RU2816531C2

RU2816531C2 - Комбинации антител для лечения рака у конкретных пациентов

Info

Publication number: RU2816531C2
Application number: RU2022104006A
Authority: RU
Inventors: Бьёрн ФРЕНДЕУС; Ингрид ТЕЙГЕ; Линда МАРТЕНССОН; Ингрид КАРЛССОН; Марк КРЭГГ; Стивен БИРС; Роберт ОУЛДЕМ
Original assignee: Биоинвент Интернэшнл Аб; Юниверсити Оф Саутгемптон
Priority date: 2019-07-17
Filing date: 2020-07-17
Publication date: 2024-04-01

Abstract

Изобретение относится к области биотехнологии. Описана группа изобретений, включающая применение комбинации молекул антител для лечения рака у пациента, имеющего инфильтрирующие опухоль Т-лимфоциты со средней или высокой экспрессией PD-1, применение фармацевтической композиции для лечения рака у пациента, набор для применения при лечении рака у пациента, применение первой молекулы антитела, которая специфически связывает FcγRIIb, и второй молекулы антитела, которая специфически связывает PD-1 и которая связывается по меньшей мере с одним рецептором Fcγ, при производстве лекарственного средства для применения при лечении рака у пациента, способ для лечения рака у пациента, диагностический тест для определения пользы пациенту от комбинированного лечения, комбинацию молекул антител для лечения рака у пациента и фармацевтическую композицию для лечения рака у пациента. Изобретение расширяет арсенал средств для лечения рака у пациента, имеющего инфильтрирующие опухоль Т-лимфоциты со средней или высокой экспрессией PD-1. 8 н. и 23 з.п. ф-лы, 9 ил., 4 пр.

Description

Область техники, к которой относится изобретение

Данное изобретение относится к комбинированному применению 1) первой молекулы антитела, которая специфически связывает FcγRIIb посредством своего участка Fab и которая связывает рецептор Fcγ посредством своего участка Fc, и 2) второй молекулы антитела, которая специфически связывает PD-1 и которая связывается по меньшей мере с одним рецептором Fcγ посредством своего участка Fc при лечении рака у пациента, который имеет среднюю или высокую экспрессию PD-1 на CD3-положительных инфильтрирующих опухоль лимфоцитах (TIL - tumor-infiltrating lymphocyte).

Область изобретения

Рецепторы ингибитора контрольных точек имунного ответа, например CTLA-4 или PD-1 (также обозначаемые также PD1), представляют собой рецепторы клеточной поверхности, которые при связывании своих лигандных рецепторов, например, членов семейства B7, CD80 и CD86, и PD-L1, соответственно, передают ингибирующие сигналы внутри клетки, ограничивая активацию и пролиферацию клеток, предотвращая чрезмерное воспаление и способствуя поддержанию аутотолерантности. Животные с генетическим дефицитом таких ингибирующих иммунных контрольных точек связаны с обострением воспалительных реакций, неспособностью развивать или поддерживать толерантность к себе, что приводит к аутоиммунному заболеванию. Антитела к рецепторам контрольных точек иммунного ответа CTLA-4 и PD-1/PD-L1 вызывают повышенную общую выживаемость пациентов с различными видами рака, в частности, включая несколько типов солидного рака, например, меланому, рак легких, мочевого пузыря, головы и шеи, и такие антитела одобрены Управлением по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США (Pardoll, D. M. (2012) Nat Rev Cancer 12(4): 252-264; Topalian, S. L. et al (2015) Cancer Cell 27(4): 450-461; Sharma, P. et al (2017) Cell 168(4): 707-723).

Антитела к осям ингибитора контрольных точек имунного ответа PD-1/PD-L1 оказались особенно эффективными при иммунотерапии рака, вызывая объективные ответы (полные и частичные ответы) примерно у 20% пациентов - значительное улучшение по сравнению со стандартом лечения (Carretero-Gonzalez, A. et al (2018) Oncotarget 9(9): 8706-8715). Однако, как свидетельствует частота ответа, доступные в данное время анти-PD-1/PD-L1 антитела активны только у меньшинства пациентов. Кроме того, у части пациентов с первоначальным ответом на лечение в конечном итоге разовьется резистентность, и лечение больше не сможет принести им пользы. Таким образом, механизмы невосприимчивости и устойчивости к антителам PD-1/PD-L1 являются клинически важной проблемой. Выявление и преодоление механизмов устойчивости к антителам PD-1/PD-L1 является серьезной проблемой и возможностью улучшить выживаемость больных раком для этого клинически важного класса лекарств.

Кроме того, общепризнано, что прогностические биомаркеры для выявления пациентов, наиболее склонных к ответу на блокаду контрольных точек анти-PD-1/PD-L1, являются важной стратегией для выявления пациентов, которые могут отвечать на терапию. И наоборот, не менее важно предотвратить ненужное лечение пациентов этими препаратами, которое часто связано со значительными, а иногда и фатальными проблемами с переносимостью. Из-за своей высокой стоимости эти методы лечения также ложатся серьезным бременем на налогоплательщиков и системы здравоохранения. Примерами существующих прогностических биомаркеров, имеющих клиническое значение для терапии анти-PD-1/PD-L1 антителами, являются микросателлитная нестабильность (MSI - Micro Satellite Instability) ( Le, D. T. et al (2015) N Engl J Med 372(26): 2509-2520; Le, D. T. et al (2017) Science 357(6349): 409-413), опухолевое мутационное бремя ( Gubin, M. M. et al (2014) Nature 515(7528): 577-581; Snyder, A., et al (2014) N Engl J Med 371(23): 2189-2199; Tran, E. et al (2014) Science 344(6184): 641-645, Tran, E. et al (2015) Science 350(6266): 1387-1390), и экспрессия опухолевого PD-L1 (Gibney, Weiner et al. 2016, Topalian, Taube et al. 2016), мутационная нагрузка опухоли и экспрессия PD-L1 опухоли.

Fc гамма рецепторы (FcγR) представляют собой мембранные белки, которые обнаруживаются на клеточной поверхности иммунных эффекторных клеток, включая моноциты, макрофаги, дендритные клетки, нейтрофилы, тучные клетки, базофилы, эозинофилы, а также клетки натуральные киллеры и B-лимфоциты. Название происходит от специфичности их связывания с Fc-участком антител. Рецепторы Fc находятся на клеточной мембране, также известной как плазматическая мембрана или цитоплазматическая мембрана. FcγR можно подразделить на активирующий FcγR и ингибирующий FcγR, которые, как известно, координируют клеточную активацию посредством связывания кластерных Fc иммуноглобулина G и передачи активирующих или ингибирующих сигналов в клетку через внутриклеточные мотивы ITAM или ITIM, соответственно. Связывание кластерного FcγR иммуноглобулина или иммунных комплексов может опосредовать интернализацию антитела в клетку и может приводить к антитело-опосредованному фагоцитозу, антителозависимой клеточно-опосредованной цитотоксичности или презентации антигена или перекрестной презентации антигена. Также известно, что FcγR опосредуют или усиливают перекрестное связывание рецепторов на клеточной поверхности, связанных с антителами. Такое сшивание, как известно, требуется для некоторых (Li, F. et al (2011) Science 333 (6045): 1030-1034; White, A. L. et al (2011) J Immunol 187 (4): 1754-1763), но не всей (Richman, L. P. et al (2014) Oncoimmunology 3: e28610) способности антител активировать передачу сигналов в клетках-мишенях и может потребоваться, а может и не потребоваться для достижения терапевтических эффектов.

У людей FcγRIIb (CD32b) является ингибирующим рецептором Fcγ, тогда как FcγRI (CD64), FcγRIIa (CD32a), FcγRIIc (CD32c) и FcγRIIIa (CD16a) являются активирующими рецепторами Fcγ. FcγgRIIIb представляет собой GPI-связанный рецептор, экспрессируемый на нейтрофилах, лишенный мотива ITAM, и считается, что он действует как рецептор-ловушка, который уравновешивает активацию передачи сигналов FcγR. (Treffers, L. W. et al (2018) Front Immunol 9: 3124). У мышей активирующими рецепторами являются FcγRI, FcγRIII и FcγRIV.

Хорошо известно, что антитела могут модулировать активность иммунных клеток посредством взаимодействия с рецепторами Fcγ. В частности, то, как иммунные комплексы антител модулируют активацию иммунных клеток, определяется их относительным связыванием активирующих и ингибирующих рецепторов Fcγ. Различные изотипы антител связываются с активирующими и ингибирующими рецепторами Fcγ с различной аффинностью, что приводит к различным соотношениям A:I (соотношения активация:ингибирование) (Nimmerjahn et al.; Science. 2005 Dec 2;310(5753):1510-2).

Связываясь с ингибирующими рецепторами Fcγ через его домен Fc, антитело может ингибировать, блокировать и/или снижать функции эффекторных клеток. Связываясь с ингибирующим FcγR через его домен Fc, антитела могут стимулировать активацию клеток за счет агрегации нацеленных на антитела сигнальных рецепторов на клетке-мишени (Li, F. et al (2011) Science 333(6045): 1030-1034; White, A. L. et al (2011) J Immunol 187(4): 1754-1763; White, A. L. et al (2011) J Immunol 187(4): 1754-1763White, A. L. et al (2014) J Immunol 193(4): 1828-1835).

Связываясь с активирующим рецептором Fcγ, антитело может активировать функции эффекторных клеток и тем самым запускать такие механизмы, как антителозависимая клеточная цитотоксичность (АЗКЦ), антителозависимый клеточный фагоцитоз (ADCP - antibody dependent cellular phagocytosis), высвобождение цитокинов и/или антителозависимый эндоцитоз, а также нетоз (NETosis) (т.е. активация и высвобождение нейтрофилов, нейтрофильных внеклеточных ловушек) в случае нейтрофилов. Связывание антител с активирующим рецептором Fcγ также может приводить к увеличению некоторых маркеров активации, таких как CD40, MHCII, CD38, CD80 и/или CD86.

В соответствии с согласованной регуляцией индуцированных антителами ответов эффекторных клеток посредством активирующих и ингибирующих рецепторов Fcγ, было показано, что активация рецепторов Fcγ способствует истощению опухолевых клеток и терапевтической активности антител, направленных непосредственно на опухоль. Доклинические и клинические исследования продемонстрировали, что противоопухолевая активность антител, направленных непосредственно на опухоль, то есть антител, терапевтическая активность которых включает прямое связывание и уничтожение опухолевых клеток, например, анти-CD20, анти-Her2 и анти-EGFR антител, усиливается у пациентов, несущих аллели с более высокой аффинностью для активации рецепторов Fcγ (Cartron, G. et al (2002) Blood 99(3): 754-758; Musolino, A., et al (2008) J Clin Oncol 26(11): 1789-1796; Zhang, W. et al (2007) J Clin Oncol 25(24): 3712-3718) и с изотипами и форматами антител, которые демонстрируют более сильное связывание с активирующими рецепторами по сравнению с ингибирующими рецепторами Fcγ (высокое соотношение A:I). (Goede, V. et al (2014) N Engl J Med 370 (12): 1101-1110). Напротив, терапевтическая активность антител, направленных непосредственно на опухоль, усиливается у животных, у которых отсутствует ингибирующий FcγRIIB (Clynes, R. A. et al (2000) Nat Med 6(4): 443-446) или, как недавно было продемонстрировано некоторыми авторами данного изобретения, когда ингибирующий FcγRIIB блокируется антагонистическими анти-FcγRIIB антителами (Roghanian, A. et al (2015) Cancer Cell 27(4): 473-488).

Новые доклинические и клинические данные демонстрируют, что рецепторы Fcγ контролируют также эффективность иммуномодулирующих антител, включая антитела, ингибирующие контрольные точки имунного ответа, нацеленные на CTLA-4, PD-1/PD-L1. У людей и мышей есть доказательства того, что терапевтической активности анти-CTLA-4 антител способствует задействование активирующих рецепторов Fcγ; пациенты с меланомой, несущие аллель с высокой аффинностью гена FcγRIIIa, показали улучшенную выживаемость в ответ на ипилимумаб по сравнению с пациентами, экспрессирующими аллели FcγRIIIa с более низким сродством. Более того, у мышей, гуманизированных для активирующих и ингибирующих рецепторов, терапевтическая эффективность оказалась FcγR-зависимой и была усилена изотипами антител с высоким соотношением A:I (Arce Vargas, F. et al (2018) Cancer Cell 33(4): 649-663 e644).

Эти данные побудили нас исследовать способность антител, блокирующих FcγRIIB, усиливать активность анти-CTLA-4 антител. Два различных типа FcγRIIB-блокирующего антитела были ранее получены и описаны некоторыми авторами данного изобретения (Roghanian, A., et al (2015) Cancer Cell 27(4): 473-488); IgG1 человека, который способен связывать как активирующие, так и ингибирующие FcγR человека, и вариант, сконструированный с помощью Fc, который демонстрирует сильно нарушенное связывание с FcγR через его Fc-домен. Было показано, что эти два различных типа анти-FcγRIIB антитела в равной степени антагонистичны в отношении блокирования интернализации CD20 и передачи сигнала FcγRIIB в В-клетках, и оба улучшают опосредованное анти-CD20 мАт истощение В-клеток у животных, трансгенных животных, экспрессирующих FcγRIIB человека и CD20 человека.

В международной заявке на патент № PCT/EP2019/050566 мы продемонстрировали, что только анти-FcγRIIB антитела, у которых отсутствует участок Fc или Fc-участок которой демонстрирует пониженное или нарушенное связывание с FcγR, способны усиливать терапевтическую активность терапевтической активности анти-CTLA-4 антител. В различных экспериментальных моделях солидного рака на мышах совместное лечение Fc:FcγR-связывающим нарушенным анти-FcγRIIB антителом, но не Fc:FcγR-связывающим опытным анти-FcγRIIB, увеличивало терапевтическую активность анти-CTLA-4 и in vivo модель гуманизированных МКПК продемонстрировала усиленное истощение Treg клинически значимого анти-CTLA-4 антитела ипилимумаба. Подобные влияния усиления на истощение и/или терапевтическую эффективность антител, специфичных к ИЛ-2R (CD25) и PD-L1, наблюдались после комбинированного лечения со Fc:FcγR-связывающим нарушенным анти-FcγRIIB антителом, демонстрируя, что эффекты бустирования не ограничивались только конкретной целью или типом клеток.

Роль рецепторов Fcγ в контроле терапевтической активности анти-PD-1/PD-L1 антител была указана в доклинических исследованиях, но индивидуальная роль активирующих и ингибирующих рецепторов Fcγ не выяснена. Dahan et al. сообщили, что мышиные антитела к PD-L1 выигрывают от FcγR-взаимодействия для противоопухолевой активности, но, наоборот, активность анти-PD-1 антител снижается из-за взаимодействия с FcγR (Dahan, R. et al (2015) Cancer Cell 28(3): 285-295). Примечательно, что изотипы анти-PD-1 антител (mIgG2a) с высоким соотношением A:I, т.е. обеспечивающие сильное взаимодействие активирующих рецепторов по сравнению с ингибирующими рецепторами Fcγ, демонстрировали меньшую терапевтическую активность по сравнению с изотипом mIgG1 с более низким соотношением A:I, т.е. ингибирующие рецепторов Fcγ, и по сравнению с вариантом анти-PD-1 антител, дефектными по Fc:FcγR-связыванию.

Используя клинически релевантное анти-PD-1 антитело IgG4 человека ниволумаб и суррогатное крысиное антитело IgG2a с заявленным аналогичным профилем связывания с рецептором Fcγ, Arlaukas и соавторы аналогичным образом обнаружили, что Fc:FcγR-связывающий нарушенный (дегликозилированный) вариант анти-PD-1 антител обладал улучшенной терапевтической активностью по сравнению с их Fc:FcγR-опытными аналогами IgG4 дикого типа человека и крысиного анти-PD-1 IgG2a (Arlauckas, S. P. et al (2017) Sci Transl Med 9(389)). Однако, в отличие от Dahan et al., используя блокирующие антитела к индивидуальным Fcγ рецепторам, авторы идентифицировали активирующий мышиный рецептор Fcγ III и ингибирующий рецептор Fcγ мыши II, лежащие в основе сниженной эффективности анти-PD-1 антител. Следовательно, относительная важность (индивидуальных) активирующих и ингибирующих рецепторов Fcγ, лежащих в основе сниженной эффективности анти-PD-1 антител, как они ограничивают эффективность клинически значимых анти-PD-1 антител человека или какие активирующие или ингибирующие FcγR должны быть заблокированы для усиления активности анти-PD-1 антител неясно из предшествующего уровня техники.

Сущность изобретения

В данном документе раскрывается комбинация:

первой молекулы антитела, которая специфически связывает FcγRIIb посредством своего участка Fab и который связывает рецептор Fcγ посредством своего участка Fc, и

второй молекулы антитела, которая специфически связывает PD-1 и которая связывается по меньшей мере с одним рецептором Fcγ посредством своего участка Fc;

для применения при лечении рака у пациента, имеющего инфильтрирующие опухоль Т-лимфоциты со средней или высокой экспрессией PD-1.

В данной заявке также раскрыта фармацевтическая композиция, содержащая:

(i) первую молекулу антитела, которая специфически связывает FcγRIIb посредством своего участка Fab и которая связывает рецептор Fcγ посредством своего участка Fc, и

(ii) вторую молекулу антитела, которая специфически связывается с PD-1 и которая связывается по меньшей мере с одним рецептором Fcγ посредством своего участка Fc;

В данном документе дополнительно раскрывается набор для применения при лечении рака у пациента, имеющего инфильтрирующие опухоль Т-лимфоциты со средней или высокой экспрессией PD-1, содержащий:

(ii) вторую молекулу антитела, которая специфически связывает PD-1 и которая связывается по меньшей мере с одним рецептором Fcγ посредством своего участка Fc.

Дополнительно в данной заявке раскрыто применение:

(i) первой молекулы антитела, которая специфически связывает FcγRIIb посредством своего участка Fab и которая связывает рецептор Fcγ посредством своего участка Fc, и

(ii) второй молекулы антитела, которая специфически связывает PD-1 и которая связывается по меньшей мере с одним рецептором Fcγ посредством своего участка Fc;

при производстве лекарственного средства для применения при лечении рака у пациента, имеющего опухоль, инфильтрирующую Т-лимфоциты со средней или высокой экспрессией PD-1

В данном документе также раскрывается способ лечения рака у пациента, имеющего опухоль, инфильтрирующую Т-лимфоциты со средней или высокой экспрессией PD-1, включающий введение:

(ii) второй молекулы антитела, которая специфически связывает PD-1 и которая связывается по меньшей мере с одним рецептором Fcγ посредством своего участка Fc.

В данном документе раскрывается также диагностический тест для определения того, получит ли пациент пользу от комбинированного лечения с:

(i) первой молекулой антитела, которая специфически связывает FcγRIIb посредством своего участка Fab и которая связывает рецептор Fcγ посредством своего участка Fc, и

(ii) второй молекулой антитела, которая специфически связывает PD-1 и которая связывается по меньшей мере с одним рецептором Fcγ посредством своего участка Fc,

этот тест включает определение экспрессии PD-1 на инфильтрирующих опухоль Т-лимфоцитах пациента, при этом средняя или высокая экспрессия PD-1 указывает на то, что пациенту будет полезно комбинированное лечение. Соответственно, отсутствие средней или высокой экспрессии PD-1 на Т-лимфоцитах, тогда как низкая экспрессия PD-1 указывает на то, что для пациента не будет пользы от комбинированного лечения.

Подробное описание изобретения

В данном документе мы демонстрируем, что ТОЛЬКО Fc:FcγR-связывающее опытное, а не Fc:FcγR-связывающее нарушенное, анти-FcγRIIB-антитело увеличивает терапевтическую эффективность анти-PD-1 антител in vivo и предотвращает фагоцитоз, индуцированный клинически значимыми анти-PD-1 антителами человека к Т-клеткам с высокой экспрессией PD-1 in vitro. Это открытие является новым и неожиданным, поскольку упомянутые выше исследования роли FcγR в терапии анти-PD-1 показали либо широкую роль для активации по сравнению с ингибирующими FcγR (Dahan, R. et al (2015) Cancer Cell 28 (3): 285-295), или индивидуальным активирующим (FcγRIII) и ингибирующим FcγRIIB (Arlauckas, S.P. et al (2017) Sci Transl Med 9(389)), как лежащая в основе нарушенная активность анти-PD-1 антител.

Данное изобретение также является неожиданным с учетом некоторых из более ранних открытий авторов данного изобретения, касающихся антител к другим контрольным точкам иммунного ответа, в частности, включая анти-CTLA-4, где только Fc:FcγR-связывающее нарушенное, а не Fc:FcγR-связывающее опытное, анти-FcγRIIB антитело усиливает терапевтическую активность.

Таким образом, данное изобретение относится к комбинированному применению:

(i) молекулы антитела, которая специфически связывает FcγRIIb посредством своего участка Fab и который связывает Fcγ-рецептор посредством своего участка Fc (в данном документе обозначена первая молекула антитела), и

(ii) молекулы антитела, которая специфически связывает PD-1 и которая связывается по меньшей мере с одним рецептором Fcγ посредством своего участка Fc (в данном документе обозначена вторая молекула антитела)

при лечении рака у пациента, имеющего инфильтрирующие опухоль Т-лимфоциты со средней или высокой экспрессией PD-1.

Эта комбинация предназначена для применения при лечении рака, такого как солидный рак, у пациента с целью повышения терапевтической эффективности молекулы антитела, которая специфически связывается с PD-1, т.е. анти-PD-1 антителом за счет уменьшения связывания с FcγR, включая FcγRIIB.

