SU1642399A1 - Способ определени антител класса I @ М к корантигену вируса гепатита В - Google Patents

Abstract

Изобретение относитс  к медицинской биотехнологии, св зано с генной инженерией и касаетс  диагностики вирусного гепатита В С целью упрощени  способа на твердую фазу сорбируют антитела к Ig M человека, внос т исследуемые образцы сыворотки или плазмы, при этом содержащиес  в них Ig M св зывают с сорбированными антителами. После инкубации и отмывки добавл ют меченый антиген, который взаимодействует со св занными специфическими Ig M. Повышение сигнала по сравнению с отрицательным контролем свидетельствует о наличии в образце антител класса Ig M. Кор-антиген высокой степени чистоты получают из лизата рекомбинантного штамма клеток Е coli Антиген мет т радиоактивной меткой, ферментом, хелатным комплексом европи  или другой меткой, используемой в высокочувствительных иммунологических реакци х. Твердой фазой служат шарики, лунки или пробирки, изготавливаемые из полистирола, полихлорвинила или другого материала, используемого в иммунологических реакци х со

Description

Изобретение относитс  к медицинской биотехнологии, в частности к генной инженерии , и может быть использовано дл  диагностики вирусного гепатита В.

Цель изобретени  - упрощение способа .

На твердую фазу сорбируют антитела к Ig M человека, затем внос т исследуемые образцы сыворотки или плазмы, при этом содержащиес  в них Ig M св зываютс  с сорбированными антителами. После инкубации и отмывки добавл ют меченый антиген, который взаимодействует со св занными

специфическими Ig M Повышение сигнала по сравнению с отрицательным контролем свидетельствует о наличии в образце анти- НВс класса Ig M.

Согласно предлагаемому способу в качестве меченого компонента используют меченый кор-антиген, который взаимодействует с антителами класса Ig M, предварительно св занными с сорбированными на твердой фазе антителами к Ig M человека.

НВс Ад высокой степени чистоты получают из лизата рекомбинантного штамма клеток Е. coli.

Јь

го со о ю

НВс Ад мет т радиоактивной меткой, ферментом, хелатным комплексом европи  или любой другой меткой, используемой в высокочувствительных иммунологических реакци х.

Твердой фазой служат шарики, лунки или пробирки, изготавливаемые из полистирола , полихлорвинила или другого материала , используемого в иммунологических реакци х на стадии сорбции первого сло .

Изобретение позвол ет упростить процесс определени  антител класса Ig M к кор-антигену вируса гепатита В. При этом чувствительность метода не снижаетс . Кроме того, исключаетс  необходимость использовани  крови человека,

Пример. Определение анти-НВс класса Ig M в радиоиммунологической реакции .

На твердую фазу сорбируют антитела против т желых цепей Ig M человека в концентрации 10 мкг/мл в объеме 0,1 мл в 0,05 М карбонат-бикарбонатном буфере, рН 9,5, в течение 16-18 ч при +4°С. После трехкратной отмывки дистиллированной водой в лунки внос т разведени  испытуемых человеческих сывороток 1:t02, 1:103 и т. д. до

1:10 по 0,1 мл в 0,4 М Na-фосфатном буфере , рН 7,2-7,4, содержащем 0,15 М хлорида натри , 0,1% тритона Х-100 и 0,1% бычьего сывороточного альбумина. После инкубации в течение 1-2 ч при +37°С лунки отмывают 5-6 раз дистиллированной водой и внос т раствор меченного 1251 НВс Ад в том же фосфатном буфере. После инкубации с антигеном 1-2 ч при +37°С следует отмывка

5-6 раз. Затем лунки вырезают и определ ют их радиоактивность ву-счетчике. Результаты, полученные по известному и предлагаемому способам, совпадают, т. е. чувствительность обоих методов не отличаетс .

Claims (1)

1. Формула изобретени  Способ определени  антител класса Ig М к кор-антигену вируса гепатита В. включающий проведение на твердой фазе иммунологической реакции между антителом и антигеном с использованием меченого компонента , отличающийс  тем, что, с целью упрощени  способа, в качестве меченого компонента используют кор-антиген, а антитела класса Ig M из испытуемых образцов св зывают с сорбированными на твердой фазе антителами к Ig M человека.