SK282920B6 - Prostriedok na indukciu cytotoxickej T-lymfocytovej odpovede a jeho použitie - Google Patents
Prostriedok na indukciu cytotoxickej T-lymfocytovej odpovede a jeho použitie Download PDFInfo
- Publication number
- SK282920B6 SK282920B6 SK89-94A SK8994A SK282920B6 SK 282920 B6 SK282920 B6 SK 282920B6 SK 8994 A SK8994 A SK 8994A SK 282920 B6 SK282920 B6 SK 282920B6
- Authority
- SK
- Slovakia
- Prior art keywords
- antigens
- antigen
- protein
- carcinoma
- hsv
- Prior art date
Links
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 title claims abstract description 121
- 230000004044 response Effects 0.000 title claims abstract description 69
- 230000006698 induction Effects 0.000 title description 42
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 183
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 183
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 179
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 72
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 34
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims abstract description 30
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract description 27
- 239000003599 detergent Substances 0.000 claims abstract description 19
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims abstract description 13
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 claims abstract description 7
- 239000007764 o/w emulsion Substances 0.000 claims abstract description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 62
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 claims description 46
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 31
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 28
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 claims description 27
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 claims description 18
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 claims description 16
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 16
- 102000007066 Prostate-Specific Antigen Human genes 0.000 claims description 14
- 108010072866 Prostate-Specific Antigen Proteins 0.000 claims description 14
- 241000282412 Homo Species 0.000 claims description 11
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 claims description 11
- 241000725643 Respiratory syncytial virus Species 0.000 claims description 9
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 claims description 9
- 108010068327 4-hydroxyphenylpyruvate dioxygenase Proteins 0.000 claims description 8
- 102100025064 Cellular tumor antigen p53 Human genes 0.000 claims description 8
- 108010069621 Epstein-Barr virus EBV-associated membrane antigen Proteins 0.000 claims description 8
- 108010083021 Epstein-Barr virus glycoprotein 85 Proteins 0.000 claims description 8
- 108091006027 G proteins Proteins 0.000 claims description 8
- 102000030782 GTP binding Human genes 0.000 claims description 8
- 108091000058 GTP-Binding Proteins 0.000 claims description 8
- 101710141454 Nucleoprotein Proteins 0.000 claims description 8
- 208000005252 hepatitis A Diseases 0.000 claims description 8
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 claims description 8
- 201000004792 malaria Diseases 0.000 claims description 8
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 claims description 8
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 claims description 8
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 7
- 108700025694 p53 Genes Proteins 0.000 claims description 7
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 claims description 7
- 102000016914 ras Proteins Human genes 0.000 claims description 7
- 108010014186 ras Proteins Proteins 0.000 claims description 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 6
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 claims description 6
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 claims description 6
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 claims description 5
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 claims description 5
- XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N IDUR Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(I)=C1 XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N 0.000 claims description 5
- 241001631646 Papillomaviridae Species 0.000 claims description 5
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 claims description 5
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 5
- 239000000693 micelle Substances 0.000 claims description 5
- 210000003046 sporozoite Anatomy 0.000 claims description 5
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 claims description 5
- 208000003950 B-cell lymphoma Diseases 0.000 claims description 3
- 101710192036 Sporozoite surface protein 2 Proteins 0.000 claims description 3
- 101710124413 Portal protein Proteins 0.000 claims description 2
- 101710137389 Probable tail terminator protein Proteins 0.000 claims description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 abstract description 28
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 16
- 230000003292 diminished effect Effects 0.000 abstract description 2
- 230000003019 stabilising effect Effects 0.000 abstract 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 71
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 53
- PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N dodecahydrosqualene Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 51
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 34
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 30
- 108010042708 Acetylmuramyl-Alanyl-Isoglutamine Proteins 0.000 description 26
- BSOQXXWZTUDTEL-ZUYCGGNHSA-N muramyl dipeptide Chemical compound OC(=O)CC[C@H](C(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](C)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H](O)[C@@H]1NC(C)=O BSOQXXWZTUDTEL-ZUYCGGNHSA-N 0.000 description 26
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 description 26
- JXTPJDDICSTXJX-UHFFFAOYSA-N n-Triacontane Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC JXTPJDDICSTXJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- 229940032094 squalane Drugs 0.000 description 24
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 23
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 22
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 22
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 22
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 21
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 19
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 19
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 18
- WQZGKKKJIJFFOK-FPRJBGLDSA-N beta-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-FPRJBGLDSA-N 0.000 description 17
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 17
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 17
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 17
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 16
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 description 15
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 15
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 14
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 14
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 14
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 14
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 13
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 12
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 12
- 239000000047 product Substances 0.000 description 12
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 description 11
- 108700027479 Syntex adjuvant formulation Proteins 0.000 description 11
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 10
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 10
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 9
- 229940092253 ovalbumin Drugs 0.000 description 9
- 230000037452 priming Effects 0.000 description 9
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 8
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 8
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 7
- RVGRUAULSDPKGF-UHFFFAOYSA-N Poloxamer Chemical compound C1CO1.CC1CO1 RVGRUAULSDPKGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 7
- 230000008348 humoral response Effects 0.000 description 7
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 7
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 7
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 229940037003 alum Drugs 0.000 description 6
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 6
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 6
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 6
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 6
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 6
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 6
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 6
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 6
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 5
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 5
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 4
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 4
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 4
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 4
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 4
- CBFCDTFDPHXCNY-UHFFFAOYSA-N icosane Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCCC CBFCDTFDPHXCNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N squalene Natural products CC(=CCCC(=CCCC(=CCCC=C(/C)CCC=C(/C)CC=C(C)C)C)C)C TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 4
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 4
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 4
- YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N (6E,10E,14E,18E)-2,6,10,15,19,23-hexamethyltetracosa-2,6,10,14,18,22-hexaene Chemical compound CC(C)=CCCC(C)=CCCC(C)=CCCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)C YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- UZOVYGYOLBIAJR-UHFFFAOYSA-N 4-isocyanato-4'-methyldiphenylmethane Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1CC1=CC=C(N=C=O)C=C1 UZOVYGYOLBIAJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 3
- YVGGHNCTFXOJCH-UHFFFAOYSA-N DDT Chemical compound C1=CC(Cl)=CC=C1C(C(Cl)(Cl)Cl)C1=CC=C(Cl)C=C1 YVGGHNCTFXOJCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N Mytomycin Chemical compound C1N2C(C(C(C)=C(N)C3=O)=O)=C3[C@@H](COC(N)=O)[C@@]2(OC)[C@@H]2[C@H]1N2 NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N 0.000 description 3
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N Tetramethylsqualene Natural products CC(=C)C(C)CCC(=C)C(C)CCC(C)=CCCC=C(C)CCC(C)C(=C)CCC(C)C(C)=C BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 3
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 3
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 3
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 3
- 125000001446 muramyl group Chemical group N[C@@H](C=O)[C@@H](O[C@@H](C(=O)*)C)[C@H](O)[C@H](O)CO 0.000 description 3
- -1 poly (oxy-1,2-ethanediyl Chemical group 0.000 description 3
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 3
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 3
- 229940031439 squalene Drugs 0.000 description 3
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 3
- KISWVXRQTGLFGD-UHFFFAOYSA-N 2-[[2-[[6-amino-2-[[2-[[2-[[5-amino-2-[[2-[[1-[2-[[6-amino-2-[(2,5-diamino-5-oxopentanoyl)amino]hexanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)p Chemical compound C1CCN(C(=O)C(CCCN=C(N)N)NC(=O)C(CCCCN)NC(=O)C(N)CCC(N)=O)C1C(=O)NC(CO)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CCCN=C(N)N)C(=O)NC(CO)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C(=O)NC(CC(C)C)C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 KISWVXRQTGLFGD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- 108010039939 Cell Wall Skeleton Proteins 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 2
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 2
- 206010018691 Granuloma Diseases 0.000 description 2
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 description 2
- 208000037357 HIV infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 102000008949 Histocompatibility Antigens Class I Human genes 0.000 description 2
- 101000957351 Homo sapiens Myc-associated zinc finger protein Proteins 0.000 description 2
- 108091054437 MHC class I family Proteins 0.000 description 2
- 102100038750 Myc-associated zinc finger protein Human genes 0.000 description 2
- 102000047918 Myelin Basic Human genes 0.000 description 2
- 101710107068 Myelin basic protein Proteins 0.000 description 2
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 2
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 2
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 2
- 108010008038 Synthetic Vaccines Proteins 0.000 description 2
- 229920002359 Tetronic® Polymers 0.000 description 2
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010053613 Type IV hypersensitivity reaction Diseases 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N alumane Chemical class [AlH3] AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N aluminium oxide Inorganic materials [O-2].[O-2].[O-2].[Al+3].[Al+3] PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000004520 cell wall skeleton Anatomy 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N cyanogen bromide Chemical compound BrC#N ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001461 cytolytic effect Effects 0.000 description 2
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 2
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 2
- DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N ethyl mercaptane Natural products CCS DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 2
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 208000033519 human immunodeficiency virus infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 2
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 2
- IZWSFJTYBVKZNK-UHFFFAOYSA-N lauryl sulfobetaine Chemical compound CCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CCCS([O-])(=O)=O IZWSFJTYBVKZNK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 2
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 229920002523 polyethylene Glycol 1000 Polymers 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 2
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 2
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 2
- 229940124551 recombinant vaccine Drugs 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000012552 review Methods 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 2
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 2
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000005951 type IV hypersensitivity Effects 0.000 description 2
- 208000027930 type IV hypersensitivity disease Diseases 0.000 description 2
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JNYAEWCLZODPBN-JGWLITMVSA-N (2r,3r,4s)-2-[(1r)-1,2-dihydroxyethyl]oxolane-3,4-diol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@H]1OC[C@H](O)[C@H]1O JNYAEWCLZODPBN-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- YHQZWWDVLJPRIF-JLHRHDQISA-N (4R)-4-[[(2S,3R)-2-[acetyl-[(3R,4R,5S,6R)-3-amino-4-[(1R)-1-carboxyethoxy]-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-5-amino-5-oxopentanoic acid Chemical compound C(C)(=O)N([C@@H]([C@H](O)C)C(=O)N[C@H](CCC(=O)O)C(N)=O)C1[C@H](N)[C@@H](O[C@@H](C(=O)O)C)[C@H](O)[C@H](O1)CO YHQZWWDVLJPRIF-JLHRHDQISA-N 0.000 description 1
- XBZYWSMVVKYHQN-MYPRUECHSA-N (4as,6as,6br,8ar,9r,10s,12ar,12br,14bs)-10-hydroxy-2,2,6a,6b,9,12a-hexamethyl-9-[(sulfooxy)methyl]-1,2,3,4,4a,5,6,6a,6b,7,8,8a,9,10,11,12,12a,12b,13,14b-icosahydropicene-4a-carboxylic acid Chemical compound C1C[C@H](O)[C@@](C)(COS(O)(=O)=O)[C@@H]2CC[C@@]3(C)[C@]4(C)CC[C@@]5(C(O)=O)CCC(C)(C)C[C@H]5C4=CC[C@@H]3[C@]21C XBZYWSMVVKYHQN-MYPRUECHSA-N 0.000 description 1
- JMTMSDXUXJISAY-UHFFFAOYSA-N 2H-benzotriazol-4-ol Chemical class OC1=CC=CC2=C1N=NN2 JMTMSDXUXJISAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- RAUPFUCUDBQYHE-AVGNSLFASA-N Asn-Phe-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O RAUPFUCUDBQYHE-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- WQAOZCVOOYUWKG-LSJOCFKGSA-N Asn-Val-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N WQAOZCVOOYUWKG-LSJOCFKGSA-N 0.000 description 1
- XJQRWGXKUSDEFI-ACZMJKKPSA-N Asp-Glu-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O XJQRWGXKUSDEFI-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 102000001189 Cyclic Peptides Human genes 0.000 description 1
- 108010069514 Cyclic Peptides Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 108700024394 Exon Proteins 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- SFKMXFWWDUGXRT-NWLDYVSISA-N Glu-Trp-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N)O SFKMXFWWDUGXRT-NWLDYVSISA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 101710154606 Hemagglutinin Proteins 0.000 description 1
- 108010088652 Histocompatibility Antigens Class I Proteins 0.000 description 1
- 108010048209 Human Immunodeficiency Virus Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- WQWSMEOYXJTFRU-GUBZILKMSA-N Leu-Glu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O WQWSMEOYXJTFRU-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- 241000186781 Listeria Species 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- OIQSIMFSVLLWBX-VOAKCMCISA-N Lys-Leu-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O OIQSIMFSVLLWBX-VOAKCMCISA-N 0.000 description 1
- 102000043129 MHC class I family Human genes 0.000 description 1
- 101150076359 Mhc gene Proteins 0.000 description 1
- 241000187481 Mycobacterium phlei Species 0.000 description 1
- 108700020354 N-acetylmuramyl-threonyl-isoglutamine Proteins 0.000 description 1
- 240000007817 Olea europaea Species 0.000 description 1
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 101710093908 Outer capsid protein VP4 Proteins 0.000 description 1
- 101710135467 Outer capsid protein sigma-1 Proteins 0.000 description 1
- 208000030852 Parasitic disease Diseases 0.000 description 1
- 235000019483 Peanut oil Nutrition 0.000 description 1