Молекула антитела в соответствии с данным изобретением, которая специфически связывает FcγRIIb, т.е. первое антитело, связывается или взаимодействует с этим рецептором Fcγ через участок Fab антитела, т.е. через антигенсвязывающий участок на антителе, которое связывается с антигенами, которые состоят из одного константного и одного вариабельного домена каждой тяжелой и легкой цепи. В частности, он связывается с FcγRIIb, присутствующим на иммунной эффекторной клетке, например, макрофаге, и, в частности, с FcγRIIb, присутствующим на поверхности иммунной эффекторной клетки.

В дополнение к вышесказанному, молекула антитела по данному изобретению, которая специфически связывает FcγRIIb, т.е. первую молекулу антитела, также связывается с активирующим рецептором Fcγ посредством взаимодействия между участком Fc и рецептором Fc, как известно, и была охарактеризована для антител изотипа IgG1 человека (Bruhns, P. et al (2009) Blood 113(16): 3716-3725).

Это имеет, по меньшей мере, следующее терапевтически важное последствие: как активирующие, так и ингибирующие рецепторы Fcγ блокируются анти-FcγRIIB антитело-зависимым (Fab- и Fc-) образом, предотвращая фагоцитоз макрофагов или других рецепторов Fcγ, экспрессирующих иммунные эффекторные клетки, анти-PD-1-антитело-опосредованной элиминации покрытых анти-PD-1 антителом противоопухолевых Т-клеток (в данном контексте покрытие означает, что анти-PD-1 антитело связалось с клетками). Механизм может дополнительно включать ингибирование FcγR-зависимой передачи макрофагами PD-1 антител от Т-клеток к FcγR-экспрессирующим эффекторным клеткам, например, макрофагам, как было описано ранее (Arlauckas, S. P. et al (2017) Sci Transl Med 9(389)).

Fc гамма рецептор, экспрессирующий иммунную эффекторную клетку, относится в данной заявке, главным образом, к врожденным эффекторным клеткам и включает в себя, в частности, макрофаги, нейтрофилы, моноциты, натуральные киллеры (НК-клетки), базофилы, эозинофилы, тучные клетки и тромбоциты. Цитотоксические Т-клетки и Т-клетки памяти, как правило, не экспрессируют рецепторы FcyR, но могут делать это при определенных условиях. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения, иммунная эффекторная клетка является врожденной иммунной эффекторной клеткой. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения, иммунная эффекторная клетка является макрофагом.

Молекула антитела, которая специфически связывается или взаимодействует с PD-1, т.е. вторая молекула антитела, имеет Fc-участок, которая связывается с активирующим Fcγ или взаимодействует с рецептором, который обеспечивает зависимую от FcγR эффекторную клетку FcγR зависимую от антитела-PD-1 элиминацию покрытых антителом анти-PD-1 противоопухолевых Т-клеток. Иммунная клетка, с которой связывается молекула анти-PD-1 антитела, представляет собой иммунную клетку, которая придает критическую противоопухолевую активность, такую как CD8+ или CD4+ Т-клетка.

Следовательно, любой вариант анти-PD-1 антитела, включая его изотипы IgG4, IgG1, IgG2 и IgG3 человека, Fc-участок которых связывается с или взаимодействует с активирующим Fcγ рецептором до степени, которая приводит к элиминации FcγR-экспрессирующей эффекторной клетки из PD-1-экспрессирующей противоопухолевой Т-клетки, может быть объединен с Fc:FcγR-связывающим опытным анти-FcγRIIB-антителом, т.е. с молекулой антитела, которая специфически связывает FcγRIIb через его участок Fab, и которая связывает рецептор Fcγ через его участок Fc.

Второе антитело представляет собой анти-PD-1 антитело. PD-1 (белок 1 запрограммированной гибели клеток), также известный как CD279, является контрольной точкой имунного ответа, то есть белком контрольной точки на иммунных клетках. Он способствует апоптозу антиген-специфических Т-клеток в лимфатических узлах и уменьшает апоптоз регуляторных Т-клеток. Ингибиторы PD-1, такие как ниволумаб (OPDIVO®), пембролизумаб (KEYTRUDA®) и цемиплимаб (LIBTAYO®), применяются при лечении рака, чтобы активировать иммунную систему для атаки опухолей. Моноклональные антитела, нацеленные как на PD-1 или PD-L1, могут блокировать связывание PD-1 с PD-L1, что может бустировать иммунный ответ против раковых клеток.

Анти-PD-1 антитело связывается с PD-1, экспрессируемым на внутриопухолевых Т-клетках.

Пациенты, которым лечение в соответствии с данным изобретением приносит пользу, являются пациентами, которые в соответствии со стандартными критериями одобренной схемы, содержащей анти-PD-1 антитело, подходят для терапии анти-PD-1, и, кроме того, у которых есть инфильтрирующие опухоль Т-лимфоциты (т.е. опухоль, инфильтрирующая CD3+ лимфоциты) со средней или высокой экспрессией PD-1. Пациенты, подходящие для лечения анти-PD-1, включают пациентов, страдающих меланомой; раком легкого, включая мелкоклеточный рак легкого (SCLC - small cell lung cancer) и немелкоклеточный рак легкого (NSCLC - non-small cell lung carcinoma) (включая неплоскоклеточный NSCLC и плоскоклеточный NSCLC, включая метастатический NSCLC); раком головы и шеи, включая плоскоклеточный рак головы и шеи (HNSCC); лимфомой Ходжкина; первичной средостенной B-клеточной лимфомой (PMBCL - primary mediastinal B-cell lymphoma); раком мочевого пузыря, включая запущенную уротелиальную карциному; колоректальным раком, включая рак с высокой нестабильностью (MSI-H) и/или дефицитом коррекции неспаренных оснований (dMMR); раком желудка, включая распространенный рак желудка и аденокарциному желудка или желудочно-пищеводного перехода (GEJ - gastroesophageal junction); раком шейки матки; раком печени, в том числе гепатоцеллюлярной карциномы; карциномой из клеток Меркеля (MCC - Merkel cell carcinoma); раком почки, в том числе почечно-клеточной карциномой (RCC - renal cell carcinoma) и плоскоклеточным раком кожи (CSCC - cutaneous squamous cell carcinoma), включая местнораспространенный CSCC у пациентов, которые не являются кандидатами на хирургическое вмешательство или облучение для лечения. Число показаний, которые можно лечить, быстро расширяется за счет новых испытаний, новых анти-PD-1 антител и новых комбинаций, что будет известно специалисту в данной области техники.

В работе, ведущей к данному изобретению, было замечено, что когда анти-PD-1 антитело вводят в Т-клетки, которые имеют среднюю или высокую экспрессию PD-1, это может привести к фагоцитозу покрытого анти-PD-1 антителом Т-клетки, и в частности CD8-положительные Т-клетки. В работе, ведущей к данному изобретению, было также обнаружено, что при введении молекулы антитела, которая специфически связывает FcγRIIb через свой участок Fab и который связывает рецептор Fcγ через свой участок Fc, вместе с анти-PD-1 антителом, этот фагоцитоз может быть заблокирован для Т-клеток, которые имеют среднюю или высокую экспрессию PD-1. Актуальность in vivo анализа in vitro, использованного для вышеупомянутых результатов, который дополнительно объясняется в примерах ниже, была подтверждена в двух различных экспериментальных моделях солидного рака, включающих иммунокомпетентных мышей, где наблюдалось значительное увеличение выживаемости комбинированного лечения с Fc:FcγR-связывающими опытными анти-FcγRIIB и анти-PD-1 антителами по сравнению с лечением одним агентом анти-PD-1. Это также более подробно показано в приведенных ниже примерах. Также подтверждая актуальность in vivo анализа in vitro, внутриопухолевые уровни экспрессии PD-1 Т-клеток in vivo были аналогичными в этих двух условиях; внутриопухолевая экспрессия PD-1 Т-клеток in vivo варьировала от ~ 20000 до 80000 молекул PD-1 на клетку, охватывая уровни экспрессии среды PD-1 in vitro (от 15500 до 78000 молекул PD-1) и высокую экспрессию (от 65000 до 391000 PD-1 молекул на клетку) Т-клеток человека, оба из которых были чувствительны к Fc:FcγR-связывающему опытному блоку анти-FcγRIIB человека анти-PD-1-опосредованного фагоцитоза.

Таким образом, в контексте данного изобретения пациенты, которым может помочь описанное в данном документе лечение, представляют собой пациенты, у которых по меньшей мере 10% опухоли инфильтрирует Т-лимфоциты, имеющие среднюю или высокую экспрессию PD-1.

В данном документе, средняя или высокая экспрессия относится к экспрессии ≥ 15500 молекул PD-1 на клетку, по меньшей мере, для 10% опухолей, инфильтрирующих Т-лимфоциты. Как поясняется ниже, абсолютные числа экспрессии PD-1 могут варьироваться в зависимости от того, какое анти-PD-1 антитело и/или какой способ применяется для измерения экспрессии PD-1. Таким образом, средняя или высокая экспрессия, равная или превышающая 15500 молекул PD-1 на клетку, как применяется в данном документе, измеряется с помощью способа, описанного в данном документе, и/или с применением антитела EH12.2H7 против PD-1 человека (доступного от BioLegend).

Как и в условиях in vivo, внутриопухолевые Т-клетки отдельного пациента будут демонстрировать гетерогенную экспрессию PD-1. У отдельного пациента могут быть разные популяции клеток с разной экспрессией PD-1, например, одна популяция имеет низкую экспрессию, а другая популяция имеет среднюю или высокую экспрессию. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения, по меньшей мере 15% опухолей пациента, инфильтрирующих CD3+ Т-лимфоциты, имеют среднюю или высокую экспрессию PD-1. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения, по меньшей мере 20% опухолей пациента, инфильтрирующих CD3+ Т-лимфоциты, имеют среднюю или высокую экспрессию PD-1. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения, по меньшей мере 25% опухолей пациента, инфильтрирующих CD3+ Т-лимфоциты, имеют среднюю или высокую экспрессию PD-1. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения, по меньшей мере 30% опухолей пациента, инфильтрирующих CD3+ Т-лимфоциты, имеют среднюю или высокую экспрессию PD-1. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения, по меньшей мере 35% опухолей пациента, инфильтрирующих CD3+ Т-лимфоциты, имеют среднюю или высокую экспрессию PD-1. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения, по меньшей мере 40% опухолей пациента, инфильтрирующих CD3+ Т-лимфоциты, имеют среднюю или высокую экспрессию PD-1. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения, по меньшей мере 45% опухолей пациента, инфильтрирующих CD3+ Т-лимфоциты, имеют среднюю или высокую экспрессию PD-1. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения, по меньшей мере 50% опухолей пациента, инфильтрирующих CD3+ Т-лимфоциты, имеют среднюю или высокую экспрессию PD-1. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения, по меньшей мере 55% опухолей пациента, инфильтрирующих CD3+ Т-лимфоциты, имеют среднюю или высокую экспрессию PD-1. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения, по меньшей мере 60% опухолей пациента, инфильтрирующих CD3+ Т-лимфоциты, имеют среднюю или высокую экспрессию PD-1. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения, по меньшей мере 65% опухолей пациента, инфильтрирующих CD3+ Т-лимфоциты, имеют среднюю или высокую экспрессию PD-1. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения, по меньшей мере 70% опухолей пациента, инфильтрирующих CD3+ Т-лимфоциты, имеют среднюю или высокую экспрессию PD-1. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения, по меньшей мере 75% опухолей пациента, инфильтрирующих CD3+ Т-лимфоциты, имеют среднюю или высокую экспрессию PD-1. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения, по меньшей мере 80% опухолей пациента, инфильтрирующих CD3+ Т-лимфоциты, имеют среднюю или высокую экспрессию PD-1. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения, по меньшей мере 85% опухолей пациента, инфильтрирующих CD3+ Т-лимфоциты, имеют среднюю или высокую экспрессию PD-1. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения, по меньшей мере 90% опухолей пациента, инфильтрирующих CD3+ Т-лимфоциты, имеют среднюю или высокую экспрессию PD-1.

В некоторых вариантах осуществления данного изобретения, эта опухоль пациента, инфильтрирующая CD3-положительные и CD8-положительные (CD3+ CD8+) Т-лимфоциты, которые имеют среднюю или высокую экспрессию PD-1.

В некоторых вариантах осуществления данного изобретения, по меньшей мере 10% опухолей пациента, инфильтрирующих CD3+ CD8+ Т-лимфоциты, имеют среднюю или высокую экспрессию PD-1. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения, по меньшей мере 15% опухолей пациента, инфильтрирующих CD3+ CD8+ Т-лимфоциты, имеют среднюю или высокую экспрессию PD-1. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения, по меньшей мере 20% опухолей пациента, инфильтрирующих CD3+ CD8+ Т-лимфоциты, имеют среднюю или высокую экспрессию PD-1. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения, по меньшей мере 25% опухолей пациента, инфильтрирующих CD3+ CD8+ Т-лимфоциты, имеют среднюю или высокую экспрессию PD-1. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения, по меньшей мере 30% опухолей пациента, инфильтрирующих CD3+ CD8+ Т-лимфоциты, имеют среднюю или высокую экспрессию PD-1. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения, по меньшей мере 35% опухолей пациента, инфильтрирующих CD3+ CD8+ Т-лимфоциты, имеют среднюю или высокую экспрессию PD-1. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения, по меньшей мере 40% опухолей пациента, инфильтрирующих CD3+ CD8+ Т-лимфоциты, имеют среднюю или высокую экспрессию PD-1. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения, по меньшей мере 45% опухолей пациента, инфильтрирующих CD3+ CD8+ Т-лимфоциты, имеют среднюю или высокую экспрессию PD-1. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения, по меньшей мере 50% опухолей пациента, инфильтрирующих CD3+ CD8+ Т-лимфоциты, имеют среднюю или высокую экспрессию PD-1. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения, по меньшей мере 55% опухолей пациента, инфильтрирующих CD3+ CD8+ Т-лимфоциты, имеют среднюю или высокую экспрессию PD-1. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения, по меньшей мере 60% опухолей пациента, инфильтрирующих CD3+ CD8+ Т-лимфоциты, имеют среднюю или высокую экспрессию PD-1. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения, по меньшей мере 65% опухолей пациента, инфильтрирующих CD3+ CD8+ Т-лимфоциты, имеют среднюю или высокую экспрессию PD-1. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения, по меньшей мере 70% опухолей пациента, инфильтрирующих CD3+ CD8+ Т-лимфоциты, имеют среднюю или высокую экспрессию PD-1. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения, по меньшей мере 75% опухолей пациента, инфильтрирующих CD3+ CD8+ Т-лимфоциты, имеют среднюю или высокую экспрессию PD-1. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения, по меньшей мере 80% опухолей пациента, инфильтрирующих CD3+ CD8+ Т-лимфоциты, имеют среднюю или высокую экспрессию PD-1. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения, по меньшей мере 85% опухолей пациента, инфильтрирующих CD3+ CD8+ Т-лимфоциты, имеют среднюю или высокую экспрессию PD-1. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения, по меньшей мере 90% опухолей пациента, инфильтрирующих CD3+ CD8+ Т-лимфоциты, имеют среднюю или высокую экспрессию PD-1.

Экспрессию PD-1 на опухолевых клетках отдельного пациента можно измерить с применением клеток или ткани, полученных из биопсии опухоли. Более конкретно, абсолютные уровни экспрессии Т-клеток могут быть определены количественно с применением описанной в данном документе или эквивалентной проточной цитометрии и набора(ов) для количественного определения антител и клеточных эпитопов на основе гранул. В качестве альтернативы, полуколичественный анализ может быть выполнен с помощью иммуногистохимии с использованием биопсий ткани опухоли, сравнивая анти-PD-1 окрашивание биопсий пациента с окрашиванием ткани или цитоспундирующих клеток, экспрессируя определенные и определенные уровни PD-1, связанные с чувствительностью (≥15500 молекул PD-1 на клетку) или отсутствие чувствительности (<15500 молекул PD-1 на клетку) к анти-FcγRIIB-опосредованному бустированию активности анти-PD-1 антител. Важно отметить, что если способ определения экспрессии PD-1 Т-клеток человека отличается от описанного в данном документе способа количественной оценки, или применяет другой клон анти-PD-1 антитела или флуоресцентную метку, анализ должен быть сравнен и подтвержден, например, способом подробно описаным в примерах ниже, в частности в Примере 1 со ссылкой на фиг. 1. В общих чертах, один из способов количественной оценки экспрессии PD-1, как проиллюстрировано в Примере 1 со ссылкой на фиг. 1, заключается в применении антитела, меченного флуорохромом в определенном соотношении; например - и, что предпочтительно, в некоторых вариантах осуществления данного изобретения - с применением антитела, меченного фикоэритрином (РЕ - phycoerythrin) в соотношении 1:1. Таким образом, применяя гранулы с определенным количеством молекул флуорохрома (например, PE) для построения стандартной кривой, можно определить количество молекул антитела, связанных с клеткой. Тестируемые клетки инкубируют с меченым анти-PD1 антителом (например, с анти-PD-1 антителом человека EH12.2H7 от BioLegend) и анализируют с помощью машины FACs, настроенной таким образом, что гранулы и клетки могут работать на тех же настройках. Строится стандартная кривая, например, путем построения графика Log молекул на шарик в сравнении с Log флуоресценции, а затем анализируются клетки, меченные флуорохромом, окрашенные анти-PD1 антителами, и средняя Log интенсивность флуоресценции (MFI - mean fluorescence intensity) применяется для расчета количества связанных антител.

Как упоминалось выше, абсолютные числа могут варьироваться в зависимости от того, какое анти-PD1 антитело применяется для измерения.

Помимо специфического связывания с PD-1 на иммунной клетке, вторая молекула антитела связывается по меньшей мере с одним рецептором Fcγ посредством своего участка Fc. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения, вторая молекула антитела связывается по меньшей мере с одним активирующим рецептором Fcγ посредством своего участка Fc. Второе антитело может быть способно связываться посредством своего участка Fc с активирующим Fcγ рецептором, таким как активирующий Fcγ рецептор, присутствующий на иммунной эффекторной клетке. Для того чтобы иметь возможность связываться с активирующим рецептором Fcy, участок Fc второго антитела должен по меньшей мере в некоторых вариантах осуществления данного изобретения быть гликозилирован в положении 297. Углеводный остаток в этом положении способствует связыванию с рецепторами Fcy. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения, предпочтительно, чтобы эти остатки были биантенными углеводами, которые содержат GlnNAc, маннозу с концевыми остатками галактозы и сиаловую кислоту. Он должен содержать участок CH₂ молекулы Fc.

Данное изобретение также относится к диагностическому тесту, который может быть применен для выявления пациентов, получающих пользу от лечения, описанного в данном документе, т.е. комбинированного лечения с (i) первой молекулой антитела, которая специфически связывает FcγRIIb через свой участок Fab и которая связывает рецептор Fcγ через свой участок Fc, и (ii) второй молекулой антитела, которая специфически связывает PD-1 и которая связывается по меньшей мере с одним рецептором Fcγ через свой участок Fc. На основании уровней экспрессии PD-1 in vivo, связанных с анти-FcγRIIB-опосредованной повышенной эффективностью анти-PD-1 антитела, и анализа фагоцитоза in vitro, включающего терапевтически релевантные анти-PD-1 антитела человека, Т-клетки человека и макрофаги, авторы изобретения определили, что определенные уровни экспрессии рецептора PD-1 Т-клетки связаны с анти-FcγRIIB-опосредованным бустированием терапевтической эффективности анти-PD-1 и необходимы для этого. Диагностический тест согласно данному изобретению основан на этом открытии и, соответственно, включает измерение экспрессии PD-1 на опухолевых клетках в образце, таком как клетки, полученные из биопсии опухоли, или ткани, полученной от пациента. Можно применять абсолютный или полуколичественный анализ уровней экспрессии PD-1 на Т-клетках, как описано выше. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения, диагностический тест основан на применении анти-PD1 антитела EH12.2H7 для измерения экспрессии PD-1; экспрессия по меньшей мере 15500 молекул PD-1 на Т-лимфоцит предсказывает, что пациенту может быть полезно комбинированное лечение по данному изобретению, как дополнительно описано выше и в Примере 1.

Антитела хорошо известны специалистам в области техники иммунологии и молекулярной биологии. Как правило, антитело состоит из двух тяжелых (H) цепей и двух легких (L) цепей. В данном документе, иногда эта полная молекула антитела называется полноразмерным антителом или антителом полной длины. Тяжелая цепь антитела содержит один вариабельный домен (VH) и три константных домена (CH1, CH2 и CH3), а легкая цепь молекулы антитела содержит один вариабельный домен (VL) и один константный домен (CL). Вариабельные домены (иногда вместе упоминаемые как участок F_V) связываются с мишенью антитела или антигеном. Каждый вариабельный домен состоит из трех петель, называемых участками, определяющими комплементарность (CDR - complementary determining region), которые отвечают за связывание с мишенью. Константные домены не участвуют непосредственно в связывании антитела с антигеном, но демонстрируют различные эффекторные функции. Антитела или иммуноглобулины могут быть отнесены к разным классам в зависимости от аминокислотной последовательности константного участка их тяжелых цепей. Существует пять основных классов иммуноглобулинов: IgA, IgD, IgE, IgG и IgM, а у человека некоторые из этих иммуноглобулинов дополнительно делятся на подклассы (изотипы), например IgG1, IgG2, IgG3 и IgG4; IgA1 и IgA2.

Другой частью антитела является участок Fc (также известный как кристаллизующийся фрагмент домена), который состоит из двух константных доменов каждой из тяжелых цепей антитела. Как уже упоминалось выше, Fc-участок отвечает за взаимодействие между антителом и рецептором Fc.

