TW202233687A - 貓抗體恆定區中之突變 - Google Patents

Abstract

本發明大體上係關於貓抗體變異體及其用途。具體而言，本發明係關於貓抗體之恆定區中用於改良各種特徵的突變。

Description

貓抗體恆定區中之突變

本發明大體上係關於貓抗體變異體及其用途。具體而言，本發明係關於貓抗體之Fc恆定區中用於改良各種特徵的一個或多個突變。

正在研發貓IgG單株抗體(mAb)作為獸醫學中之有效治療劑。若干年前，鑑別及表徵了貓IgG亞類(Strietzel等人, 2014, Vet Immunol Immunopathol., 第158(3-4)卷，第214至223頁)。然而，尚未對延長貓IgG之半衰期進行許多研究。

經由循環機制，新生兒Fc受體(FcRn)在與其片段可結晶(Fc)區之pH依賴性相互作用中延長IgG之半衰期。具體而言，跨越CH2及CH3域之界面的Fc區與細胞表面上之FcRn相互作用以調節IgG內環境穩定。IgG胞飲之後的酸性相互作用有助於此相互作用且由此防止IgG降解。內吞IgG隨後循環回至細胞表面且在鹼性pH下釋放至血流中，藉此維持用於恰當功能之充足血清IgG。因此，IgG之藥物動力學概況視其Fc區之結構及功能特性而定。

三個貓IgG亞類結合貓FcRn，且已與人類IgG類似物進行比較。貓IgG之半衰期仍待進行充分研究，因為在無任何實驗支援之情況下，吾人不能預期或預測其是否將與人類IgG緊密對齊。

IgG之半衰期延長可允許抗體藥物之較不頻繁給藥及/或較低劑量，其繼而減少獸醫問診，提高患者順應性，且減少濃度依賴性細胞毒性/不良事件。

因此，需要鑑別Fc恆定區中用以改良半衰期之突變。

本發明係關於突變貓IgG，其相對於野生型貓IgG提供更高的FcRn親和力。具體而言，本申請案之發明人已發現，取代一個或多個胺基酸殘基驚人且出乎意料地增強對FcRn之親和力。

在一個範疇中，本發明提供一種經修飾IgG，其包含：貓IgG恆定域，其包含相對於野生型貓IgG恆定域之至少一個胺基酸取代，其中該取代在根據如在Kabat中之Eu索引編號的胺基酸殘基247、249、250、252、254、256、285、309、311、312、314、378、399、401、402、403、404、428、430、431、432、434、436或437處。

在一些實施例中，恆定域包含以下取代中之一者或多者：P247I、P247L、P247V、D249A、D249E、D249S、T250E、T250I、T250Q、T250S、T250V、S252A、S252C、S252D、S252E、S252F、S252G、S252H、S252I、S252K、S252L、S252N、S252P、S252Q、S252R、S252T、S252V、S252Y、S252M、S252W、S254A、S254D、S254E、S254F、S254G、S254H、S254K、S254L、S254M、S254C、S254I、S254N、S254P、S254Q、S254R、S254T、S254V、S254W、S254Y、T256A、T256C、T256D、T256E、T256F、T256G、T256H、T256I、T256K、T256L、T256M、T256N、T256P、T256Q、T256R、T256V、T256W、T256Y、T256S、Y285A、L309G、L309I、Q311F、Q311H、Q311I、Q311K、Q311L、Q311M、Q311R、Q311W、Q311Y、D312A、D312H、D312K、D312R、D312P、L314K、316Q、A378C、A378D、A378E、A378F、A378G、A378H、A378I、A378K、A378L、A378M、A378N、A378P、A378Q、A378R、A378S、A378T、A378V、A378W、A378Y、D399M、D399T、D399V、D401R、G402R、T403R、Y404Q、S428A、S428C、S428D、S428E、S428F、S428G、S428H、S428I、S428K、S428L、S428N、S428P、S428R、S428T、S428V、S428W、S428Y、S428M、E430I、E430Q、A431Q、A431R、A431V、A431K、L432S、S434A、S434C、S434D、S434E、S434F、S434G、S434H、S434I、S434K、S434L、S434M、S434N、S434P、S434Q、S434R、S434T、S434V、S434W、S434Y、H436G、H436K、H436M、H436R、H436Y、T437A及T437R。

在另一範疇中，本發明提供一種多肽，其包含：貓IgG恆定域，其包含相對於野生型貓IgG恆定域之至少一個胺基酸取代，其中該取代在根據如在Kabat中之Eu索引編號的胺基酸殘基247、249、250、252、254、256、285、309、311、312 314、378、399、401、402、403、404、428、430、431、432、434、436或437處。

在又另一範疇中，本發明提供一種抗體，其包含：貓IgG恆定域，其包含相對於野生型貓IgG恆定域之至少一個胺基酸取代，其中該取代在根據如在Kabat中之Eu索引編號的胺基酸殘基247、249、250、252、254、256、285、309、311、312、314、378、399、401、402、403、404、428、430、431、432、434、436或437處。

在另一範疇中，本發明提供一種用於產生或製造抗體或分子之方法，該方法包含：提供具有包含貓IgG恆定域之抗體的載體或宿主細胞，該貓IgG恆定域包含相對於野生型貓IgG恆定域之一個或多個胺基酸取代，其中該一個或多個取代在胺基酸殘基247、249、250、252、254、256、285、309、311、312、314、378、399、401、402、403、404、428、430、431、432、434、436、437或其組合處。

在另一範疇中，本發明提供一種融合分子，其包含：貓IgG恆定域，其包含相對於野生型貓IgG恆定域之至少一個胺基酸取代，其中該取代在根據如在Kabat中之Eu索引編號的胺基酸殘基247、249、250、252、254、256、285、309、311、312、314、378、399、401、402、403、404、428、430、431、432、434、436或437處。

在另一範疇中，本發明提供一種用於增加貓中之抗體血清半衰期的方法，該方法包含：向該貓投予治療有效量的包含貓IgG恆定域之抗體，該貓IgG恆定域包含相對於野生型貓IgG恆定域之至少一個胺基酸取代，其中該取代在根據如在Kabat中之EU索引編號的胺基酸殘基胺基酸殘基252、311或428處。在一個例示性實施例中，貓IgG恆定域包含突變S252H、S252Y、Q311W、S428L、S428M及S428Y中之一者或多者。在另一例示性實施例中，貓IgG恆定域包含選自以下群組之一個或多個突變：(1) S428L；(2) S252H及S428M；(3) S252Y及S428M；(4) S428M及Q311W；或(5) S428Y及Q311W。

本發明之其他特徵及優勢將自以下詳細描述實例及圖式變得顯而易見。然而，應理解，詳細描述及特定實例雖然指示本發明之較佳實施例，但僅以說明方式給出，因為熟習此項技術者將由此詳細描述顯而易見本發明之精神及範疇內的各種變化及修改。

相關申請案之交叉參考

本申請案主張2020年12月18日申請之美國臨時專利申請案63/127313的優先權及權益，該美國臨時專利申請案以全文引用之方式併入本文中。

參考形成本發明之一部分的以下詳細描述，可更容易地理解本發明主題。應理解，本發明不限於本文中所描述及/或展示之具體產物、方法、條件或參數，且本文中所使用之術語係出於僅藉助於實例來描述特定實施例之目的，且不意欲限制任何所主張之本發明。

除非本文中另外定義，否則結合本申請案使用之科學及技術術語應具有一般熟習此項技術者通常所理解的含義。此外，除非上下文另外需要，否則單數術語應包括複數，且複數術語應包括單數。

如貫穿本發明所採用，除非另外指示，否則以下術語及縮寫應理解為具有以下含義。 定義

在本發明中，除非上下文另外明確指示，否則單數形式「一(a/an)」及「該(the)」包括複數個參考物，且對特定數值之參考至少包括彼特定值。因此，舉例而言，對「一分子」或「一化合物」之參考為對一種或多種此類分子或化合物及熟習此項技術者已知的其等效物等的參考。如本文中所使用，術語「複數個」意謂超過一個。當表述值範圍時，另一實施例包括自一個特定值及/或至另一特定值。類似地，當藉由在前面使用「約」以近似值表述值時，應理解，特定值形成另一實施例。所有範圍均為包括性且可組合的。

在說明書及申請專利範圍中，免疫球蛋白重鏈中之胺基酸殘基的編號為如在Kabat等人, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第5版. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)中之Eu索引的編號。「如Kabat中之Eu索引」係指IgG抗體之殘基編號且反映於本文中之圖2中。

術語「經分離」在關於核酸使用時為自其天然來源中通常與其相關之至少一種污染物核酸中鑑別且分離出的核酸。經分離之核酸可以與自然界中發現之形式或環境不同的形式或環境存在。因此，經分離之核酸分子區別於在天然細胞中存在的核酸分子。經分離之核酸分子包括細胞中含有的通常表現本文中所編碼之多肽的核酸分子，其中例如該核酸分子處於與天然細胞之質體或染色體位置不同的質體或染色體位置中。經分離之核酸可以單股或雙股形式存在。當經分離之核酸分子用以表現蛋白質時，寡核苷酸或聚核苷酸將含有最小有義或編碼股，但可含有有義股及反義股兩者(亦即可為雙股)。

當核酸分子與另一核酸分子具有功能關係時，該核酸分子經「可操作地連接(operably linked/operably attached)」。舉例而言，若啟動子或強化子影響序列之轉錄，則該啟動子或強化子可操作地連接至核酸之編碼序列；或若核糖體結合位點經定位以便促進轉譯，則該核糖體結合位點可操作地連接至核酸之編碼序列。若編碼變異Fc區之核酸分子經定位以使得所表現融合蛋白質包含與變異Fc區多肽上游或下游鄰接之異源蛋白質或其功能片段，則該核酸分子可操作地連接至編碼異源蛋白質(亦即當其存在於自然界中時不包含Fc區之蛋白質或其功能片段)之核酸分子；異源蛋白質可緊鄰變異Fc區多肽，或可藉由具有任何長度及組成之連接子序列與其間隔開。同樣地，當多肽(在本文中與「蛋白質」同義地使用)分子與另一多肽具有功能關係時，該多肽分子經「可操作地連接」。

如本文中所使用，當參考多肽或蛋白質(例如變異Fc區或單株抗體)時，術語「功能片段」係指保留全長多肽之至少一個功能的彼蛋白質片段。片段之大小可介於六個胺基酸至全長多肽之整個胺基酸序列減一個胺基酸的範圍內。本發明之變異Fc區多肽的功能片段保留至少一種如本文中所定義之「胺基酸取代」。變異Fc區多肽之功能片段保留此項技術中已知的與Fc區相關之至少一個功能(例如ADCC、CDC、Fc受體結合、Clq結合、細胞表面受體之下調或可例如增加與其可操作連接之多肽的活體內或試管內半衰期)。

術語「經純化」或「純化」係指自樣本實質性移除至少一種污染物。舉例而言，抗原特異性抗體可藉由完全或實質性移除(至少90%、91%、92%、93%、94%、95%，或更佳地至少96%、97%、98%或99%)至少一種污染性非免疫球蛋白蛋白質來純化；其亦可藉由移除不結合至相同抗原之免疫球蛋白蛋白質來純化。移除非免疫球蛋白蛋白質及/或移除不結合特定抗原之免疫球蛋白使得樣本中抗原特異性免疫球蛋白之百分比增加。在另一實例中，細菌性宿主細胞中表現之多肽(例如免疫球蛋白)藉由完全或實質性移除宿主細胞蛋白質來純化；藉此增加樣本中多肽之百分比。

術語「天然的」在指多肽(例如Fc區)時在本文中用以指示該多肽具有由自然界中通常存在之多肽或其天然存在的多晶型之胺基酸序列組成的胺基酸序列。天然多肽(例如天然Fc區)可藉由重組手段來製備或可自天然存在源分離。

如本文中所使用之術語「表現載體」係指含有所要編碼序列及在特定宿主生物體中表現可操作地連接之編碼序列所需之適當核酸序列的重組DNA分子。

如本文中所使用，術語「宿主細胞」係指位於試管內或原位或活體內之任何真核或原核細胞(例如細菌細胞，諸如大腸桿菌、CHO細胞、酵母細胞、哺乳動物細胞、禽類細胞、兩棲動物細胞、植物細胞、魚細胞及昆蟲細胞)。

如本文中所使用，術語「Fc區」係指免疫球蛋白重鏈之C端區。「Fc區」可為天然序列Fc區或變異Fc區。儘管免疫球蛋白重鏈之Fc區之一般可接受邊界可變化，但貓IgG重鏈Fc區通常經限定以例如自位置231處之胺基酸殘基延伸至其羧基端。在一些實施例中，變異體僅包含Fc區之部分，且可包括或不包括羧基端。免疫球蛋白之Fc區一般包含兩個恆定域：CH2及CH3。在一些實施例中，涵蓋具有恆定域中之一者或多者的變異體。在其他實施例中，涵蓋不具有此類恆定域(或僅具有此類恆定域之部分)之變異體。

貓IgG Fc區之「CH2域」通常例如自約胺基酸231延長至約胺基酸340 (參見圖2)。CH2域的獨特之處在於其不與另一域緊密配對。兩個N連接之分支鏈碳水化合物鏈插入於完整天然IgG分子之兩個CH2域之間。

