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TW202241954A - 靶向ｂ７－ｈ４之抗體－藥物共軛體和使用彼之方法 - Google Patents

靶向ｂ７－ｈ４之抗體－藥物共軛體和使用彼之方法 Download PDF

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TW202241954A
TW202241954A TW111100248A TW111100248A TW202241954A TW 202241954 A TW202241954 A TW 202241954A TW 111100248 A TW111100248 A TW 111100248A TW 111100248 A TW111100248 A TW 111100248A TW 202241954 A TW202241954 A TW 202241954A
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TW
Taiwan
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amino acid
seq
antibody
acid sequence
heavy chain
Prior art date
Application number
TW111100248A
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English (en)
Inventor
提摩西 勞文吉爾
珍妮 秦
馬克 達姆林
多林 托德
Original Assignee
美商梅爾莎納醫療公司
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
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Publication date
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Abstract

本發明大抵關於抗體-藥物共軛體及使用該共軛體作為治療劑及/或診斷劑之方法，該抗體-藥物共軛體包含特異性結合呈可溶性形式或膜結合型(即當表現在細胞表面上時)的人類B7-H4之單株抗體。

Description

靶向Ｂ７－Ｈ４之抗體－藥物共軛體和使用彼之方法
本申請案關於靶向B7-H4之抗體-藥物共軛體和使用彼之方法的相關技術。 相關申請案 本申請案主張於2021年1月04日提出申請之美國臨時申請案第63/133,707號及2021年4月09日提出申請之美國臨時申請案第63/172,968號之優先權及權益。各申請案之內容全文以引用方式併入本文中。 序列表之參照納入
在2022年1月3日建立及大小為118 KB之文字檔名稱「MRSN-034_001TW_SeqList.txt」的內容全文以引用方式併入本文中。
B7-H4亦稱為B7-H4、B7x、B7S1、B7-S1及VTCN1，其係第I型跨膜蛋白，且係提供配合T細胞受體抗原性信號之共同信號的B7蛋白超家族之成員。B7-H4係T細胞功能之負調節子且與T細胞接合抑制其生長、細胞介素分泌及細胞毒性。消除小鼠的B7-H4不影響免疫細胞恆定且無自體免疫之徵候。B7-H4之受體係未知且未經識別。
人類B7-H4已定位在染色體1上且包含橫跨66 kb之六個外顯子及五個內含子，其中外顯子6係用於選擇性剪接以產生二個不同轉錄物。其係282個胺基酸蛋白(包括胺基端信號序列)，其中預測227個胺基酸在切割胺基端信號序列之後將位於細胞外空間中。B7-H4包含Ig樣V結構域、Ig樣C結構域、跨膜結構域及短細胞質尾。
雖然B7-H4在健康組織中之蛋白層級的表現係相對有限，但B7-H4一致地過度表現於數種實體腫瘤中，諸如乳房、卵巢及子宮內膜之婦科癌。B7-H4在腫瘤中之表現傾向於與不良預後相關。B7-H4之受體未知，但咸信表現在T細胞上。咸信B7-H4直接抑制T細胞活性。
各式各樣的治療模式可用於治療晚期癌症，包括放射療法、具有細胞毒性抗腫瘤劑之習知化學療法、荷爾蒙療法(芳香酶抑制劑、促黃體激素釋放激素類似物)、雙膦酸鹽及信號轉導抑制劑。然而不幸的是，許多病患不是對這些治療模式中之任一者反應不良就是完全沒有反應。因此，需要識別靶向B7-H4之生物活性的新穎治療劑。
因此，存在對於靶向B7-H4之生物活性的療法的需求。
在一些態樣中，本揭露提供一種經單離之抗體，其特異性結合B7-H4且包含可變重鏈互補決定區1 (CDRH1)、可變重鏈互補決定區2(CDRH2)、可變重鏈互補決定區3(CDRH3)、可變輕鏈互補決定區1(CDRL1)、可變輕鏈互補決定區2(CDRL2)及可變輕鏈互補決定區3(CDRL3)，該CDRH1包含胺基酸序列GFIVSRNY(SEQ ID NO: 2)，該CDRH2包含胺基酸序列IYGSGRT(SEQ ID NO: 3)，該CDRH3包含胺基酸序列ARDADYGLDV(SEQ ID NO: 16)或胺基酸序列ARDADYGMDV(SEQ ID NO: 10)，該CDRL1包含胺基酸序列QSVSSSY(SEQ ID NO: 53)，該CDRL2包含胺基酸序列GAS(SEQ ID NO: 54)，且該CDRL3包含胺基酸序列QQYGSSPLYT(SEQ ID NO: 55)。
在一些態樣中，該經單離之抗體包含重鏈可變序列及輕鏈可變序列，該重鏈可變序列包含SEQ ID NO: 44之胺基酸序列，且該輕鏈可變序列包含SEQ ID NO: 50之胺基酸序列。在一些態樣中，該經單離之抗體包含重鏈及輕鏈，該重鏈包含SEQ ID NO: 45之胺基酸序列，且該輕鏈包含SEQ ID NO: 52之胺基酸序列。在一些態樣中，該經單離之抗體包含重鏈可變序列及輕鏈可變序列，該重鏈可變序列包含SEQ ID NO: 22之胺基酸序列，且該輕鏈可變序列包含SEQ ID NO: 50之胺基酸序列。在一些態樣中，該經單離之抗體包含重鏈及輕鏈，該重鏈包含SEQ ID NO: 23之胺基酸序列，且該輕鏈包含SEQ ID NO: 52之胺基酸序列。
在一些態樣中，經單離之抗體係單株抗體。在一些態樣中，經單離之抗體係兔、小鼠、嵌合、人化或全人單株抗體。在一些態樣中，經單離之抗體係IgG同型。在一些態樣中，經單離之抗體係IgG1同型。
在一些態樣中，該經單離之抗體與包含可變重鏈互補決定區1(CDRH1)、可變重鏈互補決定區2(CDRH2)、可變重鏈互補決定區3(CDRH3)、可變輕鏈互補決定區1(CDRL1)、可變輕鏈互補決定區2(CDRL2)及可變輕鏈互補決定區3(CDRL3)之經單離之抗體競爭與人類B7-H4之特異性結合，該CDRH1包含胺基酸序列GFIVSRNY(SEQ ID NO: 2)、該CDRH2包含胺基酸序列IYGSGRT(SEQ ID NO: 3)、該CDRH3包含胺基酸序列ARDADYGLDV(SEQ ID NO: 16)、該CDRL1包含胺基酸序列QSVSSSY(SEQ ID NO: 53)、該CDRL2包含胺基酸序列GAS(SEQ ID NO: 54)、且該CDRL3包含胺基酸序列QQYGSSPLYT(SEQ ID NO: 55)。在一些態樣中，該經單離之抗體與包含重鏈可變序列及輕鏈可變序列之經單離之抗體或與包含重鏈及輕鏈之經單離之抗體競爭與人類B7-H4之特異性結合，該重鏈可變序列包含SEQ ID NO: 44之胺基酸序列，該輕鏈可變序列包含SEQ ID NO: 50之胺基酸序列，該重鏈包含SEQ ID NO: 45之胺基酸序列，且該輕鏈包含SEQ ID NO: 52之胺基酸序列。
在一些態樣中，本揭露提供一種B7-H4抗體-藥物共軛體，其包含本揭露之經單離之抗體。
在一些態樣中，一或多個連接子-藥物部份與靶向部份共價連接，其中：各連接子-藥物部份包含多官能性連接子，該多官能性連接子經由中介各藥物單元的可釋放組裝單元連接該靶向部份與一或多個藥物單元(例如一或多種治療劑(D))並連接親水基至各連接子-藥物部份之該藥物單元；該可釋放組裝單元能在該靶向部份所靶向之目標部位附近釋放游離藥物；且該多官能性連接子包含介於該靶向部份與該親水基之間的肽部份，其中該肽部份包含至少二個胺基酸。
在一些態樣中，本揭露提供一種共軛體，其選自表A1及表A2中之共軛體之任一者。
在一些態樣中，本揭露提供一種共軛體，其選自表B1及表B2中之共軛體之任一者。
在一些態樣中，本揭露提供一種治療或預防有此需要之個體的疾病或病症之方法，其包含向個體投予治療有效量的本揭露之共軛體。
在一些態樣中，本揭露提供一種用於治療或預防有此需要之個體的疾病或病症之共軛體。
在一些態樣中，本揭露提供一種本揭露之共軛體於製造用於治療有此需要之個體的疾病或病症之藥物的用途。在一些態樣中，本揭露提供一種本揭露之共軛體於治療或預防有此需要之個體的疾病或病症之用途。
在一些態樣中，本揭露之實施態樣中任一者之方法、共軛體或用途，該共軛體在生物降解時釋放一或多種治療劑。
在一些態樣中，本揭露之實施態樣中任一者之方法、共軛體或用途，該疾病或病症係癌症。在一些態樣中，本揭露之實施態樣中任一者之方法、共軛體或用途，該癌症係B7-H4陽性癌症。
在一些態樣中，本揭露之實施態樣中任一者之方法、共軛體或用途，該B7-H4陽性癌症係選自由下列所組成之群組：膽管癌(bile duct carcinoma)、乳癌、子宮內膜癌、卵巢癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、子宮癌、甲狀腺癌、腎癌、頭頸癌、胃癌、黑色素瘤、膽管癌、乳糜管癌(cholangial carcinoma)、胰臟癌、結腸癌及膀胱癌。
在一些態樣中，個體係人類。
在一些態樣中，本揭露進一步包含向該個體投予治療劑。
本發明提供特異性結合呈可溶性形式或膜結合型(即當表現在細胞表面上時)的人類B7-H4之單株抗體。本發明提供與B7-H4特異性結合之單株抗體類。這些抗體在本文中總稱為「B7-H4」抗體。 定義
本文所述之本揭露之中間物化合物及/或化合物的化學名稱可指此類化合物之任一種互變異構表示法(在一些情況下，此類替代名稱係以實驗提供)。應理解任何指涉經命名之化合物(本揭露之中間物化合物或化合物)或經描繪結構之化合物(本揭露之中間物化合物或化合物)意欲涵蓋所有互變異構形式，包括該化合物之兩性離子形式及其任何混合物。
應理解用語「在一些實施態樣中」、「在本揭露之一些實施態樣中」及「在本揭露之化合物之一些實施態樣中」可在適當時交換使用。
當用語「約(about)」、「大約(approximately)」或「近似(approximate)」連接數值使用時，是指包括一個集合或範圍的值。在一些實施態樣中，「約X」包括X的±25%、±20%、±15%、±10%、±5%、±2%、±1%、±0.5%、±0.2%或±0.1%的一範圍值，其中X係數值。在一些實施態樣中，用語「約」係指5%大於或小於所指明值的範圍之值。在一些實施態樣中，用語「約」係指2%大於或小於所指明值的範圍之值。在一些實施態樣中，用語「約」係指1%大於或小於所指明值的範圍之值。
除非在本文中另外指示，否則列舉數值的範圍僅意圖作為個別指稱落在範圍內的各分開數值之速記方法，且各分開數值如同其個別在本文中列舉般地被併入說明書中。除非另行指明，否則在本文中使用之範圍包括範圍的二個極限。在一些實施態樣中，表示法「x係介於1與6之間的整數(x being an integer between 1 and 6)」及「x係1至6的整數(x being an integer of 1 to 6)」兩者是指「x係1、2、3、4、5或6(x being 1, 2, 3, 4, 5, or 6)」，也就是說用語「介於X與Y之間(between X and Y)」及「範圍為X至Y(range from X to Y)」包括X及Y及介於之間的整數。
在本案之揭示內容中使用之下列用語，除非另外說明，應被了解為具有下列意義：
如本文中所使用，用語「抗B7-H4抗體」、「B7-H4抗體」及「與B7-H4結合之抗體」係指能以足夠親和力結合B7-H4之抗體，以使抗體可用來作為靶向B7-H4之診斷劑及/或治療劑。
如本文中所使用之用語「B7-H4」係指在細胞中處理B7-H4前驅蛋白所得之任何天然、成熟B7-H4。該用語除非另外指示，否則包括來自任何脊椎動物來源包括哺乳動物諸如靈長動物(例如人類及食蟹獼猴)及齧齒動物(例如小鼠及大鼠)之B7-H4。該用語亦包括B7-H4之天然存在變體，例如剪接變體或等位變體。
用語「B7-H4陽性癌症」係指包含在其表面上表現B7-H4之細胞的癌症。在一些實施態樣中，B7-H4在細胞表面上之表現係例如使用抗B7-H4之抗體在諸如免疫組織化學、FACS等之方法中測定。
替代地，B7-H4 mRNA表現被認為與在細胞表面上的B7-H4表現有關且可藉由選自原位雜交及RT-PCR(包括定量RT-PCR)之方法測定。
用語「B7-H4陽性細胞」係指在其表面上表現B7-H4之細胞。
如本文中所使用之用語「抗體(antibody)」係以最廣泛的意義使用且涵蓋各種抗體結構，包括但不限於單株抗體、多株抗體、多特異性抗體(例如雙特異性抗體)及抗體片段，只要它們展現所欲抗原結合活性即可。用於編號抗體之胺基酸序列及識別互補決定區之多種方法係所屬技術領域中已知。例如，Kabat編號系統(見Kabat, E.A., et al., Sequences of Protein of immunological interest, Fifth Edition, US Department of Health and Human Services, US Government Printing Office(1991))或IMGT編號系統(見IMGT ®, the international ImMunoGeneTics information system ®.可線上取得：http: //www.imgt.org/)。IMGT編號系統在所屬技術領域中例行地使用及接受為可靠且正確系統，以測定編碼序列中之胺基酸位置、比對等位基因及容易地比較來自所有脊椎動物物種之免疫球蛋白(IG)及T細胞受體(TR)的序列。IMGT資料之正確性及一致性係基於免疫遺傳學及免疫資訊學之首個且目前獨特的本體論IMGT-ONTOLOGY(見Lefranc. M.P. et al., Biomolecules, 2014 Dec; 4(4), 1102-1139)。IMGT工具及資料庫針對自大型序列儲存庫建立之IMGT參考指引運行。在IMGT系統中，每當適當時，IG V結構域及IG C結構域的定界係考慮外顯子定界。因此，更多序列為IMGT資料庫可用，IMGT外顯子編號系統可為且係由所屬技術領域中具有通常知識者可靠地「使用」以測定編碼序列中之胺基酸位置及比對等位基因。此外，IMGT獨特編號與其他編號(即Kabat)之間的對應性可在IMGT Scientific chart中取得(見Lefranc. M.P. et al., Biomolecules, 2014 Dec; 4(4), 1102-1139)。
用語「抗體片段(antibody fragment)」係指包含完整抗體的一部分且與完整抗體所結合之抗原結合之除完整抗體以外之分子。抗體片段的實例包括但不限於Fv、Fab、Fab'、Fab’-SH、F(ab')2；雙價抗體；線性抗體；單鏈抗體分子(例如scFv)；及由抗體片段所形成的多特異性抗體。
如本文中所使用之用語「與參考抗體之相同表位結合之抗體」係指在競爭測定中阻斷參考抗體與其抗原結合達50%或超過50%之抗體，且相反地參考抗體在競爭測定中阻斷抗體與其抗原結合達50%或超過50%。本文提供例示性競爭測定。
用語抗體之「類型(class)」係指其重鏈所具有之恆定結構域或恆定區的類型。有五種主要的抗體類型：IgA、IgD、IgE、IgG及IgM，其中某些類型可進一步分成亞型(同型)，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG 4、IgA1和IgA2。對應不同類型之免疫球蛋白的重鏈恆定結構域分別被稱為α、δ、ε、γ和μ。
如本文中所使用之用語「單株抗體 (monoclonal antibody)」係指獲自實質上均質抗體之族群的抗體，即構成該族群之個別抗體係相同及/或與相同表位結合，例外為可能的變體抗體，例如含有天然存在之突變或在產生單株抗體製劑期間出現，此類變體通常以少量存在。和通常包括針對不同決定簇(表位)之不同抗體的多株抗體製劑不同的是，單株抗體製劑之各單株抗體係以抗原上之單一決定簇為目標。因此，修飾語「單株」表示抗體係自實質上均質之抗體族群獲得之特徵，不應被視為需要藉由任何特定方法產生抗體。例如，可用於本發明之單株抗體可藉由多種技術生產，包括但不限於融合瘤方法、重組DNA方法、噬菌體展示方法及採用含有所有或部分人類免疫球蛋白基因座之基因轉殖動物之方法，此類方法及其他用於生產單株抗體之例示性方法係於本文描述。
用語「裸抗體」係指未與異源性部份(例如細胞毒性部份或STING的促效劑藥物部份)共軛之抗體。裸抗體可存在於醫藥調配物中。
用語「天然抗體(native antibodies)」係指具有不同結構之天然存在免疫球蛋白分子。例如，天然IgG抗體係約150,000道爾頓之異型四聚體糖蛋白，其由經雙硫鍵鍵結之二個相同輕鏈及二個相同重鏈組成。自N端至C端，各重鏈具有可變區(VH)(亦稱為可變重結構域或重鏈可變結構域)及隨後的三個恆定結構域(CHI、CH2及CH3)。類似地，自N端至C端，各輕鏈具有可變區(VL)(亦稱為可變輕結構域或輕鏈可變結構域)及隨後的三個恆定輕(CL)結構域。抗體之輕鏈可基於其恆定結構域之胺基酸序列分成二種類型，稱為kappa(κ)及lambda(λ)。
「經單離之抗體(isolated antibody)」係指已與其天然環境中之組分分離之抗體。在一些實施態樣中，抗體係經純化至由例如電泳(例如SDS-PAGE、等電聚焦(IEF)、毛細管電泳)或層析(例如離子交換或逆相HPLC)所測定之大於95%或99%純度。以評估抗體純度之方法的回顧而言，見例如Flatman et al., J. Chromatogr. B 848: 79-87(2007)。
用語「表位(epitope)」係指抗體所結合之在抗原分子上的特定位點。
用語抗體之「人化抗體(humanized antibody)」係指保留或實質上保留親代抗體之抗原結合性質，但在人類較不具免疫原性之衍生自非人類抗體(例如鼠)之抗體。如本文中所使用人化係意欲包括去免疫化抗體。
抗體(例如非人類抗體)之用語「人化形式」係指已經歷人化之抗體。
當本文中之用語「競爭(competes with)」或「交叉競爭(cross-competes with)」用於在二個或超過二個抗體之情況中，其指示該二個或超過二個抗體競爭與B7-H4之結合，例如競爭B7-H4結合。如果抗體與一或多個其他抗體競爭25%或超過25%之與B7-H4之結合，則該抗體「阻斷(blocks)」或「交叉阻斷(cross-blocks)」該一或多個其他抗體，25%至74%代表「部分阻斷(partial block)」且75%至400%代表「完全阻斷(full block)」。除非由上下文另行定義或否定，否則本文中所使用之用語「競爭」、「交叉競爭」、「阻斷」或「交叉阻斷」亦意欲涵蓋此類抗體對。
如本文中所使用，「與人類B7-H4特異性結合(specifically binds to human B7-H4)」之抗體係意圖指以1 x l0 -7或更小、更典型為5 x 10 -8M或更小、更典型為3 x 10 -8M或更小、更典型為1 x 10 -9M或更小、甚至更典型為5 x 10 -9M或更小之K D與人類B7-H4結合之抗體。
如本文中所使用之用語與蛋白或細胞「不實質上結合(does not substantially bind)」是指不與蛋白或細胞結合或不以高親和力與蛋白或細胞結合，即以1 x 10 -8M或更多、更佳的是1 x 10 -5M或更多、更佳的是1 x 10 -4M或更多、更佳的是1 x 10 -3M或更多、甚至更佳的是1 x 10 -2M或更多之K D與蛋白或細胞結合。
用語「細胞毒性劑(cytotoxic agents)」或「細胞毒性藥物部份(cytotoxic drug moiety)」係指主要藉由直接干擾細胞功能或抑制或干擾細胞減數分裂來造成細胞死亡之化合物，包括但不限於烷化劑、腫瘤壞死因子、插入劑、微管蛋白抑制劑及拓撲異構酶抑制劑。
如本文中所使用之用語「STING的促效劑」係指能與STING交互作用之化合物或部份，例如藉由與STING結合及/或誘導下游信號傳導(例如特徵為活化與STING功能相關聯之分子)。此包括STING、IRF3及/或NF-kB之直接磷酸化且亦可包括STAT6。在一些實施態樣中，STING途徑活化導致增加產生第1型干擾素(主要為IFN-a及IFN-b)及/或表現干擾素刺激基因。
如本文中所使用之用語「STING的促效劑藥物部份(STING agonist drug moiety)」係指衍生自STING的促效劑且能與STING交互作用之部份。在一些實施態樣中，STING的促效劑藥物部份係經修飾以允許該部份與本揭露之共軛體的其餘部分連接之STING的促效劑。
用語「糖(sugar)」係指單醣，例如葡萄糖(Glc)、半乳糖(Gal)、甘露糖(Man)及岩藻糖(Fuc)。用語「糖衍生物(sugar derivative)」係指單醣糖的衍生物，即包含取代基及/或官能基之單醣糖。糖衍生物之實例包括但不限於胺基糖及糖酸。糖衍生物之實例亦包括表示為S’(F’) X1之化合物，其中S’係糖或糖衍生物，F’係官能基，且x 1指示官能基之數量。
如本文中所使用之用語「核心GlcNAc部份(core-GlcNAc moiety)」係指連接至抗體(例如經由GlcNAc之C1位置)之包含GlcNAc(例如核心GlcNAc)的單醣、多醣或寡醣部份。在一些實施態樣中，GlcNAc係經由N-糖苷鍵連接至抗體之天冬醯胺酸胺基酸側鏈中的醯胺氮原子。在一些實施態樣中，核心GlcNAc部份存在於抗體的天然糖基化位點或導入在抗體上的不同位點。在一些實施態樣中，核心GlcNAc部份係單醣(例如，核心GlcNAc部份亦為末端GlcNAc部份)。在一些實施態樣中，核心GlcNAc部份進一步包含岩藻糖，例如核心GlcNAc部份係雙醣核心GlcNAc-(α1-6-Fuc)部份(其可稱為GlcNAc(Fuc))。因此，當抗體包含核心GlcNAc部份時，抗體可包含單醣或雙醣核心GlcNAc部份，且核心GlcNAc部份可進一步包含岩藻糖(例如雙醣核心GlcNAc(Fuc)部份)。若核心GlcNAc部份進一步包含岩藻糖，則岩藻糖可連接α-1,6至核心GlcNAc部份的O-6。進一步包含岩藻糖之核心GlcNAc部份可稱為核心GlcNAc(Fuc)。
用語「核心GlcNAc」係指內部GlcNAc，其係多醣或寡醣的一部分，其中多醣或寡醣係經由內部GlcNAc連接至抗體。
如本文中所使用之用語「末端GlcNAc部份(terminal-GlcNAc moiety)」係指連接至抗體之包含GlcNAc的部份且具有可供進一步修飾之末端官能基(例如具有P”-S”-A”之化合物)。在一些實施態樣中，末端GlcNAc部份進一步包含岩藻糖。在一些實施態樣中，末端GlcNAc部份係藉由糖蛋白(例如抗體聚醣)之核心GlcNAc部份與內切糖苷酶反應形成。
用語「核苷酸(nucleotide)」係以其正常科學意義使用，且係指由核鹼基、五碳糖(核糖或2-去氧核糖)及一、二或三個磷酸基團構成之分子。若無磷酸基團，核鹼基及糖構成核苷。核苷酸因此亦可稱為核苷單磷酸鹽、核苷二磷酸鹽或核苷三磷酸鹽。核鹼基可為腺嘌呤、鳥嘌呤、胞嘧啶、尿嘧啶或胸腺嘧啶。
用語「蛋白(protein)」係以其正常科學意義使用且包括包含約10個或超過10個胺基酸之多肽。蛋白可包含天然或非天然胺基酸。
用語「糖蛋白(glycoprotein)」在本文中係以其正常科學意義使用，且係指包含一或多個共價鍵結至蛋白質之單醣或寡醣鏈(「聚醣(glycan)」)之蛋白質。聚醣可連接至蛋白質上的羥基(O-連接聚醣)、至蛋白質上的醯胺官能基(N-糖蛋白)、或至蛋白質上的碳(C-糖蛋白)。糖蛋白可包含超過一個聚醣，可包含一或多個單醣及一或多個寡醣聚醣之組合，且可包含N-連接、O-連接及C-連接聚醣之組合。據估計超過50%之所有蛋白質具有一些糖基化形式且因此符合糖蛋白的資格。
用語「聚醣(glycan)」在本文中係以其正常科學意義使用且係指連接至蛋白質之單醣或寡醣鏈。聚醣因此係指糖蛋白的碳水化合物部分。聚醣經由一個糖的C-1碳連接至蛋白質，聚醣可為不經進一步取代(單醣)或其羥基之一或多者可經進一步取代(寡醣)。天然存在之聚醣一般包含1至約10個醣部份。然而，當較長醣鏈與蛋白質連接時，該醣鏈亦被認為是聚醣。糖蛋白之聚醣可為單醣。聚醣亦可為寡醣。糖蛋白之寡醣鏈可為直鏈或支鏈。在寡醣中，與蛋白質直接連接之糖稱為核心糖。在寡醣中，非與蛋白質直接連接並與至少二個其他糖連接之糖稱為內部糖。在寡醣中，非與蛋白質直接連接但與單一其他糖之連接之糖(即，彼之其他羥基的一或多者不攜帶進一步糖取代基)稱為末端糖。為避免疑義，糖蛋白之寡醣中可存在多個末端糖，但僅一個核心糖。聚醣可為O-連接聚醣、N-連接聚醣或C-連接聚醣。在去連接聚醣中，單醣或寡醣聚醣係鍵結至蛋白質之胺基酸中的C原子。
用語「糖基轉移酶(glycosyltransferase)」係指涉及合成存在糖蛋白及糖脂上之複雜碳水化合物的酶之超家族。
用語「N-乙醯基半乳糖胺基轉移酶(N- acetylgalactosaminyl transferase)」(GalNAc-T)係催化添加N-乙醯基-D-半乳糖胺至蛋白質之N-乙醯基-D-半乳糖胺轉移酶。
如本文中所使用，用語「PEG單元」係指具有下式
Figure 02_image001
之聚乙二醇次單元。在一些實施態樣中，PEG單元包含多個PEG次單元。
如本文中所使用之用語「烷基(alkyl)」代表具有指明數量之碳原子的飽和、直鏈或支鏈烴基。用語「C 1-C 6烷基」或「C 1-6烷基」係指包含2至6個碳原子之甲基部份或直鏈或支鏈烷基部份。
例示性烷基包括但不限於甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、二級丁基、三級丁基、戊基及己基。
如本文中所使用之用語「鹵(烷基)」代表具有指明數量(n)之碳原子及一或多個(至多2n+1)鹵素原子的飽和、直鏈或支鏈烴基。「鹵基(C 1-4烷基)」之實例包括但不限於-CF 3(三氟甲基)、-CCl 3(三氯甲基)、1,1-二氟乙基、2,2,2-三氟乙基及六氟異丙基。
如本文中所使用之用語「烯基」係指具有指明數量之碳原子及至少1個及至多3個碳-碳雙鍵之直鏈或支鏈烴基。實例包括乙烯基及丙烯基。
如本文中所使用之用語「炔基」係指具有指明數量之碳原子及至少1個及至多3個碳-碳參鍵之直鏈或支鏈烴基。實例包括乙炔基及丙炔基。
如本文中所使用之用語「烷氧基-」或「(烷基)氧基-」係指「烷基-氧基-」，其包含具有指明數量之碳原子且經由氧連接原子連接的烷基部份。例示性「C 1-4烷氧基-」或「(C 1-4烷基)氧基-」包括但不限於甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、二級丁氧基及三級丁氧基。
如本文中所使用之用語「鹵(烷氧基)」代表具有指明數量(n)之碳原子及一或多個(至多2n+1)鹵素原子且經由氧連接原子連接的飽和、直鏈或支鏈烴基。例示性「鹵基(C 1-4烷氧基)-」包括但不限於-OCHF 2(二氟甲氧基)、-OCF 3(三氟甲氧基)、-OCH 2CF 3(三氟乙氧基)及-OCH(CF 3) 2(六氟異丙氧基)。
如本文中所使用之用語「胺基」係指包含至少一個氮原子之取代基。具體而言，-NH 2、-NH(C 1-4烷基)、烷基胺基或(C 1-4烷基)胺基-或(C 1-4烷基)(C 1-4烷基)胺基-或二烷基胺基、醯胺-、脲-、尿素及磺醯二胺取代基係包括於用語「胺基」中。
如本文中所使用之用語「碳環基或部份」係指其中環員係碳原子之環基部份，其可為飽和、部分不飽和(非芳族)或完全不飽和(芳族)。
如本文中所使用之用語「環烷基」係指環中包含指明數量之碳原子之非芳族、飽和烴環基。例如，用語「C 3-6環烷基」係指具有三至六個環碳原子之環基。例示性「C 3-6環烷基」包括環丙基、環丁基、環戊基及環己基。
如本文中所使用之用語「芳基」係指具有芳族性之基團，包括具有一或多個芳環之「共軛」或多環系統，該環結構中不含有任何雜原子。用語芳基包括單價物種及二價物種。芳基之實例包括但不限於苯基、聯苯基、萘基及類似物。在一些實施態樣中，芳基係苯基。
如本文中所使用之用語「雜環基或部份」係指具有至少二個不同元素之原子作為環員之環基或部份，該環基或部份可為飽和、部分不飽和(非芳族)或完全不飽和(芳族)。
如本文中所使用之用語「雜原子」係指氮、硫或氧原子，例如氮原子或氧原子。
如本文中所使用之用語「雜環烷基」係指包含3至10個環原子且包含一或多個(通常一或二個)獨立地選自氧、硫及氮之雜原子環員的非芳族、單環或雙環基團。雜環烷基之連接點可為藉由任何合適的碳或氮原子。
如本文中所使用之用語「雜芳基」係指包含5至10個環原子(包括1至4個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子)之芳族單環或雙環基團，其中該基團之至少一部分係芳族。例如，此用語涵蓋雙環雜環-芳基，其包含與雜環部份稠合之苯環或與碳環部份稠合之雜芳環部份。雜芳基之連接點可為藉由任何合適的碳或氮原子。
如本文中所使用之用語「鹵素」及「鹵基」係指鹵素基團，例如氟、氯、溴或碘取代基。
如本文中所使用之用語「側氧基」係指雙鍵結之氧部份；例如直接連接至碳原子形成羰基部份(C=O)。
如本文中所使用之用語「羥基(hydroxy/ hydroxyl)」意指基團-OH。
如本文中所使用之用語「氰基」係指腈基團 -C≡N。
如本文中所使用之用語「可選地經取代」指示基團(諸如烷基、環烷基、烷氧基、雜環烷基、芳基或雜芳基)或環或部份可為未經取代，或基團、環或部份可經一或多個取代基取代。在其中基團可選自一些替代基團之情況下，所選基團可為相同或不同。合適取代基可包括例如烷基、烯基、炔基、鹵素、羥基、烷基羰氧基、芳基羰氧基、烷氧基羰氧基、芳氧基羰氧基、羧酸基、烷基羰基、芳基羰基、烷氧基羰基、胺基羰基、烷基胺基羰基、二烷基胺基羰基、烷基硫羰基、烷氧基、磷酸基、膦酸基、亞膦酸基、胺基(包括烷基胺基、二烷基胺基、芳基胺基、二芳基胺基及烷基芳基胺基)、醯胺基(包括烷基羰基胺基、芳基羰基胺基、胺甲醯基及脲基)、脒基、亞胺基、巰基、烷硫基、芳硫基、硫代羧酸基、硫酸基、烷基亞磺醯基、磺酸根基、胺磺醯基、磺醯胺基、硝基、三氟甲基、氰基、疊氮基、雜環基、烷芳基、芳香基、或雜芳香基。
如本文中所使用之用語「獨立地 (independently)」是指其中超過一個取代基係選自一些可能的取代基，該些取代基可為相同或不同。
如本文中所使用之用語「醫藥上可接受 (pharmaceutically acceptable)」係指該些在合理醫學判斷之範疇內適合用於與人類及動物之組織接觸而無過度毒性、刺激或其他問題或併發症且符合合理利益/風險比之化合物、共軛體、材料、組成物及劑型。
如本文中所使用之用語「治療(treating/ treat)」描述對病患之處理及照顧以達到打擊疾病、病況或病症之目的，包括投予本揭露之化合物(或彼之醫藥上可接受之鹽、多晶形或溶劑合物)以緩和疾病、病況或病症之症狀或併發症或消除該疾病、病況或病症。用語「治療」亦可包括在活體外細胞或動物模型的處理。
如本文中所使用之用語「預防(preventing/ prevent/protecting against)」描述減少或消除該疾病、病況或病症之症狀或併發症的開始。
用語「個體(subject)」係指已成為治療、觀察或實驗標的之動物，較佳為哺乳動物，最佳為人類。
用語「治療有效量(therapeutically effective amount)」係指能在組織系統、動物、或人類中引發生物或醫學反應之活性化合物或藥劑(包括本揭露之共軛體)的量，該反應由研究者、獸醫師、醫師、或其他臨床醫師所尋求，且包括減輕或部分減輕欲治療之疾病、症候群、病況或病症的症狀。
治療「有效量」意指當向需要該治療之病患投予時足以如本文中定義有效治療或預防之共軛體的量。將對應該量之給定共軛體的量將取決於因子而異，諸如特定共軛體(例如特定共軛體之效力(pICso)、療效(EC 50)及生物半衰期)、疾病病況及其嚴重性、需要治療之病患的特性(例如年齡、身高及體重)，然而可例行地由所屬技術領域中具有通常知識者決定。同樣地，共軛體的治療持續時間及投予時段(劑量之間的時段及劑量時機，例如餐前/隨餐/餐後)將根據需要治療之哺乳動物的特性(例如體重)、特定共軛體及其性質(例如藥物動力學性質)、疾病或病症及其嚴重性及所使用之特定組成物及方法而異，然而可由所屬技術領域中具有通常知識者決定。
用語「組成物(composition)」係指包括治療有效量之指明成分的產物以及直接或間接來自指明量之指明成分的組合之任何產物。
如本文中所使用之用語「醫藥上可接受之賦形劑(pharmaceutically acceptable excipient)」是指可用於製備通常為安全、無毒性、不是生物非所欲也不是其他方式非所欲之醫藥組成物的賦形劑，且包括獸醫用途以及人類醫藥用途可接受之賦形劑。在說明書及申請專利範圍內所使用之「醫藥上可接受之賦形劑」包括一種及一種以上之該等賦形劑。
在一些實施態樣中，本揭露之共軛體或其鏡像異構物、非鏡像異構物、溶劑合物或醫藥上可接受之鹽形式可用於治療或緩解諸如黑色素瘤、結腸癌、乳癌、前列腺癌、肺癌、纖維肉瘤及B型肝炎之疾病、症候群、病況或病症。
如本文中所使用之用語「本揭露之共軛體(conjugate(s)of the disclosure/conjugate(s)of the present disclosure)」意指如本文中定義之呈任何形式之共軛體，即任何互變異構形式、任何異構物形式、任何鹽或非鹽形式(例如游離酸或鹼形式或鹽，特別是其醫藥上可接受之鹽)及其任何物理形式(例如包括非固體形式(例如液體或半固體形式)及固體形式(例如非晶或結晶形式、特定同質多相形式、溶劑合物形式，包括水合物形式(例如單水合物、二水合物及半水合物))及各種形式之混合物。
因此，本揭露包括本文所揭示之呈任何鹽或非鹽形式及其任何物理形式及各種形式之混合物之共軛體。雖然為本揭露所包括，將理解的是本揭露之呈任何鹽或非鹽形式及其任何物理形式之共軛體可具有各種活性水準、不同生體可用率及用於調配目的之不同操作性質。
如本文中所使用，表示法「A、B或C中之一或多者(one or more of A, B, or C)」、「一或多個A、B或C(one or more A, B, or C)」、「A、B及C中之一或多者(one or more of A, B, and C)」、「一或多個A、B及C(one or more A, B, and C)」、「選自由A、B及C所組成之群組(selected from the group consisting of A, B, and C)」、「選自A、B及C(selected from A, B, and C)」及類似表示法可交換使用，且所有皆指選自由A、B及/或C所組成之群組，即一或多個A、一或多個B、一或多個C或彼等之任何組合，除非另有指示。
應理解在本說明書當中，當組成物被描述為具有、包括或包含特定組分時，應考慮組成物亦為由該列舉組分實質上組成或組成。類似地，當方法或過程被描述為具有、包括或包含特定程序步驟，該過程亦由該列舉之程序步驟實質上組成或組成。另外應了解的是，步驟之順序或實施某些反應之順序係無關緊要，只要本發明仍為可操作地。再者，二個或超過二個步驟或反應可被同時進行。
此處所使用之所有百分比及比例除非另外標示否則皆以重量計算。本揭露之其他特徵及優點係顯見於不同的實施態樣。以下提供之實施態樣示範可用於實施本揭露之不同的成份及方法。實例不限制所主張之揭露。根據本揭示內容，技藝人士可識別及採用可用於實施本揭露之其他成份及方法。
所有本發明所引述之公開資料及專利文件係以參照方式納入此處，如同將各份公開資料或文件特別且分開說明以藉由參照方式納入本發明。公開資料及專利文獻之引用並非意圖用來承認任一者係相關先前技術，其亦不構成對該相同者之內容或日期之任何承認。本發明現藉由書面說明描述，該領域之技藝人士當能了解本發明可以各種較佳體系實施，且前述之說明及以下之實施態樣是為了說明之目的，並非用於限制後文之申請專利範圍。
在本文中當在二個或超過二個抗體的上下文使用時，用語「競爭(competes with)」或「交叉競爭(cross-competes with)」指示該二個或超過二個抗體競爭與B7-H4結合，例如在實例5或8所述之測定中競爭與B7-H4之結合。如果抗體與一或多個其他抗體競爭25%或超過25%之與B7-H4之結合，則該抗體「阻斷(blocks)」或「交叉阻斷(cross-blocks)」該一或多個其他抗體，25%至74%代表「部分阻斷(partial block)」且75%至400%代表「完全阻斷(full block)」，較佳地使用實例5或8之測定決定。以一些抗體對而言，在實例5或8之測定中之競爭或阻斷僅在當一個抗體係塗佈在板上且另一者係用於競爭時才觀察到，並非反之亦然。除非由上下文另行定義或否定，否則本文中所使用之用語「競爭」、「交叉競爭」、「阻斷」或「交叉阻斷」亦意欲涵蓋此類抗體對。 抗體 - 藥物共軛體及支架
在一些態樣中，本揭露提供一種B7-H4抗體-藥物共軛體。在一些實施態樣中，B7-H4抗體-藥物共軛體具有位點特異性。在一些實施態樣中，B7-H4抗體-藥物共軛體不具位點特異性。在一些實施態樣中，B7-H4抗體-藥物共軛體係可生物降解及可生物相容及/或展現高藥物裝載及與目標抗原強烈結合。
在一些實施態樣中，本揭露提供一種B7-H4抗體-藥物共軛體，其包含B7-H4靶向部份(例如抗體)及一或多個連接子-藥物部份，其中靶向部份與一或多個連接子-藥物部份共價連接。
在一些實施態樣中，B7-H4靶向部份係抗體、經半胱胺酸工程改造之抗體或經修飾之抗體。
在一些實施態樣中，B7-H4靶向部份係B7-H4抗體、經半胱胺酸工程改造之B7-H4抗體或經修飾之B7-H4抗體。
在一些實施態樣中，B7-H4靶向部份係B7-H4抗體。
在一些實施態樣中，B7-H4靶向部份係經半胱胺酸工程改造之B7-H4抗體。
在一些實施態樣中，B7-H4靶向部份係經修飾之B7-H4抗體。
在一些態樣中，本揭露提供一種B7-H4抗體-藥物共軛體，其包含B7-H4靶向部份(例如抗體)及一或多個與靶向部份共價連接之連接子-藥物部份，其中： 各連接子-藥物部份包含多官能性連接子，該多官能性連接子經由中介各藥物單元的可釋放組裝單元連接該靶向部份與一或多個藥物單元(例如一或多種治療劑(D))並連接親水基至各連接子-藥物部份之該藥物單元； 該可釋放組裝單元能在該靶向部份所靶向之目標部位附近釋放游離藥物；且 該多官能性連接子包含介於該靶向部份與該親水基之間的肽部份，其中該肽部份包含至少二個胺基酸。
在一些態樣中，本揭露提供一種B7-H4抗體-藥物共軛體，其包含B7-H4靶向部份(例如抗體)及一或多個與靶向部份共價連接之連接子-藥物部份，其中： 各連接子-藥物部份包含多官能性連接子，其經由中介各藥物單元的可釋放組裝單元連接B7-H4靶向部份與一或多個藥物單元(例如一或多種治療劑(D))並連接親水基與各連接子-藥物部份之藥物單元；且 可釋放組裝單元能在靶向部份所靶向之目標部位附近釋放游離藥物。
在一些態樣中，本揭露提供一種具有下式(I’)之B7-H4抗體-藥物共軛體：
Figure 02_image003
其中 a 2係1至3的整數； a 3係0至1的整數； a 4係1至約5的整數； a 5係1至3的整數； d 13係1至約12的整數； 抗體係B7-H4抗體、經半胱胺酸工程改造之B7-H4抗體或經修飾之B7-H4抗體； L P’係二價連接子部份，其連接經修飾之抗體至M P；其中對應之單價部份L P包含能與抗體的反應性部份形成共價鍵之官能基W P； M P係延伸單元； L M係鍵結或三價或四價連接子，且當L M係鍵結時，a 2係1，當L M係三價連接子時，a 2係2，或當L M係四價連接子時，a 2係3； L 3(當存在時)係含羰基部份； M A包含肽部份，該肽部份包含至少二個胺基酸； T 1包含親水基且介於T 1與M A之間的
Figure 02_image005
表示T 1及M A的直接或間接連接； D每次出現獨立地係具有≤約5 kDa之分子量的治療劑；且 L D每次出現獨立地係連接D至M A之二價連接子部份，且包含至少一個可切割鍵結，以使當鍵結斷裂時，D經釋放為用於其意圖治療效應的活性形式。
在一些實施態樣中，D係細胞毒性藥物部份或STING的促效劑藥物部份。
在一些實施態樣中，D係細胞毒性藥物部份。
在一些實施態樣中，D係STING的促效劑藥物部份。
在一些實施態樣中，抗體-藥物共軛體具有下式(II’)或(III’)：
Figure 02_image007
在一些態樣中，本揭露提供一種B7-H4抗體支架，其包含B7-H4靶向部份(例如抗體)及一或多個與B7-H4靶向部份共價連接之連接子部份。
在一些實施態樣中，本揭露提供一種下式(II)至式(V)中任一者之B7-H4抗體支架：
Figure 02_image009
、
Figure 02_image011
、
Figure 02_image013
、
Figure 02_image015
， 其中： a 2係1至3的整數； a 3(當存在時)係0至1的整數； a 4係1至約5的整數； a 5係1至3的整數； d 13係1至約12的整數； 抗體係B7-H4抗體、經半胱胺酸工程改造之B7-H4抗體或經修飾之B7-H4抗體； L P’係二價連接子部份，其連接抗體至M P；其中對應之單價部份L P包含能與抗體的官能基形成共價鍵之官能基W P； M P係延伸單元； L M(當存在時)係鍵結或三價或四價連接子，且當L M係鍵結時，a 2係1，當L M係三價連接子時，a 2係2，或當L M係四價連接子時，a 2係3； L 3(當存在時)係含羰基部份； M A包含肽部份，該肽部份包含至少二個胺基酸； T 1包含親水基且介於T 1與M A之間的
Figure 02_image005
表示T 1及M A的直接或間接連接； W D(當存在時)每次出現獨立地係能與具有≤約5 kDa之分子量的治療劑(「D」)之官能基形成共價鍵的官能基；且 L D每次出現獨立地係連接W D或D至M A之二價連接子部份，且L D包含至少一個可切割鍵結，以使當鍵結斷裂時，D經釋放為用於其意圖治療效應的活性形式。
本揭露之共軛體及支架可包括下列特徵(當適用時)中之一或多者。
在一些實施態樣中，d 13係2至12、2至10、2至8、2至6、2至4、1至2、4至10、4至8、4至6、6至12、6至10、6至8、8至14、8至12或8至10之整數。
在一些實施態樣中，d 13係範圍為1至2的整數(例如，d 13係1或2)。在一些實施態樣中，d 13係範圍為2至4的整數(例如，d 13係2、3或4)。在一些實施態樣中，d 13係範圍為4至6的整數(例如，d 13係4、5或6)。在一些實施態樣中，d 13係範圍為6至8的整數(例如，d 13係6、7或8)。在一些實施態樣中，d 13係範圍為6至10的整數(例如，d 13係6、7、8、9或10)。在一些實施態樣中，d 13係6。在一些實施態樣中，d 13係7。
在一些實施態樣中，d 13係8。在一些實施態樣中，d 13係1或2。在一些實施態樣中，d 13係1。在一些實施態樣中，d 13係2。
在一些實施態樣中，L 3係不存在。
在一些實施態樣中，各L 3(當存在時)獨立地係*-C 1-12烷基-C(O)-**、*-NH-C 1-12烷基-C(O)-**或*-C 1-12烷基-C(O)-NH-C 1-12烷基-C(O)-**，其中*指示與另一L 3(當存在時)或與L M連接；且**指示與另一L 3(當存在時)或與M A連接。
在一些實施態樣中，至少一個L 3係*-CH 2CH 2- C(O)-**或係*-NH-CH 2CH 2-C(O)-**，其中*指示與另一L 3(當存在時)或與L M連接；且**指示與另一L 3(當存在時)或與M A連接。
在一些實施態樣中，a 3係2或大於2，至少一個L 3係*-C 1-12烷基-C(O)-**，且至少一個L 3係*-NH-C 1-12烷基-C(O)-**。
在一些實施態樣中，各L 3係*-CH 2CH 2-C(O)-NH-CH 2CH 2-C(O)-**或*NH-CH 2CH 2-C(O)-CH 2CH 2-C(O)-**，其中*指示與L M連接；且**指示與M A連接。
在一些實施態樣中，a 4係1。在一些實施態樣中，a 4係2。在一些實施態樣中，a 4係3。 用於與 B7-H4 抗體或經半胱胺酸工程改造之 B7-H4 抗體共軛之可變 L P 及 L P’
在一些實施態樣中，L P’係二價連接子部份。在一些實施態樣中，L P’係連接B7-H4抗體或經半胱胺酸工程改造之B7-H4抗體之半胱胺酸至M P之二價連接子部份。在一些實施態樣中，L P’係連接B7-H4抗體之半胱胺酸至M P之二價連接子部份。在一些實施態樣中，L P’係連接經半胱胺酸工程改造之B7-H4抗體至M P之二價連接子部份。
在一些實施態樣中，L P係對應單價部份。在一些實施態樣中，當不與B7-H4抗體之半胱胺酸或經半胱胺酸工程改造之B7-H4抗體之半胱胺酸連接時，L P係L P’之對應單價部份。在一些實施態樣中，當不與B7-H4抗體之半胱胺酸連接時，L P係L P’之對應單價部份。在一些實施態樣中，當不與經半胱胺酸工程改造之B7-H4抗體之半胱胺酸連接時，L P係L P’之對應單價部份。
在一些實施態樣中，當不與B7-H4抗體之半胱胺酸或經半胱胺酸工程改造之B7-H4抗體之半胱胺酸連接時，各L P包含末端基團W P。
在一些實施態樣中，L P包含末端基團W P，其中各W P獨立地係：
Figure 02_image018
其中 環B係環烷基、雜環烷基、芳基或雜芳基； R 1K係脫離基； R 1A係硫保護基； R 2J係氫、脂族、芳基、雜脂族或碳環部份；且 R 3J係C 1-6烷基且Z 1、Z 2、Z 3及Z 7中之各者獨立地係碳或氮原子。
在一些實施態樣中，各R 1K係鹵基或RC(O)O-，其中R係氫、脂族、雜脂族、碳環或雜環烷基部份。
在一些實施態樣中，各R 1A獨立地係
Figure 02_image020
、
Figure 02_image022
、
Figure 02_image024
或
Figure 02_image026
，其中r係1或2且R s1、R s2及R s3中之各者獨立地係氫、脂族、雜脂族、碳環或雜環烷基部份。
在一些實施態樣中，W P係
Figure 02_image028
。在一些實施態樣中，W P係
Figure 02_image030
。
在一些實施態樣中，當W P係
Figure 02_image030
時，其中L P’包含
Figure 02_image033
。 用於與經修飾之 B7-H4 抗體共軛之可變 L P 及 L P’
在一些實施態樣中，L P’係藉由L P之官能基(例如W P)與經修飾之抗體之反應性部份(例如*-GlcNAc-S”-A”之經修飾之GlcNAc部份)之間的反應形成。
在一些實施態樣中，L P’包含L P之官能基(例如W P)與經修飾之抗體之反應性部份(例如*-GlcNAc-S”-A”之經修飾之GlcNAc部份)之間形成的三唑基。
在一些實施態樣中，各L P(當不與經修飾之B7-H4抗體連接時)包含末端基團W P。
在一些實施態樣中，至少一個W P係
Figure 02_image035
其中 R 8j係氫、鹵素、C 1-24烷基(例如C 1-6烷基)、C 6-24環烷基、6至24員雜環烷基、C 6-24芳基、6至24員雜芳基、 -(C 1-24烷基)-(C 6-24環烷基)、-(C 1-24烷基)-(6至24員雜環烷基)、-(C 1-24烷基)-(C 6-24芳基)或-(C 1-24烷基)-(6至24員雜芳基)， 其中C 1-24烷基係可選地被一或多個O、N或S中斷，且其中C 1-24烷基(例如C 1-6烷基)、C 6-24環烷基、6至24員雜環烷基、C 6-24芳基、6至24員雜芳基、-(C 1-24烷基)-(C 6-24環烷基)、-(C 1-24烷基)-(6至24員雜環烷基)、-(C 1-24烷基)- (C 6-24芳基)或-(C 1-24烷基)-(6至24員雜芳基)係可選地經一或多個C 1-C 12烷基、C 2-C 12烯基、C 2-C 12炔基、C 3-C 12環烷基、-O(C 1-C 12烷基)、-O(C 2-C 12烯基)、-O(C 2-C 12炔基)、 -O(C 3-C 12環烷基)、鹵素、胺基、側氧基或矽基取代， 其中C 1-C 12烷基、C 2-C 12烯基、C 2-C 12炔基、C 3-C 12環烷基、-O(C 1-C 12烷基)、-O(C 2-C 12烯基)、-O(C 2-C 12炔基)、-O(C 3-C 12環烷基)係可選地經取代，且其中C 1-C 12烷基、C 3-C 12環烷基、-O(C 1-C 12烷基)或-O(C 3-C 12環烷基)係可選地被一或多個O、N或S中斷； R 10j係氫、鹵素、C 1-24烷基(例如C 1-6烷基)、C 6-24環烷基、6至24員雜環烷基、C 6-24芳基、6至24員雜芳基、 -(C 1-24烷基)-(C 6-24環烷基)、-(C 1-24烷基)-(6至24員雜環烷基)、-(C 1-24烷基)-(C 6-24芳基)或-(C 1-24烷基)-(6至24員雜芳基)， 其中C 1-24烷基(例如C 1-6烷基)、C 6-24環烷基、6至24員雜環烷基、C 6-24芳基、6至24員雜芳基、-(C 1-24烷基)- (C 6-24環烷基)、-(C 1-24烷基)-(6至24員雜環烷基)、-(C 1-24烷基)-(C 6-24芳基)或-(C 1-24烷基)-(6至24員雜芳基)係可選地經取代； 各R 11j獨立地係氫、C 1-24烷基(例如C 1-6烷基)、C 6-24環烷基、6至24員雜環烷基、C 6-24芳基、6至24員雜芳基、 -(C 1-24烷基)-(C 6-24環烷基)、-(C 1-24烷基)-(6至24員雜環烷基)、-(C 1-24烷基)-(C 6-24芳基)或-(C 1-24烷基)-(6至24員雜芳基)； 各R 12j獨立地係鹵素、-OR 10j、-NO 2、-CN、-S(O) 2R 10j、C 1-24烷基(例如C 1-6烷基)、C 6-24環烷基、6至24員雜環烷基、C 6-24芳基、6至24員雜芳基、-(C 1-24烷基)-(C 6-24環烷基)、-(C 1-24烷基)-(6至24員雜環烷基)、-(C 1-24烷基)-(C 6-24芳基)或-(C 1-24烷基)-(6至24員雜芳基)；且 u 2係範圍為0至8的整數。
在一些實施態樣中，至少一個W P係
Figure 02_image037
；或
Figure 02_image039
。
在一些實施態樣中，至少一個W P係
Figure 02_image041
；
Figure 02_image043
；或
Figure 02_image045
。
在一些實施態樣中，各R 11j係氫。在一些實施態樣中，u 2係0。在一些實施態樣中，R 8j係氫。
在一些實施態樣中，至少一個W P係
Figure 02_image047
；
Figure 02_image049
；或
Figure 02_image051
。
在一些實施態樣中，至少一個W P係
Figure 02_image047
。
在一些實施態樣中，至少一個R 12j係拉電子基團(例如，Hammett取代基常數σ為正值之基團)。在一些實施態樣中，合適拉電子基團係所屬技術領域中已知。在一些實施態樣中，至少一個R 12j係鹵素(例如F或Cl)、-OR 10j、-NO 2、-CN、-S(O) 2R 7j、經取代之C 1-C 12烷基或經取代之C 6-C 12芳基，其中至少一個取代基係拉電子基團。在一些實施態樣中，至少一個R 12j係氟化C 1-C 12烷基(例如-CF 3)、氟化C 5-C 12芳基(例如-C 6F 5)或鹵烷化C 5-C 12芳基(例如-[3,5-(CF 3) 2(C 6H 3)])。
在一些實施態樣中，至少一個W P係
Figure 02_image054
；
Figure 02_image056
；或
Figure 02_image058
。
在一些實施態樣中，至少一個W P係
Figure 02_image060
；
Figure 02_image062
；
Figure 02_image064
；
Figure 02_image066
；
Figure 02_image068
；或
Figure 02_image070
。
在一些實施態樣中，至少一個W P係
Figure 02_image060
；或
Figure 02_image062
。
在一些實施態樣中，各R 11j係氫。在一些實施態樣中，u 2係0。
在一些實施態樣中，至少一個W P係
Figure 02_image073
。
在一些實施態樣中，各W P(當存在時)獨立地係：(a)
Figure 02_image075
；或(b)
Figure 02_image073
。
在一些實施態樣中，各W P係
Figure 02_image078
。
在一些實施態樣中，各L P’(當與B7-H4經修飾之抗體連接時)包含連接基團W P’。
在一些實施態樣中，至少一個W P’係
Figure 02_image080
。
在一些實施態樣中，至少一個W P’係
Figure 02_image082
；
Figure 02_image084
；或
Figure 02_image086
。
在一些實施態樣中，至少一個W P’係
Figure 02_image088
或
Figure 02_image090
。
在一些實施態樣中，至少一個W P’係
Figure 02_image092
或
Figure 02_image094
。
在一些實施態樣中，至少一個W P’係
Figure 02_image092
。 延伸單元 M P
在一些實施態樣中，M P係(1)
Figure 02_image097
、 (2)
Figure 02_image099
、(3)
Figure 02_image101
、(4)
Figure 02_image103
、 (5)
Figure 02_image105
、(6)
Figure 02_image107
、 (7)
Figure 02_image109
、(8)
Figure 02_image111
、 (9)
Figure 02_image113
、(10)
Figure 02_image115
、 (11)
Figure 02_image117
、 (12)
Figure 02_image119
； (13)
Figure 02_image121
；(14)
Figure 02_image123
；或 (15)
Figure 02_image125
； 其中*表示與L P’或L P連接且**表示與L M或M A連接； 各R 66獨立地係NH或O； 各R 3獨立地係-C(O)-NR 5-或-NR 5-C(O)-； 各R 5獨立地係氫、C 1-6烷基、C 6-10芳基、C 3-8環烷基、COOH或COO-C 1-6烷基； R 4係鍵結或-NR 5-(CR 20R 21)-C(O)-； 各R 20及R 21獨立地係氫、C 1-6烷基、C 6-10芳基、羥基化C 6-10芳基、多羥基化C 6-10芳基、5至12員雜環、C 3-8環烷基、羥基化C 3-8環烷基、多羥基化C 3-8環烷基或天然或非天然胺基酸之側鏈； 各R 7獨立地係-O-、-NR 8、-(C 1-C 10烷基)-、-(C 3-C 8環烷基)-、-芳基-、-O-(C 1-C 8烷基)-、-(C 1-C 10烷基)-芳基-、-芳基-(C 1-C 10烷基)-、-(C 1-C 10烷基)-(C 3-C 8環烷基)-、 -(C 3-C 8環烷基)-(C 1-C 10烷基)-、-(3至8員雜環烷基)-、-(5至8員雜芳基)-、-(C 1-C 10烷基)-(3至8員雜環烷基)-、-(C 1-C 10烷基)-(5至8員雜芳基)-、-(3至8員雜環烷基)-(C 1-C 10烷基)-、-(5至8員雜芳基)-(C 1-C 10烷基)-、-O-C(O)-(CH 2CH 2O) r-(CH 2) 2-、-(CH 2CH 2O) r-或-(CH 2CH 2O) r- (CH 2) 2-； 各b 1獨立地係範圍為0至6的整數； 各e 1獨立地係範圍為0至8的整數； 各f 1獨立地係範圍為1至6的整數； 各f 2獨立地係範圍為1至12的整數；且 各g 2獨立地係範圍為1至4的整數。
在一些實施態樣中，b 1係0。在一些實施態樣中，b 1係1。
在一些實施態樣中，各f 1獨立地係1或2。在一些實施態樣中，f 1係1。在一些實施態樣中，f 1係2。
在一些實施態樣中，g 2係1或2。在一些實施態樣中，g 2係1。在一些實施態樣中，g 2係2。
在一些實施態樣中，f 2係範圍為4至6的整數。
在一些實施態樣中，R 7係-(C 1-C 10烷基)-、 -O-(C 1-C 8烷基)-、-(CH 2CH 2O) r-、-O-C(O)-(CH 2CH 2O) r-(CH 2) 2-或-(CH 2CH 2O) r-(CH 2) 2-。
在一些實施態樣中，R 7係-O-、-NH、-N(CH 3)、-CH 2-、-(CH 2) 2-、-(CH 2) 5-、-O-C(O)-(CH 2CH 2O) 6-(CH 2) 2-、-(CH 2CH 2O)-(CH 2) 2-、-(CH 2CH 2O) 2-(CH 2) 2-、-(CH 2CH 2O) 4-(CH 2) 2-或-(CH 2CH 2O) 6-(CH 2) 2-。
應了解，以M P之實施態樣而言，*表示與L P’或L P連接且**表示與L M或M A連接。
在一些實施態樣中，M P係： (1)
Figure 02_image127
；(2)
Figure 02_image129
；(3)
Figure 02_image131
；(4)
Figure 02_image133
； (5)
Figure 02_image135
； (6)
Figure 02_image137
； (7)
Figure 02_image139
；(8)
Figure 02_image103
；(9)
Figure 02_image142
； (10)
Figure 02_image144
； (11)
Figure 02_image146
；或 (12)
Figure 02_image148
。
在一些實施態樣中，M P係：
Figure 02_image131
。
在一些實施態樣中，M P係：
Figure 02_image142
。
在一些實施態樣中，M P係：
Figure 02_image137
。
在一些實施態樣中，M P係：
Figure 02_image152
。
在一些實施態樣中，M P係：
Figure 02_image154
。
在一些實施態樣中，M P係：
Figure 02_image156
。
在一些實施態樣中，M P係：
Figure 02_image158
。 可變 L M
在一些實施態樣中，L M係鍵結(例如，二價連接子或具有2臂)或多臂連接子(例如，三價或四價或具有3或4臂)，其中各臂可為相同或不同。
在一些實施態樣中，L M係鍵結(例如，二價連接子或具有2臂)或多臂連接子(例如，四價或具有4臂；具有3臂之三價)，其中各臂可為相同或不同。
應理解如本文中所使用之用語「臂(arm)」係指L M的一部分，該部分係(1)與M P(當存在時)連接或(2)與L 3(當存在時)連接或與M A(當L 3不存在時)連接。
在一些實施態樣中，L M係鍵結(例如，二價連接子或具有2臂)。
在一些實施態樣中，L M係多臂連接子(例如，三價或四價或具有3或4臂)，其中各臂可為相同或不同。在一些實施態樣中，L M係多臂連接子(例如，三價或四價或具有3或4臂)。
在一些實施態樣中，L M係具有3臂之三價連接子，其中各臂可為相同或不同。在一些實施態樣中，L M係具有3臂之三價連接子，其中各臂可為相同。在一些實施態樣中，L M係具有3臂之三價連接子，其中各臂可為不同。
在一些實施態樣中，L M係具有4臂之四價連接子，其中各臂可為相同或不同。在一些實施態樣中，L M係具有4臂之四價連接子，其中各臂可為相同。在一些實施態樣中，L M係具有4臂之四價連接子，其中各臂可為不同。
在一些實施態樣中，a 2係2且L M係 (1)
Figure 02_image160
、(2)
Figure 02_image162
、(3)
Figure 02_image164
、 (4)
Figure 02_image166
、(5)
Figure 02_image168
、(6)
Figure 02_image170
、 (7)
Figure 02_image172
或(8)
Figure 02_image174
， 其中：
Figure 02_image176
表示與M P(當存在時)連接，或與L P或L P’(當M P不存在時)連接； Y 1表示與L 3(當存在時)連接，或與M A(當L 3不存在時)連接； R 2及R′ 2各自獨立地係氫、可選地經取代之C 1-6烷基、可選地經取代之C 2-6烯基、可選地經取代之C 2-6炔基、可選地經取代之C 3-19分支烷基、可選地經取代之C 3-8環烷基、可選地經取代之C 6-10芳基、可選地經取代之雜芳基、可選地經取代之C 1-6雜烷基、C 1-6烷氧基、芳氧基、C 1-6雜烷氧基、C 2-6烷醯基、可選地經取代之芳基羰基、C 2-6烷氧羰基、C 2-6烷醯基氧基、芳基羰基氧基、可選地經取代之C 2-6烷醯基、可選地經取代之C 2-6烷醯基氧基、可選地經取代之C 2-6經取代之烷醯基氧基、-COOH或-COO-C 1-6烷基； c 1、c 2、c 3、c 4、c 5、c 7及c 8(當存在時)中之各者係範圍獨立地介於0與10之間的整數；且 d 1、d 2、d 3、d 4、d 5及d 7(當存在時)中之各者係範圍獨立地介於0與10之間的整數。
在一些實施態樣中，a 2係2且L M係 (1)
Figure 02_image160
、(2)
Figure 02_image162
、(3)
Figure 02_image164
、 (4)
Figure 02_image166
、(5)
Figure 02_image168
、(6)
Figure 02_image170
、 (7)
Figure 02_image172
或(8)
Figure 02_image174
， 其中：
Figure 02_image176
表示與M P連接； Y 1表示與L 3(當存在時)連接，或與M A(當L 3不存在時)連接； R 2及R′ 2各自獨立地係氫、可選地經取代之C 1-6烷基、可選地經取代之C 2-6烯基、可選地經取代之C 2-6炔基、可選地經取代之C 3-19分支烷基、可選地經取代之C 3-8環烷基、可選地經取代之C 6-10芳基、可選地經取代之雜芳基、可選地經取代之C 1-6雜烷基、C 1-6烷氧基、芳氧基、C 1-6雜烷氧基、C 2-6烷醯基、可選地經取代之芳基羰基、C 2-6烷氧羰基、C 2-6烷醯基氧基、芳基羰基氧基、可選地經取代之C 2-6烷醯基、可選地經取代之C 2-6烷醯基氧基、可選地經取代之C 2-6經取代之烷醯基氧基、-COOH或-COO-C 1-6烷基； c 1、c 2、c 3、c 4、c 5、c 7及c 8(當存在時)中之各者係範圍獨立地介於0與10之間的整數；且 d 1、d 2、d 3、d 4、d 5及d 7(當存在時)中之各者係範圍獨立地介於0與10之間的整數。
在一些實施態樣中，a 2係2且L M係
Figure 02_image160
。
在一些實施態樣中，a 2係2且L M係
Figure 02_image187
。
在一些實施態樣中，c 1、c 2、c 3、c 4、c 5、c 7及c 8(當存在時)各自獨立地係1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一些實施態樣中，c 1、c 2、c 3、c 4、c 5、c 7及c 8各自獨立地係0或1。在一些實施態樣中，c 1、c 2、c 3、c 4、c 5、c 7及c 8各自獨立地係1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一些實施態樣中，c 1、c 2、c 3、c 4、c 5、c 7及c 8各自獨立地係0、1或2。在一些實施態樣中，c 1、c 2、c 3、c 4、c 5、c 7及c 8各自獨立地係0。在一些實施態樣中，c 1、c 2、c 3、c 4、c 5、c 7及c 8各自獨立地係1。在一些實施態樣中，c 1、c 2、c 3、c 4、c 5、c 7及c 8各自獨立地係2。
在一些實施態樣中，d 1、d 2、d 3、d 4、d 5及d 7(當存在時)各自獨立地係1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一些實施態樣中，d 1、d 2、d 3、d 4、d 5及d 7各自獨立地係0或1。在一些實施態樣中，d 1、d 2、d 3、d 4、d 5及d 7各自獨立地係1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一些實施態樣中，d 1、d 2、d 3、d 4、d 5及d 7各自獨立地係1、2、3或4。在一些實施態樣中，d 1、d 2、d 3、d 4、d 5及d 7各自獨立地係1。在一些實施態樣中，d 1、d 2、d 3、d 4、d 5及d 7各自獨立地係2。在一些實施態樣中，d 1、d 2、d 3、d 4、d 5及d 7各自獨立地係3。在一些實施態樣中，d 1、d 2、d 3、d 4、d 5及d 7各自獨立地係4。
在一些實施態樣中，R 2及R’ 2各自獨立地係氫、C 1-6烷基、C 6-10芳基、C 3-8環烷基、-COOH或-COO-C 1-6烷基。在一些實施態樣中，R 2及R’ 2各自獨立地係氫或C 1-6烷基。在一些實施態樣中，R 2及R’ 2各自獨立地係氫。在一些實施態樣中，R 2及R’ 2各自獨立地係C 1-6烷基。
在一些實施態樣中，L M係：
Figure 02_image189
Figure 02_image191
在一些實施態樣中，a 2係3且L M係
Figure 02_image193
Figure 02_image195
其中：
Figure 02_image176
表示與M P(當存在時)連接，或與L P或L P’(當M P不存在時)連接； Y 1表示與L 3(當存在時)連接，或與M A(當L 3不存在時)連接； R 2及R′ 2各自獨立地係氫、可選地經取代之C 1-6烷基、可選地經取代之C 2-6烯基、可選地經取代之C 2-6炔基、可選地經取代之C 3-19分支烷基、可選地經取代之C 3-8環烷基、可選地經取代之C 6-10芳基、可選地經取代之雜芳基、可選地經取代之C 1-6雜烷基、C 1-6烷氧基、芳氧基、C 1-6雜烷氧基、C 2-6烷醯基、可選地經取代之芳基羰基、C 2-6烷氧羰基、C 2-6烷醯基氧基、芳基羰基氧基、可選地經取代之C 2-6烷醯基、可選地經取代之C 2-6烷醯基氧基、可選地經取代之C 2-6經取代之烷醯基氧基、-COOH或-COO-C 1-6烷基； c 1、c 2、c 3、c 4、c 5、c 6、c 7及c 8中之各者係範圍獨立地介於0與10之間的整數； d 1、d 2、d 3、d 4、d 5、d 6、d 7及d 8中之各者係範圍獨立地介於0與10之間的整數；且 e 1、e 2、e 3、e 4、e 5、e 6、e 7及e 8中之各者係範圍獨立地介於0與10之間的整數。
在一些實施態樣中，a 2係3且L M係
Figure 02_image198
Figure 02_image200
其中：
Figure 02_image176
表示與M P連接； Y 1表示與L 3(當存在時)連接，或與M A(當L 3不存在時)連接； R 2及R′ 2各自獨立地係氫、可選地經取代之C 1-6烷基、可選地經取代之C 2-6烯基、可選地經取代之C 2-6炔基、可選地經取代之C 3-19分支烷基、可選地經取代之C 3-8環烷基、可選地經取代之C 6-10芳基、可選地經取代之雜芳基、可選地經取代之C 1-6雜烷基、C 1-6烷氧基、芳氧基、C 1-6雜烷氧基、C 2-6烷醯基、可選地經取代之芳基羰基、C 2-6烷氧羰基、C 2-6烷醯基氧基、芳基羰基氧基、可選地經取代之C 2-6烷醯基、可選地經取代之C 2-6烷醯基氧基、可選地經取代之C 2-6經取代之烷醯基氧基、-COOH或-COO-C 1-6烷基； c 1、c 2、c 3、c 4、c 5、c 6、c 7及c 8中之各者係範圍獨立地介於0與10之間的整數； d 1、d 2、d 3、d 4、d 5、d 6、d 7及d 8中之各者係範圍獨立地介於0與10之間的整數；且 e 1、e 2、e 3、e 4、e 5、e 6、e 7及e 8中之各者係範圍獨立地介於0與10之間的整數。
在一些實施態樣中，a 2係3且L M係
Figure 02_image203
。
在一些實施態樣中，a 2係3且L M係
Figure 02_image205
。
在一些實施態樣中，-L M-(L 3) a2-係：
Figure 02_image207
。
在一些實施態樣中，其中胺基酸單元具有二個連接位點(即末端藥物單元)，以上顯示之連接位點中之一者可經例如H、OH或C 1-3未經取代之烷基置換。
在一些實施態樣中，當L M係多臂連接子且未與延伸單元M P連接時，W M係L M之末端，且W M每次出現獨立地係氫、保護基、脫離基或能藉由形成共價鍵而連接L M至M P之官能基。
在一些實施態樣中，W M係胺保護基。在一些實施態樣中，W M係BOC。
在一些實施態樣中，W M係胺保護基，且L M係
Figure 02_image209
。
在一些實施態樣中，W M係胺保護基，且L M係
Figure 02_image211
。
在一些實施態樣中，W M係BOC，且L M係
Figure 02_image213
。
在一些實施態樣中，W M包含胺基團。在一些實施態樣中，W M包含-C(O)-(CH 2) w-NH 2，其中w係1至6之整數。在一些實施態樣中，W M係-C(O)-CH 2-NH 2。
在一些實施態樣中，W M係-C(O)-CH 2-NH 2，且L M係
Figure 02_image215
。
在一些實施態樣中，W M係-C(O)-CH 2-NH 2，且L M係
Figure 02_image217
。
在一些實施態樣中，W M係H。 可變 L 3
在一些實施態樣中，各L 3係不存在。在一些實施態樣中，各L 3係含羰基部份。
應理解以L 3之實施態樣而言，*指示與另一L 3(當存在時)或與L M連接；且**指示與另一L 3(當存在時)或與M A連接。
在一些實施態樣中，各L 3(當存在時)獨立地係*-C 1-12烷基-C(O)-**、*-NH-C 1-12烷基-C(O)-**或*-C 1-12烷基-C(O)-NH-C 1-12烷基-C(O)-**。
在一些實施態樣中，至少一個L 3係*-C 1-12烷基-C(O)-**。
在一些實施態樣中，至少一個L 3係 *-CH 2CH 2-C(O)-**。
在一些實施態樣中，L 3係*-CH 2CH 2-C(O)-**。
在一些實施態樣中，(L 3) a3係*-CH 2CH 2-C(O)-**。
在一些實施態樣中，至少一個L 3係*-NH-C 1-12烷基-C(O)-**。
在一些實施態樣中，至少一個L 3係*-NH-CH 2CH 2-C(O)-**。
在一些實施態樣中，L 3係*-NH-CH 2CH 2-C(O)-**。
在一些實施態樣中，(L 3) a3係*-NH-CH 2CH 2-C(O)-**。
在一些實施態樣中，至少一個L 3係*-C 1-12烷基-C(O)-NH-C 1-12烷基-C(O)-**。
在一些實施態樣中，至少一個L 3係 *-CH 2CH 2-C(O)-NH-CH 2CH 2-C(O)-**。
在一些實施態樣中，L 3係*-CH 2CH 2-C(O)-NH-CH 2CH 2-C(O)-**。
在一些實施態樣中，(L 3) a3係*-CH 2CH 2-C(O)-NH-CH 2CH 2-C(O)-**。
在一些實施態樣中，a 3係2或大於2，至少一個L 3係*-C 1-12烷基-C(O)-**，且至少一個L 3係*-NH-C 1-12烷基-C(O)-**。
在一些實施態樣中，(L 3) a3係*-CH 2CH 2-C(O)-NH-CH 2CH 2-C(O)-**。
在一些實施態樣中，(L 3) a3係*NH-CH 2CH 2-C(O)-CH 2CH 2-C(O)-**。 可變 M A
在一些實施態樣中，M A係連接子部份，其能連接一或多個藥物及一或多個親水基至L P或L P’。在一些實施態樣中，M A包含至少二個胺基酸的肽部份。在一些實施態樣中，胺基酸在本文中稱為「AA」。
在一些實施態樣中，肽部份係能與-L D-D單元形成共價鍵且允許連接多個藥物之部份。在一些實施態樣中，肽部份包含單一AA單元或具有二個或超過二個AA單元(例如2至10個、2至6個、或2、3、4、5或6個)，其中AA單元各自獨立地係天然或非天然胺基酸、胺醇、胺醛、二胺、多胺或彼等之組合。在一些實施態樣中，為了具有必需數量的連接，AA單元中至少一者將具有官能化側鏈以提供與-L D-D單元的連接。在一些實施態樣中，例示性官能化AA單元(例如胺基酸、胺醇或胺醛)包括例如疊氮基或炔烴官能化AA單元(例如經修飾以具有疊氮基或炔烴基之胺基酸、胺醇或胺醛)。在一些實施態樣中，疊氮基或炔烴基係使用點擊化學連接。
在一些實施態樣中，肽部份具有2至12個AA單元。在一些實施態樣中，肽部份具有2至10個AA單元。在一些實施態樣中，肽部份具有2至6個AA單元。在一些實施態樣中，肽部份具有2、3、4、5或6個AA單元。
在一些實施態樣中，肽部份具有2個AA單元。在一些實施態樣中，肽部份具有3個AA單元。在一些實施態樣中，肽部份具有4個AA單元。在一些實施態樣中，肽部份具有5個AA單元。在一些實施態樣中，肽部份具有6個AA單元。
在一些實施態樣中，在肽部份內或與共軛體、其中間物或支架之其他組分連接可例如經由胺基、羧基或其他官能基。在一些實施態樣中，肽部份之各胺基酸可獨立地係含氫硫基胺基酸之D或L異構物。在一些實施態樣中，肽部份之各胺基酸可獨立地係含氫硫基胺基酸之D異構物。在一些實施態樣中，肽部份之各胺基酸可獨立地係含氫硫基胺基酸之L異構物。在一些實施態樣中，含氫硫基胺基酸可為例如半胱胺酸、升半胱胺酸或青黴胺。
在一些實施態樣中，包含肽部份之各胺基酸可獨立地係下列胺基酸之L或D異構物：丙胺酸(包括β-丙胺酸)、精胺酸、天冬胺酸、天冬醯胺酸、半胱胺酸、組胺酸、甘胺酸、麩胺酸、麩醯胺酸、苯丙胺酸、離胺酸、白胺酸、甲硫胺酸、絲胺酸、酪胺酸、蘇胺酸、色胺酸、脯胺酸、鳥胺酸、青黴胺、胺基炔酸(aminoalkynoic acid)、胺基烷二酸(aminoalkanedioic acid)、雜環-羧酸、瓜胺酸、司特丁(statine)、二胺基烷酸(diaminoalkanoic acid)、彼等之立體異構物或彼等之衍生物。
在一些實施態樣中，包含肽部份之各胺基酸獨立地係半胱胺酸、升半胱胺酸、青黴胺、鳥胺酸、離胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、甘胺酸、麩醯胺酸、丙胺酸、天冬胺酸、麩胺酸、硒代半胱胺酸、脯胺酸、甘胺酸、異白胺酸、白胺酸、甲硫胺酸、纈胺酸、丙胺酸或彼等之立體異構物。
在一些實施態樣中，肽部份包含單肽、雙肽、三肽、四肽或五肽。在一些實施態樣中，肽部份包含五肽。
在一些實施態樣中，肽部份包含至少約五個胺基酸(例如5、6、7、8、9或10個胺基酸)。在一些實施態樣中，肽部份包含至多約十個胺基酸。
在一些實施態樣中，包含肽部份之各胺基酸獨立地係甘胺酸、絲胺酸、麩胺酸、離胺酸、天冬胺酸及半胱胺酸。
在一些實施態樣中，肽部份包含至少四個甘胺酸及至少一個絲胺酸，例如(甘胺酸) 4及絲胺酸，其中絲胺酸位於肽鏈上的任何位置，諸如例如(絲胺酸)-(甘胺酸) 4；(甘胺酸)-(絲胺酸)-(甘胺酸) 3；(甘胺酸) 2-(絲胺酸)-(甘胺酸) 2；(甘胺酸) 3-(絲胺酸)-(甘胺酸)；或(甘胺酸) 4-(絲胺酸)。
在一些實施態樣中，肽部份包含(甘胺酸) 4-(絲胺酸)或(絲胺酸)-(甘胺酸) 4。在一些實施態樣中，肽部份包含(甘胺酸) 4-(絲胺酸)。在一些實施態樣中，肽部份包含(絲胺酸)-(甘胺酸) 4。
在一些實施態樣中，肽部份包含至少四個甘胺酸及至少一個麩胺酸，例如(甘胺酸) 4及麩胺酸，其中麩胺酸位於肽鏈上的任何位置。
在一些實施態樣中，肽部份包含(麩胺酸)-(甘胺酸) 4或(甘胺酸) 4-(麩胺酸)。
在一些實施態樣中，肽部份包含(β-丙胺酸)-(甘胺酸) 4-(絲胺酸)，其中絲胺酸位於肽鏈上的任何位置。
在一些實施態樣中，肽部份包含(甘胺酸) 4-(絲胺酸)-(麩胺酸)，其中絲胺酸位於肽鏈上的任何位置。在一些實施態樣中，肽部份包含(β-丙胺酸)-(甘胺酸) 4-(絲胺酸)-(麩胺酸)，其中絲胺酸位於肽鏈上的任何位置。
在一些實施態樣中，肽部份包含(甘胺酸) 1-4-(絲胺酸)，其中肽部份係經由甘胺酸中之一者與L 3(當存在時)或與L M(當L 3不存在時)連接；肽部份係經由絲胺酸與T 1(當存在時)連接；且肽部份係經由絲胺酸與L D(當存在時)連接。
在一些實施態樣中，肽部份包含(絲胺酸)-(甘胺酸) 1-4，其中肽部份係經由絲胺酸與L 3(當存在時)或與L M(當L 3不存在時)連接；肽部份係經由甘胺酸與T 1(當存在時)連接；且肽部份係經由絲胺酸與L D(當存在時)連接。
應理解以肽部份之實施態樣而言，*指示與L 3(當存在時)或與L M(當L 3不存在時)連接。在一些實施態樣中，**指示與T 1(當存在時)或-OH(當T 1不存在時)連接。在一些實施態樣中，***指示與L D(當存在時)或氫(當L D不存在時)連接。
在一些實施態樣中，肽部份包含
Figure 02_image219
。
在一些實施態樣中，肽部份包含(甘胺酸)-(絲胺酸)，其中肽部份係經由甘胺酸與L 3(當存在時)或與L M(當L 3不存在時)連接；肽部份係經由絲胺酸與T 1(當存在時)連接；且肽部份係經由絲胺酸與L D(當存在時)連接。
在一些實施態樣中，肽部份包含(甘胺酸)-(絲胺酸)，其中肽部份係經由絲胺酸與L 3(當存在時)或與L M(當L 3不存在時)連接；肽部份係經由甘胺酸與T 1(當存在時)連接；且肽部份係經由絲胺酸與L D(當存在時)連接。
在一些實施態樣中，肽部份包含
Figure 02_image221
。
在一些實施態樣中，肽部份包含(甘胺酸) 4-(絲胺酸)，其中肽部份係經由甘胺酸中之一者與L 3(當存在時)或與L M(當L 3不存在時)連接；肽部份係經由絲胺酸與T 1(當存在時)連接；且肽部份係經由絲胺酸與L D(當存在時)連接。
