4.56 (1H, d), 5.05 (1H, d), 5.51 (2H, s), 6.03 (1H, d), 7.15 - 7.24 (1H, m), 7.21 - 7.32 (1H, m), 7.29 - 7.39 (2H, m), 7.47 - 7.62 (3H, m), 10.71 (1H, d)；
m/zMH
+510
實例 8 ： (
S)-2-((5-
胺基 -6- 氟 -1
H-
吡咯并 [3,2-
b]
吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-1'-(2,2- 二氟乙基 )-5- 氟螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮 步驟 1 ； (
S)-(2-((1'-(2,2-
二氟乙基 )-5- 氟 -2',3- 二側氧基螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2- 基 ) 甲基 )-6- 氟 -1-((2-( 三甲矽 ) 乙氧基 ) 甲基 )-1
H-
吡咯并 [3,2-
b]
吡啶 -5- 基 ) 胺基甲酸三級丁酯
在rt下，經1小時的時間段，將三乙醯氧基硼氫化鈉（3.94 g，18.61 mmol）添加到在1,2-二氯乙烷（50 mL）中的(
S)-2-((5-((三級丁氧基羰基)胺基)-6-氟-1-((2-(三甲矽)乙氧基)甲基)-1
H-吡咯并[3,2-
b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-3-側氧基-1-(2-側氧基乙基)異吲哚啉-1-甲酸甲酯（4.00 g，6.20 mmol）和2,2-二氟乙-1-胺（1.01 g，12.41 mmol）中。將反應混合物在40°C下攪拌1小時。將反應混合物用飽和NH
4Cl（100 mL）淬滅，並且用EtOAc（3 x 100 mL）萃取。將有機相經MgSO
4乾燥，過濾並真空除去溶劑。將粗產物藉由急速二氧化矽層析法（洗脫梯度為石油醚（60°C-90°C）中的0至100% EtOAc）進行純化。將純級分蒸發至乾燥，以提供呈黃色固體之標題化合物（4.20 g，100%）。
1 HNMR (300 MHz, DMSO-d6, 23°C) -0.24 (9H, s), 0.50-0.60 (2H, m), 1.30 (9H, s), 2.18-2.36 (2H, m), 3.26-3.42 (3H, m), 3.91 (3H, q), 4.48 (2H, d), 5.06 (2H, d), 5.82-5.90 (1H, m), 7.91 (2H, d), 8.13 (1H, s), 9.07 (2H, s), 11.82 (1H, s)；
m/zMH
+678
步驟 2 ； (
S)-2-((5-
胺基 -6- 氟 -1
H-
吡咯并 [3,2-
b]
吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-1'-(2,2- 二氟乙基 )-5- 氟螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮
在rt下，將2,2,2-三氟乙酸（30 mL）添加到(S)-(2-((1'-(2,2-二氟乙基)-5-氟-2',3-二側氧基螺[異吲哚啉-1,3'-吡咯啶]-2-基)甲基)-6-氟-1-((2-(三甲矽)乙氧基)甲基)-1
H-吡咯并[3,2-
b]吡啶-5-基)胺基甲酸三級丁酯（4.00 g，5.90 mmol）中，並將反應混合物在rt下攪拌1小時。真空除去2,2,2-三氟乙酸並將粗產物藉由離子交換層析法（使用SCX柱）進行純化。將所希望的產物使用7 M NH
3/MeOH從柱上洗脫並且將級分蒸發至乾燥。將粗產物藉由快速C18-急速層析法（洗脫梯度為以在水（0.1% NH
4HCO
3）中的0至50% MeCN）進行純化。將純級分蒸發至乾燥，以提供呈黃色固體之標題化合物（2.00 g，76%）。
1 HNMR (300 MHz, DMSO-d6) 2.32-2.49 (2H, m), 3.54-3.92 (4H, m), 4.30 (1H, d), 5.02 (1H, d), 5.52 (2H, s), 6.03-6.43 (2H, m), 7.31-7.41 (1H, m), 7.51-7.63 (3H, m), 10.71 (1H, d)；
m/zMH
+448
實例 9 ： (S)-2-((5- 胺基 -6- 氟 -1
H-
吡咯并 [3,2-
b]
吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-5- 氟 -1'-((1-( 氟甲基 ) 環丙基 ) 甲基 ) 螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮
根據
通用方法 C，使用(
S)-2-((5-((三級丁氧基羰基)胺基)-6-氟-1-((2-(三甲矽)乙氧基)甲基)-1
H-吡咯并[3,2-
b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-3-側氧基-1-(2-側氧基乙基)異吲哚啉-1-甲酸甲酯和(1-(氟甲基)環丙基)甲胺鹽酸鹽製備標題化合物（70 mg，17%，黃色固體）。
1 HNMR (300 MHz, DMSO-d6, 23°C) 0.65 (4H, s), 2.41 (2H, t), 3.12-3.23 (1H, m), 3.47 (1H, d), 3.55 (1H, s), 3.81 (1H, t), 4.07-4.40 (3H, m), 5.02 (1H, d), 5.52 (2H, s), 6.08 (1H, s), 7.36 (1H, d), 7.46-7.67 (3H, m), 10.70 (1H, s)；
m/zMH
+470
實例 10 ： (
S)-2-((5-
胺基 -6- 氟 -1
H-
吡咯并 [3,2-
b]
吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-5- 氟 -1'- 甲基螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮 步驟 1 ；外消旋 -6- 氟 -2-[(4- 甲氧基苯基 ) 甲基 ]-1'- 甲基 - 螺 [ 異吲哚啉 -3,3'- 吡咯啶 ]-1,2'- 二酮
在rt下，將乙酸鈉（19.88 g，242.4 mmol）一次性添加到在1,2-二氯乙烷（400 mL）中的外消旋-5-氟-2-[(4-甲氧基苯基)甲基]-3-側氧基-1-(2-側氧基乙基)異吲哚啉-1-甲酸甲酯（30.00 g，80.78 mmol）和鹽酸甲胺（16.36 g，242.4 mmol）中。1小時後，添加三乙醯氧基硼氫化鈉（51.40 g，242.4 mmol）並將反應混合物在rt下攪拌16小時。將反應混合物傾倒入飽和NaHCO
3（1 L）中，並且用DCM（3 x 750 mL）萃取。將有機相經Na
2SO
4乾燥，過濾並真空除去溶劑。將粗產物藉由急速二氧化矽層析法（洗脫梯度為石油醚（60°C-90°C）中的0至60% EtOAc）進行純化。將純級分蒸發至乾燥，以提供呈白色固體之標題化合物（10.00 g，35%）。
1 HNMR (300 MHz, DMSO-d6) 2.29 - 2.40 (2H, m), 2.72 - 2.86 (3H, m), 3.28 - 3.36 (2H, m), 3.72 (3H, d), 4.20 (1H, d), 4.80 (1H, d), 6.78 - 6.91 (2H, m), 7.18 - 7.31 (2H, m), 7.43 - 7.58 (2H, m), 7.60 - 7.67 (1H, m)；
m/zMH
+355
步驟 2 ； (
S)-5-
氟 -1'- 甲基螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮
在rt下，將硝酸鈰銨（30.90 g，56.44 mmol）添加到在MeCN（80 mL）和水（40 mL）中的外消旋-6-氟-2-[(4-甲氧基苯基)甲基]-1'-甲基-螺[異吲哚啉-3,3'-吡咯啶]-1,2'-二酮（10.00 g，28.22 mmol）中。將反應混合物在rt下攪拌16小時。將反應混合物傾倒入水（250 mL）中並用EtOAc（250 mL）萃取。將有機相經MgSO
4乾燥，過濾並真空除去溶劑。將粗產物藉由急速二氧化矽層析法（洗脫梯度為DCM中的0至10% MeOH）進行純化。將純級分蒸發至乾燥，以提供呈黃色油狀物的標題化合物（5.60 g，85%）。將鏡像異構物混合物藉由手性HPLC進行純化，柱：CHIRAL ART纖維素-SB，4.6*100 mm，3.0 um；流動相A：，流動相B：MEOH（0.1%DEA）；流速：2 mL/min；梯度：10% B；220 nm。將含有所希望的化合物的級分蒸發至乾燥，以提供呈黃色固體之標題化合物（2.90 g，52%）。
（基於使用中間體之該鏡像異構物製備的生物活性化合物之生物活性（與使用其他鏡像異構物製備的那些相比），以及
S鏡像異構物係較佳的並且比
R鏡像異構物更具活性的X射線結構證據，推測的該中間體之立體化學分配）。
1 HNMR (300 MHz, DMSO-d6) 2.29 - 2.51 (2H, m), 2.87 (3H, s), 3.47 - 3.60 (1H, m), 3.64 - 3.78 (1H, m), 7.38 - 7.51 (2H, m), 7.53 - 7.64 (1H, m), 9.03 (1H, s)；
m/zMH
+235
步驟 3 ； (
S)-2-((5-
氯 -6- 氟 -1-((2-( 三甲矽 ) 乙氧基 ) 甲基 )-1
H-
吡咯并 [3,2-
b]
吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-5- 氟 -1'- 甲基螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮
在0°C下，將氫化鈉（60%於礦物油中）（0.13 g，3.30 mmol）添加到在DMF（15 mL）中的(S)-5-氟-1'-甲基螺[異吲哚啉-1,3'-吡咯啶]-2',3-二酮（0.595 g，2.54 mmol）中。1小時後，添加2-(溴甲基)-5-氯-6-氟-1-((2-(三甲矽)乙氧基)甲基)-1
H-吡咯并[3,2-
b]吡啶（1.00 g，2.54 mmol），並將反應混合物在rt下攪拌2小時。將反應混合物用飽和NH
4Cl（100 mL）淬滅，並且用EtOAc（100 mL）萃取。將有機相經Na
2SO
4乾燥，過濾並真空除去溶劑。將粗產物藉由急速二氧化矽層析法（洗脫梯度為石油醚（60°C-90°C）中的0至40% EtOAc）進行純化。將純級分蒸發至乾燥，以提供呈黃色油狀物的標題化合物（1.18 g，85%）。
1 HNMR (300 MHz, DMSO-d6) -0.11 (9H, d), 0.65 - 0.85 (2H, m), 2.32 - 2.45 (1H, m), 2.63 (3H, s), 2.89 (1H, s), 3.36 - 3.53 (3H, m), 3.66 - 3.81 (1H, m), 4.75 (1H, d), 5.07 (1H, d), 5.52 (1H, d), 5.56 - 5.69 (1H, m), 6.64 (1H, s), 7.44 - 7.56 (1H, m), 7.53 - 7.68 (2H, m), 8.28 (1H, d)；
m/zMH
+547
步驟 4 ； (
S)-2-((5-((
二苯基亞甲基 ) 胺基 )-6- 氟 -1-((2-( 三甲矽 ) 乙氧基 ) 甲基 )-1
H-
吡咯并 [3,2-
b]
吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-5- 氟 -1'- 甲基螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮
在氮氣下，在rt下，將三(二苯亞甲基丙酮)二鈀(0)（0.092 g，0.10 mmol）添加到在甲苯（15 mL）中的(
S)-2-((5-氯-6-氟-1-((2-(三甲矽)乙氧基)甲基)-1
H-吡咯并[3,2-
b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1'-甲基螺[異吲哚啉-1,3'-吡咯啶]-2',3-二酮（1.10 g，2.01 mmol）、二苯基甲亞胺（0.44 g，2.41 mmol）、三級丁醇鈉（0.39 g，4.02 mmol）和2-二三級丁基膦基-2',4',6'-三-異丙基-1,1'-聯苯（0.085 g，0.20 mmol）中。將反應混合物在60°C下攪拌2小時。將反應混合物冷卻並真空除去溶劑。將粗產物藉由急速二氧化矽層析法（洗脫梯度為石油醚（60°C-90°C）中的0至100% EtOAc）進行純化。將純級分蒸發至乾燥，以提供呈白色固體之標題化合物（1.26 g，91%）。
1 HNMR (300 MHz, DMSO-d6) -0.12 (9H, s), 0.63 - 0.80 (2H, m), 2.43 (3H, s), 2.51 (2H, s), 3.34 (3H, s), 3.62 - 3.76 (1H, m), 4.80 (1H, d), 4.94 (1H, d), 5.36 (1H, d), 5.45 (1H, d), 6.46 (1H, s), 7.08 - 7.18 (2H, m), 7.21 - 7.32 (3H, m), 7.43 - 7.66 (6H, m), 7.66 - 7.76 (2H, m), 7.83 (1H, d)；
m/zMH
+692
步驟 5 ； (
S)-2-((5-
胺基 -6- 氟 -1
H-
吡咯并 [3,2-
b]
吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-5- 氟 -1'- 甲基螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮
在rt下，將2,2,2-三氟乙酸（20 mL）添加到(
S)-2-((5-((二苯基亞甲基)胺基)-6-氟-1-((2-(三甲矽)乙氧基)甲基)-1
H-吡咯并[3,2-
b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1'-甲基螺[異吲哚啉-1,3'-吡咯啶]-2',3-二酮（1.20 g，1.73 mmol）中。將反應混合物在rt下攪拌1小時。真空除去溶劑並將殘餘物用NaHCO
3鹼化。將反應混合物用EtOAc（50 mL）稀釋，並依次用水（2 x 50 mL）洗滌。將有機相經Na
2SO
4乾燥，過濾並真空除去溶劑。將粗產物藉由製備型HPLC進行純化。將含有所希望的化合物的級分蒸發至乾燥，以提供呈白色固體之標題化合物（30 mg，44%）。
1 HNMR (300 MHz, DMSO-d6) 2.32 - 2.47 (2H, m), 2.84 (3H, s), 3.40 - 3.54 (1H, m), 3.66 - 3.81 (1H, m), 4.30 (1H, d), 4.97 (1H, d), 5.58 (2H, s), 6.12 (1H, d), 7.39 (1H, d), 7.46 - 7.59 (2H, m), 7.64 - 7.71 (1H, m), 10.71 (1H, s)；
m/zMH
+398
實例 11 ： (
S)-2-((5-
胺基 -6- 氟 -1
H-
吡咯并 [3,2-
b]
吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-1'-(2-( 二氟甲氧基 ) 乙基 )-5- 氟螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮
根據
通用方法 B，使用(
S)-2-((5-((三級丁氧基羰基)胺基)-6-氟-1-((2-(三甲矽)乙氧基)甲基)-1
H-吡咯并[3,2-
b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-3-側氧基-1-(2-側氧基乙基)異吲哚啉-1-甲酸甲酯和2-(二氟甲氧基)乙-1-胺鹽酸鹽製備標題化合物（14 mg，38%，膏狀固體）。
1 HNMR (400 MHz, DMSO-d6, 27°C) 2.36 - 2.45 (2H, m), 3.44 - 3.66 (3H, m), 3.75 - 3.85 (1H, m), 3.94 - 4.08 (2H, m), 4.27 (1H, d), 5.01 (1H, d), 5.49 (2H, s), 6.10 (1H, d), 6.75 (1H, t), 7.36 (1H, d), 7.51 (1H, td), 7.55 - 7.62 (2H, m), 10.67 (1H, s)；