- RBRNEFJTEHPDSL-ACRUOGEOSA-N Phe-Phe-Lys Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 RBRNEFJTEHPDSL-ACRUOGEOSA-N 0.000 description 1
- 229920002046 Pluronic® L 62 LF Polymers 0.000 description 1
- 229920001214 Polysorbate 60 Polymers 0.000 description 1
- 101710176177 Protein A56 Proteins 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 241001222774 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Minnesota Species 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- WLJPJRGQRNCIQS-ZLUOBGJFSA-N Ser-Ser-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O WLJPJRGQRNCIQS-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- PRXRUNOAOLTIEF-ADSICKODSA-N Sorbitan trioleate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OC[C@@H](OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC)[C@H]1OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC PRXRUNOAOLTIEF-ADSICKODSA-N 0.000 description 1
- 101800001271 Surface protein Proteins 0.000 description 1
- MUAFDCVOHYAFNG-RCWTZXSCSA-N Thr-Pro-Arg Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O MUAFDCVOHYAFNG-RCWTZXSCSA-N 0.000 description 1
- MROIJTGJGIDEEJ-RCWTZXSCSA-N Thr-Pro-Pro Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N1[C@H](C(O)=O)CCC1 MROIJTGJGIDEEJ-RCWTZXSCSA-N 0.000 description 1
- VENKIVFKIPGEJN-NHCYSSNCSA-N Val-Met-Glu Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)N VENKIVFKIPGEJN-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- SSKKGOWRPNIVDW-AVGNSLFASA-N Val-Val-His Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)N SSKKGOWRPNIVDW-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- UZQJVUCHXGYFLQ-AYDHOLPZSA-N [(2s,3r,4s,5r,6r)-4-[(2s,3r,4s,5r,6r)-4-[(2r,3r,4s,5r,6r)-4-[(2s,3r,4s,5r,6r)-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)-4-[(2s,3r,4s,5s,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxyoxan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxy-6-(hy Chemical compound O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]1O)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]1O)O[C@H]1CC[C@]2(C)[C@H]3CC=C4[C@@]([C@@]3(CC[C@H]2[C@@]1(C=O)C)C)(C)CC(O)[C@]1(CCC(CC14)(C)C)C(=O)O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O[C@H]4[C@@H]([C@@H](O[C@H]5[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O5)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O4)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O UZQJVUCHXGYFLQ-AYDHOLPZSA-N 0.000 description 1
- 238000009098 adjuvant therapy Methods 0.000 description 1
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 1
- KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N alpha-L-glutamyl-L-glutamic acid Natural products OC(=O)CCC(N)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 210000003850 cellular structure Anatomy 0.000 description 1
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 1
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 1
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 238000010411 cooking Methods 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000008260 defense mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 238000009795 derivation Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 229940111685 dibasic potassium phosphate Drugs 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 1
- 210000003162 effector t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 208000021045 exocrine pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009931 harmful effect Effects 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 239000000185 hemagglutinin Substances 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 108010092114 histidylphenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 1
- 230000009610 hypersensitivity Effects 0.000 description 1
- 210000004201 immune sera Anatomy 0.000 description 1
- 229940042743 immune sera Drugs 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000002998 immunogenetic effect Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 230000002434 immunopotentiative effect Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 229960003971 influenza vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000004073 interleukin-2 production Effects 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 230000007794 irritation Effects 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 230000021633 leukocyte mediated immunity Effects 0.000 description 1
- 231100000053 low toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 201000006512 mast cell neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000006971 mastocytoma Diseases 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 1
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000012737 microarray-based gene expression Methods 0.000 description 1
- 229960004857 mitomycin Drugs 0.000 description 1
- 229940111688 monobasic potassium phosphate Drugs 0.000 description 1
- 229940035032 monophosphoryl lipid a Drugs 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 238000012243 multiplex automated genomic engineering Methods 0.000 description 1
- 229940055036 mycobacterium phlei Drugs 0.000 description 1
- 230000001613 neoplastic effect Effects 0.000 description 1
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000957 no side effect Toxicity 0.000 description 1
- 231100000956 nontoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 description 1
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 239000000312 peanut oil Substances 0.000 description 1
- 238000005191 phase separation Methods 0.000 description 1
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 229960000502 poloxamer Drugs 0.000 description 1
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 1
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 1
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 229950008882 polysorbate Drugs 0.000 description 1
- 229940068968 polysorbate 80 Drugs 0.000 description 1
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 1
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000009696 proliferative response Effects 0.000 description 1
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000002271 resection Methods 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 1
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 1
- 206010040872 skin infection Diseases 0.000 description 1
- PXLIDIMHPNPGMH-UHFFFAOYSA-N sodium chromate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-][Cr]([O-])(=O)=O PXLIDIMHPNPGMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YYGNTYWPHWGJRM-AAJYLUCBSA-N squalene Chemical compound CC(C)=CCC\C(C)=C\CC\C(C)=C\CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CCC=C(C)C YYGNTYWPHWGJRM-AAJYLUCBSA-N 0.000 description 1
- 229940038774 squalene oil Drugs 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 208000008732 thymoma Diseases 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
- A61K39/001102—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- A61K39/001103—Receptors for growth factors
- A61K39/001106—Her-2/neu/ErbB2, Her-3/ErbB3 or Her 4/ErbB4
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
- A61K39/001148—Regulators of development
- A61K39/00115—Apoptosis related proteins, e.g. survivin or livin
- A61K39/001151—Apoptosis related proteins, e.g. survivin or livin p53
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
- A61K39/001154—Enzymes
- A61K39/001164—GTPases, e.g. Ras or Rho
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
- A61K39/001169—Tumor associated carbohydrates
- A61K39/00117—Mucins, e.g. MUC-1
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
- A61K39/00118—Cancer antigens from embryonic or fetal origin
- A61K39/001182—Carcinoembryonic antigen [CEA]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
- A61K39/00119—Melanoma antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/002—Protozoa antigens
- A61K39/015—Hemosporidia antigens, e.g. Plasmodium antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/107—Emulsions ; Emulsion preconcentrates; Micelles
- A61K9/1075—Microemulsions or submicron emulsions; Preconcentrates or solids thereof; Micelles, e.g. made of phospholipids or block copolymers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P39/00—General protective or antinoxious agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55566—Emulsions, e.g. Freund's adjuvant, MF59
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
- C12N2740/16111—Human Immunodeficiency Virus, HIV concerning HIV env
- C12N2740/16134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Immunology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Pregnancy & Childbirth (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Virology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Gynecology & Obstetrics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Prostriedok na indukciu cytotoxickej T-lymfocytovej odpovede (CTL) obsahuje mikrofluidizovaný antigén iný ako albumín a mikrofluidizovaný antigénny prostriedok zložený minimálne z 2 nasledujúcich zložiek: stabilizujúceho detergenta, činidla tvoriaceho micely a biodegradovateľného a biokompatibilného oleja, pričom antigén aj antigénny prostriedok sú vo forme stabilnej emulzie typu olej vo vode. Tento prostriedok neobsahuje imunostimulačné peptidy. Prostriedok sa používa na prípravku lieku na vyvolanie cytotoxickej T-lymfocytovej odpovede človeka alebo zvieraťa, ktoré sú infikované vírusom a trpia jedným alebo viacerými symptómami vírusovej infekcie.ŕ
Description
Oblasť techniky
Vynález sa týka prostriedku na indukciu cytotoxickej T-lymfocytovej odpovede (CTL) sprostredkovanej cytotoxickými T-bunkami v ľuďoch a domácich a poľnohospodárskych zvieratách. Je to pokračovanie US prihlášky č. 07/735 069, podanej 25. júla 1991 pod názvom „Indukcia cytotoxických T-lymfocytových odpovedí“ [„Induction of Cytotoxic Tlymphocyte Responses“] Syamalom Raychaudhurim a Williamom H. Rastetterom.
Doterajší stav techniky
O cytotoxických T-lymfocytoch (CTL) sa predpokladá, že sú hlavným obranným mechanizmom hostiteľa pri odpovedi na rad vírusových infekcií a na neoplastický alebo nádorový rast. Tieto bunky eliminujú infikované a/alebo transformované bunky rozpoznávaním antigénnych fragmentov spojených s rôznymi molekulami (nazývanými molekuly MHC triedy I) na infikovaných a/alebo transformovaných bunkách. CTL môžu byť indukované experimentálne cytoplazmatickým zavedením istých rozpustných antigénov do špecifických buniek. Imunizácia samotným rozpustným antigénom je všeobecne nedostačujúca na špecifickú indukciu cytotoxických T-lymfocytov.
Jednou z metód, ktorou sa dá CTL odpoveď indukovať, je použitie techník rekombinantného inžinierstva na inkorporáciu kritickej zložky antigénu, o ktorý' ide, do genómu benígneho infekčného činidla. Cieľom takejto stratégie je vyvolať antigén-špecifickú cytotoxickú T-lymfo-cytovú odpoveď k žiadanému epitopu podrobením hostiteľa miernej, samoregulovanej infekcii. Boli opísané chiméme vektory s použitím vakcín, polyo, adeno- a rctrovírusov, ako aj baktérií, ako Listeria a BCG. Napríklad Takahashi et al. 85 Proc. Natl. Acad. Sci., USA 3105, 1988 opisujú použitie rekombinantného vírusu vakcíny exprimujúceho HIV gpl60 obalový gén ako potenciálny prostriedok na indukciu cytotoxických T-lymfocytov.
Druhou metódou, ktorou sa dá bunkami sprostredkovaná odpoveď indukovať, zahrnuje použitie adjuvans. Zatiaľ čo v tomto odbore sa zdá byť plno diskusií o použití adjuvans, zostáva v odbore nejasné, či sa indukuje bunkami sprostredkovaná imunita a či takáto bunkami sprostredkovaná imunita zahrnuje cytotoxickú T-lymfocytovú odpoveď. Nasledujúcimi príkladmi reprezentatívnych publikácií v tejto oblasti sú: Stover et al. 352 Náture 456, 1991 (neuznávané ako predchádzajúci spôsob k tomuto vynálezu) opisuje CTL odpoveď na β-galaktozidázu s použitím rekombinantnej BCG obsahujúcej β-galaktozidázový gén. Takáto odpoveď nebola detegovaná pri použití nekompletného Freundovho adjuvans a β-galaktozidázy.
Mitchell et al., 8 J. Clinical Oncology 856; 1990 opisuje liečbu pacientov s metastázujúcimi melanónmi pomocou adjuvans nazývaného „DETOX“ a lyzátov alogenických melanómov s podávaním päťkrát počas šesť týždňov. V malom počte pacientov sa pozoroval vzrast cytotoxických T-buniek. Autori opisujú potrebu zlepšenia hladiny tvorby cytotoxických T-lymfocytov a navrhujú kombinovanú terapiu adjuvans s interleukínom 2, ako aj predchádzajúce pôsobenie [pretreatment] cyklofosfoamidmi na zníženie hladiny nádorovo špecifických T-supresorových buniek, ktoré môžu existovať. DETOX zahrnuje detoxikovaný endotoxín (monofosforyl lipid A) zo Salmonela minnesota, kostru bunkovej steny Mycobacterium phlei, skvalénový olej a emulgátor.
Allison a Gregoriadis, 11 Immunology Today 427, 1990 opisujú, že jediné adjuvans „povolené na použitie“ v ľuďoch sú hlinité soli (alum), ktoré neposkytujú konzistentnú podporu bunkami sprostredkovanej imunity. Allison a Gregoriadis tvrdia „nastáva preto potreba vývoja adju vans s účinnosťou kompletného Freundovho adjuvans, ale bez jeho rôznych vedľajších účinkov, ako sú granulómy“. Pokračujú tvrdením, že existujú tri stratégie, napríklad použitie lipozómov; použitie adjuvans, nazývaných imunostimulačné komplexy (ISCOM, ktoré zahrnujú saponín a/alebo Quil A (triterpenoid s dvomi cukrovými reťazcami), cholesterol a fosfatidylcholín), ktoré sú povolené na použitie v chrípkovej vakcíne pre kone (Morein et al., Immnulgical Adjuvants and Vaccines, Plénum Press, 153); a použitie emulzií (SAF) skvalénu a/alebo Squalanu (s a/alebo bez pluronického Činidla) a muramyl dipeptidu (MDP). O SAF sa hovorí, že podporuje vyvolanie bunkami sprostredkovanej imunity v myšiach, aj keď „sa dlho myslelo, že podjednotkové antigény nemôžu vyvolávať cytotoxické T-bunkové (CTL) odpovede“.
Takahashi et al., 344 Náture 873, 1990, opisujú indukciu pomocných buniek obmedzených na triedu II (class II restricted helper] a cytotoxických T-lymfocytov použitím ISCOM s jednou podkožnou imunizáciou v myšiach. Tvrdia, že Freundovo adjuvans, nekompletné Freundovo adjuvans, fosfátom pufrovaný soľný roztok, neindukovali cytotoxickú aktivitu T-lymfocytov proti cieľom, o ktoré bol záujem. Tvrdia, že na rozdiel od výsledkov s inými formami exogénneho rozpustného bielkovinného antigénu, je možné iniciovať antigén špecifické CD8+ CD4’ CTL obmedzené na MHC triedy I imunizáciou s exogénnou intaktnou bielkovinou s použitím ISCOM. Tvrdia tiež, že opísané pokusy napovedajú, že by malo byť možné vyvolať ľudské CTL použitím ISCOM obsahujúcich HIV bielkoviny, a že vakcíny založené na ISCOM môžu dosiahnuť dlho hľadaný cieľ súčasnej indukcie CTL a protilátok purifikovanou bielkovinou.
Byars a Allison, 5 Vaccines 223, 1987 opisujú použitie SAF-1, ktorá obsahuje TWEEN 80, PLURONIC L121, a skvalén alebo Squalane, s muramyl dipeptidom alebo bez neho, a predpokladajú, že podľa ich údajov budú prostriedky bez muramyl dipeptidu užitočné na humánne a veterinárne vakcíny. Zosilňovacie dávky [booster shots] adjuvans sa podávali bez muramyl dipeptidu. O muramyl dipeptide sa hovorí, že zvyšuje produkciu protilátok významne oproti použitiu adjuvans bez muramyl dipeptidu. Bunkami sprostredkovaná imunita sa merala ako hypersenzitivita oneskoreného typu pomocou kožných testov na stanovenie indukcie T pomocných buniek. Táto hypersenzitivita bola vyššia a trvalejšia, keď sa podal v adjuvans muramyl dipeptid. Podobné adjuvans sú opísané v Allison et al., US patent 4 770 874 (kde sa tvrdí, že kombinácia muramyl dipeptidu a pluronického polyolu je podstatná na vyvolanie bunkami sprostredkovanej a humorálnej odpovede na sérový albumín); Allison et al., US patent 4 772 466; MurphyCorb et al., 246 Science.1293, 1989 (kde sa tvrdí, že použitie kombinovaného adjuvans s muramyl dipepetidom by mohlo zosilniť indukciu obidvoch zložiek imunitnej odpovede, humorálnej a bunkovej); Allison a Byars, 87 Vaccines 56, 1987 (kde sa tvrdí, že bunkami sprostredkovaná imunitná odpoveď je vyvolávaná SAF (s muramyl dipeptidom), ako sa ukazuje hypersenzitivitou oneskoreného typu, proliferatívnou odpoveďou T-buniek na antigén, produkciou interleukínu 2, a špecifickou geneticky obmedzenou lýziou cieľových buniek nesúcich imunizačný antigén); Allison a Byars, Immunopharmacology of Infectious Diseases: Vaccine Adjuvans and Modulators of NonSpecific Resistance 191 - 201, 1987; Morgan et al., 29 J. Medical Virology 74, 1989; Kenney et al., 121 J. Jmmunological Methods 157, 1989; Allison a Byars, 95 J. Immunological Methods 157, 1986 (kde sa ukazuje, že hlinité soli a emulzie minerálnych olejov zvyšujú tvorbu protilátok, ale nie bunkami sprostredkovanú imunitu, a že prostriedky s muramyl dipeptidom vyvolávajú bunkami sprostredkovanú imunitu); Byars et al. 8 Vaccine 49, 1992 (neuznávané ako predchádzajúci spôsob k tomuto vynálezu; kde sa tvrdí, že ich ad juvans prípravky význačne zvyšovali humorálne odpovede a v menšej miere zosilňovali bunkami sprostredkované odpovede na chrípkový hemaglutinín ako antigén); Allison a Byares, 28 Molecular Immunology 279, 1991 tvrdia, že funkcia muramyl dipeptidu je indukovať expresiu cytokínov a zvyšovať expresiu hlavných histokompatibilitných (MHC) génov; a že sa dosiahli lepšie protilátkové a bunkové odpovede ako s inými adjuvans, a že sa očakáva zistenie, či podobné stratégie vedú k žiadanému účinku v ľuďoch); Allison a Byars, Technology Advances in Vaccine Development 401, 1988 (opisujú bunkami sprostredkovanú imunitu s použitím SAF); Epstein et al., 4 Advance Drug Delivery Reviews 223, 1990 (kde je poskytnutý prehľad rôznych adjuvans používaných pri príprave vakcín); Allison a Byars; 95 J. Immunological Methods 157, 1986 (tvrdia, že prídavok muramyl dipeptidu k adjuvans význačne zvyšuje bunkami sprostredkované odpovede na rad antigénov, vrátane monoklonálnych imunoglobulínov a vírusových antigénov); a Morgan et al. 29. J. Medical Virology 74, 1989 (opisujú použitie SAF-1 na prípravu vakcíny na Epstein-Barrov vírus).
Kwak et al., Idiotypové siete v biológii a lekárstve [Idiotype Networks in Biology and Medicíne], Elsevier Science Publishers, str. 163,1990 opisuje použitie SAF bez muramyl dipeptidu ako adjuvans pre B-bunkový lymfómový idiotyp v ľuďoch. Konkrétne, emulzia Pluronic L121, Squalenu a 0,4 % TWEEN-80 vo fosfátom pufrovanom soľnom roztoku sa podávala s idiotypom. Uvádza sa, že „pridanie adjuvans má ďalej zvýšiť humorálnu odpoveď, a môže uľahčiť aj indukciu bunkovej odpovede.