Термин «молекула антитела», употребляющийся в данной заявке, относится к полноразмерным антителам или антителам полной длины, а также к функциональным фрагментам полноразмерных антител и производным молекул таких антител.

Функциональные фрагменты полноразмерного антитела имеют те же характеристики связывания антигена, что и соответствующее полноразмерное антитело, и включают либо те же вариабельные домены (т.е. последовательности VH и VL), либо те же последовательности CDR, что и соответствующее полноразмерное антитело. То, что функциональный фрагмент имеет те же характеристики связывания антигена, что и соответствующее полноразмерное антитело, означает то, что он связывается с тем же эпитопом на мишени, что и полноразмерное антитело. Такой функциональный фрагмент может соответствовать участку Fv полноразмерного антитела. Как альтернатива, такой фрагмент может быть Fab, также обозначаемым F(ab), который является моновалентным антигенсвязывающим фрагментом, не содержащим участки Fc, или F(ab')₂, который является двухвалентным антигенсвязывающим фрагментом, содержащим два антигенсвязывающие участка Fab, связанные между собой дисульфидными связями, или F(ab'), т. е. моновалентным вариантом F(ab')₂. Таким фрагментом может быть также одноцепочечный вариабельный фрагмент (scFv).

Функциональный фрагмент не всегда содержит все шесть CDR соответствующего полноразмерного антитела. Следует отметить, что молекулы, содержащие три или меньшее количество участков CDR (в некоторых случаях даже только один участок CDR или его часть), способны сохранять антигенсвязывающую активность антитела, производными которого являются участки, определяющие комплементарность (CDR). Например, в работе Gao et al., 1994, J. Biol. Chem., 269: 32389-93 указано, что вся цепь VL (включая все три участка CDR) имеет высокое сродство к своему субстрату.

Молекулы, содержащие два участка CDR, описаны, например, в работе Vaughan & Sollazzo 2001, Combinatorial Chemistry & High Proposal Screening, 4: 417-430. На странице 418 (правая колонка - 3 «Наша стратегия проектирования») описано миниантитело, включающее только гипервариабельные участки H1 и H2 CDR, перемежающиеся внутри каркасных участков. Это миниантитело описывают, как способное связываться с мишенью. На работы Pessi et al., 1993, Nature, 362: 367-9, и Bianchi et al., 1994, J. Mol. Biol., 236: 649-59, ссылаются Vaughan и Sollazzo и более подробно описывают миниантитела H1 и H2 и их свойства. В работе Qiu et al., 2007, Nature Biotechnology, 25:921-9 показано, что молекула, состоящая из двух связанных участков CDR, способна связывать антиген. Quiocho 1993, Nature, 362: 293-4, дает краткое описание технологии «миниантитела». Ladner 2007, Nature Biotechnology, 25:875-7, комментирует, что молекулы, содержащие два участка CDR, способны сохранять антигенсвязывающую активность.

Молекулы антител, содержащие один участок CDR, описаны, например, в работе Laune et al., 1997, JBC, 272: 30937-44, в которой показано, что ряд гексапептидов, полученных из участка CDR, демонстрируют антигенсвязывающую активность, и отмечается, что синтетические пептиды полного единичного участка CDR демонстрируют сильную связывающую активность. В работе Monnet et al., 1999, JBC, 274: 3789-96, показано, что ряд 12-мерных пептидов и связанных с ними каркасных участков обладают антигенсвязывающей активностью, и прокомментировано, что один только CDR3-подобный пептид способен связывать антиген. В работе Heap et al., 2005, J. Gen. Virol., 86: 1791-1800, сообщается, что “микроантитело” (молекула, содержащая один участок CDR) способно связывать антиген, и показано, что циклический пептид из анти-ВИЧ антитела обладает антигенсвязывающей активностью и функцией. В работе Nicaise et al., 2004, Protein Science, 13: 1882-91, показано, что один участок CDR может придавать антигенсвязывающую активность и аффинность к своему лизоцимному антигену.

Таким образом, молекулы антител, имеющие пять, четыре, три или меньшее количество участков CDR способны сохранять антигенсвязывающие свойства полноразмерных антител, производными которых они являются.

Такая молекула антитела может также быть производной полноразмерного антитела или фрагментом такого антитела. При использовании производного оно должно обладать теми же антигенсвязывающими характеристиками, что и соответствующее полноразмерное антитело, в том смысле, что оно связывается с тем же эпитопом на мишени, что и полноразмерное антитело.

Таким образом, под термином «молекула антитела», который употребляется в данной заявке, понимаются все типы молекул антител и их функциональные фрагменты, а также их производные, включая: моноклональные антитела, поликлональные антитела, синтетические антитела, рекомбинантно полученные антитела, мультиспецифичные антитела, биспецифичные антитела, человеческие антитела, антитела человеческого происхождения, гуманизированные антитела, химерные антитела, одноцепочечные антитела, одноцепочечные Fvs (scFv), фрагменты Fab, фрагменты F(ab')₂, фрагменты F(ab'), Fvs (sdFv) с дисульфидной связью, тяжелые цепи антител, легкие цепи антител, гомодимеры тяжелых цепей антител, гомодимеры легких цепей антител, гетеродимеры тяжелых цепей антител, гетеродимеры легких цепей антител, антигенсвязывающие функциональные фрагменты таких гомо- и гетеродимеров.

Кроме того, термин «молекула антитела», употребляемый в данной заявке, включает все классы молекул антител и функциональных фрагментов, включая: IgG, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, IgM, IgD и IgE, если не указано иное.

В некоторых вариантах осуществления данного изобретения, первое антитело представляет собой IgG1 человека. Квалифицированный специалист поймет, что мышиный IgG2a и IgG1 человека взаимодействуют и способны блокировать активирующие Fc гамма рецепторы, тем самым предотвращая опосредованное анти-PD-1 взаимодействие активирующих Fc гамма рецепторов на иммунных эффекторных клетках и их последующее устранение эффекторных Т-клеток, покрытых анти-PD-1 антителом, например, ADCP или АЗКЦ. Таким образом, в вариантах осуществления данного изобретения, где мышиный IgG2a является предпочтительным изотипом для делеции у мыши, IgG1 человека является предпочтительным изотипом для делеции у человека в таких вариантах осуществления данного изобретения.

В некоторых вариантах осуществления данного изобретения, первое антитело представляет собой IgG1 человека. В других вариантах осуществления данного изобретения, первое антитело представляет собой IgG4, IgG3 или IgG2 человека. В других вариантах осуществления данного изобретения, первое антитело представляет собой антитело IgG человека, сконструированное с помощью Fc для усиленного связывания с Fc гамма рецепторами. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения, антитело IgG человека сконструировано с помощью Fc для улучшенного связывания с одним или более активирующими рецепторами Fcγ и/или сконструировано для улучшенного относительного связывания с активирующими по сравнению с ингибирующими рецепторами Fcγ. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения, анти-FcγRIIB антитело представляет собой антитело IgG человека, сконструированное с помощью Fc. Примеры таких сконструированных вариантов антител включают афукозилированные антитела с селективным улучшенным связыванием антител с FcγRIIIA и антитела, сконструированные путем направленной, мутационной или другой замены аминокислот, приводящей к улучшенному связыванию с одним или более активирующими рецепторами Fcγ по сравнению с ингибирующим FcγRIIB. (Richards et al. 2008. 'Optimization of antibody binding to FcgammaRIIa enhances macrophage phagocytosis of tumor cells', Mol Cancer Ther, 7: 2517-27; Lazar et al. 2006. 'Engineered antibody Fc variants with enhanced effector function', Proc Natl Acad Sci U S A, 103: 4005-10) В некоторых вариантах осуществления данного изобретения, антитело IgG человека, которое сконструировано для улучшенного связывания с активирующими Fc гамма-рецепторами, может быть антителом IgG человека, несущим две мутации S239D и I332E или три мутации S239D, I332E и A330L, и/или мутации G236A в его Fc-участке. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения, антитело IgG человека, которое сконструировано для улучшенного связывания с активирующими Fc гамма-рецепторами, может быть афукозилированным антителом IgG человека.

В некоторых вариантах осуществления данного изобретения, второе антитело представляет собой IgG4 человека, изотип одобренных в данное время анти-PD-1 антител ниволумаба, пембролизумаба и цеплизумаба FDA. Квалифицированный специалист поймет, что несколько изотипов мышиных антител способны связывать как активирующие, так и ингибирующие Fc гамма рецепторы. Важно, что специалист в данной области техники будет знать, что связывание изотипа IgG2a крысы с активирующими и ингибирующими Fc гамма рецепторами мыши, как известно, близко имитирует связывание изотипа IgG4 человека с активирующими и ингибирующими Fc гамма рецепторами человека (Arlauckas, S. P. et al (2017) Sci Transl Med 9(389)). Квалифицированный специалист также будет знать, что помимо изотипов IgG1 и IgG4 человека, антитела IgG3 и IgG2 человека могут продуктивно взаимодействовать с FcγR человека (Sanders, L. A. et al (1995) Infect Immun 63(1): 73-81) и опосредуют антитело-зависимое истощение Т-клеток, например, посредством ADCP и АЗКЦ, после активации активирующих иммунных клеток, несущих Fc гамма рецептор (Arce Vargas, F. et al (2018) Cancer Cell 33(4): 649-663 e644). Следовательно, в некоторых вариантах осуществленя данного изобретения, второе антитело может быть антителом IgG1, или IgG2, или IgG3 человека.

Как указывается выше, данное изобретение включает в себя различные типы и формы молекул антител, которые должны быть известны специалисту в области иммунологии. Хорошо известно, что антитела, применяющиеся в терапевтических целях, часто модифицируются дополнительными компонентами, которые изменяют свойства молекулы антитела.

Соответственно, в данной заявке учитывается, что молекула антитела по данному изобретению или молекула антитела, применяющаяся в соответствии с данным изобретением (например, молекула моноклонального антитела и/или молекула поликлонального антитела, и/или молекула биспецифического антитела), содержит обнаруживаемый фрагмент молекулы и/или цитотоксический фрагмент молекулы.

Под «обнаруживаемым фрагментом молекулы» нами подразумевается одна или большее количество групп, состоящих из: фермента; радиоактивного атома; флуоресцентного фрагмента молекулы; хемилюминесцентного фрагмента молекулы; биолюминесцентного фрагмента молекулы. Обнаруживаемый фрагмент молекулы позволяет визуализировать молекулу антитела in vitro и/или in vivo, и/или ex vivo.

Под «цитотоксическим фрагментом молекулы» в данном изобретении подразумевается радиоактивная часть и/или фермент, причем фермент является каспазой; и/или токсин, причем токсин является бактериальным токсином или ядом; причем цитотоксический фрагмент способен индуцировать лизис клеток.

Также в данном изобретении подразумевается, что молекула антитела может быть в изолированной форме и/или очищенной форме, и/или может быть ПЕГилирована. Пегилирование - это метод, с помощью которого полимеры полиэтиленгликоля добавляются к молекуле, такой как молекула антитела или производное, с целью изменить ее поведение, например, продлить период полураспада путем увеличения ее гидродинамического размера, препятствуя выведению почками.

Как уже обсуждалось выше, CDR антитела связываются с антителом-мишенью. Назначение аминокислот каждому участку CDR, описанному в данной заявке, соответствует определениям, согласно работе Kabat EA et al. 1991, в "Sequences of Proteins of Immunological Interest" (последовательности белков, представляющих иммунологический интерес), пятое издание, публикация NIH No. 91-3242, pp xv-xvii.

Как может быть известно специалисту в данной области техники, существуют и другие способы назначения аминокислот каждому участку CDR. Например, Международная информационная система иммуногенетики (IMGT(R)) (http://www.imgt.org/ и Lefranc и Lefranc "The Immunoglobulin FactsBook" опубликованные издательством Academic Press, 2001).

В дополнительном варианте осуществления данного изобретения, молекула антитела по данному изобретению или применяемая в соответствии с данным изобретением, представляет собой молекулу антитела, которое способно конкурировать со специфическими антителами, представленными в данной заявке, например, с молекулами антител, содержащими любую из аминокислотных последовательностей, указанных, например, в последовательностях SEQ ID NO: 1-194, для связывания со специфической мишенью.

Под «способное конкурировать за» подразумевается то, что конкурирующее антитело способно ингибировать или иным образом вмешиваться, по меньшей мере частично, в связывание молекулы антитела, как определено в данной заявке, с конкретной мишенью.

Например, такая молекула конкурирующего антитела может быть способна ингибировать связывание описанной в данном документе молекулы антитела, по меньшей мере на около 10%; например, по меньшей мере на около 20% или по меньшей мере на около 30%, по меньшей мере на около 40%, по меньшей мере на около 50%, по меньшей мере на около 60%, по меньшей мере на около 70%, по меньшей мере на около 80%, по меньшей мере на около 90%, по меньшей мере на около 95%, около на 100%, и/или ингибировать способность описанного в данной заявке антитела препятствовать связыванию или уменьшать связывание со специфической мишенью по меньшей мере на около 10%, например, по меньшей мере на около 20%, по меньшей мере на около 30%, по меньшей мере на около 40%, по меньшей мере на около 50%, по меньшей мере на около 60%, по меньшей мере на около 70%, по меньшей мере на около 80%, по меньшей мере на около 90%, по меньшей мере на около 95% или на около 100%.

Конкурентное связывание может быть определено способами, хорошо известными специалистам в данной области техники, такими как иммуноферментный анализ (ИФА).

Анализы ИФА можно применять для оценки эпитоп-модифицирующих или блокирующих антител. Дополнительные способы, пригодные для выявления конкурирующего антитела, описаны в лабораторном руководстве Antibodies: A Laboratory Manual, Harlow & Lane («Антитела: Лабораторное руководство», авторы - Харлоу и Лейн), которое включено в данную заявку посредством ссылки (например, см. стр. 567 - 569, 574 - 576, 583 и 590 - 612, 1988, CSHL, NY, ISBN 0-87969-314-2).

Хорошо известно, что антитело специфически связывается или взаимодействует с определенной молекулой-мишенью или антигеном, и что это означает, что антитело предпочтительно и избирательно связывает свою мишень, а не молекулу, которая не является мишенью.

Мишени антител согласно данному изобретению или антител, применяемых в соответствии с данным изобретением, экспрессируются на поверхности клеток, т. е. они являются поверхностным клеточным антигеном, который может включать эпитоп (также известный в контексте данной заявки как эпитоп поверхности клетки) для этого антитела. Поверхностный клеточный антиген и эпитоп - это термины, которые может легко понять специалист в области техники иммунологии или клеточной биологии.

Под «поверхностным клеточным антигеном» в данной заявке подразумевается то, что поверхностный клеточный антиген расположен на внеклеточной стороне клеточной мембраны, но может располагаться на внеклеточной стороне клеточной мембраны только временно. Под «временно располагаться» в данной заявке подразумевается то, что поверхностный клеточный антиген может быть интернализован в клетку или высвобожден с внеклеточной стороны клеточной мембраны во внеклеточное пространство. Антиген клеточной поверхности может высвобождаться с внеклеточной стороны клеточной мембраны путем расщепления, которое может быть опосредовано протеазой.

Поверхностный клеточный антиген может высвобождаться с внеклеточной стороны клеточной мембраны путем расщепления, которое может происходить при участии протеазы. Термин «временно связанный» означает, что антиген клеточной поверхности может высвобождаться с внеклеточной стороны клеточной мембраны во внеклеточное пространство. Антиген клеточной поверхности может высвобождаться с внеклеточной стороны клеточной мембраны путем расщепления, которое может быть опосредовано протеазой.

В данной заявке также подразумевается то, что поверхностный клеточный антиген может быть пептидом, или полипептидом, или углеводом, или олигосахаридной цепью, или липидом; и/или эпитопом, который присутствует на белке или гликопротеине, или липопротеине.

Способы оценки связывания белков известны специалистам в области биохимии и иммунологии. Было бы желательно, чтобы специалисты могли применять эти способы для оценки связывания антитела с мишенью и/или связывания участка Fc антитела с рецептором Fc, а также для оценки относительной силы или специфичности, или ингибирования, или уменьшения этих взаимодействий, или препятствования этим взаимодействиям. Примерами способов, которые можно применять для оценки связывания белков, являются, например, иммуноанализ, анализ межклеточного взаимодействия с помощью систем BIAcore, вестерн-блоттинг, радиоиммуноанализ (РИА) (RIA) и иммуноферментный анализ (ИФА) (обсуждения специфичности антител см. в Fundamental Immunology Second Edition, Raven Press, New York, на страницах 332-336 (1989) (для обсуждения специфичности антитела Fundamental Immunology Second Edition, Raven Press, New York at pages 332-336 (1989).

Соответственно, под «молекулой антитела, специфически связывающейся» или «молекулой антитела, специфической для мишени» в данной заявке подразумеваем то, что молекула антитела специфически связывается с мишенью, но не связывается с участком, не являющимся мишенью, или связывается с участком, не являющимся мишенью (таким участком, как участок с более низкой аффинностью), более слабо, чем с мишенью.

Также данная заявка включает концепцию того, что антитело специфически связывается с мишенью по меньшей мере в два раза сильнее, или по меньшей мере в пять раз сильнее, или по меньшей мере в 10 раз сильнее, или по меньшей мере в 20 раз сильнее, или по меньшей мере в 50 раз сильнее, или по меньшей мере в 100 раз сильнее, или по меньшей мере в 200 раз сильнее, или по меньшей мере в 500 раз сильнее, или по меньшей мере около в 1000 раз сильнее, чем с участком, не являющимся мишенью.

Кроме того данная заявка включает концепцию того, что антитело специфически связывается с мишенью, если оно связывается с мишенью с K_d по меньшей мере около 10^-1 K_d, или по меньшей мере около 10^-2 K_d, или по меньшей мере около 10^-3 K_d, или по меньшей мере около 10^-4 K_d, или по меньшей мере около 10^-5 K_d, или по меньшей мере около 10^-6 K_d, или по меньшей мере около 10^-7 K_d, или по меньшей мере около 10^-8 K_d, или по меньшей мере около 10^-9 K_d, или по меньшей мере около 10^-10 K_d, или по меньшей мере около 10^-11 K_d, или по меньшей мере около 10^-12 K_d, или по меньшей мере около 10^-13 K_d, или по меньшей мере около 10^-14 K_d, или по меньшей мере около 10^-15 K_d.

В некоторых вариантах осуществления данного изобретения, молекула антитела, которая специфически связывает FcγRIIb, является антителом человека.

В некоторых вариантах осуществления данного изобретения, молекула антитела, которая специфически связывает FcγRIIb, является антителом человеческого происхождения, т. е. первоначально антителом человека, которое было модифицировано, как описано в данной заявке.

В некоторых вариантах осуществления данного изобретения, молекула антитела, которая специфически связывает FcγRIIb, является гуманизированным антителом, т. е. первоначально нечеловеческим антителом, которое было модифицировано для увеличения его подобия с антителом человека. Гуманизированные антитела могут быть, например, мышиными антителами или антителами ламы.