m/zMH
+478
實例 12 ： (
S)-2-((5-
胺基 -6- 氟 -1
H-
吡咯并 [3,2-
b]
吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-5- 氟 -1'-((3- 氟吡啶 -2- 基 ) 甲基 ) 螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮
根據
通用方法 C，使用(
S)-2-((5-((三級丁氧基羰基)胺基)-6-氟-1-((2-(三甲矽)乙氧基)甲基)-1
H-吡咯并[3,2-
b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-3-側氧基-1-(2-側氧基乙基)異吲哚啉-1-甲酸甲酯和(3-氟吡啶-2-基)甲胺鹽酸鹽製備標題化合物（16 mg，40%，黃色固體）。
1 HNMR (300 MHz, DMSO-d6, 22°C) 2.38 (2H, t), 3.43-3.56 (1H, m), 3.77 (1H, q), 4.36 (1H, d), 4.6-4.81 (2H, m), 5.06 (1H, d), 5.49 (2H, s), 6.04-6.11 (1H, m), 7.34 (1H, d), 7.48-7.61 (3H, m), 7.70-7.83 (2H, m), 8.44-8.53 (1H, m), 10.69 (1H, d)；
m/zMH
+493
實例 13 ： (
S)-2-((5-
胺基 -6- 氟 -1
H-
吡咯并 [3,2-
b]
吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-5- 氟 -1'-( 異㗁唑 -5- 基甲基 ) 螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮
根據
通用方法 D，使用(
S)-2-((5-((三級丁氧基羰基)胺基)-6-氟-1-((2-(三甲矽)乙氧基)甲基)-1
H-吡咯并[3,2-
b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-3-側氧基-1-(2-側氧基乙基)異吲哚啉-1-甲酸甲酯和異㗁唑-5-基甲胺鹽酸鹽製備標題化合物（23 mg，40%，白色固體）。
1 HNMR (300 MHz, DMSO-d6) 2.39 - 2.47 (2H, m), 3.50 (1H, d), 3.67 - 3.81 (1H, m), 4.27 (1H, d), 4.59 - 4.79 (2H, m), 5.02 (1H, d), 5.50 (2H, s), 6.06 (1H, s), 6.51 (1H, d), 7.30 - 7.40 (1H, m), 7.46 - 7.64 (3H, m), 8.59 (1H, d), 10.70 (1H, s)；
m/zMH
+465
實例 14 ： (
S)-2-((5-
胺基 -6- 氟 -1
H-
吡咯并 [3,2-
b]
吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-5- 氟 -1'-((5-( 三氟甲基 ) 嗒 𠯤 -3- 基 ) 甲基 ) 螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮
根據
通用方法 D，使用(
S)-2-((5-((三級丁氧基羰基)胺基)-6-氟-1-((2-(三甲矽)乙氧基)甲基)-1
H-吡咯并[3,2-
b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-3-側氧基-1-(2-側氧基乙基)異吲哚啉-1-甲酸甲酯和(5-(三氟甲基)嗒𠯤-3-基)甲胺製備標題化合物（19 mg，23%，白色固體）。
1 HNMR (400 MHz, DMSO-d6) 2.44 (2H, d), 3.56 - 3.66 (1H, m), 3.82 - 3.93 (1H, m), 4.41 (1H, d), 4.87 - 5.13 (3H, m), 5.49 (2H, s), 6.17 (1H, d), 7.35 (1H, d), 7.48 - 7.56 (1H, m), 7.56 - 7.63 (1H, m), 7.72 - 7.80 (1H, m), 8.12 (1H, t), 9.70 (1H, d), 10.68 (1H, d)；
m/zMH
+544
實例 15 ： (
S)-2-((5-
胺基 -6- 氟 -1
H-
吡咯并 [3,2-
b]
吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-5- 氟 -1'-((1- 甲基 -1
H-
吲唑 -5- 基 ) 甲基 ) 螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮
根據
通用方法 D，使用(
S)-2-((5-((三級丁氧基羰基)胺基)-6-氟-1-((2-(三甲矽)乙氧基)甲基)-1
H-吡咯并[3,2-
b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-3-側氧基-1-(2-側氧基乙基)異吲哚啉-1-甲酸甲酯和(1-甲基-1
H-吲唑-5-基)甲胺製備標題化合物（42 mg，51%，白色固體）。
1 HNMR (300 MHz, DMSO-d6) 2.35 (2H, t), 3.33 (1H, s), 3.51 - 3.65 (1H, m), 4.07 (3H, s), 4.30 (1H, d), 4.47 - 4.66 (2H, m), 5.05 (1H, d), 5.51 (2H, s), 6.02 (1H, d), 7.20 - 7.29 (1H, m), 7.35 (1H, d), 7.40 - 7.60 (2H, m), 7.56 - 7.71 (3H, m), 8.08 (1H, s), 10.71 (1H, s)；
m/zMH
+528
實例 16 ： (S)-2-((5- 胺基 -6- 氟 -1
H-
吡咯并 [3,2-
b]
吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-1'-( 苯并 [d] 㗁唑 -2- 基甲基 )-5- 氟螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮
根據
通用方法 C，使用(
S)-2-((5-((三級丁氧基羰基)胺基)-6-氟-1-((2-(三甲矽)乙氧基)甲基)-1
H-吡咯并[3,2-
b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-3-側氧基-1-(2-側氧基乙基)異吲哚啉-1-甲酸甲酯和苯并[d]㗁唑-2-基甲胺鹽酸鹽製備標題化合物（20 mg，52%，米色固體）。
1 HNMR (400 MHz, DMSO-d6, 27°C) 2.43 - 2.49 (2H, m), 3.67 (1H, ddd), 3.84 - 3.98 (1H, m), 4.40 (1H, d), 4.85 (1H, d), 4.94 (1H, d), 5.10 (1H, d), 5.49 (2H, s), 6.16 (1H, d), 7.31 - 7.40 (1H, m), 7.39 - 7.48 (2H, m), 7.61 (2H, ddq), 7.75 - 7.85 (3H, m), 10.72 (1H, d)；
m/zMH
+515
實例 17 ： (
S)-2-((5-
胺基 -6- 氟 -1
H-
吡咯并 [3,2-
b]
吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-5- 氟 -1'-(2-(4- 氟苯氧基 ) 乙基 ) 螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮
根據
通用方法 C ，使用(
S)-2-((5-((三級丁氧基羰基)胺基)-6-氟-1-((2-(三甲矽)乙氧基)甲基)-1
H-吡咯并[3,2-
b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-3-側氧基-1-(2-側氧基乙基)異吲哚啉-1-甲酸甲酯和2-(4-氟苯氧基)乙-1-胺製備標題化合物（32 mg，69%，白色固體）。
1 HNMR (400 MHz, DMSO-d6, 27°C) 2.35 - 2.48 (2H, m), 3.52 - 3.67 (2H, m), 3.72 (1H, ddd), 3.78 - 3.88 (1H, m), 4.13 (2H, tt), 4.30 (1H, d), 5.01 (1H, d), 5.49 (2H, s), 6.05 (1H, d), 6.93 - 7.04 (2H, m), 7.11 - 7.20 (2H, m), 7.32 - 7.38 (1H, m), 7.39 - 7.49 (1H, m), 7.57 (2H, td), 10.66 (1H, d)；
m/zMH
+522
實例 18 ： (
S)-2-((5-
胺基 -6- 氟 -1
H-
吡咯并 [3,2-
b]
吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-5- 氟 -1'-(2-(4- 甲基噻唑 -5- 基 ) 乙基 ) 螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮
根據
通用方法 D，使用(
S)-2-((5-((三級丁氧基羰基)胺基)-6-氟-1-((2-(三甲矽)乙氧基)甲基)-1
H-吡咯并[3,2-
b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-3-側氧基-1-(2-側氧基乙基)異吲哚啉-1-甲酸甲酯和2-(4-甲基噻唑-5-基)乙-1-胺製備標題化合物（27 mg，69%，白色固體）。
1 HNMR (400 MHz, DMSO-d6, 27°C) 2.31 - 2.43 (5H, m), 3.05 (2H, t), 3.49 (3H, dq), 3.66 - 3.8 (1H, m), 4.17 (1H, d), 4.95 (1H, d), 5.48 (2H, s), 6.09 (1H, d), 7.36 (1H, d), 7.38 - 7.52 (2H, m), 7.57 (1H, dd), 8.86 (1H, s), 10.64 (1H, s)；
m/zMH
+509
實例 19 ： (
S)-2-((5-
胺基 -6- 氟 -1
H-
吡咯并 [3,2-
b]
吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-5- 氟 -1'-((R*)-1-(1- 甲基環丙基 ) 乙基 ) 螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮
根據
通用方法 D，使用(
S)-2-((5-((三級丁氧基羰基)胺基)-6-氟-1-((2-(三甲矽)乙氧基)甲基)-1
H-吡咯并[3,2-
b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-3-側氧基-1-(2-側氧基乙基)異吲哚啉-1-甲酸甲酯和外消旋-1-(1-甲基環丙基)乙-1-胺鹽酸鹽製備2種非鏡像異構物之混合物。非鏡像異構物藉由手性柱進行分離：CHIRALPAK IF，2*25 cm，5 μm；流動相A：Hex : DCM = 3 : 1（0.5% 2M NH3-MeOH）--HPLC，流動相B：IPA--HPLC；流速：20 mL/min；梯度：在42 min內從50% B到50% B；波長：220/254 nm；RT1（min）：26.51；RT2（min）：34.77。將含有第二洗脫異構物2的級分蒸發至乾燥，以提供呈白色固體之標題化合物（28 mg，13%，95% ee）。
（注意實例19在甲基環丙基位置處具有未知的立體化學組態，在四級中心處具有固定的推測的
S立體化學組態（鑒於使用的中間體具有推測的
S立體化學組態））
1 HNMR (400 MHz, DMSO-d6) 0.21-0.33 (2H, m), 0.40 (1H, d), 0.55-0.62 (1H, m), 0.99-1.06 (6H, m), 2.31-2.46 (2H, m), 3.53 (1H, t), 3.66-3.77 (1H, m), 3.80-3.90 (1H, m), 4.19-4.28 (1H, m), 4.99 (1H, d), 5.49 (2H, s), 6.08 (1H, s), 7.31-7.39 (1H, m), 7.49-7.58 (1H, m), 7.54-7.61 (2H, m), 10.71 (1H, s)；
m/zMH
+466
實例 20 ： (
S)-2-((5-
胺基 -6- 氟 -1
H-
吡咯并 [3,2-
b]
吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-1'-(3- 環丙基丙 -2- 炔 -1- 基 )-5- 氟螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮 步驟 1 ； (
S)-(2-((1'-(3-
環丙基丙 -2- 炔 -1- 基 )-5- 氟 -2',3- 二側氧基螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2- 基 ) 甲基 )-6- 氟 -1-((2-( 三甲矽 ) 乙氧基 ) 甲基 )-1
H-
吡咯并 [3,2-
b]
吡啶 -5- 基 ) 胺基甲酸三級丁酯
將(
S)-2-((5-((三級丁氧基羰基)胺基)-6-氟-1-((2-(三甲矽)乙氧基)甲基)-1
H-吡咯并[3,2-
b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-3-側氧基-1-(2-側氧基乙基)異吲哚啉-1-甲酸甲酯（100 mg，0.16 mmol）和3-環丙基丙-2-炔-1-胺鹽酸鹽（30 mg，0.23 mmol）置於具有1,2-二氯乙烷（2 mL）的燒瓶中。添加三乙胺（32.4 µl，0.23 mmol）並將反應混合物在rt下攪拌15分鐘。添加三乙醯氧基硼氫化鈉（66 mg，0.31 mmol）並將反應混合物在rt下攪拌6小時。將反應混合物用DCM（25 mL）稀釋並用飽和NaHCO
3（25 mL）洗滌。將有機相通過相分離濾紙並真空除去溶劑。將粗產物藉由急速二氧化矽層析法（洗脫梯度為庚烷中的0至100% EtOAc）進行純化。合併純級分並真空除去溶劑，以提供呈米色泡沫的標題化合物（63 mg，59%）。
1 HNMR (400 MHz, DMSO-d6, 27°C) -0.13 (9H, s), 0.64 - 0.67 (2H, m), 0.68 - 0.77 (2H, m), 0.77 - 0.83 (2H, m), 1.35 (1H, ddt), 1.42 (9H, s), 2.39 (2H, t), 3.37 - 3.52 (3H, m), 3.69 - 3.80 (1H, m), 3.86 - 4.00 (2H, m), 4.52 (1H, d), 5.19 (1H, d), 5.49 - 5.59 (2H, m), 6.52 (1H, s), 7.50 - 7.62 (3H, m), 8.02 (1H, d), 9.15 (1H, s)；
m/zMH
+692
步驟 2 ； (
S)-2-((5-
胺基 -6- 氟 -1
H-
吡咯并 [3,2-
b]
吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-1'-(3- 環丙基丙 -2- 炔 -1- 基 )-5- 氟螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮
將(S)-(2-((1'-(3-環丙基丙-2-炔-1-基)-5-氟-2',3-二側氧基螺[異吲哚啉-1,3'-吡咯啶]-2-基)甲基)-6-氟-1-((2-(三甲矽)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-5-基)胺基甲酸三級丁酯（40 mg，0.06 mmol）置於具有甲酸（250 µL，0.06 mmol）的燒瓶中且將溶液在rt下放置72小時。將粗產物藉由製備型HPLC進行純化。將含有所希望的化合物的級分蒸發至乾燥，以提供呈無色乾燥薄膜的標題化合物（10 mg，35%）（
m/zMH
+492）。將中間體溶解在DMF（0.50 mL）中。添加乙-1,2-二胺（12 mg，0.20 mmol）並且將反應混合物在rt下攪拌1小時。將粗產物藉由製備型HPLC進行純化。將含有所希望的化合物的級分蒸發至乾燥，以提供呈無色乾燥薄膜的標題化合物（4 mg，45%）。