Iné imunologické prostriedky zahrnujú lipozómy (Allison et al., US patenty 4 053 585 a 4 117 113); cyklické peptidy (Dreesman et al., US patent 4 778 784); Freundovo kompletné adjuvans (Asherson et al., 22 Immunology 465, 1972; Berman et al. 2 Intemational J. Cancer 539, 1967; Allison, 18 Immunopotentiation 73,1973; a Allison Nešpecifické faktory ovplyvňujúce hostiteľskú odolnosť [NonSpecifíc Factors Influencing Host Resistance] 247, 1973); ISCOM (Letvin et al., 87 Vaccines 209, 1987); adjuvans obsahujúce blokové polymérové činidlá tvorené minerálnym olejom, povrchovo aktívne činidlá a TWEEN 80 (Hunter a Bennett, 133 J. Immunology 3167, 1984; a Hunter et al. 127 J. Immunology 1244, 1981); adjuvans zložené z minerálneho oleja a emulgačného činidla s umŕtvených mykobaktérii alebo bez nich (Sanchez-Pescador et al., 141 J. Immunology 1720, 1988); a iné adjuvans ako lipofilné deriváty muramyl tripeptidu, a muramyl dipeptid kovalentne konjugovaný k rekombinantnej bielkovine.
Podstata vynálezu
Podstatou vynálezu je prostriedok na indukciu cytotoxickej T-lymfocytovej odpovede (CTL), ktorý obsahuje mikrofluidizovaný antigén iný ako albumín, a mikrofluidizovaný antigénny prostriedok zložený minimálne z 2 nasledujúcich zložiek
a) stabilizujúceho detergenta,
b) činidla tvoriaceho micely a
c) biodegradovatefného a biokompatibilného oleja, pričom antigén aj antigénny prostriedok sú vo forme stabilnej emulzie typu olej vo vode.
Mikrofluidizovaný antigén podľa vynálezu je vybraný z antigénnych úsekov HIV antigénov: gpl60, gag, pol, Nef, tat a Rev; maláriových antigénov: CS proteín a sporozoitový povrchový proteín 2; z povrchových antigénov hepatitídy B: Pre-Sl, Pre-S2, Hbc Ag a Hbe Ag; chrípkových anti génov: HA, NP a NA; z povrchových antigénov hepatitídy A; z antigénov herpetického vírusu: EBV gp340, EBV gp85, HSV gB, HSV gD, HSV gH, HSV včasného bielkovinového produktu, cytomegalovírusového gB, cytomegalovírusového gH a IE proteínu gP72; z antigénov respiračného syncytiálneho vírusu; F proteín, G proteín a N proteín; a z nádorových antigénov karcinómu CEA s karcinómom asociovaného mucínu, karcinómu P21, karcinómu P53, melanómu MPG, melanómu p97 a karcinómového produktu Neu onkogénu, karcinómového p53 génového produktu, prostatického špecifického antigénu (PSA), s prostatou asociovaného antigénu a mutovaného p21 ras proteínu.
Prostriedok na indukciu CTL odpovede zahŕňa zmes mikrofluidizovaného antigénu, s výnimkou antigénu B-bunkového lymfómu alebo albumínu s mikrofluidizovaným antigénnym prípravkom, ktorý je zložený minimálne z 2 nasledujúcich zložiek
a) stabilizujúceho detergenta,
b) činidla tvoriaceho micely a
c) biodegradovateľného a biokompatibilného oleja, pričom nie je obsiahnutá imunostimulačná peptidová zložka a je vo forme stabilnej emulzie typu olej vo vode.
Mikrofluidizovaný antigénový prípravok obsahuje detergent, činidlo a olej, je netoxický pre ľudí a domáce alebo poľnohospodárske zvieratá a je vybraný z HIV antigénov: gpl60, gag, pol, Nef, Tat a Rev; maláriových antigénov: CS proteín a sporozoitový povrchový antigén 2; z povrchových antigénov hepatitídy B: Pre-Sl, Pre-S2, Hbc Ag a Hbe Ag; chrípkových antigénov: HA, NP a NA; z povrchových antigénov hepatitídy A; z antigénov herpetického vírusu: EBV gp340, EBV gp85, HSV gB, HSV gD, HSV gH, HSV včasného bielkovinového produktu, cytomegalovírusového gB, cytomegalovírusového gH a IE proteínu gP72; z antigénov herpetického papilómového vírusu E4, E6 a E7; z antigénov respiračného syncytiálneho vírusu: F proteín, G proteín a N proteín; a z nádorových antigénov: karcinómu CEA s karcinómom asociovaného mucínu, karcinómu P21, karcinómu P53, melanómu MPG, melanómu p97 a karcinómového produktu Neu onkogénu, karcinómového p53 génového produktu, prostatického špecifického antigénu (PSA), s prostatou asociovaného antigénu a mutovaného p21 ras proteínu.
Podstatou vynálezu je aj použitie prostriedku na prípravu lieku na vyvolanie cytotoxickej T-lymfocytovej odpovede človeka alebo zvieraťa, kde človek alebo zviera je infikované vírusom a trpí jedným alebo viacerými symptómami vírusovej infekcie, pričom mikrofluidizovaný antigénový prostriedok je netoxický pre človeka alebo zviera.
Mikrofluidizovaný antigén je vybraný z HIV antigénov: gplóO, gag, pol, Nef, Tat a Rev; maláriových antigénov:CS proteín a sporozoitový povrchový antigén 2; z povrchových antigénov hepatitídy B: Pre-Sl, Pre-S2, Hbc Ag a Hbe Ag; chrípkových antigénov: HA, NP a NA; z povrchových antigénov hepatitídy A; z antigénov herpetického vírusu: EBV gp340, EBV gp85, HSV gB, HSV gD, HSV gH, HSV včasného bielkovinového produktu, cytomegalovírusového gB, cytomegalovírusového gH a IE proteínu gP72; z antigénov herpetického papilómového vírusu E4, E6 a E7; z antigénov respiračného syncytiálneho vírusu: F proteín, G proteín a N proteín; a z nádorových antigénov: karcinómu CEA s karcinómom asociovaného mucínu, karcinómu P21, karcinómu P53, melanómu MPG, melanómu p97 a karcinómového produktu Neu onkogénu, karcinómového p53 génového produktu, prostatického špecifického antigénu (PSA), s prostatou asociovaného antigénu a mutovaného p21 ras proteínu.
Prostriedok podľa vynálezu sa používa tiež na prípravu lieku na indukciu cytotoxickej T-lymfocytovej odpovede človeka a domáceho alebo poľnohospodárskeho zvieraťa, kde človek alebo zviera má jeden alebo viac symptómov vírusovej infekcie a v ktorom antigénový prostriedok je netoxický pre človeka alebo zviera.
Mikrofluidizovaný antigénový prípravok sa skladá v podstate z uvedeného detergentu a činidla tvoriaceho micely alebo z detergentu a oleja, alebo z oleja a činidla tvoriaceho micely.
Bol teda zistený bezpečný a výhodný prostriedok, ktorým sa dajú CTL odpovede indukovať v ľuďoch alebo v domácich či poľnohospodársky významných zvieratách. Prostriedok zahŕňa antigén, ktorý' má malú alebo žiadnu toxicitu pre zvieratá a neobsahuje imunostimulačný peptid (napr. muramyl dipeptid), ktorého prítomnosť by mohla znížiť žiadanú bunkovú odpoveď. Navyše sa metodológia ľahko používa a nevyžaduje rozsiahlu in vivo prácu na zmenu existujúcich buniek rekombinantnými technikami tak, aby sa stali imunogénnymi. Toto zistenie je prekvapujúce, lebo sa neočakávalo, že takéto CTL odpovede by sa dali dosiahnuť takými antigénovými prípravkami, ktoré neobsahujú imunostimulačné peptidy alebo ich ekvivalent. Použitie takýchto prípravkov antigénu je možné v širokom spektre chorobných stavov, alebo ako profylaktického činidla. Napríklad, podávanie takéhoto prípravku antigénu sa dá použiť na liečbu vírusového ochorenia, v ktorom je dôležitá CTL odpoveď, napríklad v liečbe infekcie HIV alebo chrípky; môže byť tiež rozšírené na použitie pri liečbe bakteriálnych infekcií, rakoviny, parazitálnych infekcií a podobne. Ako profylaktické činidlo, antigénový prípravok s vhodným antigénom je vhodný na prevenciu infekcií vírusmi spôsobujúcimi uvedené vírusové ochorenia, najmä profylaxiu HIV infekcie, a tiež pri profylaxii pacientov s rizikom rakoviny, napríklad po resekcii primárneho nádoru.
Takto prvým aspektom vynálezu je prostriedok na indukciu CTL odpovede v človekovi alebo v domácom zvierati (napr. pes alebo mačka), alebo v poľnohospodársky významnom zvierati (napr. kôň, krava alebo ošípaná) k antigénu inému, ako je antigén lymfómových B-buniek alebo vaječný albumín. Prostriedkom sa poskytuje antigén, ku ktorému je CTL odpoveď žiadaná, a ktorý zahŕňa stabilizujúci detergent, činidlo tvoriace micely [micelle-forming agent], a biodegradovateľný a biokompatibilný olej. Tento antigénový prípravok výhodne neobsahuje žiadnu peptidovú imunostimulačnú zložku, alebo má dostatočne nízku hladinu takejto zložky, takže žiadaná bunková odpoveď nie je znížená. Tento prípravok je výhodne poskytnutý ako stabilná emulzia „olej vo vode“. Toto znamená, že každá z rozličných zložiek je vybraná tak, aby emulzia sa udržala sama osebe počas najmenej jedného mesiaca, výhodne dlhšie ako rok, bez oddelenia fáz. Antigén a antigénový prípravok sa zmiešajú spolu, aby vytvorili zmes (výhodne pomocou mikrofluidizácie) a táto zmes sa podá zvieraťu v množstve dostatočnom na vyvolanie CTL odpovede v zvierati. Takéto podanie je potrebné len jeden raz.
Pod pojmom „stabilizujúci detergent“ sa myslí detergent, ktorý umožňuje zložkám emulzie zostať v stálej emulzii. Takéto detergenty zahrnujú polysorbát, 80 (TWEEN) (Sorbitan-mono-9-oktadecenoát-poly(oxy-l,2-etándiyl; vyrábaný ICI Americas, Wilmington, DE), TWEEN 40, TWEEN 20, TWEEN 60, Zwittergent 3-12, TEEPOL HB7, a SPAN 85.
Tieto detergenty sú zvyčajne poskytované v množstve približne 0,05 až 0,5 % hmotn., výhodne asi 0,2 % hmotn.
Pod pojmom „činidlo tvoriace micely“ sa rozumie činidlo, ktoré má schopnosť stabilizovať emulziu s inými zložkami tak, že sa vytvorí štruktúra podobná micelám. Takéto činidlá výhodne spôsobujú isté podráždenie v mieste infekcie, aby sa pritiahli makrofágy na podporu bunkovej odpovede. Príklady týchto činidiel zahrnujú polyméme povrchovo aktívne látky opísané BASF Wyandotte publikáciami, napr. Schmolka, 54 J. Am. Oil. Chem. Soc. 110, 1977, a Hunter et al. 129 J. Immunol. 1244, 1981, obidvoje zahrnuté tu odkazom, PLURONIC L62LF, L101, a L64, L121, PEG1000, a TETRONIC 1501, 15081, 701, 901, 1301 a 13081. Chemické štruktúry týchto činidiel sú v odbore dobre známe. Výhodne je toto činidlo vybrané tak, aby malo pomer hydrofilov/lipofilov [HLB] medzi 0 a 2, ako je definované Hunterom a Bennettom, 133 J. Immunology 3167, 1984. Činidlo sa výhodne poskytuje v množstve medzi 0,001 a 10 %, najvýhodnejšie v množstve medzi 0,001 a 5%.
Olej je vybraný na podporu udržania antigénu v emulzii oleja vo vode, t. j. na poskytnutie vehikula pre žiadaný antigén, a výhodne má teplotu topenia nižšiu ako 65 °C, takže emulzia sa vytvorí pri izbovej teplote (okolo 20 až 25 °C), alebo pri znížení teploty emulzie na izbovú teplotu. Príklady takýchto olejov zahrnujú skvalén, Squalane, EICOSANE, tetratetraoktán, glycerol a arašidový olej alebo iný rastlinný olej. Olej sa výhodne používa v množstve medzi 1 a 10 % hmotn., najvýhodnejšie medzi 2,5 a 5 % hmotn. Je dôležité, aby olej bol biodegradovateľný a biokompatibilný tak, aby telo mohlo olej v čase rozkladať a aby žiadne škodlivé účinky, ako granulómy, neboli zrejmé pri použití oleja.
Pri uvedených prípravkoch je dôležité, že v nich nie je peptidová zložka, osobitne muramyl dipeptid (MDP). Takýto peptid by interferoval s indukciou CTL odpovede, ak by bol použitý v množstve väčšom ako 20 mikrogramov na normálne humánne podanie prípravku. Prednosť sa dáva úplnej neprítomnosti takých peptidov v antigénovom prípravku, napriek ich zreteľnej stimulácii humorálnej časti imunitného systému. To znamená: teraz bolo zistené, že aj keď také peptidy môžu podporovať humorálnu odpoveď, sú nevýhodné, keď je žiadaná cytotoxická T-lymfocytová odpoveď.
Z iných príbuzných ohľadov, antigénový prípravok je tvorený len dvoma z troch uvedených zložiek a použitý s akýmkoľvek žiadaným antigénom (kde tento výraz zahrnuje bielkoviny, polypeptidy a ich fragmenty, ktoré sú imunogénne) s výnimkou vaječného albumínu (alebo iných albumínov, napr. HSA, BSA a ovalbumín) na indukciu CTL odpovede vo zvieratách alebo ľuďoch.
Bolo zistené, že uvedené prípravky sú významne výhodnejšie ako známe prípravky (vrátane ISCOM, DETOX a SAF) na humánne ciele. Na rozdiel od takýchto prípravkov, predkladané prípravky obsahujú činidlo podporujúce tvorbu miciel a súčasne nemajú žiadne peptidy, kostru bunkovej steny alebo bakteriálne bunkové zložky. Predkladané prípravky tiež vyvolávajú CTL odpoveď, ktorá buď nenastáva so známymi prípravkami, alebo je významne zvýšená v porovnaní s týmito prípravkami.
Výrazom „netoxický“ sa rozumie, že v zvierati alebo človeku, na ktoré sa pôsobí, sa pozorujú malé, alebo sa nepozorujú žiadne vedľajšie účinky antigénneho prípravku. Tí, ktorí majú bežné znalosti v lekárskych alebo veterinárnych odboroch rozpoznajú, že tento výraz má široký význam. Napríklad, pre v podstate zdravého človeka alebo zviera sa môže tolerovať len slabá toxicita, zatiaľ čo pre ľudí trpiacich terminálnou chorobou (s prognózou menej ako tri roky života) sa dá tolerovať toxicita podstatne vyššia.
V uskutočneniach, ktorým sa dáva prednosť, antigénový prípravok obsahuje v podstate dve alebo tri zo zložiek:
detergent, činidlo a olej a používa sa v podstate ako jednorazové podanie zmesi (antigén plus antigénový prípravok); človek alebo zviera sú infikovaní vírusom a trpia jedným alebo viacerými symptómami infekcie vírusom (ako sú všeobecne definované lekármi v príslušnom odbore); a antigénový prípravok je netoxický pre ľudí alebo zvieratá.
V iných uskutočneniach, ktorým sa dáva prednosť, je antigén vybraný z antigénnych úsekov HIV antigénov: gplóO, gag, pol, Nef, Tat, a Rev; maláriových antigénov: CS protein a sporozoitový povrchový proteín 2; z povrchových antigénov hepatitídy B: Pre-Sl, Pre-S2, HBc Ag, a HBe Ag; chrípkových antigénov: HA, NP a NA; z povrchových antigénov hepatitídy A; z antigénov herpetického vírusu: EBV gp340, EBV gp85, HSV gB, HSV gD, HSV gH, HSV včasného bielkovinového produktu, cytomegalovírusového gB, cytomegalovírusového gH, a IE proteínu gP72; z antigénov respiračného syncytiálneho vírusu: F proteín, G proteín a N proteín; a z nádorových antigénov karcinómu CEA, s karcinómom asociovaného mačinu, karcinómu P21, karcinómu P53, melanómu MPG, melanómu p97, a karcinómového produktu Neu onkogénu, melanómového antigénu nazývaného MAGE, a mutovaného p21 ros proteínu prítomného v celom rade zhubných nádorov.
