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TW202130662A - 特異性結合ｃｄ３及／或ｃｄ１２３之抗—ｃｄ３抗體，抗—ｃｄ１２３抗體及雙特異性抗體 - Google Patents

特異性結合ｃｄ３及／或ｃｄ１２３之抗—ｃｄ３抗體，抗—ｃｄ１２３抗體及雙特異性抗體 Download PDF

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TW202130662A
TW202130662A TW110113349A TW110113349A TW202130662A TW 202130662 A TW202130662 A TW 202130662A TW 110113349 A TW110113349 A TW 110113349A TW 110113349 A TW110113349 A TW 110113349A TW 202130662 A TW202130662 A TW 202130662A
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塞德里克 巴里耶爾
克里斯坦 拜勒
喬承 貝寧佳
香戴兒 卡雷
史蒂芬 葛里夫
卡佳 克羅爾
克里斯坦 朗格
桑德里納 萊莫伊內
烏爾夫德克 洛伊施納
埃爾科萊 拉奧
馬里昂 施奈德
瑪利賽西兒 威瑟
彼得 萬諾藍
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法商賽諾菲公司
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Abstract

本發明關於與CD3特異性結合並與至少另一種抗原例如CD123特異性結合的抗體樣結合蛋白。本發明還關於與CD123特異性結合並與至少另一種抗原特異性結合的抗體樣結合蛋白。本發明進一步涉及抗CD3抗體和抗CD123抗體。本發明還關於包含本發明抗體樣結合蛋白、抗CD3抗體或抗CD123抗體的藥物組合和其治療癌症的用途。本發明進一步關於包含編碼該抗體樣結合蛋白序列的分離的核酸、載體和宿主細胞、抗CD3或抗CD123抗體和該抗CD123抗體作為診斷工具的用途。

Description

特異性結合CD3及/或CD123之抗-CD3抗體，抗-CD123抗體及雙特異性抗體
本發明關於與CD3特異性結合並與至少另一種抗原例如CD123特異性結合的抗體樣結合蛋白。本發明進一步關於抗CD3抗體和抗CD123抗體。本發明還關於與CD123特異性結合並與至少另一種抗原特異性結合的抗體樣結合蛋白。本發明還關於包含本發明抗體樣結合蛋白、抗CD3抗體或抗CD123抗體的醫藥組成物和其治療癌症的用途。本發明進一步關於包含編碼該抗體樣結合蛋白序列、抗CD3或抗CD123抗體的分離的核酸、載體和宿主細胞和該抗CD123抗體作為診斷工具的用途。
第一代雙特異性抗體開發已逾20年。自那時起多項臨床研究已測試了雙特異性抗體工程化以靶向癌細胞表面抗原。這類抗癌症融合蛋白包含兩個或多個在靶向的癌細胞附近定位的免疫效應細胞以獲得抗癌活性的功能性結構域(domains)。
隨雙特異性抗體技術的開發，稱為雙特異性T-細胞銜接器(bispecific T-cell engagers)(BiTE)的不同類融合蛋白僅藉由使用柔性連接子連接兩抗體單鏈可變區(scFv)(不包括Fc胺基酸區段)生成，一個scFv結合靶向的細胞且另一個結合T細胞表面的CD3。一種具有CD19xCD3雙特異性結合活性的BiTE，blinatumomab，在針對具有B-系急性淋巴細胞中微小殘留 病變的患者的II期臨床試驗中展示有前景的結果。
CD123(白細胞介素-3受體α鏈IL-3Rα)是在多種血液系統腫瘤中過表現的腫瘤抗原。大量AML母細胞表現表面CD123且該表現不隨AML的亞型而變化。診斷時CD123在AML上的較高表現已報導與較差預後相關。已報導CD123在白血病幹細胞(LSC)上表現。越來越多的證據表明AML從展示靜息和對DNA損傷化療相對抵抗的白血病幹細胞發生。
與造血幹細胞(HSC)相比LSC上增加的CD123表現因此提供用於靶向的治療機會。
針對CD123產生的單株抗體(MAb)7G3先前已顯示抑制白血病細胞系和原代細胞兩者IL-3介導的增殖和活化(美國專利號6,177,078)。然而，靶向CD123是否可功能性損壞AML-LSC尚不清楚。
CD123xCD3抗體樣結合蛋白的使用導致腫瘤細胞殺傷，如本文由發明人所示。
已提出產生具有CD123xCD3雙特異性結合活性的的雙特異性抗體樣結合蛋白的構思並敘述於國際專利申請WO2013/173820中。
此外，來自MacroGenics的基於CD123 x CD3雙親和性再靶向(DART)雙特異性抗體的分子已在2014進入I期臨床試驗。
然而，如由發明人所示，該來自MacroGenics的基於CD123xCD3雙親和性再靶向(DART)雙特異性抗體的分子，例如，在靶細胞不存在時具有82%的表現CD4+的T-細胞活化和83%的表現CD8+的T-細胞活化。T-細胞不合適的活化可導致嚴重的副作用，如細胞因子釋放綜合徵。細胞因子釋放綜合徵指藉由活化的T細胞產生與在嚴重感染中發現相似並特徵在於低血壓、發熱和僵直表徵的全身性炎性反應的細胞因子的釋放。已報導由於細胞因子釋放綜合徵導致的死亡例如對於OKT3。
因此，儘管雙特異性抗體技術的這些進展，對於其他癌症療法特別是有效直接或間接靶向並殺傷癌細胞的那些療法存在需求。
發明人已成功生成、篩選並選擇對於人和食蟹猴(Macaca fascicularis)CD3蛋白都展示高親和力的特異性大鼠抗CD3抗體。
發明人開發了對抗原CD3和至少一種其他靶抗原具有生物和免疫特異性的抗體樣結合蛋白。在一個實例中，為證明這些抗CD3抗體在雙特異性抗體樣結合蛋白生成中的用途，發明人生成了抗CD3/抗CD123抗體樣結合蛋白並證明了其治療用途。那些雙特異性抗CD3/抗CD123抗體樣結合蛋白具有低T-細胞活化，如對單獨的抗CD3抗體所觀察。然而，一旦CD12表現的靶細胞如THP-1細胞存在，所述雙特異性抗CD3/抗CD123抗體樣結合蛋白展示高T-細胞活化。相應地，上文定義的本發明的抗CD3抗體對於本發明抗體樣結合蛋白的製備特別有效。
定義
貫穿本發明，術語“和/或”是語法上的結合進而應理解為其連接的涵蓋一種或多種情況可發生。例如，詞語"這種天然序列蛋白可使用標準重組和/或合成方法製備"這一表述表明天然的序列蛋白可使用標準重組和合成方法製備或天然序列蛋白可使用標準重組方法或天然序列蛋白可使用合成方法製備。
此外，貫穿本發明，術語“包含”應理解為涵蓋全部具體提及的特徵以及任選的、額外的、未描述的一些。如本文使用，術語“包含”的使用還公開給出其中除具體提及的特徵而無其他特徵的具體實例(即“由...組成”)。此外，不定冠詞"一個"或"一種"不排除複數。某些措施記載在相互不同的從屬請求項中這一事實並不表明不能有利地使用這些措施的組合。
術語"基因"意為編碼或對應包含一個或多個蛋白或酶的特定胺基酸序列的DNA序列，且可包含或不包含調節性DNA序列如啟動子序列(其例如確定在何種條件下基因表現)。一些並非為結構基因的基因，可從DNA轉錄成RNA，但不翻譯成胺基酸序列。其他基因可作為結構基因的調節子或作為DNA轉錄的調節子發揮功能。具體地，術語基因可以表示編碼蛋白的基因組序列，即包含調節子、啟動子、內含子和外顯子序列的序列。
“與參照序列至少85%相同”的序列是在其全長上與參照序列的全長具有85%或更多，具體地90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性的序列。
在本發明的上下文中，“同一性的百分比”使用全域雙序列比對(即將兩序列在其全長上比較)計算。用於比對兩或多序列同一性的方法為本領域熟知。當考慮其全長時，例如可使用應用Needleman-Wunsch全域比對算法的«needle»程序(Needleman and Wunsch,1970 J.Mol.Biol.48：443-453)已發現兩序列的最佳排列(包括缺口)。Needle程序例如可在ebi.ac.uk全球網站上獲得。依據本發明兩多肽間同一性的百分比使用具有“缺口開放”參數等於10.0、“缺口延伸(Gap Extend)”參數等於0.5和Blosum62矩陣的EMBOSS：needle(global)程序計算。
由與參照序列“至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%相同”的胺基酸序列組成的蛋白與參照序列相比可包含突變如缺失、插入和/或取代。在取代的情況中，由與參照序列至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%相同的胺基酸序列組成的蛋白可對應源自不同於參照序列的物種的同源序列。
“胺基酸取代”可以是保守或非保守的。優選地，取代為保守取代，其中一個胺基酸由具有相似結構和/或化學性質的另一胺基酸取代。 所述取代優選對應如下表所示的保守取代。
Figure 110113349-A0101-12-0005-3
“抗體”也稱為“免疫球蛋白“其可以是天然或常規的抗體，其中兩條重鏈通過二硫鍵彼此連接且每條重鏈與輕鏈通過二硫鍵連接。存在兩種類型的輕鏈，λ(l)和κ(k)。存在五種主要的重鏈種類(或同型)，其決定抗體分子的功能活性：IgM、IgD、IgG、IgA和IgE。每種鏈包含不同的序列結構域。輕鏈包括兩個結構域或區，可變結構域(VL)和恒定結構域(CL)。重鏈包括四個結構域，可變結構域(VH)和三個恒定結構域(CH1、CH2和CH3，統稱為CH)。輕鏈(VL)和重鏈(VH)的可變區都決定對抗原的結合識別和特異性。輕鏈的恒定結構域(CL)和重鏈的恒定結構域(CH)賦予重要的生物性質如抗體鏈結合、分泌、經胎盤的移動性、補體結合和與Fc受體(FcR)的結合。Fv片段是免疫球蛋白Fab片段的N-末端部分且由一條輕鏈和一條重鏈的可變部分組成。抗體的特異性取決於抗體結合位點和抗原決定區間的結構互補。抗體結合位點由主要來自高度可變區或互補決定區(CDR)的殘基組成。偶爾，來自非高度可變或框架區(FR)的殘基影響整體結構域結構且進而影響結合位點。互補決定區或CDR指共同限定結合親和力和天然免疫球蛋白結合位點天然Fv區的特異性的胺基酸序列。免疫球蛋白的輕鏈和重鏈各具有三個CDR，分別稱為CDR1-L、CDR2-L、CDR3-L和CDR1-H、CDR2-H、CDR3-H。常規抗體抗原結合位點因此包括六個CDR，包含來自每個重鏈和輕鏈V區的CDR集合。
在本發明的上下文中，抗體或免疫球蛋白是IgM、IgD、IgG、IgA和IgE。
“框架區”(FR)指插入CDR間的胺基酸序列，即指在單一物種中不同的免疫球蛋白間相對保守的免疫球蛋白的輕鏈和重鏈可變區的那些部分。免疫球蛋白的輕鏈和重鏈各具有四個FR，分別稱為FR1-L、FR2-L、FR3-L、FR4-L和FR1-H、FR2-H、FR3-H、FR4-H。相應地，輕鏈可變結構域可因此稱作(FR1-L)-(CDR1-L)-(FR2-L)-(CDR2-L)-(FR3-L)-(CDR3-L)-(FR4-L)且重鏈可變結構域可因此表示為(FR1-H)-(CDR1-H)-(FR2-H)-(CDR2-H)-(FR3-H)-(CDR3-H)-(FR4-H)。
獲知CDR的胺基酸序列，本領域的技術人員可輕易確定框架區FR1-L、FR2-L、FR3-L、FR4-L和/或FR1-H、FR2-H、FR3-H、FR4-H。
如本文使用的"人框架區"是與天然存在的人抗體的框架區基本相同的(約85%或更多，具體地90%、95%、97%、99%或100%)框架區。
在本發明的上下文中，免疫球蛋白輕鏈或重鏈中CDR/FR的限定基於IMGT的定義確定(Lefranc et al.Dev.Comp.Immunol.,2003,27(1)：55-77；www.imgt.org)。
如本實驗的術語“抗體”指代常規抗體及其片段以及單結構域抗體及其片段，具體地單結構域抗體的可變重鏈和嵌合、人源化、雙特異性或多重特異性抗體。
如本文使用的抗體或免疫球蛋白還包括近來更多描述且其互補決定區是單結構域多肽部分的“單結構域抗體”。單結構域抗體的實例包括重鏈抗體、天然缺乏輕鏈的抗體、源自常規四鏈抗體的單結構域抗體、工程化單結構域抗體。單結構域抗體可源自任何物種，包括但不限於小鼠、 人、駱駝、美洲駝、羊、兔、牛。單結構域抗體可以是天然存在的已知為缺乏輕鏈的重鏈抗體的單結構域抗體。具體地，駱駝科(Camelidae)物種例如駱駝，單峰駱駝、美洲駝、羊駝和原駝產生天然缺乏輕鏈的重鏈抗體。駱駝的重鏈抗體也缺乏CH1結構域。
這些缺乏輕鏈的單結構域抗體的可變重鏈在本領域中已知為“VHH”或“奈米抗體”。與常規VH結構域相似的是VHH包含四個FR和三個CDR。奈米抗體比常規抗體具有優勢：其比IgG分子小約十倍，且作為結果恰當折疊的功能性奈米抗體可通過體外表現產生並獲得高產量。此外，奈米抗體非常穩定，且能抵抗蛋白酶的作用。Harmsen和De Haard HJ(Appl.Microbiol.Biotechnol.2007 Nov；77(1)：13-22)已對奈米抗體的性質和產生進行了綜述。
如本文使用的術語“單株抗體”或“mAb”指針對特定抗原的具有單一胺基酸組成的抗體分子，且不應理解為需要通過任何特定方法產生該抗體。單株抗體可由B細胞或融合瘤的單一克隆產生，但還可為重組的，即通過蛋白工程產生。
術語“嵌合抗體”指其最廣泛意義上含有來自一種抗體的一個或多個區和來自一種或多種其他抗體的一個或多個區的工程化抗體。具體而言，嵌合抗體包含衍生自非人動物的抗體的VH結構域和VL結構域，其與另一抗體(具體而言人抗體)的CH結構域和CL結構域聯合。作為非人動物，可使用任何動物，例如小鼠、大鼠、倉鼠、兔等等。嵌合抗體還可指對至少兩種不同抗原具有特異性的多特異性抗體。
術語“人源化抗體”指起初完全或部分為非人來源，且已經修飾以置換某些胺基酸(具體而言重鏈和輕鏈的框架區中的胺基酸)以避免或最小化人中的免疫反應的抗體。人源化抗體的恒定結構域大多數為人CH和 CL結構域。
多種用於抗體序列人源化的方法為本領域已知；參見例如Almagro和Fransson(2008)Front Biosci.13：1619-1633。一種常用方法是CDR移植或抗體重塑，其牽涉將供體抗體、通常為小鼠抗體的CDR序列移植入具有不同特異性的人抗體的框架支架中。由於CDR移植可降低CDR移植的非人抗體的結合特異性和親和性，且因此降低生物活性，所以可在CDR移植抗體的所選位置引入回復突變進而保留親代抗體的結合特異性和親和性。可使用可在文獻和抗體數據庫中獲得的信息實施用於可能的恢復突變的位點識別。用於回復突變的候選者的胺基酸殘基通常是位於抗體分子的表面的那些，而包埋或具有低表面暴露度的殘基通常將不發生變化。CDR移植和回復突變的替代性人源化技術是表面重修(resurfacing)，其中保留非人來源的非表面暴露殘基，而將表面殘基改變為人殘基。另一可替代的技術稱為“引導選擇”(Jespers et al,(1994)Biotechnology 12,899)且可用於從鼠類或大鼠抗體衍生保留親代抗體表位和結合特徵的全人抗體。人源化的另一方法稱為4D人源化。4D人源化方案描述於專利申請US20110027266 A1(WO2009032661A1)且例證於下列4D人源化的應用以人源化大鼠抗體可變輕鏈(VL)和可變重鏈(VH)結構域。在一個實例中，大鼠抗體同源模型用典型的MOE軟體(v.2011.10-Chemical Computing Group,Quebec,Canada)使用PDB結構(Berman et al.,Nucleic Acids Research,2000,28：235-242)作為模板完成且隨後使用MOE中實施的標準步驟最小化能量。隨後在大鼠抗體上的微小化3D同源模型(用MOE軟體完成)上實施分子動態(MD)模擬並與例如源自由LGCR/SDI設計的7種代表性輕鏈(vk1、vk2、vk3、vk4、vλ1、vλ2、vλ3)和7種代表性重鏈(vh1a、vh1b、vh2、vh3、vh4、vh5、vh6)且在MOE內可獲得的49種人模型進行了比較。例如，選擇了疏水性、靜電組分和CDR外的 序列同一性都最佳的鏈對的一個模型(Vkx-Vhx)用於“4D人源化”。對於大鼠抗體可變結構域和所選模型間的配對締合，通常基於相應同源模型的α碳的最佳3D疊加比對序列。隨後考慮並突變不想要的基序(motifs)。最後，獲得的人源化序列針對序列相似性進行使用例如IEDB數據庫(http：//www.immuneepitope.org；版本2012/01/30本地可獲得)比對以確保無序列包含任何列舉的已知B-或T-細胞表位。
對於嵌合抗體，人源化通常涉及可變區序列框架區的修飾。
CDR部分的胺基酸殘基通常在人源化方面將不改變，儘管在一些情況中，想要改變個體CDR胺基酸殘基，例如以去除糖基化位點、脫醯胺位點和不想要的半胱胺酸殘基。N-連接的糖基化通過三肽序列Asn-X-Ser或Asn-X-Thr中寡糖鏈附著至天冬胺酸殘基發生，其中X可以是除Pro外的任何胺基酸。N-糖基化位點的去除可通過突變Asn或Ser/Thr殘基至不同殘基實現，具體地通過保守取代的方式。天冬醯胺和穀胺醯胺殘基的去醯胺可取決於因素如pH和表面暴露的發生。天冬醯胺殘基通常對去醯胺易感，首要是當存在於序列Asn-Gly中時，且在其他二肽序列如Asn-Ala中程度較少。當該去醯胺位點特別是Asn-Gly存在於CDR序列中，因此可預期通常通過保守取代去除所述位點以去除牽涉的殘基之一。CDR序列中的取代以去除牽涉的殘基之一也意在涵蓋於本發明中。
(常規)抗體的“片段”包含完整抗體的一部分，具體而言完整抗體的抗原結合區或可變區。抗體片段的實例包括由抗體片段形成的Fv、Fab、F(ab’)2、Fab’、dsFv、(dsFv)2、scFv、sc(Fv)2、雙抗體、雙特異性和多特異性抗體。常規抗體的片段還可為單一結構域抗體，例如重鏈抗體或VHH。
術語“Fab”表示具有約50,000分子量和抗原結合活性的抗體 片段，其中在藉由用蛋白酶木瓜蛋白酶處理IgG獲得的片段中，H鏈的N末端側的約一半和整個L鏈通過二硫鍵結合在一起。
術語“F(ab’)2”是指具有約100,000的分子量和抗原結合活性的抗體片段，在藉由用蛋白酶胃蛋白酶處理IgG所獲得的片段中，其稍大於經由鉸鏈區域的二硫鍵結合的Fab。
術語“Fab'”指具有約50,000分子量和抗原結合活性的抗體片段，其藉由剪切F(ab')2鉸鏈區的二硫鍵獲得。
單鏈Fv(“scFv”)多肽是共價連接的VH：：VL異源二聚體，其通常由包括藉由肽編碼連接子(linker)連接的編碼VH和VL的基因的基因融合表現。本發明的人scFv片段包括具體而言藉由使用基因重組技術來保持適當構象的CDR。二價和多價抗體片段可自發地藉由單價scFv締合來形成，或可通過肽連接子偶聯單價scFv來生成，例如二價sc(Fv)2。“dsFv”是藉由二硫鍵穩定的VH：：VL異源二聚體。“(dsFv)2”指兩個通過肽連接子偶聯的dsFv。
術語“雙特異性抗體”或“BsAb”一般指將兩個抗體的抗原結合位點結合於單一分子內的抗體。因此，BsAb能夠同時結合兩種不同抗原。已經使用基因工程以越來越高的頻率設計、修飾並產生具有一組預期的結合性質和效應功能的抗體或抗體衍生物，例如如EP 2 050 764 A1中所述。
術語“多特異性抗體”指將兩種或更多種抗體的抗原結合位點結合於單一分子內的抗體。
術語“雙抗體”指具有兩個抗原結合位點的小抗體片段，所述片段包含在同一多肽鏈(VH-VL)中與輕鏈可變結構域(VL)連接的重鏈可變結構域(VH)。藉由使用過短而不允許同一鏈上的兩個結構域之間配對的連接子，迫使所述結構域與另一鏈的互補結構域配對並形成兩個抗原結合位 點。
術語“融合瘤”指一種細胞，其通過將由用抗原免疫非人哺乳動物製備的B細胞與衍生自小鼠等等的產生具有抗原特異性的預期單株抗體的骨髓瘤細胞進行細胞融合來獲得。
當指代多肽(即本發明的抗體)或核苷酸序列時，“純化”和“分離”意為指示的分子在基本上不存在相同類型的其他生物大分子的情況下存在。具體而言，如本文使用的術語“純化”意為存在至少75%、85%、95%或98%重量的相同類型的生物大分子。編碼特定多肽的“分離”核酸分子指實質上不含其他不編碼主題多肽的核酸分子的核酸分子；然而，該分子可包含一些不會不利地影響組合物基本特性的其他鹼基或部分。
如本文使用的術語"抗原"或"靶抗原"指能夠由抗體或抗體樣結合蛋白所結合的分子或分子的部分。該術語進一步指能夠用於動物以產生能夠與該抗原的表位結合的抗體的分子或分子的部分。靶抗原可具有一個或多個表位。對於每種由抗體或由抗體樣結合蛋白識別的靶抗原，抗體樣結合蛋白能夠與識別靶抗原的完整抗體競爭。
“親和力”理論上通過完整抗體和抗原間的平衡締合來定義。親和力可以例如由半數最大有效濃度(EC50)或平衡解離常數(KD)表述。
“半數最大有效濃度”還稱為“EC50“，指特定暴露時間後在基線和最大值間誘導一半反應的藥物、抗體或或毒物的濃度。EC50和親和力呈負相關，EC50值越低，抗體的親和力越高。
“KD“是平衡解離常數，是抗體和其抗原間koff/kon的比率。KD和親和力呈負相關。KD值涉及抗體濃度且KD值越低，抗體的親和力越高。親和力可藉由多種已知的方法實驗性評估，如用表面等離子體共振測量締合和解離速率或在免疫化學試驗(ELISA、FACS)中測量EC50。酶聯免疫吸 附試驗(ELISA)是一種生化試驗，其使用固相酶免疫試驗以檢測物質的存在，通常是在液體樣品或濕性樣品中的抗原。來自樣品的抗原附著至表面。隨後，將另一特異性抗體應用至表面進而其可與抗原結合。該抗體連接至酶，其在最終步驟中，添加包含酶的底物的物質。後續反應產生可檢測的信號，最常用的是底物中的顏色改變。螢光活化的細胞分選(FACS)提供用於將生物細胞的非均勻混合物分選入兩個或多個容器的方法，一個細胞一次，基於每個細胞的特定光散射和螢光特性。在這些試驗中，EC50是通過ELISA(酶聯免疫吸附試驗)暴露至定義的抗原濃度或通過FACS(螢光活化細胞分選)的表現所述抗原的細胞上一些特定時間後誘導基線和最大值間一半反應的抗體濃度。表面等離子體共振是無標記的方法，其中可溶相(“分析物”)中分子的結合直接測量成在感應器表面上固定的“配體”分子。在感應裝置中，配體的結合藉由稱為表面等離子體的光學現象監測。具體地，當“分析物”分子從“配體”分子解離時，觀察到SPR信號(共振單元中表現，RU)的減少。締合('開速率'，k a)和解離速率('關速率'，k d)從締合和解離過程中獲得的信號取得，且由此計算平衡解離常數('結合常數'，K D)和尤其計算。共振單元(RU)中給出的信號取決於分析物中存在的配體大小，然而在實驗條件相同的情況中，即配體是在相同條件的相同分子，獲得的RU可表示親和力，其中RU中獲得的信號越高，結合越高。
當對於兩種抗原EC50在相似範圍時，與抗原1(Ag1)結合的單株抗體與抗原2(Ag2)“交叉反應”。在本申請中，用相同方法針對兩種抗原測量親和力，當Ag2的親和力比Ag1的親和力的比率等於或小於10(具體地5、2、1或0.5)時，與Ag1結合的單株抗體與Ag2交叉反應。
當針對兩抗原的親和力非常不同時，與Ag1結合的單株抗體與Ag2“不顯著交叉反應”。如果結合反應過低，針對Ag2的親和力可能不可 測量。在本發明中，在相同的實驗設置和相同抗體濃度中，如果單株抗體對Ag2的結合反應小於相同單株抗體對Ag1的結合反應的5%時，則與Ag1結合的單株抗體與Ag2不顯著交叉反應。實踐中，使用的抗體濃度可以是EC50或用Ag1獲得達到飽和平臺所需的濃度。
如本文使用的“特異性”指代抗體從高度相關、高度同源的肽序列辨析其結合(“表位”)的靶肽序列的能力。
當其不與Ag2顯著交叉反應時，單株抗體與Ag1“特異性結合”。
“結構域”可以是蛋白的任何區，一般基於序列同源性限定且通常涉及特定結構或功能實體。
"重組"分子是通過重組方式製備、表現、生成或分離的那些分子。
如本文使用的“受試者”指代哺乳動物，如齧齒動物、貓科動物、犬科動物和靈長類動物。具體地，根據本發明的受試者是人。
抗CD3抗體
“CD3”指代作為多分子T-細胞受體複合物的部分表現在T-細胞上且由至少由三條不同的鏈CD3ε、CD3δ和CD3γ組成的抗原。CD3δ和CD3γ具有低序列同一性和/或與人CD3ε的相似性(相似性和同一性小於20%)。CD3ε和CDR3δ可共同形成複合物，在本文稱為“CD3ε/δ-複合物”。CD3ε還與CDR3γ形成的複合物，其稱為“CD3ε/γ-複合物”。T-細胞上的CD3簇(例如藉由固定的抗CD3-抗體)導致T-細胞受體參與相似的T-細胞活化但不依賴於其選殖株典型特異性。“CD3ε”包含三個結構域，細胞內結構域、跨膜結構域和細胞外結構域。
大多現有抗CD3抗體識別CD3ε-鏈。這些現有抗CD3-抗體之 一是OKT3。現有技術已列舉採用抗體分子的T細胞活化，例如通過採用抗體分子OKT3。抗CD3抗體及其變體已描述於現有技術(US 4,361,549；US 4,361,549；US 5,885,573；US 5,929,212和WO 98/52975或US 5,955,358)。OKT3已進一步在臨床移植中用作強效免疫抑制劑以治療同種異體移植排斥(Thistlethwaite 1984,Transplantation 38,695-701；Woodle 1991,Transplantation 51,1207-1212；Choi 2001,Eur.J.Immunol.31(1),94-106)。
該療法的主要缺點是T細胞活化由於T細胞和具有FcγR的細胞間的交聯和人抗小鼠抗體(HAMA)反應顯現細胞因子釋放。數篇出版物已描述改變如OKT3的人源化減少這些副作用：US 5,929,212；US 5,885,573和其他。另一方面，OKT3或其他抗CD3-抗體可用作免疫增強劑以刺激T細胞活化和增殖(US 6,406,696 Bluestone；US 6,143,297 Bluestone；US 6,113,901 Bluestone；Yannelly 1990,J.Immunol.Meth.1,91-100)。抗CD3-抗體還已描述作為與抗CD28-抗體的組合使用以誘導T細胞增殖(US 6,352,694)。OKT3已進一步通過其自身或作為雙特異性抗體的組分使用以靶向細胞毒性T細胞至腫瘤細胞或病毒感染的細胞(Nitta 1990,Lancet 335,368-376；Sanna 1995,Bio/Technology 13,1221-1224；WO 99/54440)。
目前現有的使用抗體作為作用劑用於招募T-細胞的方式已通過數項發現受到限制。首先，具有與T-細胞高親和力的天然或工程化抗體經常不活化與之結合的T-細胞。第二，具有與T-細胞低親和力的天然或工程化抗體經常無法有效地觸發T-細胞介導的細胞裂解能力。
包括信號肽的全長人CD3ε蛋白的參照可從Uniprot數據庫登錄號P07766下獲得且本文公開在SEQ ID NO：1(2014年12月12日可獲得)下。
包括信號肽的全長食蟹猴CD3ε蛋白的參照序列可從Uniprot數據庫登錄號Q95LI5下獲得且本文公開在SEQ ID NO：2(2014年12月12日 可獲得)下。
由發明人從基因組DNA選殖的序列成熟人CD3ε His-標簽Fc-融合蛋白的序列公開於SEQ ID NO：3下。所述成熟的人CD3ε His-標簽Fc-融合蛋白包含全長人CD3ε蛋白的胺基酸23至126且因此包含人CD3ε的細胞外結構域。
通過發明從基因組DNA選殖的成熟的食蟹猴CD3ε Fc-融合蛋白序列在SEQ ID NO：4下公開。所述成熟的食蟹猴CD3ε Fc-融合蛋白包含全長食蟹猴CD3ε蛋白的胺基酸23-117且因此包含人或食蟹猴CD3ε的細胞外結構域，與野生型序列的胺基酸位置57相比在胺基酸位置35處含有一個丙胺酸至纈胺酸的交換。
人和食蟹猴CD3ε的結構域組織如下(基於Uniprot P07766序列(人)和Uniprot Q95LI5序列(食蟹猴))：
Figure 110113349-A0101-12-0015-4
相應地，人CD3ε的細胞外結構域由SEQ ID NO：1的位置23-126處的胺基酸組成且食蟹猴CD3ε的細胞外結構域由SEQ ID NO：2位置22-117處的胺基酸組成。
發明人成功生成、篩選並選擇了特異性小鼠和大鼠抗CD3抗體。這些抗CD3抗體展示對於人和食蟹猴CD3蛋白的高親和力，但是在靶細胞不存在時具有低T-細胞活化。
本發明確定這種單株抗體可變重鏈和輕鏈的序列，其稱為抗CD3抗體“20G6-F3”、“4B4-D7”、“4E7-C9”、“18F5-H10”、“12D2-E5”、 “11D7-C3”、“11H3-E5”、“13H2-C2”、“13C1-F6”、“18H11-F10”、“1E6-C9”、“10F4-C10”、“10E6-G6”、“18G9-H11”、“11F3-B9”、“12G3-E8”、“5B1-G2”、“16F8-A7”、“11F9-F8”、“3G5-E10”、“9D7-F3”、“8C2-F7”、“20E5-F10”、“20B5-F10”、“6C9-C9”、“3E8-G1”、“3H6-D2”和“8H2”。
稱為“20G6-F3”的抗CD3抗體包含：
- 重鏈可變結構域，其由下列序列組成
Figure 110113349-A0101-12-0016-5
Figure 110113349-A0101-12-0016-6
(SEQ ID NO：5，其中CDR以粗體 和下劃線顯示)，含有序列SEQ ID NO：6的CDR1-H、序列SEQ ID NO：7的CDR2-H和序列SEQ ID NO：8的CDR3-H，和
- 輕鏈可變結構域，其由下列序列組成
Figure 110113349-A0101-12-0016-7
Figure 110113349-A0101-12-0016-8
(SEQ ID NO：9，其中CDR以粗體和下劃線顯示)，含 有序列SEQ ID NO：10的CDR1-L、序列‘KVS’組成的CDR2-L和序列SEQ ID NO：11的CDR3-L。
稱為“4B4-D7”的抗CD3抗體包含：
- 重鏈可變結構域，其由下列序列組成
Figure 110113349-A0101-12-0016-9
Figure 110113349-A0101-12-0016-10
(SEQ ID NO：12，其中CDR以粗 體和下劃線顯示)，含有序列SEQ ID NO：13的CDR1-H、序列SEQ ID NO：14的CDR2-H和序列SEQ ID NO：15的CDR3-H，和
- 輕鏈可變結構域，其由下列序列組成
Figure 110113349-A0101-12-0017-11
Figure 110113349-A0101-12-0017-12
(SEQ ID NO：16，其中CDR以粗體和下劃線顯示)，含 有序列SEQ ID NO：17的CDR1-L、序列‘KVS’組的CDR2-L和序列SEQ ID NO：11的CDR3-L。
稱為“4E7-C9”的抗CD3抗體包含：
- 重鏈可變結構域，其由下列序列組成
Figure 110113349-A0101-12-0017-13
Figure 110113349-A0101-12-0017-14
(SEQ ID NO：18，其中CDR以粗 體和下劃線顯示)，含有序列SEQ ID NO：13的CDR1-H、序列SEQ ID NO：19的CDR2-H和序列SEQ ID NO：20的CDR3-H，和
- 輕鏈可變結構域，其由下列序列組成
Figure 110113349-A0101-12-0017-17
Figure 110113349-A0101-12-0017-18
(SEQ ID NO：21，其中CDR以粗體和下劃線顯示)，含 有序列SEQ ID NO：22的CDR1-L、序列‘KVS’組成的CDR2-L和序列SEQ ID NO：11的CDR3-L。
稱為“18F5-H10”的抗CD3抗體包含：
- 重鏈可變結構域，其由下列序列組成
Figure 110113349-A0101-12-0017-15
Figure 110113349-A0101-12-0017-16
(SEQ ID NO：23，其中CDR以粗 體和下劃線顯示)，含有序列SEQ ID NO：24的CDR1-H、序列SEQ ID NO：19的CDR2-H和序列SEQ ID NO：25的CDR3-H，和
- 輕鏈可變結構域，其由下列序列組成
Figure 110113349-A0101-12-0018-25
Figure 110113349-A0101-12-0018-26
(SEQ ID NO：26，其中CDR以粗體和下劃線顯示)，含有 序列SEQ ID NO：27的CDR1-L、序列‘KVS’組成的CDR2-L和序列SEQ ID NO：28的CDR3-L。
稱為“12D2-E5”的抗CD3抗體包含：
- 重鏈可變結構域，其由下列序列組成
Figure 110113349-A0101-12-0018-23
Figure 110113349-A0101-12-0018-24
(SEQ ID NO：29，其中CDR以粗體和 下劃線顯示)，含有序列SEQ ID NO：30的CDR1-H、序列SEQ ID NO：31的CDR2-H和序列SEQ ID NO：32的CDR3-H，和
- 輕鏈可變結構域，其由下列序列組成
Figure 110113349-A0101-12-0018-20
Figure 110113349-A0101-12-0018-21
(SEQ ID NO：33，其中CDR以粗體和下劃線顯示)，含有序 列SEQ ID NO：34的CDR1-L、序列‘RDD’組成的CDR2-L和序列SEQ ID NO：35的CDR3-L。
稱為“11D7-C3”的抗CD3抗體包含：
- 重鏈可變結構域，其由下列序列組成
Figure 110113349-A0101-12-0018-19
Figure 110113349-A0101-12-0019-28
Figure 110113349-A0101-12-0019-29
(SEQ ID NO：36，其中CDR以粗 體和下劃線顯示)，含有序列SEQ ID NO：13的CDR1-H、序列SEQ ID NO：37的CDR2-H和序列SEQ ID NO：38的CDR3-H。
- 輕鏈可變結構域，其由下列序列組成
Figure 110113349-A0101-12-0019-30
Figure 110113349-A0101-12-0019-31
(SEQ ID NO：39，其中CDR以粗體和下劃線顯示)，含 有序列SEQ ID NO：10的CDR1-L、序列‘KVS’組成的CDR2-L和序列SEQ ID NO：28的CDR3-L。
稱為“11H3-E5”的抗CD3抗體包含：
- 重鏈可變結構域，其由下列序列組成
Figure 110113349-A0101-12-0019-32
Figure 110113349-A0101-12-0019-33
(SEQ ID NO：40，其中CDR以粗體 和下劃線顯示)，含有序列SEQ ID NO：13的CDR1-H、序列SEQ ID NO：37的CDR2-H和序列SEQ ID NO：41的CDR3-H，和
- 輕鏈可變結構域，其由下列序列組成
Figure 110113349-A0101-12-0019-34
Figure 110113349-A0101-12-0019-35
(SEQ ID NO：42，其中CDR以粗體和下劃線顯示)， 含有序列SEQ ID NO：17的CDR1-L、序列‘KVS’組成的CDR2-L和序列SEQ ID NO：11的CDR3-L。
稱為“13H2-C2”的抗CD3抗體包含：
- 重鏈可變結構域，其由下列序列組成
Figure 110113349-A0101-12-0020-36
Figure 110113349-A0101-12-0020-37
(SEQ ID NO：43，其中CDR以粗 體和下劃線顯示)，含有序列SEQ ID NO：13的CDR1-H、序列SEQ ID NO：37的CDR2-H和序列SEQ ID NO：44的CDR3-H，和
- 輕鏈可變結構域，其由下列序列組成
Figure 110113349-A0101-12-0020-38
Figure 110113349-A0101-12-0020-39
(SEQ ID NO：45，其中CDR以粗體和下劃線顯示)，含 有序列SEQ ID NO：10的CDR1-L、序列‘KVS’組成的CDR2-L和序列SEQ ID NO：11的CDR3-L。
稱為“13C1-F6”的抗CD3抗體包含：
- 重鏈可變結構域，其由下列序列組成
Figure 110113349-A0101-12-0020-40
Figure 110113349-A0101-12-0020-41
(SEQ ID NO：46，其中CDR以粗體 和下劃線顯示)，含有序列SEQ ID NO：13的CDR1-H、序列SEQ ID NO：37的CDR2-H和序列SEQ ID NO：47的CDR3-H，和
- 輕鏈可變結構域，其由下列序列組成
Figure 110113349-A0101-12-0020-42
Figure 110113349-A0101-12-0020-44
(SEQ ID NO：48，其中CDR以粗體和下劃線顯示)，含有 序列SEQ ID NO：10的CDR1-L、序列‘KVS’組成的CDR2-L和序列SEQ ID NO：11的CDR3-L。
稱為“18H11-F10”的抗CD3抗體包含：
- 重鏈可變結構域，其由下列序列組成
Figure 110113349-A0101-12-0021-45
Figure 110113349-A0101-12-0021-52
(SEQ ID NO：49，其中CDR以粗體和下 劃線顯示)，含有序列SEQ ID NO：50的CDR1-H、序列SEQ ID NO：51的CDR2-H和序列SEQ ID NO：52的CDR3-H，和
- 輕鏈可變結構域，其由下列序列組成
Figure 110113349-A0101-12-0021-46
Figure 110113349-A0101-12-0021-51
(SEQ ID NO：53，其中CDR以粗體和下劃線顯示)，含有序列SEQ ID NO：54的CDR1-L、序列‘NAN’組成的CDR2-L和序列SEQ ID NO：55的CDR3-L。
稱為“1E6-C9”的抗CD3抗體包含：
- 重鏈可變結構域，其由下列序列組成
Figure 110113349-A0101-12-0021-48
Figure 110113349-A0101-12-0021-50
(SEQ ID NO：56，其中CDR以粗體 和下劃線顯示)，含有序列SEQ ID NO：57的CDR1-H、序列SEQ ID NO：37的CDR2-H和序列SEQ ID NO：58的CDR3-H，和
- 輕鏈可變結構域，其由下列序列組成
Figure 110113349-A0101-12-0021-49
Figure 110113349-A0101-12-0022-61
(SEQ ID NO：59，其中CDR以粗體和下劃線顯示)，含 有序列SEQ ID NO：10的CDR1-L、序列‘KVS’組成的CDR2-L和序列SEQ ID NO：28的CDR3-L。
稱為“10F4-C10”的抗CD3抗體包含：
- 重鏈可變結構域，其由下列序列組成
Figure 110113349-A0101-12-0022-58
Figure 110113349-A0101-12-0022-59
(SEQ ID NO：60，其中CDR以粗體 和下劃線顯示)，含有序列SEQ ID NO：13的CDR1-H、序列SEQ ID NO：37的CDR2-H和序列SEQ ID NO：61的CDR3-H，和
- 輕鏈可變結構域，其由下列序列組成
Figure 110113349-A0101-12-0022-56
Figure 110113349-A0101-12-0022-57
(SEQ ID NO：62，其中CDR以粗體和下劃線顯示)，含 有序列SEQ ID NO：10的CDR1-L、序列‘KVS’組成的CDR2-L和序列SEQ ID NO：11的CDR3-L。
稱為“10E6-G6”的抗CD3抗體包含：
- 重鏈可變結構域，其由下列序列組成
Figure 110113349-A0101-12-0022-53
Figure 110113349-A0101-12-0022-54
(SEQ ID NO：63，其中CDR以粗體 和下劃線顯示)，含有序列SEQ ID NO：64的CDR1-H、序列SEQ ID NO：65的CDR2-H和序列SEQ ID NO：47的CDR3-L，和
- 輕鏈可變結構域，其由下列序列組成
Figure 110113349-A0101-12-0023-62
Figure 110113349-A0101-12-0023-63
(SEQ ID NO：66，其中CDR以粗體和下劃線顯示)，含 有序列SEQ ID NO：67的CDR1-L、序列‘KVS’組成的CDR2-L和序列SEQ ID NO：28的CDR3-L。
稱為“18G9-H11”的抗CD3抗體包含：
- 重鏈可變結構域，其由下列序列組成
Figure 110113349-A0101-12-0023-64
Figure 110113349-A0101-12-0023-65
(SEQ ID NO：68，其中CDR以粗 體和下劃線顯示)，含有序列SEQ ID NO：13的CDR1-H、序列SEQ ID NO：37的CDR2-H和序列SEQ ID NO：69的CDR3-H，和
- 輕鏈可變結構域，其由下列序列組成
Figure 110113349-A0101-12-0023-66
Figure 110113349-A0101-12-0023-67
(SEQ ID NO：70，其中CDR以粗體和下劃線顯示)，含 有序列SEQ ID NO：10的CDR1-L、序列‘KVS’組成的CDR2-L和序列SEQ ID NO：71的CDR3-L。
稱為“11F3-B9”的抗CD3抗體包含：
- 重鏈可變結構域，其由下列序列組成
Figure 110113349-A0101-12-0023-68
Figure 110113349-A0101-12-0023-69
(SEQ ID NO：72，其中CDR以粗體 和下劃線顯示)，含有序列SEQ ID NO：13的CDR1-H、序列SEQ ID NO：37 的CDR2-H和序列SEQ ID NO：84的CDR3-H，和
- 輕鏈可變結構域，其由下列序列組成
Figure 110113349-A0101-12-0024-70
Figure 110113349-A0101-12-0024-71
(SEQ ID NO：73，其中CDR以粗體和下劃線顯示)，含 有序列SEQ ID NO：17的CDR1-L、序列‘KVS’組成的CDR2-L和序列SEQ ID NO：11的CDR3-L。
稱為“12G3-E8”的抗CD3抗體包含：
- 重鏈可變結構域，其由下列序列組成
Figure 110113349-A0101-12-0024-72
Figure 110113349-A0101-12-0024-73
(SEQ ID NO：74，其中CDR 以粗體和下劃線顯示)，含有序列SEQ ID NO：75的CDR1-H、序列SEQ ID NO：76的CDR2-H和序列SEQ ID NO：77的CDR3-H，和
- 輕鏈可變結構域，其由下列序列組成
Figure 110113349-A0101-12-0024-74
Figure 110113349-A0101-12-0024-77
(SEQ ID NO：78，其中CDR以粗體和下劃線顯示)，含 有序列SEQ ID NO：10的CDR1-L、序列‘KVS’組成的CDR2-L和序列SEQ ID NO：11的CDR3-L。
稱為“5B1-G2”的抗CD3抗體包含：
- 重鏈可變結構域，其由下列序列組成
Figure 110113349-A0101-12-0024-76
Figure 110113349-A0101-12-0025-84
(SEQ ID NO：79，其中CDR以粗 體和下劃線顯示)，含有序列SEQ ID NO：80的CDR1-H、序列SEQ ID NO：76的CDR2-H和序列SEQ ID NO：81的CDR3-H，和
- 輕鏈可變結構域，其由下列序列組成
Figure 110113349-A0101-12-0025-80
Figure 110113349-A0101-12-0025-81
(SEQ ID NO：82，其中CDR以粗體和下劃線顯示)，含有 序列SEQ ID NO：10的CDR1-L、序列‘KVS’組成的CDR2-L和序列SEQ ID NO：11的CDR3-L。
稱為“16F8-A7”的抗CD3抗體包含：
- 重鏈可變結構域，其含有序列
Figure 110113349-A0101-12-0025-82
Figure 110113349-A0101-12-0025-83
(SEQ ID NO：83，其中CDR以粗體和下 劃線顯示)，含有序列SEQ ID NO：13的CDR1-H、序列SEQ ID NO：37的CDR2-H和序列SEQ ID NO：84的CDR3-H，和
- 輕鏈可變結構域，其由下列序列組成
Figure 110113349-A0101-12-0025-78
Figure 110113349-A0101-12-0025-79
(SEQ ID NO：85，其中CDR以粗體和下劃線顯示)，含 有序列SEQ ID NO：10的CDR1-L、序列‘KVS’組成的CDR2-L和序列SEQ ID NO：11的CDR3-L。
稱為“11F9-F8”的抗CD3抗體包含：
- 重鏈可變結構域，其由下列序列組成
Figure 110113349-A0101-12-0026-86
Figure 110113349-A0101-12-0026-88
(SEQ ID NO：46，其中CDR以粗體 和下劃線顯示)，含有序列SEQ ID NO：13的CDR1-H、序列SEQ ID NO：37的CDR2-H和序列SEQ ID NO：47的CDR3-H，和
- 輕鏈可變結構域，其由下列序列組成
Figure 110113349-A0101-12-0026-89
Figure 110113349-A0101-12-0026-90
(SEQ ID NO：87，其中CDR以粗體和下劃線顯示)，含 有序列SEQ ID NO：10的CDR1-L、序列‘KVS’組成的CDR2-L和序列SEQ ID NO：88的CDR3-L。
稱為“3G5-E10”的抗CD3抗體包含：
- 重鏈可變結構域，其由下列序列組成
Figure 110113349-A0101-12-0026-91
Figure 110113349-A0101-12-0026-92
(SEQ ID NO：89，其中CDR以粗體和下 劃線顯示)，含有序列SEQ ID NO：90的CDR1-H、序列SEQ ID NO：91的CDR2-H和序列SEQ ID NO：32的CDR3-H，和
- 輕鏈可變結構域，其由下列序列組成
Figure 110113349-A0101-12-0026-94
Figure 110113349-A0101-12-0026-95
(SEQ ID NO：92，其中CDR以粗體和下劃線顯示)，含有序 列SEQ ID NO：93的CDR1-L、序列‘GAS’組成的CDR2-L和序列SEQ ID NO：94的CDR3-L。
稱為“9D7-F3”的抗CD3抗體包含：
- 重鏈可變結構域，其由下列序列組成
Figure 110113349-A0101-12-0027-102
Figure 110113349-A0101-12-0027-103
(SEQ ID NO：95，其中CDR以粗體和 下劃線顯示)，含有序列SEQ ID NO：96的CDR1-H、序列SEQ ID NO：97的CDR2-H和序列SEQ ID NO：98的CDR3-H，和
- 輕鏈可變結構域，其由下列序列組成
Figure 110113349-A0101-12-0027-100
Figure 110113349-A0101-12-0027-101
(SEQ ID NO：99，其中CDR以粗體和下劃線顯示)，含有序列SEQ ID NO：100的CDR1-L、序列‘NTN’組成的CDR2-L和序列SEQ ID NO：101的CDR3-L。
稱為“8C2-F7”的抗CD3抗體包含：
- 重鏈可變結構域，其由下列序列組成
Figure 110113349-A0101-12-0027-98
Figure 110113349-A0101-12-0027-99
(SEQ ID NO：102，其中CDR以粗體和下劃線顯 示)，含有序列SEQ ID NO：103的CDR1-H、序列SEQ ID NO：104的CDR2-H和序列SEQ ID NO：105的CDR3-H，和
- 輕鏈可變結構域，其由下列序列組成
Figure 110113349-A0101-12-0027-96
Figure 110113349-A0101-12-0027-97
(SEQ ID NO：106，其中CDR以粗體和下劃線顯示)，含 有序列SEQ ID NO：10的CDR1-L、序列‘KVS’組成的CDR2-L和序列SEQ ID NO：11的CDR3-L。
稱為“20E5-F10”的抗CD3抗體包含：
- 重鏈可變結構域，其由下列序列組成
Figure 110113349-A0101-12-0028-109
Figure 110113349-A0101-12-0028-110
(SEQ ID NO：107，其中CDR以 粗體和下劃線顯示)，含有序列SEQ ID NO：80的CDR1-H、序列SEQ ID NO：19的CDR2-H和序列SEQ ID NO：108的CDR3-H，和
- 輕鏈可變結構域，其由下列序列組成
Figure 110113349-A0101-12-0028-107
Figure 110113349-A0101-12-0028-108
(SEQ ID NO：109，其中CDR以粗體和下劃線顯示)，含 有序列SEQ ID NO：10的CDR1-L、序列‘KVS’組成的CDR2-L和序列SEQ ID NO：11的CDR3-L。
稱為“20B5-F10”的抗CD3抗體包含：
- 重鏈可變結構域，其由下列序列組成
Figure 110113349-A0101-12-0028-105
Figure 110113349-A0101-12-0028-106
(SEQ ID NO：110，其中CDR以粗 體和下劃線顯示)，含有序列SEQ ID NO：13的CDR1-H、序列SEQ ID NO：37的CDR2-H和序列SEQ ID NO：111的CDR3-H，和
- 輕鏈可變結構域，其由下列序列組成
Figure 110113349-A0101-12-0028-104
Figure 110113349-A0101-12-0029-111
Figure 110113349-A0101-12-0029-112
(SEQ ID NO：112，其中CDR以粗體和下劃線顯示)， 含有序列SEQ ID NO：113的CDR1-L、序列‘KVS’組成的CDR2-L和序列SEQ ID NO：114的CDR3-L。
稱為“6C9-C9”的抗CD3抗體包含：
- 重鏈可變結構域，其由下列序列組成
Figure 110113349-A0101-12-0029-113
Figure 110113349-A0101-12-0029-114
(SEQ ID NO：115，其中CDR以粗 體和下劃線顯示)，含有序列SEQ ID NO：116的CDR1-H、序列SEQ ID NO：117的CDR2-H和序列SEQ ID NO：118的CDR3-H，和
- 輕鏈可變結構域，其由下列序列組成
Figure 110113349-A0101-12-0029-116
Figure 110113349-A0101-12-0029-117
(SEQ ID NO：119，其中CDR以粗體和下劃線顯示)，含有序列SEQ ID NO：100的CDR1-L、序列‘VTN’組成的CDR2-L和序列SEQ ID NO：120的CDR3-L。
稱為“3E8-G1”的抗CD3抗體包含：
- 重鏈可變結構域，其由下列序列組成
Figure 110113349-A0101-12-0029-118
Figure 110113349-A0101-12-0029-119
(SEQ ID NO：121，其中CDR以粗體和下 劃線顯示)，含有序列SEQ ID NO：122的CDR1-H、序列SEQ ID NO：123的CDR2-H和序列SEQ ID NO：124的CDR3-H，和
- 輕鏈可變結構域，其由下列序列組成
Figure 110113349-A0101-12-0030-126
Figure 110113349-A0101-12-0030-127
(SEQ ID NO：125，其中CDR以粗體和下劃線顯示)，含有 序列SEQ ID NO：126的CDR1-L、序列‘RDD’組成的CDR2-L和序列SEQ ID NO：127的CDR3-L。
稱為“3H6-D2”的抗CD3抗體包含：
- 重鏈可變結構域，其由下列序列組成
Figure 110113349-A0101-12-0030-124
Figure 110113349-A0101-12-0030-125
(SEQ ID NO：128，其中CDR 以粗體和下劃線顯示)，含有序列SEQ ID NO：13的CDR1-H、序列SEQ ID NO：19的CDR2-H和序列SEQ ID NO：129的CDR3-H，和
- 輕鏈可變結構域，其由下列序列組成
Figure 110113349-A0101-12-0030-122
Figure 110113349-A0101-12-0030-123
(SEQ ID NO：130，其中CDR以粗體和下劃線顯示)， 含有序列SEQ ID NO：10的CDR1-L、序列‘KVS’組成的CDR2-L和序列SEQ ID NO：11的CDR3-L。
稱為“8H2”的抗CD3抗體包含：
- 重鏈可變結構域，其由下列序列組成
Figure 110113349-A0101-12-0030-120
Figure 110113349-A0101-12-0030-121
(SEQ ID NO：131，其中CDR以粗體和下劃線 顯示)，含有序列SEQ ID NO：103的CDR1-H、序列SEQ ID NO：104的CDR2-H和序列SEQ ID NO：105的CDR3-H，和
- 輕鏈可變結構域，其由下列序列組成
Figure 110113349-A0101-12-0031-128
Figure 110113349-A0101-12-0031-129
(SEQ ID NO：132，其中CDR以粗體和下劃線顯示)，含 有序列SEQ ID NO：133的CDR1-L、序列‘LVS’組成的CDR2-L和序列SEQ ID NO：134的CDR3-L。
在具體實例中，本發明的抗CD3抗體與人CD3結合。在另一個具體實例中，本發明的抗CD3抗體還與食蟹猴CD3結合。具體地，本發明的抗CD3抗體與人CD3或人和食蟹猴CD3兩者的細胞外結構域結合。更具體地，所述抗體與CD3ε結合。更具體地，所述抗CD3抗體與人和食蟹猴CD3ε的細胞外結構域結合。當在複合物的形式如CD3ε/δ複合物中存在或作為單蛋白存在時，無論是在分離形式中表現還是存在於可溶性細胞外結構域或全長膜錨定的CD3ε中在例如存在於T-細胞中，所述抗CD3抗體與CD3ε結合。
根據本發明的抗CD3抗體特異性針對表面人CD3蛋白或人和食蟹猴CD3蛋白兩者，特別是CD3ε。
在具體實例中，根據本發明的抗CD3抗體對於食蟹猴CD3的親和力比對人CD3的親和力的比率(KD(食蟹猴)/KD(人))
Figure 110113349-A0101-12-0031-274
10，具體地
Figure 110113349-A0101-12-0031-275
6、
Figure 110113349-A0101-12-0031-282
5、
Figure 110113349-A0101-12-0031-277
4、
Figure 110113349-A0101-12-0031-278
3，例如
Figure 110113349-A0101-12-0031-279
2、
Figure 110113349-A0101-12-0031-280
1或
Figure 110113349-A0101-12-0031-281
0.5。這種根據本發明的多肽可用於在猴中實施的毒性研究，猴中觀察到的毒性概貌與在人中預期潛在的副作用相關。
具體地，本發明的抗CD3抗體不與CD3γ和/或CD3δ蛋白結合或不與CD3γ和/或CD3δ蛋白顯著交叉反應。
具體地，所述抗體不與人和食蟹猴CD3γ和/或CD3δ蛋白結合，或不與人和食蟹猴CD3γ和/或CD3δ蛋白顯著交叉反應。
全長人CD3δ蛋白序列可在Uniprot數據庫登錄號P04234下獲得(SEQ ID NO：86，2014年12月14日可獲得)。人CD3δ的細胞外結構域由SEQ ID NO：86位置22-105處的胺基酸組成。
全長人CD3γ蛋白的序列可在Uniprot數據庫登錄號P09693下獲得(SEQ ID NO：185，2014年12月14日可獲得)。人CD3γ的細胞外結構域由SEQ ID NO：185位置23-116處的胺基酸組成。
此外，根據本發明的抗CD3抗體對於人CD3或食蟹猴CD3或兩者的親和力(KD)
Figure 110113349-A0101-12-0032-264
90nM、
Figure 110113349-A0101-12-0032-265
50nM，或
Figure 110113349-A0101-12-0032-266
30nM，例如
Figure 110113349-A0101-12-0032-267
20nM、
Figure 110113349-A0101-12-0032-268
10nM、
Figure 110113349-A0101-12-0032-269
8nM、
Figure 110113349-A0101-12-0032-271
6nM、
Figure 110113349-A0101-12-0032-272
4nM或
Figure 110113349-A0101-12-0032-273
2nM，例如具有0.1nM-10nM的親和力，具體地0.1nM-8nM或0.1nM-4nM的親和力。
用使用來自人和食蟹猴的可溶性重組CD3ε/δ複合物作為捕獲抗原的表面等離子體共振確定對於人CD3或對於食蟹猴CD3的親和力的KD值。
在一個實例中，抗CD3抗體的結合親和力通過表面等離子體共振(SPR)使用例如Biacore3000儀器(GE Healthcare)測量。試驗緩衝劑為例如HBS-EP(BR-1001-88,GE Healthcare)。可使用實例中所述的Fc-融合蛋白形式的包含信號肽的抗原，例如人CD3ε和人CD3δ亞單元細胞外結構域構築體。可替換地，可使用實施例中所述的Fc-融合蛋白形式的包含信號肽的食蟹猴CD3ε和食蟹猴CD3δ亞單元細胞外結構域構築體作為抗原。人或食蟹猴CD3ε/δ-Fc融合蛋白的捕獲使用例如人抗體捕獲套組(GE Healthcare)實現。例如，捕獲的抗體可與CM5芯片(BR-1001-88,GE Healthcare)使用距離來說胺偶聯套組(BR-100-50,GE Healthcare)偶聯至例如大約12.000 RU。 CD3ε/δ-Fc融合蛋白以10μl/min捕獲至大約70 RU以獲得30 RU的Rmax值。對於抗CD3抗體的結合動力學可以例如30μl/min分別測量締合和解離階段240s和600s。例如，可使用在試驗緩衝劑中的3-400nM的抗CD3抗體二倍稀釋液。捕獲表面的生成可實施例如3M MgCl2溶液以30μl/min注射1min。對於數據分析可使用例如BIA評估軟體v.4.1(GE Healthcare)。數據可使用具有質量轉移的1：1 Langmuir模型全域擬合。
在具體實例中，本發明的抗CD3抗體還具有通過對人T-細胞的FACS分析確定的表觀EC50，其
Figure 110113349-A0101-12-0033-258
60nM，舉例來說
Figure 110113349-A0101-12-0033-259
50nM、
Figure 110113349-A0101-12-0033-260
40nM、
Figure 110113349-A0101-12-0033-261
30nM、
Figure 110113349-A0101-12-0033-262
20nM或
Figure 110113349-A0101-12-0033-263
15nM。通常，表觀EC50在1-60nM的範圍，特別是1-30nM，例如1-20nM。
在一個具體實例中，在靶細胞不存在時本發明的抗CD3抗體具有少於10%、少於8%、少於6%、少於4%、少於2%、少於1%，例如少於0.5%的T-細胞活化。
術語"T-細胞的活化"在本文指觸發涉及細胞毒性顆粒融合、瞬間細胞因子釋放和增殖的CD3信號。靶細胞存在時，本發明的抗體樣結合蛋白和抗CD3抗體靶向CD3ε並活化T-細胞；該活性也稱為“T-細胞銜接效應”。T-細胞銜接效應誘導靶細胞中的細胞毒性。
如本領域的技術人員已知，T-細胞的活化誘導表面標記物如CD69和CD25的表現。T-細胞的活化可因此通過檢測和測量CD4+/CD25+、CD4+/CD69+、CD8+/CD25+或CD8+/CD69+ T細胞測量。測量T-細胞活化的方法為本領域的技術人員已知。
測量T-細胞活化的方法還公開在實施例(實施例3.3)部分中。相應地，在本發明的上下文中，T-細胞活化作為總細胞數中表現CD69的細胞的百分比(%)測量，或作為總細胞數中表現CD4和CD69的細胞的百分 比(%)測量，或作為總細胞數中表現CD8和CD69的細胞的百分比(%)測量。
本發明上下文中的的抗CD3抗體的“低T-細胞活化”指靶細胞不存在時少於10%、少於8%、少於6%、少於4%、少於2%、少於1%，例如少於0.5%的T-細胞活化。
實施了“20G6-F3”、“4B4-D7”、“4E7-C9”、“18F5-H10”、“12D2-E5”、“11D7-C3”、“11H3-E5”、“13H2-C2”、“13C1-F6”、“18H11-F10”、“1E6-C9”、“10F4-C10”、“10E6-G6”、“18G9-H11”、“11F3-B9”、“12G3-E8”、“5B1-G2”、“16F8-A7”、“11F9-F8”、“3G5-E10”、“9D7-F3”、“8C2-F7”、“20E5-F10”、“20B5-F10”、“6C9-C9”、“3E8-G1”、“3H6-D2”和“8H2”抗CD3抗體VH和VL區的序列比對。CDR-H和CDR-L序列的比較傾向於表明結構上“20G6-F3”、“4B4-D7”、“4E7-C9”、“18F5-H10”、“11D7-C3”、“11H3-E5”、“13H2-C2”、“13C1-F6”、“1E6-C9”、“10F4-C10”、“10E6-G6”、“18G9-H11”、“11F3-B9”、“12G3-E8”、“5B1-G2”、“16F8-A7”、“11F9-F8”、“20E5-F10”、“20B5-F10”和“3H6-D2”密切相關，所述抗體可能與相同表位結合。所述相關抗體的CDR-H和CDR-L序列的比較分別在圖1和2中給出。識別了在抗體間嚴格保守的且認作對特異性至關重要的CDR位置，而其他位置可支持取代。
相應地，根據本發明的抗體包含：
- 重鏈可變結構域，其含有序列GFX1X2X3X4AW(SEQ ID NO：331)組成的CDR1-H，其中X1是T或S，X2是F或V，X3是S或T且X4是N、K、L或Y，或其任何組合，和
序列IKX1X2X3NX4YX5T(SEQ ID NO：332)組成的CDR2-H，其中X1是A或D，X2是K或R，X3是S或A，X4是N或S且X5是A或E，或其任何組合；和
序列TWRHYYSSHTMDA(SEQ ID NO：69)或RALTYYGYKKDAMDG(SEQ ID NO：129)或RX1X2X3YX4X5X6X7X8X9X10X11DX12(SEQ ID NO：333)組成的CDR3-H，其中X1是Y，G或A，X2V，T或L，X3是H、N、Y或Q，X4是G、R或A，X5是F或V或無胺基酸，X6是R或無胺基酸，X7是F、S或I或無胺基酸，X8是F、L、N、M、Y、S、A或G，X9是Y、A、K、S、N、T、F或L，X10是A、P、G或T，X11是M、L、F或S且X12是A、V或Y，或其任何組合，和
- 輕鏈可變結構域，其含有序列QX1LX2HX3NGX4TY(SEQ ID NO：334)組成的CDR1-L，其中X1是R或S，X2是V或E，X3是N、D或T且X4是N或Y，或其任何組合；和
序列‘KVS’組成的CDR2-L；和
序列GQGX1X2YPFT(SEQ ID NO：335)組成的CDR3-L，其中X1是T、A或S且X2是H、E或Q，或其任何組合。
根據具體實例，根據本發明的抗CD3抗體包含上文列舉的28種稱為“20G6-F3”、“4B4-D7”、“4E7-C9”、“18F5-H10”、“12D2-E5”、“11D7-C3”、“11H3-E5”、“13H2-C2”、“13C1-F6”、“18H11-F10”、“1E6-C9”、“10F4-C10”、“10E6-G6”、“18G9-H11”、“11F3-B9”、“12G3-E8”、“5B1-G2”、“16F8-A7”、“11F9-F8”、“3G5-E10”、“9D7-F3”、“8C2-F7”、“20E5-F10”、“20B5-F10”、“6C9-C9”、“3E8-G1”、“3H6-D2”和“8H2”抗CD3抗體之一的重鏈和/或輕鏈的CDR序列。
因此，本發明涉及抗CD3抗體，其包含：
a)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：6或與SEQ ID NO：6的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-H；序列SEQ ID NO：7或與 SEQ ID NO：7的區別在於一個或多個胺基酸取代的序列的CDR2-H；序列SEQ ID NO：8或與SEQ ID NO：8的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-H；和
輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：10或SEQ ID NO：142或與SEQ ID NO：10或SEQ ID NO：142的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-L；序列‘KVS’或與‘KVS’的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR2-L和序列SEQ ID NO：11或與SEQ ID NO：11的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-L；或
b)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：13或與SEQ ID NO：13的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-H；序列SEQ ID NO：14或與SEQ ID NO：14的區別在於一個或多個胺基酸取代的序列的CDR2-H；序列SEQ ID NO：15或與SEQ ID NO：15的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-H；和
輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：17或SEQ ID NO：184或與SEQ ID NO：17或SEQ ID NO：184的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-L；序列‘KVS’或與‘KVS’的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR2-L和序列SEQ ID NO：11或與SEQ ID NO：11的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-L；或
c)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：13或與SEQ ID NO：13的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-H；序列SEQ ID NO：19或與SEQ ID NO：19的區別在於一個或多個胺基酸取代的序列的CDR2-H；序列SEQ ID NO：20或與SEQ ID NO：20的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-H；和
輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：22或與SEQ ID NO：22的 區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-L；序列‘KVS’或與‘KVS’的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR2-L和序列SEQ ID NO：11或與SEQ ID NO：11的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-L；或
d)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：24或與SEQ ID NO：24的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-H；序列SEQ ID NO：19或與SEQ ID NO：19的區別在於一個或多個胺基酸取代的序列的CDR2-H；序列SEQ ID NO：25或與SEQ ID NO：25的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-H；和
輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：27或與SEQ ID NO：27的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-L；序列‘KVS’或與‘KVS’的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR2-L和序列SEQ ID NO：28或與SEQ ID NO：28的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-L；或
e)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：30或與SEQ ID NO：30的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-H；序列SEQ ID NO：31或與SEQ ID NO：31的區別在於一個或多個胺基酸取代的序列的CDR2-H；序列SEQ ID NO：32或與SEQ ID NO：32的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-H；和
輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：34或與SEQ ID NO：34的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-L；序列‘RDD’或與‘RDD’的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR2-L和序列SEQ ID NO：35或與SEQ ID NO：35的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-L；或
f)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：13或與SEQ ID NO：13的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-H；序列SEQ ID NO：37或與SEQ ID NO：37的區別在於一個或多個胺基酸取代的序列的CDR2-H；序列SEQ ID NO：38或與SEQ ID NO：38的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-H；和
輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：10或與SEQ ID NO：10的區別在於一個胺基酸取代的序列的CIDR1-L；序列‘KVS’或與‘KVS’的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR2-L和序列SEQ ID NO：28或與SEQ ID NO：28的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-L；或
g)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：13或與SEQ ID NO：13的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-H；序列SEQ ID NO：37或與SEQ ID NO：37的區別在於一個或多個胺基酸取代的序列的CDR2-H；序列SEQ ID NO：41或與SEQ ID NO：41的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-H；和
輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：17或與SEQ ID NO：17的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-L；序列‘KVS’或與‘KVS’的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR2-L和序列SEQ ID NO：11或與SEQ ID NO：11的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-L；或
h)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：13或與SEQ ID NO：13的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-H；序列SEQ ID NO：37或與SEQ ID NO：37的區別在於一個或多個胺基酸取代的序列的CDR2-H；序列SEQ ID NO：44或與SEQ ID NO：44的區別在於一個 胺基酸取代的序列的CDR3-H；和
輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：10或與SEQ ID NO：10的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-L；序列‘KVS’或與‘KVS’的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR2-L和序列SEQ ID NO：11或與SEQ ID NO：11的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-L；或
i)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：13或與SEQ ID NO：13的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-H；序列SEQ ID NO：37或與SEQ ID NO：37的區別在於一個或多個胺基酸取代的序列的CDR2-H；序列SEQ ID NO：47或與SEQ ID NO：47的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-H；和
輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：10或與SEQ ID NO：10的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-L；序列‘KVS’或與‘KVS’的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR2-L和序列SEQ ID NO：11或與SEQ ID NO：11的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-L；或
j)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：50或與SEQ ID NO：50的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-H；序列SEQ ID NO：51或與SEQ ID NO：51的區別在於一個或多個胺基酸取代的序列的CDR2-H；序列SEQ ID NO：52或與SEQ ID NO：52的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-H；和
輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：54或與SEQ ID NO：54的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-L；序列‘NAN’或與‘NAN’的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR2-L和序列SEQ ID NO： 55或與SEQ ID NO：55的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-L；或
k)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：57或與SEQ ID NO：57的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-H；序列SEQ ID NO：37或與SEQ ID NO：37的區別在於一個或多個胺基酸取代的序列的CDR2-H；序列SEQ ID NO：58或與SEQ ID NO：58的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-H；和
輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：10或與SEQ ID NO：10的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-L；序列‘KVS’或與‘KVS’的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR2-L和序列SEQ ID NO：28或與SEQ ID NO：28的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-L；或
l)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：13或與SEQ ID NO：13的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-H；序列SEQ ID NO：37或與SEQ ID NO：37的區別在於一個或多個胺基酸取代的序列的CDR2-H；序列SEQ ID NO：61或與SEQ ID NO：61的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-H；和
輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：10或與SEQ ID NO：10的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-L；序列‘KVS’或與‘KVS’的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR2-L和序列SEQ ID NO：11或與SEQ ID NO：11的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-L；或
m)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：64或與SEQ ID NO：64的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-H；序列SEQ ID NO：65或 與SEQ ID NO：65的區別在於一個或多個胺基酸取代的序列的CDR2-H；序列SEQ ID NO：47或與SEQ ID NO：47的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-H；和
輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：67或與SEQ ID NO：67的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-L；序列‘KVS’或與‘KVS’的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR2-L和序列SEQ ID NO：28或與SEQ ID NO：28的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-L；或
n)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：13或與SEQ ID NO：13的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-H；序列SEQ ID NO：37或與SEQ ID NO：37的區別在於一個或多個胺基酸取代的序列的CDR2-H；序列SEQ ID NO：69或與SEQ ID NO：69的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-H；和
輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：10或與SEQ ID NO：10的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-L；序列‘KVS’或與‘KVS’的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR2-L和序列SEQ ID NO：71或與SEQ ID NO：71的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-L；或
o)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：13或與SEQ ID NO：13的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-H；序列SEQ ID NO：37或與SEQ ID NO：37的區別在於一個或多個胺基酸取代的序列的CDR2-H；序列SEQ ID NO：84或與SEQ ID NO：84的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-H；和
輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：17或與SEQ ID NO：17的 區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-L；序列‘KVS’或與‘KVS’的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR2-L和序列SEQ ID NO：11或與SEQ ID NO：11的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-L；或
p)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：75或與SEQ ID NO：75的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-H；序列SEQ ID NO：76或與SEQ ID NO：76的區別在於一個或多個胺基酸取代的序列的CDR2-H；序列SEQ ID NO：77或與SEQ ID NO：77的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-H；和
輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：10或與SEQ ID NO：10的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-L；序列‘KVS’或與‘KVS’的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR2-L和序列SEQ ID NO：11或與SEQ ID NO：11的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-L；或
q)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：80或與SEQ ID NO：80的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-H；序列SEQ ID NO：76或與SEQ ID NO：76的區別在於一個或多個胺基酸取代的序列的CDR2-H；序列SEQ ID NO：81或與SEQ ID NO：81的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-H；和
輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：10或與SEQ ID NO：10的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-L；序列‘KVS’或與‘KVS’的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR2-L和序列SEQ ID NO：11或與SEQ ID NO：11的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-L；或
r)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：13或與SEQ ID NO：13的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-H；序列SEQ ID NO：37或與SEQ ID NO：37的區別在於一個或多個胺基酸取代的序列的CDR2-H；序列SEQ ID NO：84或與SEQ ID NO：84的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-H；和
輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：10或與SEQ ID NO：10的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-L；序列‘KVS’或與‘KVS’的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR2-L和序列SEQ ID NO：11或與SEQ ID NO：11的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-L；或
s)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：13或與SEQ ID NO：13的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-H；序列SEQ ID NO：37或與SEQ ID NO：37的區別在於一個或多個胺基酸取代的序列的CDR2-H；序列SEQ ID NO：47或與SEQ ID NO：47的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-H；和
輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：10或與SEQ ID NO：10的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-L；序列‘KVS’或與‘KVS’的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR2-L和序列SEQ ID NO：88或與SEQ ID NO：88的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-L；或
t)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：90或與SEQ ID NO：90的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-H；序列SEQ ID NO：91或與SEQ ID NO：91的區別在於一個或多個胺基酸取代的序列的CDR2-H；序列SEQ ID NO：32或與SEQ ID NO：32的區別在於一個 胺基酸取代的序列的CDR3-H，和
輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：93或與SEQ ID NO：93的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-L；序列‘GAS’或與‘GAS’的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR2-L和序列SEQ ID NO：94或與SEQ ID NO：94的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-L；或
u)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：96或與SEQ ID NO：96的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-H；序列SEQ ID NO：97或與SEQ ID NO：97的區別在於一個或多個胺基酸取代的序列的CDR2-H；序列SEQ ID NO：98或與SEQ ID NO：98的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-H；和
輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：100或與SEQ ID NO：100的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-L；序列‘NTN’或與‘NTN’的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR2-L和序列SEQ ID NO：101或與SEQ ID NO：101的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-L；或
v)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：103或與SEQ ID NO：103的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-H；序列SEQ ID NO：104或與SEQ ID NO：104的區別在於一個或多個胺基酸取代的序列的CDR2-H；序列SEQ ID NO：105或與SEQ ID NO：105的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-H；和
輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：10或與SEQ ID NO：10的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-L；序列‘KVS’或與‘KVS’的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR2-L和序列SEQ ID NO： 11或與SEQ ID NO：11的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-L；或
w)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：80或與SEQ ID NO：80的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-H；序列SEQ ID NO：19或與SEQ ID NO：19的區別在於一個或多個胺基酸取代的序列的CDR2-H；序列SEQ ID NO：108或與SEQ ID NO：108的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-H；和
輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：10或與SEQ ID NO：10的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-L；序列‘KVS’或與‘KVS’的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR2-L和序列SEQ ID NO：11或與SEQ ID NO：11的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-L；或
x)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：13或與SEQ ID NO：13的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-H；序列SEQ ID NO：37或與SEQ ID NO：37的區別在於一個或多個胺基酸取代的序列的CDR2-H；序列SEQ ID NO：111或與SEQ ID NO：111的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-H；和
輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：113或與SEQ ID NO：113的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-L；序列‘KVS’或與‘KVS’的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR2-L和序列SEQ ID NO：114或與SEQ ID NO：114的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-L；或
y)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：116或與SEQ ID NO：116的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-H；序列SEQ ID NO： 117或與SEQ ID NO：117的區別在於一個或多個胺基酸取代的序列的CDR2-H；序列SEQ ID NO：118或與SEQ ID NO：118的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-H；和
輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：100或與SEQ ID NO：100的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-L；序列‘VTN’或與‘VTN’的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR2-L和序列SEQ ID NO：120或與SEQ ID NO：120的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-L；或
z)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：122或與SEQ ID NO：122的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-H；序列SEQ ID NO：123或與SEQ ID NO：123的區別在於一個或多個胺基酸取代的序列的CDR2-H；序列SEQ ID NO：124或與SEQ ID NO：124的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-H；和
輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：126或與SEQ ID NO：126的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-L；序列‘RDD’或與‘RDD’的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR2-L和序列SEQ ID NO：127或與SEQ ID NO：127的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-L；或
aa)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：13或與SEQ ID NO：13的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-H；序列SEQ ID NO：19或與SEQ ID NO：19的區別在於一個或多個胺基酸取代的序列的CDR2-H；序列SEQ ID NO：129或與SEQ ID NO：129的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-H；和
輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：10或與SEQ ID NO：10的 區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-L；序列‘KVS’或與‘KVS’的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR2-L和序列SEQ ID NO：11或與SEQ ID NO：11的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-L；或
bb)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：103或與SEQ ID NO：103的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-H；序列SEQ ID NO：104或與SEQ ID NO：104的區別在於一個或多個胺基酸取代的序列的CDR2-H；序列SEQ ID NO：105或與SEQ ID NO：105的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-H；和
輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：133或與SEQ ID NO：133的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-L；序列‘LVS’或與‘LVS’的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR2-L和序列SEQ ID NO：134或與SEQ ID NO：134的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-L。
一個或多個上述CDR序列中的一個或多個單個胺基酸可通過取代特別是通過保守取代改變。這種改變在抗體的人源化方面意在例如去除糖基化位點或去醯胺位點。
基於“20G6-F3”、“4B4-D7”、“4E7-C9”、“18F5-H10”、“11D7-C3”、“11H3-E5”、“13H2-C2”、“13C1-F6”、“1E6-C9”、“10F4-C10”、“10E6-G6”、“18G9-H11”、“11F3-B9”、“12G3-E8”、“5B1-G2”、“16F8-A7”、“11F9-F8”、“20E5-F10”、“20B5-F10”和“3H6-D2”的VH和VL區的序列比對，識別了胺基酸取代。因此，在一個具體實例中，在下列位置進行胺基酸取代：
- 在CDR1-H中位置3-6的一處或多處，例如在序列GFTFSNAW (SEQ ID NO：13)CDR1-H的位置3、5或6或例如在序列GFTFSNAW(SEQ ID NO：13)CDR1-H的位置4和5；和/或
- 在CDR2-H中位置3-5、7和9的一處或多處，例如在序列IKAKSNNYAT(SEQ ID NO：37)CDR2-H的位置3、4、5、7或9或例如序列IKAKSNNYAT(SEQ ID NO：37)CDR2-H的位置3和5或3和7；和/或
- 在CDR3-H中位置2-4、7-10和12的一處或多處，例如序列RGVYYALSPFDY(SEQ ID NO：8)CDR3-H的位置2、3、4、6、7、8、9和10或位置2、4、6、8、10和12或序列RGVYYALSPFDY(SEQ ID NO：8)CDR3-H的位置2、3、7和8或序列RGLYYGLSPSDY(SEQ ID NO：38)CDR3-H的位置7和8或序列RGLYYGLSPSDY(SEQ ID NO：38)CDR3-H的位置2、3、4、6、7、8、9和10；和/或
- 在CDR1-L中位置2、4、6和9的一處或多處，例如序列QSLVHDNGNTY(SEQ ID NO：17)或QSLVHTNGNTY(SEQ ID NO：27)CDR1-L的位置6或序列QSLVHNNGNTY(SEQ ID NO：10)或QRLVHNNGNTY(SEQ ID NO：113)CDR1-L的位置2或序列QSLVHNNGNTY(SEQ ID NO：10)CDR1-L的位置4、6和9；和/或
在CDR3-L中位置4和5的一處或多處，例如序列GQGSQYPFT(SEQ ID NO：71)或GQGTQYPFT(SEQ ID NO：11)CDR3-L的位置4，或序列GQGAHYPFT(SEQ ID NO：88)CDR3-L的位置4和5或序列GQGTHYPFT(SEQ ID NO：28)或GQGTEYPFT(SEQ ID NO：114)CDR3-L的位置5。
根據本發明的抗CD3抗體具體是常規抗體，特別是常規單株抗體或抗體片段、雙特異性或多重特異性抗體。
根據本發明的抗CD3抗體具體包含IgG或其片段或由IgG或其片段組成。
根據另一具體實例，本發明涉及抗CD3抗體，其包含：
a)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：6的CDR1-H，序列SEQ ID NO：7的CDR2-H，序列SEQ ID NO：8的CDR3-H，和
輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：10或SEQ ID NO：142的CDR1-L，序列‘KVS’的CDR2-L和序列SEQ ID NO：11的CDR3-L；或
b)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：13的CDR1-H，序列SEQ ID NO：14的CDR2-H，序列SEQ ID NO：15的CDR3-H，和
輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：17或SEQ ID NO：184的CDR1-L，序列‘KVS’的CDR2-L和序列SEQ ID NO：11的CDR3-L；或
c)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：13的CDR1-H，序列SEQ ID NO：19的CDR2-H，序列SEQ ID NO：20的CDR3-H，和
輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：22的CDR1-L，序列‘KVS’的CDR2-L和序列SEQ ID NO：11的CDR3-L；或
d)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：24的CDR1-H，序列SEQ ID NO：19的CDR2-H，序列SEQ ID NO：25的CDR3-H，和
輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：27的CDR1-L，序列‘KVS’的CDR2-L和序列SEQ ID NO：28的CDR3-L；或
e)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：30的CDR1-H，序列SEQ ID NO：31的CDR2-H，序列SEQ ID NO：32的CDR3-H，和
輕鏈可變結構域，其包含序列SEQ ID NO：34的CDR1-L，序列‘RDD’的CDR2-L和序列SEQ ID NO：35的CDR3-L；或
f)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：13的CDR1-H，序列SEQ ID NO：37的CDR2-H，序列SEQ ID NO：38的CDR3-H，和
輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：10的CDR1-L，序列‘KVS’的CDR2-L和序列SEQ ID NO：28的CDR3-L；或
g)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：13的CDR1-H，序列SEQ ID NO：37的CDR2-H，序列SEQ ID NO：41的CDR3-H，和
輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：17的CDR1-L，序列‘KVS’的CDR2-L和序列SEQ ID NO：11的CDR3-L；或
h)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：13的CDR1-H，序列SEQ ID NO：37的CDR2-H，序列SEQ ID NO：44的CDR3-H，和
輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：10的CDR1-L，序列‘KVS’的CDR2-L和序列SEQ ID NO：11的CDR3-L；或
i)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：13的CDR1-H，序列SEQ ID NO：37的CDR2-H，序列SEQ ID NO：47的CDR3-H，和
輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：10的CDR1-L，序列‘KVS’的CDR2-L和序列SEQ ID NO：11的CDR3-L；或
j)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：50的CDR1-H，序列SEQ ID NO：51的CDR2-H，序列SEQ ID NO：52的CDR3-H，和
輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：54的CDR1-L，序列‘NAN’的CDR2-L和序列SEQ ID NO：55的CDR3-L；或
k)重鏈可變結構域，其含有序列5EQ ID NO：57的CDR1-H，序列SEQ ID NO：37的CDR2-H，序列SEQ ID NO：58的CDR3-H，和
輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：10的CDR1-L，序列‘KVS’的CDR2-L和序列SEQ ID NO：28的CDR3-L；或
l)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：13的CDR1-H，序列SEQ ID NO：37的CDR2-H，序列SEQ ID NO：61的CDR3-H，和
輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：10的CDR1-L，序列‘KVS’的CDR2-L和序列SEQ ID NO：11的CDR3-L；或
m)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：64的CDR1-H，序列SEQ ID NO：65的CDR2-H，序列SEQ ID NO：47的CDR3-H，和
輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：67的CDR1-L，序列‘KVS’的CDR2-L和序列SEQ ID NO：28的CDR3-L；或
n)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：13的CDR1-H，序列SEQ ID NO：37的CDR2-H，序列SEQ ID NO：69的CDR3-H，和
輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：10的CDR1-L，序列‘KVS’的CDR2-L和序列SEQ ID NO：71的CDR3-L；或
o)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：13的CDR1-H，序列SEQ ID NO：37的CDR2-H，序列SEQ ID NO：84的CDR3-H，和
輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：17的CDR1-L，序列‘KVS’的CDR2-L和序列SEQ ID NO：11的CDR3-L；或
p)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：75的CDR1-H，序列SEQ ID NO：76的CDR2-H，序列SEQ ID NO：77的CDR3-H，和
輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：10的CDR1-L，序列‘KVS’的CDR2-L和序列SEQ ID NO：11的CDR3-L；或
q)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：80的CDR1-H，序列SEQ ID NO：76的CDR2-H，序列SEQ ID NO：81的CDR3-H，和
輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：10的CDR1-L，序列‘KVS’的CDR2-L和序列SEQ ID NO：11的CDR3-L；或
r)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：13的CDR1-H，序列SEQ ID NO：37的CDR2-H，序列SEQ ID NO：84的CDR3-H，和
輕鏈可變結構域，其包含序列SEQ ID NO：10的CDR1-L，序列‘KVS’的CDR2-L和序列SEQ ID NO：11的CDR3-L；或
s)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：13的CDR1-H，序列SEQ ID NO：37的CDR2-H，序列SEQ ID NO：47的CDR3-H，和
輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：10的CDR1-L，序列‘KVS’的CDR2-L和序列SEQ ID NO：88的CDR3-L；或
t)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：90的CDR1-H，序列SEQ ID NO：91的CDR2-H，序列SEQ ID NO：32的CDR3-H，和
輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：93的CDR1-L，序列‘GAS’的CDR2-L和序列SEQ ID NO：94的CDR3-L；或
u)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：96的CDR1-H，序列SEQ ID NO：97的CDR2-H，序列SEQ ID NO：98的CDR3-H，和
輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：100的CDR1-L，序列‘NTN’的CDR2-L和序列SEQ ID NO：101的CDR3-L；或
v)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：103的CDR1-H，序列SEQ ID NO：104的CDR2-H，序列SEQ ID NO：105的CDR3-H，和
輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：10的CDR1-L，序列‘KVS’的CDR2-L和序列SEQ ID NO：11的CDR3-L；或
w)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：80的CDR1-H，序列SEQ ID NO：19的CDR2-H，序列SEQ ID NO：108的CDR3-H，和
輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：10的CDR1-L，序列‘KVS’的CDR2-L和序列SEQ ID NO：11的CDR3-L；或
x)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：13的CDR1-H，序列SEQ ID NO：37的CDR2-H，序列SEQ ID NO：111的CDR3-H，和
輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：113的CDR1-L，序列‘KVS’的CDR2-L和序列SEQ ID NO：114的CDR3-L；或
y)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：116的CDR1-H，序列SEQ ID NO：117的CDR2-H，序列SEQ ID NO：118的CDR3-H，和
輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：100的CDR1-L，序列‘VTN’的CDR2-L和序列SEQ ID NO：120的CDR3-L；或
z)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：122的CDR1-H，序列SEQ ID NO：123的CDR2-H，序列SEQ ID NO：124的CDR3-H，和
輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：126的CDR1-L，序列‘RDD’的CDR2-L和序列SEQ ID NO：127的CDR3-L；或
aa)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：13的CDR1-H，序列SEQ IID NO：19的CDR2-H，序列SEQ ID NO：129的CDR3-H，和
輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：10的CDR1-L，序列‘KVS’的CDR2-L和序列SEQ ID NO：11的CDR3-L；或
bb)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：103的CDR1-H，序列SEQ ID NO：104的CDR2-H，序列SEQ ID NO：105的CDR3-H；和
輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：133的CDR1-L，序列‘LVS’的CDR2-L和序列SEQ ID NO：134的CDR3-L。
本發明還提供抗CD3抗體，其至少包含上文列舉的稱為抗CD3抗體之一的重鏈可變結構域和/或輕鏈可變結構域。
因此，本發明具體涉及抗CD3抗體，其包含：
a)序列SEQ ID NO：5或與其至少85%相同的序列的重鏈可變結構域，和/或序列SEQ ID NO：9或其至少85%相同的序列的輕鏈可變結 構域；或
b)序列SEQ ID NO：12或與其至少85%相同的序列的重鏈可變結構域，和/或序列SEQ ID NO：16或其至少85%相同的序列的輕鏈可變結構域；或
c)序列SEQ ID NO：18或與其至少85%相同的序列的重鏈可變結構域，和/或序列SEQ ID NO：21或其至少85%相同的序列的輕鏈可變結構域；或
d)序列SEQ ID NO：23或與其至少85%相同的序列的重鏈可變結構域，和/或序列SEQ ID NO：26或其至少85%相同的序列的輕鏈可變結構域；或
e)序列SEQ ID NO：29或與其至少85%相同的序列的重鏈可變結構域，和/或序列SEQ ID NO：33或其至少85%相同的序列的輕鏈可變結構域；或
f)序列SEQ ID NO：36或與其至少85%相同的序列的重鏈可變結構域，和/或序列SEQ ID NO：39或其至少85%相同的序列的輕鏈可變結構域；或
g)序列SEQ ID NO：40或與其至少85%相同的序列的重鏈可變結構域，和/或序列SEQ ID NO：42或其至少85%相同的序列的輕鏈可變結構域；或
h)序列SEQ ID NO：43或與其至少85%相同的序列的重鏈可變結構域，和/或序列SEQ ID NO：45或其至少85%相同的序列的輕鏈可變結構域；或
i)序列SEQ ID NO：46或與其至少85%相同的序列的重鏈可變結構域，和/或序列SEQ ID NO：48或其至少85%相同的序列的輕鏈可變 結構域；或
j)序列SEQ ID NO：49或與其至少85%相同的序列的重鏈可變結構域，和/或序列SEQ ID NO：53或其至少85%相同的序列的輕鏈可變結構域；或
k)序列SEQ ID NO：56或與其至少85%相同的序列的重鏈可變結構域，和/或序列SEQ ID NO：59或其至少85%相同的序列的輕鏈可變結構域；或
l)序列SEQ ID NO：60或與其至少85%相同的序列的重鏈可變結構域，和/或序列SEQ ID NO：62或其至少85%相同的序列的輕鏈可變結構域；或
m)序列SEQ ID NO：63或與其至少85%相同的序列的重鏈可變結構域，和/或序列SEQ ID NO：66或其至少85%相同的序列的輕鏈可變結構域；或
n)序列SEQ ID NO：68或與其至少85%相同的序列的重鏈可變結構域，和/或序列SEQ ID NO：70或其至少85%相同的序列的輕鏈可變結構域；或
o)序列SEQ ID NO：72或與其至少85%相同的序列的重鏈可變結構域，和/或序列SEQ ID NO：73或其至少85%相同的序列的輕鏈可變結構域；或
p)序列SEQ ID NO：74或與其至少85%相同的序列的重鏈可變結構域，和/或序列SEQ ID NO：78或其至少85%相同的序列的輕鏈可變結構域；或
q)序列SEQ ID NO：79或與其至少85%相同的序列的重鏈可變結構域，和/或序列SEQ ID NO：82或其至少85%相同的序列的輕鏈可變 結構域；或
r)含有序列SEQ ID NO：83或與其至少85%相同的序列的重鏈可變結構域，和/或序列SEQ ID NO：85或其至少85%相同的序列的輕鏈可變結構域；或
s)序列SEQ ID NO：46或與其至少85%相同的序列的重鏈可變結構域，和/或序列SEQ ID NO：87或其至少85%相同的序列的輕鏈可變結構域；或
t)序列SEQ ID NO：89或與其至少85%相同的序列的重鏈可變結構域，和/或序列SEQ ID NO：92或其至少85%相同的序列的輕鏈可變結構域；或
u)序列SEQ ID NO：95或與其至少85%相同的序列的重鏈可變結構域，和/或序列SEQ ID NO：99或其至少85%相同的序列的輕鏈可變結構域；或
v)序列SEQ ID NO：102或與其至少85%相同的序列的重鏈可變結構域，和/或序列SEQ ID NO：106或其至少85%相同的序列的輕鏈可變結構域；或
w)序列SEQ ID NO：107或與其至少85%相同的序列的重鏈可變結構域，和/或序列SEQ ID NO：109或其至少85%相同的序列的輕鏈可變結構域；或
x)序列SEQ ID NO：110或與其至少85%相同的序列的重鏈可變結構域，和/或序列SEQ ID NO：112或其至少85%相同的序列的輕鏈可變結構域；或
y)序列SEQ ID NO：115或與其至少85%相同的序列的重鏈可變結構域，和/或序列SEQ ID NO：119或其至少85%相同的序列的輕鏈可變 結構域；或
z)序列SEQ ID NO：121或與其至少85%相同的序列的重鏈可變結構域，和/或序列SEQ ID NO：125或其至少85%相同的序列的輕鏈可變結構域；或
aa)序列SEQ ID NO：128或與其至少85%相同的序列的重鏈可變結構域，和/或序列SEQ ID NO：130或其至少85%相同的序列的輕鏈可變結構域；或
bb)序列SEQ ID NO：131或與其至少85%相同的序列的重鏈可變結構域，和/或序列SEQ ID NO：132或其至少85%相同的序列的輕鏈可變結構域。
例如，重鏈或輕鏈可變結構域的序列酌情可與參照序列SEQ ID NO：5、9、12、16、18、21、23、26、29、33、36、39、40、42、43、45、46、48、49、53、56、59、60、62、63、66、68、70、72、73、74、78、79、82、83、85、87、89、92、95、99、102、106、107、109、110、112、115、119、121、125、128、130、131、132區別可為一個或多個胺基酸取代，特別是一個或多個保守胺基酸取代和/或用典型殘基的取代。具體地，重鏈或輕鏈可變結構域的序列與參照序列SEQ ID NO：5、9、12、16、18、21、23、26、29、33、36、39、40、42、43、45、46、48、49、53、56、59、60、62、63、66、68、70、72、73、74、78、79、82、83、85、87、89、92、95、99、102、106、107、109、110、112、115、119、121、125、128、130、131、132區別僅在於保守胺基酸取代。
與序列SEQ ID NO：5、9、12、16、18、21、23、26、29、33、36、39、40、42、43、45、46、48、49、53、56、59、60、62、63、66、68、70、72、73、74、78、79、82、83、85、87、89、92、95、99、 102、106、107、109、110、112、115、119、121、125、128、130、131、132相比的序列改變具體將基本上在一個或多個框架區FR1-L、FR2-L、FR3-L、FR4-L和/或FR1-H、FR2-H、FR3-H、FR4-H中。
然而，一個或多個CDR中的胺基酸取代也有可能。具體地，輕鏈可變結構域的序列可與序列SEQ ID NO：9區別僅在於SEQ ID NO：9位置28處的S至R的取代(CDR1-L中)不同，和/或至少至少通過在SEQ ID NO：9位置30處的V至E的取代(CDR1-L中)，和/或至少通過在SEQ ID NO：9位置33處的N至D或T的取代(CDR1-L中)不同，和/或至少通過在SEQ ID NO：9位置35處的N至Y的取代(CDR1-L中)不同，和/或輕鏈可變結構域序列可與序列SEQ ID NO：9至少通過在SEQ ID NO：9位置97處的T至S或A的取代(CDR3-L中)不同，和/或至少通過在SEQ ID NO：9位置98處的Q至H或E的取代(CDR3-L中)不同，和/或重鏈可變結構域可與序列SEQ ID NO：9至少通過在SEQ ID NO：5位置28處的T至N或S的取代(CDR1-H中)不同，和/或至少通過在SEQ ID NO：5位置29處的F至V的取代(CDR1-H中)不同，或至少通過在SEQ ID NO：5位置30處的T至N或Y的取代(CDR1-H中)不同，或至少通過在SEQ ID NO：5位置31處的K至L或Y的取代(CDR1-H中)不同，和/或重鏈可變結構域可與序列SEQ ID NO：5至少通過在SEQ ID NO：5位置53處的D至A的取代(CDR2-H中)不同，或至少通過在SEQ ID NO：5位置54處的K至R的取代(CDR2-H中)不同，或至少通過在SEQ ID NO：5位置55處的S至A的取代(CDR2-H中)不同，或至少通過在SEQ ID NO：5位置57處的S至N的取代(CDR2-H中)不同，或至少通過在SEQ ID NO：5位置59處的A至E的取代(CDR2-H中)不同，和/或重鏈可變結構域可與序列SEQ ID NO：5至少通過在SEQ ID NO：5位置100處的G至A的取代(CDR3-H中)不同，和/或至少通過在SEQ ID NO：5位置101處的T至V的取代(CDR3-H中)不同，至少通過在SEQ ID NO：5位置102處的Q至Y的取代(CDR3-H中)不同。
在一個具體實例中，本發明的抗CD3抗體及其片段分別為大鼠抗體和大鼠抗體片段。
本發明的一方面，本發明的抗CD3抗體還可以是嵌合抗體且具體地是大鼠/人抗體，例如包含大鼠重鏈和輕鏈可變結構域和來自人的CH結構域和CL結構域的抗體。
在本發明的另一方面，抗CD3抗體還可以是人源化抗體或例如藉由CDR-移植或藉由4D方法獲得的人源化抗體片段(US20110027266)。
相應地，在一個具體實例中，本發明的抗CD3抗體是人源化抗體，包含：
a)重鏈可變結構域，其含有選自下組的胺基酸序列：SEQ ID NO：135、SEQ ID NO：136、SEQ ID NO：137、SEQ ID NO：138、SEQ ID NO：144、SEQ ID NO：145、SEQ ID NO：146、SEQ ID NO：147、SEQ ID NO：152、SEQ ID NO：153，和
輕鏈可變結構域，其含有選自下組的胺基酸序列：SEQ ID NO：139、SEQ ID NO：140、SEQ ID NO：141、SEQ ID NO：143、SEQ ID NO：148、SEQ ID NO：149、SEQ ID NO：150、SEQ ID NO：151、SEQ ID NO：154、SEQ ID NO：155、SEQ ID NO：156、SEQ ID NO：157，或
b)重鏈可變結構域，其含有選自下組的胺基酸序列：SEQ ID NO：171、SEQ ID NO：172、SEQ ID NO：173、SEQ ID NO：174、SEQ ID NO：175、SEQ ID NO：176、SEQ ID NO：177、SEQ ID NO：178、SEQ ID NO：179、SEQ ID NO：180、SEQ ID NO：181、SEQ ID NO：183，和
輕鏈可變結構域，其含有選自下組的胺基酸序列：SEQ ID NO：158、SEQ ID NO：159、SEQ ID NO：160、SEQ ID NO：161、SEQ ID NO：162、SEQ ID NO：163、SEQ ID NO：164、SEQ ID NO：165、SEQ ID NO：166、SEQ ID NO：167、SEQ ID NO：168、SEQ ID NO：169、SEQ ID NO：170、SEQ ID NO：182。
根據另一具體實例，本發明的抗CD3抗體是人源化抗體，包含
a)序列SEQ ID NO：138的重鏈可變結構域和/或序列SEQ ID NO：143的輕鏈可變結構域；或
b)序列SEQ ID NO：171的重鏈可變結構域和/或序列SEQ ID NO：158的輕鏈可變結構域；或
c)序列SEQ ID NO：176的重鏈可變結構域和/或序列SEQ ID NO：164的輕鏈可變結構域。
在一個具體實例中，根據本發明的抗CD3抗體包含上文列舉的稱為抗CD3抗體重鏈的三個CDR序列或可變結構域，或重鏈和輕鏈的六個CDR序列或可變結構域。
本發明還參照上文定義的人源化抗CD3抗體片段。在一個具體實例中，上文所述的人源化抗CD3抗體是嵌合抗體。
根據本發明的抗CD3抗體還可以是單結構域抗體或其片段。具體地，單結構域抗體片段可由包含上文所述的抗體之一的CDR1-H、CDR2-H和CDR3-H的可變重鏈(VHH)組成。抗CD3抗體還可以是重鏈抗體，即缺乏輕鏈的抗體，其可包含或不包含CH1結構域。
單結構域抗體或其片段還可以包含駱駝單結構域抗體的框架區和任選地駱駝單結構域抗體的恒定結構域。
根據本發明的抗CD3抗體還可以是選自下組的抗體片段：Fv、Fab、F(ab')2、Fab'、dsFv、(dsFv)2、scFv、sc(Fv)2和雙抗體，特別是人源化抗體片段。
相應地，本發明的抗CD3抗體是Fab，其包含或由下列組成：
a)重鏈胺基酸序列SEQ ID NO：186和/或輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO：187；或
b)重鏈胺基酸序列SEQ ID NO：188和/或輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO：189；或
c)重鏈胺基酸序列SEQ ID NO：190和/或輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO：191；或
d)重鏈胺基酸序列SEQ ID NO：192和/或輕鏈胺基酸序列SEQ ID NO：193。
在具體實例中，CD3-抗體是由本發明的抗CD3抗體至少一個抗體片段或至少一個可變結構域形成的雙特異性或多重特異性抗體。多重特異性抗體是多價蛋白複合物，如例如EP 2 050 764 A1或US 2005/0003403 A1中所述。
根據本發明的雙特異性或多重特異性CD3-抗體可具有針對(a)由上述抗CD3抗體之一靶向的人或人和食蟹猴CD3細胞外結構域和(b)至少一種其他抗原具有特異性。
在一個具體實例中，其他抗原是CD123且相應地獲得的雙特異性抗體是CD3/CD123雙特異性抗體。常規的雙特異性抗體可通過本領域已知的技術產生。
根據本發明的抗體和抗CD3抗體片段可用於以分離(例如純化)形式或包含於載體中，如膜或脂質媒介物(例如脂質體)。
在另一具體實例中，本發明的抗CD3抗體用於製備本發明的在“抗體樣結合蛋白”部分進一步定義的抗體樣結合蛋白。
上述具體實例的任何組合構成本發明的部分。
抗CD123抗體
“CD123”(分化簇123)也稱為“白細胞介素3受體，α(IL3RA)”或“IL3R”、“IL3RX”、“IL3RY”、“IL3RAY”、“hIL-3Ra”且指代異二聚化細胞因子受體的白細胞介素3特異性亞單元。功能性白細胞介素3受體是包含特異性α鏈(IL-3A；CD123)和與針對粒細胞巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)和白細胞介素5(IL-5)的受體共享的IL-3受體β鏈(β0；CD 131)的異二聚體。CD123是具有約43kDa的推導分子量的I型整體跨膜蛋白，其包含參與IL-3結合的細胞外結構域，跨膜結構域和約50個胺基酸的短胞質尾。細胞外結構域由兩個區構成：約100胺基酸的N-末端區，該序列展示與GM-CSF和IL-5受體α-鏈的等同區的相似性；和該細胞因子受體家族其他成員常見的包含四個保守半胱胺酸殘基和WSXWS基序的跨膜結構域的近端區。IL-3結合結構域包含兩個Ig-樣折疊結構域組成的約200個胺基酸殘基細胞因子受體基序(cytokine receptor motifs,CRM)。CD123的細胞外結構域高度糖基化，具有配體結合和受體信號都需要的N-糖基化。蛋白家族彙集三個成員：IL3RA(CD123A)、CSF2RA和IL5RA。整體結構在三成員間非常保守但序列同源性非常低。目前已發現一種300胺基酸長的同型CD123，但僅在RNA水平，其可在Getentry數據庫登錄號ACM24116.1下獲得。
美國專利號6,177,078揭示抗IL-3受體α鏈(IL-3Rα，CD123)單株抗體7G3和7G3結合IL-3Rα的N-末端結構域特別是胺基酸殘基19-49的能力。美國專利號6,733,743揭示解由將細胞與抗體和細胞毒性劑(選自化療劑、毒素或α-發射放射性同位素)的組合物接觸，其中該組合物選擇性地以 有效導致細胞死亡的量與CD123結合，以損傷表現CD123但不顯著表現CD131的血液癌症前體細胞。然而，靶向CD123是否功能性損傷AML-LSC尚不清楚。
包括信號肽的全長人CD123蛋白的參照序列可從NCBI數據庫在登錄號NP_002174.1下和在Uniprot登錄號P26951下獲得，且在本文公開於SEQ ID NO：194下(2014年12月14日可獲得)。包括信號肽的全長食蟹猴CD123蛋白的參照序列可從GenBank數據庫在登錄號EHH61867.1下和Uniprot登錄號G8F3K3下獲得，且在本文公開於SEQ ID NO：195下(2014年12月14日可獲得)。
由發明人從基因組DNA選殖的成熟人CD123 Strep-II標簽Fc-融合蛋白序列公開於SEQ ID NO：196下。所述成熟人CD123Fc-融合蛋白包含全長人CD123蛋白胺基酸19-305且因此包含人CD123的細胞外結構域。
由發明人從基因組DNA選殖的成熟食蟹猴CD123 Strep-II標簽Fc-融合蛋白的序列公開於SEQ ID NO：197下。所述成熟食蟹猴CD123 Fc-融合蛋白包含全長食蟹猴CD123蛋白胺基酸19-305且因此包含食蟹猴CD123的細胞外結構域。
人和食蟹猴CD123的結構域組織如下(人CD123序列可基於可在NCBI數據庫在登錄號NP_002174.1下獲得的人序列(SEQ ID NO：194)，以及基於可在數據庫登錄號G8F3K3下獲得的食蟹猴CD123序列獲得，SEQ ID NO：195)：
Figure 110113349-A0101-12-0063-130
Figure 110113349-A0101-12-0064-131
相應地，人CD123的細胞外結構域由SEQ ID NO：194位置19-305處的胺基酸組成。
CD123(白細胞介素-3受體α鏈IL-3Rα)是腫瘤抗原在多種血液腫瘤中過表現。大量的AML原始細胞主要表現表面CD123且該表現不隨AML亞型變化。診斷時CD123在AML上的較高表現已報導與較差預後相關。CD123表現已在其他血液惡性腫瘤包括骨髓增生異常、全身性肥大細胞增多症、急漿樣樹突狀細胞腫瘤(BPDCN)、ALL和毛細胞白血病中報導。
CD123表現在AML白血病幹細胞上且越來越多的證據表明AML從這些LSC產生，其顯示靜息且對DNA損傷化療相對抵抗。假設LSC的持久鞏固初始緩解後的復發，因此將根除LSC認為是治癒所必需，且是重要的治療目標。
“白血病幹細胞(LSC)”是具有與正常幹細胞相關的特性(即自我更新的性質和發育成多系的能力)的癌細胞已提出，此類細胞存留於血液癌症如AML中作為特殊群體。存在於AML中的LCS也稱為“AML-LCS”。
“急性骨髓性白血病(AML)”是由於異種和未分化的髓性原始細胞增殖的增加而在臨床呈現的選殖性病症。白血病等級通過具有特殊自我更新能力的LSC(AML-LCS)的小群體維持，且能夠分化成白血病原始細胞。這些原始細胞在診斷和復發時生成在患者中易於檢測的大數目的白血病原始細胞，最終導致死亡。AML-LSC通常報導為靜息細胞，與快速分裂選殖形成型祖細胞不同。AML-LSC的性質給予靶向增殖細胞不那麼有效的常規化療劑，潛在說明了AML患者進入完全緩解但幾乎總是復發的高比例，4年以上具有<30%的成人生存率。此外，診斷時微小殘留病的發生和較差的生存率已歸因於AML患者中的高LSC頻率。因此，當務之急是開發 以特異性消除LSC的新療法的AML(和相似的上述血液癌症病況)的長期管理。
已報導CD123在AML原始細胞和CD34+/CD38 AML-LSC上相對正常血細胞過表現。
CD123因此提供用於癌症治療的重要治療靶標，特別是用於具有不良預後的患者的癌症治療。
發明人已成功生成、篩選和選擇了針對人和食蟹猴CD123蛋白都顯示高親和力的特異性小鼠和大鼠抗CD123抗體，且其不與人CSF2RA和IL5RA蛋白和食蟹猴CD3蛋白顯著交叉反應。
發明人確定這種稱為“3E3-D3”、“1E1-G5”、“2B8-F3”、“2F8-D6”、“3B10-E6”、“5A5-B4”、“6B10-E4”、“6C10-C4”、“6D6-B8”、“8B11-B7”、“9B8-G6”、“9D7-C8”和“9F6-G3”抗CD123抗體的單株抗體可變重鏈和輕鏈的序列。
稱為“3E3-D3”的抗CD123抗體包含：
- 重鏈可變結構域，其由下列序列組成
Figure 110113349-A0101-12-0065-132
Figure 110113349-A0101-12-0065-133
(SEQ ID NO：226，其中CDR以粗體顯 示)，含有序列SEQ ID NO：227的CDR1-H、序列SEQ ID NO：228的CDR2-H和序列SEQ ID NO：229的CDR3-H，或
- 重鏈可變結構域，其由下列序列組成
Figure 110113349-A0101-12-0065-134
Figure 110113349-A0101-12-0065-135
(SEQ ID NO：277，其中CDR以粗體顯 示)，含有序列SEQ ID NO：227的CDR1-H、序列SEQ ID NO：353的CDR2-H和序列SEQ ID NO：229的CDR3-H，或
- 重鏈可變結構域，其由下列序列組成
Figure 110113349-A0101-12-0066-144
Figure 110113349-A0101-12-0066-145
(SEQ ID NO：278，其中CDR以粗體顯 示)，含有序列SEQ ID NO：227的CDR1-H、序列SEQ ID NO：279的CDR2-H和序列SEQ ID NO：229的CDR3-H，和
- 輕鏈可變結構域其由下列序列組成
Figure 110113349-A0101-12-0066-146
Figure 110113349-A0101-12-0066-147
(SEQ ID NO：230，其中CDR以粗體顯示)，含有序列SEQ ID NO：231的CDR1-L、序列‘RDD’組成的CDR2-L和序列SEQ ID NO：232的CDR3-L。
稱為“1E1-G5”的抗CD123抗體包含：
- 重鏈可變結構域，其由下列序列組成：
Figure 110113349-A0101-12-0066-148
Figure 110113349-A0101-12-0066-149
(SEQ ID NO：198，其中CDR以粗體顯 示)，含有序列SEQ ID NO：199的CDR1-H、序列SEQ ID NO：200的CDR2-H和序列SEQ ID NO：201的CDR3-H和
- 輕鏈可變結構域其由下列序列組成：
Figure 110113349-A0101-12-0066-150
Figure 110113349-A0101-12-0067-1238
(SEQ ID NO：202，其中CDR以粗體顯示)，含有序列SEQ ID NO：203的CDR1-L、序列‘DAN’組成的CDR2-L和序列SEQ ID NO：204的CDR3-L。
稱為“2B8-F3”的抗CD123抗體包含：
- 重鏈可變結構域，其由下列序列組成：
Figure 110113349-A0101-12-0067-141
Figure 110113349-A0101-12-0067-143
(SEQ ID NO：205，其中CDR以粗體 顯示)，含有序列SEQ ID NO：206的CDR1-H、序列SEQ ID NO：207的CDR2-H和序列SEQ ID NO：208的CDR3-H和
- 輕鏈可變結構域其由下列序列組成：
Figure 110113349-A0101-12-0067-136
Figure 110113349-A0101-12-0067-137
(SEQ ID NO：209，其中CDR以粗體顯示)，含有序列SEQ ID NO： 210的CDR1-L、序列‘ETS’組成的CDR2-L和序列SEQ ID NO：211的CDR3-L。
稱為“2F8-D6”的抗CD123抗體包含：
- 重鏈可變結構域，其由下列序列組成：
Figure 110113349-A0101-12-0067-138
Figure 110113349-A0101-12-0067-139
(SEQ ID NO：212，其中CDR以粗體 顯示)，含有序列SEQ ID NO：213的CDR1-H、序列SEQ ID NO：214的CDR2-H和序列SEQ ID NO：215的CDR3-H和
- 輕鏈可變結構域其由下列序列組成：
Figure 110113349-A0101-12-0067-140
Figure 110113349-A0101-12-0068-151
Figure 110113349-A0101-12-0068-152
(SEQ ID NO：216，其中CDR以粗體顯示)，含有序列SEQ ID NO： 217的CDR1-L、序列‘NTN’組成的CDR2-L和序列SEQ ID NO：218的CDR3-L。
稱為“3B10-E6”的抗CD123抗體包含：
- 重鏈可變結構域，其由下列序列組成：
Figure 110113349-A0101-12-0068-153
Figure 110113349-A0101-12-0068-154
(SEQ ID NO：219，其中 CDR以粗體顯示)，含有序列SEQ ID NO：220的CDR1-H、序列SEQ ID NO：221的CDR2-H和序列SEQ ID NO：222的CDR3-H和
- 輕鏈可變結構域其由下列序列組成：
Figure 110113349-A0101-12-0068-155
Figure 110113349-A0101-12-0068-160
(SEQ ID NO：223，其中CDR以粗體顯示)，其含有序 列SEQ ID NO：224的CDR1-L、序列‘RVS’組成的CDR2-L和序列SEQ ID NO：225的CDR3-L。
稱為“5A5-B4”的抗CD123抗體包含：
- 重鏈可變結構域，其由下列序列組成：
Figure 110113349-A0101-12-0068-157
Figure 110113349-A0101-12-0068-159
(SEQ ID NO：233，其中CDR以粗體顯 示)，含有序列SEQ ID NO：234的CDR1-H、序列SEQ ID NO：235的CDR2-H和序列SEQ ID NO：236的CDR3-H和
- 輕鏈可變結構域其由下列序列組成：
Figure 110113349-A0101-12-0069-168
Figure 110113349-A0101-12-0069-169