貓IgG Fc區之「CH3域」一般為殘基C端向Fc區延長中之CH2域的延伸，例如約胺基酸殘基341至約胺基酸殘基447 (參見圖2)。

「功能性Fc區」擁有天然序列Fc區之「效應功能」。相對於包含天然Fc區或變異體之親本Fc區的多肽，包含本發明之變異Fc區的多肽之至少一種效應功能可增強或減弱。效應功能之實例包括但不限於：Clq結合；補體依賴性細胞毒性(CDC)；Fc受體結合；抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC)；吞噬作用；細胞表面受體(例如B細胞受體；BCR)之下調等。此類效應功能可能需要Fc區可操作地連接至結合域(例如抗體可變域)，且可使用各種檢定(例如Fc結合檢定、ADCC檢定、CDC檢定、來自全部或分級分離之血液樣本的目標細胞耗乏等)來評定。

「天然序列Fc區」或「野生型Fc區」係指與在自然界中通常發現之Fc區之胺基酸序列一致的胺基酸序列。例示性天然序列貓Fc區展示於圖2中，且包括貓IgG1a Fc區之天然序列。

「變異Fc區」包含與天然序列Fc區(或其片段)之胺基酸序列相差至少一個如本文中所定義之「胺基酸取代」的胺基酸序列。在較佳實施例中，變異Fc區相比於天然序列Fc區或在親本多肽之Fc區中具有至少一個胺基酸取代，較佳地在天然序列Fc區中或在親本多肽之Fc區中具有1、2、3、4或5個胺基酸取代。在一替代實施例中，變異Fc區可根據本文中所揭示之方法來產生，且此變異Fc區可融合至所選異源多肽(諸如抗體可變域)或非抗體多肽(例如受體或配位體之結合域)。

如本文中所使用，在多肽之上下文中的術語「衍生物」係指包含已藉由引入胺基酸殘基取代而改變之胺基酸序列的多肽。如本文中所使用，術語「衍生物」亦指已藉由任何類型之分子與多肽之共價連接經修飾的多肽。舉例而言(但不以限制方式)，抗體可例如藉由糖基化、乙醯化、聚乙二醇化、磷酸化、醯胺化、藉由已知保護/阻斷基團進行之衍生化、蛋白水解裂解、與細胞配位體或其他蛋白質連接等來修飾。衍生物多肽可藉由化學修飾使用熟習此項技術者所已知的技術來產生，該等技術包括但不限於特異性化學裂解、乙醯化、甲醯化、衣黴素之代謝合成等。此外，衍生物多肽擁有與其所衍生之多肽類似或相同的功能。應理解，包含本發明之變異Fc區的多肽可為如本文中所定義之衍生物，較佳地，衍生化發生於Fc區內。

如本文中參考多肽(例如Fc區或單株抗體)所使用之「實質上貓來源」指示多肽具有與天然貓胺基多肽之胺基酸序列至少80%、至少85%，更佳地至少90%、91%、92%、93%、94%，或甚至更佳地至少95%、95%、97%、98%或99%同源的胺基酸序列。

術語「Fc受體」或「FcR」用以描述結合至Fc區(例如抗體之Fc區)之受體。較佳FcR為天然序列FcR。此外，較佳FcR為結合IgG抗體(γ受體)且包括FcγRI、FcγRII、FcγRIII亞類之受體(包括此等受體之對偶基因變異體及交替剪接形式)的FcR。另一較佳FcR包括新生受體FcRn，其負責將母體IgG轉移至胎兒(Guyer等人, J. Immunol. 117:587 (1976)及Kim等人, J. Immunol. 24:249 (1994))。包括未來將鑑別之FcR的其他FcR由本文中之術語「FcR」涵蓋。

片語「抗體依賴性細胞介導之細胞毒性」及「ADCC」係指細胞介導之反應，其中表現FcR之非特異性細胞毒性細胞(例如非特異性) (例如自然殺手(「NK」)細胞、嗜中性球及巨噬細胞)識別目標細胞上之經結合抗體，且隨後促使目標細胞裂解。用於介導ADCC之原代細胞NK細胞僅表現FcγRIII，而單核球表現FcγRI、FcγRII及FcγRIII。

如本文中所使用，片語「效應細胞」係指表現一種或多種FcR且執行效應功能之白血球(較佳地貓)。較佳地，細胞至少表現FcγRIII，且執行ADCC效應功能。介導ADCC之白血球的實例包括PBMC、NK細胞、單核球、細胞毒性T細胞及嗜中性球。效應細胞可自天然來源(例如自血液或PBMC)分離。

具有「經改變」FcRn結合親和力之變異多肽為在pH 6.0下量測時，與變異體之親本多肽或包含天然Fc區之多肽相比，具有增強(亦即增加的、更大的或更高的)或減弱(亦即降低的、減小的或更低的) FcRn結合親和力之多肽。顯示與FcRn之結合增加或結合親和力增加的變異多肽以比親本多肽更大的親和力結合FcRn。顯示與FcRn之結合減小或結合親和力減小的變異多肽以比其親本多肽更低的親和力結合FcRn。顯示與FcRn之結合減小的此類變異體可擁有與FcRn極少或無可觀的結合，例如與親本多肽相比，0%至20%的與FcRn之結合。與其親本多肽相比，以「增強的親和力」結合FcRn之變異多肽為當在結合檢定中變異多肽與親本多肽之量基本上相同且所有其他條件一致時，以比親本多肽更高的結合親和力結合FcRn之多肽。舉例而言，具有增強的FcRn結合親和力之變異多肽可顯示相比於親本多肽，FcRn結合親和力增加約1.10倍至約100倍(更典型地約1.2倍至約50倍)，其中例如在ELISA檢定或一般熟習此項技術者可用之其他方法中測定FcRn結合親和力。

如本文中所使用，「胺基酸取代」係指給定胺基酸序列中之至少一個現有胺基酸殘基經另一不同「置換」胺基酸殘基置換。一個或多個置換殘基可為「天然存在之胺基酸殘基」(亦即由遺傳密碼編碼)，且選自：丙胺酸(Ala)；精胺酸(Arg)；天冬醯胺(Asn)；天冬胺酸(Asp)；半胱胺酸(Cys)；麩醯胺酸(Gln)；麩胺酸(Glu)；甘胺酸(Gly)；組胺酸(His)；異白胺酸(Ile)：白胺酸(Leu)；離胺酸(Lys)；甲硫胺酸(Met)；苯丙胺酸(Phe)；脯胺酸(Pro)；絲胺酸(Ser)；蘇胺酸(Thr)；色胺酸(Trp)；酪胺酸(Tyr)；及纈胺酸(Val)。本文中之胺基酸取代的定義亦涵蓋經一個或多個非天然存在之胺基酸殘基的取代。「非天然存在之胺基酸殘基」係指除上文所列之彼等天然存在之胺基酸殘基之外的能夠共價結合多肽鏈中之一個或多個相鄰胺基酸殘基的殘基。非天然存在之胺基酸殘基的實例包括正白胺酸、鳥胺酸、正纈胺酸、高絲胺酸及其他胺基酸殘基類似物，諸如Ellman等人，Meth. Enzym. 202:301-336 (1991)中所描述之彼等者。

術語「檢定信號」係指來自偵測蛋白質-蛋白質相互作用之任何方法的輸出，包括但不限於比色檢定之吸光度量測、螢光強度或每分鐘之衰變數。檢定格式可包括ELISA、facs或其他方法。「檢定信號」之變化可反映細胞存活率之變化及/或動力學解離速率、動力學締合速率或兩者的變化。「更高檢定信號」係指大於另一數值之所量測輸出數值(例如在ELISA檢定中，與親本多肽相比，變異體可具有更高(更大)的量測數值)。「更低」檢定信號係指小於另一數值之所量測輸出數值(例如在ELISA檢定中，與親本多肽相比，變異體可具有更低(更小)的量測數值)。

術語「結合親和力」係指與各Fc受體-Fc結合相互作用相關之平衡解離常數(以濃度單位表述)。結合親和力直接與動力學解離速率(一般以倒數時間單位報導，例如秒 ^-1)除以動力學締合速率(一般以每單位時間之濃度單位報導，例如莫耳/秒)之比率相關。一般而言，不可能明確地陳述平衡解離常數(K _D或KD)之變化係由於締合速率、解離速率抑或兩者之差異，除非此等參數中之每一者以實驗方式經測定(例如藉由BIACORE或SAPIDYNE量測)。

如本文中所使用，術語「鉸鏈區」係指例如貓IgG1a中之胺基酸延伸(例如自貓IgG1a之位置216至位置230的延伸)。其他IgG同型之鉸鏈區可藉由將形成重鏈間二硫鍵(S-S)鍵結之第一及最後一個半胱胺酸殘基置放於相同位置中而與IgG序列對齊。

「Clq」為包括針對免疫球蛋白之Fc區之結合位點的多肽。Clq連同兩個絲胺酸蛋白酶Clr及Cls形成複合體Cl (CDC路徑之第一組分)。

如本文中所使用，術語「抗體」可與「免疫球蛋白」互換使用，或「Ig」以最廣泛意義使用，且特定地涵蓋單株抗體(包括全長單株抗體)、多株抗體、多特異性抗體(例如雙特異性抗體)及抗體片段，只要其展現所要生物活性或功能活性。本發明及術語「抗體」亦涵蓋包含衍生自不同物種之部分的單鏈抗體及嵌合、貓或貓類化抗體，以及嵌合或CDR移植之單鏈抗體及其類似者。此等抗體之各種部分可藉由習知技術以合成方式以化學方式接合在一起或可使用基因工程改造技術製備為連續蛋白質。舉例而言，編碼嵌合或貓類化鏈之核酸可表現以產生連續蛋白質。參見例如美國專利第4,816,567號；美國專利第4,816,397號；WO 86/01533；美國專利第5,225,539號；及美國專利第5,585,089號及第5,698,762號。關於靈長類化抗體，亦參見Newman,R.等人，BioTechnology, 10:1455-1460, 1993，且關於單鏈抗體，參見Ladner等人，美國專利第4,946,778號及Bird, R. E.等人，Science, 242:423-426, 1988。應理解，包含Fc區(或其部分)之抗體的所有形式在本文中涵蓋於術語「抗體」內。此外，抗體可用可偵測標記來標記，固定於固相上，且/或根據此項技術中已知的方法與異源化合物(例如酶或毒素)共軛。

如本文中所使用，術語「抗體片段」係指完整抗體之一部分。抗體片段之實例包括但不限於直鏈抗體；單鏈抗體分子；Fc或Fc之肽、Fab及Fab片段，及由抗體片段形成之多特異性抗體。抗體片段較佳地保留鉸鏈之至少一部分，且視情況保留IgG重鏈之CH1區。在其他較佳實施例中，抗體片段包含CH2區之至少一部分或整個CH2區。

如本文中所使用，當參考單株抗體使用時，術語「功能片段」意欲指單株抗體仍保持功能活性之部分。功能活性可為例如抗原結合活性或特異性、受體結合活性或特異性、效應功能活性及其類似者。單株抗體功能片段包括例如個別重鏈或輕鏈及其片段，諸如VL、VH及Fd；單價片段，諸如Fv、Fab及Fab'；二價片段，諸如F(ab')2；單鏈Fv (scFv)；及Fc片段。此類術語例如描述於以下各者中：Harlowe及Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, New York (1989)；Molec. Biology and Biotechnology: A Comprehensive Desk Reference (Myers, R. A. (編), New York: VCH Publisher, Inc.)；Huston等人, Cell Biophysics, 22: 189-224 (1993)；Pluckthun及Skerra, Meth. Enzymol., 178:497-515 (1989)；及Day, E. D., Advanced Immunochemistry,第二版., Wiley-Liss, Inc., New York, N.Y. (1990)。術語功能片段意欲包括例如藉由蛋白酶消化或單株抗體還原及藉由熟習此項技術者已知的重組DNA方法產生之片段。

如本文中所使用，術語「片段」係指包含另一多肽之胺基酸序列的至少5、15、20、25、40、50、70、90、100或更多個相連胺基酸殘基之胺基酸序列的多肽。在一較佳實施例中，多肽之片段保留全長多肽之至少一個功能。

如本文中所使用，術語「嵌合抗體」包括單價、二價或多價免疫球蛋白。單價嵌合抗體為由經由與嵌合輕鏈之二硫橋鍵締合之嵌合重鏈形成的二聚體。二價嵌合抗體為由經由至少一個二硫橋鍵締合之兩個重鏈-輕鏈二聚體形成的四聚體。用於貓中之抗體的嵌合重鏈包含衍生自非貓抗體之重鏈的抗原結合區，該抗原結合區連接至貓重鏈恆定區之至少一部分，諸如CH1或CH2。用於貓中之抗體的嵌合輕鏈包含衍生自非貓抗體之輕鏈的連接至貓輕鏈恆定區(CL)之至少一部分的抗原結合區。具有相同或不同可變區結合特異性之嵌合重鏈及輕鏈的抗體、片段或衍生物亦可藉由個別多肽鏈根據已知方法步驟之適當締合來製備。藉由此途徑，將表現嵌合重鏈之宿主與表現嵌合輕鏈之宿主分開培養，且分開回收免疫球蛋白鏈，且隨後進行締合。可替代地，宿主可進行共培養，且使各鏈在培養基中自發地締合，隨後回收經組裝之免疫球蛋白或片段，或重鏈及輕鏈皆可在相同宿主細胞中表現。用於產生嵌合抗體之方法為此項技術中熟知的(參見例如美國專利第6,284,471號；第5,807,715號；第4,816,567號；及第4,816,397號)。