在一些實施態樣中，肽部份包含
Figure 02_image223
。
在一些實施態樣中，肽部份包含(絲胺酸)-(甘胺酸) 4，其中肽部份係經由絲胺酸與L 3(當存在時)或與L M(當L 3不存在時)連接；肽部份係經由甘胺酸中之一者與T 1(當存在時)連接；且肽部份係經由絲胺酸與L D(當存在時)連接。
在一些實施態樣中，肽部份包含
Figure 02_image225
。
在一些實施態樣中，肽部份包含
Figure 02_image227
。
在一些實施態樣中，肽部份包含(β-丙胺酸)-(甘胺酸) 1-4-(絲胺酸)，其中肽部份係經由β-丙胺酸與L 3(當存在時)或與L M(當L 3不存在時)連接；肽部份係經由絲胺酸與T 1(當存在時)連接；且肽部份係經由絲胺酸與L D(當存在時)連接。
在一些實施態樣中，肽部份包含
Figure 02_image229
。
在一些實施態樣中，肽部份包含(β-丙胺酸)-(甘胺酸) 4-(絲胺酸)，其中： 肽部份係經由β-丙胺酸與L 3(當存在時)或與L M(當L 3不存在時)連接；肽部份係經由絲胺酸與T 1(當存在時)連接；且肽部份係經由絲胺酸與L D(當存在時)連接。
在一些實施態樣中，肽部份包含
Figure 02_image231
。
在一些實施態樣中，肽部份包含(甘胺酸) 1-4-(麩胺酸)，其中肽部份係經由甘胺酸中之一者與L 3(當存在時)或與L M(當L 3不存在時)連接；肽部份係經由麩胺酸與T 1(當存在時)連接；且肽部份係經由麩胺酸與L D(當存在時)連接。
在一些實施態樣中，肽部份包含(甘胺酸) 1-4-(麩胺酸)，其中：肽部份係經由麩胺酸與L 3(當存在時)或與L M(當L 3不存在時)連接；肽部份係經由甘胺酸與T 1(當存在時)連接；且肽部份係經由麩胺酸與L D(當存在時)連接。
在一些實施態樣中，肽部份包含
Figure 02_image233
。
在一些實施態樣中，肽部份包含(甘胺酸)-(麩胺酸)，其中：肽部份係經由甘胺酸與L 3(當存在時)或與L M(當L 3不存在時)連接；肽部份係經由麩胺酸與T 1(當存在時)連接；且肽部份係經由麩胺酸與L D(當存在時)連接。
在一些實施態樣中，肽部份包含
Figure 02_image235
。
在一些實施態樣中，肽部份包含(甘胺酸) 4-(麩胺酸)，其中：肽部份係經由甘胺酸中之一者與L 3(當存在時)或與L M(當L 3不存在時)連接；肽部份係經由麩胺酸與T 1(當存在時)連接；且肽部份係經由麩胺酸與L D(當存在時)連接。
在一些實施態樣中，肽部份包含
Figure 02_image237
。
在一些實施態樣中，肽部份包含(麩胺酸)-(甘胺酸) 1-4，其中：肽部份係經由麩胺酸與L 3(當存在時)或與L M(當L 3不存在時)連接；肽部份係經由甘胺酸中之一者與T 1(當存在時)連接；且肽部份係經由麩胺酸與L D(當存在時)連接。
在一些實施態樣中，肽部份包含
Figure 02_image239
。
在一些實施態樣中，肽部份包含
Figure 02_image241
。
在一些實施態樣中，肽部份包含(麩胺酸)-(甘胺酸) 4，其中：肽部份係經由麩胺酸與L 3(當存在時)或與L M(當L 3不存在時)連接；肽部份係經由甘胺酸中之一者與T 1(當存在時)連接；且肽部份係經由麩胺酸與L D(當存在時)連接。
在一些實施態樣中，肽部份包含
Figure 02_image243
。
在一些實施態樣中，肽部份包含(麩胺酸)-(甘胺酸)，其中： 肽部份係經由麩胺酸與L 3(當存在時)或與L M(當L 3不存在時)連接；肽部份係經由甘胺酸中之一者與T 1(當存在時)連接；且肽部份係經由麩胺酸與L D(當存在時)連接。
在一些實施態樣中，肽部份包含
Figure 02_image245
。
在一些實施態樣中，肽部份包含(β-丙胺酸)-(甘胺酸) 1-4-(麩胺酸)，其中： 肽部份係經由β-丙胺酸與L 3(當存在時)或與L M(當L 3不存在時)連接；肽部份係經由麩胺酸與T 1(當存在時)連接；且肽部份係經由麩胺酸與L D(當存在時)連接。
在一些實施態樣中，肽部份包含
Figure 02_image247
。
在一些實施態樣中，肽部份包含(β-丙胺酸)-(甘胺酸) 4-(麩胺酸)，其中： 肽部份係經由β-丙胺酸與L 3(當存在時)或與L M(當L 3不存在時)連接；肽部份係經由麩胺酸與T 1(當存在時)連接；且肽部份係經由麩胺酸與L D(當存在時)連接。
在一些實施態樣中，肽部份包含
Figure 02_image249
。
應理解以M A之實施態樣而言，*指示與L 3(當存在時)或與L M(當L 3不存在時)連接，**指示與T 1連接，且***指示與L D連接。
在一些實施態樣中，肽部份包含(β-丙胺酸)-(甘胺酸)-(麩胺酸)，其中： 肽部份係經由β-丙胺酸與L 3(當存在時)或與L M(當L 3不存在時)連接；肽部份係經由麩胺酸與T 1(當存在時)連接；且肽部份係經由麩胺酸與L D(當存在時)連接。
在一些實施態樣中，肽部份包含
Figure 02_image251
。 可變 L D
在一些實施態樣中，各L D獨立地係連接D至M A之二價連接子部份。在一些實施態樣中，各L D包含至少一個可切割鍵結，以使當鍵結被切割時，D經釋放為用於其意圖治療效應的活性形式。
在一些實施態樣中，L D包含一個可切割鍵結。在一些實施態樣中，L D包含多個切割位點或鍵結。
應理解各L D在連接至D之前獨立地對應單價部份L D’。
在一些實施態樣中，L D’包含能形成可切割鍵結之官能基。能形成可切割鍵結之官能基可包括例如巰基以形成雙硫鍵，醛、酮或肼基以形成腙鍵，羥胺基團以形成肟鍵，羧酸基團或胺基以形成肽鍵，羧酸基團或羥基以形成酯鍵及糖以形成糖苷鍵。
在一些實施態樣中，各L D包含可經由二硫化物交換切割之雙硫鍵、可在酸性pH下切割之酸不穩定性鍵及/或可藉由水解酶切割之鍵結。在一些實施態樣中，L D包含胺甲酸酯鍵(即，-O-C(O)-NR-，其中R係氫或烷基或類似物)。
在一些實施態樣中，L D中之可切割鍵結的結構及序列可為使鍵結藉由存在於目標部位之酶的作用切割。在一些實施態樣中，可切割鍵結可藉由其他機制切割。
在一些實施態樣中，L D中之可切割鍵結的結構及序列可為使鍵結藉由存在於目標部位之酶的作用切割。在一些實施態樣中，可切割鍵結可藉由其他機制切割。
在一些實施態樣中，可切割鍵結可藉由一或多種酶(包括腫瘤相關蛋白酶)進行酶催化性切割，以釋放藥物單元或D，其中本揭露之共軛體、或其中間物或支架在活體內釋放時係經質子化以提供藥物單元或D。
在一些實施態樣中，各L D獨立地係
Figure 02_image253
，其中： L E(當存在時)係-NH-[(CH 2CH 2O) p-(CH 2) 0-2] q-C(O)-、 -NH-(C 1-C 6烷基)-O-C(O)-或-NH-[(CH 2CH 2O) p-(CH 2) 0-2] q-C(O)-NH-(C 1-C 6烷基)-O-C(O)-，其中p係範圍約1至約20的整數，且q係範圍約1至約10的整數； 各W獨立地係天然或非天然胺基酸單元； w係範圍約0至約12的整數； ***表示與M A連接；且 ****表示與D連接。
在一些實施態樣中，各L D獨立地係
Figure 02_image255
。
在一些實施態樣中，各L D獨立地係
Figure 02_image257
。
在一些實施態樣中，各L D獨立地係
Figure 02_image259
。
在一些實施態樣中，L E包含至少一個PEG單元。
在一些實施態樣中，PEG單元包含至少1個次單元、至少2個次單元、至少3個次單元、至少4個次單元、至少5個次單元或至少6個次單元。在一些實施態樣中，PEG單元包含至少4個次單元、至少3個次單元、至少2個次單元或至少1個次單元。
在一些實施態樣中，PEG單元包含至少1個次單元。
在一些實施態樣中，PEG單元包含至少2個次單元。
在一些實施態樣中，p係範圍約1至約15、約1至約10、約1至約9、約1至約8、約1至約7、約1至約6或約1至約5的整數。
在一些實施態樣中，p係範圍約1至約6的整數。在一些實施態樣中，p係範圍約1至約4的整數。在一些實施態樣中，p係範圍約1至約2的整數。
在一些實施態樣中，p係2。
在一些實施態樣中，q係範圍約1至約15、約1至約10、約1至約9、約1至約8、約1至約7、約1至約6或約1至約5的整數。
在一些實施態樣中，q係1、2、3、4或5。在一些實施態樣中，q係2。
在一些實施態樣中，L E(當存在時)係-NH-(CH 2CH 2O) 1-4-(CH 2) 2-C(O)-。在一些實施態樣中，L E(當存在時)係-NH-(CH 2CH 2O) 2-(CH 2) 2-C(O)-。在一些實施態樣中，L E(當存在時)係-NH-(CH 2CH 2O) 3-(CH 2) 0-2-C(O)-。在一些實施態樣中，L E(當存在時)係-NH-(CH 2CH 2O) 3-(CH 2)-C(O)-。在一些實施態樣中，L E(當存在時)係-NH-(CH 2CH 2O) 3-(CH 2) 2-C(O)-。在一些實施態樣中，L E(當存在時)係-NH-(CH 2CH 2O)-(CH 2) 0-2-C(O)-。在一些實施態樣中，L E(當存在時)係-NH-CH 2CH 2O-C(O)-。在一些實施態樣中，L E(當存在時)係-NH-(C 1-C 6alkyl)-O-C(O)-。在一些實施態樣中，L E(當存在時)係-NH-CH 2-CH(CH 3)-O-C(O)-。在一些實施態樣中，L E(當存在時)係-NH-[(CH 2CH 2O) 1-4-(CH 2) 2-C(O)-NH-(C 1-C 6alkyl)-O-C(O)-。在一些實施態樣中，L E(當存在時)係-NH-CH 2CH 2O-(CH 2) 2-C(O)-NH-(CH 2) 2-O-C(O)-。
在一些實施態樣中，w係範圍約1至約12的整數(例如1至6或1至4或1至3或1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12)。
在一些實施態樣中，w係0、1、2、3、4或5。在一些實施態樣中，w係1、2、3、4或5。
在一些實施態樣中，w係1。在一些實施態樣中，w係2。在一些實施態樣中，w係3。
在一些實施態樣中，各W獨立地係天然或非天然胺基酸及/或D或L異構物。
在一些實施態樣中，各W獨立地係天然或非天然之α、β或γ胺基酸。
在一些實施態樣中，至少一個W係天然胺基酸。在一些實施態樣中，至少一個W係非天然胺基酸。
在一些實施態樣中，W W不包含天然胺基酸。在一些實施態樣中，W W不包含非天然胺基酸。
在一些實施態樣中，W W包含與非天然胺基酸連接之天然胺基酸。
在一些實施態樣中，W W包含與天然胺基酸之D-異構物連接之天然胺基酸。
在一些實施態樣中，W W係雙肽，例如-Val-Cit-、-Phe-Lys-、-Val-Ala-或Glu-Ala。
在一些實施態樣中，W w係單肽、雙肽、三肽、四肽、五肽、六肽、七肽、八肽、九肽、十肽、十一肽或十二肽單元。
在一些實施態樣中，W w係肽(例如1至12個胺基酸之肽)，其係直接與D共軛。在一些實施態樣中，肽係單一胺基酸。在一些實施態樣中，肽係雙肽。在一些實施態樣中，肽係三肽。
在一些實施態樣中，W W中之各胺基酸係獨立地選自丙胺酸、β-丙胺酸、精胺酸、天冬胺酸、天冬醯胺酸、組胺酸、甘胺酸、麩胺酸、麩醯胺酸、苯丙胺酸、離胺酸、白胺酸、絲胺酸、酪胺酸、蘇胺酸、異白胺酸、脯胺酸、色胺酸、纈胺酸、半胱胺酸、甲硫胺酸、硒代半胱胺酸、鳥胺酸、青黴胺、胺基烷酸、胺基炔酸、胺基烷二酸、胺苯甲酸、胺基-雜環-烷酸、雜環-羧酸、瓜胺酸、司特丁、二胺基烷酸及彼等之衍生物。
在一些實施態樣中，W W中之各胺基酸係獨立地選自丙胺酸、β-丙胺酸、精胺酸、天冬胺酸、天冬醯胺酸、組胺酸、甘胺酸、麩胺酸、麩醯胺酸、苯丙胺酸、離胺酸、白胺酸、絲胺酸、酪胺酸、蘇胺酸、異白胺酸、脯胺酸、色胺酸、纈胺酸、瓜胺酸及彼等之衍生物。
在一些實施態樣中，W W中之各胺基酸係獨立地選自蛋白原性及非蛋白原性胺基酸。
在一些實施態樣中，W W中之各胺基酸係獨立地選自下列胺基酸之L或D異構物：丙胺酸、β-丙胺酸、精胺酸、天冬胺酸、天冬醯胺酸、半胱胺酸、組胺酸、甘胺酸、麩胺酸、麩醯胺酸、苯丙胺酸、離胺酸、白胺酸、甲硫胺酸、絲胺酸、酪胺酸、蘇胺酸、色胺酸、脯胺酸、鳥胺酸、青黴胺、胺基炔酸、胺基烷二酸、雜環-羧酸、瓜胺酸、司特丁、二胺基烷酸、纈胺酸、瓜胺酸及彼等之衍生物。
在一些實施態樣中，W W中之各胺基酸獨立地係半胱胺酸、升半胱胺酸、青黴胺、鳥胺酸、離胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、甘胺酸、麩醯胺酸、丙胺酸、天冬胺酸、麩胺酸、硒代半胱胺酸、脯胺酸、甘胺酸、異白胺酸、白胺酸、甲硫胺酸、纈胺酸、瓜胺酸或丙胺酸。
在一些實施態樣中，W W中之各胺基酸係獨立地選自下列胺基酸之L-異構物：丙胺酸、β-丙胺酸、精胺酸、天冬胺酸、天冬醯胺酸、組胺酸、甘胺酸、麩胺酸、麩醯胺酸、苯丙胺酸、離胺酸、白胺酸、絲胺酸、酪胺酸、蘇胺酸、異白胺酸、色胺酸、瓜胺酸及纈胺酸。
在一些實施態樣中，W W中之各胺基酸係獨立地選自下列胺基酸之D-異構物：丙胺酸、β-丙胺酸、精胺酸、天冬胺酸、天冬醯胺酸、組胺酸、甘胺酸、麩胺酸、麩醯胺酸、苯丙胺酸、離胺酸、白胺酸、絲胺酸、酪胺酸、蘇胺酸、異白胺酸、色胺酸、瓜胺酸及纈胺酸。
在一些實施態樣中，W W中之各胺基酸係丙胺酸、β-丙胺酸、甘胺酸、麩醯胺酸、麩胺酸、異麩胺酸、異天冬胺酸、纈胺酸、瓜胺酸或天冬胺酸。
在一些實施態樣中，W W包含β-丙胺酸。在一些實施態樣中，W W包含(β-丙胺酸)-(丙胺酸)。在一些實施態樣中，W W包含(β-丙胺酸)及可選地麩胺酸、麩醯胺酸、異麩胺酸、天冬胺酸、異天冬胺酸、纈胺酸、(纈胺酸)-(丙胺酸)、(丙胺酸)-(丙胺酸)或(纈胺酸)-(瓜胺酸)。
在一些實施態樣中，W w包含(麩胺酸)-(丙胺酸)。
在一些實施態樣中，W W包含(β-丙胺酸)-(麩醯胺酸)。
在一些實施態樣中，W W包含(β-丙胺酸)-(麩醯胺酸)-(丙胺酸)。
在一些實施態樣中，W W包含麩胺酸及可選地丙胺酸、甘胺酸、異麩胺酸、天冬胺酸、異天冬胺酸、纈胺酸、(纈胺酸)-(丙胺酸)、(丙胺酸)-(丙胺酸)或(纈胺酸)-(瓜胺酸)。
在一些實施態樣中，W w包含2,3-二胺基丙酸。在一些實施態樣中，W w包含(R)-2,3-二胺基丙酸。在一些實施態樣中，W w包含麩胺酸。在一些實施態樣中，W w包含(麩胺酸)-(丙胺酸)。在一些實施態樣中，W w包含(麩胺酸)-(甘胺酸)-(丙胺酸)。
在一些實施態樣中，W W包含L-麩胺酸、D-麩胺酸、(L-麩胺酸)-(L-丙胺酸)、(L-麩胺酸)-(D-丙胺酸)、(D-麩胺酸)-(L-丙胺酸)、(D-麩胺酸)-(D-丙胺酸)、(L-麩胺酸)-(甘胺酸)-(L-丙胺酸)、D-麩胺酸)-(甘胺酸)-(D-丙胺酸)、(L-麩胺酸)-(甘胺酸)-(D-丙胺酸)或(D-麩胺酸)-(甘胺酸)-(L-丙胺酸)。
在一些實施態樣中，W w除了一或多個胺基酸以外包含胺甲酸酯鍵。
在一些實施態樣中，L D(例如W w)具有酶催化性切割之選擇性(例如藉由特定酶)。在一些實施態樣中，特定酶係腫瘤相關蛋白酶。
在一些實施態樣中，L D(例如W W)包含其切割係藉由組織蛋白酶B、C及D或纖維蛋白溶酶催化之鍵結。
在一些實施態樣中，L D包含糖切割位點。
在一些實施態樣中，L D包含經由氧糖苷鍵連接至自毀型基團之糖部份(Su)。
在一些實施態樣中，「自毀型基團(self-immolative group)」可為能將三個隔開的化學部份(即，糖部份(經由糖苷鍵)、藥物單元(直接或間接)及當M A存在時之M A或當M A不存在時之A 1(直接或間接))共價連接在一起的三官能性化學部份。
在一些實施態樣中，可在目標部位切割糖苷鍵以起始導致藥物釋放之自毀型反應次序。
在一些實施態樣中，各L D(當存在時)獨立地係：
Figure 02_image261
Figure 02_image263
Figure 02_image265
其中：***表示與M A連接；且****表示與D連接。
在一些實施態樣中，各L D(當存在時)獨立地係：
Figure 02_image267
Figure 02_image269
其中： ***表示與M A連接；且 ****表示與D連接。
在一些實施態樣中，各L D(當存在時)獨立地係：
Figure 02_image271
。 治療劑、藥物單元或可變 D
在一些實施態樣中，治療劑係細胞毒性藥物部份。在一些實施態樣中，治療劑係STING的促效劑藥物部份。
在一些實施態樣中，細胞毒性藥物部份係小分子。
在一些實施態樣中，治療劑具有≤約5 kDa之分子量(例如，具有≤約4 kDa、≤約3 kDa、≤約1.5 kDa或≤約1 kDa之分子量)。
在一些實施態樣中，治療劑具有約小於1 nM之IC 50。在一些實施態樣中，細胞毒性藥物部份或STING的促效劑藥物部份具有小於1 nM之IC 50。
在一些實施態樣中，治療劑具有約大於1 nM之IC 50(例如，細胞毒性藥物部份或STING的促效劑藥物部份具有約1至50 nM之IC 50)。在一些實施態樣中，治療劑具有約大於1 nM之IC 50。在一些實施態樣中，治療劑具有大於1 nM之IC 50(例如，細胞毒性藥物部份或STING的促效劑藥物部份具有1至50 nM之IC 50)。在一些實施態樣中，治療劑具有大於1 nM之IC 50。
在一些實施態樣中，具有大於約1 nM之IC 50的治療劑(例如「較不強效之藥物(less potent drug)」不適合用於使用所屬技術領域公認之共軛技術與抗體共軛。在不希望受到理論束縛下，此類治療劑(即，細胞毒性劑藥物部份或STING的促效劑藥物部份)具有的效力不足以用於使用習知技術之靶向抗體-藥物共軛體，因為無法在不導致共軛體之藥物動力學及物理化學性質減損下使用所屬技術領域公認之技術共軛足夠拷貝數的藥物(即超過8個)。在一些實施態樣中，可使用本文所述之共軛策略達成足夠高裝載的這些較不強效之藥物，藉此導致高裝載的治療劑，同時維持所欲之藥物動力學及物理化學性質。在一些實施態樣中，本揭露關於抗體-藥物共軛體，其包括抗體、支架及至少八個治療劑(即，細胞毒性劑藥物部份或STING的促效劑藥物部份)，其中治療劑具有大於約1 nM之IC 50。 細胞毒性藥物部份(可變D)
在一些實施態樣中，治療劑係細胞毒性藥物部份。在一些實施態樣中，細胞毒性藥物部份係下列之衍生物：(a)耳抑素化合物；(b)卡利奇黴素化合物；(c)雙聯黴素(duocarmycin)化合物；(d)Sn38；(e)吡咯并苯并二氮呯；(f)長春花(vinca)化合物；(g)微管溶素(tubulysin)化合物；(h)非天然喜樹鹼(camptothecin)化合物；(i)類美坦素化合物；(j)DNA結合藥物；(k)激酶抑制劑；(l)MEK抑制劑；(m)KSP抑制劑；(n)拓撲異構酶抑制劑；(o)DNA烷化藥物；(p)RNA聚合酶；(q)PARP抑制劑；(r)NAMPT抑制劑；(s)拓撲異構酶抑制劑；(t)蛋白質合成抑制劑；(u)DNA結合藥物；(v)DNA插層藥物；或(w)免疫調節化合物(如US 2018/0154018所述，其內容全文特此以引用方式併入本文中。
在一些實施態樣中，細胞毒性藥物部份係耳抑素F-羥基丙基醯胺-L-丙胺酸。
在一些實施態樣中，耳抑素係下式(X)之化合物：
Figure 02_image273
其中： R 31及R 32中之各者獨立地係氫或C 1-8烷基且R 31及R 32中之至多一者係H； R 33係氫、C 1- 8烷基、C 3- 8碳環、C 6-10芳基、C 1- 8烷基-C 6-10芳基、X 1-(C 3- 8碳環)、C 3- 8雜環或X 1-(C 3- 8雜環)； R 34係氫、C 1- 8烷基、C 3- 8碳環、C 6-10芳基、X 1-C 6-10芳基、X 1-(C 3- 8碳環)、C 3- 8雜環或X 1-(C 3- 8雜環)； R 35係氫或甲基； 或R 34及R 35與其等所連接之碳原子一起形成具有式  -(CR 55R 41) b-之碳環，其中R 55及R 41中之各者獨立地係氫或C 1- 8烷基 且b係3至7的整數； R 36係氫或C 1- 8烷基； R 37係氫、C 1- 8烷基、C 3- 8碳環、C 6-10芳基、-X 1-C 6-10芳基、-X 1-(C 3- 8碳環)、C 3- 8雜環或-X 1-(C 3- 8雜環)； 各R 38獨立地係氫、OH、C 1- 8烷基、C 3- 8碳環或 O-(C 1- 8烷基)； R 53係：
Figure 02_image275
或R 54； R 39係氫、C 1-8烷基、C 6-10芳基、-X 1-C 6-10芳基、C 3-8碳環、C 3-8雜環、-X 1-C 3-8雜環、-C 1-8伸烷基-NH 2或(CH 2) 2SCH 3； 各X 1獨立地係C 1-10伸烷基或C 3-10伸環烷基。 R 44係氫或C 1-8烷基； R 45係X 3-R 42或NH-R 19； X 3係O或S； R 19係氫、OH、胺基、C 1-8烷基胺基或-[C(R 20R 21)] a-R 22； R 42係胺基、C 1-6烷基胺基或-[C(R 20R 21)] a-R 22； R 20及R 21中之各者獨立地係氫、C 1-6烷基、C 6-10芳基、羥基化C 6-10芳基、多羥基化C 6-10芳基、5至12員雜環、C 3-8環烷基、羥基化C 3-8環烷基、多羥基化C 3-8環烷基或天然或非天然胺基酸之側鏈； R 22係-OH、-NHR 23、-COOH、-R 82-C(O)(CH 2) c- C(H)(R 23)-N(H)(R 23)、-R 82-C(O)(CH 2) d-(OCH 2-CH 2) f- N(H)(R 23)或-R 82-(C(O)-CH(X 2)-NH) d-R 77； 各R 23獨立地係氫、C 1-6烷基、C 6-10芳基、C 3-8環烷基、-COOH或-COO-C 1-6烷基； X 2係天然或非天然胺基酸之側鏈； R 77係氫或X 2且NR 77形成含氮環狀化合物； R 82係-NR 23或氧； R 54係-C(R 56) 2--C(R 56) 2-C 6-10芳基、-C(R 56) 2--C(R 56) 2-C 3-8雜環、或-C(R 56) 2--C(R 56) 2-C 3-8碳環； R 56獨立地係H、OH、C 1-8烷基、C 3-8碳環、-O-C 1-8烷基、-O-C(O)-R 29或-O-R 23-O-C 1-6烷基-NH 2； R 29係胺基、5至12員雜環烷基、-R 28-C 1-6烷基-R 22、R 28-C 5- 12雜環烷基-C 1-6烷基-R 22、-[C(R 20R 21)] a-R 22或-R 28-C 1-6烷基-C 6- 12芳基-C 1-6烷基-R 22；或R 29係如本文中定義之R 47； R 28係不存在、NR 23或氧； a係1至6的整數；c係0至3的整數；d係1至3的整數；且f係1至12的整數。
在一些實施態樣中，在式(X)之耳抑素化合物中： R 39係苄基或
Figure 02_image277
；且R 44係氫。
在一些實施態樣中，耳抑素係下式(Xa)之化合物：
Figure 02_image279
其中： R 33至R 38、及R 44係如本文中所定義， R 31及R 32中之一者係氫或C 1-8烷基且其他係：
Figure 02_image281
其中： R 83係氫或CH 3； R 84係C 1-6烷基或C 6-10芳基； 各R 12’獨立地係鹵素、-C 1-8烷基、-O-C 1-8烷基、硝基或氰基； h係0至4的整數； u係整數0或1； R 53係：
Figure 02_image275
或R 54R 39係氫、C 1-8烷基、C 6-10芳基、-X 1-C 6-10芳基、C 3-8碳環、C 3-8雜環、-X 1-C 3-8雜環、-C 1-8伸烷基-NH 2或(CH 2) 2SCH 3， 各X 1獨立地係C 1-10伸烷基或C 3-10伸環烷基。 R 45係X 3-R 42或NH-R 19； X 3係O或S； R 19係氫、OH、胺基、C 1-8烷基胺基或-[C(R 20R 21)] a-R 22； R 42係氫、胺基、C 1-6烷基胺基或-[C(R 20R 21)] a-R 22； R 20及R 21中之各者獨立地係氫、C 1-6烷基、C 6-10芳基、羥基化C 6-10芳基、多羥基化C 6-10芳基、5至12員雜環、C 3-8環烷基、羥基化C 3-8環烷基、多羥基化C 3-8環烷基或天然或非天然胺基酸之側鏈； R 22係-OH、-NHR 23、-COOH、-R 82-C(O)(CH 2) c-C(H) (R 23)-N(H)(R 23)、-R 82-C(O)(CH 2) d-(O-CH 2-CH 2) f-N(H)(R 23)或-R 82-(C(O)-CH(X 2)-NH) d-R 77； 各R 23獨立地係氫、C 1-6烷基、C 6-10芳基、C 3-8環烷基、-COOH或-COO-C 1-6烷基； X 2係天然或非天然胺基酸之側鏈； R 77係氫或X 2且NR 77形成含氮環狀化合物； R 82係-NR 23或氧； R 54係-C(R 56) 2--C(R 56) 2-C 6-10芳基、-C(R 56) 2--C(R 56) 2-C 3-8雜環、或-C(R 56) 2--C(R 56) 2-C 3-8碳環； R 56獨立地係氫、OH、C 1-8烷基、C 3-8碳環、-O-C 1-8烷基、-O-C(O)-R 29或-O-R 23-O-C 1-6烷基-NH 2； R 29係胺基、5至12員雜環烷基、-R 28-C 1-6烷基-R 22、R 28-C 5- 12雜環烷基-C 1-6烷基-R 22、-[C(R 20R 21)] a-R 22或-R 28-C 1-6烷基-C 6- 12芳基-C 1-6烷基-R 22；或R 29係如本文中定義之R 47； R 28係不存在、NR 23或氧； a係1至6的整數；c係0至3的整數；d係1至3的整數；且f係1至12的整數。
在一些實施態樣中，式(Xa)之耳抑素化合物係下式(XIa)或式(XIb)之化合物：
Figure 02_image284
其中： R 92係：
Figure 02_image286
；
Figure 02_image288
；或
Figure 02_image290
，且 R 83係氫或CH 3。
在一些實施態樣中，式(X)之耳抑素係下式(XI)、下式(XII)或下式(XIII)之化合物： 其中式(XI)之化合物係：
Figure 02_image292
其中R 31係氫或CH 3且R 42係-CH 3或下列結構中之任一者：
Figure 02_image294
Figure 02_image296
其中： a係1至6的整數；c係0至3的整數；且g係2至6的整數； 其中式(XII)之化合物係：
Figure 02_image298
其中R 31係氫或CH 3且R 40係氫、-OH、-NH 2或下列結構中之任一者：
Figure 02_image300
Figure 02_image302
其中： a係1至6的整數；g係2至6的整數；且c係0至3的整數； 其中式(XIII)之化合物係：
Figure 02_image304
其中： R 31係氫或CH 3； R 29係胺基、5至12員雜環烷基、-R 28-C 1-6烷基-R 22、R 28-C 5- 12雜環烷基-C 1-6烷基-R 22、-R 28-[C(R 20R 21)] a-R 22或  -R 28-C 1-6烷基-C 6- 12芳基-C 1-6烷基-R 22；或R 29係如本文中定義之R 47； R 20及R 21中之各者獨立地係氫、C 1-6烷基、C 6-10芳基、羥基化C 6-10芳基、多羥基化C 6-10芳基、5至12員雜環、C 3-8環烷基、羥基化C 3-8環烷基、多羥基化C 3-8環烷基或天然或非天然胺基酸之側鏈； R 22係-OH、-NHR 23、-COOH、-R 82-C(O)(CH 2) c-C(H)(R 23)-N(H)(R 23)、-R 82-C(O)(CH 2) d-(O CH 2-CH 2) f- N(H)(R 23)或-R 82-(C(O)-CH(X 2)-NH) d-R 77； 各R 23獨立地係氫、C 1-6烷基、C 6-10芳基、C 3-8環烷基、-COOH或-COO-C 1-6烷基； X 2係天然或非天然胺基酸之側鏈； R 77係氫或X 2且NR 77形成含氮環狀化合物； R 82係-NR 23或氧； R 28係不存在、NR 23或氧； a係1至6的整數；c係0至3的整數；d係1至3的整數；且f係1至12的整數。
在式(XII)之一些實施態樣中，R 40係
Figure 02_image306
、
Figure 02_image308
在一些實施態樣中，式(XII)之化合物係下式(XIIa)、(XIIb)、(XIIc)、(XIId)、(XIIe)、(XIIf)、(XIIg)或(XIIh)之化合物：
Figure 02_image310
Figure 02_image312
Figure 02_image314
Figure 02_image316
Figure 02_image318
。
在式(XIII)之化合物之一些實施態樣中，R 29係-NH 2、5員雜環烷基、-R 28-C 1-6烷基-R 22、R 28-C 5- 12雜環烷基-C 1-6烷基-R 22或-R 28-C 1-6烷基-C 6- 12芳基-C 1-6烷基-R 22；或R 29係如本文中定義之R 47； R 28係不存在、NR 23或氧； R 22係-OH、-NHR 23、-COOH、-R 82-C(O)(CH 2) c- C(H)(R 23)-N(H)(R 23)、-R 82-C(O)(CH 2) d-(O CH 2-CH 2) f- N(H)(R 23)或-R 82-(C(O)-CH(X 2)-NH) d-R 77； 各R 23獨立地係氫、C 1-6烷基、C 6-10芳基、C 3-8環烷基、 -COOH或-COO-C 1-6烷基； X 2係天然或非天然胺基酸之側鏈； R 77係氫或X 2且NR 77形成含氮環狀化合物； R 82係-NR 23或氧； c係0至3的整數；d係1至3的整數；且f係1至12的整數。
在一些實施態樣中，R 29係：
Figure 02_image320
Figure 02_image322
Figure 02_image324
其中： a係1至6的整數；c係0至3的整數；且g係2至6的整數。
Figure 02_image326
其中R 42係H、-CH 3(m/z=760)、
Figure 02_image328
(m/z=802.6)、
Figure 02_image330
(m/z=790)或
Figure 02_image332
(m/z=804)；
Figure 02_image334
其中R40係H、
Figure 02_image336
(m/z=803.5)、
Figure 02_image338
(m/z=789.1)、
Figure 02_image340
(m/z=974.2)、
Figure 02_image342
(m/z=874.5)、
Figure 02_image344
(m/z=902.2)、
Figure 02_image330
、
Figure 02_image347
、-OH(m/z=788)、
Figure 02_image349
(m/z=803.4)、
Figure 02_image351
(m/z=803.4)、
Figure 02_image353
(m/z=874.4)、
Figure 02_image355
(m/z=874.4)、
Figure 02_image357
(m/z=874.4)、
Figure 02_image359
(m/z=874.4)、
Figure 02_image361
(m/z=900.2)、
Figure 02_image363
(m/z=900.2)、
Figure 02_image365
(m/z=900.5)、
Figure 02_image367
(m/z=900.5)、
Figure 02_image369
(m/z=1016.6)、
Figure 02_image371
(m/z=989.5)或
Figure 02_image373
(m/z=975.5)；或
Figure 02_image375
其中-C(O)-R 29係
Figure 02_image377
(m/z=903.2)、
Figure 02_image379
(m/z=803.1)、
Figure 02_image381
(m/z=790)、
Figure 02_image383
(m/z=832.6)、
Figure 02_image385
(m/z=829.1)或
Figure 02_image387
(m/z=802)。
在一些實施態樣中，細胞毒性藥物部份(D)係：
Figure 02_image389
。 STING 的促效劑藥物部份 ( 可變 D)
在一些實施態樣中，STING的促效劑藥物部份(D)係下式(A)之化合物：
Figure 02_image391
或其前藥、溶劑合物、醫藥上可接受之鹽或互變異構物，其中： Y 1、Y 2、Z 1及Z 2各自獨立地係O、S、C或N； X 1、X 2、W 1及W 2各自獨立地係C或N； X 3及X 4各自獨立地係S或NR f； X 5係N或CR A2； X 6係N或CR A1； X 7係N或CR 4； R 3及R 5各自獨立地係-CON(R d)(R f)、-CH 2N(R d)(R f)、 -N(R d)(R f)、-N(R d)CO(R f)、-CH 2N(R d)CO(R f)，或R 3及R 5中一者係-CON(R d)(R f)、-CH 2N(R d)(R f)、-N(R d)(R f)、 -N(R d)CO(R f)或-CH 2N(R d)CO(R f)且R 3及R 5中另一者係H、 -COOH或-CO 2(R C)； R c係C 1-4烷基； R A2、R A1及R 4各自獨立地係H、鹵素、羥基、胺基、胺基(C 1-4烷基)-、可選地經取代之(C 1-6烷基)或可選地經取代之(C 1-6烷基)氧基-，其中該可選地經取代之(C 1-6烷基)或可選地經取代之(C 1-6烷基)氧基-中之C 1-6烷基係可選地經1至4個各自獨立地選自包含羥基、C 1-4烷氧基、-N(R e)(R f)、-CO 2(R f)、-CON(R e)(R f)及-COOH之群組之取代基取代； 各R d獨立地係H、羥基或C 1-4烷基； R e係選自H、(C 1-4烷基)、-CO(C 1-4烷基)、-OCO(C 1-4烷基)及-CO 2(C 1-4烷基)； 各R f獨立地係H、羥基或(C 1-4烷基)； R 14及R C2各自獨立地係不存在或C 1-4烷基，其中C 1-4烷基係可選地經選自鹵素、-OR c、-NR cR d、-CO 2R c、 -CONR cR d、-SO 2NR cR d及-OCONR cR d之取代基取代； R 16及R C1各自獨立地係不存在、H或C 1-4烷基；且 R 15、R 17、R 18或R 19各自獨立地係不存在、H或C 1-4烷基，其中C 1-4烷基係可選地經選自鹵素、-OR c、-NR cR d、 -CO 2R c、-CONR cR d、-SO 2NR cR d及-OCONR cR d之取代基取代； 其中：(i)R A2及R A1中至少一者係存在，且其中R A2及R A1中至少一者係經由R A2及/或R A1之至少一個官能基直接或間接連接至L C(當L C存在時)或A 1(當L C不存在時)；或(ii)R C2及R C1中至少一者係存在，且其中R C2及R C1中至少一者係經由R C2及/或R C1之至少一個官能基直接或間接連接至L C(當L C存在時)或A 1(當L C不存在時)。
在一些實施態樣中，STING的促效劑藥物部份(D)係下式(A’)之化合物：
Figure 02_image393
或其前藥、溶劑合物、醫藥上可接受之鹽或互變異構物，其中Y 1、Y 2、Z 1、Z 2、X 1、X 2、W 1、W 2、X 3、X 4、X 5、X 6、R 3、R 5、R c、R A1、R A2、R d、R e、R f、R 14、R C2、R 16、R C1、R 15、R 17、R 18及R 19係如式(A)中之定義。
在一些實施態樣中，STING的促效劑藥物部份係下式(A-a)之化合物：
Figure 02_image395
或其前藥、溶劑合物、醫藥上可接受之鹽或互變異構物，其中： Y 1、Y 2、Z 1、Z 2、X 1、X 2、W 1、W 2、X 3、X 4、R 3、R 5、R c、R d、R e、R f、R 14、R C2、R 16、R C1、R 15、R 17、R 18及R 19係如式(A)中之定義； X 5係CR A2；且 R A2係鹵素、羥基、可選地經取代之(C 1-6烷基)、經取代之(C 1-6烷基)氧基-、可選地經取代之(C 1-6烷基)胺基-或可選地經取代之(C 1-6烷基)(C 1-4烷基)胺基-，其中該可選地經取代之(C 1-6烷基)或經取代之(C 1-6烷基)氧基-中之C 1-6烷基係可選地經1至4個各自獨立地選自包含羥基、C 1-4烷氧基、-N(R e)(R f)、-CO 2(R f)、-CON(R e)(R f)及-COOH之群組之取代基取代； 其中：(i)R A2係經由R A2之官能基連接至L D；或(ii)R C2及R C1中至少一者係存在，且其中R C2及R C1中至少一者係經由R C2及/或R C1之至少一個官能基連接至L D。
在一些實施態樣中，STING的促效劑藥物部份係下式(A-b)之化合物：
Figure 02_image397
或其前藥、溶劑合物、醫藥上可接受之鹽或互變異構物，其中： Y 1、Y 2、Z 1、Z 2、X 1、X 2、W 1、W 2、X 4、X 5、X 6、R 3、R 5、R c、R A2、R A1、R d、R e、R f、R 14、R C2、R 16、R C1、R 15、R 17、R 18及R 19係如式(A)中之定義； 其中：(i)R A2及R A1中至少一者係存在，且其中R A2及R A1中至少一者係經由R A2及/或R A1之至少一個官能基連接至L D；或(ii)R C2及R C1中至少一者係存在，且其中R C2及R C1中至少一者係經由R C2及/或R C1之至少一個官能基連接至L D。
在一些實施態樣中，STING的促效劑藥物部份係下式(A-c)之化合物：
Figure 02_image399
或其前藥、溶劑合物、醫藥上可接受之鹽或互變異構物，其中： Y 2、Z 2、X 2、W 2、X 3、X 4、X 5、X 6、R 3、R 5、R c、R A2、R A1、R d、R e、R f、R 14、R C2、R 16、R C1、R 15、R 17、R 18及R 19係如式(A)中之定義； 其中W 1、X 1、Y 1及Z 1中之一者係N，且額外W 1、X 1、Y 1及Z 1係O、S或C； 其中：(i)R A2及R A1中至少一者係存在，且其中R A2及R A1中至少一者係經由R A2及/或R A1之至少一個官能基連接至L D；或(ii)R C2及R C1中至少一者係存在，且其中R C2及R C1中至少一者係經由R C2及/或R C1之至少一個官能基連接至L D。
在一些實施態樣中，STING的促效劑藥物部份係下式(A-d)之化合物：
Figure 02_image401
或其前藥、溶劑合物、醫藥上可接受之鹽或互變異構物，其中： Y 1、Y 2、Z 1、Z 2、X 1、X 2、W 1、W 2、X 3、R 3、R 5、R c、R d、R e、R f、R 14、R A2、R C2、R 16、R C1、R 15、R 17、R 18及R 19係如式(A)中之定義； X 5係CR A2；且 其中：(i)R A2係經由R A2之官能基連接至L D；或(ii)R C2及R C1中至少一者係存在，且其中R C2及R C1中至少一者係經由R C2及/或R C1之至少一個官能基連接至L D。
在一些實施態樣中，STING的促效劑藥物部份係下式(A-e)之化合物：
Figure 02_image403
或其前藥、溶劑合物、醫藥上可接受之鹽或互變異構物，其中： Y 1、Y 2、Z 1、Z 2、X 1、X 2、X 3、W 1、W 2、R A1、R3、R 5、R c、R d、R e、R f、R 14、R C2、R 16、R C1、R 15、R 17、R 18及R 19係如式(A)中之定義； X 6係CR A1；且 其中：(i)R A1係經由R A1之官能基連接至L D；或(ii)R C2及R C1中至少一者係存在，且其中R C2及R C1中至少一者係經由R C2及/或R C1之至少一個官能基連接至L D。
在一些實施態樣中，STING的促效劑藥物部份係下式(A-f)之化合物：
Figure 02_image405
或其前藥、溶劑合物、醫藥上可接受之鹽或互變異構物，其中： X 2、X 3、X 4、X 5、X 6、W 2、Y 2、Z 2、R 3、R 5、R c、R A2、R A1、R d、R e、R f、R 16、R 17、R 18、R 19、R C2及R C1係如式(A)中之定義，且 其中：(i)R A2及R A1中至少一者係存在，且其中R A2及R A1中至少一者係經由R A2及/或R A1之至少一個官能基連接至L D；或(ii)R C2及R C1中至少一者係存在，且其中R C2及R C1中至少一者係經由R C2及/或R C1之至少一個官能基連接至L D。
在一些實施態樣中，STING的促效劑藥物部份係下式(A-f1)之化合物：
Figure 02_image407
或其前藥、溶劑合物、醫藥上可接受之鹽或互變異構物，其中： X 2、X 3、X 4、W 2、Y 2、Z 2、R 3、R 5、R c、R d、R e、R f、R 16、R A2、R 17、R 18、R 19、R C2及R C1係如式(A)中之定義； X 5係CR A2；且 其中：(i)R A2係經由R A2之官能基連接至L D；或(ii)R C2及R C1中至少一者係存在，且其中R C2及R C1中至少一者係經由R C2及/或R C1之至少一個官能基連接至L D。
在一些實施態樣中，STING的促效劑藥物部份係下式(A-f2)之化合物：
Figure 02_image409
或其前藥、溶劑合物、醫藥上可接受之鹽或互變異構物，其中： X 2、X 4、X 5、X 6、X 7、W 2、Y 2、Z 2R 3、R 5、R c、R A2、R A1、R 4、R d、R e、R C1、R C2、R 16、R 17、R 18、R 19、及R f係如式(A)中之定義； 其中：(i)R A2及R A1中至少一者係存在，且其中R A2及R A1中至少一者係經由R A2及/或R A1之至少一個官能基連接至L D；或(ii)R C2及R C1中至少一者係存在，且其中R C2及R C1中至少一者係經由R C2及/或R C1之至少一個官能基連接至L D。
在一些實施態樣中，STING的促效劑藥物部份係下式(A-f3)之化合物：
Figure 02_image411
或其前藥、溶劑合物、醫藥上可接受之鹽或互變異構物，其中： X 2、X 4、W 2、Y 2、Z 2、R 3、R 5、R c、R d、R e、R f、R 16、R A2、R C2、R 16、R 17、R 18、R 19及R C1係如式(A)中之定義； X 5係CR A2；且 其中：(i)R A2係經由R A2之官能基連接至L D；或(ii)R C2及R C1中至少一者係存在，且其中R C2及R C1中至少一者係經由R C2及/或R C1之至少一個官能基連接至L D。
在一些實施態樣中，STING的促效劑藥物部份係下式(A-f4)之化合物：
Figure 02_image413
或其前藥、溶劑合物、醫藥上可接受之鹽或互變異構物，其中： X 2、X 4、W 2、Y 2、Z 2、R 3、R 5、R c、R d、R e、R f、R 16、R A2、R C2、R 16、R 17、R 18、R 19及R C1係如式(A)中之定義； X 5係CR A2；且 其中：(i)R A2係經由R A2之官能基連接至L D；或(ii)R C2及R C1中至少一者係存在，且其中R C2及R C1中至少一者係經由R C2及/或R C1之至少一個官能基連接至L D。
在一些實施態樣中，STING的促效劑藥物部份係下式(A-f5)之化合物：
Figure 02_image415
或其前藥、溶劑合物、醫藥上可接受之鹽或互變異構物，其中： X 2、W 2、Y 2、Z 2、R 3、R 5、R c、R d、R e、R f、R 16、R A2、R C2、R 16、R 17、R 18、R 19及R C1係如式(A)中之定義； X 5係CR A2；且 其中：(i)R A2係經由R A2之官能基連接至L D；或(ii)R C2及R C1中至少一者係存在，且其中R C2及R C1中至少一者係經由R C2及/或R C1之至少一個官能基連接至L D。
在一些實施態樣中，STING的促效劑藥物部份係下式(A-f6)之化合物：
Figure 02_image417
或其前藥、溶劑合物、醫藥上可接受之鹽或互變異構物，其中： Y 1、Y 2、Z 1、Z 2、X 1、X 2、W 1、W 2、X 4、X 5、X 6、R 3、R 5、R c、R A2、R A1、R d、R e、R f、R 14、R C2、R 16、R C1、R 15、R 17、R 18及R 19係如式(A)中之定義； 其中：(i)R A2及R A1中至少一者係存在，且其中R A2及R A1中至少一者係經由R A2及/或R A1之至少一個官能基連接至L D；或(ii)R C2及R C1中至少一者係存在，且其中R C2及R C1中至少一者係經由R C2及/或R C1之至少一個官能基連接至L D。
在一些實施態樣中，STING的促效劑藥物部份係下式(A-f7)之化合物：
Figure 02_image419
或其前藥、溶劑合物、醫藥上可接受之鹽或互變異構物，其中： X 2、X 4、W 2、Y 2、Z 2、R 3、R 5、R c、R d、R e、R f、R 16、R A2、R C2、R 16、R 17、R 18、R 19及R C1係如式(A)中之定義； X 5係CR A2；且 其中：(i)R A2係經由R A2之官能基連接至L D；或(ii)R C2及R C1中至少一者係存在，且其中R C2及R C1中至少一者係經由R C2及/或R C1之至少一個官能基連接至L D。
在一些實施態樣中，STING的促效劑藥物部份係下式(A-g)之化合物：
Figure 02_image421
或其前藥、溶劑合物、醫藥上可接受之鹽或互變異構物，其中： X 3、X 4、X 5、X 6、X 7、R 3、R 5、R c、R A2、R A1、R 4、R C2、R 17、R 18、R 19、R d、R e、R f、R 16及R C1係如式(A)中之定義； Y 2及Z 2各自獨立地係O、S、C或N； X 2及W 2各自獨立地係C或N； 其中：(i)R A2及R A1中至少一者係存在，且其中R A2及R A1中至少一者係經由R A2及/或R A1之至少一個官能基連接至L D；或(ii)R C2及R C1中至少一者係存在，且其中R C2及R C1中至少一者係經由R C2及/或R C1之至少一個官能基連接至L D。
在一些實施態樣中，STING的促效劑藥物部份係下式(A-g1)之化合物：
Figure 02_image423
或其前藥、溶劑合物、醫藥上可接受之鹽或互變異構物，其中： X 2、W 2、Y 2、Z 2、X 3、X 4、X 5、R 3、R 5、R c、R d、R e、R f、R A2、R C2、R 17、R 18、R 19、R 16及R C1係如式(A)中之定義；其中：(i)R A2係經由R A2之官能基連接至L D；或(ii)R C2及R C1中至少一者係存在，且其中R C2及R C1中至少一者係經由R C2及/或R C1之至少一個官能基連接至L D。
在一些實施態樣中，STING的促效劑藥物部份係下式(A-g2)之化合物：
Figure 02_image425
或其前藥、溶劑合物、醫藥上可接受之鹽或互變異構物，其中： X 2、X 4、X 5、X 6、X 7、W 2、Y 2、Z 2、R 3、R 5、R c、R A2、R A1、R 4、R C2、R 17、R 18、R 19、R d、R e、R f、R 16及R C1係如式(A)中之定義； 其中：(i)R A2及R A1中至少一者係存在，且其中R A2及R A1中至少一者係經由R A2及/或R A1之至少一個官能基連接至L D；或(ii)R C2及R C1中至少一者係存在，且其中R C2及R C1中至少一者係經由R C2及/或R C1之至少一個官能基連接至L D。
在一些實施態樣中，STING的促效劑藥物部份係下式(A-g3)之化合物：
Figure 02_image427
或其前藥、溶劑合物、醫藥上可接受之鹽或互變異構物，其中： X 2、X 4、W 2、Y 2、Z 2、R 3、R 5、R c、R A2、R C2、R 17、R 18、R 19、R 16及R C1係如式(A)中之定義； X 5係CR A2；且 其中：(i)R A2係經由R A2之官能基連接至L D；或(ii)R C2及R C1中至少一者係存在，且其中R C2及R C1中至少一者係經由R C2及/或R C1之至少一個官能基連接至L D；且 可選地，其中R A2係經由R A2之官能基連接至L D。
在一些實施態樣中，STING的促效劑藥物部份係下式(A-g4)之化合物：
Figure 02_image429
或其前藥、溶劑合物、醫藥上可接受之鹽或互變異構物，其中： X 2、X 4、W 2、Y 2、Z 2、R 3、R 5、R c、R d、R e、R f、R A2、R C2、R 17、R 18、R 19、R 16及R C1係如式(A)中之定義； X 5係CR A2；且 其中：(i)R A2係經由R A2之官能基連接至L D；或(ii)R C2及R C1中至少一者係存在，且其中R C2及R C1中至少一者係經由R C2及/或R C1之至少一個官能基連接至L D。
在一些實施態樣中，STING的促效劑藥物部份係下式(A-g5)之化合物：
Figure 02_image431
或其前藥、溶劑合物、醫藥上可接受之鹽或互變異構物，其中： X 2、W 2、Y 2、Z 2、R 3、R 5、R c、R d、R e、R f、R A2、R C2、R 17、R 18、R 19、R 16及R C1係如式(A)中之定義； X 5係CR A2；且 其中：(i)R A2係經由R A2之官能基連接至L D；或(ii)R C2及R C1中至少一者係存在，且其中R C2及R C1中至少一者係經由R C2及/或R C1之至少一個官能基連接至L D。
在一些實施態樣中，STING的促效劑藥物部份係下式(A-g6)之化合物：
Figure 02_image433
或其前藥、溶劑合物、醫藥上可接受之鹽或互變異構物，其中： X 2、X 4、W 2、Y 2、Z 2、R 3、R 5、R c、R A2、R C2、R 17、R 18、R 19、R 16及R C1係如式(A)中之定義； X 5係CR A2；且 其中：(i)R A2係經由R A2之官能基連接至L D；或(ii)R C2及R C1中至少一者係存在，且其中R C2及R C1中至少一者係經由R C2及/或R C1之至少一個官能基連接至L D；且 可選地，其中R A2係經由R A2之官能基連接至L D。
在一些實施態樣中，STING的促效劑藥物部份係下式(A-h)之化合物：
Figure 02_image435
或其前藥、溶劑合物、醫藥上可接受之鹽或互變異構物，其中： X 1、W 1、Y 1、Z 1、X 3、X 4、X 5、X 6、R 3、R 5、R c、R A2、R A1、R d、R e、R f、R 14、R 15、R 18、R 19、R 16及R C1係如式(A)中之定義；其中：(i)R A2及R A1中至少一者係存在，且其中R A2及R A1中至少一者係經由R A2及/或R A1之至少一個官能基連接至L D；或(ii)R C2及R C1中至少一者係存在，且其中R C2及R C1中至少一者係經由R C2及/或R C1之至少一個官能基連接至L D。
在一些實施態樣中，STING的促效劑藥物部份係下式(A-h1)之化合物：
Figure 02_image437
或其前藥、溶劑合物、醫藥上可接受之鹽或互變異構物，其中： X 1、X 3、W 1、Y 1、Z 1、X 5、X 6、R 3、R 5、R c、R A2、R A1、R d、R e、R f、R 14、R 15、R 18、R 19、R 16及R C1係如式(A)中之定義； 其中：(i)R A2及R A1中至少一者係存在，且其中R A2及R A1中至少一者係經由R A2及/或R A1之至少一個官能基連接至L D；或(ii)R C2及R C1中至少一者係存在，且其中R C2及R C1中至少一者係經由R C2及/或R C1之至少一個官能基連接至L D。
在一些實施態樣中，STING的促效劑藥物部份係下式(A-h2)之化合物：
Figure 02_image439
或其前藥、溶劑合物、醫藥上可接受之鹽或互變異構物，其中： X 1、X 3、W 1、Y 1、Z 1、R 3、R 5、R c、R d、R e、R f、R A2、R 14、R 15、R 18、R 19、R 16及R C1係如式(A)中之定義； X 5係CR A2；且 其中：(i)R A2及R A1中至少一者係存在，且其中R A2及R A1中至少一者係經由R A2及/或R A1之至少一個官能基連接至L D；或(ii)R C2及R C1中至少一者係存在，且其中R C2及R C1中至少一者係經由R C2及/或R C1之至少一個官能基連接至L D。
在一些實施態樣中，STING的促效劑藥物部份(D)係式(A)之化合物，其中該化合物具有下式(A-i)：
Figure 02_image441
或其前藥、溶劑合物、醫藥上可接受之鹽或互變異構物，其中： Y 1、Y 2、Z 1、Z 2、X 1、X 2、X 3 、X 6 、X 7 、W 1、W 2、R A1、R A2、R 4、R c、R d、R e、R f、R 14、R C2、R 16、R C1、R 15、R 17、R 18及R 19係如式(A)中之定義；且 其中：(i)R A2及R A1中至少一者係存在，且其中R A2及R A1中至少一者係經由R A2及/或R A1之至少一個官能基連接至L D；或(ii)R C2及R C1中至少一者係存在，且其中R C2及R C1中至少一者係經由R C2及/或R C1之至少一個官能基連接至L D。
在一些實施態樣中，各STING的促效劑藥物部份(D)獨立地係：
Figure 02_image443
Figure 02_image445
Figure 02_image447
Figure 02_image449
Figure 02_image451
Figure 02_image453
Figure 02_image455
Figure 02_image457
Figure 02_image459
Figure 02_image461
Figure 02_image463
其中： R 2係不存在、-O-或-NR 4-；R 4係H或C 1-3烷基；且
Figure 02_image465
表示與L D連接。
在一些實施態樣中，各STING的促效劑藥物部份(D)獨立地係：
Figure 02_image467
Figure 02_image469
Figure 02_image471
其中： R 2係不存在、-O-或-NR 4-；R 4係H或C 1-3烷基；且
Figure 02_image465
表示與L D連接。
在一些實施態樣中，各STING的促效劑藥物部份(D)獨立地係：
Figure 02_image473
其中： R 2係不存在、-O-或-NR 4-；R 4係H或C 1-3烷基；且
Figure 02_image465
表示與L D連接。
在一些實施態樣中，各STING的促效劑藥物部份(D)獨立地係：
Figure 02_image475
其中： R 2係不存在、-O-或-NR 4-；R 4係H或C 1-3烷基；且
Figure 02_image465
表示與L D連接。
在一些實施態樣中，各STING的促效劑藥物部份(D)獨立地係：
Figure 02_image477
其中： R 2係不存在、-O-或-NR 4-；R 4係H或C 1-3烷基；且
Figure 02_image465
表示與L D連接。 親水基 ( 可變 T 1)
在一些實施態樣中，包括於本揭露之共軛體或支架中之親水基係水溶性及實質上非抗原性聚合物。親水基之實例包括但不限於多元醇、聚醚、多價陰離子、多價陽離子、多磷酸、多胺、多醣、多羥基化合物、聚離胺酸及彼等之衍生物。在一些實施態樣中，親水基之一端可經官能化，使其可藉由不可切割鍵聯或經由可切割鍵聯共價連接至M A連接子(例如，至M A連接子中之胺基酸)。在一些實施態樣中，官能化可為例如經由胺、氫硫基、NHS酯、順丁烯二醯亞胺、炔烴、疊氮、羰基或其他官能基。在一些實施態樣中，親水基之其他末端將為游離且非繫留。在一些實施態樣中，「非繫留(untethered)」是指親水基將不連接至另一部份，諸如D或藥物單元或本揭露之共軛體或支架的其他組分。在一些實施態樣中，親水基之游離且非繫留端可包括甲氧基、羧酸、醇或其他合適官能基。在一些實施態樣中，甲氧基、羧酸、醇或其他合適官能基作為親水基之末端的帽蓋。
在一些實施態樣中，可切割鍵聯係指在血漿中循環時實質上對切割不敏感，但在細胞內或腫瘤內環境中對切割敏感之鍵聯。在一些實施態樣中，不可切割鍵聯係在任何生物環境中對切割實質上不敏感者。在一些實施態樣中，腙之化學水解、二硫化物之還原及肽鍵或糖苷鍵聯之酶催化性切割係可切割鍵聯之實例。在一些實施態樣中，親水基之例示性連接係經由醯胺鍵聯、醚鍵聯、酯鍵聯、腙鍵聯、肟鍵聯、雙硫鍵、肽鍵聯或三唑鍵聯。在一些實施態樣中，親水基與M A連接子(例如M A連接子中之胺基酸)之連接係經由醯胺鍵聯。
在本揭露之共軛體或支架包含超過一個親水基之一些實施態樣中，多個親水基可為相同或不同的化學部份(例如具有不同分子量、次單元之數量或化學結構的親水基)。在一些實施態樣中，多個親水基可與M A連接子的單一連接位點或不同位點連接。
在一些實施態樣中，添加親水基可對所得共軛體之藥物動力學具有二個潛在影響。在一些實施態樣中，所欲影響係源自藥物或藥物-連接子之暴露疏水性元件所誘導之非特異性交互作用減少的廓清降低(及後續暴露增加)。在一些實施態樣中，非所欲影響係可源自共軛體之分子量增加的分布體積及速率降低。在一些實施態樣中，增加親水基的分子量增加共軛體的流體動力學半徑，導致可減損共軛體穿透至腫瘤中之能力的擴散性降低。由於這二種競爭性藥物動力學效應，所欲的是使用足夠大之親水基以降低共軛體廓清，因此增加血漿暴露，但不致大到大幅減損其擴散性，其可減少共軛體到達意圖標靶細胞族群之能力。
在一些實施態樣中，親水基包括但不限於糖醇(亦稱為多元醇、多羥基酒精、醛醣醇或醣醇，諸如肌醇、甘油、赤藻糖醇、蘇糖醇、阿拉伯糖醇、木醣醇、核糖醇、半乳糖醇、甘露醇、山梨醇及類似物)或其衍生物(例如胺基多元醇)、碳水化合物(例如醣)、聚乙烯醇、基於碳水化合物之聚合物(例如右旋糖苷)、羥丙基甲基丙烯醯胺(HPMA)、聚伸烷基氧化物及/或其共聚物。
在一些實施態樣中，T 1包含複數個羥基(「 -OH」)，諸如併入單醣、寡醣、多醣及類似物之部份。
在一些實施態樣中，T 1包含複數個-(CR 58OH)-基團，其中R 58係-H或C 1-8烷基。
在一些實施態樣中，T 1係-OH或
Figure 02_image479
，其中： n 1係0至約6的整數； 各R 58獨立地係-H或C 1-8烷基； R 60係鍵結、C 1-6烷基連接子或-CHR 59-，其中R 59係-H、C 1-8烷基、環烷基或芳基烷基； R 61係CH 2OR 62、COOR 62、-(CH 2) n2COOR 62、或經一或多個羥基取代之雜環烷基； R 62係-H或C 1-8烷基；且 n 2係1至約5的整數。
在一些實施態樣中，T 1係-OH。
在一些實施態樣中，T 1係
Figure 02_image479
。
在一些實施態樣中，R 58係-H；R 60係鍵結或C 1-6烷基連接子；n 1係1至約6的整數；且R 61係CH 2OH或COOH。
在一些實施態樣中，R 58係-H；R 60係-CHR 59-；n 1係0；且R 61係經一或多個羥基取代之雜環烷基，例如單醣。
在一些實施態樣中，T 1包含葡苷基-胺、二-胺或三-胺。
在一些實施態樣中，T 1包含下列片段之一或多者或其立體異構物：
Figure 02_image481
其中： R 59係-H、C 1-8烷基、環烷基或芳基烷基； n 1係1至約6的整數； n 2係1至約5的整數；且 n 3係約1至約3的整數。
應理解親水基之所有立體化學形式皆在本文中考慮。例如在上式中，親水基可衍生自核糖、木糖、葡萄糖、甘露糖、半乳糖或其他糖且保留存在該些分子上之側接羥基及烷基的立體化學安排。
應理解在前式中，亦考慮各種去氧化合物。例示性地，適用時考慮親水基之一或多個下列特徵。
在一些實施態樣中，n 3係2或3。
在一些實施態樣中，n 1係1、2或3。
在一些實施態樣中，n 2係1。
在一些實施態樣中，R 59係氫。
在一些實施態樣中，T 1係
Figure 02_image483
。在一些實施態樣中，T 1係
Figure 02_image485
。
在一些實施態樣中，T 1係
Figure 02_image487
。
在一些實施態樣中，T 1係
Figure 02_image489
，其中 n 4係1至約25的整數； 各R 63獨立地係-H或C 1-8烷基； R 64係鍵結或C 1-8烷基連接子； R 65係-H、C 1-8烷基、-(CH 2) n2COOR 62或-(CH 2) n2COR 66； R 62係H或C 1-8烷基； R 66係H、
Figure 02_image491
、
Figure 02_image493
Figure 02_image495
、
Figure 02_image497
、
Figure 02_image499
或
Figure 02_image501
；且 n 2係1至約5的整數。
在一些實施態樣中，T 1係：
Figure 02_image503
其中R 67係：(1)OH
Figure 02_image505
其中n 4係約2至約20、約4至約16、約6至約12、約8至約12的整數。
在一些實施態樣中，T 1係
Figure 02_image507
。
在一些實施態樣中，n 4係約2至約20、約4至約16、約6至約12、約8至約12的整數。
在一些實施態樣中，n 4係6、7、8、9、10、11或12。
在一些實施態樣中，n 4係8或12。
在一些實施態樣中，T 1係
Figure 02_image509
Figure 02_image511
，其中n 4係約2至約24、約4至約16、約6至約12、約8至約12的整數。
在一些實施態樣中，n 4係6、7、8、9、10、11或12。
在一些實施態樣中，n 4係8。在一些實施態樣中，n 4係12。
在一些實施態樣中，T 1係
Figure 02_image513
，其中n 4係8。
在一些實施態樣中，T 1包含聚醚，例如聚伸烷基二醇(PAO)。PAO包括但不限於低級伸烷基氧化物之聚合物，特別是環氧乙烷之聚合物，諸如例如丙烯氧化物、聚丙烯二醇、聚乙二醇(PEG)、聚氧乙烯化多元醇、其共聚物及其嵌段共聚物。
在一些實施態樣中，聚伸烷基二醇係聚乙二醇(PEG)，其包括但不限於多分散PEG、單分散PEG及離散PEG。多分散PEG係大小及分子量之異質性混合物，然而單分散PEG一般係自異質性混合物純化且因此提供單鏈長度及分子量。在一些實施態樣中，PEG單元係離散PEG，提供經定義及指明鏈長之單一分子。在一些實施態樣中，聚乙二醇係mPEG。
在一些實施態樣中，T 1包含PEG單元，其包含一或多個PEG鏈。PEG鏈可連接在一起呈例如直鏈、支鏈或星形組態。PEG單元除了包含重複PEG次單元之外，亦可包含非PEG材料(例如，以促進多個PEG鏈彼此偶合或促進與胺基酸偶合)。非PEG材料係指PEG鏈中的原子不是重複-CH 2CH 2O-次單元的一部分。在一些實施態樣中，PEG鏈可包含經由非PEG元件彼此連接之二個單體PEG鏈。在一些實施態樣中，PEG單元可包含二個與中央核心連接之線性PEG鏈，該中央核心與胺基酸連接(即PEG單元本身係分支的)。
PEG單元可經由反應基共價連接至M A連接子(例如M A連接子中之胺基酸)。反應基係該些可與經活化之PEG分子連接之基團(例如游離胺基或羧基)。在一些實施態樣中，N端胺基酸及離胺酸(K)具有游離胺基；且C端胺基酸殘基具有游離羧基。巰基(例如見於半胱胺酸殘基)亦可用來作為連接PEG之反應基。
在一些實施態樣中，PEG單元可藉由使用具有不同反應性部份之甲氧基化PEG(「mPEG」)連接至M A連接子(例如M A連接子中之胺基酸)，包括但不限於琥珀醯亞胺基琥珀酸酯(SS)、琥珀醯亞胺基碳酸酯(SC)、mPEG-亞胺酸酯、對硝基苯基碳酸酯(NPC)、琥珀醯亞胺基丙酸酯(SPA)及三聚氯化氰。mPEG之實例包括但不限於mPEG-琥珀醯亞胺基琥珀酸鹽(mPEG-SS)、mPEG 2-琥珀醯亞胺基琥珀酸鹽(mPEG 2-SS)、mPEG-琥珀醯亞胺基碳酸酯(mPEG-SC)、mPEG 2-琥珀醯亞胺基碳酸酯(mPEG 2-SC)、mPEG-亞胺酸酯、mPEG-對硝基苯基碳酸酯(mPEG-NPC)、mPEG-亞胺酸酯、mPEG 2-對硝基苯基碳酸酯(mPEG 2-NPC)、mPEG-琥珀醯亞胺基丙酸酯(mPEG-SPA)、mPEG 2-琥珀醯亞胺基丙酸酯(mPEG 2-SPA)、mPEG-N-羥基-琥珀醯亞胺(mPEG-NHS)、mPEG 2-N-羥基-琥珀醯亞胺(mPEG 2-NHS)、mPEG-三聚氯化氰、mPEG 2-三聚氯化氰、mPEG 2-Lysinol-NPC及mPEG 2-Lys-NHS。可使用多種PEG物種，且實質上可使用任何合適的反應性PEG試劑。在一些實施態樣中，反應性PEG試劑將在與多官能性連接子或M A連接子(例如M A連接子中之胺基酸)連接時導致胺甲酸酯或醯胺鍵形成。反應性PEG試劑包括但不限於mPEG 2-N-羥基-琥珀醯亞胺(mPEG 2-NHS)、雙官能性PEG丙醛(mPEG 2-ALD)、多臂PEG、含有順丁烯二醯亞胺之PEG (mPEG(MAL) 2、mPEG 2(MAL))、mPEG-NH 2、mPEG-琥珀醯亞胺基丙酸酯(mPEG-SPA)、mPEG-丁酸琥珀醯亞胺酯(mPEG-SBA)、mPEG-硫酯、mPEG-雙酯、mPEG-BTC、mPEG-ButyrALD、mPEG-二乙醇縮乙醛(mPEG-ACET)、雜官能性PEG(例如NH 2-PEG-COOH、Boc-PEG-NHS、Fmoc-PEG-NHS、NHS-PEG-乙烯碸(NHS-PEG-VS)或NHS-PEG-MAL)、PEG丙烯酸酯(ACRL-PEG-NHS)、PEG-磷脂質(例如mPEG-DSPE)、SUNBRITE™系列之多臂PEG包括藉由所屬技術領域中具有通常知識者所選之化學活化之基於甘油之PEG、任何SUNBRITE活化PEG(包括但不限於羧基-PEG、p-NP-PEG、三氟代乙烷磺醯(Tresyl)-PEG、醛PEG、縮醛-PEG、胺基-PEG、氫硫基-PEG、順丁烯二醯亞胺基-PEG、羥基-PEG-胺、胺基-PEG-COOK羥基-PEG-醛、羧酸酐型-PEG、官能化PEG-磷脂質及其他類似及/或合適反應性PEG。
在一些實施態樣中，PEG單元包含至少6個次單元、至少7個次單元、至少8個次單元、至少9個次單元、至少10個次單元、至少11個次單元、至少12個次單元、至少13個次單元、至少14個次單元、至少15個次單元、至少16個次單元、至少17個次單元、至少18個次單元、至少19個次單元、至少20個次單元、至少21個次單元、至少22個次單元、至少23個次單元或至少24個次單元。在一些此類實施態樣中，PEG單元包含不超過約72個次單元。
在一些實施態樣中，PEG單元包含至少6個次單元、至少7個次單元、至少8個次單元、至少9個次單元、至少10個次單元、至少11個次單元、至少12個次單元、至少13個次單元、至少14個次單元、至少15個次單元、至少16個次單元、至少17個次單元、至少18個次單元、至少19個次單元或至少20個次單元。
在一些實施態樣中，PEG單元包含至少6個次單元、至少7個次單元、至少8個次單元、至少9個次單元、至少10個次單元、至少11個次單元、至少12個次單元、至少13個次單元、至少14個次單元、至少15個次單元、至少16個次單元、至少17個次單元或至少18個次單元。
在一些實施態樣中，PEG單元包含至少6個次單元、至少7個次單元、至少8個次單元、至少9個次單元、至少10個次單元、至少11個次單元或至少12個次單元。
在一些實施態樣中，PEG單元包含至少8個次單元、至少9個次單元、至少10個次單元、至少11個次單元或至少12個次單元。
在一些實施態樣中，PEG單元包含至少6個次單元、至少7個次單元或至少8個次單元。
在一些實施態樣中，線性PEG單元係：
Figure 02_image515
其中
Figure 02_image176
指示與M A連接子連接之位點(例如M A連接子中之胺基酸)； Y 71係PEG連接單元； Y 72係PEG加蓋單元； Y 73係PEG偶合單元(即用於將多個PEG次單元鏈偶合在一起)； d 9係2至72的整數； 各d 10獨立地係1至72的整數；且 d 11係2至5的整數。
在一些實施態樣中，d 9係2至24的整數。在一些實施態樣中，d 9係4至24的整數。在一些實施態樣中，d 9係6至24、8至24、10至24或12至24的整數。
在一些實施態樣中，PEG單元中有至少6個PEG次單元。在一些實施態樣中，PEG單元中有至少8個PEG次單元。在一些實施態樣中，PEG單元中有至少10個PEG次單元。在一些實施態樣中，PEG單元中有至少12個PEG次單元。
在一些實施態樣中，d 9係8或約8、12或約12、24或約24。
在一些實施態樣中，各Y 72獨立地係-C 1-10烷基、-C 2-10烷基-CO 2H、-C 2-10烷基-OH、-C 2-10烷基-NH 2、 -C 2-10烷基-NH(C 1-3烷基)或C 2-10烷基-N(C 1-3烷基) 2。
在一些實施態樣中，Y 72係-C 1-10烷基、-C 2-10烷基-CO 2H、-C 2-10烷基-OH或-C 2-10烷基-NH 2。
在一些實施態樣中，PEG偶合單元係PEG單元的一部分且係非PEG材料，其作用以連接重複CH 2CH 2O-次單元之二或更多個鏈。在一些實施態樣中，PEG偶合單元Y 73係-C 2-10烷基-C(O)-NH-、-C 2-10烷基-NH-C(O)-、 -C 2-10烷基-NH-、-C 2-10烷基-C(O)-、-C 2-10烷基-O-或-C 2-10烷基-S-。
在一些實施態樣中，各Y 73獨立地係-C 1-10烷基-C(O)-NH-、-C 1-10烷基-NH-C(O)-、-C 2-10烷基-NH-、 -C 2-10烷基-O-、-C 1-10烷基-S-或-C 1-10烷基-NH-。
在一些實施態樣中，PEG連接單元係PEG單元的一部分且作用以連接PEG單元與M A連接子(例如M A連接子中之胺基酸)。在一些實施態樣中，胺基酸具有與PEG單元形成鍵結之官能基。在一些實施態樣中，用於連接PEG單元至胺基酸之官能基包括形成雙硫鍵或硫醚鍵之巰基、形成腙鍵之醛基、酮基或肼基、形成肟鍵之羥胺、形成肽鍵之羧基或胺基、形成酯鍵之羧基或羥基、形成磺醯胺鍵之磺酸、形成胺甲酸酯鍵之醇及形成磺醯胺鍵或胺甲酸酯鍵或醯胺鍵之胺。在一些實施態樣中，PEG單元可經由例如二硫化物、硫醚、腙、肟、肽、酯、磺醯胺、胺甲酸酯或醯胺鍵與胺基酸連接。在一些實施態樣中，用於連接PEG單元之反應可為環加成、加成、加成/排除或取代反應或彼等之組合(當適用時)。
線性PEG單元之實例包括：
Figure 02_image518
其中
Figure 02_image176
指示連接至多官能性連接子或M A連接子之位點(例如M A連接子中之胺基酸)且各d 9獨立地係4至24、6至24、8至24、10至24、12至24、14至24或16至24的整數。
在一些實施態樣中，d 9係約8、約12或約24。
在一些實施態樣中，d 9係約8。
在一些實施態樣中，PEG單元係約300 Da至約5 kDa；約300 Da至約4 kDa；約300 Da至約3 kDa；約300 Da至約2 kDa；或約300 Da至約1 kDa。在一些實施態樣中，PEG單元具有至少6個次單元或至少8、10或12個次單元。在一些實施態樣中，PEG單元具有至少6個次單元或至少8、10或12個次單元但不超過24個次單元。
在一些實施態樣中，合適聚乙二醇可在聚合物分子之各端具有游離羥基，或可具有一個經低級烷基(例如甲基)醚化之羥基。在一些實施態樣中，合適聚乙二醇係具有可酯化羧基之聚乙二醇之衍生物。在一些實施態樣中，聚乙二醇係以商品名稱PEG自商業途徑獲得，通常作為以平均分子量為特徵之聚合物的混合物。在一些實施態樣中，聚乙二醇具有約300至約5000的平均分子量。在一些實施態樣中，聚乙二醇具有約600至約1000的平均分子量。
在一些實施態樣中，適合用於在本文中揭示之共軛體、支架及方法的親水基之實例可見於例如US 8,367,065第13欄；US 8524696第6欄；WO2015/ 057699及WO 2014/062697，其各者內容全文特此以引用方式併入本文中。 抗體
在一些實施態樣中，包含核心N-乙醯葡萄糖胺取代基(核心GlcNAc部份)之糖蛋白係包含核心N-乙醯葡萄糖胺取代基(核心GlcNAc部份)之抗體。在一些實施態樣中，糖蛋白係單株抗體(mAb)IgA、IgD、IgE、IgG或IgM抗體。在一些實施態樣中，抗體係IgG抗體。在一些實施態樣中，抗體係lgG1抗體。在一些實施態樣中，當該抗體係完整抗體時，抗體之各重鏈上包含一或多個(例如一個)核心GlcNAc部份，該核心GlcNAc部份係可選地經岩藻糖基化。在一些實施態樣中，完整抗體包含二個或超過二個(例如二個)可選地經岩藻糖基化之核心GlcNAc部份。在一些實施態樣中，當該抗體係單鏈抗體或抗體片段例如Fab或Fc片段時，抗體包含一或多個核心GlcNAc部份，其係可選地經岩藻糖基化。在包含核心GlcNAc部份之抗體的一些實施態樣中，該核心GlcNAc部份可位於抗體上的任何地方，前提是該取代基不阻擾抗體的抗原結合部位。在一些實施態樣中，該核心GlcNAc部份存在於抗體的天然N-糖基化位點。在一些實施態樣中，抗體包含或經工程改造以包含至少一個化學反應基或化學反應性胺基酸部份或側鏈。
在一些實施態樣中，抗體能引導共軛體至特異性組織、細胞或細胞中的位置。在一些實施態樣中，抗體能在培養或完整有機體或兩者中引導共軛體。在一些實施態樣中，抗體包含存在於靶向細胞之細胞表面上之配體並以有效特異性、親和力及親合力與之結合。在一些實施態樣中，抗體引導共軛體至除了肝臟以外的組織。在一些實施態樣中，抗體引導共軛體至特異性組織，諸如肝臟、腎臟、肺臟或胰臟。在一些實施態樣中，抗體引導共軛體至目標細胞(例如癌細胞)、表現在細胞(例如癌細胞)上之受體、基質組織或與癌症相關的蛋白(例如腫瘤抗原)。在一些實施態樣中，可靶向包含腫瘤血管分布之細胞。在一些實施態樣中，抗體能引導共軛體至特定類型的細胞，例如特異性靶向肝臟中的肝細胞而非Kupffer細胞。在一些實施態樣中，抗體能引導共軛體至網狀內皮或淋巴系統之細胞，或至專業吞噬細胞性細胞諸如巨噬細胞或嗜酸性球。在一些實施態樣中，共軛體本身係有效遞送系統，不需要特異性靶向。
在一些實施態樣中，抗體能引導共軛體至細胞內的位置(例如細胞核、細胞質或胞內體)。在一些實施態樣中，抗體增強與受體的細胞性結合或細胞質運輸至細胞核及核進入或自胞內體或其他細胞內囊泡釋放。
在一些實施態樣中，共軛體包含本揭露之B7-H4抗體或經修飾之B7-H4抗體。 B7-H4 抗體
本揭露提供經單離之抗體，其與B7-H4結合，該B7-H4係見於例如抗原呈現細胞(APC)之表面上的第I型跨膜蛋白。B7-H4抗體包括但不限於人化抗體、嵌合抗體、小鼠抗體、人抗體及包含此處所討論之重鏈及/或輕鏈CDR之抗體。
在一些實施態樣中，本揭露之B7-H4抗體與包含胺基酸序列： MASLGQILFWSIISIIIILAGAIALIIGFGISGRHSITVTTVASAGNIGEDGILSCTFEPDIKLSDIVIQWLKEGVLGLVHEFKEGKDELSEQDEMFRGRTAVFADQVIVGNASLRLKNVQLTDAGTYKCYIITSKGKGNANLEYKTGAFSMPEVNVDYNASSETLRCEAPRWFPQPTVVWASQVDQGANFSEVSNTSFELNSENVTMKVVSVLYNVTINNTYSCMIENDIAKATGDIKVTESEIKRRSHLQLLNSKASLCVSSFFAISWALLPLSPYLMLK(SEQ ID NO: 59)的全長人類B7-H4蛋白上之表位特異性結合。
在一些實施態樣中，B7-H4抗體係人類抗體。在一些實施態樣中，B7-H4抗體調節B7-H4活性。在一些實施態樣中，抗體係誘導接受該抗體之個體的ADCC反應之抗體。在一些實施態樣中，B7-H4抗體不抑制B7-H4之T細胞抑制活性。本揭露之B7-H4抗體可為例如全長抗體。替代地，抗體可為抗體片段，諸如Fab、Fab'或Fab' 2片段或單鏈抗體(例如scFv)。在一些實施態樣中，抗體係IgG1抗體。
在一些實施態樣中，B7-H4抗體包含重鏈可變區及輕鏈可變區。在一些實施態樣中，B7-H4抗體包含至少一條重鏈及至少一條輕鏈，該重鏈包含重鏈可變區及至少部分之重鏈恆定區，該輕鏈包含輕鏈可變區及至少部分之輕鏈恆定區。在一些實施態樣中，B7-H4抗體包含二條重鏈及二條輕鏈，其中每條重鏈包含重鏈可變區及至少部分之重鏈恆定區，且其中每條輕鏈包含輕鏈可變區及至少部分之輕鏈恆定區。
在一些實施態樣中，人類B7-H4抗體包含一或多個人類恆定區。在一些實施態樣中，人類重鏈恆定區係屬於選自IgA、IgG(例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4)及IgD之同型。在一些實施態樣中，人類輕鏈恆定區係屬於選自kappa(κ)及lambda(λ)之同型。在一些實施態樣中，本文所述之人類抗體包含人類IgG恆定區。在一些實施態樣中，本文所述之人類抗體包含人類IgG4重鏈恆定區。在一些實施態樣中，本文所述之人類抗體包含人類IgG4恆定區及人類κ輕鏈。
在一些實施態樣中，當希望具備效應功能時，選擇包含人類IgG1重鏈恆定區或人類IgG3重鏈恆定區之人類B7-H4抗體。在一些實施態樣中，當不希望具備效應功能時，選擇包含人類IgG4或IgG2重鏈恆定區之人類B7-H4抗體。