(SEQ ID NO：237，其中CDR以粗體顯示)，含有序列SEQ ID NO： 238的CDR1-L、序列‘GAS’組成的CDR2-L和序列SEQ ID NO：239的CDR3-L。
稱為“6B10-E4”的抗CD123抗體包含：
- 重鏈可變結構域，其由下列序列組成：
Figure 110113349-A0101-12-0069-161
Figure 110113349-A0101-12-0069-162
(SEQ ID NO：240，其中CDR以粗體顯 示)，含有序列SEQ ID NO：241的CDR1-H、序列SEQ ID NO：242的CDR2-H和序列SEQ ID NO：243的CDR3-H和
- 輕鏈可變結構域其由下列序列組成：
Figure 110113349-A0101-12-0069-163
Figure 110113349-A0101-12-0069-165
(SEQ ID NO：244，其中CDR以粗體顯示)，含有序列SEQ ID NO：245的CDR1-L、序列‘YAS’組成的CDR2-L和序列SEQ ID NO：246的CDR3-L。
稱為“6C10-C4”的抗CD123抗體包含：
- 重鏈可變結構域，其由下列序列組成：
Figure 110113349-A0101-12-0069-166
Figure 110113349-A0101-12-0069-167
(SEQ ID NO：247，其中CDR以粗體顯示)， 含有序列SEQ ID NO：248的CDR1-H、序列SEQ ID NO：249的CDR2-H和序列SEQ ID NO：250的CDR3-H和
- 輕鏈可變結構域其由下列序列組成：
Figure 110113349-A0101-12-0070-170
Figure 110113349-A0101-12-0070-171
(SEQ ID NO：251，其中CDR以粗體顯示)，含有序列 SEQ ID NO：252的CDR1-L、序列‘WAS’組成的CDR2-L和序列SEQ ID NO：253的CDR3-L。
稱為“6D6-B8”的抗CD123抗體包含：
- 重鏈可變結構域，其由下列序列組成：
Figure 110113349-A0101-12-0070-172
Figure 110113349-A0101-12-0070-173
(SEQ ID NO：254，其中CDR以粗體顯 示)，含有序列SEQ ID NO：255的CDR1-H、序列SEQ ID NO：200的CDR2-H和序列SEQ ID NO：201的CDR3-H和
- 輕鏈可變結構域其由下列序列組成：
Figure 110113349-A0101-12-0070-174
Figure 110113349-A0101-12-0070-175
(SEQ ID NO：256，其中CDR以粗體顯示)，含有序列SEQ ID NO： 257的CDR1-L、序列‘DAN’組成的CDR2-L和序列SEQ ID NO：258的CDR3-L。
稱為“8B11-B7”的抗CD123抗體包含：
- 重鏈可變結構域，其由下列序列組成：
Figure 110113349-A0101-12-0070-176
Figure 110113349-A0101-12-0071-178
Figure 110113349-A0101-12-0071-179
(SEQ ID NO：259，其中CDR以粗體顯 示)，含有序列SEQ ID NO：199的CDR1-H、序列SEQ ID NO：260的CDR2-H和序列SEQ ID NO：201的CDR3-H和
- 輕鏈可變結構域其由下列序列組成：
Figure 110113349-A0101-12-0071-180
Figure 110113349-A0101-12-0071-181
(SEQ ID NO：261，其中CDR以粗體顯示)，含有序列SEQ ID NO： 262的CDR1-L、序列‘DAS’組成的CDR2-L和序列SEQ ID NO：263的CDR3-L。
稱為“9B8-G6”的抗CD123抗體包含：
- 重鏈可變結構域，其由下列序列組成：
Figure 110113349-A0101-12-0071-182
Figure 110113349-A0101-12-0071-183
(SEQ ID NO：264，其中CDR以粗體 顯示)，含有序列SEQ ID NO：265的CDR1-H、序列SEQ ID NO：266的CDR2-H和序列SEQ ID NO：267的CDR3-H和
- 輕鏈可變結構域其由下列序列組成：
Figure 110113349-A0101-12-0071-184
Figure 110113349-A0101-12-0071-185
(SEQ ID NO：251，其中CDR以粗體顯示)，含有序列 SEQ ID NO：252的CDR1-L、序列‘WAS’組成的CDR2-L和序列SEQ ID NO：253的CDR3-L。
稱為“9D7-C8”的抗CD123抗體包含：
- 重鏈可變結構域，其由下列序列組成：
Figure 110113349-A0101-12-0072-186
Figure 110113349-A0101-12-0072-187
(SEQ ID NO：268，其中CDR以粗體 顯示)，含有序列SEQ ID NO：265的CDR1-H、序列SEQ ID NO：266的CDR2-H和序列SEQ ID NO：269的CDR3-H和
- 輕鏈可變結構域其由下列序列組成：
Figure 110113349-A0101-12-0072-188
Figure 110113349-A0101-12-0072-189
(SEQ ID NO：270，其中CDR以粗體顯示)，含有序列 SEQ ID NO：271的CDR1-L、序列‘WAS’組成的CDR2-L和序列SEQ ID NO：253的CDR3-L。
稱為“9F6-G3”的抗CD123抗體包含：
- 重鏈可變結構域，其由下列序列組成：
Figure 110113349-A0101-12-0072-190
Figure 110113349-A0101-12-0072-191
(SEQ ID NO：272，其中CDR以粗體顯 示)，含有序列SEQ ID NO：273的CDR1-H、序列SEQ ID NO：274的CDR2-H和序列SEQ ID NO：201的CDR3-H和
- 輕鏈可變結構域其由下列序列組成：
Figure 110113349-A0101-12-0072-192
Figure 110113349-A0101-12-0072-193
(SEQ ID NO：275，其中CDR以粗體顯示)，含有序列SEQ ID NO： 276的CDR1-L、序列‘DAS’組成的CDR2-L和序列SEQ ID NO：258的 CDR3-L。
本發明的一方面，抗CD123抗體與人CD123結合。在另一個具體實例中，抗CD123抗體進一步與食蟹猴CD123結合。具體地，本發明的抗CD123抗體與人CD123或人和食蟹猴CD123兩者的細胞外結構域結合。更具體地，抗CD123抗體與CD123的遠端部分結合，例如與胺基酸序列SEQ ID NO：194的人CD123的位置19-49處的胺基酸結合。無論在分離形式表現還是存在於CD123表現細胞如AML細胞或CD123轉染細胞中的可溶性細胞外結構域或全長膜錨定的CD123中，抗CD123抗體都與CD123結合。根據本發明的抗CD123抗體對在其表面表現人和食蟹猴CD123蛋白的細胞例如表現CD123的癌細胞具有特異性。
根據本發明的抗CD123抗體對於食蟹猴CD123的親和力比對人CD123的親和力的比率(KD(食蟹猴)/KD(人))
Figure 110113349-A0101-12-0073-292
10，具體地
Figure 110113349-A0101-12-0073-293
6、
Figure 110113349-A0101-12-0073-294
5、
Figure 110113349-A0101-12-0073-295
4、
Figure 110113349-A0101-12-0073-296
3，例如
Figure 110113349-A0101-12-0073-297
2、
Figure 110113349-A0101-12-0073-298
1或
Figure 110113349-A0101-12-0073-299
0.5。因此根據本發明的多肽可用於在猴中實施的毒性研究，猴中觀察到的毒性概貌與在人中預期潛在的副作用相關。
具體地，本發明的抗CD123抗體不與CSF2RA和IL5RA蛋白結合或不與CSF2RA和IL5RA蛋白顯著交叉反應。
具體地，所述抗體不與人和食蟹猴的上述CSF2RA和IL5RA蛋白結合，或不與人和食蟹猴的CSF2RA和IL5RA蛋白顯著交叉反應。
此外，根據本發明的抗CD123抗體對於人CD123或食蟹猴CD123或對於兩者的親和力(KD)
Figure 110113349-A0101-12-0073-300
50nM、
Figure 110113349-A0101-12-0073-301
40nM、
Figure 110113349-A0101-12-0073-302
30nM例如
Figure 110113349-A0101-12-0073-303
20nM、
Figure 110113349-A0101-12-0073-304
15nM、
Figure 110113349-A0101-12-0073-305
10nM、
Figure 110113349-A0101-12-0073-306
8nM、
Figure 110113349-A0101-12-0073-307
6nM、
Figure 110113349-A0101-12-0073-308
4nM、
Figure 110113349-A0101-12-0073-309
2nM、
Figure 110113349-A0101-12-0073-310
1nM或
Figure 110113349-A0101-12-0073-311
0.5nM，例如有0.1nM-20nM的親和力，例如0.1nM-10nM的親和力，具體地0.1nM-2nM或0.1nM-1nM的親和力。
在一個實例中，用使用來自人和食蟹猴的重組CD123蛋白 (例如用人和食蟹猴CD123-Fc融合蛋白)作為捕獲抗原的表面等離子體共振定確定對於人CD3或對於食蟹猴CD3的親和力的KD值。
抗原可用於例如對應野生型蛋白(SEQ ID NO：194(人)，SEQ ID NO：195(食蟹猴))位置M1-R305的胺基酸序列的包含信號肽的人或食蟹猴CD123細胞外結構域。獲得的用於人或食蟹猴CD123成熟蛋白的胺基酸序列分別列於SEQ ID NO：196和SEQ ID NO：197。Biacore測量為本領域已知。在給出的實例中，Biacore測量可如上文“抗CD3抗體”部分所述實施。
本發明的抗CD123抗體還由FACS分析確定表觀親和力常數(表觀KD)，(所述分析對於例如具有通過適應在融合瘤上清中純化的抗CD123抗體對CD123表現細胞如CD123轉染的HEK293細胞進行)，其
Figure 110113349-A0101-12-0074-283
20nM，例如
Figure 110113349-A0101-12-0074-284
15nM、
Figure 110113349-A0101-12-0074-285
10nM、
Figure 110113349-A0101-12-0074-286
6nM、
Figure 110113349-A0101-12-0074-287
5nM、
Figure 110113349-A0101-12-0074-288
4nM、
Figure 110113349-A0101-12-0074-289
3nM、
Figure 110113349-A0101-12-0074-290
2nM或
Figure 110113349-A0101-12-0074-291
1nM。通常，表觀KD在0.1-20nM範圍，具體地0.1-10nM，例如0.1-5nM。
對稱為“3E3-D3”、“1E1-G5”、“2B8-F3”、“2F8-D6”、“3B10-E6”、“5A5-B4”、“6B10-E4”、“6C10-C4”、“6D6-B8”、“8B11-B7”、“9B8-G6”、“9D7-C8”、“9F6-G3”抗CD123抗體的VH和VL區序列進行比對。CDR-H和CDR-L序列比較傾向於表明結構上一方面“1E1-G5”、“6D6-B8”、“8B11-B7”和“9F6-G3”抗CD123抗體和另一方面“6C10-C4”、9B8-G6”、“9D7-C8”抗CD123抗體密切相關，所述抗體與相同表位適當結合。稱為“1E1-G5”、“6D6-B8”、“8B11-B7”和“9F6-G3”抗CD123抗體和“6C10-C4”、9B8-G6”、“9D7-C8”抗CD123抗體的比對分別示於圖3和圖4。CDR-H和CDR-L序列的比較進一步識別了在兩組抗體間嚴格保守的CDR位置且其因此被認為對於特異性至關重要，而其他位置可支持取代。
相應地，根據本發明的抗體包含：
a)重鏈可變結構域，其含有序列X1YTFTDX2I(SEQ ID NO：336)組成 的CDR1-H，其中X1是G或A且X2是H、Y或N，或其任何組合；和
序列INPYSX1GX2(SEQ ID NO：337)組成的CDR2-H，其中X1是G或D且X2是T或A，或其任何組合；和
序列ALNYGSYYAMDA(SEQ ID NO 201)組成的CDR3-H，和
輕鏈可變結構域，其含有序列X1DIX2X3N(SEQ ID NO：338)組成的CDR1-L，其中X1是E或K，X2是F、H或Y且X3是N或S，或其任何組合；和
序列‘DAN’或‘DAS’組成的CDR2-L；和
序列X1QYNX2YPYT(SEQ ID NO：339)組成的CDR3-L，其中X1是H或Q且X2是I、K或N，或其任何組合；或
b)重鏈可變結構域，其含有序列GFSLTSYX1(SEQ ID NO：340)組成的CDR1-H，其中X1是H或S；和
序列MWX1DGDT(SEQ ID NO：341)組成的CDR2-H，其中X1是S或N；和
序列ARGX1X2X3X4X5X6X7X8X9FX10Y(SEQ ID NO：342)組成的CDR3-H，其中X1是D、Y或H，X2是Y或R，X3是S或T，X4是S或P，X5是Y或無胺基酸，X6是L、I或無胺基酸，X7是Y或無胺基酸，X8是L或無胺基酸，X9是W或無胺基酸，X10是A或D，或其任何組合，和
輕鏈可變結構域，其含有序列QSFLSSGDX1X2NY(SEQ ID NO：343)組成的CDR1-L，其中X1是E或G且X2是R或K，或其任何組合；和
序列‘WAS’組成的CDR2-L；和
序列QQYYDTPLT(SEQ ID NO：253)組成的CDR3-L。
根據具體實例，根據本發明的抗CD123抗體包含上文列舉的13種稱為“3E3-D3”、“1E1-G5”、“2B8-F3”、“2F8-D6”、“3B10-E6”、“5A5-B4”、“6B10-E4”、“6C10-C4”、“6D6-B8”、“8B11-B7”、“9B8-G6”、“9D7-C8”和“9F6-G3”抗CD123抗體之一的重鏈和/或輕鏈CDR序列。
因此，本發明涉及抗CD123抗體，其包含：
a)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：227或與SEQ ID NO：227的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-H；序列SEQ ID NO：228或SEQ ID NO：353或SEQ ID NO：279或與SEQ ID NO：228或SEQ ID NO：353或SEQ ID NO：279的區別在於一個或多個胺基酸取代的序列的CDR2-H；序列SEQ ID NO：229或與SEQ ID NO：229的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-H；和
輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：231或與SEQ ID NO：231的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-L；序列‘RDD’或與‘RDD’的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR2-L和序列SEQ ID NO：232或與SEQ ID NO：232的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-L；或
b)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：199或與SEQ ID NO：199的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-H；序列SEQ ID NO：200或與SEQ ID NO：200的區別在於一個或多個胺基酸取代的序列的CDR2-H；序列SEQ ID NO：201或與SEQ ID NO：201的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-H；和
輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：203或與SEQ ID NO：203的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-L；序列‘DAN’或與‘DAN’的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR2-L和序列SEQ ID NO：204或與SEQ ID NO：204的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-L；或
c)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：206或與SEQ ID NO：206的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-H；序列SEQ ID NO：207或與SEQ ID NO：207的區別在於一個或多個胺基酸取代的序列的CDR2-H；序列SEQ ID NO：208或與SEQ ID NO：208的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-H；和
輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：210或與SEQ ID NO：210的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-L；序列‘ETS’或與‘ETS’的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR2-L和序列SEQ ID NO：211或與SEQ ID NO：211的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-L；或
d)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：213或與SEQ ID NO：213的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-H；序列SEQ ID NO：214或與SEQ ID NO：214的區別在於一個或多個胺基酸取代的序列的CDR2-H；序列SEQ ID NO：215或與SEQ ID NO：215的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-H；和
輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：217或與SEQ ID NO：217的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-L；序列‘NTN’或與‘NTN’的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR2-L和序列SEQ ID NO：218或與SEQ ID NO：218的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-L；或
e)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：220或與SEQ ID NO：220的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-H；序列SEQ ID NO： 221或與SEQ ID NO：221的區別在於一個或多個胺基酸取代的序列的CDR2-H；序列SEQ ID NO：222或與SEQ ID NO：222的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-H of；和
輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：224或與SEQ ID NO：224的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-L；序列‘RVS’或與‘RVS’的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR2-L和序列SEQ ID NO：225或與SEQ ID NO：225的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-L；或
f)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：234或與SEQ ID NO：234的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-H；序列SEQ ID NO：235或與SEQ ID NO：235的區別在於一個或多個胺基酸取代的序列的CDR2-H；序列SEQ ID NO：236或與SEQ ID NO：236的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-H；和
輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：238或與SEQ ID NO：238的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-L；序列‘GAS’或與‘GAS’的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR2-L和序列SEQ ID NO：239或與SEQ ID NO：239的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-L；或
g)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：241或與SEQ ID NO：241的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-H；序列SEQ ID NO：242或與SEQ ID NO：242的區別在於一個或多個胺基酸取代的序列的CDR2-H；序列SEQ ID NO：243或與SEQ ID NO：243的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-H；和
輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：245或與SEQ ID NO：245 的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-L；序列‘YAS’或與‘YAS’的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR2-L和序列SEQ ID NO：246或與SEQ ID NO：246的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-L；或
h)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：248或與SEQ ID NO：248的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-H；序列SEQ ID NO：249或與SEQ ID NO：249的區別在於一個或多個胺基酸取代的序列的CDR2-H；序列SEQ ID NO：250或與SEQ ID NO：250的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-H；和
輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：252或與SEQ ID NO：252的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-L；序列‘WAS’或與‘WAS’的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR2-L和序列SEQ ID NO：253或與SEQ ID NO：253的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-L；或
i)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：255或與SEQ ID NO：255的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-H；序列SEQ ID NO：200或與SEQ ID NO：200的區別在於一個或多個胺基酸取代的序列的CDR2-H；序列SEQ ID NO：201或與SEQ ID NO：201的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-H；和
輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：257或與SEQ ID NO：257的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-L；序列‘DAN’或與‘DAN’的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR2-L和序列SEQ ID NO：258或與SEQ ID NO：258的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-L；或
j)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：199或與SEQ ID NO：199的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-H；序列SEQ ID NO：260或與SEQ ID NO：260的區別在於一個或多個胺基酸取代的序列的CDR2-H；序列SEQ ID NO：201或與SEQ ID NO：201的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-H；和
輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：262或與SEQ ID NO：262的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-L；序列‘DAS’或與‘DAS’的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR2-L和序列SEQ ID NO：263或與SEQ ID NO：263的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-L；或
k)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：265或與SEQ ID NO：265的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-H；序列SEQ ID NO：266或與SEQ ID NO：266的區別在於一個或多個胺基酸取代的序列的CDR2-H；序列SEQ ID NO：267或與SEQ ID NO：267的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-H；和
輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：252或與SEQ ID NO：252的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-L；序列‘WAS’或與‘WAS’的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR2-L和序列SEQ ID NO：253或與SEQ ID NO：253的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-L；或
l)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：265或與SEQ ID NO：265的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-H；序列SEQ ID NO：266或與SEQ ID NO：266的區別在於一個或多個胺基酸取代的序列的CDR2-H；序列SEQ ID NO：269或與SEQ ID NO：269的區別在於 一個胺基酸取代的序列的CDR3-H；和
輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：271或與SEQ ID NO：271的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-L；序列‘WAS’或與‘WAS’的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR2-L和序列SEQ ID NO：253或與SEQ ID NO：253的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-L；或
m)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：273或與SEQ ID NO：273的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-H；序列SEQ ID NO：274或與SEQ ID NO：274的區別在於一個或多個胺基酸取代的序列的CDR2-H；序列SEQ ID NO：201或與SEQ ID NO：201的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-H；和
輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：276或與SEQ ID NO：276的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-L；序列‘DAS’或與‘DAS’的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR2-L和序列SEQ ID NO：258或與SEQ ID NO：258的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-L。
在一種或多上述的CDR序列中，一個或多個個體胺基酸可通過取代特別是通過保守取代改變。這種改變在抗體人源化方面可意在例如去除糖基化位點或去醯胺位點。
基於“1E1-G5”、“6D6-B8”、“8B11-B7”、“9F6-G3”抗CD123抗體VH和VL區序列的比對識別了不同的胺基酸取代。因此在一個具體實例中，可進行下列胺基酸取代：
- 在CDR1-H位置1和7的一處或多處，例如在CDR1-H序列GYTFTDHI(SEQ ID NO：199)或GYTFTDYI(SEQ ID NO：273)的位置7，例如 在序列AYTFTDNI(SEQ ID NO：255)CDR1-H的位置1和5；和/或
- 在CDR2-H位置6和8的一處或多處，例如在CDR2-H序列INPYSGGT(SEQ ID NO：200)或INPYSDGT(SEQ ID NO：274)或INPYSGGA(SEQ ID NO：260)的位置6和/或8；和/或
- 在CDR1-L位置1、4和5的一處或多處，例如在CDR1-L序列KDIYSN(SEQ ID NO：262)或EDIFNN(SEQ ID NO：257)的位置1或1、4和5；和/或
- 在CDR2-L的序列‘DAN’或‘DAS’的位置3處；和/或
- 在CDR3-位置1和5的一處或多處，例如在CDR3-L序列HQYNIYPYT(SEQ ID NO：258)或QQYNKYPYT(SEQ ID NO：204)或HQYNNYPYT(SEQ ID NO：263)的位置1和/或5。
在另一具體實例中，進行下列胺基酸取代：
- 在CDR1-H中的位置8處，例如在CDR1-H序列GFSLTSYH(SEQ ID NO：265)或GFSLTSYS(SEQ ID NO：248)的位置8；和/或
- 在CDR2-H中的位置3處，例如在CDR2-H序列MWSDGD(SEQ ID NO：265)或MWNDGD(SEQ ID NO：248)的位置3；和/或
- 在CDR3-H中的位置4和9處，例如在CDR3-H序列ARGDYSSYIYLWFAY(SEQ ID NO：267)或ARGYYSSYLYLWFAY(SEQ ID NO：269)的位置4和9；和/或
- 在CDR1-L中位置9和10的一處或多處，例如在CDR1-L序列QSFLSSGDERNY(SEQ ID NO：252)或QSFLSSGDGKNY(SEQ ID NO：271)的位置9和10。
根據具體實例，所述抗體包含：
a)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：227的CDR1-H、序列 SEQ ID NO：228、SEQ ID NO：353、SEQ ID NO：279的CDR2-H、序列SEQ ID NO：229的CDR3-H，和
輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：231的CDR1-L、序列‘RDD’的CDR2-L和序列SEQ ID NO：232的CDR3-L；或
n)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：199的CDR1-H、序列SEQ ID NO：200的CDR2-H、序列SEQ ID NO：201的CDR3-H；和
輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：203的CDR1-L、序列‘DAN’的CDR2-L和序列SEQ ID NO：204的CDR3-L；或
o)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：206的CDR1-H、序列SEQ ID NO：207的CDR2-H、序列SEQ ID NO：208的CDR3-H，和
輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：210的CDR1-L、序列‘ETS’的CDR2-L和序列SEQ ID NO：211的CDR3-L；或
p)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：213的CDR1-H、序列SEQ ID NO：214的CDR2-H、序列SEQ ID NO：215的CDR3-H，和
輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：217的CDR1-L、序列‘NTN’的CDR2-L和序列SEQ ID NO：218的CDR3-L；或
q)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：220的CDR1-H、序列SEQ ID NO：221的CDR2-H、序列SEQ ID NO：222的CDR3-H，和
輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：224的CDR1-L、序列‘RVS’生的CDR2-L和序列SEQ ID NO：225的CDR3-L；或
r)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：234的CDR1-H、序列SEQ ID NO：235的CDR2-H、序列SEQ ID NO：236的CDR3-H，和
輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：238的CDR1-L，序列‘GAS’的CDR2-L和序列SEQ ID NO：239的CDR3-L；或
s)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：241的CDR1-H、序列SEQ ID NO：242的CDR2-H、序列SEQ ID NO：243的CDR3-H，和
輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：245的CDR1-L、序列‘YAS’的CDR2-L和序列SEQ ID NO：246的CDR3-L；或
t)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：248的CDR1-H、序列SEQ ID NO：249的CDR2-H、序列SEQ ID NO：250的CDR3-H，和
輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：252的CDR1-L、序列‘WAS’的CDR2-L和序列SEQ ID NO：253的CDR3-L；或
u)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：255的CDR1-H、序列SEQ ID NO：200的CDR2-H、序列SEQ ID NO：201的CDR3-H，和
輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：257的CDR1-L、序列‘DAN’的CDR2-L和序列SEQ ID NO：258的CDR3-L；或
v)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：199的CDR1-H、序列SEQ ID NO：260的CDR2-H、序列SEQ ID NO：201的CDR3-H，和
輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：262的CDR1-L、序列‘DAS’的CDR2-L和序列SEQ ID NO：263的CDR3-L；或
w)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：265的CDR1-H、序列SEQ ID NO：266的CDR2-H、序列SEQ ID NO：267的CDR3-H，和
輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：252的CDR1-L、序列‘WAS’的CDR2-L和序列SEQ ID NO：253的CDR3-L；或
x)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：265的CDR1-H、序列SEQ ID NO：266的CDR2-H、序列SEQ ID NO：269的CDR3-H，和
輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：271的CDR1-L、序列‘WAS’的CDR2-L和序列SEQ ID NO：253的CDR3-L；或
y)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：273的CDR1-H、序列SEQ ID NO：274的CDR2-H、序列SEQ ID NO：201的CDR3-H，和
輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：276的CDR1-L、序列‘DAS’的CDR2-L和序列SEQ ID NO：258的CDR3-L。
根據本發明的抗CD123抗體具體是常規抗體，特別是常規單株抗體或抗體片段、雙特異性或多重特異性抗體。
根據本發明的抗CD123抗體具體包含IgG或其片段或由IgG或其片段組成。
本發明還提供如上文定義的抗CD123抗體，其至少包含上文列舉的稱為抗CD123抗體之一的重鏈可變結構域和/或輕鏈可變結構域。
因此，本發明特別關於抗CD123抗體，其包含：
a)序列SEQ ID NO：226或SEQ ID NO：277或SEQ ID NO：278或與其至少85%相同的序列的重鏈可變結構域，和/或序列SEQ ID NO：230或與其至少85%相同的序列的輕鏈可變結構域；或
b)序列SEQ ID NO：198或與其至少85%相同的序列的重鏈可變結構域，和/或序列SEQ ID NO：202或與其至少85%相同的序列的輕鏈可變結構域；或
c)序列SEQ ID NO：205或與其至少85%相同的序列的重鏈可變結構域，和/或序列SEQ ID NO：209或與其至少85%相同的序列的輕鏈可變結構域；或
d)序列SEQ ID NO：212或與其至少85%相同的序列的重鏈可變結構域，和/或序列SEQ ID NO：216或與其至少85%相同的序列的輕鏈可變結構域；或
e)序列SEQ ID NO：219或與其至少85%相同的序列的重鏈可變結構 域，和/或序列SEQ ID NO：223或與其至少85%相同的序列的輕鏈可變結構域；或
f)序列SEQ ID NO：233或與其至少85%相同的序列的重鏈可變結構域，和/或序列SEQ ID NO：237或與其至少85%相同的序列的輕鏈可變結構域；或
g)序列SEQ ID NO：240或與其至少85%相同的序列的重鏈可變結構域，和/或序列SEQ ID NO：244或與其至少85%相同的序列的輕鏈可變結構域；或
h)序列SEQ ID NO：247或與其至少85%相同的序列的重鏈可變結構域，和/或序列SEQ ID NO：251或與其至少85%相同的序列的輕鏈可變結構域；或
i)序列SEQ ID NO：254或與其至少85%相同的序列的重鏈可變結構域，和/或序列SEQ ID NO：256或與其至少85%相同的序列的輕鏈可變結構域；或
j)序列SEQ ID NO：259或與其至少85%相同的序列的重鏈可變結構域，和/或序列SEQ ID NO：261或與其至少85%相同的序列的輕鏈可變結構域；或
k)序列SEQ ID NO：264或與其至少85%相同的序列的重鏈可變結構域，和/或序列SEQ ID NO：251或與其至少85%相同的序列的輕鏈可變結構域；或
l)序列SEQ ID NO：268或與其至少85%相同的序列的重鏈可變結構域，和/或序列SEQ ID NO：270或與其至少85%相同的序列的輕鏈可變結構域；或
m)序列SEQ ID NO：272或與其至少85%相同的序列的重鏈可變結構 域，和/或序列SEQ ID NO：275或與其至少85%相同的序列的輕鏈可變結構域。
例如，重鏈或輕鏈可變結構域的序列適當時可與參照序列SEQ ID NO：226、277、278、230、198、202、205、209、212、216、219、223、233、237、240、244、247、251、254、256、259、261、264、251、268、270、272或275區別在於一個或多個胺基酸取代，具體地通過一個或多個保守胺基酸取代和/或用典型殘基的取代。具體地，重鏈或輕鏈可變結構域的序列可與參照序列SEQ ID NO：226、277、278、230、198、202、205、209、212、216、219、223、233、237、240、244、247、251、254、256、259、261、264、251、268、270、272或275區別僅在於保守胺基酸取代。
與序列SEQ ID NO：226、277、278、230、198、202、205、209、212、216、219、223、233、237、240、244、247、251、254、256、259、261、264、251、268、270、272或275相比的序列改變具體基本上在一個或多個以下框架區中存在：FR1-L、FR2-L、FR3-L、FR4-L和/或FR1-H、FR2-H、FR3-H、FR4-H。
在一個具體實例中，本發明的抗CD123抗體及其片段分別是大鼠抗體和大鼠抗體的片段。
本發明的抗CD123抗體還可以是嵌合抗體，且具體是大鼠/人抗體，例如包含大鼠重鏈和輕鏈可變結構域和來自人抗體的CH結構域和CL結構域的抗體。這種抗體的片段可以是多肽。抗CD123抗體還可以是人源化抗體或藉由CDR-移植或藉由4D方法獲得的人源化抗體的片段(US20110027266)。
相應地，在一個具體實例中，本發明的抗CD123抗體是人源化的抗體，其包含：
a)重鏈可變結構域，其含有選自下組的胺基酸序列：SEQ ID NO：280、SEQ ID NO：281、SEQ ID NO：282、SEQ ID NO：283、SEQ ID NO：284、SEQ ID NO：285、SEQ ID NO：286、SEQ ID NO：287、SEQ ID NO：288、SEQ ID NO：289、SEQ ID NO：290、SEQ ID NO：291、SEQ ID NO：301和SEQ ID NO：302；和
b)輕鏈可變結構域，其含有選自下組的胺基酸序列：SEQ ID NO：292、SEQ ID NO：293、SEQ ID NO：294、SEQ ID NO：295、SEQ ID NO：296、SEQ ID NO：297、SEQ ID NO：298、SEQ ID NO：299、SEQ ID NO：300、SEQ ID NO：303、SEQ ID NO：304和SEQ ID NO：305。
在一個具體實例中，根據本發明的抗CD123抗體包含上文列舉的稱為抗CD123抗體之一的重鏈三個CDR序列或可變結構域，或重鏈和輕鏈的六個CDR序列或可變結構域。
本發明進一步涉及如上文列舉的人源化抗CD123抗體的片段。在一個具體實例中，上文所述的人源化抗CD123抗體是嵌合抗體。
根據本發明的抗CD123抗體還可以是單結構域抗體或其片段。具體地，單結構域抗體片段可由包含上文所述的抗體之一的CDR1-H、CDR2-H和CDR3-H的可變重鏈(VHH)組成。抗CD3抗體還可以是重鏈抗體，即缺乏輕鏈的抗體，其可包含或不包含CH1結構域。
單結構域抗體或其片段還可以包含駱駝(camelid)單結構域抗體的框架區和任選地駱駝單結構域抗體的恒定結構域。
根據本發明的抗CD123抗體還可以是選自下列組成群組的抗體片段：Fv、Fab、F(ab')2、Fab'、dsFv、(dsFv)2、scFv、sc(Fv)2和雙抗體，特別是人源化抗體片段。
根據本發明的抗CD123抗體也可為由本發明的至少一種抗CD123的抗體片段或至少一個可變結構域所形成之雙特異性及多重特異性抗體。多重特異性抗體為多價蛋白複合物，例如於EP 2 050 764 A1或US 2005/0003403 A中所述者。
根據本發明的雙特異性或多重特異性CD123-抗體可具有針對(a)由上述抗CD123抗體之一靶向的人或人和食蟹猴CD123細胞外結構域和(b)至少一種其他抗原具有特異性。
在具體的具體實例中，其他抗原是CD3且相應地獲得的雙特異性抗體是CD3/CD123雙特異性抗體。常規的雙特異性抗體可通過本領域已知的技術產生。
根據本發明的抗體和其片段可用於分離(例如純化)形式或包含於載體中，如膜或脂質媒介物(例如脂質體)。
在另一具體實例中，本發明的抗CD123抗體用於製備本發明的在”抗體樣結合蛋白”部分進一步定義的抗體樣結合蛋白。
上述具體實例的任何組合構成本發明的部分。
抗體樣結合蛋白
發明人已生成數種抗體樣結合蛋白，稱為“7G3x20G6”、“7G3x4E7”、“7G3x4B4”、“7G3x18F5”、“hz20G6x7G3”、“7G3xhz4B4”、“hz4B4x3E3”、“hz20G6x7G3-TL4”和“hz20G6xhz7G3”抗體樣結合蛋白，其中術語“hz”指代人源化抗體。這些抗體樣結合蛋白具有CODV設計，特別是CODV-Fab或CODV-Ig設計。
本發明上下文中的“CODV形式”指雙特異性抗體或多重特異性抗體的交叉雙可變(CODV)配置。CODV形式允許可變結構域折疊保留和最終親和力的互換性。
CODV形式之前已在國際專利申請WO2012/135345中描述。相應地，在一個具體實例中，本發明的抗體樣結合蛋白如之前國際專利申請WO2012/135345(其通過提述併入本文)中所述處於CODV形式。
在一個具體實例中，本發明關於CODV-Fab形式的抗體樣結合蛋白。相應地，在一個具體實例中，本發明關於包含形成兩抗原結合位點的兩條多肽鏈的抗體樣結合蛋白，其中第一多肽具有由式[I]所示的結構：
VD1-L1-VD2-L2-CL [I]
且第二多肽具有通過式[II]所示的結構：
VD3-L3-VD4-L4-CH1 [II]
其中：
VD1是第一免疫球蛋白重鏈或輕鏈的可變結構域；
VD2是第二免疫球蛋白重鏈或輕鏈的可變結構域；
VD3是所述第二免疫球蛋白重鏈或輕鏈的可變結構域；
VD4是所述第一免疫球蛋白重鏈或輕鏈的可變結構域；
CL是免疫球蛋白的輕鏈恒定結構域；
CH1是免疫球蛋白的CH1重鏈恒定結構域；
L1、L2、L3和L4是胺基酸連接子；
且其中所述第一和第二多肽形成交叉輕鏈-重鏈對，且
其中VD1和VD2均為輕鏈可變結構域或均為重鏈可變結構域，且如果VD1和VD2為輕鏈可變結構域，則VD3和VD4均為重鏈可變結構域，或如果VD1和VD2是重鏈可變結構域，則VD3和VD4均為輕鏈可變結構域。
在CODV-Fab中添加Fc結構域至抗體樣結合蛋白進一步穩定抗體樣結合蛋白。更準確地，添加Fc結構域至CODV-Fab中的式(II)抗體 樣結合蛋白的多肽增加抗體樣結合蛋白的半衰期且因此改進抗體樣結合蛋白的藥物動力學概貌(profile)。添加一個Fc區至CODV-Fab導致包含Fc結構域的多肽二聚化且獲得的抗體樣結合蛋白是CODV-Ig形式的抗體樣結合蛋白。本發明因此進一步關於CODV-Ig形式的抗體樣結合蛋白。
因此，本發明進一步關於包含形成四抗原結合位點的四條多肽鏈的抗體樣結合蛋白，其中兩條多肽鏈具有由式[I]所示的結構：
VD1-L1-VD2-L2-CL [I]
且兩條多肽鏈具有通過式[III]所示的結構：
VD3-L3-VD4-L4-CH1-Fc [III]
其中：
VD1是第一免疫球蛋白重鏈或輕鏈的可變結構域；
VD2是第二免疫球蛋白重鏈或輕鏈的可變結構域；
VD3是所述第二免疫球蛋白重鏈或輕鏈的可變結構域；
VD4是所述第一免疫球蛋白重鏈或輕鏈的可變結構域；
CL是免疫球蛋白的輕鏈恒定結構域；
CH1是免疫球蛋白的CH1重鏈恒定結構域；
Fc是免疫球蛋白中的免疫球蛋白鉸鏈區和CH2、CH3免疫球蛋白重鏈恒定結構域；
L1、L2、L3和L4是胺基酸連接子；
且其中所述式I的多肽和式III的多肽形成交叉輕鏈-重鏈對，且
其中VD1和VD2均為輕鏈可變結構域或均為重鏈可變結構域，且如果VD1和VD2是輕鏈可變結構域，則VD3和VD4均為重鏈可變結構域，或如果VD1和VD2是重鏈可變結構域，則VD3和VD4均為輕鏈可變結構域。
在所述CODV-Ig形式中，兩條具有由式[III]所示的結構的多肽鏈藉由其Fc結構域二聚化。
在另一個具體實例中，將第一Fc結構域添加至式[II]抗體樣結合蛋白CODV-Fab多肽，並將第二Fc結構域(稱為Fc2)添加至式[I]抗體樣結合蛋白CODV-Fab多肽。此外，在相同的具體實例中，連接子L5出現在式[I]多肽鏈CL和Fc2結構域間獲得式[IV]多肽鏈。
相應地，本發明進一步關於包含形成兩抗原結合位點的兩條多肽鏈的抗體樣結合蛋白，其中一條多肽鏈具有由式[IV]所示的結構：
VD1-L1-VD2-L2-CL-L5-Fc2 [IV]
且一條多肽鏈具有通過式[III]所示的結構：
VD3-L3-VD4-L4-CH1-Fc [III]
其中：
VD1是第一免疫球蛋白重鏈或輕鏈的可變結構域；
VD2是第二免疫球蛋白重鏈或輕鏈的可變結構域；
VD3是所述第二免疫球蛋白重鏈或輕鏈的可變結構域；
VD4是所述第一免疫球蛋白重鏈或輕鏈的可變結構域；
CL是免疫球蛋白的輕鏈恒定結構域；
CH1是免疫球蛋白的CH1重鏈恒定結構域；
Fc是免疫球蛋白的免疫球蛋白鉸鏈區和CH2、CH3免疫球蛋白重鏈恒定結構域；
Fc2是免疫球蛋白的免疫球蛋白鉸鏈區和CH2、CH3免疫球蛋白重鏈恒定結構域；
L1、L2、L3、L4和L5是胺基酸連接子；且
其中式[IV]的多肽和式[III]的多肽形成交叉輕鏈-重鏈對；且
其中VD1和VD2均為輕鏈可變結構域或均為重鏈可變結構域，且如果VD1和VD2是輕鏈可變結構域，則VD3和VD4均為重鏈可變結構域，或如果VD1和VD2是重鏈可變結構域，則VD3和VD4均為輕鏈可變結構域。
該CODV形式中，其中由式[III]和[IV]所示的多肽鏈通過其分別的Fc2和Fc區二聚化，本文中稱為CODV-Fab-TL。
在CODV-Fab的另一具體實例中，將第一Fc結構域添加至由式[II]所示的多肽鏈(獲得式[III])，且抗體樣結合蛋白包含含有第二Fc結構域或由其組成的多肽鏈(稱為Fc3)。
本發明進一步關於抗體樣結合蛋白，其包含形成兩抗原結合位點的三條多肽鏈，其中
第一多肽具有通過式[I]所示的結構：
VD1-L1-VD2-L2-CL [I]
第二多肽具有通過式[III]所示的結構：
VD3-L3-VD4-L4-CH1-Fc [III]
第三多肽Fc3是免疫球蛋白的免疫球蛋白鉸鏈區和CH2、CH3免疫球蛋白重鏈恒定結構域(也稱為Fc殘端(stump))；
其中
VD1是第一免疫球蛋白重鏈或輕鏈的可變結構域；
VD2是第二免疫球蛋白重鏈或輕鏈的可變結構域；
VD3是所述第二免疫球蛋白重鏈或輕鏈的可變結構域；
VD4是所述第一免疫球蛋白重鏈或輕鏈的可變結構域；
CL是免疫球蛋白的輕鏈恒定結構域；
CH1是免疫球蛋白的CH1重鏈恒定結構域；
Fc是免疫球蛋白的免疫球蛋白鉸鏈區和CH2、CH3免疫球蛋白重鏈恒定結構域；
L1、L2、L3，和L4是胺基酸連接子；
且其中式[I]的多肽和式[III]的多肽形成交叉輕鏈-重鏈對，且
其中VD1和VD2均為輕鏈可變結構域或均為重鏈可變結構域，且如果VD1和VD2是輕鏈可變結構域，則VD3和VD4均為重鏈可變結構域，或如果VD1和VD2是重鏈可變結構域，則VD3和VD4均為輕鏈可變結構域；
且其中式[III]的多肽與第三多肽藉由其Fc結構域異二聚化。
相應地，在所述具體實例中，所謂的“Fc殘端”(Fc3)與根據式III的多肽Fc區異二聚化。該CODV形式本文稱為CODV-Fab-OL。該構築體避免CODV-Fab形成聚集體。
在CODV-Fab-OL的一個具體實例中，Fc和Fc3都是免疫球蛋白變體，其中CH3結構域已修飾：根據特別是描述於專利US5731168和US8216805(其以提述併入本文)中稱為“Knob-into-Hole”的技術，Fc和Fc3各已在CH3-CH3界面基因工程化以促進異多聚體形成。
相應地，在具體實例中，Fc和Fc3之一的CH3結構域包含突變Y349C、T366S、L368A和Y407V，而其他Fc和Fc3的CH3結構域包含突變S354C和T366W(胺基酸位置由參照IgG1序列表示)。
合適的Fc和Fc3對的實例包括SEQ ID NO：396(Fc)和SEQ ID NO：397(Fc3)對和SEQ ID NO：394(Fc)和SEQ ID NO：398(Fc3)對。
在本發明的一個具體實例中，第一免疫球蛋白或第二免疫球蛋白是如上文«抗CD3抗體»部分定義的一種抗CD3抗體。
在本發明的另一具體實例中，第一免疫球蛋白或第二免疫球 蛋白是如上文«抗CD123抗體»部分定義的一種抗CDI23抗體。
根據本發明的具體實例，式I或式[IV]多肽的VD1和VD2均為輕鏈可變結構域或均為重鏈可變結構域，且II或III多肽的VD3和VD4均為重鏈或均為輕鏈可變結構域。該可交換性也稱為"交換能力"且因此確定本發明抗體樣結合蛋白的交叉雙可變(CODV)配置。
根據上文定義，VD1和VD4是第一免疫球蛋白的重鏈或輕鏈可變結構域，且是VD2和VD3第二免疫球蛋白的重鏈或輕鏈可變結構域，VD1和VD4以及VD2和VD3因此考慮為關聯結構域。
相應地，術語“交叉”指式[I]或式[IV]多肽的VD1或VD2對應其式[II]或式[III]多肽的關聯可變結構域VD4或VD3的交換比對。
在一個具體的具體實例中，VD1和VD2是輕鏈可變結構域且VD3和VD4是重鏈可變結構域。
本發明的抗體樣結合蛋白可使用獲得自或源自任何人或非人抗體的結構域或序列，例如人、大鼠或人源化抗體。
在一個具體實例中，免疫球蛋白是IgG免疫球蛋白。
相應地，在一個具體實例中，CL是IgG免疫球蛋白的輕鏈恒定結構域。在另一個具體實例中，CH1是IgG免疫球蛋白的CH1重鏈恒定結構域。
在一個具體實例中，本發明的抗體樣結合蛋白可以使用本文所述的抗CD3抗體和抗CD123抗體的結構域或序列製備。
如本文使用的術語“連接子(linker)”是指插入免疫球蛋白結構域中為輕鏈和重鏈的結構域提供足夠的可動性以折疊成交換雙重可變區免疫球蛋白的一個或多個胺基酸殘基。在一些具體實例中，連接子由0個胺基酸組成意為不存在連接子。在序列水平，連接子分別在可變結構域間或 可變和恒定結構域間過渡處插入。由於已熟知免疫球蛋白結構域的大致大小，因此可識別結構域間的過渡。如通過實驗數據所證或如通過建模或二級結構預測所假設，可通過定位不形成第二結構組成(如β-片層或α-螺旋)的肽段來確定結構域過渡的精確位置。本發明上下文所述的連接子是連接子L1、L2、L3、L4和L5。L1位於N-末端VD1結構域和VD2結構域間；L2位於VD2和C-末端CL結構域間。連接子L3和L4位於如根據抗體樣-蛋白式II或III所定義的多肽上。更精確地，L3位於N-末端VD3和VD4結構域間且L4位於VD4和C-末端CH1-Fc結構域間。L5位於CL和N-末端Fc2間。連接子L1、L2、L3、L4和L5是獨立的，但在一些具體實例中，其具有相同的序列和/或長度。
在本發明的一些抗體樣結合蛋白中，L3的長度是L1長度的至少兩倍。在本發明的其他抗體樣結合蛋白中，L4的長度是L2長度的至少兩倍。在本發明的一些抗體樣結合蛋白中，L1的長度是L3長度的至少兩倍。在本發明的其他抗體樣結合蛋白中，L2的長度是L4長度的至少兩倍。
在一個具體實例中，連接子L1、L2、L3和L4包含0-20個胺基酸。在一個具體實例中，L5包含0-10個胺基酸。
在本發明的一些抗體樣結合蛋白中，L1是3-12個胺基酸殘基長，L2是3-14個胺基酸殘基長，L3是1-8個胺基酸殘基長，且L4是1-3個胺基酸殘基長。在其他抗體樣結合蛋白中，L1是5-10個胺基酸殘基長，L2是5-8個胺基酸殘基長，L3是1-5個胺基酸殘基長，且L4是1-2個胺基酸殘基長。在優選的抗體樣結合蛋白中，L1是7個胺基酸殘基長，L2是5個胺基酸殘基長，L3是1個胺基酸殘基長，且L4是2個胺基酸殘基長。
在本發明的一些抗體樣結合蛋白中，L1是1-3個胺基酸殘基長，L2是1-4個胺基酸殘基長，L3是2-15個胺基酸殘基長，且L4是2-15個胺基酸殘基長。在其他抗體樣結合蛋白中，L1是1-2個胺基酸殘基長，L2是1-2個 胺基酸殘基長，L3是4-12個胺基酸殘基長，且L4是2-12個胺基酸殘基長。在優選的抗體樣結合蛋白中，L1是1個胺基酸殘基長，L2是2個胺基酸殘基長，L3是7個胺基酸殘基長，且L4是5個胺基酸殘基長。
在本發明的一些抗體樣結合蛋白中，L1、L3或L4可等於0。然而，在其中L3或L4等於0的抗體樣結合蛋白中，可變區和恒定區或在其他鏈上的雙可變結構域間的相應過渡連接子不能為0。在一些具體實例中，L1等於0且L3是2個或多個胺基酸殘基，L3等於0且L1等於1個或更多胺基酸殘基，或L4等於0且L2是3個或多個胺基酸殘基。
在本發明的一些抗體樣結合蛋白中，選自下組的連接子至少之一包含至少一個半胱胺酸殘基：L2、L3和L4。
合適的連接子實例包括單甘胺酸、蘇胺酸或絲胺酸殘基；二肽如二甘胺酸肽、組胺酸-蘇胺酸肽或甘胺酸-絲胺酸二肽；具有三個甘胺酸的三肽、三肽Thr-His-Thr、三肽Gly-Gly-Ser；具有四個甘胺酸殘基的肽；具有五個甘胺酸殘基的肽；具有六個甘胺酸殘基的肽；具有七個甘胺酸殘基的肽；具有八個甘胺酸殘基的肽。可使用其他胺基酸殘基的組合如肽Gly-Gly-Gly-Ser(SEQ ID NO：354)、肽Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(SEQ ID NO：344)、肽Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(SEQ ID NO：355)、肽Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(SEQ ID NO：356)、肽Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(SEQ ID NO：357)、肽Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(SEQ ID NO：358)，和肽Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(SEQ ID NO：345)。其他合適的連接子包括單Ser和Val殘基；二肽Arg-Thr、Gin-Pro、Ser-Ser、Thr-Lys和Ser-Leu；Lys-Thr-His-Thr(SEQ ID NO：359)；Lys-Thr-His-Thr-Ser(SEQ ID NO：360)；Asp-Lys-Thr-His-Thr-Ser(SEQ ID NO：361)； Asp-Lys-Thr-His-Thr-Ser-Pro(SEQ ID NO：362)；Ser-Asp-Lys-Thr-His-Thr-Ser-Pro(SEQ ID NO：363)；Ser-Asp-Lys-Thr-His-Thr-Ser-Pro-Pro(SEQ ID NO：364)；Lys-Ser-Asp-Lys-Thr-His-Thr-Ser-Pro-Pro-Ser(SEQ ID NO：365)；Pro-Lys-Ser-Asp-Lys-Thr-His-Thr-Ser-Pro-Pro-Ser(SEQ ID NO：366)；Pro-Lys-Ser-Asp-Lys-Thr-His-Thr-Ser-Pro-Pro-Ser-Pro(SEQ ID NO：367)；Glu-Pro-Lys-Ser-Asp-Lys-Thr-His-Thr-Ser-Pro-Pro-Ser-Pro(SEQ ID NO：368)；Glu-Pro-Lys-Ser-Asp-Lys-Thr-His-Thr-Ser-Pro-Pro-Ser-Pro-Gly(SEQ ID NO：369)；Gly-Glu-Pro-Lys-Ser-Asp-Lys-Thr-His-Thr-Ser-Pro-Pro-Ser-Pro-Gly(SEQ ID NO：370)；Gly-Glu-Pro-Lys-Ser-Asp-Lys-Thr-His-Thr-Ser-Pro-Pro-Ser-Pro-Gly-Gly(SEQ ID NO：371)；Gly-Gly-Glu-Pro-Lys-Ser-Asp-Lys-Thr-His-Thr-Ser-Pro-Pro-Ser-Pro-Gly-Gly(SEQ ID NO：372)；Gly-Gly-Glu-Pro-Lys-Ser-Asp-Lys-Thr-His-Thr-Ser-Pro-Pro-Ser-Pro-Gly-Gly-Gly(SEQ ID NO：373)；Gly-Gly-Gly-Glu-Pro-Lys-Ser-Asp-Lys-Thr-His-Thr-Ser-Pro-Pro-Ser-Pro-Gly-Gly-Gly(SEQ ID NO：374)；Thr-Val-Ala-Ala-Pro(SEQ ID NO：346)、Gln-Pro-Lys-Ala-Ala(SEQ ID NO：347)、Gln-Arg-Ile-Glu-Gly(SEQ ID NO：348)；Ala-Ser-Thr-Lys-Gly-Pro-Ser(SEQ ID NO：349)、Arg-Thr-Val-Ala-Ala-Pro-Ser(SEQ ID NO：350)、Gly-Gln-Pro-Lys-Ala-Ala-Pro(SEQ ID NO：307)、Thr-Lys-Gly-Pro-Ser(SEQ ID NO：309)、His-Ile-Asp-Ser-Pro-Asn-Lys(SEQ ID NO：351)和Gly-Gly-Ser-Gly-Ser-Ser-Gly-Ser-Gly-Gly(SEQ ID NO：389)。上文列舉的實 例並非意在以任何方式限制本發明的保護範圍，且包含選自下列組成群組的隨機所選的胺基酸的連接子已顯示適合用於本發明的抗體樣結合蛋白：纈胺酸、亮胺酸、異亮胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、賴胺酸、精胺酸、組胺酸、天冬胺酸、谷胺酸、天冬醯胺、穀氨醯胺、甘胺酸和脯胺酸。
連接子中胺基酸殘基的標識和序列可隨著連接子中需要實現的次級結構要素的類型而變化。例如，甘胺酸、絲胺酸和丙胺酸對於具有最大柔性的連接子最佳。如果需要更加剛性和延伸的連接子，則甘胺酸、脯胺酸、蘇胺酸和絲胺酸的一些組合有效。根據預期性質任何胺基酸殘基與其他胺基酸殘基組合以按需要構建較大肽連接子時均可認作是連接子。
在一個具體實例中，連接子L1是序列Gly-Gln-Pro-Lys-Ala-Ala-Pro(SEQ ID NO：307)，連接子L2是序列Thr-Lys-Gly-Pro-Ser(SEQ ID NO：309)，連接子L3是序列‘S’且連接子L4是序列‘RT’。
在另一個具體實例中，L1、L2、L3和L4連接子序列選自下組：蘇胺酸；二肽如組胺酸-蘇胺酸肽；三肽Thr-His-Thr、Lys-Thr-His-Thr(SEQ ID NO：359)；Lys-Thr-His-Thr-Ser(SEQ ID NO：360)；Asp-Lys-Thr-His-Thr-Ser(SEQ ID NO：361)；Asp-Lys-Thr-His-Thr-Ser-Pro(SEQ ID NO：362)；Ser-Asp-Lys-Thr-His-Thr-Ser-Pro(SEQ ID NO：363)：Ser-Asp-Lys-Thr-His-Thr-Ser-Pro-Pro(SEQ ID NO：364)；Lys-Ser-Asp-Lys-Thr-His-Thr-Ser-Pro-Pro-Ser(SEQ ID NO：365)；Pro-Lys-Ser-Asp-Lys-Thr-His-Thr-Ser-Pro-Pro-Ser(SEQ ID NO：366)；Pro-Lys-Ser-Asp-Lys-Thr-His-Thr-Ser-Pro-Pro-Ser-Pro(SEQ ID NO：367)；Glu-Pro-Lys-Ser-Asp-Lys-Thr-His-Thr-Ser-Pro-Pro-Ser-Pro(SEQ ID NO：368)；Glu-Pro-Lys-Ser-Asp-Lys-Thr-His-Thr-Ser-Pro-Pro-Ser-Pro-Gly(SEQ ID NO：369)；Gly-Glu-Pro-Lys-Ser-Asp-Lys-Thr-His-Thr-Ser-Pro-Pro-Ser-Pro-Gly(SEQ ID NO：370)；Gly-Glu-Pro-Lys-Ser-Asp-Lys-Thr-His-Thr-Ser-Pro-Pro-Ser-Pro-Gly-Gly(SEQ ID NO：371)；Gly-Gly-Glu-Pro-Lys-Ser-Asp-Lys-Thr-His-Thr-Ser-Pro-Pro-Ser-Pro-Gly-Gly(SEQ ID NO：372)；Gly-Gly-Glu-Pro-Lys-Ser-Asp-Lys-Thr-His-Thr-Ser-Pro-Pro-Ser-Pro-Gly-Gly-Gly(SEQ ID NO：373)和Gly-Gly-Gly-Glu-Pro-Lys-Ser-Asp-Lys-Thr-His-Thr-Ser-Pro-Pro-Ser-Pro-Gly-Gly-Gly(SEQ ID NO：374)。在一個具體實例中，連接子L5的序列選自下組：單絲胺酸殘基；二肽如甘胺酸-絲胺酸二肽；和三肽Gly-Gly-Ser、肽Gly-Gly-Gly-Ser(SEQ ID NO：354)、肽Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(SEQ ID NO：344)、肽Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(SEQ ID NO：355)、肽Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(SEQ ID NO：356)、肽Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(SEQ ID NO：357)、肽Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(SEQ ID NO：358)，肽Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(SEQ ID NO：345)和肽Gly-Gly-Ser-Gly-Ser-Ser-Gly-Ser-Gly-Gly(SEQ ID NO：389)。
本文使用的術語"Fc結構域"涵蓋天然Fc和Fc變體和如上文定義的序列。當與Fc變體和天然Fc分子一起時，術語"Fc結構域"包括單體或多聚體形式的分子，無論從完整抗體消化還是由其他方式產生。
本文使用的術語"天然Fc"指包含由抗體消化或由其他方式產生的非抗原結合片段序列的分子，無論是單體或多聚體形式，並可包含鉸鏈區。天然Fc的最初免疫球蛋白來源具體地是人來源且可以是任何免疫 球蛋白，儘管優選是IgG1和IgG2。天然Fc分子由可通過共價(即二硫鍵)和非共價締合連接成二聚體或多聚體形式的單體多肽構成。天然Fc分子單體亞單元間的分子間二硫鍵的數目取決於種類(例如IgG、IgA和IgE)或亞類(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgA1和IgGA2)可以是1-4。天然Fc的一個實例是IgG的木瓜蛋白酶消化獲得的二硫鍵二聚體。本文使用的術語"天然Fc"是單聚體、二聚體和多聚體形式的統稱。
本文使用的術語"Fc變體"指從天然Fc修飾但仍包含針對救助受體FcRn(新生Fc受體)的結合位點的分子或序列。典型的Fc變體和其與救助受體的相互作用為本領域已知。因此，術語"Fc變體"可包含從非人天然Fc人源化的分子或序列。此外，天然的Fc包含由於提供非對於本發明的抗體樣結合蛋白所需的結構特徵和生物活性因此可去除的區。因此，術語"Fc變體"包含缺少一個或多個天然Fc位點或殘基或其中一個或多個Fc位點或殘基已修飾的分子或序列，所述修飾影響或參與：(1)二硫鍵形成，(2)與所選宿主細胞的不相容性，(3)在所選宿主細胞中表現時N-末端異質性，(4)糖基化，(5)與補體的相互作用，(6)與Fc受體而非救助受體的結合，或(7)抗體依賴性細胞毒性(ADCC)。