如本文中所使用，非貓(例如鼠)抗體之「貓類化」形式(亦即貓類化抗體)為含有衍生自非貓免疫球蛋白之最小序列或無衍生自非貓免疫球蛋白之序列的抗體。在極大程度上，貓類化抗體為貓免疫球蛋白(接受者抗體)，其中來自接受者之高變區的殘基經來自具有所要特異性、親和力及能力之諸如小鼠、大鼠、兔、人類或非人類靈長類動物之非貓物種(供者抗體)的高變區之殘基置換。在一些情況下，貓免疫球蛋白之構架區(FR)殘基經對應非貓殘基置換。此外，貓類化抗體可包含在接受者抗體或供者抗體中未發現之殘基。一般進行此等修飾以進一步改進抗體效能。一般而言，貓類化抗體將包含實質上全部至少一個，且典型地兩個可變域，其中全部或實質上全部高變環(CDR)對應於非貓免疫球蛋白之彼等高變環，且全部或實質上全部FR殘基為貓免疫球蛋白序列之彼等FR殘基。貓類化抗體亦可包含免疫球蛋白恆定區(Fc) (典型地貓免疫球蛋白之免疫球蛋白恆定區)之至少一部分。

如本文中所使用，術語「免疫黏附素」表示將異源「黏附素」蛋白質(例如受體、配位體或酶)之結合域與免疫球蛋白恆定域組合之抗體樣分子。在結構上，免疫黏附素包含除抗體(亦即為「異源」)之抗原識別及結合位點(抗原組合位點)之外的黏附素胺基酸序列以所要結合特異性與免疫球蛋白恆定域序列之融合。

如本文中所使用，術語「配位體結合域」係指任何天然受體或其保持對應天然受體之至少一種定性配位體結合能力的任何區或衍生物。在某些實施例中，受體係來自具有與免疫球蛋白超基因家族之成員同源的胞外域之細胞表面多肽。不為免疫球蛋白超基因家族成員，但此定義仍特定涵蓋之其他受體為細胞介素之受體，且特定言之具有酪胺酸激酶活性之受體(受體酪胺酸激酶) (造血素及神經生長因子受體超家族之成員)，及細胞黏附分子(例如E-選擇素、L-選擇素及P-選擇素)。

如本文中所使用，術語「受體結合域」係指受體之任何天然配位體，包括例如細胞黏附分子，或此天然配位體保持對應天然配位體之至少一種定性受體結合能力的任何區或衍生物。

如本文中所使用，「經分離」之多肽為已自其天然環境之組分鑑別及分離及/或回收之多肽。其天然環境之污染組分為將干擾多肽之診斷或治療用途之物質，且可包括酶、激素及其他蛋白質或非蛋白質溶質。在某些實施例中，經分離之多肽經純化(1)至如藉由洛瑞法(Lowry method)所測定的大於95重量%之多肽，且更佳地超過99重量%，(2)至足以藉由使用旋轉杯式定序儀而獲得至少15個N端殘基或內部胺基酸序列之程度，或(3)藉由SDS-page在還原或非還原條件下使用庫馬斯藍(Coomassie blue)或銀染色達至均質性。因多肽之天然環境的至少一種組分將不存在，故經分離之多肽包括重組細胞內之原位多肽。然而，經分離之多肽通常將藉由至少一個純化步驟來製備。

如本文中所使用，術語「病症」及「疾病」可互換使用以指代將得益於用變異多肽(包含本發明之變異Fc區的多肽)治療之任何病狀，包括慢性及急性病症或疾病(例如使患者易患特定病症之病理學病狀)。

如本文中所使用，術語「受體」係指能夠結合至少一種配位體之多肽。較佳受體為具有胞外配位體結合域及視情況存在之其他域(例如跨膜域、胞內域及/或膜錨)之細胞表面或可溶性受體。在本文中所描述之檢定中評估之受體可為完整受體或其片段或衍生物(例如包含與一種或多種異源多肽融合之受體的結合域之融合蛋白質)。此外，待針對其結合特性進行評估之受體可存在於細胞中，或經分離及視情況經塗佈於檢定板或一些其他固相上，或經直接標記且用作探針。 貓野生型 IgG

貓IgG為此項技術中熟知的，且充分描述於例如Strietzel等人, 2014, Vet Immunol Immunopathol., 第158(3-4)卷, 第214至223頁中。在一個實施例中，貓IgG為IgG1 _a。在另一實施例中，貓IgG為IgG1 _b。在又另一實施例中，貓IgG為IgG2。在一特定實施例中，貓IgG為IgG1 _a。

IgG1 _a、IgG1 _b及IgG2之胺基酸及核酸序列亦為此項技術中熟知的。

在一個實例中，本發明之IgG包含恆定域，例如CH1、CH2或CH3域或其組合。在另一實例中，本發明之恆定域包含Fc區，包括例如CH2或CH3域或其組合。

在一特定實例中，野生型恆定域包含SEQ ID NO.: 1、3或4中所闡述之胺基酸序列。在一些實施例中，野生型IgG恆定域為SEQ ID NO.: 1、3或4之同源物、變異體、異構體或功能片段，但不具有任何突變。各可能性代表本發明之單獨實施例。

IgG恆定域亦包括具有與重鏈及/或輕鏈之胺基酸序列實質上類似的胺基酸序列之多肽。實質上相同胺基酸序列在本文中定義為如藉由FASTA搜索法根據Pearson及Lipman, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:2444-2448 (1988)所測定，與所比較胺基酸序列具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%或99%一致性之序列。

本發明亦包括本文中所描述的編碼IgG或其部分之核酸分子。在一個實施例中，核酸可編碼包含例如CH1、CH2、CH3區或其組合之抗體重鏈。在另一實施例中，核酸可編碼抗體重鏈，該抗體重鏈包含例如VH區中之任一者或其部分，或VH CDR中之任一者，包括其任何變異體。本發明亦包括編碼抗體輕鏈之核酸分子，該抗體輕鏈包含例如CL區中之任一者或其部分、VL區中之任一者或其部分，或VL CDR中之任一者，包括其任何變異體。在某些實施例中，核酸編碼重鏈及輕鏈兩者或其部分。

SEQ ID NO.: 1、3或4中所闡述之野生型恆定域的胺基酸序列由分別包含SEQ ID NO.: 2、7或8中所闡述之序列的核酸序列編碼。 經修飾貓 IgG

本申請案之發明人已發現，取代一個或多個胺基酸殘基驚人且出乎意料地增強對FcRn之親和力。如本文中所使用，胺基酸位置編號係指根據如在Kabat中之Eu索引編號的位置(Kabat等人, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第5版. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991))。

因此，在一個實施例中，本發明提供一種經修飾IgG，其包含：貓IgG恆定域，其包含相對於野生型貓IgG恆定域之至少一個胺基酸取代，其中該取代在根據如在Kabat中之Eu索引編號的胺基酸殘基247、249、250、252、254、256、285、309、311、312、314、378、399、401、402、403、404、428、430、431、432、434、436或437處。

在一些實施例中，恆定域包含以下取代中之一者或多者：P247I、P247L、P247V、D249A、D249E、D249S、T250E、T250I、T250Q、T250S、T250V、S252A、S252C、S252D、S252E、S252F、S252G、S252H、S252I、S252K、S252L、S252N、S252P、S252Q、S252R、S252T、S252V、S252Y、S252M、S252W、S254A、S254D、S254E、S254F、S254G、S254H、S254K、S254L、S254M、S254C、S254I、S254N、S254P、S254Q、S254R、S254T、S254V、S254W、S254Y、T256A、T256C、T256D、T256E、T256F、T256G、T256H、T256I、T256K、T256L、T256M、T256N、T256P、T256Q、T256R、T256V、T256W、T256Y、T256S、Y285A、L309G、L309I、Q311F、Q311H、Q311I、Q311K、Q311L、Q311M、Q311R、Q311W、Q311Y、D312A、D312H、D312K、D312R、D312P、L314K、316Q、A378C、A378D、A378E、A378F、A378G、A378H、A378I、A378K、A378L、A378M、A378N、A378P、A378Q、A378R、A378S、A378T、A378V、A378W、A378Y、D399M、D399T、D399V、D401R、G402R、T403R、Y404Q、S428A、S428C、S428D、S428E、S428F、S428G、S428H、S428I、S428K、S428L、S428N、S428P、S428R、S428T、S428V、S428W、S428Y、S428M、E430I、E430Q、A431Q、A431R、A431V、A431K、L432S、S434A、S434C、S434D、S434E、S434F、S434G、S434H、S434I、S434K、S434L、S434M、S434N、S434P、S434Q、S434R、S434T、S434V、S434W、S434Y、H436G、H436K、H436M、H436R、H436Y、T437A及T437R。

在一特定實例中，本發明包含本文中所描述在SEQ ID NO.: 1、3或4中所闡述之野生型胺基酸序列中之一個或多個突變。在一些實施例中，突變IgG恆定域為具有本文中所描述之一個或多個突變的同源物、變異體、異構體或功能片段。各可能性代表本發明之單獨實施例。

突變恆定域之胺基酸序列由其對應突變核酸序列編碼。 用於製造本發明之抗體分子的方法

用於製造抗體分子之方法為此項技術中熟知的，且充分描述於美國專利8,394,925；8,088,376；8,546,543；10,336,818；及9,803,023以及美國專利申請公開案20060067930中，該等專利以全文引用之方式併入本文中。可使用熟習此項技術者已知的任何合適的方法、製程或技術。具有本發明之變異Fc區的抗體分子可根據此項技術中熟知的方法來產生。在一些實施例中，變異Fc區可融合至所選異源多肽，諸如抗體可變域或受體或配位體之結合域。

隨著分子生物學及重組技術之方法的出現，熟習此項技術者可藉由重組手段來產生抗體及抗體樣分子，且藉此產生編碼在抗體之多肽結構中發現之特異性胺基酸序列的基因序列。此類抗體可藉由選殖編碼該等抗體之多肽鏈的基因序列或藉由直接合成該等多肽鏈來產生，其中組裝合成鏈以形成對特異性抗原決定基及抗原決定子具有親和力之活性四聚體(H2L2)結構。此允許隨時產生具有來自不同物種及來源之中和抗體之序列特徵的抗體。

不管抗體來源，或其如何以重組方式構築，或其如何使用轉殖基因動物、實驗室或商業規模之大型細胞培養、使用轉殖基因植物進行試管內或活體內合成，或藉由在製程之任何階段均不採用活生物體進行直接化學合成，所有抗體均具有類似的整體3維結構。此結構通常以H2L2形式給出，且係指抗體通常包含兩條輕(L)胺基酸鏈及2條重(H)胺基酸鏈之事實。兩條鏈具有能夠與結構上互補的抗原目標相互作用之區。與目標相互作用之區稱為「可變」或「V」區，且由來自具有不同抗原特異性之抗體的胺基酸序列差異表徵。H或L鏈之可變區含有能夠與抗原目標特異性結合之胺基酸序列。

如本文中所使用，術語「抗原結合區」係指抗體分子的含有與抗原相互作用且賦予抗體對抗原之特異性及親和力的胺基酸殘基之部分。抗體結合區包括維持抗原結合殘基之適當構形所必需的「構架」胺基酸殘基。在提供抗原結合區之H或L鏈的可變區內為較小序列，歸因於其在具有不同特異性之抗體之間的極端變異性，該等較小序列被稱為「高變」。此類高變區亦稱為「互補決定區」或「CDR」區。此等CDR區引起抗體對特定抗原決定子結構之基本特異性。

CDR代表可變區內之非連續胺基酸延伸，但無論物種如何，已發現此等關鍵胺基酸序列在可變重鏈及輕鏈區內之定位位置在可變鏈之胺基酸序列內具有類似位置。所有抗體之可變重鏈及輕鏈各自具有三個CDR區，各區與其他區不相連。在所有哺乳動物物種中，抗體肽含有恆定(亦即高度保守)區及可變區，且在後者內存在CDR及所謂的「構架區」，該等構架區由在重鏈或輕鏈之可變區內但在CDR外之胺基酸序列構成。

本發明進一步提供一種載體，其包括上文所描述之核酸中之至少一者。因遺傳密碼為簡併的，故可使用超過一個密碼子來編碼特定胺基酸。使用遺傳密碼，可確定一個或多個不同的核苷酸序列，其中之每一者將能夠編碼胺基酸。特定寡核苷酸實際上將構成實際編碼序列之機率可藉由考慮異常鹼基配對關係及在表現抗體或部分之真核或原核細胞中實際上使用(編碼特定胺基酸的)特定密碼子的頻率來估算。Lathe, 等人，183 J. Molec. Biol. 1-12(1985)揭示了此類「密碼子使用規則」。使用Lathe之「密碼子使用規則」，可鑑別出含有理論上「最可能」的能夠編碼貓IgG序列之核苷酸序列之單核苷酸序列或核苷酸序列集合。亦預期用於本發明中之抗體編碼區亦可藉由使用產生本文中所描述之抗體及肽之變異體的標準分子生物技術改變現有抗體基因來提供。此類變異體包括但不限於抗體或肽之胺基酸序列的缺失、添加及取代。