1 HNMR (400 MHz, CD3CN, 27°C) 0.63 - 0.69 (2H, m), 0.78 - 0.84 (2H, m), 1.31 (1H, dddd), 2.39 (1H, ddd), 2.53 - 2.61 (1H, m), 3.64 (1H, td), 3.78 (1H, dt), 3.97 (1H, dd), 4.13 (1H, dd), 4.45 (1H, d), 4.86 (2H, d), 6.23 (1H, d), 7.34 - 7.41 (2H, m), 7.45 (1H, dd), 7.49 (1H, dd), 8.10 (1H, s), 9.44 (1H, s)；
m/zMH
+462
實例 21 ： (
S)-2-((5-
胺基 -6- 氟 -1
H-
吡咯并 [3,2-
b]
吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-4- 氯 -1'-(4- 氟苄基 ) 螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮 步驟 1 ； 2- 氯 -6-(2- 甲氧基 -2- 側氧基乙基 ) 苯甲酸甲酯
在rt下，在一氧化碳下，將1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵二氯鈀(II)DCM加合物（1.55 g，1.90 mmol）添加到在MeOH（80 mL）中的2-(2-溴-3-氯苯基)乙酸甲酯（CAS號1021089-12-2）（5.00 g，18.97 mmol）和TEA（7.93 mL，56.92 mmol）中。將反應混合物在130°C下攪拌16小時。使反應混合物冷卻並真空除去溶劑。將粗產物藉由急速二氧化矽層析法（洗脫梯度為石油醚（60°C-90°C）中的0至20% EtOAc）進行純化。將純級分蒸發至乾燥，以提供呈無色油狀物的標題化合物（2.36 g，51%）。
1 HNMR (400 MHz, DMSO-d6) 3.61 (3H, d), 3.73 (2H, s), 3.85 (3H, d), 7.34 - 7.43 (1H, m), 7.44 - 7.54 (2H, m)；
m/zMH
+未觀察到。
步驟 2 ；外消旋 -2-(1- 溴 -2- 甲氧基 -2- 側氧基乙基 )-6- 氯苯甲酸甲酯
在rt下，將2,2'-偶氮雙(2-甲基丙腈)（0.63 g，3.82 mmol）添加到在CCl
4（50 mL）中的5-氯-2-(2-甲氧基-2-側氧基乙基)苯甲酸甲酯（2.32 g，9.54 mmol）和NBS（3.40 g，19.09 mmol）中。將反應混合物在80°C下攪拌16小時。使反應混合物冷卻並真空除去溶劑。將粗產物藉由急速二氧化矽層析法（洗脫梯度為石油醚（60°C-90°C）中的0至20% EtOAc）進行純化。將純級分蒸發至乾燥，以提供呈無色油狀物的標題化合物（1.75 g，57%）。
1 HNMR (300 MHz, DMSO-d6) 3.66 (3H, d), 3.90 (3H, s), 5.90 (1H, s), 7.59 (3H, d)；
m/zMH
+321
步驟 3 ；外消旋 -7- 氯 -2-(4- 甲氧基苄基 )-3- 側氧基異吲哚啉 -1- 甲酸甲酯
將4-甲氧基苄胺（0.77 g，5.73 mmol）添加到在MeCN（28 mL）中的外消旋-2-(1-溴-2-甲氧基-2-側氧基乙基)-6-氯苯甲酸甲酯（1.75 g，5.45 mmol）和碳酸氫鈉（1.83 g，21.82 mmol）中。將反應混合物在60°C下攪拌3小時。使反應混合物冷卻並真空除去溶劑。將粗產物藉由急速二氧化矽層析法（洗脫梯度為石油醚（60°C-90°C）中的0至40% EtOAc）進行純化。將純級分蒸發至乾燥，以提供呈黃色固體之標題化合物（1.29 g，68%）。
1 HNMR (300 MHz, DMSO-d6) 3.63 - 3.76 (6H, m), 4.29 (1H, d), 4.99 (1H, d), 5.18 (1H, s), 6.85 - 6.96 (2H, m), 7.17 - 7.26 (2H, m), 7.49 - 7.69 (3H, m)；
m/zMH
+346
步驟 4 ；外消旋 -1- 烯丙基 -4- 氯 -2-(4- 甲氧基苄基 )-3- 側氧基異吲哚啉 -1- 甲酸甲酯
在5°C下，在氮氣下，將1,1,3,3-四甲基胍（0.67 mL，5.38 mmol）逐滴添加到在THF（16 mL）中的外消旋-7-氯-2-(4-甲氧基苄基)-3-側氧基異吲哚啉-1-甲酸甲酯（1.24 g，3.59 mmol）、乙酸烯丙酯（0.58 mL，5.38 mmol）、三(二苯亞甲基丙酮)二鈀(0)（0.08 g，0.09 mmol）和
N,N'-((1R,2R)-環己烷-1,2-二基)雙(2-(二苯基磷烷基)苯甲醯胺)（0.12 g，0.18 mmol）中。將所得溶液在5°C下攪拌10分鐘。將反應混合物傾倒入水（300 mL）中，並用EtOAc（2 x 300 mL）萃取。將有機相經Na
2SO
4乾燥，過濾並真空除去溶劑。將粗產物藉由急速二氧化矽層析法（洗脫梯度為石油醚（60°C -90°C）中的0至30% EtOAc）進行純化。將純級分蒸發至乾燥，以提供呈白色固體之標題化合物（1.31 g，94%）。
1 HNMR (400 MHz, DMSO-d6) 3.05 - 3.14 (1H, m), 3.14 - 3.22 (1H, m), 3.24 (3H, s), 3.73 (3H, s), 4.49 (1H, d), 4.71 (1H, d), 4.76 - 4.89 (2H, m), 4.86 - 4.97 (1H, m), 6.84 - 6.93 (2H, m), 7.30 - 7.38 (2H, m), 7.52 - 7.59 (2H, m), 7.59 - 7.67 (1H, m)；
m/zMH
+386
步驟 5 ；外消旋 -4- 氯 -2-(4- 甲氧基苄基 )-3- 側氧基 -1-(2- 側氧基乙基 ) 異吲哚啉 -1- 甲酸甲酯
將鋨酸鉀(VI)二水合物（0.02 g，0.07 mmol）添加到在二㗁𠮿（15 mL）和水（5 mL）中的外消旋-1-烯丙基-4-氯-2-(4-甲氧基苄基)-3-側氧基異吲哚啉-1-甲酸甲酯（1.28 g，3.32 mmol）、2,6-二甲基吡啶（0.71 g，6.63 mmol）和高碘酸鈉（2.13 g，9.95 mmol）中。將反應混合物在rt下攪拌16小時。將反應混合物用EtOAc（100 mL）萃取。將有機相經Na
2SO
4乾燥，過濾並真空除去溶劑。將粗產物藉由急速二氧化矽層析法（洗脫梯度為石油醚（60°C -90°C）中的0至40% EtOAc）進行純化。將純級分蒸發至乾燥，以提供呈白色固體之標題化合物（1.01 g，78%）。
1 HNMR (300 MHz, DMSO-d6) 3.37 (3H, s), 3.49 (1H, s), 3.53 (1H, s), 3.70 (3H, s), 4.54 (1H, d), 4.68 (1H, d), 6.78 - 6.89 (2H, m), 7.17 - 7.27 (2H, m), 7.53 - 7.68 (3H, m), 9.05 (1H, s)；
m/zMH
+388
步驟 6 ；外消旋 -4- 氯 -1'-(4- 氟苄基 )-2-(4- 甲氧基苄基 ) 螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮
將4-氟苄胺（0.650 g，5.19 mmol）添加到在1,2-二氯乙烷（16 mL）中的外消旋-4-氯-2-(4-甲氧基苄基)-3-側氧基-1-(2-側氧基乙基)異吲哚啉-1-甲酸甲酯（1.01 g，2.60 mmol）中。1小時後，添加三乙醯氧基硼氫化鈉（1.10 g，5.19 mmol）並將反應混合物在rt下攪拌16小時。將反應混合物用飽和NH
4Cl（10 mL）淬滅，並用EtOAc（3 x 25 mL）萃取。將有機相經Na
2SO
4乾燥，過濾並真空除去溶劑。將粗產物藉由急速二氧化矽層析法（洗脫梯度為石油醚（60°C-90°C）中的0至70% EtOAc）進行純化。將純級分蒸發至乾燥，以提供呈白色固體之標題化合物（1.00 g，83%）。
1 HNMR (300 MHz, DMSO-d6) 2.24 - 2.42 (2H, m), 3.35 - 3.40 (1H, m), 3.49 - 3.66 (1H, m), 3.70 (3H, s), 4.11 (1H, d), 4.40 (2H, s), 4.82 (1H, d), 6.80 - 6.90 (2H, m), 7.05 - 7.35 (6H, m), 7.35 - 7.42 (1H, m), 7.51 - 7.60 (1H, m), 7.55 - 7.66 (1H, m)；
m/zMH
+465
步驟 7 ；外消旋 -4- 氯 -1'-(4- 氟苄基 ) 螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮
在rt下，將2,2,2-三氟乙酸（13 mL）添加到外消旋-4-氯-1'-(4-氟苄基)-2-(4-甲氧基苄基)螺[異吲哚啉-1,3'-吡咯啶]-2',3-二酮（0.96 g，2.06 mmol）中。將反應混合物在80°C下攪拌2小時。將反應混合物用飽和NaHCO
3中和並用水（20 mL）和EtOAc（3 x 50 mL）稀釋。將有機相經Na
2SO
4乾燥，過濾並真空除去溶劑。將粗產物藉由急速二氧化矽層析法（洗脫梯度為石油醚（60°C -90°C）中的0至100% EtOAc）進行純化。將純級分蒸發至乾燥，以提供呈白色固體之標題化合物（0.61 g，86%）。
1 HNMR (300 MHz, DMSO-d6) 2.29 - 2.50 (2H, m), 3.39 - 3.52 (1H, m), 3.53 - 3.65 (1H, m), 4.46 (2H, s), 7.14 - 7.26 (2H, m), 7.27 - 7.39 (3H, m), 7.46 - 7.53 (1H, m), 7.57 (1H, t), 9.09 (1H, s)；
m/zMH
+345
步驟 8 ；外消旋 -4- 氯 -2-((5- 氯 -6- 氟 -1-((2-( 三甲矽 ) 乙氧基 ) 甲基 )-1
H-
吡咯并 [3,2-b] 吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-1'-(4- 氟苄基 ) 螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮
在0°C下，將氫化鈉（60%於礦物油中）（0.10 g，2.57 mmol）添加到在THF（12 mL）中的外消旋-4-氯-1'-(4-氟苄基)螺[異吲哚啉-1,3'-吡咯啶]-2',3-二酮（0.59 g，1.71 mmol）中。將反應混合物在rt下攪拌1小時。添加5-氯-2-(溴甲基)-6-氟-1-((2-(三甲矽)乙氧基)甲基)-1
H-吡咯并[3,2-
b]吡啶（0.88 g，2.23 mmol），並將反應混合物在rt下攪拌6小時。將反應混合物用飽和NH
4Cl（2 mL）淬滅並真空除去溶劑。將粗產物藉由急速二氧化矽層析法（洗脫梯度為石油醚（60°C-90°C）中的0至50% EtOAc）進行純化。將純級分蒸發至乾燥，以提供呈黃色固體之標題化合物（0.71 g，63%）。
1 HNMR (300 MHz, DMSO-d6) -0.15 (9H, s), 0.55 - 0.79 (2H, m), 2.19 - 2.42 (1H, m), 2.50 (1H, s), 3.31 - 3.39 (1H, m), 3.40 - 3.52 (2H, m), 3.53 - 3.68 (1H, m), 4.20 - 4.38 (2H, m), 4.70 (1H, d), 5.08 (1H, d), 5.52 (1H, d), 5.61 (1H, d), 6.54 (1H, s), 7.09 - 7.25 (4H, m), 7.34 - 7.42 (1H, m), 7.53 - 7.62 (1H, m), 7.57 - 7.68 (1H, m), 8.29 (1H, d)；
m/zMH
+658
步驟 9 ；外消旋 -2-((4- 氯 -1'-(4- 氟苄基 )-2',3- 二側氧基螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2- 基 ) 甲基 )-6- 氟 -1-((2-( 三甲矽 ) 乙氧基 ) 甲基 )-1
H-
吡咯并 [3,2-
b]
吡啶 -5- 基 ) 胺基甲酸三級丁酯
在氮氣下，在rt下，將外消旋-4-氯-2-((5-氯-6-氟-1-((2-(三甲矽)乙氧基)甲基)-1
H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-1'-(4-氟苄基)螺[異吲哚啉-1,3'-吡咯啶]-2',3-二酮（400 mg，0.61 mmol）添加到在二㗁𠮿（4.5 mL）中的三(二苯亞甲基丙酮)二鈀(0)（111 mg，0.12 mmol）、胺基甲酸三級丁酯（64 mg，0.55 mmol）、9,9-二甲基-4,5-雙(二苯基膦基)𠮿口星（70 mg，0.12 mmol）和碳酸銫（396 mg，1.22 mmol）中。將反應混合物在80°C下攪拌4小時。真空除去溶劑並將粗產物藉由急速二氧化矽層析法（洗脫梯度為DCM中0至40% EtOAc）進行純化。將純級分蒸發至乾燥，以提供呈黃色固體之標題化合物（0.18 g，40%）。
1 HNMR (300 MHz, DMSO-d6) -0.15 (9H, s), 0.67 (2H, s), 1.40 (9H, s), 2.22 - 2.39 (2H, m), 3.58 (2H, d), 4.14 - 4.40 (3H, m), 4.67 (1H, d), 5.07 (1H, s), 5.36 - 5.61 (2H, m), 6.43 (1H, s), 7.14 - 7.30 (4H, m), 7.40 (1H, d), 7.45 - 7.69 (3H, m), 8.01 (1H, d), 9.20 (1H, s)；
m/zMH
+738
步驟 10 ： (
S)-2-((5-
胺基 -6- 氟 -1
H-
吡咯并 [3,2-
b]
吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-4- 氯 -1'-(4- 氟苄基 ) 螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮
在氮氣下，在rt下，將外消旋-2-((4-氯-1'-(4-氟苄基)-2',3-二側氧基螺[異吲哚啉-1,3'-吡咯啶]-2-基)甲基)-6-氟-1-((2-(三甲矽)乙氧基)甲基)-1
H-吡咯并[3,2-
b]吡啶-5-基)胺基甲酸三級丁酯（172 mg，0.23 mmol）在2,2,2-三氟乙酸（2.5 mL）中攪拌1小時。將粗產物藉由離子交換層析法（使用SCX柱）進行純化。使用7 M NH
3/MeOH將所希望的產物從柱上洗脫，並將純級分蒸發至乾燥，以提供外消旋-2-((5-胺基-6-氟-1
H-吡咯并[3,2-
b]吡啶-2-基)甲基)-4-氯-1'-(4-氟苄基)螺[異吲哚啉-1,3'-吡咯啶]-2',3-二酮。鏡像異構物藉由手性柱進行分離：CHIRALPAK IF，2*25 cm，5 um；流動相A：Hex : DCM = 3 : 1（0.5% 2M NH3-MeOH）-HPLC，流動相B：EtOH；流速：15 mL/min；梯度：在30分鐘內從50 B到50 B；254/220 nm；RT1：7.28；RT2：23.02。將含有所希望的化合物的級分蒸發至乾燥，以提供呈黃色固體之標題化合物（31 mg，27%）。
（基於相對於其他鏡像異構物之生物活性，以及
S鏡像異構物係較佳的並且比
R鏡像異構物更具活性的X射線結構證據，推測的該化合物之立體化學分配）。
1 HNMR (300 MHz, DMSO-d6) 2.38 (2H, t), 3.39 (1H, d), 3.53 - 3.67 (1H, m), 4.28 (1H, d), 4.45 (2H, s), 5.01 (1H, d), 5.55 (2H, s), 6.02 (1H, s), 7.17 - 7.45 (6H, m), 7.53 - 7.71 (2H, m), 10.72 (1H, d)；
m/zMH
+508。
實例 22 ： (
S)-2'-((5-
胺基 -6- 氟 -1
H-
吡咯并 [3,2-
b]
吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-1-(4- 氟苄基 ) 螺 [ 吡咯啶 -3,1'- 吡咯并 [3,4-c] 吡啶 ]-2,3'(2'H)- 二酮 步驟 1 ；外消旋 -3-(((5- 氯 -6- 氟 -1-((2-( 三甲矽 ) 乙氧基 ) 甲基 )-1