在一些具體實例中，當抗體樣結合蛋白包含兩個Fc結構域時，即在CODV-Ig(Fc和Fc2)、CODV-Fab-TL(兩Fc結構域)和CODV-Fab-OL(Fc和Fc3)中，兩Fc結構域為相同的免疫球蛋白同型或同型亞類。相應地，在一些具體實例中，CODV-Ig的Fc和Fc2或CODV-Fab-TL的兩Fc結構域，或CODV-Fab-OL的Fc和Fc3都是IgG1亞類，或IgG2亞類，或IgG3亞類，或IgG4亞類。
如本文所述的全部抗體樣結合蛋白不具有效應器功能。這意味著當抗體樣結合蛋白包含一個或多個IgG1亞類的Fc結構域時(即式[III]中 的Fc、式[IV]中的Fc2和/或Fc3)，所述IgG1骨架的一個或多個Fc結構域包含廢除Fc效應器功能的雙突變L234A和L235A(稱為“LALA突變”)。Fc雙突變L234A和L235A不結合FcγR或C1q，且IgG1亞類Fc結構域的ADCC和CDC功能都被廢除(Hezareh,M.et al.,J Virol.2001 Dec；75(24)：12161-12168)。
在一個實例中，Fc區包含胺基酸序列SEQ ID NO：330、SEQ ID NO：394或SEQ ID NO：396。在一個具體實例中，FC2區包含CH3結構域中的H435R和Y436F這兩處胺基酸交換，如Jendeberg,L.et al.(1997,J.Immunological Meth.201：25-34)中所述。相應地，在一個具體實例中，FC2區包含胺基酸序列SEQ ID NO：327。在另一個具體實例中，FC2區包含胺基酸序列SEQ ID NO：392。
稱為CODV-Fab“7G3x20G6”的抗體樣結合蛋白包含：
- 根據式I的一條多肽，胺基酸序列為：
Figure 110113349-A0101-12-0102-194
Figure 110113349-A0101-12-0102-195
(SEQ ID NO：306，連接子以粗體和 下劃線表示)，其含有序列SEQ ID NO：9的VD1、序列SEQ ID NO：307的L1、序列SEQ ID NO：308的VD2、序列SEQ ID NO：309的L2和序列SEQ ID NO：310的CL，和
- 根據式II的一條多肽，胺基酸序列為：
Figure 110113349-A0101-12-0103-196
Figure 110113349-A0101-12-0103-197
(SEQ ID NO：311，連接子以粗 體和下劃線表示)，其含有序列SEQ ID NO：312‘RT’的VD3、胺基酸序列‘S’的L3、序列SEQ ID NO：5的VD4、胺基酸序列的L4和序列SEQ ID NO：313的CH1。
稱為CODV-Fab“7G3x4E7”的抗體樣結合蛋白包含：
- 根據式I的一條多肽，胺基酸序列為：
Figure 110113349-A0101-12-0103-198
Figure 110113349-A0101-12-0103-199
(SEQ ID NO：314，連接子以粗體和下 劃線表示)，其含有序列SEQ ID NO：21的VD1、序列SEQ ID NO：307的L1、序列SEQ ID NO：308的VD2、序列SEQ ID NO：309的L2和序列SEQ ID NO：310的CL，和
- 根據式II的一條多肽，胺基酸序列為：
Figure 110113349-A0101-12-0104-236
Figure 110113349-A0101-12-0104-237
(SEQ ID NO：315，連接子以粗 體和下劃線表示)，其含有序列SEQ ID NO：312的VD3、胺基酸序列‘S’的L3、序列SEQ ID NO：18的VD4、胺基酸序列‘RT’的L4和序列SEQ ID NO：313的CH1。
稱為CODV-Fab“7G3x4B4”的抗體樣結合蛋白包含：- 根據式I的一條多肽，胺基酸序列為：
Figure 110113349-A0101-12-0104-238
Figure 110113349-A0101-12-0104-239
(SEQ ID NO：316，連接子以粗體和下 劃線表示)，其含有序列SEQ ID NO：16的VD1、序列SEQ ID NO：307的L1、序列SEQ ID NO：308的VD2、序列SEQ ID NO：309的L2和序列SEQ ID NO：310的CL，和
- 根據式II的一條多肽，胺基酸序列為：
Figure 110113349-A0101-12-0105-232
Figure 110113349-A0101-12-0105-233
(SEQ ID NO：317，連接子以粗 體和下劃線表示)，其含有序列SEQ ID NO：312的VD3、胺基酸序列‘S’的L3，序列SEQ ID NO：12的VD4，胺基酸序列‘RT’的L4和序列SEQ ID NO：313的CH1。
稱為CODV-Fab“7G3x18F5”的抗體樣結合蛋白包含：
- 根據式I的一條多肽，胺基酸序列為
Figure 110113349-A0101-12-0105-234
Figure 110113349-A0101-12-0105-235
(SEQ ID NO：318，連接子以粗體和 下劃線表示)，其含有序列SEQ ID NO：26的VD1、序列SEQ ID NO：307 的L1、序列SEQ ID NO：308的VD2、序列SEQ ID NO：309的L2和序列SEQ ID NO：310的CL，和
- 根據式II的一條多肽，胺基酸序列為：
Figure 110113349-A0101-12-0106-227
Figure 110113349-A0101-12-0106-228
(SEQ ID NO：319，連接子以粗 體和下劃線表示)，其含有序列SEQ ID NO：312的VD3，胺基酸序列‘S’的L3，序列SEQ ID NO：23的VD4，胺基酸序列‘RT’的L4和序列SEQ ID NO：313的CH1。
稱為CODV-Fab“hz20G6x7G3”的抗體樣結合蛋白包含：
- 根據式I的一條多肽，胺基酸序列為：
Figure 110113349-A0101-12-0106-230
Figure 110113349-A0101-12-0106-231
(SEQ ID NO：320，連接子以粗體和下 劃線表示)，其含有序列SEQ ID NO：308的VD1，序列SEQ ID NO：307的L1，序列SEQ ID NO：143的VD2，序列SEQ ID NO：309的L2和序列SEQ ID NO：310的CL，和
- 根據式II的一條多肽，胺基酸序列為：
Figure 110113349-A0101-12-0107-224
Figure 110113349-A0101-12-0107-225
(SEQ ID NO：321，連接子以粗 體和下劃線表示)，其含有序列SEQ ID NO：138的VD3、胺基酸序列‘S’的L3、序列SEQ ID NO：312的VD4、胺基酸序列‘RT’的L4和序列SEQ ID NO：313的CH1。
稱為CODV-Fab“7G3xhz4B4”的抗體樣結合蛋白包含：
- 根據式I的一條多肽，胺基酸序列為：
Figure 110113349-A0101-12-0107-226
Figure 110113349-A0101-12-0108-220
(SEQ ID NO：322，連接子以粗體和下 劃線表示)，其含有序列SEQ ID NO：158的VD1、序列SEQ ID NO：307的L1、序列SEQ ID NO：308的VD2、序列SEQ ID NO：309的L2和序列SEQ ID NO：310的CL，和
- 根據式II的一條多肽，胺基酸序列為：
Figure 110113349-A0101-12-0108-221
Figure 110113349-A0101-12-0108-222
(SEQ ID NO：323，連接子以粗 體和下劃線表示)，其含有序列SEQ ID NO：312的VD3、胺基酸序列‘S’的L3、序列SEQ ID NO：171的VD4、胺基酸序列‘RT’的L4和序列SEQ ID NO：313的CH1。
稱為CODV-Fab“hz4B4x3E3”的抗體樣結合蛋白包含：
- 根據式I的一條多肽，胺基酸序列為：
Figure 110113349-A0101-12-0108-223
Figure 110113349-A0101-12-0109-215
Figure 110113349-A0101-12-0109-216
(SEQ ID NO：324，連接子以粗體和下劃線 表示)，其含有序列SEQ ID NO：230的VD1、序列SEQ ID NO：307的L1、序列SEQ ID NO：158的VD2、序列SEQ ID NO：309的L2和序列SEQ ID NO：310的CL，和
- 根據式II的一條多肽，胺基酸序列為：
Figure 110113349-A0101-12-0109-217
Figure 110113349-A0101-12-0109-218
(SEQ ID NO：325，連接子以粗體和下 劃線表示)，其含有序列SEQ ID NO：171的VD3、胺基酸序列‘S’的L3、序列SEQ ID NO：226的VD4、胺基酸序列‘RT’的L4和序列SEQ ID NO：313的CH1。
稱為CODV-Fab“hz20G6xhz7G3”的抗體樣結合蛋白包含：
- 一條根據式[I]的多肽，其基本由下列胺基酸序列組成：
Figure 110113349-A0101-12-0109-219
Figure 110113349-A0101-12-0110-210
Figure 110113349-A0101-12-0110-212
(SEQ ID NO：388，連接子 以粗體和下劃線表示)，其含有序列SEQ ID NO：385的VD1、序列SEQ ID NO：389的L1、序列SEQ ID NO：141的VD2、序列SEQ ID NO：389的L2和序列SEQ ID NO：310的CL，和
- 一條根據式[II]的多肽，其基本由下列胺基酸序列組成：
Figure 110113349-A0101-12-0110-213
Figure 110113349-A0101-12-0110-214
(SEQ ID NO：390)，其含有序列SEQ ID NO：138 的VD3、L3是0胺基酸，序列SEQ ID NO：383的VD4(斜體和下劃線)，L4是0胺基酸和序列SEQ ID NO：313的CH1。
在一個實例中，稱為CODV-Fab“7G3x20G6”、“7G3x4E7”、“7G3x4B4”、“7G3x18F5”、“hz20G6x7G3”、“7G3xhz4B4”、“hz4B4x3E3”和“hz20G6xhz7G3”抗體樣結合蛋白的根據式II的多肽進一步包含對應使用的鉸鏈序列和His標簽的序列EPKSCDKTHTHHHHHH(SEQ ID NO：352)，例如用於純化。
稱為CODV-Fab“hz20G6x7G3-TL4”(也稱為CODV-Fab-TL4“hz20G6x7G3”)的抗體樣結合蛋白包含：
- 一條根據式[IV]的多肽，其基本由下列胺基酸序列組成：
Figure 110113349-A0101-12-0111-207
Figure 110113349-A0101-12-0111-208
(SEQ ID NO：326，連接子以粗體和下劃 線表示)，其含有序列SEQ ID NO：308的VD1、序列SEQ ID NO：307的L1、序列SEQ ID NO：143的VD2、序列SEQ ID NO：309的L2、序列SEQ ID NO：310的CL和序列SEQ ID NO：327的Fc2(下劃線)，和
- 一條根據式[III]的多肽，其基本由下列胺基酸序列組成：
Figure 110113349-A0101-12-0111-209
Figure 110113349-A0101-12-0112-204
Figure 110113349-A0101-12-0112-205
(SEQ ID NO：328，連接子以粗 體和下劃線表示)，其含有序列SEQ ID NO：138的VD3、胺基酸序列‘S’的L3、序列SEQ ID NO：312的VD4、胺基酸序列‘RT’的L4和序列SEQ ID NO：329的CH1和序列SEQ ID NO：330的Fc。
在上述CODV-Fab-TL4“hz20G6x7G3”抗體樣結合蛋白中，序列SEQ ID NO：330的Fc和序列SEQ ID NO：327的Fc2來自IgG4骨架。所述抗體樣結合蛋白為CODV-Fab-TL形式且包含一條式III的多肽和一條式IV的多肽或由其組成。
稱為CODV-Fab-TL1“hz20G6xhz7G3”的抗體樣結合蛋白包含：
- 一條根據式IV的多肽基本由下列胺基酸序列組成：
Figure 110113349-A0101-12-0112-206
Figure 110113349-A0101-12-0113-202
(SEQ ID NO：391，連接子以粗體和下劃線表示)，其含有序列SEQ ID NO：385的VD1、序列SEQ ID NO：389的L1、序列SEQ ID NO：141的VD2、序列SEQ ID NO：389的L2、序列SEQ ID NO：310的CL、包含0胺基酸的L5和序列SEQ ID NO：392的Fc2(下劃線)；和
- 根據式III的一條多肽，其胺基酸序列為：
Figure 110113349-A0101-12-0113-203
(SEQ ID NO：393)，其含有序列SEQ ID NO：138的VD3、L3是0個胺基酸、序列SEQ ID NO：383的VD4(斜體)，L4是0個胺基酸、序列SEQ ID NO：313的CH1和序列SEQ ID NO：394的Fc(下劃線)。
在CODV-Fab-TL1“hz20G6x7G3”的抗體樣結合蛋白中，序列SEQ ID NO：394的Fc和序列SEQ ID NO：392的Fc2來自IgG1骨架。所述抗體樣結合蛋白是CODV-Fab-TL形式。其包含或由式IV的一條多肽和式III的一條多肽組成。
稱為CODV-Fab-OL1“hz20G6xhz7G3”的抗體樣結合蛋白包含：
- 根據式I的一條多肽，其胺基酸序列為：
Figure 110113349-A0101-12-0114-200
(SEQ ID NO：388，連接子以粗體和下劃線表示)，其含有序列SEQ ID NO：385的VD1、序列SEQ ID NO：389的L1、序列SEQ ID NO：141的VD2、序列SEQ ID NO：389的L2和序列SEQ ID NO：310的CL；和
- 根據式III的一條多肽，其胺基酸序列為：
Figure 110113349-A0101-12-0114-201
Figure 110113349-A0101-12-0115-240
(SEQ ID NO：395)，其含有序列SEQ ID NO：138的VD3，0胺基酸的L3、序列SEQ ID NO：383的VD4(斜體和下劃線)，0胺基酸的L4，序列SEQ ID NO：313的CH1和序列SEQ ID NO：396的Fc(下劃線)；
- 且其中稱為CODV-Fab-OL1“hz20G6xhz7G3”的抗體樣結合蛋白進一步包含Fc殘端(Fc3)，其胺基酸序列為：
Figure 110113349-A0101-12-0115-241
(SEQ ID NO：397)，且其與根據式III的多肽的Fc區異二聚化。
所述抗體樣結合蛋白為CODV-Fab-OL形式，即其包含或由一條式I的多肽、一條式III的多肽和一條Fc殘端或由上述組成。其Fc和Fc3序 列已根據“Knob-into-Hole”技術工程化並進一步包含雙突變L234A和L235A。
序列SEQ ID NO：396的Fc序列已設計在位置200-221(上文粗體)包含RF殘基，替代本來在Fc區的這些位置存在的HY殘基。HY>RF突變(即CH3結構域中的H435R和Y436F由Jendeberg,L.et al.1997,J.Immunological Meth.,201：25-34進行了描述)就純化目的是具有優勢的，這是由於其廢除與蛋白A的結合。在CODV-Fab-OL1“hz20G6xhz7G3”的情況中，序列SEQ ID NO：397的Fc殘端在位置217-218包含HY殘基(上文粗體)。
稱為CODV-Fab-OL1a“hz20G6xhz7G3”的抗體樣結合蛋白包含：
- 根據式I的一條多肽，其胺基酸序列為：
Figure 110113349-A0101-12-0116-242
(SEQ ID NO：388)，其包含序列SEQ ID NO：385的VD1、序列SEQ ID NO：389的L1、序列SEQ ID NO：141的VD2、序列SEQ ID NO：389的L2和序列SEQ ID NO：310的CL；
- 根據式III的一條多肽，其胺基酸序列為：
Figure 110113349-A0101-12-0116-243
Figure 110113349-A0101-12-0117-244
(SEQ ID NO：399)，其包含序列SEQ ID NO：138的VD3，0個胺基酸的L3，序列SEQ ID NO：383的VD4(斜體和下劃線)，0個胺基酸的L4，序列SEQ ID NO：313的CH1和序列SEQ ID NO：400的Fc(下劃線)；
- 且其中稱為CODV-Fab-OL1a“hz20G6xhz7G3”的抗體樣結合蛋白進一步包含Fc殘端(Fc3)，其胺基酸序列為：
Figure 110113349-A0101-12-0117-245
(SEQ ID NO：398)，其與根據式III的多肽的Fc區異二聚化。
序列SEQ ID NO：400的Fc在位置220-221包含HY殘基(上文 粗體)而序列SEQ ID NO：398的Fc殘端在位置217-218包含RF殘基(上文粗體)。
所述抗體樣結合蛋白為CODV-Fab-OL形式，即其包含或由一條式I的多肽、一條式III的多肽和一條Fc殘端或由上述組成。其Fc和Fc3序列已根據“Knob-into-Hole”技術工程化並進一步包含雙突變L234A和L235A。
在一個具體實例中，第一免疫球蛋白或第二免疫球蛋白選自下組的一種抗CD123抗體：稱為“3E3-D3”、“1E1-G5”、“2B8-F3”、“2F8-D6”、“3B10-E6”、“5A5-B4”、“6B10-E4”、“6C10-C4”、“6D6-B8”、“8B11-B7”、“9B8-G6”、“9D7-C8”和“9F6-G3”抗CD123抗體，或其人源化形式，或下文所述的抗CD123抗體“7G3”，例如抗CD123抗體“3E3-D3”或“7G3”，或其人源化形式。
在一個具體實例中，第一免疫球蛋白或第二免疫球蛋白是選自下組的一種抗CD3抗體：稱為“20G6-F3”、“4B4-D7”、“4E7-C9”、“18F5-H10”、“12D2-E5”、“11D7-C3”、“11H3-E5”、“13H2-C2”、“13C1-F6”、“18H11-F10”、“1E6-C9”、“10F4-C10”、“10E6-G6”、“18G9-H11”、“11F3-B9”、“12G3-E8”、“5B1-G2”、“16F8-A7”、“11F9-F8”、“3G5-E10”、“9D7-F3”、“8C2-F7”、“20E5-F10”、“20B5-F10”、“6C9-C9”、“3E8-G1”、“3H6-D2”和“8H2”抗CD3抗體，或其人源化形式，例如稱為“20G6-F3”、“4B4-D7”、“4E7-C9”、“18F5-H10”和“hz20G6”抗CD3抗體，例如稱為“20G6-F3”、“4B4-D7”抗CD3抗體。
相應地，VD1和VD4或VD2和VD3是抗CD3抗體重鏈或輕鏈的可變結構域，其中所述抗CD3抗體包含：
a)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：6的CDR1-H、序列SEQ ID NO：7的CDR2-H、序列SEQ ID NO：8的CDR3-H，和輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：10或SEQ ID NO：142的CDR1-L、序列‘KVS’的CDR2-L和序列SEQ ID NO：11的CDR3-L；或
b)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：13的CDR1-H、序列SEQ ID NO：14的CDR2-H、序列SEQ ID NO：15的CDR3-H，和輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：17或SEQ ID NO：184的CDR1-L、序列‘KVS’的CDR2-L和序列SEQ ID NO：11的CDR3-L；或
c)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：13的CDR1-H、序列SEQ ID NO：19的CDR2-H、序列SEQ ID NO：20的CDR3-H，和輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：22的CDR1-L、序列‘KVS’的CDR2-L和序列SEQ ID NO：11的CDR3-L；或
d)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：24的CDR1-H、序列SEQ ID NO：19的CDR2-H、序列SEQ ID NO：25的CDR3-H，和輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：27的CDR1-L、序列‘KVS’的CDR2-L和序列SEQ ID NO：28的CDR3-L，且
其中如果VD4是輕鏈的可變結構域，則VD1是如上文定義的重鏈的可變結構域，或如果VD4是重鏈的可變結構域，則VD1是如上文定義的輕鏈的可變結構域，
如果VD3是輕鏈的可變結構域，則VD2是如上文定義的重鏈的可變結構域，或如果VD3是重鏈的可變結構域，則VD3是如上文定義的輕鏈的可變結構域。
在另一個具體實例中，VD1和VD4或VD2和VD3是抗CD3抗體重鏈或輕鏈的可變結構域，其中所述抗CD3抗體是人源化抗體且包含：
a)序列SEQ ID NO：13或與其至少85%相同的序列的重鏈可變結構域 和/或序列SEQ ID NO：143或與其至少85%相同的序列的輕鏈可變結構域；或
b)序列SEQ ID NO：171或與其至少85%相同的序列的重鏈可變結構域和/或序列SEQ ID NO：158或與其至少85%相同的序列的輕鏈可變結構域；或
c)序列SEQ ID NO：176或與其至少85%相同的序列的重鏈可變結構域和/或序列SEQ ID NO：164或與其至少85%相同的序列的輕鏈可變結構域；或
其中如果VD4是輕鏈的可變結構域，則VD1是如上文定義的重鏈的可變結構域，或如果VD4是重鏈的可變結構域，則VD1是如上文定義的輕鏈的可變結構域，
如果VD3是輕鏈的可變結構域，則VD2是如上文定義的重鏈的可變結構域，或如果VD3是重鏈的可變結構域，則VD3是如上文定義的輕鏈的可變結構域。
在與SEQ ID NO：138、SEQ ID NO：143、SEQ ID NO：171、SEQ ID NO：158、SEQ ID NO：176或SEQ ID NO：164至少85%相同的序列中，6個CDR序列與參照序列SEQ ID NO：138、SEQ ID NO：143、SEQ ID NO：171、SEQ ID NO：158、SEQ ID NO：176或SEQ ID NO：164中存在的6個CDR相比無變化。
在具體實例中，本發明的抗體樣結合蛋白與人CD3結合。在另一個具體實例中，本發明的抗體樣結合蛋白進一步與食蟹猴CD3結合。具體地，本發明的抗體樣結合蛋白與人CD3或人和食蟹猴CD3兩者的細胞外結構域結合。更具體地，抗體與CD3ε結合。更具體地，抗體樣結合蛋白與人或人和食蟹猴CD3ε細胞外結構域結合。當以複合物的形式如CD3ε/δ複合物 存在或作為單蛋白存在時，無論在分離的形式中表現還是存在於例如T細胞中的可溶性細胞外結構域或全長膜錨定的CD3ε，抗體樣結合蛋白均與CD3ε結合。根據本發明的抗體樣結合蛋白特異性針對表面人CD3蛋白或人和食蟹猴CD3蛋白兩者，特別是CD3ε。
根據本發明的抗體樣結合對於食蟹猴CD3的親和力比對人CD3的親和力的比率(KD(食蟹猴)/KD(人))
Figure 110113349-A0101-12-0121-319
10，具體地
Figure 110113349-A0101-12-0121-321
6、
Figure 110113349-A0101-12-0121-328
5、
Figure 110113349-A0101-12-0121-323
4、
Figure 110113349-A0101-12-0121-324
3、
Figure 110113349-A0101-12-0121-325
2、
Figure 110113349-A0101-12-0121-326
1或
Figure 110113349-A0101-12-0121-327
0.5。因此，這種根據本發明的多肽可用於在猴中實施的毒性研究，猴中觀察到的毒性概貌與在人中預期潛在的副作用相關。
此外，根據本發明的抗體樣結合蛋白對於人CD3或食蟹猴CD3或兩者親和力(KD)
Figure 110113349-A0101-12-0121-329
50nM、
Figure 110113349-A0101-12-0121-330
40n或
Figure 110113349-A0101-12-0121-331
30nM，例如
Figure 110113349-A0101-12-0121-332
20nM，例如0.1nM-30nM的親和力，具體地0.4nM-20nM或0.4nM-15nM的親和力。
在一個具體實例中，不存在靶細胞時本發明的抗體樣結合蛋白具有小於20%、小於18%、小於16%、小於14%、小於12%、小於10%的更低的T-細胞活化。
在一個具體實例中，靶細胞存在時本發明的抗體樣結合蛋白具有高於55%、高於60%、高於62%、高於64%、高於66%、高於68%、高於70%更高的T-細胞活化。
“低T-細胞活化”在本發明抗體樣結合蛋白的上下文中指小於20%、小於18%、小於16%、小於14%、小於12%、小於10%的T-細胞活化。
本文的“靶細胞”指表現第二抗原的細胞，在本文靶細胞的一個實例中指表現CD123的細胞如THP-1細胞。
本文的“高T-細胞活化”指高於50%、高於55%、高於60%、高於62%、高於64%、高於66%、高於68%、高於70%的T-細胞活化。
在另一個具體實例中，本發明涉及對至少一種其他靶抗原具有生物和免疫特異性的抗體樣結合蛋白。
因此，本發明的一方面，本發明的抗體樣結合蛋白進一步與至少一種其他靶抗原結合。相應地，在一個具體實例中，本發明的抗體樣結合蛋白是雙特異性的且能夠結合兩種不同的抗原靶標或表位。
相應地，在一個具體實例中，如果第二免疫球蛋白是一種如上文«抗CD123抗體»部分所定義的CD123抗體，則第一免疫球蛋白是針對至少一種其他靶標的免疫球蛋白，或如果第一免疫球蛋白是一種如上文«抗CD123抗體»部分所定義的CD123抗體，則第二免疫球蛋白是針對至少一種其他靶標的免疫球蛋白。
在另一具體實例中，如果第二免疫球蛋白是一種如上文«抗CD3抗體»部分所定義的CD3抗體，則第一免疫球蛋白是針對至少一種其他靶標的免疫球蛋白，或如果第一免疫球蛋白是一種如上文«抗CD3抗體»部分所定義的CD3抗體，則第二免疫球蛋白是針對至少一種其他靶標的免疫球蛋白。
本發明的抗體樣結合蛋白具有T-細胞銜接效應。該T-細胞銜接效應在靶細胞中誘導細胞毒性。在一個具體實例中，靶細胞是表現CD123的細胞，如表現CD123的癌細胞，例如THP-1或TF-1。
相應地，在一個具體實例中，根據本發明的抗體樣結合蛋白可結合能夠銜接原代T-細胞並能夠體外裂解細胞，其中(EC50)
Figure 110113349-A0101-12-0122-316
40pM、
Figure 110113349-A0101-12-0122-317
35pM，例如
Figure 110113349-A0101-12-0122-318
30pM。
“細胞毒性”在本文指化合物如本發明的抗體樣結合蛋白或抗CD123抗體對於細胞有毒的性質。細胞毒性可通過不同反應機制誘導且可因此分為細胞介導毒性、細胞凋亡、抗體依賴性細胞介導的毒性(ADCC)或 補體依賴性細胞毒性(CDC)。
“抗體依賴性細胞介導的毒性”或“ADCC”指細胞介導的免疫抵禦機制由此免疫系統的效應器細胞活躍地裂解其膜表面抗原已由特異性抗體結合的靶細胞。
“補體依賴性細胞毒性”或“CDC”在本發明的上下文中指在補體系統蛋白存在下裂解靶細胞。
“細胞介導的細胞毒性”指靶細胞通過效應器淋巴細胞如細胞毒性T淋巴細胞或天然殺傷細胞進行細胞裂解，且因此可分為T-細胞介導的細胞毒性和NK細胞毒性。
在一個具體實例中，本文的細胞毒性指細胞介導的細胞毒性例如T-細胞介導的細胞毒性。
此外，在一個具體實例中，細胞介導的細胞毒性指通過T細胞的細胞介導的細胞毒性。
相應地，本發明的抗體樣結合蛋白在藉由T細胞介導的靶細胞中藉由誘導細胞介導的細胞毒性。
測量細胞毒性的方法為本領域的技術人員已知且包括使用51鉻(Cr)釋放試驗，靶細胞的活/死細胞染色包括碘化丙錠、7-AAD和其他本領域的技術人員已知的染料、藉由流式細胞術或ELISA檢測由T細胞釋放的裂解分子的包括顆粒酶和穿透細胞膜蛋白質、從損傷細胞釋放如培養基的乳酸脫氫酶(LDH)作為對於細胞的細胞毒性和細胞裂解的檢測、CD107a的細胞表面運動檢測、凋亡靶細胞的Annexin V(鈣依賴性磷脂結合蛋白)染色和例如激活Caspase-3的(CASP3)檢測。此外，本領域的技術人員可在基於所選測試和基於實驗設置區分不同的細胞毒性機制。
在一個實例中，細胞介導的細胞毒性可例如如上文所述使用 CFSE以標記靶細胞和7-AAD以標記死亡細胞測量，例如在實施例3.2中。
在另一個具體實例中，抗體樣結合蛋白能夠與CD3和至少一種其他抗原靶標結合，例如CD123。
在一個具體實例中，抗體樣結合蛋白能夠抑制該其他抗原靶標的功能，例如CD123。
本發明的一方面，抗體樣結合蛋白與人CD123結合。在另一個具體實例中，抗體樣結合蛋白還與食蟹猴CD123結合。具體地，本發明的抗體樣結合蛋白與人CD123或人和食蟹猴CD123兩者的細胞外結構域結合。更具體地，抗體樣結合蛋白CD123的遠端部分結合，例如，與始於胺基酸序列SEQ ID NO：104的人CD123的位置19-49的胺基酸結合。無論在分離形式中或存在於CD123表現細胞如AML細胞或CD123轉染細胞中存在的可溶性細胞外結構域或全長膜錨定的CD123中，抗體樣結合蛋白都與CD123結合。根據本發明的抗體樣結合蛋白對在其表面表現人和食蟹猴CD123蛋白的細胞具有特異性，例如表現CD123的癌細胞。
相應地，根據本發明的抗體樣結合蛋白對於人CD123或食蟹猴CD123或兩者的親和力(KD)
Figure 110113349-A0101-12-0124-312
20nM、
Figure 110113349-A0101-12-0124-313
15nM或
Figure 110113349-A0101-12-0124-314
10nM，例如
Figure 110113349-A0101-12-0124-315
5nM，例如親和力為0.01nM-5nM，更具體地0.1nM-5nM。
相應地，在一個具體實例中，第一免疫球蛋白是一種選自下組的抗CD3抗體：稱為“20G6-F3”、“4B4-D7”、“4E7-C9”、“18F5-H10”、“12D2-E5”、“11D7-C3”、“11H3-E5”、“13H2-C2”、“13C1-F6”、“18H11-F10”、“1E6-C9”、“10F4-C10”、“10E6-G6”、“18G9-H11”、“11F3-B9”、“12G3-E8”、“5B1-G2”、“16F8-A7”、“11F9-F8”、“3G5-E10”、“9D7-F3”、“8C2-F7”、“20E5-F10”、“20B5-F10”、“6C9-C9”、“3E8-G1”、“3H6-D2”和“8H2”抗CD3抗體，或其人源化形式，例如，稱為“20G6-F3”、“4B4-D7”、“4E7-C9”、 “18F5-H10”、“hz4B4”和“hz20G6”的抗CD3抗體，且第二免疫球蛋白是選自下組的一種抗CD123抗體：稱為“3E3-D3”、“1E1-G5”、“2B8-F3”、“2F8-D6”、“3B10-E6”、“5A5-B4”、“6B10-E4”、“6C10-C4”、“6D6-B8”、“8B11-B7”、“9B8-G6”、“9D7-C8”和“9F6-G3”抗CD123抗體。
相應地，在另一個具體實例中，第二免疫球蛋白是一種選自下組的抗CD3抗體：稱為“20G6-F3”、“4B4-D7”、“4E7-C9”、“18F5-H10”、“12D2-E5”、“11D7-C3”、“11H3-E5”、“13H2-C2”、“13C1-F6”、“18H11-F10”、“1E6-C9”、“10F4-C10”、“10E6-G6”、“18G9-H11”、“11F3-B9”、“12G3-E8”、“5B1-G2”、“16F8-A7”、“11F9-F8”、“3G5-E10”、“9D7-F3”、“8C2-F7”、“20E5-F10”、“20B5-F10”、“6C9-C9”、“3E8-G1”、“3H6-D2”和“8H2”抗CD3抗體，或其人源化形式，例如稱為“20G6-F3”、“4B4-D7”、“4E7-C9”、“18F5-H10”、“hz4B4”和“hz20G6”的抗CD3抗體，且第一免疫球蛋白是一種選自下組的抗CD123抗體：稱為“3E3-D3”、“1E1-G5”、“2B8-F3”、“2F8-D6”、“3B10-E6”、“5A5-B4”、“6B10-E4”、“6C10-C4”、“6D6-B8”、“8B11-B7”、“9B8-G6”、“9D7-C8”和“9F6-G3”的抗CD123抗體。
相應地，在一個具體實例中，VD1和VD4或VD2和VD3包含重鏈可變結構域和輕鏈可變結構域，其分別通過如上文所述的13種稱為“3E3-D3”、“1E1-G5”、“2B8-F3”、“2F8-D6”、“3B10-E6”、“5A5-B4”、“6B10-E4”、“6C10-C4”、“6D6-B8”、“8B11-B7”、“9B8-G6”、“9D7-C8”和“9F6-G3”抗CD123抗體之一的三個CDR序列或通過重鏈和輕鏈可變結構域序列限定，
其中如果VD2和VD3都包含如上文定義的一種抗CD3抗體重鏈和輕鏈可變結構域序列的三個CDR序列，則VD1和VD4都包含如上文定義的一種抗CD123抗體重鏈和輕鏈可變結構域序列的三個CDR序列，或
其中如果VD1和VD4都包含如上文定義的一種抗CD3抗體重鏈和輕鏈可變結構域序列的CDR序列，則VD2和VD3都包含如上文定義的一種抗CD123抗體重鏈和輕鏈可變結構域序列的三個CDR。
相應地，在一個具體實例中VD1和VD4為抗CD3抗體重鏈或輕鏈的可變結構域，其中所述抗CD3抗體包含含有序列SEQ ID NO：6的CDR1-H、序列SEQ ID NO：7的CDR2-H、序列SEQ ID NO：8的CDR3-H的重鏈可變結構域和含有序列SEQ ID NO：10或SEQ ID NO：142的CDR1-L、序列‘KVS’的CDR2-L和序列SEQ ID NO：11的CDR3-L的輕鏈可變結構域且VD2和VD3是選自下組的抗CD123抗體重鏈或輕鏈的可變結構域：“3E3-D3”、“1E1-G5”、“2B8-F3”、“2F8-D6”、“3B10-E6”、“5A5-B4”、“6B10-E4”、“6C10-C4”、“6D6-B8”、“8B11-B7”、“9B8-G6”、“9D7-C8”、“9F6-G3”抗CD123抗體，如上文在“抗CD123抗體”部分所述，
其中如果VD3和VD4均為重鏈可變結構域，則VD1和VD2均為輕鏈可變結構域，或如果VD3和VD4均為輕鏈可變結構域，則VD1和VD2均為重鏈可變結構域。
相應地，在另一具體實例中，VD2和VD3是抗CD3抗體重鏈或輕鏈的可變結構域，其中所述抗CD3抗體包含含有序列SEQ ID NO：6的CDR1-H、序列SEQ ID NO：7的CDR2-H、序列SEQ ID NO：8的CDR3-H的重鏈可變結構域和含有序列SEQ ID NO：10或SEQ ID NO：142的CDR1-L、序列‘KVS’的CDR2-L和序列SEQ ID NO：11的CDR3-L的輕鏈可變結構域，且VD1和VD4是選自下組的CD123抗體重鏈或輕鏈的可變結構域：“3E3-D3”、“1E1-G5”、“2B8-F3”、“2F8-D6”、“3B10-E6”、“5A5-B4”、“6B10-E4”、“6C10-C4”、“6D6-B8”、“8B11-B7”、“9B8-G6”、“9D7-C8”、“9F6-G3”抗CD123抗體，如上文在“抗CD123抗體”部分所述，
其中如果VD3和VD4均為重鏈可變結構域，則VD1和VD2均為輕鏈可變結構域，或如果VD3和VD4均為輕鏈可變結構域，則VD1和VD2均為重鏈可變結構域。
相應地，在另一具體實例中，VD1和VD4是抗CD3抗體重鏈或輕鏈的可變結構域，其中所述抗CD3抗體包含含有序列SEQ ID NO：13的CDR1-H、序列SEQ ID NO：14的CDR2-H、序列SEQ ID NO：15的CDR3-H的重鏈可變結構域和含有序列SEQ ID NO：17或SEQ ID NO：184的CDR1-L、序列‘KVS’的CDR2-L和序列SEQ ID NO：11的CDR3-L的輕鏈可變結構域，且VD2和VD3是選自下組的抗CD123抗體重鏈或輕鏈的可變結構域：“3E3-D3”、“1E1-G5”、“2B8-F3”、“2F8-D6”、“3B10-E6”、“5A5-B4”、“6B10-E4”、“6C10-C4”、“6D6-B8”、“8B11-B7”、“9B8-G6”、“9D7-C8”、“9F6-G3”抗CD123抗體，如上文在“抗CD123抗體”部分所述，
其中如果VD3和VD4均為重鏈可變結構域，則VD1和VD2均為輕鏈可變結構域，或如果VD3和VD4均為輕鏈可變結構域，則VD1和VD2均為重鏈可變結構域。
相應地，在另一具體實例中，VD1和VD4為抗CD3抗體重鏈或輕鏈的可變結構域，其中所述抗CD3抗體包含含有序列SEQ ID NO：13的CDR1-H、序列SEQ ID NO：14的CDR2-H、序列SEQ ID NO：15的CDR3-H的重鏈可變結構域和含有序列SEQ ID NO：17或SEQ ID NO：184的CDR1-L、序列‘KVS’的CDR2-L和序列SEQ ID NO：11的CDR3-L輕鏈可變結構域，且VD2和VD3是選自下組的抗CD123抗體重鏈或輕鏈的可變結構域：“3E3-D3”、“1E1-G5”、“2B8-F3”、“2F8-D6”、“3B10-E6”、“5A5-B4”、“6B10-E4”、“6C10-C4”、“6D6-B8”、“8B11-B7”、“9B8-G6”、“9D7-C8”、“9F6-G3”抗CD123抗體，如上文在“抗CD123抗體”部分所述，
其中如果VD3和VD4均為重鏈可變結構域，則VD1和VD2均為輕鏈可變結構域，或如果VD3和VD4均為輕鏈可變結構域，則VD1和VD2均為重鏈可變結構域。
在另一具體實例中，VD1和VD4是人源化抗CD3抗體重鏈或輕鏈的可變結構域，其中所述抗CD3抗體包含序列SEQ ID NO：138的可變重鏈可變結構域和/或序列SEQ ID NO：143的輕鏈可變結構域，且VD2和VD3是選自下組的抗CD123抗體重鏈或輕鏈的可變結構域：“3E3-D3”、“1E1-G5”、“2B8-F3”、“2F8-D6”、“3B10-E6”、“5A5-B4”、“6B10-E4”、“6C10-C4”、“6D6-B8”、“8B11-B7”、“9B8-G6”、“9D7-C8”、“9F6-G3”抗CD123抗體，如上文在“抗CD123抗體”部分所述，
其中如果VD3和VD4均為重鏈可變結構域，則VD1和VD2均為輕鏈可變結構域，或如果VD3和VD4均為輕鏈可變結構域，則VD1和VD2均為重鏈可變結構域。
在另一具體實例中，VD2和VD3是人源化抗CD3抗體重鏈或輕鏈的可變結構域，其中所述抗CD3抗體包含序列SEQ ID NO：138重鏈可變結構域和/或序列SEQ ID NO：143的輕鏈可變結構域，且VD1和VD4是選自下組的抗CD123抗體重鏈或輕鏈的可變結構域：“3E3-D3”、“1E1-G5”、“2B8-F3”、“2F8-D6”、“3B10-E6”、“5A5-B4”、“6B10-E4”、“6C10-C4”、“6D6-B8”、“8B11-B7”、“9B8-G6”、“9D7-C8”、“9F6-G3”抗CD123抗體，如上文在“抗CD123抗體”部分所述，
其中如果VD3和VD4均為重鏈可變結構域，則VD1和VD2均為輕鏈可變結構域，或如果VD3和VD4均為輕鏈可變結構域，則VD1和VD2均為重鏈可變結構域。
在另一具體實例中，VD1和VD4是人源化抗CD3抗體重鏈或輕 鏈的可變結構域，其中所述抗CD3抗體包含序列SEQ ID NO：171重鏈可變結構域和/或序列SEQ ID NO：158的輕鏈可變結構域，且VD2和VD3是選自下組的抗CD123抗體重鏈或輕鏈的可變結構域：“3E3-D3”、“1E1-G5”、“2B8-F3”、“2F8-D6”、“3B10-E6”、“5A5-B4”、“6B10-E4”、“6C10-C4”、“6D6-B8”、“8B11-B7”、“9B8-G6”、“9D7-C8”、“9F6-G3”抗CD123抗體，如上文在“抗CD123抗體”部分所述，
其中如果VD3和VD4均為重鏈可變結構域，則VD1和VD2均為輕鏈可變結構域，或如果VD3和VD4均為輕鏈可變結構域，則VD1和VD2均為重鏈可變結構域。
在另一具體實例中，VD2和VD3是人源化抗CD3抗體重鏈或輕鏈的可變結構域，其中所述抗CD3抗體包含序列SEQ ID NO：171的重鏈可變結構域和/或序列SEQ ID NO：158的輕鏈可變結構域，且VD1和VD4是選自下組的抗CD123抗體重鏈或輕鏈的可變結構域：“3E3-D3”、“1E1-G5”、“2B8-F3”、“2F8-D6”、“3B10-E6”、“5A5-B4”、“6B10-E4”、“6C10-C4”、“6D6-B8”、“8B11-B7”、“9B8-G6”、“9D7-C8”、“9F6-G3”抗CD123抗體，如上文在“抗CD123抗體”部分所述，
其中如果VD3和VD4均為重鏈可變結構域，則VD1和VD2均為輕鏈可變結構域，或如果VD3和VD4均為輕鏈可變結構域，則VD1和VD2均為重鏈可變結構域。
在另一具體實例中，VD1和VD4是人源化抗CD3抗體重鏈或輕鏈的可變結構域，其中所述抗CD3抗體包含序列SEQ ID NO：176的重鏈可變結構域和/或序列SEQ ID NO：164的輕鏈可變結構域，且VD2和VD3是選自下組的抗CD123抗體重鏈或輕鏈的可變結構域：“3E3-D3”、“1E1-G5”、“2B8-F3”、“2F8-D6”、“3B10-E6”、“5A5-B4”、“6B10-E4”、“6C10-C4”、 “6D6-B8”、“8B11-B7”、“9B8-G6”、“9D7-C8”、“9F6-G3”抗CD123抗體，如上文在“抗CD123抗體”部分所述，
其中如果VD3和VD4均為重鏈可變結構域，則VD1和VD2均為輕鏈可變結構域，或如果VD3和VD4均為輕鏈可變結構域，則VD1和VD2均為重鏈可變結構域。
在另一具體實例中，VD2和VD3是人源化抗CD3抗體重鏈或輕鏈的可變結構域，其中所述抗CD3抗體包含序列SEQ ID NO：176的重鏈可變結構域和/或序列SEQ ID NO：164的輕鏈可變結構域，且VD1和VD4是選自下組的抗CD123抗體重鏈或輕鏈的可變結構域：“3E3-D3”、“1E1-G5”、“2B8-F3”、“2F8-D6”、“3B10-E6”、“5A5-B4”、“6B10-E4”、“6C10-C4”、“6D6-B8”、“8B11-B7”、“9B8-G6”、“9D7-C8”、“9F6-G3”抗CD123抗體，如上文在“抗CD123抗體”部分所述，
其中如果VD3和VD4均為重鏈可變結構域，則VD1和VD2均為輕鏈可變結構域，或如果VD3和VD4均為輕鏈可變結構域，則VD1和VD2均為重鏈可變結構域。
根據本發明的另一方面，第一或第二免疫球蛋白是抗CD123抗體7G3。因此，在一個具體實例中，VD1和VD4或VD2和VD3包含如通過如本文下文定義的抗體7G3重鏈和輕鏈可變結構域序列CDR序列所定義重鏈可變結構域和輕鏈可變結構域。在一個具體實例中，VD1和VD4或VD2和VD3包含如專利申請WO2013/173820(其通過提述併入本文)中所述的抗體7G3的重鏈可變結構域和輕鏈可變結構域。
相應地，如本文使用的稱為“7G3”的抗CD123抗體包含：
- 下列序列組成的重鏈可變結構域：
Figure 110113349-A0101-12-0130-246
Figure 110113349-A0101-12-0131-248
Figure 110113349-A0101-12-0131-249
(SEQ ID NO：312，其 中CDR以粗體顯示)，其含有序列SEQ ID NO：375的CDR1-H、序列SEQ ID NO：376的CDR2-H和序列SEQ ID NO：377的CDR3-H且
- 下列序列組成的輕鏈可變結構域：
Figure 110113349-A0101-12-0131-250
Figure 110113349-A0101-12-0131-251
(SEQ ID NO：308，其中CDR以粗體 顯示)，其含有序列SEQ ID NO：378的CDR1-L、序列‘WAS’的CDR2-L和序列SEQ ID NO：379的CDR3-L。
在本發明的另一方面中，抗體7G3還可以是人源化抗體或人源化抗體的片段。相應地，在一個具體實例中，本發明的抗體7G3是人源化抗體，其包含：
- 下列序列組成的重鏈可變結構域：
Figure 110113349-A0101-12-0131-252
Figure 110113349-A0101-12-0131-253
(SEQ ID NO：380， 其中CDR以粗體顯示)，其含有序列SEQ ID NO：381的CDR1-H、序列SEQ ID NO：377的CDR2-H和序列SEQ ID NO：382的CDR3-H，或
- 下列序列組成的重鏈可變結構域：
Figure 110113349-A0101-12-0131-254
Figure 110113349-A0101-12-0131-255
(SEQ ID NO：383， 其中CDR以粗體顯示)，其含有序列SEQ ID NO：381的CDR1-H、序列 SEQ ID NO：384的CDR2-H和序列SEQ ID NO：382的CDR3-H，或
- 下列序列組成的輕鏈可變結構域：
Figure 110113349-A0101-12-0132-256
Figure 110113349-A0101-12-0132-257
(SEQ ID NO：385，其中CDR以粗體顯 示)，其含有序列SEQ ID NO：378的CDR1-L、序列‘WAS’的CDR2-L和序列SEQ ID NO：379的CDR3-L。
在一個具體實例中，與人CD3ε和人CD123特異性結合的抗體樣結合蛋白包含：
(a)第一免疫球蛋白的輕鏈可變結構域(VD1)，其由胺基酸序列SEQ ID NO：9或與其至少85%相同的序列組成，第二免疫球蛋白的輕鏈可變結構域(VD2)，其由胺基酸序列SEQ ID NO：308或與其至少85%相同的序列組成，第二免疫球蛋白的重鏈可變結構域(VD3)，其由胺基酸序列SEQ ID NO：312或與其至少85%相同的序列組成，和第一免疫球蛋白的重鏈可變結構域(VD4)，其由胺基酸序列SEQ ID NO：5或與其至少85%相同的序列組成，或
(b)第一免疫球蛋白的輕鏈可變結構域(VD1)，其由胺基酸序列SEQ ID NO：21或與其至少85%相同的序列組成，第二免疫球蛋白的輕鏈可變結構域(VD2)，其由胺基酸序列SEQ ID NO：308或與其至少85%相同的序列組成，第二免疫球蛋白的重鏈可變結構域(VD3)，其由胺基酸序列SEQ ID NO：312或與其至少85%相同的序列組成，和第一免疫球蛋白的重鏈可變結構域(VD4)，其由胺基酸序列SEQ ID NO：18或與其至少85%相同的序列組成，或
(c)第一免疫球蛋白的輕鏈可變結構域(VD1)，其由胺基酸序列SEQ ID NO：16或與其至少85%相同的序列組成，第二免疫球蛋白的輕鏈可變結構域(VD2)，其由胺基酸序列SEQ ID NO：308或與其至少85%相同的序列組成，第二免疫球蛋白的重鏈可變結構域(VD3)，其由胺基酸序列SEQ ID NO：312或與其至少85%相同的序列組成，和第一免疫球蛋白的重鏈可變結構域(VD4)，其由胺基酸序列SEQ ID NO：12或與其至少85%相同的序列組成，或
(d)第一免疫球蛋白的輕鏈可變結構域(VD1)，其由胺基酸序列SEQ ID NO：26或與其至少85%相同的序列組成，第二免疫球蛋白的輕鏈可變結構域(VD2)，其由胺基酸序列SEQ ID NO：308或與其至少85%相同的序列組成，第二免疫球蛋白的重鏈可變結構域(VD3)，其由胺基酸序列SEQ ID NO：312或與其至少85%相同的序列組成，和第一免疫球蛋白的重鏈可變結構域(VD4)，其由胺基酸序列SEQ ID NO：23或與其至少85%相同的序列組成，或
(e)第一免疫球蛋白的輕鏈可變結構域(VD1)，其由胺基酸序列SEQ ID NO：308或與其至少85%相同的序列組成，第二免疫球蛋白的輕鏈可變結構域(VD2)，其由胺基酸序列SEQ ID NO：143或與其至少85%相同的序列組成，第二免疫球蛋白的重鏈可變結構域(VD3)，其由胺基酸序列SEQ ID NO：138或與其至少85%相同的序列組成，和第一免疫球蛋白的重鏈可變結構域(VD4)，其由胺基酸序列SEQ ID NO：312或與其至少85%相同的序列組成，或
(f)第一免疫球蛋白的輕鏈可變結構域(VD1)，其由胺基酸序列SEQ ID NO：158或與其至少85%相同的序列組成，第二免疫球蛋白的輕鏈可變結構域(VD2)，其由胺基酸序列SEQ ID NO：308或與其至少85%相同的序列組成，第二免疫球蛋白的重鏈可變結構域(VD3)，其由 胺基酸序列SEQ ID NO：312或與其至少85%相同的序列組成，和第一免疫球蛋白的重鏈可變結構域(VD4)，其由胺基酸序列SEQ ID NO：171或與其至少85%相同的序列組成，
(g)第一免疫球蛋白的輕鏈可變結構域(VD1)，其由胺基酸序列SEQ ID NO：230或與其至少85%相同的序列組成，第二免疫球蛋白的輕鏈可變結構域(VD2)，其由胺基酸序列SEQ ID NO：158或與其至少85%相同的序列組成，第二免疫球蛋白的重鏈可變結構域(VD3)，其由胺基酸序列SEQ ID NO：171或與其至少85%相同的序列組成，和第一免疫球蛋白的重鏈可變結構域(VD4)，其由胺基酸序列SEQ ID NO：226或與其至少85%相同的序列組成，
(h)第一免疫球蛋白的輕鏈可變結構域(VD1)，其由胺基酸序列SEQ ID NO：385或與其至少85%相同的序列組成，第二免疫球蛋白的輕鏈可變結構域(VD2)，其由胺基酸序列SEQ ID NO：141或與其至少85%相同的序列組成，第二免疫球蛋白的重鏈可變結構域(VD3)，其由胺基酸序列SEQ ID NO：138或與其至少85%相同的序列組成，和第一免疫球蛋白的重鏈可變結構域(VD4)，其由胺基酸序列SEQ ID NO：383或與其至少85%相同的序列組成。
在上文所述的與參照序列至少85%相同的序列(例如與SEQ ID NO：383或SEQ ID NO：385至少85%相同的序列)中，與本發明參照序列中的6個CDR相比，6個CDR的序列未改變。
在一個具體實例中，根據a)-g)任一項定義的抗體結合蛋白進一步包含下列連接子：序列SEQ ID NO：307的L1、序列SEQ ID NO：309的L2、胺基酸序列‘S’的L3、胺基酸序列‘RT’的L4和序列SEQ ID NO：313的CH1。
在一個具體實例中，根據a)-g)任一項定義的抗體結合蛋白進 一步包含序列SEQ ID NO：327的Fc2。
在一個具體實例中，根據h)定義的抗體結合蛋白進一步包含下列連接子：序列SEQ ID NO：389的L1、序列SEQ ID NO：389的L2、由0個胺基酸組成的L3和L4和序列SEQ ID NO：313的CH1。
在一個具體實例中，根據h)定義的抗體結合蛋白進一步包含序列SEQ ID NO：392的Fc2。
在一個具體實例中，根據a)-h)任一項定義的抗體結合蛋白的L5包含0個胺基酸。
在另一具體實例中，根據a)-g)任一項定義的抗體結合蛋白進一步包含下列連接子：序列SEQ ID NO：307的L1、序列SEQ ID NO：309的L2、胺基酸序列‘S’的L3、胺基酸序列‘RT’的L4、序列SEQ ID NO：329的CH1和序列SEQ ID NO：330的Fc。
在另一個具體實例中，根據h)定義的抗體結合蛋白進一步包含下列連接子：序列SEQ ID NO：389的L1、序列SEQ ID NO：389的L2、由0個胺基酸組成的L3和L4、序列SEQ ID NO：313的CH1和序列SEQ ID NO：394的Fc。
在另一個具體實例中，根據h)定義的抗體結合蛋白進一步包含序列SEQ ID NO：397或SEQ ID NO：398或與SEQ ID NO：397或SEQ ID NO：398至少的85%相同的序列的Fc殘端。
在具體實例中，與人CD3ε和人CD123特異性結合的抗體結合蛋白包含或基本上由下列組成：
(a)根據式[I]的一條多肽，其由含有序列SEQ ID NO：385的VD1、序列SEQ ID NO：389的L1、序列SEQ ID NO：141的VD2、序列SEQ ID NO：389的L2和序列SEQ ID NO：310的CL的胺基酸序列SEQ ID NO：388 組成，或
與SEQ ID NO：388至少85%相同的序列，其中hz7G3輕鏈可變結構域(SEQ ID NO：385的VD1的序列)中SEQ ID NO：378、‘WAS’和SEQ ID NO：379的3個CDR，和hz20G6輕鏈可變結構域(SEQ ID NO：141的VD2的序列)中SEQ ID NO：142、‘KVS’和SEQ ID NO：11的3個CDR未改變，和
(b)根據式[II]的一條多肽，其由含有序列SEQ ID NO：138的VD3(L3是0胺基酸)、序列SEQ ID NO：383的VD4(L4是0胺基酸)和序列SEQ ID NO：313的CH1的胺基酸序列SEQ ID NO：390組成，或
與SEQ ID NO：390至少85%相同的序列，其中hz7G3重鏈可變結構域(SEQ ID NO：383的VD4的序列)中SEQ ID NO：381、SEQ ID NO：384和SEQ ID NO：382的3個CDR和hz20G6重鏈可變結構域(SEQ ID NO：138的VD3的序列)中SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8的3個CDR未改變；
且其中所述式[I]的多肽和所述式[II]的多肽形成交叉輕鏈-重鏈對。
在具體實例中，與人CD3ε和人CD123特異性結合的抗體結合蛋白包含或基本上由下列組成：
(a)根據式[IV]的一條多肽，其由包含序列SEQ ID NO：385的VD1、序列SEQ ID NO：389的L1、序列SEQ ID NO：141的VD2、序列SEQ ID NO：389的L2、序列SEQ ID NO：310的CL、包含0胺基酸的L5和序列SEQ ID NO：392的Fc2的胺基酸序列SEQ ID NO：391組成，或
與SEQ ID NO：391至少85%相同的序列，其中hz7G3輕鏈可變結構域(SEQ ID NO：385的VD1的序列)中SEQ ID NO：378、‘WAS’和SEQ ID NO：379的3個CDR和hz20G6輕鏈可變結構域(SEQ ID NO：141 的VD2的序列)中SEQ ID NO：142、‘KVS’和SEQ ID NO：11的3個CDR未改變；和
(b)根據式[III]的一條多肽，其由含有序列SEQ ID NO：138的VD3(L3是0胺基酸)、序列SEQ ID NO：383的VD4(L4是0胺基酸)和序列SEQ ID NO：313的CH1和序列SEQ ID NO：394的Fc的胺基酸序列SEQ ID NO：393組成，或
與SEQ ID NO：393至少85%相同的序列，其中hz7G3重鏈可變結構域(SEQ ID NO：383的VD4的序列)中SEQ ID NO：381、SEQ ID NO：384和SEQ ID NO：382的3個CDR，和hz20G6重鏈可變結構域(SEQ ID NO：138的VD3的序列)中SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8的3個CDR未改變；
且其中所述式[IV]的多肽和所述式[III]的多肽形成交叉輕鏈-重鏈對。
在所述抗體樣結合蛋白中，由式[III]和[IV]所示的多肽鏈通過其分別的Fc2和Fc區二聚化。
在具體實例中，與人CD3ε和人CD123特異性結合的抗體結合蛋白包含或基本上由下列組成：
(a)根據式[I]的一條多肽，其由含有序列SEQ ID NO：385的VD1、序列SEQ ID NO：389的L1、序列SEQ ID NO：141的VD2、序列SEQ ID NO：389的L2、和序列SEQ ID NO：310的CL的胺基酸序列SEQ ID NO：388組成，或
與SEQ ID NO：388至少85%相同的序列，其中hz7G3輕鏈可變結構域(SEQ ID NO：385的VD1的序列)中SEQ ID NO：378、‘WAS’和SEQ ID NO：379的3個CDR和hz20G6輕鏈可變結構域(SEQ ID NO：141的VD2的序列)中SEQ ID NO：142、‘KVS’和SEQ ID NO：11的3個CDR 未改變；和
(b)根據式[III]的一條多肽，其由包含序列SEQ ID NO：138的VD3(L3是0胺基酸)、序列SEQ ID NO：383的VD4(L4是0胺基酸)和序列SEQ ID NO：313的CH1和序列SEQ ID NO：396的Fc的胺基酸序列SEQ ID NO：395組成，或
與SEQ ID NO：395至少85%相同的序列，其中hz7G3重鏈可變結構域(SEQ ID NO：383的VD4的序列)中SEQ ID NO：381、SEQ ID NO：384和SEQ ID NO：382的3個CDR，和hz20G6重鏈可變結構域(SEQ ID NO：138的VD3的序列)中SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8的3個CDR未改變；和
(c)一條Fc殘端(多肽Fc3)，其為序列SEQ ID NO：397或與其至少85%相同的序列，其中所述殘端Fc3或與其至少85%相同的序列與根據式[III]的多肽的Fc區異二聚化；且
其中所述式[I]的多肽和所述式[III]的多肽形成交叉輕鏈-重鏈對。
在具體實例中，與人CD3ε和人CD123特異性結合的抗體結合蛋白包含或基本上由下列組成：
(a)根據式[I]的一條多肽，其由包含序列SEQ ID NO：385的VD1、序列SEQ ID NO：389的L1、序列SEQ ID NO：141的VD2、序列SEQ ID NO：389的L2和序列SEQ ID NO：310的CL的胺基酸序列SEQ ID NO：388組成，或
與SEQ ID NO：388至少85%相同的序列，其中hz7G3輕鏈可變結構域(SEQ ID NO：385的VD1的序列)中SEQ ID NO：378、‘WAS’和SEQ ID NO：379的3個CDR，和hz20G6輕鏈可變結構域(SEQ ID NO：141的VD2的序列)中SEQ ID NO：142、‘KVS’和SEQ ID NO：11的3個CDR 未改變；和
(b)根據式[III]的一條多肽，其由包含序列SEQ ID NO：138的VD3(L3是0胺基酸)、序列SEQ ID NO：383的VD4(L4是0胺基酸)和序列SEQ ID NO：313的CH1和序列SEQ ID NO：400的Fc的胺基酸序列SEQ ID NO：399組成，或
與SEQ ID NO：399至少85%相同的序列，其中hz7G3重鏈可變結構域(SEQ ID NO：383的VD4的序列)中SEQ ID NO：381、SEQ ID NO：384和SEQ ID NO：382的3個CDR，和hz20G6重鏈可變結構域(SEQ ID NO：138的VD3的序列)中SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8的3個CDR未改變；和
(c)一條Fc殘端(多肽Fc3)，其為序列SEQ ID NO：398或與其至少85%相同的序列，其中所述殘端Fc3或與其至少85%相同的序列與根據式[III]的多肽的Fc區異二聚化；且
其中所述式[I]的多肽和所述式[III]的多肽形成交叉輕鏈-重鏈對。
免疫接合物(Immunoconjugates)
在一個具體實例中，本發明的抗CD123抗體與生長抑制劑、細胞毒性劑或前體藥物激活酶接合或連接。具體地，本發明的抗CD123抗體對於靶向所述生長抑制劑、細胞毒性劑或前體藥物至在表面表現或過表現CD123的癌細胞確實有效。
核酸、載體和重組宿主細胞
本發明的另一目的涉及包含或由編碼如上文定義的抗CD3抗體、抗CD123抗體或抗體樣結合蛋白的序列組成的核酸序列。
通常，所述核酸是DNA或RNA分子，其可包括與任何合適的載體中，如質體、粘粒、附加體、人工染色體、噬菌體或病毒載體。
術語"載體"、"選殖載體"和"表現載體"意為通過其DNA或RNA序列(例如外源基因)可轉入宿主細胞進而轉化宿主並促進導入的基因表現(例如轉錄和翻譯)的媒介物。
因此，本發明的另一目的涉及包含本發明核酸的載體。
這種載體可包含調節組成，如啟動子、增強子、終止子等，以在施用至受試者時引起或指導所述多肽的表現。在表現載體中使用的用於動物細胞的啟動子和增強子的實例包括SV40早期啟動子和增強子(Mizukami T.et al.1987)、LTR啟動子莫洛尼小鼠白血病病毒(Moloney mouse leukemia virus)(Kuwana Y et al.1987)的增強子、啟動子(Mason JO et al.1985)和免疫球蛋白H鏈增強子(Gillies SD et al.1983)等。
可使用任何用於動物細胞的表現載體，只要編碼人抗體C區的基因可以插入和表現。合適的載體的實例包括pAGE107(Miyaji H et al.1990)、pAGE103(Mizukami T et al.1987)、pHSG274(Brady G et al.1984)、pKCR(O'Hare K et al.1981)、pSG1βd2-4-(Miyaji H et al.1990)等。質體的其他實例包括包含複製起點的質體，或整合質體，如pUC、pcDNA、pBR等。
病毒載體的其他實例包括腺病毒、逆轉錄病毒、皰疹病毒和AAV載體。這種重組病毒可通過本領域已知的技術產生，如通過轉染包裝細胞或通過使用複製質體或病毒的瞬時轉染。病毒包裝細胞的典型實例包括PA317細胞、PsiCRIP細胞、GPenv+細胞、293細胞等。用於產生這種複製缺陷性重組病毒的詳細方案可例如在WO 95/14785、WO 96/22378、US 5,882,877、US 6,013,516、US 4,861,719、US 5,278,056和WO 94/19478中發現。
本發明的另一目的涉及已通過根據本發明的核酸和/或載體轉染、感染或轉化的細胞。
術語"轉化"意為將"外源"(即外來的)基因、DNA或RNA序列導入宿主細胞，進而宿主細胞將表現導入的基因或序列以產生預期物質，通常是由導入的基因或序列編碼的蛋白或酶。接收和表現導入的DNA或RNA的宿主細胞已"轉化"。
本發明的核酸可用於在合適的表現系統產生本發明的重組抗體。術語"表現系統"意為在合適的條件下的宿主細胞和相容載體，例如由外源DNA編碼的蛋白通過載體攜載並導入宿主細胞表現。
通用的表現系統包括大腸桿菌宿主細胞和質體載體、昆蟲宿主細胞和杆狀病毒載體，和哺乳動物宿主細胞和載體。其他宿主細胞的實例包括但不限於原核細胞(如細菌)和真核細胞(如酵母細胞、哺乳動物細胞、昆蟲細胞、植物細胞等)。具體的實例包括大腸桿菌(E.coli)、克魯維酵母(Kluyveromyces)或釀酒酵母(Saccharomyces yeasts)、哺乳動物細胞系(例如Vero細胞、CHO細胞、3T3細胞、COS細胞等)以及原代或建立的哺乳動物細胞培養(例如從淋巴母細胞、成纖維細胞、胚胎細胞、上皮細胞、神經細胞、脂肪細胞等產生)。實例還包括小鼠SP2/0-Ag14細胞(ATCC CRL1581)、小鼠P3X63-Ag8.653細胞(ATCC CRL1580)、其中二氫葉酸還原酶基因(此後稱為"DHFR基因")缺陷的CHO細胞、大鼠YB2/3HL.P2.G11.16Ag.20細胞(ATCC CRL1662，此後稱為"YB2/0細胞")等。優選為YB2/0細胞，由於當在該細胞中表現時，嵌合或人源化抗體的ADCC活性增強。
具體地，對於人源化抗體或抗體樣結合蛋白的表現，表現載體可以是其中編碼抗體重鏈的基因和編碼抗體輕鏈的基因存在於分開的載體上的類型或其中兩基因存在於相同載體上的類型(串聯型)。考慮到人源化抗體和抗體樣結合蛋白表現載體構建的難易程度、導入動物細胞的難易程 度和抗體H和L鏈在動物細胞中的表現水平間的平衡，優選串聯型人源化抗體表現載體(Shitara K et al.J Immunol Methods.1994 Jan.3；167(1-2)：271-8)。串聯型人源化抗體表現載體的實例包括pKANTEX93(WO 97/10354)、pEE18等。
本發明還涉及表現根據本發明的抗CD3抗體、抗CD123抗體或抗體樣結合蛋白的重組宿主細胞的產生方法，所述方法包括或由下列步驟組成：(i)將如上文所述的重組核酸或載體體外或離體導入感受態宿主細胞，(ii)體外或離體培養獲得的重組宿主細胞並(iii)任選地，選擇表現和/或分泌所述抗體的細胞。
這些重組宿主細胞可用於產生本發明的抗CD3抗體、至少一種抗CD123抗體或至少一種抗體樣結合蛋白。
產生本發明的抗體和抗體樣結合蛋白的方法
本發明的一個具體實例提供製備包含形成兩抗原結合位點的兩條多肽鏈的抗體樣結合蛋白的方法，其中第一多肽具有由式[I]所示的結構：
VD1-L1-VD2-L2-CL [I]
且第二多肽具有通過式[II]所示的結構：
VD3-L3-VD4-L4-CH1 [II]
其中：
VD1是第一免疫球蛋白重鏈或輕鏈的可變結構域；
VD2是第二免疫球蛋白重鏈或輕鏈的可變結構域；
VD3是所述第二免疫球蛋白重鏈或輕鏈的可變結構域；
VD4是所述第一免疫球蛋白重鏈或輕鏈的可變結構域；
CL是免疫球蛋白的輕鏈恒定結構域；
CH1是免疫球蛋白的CH1重鏈恒定結構域；
L1、L2、L3和L4是胺基酸連接子；
且其中所述第一和第二多肽形成交叉輕鏈-重鏈對，且
其中VD1和VD2均為輕鏈可變結構域或均為重鏈可變結構域，且如果VD1和VD2為輕鏈可變結構域，則VD3和VD4均為重鏈可變結構域，或如果VD1和VD2是重鏈可變結構域，則VD3和VD4均為輕鏈可變結構域。
在另一個具體實例中，本發明提供用於製備包含形成四抗原結合位點的四條多肽鏈的抗體樣結合蛋白的方法，其中兩條多肽鏈具有由式[I]所示的結構：
VD1-L1-VD2-L2-CL [I]
且一條多肽鏈具有通過式[III]所示的結構：
VD3-L3-VD4-L4-CH1-Fc [III]
其中：
VD1是第一免疫球蛋白重鏈或輕鏈的可變結構域；
VD2是第二免疫球蛋白重鏈或輕鏈的可變結構域；
VD3是所述第二免疫球蛋白重鏈或輕鏈的可變結構域；
VD4是所述第一免疫球蛋白重鏈或輕鏈的可變結構域；
CL是免疫球蛋白的輕鏈恒定結構域；
CH1是免疫球蛋白的CH1重鏈恒定結構域；
Fc是免疫球蛋白的免疫球蛋白鉸鏈區和CH2、CH3免疫球蛋白重鏈恒定結構域；
L1、L2、L3和L4是胺基酸連接子；
且其中所述式I的多肽和式III的多肽形成交叉輕鏈-重鏈對，且
其中VD1和VD2均為輕鏈可變結構域或均為重鏈可變結構域，且如果VD1和VD2是輕鏈可變結構域，則VD3和VD4均為重鏈可變結構域，或如果VD1和VD2是重鏈可變結構域，則VD3和VD4均為輕鏈可變結構域。
在另一個具體實例中，本發明提供用於製備包含形成四抗原結合位點的四條多肽鏈的抗體樣結合蛋白的方法，其中兩條多肽鏈具有由式[IV]所示的結構：
VD1-L1-VD2-L2-CL-L5-Fc2 [IV]
且兩條多肽鏈具有通過式[III]所示的結構：
VD3-L3-VD4-L4-CH1-Fc [III]
其中：
VD1是第一免疫球蛋白重鏈或輕鏈的可變結構域；
VD2是第二免疫球蛋白重鏈或輕鏈的可變結構域；
VD3是所述第二免疫球蛋白重鏈或輕鏈的可變結構域；
VD4是所述第一免疫球蛋白重鏈或輕鏈的可變結構域；
CL是免疫球蛋白的輕鏈恒定結構域；
CH1是免疫球蛋白的CH1重鏈恒定結構域；
Fc是免疫球蛋白的免疫球蛋白鉸鏈區和CH2、CH3免疫球蛋白重鏈恒 定結構域；
Fc2是免疫球蛋白的免疫球蛋白鉸鏈區和CH2、CH3免疫球蛋白重鏈恒定結構域；
L1、L2、L3、L4和L5是胺基酸連接子；且
其中式[IV]的多肽和式[III]的多肽形成交叉輕鏈-重鏈對；且
其中VD1和VD2均為輕鏈可變結構域或均為重鏈可變結構域，且如 果VD1和VD2是輕鏈可變結構域，則VD3和VD4均為重鏈可變結構域，或如果VD1和VD2是重鏈可變結構域，則VD3和VD4均為輕鏈可變結構域。
在本發明的一個具體實例中，第一免疫球蛋白或第二免疫球蛋白是一種如上文«抗CD3抗體»部分定義的抗CD3抗體。
在本發明的另一具體實例中，第一免疫球蛋白或第二免疫球蛋白是一種如上文«抗CD123抗體»部分定義的抗CD123抗體。
本發明的抗CD3抗體、抗CD123抗體和/或抗體樣結合蛋白可通過任何本領域已知的技術產生，如但不限於單獨的任何化學、生物、基因或酶技術或其組合。
獲知預期序列的胺基酸序列，本領域的技術人員可以很容易地藉由標準用於產生多肽的技術產生所述抗體或免疫球蛋白鏈。例如，其可使用已知的固相方法合成、具體地使用市場有售的肽合成設備(如由Applied Biosystems,Foster City,California製造的)並依照生產商的說明書合成。可替換地，本發明的抗體、免疫球蛋白鏈和抗體樣結合蛋白可通過本領域熟知的重組DNA技術合成。例如，這些片段作為DNA表現產物如下獲得：將編碼預期(多)肽的DNA序列併入表現載體並將這種載體導入合適的將表現預期多肽的真核或原核宿主後，隨後使用已知技術從其分離所述片段。
具體地，本發明進一步涉及產生本發明的抗CD3抗體、抗CD123抗體和/或抗體樣結合蛋白的方法，該方法包括或由下列步驟組成：(i)培養根據本發明的轉化的宿主細胞；(ii)表現所述抗體或多肽；和(iii)回收表現的抗體或多肽。
本發明的抗CD3抗體、抗CD123抗體和/或抗體樣結合蛋白通過常規的免疫球蛋白純化步驟例如A-瓊脂糖、羥磷灰石層析、凝膠電泳、 透析或親和層析從培養基適當分離。
在具體的具體實例中，本發明的人源化嵌合抗CD3抗體和/或抗CD123抗體可通過下列方式產生：獲得編碼之前所述的人源化VL和VH結構域的核酸序列，藉由將其插入用於具有編碼人抗體CH和人抗體CL的基因的動物細胞的表現載體構建人嵌合抗體表現載體，並通過將表現載體導入動物細胞表現編碼序列。類似於此，人源化抗體樣結合蛋白可通過使用兩種人源化抗體的重鏈和輕鏈的第一人源化免疫球蛋白的重鏈或輕鏈可變結構域(VD1)、第二人源化免疫球蛋白的重鏈或輕鏈可變結構域(VD2)、所述第二人源化免疫球蛋白的重鏈或輕鏈可變結構域(VD4)和所述第一人源化免疫球蛋白的重鏈或輕鏈可變結構域獲得。
作為本發明的人嵌合抗體的CH結構域或抗體樣結合蛋白的CH結構域，其可以是屬人免疫球蛋白重鏈的任何區，但這些IgG類型是合適的且也可使用屬IgG類型的亞類的任何一種如IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。此外，作為本發明的人嵌合抗體的CL或抗體樣結合蛋白的CL，其可以是屬人免疫球蛋白輕鏈的任何區，且可使用κ類或λ類的那些。
用於產生人源化或嵌合抗體的方法涉及本領域熟知的常規重組DNA和基因轉入技術(參見Morrison SL.et al.(1984)and patent documents US5,202,238；和US5,204,244)。
