RU2809375C1 - Цельновирионная инактивированная вакцина против инфекции, вызываемой sars-cov-2, и ее применение - Google Patents
Цельновирионная инактивированная вакцина против инфекции, вызываемой sars-cov-2, и ее применение Download PDFInfo
- Publication number
- RU2809375C1 RU2809375C1 RU2023109996A RU2023109996A RU2809375C1 RU 2809375 C1 RU2809375 C1 RU 2809375C1 RU 2023109996 A RU2023109996 A RU 2023109996A RU 2023109996 A RU2023109996 A RU 2023109996A RU 2809375 C1 RU2809375 C1 RU 2809375C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- vaccine
- cov
- virus
- sars
- cpg
- Prior art date
Links
- 208000025721 COVID-19 Diseases 0.000 title abstract description 28
- 229940031551 inactivated vaccine Drugs 0.000 title description 13
- 208000037847 SARS-CoV-2-infection Diseases 0.000 title description 5
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 title description 4
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims abstract description 100
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims abstract description 71
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims abstract description 28
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims abstract description 22
- 230000007123 defense Effects 0.000 claims abstract description 7
- 238000011160 research Methods 0.000 claims abstract description 7
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 claims abstract description 6
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 48
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 46
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 46
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 46
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims description 42
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 38
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 claims description 23
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 21
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 claims description 21
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 12
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 9
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 claims description 9
- 229940046166 oligodeoxynucleotide Drugs 0.000 claims description 8
- 230000006698 induction Effects 0.000 claims description 7
- 238000011161 development Methods 0.000 claims description 6
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 6
- 241000315672 SARS coronavirus Species 0.000 claims description 3
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 claims description 3
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 claims description 3
- 201000003176 Severe Acute Respiratory Syndrome Diseases 0.000 abstract description 29
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 13
- 208000001528 Coronaviridae Infections Diseases 0.000 abstract description 8
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 abstract description 7
- 230000002265 prevention Effects 0.000 abstract description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 4
- 238000011282 treatment Methods 0.000 abstract description 4
- 229940046168 CpG oligodeoxynucleotide Drugs 0.000 abstract 1
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 abstract 1
- 241001678559 COVID-19 virus Species 0.000 description 44
- 238000000034 method Methods 0.000 description 36
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 32
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 30
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 28
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 22
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 22
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 21
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 20
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 19
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 19
- 239000000463 material Substances 0.000 description 18
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 16
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 16
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 description 16
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 15
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 15
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 14
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 14
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 14
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 14
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 14
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 13
- 239000002594 sorbent Substances 0.000 description 13
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 12
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 12
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 12
- 241000711573 Coronaviridae Species 0.000 description 11
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 10
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 10
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 10
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 10
- 239000000047 product Substances 0.000 description 10
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 10
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 10
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 9
- -1 oil emulsions Chemical class 0.000 description 9
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 9
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 8
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 8
- 230000008569 process Effects 0.000 description 8
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 8
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 7
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 7
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 7
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 6
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 6
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 6
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 6
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 6
- 239000013067 intermediate product Substances 0.000 description 6
- 238000012433 multimodal chromatography Methods 0.000 description 6
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 5
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 5
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 5
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 5
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 5
- 238000013060 ultrafiltration and diafiltration Methods 0.000 description 5
- 210000003501 vero cell Anatomy 0.000 description 5
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 4
- 241000699673 Mesocricetus auratus Species 0.000 description 4
- 229910014130 Na—P Inorganic materials 0.000 description 4
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 4
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 4
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 4
- 238000004264 monolayer culture Methods 0.000 description 4
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 4
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 4
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 4
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 4
- 230000004044 response Effects 0.000 description 4
- 239000012465 retentate Substances 0.000 description 4
- 229940022962 COVID-19 vaccine Drugs 0.000 description 3
- 206010011224 Cough Diseases 0.000 description 3
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229940025291 Sinovac-CoronaVac COVID-19 vaccine Drugs 0.000 description 3
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 3
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 3
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 3
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 3
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 3
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 3
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 3
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000036541 health Effects 0.000 description 3
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 3
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 3
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 3
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 3
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 3
- 108700021021 mRNA Vaccine Proteins 0.000 description 3
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 3
- PGSADBUBUOPOJS-UHFFFAOYSA-N neutral red Chemical compound Cl.C1=C(C)C(N)=CC2=NC3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 PGSADBUBUOPOJS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 3
- 229920002477 rna polymer Polymers 0.000 description 3
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 3
- CWERGRDVMFNCDR-UHFFFAOYSA-M thioglycolate(1-) Chemical compound [O-]C(=O)CS CWERGRDVMFNCDR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 3
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 3
- 229940126580 vector vaccine Drugs 0.000 description 3
- RDEIXVOBVLKYNT-VQBXQJRRSA-N (2r,3r,4r,5r)-2-[(1s,2s,3r,4s,6r)-4,6-diamino-3-[(2r,3r,6s)-3-amino-6-(1-aminoethyl)oxan-2-yl]oxy-2-hydroxycyclohexyl]oxy-5-methyl-4-(methylamino)oxane-3,5-diol;(2r,3r,4r,5r)-2-[(1s,2s,3r,4s,6r)-4,6-diamino-3-[(2r,3r,6s)-3-amino-6-(aminomethyl)oxan-2-yl]o Chemical compound OS(O)(=O)=O.O1C[C@@](O)(C)[C@H](NC)[C@@H](O)[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2[C@@H](CC[C@@H](CN)O2)N)[C@@H](N)C[C@H]1N.O1C[C@@](O)(C)[C@H](NC)[C@@H](O)[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2[C@@H](CC[C@H](O2)C(C)N)N)[C@@H](N)C[C@H]1N.O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N RDEIXVOBVLKYNT-VQBXQJRRSA-N 0.000 description 2
- WEEMDRWIKYCTQM-UHFFFAOYSA-N 2,6-dimethoxybenzenecarbothioamide Chemical compound COC1=CC=CC(OC)=C1C(N)=S WEEMDRWIKYCTQM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940025280 BBV152 vaccine Drugs 0.000 description 2
- 241000008904 Betacoronavirus Species 0.000 description 2
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 2
- 102100031673 Corneodesmosin Human genes 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 241000282560 Macaca mulatta Species 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- QPCDCPDFJACHGM-UHFFFAOYSA-N N,N-bis{2-[bis(carboxymethyl)amino]ethyl}glycine Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(=O)O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O QPCDCPDFJACHGM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 2
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 2
- FCPVYOBCFFNJFS-LQDWTQKMSA-M benzylpenicillin sodium Chemical compound [Na+].N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C([O-])=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 FCPVYOBCFFNJFS-LQDWTQKMSA-M 0.000 description 2
- VEZXCJBBBCKRPI-UHFFFAOYSA-N beta-propiolactone Chemical compound O=C1CCO1 VEZXCJBBBCKRPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960005069 calcium Drugs 0.000 description 2
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 2
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 2
- 210000000234 capsid Anatomy 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- OSASVXMJTNOKOY-UHFFFAOYSA-N chlorobutanol Chemical compound CC(C)(O)C(Cl)(Cl)Cl OSASVXMJTNOKOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 2
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 2
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 2