舉例而言，一類取代為保守胺基酸取代。此類取代為貓抗體肽中之給定胺基酸經具有類似特徵之另一胺基酸取代的彼等取代。典型地視為保守性取代的係脂族胺基酸Ala、Val、Leu及lie當中之一者置換為另一者；羥基殘基Ser與Thr之互換；酸性殘基Asp與Glu之交換；醯胺殘基Asn與Gin之間的取代；鹼性殘基Lys及Arg之交換；芳族殘基Phe、Tyr及其類似者當中之置換。關於哪些胺基酸變化有可能在表型上沉默之指南發現於Bowie等人, 247 Science1306-10 (1990)中。

變異貓抗體或肽可為全功能的，或可在一個或多個活動中缺乏功能。全功能變異體典型地僅含有保守變異或非關鍵殘基或非關鍵區之變異。功能變異體亦可含有類似胺基酸之取代，此導致功能無變化或變化不顯著。可替代地，此類取代可在一定程度上正面或負面地影響功能。非功能變異體典型地含有一個或多個非保守胺基酸取代、缺失、插入、倒位或截短，或在關鍵殘基或關鍵區中之取代、插入、倒位或缺失。

功能必需的胺基酸可藉由此項技術中已知的方法來鑑別，該等方法諸如定點突變誘發或丙胺酸掃描突變誘發。Cunningham等人, 244 Science1081-85 (1989)。後一程序在分子中之每一殘基處引入單一丙胺酸突變。隨後測試所得突變分子之生物活性，諸如抗原決定基結合或試管內ADCC活性。配位體-受體結合之關鍵位點亦可藉由結構分析來確定，諸如晶體學、核磁共振或光親和性標記。Smith等人, 224 J. Mol. Biol.899-904 (1992)；de Vos等人, 255 Science306-12 (1992)。

此外，多肽通常含有除二十種「天然存在」之胺基酸之外的胺基酸。此外，包括末端胺基酸之許多胺基酸可藉由天然過程，諸如加工及其他轉譯後修飾，或藉由此項技術中熟知的化學修飾技術來修飾。已知修飾包括但不限於乙醯化、醯化、ADP核糖基化、醯胺化、黃素之共價連接、血紅素部分之共價連接、核苷酸或核苷酸衍生物之共價連接、脂質或脂質衍生物之共價連接、磷脂醯肌醇之共價連接、交聯、環化、二硫鍵形成、去甲基化、共價交聯之形成、胱胺酸之形成、焦麩胺酸之形成、甲醯化、γ羧化、糖基化、GPI錨形成、羥基化、碘化、甲基化、肉豆蔻醯化、氧化、蛋白質水解加工、磷酸化、異戊烯化、外消旋化、硒醯化、硫酸化、轉移RNA介導之胺基酸添加至蛋白質，諸如精胺醯化及泛素化。此類修飾為熟習此項技術者熟知的，且已非常詳細地描述於科學文獻中。若干尤其常見的修飾(糖基化、脂質連接、硫酸化、麩胺酸殘基之γ-羧化、羥基化及ADP核糖基化)例如描述於大部分基礎文本中，諸如Proteins-Structure and Molecular Properties (第2版，T. E. Creighton, W. H. Freeman & Co., N.Y., 1993)。可獲得關於此主題之許多詳細綜述，諸如Wold，Posttranslational Covalent Modification of proteins, 1-12 (Johnson編., Academic Press, N.Y., 1983)；Seifter等人. 182 Meth. Enzymol. 626-46 (1990)；及Rattan等人663 Ann. NY Acad. Sci. 48-62 (1992)。

在另一範疇中，本發明提供抗體衍生物。抗體之「衍生物」含有通常並非蛋白質之一部分的額外化學部分。蛋白質之共價修飾包括於本發明之範疇內。此類修飾可藉由使抗體之目標胺基酸殘基與能夠與所選側鏈或末端殘基反應之有機衍生劑反應而引入分子中。舉例而言，用此項技術中熟知的雙官能劑進行衍生化可適用於將抗體或片段交聯至水不溶性支援基質或其他大分子載體。

衍生物亦包括放射性標記之單株抗體，該等抗體經標記。舉例而言，放射性碘(251、1311)、碳(4C)、硫(35S)、銦、氚(H ³)或其類似者；單株抗體與生物素或抗生素蛋白、與酶(諸如辣根過氧化物酶、鹼性磷酸酶、β-D-半乳糖苷酶、葡糖氧化酶、澱粉酶、羧酸去氫酶、乙醯膽鹼酯酶、溶菌酶、蘋果酸去氫酶或葡糖6-磷酸酯去氫酶)之結合物；以及單株抗體與生物發光劑(諸如螢光素酶)、靜默變化劑(諸如吖啶酯)或螢光劑(諸如藻膽蛋白)之結合物。

本發明之另一衍生物雙官能性抗體為藉由組合兩種單獨抗體的識別兩種不同抗原基團之部分而產生的雙特異性抗體。此可藉由交聯或重組技術來達成。另外，可向抗體或其一部分添加部分以增加活體內半衰期(例如藉由延長自血流中清除之時間)。此類技術包括例如添加PEG部分(亦稱為聚乙二醇化)，且為此項技術中熟知的。參見美國專利申請公開案第20030031671號。

在一些實施例中，將編碼主題抗體之核酸直接引入宿主細胞中，且在足以誘導所編碼抗體之表現的條件下培育細胞。在主題核酸已引入細胞中之後，典型地通常在37℃下(有時在選擇下)將細胞培育約1至24小時之時段以便允許抗體表現。在一個實施例中，抗體分泌至細胞生長之培養基的上清液中。傳統上，單株抗體已在鼠融合瘤細胞株中作為天然分子產生。除彼技術以外，本發明亦提供抗體之重組DNA表現。此允許在所選宿主物種中產生抗體，以及一系列抗體衍生物及融合蛋白質。

編碼本發明之至少一種抗體、部分或多肽的核酸序列可根據習知技術與載體DNA重組，該等技術包括用於連接之平端式或交錯端式末端、提供適當末端之限制酶消化、視需要對黏合末端之填充、避免非所要接合之鹼性磷酸酶處理及利用適當連接酶之連接。用於此類操縱之技術例如由Maniatis等人, MOLECULAR CLONING, LAB. MANUAL, (Cold Spring Harbor Lab. Press, NY, 1982及1989)及Ausubel等人，1993同上所揭示，可用以構築編碼抗體分子或其抗原結合區之核酸序列。

若諸如DNA之核酸分子含有含轉錄及轉譯調節資訊之核苷酸序列，且此類序列「可操作地連接」至編碼多肽之核苷酸序列，則稱該核酸分子為「能夠表現」多肽。可操作鍵聯為其中試圖表現之調節DNA序列及DNA序列以准許基因表現為可回收量的肽或抗體部分之方式連接的鍵聯。基因表現所需之調節區的精確性質可因生物體不同而不同，如類似技術中所熟知。參見例如Sambrook等人, 2001同上；Ausubel等人, 1993同上。

因此，本發明涵蓋原核或真核細胞中之抗體或肽的表現。合適的宿主包括細菌或真核宿主，包括活體內或原位的細菌、酵母、昆蟲、真菌、鳥類及哺乳動物細胞，或哺乳動物、昆蟲、鳥類或酵母來源之宿主細胞。哺乳動物細胞或組織可屬於人類、靈長類、倉鼠、兔、嚙齒類動物、乳牛、豬、綿羊、馬、山羊、狗或貓來源。亦可使用此項技術中已知的任何其他合適的哺乳動物細胞。

在一個實施例中，本發明之核苷酸序列將併入至能夠在接受者宿主中自發複製的質體或病毒載體中。為此目的，可採用廣泛多種載體中之任一種。參見例如Ausubel等人, 1993同上。選擇特定質體或病毒載體之重要因素包括：可自不含有載體之彼等接受者細胞中識別且選擇出含有載體之接受者細胞的容易性；特定宿主中所需之載體的複本數目；及是否需要能夠在不同物種之宿主細胞之間「穿梭」載體。

此項技術中已知的實例原核載體包括質體，諸如能夠在大腸桿菌中複製之彼等質體(諸如pBR322、CoIE1、pSC101、184、pi.vX)。舉例而言，此類質體藉由Maniatis等人, 1989同上；Ausubel等人, 1993同上揭示。芽孢桿菌質體包括pC194、pC221、pT127等。此類質體藉由Gryczan在THE MOLEC. BIO. OF THE BACILLI 307-329 (Academic Press, NY, 1982)中揭示。合適的鏈黴菌屬質體包括p1J101 (Kendall等人, 169 J. Bacteriol. 4177-83 (1987))及鏈黴菌屬噬菌體，諸如phLC31 (Chater等人之SIXTH INT'L SYMPOSIUM ON ACTINOMYCETALES BIO. 45-54 (Akademiai Kaido, Budapest, Hungary 1986)中)。假單胞菌屬質體綜述於John等人, 8 Rev. Infect. Dis. 693-704 (1986)；lzaki, 33 Jpn. J. Bacteriol. 729-42 (1978)；及Ausubel等人, 1993同上中。

可替代地，適用於表現編碼抗體或肽之cDNA的基因表現元件包括但不限於(a)病毒轉錄啟動子及其強化子元件，諸如SV40早期啟動子(Okayama等人, 3 Mol. Cell. Biol. 280 (1983))、勞氏肉瘤病毒(Rous sarcoma virus) LTR (Gorman等人，79 Proc. Natl. Acad. Sci., USA 6777 (1982))及莫洛尼(Moloney)鼠白血病病毒LTR (Grosschedl等人, 41 Cell 885 (1985))；(b)剪接區及聚腺苷酸化位點，諸如衍生自SV40晚期區之彼等者(Okayarea等人, 1983)；及(c)諸如SV40中之聚腺苷酸化位點(Okayama等人, 1983)。

免疫球蛋白cDNA基因可如Weidle等人, 51 Gene 21 (1987)所描述，使用以下各者作為表現元件來表現：SV40早期啟動子及其強化子、小鼠免疫球蛋白H鏈啟動子強化子、SV40晚期區mRNA剪接、兔S-球蛋白插入序列、免疫球蛋白及兔S-球蛋白多腺苷酸化位點及SV40多腺苷酸化元件。對於由部件cDNA、部件基因體DNA構成之免疫球蛋白基因(Whittle等人, 1 Protein Engin. 499 (1987))，轉錄啟動子可為人類細胞巨大病毒，啟動子強化子可為細胞巨大病毒及小鼠/人類免疫球蛋白，且mRNA剪接及聚腺苷酸化區可為天然染色體免疫球蛋白序列。

在一個實施例中，對於在嚙齒動物細胞中表現cDNA基因，轉錄啟動子為病毒LTR序列，轉錄啟動子強化子為小鼠免疫球蛋白重鏈強化子及病毒LTR強化子中之任一者或兩者，剪接區含有大於31 bp之內含子，且多腺苷酸化及轉錄終止區衍生自對應於所合成之免疫球蛋白鏈的天然染色體序列。在其他實施例中，編碼其他蛋白質之cDNA序列與上文列舉之表現元件組合以達成蛋白質在哺乳動物細胞中之表現。

各融合基因可組裝於表現載體中或插入表現載體中。能夠表現免疫球蛋白鏈基因產物之接受者細胞隨後僅傳染有肽或H或L鏈編碼基因，或共轉染有H及L鏈基因。經轉染之接收者細胞在准許表現所併入基因之條件下進行培養，且自培養物回收所表現之免疫球蛋白鏈或完整抗體或片段。

在一個實施例中，編碼肽或H及L鏈或其部分之融合基因經組裝於單獨的表現載體中，該等表現載體隨後用以共轉染接受者細胞。可替代地，編碼H及L鏈之融合基因可組裝於相同表現載體上。對於表現載體之轉染及抗體之產生，接受者細胞株可為骨髓瘤細胞。骨髓瘤細胞可合成、組裝及分泌由經傳染之免疫球蛋白基因編碼的免疫球蛋白，且擁有免疫球蛋白之糖基化機制。骨髓瘤細胞可在培養物中或在小鼠腹腔中生長，其中所分泌之免疫球蛋白可自腹水液中獲得。其他合適的接受者細胞包括淋巴細胞，諸如貓或非貓來源之B淋巴球、貓或非貓來源之融合瘤細胞或種間異種融合瘤細胞。

攜載本發明之抗體構築體或多肽的表現載體可藉由多種合適的手段中之任一種引入適當宿主細胞中，該等手段包括生物化學手段，諸如轉化、轉染、共軛、原生質體融合、磷酸鈣-沈澱及施用諸如二乙胺基乙基(DEAE)葡聚糖之聚陽離子；及機械手段，諸如電穿孔、直接顯微注射及微彈轟擊。Johnston等人, 240 Science1538 (1988)。