В некоторых вариантах осуществления данного изобретения молекула антитела, которая специфически связывает FcγRIIb, содержит следующие константные участки (CH и CL):

IgG1-CH [SEQ ID NO: 1]

ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

IgG1-CL [SEQ ID NO: 2]

QPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS

В некоторых вариантах осуществления данного изобретения, молекула антитела, которая специфически связывает FcγRIIb, содержит одну или более последовательностей следующих клонов:

Клон антитела: 1A01

1A01-VH [SEQ ID NO: 3]

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMNWIRQTPGKGLEWVSLIGWDGG

STYYADSVKGRFTISRDNSENTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARAYSGYELDYWGQ

GTLVTVSS

1A01-VL [SEQ ID NO: 27]

QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGNNAVNWYQQLPGTAPKLLIYDNNNRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLNASIFGGGTKLTVLG

Участки CDR

CDRH1: DYYMN [SEQ ID NO: 51]

CDRH2: LIGWDGGSTYYADSVKG [SEQ ID NO: 52]

CDRH3: AYSGYELDY [SEQ ID NO: 53]

CDRL1: SGSSSNIGNNAVN [SEQ ID NO: 54]

CDRL2: DNNNRPS [SEQ ID NO: 55]

CDRL3: AAWDDSLNASI [SEQ ID NO: 56]

Клон антитела: 1B07

1B07-VH [SEQ ID NO: 4]

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAFTRYDG

SNKYYADSVRGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARENIDAFDVWG

QGTLVTVSS

1B07-VL [SEQ ID NO: 28]

QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGNNAVNWYQQLPGTAPKLLIYDNQQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCEAWDDRLFGPVFGGGTKLTVLG

Участки CDR

CDRH1: SYGMH [SEQ ID NO: 57]

CDRH2: FTRYDGSNKYYADSVRG [SEQ ID NO: 58]

CDRH3: ENIDAFDV [SEQ ID NO: 59]

CDRL1: SGSSSNIGNNAVN [SEQ ID NO: 60]

CDRL2: DNQQRPS [SEQ ID NO: 61]

CDRL3: WDDRLFGPV [SEQ ID NO: 62]

Клон антитела: 1C04

1C04-VH [SEQ ID NO: 5]

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSSISDSGAGRYYADSVEGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARTHDSGELLDAFDIWGQGTLVTVSS

1C04-VL [SEQ ID NO: 29]

QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNHVLWYQQLPGTAPKLLIYGNSNRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLNGWVFGGGTKLTVLG

Участки CDR

CDRH1: SYAMS [SEQ ID NO: 63]

CDRH2: SISDSGAGRYYADSVEG [SEQ ID NO: 64]

CDRH3: THDSGELLDAFDI [SEQ ID NO: 65]

CDRL1: SGSSSNIGSNHVL [SEQ ID NO: 66]

CDRL2: GNSNRPS [SEQ ID NO: 67]

CDRL3: AAWDDSLNGWV [SEQ ID NO: 68]

Клон антитела: 1E05

1E05-VH [SEQ ID NO: 6]

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYAMNWVRQVPGKGLEWVAVISYDGSNKNYVDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNFDNSGYAIPDAFDIWGQGTLVTVSS

1E05-VL [SEQ ID NO: 30]

QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGTAPKLLIYDNNSR

PSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLGGPVFGGGTKLTVLG

Участки CDR

CDRH1: TYAMN [SEQ ID NO: 69]

CDRH2: VISYDGSNKNYVDSVKG [SEQ ID NO: 70]

CDRH3: NFDNSGYAIPDAFDI [SEQ ID NO: 71]

CDRL1: TGSSSNIGAGYDVH [SEQ ID NO: 72]

CDRL2: DNNSRPS [SEQ ID NO: 73]

CDRL3: AAWDDSLGGPV [SEQ ID NO: 74]

Клон антитела: 2А09

2A09-VH [SEQ ID NO: 7]

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNAWMSWVRQAPGKGLEWVAY

ISRDADITHYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTTGFDY

AGDDAFDIWGQGTLVTVSS

2A09-VL [SEQ ID NO: 31]

QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNAVNWYQQLPGTAPKLLIYGNS

DRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLNGRWVFG

GGTKLTVLG

Участки CDR

CDRH1: NAWMS [SEQ ID NO: 75]

CDRH2: YISRDADITHYPASVKG [SEQ ID NO: 76]

CDRH3: GFDYAGDDAFDI [SEQ ID NO: 77]

CDRL1: SGSSSNIGSNAVN [SEQ ID NO: 78]

CDRL2: GNSDRPS [SEQ ID NO: 79]

CDRL3: AAWDDSLNGRWV [SEQ ID NO: 80]

Клон антитела: 2B08

2B08-VH [SEQ ID NO: 8]

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWVRQAPGKGLEWVAL

IGHDGNNKYYLDSLEGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARATD

SGYDLLYWGQGTLVTVSS

2B08-VL [SEQ ID NO: 32]

QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGNNAVNWYQQLPGTAPKLLIYYD

DLLPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCTTWDDSLSGVVFGG

GTKLTVLG

Участки CDR

CDRH1: DYYMS [SEQ ID NO: 81]

CDRH2: LIGHDGNNKYYLDSLEG [SEQ ID NO: 82]

CDRH3: ATDSGYDLLY [SEQ ID NO: 83]

CDRL1: SGSSSNIGNNAVN [SEQ ID NO: 84]

CDRL2: YDDLLPS [SEQ ID NO: 85]

CDRL3: TTWDDSLSGVV [SEQ ID NO: 86]

Клон антитела: 2E8-VH

2E8-VH [SEQ ID NO: 9]

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWIRQAPGKGLEWVSAIGFSDDNT

YYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAGGDGSGWSFWGQGTLVT

VSS

2E8-VL [SEQ ID NO: 33]

QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGNNAVNWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGVP-

DRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCATWDDSLRGWVFGGGTKLTVLG

Участки CDR

CDRH1: DYYMS [SEQ ID NO: 87]

CDRH2: AIGFSDDNTYYADSVKG [SEQ ID NO: 88]

CDRH3: GDGSGWSF [SEQ ID NO: 89]

CDRL1: SGSSSNIGNNAVN [SEQ ID NO: 90]

CDRL2: DNNKRPS [SEQ ID NO: 91]

CDRL3: ATWDDSLRGWV [SEQ ID NO: 92]

Клон антитела: 5C04

5C04-VH [SEQ ID NO: 10]

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGS-

NKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREWRDAFDIWGQ

GTLVTVSS

5C04-VL [SEQ ID NO: 34]

QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGTAPKLLIYSD

NQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSGSWVF

GGGTKLTVLG

Участки CDR

CDRH1: NYGMH [SEQ ID NO: 93]

CDRH2: VISYDGSNKYYADSVKG [SEQ ID NO: 94]

CDRH3: WRDAFDI [SEQ ID NO: 95]

CDRL1: TGSSSNIGAGYDVH [SEQ ID NO: 96]

CDRL2: SDNQRPS [SEQ ID NO: 97]

CDRL3: AAWDDSLSGSWV [SEQ ID NO: 98]

Клон антитела: 5C05

5C05-VH [SEQ ID NO: 11]

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDG

SNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARENFDAFDVWGQ

GTLVTVSS

5C05-VL [SEQ ID NO: 35]

QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGTAPKLLIYSNSQRPS

GVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLNGQVVFGGGTKLTVLG

Участки CDR

CDRH1: TYGMH [SEQ ID NO: 99]

CDRH2: VISYDGSNKYYADSVKG [SEQ ID NO: 100]

CDRH3: ENFDAFDV [SEQ ID NO: 101]

CDRL1: TGSSSNIGAGYDVH [SEQ ID NO: 102]

CDRL2: SNSQRPS [SEQ ID NO: 103]

CDRL3: AAWDDSLNGQVV [SEQ ID NO: 104]

Клон антитела: 5D07

5D07-VH [SEQ ID NO: 12]

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIAYD

GSKKDYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREYRDAFDIWG

QGTLVTVSS

5D07-VL [SEQ ID NO: 36]

QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGTAPKLLIYGNSNRP

SGVPDRFSGSKSGTTASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSVSGWMFGGGTKLTVLG

Участки CDR

CDRH1: TYGMH [SEQ ID NO: 105]

CDRH2: VIAYDGSKKDYADSVKG [SEQ ID NO: 106]

CDRH3: EYRDAFDI [SEQ ID NO: 107]

CDRL1: TGSSSNIGAGYDVH [SEQ ID NO: 108]

CDRL2: GNSNRPS [SEQ ID NO: 109]

CDRL3: AAWDDSVSGWM [SEQ ID NO: 110]

Клон антитела: 5E12

5E12-VH [SEQ ID NO: 13]

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGIN

KDYADSMKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARERKDAFDIWGQGT

LVTVSS

5E12-VL [SEQ ID NO: 37]

QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGTAPKLLIYSNNQR

PSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCATWDDSLNGLVFGGGTKLTVLG

Участки CDR

CDRH1: SYGMH [SEQ ID NO: 111]

CDRH2: VISYDGINKDYADSMKG [SEQ ID NO: 112]

CDRH3: ERKDAFDI [SEQ ID NO: 113]

CDRL1: TGSSSNIGAGYDVH [SEQ ID NO: 114]

CDRL2: SNNQRPS [SEQ ID NO: 115]

CDRL3: ATWDDSLNGLV [SEQ ID NO: 116]

Клон антитела: 5G08

5G08-VH [SEQ ID NO: 14]

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFNNYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYD

GSNRYYADSVKGRFTMSRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRWNGMDV

WGQGTLVTVSS

5G08-VL [SEQ ID NO: 38]

QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGTAPKLLIYANNQRP-

SGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLNGPWVFGGGTKLTVLG

Участки CDR

CDRH1: NYGMH [SEQ ID NO: 117]

CDRH2: VISYDGSNRYYADSVKG [SEQ ID NO: 118]

CDRH3: DRWNGMDV [SEQ ID NO: 119]

CDRL1: SGSSSNIGAGYDVH [SEQ ID NO: 120]

CDRL2: ANNQRPS [SEQ ID NO: 121]

CDRL3: AAWDDSLNGPWV [SEQ ID NO: 122]

Клон антитела: 5H06

5H06-VH [SEQ ID NO: 15]

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGS

DTAYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDHSVIGAFDIWGQ

GTLVTVSS

5H06-VL [SEQ ID NO: 39]

QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNTVNWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRP

SGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCSSYAGSNNVVFGGGTKLTVLG

Участки CDR

CDRH1: SYGMH [SEQ ID NO: 123]

CDRH2: VISYDGSDTAYADSVKG [SEQ ID NO: 124]

CDRH3: DHSVIGAFDI [SEQ ID NO: 125]

CDRL1: SGSSSNIGSNTVN [SEQ ID NO: 126]

CDRL2: DNNKRPS [SEQ ID NO: 127]

CDRL3: SSYAGSNNVV [SEQ ID NO: 128]

Клон антитела: 6А09

6A09-VH [SEQ ID NO: 16]

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVTSYDGN

TKYYANSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREDCGGDCFDYW

GQGTLVTVSS

6A09-VL [SEQ ID NO: 40]

QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGTAPKLLIYGNSNRPS

GVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLNEGVFGGGTKLTVLG

Участки CDR

CDRH1: SYGMH [SEQ ID NO: 129]

CDRH2: VTSYDGNTKYYANSVKG [SEQ ID NO: 130]

CDRH3: EDCGGDCFDY [SEQ ID NO: 131]

CDRL1: TGSSSNIGAGYDVH [SEQ ID NO: 132]

CDRL2: GNSNRPS [SEQ ID NO: 133]

CDRL3: AAWDDSLNEGV [SEQ ID NO: 134]

Клон антитела: 6В01

6B01-VH [SEQ ID NO: 17]

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGS

NKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDQLGEAFDIWGQGT

LVTVSS

6B01-VL [SEQ ID NO: 41]

QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPS

GVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCATWDDSLSGPVFGGGTKLTVLG

Участки CDR

CDRH1: NYGMH [SEQ ID NO: 135]

CDRH2: VISYDGSNKYYADSVKG [SEQ ID NO: 136]

CDRH3: DQLGEAFDI [SEQ ID NO: 137]

CDRL1: TGSSSNIGAGYDVH [SEQ ID NO: 138]

CDRL2: DNNKRPS [SEQ ID NO: 139]

CDRL3: ATWDDSLSGPV [SEQ ID NO: 140]

Клон антитела: 6C11

6C11-VH [SEQ ID NO: 18]

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFDDYGMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSG

SSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAGGDIDYFDYWGQGTL-

sVTVSS

6C11-VL [SEQ ID NO: 42]

QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCTGSSSNFGAGYDVHWYQQLPGTAPKLLIYENNKRP

SGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLNGPVFGGGTKLTVLG

Участки CDR

CDRH1: DYGMS [SEQ ID NO: 141]

CDRH2: AISGSGSSTYYADSVKG [SEQ ID NO: 142]

CDRH3: GDIDYFDY [SEQ ID NO: 143]

CDRL1: TGSSSNFGAGYDVH [SEQ ID NO: 144]

CDRL2: ENNKRPS [SEQ ID NO: 145]

CDRL3: AAWDDSLNGPV [SEQ ID NO: 146]

Клон антитела: 6C12

6C12-VH [SEQ ID NO: 19]

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGS

NKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARERRDAFDIWGQGT

LVTVSS

6C12-VL [SEQ ID NO: 43]

QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGTAPKLLIYSDNQ

RPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCATWDSDTPVFGGGTKLTVLG

Участки CDR

CDRH1: SYGMH [SEQ ID NO: 147]

CDRH2: VISYDGSNKYYADSVKG [SEQ ID NO: 148]

CDRH3: ERRDAFDI [SEQ ID NO: 149]

CDRL1: TGSSSNIGAGYDVH [SEQ ID NO: 150]

CDRL2: SDNQRPS [SEQ ID NO: 151]

CDRL3: ATWDSDTPV [SEQ ID NO: 152]

Клон антитела: 6D01

6D01-VH [SEQ ID NO: 20]

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGS

NKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAMYYCARDHSAAGYFDYWGQ

GTLVTVSS

6D01-VL [SEQ ID NO: 44]

QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNTVNWYQQLPGTAPKLLIYGNSIRPSG

GPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCASWDDSLSSPVFGGGTKLTVLG

Участки CDR

CDRH1: SYGMH [SEQ ID NO: 153]

CDRH2: VISYDGSNKYYADSVKG [SEQ ID NO: 154]

CDRH3: DHSAAGYFDY [SEQ ID NO: 155]

CDRL1: SGSSSNIGSNTVN [SEQ ID NO: 156]

CDRL2: GNSIRPS [SEQ ID NO: 157]

CDRL3: ASWDDSLSSPV [SEQ ID NO: 158]

Клон антитела: 6G03

6G03-VH [SEQ ID NO: 21]

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFGSYGMHWVRQAPGKGLEWVSGISWDS

AIIDYAGSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDEAAAGAFDIWGQG

TLVTVSS

6G03-VL [SEQ ID NO: 45]

QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGTAPKLLIYGNTDRPS

GVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSGPVVFGGGTKLTVLG

Участки CDR

CDRH1: SYGMH [SEQ ID NO: 159]

CDRH2: GISWDSAIIDYAGSVKG [SEQ ID NO: 160]

CDRH3: DEAAAGAFDI [SEQ ID NO: 161]

CDRL1: TGSSSNIGAGYDVH [SEQ ID NO: 162]

CDRL2: GNTDRPS [SEQ ID NO: 163]

CDRL3: AAWDDSLSGPVV [SEQ ID NO: 164]

Клон антитела: 6G08

6G08-VH [SEQ ID NO: 22]

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLSSYGISWVRQAPGKGLEWVSGISGSGGN

TYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCASSVGAYANDAFDIWGQ

GTLVTVSS

6G08-VL [SEQ ID NO: 46]

QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGTAPKLLIYGDTNRPS

GVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLNGPVFGGGTKLTVLG

Участки CDR

CDRH1: SYGIS [SEQ ID NO: 165]

CDRH2: GISGSGGNTYYADSVKG [SEQ ID NO: 166]

CDRH3: SVGAYANDAFDI [SEQ ID NO: 167]

CDRL1: TGSSSNIGAGYDVH [SEQ ID NO: 168]

CDRL2: GDTNRPS [SEQ ID NO: 169]

CDRL3: AAWDDSLNGPV [SEQ ID NO: 170]

Клон антитела: 6G11

6G11-VH [SEQ ID NO: 23]

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWMAVISYDGS

NKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARELYDAFDIWGQGTL

VTVSS

6G11-VL [SEQ ID NO: 47]

QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGTAPKLLIYADDHRP

SGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCASWDDSQRAVIFGGGTKLTVLG

Участки CDR

CDRH1: SYGMH [SEQ ID NO: 171]

CDRH2: VISYDGSNKYYADSVKG [SEQ ID NO: 172]

CDRH3: ELYDAFDI [SEQ ID NO: 173]

CDRL1: TGSSSNIGAGYDVH [SEQ ID NO: 174]

CDRL2: ADDHRPS [SEQ ID NO: 175]

CDRL3: ASWDDSQRAVI [SEQ ID NO: 176]

Клон антитела: 6H08

6H08-VH [SEQ ID NO: 24]

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFNNYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGS

NKYYADSVKGRFTISKDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREYKDAFDIWGQGTL

VTVSS

6H08-VL [SEQ ID NO: 48]

QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCTGSSSNIGSNTVNWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPS

GVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCQAWGTGIRVFGGGTKLTVLG

Участки CDR

CDRH1: NYGMH [SEQ ID NO: 177]

CDRH2: VISYDGSNKYYAD SVKG [SEQ ID NO: 178]

CDRH3: EYKDAFDI [SEQ ID NO: 179]

CDRL1: TGSSSNIGSNTVN [SEQ ID NO: 180]

CDRL2: DNNKRPS [SEQ ID NO: 181]

CDRL3: QAWGTGIRV [SEQ ID NO: 182]

Клон антитела: 7C07

7C07-VH [SEQ ID NO: 25]

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGS

NKYYADSVKGRFTISRDNSQNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREFGYIILDYWGQG

TLVTVSS

7C07-VL [SEQ ID NO: 49]

QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNTVNWYQQLPGTAPKLLIYRDYER

PSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCMAWDDSLSGVVFGGGTKLTVLG

Участки CDR

CDRH1: SYGMH [SEQ ID NO: 183]

CDRH2: VISYDGSNKYYADSVKG [SEQ ID NO: 184]

CDRH3: EFGYIILDY [SEQ ID NO: 185]

CDRL1: SGSSSNIGSNTVN [SEQ ID NO: 186]

CDRL2: RDYERPS [SEQ ID NO: 187]

CDRL3: MAWDDSLSGVV [SEQ ID NO: 188]

Клон антитела: 4B02

4B02-VH [SEQ ID NO: 26]

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNHGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGT

NKYYADSVRGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARETWDAFDVWGQGTLV

TVSS

4B02-VL [SEQ ID NO: 50]

QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNNANWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCQAWDSSTVVFGGGTKLTVLG

Участки CDR

CDRH1: NHGMH [SEQ ID NO: 189]

CDRH2: VISYDGTNKYYADSVRG [SEQ ID NO: 190]

CDRH3: ETWDAFDV [SEQ ID NO: 191]

CDRL1: SGSSSNIGSNNAN [SEQ ID NO: 192]

CDRL2: DNNKRPS [SEQ ID NO: 193]

CDRL3: QAWDSSTVV [SEQ ID NO: 194]

В некоторых вариантах осуществления данного изобретения, которые иногда являются предпочтительными вариантами осуществления данного изобретения, молекула антитела, которая специфически связывает FcγRIIb, содержит следующие участки CDR: SEQ ID NO: 171 (CDRH1), SEQ ID NO: 172 (CDRH2), SEQ ID NO: 173 (CDRH3), SEQ ID NO: 174 (CDRL1), SEQ ID NO: 175 (CDRL2) and SEQ ID NO: 176 (CDRL3), т. е. участки CDR клона 6G11.

В некоторых вариантах осуществления данного изобретения, которые иногда являются предпочтительными вариантами осуществления данного изобретения, молекула антитела, которая специфически связывает FcγRIIb, содержит следующие константные участки: SEQ ID NO: 1 (CH) и SEQ ID NO: 2 (CL); и следующие вариабельные участки: SEQ ID NO: 23 (VL) и SEQ ID NO: 47 (VH), т. е. константные и вариабельные участки клона 6G11.

В некоторых вариантах осуществления данного изобретения, молекула анти-PD-1 антитела представляет собой молекулу антитела человека или молекулу антитела человеческого происхождения. В некоторых таких вариантах осуществления данного изобретения, молекула антитела человека или молекула антитела человеческого происхождения являются антителом IgG. В некоторых таких вариантах осуществления данного изобретения, молекула антитела человека или молекула антитела человеческого происхождения являются антителом IgG4.

Молекула анти-PD-1 антитела представляет собой молекулу антитела, которая специфически связывается с PD-1.

В некоторых вариантах осуществления данного изобретения, молекула анти-PD-1 антитела блокирует связывание PD-L1 и/или PD-L2 с PD-1 и затем может рассматриваться как антагонист PD-1.

В некоторых вариантах осуществления данного изобретения, молекула анти-PD-1 антитела представляет собой гуманизированную молекулу антитела.

В некоторых вариантах осуществления данного изобретения, молекула анти-PD-1 антитела представляет собой химерное антитело.

Как упоминалось выше, анти-PD-1 антитело должно обладать способностью взаимодействовать с FcγR.

В некоторых вариантах осуществления данного изобретения, молекула анти-PD-1 антитела выбрана из группы, состоящей из ниволумаба (OPDIVO®), пембролизумаба (KEYTRUDA®) и цемиплимаба (LIBTAYO®).

В некоторых вариантах осуществления данного изобретения, изобретения молекулу антитела, которая специфически связывает FcγRIIb, и молекулу анти-PD-1 антитела вводят пациенту одновременно, что означает, что они либо вводятся вместе в одно время, либо по отдельности очень близко друг к другу по времени.

В некоторых вариантах осуществления данного изобретения, молекула антитела, которая специфически связывает FcγRIIb, вводится пациенту до введения молекулы анти-PD-1 антитела. Такое последовательное введение может быть достигнуто путем временного разделения двух антител. Как альтернатива или в комбинации с первым вариантом, последовательное введение может быть также достигнуто путем пространственного разделения двух молекул антитела, путем введения молекулы антитела, которая специфически связывает FcγRIIb, интратуморально, так чтобы она достигает рака раньше, чем молекула анти-PD-1, которую затем вводят системно, так чтобы она достигла рака после молекулы антитела, которая специфически связывает FcγRIIb.

В некоторых вариантах осуществления данного изобретения, молекулу анти-PD-1 антитела вводят пациенту перед введением молекулы антитела, которая специфически связывает FcγRIIb. Подобно тому, что описано выше, такое последовательное введение может быть достигнуто путем временного разделения двух антител и/или пространственного разделения двух молекул антител. Для пространственного введения, молекулу анти-PD-1 антитела вводят таким способом, как внутриопухолевый, так что она достигает рака раньше, чем молекула антитела, которая специфически связывает FcγRIIb, которую затем вводят системно, так что она достигает рака после молекулы антитела PD-1.

Специалисту в области медицины может быть известно, что лекарства могут быть модифицированы с помощью различных добавок, например, чтобы изменить скорость всасывания лекарства в организме; и могут быть модифицированы в различных формах, например, чтобы обеспечить определенный путь введения в организм.

Соответственно, в данной заявке подразумевается, что композиция и/или антитело, и/или лекарственное средство по данному изобретению можно скомбинировать с наполнителем и/или фармацевтически приемлемым носителем, и/или фармацевтически приемлемым разбавителем и/или адъювантом.

