TW202200144A - ４—烷基—５—雜芳基—３ｈ—１，２—二硫雜環戊二烯—３—硫酮之旋轉異構異構物 - Google Patents

Abstract

本揭示案尤其提供4-烷基-5-雜芳基-3H-1,2-二硫雜環戊二烯-3-硫酮之旋轉異構異構物、其中個別旋轉異構形式係藉由穩定獲得之此類異構物之複合物及包含過量個別旋轉異構物(旋轉異構過量)作為穩定複合物之組合物。本揭示案亦係關於製造及使用以下之方法：此類旋轉異構物及複合物，包括用此類旋轉異構物或其複合物治療人類或動物患者之方法，例如以預防、治療或減輕諸如黏膜炎、病毒感染、中風損傷、缺血/再灌注損傷、心臟缺血之多種病症之症狀及/或出於醫學目的提供針對多種器官及組織之氧化損害之保護。

Description

4-烷基-5-雜芳基-3H-1,2-二硫雜環戊二烯-3-硫酮之旋轉異構異 構物

本揭示案尤其係關於4-烷基-5-雜芳基-3H-1,2-二硫雜環戊二烯-3-硫酮之旋轉異構異構物、其中個別旋轉異構形式係藉由穩定獲得之此類異構物之複合物及包含過量個別旋轉異構物(旋轉異構過量)作為穩定複合物之組合物。本揭示案亦係關於製造及使用以下之方法：此類旋轉異構物；其中個別旋轉異構物係藉由穩定獲得且以旋轉異構過量存在之複合物；包含旋轉異構物或其複合物之組合物(包括旋轉異構醫藥組合物)；藉由使用此類旋轉異構物或其複合物調控人類氧化保護基因之功能之方法；及用此類旋轉異構物或其複合物治療人類或動物患者之方法(例如以預防、治療或減輕諸如黏膜炎之多種病症之症狀，及/或出於醫學目的提供針對多種器官及組織之氧化損害之保護)。

本文之揭示案係關於新醫藥調配物、組合物及療法，其包含富含可在複合物中穩定之個別旋轉異構物之4-甲基-5-(吡嗪-2-基)-3H-1,2-二硫雜環戊二烯-3-硫酮(亦稱為奧替普拉(oltipraz))旋轉異構物之群體。

圖1奧替普拉(4-烷基-5--(吡嗪-2-基)-3H-1,2-二硫雜環戊二烯-3-硫酮)。

圖2繪示以其兩個環幾乎彼此正交之構形顯示之奧替普拉。

圖3繪示奧替普拉類似物，其中α二硫醇硫原子經碳原子取代。

圖4A繪示奧替普拉之正(+)旋轉異構物。

圖4B繪示奧替普拉之負(-)旋轉異構物。

圖5繪示奧替普拉之羥基馬來酸酐複合物。

圖2-5中之原子顯示為圓(球)，用「H」標記氫，用「S」標記硫，用「N」標記氮，或用「O」標記氧。碳原子顯示為未經標記之圓(球)。

圖6顯示大鼠皮質神經元中半胱天冬酶3/7活化分析以及陽性對照及陰性對照之結果。

圖7顯示四種旋轉異構物複合物(100μg/ml)以及陽性對照及陰性對照對大鼠皮質神經元中OGD誘導之半胱天冬酶3/7活化之預防。

圖8顯示小鼠新生原代心肌細胞中半胱天冬酶3/7活化分析以及陽性對照及陰性對照之結果。

圖9顯示四種旋轉異構物複合物(100μg/ml)以及陽性對照及陰性對照對小鼠新生原代心肌細胞中OGD誘導之半胱天冬酶3/7活化之預防。

已揭示呈結晶及非晶形形式之4-甲基-5-(吡嗪-2-基)-3H-1,2-二硫雜環戊二烯-3-硫酮，亦稱為奧替普拉。奧替普拉已闡述為具有多種性質，例如作為控制血吸蟲病之抗微生物化合物，作為抗腫瘤劑，作為化學保護劑，及作為幫助控制化學輻射誘發之黏膜炎之化合物。

已闡述化學保護及黏膜炎控制效應之作用機制係經由上調轉錄因子、核因子紅血球2相關因子2(Nrf2)保護基因。由活性含氧物(ROS)活化之Nrf2似乎係氧化應力基因調控之關鍵調控劑。Nrf2係bZIP蛋白之Cap’n’Collar家族之成員。在正常條件下，Nrf2結合至其抑制劑，即細胞骨架相關蛋白Keap1， 該抑制劑藉由促進其蛋白酶體降解來抑制Nrf2。在藉由抗氧化劑處理後，Nrf2自Keap1釋放且其起始超過2000種抗氧化劑基因之上調。

已顯示，在使用匯集之人類齒齦上皮細胞之活體外基因表現分析中，奧替普拉會活化一系列氧化保護基因。與健康吸煙者相比，在患有COPD(慢性阻塞性肺病症)之個體中，亦已使用基因表現來顯示200種差異表現之氧化基因，且使用來自相同供體之原代支氣管上皮細胞活體外再現在活體內觀察到之氧化劑反應基因之顯著變化。[Pierrou,S.,Broberg,P.,O'Donnell,R.A.,Paw

owski,K.,Virtala,R.,Lindqvist,E.(2007)Expression of Genes Involved in Oxidative Stress Responses in Airway Epithelial Cells of Smokers with Chronic Obstructive Pulmonary Disease.Am.J.of Respiratory and Critical Care Medicine,175(6),577-587]。

亦已在人類角膜內皮細胞(HCEC)中研究活體外基因表現以確定核氧化DNA損害是否隨年齡增加。HCEC藉由以年齡依賴性方式上調其84種氧化應力及DNA損害信號傳導基因中之4者因應此損害。[Joyce,N.C.,Harris,D.L.,Zhu,C.C.Age-Related Gene Response of Human Corneal Endothelium to Oxidative Stress and DNA Damage(2011)Cornea,52(3),1641-1649]。

因此，廣泛接受的是，已顯示在活體外細胞分析中觀察到之基因表現變化代表賦予特定器官及組織之生理學氧化保護。

藉由定量結構活性關係(QSAR)研究將奧替普拉之化學結構最佳化用於血吸蟲病控制。儘管奧替普拉最近已顯示Nrf2上調活性，但未知其對於Nrf2上調係適宜結構亦或呈最佳構形。

如下文所論述，已發現可製備包含奧替普拉之兩種不同旋轉異構物之穩定組合物。組合物可包含高達約80%、85%、90%、95%、97%、98%或99%旋轉異構過量之兩種旋轉異構物中之一者，其可以奧替普拉複合物之形式穩 定。包含較高旋轉異構過量百分比(例如高於90%，即95%之一種旋轉異構物及5%之另一旋轉異構物)之組合物在較高溫度下可能不太穩定，此乃因旋轉之障壁相對較低。如本文所用之「奧替普拉複合物」意指與分子或原子可解離地締合(共價或非共價)之奧替普拉。包含旋轉異構過量之個別旋轉異構物中之任一者之此類組合物可特定增加轉錄因子Nrf2效應之上調，且因此在胃腸系統中(包括在口腔中)提供氧化保護免於化學輻射及免疫療法誘發之黏膜炎。

奧替普拉(4-烷基-5--(吡嗪-2-基)-3H-1,2-二硫雜環戊二烯-3-硫酮)係由兩個環組成，該兩個環係藉由碳-碳單鍵連結之吡嗪基環及二硫雜環戊二烯硫酮環(圖1)。

通常，自由旋轉可能圍繞此一碳-碳(C-C)鍵進行，使得不鎖定兩個環之具體定向且兩個環在X射線結構出版物中已闡述為呈扭曲平面構形，其中每一環中不飽和鍵之間之結合允許最低的能量穩定狀態，如上圖1中所顯示。參見Wei,C.H.,Structure of 4-Methyl-5-(2-pyrazinyl)-3H-1,2-dithiole-3-thione(Oltipraz),A New Antischistosomal Drug.Acta Cryst.(1983).C39,1079-1082)

使用能量最小化電腦模擬並應用Tinker(R)工具及公共參數集(例如Amber及MMFF)，發現多分子之奧替普拉亦可呈其中兩個環幾乎彼此正交之穩定構形，例如如圖2中所顯示。

對類似物結構之進一步電腦分析顯示，此較佳正交構形可能歸因於硫超共軛。用無法參與超共軛之碳原子取代α二硫醇硫原子產生平面結構作為最小能量構形，其中圍繞連結的C-C單鍵自由旋轉，如圖3中所顯示。

模擬亦顯示，在兩個正交環之一個定向對其鏡像之間存在14.1kJ/mol之意外的異常高的能量障壁。此可歸因於需要被破壞以允許沿兩個環之間之鍵旋轉之硫超共軛效應。因此，旋轉異構物係一對阻轉異構物，此歸因於圍繞奧替普拉之兩個環之間之鍵的位阻旋轉。

旋轉異構物組合物

因此，可能存在奧替普拉之兩種不同的旋轉異構物。兩種旋轉異構物中之每一者可定義為彼此正交之兩個環；(+)-旋轉異構物係藉由將硫酮及甲基定向於頂部且將嘧啶環之α氮定向於右側來定義，而(-)-旋轉異構物在左側具有嘧啶環之α氮(參見圖4A及圖4B)。

已發現，製備呈多種如下文所述之鹽形式之奧替普拉複合物產生組合物，其中(+)-旋轉異構物(圖4A)可以旋轉異構過量(例如高達約80%)存在。如本文所用之術語「旋轉異構過量」意指一種旋轉異構物相對於另一旋轉異構物過量，如通常應用於術語「鏡像異構過量」。因此，「旋轉異構過量」在本文中闡述為奧替普拉旋轉異構物群體整體之純度之量度。其反映樣品所含之一種旋轉異構物之量比另一旋轉異構物大之程度。內消旋混合物具有0%之旋轉異構過量，而單一完全純之旋轉異構物具有100%之旋轉異構過量。因此，例如，含有70%之一種旋轉異構物及30%之另一旋轉異構物之樣品具有40%(70%-30%)之旋轉異構過量。

一種異構物相對於另一異構物之相對百分數可使用在FTIR分析中約1200cm-1及約440cm-1處之硫酮峰之相對強度來分配。(+)旋轉異構物在420至424之間及1210至1215之間展示FTIR硫酮峰，而(-)旋轉異構物在432至436之間及1200至1205之間顯示FTIR硫酮峰。

