RU97729U1

RU97729U1 - Устройство для получения вирионов хантавирусов из вируссодержащей суспензии

Info

Publication number: RU97729U1
Application number: RU2009141498/15U
Authority: RU
Inventors: Павел Алексеевич Набатников; Тамара Казбековна Дзагурова; Евгений Александрович Ткаченко; Андрей Евгеньевич Малкин; Александр Васильевич Киктенко; Михаил Иванович Михайлов
Original assignee: Павел Алексеевич Набатников; Тамара Казбековна Дзагурова; Евгений Александрович Ткаченко; Андрей Евгеньевич Малкин; Александр Васильевич Киктенко; Михаил Иванович Михайлов
Priority date: 2009-11-11
Filing date: 2009-11-11
Publication date: 2010-09-20

Abstract

1. Устройство для поучения вирионов хантавирусов из вируссодержащей суспензии, включающее заполненное сорбентом вместилище, корпус которого выполнен из материала, не взаимодействующего с вирионами хантавирусов, отличающееся тем, что вместилище заполнено агарозой марки Sepharose 6 Fast Flow. ! 2. Устройство по п.1, отличающееся тем, что вместилище выполнено в виде полого цилиндра.

Description

Полезная модель относится к устройствам для получения вирионов хантавирусов, в частности возбудителей геморрагической лихорадки с почечным синдромом (ГЛПС), для изготовления противовирусных вакцин.

В процессе производства вакцин против хантавирусов - возбудителей ГЛПС - необходимо выделить из вируссодержащей суспензии фракцию вирионов и очистить ее от неиммуногенных и слабоиммуногенных примесей: антибиотиков, фрагментов мембран, белков, РНК, ДНК клеток, используемых для культивирования вирусов, а также неструктурных вирусных белков и фрагментов вирионов.

Известно устройство для поучения вирионов хантавирусов из вируссодержащей суспензии, включающее заполненное сорбентом вместилище, корпус которого выполнен из материала, не взаимодействующего с вирионами хантавирусов (CN 1109782),

Известное устройство производит путем очистки вируссодержащей суспензии от примесных компонентов на принципе ионного обмена ввиду использования сорбента, несущего электрический заряд, что приводит к необходимости применения буферных растворов с высоким содержанием соли и, следовательно, к необходимости последующей очистки полученного продукта от солевых добавок.

Технический результат от использования предлагаемого устройства заключается в сокращении времени очистки вируссодержащей суспензии от примесных компонентов.

Указанный технический результат достигается тем, что в устройстве для получения вирионов хантавирусов из вируссодержащей суспензии, включающем заполненное сорбентом вместилище, корпус которого выполнен из материала, не взаимодействующего с вирионами хантавирусов, вместилище заполнено агарозой марки Sepharose 6 Fast Flow.

Указанный технический результат достигается также тем, что вместилище выполнено в виде полого цилиндра.

На фиг.1 показано устройство для получения вирионов хантавирусов из вируссодержащей суспензии, на фиг.2 - хроматограмма процесса очистки.

Устройство содержит полый цилиндр 1, с входным отверстием 2, и выходным отверстием 3, заполненный агарозой 4.

Устройство для получения вирионов хантавирусов из вируссодержащей суспензии используют следующим образом.

Через входное отверстие 2 в заполненный агарозой полый цилиндр 1 подают определенную порцию вируссодержащей суспензии, включающей, наряду с вирионами хантавирусов, фрагменты мембран, белки, РНК и ДНК клеток, вирусные белки, фрагменты вирионов хантавирусов, а также компоненты питательной среды. Затем подают через то же отверстие буферный раствор. В результате осуществляется гель-фильтраци, в процессе которой из выходного отверстия 3 собирают фракцию вирионов хантавирусов.

Пример.

Вируссодержащую культуральную жидкость получили путем репродуцирования хантавируса Пуумала в монослойной перевиваемой культуре клеток почек зеленой мартышки (Vero). Монослой клеток получили в роллерных бутылях объемом 1 л в среде Игла MEM с двойным набором витаминов и аминокислот и 5% сыворотки крови плодов коров. После заражения монослойных культур для поддержания размножения вируса использовали среду, не содержащую, компонентов сыворотки крови. Сбор вируссодержащей жидкости начинали на шестой день. С одного монослоя клеток получили от 3 до 5 сборов вируссодержащей жидкости. Полученную вируссодержащую жидкость со средним титром 6,0 lg ФОЕ/мл фильтровали через каскад фильтров с рейтингом от 0.6 до 0.22 мкм. Концентрирование осветленной вируссодержащей жидкости проводили на ультрафильтрационных кассетах (Millipore) с молекулярным весом проходимых частиц 100000 Дальтон и площадью 0,2 м². Вируссодержащую жидкость концентрировали в 70-200 раз. Вирусный концентрат очищали на колонке 2,6/70 с Sepharose 6 Fast Flow со скоростью 7 мл/мин. На выходе из колонки собирали фракцию вирионов вируса Пуумала. На хроматограмме процесса очистки первый пик соответствует моменту времени выхода очищенных вирионов вируса Пуумала, второй и третий пики - моментам времени выхода балластных компонентов (фиг.2).

Claims

1. Устройство для поучения вирионов хантавирусов из вируссодержащей суспензии, включающее заполненное сорбентом вместилище, корпус которого выполнен из материала, не взаимодействующего с вирионами хантавирусов, отличающееся тем, что вместилище заполнено агарозой марки Sepharose 6 Fast Flow.

2. Устройство по п.1, отличающееся тем, что вместилище выполнено в виде полого цилиндра.