Podľa súvislostí vynález sa vyznačuje zložením v podstate pozostávajúcim z antigénu zmiešaného s antigénovým prípravkom už opísaným, a antigén je vybraný z antigénnych úsekov už uvedených.
V iných možnostiach, vynález uvádza aj spôsob liečby pacienta infikovaného HIV, trpiaceho maláriou, trpiaceho chrípkou, trpiaceho hepatitídou, trpiaceho rakovinou, infikovaného herpetickým vírusom, alebo infikovaného respiračným syncytiálnym vírusom, pomocou podania prostriedku zahrnujúceho príslušný antigén (napr. vybraný z tých, čo sú uvedené), zmiešaného s jedným z uvedených antigénových prípravkov.
Iné význačné vlastnosti a výhody vynálezu vyplynú z nasledujúceho opisu.
Prehľad obrázkov na výkresoch
Obr. 1A - IC sú grafickým znázornením dát porovnávajúcich CTL indukciu rôznymi ovoalbumínovými prípravkami. E : T predstavuje pomer efektora k cieľu na všetkých obrázkoch.
Obr. 2A a 2B sú grafickým znázornením dát porovnávajúcich CTL indukciu rôznymi β-galaktozidázovými prípravkami.
Obr. 3 je grafickým znázornením dát porovnávajúcich CTL indukciu ovoalbumínom v lipozóme a v antigénovom prípravku.
Obr. 4 je grafickým znázornením dát ukazujúcich vplyv delécie CD4 a CD8 buniek na CTL indukciu.
Obr. 5 a 6 sú grafickým znázornením dát porovnávajúcich CTL indukciu ovoalbumínom v lipozóme a v antigénovom prípravku.
Obr. 7 je grafickým znázornením dát ukazujúcich CTL indukciu zmesou Squalane a TWEEN a antigénu.
Obr. 8 je grafickým znázornením dát ukazujúcich CTL indukciu zmesou skvalánu s pluronicom a antigénu.
Obr. 9 je grafickým znázornením indukcie anti-gp 120111b protilátok v opiciach rôznymi antigénovými prípravkami. Obr. 10A - 10B sú grafickým znázornením dát porovnávajúcich gpl20-špeciflckú CTL odpoveď v opiciach imunizovaných vakcínou gp 120 a gp 120-antigénovým prípravkom [gpl20-AF].
Príklady uskutočnenia vynálezu
Antigénové prípravky
Antigénová prípravky užitočné podľa tohto vynálezu sú všeobecne opísané. Tí, čo sú obyčajne zbehlí v odbore, rozpoznajú, že rovnocenné prípravky sa ľahko pripravia a že sa môže očakávať, že budú mať rovnocenné vlastnosti pri indukcii CTL odpovede. Takéto prípravky sú ľahko testovateľné čo do ich vlastností s použitím techník opísaných v príkladoch ďalej.
Nasledujúce príklady uskutočnenia vynálezu sú s použitím antigénového prípravku (AF) zloženého z 15 % Squalane (0,6 % TWEEN 80) a (0,0045 - 3,75 % pluronic) vo fosfátom pufrovanom soľnom roztoku (Imed STP). Konkrétne, emulzia AF obsahovala: 150 mg Squalane, 0,045 - 37,5 mg poloxaméru 401 (PLURONIC L 121), 6 mg polysorbátu 80 (TWEEN 80), 0,184 mg chloridu draselného, 0,522 mg monobázického fosforečnanu draselného, 7,36 mg chloridu sodného, 3,3 mg dibázického fosforečnanu draselného (bezvodého), na 1 ml vody, pH 7,4. Táto emulzia bola mikrofluidizovaná s použitím štandardnej techniky (Microfluidics Model M110F) s modulom spätného tlaku pri 75,79 kPa až 96460 kPa s postupným návratom k atmosférickému tlaku, chladením a balením v ľade.
V iných príkladoch sa antigén miešal s mikrofluidizovaným Squalane (S), pluronic (P) a TWEEN 80 (T) zmesami na dosiahnutie príslušných konečných koncentrácií 5 % Squalane, 0,2 % TWEEN 80 alebo 0,0015 až 1,25 % pluronic. Na určenie podzložiek potrebných na indukciu imunitnej odpovede špecifickej k antigénu, SqualaneTWEEN 80, pluronicTWEEN 80 a Squalane-pluronic boli pripravené v tých istých koncentráciách ako pri trojzložkovej zmesi. Pluronic, Squalane a TWEEN 80 boli pripravené aj jednotlivo na určenie vplyvu jednotlivých zložiek na CTL indukciu. Uskutočnila sa aj náhrada TWEEN 40, TWEEN 20 a Zwittergent za TWEEN 80 na určenie vplyvu rôznych derivátov TWEEN na CTL indukciu v ova systéme. Uskutočnila sa náhrada Squalane v trojzložkovom prípravku pomocou Eicosane alebo Triacontone a náhrada kopolyméru pluronic v tom istom trojzložkovom prípravku pomocou PEG 1000, Pleuronic L62LF a Tetronics 1501 a 15081. Pokiaľ sa týka dvojzložkových prípravkov, rôzne analógy v rôznych kombináciách sa miešali a testovali na ova špecifickú CTL indukciu. Boli to zmesi cholesterol TWEEN 80, Squalane - TWEEN 20, Pristane - TWEEN 80, alebo olivový olej - TWEEN 80. Na štúdiu stabilizácie, mikrofluidizovaná zmes Squalane-TWEEN 80 bola zmiešaná s dextrózou do konečnej koncentrácie 5 %. Vo všetkých prípadoch sa excipienty miešali v mikrofluidizačnom prístroji na vytvorenie stabilnej emulzie. V niektorých pokusoch sa dvojzložkové prípravky zmiešali s rôznymi koncentráciami MDP na indukciu CTL a humorálnych odpovedí. Tabuľka 1 ukazuje prehľadný zoznam rôznych prípravkov použitých pre túto štúdiu.
Tabuľka 1
Vplyv rôznych náhrad v trojzložkových a dvojzložkových systémoch
Náhrada v trojzložkových prípravkoch
STH B8 10
Ttaeer. 40 <T)
Twnen 20(T>
T1S01
T150R](P>
Pluronic 162LF IP)
PFG1300(P)
Triacontan» (S)
Náhrada v dvojzlcižkových prípravkoch
ST 82 44
PT
SP
Cholesterol(ΰ; ľťwean 80
Pristane :s) 'ľw-.-er. 80
Olivový ol.-.-i ; S ) -Τ-··η 80
Jcdnozložkové prípravky
Pokus £. 1 - % zabitia pri E:T 100:1
Pokus č. 2 · ¼ zabitia pri E:T 100: J l
Tweeri 80
Squalane + Tween 80 '
Prípravok adjuvans syntex mikrofluidizovaný (Syntex adjuvant formulation, SAFm) sa používal ako kontrolné adjuvans a skladal sa z dvoch časti. Časť 1 sa skladala z fosfátom pufrovaného soľného roztoku obsahujúceho finálnu koncentráciu 5 % Squalane, 1,25 pluronic a 0,2 % TWEEN 80 (vehikulum Čiže I-SAF). Časť II sa skladala z N-acetylmuramyl-L-treonyl-D-izoglutamínu (Thr-MDP), derivátu zložky mykobakteriálnej bunkovej steny. Pre ciele imunizácie sa antigén miešal s mikrofluidizovaným vehikulom (časť I) na získanie homogénnej emulzie. MDP sa pridal na vytvorenie SAFm a krátko vortexoval. Koncentrácia MDP sa menila, aby sa dalo stanoviť, či existuje koncentrácia opimálna pre CDL indukciu. Ako kontrola adjuvans, myši boli tiež imunizované s rozpustným antigénom zmiešaným s alumom podľa príručky výrobcu (Pierce Chemical, Rockford, ÍL), alebo s úplným Freundovým andjuvans (CFA).
STP antigénový prípravok sa používa na indukciu cytotoxických T-lymfocytových odpovedí v myšiach. Tí, čo sú zbehlí v odbore, rozpoznajú, že takýto myšací model ukazuje, že rovnocenné pokusy alebo pôsobenia budú podobne indukovať cytotoxické T-lymfocytové odpovede v ľuďoch a domácich alebo poľnohospodárskych zvieratách. Množstvo antigénneho prípravku a antigén užitočný na vytvorenie žiadanej bunkovej odpovede sa dajú stanoviť empiricky štandardnými postupmi, dobre známymi tým, čo sú zbehlí v odbore, bez zbytočného experimentovania. Teda, ak je žiaduce minimalizovať vedľajšie účinky pôsobenia takejto zmesi, je možné stanoviť minimálnu hladinu takejto zmesi na podávanie ľuďom, domácim alebo poľnohospodárskym zvieratám tak, aby sa vyvolala CTL odpoveď a tak indukovala imunita na žiadaný antigén. Pri normálnom použití sa takáto zmes podá injekčné ktorýmkoľvek z radu štandardných postupov, ale osobitne preferovaná je vnútrosvalová injekcia v mieste, ktoré dovolí, aby emulzia zostala stabilná počas niekoľkých dní alebo týždňov.
Metódy
Nasledujúce materiály a metódy sa použili v príkladoch uvedených ďalej, ak sa neuvádza inak:
Myši
Samice myší C57BL/6 a BALB/c (H-2d) sa získali od Harlen Sprague (San Diego, Kalifornia).
Antigény
Ovalbumín (ova, Gráde VII, Sigma Chemical Co., St. Louis, MO) sa používal v natívnej forme, β-galaktozidáza, (β-gal, Gráde V III; BRL) sa používala v natívnej forme a po varení v 1 N NaOH 2 minúty na vytvorenie alkalického hydrolyzátu. Rekombinantný gp 120 sa získal od Američan Biotechnology.
Nádorové bunku a transfektanty
Používané nádorové bunky boli la línie EL4 (C57BL/6 H-2d tymómové) a P815 (DBA/2, H-2d mastocytómové). Odvodenie ova-produkujúceho EL4 transfektantu, EG7-ova, je opísané už Moorom et al, 54 Celí 777,1988. β-galprodukujúci transfektant, P13.1, bol odvodený elektroporáciou 107 buniek P815 v 1 ml fosfátom pufrovaného soľného roztoku (PBS) s 10 mg ft/I-linearizovaného pCHUO (Pharmacia LKB Biotechnology Inc., Piscataway, NJ) a 1 mg AW-linearizovaného pSV2 neo (Southem et al., 1 J. Mol. Appl. Genet. 327, 1988) s nasledujúcou selekciou v 400 pg/ml antibiotika G418. Transfektant C3-4 bol odvodený z BALB/c hybridómu Igm 662 transfekciou plazmidom kódujúcim β-gal gén fúzovaným k tretiemu a štvrtému exónu ťažkého reťazca IgM (Rammensee et al., 30 Immunogenetics 296, 1989). Fibroblast 3T3 exprimujúci gp 160111b, 15 - 12, bol poskytnutý Dr. Germainom z NIH (Bethesda, MD). Kb transfekovaná L bunková línia bola poskytnutá Dr. Carboneom, Monash University, Austrália. Dd a Ld transfekované L bunkové línie boli poskytnuté Dr. Tedom Hensenom, Washington University, St. Louis.
Imunizácia
Myši boli imunizované intravenózne 200 μΐ suspenzie 25 x 106 splenocytov, po cytoplazmatickom nabití, ako je opísané v Moore et al., skôr, a Carbone et al., J. Exp. Med. 169: 603, 1989. Na imunizáciu ova-antigénovým prípravkom a β-gal-antigénovým prípravkom, 30 pg každého bielkovinového antigénu na myš sa podalo injekčné subkutánne do labiek a koreňa chvosta. Každá injekcia sa skladala z 67 μΐ mikrofluidizovaného antigénneho prípravku (pripraveného podľa štandardného postupu) a 30 pg bielkovinného antigénu vo finálnom objeme 200 μΐ. Finálny objem sa doplňoval HBSS, pozri Whittaker Manual (Welkersville, MD). MDP sa poskytlo v koncentráciách do 300 pg. Tam, kde je uvedené, boli myši imunizované rozpustnými antigénmi v CFA alebo alume v celkovom objeme 200 pl.
In vitro stimulácia efektorových populácii
Bunky sleziny (30 x 106) z normálnych alebo imunizovaných myší, ktoré boli primované najmenej 14 dní skôr, bolí inkubované s 1,5 x 106 EG7-ova (ožiarených 20 000 rad) na ova odpovede alebo s 1,5 x 106 C3-4 buniek (ožiarených 20 000 rad) na β-gal odpovede v 24-jamkovej platničke pri 37 °C a 7 % CCL/vzduchu. Všetky tkanivové kultivácie sa vykonávali v kompletnom médiu zloženom z IMDM média, pozri Whittaker Manual (Welkersville, MD), doplnenom 10 % fetálneho teľacieho séra (FCS), 2 mM glutamínom, gentamycínom a 2 x 10'5 M merkaptoetanolom. Pre in vitro deplečné pokusy, na slezinné bunky in vivo primované alebo in vitro stimulované sa pôsobilo monoklonálnymi protilátkami mAb RL.172 (anti-CD4) alebo mAb 3.168 (anti-CD8) na odstránenie CD4+ alebo CD8+ T buniek (Sarmiento et al., 125 J. Immunol. 2665, 1980, a Ceredig et al., 314 Náture 98, 1985). mAb RL.172 a mAb 3.168 boli získané od Dr. Jonathana Sprenta na Scripps Clinic and Research Foundation, La Jolla, CA.
Bunky sleziny (30 x 106) z normálnych alebo imunizovaných myší, ktoré boli primované najmenej 21 dní skôr, boli inkubované s 1,5 x 106 15-12 buniek (opracovaných s 200 pg mitomycínu C na 10s buniek po 45 minút) alebo s 500 pg 18111b peptidu obsahujúceho dominantný CTL epitop v BALB/c myši v kompletnom IMDM médiu, obsahujúcom 10 % vopred hodnoteného FCS (ICN Flow; ICN
Biochemicals, Inc., Costa Mes, CA), 2 mM glutamín, gentamycín a 2 x 10‘5 M merkaptoetanol. Na in vitro stimuláciu peptidmi boli bunky sleziny kultivované v kompletnom IMDM obsahujúcom 5 % ConA supematantu.
Pre in vitro deplečné pokusy sa na bunky sleziny in vivo primované alebo in vitro stimulované pôsobilo monoklonálnymi protilátkami mAb RL.172 (anti-CD4) alebo mAb 3168 (anti-CD8) v prítomnosti nizkotoxického králičieho komplementu na odstránenie CD4+ alebo CD8+ T buniek (22, 23). mAb RL.172 a mAb 3.168 boli dar od Dr. Jonathana Sprenta na Scripps Clinic and Research Foundation, La Jolla, CA.
Stanovenie cytotoxicity
Cieľové bunky (1 x 106) boli označené 100 pCi [51Cr] chromanu sodného 60 minút. Pre peptidmi pulzované ciele, 50 μΐ roztoku 1 mg/ml peptidu v HBSS sa pridalo počas značenia cieľa 5lCr. Po premytí, 104 cieľov a seriálne riedenia efektorových buniek, boli inkubované v 200 μΐ RP10 počas 4 hodín pri 37 °C. Odobralo sa 100 μΐ supematantu a špecifická lýza sa určila ako: Percento špecifickej lýzy = 100 x (uvoľnenie pomocou CTL-spontánne uvoľnenie) / / (maximálne uvoľnenie - spontánne uvoľnenie)}. Spontánne uvoľnenie v neprítomnosti cytotoxických T-lymfocytov (CTL) bolo vo všetkých pokusoch < 25 % maximálneho uvoľnenia detergentom.