可展現對(+)-旋轉異構物之旋轉異構異構偏好(參見下文實例1及實例3-6)之奧替普拉複合物之實例包括源自將基團添加或締合(例如可逆添加HCl、烷基鹵化物或醯基鹵化物)至奧替普拉之吡嗪基環(例如在α氮處)、產生N-取代之吡嗪鎓離子(正電荷最可能集中在吡嗪基之α氮上)及締合的陰離子的鹽。可因形成鹽而存在於吡嗪環上之一些取代基包括(但不限於)氫、烷基、烯基、炔基、醯基、苯醯基或苯甲醯基，其可不經取代或經其他官能基取代，該等其 他官能基包括(但不限於)鹵化物(例如Cl或F)、烷基(例如甲基、乙基、正丙基、異丙基)、烷氧基(-OCH₃或-OCH₂CH₃)、芳氧基(例如-O-苯基)及諸如此類。舉例而言，此類鹽可藉由使奧替普拉與HCl反應形成。在另一實例中，此類鹽可藉由使奧替普拉與烷基、烯基或炔基鹵化物(例如甲基氯、甲基碘及諸如此類)反應形成。在另一實例中，此類鹽可藉由與醯基、苯醯基或苯甲醯基鹵化物(例如氯化物，例如乙醯氯、正丁基氯、苯甲醯氯及諸如此類)反應形成。

亦已發現，可製備可以實質性旋轉異構過量(例如高達約90%或更高，包括30%-40%過量、40%-50%過量、50%-60%過量以及60%-65%、60%-70%及70%-80%過量)存在之(-)旋轉異構物(參見下文實例2及實例7-11)。

(-)旋轉異構物奧替普拉複合物可例如如實例2及實例7-11中所述、藉由使奧替普拉與多種羧酸或磷酸及其鹽、磷酸烷基酯及磷酸芳基酯、烷基及芳基磺酸及其鹽、經取代及未經取代之硫代羧酸及其鹽反應來製備。舉例而言，在羥基馬來酸鹽奧替普拉複合物之情形下，使奧替普拉與(+)-二乙醯基-L-酒石酸酐在5ml無水極性溶劑(例如超無水丙酮)中反應，然後添加冰乙酸。此反應在吡嗪基環之α氮與馬來酸鹽之氧原子之間形成鍵，實質上同時進行酒石酸二乙醯酯之環化重排，以產生馬來酸酐環。

可對(-)旋轉異構物展現旋轉異構異構偏好之奧替普拉之其他複合物包括其中在吡嗪基環之α氮與電負性原子(如氧、硫或磷)之間形成直接鍵、足以破壞分子內之超共軛的複合物。若此類奧替普拉複合物可經由破壞上述超共軛及/或增加立體應變穩定(-)旋轉異構物構形，則其可提供高達100%旋轉異構過量之(-)旋轉異構物。舉例而言，此類奧替普拉複合物可提供選自由以下組成之群之量之(-)旋轉異構物之旋轉異構過量：至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%。因此，(-)旋轉異構物之旋轉異構過量可為例如選自由以下 組成之群之量：30%-40%過量、40%-50%過量、50%-60%過量、60%-65%過量、60%-70%過量、70%-80%過量、80%-90%過量及90%-100%過量。此類奧替普拉複合物包括藉由使奧替普拉與多種羧酸或磷酸及其鹽、磷酸烷基酯及磷酸芳基酯、烷基及芳基磺酸及其鹽(例如經取代及未經取代之硫代羧酸及其鹽，例如乳酸、丙醇二酸、異硫磺酸、異絲胺酸、2-巰基乙磺酸、牛磺酸、丙基膦酸、2-胺基乙基膦酸、二硫代磷酸二乙酯、硫代磷酸二乙酯、磷酸二甲酯)反應形成之複合物。應注意，似乎不可能藉由改變二硫醇硫酮環(其在奧替普拉中係甲基)之4位取代基之大小來誘導5-(吡嗪-2-基)-3H-1,2-二硫雜環戊二烯-3-硫酮形成如奧替普拉之(-)旋轉異構物之構形。

另外或替代地，對於涉及吡嗪基環之α氮之超共軛，超共軛亦可受與吡嗪基環之間位氮形成奧替普拉複合物的影響。此類(-)旋轉異構異構複合物可經由間位氮原子與碳、氧、硫或磷原子之間之鍵形成。此鍵可單獨出現，或與涉及吡嗪基環上之α(鄰位)氮原子之複合一起出現。

由於將奧替普拉構象異構物理解為在波茲曼分佈(Boltzmann distribution)中隨著其相對能量之變化分佈，獲得更高旋轉異構過量之在任何給定條件集(例如特定溶劑)下最穩定之個別奧替普拉旋轉異構物(或奧替普拉複合物之個別旋轉異構物)的一種方式包括冷卻期望奧替普拉組合物之溶液(例如低於室溫，例如-78℃或更低)及提供足夠時間以使旋轉異構物實質上平衡。在此類條件下，更多分子將處於比室溫更穩定(更低能量)之構象。然後藉由蒸發及/或凍乾、較佳不使用加熱來乾燥冷卻之組合物。已進一步發現，其中(-)-旋轉異構物或(+)-旋轉異構物呈旋轉異構過量之奧替普拉複合物(例如鹽)能夠實質上純化至例如大於90%、大於91%、大於92%、大於93%、大於94%、大於95%、大於96%、大於97%、大於98%及大於99%之純度。應選擇純化製程及條件以最小化組合物之期望旋轉異構過量之變化。舉例而言，在純化期間使用高於40℃ 之溫度或使用極具極性之溶劑(例如DMSO)使旋轉異構過量之平衡及實質性損失接近或等於0，而使用手性層析似乎會改良旋轉異構過量產率。因此，在一種旋轉異構形式與介質之締合更強於另一旋轉異構形式之條件下使奧替普拉複合物暴露於手性介質、允許複合物有時間平衡並在不利於旋轉異構物平衡之條件(例如低溫)下溶析複合物，代表富集期望構形之奧替普拉複合物之方式。

已進一步發現，當(+)-旋轉異構物及(-)-旋轉異構物之複合物(例如鹽)儲存在室溫(例如15℃至30℃之間及40%至80%相對濕度，例如20℃至25℃及50%相對濕度)下時，(+)-旋轉異構物及(-)-旋轉異構物定向並非過渡狀態，而是實質上穩定之構形。在此上下文中，「實質上穩定」意指如在最終純化後30分鐘內藉由FTIR(如下文所論述)量測之組合物中(+)-旋轉異構物及(-)-旋轉異構物之濃度，在最終純化後4週使用相同的FTIR分析量測時，其變化將不超過選自由以下組成之群之量：10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%及1%。

包含旋轉異構物組合物之醫藥組合物

上文所述之旋轉異構物組合物可製備為醫藥組合物，作為(i)一或多種包含旋轉異構過量之(+)-旋轉異構物之奧替普拉複合物(例如鹽)，(ii)一或多種包含旋轉異構過量之(-)-旋轉異構物之奧替普拉複合物(例如實例2及實例7-11之複合物)，或(iii)(i)及(ii)之混合物。上述醫藥組合物(i)-(iii)在本文中稱為「旋轉異構物醫藥組合物」。此類旋轉異構物醫藥組合物可以乾燥或液體組合物投與。用於經口投與之旋轉異構物醫藥組合物之調配物亦可呈現為漱口水、或碳酸液體、或口服噴霧劑或氣溶膠、或口服軟膏、凝膠或乳霜。

在某些態樣中，適於調配用於經口投與(例如經頰投與)之旋轉異構物醫藥組合物之液體可包括水性及非水性載劑，例如水；鹽水；緩衝溶液；有機溶劑，例如醇(例如乙醇)、二醇、脂族醇；水及有機溶劑之混合物以及有機溶劑(視情況亦含水)之混合物；基於脂質之材料、基於多糖之材料以及適於投與口腔 之其他媒劑及媒劑組分以及如上文所鑒別或其他此項技術中已知之經頰媒劑組分之混合物。

可用於經口投與之液體劑量形式包括醫藥學上可接受之乳液、微乳液、懸浮液、糖漿及酏劑。除活性成分外，液體劑量形式可含有此項技術中常用之惰性稀釋劑。除惰性稀釋劑外，口服組合物亦可包括佐劑，例如潤濕劑、乳化及懸浮劑(用於乳液及懸浮液)、甜味劑、矯味劑、著色劑、芳香劑及防腐劑。

適於旋轉異構物醫藥組合物之經口投與之旋轉異構物醫藥組合物之替代態樣包括呈以下形式之組合物：膠囊(包括噴灑膠囊及明膠膠囊)、小藥囊、棒包、丸劑、錠劑、菱形錠劑、親液膠體、粉劑、顆粒、可植人組合物或水性或非水性液體中之溶液或懸浮液，包括例如適於注射或輸注之組合物，或水包油或油包水液體乳液，或酏劑或糖漿，或軟錠劑及/或漱口水及諸如此類，其各自含有預定量之組合物，該組合物包含一定量之如本文所述之旋轉異構物醫藥組合物作為活性成分。組合物或化合物亦可以濃注、舐劑或糊劑投與。

為製備用於經口投與之固體劑量形式(膠囊(包括噴灑膠囊及明膠膠囊)、錠劑、丸劑、糖衣錠、粉劑、顆粒及諸如此類)，可將包含一定量之旋轉異構物醫藥組合物之組合物與一或多種醫藥學上可接受之載劑及/或以下中之任一者混合：填充劑或增量劑、黏合劑、保濕劑、崩解劑溶液阻滯劑、吸收加速劑、潤濕劑、吸收劑、潤滑劑、複合劑及著色劑。旋轉異構物醫藥組合物可進一步包括適於改良調配物之穩定性或有效性之組分。在膠囊(包括噴灑膠囊及明膠膠囊)、錠劑及丸劑之情形下，旋轉異構物醫藥組合物亦可包含緩衝劑。亦可採用相似類型之固體組合物作為使用已知賦形劑之軟及硬填充明膠膠囊中之填充劑。

旋轉異構物醫藥組合物之錠劑及其他固體劑量形式可視情況使用包衣或殼(例如此項技術中已知之腸溶包衣及其他包衣)來刻劃或製備。其亦可經調 配以提供其中活性成分之緩慢或控制釋放來提供期望釋放輪廓。該等組合物亦可視情況含有遮光劑且可為視情況以延遲方式僅(或優先)在胃腸道之某一部分中釋放活性成分之組合物。活性成分亦可呈(若適宜)含有一或多種上述賦形劑之微囊封形式。