基於常規重組DNA和基因轉染技術的用於產生人源化抗體的方法為本領域熟知(參見例如Riechmann L.et al.1988；Neuberger MS.et al.1985)。抗體可使用多種本領域已知的技術人源化包括例如在專利申請WO2009/032661中公開的技術、CDR-移植(EP 239,400；PCT公開WO91/09967；美國專利號5,225,539；5,530,101；和5,585,089)、飾面或表面置換(EP 592,106；EP 519,596；Padlan EA(1991)；Studnicka GM et al.(1994)； Roguska MA.et al.(1994))和鏈替換(美國專利號5,565,332)。用於製備這種抗體的一般重組DNA技術也已知(參見歐洲專利申請EP 125023和國際專利申請WO 96/02576)。
本發明的Fab可通過用蛋白酶如木瓜蛋白酶處理與CD3或CD123特異性反應的抗體獲得。此外，Fab可通過將編碼抗體的兩條Fab鏈的DNA序列插入用於原核表現或用於真核表現的載體，並將所述載體導入原核或真核(如適當時)細胞以表現Fab產生。
本發明的F(ab')2可用蛋白酶木瓜蛋白酶處理與CD3或CD123特異性反應的抗體獲得。此外，F(ab')2可通過經由硫醚鍵或二硫鍵結合下文所述的Fab'。
本發明的Fab'可用還原劑如二硫蘇糖醇處理與CD3或CD123特異性反應的F(ab')2獲得。此外，Fab'可通過將編碼抗體Fab'鏈的DNA序列插入用於原核表現或用於真核表現的載體，並將所述載體導入原核或真核(酌情)細胞以表現Fab產生。
本發明的scFv可通過採用如前文所述的CDR或VH和VL結構域的序列，構建編碼scFv片段的DNA，將DNA插入原核表現或真核表現的載體，且隨後將表現載體導入原核或真核細胞(酌情)以表現Fab產生。為生成人源化scFv片段，可使用稱為CDR移植的已知技術，其涉及選擇根據本發明的互補決定區(CDR)，並將其移植至已知三維結構的人scFv片段框架上(參見例如W098/45322；WO 87/02671；US5,859,205；US5,585,089；US4,816,567；EP0173494)。
本發明抗體的修飾
預期對如本文所述的抗體或抗體樣結合蛋白進行胺基酸序列修飾。例如，期望改進抗體或抗體樣結合蛋白的結合親和力和/或其他生 物學性質。例如，已知當人源化抗體通過僅將源自非人動物的抗體VH和VL中的CDR移植至人抗體VH和VL的FR中產生，與原始源自非人的動物抗體相比抗原結合活性可減少。考慮非人抗體VH和VL中的數種胺基酸殘基不僅在CDR中還在FR中，也可直接或間接與抗原結合活性相關。因此用源自人抗體VH和VL的FR的不同胺基酸殘基的這些胺基酸殘基取代將減少結合活性。為解決該問題，在移植了非人CDR的人抗體中，需做出在人抗體的VH和VL的FR的胺基酸序列中識別與抗體結合直接相關的胺基酸殘基，或與維持抗體三維結構且與跟抗原的結合直接相關的CDR相互作用的胺基酸殘基。減少的抗原結合活性通過用源自非人動物的最初抗體的胺基酸殘基取代識別的胺基酸增加。本發明的抗體樣結合蛋白可包含人源化抗體的可變區，且因此在本文提及的考慮同樣可應用至本發明的抗體樣結合蛋白。
修飾和改變可發生在本發明的抗體結構以及在編碼它們的DNA序列中，並仍得到具有預期特性的功能性抗體、抗體樣結合蛋白或多肽。
在產生這些多肽的胺基酸序列中的改變時，可考慮胺基酸的親水性指數。賦予相互作用的生物功能的親水性胺基酸指數對蛋白的重要性一般為本領域所理解。已接受胺基酸的相對親水特徵對有助於所產生的蛋白的二級結構，其隨後限定蛋白與其他分子的相互作用，例如酶、底物、受體、DNA、抗體、抗原等。已確定於其親水性和電荷特性確定每種胺基酸的親水性指數：異亮胺酸(+4.5)；纈胺酸(+4.2)；亮胺酸(+3.8)；苯丙胺酸(+2.8)；半胱胺酸/胱胺酸(+2.5)；蛋胺酸(+1.9)；丙胺酸(+1.8)；甘胺酸(-0.4)；蘇胺酸(-0.7)；絲胺酸(-0.8)；色胺酸(-0.9)；酪胺酸(-1.3)；脯胺酸(-1.6)；組胺酸(-3.2)；谷胺酸(-3.5)；穀氨醯胺(-3.5)；天冬胺酸-3.5)；天冬醯胺(-3.5)；賴胺酸(-3.9)和精胺酸(-4.5)。
本發明的另一目的還涵蓋本發明的抗CD3抗體、抗CD123抗體和抗體樣結合蛋白的多肽的功能性保守變體。
例如，一些胺基酸可由其他蛋白結構中的胺基酸取代而不喪失活性。由於蛋白的相互作用能力和性質限定其生物功能活性，一些胺基酸取代可在蛋白序列中發生，且當然可在其DNA編碼序列中發生，而仍然獲得具有相似性質的蛋白。因此預期多種改變可在本發明的抗體序列中發生，或在對應的編碼所述多肽的DNA序列中發生，而不喪失其生物活性。
本領域已知一些胺基酸可通過其他具有相似親水性指數或分數的胺基酸取代且仍導致具有相似生物活性的蛋白，即仍獲得生物功能性等同的蛋白。可能使用已建立的技術如丙胺酸掃描方式以在本發明的抗體或多多肽中鑑別可取代而不顯著喪失與抗原的結合的全部胺基酸。由於這些殘基不參與抗原結合或維持抗體的結構，它們可以具有中性的性質。一個或多個這種中性位置可通過丙胺酸通過另一胺基酸取代而不改變本發明的抗體或多肽的主要特性。
如上所述，胺基酸一般因此基於其胺基酸側鏈取代基的相似性例如其親水性、疏水性、電荷、大小等而發生取代。考慮上述特徵的典型取代為本領域的技術人員已知且包括：精胺酸和賴胺酸；谷胺酸和天冬胺酸；絲胺酸和蘇胺酸；穀氨醯胺和天冬醯胺以及纈胺酸、亮胺酸和異亮胺酸。
還可預期對應抗CD3抗體、抗CD123抗體和抗體樣結合蛋白的效應器功能進行修飾，例如從而增強或減少抗原依賴性細胞介導的細胞毒性(ADCC)和/或抗體的補體依賴性細胞毒性(CDC)。這可通過在抗體的Fc區引進一個或多個胺基酸取代實現，在本發明抗體樣結合蛋白的上下文中，此處也稱為Fc-變體。可替換地或附加地，半胱胺酸殘基可引進Fc區， 由此允許在該區形成鏈內二硫鍵。生產的同二聚化抗體可具有改進的或減少的內化能力和/或增加的補體介導的細胞殺傷和/或抗體依賴性細胞的細胞毒性(ADCC)(Caron PC.et al.1992；and Shopes B.1992)。
另一類型本發明的抗CD3抗體、抗CD123抗體和抗體樣結合蛋白胺基酸修飾可用於改變抗CD3抗體、抗CD123抗體和抗體樣結合蛋白的最初糖基化類型，即通過刪除一個或多個在抗CD3抗體、抗CD123抗體和抗體樣結合蛋白中發現的糖部分和/或添加一個或多個未在抗CD3抗體、抗CD123抗體和抗體樣結合蛋白中存在的糖基化位點。三肽序列天冬醯胺-X-絲胺酸或天冬醯胺-X-蘇胺酸的存在(其中X是除脯胺酸外的任何胺基酸)生成潛在的糖基化位點。糖基化位點對於抗CD3抗體、抗CD123抗體和抗體樣結合蛋白抗CD3的添加或刪除可通過改變胺基酸序列方便地完成，由此其包含一個或多個上述的三肽序列(對於N-連接糖基化位點)。
另一類型的修飾涉及去除在計算機中或實驗中識別的潛在導致抗CD3抗體、抗CD123抗體和抗體樣結合蛋白製劑產生降解產物或異質性的序列。舉例來說，天冬醯胺和穀氨醯胺的去醯胺化可取決於因素如pH和表面暴露而發生。天冬醯胺殘基對去醯胺化特別易感，特別是當存在於序列Asn-Gly中，且在其他二肽中如Asn-Ala程度較少。當該去醯胺化位點特別是Asn-Gly存在於本發明的抗CD3抗體、抗CD123抗體和抗體樣結合蛋白或多肽時，因此可預期去除該位點，通常通過保守取代，以去除殘留的殘基之一。序列中的這種去除一個或多個殘留殘基的取代也意在涵蓋於本發明中。
共價修飾的另一類型涉及將糖苷與抗CD3抗體、抗CD123抗體和抗體樣結合蛋白化學或酶學偶聯。這些操作對於在不需要在具有N-或O-連接糖基化的宿主細胞中產生抗CD3抗體、抗CD123抗體和抗體樣結合蛋 白中存在優勢。依賴於使用的偶聯模式，糖可與以下附著：(a)精胺酸和組胺酸，(b)游離羧基，(c)游離巰基如半胱胺酸中的游離巰基，(d)游離羥基，如絲胺酸、蘇胺酸或羥基脯胺酸中的游離羥基，(e)芳香族殘基，諸如苯丙胺酸、酪胺酸或色胺酸中的芳香族殘基，或(f)穀氨醯胺的醯胺基。這些方法例如描述於WO87/05330。
存在於抗CD3抗體，抗CD123抗體或抗體樣結合蛋白的任何糖部分的去除可化學或酶學實現。化學去糖基化需要抗CD3抗體，抗CD123抗體或抗體樣結合蛋白暴露至化合物三氟甲磺酸或等同化合物。該處理導致除連接糖(N-乙醯葡糖胺或N-乙醯半乳糖)以外的大多數或全部糖的裂解，而保持抗體完整。化學去糖基化由Sojahr H.et al.(1987)和by Edge,AS.et al.(1981)描述。抗體上糖部分的酶學裂解可通過使用如Thotakura,NR.et al.(1987)所述的多種內切和外切糖苷酶實現。
抗CD3抗體、抗CD123抗體或抗體樣結合蛋白另一類型的共價修飾包含將抗體以美國專利號4,640,835；4,496,689；4,301,144；4,670,417；4,791,192或4,179,337所述的方式連接至多種非蛋白多聚物之一，例如聚乙二醇、聚丙二醇或聚氧化烯。
醫藥組成物
本發明的抗CD3抗體、抗CD123抗體和/或抗體樣結合蛋白可與藥物上可接受的賦形劑和任選的緩釋基質如可生物降解的聚合物組合以形成治療組成物。
因此，本發明的另一目的關於包含本發明的抗CD3抗體、抗CD123抗體或抗體樣結合蛋白和藥物上可接受的載劑的醫藥組成物。
本發明還關於根據本發明的抗CD3抗體、抗CD123抗體或抗體樣結合蛋白用作藥物的用途。本發明還涉及本發明的醫藥組成物用作藥 物的用途。
本文使用的術語"醫藥組成物"或"治療組合物"指當適當施用至患者時能誘導預期治療效果的化合物或組成物。
這樣的治療或醫藥組成物可包含治療上有效的量的抗CD3抗體、抗CD123抗體或抗體樣結合蛋白或其藥物偶聯物，和與所選用於施用模式穩定性的藥物上或生理上可接受的配製劑的混合物。
"藥物上"或"藥物上可接受的"指酌情使用至哺乳動物特別是人時不產生副作用、過敏或其他不良反應的整體和組合物。藥物上可接受的載劑或賦形劑指任何類型的非毒性固體或液體填充劑、稀釋劑、包封材料或製劑輔料。
本文使用的“藥物上可接受的載劑”包括任何和全部生理上兼容的溶劑、分散介質、包衣、抗菌劑和抗真菌劑等。合適的載劑、溶劑和/或賦形劑的實例包括水、胺基酸、鹽水、磷酸鹽緩衝鹽水、葡萄糖、甘油、乙醇等的一種或多種，以及其組合。在許多情況中，優選組合物中包括等滲劑，如糖、多元醇或氯化鈉且製劑還可包含抗氧化劑如色胺類和穩定劑如吐溫20(Tween 20)。
醫藥組成物的形式、施用途徑、劑量和方案自然取決於待治療的病況、疾病的嚴重性、患者的年齡、重量和性別等。
本發明的醫藥組成物可配製用於局部、口服、腸胃外、鼻內、靜脈內、肌肉內、皮下或眼內施用等。
具體地，醫藥組成物包含媒介物、其對於能夠注射的製劑是藥物上可接受的。這些可具體為等滲、無菌的鹽水溶液(單鈉或二鈉磷酸鹽、鈉、鉀、鈣或鎂鹽酸鹽等或這些鹽的組合物)，或根據情況為乾燥的特別是冷凍乾燥的組合物，其在添加無菌水或生理鹽水時可構成可注射溶液。
用於施用的劑量可作為相關疾病的多種參數的函數，且特別是作為施用模式或預期治療持續時間的函數。
為製備醫藥組成物，可將有效量的本發明的抗體或免疫接合物溶解或分散於藥物上可接受的載劑或水介質中。
適於可注射用途的藥物形式包括無菌溶液或分散劑；製劑包括芝麻油、花生油或丙二醇水溶液；和用於可注射溶液或分散劑的臨時製備的無菌粉末。在所有情況中，所述形式必需為無菌且必需為易於注射的一定程度的液體。其在製造和保存條件下必需穩定且必需可預防微生物，如細菌和真菌的污染作用。
作為游離鹼或藥物上可接受的鹽的活性化合物的溶液可與表面活性劑如羥丙基纖維素在水中適當製備。分散劑還可在甘油、液體聚乙二醇及其混合物中和油中製備。在正常的保存和使用條件下，這些製劑包含防腐劑以預防微生物生長。
本發明的抗CD3抗體、抗CD123抗體或抗體樣結合可配製成中性或鹽形式的組合物。藥物上可接受的鹽包括酸加成鹽(用蛋白的游離胺基酸基團形成)且其用無機酸如例如鹽酸或磷酸或有機酸如乙酸、草酸、酒石酸、扁桃酸等形成。用游離羧基基團形成的鹽還可源自無機鹼如例如鈉，鉀、銨、鈣或鐵的氫氧化物和有機鹼如異丙胺、三甲胺、甘胺酸、組胺酸、普魯卡因等。
載劑還可以是溶劑或分散介質，包括例如水、乙醇、多元醇(例如甘油，丙二醇和液體聚乙二醇等)，其合適的混合物和植物油。通過例如包衣如卵磷脂的使用、在分散劑的情況中通過維持所需顆粒尺寸和通過使用表面活性劑保持適當的流動性。微生物作用的預防可通過多種抗菌可抗真菌劑帶來，例如對羥基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸、硫柳汞等。 在很多情況中，優選包括等滲劑例如糖或氯化鈉。可注射組合物的延長吸收可通過在組合物中使用延遲吸收劑例如單硬脂酸鋁和明膠帶來。
無菌可注射溶液優選通過在具有多種其他上文列舉的成分的合適的溶劑中以所需的量併入活性化合物製備，按需要隨後可過濾滅菌。一般而言，分散劑可通過將多種無菌活性成分併入包含基礎分散介質和需要的上文列舉的其他成分的無菌媒介物製備。在用於製備可注射溶液的無菌粉末的情況中，優選的製備方法是從之前的其無菌過濾溶液獲得活性成分及其他預期成分粉末的真空乾燥和冷凍乾燥技術。
還預期製備用於直接注射的更濃或高度濃縮的溶液，其中預想將DMSO用作溶劑以導致快速穿透，遞送高濃度活性劑至小腫瘤區域。
配製後，溶液將以與劑量配製相容和治療上有效的量的方式施用。製劑可以多種劑型施用，如上文所述的可注射溶液的類型，但也可採用藥物釋放膠囊等。
對於液體溶液中的腸胃外施用，例如，必要時所述溶液應適當緩衝且液體溶劑用足夠的鹽或葡萄糖首先賦予等滲。這些特定的水溶液特別適於靜脈內、肌內、皮下和腹膜內施用。在這方面，在本公開的啟示下可採用的無菌水介質為本領域的技術人員已知。例如，可將一劑量溶於1ml的等滲NaCl溶液並添加至1000ml皮下輸液或在選定輸液位點注射(參見例如"Remington's Pharmaceutical Sciences"第15版，1035-1038和1570-1580頁)。劑量上的一些變化取決於治療的患者的病況可按需要發生。在任何事件中，負責施用的人將確定用於個體受試者的合適劑量。
在一個具體實例中，本發明的抗CD3抗體、抗CD123抗體或抗體樣結合蛋白在合適的治療混合物中配製以使每劑量包含約0.01-100毫克等。
除配製用於腸胃外施用的抗CD3抗體、抗CD123抗體或抗體樣結合蛋白如靜脈或肌肉注射，其他治療上可接受的形式包括例如片劑或其他用於口服施用的固體；時間釋放膠囊；和任何其他現在使用的形式。
在一些具體實例中，預期使用脂質體和/或奈米顆粒用於將多肽如抗CD3抗體、抗CD123抗體或抗體樣結合蛋白導入宿主細胞。脂質體和/或奈米顆粒的配製和使用為本領域的技術人員已知。
奈米膠囊一般可以穩定和可重複的方式包裹化合物。為避免由於細胞內多聚物過載引起的副作用，一般使用可在體內降解的聚合物設計這種超細顆粒(尺寸約0.1μm)。預期滿足需要的生物可降解聚氰基丙烯酸酯奈米顆粒可在本發明中使用，且這種顆粒可很容易地製備。
可從分散於水介質且同時形成多層同心雙層囊泡(也稱為多層囊泡(MLV))的磷脂形成脂質體。MLV的直徑一般為25nm-4μm。Sonication of MLV的超聲形成直徑為200-500Å的小單層囊泡(SUV)，其在中心包含水溶液。脂質體的物理特性依賴於pH、離子強度和二價氧離子的存在。
一旦配製了醫藥組成物，其可作為溶液、懸液、凝膠、乳液、固體或作為脫水或凍乾粉末在無菌小瓶中保存。這種製劑可以即用形式或以需要在施用前重構的形式(例如凍乾形式)保存。
治療方法和用途
發明人已展示本發明的數種雙特異性化合物，如“hz20G6x7G3”,“7G3xhz4B4”,“hz4B4x3E3”和“hz20G6x7G3-TL4”對CD123陽性腫瘤細胞系模型的T-細胞介導的細胞毒性。此外，發明人還證明了數種本發明的雙特異性化合物在靶細胞存在下激活T細胞導致腫瘤細胞的細胞毒性的能力。發明人還進一步證明了靶細胞不存在下無T-細胞活化中的T 細胞低活化。
已知治療性抗CD123單株抗體可導致具有由抗體特異性識別的抗原的消耗。該消耗可通過至少三種機制介導。抗體介導的細胞的細胞毒性(ADCC)、補體依賴性細胞毒性(CDC)和通過經由抗體靶向的抗原賦予的信號的腫瘤生長的直接抗腫瘤抑制。在一個具體實例中，本發明的抗CD123抗體通過抗體介導細胞毒性(ADCC)、補體依賴性細胞毒性(CDC)的誘導表現CD123的細胞的細胞毒性。
"補體依賴性細胞毒性"或"CDC"指補體存在下的靶細胞裂解。經典補體通路的活化通過補體系統的第一組成與結合關聯抗原的抗體的結合而啟動。為評估補體活化'實施CDC試驗例如Gazzano-Santoro et al.(1997)中所述。
"抗體依賴性細胞介導的細胞毒性"或"ADCC"指其中分泌的抗體結合至存在於一些細胞毒性細胞(例如自然殺傷(NK)細胞、嗜中性粒細胞和巨噬細胞)表面的Fc受體(FcR)使這些細胞毒性效應器特異性結合帶有抗原的靶細胞且隨後殺傷靶細胞的細胞毒性形式。為評估感興趣的分子的ADCC活性，可實施體外ADCC試驗，如美國專利號5,500,362或5,821,337所述。
如上文“抗CD3抗體”部分所述，本發明的抗CD3抗體具有低T-細胞活化，其因此在受試者中具有用作免疫抑制劑的治療潛力。
此外，如上文定義的抗體樣結合蛋白目的在於通過靶向T-細胞至腫瘤細胞增強患者對腫瘤的免疫反應。在一個具體實例中，如上文定義的抗體樣結合蛋白在T-細胞表面靶向T-細胞受體(TCR)的CD3ε亞單位，而其他臂靶向表現CD123的癌細胞，其中T-細胞和腫瘤細胞藉由雙特異性構築體的共同參與導致細胞裂解合酶的形成，其誘導細胞活化並導致腫 瘤細胞殺傷。腫瘤細胞殺傷可藉由至少兩種機制介導：穿孔蛋白/顆粒酶殺傷和FasL/Fas殺傷，例如穿孔蛋白/顆粒酶殺傷。
因此，在一個具體實例中，本發明提供治療或預防疾病並病症的方法，其包括將本發明的治療上有效的量的抗CD3抗體、抗CD123抗體、抗體樣結合蛋白或如上文“醫藥組成物”定義的醫藥組成物施用至有需要的受試者。
本發明進一步關於本發明的抗CD3抗體、抗CD123抗體、抗體樣結合蛋白或醫藥組成物用於製備治療或預防受試者中疾病或病症的藥物的用途。在一個具體實例中，本發明關於抗CD3抗體、抗CD123抗體、抗體樣結合蛋白或醫藥組成物用於治療或預防受試者中疾病或病症的用途。
術語“受試者”或“個體”可交換使用且可例如為人或非人哺乳動物。例如，受試者是蝙蝠；鼬；兔；貓科動物(貓)；犬科動物(狗)；靈長類動物(猴)，馬類(馬)；人包括男人、女人和兒童。在一個具體實例中，"受試者"指人。
在本發明的上下文中，術語"治療"或"療法"指治療用途(即對具有給定疾病的受試者)且意為逆轉、減輕、抑制一種或多種這些病症或病況的進展。因此，治療不僅指導致疾病完全治癒的治療，還指減緩疾病進展和/或延長受試者生存率的治療。
“預防”意為預防性用途(即對給定疾病易於發展的受試者的作用)。
在一個具體實例中，"疾病"或"病症"是將從用本發明的抗CD123抗體或抗體樣結合蛋白的治療獲益的任何狀況。在一個具體實例中，其包括長期或急性病症或疾病，其包括使受試者易感於相關病症的病理狀況。術語“需要治療”指具有病症以及病症將發展的受試者。
在一個具體實例中，"疾病"或"病症"是將從用本發明的抗CD3抗體治療獲益的任何病況。因此，在一個具體實例中，其包括特徵在於病理性免疫反應的疾病或病症。
"病理性免疫反應"在本發明的上下文中意為炎性免疫反應。
在一個具體實例中，特徵在於病理性免疫反應的疾病是自身免疫學疾病、移植相關疾病或炎性相關疾病。
自體免疫疾病為例如克羅恩氏病(Crohn's disease)，潰瘍性結腸炎和1型糖尿病或移植相關疾病，如移植物抗宿主病(GVHD)。
因此，在一個具體實例中，受試者已診斷患有特徵在於病理性免疫反應的疾病或病症。
在一個具體實例中，受試者已診斷患有自體免疫疾病。
在另一個具體實例中，所述病症指癌症。
在另一個具體實例中，癌症涉及血液癌症，特別是與CD123表現相關的血液癌症。
在一個具體實例中，由癌細胞表現的CD123可以很容易地例如通過使用根據本發明的抗CD123抗體如在“診斷用途”部分所述進行試驗。
“與CD123表現相關血液癌症”包括白血病(如急性髓細胞性白血病、慢性骨髓性白血病、急性淋巴性白血病、慢性淋巴性白血病、毛細胞白血病和骨髓增生異常綜合徵)和惡性淋巴增殖病況，母細胞性漿細胞樣樹突細胞腫瘤(BPDCN)，系統性肥大細胞增多症，包括淋巴瘤(如多發性骨髓瘤、非霍奇金氏淋巴瘤(non-Hodgkin's lymphoma)，伯基特氏淋巴瘤(Burkitt's lymphoma)和小細胞和大細胞濾泡性淋巴瘤)。
如上文‘抗CD123抗體”部分所述LSC表現CD123。
因此，在相關具體實例中，癌症指與白血病幹細胞相關的血 液癌症。
依照本發明待治療的與白血病幹細胞(LSC)相關的血液癌症病況包括白血病(如急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、急性淋巴性白血病、慢性淋巴性白血病和骨髓增生異常綜合徵)和惡性淋巴增殖病況、母細胞性漿細胞樣樹突細胞腫瘤(BPDCN)、系統性肥大細胞增多症包括淋巴瘤(如多發性骨髓瘤、非霍奇金氏淋巴瘤(non-Hodgkin's lymphoma)，伯基特氏淋巴瘤(Burkitt's lymphoma)和小細胞和大細胞濾泡性淋巴瘤)。
本發明的一方面，血液癌症是急性骨髓性白血病(AML)。
在一個具體實例中，受試者已診斷患有AML。
在另一個具體實例中，受試者已用化療治療直至完全緩解但復發。
“復發”定義為完全緩解後AML的重新出現。
“完全緩解”或“CR”定義如下：中性粒細胞為正常值(>1.0*109/L)，10g/dL的血紅蛋白水平，和血小板計數(>100*109/L)且不依賴紅細胞輸血；少於5%的原始細胞，無原始細胞簇或聚集，和對骨髓的檢查無Auer小體存在；和血細胞的正常成熟(形態學；脊髓X線造影攝片)且不存在髓外白血病。
在一個具體實例中，本發明的抗CD3抗體、抗CD123抗體或抗體樣結合蛋白單獨使用或與任何合適的生長抑制劑組合使用。
本發明多肽的"治療上有效的量"意為以合理的收益/風險比率應用至任何醫學治療足以治療所述癌症疾病的多肽的量。然而，可以理解的是本發明多肽和組合物的每日總用量將由主治醫師在安全醫學判斷範圍內決定。用於任何特定患者的特定的治療上有效的量將取決於多種因素，包括待治療的病症和病症的嚴重性；採用的特定多肽的活性；採用的 特定組合物；患者的年齡、體重、基本健康、性別和飲食；施用時間；施用途徑和採用的多肽的排泄率；治療持續時間；與採用的多肽組合或同時使用的藥物等醫學領域已知的因素。例如，本領域的技術人員已知化合物的初始劑量低於實現預期治療效果所需的劑量且逐漸增加劑量直至達到預期效果。
在一個具體實例中，用本發明的抗CD3抗體、抗CD123抗體或抗體樣結合蛋白或根據本發明的免疫接合物治療的效力在體內可以很容易地試驗，例如在癌症小鼠模型中，例如通過測量例如治療和對照組間腫瘤體積的變化。
診斷用途
已報導CD123在多種血液腫瘤表面過表現。
因此，CD123構成癌症標記物且因此具有用於預測抗癌療法或檢測疾病復發的潛力。
在具體實例中，本發明的抗CD123抗體用作上下文中靶向表現CD123腫瘤的療法的試驗組成，進而確定患者對治療劑的易感性，監測抗癌療法的有效性或檢測治療後疾病復發。具體地，本發明相同的抗CD123抗體既可作為治療劑的組成也可作為診斷試驗的組成。
因此，本發明的另一目的關於根據本發明的抗CD123抗體用於在受試者體內檢測抗CD123抗體表現的用途，或用於在受試者的生物樣品中離體檢測CD123抗體表現的用途。在一個具體實例中，所述檢測具體目的為：
(a)診斷受試者中癌症的存在，或
(b)確定具有癌症的患者對靶向CD123特別是根據本發明的抗CD123抗體或抗體樣結合蛋白治療劑的易感性，或
(c)藉由檢測腫瘤細胞上表面蛋白CD123的表現監測抗CD123癌症療法的有效性或檢測抗CD123癌症療法後癌症的復發。
在具體實例中，抗體目的用於體外或離體用途。例如，在從受試者獲得的生物樣品中使用本發明的抗CD123抗體體外或離體檢測CD123。根據本發明的用途還可以是體內用途。例如，將根據本發明的抗CD123抗體或抗體樣結合蛋白施用至受試者並檢測和/或量化抗體細胞複合物，由此所述複合物的檢測對癌症有指示作用。
本發明進一步關於體外或離體檢測受試者中癌症的存在，其包括或由下列步驟組成：
(a)將受試者的生物樣品與根據本發明的抗CD123抗體接觸，特別是在使抗體與生物樣品足以形成複合物的條件中；
(b)測量與所述生物樣品結合的抗體的水平，
(c)藉由比較抗體和對照的結合水平來檢測癌症的存在，抗體結合水平高於對照則對癌症具有指示性。
本發明還關於確定具有癌症的患者對靶向CD123的治療劑特別是根據本發明的抗CD123抗體或抗體樣結合蛋白的易感性的體外或離體方法，該方法包括或由下列步驟組成：
(a)將具有癌症的患者的生物樣品與根據本發明的抗CD123抗體接觸，特別是在使抗體與生物樣品足以形成複合物的條件中；
(b)測量與所述生物樣品結合的抗體的水平，
(c)將測得的抗體與所述生物樣品的結合水平與抗體與對照的結合水平進行比較。
其中與對照相比，與所述生物樣品結合的抗體水平更高表明患者對靶向至少CD123的治療劑易感。
在上述方法中，所述對照可以是相同類型的正常、非癌症生物樣品或在相同類型的正常生物樣品中確定的代表性抗體結合水平的參照值。
在具體實例中，本發明的抗CD123抗體對診斷與CD123表現相關的血液癌症的有效，包括白血病(如急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、急性淋巴性白血病、慢性淋巴性白血病、毛細胞白血病和骨髓增生異常綜合徵)和惡性淋巴增殖病況、母細胞性漿細胞樣樹突細胞腫瘤(BPDCN)、系統性肥大細胞增多症包括淋巴瘤(如多發性骨髓瘤、非霍金氏淋巴瘤(non-Hodgkin's lymphoma)，伯基特氏淋巴瘤(Burkitt's lymphoma)和小細胞和大細胞濾泡性淋巴瘤)。
本發明進一步涉及體外或離體監測抗CD123癌症療法有效性的方法，其包括或由下列步驟組成：
(a)將經歷抗CD123癌症療法的受試者的生物樣品與根據本發明的抗CD123抗體接觸，特別是在使抗體與生物樣品足以形成複合物的條件中；
(b)測量與所述生物樣品結合的抗體的水平，
(c)將所測得的抗體的結合水平與抗體與對照的結合水平進行比較；
其中與對照相比與所述生物樣品結合的抗體水平減少指示所述抗CD123癌症療法的有效性。
在所述方法中，與對照相比與所述生物樣品結合的抗體水平的增加指示所述抗CD123癌症療法無效。
所述對照具體是與用於分析的生物樣品相同的生物樣品類型，但其在之前抗CD123癌症療法的過程中及時從受試者獲得。
本發明進一步涉及體外或離體檢測抗CD123癌症療法後癌 症復發的方法，其包括或由下列步驟組成：
(a)將具有完全抗CD123癌症療法的受試者的生物樣品與根據本發明的抗CD123抗體接觸，特別是在使抗體與生物樣品足以形成複合物的條件中；
(b)測量與所述生物樣品結合的抗體的水平，
(c)將所測得的抗體的結合水平與抗體與對照的結合水平進行比較；
其中與對照相比與所述生物樣品結合的抗體水平的增加指示抗CD123癌症療法後癌症的復發。
所述對照具體是與用於分析的生物樣品相同的生物樣品類型，但其之前從抗CD123癌症療法完成時或之後及時從受試者獲得。
所述抗CD123癌症療法具體是使用抗CD123抗體或抗體樣結合蛋白或根據本發明的免疫接合物的療法。所述抗CD123癌症療法靶向表現CD123的癌症，具體為與CD123表現相關的血液癌症，包括白血病(如急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、急性淋巴性白血病、慢性淋巴性白血病、毛細胞白血病和骨髓增生異常綜合徵)和惡性淋巴增殖病況、母細胞性漿細胞樣樹突細胞腫瘤(BPDCN)、系統性肥大細胞增多症包括淋巴瘤(如多發性骨髓瘤、非霍金氏淋巴瘤(non-Hodgkin's lymphoma)，伯基特氏淋巴瘤(Burkitt's lymphoma)和小細胞和大細胞濾泡性淋巴瘤)。
在具體實例中，本發明的抗CD123用可檢測的分子或物質如螢光分子或任何已知提供(直接或間接)信號的其他標記物進行標記。
對於根據本發明的抗CD123抗體，本文使用的術語"標記"意在涵蓋通過偶聯(即物理連接)可檢測物質直接標記抗CD123抗體，如將放射劑或螢光基團(如異硫氰酸螢光素(FITC)或藻紅蛋白(PE)或吲哚菁(Cy5))偶聯至多肽，以及通過用可檢測物質間接標記多肽。
在另一個具體實例中，本發明的抗CD123抗體用放射性分子通過本領域已知的方法標記。例如放射性分子包括但不限於用於閃爍照相研究的放射性原子如I123、I124、In111、Re186、Re188、Tc99。例如，本發明的多肽可用用於核磁共振(NMR)成像(也稱為磁共振成像，MRI)的自旋標記如碘-123、銦-111、氟-19、碳-13、氮-15、氧-17、釓、錳或鐵進行標記。
"生物樣品"涵蓋從受試者獲得的多種樣品類型且可在診斷或檢測中使用。生物樣品包括但不限於血液和其他生物來源的液體樣品、固體組織樣品如活檢樣品或組織培養或源自它們的細胞，和其子代。因此，生物樣品涵蓋臨床樣品、培養基中的細胞、細胞上清、細胞裂解物、血清、血漿、生物液體和組織樣品，特別是腫瘤樣品。
本發明還關於體內檢測受試者中癌症存在的方法，其包括或由下列步驟組成：
(a)將可檢測標記的根據本發明的抗體施用至患者；
(b)在患者中通過成像檢測所述可檢測標記的抗體的定位。
在一個具體實例中，本發明的抗體對於癌症分期(例如放射成像中)有效。其可單獨或與其他癌症標記物組合使用。
本文使用的術語"檢測"或“檢測了”包括具有或無對照參照的定性和/或定量檢測(測量水平)。
在本發明的上下文中，本文使用的“診斷”意為目的在於從收集的多項數據中識別影響患者的病理從而確定醫療病況的性質。
在所述方法中，癌症是如上文所述的表現CD123的癌症。
套組
最後，本發明還提供包含本發明的至少一種抗CD3抗體、至少一種抗CD123抗體或至少一種抗體樣結合蛋白的套組。已發現包含本發明 的抗CD123或抗CD3抗體的套組可用於檢測表面蛋白CD123或CD3中或治療或診斷試驗中。本發明的套組可包含多肽或抗CD3抗體、與固體支持物偶聯的至少一種抗體或至少一種抗體樣結合蛋白，例如組織培養平板或珠(例如瓊脂糖珠)。包含在體外檢測和量化表面蛋白CD123或CD3的抗體的套組可在例如ELISA或蛋白免疫印跡中提供。在一個具體實例中，所述抗體對於檢測有效且提供標記物如螢光或放射標記。
在一個具體實例中，本發明涵蓋用於產生單劑量施用單位的套組。每個套組可包含具有乾燥蛋白的第一容器和具有水性製劑的第二容器。還包括在本發明保護範圍之內的是包含單或多室預填充注射器的套組(例如液體注射器和lyosyringes)。
貫穿本申請，術語“包含”應理解為涵蓋全部具體提及的特徵以及任選地、額外的未描述的那些。本文使用的術語“包含了”也公開其中除具體提及的特徵未給出其他特徵的具體實例(即“由...組成”)。此外不定冠詞"一個"或"一種"不排除複數。某些記載在相互不同的從屬請求項中的措施這一起碼事實並不表示這些措施的組合不能有利地使用。
本發明現將更詳細地參照下文附圖和實施例描述。全部本文記載的文獻和專利文件在此處以提述併入。由於本發明在前文說明書中已詳細闡述並說明，因此實施例應理解為闡述性或示例性而非限制性的。
序列簡述
SEQ ID NO：1展示包含信號肽的全長人CD3ε蛋白的胺基酸序列，可從Uniprot數據庫在登錄號P07766下獲得。
SEQ ID NO：2展示包含信號肽的全長食蟹猴CD3ε蛋白的胺基酸序列，可從Uniprot數據庫在登錄號Q95LI5下獲得。
SEQ ID NO：3展示包含全長野生型人CD3ε蛋白胺基酸 23-126的成熟人CD3ε His-標簽Fc-融合蛋白的胺基酸序列。
SEQ ID NO：4展示包含與野生型序列的胺基酸位置57相比含有在胺基酸位置35包含一個Ala至Val交換的全長野生型食蟹猴CD3ε蛋白(SEQ ID NO：2)的胺基酸23-117的成熟食蟹猴CD3ε Fc-融合蛋白的胺基酸序列。
SEQ ID NO：5展示稱為“20G6-F3”抗體的重鏈可變結構域的胺基酸序列。
SEQ ID NO：6、7和8展示稱為“20G6-F3”抗體的CDR1-H、CDR2-H和CDR3-H的胺基酸序列。
SEQ ID NO：9展示稱為“20G6-F3”抗體的輕鏈可變結構域的胺基酸序列。
SEQ ID NO：10展示稱為“20G6-F3”、“11D7-C3”、“13H2-C2”、“13C1-F6”、“1E6-C9、“10F4-C10”、“18G9-H11”、“12G3-E8”、“5B1-G2”、“16F8-A7”、“11F9-F8”、“8C2-F7”、“20E5-F10”和“3H6-D2”抗體的CDR1-L的胺基酸序列。
SEQ ID NO：11展示稱為“20G6-F3”、“4B4-D7”、“11H3-E5”、“13H2-C2”、“13C1-F6”、“10F4-C10”、“4E7-C9”、“11F3-B9”、“12G3-E8”、“5B1-G2”、“16F8-A7”、“20E5-F10”和“3H6-D2”抗體的CDR3-L的胺基酸序列。
SEQ ID NO：12展示稱為“4B4-D7”抗體的重鏈可變結構域的胺基酸序列。
SEQ ID NO：13展示稱為“4B4-D7”、“11D7-C3”、“11H3-E5”、“13H2-C2”、“13C1-F6”、“10F4-C10”、“18G9-H11”、“4E7-C9”、“11F3-B9”、“16F8-A7”、“11F9-F8”、“20B5-F10”和“3H6-D2”抗體的CDR1-H 的胺基酸序列。
SEQ ID NO：14和15展示稱為“4B4-D7”抗體的CDR2-H和CDR3-H胺基酸序列。
SEQ ID NO：16展示稱為“4B4-D7”抗體的輕鏈可變結構域的胺基酸序列。
SEQ ID NO：17展示稱為“4B4-D7”、“11H3-E5”和“11F3-B9”抗體的CDR1-L的胺基酸序列。
SEQ ID NO：18展示稱為“4E7-C9”抗體的重鏈可變結構域的胺基酸序列。
SEQ ID NO：19展示稱為“4E7-C9”、“18F5-H10”、“20E5-F10”和“3H6-D2”抗體的CDR2-H的胺基酸序列。
SEQ ID NO：20展示稱為“4E7-C9”抗體的CDR3-H的胺基酸序列。
SEQ ID NO：21展示稱為“4E7-C9”抗體的輕鏈可變結構域的胺基酸序列。
SEQ ID NO：22展示稱為“4E7-C9”抗體的CDR1-H的胺基酸序列。
SEQ ID NO：23展示稱為“18F5-H10”抗體的重鏈可變結構域的胺基酸序列。
SEQ ID NO：24展示稱為“18F5-H10”抗體的CDR1-H的胺基酸序列。
SEQ ID NO：25展示稱為“18F5-H10”抗體的CDR3-H的胺基酸序列。
SEQ ID NO：26展示稱為“18F5-H10”抗體的輕鏈可變結構域 的胺基酸序列。
SEQ ID NO：27展示稱為“18F5-H10”抗CD3抗體的CDR1-L的胺基酸序列。
SEQ ID NO：28展示稱為“18F5-H10”、“11D7-C3”、“1E6-C9”和“10E6-G6”抗CD3抗體的CDR3-L的胺基酸序列。
SEQ ID NO：29展示稱為“12D2-E5”抗CD3抗體的重鏈可變結構域的胺基酸序列。
SEQ ID NO：30和31展示稱為“12D2-E5”抗CD3抗體的CDR1-H和CDR2-H的胺基酸序列。
SEQ ID NO：32展示稱為“12D2-E5”和“3G5-E10”抗CD3抗體的CDR3-H的胺基酸序列。
SEQ ID NO：33展示稱為“12D2-E5”抗CD3抗體的輕鏈可變結構域的胺基酸序列。
SEQ ID NO：34和35展示稱為“12D2-E5”抗CD3抗體的CDR1-H和CDR3-H的胺基酸序列。
SEQ ID NO：36展示稱為“11D7-C3”抗CD3抗體的重鏈可變結構域的胺基酸序列。
SEQ ID NO：37展示稱為“11D7-C3”、“11H3-E5”、“13H2-C2”、“13C1-F6”、“1E6-C9”、“10F4-C10”、“18G9-H11”、“11F3-B9”、“16F8-A7”、“11F9-F8”和“20B5-F10”抗CD3抗體的CDR2-H的胺基酸序列。
SEQ ID NO：38展示稱為“11D7-C3”抗CD3抗體的CDR3-H的胺基酸序列。
SEQ ID NO：39展示稱為“11D7-C3”抗CD3抗體的輕鏈可變結構域的胺基酸序列。
SEQ ID NO：40展示稱為“11H3-E5”抗CD3抗體的重鏈可變結構域的胺基酸序列。
SEQ ID NO：41展示稱為“11H3-E5”抗CD3抗體的CDR3-H的胺基酸序列。
SEQ ID NO：42展示稱為“11H3-E5”抗CD3抗體的輕鏈可變結構域的胺基酸序列。
SEQ ID NO：43展示稱為“13H2-C2”抗CD3抗體的重鏈可變結構域的胺基酸序列。
SEQ ID NO：44展示稱為“13H2-C2”抗CD3抗體的CDR3-H的胺基酸序列。
SEQ ID NO：45展示稱為“13H2-C2”抗CD3抗體的輕鏈可變結構域的胺基酸序列。
SEQ ID NO：46展示稱為“13C1-F6”和“11F9-F8”抗CD3抗體的重鏈可變結構域的胺基酸序列。
SEQ ID NO：47展示稱為“13C1-F6”、“10E6-G6”和“11F9-F8”抗CD3抗體的CDR3-H的胺基酸序列。
SEQ ID NO：48展示稱為“13H2-C2”抗CD3抗體的輕鏈可變結構域的胺基酸序列。
SEQ ID NO：49展示稱為“18H11-F10”抗CD3抗體的重鏈可變結構域的胺基酸序列。
SEQ ID NO：50、51和52展示稱為“18H11-F10”抗CD3抗體的CDR1-H、CDR2-H和CDR3-H的胺基酸序列。
SEQ ID NO：53展示稱為“18H11-F10”抗CD3抗體的輕鏈可變結構域的胺基酸序列。
SEQ ID NO：54和55展示稱為“18H11-F10”抗CD3抗體的CDR1-L和CDR3-L的胺基酸序列。
SEQ ID NO：56展示稱為“1E6-C9”抗CD3抗體的重鏈可變結構域的胺基酸序列。
SEQ ID NO：57和58展示稱為“1E6-C9”抗CD3抗體的CDR1-H和CDR3-H的胺基酸序列。
SEQ ID NO：59展示稱為“1E6-C9”抗CD3抗體的輕鏈可變結構域的胺基酸序列。
SEQ ID NO：60展示稱為“10F4-C10”抗CD3抗體的重鏈可變結構域的胺基酸序列。
SEQ ID NO：61展示稱為“10F4-C10”抗CD3抗體的CDR3-H的胺基酸序列。
SEQ ID NO：62展示稱為“10F4-C10”抗CD3抗體的輕鏈可變結構域的胺基酸序列。
SEQ ID NO：63展示稱為“10E6-G6”抗CD3抗體的重鏈可變結構域的胺基酸序列。
SEQ ID NO：64和65展示稱為“10E6-G6”抗CD3抗體的CDR1-H和CDR2-H的胺基酸序列。
SEQ ID NO：66展示稱為“10E6-G6”抗CD3抗體的輕鏈可變結構域的胺基酸序列。
SEQ ID NO：67展示稱為“10E6-G6”抗CD3抗體的CDR1-L的胺基酸序列。
SEQ ID NO：68展示稱為“18G9-H11”抗CD3抗體的重鏈可變結構域的胺基酸序列。
SEQ ID NO：69展示稱為“18G9-H11”抗CD3抗體的CDR3-H的胺基酸序列。
SEQ ID NO：70展示稱為“18G9-H11”抗CD3抗體的輕鏈可變結構域的胺基酸序列。
SEQ ID NO：71展示稱為“18G9-H11”抗CD3抗體的CDR3-L的胺基酸序列。
SEQ ID NO：72展示稱為“11F3-B9”抗CD3抗體的重鏈可變結構域的胺基酸序列。
SEQ ID NO：73展示稱為“11F3-B9”抗CD3抗體的輕鏈可變結構域的胺基酸序列。
SEQ ID NO：74展示稱為“12G3-E8”抗CD3抗體的重鏈可變結構域的胺基酸序列。
SEQ ID NO：75、76和77展示稱為“12G3-E8”抗CD3抗體的CDR1-H、CDR2-H和CDR3-H的胺基酸序列。
SEQ ID NO：78展示稱為“12G3-E8”抗CD3抗體的輕鏈可變結構域的胺基酸序列。
SEQ ID NO：79展示稱為“5B1-G2”抗CD3抗體的重鏈可變結構域的胺基酸序列。
SEQ ID NO：80和81展示的CDR1-H和CDR3-H的胺基酸序列稱為“5B1-G2”抗CD3抗體.
SEQ ID NO：82展示稱為“5B1-G2”抗CD3抗體的輕鏈可變結構域的胺基酸序列。
SEQ ID NO：83展示稱為“16F8-A7”抗CD3抗體的重鏈可變結構域的部分的胺基酸序列。
SEQ ID NO：84展示稱為“16F8-A7”和“11F3-B9”抗CD3抗體的CDR3-H的胺基酸序列。
SEQ ID NO：85展示稱為“16F8-A7”抗CD3抗體的輕鏈可變結構域的胺基酸序列。
SEQ ID NO：86展示包含信號肽的全長人CD3δ蛋白的胺基酸序列，可從Uniprot數據庫登錄號P04234下獲得。
SEQ ID NO：87展示稱為“11F9-F8”抗CD3抗體的輕鏈可變結構域的胺基酸序列。
SEQ ID NO：88展示稱為“11F9-F8”抗CD3抗體的CDR3-L的胺基酸序列。
SEQ ID NO：89展示稱為“3G5-E10”抗CD3抗體的重鏈可變結構域的胺基酸序列。
SEQ ID NO：90和91展示稱為“3G5-E10”抗CD3抗體的CDR1-H和CDR2-H的胺基酸序列。
SEQ ID NO：92展示稱為“3G5-E10”抗CD3抗體的輕鏈可變結構域的胺基酸序列。
SEQ ID NO：93和94展示稱為“3G5-E10”抗CD3抗體的CDR1-L和CDR3-L的序列。
SEQ ID NO：95展示稱為“9D7-F3”抗CD3抗體的重鏈可變結構域的胺基酸序列。
SEQ ID NO：96、97和98展示稱為“9D7-F3”抗CD3抗體的CDR1-H、CDR2-H和CDR3-H的胺基酸序列。
SEQ ID NO：99展示稱為“9D7-F3”抗CD3抗體的輕鏈可變結構域的胺基酸序列。
SEQ ID NO：100和101展示稱為"9D7-F3"和"6C9-C9"抗CD3抗體的CDR1-L和CDR3-L的胺基酸序列。
SEQ ID NO：102展示稱為“8C2-F7”抗CD3抗體的重鏈可變結構域的胺基酸序列。
SEQ ID NO：103、104和105展示稱為“8C2-F7”抗CD3抗體的CDR1-H、CDR2-H和CDR3-H的胺基酸序列。
SEQ ID NO：106展示稱為“8C2-F7”抗CD3抗體的輕鏈可變結構域的胺基酸序列。
SEQ ID NO：107展示稱為“20E5-F10”抗CD3抗體的重鏈可變結構域的胺基酸序列。
SEQ ID NO：108展示稱為“20E5-F10”抗CD3抗體的CDR3-H的胺基酸序列。
SEQ ID NO：109展示稱為“20E5-F10”抗CD3抗體的輕鏈可變結構域的胺基酸序列。
SEQ ID NO：110展示稱為“20B5-F10”抗CD3抗體的重鏈可變結構域的胺基酸序列。
SEQ ID NO：111展示稱為“20B5-F10”抗CD3抗體的CDR3-H的胺基酸序列。
SEQ ID NO：112展示稱為“20B5-F10”抗CD3抗體的輕鏈可變結構域的胺基酸序列。
SEQ ID NO：113和114展示稱為“20B5-F10”抗CD3抗體的CDR1-L和CDR3-L的胺基酸序列。
SEQ ID NO：115展示稱為“6C9-C9”抗CD3抗體的重鏈可變結構域的胺基酸序列。
SEQ ID NO：116、117和118展示稱為“6C9-C9”抗CD3抗體的CDR1-H、CDR2-H和CDR3-H的胺基酸序列。
SEQ ID NO：119展示稱為“6C9-C9”抗CD3抗體的輕鏈可變結構域的胺基酸序列。
SEQ ID NO：120展示稱為“6C9-C9”抗CD3抗體的CDR3-L的胺基酸序列。
SEQ ID NO：121展示稱為“3E8-G1”抗CD3抗體的重鏈可變結構域的胺基酸序列。
SEQ ID NO：122、123和124展示稱為“3E8-G1”抗CD3抗體的CDR1-H、CDR2-H和CDR3-H的胺基酸序列。
SEQ ID NO：125展示稱為“3E8-G1”抗CD3抗體的輕鏈可變結構域的胺基酸序列。
SEQ ID NO：126和127展示稱為“3E8-G1”抗CD3抗體的CDR1-L和CDR3-L的胺基酸序列。
SEQ ID NO：128展示稱為“3H6-D2”抗CD3抗體的重鏈可變結構域的胺基酸序列。
SEQ ID NO：129展示稱為“3H6-D2”抗CD3抗體的CDR3-H的胺基酸序列。
SEQ ID NO：130展示稱為“3H6-D2”抗CD3抗體的輕鏈可變結構域的胺基酸序列。
SEQ ID NO：131展示稱為“8H2”抗CD3抗體的重鏈可變結構域的胺基酸序列。
SEQ ID NO：132展示稱為“8H2”抗CD3抗體的輕鏈可變結構域的胺基酸序列。
SEQ ID NO：133和134展示稱為“8H2”抗CD3抗體的CDR1-L和CDR3-L的胺基酸序列。
SEQ ID NO：135展示人源化“20G6”抗CD3抗體的VH變體胺基酸序列VH1a。
SEQ ID NO：136展示人源化“20G6”抗CD3抗體的VH變體胺基酸序列VH1b。
SEQ ID NO：137展示人源化“20G6”抗CD3抗體的VH變體胺基酸序列VH1c。
SEQ ID NO：138展示人源化“20G6”抗CD3抗體的VH變體胺基酸序列VH1d。
SEQ ID NO：139展示人源化“20G6”抗CD3抗體的VL變體胺基酸序列VL1a。
SEQ ID NO：140展示人源化“20G6”抗CD3抗體的VL變體胺基酸序列VL1b。
SEQ ID NO：141展示人源化“20G6”抗CD3抗體的VL變體胺基酸序列VL1c。
SEQ ID NO：142展示人源化“20G6”抗CD3抗體VL1c變體的CDR1-L的胺基酸序列。
SEQ ID NO：143展示人源化“20G6”抗CD3抗體的VL變體胺基酸序列VL1d。
SEQ ID NO：144展示人源化“20G6”抗CD3抗體的VH變體胺基酸序列VH2a。
SEQ ID NO：145展示人源化“20G6”抗CD3抗體的VH變體胺基酸序列VH2b。
SEQ ID NO：146展示人源化“20G6”抗CD3抗體的VH變體胺基酸序列VH2c。
SEQ ID NO：147展示人源化“20G6”抗CD3抗體的VH變體胺基酸序列VH2d。
SEQ ID NO：148展示人源化“20G6”抗CD3抗體的VL變體胺基酸序列VL2a。
SEQ ID NO：149展示人源化“20G6”抗CD3抗體的VL變體胺基酸序列VL2b。
SEQ ID NO：150展示人源化“20G6”抗CD3抗體的VL變體胺基酸序列VL2c。
SEQ ID NO：151展示人源化“20G6”抗CD3抗體的VL變體胺基酸序列VL2d。
SEQ ID NO：152展示人源化“20G6”抗CD3抗體的VH變體胺基酸序列VH3a。
SEQ ID NO：153展示人源化“20G6”抗CD3抗體的VH變體胺基酸序列VH3b。
SEQ ID NO：154展示人源化“20G6”抗CD3抗體的VL變體胺基酸序列VL3a。
SEQ ID NO：155展示人源化“20G6”抗CD3抗體的VL變體胺基酸序列VL3b。
SEQ ID NO：156展示人源化“20G6”抗CD3抗體的VL變體胺基酸序列VL3c。
SEQ ID NO：157展示人源化“20G6”抗CD3抗體的VL變體胺基酸序列VL3d。
SEQ ID NO：158展示人源化“4B4”抗CD3抗體的VL變體胺基酸序列VL1A。
SEQ ID NO：159展示人源化“4B4”抗CD3抗體的VL變體胺基酸序列VL1B。
SEQ ID NO：160展示人源化“4B4”抗CD3抗體的VL變體胺基酸序列VL2A。
SEQ ID NO：161展示人源化“4B4”抗CD3抗體的VL變體胺基酸序列VL2B。
SEQ ID NO：162展示人源化“4B4”抗CD3抗體的VL變體胺基酸序列VL1Cmodif1。
SEQ ID NO：163展示人源化“4B4”抗CD3抗體的VL變體胺基酸序列VL1Cmodif2。
SEQ ID NO：164展示人源化“4B4”抗CD3抗體的VL變體胺基酸序列VL1Cmodif3。
SEQ ID NO：165展示人源化“4B4”抗CD3抗體的VL變體胺基酸序列VL1Amodif1。
SEQ ID NO：166展示人源化“4B4”抗CD3抗體的VL變體胺基酸序列VL1Amodif2。
SEQ ID NO：167展示人源化“4B4”抗CD3抗體的VL變體胺基酸序列VL1Amodif3。
SEQ ID NO：168展示人源化“4B4”抗CD3抗體的VL變體胺基酸序列VL2C。
SEQ ID NO：169展示人源化“4B4”抗CD3抗體的VL變體胺基酸序列VL2D。
SEQ ID NO：170展示人源化“4B4”抗CD3抗體的VL變體胺基酸序列VL2F。
SEQ ID NO：171展示人源化“4B4”抗CD3抗體的VH變體胺基酸序列VH1A。
SEQ ID NO：172展示人源化“4B4”抗CD3抗體的VH變體胺基酸序列VH1B。
SEQ ID NO：173展示人源化“4B4”抗CD3抗體的VH變體胺基酸序列VH2A。
SEQ ID NO：174展示人源化“4B4”抗CD3抗體的VH變體胺基酸序列VH2B。
SEQ ID NO：175展示人源化“4B4”抗CD3抗體的VH變體胺基酸序列VH6Bmodif1。
SEQ ID NO：176展示人源化“4B4”抗CD3抗體的VH變體胺基酸序列VH6Bmodif2。
SEQ ID NO：177展示人源化“4B4”抗CD3抗體的VH變體胺基酸序列VH6Amodif1。
SEQ ID NO：178展示人源化“4B4”抗CD3抗體的VH變體胺基酸序列VH6Amodif2。
SEQ ID NO：179展示人源化“4B4”抗CD3抗體的VH變體胺基酸序列VH6Amodif3。
SEQ ID NO：180展示人源化“4B4”抗CD3抗體的VH變體胺基酸序列VH6C。
SEQ ID NO：181展示人源化“4B4”抗CD3抗體的VH變體胺基酸序列VH6D。
SEQ ID NO：182展示人源化“4B4”抗CD3抗體的VL變體胺基酸序列D7-VK3mut。
SEQ ID NO：183展示人源化“4B4”抗CD3抗體的VH變體胺基酸序列D7-VH1mut。
SEQ ID NO：184展示人源化“4B4”抗CD3抗體的VL1B、VL2B、VL1Cmodif3和VL2F變體的CDR1-L胺基酸序列。
SEQ ID NO：185展示包含信號肽的全長人CD3γ蛋白的胺基酸序列，可從Uniprot數據庫登錄號P09693下獲得。
SEQ ID NO：186展示稱為“20G6-F3”抗CD3抗體的Fab重鏈的胺基酸序列。
SEQ ID NO：187展示稱為“20G6-F3”抗CD3抗體的Fab輕鏈的胺基酸序列。
SEQ ID NO：188展示稱為“4E7-C9”抗CD3抗體的Fab重鏈的胺基酸序列。
SEQ ID NO：189展示稱為“4E7-C9”抗CD3抗體的Fab輕鏈的胺基酸序列。
SEQ ID NO：190展示稱為“4B4-D7”抗CD3抗體的Fab重鏈的胺基酸序列。
SEQ ID NO：191展示稱為“4B4-D7”抗CD3抗體的Fab輕鏈的胺基酸序列。
SEQ ID NO：192展示稱為“18F5-H10”抗CD3抗體的Fab重鏈的胺基酸序列。
SEQ ID NO：193展示稱為“18F5-H10”抗CD3抗體的Fab輕鏈的胺基酸序列。
SEQ ID NO：194展示包含信號肽的全長人CD123蛋白的胺基酸序列可從NCBI數據庫NP_002174.1下和從Uniprot數據庫P26951下獲得。
SEQ ID NO：195展示包含信號肽的全長食蟹猴CD123蛋白的胺基酸序列，可從GenBank數據庫EHH61867.1下和Uniprot數據庫G8F3K3下獲得。
SEQ ID NO：196展示包含全長人CD123蛋白(SEQ ID NO：194)胺基酸22-305的成熟人CD123 Strep-II標簽Fc-融合蛋白的胺基酸序列。
SEQ ID NO：197展示包含全長食蟹猴CD123蛋白(SEQ ID NO：195)胺基酸22-305的成熟食蟹猴CD123 Strep-II標簽Fc-融合蛋白的胺基酸序列。
SEQ ID NO：198展示稱為“1E1-G5”抗CD123抗體的重鏈可變結構域的胺基酸序列。
SEQ ID NO：199展示稱為“1E1-G5”和“8B11-B7”抗CD123抗體的CDR1-H的胺基酸序列。
SEQ ID NO：200展示稱為“1E1-G5”和“6D6-B8”抗CD123抗體的CDR2-H的胺基酸序列。
SEQ ID NO：201展示稱為“1E1-G5”,“6D6-B8”,“8B11-B7”和“9F6-G3”抗CD123抗體的CDR3-H的胺基酸序列。
SEQ ID NO：202展示稱為“1E1-G5”抗CD123抗體的輕鏈可變結構域的胺基酸序列。
SEQ ID NO：203和204展示稱為“1E1-G5”抗CD123抗體的CDR1-L和CDR3-L的胺基酸序列。
SEQ ID NO：205展示稱為“2B8-F3”抗CD123抗體的重鏈可 變結構域的胺基酸序列。
SEQ ID NO：206、207和208展示稱為“2B8-F3”抗CD123抗體的CDR1-H、CDR2-H和CDR3-H的胺基酸序列。
SEQ ID NO：209展示稱為“2B8-F3”抗CD123抗體的輕鏈可變結構域的胺基酸序列。
SEQ ID NO：210和211展示稱為“2B8-F3”抗CD123抗體的CDR1-L和CDR3-L的胺基酸序列。
SEQ ID NO：212展示稱為“2F8-D6”抗CD123抗體的重鏈可變結構域的胺基酸序列。
SEQ ID NO：213、214和215展示稱為“2F8-D6”抗CD123抗體的CDR1-H、CDR2-H和CDR3-H的胺基酸序列。
SEQ ID NO：216展示稱為“2F8-D6”抗CD123抗體的輕鏈可變結構域的胺基酸序列。
SEQ ID NO：217和218展示稱為“2F8-D6”抗CD123抗體的CDR1-L和CDR3-L的胺基酸序列。
SEQ ID NO：219展示稱為“3B10-E6”抗CD123抗體的重鏈可變結構域的胺基酸序列。
SEQ ID NO：220、221和222展示稱為“3B10-E6”抗CD123抗體的CDR1-H、CDR2-H和CDR3-H的胺基酸序列。
SEQ ID NO：223展示稱為“3B10-E6”抗CD123抗體的輕鏈可變結構域的胺基酸序列。
SEQ ID NO：224和225展示稱為“3B10-E6”抗CD123抗體的CDR1-L和CDR3-L的胺基酸序列。
SEQ ID NO：226展示稱為“3E3-D3”抗CD123抗體的重鏈可 變結構域的胺基酸序列。
SEQ ID NO：227、228和229展示稱為“3E3-D3”抗CD123抗體的CDR1-H、CDR2-H和CDR3-H的胺基酸序列。
SEQ ID NO：230展示稱為“3E3-D3”抗CD123抗體的輕鏈可變結構域的胺基酸序列。
SEQ ID NO：231和232展示稱為“3E3-D3”抗CD123抗體的CDR1-L和CDR3-L的胺基酸序列。
SEQ ID NO：233展示稱為“5A5-B4”抗CD123抗體的重鏈可變結構域的胺基酸序列。
SEQ ID NO：234、235和236展示稱為“5A5-B4”抗CD123抗體的CDR1-H、CDR2-H和CDR3-H的胺基酸序列。
SEQ ID NO：237展示稱為“5A5-B4”抗CD123抗體的輕鏈可變結構域的胺基酸序列。
SEQ ID NO：238和239展示稱為“5A5-B4”抗CD123抗體的CDR1-L和CDR3-L的胺基酸序列。
SEQ ID NO：240展示稱為“6B10-E4”抗CD123抗體的重鏈可變結構域的胺基酸序列。
SEQ ID NO：241、242和243展示稱為“6B10-E4”抗CD123抗體的CDR1-H、CDR2-H和CDR3-H的胺基酸序列。
SEQ ID NO：244展示稱為“6B10-E4”抗CD123抗體的輕鏈可變結構域的胺基酸序列。
SEQ ID NO：245和246展示稱為“6B10-E4”抗CD123抗體的CDR1-L和CDR3-L的胺基酸序列。
SEQ ID NO：247展示稱為“6C10-C4”抗CD123抗體的重鏈可 變結構域的胺基酸序列。
SEQ ID NO：248、249和250展示稱為“6C10-C4”抗CD123抗體的CDR1-H、CDR2-H和CDR3-H的胺基酸序列。
SEQ ID NO：251展示稱為“6C10-C4”和“9B8-G6”抗CD123抗體的輕鏈可變結構域的胺基酸序列。
SEQ ID NO：252展示稱為“6C10-C4”和“9B8-G6”抗CD123抗體的CDR1-L的胺基酸序列。
SEQ ID NO：253展示稱為“6C10-C4”、“9B8-G6”和“9D7-G3”抗CD123抗體的CDR3-L的胺基酸序列。
SEQ ID NO：254展示稱為“6D6-B8”抗CD123抗體的重鏈可變結構域的胺基酸序列。
SEQ ID NO：255展示稱為“6D6-B8”抗CD123抗體的CDR1-H的胺基酸序列。
SEQ ID NO：256展示稱為“6D6-B8”抗CD123抗體的輕鏈可變結構域的胺基酸序列。
SEQ ID NO：257和258展示稱為“6D6-B8”抗CD123抗體的CDR1-L和CDR3-L的胺基酸序列。
SEQ ID NO：259展示稱為“8B11-B7”抗CD123抗體的重鏈可變結構域的胺基酸序列。
SEQ ID NO：260展示稱為“8B11-B7”抗CD123抗體的CDR2-H的胺基酸序列。
SEQ ID NO：261展示稱為“8B11-B7”抗CD123抗體的輕鏈可變結構域胺基酸序列。
SEQ ID NO：262和263展示稱為“8B11-B7”抗CD123抗體的 CDR1-L和CDR3-L的胺基酸序列。
SEQ ID NO：264展示稱為“9B8-G6”抗CD123抗體的重鏈可變結構域的胺基酸序列。
SEQ ID NO：265和266展示稱為“9B8-G6”和“9D7-C8”抗CD123抗體的CDR1-H和CDR2-H的胺基酸序列。
SEQ ID NO：267展示稱為“9B8-G6”抗CD123抗體的CDR3-H的胺基酸序列。
SEQ ID NO：268展示稱為“9D7-C8”抗CD123抗體的重鏈可變結構域的胺基酸序列。
SEQ ID NO：269展示稱為“9D7-C8”抗CD123抗體的CDR3-H的胺基酸序列。
SEQ ID NO：270展示稱為“9D7-C8”抗CD123抗體的輕鏈可變結構域的胺基酸序列。
SEQ ID NO：271展示稱為“9D7-C8”抗CD123抗體的CDR1-L的胺基酸序列。
SEQ ID NO：272展示稱為“9F6-G3”抗CD123抗體的重鏈可變結構域的胺基酸序列。
SEQ ID NO：273和274展示稱為“9F6-G3”抗CD123抗體的CDR1-H和CDR2-H的胺基酸序列。
SEQ ID NO：275展示稱為“9F6-G3”抗CD123抗體的輕鏈可變結構域胺基酸序列。
SEQ ID NO：276展示稱為“9F6-G3”抗CD123抗體的CDR1-L的胺基酸序列。
SEQ ID NO：277展示“3E3”抗CD123抗體的VH變體胺基酸 序列VH_G45A。
SEQ ID NO：278展示“3E3”抗CD123抗體的VH變體胺基酸序列VHmDG。
SEQ ID NO：279展示“3E3”抗CD123抗體變體VHmDG的CDR2-H和人源化“3E3”抗CD123抗體VH1Fm2DG變體的CDR2-H的胺基酸序列。
SEQ ID NO：280展示人源化“3E3”抗CD123抗體的VH變體胺基酸序列VH1A。
SEQ ID NO：281展示人源化“3E3”抗CD123抗體的VH變體胺基酸序列VH1B。
SEQ ID NO：282展示人源化“3E3”抗CD123抗體的VH變體胺基酸序列VH1C。
SEQ ID NO：283展示人源化“3E3”抗CD123抗體的VH變體胺基酸序列VH1D。
SEQ ID NO：284展示人源化“3E3”抗CD123抗體的VH變體胺基酸序列VH1E。
SEQ ID NO：285展示人源化“3E3”抗CD123抗體的VH變體胺基酸序列VH1F。
SEQ ID NO：286展示人源化“3E3”抗CD123抗體的VH變體胺基酸序列VH1G。
SEQ ID NO：287展示人源化“3E3”抗CD123抗體的VH變體胺基酸序列VH1Fm1。
SEQ ID NO：288展示人源化“3E3”抗CD123抗體的VH變體胺基酸序列VH1Fm2。
SEQ ID NO：289展示人源化“3E3”抗CD123抗體的VH變體胺基酸序列VH1Fm2DG。
SEQ ID NO：290展示人源化“3E3”抗CD123抗體的VH變體胺基酸序列VH1Dm1。
SEQ ID NO：291展示人源化“3E3”抗CD123抗體的VH變體胺基酸序列VH1Em1。
SEQ ID NO：292展示人源化“3E3”抗CD123抗體的VL變體胺基酸序列VL1A。
SEQ ID NO：293展示人源化“3E3”抗CD123抗體的VL變體胺基酸序列VL1B。
SEQ ID NO：294展示人源化“3E3”抗CD123抗體的VL變體胺基酸序列VL1C。
SEQ ID NO：295展示人源化“3E3”抗CD123抗體的VL變體胺基酸序列VL1D。
SEQ ID NO：296展示人源化“3E3”抗CD123抗體的VL變體胺基酸序列VL1E。
SEQ ID NO：297展示人源化“3E3”抗CD123抗體的VL變體胺基酸序列VL1F。
SEQ ID NO：298展示人源化“3E3”抗CD123抗體的VL變體胺基酸序列VL1G。
SEQ ID NO：299展示人源化“3E3”抗CD123抗體的VL變體胺基酸序列VL1Fm1。
SEQ ID NO：300展示人源化“3E3”抗CD123抗體的VL變體胺基酸序列VL1Fm2。
SEQ ID NO：301展示人源化“3E3”抗CD123抗體的VH變體胺基酸序列VH2A。
SEQ ID NO：302展示人源化“3E3”抗CD123抗體的VH變體胺基酸序列VH3A。
SEQ ID NO：303展示人源化“3E3”抗CD123抗體的VL變體胺基酸序列VL2A。
SEQ ID NO：304展示人源化“3E3”抗CD123抗體的VL變體胺基酸序列VL2Am1。
SEQ ID NO：305展示人源化“3E3”抗CD123抗體的VL變體胺基酸序列VL2Am2。
SEQ ID NO：306展示稱為CODV-Fab“7G3x20G6”抗體樣結合蛋白的多肽根據式I的胺基酸序列。
SEQ ID NO：307展示稱為CODV-Fab“7G3x20G6”、“7G3x4E7”、“7G3x4B4”、“7G3x18F5”、“hz20G6x7G3”、“7G3xhz4B4”、“hz4B4x3E3”和CODV-Fab“hz20G6x7G3-TL4”抗體樣結合蛋白的連接子L1的胺基酸序列。
SEQ ID NO：308展示稱為CODV-Fab“7G3x20G6“、“7G3x4E7“、“7G3x4B4“、“7G3x18F5“、“hz20G6x7G3“、“7G3xhz4B4“和CODV-Fab“hz20G6x7G3-TL4“抗體樣結合蛋白的代表VD1或VD2結構域的7G3的可變輕鏈結構域的胺基酸序列。
SEQ ID NO：309展示稱為CODV-Fab“7G3x20G6“、“7G3x4E7“、“7G3x4B4“、“7G3x18F5“、“hz20G6x7G3“、“7G3xhz4B4“、“hz4B4x3E3“和CODV-Fab“hz20G6x7G3-TL4“抗體樣結合蛋白的連接子L2的胺基酸序列。
SEQ ID NO：310展示稱為CODV-Fab“7G3x20G6“、“7G3x4E7“、“7G3x4B4“、“7G3x18F5“、“hz20G6x7G3“、“7G3xhz4B4“和“hz4B4x3E3“抗體樣結合蛋白的CL胺基酸序列。
SEQ ID NO：311展示稱為CODV-Fab“7G3x20G6”抗體樣結合蛋白的根據式II的多肽的胺基酸序列。
SEQ ID NO：312展示稱為CODV-Fab“7G3x20G6“、“7G3x4E7“、“7G3x4B4“、“7G3x18F5“、“hz20G6x7G3“、“7G3xhz4B4“和CODV-Fab“hz20G6x7G3-TL4“抗體樣結合蛋白的本文代表VH1或VH2結構域的7G3的可變重鏈結構域的胺基酸序列。
SEQ ID NO：313展示稱為CODV-Fab“7G3x20G6“、“7G3x4E7“、“7G3x4B4“、“7G3x18F5“、“hz20G6x7G3“、“7G3xhz4B4“、“hz4B4x3E3“抗體樣結合蛋白的CH1胺基酸序列。
SEQ ID NO：314展示稱為CODV-Fab“7G3 x 4E7”抗體樣結合蛋白的根據式I的多肽的胺基酸序列。
SEQ ID NO：315展示稱為CODV-Fab“7G3x4E7”抗體樣結合蛋白的根據式II的多肽的胺基酸序列。
SEQ ID NO：316展示稱為CODV-Fab“7G3x4B4”抗體樣結合蛋白的根據式I的多肽的胺基酸序列。
SEQ ID NO：317展示稱為CODV-Fab“7G3x4B4”抗體樣結合蛋白的根據式II的多肽的胺基酸序列。
SEQ ID NO：318展示稱為CODV-Fab“7G3x18F5”抗體樣結合蛋白的根據式I的多肽的胺基酸序列。
SEQ ID NO：319展示稱為CODV-Fab“7G3x18F5”抗體樣結合蛋白的根據式II的多肽的胺基酸序列。
SEQ ID NO：320展示稱為CODV-Fab“hz20G6x7G3”抗體樣結合蛋白的多肽根據式I的多肽的胺基酸序列。
SEQ ID NO：321展示稱為CODV-Fab“hz20G6x7G3”抗體樣結合蛋白的根據式II的多肽的胺基酸序列。
SEQ ID NO：322展示稱為CODV-Fab 7G3xhz4B4”抗體樣結合蛋白的根據式I的多肽的胺基酸序列。
SEQ ID NO：323展示稱為CODV-Fab“7G3xhz4B4”抗體樣結合蛋白的根據式II的多肽的胺基酸序列。
SEQ ID NO：324展示稱為CODV-Fab“hz4B4x3E3”抗體樣結合蛋白的根據式I的多肽的胺基酸序列。
SEQ ID NO：325展示稱為CODV-Fab“hz4B4x3E3”抗體樣結合蛋白的根據式II的多肽的胺基酸序列。
SEQ ID NO：326展示稱為CODV-Fab“hz20G6x7G3 TL4”抗體樣結合蛋白的根據式I的多肽的胺基酸序列。
SEQ ID NO：327展示稱為CODV-Fab“hz20G6x7G3-TL4“抗體樣結合蛋白的Fc2胺基酸序列。
SEQ ID NO：328展示稱為CODV-Fab“hz20G6x7G3-TL4”抗體樣結合蛋白的根據式III的多肽的胺基酸序列。
SEQ ID NO：329展示稱為CODV-Fab“hz20G6x7G3-TL4“抗體樣結合蛋白的CH1胺基酸序列。
SEQ ID NO：330展示稱為CODV-Fab“hz20G6x7G3-TL4“抗體樣結合蛋白的Fc胺基酸序列。
SEQ ID NO：331展示基於序列比對的稱為“20G6-F3”、“4B4-D7”、“4E7-C9”、“18F5-H10”、“11D7-C3”、“11H3-E5”、“13H2-C2”、 “13C1-F6”、“1E6-C9”、“10F4-C10”、“10E6-G6”、“18G9-H11”、“11F3-B9”、“12G3-E8”、“5B1-G2”、“16F8-A7”、“11F9-F8”、“20E5-F10”、“20B5-F10”、“3H6-D2”抗CD3抗體的CDR1-H共有序列。
SEQ ID NO：332展示基於序列比對的稱為“20G6-F3”、“4B4-D7”、“4E7-C9”、“18F5-H10”、“11D7-C3”、“11H3-E5”、“13H2-C2”、“13C1-F6”、“1E6-C9”、“10F4-C10”、“10E6-G6”、“18G9-H11”、“11F3-B9”、“12G3-E8”、“5B1-G2”、“16F8-A7”、“11F9-F8”、“20E5-F10”、“20B5-F10”、“3H6-D2”抗CD3抗體的CDR2-H共有序列。
SEQ ID NO：333展示基於序列比對的稱為“20G6-F3”、“4B4-D7”、“4E7-C9”、“18F5-H10”、“11D7-C3”、“11H3-E5”、“13H2-C2”、“13C1-F6”、“1E6-C9”、“10F4-C10”、“10E6-G6”、“18G9-H11”、“11F3-B9”、“12G3-E8”、“5B1-G2”、“16F8-A7”、“11F9-F8”、“20E5-F10”、“20B5-F10”、“3H6-D2”抗CD3抗體的CDR3-H共有序列。
SEQ ID NO：334展示基於序列比對的稱為“20G6-F3”、“4B4-D7”、“4E7-C9”、“18F5-H10”、“11D7-C3”、“11H3-E5”、“13H2-C2”、“13C1-F6”、“1E6-C9”、“10F4-C10”、“10E6-G6”、“18G9-H11”、“11F3-B9”、“12G3-E8”、“5B1-G2”、“16F8-A7”、“11F9-F8”、“20E5-F10”、“20B5-F10”、“3H6-D2”抗CD3抗體的CDR1-L共有序列。
SEQ ID NO：335展示基於序列比對的稱為“20G6-F3”、“4B4-D7”、“4E7-C9”、“18F5-H10”、“11D7-C3”、“11H3-E5”、“13H2-C2”、“13C1-F6”、“1E6-C9”、“10F4-C10”、“10E6-G6”、“18G9-H11”、“11F3-B9”、“12G3-E8”、“5B1-G2”、“16F8-A7”、“11F9-F8”、“20E5-F10”、“20B5-F10”、“3H6-D2”抗CD3抗體的CDR3-L共有序列。
SEQ ID NO：336展示基於序列比對的稱為“1E1-G5”、 “6D6-B8”、“8B11-B7”、“9F6-G3”抗CD123抗體的CDR1-H共有序列。
SEQ ID NO：337展示基於序列比對的稱為“1E1-G5”、“6D6-B8”、“8B11-B7”、“9F6-G3”抗CD123抗體的CDR2-H共有序列。
SEQ ID NO：338展示基於序列比對的稱為“1E1-G5”、“6D6-B8”、“8B11-B7”、“9F6-G3”抗CD123抗體的CDR1-L共有序列。
SEQ ID NO：339展示基於序列比對的稱為“1E1-G5”、“6D6-B8”、“8B11-B7”、“9F6-G3”抗CD123抗體的CDR3-L共有序列。
SEQ ID NO：340展示基於序列比對的稱為“6C10-C4”、9B8-G6”、“9D7-C8”抗CD123抗體的CDR1-H共有序列。
SEQ ID NO：341展示基於序列比對的稱為“1E1-G5”、“6D6-B8”、“8B11-B7”、“9F6-G3”抗CD123抗體的CDR2-H共有序列。
SEQ ID NO：342展示基於序列比對的稱為“1E1-G5”、“6D6-B8”、“8B11-B7”、“9F6-G3”抗CD123抗體的CDR3-H共有序列。
SEQ ID NO：343展示基於序列比對的“1E1-G5”、“6D6-B8”、“8B11-B7”、“9F6-G3”抗CD123抗體的CDR1-L共有序列。
SEQ ID NO：344展示連接子序列的胺基酸序列(Gly-Gly-Gly-Gly-Ser)。
SEQ ID NO：345展示連接子序列的胺基酸序列(Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser)。
SEQ ID NO：346展示連接子序列的胺基酸序列(Thr-Val-Ala-Ala-Pro)。
SEQ ID NO：347展示連接子序列的胺基酸序列(Gln-Pro-Lys-Ala-Ala)。
SEQ ID NO：348展示連接子序列的胺基酸序列 (Gln-Arg-Ile-Glu-Gly)。
SEQ ID NO：349展示連接子序列的胺基酸序列(Ala-Ser-Thr-Lys-Gly-Pro-Ser)。
SEQ ID NO：350展示連接子序列的胺基酸序列(Ala-Ser-Thr-Lys-Gly-Pro-Ser)。
SEQ ID NO：351展示連接子序列的胺基酸序列(His-Ile-Asp-Ser-Pro-Asn-Lys)。
SEQ ID NO：352展示連接子的胺基酸序列和His-tag序列，其被添加至稱為CODV-Fab“7G3x20G6”、“7G3x4E7”、“7G3x4B4”、“7G3x18F5”、“hz20G6x7G3”、“7G3xhz4B4”和“hz4B4x3E3”抗體樣結合蛋白的根據式II的多肽C-末端的胺基酸序列，對應於用於純化實例的對應鉸鏈序列和His-標簽。
SEQ ID NO：353展示稱為“3E3”抗CD123抗體的變體的CDR2-H的胺基酸序列。
SEQ ID NO：354展示連接子序列的胺基酸序列(Gly-Gly-Gly-Ser).