Stanovenie protilátkovej odpovede v myšiach a opiciach
Každá jamka 96-jamkovej platničky s U profilmi dna (Costar, Cambridge, MA) bola pokrytá 150 ng ova alebo gpl20 v 50 μΐ HBSS a inkubovaná cez noc pri 4 °C. Na stanovenie anti-ονα a anti-gpl20 protilátkových odpovedí v myšiach, platnička bola blokovaná 1 % BSA 1 hodinu. Seriálne riedené séra boli pridané v objeme 25 pl na jamku a inkubované 2 hodiny. Platne boli premyté a 50 μΐ 1 : 1000 riedenia kozieho protimyšacieho IgG konjugovaného s HRPO (SBT, Alabama) v 1 % BSA sa pridalo na jamku. Po 1-hodinovej inkubácii sa platne premyli a pridalo sa 100 μΐ substrátu na jamku. OD4o5 sa odobrala po 10 až 15 minútach. Na stanovenie opičích anti-gpl20 protilátkových odpovedí boli všetky kroky rovnaké až na to, že tak blokovanie platničiek, ako aj riedenie séra sa vykonali v 5 % normálnom kozom sére v Havkovom vyrovnanom soľnom roztoku.
Syntéza peptidov
Syntetické peptidy zodpovedajúce aminokyselinovej sekvencii 253 - 276 (Zoznam sekvencii čís. 1: EQLESIINFEKLTEWTSSNVMEER; kde sa používa štandardný jednopísmenkový kód na označenie každej aminokyseliny) ovalbumínu (ova 253 - 276), aminokyselinovej sekvencii 84 - 102 myelínového bázického proteínu (MBP 84 - 102) (Zoznam sekvencii čís. 2: DENPVVHFFKNIVTPRTPP) a syntetické peptidy zodpovedajúce aminokyselinovej sekvencii 308 - 322 (18IIIb sekvencia) gpl20IIIb boli vytvorené peptidovou syntézou na pevnom nosiči s použitím syntetizátora Applied Biosystems 430A. Aminokyseliny boli kondenzované prostredníctvom preformovaných symetrických anhydridov, s výnimkou asparaginu, glutamínu a arginínu, ktoré bolí kondenzované ako hydroxybenzotriazolové estery. Kondenzačná účinnosť bola sledovaná ninhydrínovou reakciou podľa postupu Keisera et al., 34 Anál. Biochem. 595, 1970. Peptidy boli uvoľňované z nosiča pomocou HF podľa postupu „vysoko-nízko“ opísaného Tamom et al. 21 J. Am. Chem. Soc. 6442, 1983 a peptidy boli extrahované zo živice 10 % kyselinou octovou. Po lyofilizácii boli peptidy odsolené na kolóne Sephadex G-25 a vzorky peptidov potom čistené HPLC chromatografiou s obrátenou fázou na preparatívnej kolóne Vydac C-18. Vyčistené peptidy (98 %) boli solubilizované v HBSS vo finálnej koncentrácii 10 mg/ml a zriedené na žiadanú koncentráciu v kompletnom médiu.
Digescia CNBr
Na vzorky bielkovín (napr. β-galaktozidázy) sa pôsobilo 100-násobným molámym prebytkom brómkyánu v roztoku 100 mM trifluóroctovej kyseliny. Reakcia sa nechala uskutočňovať 18 hodín pri izbovej teplote (asi 20 °C) s otáčaním. Po predpísanom reakčnom čase boli peptidové fragmenty oddelené od reaktantov použitím prístroja SEP-PAK C-18 (Waters), eluované 95 % acetonitrilom a lyofilizované.
Alkalická digescia
Na vzorky bielkovín (napr. β-galaktozidázy) sa pôsobilo IN NaOH varom 2 minúty a výsledné peptidové fragmenty boli oddelené od reaktantov použitím prístroja SEP-PAK C-18 (Waters), a eluované 95 % acetonitrilom a lyofilizované.
Príklad 1: Iniciácia CTL obmedzených na triedu I
Moore et al., 113 LICLA Symp. Mol. Celí. Biol. 1989 a Carbone a Bevan, 171 J. Exp. Medicíne 377, 1990, ukazujú, že myši imunizované bunkami sleziny cytoplazmaticky nabitými rozpustným ova boli primované ku špecifickej odpovedi CTL obmedzených na triedu I. ova-exprimujúci EL4 transfektant EG7-ova bol použitý na in vitro stimuláciu in vivo primovaných slezinných lymfocytov a tiež ako cieľ pre ova špecifické CTL sprostredkované zabíjanie. Táto štúdia tiež ukázala že CD8+ efektory indukované EG7-ova transfektantom alebo bunkami sleziny cytoplazmaticky nabitými ova rozpoznávajú determinantu mapovanú peptidom ova 258-2276 v kontexte H-2Kb, lyžujú EG7-ova, a tiež zabíjajú EL4 bunky pokryté ova 258 - 276. Teda, aby sa určilo, či nejaká endogénna dráha CD8+ T buniek obmedzených na triedu I môže byť indukovaná rozpustným antigénom, uvedený systém sa použil na stanovenia, či sa isté antigénne prípravky dajú použiť na zavedenie rozpustného antigénu do dráhy obmedzenej na triedu I.
a) ova
Myši C57BL/6 boli imunizované jedenkrát rôznymi množstvami ova (30 pg až 1 mg na myš) s antigénovým prípravkom, alebo bez antigénového prípravku. Myši dostali injekciu subkutánne do koreňa chvosta. Bunky sleziny boli odobrané z imunizovaných myší najmenej dva týždne po imunizácii a boli in vitro stimulované EG7-ova transfektantmi. Koncentrácia ova tak nízka ako 30 pg bola rovnako účinná ako dávka 1 mg. Pre toto boli CTL štúdie rutinne vykonávané s bunkami sleziny z myší primovaných 30 pg ova.
Myši, ktorým bol injekčné podaný rozpustný ova v HBSS v takom vysokom množstve ako 1 mg, nevykazovali žiadne potvrdenie CTL primovania (OBR. 1A). Naproti tomu myši imunizované 30 pg ova v antigénnom prípravku opísanom skôr (označovanom na obrázkoch ako AF [antigén formulation]) ukazovali významnú transfektantšpecifickú CTL odpoveď (obr. 1C). Navyše rozsah zabíjania EG7-ova buniek ova-AF imunizovanými bunkami sleziny bol porovnateľný s rozsahom zabíjania bunkami z myší imunizovaných ονα-nabitými bunkami sleziny (obr. IB).
To, že špecifita CTL primovania in vivo bola antigén špecifická, ukazovala neschopnosť buniek sleziny z β-galaktozidázou imunizovaných myší vykazovať sekundár nu CTL odpoveď in vitro pri stimulácii EG7-ova. Žiadna ονα-špecifická CTL indukcia nebola pozorovaná.
b) β-galaktozidáza
Podobné výsledky boli získané pri použití iného rozpustného antigénu, β-gal. Na určenie β-gal špecifickej CTL odpovede bol používaný ako cieľ β-gal exprimujúci transfektant C3-4 odvodený z BALB/c. Imunizácia BALB/c myší rozpustným β-gal dala CTL odpoveď na úrovni pozadia. Preto na stanovenie špecifickej CTL odpovede odohranie slezinných lymfocytov bolo odložené na najmenej osem týždňov a tieto boli kultivované 5 dní v prítomnosti ožiarených C3-4 transfektantov.
Obr. 2B ukazuje, že 30 pg β-galaktozidázy v AF indukovalo silnú špecifickú CTL odpoveď proti transfektantovi. Pri pomere efektora k cieľu (E : T) 3 : 1, β-gal-AF imunizované myši vykazovali okolo 80 % špecifického zabíjania. Naproti tomu len 20 % zabíjanie toho istého cieľa sa dosiahlo s efektormi izolovanými z myší imunizovaných β-gal v HBSS pri rovnakom pomere E : T (obr. 2A). Pretože ani EL4 ani P815 neexprimujú MHC génové produkty triedy II a lýza vykazuje syngénnu reštrikciu, tieto ova a β-gal špecifické efektory sú obmedzené na triedu I MHC.
Aby sa preukázala užitočnosť antigénových prípravkov, myši boli imunizované rozpustným ova uzavretým do dvoch typov lipozómov, z ktorých jeden bol pH senzitívny lipozóm. Po jednom týždni boli bunky sleziny stimulované in vitro, ako je opísané a testované proti 51CR-značeným EG7-ova alebo EL4. Obr. 3 ukazuje reprezentatívny výsledok preukazujúci, že ova v lipozóme nemôže primovať myš k podstatnej CTL indukcii. Podobné výsledky sa pozorovali, keď sa imunizovalo ova v alumine.
Príklad 2: CTL rekognícia epitopu
Carbone a Bcvan, preukázali, že CTL indukované v C57BL/6 myšiach EG7-ova transfektantom a cytoplazmaticky ονα-nabitými splenocytmi rozpoznávajú EL4 bunky pokryté peptidom ova 258 - 276. Aby sa stanovilo, či rozpustný ovalbumín v AF indukuje podobné CTL odpovede, bunky sleziny sa pripravili z imunizovaných myší a stimulovali in vitro EGl-ova. Efektory boli testované proti EL4 bunkám pokrytým peptidom ova 253 - 276, alebo kontrolným peptidom odvodeným od myelínového bázického proteínu (MBP 84-102).
Výsledky ukazujú na ονα-AF primované CTL so špecificitou podobnou tým, čo boli primované transfektantmi alebo cytoplazmaticky nabitými ova (obr. ΙΑ, 1B a 1C). Ονα-AF primované efektorové bunky účinne lyžovali EG7ova a netransfektované EL4 bunky pokryté 50 pg/108 buniek ova peptidu, ale nelyzovali EL4 bunky pokryté SO pg/108 buniek MBP peptidu.
V β-galaktozidázovom systéme Carbone a Bevan ukázali, že β-gal exprimujúce transfektanty a splenocyty cytoplazmaticky nabité β-galaktozidázou indukujú CTL, ktoré lyžujú β-gal exprimujúce transfektanty a netransfektované P815 bunky pokryté alkalický hydrolyzovanou β-galaktozidázou. Rozpustná β-galaktozidáza indukuje CTL, ktoré majú podobnú špecificitu, ak sa imunizuje v AF (obr. 2).
Príklad 3: CTL efektory sú CD8+bunky
To, že rozpustné bielkovinové antigény v AF indukujú CD8+ efektorové T bunky, je ďalej ukázané. Splenocyty z imunizovaných myší boli kultivované 5 dní s ožiarenými transfektantmi in vitro. Potom sa bunky zobrali a depletovali od CD4+ a CD8+ T buniek s použitím monoklonálnych anti-CD4 alebo anti-CD8 protilátok a s komplementom.
Depletované populácie boli potom testované proti 51CR-EG7-ova v ova systéme alebo 5ICRP13.1 v β-gal systéme. Dáta znázornené na obr. 4 ukazujú, že v ova systéme deplécia od CD8+ T buniek zničí cytolytickú aktivitu príslušnú celej efektorovej bunkovej populácii. Naproti tomu deplécia od CD4+ T buniek nemala žiadny efekt na lýzu EG7-ova.
Podobne v β-gal systéme deplécia od CD8+ T buniek ničila cytolytickú aktivitu buniek sleziny imunizovaných β-gal-AF (dáta nie sú znázornené).
Príklad 4: Rozpustný ova v AF primuje CD8+ T bunky
Aby sa preukázalo, že ονα-AF primuje CD8+ T bunkovú populáciu in vivo a je kruciálny pre in vitro sekundárnu odpoveď, CD4+ a CD8+ populácie boli depletované zo slezín ονα-AF imunizovaných myší a kontrolných myší. Takto opracované populácie boli potom stimulované in vitro EGl-ova samotnými, alebo v kombinácii s CD4+ a CDB+ T bunkami z ονα-AF imunizovaných myší alebo v rôznych kombináciách CD4+ a CD8+ T buniek z ονα-AF imunizovaných myší s CD4+ a CD8* bunkami z kontrolných myší. Obr. 5 ukazuje, že primovanie CD8+ buniek je podstatné pre prejavy sekundárnej CTL odpovede in vitro. Tieto dáta tiež ukazujú, že pre účinnú sekundárnu CTL odpoveď in vitro sú potrebné CD4+ T bunky. CD4+ bunky nie sú potrebné na primovanie.
Uvedené príklady preukazujú vplyv antigénneho prípravku na indukciu odpovede CTL obmedzených na triedu I proti rozpustným bielkovinovým antigénom. Antigénny prípravok sprostredkoval a rozpustný antigén vyvolal primovanie CTL, ktoré bolo čo do aktivity podobné tomu, čo sa vyvolávalo transfektantmi alebo splenocytmi cytoplazmaticky nabitými ova alebo β-gal. V ovalbumínovom systéme EGl-ova, cytoplazmaticky nabité ova splenocyty a oνα-AF indukovali: (a) CD8+ CTL obmedzené na triedu I: (b) CTL, ktoré rozpoznávali cieľ scitlivený ova 253-276 syntetickým peptidom a (c) CTL s dlhou životnosťou po jedinej imunizácii. V β-galaktozidázovom systéme β-galAF indukoval CTL, ktoré rozpoznávali β-gal exprimujúceho transfektanta C3-4 a tiež netransfekované P815 bunky zcitlivené alkalický hydrolyzovanou β-gal. Toto je analogické tomu, čo sa pozorovalo s CTL indukovanými imunizáciou bunkami sleziny cytoplazmaticky nabitými β-galaktozidázou. Indukcia ονα-špecifických CTL antigénovým prípravkom je jedinečná, pretože ova uzavretý v pH citlivom lipozóme alebo v alumine (dáta nie sú znázornené) nemôže indukovať CTL primovanie in vivo.
Tieto príklady ukazujú, že antigénový prípravok použitý ako je uvedené, alebo jeho ekvivalenty, sú užitočné v humánnej terapii a vývoji vakcín na indukciu CTL pri rôznych nádorových a vírusových ochoreniach.
Príklad 5
Toto je konkrétny príklad dokladujúci použitie uvedeného AF na vytvorenie primovania CTL obmedzených na triedu I rozpustným gpl20 z HIV.
gpl60 exprimujúca bunková línia (15-12) bola vytvorená v Balb/c bunkovej 3T3 línii odvodenej z fibroblastov. Získaná bola od Dr. Rona Germaina a Dr. Jaya Berzofskyho, National Inštitúte of Health, Bethesda, MD. Bunková línia exprimujúca gpl60 sa použila na in vitro stimuláciu in vivo primovaných slezinných lymfocytov a tiež ako cieľ na gpl60 špecifickú CTL indukciu. V mnohých pokusoch bol peptid 18111b, ktorý obsahuje dominantný CTL epitop, použitý na in vitro stimuláciu. Na peptidovú restimuláciu v kultúre sa pridal do média IL-2. Balb/c myši boli imunizované raz 1 pg gpl20 na myš s alebo bez AF. Myšiam sa podala injekcia subkutánne alebo do koreňa chvosta. Bunky sleziny sa odobrali tri týždne po imunizácii a in vitro stimulovali ožiarenými gpl60 transfektantmi alebo peptidom 18IIIb. Po piatich dňoch kultivácie in vitro bolo primovanie zisťované podľa prítomnosti špecifických efektorov schopných lyžovať gplôO transfektanty, ale nie netransfektované bunkové línie. V niektorých pokusoch vac:gpl60 infikované P815 bunky boli použité ako cieľ. Výsledky sú znázornené v tabuľke 4A, kde CTL odpoveď je potenciovaná AF a gp 120. Musí sa pripomenúť, že v gpl20 systéme je optimum AF prípravku na gpl20-špecifickú CTL indukciu (po jednej imunizácii 1 gg gpl20 v AF) také, ktoré neobsahuje žiadny alebo minimálny pluronic. Ak však myši boli imunizované viackrát 5 gg gpl20 v AF obsahujúcom vyššiu koncentráciu pluronic (3,75 %), pozorovala sa podstatná CTL indukcia (dáta sa neuvádzajú).