用於局部投與之旋轉異構物醫藥組合物

在一些態樣中，旋轉異構物醫藥組合物可納入可適於局部投與之調配物中，且可包括增濕劑、保濕劑及其他已知用於局部投與之添加劑。局部組合物亦可經由施用於皮膚上之貼片經皮遞送，且此類貼片為此項技術中所熟知。熟習此項技術者將認識到可使用之局部遞送組合物及媒劑。

用於直腸/結腸遞送之旋轉異構物醫藥組合物

在某些態樣中，上文所述之旋轉異構物醫藥組合物可經調配用於直腸投與以使用已知方法及組合物提供結腸特異性遞送。一般而言，經由直腸投與途徑遞送旋轉異構物醫藥組合物可藉由使用栓劑、灌腸劑、軟膏、乳霜或泡沫劑來達成。栓劑係最常用之直腸劑量形式，且基底在自然界中通常為脂肪，但亦可使用水溶性或水不混溶性基底。為達成期望生物利用度，活性成分應與直腸或結腸黏膜接觸。

已知用於製備組合物適於直腸投與之適宜賦形劑包括(但不限於)媒劑、防腐劑、表面活性劑、乳化劑、礦物油、推進劑、增稠劑、潤滑劑、防腐劑、pH調節劑、螯合劑、軟化劑及/或保濕劑、滲透增強劑、懸浮液形成劑或黏膜黏附劑或其組合。媒劑可包括已知與直腸及結腸黏膜相容之水性、非水性或水醇性組分。

替代地，結腸吸收可經由經口投與旋轉異構物醫藥組合物來完成，該等組合物經設計以在結腸中釋放活性奧替普拉。此類組合物可呈提供延遲釋放直至劑量形式處於結腸中之口服劑量形式，例如丸劑、膠囊或液體

旋轉異構物醫藥組合物及用於吸入投與之裝置

在其他態樣中，上文所述之旋轉異構物醫藥組合物可藉由提供呈可吸入形式(例如在吸入裝置中，呈乾燥粉末形式或在液體載劑中)之組合物經由呼吸道遞送。舉例而言，可吸入組合物可包含提供於乾燥粉末吸入器中之乾燥粉末組合物中之活性旋轉異構物醫藥組合物。參見例如WO2014177519及US20140065219。替代地，可吸入組合物可包含液體載劑(例如乙醇)中之活性成分。參見例如EP2536412 A2。

因此，本揭示案亦提供套組，其包含(i)如上文所述之旋轉異構物醫藥組合物，及(ii)藉由吸入投與此類組合物之裝置。套組視情況進一步含有使用說明書。

用於經口投與之裝置

在某些態樣中，可製備用於經口投與之旋轉異構物醫藥組合物之液體調配物並使用幫助投與單劑量之旋轉異構物醫藥組合物之裝置投與。此項技術中已知之此類裝置可包括空腔或貯器，其中可混合乾燥組合物及液體(例如水及/或非水性溶劑)且然後經由裝置中之開口投與患者。通常，此類裝置包括空腔及與空腔分開之小室，乾燥粉末可駐留在該小室中。在投與時，粉末自小室釋放至空腔或貯器中。在一些裝置中，此係藉由破壞分開小室與空腔或貯器之障壁來完成。然後，通常可藉由振蕩將粉劑與空腔中之液體混合，該液體可在早期添加或當時添加。空腔之大小足以容納乾燥旋轉異構物醫藥組合物及一定量之液體，該液體包含足以允許混合乾燥旋轉異構物醫藥組合物以形成液體組合物之量之水及/或非水性溶劑。可在封裝時將液體添加至容器中以產生自含產品，其包含可在投與時混合在一起之乾燥組合物及液體。替代地，容器可僅含乾燥旋轉異構物醫藥組合物且然後在投與之前添加液體。液體可含有如下文所論述之矯味添加劑。替代地，可使用分開乾燥及液體成分之其他類型之封裝。 舉例而言，粉末及液體可密封在2個成型-填充-密封袋中，並排或一個在另一個之頂部且由可破裂之封條分開。投與藥物之人隨後將使封條破裂且在2個小室之間來回混合內容物直至溶解或懸浮。

一旦組合物實質上均質(例如藉由振蕩)後，便立即經由裝置中之開口將其投與患者，該開口係例如藉由解開裝置之一部分以暴露含有液體混合物之空腔來產生。舉例而言，可藉由自容器之另一螺紋部分擰下螺紋部分來移除裝置之一部分(例如頂部)以暴露含有液體混合物之空腔，該液體混合物隨後可投與患者或由患者投與。此類裝置之實例提供於美國專利6,148,996、美國申請案20080202949及美國專利3,156,369中。此類一次性裝置可用於經口投與本文所述之液體組合物，尤其用於預防或治療如下文所述之口腔黏膜炎或其症狀。

因此，本揭示案亦提供套組，其包含(i)如上文所述之旋轉異構物醫藥組合物，(ii)用於經口投與此類組合物之裝置。套組視情況進一步含有使用說明書。

對於此類裝置，旋轉異構物醫藥組合物可呈乾燥形式。在此類情況下，在投與之前將可一起存在於例如如上文所述之小室中之乾燥組合物與水及/或其他液體溶劑混合(例如藉由將乾燥組合物暴露於液體並振蕩)，如上文所論述。

治療方法

在某些態樣中，上文所述之旋轉異構物醫藥組合物及裝置可用於治療有需要之人類或非人類動物患者。患者通常將為人類患者，但本揭示案之旋轉異構物醫藥組合物可用於治療非人類動物，例如用於獸醫應用。本揭示案之組合物可用於預防或治療眾多種疾病及疾患，包括已知用奧替普拉治療之疾病及疾患。此類疾病及疾患之實例包括黏膜炎、HIV、癌症、肝炎(包括HBV及HCV)、基於角蛋白之皮膚病，包括皮膚起泡及單純性水疱性表皮鬆解症及相關 疾病、皮膚炎、發炎性病症或疾病(包括內皮功能障礙及心血管疾病)、惡病質、體重損失、敗血症、對比劑誘發之腎病變、糖尿病、肥胖症、PCOS、脂肪變性、高脂血症及高血壓、慢性腎病、肺纖維化、低氧疾患、化學品誘發之肺損傷、呼吸窘迫病症、陰離子間隙酸中毒、腎炎、狼瘡、間質性肺疾病、移植物功能障礙、肝炎、急性腎損傷、雜訊誘發之應力損傷、毒物攝入、視網膜病變、神經毒性、癌症誘發之損傷(例如耳毒性)、呼吸感染、自閉症、涉及血管痙攣之疾患及視為可藉由提供正乙醯基半胱胺酸、可注射還原麩胱甘肽或已知細胞內麩胱甘肽增強劑治療之疾患。

上文所述之旋轉異構物醫藥組合物及裝置可用於其中期望神經保護效應之神經疾病或疾患，例如以預防、減輕或減少與中風損傷及缺血/再灌注損傷相關之效應及/或症狀。上文所述之旋轉異構物醫藥組合物及裝置亦可用於其中期望心臟保護效應之心臟疾病或疾患，例如以預防、減輕或減少與由減少到達心肌之血流及氧引起、導致或源自心肌梗塞及心臟組織死亡之心臟缺血相關之效應及/或症狀。

上文所述之旋轉異構物醫藥組合物及裝置亦可用於治療患有病毒感染之個體以減輕、減少或消除與病毒感染相關之效應及/或症狀。此類病毒感染可包括反轉錄病毒感染、SARS(重度急性呼吸症候群)冠狀病毒及其他冠狀病毒感染。替代地或另外，上文所述之旋轉異構物醫藥組合物及裝置亦可用於治療具有病毒感染風險之個體，以使個體在發生病毒感染時更好地抵抗該病毒感染。在病毒感染前之此「宿主加固(host hardening)」可減輕、減少或消除個體在他/她經歷病毒感染之情況下經歷之一些或所有效應及/或症狀，此可能尤其有益於具有病毒感染(例如反轉錄病毒感染、SARS(重度急性呼吸症候群)冠狀病毒及其他冠狀病毒感染)風險之人，例如患有高血壓、肺功能降低或呼吸疾病或疾患(例如肺炎)之個體。

通常，旋轉異構物醫藥組合物係以有效量提供至患者。術語「有效量」在本文中用於指足以產生顯著生物學反應(例如發炎顯著減輕)之旋轉異構物醫藥組合物之量。旋轉異構物醫藥組合物之實際劑量水準可發生變化以投與可有效地達成特定個體及/或應用期望之治療反應之量。當然，任一具體情形下之有效量將端視多種因素而定，包括調配物、投與途徑、與其他藥物或治療之組合、所治療疾患之嚴重程度以及所治療個體之身體狀況及先前醫學史。

如本文所用之術語「個體」包括人類及動物個體二者，且因此根據本揭示案提供獸醫治療用途。術語「治療(treatment)」或「治療(treating)」係關於相關疾患(例如黏膜炎、發炎性病症或癌症)之任何治療，包括(但不限於)預防性治療及治療性治療。因此，術語「治療(treatment)」或「治療(treating)」包括(但不限於)：預防相關疾患或相關疾患之發展；抑制相關疾患之進展；阻止或預防相關疾患之進一步發展；減弱相關疾患之嚴重程度；改善或減輕與相關疾患相關之症狀；及引起相關疾患或與相關疾患相關之一或多種症狀之部分、實質上完全或完全消退。

上文所述之旋轉異構物醫藥組合物及裝置適於治療例如在口腔中(包括在頰腔中)、在消化道中、在結腸及/或直腸中及/或在皮膚上患有黏膜炎或將經受可引起黏膜炎之治療(例如輻射治療或化學療法)之患者。倘若黏膜炎係口腔黏膜炎，則上文所述用於經口遞送之組合物及裝置可能較佳。例如，此類患者可正在經受或欲經受化學療法及/或輻射療法，例如頭頸區或身體另一區域之輻射治療。