В данной заявке также подразумевается, что композиция, и/или антитело, и/или лекарственное средство по данному изобретению могут быть пригодны для парентерального введения, включая водные и/или неводные стерильные инъекционные растворы, которые могут содержать антиоксиданты, и/или буферы, и/или бактериостатики, и/или растворенные вещества, которые делают состав изотоническим с кровью предполагаемого реципиента; и/или водные и/или неводные стерильные суспензии, которые могут включать суспензирующие агенты и/или загустители. Эта композиция и/или антитело, и/или агент, и/или лекарственное средство по данному изобретению могут быть представлены в однодозовых или многодозовых контейнерах, например, в герметичных ампулах и флаконах, и могут храниться в высушенном сублимацией (т. е. лиофилизированном) состоянии, требующем только добавления стерильного жидкого носителя, например воды для инъекций, непосредственно перед применением.

Экстемпоральные инъекционные растворы и суспензии можно приготовить из стерильных порошков и/или гранул, и/или таблеток ранее описанного вида.

Для парентерального введения больным людям суточная доза молекулы антитела, которая специфически связывает FcγRIIb, и/или молекулы анти-PD-1 антитела, как правило, составляет от 1 мг/кг до 20 мг/кг массы тела пациента, а в некоторых случаях даже до 100 мг/кг массы тела пациента; вводится в однократной дозе или в разделенных дозах. Более низкие дозы можно применять в особых обстоятельствах, например, в сочетании с продолжительным введением. В любом случае врач определит фактическую дозировку, которая будет наиболее подходящей для каждого отдельного пациента, и которая будет варьировать в зависимости от возраста, веса и реакции конкретного пациента. Приведенные выше дозы являются типичными для среднего случая. Конечно, могут быть отдельные случаи, когда оправданы более высокие или более низкие диапазоны дозировок, и такие случаи относятся к сфере применения данного изобретения.

Как правило, композиция и/или лекарственное средство данного изобретения содержит молекулу антитела, которая специфически связывает FcγRIIb, и/или анти-PD-1 антитела, в концентрации в диапазоне приблизительно от 2 мг/мл до 150 мг/мл или приблизительно от 2 мг/мл до 200 мг/мл. В предпочтительном варианте осуществления данного изобретения, лекарственные средства и/или композиции по данному изобретению будут содержать молекулу антитела, которая специфически связывает FcγRIIb, и/или молекулу анти-PD-1 антитела, в концентрации 10 мг/мл.

Как правило, у человека пероральное или парентеральное введение композиции и/или антитела, и/или агента, и/или лекарственного средства по данному изобретению является предпочтительным путем введения, поскольку он является наиболее удобным. Для ветеринарного применения композицию и/или антитело, и/или агент, и/или лекарственное средство по данному изобретению вводят в виде подходящей приемлемой лекарственной формы в соответствии с обычной ветеринарной практикой, а ветеринарный врач определяет режим дозирования и способ введения, который будет наиболее подходящим для конкретного животного. Таким образом, данное изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей количество антитела и/или агента по данному изобретению, эффективное для лечения различных состояний (как описано выше и далее ниже). Предпочтительно, чтобы композиция и/или антитело, и/или агент, и/или лекарственное средство было адаптировано для доставки путем введения, выбранным из группы, включающей: внутривенное (в/в); подкожное (п/к), внутримышечное (в/м) или интратуморальное введение.

Данное изобретение также включает композицию и/или антитело, и/или агент, и/или лекарственное средство, содержащее фармацевтически приемлемые кислые или оснóвные аддитивные соли полипептидсвязывающих группировок по данному изобретению. Кислоты, которые применяются для получения фармацевтически приемлемых кислых аддитивных солей вышеупомянутых оснóвных соединений, полезных в данном изобретении, являются кислотами, которые образуют нетоксичные кислые аддитивные соли, т.е. соли, содержащие фармакологически приемлемые анионы, в частности, такие как соли гидрохлорид, гидробромид, гидройодид, нитрат, сульфат, бисульфат, фосфат, кислый фосфат, ацетат, лактат, цитрат, кислый цитрат, тартрат, битартрат, сукцинат, малеат, фумарат, глюконат, сахарат, бензоат, метансульфонат, этансульфонат, бензолсульфонат, п-толуолсульфонат и памоат [т. е. 1,1' - метилен-бис-(2-гидрокси-3 нафтоат)] среди прочего. Фармацевтически приемлемые оснóвные аддитивные соли также можно применять для получения фармацевтически приемлемых солевых форм агентов согласно данному изобретению. Химические основания, которые можно применять в качестве реактивов для получения фармацевтически приемлемых оснóвных солей настоящих агентов, которые являются кислотными по своей природе, являются химические основания, которые образуют с такими соединениями нетоксичные оснóвные соли. Такие нетоксичные оснóвные соли включают, но не ограничиваются ими, нетоксичные оснóвные соли, являющиеся производными таких фармакологически приемлемых катионов, как катионы щелочных металлов (например, калия и натрия) и катионы щелочноземельных металлов (например, кальция и магния). кальций и магний), аммоний или водорастворимые аминовые аддитивные соли, такие как N-метилглюкамин-(меглюмин), а также в том числе низший алканоламмоний и другие оснóвные соли фармацевтически приемлемых органических аминов. Эти агенты и/или полипептидсвязывающие группировки по данному изобретению могут быть лиофилизированы для хранения и ресуспензированы в подходящем носителе перед применением. Можно применять любой подходящий метод лиофилизации (например, распылительная сушка, сушка осадка) и/или методы ресуспензирования. Специалисты в данной области техники примут во внимание то, что лиофилизация и ресуспензирование могут привести к потере организмом в различной степени активности антител (например, при применении обычных иммуноглобулинов антитела IgM имеют тенденцию к большей потере активности, чем антитела IgG) и что для компенсации этого уровни применения могут быть скорректированы в сторону увеличения. В одном варианте осуществления данного изобретения, лиофилизированная (сублимированная) полипептидсвязывающий фрагмент теряет не более чем около 20%, или не более чем около 25%, или не более чем около 30%, или не более чем около 35%, или не более чем около 40%, или не более чем около 45%, или не более чем около 50% своей активности (до лиофилизации) при регидратации.

Комбинация молекулы антитела, которая специфически связывает FcγRIIb, и молекулы анти-PD-1 антитела, может быть применена для лечения рака.

Термин "пациент", употребляющийся в данной заявке, относится к животному, включая человека, у которого был диагностирован рак, отрицательный по FcγRIIb, или рак, который считается раком, вероятно отрицательным по FcγRIIb, и/или который демонстрирует симптомы такого рака.

В данной заявке предполагается, что пациент может быть млекопитающим или не млекопитающим. Предпочтительно, чтобы пациент был человеком или млекопитающим, например, лошадью, коровой, овцой, свиньей, верблюдом, собакой или кошкой. Более всего предпочтительно, чтобы пациент-млекопитающее представлял собой человека.

Под «демонстрировать» в данной заявке подразумевается, что субъект демонстрирует симптом рака и/или диагностический маркер рака; и/или симптом рака и/или диагностический маркер рака можно измерить и/или оценить, и/или количественно определить.

Специалист в области медицины сразу поймет, каковы симптомы рака и диагностические маркеры рака, а также, как измерить и/или оценить, и/или количественно определить, происходит ли уменьшение или увеличение тяжести симптомов рака или уменьшение или увеличение диагностических маркеров рака; а также как эти симптомы рака и/или диагностические маркеры рака можно использовать для формирования прогноза течения рака.

Лечение рака часто назначают в виде курса лечения, то есть лекарственный препарат вводят в течение определенного периода времени. Продолжительность курса лечения будет зависеть от ряда факторов, которые среди прочего могут включать тип вводимого лекарственного препарата; тип рака, который подвергается лечению; тяжесть рака, который подвергается лечению; возраст и состояние здоровья пациента.

Под «во время лечения» в данной заявке подразумевается то, что пациент в данное время проходит курс лечения и/или получает лекарственный препарат, и/или получает курс лекарственного препарата.

Пациент, которого лечат в соответствии с данным изобретением, имеет рак, характеризующийся опухолями, положительными по PD-1.

В некоторых вариантах осуществления данного изобретения, рак, подлежащий лечению, представляет собой солидный рак.

В некоторых вариантах осуществления данного изобретения, солидный рак, подлежащий лечению, представляет собой рак, лечение которого обычно содержит или включает иммунотерапию анти-PD-1 антителом.

В некоторых вариантах осуществления данного изобретения, рак, подлежащий лечению, выбран из группы, состоящей из меланомы; рака легкого, включая мелкоклеточный рак легкого (SCLC) и немелкоклеточный рак легкого (NSCLC) (включая неплоскоклеточный NSCLC и плоскоклеточный NSCLC, включая метастатический NSCLC); рака головы и шеи, включая плоскоклеточный рак головы и шеи (HNSCC); лимфомы Ходжкина; первичной средостенной B-клеточной лимфомы (PMBCL); рака мочевого пузыря, включая запущенную уротелиальную карциному; колоректального рака, включая рак с высокой нестабильностью (MSI-H) и/или дефицит репарации несоответствий (dMMR); рака желудка, включая распространенный рак желудка и аденокарциному желудка или желудочно-пищеводного перехода (GEJ); рака шейки матки; рака печени, в том числе гепатоцеллюлярную карциному; карциномы из клеток Меркеля (MCC); рака почки, в том числе почечно-клеточной карциномы (RCC) и плоскоклеточного рака кожи (CSCC), включая местнораспространенный CSCC у пациентов, которые не являются кандидатами на хирургическое вмешательство или лечебное облучение. Специалистам в данной области техники будет известно, что количество и типы показаний, относящихся к анти-PD-1 иммунотерапии, быстро расширяются.

В некоторых вариантах осуществления данного изобретения, рак представляет собой рефрактерный рак. В некоторых таких вариантах осуществления данного изобретения, рефрактерный рак представляет собой рак, который, как обнаружено, устойчив к лечению анти-PD-1 антителом уже в начале лечения. Об этой резистентности может свидетельствовать либо отсутствие реакции пациента на лечение, либо некоторый прогресс рака, несмотря на лечение. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения, рефрактерный рак представляет собой рак, который становится устойчивым к анти-PD-1 антителу во время лечения этим антителом, что означает, что пациент перестает отвечать на лечение или демонстрирует пониженный ответ на лечение. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения, рефрактерный рак является резистентным после или на последних стадиях успешного лечения анти-PD-1 антителом, что означает, что анти-PD-1 антитело не будет иметь никакого эффекта или уменьшит эффект в случае рецидива рака.

Каждый из вышеописанных видов рака хорошо известен, а симптомы и диагностические маркеры рака хорошо описаны, как и лекарственные препараты, применяющиеся для лечения этих видов рака. Соответственно, симптомы, диагностические маркеры рака и лекарственные препараты, применяющиеся для лечения вышеуказанных типов рака, известны специалистам в области медицины.

Клинические определения диагноза, прогноза и прогрессирования большого количества раковых заболеваний основаны на определенных классификациях, известных как определение стадии рака. Эти системы определения стадии рака действуют для сопоставления ряда различных диагностических маркеров рака и симптомов рака, для обеспечения формулировки диагноза и/или прогноза, и/или прогрессирования рака. Специалисту в области онкологии будет известно, как оценить диагноз, и/или прогноз, и/или прогрессирование рака, используя систему определения стадии рака, и какие диагностические маркеры рака и симптомы рака следует применять для этого.

Под «определением стадии рака» в данной заявке подразумевается определение стадии рака по классификации Rai, которая включает в себя стадию 0, стадию I, стадию II, стадию III и стадию IV, и/или по классификации Binet, которая включает в себя стадию А, стадию B и стадию C, и/или по классификации Ann Arbour, которая включает стадию I, стадию II, стадию III и стадию IV.

Известно, что рак может вызывать аномалии в морфологии клеток. Эти аномалии часто повторно встречаются при определенных видах рака, что означает то, что исследование этих изменений в морфологии (также известное как гистологическое исследование) можно применять в диагностике или прогнозировании рака. Методы визуализации образцов для изучения морфологии клеток и подготовки образцов для визуализации хорошо известны в данной области техники; например, световая микроскопия или конфокальная микроскопия.

Под «гистологическим исследованием» в данной заявке подразумевается наличие мелких зрелых лимфоцитов и/или наличие мелких зрелых лимфоцитов с узкой каймой цитоплазмы, наличие мелких зрелых лимфоцитов с плотным ядром, лишенным отчетливо видимых ядрышек, и/или наличие мелких зрелых лимфоцитов с узкой каймой цитоплазмы, и/или с плотным ядром, лишенным отчетливо видимых ядрышек, и/или наличие атипичных клеток, и/или расщепленных клеток, и/или пролимфоцитов.

Хорошо известно, что рак является результатом мутаций в ДНК клетки, которые могут привести к тому, что клетка избегает клеточной гибели или бесконтрольно размножается. Поэтому исследование этих мутаций (также известное как цитогенетическое исследование) может быть полезным инструментом для оценки диагноза и/или прогноза рака. Примером этого является делеция хромосомной локации 13q14.1, которая характерна для хронической лимфоцитарной лейкемии. Методы исследования мутаций в клетках хорошо известны в данной области техники; например, флуоресцентная гибридизация in situ (FISH - fluorescence in situ hybridization).

Под «цитогенетическим исследованием» в данной заявке подразумевается исследование ДНК в клетке и, в частности, в хромосоме. Цитогенетическое исследование можно применять для выявления изменений в ДНК, которые могут быть связаны с наличием рефрактерного рака и/или рецидивирующего рака. Такие изменения ДНК могут включать: делеции в длинном плече хромосомы 13 и/или делеции локуса 13q14.1 хромосомы, и/или трисомию хромосомы 12, и/или делеции в длинном плече хромосомы 12, и/или делеции в длинном плече хромосомы 11, и/или делецию 11q, и/или делеции в длинном плече хромосомы 6, и/или делецию 6q, и/или делеции в коротком плече хромосомы 17, и/или делецию в 17p, и/или транслокацию t(11:14), и/или транслокацию (q13:q32), и/или перестройку рецептора гена антигена, и/или перестройки BCL2, и/или перестройки BCL6, и/или транслокации t(14:18), и/или транслокации t(11:14), и/или транслокации (q13:q32), и/или транслокации (3:v), и/или транслокации (8:14), и/или транслокации (8:v), и/или транслокации t(11:14) и (q13:q32).

Известно, что больные раком проявляют определенные физикальные симптомы, которые часто являются результатом бремени рака на организм. Эти симптомы часто повторяются при одном и том же раке, и поэтому могут быть характерными для диагноза, и/или прогноза, и/или прогрессирования заболевания. Специалист в области медицины должен понимать, какие физикальные симптомы связаны с какими видами рака, и как оценка этих физикальных систем может коррелировать с диагнозом, и/или прогнозом, и/или прогрессированием заболевания. Под «физикальными симптомами» в данной заявке подразумевается гепатомегалия и/или спленомегалия.

Краткое описание графических материалов

В приведенных ниже примерах делается ссылка на следующие фигуры:

Фиг. 1 демонстрирует экспрессию PD-1 на Т-клетках Jurkat человека, трансфицированных с PD-1. Клетки Jurkat, трансфицированные PD-1, разделяли на клетки с низкой, средней и высокой экспрессией PD-1. После размножения экспрессия PD-1 была количественно определена в трех различных подгруппах, и количество молекул PD-1 на клетку продемонстрировано на фиг. 1A (низкая), фиг. 1B (средняя) и фиг. 1C (высокая).

Фиг. 2 демонстрирует, что BI-1206 (6G11 ДТ) ингибирует PD-1-опосредованный фагоцитоз клеток со средней и высокой, но не низкой экспрессией. Фиг. 2A иллюстрирует пример, демонстрирующий фагоцитированные клетки Jurkat. FL4 на оси y отображает макрофаги CD14+, а FL1 на оси x отображает клетки Jurkat, меченные CFSE. Таким образом, обведенный кружком верхний правый квадрант демонстрирует двойные положительные CD14+ CFSE+ клетки, которые являются фагоцитированными клетками Jurkat. В примере продемонстрирован фагоцитоз клеток Jurkat с высокой экспрессией PD-1. Фиг. 2B демонстрирует фагоцитоз клеток Jurkat с средней экспрессией PD-1, а на фиг. 2C показаны клетки Jurkat с высокой экспрессией. Значения нормализованы в отношении опсонизации изотипа (установлено на ноль %) и опсонизации против CD3 (OKT3 hIgG1, установлено на 100%). На фигуре продемонстрировано, что BI-1206 (обозначенный на фигуре 6G11 ДТ) ингибирует фагоцитоз, опосредованный ниволумабом, при всех протестированных концентрациях. Кроме того, на фигуре продемонстрировано, что антителу 6G11 необходима интактная Fc-часть для ингибирования фагоцитоза, поскольку нарушение связывания FcγR вызвано индуцированием мутации в положении 297 от аминокислоты аспарагин (N) до аминокислоты глутамина (Q) (т.е. антитело в данном документе обозначается 6G11NQ) снижает его способность ингибировать фагоцитоз, опосредованный ниволумабом. На фигуре продемонстрированы 2 эксперимента для клеток со средней экспрессией и 3 эксперимента для клеток с высокой экспрессией. Фиг. 2D демонстрирует, что в клетках с низкой экспрессией отсутствует фагоцитоз, опосредованный ниволумабом.

Фиг. 3 демонстрирует, что Fc:FcγR-связывающее опытное анти-FcγRIIB (AT-130-2 mIgG2a и mIgG1), но не Fc:FcγR-связывающее нарушенное анти-FcγRIIB (AT-130-2 mIgG1 NA), усиливает терапевтическую эффективность и выживаемость анти-PD-1 антител in vivo. Мышей CT26 (фиг. A и B) или MC38 (фиг. 3C и фиг. 3D) несущих опухоли обрабатывали трижды (на 8, 12 и 15 дни после инокуляции 5×10⁵ опухолевых клеток п/к на 100 мкл PBS) с 200 мкг анти-PD-1 (клон 29F.1A12; Bioxcell) антитела отдельно или в комбинации с 200 мкг указанного варианта анти-FcγRIIB антитела или изотипического контроля (WR17). Для первого лечения AT130-2 вводили за 6 часов до анти-PD1 антитела. Для последующего лечения оба антитела вводили вместе. Все инъекции были внутрибрюшинными в 200 мкл PBS. Опухоли были рассмотрены как терминальные, когда они достигли площади 400 мм² для CT26 или 225 мм² для MC38Graphs демонстрации роста опухоли (фиг. 3А и фиг. 3C) и выживаемости (фиг. 3B и фиг. 3D) животных (**Р <0,01; лог-ранговый тест). Эксперименты проводились на самках мышей в возрасте 8-14 недель.

Фиг. 4 демонстрирует экспрессию PD-1 на иммунных клетках мышей, несущих опухоль. Иммунные клетки опухолей мышей количественно оценивали на экспрессию PD-1. Мышам вводили клетки MC38, и опухоли собирали через ~20 дней. Клетки окрашивали на различные субпопуляции Т-клеток, и экспрессию PD-1 на CD8+ Т-клетках анализировали с помощью FACS. Средние флуоресцентные значения интенсивности PD-1 на клетки были соотнесены со значениями от Quantum™ Simply Cellular® гранул, окрашенные тем же анти-PD-1 антитела, чтобы определить количество рецепторов на клетку.

Фиг. 5 демонстрирует клетки Jurkat, экспрессирующие разные уровни PD-1, т.е. низкий PD-1, средний PD-1 (средний) и высокий PD-1. Экспрессии PD-1 определяли с применением насыщающей концентрации Alexa Fluor 647 человеческого антитела против PD-1 человека (пембролизумаб).

Фиг. 6 демонстрирует экспрессию PD-1 на «средних клетках Jurkat PD-1». Гейтирование показывает гейтирование полной ширины/половины высоты, используемую для определения нижнего предела «средней-высокой» экспрессии PD-1 на образцах опухолей.

Фиг. 7 демонстрирует стратегию гейтирования, используемую для определения экспрессии PD-1 в образцах опухолей человека. Сначала были определены события CD45+ (A), затем были определены живые клетки (B), затем были определены CD3+ (C) или CD3+CD8+ (D). Высокое гейтирование PD-1 было установлено в популяции CD3+ (E) и CD3+CD8+ соответственно (F). «Высокое» гейтирование PD-1 было определено на основе клеток Jurkat, трансфицированных PD-1, а нижний предел был установлен в соответствии с нижним предел гейтирования полной ширины/половины высоты на средних клетках Jurkat PD-1. (G) и (H) демонстрируют FMO для Alexa Fluor 647 человека против PD-1 человека (пембролизумаб) в популяции CD3+ и CD3+CD8+ соответственно.

Фиг. 8 демонстрирует таблицу, обобщающую данные для каждого пациента, у которого были получены образцы опухоли, включая характеристики пациента, включая экспрессию PD-1 и прогнозируемый ответ.

Фиг. 9 демонстрирует процент средней-высокой экспрессии PD-1 лимфоцитов CD3+ и CD3+CD8+. Пунктирная линия обозначает 10%. Буквы (F, G, H и т.д.) соответствуют идентификатору пациента в таблице на фиг. 8.

ПРИМЕРЫ

Теперь будут описаны конкретные примеры, не имеющие ограничительного характера, которые содержат в себе определенные аспекты данного изобретения. Эти примеры следует читать вместе с кратким описанием графических материалов, приведенных выше.