H-
吡咯并 [3,2-
b]
吡啶 -2- 基 ) 甲基 ) 胺基 )-1-(4- 氟苄基 ) 吡咯啶 -2- 酮
將3-胺基-1-(4-氟苄基)吡咯啶-2-酮（167 mg，0.80 mmol）在DCM（5 mL）中之溶液添加到5-氯-6-氟-1-((2-(三甲矽)乙氧基)甲基)-1
H-吡咯并[3,2-
b]吡啶-2-甲醛（264 mg，0.80 mmol）的攪拌溶液中，並將混合物攪拌2小時。添加硼氫化鈉（46 mg，1.22 mmol），然後添加MeOH（5 mL）。將反應混合物攪拌15分鐘並添加更多的硼氫化鈉（46 mg，1.22 mmol）。將反應混合物再攪拌15分鐘並用飽和NaHCO
3（5 mL）淬滅並用DCM（5 x 10 mL）萃取。使用相分離柱分離有機相並真空除去溶劑。將粗產物藉由急速二氧化矽層析法（洗脫梯度為庚烷中的0至100% EtOAc）進行純化，以提供呈膠狀物的標題化合物（318 mg，76%）。
1 HNMR (400 MHz, CDCl
3, 30°C) -0.05 (9H, s), 0.84 - 0.95 (2H, m), 1.69 (1H, dq), 2.20 (2H, dddd), 3.16 (2H, ddd), 3.49 (3H, ddd), 4.10 (1H, d), 4.23 (1H, d), 4.42 (2H, s), 5.58 (2H, d), 6.58 (1H, s), 6.97 - 7.05 (2H, m), 7.19 (2H, ddd), 7.53 (1H, dd)；
m/zMH
+521。
步驟 2 ；外消旋 -
N-((5-
氯 -6- 氟 -1-((2-( 三甲矽 ) 乙氧基 ) 甲基 )-1
H-
吡咯并 [3,2-
b]
吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-
N-(1-(4-
氟苄基 )-2- 側氧基吡咯啶 -3- 基 ) 菸鹼醯胺
將菸鹼醯氯鹽酸鹽（72 mg，0.40 mmol）添加到外消旋-3-(((5-氯-6-氟-1-((2-(三甲矽)乙氧基)甲基)-1
H-吡咯并[3,2-
b]吡啶-2-基)甲基)胺基)-1-(4-氟苄基)吡咯啶-2-酮（97 mg，0.19 mmol）和
N-乙基-
N-異丙基丙-2-胺（200 µl，1.12 mmol）在DCM（3 mL）中之攪拌溶液中。將反應混合物攪拌30分鐘並真空濃縮。將粗產物藉由製備型HPLC進行純化，以提供呈膠狀物的標題化合物（114 mg，97%）。
1 HNMR (400 MHz, DMSO-d6, 90 °C) -0.10 (9H, s), 0.71 (2H, t), 2.22 (1H, s), 2.29 - 2.38 (1H, m), 3.19 (2H, t), 3.39 (2H, t), 4.29 (1H, d), 4.44 (1H, d), 4.52 (1H, t), 4.70 (1H, d), 4.99 (1H, d), 5.45 - 5.57 (2H, m), 6.92 (1H, s), 7.04 - 7.14 (2H, m), 7.29 (2H, dd), 7.43 (1H, dd), 7.90 (1H, d), 8.17 (1H, d), 8.64 (1H, dd), 8.69 - 8.71 (1H, m)；
m/zMH
+626。
步驟
3
；外消旋
-2'-((5-
氯
-6-
氟
-1-((2-(
三甲矽
)
乙氧基
)
甲基
)-1
H-
吡咯并
[3,2-
b]
吡啶
-2-
基
)
甲基
)-1-(4-
氟苄基
)
螺
[
吡咯啶
-3,1'-
吡咯并
[3,4-
c]
吡啶
]-2,3'(2'
H)-
二酮。
在-78°C下，將1 M雙(三甲矽)醯胺鉀在THF（401 µl，0.40 mmol）中之溶液逐滴添加到外消旋-
N-((5-氯-6-氟-1-((2-(三甲矽)乙氧基)甲基)-1
H-吡咯并[3,2-
b]吡啶-2-基)甲基)-N-(1-(4-氟苄基)-2-側氧基吡咯啶-3-基)菸鹼醯胺（114 mg，0.18 mmol）在THF（5 mL）中之攪拌溶液中。將反應混合物在-78°C下攪拌30分鐘，緩慢溫熱至-20°C（約60分鐘）並用甲酸（40 µl，1.04 mmol）淬滅。將反應混合物真空濃縮並再溶於DCM（5 mL）中。添加氧化錳(IV)（237 mg，2.73 mmol）並將反應混合物在rt下攪拌1.5小時。將反應混合物通過Celite®墊過濾，並且將濾液真空濃縮。將粗產物藉由製備型HPLC進行純化，以提供呈膠狀物的標題化合物（23 mg，20%）。
1 HNMR (400 MHz, CDCl
3, 30°C) -0.00 (9H, s), 0.82 (1H, ddd), 0.91 (1H, ddd), 2.30 (1H, ddd), 2.57 (1H, ddd), 3.43 (1H, td), 3.52 (1H, dt), 3.61 (2H, dddd), 4.03 (1H, d), 4.48 (1H, d), 5.08 (1H, d), 5.15 (1H, d), 5.52 (1H, d), 5.58 (1H, d), 6.53 - 6.59 (1H, m), 7.07 (1H, dd), 7.1 - 7.23 (4H, m), 7.66 (1H, dd), 8.82 (1H, d), 9.23 (1H, d)；
m/zMH
+624。
步驟 4 ；外消旋 -2'-((5-(( 二苯基亞甲基 ) 胺基 )-6- 氟 -1-((2-( 三甲矽 ) 乙氧基 ) 甲基 )-1
H-
吡咯并 [3,2-
b]
吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-1-(4- 氟苄基 ) 螺 [ 吡咯啶 -3,1'- 吡咯并 [3,4-
c]
吡啶 ]-2,3'(2'
H)-
二酮
將三(二苯亞甲基丙酮)二鈀(0)（10 mg，0.01 mmol）添加到外消旋-2'-((5-氯-6-氟-1-((2-(三甲矽)乙氧基)甲基)-1
H-吡咯并[3,2-
b]吡啶-2-基)甲基)-1-(4-氟苄基)螺[吡咯啶-3,1'-吡咯并[3,4-
c]吡啶]-2,3'(2'
H)-二酮（48 mg，0.08 mmol）、二苯基甲亞胺（42 mg，0.23 mmol）、tBuXPhos（10 mg，0.02 mmol）和2-甲基丙-2-醇鈉（30 mg，0.31 mmol）在甲苯（3 mL）中的脫氣溶液中。將反應混合物密封在微波管中並在加熱塊中在70°C下加熱1小時。將粗產物藉由製備型HPLC進行純化，以提供標題化合物（24 mg，40%）。
1 HNMR (400 MHz, CDCl
3, 30°C) -0.10 (9H, s), 0.66 - 0.84 (2H, m), 2.19 (1H, ddd), 2.44 (1H, ddd), 3.30 (1H, td), 3.33 - 3.43 (1H, m), 3.43 - 3.55 (2H, m), 3.79 (1H, d), 4.39 (1H, d), 5.00 (2H, s), 5.33 (1H, d), 5.41 (1H, d), 6.39 (1H, s), 6.96 (1H, dd), 7.04 - 7.12 (2H, m), 7.15 (5H, td), 7.20 - 7.25 (2H, m), 7.28 - 7.33 (1H, m), 7.36 - 7.45 (2H, m), 7.46 - 7.53 (1H, m), 7.83 (2H, d), 8.73 (1H, d), 9.15 (1H, d)；
m/zMH
+769。
步驟 5 ； (
S)-2'-((5-
胺基 -6- 氟 -1
H-
吡咯并 [3,2-
b]
吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-1-(4- 氟苄基 ) 螺 [ 吡咯啶 -3,1'- 吡咯并 [3,4-
c]
吡啶 ]-2,3'(2'
H)-
二酮
將外消旋-2'-((5-((二苯基亞甲基)胺基)-6-氟-1-((2-(三甲矽)乙氧基)甲基)-1
H-吡咯并[3,2-
b]吡啶-2-基)甲基)-1-(4-氟苄基)螺[吡咯啶-3,1'-吡咯并[3,4-
c]吡啶]-2,3'(2'
H)-二酮（33 mg，0.04 mmol）在2,2,2-三氟乙酸（0.5 mL）和水（0.05 mL）中之溶液在70°C下攪拌20分鐘並真空濃縮。將殘餘物再溶於MeCN（2 mL）中並添加30% NH
3水溶液（0.5 mL）。將反應混合物在微波反應器中在70°C下攪拌30分鐘，冷卻並藉由製備型HPLC純化，以提供外消旋產物（20 mg，100%）。兩種鏡像異構物使用SFC條件進行分離：柱：Phenomenex Lux iC5，21.2 x 250 mm，5微米，流動相：50% MeOH + 0.1% NH
3/50% scCO
2，流速：60 mL/min；BPR：120巴，柱溫：40℃，UV最大值220 nm（滯留時間：異構物1 - 11.9分鐘和異構物2 - 14.4分鐘）以提供異構物1（10 mg，＞ 99純度，＞ 99% ee）和異構物2（10 mg，＞ 99純度，＞ 99% ee）。
異構物1（實例22）- (
S)-2'-((5-胺基-6-氟-1
H-吡咯并[3,2-
b]吡啶-2-基)甲基)-1-(4-氟苄基)螺[吡咯啶-3,1'-吡咯并[3,4-
c]吡啶]-2,3'(2'
H)-二酮
（基於相對於其他鏡像異構物之生物活性，以及
S鏡像異構物係較佳的並且比
R鏡像異構物更具活性的X射線結構證據，推測的實例22的立體化學分配）。
1 HNMR (400 MHz, CDCl
3, 30°C) 2.29 (1H, ddd), 2.65 (1H, dt), 3.44 - 3.60 (2H, m), 4.33 (1H, d), 4.37 (1H, d), 4.40 (2H, s), 4.71 (1H, d), 5.03 (1H, d), 6.24 (1H, d), 7.01 (1H, dd), 7.06 - 7.14 (2H, m), 7.21 - 7.29 (3H, m), 8.74 (1H, d), 9.12 (1H, d), 9.15 (1H, s)；
m/zMH
+475。
異構物2 - (
R)-2'-((5-胺基-6-氟-1
H-吡咯并[3,2-
b]吡啶-2-基)甲基)-1-(4-氟苄基)螺[吡咯啶-3,1'-吡咯并[3,4-
c]吡啶]-2,3'(2'
H)-二酮
1 HNMR (400 MHz, CDCl
3, 30°C) 2.29 (1H, ddd), 2.65 (1H, dt), 3.44 - 3.60 (2H, m), 4.33 (1H, d), 4.37 (1H, d), 4.40 (2H, s), 4.71 (1H, d), 5.03 (1H, d), 6.24 (1H, d), 7.01 (1H, dd), 7.06 - 7.14 (2H, m), 7.21 - 7.29 (3H, m), 8.74 (1H, d), 9.12 (1H, d), 9.15 (1H, s)；
m/zMH
+475。
實例 23 ： (
S)-2-((5-
胺基 -6- 氟 -1
H-
吡咯并 [3,2-
b]
吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-5- 氟 -1',7- 二甲基螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮 步驟 1 ；外消旋 -5- 氟 -2-(4- 甲氧基苄基 )-1',7- 二甲基螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮
在rt，氮氣下，將Pd118（63 mg，0.09 mmol）添加到在二㗁𠮿（5 mL）中的外消旋-7-溴-5-氟-2-(4-甲氧基苄基)-1'-甲基螺[異吲哚啉-1,3'-吡咯啶]-2',3-二酮（400 mg，0.92 mmol）、2,4,6-三甲基-1,3,5,2,4,6-三氧雜三硼雜環己烷（232 mg，1.85 mmol）和磷酸三鉀（392 mg，1.85 mmol）中。將反應混合物在90°C下攪拌4小時，冷卻並真空除去溶劑。將粗產物藉由急速二氧化矽層析法（洗脫梯度為石油醚（60°C-90°C）中的0至100% EtOAc）進行純化。將純級分蒸發至乾燥，以提供呈黃色固體之標題化合物（30 mg，88%）。
1 HNMR (400 MHz, DMSO-d6) 2.20 (3H, s), 2.71 (3H, s), 3.33 (2H, s), 3.46 - 3.60 (2H, m), 3.72 (3H, s), 4.42 (1H, d), 4.59 (1H, d), 6.82 - 6.90 (2H, m), 7.18 - 7.27 (2H, m), 7.28 - 7.39 (2H, m)；
m/zMH
+369。
步驟 2 ；外消旋 -5- 氟 -1',7- 二甲基螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮
在rt下，將硝酸鈰(IV)銨（446 mg，0.81 mmol）添加到在水（1.50 mL）和MeCN（3 mL）中的外消旋-5-氟-2-(4-甲氧基苄基)-1',7-二甲基螺[異吲哚啉-1,3'-吡咯啶]-2',3-二酮（300 mg，0.81 mmol）中。將反應混合物在rt下攪拌1小時並真空除去溶劑。將粗產物藉由急速二氧化矽層析法（洗脫梯度為石油醚（60°C-90°C）中的0至100% EtOAc）進行純化。將純級分蒸發至乾燥，以提供呈黃色固體之標題化合物（120 mg，59%）。
1 HNMR (400 MHz, DMSO-d6) 2.22 (3H, s), 2.49 (1H, d), 2.51 (1H , d), 2.86 (3H, s), 3.53-3.65 (2H, m), 7.21 - 7.33 (2H, m), 9.16 (1H, s)；
m/zMH
+249
步驟 4 ； (
S)-2-((5-
胺基 -6- 氟 -1
H-
吡咯并 [3,2-
b]
吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-5- 氟 -1',7- 二甲基螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮
在氮氣下，在rt下，將外消旋-5-氟-1',7-二甲基螺[異吲哚啉-1,3'-吡咯啶]-2',3-二酮（120 mg，0.48 mmol）添加到在DMF（3 mL）中的5-氯-2-(氯甲基)-6-氟-1-((2-(三甲矽)乙氧基)甲基)-1
H-吡咯并[3,2-
b]吡啶（169 mg，0.48 mmol）和碳酸銫（315 mg，0.97 mmol）中。將反應混合物在60°C下攪拌16小時，冷卻並真空除去溶劑。將粗產物藉由急速二氧化矽層析法（洗脫梯度為石油醚（60°C-90°C）中的0至4% EtOAc）進行純化。將級分蒸發至乾燥，以提供呈不純的黃色固體之外消旋-2-((5-氯-6-氟-1-((2-(三甲矽)乙氧基)甲基)-1
H-吡咯并[3,2-
b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1',7-二甲基螺[異吲哚啉-1,3'-吡咯啶]-2',3-二酮（100 mg，37%）。
在氮氣下，將EPhos Pd G4（13 mg，0.01 mmol）添加到在1,4-二㗁𠮿（2 mL）中的外消旋-2-((5-氯-6-氟-1-((2-(三甲矽)乙氧基)甲基)-1
H-吡咯并[3,2-
b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1',7-二甲基螺[異吲哚啉-1,3'-吡咯啶]-2',3-二酮（80 mg，0.14 mmol）、胺基甲酸三級丁酯（17 mg，0.14 mmol）、碳酸銫（93 mg，0.29 mmol）和EPhos（8 mg，0.01 mmol）中。將反應混合物在80°C下攪拌1小時。將反應混合物通過Celite®過濾，並真空除去溶劑。添加2,2,2-三氟乙酸（2 mL）並將反應混合物在rt下攪拌1小時。將粗產物藉由離子交換層析法（使用SCX柱）進行純化。使用7 M NH
3/MeOH從柱上洗脫外消旋產物，合併級分並真空除去溶劑。鏡像異構物藉由手性柱進行分離：CHIRALPAK ID，2*25 cm，5 um；流動相A：MTBE（0.5% 2M NH
3-MeOH）--HPLC，流動相B：EtOH--HPLC；流速：18 mL/min；梯度：在10 min內從30 B到30 B；220/254 nm。將含有所希望的化合物的級分蒸發至乾燥，以提供呈白色固體之標題化合物（4 mg，7%）。
（基於相對於其他鏡像異構物之生物活性，以及
S鏡像異構物係較佳的並且比
R鏡像異構物更具活性的X射線結構證據，推測的該化合物之立體化學分配）。