上述旋轉異構物醫藥組合物及裝置可用於完成對人類或非人類動物患者之以下有益效應中之一者、一者以上或所有，即(i)預防性預防或延遲黏膜炎(包括口腔黏膜炎，例如黏膜發炎)之發作，(ii)治療現有黏膜炎，包括口腔黏膜炎，(iii)緩解與黏膜炎(包括口腔黏膜炎)相關之症狀，(iv)減弱或減輕現有黏膜炎 (包括口腔黏膜炎)之嚴重程度，(v)促進黏膜炎(包括口腔黏膜炎)之根治或治愈，(vi)減少黏膜炎(包括口腔黏膜炎，例如輕度、中度及重度口腔黏膜炎)之發生及/或持續時間，(vii)預防性預防或延遲患有口腔黏膜炎之患者之體重損失或惡病質之發作，(viii)減少患有口腔黏膜炎之患者經歷之體重損失或惡病質之量，及/或(ix)增加患有口腔黏膜炎之患者藉由口進食之能力。此類組合物亦可用於預防及/或治療患有吞嚥困難(難以吞嚥)之患者，例如癌症患者，或延遲吞嚥困難之發作或減輕吞嚥困難之嚴重程度，例如在癌症患者中。此類組合物亦可用於預防及/或治療患有口乾症(口乾之主觀感覺)之患者，或延遲口乾症之發作，減輕口乾症之嚴重程度，及/或減少中度至重度口乾症之發生。在某些態樣中，上文所述之一次性裝置可用於投與液體組合物以完成與口腔黏膜炎、吞嚥困難及口乾症相關之上述情況中之一者、一者以上或所有。有利地，調配物亦係非刺激性的、耐受良好的、可口的(若經口投與)、非細胞毒性的、弱的或非敏化的、非敏化的。

本文之某些態樣提供治療黏膜炎之方法，其包括向有需要之患者投與治療有效量之如本文所述之旋轉異構物醫藥組合物。本揭示案亦提供如本文所述之旋轉異構物醫藥組合物，其用於治療黏膜炎。本揭示案亦提供如本文所述之旋轉異構物醫藥組合物之用途，其用於製造用來治療黏膜炎之藥物。向患者投與調配物可為經口投與，包括經頰投與。本文所述之投與方法可代表預定持續時間(例如1個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月或更長時間)之治療方案。本揭示案之旋轉異構物醫藥組合物可每天一次、每天兩次、每天三次或視需要施用或投與。在患者正在經受化學療法及或輻射療法之情況下，劑量可在治療之前(例如治療前1小時內、3小時內、6小時內、12小時內、24小時內或24小時以上)投與。舉例而言，給藥可在接受化學療法、輻射療法及/或化學輻射療法之前幾天開始。舉例而言，患者可在起始療法前三天開始，開始 接受每天一次或每天一次以上之治療，且然後在療程(包括未接受療法之日)中每天接受給藥。在給予治療之日，例如在療法之前、例如在投與療法之前1小時內給予給藥。給藥可在一天之任一時間(例如在早晨)、未接受療法之日給予。另外或替代地，可在治療後(例如在治療後1小時內、3小時內、6小時內、12小時內、24小時內或治療後24小時以上)投與劑量。

因此，本揭示案提供治療黏膜炎之方法，其包括向有需要之患者投與治療有效量之上文所述之旋轉異構物醫藥組合物。本揭示案亦提供如上文所述之旋轉異構物醫藥組合物，其用於治療黏膜炎。本揭示案亦提供如本文所述之旋轉異構物醫藥組合物之用途，其用於製造用來治療黏膜炎之藥物。向患者投與旋轉異構物醫藥組合物可為經口投與，包括經頰投與。

倘若投與液體組合物，則組合物可經口或非經腸(例如藉由皮下、肌內、胸骨內或靜脈內注射)投與。倘若採用經口投與，則液體組合物可簡單地吞嚥，或其可藉由「漱口後吞嚥(swish and swallow)」方案或「漱口後吐出(swish and spit)」方案投與。藉由向患有口腔黏膜炎或具有患上口腔黏膜炎風險(例如正在經受或欲經受化學療法、輻射療法及/或化學輻射療法)之患者經口投與呈液體形式之組合物，組合物可提供針對如上文所述之黏膜炎之治療益處，即其可預防性預防或延遲黏膜炎之發作，治療現有黏膜炎，緩解或減少與黏膜炎相關之症狀(例如黏膜發炎及出血)，減弱或減輕現有黏膜炎之嚴重程度，縮短黏膜炎之持續時間，及/或促進黏膜炎之減弱、根治或治愈。在此類情形下，包含帶負電荷之成分(例如陽離子表面活性劑或聚合物，例如Eudragit RL)之液體組合物可藉助提供與往往具有正電荷之口腔黏膜之黏附或締合提供另一優點。本文所述組合物之態樣之物理及化學性質可賦予調配物諸如穩定性、將活性劑遞送至黏膜及易於投與之特徵。

如上文所述，如本文所述之旋轉異構物醫藥組合物可與其他治療劑一起或分開共投與，作為治療方案之一部分。此類劑包括N乙醯半胱胺酸及/或其他抗氧化劑、泛酸(維生素B5)或增強麩胱甘肽合成之其他劑、麩胱甘肽(例如用於局部投與)、Medihoney(用於局部投與)、薑黃素(用於局部投與)或其他NF-κB抑制劑、美沙拉明(Mesalamine)及/或其他抗發炎劑(例如用於經口或經直腸投與組合物)及超氧化物歧化酶或預防活性O₂ ^-(超氧化物)之損害之其他化合物。

實例

藉由以下實例進一步說明本揭示案之某些態樣，該等實例不應解釋為以任何方式限制所附申請專利範圍之範圍。

實例1：製造奧替普拉：(+)旋轉異構物鹽酸鹽之方法

使用乙腈：水使20mg合成的奧替普拉粉末(ST-617-API，論述於下文中)重結晶且將其添加至配備有橡膠隔片之5ml玻璃小瓶中。在室溫下向小瓶中添加1ml無水氯仿且將小瓶置於振動台上直至溶液澄清。使用氣體注射器，使5ml無水鹽酸氣體在5分鐘內緩慢鼓泡至溶液中且間歇性振蕩小瓶。一旦添加所有HCl氣體，便立即將小瓶振蕩5分鐘，移除隔片，並在緩慢穩定氮氣流下溫和地蒸發溶劑以獲得橙色/紅色固體狀奧替普拉之鹽酸鹽複合物。FTIR：C=S峰1203/1211(相對強度3：7)及433/421(相對強度2：8)。

實例2：製造奧替普拉：(-)-旋轉異構物之羥基馬來酸酐複合物之方法

使用乙腈：水使20mg合成的奧替普拉粉末重結晶且將其添加至配備有橡膠隔片之10ml玻璃小瓶中。使用氣體注射器藉由氮氣自小瓶移除所有水分。將小瓶置於冰浴中且向其中添加22mg(+)-二乙醯基-L-酒石酸酐於5ml超無水丙酮中之預冷(10℃)溶液，在振動台上振蕩5分鐘，且5分鐘後使用注射器在30秒內添加0.5ml冰乙酸。在0-10℃下間歇性振蕩4h後，將小瓶升溫至室溫。移除隔片，並在緩慢穩定氮氣流下溫和地蒸發溶劑以獲得橙色固體狀奧替 普拉之羥基馬來酸酐複合物(參見圖5)。用乙醚將複合物洗滌3次以移除痕量乙酸。FTIR：C=S峰1201/1214(相對強度8：2)及434/423(相對強度8：2)。用KBR研磨2mg奧替普拉複合物樣品且將其製成標準小丸以在Perkin Elmer 1600系列FTIR上進行FTIR分析。

實例3：製造奧替普拉：(+)旋轉異構物之乙醯氯複合物之方法

使用丙酮：水使20mg合成的奧替普拉粉末重結晶且將其添加至配備有橡膠隔片之玻璃小瓶中。在室溫下向小瓶中添加10ml無水氯仿且將小瓶置於振動台上直至溶液澄清。使用注射器，將5ml無水乙醯氯緩慢添加至溶液中且間歇性振蕩小瓶。一旦添加所有乙醯氯，便立即將小瓶振蕩15分鐘，移除隔片，並在緩慢穩定氮氣流下溫和地蒸發溶劑及過量試劑以獲得橙色固體狀奧替普拉之乙醯氯複合物。FTIR：C=S峰1202/1212(相對強度3：7)及432/422(相對強度2：8)。

實例4：製造奧替普拉：(+)旋轉異構物之正丁基氯複合物之方法

使用丙酮：水使20mg合成的奧替普拉粉末重結晶且將其添加至配備有橡膠隔片之玻璃小瓶中。在室溫下向小瓶中添加10ml無水氯仿且將小瓶置於振動台上直至所得溶液澄清。使用注射器，將5ml正丁基氯緩慢添加至溶液中且間歇性振蕩小瓶。一旦添加所有正丁基氯，便立即將小瓶升溫至65℃且振蕩30分鐘，移除隔片，並在緩慢穩定氮氣流下溫和地蒸發溶劑及過量試劑以獲得紅色固體狀奧替普拉之正丁基氯複合物。FTIR：C=S峰1201/1213(相對強度2：8)及433/421(相對強度2：8)。

實例5：製造奧替普拉：(+)旋轉異構物之甲基碘複合物之方法

使用丙酮：水使50mg合成的奧替普拉粉末重結晶且將其添加至配備有螺旋密封條之額定壓力玻璃小瓶中。在室溫下向小瓶中添加20ml無水氯仿且將小瓶置於振動台上直至所得溶液澄清。使用注射器，將10ml甲基碘緩慢添加 至溶液中且間歇性振蕩小瓶。一旦添加所有甲基碘，便立即將小瓶密封且在壓力下加熱至120℃並振蕩3小時(「hr」)，將小瓶冷卻且解封，並在緩慢穩定氮氣流下溫和地蒸發溶劑及過量試劑以獲得紅色/棕色固體狀奧替普拉之甲基碘複合物。FTIR：C=S峰1197/1214(相對強度2：8)及431/419(相對強度2：8)。

實例6：製造奧替普拉：(+)旋轉異構物之苯甲醯氯複合物之方法

將20mg粗奧替普拉粉末添加至配備有橡膠隔片之玻璃小瓶中。在室溫下向小瓶中添加10ml無水氯仿且將小瓶置於振動台上直至所得溶液澄清。使用注射器，將1ml無水苯甲醯氯緩慢添加至溶液中且間歇性振蕩小瓶。一旦添加所有苯甲醯氯，便立即將小瓶振蕩15分鐘，移除隔片，並在10mm Hg真空下溫和地蒸發溶劑及過量試劑以獲得紅色固體狀奧替普拉之苯甲醯氯複合物。FTIR：C=S峰1200/1213(相對強度3：7)及431/419(相對強度3：7)。