對於免疫球蛋白H及L鏈之產生，酵母可提供優於細菌之顯著優勢。酵母進行包括糖基化之轉譯後肽修飾。目前存在許多重組DNA策略，其利用可用於在酵母中產生所要蛋白質之強啟動子序列及高複本數質體。酵母識別經選殖哺乳動物基因產物之前導序列，且分泌攜帶前導序列之肽(亦即前肽)。Hitzman等人, 第11次國際酵母會議(11th Int'l Conference on Yeast), Genetics & Molec. Biol. (Montpelier, France, 1982)。

針對肽、抗體、其片段及區的產生量、分泌量及穩定性，可常規地評估酵母基因表現系統。可利用一系列酵母基因表現系統中之任一者，該等系統併入有來自編碼糖酵解酶之活躍表現基因的啟動子及終止元件，當酵母在富含葡糖之培養基中生長時，該等糖酵解酶大量產生。已知糖酵解基因亦可提供極有效的轉錄控制信號。舉例而言，可利用磷酸甘油酸激酶(PGK)基因之啟動子及終止子信號。可採取許多途徑來評估在酵母中表現所選殖之免疫球蛋白cDNA的最佳表現質體。參見第II卷DNA Cloning, 45-66, (Glover編,) IRL Press, Oxford, UK 1985)。

細菌菌株亦可用作產生本發明所描述之抗體分子或肽的宿主。含有衍生自與宿主細胞相容之物種的複製子及控制序列之質體載體與此等細菌宿主結合使用。載體攜載複製位點以及能夠在經轉型細胞中提供表型選擇之特異性基因。可採用許多途徑來評估在細菌中產生由經選殖之免疫球蛋白cDNA編碼的抗體、片段及區或抗體鏈之表現質體(參見Glover, 1985同上；Ausubel, 1993同上；Sambrook, 2001同上；Colligan等人編. Current Protocols in Immunology, John Wiley & Sons, NY, N.Y. (1994-2001)；Colligan等人編. Current Protocols in Protein Science, John Wiley & Sons, NY, N.Y. (1997-2001))。

宿主哺乳動物細胞可試管內或活體內生長。哺乳動物細胞提供針對免疫球蛋白蛋白質分子之轉譯後修飾，包括前導肽移除、H及L鏈之摺疊及組裝、抗體分子之糖基化及功能性抗體蛋白質之分泌。除上文所描述之淋巴來源的細胞以外，可適用作產生抗體蛋白質之宿主的哺乳動物細胞包括纖維母細胞來源之細胞，諸如Vero (ATCC CRL 81)或CHO-K1 (ATCC CRL 61)細胞。許多載體系統可用於在哺乳動物細胞中表現所選殖肽H及L鏈基因(參見Glover，1985同上)。可遵循不同途徑以獲得完整H2L2抗體。有可能在相同細胞中共表現H及L鏈以達成H及L鏈之胞內締合及鍵聯為完全四聚體H2L2抗體及/或肽。共表現可藉由在相同宿主中使用相同或不同質體來進行。H及L鏈兩者及/或肽之基因可置放於相同質體中，隨後將該質體轉染至細胞中，藉此直接選擇表現兩條鏈之細胞。可替代地，可首先用編碼一條鏈(例如L鏈)之質體轉染細胞，隨後用含有第二可選標記之H鏈質體轉染所得細胞株。經由任一途徑產生肽及/或H2L2分子之細胞株可用編碼額外肽複本、H、L或H加L鏈以及額外可選標記之質體轉染以產生具有增強特性的細胞株，該等特性諸如經組裝H2L2抗體分子之較高產量或經轉染細胞株之穩定性增強。

對於長期、高產率產生重組抗體，可使用穩定表現。舉例而言，可對穩定表現抗體分子之細胞株進行工程改造。可用免疫球蛋白表現卡匣及可選標記來轉型宿主細胞，而非使用含有病毒複製起點之表現載體。在引入外來DNA之後，可使經工程改造之細胞在富集培養基中生長1至2天，且隨後切換為選擇性培養基。重組質體中之可選標記賦予選擇抗性，且允許細胞將質體穩定整合至染色體中且生長以形成變異區(foci)，該變異區繼而可選殖及擴增至細胞株中。此類經工程改造之細胞株在篩選及評估直接或間接與抗體分子相互作用的化合物/組分時可為尤其適用的。

一旦已產生本發明之抗體，則其可藉由此項技術中已知用於純化免疫球蛋白分子之任何方法來純化，例如藉由層析法(例如離子交換，親和力，尤其對蛋白質A之後的特異性抗原之親和力，及篩分管柱層析法)、離心、差異溶解性或藉由用於純化蛋白質之任何其他標準技術。在許多實施例中，抗體自細胞分泌至培養基中，且自培養基中採集。 醫藥學及獸醫學應用

本發明亦提供一種醫藥組合物，其包含本發明之分子及一種或多種醫藥學上可接受之載劑。更具體而言，本發明提供一種醫藥組合物，其包含醫藥學上可接受之載劑或稀釋劑及作為活性成分的根據本發明之抗體或肽。

「醫藥學上可接受之載劑」包括對於以所採用劑量及濃度暴露於其中之細胞或動物為無毒的任何賦形劑。醫藥組合物可包括一種或額外治療劑。

「醫藥學上可接受」係指在合理醫學判斷之範疇內，適用於與動物之組織接觸而無過度毒性、刺激、過敏反應或其他與合理的效益/風險比相稱之問題併發症的彼等化合物、物質、組合物及/或劑型。

醫藥學上可接受之載劑包括溶劑、分散介質、緩衝劑、包衣、抗菌劑及抗真菌劑、潤濕劑、防腐劑、buggers、螯合劑、抗氧化劑、等張劑及吸收延遲劑。

醫藥學上可接受之載劑包括水；生理鹽水；磷酸鹽緩衝鹽水；右旋糖；甘油；醇，諸如乙醇及異丙醇；磷酸、檸檬酸及其他有機酸；抗壞血酸；低分子量(少於約10個殘基)多肽；蛋白質，諸如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水性聚合物，諸如聚乙烯吡咯啶酮；胺基酸，諸如甘胺酸、麩醯胺酸、天冬胺酸、精胺酸或離胺酸；單醣、雙醣及包括葡糖、甘露糖或糊精之其他碳水化合物；EDTA；諸如鈉之成鹽相對離子；及/或非離子表面活性劑，諸如TWEEN、聚乙二醇(PEG)及PLURONICS；等張劑，諸如糖、多元醇(諸如甘露醇及山梨醇)及氯化鈉；以及其組合。

本發明之醫藥組合物可以多種方式進行調配，該等方式包括例如液體、半固體或固體劑型，諸如液體溶液(例如可注射及可輸注溶液)、分散液或懸浮液、脂質體、栓劑、錠劑、丸劑或粉劑。在一些實施例中，組合物呈可注射或可輸注溶液之形式。組合物可呈適用於靜脈內、動脈內、肌內、皮下、非經腸、經黏膜、經口、局部或經皮投藥之形式。組合物可調配為立即、受控、延長或延遲釋放組合物。

本發明之組合物可以單獨的治療劑形式或與其他治療劑組合形式進行投予。該等組合物可單獨投予，但一般與基於所選投藥途徑及標準醫藥實踐選擇之醫藥載劑一起投予。本文中所揭示之抗體的投予可藉由任何合適的手段來進行，該等手段包括非經腸注射(諸如腹膜內、皮下或肌內注射)、經口或藉由向氣道表面局部投予抗體(典型地攜載於醫藥調配物中)。向氣道表面之局部投予可藉由鼻內投藥(例如藉由使用滴管、拭子或吸入器)來進行。向氣道表面局部投予抗體亦可藉由吸入投藥來進行，諸如藉由將含有抗體之醫藥調配物的可吸入粒子(包括固體及液體粒子兩者)形成為氣溶膠懸浮液，且隨後使個體吸入可吸入粒子。用於投予醫藥調配物之可吸入粒子的方法及設備為熟知的，且可採用任何習知技術。

在一些所要實施例中，抗體藉由非經腸注射進行投予。對於非經腸投藥，抗體或分子可結合醫藥學上可接受之非經腸媒劑而調配為溶液、懸浮液、乳液或凍乾粉劑。舉例而言，媒劑可為抗體之溶液或其溶解於可接受之載劑(諸如水性載劑)中的混合液，此類媒劑為水、生理鹽水、林格氏溶液(Ringer's solution)、右旋糖溶液、海藻糖或蔗糖溶液或5%血清白蛋白、0.4%生理鹽水、0.3%甘胺酸及其類似者。亦可使用脂質體及非水性媒劑，諸如不揮發性油。此等溶液為無菌的，且一般不含粒子物質。此等組合物可藉由習知、熟知的滅菌技術來滅菌。組合物可含有接近生理條件所需的醫藥學上可接受之輔助物質，諸如pH調節劑及緩衝劑、毒性調節劑及其類似者，例如乙酸鈉、氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣、乳酸鈉等。此等調配物中之抗體的濃度可廣泛變化，例如自小於約0.5重量%，通常為或至少約為1重量%至高達15重量%或20重量%，且將根據所選特定投藥模式主要基於液體體積、黏度等來選擇。媒劑或凍乾粉劑可含有維持等張性之添加劑(例如氯化鈉、甘露醇)及維持化學穩定性之添加劑(例如緩衝劑及防腐劑)。調配物藉由常用技術來滅菌。用於製備非經腸可投予組合物之實際方法將為熟習此項技術者已知或顯而易見的，且更詳細地描述於例如REMINGTON'S PHARMA. SCI. (第15版, Mack Pub. Co., Easton, Pa., 1980)中。

本發明之抗體或分子可凍乾以便儲存，且在使用之前在合適的載劑中進行復原。此技術已展現對習知免疫球蛋白有效。可採用任何合適的凍乾及復原技術。熟習此項技術者將瞭解，凍乾及復原可引起不同程度的抗體活性損失，且可能必須調整使用量以進行補償。可投予含有本發明抗體或其混合液之組合物以用於預防現有疾病之復發及/或治療性治療現有疾病。合適的醫藥載劑描述於最新版本之REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES (此技術領域中之標準參考文本)中。在治療性應用中，以足以治癒或至少部分遏制或減輕疾病及其併發症之量向已患有疾病之個體投予組合物。

用於治療如本文中所描述之病狀或疾病的本發明之組合物的有效劑量視許多不同因素而變化，該等因素包括例如但不限於特定藥劑之藥效學特徵及其投藥模式及途徑；目標位點；動物之生理狀態；所投予之其他藥物；治療為防治性抑或治療性的；接受者之年齡、健康狀況及體重；症狀之性質及程度、並行治療之種類、治療頻率及所要效果。

可進行組合物之單次或多次投予，其中劑量及模式由治療獸醫選擇。在任何情況下，醫藥調配物應提供足以有效治療個體之量的本發明之抗體。

治療劑量可使用熟習此項技術者已知的常規方法來滴定以最佳化安全性及功效。

本發明之醫藥組合物可包括「治療有效量」。「治療有效量」係指在所需劑量及時間段下有效達成所要治療結果之量。分子之治療有效量可根據諸如個體之疾病病況、年齡、性別及體重以及分子在個體中引起所要反應之能力的因素而變化。治療有效量亦為治療有益效果超過分子之任何毒性或不利影響的量。

在另一範疇中，本發明之組合物可用於例如治療貓中之各種疾病及病症。如本文中所使用，術語「治療(treat/treatment)」係指治療性治療，包括防治性或預防性措施，其中目標為預防或減緩(減輕)與疾病或病狀相關之非所要生理變化。不論可偵測或不可偵測，有益或所要臨床結果均包括但不限於症狀緩解、疾病或病狀之程度減弱、疾病或病狀穩定(亦即其中疾病或病狀不惡化)、疾病或病狀之進程延遲或減緩、疾病或病狀改善或緩和及疾病或病狀緩解(不論部分或整體)。需要治療之彼等者包括已患有該疾病或病狀以及易患有該疾病或病狀之彼等者或應預防該疾病或病狀的彼等者。

本說明書中所引用之所有專利及文獻參考特此以全文引用的方式併入。

提供以下實例以補充先前揭示內容且提供對本文中所描述之主題的較佳理解。此等實例不應被視為限制所描述之主題。應理解，本文中所描述之實例及實施例僅用於說明之目的，且鑒於其之各種修改或改變對於熟習此項技術者將為顯而易見的，且意欲包括於本發明之真實範疇內，且可在不脫離本發明之真實範疇的情況下進行。 實例 實例 1 構築貓 IgG Fc 突變體

如Strietzel等人(Strietzel等人, 2014, Vet Immunol Immunopathol., 第158(3-4)卷, 第214至223頁)所描述來進行所有貓IgG之構築( 圖 1)，其中利用含有編碼IgG亞類1對偶基因a (IgG1a)之貓恆定區之序列的質體，且本文中所探究之各mAb的VH/VL序列經插入於上游，且與編碼恆定域之核苷酸同框。突變藉由恆定區直接DNA合成為基因片段而併入各質體之CH1、CH2或CH3域( 圖 2)之各各別位置中，且隨後經次選殖至各別所關注可變區中。 表現及純化