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N dimethyl sulfoxide Natural products CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- JJTUDXZGHPGLLC-UHFFFAOYSA-N lactide Chemical compound CC1OC(=O)C(C)OC1=O JJTUDXZGHPGLLC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940126582 mRNA vaccine Drugs 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 229960003330 pentetic acid Drugs 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 description 2
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 2
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 2
- 229940068968 polysorbate 80 Drugs 0.000 description 2
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 2
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 229960000380 propiolactone Drugs 0.000 description 2
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 2
- 238000011012 sanitization Methods 0.000 description 2
- 238000011218 seed culture Methods 0.000 description 2
- 238000003998 size exclusion chromatography high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 2
- 229960002385 streptomycin sulfate Drugs 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 2
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 2
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 2
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 2
- FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N 4-hydroxybenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 206010003757 Atypical pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 241000588832 Bordetella pertussis Species 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 241001466804 Carnivora Species 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 1
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 1
- 241000288673 Chiroptera Species 0.000 description 1
- 208000017667 Chronic Disease Diseases 0.000 description 1
- 101710139375 Corneodesmosin Proteins 0.000 description 1
- 229940125620 CoviVac Drugs 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- 108010041986 DNA Vaccines Proteins 0.000 description 1
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 1
- 206010013975 Dyspnoeas Diseases 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100039328 Endoplasmin Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 1
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 1
- 101000812663 Homo sapiens Endoplasmin Proteins 0.000 description 1
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 1
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 description 1
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 description 1
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 1
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 1
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 description 1
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 108010002386 Interleukin-3 Proteins 0.000 description 1
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 1
- 108010002616 Interleukin-5 Proteins 0.000 description 1
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 1
- 108010002586 Interleukin-7 Proteins 0.000 description 1
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 description 1
- 108010002335 Interleukin-9 Proteins 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- 125000000174 L-prolyl group Chemical group [H]N1C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[C@@]1([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 108010028921 Lipopeptides Proteins 0.000 description 1
- 108010074338 Lymphokines Proteins 0.000 description 1
- 102000008072 Lymphokines Human genes 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 108010050619 Monokines Proteins 0.000 description 1
- 102000013967 Monokines Human genes 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 108010084333 N-palmitoyl-S-(2,3-bis(palmitoyloxy)propyl)cysteinyl-seryl-lysyl-lysyl-lysyl-lysine Proteins 0.000 description 1
- 101710141454 Nucleoprotein Proteins 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- 108010081690 Pertussis Toxin Proteins 0.000 description 1
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 1
- 229940096437 Protein S Drugs 0.000 description 1
- 239000012564 Q sepharose fast flow resin Substances 0.000 description 1
- 229940022005 RNA vaccine Drugs 0.000 description 1
- 241001678558 SARS-like-CoVZXC21 Species 0.000 description 1
- 101000629318 Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 Spike glycoprotein Proteins 0.000 description 1
- 229940125574 Sinopharm COVID-19 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 108010003533 Viral Envelope Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 108010031318 Vitronectin Proteins 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 229940037003 alum Drugs 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- 239000003443 antiviral agent Substances 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 1
- 229940031567 attenuated vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000000680 avirulence Effects 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 229960000686 benzalkonium chloride Drugs 0.000 description 1
- CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N benzyl(dimethyl)azanium;chloride Chemical compound [Cl-].C[NH+](C)CC1=CC=CC=C1 CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910001423 beryllium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 1
- 239000011692 calcium ascorbate Substances 0.000 description 1
- 235000010376 calcium ascorbate Nutrition 0.000 description 1
- 229940047036 calcium ascorbate Drugs 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960002713 calcium chloride Drugs 0.000 description 1
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000004227 calcium gluconate Substances 0.000 description 1
- 229960004494 calcium gluconate Drugs 0.000 description 1
- 235000013927 calcium gluconate Nutrition 0.000 description 1
- MKJXYGKVIBWPFZ-UHFFFAOYSA-L calcium lactate Chemical compound [Ca+2].CC(O)C([O-])=O.CC(O)C([O-])=O MKJXYGKVIBWPFZ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000001527 calcium lactate Substances 0.000 description 1
- 229960002401 calcium lactate Drugs 0.000 description 1
- 235000011086 calcium lactate Nutrition 0.000 description 1
- BLORRZQTHNGFTI-ZZMNMWMASA-L calcium-L-ascorbate Chemical compound [Ca+2].OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1[O-].OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1[O-] BLORRZQTHNGFTI-ZZMNMWMASA-L 0.000 description 1
- NEEHYRZPVYRGPP-UHFFFAOYSA-L calcium;2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanoate Chemical compound [Ca+2].OCC(O)C(O)C(O)C(O)C([O-])=O.OCC(O)C(O)C(O)C(O)C([O-])=O NEEHYRZPVYRGPP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- BHRQIJRLOVHRKH-UHFFFAOYSA-L calcium;2-[bis[2-[bis(carboxylatomethyl)amino]ethyl]amino]acetate;hydron Chemical compound [Ca+2].OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC([O-])=O)CCN(CC(O)=O)CC([O-])=O BHRQIJRLOVHRKH-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 238000005277 cation exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000013553 cell monolayer Substances 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 229960004926 chlorobutanol Drugs 0.000 description 1
- 238000011097 chromatography purification Methods 0.000 description 1
- 108010041649 chymopsin Proteins 0.000 description 1
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 1
- 238000011970 concomitant therapy Methods 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 238000011035 continuous diafiltration Methods 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 238000002790 cross-validation Methods 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 1
- 238000000432 density-gradient centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 1
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 239000000428 dust Substances 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 239000008393 encapsulating agent Substances 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 239000012537 formulation buffer Substances 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 244000144980 herd Species 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000013632 homeostatic process Effects 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000004191 hydrophobic interaction chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000004957 immunoregulator effect Effects 0.000 description 1
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 230000015788 innate immune response Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940047122 interleukins Drugs 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 238000004460 liquid liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 210000004779 membrane envelope Anatomy 0.000 description 1
- 244000005706 microflora Species 0.000 description 1
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000403 monosodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004570 mortar (masonry) Substances 0.000 description 1
- OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N n-methyl-1-(2-naphthalen-1-ylsulfanylphenyl)methanamine Chemical compound CNCC1=CC=CC=C1SC1=CC=CC2=CC=CC=C12 OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002790 naphthalenes Chemical class 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 231100001093 no immunotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003002 pH adjusting agent Substances 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 229940023041 peptide vaccine Drugs 0.000 description 1
- 239000012466 permeate Substances 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;potassium Chemical compound [K].OP(O)(O)=O PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 229920001515 polyalkylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 1
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 229920001451 polypropylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 229950008882 polysorbate Drugs 0.000 description 1
- 229910052573 porcelain Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 1
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 1
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 1
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 1
- 239000004576 sand Substances 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 206010041232 sneezing Diseases 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011008 sodium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 239000012536 storage buffer Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002562 thickening agent Substances 0.000 description 1
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940033663 thimerosal Drugs 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229940125575 vaccine candidate Drugs 0.000 description 1
- ABDKAPXRBAPSQN-UHFFFAOYSA-N veratrole Chemical compound COC1=CC=CC=C1OC ABDKAPXRBAPSQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 229940126581 whole-virion vaccine Drugs 0.000 description 1
Abstract
Изобретение относится к области медицинской биотехнологии и иммунологии. Предложена вакцина для профилактики или лечения коронавирусной инфекции, такой как COVID-19 и применение ее для индукции иммунного ответа. Вакцина содержит штамм nCoV-19/Russia/SP48-1339/2021 вируса SARS-Cov-2, депонированный в специализированной коллекции эталонных культур штаммов II-IV групп патогенности (арбовирусы и другие) ФГБУ «48 ЦНИИ» Минобороны России под регистрационным №1339. Вакцина обеспечивает высокую иммуногенность и эффективность, а использование оптимально низких концентраций адъювантов в комбинации, прежде всего CpG-ODN, значительно снижает риски по безопасности препарата при массовом применении. 2 н. и 7 з.п. ф-лы, 5 табл., 4 пр.