實例7：製造奧替普拉：(-)旋轉異構物之二硫代磷酸二乙酯複合物之方法

使用丙酮：水使22mg合成的奧替普拉粉末重結晶且將其添加至配備有磁力攪拌棒及冷水冷凝器之玻璃圓底燒瓶中。在室溫下向燒瓶中添加10ml丙酮且在持續攪拌的同時，將20mg二硫代磷酸二乙酯銨鹽緩慢添加至溶液中。一旦添加所有二硫代磷酸二乙酯，便立即升高溫度且設定為回流3hr。自冷凝器頂部稀鹽酸捕集器中捕獲釋放的氨。3hr後，移除溶劑以產生橙色/紅色固體狀奧替普拉之二硫代磷酸二乙酯複合物。FTIR：C=S峰1201/1220(相對強度9：1)及472/444(相對強度8：2)

實例8：製造奧替普拉：(-)旋轉異構物之硫代磷酸二乙酯複合物之方法

使用丙酮：水使22mg合成的奧替普拉粉末重結晶且將其添加至配備有磁力攪拌棒及冷水冷凝器之玻璃圓底燒瓶中。在室溫下向燒瓶中添加10ml丙酮且在持續攪拌的同時，將19mg硫代磷酸二乙酯銨鹽緩慢添加至溶液中。一旦添加所有硫代磷酸二乙酯，便立即升高溫度且設定為回流3hr。自冷凝器頂 部稀鹽酸捕集器中捕獲釋放的氨。3hr後，移除溶劑以產生橙色/紅色固體狀奧替普拉之二硫代磷酸二乙酯複合物。FTIR：C=S峰1208/1221(相對強度9：1)及479/442(相對強度9：1)。

實例9：製造奧替普拉：(-)旋轉異構物之磷酸二甲酯複合物之方法

將175mg磷酸三甲酯與100mg粗奧替普拉(95%純度)一起置於配備有冷凝器及攪拌棒之圓底燒瓶中且在80℃下加熱72hr。72hr後，將混合物冷卻至室溫且用50ml甲苯洗滌五次。自下層收集255g橙色/紅色N-甲基奧替普拉之磷酸二甲酯複合物且在真空下在60℃下乾燥。FTIR：C=S峰1210/1227(相對強度9：1)及489/453(相對強度9：1)。

實例10：製造奧替普拉：(-)旋轉異構物之羥乙磺酸複合物之方法

將22mg粗奧替普拉粉末添加至配備有磁力攪拌棒及冷水冷凝器之玻璃圓底燒瓶中。在室溫下向燒瓶中添加10ml丙酮且在持續攪拌的同時，將30mg羥乙磺酸銨鹽緩慢添加至溶液中。一旦添加所有羥乙磺酸銨鹽，便立即升高溫度且設定為回流6hr。自冷凝器頂部稀鹽酸捕集器中捕獲釋放的氨。6hr後，用少量濃鹽酸使反應物達到pH 6.8且將所得混合物在真空下蒸發至乾燥以產生紅色/棕色固體狀奧替普拉之羥乙磺酸複合物。FTIR：C=S峰1216/1228(相對強度9：1)及464/435(相對強度9：1)。

實例11：製造奧替普拉：(-)旋轉異構物之硫代苯甲酸複合物之方法

將20mg粗奧替普拉粉末添加至配備有橡膠隔片之玻璃小瓶中。在室溫下向小瓶中添加10ml無水氯仿且將小瓶置於振動台上直至所得溶液澄清。使用注射器，將1ml硫代苯甲酸銨鹽緩慢添加至溶液中且間歇性振蕩小瓶。一旦添加所有硫代苯甲酸銨鹽，便立即升高溫度且設定為回流1hr。自冷凝器頂部稀鹽酸捕集器中捕獲釋放的氨。1小時後，在真空下移除內容物以產生橙色固 體狀奧替普拉之硫代苯甲酸複合物。FTIR：C=S峰1210/1223(相對強度9：1)及474/438(相對強度9：1)

實例12：(+)及(-)旋轉異構物對H ₂ O ₂ 誘導之氧化應激HGEPp細胞中之ROS產生之效應

活性含氧物(ROS)之形成指示氧化應力。與氧化應力增加偶合之ROS累積在許多疾病之發病機制中有所涉及，該等疾病中之一者係黏膜炎。參見Sonis,A biological approach to mucositis,J Support Oncol 2004；2：21-36；Halliwell及Whiteman,Measuring reactive species and oxidative damage in vivo and in cell culture：how should you do it and what do the results mean？,British J.Pharmacology，第142卷，第2期，2004年5月，231-255；及Iglesias-Baitolome等人，mTOR Inhibition Prevents Epithelial Stem Cell Senescence and Protects from Radiation-Induced Mucositis,Cell Stem Cell 11,401-414,2012年9月7日)。自由基及其他活性物質在活體內不斷產生且對生物分子造成氧化損害，該過程受多種抗氧化劑及修復系統之制約。

PCT/IB2017/001312之實例7中闡述使用HGEPp細胞測定奧替普拉及經調配奧替普拉晶體對細胞內ROS之效應之分析，該申請案公開為授予申請者ST IP Holding AG之WO 2018/047013。經調配奧替普拉晶體通常係根據PCT/IB2017/001312之實例1中所述之製程製備(MHD小於約350nm)。對上文實例1-11中製備之旋轉異構物組合物實施該相同分析以測定其對保護原代人類齒齦上皮細胞(HGEPp)免於過氧化氫(H₂O₂)誘發之氧化損害之效應。

條件：

結果：

對ST-617-DPI及實例1-11之旋轉異構物複合物之上述分析之結果顯示於下表1中。下表1中所報告之ST-617-API(根據WO2016207914中所揭示之製程製備之重結晶奧替普拉)之結果取自PCT/IB2017/001312之圖9(100μg/mL預處理)。

在分析中經100μg/mL之ST-617-DPI處理之細胞群之ROS水準(122%)與對照(139%)相比之減小與PCT/IB2017/001312中對100μg/mL所報導之結果(123%)一致，且在此分析中對ST-617-DPI獲得其他結果。(+)旋轉異構物複合物提供ROS之適度減少，而(-)旋轉異構物複合物提供實質性減少。(-)旋轉異構物之分析結果在90%信賴水準下在統計學上較顯著。

實例13：用ST-617-DPI、ST-617-API及實例1-11之旋轉異構物複合物處理後，HGEPp細胞中之差異調控之氧化應力相關基因

Nrf2系統(上文所論述)藉由活化編碼II期去毒及抗氧化酶之基因視為針對氧化損害之主要細胞防禦機制。一種此類氧化損害係口腔黏膜炎，其發生在化學療法治療、尤其頭頸癌治療期間及之後。在HGEPp細胞內，用通常根據PCT/IB2017/001312之實例1中所述之製程製備之100ug/ml經調配奧替普拉組合物(MHD小於約350nm)、上文實例1-11中所述之旋轉異構異構複合物及陰性對照(不含奧替普拉之經調配奧替普拉組合物)預處理後，使用人類氧化應力PCR陣列來評估84種應力基因之相對表現。

材料

HGEPp細胞係購自CellnTec Advanced Cell Systems AG。RNEasy Plus Micro套組係購自Qiagen N.V.,USA。無RNase之DNase Set係購自Qiagen N.V.,USA。RT2簡易第一股套組(DNA發生器)及RT2 SYBR® Green fluor qPCR mastermix係購自Qiagen N.V.,USA。氧化應力RT2 profiler PCR陣列(84種保護基因)係購自Qiagen N.V.,USA。使用來自Bio-Rad Inc.,USA之iCycler PCR系統進行RT-PCR。

方法

細胞培養物：

使匯集之原代HGEPp細胞在100mm皮氏培養皿(petri dish)上在由CellnTec提供之CnT-Prime上皮細胞培養基中繁殖，該等皮氏培養皿經稀釋於達爾伯克氏磷酸鹽緩衝鹽水(Dulbecco’s phosphate-buffered saline，DPBS)中之30mg/ml I型大鼠尾膠原(BD Biosciences)包被。HGEPp細胞以2.5×104個細胞/cm2之密度濃度生長於12×60mm Nunc^TM細胞培養皿中。

給藥溶液之製備：

通常根據PCT/IB2017/001312之實例1中所述之製程製備經調配奧替普拉晶體(ST-617-DPI)。根據WO2016207914 ST-617-API中所揭示之製程製備 重結晶的奧替普拉。將ST-617-DPI、ST-617-API及實例1-11之旋轉異構異構複合物溶解於DMSO中以達到100μg/ml之最終濃度。所有給藥溶液皆含有0.3%之DMSO，其遠低於HGEPp細胞之最大耐受DMSO百分比，即0.8%。

用ST-617-DPI及旋轉異構物複合物溶液預處理HGEPp細胞：

1.培養皿細胞濃度選擇為2.5×105/ml以產生在對照曲線之線性部分內之OD吸光度。

2.一旦在培養皿上培養HGEPp細胞且準備好(已達到鋪滿)，便立即移除並丟棄培養基。用DPBS將細胞輕輕地洗滌2-3次且移除並丟棄最後一次洗滌物。

3.然後在37℃下，用100μg/mL濃度(一式兩份)之ST-617-API、ST-617-DPI及旋轉異構異構複合物將HGEPp細胞培養皿預處理24h。

來自HGEPp細胞之mRNA製劑：

使用RNeasy UCP Micro套組自HGEPp細胞純化mRNA。

1.丟棄並洗滌處理物後，藉由在離心管中以1000RPM離心5min使細胞沈澱。藉由抽吸小心地移除所有上清液，確保已充分移除所有細胞培養基。

2.藉由添加350μl緩衝液RULT破壞細胞，小心地使細胞沈澱物自管鬆散並渦旋以充分混合，且藉由使溶解物通過裝配至無RNase注射器之20號針5次使混合物均質化。

3.將350μl 70%乙醇添加至溶解物中且藉由吸取再將其混合。(可見一些沈澱但其對於分析而言不成問題)

4.將樣品(包括可能已形成之任何沈澱)轉移至置於2ml收集管中之RNeasy UCP MinElute旋轉管柱並以10,000rpm離心15s。丟棄流過物。

5.將350μl緩衝液RUWT添加至旋轉管柱中且以10,000rpm離心15s以洗滌膜。丟棄流過物。

6.將10μl DNase I儲備溶液添加至70μl緩衝RDD中。輕輕地混合，將80ul DNase I混合物直接添加至旋轉管柱膜中並渦旋15min。

7.將350μl緩衝液RUWT添加至旋轉管柱中且以10,000rpm離心15s以洗滌該旋轉管柱並丟棄流過物。

8.將旋轉管柱置於新2ml收集管中，添加500μl緩衝液RUPE且以10,000rpm離心15s。丟棄流過物。

9.用500μl 80%乙醇再洗滌旋轉管柱且將其置於新2ml收集管中並打開蓋子全速離心5min以確保移除所有乙醇。

10.將旋轉管柱置於新1.5ml收集管中，將14μl超純水直接添加至旋轉管柱膜之中心，關閉蓋子且全速離心1min以溶析RNA。旋轉管柱之怠體積為4μl。用16μl超純水溶析以產生20μl(4μg)RNA溶析物。