單株抗體(mAb)突變體在獲自Thermo Fisher之哺乳動物懸浮細胞系統EXPICHO-S (Chinese Hamster Ovary)細胞中表現。懸浮EXPICHO-S細胞在EXPICHO表現培養基(Gibco)中維持於0.14與8.0×10e6個細胞/毫升之間。細胞在第-1天及轉染日遵循ExpiCHO方案使用者手冊進行稀釋。使用來源於ExpiFectamine CHO轉染套組(Gibco)之試劑，遵循最大滴度條件，如方案中所描述來轉染經稀釋之細胞。在12至14天培育之後，採集培養物且進行澄清。在已藉由PBS預平衡之MabSelect Sure LX (GE Healthcare)上經由蛋白質A層析自經澄清之上清液純化抗體。在樣本裝載之後，將樹脂用PBS洗滌，且隨後用20 mM pH 5.5乙酸鈉洗滌。用20 mM pH 3.5乙酸自管柱溶離樣本。在溶離之後，進行彙集，且藉由添加1 M乙酸鈉而中和至4%。視可用體積及預期用途而定，有時將樣本更換為最終緩衝劑(例如PBS、其他)。藉由在280 nm下之吸光度來量測濃度。 SDS-PAGE

使用4至12%含Bis-Tris NuPAGE凝膠之MES-SDS操作緩衝劑及SeeBlue Plus 2標準物(均來自Invitrogen)執行非還原性(nr)及還原性十二烷基硫酸鈉聚丙烯醯胺電泳(SDS-PAGE)。對於非還原性樣本，添加1mM之烷化劑N-乙基順丁烯二醯亞胺(NEM)，對於還原性樣本，添加還原劑二硫蘇糖醇 (DTT)。用庫馬斯藍對凝膠進行染色以偵測蛋白質帶。 分析型 SEC

使用來自TOSOH BioScience之TSK凝膠SuperSW3000、4.6mm、10×30 cm、4μm管柱在200mM NaPhosphate pH 7.2操作緩衝劑中以0.25毫升/分鐘進行分析型SEC。 NR-CGE

使用Beckman Coulter PA800 plus分析器使用A55625毛細管筒按照製造商說明書來執行非還原性毛細管凝膠電泳(nrCGE)。 SMAC

使用Sepax Zenix SEC-300、4.6×300mm管柱在200mM磷酸鈉pH 7.2操作緩衝劑中以0.35ml/min進行自立單層吸收層析(SMAC)。 HIC

使用Sepax Proteomix HIC Butyl-NP5、4.6× 100mm管柱進行疏水性相互作用層析(HIC)。以0.75ml/min應用自含100% 1.8M硫酸銨之0.1M磷酸鈉pH 6.5至100% 0.1M磷酸鈉pH 6.5之線性梯度持續20min。 Octet-BLI

使用Forte Bio's Octet QKe藉由胺反應性第二代生物感測器進行此檢定。將樣本更換為無鈣及鎂之1× Gibco PBS，且稀釋至0.5mg/mL之濃度。在建立生物感測器基線之後，將生物感測器浸沒至100uL之樣本中持續600秒。

經由Octet QKe定量(Pall ForteBio Corp, Menlo Park, CA, USA)篩檢結合至蛋白質A感測器之抗體。如Strietzel等人針對蛋白質品質所描述來純化及定量結合至蛋白質A之構築體。 實例 2 FcRn 結合檢定

分離、製備貓FcRn，且針對貓FcRn根據Strietzelg等人來檢定突變Fc IgG。使用標準RACE PCR來擴增貓FcRn-α次單元及β-微球蛋白。FcRn-α次單元及β-微球蛋白經共轉染至HEK 293細胞中，且FcRn複合體藉由經由c端His標籤進行IMAC親和純化來純化。FcRn複合體經由BirA酶促生物素醯化反應來進行生物素標記。藉由Biacore 3000或Biacore T200 (GE Healthcare, Pittsburgh, PA, USA)使用SA感測器晶片來量測KD。

使用經修改之SA捕獲方法將FcRn捕獲於感測器表面上。10mM MES；150mM NaCl；0.005% Tween20；0.5 mg/mL BSA；pH6用作捕獲方法操作操作緩衝劑及滴定。1×HB-P、0.5 mg/mL BSA；pH7.4亦用於方法操作緩衝劑及滴定。使Fc突變IgG在受體表面上流動，且使用Scrubber2軟體分析(BioLogic Software Pty, Ltd., Campbell, Australia)或T200評估軟體測定親和力( 表 1 及表 4)。自所有操作中減除僅含有緩衝劑之空白操作。使用50 mM Tris pH8更新流量槽。在15℃下執行操作。

在各別位置處形成之突變對於IgG在pH6下對FcRn之親和力具有明顯影響。IgG之FcRn親和力的增加並不依賴於VHVL域，且針對任何貓IgG1a為通用的。

藉由表面電漿子共振(Biacore)來量測野生型(WT)及突變IgG與貓FcRn之結合。亦執行生物物理學表徵。

根據如在Kabat中之EU索引對突變體進行編號。NBO=未觀測到結合。ND=未測定/無資料。

對於特異性突變編號，係指表1中之對應ID編號。SEC=尺寸排阻層析法；CGE=毛細管凝膠電泳；RT=滯留時間；SMAC=自立單層吸收層析術。

關於生物物理學表徵之資料顯示，複數個突變呈現尤其關於多反應性之改良的生物物理學特性。

結果明確顯示，在各種位置處形成之突變對於IgG對FcRn之親和力具有明顯影響。 實例 3 貓中之 Fc 突變 IgG PK 研究

進行藥物動力學(PK)研究以展示各種貓IgG點突變(1) S428L；(2) S252H、S428M；(3) S252Y、S428M；(4) S428M、Q311W；及(5) S428Y、Q311W之半衰期延長的效果。

將表4中所列出之五個Fc經修飾貓單株抗體以及野生型貓單株抗體用於實驗中。以單次1 mg/kg皮下投予向3隻貓給予各分子。在給藥前、第7天、第14天、第28天、第42天及第56天自動物收集血清樣本。使用配位體結合法評定各單株抗體之暴露。

使用非隔室途徑(用於AUC計算之線性梯形法則)藉助於Watson™在貓中評估五個Fc經修飾貓單株抗體之藥物動力學特徵。藉由Excel™執行額外計算，包括校正在第2次及第3次注射藥物之後的濃度-時間特徵曲線之重疊的AUC。使用Excel™或Watson™來計算簡單統計(平均值、標準差、變異係數)下濃度-時間資料及藥物動力學資料之概述。不進行其他統計分析。

結果概述於以下表4中。

野生型mAb ZTS5864之半衰期(T _1/2)為12.4 ± 2.2天。然而，Fc經修飾貓單株抗體ZTS515、ZTS520、ZTS524、ZTS530及ZTS534之半衰期(T _1/2)分別為28.7 ± 4.0、29.4 ± 6.7、41.6 ± 2.5、30.4 ± 6.3及27.2 ± 12.2。

結果明確顯示，貓IgG點突變(1) S428L；(2) S252H、S428M；(3) S252Y、S428M；(4) S428M、Q311W；及(5) S428Y、Q311W高效增加家貓中之半衰期。

已描述本發明之較佳實施例，應理解，本發明不限於確切實施例，且各種變化及修改可由熟習此項技術者在不脫離如所附申請專利範圍中所定義的本發明之範疇或精神的情況下在本文中實現。

專利或申請案檔案含有至少一個彩製圖式。在請求且支付必要費用後，專利局將提供具有彩圖之此專利或專利申請公開案的複本。

[圖1]說明IgG之域結構。

[圖2]展示野生型(WT)人類IgG1、WT貓1gG1a、WT貓IgG1b、WT貓IgG2及具有鉸鏈突變之突變貓IgG2的胺基酸序列之比對。胺基酸殘基係根據如在Kabat中之Eu索引進行編號。CH1、鉸鏈、CH2及CH3胺基酸殘基分別呈紅色、紫色、藍色及綠色。