Description
Область техники, к которой относится изобретение
Изобретение относится к области медицинской биотехнологии и иммунологии, конкретно к получению цельновирионной инактивированной вакцины против инфекции, вызываемой SARS-CoV-2. Предложенная вакцина может быть использована для профилактики или лечения коронавирусной инфекции, такой как COVID-19.
Предшествующий уровень техники
Коронавирус 2 тяжелого острого респираторного синдрома (SARS-CoV-2), который стал причиной глобальной пандемии COVID-19, был впервые обнаружен в Китае в конце 2019 года. Вирус SARS-CoV-2, также называемый как 2019-nCoV (далее - вирус) относится к семейству Coronaviridae, роду Betacoronavirus (betaCoV), его природным резервуаром являются летучие мыши. Геном вируса представлен одноцепочечной РНК, состоящей из 29903 п.н. (эталонная полноразмерная последовательность генома вируса штамма Wuhan-Hu-1 размещена в Базе данных Genbank под номером NC_045512.2), который кодирует полипептид из 9860 аминокислот, включающий 25 неструктурных белков и 4 структурных белка, таких как белки шипа (S), оболочки (E), мембраны (M) и нуклеокапсида (N). Нуклеотидная последовательность вирусного генома на 89% идентична SARS-подобному CoVZXC21 вирусу летучей мыши и на 82% идентична SARS-CoV вирусу человека (Chan J.F.-W. et al., Genomic characterization of the 2019 novel human-pathogenic coronavirus isolated from a patient with atypical pneumonia after visiting Wuhan, 2020, Emerg Microbes Infect,., 2020 Jan 28;9(1):221-236). Вирус чувствителен к ультрафиолетовому излучению, теплу и липидным растворителям.
Передача инфекции SARS-CoV-2 осуществляется воздушно-капельным, воздушно-пылевым и контактным путями. Ведущим путем передачи SARS-CoV-2 является воздушно-капельный, который реализуется при кашле, чихании и разговоре на близком расстоянии. Возможен контактный путь передачи, который реализуется во время рукопожатий и других видах непосредственного контакта с инфицированным человеком, а также через поверхности и предметы, контаминированные вирусом. Кроме того, вирус может передаваться при переливании крови, трансплацентарно и половым путем. Хотя инфекция SARS-CoV-2 может проявляться только легкими симптомами, такими как, как правило, лихорадка и кашель, или даже протекать бессимптомно; в другой крайности это может быть фатальным. Основными симптомами обычно являются высокая температура, кашель и затрудненное дыхание.
В настоящее время SARS-CoV-2 представляет значительную угрозу для здоровья населения. Начиная с 2019 года, вирус быстро распространился по миру и по данным ВОЗ на конец февраля 2023 года привел уже к более чем 757 млн. подтвержденных случаев COVID-19, включая почти 7 млн. смертельных случаев (https://covid19.who.int/). В связи с этим продолжаются поиски терапевтических средств, которые могли бы окончательно остановить переход от инфицирования к развитию тяжелой формы COVID-19.
Внимание исследователей направлено на разработку различных терапевтических стратегий, среди которых предотвращение связывания SARS-CoV-2 с рецепторами на клетках человека, блокировка синтеза и репликации вирусной рибонуклеиновой кислоты (РНК), восстановление врожденного иммунитета хозяина и регуляция специфических рецепторов или ферментов хозяина. Однако, наиболее многообещающим подходом для сдерживания пандемии считаются вакцины, предотвращающие инфицирование SARS-CoV-2 (Вакцины против SARS-CoV-2: светлые и темные стороны, перевод Савицкая Р., размещено 09.08.2021 по адресу https://medach.pro/post/2680).
На сегодняшний день разработаны различные типы вакцин против COVID-19, включая цельновирионные аттенуированные и инактивированные вакцины, пептидные и векторные вакцины, ДНК- и РНК-вакцины, которые направлены на стимуляцию нейтрализующего вирус иммунного ответа организма. По данным ВОЗ на конец февраля 2023 г. известно о разработке 199 вакцин-кандидатов против COVID-19, находящихся на стадии доклинических испытаний, и о 180 вакцинах на стадии клинических испытаний, из них только 22 относятся к инактивированных вакцинам (https://www.who.int/publications/m/item/draft-landscape-of-covid-19-candidate-vaccines).
Доступны к применению для профилактики COVID-19, как минимум, шесть цельновирионных инактивированных вакцин, пять из которых применяются для человека и одна для плотоядных животных, такие как: российские вакцины для человека - КовиВак («Институт полиомиелита им. Чумакова») и для животных - Карнивак-Ков (ФГБУ «ВНИИЗЖ»), китайские вакцины - CoronaVac и PiCoVacc (Sinovac), а также BBIBP-CorV/COVILO (Sinopharm) и индийская вакцина Covaxin/BBV152 (Bharat Biotech).
В качестве аналогов предлагаемого изобретения могут быть рассмотрены следующие документы, относящиеся к цельновирионным вакцинным препаратам против инфекции, вызванной SARS-CoV-2, полученные на основе инактивированных вирусных штаммов.
Международная патентная заявка WO 2022038642 A1, опубликованная 24.02.2022, в которой раскрыта цельновирионная инактивированная вакцина на основе вирусного антигена из штамма NIV-2020-770 вируса SARS-CoV-2. Вакцина содержит активный ингредиент - инактивированный очищенный SARS-CoV-2 в фосфатно-солевом буфере и адъюванты. В качестве адъювантов в составе вакцины могут быть использованы CpG олигонуклеотиды и гидроксид алюминия. С целью индукции иммунного ответа против SARS-CoV-2 и его вариантов у млекопитающих, в том числе людей, вакцинную композицию с антигеном вируса SARS-CoV-2 вводят в эффективной дозе в диапазоне от 0,125 до 100 мкг на дозу с адъювантом или без него, либо в виде однократной дозы или в двух или более дозах, чтобы вызвать иммунный ответ у млекопитающих. Гидроксид алюминия присутствует в диапазоне концентраций от 0,1 мг до 1,5 мг алюминия на дозу вакцины.
Международная патентная заявка WO 2021209060 A1, опубликованная 21.10.2021, относящаяся к инактивированной вакцине PiCoVacc против SARS-Cov-2 на основе вирусного антигена из штамма CN3 вируса SARS-CoV-2. Также предложен способ лечения, профилактики или иммунизации против заболеваний, связанных с инфекцией вирусами SARS-CoV-2, включающий введение субъекту фармацевтической композиции или вакцины, содержащей фармацевтически эффективное количество инактивированного вируса SARS-Cov-2, адъюванты и фармацевтически приемлемый носитель. Вакцина в дозе 0,5-8 мкг, предпочтительно 2-6 мкг, обеспечивает защиту субъекта от заражения SARS-CoV-2.