用於RT-PCR之cDNA製劑：

1.將來自上述處理物中每一者之RNA樣品添加至40μl緩衝液GE2(gDNA消除緩衝液)及無RNase之H2O中以製成60μl之最終體積。

2.在37℃下培育5min且立即於冰上放置2分鐘。

3.將62μl BC5反轉錄酶混合物添加至每一60μl RNA樣品中達到102μl之最終體積。

4.在42℃下培育正好15分鐘且然後立即藉由在95℃下加熱5分鐘終止反應。(保持在冰上直至qPCR(若需要))。

人類氧化應力RT2 Profiler PCR陣列：

RT-PCR係高度靈敏且可靠的基因表現分析方法。該分析可靠地用於分析HGEPp細胞中與氧化應力相關之84種基因之表現水準，該等HGEPp細胞經100μg/ml之ST-617-API、ST-617-DPI及旋轉異構異構複合物預處理24h。將上述cDNA與RT2 SYBR Green fluor Mastermix混合且等分至RT2 Profiler PCR 陣列之孔中。在iCycler上實施RT-PCR。使用Ct值比較基因表現且使用△△Ct方法計算結果並正規化至5種常見基因(ACTB、B2M、GAPDH、HPRT及RPL13A)之平均表現水準。

結果：

對ST-617-DPI及實例1-11之旋轉異構物複合物之分析之結果顯示於下表2中。下表2中所報告之ST-617-API(根據WO2016207914中所揭示之製程製備之重結晶奧替普拉)之結果來自如上文所述實施之早期分析。

陰性對照未顯示任何基因調控之變化。所有旋轉異構物顯示(-)旋轉異構物高於(+)旋轉異構物之基因調控反應。兩種旋轉異構物之間之最高倍數變 化係針對SOD1、GCLC、GCLM及UCP2。值得注意的是，為麩胱甘肽(GSH)生物合成基因之GCLC及GCLM基因顯示(+)旋轉異構物與(-)旋轉異構物之間明顯一致之差異。該等結果與在臨床試驗中在接受ST-617-DPI且經歷低口腔黏膜炎發展同時經受頭頸癌之輻射療法之患者中觀察到之血清GSH之增加相關聯。(-)旋轉異構物顯示ALOX12、SOD1、NQO1、GCLC及GSTP1高於ST-617-API之基因上調反應。(-)旋轉異構物顯示SOD1、NQO1、GCLC、GSTP1及GCLM高於ST-617-DPI之基因上調反應。在(-)旋轉異構物內，磷酸二甲酯及羥乙磺酸複合物(分別為實例9及實例10)顯示SOD1、NQO1、GCLC、GSTP1及GCLM顯著高於ST-617-DPI及ST-617-DPI之上調。(-)旋轉異構物亦顯示與ST-617-DPI及ST-617-API相比UCP2之差異下調(粒線體解偶聯蛋白2，其參與粒線體源性ROS之控制)。

因此，本揭示案之旋轉異構物醫藥組合物及投與旋轉異構物醫藥組合物之方法可用於治療任何人類或非人類動物患者以減少細胞內活性含氧物(ROS)及/或降低氧化應力，包括在經受提供氧化應力之治療(例如化學療法或輻射療法)之患者中。

本揭示案之旋轉異構物醫藥組合物及投與旋轉異構物醫藥組合物之方法可用於治療任何人類或非人類動物患者以提供抗氧化效應，包括在經受提供氧化應力之治療(例如化學療法或輻射療法)之患者中。本揭示案之旋轉異構物醫藥組合物及投與旋轉異構物醫藥組合物之方法亦可用於減緩患者之氧化損害(例如黏膜炎，包括口腔黏膜炎)之發作、及/或減輕其嚴重程度及/或縮短其持續時間，包括在經受提供氧化損害之治療(例如化學療法或輻射療法)之患者中。

基於上述結果，人們進一步認為，(+)旋轉異構物(包括其中存在旋轉異構過量之(+)旋轉異構物之組合物)可使與Nrf2路徑相關之基因上調。基於上述 結果，人們進一步認為，(-)旋轉異構物(包括其中存在旋轉異構過量之(-)旋轉異構物之組合物)可使與Nrf2路徑相關之基因上調。

實例14：實例1、實例2、實例3及實例9之旋轉異構物複合物之神經保護效應

在半胱天冬酶3/7活化分析中測試實例1、實例2、實例3及實例9之旋轉異構物複合物對氧葡萄糖剝奪(OGD)誘發之神經毒性之效應。該分析適用於在96孔板中培養且暴露於100μg/ml化合物之剛剛分離之大鼠皮質神經元。

方法

在大鼠原代神經元培養物中藉由氧-葡萄糖剝奪2小時誘導活體外缺血性損傷。在OGD誘導前18小時，將神經元與化合物一起培育1小時。使用10μM地佐環平(Dizocilpine，MK801)作為陽性神經保護對照。處理後，與三種光學相容性螢光染料一起培育且隨後用BD路徑855(Becton Dickinson)分析。在單細胞層級上藉由高含量篩選量測與半胱天冬酶3/7活化相關之細胞參數，該等細胞參數指示致死前細胞毒性效應。如下文所論述，每一旋轉異構物複合物在此分析中展現高度的神經保護。

在胚胎第18天，自史-道二氏大鼠(Sprague-Dawley rat)胎兒之大腦皮層分離原代皮質神經元培養物。移除腦且在移除腦膜後，在雙目顯微鏡下解剖組識。藉由在37℃下胰蛋白酶0.2%及DNAse I 0.04%消化10min對神經元進行酶分散，平鋪於聚L-離胺酸孔中且與B27補充之神經基礎培養基一起培育。

將18天齡胚胎大鼠之皮質神經元平鋪於聚1-離胺酸包被之96孔板(30.000個細胞/孔)中。將細胞在37℃下在加濕5% CO2氣氛中在補充有B-27組分之神經基礎培養基中維持5天。在第5天時，使細胞在37℃下經受氧葡萄糖剝奪(OGD)2小時。將培養物置於好氧室(Billops-Rothenberg)中且在缺乏葡萄糖及B27因子之神經基礎培養基中培育，並充入厭氧氣體混合物(94.7% N2、5% CO2、0.3% O2)以移除殘餘氧。將對照培養物保持在原始神經基礎培養基中，但 提交給厭氧條件。在OGD條件結束時，自厭氧室移除細胞，將OGD培養基更換為含有葡萄糖之神經基礎培養基，且將細胞再培育24h。在OGD誘導前18小時，將測試化合物添加至神經元中並維持1h。如上文所述用地佐環平(MK801)處理重複培養物作為神經保護之陽性對照。藉由半胱天冬酶3/7活化分析測定四種旋轉異構物複合物之神經保護潛能。

半胱天冬酶3/7活化分析：

使用CellEvent®半胱天冬酶-3/7綠色偵測試劑測定半胱天冬酶3/7活化，該半胱天冬酶-3/7綠色偵測試劑固有地係抑制染料與DNA結合之能力之非螢光肽。然而，在凋亡細胞中之半胱天冬酶-3/7活化後，肽裂解，從而允許染料結合至DNA，產生明亮的螢光反應。用5μM試劑對細胞染色，洗滌3次，且在488nm/530nm Ex/Em下量測。此染料允許直接量化凋亡細胞。

當在暴露後24h量測時，OGD處理使神經元中之半胱天冬酶3/7活化增加三倍，而神經保護陽性對照MK801防止基於半胱天冬酶活化28%之OGD誘導之細胞凋亡。圖6顯示陽性對照及陰性對照之半胱天冬酶3/7活化分析之結果。數據點代表每一條件之每個核之凋亡細胞數之平均值±SD。

亦可藉由施加四種旋轉異構物複合物(100μg/ml)來防止OGD誘導之半胱天冬酶3/7活化，此會顯著減少半胱天冬酶3/7活化且改良神經元之存活(圖7)。在圖7中，COM 1係上文實例2中所述之奧替普拉：(-)-旋轉異構物之羥基馬來酸酐複合物。COM 2係上文實例1中所述之奧替普拉：(+)旋轉異構物之鹽酸鹽。COM 3係上文實例9中所述之奧替普拉：(-)旋轉異構物之磷酸二甲酯複合物，且COM 4係上文實例3中所述之奧替普拉：(+)旋轉異構物之乙醯氯複合物。數據點代表每一條件之每個核之凋亡細胞數之平均值±SD。如圖7中所顯示，每一旋轉異構物複合物展現高度的神經保護。

實例15：實例1、實例2、實例3及實例9之旋轉異構物複合物之心臟保護效應

在半胱天冬酶3/7活化分析中測試實例1、實例2、實例3及實例9之旋轉異構物複合物對氧葡萄糖剝奪(OGD)誘發之心臟毒性之效應。該分析適用於在96孔板中培養且暴露於100μg/ml複合物之「剛剛分離」之小鼠心肌細胞。

方法

在小鼠新生原代心肌細胞培養物中藉由氧葡萄糖剝奪(OGD)18小時誘導活體外缺血性損傷。在OGD誘導前4小時期間，將心肌細胞與旋轉異構物複合物之不同處理一起培育。在OGD刺激及24h恢復時段期間，測試化合物亦存在。使用NAC作為心臟保護之陽性對照。處理後，向細胞同時加載顯示光學相容性之兩種螢光染料，且然後用BD路徑855(Becton Dickinson)分析。藉由使用高含量篩選(HCS)技術，在允許高通量篩選之單細胞層級上量測與半胱天冬酶3/7活化相關之細胞參數(指示致死前細胞毒性效應且代表不同的毒性機制)。

自瑞士小鼠(Swiss mouse)新生兒P0-P2之心臟製備原代心肌細胞培養物。遵循Miltenyi Biotec之新生兒心臟解離套組之說明書移除心臟且進行酶解離。然後，亦遵循Miltenyi biotec之說明書分離心肌細胞。簡言之，藉由清除非靶細胞來分離細胞。用與MACS微珠結合之單株抗體之混合劑直接對非靶細胞(纖維母細胞及內皮細胞)進行磁力標記。藉由將經磁力標記之非靶細胞保留在MACS分離器之磁場中之MCS管柱內、同時使未經標記之心肌細胞通過管柱來清除該等經磁力標記之非靶細胞。然後，對心肌細胞計數且將其平鋪於含有心肌細胞完全培養基(1% CMGS組分、1%青黴素(pencillin)/鏈黴素(streptomycina)及5% FBS)之纖連蛋白包被之孔上。