SEQ ID NO：355展示連接子序列的胺基酸序列(Ser-Gly-Gly-Gly-Ser).
SEQ ID NO：356展示連接子序列的胺基酸序列(Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser).
SEQ ID NO：357展示連接子序列的胺基酸序列(Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser).
SEQ ID NO：358展示連接子序列的胺基酸序列(Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser).
SEQ ID NO：359展示連接子序列的胺基酸序列(Lys-Thr-His-Thr).
SEQ ID NO：360展示連接子序列的胺基酸序列(Lys-Thr-His-Thr-Ser).
SEQ ID NO：361展示連接子序列的胺基酸序列(Asp-Lys-Thr-His-Thr-Ser).
SEQ ID NO：362展示連接子序列的胺基酸序列(Asp-Lys-Thr-His-Thr-Ser-Pro).
SEQ ID NO：363展示連接子序列的胺基酸序列(Ser-Asp-Lys-Thr-His-Thr-Ser-Pro).
SEQ ID NO：364展示連接子序列的胺基酸序列(Ser-Asp-Lys-Thr-His-Thr-Ser-Pro-Pro).
SEQ ID NO：365展示連接子序列的胺基酸序列(Lys-Ser-Asp-Lys-Thr-His-Thr-Ser-Pro-Pro-Ser)
SEQ ID NO：366展示連接子序列的胺基酸序列(Pro-Lys-Ser-Asp-Lys-Thr-His-Thr-Ser-Pro-Pro-Ser).
SEQ ID NO：367展示連接子序列的胺基酸序列(Pro-Lys-Ser-Asp-Lys-Thr-His-Thr-Ser-Pro-Pro-Ser-Pro)
SEQ ID NO：368展示連接子序列的胺基酸序列(Glu-Pro-Lys-Ser-Asp-Lys-Thr-His-Thr-Ser-Pro-Pro-Ser-Pro)
SEQ ID NO：369展示連接子序列的胺基酸序列(Glu-Pro-Lys-Ser-Asp-Lys-Thr-His-Thr-Ser-Pro-Pro-Ser-Pro-Gly).
SEQ ID NO：370展示連接子序列的胺基酸序列(Gly-Glu-Pro-Lys-Ser-Asp-Lys-Thr-His-Thr-Ser-Pro-Pro-Ser-Pro-Gly).
SEQ ID NO：371展示連接子序列的胺基酸序列(Gly-Glu-Pro-Lys-Ser-Asp-Lys-Thr-His-Thr-Ser-Pro-Pro-Ser-Pro-Gly-Gly).
SEQ ID NO：372展示連接子序列的胺基酸序列(Gly-Gly-Glu-Pro-Lys-Ser-Asp-Lys-Thr-His-Thr-Ser-Pro-Pro-Ser-Pro-Gly-Gly)
SEQ ID NO：373展示連接子序列的胺基酸序列(Gly-Gly-Glu-Pro-Lys-Ser-Asp-Lys-Thr-His-Thr-Ser-Pro-Pro-Ser-Pro-Gly-Gly-Gly).
SEQ ID NO：374展示連接子序列的胺基酸序列(Gly-Gly-Gly-Glu-Pro-Lys-Ser-Asp-Lys-Thr-His-Thr-Ser-Pro-Pro-Ser-Pro-Gly-Gly-Gly)
SEQ ID NO：375、376和377展示稱為“7G3”抗體的CDR1-H、CDR2-H和CDR3-H的胺基酸序列。
SEQ ID NO：378和379展示稱為“7G3”抗體的CDR1-L和CDR3-L的胺基酸序列。
SEQ ID NO：380展示稱為人源化“7G3”抗體的重鏈可變結構域變體的胺基酸序列。
SEQ ID NO：381和382展示稱為人源化“7G3”抗體的CDR1-H和CDR3-H的胺基酸序列。
SEQ ID NO：383展示稱為人源化“7G3”抗體的重鏈可變結構域另一變體的胺基酸序列。
SEQ ID NO：384展示稱為人源化“7G3”抗體之一的CDR2-H的胺基酸序列。
SEQ ID NO：385展示稱為人源化“7G3”抗體的輕鏈可變結構域的胺基酸序列。
SEQ ID NO：386展示如WO2015026892所示的胺基酸序列SEQ ID NO：1。
SEQ ID NO：387展示如WO2015026892所示的胺基酸序列SEQ ID NO：3。
SEQ ID NO：388展示稱為CODV-Fab“hz20G6xhz7G3”、CODV-Fab-OL1“hz20G6xhz7G3”和CODV-Fab-OL1a“hz20G6xhz7G3”抗體樣結合蛋白的根據式I的多肽的胺基酸序列。
SEQ ID NO：389展示連接子序列的胺基酸序列(Gly-Gly-Ser-Gly-Ser-Ser-Gly-Ser-Gly-Gly).
SEQ ID NO：390展示稱為CODV-Fab“hz20G6xhz7G3”抗體樣結合蛋白的根據式II的多肽的胺基酸序列。
SEQ ID NO：391展示稱為CODV-Fab-TL1“hz20G6xhz7G3”抗體樣結合蛋白的根據式IV的多肽的胺基酸序列。
SEQ ID NO：392展示稱為CODV-Fab-TL1“hz20G6xhz7G3”抗體樣結合蛋白的Fc2區的胺基酸序列。
SEQ ID NO：393展示稱為CODV-Fab-TL1“hz20G6xhz7G3”抗體樣結合蛋白的根據式III的多肽的胺基酸序列。
SEQ ID NO：394展示稱為CODV-Fab-TL1“hz20G6xhz7G3”的Fc區的胺基酸序列。
SEQ ID NO：395展示稱為CODV-Fab-OL1“hz20G6xhz7G3”抗體樣結合蛋白的根據式II的多肽的胺基酸序列。
SEQ ID NO：396展示稱為CODV-Fab-OL1“hz20G6xhz7G3”抗體樣結合蛋白的Fc區的胺基酸序列。
SEQ ID NO：397展示稱為CODV-Fab-OL1“hz20G6xhz7G3” 抗體樣結合蛋白的Fc殘端(Fc3)的胺基酸序列。
SEQ ID NO：398展示稱為CODV-Fab-OL1a“hz20G6xhz7G3”抗體樣結合蛋白的Fc殘端(Fc3)的胺基酸序列。
SEQ ID NO：399展示稱為CODV-Fab-OL1a“hz20G6xhz7G3”抗體樣結合蛋白的根據式II的多肽的胺基酸序列。
SEQ ID NO：400展示稱為CODV-Fab-OL1a“hz20G6xhz7G3”抗體樣結合蛋白的Fc殘端(Fc3)的胺基酸序列。
圖1：稱為“20G6-F3”、“4B4-D7”、“4E7-C9”、“18F5-H10”、“11D7-C3”、“11H3-E5”、“13H2-C2”、“13C1-F6”、“1E6-C9”、“10F4-C10”、“10E6-G6”、“18G9-H11”、“11F3-B9”、“12G3-E8”、“5B1-G2”、“16F8-A7”、“11F9-F8”、“20E5-F10”、“20B5-F10”、“3H6-D2”抗CD3抗體VH區的序列比對。
圖2：稱為“20G6-F3”、“4B4-D7”、“4E7-C9”、“18F5-H10”、“11D7-C3”、“11H3-E5”、“13H2-C2”、“13C1-F6”、“1E6-C9”、“10F4-C10”、“10E6-G6”、“18G9-H11”、“11F3-B9”、“12G3-E8”、“5B1-G2”、“16F8-A7”、“11F9-F8”、“20E5-F10”、“20B5-F10”、“3H6-D2”抗CD3抗體的VL區的序列比對。
圖3：稱為“1E1-G5”、“6D6-B8”、“8B11-B7”、“9F6-G3”抗CD123抗體的VH和VL區的序列比對。
圖4：稱為“6C10-C4”、9B8-G6”、“9D7-C8”抗CD123抗體的VH和VL區的序列比對。
圖5和7：人T細胞中存在的完整人CODV-Fab-TL1“hz20G6xhz7G3”IV Q3d在全部機體中在所有所測試劑量都抑制Molm13腫 瘤生長。
圖6和8：人T細胞中存在的完整人CODV-Fab-TL1“hz20G6xhz7G3”IV Q3d在長骨中在所有所測試劑量都與腫瘤消退相關。
圖9和11：人T細胞中存在的完整人CODV-Fab“hz20G6xhz7G3”IV抑制腫瘤生長。
圖10和12：人T細胞中存在的完整人CODV-Fab“hz20G6xhz7G3”IV在長骨中與腫瘤消退相關。
圖13和15：人T細胞中存在的完整人CODV-Fab“hz20G6xhz7G3”CIP以0.13nmol/Kg/天或更高的劑量抑制全機體腫瘤生長。
圖14和16：人T細胞中存在的完整人CODV-Fab“hz20G6xhz7G3”CIP在長骨中以0.13nmol/Kg/天或更高的劑量抑制腫瘤生長。
圖17：CODV-Ig、CODV-Fab-TL和CODV-Fab-OL的結構圖示(還展示了LALA突變(當使用IgG1的Fc骨架時)和Knob-into-Hole突變)。
實施例
實施例1：抗體生成
1.1 hCD3ε/δ-hFc融合表現質體(CD3ed-Fc)的構建
使用包含cDNA的質體作為模板，如此處下文詳述，在閱讀框中用攜帶8 x His或Strep-II標簽以用於任選串聯純化的包含人免疫球蛋白IgG鉸鏈區、CH2和CH3的重鏈恒定結構域生成人和食蟹猴CD3ε和CDδ融合蛋白。
使用人DNA基因組作為模板，擴增包含信號肽序列的人CD3ε和人CDδ亞單位細胞外結構域。獲得的擴增裂解和純化的PCR產物通 過連接PCR組合，並通過InFusion方法使用NheI和HindIII位點連接入哺乳動物表現載體pXL。將每個亞單位克隆至質體上。獲得的成熟人CD3ε His-標簽Fc-融合蛋白序列在本文公開於SEQ ID NO：3。SEQ ID NO：3的胺基酸1-104對應野生型全長人CD3ε(本文公開於SEQ ID NO：1下，可從Uniprot數據庫在登錄號P07766下獲得)蛋白胺基酸23-126且因此對應於人CD3ε細胞外結構域。
使用食蟹猴基因組DNA作為模板，擴增了包含信號肽的食蟹猴CD3ε和CD3δ細胞外結構域。獲得的擴增裂解和純化的PCR產物通過連接PCR組合並通過InFusion方法使用NheI和HindIII位點連接入哺乳動物表現載體pXL。將每個亞單位克隆至質體上。獲得的成熟食蟹猴CD3ε Fc-融合蛋白序列公開於SEQ ID NO：4下。SEQ ID NO：3的胺基酸1-95對應全長食蟹猴CD3ε蛋白胺基酸23-117且因此包含野生型全長食蟹猴CD3ε的細胞外結構域(本文公開於SEQ ID NO：2下，可從Uniprot數據庫登錄號Q95LI5下獲得)。克隆的融合蛋白與野生型序列胺基酸位置57相比進一步在胺基酸位置35包含一個丙胺酸至纈胺酸的交換。
1.2 人和食蟹猴CD3ed-Fc的表現和純化
生長在無F17血清的懸浮培養基(Life)中的自由式HEK293細胞用表現質體瞬時轉染。使用Cellfectin轉染試劑(Life)實施代表CD3ε和CD3δ細胞外結構域(ECD)亞單位的兩種質體的共轉染。在37℃培養細胞7天。包含重組蛋白的培養基上清通過離心收穫並通過過濾(0.22μm)澄清。
對於純化，在蛋白A基質(GE)上捕獲Fc-融合蛋白變體並通過pH轉移洗脫。通過尺寸排阻層析(SEC)使用Superdex 200(GE)和最終超濾濃縮步驟精緻蛋白後，將蛋白用於進一步試驗。
在蛋白A上捕獲後將人異二聚體額外應用至His-Trap管柱 (GE)並除鹽。將洗脫的蛋白應用至Strepavidin管柱(GE)並在通過使用Superdex 200(GE)的SEC最終精緻前用D-脫硫生物素洗脫。該策略用於從同型二聚體分離異二聚體。
1.3人/食蟹猴交叉反應抗CD3抗體的生成
將人和食蟹猴CD3ε和CD3 δ cDNA分別克隆入Aldevron專有免疫載體(pB8和VV8)並用於大鼠的基因免疫。免疫組MR12-266(“CD3-食蟹猴”)的大鼠最初用人CD3ε和CD3δcDNA免疫，隨後進一步用人和食蟹猴CD3ε和CD3 δcDNA的混合物兩次免疫。4次基因應用(IS24d-4)後，在免疫步驟的24天取免疫血清。稀釋在PBS 1% BSA中的血清，在共轉染實驗中通過流式細胞術使用用靶cDNA瞬時轉染的哺乳動物細胞對該測試血清進行測試以獲得人和食蟹猴CD3ε和CD3δ TCR複合物。此外，將免疫血清在下列細胞系上測試：Jurkat E6-1(表現人TCR)、Jurkat-RT-T3.5(TCR陰性)和食蟹猴HSC-F(表現食蟹猴TCR)；未獲得對於食蟹猴TCR陰性的細胞系。將10μg/ml的山羊抗大鼠IgG R-藻紅蛋白偶聯物(Southern Biotech,#3030-09)用作第二抗體。
當與用不相關的cDNA轉染的細胞比較時，可在免疫的動物中檢測到特別針對用CD3ε和CD3δcDNA的組合轉染的細胞的免疫血清的特異反應性。當與TCR-陰性細胞系(RT-T3.5)相比時，其對於對TCR陽性的Jurkat細胞系(E6-1)相同檢測有效，在食蟹猴HSC-F細胞系上檢測到明顯較少但仍顯著的信號(參見表1)。
表1：藉由流式細胞術對每只動物中針對TCR-複合物的免疫血清的特異反應性的檢測。數據表示為相對螢光強度(rfu)的幾何平均值。
Figure 110113349-A0101-12-0200-1240
免疫組MR12-265(“CD3-hum”)的大鼠與克隆入相應表現載體的人CD3ε和CD3δ cDNA共免疫。4次基因應用(IS24d-4)後，在免疫步驟的24天取免疫血清。稀釋在PBS 1% BSA中的血清，在共轉染實驗中通過流式細胞術使用用靶cDNA瞬時轉染的哺乳動物細胞測試對該測試血清進行以獲得人和食蟹猴CD3ε和CD3δ TCR複合物。將10μg/ml的山羊抗大鼠IgG R-藻紅蛋白偶聯物(Southern Biotech,#3030-09)用作第二抗體。此外，在下列細胞系測試了免疫血清：Jurkat E6-1(表現人TCR)、Jurkat-RT-T3.5(TCR陰性)和食蟹猴HSC-F(表現食蟹猴TCR)；未獲得對於食蟹猴TCR陰性的細胞系。將10μg/ml的山羊抗大鼠IgG R-藻紅蛋白偶聯物(Southern Biotech,#3030-09)用作第二抗體。
當與用不相關的cDNA轉染的細胞比較時，可在免疫的動物中檢測到特別針對用CD3ε和CD3δcDNA的組合轉染的細胞的免疫血清的特異反應性。當與TCR-陰性細胞系(RT-T3.5)相比時，其對於對TCR陽性的Jurkat細胞系(E6-1)的檢測的情況也同樣有效，但在食蟹猴HSC-F細胞系上檢測到明顯較少的信號(然而在陽性大鼠中仍顯著)(參見表2)。
表2. 藉由流式細胞術對每只動物中針對TCR-複合物的免疫血清的特異反應性的檢測。數據表示為相對螢光強度的幾何平均值(rfu).
Figure 110113349-A0101-12-0202-543
處死具有陽性血清的大鼠並將B細胞與小鼠骨髓瘤細胞融合。獲得的融合瘤在用人或食蟹猴CD3ε和CD3δ表現質體轉染的HEK293細胞上、在Jurkat E6.1(CD3+)和Jurkat T3.5(CD3-)上通過流式細胞術篩選。通過表面等離子體共振將融合瘤克隆的上清液用於評估通過固定分析物為25nM的針對人和食蟹猴CD3ε/δ複合物的單點動力學(數據示於表3)。
表3：藉由流式細胞術和Biacore分析的不同融合瘤克隆上清液的特異反應性檢測。 對不同細胞系的上清進行了測試(Jurkat E6-1、Jurkat-RT-T3.5和食蟹猴HSC-F)。分別針對來自人和食蟹猴的CD3e/d實施了Biacore分析。
Figure 110113349-A0101-12-0203-544
Figure 110113349-A0101-12-0204-545
擴大陽性克隆並通過RT-PCR分離可變重鏈和輕鏈的相應cDNA。將VH和VL序列克隆入與人CH1、IGHG1-骨架或κ鏈融合的表現載體進而表現Fab-片段以及完整的IgG。
1.4 IgG和Fab-片段的表現
編碼IgG的重鏈和輕鏈和Fab-片段的表現質體在大腸桿菌NEB 10-β(DH10B衍生物)中繁殖。從大腸桿菌使用QIAGEN Plasmid Plus Kit(目錄號：12991)製備用於轉染的質體。
生長在Freestyle Medium(Invitrogen)的HEK 293-FS細胞用所示的編碼重鏈和輕鏈的LC和HC質體使用293fectin(Invitrogen)轉染試劑如製造商所述轉染。細胞在37℃、8% CO2的Kuhner ISF1-X震動溫育器中以110rpm培養。培養7天后，將細胞通過離心去除，添加10% Vol/Vol的1M Tris HCl pH 8,0並經由0,2μM瓶頂過濾器過濾上清以去除顆粒CODV-IgG1構築體。通過在蛋白A管柱(HiTrap蛋白A HP管柱，GE Life Sciences)上的親和層析純化。從管柱用0,1M檸檬酸，pH 3.0洗脫後，使用配製於PBS的HiPrep 26/10除鹽管柱(Gibco 14190-136)對CODV-IgG1構築體除鹽。
通過HisTrap高性能管柱(GE Healthcare,Cat.No.：17-5248-02)純化雙特異性CODV-Fab構築體。從管柱(洗脫緩衝液：20mM 磷酸鈉，0.5M NaCl，500mM咪唑，pH 7.4)洗脫後，收集包含組分的蛋白並使用使用配製於PBS的HiPrep 26/10除鹽管柱(Gibco 14190-136)除鹽。
為從聚集物分離單體，使用HiLoad Superdex 200 26/60 320ml管柱(GE Healthcare目錄號：29-9893-36)在PBS(Gibco 14190-136)中對於兩種構築體CODV-IgG和CODV-Fab片段實施了高分辨率分餾步驟。收集單體組分並使用Vivaspin 20離心管柱(VS2002 Sartorius Stedim biotech)濃縮至1mg/ml且使用0.22μm膜(Millex® Syringe Filters SLGV033RS)過濾。
蛋白濃度通過測量在280nm的吸光度確定。每批次通過SDS-PAGE在還原和非還原條件下分析以確定每種單體亞單位的純度和分子量。
1.5抗CD3抗體親和力的評估
1.5.1人和食蟹猴CD3ε/δ兩者親和力的評估
結合抗CD3的Fab或CODV-Fab的結合親和力通過表面等離子體共振(SPR)使用Biacore3000儀器(GE Healthcare)測量。試驗緩衝液為HBS-EP(BR-1001-88，GE Healthcare)。CD3ε/δ-Fc融合蛋白的捕獲使用人抗體捕獲套組(GE Healthcare)實現。使用胺偶聯套組(BR-100-50,GE Healthcare)將捕獲抗體與CM5芯片(BR-1001-88,GE Healthcare)偶聯至約12.000RU。以10μl/min捕獲CD3εδ-Fc融合蛋白至約70RU以獲得30RU的值。與抗CD3 Fab或CODV-Fab的結合動力學以30μl/min在締合和解離階段分別測量240秒和600秒。使用在試驗緩衝液中3-400nM的Fab的兩倍稀釋液。全部Fab濃度一式兩份地進行。與兩份空白緩衝液進行雙重比較。捕獲表面的再生用3M MgCl2溶液以30μl/min用1分鐘注射實施。使用BIA評估軟體v.4.1(GE Healthcare)用於數據分析。數據使用1：1具有質量轉移的Langmuir模型整體擬合。
抗CD3 IgG和CODV-Fc蛋白結合親和力的測量，除捕獲抗體外，類似與對於Fab和CODV-Fab的結合試驗實施。在這種情況中，將His捕獲套組(28-9950-56,GE Healthcare)用於經由His-標簽捕獲人CD3-Fc蛋白。對於與食蟹猴CD3-Fc的結合試驗，將Strep-MAB經典抗體(2-1507-001,IBA)用作捕獲抗體。在這種情況中，再生溶液為10mM甘胺酸緩衝液pH2.0。
表4：藉由Biacore測量的所選CD3抗體針對人和食蟹猴CD3ε/δ複合物的親和力。
Figure 110113349-A0101-12-0206-1241
Figure 110113349-A0101-12-0207-547
1.5.2 藉由流式細胞術測定抗CD3抗體與表現在HEK293F細胞表面的huCD3ε、huCD3δ和huCD3ε/δ的結合
為分析抗體與表現在細胞表面的人CD3ε和人CD3δ的結合，用兩種抗體單獨或共轉染來轉染HEK293細胞，並藉由流式細胞術測量信號。對於轉染步驟根據製造商的說明使用FuGENE HD轉染試劑(Promega,#E2311)。
HEK293F細胞以6E6細胞每管接種於具有過濾器(Greiner bio-one)的50ml Cellstar Cellreactor管中的Freestyle293培養基(Gibco)。根據FuGENE方案完成轉染。複合物的製備在無酚紅的OptiMEM(Gibco)中以3：1的比例完成(使用3.0：1的FuGENE®HD：DNA的比率用於在T-25燒瓶中的8,000μl培養基生長的293F細胞的轉染的方案，http：//www.promega.com/techserv/tools/FugeneHdTool/default.aspx)。
細胞在37℃和5% CO2的振動器上溫育。轉染細胞在1-3天收穫且抗體的結合藉由流式細胞術分析。
用於染色的抗體以1μg接種於96-孔U-底懸液培養板(Greiner bio-one)中具有50μl的FBS的每孔。收穫的轉染細胞在具有FBS的染色緩衝液中重懸並以50μl每孔添加至抗體。將細胞在4℃暗處溫育30分鐘並洗滌兩次。0.5μg第二抗體山羊F(ab')2抗人IgG-FITC(Beckman Coulter,#732598)或山羊F(ab')2抗人κ-PE(Southern Biotech,#206209)分別在每孔中與0.5μg 7-AAD每孔的組合，加入100μl具有FBS的染色緩衝液。細胞在4℃暗處溫育15min並洗滌兩次。對於測量，將細胞在200μl具有FBS的染色緩衝液中重懸。分別使用MACSQuant(Miltenyi Biotec)或LSRII(BD)流式細胞術測量細胞。使用FlowJo軟體(Tree Star,Inc.)實施進一步的數據分析。讀取對於抗體染色陽性的7-AAD陰性單細胞的百分比(數據示於表5)。
1.5.3 藉由SPR的抗CD3 Fab與huCD3ε/δ和huCD3ε/γ的結合
藉由SPR使用用HBS-EP緩衝液運行的BIAcore300儀器測試結合。以10μl/min經由Fc-標簽藉由固定在CM5感應芯片上的抗人Fc捕獲抗體MAB1302(Millipore)捕獲重組huCD3蛋白(ε/δ(PB01226),ε/γ(PB01225))。將抗CD3 Fab以100nM用240秒和300秒的締合和解離時間用作分析物。每次循環後，藉由10mM甘胺酸緩衝液pH2.5的2分鐘脈衝再生表面。
當僅huCD3δ表現在HEK293F細胞表面時，藉由流式細胞術不能檢測到信號。相反，幾乎所有的抗體可與用僅huCD3ε轉染或huCD3ε與huCD3δ共轉染的細胞結合，表明huCD3ε作為表位是必需的。在Biacore試驗中，與huCD3ε的結合表明與是否使用δ或γ鏈用於重組蛋白無關，表明huCD3ε作為抗原是足夠的。當合作鏈存在時，抗體12D2例外地僅與huCD3ε結合。
g或d鏈共表現對於展示該抗體表位蛋白的構象結構可能存在間接效應。對於公開的抗體OKT3已展示了相同效應。描述了該抗體與 huCD3ε與huCD3δ或γ分別締合後形成的構象表位相互作用(Salmeron et al.,1991,The Journal of Immunology)。還展示了其僅與huCD3ε亞單位結合(Kjer-Nielsen et al.,2004,PNAS)。由於12D2和OKT3相似的行為，與huCD3ε的相互作用對於12D2是可以設想的。總之，huCD3ε看起來是所有分析的抗體的抗原結構域(數據示於表5)。
表5：藉由流式細胞術和Biacore測量的所選CD3抗體針對huCD3δ、huCD3ε、huCD3ε/δ和huCD3ε/γ複合物的親和力。
Figure 110113349-A0101-12-0209-548
1.6 CD3 Fab與人T細胞的結合
CD3-Fab的結合能力藉由流式細胞術確定。將原代人T細胞用作靶細胞。因此，從用EDTA治療的健康捐贈者200ml外周血藉由Ficoll密度離心分離外周血單核細胞(PBMC)。15ml Histopaque(Sigma-Aldrich)預先裝載至50ml Leucosep-管(Greiner bio-one)上。血液用autoMACS清洗緩衝 液+1% BSA(Miltenyi Biotec)稀釋並裝載於共10只製備的管的膜上。1000 xg無制動離心管10min。收集PBMC並用autoMACS清洗緩衝液+1% BSA洗滌三次。最後，在autoMACS運行緩衝液(Miltenyi Biotec)中重懸PBMC用於藉由autoMACSpro技術根據製造商的說明使用泛T細胞分離套組(Miltenyi Biotec)分離T淋巴細胞。分離的T細胞的純度藉由MACSQuant流式細胞術使用人7色免疫表型套組(Miltenyi Biotec)分析。分離的T細胞在具有FBS的染色緩衝液(BD Pharmingen)中重懸並將100μl每孔中的1E5細胞接種於96-孔U-底懸浮培養平板(Greiner bio-one)中。Fab抗體在PBS(Invitrogen)中1：3系列稀釋並將每種以30000ng/ml終濃度添加5μl至細胞。
試驗在4℃溫育45分鐘。細胞用具有FBS的染色緩衝液洗滌兩次且將1μg第二抗體山羊F(ab')2抗人κ-FITC(Beckman Coulter,#732621)每孔添加至每孔的100μl染色緩衝液中。試驗在4℃溫育20分鐘並在此後洗滌兩次。細胞在具有FBS的150μl染色緩衝液中重懸並使用MACSQuant(Miltenyi Biotec)或LSRII(BD)流式細胞術測量。使用FlowJo軟體(Tree Star,Inc.)實施進一步的數據分析。讀取對於抗體結合陽性的細胞百分比。僅用第二抗體處理而無一抗的細胞用於設置入口。EC50曲線藉由XLfit(Algorithm 205)計算，EC50值以斜率拐點計算(數據示於表6)。
表6：藉由流式細胞術測量的CD3 Fab與人T細胞的親和力。給出的是從曲線計算的平均EC50。
Figure 110113349-A0101-12-0210-1242
Figure 110113349-A0101-12-0211-550
1.7 CD3 Fab的安全性
1.7.1藉由CD25+和CD69+在人T細胞上的表現測量CD3 Fab的安全性CD3 Fab抗體對T細胞活化狀態的作用，作為安全性的讀數，藉由基於流式細胞術的活化標記物CD25和CD69在原代人T細胞表面上的表現檢測分析而讀出。
分離的原代人T淋巴細胞在RPMI+GlutaMAX I(Gibco)+10% FCS(Invitrogen)中重懸並將2.5E5細胞接以100μl每孔接種於96-孔U-底懸浮培養平板(Greiner bio-one)中。
將5μl Fab CD3抗體以30 000ng/ml的終濃度添加至細胞。試驗在37℃的5% CO2中溫育20h。
溫育時間後，離心細胞並在100μl具有FBS的染色緩衝液(BD Pharmingen)中用下列標記的抗體於4℃染色15分鐘：CD25-V450、CD69-APC。
染色後洗滌細胞兩次，在150μl具有FBS的染色緩衝液中重懸，並使用LSRII(BD)流式細胞術測量5000細胞。使用FlowJo軟體(Tree Star,Inc.)實施進一步的數據分析。讀取CD25陽性和CD69陽性的T細胞百分比(表7)。
表7：藉由人T細胞上CD25+和CD69+的表現測量的CD3 Fab安全性
Figure 110113349-A0101-12-0212-551
1.7.2 藉由CD4+/CD69+、CD4+/CD25+、CD8+/CD69+和CD8+/CD25+在人T細胞上的表現測量CD3 Fab安全性
CD3 Fab抗體對T細胞活化狀態的作用，作為安全性的讀數，藉由基於流式細胞術的活化標記物CD25和CD69在原代人T細胞表面上的表現檢測分析。僅測試T淋巴細胞且在孔中填充了50μl RPMI+GlutaMAX I(Gibco)+10% FCS，或將靶細胞(即THP-1細胞系)以2.5E4細胞每孔添加至50μl RPMI+GlutaMAX I+10% FCS中。雙特異性抗體在PBS(Invitrogen)中1：3系列稀釋並將每種以30 000ng/ml的最終最大濃度添加5μl至細胞。在37℃5% CO2中溫育試驗20h。溫育時間後，離心細胞並在100μl具有FBS的染色緩衝液(BD Pharmingen)中用下列標記的抗體於4℃染色15 分鐘：CD4-PE、CD8-APC-Cy7、CD25-APC、CD69-PE-Cy7。作為Fluorescence Minus One(FMO)對照，如上文所述染色激活的T細胞，但在一個管中藉由其同型(Isotype APC-IG1k)替代CD25並在第二管中藉由其同型(Isotype PE-Cy7-IG1k)替代CD69。染色後將細胞洗滌兩次，在150μl具有FBS的染色緩衝液中重懸，並使用LSRII(BD)流式細胞術測量5000細胞。使用FlowJo軟體(Tree Star,Inc.)實施進一步的數據分析。讀取CD4+CD25+、CD4+CD69+、CD8+CD25+和CD8+CD69+的T細胞的百分比。根據FMO對照設置入口(參照表8)。
表8：藉由人T細胞上CD4+/CD69+、CD4+/CD25+、CD8+/CD69+和CD8+/CD25+的表現測量的CD3 Fab的安全性
Figure 110113349-A0101-12-0213-552
實施例2：CD123序列
2.1 CD123(IL3RA)-hFc融合表現質體(CD123-Fc)的構建
使用包含cDNA的質體作為模板，將人和食蟹猴CD123融合蛋白在具有包括GS-連接子(獼猴蛋白中使用)、鉸鏈區、額外攜帶Strep-II標簽(僅人蛋白版本)的人免疫球蛋白IgG的CH2和CH3結構域的閱讀框中生成。
使用人基因組DNA作為模板，擴增包含信號肽的人CD123(IL3RA)細胞外結構域。獲得的擴增裂解和純化的PCR產物藉由連接PCR組合並藉由InFusion方法使用NheI和HiddIII位點連接入哺乳動物表現載體pXL。獲得的成熟人CD123 Strep-II標簽Fc-融合蛋白的序列公開於SEQ ID NO：196下。胺基酸1-284對應全長野生型人CD123蛋白(本文公開於SEQ ID NO：194下，可從NCBI數據庫登錄號NP_002174.1下獲得)胺基酸22-305，且因此對應人CD123細胞外結構域。
為克隆食蟹猴CD123，從食蟹猴種群血液中製備cDNA。使用該分離的cDNA作為模板，擴增包含信號肽的獼猴CD123(IL3ra)細胞外結構域。獲得的擴增裂解和純化的PCR產物藉由連接PCR組合並藉由InFusion方法使用NheI和HindIII位點連接入哺乳動物表現載體pXL。獲得的成熟人CD123 Strep-II標簽Fc-融合蛋白序列公開於SEQ ID NO：197下。胺基酸1-284對應全長野生型食蟹猴CD123蛋白(本文公開於SEQ ID NO：195下，可從NCBI數據庫登錄號NP_002174.1下獲得)的胺基酸22-305，且因此對應人CD123細胞外結構域。
2.2人和食蟹猴CD123-Fc的表現和純化
生長在無F17血清的懸浮培養基(Life)中的自由式HEK293細胞用表現質體瞬時轉染。使用Cellfectin轉染試劑(Life)實施轉染。在37℃培養細胞7天。包含重組蛋白的培養基上清藉由離心收穫並藉由過濾(0.22μm)澄清。
對於純化，在蛋白A基質(GE)上捕獲Fc-融合蛋白變體並藉由pH轉移洗脫。藉由尺寸排阻層析(SEC)使用Superdex 200(GE)和最終超濾濃縮步驟精緻蛋白後，將蛋白用於進一步試驗。
2.3來自融合瘤的人和 食蟹猴CD123大鼠IgG兩者親和力的評估
用融合瘤上清使用Proteon XPR36(Biorad)以一次性動力學的方式實施了針對與人CD123的結合親和力和與食蟹猴CD123的交叉反應的抗CD123大鼠IgG的篩選。使用山羊抗大鼠IgG(112-005-071,Jackson Immuno Research)建立捕獲試驗。以垂直方向使用胺偶聯套組(176-2410, Biorad)將捕獲的抗體包被在GLC芯片上(176-5011,Biorad)至約8000RU。垂直方向大鼠IgG至約200RU的捕獲導致CD123-Fc Rmax值對於多至100RU。與人和食蟹猴CD123-Fc融合蛋白的結合動力學，在水平方向以100μl/min對於締合和解離分別測量120秒和600秒。將CD123-Fc蛋白用於6nM-100nM的二倍稀釋液。將PBSET緩衝液(176-2730,Biorad)用作試驗緩衝液。再生藉由以30μl/min注射10mM甘胺酸緩衝液(pH 1.5)18秒實現。使用ProteonManager軟體v3.0實施數據處理和分析。用1：1 Langmuir模型完成傳感圖擬合。基於親和性KD<1的人CD123和與食蟹猴的交叉反應性選擇克隆。
Fab和CODV-Fab
抗CD123結合Fab或CODV-Fab的結合親和力使用Biacore3000儀器(GE Healthcare)測量。試驗緩衝液為HBS-EP(BR-1001-88,GE Healthcare)。CD123-Fc融合蛋白的捕獲使用人抗體捕獲套組(GE Healthcare)實現。捕獲的抗體與CM5芯片(BR-1001-88,GE Healthcare)使用胺偶聯套組(BR-100-50,GE Healthcare)偶聯至約12.000RU。CD123-Fc融合蛋白以10μl/min捕獲至約70RU以獲得30RU的Rmax值。與抗CD123 Fab或CODV-Fab的結合動力學以30μl/min對於締合和解離階段分別測量240秒和600秒。使用試驗緩衝液中3-200nM的Fab二倍稀釋液。全部Fab濃度與用於雙重空白的兩份緩衝空白共同運行兩次。捕獲表面的再生以30μl/min用3M MgCl2溶液注射1分鐘實施。使用BIAevaluation軟體v.4.1(GE Healthcare)用於數據分析。數據使用具有質量轉移的1：1 Langmuir模型整體擬合。
IgG和CODV-Fc蛋白
抗CD123 IgG和CODV-Fc蛋白結合親和力的測量，除捕獲抗體外，與用於Fab和CODV-Fab的結合試驗相似實施。在該情況中，使用 Strep-MAB經典抗體(2-1507-001,IBA)經由其StrepII-標簽捕獲人CD123-Fc。此處再生溶液為10mM甘胺酸緩衝液pH2.0。
2.4 人和食蟹猴交叉反應的抗CD123抗體的生成
將人和食蟹猴CD123 cDNA分別克隆入Aldevron專有免疫載體(pB8和VV8)。免疫組MR13-296的三隻大鼠用免疫載體IL3RA-hum.-ECD(aa19-305)進行免疫。4次基因應用(IS24d-4)後，在免疫步驟的24天取免疫血清。稀釋在PBS 1% BSA中的血清藉由流式細胞術使用用人和食蟹猴IL3RA cDNA變體IL3RA-hum.ECD和IL3RA-hum.D3瞬時轉染的哺乳動物細胞測試。
當與用不相關的cDNA轉染的細胞相比時，可在全部免疫的動物中檢測到免疫血清針對用pB1-IL3RA-hum.ECD以及用IL3RA-食蟹猴(pFF1262)轉染的細胞和THP-1細胞的特定反應性。
處死具有陽性血清的大鼠並將B細胞與小鼠骨髓瘤細胞融合。獲得的融合瘤藉由在用人或食蟹猴CD123表現質體轉染的HEK293細胞上、不同表現CD123的細胞系上篩選(數據示於表10)。
將靶細胞以5E4細胞接種於96-孔U-底懸浮培養平板中(每孔50μl具有FBS的染色緩衝液(BD Pharmingen))。
將融合瘤上清在PBS(Invitrogen)中1：3系列稀釋並將50μl每種以1μg/ml的最終最大濃度添加至細胞。將試驗在4℃溫育45min。
用具有FBS的染色緩衝液洗滌細胞兩次並將1μg第二抗體山羊抗大鼠IgG(H+L)-Alexa Fluor 488(Invitrogen-Life Technologies,#MH10520)添加至每孔100μl具有FBS的染色緩衝液中。將試驗在4℃溫育15分鐘且之後洗滌兩次。
將細胞在每孔200μl具有FBS的染色緩衝液中重懸並使用 MACSQuant(Miltenyi Biotec)或LSRII(BD)流式細胞術測量。使用FlowJo軟體(Tree Star,Inc.)實施進一步的數據分析。讀取對於抗體結合陽性的細胞百分比。將僅用二抗而無一抗處理的細胞用於設置入口。曲線藉由XLfit(Algorithm 205)計算。
與檢測不到信號的未轉染的HEK293細胞相比，克隆與CD123的特異性結合可展示在轉染的HEK293表面上(數據未展示)。抗體的結合是濃度依賴的，具有0.4-17.7ng/ml的EC50值(表9)。
表9：藉由流式細胞術檢測的融合瘤上清中大鼠IgG克隆的特異性CD123結合。使用CD123轉染的HEK293作為靶細胞和山羊抗-大鼠IgG(H+L)-Alexa Fluor 488作為二抗測量抗體的濃度依賴性結合。給出的是曲線計算的EC50值。
Figure 110113349-A0101-12-0217-553
Figure 110113349-A0101-12-0218-554
表10：CD123抗體與表現重組CD123和CD123的細胞的結合數據。結合數據展示CD123抗體針對來自人和食蟹猴的重組CD123蛋白的親和力。藉由流式細胞術檢測細胞表面上的結合。SP2指表現CD123的N-末端截斷(D1區)變體的細胞。抗體藉由Proteon XPR36對其與IL3結合CD123的競爭能力進行檢測。
Figure 110113349-A0101-12-0219-555
2.5抗CD123大鼠抗體序列的人源化
大鼠抗體的人源化藉由CDR-移植或藉由4D方法(US20110027266)實施。對於大鼠-抗CD3抗體3E3，識別的最接近的家鼠種系序列的重鏈可變區為IGHV2S48*01和IGHJ3*01且輕鏈可變區為IGKJ3*01。計算的大鼠生殖性指數(germinality index)(僅框架序列)對於VH為94.51%且對於VL為98.9%。
檢查了潛在的暴露問題殘基且修飾了CDRH2中的一個殘基是修飾的。
使用移植方法，基於識別的最接近的人種系序列生成了多種人源化變體：對於VH的IGHV4-59*05和IGHJ4*01(框架上的生殖性指數：75.82%)；和對於VL的IGLV6-57*01和IGLJ3*01(框架上的生殖性指數：72.22%)。
除CDR移植外，使用4D人源化方案(US20110027266)以人源化大鼠抗CD123 3E3可變輕鏈(VL)和重鏈(VH)結構域。分子動力學(MD)模擬在大鼠抗CD123 3E3的最小化的3D同源模型(用MOE完成；使用的PDB：1FLR)上實施並與藉由LGCR/SDI設計的且可從MOE獲得的源自7條代表性輕鏈(vk1、vk2、vk3、vk4、λ1、λ2、λ3)和7條代表性重鏈(vh1a、vh1b、vh2、vh3、vh4、vh5、vh6)的49種人模型進行了比較。
選擇了兩種模型用於“4D人源化”：具有最佳疏水和靜電組成的Vl3-vh4和VL3-VH2和CDR外的序列標識。對於大鼠抗CD123 3E3可變結構域和兩種所選模型間的配對締合，基於相應同源模型的α碳的最佳3D疊加比對序列。
實施例3：雙特異性CODV-Fab形式的抗體
3.1雙特異性CODV-Fab形式的所選CD3序列與抗CD123 mAb 7G3組合的 克隆以研究其T-細胞銜接活性
選擇的CD3抗體序列如I2C、mAb2(Macrogenics)和稱為“20G6-F3”、“4E7-C9”、“4B4-D7”和“18F5-H10”的序列作為單特異性抗CD3 Fab表現，所述選擇的序列還作為雙特異性CD3xCD123 CODV-Fab使用單株抗體7G3序列表現，獲得CODV-Fab構築體“I2Cx7G3”和稱為“7G3x20G6”、“7G3x4E7”、“7G3x4B4”和“7G3x18F5”，如本文“抗體樣結合蛋白”部分進一步所述。將純化的蛋白用於Biacore試驗以比較針對CD3ε/δ複合物的親和力(數據示於表11)。當將CD3序列導入雙特異性CODV-Fab形式時，藉由Biacore分析未檢測到親和力的變化。
表11：Fab-片段和CODV-Fab間針對來自任何食蟹猴的CD3ε/δ複合物的親和力的比較
Figure 110113349-A0101-12-0221-556
3.2針對CD123和CD3的雙特異性CODV-Fab介導強效重定向T-細胞殺傷
這種雙特異性CODV-Fab具有定位T-細胞(藉由結合這種T-細胞至CD3-結合CODV-Fab的CD3-結合部分)至腫瘤細胞的位置(藉由結合這種癌細胞至CODV-Fab的CD123部分)的能力。定位的T-細胞隨後可在本文中稱為"重定向"殺傷的步驟中介導腫瘤的殺傷。構建特異性針對CD123和CD3的雙特異性CODV-Fab其具有單株抗體7G3的抗CD123可變結構域和實 施例1中生成的所選CD3抗體的抗CD3可變結構域。
因此，Ficoll密度離心藉由從200ml用EDTA治療的健康捐贈者外周血分離外周血單核細胞(PBMC)。15ml Histopaque(Sigma-Aldrich)預先裝載至50ml Leucosep-管(Greiner bio-one)上。血液用autoMACS清洗緩衝液+1% BSA(Miltenyi Biotec)稀釋並裝載於共10只製備的管的膜上。1000 xg無制動離心管10min。收集PBMC並用autoMACS清洗緩衝液+1% BSA洗滌三次。最後，在autoMACS運行緩衝液(Miltenyi Biotec)中重懸PBMC用於藉由autoMACSpro技術根據製造商的說明使用泛T細胞分離套組(Miltenyi Biotec)分離T淋巴細胞。分離的T細胞的純度藉由MACSQuant流式細胞術使用人7色免疫表型套組(Miltenyi Biotec)分析。
基於細胞毒性試驗藉由流式細胞術分析雙特異性抗體的T細胞銜接效應。用1μM在1ml RPMI+GlutaMAX I(Gibco)(對於每1E7個細胞)中的CFSE在37℃染色靶細胞(即THP-1細胞系)15分鐘。之後，洗滌細胞兩次並在RPMI+GlutaMAX I+10% FCS(Invitrogen)中重懸。將2.5E4靶細胞接種於96-孔U-底懸浮培養平板(Greiner bio-one)每孔50μl的培養基中。
分離的原代人T淋巴細胞在RPMI+GlutaMAX I+10% FCS中重懸並以所述的效應器對靶標的比率添加至50μl每孔的靶細胞(一般效應器：靶標=10：1)中。
將雙特異性抗體在PBS(Invitrogen)中1：3系列稀釋並將每種以3 000ng/ml的最終最大濃度添加5μl至細胞。試驗在37℃5% CO2中溫育20h。
為檢測死亡的細胞，將全部細胞用7-AAD染色。因此，將具有FBS的染色緩衝液(BD Pharmingen)中稀釋的5μg/ml 7-AAD添加至每孔並在4℃暗處溫育15min。分別使用MACSQuant(Miltenyi Biotec)或LSRII(BD) 流式細胞術測量細胞。使用FlowJo軟體(Tree Star,Inc.)實施進一步的數據分析。讀取CFSE和7-AAD雙重陽性細胞的百分比。
例如在表20-22中展示的這些研究結果證明CD123xCD3 CODV-Fab介導腫瘤細胞重定向殺傷的能力。
3.3 重定向T-細胞殺傷的安全性評估
雙特異性抗體對T細胞活化狀態的作用作為安全性的讀數，藉由基於流式細胞術的原代人T細胞表面上表現的活化標記物CD25和CD69的表現的檢測分析來讀取。
分離的原代人T淋巴細胞在RPMI+GlutaMAX I(Gibco)+10% FCS(Invitrogen)中重懸並將2.5E5細胞接種於96-孔U-底懸浮培養平板(Greiner bio-one)的50μl每孔。
僅對T細胞進行測試並用50μl RPMI+GlutaMAX I+10% FCS填充孔，或以2.5E4細胞每孔在50μl RPMI+GlutaMAX I+10% FCS中添加靶細胞(即THP-1細胞系)。
雙特異性抗體在PBS(Invitrogen)中1：3系列稀釋並將每種以30 000ng/ml的最終最大濃度添加5μl至細胞。
溫育時間後，離心細胞並用下列標記抗體在每孔100μl具有FBS的染色緩衝液(BD Pharmingen)中於4℃染色15min：CD4-PE、CD8-APC-Cy7、CD25-APC、CD69-PE-Cy7。
作為Fluorescence Minus One(FMO)如前所述染色對照活化的T細胞，但在一個管中CD25由其同型(同型APC-IG1k)替代且在第二管中CD69由其同型(同型PE-Cy7-IG1k)替代。
染色後洗滌細胞兩次，在150μl具有FBS的染色緩衝液中重懸，並使用LSRII(BD)流式細胞術測量5000細胞。使用FlowJo軟體(Tree Star,Inc.)實施進一步的數據分析。讀取CD4+CD25+、CD4+CD69+、CD8+CD25+和CD8+CD69+ T細胞的百分比。根據FMO對照設置入口(參見表12)。
表12：在細胞毒性試驗中測量的CD123 x CD3 CODV-Fab的活性和藉由CD69的表現測量的安全性
Figure 110113349-A0101-12-0224-557
3.4抗CD3大鼠抗體序列和雙特異性抗體的人源化
藉由CDR-移植或藉由4D方法(US20110027266)實施大鼠抗體人源化。
對於大鼠-抗CD3抗體“20G6”，識別的最接近的家鼠種系為IGHV6S17*01和IGHJ2*01(對於重鏈可變區，且對於輕鏈可變區為IGKV1S21*01和IGKJ4*01)。計算的大鼠生殖性指數(僅框架序列)對於VH為97,80%對於VL為95,5%。
使用移植方法的多種人源化變體基於下列生成：
1)在識別的最接近的人種系序列上，IGHV3-30-01_IGHJ4-01對於VH具有77%的框架上的生殖性指數；IGK2D-29-02_IGKJ4-01對於VL具有80%的框架上的生殖性指數)，或
2)或基於識別的具有較低PI的最接近的種系序列，IGVH3-48*02-IGHJ4-01對於VH具有75%的框架上的生殖性指數；IGKV2-28*01-IGKJ4-01對於VL具有77,5%的框架上的生殖性指數， 或
3)由更遙遠的人種系列(改變種系分支)
(VH的IGVH1-46*01-IGHJ4*01對於具有框架上56%的生殖性指數；IGKV4*01-IGKJ4*01對於VL具有框架上67,5%的生殖性指數)組成。
隨後將人源化序列導入稱為CODV-Fab“7G3 x 20G6”與來自上文所述的抗體7G3的抗CD123序列的組合的CODV-Fab形式。將純化的CD123 x CD3 CODV-Fab用於Biacore試驗以評估CD3ε/δ的親和力(參見表13)。
表13：抗CD3抗體20G6所選的人源化變體與重組CD3ε/δ複合物的親和力。
Figure 110113349-A0101-12-0225-558
對於大鼠-抗CD3抗體4B4-D7，識別的最接近的家鼠種系序列對於重鏈可變區為IGHV6S17*01(93%的同一性)和IGHJ2*01(87.5%的同一性)且對於輕鏈可變區為IGKV1S21*01(93%的同一性)和IGKJ4*01(100%的同一性)。
計算的識別的家鼠V-序列與人種系(僅框架序列)的同一性百分比對於VH為79%且對於VL為77.53%。
藉由用額外序列工程化移植，試驗最接近的人種系序列 (IGHV3-30*01_IGHJ6*02；IGKV2-30*02/IGKV2D-39*02_IGKJ2*01)生成VH和VL的多種人源化變體對。計算的對於人源化V-序列的人生殖性(僅4 IMGT框架序列)列於表14。
表14：藉由稱為“B4-D7”的抗體的移植獲得的人源化V-序列的人生殖性百分比。僅基於4 IMGT框架序列計算百分比。
Figure 110113349-A0101-12-0226-559
除CDR移植，如美國專利申請US20110027266中所述的4D人源方案可用於人源化大鼠抗CD3 4B4-D7可變輕鏈(VL)和重鏈(VH)結構域。分分子動力學(MD)模擬在大鼠抗CD3 4B4-D7的最小化的3D同源模型(用MOE完成；使用的PDB：1FLR)上實施並與藉由LGCR/SDI設計的且可從MOE獲得的源自7條代表性輕鏈(vk1、vk2、vk3、vk4、λ1、λ2、λ3)和7條代表性重鏈(vh1a、vh1b、vh2、vh3、vh4、vh5、vh6)的49種人模型進行了比較。
選擇了兩種模型用於“4D人源化”。具有最高4D相似性的vk1-vh6，具有疏水和靜電組成。具有CDR外最高序列同一性的vk2-vh3。對 於大鼠抗CD3 4B4-D7可變結構域和兩種所選模型間的配對締合，基於相應同源模型的α碳的最佳3D疊加比對序列。進一步優化了多種其他VH和VL的人源化變體對。
計算的對於人源化V-序列的人生殖性的百分比(僅4 IMGT框架序列)列於表15。
表15：稱為“B4-D7”的抗體的4D人源化獲得的人源化V-序列的生殖性百分比。僅基於4 IMGT框架序列計算百分比。
Figure 110113349-A0101-12-0227-560
人源化序列作為Fab-片段表現和純化且隨後藉由Biacore試驗評估CD3ε/δ的親和力(數據示於表16)。
表16：抗CD3抗體4B4-D7所選的人源化變體與重組CD3ε/δ複合物的親和力
Figure 110113349-A0101-12-0227-561
Figure 110113349-A0101-12-0228-562
3.5 CODV人-Fab CD123 x CD3與THP-1和TF-1細胞的結合
將所選的CD123抗體的序列克隆入CODV-Fab形式與CD3結合序列的組合，並表現和純化蛋白。
其與天然表現CD123的細胞的結合能力藉由流式細胞術確定。將THP-1細胞系或TF-1細胞系用作靶細胞。
將靶細胞用FcR-Blocker(Sigma)封閉。因此，將靶細胞在具 有PBS的染色緩衝液(BD Pharmingen)中重懸並用100μl封閉試劑每ml在4℃封閉1h。使用具有PBS的染色緩衝液填充細胞並將50μl每孔的1E5細胞接種於96-孔U-底懸浮培養平板(Greiner bio-one)中。
將3μg抗體添加入每孔50μl具有PBS的染色緩衝液中。將該試驗在4℃溫育30min。
用具有PBS的染色緩衝液洗滌細胞兩次並將1μg第二抗體山羊F(ab')2抗人κ-FITC(Beckman Coulter,#732621)每孔添加入每孔具有PBS的染色緩衝液。將試驗在4℃溫育20min並隨後洗滌兩次。
將細胞在每孔150μl具有PBS的染色緩衝液中重懸並使用MACSQuant(Miltenyi Biotec)或LSRII(BD)流式細胞術測量。使用FlowJo軟體(Tree Star,Inc.)實施進一步的數據分析。讀取對於抗體結合的陽性細胞的百分比。僅用第二抗體而無一抗處理的細胞用於設置入口。
CD123xCD3 CODV-Fab與CD123的結合示於具有下列兩種表現CD123的不同細胞系：在與CD131共表現的TF-1細胞系上或在缺乏CD131表現的THP-1細胞表面上。例示性展示了五種與靶細胞結合的不同克隆。將CD19xCD3 CODV-Fab用作陰性對照(特異性對照)和參照CD123xCD3 CODV-Fab作為陽性對照(表17)。
表17：克隆入CODV-Fab骨架的靶向CD123的序列與CD3結合序列的組合與THP-1和TF-1細胞系的特異性結合。使用表現CD123的THP-1和TF-1作為靶細胞檢測抗體的結合。添加3μg抗體並藉由第二山羊抗人κ-FITC抗體檢測。展示的是抗體陽性靶細胞的百分比。
Figure 110113349-A0101-12-0229-1243
Figure 110113349-A0101-12-0230-564
3.6 藉由CODV-Fab CD123 x CD3介導的對THP-1細胞的細胞毒性作用
藉由流式細胞術基於細胞毒性試驗分析由新生成的CD123序列和相同的CD3結合序列組成的雙特異性抗體的T-細胞銜接效應。效應器細胞是從健康捐贈者的全血分離的原代T細胞。將THP-1細胞用作表現CD123的靶細胞。
從用EDTA治療的健康捐贈者200ml外周血藉由Ficoll密度離心分離外周血單核細胞(PBMC)。15ml Histopaque(Sigma-Aldrich)預先裝載至50ml Leucosep-管(Greiner bio-one)上。血液用autoMACS清洗緩衝液+1% BSA(Miltenyi Biotec)稀釋並裝載於共10只製備的管的膜上。1000 xg無制動離心管10min。收集PBMC並用autoMACS清洗緩衝液+1% BSA洗滌三次。最後，在autoMACS運行緩衝液(Miltenyi Biotec)中重懸PBMC用於藉由autoMACSpro技術根據製造商的說明使用泛T細胞分離套組(Miltenyi Biotec)分離T淋巴細胞。分離的T細胞的純度藉由MACSQuant流式細胞術使用人7色免疫表型套組(Miltenyi Biotec)分析。
在37℃用1μM CFSE在1ml RPMI+GlutaMAX I+10% FCS(Invitrogen)中染色靶細胞(即THP-1細胞系)。將2.5E4靶細胞接種於96-孔U-底懸浮培養平板(Greiner bio-one)中每孔50μl的培養基中。
將分離的原代人T淋巴細胞在RPMI+GlutaMAX I+10% FCS中重懸並以所示效應器對靶標的比率添加在每孔50μl的靶細胞中(一般效應器：靶標=10：1)。
將雙特異性抗體在PBS(Invitrogen)中以1：3系列稀釋並將5μl每種以3 000ng/ml的最終最大濃度添加至細胞。將試驗在37℃ 5% CO2中溫育20h。
為檢測死亡的細胞，將全部細胞用7-AAD染色。因此，將具有FBS的染色緩衝液(BD Pharmingen)中稀釋的5μg/ml 7-AAD添加至每孔並在4℃暗處溫育15min。分別使用MACSQuant(Miltenyi Biotec)或LSRII(BD)流式細胞術測量細胞。使用FlowJo軟體(Tree Star,Inc.)實施進一步的數據分析。讀取CFSE和7-AAD雙重陽性細胞的百分比。曲線由XLfit(Algorithm 205)計算。
如在表18中所例示，雙特異性抗體能夠銜接原代T細胞並在體外裂解THP-1靶細胞。死亡的靶細胞中抗體濃度依賴的增加可在20h共溫育後檢測。對於此處展示的抗體，計算的EC50值為12.2-429.3ng/ml。
表18：基於流式細胞術的細胞毒性試驗檢測的雙特異性CODV-Fab CD123 x CD3的T-細胞銜接效應。給出了從曲線計算的平均EC50值
Figure 110113349-A0101-12-0231-565
CD123克隆3E3以CODV-Fab形式與抗CD3抗體4B4的人源化變體組合。分析了其T-細胞銜接效應和其體外活化T細胞的能力。
如上文所述實施細胞毒性試驗。由這些構築體介導的原代T細胞對THP-1靶細胞的裂解效應示例性地藉由CODV-Fab hz4B4(4D_A)x3E3示於表20。可用從七位不同的健康捐贈者分離的T細胞的濃度依賴效應很可靠地誘導細胞毒性活性(表19)。
表19：基於流式細胞術的細胞毒性試驗中檢測的雙特異性CODV-Fab hz4B4(4D_A)x 3E3的T-細胞銜接效應。給出從曲線計算的平均EC50值。
Figure 110113349-A0101-12-0232-566
3.7CD123xCD3 CODV-Fab或DART的T-細胞活化效應
雙特異性抗體對T細胞的活化狀態的效果，作為安全性的讀數藉由如上文所述的基於流式細胞術的原代人T細胞表面的活化標記物CD25和CD69的表現檢測來讀取。比較包括了描述於WO2015026892的包含序列SEQ ID NO：386(其在WO2015026892以SEQ ID NO：1展示)的第一多肽鏈和序列SEQ ID NO：387(其在WO2015026892以SEQ ID NO：3展示)的第二多肽鏈的藉由二硫鍵彼此共價結合的DART形式的單鏈CD123 x CD3雙特異性雙抗體(本文稱為“MGD006”)。
當CODV-Fab僅與分離的T細胞溫育時，未在CD4陽性和CD8陽性的T細胞表面檢測到晚期活化標記物CD25的表現上的顯著增加(數據未展示)。相同地，在兩種T-細胞亞群上不存在早期活化標記物CD69表現水平的濃度依賴性增加(表20)。因此，將構築體評估為非活性的(NA)。相反，當添加THP-1靶細胞時，可測量兩種標記物表現水平上的巨大增加(CD25數 據未展示，CD69數據在表21)。
表20：藉由基於流式細胞術的試驗中檢測的CD69表現水平檢測的雙特異性CD123 x CD3CODV-Fab或DART對T細胞活化狀態的影響。給出的是僅使用T細胞的試驗中100nM抗體濃度和最小效果-濃度的活化CD8和CD4 T細胞的平均百分比。
Figure 110113349-A0101-12-0233-567
表20中展示的結果表明單鏈抗體(DART)在測試條件下無靶細胞時引起明顯更多的T-細胞活化。
表21：藉由基於流式細胞術的試驗中CD69表現水平檢測的雙特異性CODV-Fab hz4B4(4D_A)x 3E3對T細胞活化狀態的影響。展示了在最大抗體濃度(Cmax)和在細胞毒性試驗中EC50的抗體濃度時活化的CD8和CD4 T細胞的平均百分比。用THP-1靶細胞和T細胞的共溫育實施試驗。
Figure 110113349-A0101-12-0234-568
表22：藉由基於流式細胞術的試驗中CD69的表現水平檢測包含CODV分子和單鏈Dart的雙特異性完整人源化7G3對T細胞活化狀態的影響。展示了細胞毒性試驗中活化的CD8和CD4 T細胞代表性測試的EC50值。用THP-1靶細胞和T細胞的共溫育實施試驗。
Figure 110113349-A0101-12-0234-569
為評估具有人源化CD3部分的新型CD123抗體的細胞毒性效果，生成包含不同Fv組合的CODV-Fab“hz20G6x7G3”、“7G3xhz4B4”、“hz4B4x3E3”。還生產一種包含Fc的變體，CODV-Fab“hz20G6x7G3-TL4”在輕鏈具有Fc標記以形成具有相應重鏈的Fc異二聚體(TL4變體)。雙特異性 構築體對CD3ε/δ-複合物和CD123的親和力藉由Biacore測量。此外，如上文所述實施了細胞毒性試驗並測量了CD4+活化和CD8+活化。
表23：雙特異性CD123 x CD3 CODV-分子的親和力和活性
Figure 110113349-A0101-12-0235-571
還評估了CODV-Fab“hz20G6xhz7G3”、CODV-Fab-TL1“hz20G6xhz7G3”,CODV-Fab-OL1“hz20G6xhz7G3”和單鏈Dart MGD006的細胞毒性效應。每種雙特異性構築體與CD3ε/δ-複合物和CD123的親和力藉由Biacore測量。此外，如上文所述實施了細胞毒性試驗並測量了CD4+活化和CD8+活化。
表24：雙特異性CD123 x CD3 CODV-分子和DART(MGD006)的親和力和活性
Figure 110113349-A0101-12-0235-570
Figure 110113349-A0101-12-0236-572
為評估在靶細胞存在(想要的)和不存在(不想要的)時分子觸發T-細胞活化的潛力，實施了新的試驗。將NFAT-RE-luc2 Jurkat細胞(Promega #CS176403細胞)與新鮮分離的人T-細胞以效應器靶標1：1的比率在386孔平板中具有2g/L(11mM)葡萄糖、具有GlutaMAX、具有25mM HEPES的RPMI中於37℃5% CO2溫育。5小時後，停止溫育並使用Bio-Glo螢光素酶分析系統，Promega #G7940在發光HTS微板讀數器中測量發光。
表25：如Jurkat-NFAT-Luc-報告細胞系中測量的藉由CD123 x CD3 CODV-分子和MGD006誘導的活化的T細胞活化
Figure 110113349-A0101-12-0236-573
示於表25的結果表明全部抗體都誘導報告細胞活化，其中EC50值在靶細胞存在時在nM以下。對於T-細胞銜接方式，T-細胞活化應受限於靶細胞的存在。由於靶細胞不存在時無明顯的發光信號，這一點對於CODV分子可見。相反地，單鏈DART分子在靶細胞不存在時誘導更高的報告細胞系活化。這些結果與用原代T-細胞獲得的結果吻合。
3.8 CD123xCD3雙特異性CODV-Fab-TL1和CD123xCD3雙特異性CODV-Fab的體內抗腫瘤活性
材料和方法
從全血分離人PBMC和T細胞
用Ficoll梯度離心，從人健康捐贈者的全血分離PBMC。將全血在無菌的磷酸緩衝鹽水(PBS)中1：1稀釋。隨後，將35mL兩體積的稀釋血液置於存在15mL Ficoll-Paque的兩隻50mL Falcon管中。將管在200g室溫無制動離心40分鐘。回收棕黃包衣層並置於具有45mL無菌PBS的六隻50mL Falcon管中並以100g室溫無制動在10分鐘的過程中離心三次(每次離心之間，棄上清並添加45mL PBS)。最後離心後，將兩沉澱共同放入50mL Falcon管中由PBS完成的50mL的最終體積。總可變PBMC數目藉由Vicell技術定義。隨後在來自Myltenyi Biotech(130-091-221)的Automacs運行緩衝液中回收沉澱並從PBMC根據製造商的說明使用來自Miltenyi Biotech(130-091-156)和Automacs的陰性選擇套組分離T細胞。回收純化的T細胞並以2.5 x10E+6細胞/mL的濃度置於Xvivo-15 5%HIS+peni-strepto1X培養基的培養中。
人T細胞擴增
活化人富集的T細胞種群並在14天過程中使用來自Miltenyi Biotech(130-091-441)的T細胞活化/擴大套組擴大。
用於體內施用的人T細胞的製備
400g離心細胞和細胞培養基10分鐘。以2x10E+7細胞/ml的濃度在PBS中回收沉澱。根據生產商的說明使用來自Myltenyi Biotech(130-092-168)的MACsiMAG的分隔器實施從擴增的T細胞對活化的珠的去除。富集的T細胞種群藉由Vicell計數進行計數並在50mL Falcon管中的25 mL無菌PBS中回收。室溫10分鐘的過程中在400g的離心步驟後，在等體積的無菌PBS中回收細胞沉澱以獲得5x10E+7細胞/mL的最終濃度。
腫瘤模型
從微生物和細胞培養收集Leibniz-institut DSMZ-German(DSMZ Braunshweig,Germany)獲得表現CD123的Molm-13人急性髓性白血病細胞。細胞在RPMI1640 Glutamax培養基(用20%胎牛血清完成)中培養(37℃，5% CO2，95%濕度)生長。用藉由非複製型慢病毒攜帶的螢光素螢光素酶載體(SV40-PGL4-Puro-即由連接至螢光素酶2的Simian Virus40啟動子和嘌呤黴素抗性盒序列組成的螢光素酶載體)感染Molm-13細胞。
在NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1WjI/SzJ NSG小鼠中靜脈注射(IV)Molm13-luc+腫瘤細胞(在200μl PBS懸液中的10E+6細胞每動物)。24小時後，在0.2mL體積的無菌PBS下腹腔注射(IP)10E+7人T-細胞至相同小鼠。
在腫瘤植入後三天使用具有Living Image 3.2採集軟體(Perkin-Elmer,Waltham,M,USA)的IVIS100成像儀(PerkinElmer,Waltham,MA,USA)實施基線生物發光成像。成像前15分鐘用120mg/kgPBS中的甲殼蟲螢光素鉀鹽(批次316019,Promega,Lyon,France)IP注射動物。成像前5分鐘用ketamine®/Xylazine®(120mg/kg；6mg/kg IM,5ml/kg)麻醉小鼠。
藉由靜脈途徑(IV)或連續腹腔內灌注(CIP)在腫瘤植入後第4天對建立的已在骨中可檢測的腫瘤初始CODV-Fab-TL1“hz20G6xhz7G3”、CODV-Fab“hz20G6xhz7G3”、CD123xCD3雙特異性DART競爭劑(單鏈抗體DART形式MGD006或接近的類似物，本文稱為“DART-tool”)或PBS治療，如在表26(CODV-Fab-TL1“hz20G6xhz7G3”)、表27(CODV-Fab“hz20G6xhz7G3”IV)和表28(CODV-Fab“hz20G6xhz7G3”CIP)所示。
表26：CD123xCD3雙特異性CODV-Fab-TL1靜脈注射(IV)的評估研究設計
Figure 110113349-A0101-12-0239-574
表27：CD123xCD3雙特異性CODV-Fab靜脈注射(IV)的評估研究設計
Figure 110113349-A0101-12-0239-575
表28：CD123xCD3雙特異性CODV-Fab連續腹腔內灌注(CIP)評估研究設計
Figure 110113349-A0101-12-0239-576
Figure 110113349-A0101-12-0240-577
數據收集和效力標準
從第三天至試驗結束監測動物體重進而跟蹤治療影響。將在連續3天內出現20%體重喪失或15%體重喪失或更多藥物相關死亡的劑量認作過度毒性劑量。動物體重包括腫瘤重量。
腫瘤負荷隨後是非侵入性生物發光成像(BLI)。在植入後第三天治療開始的24小時前實施基線BLI。基於全身生物發光信號將動物分配於不同組。在全身和後腿長骨中藉由在腫瘤植入後第7、10和14天BLI信號測量追蹤腫瘤生長。長骨信號藉由分區測量且可由附近的局部區域的信號影響(例如在後期時間點軟組織中的殘留信號)。將治療組與具有Molm13-luc+浸染的腫瘤和人T細胞的對照動物進行了比較。
主要效力終點是治療組和對照組從基線改變的腫瘤信號的比率(dT/dC)、部分腫瘤消退的數目(PR)和完全腫瘤消退的數目(CR)。
對於每治療組的每只動物準時監測基於生物發光曲線的腫 瘤生長(以Phot/秒表述)並以中值曲線±MAD表示，都針對全身和骨區段信號。對於每對照(C)和治療(T)動物每天藉由從在具體觀察日的腫瘤信號減去在第一治療日(分期日)的腫瘤信號計算生物發光信號的改變。對於治療組計算中值T且對於對照組計算中值C。
隨後計算T/C比率並以百分比表示：
dT/dC=[(觀察天的中值T-第3天中值T)/(觀察天的中值C-第3天中值C)]x 100
當在試驗末期(14天)的dT/dC低於42%時將劑量認為治療上有活性，且當dT/dC低於10%認作非常有活性。
腫瘤消退的百分比定義為治療組中在具體的觀察日與治療第一日的信號相比腫瘤信號減少的百分比。在具體時間點且對於每只動物，%消退計算為：
Figure 110113349-A0101-12-0241-578
假設由於螢光素動力學和可能錯過的IP注射的信號變異風險，對於動物僅當在至少兩連續時間點觀察到時將信號消退認作真的腫瘤消退。
部分消退(PR)：如果對於兩次連續時間點腫瘤信號減少低於初始治療信號，保持高於基線信號的50%，則將消退定義為部分。
完全消退(CR)：如果對於兩次連續時間點腫瘤信號減少至治療初始的50%以下，則將消退定義為完全。
統計學分析
IV 途徑的化合物的評估
用按天的重複測量進行雙向方差分析隨後使用用於多重配對比較的Bonferroni-Holm調整將每治療組的個體生物發光信號與其他組進行了比較：p>0.05：NS，0.05>p>0.01：*，p<0.01：**。對於全身生物發光信號和長骨生物發光信號都實施了統計學分析。
CIP途徑的化合物評估
CODV-Fab“hz20G6xhz7G3”CIP途徑的評估導致兩獨立研究的數據聚集(第一項研究設計高劑量化合物，第二項研究用於低劑量，兩項研究都包含媒介物對照組和CODV-Fab“bz20G6xhz7G3”1.3nmol/kg IV Qd陽性對照組)。藉由相同實驗相同天媒介物組生物發光信號的方式標準化數據後，實施了每只小鼠每天的生物發光信號的統計學分析(集合的媒介物對照n=19；收集的陽性對照n=20)。用按天的重複測量進行雙向方差分析隨後使用用於多重配對比較的Bonferroni-Holm調整將治療的每組個體的標準化生物發光信號與其他組進行了比較：p>0.05：NS，0.05>p>0.01：*，p<0.01：**。對於全身生物發光信號和長骨生物發光信號都實施了統計學分析。
結果
CD123xCD3雙特異性CODV-Fab-TL1“hz20G6xhz7G3”IV
人T細胞存在的完整的人CODV-Fab-TL1“hz20G6xhz7G3”IV Q3d在全部測試劑量抑制Molm13腫瘤生長(1.3、0.13和0.013nmol/Kg Q3d)，在全血中分別具有20%、14%和38%的dT/dC(圖5和7)且在全部測試劑量與長骨中的腫瘤消退相關，分別具有4/7 CR、6/8 CR和2/6 CR(圖6和8)。
在全身和長骨中以0.13nmol/kg Q3d獲得完整的人CODV-Fab-TL1“hz20G6xhz7G3”最大反應。在該劑量，活性與DART 1.3 nmol/kg IV Qd(全身dT/dC 29%，具有1/7CR和長骨中1/7PR)無統計學差異， 且與CODV-Fab“hz20G6xhz7G3”1.3nmol/kgIV Qd(全身dT/dC 23%，1/8CR且長骨中的腫瘤消退1/8PR)等同。數據藉由末端組織病理學分析確認(未顯示)。
在全身和長骨間觀察到的差異與IV注射後連續的外髓質腫瘤傳播的卵巢和腹部脂肪中殘留腫瘤生長相關。
CD123xCD3雙特異性CODV-Fab“hz20G6xhz7G3”IV
人T細胞存在的完整的人CODV-Fab“hz20G6xhz7G3”IV在所有所測試劑量(1.3和0.13nmol/Kg Qd4-13)均抑制腫瘤生長，分別具有14%和39%的dT/dC(圖9和11)，與1.3nmol/kg時長骨中具有5/8 CR的腫瘤消退相關(圖10和12)。
DART 1.3nmol/kg IV Qd4-13抑制腫瘤生長，具有全身dT/dC 29%和長骨中3/8 CR腫瘤消退，與CODV-Fab“hz20G6xhz7G3”1.3nmol/Kg IV無顯著性差異。儘管長骨中1/7PR腫瘤消退，但DART在0.13nmol/Kg IV Qd4-13(dT/dC 62%)無抑制全身腫瘤信號的活性。在研究末期使用相同劑量的完整的人CODV-Fab“hz20G6xhz7G3”未觀察到顯著差異。當以1.3nmol/kg iv QD4-13的相同劑量給藥時，在完整人CODV-Fab“hz20G6xhz7G3”和部分人源化CODV-Fab hz20G6x7G3化合物間未看到統計學差異：在該劑量CODV-Fab hz20G6x7G3抑制全身腫瘤生長，具有34%的dT/dC，與長骨中的腫瘤消退相關(1/8CR和1/8PR)。
在全身和長骨間觀察到的差異與IV注射後連續的外髓質腫瘤傳播的卵巢和腹部脂肪中殘留腫瘤生長相關。
CD123xCD3雙特異性CODV-Fab CIP
人T細胞存在的完整的人CODV-Fab“hz20G6xhz7G3”CIP以3.9、1.3和0.13nmol/Kg/天CIP4-14抑制全身腫瘤生長且在0.013nmol/kg/ 天無活性，在全身分別具有2%、3%、21%和57%的dT/dC(圖13和15)。在3.9、1.3和0.13nmol/kg時其分別與長骨中的腫瘤消退和5/9CR 3/9PR、6/10CR 1/10PR和7/8CR相關(圖14和16)。
DART 3.9,1.3和0.13nmol/kg/天CIP4-14但非0.013nmol/kg/天抑制全身腫瘤生長，分別具有21%、5%、21%和46%的dT/dC(圖13)，在長骨中以3.9、1.3和0.13nmol/kg誘導腫瘤消退，分別具有3/9 CR 3/9PR；8/9CR和4/8CR 2/8PR(圖14)。
完整的人CODV-Fab“hz20G6xhz7G3”1.3nmol/kg IV Qd4-13在全身抑制腫瘤生長，具有4%和5%的dT/dC(分別在第一和第二項研究中)，與長骨中的腫瘤消退相關(在第一和第二項研究中分別8/10CR 1/10PR vs 8/10 CR)。
<110> 法商賽諾菲公司(SANOFI)
<120> 特異性結合CD3和/或CD123之抗CD3抗體、抗CD123抗體和雙特異性抗體
<130>
<140> 105102149
<141> 2016-01-22
<150> EP15305077.8
<151> 2015-01-23
<160> 400
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 207
<212> PRT
<213> 人(Homo sapiens)
<400> 1
Figure 110113349-A0101-12-0245-579
Figure 110113349-A0101-12-0246-580
<210> 2
<211> 198
<212> PRT
<213> 食蟹猴(Macaca fascicularis)
<400> 2
Figure 110113349-A0101-12-0246-581
Figure 110113349-A0101-12-0247-582
<210> 3
<211> 340
<212> PRT
<213> 人(Homo sapiens)
<220>
<221> DOMAIN
<222> (1)..(104)
<223> 人CD3 ε的細胞外結構域
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (105)..(340)
<223> His-標簽FC-融合蛋白
<400> 3
Figure 110113349-A0101-12-0247-583
Figure 110113349-A0101-12-0248-584
<210> 4
<211> 333
<212> PRT
<213> 食蟹猴(Macaca fascicularis)
<220>
<221> 結構域
<222> (1)..(95)
<223> 食蟹猴(Macaca fascicularis)CD3 ε蛋白的細胞外結構域
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (96)..(333)
<223> Fc融合蛋白
<400> 4
Figure 110113349-A0101-12-0249-585
Figure 110113349-A0101-12-0250-586
<210> 5
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的”20G6-F3”抗CD3抗體的VH
<400> 5
Figure 110113349-A0101-12-0250-587
<210> 6
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的”20G6-F3”抗CD3抗體的CDR1-H
<400> 6
Figure 110113349-A0101-12-0251-591
<210> 7
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的”20G6-F3”抗CD3抗體的CDR2-H
<400> 7
Figure 110113349-A0101-12-0251-590
<210> 8
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的”20G6-F3”抗CD3抗體的CDR3-H
<400> 8
Figure 110113349-A0101-12-0251-589
<210> 9
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的”20G6-F3”抗CD3抗體的VL
<400> 9
Figure 110113349-A0101-12-0251-588
Figure 110113349-A0101-12-0252-592
<210> 10
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞20G6-F3〞,〞11D7-C3〞,〞13H2-C2〞,〞13C1-F6〞,〞1E6-C9,〞10F4-C10〞,〞18G9-H11〞,〞12G3-E8〞,〞5B1-G2〞,〞16F8-A7〞,〞11F9-F8〞,〞8C2-F7〞,〞20E5-F10”和”3H6-D2〞抗CD3抗體的CDR1-L
<400> 10
Figure 110113349-A0101-12-0252-593
<210> 11
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞20G6-F3〞,〞4B4-D7〞,〞11H3-E5〞,〞13H2-C2〞,〞13C1-F6〞,〞10F4-C10〞,〞4E7-C9〞,〞11F3-B9〞,〞12G3-E8〞,〞5B1-G2〞,〞6F4-D10〞,〞16F8-A7〞,〞20E5-F10”和”3H6-D2〞抗CD3抗體的CDR3-L
<400> 11
Figure 110113349-A0101-12-0252-594
<210> 12
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞4B4-D7〞抗CD3抗體的VH
<400> 12
Figure 110113349-A0101-12-0252-595
Figure 110113349-A0101-12-0253-598
<210> 13
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞20G6-F3〞,〞4B4-D7〞,〞11H3-E5〞,〞13H2-C2〞,〞13C1-F6〞,〞10F4-C10〞,〞4E7-C9〞,〞11F3-B9〞,〞12G3-E8〞,〞5B1-G2〞,〞16F8-A7〞,〞20E5-F10”和”3H6-D2〞抗CD3抗體的CDR3-L
<400> 13
Figure 110113349-A0101-12-0253-596
<210> 14
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞4B4-D7〞抗CD3抗體的CDR2-H
<400> 14
Figure 110113349-A0101-12-0253-597
<210> 15
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞4B4-D7〞抗CD3抗體的CDR3-H
<400> 15
Figure 110113349-A0101-12-0254-599
<210> 16
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞4B4-D7〞抗CD3抗體的VL
<400> 16
Figure 110113349-A0101-12-0254-600
<210> 17
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞4B4-D7〞,〞11H3-E5”和”11F3-B9〞抗CD3抗體的CDR1-L
<400> 17
Figure 110113349-A0101-12-0254-601
<210> 18
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞4E7-C9〞抗CD3抗體的VH
<400> 18
Figure 110113349-A0101-12-0255-603
<210> 19
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞4E7-C9〞,〞18F5-H10〞,〞20E5-F10”和〞3H6-D2〞抗CD3抗體的CDR2-H
<400> 19
Figure 110113349-A0101-12-0255-602
<210> 20
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞4E7-C9〞抗CD3抗體的CDR3-H
<400> 20
Figure 110113349-A0101-12-0256-604
<210> 21
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞4E7-C9〞抗CD3抗體的VL
<400> 21
Figure 110113349-A0101-12-0256-605
<210> 22
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞4E7-C9〞抗CD3抗體的CDR1-H
<400> 22
Figure 110113349-A0101-12-0256-606
<210> 23
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞18F5-H10〞抗CD3抗體的VH
<400> 23
Figure 110113349-A0101-12-0257-609
<210> 24
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞18F5-H10〞抗CD3抗體的CDR1-H
<400> 24
Figure 110113349-A0101-12-0257-608
<210> 25
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞18F5-H10〞抗CD3抗體的CDR3-H
<400> 25
Figure 110113349-A0101-12-0257-607
<210> 26
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞18F5-H10〞抗CD3抗體的VL
<400> 26
Figure 110113349-A0101-12-0258-610
<210> 27
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞18F5-H10〞抗CD3抗體的CDR1-L
<400> 27
Figure 110113349-A0101-12-0258-611
<210> 28
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞18F5-H10〞,〞11D7-C3〞,〞1E6-C9”和〞10E6-G6〞抗CD3抗體的CDR3-L
<400> 28
Figure 110113349-A0101-12-0258-612
<210> 29
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞12D2-E5〞抗CD3抗體的VH
<400> 29
Figure 110113349-A0101-12-0259-614
<210> 30
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞12D2-E5〞抗CD3抗體的CDR1-H
<400> 30
Figure 110113349-A0101-12-0259-613
<210> 31
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞12D2-E5〞抗CD3抗體的CDR2-H
<400> 31
Figure 110113349-A0101-12-0260-615
<210> 32
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞12D2-E5”和”3G5-E10〞抗CD3抗體的CDR3-H
<400> 32
Figure 110113349-A0101-12-0260-616
<210> 33
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞12D2-E5〞抗CD3抗體的VL
<400> 33
Figure 110113349-A0101-12-0260-617
<210> 34
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞12D2-E5〞抗CD3抗體的CDR1-H
<400> 34
Figure 110113349-A0101-12-0261-619
<210> 35
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞12D2-E5〞抗CD3抗體的CDR3-H
<400> 35
Figure 110113349-A0101-12-0261-620
<210> 36
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞11D7-C3〞抗CD3抗體的VH
<400> 36
Figure 110113349-A0101-12-0261-618
<210> 37
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞11D7-C3〞,〞11H3-E5〞,〞13H2-C2〞,〞13C1-F6〞,〞1E6-C9〞,〞10F4-C10〞,〞18G9-H11〞,〞11F3-B9〞,〞6F4-D10〞,〞16F8-A7〞,〞11F9-F8”和”20B5-F10〞抗CD3抗體的CDR2-H
<400> 37
Figure 110113349-A0101-12-0262-621
<210> 38
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞11D7-C3〞抗CD3抗體的CDR3-H
<400> 38
Figure 110113349-A0101-12-0262-622
<210> 39
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞11D7-C3〞抗CD3抗體的VL
<400> 39
Figure 110113349-A0101-12-0262-623
Figure 110113349-A0101-12-0263-624
<210> 40
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞11H3-E5〞抗CD3抗體的VH
<400> 40
Figure 110113349-A0101-12-0263-625
<210> 41
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞11H3-E5〞抗CD3抗體的CDR3-H
<400> 41
Figure 110113349-A0101-12-0263-626
<210> 42
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞11H3-E5〞抗CD3抗體的VL
<400> 42
Figure 110113349-A0101-12-0264-628
<210> 43
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞13H2-C2〞抗CD3抗體的VH
<400> 43
Figure 110113349-A0101-12-0264-627
Figure 110113349-A0101-12-0265-629
<210> 44
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞13H2-C2〞抗CD3抗體的CDR3-H
<400> 44
Figure 110113349-A0101-12-0265-631
<210> 45
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞13H2-C2〞抗CD3抗體的VL
<400> 45
Figure 110113349-A0101-12-0265-630
Figure 110113349-A0101-12-0266-634
<210> 46
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞13C1-F6”和”11F9-F8〞抗CD3抗體的VH
<400> 46
Figure 110113349-A0101-12-0266-633
<210> 47
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞13C1-F6〞,〞10E6-G6”和”11F9-F8〞抗CD3抗體的CDR3-H
<400> 47
Figure 110113349-A0101-12-0266-632
<210> 48
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞13H2-C2〞抗CD3抗體的VL
<400> 48
Figure 110113349-A0101-12-0267-635
<210> 49
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞18H11-F10〞抗CD3抗體的VH
<400> 49
Figure 110113349-A0101-12-0267-636
Figure 110113349-A0101-12-0268-640
<210> 50
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞18H11-F10〞抗CD3抗體的CDR1-H
<400> 50
Figure 110113349-A0101-12-0268-639
<210> 51
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞18H11-F10〞抗CD3抗體的CDR2-H