Международная патентная заявка WO 2021176434 A1, опубликованная 10.09.2021, раскрывает вакцину против SARS-CoV-2, содержащую: (i) инактивированную частицу SARS-CoV-2, где количество инактивированного вируса SARS-CoV-2 на дозу в вакцине составляет примерно от 0,01 до 25 мАЕ (миллиабсорбционных единиц x минуты), предпочтительно от примерно 0,25 до 2,5 мАЕ по оценке SEC-HPLC; ii) CpG-содержащий олигодезоксинуклеотид (CpG-ODN) от 0,25 до 6 мг/мл, предпочтительно примерно 2 мг/мл, т.е. 1 мг/доза; и iii) гидроксид алюминия от 0,1 до 2 мг/мл, предпочтительно 1 мг/мл, т.е. 0,5 мг/доза, при этом вакцина доставляется в объеме 0,5 мл. Эффективное количество вакцины против SARS-CoV-2 на дозу составляет от 0,05 до 50 мг общего белка, предпочтительно около 5 мкг общего белка/доза, т.е. как измерено (p)BCA. Вакцина обеспечивает профилактику инфекции SARS-CoV-2 без индукции антителозависимого усиления (ADE) SARS-CoV-2-ассоциированного заболевания (COVID-19) или иммунопатология у субъекта.
Следует отметить преимущества инактивированных вакцин перед живыми, которые заключаются в отсутствии риска инфицирования, поскольку убитые вирусы не могут мутировать, соответственно, в них нет потенциальной опасности как у живых вакцин, в ходе репликации которых в организме хозяина возможен возврат к дикому типу или рекомбинация с вирусом дикого типа. По сравнению с векторными и мРНК-вакцинами преимущества инактивированных вакцин состоят в том, что пациенту вводится цельный вирусный капсид, что приводит к формированию иммунитета против всего комплекса вирусных белков, а не только фрагмента S-белка, ранее считавшегося консервативным у мутировавших штаммов, но реальные условия пандемии показали иное, что привело к снижению эффективности как векторных, так и мРНК-вакцин, нацеленных исключительно на S-белок.
У известных инактивированных вакцин есть и недостатки, связанные с недостаточной иммуногенной активностью, а именно, недостаточным формированием Т-клеточного противовирусного иммунитета, что требует использования адъювантов для повышения их эффективности, сложностями их производства и нежелательными побочными явлениями.
В связи с этим существует потребность в разработке новых вакцинных препаратов, эффективных против COVID-19. Идеальная вакцина-кандидат против SARS-CoV-2 должна обладать высокой иммуногенностью, надежной способностью вызывать эффективный иммунный ответ с помощью нейтрализующих антител, обеспечивать практически полную защиту от тяжелых форм COVID-19 и быть безопасной - то есть не нести значительных побочных эффектов.
В качестве ближайшего аналога (прототипа) предлагаемого изобретения может быть выбрана цельновирионная инактивированная вакцина против SARS-CoV-2, раскрытая в WO 2021176434 A1, 10.09.2021. В качестве недостатков прототипа можно отметить следующие:
- использование исходного уханьского штамм коронавируса, который уже не актуален с эпидемической точки зрения;
- количество действующего вещества - инактивированного вирусного антигена в составе вакцинного препарата выражено в условных единицах, которые не отражают абсолютное количество антигена и препятствуют обеспечению воспроизводимости и масштабированию процесса в условиях GMP;
- относительно высокое содержание такого адъюванта как CpG-ODN, что несет в себе определенные риски по безопасности препарата при массовом применении.
Таким образом, в данной области техники существует проблема в недостаточном ассортименте цельновирионных инактивированных вакцин, эффективных против инфекции, вызываемой SARS-CoV-2.
Задача предлагаемого изобретения состоит в получении вакцины, эффективной против инфекции, вызываемой SARS-CoV-2.
Раскрытие сущности изобретения
Если не определено иное, все термины и понятия, применяемые в раскрытии настоящего изобретения, включая технические и научные термины, имеют значение, которое обычно понятно среднему специалисту в технической области, к которой принадлежит настоящее изобретение. Как правило, используемая классификация и методы клеточной и молекулярной биологии, иммунологии, микробиологии, вирусологии, аналитической, препаративной, медицинской и фармацевтической химии, описанные в настоящем документе, хорошо известны специалистам и широко применяются в данной области. Методики получения вирусов и культивирования клеток-продуцентов, выделения целевого белка, очистки и проверки активности целевого белка осуществляют в соответствии с инструкциями производителя, как это обычно осуществляется в данной области, или как это подробно описано в настоящем документе.
Все документы, цитируемые или приводимые в качестве ссылок в настоящем описании изобретения, и все документы, цитируемые или приводимые в качестве ссылок в документах, цитируемых в настоящем описании изобретения, вместе с любыми инструкциями производителя, описаниями и режимами использования способа или продуктов, упомянутых в настоящем документе или в любом документе, включенном в настоящий документ посредством ссылки, включены в предложенный документ посредством ссылки и могут быть использованы при осуществлении предложенного изобретения на практике.
Технический результат предлагаемого изобретения заключается в расширении ассортимента цельновирионных инактивированных вакцин против коронавирусной инфекции SARS-Cov-2, а именно в создании цельновирионной инактивированной вакцины на основе уникального штамма nCoV-19/Russia/SP48-1339/2021 вируса SARS-Cov-2, депонированного в специализированной коллекции эталонных культур штаммов II-IV групп патогенности (арбовирусы и другие) ФГБУ «48 ЦНИИ» Минобороны России под регистрационным № 1339, эффективной против коронавирусной инфекции, вызываемой вирусом SARS-Cov-2.
Также следует отметить дополнительные преимущества предложенного изобретения перед ближайщим аналогом, которые заключаются в:
- использовании высоковирулентного штамма, который сохраняется таковым среди известных вариантов вируса и является высоко патогенным для человека, что обеспечивает высокую иммуногенность и эффективность вакцины, в том числе перекрестную;
- использовании оптимально низких концентраций адъювантов в комбинации, прежде всего CpG-ODN, что значительно снижает риски по безопасности препарата при массовом применении;
- однозначном определении дозы инактивированного вируса, что позволяет проводить исследования и разработку (GLP), а также масштабировать производство (GMP);
- снижении рисков возникновения нежелательных побочных эффектов при использовании вакцинного препарата на основе инактивированного вирусного антигена за счет повышения степени его очистки.
Указанный технический результат достигается за счет предложенной вакцины против инфекции, вызываемой вирусом тяжелого острого респираторного синдрома SARS-Cov-2, включающей очищенный инактивированный вирусный антиген возбудителя указанной инфекции в эффективном количестве и фармацевтически приемлемые эксципиенты.
В качестве очищенного инактивированного вирусного антигена возбудителя инфекции, вызываемой вирусом SARS-Cov-2, в составе предложенной вакцины используют вирусный антиген из уникального штамма nCoV-19/Russia/SP48-1339/2021 вируса SARS-Cov-2, депонированного в специализированной коллекции эталонных культур штаммов II-IV групп патогенности (арбовирусы и другие) ФГБУ «48 ЦНИИ» Минобороны России под регистрационным № 1339.
Вирусный антиген используют в эффективном количестве в составе фармацевтической композиции, в частности, вакцины, которая представляет собой средство, вызывающее специфический иммунный ответ против вируса SARS-Cov-2.
Термин «фармацевтическая композиция», «вакцинная композиция», «вакцина» и подобные им используют в настоящем документе взаимозаменяемо, и они относятся к составу, содержащему терапевтически эффективный агент, предпочтительно вместе с фармацевтически приемлемыми эксципиентами. Указанная фармацевтическая композиция полезна для лечения, предотвращения или снижения тяжести заболевания или расстройства путем введения указанной фармацевтической композиции субъекту, предпочтительно для профилактики, предотвращения или предупреждения возникновения коронавирусного заболевания, вызванного коронавирусом 2 острого респираторного синдрома (SARS-CoV-2), путем индукции специфического иммунитета.
Термин «субъект», «пациент», «индивидуум» и подобные им используют в настоящем документе взаимозаменяемо, и они относятся к любому животному, поддающемуся воздействию предложенными средствами и способами. Предпочтительно субъект, пациент или индивидуум является человеком любого пола и любого возраста.