半胱天冬酶3/7活化分析：

使用CellEvent®半胱天冬酶-3/7綠色偵測試劑測定半胱天冬酶3/7活化，該半胱天冬酶-3/7綠色偵測試劑固有地係抑制染料與DNA結合之能力之非螢光肽。然而，在凋亡細胞中之半胱天冬酶-3/7活化後，肽裂解，從而允許染料 結合至DNA，產生明亮的螢光反應。用5μM試劑對細胞染色，洗滌3次，且在488nm/530nm Ex/Em下量測。此染料允許直接量化凋亡細胞。對於所有旋轉異構物複合物，考慮到在OGD條件下相對於媒劑處理之培養物，螢光強度或相應形態學參數變化至少20%。在本研究中，OGD毒性與半胱天冬酶3/7活化之增加相關。旋轉異構物複合物對OGD毒性顯示之預防效應與半胱天冬酶3/7活性之恢復相關。

圖8顯示陽性對照及陰性對照之半胱天冬酶3/7活化分析之結果。心肌細胞在OGD誘導前4小時期間與NAC一起培育，且在OGD刺激及24h恢復時段期間亦存在。處理後，實施HCS分析。數據點代表每一條件之每個核之凋亡細胞數之平均值±SD。

圖9顯示分析之結果，其中心肌細胞在OGD誘導前4小時期間與旋轉異構物複合物一起培育且在OGD刺激及24h恢復時段期間亦存在。處理後，實施HCS分析。數據點代表每一條件之每個核之凋亡細胞數之平均值±SD。在圖9中，COM 1係上文實例2中所述之奧替普拉：(-)-旋轉異構物之羥基馬來酸酐複合物。COM 2係上文實例1中所述之奧替普拉：(+)旋轉異構物之鹽酸鹽。COM 3係上文實例9中所述之奧替普拉：(-)旋轉異構物之磷酸二甲酯複合物，且COM 4係上文實例3中所述之奧替普拉：(+)旋轉異構物之乙醯氯複合物。數據點代表每一條件之每個核之凋亡細胞數之平均值±SD。如圖9中所顯示，每一旋轉異構物複合物展現高度的心臟保護。

態樣之列舉

1.一種組合物，其包含旋轉異構過量之4-甲基-5-(吡嗪-2-基)-3H-1,2-二硫雜環戊二烯-3-硫酮(奧替普拉，參見圖4A)之(+)旋轉異構物。

2.如態樣1之組合物，其中組合物包含一或多種具有旋轉異構過量之(+)旋轉異構物之奧替普拉複合物(例如奧替普拉之一或多種鹽)。

3.如態樣2之組合物，其中一或多種奧替普拉複合物包含源自將基團添加(例如可逆添加HCl、烷基鹵化物或醯基鹵化物)至奧替普拉之吡嗪基環之α氮、產生N-取代之吡嗪鎓離子及締合的陰離子之鹽。源自將基團添加至奧替普拉之吡嗪基環之α氮、產生N-取代之吡嗪鎓離子及締合的陰離子。

4.如態樣3之組合物，其中一或多種奧替普拉複合物包含至少一種奧替普拉複合物，該至少一種奧替普拉複合物係藉由添加至一或多種選自由以下組成之群之反應物之奧替普拉之吡嗪基環之α氮來形成：烷基鹵化物、烯基鹵化物、炔基鹵化物、醯基鹵化物、苯甲醯基鹵化物及其組合(例如一或多種選自由以下組成之群之反應物：HCl、甲基氯、經取代或未經取代之甲基、經取代或未經取代之甲醯基、經取代或未經取代之乙醯基、經取代或未經取代之苯甲醯基、經取代及未經取代之丁基)。此類奧替普拉複合物可藉由奧替普拉分別與例如甲醯氯、乙醯氯、苯甲醯氯及正丁基碘、甲基碘及其組合之反應來形成。在此一態樣中，甲醯基、乙醯基、苯甲醯基及丁基可在吡嗪環之2位或4位與氮原子締合，且可帶有一或多個選自例如鹵素(例如F或Cl)及/或低碳烷基(C1-C6烷基)之取代基。

5.如態樣1-4中任一者之組合物，其中(+)旋轉異構物之旋轉異構過量介於選自由以下組成之群之範圍內：30%-40%過量、40%-50%過量、50%-60%過量及60%-70%過量、70%-80%過量及大於80%過量。

6.一種包含奧替普拉複合物之組合物，其中奧替普拉複合物具有過量之4-甲基-5-(吡嗪-2-基)-3H-1,2-二硫雜環戊二烯-3-硫酮(奧替普拉)之(-)旋轉異構物。

7.如態樣6之組合物，其中組合物包含一或多種具有旋轉異構過量之(-)旋轉異構物之奧替普拉複合物。

8.如態樣7之組合物，其中一或多種奧替普拉複合物中之至少一者包含介於吡嗪基環之α氮與電負性原子之間之直接鍵。

9.如態樣8之組合物，其中電負性原子係選自由氧、硫及磷組成之群。

10.如實施例6-9中任一者之組合物，其中一或多種奧替普拉複合物包含羥基馬來酸鹽奧替普拉複合物。

11.如態樣6-9中任一者之組合物，其中一或多種奧替普拉複合物包含一或多種複合物，該一或多種複合物係藉由使奧替普拉與一或多種選自由以下組成之群之反應物反應形成：羧酸或其鹽、磷酸或其鹽、磷酸烷基酯、磷酸芳基酯、烷基磺酸或其鹽、芳基磺酸或其鹽、經取代及未經取代之硫代羧酸或其鹽及前述一或多者之組合，例如乳酸、丙醇二酸、異硫磺酸、異絲胺酸、2-巰基乙磺酸、牛磺酸、丙基膦酸、2-胺基乙基膦酸、二硫代磷酸二乙酯、硫代磷酸二乙酯、磷酸二甲酯。

12.如態樣6-9中任一者之組合物，其中一或多種奧替普拉複合物包含一或多種複合物，該一或多種複合物係藉由使奧替普拉與一或多種選自由以下組成之群之反應物反應形成：乳酸、丙醇二酸、異硫磺酸、異絲胺酸、2-巰基乙磺酸、牛磺酸、丙基膦酸、2-胺基乙基膦酸、二硫代磷酸二乙酯、硫代磷酸二乙酯、磷酸二甲酯及其組合。

13.如態樣6-12中任一者之組合物，其中(-)旋轉異構物之旋轉異構過量介於選自由以下組成之群之範圍內：30%-40%過量、40%-50%過量、50%-60%過量、60%-65%過量、60%-70%過量、70%-80%過量、80%-90%過量及90%-100%過量。

14.一種醫藥組合物，其包含至少一種如態樣1-13中任一者之組合物，其中組合物適於投與人類。

15.如態樣14之醫藥組合物，其中組合物呈適於局部投與之形式。

16.如態樣15之醫藥組合物，其中組合物呈適於直腸投與或藉由吸入投與之形式。

17.如態樣14之醫藥組合物，其中組合物呈適於皮下、肌內、胸骨內或靜脈內注射之形式。

18.如態樣14之醫藥組合物，其中組合物呈適於經口投與之形式。

19.如態樣18之醫藥組合物，其中組合物呈粉劑、丸劑、錠劑或含於膠囊內之形式。

20.如態樣18之醫藥組合物，其中組合物呈液體形式。

21.一種治療有需要之人類或非人類動物患者之方法，其包括向患者投與如態樣13-20中任一者之醫藥組合物。

22.如態樣21之方法，其中投與包括經口投與。

23.如態樣21之方法，其中投與包括經頰投與

24.一種預防、治療、改善有需要之人類或非人類動物患者之黏膜炎之症狀、減輕黏膜炎之嚴重程度及/或縮短黏膜炎之持續時間的方法，其包括經口投與如態樣18-20中任一者之醫藥組合物。

25.一種預防、治療、改善有需要之人類或非人類動物患者之黏膜炎之症狀、減輕黏膜炎之嚴重程度及/或縮短黏膜炎之持續時間的方法，其包括經口投與根據態樣18-20中之任一者製備之醫藥組合物。

26.一種預防、治療、改善有需要之人類或非人類動物患者之黏膜炎之症狀、減輕黏膜炎之嚴重程度及/或縮短黏膜炎之持續時間的方法，其包括向患者經口投與如態樣18-20中任一者之醫藥組合物。

27.如態樣24-26中任一者之方法，其中黏膜炎係口腔黏膜炎。

28.如態樣24-26中任一者之方法，其中黏膜炎係消化道黏膜炎。

29.一種預防、治療、改善有需要之人類或非人類動物患者之黏膜炎或皮膚炎之症狀、減輕黏膜炎或皮膚炎之嚴重程度及/或縮短黏膜炎或皮膚炎之持續時間的方法，其包括局部投與如態樣15之組合物。

30.一種預防、治療、改善有需要之人類或非人類動物患者之黏膜炎之症狀、減輕黏膜炎之嚴重程度及/或縮短黏膜炎之持續時間的方法，其包括直腸投與如態樣16之組合物。

31.一種預防、治療、改善有需要之人類或非人類動物患者之黏膜炎之症狀、減輕黏膜炎之嚴重程度及/或縮短黏膜炎之持續時間的方法，其包括藉由吸入投與如態樣16之組合物。

32.如態樣21-31中任一者之方法，其中患者正在經受輻射療法。

33.一種製造奧替普拉之羥基馬來酸酐(-)旋轉異構物之方法，其包括以下步驟：

(i)使奧替普拉與(+)-二乙醯基-L-酒石酸酐在無水極性溶劑存在下反應以形成反應混合物；及

(ii)將乙酸添加至反應混合物中。

34.一種預防、治療、改善有需要之人類或非人類動物患者之病毒感染之症狀、減輕病毒感染之嚴重程度及/或縮短病毒感染之持續時間的方法，其包括投與如態樣14-20中任一者之醫藥組合物。