1 HNMR (400 MHz, DMSO-d6) 2.21 (4H, s), 2.59 - 2.71 (1H, m), 2.74 (3H, s), 3.48 - 3.65 (2H, m), 4.58 (1H, d), 4.78 (1H, d), 6.28 (1H, d), 6.80 (2H, broad), 7.30 - 7.41 (2H, m), 7.76 (1H, d), 11.34 (1H, s)；
m/zMH
+412
實例 24 ： (
S)-2-((5-
胺基 -6- 氟 -1
H-
吡咯并 [3,2-
b]
吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-5- 氟 -7- 甲氧基 -1'- 甲基螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮 步驟 1 ；外消旋 -5- 氟 -7- 甲氧基 -1'- 甲基螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮
在氮氣下，將Rockphos Pd G3（0.19 g，0.23 mmol）添加到在MeOH（10 mL）中的外消旋-7-溴-5-氟-2-(4-甲氧基苄基)-1'-甲基螺[異吲哚啉-1,3'-吡咯啶]-2',3-二酮（1.00 g，2.31 mmol）和碳酸銫（1.50 g，4.62 mmol）中。將反應混合物在80°C下攪拌1小時，冷卻並真空除去溶劑。將粗產物藉由快速C18急速層析法（洗脫梯度為水（0.1% FA）中的0至60%MeOH）進行純化。將純級分蒸發至乾燥，以提供呈不純的白色固體之外消旋-(
R)-5-氟-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苄基)-1'-甲基螺[異吲哚啉-1,3'-吡咯啶]-2',3-二酮（0.22 g，25%）。在rt下，將硝酸鈰銨（0.86 g，1.56 mmol）添加到在水（1 mL）和MeCN（2 mL）中的中間體（0.20 g，0.52 mmol）中。將反應混合物在rt下攪拌1小時並真空除去溶劑。將粗產物藉由急速二氧化矽層析法（洗脫梯度為石油醚（60°C-90°C）中的0至100% EtOAc）進行純化。將純級分蒸發至乾燥，以提供呈黃色固體之標題化合物（0.13 g，95%）。
1 HNMR (400 MHz, DMSO-d6) 2.23 - 2.35 (1H, m), 2.52 - 2.59 (1H, m), 2.83 (3H, s), 3.44 - 3.61 (2H, m), 3.85 (3H, s), 6.96 - 7.03 (1H, m), 7.10 - 7.18 (1H, m), 9.05 (1H, s)；
m/zMH
+265
步驟 2 ；外消旋 -2-((5- 氯 -6- 氟 -1-((2-( 三甲矽 ) 乙氧基 ) 甲基 )-1
H-
吡咯并 [3,2-
b]
吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-5- 氟 -7- 甲氧基 -1'- 甲基螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮
在氮氣下，在rt下，將氫化鈉（60%於礦物油中）（36 mg，0.91 mmol）添加到在THF（3 mL）中的外消旋-5-氟-7-甲氧基-1'-甲基螺[異吲哚啉-1,3'-吡咯啶]-2',3-二酮（200 mg，0.76 mmol）中。將反應混合物在rt下攪拌20分鐘。然後添加2-(溴甲基)-5-氯-6-氟-1-((2-(三甲矽)乙氧基)甲基)-1
H-吡咯并[3,2-
b]吡啶（298 mg，0.76 mmol），並將反應混合物在rt下攪拌1小時。將反應混合物用飽和NH
4Cl淬滅，並用EtOAc（25 mL）萃取。將有機相經Na
2SO
4乾燥，過濾並真空除去溶劑。將粗產物藉由急速二氧化矽層析法（洗脫梯度為石油醚（60°C-90°C）中的0至60% EtOAc）進行純化。將純級分蒸發至乾燥，以提供呈黃色固體之標題化合物（200 mg，46%）。
1 HNMR (400 MHz,DMSO-d6) -0.11 (9H, s), 0.67 - 0.77 (2H, m), 2.34 - 2.46 (2H, m), 2.70 (3H, s), 3.27 - 3.47 (1H, m), 3.43 - 3.50 (1H, m), 3.47 - 3.60 (2H, m), 3.84 (3H, s), 4.71 - 4.84 (1H, m), 4.95 - 5.11 (1H, m), 5.45 - 5.56 (1H, m), 5.58 (1H, t), 6.65 (1H, d), 7.12 - 7.16 (1H, m), 7.45 - 7.67 (1H, m), 8.25 - 8.32 (1H, m)；
m/zMH
+577
步驟 3 ；外消旋 -(6- 氟 -2-((5- 氟 -7- 甲氧基 -1'- 甲基 -2',3- 二側氧基螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2- 基 ) 甲基 )-1-((2-( 三甲矽 ) 乙氧基 ) 甲基 )-1
H-
吡咯并 [3,2-
b]
吡啶 -5- 基 ) 胺基甲酸三級丁酯
在氮氣下，將EPhos Pd（28 mg，0.03 mmol）添加到在1,4-二㗁𠮿（3 mL）中的外消旋-2-((5-氯-6-氟-1-((2-(三甲矽)乙氧基)甲基)-1
H-吡咯并[3,2-
b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-7-甲氧基-1'-甲基螺[異吲哚啉-1,3'-吡咯啶]-2',3-二酮（200 mg，0.30 mmol）、胺基甲酸三級丁酯（36 mg，0.30 mmol）、碳酸銫（297 mg，0.91 mmol）和EPhos（16 mg，0.03 mmol）中。將反應混合物在80°C下攪拌1小時，冷卻並真空除去溶劑。將粗產物藉由急速二氧化矽層析法（洗脫梯度為石油醚（60
oC-90
oC）中的0至60% EtOAc）進行純化。將級分蒸發至乾燥，以提供呈黃色固體之粗標題化合物（150 mg，75%）。
m/zMH
+658。
步驟 4 ； (
S)-2-((5-
胺基 -6- 氟 -1
H-
吡咯并 [3,2-
b]
吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-5- 氟 -7- 甲氧基 -1'- 甲基螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮
將2,2,2-三氟乙酸（2 mL）添加到外消旋-(6-氟-2-((5-氟-7-甲氧基-1'-甲基-2',3-二側氧基螺[異吲哚啉-1,3'-吡咯啶]-2-基)甲基)-1-((2-(三甲矽)乙氧基)甲基)-1
H-吡咯并[3,2-
b]吡啶-5-基)胺基甲酸三級丁酯（150 mg，0.23 mmol）中。將反應混合物在rt下攪拌1小時並真空除去溶劑。將粗產物藉由離子交換層析法（使用SCX柱）進行純化。使用7 M NH
3/MeOH將所希望的產物從柱上洗脫，合併級分並真空除去溶劑。鏡像異構物藉由手性柱進行分離：CHIRALPAK ID，2*25 cm，5 μm；流動相A：Hex: DCM=3: 1（0.5% 2M NH
3-MeOH）--HPLC，流動相B：EtOH--HPLC；流速：15 mL/min；梯度：在47 min內從50% B到50% B；波長：220/254 nm。將含有所希望的化合物的級分蒸發至乾燥，以提供呈白色固體之標題化合物（23 mg，24%）。
（基於相對於其他鏡像異構物之生物活性，以及
S鏡像異構物係較佳的並且比
R鏡像異構物更具活性的X射線結構證據，推測的該化合物之立體化學分配）。
1 HNMR (400 MHz, DMSO-d6) 2.19 - 2.31 (1H, m), 2.38 - 2.49 (1H, m), 2.78 (3H, s), 3.37 - 3.47 (1H, m), 3.48 - 3.58 (1H, m), 3.86 (3H, s), 4.28 (1H, d), 4.89 (1H, d), 5.49 (2H, s), 6.11 (1H, d), 7.08 - 7.15 (1H, m), 7.15 - 7.23 (1H, m), 7.36 (1H, d), 10.65 (1H, d)；
m/zMH
+428
實例 25 ： (
S)-2'-((5-
胺基 -6- 氟 -1
H-
吡咯并 [3,2-
b]
吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-1-(4- 氟苄基 ) 螺 [ 吡咯啶 -3,3'- 吡咯并 [3,4-c] 吡啶 ]-1',2(2'
H)-
二酮 步驟 1 ；外消旋 -1-(4- 氟苄基 )-3-((4- 甲氧基苄基 ) 胺基 ) 吡咯啶 -2- 酮
將4-甲氧基苯甲醛（251 µl，2.06 mmol）添加到3-胺基-1-(4-氟苄基)吡咯啶-2-酮（430 mg，2.06 mmol）在DCM（5 mL）中之攪拌溶液中，並將反應混合物在rt下攪拌2小時。添加硼氫化鈉（138 mg，3.65 mmol），然後添加MeOH（5 mL）。將反應混合物攪拌45分鐘，用飽和NaHCO
3（15 mL）淬滅並用DCM（3 x 50 mL）萃取。使用相分離柱分離有機相並真空除去溶劑。將粗產物藉由急速二氧化矽層析法（洗脫梯度為庚烷中的0至100% EtOAc，然後洗脫梯度為EtOAc中的0至20% MeOH）進行純化，以提供呈無色膠狀物的標題化合物（0.64 g，94%）。
1 HNMR (400 MHz, CDCl
3, 30°C) 1.78 (1H, dq), 2.22 (1H, dddd), 3.07 - 3.23 (2H, m), 3.45 (1H, t), 3.80 (1H, d), 3.80 (3H, s), 3.84 (1H, d), 4.34 - 4.50 (2H, m), 6.83 - 6.88 (2H, m), 6.96 - 7.04 (2H, m), 7.19 (2H, ddd), 7.24 - 7.29 (2H, m)；
m/zMH
+329。
步驟 2 ；外消旋 -
N-(1-(4-
氟苄基 )-2- 側氧基吡咯啶 -3- 基 )-
N-(4-
甲氧基苄基 ) 異菸鹼醯胺
將異菸鹼醯氯鹽酸鹽（136 mg，0.76 mmol）添加到1-(4-氟苄基)-3-((4-甲氧基苄基)胺基)吡咯啶-2-酮（125 mg，0.38 mmol）和DIPEA（332 µl，1.90 mmol）在DCM（3 mL）中之攪拌溶液中。將反應混合物攪拌15分鐘並真空濃縮。將粗產物藉由製備型HPLC進行純化，以提供呈固體之標題化合物（159 mg，96%）。
1 HNMR (400 MHz, DMSO-
d 6, 90 °C) 2.02 - 2.12 (1H, m), 2.11 - 2.22 (2H, m), 3.11 - 3.22 (2H, m), 3.76 (3H, s), 4.29 (1H, d), 4.32 - 4.41 (1H, m), 4.45 (1H, d), 4.60 (1H, s), 6.89 (2H, d), 7.11 (2H, t), 7.24 (2H, d), 7.26 - 7.34 (2H, m), 7.38 (2H, d), 8.65 (2H, d)；
m/zMH
+434。
步驟 3 ；外消旋 -1-(4- 氟苄基 )-2'-(4- 甲氧基苄基 ) 螺 [ 吡咯啶 -3,3'- 吡咯并 [3,4-
c]
吡啶 ]-1',2(2'
H)-
二酮
在-78°C下，將雙(三甲矽)醯胺鉀溶液（1 M於THF中）（807 µl，0.81 mmol）逐滴添加到外消旋-
N-(1-(4-氟苄基)-2-側氧基吡咯啶-3-基)-
N-(4-甲氧基苄基)異菸鹼醯胺（140 mg，0.32 mmol）在THF（3 mL）中之攪拌溶液中。將反應混合物在-78°C下攪拌30分鐘並經4小時溫熱至-20°C。將反應混合物在-20°C下保持2天。將反應混合物用甲酸（50 µl，1.30 mmol）淬滅並真空濃縮。將殘餘物溶於DCM（3 mL）中。添加氧化錳(IV)（440 mg，5.06 mmol）並將反應混合物攪拌1小時。濾出無機固體並真空濃縮濾液。將粗產物藉由製備型HPLC純化以提供呈膠狀物的標題化合物（26 mg，19%）。
1 HNMR (400 MHz, CDCl
3, 27°C) 2.24 (1H, ddd), 2.34 (1H, ddd), 3.24 - 3.34 (1H, m), 3.49 (1H, dt), 3.78 (3H, s), 4.06 (1H, d), 4.41 (1H, d), 4.61 (1H, d), 5.25 (1H, d), 6.75 - 6.85 (2H, m), 7.06 - 7.17 (4H, m), 7.25 - 7.3 (2H, m), 7.81 (1H, dd), 8.52 (1H, d), 8.81 (1H, d)；
m/zMH
+432。
步驟 4 ；外消旋 -1-(4- 氟苄基 ) 螺 [ 吡咯啶 -3,3'- 吡咯并 [3,4-
c]
吡啶 ]-1',2(2'
H)-
二酮
將硝酸鈰(IV)銨（182 mg，0.33 mmol）添加到外消旋-1-(4-氟苄基)-2'-(4-甲氧基苄基)螺[吡咯啶-3,3'-吡咯并[3,4-
c]吡啶]-1',2(2'
H)-二酮（26 mg，0.06 mmol）在MeCN（1 mL）和水（0.5 mL）中之攪拌溶液中。將反應混合物在rt下攪拌45分鐘並藉由製備型HPLC進行純化，以提供呈白色固體之標題化合物（14 mg，75%）。
1 HNMR (400 MHz, MeOD-
d 4, 27°C) 2.56 (1H, ddd), 2.65 (1H, ddd), 3.60 (1H, ddd), 3.74 (1H, dt), 4.55 (1H, d), 4.61 (1H, d), 7.09 - 7.16 (2H, m), 7.33 - 7.40 (2H, m), 7.79 (1H, dd), 8.67 (1H, d), 8.79 (1H, d)；
m/zMH
+312。
步驟 5 ；外消旋 -2'-((5- 氯 -6- 氟 -1-((2-( 三甲矽 ) 乙氧基 ) 甲基 )-1
H-
吡咯并 [3,2-
b]
吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-1-(4- 氟苄基 ) 螺 [ 吡咯啶 -3,3'- 吡咯并 [3,4-
c]
吡啶 ]-1',2(2'
H)-
二酮
將外消旋-1-(4-氟苄基)螺[吡咯啶-3,3'-吡咯并[3,4-
c]吡啶]-1',2(2'
H)-二酮（14 mg，0.04 mmol）、5-氯-2-(氯甲基)-6-氟-1-((2-(三甲矽)乙氧基)甲基)-1
H-吡咯并[3,2-
b]吡啶（27 mg，0.08 mmol），碳酸銫（51 mg，0.16 mmol）和DMA（1 mL）之混合物在85°C下攪拌3小時並冷卻至rt。將反應混合物過濾並將濾液藉由製備型HPLC進行純化以提供呈膠狀物的標題化合物（23 mg，80%）。
1 HNMR (400 MHz, CDCl
3, 27°C) -0.07 (9H, s), 0.75 (1H, ddd), 0.84 (1H, ddd), 2.28 (1H, ddd), 2.55 (1H, ddd), 3.37 (1H, td), 3.45 - 3.60 (3H, m), 4.00 (1H, d), 4.42 (1H, d), 5.03 (1H, d), 5.10 (1H, d), 5.44 (1H, d), 5.50 (1H, d), 6.51 (1H, s), 7.03 - 7.14 (4H, m), 7.59 (1H, dd), 7.81 (1H, dd), 8.43 - 8.52 (1H, m), 8.83 (1H, d)；
m/zMH
+624。
步驟 6 ； (
S)-2'-((5-
胺基 -6- 氟 -1
H-
吡咯并 [3,2-
b]
吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-1-(4- 氟苄基 ) 螺 [ 吡咯啶 -3,3'- 吡咯并 [3,4-
c]
吡啶 ]-1',2(2'
H)-
二酮
將三(二苯亞甲基丙酮)二鈀(0)（5 mg，5.41 µmol）添加到外消旋-2'-((5-氯-6-氟-1-((2-(三甲矽)乙氧基)甲基)-1
H-吡咯并[3,2-
b]吡啶-2-基)甲基)-1-(4-氟苄基)螺[吡咯啶-3,3'-吡咯并[3,4-
c]吡啶]-1',2(2'
H)-二酮（22 mg，0.04 mmol）、二苯基甲亞胺（20 mg，0.11 mmol）、tBuXPhos（5 mg，10.81 µmol）和2-甲基丙-2-醇鈉（14 mg，0.15 mmol）在甲苯（2 mL）中的脫氣溶液中。將反應混合物密封在微波管中並在加熱塊中在80°C下加熱1小時。冷卻至rt後，將反應混合物用1滴甲酸淬滅並真空濃縮。將殘餘物再溶解於2,2,2-三氟乙酸（0.5 mL）和水（0.05 mL）中。將反應混合物在40°C下攪拌30分鐘並真空濃縮。添加MeCN（1 mL），然後添加30% NH