[圖3]展示貓Fc IgG1a WT核苷酸序列。

[圖4]展示貓IgG點突變增加家貓中之半衰期。 序列表之簡要說明

SEQ ID NO.: 1為貓IgG1a野生型恆定區之胺基酸序列。

SEQ ID NO.: 2為貓Fc IgG1a野生型恆定區之核酸序列。

SEQ ID NO.: 3為貓IgG1b野生型恆定區之胺基酸序列。

SEQ ID NO.: 4為貓IgG2野生型恆定區之胺基酸序列。

SEQ ID NO.: 5為貓IgG2_鉸鏈突變恆定區之胺基酸序列。

SEQ ID NO.: 6為人類IgG1恆定區之胺基酸序列。

SEQ ID NO.: 7為貓IgG1b野生型恆定區之核酸序列。

SEQ ID NO.: 8為貓IgG2野生型恆定區之核酸序列。

SEQ ID NO.: 9為抗IL31抗體(ZTS-5864)重鏈可變區之核酸序列。

SEQ ID NO.: 10為抗IL31抗體(ZTS-5864)重鏈可變區之胺基酸序列。

SEQ ID NO.: 11為抗IL31抗體(ZTS-5864)重鏈可變區CDR1之胺基酸序列。

SEQ ID NO.: 12為抗IL31抗體(ZTS-5864)重鏈可變區CDR2之胺基酸序列。

SEQ ID NO.: 13為抗IL31抗體(ZTS-5864)重鏈可變區CDR3之胺基酸序列。

SEQ ID NO.: 14為抗IL31抗體(ZTS-5864)輕鏈可變區之核酸序列。

SEQ ID NO.: 15為抗IL31抗體(ZTS-5864)輕鏈可變區之胺基酸序列。

SEQ ID NO.: 16為抗IL31抗體(ZTS-5864)輕鏈可變區CDR1之胺基酸序列。

SEQ ID NO.: 17為抗IL31抗體(ZTS-5864)輕鏈可變區CDR2之胺基酸序列。

SEQ ID NO.: 18為抗IL31抗體(ZTS-5864)輕鏈可變區CDR3之胺基酸序列。


          <![CDATA[<110>  美商碩騰服務公司(Zoetis Services LLC)]]>
          <![CDATA[<120>  貓抗體恆定區中之突變]]>
          <![CDATA[<130>  ZP000370A]]>
          <![CDATA[<140>  TW 110147781]]>
          <![CDATA[<141>  2021-12-20]]>
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          <![CDATA[<151>  2020-12-18]]>
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          <![CDATA[<223>  貓IgG1a野生型恆定區]]>
          <![CDATA[<400>  1]]>
          Ala Ser Thr Thr Ala Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Cys Gly 
          1               5                   10                  15      
          Thr Thr Ser Gly Ala Thr Val Ala Leu Ala Cys Leu Val Leu Gly Tyr 
                      20                  25                  30          
          Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 
                  35                  40                  45              
          Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ala Ser Gly Leu Tyr Ser 
              50                  55                  60                  
          Leu Ser Ser Met Val Thr Val Pro Ser Ser Arg Trp Leu Ser Asp Thr 
          65                  70                  75                  80  
          Phe Thr Cys Asn Val Ala His Pro Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 
                          85                  90                  95      
          Thr Val Arg Lys Thr Asp His Pro Pro Gly Pro Lys Pro Cys Asp Cys 
                      100                 105                 110         
          Pro Lys Cys Pro Pro Pro Glu Met Leu Gly Gly Pro Ser Ile Phe Ile 
                  115                 120                 125             
          Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Ser Ile Ser Arg Thr Pro Glu 
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          Val Thr Cys Leu Val Val Asp Leu Gly Pro Asp Asp Ser Asp Val Gln 
          145                 150                 155                 160 
          Ile Thr Trp Phe Val Asp Asn Thr Gln Val Tyr Thr Ala Lys Thr Ser 
                          165                 170                 175     
          Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu 
                      180                 185                 190         
          Pro Ile Leu His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys 
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              210                 215                 220                 
          Ala Lys Gly Gln Pro His Glu Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Ala 
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          Pro Glu Pro Glu Asn Asn Tyr Arg Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp Ser 
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          His Ser His His Thr Gln Lys Ser Leu Thr Gln Ser Pro Gly Lys 
                          325                 330                 335 
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          <![CDATA[<223>  貓Fc IgG1a野生型恆定區]]>
          <![CDATA[<400>  2]]>
          ccccctgaga tgcttggagg accgtccatc ttcatcttcc ccccaaaacc caaggacacc       60
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          <![CDATA[<400>  3]]>
          Ala Ser Thr Thr Ala Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Cys Gly 
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                          85                  90                  95      
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          Pro Glu Pro Glu Asn Asn Tyr Arg Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp Ser 
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          Asp Gly Thr Tyr Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Ser Val Asp Arg Ser Arg 
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                          325                 330                 335 
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          <![CDATA[<211>  335]]>
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          <![CDATA[<213>  家貓]]>
          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<223>  貓IgG2野生型恆定區]]>
          <![CDATA[<400>  4]]>
          Ala Ser Thr Thr Ala Ser Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Cys Gly 
          1               5                   10                  15      
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                      20                  25                  30          
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                  195                 200                 205             
          Val Asn Ser Lys Ser Leu Pro Ser Ala Met Glu Arg Thr Ile Ser Lys 
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                          245                 250                 255     
          Gly Phe His Pro Pro Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ile Thr Gly Gln 
                      260                 265                 270         
          Pro Glu Pro Glu Asn Asn Tyr Gln Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp Ser 
                  275                 280                 285             
          Asp Gly Thr Tyr Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Ser Val Asp Arg Ser His 
              290                 295                 300                 
          Trp Gln Arg Gly Asn Thr Tyr Thr Cys Ser Val Ser His Glu Ala Leu 
          305                 310                 315                 320 
          His Ser His His Thr Gln Lys Ser Leu Thr Gln Ser Pro Gly Lys 
                          325                 330                 335 
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          <![CDATA[<223>  貓IgG2_鉸鏈突變恆定區]]>
          <![CDATA[<400>  5]]>
          Ala Ser Thr Thr Ala Ser Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Cys Gly 
          1               5                   10                  15      
          Thr Thr Ser Gly Ala Thr Val Ala Leu Ala Cys Leu Val Leu Gly Tyr 
                      20                  25                  30          
          Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 
                  35                  40                  45              
          Gly Val His Thr Phe Pro Ser Val Leu Gln Ala Ser Gly Leu Tyr Ser 
              50                  55                  60                  
          Leu Ser Ser Met Val Thr Val Pro Ser Ser Arg Trp Leu Ser Asp Thr 
          65                  70                  75                  80  
          Phe Thr Cys Asn Val Ala His Arg Pro Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys 
                          85                  90                  95      
          Thr Val Pro Lys Thr Ala Ser Thr Ile Glu Ser Lys Thr Gly Cys Gly 
                      100                 105                 110         
          Cys Lys Cys Pro Val Pro Glu Ile Pro Gly Ala Pro Ser Val Phe Ile 
                  115                 120                 125             
          Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Ser Ile Ser Arg Thr Pro Glu 
              130                 135                 140                 
          Val Thr Cys Leu Val Val Asp Leu Gly Pro Asp Asp Ser Asn Val Gln 
          145                 150                 155                 160 
          Ile Thr Trp Phe Val Asp Asn Thr Glu Met His Thr Ala Lys Thr Arg 
                          165                 170                 175     
          Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu 
                      180                 185                 190         
          Pro Ile Leu His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys 
                  195                 200                 205             
          Val Asn Ser Lys Ser Leu Pro Ser Ala Met Glu Arg Thr Ile Ser Lys 
              210                 215                 220                 
          Ala Lys Gly Gln Pro His Glu Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Thr 
          225                 230                 235                 240 
          Gln Glu Glu Leu Ser Glu Asn Lys Val Ser Val Thr Cys Leu Ile Lys 
                          245                 250                 255     
          Gly Phe His Pro Pro Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ile Thr Gly Gln 
                      260                 265                 270         
          Pro Glu Pro Glu Asn Asn Tyr Gln Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp Ser 
                  275                 280                 285             
          Asp Gly Thr Tyr Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Ser Val Asp Arg Ser His 
              290                 295                 300                 
          Trp Gln Arg Gly Asn Thr Tyr Thr Cys Ser Val Ser His Glu Ala Leu 
          305                 310                 315                 320 
          His Ser His His Thr Gln Lys Ser Leu Thr Gln Ser Pro Gly Lys 
                          325                 330                 335 
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          <![CDATA[<221>  MISC_FEATURE]]>
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          <![CDATA[<400>  6]]>
          Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 
          1               5                   10                  15      
          Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 
                  35                  40                  45              
          Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 
              50                  55                  60                  
          Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 
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          Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 
                          85                  90                  95      
          Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 
                      100                 105                 110         
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                  115                 120                 125             
          Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 
              130                 135                 140                 
          Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 
          145                 150                 155                 160 
          Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 
                          165                 170                 175     
          Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 
                      180                 185                 190         
          His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 
                  195                 200                 205             
          Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 
              210                 215                 220                 
          Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu 
          225                 230                 235                 240 
          Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 
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          Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 
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          Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 
                  275                 280                 285             
          Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 
              290                 295                 300                 
          Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 
          305                 310                 315                 320 
          Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 
                          325                 330 
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          gcctccacca cggccccatc ggtgttccca ctggccccca gctgcgggac cacatctggc       60
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          tggaactccg gcgccctgac cagcggtgtg cacaccttcc cggccgtcct gcaggcctcg      180
          gggctgtact ctctcagcag catggtgaca gtgccctcca gcaggtggct cagtgacacc      240
          ttcacctgca acgtggccca cccgcccagc aacaccaagg tggacaagac cgtgcgcaaa      300
          acagaccacc caccgggacc caaaccctgc gactgtccca aatgcccacc ccctgagatg      360
          cttggaggac cgtccatctt catctttccc ccaaaaccca aggacaccct ctcgatttcc      420
          cggacgcccg aggtcacatg cttggtggtg gacttgggcc cagatgactc cgatgtccag      480
          atcacatggt ttgtggataa cacccaggtg tacacagcca agacgagtcc gcgtgaggag      540
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          aaggggaagg agttcaagtg caaggtcaac agcaaatccc tcccctcccc catcgagagg      660
          accatctcca aggacaaagg acagccccac gagccccagg tgtacgtcct gcctccagcc      720
          caggaggagc tcagcaggaa caaagtcagt gtgacctgcc tgatcgaagg cttctacccg      780
          tctgacattg ccgtcgagtg ggagatcacc ggacagccgg agccagagaa caactaccgg      840
          acgaccccgc cccagctgga cagcgacggg acctacttcc tgtacagcag gctctcggtg      900
          gacaggtccc gctggcagag gggaaacacc tacacctgct cggtgtcaca cgaagctctg      960
          cacagccacc acacacagaa atccctcacc cagtctccgg gtaaa                     1005
          <![CDATA[<210>  8]]>
          <![CDATA[<211>  1005]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  家貓]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<223>  貓IgG2野生型恆定區]]>
          <![CDATA[<400>  8]]>
          gcctccacca cggcctcatc ggtgttccca ctggccccca gctgcgggac cacatctggc       60
          gccaccgtgg ccctggcctg cctggtgtta ggctacttcc ctgagccggt gaccgtgtcc      120
          tggaactccg gcgccctgac cagcggtgtg cacaccttcc catccgtcct gcaggcctcg      180
          gggctgtact ctctcagcag catggtgaca gtgccctcca gcaggtggct cagtgacacc      240
          ttcacctgca acgtggccca ccggcccagc agcaccaaag tggacaagac cgtacccaaa      300
          acagcgtcta caatagagtc caaaaccggg gaaggtccca aatgcccagt tcctgagatt      360
          cctggagcac cgtccgtctt catcttcccc ccaaaaccca aggacaccct ctcgatttcc      420
          cggacgcccg aggtcacgtg cttggtggtg gacttgggcc cagatgactc caatgtccag      480
          atcacatggt ttgtggataa caccgagatg cacacagcca agacgaggcc gcgtgaggag      540
          cagttcaaca gcacctaccg tgtggtcagt gtcctcccca tcctacacca ggactggctc      600
          aaggggaagg agttcaagtg caaggtcaac agcaaatccc tcccctctgc catggagagg      660
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          <![CDATA[<400>  10]]>
          Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Thr Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Gln Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ala Gly Ile Asp Ser Val Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ala Asp Ser Val 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Ser Gly Phe Pro Gly Ser Phe Glu His Trp Gly Gln Gly Thr Leu 
                      100                 105                 110         
          Val Thr Val Ser Ser 
                  115         
          <![CDATA[<210>  11]]>
          <![CDATA[<211>  5]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  家犬]]>
          <![CDATA[<400>  11]]>
          Asp Tyr Ala Met Ser 
          1               5   
          <![CDATA[<210>  12]]>
          <![CDATA[<211>  17]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  家犬]]>
          <![CDATA[<400>  12]]>
          Gly Ile Asp Ser Val Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ala Asp Ser Val Lys 
          1               5                   10                  15      
          Gly 
          <![CDATA[<210>  13]]>
          <![CDATA[<211>  8]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  家犬]]>
          <![CDATA[<400>  13]]>
          Gly Phe Pro Gly Ser Phe Glu His 
          1               5               
          <![CDATA[<210>  14]]>
          <![CDATA[<211>  312]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  ZTS-5864輕鏈可變區]]>
          <![CDATA[<400>  14]]>
          cagtctgtgc tgactcagcc atcctcagtg tctgggaccc taggccagag gatcaccatc       60
          tcctgcaccg gaagcagctc caacatcggg agtggttatg tgggctggta tcaacaagtc      120
          ccaggaatgg gccccaaaac cgtcatctat tataatagcg accgaccctc tggagtccca      180
          gataggttct ccggctccaa gtctggcagc tcaggcaccc tgaccatcac tggattgcag      240
          gctgaagacg aggctgacta ttactgttca gtatatgaca gaactttcaa tgctgtgttc      300
          ggcggaggga cc                                                          312
          <![CDATA[<210>  15]]>
          <![CDATA[<211>  104]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  ZTS-5864輕鏈可變區]]>
          <![CDATA[<400>  15]]>
          Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Ser Ser Val Ser Gly Thr Leu Gly Gln 
          1               5                   10                  15      
          Arg Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Gly 
                      20                  25                  30          
          Tyr Val Gly Trp Tyr Gln Gln Val Pro Gly Met Gly Pro Lys Thr Val 
                  35                  40                  45              
          Ile Tyr Tyr Asn Ser Asp Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 
              50                  55                  60                  
          Gly Ser Lys Ser Gly Ser Ser Gly Thr Leu Thr Ile Thr Gly Leu Gln 
          65                  70                  75                  80  
          Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Val Tyr Asp Arg Thr Phe 
                          85                  90                  95      
          Asn Ala Val Phe Gly Gly Gly Thr 
                      100                 
          <![CDATA[<210>  16]]>
          <![CDATA[<211>  13]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  家犬]]>
          <![CDATA[<400>  16]]>
          Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Gly Tyr Val Gly 
          1               5                   10              
          <![CDATA[<210>  17]]>
          <![CDATA[<211>  7]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  家犬]]>
          <![CDATA[<400>  17]]>
          Tyr Tyr Asn Ser Asp Arg Pro 
          1               5           
          <![CDATA[<210>  18]]>
          <![CDATA[<211>  10]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  家犬]]>
          <![CDATA[<400>  18]]>
          Ser Val Tyr Asp Arg Thr Phe Asn Ala Val 
          1               5                   10  
          

Claims (71)