<400> 51
Figure 110113349-A0101-12-0268-638
<210> 52
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞18H11-F10〞抗CD3抗體的CDR3-H
<400> 52
Figure 110113349-A0101-12-0268-637
<210> 53
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞18H11-F10〞抗CD3抗體的VL
<400> 53
Figure 110113349-A0101-12-0269-641
<210> 54
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞18H11-F10〞抗CD3抗體的CDR1-L
<400> 54
Figure 110113349-A0101-12-0269-642
<210> 55
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞18H11-F10〞抗CD3抗體的CDR3-L
<400> 55
Figure 110113349-A0101-12-0269-643
<210> 56
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞1E6-C9〞抗CD3抗體的VH
<400> 56
Figure 110113349-A0101-12-0270-646
<210> 57
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞1E6-C9〞抗CD3抗體的CDR1-H
<400> 57
Figure 110113349-A0101-12-0270-645
<210> 58
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞1E6-C9〞抗CD3抗體的CDR3-H
<400> 58
Figure 110113349-A0101-12-0270-644
<210> 59
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞1E6-C9〞抗CD3抗體的VL
<400> 59
Figure 110113349-A0101-12-0271-647
<210> 60
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞10F4-C10〞抗CD3抗體的VH
<400> 60
Figure 110113349-A0101-12-0271-648
Figure 110113349-A0101-12-0272-650
<210> 61
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞10F4-C10〞抗CD3抗體的CDR3-H
<400> 61
Figure 110113349-A0101-12-0272-651
<210> 62
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞10F4-C10〞抗CD3抗體的VL
<400> 62
Figure 110113349-A0101-12-0272-649
<210> 63
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞10E6-G6〞抗CD3抗體的VH
<400> 63
Figure 110113349-A0101-12-0273-652
<210> 64
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞10E6-G6〞抗CD3抗體的CDR1-H
<400> 64
Figure 110113349-A0101-12-0273-653
<210> 65
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞10E6-G6〞抗CD3抗體的CDR3-H
<400> 65
Figure 110113349-A0101-12-0274-655
<210> 66
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞10E6-G6〞抗CD3抗體的VL
<400> 66
Figure 110113349-A0101-12-0274-656
<210> 67
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞10E6-G6〞抗CD3抗體的CDR1-L
<400> 67
Figure 110113349-A0101-12-0274-654
<210> 68
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞18G9-H11〞抗CD3抗體的VH
<400> 68
Figure 110113349-A0101-12-0275-657
<210> 69
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞18G9-H11〞抗CD3抗體的CDR3-H
<400> 69
Figure 110113349-A0101-12-0275-658
<210> 70
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞18G9-H11〞抗CD3抗體的VL
<400> 70
Figure 110113349-A0101-12-0275-659
Figure 110113349-A0101-12-0276-662
<210> 71
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞18G9-H11〞抗CD3抗體的CDR3-L
<400> 71
Figure 110113349-A0101-12-0276-661
<210> 72
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞11F3-B9〞抗CD3抗體的VH
<400> 72
Figure 110113349-A0101-12-0276-660
Figure 110113349-A0101-12-0277-663
<210> 73
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞11F3-B9〞抗CD3抗體的VL
<400> 73
Figure 110113349-A0101-12-0277-664
<210> 74
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞12G3-E8〞抗CD3抗體的VH
<400> 74
Figure 110113349-A0101-12-0278-667
<210> 75
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞18G9-H11〞抗CD3抗體的CDR1-H
<400> 75
Figure 110113349-A0101-12-0278-665
<210> 76
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞18G9-H11〞抗CD3抗體的CDR2-H
<400> 76
Figure 110113349-A0101-12-0278-666
<210> 77
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞18G9-H11〞抗CD3抗體的CDR3-H
<400> 77
Figure 110113349-A0101-12-0279-668
<210> 78
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞12G3-E8〞抗CD3抗體的VL
<400> 78
Figure 110113349-A0101-12-0279-669
<210> 79
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞5B1-G2〞抗CD3抗體的VH
<400> 79
Figure 110113349-A0101-12-0279-670
Figure 110113349-A0101-12-0280-673
<210> 80
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞5B1-G2〞抗CD3抗體的CDR1-H
<400> 80
Figure 110113349-A0101-12-0280-672
<210> 81
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞5B1-G2〞抗CD3抗體的CDR3-H
<400> 81
Figure 110113349-A0101-12-0280-671
<210> 82
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞5B1-G2〞抗CD3抗體的VL
<400> 82
Figure 110113349-A0101-12-0281-674
<210> 83
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞16F8-A7〞抗CD3抗體的部分VH
<400> 83
Figure 110113349-A0101-12-0281-675
Figure 110113349-A0101-12-0282-677
<210> 84
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞16F8-A7”和”11F3-B9〞抗CD3抗體的CDR3-H
<400> 84
Figure 110113349-A0101-12-0282-678
<210> 85
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞16F8-A7〞抗CD3抗體的VL
<400> 85
Figure 110113349-A0101-12-0282-676
<210> 86
<211> 171
<212> PRT
<213> 人(Homo sapiens)
<400> 86
Figure 110113349-A0101-12-0283-679
<210> 87
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞11F9-F8〞抗CD3抗體的VL
<400> 87
Figure 110113349-A0101-12-0283-680
Figure 110113349-A0101-12-0284-683
<210> 88
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞11F9-F8〞抗CD3抗體的CDR3-L
<400> 88
Figure 110113349-A0101-12-0284-682
<210> 89
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞3G5-E10〞抗CD3抗體的VH
<400> 89
Figure 110113349-A0101-12-0284-681
Figure 110113349-A0101-12-0285-684
<210> 90
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞3G5-E10〞抗CD3抗體的CDR1-H
<400> 90
Figure 110113349-A0101-12-0285-687
<210> 91
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞3G5-E10〞抗CD3抗體的CDR2-H
<400> 91
Figure 110113349-A0101-12-0285-686
<210> 92
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞3G5-E10〞抗CD3抗體的VL
<400> 92
Figure 110113349-A0101-12-0285-685
Figure 110113349-A0101-12-0286-688
<210> 93
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞3G5-E10〞抗CD3抗體的CDR1-L
<400> 93
Figure 110113349-A0101-12-0286-689
<210> 94
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞3G5-E10〞抗CD3抗體的CDR3-L
<400> 94
Figure 110113349-A0101-12-0286-690
<210> 95
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞9D7-F3〞抗CD3抗體的VH
<400> 95
Figure 110113349-A0101-12-0286-691
Figure 110113349-A0101-12-0287-694
<210> 96
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞9D7-F3〞抗CD3抗體的CDR1-H
<400> 96
Figure 110113349-A0101-12-0287-695
<210> 97
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞9D7-F2〞抗CD3抗體的CDR2-H
<400> 97
Figure 110113349-A0101-12-0287-693
<210> 98
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞9D7-F3〞抗CD3抗體的CDR3-H
<400> 98
Figure 110113349-A0101-12-0287-692
<210> 99
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞9D7-F3〞抗CD3抗體的VL
<400> 99
Figure 110113349-A0101-12-0288-698
<210> 100
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞9D7-F3”和”6C9-C9〞抗CD3抗體的CDR1-L
<400> 100
Figure 110113349-A0101-12-0288-697
<210> 101
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞9D7-F3〞抗CD3抗體的CDR3-L
<400> 101
Figure 110113349-A0101-12-0288-696
<210> 102
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞8C2-F7〞抗CD3抗體的VH
<400> 102
Figure 110113349-A0101-12-0289-699
<210> 103
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞8C2-F7〞抗CD3抗體的CDR1-H
<400> 103
Figure 110113349-A0101-12-0289-700
<210> 104
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞8C2-F7〞抗CD3抗體的CDR2-H
<400> 104
Figure 110113349-A0101-12-0290-703
<210> 105
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞8C2-F7〞抗CD3抗體的CDR3-H
<400> 105
Figure 110113349-A0101-12-0290-702
<210> 106
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞8C2-F7〞抗CD3抗體的VL
<400> 106
Figure 110113349-A0101-12-0290-701
<210> 107
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞20E5-F10〞抗CD3抗體的VH
<400> 107
Figure 110113349-A0101-12-0291-704
<210> 108
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞20E5-F10〞抗CD3抗體的CDR3-H
<400> 108
Figure 110113349-A0101-12-0291-705
<210> 109
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞20E5-F10〞抗CD3抗體的VL
<400> 109
Figure 110113349-A0101-12-0291-706
Figure 110113349-A0101-12-0292-707
<210> 110
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞20B5-F10〞抗CD3抗體的VH
<400> 110
Figure 110113349-A0101-12-0292-708
Figure 110113349-A0101-12-0293-710
<210> 111
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞20B5-F10〞抗CD3抗體的CDR3-H
<400> 111
Figure 110113349-A0101-12-0293-711
<210> 112
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞20B5-F10〞抗CD3抗體的VL
<400> 112
Figure 110113349-A0101-12-0293-709
<210> 113
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞20B5-F10〞抗CD3抗體的CDR1-L
<400> 113
Figure 110113349-A0101-12-0294-712
<210> 114
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞20B5-F10〞抗CD3抗體的CDR3-L
<400> 114
Figure 110113349-A0101-12-0294-714
<210> 115
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞6C9-C9〞抗CD3抗體的VH
<400> 115
Figure 110113349-A0101-12-0294-713
<210> 116
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞6C9-C9〞抗CD3抗體的CDR1-H
<400> 116
Figure 110113349-A0101-12-0295-715
<210> 117
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞6C9-C9〞抗CD2抗體的CDR2-H
<400> 117
Figure 110113349-A0101-12-0295-716
<210> 118
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞6C9-C9〞抗CD3抗體的CDR3-H
<400> 118
Figure 110113349-A0101-12-0295-718
<210> 119
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞6C9-C9〞抗CD3抗體的VL
<400> 119
Figure 110113349-A0101-12-0295-717
Figure 110113349-A0101-12-0296-719
<210> 120
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞6C9-C9〞抗CD3抗體的CDR3-L
<400> 120
Figure 110113349-A0101-12-0296-720
<210> 121
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞3E8-G1〞抗CD3抗體的VH
<400> 121
Figure 110113349-A0101-12-0296-721
Figure 110113349-A0101-12-0297-722
<210> 122
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞3E8-G1〞抗CD3抗體的CDR1-H
<400> 122
Figure 110113349-A0101-12-0297-723
<210> 123
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞3E8-G1〞抗CD3抗體的CDR2-H
<400> 123
Figure 110113349-A0101-12-0297-724
<210> 124
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞3E8-G1”抗CD3抗體的CDR3-H
<400> 124
Figure 110113349-A0101-12-0297-725
<210> 125
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞3E8-G1”抗CD3抗體的VL
<400> 125
Figure 110113349-A0101-12-0297-726
Figure 110113349-A0101-12-0298-727
<210> 126
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞3E8-G1”抗CD3抗體的CDR1-L
<400> 126
Figure 110113349-A0101-12-0298-730
<210> 127
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞3E8-G1”抗CD3抗體的CDR3-L
<400> 127
Figure 110113349-A0101-12-0298-728
<210> 128
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞3H6-D2”抗CD3抗體的VH
<400> 128
Figure 110113349-A0101-12-0298-729
Figure 110113349-A0101-12-0299-731
<210> 129
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞3H6-D2”抗CD3抗體的CDR3-H
<400> 129
Figure 110113349-A0101-12-0299-732
<210> 130
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞3H6-D2”抗CD3抗體的VL
<400> 130
Figure 110113349-A0101-12-0299-733
Figure 110113349-A0101-12-0300-734
<210> 131
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞8H2”抗CD3抗體的VH
<400> 131
Figure 110113349-A0101-12-0300-735
<210> 132
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞8H2”抗CD3抗體的VL
<400> 132
Figure 110113349-A0101-12-0301-738
<210> 133
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞8H2”抗CD3抗體的CDR1-L
<400> 133
Figure 110113349-A0101-12-0301-737
<210> 134
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞8H2”抗CD3抗體的CDR3-L
<400> 134
Figure 110113349-A0101-12-0301-736
<210> 135
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化〞20G6”抗CD3抗體的VH1a
<400> 135
Figure 110113349-A0101-12-0302-739
<210> 136
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化〞20G6”抗CD3抗體的VH1b
<400> 136
Figure 110113349-A0101-12-0302-740
Figure 110113349-A0101-12-0303-741
<210> 137
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化〞20G6”抗CD3抗體的VH1c
<400> 137
Figure 110113349-A0101-12-0303-742
<210> 138
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化〞20G6”抗CD3抗體的VH1d
<400> 138
Figure 110113349-A0101-12-0304-744
<210> 139
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化〞20G6”抗CD3抗體的VL1a
<400> 139
Figure 110113349-A0101-12-0304-743
Figure 110113349-A0101-12-0305-745
<210> 140
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化〞20G6”抗CD3抗體的VL1b
<400> 140
Figure 110113349-A0101-12-0305-746
<210> 141
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化〞20G6”抗CD3抗體的VL1c
<400> 141
Figure 110113349-A0101-12-0305-747
Figure 110113349-A0101-12-0306-748
<210> 142
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化〞20G6〞抗CD3抗體的VL1c變體的CDR1-L
<400> 142
Figure 110113349-A0101-12-0306-749
<210> 143
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化〞20G6”抗CD3抗體的VL1d
<400> 143
Figure 110113349-A0101-12-0306-750
Figure 110113349-A0101-12-0307-751
<210> 144
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化〞20G6”抗CD3抗體的VH2a
<400> 144
Figure 110113349-A0101-12-0307-752
<210> 145
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化〞20G6”抗CD3抗體的VH2b
<400> 145
Figure 110113349-A0101-12-0307-753
Figure 110113349-A0101-12-0308-755
<210> 146
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化〞20G6”抗CD3抗體的VH2c
<400> 146
Figure 110113349-A0101-12-0308-754
Figure 110113349-A0101-12-0309-756
<210> 147
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化〞20G6”抗CD3抗體的VH2d
<400> 147
Figure 110113349-A0101-12-0309-757
<210> 148
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化〞20G6”抗CD3抗體的VL2a
<400> 148
Figure 110113349-A0101-12-0309-758
Figure 110113349-A0101-12-0310-760
<210> 149
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化〞20G6”抗CD3抗體的VL2b
<400> 149
Figure 110113349-A0101-12-0310-759
<210> 150
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化〞20G6”抗CD3抗體的VL2c
<400> 150
Figure 110113349-A0101-12-0311-761
<210> 151
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化〞20G6”抗CD3抗體的VL2d
<400> 151
Figure 110113349-A0101-12-0311-762
Figure 110113349-A0101-12-0312-765
<210> 152
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化〞20G6”抗CD3抗體的VH3a
<400> 152
Figure 110113349-A0101-12-0312-763
<210> 153
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化〞20G6”抗CD3抗體的VH3b
<400> 153
Figure 110113349-A0101-12-0312-764
Figure 110113349-A0101-12-0313-766
<210> 154
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化〞20G6”抗CD3抗體的VL3a
<400> 154
Figure 110113349-A0101-12-0313-767
Figure 110113349-A0101-12-0314-769
<210> 155
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化〞20G6”抗CD3抗體的VL3b
<400> 155
Figure 110113349-A0101-12-0314-770
<210> 156
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化〞20G6”抗CD3抗體的VL3c
<400> 156
Figure 110113349-A0101-12-0314-768
Figure 110113349-A0101-12-0315-771
<210> 157
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化〞20G6”抗CD3抗體的VL3d
<400> 157
Figure 110113349-A0101-12-0315-772
<210> 158
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化〞4B4”抗CD3抗體的VL1A
<400> 158
Figure 110113349-A0101-12-0316-774
<210> 159
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化〞4B4”抗CD3抗體的VL1B
<400> 159
Figure 110113349-A0101-12-0316-773
<210> 160
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化〞4B4”抗CD3抗體的VL2A
<400> 160
Figure 110113349-A0101-12-0317-775
<210> 161
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化〞4B4”抗CD3抗體的VL2B
<400> 161
Figure 110113349-A0101-12-0317-776
Figure 110113349-A0101-12-0318-779
<210> 162
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化〞4B4”抗CD3抗體的VL1Cmodif1
<400> 162
Figure 110113349-A0101-12-0318-778
<210> 163
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化〞4B4”抗CD3抗體的VL1Cmodif2
<400> 163
Figure 110113349-A0101-12-0318-777
Figure 110113349-A0101-12-0319-780
<210> 164
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化〞4B4”抗CD3抗體的VL1Cmodif3
<400> 164
Figure 110113349-A0101-12-0319-781
<210> 165
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化〞4B4”抗CD3抗體的VL1Amodiflof
<400> 165
Figure 110113349-A0101-12-0320-783
<210> 166
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化〞4B4”抗CD3抗體的VL1Amodif2of
<400> 166
Figure 110113349-A0101-12-0320-782
Figure 110113349-A0101-12-0321-784
<210> 167
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化〞4B4”抗CD3抗體的VL1Amodif3
<400> 167
Figure 110113349-A0101-12-0321-785
<210> 168
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化〞4B4”抗CD3抗體的VL2C
<400> 168
Figure 110113349-A0101-12-0321-786
Figure 110113349-A0101-12-0322-787
<210> 169
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化〞4B4”抗CD3抗體的VL2D
<400> 169
Figure 110113349-A0101-12-0322-788
<210> 170
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化〞4B4”抗CD3抗體的VL2F
<400> 170
Figure 110113349-A0101-12-0323-789
<210> 171
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化〞4B4”抗CD3抗體的VH1A
<400> 171
Figure 110113349-A0101-12-0323-790
Figure 110113349-A0101-12-0324-791
<210> 172
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化〞4B4”抗CD3抗體的VH1B
<400> 172
Figure 110113349-A0101-12-0324-792
<210> 173
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化〞4B4”抗CD3抗體的VH2A
<400> 173
Figure 110113349-A0101-12-0325-794
<210> 174
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化〞4B4”抗CD3抗體的VH2B
<400> 174
Figure 110113349-A0101-12-0325-793
Figure 110113349-A0101-12-0326-795
<210> 175
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化〞4B4”抗CD3抗體的VH6Bmodif1
<400> 175
Figure 110113349-A0101-12-0326-796
<210> 176
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化〞4B4”抗CD3抗體的VH6Bmodif2
<400> 176
Figure 110113349-A0101-12-0327-901
<210> 177
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化〞4B4”抗CD3抗體的VH6Amodif1
<400> 177
Figure 110113349-A0101-12-0327-902
Figure 110113349-A0101-12-0328-903
<210> 178
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化〞4B4”抗CD3抗體的VH6Amodif2
<400> 178
Figure 110113349-A0101-12-0328-904
<210> 179
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化〞4B4”抗CD3抗體的VH6Amodif3
<400> 179
Figure 110113349-A0101-12-0328-905
Figure 110113349-A0101-12-0329-906
<210> 180
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化〞4B4”抗CD3抗體的VH6C
<400> 180
Figure 110113349-A0101-12-0329-907
Figure 110113349-A0101-12-0330-908
<210> 181
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化〞4B4”抗CD3抗體的VH6D
<400> 181
Figure 110113349-A0101-12-0330-909
<210> 182
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化〞4B4”抗CD3抗體的VL〞D7-VK3mut〞
<400> 182
Figure 110113349-A0101-12-0330-910
Figure 110113349-A0101-12-0331-911
<210> 183
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化〞4B4”抗CD3抗體的D7-VH1mut
<400> 183
Figure 110113349-A0101-12-0331-912
<210> 184
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化〞4B4”抗CD3抗體的VL1B,VL2B,VL1Cmofif3和VL2F變體的CDR1-L
<400> 184
Figure 110113349-A0101-12-0332-913
<210> 185
<211> 182
<212> PRT
<213> 人(Homo sapiens)
<400> 185
Figure 110113349-A0101-12-0332-914
Figure 110113349-A0101-12-0333-915
<210> 186
<211> 249
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 〞20G6-F3〞 Fab的重鏈序列
<400> 186
Figure 110113349-A0101-12-0333-916
Figure 110113349-A0101-12-0334-917
<210> 187
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 〞20G6-F3〞 Fab的輕鏈序列
<400> 187
Figure 110113349-A0101-12-0334-918
Figure 110113349-A0101-12-0335-920
<210> 188
<211> 250
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 〞4E7-C9〞 Fab的重鏈序列
<400> 188
Figure 110113349-A0101-12-0335-919
Figure 110113349-A0101-12-0336-921
<210> 189
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 〞4E7-C9〞 Fab的輕鏈序列
<400> 189
Figure 110113349-A0101-12-0336-922
Figure 110113349-A0101-12-0337-924
<210> 190
<211> 249
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 〞4B4-D7〞 Fab的重鏈序列
<400> 190
Figure 110113349-A0101-12-0337-923
Figure 110113349-A0101-12-0338-925
<210> 191
<211> 218
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 〞4B4-D7〞 Fab的輕鏈序列
<400> 191
Figure 110113349-A0101-12-0338-926
Figure 110113349-A0101-12-0339-927
<210> 192
<211> 250
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 〞18F5-H10〞 Fab的重鏈序列
<400> 192
Figure 110113349-A0101-12-0339-928
Figure 110113349-A0101-12-0340-929
<210> 193
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 〞18F5-H10〞 Fab的輕鏈序列
<400> 193
Figure 110113349-A0101-12-0341-930
<210> 194
<211> 378
<212> PRT
<213> 人(Homo sapiens)
<400> 194
Figure 110113349-A0101-12-0341-931
Figure 110113349-A0101-12-0342-932
Figure 110113349-A0101-12-0343-933
<210> 195
<211> 378
<212> PRT
<213> 食蟹猴(Macaca fascicularis)
<400> 195
Figure 110113349-A0101-12-0343-934
Figure 110113349-A0101-12-0344-935
Figure 110113349-A0101-12-0345-936
<210> 196
<211> 523
<212> PRT
<213> 人(Homo sapiens)
<220>
<221> 結構域
<222> (1)..(284)
<223> 人CD123的細胞外結構域
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (285)..(519)
<223> Strep-II標簽Fc-融合蛋白
<400> 196
Figure 110113349-A0101-12-0345-937
Figure 110113349-A0101-12-0346-938
Figure 110113349-A0101-12-0347-939
<210> 197
<211> 519
<212> PRT
<213> 食蟹猴(Macaca fascicularis)
<220>
<221> 結構域
<222> (1)..(284)
<223> 食蟹猴(Macaca fascicularis)CD123的細胞外結構域
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (285)..(516)
<223> Strep-II標簽Fc-融合蛋白
<400> 197
Figure 110113349-A0101-12-0347-940
Figure 110113349-A0101-12-0348-941
Figure 110113349-A0101-12-0349-942
<210> 198
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞1E1-G5〞抗-CD123抗體的VH
<400> 198
Figure 110113349-A0101-12-0349-943
Figure 110113349-A0101-12-0350-944
<210> 199
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞1E1-G5”和”8B11-B7〞抗-CD123抗體的CDR1-H
<400> 199
Figure 110113349-A0101-12-0350-945
<210> 200
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞1E1-G5”和”6D6-B8〞抗-CD123抗體的CDR2-H
<400> 200
Figure 110113349-A0101-12-0350-946
<210> 201
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞1E1-G5〞,〞6D6-B8〞,〞8B11-B7”和〞9F6-G3〞抗-CD123抗體的CDR3-H
<400> 201
Figure 110113349-A0101-12-0351-948
<210> 202
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞1E1-G5〞抗-CD123抗體的VL
<400> 202
Figure 110113349-A0101-12-0351-949
<210> 203
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞1E1-G5〞抗-CD123抗體的CDR1-L
<400> 203
Figure 110113349-A0101-12-0351-947
<210> 204
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞1E1-G5〞抗-CD123抗體的CDR1-L
<400> 204
Figure 110113349-A0101-12-0352-950
<210> 205
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞2B8-F3〞抗-CD123抗體的VH
<400> 205
Figure 110113349-A0101-12-0352-951
<210> 206
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞2B8-F3〞抗-CD123抗體的CDR1-H
<400> 206
Figure 110113349-A0101-12-0352-952
Figure 110113349-A0101-12-0353-954
<210> 207
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞2B8-F3〞抗-CD123抗體的CDR2-H
<400> 207
Figure 110113349-A0101-12-0353-955
<210> 208
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞2B8-F3〞抗-CD123抗體的CDR3-H
<400> 208
Figure 110113349-A0101-12-0353-956
<210> 209
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞2B8-F3〞抗-CD123抗體的VL
<400> 209
Figure 110113349-A0101-12-0353-953
Figure 110113349-A0101-12-0354-957
<210> 210
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞2B8-F3〞抗-CD123抗體的CDR1-L
<400> 210
Figure 110113349-A0101-12-0354-958
<210> 211
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞2B8-F3〞抗-CD123抗體的CDR3-L
<400> 211
Figure 110113349-A0101-12-0354-959
<210> 212
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞2F8-D6〞抗-CD123抗體的VH
<400> 212
Figure 110113349-A0101-12-0354-960
Figure 110113349-A0101-12-0355-964
<210> 213
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞2F8-D6〞抗-CD123抗體的CDR1-H
<400> 213
Figure 110113349-A0101-12-0355-963
<210> 214
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞2F8-D6〞抗-CD123抗體的CDR2-H
<400> 214
Figure 110113349-A0101-12-0355-962
<210> 215
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞2F8-D6〞抗-CD123抗體的CDR3-H
<400> 215
Figure 110113349-A0101-12-0355-961
<210> 216
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞2F8-D6〞抗-CD123抗體的VL
<400> 216
Figure 110113349-A0101-12-0356-965
<210> 217
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞2F8-D6〞抗-CD123抗體的CDR1-L
<400> 217
Figure 110113349-A0101-12-0356-967
<210> 218
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞2F8-D6〞抗-CD123抗體的CDR3-L
<400> 218
Figure 110113349-A0101-12-0356-966
<210> 219
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞3B10-E6〞抗-CD123抗體的VH
<400> 219
Figure 110113349-A0101-12-0357-970
<210> 220
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞3B10-E6〞抗-CD123抗體的CDR1-H
<400> 220
Figure 110113349-A0101-12-0357-969
<210> 221
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞3B10-E6〞抗-CD123抗體的CDR2-H
<400> 221
Figure 110113349-A0101-12-0357-968
<210> 222
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞3B10-E6〞抗-CD123抗體的CDR3-H
<400> 222
Figure 110113349-A0101-12-0358-971
<210> 223
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞3B10-E6〞抗-CD123抗體的VL
<400> 223
Figure 110113349-A0101-12-0358-972
<210> 224
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞3B10-E6〞抗-CD123抗體的CDR1-L
<400> 224
Figure 110113349-A0101-12-0359-974
<210> 225
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞3B10-E6〞抗-CD123抗體的CDR3-L
<400> 225
Figure 110113349-A0101-12-0359-975
<210> 226
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞3E3-D3〞抗-CD123抗體的VH
<400> 226
Figure 110113349-A0101-12-0359-973
Figure 110113349-A0101-12-0360-976
<210> 227
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞3E3-D3〞抗-CD123抗體的CDR1-H
<400> 227
Figure 110113349-A0101-12-0360-977
<210> 228
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞3E3-D3〞抗-CD123抗體的CDR2-H
<400> 228
Figure 110113349-A0101-12-0360-980
<210> 229
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞3E3-D3〞抗-CD123抗體的CDR3-H
<400> 229
Figure 110113349-A0101-12-0360-978
<210> 230
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞3E3-D3〞抗-CD123抗體的VL
<400> 230
Figure 110113349-A0101-12-0360-979
Figure 110113349-A0101-12-0361-982
<210> 231
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞3E3-D3〞抗-CD123抗體的CDR1-L
<400> 231
Figure 110113349-A0101-12-0361-983
<210> 232
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞3E3-D3〞抗-CD123抗體的CDR3-L
<400> 232
Figure 110113349-A0101-12-0361-984
<210> 233
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞5A5-B4〞抗-CD123抗體的VH
<400> 233
Figure 110113349-A0101-12-0361-981
Figure 110113349-A0101-12-0362-985
<210> 234
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞5A5-B4〞抗-CD123抗體的CDR1-H
<400> 234
Figure 110113349-A0101-12-0362-986
<210> 235
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞5A5-B4〞抗-CD123抗體的CDR2-H
<400> 235
Figure 110113349-A0101-12-0362-987
<210> 236
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞5A5-B4〞抗-CD123抗體的CDR3-H
<400> 236
Figure 110113349-A0101-12-0362-988
Figure 110113349-A0101-12-0363-990
<210> 237
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞5A5-B4〞抗-CD123抗體的VL
<400> 237
Figure 110113349-A0101-12-0363-991
<210> 238
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞5A5-B4〞抗-CD123抗體的CDR1-L
<400> 238
Figure 110113349-A0101-12-0363-989
<210> 239
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞5A5-B4〞抗-CD123抗體的CDR3-L
<400> 239
Figure 110113349-A0101-12-0364-992
<210> 240
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞6B10-E4〞抗-CD123抗體的VH
<400> 240
Figure 110113349-A0101-12-0364-993
<210> 241
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞6B10-E4〞抗-CD123抗體的CDR1-H
<400> 241
Figure 110113349-A0101-12-0364-994
<210> 242
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞6B10-E4〞抗-CD123抗體的CDR2-H
<400> 242
Figure 110113349-A0101-12-0365-996
<210> 243
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞6B10-E4〞抗-CD123抗體的CDR3-H
<400> 243
Figure 110113349-A0101-12-0365-997
<210> 244
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞6B10-E4〞抗-CD123抗體的VL
<400> 244
Figure 110113349-A0101-12-0365-995
<210> 245
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞6B10-E4〞抗-CD123抗體的CDR1-L
<400> 245
Figure 110113349-A0101-12-0366-998
<210> 246
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞6B10-E4〞抗-CD123抗體的CDR3-L
<400> 246
Figure 110113349-A0101-12-0366-1000
<210> 247
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞6C10-C4〞抗-CD123抗體的VH
<400> 247
Figure 110113349-A0101-12-0366-999
Figure 110113349-A0101-12-0367-1004
<210> 248
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞6C10-C4〞抗-CD123抗體的CDR1-H
<400> 248
Figure 110113349-A0101-12-0367-1005
<210> 249
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞6C10-C4〞抗-CD123抗體的CDR2-H
<400> 249
Figure 110113349-A0101-12-0367-1003
<210> 250
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞6C10-C4〞抗-CD123抗體的CDR3-H
<400> 250
Figure 110113349-A0101-12-0367-1002
<210> 251
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞6C10-C4”和”9B8-G6〞抗-CD123抗體的VL
<400> 251
Figure 110113349-A0101-12-0367-1001
Figure 110113349-A0101-12-0368-1006
<210> 252
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞6C10-C4”和”9B8-G6〞抗-CD123抗體的CDR1-L
<400> 252
Figure 110113349-A0101-12-0368-1007
<210> 253
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞6C10-C4〞,〞9B8-G6”和”9D7-G3〞抗-CD123抗體的CDR3-L
<400> 253
Figure 110113349-A0101-12-0368-1008
<210> 254
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞6D6-B8〞抗-CD123抗體的VH
<400> 254
Figure 110113349-A0101-12-0369-1009
<210> 255
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞6D6-B8〞抗-CD123抗體的CDR1-H
<400> 255
Figure 110113349-A0101-12-0369-1010
<210> 256
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞6D6-B8〞抗-CD123抗體的VL
<400> 256
Figure 110113349-A0101-12-0369-1011
Figure 110113349-A0101-12-0370-1015
<210> 257
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞6D6-B8〞抗-CD123抗體的CDR1-L
<400> 257
Figure 110113349-A0101-12-0370-1014
<210> 258
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞6D6-B8〞抗-CD123抗體的CDR3-L
<400> 258
Figure 110113349-A0101-12-0370-1013
<210> 259
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞8B11-B7〞抗-CD123抗體的VH
<400> 259
Figure 110113349-A0101-12-0370-1012
Figure 110113349-A0101-12-0371-1016
<210> 260
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞8B11-B7〞抗-CD123抗體的CDR2-H
<400> 260
Figure 110113349-A0101-12-0371-1017
<210> 261
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞8B11-B7〞抗-CD123抗體的VL
<400> 261
Figure 110113349-A0101-12-0371-1018
Figure 110113349-A0101-12-0372-1021
<210> 262
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞8B11-B7〞抗-CD123抗體的CDR1-L
<400> 262
Figure 110113349-A0101-12-0372-1022
<210> 263
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞8B11-B7〞抗-CD123抗體的CDR3-L
<400> 263
Figure 110113349-A0101-12-0372-1019
<210> 264
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞9B8-G6〞抗-CD123抗體的VH
<400> 264
Figure 110113349-A0101-12-0372-1020
Figure 110113349-A0101-12-0373-1023
<210> 265
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞9B8-G6”和”9D7-C8〞抗-CD123抗體的CDR1-H
<400> 265
Figure 110113349-A0101-12-0373-1024
<210> 266
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞9B8-G6”和”9D7-C8〞抗-CD123抗體的CDR2-H
<400> 266
Figure 110113349-A0101-12-0373-1025
<210> 267
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞9B8-G6〞抗-CD123抗體的CDR3-H
<400> 267
Figure 110113349-A0101-12-0373-1026
<210> 268
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞9D7-C8〞抗-CD123抗體的VH
<400> 268
Figure 110113349-A0101-12-0374-1028
<210> 269
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞9D7-C8〞抗-CD123抗體的CDR3-H
<400> 269
Figure 110113349-A0101-12-0374-1027
<210> 270
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞9D7-C8〞抗-CD123抗體的VL
<400> 270
Figure 110113349-A0101-12-0375-1029
<210> 271
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞9D7-C8〞抗-CD123抗體的CDR1-L
<400> 271
Figure 110113349-A0101-12-0375-1031
<210> 272
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞9F6-G3〞抗-CD123抗體的VH
<400> 272
Figure 110113349-A0101-12-0375-1030
Figure 110113349-A0101-12-0376-1034
<210> 273
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞9F6-G3〞抗-CD123抗體的CDR1-H
<400> 273
Figure 110113349-A0101-12-0376-1033
<210> 274
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞9F6-G3〞抗-CD123抗體的CDR2-H
<400> 274
Figure 110113349-A0101-12-0376-1032
<210> 275
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞9F6-G3〞抗-CD123抗體的VL
<400> 275
Figure 110113349-A0101-12-0377-1035
<210> 276
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞9F6-G3〞抗-CD123抗體的CDR1-L
<400> 276
Figure 110113349-A0101-12-0377-1036
<210> 277
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化〞3E3〞抗-CD123抗體的VH_G45A
<400> 277
Figure 110113349-A0101-12-0377-1037
Figure 110113349-A0101-12-0378-1038
<210> 278
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 〞3E3〞抗-CD123抗體的VHmDG變體
<400> 278
Figure 110113349-A0101-12-0378-1039
<210> 279
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 〞3E3”和CDR2H人源化〞3E3〞抗-CD123抗體的VHmDG變體的CDR2-H
<400> 279
Figure 110113349-A0101-12-0379-1040
<210> 280
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化〞3E3〞抗-CD123抗體的VH1A
<400> 280
Figure 110113349-A0101-12-0379-1041
<210> 281
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化〞3E3〞抗-CD123抗體的VH1B
<400> 281
Figure 110113349-A0101-12-0380-1043
<210> 282
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化〞3E3〞抗-CD123抗體的VH1C
<400> 282
Figure 110113349-A0101-12-0380-1042
Figure 110113349-A0101-12-0381-1044
<210> 283
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化〞3E3〞抗-CD123抗體的VH1D
<400> 283
Figure 110113349-A0101-12-0381-1045
<210> 284
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化〞3E3〞抗-CD123抗體的VH1E
<400> 284
Figure 110113349-A0101-12-0382-1047
<210> 285
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化〞3E3〞抗-CD123抗體的VH1F
<400> 285
Figure 110113349-A0101-12-0382-1046
Figure 110113349-A0101-12-0383-1048
<210> 286
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化〞3E3〞抗-CD123抗體的VH1G
<400> 286
Figure 110113349-A0101-12-0383-1049
<210> 287
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化〞3E3〞抗-CD123抗體的VH1Fm1
<400> 287
Figure 110113349-A0101-12-0383-1050
Figure 110113349-A0101-12-0384-1052
<210> 288
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化〞3E3〞抗-CD123抗體的VH1Fm2
<400> 288
Figure 110113349-A0101-12-0384-1051
Figure 110113349-A0101-12-0385-1053
<210> 289
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化〞3E3〞抗-CD123抗體的VH1Fm2DG
<400> 289
Figure 110113349-A0101-12-0385-1054
<210> 290
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化〞3E3〞抗-CD123抗體的VH1Dm1
<400> 290
Figure 110113349-A0101-12-0385-1055
Figure 110113349-A0101-12-0386-1057
<210> 291
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化〞3E3〞抗-CD123抗體的VH1Em1
<400> 291
Figure 110113349-A0101-12-0386-1056
Figure 110113349-A0101-12-0387-1058
<210> 292
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化〞3E3〞抗-CD123抗體的VL1A
<400> 292
Figure 110113349-A0101-12-0387-1059
<210> 293
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化〞3E3〞抗-CD123抗體的VL1B
<400> 293
Figure 110113349-A0101-12-0387-1060
Figure 110113349-A0101-12-0388-1061
<210> 294
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化〞3E3〞抗-CD123抗體的VL1C
<400> 294
Figure 110113349-A0101-12-0388-1062
<210> 295
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化〞3E3〞抗-CD123抗體的VL1D
<400> 295
Figure 110113349-A0101-12-0389-1063
<210> 296
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化〞3E3〞抗-CD123抗體的VL1E
<400> 296
Figure 110113349-A0101-12-0389-1064
Figure 110113349-A0101-12-0390-1065
<210> 297
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化〞3E3〞抗-CD123抗體的VL1F
<400> 297
Figure 110113349-A0101-12-0390-1066
<210> 298
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化〞3E3〞抗-CD123抗體的VL1G
<400> 298
Figure 110113349-A0101-12-0390-1067
Figure 110113349-A0101-12-0391-1068
<210> 299
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化〞3E3〞抗-CD123抗體的VL1Fm1
<400> 299
Figure 110113349-A0101-12-0391-1069
<210> 300
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化〞3E3〞抗-CD123抗體的VL1Fm2
<400> 300
Figure 110113349-A0101-12-0392-1070
<210> 301
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化〞3E3〞抗-CD123抗體的VH2A
<400> 301
Figure 110113349-A0101-12-0392-1071
Figure 110113349-A0101-12-0393-1072
<210> 302
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化〞3E3〞抗-CD123抗體的VH3A
<400> 302
Figure 110113349-A0101-12-0393-1073
<210> 303
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化〞3E3〞抗-CD123抗體的VL2A
<400> 303
Figure 110113349-A0101-12-0393-1074
Figure 110113349-A0101-12-0394-1076
<210> 304
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化〞3E3〞抗-CD123抗體的VL2Am1
<400> 304
Figure 110113349-A0101-12-0394-1075
<210> 305
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化〞3E3〞抗-CD123抗體的VL2Am2
<400> 305
Figure 110113349-A0101-12-0395-1077
<210> 306
<211> 344
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的CODV-Fab〞7G3 x 20G6〞抗體樣結合蛋白的多肽I
<400> 306
Figure 110113349-A0101-12-0395-1078
Figure 110113349-A0101-12-0396-1079
Figure 110113349-A0101-12-0397-1080
<210> 307
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的CODV-Fab〞7G3x20G6〞,〞7G3x4E7〞,〞7G3x4B4〞,〞7G3x18F5〞,〞hz20G6x7G3〞,〞7G3xhz4B4〞,〞hz4B4x3E3”和CODV-Fab〞hz20G6x7G3-TL4〞抗體樣結合蛋白的L1
<400> 307
Figure 110113349-A0101-12-0397-1081
<210> 308
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的CODV-Fab〞7G3x20G6〞,〞7G3x4E7〞,〞7G3x4B4〞,〞7G3x18F5〞,〞hz20G6x7G3〞,〞7G3xhz4B4”和CODV-Fab〞hz20G6x7G3-TL4〞抗體樣結合蛋白的VL1或VL2結構域
<400> 308
Figure 110113349-A0101-12-0397-1082
<210> 309
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的CODV-Fab〞7G3x20G6〞,〞7G3x4E7〞,〞7G3x4B4〞,〞7G3x18F5〞,〞hz20G6x7G3〞,〞7G3xhz4B4〞,〞hz4B4x3E3”和CODV-Fab〞hz20G6x7G3-TL4〞抗體樣結合蛋白的L2
<400> 309
Figure 110113349-A0101-12-0398-1083
<210> 310
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的CODV-Fab〞7G3x20G6〞,〞7G3x4E7〞,〞7G3x4B4〞,〞7G3x18F5〞,〞hz20G6x7G3〞,〞7G3xhz4B4”和”hz4B4x3E3〞抗體樣結合蛋白的CL
<400> 310
Figure 110113349-A0101-12-0398-1084
<210> 311
<211> 342
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的CODV-Fab〞7G3 x 20G6〞 抗體樣結合蛋白的多肽II
<400> 311
Figure 110113349-A0101-12-0399-1085
Figure 110113349-A0101-12-0400-1086
<210> 312
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的CODV-Fab〞7G3x20G6〞,〞7G3x4E7〞,〞7G3x4B4〞,〞7G3x18F5〞,〞hz20G6x7G3〞,〞7G3xhz4B4”和CODV-Fab〞hz20G6x7G3-TL4〞抗體樣結合蛋白的VH1或VH2結構域
<400> 312
Figure 110113349-A0101-12-0400-1087
Figure 110113349-A0101-12-0401-1088
<210> 313
<211> 98
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的CODV-Fab〞7G3x20G6〞,〞7G3x4E7〞,〞7G3x4B4〞,〞7G3x18F5〞,〞hz20G6x7G3〞,〞7G3xhz4B4〞,〞hz4B4x3E3〞抗體樣結合蛋白的CH1
<400> 313
Figure 110113349-A0101-12-0401-1089
<210> 314
<211> 344
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的CODV-Fab〞7G3 x 4E7〞抗體樣結合蛋白的多肽I
<400> 314
Figure 110113349-A0101-12-0401-1090
Figure 110113349-A0101-12-0402-1091
Figure 110113349-A0101-12-0403-1093
<210> 315
<211> 343
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的CODV-Fab〞7G3 x 4E7〞抗體樣結合蛋白的多肽II
<400> 315
Figure 110113349-A0101-12-0403-1092
Figure 110113349-A0101-12-0404-1094
<210> 316
<211> 344
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的CODV-Fab〞7G3 x 4B4〞抗體樣結合蛋白的多肽I
<400> 316
Figure 110113349-A0101-12-0405-1095
Figure 110113349-A0101-12-0406-1096
<210> 317
<211> 342
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的CODV-Fab〞7G3 x 4B4〞抗體樣結合蛋白的多肽II
<400> 317
Figure 110113349-A0101-12-0406-1097
Figure 110113349-A0101-12-0407-1098
<210> 318
<211> 344
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的CODV-Fab〞7G3x18F5〞抗體樣結合蛋白的多肽I
<400> 318
Figure 110113349-A0101-12-0408-1099
Figure 110113349-A0101-12-0409-1100
<210> 319
<211> 343
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的CODV-Fab〞7G3x18F5〞抗體樣結合蛋白的多肽II.