3水溶液（0.5 mL）。將混合物密封並在70°C下攪拌30分鐘。將粗製混合物藉由製備型HPLC進行純化，以提供呈膠狀物的外消旋-2'-((5-胺基-6-氟-1
H-吡咯并[3,2-
b]吡啶-2-基)甲基)-1-(4-氟苄基)螺[吡咯啶-3,3'-吡咯并[3,4-
c]吡啶]-1',2(2'
H)-二酮（13 mg，78%）。鏡像異構物使用SFC條件進行分離：柱：YMC直鏈澱粉C，20 x 250 mm，5微米，流動相：45% MeOH + 0.1% NH
3/ 55% scCO
2：60 mL/min；BPR：120巴，柱溫：40℃，UV最大值210 nm（滯留時間：異構物1 - 3.3分鐘和異構物2 - 11.8分鐘），以提供異構物1（6 mg，＞ 99純度，＞ 99% ee）和異構物2（5 mg，＞ 99純度，＞ 99% ee）。
異構物1 - (
R)-2'-((5-胺基-6-氟-1
H-吡咯并[3,2-
b]吡啶-2-基)甲基)-1-(4-氟苄基)螺[吡咯啶-3,3'-吡咯并[3,4-
c]吡啶]-1',2(2'
H)-二酮
1 HNMR (400 MHz, CDCl
3, 27°C) 2.33 (1H, ddd), 2.71 (1H, dt), 3.48 - 3.66 (2H, m), 4.34 (1H, d), 4.40 (2H, s), 4.40 (1H, d), 4.76 (1H, d), 5.03 (1H, d), 6.27 (1H, d), 7.06 - 7.14 (2H, m), 7.26 (3H, s), 7.78 (1H, dd), 8.49 (1H, d), 8.82 (1H, d), 9.11 (1H, s)；
m/zMH
+475。
異構物2（實例25）- (
S)-2'-((5-胺基-6-氟-1
H-吡咯并[3,2-
b]吡啶-2-基)甲基)-1-(4-氟苄基)螺[吡咯啶-3,3'-吡咯并[3,4-
c]吡啶]-1',2(2'
H)-二酮
（基於相對於其他鏡像異構物之生物活性，以及
S鏡像異構物係較佳的並且比
R鏡像異構物更具活性的X射線結構證據，推測的該化合物之立體化學分配）。
1 HNMR (400 MHz, CDCl
3, 27°C) 2.33 (1H, ddd), 2.71 (1H, dt), 3.48 - 3.66 (2H, m), 4.34 (1H, d), 4.40 (2H, s), 4.40 (1H, d), 4.76 (1H, d), 5.03 (1H, d), 6.27 (1H, d), 7.06 - 7.14 (2H, m), 7.26 (3H, s), 7.78 (1H, dd), 8.49 (1H, d), 8.82 (1H, d), 9.11 (1H, s)；
m/zMH
+475
實例 26 ： (
S)-5-
胺基 -2-((5- 氟 -1'-((1- 甲基環丙基 ) 甲基 )-2',3- 二側氧基螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2- 基 ) 甲基 )-1
H-
吡咯并 [3,2-
b]
吡啶 -7- 甲腈 步驟 1 ： (
S)-1-
烯丙基 -2-((5- 溴 -7- 氯 -1-((2-( 三甲矽 ) 乙氧基 ) 甲基 )-1
H-
吡咯并 [3,2-
b]
吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-5- 氟 -3- 側氧基異吲哚啉 -1- 甲酸甲酯
在0°C下，將氫化鈉（60%於礦物油中）（0.29 g，7.26 mmol）添加到在DMF（20 mL）中的(
S)-1-烯丙基-5-氟-3-側氧基異吲哚啉-1-甲酸甲酯（1.73 g，6.93 mmol）中。將反應混合物在rt下攪拌30分鐘。添加5-溴-2-(溴甲基)-7-氯-1-((2-(三甲矽)乙氧基)甲基)-1
H-吡咯并[3,2-
b]吡啶（3.00 g，6.60 mmol）並將反應混合物在rt下攪拌1小時。將反應混合物用飽和NH
4Cl（50 mL）淬滅，並用EtOAc（2 x 100 mL）萃取。將有機相經Na
2SO
4乾燥，過濾並真空除去溶劑。將粗產物藉由急速二氧化矽層析法（洗脫梯度為石油醚（60°C-90°C）中的0至50% EtOAc）進行純化。將純級分蒸發至乾燥，以提供呈黃色固體之標題化合物（3.85 g，94%）。
1 HNMR (300 MHz, DMSO-d6) -0.09 (9H, s), 0.77 - 0.88 (2H, m), 3.08 (3H, s), 3.12 - 3.32 (2H, m), 3.52 - 3.65 (2H, m), 4.77 (1H, d), 4.83 - 5.12 (3H, m), 5.25 (1H, d), 5.67 (1H, d), 5.92 (1H, d), 6.85 (1H, s), 7.41 - 7.70 (4H, m)；
m/zMH
+622
步驟 2 ： (
S)-1-
烯丙基 -2-((5-(( 三級丁氧基羰基 ) 胺基 )-7- 氯 -1-((2-( 三甲矽 ) 乙氧基 ) 甲基 )-1
H-
吡咯并 [3,2-
b]
吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-5- 氟 -3- 側氧基異吲哚啉 -1- 甲酸甲酯
在氮氣下，在rt下，將(
S)-1-烯丙基-2-((5-溴-7-氯-1-((2-(三甲矽)乙氧基)甲基)-1
H-吡咯并[3,2-
b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-3-側氧基異吲哚啉-1-甲酸甲酯（3.80 g，6.10 mmol）添加到在二㗁𠮿（20 mL）中的三(二苯亞甲基丙酮)二鈀(0)（1.12 g，1.22 mmol）、胺基甲酸三級丁酯（0.71 g，6.10 mmol）、9,9-二甲基-4,5-雙(二苯基膦基)𠮿口星（0.71 g，1.22 mmol）和碳酸銫（3.97 g，12.20 mmol）中。將反應混合物在80°C下攪拌4小時，冷卻並真空除去溶劑。將粗產物藉由急速二氧化矽層析法（洗脫梯度為石油醚（60°C-90°C）中的0至30% EtOAc）進行純化。將純級分蒸發至乾燥，以提供呈黃色固體之標題化合物（3.00 g，75%）。
1 HNMR (300 MHz, DMSO-d6) -0.06 (9H, d), 0.84 - 0.89 (2H, m), 1.48 (9H, s), 3.01 - 3.10 (3H, m), 3.13 - 3.33 (2H, m), 3.54 - 3.71 (2H, m), 4.67 - 4.81 (1H, m), 4.84 - 5.15 (3H, m), 5.28 (1H, d), 5.63 (1H, d), 5.90 (1H, d), 6.69 (1H, s), 7.47 - 7.59 (1H, m), 7.59 - 7.71 (2H, m), 7.76 (1H, s), 9.84 (1H, s)；
m/zMH
+659
步驟 3 ： (
S)-2-((5-((
三級丁氧基羰基 ) 胺基 )-7- 氯 -1-((2-( 三甲矽 ) 乙氧基 ) 甲基 )-1
H-
吡咯并 [3,2-
b]
吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-5- 氟 -3- 側氧基 -1-(2- 側氧基乙基 ) 異吲哚啉 -1- 甲酸甲酯
在rt下，將二氧化二側氧基鋨鉀二水合物（0.08 g，0.20 mmol）添加到在二㗁𠮿（75 mL）和水（25 mL）中的(S)-1-烯丙基-2-((5-((三級丁氧基羰基)胺基)-7-氯-1-((2-(三甲矽)乙氧基)甲基)-1
H-吡咯并[3,2-
b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-3-側氧基異吲哚啉-1-甲酸甲酯（2.70 g，4.10 mmol）、高碘酸鈉（3.50 g，16.38 mmol）和2,6-二甲基吡啶（0.88 g，8.19 mmol）中。將反應混合物在rt下攪拌16小時。將反應混合物傾倒入水（150 mL）中並用EtOAc（2 x 200 mL）萃取。合併有機相，用飽和鹽水洗滌，經MgSO
4乾燥並真空除去溶劑。將粗產物藉由急速二氧化矽層析法（洗脫梯度為石油醚（60°C-90°C）中的0至60% EtOAc）進行純化。將純級分蒸發至乾燥，以提供呈黃色泡沫的標題化合物（1.80 g，66%）。
1 HNMR (400 MHz, CDCl
3) -0.03 (9H, s), 0.72 - 0.92 (2H, m), 1.54 (9H, s), 3.27 - 3.41 (2H, m), 3.54 - 3.61 (5H, m), 4.96 (1H, d), 5.22 - 5.38 (1H, m), 5.71 (1H, d), 5.89 (1H, d), 6.38 (1H, s), 7.29 - 7.37 (2H, m), 7.48 - 7.55 (1H, m), 7.57 - 7.64 (1H, m), 7.95 (1H, s), 9.20 (1H, d)；
m/zMH
+661
步驟 4 ： (
S)-(7-
氯 -2-((5- 氟 -1'-((1- 甲基環丙基 ) 甲基 )-2',3- 二側氧基螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2- 基 ) 甲基 )-1-((2-( 三甲矽 ) 乙氧基 ) 甲基 )-1
H-
吡咯并 [3,2-
b]
吡啶 -5- 基 ) 胺基甲酸三級丁酯
在rt下，將乙酸鈉（112 mg，1.36 mmol）添加到在1,2-二氯乙烷（10 mL）中的(
S)-2-((5-((三級丁氧基羰基)胺基)-7-氯-1-((2-(三甲矽)乙氧基)甲基)-1
H-吡咯并[3,2-
b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-3-側氧基-1-(2-側氧基乙基)異吲哚啉-1-甲酸甲酯（450 mg，0.68 mmol）和(1-甲基環丙基)甲胺鹽酸鹽（99 mg，0.82 mmol）中。1小時後，添加三乙醯氧基硼氫化鈉（288 mg，1.36 mmol）並將反應混合物在rt下攪拌16小時。除去溶劑並真空除去溶劑。將粗產物藉由急速二氧化矽層析法（洗脫梯度為石油醚（60°C-90°C）中的0至100% EtOAc）進行純化。將純級分蒸發至乾燥，以提供呈淡黃色固體之標題化合物（0.42 g，88%）。
1 HNMR (300 MHz, DMSO-d6) -0.10 (9H, s), 0.24 - 0.46 (4H, m), 0.60 - 0.82 (2H, m), 0.90 (3H, s), 1.47 (9H, s), 2.35 - 2.49 (2H, m), 2.76 (1H, d), 3.19 (1H, d), 3.42 - 3.63 (3H, m), 3.83 (1H, q), 4.62 (1H, d), 5.18 (1H, d), 5.61 (1H, d), 5.74 - 5.88 (1H, m), 6.48 (1H, s), 7.42 - 7.83 (4H, m), 9.77 (1H, s)；
m/zMH
+698
步驟 5 ： (
S)-5-
胺基 -2-((5- 氟 -1'-((1- 甲基環丙基 ) 甲基 )-2',3- 二側氧基螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2- 基 ) 甲基 )-1
H-
吡咯并 [3,2-
b]
吡啶 -7- 甲腈
在rt下，在氮氣下，將三(二苯亞甲基丙酮)二鈀(0)（108 mg，0.12 mmol）添加到在二㗁𠮿（0.5 mL）中的(
S)-(7-氯-2-((5-氟-1'-((1-甲基環丙基)甲基)-2',3-二側氧基螺[異吲哚啉-1,3'-吡咯啶]-2-基)甲基)-1-((2-(三甲矽)乙氧基)甲基)-1
H-吡咯并[3,2-
b]吡啶-5-基)胺基甲酸三級丁酯（410 mg，0.59 mmol）、1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵（130 mg，0.23 mmol）、氰化鋅（69 mg，0.59 mmol）和鋅（8 mg，0.12 mmol）中。將反應混合物在100°C下攪拌4小時，冷卻，通過Celite®墊過濾並真空除去溶劑。將粗產物藉由急速二氧化矽層析法（洗脫梯度為石油醚（60°C-90°C）中的0至100% EtOAc）進行純化。將純級分蒸發至乾燥，以提供呈棕色膠狀物的(
S)-(7-氰基-2-((5-氟-1'-((1-甲基環丙基)甲基)-2',3-二側氧基螺[異吲哚啉-1,3'-吡咯啶]-2-基)甲基)-1-((2-(三甲矽)乙氧基)甲基)-1
H-吡咯并[3,2-
b]吡啶-5-基)胺基甲酸三級丁酯。添加2,2,2-三氟乙酸（10 mL，129.80 mmol）並將反應混合物在rt下攪拌1小時。真空除去溶劑並將粗產物藉由離子交換層析法（使用SCX柱）純化。使用7 M NH
3/MeOH將所希望的產物從柱上洗脫，將純級分蒸發至乾燥，以提供粗產物。將粗產物藉由製備型HPLC進行純化。將含有所希望的化合物的級分蒸發至乾燥，以提供呈淡黃色固體之標題化合物（85 mg，32%）。
1 HNMR (400 MHz, DMSO-d6) 0.25 - 0.55 (4H, m), 0.97 (3H, s), 2.37 - 2.50 (2H, m), 2.93 (1H, d), 3.36 (1H, d), 3.48 - 3.58 (1H, m), 3.79 - 3.90 (1H, m), 4.30 (1H, d), 5.03 (1H, d), 5.78 (2H, s), 6.13 (1H, s), 6.59 (1H, s), 7.39 - 7.79 (3H, m), 11.60 (1H, s)；
m/zMH
+459
實例 27 ： (
S)-2-((5-
胺基 -6- 氯 -1
H-
吡咯并 [3,2-
b]
吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-5- 氟 -1'-(2-( 三氟甲氧基 ) 乙基 ) 螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮 步驟 1 ： (
S)-5-
氟 -1'-(2-( 三氟甲氧基 ) 乙基 ) 螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮
將2-(三氟甲氧基)乙-1-胺（2.92 g，22.62 mmol）添加到在1,2-二氯乙烷（80 mL）中的(
S)-5-氟-2-(4-甲氧基苄基)-3-側氧基-1-(2-側氧基乙基)異吲哚啉-1-甲酸甲酯（8.00 g，21.54 mmol）中。1小時後，添加三乙醯氧基硼氫化鈉（10.96 g，51.70 mmol）並將反應混合物在rt下攪拌16小時。真空除去溶劑。將粗產物藉由急速矽膠層析法（洗脫梯度為EtOAc中0至60%石油醚）進行純化。將純級分蒸發至乾燥，以提供外消旋-(
R)-5-氟-2-(4-甲氧基苄基)-1'-(2-(三氟甲氧基)乙基)螺[異吲哚啉-1,3'-吡咯啶]-2',3-二酮（9.50 g，97%）。在rt下，將該物質添加到在MeCN（70 mL）和水（35 mL）中的硝酸鈰(IV)銨（23.02 g，42.00 mmol）中。將反應混合物在rt下攪拌2小時。將反應混合物用水（70 mL）稀釋，並用EtOAc（3 x 200 mL）萃取。將有機相經Na
2SO
4乾燥並真空除去溶劑。將粗產物藉由急速二氧化矽層析法（洗脫梯度為石油醚（60°C-90°C）中0至60% EtOAc，以及洗脫梯度為DCM中0至25% MeOH）進行純化。將外消旋粗產物藉由製備型手性HPLC進行純化。將純級分蒸發至乾燥，以提供呈黃色固體之標題化合物（4.50 g，65%）。
1 HNMR (400 MHz, DMSO-d6) 2.36 - 2.50 (2H, m), 3.50 - 3.61 (1H, m), 3.58 - 3.68 (1H, m), 3.68 - 3.84 (2H, m), 4.21 - 4.34 (2H, m), 7.41 - 7.55 (3H, m), 9.10 (1H, s)；
m/zMH
+333
步驟 2 ： ((
S)-2-((5-
氯 -1- 甲苯磺醯基 -1
H-
吡咯并 [3,2-
b]
吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-5- 氟 -1'-(2-( 三氟甲氧基 ) 乙基 ) 螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮
在0°C下，將氫化鈉（60%於礦物油中）（66 mg，1.66 mmol）添加到在THF（15 mL）中的(