Термин «профилактика», «предотвращение» или «предупреждение» и подобные им означает замедление или предотвращение появления симптомов заболевания или инфекции, предпочтительно симптомов заболевания COVID-19 или инфекции, вызванной вирусом SARS-Cov-2.
Термин «индукция иммунитета» или «индукция иммунного ответа», как используют в настоящем изобретении, относится к специфическому контролю или к влиянию на активность иммунного ответа и включает активацию иммунного ответа, стимуляцию иммунного ответа, усиление иммунного ответа.
Термин «специфический иммунитет», согласно настоящему документу, относится к состоянию невосприимчивости к заболеванию вследствие индукции иммунного ответа, предпочтительно, к невосприимчивости к COVID-19 вследствие индукции иммунного ответа против вируса SARS-Cov-2.
Термин «заболевание» относится к состоянию здоровья субъекта, при котором нарушаются функции поддержания гомеостаза, и в том случае, если заболевание не облегчают, то здоровье субъекта продолжает ухудшаться или не улучшается.
Термин «инфекция», как указано в настоящем документе, относится к заражению живого организма инфекционным агентом, процессу его размножения или развития в организме, а также реакции организма на присутствие в нем инфекционного агента и на выделяемые им токсины, предпочтительно инфекция вызывается вирусом SARS-Cov-2.
Под термином «инфекционное заболевание» в настоящем документе понимается развитие заболевания в результате инфекции, предпочтительно инфекционное заболевание представляет собой коронавирусное заболевание, а именно COVID-19, вызванное таким инфекционным агентом как вирус SARS-Cov-2.
Термин «эффективное количество», в том числе «фармакологически эффективное количество», «профилактически эффективное количество» или «терапевтически эффективное количество» относится к количеству, которое обеспечивает желательную реакцию или желательный эффект отдельно или вместе с дополнительными дозами, в частности, которое избавит в определенной степени от одного или нескольких симптомов заболевания, по поводу которого проводится лечение.
Желательная реакция предпочтительно связана с профилактикой, а именно с ингибированием или предупреждением возникновения коронавирусного заболевания, вызванного вирусом SARS-Cov-2. Желательным эффектом может быть отсрочка начала или предотвращение наступления COVID-19.
Также желательная реакция связана с лечением коронавирусного заболевания, вызванного вирусом SARS-Cov-2, а именно с ингибированием течения заболевания, облегчении тяжести инфекции, уменьшения одного или нескольких симптомов заболевания, ускорении процесса выздоровления, снижении осложнений основного заболевания и уменьшении выраженности сопутствующих патологических состояний. Желательный эффект включает замедление прогрессирования заболевания, в частности, прекращение заболевания или бессимптомное течение COVID-19.
Эффективное количество описанных в данном документе вакцинных композиций может зависеть от состояния, подлежащего лечению, тяжести заболевания, индивидуальных параметров пациента, включая возраст, физиологическое состояние, размер и массу, продолжительность лечения, тип сопутствующей терапии в случае ее наличия, конкретного способа введения и других факторов. Соответственно, вводимые дозы вакцинных композиций, описанных в данном документе, могут зависеть от множества таких параметров. В том случае, когда реакция пациента или достигаемый эффект недостаточны при исходной дозе, могут использоваться более высокие дозы или эффективно более высокие дозы, достигнутые с помощью другого более точно локализованного пути введения.
Предпочтительно эффективное количество, согласно настоящему документу, представляет собой количество, достаточное для образования у субъекта вируснейтрализующих антиген-специфических антител, а именно, антител против SARS-CoV-2.
Указанное количество рассчитывается на одну дозу вакцины, которая предпочтительно составляет от 0,5 до 10 мл, наиболее предпочтительно 0,5 мл на одно введение субъекту.
Количество указанного вирусного антигена в составе вакцины составляет от 3 до 60 мкг на одну дозу, предпочтительно 7,5-30 мкг на одну дозу, наиболее предпочтительно 15 мкг на одну дозу.
Концентрация указанного вирусного антигена в составе вакцины составляет от 6 до 120 мкг/мл, предпочтительно 15-60 мкг/мл, наиболее предпочтительно 30 мкг/мл.
Используемые в составе фармацевтической композиции по настоящему изобретению фармацевтически приемлемые эксципиенты представляют собой один или несколько адъювантов и фармацевтически приемлемый разбавитель, наполнитель или носитель. Примеры эксципиентов включают, без ограничения указанными, носители, связующие, разбавители, смазывающие вещества, загустители, поверхностно-активные агенты, консерванты, стабилизаторы, эмульгаторы, буферы.
Фармацевтические композиции могут содержать один или несколько адъювантов или могут вводиться с одним или несколькими адъювантами.
Термин «адъювант» относится к соединению, которое продлевает, усиливает или ускоряет иммунный ответ. Адъюванты включают гетерогенную группу соединений, таких как масляные эмульсии, например, адъюванты Фрейнда, минеральные соединения, такие как квасцы, например, гидроксид алюминия (например, не ограничиваясь указанными, коммерчески доступные гели гидроксида алюминия - Alhydrogel™ (Brenntag Biosector), Rehydragel™ (Reheis), Rehsorptar™ (Armour Pharmaceutical) и др.), бактериальные продукты, такие как токсин Bordetella pertussis или иммуностимулирующие комплексы. Примеры адъювантов включают, без ограничения указанными: LPS, GP96, CpG-содержащие олигодезоксинуклеотиды (CpG-ODN, например, не ограничиваясь указанными, такие как CPG-ODN 1018 (Dynavax Technologies), CpG-ODN 1826 (Синтол), CpG-ODN 2006 (Invivogen), CpG-ODN 2216 (Invivogen) и др.), липопептиды, такие как Pam3Cys, факторы роста и цитокины, такие как монокины, лимфокины, интерлейкины, хемокины, например, IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-12, IFN-α, IFN-γ, GM-CSF и другие.
Термин «наполнитель» означает агент, который может быть добавлен к композиции для обеспечения требуемой консистенции, например, изменения объемных свойств, улучшения стабильности и/или регулирования осмоляльности. Примеры обычно используемых наполнителей включают, не ограничиваясь ими, хлорид натрия; сахара, например, сахарозу; полиолы, например, маннит; аминокислоты, например, гистидин, аргинин; поверхностно-активные вещества, например, полисорбат 80 и полимеры.
Термин «носитель» относится к компоненту, который может быть натуральным, синтетическим, органическим, неорганическим, в котором активный компонент объединен для облегчения, усиления или обеспечения возможности введения фармацевтической композиции. Используемый в настоящем документе носитель может быть представлен одним или несколькими совместимыми твердыми или жидкими наполнителями, разбавителями или инкапсулирующими веществами, которые подходят для введения субъекту. Подходящий носитель включает, без ограничения указанными, стерильную воду, раствор Рингера, лактат Рингера, стерильный раствор хлорида натрия, изотонический солевой раствор, полиалкиленгликоли, гидрогенизированные нафталины и, в частности, биосовместимые полимеры лактида, сополимеры лактида/гликолида или сополимеры полиоксиэтилена/полиоксипропилена.
Термин «разбавитель» относится к разбавляющему и/или разжижающему агенту. Более того, термин «разбавитель» включает любую одну или несколько из жидкости, жидкой или твердой суспензии и/или смешивающей среды. Примеры подходящих разбавителей включают буферный раствор, например, фосфатно-солевой буфер (PBS), раствор NaCl (0,9%), этанол, глицерин или воду.