Nasledujúci príklad ukazuje použitie antigénneho prípravku s použitím len jednej alebo dvoch zložiek. Tieto príklady preukazujú, že CTL odpovede môžu byť indukované s len jednou alebo dvomi z troch uvedených zložiek.
Príklad 6: Stanovenie kľúčových zložiek potrebných na CTL indukciu
Na stanovenie, či všetky uvedené zložky sú potrebné na antigén-špecifickú CTL indukciu, myši boli imunizované ovalbumínom v mikrofluidizovaných prípravkoch s rôznymi kombináciami dvoch alebo troch zložiek uvádzaných v AF, s náhradou PBS na mieste tretej zložky. Použité dvojzložkové kombinácie boli nasledovné: Squalane/TWEEN v PBS; Squalane/Pluronic v PBS alebo Pluronic/TWEEN v PBS. Iná séria skupín bola zahrnutá, keď sa myši imunizovali ova formulovaným v jednozložkových systémoch, t. j. len v Squalane v PBS, Pluronic v PBS alebo TWEEN v PBS.
Tieto uvedené antigénne prípravky sa skladajú z: 0,300 g TWEEN 80 (Aldrich, WI), 1,875 g Pluronic L121 (BASF, NJ), a 7,5 g Squalane (Aldrich, WI), doplnených PBS na 50 ml.
Dvojzložkové antigénne prípravky boli: Squalane/TWEEN: 0,300 g TWEEN 80 a 7,5 g Squalane doplnených PBS na 50 ml.
Pluronic/TWEEN: 1,875 g Pluronic L121 a 0,300 g TWEEN 80 doplnených PBS na 50 ml.
Pluronic/Squalane: 1,875 g Pluronic L121 a 7,5 g Squalane doplnených PBS na 50 ml.
Trojzložkové prípravky s premennou koncentráciou pluronic boli:
Koncentrácie Squalane a TWEEN sa udržiavali ako pred tým a koncentrácia pluronic sa menila.
S (gramov) T (gramov) P (^rumov)
7,5 0.300 0.75
0.075 0.0075 0.00075 0.00091 0.00045 0.00017
1,5 % 0.1 5 % 0.01 5 % 0.0015% 0.018 Vo 0,009 % 0.003 %
Vzorky boli potom spracované cez mikrofluidizér, model HOT, Microfluidics Corp, naplnené a uložené pri 4 °C do použitia.
Ovalbumín (ova, Sigma MO) bol navážený a prevedený do roztoku 0,3 mg/ml v HBSS (Whittaker, vyššie). Zásobný roztok 0,3 mg/ml bol spojený s dvojzložkovými prípravkami v nasledujúcich množstvách: 5 dielov roztoku ovalbumínu 0,3 mg/ml, 3,3 diely dvojzložkového prípravku a 1,7 dielu HBSS. Podobne sa s AF miešali β-gal a gpl20.
Prípravok sa vortexoval a držal na ľade až do injekčného použitia. Všetky roztoky sa spájali tesne pred podaním injekciou.
Každá myš dostala 200 μΐ jedného prípravku obsahujúceho 30 μΐ ova subkutánnou inekciou do koreňa chvosta.
Myši boli ponechané najmenej dva až štyri týždne pred odobratím slezín.
Dva týždne po imunizácii boli bunky sleziny vypreparované a in vitro stimulované ožiarenými EGl-ova. Po piatich dňoch kultivovania bola prítomnosť ova-špecifických CTL meraná testovním proti 51Cr-EG7-ov<a alebo 51Cr-EL4 pomocou stanovenia štvorhodinového uvoľnenia 51Cr. Dáta znázornené na obr. 6 až 8 ukazujú, že ovalbumín pripravený v mikrofluidizovanom dvojzložkovom systéme môže primovať owj-špeciftcké CTL in vivo.
Ďalej bol hodnotený relatívny príspevok jednotlivých zložiek na ich schopnosť indukovať CTL v spojení s bielkovinovými antigénmi. Na imunizačné ciele bol rozpustný antigén zmiešaný s mikrofluidizovanými excipientmi, aby sa získala stabilná homogénna emulzia s veľkosťou častíc 250 až 300 nm. Na ďalšie určenie zložiek prípravku SqualaneTWEEN 80-pluronic (STP) zodpovedných za indukciu CTL boli imunizované myši ova v zmesi SqualaneTWEEN 80 (ST), pluronic-TWEEN 80 (PT), zmesi Squalane- pluronic (SP) a ako kontrola v Squalane (S), TWEEN 80 (T), alebo pluronic (P). Myši boli tiež imunizované ova-SAFm (obsahujúcom 70 gg MDP) alebo ora-alumom ako s kontrolnými adjuvans. Pre pozitívnu kontrolu boli myši imunizované bunkami sleziny cytoplazmaticky nabitými rozpustným ova. Boli použité aj iné kombinácie a výsledky sú predvedené v tabuľke L Výsledky ukazujú, že STP alebo ST primuje odpoveď CTL obmedzených na triedu I v myšiach. Primovanie ova-špeciftckých CTL ova pomocou ova v STP alebo ova v SP sa ukazuje ako lepšie než to, ktoré je indukované bunkami sleziny cytoplazmaticky nabitými ova. Ova v PT alebo ova v SP mohli indukovať ova-špecifické CTL odpovede v myšiach, ale nekonzistentné a slabo. Na rozdiel od SAFm, pridanie MDP do ST prípravkov neohrozovalo ονα-špecifickú CTL indukciu v myšiach (tabuľa 2). Žiadna ονα-špecifická CTL indukcia neprebehla, keď myši boli imunizované ova zmiešaným s jednotlivými zložkami S, P či T, alebo keď myši boli imunizované ονα-SAFm alebo ονα-alumom. Myši imunizované takým vysokým množstvom ova, ako je 1 mg ova v (a) HBSS, v (b) SAFm alebo (c) absorbovaným k alumu neprimovali ονα-špecifické CTL.
Tabuľka 2
Indukcia ονα-špecifickej CTL odpovede nie je blokovaná
| ST + MDP | ova-ST | % cytotoxicity v myšiach in | nunizovuriých s | ||
| ova-ST | ova-ST MDP 300pg rnyš | ova-ST MDP ŤSpg myš | |||
| Stimulátor Cieľ*' | E-T | ||||
| CG7-ova HG7-ova | 100:1 | 0 | 100 | 82 | 76 |
| 33:1 | 0 | 86 | 67 | 62 | |
| 11:1 | 0 | 33 | 39 | 25 | |
| 3:1 | 0 | 6 | 13 | 3 | |
| 1:1 | 0 | 0 | 0 | 0 | |
| 3:1 | 0 | 0 | 0 | 0 |
* myši boli imunizované 30 gg ova s rôznymi prípravkami ** % cytotoxicity bolo počítané odčítaním percenta zabitia proti bunkovým líniám neexprimujúcim antigén
Príklad 7: Zložky potrebné na tvorbu ova-špecifických protilátok
Myši boli imunizované trikrát v dvojtýždňových intervaloch 30 gg ova v HBSS, STP, ST, PT alebo SP. Ako pozitívna kontrola boli myši tiež imunizované ονα-SAFm, keďže pre SAFm je známa indukcia silnej protilátkovej odpovede. Sedem dní po druhej a tretej imunizácii bola myšia odobraná krv a sérum testované na ονα-špecifickú protilátkovú odpoveď. Výsledky sú uvedené v tabuľke 3. Výsledky ukazujú, že myši imunizované ova v STP, ST alebo v SAFm vykazujú podobnú anti-ονα odpoveď po troch imunizáciách.
Tabuľka 3
Indukcia anti-ονα protilátkovej odpovede
| Imunizácia sa | Počet myši s odpoveďou/ celkový počet myší | Titer anti-ova protilátok^ (1/riedenie séra) |
| Pokusč 1 | ||
| HBSS | 0/3 | <1/20; <1/20: >1/15 360 |
| STP | 3/3 | >1/15 360; >1/15 360; >1/15 360 |
| ST | 3/3 | 1/3 840; 1/15 360; 1/3 840 |
| PT | 3/3 | >1/15 360; >1/15 360; >1/15 360 |
| SP | 3/3 | >1/15 360;>V15 360; >1/15 360 |
| SAFm | 3/3 | >1/15 360: >1/15 360, 1/3 840 |
| Pokus č. 2 | ||
| STP 0.0015 % | 3/3 | >1/4 860; > 1/4 B60; >1/4 860 |
| STP 0,015 % | 3/3 | >1/4 860; >1/4 860; >1/4 860 |
| STP 0.15 % | 3/3 | >1/4 860; >1/4 860; l/l 620 |
| STP 1,5% | 3/3 | >1/4 860, >1/4 860; 1/1 620 |
| HBSS | 1/3 | <1/20; 1/80; <1/20 |
| ST | 3/3 | >1/4 860; >1/4 860; >1/4 860 |
| STP | 3/3 | >1/4 860; >1/4 860; >1/4 860 |
a Myši boli imunizované trikrát s 30 pg ova v rôznych prípravkoch ° Titer bol vypočítavaný ako riedenie séra, ktoré dáva OD40J väčšie ako OD405+2SD získané s preimunným sérom
Príklad 8: HIV gpl20 špecifická CTL indukcia
HIV gpl20 Illb bol použitý ako tretí antigénový systém na stanovenie CTL indukcie v STP alebo iných dvoj- a trojzložkových obmenách prípravkov. Myši boli imunizované 1 pg gp 120 Illb v HBSS, STP, PT alebo v ST. Ako kontroly boli myši boli imunizované 1 pg gpl20 Illb v SAFm alebo CFA (kompletné Freundovo adjuvans) (tabuľka 4B). Bunky sleziny sa odobrali tri týždne po imunizácii a in vitro stimulovali mytomycínom opracovanými transfektovanými bunkami 15-12 alebo peptidom 18111b. Po piatich dňoch kultivácie výsledné efektorové bunky boli testované proti vakcíne : gp 160 IIIB, alebo rodičovským vakcínam infikovaným P815 bunkám ako cieľom. Výsledky ukazujú, že gpl20Squalane-TWEEN 80 konzistentne indukuje špecifickú CTL odpoveď v myšiach (tabuľky 4A a 4B). CFA a SAFm však boli neschopné indukovať gp 120-špecifické CTL (tabuľka 4B). V osobitnej štúdii sa na CTL indukciu testovali gpl20 v rôznych dávkach pluronic, od 0,0015% do 1,5%.
Tabuľka 4A
Indukcia gpl20-špecifickej CTL odpovede v myšiach
| % cytotoxicily v myšiach imunizovaných s* | ||||
| Stimulátor Cici**’ | E-T | gp!20-HBSS | gp!2D-ST | gpl20-STP |
| l«lllb/IL2 vac:gp!20 | 100:1 | 23 | 42 | ND*‘“ |
| 33:1 | 23 | 38 | ND | |
| 11:1 | 0 | O | ND | |
| 3:1 | 0 | 35 | ND |
ÍSIIMU 13-12 100:1 0
33:1 0
11.1 O
0
0 ** % cytotoxicity bolo počítané odčítaním percenta zabitia proti bunkovým líniám neexprimujúcim antigén *** ND: nedostupné
Tabuľka 4B
Indukcia gpl20-špecifickej CTL odpovede v myšiach3 % cylotoxicíty v myšiach imunizovaných gplZO-HBSS gpl20-ST gp120-CFA gp!20-SAFm
| CE-T | % | E-T | % | E-T | % | E-T | % |
| 100:1 | 16 | 67:1 | 94 | 17 1 | 0 | 100:1 | 3 |
| 33:1 | 14 | 22:1 | 91 | 6:1 | 0 | 33:1 | 2 |
| 11:1 | 2 | 7:1 | 58 | 2:1 | 0 | 11:1 | 0 |
| 3:1 | 0 | 2,3:1 | 57 | 0,7:1 | 0 | 3:1 | 0 |
| 1:1 | 0 | 0,8:1 | 12 | 0,2:1 | 0 | 1:1 | 0 |
| 0,3:1 | 0 | 0,3 ti | 7 | 0,07:1 | 0 | 0,3.1 | 0 |
a myši boli imunizované 1 pg gp 120ΙΙΙ v rôznych prípravkoch b bunky sleziny z rôznych skupín boli stimulované in vitro 18IIIb peptidom a IL-2 c cytotoxicita bola testovaná proti 5lCr značeným bunkám 3T3 alebo 15-12. Percento špecifickej cylotoxicíty bolo počítané odčítaním percenta zabitia proti bunkovým líniám neexprimujúcim antigén
Príklad 9: Indukcia gpl20-špecifických humorálnych odpovedí v myšiach
Na indukciu gpl20-špecifických humorálnych odpovedí boli myši imunizované 1 pg gp 120111b trikrát v dvojtýždňových intervaloch. Zvieratám bola odobraná krv a testovaná na prítomnosť IgG protilátok detekciou gp 120111b pomocou meraní ELISA na pevnej fáze. Výsledky pokusu č. 1 ukazujú, že gpl20 v ST alebo PT sú lepšie imunogény ako gpl20HBSS alebo gpl20-SAFm. Pokus č. 2 však ukazuje, že gpl20 v ST alebo STP (s koncentráciami pluronic 1,5 % alebo 3,75 %) môže indukovať vysokotitrové protilátkové odpovede.
Tabuľka 5
Indukcia anti-gpl20 protilátkovej odpovede
| Imunizácia sa gpl20 v | Počet myší s odpoveďou/ celkový počet myší | Titer anti-gp!20 protilátok^ (1/riedcntc séra) |
| Pokus č, 1 | ||
| HBSS | 2/3 | 1/60; <1/20; 1/60 |
| STP | 1/3 | <1/20; >1/4 SôU; >1/4 860 |
| ST | 3/3 | >1/4 860; >1/4 860; >1/4 860. |
| PT | 3/3 | >1/4 «60; >1/4 860; >1/4 860, |
| SP | 2/3 | <1/20; 1:540; 1:540 |
| SAFm | 3/3 | 1; 180; >1/4 860; 1:540 |
| Pokus č, 2 | ||
| STP 0,0015% | 2/3 | 1/180; 1/1 620; <1/120 |
| STP 0,015 % | 0/3 | <1/20; <1/20; <1/20 |
| STP 0.J5 % | 2/3 | >1/4 860; 1/1 620; <1/20 |
| STP 1,5% | 3/3 | >1/4 860; >1/4 «60; >1/4 860 |
| HBSS | 1/3 | <1/20; <1/20; >1/4 860; |
| ST | 3/3 | >1/4 860;>í/4 860; >1/4 860 |
| STP | 2/3 | >1/4 860; >1/4 860; 1/20 |
a Myši boli imunizované trikrát s 1 pg gp 120111b v rôznych prípravkoch “ Anti-gpl20 titer bol vypočítavaný, ako je opísané v tabuľke 3.
3:1 O
18lllb/ÍL2 313* 18111b IOO:1 O
S9
33:1 O 59
11:1 O
3:1 0
0
O
| 15-12 | vac:gpl20 | 100:1 | 35 | 84 | ND |
| 33:1 | 19 | 65 | ND | ||
| 11:1 | 12 | 37 | ND | ||
| 3.1 | 0 | 22 | N D | ||
| 1:1 | 0 | 0 | N D |
* myši boli imunizované 1 pg gp 120III v rôznych prípravkoch
Príklad 10: gpl20-špecifické protilátkové odpovede v opiciach
Opice (dve na skupinu) boli imunizované gp 120-SAFm, gp 120-SPT, gp 120-ST alebo gpl20-HBSS. Ako kontrola bola skupina opíc imunizovaná rekombinantnou vakcínou obsahujúcou gpl60111b. Opice boli imunizované v dvojtýždňových intervaloch a krv im bola odoberaná dva a tri týždne po druhej imunizácii. Pre- a imúnne séra z každej opice boli seriálne riedené a merané na anti-gpl20 aktivitu v ELISA, ako je opísané v materiáloch a metódach. Dáta (obr. 9) ukazujú, že opice imunizované gp 120-STP a gp 120-SAFm indukovali podobné odpovede v opiciach. Jedna opica indukovaná gpl20-ST indukovala anti-gpl20 odpoveď podobnú gpl20-SAFm alebo gpl20-SPT imunízovanej skupine. Jedna opica imunizovaná gpl20-ST neindukovala silnú anti-gpl20 odpoveď po dvoch imunizáciách.