Пример 1

Трансфекция клеток Jurkat

Для трансфекции клеток Jurkat клетки культивировали в среде RPMI-1640, содержащей 10% фетальной телячьей сыворотки, FCS (Sigma), L-глутамин (Life Technologies), пируват натрия (Life Technologies) и Pen-Strep (Life Technologies). За день до трансфекции клетки разделяли до 0,5×10⁶/мл и культивировали в течение ночи. Для трансфекции клеток, 1x10⁶ клеток центрифугировали при 90xG в течение 10 минут, а затем повторно суспендировали в 100 мкл раствора нуклеофектора (Amaxa® клеточной линии Nucleofector® набор В, Lonza), где 2 мкг ДНК было добавлено (hPD-1 в pcDNA3). Затем смесь переносили в кювету с нуклеофектором. Кюветы помещали в машину Nucleofector II и подвергали нуклеофекции с помощью программы X-005. После инкубации при комнатной температуре (около 18-22°C) в течение 10 минут в кювету добавляли 500 мл среды и переносили в 12-луночный планшет, содержащий 1 мл среды. Для отбора трансфицированных клеток через 48 часов после трансфекции добавляли генетицин в концентрации 1 мг/мл. 10-14 дней спустя положительные клетки очищали до низких, средних и высоких экспрессоров PD-1 с помощью сортировки FACS на машине FACSAria II. После этого трансфицированные клетки поддерживали в среде, содержащей 1 мг/мл генетицина.

Количественное определение PD-1

Основной принцип количественной оценки с применением этого набора гранул основан на том факте, что фитоэритрин (PE) маркирует антитела в соотношении 1:1. Следовательно, применяя гранулы с определенным количеством молекул РЕ для построения стандартной кривой, можно определить количество молекул антитела, связанных с клеткой.

Клетки Jurkat окрашивали меченным РЕ анти-PD1 антителом (EH12.2H7, BioLegend) или изотипическим контролем в буфере FACS (PBS с 2 % FCS) при 4 °C в течение 30 минут с последующей промывкой в буфере FACS. Одна пробирка с гранулами Quantibrite™ (набор для количественного определения фитоэритрина PE, BD bioscience (кат. No. 340495) повторно суспендировали в 500 мкл PBS.

После этого аппарат FACs был настроен таким образом, что гранулы Quantibrite™ и клетки Jurkat можно было запускать при одних и тех же настройках. Гранулы обрабатывали до тех пор, пока не было собрано 10000 событий, и на основании этого была построена стандартная кривая, как описано BD Biosciences для набора PE Phycoerythrin Fluorescence Quantitation, т.е. с помощью построения графика Log молекул на гранулу (информация о партии в наборе) в сравнении с Log MFI (интенсивность флуоресценции) для 4 доставленных популяций гранул Quantibrite™. Затем эту стандартную кривую использовали для расчета количества молекул в клеточной линии путем преобразования их MFI в количество молекул. Учитывая, что антитела применяются в насыщающих концентрациях и имеется связывание 1:1 антител с молекулами PD-1 на клетку, количество антител, связанных на клетку, соответствует количеству молекул PD-1, присутствующих на клетку.

После этого окрашенные PD1-PE клетки Jurkat обрабатывали на FACS и использовали среднюю Log интенсивность флуоресценции (MFI) для интересующих образцов для расчета количества связанных антител.

Результаты показаны на фиг. 1.

Из фиг. 1 видно, что популяция клеток с низкой экспрессией включает некоторые клетки (приблизительно 2%) со средней экспрессией; однако это незначительная часть популяции, и из эксперимента по фагоцитозу, показанного ниже (и продемонстрированного на фиг. 2), ясно, что эта небольшая часть не влияет на фагоцитоз. Точно так же ясно, что популяция клеток со средней экспрессией включает некоторые клетки с низкой экспрессией, но, опять же, эта небольшая фракция клеток не влияет на результаты фагоцитоза, как показано ниже.

Подмножество с низкой экспрессией (фиг. 1A) имеет в среднем 3249 PD-1 молекул/клетка, при этом нижние 5% отсечки составляют 1253 PD-1 молекул/клетка и верхние 5% отсечки составляют 10 643 PD-1 молекул/клетка. Подмножество экспрессии среды (фиг. 1B) имеет в среднем 32951 молекул PD-1/клетка, при этом нижние 5% отсечки составляют 15498 молекул PD-1/клетка и верхние 5% отсечки составляют 77822 молекул PD-1/клетка. Подмножество с высоким уровнем экспрессии (фиг. 1С) имеет в среднем 165968 молекул PD-1/клетка, при этом нижние 5% отсечки составляют 65406 молекул PD-1/клетка и верхние 5% отсечки составляют 390946 молекул PD-1/клетка. Верхние и нижние 5% значения отсечки предусмотрены для меньшего перекрытия между различными поднаборами. Нижнее 5% значение отсечки, равное 15498, т.е. приблизительно 15500 молекул PD-1/клетка, как измерено выше, применяются в данном документе для определения нижнего предела средней или высокой экспрессии.

Фагоцитоз

МКПК человека, выделенные из лейкоцитарных колбочек, полученных от Национальной службы крови в Саутгемптоне, инкубировали в чашках со средой RPMI (Life Technologies), содержащей глутамин, пируват, PenStrep и 1 % инактивированной нагреванием сыворотки человека от Sigma Heat, в течение 2 часов, чтобы дать возможность моноцитам адгезироваться. Затем среду заменяли средой RPMI, содержащей глутамин, пируват, PenStrep и +10% FCS (Sigma). Через 24 часа добавляли MCSF (производимый в Университете Саутгемптона). Макрофаги были получены в течение 7 дней с 2 заменами среды (включая MCSF). После этого макрофаги собирали путем удаления среды, добавления 2 мл PBS и помещения на лед на 15 минут перед легким соскабливанием. Затем макрофаги повторно высевали в 96-луночный планшет на 2 часа. Макрофаги предварительно обрабатывали моноклональными анти-hFcγRIIb антителами (6G11 WT или 6G11 NQ) в течение 45 минут при 2-кратной конечной концентрации перед добавлением CFSE (молекулярные зонды), меченных Jurkat, опсонизированных ниволумабом (hIgG4) в 2-кратной конечной концентрации в течение 15 минут. Клетки совместно культивировали в течение 1 часа при 37°C перед окрашиванием анти-CD14 (BD-Bioscience) путем инкубации в течение 30 минут в FACS-буфере при 4 °C с последующей промывкой и затем считывали в FACS-машине.

Результаты показаны на фиг. 2.

Пример 2. Количественное определение PD-1 на иммунных клетках мышей, несущих опухоль

Количество PD-1 рецепторов на иммунных клетках от опухолей мышей определяли с применением Quantum™ Simply Cellular® гранул (Bangs Laboratories, Inc.). Вкратце, гранулы окрашивали крысиным анти-PD-1 антителом (клон 29F.1A12, BioLegend) для создания стандартной кривой. Затем образцы клеток сравнивали с кривой для определения экспрессии.

Количественная оценка проводилась на клетках мышей, несущих опухоли. Мышей разводили и содержали на местных объектах в соответствии с рекомендациями домашнего офиса. Шести-восьминедельные самки BalbC и C57/BL6 мышей были предоставлены Taconic (Bomholt, Дания) и содержались в местных помещениях для животных. Клетки MC38 (ATCC) выращивали в забуференной глутамаксом среде RPMI с добавлением 10% FBS. Когда клетки были полуконфлюэнтными, их отделяли трипсином и ресуспендировали в стерильном PBS при 10×10⁶ клеток/мл. Мышам п/к инъецировали 100 мкл клеточной суспензии, что соответствует 1×10⁶ клеток/мышь. Перед сбором опухоли выращивали в течение ~20 дней. Подмножества CD8+ Т-клеток были идентифицированы с помощью FACS с применением маркеров CD45, CD3, CD4 и CD8 (все от BD Biosciences). Экспрессию PD-1 на различных субпопуляциях Т-клеток количественно оценивали с применением коммерческого крысиного анти-PD-1 антитела (клон 29F.1A12) с соответствующим изотипическим контролем (BioLegend). Результаты показаны на фиг. 4.

Пример 3. Комбинированный эффект с анти PD-1 in vivo

Экспрессия PD-1 на клетках мышей соответствует уровням экспрессии между «средним и высоким» на трансфицированных клетках Jurkat (пример 1, фиг. 1). В анализе фагоцитоза было показано, что BI-1206 значительно снижает уровень фагоцитоза для этих «средних и высоких» экспрессирующих PD-1 клеток (пример 1, фиг. 2). Эти данные в сочетании с улучшенным терапевтическим противоопухолевым эффектом, наблюдаемым в сочетании анти-PD-1 с анти-FcγRIIb (суррогат мыши BI-1206) в модели MC38 in vivo (фиг. 3), позволяют предположить улучшенный терапевтический эффект анти-PD-1 в сочетании с BI-1206 у пациентов со средней или высокой экспрессией PD-1, т.е. экспрессией PD-1, равной или превышающей 15500 молекул PD-1 на клетку.

Пример 4. Количественная оценка экспрессии PD-1 на Т-клетках человека

Образцы диссоциированных и жизнеспособных замороженных опухолей (см. Таблицу на фиг. 8) были приобретены у Discovery Life Sciences. Клетки оттаивали и промывали фосфатно-солевым буфером (PBS) перед окрашиванием смесью следующих антител: антитела мыши Alexa Fluor 700 против CD45 человека (клон HI30, BD 560566), антитела мыши BV605 против CD8 человека (клон SK1, BD 564116), антитела PerCP-Cy5.5 мыши против CD3 человека (клон UCHT1, BD 560835), антитела Alexa Fluor 647 человека против человека PD-1 (пембролизумаб (KEYTRUDA), клиническая степень, Lot# 8SNL80406, Merck Sharp & Dohme Limited). Краситель Fixable Viability eFluor 780 также был включен в смесь для окрашивания антител (Invitrogen, 65-0865-14). Окрашивание проводили в буфере для окрашивания BD Horizon Brilliant Stain Buffer (BD 563794). Анти-человеческий PD-1 конъюгировали на месте с Alexa Fluor 647 и использовали при концентрации насыщения рецептора (5,5 мкг/мл), показанной в экспериментах перед титрованием. Остальные антитела применяли в концентрациях, рекомендованных производителем. Клетки инкубировали с антителами в течение 20 минут, а затем промывали и ресуспендировали в PBS перед сбором с применением BD FACSAria II. Анализ проводился с применением программного обеспечения FlowJo. Анализы экспрессии PD-1 на трансфицированных PD-1 клетках Jurkat проводили аналогичным образом, но только с включением в окрашивающую смесь человека против PD-1 человека Alexa Fluor 647 и красителя Fixable Viability eFluor 780. Результаты показаны на фиг. 5. В образцах опухолей экспрессия PD-1 определялась в популяции CD3+ и CD3+CD8+, соответственно, с предварительным гейтированием на живых клетках CD45+ (фиг. 7). Высокое гейтирование PD-1 были определены на основе клеток Jurkat, трансфицированных PD-1, и были на нижнем конце, установленном в соответствии с нижним предел гейтирования полной ширины/половины высоты на средних клетках Jurkat PD-1 (фиг. 6).

Фиг. 9 демонстрирует процентное содержание PD-1 средне-высоко экспрессирующих CD3+ лимфоцитов и CD3+CD8+ лимфоцитов, соответственно, в индивидуальных образцах опухолей, полученных от разных пациентов. Ожидается, что пациенты с 10% Т-клеток, экспрессирующих PD-1 на среднем или высоком уровне, получат пользу от анти-FcγRIIb в комбинации с анти-PD-1, поэтому была включена пунктирная линия при 10% экспрессии.

--->

СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> БИОИНВЕНТ ИНТЕРНЭШНЛ АБ

ЮНИВЕРСИТИ ОФ САУТГЕМПТОН

<120> КОМБИНАЦИИ АНТИТЕЛ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ РАКА У КОНКРЕТНЫХ ПАЦИЕНТОВ

<130> BI87 PCT

<150> EP19186840.5

<151> 2019-07-17

<160> 194

<170> BiSSAP 1.2

<210> 1

<211> 330

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> IgG constant region heavy (CH)

<400> 1

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys

1 5 10 15

Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr

65 70 75 80

Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

100 105 110

Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

115 120 125

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

130 135 140

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp

145 150 155 160

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

165 170 175

Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

180 185 190

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

195 200 205

Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly

210 215 220

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu

225 230 235 240

Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr

245 250 255

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn

260 265 270

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe

275 280 285

Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn

290 295 300

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr

305 310 315 320

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

325 330

<210> 2

<211> 105

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> IgG constant region light (CL)

<400> 2

Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu

1 5 10 15

Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe

20 25 30

Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val

35 40 45

Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys

50 55 60

Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser

65 70 75 80

His Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu

85 90 95

Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser

100 105

<210> 3

<211> 118

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 1A01-VH: variable region heavy (VH)

<400> 3

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Tyr Met Asn Trp Ile Arg Gln Thr Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Leu Ile Gly Trp Asp Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Glu Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ala Tyr Ser Gly Tyr Glu Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 4

<211> 117

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 1B07: variable region heavy (VH)

<400> 4

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Phe Thr Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Asn Ile Asp Ala Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 5

<211> 122

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 1C04: variable region heavy (VH)

<400> 5

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ser Ile Ser Asp Ser Gly Ala Gly Arg Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Thr His Asp Ser Gly Glu Leu Leu Asp Ala Phe Asp Ile Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 6

<211> 124

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 1E05: variable region heavy (VH)

<400> 6

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr

20 25 30

Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Val Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Asn Tyr Val Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asn Phe Asp Asn Ser Gly Tyr Ala Ile Pro Asp Ala Phe Asp

100 105 110

Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 7

<211> 121

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 2A09 : variable region heavy (VH)

<400> 7

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ala

20 25 30

Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Tyr Ile Ser Arg Asp Ala Asp Ile Thr His Tyr Pro Ala Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Thr Thr Gly Phe Asp Tyr Ala Gly Asp Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 8

<211> 119

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 2B08: variable region heavy (VH)

<400> 8

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Leu Ile Gly His Asp Gly Asn Asn Lys Tyr Tyr Leu Asp Ser Leu

50 55 60

Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ala Thr Asp Ser Gly Tyr Asp Leu Leu Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 9

<211> 117

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 2E08: variable region heavy (VH)

<400> 9

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Gly Phe Ser Asp Asp Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Gly Gly Asp Gly Ser Gly Trp Ser Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 10

<211> 117

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 5C04: variable region heavy (VH)

<400> 10

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Trp Arg Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 11

<211> 117

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 5C05: variable region heavy (VH)

<400> 11

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Asn Phe Asp Ala Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 12

<211> 117

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 5D07: variable region heavy (VH)

<400> 12

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Ile Ala Tyr Asp Gly Ser Lys Lys Asp Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Tyr Arg Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 13

<211> 117

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 5E12: variable region heavy (VH)

<400> 13

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ile Asn Lys Asp Tyr Ala Asp Ser Met

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Arg Lys Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 14

<211> 117

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 5G08: variable region heavy (VH)

<400> 14

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Asn Tyr

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Arg Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Met Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Arg Trp Asn Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 15

<211> 119

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 5H06: variable region heavy (VH)

<400> 15

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asp Thr Ala Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp His Ser Val Ile Gly Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 16

<211> 119

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 6A09: variable region heavy (VH)

<400> 16

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Thr Ser Tyr Asp Gly Asn Thr Lys Tyr Tyr Ala Asn Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Asp Cys Gly Gly Asp Cys Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 17

<211> 118

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 6B01: variable region heavy (VH)

<400> 17

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Gln Leu Gly Glu Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 18

<211> 117

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 6C11: variable region heavy (VH)

<400> 18

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr

20 25 30

Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Ser Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Gly Gly Asp Ile Asp Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 19

<211> 117

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 6C12: variable region heavy (VH)

<400> 19

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Arg Arg Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 20

<211> 119

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 6D01: variable region heavy (VH)

<400> 20

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp His Ser Ala Ala Gly Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 21

<211> 119

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 6G03: variable region heavy (VH)

<400> 21

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Ser Tyr

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Gly Ile Ser Trp Asp Ser Ala Ile Ile Asp Tyr Ala Gly Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Asp Glu Ala Ala Ala Gly Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 22

<211> 121

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 6G08: variable region heavy (VH)

<400> 22

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Ser Ser Tyr

20 25 30

Gly Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Gly Ile Ser Gly Ser Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ser Ser Val Gly Ala Tyr Ala Asn Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 23

<211> 117

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 6G11: variable region heavy (VH)

<400> 23

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Leu Tyr Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 24

<211> 117

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 6H08: variable region heavy (VH)

<400> 24

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Asn Tyr

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Tyr Lys Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 25

<211> 118

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 7C07: variable region heavy (VH)

<400> 25

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Gln Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Phe Gly Tyr Ile Ile Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 26

<211> 117

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 4B02: variable region heavy (VH)

<400> 26

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn His

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Thr Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Thr Trp Asp Ala Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 27

<211> 111

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 1A01: variable region light (VL)

<400> 27

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn

20 25 30

Ala Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Asp Asn Asn Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg

65 70 75 80

Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu

85 90 95

Asn Ala Ser Ile Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly

100 105 110

<210> 28

<211> 111

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 1B07: variable region light (VL)

<400> 28

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn

20 25 30

Ala Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Asp Asn Gln Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg

65 70 75 80

Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Glu Ala Trp Asp Asp Arg Leu

85 90 95

Phe Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly

100 105 110

<210> 29

<211> 111

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 1C04: variable region light (VL)

<400> 29

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn

20 25 30

His Val Leu Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Gly Asn Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg

65 70 75 80

Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu

85 90 95

Asn Gly Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly

100 105 110

<210> 30

<211> 112

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 1E05: variable region light (VL)

<400> 30

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly

20 25 30

Tyr Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu

35 40 45

Leu Ile Tyr Asp Asn Asn Ser Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu

65 70 75 80

Arg Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser

85 90 95

Leu Gly Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly

100 105 110

<210> 31

<211> 112

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 2A09: variable region light (VL)

<400> 31

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn

20 25 30

Ala Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Gly Asn Ser Asp Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg

65 70 75 80

Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu

85 90 95

Asn Gly Arg Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly

100 105 110

<210> 32

<211> 111

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 2B08: variable region light (VL)

<400> 32

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn

20 25 30

Ala Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Tyr Asp Asp Leu Leu Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg

65 70 75 80

Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Thr Thr Trp Asp Asp Ser Leu

85 90 95

Ser Gly Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly

100 105 110

<210> 33

<211> 111

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 2E08: variable region light (VL)

<400> 33

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn

20 25 30

Ala Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Asp Asn Asn Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg

65 70 75 80

Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Thr Trp Asp Asp Ser Leu

85 90 95

Arg Gly Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly

100 105 110

<210> 34

<211> 113

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 5C04: variable region light (VL)

<400> 34

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly

20 25 30

Tyr Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu

35 40 45

Leu Ile Tyr Ser Asp Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu

65 70 75 80

Arg Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser

85 90 95

Leu Ser Gly Ser Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105 110

Gly

<210> 35

<211> 113

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 5C05: variable region light (VL)

<400> 35

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly

20 25 30

Tyr Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu

35 40 45

Leu Ile Tyr Ser Asn Ser Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu

65 70 75 80

Arg Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser

85 90 95

Leu Asn Gly Gln Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105 110

Gly

<210> 36

<211> 112

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 5D07: variable region light (VL)

<400> 36

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly

20 25 30

Tyr Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu

35 40 45

Leu Ile Tyr Gly Asn Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Thr Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu

65 70 75 80

Arg Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser

85 90 95

Val Ser Gly Trp Met Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly

100 105 110

<210> 37

<211> 112

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 5E12: variable region light (VL)

<400> 37

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly

20 25 30

Tyr Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu

35 40 45

Leu Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu

65 70 75 80

Arg Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Thr Trp Asp Asp Ser

85 90 95

Leu Asn Gly Leu Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly

100 105 110

<210> 38

<211> 113

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 5G08: variable region light (VL)

<400> 38

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly

20 25 30

Tyr Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu

35 40 45

Leu Ile Tyr Ala Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu

65 70 75 80

Arg Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser

85 90 95

Leu Asn Gly Pro Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105 110

Gly

<210> 39

<211> 110

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 5H06: variable region light (VL)

<400> 39

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn

20 25 30

Thr Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Asp Asn Asn Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg

65 70 75 80

Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Ala Gly Ser Asn

85 90 95

Asn Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly

100 105 110

<210> 40

<211> 112

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 6A09: variable region light (VL)

<400> 40

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly

20 25 30

Tyr Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu

35 40 45

Leu Ile Tyr Gly Asn Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu

65 70 75 80

Arg Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser

85 90 95

Leu Asn Glu Gly Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly

100 105 110

<210> 41

<211> 112

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 6B01: variable region light (VL)

<400> 41

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly

20 25 30

Tyr Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu

35 40 45

Leu Ile Tyr Asp Asn Asn Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu

65 70 75 80

Arg Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Thr Trp Asp Asp Ser

85 90 95

Leu Ser Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly

100 105 110

<210> 42

<211> 112

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 6C11: variable region light (VL)

<400> 42

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Phe Gly Ala Gly

20 25 30

Tyr Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu

35 40 45

Leu Ile Tyr Glu Asn Asn Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu

65 70 75 80

Arg Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser

85 90 95

Leu Asn Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly

100 105 110

<210> 43

<211> 110

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 6C12: variable region light (VL)

<400> 43

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly

20 25 30

Tyr Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu

35 40 45

Leu Ile Tyr Ser Asp Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu

65 70 75 80

Arg Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Thr Trp Asp Ser Asp

85 90 95

Thr Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly

100 105 110

<210> 44

<211> 111

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 6D01: variable region light (VL)

<400> 44

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn

20 25 30

Thr Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Gly Asn Ser Ile Arg Pro Ser Gly Gly Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg

65 70 75 80

Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ser Trp Asp Asp Ser Leu

85 90 95

Ser Ser Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly

100 105 110

<210> 45

<211> 113

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 6G03: variable region light (VL)

<400> 45

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly

20 25 30

Tyr Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu

35 40 45

Leu Ile Tyr Gly Asn Thr Asp Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu

65 70 75 80

Arg Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser

85 90 95

Leu Ser Gly Pro Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105 110

Gly

<210> 46

<211> 112

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 6G08: variable region light (VL)