在一些實施態樣中，本揭露之抗體的特徵在於抗體之特定功能特徵或性質。例如，抗體與人類B7-H4特異性結合。一般而言，本揭露之抗體以高親和力，例如K D1 x 10 -7M或更小與B7-H4結合。本揭露之抗B7-H4抗體一般展現下列一或多項特徵： (a)以1 x 10 -7M或更小之K D與人類B7-H4結合；及/或 (b)與經B7-H4(例如人類B7-H4)轉染之人類CHO細胞結合。
在一些實施態樣中，抗體以5 x 10 -8M或更小之K D與人類B7-H4結合、以2 x 10 -8M或更小之K D與人類B7-H4結合、以5 x 10 -9M或更小之K D與人類B7-H4結合、以4 x 10 -9M或更小之K D與人類B7-H4結合、以3 x 10 -9M或更小之K D與人類B7-H4結合、以2 x 10 -9M或更小之K D與人類B7-H4結合或以1 x 10 -9M或更小之K D與人類B7-H4結合。
評估抗體與B7-H4之結合能力的標準測定係該領域已知，包括例如ELISA、西方墨點轉漬法、RIA及流式細胞術分析。抗體之結合動力學(例如結合親和力)亦可藉由該領域已知之標準測定評估，諸如ELISA、Scatchard及Biacore®系統分析。
潛在治療性mAb必須不僅與其目標結合，但也必須不具有「發展性問題」，諸如不良穩定性或高聚集水準。吾等描述被認為涉及不良發展性之五個度量的準則值：互補決定區(CDR)之總長度、表面疏水性之範圍及量值、CDR之正電荷及負電荷及淨重鏈及輕鏈表面電荷之不對稱性。各性質之準則臨界係衍生自見於CST之值，且提議警示系統以識別不合格候選物。
本揭露之例示性B7-H4抗體包括B7-H4_2F9 (在本文中亦稱為「B7-H4_2F9親代抗體」、「2F9親代抗體」或「親代抗體」)，其係揭示於美國專利第8,609,816號，其內容全文特此以引用方式併入本文中。
潛在治療性mAb必須不僅與其目標結合，但也必須不具有「發展性問題」，諸如不良穩定性、高聚集水準、低表現水準、低溶解度、共價完整性、構形及膠體不穩定性、高度多特異性及高度免疫原性。
因此針對被認為涉及不良發展性之度量分析B7-H4_2F9親代抗體序列，諸如例如互補決定區(CDR)之總長度、表面疏水性之範圍及量值、CDR之正電荷及負電荷、淨重鏈及輕鏈表面電荷之不對稱性及轉譯後修飾(PTM)。B7-H4_2F9親代抗體序列之此發展性分析顯示三個潛在序列負債。具體而言，B7-H4_2F9親代抗體序列具有不成對半胱胺酸殘基、天冬胺酸異構化序列及甲硫胺酸氧化位點。這三種序列負債之各者可能產生潛在發展諸如抗體之穩定性、效力及均質狀態，且可導致下游發展之複雜過程。
為了處理B7-H4_2F9親代抗體之潛在序列負債，設計及產生處理這些潛在發展性疑慮之二十(20)個B7-H4_2F9之變體。這些變體抗體包括B7-H4_2F9V1、B7-H4_2F9V2、B7-H4_2F9V3、B7-H4_2F9V4 、B7-H4_2F9V5、B7-H4_2F9V6、B7-H4_2F9V7、B7-H4_2F9V8、B7-H4_2F9V9、B7-H4_2F9V10、B7-H4_2F9V11、B7-H4_2F9V12、B7-H4_2F9V13、B7-H4_2F9V14、B7-H4_2F9V15、B7-H4_2F9V16、B7-H4_2F9V17、B7-H4_2F9V18、B7-H4_2F9V19及B7-H4_2F9V20。表徵20個變體之各者的B7-H4結合、多特異性及其他性質。
本揭露之單株B7-H4抗體之核酸及胺基酸序列係提供於下。重鏈及輕鏈之互補決定區(CDR)在以下呈現之胺基酸序列中以畫底線表示。涵蓋如下所示之互補決定區(CDR)之胺基酸係根據IMGT編號系統定義(見IMGT ®, the international ImMunoGeneTics information system ®.可線上取得：http://www.imgt.org/)。 B7-H4 2F9可變區
所有二十個B7-H4 2F9親代變體(即B7-H4_2F9V1至B7-H4_ 2F9V20)共用共同輕鏈可變區。(在本文中稱為B7-H4_2F9 V L)。
在一些實施態樣中，本揭露之所有抗體包含輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 50之胺基酸序列或由其組成。
B7-H4_2F9_V L之V L鏈(SEQ ID NO: 50)包含下列胺基酸序列或由其組成：
Figure 02_image520
B7-H4_2F9_親代之VH鏈(SEQ ID NO: 1)包含下列胺基酸序列或由其組成：
Figure 02_image522
B7-H4_2F9V1之VH鏈(SEQ ID NO: 5)包含下列胺基酸序列或由其組成：
Figure 02_image524
B7-H4_2F9V2之VH鏈(SEQ ID NO: 8)包含下列胺基酸序列或由其組成：
Figure 02_image526
B7-H4_2F9V3之VH鏈(SEQ ID NO: 11)包含下列胺基酸序列或由其組成：
Figure 02_image528
B7-H4_2F9V4之VH鏈(SEQ ID NO: 14)包含下列胺基酸序列或由其組成：
Figure 02_image530
B7-H4_2F9V5之VH鏈(SEQ ID NO: 17)包含下列胺基酸序列或由其組成：
Figure 02_image532
B7-H4_2F9V6之VH鏈(SEQ ID NO: 20)包含下列胺基酸序列或由其組成：
Figure 02_image534
B7-H4_2F9V7之VH鏈(SEQ ID NO: 22)包含下列胺基酸序列或由其組成：
Figure 02_image536
B7-H4_2F9V7可變重鏈在本文中亦稱為XMT-1603可變重鏈。
B7-H4_2F9V8之VH鏈(SEQ ID NO: 24)包含下列胺基酸序列或由其組成：
Figure 02_image538
B7-H4_2F9V9之VH鏈(SEQ ID NO: 26)包含下列胺基酸序列或由其組成：
Figure 02_image540
B7-H4_2F9V10之VH鏈(SEQ ID NO: 28)包含下列胺基酸序列或由其組成：
Figure 02_image542
B7-H4_2F9V11之VH鏈(SEQ ID NO: 30)包含下列胺基酸序列或由其組成：
Figure 02_image544
B7-H4_2F9V12之VH鏈(SEQ ID NO: 32)包含下列胺基酸序列或由其組成：
Figure 02_image546
B7-H4_2F9V13之VH鏈(SEQ ID NO: 34)包含下列胺基酸序列或由其組成：
Figure 02_image548
B7-H4_2F9V14之VH鏈(SEQ ID NO: 36)包含下列胺基酸序列或由其組成：
Figure 02_image550
B7-H4_2F9V15之VH鏈(SEQ ID NO: 38)包含下列胺基酸序列或由其組成：
Figure 02_image552
B7-H4_2F9V16之VH鏈(SEQ ID NO: 40)包含下列胺基酸序列或由其組成：
Figure 02_image554
B7-H4_2F9V17之VH鏈(SEQ ID NO: 42)包含下列胺基酸序列或由其組成：
Figure 02_image556
B7-H4_2F9V18之VH鏈(SEQ ID NO: 44)(在本文中亦稱為XMT-1604 VH)包含下列胺基酸序列或由其組成：
Figure 02_image558
B7-H4_2F9V18可變重鏈在本文中亦稱為XMT-1604可變重鏈。
B7-H4_2F9V19之VH鏈(SEQ ID NO: 46)包含下列胺基酸序列或由其組成：
Figure 02_image560
B7-H4_2F9V20之VH鏈(SEQ ID NO: 48)包含下列胺基酸序列或由其組成：
Figure 02_image562
CDR
下表I概述本揭露之B7-H4抗體之CDR。
Figure 02_image564
所屬技術領域中廣知的是獨立於CDRl及/或CDR2結構域之單獨CDR3結構域可決定B7-H4抗體針對同源抗原之結合特異性且預期可基於共同CDR3序列產生具有相同結合特異性之多種抗體。
在一些實施態樣中，抗體包含來自非人類抗體(諸如小鼠或大鼠抗體)之一或多個重鏈及/或輕鏈CDR3結構域，其中單株抗體能與B7-H4特異性結合。在一些實施態樣內，包含來自非人類抗體之一或多個重鏈及/或輕鏈CDR3結構域之本發明之抗體(a)能與對應親代非人類抗體競爭結合；(b)保留功能特徵；(c)與相同表位結合；及/或(d)具有類似結合親和力。
在一些實施態樣中，單株抗體包含來自第一人類抗體(諸如例如獲自非人類動物之人類抗體)之一或多個重鏈及/或輕鏈CDR3結構域，其中第一人類抗體能與B7-H4特異性結合，且其中來自第一人類抗體之CDR3結構域取代人類抗體中缺乏針對B7-H4之結合特異性的CDR3結構域以產生能與B7-H4特異性結合之第二人類抗體。在一些實施態樣中，包含來自第一人類抗體之一或多個重鏈及/或輕鏈CDR3結構域之抗體(a)能與對應親代第一人類抗體競爭結合；(b)保留功能特徵；(c)與相同表位結合；及/或(d)具有類似結合親和力。 B7-H4 2F9 恆定區
B7-H4 2F9親代抗體及本揭露之二十個變體具有輕鏈恆定區，該輕鏈恆定區包含下列胺基酸序列或由其組成：
Figure 02_image566
B7-H4 2F9輕鏈恆定區(SEQ ID NO: 51)在本文中亦稱為B7-H4 2F9 LC。
在一些實施態樣中，本揭露之抗體包含輕鏈，該輕鏈包含輕鏈可變區胺基酸序列及輕鏈恆定區胺基酸序列或由其組成。本揭露之抗體輕鏈(可變及恆定區)包含SEQ ID NO: 52之胺基酸序列或由其組成。
B7-H4 2F9親代抗體及本揭露之二十個變體具有IgG1重鏈恆定區，該IgG1重鏈恆定區包含下列胺基酸序列或由其組成： ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO: 6)。B7-H4 2F9 IgG1重鏈恆定區(SEQ ID NO: 6)在本文中亦稱為B7-H4 2F9 HC。
在一些實施態樣中，包含SEQ ID NO: 6或由其組成之IgG1重鏈恆定區進一步包含在N端或C端之一或多個胺基酸。在一些實施態樣中，IgG1重鏈恆定區包含C端離胺酸。
在一些實施態樣中，本揭露之抗體包含重鏈，該重鏈包含重鏈可變區胺基酸序列及重鏈恆定區胺基酸序列或由其組成。本揭露之抗體重鏈(可變及恆定區)係描述於表II及隨之提出之序列表。
在一些實施態樣中，本揭露之抗體可包含IgG2重鏈恆定區，該IgG2重鏈恆定區包含下列胺基酸序列由其組成：
Figure 02_image568
Figure 02_image570
在一些實施態樣中，本揭露之抗體可包含IgG4重鏈恆定區，該IgG4重鏈恆定區包含下列胺基酸序列由其組成：
Figure 02_image572
Figure 02_image574
具體實施態樣
在又一實施態樣中，本揭露之B7-H4抗體包含重鏈可變區及輕鏈可變區，該重鏈可變區及輕鏈可變區包含與本文所述之較佳抗體的胺基酸序列同源之胺基酸序列，且其中抗體保留本揭露之抗B7-H4抗體的所欲功能性質。例如，本揭露提供經單離之單株抗體或其抗原結合部分，該經單離之單株抗體或其抗原結合部分包含重鏈可變區及輕鏈可變區，其中： (a)重鏈可變區包含與選自由SEQ ID NO: 44、22、30、40及42所組成之群組之胺基酸序列具有至少80%同源性之胺基酸序列； (b)輕鏈可變區包含與SEQ ID NO: 50之胺基酸序列具有至少80%同源性之胺基酸序列； (c)抗體以1 x 10-7 M或更小之K D與人類B7-H4結合；且 (d)抗體與經B7-H4轉染之人類CHO細胞結合。
在各種實施態樣中，抗體可為例如人類抗體、人化抗體或嵌合抗體。
在其他實施態樣中，VH及/或VL胺基酸序列可與以上所示之序列具有85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%同源性。具有與以上所示之序列的VH及VL區具有高度(即80%或較大)同源性之VH及VL區的B7-H4抗體可藉由編碼SEQ ID NO: 44、22、30、40及42所示之胺基酸序列的核酸分子之突變形成(例如定點或PCR介導之突變形成)獲得，隨後使用本文所述功能測定測試經編碼之改變抗體的保留功能(即如以上(c)及(d)所示之功能)。
在一較佳實施態樣中，重鏈可變區CDR2序列包含選自由SEQ ID NO: 44、22、30、40及42之胺基酸序列所組成之群組之胺基酸序列及其保守性修飾；且輕鏈可變區CDR2序列包含SEQ ID NO: 54之胺基酸序列及其保守性修飾。在另一較佳實施態樣中，重鏈可變區CDR1序列包含選自由SEQ ID NO: 44、22、30、40及42之胺基酸序列所組成之群組之胺基酸序列及其保守性修飾；且輕鏈可變區CDR1序列包含SEQ ID NO: 50之胺基酸序列及其保守性修飾。
在各種實施態樣中，抗體可為例如人類抗體、人化抗體或嵌合抗體。
在一些實施態樣中，抗體與和本揭露之B7-H4單株抗體之任一者相同的人類B7-H4上之表位結合(即具有與本揭露之單株抗體之任一者交叉競爭與B7-H4結合之能力的抗體)。
因此，本揭露之另一實施態樣關於經單離之單株抗體或其抗原結合部分，該經單離之單株抗體或其抗原結合部分包含重鏈可變區及輕鏈可變區，該重鏈可變區包含CDRl、CDR2及CDR3序列，該CDRl、CDR2及CDR3序列分別包含選自由SEQ ID NO: 44、22、30、40及42所組成之群組之胺基酸序列，且該輕鏈可變區包含CDRl、CDR2及CDR3序列，該CDRl、CDR2及CDR3序列分別包含SEQ ID NO: 53、54及55之胺基酸序列。
因此，在另一實施態樣中，本揭露提供經單離之抗B7-H4單株抗體或其抗原結合部分，該經單離之抗B7-H4單株抗體或其抗原結合部分包含重鏈可變區，該重鏈可變區包含：(a)VH CDR1區，其包含胺基酸序列，該胺基酸序列包含SEQ ID NO: 2；或相較於SEQ ID NO: 2具有一、二、三、四或五個胺基酸取代、刪除或添加之胺基酸序列；(b)VH CDR2區，其包含胺基酸序列，該胺基酸序列包含SEQ ID NO: 3；或相較於SEQ ID NO: 3具有一、二、三、四或五個胺基酸取代、刪除或添加之胺基酸序列；(c)VH CDR3區，其包含胺基酸序列，該胺基酸序列選自由SEQ ID NO: 16、10或4所組成之群組；或相較於SEQ ID NO: 16、10或4具有一、二、三、四或五個胺基酸取代、刪除或添加之胺基酸序列。
在一些實施態樣中，在本文中揭示之抗體含有重鏈及輕鏈，該重鏈具有與選自由SEQ ID NO: 45、23、31、41或43所組成之群組之序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或超過99%一致性之胺基酸序列，且該輕鏈具有與選自由SEQ ID No: 52所組成之群組之序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或超過99%一致性之胺基酸序列。
在一些實施態樣中，在本文中揭示之抗體含有選自由下列所組成之群組的重鏈胺基酸序列及輕鏈胺基酸序列之組合：(i)與SEQ ID NO: 45之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或超過99%一致性之重鏈胺基酸序列及與SEQ ID NO: 52之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或超過99%一致性之輕鏈胺基酸序列；(ii)與SEQ ID NO: 23之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或超過99%一致性之重鏈胺基酸序列及與SEQ ID NO: 52之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或超過99%一致性之輕鏈胺基酸序列；(iii)與SEQ ID NO: 31之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或超過99%一致性之重鏈胺基酸序列及與SEQ ID NO: 52之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或超過99%一致性之輕鏈胺基酸序列；(iv)與SEQ ID NO: 41之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或超過99%一致性之重鏈胺基酸序列及與SEQ ID NO: 50之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或超過99%一致性之輕鏈胺基酸序列；及(v)與SEQ ID NO: 43之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或超過99%一致性之重鏈胺基酸序列及與SEQ ID NO: 52之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或超過99%一致性之輕鏈胺基酸序列。
在一些實施態樣中，在本文中揭示之抗體含有與SEQ ID NO: 45之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或超過99%一致性之重鏈胺基酸序列及與SEQ ID NO: 52之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或超過99%一致性之輕鏈胺基酸序列。
在一些實施態樣中，在本文中揭示之抗體含有與SEQ ID NO: 23之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或超過99%一致性之重鏈胺基酸序列及與SEQ ID NO: 52之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或超過99%一致性之輕鏈胺基酸序列。
在一些實施態樣中，在本文中揭示之抗體含有與SEQ ID NO: 31之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或超過99%一致性之重鏈胺基酸序列及與SEQ ID NO: 52之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或超過99%一致性之輕鏈胺基酸序列。
在一些實施態樣中，在本文中揭示之抗體含有與SEQ ID NO: 41之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或超過99%一致性之重鏈胺基酸序列及與SEQ ID NO: 52之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或超過99%一致性之輕鏈胺基酸序列。
在一些實施態樣中，在本文中揭示之抗體含有與SEQ ID NO: 43之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或超過99%一致性之重鏈胺基酸序列及與SEQ ID NO: 52之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或超過99%一致性之輕鏈胺基酸序列。
在一些實施態樣中，在本文中揭示之抗體含有重鏈及輕鏈，該重鏈具有選自由SEQ ID NO: 45、23、31、41或43所組成之群組之胺基酸序列，且該輕鏈具有SEQ ID NO: 52之胺基酸序列。
在一些實施態樣中，在本文中揭示之抗體含有選自由下列所組成之群組的重鏈胺基酸序列及輕鏈胺基酸序列之組合：(i)SEQ ID NO: 45之重鏈胺基酸序列及SEQ ID NO: 52之輕鏈胺基酸序列；(ii)SEQ ID NO: 23之重鏈胺基酸序列及SEQ ID NO: 52之輕鏈胺基酸序列；(iii)SEQ ID NO: 31之重鏈胺基酸序列及SEQ ID NO: 52之輕鏈胺基酸序列；(iv)SEQ ID NO: 41之重鏈胺基酸序列及SEQ ID NO: 52之輕鏈胺基酸序列；及(v)SEQ ID NO: 43之重鏈胺基酸序列及SEQ ID NO: 52之輕鏈胺基酸序列。
在一些實施態樣中，在本文中揭示之抗體含有SEQ ID NO: 45之重鏈胺基酸序列及SEQ ID NO: 52之輕鏈胺基酸序列。
在一些實施態樣中，在本文中揭示之抗體含有SEQ ID NO: 23之重鏈胺基酸序列及SEQ ID NO: 52之輕鏈胺基酸序列。
在一些實施態樣中，在本文中揭示之抗體含有SEQ ID NO: 31之重鏈胺基酸序列及SEQ ID NO: 52之輕鏈胺基酸序列。
在一些實施態樣中，在本文中揭示之抗體含有SEQ ID NO: 41之重鏈胺基酸序列及SEQ ID NO: 52之輕鏈胺基酸序列。
在一些實施態樣中，在本文中揭示之抗體含有SEQ ID NO: 43之重鏈胺基酸序列及SEQ ID NO: 52之輕鏈胺基酸序列。
在本文中揭示之抗體含有重鏈可變區，該重鏈可變區具有與選自由SEQ ID NO: 44、22、30、40或42所組成之群組之序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或超過99%一致性之胺基酸序列 及輕鏈可變區，該輕鏈可變區具有與選自由SEQ ID NO: 50所組成之群組之序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或超過99%一致性之胺基酸序列。
在一些實施態樣中，在本文中揭示之抗體之三個重鏈CDR包括重鏈互補決定區1(CDRH1)、重鏈互補決定區2(CDRH2)及重鏈互補決定區3(CDRH3)，該CDRH1包括與包含SEQ ID NO: 2之序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或超過99%一致性之胺基酸序列；該CDRH2包括與包含SEQ ID NO: 3之序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或超過99%一致性之胺基酸序列；且該CDRH3包括與選自由SEQ ID NO: 16、10或4所組成之群組之序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或超過99%一致性之胺基酸序列；及與SEQ ID NO: 45、23、31、41或43之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或超過99%一致性之重鏈胺基酸序列。
在本文中揭示之抗體之三個輕鏈CDR包括輕鏈互補決定區1(CDRL1)、輕鏈互補決定區2(CDRL2)及輕鏈互補決定區3(CDRL3)，該CDRL1包括與包含SEQ ID NO. 53之序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或超過99%一致性之胺基酸序列；該CDRL2包括與包含SEQ ID NO: 54之序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或超過99%一致性之胺基酸序列；且該CDRL3包括與包含SEQ ID NO: 55之序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或超過99%一致性之胺基酸序列。
抗體包括重鏈CDR序列與輕鏈CDR序列之組合，該組合包括：CDRH1，其包括與包含SEQ ID NO: 2之序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或超過99%一致性之胺基酸序列；CDRH2，其包括與包含SEQ ID NO: 3之序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或超過99%一致性之胺基酸序列；CDRH3，其包括與選自由SEQ ID NO: 16、10或4所組成之群組之序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或超過99%一致性之胺基酸序列；CDRL1，其包括與選自由SEQ ID NO: 53所組成之群組之序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或超過99%一致性之胺基酸序列；CDRL2，其包括與SEQ ID NO: 54之序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或超過99%一致性之胺基酸序列；及CDRL3，其包括與SEQ ID NO: 55具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或超過99%一致性之胺基酸序列；及與SEQ ID NO: 45、23、31、41或43之胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或超過99%一致性之重鏈胺基酸序列。
在本文中揭示之抗體之三個重鏈CDR包括：CDRH1，其包括選自包含SEQ ID NO: 2之群組之胺基酸序列；CDRH2，其包括包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列；及CDRH3，其包括選自由SEQ ID NO: 10或16所組成之群組之胺基酸序列；及選自由SEQ ID NO: 45或23所組成之群組之重鏈胺基酸序列。
在本文中揭示之抗體之三個輕鏈CDR包括：CDRL1，其具有SEQ ID NO: 53之胺基酸序列；CDRL2，其具有SEQ ID NO: 54之胺基酸序列；及CDRL3，其具有SEQ ID NO: 55之胺基酸序列。在本文中揭示之抗體包括重鏈CDR序列與輕鏈CDR序列之組合，該組合包括：CDHR1，其包括包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列；CDRH2，其包括包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列；CDRH3，其包括包含SEQ ID NO: 10或16之胺基酸序列；CDRL1，其具有SEQ ID NO: 53之胺基酸序列；CDRL2，其具有SEQ ID NO: 54之胺基酸序列；及CDRL3，其具有SEQ ID NO: 55之胺基酸序列；及SEQ ID NO: 45或23之重鏈胺基酸序列。在本文中揭示之抗體含有選自由下列所組成之群組的重鏈互補決定區胺基酸序列及輕鏈互補決定區胺基酸序列之組合：(i)SEQ ID NO: 2之CDRH1胺基酸序列、SEQ ID NO: 3之CDRH2胺基酸序列、SEQ ID NO: 16之CDRH3胺基酸序列、SEQ ID NO: 53之CDRL1胺基酸序列、SEQ ID NO: 54之CDRL2胺基酸序列、SEQ ID NO: 55之CDRL3胺基酸序列及SEQ ID NO: 45之重鏈胺基酸序列；(ii)SEQ ID NO: 2之CDRH1胺基酸序列、SEQ ID NO: 3之CDRH2胺基酸序列、SEQ ID NO: 10之CDRH3胺基酸序列、SEQ ID NO: 53之CDRL1胺基酸序列、SEQ ID NO: 54之CDRL2胺基酸序列、SEQ ID NO: 55之CDRL3胺基酸序列及SEQ ID NO: 23之重鏈胺基酸序列；(iii)SEQ ID NO: 2之CDRH1胺基酸序列、SEQ ID NO: 3之CDRH2胺基酸序列、SEQ ID NO: 4之CDRH3胺基酸序列、SEQ ID NO: 53之CDRL1胺基酸序列、SEQ ID NO: 54之CDRL2胺基酸序列、SEQ ID NO: 55之CDRL3胺基酸序列及SEQ ID NO: 31之重鏈胺基酸序列；(iv)SEQ ID NO: 2之CDRH1胺基酸序列、SEQ ID NO: 3之CDRH2胺基酸序列、SEQ ID NO: 4之CDRH3胺基酸序列、SEQ ID NO: 53之CDRL1胺基酸序列、SEQ ID NO: 54之CDRL2胺基酸序列、SEQ ID NO: 55之CDRL3胺基酸序列及SEQ ID NO: 41之重鏈胺基酸序列及(v)SEQ ID NO: 2之CDRH1胺基酸序列、SEQ ID NO: 3之CDRH2胺基酸序列、SEQ ID NO: 10之CDRH3胺基酸序列、SEQ ID NO: 53之CDRL1胺基酸序列、SEQ ID NO: 54之CDRL2胺基酸序列、SEQ ID NO: 55之CDRL3胺基酸序列及SEQ ID NO: 43之重鏈胺基酸序列。
在一些實施態樣中，在本文中揭示之抗體含有SEQ ID NO: 2之CDRH1胺基酸序列、SEQ ID NO: 3之CDRH2胺基酸序列、SEQ ID NO: 16之CDRH3胺基酸序列、SEQ ID NO: 53之CDRL1胺基酸序列、SEQ ID NO: 54之CDRL2胺基酸序列、SEQ ID NO: 55之CDRL3胺基酸序列及SEQ ID NO: 45之重鏈胺基酸序列。
在一些實施態樣中，在本文中揭示之抗體含有SEQ ID NO: 2之CDRH1胺基酸序列、SEQ ID NO: 3之CDRH2胺基酸序列、SEQ ID NO: 10之CDRH3胺基酸序列、SEQ ID NO: 53之CDRL1胺基酸序列、SEQ ID NO: 54之CDRL2胺基酸序列、SEQ ID NO: 55之CDRL3胺基酸序列及SEQ ID NO: 23之重鏈胺基酸序列。
在一些實施態樣中，在本文中揭示之抗體含有SEQ ID NO: 2之CDRH1胺基酸序列、SEQ ID NO: 3之CDRH2胺基酸序列、SEQ ID NO: 4之CDRH3胺基酸序列、SEQ ID NO: 53之CDRL1胺基酸序列、SEQ ID NO: 54之CDRL2胺基酸序列及SEQ ID NO: 55之CDRL3胺基酸序列。
在一些實施態樣中，在本文中揭示之抗體含有SEQ ID NO: 2之CDRH1胺基酸序列、SEQ ID NO: 3之CDRH2胺基酸序列、SEQ ID NO: 4之CDRH3胺基酸序列、SEQ ID NO: 53之CDRL1胺基酸序列、SEQ ID NO: 54之CDRL2胺基酸序列及SEQ ID NO: 55之CDRL3胺基酸序列。
在一些實施態樣中，在本文中揭示之抗體含有SEQ ID NO: 2之CDRH1胺基酸序列、SEQ ID NO: 3之CDRH2胺基酸序列、SEQ ID NO: 10之CDRH3胺基酸序列、SEQ ID NO: 53之CDRL1胺基酸序列、SEQ ID NO: 54之CDRL2胺基酸序列及SEQ ID NO: 55之CDRL3胺基酸序列。
在本文中揭示之較佳抗體包括例如B7-H4-2F9V7(在本文中亦稱為XMT 1603抗體)及B7-H4-2F9V18(在本文中亦稱為XMT 1604抗體)。這些抗體顯示針對人類B7-H4之特異性且它們已經顯示在活體外抑制B7-H4的功能活性。 B7-H4 抗體之生產
B7-H4抗體係例如使用本文提供之實例中所述的方法產生。替代地或額外地，各種該領域中已知之方法可被用來產製以B7-H4或彼之衍生物、片段、類似物同源物或直系同源物為目標之單株抗體。(見例如Antibodies: A Laboratory Manual, Harlow E, and Lane D, 1988, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY；Kozbor, et al., 1983 Immunol Today 4: 72)；Cole, et al., 1985 In: Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, Inc., pp. 77-96；Cote, et al., 1983. Proc Natl Acad Sci USA 80: 2026-2030；Cole, et al., 1985 In: Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, Inc., pp. 77-96；其各者全文以引用方式併入本文中。)
在本文中揭示之單株抗體包括全人抗體或人化抗體。該些抗體適合用於投予至人類而不會產生由該人類對抗該經投予之免疫球蛋白之免疫反應。人化或全人B7-H4抗體係利用例如使用僅包含人序列之抗體的噬菌體展示方法發展。該等方法係該領域所廣為周知，例如WO92/01047及美國專利第6,521,404號，其特此以引用方式併入本文中。
抗體係藉由廣為周知之技術純化，諸如使用蛋白A或蛋白G之親和性層析，該技術主要提供免疫血清中之IgG組分。因此或選擇性地，係為該免疫球蛋白尋找標的之特定抗原或彼之表位可被固定在管柱上以藉由免疫親和性層析純化該免疫特異性抗體。免疫球蛋白之純化係由例如D. Wilkinson討論(The Scientist, published by The Scientist, Inc., Philadelphia PA, Vol. 14, No. 8(April 17, 2000), pp. 25‑28；以引用方式併入本文中)。
本發明亦包括F v、F ab、F ab’及F (ab’)2抗B7-H4片段或抗B7-H4片段、單鏈抗B7-H4抗體、其中至少一臂與B7-H4結合之多特異性抗體及異源共軛抗B7-H4抗體。
雙特異性抗體係針對至少二種不同抗原具有結合特異性之抗體。在本例中，結合特異性中之一者係針對B7-H4。第二結合目標係任何其他抗原，包括細胞表面蛋白或受體或受體次單元。
用於製造雙特異性抗體之方法係該領域所知。傳統上，雙特異性抗體之重組生產係基於共表現二個免疫球蛋白重鏈/輕鏈對，其中該二個重鏈具有不同特異性(Milstein and Cuello, Nature, 305: 537-539(1983))。
雙特異性抗體可被製備為全長抗體或抗體片段(例如F(ab’) 2雙特異性抗體)。自抗體片段產生雙特異性抗體之技術已於文獻中描述。
本發明考慮超過兩價之抗體。舉例來說，可製備三特異性抗體。Tutt et al., J. Immunol. 147: 60 (1991)。
例示性雙特異性抗體可與二種不同表位結合，其中至少一者源自在本文中揭示之蛋白抗原。替代地，免疫球蛋白分子之抗‑抗原性臂可與一臂組合，該臂與白血球上之觸發分子諸如T‑細胞受體分子(例如CD2、CD3、CD28或B7)、或IgG之Fc受體(FcγR)諸如FcγRI (CD64)、FcγRII(CD32)及FcγRIII(CD16)結合，以使細胞性防禦機制聚焦於表現特定抗原之細胞。雙特異性抗體亦可用於引導細胞毒性劑至表現特定抗原之細胞。這些抗體具有抗原結合臂及與細胞毒性劑或放射性核種螯合劑諸如EOTUBE、DPTA、DOTA或TETA結合之臂。另一受關注雙特異性抗體結合本文所述之蛋白抗原且進一步結合組織因子(TF)。
異源共軛抗體亦屬於本發明之範圍內。異源共軛抗體係由二個共價連接之抗體組成。該等抗體已被提議用於例如使免疫系統細胞靶向非所欲之細胞(見美國專利第4,676,980號)及用於治療HIV感染(見WO 91/00360；WO 92/200373；EP 03089)。考慮到該等抗體可利用已知之合成蛋白質化學方法於試管內製備，包括該些涉及交聯劑之方法。舉例來說，免疫毒素可利用雙硫交換反應或藉由形成硫醚鍵加以建構。用於此目的之合適試劑的實例包括亞胺基硫醇鹽及甲基-4-巰基丁醯亞胺酸鹽及該些揭示於例如美國專利第4,676,980號者。
可為所欲的是就效應功能修飾在本文中揭示之抗體，以增強該抗體於例如治療與異常B7-H4表現及/或活性有關之疾病和疾患上之有效性。舉例來說，半胱胺酸殘基可被導入Fc區，藉以允許在此區中形成鏈間雙硫鍵。如此產生之同型二聚抗體可具有經改善之內化能力及/或增加之補體介導性細胞殺滅及抗體依賴性細胞性細胞毒性(ADCC)。(見Caron et al., J. Exp Med., 176: 1191-1195 (1992) and Shopes, J. Immunol., 148: 2918-2922(1992))。或者，抗體可經工程化以具有雙Fc區，藉此可具有增強之補體溶解及ADCC能力。(見Stevenson et al., Anti-Cancer Drug Design, 3: 219-230 (1989))。 經半胱胺酸工程改造之 B7-H4 抗體
在一些實施態樣中，經半胱胺酸工程改造之B7-H4抗體引導包含肽連接子之共軛體至特異性組織、細胞或細胞中的位置。在一些實施態樣中，經半胱胺酸工程改造之B7-H4抗體包含工程改造半胱胺酸。
在一些實施態樣中，經半胱胺酸工程改造之B7-H4抗體或抗體片段係B7-H4抗體或抗體片段，其中對應親代抗體或抗體片段(例如對應野生型B7-H4抗體或抗體片段)之一或多個胺基酸係經半胱胺酸(例如工程改造半胱胺酸)取代。在一些實施態樣中，親代B7-H4抗體或抗體片段係該些在本文中描述者。
在一些實施態樣中，B7-H4抗體係經工程改造以形成經半胱胺酸工程改造之抗體。在一些實施態樣中，經半胱胺酸工程改造之B7-H4抗體或抗體片段保留其對應野生型B7-H4抗體或抗體片段之抗原結合能力。在一些實施態樣中，經半胱胺酸工程改造之抗體或抗體片段能與其對應野生型B7-H4抗體或抗體片段之一或多種抗原結合。
在一些實施態樣中，工程改造半胱胺酸不是鏈內或鏈間雙硫鍵單元之一部分。在一些實施態樣中，工程改造半胱胺酸含有與親電子官能基反應之游離氫硫基。在一些實施態樣中，在B7-H4抗體或抗體片段表面上之工程改造半胱胺酸(例如游離其氫硫基)可允許B7-H4抗體或抗體片段與包含氫硫基反應基(例如順丁烯二醯亞胺或鹵乙醯基)之連接子-藥物部份共軛。
應理解以半胱胺酸取代B7-H4抗體或抗體片段中之一或多個非半胱胺酸胺基酸可產生作為可用共軛位點之一或多個工程改造半胱胺酸。在一些實施態樣中，藉由以半胱胺酸取代B7-H4抗體或抗體片段中之非半胱胺酸胺基酸，反應性氫硫基係定位於抗體或抗體片段之可接觸位點，且可用於共軛抗體或抗體片段與其他部份(例如藥物部份或連接子-藥物部份)及產生本揭露之共軛體。在一些實施態樣中，親代B7-H4抗體或抗體片段之輕鏈的V205(Kabat或EU編號)或重鏈的A118或S442(EU編號)之胺基酸係經半胱胺酸取代。在一些實施態樣中，經半胱胺酸工程改造之抗體可如例如美國專利第7,521,541號所述產生。
在一些實施態樣中，經半胱胺酸工程改造之B7-H4抗體係藉由形成經由工程改造半胱胺酸之巰基與連接子-藥物部份之官能基的共價鍵來與連接子-藥物部份共軛。 經修飾之 B7-H4 抗體
在一些實施態樣中，B7-H4抗體係經修飾之B7-H4抗體。
在經修飾之B7-H4抗體之一些實施態樣中，*表示直接或間接連接至經修飾之B7-H4抗體的其他部分。在一些實施態樣中，S”係糖或衍生糖。在一些實施態樣中，A”係能與連接子-藥物部份的官能基形成共價鍵之官能基。
在一些實施態樣中，經修飾之B7-H4抗體在共軛之前包含
Figure 02_image576
之糖衍生部份。
在一些實施態樣中，經修飾之B7-H4抗體包含在區域290至305中之天冬醯胺酸基團(例如N297；EU編號)。在一些實施態樣中，糖衍生部份與天冬醯胺酸基團(例如N297)直接或間接連接。
在一些實施態樣中，經修飾之B7-H4抗體在共軛之前包含經修飾之GlcNAc部份
Figure 02_image578
，其中GlcNAc係N-乙醯葡萄糖胺。
在一些實施態樣中，經修飾之GlcNAc部份係經由GlcNAc之C1位置連接至經修飾之B7-H4抗體的其他部分。在一些實施態樣中，經修飾之GlcNAc部份進一步包含岩藻糖。
在一些實施態樣中，經修飾之GlcNAc部份與天冬醯胺酸基團(例如N297)直接或間接連接。
在一些實施態樣中，經修飾之B7-H4抗體係經由在A”與連接子-藥物部份之官能基之間形成的共價鍵與連接子-藥物部份共軛。
在一些實施態樣中，本揭露之經修飾之B7-H4抗體係藉由過程獲得，該過程包含： (a)使包含B7-H4抗體及核心GlcNAc部份之糖蛋白(例如B7-H4抗體聚醣)與內切糖苷酶接觸，藉此形成包含抗體及末端GlcNAc部份之中間物抗體，且可選地，末端GlcNAc部份進一步包含岩藻糖；及 (b)使中間物抗體與具有
Figure 02_image580
結構之化合物在糖基轉移酶存在下接觸，藉此形成包含抗體及經修飾之GlcNAc部份
Figure 02_image578
的經修飾之B7-H4抗體，且可選地，經修飾之GlcNAc部份係經由GlcNAc之C1位置連接至經修飾之B7-H4抗體的其他部分；其中 GlcNAc係N-乙醯葡萄糖胺； S”係糖或衍生糖； A”係疊氮基、酮基或炔基；且 P”係尿苷二磷酸鹽(UDP)、鳥苷二磷酸鹽(GDP)或胞苷二磷酸鹽(CDP)。
在一些實施態樣中，步驟(a)及(b)係依序進行。在一些實施態樣中，步驟(a)及(b)係同時進行。
在一些實施態樣中，抗體聚醣包含糖化形式G0、Gl、G2、G0F、GIF、G2F及M5(例如圖1所示之糖化形式)之混合物。
在一些實施態樣中，抗體係單株抗體(mAb)。
在一些實施態樣中，抗體係IgA、IgD、IgE、IgG或IgM抗體。
在一些實施態樣中，抗體係IgG抗體，例如IgGl、IgG2、IgG3或IgG4抗體。在一些實施態樣中，抗體係lgG1抗體。
在一些實施態樣中，抗體係全長抗體，且抗體聚醣包含一或多個核心GlcNAc部份。
在一些實施態樣中，抗體係全長抗體，且抗體聚醣包含一或多個與抗體之各重鏈連接之核心GlcNAc部份。
在一些實施態樣中，核心GlcNAc部份進一步包含岩藻糖。
在一些實施態樣中，抗體係全長抗體，且抗體聚醣包含二個或超過二個與全長抗體連接之核心GlcNAc部份。
在一些實施態樣中，抗體係全長抗體，且抗體聚醣包含二個與全長抗體連接之核心GlcNAc部份。
在一些實施態樣中，二個或超過二個核心GlcNAc部份中之至少一者進一步包含岩藻糖。
在一些實施態樣中，二個或超過二個核心GlcNAc部份中之各者進一步包含岩藻糖。
在一些實施態樣中，抗體係單鏈抗體或B7-H4抗體片段(例如Fab或Fc片段)，抗體聚醣包含一或多個與抗體連接之核心GlcNAc部份(其可選地進一步包含岩藻糖)。
在一些實施態樣中，核心GlcNAc部份係與抗體之位置連接，其中核心GlcNAc部份實質上不阻擾抗體之抗原結合部位。
在一些實施態樣中，核心GlcNAc部份係與抗體之Fc片段連接。在一些實施態樣中，核心GlcNAc部份係與CH結構域連接。在一些實施態樣中，核心GlcNAc部份係與抗體之Fab或Fc片段連接。在一些實施態樣中，核心GlcNAc部份係經由N-糖苷鍵連接至抗體之天冬醯胺酸胺基酸側鏈中的醯胺氮原子。在一些實施態樣中，核心GlcNAc部份係與抗體的天然N-糖基化位點連接。
在一些實施態樣中，抗體係IgG抗體且核心GlcNAc部份係與IgG的天然N-糖基化位點連接。
在一些實施態樣中，抗體係IgG抗體且核心GlcNAc部份係與IgG的天然N-糖基化位點(例如，IgG的N297 N-糖基化位點)連接。在一些實施態樣中，N297 N-糖基化位點存在於IgG抗體之重鏈的保守Fc區的區域290至305中之天冬醯胺酸(例如N297)。
在一些實施態樣中，中間物抗體具有下式(XXII)：
Figure 02_image583
(XXII)；其中： Ab係B7-H4抗體；GlcNAc係N-乙醯葡萄糖胺；Fuc係岩藻糖；u 3係0或1；且u 4係範圍為1至16的整數。
在一些實施態樣中，u 4係範圍為1至10的整數。在一些實施態樣中，u 4係1、2、3、4、5、6、7或8。在一些實施態樣中，u 4係1、2、3、4、5或6。在一些實施態樣中，u 4係1、2、3或4。在一些實施態樣中，u 4係2或4。在一些實施態樣中，u 4係1或2。在一些實施態樣中，u 4係1。在一些實施態樣中，u 4係2。
在一些實施態樣中，抗體包含一個核心GlcNAc部份(例如u 4係1)。在一些實施態樣中，抗體包含二個核心GlcNAc部份(例如u 4係2)。
在一些實施態樣中，經修飾之B7-H4抗體係藉由方案1中概述之過程獲得。如下所示，使包含一個末端GlcNAc部份之式(XXIII)之中間物抗體與具有
Figure 02_image580
結構之化合物在糖基轉移酶存在下接觸提供包含一個經修飾之GlcNAc部份之經修飾之B7-H4抗體(例如式(XXIIIa)之經修飾之B7-H4抗體)。
在一些實施態樣中，經修飾之B7-H4抗體係藉由使包含二個末端GlcNAc部份之式(XXIV)之中間物抗體與具有
Figure 02_image580
結構之化合物在糖基轉移酶存在下接觸獲得，提供包含二個經修飾之GlcNAc部份之經修飾之B7-H4抗體(例如式(XXIVa)之經修飾之B7-H4抗體)。
Figure 02_image585
其中u 3、Ab、S”、A”及P”係如本文中所定義。
在一些實施態樣中，在根據本揭露之過程中修飾的抗體聚醣包含聚醣，該聚醣包含核心GlcNAc部份，即存在於聚醣之非還原端的GlcNAc部份。在一些實施態樣中，聚醣包含一或多個醣部份且可為直鏈或支鏈。
在一些實施態樣中，在與內切糖苷酶反應時，可形成中間物抗體，其包含末端GlcNAc部份(例如式(XXIII)或(XXIV)之中間物抗體)。
在一些實施態樣中，過程之步驟(a)(去糖基化或修剪)係如圖2所示，其中抗體糖化形式G2F、GIF、G0F、G2、Gl、G0及M5之混合物(例如見圖1)及可能的額外糖化形式(例如三觸角聚醣)係經轉換成包含末端GlcNAc部份之中間物抗體，其可選地包含岩藻糖(例如u 3係0或1)。
在一些實施態樣中，內切糖苷酶係內切糖苷酶Endo S、Endo SH、Endo S2、Endo S49、Endo Fl、Endo F2、Endo F3或彼等之組合。
在一些實施態樣中，內切糖苷酶係Endo S、Endo SH、Endo S2、Endo S49或彼等之組合。
在一些實施態樣中，內切糖苷酶係Endo S或Endo SH或彼等之組合。在一些實施態樣中，內切糖苷酶係Endo SH。
在一些實施態樣中，過程之步驟(b)(形成經修飾之B7-H4抗體)係如圖3所示，其中中間物抗體包含單株抗體(mAb)及在單株抗體(mAb)之各重鏈上的末端GlcNAc部份(其可選地包含岩藻糖(例如u 3係0或1))。在一些實施態樣中，在步驟(b)中，末端GlcNAc部份係經轉換成經修飾之GlcNAc部份。在一些實施態樣中，該轉換可經由末端GlcNAc部份與
Figure 02_image580
之化合物在糖基轉移酶存在下之反應執行。
在一些實施態樣中，
Figure 02_image580
之化合物係GalNAz-UDP(例如4-AzGalNAc-UDP)。在一些實施態樣中，末端GlcNAc部份係*-GlcNAc-GalNAz或*-GlcNAc (Fuc)-GalNAz，其中*表示連接至經修飾之B7-H4抗體的其他部分。
在一些實施態樣中，去糖基化/修剪步驟及形成經修飾之B7-H4抗體之步驟係依序進行。
在一些實施態樣中，去糖基化/修剪步驟及形成經修飾之B7-H4抗體之步驟係同時進行。
在一些實施態樣中，用於製備經修飾之B7-H4抗體之過程係在合適緩衝溶液中實施，例如緩衝鹽水(例如磷酸鹽緩衝鹽水、Tris緩衝鹽水)、檸檬酸鹽、HEPES、Tris及甘胺酸。在一些實施態樣中，緩衝溶液係磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)或Tris緩衝鹽水。在一些實施態樣中，緩衝溶液係磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)。
在一些實施態樣中，過程係在範圍為約4至約50℃的溫度下實施。在一些實施態樣中，過程係在範圍為約10至約45℃的溫度下實施。在一些實施態樣中，過程係在範圍為約20至約40℃的溫度下實施。在一些實施態樣中，過程係在範圍為約30至約37℃的溫度下實施。在一些實施態樣中，過程係在約30℃的溫度下實施。在一些實施態樣中，過程係在30℃的溫度下實施。
在一些實施態樣中，過程係在範圍為約5至約9的pH值下實施(例如約5.5至約8.5、約6至約8或約7至約8)。在一些實施態樣中，過程係在約7.4的pH值下實施。
在一些實施態樣中，用於製備經修飾之B7-H4抗體之過程係如圖4所示。
在一些實施態樣中，用於製備經修飾之B7-H4抗體之過程包含： (a)使包含B7-H4抗體及核心GlcNAc部份之糖蛋白(例如B7-H4抗體聚醣)與內切糖苷酶Endo SH接觸，該核心GlcNAc部份與該抗體的位點N297連接，藉此形成包含末端GlcNAc部份之中間物抗體；及 (b)使中間物抗體與4-AzGalNAc-UDP在β-(l,4)-GalNAcT酶存在下接觸，藉此形成包含經修飾之GlcNAc部份的經修飾之B7-H4抗體； 其中步驟(a)及(b)係同時進行。
在一些實施態樣中，內切糖苷酶係Endo SH，其係藉由富含Gly之間隔子連接的二種內切糖苷酶Endo S與Endo H之間的融合物，且包含內部6xHis標籤導致139 kDa之整體分子量。
在一些實施態樣中，β-(l,4)-GalNAcT酶包含N端6xHis標籤且具有45.7 kDa之整體分子量。在一些實施態樣中，含有N端6xHis標籤之β-(l,4)-GalNAcT酶係衍生自粉紋夜蛾( Trichopulsia ni)。
在一些實施態樣中，過程係在PBS緩衝劑中在pH值約7.4下且在約30℃之溫度下進行。 內切糖苷酶
內切糖苷酶係能切割聚醣結構中之內部糖苷鍵聯的酶，藉此重塑或修剪聚醣結構。例如，當內切糖苷酶切割保守聚醣區域內之可預測位點時，它們可用於異質性聚醣族群的簡易均質化。一種類型的內切糖苷酶包含內切-β-N-乙醯葡萄糖胺酶(EC 3.2.1.96，公知為Endo S或ENGase)，其為藉由水解Ν,Ν'-二乙醯基幾丁二糖核心中之β-l,4-糖苷鍵自糖蛋白移除N-聚醣(如Wong et al. Chem. Rev. 2011, 111, 4259中所述，其全文以引用方式併入本文中)，留下單一核心N-連接GlcNAc殘基之水解酶類型。內切-β-N-乙醯葡萄糖胺酶廣泛見於天然中，常見的化學酶催化性變體包括：Endo D，其對寡甘露糖具特異性；Endo A及Endo H，其對高甘露糖具特異性；Endo F亞型，範圍自高甘露糖至雙觸角複雜型；及Endo M，其可切割除經岩藻糖基化之聚醣以外之大部分N-聚醣結構(高甘露糖/複雜型/雜合型)，且對高甘露糖型寡醣之水解活性顯著高於複雜型及雜合型寡醣。在一些實施態樣中，這些ENGase顯示對遠端N-聚醣結構而非展示其之蛋白質的特異性，使它們可用於在天然條件下自糖蛋白切割大部分N-連接聚醣。
在一些實施態樣中，內切糖苷酶Fl、F2及F3適用於去糖基化天然蛋白質。Endo Fl、F2及F3之鍵聯特異性建議可在不變性蛋白質下移除所有N-連接寡醣類型之去糖基化蛋白質的常規策略。在一些實施態樣中，雙觸角及三觸角結構可分別藉由內切糖苷酶F2及F3立即移除。在一些實施態樣中，寡甘露糖及雜合結構可藉由Endo Fl移除。
Endo S係來自化膿鏈球菌之經分泌之內切糖苷酶，且亦屬於糖苷水解酶家族18，如Collin et al.(EMBO J., 2001, 20, 3046)所揭示，其全文以引用方式併入本文中。相對於以上提及之ENGase，Endo S具有更明確的特異性且僅對人類IgG之Fc結構域中的保守N-聚醣具切割特異性(到目前為止尚未識別其他受質)，建議介於酶與IgG之間的蛋白質交互作用提供此特異性。
Endo S49(亦稱為Endo S2)係描述於WO 2013/037824(其全文以引用方式併入本文中)中，其係自化膿鏈球菌NZ131單離且係Endo S之同源物。Endo S49對天然IgG具有特異性內切糖苷酶活性，且比起Endo S切割更多種類的Fc聚醣。
Endo SH係藉由富含Gly之間隔子連接的二種內切糖苷酶Endo S與Endo H之間的融合物。Endo SH特異性切割聚醣鏈之核心區域中介於二個N-乙醯葡萄糖胺(GluNAc)部份之間的N-連接聚醣。
在一些實施態樣中，用於去糖基化抗體之內切糖苷酶係Endo S、Endo SH、Endo S2、Endo S49、Endo Fl、Endo F2、Endo F3、Endo H、Endo M、Endo A或彼等之組合。在一些實施態樣中，用於去糖基化抗體之內切糖苷酶係Endo S、Endo SH、Endo S2、Endo S49、Endo Fl、Endo F2、Endo F3、Endo H或彼等之組合。在一些實施態樣中，內切糖苷酶係Endo S、Endo SH、Endo S2或Endo S49。
在一些實施態樣中，當待修剪之聚醣係複雜型之雙觸角結構時，內切糖苷酶係Endo S、Endo SH、Endo S2、Endo S49、Endo Fl、Endo F2、Endo F3或彼等之組合。
在一些實施態樣中，當糖蛋白係B7-H4抗體，且待修剪之寡醣係複雜型之雙觸角結構且存在於IgG保守N-糖基化位點N297時，內切糖苷酶係Endo S、Endo SH、Endo S2、Endo S49、Endo Fl、Endo F2、Endo F3或彼等之組合。在一些實施態樣中，內切糖苷酶係Endo S、Endo SH、Endo S2、Endo S49或彼等之組合。
在一些實施態樣中，當糖蛋白係B7-H4抗體，且待修剪之聚醣係複雜型之雙觸角結構且不存在於IgG保守N-糖基化位點N297時，內切糖苷酶係Endo Fl、Endo F2、Endo F3或彼等之組合。
在一些實施態樣中，當待修剪之聚醣係高甘露糖時，內切糖苷酶係Endo H、Endo M、Endo A、Endo F1或彼等之組合。
在一些實施態樣中，當糖蛋白係B7-H4抗體，且待修剪之寡醣係高甘露糖且具有複雜型之雙觸角結構且存在於IgG保守N-糖基化位點N297時，內切糖苷酶係Endo S、Endo SH、Endo S2、Endo S49或彼等之組合。在一些實施態樣中，內切糖苷酶係Endo S或Endo SH。在一些實施態樣中，內切糖苷酶係Endo SH。
在一些實施態樣中，如本文中定義之內切糖苷酶包含編碼便於純化之標籤之序列。在一些實施態樣中，該標籤包括但不限於FLAG標籤、聚(His)標籤、HA標籤、Myc標籤、SUMO標籤、GST標籤、MBP標籤或CBP標籤。在一些實施態樣中，該標籤係6xHis標籤。在一些實施態樣中，該標籤係與內切糖苷酶之酶的C端或內部殘基共價連接。在一些實施態樣中，該標籤係與內切糖苷酶之酶的N端共價連接。
在一些實施態樣中，Endo SH係藉由富含Gly之間隔子連接的二種內切糖苷酶Endo S與Endo H之間的融合物，且包含內部6xHis標籤導致139 kDa之整體分子量。 糖基轉移酶
形成經修飾之B7-H4抗體的過程包含在糖基轉移酶存在下用式S’’(A’’)-P’’之化合物處理具有可選地經岩藻糖基化之末端N-乙醯葡萄糖胺(Gal-NAc)部份的去糖基化/經修剪抗體，以形成具有經由β-1,4-O-糖苷鍵鍵結至抗體的GalNAc部份之C1的GlcNAc-S’’(A’’)取代基之經修飾之B7-H4抗體。
在一些實施態樣中，糖基轉移酶係β-l,4-半乳糖基轉移酶(4Gal-T)、β-(1,4)-乙醯半乳糖胺基轉移酶(β-(l,4)-GalNAcT或GalNAcT)或彼等之突變體。
已在一些生物體中識別β-(1,4)-乙醯半乳糖胺基轉移酶(β-(l,4)-GalNAcT或GalNAcT)，包括人類、秀麗隱桿線蟲(Caenorhabditis elegans)(Kawar et al, J. Biol. Chem. 2002, 277, 34924，其全文以引用方式併入本文中)、黑腹猩猩蠅(Drosophila melanogaster)(Hoskins et al. Science 2007, 316, 1625，其全文以引用方式併入本文中)及粉紋夜蛾(Trichoplusia ni)(Vadaie et al, J. Biol. Chem. 2004, 279, 33501，其全文以引用方式併入本文中)。
β-(l,4)-N-乙醯半乳糖胺基轉移酶(β-(l,4)-GalNAcT)係所屬技術領域中已知。在一些實施態樣中，β-(l,4)-GalNAcT係催化N-乙醯半乳糖胺(GalNAc)自尿苷二磷酸鹽-GalNAc(UDP-GalNAc，亦稱為GalNAc-UDP)轉移至糖蛋白聚醣之末端GlcNAc部份的酶，其中GalNAc部份之C1係經由β-1,4-O-糖苷鍵連接至抗體。在一些實施態樣中，末端GlcNAc部份係經岩藻糖基化。
在一些實施態樣中，本發明之過程所使用之β-(l,4)-GalNAcT酶係或係衍生自無脊椎動物β-(l,4)-GalNAcT酶，諸如例如係或係衍生自無脊椎動物物種來源之β-(l,4)-GalNAcT。β-(1,4)-GalNAcT酶可為或可衍生自所屬技術領域中具有通常知識者已知之任何無脊椎動物β-(l,4)-GalNAcT酶。在一些實施態樣中，β-(l,4)-GalNAcT酶係或係衍生自線形動物門(諸如例如色矛綱( Chromadorea)或胞管腎綱( Secernentea))或節肢動物門( Arthropoda)(諸如例如昆蟲綱( Insecta))來源之β-(l,4)-GalNAcT酶。在一些實施態樣中，β-(l,4)-GalNAcT酶係或係衍生自 秀麗隱桿線蟲、雷曼內隱桿線蟲 (Caenorhabditis remanei) 、布里吉沙耶隱桿線蟲 (Caenorhabditis briggsae) 、豬蛔蟲 (Ascaris suum) 、粉紋夜蛾、黑腹猩猩蠅、潘氏絲狀蟲 (Wuchereria bancrofti) 、羅阿絲狀蟲 (Loa loa) 、畢氏粗角蟻 (Cerapachys biroi) 、內華達古白蟻 (Zootermopsis nevadensis) 、佛羅里達巨山蟻 (Camponotus floridanus) 、長牡蠣 (Crassostrea gigas)或 黑脈金斑蝶 (Danaus plexippus)(例如 秀麗隱桿線蟲、豬蛔蟲、粉紋夜蛾或 黑腹猩猩蠅)來源之β-(l,4)-GalNAcT酶。在一些實施態樣中，β-(l,4)-GalNAcT酶係或係衍生自秀麗隱桿線蟲、豬蛔蟲或粉紋夜蛾來源之β-(l,4)-GalNAcT酶。在其他實施態樣中，β-(l,4)-GalNAcT酶係或係衍生自粉紋夜蛾來源之β-(l,4)-GalNAcT酶。
用語「衍生自(derived from)」包含例如截短型酶、突變體酶、包含便於純化之標籤的酶或這些修飾之組合。衍生自因此係指具有分別藉由取代、插入、刪除或添加一或多個(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、14、16、18、20或超過20個)胺基酸而自天然存在β-(l,4)-GalNAcT酶改變之胺基酸序列。衍生自β-(l,4)-GalNAcT酶之β-(l,4)-GalNAcT酶在本文中亦稱為衍生性β-(1,4)-GalNAcT酶或經修飾之β-(l,4)-GalNAcT酶或β-(l,4)-GalNAcT突變體酶。
在一些實施態樣中，衍生性β-(l,4)-GalNAcT酶係藉由添加額外N端或C端胺基酸或化學部份或藉由刪除N端或C端胺基酸以增加穩定性、溶解度、活性及/或便於純化來修飾。
在一些實施態樣中，β-(l,4)-GalNAcT酶係藉由刪除N端細胞質結構域及跨膜結構域來修飾，稱為截短型酶。
其中已取代、添加或刪除一或多個胺基酸之β-(l,4)-GalNAcT酶在本文中亦稱為突變體β-(l,4)-GalNAcT酶或衍生性β-(l,4)-GalNAcT酶。在一些實施態樣中，β-(l,4)-GalNAcT酶係藉由刪除N端細胞質結構域及跨膜結構域來修飾，且藉由取代一或多個胺基酸來突變。一或多個胺基酸之取代在本文中亦稱為突變。包含一或多個取代之胺基酸之酶亦稱為突變體酶。
在一些實施態樣中，當糖基轉移酶係β-(l,4)-GalNAcT酶或截短型β-(l,4)-GalNAcT酶時，該酶進一步包含一或多個突變。在一些實施態樣中，這些突變包括但不限於位置257之異白胺酸(He，亦稱為I)被白胺酸(Leu，亦稱為L)、甲硫胺酸(Met，亦稱為M)或丙胺酸(Ala，亦稱為A)取代。在一些實施態樣中，亦包括位置312之甲硫胺酸(Met，亦稱為M)被組胺酸(His，亦稱為H)取代。應注意的是胺基酸位置的編號在本文中係基於野生型β-(l,4)-GalNAcT酶中之胺基酸位置的編號。當β-(l,4)-GalNAcT酶係例如截短型酶時，在本文中用於指示胺基酸取代之位置的數字對應相對野生型β-(l,4)-GalNAcT酶中之胺基酸位置的編號。
在一些實施態樣中，糖基轉移酶係包含突變體催化結構域之β(l,4)-GalT酶。
催化結構域可具有見於野生型酶之胺基酸序列或具有異於野生型序列之胺基酸序列。具有異於野生型序列之胺基酸序列的催化結構域在本文中稱為突變體催化結構域。在一些實施態樣中，突變可包含單一胺基酸改變(例如，點突變)或多個胺基酸改變(例如，1至10、或1至6、或1、2、3或4、或1或2個胺基酸)、或刪除或插入一或多個胺基酸(例如，1至10、或1至6、或1、2、3或4、或1或2個)胺基酸。在一些實施態樣中，該突變體催化結構域可存在於全長酶，例如，β(l,4)-半乳糖基轉移酶或α(l,3)-N-半乳糖基轉移酶，但亦可存在於可選地與額外胺基酸連接之包含該突變體催化結構域的多肽片段或重組多肽。
β(l,4)-半乳糖基轉移酶I在本文中稱為GalT。該突變體GalT催化結構域係揭示於例如WO 2004/063344，其全文以引用方式併入本文中。WO 2004/063344亦揭示GalT之Tyr-289突變體及彼等之製備方法。這些突變體稱為Y289L、Y289N或Y289I。
在一些實施態樣中，GalT突變體催化結構域係Y289L、Y289N、Y289I、Y284L或R228K。在一些實施態樣中，GalT突變體催化結構域係Y289L。
在一些實施態樣中，GalT Y289F、GalT Y289M、GalT Y289V、GalT Y289G、GalT Y289I、GalT Y289A、GalT Y289N及GalT Y289L突變體可經由描述於例如WO2004063344、Qasba et al, Prot. Expr. Pur. 2003, 30, 219及Qasba et al, J. Biol. Chem. 2002, 277, 20833(所有全文以引用方式併入本文中)中之定點突變形成過程產生。在GalT Y289F中，位置289之酪胺酸胺基酸(Y)係置換成苯基丙胺酸(F)胺基酸；在GalT Y289M中，該酪胺酸係置換成甲硫胺酸(M)胺基酸；在GalT Y289V中置換成纈胺酸(V)胺基酸；在GalT Y289G中置換成甘胺酸(G)胺基酸；在GalT Y289I中置換成異白胺酸(I)胺基酸；且在Y289A中置換成丙胺酸(A)胺基酸。
在一些實施態樣中，β-(l,4)-GalNAcT酶包含編碼便於純化之標籤之序列。在一些實施態樣中，該標籤包括但不限於FLAG標籤、聚(His)標籤、HA標籤、Myc標籤、SUMO標籤、GST標籤、MBP標籤或CBP標籤。在其他實施態樣中，該標籤係6xHis標籤。在一些實施態樣中，該標籤係與β-(l,4)-GalNAcT酶之酶的C端共價連接。在一些實施態樣中，該標籤係與β-(l,4)-GalNAcT酶之酶的N端共價連接。
在一些實施態樣中，β-(l,4)-GalNAcT酶包含N端6xHis標籤且具有45.7 kDa之整體分子量。在一些實施態樣中，含有N端6xHis標籤之β-(l,4)-GalNAcT酶係衍生自粉紋夜蛾( Trichopulsia ni)。 P”-S”-A”分子
在一些實施態樣中，用於製備本揭露之經修飾之B7-H4抗體的過程之P”-S”-A”分子可為任何係為合適半乳糖基轉移酶催化劑之受質的糖衍生核苷酸。
在一些實施態樣中，S”-A”係糖衍生部份，其中：
S”係糖或衍生糖；且A”係能與連接子-藥物部份的官能基形成共價鍵之官能基。
在一些實施態樣中，A”係疊氮基、酮基或炔基部份。在一些實施態樣中，A”係疊氮基或酮基部份。在一些實施態樣中，A”係疊氮基部份。在一些實施態樣中，A”係-N 3。在一些實施態樣中，A”係酮基部份。
在一些實施態樣中，A”係-[C(R 8k) 2] x2C(O)R 9k，其中： R 9k係甲基或可選地經取代的C 2-24烷基； 各R 8k獨立地係氫、鹵素或R 9k；且 x 2係範圍為0至24的整數。
在一些實施態樣中，x 2係範圍為0至10的整數。在一些實施態樣中，x 2係0、1、2、3、4、5或6。
在一些實施態樣中，各R 8k係氫。
在一些實施態樣中，A”係炔基部份。在一些實施態樣中，A”係末端炔基、環炔基或雜環炔基部份。在一些實施態樣中，A”係末端炔基部份。在一些實施態樣中，A”係環炔基部份。在一些實施態樣中，A”係雜環炔基部份。
在一些實施態樣中，A”係-[C(R 8k) 2] x2-C≡C-R 8k基團，其中R 8k及x 2係如本文中所定義。在一些實施態樣中，A”係-[CH 2] x2-C≡CH。
在一些實施態樣中，S”-A”係衍生自糖或衍生糖，例如胺基糖或其他方式衍生糖。在一些實施態樣中，糖及衍生糖之實例包括但不限於半乳糖(Gal)、甘露糖(Man)、葡萄糖(Glc)、葡萄醣醛酸(Gcu)及岩藻糖(Fuc)。應理解胺基糖係其中羥基(OH)基團係置換成胺基之糖。胺基糖之實例包括但不限於N-乙醯葡萄糖胺(GlcNAc)及N-乙醯半乳糖胺(GalNAc)。其他方式衍生糖之實例包括但不限於葡萄醣醛酸(Gcu)及N-乙醯神經胺糖酸(唾液酸)。
在一些實施態樣中，S”-A”係衍生自半乳糖(Gal)、甘露糖(Man)、N-乙醯葡萄糖胺(GlcNAc)、葡萄糖(Glc)、N-乙醯半乳糖胺(GalNAc)、葡萄醣醛酸(Gcu)、岩藻糖(Fuc)或N-乙醯神經胺糖酸(唾液酸)。在一些實施態樣中，S”-A”係衍生自GlcNAc、Glc、Gal或GalNAc。在一些實施態樣中，S”-A”係衍生自GlcNAc。在一些實施態樣中，S”-A”係衍生自Glc。在一些實施態樣中，S”-A”係衍生自Gal或GalNAc。在一些實施態樣中，S”-A”係衍生自Gal。在一些實施態樣中，S”-A”係衍生自GalNAc。
在一些實施態樣中，官能基A”可以各種方式連接至S”。
在一些實施態樣中，A”係直接連接至S”之糖或衍生糖的C2、C3、C4或C6位置的碳原子(例如，而非在對應位置的羥基)。
在一些實施態樣中，S”係岩藻糖或衍生岩藻糖，其缺乏任何羥基C6位置。在一些實施態樣中，當A”係連接至岩藻糖或衍生岩藻糖之C6位置時，A”係直接連接至C6位置的碳原子。
在一些實施態樣中，A”係疊氮基部份，且A”係連接至S”之糖或衍生糖的C2、C4或C6位置。
在一些實施態樣中，A”係疊氮基部份，且A”係直接連接至S”之糖或衍生糖的C2、C3、C4或C6位置的碳原子(例如，而非在對應位置的羥基)。在一些實施態樣中，S”-A”係6-疊氮基岩藻糖(6-AzFuc)。在一些實施態樣中，A”係疊氮基部份，且A”係連接至胺基糖或衍生胺基糖(例如，藉由用疊氮基乙醯基部份置換乙醯基部份)的N-乙醯基部份。在一些實施態樣中，S”-A”係2-疊氮基乙醯胺基半乳糖(GalNAz)、6-疊氮基-6-去氧半乳糖(6-AzGal)、6-疊氮基-6-去氧-2-乙醯胺基半乳糖(6-AzGalNAc)、4-疊氮基-4-去氧-2-乙醯胺基半乳糖(4-AzGalNAc)、6-疊氮基-6-去氧-2-疊氮基乙醯胺基半乳糖(6-AzGalNAz)、2-疊氮基乙醯胺基葡萄糖(GlcNAz)、6-疊氮基-6-去氧葡萄糖(6-AzGlc)、6-疊氮基-6-去氧-2-乙醯胺基葡萄糖(6-AzGlcNAc)、4-疊氮基-4-去氧-2-乙醯胺基葡萄糖(4-AzGlcNAc)或6-疊氮基-6-去氧-2-疊氮基乙醯胺基葡萄糖(6-AzGlcNAz)。在一些實施態樣中，S”-A”係GalNAz、4-AzGalNAc、GlcNAz或6-AzGlcNAc。
在一些實施態樣中，P”-S”-A”係式(XXIVb)、(XXXIVc)或(XXIVd)之化合物或彼等之鹽。
在一些實施態樣中，A”係酮基，且A”係直接連接至S”之糖或衍生糖的C2位置的碳原子(例如，而非在對應位置的羥基)。
在一些實施態樣中，A”係連接至胺基糖或衍生胺基糖(例如C2-衍生胺基糖)的氮原子。在一些實施態樣中，衍生胺基糖包含-NC(O)-R 9k部份，其中R 9k係甲基或可選地經取代之C 2-24烷基(例如乙基)。
在一些實施態樣中，R 9k係乙基。
在一些實施態樣中，S”-A”係2-去氧-(2-側氧基丙基)-半乳糖(2-酮基-Gal)、2-N-丙醯基-半乳糖胺(2-N-丙醯基Gal-NAc)、2-N-(4-側氧基戊醯基)-半乳糖胺(2-N-Lev-Gal)或2-N-丁醯基-半乳糖胺(2-N-丁醯基-GalNAc)。在一些實施態樣中，S”-A”係2-酮基GalNAc或2-N-丙醯基-GalNAc。
在一些實施態樣中，P”-S”-A”係式(XXIVe)或(XXIVf)之化合物或彼等之鹽。
在一些實施態樣中，A”係末端炔基、環炔基或雜環炔基。在一些實施態樣中，A”係連接至S”的C2-衍生胺基糖。
在一些實施態樣中，S”-A”係2-(丁-3-炔酸醯胺基)-2-去氧-半乳糖。
在一些實施態樣中，P”-S”-A”係式(XXIVg)之化合物或彼等之鹽。在一些實施態樣中，P”-S”-A”係式(XXIVd)之化合物或彼等之鹽。
在一些實施態樣中，P”-S”-A”之化合物可根據各種所屬技術領域中已知之方法合成。在一些實施態樣中，化合物係藉由連接核苷單磷酸鹽或核苷二磷酸鹽P”與糖衍生物
Figure 02_image588
合成，例如在Wang et al.( Chem. Eur. J. 16: 13343-13345(2010))、Piller et al.( ACS Chem. Biol.7: 753(2012))、Piller et al.( Bioorg. Med. Chem. Lett. 15: 5459-5462(2005)及PCT申請案公開號WO/2009/102820中揭示，其等之各者全文以引用方式併入本文中。
在一些實施態樣中，P”係核苷單磷酸鹽或二磷酸鹽。在一些實施態樣中，P”係尿苷二磷酸鹽(UDP)、鳥苷二磷酸鹽(GDP)、胸苷二磷酸鹽(TDP)、胞苷二磷酸鹽(CDP)或胞苷單磷酸鹽(CMP)。在一些實施態樣中，P”係尿苷二磷酸鹽(UDP)。
在一些實施態樣中，P”-S”-A”係式(XXIVb)、(XXIVc)、(XXIVd)、(XXIVe)、(XXIVf)或(XXIVg)之化合物：
Figure 02_image590
或彼等之鹽，其中：R 9k係C 2-24烷基。
在一些實施態樣中，P”-S”-A”係GalNAz-UDP(例如式(XXIVb))、6-AzGal-UDP(例如式(XXIVc))、6-AzGalNAc-UDP(例如式(XXIVd))、4-AzGalNAz-UDP、6-AzGalNAz-UDP、6-AzGlc-UDP、6-AzGlcNAz-UDP、2-酮基Gal-UDP(例如式(XXIVe))、2-N-丙醯基GalNAc-UDP(例如式(XXIVf)，其中R 9k係乙基)或2-(丁-3-炔酸醯胺基)-2-去氧-半乳糖-UDP(例如式(XXIVg))。
在一些實施態樣中，P”-S”-A”係GalNAz-UDP或4-AzGalNAc-UDP。在一些實施態樣中，P”-S”-A”係式(XXIVb)或(XXIVd)之化合物。GalNAz-UDP(例如式(XXIVb))及6-AzGalNAc-UDP(例如式(XXIVd))之合成係揭示於Piller et al.( Bioorg.Med. Chem. Lett.15: 5459-5462 (2005))及Wang et al.( Chem. Eur. J.16: 13343-13345 (2010))，其等之各者全文以引用方式併入本文中。
在一些實施態樣中，P”-S”-A”係4-AzGalNAc-UDP。在一些實施態樣中，P”-S”-A”係式(XXIVd)之化合物或彼等之鹽。2-酮基Gal-UDP(XXIVe)之合成係揭示於Qasba et al.( J. Am. Chem. Soc.125: 16162(2003))及其支援資訊中，其兩者全文皆以引用方式併入本文中。
2-(丁-3-炔酸醯胺基)-2-去氧-半乳糖-UDP之合成係揭示於PCT申請案公開號WO/2009/102820，其全文係以引用方式併入本文中。 可變d 13
在一些實施態樣中，d 13係範圍約2至約14、約2至約12、約2至約10、約2至約8、約2至約6、約2至約4、約4至約10、約4至約8、約4至約6、約6至約14、約6至約12、約6至約10、約6至約8、約8至約14、約8至約12或約8至約10的整數。
在一些實施態樣中，d 13係範圍約2至約8的整數。
在一些實施態樣中，d 13係2、4、6或8。在一些實施態樣中，d 13係2、6或8。在一些實施態樣中，d 13係8。在一些實施態樣中，d 13係6。在一些實施態樣中，d 13係2。 B7-H4抗體-藥物共軛體
在一些實施態樣中，本揭露之共軛體包含一或多次出現之D，其中D係細胞毒性藥物部份或STING的促效劑藥物部份，其中一或多次出現之D可為相同或不同。
在一些實施態樣中，一或多次出現之B7-H4抗體或B7-H4經修飾之抗體係與連接子-藥物部份連接，其中一或多次出現之B7-H4抗體或B7-H4經修飾之抗體可為相同或不同。在一些實施態樣中，包含一或多次出現之D的一或多個連接子-藥物部份係連接至一個B7-H4抗體或B7-H4經修飾之抗體。
在一些實施態樣中，B7-H4抗體係B7-H4抗體或經半胱胺酸工程改造之B7-H4抗體。
在一些實施態樣中，可例如根據所揭示之技術及方法將本文所述之靶向配體、連接子及藥物或前藥片段組裝成本揭露之共軛體或支架。本揭露之治療性及靶向共軛體及用於產生彼等之方法係藉由以下非限制性實例描述。
在一些實施態樣中，在連接子-藥物部份與B7-H4抗體或經半胱胺酸工程改造之B7-H4抗體之間形成的雙硫鍵總數(或連接點總數)係10或小於10(例如8、6、4或2)。
在一些實施態樣中，在連接子-藥物部份與B7-H4抗體或經半胱胺酸工程改造之B7-H4抗體之間形成的雙硫鍵總數(或連接點總數)係8或小於8。
在一些實施態樣中，在連接子-藥物部份與B7-H4抗體或經半胱胺酸工程改造之B7-H4抗體之間形成的雙硫鍵總數(或連接點總數)係8。在一些實施態樣中，在連接子-藥物部份與B7-H4抗體或經半胱胺酸工程改造之B7-H4抗體之間形成的雙硫鍵總數(或連接點總數)係6。在一些實施態樣中，在連接子-藥物部份與B7-H4抗體或經半胱胺酸工程改造之B7-H4抗體之間形成的雙硫鍵總數(或連接點總數)係5。在一些實施態樣中，在連接子-藥物部份與B7-H4抗體或經半胱胺酸工程改造之B7-H4抗體之間形成的雙硫鍵總數(或連接點總數)係4。在一些實施態樣中，在連接子-藥物部份與B7-H4抗體或經半胱胺酸工程改造之B7-H4抗體之間形成的雙硫鍵總數(或連接點總數)係3。在一些實施態樣中，在連接子-藥物部份與B7-H4抗體或經半胱胺酸工程改造之B7-H4抗體之間形成的雙硫鍵總數(或連接點總數)係2。
在一些實施態樣中，連接子-藥物部份與B7-H4抗體之間的比例係介於約1:1與約8:1之間。在一些實施態樣中，連接子-藥物部份與B7-H4抗體或經半胱胺酸工程改造之B7-H4抗體之間的比例係介於約1:1與約6:1之間。在一些實施態樣中，連接子-藥物部份與B7-H4抗體之間的比例係介於約1:1與約4:1之間。在一些實施態樣中，連接子-藥物部份與B7-H4抗體或經半胱胺酸工程改造之B7-H4抗體之間的比例係介於約2:1與約2:1之間。
在一些實施態樣中，連接子-藥物部份與B7-H4抗體或經半胱胺酸工程改造之B7-H4抗體之間的比例係介於約6:1與約8:1之間。
在一些實施態樣中，連接子-藥物部份與B7-H4抗體或經半胱胺酸工程改造之B7-H4抗體之間的比例係約8:1。
在一些實施態樣中，連接子-藥物部份與B7-H4抗體之間的比例係約6:1。
在一些實施態樣中，本揭露亦關於連接子-藥物部份，其包含至少二個部份，其中各部份係能與B7-H4抗體或經半胱胺酸工程改造之B7-H4抗體中之氫硫基共軛以形成蛋白質-連接子-藥物共軛體。
在一些實施態樣中，B7-H4抗體或經半胱胺酸工程改造之B7-H4抗體之一或多個氫硫基係藉由還原蛋白生產。接著B7-H4抗體或經半胱胺酸工程改造之B7-H4抗體之一或多個氫硫基可與一或多個連接子-藥物部份反應，該一或多個連接子-藥物部份能將B7-H4抗體或經半胱胺酸工程改造之B7-H4抗體之氫硫基與連接子-藥物部份共軛。在一些實施態樣中，連接至B7-H4抗體或經半胱胺酸工程改造之B7-H4抗體之至少二個部份係順丁烯二醯亞胺基團。在這些實施態樣中，D係細胞毒性藥物部份或STING的促效劑藥物部份。
在一些實施態樣中，抗體可藉由還原劑諸如DTT(Cleland氏試劑、二硫蘇糖醇)或TCEP(三(2-羧基乙基)膦鹽酸鹽)處理活化以與連接子-藥物部份共軛。在一些實施態樣中，全長、單株抗體可以過量之TCEP還原以還原雙硫鍵(例如介於存在於對應親代抗體或經半胱胺酸工程改造之抗體中之半胱胺酸之間)以產生抗體的還原形式。新導入及不成對半胱胺酸可維持可用於與連接子-藥物部份反應以形成本揭露之抗體共軛體。在一些實施態樣中，添加過量之連接子-藥物部份以致效共軛且形成抗體-藥物共軛體，且將共軛混合物純化以移除過量連接子-藥物中間物及其他雜質。
在一些實施態樣中，B7-H4抗體或經半胱胺酸工程改造之B7-H4與連接子-藥物部份之比例係約1:1與約1:8之間；約1:1與約1:6之間；約1:1與約1:5之間；約1:1與約1:4之間；約1:1與約1:3之間；或約1:1與約1:2之間。
在本文中揭示之共軛體可藉由大量滲濾純化(即移除任何起始材料)。若需要，可藉由粒徑排阻層析法進行額外純化以移除任何聚集的共軛體。一般來說，經純化之共軛體通常含有如藉由SEC所測定之小於5%(例如＜2% w/w)聚集的共軛體；如藉由RP-HPLC所測定之小於0.5%(例如＜0.1% w/w)游離(非共軛)藥物；如藉由SEC所測定之小於1%攜帶藥物含肽支架；及如藉由HIC-HPLC所測定之小於2%(例如＜1% w/w)非共軛B7-H4抗體。
在一些實施態樣中，與STING的促效劑藥物部份共軛之B7-H4抗體或經半胱胺酸工程改造之B7-H4係選自表A1及表A2所述之共軛體。
Figure 02_image592
Figure 02_image594
Figure 02_image596
Figure 02_image598
Figure 02_image600
Figure 02_image602
其中d 13、R 14、R 15、R 16、R 17、R 18、R 19、R C1、R C2、R 4、X 3、X 4 、X 6、X 7、X 1、W 1、Y 1、Z 1、X 2、W 2、Y 2、Z 2係如本文中所定義且抗體係B7-H4抗體或經半胱胺酸工程改造之B7-H4抗體。
在一些實施態樣中，以表A1中之共軛體而言，d 13係6至8的整數。
在一些實施態樣中，以表A1中之共軛體而言，d 13係8。在一些實施態樣中，以表A1中之共軛體而言，d 13係7。在一些實施態樣中，以表A1中之共軛體而言，d 13係6。