S)-5-氟-1'-(2-(三氟甲氧基)乙基)螺[異吲哚啉-1,3'-吡咯啶]-2',3-二酮（460 mg，1.39 mmol）中並將反應混合物在rt下攪拌1小時。添加2-(溴甲基)-5-氯-1-甲苯磺醯基-1
H-吡咯并[3,2-
b]吡啶（720 mg，1.80 mmol）並將反應混合物在rt下攪拌3小時。將反應混合物用飽和NH
4Cl淬滅，用飽和NaHCO
3（25 mL）鹼化並用EtOAc（3 x 25 mL）萃取。將有機相經Na
2SO
4乾燥並真空除去溶劑。將粗產物藉由急速二氧化矽層析法（洗脫梯度為DCM中的0至40% EtOAc）進行純化。將純級分蒸發至乾燥，以提供呈黃色固體之標題化合物（0.45 g，50%）。
1 HNMR (400 MHz, DMSO-d6) 2.38 (3H, s), 2.52 - 2.63 (2H, m), 3.49 - 3.61 (2H, m), 3.73 - 3.84 (1H, m), 3.84 - 3.95 (1H, m), 4.20 - 4.34 (2H, m), 4.68 (1H, d), 5.24 (1H, d), 6.73 (1H, s), 7.40 (1H, d), 7.43 - 7.50 (2H, m), 7.51 - 7.67 (3H, m), 7.86 - 7.93 (2H, m), 8.38 - 8.44 (1H, m)；
m/zMH
+651
步驟 3 ： (
S)-(2-((5-
氟 -2',3- 二側氧基 -1'-(2-( 三氟甲氧基 ) 乙基 ) 螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2- 基 ) 甲基 )-1- 甲苯磺醯基 -1
H-
吡咯并 [3,2-
b]
吡啶 -5- 基 ) 胺基甲酸三級丁酯
在氮氣下，在rt下，將XPhos Pd G2（53 mg，0.07 mmol）添加到在1,4-二㗁𠮿（0.5 mL）中的(
S)-2-((5-氯-1-甲苯磺醯基-1
H-吡咯并[3,2-
b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1'-(2-(三氟甲氧基)乙基)螺[異吲哚啉-1,3'-吡咯啶]-2',3-二酮（443 mg，0.68 mmol）、二環己基(2',4',6'-三異丙基-[1,1'-聯苯基]-2-基)磷烷（32 mg，0.07 mmol）、碳酸銫（443 mg，1.36 mmol）和胺基甲酸三級丁酯（239 mg，2.04 mmol）中。將反應混合物在90°C下攪拌6小時，冷卻並真空除去溶劑。將粗產物藉由急速二氧化矽層析法（洗脫梯度為DCM中的0至30% EtOAc）進行純化。將純級分蒸發至乾燥，以提供呈黃色固體之標題化合物（0.26 g，51%）。
1 HNMR (400 MHz, DMSO-d6) 1.46 (9H, s), 1.99 (1H, s), 2.36 (3H, s), 3.51 - 3.58 (2H, m), 3.74 - 3.90 (2H, m), 4.04 (1H, q), 4.24 - 4.30 (2H, m), 4.63 (1H, d), 5.23 (1H, d), 6.51 (1H, s), 7.43 (2H, d), 7.53 - 7.63 (3H, m), 7.78 (1H, d), 7.82 - 7.86 (2H, m), 8.30 (1H, d), 9.74 (1H, s)；
m/zMH
+732
步驟 4 ： (
S)-2-((5-
胺基 -1- 甲苯磺醯基 -1
H-
吡咯并 [3,2-
b]
吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-5- 氟 -1'-(2-( 三氟甲氧基 ) 乙基 ) 螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮
將(
S)-(2-((5-氟-2',3-二側氧基-1'-(2-(三氟甲氧基)乙基)螺[異吲哚啉-1,3'-吡咯啶]-2-基)甲基)-1-甲苯磺醯基-1
H-吡咯并[3,2-
b]吡啶-5-基)胺基甲酸三級丁酯（246 mg，0.34 mmol）溶於DCM（5 mL）和2,2,2-三氟乙酸（5 mL）中。將反應混合物在rt下攪拌2小時並真空除去溶劑。將粗產物藉由離子交換層析法（使用SCX柱）進行純化。將所希望的產物使用7 M NH
3/MeOH從柱上洗脫並且將級分蒸發至乾燥。將粗產物藉由快速C18急速層析法（洗脫梯度為水（0.1% NH
4HCO
3）中0至100% MeOH）進行純化。將純級分蒸發至乾燥，以提供呈白色固體之標題化合物（0.13 g，62%）。
m/zMH
+632。
步驟 5 ： (
S)-2-((5-
胺基 -6- 氯 -1- 甲苯磺醯基 -1
H-
吡咯并 [3,2-
b]
吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-5- 氟 -1'-(2-( 三氟甲氧基 ) 乙基 ) 螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮
在rt下，將N-氯代琥珀醯亞胺（19 mg，0.14 mmol）添加到在DMF（5 mL）中的(
S)-2-((5-胺基-1-甲苯磺醯基-1
H-吡咯并[3,2-
b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1'-(2-(三氟甲氧基)乙基)螺[異吲哚啉-1,3'-吡咯啶]-2',3-二酮（93 mg，0.14 mmol）中。將反應混合物在rt下攪拌12小時。真空除去溶劑。將殘餘物用EtOAc（50 mL）稀釋，並且依次用水（2 x 50 mL）和飽和鹽水（20 mL）洗滌。將有機相經Na
2SO
4乾燥，過濾並真空除去溶劑。將粗產物藉由急速二氧化矽層析法（洗脫梯度為EtOAc中的0至30% DCM）進行純化。將純級分蒸發至乾燥，以提供呈白色固體之標題化合物（60 mg，64%）。
1 HNMR (400 MHz, DMSO-d6) 1.23 (2H, s), 2.37 (3H, s), 3.50 - 3.57 (2H, m), 3.75 - 3.91 (2H, m), 4.25 (2H, dd), 4.53 (1H, d), 5.17 (1H, d), 6.24 (2H, s), 6.34 (1H, s), 7.44 (2H, d), 7.57 - 7.60 (2H, m), 7.80 (2H, d), 8.07 (1H, d) (1H在DMSO訊息下)；
m/zMH
+666
步驟 6 ； (
S)-2-((5-
胺基 -6- 氯 -1
H-
吡咯并 [3,2-
b]
吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-5- 氟 -1'-(2-( 三氟甲氧基 ) 乙基 ) 螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮
在rt下，將四丁基氟化銨三水合物（78 mg，0.25 mmol）添加到在MeCN（1 mL）中的(
S)-2-((5-胺基-6-氯-1-甲苯磺醯基-1
H-吡咯并[3,2-
b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1'-(2-(三氟甲氧基)乙基)螺[異吲哚啉-1,3'-吡咯啶]-2',3-二酮（55 mg，0.08 mmol）中。將反應混合物在80°C下攪拌2小時，冷卻並真空除去溶劑。將粗產物藉由快速C18-急速層析法（洗脫梯度為水（0.1% NH
4HCO
3）中的0至100% MeCN）進行純化。將級分蒸發至乾燥並將不純的產物藉由製備型HPLC進行純化。將含有所希望的化合物的級分蒸發至乾燥，以提供呈白色固體之標題化合物（5 mg，12%）。
1 HNMR (300 MHz, DMSO-d6) 2.40 (2H, d), 3.47 - 3.74 (4H, m), 3.76 - 3.88 (1H, m), 4.20 - 4.35 (3H, m), 5.01 (1H, d), 5.73 (1H, s), 6.10 (1H, s), 7.46 - 7.64 (4H, m), 10.84 (1H, s)；
m/zMH
+512
實例 28 ： (
S)-2-((6-
胺基 -4- 甲基 -1
H-
吡咯并 [2,3-
b]
吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-5- 氟 -1'-(2,4,5- 三氟苄基 ) 螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮 步驟 1 ； (
S)-5-
氟 -1'-(2,4,5- 三氟苄基 ) 螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮
將(
S)-5-氟-2-(4-甲氧基苄基)-3-側氧基-1-(2-側氧基乙基)異吲哚啉-1-甲酸甲酯（1.50 g，4.04 mmol）和2,4,5-三氟苄胺（0.78 g，4.85 mmol）置於具有1,2-二氯乙烷（30 mL）的燒瓶中。添加乙酸（0.46 mL，8.08 mmol），然後添加三乙醯氧基硼氫化鈉（1.71 g，8.08 mmol）。將反應混合物在40°C下攪拌2小時，冷卻，用DCM（100 mL）稀釋並用飽和NaHCO
3（100 mL）洗滌。將有機相通過相分離濾紙，並真空除去溶劑，以提供呈白色泡沫的粗製(
S)-5-氟-2-(4-甲氧基苄基)-1'-(2,4,5-三氟苄基)螺[異吲哚啉-1,3'-吡咯啶]-2',3-二酮（1.96 g，4.04 mmol）。將粗製(
S)-5-氟-2-(4-甲氧基苄基)-1'-(2,4,5-三氟苄基)螺[異吲哚啉-1,3'-吡咯啶]-2',3-二酮（1.96 g，4.04 mmol）置於具有MeCN（30 mL）和水（15 mL）的燒瓶中。添加硝酸鈰(IV)銨（6.64 g，12.12 mmol）並將反應混合物在rt下攪拌30分鐘。將反應混合物在DCM（100 mL）與水（100 mL）之間分配。將有機相通過相分離濾紙並真空除去溶劑。將粗產物藉由急速二氧化矽層析法（洗脫梯度為庚烷中的0至100% EtOAc）進行純化。將純級分蒸發至乾燥至呈灰白色結晶固體之標題化合物（1.06 g，72%）。
1 HNMR (400 MHz, DMSO-d6, 30°C) 2.41 (1H, ddd), 2.52 - 2.56 (1H, m), 3.53 (1H, td), 3.66 (1H, dt), 4.52 (2H, s), 7.45 (3H, qt), 7.50 - 7.57 (1H, m), 7.61 (1H, ddd), 9.11 (1H, s)；
m/zMH
+365。
步驟 2 ； (
S)-2-((6-
氯 -4- 甲基 -1-((2-( 三甲矽 ) 乙氧基 ) 甲基 )-1
H-
吡咯并 [2,3-
b]
吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-5- 氟 -1'-(2,4,5- 三氟苄基 ) 螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮
將(
S)-5-氟-1'-(2,4,5-三氟苄基)螺[異吲哚啉-1,3'-吡咯啶]-2',3-二酮（200 mg，0.55 mmol）置於具有無水DMF（2 mL）的燒瓶中。添加碳酸銫（537 mg，1.65 mmol），然後添加溶解在無水DMF（2 mL）中的6-氯-2-(氯甲基)-4-甲基-1-((2-(三甲矽)乙氧基)甲基)-1
H-吡咯并[2,3-
b]吡啶（209 mg，0.60 mmol），並將反應混合物在110°C下攪拌1小時。將反應混合物用飽和NH
4Cl（50 mL）淬滅，並萃取到EtOAc（50 mL）中。將有機相用水（2 x 50 mL），鹽水（50 mL）洗滌，通過相分離器並真空除去溶劑。將粗產物藉由急速二氧化矽層析法（洗脫梯度為庚烷中的0至100% EtOAc）進行純化。將純級分蒸發至乾燥，以提供呈淡黃色油狀物的標題化合物（320 mg，87%）。
1 HNMR (400 MHz, DMSO-d6, 30°C) -0.12 (9H, s), 0.71 (2H, dddd), 2.43 (5H, s), 3.35 (1H, ddd), 3.43 (2H, dtd), 3.62 - 3.73 (1H, m), 4.36 (2H, s), 4.57 (1H, d), 5.16 (1H, d), 5.50 (1H, d), 5.62 (1H, d), 6.45 (1H, s), 7.02 (1H, d), 7.37 - 7.45 (1H, m), 7.49 - 7.63 (4H, m)；
m/zMH
+673
步驟 3 ； (
S)-(2-((5-
氟 -2',3- 二側氧基 -1'-(2,4,5- 三氟苄基 ) 螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2- 基 ) 甲基 )-4- 甲基 -1-((2-( 三甲矽 ) 乙氧基 ) 甲基 )-1
H-
吡咯并 [2,3-
b]
吡啶 -6- 基 ) 胺基甲酸三級丁酯
將(
S)-2-((6-氯-4-甲基-1-((2-(三甲矽)乙氧基)甲基)-1
H-吡咯并[2,3-
b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1'-(2,4,5-三氟苄基)螺[異吲哚啉-1,3'-吡咯啶]-2',3-二酮（350 mg，0.52 mmol）、胺基甲酸三級丁酯（305 mg，2.60 mmol）和碳酸銫（508 mg，1.56 mmol）置於具有1,4-二㗁𠮿（2 mL）的燒瓶中。將反應脫氣15分鐘，添加XPhos Pd G2（40.9 mg，0.05 mmol）並將反應混合物在100°C下加熱1小時。使反應混合物冷卻，用EtOAc（20 mL）稀釋，用水（20 mL）和鹽水（20 mL）洗滌。將有機相通過相分離過濾器並真空除去溶劑。將粗產物藉由急速二氧化矽層析法（洗脫梯度為庚烷中的0至100% EtOAc）進行純化。將純級分蒸發至乾燥，以提供呈淡黃色油狀物的標題化合物（330 mg，84%）。
1 HNMR (400 MHz, DMSO-d6, 30°C) -0.13 (9H, s), 0.54 - 0.65 (1H, m), 0.71 (1H, dt), 1.27 - 1.31 (1H, m), 1.46 (9H, s), 2.37 (4H, d), 3.32 (1H, d), 3.37 - 3.43 (2H, m), 3.60 - 3.71 (1H, m), 4.29 - 4.41 (2H, m), 4.50 (1H, d), 5.17 (1H, d), 5.43 (1H, d), 5.57 (1H, d), 6.28 (1H, s), 7.36 - 7.40 (1H, m), 7.41 - 7.47 (1H, m), 7.48 - 7.67 (4H, m), 9.36 (1H, s)；
m/zMH
+754
步驟 4 ： (
S)-2-((6-
胺基 -4- 甲基 -1
H-
吡咯并 [2,3-
b]
吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-5- 氟 -1'-(2,4,5- 三氟苄基 ) 螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮
將(S)-(2-((5-氟-2',3-二側氧基-1'-(2,4,5-三氟苄基)螺[異吲哚啉-1,3'-吡咯啶]-2-基)甲基)-4-甲基-1-((2-(三甲矽)乙氧基)甲基)-1
H-吡咯并[2,3-
b]吡啶-6-基)胺基甲酸三級丁酯（330 mg，0.44 mmol）置於具有2,2,2-三氟乙酸（1997 mg，17.51 mmol）的燒瓶中。將反應混合物在rt下攪拌1小時。真空除去2,2,2-三氟乙酸並將殘餘物溶於MeCN（4 mL）中。添加氫氧化銨（28%-30%水溶液）（2045 µl，52.53 mmol）並將反應混合物在40°C下攪拌4小時，然後在rt下放置過夜。將粗產物藉由製備型HPLC進行純化。將含有所希望的化合物的級分蒸發至乾燥，以提供呈膏狀固體之標題化合物（14 mg，61%）。
1 HNMR (400 MHz, DMSO-d6, 30°C) 2.22 (3H, d), 2.35 - 2.42 (2H, m), 3.31 - 3.38 (1H, m), 3.59 - 3.69 (1H, m), 4.14 (1H, d), 4.51 (2H, q), 4.97 - 5.09 (1H, m), 5.41 (2H, s), 5.97 (1H, d), 6.04 (1H, d), 7.45 - 7.53 (2H, m), 7.56 (2H, dt), 7.64 (1H, ddd), 10.66 (1H, d)；
m/zMH
+524
實例 29 ： (1
S,5'
S)-2-((5-
胺基 -6- 氟 -1