Príklad 11: gpl20 špecifické CTL odpovede v opiciach
Opice boli imunizované 30 pg až 50 pg HIV gpl20 v AF alebo v HBSS viackrát. Ako kontrola boli opice tiež imunizované rekombinantným gpl60 vo vakcínii. Naše predbežné výsledky ukazujú, že 1/2 opíc imunizovaných gp 120-AF a 1 /2 opíc imunizovaných gp 160:vakcína vykazuje preferenčné zabíjanie vac:gpl60 infikovaných autológnych buniek (obr. 10A a 10B).
Iné uskutočnenia sú v rámci nasledujúcich nárokov.
ZOZNAM SEKVENCIÍ (1) Všeobecné informácie·.
(1) Žiadatelia: Syamal Raychaudhuri, William H. Rastetter (ii) Názov vynálezu: Prostriedok na indukciu cytotoxických T-lymfocytových odpovedí (iii) Počet sekvencií: 2 (iv) Korešpondenčná adresa:
(A) adresát: Lyon & Lyon (B) ulica: 611 West Sixth Street (C) mesto: Los Angeles (D) štát: Califomia (E) zem: USA (F) poštovné smerovacie číslo: 90017 (v) Počítačová čítacia forma:
(A) typ média: disketa 3,5, 1,44 Mb pamäte (B) počítač: IBM kompatibilný (C) operačný systém: IBM P.C. DOS (verzia 5.0) (D) počítačový program (software): Wordperfect (verzia
5.1) (vi) Údaje o súčasnej prihláške:
(A) číslo prihlášky:
(B) dátum podania:
(C) klasifikácia.
(vii) Údaje o predchádzajúcej prihláške:
Celkom predchádzajúcich prihlášok, vrátane prihlášky opísanej ďalej: 1 (A) Číslo prihlášky: 07/735,069 (B) dátum podania: 25. júla 1991 (viii) Informácia o zástupcovi:
(A) Meno: Warburg, Richard J.
(B) číslo registrácie: 32,327 (C) odkaz/číslo spisu: 197/077 (ix) Informácia o spojení:
(A) telefón: (213)489-1600 (B) fax: (213) 955-0440 (C) telex: 67-3510 (2) Informácia o sekvencií id. č. 1:
(1) Vlastnosti sekvencie:
(A) dĺžka: 24 (B) typ: aminokyselinová (C) typ vlákna: jednovláknová (D) topológia: lineárna (ii) typ molekuly: Sekv. id. č.: 1:
Glu Gin Leu Glu Ser De íle Asn Phe Glu Lys Leu Thr Glu Trp Thr
Ser Ser Asn Val Met Glu Glu Arg 24 (2) Informácia o sekvencií id. č. 2:
(i) Vlastnosti sekvencie:
(A) dĺžka: 19 (B) typ: aminokyselinová (C) typ vlákna: jednovláknová (D) topológia: lineárna (ii) typ molekuly: Sekv. id. č.: 2:
Asp Glu Asn Pro Val Val His Phe Phe Lys Asn Ľe Val Thr Pro Arg
Thr Pro Pro 19
Claims (18)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Prostriedok na indukciu cytotoxickej T-lymfocytovej odpovede (CTL), vyznačujúci sa tým, že obsahuje mikrofluidizovaný antigén iný ako albumín, a mikrofluidizovaný antigénny prostriedok zložený minimálne z 2 nasledujúcich zložieka) stabilizujúceho detergenta,b) činidla tvoriaceho micely ac) biodegradovateľného a biokompatibilného oleja, pričom antigén aj antigénny prostriedok sú vo forme stabilnej emulzie typu olej vo vode.
- 2. Prostriedok podľa nároku 1, vyznačujúci sa tým, že mikrofluidizovaný antigén je vybraný z antigénnych úsekov HIV antigénov: gpl60, gag, pol, Nef, tat a Rev; maíáriových antigénov: CS proteín a sporozoitový povrchový proteín 2; z povrchových antigénov hepatitídy B: Pre-Sl, Pre-S2, Hbc Ag a Hbe Ag; chrípkových antigénov: HA, NP a NA; z povrchových antigénov hepatitídy A; z antigénov herpetického vírusu: EBV gp340, EBV gp85, HSV gB, HSV gD, HSV gH, HSV včasného bielkovinového produktu, cytomegalovírusového gB, cytomegalovírusového gH a IE proteinu gP72; z antigénov respiračného syncytiálneho vírusu: F proteín, G proteín a N proteín; a z nádorových antigénov karcinómu CEA s karcinómom asociovaného mucínu, karcinómu P21, karcinómu P53, melanómu MPG, melanómu p97 a karcinómového produktu Neu onkogénu, karcinómového p53 génového produktu, prostatického špecifického antigénu (PSA), s prostatou asociovaného antigénu a mutovaného p21 ras proteínu.
- 3. Prostriedok na indukciu CTL odpovede, vyznačujúci sa tým, že zahŕňa zmes mikrofluidizovaného antigénu, s výnimkou antigénu B-bunkového lymfómu alebo albumínu s mikrofluidizovaným antigénnym prípravkom, ktorý je zložený minimálne z 2 nasledujúcich zložieka) stabilizujúceho detergenta,b) činidla tvoriaceho micely ac) biodegradovateľného a biokompatibilného oleja, pričom nie je obsiahnutá imunostimulačná peptidová zložka a je vo forme stabilnej emulzie typu olej vo vode.
- 4. Prostriedok podľa nároku 3, vyznačujúci sa tým, že mikrofluidizovaný antigénový prípravok obsahuje detergent, činidlo a olej.
- 5. Prostriedok podľa nároku 3, vyznačujúci sa tým, že mikrofluidizovaný antigénový prípravok je netoxický pre ľudí a domáce a/alebo poľnohospodárske zvieratá.
- 6. Prostriedok podľa nároku 3, vyznačujúci sa tým, že mikrofluidizovaný antigén je vybraný z HIV antigénov: gpl60, gag, pol, Nef, Tat a Rev; maláriových antigénov: CS proteín a sporozoitový povrchový antigén 2; z povrchových antigénov hepatitídy B: PreSl, PreS2, Hbc Ag a Hbe Ag; chrípkových antigénov: HA, NP a NA; z povrchových antigénov hepatitídy A; z antigénov herpetického vírusu: EBV gp340, EBV gp85, HSV gB, HSV gD, HSV gH, HSV včasného bielkovinového produktu, cytomegalovírusového gB, cytomegalovírusového gH a IE proteínu gP72; z antigénov herpetického papilómového vírusu E4, E6 a E7; z antigénov respiračného syncytiálneho vírusu: F proteín, G proteín a N protein; a z nádorových antigénov: karcinómu CEA s karcinómom asociovaného mucínu, karcinómu P21, karcinómu P53, melanómu MPG, melanómu p97 a karcinómového produktu Neu onkogénu, karcinómového p53 génového produktu, prostatického špecifického antigénu (PSA), s prostatou asociovaného antigénu a mutovaného p21 ras proteínu.
- 7. Použitie prostriedku podľa nároku 3 na prípravu lieku na vyvolanie cytotoxickej T-lymfocytovej odpovede človeka alebo zvieraťa.
- 8. Použitie podľa nároku 7, kde mikrofluidizovaný antigénový prípravok sa skladá z detergenta, činidla a oleja.
- 9. Použitie podľa nároku 7, kde človek alebo zviera je infikované vírusom a trpí jedným alebo viacerými symptómami vírusovej infekcie.
- 10. Použitie podľa nároku 7, v ktorom mikrofluidizovaný antigénový prostriedok je netoxický pre človeka alebo zviera.
- 11. Použitie podľa nároku 7, v ktorom mikrofluidizovaný antigén je vybraný z HIV antigénov: gp 160, gag, pol, Nef, Tat a Rev; maláriových antigénov:CS proteín a sporozoitový povrchový antigén 2; z povrchových antigénov hepatitídy B: Pre-Sl, PreS2, Hbc Ag a Hbe Ag; chrípkových antigénov: HA, NP a NA; z povrchových antigénov hepatitídy A; z antigénov herpetického vírusu: EBV gp340, EBV gp85, HSV gB, HSV gD, HSV gH, HSV včasného bielkovinového produktu, cytomegalovirusového gB, cytomegalovírusového gH a IE proteínu gP72; z antigénov herpetického papilómového vírusu E4, E6 a E7; z antigénov respiračného syncytiálneho vírusu: F proteín, G proteín a N protein; a z nádorových antigénov: karcinómu CEA s karcinómom asociovaného mucínu, karcinómu P21, karcinómu P53, melanómu MPG, melanómu p97 a karcinómového produktu Neu onkogénu, karcinómového p53 génového produktu, prostatického špecifického antigénu (PSA), s prostatou asociovaného antigénu a mutovaného p21 ras proteínu.
- 12. Použitie prostriedku podľa nároku 1 na prípravu lieku na indukciu cytotoxickej T-lymfocytovej odpovede človeka a domáceho alebo poľnohospodárskeho zvieraťa.
- 13. Použitie podľa nároku 12, kde človek alebo zviera má jeden alebo viac symptómov vírusovej infekcie.
- 14. Použitie podľa nároku 12, v ktorom antigénový prostriedok je netoxický pre človeka alebo zviera.
- 15. Použitie podľa nároku 12, v ktorom antigén je vybraný z antigénnych úsekov HIV antigénov; gplóO, gag, pol, Nef, Tat a Rev; maláriových antigénov: CS proteín a sporozoitový povrchový antigén 2; z povrchových antigénov hepatitídy B: Pre-Sl, PreS2, Hbc Ag a Hbe Ag; chrípkových antigénov: HA, NP a NA; z povrchových antigénov hepatitídy A; z antigénov herpetického vírusu: EBV gp340, EBV gp85, HSV gB, HSV gD, HSV gH, HSV včasného bielkovinového produktu, cytomegalovirusového gB, cytomegalovírusového gH a IE proteínu gP72; z antigénov herpetického papilómového vírusu E4, E6 a E7; z antigénov respiračného syncytiálneho vírusu: F proteín, G proteín a N proteín; a z nádorových antigénov: karcinómu CEA s karcinómom asociovaného mucínu, karcinómu P21, karcinómu P53, melanómu MPG, melanómu p97 a karcinómového produktu Neu onkogénu, karcinómového p53 génového produktu, prostatického špecifického antigénu (PSA), s prostatou asociovaného antigénu a mutovaného p21 ras proteínu.
- 16. Použitie podľa ktoréhokoľvek z nárokov 12 až 15, v ktorom mikrofluidizovaný antigénový prípravok sa skladá v podstate z uvedeného detergenta a činidla tvoriaceho micely.
- 17. Použitie podľa ktoréhokoľvek z nárokov 12 až 15, v ktorom mikrofluidizovaný antigénový prípravok sa skladá v podstate z uvedeného detergenta a uvedeného oleja.