35.一種治療具有病毒感染風險之人類或非人類動物患者以更好地抵抗病毒感染之方法，其包括投與如態樣14-20中任一者之醫藥組合物。

36.如態樣34或35之方法，其中患者患有高血壓、肺功能降低或呼吸疾病或疾患中之一或多者。

37.一種治療具有中風損傷及缺血/再灌注損傷風險之人類或非人類動物患者之方法，其包括投與如態樣14-20中任一者之醫藥組合物。

38.一種預防、治療、改善有需要之人類或非人類動物患者之中風損傷及缺血/再灌注損傷之症狀、減輕中風損傷及缺血/再灌注損傷之嚴重程度及/或縮短中風損傷及缺血/再灌注損傷之持續時間的方法，其包括投與如態樣14-20中任一者之醫藥組合物。

39.一種預防、治療、改善有需要之人類或非人類動物患者之心臟缺血之症狀、減輕心臟缺血之嚴重程度及/或縮短心臟缺血之持續時間以預防、減輕或減少與心臟缺血相關之效應及/或症狀的方法，其包括投與如態樣14-20中任一者之醫藥組合物。

40.一種治療具有心臟缺血損傷風險之人類或非人類動物患者之方法，其包括投與如態樣14-20中任一者之醫藥組合物。

41.如態樣34-40中任一者之方法，其中投與包括經口投與。

42.如態樣34-40中任一者之方法，其中投與包括經頰投與。

43.如態樣34-40中任一者之方法，其中投與包括靜脈內投與。

44.如態樣34-40中任一者之方法，其中投與包括藉由吸入投與。

45.如態樣34-44中任一者之方法，其中醫藥組合物包含羥基馬來酸鹽奧替普拉複合物。

46.如態樣21-32中任一者之方法，其中醫藥組合物包含羥基馬來酸鹽奧替普拉複合物。

47.如態樣14-20中任一者之醫藥組合物，其中醫藥組合物包含羥基馬來酸鹽奧替普拉複合物。

Claims (47)

1. 一種組合物，其包含旋轉異構過量之4-甲基-5-(吡嗪-2-基)-3H-1,2-二硫雜環戊二烯-3-硫酮(奧替普拉(oltipraz))之(+)旋轉異構物。
2. 如請求項1之組合物，其中該組合物包含一或多種具有旋轉異構過量之該(+)旋轉異構物之奧替普拉複合物(例如奧替普拉之一或多種鹽)。
3. 如態樣2之組合物，其中該一或多種奧替普拉複合物包含源自將基團添加至奧替普拉之吡嗪基環之α氮、產生N-取代之吡嗪鎓離子及締合的陰離子之鹽。
4. 如請求項3之組合物，其中該一或多種奧替普拉複合物包含至少一種奧替普拉複合物，該至少一種奧替普拉複合物係自奧替普拉與一或多種選自由以下組成之群之反應物之反應形成：烷基鹵化物、烯基鹵化物、炔基鹵化物、醯基鹵化物、苯甲醯基鹵化物及其組合。
5. 如請求項1至4中任一項之組合物，其中該(+)旋轉異構物之該旋轉異構過量介於選自由以下組成之群之範圍內：30%-40%過量、40%-50%過量、50%-60%過量及60%-70%過量、70%-80%過量及大於80%過量。
6. 一種包含奧替普拉複合物之組合物，其中該奧替普拉複合物具有過量之4-甲基-5-(吡嗪-2-基)-3H-1,2-二硫雜環戊二烯-3-硫酮(奧替普拉)之(-)旋轉異構物。
7. 如請求項6之組合物，其中該組合物包含一或多種具有旋轉異構過量之該(-)旋轉異構物之奧替普拉複合物。
8. 如請求項7之組合物，其中該一或多種奧替普拉複合物中之至少一者包含介於吡嗪基環之α氮與電負性原子之間之直接鍵。
9. 如請求項8之組合物，其中該電負性原子係選自由氧、硫及磷組成之群。
10. 如請求項6至9中任一項之組合物，其中該一或多種奧替普拉複合物包含羥基馬來酸鹽奧替普拉複合物。
11. 如請求項6至9中任一項之組合物，其中該一或多種奧替普拉複合物包含一或多種複合物，該一或多種複合物係藉由使奧替普拉與一或多種選自由以下組成之群之反應物反應形成：羧酸或其鹽、磷酸或其鹽、磷酸烷基酯、磷酸芳基酯、烷基磺酸或其鹽、芳基磺酸或其鹽、經取代及未經取代之硫代羧酸或其鹽及前述一或多者之組合，例如乳酸、丙醇二酸、異硫磺酸、異絲胺酸、2-巰基乙磺酸、牛磺酸、丙基膦酸、2-胺基乙基膦酸、二硫代磷酸二乙酯、硫代磷酸二乙酯、磷酸二甲酯。
12. 如請求項6至9中任一項之組合物，其中該一或多種奧替普拉複合物包含一或多種複合物，該一或多種複合物係藉由使奧替普拉與一或多種選自由以下組成之群之反應物反應形成：乳酸、丙醇二酸、異硫磺酸、異絲胺酸、2-統基乙磺酸、牛磺酸、丙基膦酸、2-胺基乙基膦酸、二硫代磷酸二乙酯、硫代磷酸二乙酯、磷酸二甲酯及其組合。
13. 如請求項6至12中任一項之組合物，其中該(-)旋轉異構物之該旋轉異構過量介於選自由以下組成之群之範圍內：30%-40%過量、40%-50%過量、50%-60%過量、60%-65%過量、60%-70%過量、70%-80%過量、80%-90%過量及90%-100%過量。
14. 一種醫藥組合物，其包含至少一種如請求項1至13中任一項之組合物，其中該組合物適於投與人類。
15. 如請求項14之醫藥組合物，其中該組合物呈適於局部投與之形式。
16. 如請求項14之醫藥組合物，其中該組合物呈適於直腸投與或藉由吸入投與之形式。
17. 如請求項14之醫藥組合物，其中該組合物呈適於皮下、肌內、胸骨內或靜脈內注射之形式。
18. 如請求項14之醫藥組合物，其中該組合物呈適於經口投與之形式。
19. 如請求項18之醫藥組合物，其中該組合物呈粉劑、丸劑、錠劑或含於膠囊內之形式。
20. 如請求項18之醫藥組合物，其中該組合物呈液體形式。
21. 一種治療有需要之人類或非人類動物患者之方法，其包括向該患者投與如請求項14至20中任一項之醫藥組合物。
22. 如請求項21之方法，其中該投與包括經口投與。
23. 如請求項22之方法，其中該投與包括經頰投與。
24. 一種預防、治療、改善有需要之人類或非人類動物患者之黏膜炎之症狀、減輕黏膜炎之嚴重程度及/或縮短黏膜炎之持續時間的方法，其包括經口投與如請求項18至20中任一項之醫藥組合物。
25. 一種預防、治療、改善有需要之人類或非人類動物患者之黏膜炎之症狀、減輕黏膜炎之嚴重程度及/或縮短黏膜炎之持續時間的方法，其包括經口投與根據請求項18至20中之任一項製備之醫藥組合物。
26. 一種預防、治療、改善有需要之人類或非人類動物患者之黏膜炎之症狀、減輕黏膜炎之嚴重程度及/或縮短黏膜炎之持續時間的方法，其包括向該患者經口投與如請求項18至20中任一項之醫藥組合物。
27. 如請求項24至26中任一項之方法，其中該黏膜炎係口腔黏膜炎。
28. 如請求項24至26中任一項之方法，其中該黏膜炎係消化道黏膜炎。
29. 一種預防、治療、改善有需要之人類或非人類動物患者之黏膜炎或皮膚炎之症狀、減輕黏膜炎或皮膚炎之嚴重程度及/或縮短黏膜炎或皮膚炎之持續時間的方法，其包括局部投與如請求項15之組合物。
30. 一種預防、治療、改善有需要之人類或非人類動物患者之黏膜炎之症狀、減輕黏膜炎之嚴重程度及/或縮短黏膜炎之持續時間的方法，其包括直腸投與如請求項16之組合物。
31. 一種預防、治療、改善有需要之人類或非人類動物患者之黏膜炎之症狀、減輕黏膜炎之嚴重程度及/或縮短黏膜炎之持續時間的方法，其包括藉由吸入投與如請求項16之組合物。
32. 如請求項21至31中任一項之方法，其中該患者正在經受輻射療法。
33. 一種製造奧替普拉之羥基馬來酸酐(-)旋轉異構物之方法，其包括以下步驟：

    (iii)使奧替普拉與(+)-二乙醯基-L-酒石酸酐在無水極性溶劑存在下反應以形成反應混合物；及

    (iv)將乙酸添加至該反應混合物中。
34. 一種預防、治療、改善有需要之人類或非人類動物患者之病毒感染之症狀、減輕病毒感染之嚴重程度及/或縮短病毒感染之持續時間的方法，其包括投與如請求項14至20中任一項之醫藥組合物。
35. 一種治療具有病毒感染風險之人類或非人類動物患者以更好地抵抗病毒感染之方法，其包括投與如請求項14至20中任一項之醫藥組合物。
36. 如請求項34或35之方法，其中該患者患有高血壓、肺功能降低或呼吸疾病或疾患中之一或多者。
37. 一種治療具有中風損傷及缺血/再灌注損傷風險之人類或非人類動物患者之方法，其包括投與如請求項14至20中任一項之醫藥組合物。
38. 一種預防、治療、改善有需要之人類或非人類動物患者之中風損傷及缺血/再灌注損傷之症狀、減輕中風損傷及缺血/再灌注損傷之嚴重程度及/或縮短中風損傷及缺血/再灌注損傷之持續時間的方法，其包括投與如請求項14至20中任一項之醫藥組合物。
39. 一種預防、治療、改善有需要之人類或非人類動物患者之心臟缺血之症狀、減輕心臟缺血之嚴重程度及/或縮短心臟缺血之持續時間以預防、減輕或減少與心臟缺血相關之效應及/或症狀的方法，其包括投與如請求項14至20中任一項之醫藥組合物。
40. 一種治療具有心臟缺血損傷風險之人類或非人類動物患者之方法，其包括投與如請求項14至20中任一項之醫藥組合物。
41. 如請求項34至40中任一項之方法，其中該投與包括經口投與。
42. 如請求項34至40中任一項之方法，其中該投與包括經頰投與。
43. 如請求項34至40中任一項之方法，其中該投與包括靜脈內投與。
44. 如請求項34至40中任一項之方法，其中該投與包括藉由吸入投與。
45. 如請求項34至44中任一項之方法，其中該醫藥組合物包含羥基馬來酸鹽奧替普拉複合物。
46. 如請求項21至32中任一項之方法，其中該醫藥組合物包含羥基馬來酸鹽奧替普拉複合物。
47. 如請求項14至20中任一項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包含羥基馬來酸鹽奧替普拉複合物。

Images