H-
吡咯并 [3,2-
b]
吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-5- 氟 -1',5'- 二甲基螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮 步驟 1 ；外消旋 -5- 氟 -2-(4- 甲氧基苄基 )-1-(2- 甲基烯丙基 )-3- 側氧基異吲哚啉 -1- 甲酸甲酯 EN11657-70-01
將3-溴-2-甲基丙-1-烯（350 µl，3.45 mmol）添加到外消旋-5-氟-2-(4-甲氧基苄基)-3-側氧基異吲哚啉-1-甲酸甲酯（508 mg，1.54 mmol）、碳酸鉀（682 mg，4.94 mmol）的攪拌混合物中，並將反應混合物在70°C下攪拌90分鐘，然後在rt下攪拌36小時。將反應混合物用飽和NH
4Cl（10 mL）和水（10 mL）淬滅，然後用DCM（3 x 15 mL）萃取。將有機相通過相分離柱並真空除去溶劑。將粗產物藉由急速二氧化矽層析法（洗脫梯度為庚烷中的0至60% EtOAc）進行純化。將純級分蒸發至乾燥，以提供呈蠟狀固體之標題化合物（0.53 g，89%）。
1 HNMR (400 MHz, CDCl
3, 30°C) 1.17 - 1.23 (3H, m), 3.07 (3H, s), 3.09 (1H, d), 3.17 (1H, d), 3.77 (3H, s), 4.26 (1H, d), 4.45 - 4.53 (1H, m), 4.67 (1H, p), 5.13 (1H, d), 6.80 - 6.85 (2H, m), 7.22 (1H, td), 7.28 - 7.35 (3H, m), 7.54 (1H, dd)；
m/zMH
+384
步驟 2 ；外消旋 -5- 氟 -2-(4- 甲氧基苄基 )-3- 側氧基 -1-(2- 側氧基丙基 ) 異吲哚啉 -1- 甲酸甲酯
將外消旋-5-氟-2-(4-甲氧基苄基)-1-(2-甲基烯丙基)-3-側氧基異吲哚啉-1-甲酸甲酯（515 mg，1.34 mmol）在DCM（5 mL）中之溶液添加到高碘酸鈉（1149 mg，5.37 mmol）在水（5 mL）中之溶液中。添加氯化釕(III)水合物（7 mg，0.03 mmol）並將混合物在rt下攪拌18小時。將反應混合物用偏亞硫酸氫鈉溶液（10%水溶液，15 mL）小心地淬滅並萃取到DCM（10 mL）中。將有機相通過相分離柱並真空除去溶劑。將粗產物藉由急速二氧化矽層析法（洗脫梯度為庚烷中的0至60% EtOAc）進行純化。將純級分蒸發至乾燥，以提供呈固體之標題化合物（0.38 g，74%）。
1 HNMR (400 MHz, CDCl
3, 30°C) 1.52 (3H, s), 2.82 (1H, d), 3.37 (1H, d), 3.68 (3H, s), 3.76 (3H, s), 4.37 (1H, d), 5.27 (1H, d), 6.73 - 6.85 (2H, m), 7.11 (2H, d), 7.25 (1H, td), 7.52 (1H, dd), 7.57 (1H, dd)；
m/zMH
+386
步驟 3 ； rel -(1
S,5'
S)-5-
氟 -2-(4- 甲氧基苄基 )-1',5'- 二甲基螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮
將三乙醯氧基硼氫化鈉（458 mg，2.16 mmol）添加到在微波管中的5-氟-2-(4-甲氧基苄基)-3-側氧基-1-(2-側氧基丙基)異吲哚啉-1-甲酸甲酯（380 mg，0.99 mmol）、乙酸鈉（404 mg，4.93 mmol）和甲胺鹽酸鹽（333 mg，4.93 mmol）的攪拌溶液中。將微波管密封並將反應混合物在微波反應器中加熱至70°C持續13小時並冷卻至rt。將反應混合物用飽和NaHCO
3（5 mL）淬滅並用DCM（3 x 10 mL）萃取。將有機相通過相分離柱並真空除去溶劑。將粗產物藉由製備型HPLC純化，以提供呈白色固體之
rel-(1
S,5'
S)-5-氟-2-(4-甲氧基苄基)-1',5'-二甲基螺[異吲哚啉-1,3'-吡咯啶]-2',3-二酮（32 mg，9%），呈白色固體之
rel-(1
R,5'
S)-5-氟-2-(4-甲氧基苄基)-1',5'-二甲基螺[異吲哚啉-1,3'-吡咯啶]-2',3-二酮（43 mg，12%）。
（注意：該等化合物之相對立體化學分配藉由2D NMR實驗確定）
rel -(1
S,5'
S)-5-
氟 -2-(4- 甲氧基苄基 )-1',5'- 二甲基螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮
1 HNMR (400 MHz, CDCl
3, 30°C) 1.25 (3H, d), 1.93 (1H, dd), 2.28 (1H, dd), 2.96 (3H, s), 3.79 (3H, s), 3.80 - 3.89 (1H, m), 3.98 (1H, d), 5.30 (1H, d), 6.81 - 6.87 (2H, m), 7.13 - 7.25 (4H, m), 7.56 (1H, ddd)；
m/zMH
+369。
rel -(1
R,5'
S)-5-
氟 -2-(4- 甲氧基苄基 )-1',5'- 二甲基螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮
1 HNMR (400 MHz, CDCl
3, 30°C) 1.33 (3H, d), 2.01 (1H, dd), 2.48 (1H, dd), 2.73 (3H, s), 3.45 - 3.55 (1H, m), 3.79 (3H, s), 4.37 (1H, d), 4.84 (1H, d), 6.81 - 6.86 (2H, m), 7.18 - 7.27 (4H, m), 7.56 (1H, ddd)；
m/zMH
+369。
步驟 4 ； rel -(1
S,5'
S)-5-
氟 -1',5'- 二甲基螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮
將硝酸鈰(IV)銨（208 mg，0.38 mmol）添加到
rel-(1
S,5'
S)-5-氟-2-(4-甲氧基苄基)-1',5'-二甲基螺[異吲哚啉-1,3'-吡咯啶]-2',3-二酮（28 mg，0.08 mmol）在MeCN（2 mL）和水（1 mL）中之攪拌溶液中。將反應混合物攪拌30分鐘，然後萃取到DCM（3 x 10 mL）中。將有機相通過相分離柱並真空除去溶劑。將粗產物藉由急速二氧化矽層析法（洗脫梯度為庚烷中的0至100% EtOAc）進行純化，以提供呈膠狀物的標題化合物（16 mg，83%）。
1 HNMR (400 MHz, CDCl
3, 30°C) 1.42 (3H, d), 2.11 (1H, dd), 2.70 (1H, dd), 2.96 (3H, s), 3.93 (1H, h), 6.92 (1H, s), 7.21 - 7.25 (2H, m), 7.47 - 7.53 (1H, m)；
m/zMH
+249。
JACS
1H
NMR (400 MHz, CDCl
3, 30°C) 1.42 (d, J = 6.2 Hz, 3H), 2.11 (dd, J = 13.5, 7.7 Hz, 1H), 2.70 (dd, J = 13.5, 6.7 Hz, 1H), 2.96 (s, 3H), 3.93 (h, J = 6.3 Hz, 1H), 6.92 (s, 1H), 7.21 - 7.25 (m, 2H), 7.47 - 7.53 (m, 1H)。
步驟 5 ； rel -(1
S,5'
S)-2-((5-
氯 -6- 氟 -1-((2-( 三甲矽 ) 乙氧基 ) 甲基 )-1
H-
吡咯并 [3,2-
b]
吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-5- 氟 -1',5'- 二甲基螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮
將
rel-(1
S,5'
S)-5-氟-1',5'-二甲基螺[異吲哚啉-1,3'-吡咯啶]-2',3-二酮（15.7 mg，0.06 mmol）、5-氯-2-(氯甲基)-6-氟-1-((2-(三甲矽)乙氧基)甲基)-1
H-吡咯并[3,2-
b]吡啶（38 mg，0.11 mmol）、碳酸銫（72 mg，0.22 mmol）和DMA（1 mL）之混合物在85°C下攪拌3小時，然後冷卻至rt。將反應混合物過濾並將濾液藉由製備型HPLC進行純化以提供呈膠狀物的標題化合物（27 mg，75%）。
1 HNMR (400 MHz, CDCl
3, 30°C) -0.08 (9H, s), 0.74 (1H, ddd), 0.84 (1H, ddd), 1.28 (3H, d), 1.99 - 2.06 (1H, m), 2.33 (1H, dd), 2.75 (3H, s), 3.46 - 3.58 (2H, m), 3.85 (1H, dt), 4.95 (1H, d), 5.11 (1H, d), 5.46 (1H, d), 5.52 (1H, d), 6.52 (1H, s), 7.17 (1H, dd), 7.23 (1H, td), 7.54 - 7.60 (2H, m)；
m/zMH
+561。
步驟 6 ； (1
S,5'
S)-2-((5-
胺基 -6- 氟 -1
H-
吡咯并 [3,2-
b]
吡啶 -2- 基 ) 甲基 )-5- 氟 -1',5'- 二甲基螺 [ 異吲哚啉 -1,3'- 吡咯啶 ]-2',3- 二酮
將三(二苯亞甲基丙酮)二鈀(0)（6 mg，6.68 µmol）添加到在微波管中的
rel-(1
S,5'
S)-2-((5-氯-6-氟-1-((2-(三甲矽)乙氧基)甲基)-1
H-吡咯并[3,2-
b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1',5'-二甲基螺[異吲哚啉-1,3'-吡咯啶]-2',3-二酮（25 mg，0.04 mmol）、二苯基甲亞胺（16 mg，0.09 mmol）、tBuXPhos（6 mg，0.01 mmol）和2-甲基丙-2-醇鈉（17 mg，0.18 mmol）在甲苯（3 mL）中的脫氣溶液中。將反應混合物在微波反應器中加熱至80°C，持續1小時，然後在加熱塊中在70°C下攪拌17小時。將反應混合物真空濃縮。添加2,2,2-三氟乙酸（0.5 mL）和水（0.05 mL），將反應混合物在rt下攪拌2小時並真空濃縮。將殘餘物再溶於MeCN（1 mL）中並添加28%-30%氨水溶液（1 mL）。將反應混合物攪拌3.5小時，過濾並藉由製備型HPLC進行純化，以提供外消旋產物（8 mg，41%）。鏡像異構物使用SFC條件進行分離：柱：Phenomenex Lux iC5，21.2 x 250 mm，5微米，流動相：45% MeOH + 0.1% NH
3/55% scCO
2，流速：60 mL/min；BPR：120巴，柱溫：40℃，UV最大值220 nm（滯留時間：異構物1 - 6.8分鐘和異構物2 - 8.5分鐘），以提供異構物1（1.6 mg，＞ 99純度，＞ 99% ee）和異構物2（2.5 mg，＞ 99純度，＞ 99% ee）。
異構物1 - (1
R,5'
R)-2-((5-胺基-6-氟-1
H-吡咯并[3,2-
b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1',5'-二甲基螺[異吲哚啉-1,3'-吡咯啶]-2',3-二酮
1 HNMR (400 MHz, CDCl
3, 30°C) 1.45 (3H, d), 2.29 (1H, dd), 2.44 (1H, dd), 3.00 (3H, s), 3.94 (1H, dt), 4.29 (1H, d), 4.37 (2H, s), 5.04 (1H, d), 6.28 (1H, d), 7.17 - 7.25 (3H, m), 7.53 (1H, dd), 9.34 (1H, s)；
m/zMH
+411。
異構物2（實例29）- (1
S,5'
S)-2-((5-胺基-6-氟-1
H-吡咯并[3,2-
b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1',5'-二甲基螺[異吲哚啉-1,3'-吡咯啶]-2',3-二酮
1 HNMR (400 MHz, CDCl
3, 30°C) 1.45 (3H, d), 2.29 (1H, dd), 2.44 (1H, dd), 3.00 (3H, s), 3.94 (1H, dt), 4.29 (1H, d), 4.37 (2H, s), 5.04 (1H, d), 6.28 (1H, d), 7.17 - 7.25 (3H, m), 7.53 (1H, dd), 9.34 (1H, s)；
m/zMH
+411。
（基於相對於其他鏡像異構物之生物活性，以及S鏡像異構物係較佳的並且比R鏡像異構物更具活性的X射線結構證據，推測的該化合物在四級中心處的立體化學分配；實例29之相對立體化學組態已經從步驟3的先前中間體之NMR分析中得到證實）。
無
為了更好地理解本發明，本文參考以下附圖：
[
圖 1]：與PRMT5結合的實例1和MTA的蛋白質晶體結構。該蛋白質晶體結構說明本說明書之化合物與MTA一起結合PRMT5。還可見的是螺環系統之立體化學以及抑制劑與PRMT5之殘基如Leu312、Glu435、Glu444、Ser578和Phe580的關鍵相互作用。
無
Claims (17)
- 一種具有式 (I) 的化合物或其藥學上可接受的鹽， (I) 其中： 含有X和Y的環係吡咯且X係NH且Y係CH或X係CH且Y係NH； Z選自CH、CF、CCl，如果Q不是N，Z選自CH、CF、CCl或N； Q選自CH、CF、CCl，如果Z不是N，Q選自CH、CF、CCl或N； m係0、1或2； n係0、1或2； p係1或2； R 1在每次出現時獨立地選自F、Cl、CN、Me、CF 3、C 1-C 3烷基、環丙基、C 1-C 3氟烷基、OMe或C 1-C 3烷氧基； R 2在每次出現時獨立地選自F、Cl、Me、MeO和CF 3； R 3係H、Me、C 1-C 3烷基或C 1-C 3氟烷基； R 4係H、Me或C 1-C 3烷基； R 5係H、Me、C 1-C 3烷基、C 1-C 3氟烷基、CH 2OMe、CH 2OCHF 2、CH 2OCF 3、CH 2O(C 1-C 3烷基)、CH 2O(C 1-C 3氟烷基)、C(CH 2CH 2)R 6、CCR 7、CH 2R 8、R 9或CH 2R 10； R 6係H、Me、CH 2F、CHF 2、CF 3、CH 2OH或CH 2OMe； R 7係H、Me、環丙基、C 1-C 3烷基、C 1-C 3氟烷基、C 3-C 6環烷基或視需要地被Me、C 1-C 3烷基、F或Cl取代的5員雜芳基基團； R 8係視需要地被Me、C 1-C 3烷基、F或Cl取代的5員雜芳基； R 9係視需要取代的苯基、5員或6員雜芳基或雙環雜芳基基團；並且 R 10係視需要取代的苯基、5員或6員雜芳基或雙環雜芳基基團。
- 如請求項1所述之化合物，其中Y係N。
- 如請求項1所述之化合物，其中X係N。
- 如任一前述請求項所述之化合物，其中p係1。
- 如任一前述請求項所述之化合物，其中Z係CF且Q係CH、CF或CCl。
- 如任一前述請求項所述之化合物，其中m係1或2且其中至少一個R 1基團係F。
- 如任一前述請求項所述之化合物，其中R 3係H。
- 如任一前述請求項所述之化合物，其中n係0。
- 如任一前述請求項所述之化合物，其中R 5係R 9。
- 如請求項1至8中任一項所述之化合物，其中R 5係CH 2R 8或CH 2R 10。
- 如請求項1至8中任一項所述之化合物，其中R 5係CCR 7。
- 一種藥物組成物，其包含如任一前述請求項所述之化合物。
- 如請求項1至11中任一項所述之化合物，其用於作為藥物使用。
- 一種治療有需要的患者之方法，該方法包括投與如請求項1至11中任一項所述之化合物。
- 如請求項1至11中任一項所述之化合物，其用於在製造藥物中使用。
- 如請求項13或請求項15所述之用途或如請求項14所述之方法，其中該用途、藥物或方法用於治療癌症，視需要地其中該癌症選自胰臟癌、大腸直腸癌、子宮癌、膽管癌、胃癌、膀胱癌、宮頸癌、睪丸生殖細胞癌和非小細胞肺癌和多發性骨髓瘤、彌漫型大B細胞淋巴瘤、橫紋肌肉瘤和皮膚鱗狀細胞癌。
- 如請求項13或請求項15所述之用途或如請求項14所述之方法，其中該用途、藥物或方法用於治療具有MTAP基因缺失的癌症，視需要地其中該癌症選自胰臟癌、大腸直腸癌、子宮癌、膽管癌、胃癌、膀胱癌、宮頸癌、睪丸生殖細胞癌和非小細胞肺癌和多發性骨髓瘤、彌漫型大B細胞淋巴瘤、橫紋肌肉瘤和皮膚鱗狀細胞癌。
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