- 18. Použitie podľa ktoréhokoľvek z nárokov 12 až 15, v ktorom mikrofluidizovaný antigénový prípravok sa skladá v podstate z uvedeného oleja a činidla tvoriaceho micely.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US73506991A | 1991-07-25 | 1991-07-25 | |
| PCT/US1992/006193 WO1993001831A1 (en) | 1991-07-25 | 1992-07-24 | Induction of cytotoxic t-lymphocyte responses |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SK8994A3 SK8994A3 (en) | 1994-11-09 |
| SK282920B6 true SK282920B6 (sk) | 2003-01-09 |
Family
ID=24954233
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SK89-94A SK282920B6 (sk) | 1991-07-25 | 1992-07-24 | Prostriedok na indukciu cytotoxickej T-lymfocytovej odpovede a jeho použitie |
Country Status (27)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US5585103A (sk) |
| EP (1) | EP0596032B2 (sk) |
| JP (1) | JP3939746B2 (sk) |
| KR (1) | KR100198868B1 (sk) |
| AT (1) | ATE166578T1 (sk) |
| AU (1) | AU666127B2 (sk) |
| BG (1) | BG62240B1 (sk) |
| BR (1) | BR9206310A (sk) |
| CA (1) | CA2113720A1 (sk) |
| CZ (1) | CZ288048B6 (sk) |
| DE (1) | DE69225710T3 (sk) |
| DK (1) | DK0596032T4 (sk) |
| ES (1) | ES2117052T5 (sk) |
| FI (2) | FI108114B (sk) |
| HU (2) | HU220295B (sk) |
| IE (1) | IE922436A1 (sk) |
| IL (1) | IL102639A (sk) |
| MX (1) | MX9204376A (sk) |
| NO (1) | NO317203B1 (sk) |
| OA (1) | OA09880A (sk) |
| PH (1) | PH30906A (sk) |
| RO (1) | RO116459B1 (sk) |
| RU (1) | RU2129439C1 (sk) |
| SK (1) | SK282920B6 (sk) |
| TW (1) | TW349867B (sk) |
| WO (1) | WO1993001831A1 (sk) |
| ZA (1) | ZA925614B (sk) |
Families Citing this family (79)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6197311B1 (en) * | 1991-07-25 | 2001-03-06 | Idec Pharmaceuticals Corporation | Induction of cytotoxic T-lymphocyte responses |
| US5709860A (en) * | 1991-07-25 | 1998-01-20 | Idec Pharmaceuticals Corporation | Induction of cytotoxic T-lymphocyte responses |
| WO1994021287A1 (en) * | 1993-03-15 | 1994-09-29 | The Government Of The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Peptide coated dendritic cells as immunogens |
| GB9314623D0 (en) * | 1993-07-14 | 1993-08-25 | Nordion Int Inc | Localization and therapy with agents directed against prostate specific antigen in breast cancer |
| GB9326253D0 (en) * | 1993-12-23 | 1994-02-23 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccines |
| AUPM446594A0 (en) * | 1994-03-16 | 1994-04-14 | Csl Limited | Cytotoxic t-cell epitopes identified within epstein-barr virus |
| GB9620795D0 (en) * | 1996-10-05 | 1996-11-20 | Smithkline Beecham Plc | Vaccines |
| US5820880A (en) * | 1995-06-07 | 1998-10-13 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army | Liposomal formulation |
| ES2195317T3 (es) * | 1997-01-30 | 2003-12-01 | Chiron Corp | Uso de microparticulas con antigeno adsorbido para estimular respuestas inmunitarias. |
| US6884435B1 (en) * | 1997-01-30 | 2005-04-26 | Chiron Corporation | Microparticles with adsorbent surfaces, methods of making same, and uses thereof |
| EP0983086B1 (en) * | 1997-02-05 | 2007-08-29 | Jean-Claude Bystryn | pH-SENSITIVE LIPOSOMES AND OTHER TYPES OF ENCAPSULATED VACCINES CONTAINING IMMUNOMODULATORS, AND METHODS FOR MAKING AND USING SAME |
| AT405939B (de) * | 1997-02-24 | 1999-12-27 | Immuno Ag | Verfahren zur inaktivierung von lipidumhüllten viren |
| DE69823347T2 (de) * | 1997-05-16 | 2005-05-12 | Alberta Research Council, Edmonton | Mikrofluidisches system und verfahren zu dessen betrieb |
| US6632619B1 (en) * | 1997-05-16 | 2003-10-14 | The Governors Of The University Of Alberta | Microfluidic system and methods of use |
| GB9718901D0 (en) | 1997-09-05 | 1997-11-12 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccine |
| DE69815692T2 (de) * | 1997-09-05 | 2004-04-29 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Öl in wasser emulsionen mit saponinen |
| MY131805A (en) * | 1997-09-18 | 2007-09-28 | Biogen Idec Inc | Synergistic composition and methods for treating neoplastic or cancerous growths and for restoring or boosting hematopoiesis. |
| US6949339B1 (en) * | 1998-05-21 | 2005-09-27 | Diadexus, Inc. | Method of diagnosing, monitoring, and staging colon cancer |
| US6858386B1 (en) * | 1998-05-21 | 2005-02-22 | Diadexus, Inc. | Method of diagnosing, monitoring, staging, imaging and treating colon cancer |
| IL142717A0 (en) * | 1998-10-30 | 2002-03-10 | Genetics Inst | Inhibition of differentiation of cytotoxic t-cells by p-selectin ligand (psgl) antagonists |
| ES2279647T3 (es) * | 1998-11-10 | 2007-08-16 | Emory University | Reguladores mitogenicos. |
| US7198920B1 (en) * | 1999-01-29 | 2007-04-03 | Corika Corporation | HER-2/neu fusion proteins |
| US20050226890A1 (en) * | 1999-08-12 | 2005-10-13 | Cohen David I | Tat-based vaccine compositions and methods of making and using same |
| US20050244434A1 (en) * | 1999-08-12 | 2005-11-03 | Cohen David I | Tat-based tolerogen compositions and methods of making and using same |
| JP3524537B2 (ja) * | 1999-11-22 | 2004-05-10 | ディアデクサス インコーポレーテッド | 癌の診断、モニタリング、ステージング、イメージングおよび処置のための新規方法 |
| US7238471B1 (en) | 1999-11-23 | 2007-07-03 | Diadexus, Inc. | Method of diagnosing, monitoring, staging, imaging and treating breast cancer |
| US20020048777A1 (en) * | 1999-12-06 | 2002-04-25 | Shujath Ali | Method of diagnosing monitoring, staging, imaging and treating prostate cancer |
| EP1292675A2 (en) * | 2000-05-26 | 2003-03-19 | Diadexus, Inc. | Method of diagnosing, monitoring, staging, imaging and treating colon cancer |
| US7229623B1 (en) * | 2000-08-03 | 2007-06-12 | Corixa Corporation | Her-2/neu fusion proteins |
| US6663861B2 (en) | 2000-11-09 | 2003-12-16 | Antibodyshop A/S | Method of producing antibodies by immunization with conjugates of molecules coupled to charge-modified proteins |
| US20070073047A1 (en) * | 2002-06-10 | 2007-03-29 | Biogen Idec Ma Inc. | Genes overexpressed by ovarian cancer and their use in developing novel therapeutics |
| BR0314629A (pt) | 2002-09-19 | 2005-08-02 | Us Gov Health & Human Serv | Polipeptìdeos de p. ariasi polipeptìdeos de p. perniciosus e métodos e uso |
| US7485306B2 (en) | 2002-10-29 | 2009-02-03 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Lutzomyia longipalpis polypeptides and methods of use |
| CN1767854B (zh) * | 2003-04-04 | 2013-07-24 | 硕腾P有限责任公司 | 微流化水包油乳剂及疫苗组合物 |
| ATE392905T1 (de) * | 2003-07-24 | 2008-05-15 | Merial Ltd | Vakzin-formulierungen mit einer öl-in-wasser- emulsion |
| WO2005090968A1 (en) * | 2004-03-16 | 2005-09-29 | Inist Inc. | Tat-based immunomodulatory compositions and methods of their discovery and use |
| US8124397B2 (en) * | 2005-08-08 | 2012-02-28 | Oregon Health & Science University | Inactivating pathogens with oxidizing agents for vaccine production |
| US20100130425A1 (en) | 2005-09-09 | 2010-05-27 | Oregon Health & Science University | Use of toll-like receptor ligands in treating excitotoxic injury, ischemia and/or hypoxia |
| US7842299B2 (en) | 2006-03-14 | 2010-11-30 | Oregon Health & Science University | Methods for producing an immune response to tuberculosis |
| EP2019684A4 (en) | 2006-04-20 | 2009-08-26 | Jackson H M Found Military Med | METHODS AND COMPOSITIONS BASED ON SHIGA TOXIN PROTEIN TYPE 1 |
| PL2468300T3 (pl) | 2006-09-26 | 2018-04-30 | Infectious Disease Research Institute | Kompozycja szczepionki zawierająca syntetyczny adiuwant |
| US20090181078A1 (en) | 2006-09-26 | 2009-07-16 | Infectious Disease Research Institute | Vaccine composition containing synthetic adjuvant |
| TWI441648B (zh) * | 2007-01-03 | 2014-06-21 | Oncotherapy Science Inc | Ｆｏｘｐ３胜肽疫苗 |
| EP2125868B1 (en) | 2007-02-28 | 2015-06-10 | The Govt. Of U.S.A. As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Brachyury polypeptides and methods for use |
| JP5669581B2 (ja) * | 2007-10-18 | 2015-02-12 | バヴァリアン・ノルディック・インコーポレイテッド | 前立腺癌を処置するためのｍｖａの使用 |
| WO2010017209A2 (en) | 2008-08-04 | 2010-02-11 | The Government Of The Usa As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Membrane proximal region of hiv gp41 anchored to the lipid layer of a virus-like particle vaccine |
| US8664183B2 (en) | 2009-02-27 | 2014-03-04 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | SPANX-B polypeptides and their use |
| DK2411043T3 (da) | 2009-03-23 | 2013-10-21 | Pin Pharma Inc | Behandling af cancer med immunostimulatorisk hiv tat derivat-polypeptider |
| US8722064B2 (en) | 2009-06-05 | 2014-05-13 | Infectious Disease Research Institute | Synthetic glucopyranosyl lipid adjuvants |
| CA2776922A1 (en) | 2009-10-07 | 2011-04-14 | Uvic Industry Partnerships Inc. | Vaccines comprising heat-sensitive transgenes |
| US9181306B2 (en) | 2009-10-16 | 2015-11-10 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Insertion of foreign genes in rubella virus and their stable expression in a live, attenuated viral vaccine |
| EP2502076B1 (en) | 2009-11-20 | 2018-04-18 | Oregon Health and Science University | Methods for detecting a mycobacterium tuberculosis infection |
| WO2011112599A2 (en) | 2010-03-12 | 2011-09-15 | The United States Of America, As Represented By The Secretary. Department Of Health & Human Services | Immunogenic pote peptides and methods of use |
| WO2011119920A2 (en) | 2010-03-25 | 2011-09-29 | Oregon Health & Science University | Cmv glycoproteins and recombinant vectors |
| AU2012243039B2 (en) | 2011-04-08 | 2017-07-13 | Immune Design Corp. | Immunogenic compositions and methods of using the compositions for inducing humoral and cellular immune responses |
| HUE037408T2 (hu) | 2011-06-10 | 2018-08-28 | Univ Oregon Health & Science | CMV glikoproteinek és rekombináns vektorok |
| CA2842180C (en) | 2011-07-18 | 2020-06-23 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Methods and compositions for inhibiting polyomavirus-associated pathology |
| AU2012216792A1 (en) | 2011-09-12 | 2013-03-28 | International Aids Vaccine Initiative | Immunoselection of recombinant vesicular stomatitis virus expressing HIV-1 proteins by broadly neutralizing antibodies |
| US9402894B2 (en) | 2011-10-27 | 2016-08-02 | International Aids Vaccine Initiative | Viral particles derived from an enveloped virus |
| US9566329B2 (en) | 2012-04-06 | 2017-02-14 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Live, attenuated rubella vector to express vaccine antigens |
| ES2787455T3 (es) | 2012-05-16 | 2020-10-16 | Immune Design Corp | Vacunas para el VHS-2 |
| JP6310909B2 (ja) | 2012-06-06 | 2018-04-11 | ビオノール イミュノ エーエスＢｉｏｎｏｒ Ｉｍｍｕｎｏ Ａｓ | 免疫原及び投薬反応物として使用するためのウイルスタンパク質に由来するペプチド |
| EP2679596B1 (en) | 2012-06-27 | 2017-04-12 | International Aids Vaccine Initiative | HIV-1 env glycoprotein variant |
| WO2014043518A1 (en) | 2012-09-14 | 2014-03-20 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Brachyury protein, non-poxvirus non-yeast vectors encoding brachyury protein, and their use |
| CA2888367A1 (en) | 2012-10-19 | 2014-04-24 | Bavarian Nordic, Inc. | Methods and compositions for the treatment of cancer |
| US8957047B2 (en) | 2013-04-18 | 2015-02-17 | Immune Design Corp. | GLA monotherapy for use in cancer treatment |
| US9463198B2 (en) | 2013-06-04 | 2016-10-11 | Infectious Disease Research Institute | Compositions and methods for reducing or preventing metastasis |
| EP2848937A1 (en) | 2013-09-05 | 2015-03-18 | International Aids Vaccine Initiative | Methods of identifying novel HIV-1 immunogens |
| AU2014329393B2 (en) | 2013-10-04 | 2020-04-30 | Pin Pharma, Inc. | Immunostimulatory HIV Tat derivative polypeptides for use in cancer treatment |
| EP2873423B1 (en) | 2013-10-07 | 2017-05-31 | International Aids Vaccine Initiative | Soluble hiv-1 envelope glycoprotein trimers |
| JP6758185B2 (ja) | 2013-12-13 | 2020-09-23 | ザ ユナイテッド ステイツ オブ アメリカ， アズ リプレゼンテッド バイ ザ セクレタリー， デパートメント オブ ヘルス アンド ヒューマン サービシーズ | マルチエピトープｔａｒｐペプチドワクチンおよびその使用 |
| WO2015095770A1 (en) | 2013-12-20 | 2015-06-25 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Immunogenic jc polyomavirus compositions and methods of use |
| US10174292B2 (en) | 2015-03-20 | 2019-01-08 | International Aids Vaccine Initiative | Soluble HIV-1 envelope glycoprotein trimers |
| US9931394B2 (en) | 2015-03-23 | 2018-04-03 | International Aids Vaccine Initiative | Soluble HIV-1 envelope glycoprotein trimers |
| EP4137150A1 (en) | 2015-08-03 | 2023-02-22 | The United States of America, as represented by the Secretary, Department of Health and Human Services | Brachyury deletion mutants, non-yeast vectors encoding brachyury deletion mutants, and their use |
| EP3454894B1 (en) | 2016-05-10 | 2022-07-27 | Najit Technologies, Inc. | Inactivating pathogens and producing highly immunogenic inactivated vaccines using a dual oxidation process |
| EP3703745B1 (en) | 2017-11-04 | 2024-04-10 | Nevada Research & Innovation Corporation | Immunogenic conjugates and methods of use thereof |
| CN113454100B (zh) | 2018-12-04 | 2024-08-23 | 洛克菲勒大学 | Hiv疫苗免疫原 |
| US20230109142A1 (en) | 2020-02-14 | 2023-04-06 | Immunor As | Corona virus vaccine |
Family Cites Families (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3083142A (en) * | 1958-02-27 | 1963-03-26 | Glaxo Group Ltd | Improved swine erysipelas vaccine |
| US3790665A (en) * | 1968-02-23 | 1974-02-05 | Haver Lockhart Labor Inc | Injectable adjuvant,method of preparing same and compositions including such adjuvant |
| US3919411A (en) * | 1972-01-31 | 1975-11-11 | Bayvet Corp | Injectable adjuvant and compositions including such adjuvant |
| GB1502774A (en) * | 1974-06-25 | 1978-03-01 | Nat Res Dev | Immunological preparations |
| US4117113A (en) * | 1974-06-25 | 1978-09-26 | National Research Development Corporation | Immunological preparations |
| US4772466A (en) * | 1983-08-22 | 1988-09-20 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Vaccines comprising polyoxypropylene-polyoxyethylene block polymer based adjuvants |
| US4770874A (en) * | 1983-08-22 | 1988-09-13 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Polyoxypropylene-polyoxyethylene block polymer based adjuvants |
| JPS6147500A (ja) * | 1984-08-15 | 1986-03-07 | Res Dev Corp Of Japan | キメラモノクロ−ナル抗体及びその製造法 |
| DE3751772T2 (de) * | 1986-10-20 | 1996-12-05 | Chiron Corp | Impfstoff zur behandlung von hsv |
| US4778784A (en) * | 1987-01-07 | 1988-10-18 | Baylor College Of Medicine | Cyclic peptide and method of use for inducing an immunological response to hepatitis B virus |
| US4963354A (en) * | 1987-01-21 | 1990-10-16 | Genentech, Inc. | Use of tumor necrosis factor (TNF) as an adjuvant |
| IL162181A (en) * | 1988-12-28 | 2006-04-10 | Pdl Biopharma Inc | A method of producing humanized immunoglubulin, and polynucleotides encoding the same |
| CA2017507C (en) * | 1989-05-25 | 1996-11-12 | Gary Van Nest | Adjuvant formulation comprising a submicron oil droplet emulsion |
| AU1025692A (en) * | 1991-02-06 | 1992-08-13 | Ciba-Geigy Ag | Novel chimeric antiidiotypic monoclonal antibodies |
-
1992
- 1992-07-24 ES ES92917479T patent/ES2117052T5/es not_active Expired - Lifetime
- 1992-07-24 DK DK92917479T patent/DK0596032T4/da active
- 1992-07-24 AU AU24338/92A patent/AU666127B2/en not_active Ceased
- 1992-07-24 RO RO94-00094A patent/RO116459B1/ro unknown
- 1992-07-24 US US07/919,787 patent/US5585103A/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-07-24 SK SK89-94A patent/SK282920B6/sk unknown
- 1992-07-24 WO PCT/US1992/006193 patent/WO1993001831A1/en active IP Right Grant
- 1992-07-24 HU HU9400202A patent/HU220295B/hu not_active IP Right Cessation
- 1992-07-24 DE DE69225710T patent/DE69225710T3/de not_active Expired - Fee Related
- 1992-07-24 BR BR9206310A patent/BR9206310A/pt not_active Application Discontinuation
- 1992-07-24 CA CA002113720A patent/CA2113720A1/en not_active Abandoned
- 1992-07-24 IL IL102639A patent/IL102639A/xx not_active IP Right Cessation
- 1992-07-24 IE IE243692A patent/IE922436A1/en not_active IP Right Cessation
- 1992-07-24 CZ CZ1994150A patent/CZ288048B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1992-07-24 RU RU94038046/14A patent/RU2129439C1/ru not_active IP Right Cessation
- 1992-07-24 MX MX9204376A patent/MX9204376A/es not_active IP Right Cessation
- 1992-07-24 AT AT92917479T patent/ATE166578T1/de not_active IP Right Cessation
- 1992-07-24 PH PH44711A patent/PH30906A/en unknown
- 1992-07-24 KR KR1019940700218A patent/KR100198868B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1992-07-24 EP EP92917479A patent/EP0596032B2/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-07-24 JP JP50307193A patent/JP3939746B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1992-07-27 ZA ZA925614A patent/ZA925614B/xx unknown
- 1992-08-27 TW TW081105966A patent/TW349867B/zh not_active IP Right Cessation
-
1994
- 1994-01-21 NO NO19940218A patent/NO317203B1/no unknown
- 1994-01-24 BG BG98410A patent/BG62240B1/bg unknown
- 1994-01-24 FI FI940335A patent/FI108114B/fi active
- 1994-01-24 OA OA60461A patent/OA09880A/en unknown
-
1995
- 1995-05-24 US US08/449,728 patent/US6270769B1/en not_active Expired - Fee Related
- 1995-06-22 HU HU95P/P00339P patent/HU211299A9/hu unknown
-
2001
- 2001-06-05 FI FI20011187A patent/FI109335B/fi active
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0596032B2 (en) | Induction of cytotoxic t-lymphocyte responses | |
| AP661A (en) | Induction of cytotoxic T- lymphocite responses. | |
| US20060057162A1 (en) | Induction of cytotoxic T-lymphocyte responses | |
| KR100478617B1 (ko) | 세포독성t-림프구반응을유도하는방법 |