在一些實施態樣中，以表A1中之共軛體而言，d 13係8。
Figure 02_image604
Figure 02_image606
Figure 02_image608
Figure 02_image610
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Figure 02_image632
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Figure 02_image638
Figure 02_image640
Figure 02_image642
Figure 02_image644
Figure 02_image646
Figure 02_image648
Figure 02_image650
其中d 13係如本文中所定義且抗體係B7-H4抗體或經半胱胺酸工程改造之B7-H4抗體。
在一些實施態樣中，以表A2中之共軛體而言，d 13係6至8的整數。
在一些實施態樣中，以表A2中之共軛體而言，d 13係8。在一些實施態樣中，以表A2中之共軛體而言，d 13係7。在一些實施態樣中，以表A2中之共軛體而言，d 13係6。
在一些實施態樣中，以表A2中之共軛體而言，d 13係8。
在一些實施態樣中，STING的促效劑藥物共軛體係：
Figure 02_image652
Figure 02_image654
其中d 13係8，且抗體係B7-H4抗體或經半胱胺酸工程改造之B7-H4抗體， 其中該B7-H4抗體包含可變重鏈互補決定區1(CDRH1)、可變重鏈互補決定區2(CDRH2)、可變重鏈互補決定區3(CDRH3)、可變輕鏈互補決定區1(CDRL1)、可變輕鏈互補決定區2(CDRL2)及可變輕鏈互補決定區3 (CDRL3)，該CDRH1包含胺基酸序列GFIVSRNY(SEQ ID NO: 2)，該CDRH2包含胺基酸序列IYGSGRT(SEQ ID NO: 3)，該CDRH3包含胺基酸序列ARDADYGLDV(SEQ ID NO: 16)或胺基酸序列ARDADYGMDV(SEQ ID NO: 10)，該CDRL1包含胺基酸序列QSVSSSY(SEQ ID NO: 53)，該CDRL2包含胺基酸序列GAS(SEQ ID NO: 54)，且該CDRL3包含胺基酸序列QQYGSSPLYT(SEQ ID NO: 55)。
在一些實施態樣中，STING的促效劑藥物共軛體係：
Figure 02_image656
其中d 13係8，且抗體係B7-H4抗體或經半胱胺酸工程改造之B7-H4抗體， 其中該B7-H4抗體包含可變重鏈互補決定區1(CDRH1)、可變重鏈互補決定區2(CDRH2)、可變重鏈互補決定區3(CDRH3)、可變輕鏈互補決定區1(CDRL1)、可變輕鏈互補決定區2(CDRL2)及可變輕鏈互補決定區3(CDRL3)，該CDRH1包含胺基酸序列GFIVSRNY(SEQ ID NO: 2)，該CDRH2包含胺基酸序列IYGSGRT(SEQ ID NO: 3)，該CDRH3包含胺基酸序列ARDADYGLDV(SEQ ID NO: 16)或胺基酸序列ARDADYGMDV(SEQ ID NO: 10)，該CDRL1包含胺基酸序列QSVSSSY(SEQ ID NO: 53)，該CDRL2包含胺基酸序列GAS(SEQ ID NO: 54)，且該CDRL3包含胺基酸序列QQYGSSPLYT(SEQ ID NO: 55)。
在一些實施態樣中，STING的促效劑藥物共軛體係：
Figure 02_image658
其中d 13係8且抗體係B7-H4抗體，或d 13係2且抗體係經半胱胺酸工程改造之B7-H4抗體， 其中該B7-H4抗體包含可變重鏈互補決定區1 (CDRH1)、可變重鏈互補決定區2(CDRH2)、可變重鏈互補決定區3(CDRH3)、可變輕鏈互補決定區1(CDRL1)、可變輕鏈互補決定區2(CDRL2)及可變輕鏈互補決定區3(CDRL3)，該CDRH1包含胺基酸序列GFIVSRNY(SEQ ID NO: 2)，該CDRH2包含胺基酸序列IYGSGRT(SEQ ID NO: 3)，該CDRH3包含胺基酸序列ARDADYGLDV(SEQ ID NO: 16)或胺基酸序列ARDADYGMDV(SEQ ID NO: 10)，該CDRL1包含胺基酸序列QSVSSSY(SEQ ID NO: 53)，該CDRL2包含胺基酸序列GAS(SEQ ID NO: 54)，且該CDRL3包含胺基酸序列QQYGSSPLYT(SEQ ID NO: 55)。
在一些實施態樣中，與細胞毒性藥物部份共軛之B7-H4抗體或經半胱胺酸工程改造之B7-H4係選自表B1所述之共軛體。
Figure 02_image660
Figure 02_image662
Figure 02_image664
Figure 02_image666
Figure 02_image668
Figure 02_image670
Figure 02_image672
Figure 02_image674
Figure 02_image676
Figure 02_image678
Figure 02_image680
Figure 02_image682
Figure 02_image684
Figure 02_image686
Figure 02_image688
Figure 02_image690
其中d 13係如本文中所定義且抗體係B7-H4抗體或經半胱胺酸工程改造之B7-H4抗體。
在一些實施態樣中，與細胞毒性藥物部份共軛之B7-H4抗體或經半胱胺酸工程改造之B7-H4抗體係下式(XXX)之共軛體：
Figure 02_image692
其中各R A係：
Figure 02_image694
其中：d 13係2、4、6或8。
在其他實施態樣中，與細胞毒性藥物部份共軛之B7-H4抗體或經半胱胺酸工程改造之B7-H4抗體係式(XXX)之共軛體， 其中各R A係
Figure 02_image696
、
Figure 02_image698
、
Figure 02_image700
、
Figure 02_image702
、
Figure 02_image704
、
Figure 02_image706
、
Figure 02_image708
、
Figure 02_image710
或
Figure 02_image712
； 其中： d 13係2、4、6或8。
在一些實施態樣中，與細胞毒性藥物部份共軛之B7-H4抗體或經半胱胺酸工程改造之B7-H4抗體係式(XXX)之共軛體，其中各R A係：
Figure 02_image714
。
在一些實施態樣中，與細胞毒性藥物部份共軛之B7-H4抗體或經半胱胺酸工程改造之B7-H4抗體係下式(XXXI-1)、(XXXI-2)、(XXXI-3)或(XXXI-4)之共軛體：
Figure 02_image716
在一些實施態樣中，與細胞毒性藥物部份共軛之B7-H4抗體或經半胱胺酸工程改造之B7-H4抗體係下式(XXXII)之共軛體：
Figure 02_image718
。
在一些實施態樣中，與細胞毒性藥物部份共軛之B7-H4抗體或經半胱胺酸工程改造之B7-H4抗體係下式(XXXII)之共軛體：
Figure 02_image720
其中各R B係：
Figure 02_image722
、
Figure 02_image724
、
Figure 02_image726
、
Figure 02_image728
、
Figure 02_image730
或
Figure 02_image732
。
在一些實施態樣中，與細胞毒性藥物部份共軛之B7-H4抗體或經半胱胺酸工程改造之B7-H4抗體係式(XXXI-1)、(XXXI-2)、(XXXI-3)、(XXXI-4)或(XXXII)之共軛體，其中可變L D-D係：
Figure 02_image734
Figure 02_image736
。
在一些實施態樣中，與細胞毒性藥物部份共軛之B7-H4抗體或經半胱胺酸工程改造之B7-H4抗體係式(XXXI-1)、(XXXI-2)、(XXXI-3)、(XXXI-4)或(XXXII)之共軛體，其中可變L D-D係：
Figure 02_image738
。
在一些實施態樣中，與細胞毒性藥物部份共軛之B7-H4抗體或經半胱胺酸工程改造之B7-H4抗體係下式(XXXXIII-3)之共軛體：
Figure 02_image740
其中各R A係：
Figure 02_image742
在一些實施態樣中，與細胞毒性藥物部份共軛之B7-H4抗體或經半胱胺酸工程改造之B7-H4抗體係下式(XXXXIII-8)之共軛體：
Figure 02_image744
在一些實施態樣中，與細胞毒性藥物部份共軛之B7-H4抗體或經半胱胺酸工程改造之B7-H4抗體係下式(XXXIII-5)之共軛體：
Figure 02_image746
Figure 02_image748
其中d 13係如本文中所定義。
在一些實施態樣中，與細胞毒性藥物部份共軛之B7-H4抗體或經半胱胺酸工程改造之B7-H4抗體係下式(XXXIII-8)之共軛體：
Figure 02_image750
其中d 13係如本文中所定義。 經修飾之 B7-H4 抗體 - 藥物共軛體
在一些實施態樣中，本揭露之經修飾之B7-H4抗體-藥物共軛體可藉由使本揭露之經修飾之B7-H4抗體與連接子-藥物部份反應而獲得，該連接子-藥物部份包含能與經修飾之B7-H4抗體中之經修飾之GlcNAc部份
Figure 02_image578
的官能基A”形成共價鍵之官能基(例如W P)。
在一些實施態樣中，W P包含炔基，例如環炔基、雜環炔基或末端炔基。
在一些實施態樣中，經修飾之B7-H4抗體的官能基A”係疊氮基、酮基或炔基。在一些實施態樣中，經修飾之B7-H4抗體的官能基A”係疊氮基。在一些實施態樣中，經修飾之B7-H4抗體的疊氮基官能基A”與連接子-藥物部份之W P的炔基(例如環炔基、雜環炔基或末端炔基)反應以形成三唑部份(例如經由環加成反應)。疊氮基與炔基的環加成反應在所屬技術領域中稱為「點擊化學(click chemistry)」。
在一些實施態樣中，連接子-藥物部份之W P包含末端炔基，且環加成反應可在催化劑(例如Cu(I)催化劑)存在下實施。
在一些實施態樣中，連接子-藥物部份之W P包含環炔基或雜環炔基(例如應變環炔基或雜環炔基)。
在一些實施態樣中，連接子-藥物部份之W P包含應變環炔基或雜環炔基，且環加成反應可在催化劑存在或不存在下實施。在一些實施態樣中，環加成反應可藉由稱為應變促進的疊氮-炔烴環加成(SPAAC)之反應自行發生，其在所屬技術領域中稱為「無金屬點擊化學(metal-free click chemistry)」。在一些實施態樣中，應變環炔基或雜環炔基係如本文所述。
在一些實施態樣中，在共軛時，經修飾之B7-H4抗體的官能基A”與連接子-藥物部份的W P形成三唑部份。
在一些實施態樣中，在共軛時，經修飾之B7-H4抗體的官能基A”與連接子-藥物部份的W P形成下式(XXXV)之三唑部份：
Figure 02_image753
(XXXV)，其中*表示直接或間接連接至經修飾之B7-H4抗體的其他部分；且**指示與M p(當存在時)連接，或與L M或M A連接。
在一些實施態樣中，當本揭露之經疊氮修飾之B7-H4抗體係與包含炔基之連接子-藥物部份反應以形成抗體-藥物共軛體時，抗體-藥物共軛體中所形成之三唑部份可抗水解及/或其他降解途徑。
在一些實施態樣中，當本揭露之經醛或酮修飾之B7-H4抗體係與包含羥胺或肼之連接子-藥物部份反應時，經修飾之B7-H4抗體-藥物共軛體中所形成之肟或腙部份在中性條見下可相對惰性。
在一些實施態樣中，本揭露之經修飾之B7-H4抗體-藥物共軛體可具有高穩定性。
在一些實施態樣中，本揭露之經修飾之B7-H4抗體及經修飾之B7-H4抗體-藥物共軛體可藉由實用合成途徑合成，因為用於將官能基A”(例如疊氮基、酮基或炔基)導入抗體中之過程係直觀且通常可行的。
在一些實施態樣中，本揭露之位點特異性B7-H4抗體-藥物共軛體係藉由過程獲得，該過程包含使經修飾之B7-H4抗體與連接子-藥物部份反應，其中： 連接子-藥物部份包含環炔基或雜環炔基， 經修飾之B7-H4抗體在共軛之前包含B7-H4抗體及經修飾之GlcNAc部份
Figure 02_image578
，該經修飾之GlcNAc部份經由GlcNAc之C1位置連接至B7-H4抗體；GlcNAc係N-乙醯葡萄糖胺；S”係糖或衍生糖；且A”係疊氮基。
在一些實施態樣中，A”係環炔基或雜環炔基。在一些實施態樣中，A”係環炔基。在一些實施態樣中，A”係雜環炔基。
在一些實施態樣中，A”係應變環炔基或雜環炔基。在一些實施態樣中，A”係應變環炔基。在一些實施態樣中，A”係應變雜環炔基。
在一些實施態樣中，本揭露之位點特異性B7-H4抗體-藥物共軛體係藉由過程獲得，該過程包含下列步驟： (a)使式(XXII)之中間物抗體：
Figure 02_image756
(XXII)；其中： Ab係B7-H4抗體；GlcNAc係N-乙醯葡萄糖胺；Fuc係岩藻糖；u 3係0或1；且d 13係範圍為1至12的整數； 與化合物
Figure 02_image580
，其中： S”係糖或衍生糖；A”係疊氮基；且P係尿苷二磷酸鹽(UDP)、鳥苷二磷酸鹽(GDP)或胞苷二磷酸鹽(CDP)； 在半乳糖基轉移酶存在下接觸，藉此形成包含經修飾之GlcNAc部份
Figure 02_image578
(可選地，經修飾之GlcNAc部份係經由GlcNAc之C1位置連接至經修飾之抗體的其他部分)的經修飾之B7-H4抗體；及 (b)使經修飾之B7-H4抗體與包含應變環炔基或雜環炔基之連接子-藥物部份反應，藉此形成抗體-藥物共軛體。
在一些實施態樣中，用於製備位點特異性B7-H4抗體-藥物共軛體之過程係描繪於圖5。
在一些實施態樣中，在抗體之各胺基酸N297包含疊氮基之經修飾之B7-H4抗體係藉由無金屬點擊化學與包含應變環炔基或雜環炔基之連接子-藥物部份共軛以形成本揭露之位點特異性抗體-藥物共軛體。
在一些實施態樣中，當經修飾之B7-H4抗體包含至少一個疊氮基部份且連接子-藥物部份包含應變環炔基時，銅催化劑的存在並非經修飾之抗體中之疊氮基與連接子-藥物部份中之應變環炔基或雜環炔基之間的環加成反應所需。在一些實施態樣中，環加成反應在銅催化劑不存在下進行，其可減輕在過程中使用銅催化劑之數個可能的缺點。
在一些實施態樣中，Cu(I)催化劑通常係抗體之疊氮基部份與末端炔烴部份之環加成所需。在一些實施態樣中，可能需要大幅最佳化及微調條件以找到有效轉換之最佳參數。然而，即使在此類條件下，無法總是完全避免反應性氧物種的伴發形成，其進而可能誘導對抗體/蛋白質的氧化性損害(例如甲硫胺酸、組胺酸、半胱胺酸或雙硫鍵的氧化)。其他規程採用Cu(I)來源(諸如CuBr)以標示固定細胞及合成糖蛋白。在這些情況中，Cu(I)在空氣中的不穩定性導致需要大量過量的Cu(例如大於4 mm)及配體以有效反應，其亦可升高抗體/蛋白質損害或沉澱的風險，加上純化後存在殘餘金屬。因此，含疊氮基之抗體與末端炔烴在銅催化劑存在下之共軛可導致藉由非所欲之胺基酸氧化形成大量副產物。
在一些實施態樣中，(例如，在抗體之各胺基酸N297)包含疊氮基之經修飾之B7-H4抗體係(例如，藉由無金屬點擊化學)與包含應變環炔基或雜環炔基之連接子-藥物部份共軛。
在一些實施態樣中，在共軛時，經修飾之B7-H4抗體的疊氮基部份與連接子-藥物部份的應變環炔基或雜環炔基形成下式(XXXV)之三唑部份：
Figure 02_image760
(XXXV)，其中*表示直接或間接連接至經修飾之抗體的其他部分；且**指示與M p(當存在時)連接，或與L M或M A連接。
在一些實施態樣中，本揭露之B7-H4抗體-藥物共軛體包含一或多次出現之D，其中各D獨立地係治療劑(例如細胞毒性藥物部份)，其中一或多次出現之D可為相同或不同。
在一些實施態樣中，B7-H4抗體之一或多個特異性位點係與連接子-藥物部份連接，其中連接至一或多個特異性位點之連接子-藥物部份可為相同或不同。在一些實施態樣中，包含一或多次出現之D(即細胞毒性藥物部份)的一或多個連接子-藥物部份係連接至一個B7-H4抗體。
在一些實施態樣中，D係細胞毒性藥物部份，其中該細胞毒性藥物部份係(a)耳抑素化合物；(b)卡利奇黴素化合物；(c)雙聯黴素(duocarmycin)化合物；(d)SN38；(e)吡咯并苯并二氮呯；(f)長春花(vinca)化合物；(g)微管溶素(tubulysin)化合物；(h)非天然喜樹鹼(camptothecin)化合物；(i)類美坦素化合物；(j)DNA結合藥物；(k)激酶抑制劑；(l)MEK抑制劑；(m)KSP抑制劑；(n)拓撲異構酶抑制劑；(o)DNA烷化藥物；(p)RNA聚合酶；(q)PARP抑制劑；(r)NAMPT抑制劑；(s)拓撲異構酶抑制劑；(t)蛋白質合成抑制劑；(u)DNA結合藥物；(v)DNA插層藥物；或(w)免疫調節化合物。
在一些實施態樣中，D(細胞毒性藥物部份)係(a)耳抑素化合物；(b)卡利奇黴素化合物；(c)雙聯黴素化合物；(d)喜樹鹼化合物；(e)吡咯并苯并二氮呯化合物；(f)長春花化合物；或彼等之類似物。
在一些實施態樣中，耳抑素化合物係耳抑素、海兔毒素、單甲基耳抑素E(MMAE)、單甲基耳抑素F (MMAF)、耳抑素F、AF-HPA、MMAF-HPA或苯二胺(AFP)。
在一些實施態樣中，雙聯黴素或其類似物係雙聯黴素A、雙聯黴素B1、雙聯黴素B2、雙聯黴素C1、雙聯黴素C2、雙聯黴素D、雙聯黴素SA、CC-1065、阿多來新(adozelesin)、比折來新(bizelesin)或卡折來新(carzelesin)。
在一些實施態樣中，喜樹鹼化合物係喜樹鹼、CPT-11(伊立替康(irinotecan))、SN-38或托泊替康(topotecan)。
在一些實施態樣中，吡咯并苯并二氮呯化合物係吡咯并苯并二氮呯單體、對稱吡咯并苯并二氮呯二聚體或不對稱吡咯并苯并二氮呯二聚體。
在一些實施態樣中，經修飾之B7-H4抗體係在胺基酸N297處經修飾。
在一些實施態樣中，在連接子-藥物部份與經修飾之B7-H4抗體之間形成的特異性鍵結總數(或連接點總數)係12或小於12。在一些實施態樣中，在連接子-藥物部份與經修飾之B7-H4抗體之間形成的特異性鍵結總數(或連接點總數)係10或小於10。在一些實施態樣中，在連接子-藥物部份與經修飾之B7-H4抗體之間形成的特異性鍵結總數(或連接點總數)係8或小於8。在一些實施態樣中，在連接子-藥物部份與經修飾之B7-H4抗體之間形成的特異性鍵結總數(或連接點總數)係6或小於6。在一些實施態樣中，在連接子-藥物部份與經修飾之B7-H4抗體之間形成的特異性鍵結總數(或連接點總數)係4或小於4。在一些實施態樣中，在連接子-藥物部份與經修飾之B7-H4抗體之間形成的特異性鍵結總數(或連接點總數)係2或小於2。
在一些實施態樣中，在連接子-藥物部份與經修飾之B7-H4抗體之間形成的特異性鍵結總數(或連接點總數)係2。
在一些實施態樣中，可根據所屬技術領域中已知之各種技術及方法將本文所述之經修飾之B7-H4抗體、連接子或治療劑組裝成本揭露之共軛體或支架。本揭露之共軛體及用於產生共軛體之方法係在本文中(例如藉由非限制性實施態樣及實例)描述。
在一些實施態樣中，在連接子-藥物部份與經修飾之B7-H4抗體之間形成的鍵結總數(或連接點總數)係12或小於12。
在一些實施態樣中，連接子-藥物部份與經修飾之B7-H4抗體之間的比例係大於1:1且小於或等於12:1。在一些實施態樣中，連接子-藥物部份與經修飾之B7-H4抗體之間的比例係約12:1、約11:1、約10:1、約9:1、約8:1、約7:1、約6:1、約5:1、約4:1、約3:1、約2:1或約1:1。在一些實施態樣中，連接子-藥物部份與經修飾之B7-H4抗體之間的比例係介於2:1與10:1之間。在一些實施態樣中，連接子-藥物部份與經修飾之B7-H4抗體之間的比例係約10:1、約9:1、約8:1、約7:1、約6:1、約5:1、約4:1、約3:1或約2:1。在一些實施態樣中，連接子-藥物部份與經修飾之B7-H4抗體之間的比例係介於約2:1與約4:1之間。在一些實施態樣中，連接子-藥物部份與經修飾之B7-H4抗體之間的比例係約4:1、約3:1或約2:1。在一些實施態樣中，連接子-藥物部份與經修飾之B7-H4抗體之間的比例係約2:1或1:1。
在一些實施態樣中，a 2係3，連接子-藥物部份與經修飾之B7-H4抗體之間的比例係2:1，且治療劑(D)與經修飾之B7-H4抗體之間的比例係約8:1、約7:1、約6:1、約5:1、約4:1、約3:1、約2:1或約1:1。在一些實施態樣中，a 2係3，連接子-藥物部份與經修飾之B7-H4抗體之間的比例係2:1，且治療劑(D)與經修飾之B7-H4抗體之間的比例係約6:1、約5:1、約4:1、約3:1、約2:1或約1:1。在一些實施態樣中，a 2係3，連接子-藥物部份與經修飾之B7-H4抗體之間的比例係2:1，且治療劑(D)與經修飾之B7-H4抗體之間的比例係約6:1、約5:1、約4:1或約3:1。在一些實施態樣中，a 2係3，連接子-藥物部份與經修飾之B7-H4抗體之間的比例係1:1，且治療劑(D)與經修飾之B7-H4抗體之間的比例係約3:1、約2:1或約1:1。
在一些實施態樣中，a 2係3，連接子-藥物部份與經修飾之B7-H4抗體之間的比例係2:1，且治療劑(D)與經修飾之B7-H4抗體之間的比例係約8:1。在一些實施態樣中，a 2係3，連接子-藥物部份與經修飾之抗體之間的比例係2:1，且治療劑(D)與經修飾之B7-H4抗體之間的比例係約6:1。在一些實施態樣中，a 2係3，連接子-藥物部份與經修飾之B7-H4抗體之間的比例係2:1，且治療劑(D)與經修飾之B7-H4抗體之間的比例係約5:1。在一些實施態樣中，a 2係3，連接子-藥物部份與經修飾之B7-H4抗體之間的比例係2:1，且治療劑(D)與經修飾之B7-H4抗體之間的比例係約4:1。在一些實施態樣中，a 2係3，連接子-藥物部份與經修飾之抗體之間的比例係2:1，且治療劑(D)與經修飾之B7-H4抗體之間的比例係約3:1。在一些實施態樣中，a 2係3，連接子-藥物部份與經修飾之抗體之間的比例係2:1，且治療劑(D)與經修飾之B7-H4抗體之間的比例係約2:1。在一些實施態樣中，a 2係3，連接子-藥物部份與經修飾之B7-H4抗體之間的比例係2:1，且治療劑(D)與經修飾之B7-H4抗體之間的比例係約1:1。
在一些實施態樣中，連接子-藥物部份與經修飾之B7-H4抗體之間的比例係約2:1。
在一些實施態樣中，抗體包含在區域290至305中之天冬醯胺酸基團(例如N297)，該基團連接至糖衍生部份，該糖衍生部份包含官能基A”；且經修飾之B7-H4抗體係藉由在A”與連接子-藥物部份之官能基之間形成的共價鍵與連接子-藥物部份共軛。
在一些實施態樣中，連接子-藥物部份包含至少二個官能基，其等之各者能與經修飾之B7-H4抗體之糖衍生部份的官能基A”(例如抗體的胺基酸N297)形成共價鍵以形成抗體-藥物共軛體。
在一些實施態樣中，經修飾之B7-H4抗體與連接子-藥物部份之間的比例係介於約1:1與約1:2之間。
在一些實施態樣中，本揭露之經修飾之B7-H4抗體-藥物共軛體及支架可藉由大量滲濾純化(例如以移除任何起始材料)。若需要，可藉由粒徑排阻層析法進行額外純化以移除任何聚集的共軛體。在一些實施態樣中，經純化之共軛體或支架包含如藉由SEC所測定之小於5% w/w(例如＜2% w/w)聚集的共軛體；如藉由RP-HPLC所測定之小於0.5% w/w(例如＜0.1% w/w)游離(非共軛)藥物；如藉由SEC所測定之小於1% w/w帶藥含肽支架；及/或如藉由HIC-HPLC所測定之小於2% w/w(例如＜1% w/w)非共軛抗體。
在一些實施態樣中，與細胞毒性藥物部份共軛之經修飾之B7-H4抗體係選自表B2所述之共軛體。
Figure 02_image762
Figure 02_image764
Figure 02_image766
Figure 02_image768
Figure 02_image770
Figure 02_image772
Figure 02_image774
Figure 02_image776
Figure 02_image778
Figure 02_image780
Figure 02_image782
Figure 02_image784
其中： 抗體係經修飾之B7-H4抗體；
Figure 02_image786
係GlcNAc；
Figure 02_image788
係Fuc；
Figure 02_image790
係GalNAc；且d 13係如本文中所定義。
應理解除非另外說明，否則
Figure 02_image786
之符號係指本揭露中之GlcNAc。應理解除非另外說明，否則
Figure 02_image788
之符號係指本揭露中之岩藻糖。應理解除非另外說明，否則
Figure 02_image790
之符號係指本揭露中之GalNAc。
在一些實施態樣中，經修飾之B7-H4抗體-藥物共軛體具有下式(XXXIV)：
Figure 02_image795
其中： 各R A係
Figure 02_image797
Figure 02_image799
d 13係2；且一或多個連接子-藥物部份係連接至抗體之N297處的天冬醯胺酸基團。 在一些實施態樣中，經修飾之B7-H4抗體-藥物共軛體具有式(XXXIV)，其中各R A係：
Figure 02_image801
、
Figure 02_image803
、
Figure 02_image805
、
Figure 02_image807
、
Figure 02_image809
、
Figure 02_image811
、
Figure 02_image813
、
Figure 02_image815
或
Figure 02_image817
其中d 13係2；且該經修飾之B7-H4抗體在連接至該共軛體的其他部分之N297處包含一或多個天冬醯胺酸基團。
在一些實施態樣中，經修飾之B7-H4抗體-藥物共軛體具有式(XXXIV)，其中各R A係
Figure 02_image819
。
在一些實施態樣中，經修飾之B7-H4抗體-藥物共軛體具有式(XXXIV)，其中各R A係
Figure 02_image821
。
在一些實施態樣中，經修飾之B7-H4抗體-藥物共軛體具有式(XXXIV)，其中各R A係
Figure 02_image823
。
在一些實施態樣中，經修飾之B7-H4抗體-藥物共軛體具有式(XXXIV)，其中各R A係
Figure 02_image825
。
在一些實施態樣中，經修飾之B7-H4抗體-藥物共軛體具有式(XXXIV)，其中各R A係
Figure 02_image827
。
在一些實施態樣中，經修飾之B7-H4抗體-藥物共軛體具有式(XXXIV)，其中各R A係
Figure 02_image829
。
在一些實施態樣中，經修飾之B7-H4抗體-藥物共軛體具有式(XXXIV)，其中各R A係
Figure 02_image831
。
在一些實施態樣中，經修飾之B7-H4抗體-藥物共軛體具有式(XXXIV)，其中各R A係：
Figure 02_image833
。
在一些實施態樣中，經修飾之B7-H4抗體-藥物共軛體具有式(XXXIV)，其中各R A係
Figure 02_image835
。
在一些實施態樣中，經修飾之B7-H4抗體-藥物共軛體具有下式(XXXIV-1)、(XXXIV-2)、(XXXIV-3)或(XXXIV-4)：
Figure 02_image837
Figure 02_image839
Figure 02_image841
Figure 02_image843
在一些實施態樣中，經修飾之B7-H4抗體-藥物共軛體具有下式(XXXV)：
Figure 02_image845
其中各R B係：
Figure 02_image847
Figure 02_image849
Figure 02_image851
在一些實施態樣中，經修飾之B7-H4抗體-藥物共軛體具有式(XXXIV-1)、(XXXIV-2)、(XXXIV-3)、(XXXIV-4)或(XXXV)，其中-L D-D之部份係：
Figure 02_image853
Figure 02_image855
在一些實施態樣中，經修飾之B7-H4抗體-藥物共軛體具有式(XXXIV-1)、(XXXIV-2)、(XXXIV-3)、(XXXIV-4)或(XXXV)，其中-L D-D之部份係：
Figure 02_image857
。
在一些實施態樣中，經修飾之B7-H4抗體-藥物共軛體具有下式(XXXVI)：
Figure 02_image859
其中各R A係
Figure 02_image861
、
Figure 02_image863
、
Figure 02_image865
、
Figure 02_image867
或
Figure 02_image869
。
在一些實施態樣中，經修飾之B7-H4抗體-藥物共軛體係式(XXXVI)之共軛體，其中各R A係
Figure 02_image871
其中該經修飾之B7-H4抗體在連接至該共軛體的其他部分之N297處包含一或多個天冬醯胺酸基團。
在一些實施態樣中，經修飾之B7-H4抗體-藥物共軛體係下式(XXXVII)之共軛體：
Figure 02_image873
其中 d 13係2； 抗體係B7-H4抗體，其包含可變重鏈互補決定區1 (CDRH1)、可變重鏈互補決定區2(CDRH2)、可變重鏈互補決定區3(CDRH3)、可變輕鏈互補決定區1(CDRL1)、可變輕鏈互補決定區2(CDRL2)及可變輕鏈互補決定區3 (CDRL3)，該CDRH1包含胺基酸序列GFIVSRNY(SEQ ID NO: 2)，該CDRH2包含胺基酸序列IYGSGRT(SEQ ID NO: 3)，該CDRH3包含胺基酸序列ARDADYGLDV(SEQ ID NO: 16)或胺基酸序列ARDADYGMDV(SEQ ID NO: 10)，該CDRL1包含胺基酸序列QSVSSSY(SEQ ID NO: 53)，該CDRL2包含胺基酸序列GAS(SEQ ID NO: 54)，且該CDRL3包含胺基酸序列QQYGSSPLYT(SEQ ID NO: 55) 該連接子-藥物部份係連接至該B7-H4抗體之N297處的天冬醯胺酸基團；
Figure 02_image786
係GlcNAc；
Figure 02_image788
係Fuc；且
Figure 02_image790
係GalNAc。
在一些實施態樣中，經修飾之B7-H4抗體-藥物共軛體係下式(XXXVIII)之共軛體：
Figure 02_image878
其中 d 13係整數2； 抗體係B7-H4抗體，其包含：可變重鏈互補決定區1(CDRH1)、可變重鏈互補決定區2(CDRH2)、可變重鏈互補決定區3(CDRH3)、可變輕鏈互補決定區1(CDRL1)、可變輕鏈互補決定區2(CDRL2)及可變輕鏈互補決定區3(CDRL3)，該CDRH1包含胺基酸序列GFIVSRNY(SEQ ID NO: 2)，該CDRH2包含胺基酸序列IYGSGRT(SEQ ID NO: 3)，該CDRH3包含胺基酸序列ARDADYGLDV(SEQ ID NO: 16)或胺基酸序列ARDADYGMDV(SEQ ID NO: 10)，該CDRL1包含胺基酸序列QSVSSSY(SEQ ID NO: 53)，該CDRL2包含胺基酸序列GAS(SEQ ID NO: 54)，且該CDRL3包含胺基酸序列QQYGSSPLYT(SEQ ID NO: 55) 連接子-藥物部份係連接至抗體之N297處的天冬醯胺酸基團；
Figure 02_image786
係GlcNAc；
Figure 02_image788
係Fuc；且
Figure 02_image790
係GalNAc。 使用方法
在一些實施態樣中，本揭露提供一種治療或預防有此需要之個體的疾病或病症之方法，其包含向個體投予治療有效量的在本文中揭示之共軛體。
在一些實施態樣中，本揭露提供一種治療有此需要之個體的疾病或病症之方法，其包含向個體投予治療有效量的在本文中揭示之共軛體。
在一些實施態樣中，本揭露提供一種治療或預防有此需要之個體的疾病或病症之方法，其包含向個體投予在本文中揭示之共軛體。
在一些實施態樣中，本揭露提供一種治療有此需要之個體的疾病或病症之方法，其包含向個體投予在本文中揭示之共軛體。
在一些實施態樣中，本揭露關於一種治療有此需要之個體的癌症之方法，其包含向個體投予有效量的在本文中揭示之共軛體。在一些實施態樣中，本揭露關於一種治療有此需要之個體的B7-H4陽性癌症之方法，其包含向個體投予有效量的在本文中揭示之共軛體。
在一些實施態樣中，本揭露提供一種用於治療或預防有此需要之個體的疾病或病症之在本文中揭示之共軛體。
在一些實施態樣中，本揭露提供一種用於治療有此需要之個體的疾病或病症之在本文中揭示之共軛體。
在一些實施態樣中，本揭露提供一種在本文中揭示之共軛體用於治療有此需要之個體的癌症之用途。在一些實施態樣中，本揭露提供一種在本文中揭示之共軛體用於治療有此需要之個體的B7-H4陽性表現之癌症之用途。
在一些實施態樣中，本揭露提供一種在本文中揭示之共軛體於製造用於治療有此需要之個體的疾病或病症之藥物的用途。
在一些實施態樣中，本揭露提供一種在本文中揭示之共軛體於製造用於治療或預防有此需要之個體的疾病或病症之藥物的用途。
在一些實施態樣中，本揭露提供一種在本文中揭示之共軛體於製造用於治療有此需要之個體的癌症之藥物的用途。在一些實施態樣中，本揭露提供一種在本文中揭示之共軛體於製造用於治療有此需要之個體的B7-H4陽性表現之癌症之藥物的用途。
在一些實施態樣中，本揭露提供一種共軛體於治療或預防有此需要之個體的疾病或病症之用途。
在一些實施態樣中，本揭露提供一種共軛體於治療有此需要之個體的疾病或病症之用途。
在一些實施態樣中，本揭露提供一種共軛體於治療有此需要之個體的癌症之用途，其包含向個體投予有效量的在本文中揭示之共軛體。在一些實施態樣中，本揭露提供一種共軛體於治療有此需要之個體的B7-H4陽性表現癌症之用途，其包含向個體投予有效量的在本文中揭示之共軛體。
在一些實施態樣中，本揭露提供一種治療或預防有此需要之個體的疾病或病症之方法，其包含向個體投予有效量的至少一種本揭露之共軛體；其中該共軛體在生物降解時釋放一或多種治療劑。
在一些實施態樣中，本揭露提供一種治療有此需要之個體的疾病或病症之方法，其包含向個體投予有效量的至少一種本揭露之共軛體；其中該共軛體在生物降解時釋放一或多種治療劑。
在一些實施態樣中，疾病係癌症。
在一些實施態樣中，本揭露提供之方法包含向個體投予治療有效量的在本文中揭示之B7-H4抗體-藥物共軛體。
在一些實施態樣中，本揭露提供之方法包含向個體投予在本文中揭示之B7-H4抗體-藥物共軛體。
在一些實施態樣中，本揭露提供一種抑制B7-H4陽性細胞增生之方法，該方法包含在允許B7-H4抗體-藥物共軛體與細胞之表面上的B7-H4結合及隨後內化以藉此抑制細胞增生之條件下，使細胞暴露至B7-H4抗體-藥物共軛體。在某些實施態樣中，方法係活體外或活體內方法。在進一步實施態樣中，細胞係乳房、卵巢或子宮內膜細胞。
活體外細胞增生之抑制可使用CellTiter-Glo™發光細胞存活性測定(可購自Promega(Madison, Wis.))測定。該測定基於存在之ATP(其係代謝活性細胞的指標)的定量測定培養中存活細胞之數量。見Crouch et al.(1993) J. Immunol. Meth.160: 81-88, U.S. Pat. No. 6,602,677。該測定可以96或384孔格式進行，使其適於自動化高通量篩選(HTS)。見Cree et al.(1995) AntiCancer Drugs6: 398-404。測定程序涉及直接添加單一試劑(CellTiter-Glo®試劑)至培養細胞。此導致細胞裂解及產生藉由螢光素酶反應產生之發光信號。發光信號與存在之ATP的量等比，其係與存在於培養中之存活細胞的數量成正比。資料可藉由亮度計或CCD相機成像裝置記錄。發光輸出係表現為相對光單位(RLU)。
在一些實施態樣中，本揭露提供一種B7-H4抗體-藥物共軛體作為藥物之用途。在一些實施態樣中，提供用於治療之方法中之B7-H4抗體-藥物共軛體。在一些實施態樣中，提供用於治療B7-H4陽性癌症之B7-H4抗體-藥物共軛體。在一些實施態樣中，本發明提供用於治療患有B7-H4陽性癌症之個體之方法中之B7-H4抗體-藥物共軛體，該方法包含向該個體投予有效量的B7-H4抗體-藥物共軛體。在一些實施態樣中，方法進一步包含向個體投予有效量的例如如下述之至少一種額外治療劑。
在一些實施態樣中，本揭露提供B7-H4抗體-藥物共軛體於製造或製備藥物之用途。在一些實施態樣中，藥物係用於治療B7-H4陽性癌症。在一些實施態樣中，藥物係用於治療B7-H4陽性癌症之方法，該方法包含向患有B7-H4陽性癌症之個體投予有效量的藥物。在一些實施態樣中，方法進一步包含向個體投予有效量的例如如下述之至少一種額外治療劑。
在一些實施態樣中，本揭露提供一種用於治療B7-H4陽性癌症之方法。在一些實施態樣中，方法包含向患有該B7-H4陽性癌症之個體投予有效量的B7-H4抗體-藥物共軛體。在一些實施態樣中，方法進一步包含向個體投予有效量的如下述之至少一種額外治療劑。
在一些實施態樣中，B7-H4陽性癌症係例如乳癌、子宮內膜癌、卵巢癌、非小細胞肺癌(例如鱗狀細胞癌)、胰臟癌、甲狀腺癌、腎癌(例如腎細胞癌)、膀胱癌(例如泌尿上皮細胞癌)、結腸癌、頭頸癌、小細胞肺癌、胃癌、黑色素瘤、膽管癌、子宮癌及乳糜管癌。
在一些實施態樣中，B7-H4陽性癌症係例如乳癌子宮內膜癌、卵巢癌或乳糜管癌。
在一些實施態樣中，B7-H4陽性乳癌係三陰性乳癌、荷爾蒙受體陽性/HER2(-)(HR+/HER2(-))乳癌或腺管癌。
在一些實施態樣中，B7-H4陽性卵巢癌係漿液性腺癌卵巢癌。
在一些實施態樣中，B7-H4陽性卵巢癌係高惡性度漿液性卵巢癌。在一些實施態樣中，高惡性度漿液性卵巢癌係輸卵管或原發性腹膜癌。在一些實施態樣中，輸卵管或原發性腹膜癌係轉移性。在一些實施態樣中，輸卵管或原發性腹膜癌係反覆性。
在一些實施態樣中，本揭露關於一種治療有此需要之個體的三陰性乳癌之方法，其包含向個體投予有效量的在本文中揭示之共軛體或其醫藥組成物。
在一些實施態樣中，本揭露關於一種治療有此需要之個體的HR+/HER2(-)乳癌之方法，其包含向個體投予有效量的在本文中揭示之共軛體或其醫藥組成物。
在一些實施態樣中，本揭露關於一種治療有此需要之個體的子宮內膜癌之方法，其包含向個體投予有效量的在本文中揭示之共軛體或其醫藥組成物。
在一些實施態樣中，三陰性乳癌個體已接受下列之先前治療：拓撲異構酶抑制劑或其ADC，諸如例如薩西土珠單抗戈維特坎(sacituzumab govitecan)；化學治療劑，諸如例如多西紫杉醇(docetaxel)、多柔比星(doxorubicin)、環磷醯胺、卡鉑、太平洋紫杉醇、白蛋白結合型太平洋紫杉醇(nab-paclitaxel)、吉西他濱(gemcitabine)及順鉑；抗腫瘤劑，諸如例如阿特珠單抗(atezolizumab)；AKT抑制劑，諸如例如伊帕他色替(ipatasertib)；PARP抑制劑，諸如例如奧拉帕尼(olaparib)(Lynparza)、盧卡帕瑞(rucaparib) (Rubraca)、他拉帕瑞(talazoparib)及尼拉帕瑞(niraparib) (Zejula)或彼等之組合。
在一些實施態樣中，HR+/HER2(-)乳癌個體已接受下列之先前治療：週期蛋白依賴性激酶4及6(CDK4/6)抑制劑，諸如例如帕博西尼(palbociclib)、瑞博昔布(ribociclib)及阿貝馬昔布(abemaciclib)；化學治療劑，諸如例如多西紫杉醇、多柔比星、環磷醯胺、卡鉑、太平洋紫杉醇、白蛋白結合型太平洋紫杉醇、吉西他濱及順鉑；血管生成抑制劑，諸如例如貝伐珠單抗(bevacizumab)(Avastin)；雌激素受體拮抗劑，諸如例如氟維司群(fulvestrant) (Faslodex)；mTOR抑制劑，諸如例如依維莫司(everolimus)；PI3K抑制劑，諸如例如艾培昔布(alpelisib)；或彼等之組合。
在一些實施態樣中，卵巢癌個體已接受下列之先前治療：化學治療劑，諸如例如，多西紫杉醇(docetaxel)、多柔比星(doxorubicin)、環磷醯胺(cyclophosphamide)、卡鉑(carboplatin)、太平洋紫杉醇(paclitaxel)、白蛋白結合型太平洋紫杉醇(nab-paclitaxel)、吉西他濱(gemcitabine)及順鉑(cisplatin)；血管生成抑制劑，諸如例如，貝伐珠單抗(bevacizumab) (Avastin)；PARP抑制劑，諸如例如，尼拉帕瑞(niraparib)(Zejula)、奧拉帕瑞(olaparib)(Lynparza)及維利帕瑞(veliparib)；奧拉帕瑞(Lynparza)與貝伐珠單抗之組合；或彼等之組合。
在一些實施態樣中，子宮內膜癌個體已接受下列之先前治療：化學治療劑，諸如例如多西紫杉醇、多柔比星、環磷醯胺、卡鉑、太平洋紫杉醇、白蛋白結合型太平洋紫杉醇、吉西他濱及順鉑；黃體激素，諸如例如乙酸甲羥孕酮(Provera®)及甲地孕酮乙酸酯(Megace)；抗雌激素藥物，諸如例如它莫西芬(tamoxifen)；促黃體激素釋放激素促效劑(LHRH促效劑)，諸如例如戈舍瑞林(goserelin)(Zoladex)及亮丙瑞林(leuprolide)(Lupron)；芳香酶抑制劑，諸如例如來曲唑(letrozole)(Femara)、阿那曲唑(anastrozole)(Arimidex)及依西美坦(exemestane) (Aromasin)；激酶抑制劑，諸如例如樂伐替尼(Lenvatini)；血管生成抑制劑，諸如例如貝伐珠單抗(Avastin)；mTOR抑制劑，諸如例如依維莫司(Afinitor)；PD-1抗體，諸如例如尼沃魯單抗(nivolumab)(OPDIVO)、派姆單抗(pembrolizumab)(KEYTRUDA)、MEDI-0680 (AMP-514; WO2012/145493)、卡瑞利珠單抗(camrelizumab)(SHR-1210)、替雷利珠單抗(tislelizumab)(BGB-A317)及斯巴達利珠單抗(spartalizumab)(NPVPDR001、NVS240118、PDR001)；或彼等之組合。
在一些實施態樣中，本揭露關於一種治療癌症個體之方法，該個體係PD-1/PD-L1抑制劑不當反應者，該方法包含向個體投予有效量的在本文中揭示之共軛體或其醫藥組成物。
屬於PD-1/PD-L1抑制劑不當反應者之癌症個體先前可能對PD-1/PD-L1抑制劑有反應，但變成對PD-1/PD-L1抑制劑較不具反應，或癌症可能從未對PD-1/PD-L1抑制劑有反應。對PD-1/PD-L1抑制劑之不當反應是指原本預期在標準劑量之PD-1/PD-L1抑制劑之後改善之癌症的態樣未經改善，及/或僅在投予大於標準劑量時才發生改善。在一些實施態樣中，屬於PD-1/PD-L1抑制劑不當反應者之癌症個體在接受標準劑量之後已經歷或正在經歷對PD-1/PD-L1抑制劑之不當反應達至少二週、至少三週、至少四週、至少六週或至少十二週。「標準」劑量係由醫療專業人員判定，且可取決於個體的年齡、體重、健康史、疾病嚴重性、投藥頻率等。在一些實施態樣中，屬於PD-1/PD-L1抑制劑不當反應者之癌症個體已經歷或正在經歷對抗PD-1抗體及/或抗PD-L1抗體之不當反應。在一些實施態樣中，屬於PD-1/PD-L1抑制劑不當反應者之患有癌症之個體已經歷或正在經歷對AMP-224之不當反應。在一些實施態樣中，屬於PD-1/PD-L1抑制劑不當反應者之患有癌症之個體已經歷或正在經歷對選自尼沃魯單抗、派姆單抗及阿特珠單抗之PD-1/PD-L1抑制劑之不當反應。
在一些實施態樣中，本揭露關於一種治療表現低PD-L1水準之癌症之方法，該方法包含向個體投予有效量的在本文中揭示之共軛體或其醫藥組成物。在一些實施態樣中，表現「低PD-L1水準(low level of PD-L1)」或表現「低水準PD-L1(PD-L1 at a low level)」之癌症表示PD-L1水準低於適用於以PD-1或PD-L1拮抗劑治療之癌症的表現水準，其中個體係基於PD-L1表現水準選擇治療。在一些實施態樣中，「低PD-L1水準(low level of PD-L1)」係腫瘤中小於1%之細胞具有膜染色。在一些實施態樣中，關於PD-L1之「低水準(low level)」係小於1%染色，例如0.9、0.8、0.7、0.6、0.5、0.4、0.3、0.2、0.1%或0%之腫瘤細胞係經染色。在一些實施態樣中，PD-L1表現水準可藉由顯色IHC或免疫螢光IHC(Aqua scoring)測量。在某些實施態樣中，5%或小於5%之PD-L1染色(包括腫瘤及/或免疫細胞)可指示樣本表現「低PD-L1水準」。在某些實施態樣中，10%或小於10%之PD-L1染色(包括腫瘤及/或免疫細胞)可指示樣本表現「低PD-L1水準」。除非本文以其他方式指示，否則本文中使用5%臨限(即5%或小於5%指示「低PD-L1水準」)。
在一些實施態樣中，在本文中揭示之共軛體或其醫藥組成物係向經診斷為癌症之個體投予以增加病患的T細胞、CD4+T細胞或CD8+T細胞之增生。在另一實施態樣中，在本文中揭示之共軛體或其醫藥組成物係向經診斷為癌症之個體投予以增加個體的干擾素γ(IFNγ)生產。在另一實施態樣中，在本文中揭示之共軛體或其醫藥組成物係向經診斷為癌症之個體投予以阻斷個體的B7-H4對T細胞之抑制活性。在另一實施態樣中，在本文中揭示之共軛體或其醫藥組成物係向經診斷為癌症之個體投予以除盡個體的B7-H4表現性癌細胞。
在一些實施態樣中，在本文中揭示之共軛體或其醫藥組成物係如以上提供向個體投予，且進一步與額外治療劑組合，例如PD-1拮抗劑；PD-L1拮抗劑；拓撲異構酶抑制劑或其ADC，諸如例如薩西土珠單抗戈維特坎；化學治療劑，諸如例如多西紫杉醇、多柔比星、環磷醯胺、卡鉑、太平洋紫杉醇、白蛋白結合型太平洋紫杉醇、吉西他濱及順鉑；抗腫瘤劑，諸如例如阿特珠單抗；血管生成抑制劑，諸如例如貝伐珠單抗(Avastin)；AKT抑制劑，諸如例如伊帕他色替；PARP抑制劑，諸如例如奧拉帕尼(Lynparza)、盧卡帕瑞(Rubraca)、他拉帕瑞及尼拉帕瑞(Zejula)；週期蛋白依賴性激酶4及6(CDK4/6)抑制劑，諸如例如帕博西尼、瑞博昔布及阿貝馬昔布；選擇性雌激素受體拮抗劑，諸如例如氟維司群(Faslodex)；mTOR抑制劑，諸如例如依維莫司(Afinitor)；PI3K抑制劑，諸如例如艾培昔布；或彼等之組合。
在一些實施態樣中，額外治療劑係PD-1拮抗劑，諸如拮抗性PD-1抗體。合適PD-1抗體包括例如尼沃魯單抗(OPDIVO)、派姆單抗(KEYTRUDA)、MEDI-0680(AMP-514; WO2012/145493)、卡瑞利珠單抗(SHR-1210)、替雷利珠單抗(BGB-A317)或斯巴達利珠單抗(NPVPDR001, NVS240118, PDR001)。額外治療劑亦可包括匹利珠單抗(CT-011)。由融合至IgG1之Fc部分的PD-L2(B7-DC)之胞外結構域構成之重組蛋白(稱為AMP-224)亦可用於拮抗PD-1受體。
在一些實施態樣中，PD-L1拮抗劑係拮抗性PD-L1抗體。合適PD-L1抗體包括例如阿特珠單抗(TECENTRIQ)、德瓦魯單抗(MEDI4736)、BMS-936559 (WO2007/005874)、艾維路單抗(WO2013/79174)或rHigM12B7。
在一些實施態樣中，例如當癌症係Her2癌症時，額外治療劑係曲妥珠單抗(trastuzumab)、曲妥珠單抗恩他新(Trastuzumab emtansine)(Kadcyla®)、帕妥珠單抗(pertuzumab)(Perjeta®)、酪胺酸激酶抑制劑，諸如例如拉帕替尼(lapatinib)及圖卡替尼(tucatinib)。
以上注意之該組合療法涵蓋組合投予(其中二種或超過二種治療劑係包括於相同或分開調配物中)及分開投予，在該情況中，本發明之抗體或抗體-藥物共軛體之投予可發生在投予額外治療劑及/或佐劑之前、之同時及/或之後。本發明之B7-H4抗體-藥物共軛體亦可用於與放射療法組合。
所屬技術領域中具有通常知識者的水準可判定欲投予至個體之活性劑(包括B7-H4抗體-藥物共軛體)的精確量。例如，此類用於治療癌症及實體腫瘤之劑及用途係所屬技術領域中廣為周知。因此，此類劑之劑量可基於該劑在給定投予途徑下之標準投藥方案選擇。
應理解治療之精確劑量及持續時間係隨著所欲治療之組織或腫瘤變化，且可使用已知測試規程或藉由自活體內或活體外測試資料外推依經驗決定及/或可自特定劑之已知投藥方案決定。應注意濃度及劑量值亦可隨著治療個體之年齡、個體之體重、投予途徑及/或疾病範圍或嚴重性及執業醫生之技藝水準內所考慮的其他因子而變化。通常，選擇限制毒性之劑量方案。應注意，主治醫師會瞭解如何及何時應因應毒性或骨髓、肝臟或腎臟或其他組織功能異常而終止、中斷或調整療法以降低劑量。相反地，主治醫師亦瞭解如何及何時應將治療調整至較高水準，若臨床反應不適當(排除毒性不良反應)。應進一步理解的是，對任何特定個體而言，特定給藥方案應根據個體需求及投予或監督調配物投予之人士的專業判斷隨時間調整，且本文列示之濃度範圍僅供例示之用，並無意圖限制其範圍。
除非另行定義，否則本文所使用之所有技術及科學用語具有本發明所屬技術領域中具有通常知識者所通常瞭解之相同意義。在本說明書中，單數形式亦包括多數形式，除非上下文中另外清楚地指示。雖然與此處所描述之方法及材料類似或相等者可被用於實施或測試本發明，以下描述適當之方法及材料。若發生衝突，以本說明書(包括定義)為主。此外，該等材料、方法及實施態樣僅用來示例而非意圖限制。
在本說明當中，當化合物、支架及組成物被描述為具有、包括或包含特定成份時，應考慮組成物亦為由該列舉成份實質上組成或組成。類似地，當方法或過程被描述為具有、包括或包含特定程序步驟，該過程亦由該列舉之程序步驟實質上組成或組成。另外應了解的是，步驟之順序或實施某些反應之順序係無關緊要，只要本發明仍為可操作地。再者，二個或超過二個步驟或反應可被同時進行。
本文所述之所有方法可以任何合適順序實施，除非在本文中另外指示或另外與上下文清楚矛盾。使用本文提供之任何及所有實例或例示性語言(例如，「諸如(such as)」)僅意圖更佳地說明本發明，且不應被解讀為對權利要求範圍的限制，除非另行明確地主張權利。在說明書中的語言不應被解讀為表示任何非主張權利的元件係主張權利所必需。 實例
下列工作例說明連接子、藥物分子及抗體或抗體片段及用於製備彼之方法。這些並非意圖限制且所屬技術領域中具有通常知識者將輕易理解可採用其他試劑或方法。 縮寫
下列縮寫係用於以下的反應方案及合成實例。此清單並非包括本申請案中所使用之所有縮寫的清單，因為合成方案及實例中亦可使用有機合成所屬技術領域中具有通常知識者可輕易理解的額外標準縮寫。 縮寫： CAN            乙腈 AF              耳抑素(auristatin)F AF-HPA       耳抑素F羥丙基醯胺 aq               水性 CE              毛細管電泳 CR              完全消退 DAD            二極體陣列偵測器 DAR            藥物抗體比 DMEM         Dulbecco氏改良Eagle氏培養基 ELISA         酶連接免疫吸附測定 Endo SH       內切糖苷酶SH FBS             胎牛血清 Fuc             岩藻糖 GalNAcT      糖基轉移酶 HIC             疏水性交互作用層析法 HRP            辣根過氧化酶 IV               靜脈內 LC              液相層析術 MS              質譜法 MTV            中位數腫瘤體積 NMR           核磁共振 PBS             磷酸鹽緩衝鹽水 PBST           含有Tween之磷酸鹽緩衝鹽水 PR              部分消退 RP-HPLC      逆相高效液相層析法 SEC            粒徑排阻層析法 TFS             無腫瘤存活 TGI             腫瘤生長抑制 TCEP           三[2-羧基乙基]膦 TEAA          乙酸三乙銨 TMB            四甲基聯苯胺 UDP            尿苷二磷酸鹽 UF/DF         超過濾/滲濾 WCX           弱陽離子交換層析法 一般資訊
除非另行說明，否則所有試劑皆購自相關提供者。
B7-H4_2F9親代抗體(抗B7-H4抗體)及2A7係揭示於US 2011/0085970 Al。1D11抗體係揭示於 US20160159910A1。Endo SH係如PCT申請案 WO 2017137459所述製備，其所有內容物以引用方式併入本文中。UDP-疊氮基糖及GalNAcT係如US 9,988,662所述製備，其所有內容物以引用方式併入本文中。
DiABZI STING的促效劑係如Ramanjulu et al (Nature, 564(7736): 439-443(2018))中所述製備。
腫瘤生長抑制(%TGI)係定義為治療與對照組之間中位數腫瘤體積(MTV)的百分比差異。腫瘤大小係貫穿各療效研究測量以測定腫瘤生長抑制(TGI)。
適用時，共軛體之藥物含量係以分光光度測定，否則實施RP-HPLC或LC/MS以定量測定藥物含量。
抗體-藥物共軛體之蛋白質含量係以分光光度測定或藉由ELISA測定。
抗體-藥物共軛體、攜帶藥物支架或抗體支架係藉由所需之大量滲濾、CHT層析法或HIC純化(即移除殘餘之未反應藥物、未共軛抗體、酶或起始材料)。若需要，藉由SEC或HIC進行額外純化以移除聚集的抗體-藥物共軛體。一般來說，經純化之抗體-藥物共軛體含有如藉由SEC所測定之＜5%(w/w)(例如＜2%(w/w))聚集的抗體-藥物共軛體；如藉由RP-HPLC及/或LC-MS/MS所測定之＜0.5%(w/w)(例如＜0.1%(w/w))游離(未共軛)藥物；如藉由SEC及/或RP-HPLC所測定之＜1%(w/w)游離藥物共軛體；及如藉由HIC-HPLC及/或RP-HPLC所測定之＜10%(w/w)(例如＜1%(w/w))未共軛抗體或抗體片段。經還原或部分還原之抗體係使用文獻所述之程序製備，見例如Francisco et al., Blood 102(4): 1458-1465(2003)。總藥物(共軛及未共軛)濃度係藉由UV-Vis分光光度法或RP-HPLC測定。
為了測定生物樣本中游離AF-HPA藥物的濃度，酸化樣本係經ACN處理。萃取游離藥物並分析ACN上清液。為了測定非臨床樣本中共軛AF-HPA的濃度，樣本使用抗IgG1抗體塗佈磁珠進行免疫捕捉隨後進行耗竭式鹼水解。藉由LC-MS/MS分析含有經釋放之AF-HPA藥物的ACN上清液。非臨床樣本中之總抗體濃度係在使用抗IgG1抗體進行免疫捕捉之後藉由LC-MS/MS測量，經由在胰蛋白酶消化之後偵測抗體獨特的肽序列。以臨床樣本而言，可遵照相同程序，不同的是將使用抗獨特型抗體進行免疫捕捉以避免內源性抗體干擾。
游離AF及AF-HPA之分析係藉由RP-HPLC使用C4管柱、ACN梯度及UV偵測進行。整合峰面積並與AF及AF-HPA標準比較。方法係用於定量血漿及組織均質物中之AF及AF-HPA，且在0.1 ng/mL至150 ng/mL的濃度範圍內呈線性。在經NaOH(aq)水解之後釋放的總藥物(AF-HPA)係以動態範圍為1 ng/mL至5,000 ng/mL在相同條件下測量。總抗體標準的範圍為0.1 µg/mL至100 µg/mL。
抗體-藥物共軛體之疏水性係在配備有DAD之Shimadzu Prominence HPLC系統上藉由HIC-HPLC測定。TSK凝膠丁基-NPR管柱(2.5 µm粒徑)係保持在35℃下以進行這些分析。動相A係1.5 M硫酸銨、25 mM磷酸鈉及pH 7.0，且動相B係25 mM磷酸鈉、10%異丙醇及pH 7.0。分離係以0至100%線性梯度之動相B在25分鐘內實施。流速係1 mL/min。樣本注射的範圍為約10 µg至100 µg。
包含細胞毒性劑藥物部份之共軛體的藥物抗體比(DAR)係藉由使抗體-藥物共軛體進行耗竭式鹼水解來測定。接著自RP-HPLC的標準曲線定量經釋放之AF-HPA。經測量之AF-HPA濃度係與抗體含量相關以測定DAR。
包含STING的促效劑藥物部份之共軛體的藥物抗體比(DAR)係藉由測量共軛體之吸光度測定。DAR值係使用抗體及STING的促效劑載荷物之適當莫耳消光係數計算。
腫瘤係使用數位卡尺每週測量二次且腫瘤體積係使用下式計算：腫瘤體積(mm 3)=(寬度 2x 長度)/2。第一週每日記錄體重且之後每週記錄二次。動物維持研究直到個別腫瘤體積達到≥ 1000mm 3 、≥ 1500mm 3或如所示。體重變化百分比係使用下式計算：體重變化(%)=((體重 研究第 X 天-體重 研究第 1 天)/體重 研究第 1 天)*100。腫瘤體積係報告為平均值±平均值之標準誤(SEM)。腫瘤生長抑制(%TGI)係定義為治療與對照組之間平均數腫瘤體積(MTV)的百分比差異。腫瘤大小係貫穿各療效研究測量以測定腫瘤生長抑制(TGI)。腫瘤消退百分比係使用下式計算：消退%=(1-(平均腫瘤體積 最終)/(平均腫瘤體積 第 1 天))*100。
以異種移植研究而言，個別動物的消退反應係經分類。部分反應(PR)係定義為三次連續測量的腫瘤體積為第1天體積的50%或小於50%且這三個測量值之至少一者等於或大於13.5 mm 3。完全反應(CR)係定義為三次連續測量的腫瘤體積小於13.5 mm 3。無腫瘤存活(TFS)係歸類為在研究結束時具有CR。動物在研究期間僅針對PR或CR事件計分一次且只有當PR及CR標準皆符合才計分為CR。在研究終止時具有CR反應之動物係額外歸類為無腫瘤存活(TFS)。
以PDX研究而言，個別動物的消退反應係經分類： TS(腫瘤穩定化)=在數次連續測量期間呈現恆定腫瘤大小之小鼠數量。 PR(部分消退)=在數次連續測量期間呈現腫瘤大小低於初始腫瘤大小之小鼠數量。 CR(完全消退)=在數次連續測量期間呈現0至13 mm 3腫瘤大小之小鼠數量。 TFS(無腫瘤存活者)=記錄至群組日結束之完全消退數量。 實例 1 ：合成 XMT-1604(B7-H4_2F9V18) 細胞毒性藥物共軛體 1
Figure 02_image883
Figure 02_image885
其中：
Figure 02_image786
係GlcNAc；
Figure 02_image788
係Fuc；且
Figure 02_image790
係GalNAc。 步驟 1 。經疊氮基修飾之 XMT-1604(B7-H4_2F9V18) 抗體
在於50 mM Tris-HCl pH 7.6中之XMT-1604 (B7-H4_2F9V18)抗體(12.71 mg, 0.088 µmole)中依下列順序添加：Endo SH(0.127 mg, 1 w-%)、GalNAcT(0.64 mg, 5 w-%)、UDP-疊氮基糖(1.34 mg, 2.12 µmole)及MnCl 2(1.18 mg, 9.4 µmole)，以達成13.5 g/L的最終抗體濃度。將反應在30℃下以30 rpm攪拌17小時。經疊氮基修飾之粗製XMT-1604(B7-H4_2F9V18)抗體係藉由蛋白質A層析法純化並透析以給出經疊氮基修飾之XMT-1604(B7-H4_2F9V18)抗體(10.53 mg，83%產率)。 步驟 2 。 XMT-1604(B7-H4_2F9V18) 藥物共軛體 1
將於PBS pH 7.2中之經疊氮基修飾之XMT-1604(B7-H4_2F9V18)抗體(10.03 mg, 0.070 µmole)及於水中之支架 1A(4.25 mg，0.67 µmole，如US 17/144,378中所述製備)輕柔混合，接著靜置在30℃下20小時不加震盪或搖晃。將粗產物藉由UF/DF及HIC純化以給出共軛體 1-1(5.85 mg，58%產率)，其藉由還原RP-HPLC所測定之DAR為5.9。
以下給出共軛體 1-1、 1-2及 1-3之細節。
Figure 02_image890
實例 2 ：合成 XMT-1604(B7-H4_2F9V18) 細胞毒性藥物共軛體 2 ， DAR 2.0
Figure 02_image892
其中：
Figure 02_image786
係GlcNAc；
Figure 02_image788
係Fuc；且
Figure 02_image790
係GalNAc。
共軛體 2係如實例1所述合成，不同的是步驟2使用經疊氮基修飾之XMT-1604(B7-H4_2F9V18)抗體(50 mg, 0.346 µmole)及支架 2A(7.12 mg, 3.34 µmole)而非支架 1A。經純化之共軛體 2(30.1 mg，60%產率)藉由還原RP-HPLC所測定之DAR為2.0。以下給出共軛體 2-1及 2-2之細節。
Figure 02_image895
實例 3 ：合成 XMT-1603(K+)(B7-H4_2F9V7) 細胞毒性藥物共軛體 3 ， DAR 5.9
Figure 02_image897
其中：
Figure 02_image786
係GlcNAc；
Figure 02_image788
係Fuc；且
Figure 02_image790
係GalNAc。
共軛體 3係如實例1所述合成，不同的是步驟2使用經疊氮基修飾之XMT-1603(K+)(B7-H4_2F9V7)抗體(13.7 mg，0.095 µmole，如實例1步驟1中所述製備)而非經疊氮基修飾之XMT-1604(B7-H4_2F9V18)抗體。經純化之共軛體3(8.8 mg，64%產率)藉由還原RP-HPLC所測定之DAR為5.9。 實例 4 ：合成 XMT-1603(B7-H4_2F9V7) 細胞毒性藥物共軛體 4 ， DAR 5.9
Figure 02_image902
其中：
Figure 02_image786
係GlcNAc；
Figure 02_image788
係Fuc；且
Figure 02_image790
係GalNAc。
共軛體 4係如實例1所述合成，不同的是步驟2使用經疊氮基修飾之XMT-1603(B7-H4_2F9V7)抗體(22 mg，0.153 µmole，如實例1步驟1中所述製備)而非經疊氮基修飾之XMT-1604(B7-H4_2F9V18)抗體。經純化之共軛體 4(13.8 mg，63%產率)藉由還原RP-HPLC所測定之DAR為5.9。 實例 5 ：合成 XMT-1603(B7-H4_2F9V7) 細胞毒性藥物共軛體 5 ， DAR 1.9
Figure 02_image906
其中：
Figure 02_image786
係GlcNAc；
Figure 02_image788
係Fuc；且
Figure 02_image790
係GalNAc。
共軛體 5係如實例2所述合成，不同的是步驟2使用經疊氮基修飾之XMT-1603(B7-H4_2F9V7)抗體(50 mg，0.347 µmole，如實例1步驟1中所述製備)而非經疊氮基修飾之XMT-1604(B7-H4_2F9V18)抗體。經純化之共軛體 5(30.5 mg，61%產率)藉由還原RP-HPLC所測定之DAR為1.9。 實例 6 ：合成 B7-H4_2F9V11(K+) 細胞毒性藥物共軛體 6 ， DAR 5.9
Figure 02_image911
其中：
Figure 02_image786
係GlcNAc；
Figure 02_image788
係Fuc；且
Figure 02_image790
係GalNAc。
共軛體 6係如實例1所述合成，不同的是步驟2使用經疊氮基修飾之B7-H4_2F9V11(K+)抗體(16.66 mg，0.116 µmole，如實例1步驟1中所述製備)而非經疊氮基修飾之XMT-1604(B7-H4_2F9V18)抗體。經純化之共軛體 6(10.75 mg，65%產率)藉由還原RP-HPLC所測定之DAR為5.9。 實例 7 ：合成 B7-H4_2F9V17(K+) 細胞毒性藥物共軛體 7 ， DAR 5.9
Figure 02_image913
其中：
Figure 02_image786
係GlcNAc；
Figure 02_image788
係Fuc；且
Figure 02_image790
係GalNAc。
共軛體 7係如實例1所述合成，不同的是步驟2使用經疊氮基修飾之B7-H4_2F9V17(K+)抗體(13.62 mg，0.094 µmole，如實例1步驟1中所述製備)而非經疊氮基修飾之XMT-1604(B7-H4_2F9V18)抗體。經純化之共軛體 7(8.1 mg，59%產率)藉由還原RP-HPLC所測定之DAR為5.9。 實例 8 ：合成 1D11 細胞毒性藥物共軛體 8 ， DAR 5.8
Figure 02_image915
其中：
Figure 02_image786
係GlcNAc；
Figure 02_image788
係Fuc；且
Figure 02_image790
係GalNAc。
共軛體 8係如實例1所述合成，不同的是步驟2使用經疊氮基修飾之1D11抗體(15 mg，1.04 µmole，如實例1步驟1中所述製備)而非經疊氮基修飾之XMT-1604(B7-H4_2F9V18)抗體。下表給出經純化之共軛體8-1及8-2之細節。
Figure 02_image919
實例 9 ：合成利妥昔單抗 (Rituximab) 細胞毒性藥物共軛體 9 ， DAR 5.7
Figure 02_image921
其中：
Figure 02_image786
係GlcNAc；
Figure 02_image788
係Fuc；且
Figure 02_image790
係GalNAc。
共軛體 9係如實例1所述合成，不同的是步驟2使用經疊氮基修飾之利妥昔單抗抗體(131.4 mg，0.91 µmole，如實例1步驟1中所述製備)而非經疊氮基修飾之XMT-1604(B7-H4_2F9V18)抗體。下表給出經純化之共軛體 9-1及 9-2之細節。
Figure 02_image924
實例 10 ：合成利妥昔單抗 (Rituximab) 細胞毒性藥物共軛體 10 ， DAR 1.9
Figure 02_image926
其中：
Figure 02_image786
係GlcNAc；
Figure 02_image788
係Fuc；且
Figure 02_image790
係GalNAc。
共軛體 10係如實例2所述合成，不同的是步驟2使用經疊氮基修飾之利妥昔單抗抗體(35 mg，0.242 µmole，如實例1步驟1中所述製備)而非經疊氮基修飾之XMT-1604(B7-H4_2F9V18)抗體。經純化之共軛體 10(24 mg，69%產率)藉由還原RP-HPLC所測定之DAR為1.9。 實例 11 ：合成 B7-H4_2F9 細胞毒性藥物共軛體 11 ， DAR 5.9
Figure 02_image929
其中：
Figure 02_image786
係GlcNAc；
Figure 02_image788
係Fuc；且
Figure 02_image790
係GalNAc。
共軛體 11係如實例1所述合成，不同的是步驟2使用經疊氮基修飾之B7-H4_2F9抗體(21.2 mg，0.147 µmole，如實例1步驟1中所述製備)而非經疊氮基修飾之XMT-1604(B7-H4_2F9V18)抗體。經純化之共軛體 11(11.2 mg，53%產率)藉由還原RP-HPLC所測定之DAR為5.9。 實例 12 ：合成 XMT-1604(B7-H4_2F9V18) 細胞毒性藥物共軛體 12 ， DAR 11.9
Figure 02_image933
在於TEAA緩衝劑pH 7(4 mL)中之XMT-1604 (B7-H4_2F9V18)抗體(20 mg, 0.139 µmole)溶液中，在攪拌時添加TCEP(0.0993 mg, 0.347 µmole)之溶液。使混合物在室溫下培育1.5 h。接著將經部分還原之XMT-1604(B7-H4_2F9V18)抗體添加至支架 12A(18 mg，1.807 µmole，如US 9,849,191中所述製備)於TEAA緩衝劑pH 6(1.8 mL)中之劇烈攪拌溶液中。在室溫下持續攪拌1 h。將反應用半胱胺酸(0.421 mg, 3.47 µmole)於TEAA緩衝劑pH 7(0.084 mL)中之水溶液淬熄。在環境溫度且pH為7.0下攪拌30分鐘之後，將反應混合物酸化至pH 5.8。將粗產物藉由WCX純化以給出共軛體 12(10 mg，50%產率)，其藉由水解及隨後RP-HPLC所測定之DAR為11.9。 實例 13 ：合成 XMT-1603(B7-H4_2F9V7) 細胞毒性藥物共軛體 13 ， DAR 11.8
Figure 02_image935
共軛體 13係如實例12所述合成，不同的是使用XMT-1603(B7-H4_2F9V7)抗體(20 mg, 6.99 µmole)而非XMT-1604(B7-H4_2F9V18)抗體。經純化之共軛體 13(11.5 mg，58%產率)藉由水解及隨後RP-HPLC所測定之DAR為11.8。 實例 14 ：合成利妥昔單抗 (Rituximab) 細胞毒性藥物共軛體 14 ， DAR 10.8
Figure 02_image937
共軛體 14係如實例12所述合成，不同的是使用利妥昔單抗抗體(100 mg, 6.99 µmole)而非XMT-1604(B7-H4_2F9V18)抗體。經純化之共軛體 14(62.6 mg，63%產率)藉由水解及隨後RP-HPLC所測定之DAR為10.8。 實例 15 ：合成 XMT-1604(B7-H4_2F9V18)STING 的促效劑藥物共軛體 15 ， DAR 6.8
Figure 02_image939
在於50 mM HEPES、1 mM EDTA緩衝劑pH 7.0(1.53 mL)中之XMT-1604(B7-H4_2F9V18)(8 mg, 0.055 µmole)溶液中，在攪拌時添加TCEP(8 mg, 0.055 µmole)於50 mM HEPES、1 mM EDTA緩衝劑pH 7.0(0.075 mL)中之溶液。使混合物在37℃下培育1.5 h。經還原之XMT-1604(B7-H4_2F9V18)接著在攪拌時添加支架 15A(如US 17/221,341中所述製備，1.18 mg，0.5 µmole)於DMA(0.16 mL)中之溶液。在37℃下持續攪拌1 h。將反應用半胱胺酸(0.1 mg, 0.83 µmole)於50 mM HEPES、1 mM EDTA緩衝劑pH 7(0.02 mL)中之水溶液淬熄。在環境溫度且pH為7下攪拌45分鐘之後，將粗產物藉由CHT層析法純化以給出共軛體15(7.6 mg，95%產率)，其藉由UV-Vis所測定之DAR為6.8。共軛體15-1及15-2係以類似方式合成且下表提供經純化之對應共軛體之細節。
Figure 02_image941
實例 16 ：合成 1D11STING 的促效劑共軛體 16 ， DAR 6.5
Figure 02_image943
共軛體 16係如實例15所述合成，不同的是使用1D11抗體(8 mg, 0.055 µmole)而非XMT-1604(B7-H4_2F9V18)抗體。經純化之共軛體16(7 mg，87.5%產率)藉由UV-Vis所測定之DAR為6.5。 實例 17 ：合成帕利珠單抗 (Palivizumab)STING 的促效劑共軛體 17 ， DAR 6.8
Figure 02_image945
共軛體 17係如實例15所述合成，不同的是使用帕利珠單抗而非XMT-1604(B7-H4_2F9V18)抗體。經純化之共軛體 17(7 mg，87.5%產率)藉由UV-Vis所測定之DAR為6.8。 實例 18 ：合成 1D11 STING 的促效劑共軛體 18 ， DAR 6.9
Figure 02_image947
在於50 mM HEPES、1 mM EDTA緩衝劑pH 7.0(3.105 mL)中之1D11(15.9 mg, 0.109 µmole)溶液中，在攪拌時添加TCEP(0.125 mg, 0.436 µmole)於50 mM HEPES、1 mM EDTA緩衝劑pH 7.0(0.075 mL)中之溶液。使混合物在37℃下培育1.5 h。經還原之1D11接著在攪拌時添加支架18A(如US 17/221,341中所述製備，2.084 mg，0.872 µmole)於DMA(0.31 mL)中之溶液。在37℃下持續攪拌1 h。將反應用半胱胺酸(0.198 mg, 1.635 µmole)於50 mM HEPES、1 mM EDTA緩衝劑pH 7(0.04 mL)中之水溶液淬熄。在環境溫度且pH為7下攪拌45分鐘之後，將粗產物藉由CHT層析法純化以給出共軛體 18(10.8 mg，68%產率)，其藉由UV-Vis所測定之DAR為6.9。 實例 19 ：合成 1D11 STING 的促效劑共軛體 19 ， DAR 6.5
Figure 02_image949
在於50 mM HEPES、1 mM EDTA緩衝劑pH 7.0(1.921 mL)中之1D11(10 mg, 0.069 µmole)溶液中，在攪拌時添加TCEP(0.079 mg, 0.276 µmole)於50 mM HEPES、1 mM EDTA緩衝劑pH 7.0(0.079 mL)中之溶液。使混合物在37℃下培育1.5 h。經還原之1D11接著在攪拌時添加支架20A(如US 17/221,341中所述製備，0.606 mg，0.552 µmole)於DMA(0.2 mL)中之溶液。在37℃下持續攪拌1 h。將反應用半胱胺酸(0.125 mg, 1.035 µmole)於50 mM HEPES、1 mM EDTA緩衝劑pH 7(0.013 mL)中之水溶液淬熄。在環境溫度且pH為7下攪拌45分鐘之後，將粗產物藉由CHT層析法純化以給出共軛體 19(8.2 mg，82%產率)，其藉由UV-Vis所測定之DAR為6.5。 實例 20 ：合成 B7-H4_2F9V18 STING 的促效劑共軛體 21 ， DAR 6.9
Figure 02_image951
共軛體 20係如實例19所述合成，不同的是使用XMT-1604(B7-H4_2F9V18)抗體(10 mg, 0.069 µmole)而非1D11抗體。經純化之共軛體20(6.2 mg，62%產率)藉由UV-Vis所測定之DAR為6.9。 實施態樣 21 ：合成支架 24
Figure 02_image953
步驟 1 。化合物 22
Figure 02_image955
將化合物 21(250 mg，0.124 mmol，使用US 15/819,650所述之程序製備，其所有內容物以引用方式併入本文中)、水(5.9 mL)、NMP(1.5 mL)、EDC(166 mg, 0.868 mmol)及HOAt(0.041 mg, 0.298 mmol)於冰浴中攪拌，並將pH以1N NaHCO 3(aq)調整至約6.5。添加化合物 2(631 mg, 0.558 mmol)，隨後調整pH至約6.5。將所得混合物冷攪拌3 h。添加額外EDC、HOAt及化合物 2(198 mg, 0.164 mmol)，並持續攪拌隔夜。反應混合物係在C18管匣(100 g)上以自10%至60%至100% v/v ACN/H 2O之ACN/H 2O不連續梯度純化。將所欲流份冷凍乾燥以給出呈白色非晶固體(275 mg，53%產率)之化合物 22。MS: 2083.64(2 +), 1389.43(3 +), 1042.35(4 +)。 步驟 2 。化合物 23
Figure 02_image957
在化合物22(375 mg, 0.09 mmol)、EtOH(1.5 mL)及水(1.5 mL)於玻璃Parr瓶中之混合物中將氬鼓泡通過混合物，隨後添加Pd/C(9.5 mg, 0.009 mmol)。將瓶連接至氫化設備接著連續真空泵送、以氬充滿、接著以氫(0.762 mg, 0.378 mmol)充滿至30 psi，並將混合物劇烈攪拌隔夜。將反應混合物通過矽膠塞過濾並濃縮成油。將油溶解於ACN/H 2O並冷凍乾燥以獲得呈白色非晶固體(220 mg，63%產率)之化合物 23。MS: 1926.60(2 +), 1284.74(3 +), 963.80(4 +)。 步驟 3 。支架 24
Figure 02_image959
在化合物 23(150 mg, 0.039 mmol)於ACN(1.04 mL)及DMF(0.500 mL)中之冰冷溶液中添加2,5-二側氧基吡咯啶-1-基1-((1R,8S,9s)-雙環[6.1.0]壬-4-炔-9-基)-3-側氧基-2,7,10-三氧雜-4-氮雜十三-13-酯(35 mg, 0.078 mmol)及DIPEA(0.027 mL, 0.156 mmol)，最終pH約8至9。將混合物在室溫下攪拌2 h，接著濃縮並在製備型HPLC使用ACN/H 2O(0.1% TFA)作為動相純化。將所欲流份冷凍乾燥以給出呈白色非晶固體(93.1 mg，57%產率)之支架 24。MS: 2094.23(2 +), 1396.43(3 +), 1047.62(4 +)838.30(5 +)。 實例 22 ：識別對 B7-H4_2F9 之轉譯後修飾風險及產生 B7-H4 變體。
B7-H4_2F9及B7-H4_2A7之VH及VL區之分析(揭示於US20110085970A1)識別潛在轉譯後修飾(PTM)負債，因為對抗體發展性具有潛在風險而被認為非為所欲。如下所示，此分析之結果識別在B4-H4_2F9之VH鏈中之潛在風險。為了降低理論風險，這些包括以下所示之B7-H4_2F9的非典型半胱胺酸殘基、潛在Asp異構化位點及潛在Met氧化位點。
Figure 02_image961
為了消除潛在PTM危害，同時保留所欲抗體性質而產生抗體B4-H4_2F9之變體，如表1所概述。所產生之各變體抗體含有四個變化中之一者以消除非典型半胱胺酸風險(DC至YY、DY、DA或DS)。變體含有單獨這些突變(B7-H4_2F9V1、B7-H4_2F9V6、B7-H4_2F9V11、B7-H4_2F9V16)或與其他突變之組合，包括除了處理非典型半胱胺酸風險之外亦具有移除潛在Asp異構化位點之突變(DG至DA)的四個變體：B7-H4_2F9V2、B7-H4_2F9V7、B7-H4_2F9V12、B7-H4_2F9V17。四個變體具有這些突變加上處理潛在甲硫胺酸氧化危害之額外突變(MDV至LDV；B7-H4_2F9V3、B7-H4_2F9V8、B7-H4_2F9V13、B7-H4_2F9V18)，因此處理所有三個潛在PTM負債。四個變體係經設計為除了含有處理非典型半胱胺酸風險之突變之外，藉由添加2A7 HCDR3區而非B4-H4_2F9 HCDR3區來消除Asp異構化序列(B7-H4_2F9V4、B7-H4_2F9V9、B7-H4_2F9V14、B7-H4_2F9V19)。剩餘四個變體含有藉由包括2A7 HCDR3區來處理非典型半胱胺酸風險、Asp異構化風險之突變及MDV至LDV突變以處理甲硫胺酸氧化風險(B7-H4_2F9V5、B7-H4_2F9V10、B7-H4_2F9V15、B7-H4_2F9V20)。表1概述B4-H4_2F9抗體序列變異及所處理之PTM負債。