<400> 46

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly

20 25 30

Tyr Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu

35 40 45

Leu Ile Tyr Gly Asp Thr Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu

65 70 75 80

Arg Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser

85 90 95

Leu Asn Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly

100 105 110

<210> 47

<211> 112

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 6G11: variable region light (VL)

<400> 47

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly

20 25 30

Tyr Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu

35 40 45

Leu Ile Tyr Ala Asp Asp His Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu

65 70 75 80

Arg Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ser Trp Asp Asp Ser

85 90 95

Gln Arg Ala Val Ile Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly

100 105 110

<210> 48

<211> 109

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 6H08: variable region light (VL)

<400> 48

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn

20 25 30

Thr Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Asp Asn Asn Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg

65 70 75 80

Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ala Trp Gly Thr Gly Ile

85 90 95

Arg Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly

100 105

<210> 49

<211> 111

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 7C07: variable region light (VL)

<400> 49

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn

20 25 30

Thr Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Arg Asp Tyr Glu Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg

65 70 75 80

Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Met Ala Trp Asp Asp Ser Leu

85 90 95

Ser Gly Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly

100 105 110

<210> 50

<211> 109

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 4B02: variable region light (VL)

<400> 50

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn

20 25 30

Asn Ala Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Asp Asn Asn Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg

65 70 75 80

Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ala Trp Asp Ser Ser Thr

85 90 95

Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly

100 105

<210> 51

<211> 5

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 1A01: CDRH1

<400> 51

Asp Tyr Tyr Met Asn

1 5

<210> 52

<211> 17

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 1A01: CDRH2

<400> 52

Leu Ile Gly Trp Asp Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 53

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 1A01: CDRH3

<400> 53

Ala Tyr Ser Gly Tyr Glu Leu Asp Tyr

1 5

<210> 54

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 1A01: CDRL1

<400> 54

Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn Ala Val Asn

1 5 10

<210> 55

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 1A01: CDRL2

<400> 55

Asp Asn Asn Asn Arg Pro Ser

1 5

<210> 56

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 1A01: CDRL3

<400> 56

Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Asn Ala Ser Ile

1 5 10

<210> 57

<211> 5

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 1B07: CDRH1

<400> 57

Ser Tyr Gly Met His

1 5

<210> 58

<211> 17

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 1B07: CDRH2

<400> 58

Phe Thr Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Arg

1 5 10 15

Gly

<210> 59

<211> 8

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 1B07: CDRH3

<400> 59

Glu Asn Ile Asp Ala Phe Asp Val

1 5

<210> 60

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 1B07: CDRL1

<400> 60

Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn Ala Val Asn

1 5 10

<210> 61

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 1B07: CDRL2

<400> 61

Asp Asn Gln Gln Arg Pro Ser

1 5

<210> 62

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 1B07: CDRL3

<400> 62

Trp Asp Asp Arg Leu Phe Gly Pro Val

1 5

<210> 63

<211> 5

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 1C04: CDRH1

<400> 63

Ser Tyr Ala Met Ser

1 5

<210> 64

<211> 17

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 1C04: CDRH2

<400> 64

Ser Ile Ser Asp Ser Gly Ala Gly Arg Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Glu

1 5 10 15

Gly

<210> 65

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 1C04: CDRH3

<400> 65

Thr His Asp Ser Gly Glu Leu Leu Asp Ala Phe Asp Ile

1 5 10

<210> 66

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 1C04: CDRL1

<400> 66

Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn His Val Leu

1 5 10

<210> 67

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 1C04: CDRL2

<400> 67

Gly Asn Ser Asn Arg Pro Ser

1 5

<210> 68

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 1C04: CDRL3

<400> 68

Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Asn Gly Trp Val

1 5 10

<210> 69

<211> 5

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 1E05: CDRH1

<400> 69

Thr Tyr Ala Met Asn

1 5

<210> 70

<211> 17

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 1E05: CDRH2

<400> 70

Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Asn Tyr Val Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 71

<211> 15

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 1E05: CDRH3

<400> 71

Asn Phe Asp Asn Ser Gly Tyr Ala Ile Pro Asp Ala Phe Asp Ile

1 5 10 15

<210> 72

<211> 14

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 1E05: CDRL1

<400> 72

Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly Tyr Asp Val His

1 5 10

<210> 73

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 1E05: CDRL2

<400> 73

Asp Asn Asn Ser Arg Pro Ser

1 5

<210> 74

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 1E05: CDRL3

<400> 74

Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Gly Gly Pro Val

1 5 10

<210> 75

<211> 5

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 2A09: CDRH1

<400> 75

Asn Ala Trp Met Ser

1 5

<210> 76

<211> 17

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 2A09: CDRH2

<400> 76

Tyr Ile Ser Arg Asp Ala Asp Ile Thr His Tyr Pro Ala Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 77

<211> 12

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 2A09: CDRH3

<400> 77

Gly Phe Asp Tyr Ala Gly Asp Asp Ala Phe Asp Ile

1 5 10

<210> 78

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 2A09: CDRL1

<400> 78

Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Ala Val Asn

1 5 10

<210> 79

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 2A09: CDRL2

<400> 79

Gly Asn Ser Asp Arg Pro Ser

1 5

<210> 80

<211> 12

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 2A09: CDRL3

<400> 80

Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Asn Gly Arg Trp Val

1 5 10

<210> 81

<211> 5

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 2B08: CDRH1

<400> 81

Asp Tyr Tyr Met Ser

1 5

<210> 82

<211> 17

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 2B08: CDRH2

<400> 82

Leu Ile Gly His Asp Gly Asn Asn Lys Tyr Tyr Leu Asp Ser Leu Glu

1 5 10 15

Gly

<210> 83

<211> 10

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 2B08: CDRH3

<400> 83

Ala Thr Asp Ser Gly Tyr Asp Leu Leu Tyr

1 5 10

<210> 84

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 2B08: CDRL1

<400> 84

Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn Ala Val Asn

1 5 10

<210> 85

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 2B08: CDRL2

<400> 85

Tyr Asp Asp Leu Leu Pro Ser

1 5

<210> 86

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 2B08: CDRL3

<400> 86

Thr Thr Trp Asp Asp Ser Leu Ser Gly Val Val

1 5 10

<210> 87

<211> 5

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 2E08: CDRH1

<400> 87

Asp Tyr Tyr Met Ser

1 5

<210> 88

<211> 17

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 2E08: CDRH2

<400> 88

Ala Ile Gly Phe Ser Asp Asp Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 89

<211> 8

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 2E08: CDRH3

<400> 89

Gly Asp Gly Ser Gly Trp Ser Phe

1 5

<210> 90

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 2E08: CDRL1

<400> 90

Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn Ala Val Asn

1 5 10

<210> 91

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 2E08: CDRL2

<400> 91

Asp Asn Asn Lys Arg Pro Ser

1 5

<210> 92

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 2E08: CDRL3

<400> 92

Ala Thr Trp Asp Asp Ser Leu Arg Gly Trp Val

1 5 10

<210> 93

<211> 5

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 5C04: CDRH1

<400> 93

Asn Tyr Gly Met His

1 5

<210> 94

<211> 17

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 5C04: CDRH2

<400> 94

Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 95

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 5C04: CDRH2

<400> 95

Trp Arg Asp Ala Phe Asp Ile

1 5

<210> 96

<211> 14

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 5C04: CDRL1

<400> 96

Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly Tyr Asp Val His

1 5 10

<210> 97

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 5C04: CDRL2

<400> 97

Ser Asp Asn Gln Arg Pro Ser

1 5

<210> 98

<211> 12

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 5C04: CDRL3

<400> 98

Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Ser Gly Ser Trp Val

1 5 10

<210> 99

<211> 5

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 5C05: CDRH1

<400> 99

Thr Tyr Gly Met His

1 5

<210> 100

<211> 17

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 5C05: CDRH2

<400> 100

Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 101

<211> 8

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 5C05: CDRH3

<400> 101

Glu Asn Phe Asp Ala Phe Asp Val

1 5

<210> 102

<211> 14

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 5C05: CDRL1

<400> 102

Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly Tyr Asp Val His

1 5 10

<210> 103

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 5C05: CDRL2

<400> 103

Ser Asn Ser Gln Arg Pro Ser

1 5

<210> 104

<211> 12

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 5C05: CDRL3

<400> 104

Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Asn Gly Gln Val Val

1 5 10

<210> 105

<211> 5

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 5D07: CDRH1

<400> 105

Thr Tyr Gly Met His

1 5

<210> 106

<211> 17

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 5D07: CDRH2

<400> 106

Val Ile Ala Tyr Asp Gly Ser Lys Lys Asp Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 107

<211> 8

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 5D07: CDRH3

<400> 107

Glu Tyr Arg Asp Ala Phe Asp Ile

1 5

<210> 108

<211> 14

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 5D07: CDRL1

<400> 108

Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly Tyr Asp Val His

1 5 10

<210> 109

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 5D07: CDRL2

<400> 109

Gly Asn Ser Asn Arg Pro Ser

1 5

<210> 110

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 5D07: CDRL3

<400> 110

Ala Ala Trp Asp Asp Ser Val Ser Gly Trp Met

1 5 10

<210> 111

<211> 5

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 5E12: CDRH1

<400> 111

Ser Tyr Gly Met His

1 5

<210> 112

<211> 17

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 5E12: CDRH2

<400> 112

Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ile Asn Lys Asp Tyr Ala Asp Ser Met Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 113

<211> 8

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 5E12: CDRH3

<400> 113

Glu Arg Lys Asp Ala Phe Asp Ile

1 5

<210> 114

<211> 14

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 5E12: CDRL1

<400> 114

Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly Tyr Asp Val His

1 5 10

<210> 115

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 5E12: CDRL2

<400> 115

Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser

1 5

<210> 116

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 5E12: CDRL3

<400> 116

Ala Thr Trp Asp Asp Ser Leu Asn Gly Leu Val

1 5 10

<210> 117

<211> 5

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 5G08: CDRH1

<400> 117

Asn Tyr Gly Met His

1 5

<210> 118

<211> 17

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 5G08: CDRH2

<400> 118

Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Arg Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 119

<211> 8

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 5G08: CDRH3

<400> 119

Asp Arg Trp Asn Gly Met Asp Val

1 5

<210> 120

<211> 14

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 5G08: CDRL1

<400> 120

Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly Tyr Asp Val His

1 5 10

<210> 121

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 5G08: CDRL2

<400> 121

Ala Asn Asn Gln Arg Pro Ser

1 5

<210> 122

<211> 12

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 5G08: CDRL3

<400> 122

Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Asn Gly Pro Trp Val

1 5 10

<210> 123

<211> 5

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 5H06: CDRH1

<400> 123

Ser Tyr Gly Met His

1 5

<210> 124

<211> 17

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 5H06: CDRH2

<400> 124

Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asp Thr Ala Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 125

<211> 10

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 5H06: CDRH3

<400> 125

Asp His Ser Val Ile Gly Ala Phe Asp Ile

1 5 10

<210> 126

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 5H06: CDRL1

<400> 126

Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Thr Val Asn

1 5 10

<210> 127

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 5H06: CDRL2

<400> 127

Asp Asn Asn Lys Arg Pro Ser

1 5

<210> 128

<211> 10

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 5H06: CDRL3

<400> 128

Ser Ser Tyr Ala Gly Ser Asn Asn Val Val

1 5 10

<210> 129

<211> 5

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 6A09: CDRH1

<400> 129

Ser Tyr Gly Met His

1 5

<210> 130

<211> 17

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 6A09: CDRH2

<400> 130

Val Thr Ser Tyr Asp Gly Asn Thr Lys Tyr Tyr Ala Asn Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 131

<211> 10

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 6A09: CDRH3

<400> 131

Glu Asp Cys Gly Gly Asp Cys Phe Asp Tyr

1 5 10

<210> 132

<211> 14

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 6A09: CDRL1

<400> 132

Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly Tyr Asp Val His

1 5 10

<210> 133

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 6A09: CDRL2

<400> 133

Gly Asn Ser Asn Arg Pro Ser

1 5

<210> 134

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 6A09: CDRL3

<400> 134

Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Asn Glu Gly Val

1 5 10

<210> 135

<211> 5

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 6B01: CDRH1

<400> 135

Asn Tyr Gly Met His

1 5

<210> 136

<211> 17

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 6B01: CDRH2

<400> 136

Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 137

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 6B01: CDRH3

<400> 137

Asp Gln Leu Gly Glu Ala Phe Asp Ile

1 5

<210> 138

<211> 14

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 6B01: CDRL1

<400> 138

Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly Tyr Asp Val His

1 5 10

<210> 139

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 6B01: CDRL2

<400> 139

Asp Asn Asn Lys Arg Pro Ser

1 5

<210> 140

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 6B01: CDRL3

<400> 140

Ala Thr Trp Asp Asp Ser Leu Ser Gly Pro Val

1 5 10

<210> 141

<211> 5

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 6C11: CDRH1

<400> 141

Asp Tyr Gly Met Ser

1 5

<210> 142

<211> 17

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 6C11: CDRH2

<400> 142

Ala Ile Ser Gly Ser Gly Ser Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 143

<211> 8

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 6C11: CDRH3

<400> 143

Gly Asp Ile Asp Tyr Phe Asp Tyr

1 5

<210> 144

<211> 14

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 6C11: CDRL1

<400> 144

Thr Gly Ser Ser Ser Asn Phe Gly Ala Gly Tyr Asp Val His

1 5 10

<210> 145

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 6C11: CDRL3

<400> 145

Glu Asn Asn Lys Arg Pro Ser

1 5

<210> 146

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 6C11: CDRL3

<400> 146

Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Asn Gly Pro Val

1 5 10

<210> 147

<211> 5

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 6C12: CDRH1

<400> 147

Ser Tyr Gly Met His

1 5

<210> 148

<211> 17

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 6C12: CDRH2

<400> 148

Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 149

<211> 8

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 6C12: CDRH3

<400> 149

Glu Arg Arg Asp Ala Phe Asp Ile

1 5

<210> 150

<211> 14

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 6C12: CDRL1

<400> 150

Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly Tyr Asp Val His

1 5 10

<210> 151

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 6C12: CDRL2

<400> 151

Ser Asp Asn Gln Arg Pro Ser

1 5

<210> 152

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 6C12: CDRL3

<400> 152

Ala Thr Trp Asp Ser Asp Thr Pro Val

1 5

<210> 153

<211> 5

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 6D01: CDRH1

<400> 153

Ser Tyr Gly Met His

1 5

<210> 154

<211> 17

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 6D01: CDRH2

<400> 154

Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 155

<211> 10

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 6D01: CDRH3

<400> 155

Asp His Ser Ala Ala Gly Tyr Phe Asp Tyr

1 5 10

<210> 156

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 6D01: CDRL1

<400> 156

Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Thr Val Asn

1 5 10

<210> 157

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 6D01: CDRL2

<400> 157

Gly Asn Ser Ile Arg Pro Ser

1 5

<210> 158

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 6D01: CDRL3

<400> 158

Ala Ser Trp Asp Asp Ser Leu Ser Ser Pro Val

1 5 10

<210> 159

<211> 5

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 6G03: CDRH1

<400> 159

Ser Tyr Gly Met His

1 5

<210> 160

<211> 17

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 6G03: CDRH2

<400> 160

Gly Ile Ser Trp Asp Ser Ala Ile Ile Asp Tyr Ala Gly Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 161

<211> 10

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 6G03: CDRH3

<400> 161

Asp Glu Ala Ala Ala Gly Ala Phe Asp Ile

1 5 10

<210> 162

<211> 14

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 6G03: CDRL1

<400> 162

Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly Tyr Asp Val His

1 5 10

<210> 163

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 6G03: CDRL2

<400> 163

Gly Asn Thr Asp Arg Pro Ser

1 5

<210> 164

<211> 12

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 6G03: CDRL3

<400> 164

Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Ser Gly Pro Val Val

1 5 10

<210> 165

<211> 5

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 6G08: CDRH1

<400> 165

Ser Tyr Gly Ile Ser

1 5

<210> 166

<211> 17

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 6G08: CDRH2

<400> 166

Gly Ile Ser Gly Ser Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 167

<211> 12

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 6G08: CDRH3

<400> 167

Ser Val Gly Ala Tyr Ala Asn Asp Ala Phe Asp Ile

1 5 10

<210> 168

<211> 14

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 6G08: CDRL1

<400> 168

Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly Tyr Asp Val His

1 5 10

<210> 169

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 6G08: CDRL2

<400> 169

Gly Asp Thr Asn Arg Pro Ser

1 5

<210> 170

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 6G08: CDRL3

<400> 170

Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Asn Gly Pro Val

1 5 10

<210> 171

<211> 5

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 6G11: CDRH1

<400> 171

Ser Tyr Gly Met His

1 5

<210> 172

<211> 17

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 6G11: CDRH2

<400> 172

Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 173

<211> 8

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 6G11: CDRH3

<400> 173

Glu Leu Tyr Asp Ala Phe Asp Ile

1 5

<210> 174

<211> 14

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 6G11: CDRL1

<400> 174

Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly Tyr Asp Val His

1 5 10

<210> 175

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 6G11: CDRL2

<400> 175

Ala Asp Asp His Arg Pro Ser

1 5

<210> 176

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 6G11: CDRL3

<400> 176

Ala Ser Trp Asp Asp Ser Gln Arg Ala Val Ile

1 5 10

<210> 177

<211> 5

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 6H08: CDRH1

<400> 177

Asn Tyr Gly Met His

1 5

<210> 178

<211> 17

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 6H08: CDRH2

<400> 178

Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 179

<211> 8

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 6H08: CDRH3

<400> 179

Glu Tyr Lys Asp Ala Phe Asp Ile

1 5

<210> 180

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 6H08: CDRL1

<400> 180

Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Thr Val Asn

1 5 10

<210> 181

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 6H08: CDRL2

<400> 181

Asp Asn Asn Lys Arg Pro Ser

1 5

<210> 182

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 6H08: CDRL3

<400> 182

Gln Ala Trp Gly Thr Gly Ile Arg Val

1 5

<210> 183

<211> 5

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 7C07: CDRH1

<400> 183

Ser Tyr Gly Met His

1 5

<210> 184

<211> 17

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 7C07: CDRH2

<400> 184

Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 185

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 7C07: CDRH3

<400> 185

Glu Phe Gly Tyr Ile Ile Leu Asp Tyr

1 5

<210> 186

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 7C07: CDRL1

<400> 186

Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Thr Val Asn

1 5 10

<210> 187

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 7C07: CDRL2

<400> 187

Arg Asp Tyr Glu Arg Pro Ser

1 5

<210> 188

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 7C07: CDRL1

<400> 188

Met Ala Trp Asp Asp Ser Leu Ser Gly Val Val

1 5 10

<210> 189

<211> 5

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 4B02: CDRH1

<400> 189

Asn His Gly Met His

1 5

<210> 190

<211> 17

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 4B02: CDRH2

<400> 190

Val Ile Ser Tyr Asp Gly Thr Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Arg

1 5 10 15

Gly

<210> 191

<211> 8

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 4B02: CDRH3

<400> 191

Glu Thr Trp Asp Ala Phe Asp Val

1 5

<210> 192

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 4B02: CDRL1

<400> 192

Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Asn Ala Asn

1 5 10

<210> 193

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 4B02: CDRL2

<400> 193

Asp Asn Asn Lys Arg Pro Ser

1 5

<210> 194

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Antibody clone 4B02: CDRL3

<400> 194

Gln Ala Trp Asp Ser Ser Thr Val Val

1 5

<---

Claims

1. Применение комбинации молекул антител для лечения рака у пациента, имеющего инфильтрирующие опухоль Т-лимфоциты со средней или высокой экспрессией PD-1, причем указанная комбинация состоит из:

первой молекулы антитела, которая специфически связывает FcγRIIb посредством своего участка Fab и которая связывает рецептор Fcγ посредством своего участка Fc, и

второй молекулы антитела, которая специфически связывает PD-1 и которая связывается по меньшей мере с одним рецептором Fcγ посредством своего участка Fc.

2. Применение фармацевтической композиции для лечения рака у пациента, имеющего инфильтрирующие опухоль Т-лимфоциты со средней или высокой экспрессией PD-1, причем указанная композиция содержит:

3. Набор для применения при лечении рака у пациента, имеющего инфильтрирующие опухоль Т-лимфоциты со средней или высокой экспрессией PD-1, содержащий:

4. Применение

(ii) второй молекулы антитела, которая специфически связывает PD-1 и которая связывается по меньшей мере с одним рецептором Fcγ посредством своего участка Fc,

при производстве лекарственного средства для применения при лечении рака у пациента, имеющего инфильтрирующие опухоль Т-лимфоциты со средней или высокой экспрессией PD-1.

5. Способ для лечения рака у пациента, имеющего инфильтрирующие опухоль Т-лимфоциты со средней или высокой экспрессией PD-1, включающий введение:

6. Диагностический тест для определения пользы пациенту от комбинированного лечения с помощью:

причем этот тест включает определение экспрессии PD-1 на инфильтрирующих опухоль Т-лимфоцитах пациента, при этом средняя или высокая экспрессия PD-1 указывает на то, что пациенту будет полезно комбинированное лечение.

7. Комбинация молекул антител для лечения рака у пациента, имеющего инфильтрирующие опухоль Т-лимфоциты со средней или высокой экспрессией PD-1, причем указанная комбинация состоит из:

8. Фармацевтическая композиция для лечения рака у пациента, имеющего инфильтрирующие опухоль Т-лимфоциты со средней или высокой экспрессией PD-1, причем указанная композиция содержит:

9. Применение по любому из пп. 1, 2, 4, набор по п. 3, способ по п. 5, диагностический тест по п. 6, комбинация по п.7 или фармацевтическая композиция по п.8, отличающиеся тем, что CD3-положительные Т-лимфоциты, инфильтрирующие опухоль, пациента имеют среднюю или высокую экспрессию PD-1.