Фармацевтические композиции, согласно настоящему изобретению, могут содержать подходящие добавки, соли, буферы, антиоксиданты, консерванты, агенты, регулирующие осмоляльность, и агенты, регулирующие рН, и, возможно, другие терапевтические агенты, например, другие иммунорегуляторные средства.
Подходящие добавки включают хелатирующие агенты, например, диэтилентриаминпентауксусную кислоту (DTPA), DTPA-бисамид и другие или кальциевые хелатные комплексы, например, кальция DTPA, CaNaDTPA-бисамид и другие, или, возможно, добавки кальциевой или натриевой солей, например, хлорида кальция, аскорбата кальция, глюконата кальция, лактата кальция и другие.
Подходящие буферы для применения в фармацевтических композициях по настоящему изобретению включают физиологически биосовместимые буферные растворы, например, PBS и другие.
Фосфатно-солевой буфер (PBS) представляет собой физиологически приемлемый буферный солевой раствор на водной основе (pH ~ 7,4), содержащий динатриевый гидрофосфат, хлорид натрия и, в некоторых составах, хлорид калия и дигидрофосфат калия, который помогает поддерживать постоянный рН. Типичный химический состав 1X PBS имеет конечную концентрацию NaCl - 137 мМ/л, KCl - 2.7 мМ/л, Na2HPO4 - 10 мМ/л, KH2PO4 - 1.8 мМ/л.
При необходимости состав фармацевтических композиций по настоящему изобретению может быть дополнен подходящими консервантами, например, без ограничения указанными, хлоридом бензалкония, хлорбутанолом, парабеном и тимеросалом и другими.
Фармацевтически приемлемые эксципиенты могут быть выбраны с учетом предполагаемого пути введения и стандартной фармацевтической практики.
Описанные в данном документе фармацевтические композиции можно вводить подкожно, внутрикожно или внутримышечно. В предпочтительном варианте фармацевтические композиции составлены для системного введения путем внутримышечной инъекции.
Предпочтительно в состав вакцины входят такие адъюванты как гидроксид алюминия и/или CpG-содержащий олигодезоксинуклеотид (CpG-ODN) в фармацевтически приемлемом разбавителе, предпочтительно комплексный адъювант - гидроксид алюминия и CpG-ODN в фосфатно-солевом буфере (PBS). При этом гидроксид алюминия используют предпочтительно в количестве 100 - 1000 мкг на одну дозу (в концентрации 200 - 2000 мкг/мл), а CpG-ODN в количестве 1 - 100 мкг на одну дозу (в концентрации 2-200 мкг/мл), наиболее предпочтительно гидроксид алюминия в количестве 500 мкг на одну дозу (в концентрации 1000 мкг/мл) и CpG-ODN в количестве 10 мкг на одну дозу (в концентрации 20 мкг/мл).
В наиболее предпочтительном варианте осуществления изобретения предложенная композиция вакцины содержит вирусный антиген в концентрации 30 мкг/мл в сочетании с гидроксидом алюминия в концентрации 1000 мкг/мл и CpG-ODN в концентрации 20 мкг/мл с доведением объема раствора фосфатно-солевым буфером (PBS) до 1 мл, и используется в дозе 0,5 мл на одно введение субъекту.
В расчете на одну дозу для введения субъекту, например, в дозе 0,5 мл на одно внутримышечное введение субъекту предложенная композиция вакцины содержит 15 мкг вирусного антигена; 500 мкг гидроксида алюминия; 10 мкг CpG-ODN и PBS до 0,5 мл.
Также указанный технический результат достигается за счет применения предложенной вакцины для индукции специфического иммунного ответа против инфекции, вызываемой вирусом SARS-Cov-2.
Способ применения предложенной вакцины для индукции специфического иммунного ответа против инфекции, вызываемой вирусом SARS-Cov-2, включает однократное или многократное введение нуждающемуся в этом субъекту вакцинной композиции в дозе, эффективной для лечения инфекции, вызываемой вирусом SARS-Cov-2.
Предложенное применение вакцины обеспечивает индукцию устойчивого иммунного ответа против инфекции, вызываемой вирусом SARS-Cov-2, который позволяет предупредить развитие указанной инфекции или ослабить по меньшей мере один из ее симптомов.
Несмотря на то, что предпочтительным является стимуляция устойчивого иммунитета путем однократного или двукратного введения, для достижения требуемого эффекта возможно вводить дополнительные дозы с помощью такого же или отличающегося пути введения. Например, у детей для достижения достаточных уровней иммунитета могут потребоваться многократные введения дозы вакцины с определенными интервалами на протяжении всего детского возраста при необходимости поддержания достаточных уровней защиты против инфекции. Аналогично для взрослых, которые особенно восприимчивы к повторному возникновению или тяжелому протеканию коронавирусной инфекции, например, медицинские или социальные работники, пожилые и субъекты с хроническими заболеваниями, могут потребоваться множественные иммунизации для установления и/или поддержания защитных иммунных ответов. Уровни индуцированного иммунитета возможно отслеживать, например, путем измерения количеств нейтрализующих секреторных и сывороточных антител, и при необходимости производят коррекцию дозировок или повторяют вакцинации для вызова или поддержания требуемых уровней защиты от инфекции, вызываемой вирусом SARS-Cov-2.
Предложенное применение вакцины заключается в однократном или многократном введении, предпочтительно двух- или трехкратном введении дозы вакцины для индукции устойчивого иммунитета, достаточного для предупреждения развития указанной инфекции или ослабления по меньшей мере одного из ее симптомов.
Вакцинные составы можно вводить на основе схемы многократного введения, например, осуществляя первичное введение вакцинной композиции с последующими бустерными введениями. Повторную дозу композиции вводят в пределах от двух недель до одного года, предпочтительно от двух недель до шести месяцев, наиболее предпочтительно от двух до трех недель после первичного введения. При необходимости после второй дозы можно вводить третью и последующие дозы с интервалом от трех недель до трех лет, наиболее предпочтительно от трех недель до одного года после первичного введения.
Способ профилактики или лечения инфекции, вызываемой вирусом SARS-Cov-2, может предусматривать проведение комбинированной терапии, например, использование предложенной вакцинной композиции совместно с другими активными агентами, например, иммуногенными композициями и/или противовирусными препаратами.
Для получения вакцины согласно настоящему документу используют уникальный штамм nCoV-19/Russia/SP48-1339/2021 вируса SARS-Cov-2, который выделен из биопробы от больного в ФГБУ «48 ЦНИИ» Минобороны России и депонирован в специализированной коллекции эталонных культур штаммов II-IV групп патогенности (арбовирусы и другие) ФГБУ «48 ЦНИИ» Минобороны России под регистрационным № 1339.
Способ получения вакцины против инфекции, вызываемой вирусом SARS-Cov-2, включает культивирования указанного штамма возбудителя COVID-19 в монослое клеток Vero с последующей инактивацией вируса, очисткой вирусного антигена и дополнением состава вакцины фармацевтически приемлемыми эксципиентами, предпочтительно комплексным адъювантом и фосфатно-солевым буферным раствором с получением, таким образом, вакцины против указанной инфекции.
В соответствии с настоящим изобретением, термин «очистка вирусного антигена» означает основные способы очистки или основные стадии очистки, такие способы очистки, как хроматография или ультрафильтрация/диафильтрация, при необходимости могут быть использованы различные методы концентрирования и доочистки, например, центрифугирование в градиенте плотности сахарозы (периодическое центрифугирование). Используемой хроматографией может быть ионообменная хроматография, например, анионобменная или катионобменная хроматография, мультимодальная хроматография (хроматография на мультимодальных матрицах), хроматография гидрофобного взаимодействия, комбинированная хроматография, псевдоаффинная хроматография, аффинная хроматография, жидкостно-жидкостная хроматография и тому подобное.