Figure 02_image963
實例 23 ： B7-H4_F9 親代抗體及其 20 個 B7-H4_2F9 抗體變體與人類 B7-H4 蛋白的 ELISA 結合
將重組人類B7-H4蛋白(R&D Systems #6576-B7-050)(1µg/mL於PBS中)藉由在4℃下培育隔夜以將該肽塗佈在96孔板各孔的表面上。接著藉由與BSA(5%於含有0.1% Tween 20之PBS(PBST)中)在室溫下培育1小時以將孔封端。接著將測試物品(B7-H4_2F9及20個B7-H4_2F9抗體變體)的一範圍稀釋(0.0061 nM至100 nM；於3% BSA於PBS中之4倍連續稀釋)添加至各孔，並使板在室溫下輕柔搖晃培育1小時。未結合之測試物品藉由PBST(3x)洗滌移除。與HRP共軛之二級抗人類IgG(0.16 µg/mL於PBST中)係於各孔中培育1小時。未結合之二級抗體藉由PBST(3x)洗滌移除。將HRP受質TMB添加至各孔並培育直到見到藍色。將反應藉由添加硫酸(0.2 N, 100 μL)淬熄。在板讀取儀(Molecular Devices, Spectramax M5)中測量在450 nm下之吸光度。數值使用GraphPad Prism軟體作圖。EC 50值係藉由四參數曲線擬合測定。表2概述結合值(EC 50)。
Figure 02_image965
如表2所示，B7-H4_2F9親代抗體與人類B7-H4蛋白結合之EC 50值為1.46 nM，且B4-H4_2F9變體與人類B7-H4蛋白結合之EC 50值介於0.94 nM與＞100 nM之間。大部分變體以與B4-H4_2F9類似之EC 50值(在三倍以內)結合，不同的是B7-H4_2F9V1、B7-H4_2F9V4、B7-H4_2F9V6、B7-H4_2F9V11及B7-H4_2F9V14，其以介於4.40與11.67 nM之間的EC 50值與B7-H4結合，及B7-H4_2F9V12在此測定中不具有可測量的結合。 實例 24 ： 20 個 B7-H4_2F9 抗體變體的 FACS 細胞性結合
B7-H4_2F9變體抗體及工具B7-H4抗體1D11與經培養之MX-1及HCC1569細胞的細胞表面結合係使用MACSQuant流動式細胞測量儀(Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Germany)評估。MX-1細胞係生長於含有10% FBS(Life Technologies)及1%青黴素/鏈黴素(Life Technologies)之DMEM: F12K(Life Technologies)中。HCC1569細胞係生長於含有10% FBS(Life Technologies)及1%青黴素/鏈黴素(Life Technologies)之RPMI(ATCC)中。以染色而言，藉由Accutase細胞剝離溶液(Innovative Cell Technologies)處理將細胞剝離。經剝離之細胞係於培養基中研磨，並以50,000個細胞於培養基(75 µL)中之密度接種於96孔U底板。細胞係與一範圍濃度(100 nM至0.0128 nM；3倍連續稀釋)之測試物品於含有6%山羊血清之總體積100 μl培養基中在冰上培育3小時。將細胞以冰冷PBS(3x)洗滌，在各洗滌步驟之間以1,000 × RCF形成團塊，並重懸於含有2%山羊血清(100 μL)及二級螢光標示抗體Alexa Fluor ®647標示山羊抗人類IgG(5 μg/mL, Life Technologies)之RPMI-1640中在冰上1小時。將細胞以冰冷PBS(3x)洗滌，並重懸於含有1%聚甲醛(100 μL)之冰冷PBS中。每細胞螢光係藉由在流動式細胞測量儀上分析各處理5,000個細胞來測定。將各處理之中位數螢光值作圖，並使用Graphpad Prism軟體藉由四參數曲線擬合計算EC 50值。
表3概述20個B7-H4_2F9抗體變體抗體與所示細胞系結合之EC 50值。
Figure 02_image967
如表3所示，與MX-1細胞之表面結合之EC 50值係在0.9至4.43 nM之範圍內，對比B4-H4_2F9之1.58 nM。大部分B7-H4_2F9變體與MX-1細胞結合之EC 50值非常類似於B4-H4_2F9(在二倍以內)，不同的是B7-H4_2F9V2之4.43 nM。1D11抗體與MX-1細胞結合之EC 50值係4.9 nM。B4-H4_2F9變體與HCC1569細胞之表面結合之EC 50值係在0.52至2.28 nM之範圍內，對比B4-H4_2F9之1.26 nM。大部分變體與HCC1569細胞結合之EC 50值非常類似於B4-H4_2F9，不同的是B7-H4_2F9V15之0.52 nM。1D11抗體與HCC1569細胞之表面結合之EC 50值係3.44 nM。 實例 25 ：藉由 ELISA 評估 20 個 B7-H4_2F9 抗體變體之多反應性
20個B7-H4_2F9抗體變體及對照的多反應性係藉由桿狀病毒粒子(BVP)ELISA評估。將板在4℃下用於碳酸鹽緩衝劑pH 9.6中之1% BVP萃取物塗佈隔夜。以三重複測試150、50、16.7及5.6 µg/mL之測試抗體。測定係遵照標準ELISA規程實施，使用陽性對照抗體(人類IgG1多特異性對照抗體；MEDNA Cat # H1308)及陰性對照抗體(人類IgG1同型對照MEDNA Cat # 1301；小鼠IgG同型對照(Invitrogen Cat # 31903))。BVP分數係基於測試抗體在150 µg/ml之濃度下以三重複超過背景信號(僅二級抗體)之ELISA信號計算。表4概述抗體之平均BVP分數。
Figure 02_image969
如表4所示，B7-H4_2F9(10.7)之BVP分數係類似於1D11抗體。結果顯示相對於B4-H4_2F9抗體在變體中製造之小序列變化導致廣泛範圍之BVP分數。變體B7-H4_2F9V6、XMT-1603(+K)B7-H4_2F9V7、B7-H4_2F9V8、B7-H4_2F9V11、B7-H4_2F9V16、B7-H4_2F9V17及XMT-1604(+K)B7-H4_2F9V18皆具有低於B7-H4_2F9及1D11抗體之BVP分數，指示所欲之多反應性減少。具有大於B7-H4_2F9抗體、1D11抗體及陽性對照之BVP分數之剩餘變體包括B7-H4_2F9V3、B7-H4_2F9V5、B7-H4_2F9V9、B7-H4_2F9V10、B7-H4_2F9V15、B7-H4_2F9V19及B7-H4_2F9V20抗體。具有最低BVP分數之5個變體(XMT-1603(+K)B7-H4_2F9V7、B7-H4_2F9V8、B7-H4_2F9V11、B7-H4_2F9V17及XMT-1604(+K)B7-H4_2F9V18)顯示所欲之多反應性減少。無法預測序列變化及所得BVP分數。 實例 26 ： B7-H4_2F9 抗體變體與人類 B7-H4 蛋白之 Octet 結合親和力
B4-H4_2F9、工具抗體1D11及5 B7-H4變體抗體(XMT-1603(+K)(B7-H4_2F9V7)、B7-H4_2F9V11、B7-H4_2F9V16、B7-H4_2F9V17及XMT-1604(+K)(B7-H4_2F9V18)之結合動力學係藉由生物膜干涉術(BLI; Octet; ForteBio)測定且親和力值係使用標準Octet程序(ForteBio)測定。將抗體固定在於1x動力學緩衝劑中之抗人類Fc生物感測器上。接著將增加濃度之重組人類B7-H4蛋白(R&D Systems #6576-B7-050)與於1x動力學緩衝劑中之固定肽相關聯。表5概述測試抗體在25℃下之K d(平衡解離常數)、k on(締合速率)及k off(解離速率)。
Figure 02_image971
如表5所示，B7-H4_2F9抗體及測試B7-H4_2F9抗體變體：XMT-1603(+K)(B7-H4_2F9V7)、B7-H4_2F9V11、B7-H4_2F9V16、B7-H4_2F9V17及XMT-1604(+K)(B7-H4_2F9V18)具有可相比的與人類B7-H4結合之親和力值。B4-H4_2F9變體之K d值在1.10E-08至2.23E-08 M之範圍內，相較之下B4-H4_2F9為1.39E-08M。B4-H4_2F9變體之k on值在7.39E+04至1.84E+05(M -1s -1)之範圍內，相較之下B4-H4_2F9為1.59E+05(M -1s -1)。B4-H4_2F9變體之k off值在1.61E-03至2.67E-03 s -1之範圍內，相較之下B4-H4_2F9為2.21E-03 s -1。工具抗體1D11具有低於B4-H4_2F9超過100倍之K d值。1D11抗體之k on值非常類似於B4-H4_2F9及變體抗體之值(在二倍以內)，但低於B7-H4_2F9及變體超過100倍。 實例 27 ：評估 XMT-1604(B7-H4_2F9V18) 抗體之 T 細胞抑制
將野生型HEK-293細胞(HEK-293-WT)或經工程改造以表現B7-H4(HEK-293-B7-H4)之HEK293細胞以50,000個細胞之密度接種及培養於96孔板之補充有10% FBS及5%青黴素/鏈黴素之Eagle氏最低必需培養基中，且允許在37℃、5% CO 2的增濕氣氛下附著隔夜。隔天，移除培養基且置換為T細胞培養基(含有10% FBS及5%青黴素/鏈黴素之Iscove氏改良Dulbecco氏培養基)。將細胞用50 nM最終濃度之1D11工具抗體、XMT-1604(+K)(B7-H4_2F9V18)抗體或非結合對照抗體帕利珠單抗在37℃下培育2小時，然後添加如下製備之CD3+T細胞。將冷凍人類PBMC(2.5x10 7個細胞)解凍且使用Easy step™人類T細胞單離套組(StemCell Technologies)富集CD3+T細胞。將CD3+T細胞用CellTrace™ Violet細胞增生套組(CTV; ThermoFisher Scientific)標示且調整至2x10 6個細胞/mL。將經CTV標示之T細胞(1x10 5)添加至經測試物品處理之HEK-293-WT或HEK-293-B7-H4細胞，以Immunocult™人類CD3/CD28 T細胞刺激劑(StemCell Technologies)刺激且在37℃下於5% CO 2中培育。在HEK-293-WT或HEK-293-B7-H4與經CTV標示之T細胞共培養4天之後，使用流式細胞術藉由稀釋經CTV標示之T細胞來評估T細胞增生。將各組的共培養細胞(經CTV標示之T細胞及HEK-293-WT/HEK-293-B7-H4細胞)轉移至U底96孔板、用PBS洗滌、用活/死可固定Aqua死細胞染色染料(ThermoFisher Scientific)染色，且接著用經螢光團共軛之目標特異性或同型對照抗體(FITC抗人類CD45、PE/Cy7抗人類CD4、PE/Cy7抗人類CD8)額外染色。將細胞固定且受到關注蛋白的表面表現係藉由流式細胞分析在MACSQuant流式細胞儀上測定。使用下列階層流，藉由FlowJo軟體實施資料分析：1)單一圈選，2)活細胞，3)CD45+細胞及4)經稀釋之CTV(相較於未經刺激之T細胞)。分別使用CD4+與經稀釋之CTV之組合及CD8+與經稀釋之CTV之組合計算增生CD4+或CD8+T細胞之百分比。資料代表各測試物品之三重複孔的平均(±標準差)。表6給出各條件下活細胞、CD45+、增生CD4+T細胞及增生CD8+T細胞之族群(%)。
Figure 02_image973
如表6所示，當T細胞在對照組(帕利珠單抗)中與HEK-293-B7-H4細胞培養相較於HEK-293-WT細胞時，增生CD4+細胞及增生CD8+T細胞之比例顯著降低(student’s t檢定；分別P≤0.001及P≤0.05)。以1D11 B7-H4_或1604(+K)(B7-H4_2F9V18)抗體處理不顯著恢復CD4+T細胞或CD8+T細胞之增生。因此，XMT-1604(+K)(B7-H4_2F9V18)不抑制HEK-293-B7-H4細胞對於共培養CD4+或CD8+T細胞之抗增生效應。 實例 28 ：變體 B7-H4 細胞毒性藥物抗體 - 藥物共軛體與 B7-H4 蛋白的 ELISA 結合
自B4-H4_2F9變體XMT-1603(+K)產生之ADC DAR 6個共軛體；共軛體 3)、B7-H4_2F9V11共軛體 6、B7-H4_2F9V17共軛體 7、XMT-1604(+K)；共軛體 1-1及共軛體 8-1、對應未共軛抗體、非結合對照ADC共軛體 9-1及非結合對照mAb(帕利珠單抗)與B7-H4蛋白的ELISA結合係如實例23所述進行，不同的是藉由與阻斷緩衝液(4% BSA於PBS中)培育以將孔封端，且使用B7-H4測試物品及非結合對照的一範圍稀釋(0.0013 nM至100nM；5倍連續稀釋於1% BSA於PBS中)。表7概述結合值(EC 50)。
Figure 02_image975
如表7所示，以B4-H4_2F9變體抗體XMT-1603(+K)(B7-H4_2F9V7)、B7-H4_2F9V11及XMT-1604(+K)(B7-H4_2F9V18)製成的抗體-藥物共軛體及1D11之EC 50值具有與對應未共軛抗體類似的結合值(在2.5倍以內)。共軛體7之結合比起其未共軛抗體B7-H4_2F9V17顯示大於4x較不強效。在對照抗體及其對應ADC所觀察到之缺乏結合指示B7-H4靶向抗體及ADC之結合特異性。 實例 29 ： XMT-1603(B7-H4_2F9V7) 及 XMT-1604(B7-H4_ 2F9V18) 細胞毒性藥物共軛體與人類 B7-H4 蛋白的 ELISA 結合
XMT-1603(+K)(B7-H4_2F9V7)、XMT-1604(+K) (B7-H4_2F9V18)及其對應細胞毒性藥物共軛體與人類B7-H4蛋白之結合係藉由ELISA如實例23所述測試，不同的是使用測試物品的一範圍稀釋(0.0013 nM至100nM；5倍連續稀釋於1% BSA於PBS中)。測試物品係共軛體 5、共軛體 4、共軛體 13、共軛體 2-1、共軛體 1-2及共軛體 12。本研究所使用之對照包括非結合抗體及非結合對照ADC共軛體 10、共軛體 9-2及共軛體 14(多拉弗來蛋白(Dolaflexin) DAR10.9)。表8概述結合值(EC 50)。
Figure 02_image977
如表8所示，以B4-H4_2F9變體抗體XMT-1603 B7-H4_2F9V7及XMT-1604 B7-H4_2F9V18製成的共軛體之EC 50值與其未共軛抗體類似(在二倍以內)。在對照抗體所觀察到之缺乏結合指示B7-H4靶向抗體及ADC之結合特異性。 實例 30 ： XMT-1604 B7-H4_2F9V18 及細胞毒性藥物共軛體與來自人類、猴、大鼠及小鼠之 B7-H4 蛋白的 ELISA 結合
來自人類、猴、大鼠及小鼠B7-H4之B7-H4蛋白與XMT-1604(B7H4_2F9V18)及對應細胞毒性藥物共軛體之結合係藉由ELISA如實例23所述測試。這些研究所使用之蛋白係：人類B7-H4(R&D Systems; 6576-B7-050)、猴B7-H4(Creative Biomart; VTCN1-1519R)、大鼠(R&D Systems 10085-B7)及小鼠(Creative Biomart; VTCN1-1519R)。測試物品係共軛體2-1、共軛體1-2及共軛體12。本研究所使用之對照包括非結合hu-IgG1抗體及非結合對照ADC共軛體 10、共軛體 9-2及共軛體 14。表9概述結合值(EC 50)。以人類、猴、大鼠及小鼠B7-H4而言，結果係二個研究的平均。
Figure 02_image979
如表9所示，XMT-1604(B7H4_2F9V18)及對應細胞毒性藥物共軛體(共軛體 12、共軛體 1-2及共軛體 2-1)的結合值在四個測試物種之間彼此類似。與人類B7-H4蛋白結合之EC 50值的範圍係介於0.20與0.30 nM之間，猴蛋白0.17與0.24 nM之間，大鼠蛋白0.13與0.18 nM之間，及小鼠蛋白0.30與0.52 nM之間。對照細胞毒性藥物共軛體及抗體顯示與B7-H4蛋白無結合。 實例 31 ： XMT-1604 B7-H4_2F9V18 及細胞毒性藥物共軛體與人類 B7-H4 蛋白的 Octet 結合親和力
二個批次XMT-1604 B7-H4_2F9V18-批次1及其XMT-細胞毒性藥物共軛體(共軛體 2-1、共軛體 1-2及共軛體 12)及XMT-1604 B7-H4_2F9V18-批次2及其細胞毒性藥物共軛體及共軛體 2-2、共軛體 1-3與人類B7-H4的結合動力學係藉由生物膜干涉術(Octet)如實例23所述評估。表10概述結果。以人類、猴、大鼠及小鼠B7-H4而言，XMT-1604 B7H4_2F9V18-批次1、共軛體 12、共軛體 1-2及共軛體 2-1的結果係三個研究的平均，且XMT-1604 B7-H4_2F9V18-批次2共軛體 2-2及共軛體 1-3係分析一次。
Figure 02_image981
如表10所示，XMT-1604 B7H4_2F9V18細胞毒性藥物共軛體及XMT-1604 B7H4_2F9V18抗體的K d、k on及k off值類似於未共軛抗體。以XMT-1604 B7H4_2F9V18-批次1及其共軛體(共軛體 12、共軛體 1-2及共軛體 2-1)而言，K d值的範圍介於1.87E-08至2.56E-08 M之間，k on值介於8.13E+04至1.09E+05 M -1s -1之間，且k off值介於1.80E-03至1.94E-03 s -1之間。以XMT-1604 B7H4_2F9V18-批次2及其細胞毒性藥物共軛體(共軛體 1-3及共軛體 2-2)而言，K d值係介於2.15E-08至2.51E-08 M之間，k on值介於8.51E+04至1.06E+05之間，且k off值介於2.01E-03至2.44E-03之間。 實例 32 ： XMT-1604(B7-H4_2F9V18)B7-H4 細胞毒性藥物共軛體的 FACS 細胞性結合測定
XMT-1604(B7-H4_2F9V18)及其共軛體(共軛體 2-1、共軛體 1-2及共軛體 12)與人類B7-H4的細胞表面結合係藉由流式細胞術評估。本研究所使用的對照包括非結合hu-IgG1抗體帕利珠單抗及ADC共軛體 10、共軛體 9-2及共軛體 14。
測試物品與經人類B7-H4穩定轉染之細胞系MX-1及HEK-293細胞及未轉染HEK-293細胞之結合係使用MACSQuant流式細胞儀(Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Germany)如實例24所述評估，不同的是測試物品係以0.0013 nM至100 nM之濃度；5倍連續稀釋於1% BSA於PBS中評估。MX-1細胞係如實例24所述生長。HEK-293-B7-H4細胞係生長於EMEM(ATCC)、10% FBS、1%青黴素/鏈黴素及3µg/ml嘌呤黴素(Life Technologies)中且未轉染HEK-293細胞係生長於EMEM、10% FBS、1%青黴素/鏈黴素中。表11概述測試物品在MX-1、HEK-293-B7-H4及HEK-293細胞之表面上的EC 50值。結果係各測試物品二個複製實驗的平均值。
Figure 02_image983
如表11所示，XMT-1604(B7-H4_2F9V18)與MX-1及HEK-293-B7-H4細胞之結合與其細胞毒性藥物共軛體(共軛體 12、共軛體 1-2及共軛體 2-1)非常類似(所有皆在二倍以內)。非結合對照抗體及其細胞毒性藥物共軛體不與MX-1或HEK-293-B7-H4細胞結合，且無測試物品與未轉染HEK-293細胞結合。這些結果指示XMT-1604(B7-H4_2F9V18)及其細胞毒性藥物共軛體與細胞表面B7-H4之特異性、強效結合。 實例 33 ： XMT-1604(B7-H4_2F9V18) 細胞毒性藥物共軛體的細胞毒性測定
XMT-1604(B7-H4_2F9V18)細胞毒性藥物共軛體之抗增生活性係於細胞毒性測定中測試。測試細胞毒性藥物共軛體係共軛體 2-1、共軛體 1-2、共軛體 1-3及共軛體 12。本研究所使用之對照包括非結合對照共軛體(共軛體 10、共軛體 9-2及共軛體 14)。
細胞毒性測定係使用HEK-293-B7-H4及未轉染HEK-293細胞於活體外使用CellTiter-Glo ®(Promega Corp)實施。將細胞以每孔2,000個細胞之密度接種於白壁(體積)96孔板，且允許在37℃、5% CO 2的增濕氣氛下附著隔夜。細胞係以增加濃度之測試物品培育。以CAMA-1細胞而言，在三天之後或五天之後，添加CellTiter-Glo ®試劑至在室溫下之孔。在10分鐘後使用SpectraMax M5板讀取儀(Molecular Devices)測量發光信號。使用GraphPad Prism軟體產製劑量反應曲線。EC 50值係自四參數曲線擬合測定。表12概述EC 50值。顯示的值係各測試物品二個複製實驗的平均值。
Figure 02_image985
如表12所示，以CAMA-1細胞而言，共軛體1-3比起共軛體9-2更強效超過200倍。以HEK-293-B7-H4細胞而言，共軛體 12、共軛體 1-2及共軛體 2-1顯示類似細胞毒性效力(在二倍以內)，然而非結合對照共軛體(共軛體 9-2、共軛體 10及共軛體 14)超過100x較不強效。在不表現B7-H4之未轉染HEK-293細胞中，所有共軛體顯示大於100 nM之類似EC 50值(在二倍以內)。這些研究的結果指示B7-H4共軛體特異性、強效誘導細胞性細胞毒性。 實例 34 ： XMT-1604(B7-H4_2F9V18) 及 1D11 STING 的促效劑共軛體與重組人類 B7-H4 蛋白的 ELISA 結合
XMT-1604(B7-H4_2F9V18)及其STING的促效劑共軛體(共軛體 15及共軛體 19)與重組人類B7-H4蛋白之結合係藉由ELISA如實例23所述進行，不同的是孔係藉由以阻斷緩衝液(3% BSA於PBST中)培育來封端及使用0至100 nM之一範圍稀釋測試物品(4倍連續稀釋於1% BSA於PBST中)。本研究中之其他測試物品係1D11抗體及其STING的促效劑共軛體(共軛體 16、共軛體 18及共軛體 20)、非結合抗體(帕利珠單抗)及其STING的促效劑共軛體(共軛體 17)。表13概述結合值(EC 50)。
Figure 02_image987
如表13所示，共軛體 15、共軛體 16、共軛體 18、共軛體 19及共軛體 20之EC 50值分別為0.99、1.08 nM、0.76、0.47及1.54係可相比的，然而對照抗體及其共軛體不顯示任何結合。這些結果指示XMT-1604(B7-H4_2F9V18)及其共軛體與人類B7-H4蛋白之特異性結合。 實例 35 ： XMT-1604(B7-H4_2F9V18) 及 1D11 STING 的促效劑共軛體的 FACS 細胞性結合測定
XMT-1604(B7-H4_2F9V18)及其共軛體(共軛體 15、共軛體 15-1及共軛體 20)與MX-1細胞的細胞表面結合係使用MACSQuant流式細胞儀(Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Germany)評估。本研究所使用之對照包括1D11抗體及其共軛體(共軛體 16及共軛體 19)及非結合抗體(帕利珠單抗)及其共軛體(共軛體 17)。實驗係如實例24所述實施，不同的是細胞係與0.0122 nM至200 nM(4倍連續稀釋)之一範圍濃度之測試物品於調整含有6%山羊血清之總體積100 μl培養基中在冰上培育2小時。將細胞以冰冷PBS(2x)洗滌，在各洗滌步驟之間以1,000 × RCF形成團塊，並重懸於含有2%山羊血清(100 μL)及二級螢光標示抗體Alexa Fluor ®647標示山羊抗人類IgG(6 μg/mL, Life Technologies)之RPMI-1640中在冰上1小時。將細胞以冰冷PBS(2x)洗滌，並重懸於含有1%聚甲醛(100 μL)之冰冷PBS中。每細胞螢光係藉由在流動式細胞測量儀上分析各處理10,000個細胞來測定。表14概述抗體及其對應STING的促效劑共軛體與MX-1細胞結合之EC 50值。
Figure 02_image989
如表14所示，XMT-1604(B7-H4_2F9V18)及其共軛體(共軛體 15、共軛體 15-1及共軛體 20)與MX-1細胞之結合係可相比的且其EC 50值大於在1D11抗體及其共軛體(共軛體 16及共軛體 19)所觀察到者(在2至4倍以內)。非結合對照抗體(帕利珠單抗)及其共軛體(共軛體17)不與MX-1細胞結合。這些結果指示B7-H4_2F9V18及其共軛體(共軛體 15、共軛體 15-1及共軛體 20)與細胞表面B7-H4之特異性低nM結合。 實例 36 ：使用癌細胞 /THP1 螢光素酶報導子細胞共培養之 XMT-1604(B7-H4_2F9V18) 及 1D11 STING 的促效劑共軛體的 STING 活化活體外功能測定
藉由靶向B7-H4之STING的促效劑共軛體誘導免疫細胞的STING途徑係藉由癌細胞/THP1-IRF3-螢光素酶報導子細胞共培養測定評估。將MX-1細胞接種於96孔CellBind表面組織培養板(17,000個細胞/孔)且允許於RPMI-1640培養基(含10% FBS及1%青黴素/鏈黴素)中附著4小時。將共軛體之一範圍稀釋(基於載荷物0.01 nM至100 nM；4倍連續稀釋於生長培養基中)：共軛體 15、共軛體 16、共軛體 19、共軛體 20、共軛體 15-1、共軛體 15-2及共軛體 17或游離STING的促效劑(如US 11,155,567中所述製備)添加至各孔，並使板在37℃下培育20 min。接著將THP1-Dual™細胞(InvivoGen)(50,000個細胞)添加至各孔且在37℃下在5% CO 2之增濕氣氛下持續培育24小時。將來自各培育樣本之細胞培養上清液(20 µL)添加至經重懸之QUANTI-Luc(InvivoGen)(50 μL)並使用SpectraMax M5板讀取儀(Molecular Devices)立即測量發光信號。自劑量反應曲線測定EC 50值。表15提供與MX-1癌細胞共培養之THP1雙重細胞中的EC 50值。
Figure 02_image991
如表15所示，兩種STING的促效劑共軛體(共軛體 15、共軛體 16、共軛體 19、共軛體 20、共軛體 15-1、共軛體 15-2)展現類似的螢光素酶報導子活性，其EC 50值低於1 nM，且比起非結合抗體(帕利珠單抗)共軛體(共軛體 17)及游離STING的促效劑分別降低至少200倍。因此，B7-H4_2F9V18 STING的促效劑共軛體顯示目標特異性及Fc受體介導之遞送至免疫細胞(THP1)活性之角色。 實例 37 ：在 MX-1 TNBC 異體移植小鼠模型中投予 B7-H4_2F9 細胞毒性藥物共軛體的腫瘤生長反應
雌性無胸腺裸鼠係經皮下植入MX-1人類乳癌異種移植腫瘤片段(每小鼠約1 mm 3)。當腫瘤體積介於63至196 mm 3之間時，將動物隨機分組至治療組(平均=119至123 mm 3/組)(n=10/組)。媒劑、共軛體 9-1(2.46/0.075或4.92/0.150 mg/kg)、共軛體 11(2.28/0.075或4.56/0.150 mg/kg)、共軛體 3(2.30/0.075或4.60/0.150 mg/kg)、共軛體 6(2.30/0.075或4.61/0.150 mg/kg)、3740(2.30/0.075或4.60/0.150 mg/kg)或共軛體 1-1(2.30/0.075或4.60/0.150 mg/kg)係在第1天靜脈內投藥(所有劑量係以抗體/載荷物給予)。未注意到顯著體重減輕或臨床觀察。
圖 7提供經B7-H4_2F9細胞毒性藥物共軛體：共軛體 9-1、共軛體 11、共軛體 3、共軛體 6、共軛體 7及共軛體 1-1治療之MX-1荷瘤小鼠的腫瘤體積結果。以共軛體 112.28/0.075 mg/kg治療導致4 CR。以共軛體 32.30/0.075 mg/kg治療導致1 PR及1 CR。以共軛體 62.30/0.075 mg/kg治療導致1 PR、2 CR、1 TFS。以共軛體 72.30/0.075 mg/kg治療導致1 PR、3 CR、1 TFS。以共軛體 1-12.30/0.075 mg/kg治療導致2 PR、1 CR、1 TFS。以共軛體 114.56/0.150 mg/kg治療導致1 PR、9 CR、4 TFS。以共軛體 34.60/0.150 mg/kg治療導致10 CR、6 TFS。以共軛體 64.61/0.150 mg/kg治療導致10 CR、10 TFS。以共軛體 74.60/0.150 mg/kg治療導致10 CR、8 TFS。以共軛體 1-14.60/0.150 mg/kg治療導致10 CR、7 TFS。無其他治療誘導消退反應。 實例 38 ：在 MX-1 TNBC 異體移植小鼠模型中投予 B7-H4_2F9V18 細胞毒性藥物共軛體的腫瘤生長反應
雌性無胸腺裸鼠係經皮下植入MX-1人類乳癌異種移植腫瘤片段(每小鼠約1mm 3)。當腫瘤體積介於75至221 mm 3之間時，將動物隨機分組至治療組(平均=123.5至126.8 mm 3/組)(n=10/組)。媒劑、共軛體 14(2.57/0.150 mg/kg)、共軛體 9-2(4.56/0.150 mg/kg)、共軛體 10(14.37/ 0.150 mg/kg)、共軛體 12(2.26/0.150或0.75/0.050 mg/kg)、共軛體 1-2(5.37/0.177、2.33/0.077或1.79/0.059 mg/kg)、共軛體 2-1(13.45/0.150、4.60/0.050或2.30/0.025 mg/kg)或XMT-1604 B7-H4_2F9V18(13.80/0 mg/kg)係在第1天靜脈內投藥(所有劑量係以抗體/載荷物給予)。未注意到顯著體重減輕或臨床觀察。
圖 8提供經B7-H4_2F9細胞毒性藥物共軛體：共軛體 14、共軛體 9-2、共軛體 10、共軛體 12、共軛體 1-2、共軛體 2-1及XMT-1604(B7-H4_2F9V18)治療之MX-1荷瘤小鼠的腫瘤體積結果。以共軛體 142.57/0.150 mg/kg治療導致1 CR、1 TFS。以共軛體 122.26/0.150 mg/kg治療導致1 PR。以共軛體 1-25.37/0.177 mg/kg治療導致10 CR、8 TFS。以共軛體 1-22.33/0.077 mg/kg治療導致1 PR、2 CR、2 TFS。以共軛體 1-21.79/0.050 mg/kg治療導致1 CR。無其他治療誘導消退反應。 實例 39 ：在 HBCx-19 病患衍生性異體移植模型中投予 B7-H4_2F9V18 細胞毒性藥物共軛體的腫瘤生長反應
雌性無胸腺裸鼠係經皮下植入HBCx-19人類乳癌異種移植腫瘤片段(每小鼠4x3 mm)。當腫瘤體積介於75至221 mm 3之間時，將動物隨機分組至治療組(平均=123.5至126.8 mm 3/組)(n=10/組)。媒劑、共軛體 1-2(1.79/0.059或5.37/0.177 mg/kg)、共軛體 9-2(4.56/0.150 mg/kg)、共軛體 2-1(4.60/0.050或13.45/0.150 mg/kg)或共軛體 10(14.37/0.150 mg/kg)係在第1天靜脈內投藥(所有劑量係以抗體/載荷物給予)。未注意到顯著體重減輕或臨床觀察。
圖 9提供經B7-H4_2F9細胞毒性藥物共軛體：共軛體 9-2、共軛體 10、共軛體 1-21及共軛體 2-1治療之HBCx-19荷瘤小鼠的腫瘤體積結果。以共軛體1-2(5.37/ 0.177 mg/kg)治療導致7 TFS，顯示此共軛體最為有效。無其他治療誘導抗腫瘤反應。 實例 40 ：在 HBCx-24 病患衍生性異體移植模型中投予 B7-H4_2F9V18 細胞毒性藥物共軛體的腫瘤生長反應
雌性無胸腺裸鼠係經皮下植入HBCx-24人類乳癌異種移植腫瘤片段(每小鼠4x3 mm)。當腫瘤體積介於62.5至256 mm 3之間時，將動物隨機分組至治療組(平均=141.40至149.25 mm 3/組)(n=10/組)。媒劑、共軛體 14(2.57/0.150 mg/kg)、共軛體 9-2(4.56/0.150 mg/kg)、共軛體 10(14.37/0.150 mg/kg)、共軛體 12(2.26/0.150或0.75/ 0.050 mg/kg)、共軛體 1-2(4.56/0.150、2.30/0.076或1.52/ 0.05 mg/kg)、共軛體 2-1(13.45/0.150、4.60/0.050或2.30/ 0.025 mg/kg)或XMT-1604(B7-H4_2F9V18)(13.80/0 mg/kg)係在第1天靜脈內投藥(所有劑量係以抗體/載荷物給予)。未注意到顯著體重減輕或臨床觀察。
圖 10提供經B7-H4_2F9細胞毒性藥物共軛體：共軛體 14、共軛體 9-2、共軛體 10、共軛體 12、共軛體 1-2、共軛體 2-1及XMT-1604(B7-H4_2F9V18)治療之HBCx-24荷瘤小鼠的腫瘤體積結果。以共軛體 12(2.26/ 0.150 mg/kg)治療導致3 PR、6 CR、1 TFS。以共軛體 1-2(1.52/0.050 mg/kg)治療導致5 TFS。以共軛體 1-2(2.30/ 0.076 mg/kg)治療導致3 PR及4 CR。以共軛體 1-2(4.56/ 0.150 mg/kg)治療導致10 CR及3 TFS。以共軛體 2-1(4.60/ 0.050 mg/kg)治療導致5 TS。以共軛體 2-1(13.80/0.150 mg/kg)治療導致7 TS。無其他治療誘導抗腫瘤反應。 實例 41 ： MX-1 腫瘤小鼠在投予 B7-H4_2F9V18 細胞毒性藥物共軛體之後的總藥物血漿暴露
雌性無胸腺裸鼠係經皮下植入MX-1腫瘤片段(各組n=4)。共軛體 12(2.26/0.150或0.75/0.050 mg/kg)、共軛體 1-2(5.37/0.177、2.33/0.077或1.79/0.059 mg/kg)或共軛體 2-1(13.80/0.150、4.60/0.050或2.30/0.025 mg/kg)係在第1天靜脈內投藥(所有劑量係以抗體/載荷物給予)。在下列時間點收集剪尾血液樣本(0.04 mL)：投藥後15分鐘、24小時(第2天)、72小時(第4天)、168小時(第8天)、240小時(第11天)及336小時(第15天)。將血液以K 2EDTA抗凝血劑處理成血漿以供收集。將樣本急速冷凍且儲存在-80℃下直到運送。
使用MSD-ECL夾心式免疫測定測量總抗體。經共軛之藥物係在樣本使用一般抗人類Fc磁珠進行免疫捕捉且經氫氧化鈉處理以釋放經共軛之藥物之後藉由LC-MS測量。表16及表17分別給出總抗體及經共軛之藥物的PK參數。
Figure 02_image993
Figure 02_image995
以總抗體而言，共軛體 12、共軛體 1-2及共軛體 2-1似乎具有劑量等比性C max。所有測試物品似乎顯示隨著劑量增加而降低廓清。共軛體 1-2與在不同劑量水準下之共軛體 2-1具有可相比的廓清，然而由於DAR差異及相等載荷物投藥而具有抗體之低暴露(AUC)。
以經抗體共軛之藥物而言，共軛體 12、共軛體 1-2及共軛體 2-1似乎具有劑量等比性C max。觀察到具有0.15 mg/kg及0.05 mg/kg載荷物劑量之共軛體 12相較於共軛體 1-2及共軛體 2-1具有較低暴露及較快廓清。共軛體 1-2與在不同劑量水準下之共軛體 2-1具有可相比的暴露及廓清。 實例 42 ： MX-1 腫瘤小鼠在投予 B7-H4_2F9 細胞毒性藥物共軛體之後的總藥物血漿暴露
雌性無胸腺裸鼠係經皮下植入MX-1腫瘤片段(各組n=4)。媒劑、共軛體 11(4.56/0.150 mg/kg)、共軛體 3(4.60/0.150 mg/kg)、共軛體 6(4.61/0.150 mg/kg)、3740(4.60/0.150 mg/kg)或共軛體 1-1(4.60/0.150 mg/kg)係在第1天靜脈內投藥(所有劑量係以抗體/載荷物給予)。在下列時間點收集剪尾血液樣本(0.04 mL)：投藥後15分鐘、24小時(第2天)、72小時(第4天)、168小時(第8天)、240小時(第11天)及336小時(第15天)。將血液以K 2EDTA抗凝血劑處理成血漿以供收集。將樣本急速冷凍且儲存在-80℃下直到運送。
使用MSD-ECL夾心式免疫測定測量總抗體。總藥物係在樣本經氫氧化鈉直接處理以釋放經共軛之藥物之後藉由LC-MS測量。表18及表19分別給出總抗體及總藥物的PK參數。
Figure 02_image997
Figure 02_image999
以總抗體而言，所有測試物品具有近似可相比的C max、廓清及表現為AUC∞之暴露。以經共軛之藥物而言，所有測試物品具有就C max、廓清及表現為AUC∞之暴露方面可相比的PK參數。 實例 43 ：在 MX- 1 異體移植小鼠模型中投予 B7-H4_2F9V18 及 1D11 STING 的促效劑藥物共軛體的腫瘤生長反應
雌性CB.17 SCID小鼠係經皮下接種MX-1人類乳癌異種移植腫瘤片段(每小鼠約1 mm 3)。當腫瘤體積介於63至108 mm 3之間時，將動物隨機分組至治療組(平均=76.8至82 mm 3/組)(n=10/組)。媒劑、共軛體 17(0.085/ 0.030或2.84/0.100 mg/kg)、共軛體 16(0.89/0.030或2.97/ 0.100 mg/kg)、共軛體 15(0.85/0.030或2.83/0.100 mg/kg)或diABZI IV STING的促效劑(5 mg/kg)係在第1天靜脈內投藥(所有劑量皆寫為抗體/載荷物)。
圖 11提供經STING的促效劑藥物共軛體：共軛體 17、共軛體 16、共軛體 15及diABZI IV STING的促效劑治療之MX-1荷瘤小鼠的腫瘤體積結果。以共軛體 17(2.84/0.100 mg/kg)治療導致1 CR；此動物在研究終止之時(第60天)係歸類為無腫瘤存活。以共軛體 16(0.89/0.030 mg/kg)治療導致1 PR及2 CR；1 TFS。以共軛體 16(2.97/ 0.100 mg/kg)治療導致8 CR、6 TFS。以共軛體 15(0.85/ 0.030 mg/kg)治療導致1 CR及1 TFS。以共軛體 15(2.83/ 0.100 mg/kg)治療導致10 CR、5 TFS。以diABZI IV STING的促效劑(5 mg/kg)治療導致1 CR。結果顯示共軛體 15(2.83/0.100 mg/kg)最為有效。 實例 44 ：在 MX-1 TNBC 異體移植模型中投予 B7-H4_2F9V18 細胞毒性藥物共軛體的腫瘤生長反應
雌性無胸腺裸鼠係經皮下植入MX-1人類乳癌異種移植腫瘤片段(每小鼠1mm 3)。當腫瘤體積介於75至196 mm 3之間時，將動物隨機分組至治療組(平均=125至128 mm 3/組)(n=10/組)。媒劑、共軛體 14(2.57/0.150 mg/kg)、共軛體 9-2(4.56/0.150 mg/kg)、共軛體 12(2.26/ 0.150或1.13/0.075 mg/kg)、共軛體 1-3(4.68/0.150或2.34/ 0.075 mg/kg)或共軛體 2-2(13.81/0.150或6.90/0.075 mg/kg)係在第1天靜脈內投藥(所有劑量皆寫為抗體/載荷物)。未注意到顯著體重減輕或臨床觀察。
圖 12提供經共軛體 14、共軛體 9-2、共軛體 12、共軛體 1-3或共軛體 2-2治療之MX-1荷瘤小鼠的腫瘤體積結果。以共軛體 12(2.26/0.150 mg/kg)治療導致1 CR。以共軛體 1-3(4.68/0.150 mg/kg)治療導致10 CR、7 TFS。以共軛體 1-3(2.34/0.075 mg/kg)治療導致2 PR。無其他治療誘導消退反應。 實例 45 ：小鼠在投予 B7-H4_2F9V18 細胞毒性藥物共軛體之後的血漿暴露
雌性無胸腺裸鼠係經皮下植入MX-1人類乳癌異種移植腫瘤片段(每小鼠約1mm 3)。媒劑、共軛體 1-3(2.32/0.075; 4.65/0.15)、共軛體 2-2(6.74/0.075; 13.5/0.15)或共軛體 12(1.13/0.075; 2.26/0.15)係在第1天作為單一劑量靜脈內投藥(所有劑量皆寫為抗體/載荷物)。在下列時間點收集剪尾血液樣本(0.04 mL)：投藥後15分鐘、24小時(第2天)、72小時(第4天)、168小時(第8天)、240小時(第11天)及336小時(第15天)。將血液以K2EDTA抗凝血劑處理成血漿以供收集。將樣本急速冷凍且儲存在-80℃下直到運送。
使用MSD-ECL夾心式免疫測定測量總抗體。經共軛之藥物係在樣本藉由固定在磁珠上之抗人類IgG1 Fc抗體進行免疫捕捉及隨後藉由水解釋放AF-HPA之後藉由LC-MS測量。表20及表21分別給出總抗體及經共軛之藥物的PK參數。
Figure 02_image1001
Figure 02_image1003
以總抗體而言，共軛體 1-3、共軛體 2-2及共軛體 12似乎具有劑量等比性C max。觀察到共軛體 12相較於共軛體 1-2及 2-2具有較低暴露及較快廓清。共軛體 1-3與在不同劑量水準下之共軛體 2-2具有可相比的廓清，但具有抗體之低暴露(AUC)。
以經抗體共軛之藥物而言，共軛體 1-3、共軛體 2-2及共軛體 12似乎具有劑量等比性C max。觀察到共軛體 12相較於共軛體 1-2及 2-2具有較低暴露及較快廓清。共軛體 1-3與在不同劑量水準下之共軛體 2-1具有可相比的暴露及廓清。 實例 46 ：食蟹獼猴在投予 B7-H4- 細胞毒性藥物共軛體之後的血漿暴露研究
食蟹獼猴係經媒劑、共軛體 1-3(2.81/0.09)或共軛體 2-2(8.28/0.09)藉由IV輸注45分鐘靜脈注射(各組一隻雄性及一隻雌性)。在給藥前及在輸注結束後1小時、6小時、24小時(第1天)、96小時(第5天)、168小時(第8天)、240小時(第11天)及336小時(第15天)及504小時(第22天)收集血液樣本。將血液以K2-EDTA抗凝血劑處理成血漿以供收集。將樣本在乾冰上冷凍且儲存在-80℃下直到運送。
使用MSD-ECL夾心式免疫測定測量總抗體。游離藥物係藉由LC-MS測量。經共軛之藥物係在樣本藉由固定在磁珠上之抗人類IgG1 Fc抗體進行免疫捕捉及隨後藉由水解釋放AF-HPA之後藉由LC-MS測量。表22、表23及表24分別給出總抗體、經共軛之藥物及游離藥物的PK參數。
Figure 02_image1005
Figure 02_image1007
Figure 02_image1009
以總抗體而言，共軛體1-3與在不同劑量水準下之共軛體2-2具有可相比的廓清。以經共軛之藥物而言，共軛體1-3與共軛體2-2具有可相比的暴露及廓清。共軛體1-3及共軛體2-2兩者皆具有低水準的游離AF-HPA。 實例 47 ：食蟹獼猴在投予 B7-H4 STING 的促效劑藥物共軛體之後的血漿暴露研究
食蟹獼猴係經共軛體 15-2(9.0/0.33)藉由IV輸注45分鐘靜脈注射(一隻雄性及一隻雌性)。在給藥前及在輸注結束後1小時、6小時、24小時(第1天)、48小時(第2天)、96小時(第5天)、168小時(第8天)、240小時(第11天)、336小時(第15天)及504小時(第22天)收集血液樣本。將血液以K2-EDTA抗凝血劑處理成血漿以供收集。將樣本在乾冰上冷凍且儲存在-80℃下直到運送。
使用MSD-ECL夾心式免疫測定測量總抗體。游離藥物係藉由LC-MS測量。經共軛之藥物係在樣本藉由固定在磁珠上之抗人類IgG1 Fc抗體進行免疫捕捉及隨後藉由水解釋放藥物之後藉由LC-MS測量。表25、表26及表27分別給出總抗體、經共軛之藥物及游離藥物的PK參數。
Figure 02_image1011
Figure 02_image1013
Figure 02_image1015
實例 48. B7-H4_2F9V18 細胞毒性藥物共軛體於未選擇系列之人類乳房原發癌症異種移植物中之療效
將一組由供應商根據先前治療史註明且分成TNBC及ER陽性亞型之二十八個乳癌病患衍生性異種移植模型(Champions Oncology)植入至無胸腺裸Foxn1n小鼠中。當腫瘤達到150至300 mm 3之平均體積時，動物(n=3)在第1天經單一靜脈內投予共軛體 1-3(4.71 mg/kg/0.15 mg/kg，抗體/載荷物)或鹽水媒劑治療。直到對照組平均腫瘤體積達1500 mm 3或第28天之計畫終點時測量腫瘤體積。在終點時，收集作為福馬林固定石蠟包埋材料之異種移植物或腫瘤床(在無明顯腫塊之情況下)。自摘要分析排除原本提議用於本研究之二個額外ER陽性模型，因為未預期的快速生長/不明腫瘤來源(CTG-3277)或媒劑動物非常緩慢的生長(CTG-2611)。
圖 13顯示按中位數最佳反應(MBR)順序之共軛體 1-3療效，其按如供應商所註明之受體狀態(TNBC對比ER陽性)劃分。Y軸顯示各模型達成之MBR且X軸識別模型ID。在本研究中，9/28(32%)之乳癌模型在單一劑量之共軛體 1-3之後達成50%(顯示為Y軸上之-0.5)或較佳之中位數最佳反應，且50%或超過50%之MBR的抗腫瘤效應在TNBC模型6/15(40%)中相較於ER陽性模型3/13(23 %)更為頻繁。 實例 49. B7-H4 於小鼠原發性異種移植組織中之蛋白及 RNA 表現
基於來自實例44之異種移植組織的可用性，實施RNA及蛋白分析。使用Qiagen Rneasy FFPE套組根據製造商說明自FFPE樣本萃取RNA。基於nanodrop讀數將樣本相等化，且使用含有exDNase酶之Thermofisher SuperScript IV VILO Master Mix生產cDNA。基因表現測定係以TaqMan Fast Advanced Master Mix設置。ABI測定Hs01552471_g1係用於VTCN1。Hs99999903_m1 ACTB及Hs03929097_g1 GAPDH係用來作為內源性對照。表現資料係分析為各媒劑治療組(通常n=3)中動物之平均值相對於通用RNA對照的ΔΔ Ct。
在來自各模型之單一媒劑治療動物實施IHC以偵測B7-H4表現。簡言之，將組織切片成4 µ在帶正電玻片上且乾燥隔夜。使用Leica BOND III平台，將切片烘烤、去蠟並進行抗原提取(LEICA BOND III ER1+蛋白酶K)。一級B7-H4抗體(Abcam ab209242)係以0.2 µg/ml之濃度(製備於DAKO/Agilent稀釋劑S3022中)使用。使用Leica BOND聚合物優化系統/DAB色原體偵測信號。玻片係藉由光學顯微鏡評估且使用H分數及TPS方法計分。
圖 14顯示藉由TPS分數評估之蛋白表現。似乎有療效/表現關係。當TPS分數以受體狀態格狀化時，在註明為TNBC之模型中較可能有較高表現。比較H分數或相對RNA表現值與化合物療效見到類似模式。 等效物
本發明之一或多個實施態樣之細節係於以上隨附之說明中闡述。雖然任何與此處所描述之方法及材料類似或相等者均可被用於實施或測試本揭露，方法及材料係於此描述。本揭露之其他特徵、目的及好處將自詳細說明及申請專利範圍請求項中顯而易見。在本說明書及隨附申請專利範圍中，單數形式包括複數指稱物，除非上下文以其他方式清楚說明。除非另行定義，此處所使用之所有技術及科學用語和本揭露所屬技術領域中具有通常知識者所通常瞭解之意義相同。本說明書中引述之所有專利及公開案係以引用方式併入本文中。
前述內容僅為了說明之目的呈現，無意將本發明限制於所揭示之精確形式，而是由隨附於此之申請專利範圍來限制。
[ 圖 1]的圖表顯示抗體聚醣的不同糖化形式(G0、Gl、G2、G0F、GIF、G2F及M5)。
[ 圖 2]的方案顯示糖化形式G0、Gl、G2、G0F、GIF、G2F及M5之混合物在內切糖苷酶存在下的去糖基化。
[ 圖 3]的方案顯示用於製備經疊氮基修飾之抗體的過程，其中包含末端GlcNAc部份之中間物抗體與經疊氮基修飾之UDP-GalNAc衍生物分子在糖基轉移酶存在下反應。
[ 圖 4]的方案顯示製備經疊氮基修飾之抗體的過程之實施態樣。
[ 圖 5]的方案顯示製備抗體-藥物共軛體的過程之實施態樣，其中經疊氮基修飾之抗體係與包含應變(strained)環炔基之連接子-藥物部份共軛。
[ 圖 6]的圖表顯示經修飾之抗體。
[ 圖 7]的圖表顯示在MX-1 TNBC異種移植小鼠模型中，B7-H4_2F9細胞毒性藥物共軛體：共軛體 9-1(2.46/0.075或4.92/0.150 mg/kg)、共軛體 11(2.28/0.075或4.56/0.150 mg/kg)、共軛體 3(2.30/0.075或4.60/0.150 mg/kg)、共軛體 6(2.30/0.075或4.61/0.150 mg/kg)、共軛體 7(2.30/0.075或4.60/0.150 mg/kg)及共軛體 1-1(2.30/0.075或4.60/0.150 mg/kg)(所有劑量以抗體/載荷物給予)的抗腫瘤療效。
[ 圖 8]的圖表顯示在MX-1 TNBC異種移植小鼠模型中，B7-H4_2F9細胞毒性藥物共軛體：共軛體 14(2.57/0.150 mg/kg)、共軛體 9-2(4.56/0.150 mg/kg)、共軛體 10(14.37/0.150 mg/kg)、共軛體 12(2.26/0.150或0.75/0.050 mg/kg)、共軛體 1-2(5.37/0.177、2.33/0.077或1.79/0.059 mg/kg)、共軛體 2-1(13.45/0.150、4.60/0.050或2.30/0.025 mg/kg)及XMT-1604 B7-H4_2F9V18(13.80/0 mg/kg)(所有劑量以抗體/載荷物給予)的抗腫瘤療效。
[ 圖 9]的圖表顯示在HBCx-19病患衍生性異種移植模型中，B7-H4_2F9細胞毒性藥物共軛體：共軛體 1-2(1.79/0.059或5.37/0.177 mg/kg)、共軛體 9-2(4.56/0.150 mg/kg)、共軛體 2-1(4.60/0.050或13.45/0.150 mg/kg)及共軛體 10(14.37/0.150 mg/kg)(所有劑量以抗體/載荷物給予)的抗腫瘤療效。
[ 圖 10]的圖表顯示在HBCx-24病患衍生性異種移植模型中，B7-H4_2F9細胞毒性藥物共軛體：共軛體 14(2.57/0.150 mg/kg)、共軛體 9-2(4.56/0.150 mg/kg)、共軛體10(14.37/0.150 mg/kg)、共軛體 12(2.26/0.150或0.75/0.050 mg/kg)、共軛體 1-2(4.56/0.150、2.30/0.076或1.52/0.05 mg/kg)、共軛體 2-1(13.45/0.150、4.60/0.050或2.30/0.025 mg/kg)及XMT-1604(13.80/0 mg/kg)(所有劑量以抗體/載荷物給予)的抗腫瘤療效。
[ 圖 11]的圖表顯示在MX-1異種移植小鼠模型中，B7-H4_2F9 STING的促效劑藥物共軛體：共軛體 17(0.085/0.030或2.84/0.100 mg/kg)、共軛體 16(0.89/0.030或2.97/0.100 mg/kg)、共軛體 15(0.85/0.030或2.83/0.100 mg/kg)及diABZI IV STING的促效劑(5 mg/kg)(所有劑量以抗體/載荷物給予)的抗腫瘤療效。
[ 圖 12]的圖表顯示在MX-1 TNBC異種移植模型中，B7-H4_2F9 STING的促效劑藥物共軛體：共軛體 14(2.57/0.150 mg/kg)、共軛體 9-2(4.56/0.150 mg/kg)、共軛體 12(2.26/0.150或1.13/0.075 mg/kg)、共軛體 1-3(4.68/ 0.150或2.34/0.075 mg/kg)及共軛體 2-2(13.81/0.150或6.90/ 0.075 mg/kg)(所有劑量皆寫為抗體/載荷物)的抗腫瘤療效。
[ 圖 13]顯示按中位數最佳反應(MBR)順序之共軛體 1-3療效，其按未選擇系列之TNBC及ER陽性乳癌病患衍生性異種移植模型受體狀態(TNBC對比ER陽性)劃分。Y軸顯示各模型達成之MBR且X軸識別模型ID。
[ 圖 14]顯示在來自實例44之TNBC及ER陽性乳癌病患衍生性異種移植模型之子集上藉由TPS分數評估之蛋白表現。 

          <![CDATA[<110>  美商梅爾莎納醫療公司(Mersana Therapeutics, Inc.)]]>
          <![CDATA[<120>  靶向B7-H4之抗體-藥物共軛體和使用彼之方法]]>
          <![CDATA[<140>  TW 111100248]]>
          <![CDATA[<141>  2022-01-04]]>
          <![CDATA[<150>  US 63/133,707]]>
          <![CDATA[<151>  2021-01-04]]>
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          <![CDATA[<151>  2021-04-09]]>
          <![CDATA[<160>  59    ]]>
          <![CDATA[<170>  PatentIn 第 3.5 版]]>
          <![CDATA[<210>  1]]>
          <![CDATA[<211>  116]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<400>  1]]>
          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Val Ser Arg Asn 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Val Ile Tyr Gly Ser Gly Arg Thr Asp Cys Ala Asp Ser Val Lys 
              50                  55                  60                  
          Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 
                          85                  90                  95      
          Arg Asp Gly Asp Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val 
                      100                 105                 110         
          Thr Val Ser Ser 
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          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Val Ser Arg Asn 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Val Ile Tyr Gly Ser Gly Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 
              50                  55                  60                  
          Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 
                          85                  90                  95      
          Arg Asp Gly Asp Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val 
                      100                 105                 110         
          Thr Val Ser Ser 
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          <![CDATA[<400>  6]]>
          Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 
          1               5                   10                  15      
          Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 
                  35                  40                  45              
          Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 
              50                  55                  60                  
          Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 
          65                  70                  75                  80  
          Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 
                          85                  90                  95      
          Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 
                      100                 105                 110         
          Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 
                  115                 120                 125             
          Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 
              130                 135                 140                 
          Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 
          145                 150                 155                 160 
          Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 
                          165                 170                 175     
          Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 
                      180                 185                 190         
          His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 
                  195                 200                 205             
          Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 
              210                 215                 220                 
          Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu 
          225                 230                 235                 240 
          Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 
                          245                 250                 255     
          Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 
                      260                 265                 270         
          Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 
                  275                 280                 285             
          Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 
              290                 295                 300                 
          Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 
          305                 310                 315                 320 
          Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 
                          325                 330 
          <![CDATA[<210>  7]]>
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          <![CDATA[<400>  7]]>
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          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Val Ser Arg Asn 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Val Ile Tyr Gly Ser Gly Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 
              50                  55                  60                  
          Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 
                          85                  90                  95      
          Arg Asp Gly Asp Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val 
                      100                 105                 110         
          Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 
                  115                 120                 125             
          Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 
              130                 135                 140                 
          Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 
          145                 150                 155                 160 
          Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 
                          165                 170                 175     
          Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 
                      180                 185                 190         
          Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 
                  195                 200                 205             
          Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 
              210                 215                 220                 
          Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 
          225                 230                 235                 240 
          Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 
                          245                 250                 255     
          Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 
                      260                 265                 270         
          Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 
                  275                 280                 285             
          Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 
              290                 295                 300                 
          Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 
                          325                 330                 335     
          Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 
                      340                 345                 350         
          Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 
                  355                 360                 365             
          Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 
              370                 375                 380                 
          Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 
          385                 390                 395                 400 
          Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 
                          405                 410                 415     
          Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 
                      420                 425                 430         
          Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 
                  435                 440                 445     
          <![CDATA[<210>  8]]>
          <![CDATA[<211>  116]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人(Homo Sapiens)]]>
          <![CDATA[<400>  8]]>
          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Val Ser Arg Asn 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Val Ile Tyr Gly Ser Gly Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 
              50                  55                  60                  
          Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 
                          85                  90                  95      
          Arg Asp Ala Asp Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val 
                      100                 105                 110         
          Thr Val Ser Ser 
                  115     
          <![CDATA[<210>  9]]>
          <![CDATA[<211>  446]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人(Homo Sapiens)]]>
          <![CDATA[<400>  9]]>
          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Val Ser Arg Asn 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Val Ile Tyr Gly Ser Gly Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 
              50                  55                  60                  
          Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 
                          85                  90                  95      
          Arg Asp Ala Asp Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val 
                      100                 105                 110         
          Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 
                  115                 120                 125             
          Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 
              130                 135                 140                 
          Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 
          145                 150                 155                 160 
          Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 
                          165                 170                 175     
          Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 
                      180                 185                 190         
          Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 
                  195                 200                 205             
          Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 
              210                 215                 220                 
          Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 
          225                 230                 235                 240 
          Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 
                          245                 250                 255     
          Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 
                      260                 265                 270         
          Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 
                  275                 280                 285             
          Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 
              290                 295                 300                 
          Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 
                          325                 330                 335     
          Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 
                      340                 345                 350         
          Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 
                  355                 360                 365             
          Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 
              370                 375                 380                 
          Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 
          385                 390                 395                 400 
          Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 
                          405                 410                 415     
          Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 
                      420                 425                 430         
          Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 
                  435                 440                 445     
          <![CDATA[<210>  10]]>
          <![CDATA[<211>  10]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人(Homo Sapiens)]]>
          <![CDATA[<400>  10]]>
          Ala Arg Asp Ala Asp Tyr Gly Met Asp Val 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210>  11]]>
          <![CDATA[<211>  115]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人(Homo Sapiens)]]>
          <![CDATA[<400>  11]]>
          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Val Ser Arg Asn 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Val Ile Tyr Gly Ser Gly Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 
              50                  55                  60                  
          Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 
                          85                  90                  95      
          Arg Asp Thr Tyr Ala Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr 
                      100                 105                 110         
          Val Ser Ser 
                  115 
          <![CDATA[<210>  12]]>
          <![CDATA[<211>  445]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人(Homo Sapiens)]]>
          <![CDATA[<400>  12]]>
          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Val Ser Arg Asn 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Val Ile Tyr Gly Ser Gly Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 
              50                  55                  60                  
          Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 
                          85                  90                  95      
          Arg Asp Thr Tyr Ala Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr 
                      100                 105                 110         
          Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro 
                  115                 120                 125             
          Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val 
              130                 135                 140                 
          Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala 
          145                 150                 155                 160 
          Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly 
                          165                 170                 175     
          Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly 
                      180                 185                 190         
          Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys 
                  195                 200                 205             
          Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys 
              210                 215                 220                 
          Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu 
          225                 230                 235                 240 
          Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu 
                          245                 250                 255     
          Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys 
                      260                 265                 270         
          Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys 
                  275                 280                 285             
          Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu 
              290                 295                 300                 
          Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys 
          305                 310                 315                 320 
          Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys 
                          325                 330                 335     
          Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser 
                      340                 345                 350         
          Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys 
                  355                 360                 365             
          Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln 
              370                 375                 380                 
          Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly 
          385                 390                 395                 400 
          Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln 
                          405                 410                 415     
          Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn 
                      420                 425                 430         
          His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 
                  435                 440                 445 
          <![CDATA[<210>  13]]>
          <![CDATA[<211>  9]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人(Homo Sapiens)]]>
          <![CDATA[<400>  13]]>
          Ala Arg Asp Thr Tyr Ala Met Asp Val 
          1               5                   
          <![CDATA[<210>  14]]>
          <![CDATA[<211>  116]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人(Homo Sapiens)]]>
          <![CDATA[<400>  14]]>
          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Val Ser Arg Asn 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Val Ile Tyr Gly Ser Gly Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 
              50                  55                  60                  
          Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 
                          85                  90                  95      
          Arg Asp Ala Asp Tyr Gly Leu Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val 
                      100                 105                 110         
          Thr Val Ser Ser 
                  115     
          <![CDATA[<210>  15]]>
          <![CDATA[<211>  446]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人(Homo Sapiens)]]>
          <![CDATA[<400>  15]]>
          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Val Ser Arg Asn 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Val Ile Tyr Gly Ser Gly Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 
              50                  55                  60                  
          Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 
                          85                  90                  95      
          Arg Asp Ala Asp Tyr Gly Leu Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val 
                      100                 105                 110         
          Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 
                  115                 120                 125             
          Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 
              130                 135                 140                 
          Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 
          145                 150                 155                 160 
          Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 
                          165                 170                 175     
          Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 
                      180                 185                 190         
          Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 
                  195                 200                 205             
          Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 
              210                 215                 220                 
          Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 
          225                 230                 235                 240 
          Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 
                          245                 250                 255     
          Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 
                      260                 265                 270         
          Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 
                  275                 280                 285             
          Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 
              290                 295                 300                 
          Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 
                          325                 330                 335     
          Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 
                      340                 345                 350         
          Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 
                  355                 360                 365             
          Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 
              370                 375                 380                 
          Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 
          385                 390                 395                 400 
          Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 
                          405                 410                 415     
          Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 
                      420                 425                 430         
          Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 
                  435                 440                 445     
          <![CDATA[<210>  16]]>
          <![CDATA[<211>  10]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人(Homo Sapiens)]]>
          <![CDATA[<400>  16]]>
          Ala Arg Asp Ala Asp Tyr Gly Leu Asp Val 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210>  17]]>
          <![CDATA[<211>  115]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人(Homo Sapiens)]]>
          <![CDATA[<400>  17]]>
          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Val Ser Arg Asn 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Val Ile Tyr Gly Ser Gly Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 
              50                  55                  60                  
          Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 
                          85                  90                  95      
          Arg Asp Thr Tyr Ala Leu Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr 
                      100                 105                 110         
          Val Ser Ser 
                  115 
          <![CDATA[<210>  18]]>
          <![CDATA[<211>  445]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人(Homo Sapiens)]]>
          <![CDATA[<400>  18]]>
          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Val Ser Arg Asn 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Val Ile Tyr Gly Ser Gly Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 
              50                  55                  60                  
          Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 
                          85                  90                  95      
          Arg Asp Thr Tyr Ala Leu Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr 
                      100                 105                 110         
          Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro 
                  115                 120                 125             
          Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val 
              130                 135                 140                 
          Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala 
          145                 150                 155                 160 
          Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly 
                          165                 170                 175     
          Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly 
                      180                 185                 190         
          Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys 
                  195                 200                 205             
          Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys 
              210                 215                 220                 
          Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu 
          225                 230                 235                 240 
          Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu 
                          245                 250                 255     
          Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys 
                      260                 265                 270         
          Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys 
                  275                 280                 285             
          Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu 
              290                 295                 300                 
          Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys 
          305                 310                 315                 320 
          Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys 
                          325                 330                 335     
          Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser 
                      340                 345                 350         
          Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys 
                  355                 360                 365             
          Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln 
              370                 375                 380                 
          Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly 
          385                 390                 395                 400 
          Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln 
                          405                 410                 415     
          Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn 
                      420                 425                 430         
          His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 
                  435                 440                 445 
          <![CDATA[<210>  19]]>
          <![CDATA[<211>  9]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人(Homo Sapiens)]]>
          <![CDATA[<400>  19]]>
          Ala Arg Asp Thr Tyr Ala Leu Asp Val 
          1               5                   
          <![CDATA[<210>  20]]>
          <![CDATA[<211>  116]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人(Homo Sapiens)]]>
          <![CDATA[<400>  20]]>
          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Val Ser Arg Asn 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Val Ile Tyr Gly Ser Gly Arg Thr Asp Tyr Ala Asp Ser Val Lys 
              50                  55                  60                  
          Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 
                          85                  90                  95      
          Arg Asp Gly Asp Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val 
                      100                 105                 110         
          Thr Val Ser Ser 
                  115     
          <![CDATA[<210>  21]]>
          <![CDATA[<211>  446]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人(Homo Sapiens)]]>
          <![CDATA[<400>  21]]>
          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Val Ser Arg Asn 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Val Ile Tyr Gly Ser Gly Arg Thr Asp Tyr Ala Asp Ser Val Lys 
              50                  55                  60                  
          Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 
                          85                  90                  95      
          Arg Asp Gly Asp Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val 
                      100                 105                 110         
          Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 
                  115                 120                 125             
          Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 
              130                 135                 140                 
          Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 
          145                 150                 155                 160 
          Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 
                          165                 170                 175     
          Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 
                      180                 185                 190         
          Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 
                  195                 200                 205             
          Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 
              210                 215                 220                 
          Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 
          225                 230                 235                 240 
          Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 
                          245                 250                 255     
          Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 
                      260                 265                 270         
          Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 
                  275                 280                 285             
          Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 
              290                 295                 300                 
          Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 
                          325                 330                 335     
          Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 
                      340                 345                 350         
          Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 
                  355                 360                 365             
          Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 
              370                 375                 380                 
          Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 
          385                 390                 395                 400 
          Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 
                          405                 410                 415     
          Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 
                      420                 425                 430         
          Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 
                  435                 440                 445     
          <![CDATA[<210>  22]]>
          <![CDATA[<211>  116]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<400>  22]]>
          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Val Ser Arg Asn 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Val Ile Tyr Gly Ser Gly Arg Thr Asp Tyr Ala Asp Ser Val Lys 
              50                  55                  60                  
          Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 
                          85                  90                  95      
          Arg Asp Ala Asp Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val 
                      100                 105                 110         
          Thr Val Ser Ser 
                  115     
          <![CDATA[<210>  23]]>
          <![CDATA[<211>  446]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人(Homo Sapiens)]]>
          <![CDATA[<400>  23]]>
          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Val Ser Arg Asn 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Val Ile Tyr Gly Ser Gly Arg Thr Asp Tyr Ala Asp Ser Val Lys 
              50                  55                  60                  
          Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 
                          85                  90                  95      
          Arg Asp Ala Asp Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val 
                      100                 105                 110         
          Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 
                  115                 120                 125             
          Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 
              130                 135                 140                 
          Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 
          145                 150                 155                 160 
          Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 
                          165                 170                 175     
          Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 
                      180                 185                 190         
          Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 
                  195                 200                 205             
          Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 
              210                 215                 220                 
          Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 
          225                 230                 235                 240 
          Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 
                          245                 250                 255     
          Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 
                      260                 265                 270         
          Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 
                  275                 280                 285             
          Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 
              290                 295                 300                 
          Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 
                          325                 330                 335     
          Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 
                      340                 345                 350         
          Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 
                  355                 360                 365             
          Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 
              370                 375                 380                 
          Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 
          385                 390                 395                 400 
          Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 
                          405                 410                 415     
          Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 
                      420                 425                 430         
          Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 
                  435                 440                 445     
          <![CDATA[<210>  24]]>
          <![CDATA[<211>  116]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人(Homo Sapiens)]]>
          <![CDATA[<400>  24]]>
          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Val Ser Arg Asn 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Val Ile Tyr Gly Ser Gly Arg Thr Asp Tyr Ala Asp Ser Val Lys 
              50                  55                  60                  
          Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 
                          85                  90                  95      
          Arg Asp Ala Asp Tyr Gly Leu Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val 
                      100                 105                 110         
          Thr Val Ser Ser 
                  115     
          <![CDATA[<210>  25]]>
          <![CDATA[<211>  446]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<400>  25]]>
          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Val Ser Arg Asn 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Val Ile Tyr Gly Ser Gly Arg Thr Asp Tyr Ala Asp Ser Val Lys 
              50                  55                  60                  
          Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 
                          85                  90                  95      
          Arg Asp Ala Asp Tyr Gly Leu Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val 
                      100                 105                 110         
          Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 
                  115                 120                 125             
          Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 
              130                 135                 140                 
          Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 
          145                 150                 155                 160 
          Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 
                          165                 170                 175     
          Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 
                      180                 185                 190         
          Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 
                  195                 200                 205             
          Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 
              210                 215                 220                 
          Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 
          225                 230                 235                 240 
          Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 
                          245                 250                 255     
          Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 
                      260                 265                 270         
          Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 
                  275                 280                 285             
          Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 
              290                 295                 300                 
          Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 
                          325                 330                 335     
          Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 
                      340                 345                 350         
          Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 
                  355                 360                 365             
          Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 
              370                 375                 380                 
          Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 
          385                 390                 395                 400 
          Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 
                          405                 410                 415     
          Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 
                      420                 425                 430         
          Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 
                  435                 440                 445     
          <![CDATA[<210>  26]]>
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          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<400>  26]]>
          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Val Ser Arg Asn 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Val Ile Tyr Gly Ser Gly Arg Thr Asp Tyr Ala Asp Ser Val Lys 
              50                  55                  60                  
          Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 
                          85                  90                  95      
          Arg Asp Thr Tyr Ala Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr 
                      100                 105                 110         
          Val Ser Ser 
                  115 
          <![CDATA[<210>  27]]>
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          <![CDATA[<400>  27]]>
          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Val Ser Arg Asn 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Val Ile Tyr Gly Ser Gly Arg Thr Asp Tyr Ala Asp Ser Val Lys 
              50                  55                  60                  
          Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 
                          85                  90                  95      
          Arg Asp Thr Tyr Ala Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr 
                      100                 105                 110         
          Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro 
                  115                 120                 125             
          Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val 
              130                 135                 140                 
          Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala 
          145                 150                 155                 160 
          Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly 
                          165                 170                 175     
          Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly 
                      180                 185                 190         
          Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys 
                  195                 200                 205             
          Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys 
              210                 215                 220                 
          Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu 
          225                 230                 235                 240 
          Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu 
                          245                 250                 255     
          Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys 
                      260                 265                 270         
          Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys 
                  275                 280                 285             
          Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu 
              290                 295                 300                 
          Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys 
          305                 310                 315                 320 
          Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys 
                          325                 330                 335     
          Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser 
                      340                 345                 350         
          Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys 
                  355                 360                 365             
          Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln 
              370                 375                 380                 
          Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly 
          385                 390                 395                 400 
          Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln 
                          405                 410                 415     
          Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn 
                      420                 425                 430         
          His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 
                  435                 440                 445 
          <![CDATA[<210>  28]]>
          <![CDATA[<211>  115]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人(Homo Sapiens)]]>
          <![CDATA[<400>  28]]>
          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Val Ser Arg Asn 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Val Ile Tyr Gly Ser Gly Arg Thr Asp Tyr Ala Asp Ser Val Lys 
              50                  55                  60                  
          Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 
                          85                  90                  95      
          Arg Asp Thr Tyr Ala Leu Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr 
                      100                 105                 110         
          Val Ser Ser 
                  115 
          <![CDATA[<210>  29]]>
          <![CDATA[<211>  445]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人(Homo Sapiens)]]>