10. Применение, набор, способ или диагностический тест, комбинация или фармацевтическая композиция по п. 9, отличающиеся тем, что по меньшей мере 10% CD3-положительных Т-лимфоцитов, инфильтрирующих опухоль, пациента имеют среднюю или высокую PD-1 экспрессию.

11. Применение, набор, способ, диагностический тест, комбинация или фармацевтическая композиция по п. 9 или 10, отличающиеся тем, что CD3-положительные, CD8-положительные Т-лимфоциты, инфильтрирующие опухоль, пациента имеют среднюю или высокую PD-1 экспрессию.

12. Применение, набор, способ, диагностический тест, комбинация или фармацевтическая композиция по п. 11, отличающиеся тем, что по меньшей мере 10% CD3-положительных, CD8-положительных Т-лимфоцитов, инфильтрирующих опухоль, пациента имеют средний или высокий уровень PD-1 экспрессии.

13. Применение по любому из пп. 1, 2, 4, 9-12, набор по любому из пп. 3, 9-12, способ по любому из пп. 5, 9-12, диагностический тест по любому из пп. 6, 9-12, комбинация по любому из пп. 7, 9-12 или фармацевтическая композиция по любому из пп. 8-12, отличающиеся тем, что средняя или высокая экспрессия PD-1 определяется как по меньшей мере 10% от инфильтрирующих опухоль Т-лимфоцитов в образце от пациента, имеющих экспрессию по меньшей мере 15500 молекул PD-1 на Т-лимфоцит.

14. Применение, набор, способ, диагностический тест, комбинация или фармацевтическая композиция по п. 13, отличающиеся тем, что средняя или высокая экспрессия PD-1 измеряются с применением анти-PD1 антитела EH12.2H7.

15. Применение по любому из пп. 1, 2, 4, 9-14, набор по любому из пп. 3, 9-14, способ по любому из пп. 5, 9-14, диагностический тест по любому из пп. 6, 9-14, комбинация по любому из пп. 7, 9-14 или фармацевтическая композиция по любому из пп. 8-14, отличающиеся тем, что рак представляет собой солидный рак.

16. Применение, набор, способ, диагностический тест, комбинация или фармацевтическая композиция по п. 15, отличающиеся тем, что солидный рак выбран из группы, состоящей из меланомы, рака легких, рака головы и шеи, лимфомы Ходжкина, первичной B-клеточной лимфомы средостения (PMBCL), рака мочевого пузыря, колоректального рака, рака желудка, рака шейки матки, рака печени, карциномы из клеток Меркеля, рака почки и плоскоклеточного рака кожи.

17. Применение, набор, способ, диагностический тест, комбинация или фармацевтическая композиция по п. 15 или 16, отличающиеся тем, что рак является рефрактерным.

18. Применение по любому из пп. 1, 2, 4, 9-17, набор по любому из пп. 3, 9-17, способ по любому из пп. 5, 9-17, диагностический тест по любому из пп. 6, 9-17, комбинация по любому из пп. 7, 9-17 или фармацевтическая композиция по любому из пп. 8-17, отличающиеся тем, что первая молекула антитела и/или вторая молекула антитела выбраны из группы, состоящей из молекулы антитела человека, молекулы гуманизированного антитела и молекулы антитела человеческого происхождения.

19. Применение по любому из пп. 1, 2, 4, 9-18, набор по любому из пп. 3, 9-18, способ по любому из пп. 5, 9-18, диагностический тест по любому из пп. 6, 9-18, комбинация по любому из пп. 7, 9-18 или фармацевтическая композиция по любому из пп. 8-18, отличающиеся тем, что первая молекула антитела и/или вторая молекула антитела представляют собой молекулу моноклонального антитела или молекулу антитела моноклонального происхождения.

20. Применение по любому из пп. 1, 2, 4, 9-19, набор по любому из пп. 3, 9-19, способ по любому из пп. 5, 9-19, диагностический тест по любому из пп. 6, 9-19, комбинация по любому из пп. 7, 9-19 или фармацевтическая композиция по любому из пп. 8-19, отличающиеся тем, что первая молекула антитела и/или вторая молекула антитела выбраны из группы, состоящей из полноразмерного антитела, химерного антитела, одноцепочечного антитела и его антигенсвязывающего фрагмента, сохраняющего способность связываться с рецептором Fc через его участок Fc.

21. Применение по любому из пп. 1, 2, 4, 9-20, набор по любому из пп. 3, 9-20, способ по любому из пп. 5, 9-20, диагностический тест по любому из пп. 6, 9-20, комбинация по любому из пп. 7, 9-20 или фармацевтическая композиция по любому из пп. 8-20, отличающиеся тем, что первая молекула антитела и/или вторая молекула антитела представляют собой антитело IgG человека, гуманизированную молекулу антитела IgG или молекулу антитела IgG человеческого происхождения.

22. Применение, набор, способ, диагностический тест, комбинация или фармацевтическая композиция по п. 21, отличающиеся тем, что первая молекула антитела представляет собой молекулу антитела IgG1.

23. Применение, набор, способ, диагностический тест, комбинация или фармацевтическая композиция по п. 21 или 22, отличающиеся тем, что вторая молекула антитела представляет собой молекулу антитела IgG4.

24. Применение по любому из пп. 1, 2, 4, 9-23, набор по любому из пп. 3, 9-23, способ по любому из пп. 5, 9-23, диагностический тест по любому из пп. 6, 9-23, комбинация по любому из пп. 7, 9-23 или фармацевтическая композиция по любому из пп. 8-23, отличающиеся тем, что первая молекула антитела и/или вторая молекула антитела были сконструированы для улучшенного связывания с активирующими Fc гамма рецепторами.

25. Применение по любому из пп. 1, 2, 4, 9-24, набор по любому из пп. 3, 9-24, способ по любому из пп. 5, 9-24, диагностический тест по любому из пп. 6, 9-24, комбинация по любому из пп. 7, 9-24 или фармацевтическая композиция по любому из пп. 8-24, отличающиеся тем, что первая молекула антитела содержит вариабельную тяжелую цепь (VH), содержащую следующие CDR:

(i) SEQ ID NO: 51, и SEQ ID NO: 52, и SEQ ID NO: 53; или

(ii) SEQ ID NO: 57, и SEQ ID NO: 58, и SEQ ID NO: 59; или

(iii) SEQ ID NO: 63, и SEQ ID NO: 64, и SEQ ID NO: 65; или

(iv) SEQ ID NO: 69, и SEQ ID NO: 70, и SEQ ID NO: 71; или

(v) SEQ ID NO: 75, и SEQ ID NO: 76, и SEQ ID NO: 77; или

(vi) SEQ ID NO: 81, и SEQ ID NO: 82, и SEQ ID NO: 83; или

(vii) SEQ ID NO: 87, и SEQ ID NO: 88, и SEQ ID NO: 89; или

(viii) SEQ ID NO: 93, и SEQ ID NO: 94, и SEQ ID NO: 95; или

(ix) SEQ ID NO: 99, и SEQ ID NO: 100, и SEQ ID NO: 101; или

(x) SEQ ID NO: 105, и SEQ ID NO: 106, и SEQ ID NO: 107; или

(xi) SEQ ID NO: 111, и SEQ ID NO: 112, и SEQ ID NO: 113; или

(xii) SEQ ID NO: 117, и SEQ ID NO: 118, и SEQ ID NO: 119; или

(xiii) SEQ ID NO: 123, и SEQ ID NO: 124, и SEQ ID NO: 125; или

(xiv) SEQ ID NO: 129, и SEQ ID NO: 130, и SEQ ID NO: 131; или

(xv) SEQ ID NO: 135, и SEQ ID NO: 136, и SEQ ID NO: 137; или

(xvi) SEQ ID NO: 141, и SEQ ID NO: 142, и SEQ ID NO: 143; или

(xvii) SEQ ID NO: 147, и SEQ ID NO: 148, и SEQ ID NO: 149; или

(xviii) SEQ ID NO: 153, и SEQ ID NO: 154, и SEQ ID NO: 155; или

(xix) SEQ ID NO: 159, и SEQ ID NO: 160, и SEQ ID NO: 161; или

(xх) SEQ ID NO: 165, и SEQ ID NO: 166, и SEQ ID NO: 167; или

(xxi) SEQ ID NO: 171, и SEQ ID NO: 172, и SEQ ID NO: 173; или

(xxii) SEQ ID NO: 177, и SEQ ID NO: 178, и SEQ ID NO: 179; или

(xxiii) SEQ ID NO: 183, и SEQ ID NO: 184 и SEQ ID NO: 185; или

(xxiv) SEQ ID NO: 189, и SEQ ID NO: 190, и SEQ ID NO: 191.

26. Применение по любому из пп. 1, 2, 4, 9-25, набор по любому из пп. 3, 9-25, способ по любому из пп. 5, 9-25, диагностический тест по любому из пп. 6, 9-25, комбинация по любому из пп. 7, 9-25 или фармацевтическая композиция по любому из пп. 8-25, отличающиеся тем, что первая молекула антитела содержит вариабельную легкую цепь (VL), содержащую следующие CDR:

(i) SEQ ID NO: 54, и SEQ ID NO: 55, и SEQ ID NO: 56; или

(ii) SEQ ID NO: 60, и SEQ ID NO: 61, и SEQ ID NO: 62; или

(iii) SEQ ID NO: 66, и SEQ ID NO: 67, и SEQ ID NO: 68; или

(iv) SEQ ID NO: 72, и SEQ ID NO: 73, и SEQ ID NO: 74; или

(v) SEQ ID NO: 78, и SEQ ID NO: 79, и SEQ ID NO: 80; или

(vi) SEQ ID NO: 84, и SEQ ID NO: 85, и SEQ ID NO: 86; или

(vii) SEQ ID NO: 90, и SEQ ID NO: 91, и SEQ ID NO: 92; или

(viii) SEQ ID NO: 96, и SEQ ID NO: 97, и SEQ ID NO: 98; или

(ix) SEQ ID NO: 102, и SEQ ID NO: 103, и SEQ ID NO: 104; или

(x) SEQ ID NO: 108, и SEQ ID NO: 109, и SEQ ID NO: 110; или

(xi) SEQ ID NO: 114, и SEQ ID NO: 115, и SEQ ID NO: 116; или

(xii) SEQ ID NO: 120, и SEQ ID NO: 121, и SEQ ID NO: 122; или

(xiii) SEQ ID NO: 126, и SEQ ID NO: 127, и SEQ ID NO: 128; или

(xiv) SEQ ID NO: 132, и SEQ ID NO: 133, и SEQ ID NO: 134; или

(xv) SEQ ID NO: 138, и SEQ ID NO: 139, и SEQ ID NO: 140; или

(xvi) SEQ ID NO: 144, и SEQ ID NO: 145, и SEQ ID NO: 146; или

(xvii) SEQ ID NO: 150, и SEQ ID NO: 151, и SEQ ID NO: 152; или

(xviii) SEQ ID NO: 156, и SEQ ID NO: 157, и SEQ ID NO: 158; или

(xix) SEQ ID NO: 162, и SEQ ID NO: 163, и SEQ ID NO: 164; или

(xx) SEQ ID NO: 168, и SEQ ID NO: 169, и SEQ ID NO: 170; или

(xxi) SEQ ID NO: 174, и SEQ ID NO: 175, и SEQ ID NO: 176; или

(xxii) SEQ ID NO: 180, и SEQ ID NO: 181, и SEQ ID NO: 182; или

(xxiii) SEQ ID NO: 186, и SEQ ID NO: 187, и SEQ ID NO: 188; или

(xxiv) SEQ ID NO: 192, и SEQ ID NO: 193, и SEQ ID NO: 194.

27. Применение по любому из пп. 1, 2, 4, 9-26, набор по любому из пп. 3, 9-26, способ по любому из пп. 5, 9-26, диагностический тест по любому из пп. 6, 9-26, комбинация по любому из пп. 7, 9-26 или фармацевтическая композиция по любому из пп. 8-26, отличающиеся тем, что молекула первого антитела содержит аминокислотную последовательность вариабельной тяжелой цепи (VH), выбранную из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 3; SEQ ID NO: 4; SEQ ID NO: 5; SEQ ID NO: 6; SEQ ID NO: 7; SEQ ID NO: 8; SEQ ID NO: 9; SEQ ID NO: 10; SEQ ID NO: 11; SEQ ID NO: 12; SEQ ID NO: 13; SEQ ID NO: 14; SEQ ID NO: 15; SEQ ID NO: 16; SEQ ID NO: 17; SEQ ID NO: 18; SEQ ID NO: 19; SEQ ID NO: 20; SEQ ID NO: 21; SEQ ID NO: 22; SEQ ID NO: 23; SEQ ID NO: 24; SEQ ID NO: 25; и SEQ ID NO: 26.

28. Применение по любому из пп. 1, 2, 4, 9-27, набор по любому из пп. 3, 9-27, способ по любому из пп. 5, 9-27, диагностический тест по любому из пп. 6, 9-27, комбинация по любому из пп. 7, 9-27 или фармацевтическая композиция по любому из пп. 8-27, отличающиеся тем, что молекула первого антитела содержит аминокислотную последовательность вариабельной легкой цепи (VL), выбранную из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 27; SEQ ID NO: 28; SEQ ID NO: 29; SEQ ID NO: 30; SEQ ID NO: 31; SEQ ID NO: 32; SEQ ID NO: 33; SEQ ID NO: 34; SEQ ID NO: 35; SEQ ID NO: 36; SEQ ID NO: 37; SEQ ID NO: 38; SEQ ID NO: 39; SEQ ID NO: 40; SEQ ID NO: 41; SEQ ID NO: 42; SEQ ID NO: 43; SEQ ID NO: 44; SEQ ID NO: 45; SEQ ID NO: 46; SEQ ID NO: 47; SEQ ID NO: 48; SEQ ID NO: 49; и SEQ ID NO: 50.

29. Применение по любому из пп. 1, 2, 4, 9-28, набор по любому из пп. 3, 9-28, способ по любому из пп. 5, 9-28, диагностический тест по любому из пп. 6, 9-28, комбинация по любому из пп. 7, 9-28 или фармацевтическая композиция по любому из пп. 8-28, отличающиеся тем, что первая молекула антитела содержит следующие аминокислотные последовательности CDR:

(i) SEQ ID NO: 51, и SEQ ID NO: 52, и SEQ ID NO: 53, и SEQ ID NO: 54, и SEQ ID NO: 55, и SEQ ID NO: 56; или

(ii) SEQ ID NO: 57, и SEQ ID NO: 58, и SEQ ID NO: 59, и SEQ ID NO: 60, и SEQ ID NO: 61, и SEQ ID NO: 62; или

(iii) SEQ ID NO: 63, и SEQ ID NO: 64, и SEQ ID NO: 65, и SEQ ID NO: 66, и SEQ ID NO: 67, и SEQ ID NO: 68; или

(iv) SEQ ID NO: 69, и SEQ ID NO: 70, и SEQ ID NO: 71, и SEQ ID NO: 72, и SEQ ID NO: 73, и SEQ ID NO: 74; или

(v) SEQ ID NO: 75, и SEQ ID NO: 76, и SEQ ID NO: 77, и SEQ ID NO: 78, и SEQ ID NO: 79, и SEQ ID NO: 80; или

(vi) SEQ ID NO: 81, и SEQ ID NO: 82, и SEQ ID NO: 83, и SEQ ID NO: 84, и SEQ ID NO: 85, и SEQ ID NO: 86; или

(vii) SEQ ID NO: 87, и SEQ ID NO: 88, и SEQ ID NO: 89, и SEQ ID NO: 90, и SEQ ID NO: 91, и SEQ ID NO: 92; или

(viii) SEQ ID NO: 93, и SEQ ID NO: 94, и SEQ ID NO: 95, и SEQ ID NO: 96, и SEQ ID NO: 97, и SEQ ID NO: 98; или

(ix) SEQ ID NO: 99, и SEQ ID NO: 100, и SEQ ID NO: 101, и SEQ ID NO: 102, и SEQ ID NO: 103, и SEQ ID NO: 104; или

(x) SEQ ID NO: 105, и SEQ ID NO: 106, и SEQ ID NO: 107, и SEQ ID NO: 108, и SEQ ID NO: 109, и SEQ ID NO: 110; или

(xi) SEQ ID NO: 111, и SEQ ID NO: 112, и SEQ ID NO: 113, и SEQ ID NO: 114, и SEQ ID NO: 115, и SEQ ID NO: 116; или

(xii) SEQ ID NO: 117, и SEQ ID NO: 118, и SEQ ID NO: 119, и SEQ ID NO: 120, и SEQ ID NO: 121, и SEQ ID NO: 122; или

(xiii) SEQ ID NO: 123, и SEQ ID NO: 124, и SEQ ID NO: 125, и SEQ ID NO: 126, и SEQ ID NO: 127, и SEQ ID NO: 128; или

(xiv) SEQ ID NO: 129, и SEQ ID NO: 130, и SEQ ID NO: 131, и SEQ ID NO: 132, и SEQ ID NO: 133, и SEQ ID NO: 134; или

(xv) SEQ ID NO: 135, и SEQ ID NO: 136, и SEQ ID NO: 137, и SEQ ID NO: 138, и SEQ ID NO: 139, и SEQ ID NO: 140; или

(xvi) SEQ ID NO: 141, и SEQ ID NO: 142, и SEQ ID NO: 143, и SEQ ID NO: 144, и SEQ ID NO: 145, и SEQ ID NO: 146; или

(xvii) SEQ ID NO: 147, и SEQ ID NO: 148, и SEQ ID NO: 149, и SEQ ID NO: 150, и SEQ ID NO: 151, и SEQ ID NO: 152; или

(xviii) SEQ ID NO: 153, и SEQ ID NO: 154, и SEQ ID NO: 155, и SEQ ID NO: 156, и SEQ ID NO: 157, и SEQ ID NO: 158; или

(xix) SEQ ID NO: 159, и SEQ ID NO: 160, и SEQ ID NO: 161, и SEQ ID NO: 162, и SEQ ID NO: 163, и SEQ ID NO: 164; или

(xх) SEQ ID NO: 165, и SEQ ID NO: 166, и SEQ ID NO: 167, и SEQ ID NO: 168, и SEQ ID NO: 169, и SEQ ID NO: 170; или

(xxi) SEQ ID NO: 171, и SEQ ID NO: 172, и SEQ ID NO: 173, и SEQ ID NO: 174, и SEQ ID NO: 175, и SEQ ID NO: 176; или

(xxii) SEQ ID NO: 177, и SEQ ID NO: 178, и SEQ ID NO: 179, и SEQ ID NO: 180, и SEQ ID NO: 181, и SEQ ID NO: 182; или

(xxiii) SEQ ID NO: 183, и SEQ ID NO: 184, и SEQ ID NO: 185, и SEQ ID NO: 186, и SEQ ID NO: 187, и SEQ ID NO: 188; или

(xxiv) SEQ ID NO: 189, и SEQ ID NO: 190, и SEQ ID NO: 191, и SEQ ID NO: 192, и SEQ ID NO: 193, и SEQ ID NO: 194.

30. Применение по любому из пп. 1, 2, 4, 9-29, набор по любому из пп. 3, 9-29, способ по любому из пп. 5, 9-29, диагностический тест по любому из пп. 6, 9-29, комбинация по любому из пп. 7, 9-29 или фармацевтическая композиция по любому из пп. 8-29, отличающиеся тем, что первая молекула антитела содержит следующие аминокислотные последовательности:

(i) SEQ ID NO: 3 и SEQ ID NO: 27; или

(ii) SEQ IS NO: 4 и SEQ ID NO: 28; или

(iii) SEQ IS NO: 5 и SEQ ID NO: 29; или

(iv) SEQ ID NO: 6 и SEQ ID NO: 30; или

(v) SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 31; или

(vi) SEQ ID NO: 8 и SEQ ID NO: 32; или

(vii) SEQ ID NO: 9 и SEQ ID NO: 33; или

(viii) SEQ ID NO: 10 и SEQ ID NO: 34; или

(ix) SEQ ID NO: 11 и SEQ ID NO: 35; или

(x) SEQ ID NO: 12 и SEQ ID NO: 36; или

(xi) SEQ ID NO: 13 и SEQ ID NO: 37; или

(xii) SEQ ID NO: 14 и SEQ ID NO: 38; или

(xiii) SEQ ID NO: 15 и SEQ ID NO: 39; или

(xiv) SEQ ID NO: 16 и SEQ ID NO: 40; или

(xv) SEQ ID NO: 17 и SEQ ID NO: 41; или

(xvi) SEQ ID NO: 18 и SEQ ID NO: 42; или

(xvii) SEQ ID NO: 19 и SEQ ID NO: 43; или

(xviii) SEQ ID NO: 20 и SEQ ID NO: 44; или

(xix) SEQ ID NO: 21 и SEQ ID NO: 45; или

(xх) SEQ ID NO: 22 и SEQ ID NO: 46; или

(xxi) SEQ ID NO: 23 и SEQ ID NO: 47; или

(xxii) SEQ ID NO: 24 и SEQ ID NO: 48; или

(xxiii) SEQ ID NO: 25 и SEQ ID NO: 49; или

(xxiv) SEQ ID NO: 26 и SEQ ID NO: 50.

31. Применение по любому из пп. 1, 2, 4, 9-24, набор по любому из пп. 3, 9-24, способ по любому из пп. 5, 9-24, диагностический тест по любому из пп. 6, 9-24, комбинация по любому из пп. 7, 9-24 или фармацевтическая композиция по любому из пп. 8-24, отличающиеся тем, что первая молекула антитела представляет собой молекулу антитела, которая способна конкурировать за связывание с FcγRIIb с молекулой антитела, как определено в любом из пп. 25-30.