В использованном в настоящем документе значении термин «ультрафильтрация» или «UF» означает метод, в соответствии с которым раствор или суспензию фильтруют через полупроницаемую мембрану, которая задерживает макромолекулы, пропуская растворитель и мелкие молекулы растворенного вещества. Ультрафильтрация может быть использована для увеличения концентрации макромолекул в растворе или суспензии.
В использованном в настоящем документе термин «диафильтрация» или «DF» означает специальный класс фильтрации, в соответствии с которым задержанное вещество разбавляется растворителем и повторно фильтруется, в результате чего уменьшается концентрация растворимых компонентов проникающего вещества. Диафильтрация может вызывать или не вызывать увеличения концентрации задержанных компонентов, включая, например, белки. Например, в случае диафильтрации в непрерывном режиме растворитель постоянно добавляется к задержанному веществу со скоростью образования фильтрата. В таком случае объем задержанного вещества и концентрация удерживаемых компонентов не изменяется во время данного процесса. С другой стороны, в случае диафильтрации в периодическом режиме или диафильтрации с последующим разбавлением за стадией ультрафильтрации следует добавление растворителя со стороны задержанного вещества; если объем растворителя, добавляемого со стороны задержанного вещества, не равен или превышает объем образованного фильтрата, то концентрация удерживаемых компонентов увеличивается. Диафильтрация может быть использована для изменения значения рН, ионной силы, состава соли, состава буфера или других свойств раствора или суспензии макромолекул.
Термин «ультрафильтрация/диафильтрация» или «UF/DF» означает любой процесс, метод или комбинацию методов последовательного или одновременного выполнения ультрафильтрации и/или диафильтрации.
В предпочтительном варианте осуществления изобретения способ предусматривает проведение очистки вирусного антигена с использованием анионообменной и мультимодальной хроматографии с дополнительной ультрафильтрацией/диафильтрацией. Наиболее предпочтительно очистку вирусного антигена осуществляют путем последовательного проведения начального этапа ультрафильтрации/диафильтрации, анионообменной и мультимодальной хроматографии и заключительного этапа ультрафильтрации/диафильтрации.
Полученную вакцину расфасовывают во флаконы для сублимационного высушивания или реализации в жидком виде. В жидком виде препарат вакцины предпочтительно представляет собой суспензию для внутримышечного введения и имеет следующее соотношение компонентов:
- инактивированный очищенный вирусный антиген штамма «nCoV-19/Russia/SP48-1339/2021» в количестве 3 - 60 мкг на одну дозу (в концентрации 6-120 мкг/мл), наиболее предпочтительно в количестве 15 мкг на одну дозу (в концентрации 30 мкг/мл);
- гидроксид алюминия в количестве 100 - 1000 мкг на одну дозу (в концентрации 200 - 2000 мкг/мл), предпочтительно в количестве 500 мкг на одну дозу (в концентрации 1000 мкг/мл);
- CpG-ODN в количестве 1 - 100 мкг на одну дозу (в концентрации 2-200 мкг/мл), наиболее предпочтительно в количестве 10 мкг на одну дозу (в концентрации 20 мкг/мл);
- PBS (натрия гидрофосфат, натрия дигидрофосфат, натрия хлорид, вода для инъекций) - остальное.
Инактивированный очищенный вирусный антиген штамма «nCoV-19/Russia/SP48-1339/2021» представляет собой суспензию, содержащую очищенные цельновирионные капсиды возбудителя COVID-19, которые полностью сохранили свою белковую и антигенную структуру, но в результате разрушения генетического аппарата потерявшие вирулентность и способность к размножению.
Для приготовления сухого препарата жидкую вакцину высушивают путем вакуумной лиофилизации. Готовую вакцину контролируют на физические свойства, стерильность, иммуногенность, безвредность, авирулентность и т.п.
Вакцину, содержащую инактивированный вирусный материал возбудителя COVID-19, хранят при температуре 2-8°.
Осуществление изобретения
Перед тем как описать конкретные примеры осуществления изобретения, следует отметить, что настоящее изобретение не ограничивается конкретными описанными способами, используемыми средствами и методами, продуктами или комбинациями, поскольку такие способы, средства и методы, продукты или комбинации, без сомнения, могут варьироваться. Также следует отметить, что терминология, используемая в настоящей заявке, не подразумевается как ограничивающая, поскольку объем настоящего изобретения будет ограничиваться только предлагаемой формулой изобретения.
Пример 1. Получение инактивированного вирусного антигена, входящего в состав предложенной композиции вакцины против инфекции, вызываемой вирусом SARS-Cov-2
1.1. Получение культуры клеток
В данном примере показано использование клеток линии Vero (В) и специально подобранные для этого условия, но могут быть использованы другие клетки млекопитающих, подходящие для культивирования коронавирусов, например, линии клеток Vero, Vero С1008, Vero E6, Vero-TMPRSS2, GMK, СПЭВ, MDCK, COS, ВНК-21 и другие подходящие условия (см. Руководство по вирусологии: вирусы и вирусные инфекции человека и животных / ред. Д. К. Львов, Москва: Медицинское информационное агентство, 2013. - 1197 с.;. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология: учебник в 2-х т. / ред. В. В. Зверев, М.Н. Бойченко, Москва, ГЭОТАР-Медиа, 2014. - Т. 1 - 447 с.; Т. 2 - 477 с.; Медицинская микробиология, вирусология и иммунология: учебник / под ред. А. А. Воробьева, 2-е изд., испр. и доп. - Москва: МИА, 2006. - 702 с.).
Получение монослойной культуры клеток линии Vero (В), включает в себя следующие стадии: расконсервация культуры клеток, получение посевной культуры, пересев культуры клеток в пластиковый роллерный флакон.
В качестве исходного объекта используют культуру клеток Vero (В), хранящуюся в ампулах при температуре минус 196°С (жидкий азот), в виде взвеси замороженных клеток в фетальной телячьей сыворотке (ФТС) с добавлением консерванта - ДМСО.
1.1.1. Для разведения оттаянной суспензии клеток применяют питательную среду 199 с солями Эрла, дополненную ФТС (Gibco), 200мМ раствором глутамина и раствором гентамицина сульфата. Ампулу с замороженным посевным материалом клеток Vero (В) оттаивают на водяной бане при температуре от 35 до 37°С пока вся суспензия клеток не перейдет в жидкую фазу. После этого ампулу вскрывают в асептических условиях в ламинарном шкафу и переносят ее содержимое в пластиковую пробирку объемом 50 см3 с постепенным добавлением питательной среды. Не позднее 20 минут после разведения из пробирки с расконсервированной суспензией клеток отбирают пробу, в которой определяют долю жизнеспособных клеток и микробиологическую чистоту методом микроскопии. Расконсервированная культура должна быть микробиологически чистой и содержать не менее 85% жизнеспособных клеток.
1.1.2. Получение посевной культуры
Для выращивания клеток в пластиковых флаконах и роллерах также применяют среду 199 с солями Эрла, дополненную фетальной телячьей сывороткой (ФТС) (Gibco), 200 мМ раствором глутамина и раствором гентамицина сульфата. Расконсервированную суспензию клеток переносят в пластиковый флакон с площадью рабочей поверхности 75 см2 в посевной концентрации 4,0*104 кл*см2. Флаконы в горизонтальном положении помещают в СО2 - инкубатор и культивируют 4 суток при температуре около 37 °C с заменой питательной среды на свежую через 24 часа после внесения суспензии клеток в пластиковый флакон. Состояние формирующегося монослоя контролируют путем его просмотра под микроскопом. В течение пассажа должен сформироваться ровный, сплошной монослой без признаков дегенерации клеток.