1. 一種經修飾IgG，其包含：貓IgG恆定域，其包含相對於野生型貓IgG恆定域之至少一個胺基酸取代，其中該取代在根據如在Kabat中之Eu索引編號的胺基酸殘基247、249、250、252、254、256、285、309、311、312、314、378、399、401、402、403、404、428、430、431、432、434、436或437處。
2. 如請求項1之經修飾IgG，其中該恆定域包含以下取代中之一者或多者：P247I、P247L、P247V、D249A、D249E、D249S、T250E、T250I、T250Q、T250S、T250V、S252A、S252C、S252D、S252E、S252F、S252G、S252H、S252I、S252K、S252L、S252N、S252P、S252Q、S252R、S252T、S252V、S252Y、S252M、S252W、S254A、S254D、S254E、S254F、S254G、S254H、S254K、S254L、S254M、S254C、S254I、S254N、S254P、S254Q、S254R、S254T、S254V、S254W、S254Y、T256A、T256C、T256D、T256E、T256F、T256G、T256H、T256I、T256K、T256L、T256M、T256N、T256P、T256Q、T256R、T256V、T256W、T256Y、T256S、Y285A、L309G、L309I、Q311F、Q311H、Q311I、Q311K、Q311L、Q311M、Q311R、Q311W、Q311Y、D312A、D312H、D312K、D312R、D312P、L314K、316Q、A378C、A378D、A378E、A378F、A378G、A378H、A378I、A378K、A378L、A378M、A378N、A378P、A378Q、A378R、A378S、A378T、A378V、A378W、A378Y、D399M、D399T、D399V、D401R、G402R、T403R、Y404Q、S428A、S428C、S428D、S428E、S428F、S428G、S428H、S428I、S428K、S428L、S428N、S428P、S428R、S428T、S428V、S428W、S428Y、S428M、E430I、E430Q、A431Q、A431R、A431V、A431K、L432S、S434A、S434C、S434D、S434E、S434F、S434G、S434H、S434I、S434K、S434L、S434M、S434N、S434P、S434Q、S434R、S434T、S434V、S434W、S434Y、H436G、H436K、H436M、H436R、H436Y、T437A及T437R。
3. 如請求項1之經修飾IgG，其中相較於具有該野生型貓IgG恆定域之IgG，該經修飾IgG對FcRn具有更高的親和力。
4. 如請求項1之經修飾IgG，其中該經修飾IgG為貓或貓類化IgG。
5. 如請求項1之經修飾IgG，其中該IgG為IgG1 _a、IgG1 _b或IgG2。
6. 如請求項1之經修飾IgG，其中該IgG恆定域為IgG1 _a、IgG1 _b或IgG2之恆定域。
7. 如請求項1之經修飾IgG，其中該IgG恆定域包含具有CH3域之Fc恆定區。
8. 如請求項1之經修飾IgG，其中該IgG恆定域包含具有CH2及CH3域之Fc恆定區。
9. 如請求項1之經修飾IgG，其中該野生型貓IgG恆定域包含SEQ ID NO.: 1、3或4中所闡述之胺基酸序列。
10. 一種醫藥組合物，其包含如請求項1之經修飾IgG及醫藥學上可接受之載劑。
11. 一種套組，其包含在容器中之如請求項1之經修飾IgG及使用說明書。
12. 一種多肽，其包含：貓IgG恆定域，其包含相對於野生型貓IgG恆定域之至少一個胺基酸取代，其中該取代在根據如在Kabat中之EU索引編號的胺基酸殘基247、249、250、252、254、256、285、309、311、312、314、378、399、401、402、403、404、428、430、431、432、434、436或437處。
13. 如請求項12之多肽，其中該恆定域包含以下取代中之一者或多者：P247I、P247L、P247V、D249A、D249E、D249S、T250E、T250I、T250Q、T250S、T250V、S252A、S252C、S252D、S252E、S252F、S252G、S252H、S252I、S252K、S252L、S252N、S252P、S252Q、S252R、S252T、S252V、S252Y、S252M、S252W、S254A、S254D、S254E、S254F、S254G、S254H、S254K、S254L、S254M、S254C、S254I、S254N、S254P、S254Q、S254R、S254T、S254V、S254W、S254Y、T256A、T256C、T256D、T256E、T256F、T256G、T256H、T256I、T256K、T256L、T256M、T256N、T256P、T256Q、T256R、T256V、T256W、T256Y、T256S、Y285A、L309G、L309I、Q311F、Q311H、Q311I、Q311K、Q311L、Q311M、Q311R、Q311W、Q311Y、D312A、D312H、D312K、D312R、D312P、L314K、316Q、A378C、A378D、A378E、A378F、A378G、A378H、A378I、A378K、A378L、A378M、A378N、A378P、A378Q、A378R、A378S、A378T、A378V、A378W、A378Y、D399M、D399T、D399V、D401R、G402R、T403R、Y404Q、S428A、S428C、S428D、S428E、S428F、S428G、S428H、S428I、S428K、S428L、S428N、S428P、S428R、S428T、S428V、S428W、S428Y、S428M、E430I、E430Q、A431Q、A431R、A431V、A431K、L432S、S434A、S434C、S434D、S434E、S434F、S434G、S434H、S434I、S434K、S434L、S434M、S434N、S434P、S434Q、S434R、S434T、S434V、S434W、S434Y、H436G、H436K、H436M、H436R、H436Y、T437A及T437R。
14. 如請求項12之多肽，其中相較於具有該野生型貓IgG恆定域之該IgG的多肽，該多肽對FcRn具有更高的親和力。
15. 如請求項12之多肽，其中該多肽為貓或貓類化IgG之多肽。
16. 如請求項12之多肽，其中該IgG為IgG1 _a、IgG1 _b或IgG2。
17. 如請求項12之多肽，其中該IgG恆定域為IgG1 _a、IgG1 _b或IgG2之恆定域。
18. 如請求項12之多肽，其中該IgG恆定域包含具有CH3域之Fc恆定區。
19. 如請求項12之多肽，其中該IgG恆定域包含具有CH2及CH3域之Fc恆定區。
20. 如請求項12之多肽，其中該野生型貓IgG恆定域包含SEQ ID NO.: 1、3或4中所闡述之胺基酸序列。
21. 一種抗體，其包含：貓IgG恆定域，其包含相對於野生型貓IgG恆定域之至少一個胺基酸取代，其中該取代在根據如在Kabat中之EU索引編號的胺基酸殘基247、249、250、252、254、256、285、309、311、312、314、378、399、401、402、403、404、428、430、431、432、434、436或437處。
22. 如請求項21之抗體，其中該恆定域包含以下取代中之一者或多者：P247I、P247L、P247V、D249A、D249E、D249S、T250E、T250I、T250Q、T250S、T250V、S252A、S252C、S252D、S252E、S252F、S252G、S252H、S252I、S252K、S252L、S252N、S252P、S252Q、S252R、S252T、S252V、S252Y、S252M、S252W、S254A、S254D、S254E、S254F、S254G、S254H、S254K、S254L、S254M、S254C、S254I、S254N、S254P、S254Q、S254R、S254T、S254V、S254W、S254Y、T256A、T256C、T256D、T256E、T256F、T256G、T256H、T256I、T256K、T256L、T256M、T256N、T256P、T256Q、T256R、T256V、T256W、T256Y、T256S、Y285A、L309G、L309I、Q311F、Q311H、Q311I、Q311K、Q311L、Q311M、Q311R、Q311W、Q311Y、D312A、D312H、D312K、D312R、D312P、L314K、316Q、A378C、A378D、A378E、A378F、A378G、A378H、A378I、A378K、A378L、A378M、A378N、A378P、A378Q、A378R、A378S、A378T、A378V、A378W、A378Y、D399M、D399T、D399V、D401R、G402R、T403R、Y404Q、S428A、S428C、S428D、S428E、S428F、S428G、S428H、S428I、S428K、S428L、S428N、S428P、S428R、S428T、S428V、S428W、S428Y、S428M、E430I、E430Q、A431Q、A431R、A431V、A431K、L432S、S434A、S434C、S434D、S434E、S434F、S434G、S434H、S434I、S434K、S434L、S434M、S434N、S434P、S434Q、S434R、S434T、S434V、S434W、S434Y、H436G、H436K、H436M、H436R、H436Y、T437A及T437R。
23. 如請求項21之抗體，其中相較於具有該野生型貓IgG恆定域之該IgG的多肽，該多肽對FcRn具有更高的親和力。
24. 如請求項21之抗體，其中該多肽為貓或貓類化IgG之多肽。
25. 如請求項21之抗體，其中該IgG為IgG1 _a、IgG1 _b或IgG2。
26. 如請求項21之抗體，其中該IgG恆定域為IgG1 _a、IgG1 _b或IgG2之恆定域。
27. 如請求項21之抗體，其中該IgG恆定域包含具有CH3域之Fc恆定區。
28. 如請求項21之抗體，其中該IgG恆定域包含具有CH2及CH3域之Fc恆定區。
29. 如請求項21之抗體，其中該野生型貓IgG恆定域包含SEQ ID NO.: 1、3或4中所闡述之胺基酸序列。
30. 一種醫藥組合物，其包含如請求項29之抗體及醫藥學上可接受之載劑。
31. 一種套組，其包含在容器中之如請求項29之抗體及使用說明書。
32. 一種載體，其包含編碼如請求項21之抗體的胺基酸序列之核酸序列，其中該野生型貓IgG恆定域包含SEQ ID NO.: 1、3或4中所闡述之胺基酸序列。
33. 一種經分離細胞，其包含如請求項32之載體。
34. 一種製造抗體或分子之方法，該方法包含：提供如請求項33之細胞；及培養該細胞。
35. 一種製造抗體之方法，該方法包含：提供如請求項21至19中任一項之抗體。
36. 一種融合分子，其包含：貓IgG恆定域，其包含相對於野生型貓IgG恆定域之至少一個胺基酸取代，其中該取代在根據如在Kabat中之EU索引編號的胺基酸殘基247、249、250、252、254、256、285、309、311、312、314、378、399、401、402、403、404、428、430、431、432、434、436或437處。
37. 如請求項36之分子，其中該恆定域包含以下取代中之一者或多者：P247I、P247L、P247V、D249A、D249E、D249S、T250E、T250I、T250Q、T250S、T250V、S252A、S252C、S252D、S252E、S252F、S252G、S252H、S252I、S252K、S252L、S252N、S252P、S252Q、S252R、S252T、S252V、S252Y、S252M、S252W、S254A、S254D、S254E、S254F、S254G、S254H、S254K、S254L、S254M、S254C、S254I、S254N、S254P、S254Q、S254R、S254T、S254V、S254W、S254Y、T256A、T256C、T256D、T256E、T256F、T256G、T256H、T256I、T256K、T256L、T256M、T256N、T256P、T256Q、T256R、T256V、T256W、T256Y、T256S、Y285A、L309G、L309I、Q311F、Q311H、Q311I、Q311K、Q311L、Q311M、Q311R、Q311W、Q311Y、D312A、D312H、D312K、D312R、D312P、L314K、316Q、A378C、A378D、A378E、A378F、A378G、A378H、A378I、A378K、A378L、A378M、A378N、A378P、A378Q、A378R、A378S、A378T、A378V、A378W、A378Y、D399M、D399T、D399V、D401R、G402R、T403R、Y404Q、S428A、S428C、S428D、S428E、S428F、S428G、S428H、S428I、S428K、S428L、S428N、S428P、S428R、S428T、S428V、S428W、S428Y、S428M、E430I、E430Q、A431Q、A431R、A431V、A431K、L432S、S434A、S434C、S434D、S434E、S434F、S434G、S434H、S434I、S434K、S434L、S434M、S434N、S434P、S434Q、S434R、S434T、S434V、S434W、S434Y、H436G、H436K、H436M、H436R、H436Y、T437A及T437R。
38. 如請求項36之分子，其中相較於具有該野生型貓IgG恆定域之該IgG的多肽，該多肽對FcRn具有更高的親和力。
39. 如請求項36之分子，其中該多肽為貓或貓類化IgG之多肽。
40. 如請求項36之分子，其中該IgG為IgG1 _a、IgG1 _b或IgG2。
41. 如請求項36之分子，其中該IgG恆定域為IgG1 _a、IgG1 _b或IgG2之恆定域。
42. 如請求項36之分子，其中該IgG恆定域包含具有CH3域之Fc恆定區。
43. 如請求項36之分子，其中該IgG恆定域包含具有CH2及CH3域之Fc恆定區。
44. 如請求項36之分子，其中該野生型貓IgG恆定域包含SEQ ID NO.: 1、3或4中所闡述之胺基酸序列。
45. 一種醫藥組合物，其包含如請求項36之分子及醫藥學上可接受之載劑。
46. 一種套組，其包含在容器中之如請求項36之分子及使用說明書。
47. 如請求項1之經修飾IgG，其中該等突變中之至少一者改良生物物理學特性。
48. 如請求項47之經修飾IgG，其中該生物物理學特性為多反應性。
49. 如請求項12之多肽，其中該等突變中之至少一者改良生物物理學特性。
50. 如請求項49之多肽，其中該生物物理學特性為多反應性。
51. 如請求項21之抗體，其中該等突變中之至少一者改良生物物理學特性。
52. 如請求項51之抗體，其中該生物物理學特性為多反應性。
53. 如請求項36之分子，其中該等突變中之至少一者改良生物物理學特性。
54. 如請求項53之分子，其中該生物物理學特性為多反應性。
55. 一種方法，其用於增加貓中之抗體血清半衰期，該方法包含：向該貓投予治療有效量的包含貓IgG恆定域之抗體，該貓IgG恆定域包含相對於野生型貓IgG恆定域之至少一個胺基酸取代，其中該取代在根據如在Kabat中之EU索引編號的胺基酸殘基胺基酸殘基252、311或428處。
56. 如請求項55之方法，其中該貓IgG恆定域包含突變S252H、S252Y、Q311W、S428L、S428M及S428Y中之一者或多者。
57. 如請求項55之方法，其中該貓IgG恆定域包含選自以下群組之突變：(1) S428L；(2) S252H及S428M；(3) S252Y及S428M；(4) S428M及Q311W；或(5) S428Y及Q311W。
58. 如請求項55之方法，其中該貓IgG恆定域包含突變S428L。
59. 如請求項55之方法，其中該貓IgG恆定域包含突變S252H與S428M之組合。
60. 如請求項55之方法，其中該貓IgG恆定域包含突變S252Y與S428M之組合。
61. 如請求項55之方法，其中該貓IgG恆定域包含突變S428M與Q311W之組合。
62. 如請求項55之方法，其中該貓IgG恆定域包含突變S428Y與Q311W之組合。
63. 如請求項55之方法，其中相較於具有該野生型貓IgG恆定域之IgG，該貓IgG恆定域具有更高的血清半衰期。
64. 如請求項55之方法，其中該IgG為IgG1 _a、IgG1 _b或IgG2。
65. 如請求項55之方法，其中該IgG恆定域為IgG1 _a、IgG1 _b或IgG2之恆定域。
66. 如請求項55之方法，其中該IgG恆定域包含具有CH3域之Fc恆定區。
67. 如請求項55之方法，其中該IgG恆定域包含具有CH2及CH3域之Fc恆定區。
68. 如請求項55之方法，其中該野生型貓IgG恆定域包含SEQ ID NO.: 1、3或4中所闡述之胺基酸序列。
69. 如請求項55之方法，其中該抗體為抗IL31抗體。
70. 一種治療犬個體中之IL-31介導之搔癢或過敏性病狀的方法，該方法包含：向該個體投予治療有效量的如請求項69之抗IL31抗體，藉此治療該犬個體中之該IL-31介導之搔癢或過敏性病狀。
71. 如請求項70之方法，其中該IL-31介導之搔癢或過敏性病狀為選自由以下組成之群的搔癢病狀：異位性皮膚炎、濕疹、牛皮癬、硬皮病及搔癢性皮炎。

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