          <![CDATA[<400>  29]]>
          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Val Ser Arg Asn 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Val Ile Tyr Gly Ser Gly Arg Thr Asp Tyr Ala Asp Ser Val Lys 
              50                  55                  60                  
          Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 
                          85                  90                  95      
          Arg Asp Thr Tyr Ala Leu Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr 
                      100                 105                 110         
          Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro 
                  115                 120                 125             
          Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val 
              130                 135                 140                 
          Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala 
          145                 150                 155                 160 
          Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly 
                          165                 170                 175     
          Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly 
                      180                 185                 190         
          Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys 
                  195                 200                 205             
          Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys 
              210                 215                 220                 
          Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu 
          225                 230                 235                 240 
          Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu 
                          245                 250                 255     
          Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys 
                      260                 265                 270         
          Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys 
                  275                 280                 285             
          Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu 
              290                 295                 300                 
          Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys 
          305                 310                 315                 320 
          Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys 
                          325                 330                 335     
          Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser 
                      340                 345                 350         
          Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys 
                  355                 360                 365             
          Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln 
              370                 375                 380                 
          Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly 
          385                 390                 395                 400 
          Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln 
                          405                 410                 415     
          Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn 
                      420                 425                 430         
          His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 
                  435                 440                 445 
          <![CDATA[<210>  30]]>
          <![CDATA[<211>  116]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<400>  30]]>
          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Val Ser Arg Asn 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Val Ile Tyr Gly Ser Gly Arg Thr Asp Ala Ala Asp Ser Val Lys 
              50                  55                  60                  
          Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 
                          85                  90                  95      
          Arg Asp Gly Asp Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val 
                      100                 105                 110         
          Thr Val Ser Ser 
                  115     
          <![CDATA[<210>  31]]>
          <![CDATA[<211>  446]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人(Homo Sapiens)]]>
          <![CDATA[<400>  31]]>
          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Val Ser Arg Asn 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Val Ile Tyr Gly Ser Gly Arg Thr Asp Ala Ala Asp Ser Val Lys 
              50                  55                  60                  
          Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 
                          85                  90                  95      
          Arg Asp Gly Asp Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val 
                      100                 105                 110         
          Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 
                  115                 120                 125             
          Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 
              130                 135                 140                 
          Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 
          145                 150                 155                 160 
          Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 
                          165                 170                 175     
          Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 
                      180                 185                 190         
          Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 
                  195                 200                 205             
          Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 
              210                 215                 220                 
          Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 
          225                 230                 235                 240 
          Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 
                          245                 250                 255     
          Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 
                      260                 265                 270         
          Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 
                  275                 280                 285             
          Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 
              290                 295                 300                 
          Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 
                          325                 330                 335     
          Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 
                      340                 345                 350         
          Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 
                  355                 360                 365             
          Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 
              370                 375                 380                 
          Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 
          385                 390                 395                 400 
          Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 
                          405                 410                 415     
          Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 
                      420                 425                 430         
          Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 
                  435                 440                 445     
          <![CDATA[<210>  32]]>
          <![CDATA[<211>  116]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<400>  32]]>
          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Val Ser Arg Asn 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Val Ile Tyr Gly Ser Gly Arg Thr Asp Ala Ala Asp Ser Val Lys 
              50                  55                  60                  
          Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 
                          85                  90                  95      
          Arg Asp Ala Asp Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val 
                      100                 105                 110         
          Thr Val Ser Ser 
                  115     
          <![CDATA[<210>  33]]>
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          <![CDATA[<400>  33]]>
          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Val Ser Arg Asn 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Val Ile Tyr Gly Ser Gly Arg Thr Asp Ala Ala Asp Ser Val Lys 
              50                  55                  60                  
          Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 
                          85                  90                  95      
          Arg Asp Ala Asp Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val 
                      100                 105                 110         
          Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 
                  115                 120                 125             
          Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 
              130                 135                 140                 
          Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 
          145                 150                 155                 160 
          Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 
                          165                 170                 175     
          Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 
                      180                 185                 190         
          Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 
                  195                 200                 205             
          Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 
              210                 215                 220                 
          Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 
          225                 230                 235                 240 
          Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 
                          245                 250                 255     
          Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 
                      260                 265                 270         
          Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 
                  275                 280                 285             
          Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 
              290                 295                 300                 
          Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 
                          325                 330                 335     
          Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 
                      340                 345                 350         
          Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 
                  355                 360                 365             
          Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 
              370                 375                 380                 
          Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 
          385                 390                 395                 400 
          Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 
                          405                 410                 415     
          Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 
                      420                 425                 430         
          Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 
                  435                 440                 445     
          <![CDATA[<210>  34]]>
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          <![CDATA[<400>  34]]>
          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Val Ser Arg Asn 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Val Ile Tyr Gly Ser Gly Arg Thr Asp Ala Ala Asp Ser Val Lys 
              50                  55                  60                  
          Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 
                          85                  90                  95      
          Arg Asp Ala Asp Tyr Gly Leu Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val 
                      100                 105                 110         
          Thr Val Ser Ser 
                  115     
          <![CDATA[<210>  35]]>
          <![CDATA[<211>  446]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<400>  35]]>
          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Val Ser Arg Asn 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Val Ile Tyr Gly Ser Gly Arg Thr Asp Ala Ala Asp Ser Val Lys 
              50                  55                  60                  
          Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 
                          85                  90                  95      
          Arg Asp Ala Asp Tyr Gly Leu Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val 
                      100                 105                 110         
          Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 
                  115                 120                 125             
          Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 
              130                 135                 140                 
          Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 
          145                 150                 155                 160 
          Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 
                          165                 170                 175     
          Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 
                      180                 185                 190         
          Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 
                  195                 200                 205             
          Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 
              210                 215                 220                 
          Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 
          225                 230                 235                 240 
          Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 
                          245                 250                 255     
          Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 
                      260                 265                 270         
          Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 
                  275                 280                 285             
          Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 
              290                 295                 300                 
          Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 
                          325                 330                 335     
          Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 
                      340                 345                 350         
          Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 
                  355                 360                 365             
          Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 
              370                 375                 380                 
          Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 
          385                 390                 395                 400 
          Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 
                          405                 410                 415     
          Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 
                      420                 425                 430         
          Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 
                  435                 440                 445     
          <![CDATA[<210>  36]]>
          <![CDATA[<211>  115]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人(Homo Sapiens)]]>
          <![CDATA[<400>  36]]>
          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Val Ser Arg Asn 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Val Ile Tyr Gly Ser Gly Arg Thr Asp Ala Ala Asp Ser Val Lys 
              50                  55                  60                  
          Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 
                          85                  90                  95      
          Arg Asp Thr Tyr Ala Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr 
                      100                 105                 110         
          Val Ser Ser 
                  115 
          <![CDATA[<210>  37]]>
          <![CDATA[<211>  445]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人(Homo Sapiens)]]>
          <![CDATA[<400>  37]]>
          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Val Ser Arg Asn 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Val Ile Tyr Gly Ser Gly Arg Thr Asp Ala Ala Asp Ser Val Lys 
              50                  55                  60                  
          Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 
                          85                  90                  95      
          Arg Asp Thr Tyr Ala Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr 
                      100                 105                 110         
          Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro 
                  115                 120                 125             
          Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val 
              130                 135                 140                 
          Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala 
          145                 150                 155                 160 
          Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly 
                          165                 170                 175     
          Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly 
                      180                 185                 190         
          Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys 
                  195                 200                 205             
          Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys 
              210                 215                 220                 
          Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu 
          225                 230                 235                 240 
          Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu 
                          245                 250                 255     
          Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys 
                      260                 265                 270         
          Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys 
                  275                 280                 285             
          Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu 
              290                 295                 300                 
          Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys 
          305                 310                 315                 320 
          Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys 
                          325                 330                 335     
          Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser 
                      340                 345                 350         
          Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys 
                  355                 360                 365             
          Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln 
              370                 375                 380                 
          Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly 
          385                 390                 395                 400 
          Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln 
                          405                 410                 415     
          Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn 
                      420                 425                 430         
          His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 
                  435                 440                 445 
          <![CDATA[<210>  38]]>
          <![CDATA[<211>  115]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人(Homo Sapiens)]]>
          <![CDATA[<400>  38]]>
          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Val Ser Arg Asn 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Val Ile Tyr Gly Ser Gly Arg Thr Asp Ala Ala Asp Ser Val Lys 
              50                  55                  60                  
          Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 
                          85                  90                  95      
          Arg Asp Thr Tyr Ala Leu Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr 
                      100                 105                 110         
          Val Ser Ser 
                  115 
          <![CDATA[<210>  39]]>
          <![CDATA[<211>  445]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人(Homo Sapiens)]]>
          <![CDATA[<400>  39]]>
          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Val Ser Arg Asn 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Val Ile Tyr Gly Ser Gly Arg Thr Asp Ala Ala Asp Ser Val Lys 
              50                  55                  60                  
          Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 
                          85                  90                  95      
          Arg Asp Thr Tyr Ala Leu Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr 
                      100                 105                 110         
          Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro 
                  115                 120                 125             
          Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val 
              130                 135                 140                 
          Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala 
          145                 150                 155                 160 
          Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly 
                          165                 170                 175     
          Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly 
                      180                 185                 190         
          Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys 
                  195                 200                 205             
          Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys 
              210                 215                 220                 
          Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu 
          225                 230                 235                 240 
          Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu 
                          245                 250                 255     
          Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys 
                      260                 265                 270         
          Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys 
                  275                 280                 285             
          Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu 
              290                 295                 300                 
          Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys 
          305                 310                 315                 320 
          Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys 
                          325                 330                 335     
          Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser 
                      340                 345                 350         
          Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys 
                  355                 360                 365             
          Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln 
              370                 375                 380                 
          Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly 
          385                 390                 395                 400 
          Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln 
                          405                 410                 415     
          Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn 
                      420                 425                 430         
          His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 
                  435                 440                 445 
          <![CDATA[<210>  40]]>
          <![CDATA[<211>  116]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<400>  40]]>
          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Val Ser Arg Asn 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Val Ile Tyr Gly Ser Gly Arg Thr Asp Ser Ala Asp Ser Val Lys 
              50                  55                  60                  
          Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 
                          85                  90                  95      
          Arg Asp Gly Asp Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val 
                      100                 105                 110         
          Thr Val Ser Ser 
                  115     
          <![CDATA[<210>  41]]>
          <![CDATA[<211>  446]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人(Homo Sapiens)]]>
          <![CDATA[<400>  41]]>
          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Val Ser Arg Asn 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Val Ile Tyr Gly Ser Gly Arg Thr Asp Ser Ala Asp Ser Val Lys 
              50                  55                  60                  
          Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 
                          85                  90                  95      
          Arg Asp Gly Asp Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val 
                      100                 105                 110         
          Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 
                  115                 120                 125             
          Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 
              130                 135                 140                 
          Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 
          145                 150                 155                 160 
          Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 
                          165                 170                 175     
          Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 
                      180                 185                 190         
          Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 
                  195                 200                 205             
          Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 
              210                 215                 220                 
          Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 
          225                 230                 235                 240 
          Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 
                          245                 250                 255     
          Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 
                      260                 265                 270         
          Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 
                  275                 280                 285             
          Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 
              290                 295                 300                 
          Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 
                          325                 330                 335     
          Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 
                      340                 345                 350         
          Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 
                  355                 360                 365             
          Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 
              370                 375                 380                 
          Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 
          385                 390                 395                 400 
          Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 
                          405                 410                 415     
          Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 
                      420                 425                 430         
          Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 
                  435                 440                 445     
          <![CDATA[<210>  42]]>
          <![CDATA[<211>  116]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<400>  42]]>
          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Val Ser Arg Asn 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Val Ile Tyr Gly Ser Gly Arg Thr Asp Ser Ala Asp Ser Val Lys 
              50                  55                  60                  
          Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 
                          85                  90                  95      
          Arg Asp Ala Asp Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val 
                      100                 105                 110         
          Thr Val Ser Ser 
                  115     
          <![CDATA[<210>  43]]>
          <![CDATA[<211>  446]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人(Homo Sapiens)]]>
          <![CDATA[<400>  43]]>
          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Val Ser Arg Asn 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Val Ile Tyr Gly Ser Gly Arg Thr Asp Ser Ala Asp Ser Val Lys 
              50                  55                  60                  
          Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 
                          85                  90                  95      
          Arg Asp Ala Asp Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val 
                      100                 105                 110         
          Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 
                  115                 120                 125             
          Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 
              130                 135                 140                 
          Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 
          145                 150                 155                 160 
          Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 
                          165                 170                 175     
          Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 
                      180                 185                 190         
          Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 
                  195                 200                 205             
          Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 
              210                 215                 220                 
          Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 
          225                 230                 235                 240 
          Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 
                          245                 250                 255     
          Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 
                      260                 265                 270         
          Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 
                  275                 280                 285             
          Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 
              290                 295                 300                 
          Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 
                          325                 330                 335     
          Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 
                      340                 345                 350         
          Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 
                  355                 360                 365             
          Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 
              370                 375                 380                 
          Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 
          385                 390                 395                 400 
          Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 
                          405                 410                 415     
          Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 
                      420                 425                 430         
          Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 
                  435                 440                 445     
          <![CDATA[<210>  44]]>
          <![CDATA[<211>  116]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人(Homo Sapiens)]]>
          <![CDATA[<400>  44]]>