<400> 319
Figure 110113349-A0101-12-0409-1101
Figure 110113349-A0101-12-0410-1102
<210> 320
<211> 344
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的CODV-Fab〞hz20G6 x 7G3〞抗體樣結合蛋白的多肽I
<400> 320
Figure 110113349-A0101-12-0411-1103
Figure 110113349-A0101-12-0412-1104
<210> 321
<211> 342
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的CODV-Fab〞hz20G6 x 7G3〞抗體樣結合蛋白的多肽II
<400> 321
Figure 110113349-A0101-12-0412-1105
Figure 110113349-A0101-12-0413-1106
Figure 110113349-A0101-12-0414-1107
<210> 322
<211> 344
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的CODV-Fab 7G3 x hz4B4〞抗體樣結合蛋白的多肽I
<400> 322
Figure 110113349-A0101-12-0414-1108
Figure 110113349-A0101-12-0415-1109
<210> 323
<211> 342
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的CODV-Fab〞7G3 x hz4B4〞抗體樣結合蛋白的多肽II
<400> 323
Figure 110113349-A0101-12-0415-1110
Figure 110113349-A0101-12-0416-1111
Figure 110113349-A0101-12-0417-1112
<210> 324
<211> 342
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的CODV-Fab〞hz4B4 x 3E3〞抗體樣結合蛋白的多肽I
<400> 324
Figure 110113349-A0101-12-0417-1113
Figure 110113349-A0101-12-0418-1114
<210> 325
<211> 340
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的CODV-Fab〞hz4B4 x 3E3〞抗體樣結合蛋白的多肽II
<400> 325
Figure 110113349-A0101-12-0418-1115
Figure 110113349-A0101-12-0419-1116
Figure 110113349-A0101-12-0420-1117
<210> 326
<211> 572
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的CODV-Fab〞hz20G6 x 7G3 TL4〞抗體樣結合蛋白的多肽I
<400> 326
Figure 110113349-A0101-12-0420-1118
Figure 110113349-A0101-12-0421-1119
Figure 110113349-A0101-12-0422-1120
<210> 327
<211> 228
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的CODV-Fab〞hz20G6x7G3-TL4〞抗體樣結合蛋白的氨基酸序列Fc2
<400> 327
Figure 110113349-A0101-12-0422-1121
Figure 110113349-A0101-12-0423-1122
<210> 328
<211> 570
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的CODV-Fab〞hz20G6 x 7G3 TL4〞抗體樣結合蛋白的多肽III
<400> 328
Figure 110113349-A0101-12-0424-1123
Figure 110113349-A0101-12-0425-1124
Figure 110113349-A0101-12-0426-1125
<210> 329
<211> 97
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的CODV-Fab〞hz20G6x7G3-TL4〞抗體樣結合蛋白的CH1
<400> 329
Figure 110113349-A0101-12-0426-1126
<210> 330
<211> 229
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的CODV-Fab〞hz20G6x7G3-TL4〞抗體樣結合蛋白的Fc
<400> 330
Figure 110113349-A0101-12-0427-1127
<210> 331
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CD3抗體的CDR1-H
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (3)..(3)
<223> Xaa為T或S
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (4)..(4)
<223> Xaa為F或V
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> Xaa為S或T
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)..(6)
<223> Xaa為N,K,L或Y
<400> 331
Figure 110113349-A0101-12-0428-1128
<210> 332
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CD3抗體CDR2-H的共有序列
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (3)..(3)
<223> Xaa為A或D
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (4)..(4)
<223> Xaa為K或R
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> Xaa為S或A
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (7)..(7)
<223> Xaa為N或S
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (9)..(9)
<223> Xaa為A或E
<400> 332
Figure 110113349-A0101-12-0429-1129
<210> 333
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CD3抗體的CDRF-H的共有序列
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa為Y或G
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa為Y,G或A
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (3)..(3)
<223> Xaa為V,T或L
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (4)..(4)
<223> Xaa為H,N,Y或Q
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)..(6)
<223> Xaa為G,R或A
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (7)..(7)
<223> Xaa為F或V或無氨基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (8)..(8)
<223> Xaa為R或無氨基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (9)..(9)
<223> Xaa為F,S或I或無氨基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> Xaa為F,L,N,M,Y,S,A或G
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (11)..(11)
<223> Xaa為Y,A,K,S,N,T,F或L
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (12)..(12)
<223> Xaa為A,P,G或T
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> Xaa為M,L,F或S
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (15)..(15)
<223> Xaa為A,V,Y或G
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (15)..(15)
<223> Xaa為A,V或Y
<400> 333
Figure 110113349-A0101-12-0430-1131
<210> 334
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CD3抗體的CDR1-L的共有序列
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa為R或S
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (4)..(4)
<223> Xaa為V或E
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)..(6)
<223> Xaa為N,D或T
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (9)..(9)
<223> Xaa為N或Y
<400> 334
Figure 110113349-A0101-12-0430-1130
<210> 335
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CD3抗體的CDR3-L的共有序列
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (4)..(4)
<223> Xaa為T,A或S
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> Xaa為H,E或Q
<400> 335
Figure 110113349-A0101-12-0431-1132
<210> 336
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞1E1-G5〞,〞6D6-B8〞,〞8B11-B7〞,〞9F6-G3〞抗-CD123抗體的CDR1-H的共有序列
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> Xaa為G或A
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (7)..(7)
<223> Xaa為H,Y或N
<400> 336
Figure 110113349-A0101-12-0431-1133
<210> 337
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞1E1-G5〞,〞6D6-B8〞,〞8B11-B7〞,〞9F6-G3〞抗-CD123抗體的CDR2-H的共有序列
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)..(6)
<223> Xaa為G或D
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (8)..(8)
<223> Xaa為T或A
<400> 337
Figure 110113349-A0101-12-0432-1135
<210> 338
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞1E1-G5〞,〞6D6-B8〞,〞8B11-B7〞,〞9F6-G3〞抗-CD123抗體的CDR1-L的共有序列
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> Xaa為E或K
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (4)..(4)
<223> Xaa為F,H或Y
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> Xaa為N或S
<222> (5)..(5)
<400> 338
Figure 110113349-A0101-12-0432-1134
<210> 339
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞1E1-G5〞,〞6D6-B8〞,〞8B11-B7〞,〞9F6-G3〞抗-CD123抗體的CDR3-L的共有序列
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> Xaa為H或Q
<222> (1)..(1)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> Xaa為I,K或N
<400> 339
Figure 110113349-A0101-12-0433-1136
<210> 340
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞6C10-C4〞,9B8-G6〞,〞9D7-C8〞抗-CD123抗體的CDR1-H的共有序列
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (8)..(8)
<223> Xaa為H或S
<400> 340
Figure 110113349-A0101-12-0433-1137
<210> 341
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞1E1-G5〞,〞6D6-B8〞,〞8B11-B7〞,〞9F6-G3〞抗-CD123抗體的CDR2-H的共有序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (3)..(3)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<400> 341
Figure 110113349-A0101-12-0433-1138
<210> 342
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞1E1-G5〞,〞6D6-B8〞,〞8B11-B7〞,〞9F6-G3〞抗-CD123抗體的CDR3-H的共有序列
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (4)..(4)
<223> Xaa為D,Y或H
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> Xaa為Y或R
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)..(6)
<223> Xaa為S或T
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (7)..(7)
<223> Xaa為S或P
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (8)..(8)
<223> Xaa為Y或無氨基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (9)..(9)
<223> Xaa為L,I或無氨基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> Xaa為Y或無氨基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (11)..(11)
<223> Xaa為L或無氨基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (12)..(12)
<223> Xaa s W或無氨基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (14)..(14)
<223> Xaa為A或D
<400> 342
Figure 110113349-A0101-12-0434-1139
<210> 343
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞1E1-G5〞,〞6D6-B8〞,〞8B11-B7〞,〞9F6-G3〞抗-CD123抗體的CDR1-L的共有序列
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> Xaa為E或G
<222> (9)..(9)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> Xaa為R或K
<222> (10)..(10)
<400> 343
Figure 110113349-A0101-12-0435-1143
<210> 344
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 接頭序列的氨基酸序列
<400> 344
Figure 110113349-A0101-12-0435-1142
<210> 345
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 接頭序列的氨基酸序列
<400> 345
Figure 110113349-A0101-12-0435-1141
<210> 346
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 接頭序列的氨基酸序列
<400> 346
Figure 110113349-A0101-12-0435-1140
<210> 347
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 接頭序列的氨基酸序列
<400> 347
Figure 110113349-A0101-12-0436-1144
<210> 348
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 接頭序列的氨基酸序列
<400> 348
Figure 110113349-A0101-12-0436-1148
<210> 349
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 接頭序列的氨基酸序列
<400> 349
Figure 110113349-A0101-12-0436-1147
<210> 350
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 接頭序列的氨基酸序列
<400> 350
Figure 110113349-A0101-12-0436-1146
<210> 351
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 接頭序列的氨基酸序列
<400> 351
Figure 110113349-A0101-12-0436-1145
<210> 352
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 接頭和His標簽序列
<400> 352
Figure 110113349-A0101-12-0437-1149
<210> 353
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞3E3〞抗-CD123抗體的CDR2-H變體
<400> 353
Figure 110113349-A0101-12-0437-1152
<210> 354
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 接頭序列的氨基酸序列
<400> 354
<210> 355
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 展示了接頭序列的氨基酸序列
<400> 355
Figure 110113349-A0101-12-0437-1150
<210> 356
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 接頭序列的氨基酸序列
<400> 356
Figure 110113349-A0101-12-0438-1156
<210> 357
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 接頭序列的氨基酸序列
<400> 357
Figure 110113349-A0101-12-0438-1157
<210> 358
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 接頭序列的氨基酸序列
<400> 358
Figure 110113349-A0101-12-0438-1155
<210> 359
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 接頭序列的氨基酸序列
<400> 359
Figure 110113349-A0101-12-0438-1154
<210> 360
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 接頭序列的氨基酸序列
<400> 360
Figure 110113349-A0101-12-0438-1153
<210> 361
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 接頭序列的氨基酸序列
<400> 361
Figure 110113349-A0101-12-0439-1158
<210> 362
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 接頭序列的氨基酸序列
<400> 362
Figure 110113349-A0101-12-0439-1162
<210> 363
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 接頭序列的氨基酸序列
<400> 363
Figure 110113349-A0101-12-0439-1159
<210> 364
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 接頭序列的氨基酸序列
<400> 364
Figure 110113349-A0101-12-0439-1160
<210> 365
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 接頭序列的氨基酸序列
<400> 365
Figure 110113349-A0101-12-0439-1161
<210> 366
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 接頭序列的氨基酸序列
<400> 366
Figure 110113349-A0101-12-0440-1166
<210> 367
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 接頭序列的氨基酸序列
<400> 367
Figure 110113349-A0101-12-0440-1165
<210> 368
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 接頭序列的氨基酸序列
<400> 368
Figure 110113349-A0101-12-0440-1164
<210> 369
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 接頭序列的氨基酸序列
<400> 369
Figure 110113349-A0101-12-0440-1163
<210> 370
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 接頭序列的氨基酸序列
<400> 370
Figure 110113349-A0101-12-0441-1167
<210> 371
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 接頭序列的氨基酸序列
<400> 371
Figure 110113349-A0101-12-0441-1168
<210> 372
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 接頭序列的氨基酸序列
<400> 372
Figure 110113349-A0101-12-0441-1169
<210> 373
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 接頭序列的氨基酸序列
<400> 373
Figure 110113349-A0101-12-0441-1170
<210> 374
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 接頭序列的氨基酸序列
<400> 374
Figure 110113349-A0101-12-0442-1174
<210> 375
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞7G3〞抗體的
<400> 375
Figure 110113349-A0101-12-0442-1173
<210> 376
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞7G3〞抗體的CDR2-H
<400> 376
Figure 110113349-A0101-12-0442-1172
<210> 377
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞7G3〞抗體的CDR3-H
<400> 377
Figure 110113349-A0101-12-0442-1171
<210> 378
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞7G3〞抗體的CDR1-L
<400> 378
Figure 110113349-A0101-12-0443-1175
<210> 379
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的〞7G3〞抗體的CDR3-L
<400> 379
Figure 110113349-A0101-12-0443-1176
<210> 380
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的人源化〞7G3〞抗體的VH變體氨基酸序列
<400> 380
Figure 110113349-A0101-12-0443-1177
<210> 381
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的人源化〞7G3〞抗體的CDR1-H
<400> 381
Figure 110113349-A0101-12-0444-1179
<210> 382
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的人源化〞7G3〞抗體的CDR3-H
<400> 382
Figure 110113349-A0101-12-0444-1180
<210> 383
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的人源化〞7G3〞抗體的VH變體
<400> 383
Figure 110113349-A0101-12-0444-1178
Figure 110113349-A0101-12-0445-1181
<210> 384
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 一種所謂的人源化〞7G3〞抗體的CDR2-H
<400> 384
Figure 110113349-A0101-12-0445-1182
<210> 385
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的人源化〞7G3〞抗體的VL變體
<400> 385
Figure 110113349-A0101-12-0445-1183
<210> 386
<211> 272
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> WO2015/026892的SEQ ID NO：1
<400> 386
Figure 110113349-A0101-12-0446-1184
Figure 110113349-A0101-12-0447-1185
<210> 387
<211> 280
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> WO2015/026892的SEQ ID NO：3
<400> 387
Figure 110113349-A0101-12-0447-1186
Figure 110113349-A0101-12-0448-1187
<210> 388
<211> 352
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的CODV-Fab〞hz7G3xhz20G6〞,CODV-Fab-OL1〞hz7G3xhz20G6”和CODV-Fab-OL1a〞hz7G3xhz20G6〞抗體樣結合蛋白的多肽I
<400> 388
Figure 110113349-A0101-12-0448-1188
Figure 110113349-A0101-12-0449-1189
Figure 110113349-A0101-12-0450-1190
<210> 389
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Linker
<400> 389
Figure 110113349-A0101-12-0450-1191
<210> 390
<211> 339
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的CODV-Fab〞hz7G3xhz20G6〞抗體樣結合蛋白的多肽II
<400> 390
Figure 110113349-A0101-12-0450-1192
Figure 110113349-A0101-12-0451-1193
<210> 391
<211> 578
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的CODV-Fab-TL1〞hz7G3xhz20G6〞抗體樣結合蛋白的多肽IV
<400> 391
Figure 110113349-A0101-12-0451-1194
Figure 110113349-A0101-12-0452-1195
Figure 110113349-A0101-12-0453-1196
Figure 110113349-A0101-12-0454-1197
<210> 392
<211> 226
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的CODV-Fab-TL1〞hz7G3xhz20G6〞抗體樣結合蛋白的Fc2
<400> 392
Figure 110113349-A0101-12-0454-1198
Figure 110113349-A0101-12-0455-1199
<210> 393
<211> 570
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的CODV-Fab-TL1〞hz7G3xhz20G6〞抗體樣結合蛋白的多肽III
<400> 393
Figure 110113349-A0101-12-0455-1200
Figure 110113349-A0101-12-0456-1201
Figure 110113349-A0101-12-0457-1202
<210> 394
<211> 231
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的CODV-Fab-TL1〞hz7G3xhz20G6〞抗體樣結合蛋白的Fc區
<400> 394
Figure 110113349-A0101-12-0458-1203
<210> 395
<211> 570
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的CODV-Fab-OL1〞hz7G3xhz20G6〞抗體樣結合蛋白的多肽II
<400> 395
Figure 110113349-A0101-12-0459-1204
Figure 110113349-A0101-12-0460-1205
Figure 110113349-A0101-12-0461-1206
<210> 396
<211> 231
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的CODV-Fab-OL1〞hz7G3xhz20G6〞抗體樣結合蛋白的Fc區
<400> 396
Figure 110113349-A0101-12-0461-1207
Figure 110113349-A0101-12-0462-1208
<210> 397
<211> 228
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的CODV-Fab-OL1〞hz7G3xhz20G6〞抗體樣結合蛋白的的Fc3
<400> 397
Figure 110113349-A0101-12-0462-1209
Figure 110113349-A0101-12-0463-1210
<210> 398
<211> 228
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的CODV-Fab-OL1a〞hz7G3xhz20G6〞的Fc3
<400> 398
Figure 110113349-A0101-12-0463-1211
Figure 110113349-A0101-12-0464-1212
<210> 399
<211> 570
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 所謂的CODV-Fab-OL1a〞hz7G3xhz20G6〞的式II的多肽
<400> 399
Figure 110113349-A0101-12-0464-1213
Figure 110113349-A0101-12-0465-1214
Figure 110113349-A0101-12-0466-1215
Figure 110113349-A0101-12-0467-1216
<210> 400
<211> 231
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<400> 400
<223> 所謂的CODV-Fab-OL1a〞hz7G3xhz20G6〞抗體樣結合蛋白的Fc殘端
Figure 110113349-A0101-12-0467-1217
Figure 110113349-A0101-12-0468-1218

Claims (34)

  1. 一種與人CD3ε蛋白細胞外結構域結合的分離抗體，其包含：
    a)重鏈可變結構域，其含有序列GFX1X2X3X4AW(SEQ ID NO：331)組成的CDR1-H，其中X1是T或S，X2是F或V，X3是S或T且X4是N、K、L或Y，或其任何組合，和
    序列IKX1X2X3NX4YX5T(SEQ ID NO：332)組成的CDR2-H，其中X1是A或D，X2是K或R，X3是S或A，X4是N或S且X5是A或E，或其任何組合；和
    序列TWRHYYSSHTMDA(SEQ ID NO：69)或RALTYYGYKRDAMDG(SEQ ID NO：129)或RX1X2X3YX4X5X6X7X8X9X10X11DX12(SEQ ID NO：333)組成的CDR3-H，其中X1是Y、G或A，X2是V、T或L，X3是H、N、Y或Q，X4是G、R或A，X5是F或V或無胺基酸，X6是R或無胺基酸，X7是F、S或I或無胺基酸，X8是F、L、N、M、Y、S、A或G，X9是Y、A、K、S、N、T、F或L，X10是A、P、G或T，X11是M、L、F或S且X12是A、V或Y，或其任何組合，和
    輕鏈可變結構域，其含有序列QX1LX2HX3NGX4TY(SEQ ID NO：334)組成的CDR1-L，其中X1是R或S，X2是V或E，X3是N、D或T且X4是N或Y，或其任何組合；和
    序列‘KVS’組成的CDR2-L；和
    序列GQGX1X2YPFT(SEQ ID NO：335)組成的CDR3-L，其中X1是T、A或S且X2是H、E或Q，或其任何組合；或
    a)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：30或與SEQ ID NO：30的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-H；序列SEQ ID NO：31或與 SEQ ID NO：31的區別在於一個或多個胺基酸取代的序列的CDR2-H；序列SEQ ID NO：32或與SEQ ID NO：32的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-H；和
    輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：34或與SEQ ID NO：34的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-L；序列‘RDD’或與序列‘RDD’的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR2-L和序列SEQ ID NO：35或與SEQ ID NO：35的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-L；或
    b)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：50或與SEQ ID NO：50的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-H；序列SEQ ID NO：51或與SEQ ID NO：51的區別在於一個或多個胺基酸取代的序列的CDR2-H；序列SEQ ID NO：52或與SEQ ID NO：52的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-H；和
    輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：54或與SEQ ID NO：54的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-L；‘NAN’或與序列‘NAN’的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR2-L和序列SEQ ID NO：55或與SEQ ID NO：55的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-L；或
    c)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：90或與SEQ ID NO：90的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-H；序列SEQ ID NO：91或與SEQ ID NO：91的區別在於一個或多個胺基酸取代的序列的CDR2-H；序列SEQ ID NO：32或與SEQ ID NO：32的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-H；和
    輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：93或與SEQ ID NO：93的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-L；序列‘GAS’或與‘GAS’的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR2-L和序列SEQ ID NO：94或與 SEQ ID NO：94的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-L；或
    d)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：96或與SEQ ID NO：96的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-H；序列SEQ ID NO：97或與SEQ ID NO：97的區別在於一個或多個胺基酸取代的序列的CDR2-H；序列SEQ ID NO：98與SEQ ID NO：98的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-H；和
    輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：100或與SEQ ID NO：100的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-L；序列‘NTN’或與序列‘NTN’的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR2-L和序列SEQ ID NO：101或與SEQ ID NO：101的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-L；或
    e)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：103或與SEQ ID NO：103的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-H；序列SEQ ID NO：104或與SEQ ID NO：104的區別在於一個或多個胺基酸取代的序列的CDR2-H；序列SEQ ID NO：105或與SEQ ID NO：105的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-H；和
    輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：10或與SEQ ID NO：10的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-L；序列‘KVS’或與序列‘KVS’的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR2-L和序列SEQ ID NO：11或與SEQ ID NO：11的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-L；或
    f)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：116或與SEQ ID NO：116的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-H；序列SEQ ID NO：117或與SEQ ID NO：117的區別在於一個或多個胺基酸取代的序列的 CDR2-H；序列SEQ ID NO：118或與SEQ ID NO：118的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-H；和
    輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：100或與SEQ ID NO：100的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-L；序列‘VTN’或與序列‘VTN’的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR2-L和序列SEQ ID NO：120或與SEQ ID NO：120的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-L；或
    g)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：122或與SEQ ID NO：122的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-H；序列SEQ ID NO：123或與SEQ ID NO：123的區別在於一個或多個胺基酸取代的序列的CDR2-H；序列SEQ ID NO：124或與SEQ ID NO：124的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-H；和
    輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：126或與SEQ ID NO：126的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-L；序列‘RDD’或與序列‘RDD’的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR2-L和序列SEQ ID NO：127或與SEQ ID NO：127的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-L。
  2. 根據請求項1的分離抗體，其包含：
    a)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：6的CDR1-H，序列SEQ ID NO：7的CDR2-H，序列SEQ ID NO：8的CDR3-H，和
    輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：10或SEQ ID NO：142的CDR1-L，序列‘KVS’的CDR2-L和序列SEQ ID NO：11的CDR3-L；或
    b)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：13的CDR1-H，序列SEQ ID NO：14的CDR2-H，序列SEQ ID NO：15的CDR3-H，和
    輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：17或SEQ ID NO：184的CDR1-L，序列‘KVS’的CDR2-L和序列SEQ ID NO：11的CDR3-L；或
    c)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：13的CDR1-H，序列SEQ ID NO：19的CDR2-H，序列SEQ ID NO：20的CDR3-H，和
    輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：22的CDR1-L，序列‘KVS’的CDR2-L和序列SEQ ID NO：11的CDR3-L；或
    d)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：24的CDR1-H，序列SEQ ID NO：19的CDR2-H，序列SEQ ID NO：25的CDR3-H，和
    輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：27的CDR1-L，序列‘KVS’的CDR2-L和序列SEQ ID NO：28的CDR3-L；或
    e)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：30的CDR1-H，序列SEQ ID NO：31的CDR2-H，序列SEQ ID NO：32的CDR3-H，和
    輕鏈可變結構域，其包含序列SEQ ID NO：34的CDR1-L，序列‘RDD’的CDR2-L和序列SEQ ID NO：35的CDR3-L；或
    f)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：13的CDR1-H，序列SEQ ID NO：37的CDR2-H，序列SEQ ID NO：38的CDR3-H，和
    輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：10的CDR1-L，序列‘KVS’的CDR2-L和序列SEQ ID NO：28的CDR3-L；或
    g)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：13的CDR1-H，序列SEQ ID NO：37的CDR2-H，序列SEQ ID NO：41的CDR3-H，和
    輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：17的CDR1-L，序列‘KVS’的CDR2-L和序列SEQ ID NO：11的CDR3-L；或
    h)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：13的CDR1-H，序列SEQ ID NO：37的CDR2-H，序列SEQ ID NO：44的CDR3-H，和
    輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：10的CDR1-L，序列‘KVS’的CDR2-L和序列SEQ ID NO：11的CDR3-L；或
    i)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：13的CDR1-H，序列SEQ ID NO：37的CDR2-H，序列SEQ ID NO：47的CDR3-H，和
    輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：10的CDR1-L，序列‘KVS’的CDR2-L和序列SEQ ID NO：11的CDR3-L；或
    j)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：50的CDR1-H，序列SEQ ID NO：51的CDR2-H，序列SEQ ID NO：52的CDR3-H，和
    輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：54的CDR1-L，序列‘NAN’的CDR2-L和序列SEQ ID NO：55的CDR3-L；或
    k)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：57的CDR1-H，序列SEQ ID NO：37的CDR2-H，序列SEQ ID NO：58的CDR3-H，和
    輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：10的CDR1-L，序列‘KVS’的CDR2-L和序列SEQ ID NO：28的CDR3-L；或
    l)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：13的CDR1-H，序列SEQ ID NO：37的CDR2-H，序列SEQ ID NO：61的CDR3-H，和
    輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：10的CDR1-L，序列‘KVS’的CDR2-L和序列SEQ ID NO：11的CDR3-L；或
    m)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：64的CDR1-H，序列SEQ ID NO：65的CDR2-H，序列SEQ ID NO：47的CDR3-H，和
    輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：67的CDR1-L，序列‘KVS’的CDR2-L和序列SEQ ID NO：28的CDR3-L；或
    n)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：13的CDR1-H，序列SEQ ID NO：37的CDR2-H，序列SEQ ID NO：69的CDR3-H，和
    輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：10的CDR1-L，序列‘KVS’的CDR2-L和序列SEQ ID NO：71的CDR3-L；或
    o)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：13的CDR1-H，序列SEQ ID NO：37的CDR2-H，序列SEQ ID NO：84的CDR3-H，和
    輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：17的CDR1-L，序列‘KVS’的CDR2-L和序列SEQ ID NO：11的CDR3-L；或
    p)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：75的CDR1-H，序列SEQ ID NO：76的CDR2-H，序列SEQ ID NO：77的CDR3-H，和
    輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：10的CDR1-L，序列‘KVS’的CDR2-L和序列SEQ ID NO：11的CDR3-L；或
    q)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：80的CDR1-H，序列SEQ ID NO：76的CDR2-H，序列SEQ ID NO：81的CDR3-H，和
    輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：10的CDR1-L，序列‘KVS’的CDR2-L和序列SEQ ID NO：11的CDR3-L；或
    r)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：13的CDR1-H，序列SEQ ID NO：37的CDR2-H，序列SEQ ID NO：84的CDR3-H，和
    輕鏈可變結構域，其包含序列SEQ ID NO：10的CDR1-L，序列‘KVS’的CDR2-L和序列SEQ ID NO：11的CDR3-L；或
    s)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：13的CDR1-H，序列SEQ ID NO：37的CDR2-H，序列SEQ ID NO：47的CDR3-H，和
    輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：10的CDR1-L，序列‘KVS’的CDR2-L和序列SEQ ID NO：88的CDR3-L；或
    t)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：90的CDR1-H，序列SEQ ID NO：91的CDR2-H，序列SEQ ID NO：32的CDR3-H，和
    輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：93的CDR1-L，序列‘GAS’的CDR2-L和序列SEQ ID NO：94的CDR3-L；或
    u)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：96的CDR1-H，序列SEQ ID NO：97的CDR2-H，序列SEQ ID NO：98的CDR3-H，和
    輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：100的CDR1-L，序列‘NTN’的CDR2-L和序列SEQ ID NO：101的CDR3-L；或
    v)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：103的CDR1-H，序列SEQ ID NO：104的CDR2-H，序列SEQ ID NO：105的CDR3-H，和
    輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：10的CDR1-L，序列‘KVS’的CDR2-L和序列SEQ ID NO：11的CDR3-L；或
    w)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：80的CDR1-H，序列SEQ ID NO：19的CDR2-H，序列SEQ ID NO：108的CDR3-H，和
    輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：10的CDR1-L，序列‘KVS’的CDR2-L和序列SEQ ID NO：11的CDR3-L；或
    x)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：13的CDR1-H，序列SEQ ID NO：37的CDR2-H，序列SEQ ID NO：111的CDR3-H，和
    輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：113的CDR1-L，序列‘KVS’的CDR2-L和序列SEQ ID NO：114的CDR3-L；或
    y)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：116的CDR1-H，序列SEQ ID NO：117的CDR2-H，序列SEQ ID NO：118的CDR3-H，和
    輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：100的CDR1-L，序列‘VTN’的CDR2-L和序列SEQ ID NO：120的CDR3-L；或
    z)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：122的CDR1-H，序列SEQ ID NO：123的CDR2-H，序列SEQ ID NO：124的CDR3-H，和
    輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：126的CDR1-L，序列‘RDD’的CDR2-L和序列SEQ ID NO：127的CDR3-L；或
    aa)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：13的CDR1-H，序列SEQ ID NO：19的CDR2-H，序列SEQ ID NO：129的CDR3-H，和
    輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：10的CDR1-L，序列‘KVS’的CDR2-L和序列SEQ ID NO：11的CDR3-L；或
    bb)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：103的CDR1-H，序列SEQ ID NO：104的CDR2-H，序列SEQ ID NO：105的CDR3-H；和
    輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：133的CDR1-L，序列‘LVS’的CDR2-L和序列SEQ ID NO：134的CDR3-L。
  3. 一種與人CD3ε特異性結合的抗體樣結合蛋白，其包含形成兩個抗原結合位點的兩條多肽鏈，其中第一多肽具有式[I]所示的結構：
    VD1-L1-VD2-L2-CL [I]
    且第二多肽具有式[II]所示的結構：
    VD3-L3-VD4-L4-CH1 [II]
    其中：
    VD1是第一免疫球蛋白重鏈或輕鏈的可變結構域；
    VD2是第二免疫球蛋白重鏈或輕鏈的可變結構域；
    VD3是該第二免疫球蛋白重鏈或輕鏈的可變結構域；
    VD4是該第一免疫球蛋白重鏈或輕鏈的可變結構域；
    CL是免疫球蛋白的輕鏈恒定結構域；
    CH1是免疫球蛋白的CH1重鏈恒定結構域；
    L1、L2、L3和L4是胺基酸連接子；
    且其中該第一和第二多肽形成交叉輕鏈-重鏈對，且
    其中該VD1和VD4，或VD2和VD3包含如請求項1所限定的抗體的重鏈可變結構域和輕鏈可變結構域。
  4. 根據請求項3的抗體樣結合蛋白，其中該式[II]多肽進一步包含Fc結構域。
  5. 根據請求項3或4的抗體樣結合蛋白，其包含形成兩個抗原結合位點的兩條多肽鏈，其中一條多肽鏈具有式[I]所示的結構：
    VD1-L1-VD2-L2-CL [I]
    且一條多肽鏈具有式[III]所示的結構：
    VD3-L3-VD4-L4-CH1-Fc [III]
    其中：
    VD1是第一免疫球蛋白重鏈或輕鏈的可變結構域；
    VD2是第二免疫球蛋白重鏈或輕鏈的可變結構域；
    VD3是該第二免疫球蛋白重鏈或輕鏈的可變結構域；
    VD4是該第一免疫球蛋白重鏈或輕鏈的可變結構域；
    CL是免疫球蛋白的輕鏈恒定結構域；
    CH1是免疫球蛋白的CH1重鏈恒定結構域；
    Fc是免疫球蛋白是免疫球蛋白鉸鏈區和CH2、CH3免疫球蛋白重鏈恒定結構域；
    L1、L2、L3和L4是胺基酸連接子；
    且其中該式I的多肽和式III的多肽形成交叉輕鏈-重鏈對，且
    其中該VD1和VD4，或VD2和VD3包含如請求項1所限定的抗體的重鏈可變結構域和輕鏈可變結構域。
  6. 根據請求項4或5的抗體樣結合蛋白，其中該式[I]的多肽進一步包含Fc結構域(Fc2)。
  7. 根據請求項4-6中任一項的抗體樣結合蛋白，其包含形成兩個抗原結合位 點的兩條多肽鏈，其中一條多肽鏈具有式[IV]所示的結構：
    VD1-L1-VD2-L2-CL-L5-Fc2 [IV]
    且一條多肽鏈具有式[III]所示的結構：
    VD3-L3-VD4-L4-CH1-Fc [III]
    其中：
    VD1是第一免疫球蛋白重鏈或輕鏈的可變結構域；
    VD2是第二免疫球蛋白重鏈或輕鏈的可變結構域；
    VD3是該第二免疫球蛋白重鏈或輕鏈的可變結構域；
    VD4是該第一免疫球蛋白重鏈或輕鏈的可變結構域；
    CL是免疫球蛋白的輕鏈恒定結構域；
    CH1是免疫球蛋白的CH1重鏈恒定結構域；
    Fc是免疫球蛋白的免疫球蛋白鉸鏈區和CH2、CH3免疫球蛋白重鏈恒定結構域；
    Fc2是免疫球蛋白的免疫球蛋白鉸鏈區和CH2、CH3免疫球蛋白重鏈恒定結構域；
    L1、L2、L3、L4和L5是胺基酸連接子；
    其中式[IV]的多肽和式[III]的多肽形成交叉輕鏈-重鏈對。
  8. 根據請求項4或5的抗體樣結合蛋白，其包含含有Fc結構域(Fc3)的第三多肽鏈。
  9. 根據請求項4、5和8中任一項的抗體樣結合蛋白，其包含形成兩個抗原結合位點的三條多肽鏈，其中：
    第一多肽具有式[I]所示的結構：
    VD1-L1-VD2-L2-CL [I]
    第二多肽具有式[III]所示的結構：
    VD3-L3-VD4-L4-CH1-Fc [III]
    第三多肽Fc3，其是免疫球蛋白的免疫球蛋白鉸鏈區和CH2、CH3免疫球蛋白重鏈恒定結構域；
    其中
    VD1是第一免疫球蛋白重鏈或輕鏈的可變結構域；
    VD2是第二免疫球蛋白重鏈或輕鏈的可變結構域；
    VD3是該第二免疫球蛋白重鏈或輕鏈的可變結構域；
    VD4是該第一免疫球蛋白重鏈或輕鏈的可變結構域；
    CL是免疫球蛋白的輕鏈恒定結構域；
    CH1是免疫球蛋白的CH1重鏈恒定結構域；
    Fc是免疫球蛋白的免疫球蛋白鉸鏈區和CH2、CH3免疫球蛋白重鏈恒定結構域；
    L1、L2、L3，和L4是胺基酸連接子；
    且其中式[I]的多肽和式[III]的多肽形成交叉輕鏈-重鏈對，
    其中式[III]的多肽與第三多肽藉由其Fc結構域異二聚化；且
    其中該VD1和VD4，或VD2和VD3包含如請求項1所限定的重鏈可變結構域和輕鏈可變結構域。
  10. 根據請求項3-9中任一項的抗體樣結合蛋白，其中該抗體樣結合蛋白與至少一個另外的靶抗原結合。
  11. 根據請求項10的抗體樣結合蛋白，其中該至少一個另外的抗原靶是CD123。
  12. 根據請求項11的抗體樣結合蛋白，其中該抗體樣結合蛋白包含：
    a)第一免疫球蛋白的輕鏈可變結構域(VD1)，其由胺基酸序列SEQ ID NO：9或與其至少85%相同的序列組成，第二免疫球蛋白的輕鏈可變 結構域(VD2)，其由胺基酸序列SEQ ID NO：308或與其至少85%相同的序列組成，第二免疫球蛋白的重鏈可變結構域(VD3)，其由胺基酸序列SEQ ID NO：312或與其至少85%相同的序列組成，和第一免疫球蛋白的重鏈可變結構域(VD4)，其由胺基酸序列SEQ ID NO：5或與其至少85%相同的序列組成，或
    b)第一免疫球蛋白的輕鏈可變結構域(VD1)，其由胺基酸序列SEQ ID NO：21或與其至少85%相同的序列組成，第二免疫球蛋白的輕鏈可變結構域(VD2)，其由胺基酸序列SEQ ID NO：308或與其至少85%相同的序列組成，第二免疫球蛋白的重鏈可變結構域(VD3)，其由胺基酸序列SEQ ID NO：312或與其至少85%相同的序列組成，和第一免疫球蛋白的重鏈可變結構域(VD4)，其由胺基酸序列SEQ ID NO：18或與其至少85%相同的序列組成，或
    c)第一免疫球蛋白的輕鏈可變結構域(VD1)，其由胺基酸序列SEQ ID NO：16或與其至少85%相同的序列組成，第二免疫球蛋白的輕鏈可變結構域(VD2)，其由胺基酸序列SEQ ID NO：308或與其至少85%相同的序列組成，第二免疫球蛋白的重鏈可變結構域(VD3)，其由胺基酸序列SEQ ID NO：312或與其至少85%相同的序列組成，和第一免疫球蛋白的重鏈可變結構域(VD4)，其由胺基酸序列SEQ ID NO：12或與其至少85%相同的序列組成，或
    d)第一免疫球蛋白的輕鏈可變結構域，其由胺基酸序列SEQ ID NO：26或與其至少85%相同的序列組成(VD1)，第二免疫球蛋白的輕鏈可變結構域(VD2)，其由胺基酸序列SEQ ID NO：308或與其至少85%相同的序列組成，第二免疫球蛋白的重鏈可變結構域(VD3)，其由胺基酸序列SEQ ID NO：312或與其至少85%相同的序列組成，和第一免疫球 蛋白的重鏈可變結構域(VD4)，其由胺基酸序列SEQ ID NO：23或與其至少85%相同的序列組成，或
    e)第一免疫球蛋白的輕鏈可變結構域(VD1)，其由胺基酸序列SEQ ID NO：308或與其至少85%相同的序列組成，第二免疫球蛋白的輕鏈可變結構域(VD2)，其由胺基酸序列SEQ ID NO：143或與其至少85%相同的序列組成，第二免疫球蛋白的重鏈可變結構域(VD3)，其由胺基酸序列SEQ ID NO：138或與其至少85%相同的序列組成，和第一免疫球蛋白的重鏈可變結構域(VD4)，其由胺基酸序列SEQ ID NO：312或與其至少85%相同的序列組成，或
    f)第一免疫球蛋白的輕鏈可變結構域(VD1)，其由胺基酸序列SEQ ID NO：158或與其至少85%相同的序列組成，第二免疫球蛋白的輕鏈可變結構域(VD2)，其由胺基酸序列SEQ ID NO：308或與其至少85%相同的序列組成，第二免疫球蛋白的重鏈可變結構域(VD3)，其由胺基酸序列SEQ ID NO：312或與其至少85%相同的序列組成，和第一免疫球蛋白的重鏈可變結構域(VD4)，其由胺基酸序列SEQ ID NO：171或與其至少85%相同的序列組成，
    g)第一免疫球蛋白的輕鏈可變結構域(VD1)，其由胺基酸序列SEQ ID NO：230或與其至少85%相同的序列組成，第二免疫球蛋白的輕鏈可變結構域(VD2)，其由胺基酸序列SEQ ID NO：158或與其至少85%相同的序列組成，第二免疫球蛋白的重鏈可變結構域(VD3)，其由胺基酸序列SEQ ID NO：171或與其至少85%相同的序列組成，和第一免疫球蛋白的重鏈可變結構域(VD4)，其由胺基酸序列SEQ ID NO：226或與其至少85%相同的序列組成，
    h)第一免疫球蛋白的輕鏈可變結構域(VD1)，其由胺基酸序列SEQ ID NO：385或與其至少85%相同的序列組成，第二免疫球蛋白的輕鏈可變結構域(VD2)，其由胺基酸序列SEQ ID NO：141或與其至少85%相同的序列組成，第二免疫球蛋白的重鏈可變結構域(VD3)，其由胺基酸序列SEQ ID NO：138或與其至少85%相同的序列組成，和第一免疫球蛋白的重鏈可變結構域(VD4)，其由胺基酸序列SEQ ID NO：383或與其至少85%相同的序列組成。
  13. 根據請求項3的抗體樣結合分子，其包含：
    a)根據式[I]的一條多肽，其由含有序列SEQ ID NO：385的VD1、序列SEQ ID NO：389的L1、序列SEQ ID NO：141的VD2、序列SEQ ID NO：389的L2和序列SEQ ID NO：310的CL之胺基酸序列SEQ ID NO：388組成，或
    由與SEQ ID NO：388至少85%相同的序列組成，其中VD1的序列SEQ ID NO：378、‘WAS’和SEQ ID NO：379的3個CDR，和VD2的序列SEQ ID NO：142、‘KVS’和SEQ ID NO：11的3個CDR未改變，和
    b)根據式[II]的一條多肽，其由含有序列SEQ ID NO：138的VD3、L3是0個胺基酸、序列SEQ ID NO：383的VD4、L4是0個胺基酸和序列SEQ ID NO：313的CH1之胺基酸序列SEQ ID NO：390組成，或
    與SEQ ID NO：390至少85%相同的序列組成，其中VD4的序列SEQ ID NO：381、SEQ ID NO：384和SEQ ID NO：382的3個CDR和VD3的序列SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8的3個CDR未改變；
    且其中該式[I]的多肽和該式[II]的多肽形成交叉輕鏈-重鏈對。
  14. 根據請求項6或7的抗體樣結合分子，其包含：
    a)根據式[IV]的一條多肽，其由包含序列SEQ ID NO：385的VD1、序列SEQ ID NO：389的L1、序列SEQ ID NO：141的VD2、序列SEQ ID NO： 389的L2、序列SEQ ID NO：310的CL、包含0個胺基酸的L5和序列SEQ ID NO：392的Fc2之胺基酸序列SEQ ID NO：391組成，或
    與SEQ ID NO：391至少85%相同的序列組成，其中VD1的序列SEQ ID NO：378、‘WAS’和SEQ ID NO：379的3個CDR和VD2的序列SEQ ID NO：142、‘KVS’和SEQ ID NO：11的3個CDR未改變；和
    b)根據式[III]的一條多肽，其由含有序列SEQ ID NO：138的VD3、L3是0個胺基酸、序列SEQ ID NO：383的VD4、L4是0個胺基酸和序列SEQ ID NO：313的CH1和序列SEQ ID NO：394的Fc之胺基酸序列SEQ ID NO：393組成，或
    與SEQ ID NO：393至少85%相同的序列組成，其中VD4的序列SEQ ID NO：381、SEQ ID NO：384和SEQ ID NO：382的3個CDR，和VD3的序列SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8的3個CDR未改變；
    且其中該式[IV]的多肽和該式[III]的多肽形成交叉輕鏈-重鏈對。
  15. 根據請求項8或9的抗體樣結合分子，其包含：
    a)根據式[I]的一條多肽，其由含有序列SEQ ID NO：385的VD1、序列SEQ ID NO：389的L1、序列SEQ ID NO：141的VD2、序列SEQ ID NO：389的L2、和序列SEQ ID NO：310的CL之胺基酸序列SEQ ID NO：388組成，或
    與SEQ ID NO：388至少85%相同的序列組成，其中VD1的SEQ ID NO：378、‘WAS’和SEQ ID NO：379的3個CDR和VD2的序列SEQ ID NO：142、‘KVS’和SEQ ID NO：11的3個CDR未改變；和
    b)根據式[III]的一條多肽，其由包含序列SEQ ID NO：138的VD3、L3是0個胺基酸、序列SEQ ID NO：383的VD4、L4是0個胺基酸和序列SEQ ID NO：313的CH1和序列SEQ ID NO：396的Fc之胺基酸序列SEQ ID NO： 395組成，或
    與SEQ ID NO：395至少85%相同的序列組成，其中VD4的序列SEQ ID NO：381、SEQ ID NO：384和SEQ ID NO：382的3個CDR，和VD3的序列SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8的3個CDR未改變；和
    c)一條多肽Fc3，其由序列SEQ ID NO：397或與其至少85%相同的序列組成，其中該Ec3或與其至少85%相同的序列與根據式[III]的多肽的Fc區異二聚化；且
    其中所述該式[I]的多肽和該式[III]的多肽形成交叉輕鏈-重鏈對。
  16. 根據請求項8或9的抗體樣結合分子，其包含：
    a)根據式[I]的一條多肽，其由包含序列SEQ ID NO：385的VD1、序列SEQ ID NO：389的L1、序列SEQ ID NO：141的VD2、序列SEQ ID NO：389的L2和序列SEQ ID NO：310的CL的胺基酸序列SEQ ID NO：388組成，或
    與SEQ ID NO：388至少85%相同的序列，其中VD1的序列SEQ ID NO：378、‘WAS’和SEQ ID NO：379的3個CDR，和VD2序列SEQ ID NO：142、‘KVS’和SEQ ID NO：11的3個CDR未改變；和
    b)根據式[III]的一條多肽，其由包含序列SEQ ID NO：138的VD3、L3是0個胺基酸、序列SEQ ID NO：383的VD4、L4是0個胺基酸和序列SEQ ID NO：313的CH1和序列SEQ ID NO：400的Fc之胺基酸序列SEQ ID NO：399組成，或
    與SEQ ID NO：399至少85%相同的序列，其中VD4的序列SEQ ID NO：381、SEQ ID NO：384和SEQ ID NO：382的3個CDR，和VD3序列SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8的3個CDR未改變；和
    c)一條多肽Fc3，其由序列SEQ ID NO：398或與其至少85%相同的序列 組成，其中該Fc3或與其至少85%相同的序列與根據式[III]的多肽的Fc區異二聚化；且
    其中該式[I]的多肽和該式[III]的多肽形成交叉輕鏈-重鏈對。
  17. 一種與人CD123蛋白細胞外結構域結合的分離抗體，其包含：
    a)重鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：227或與SEQ ID NO：227的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-H；序列SEQ ID NO：228或SEQ ID NO：353或SEQ ID NO：279，或與SEQ ID NO：228或SEQ ID NO：353或SEQ ID NO：279的區別在於一個或多個胺基酸取代的序列的CDR2-H；序列SEQ ID NO：229或與SEQ ID NO：229的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-H；和
    輕鏈可變結構域，其含有序列SEQ ID NO：231或與SEQ ID NO：231的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-L；序列‘RDD’或與‘RDD’的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR2-L和序列SEQ ID NO：232或與SEQ ID NO：232的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-L；或
    b)重鏈可變結構域，其含有序列X1YTFTDX2I(SEQ ID NO：336)組成的CDR1-H，其中X1是G或A且X2是H、Y或N，或其任何組合；和
    序列INPYSX1GX2(SEQ ID NO：337)組成的CDR2-H，其中X1是G或D且X2是T或A，或其任何組合；和
    序列ALNYGSYYAMDA(SEQ ID NO 201)組成的CDR3-H，和
    輕鏈可變結構域，其含有序列X1DIX2X3N(SEQ ID NO：338)組成的CDR1-L，其中X1是E或K，X2是F、H或Y且X3是N或S，或其任何組合；和
    序列‘DAN’或‘DAS’組成的CDR2-L；和
    序列X1QYNX2YPYT(SEQ ID NO：339)組成的CDR3-L，其中X1是H或Q且X2是I、K或N，或其任何組合；或
    c)重鏈可變結構域，其包含序列GFSLTSYX1(SEQ ID NO：340)組成的CDR1-H，其中X1是H或S；和
    序列MWX1DGDT(SEQ ID NO：341)組成的CDR2-H，其中X1是S或N；和
    序列ARGX1X2X3X4X5X6X7X8X9FX10Y(SEQ ID NO：342)組成的CDR3-H，其中X1是D、Y或H，X2是Y或R，X3是S或T，X4是S或P，X5是Y或無胺基酸，X6是L、I或無胺基酸，X7是Y或無胺基酸，X8是L或無胺基酸，X9是W或無胺基酸，X10是A或D，或其任何組合，和
    輕鏈可變結構域，其包含序列QSFLSSGDX1X2NY(SEQ ID NO：343)組成的CDR1-L，其中X1是E或G且X2是R或K，或其任何組合；和序列‘WAS’組成的CDR2-L；和
    序列QQYYDTPLT(SEQ ID NO：253)組成的CDR3-L，或
    d)重鏈可變結構域，其包含序列SEQ ID NO：206或與SEQ ID NO：206的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-H；序列SEQ ID NO：207或與SEQ ID NO：207的區別在於一個或多個胺基酸取代的序列的CDR2-H；序列SEQ ID NO：208或與SEQ ID NO：208的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-H；和
    輕鏈可變結構域，其包含序列SEQ ID NO：210或與SEQ ID NO：210的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-L；序列‘ETS’或與‘ETS’的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR2-L和序列SEQ ID NO：211或與SEQ ID NO：211的區別在於一個胺基酸取代的序列的 CDR3-L；或
    e)重鏈可變結構域，其包含序列SEQ ID NO：213或與SEQ ID NO：213的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-H；序列SEQ ID NO：214或與SEQ ID NO：214的區別在於一個或多個胺基酸取代的序列的CDR2-H；序列SEQ ID NO：215或與SEQ ID NO：215的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-H；和
    輕鏈可變結構域，其包含序列SEQ ID NO：217或與SEQ ID NO：217的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-L；序列‘NTN’或與‘NTN’的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR2-L和序列SEQ ID NO：218或與SEQ ID NO：218的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-L；或
    f)重鏈可變結構域，其包含序列SEQ ID NO：220或與SEQ ID NO：220的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-H；序列SEQ ID NO：221或與SEQ ID NO：221的區別在於一個或多個胺基酸取代的序列的CDR2-H；序列SEQ ID NO：222或與SEQ ID NO：222的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-H；和
    輕鏈可變結構域，其包含序列SEQ ID NO：224或與SEQ ID NO：224的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-L；序列‘RVS’或與‘RVS’的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR2-L和序列SEQ ID NO：225或與SEQ ID NO：225的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-L；或
    g)重鏈可變結構域，其包含序列SEQ ID NO：234或與SEQ ID NO：234的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-H；序列SEQ ID NO：235或與SEQ ID NO：235的區別在於一個或多個胺基酸取代的序列的 CDR2-H；序列SEQ ID NO：236或與SEQ ID NO：236的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-H；和
    輕鏈可變結構域，其包含序列SEQ ID NO：238或與SEQ ID NO：238的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-L；序列‘GAS’或與‘GAS’的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR2-L和序列SEQ ID NO：239或與SEQ ID NO：239的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-L；或
    h)重鏈可變結構域，其包含序列SEQ ID NO：241或與SEQ ID NO：241的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-H；序列SEQ ID NO：242或與SEQ ID NO：242的區別在於一個或多個胺基酸取代的序列的CDR2-H；序列SEQ ID NO：243或與SEQ ID NO：243的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-H；和
    輕鏈可變結構域，其包含序列SEQ ID NO：245或與SEQ ID NO：245的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR1-L；序列‘YAS’或與‘YAS’的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR2-L和序列SEQ ID NO：246或與SEQ ID NO：246的區別在於一個胺基酸取代的序列的CDR3-L。
  18. 一種與人CD123特異性結合的抗體樣結合蛋白，其包含形成兩個抗原結合位點的兩條多肽鏈，其中第一多肽具有式[I]所示的結構：
    VD1-L1-VD2-L2-CL [I]
    且第二多肽具有式[II]所示的結構：
    VD3-L3-VD4-L4-CH1 [II]
    其中：
    VD1是第一免疫球蛋白重鏈或輕鏈的可變結構域；
    VD2是第二免疫球蛋白重鏈或輕鏈的可變結構域；
    VD3是該第二免疫球蛋白重鏈或輕鏈的可變結構域；
    VD4是該第一免疫球蛋白重鏈或輕鏈的可變結構域；
    CL是免疫球蛋白的輕鏈恒定結構域；
    CH1是免疫球蛋白的CH1重鏈恒定結構域；
    L1、L2、L3和L4是胺基酸連接子；
    且其中該第一和該第二多肽形成交叉輕鏈-重鏈對；且
    其中該VD1和VD4或VD2和VD3包含如請求項17所限定的抗體的重鏈可變結構域和輕鏈可變結構域。
  19. 一種醫藥組成物，其包含根據請求項3-16或18中任一項的抗體樣結合蛋白或根據請求項17的抗CD123抗體或根據請求項1或2的抗CD3抗體和藥物上可接受的載劑。
  20. 根據請求項3-16或18中任一項的抗體樣結合蛋白或根據請求項17的抗CD123抗體或根據請求項1或2的抗CD3抗體或根據請求項19的醫藥組成物，其係作為藥物。
  21. 根據請求項3-16或18中任一項的抗體樣結合蛋白，或根據請求項17的抗CD123抗體或其醫藥組成物，其用於治療癌症。
  22. 根據請求項1或2的抗CD3抗體或其醫藥組成物，其用於預防或治療病理性免疫反應。
  23. 根據請求項21所使用的抗體樣結合蛋白、抗體或醫藥組成物，其中該癌症是血液性癌症。
  24. 一種根據請求項3-16或18中任一項的抗體樣結合蛋白用於製造供治療或預防有需要的受試者中疾病或病症的藥劑之用途。
  25. 一種根據請求項17的抗CD123抗體用於製造供治療或預防有需要的受試 者中疾病或病症的藥劑之用途。
  26. 一種根據請求項1或2的抗CD3抗體用於製造供治療或預防有需要的受試者中疾病或病症的藥劑之用途。
  27. 一種根據請求項19的醫藥組成物用於製造供治療或預防有需要的受試者中疾病或病症的藥劑之用途。
  28. 一種分離的核酸，其包含編碼根據請求項3-16或18中任一項的抗體樣結合蛋白，或根據請求項17的抗CD123抗體，或根據請求項1或2的抗CD3抗體的序列。
  29. 一種宿主細胞，其已由根據請求項28的核酸轉化。
  30. 一種套組，其包含至少一種根據請求項1、2或17中任一項的抗體、至少一種根據請求項3-16中任一項的抗體樣結合蛋白。
  31. 根據請求項17的抗體，其用於在受試者的生物樣品中體外或體內檢測CD123表現。
  32. 根據請求項31的抗體的用途，其中該抗體用可檢測的分子或物質標記。
  33. 根據請求項31-32中任一項所使用的抗體，其中該用途是用於診斷受試者中癌症的存在、確定具有癌症的患者對靶向CD123的治療劑的易感性，或抗CD123癌症療法後監測抗CD123癌症療法的有效性或檢測癌症的復發。
  34. 根據請求項33所使用的抗體，其中該抗CD123癌症療法使用根據請求項3-16或18中任一項的抗體樣結合蛋白或根據請求項17的抗CD123抗體。
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