          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Val Ser Arg Asn 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Val Ile Tyr Gly Ser Gly Arg Thr Asp Ser Ala Asp Ser Val Lys 
              50                  55                  60                  
          Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 
                          85                  90                  95      
          Arg Asp Ala Asp Tyr Gly Leu Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val 
                      100                 105                 110         
          Thr Val Ser Ser 
                  115     
          <![CDATA[<210>  45]]>
          <![CDATA[<211>  446]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<400>  45]]>
          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Val Ser Arg Asn 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Val Ile Tyr Gly Ser Gly Arg Thr Asp Ser Ala Asp Ser Val Lys 
              50                  55                  60                  
          Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 
                          85                  90                  95      
          Arg Asp Ala Asp Tyr Gly Leu Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val 
                      100                 105                 110         
          Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 
                  115                 120                 125             
          Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 
              130                 135                 140                 
          Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 
          145                 150                 155                 160 
          Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 
                          165                 170                 175     
          Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 
                      180                 185                 190         
          Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 
                  195                 200                 205             
          Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 
              210                 215                 220                 
          Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 
          225                 230                 235                 240 
          Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 
                          245                 250                 255     
          Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 
                      260                 265                 270         
          Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 
                  275                 280                 285             
          Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 
              290                 295                 300                 
          Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 
                          325                 330                 335     
          Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 
                      340                 345                 350         
          Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 
                  355                 360                 365             
          Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 
              370                 375                 380                 
          Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 
          385                 390                 395                 400 
          Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 
                          405                 410                 415     
          Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 
                      420                 425                 430         
          Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 
                  435                 440                 445     
          <![CDATA[<210>  46]]>
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          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<400>  46]]>
          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Val Ser Arg Asn 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Val Ile Tyr Gly Ser Gly Arg Thr Asp Ser Ala Asp Ser Val Lys 
              50                  55                  60                  
          Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 
                          85                  90                  95      
          Arg Asp Thr Tyr Ala Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr 
                      100                 105                 110         
          Val Ser Ser 
                  115 
          <![CDATA[<210>  47]]>
          <![CDATA[<211>  445]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<400>  47]]>
          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Val Ser Arg Asn 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Val Ile Tyr Gly Ser Gly Arg Thr Asp Ser Ala Asp Ser Val Lys 
              50                  55                  60                  
          Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 
                          85                  90                  95      
          Arg Asp Thr Tyr Ala Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr 
                      100                 105                 110         
          Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro 
                  115                 120                 125             
          Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val 
              130                 135                 140                 
          Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala 
          145                 150                 155                 160 
          Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly 
                          165                 170                 175     
          Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly 
                      180                 185                 190         
          Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys 
                  195                 200                 205             
          Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys 
              210                 215                 220                 
          Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu 
          225                 230                 235                 240 
          Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu 
                          245                 250                 255     
          Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys 
                      260                 265                 270         
          Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys 
                  275                 280                 285             
          Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu 
              290                 295                 300                 
          Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys 
          305                 310                 315                 320 
          Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys 
                          325                 330                 335     
          Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser 
                      340                 345                 350         
          Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys 
                  355                 360                 365             
          Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln 
              370                 375                 380                 
          Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly 
          385                 390                 395                 400 
          Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln 
                          405                 410                 415     
          Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn 
                      420                 425                 430         
          His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 
                  435                 440                 445 
          <![CDATA[<210>  48]]>
          <![CDATA[<211>  115]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人(Homo Sapiens)]]>
          <![CDATA[<400>  48]]>
          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Val Ser Arg Asn 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Val Ile Tyr Gly Ser Gly Arg Thr Asp Ser Ala Asp Ser Val Lys 
              50                  55                  60                  
          Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 
                          85                  90                  95      
          Arg Asp Thr Tyr Ala Leu Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr 
                      100                 105                 110         
          Val Ser Ser 
                  115 
          <![CDATA[<210>  49]]>
          <![CDATA[<211>  445]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人(Homo Sapiens)]]>
          <![CDATA[<400>  49]]>
          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Val Ser Arg Asn 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Val Ile Tyr Gly Ser Gly Arg Thr Asp Ser Ala Asp Ser Val Lys 
              50                  55                  60                  
          Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 
                          85                  90                  95      
          Arg Asp Thr Tyr Ala Leu Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr 
                      100                 105                 110         
          Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro 
                  115                 120                 125             
          Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val 
              130                 135                 140                 
          Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala 
          145                 150                 155                 160 
          Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly 
                          165                 170                 175     
          Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly 
                      180                 185                 190         
          Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys 
                  195                 200                 205             
          Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys 
              210                 215                 220                 
          Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu 
          225                 230                 235                 240 
          Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu 
                          245                 250                 255     
          Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys 
                      260                 265                 270         
          Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys 
                  275                 280                 285             
          Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu 
              290                 295                 300                 
          Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys 
          305                 310                 315                 320 
          Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys 
                          325                 330                 335     
          Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser 
                      340                 345                 350         
          Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys 
                  355                 360                 365             
          Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln 
              370                 375                 380                 
          Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly 
          385                 390                 395                 400 
          Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln 
                          405                 410                 415     
          Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn 
                      420                 425                 430         
          His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 
                  435                 440                 445 
          <![CDATA[<210>  50]]>
          <![CDATA[<211>  109]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人(Homo Sapiens)]]>
          <![CDATA[<400>  50]]>
          Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser 
                      20                  25                  30          
          Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 
                  35                  40                  45              
          Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 
              50                  55                  60                  
          Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu 
          65                  70                  75                  80  
          Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro 
                          85                  90                  95      
          Leu Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
                      100                 105                 
          <![CDATA[<210>  51]]>
          <![CDATA[<211>  107]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人(Homo Sapiens)]]>
          <![CDATA[<400>  51]]>
          Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 
          1               5                   10                  15      
          Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 
                      20                  25                  30          
          Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 
                  35                  40                  45              
          Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 
              50                  55                  60                  
          Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 
          65                  70                  75                  80  
          Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 
                          85                  90                  95      
          Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
                      100                 105         
          <![CDATA[<210>  52]]>
          <![CDATA[<211>  216]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人(Homo Sapiens)]]>
          <![CDATA[<400>  52]]>
          Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser 
                      20                  25                  30          
          Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 
                  35                  40                  45              
          Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 
              50                  55                  60                  
          Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu 
          65                  70                  75                  80  
          Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro 
                          85                  90                  95      
          Leu Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val 
                      100                 105                 110         
          Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys 
                  115                 120                 125             
          Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg 
              130                 135                 140                 
          Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser 
                          165                 170                 175     
          Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys 
                      180                 185                 190         
          Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr 
                  195                 200                 205             
          Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
              210                 215     
          <![CDATA[<210>  53]]>
          <![CDATA[<211>  7]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人(Homo Sapiens)]]>
          <![CDATA[<400>  53]]>
          Gln Ser Val Ser Ser Ser Tyr 
          1               5           
          <![CDATA[<210>  54]]>
          <![CDATA[<211>  3]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人(Homo Sapiens)]]>
          <![CDATA[<400>  54]]>
          Gly Ala Ser 
          1           
          <![CDATA[<210>  55]]>
          <![CDATA[<211>  10]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人(Homo Sapiens)]]>
          <![CDATA[<400>  55]]>
          Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro Leu Tyr Thr 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210>  56]]>
          <![CDATA[<211>  446]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人(Homo Sapiens)]]>
          <![CDATA[<400>  56]]>
          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Val Ser Arg Asn 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Val Ile Tyr Gly Ser Gly Arg Thr Asp Cys Ala Asp Ser Val Lys 
              50                  55                  60                  
          Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 
                          85                  90                  95      
          Arg Asp Gly Asp Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val 
                      100                 105                 110         
          Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 
                  115                 120                 125             
          Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 
              130                 135                 140                 
          Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 
          145                 150                 155                 160 
          Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 
                          165                 170                 175     
          Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 
                      180                 185                 190         
          Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 
                  195                 200                 205             
          Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 
              210                 215                 220                 
          Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 
          225                 230                 235                 240 
          Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 
                          245                 250                 255     
          Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 
                      260                 265                 270         
          Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 
                  275                 280                 285             
          Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 
              290                 295                 300                 
          Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 
                          325                 330                 335     
          Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 
                      340                 345                 350         
          Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 
                  355                 360                 365             
          Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 
              370                 375                 380                 
          Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 
          385                 390                 395                 400 
          Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 
                          405                 410                 415     
          Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 
                      420                 425                 430         
          Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 
                  435                 440                 445     
          <![CDATA[<210>  57]]>
          <![CDATA[<211>  326]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人(Homo Sapiens)]]>
          <![CDATA[<400>  57]]>
          Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 
          1               5                   10                  15      
          Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 
                  35                  40                  45              
          Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 
              50                  55                  60                  
          Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr 
          65                  70                  75                  80  
          Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 
                          85                  90                  95      
          Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 
                      100                 105                 110         
          Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 
                  115                 120                 125             
          Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 
              130                 135                 140                 
          Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 
          145                 150                 155                 160 
          Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn 
                          165                 170                 175     
          Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp 
                      180                 185                 190         
          Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro 
                  195                 200                 205             
          Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu 
              210                 215                 220                 
          Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn 
          225                 230                 235                 240 
          Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 
                          245                 250                 255     
          Ser Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 
                      260                 265                 270         
          Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys 
                  275                 280                 285             
          Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys 
              290                 295                 300                 
          Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 
          305                 310                 315                 320 
          Ser Leu Ser Pro Gly Lys 
                          325     
          <![CDATA[<210>  58]]>
          <![CDATA[<211>  327]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人(Homo Sapiens)]]>
          <![CDATA[<400>  58]]>
          Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 
          1               5                   10                  15      
          Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 
                  35                  40                  45              
          Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 
              50                  55                  60                  
          Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr 
          65                  70                  75                  80  
          Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 
                          85                  90                  95      
          Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro 
                      100                 105                 110         
          Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 
                  115                 120                 125             
          Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 
              130                 135                 140                 
          Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe 
                          165                 170                 175     
          Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 
                      180                 185                 190         
          Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu 
                  195                 200                 205             
          Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 
              210                 215                 220                 
          Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys 
          225                 230                 235                 240 
          Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 
                          245                 250                 255     
          Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 
                      260                 265                 270         
          Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 
                  275                 280                 285             
          Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser 
              290                 295                 300                 
          Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 
          305                 310                 315                 320 
          Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 
                          325         
          <![CDATA[<210>  59]]>
          <![CDATA[<211>  282]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人(homo sapiens)]]>
          <![CDATA[<400>  59]]>
          Met Ala Ser Leu Gly Gln Ile Leu Phe Trp Ser Ile Ile Ser Ile Ile 
          1               5                   10                  15      
          Ile Ile Leu Ala Gly Ala Ile Ala Leu Ile Ile Gly Phe Gly Ile Ser 
                      20                  25                  30          
          Gly Arg His Ser Ile Thr Val Thr Thr Val Ala Ser Ala Gly Asn Ile 
                  35                  40                  45              
          Gly Glu Asp Gly Ile Leu Ser Cys Thr Phe Glu Pro Asp Ile Lys Leu 
              50                  55                  60                  
          Ser Asp Ile Val Ile Gln Trp Leu Lys Glu Gly Val Leu Gly Leu Val 
          65                  70                  75                  80  
          His Glu Phe Lys Glu Gly Lys Asp Glu Leu Ser Glu Gln Asp Glu Met 
                          85                  90                  95      
          Phe Arg Gly Arg Thr Ala Val Phe Ala Asp Gln Val Ile Val Gly Asn 
                      100                 105                 110         
          Ala Ser Leu Arg Leu Lys Asn Val Gln Leu Thr Asp Ala Gly Thr Tyr 
                  115                 120                 125             
          Lys Cys Tyr Ile Ile Thr Ser Lys Gly Lys Gly Asn Ala Asn Leu Glu 
              130                 135                 140                 
          Tyr Lys Thr Gly Ala Phe Ser Met Pro Glu Val Asn Val Asp Tyr Asn 
          145                 150                 155                 160 
          Ala Ser Ser Glu Thr Leu Arg Cys Glu Ala Pro Arg Trp Phe Pro Gln 
                          165                 170                 175     
          Pro Thr Val Val Trp Ala Ser Gln Val Asp Gln Gly Ala Asn Phe Ser 
                      180                 185                 190         
          Glu Val Ser Asn Thr Ser Phe Glu Leu Asn Ser Glu Asn Val Thr Met 
                  195                 200                 205             
          Lys Val Val Ser Val Leu Tyr Asn Val Thr Ile Asn Asn Thr Tyr Ser 
              210                 215                 220                 
          Cys Met Ile Glu Asn Asp Ile Ala Lys Ala Thr Gly Asp Ile Lys Val 
          225                 230                 235                 240 
          Thr Glu Ser Glu Ile Lys Arg Arg Ser His Leu Gln Leu Leu Asn Ser 
                          245                 250                 255     
          Lys Ala Ser Leu Cys Val Ser Ser Phe Phe Ala Ile Ser Trp Ala Leu 
                      260                 265                 270         
          Leu Pro Leu Ser Pro Tyr Leu Met Leu Lys 
                  275                 280
Figure 12_A0101_SEQ_0001
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Claims (28)

  1. 一種經單離之抗體，其特異性結合B7-H4且包含可變重鏈互補決定區1(CDRH1)、可變重鏈互補決定區2(CDRH2)、可變重鏈互補決定區3(CDRH3)、可變輕鏈互補決定區1(CDRL1)、可變輕鏈互補決定區2(CDRL2)及可變輕鏈互補決定區3(CDRL3)，該CDRH1包含胺基酸序列GFIVSRNY(SEQ ID NO: 2)，該CDRH2包含胺基酸序列IYGSGRT(SEQ ID NO: 3)，該CDRH3包含胺基酸序列ARDADYGLDV(SEQ ID NO: 16)或胺基酸序列ARDADYGMDV(SEQ ID NO: 10)，該CDRL1包含胺基酸序列QSVSSSY(SEQ ID NO: 53)，該CDRL2包含胺基酸序列GAS(SEQ ID NO: 54)，且該CDRL3包含胺基酸序列QQYGSSPLYT(SEQ ID NO: 55)。
  2. 如請求項1之經單離之抗體，其中該經單離之抗體包含重鏈可變序列及輕鏈可變序列，該重鏈可變序列包含SEQ ID NO: 44之胺基酸序列，且該輕鏈可變序列包含SEQ ID NO: 50之胺基酸序列。
  3. 如請求項1之經單離之抗體，其中該經單離之抗體包含重鏈及輕鏈，該重鏈包含SEQ ID NO: 45之胺基酸序列，且該輕鏈包含SEQ ID NO: 52之胺基酸序列。
  4. 如前述請求項中任一項之經單離之抗體，其中該經單離之抗體包含重鏈可變序列及輕鏈可變序列，該重鏈可變序列包含SEQ ID NO: 22之胺基酸序列，且該輕鏈可變序列包含SEQ ID NO: 50之胺基酸序列。
  5. 如前述請求項中任一項之經單離之抗體，其中該經單離之抗體包含重鏈及輕鏈，該重鏈包含SEQ ID NO: 23之胺基酸序列，且該輕鏈包含SEQ ID NO: 52之胺基酸序列。
  6. 如前述請求項中任一項之經單離之抗體，其中該經單離之抗體係單株抗體。
  7. 如前述請求項中任一項之經單離之抗體，其中該經單離之抗體係兔、小鼠、嵌合、人化或全人單株抗體。
  8. 如前述請求項中任一項之經單離之抗體，其中該經單離之抗體係IgG同型。
  9. 如前述請求項中任一項之經單離之抗體，其中該經單離之抗體係IgG1同型。
  10. 如前述請求項中任一項之經單離之抗體，其中該經單離之抗體與包含可變重鏈互補決定區1(CDRH1)、可變重鏈互補決定區2(CDRH2)、可變重鏈互補決定區3(CDRH3)、可變輕鏈互補決定區1(CDRL1)、可變輕鏈互補決定區2(CDRL2)及可變輕鏈互補決定區3(CDRL3)之經單離之抗體競爭與人類B7-H4之特異性結合，該CDRH1包含胺基酸序列GFIVSRNY(SEQ ID NO: 2)、該CDRH2包含胺基酸序列IYGSGRT(SEQ ID NO: 3)、該CDRH3包含胺基酸序列ARDADYGLDV(SEQ ID NO: 16)、該CDRL1包含胺基酸序列QSVSSSY(SEQ ID NO: 53)、該CDRL2包含胺基酸序列GAS(SEQ ID NO: 54)、且該CDRL3包含胺基酸序列QQYGSSPLYT(SEQ ID NO: 55)。
  11. 如前述請求項中任一項之經單離之抗體，其中該經單離之抗體與包含重鏈可變序列及輕鏈可變序列之經單離之抗體或與包含重鏈及輕鏈之經單離之抗體競爭與人類B7-H4之特異性結合，該重鏈可變序列包含SEQ ID NO: 44之胺基酸序列，該輕鏈可變序列包含SEQ ID NO: 50之胺基酸序列，該重鏈包含SEQ ID NO: 45之胺基酸序列，且該輕鏈包含SEQ ID NO: 52之胺基酸序列。
  12. 一種B7-H4抗體-藥物共軛體，其包含如前述請求項中任一項之經單離之抗體。
  13. 如請求項12之共軛體，其包含與靶向部份共價連接之一或多個連接子-藥物部份，其中： 各連接子-藥物部份包含多官能性連接子，該多官能性連接子經由中介各藥物單元的可釋放組裝單元連接該靶向部份與一或多個藥物單元(例如一或多種治療劑(D))並連接親水基至各連接子-藥物部份之該藥物單元； 該可釋放組裝單元能在該靶向部份所靶向之目標部位附近釋放游離藥物；且 該多官能性連接子包含介於該靶向部份與該親水基之間的肽部份，其中該肽部份包含至少二個胺基酸。
  14. 一種共軛體，其選自表A1及表A2中之共軛體之任一者。
  15. 一種共軛體，其選自表B1及表B2中之共軛體之任一者。
  16. 如請求項12之共軛體，其具有下式(XXXVII)：
    Figure 03_image001
    其中 d 13係2； 抗體係經修飾之B7-H4抗體，其包含可變重鏈互補決定區1(CDRH1)、可變重鏈互補決定區2(CDRH2)、可變重鏈互補決定區3(CDRH3)、可變輕鏈互補決定區1 (CDRL1)、可變輕鏈互補決定區2(CDRL2)及可變輕鏈互補決定區3(CDRL3)，該CDRH1包含胺基酸序列GFIVSRNY (SEQ ID NO: 2)，該CDRH2包含胺基酸序列IYGSGRT(SEQ ID NO: 3)，該CDRH3包含胺基酸序列ARDADYGLDV(SEQ ID NO: 16)或胺基酸序列ARDADYGMDV(SEQ ID NO: 10)，該CDRL1包含胺基酸序列QSVSSSY(SEQ ID NO: 53)，該CDRL2包含胺基酸序列GAS(SEQ ID NO: 54)，且該CDRL3包含胺基酸序列QQYGSSPLYT(SEQ ID NO: 55)； 該連接子-藥物部份係連接至該B7-H4抗體之N297處的天冬醯胺酸基團；且
    Figure 03_image003
    係GlcNAc；
    Figure 03_image005
    係Fuc；且
    Figure 03_image007
    係GalNAc。
  17. 如請求項12之共軛體，其具有下式(XXXVIII)：
    Figure 03_image009
    其中 d 13係整數2； 抗體係B7-H4抗體，其包含：可變重鏈互補決定區1 (CDRH1)、可變重鏈互補決定區2(CDRH2)、可變重鏈互補決定區3(CDRH3)、可變輕鏈互補決定區1(CDRL1)、可變輕鏈互補決定區2(CDRL2)及可變輕鏈互補決定區3 (CDRL3)，該CDRH1包含胺基酸序列GFIVSRNY(SEQ ID NO: 2)，該CDRH2包含胺基酸序列IYGSGRT(SEQ ID NO: 3)，該CDRH3包含胺基酸序列ARDADYGLDV(SEQ ID NO: 16)或胺基酸序列ARDADYGMDV(SEQ ID NO: 10)，該CDRL1包含胺基酸序列QSVSSSY(SEQ ID NO: 53)，該CDRL2包含胺基酸序列GAS(SEQ ID NO: 54)，且該CDRL3包含胺基酸序列QQYGSSPLYT(SEQ ID NO: 55)； 該連接子-藥物部份係連接至該抗體之N297處的天冬醯胺酸基團；且
    Figure 03_image003
    係GlcNAc；
    Figure 03_image005
    係Fuc；且
    Figure 03_image007
    係GalNAc。
  18. 一種具有下式之共軛體，
    Figure 03_image013
    Figure 03_image015
    其中d 13係8，抗體係B7-H4抗體或經半胱胺酸工程改造之B7-H4抗體， 其中該B7-H4抗體包含可變重鏈互補決定區1(CDRH1)、可變重鏈互補決定區2(CDRH2)、可變重鏈互補決定區3(CDRH3)、可變輕鏈互補決定區1(CDRL1)、可變輕鏈互補決定區2(CDRL2)及可變輕鏈互補決定區3(CDRL3)，該CDRH1包含胺基酸序列GFIVSRNY(SEQ ID NO: 2)，該CDRH2包含胺基酸序列IYGSGRT(SEQ ID NO: 3)，該CDRH3包含胺基酸序列ARDADYGLDV(SEQ ID NO: 16)或胺基酸序列ARDADYGMDV(SEQ ID NO: 10)，該CDRL1包含胺基酸序列QSVSSSY(SEQ ID NO: 53)，該CDRL2包含胺基酸序列GAS(SEQ ID NO: 54)，且該CDRL3包含胺基酸序列QQYGSSPLYT(SEQ ID NO: 55)。
  19. 一種治療或預防有此需要之個體的疾病或病症之方法，其包含向該個體投予如請求項12至18中任一項之共軛體。
  20. 如請求項12至18中任一項之共軛體，其係用於治療或預防有此需要之個體的疾病或病症。
  21. 一種如請求項12至18中任一項之共軛體於製造用於治療或預防有此需要之個體的疾病或病症的藥物之用途。
  22. 一種如請求項12至18中任一項之共軛體於治療或預防有此需要之個體的疾病或病症之用途。
  23. 如請求項19至22中任一項之方法、共軛體或用途，其中該共軛體在生物降解時釋放一或多種治療劑。
  24. 如請求項19至23中任一項之方法、共軛體或用途，其中該疾病或病症係癌症。
  25. 如請求項24之方法、共軛體或用途，其中該癌症係B7-H4陽性癌症。
  26. 如請求項25之方法、共軛體或用途，其中該B7-H4陽性癌症係膽管癌(bile duct carcinoma)、乳癌、子宮內膜癌、卵巢癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、子宮癌、甲狀腺癌、腎癌、頭頸癌、胃癌、黑色素瘤、膽管癌、乳糜管癌(cholangial carcinoma)、胰臟癌、結腸癌或膀胱癌。
  27. 如請求項19至26中任一項之方法、共軛體或用途，其中該個體係人類。
  28. 如請求項19至27中任一項之方法，其進一步包含向該個體投予治療劑。
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