По окончании пассажа сформировавшийся монослой клеток переводят в суспендированное состояние с использованием стерильного раствора Версена и раствора химопсина. В суспензии определяют количество клеток и долю жизнеспособных. Конечная концентрация клеток должна быть не менее 0,9*106 кл*см3. Суспензию в посевной концентрации не менее 4*104 кл*см2 переносят в пластиковый матрас (175 см2) и доводят объем среды до 75 см3. После этого начинают второй пассаж выращивания монослойной культуры с длительностью культивирования 3 суток.
1.1.3. Пересев культуры клеток в пластиковый роллерный флакон
Выращивание монослойной культуры клеток проводят в пластиковых роллерных флаконах с площадью рабочей поверхности 800 см2 и 4250 см2, соответственно, в которые путем последовательного пересева переносят клетки с предыдущей стадии в посевной концентрации не менее 4*104 кл*см2. Сначала проводят культивирование в течение 3 суток в роллерных флаконах с площадью рабочей поверхности 800 см2, которые в горизонтальном положении помещают на роллерную установку в СО2 - инкубатор при температуре около 37°C со скоростью вращения - 0,4 оборота в минуту.
Состояние формирующегося монослоя контролируют путем его просмотра под микроскопом. В течение пассажа должен сформироваться ровный, сплошной монослой без признаков дегенерации клеток. Микробиологическую чистоту контролируют методом микроскопии.
Затем осуществляют пересев клеток в посевной концентрации 1,4*104кл.*см2 - 1,6*104 кл.*см2 на ребристые роллеры с площадью поверхности 4250 см2 и инкубируют 1 сутки.
1.2. Получение биомассы вируса
Получение биомассы вируса включает в себя следующие стадии: получение биомассы вируса, оценка качества полученной биомассы и инактивация биомассы вируса.
1.2.1. Для получения биомассы используют штамм nCoV-19/Russia/SP48-1339/2021 вируса SARS-CoV-2 относящийся к генетической линии В.1.617.3 (Депонирован в Специализированной коллекции эталонных культур штаммов II-IV групп патогенности (арбовирусы и другие) ФГБУ «48 ЦНИИ» Минобороны России, инвентарный номер штамма 1339).
Рабочую (посевную) культуру вируса получают культивированием на суточном монослое клеток Vero (В) в пластиковых флаконах с площадью поверхности 25 см2. При инфицирующей дозе 0,1 БОЕ*кл-1, время культивирования составляет 24 часа (контролируется по наступлению цитопатического эффекта). Биологическая активность вируса SARS-CoV-2 в полученной биомассе составляет не менее 6,0 lg БОЕ*мл-1, при отсутствии посторонней микрофлоры.
Затем для получения биомассы вируса используют ребристые роллеры с площадью поверхности 4250 см2 с монослоем клеток Vero (В) возрастом 1 сутки. Для инфицирования монослоя применяют поддерживающую среду 199 с солями Хенкса, дополненную ФТС (Gibco), 200 мМ раствором глутамина и раствором Antibiotic-antimecotic (100х) (Gibco). Объем заполнения роллера составляет 600 мл, непосредственно в среду добавляют культуру вируса с инфицирующей дозой 0,1 БОЕ*кл-1. С роллеров с суточным монослоем сливают ростовую среду и заливают поддерживающую с культурой вируса, культивируют при температуре около 37 °C и скорости вращения - 0,4 оборота в минуту в течение приблизительно 50 часов (контролируется по наступлению цитопатического эффекта путем микроскопии). По достижении активности вируса не менее 6,0 lg БОЕ*мл-1 извлекают культуральную жидкость, содержащую биомассу вируса SARS-CoV-2 в концентрации не менее 108 вирусных частиц/мл.
Далее полученную биомассу вируса с роллеров сливают в отдельную ёмкость, отбирают пробы для контроля качества и передают на стадию инактивации.
1.2.2. Оценка качества полученной биомассы
Определение биологической активности проводят по образованию негативных колоний под агаровым покрытием на культуре клеток Vero С1008. Из отобранной после завершения культивирования пробы готовят последовательные десятикратные разведения на стерильном солевом растворе Хенкса с 2% ФТС и антибиотиками. Три наивысших разведения используют для инфицирования монослоя культуры клеток Vero С1008.
Флаконы с односуточным монослоем культуры клеток Vero С1008, отобранные для опыта, извлекают из термостата и удаляют из них ростовую среду. В каждый флакон вносят по 0,5 мл соответствующего разведения, расчетная концентрация вируса в которых составляет 1,0; 10,0; 100,0 БОЕ*мл-1, и оставляют в термостате при температуре около 37° С для адсорбции вируса. Через один час в каждый флакон вносят 10 мл первичного агарового покрытия и продолжают инкубирование. На 3 сутки инкубирования с целью окрашивания во флаконы добавляют вторичное агаровое покрытие, содержащее нейтральный красный. Учет результатов проводят через 1 сутки инкубирования при той же температуре.
Определение микробиологической чистоты проводят путём посева на тиогликолевую среду, для этого в 3 стеклянные пробирки с жидкой тиогликолевой средой вносят пробу биомассы вируса, отобранную после завершения культивирования, после инкубируют при температуре около 37° С. Заключение о микробиологической чистоте делают при отсутствии роста в пробирках с тиогликолевой средой спустя 7 суток.
1.2.3. Инактивация биомассы вируса
Разводят бета-пропиолактон физиологическим раствором в соотношении 1:10. К биомассе вируса SARS-CoV-2 прибавляют пипеткой разведенный бета-пропиолактон до конечной инактивирующей концентрации 0,0167 % (разведение 1:6000). Процесс инактивации проводят при перемешивании биомассы вируса SARS-CoV-2 в ёмкости при температуре от 20 до 25 °C в течение 4 часов и далее 2 часа при температуре 37 °C. Инактивированную биомассу вируса SARS-CoV-2 для передачи на стадию очистки хранят при температуре от 2 до 6 °C в условиях, исключающих случайное вскрытие емкости.
Пример 2 Очистка инактивированного вирусного антигена, входящего в состав предложенной композиции вакцины против инфекции, вызываемой вирусом SARS-Cov-2
В данном примере показано использование для очистки вирусного антигена последовательного проведения начального этапа ультрафильтрации/диафильтрации, анионообменной и мультимодальной хроматографии и заключительного этапа ультрафильтрации/диафильтрации, однако очистка может быть также проведена с использованием иной последовательности стадий, иных режимов, реагентов, материалов и оборудования (см., Комиссаров А.В., Алешина Ю.А. и другие, Применение ультрафильтрации для концентрирования и очистки антигенов, Проблемы особо опасных инфекций, вып. 1, 2015, с.79-84; международная заявка WO 2013/010797, опубликованная 24.01.2013; патент ЕАПВ EA001414B1, опубликованный 26.02.2001).
2.1. Стадия ультрафильтрации/диафильтрации 1 (UF/DF 1)
Материал исходной инактивированной вирусосодержащей жидкости (ВСЖ) перед проведением процесса фильтруют при помощи системы последовательно установленных фильтра Opticap и стерилизующего фильтра. Полученный материал ВСЖ концентрируют на кассете SARTOCON Slice Cassette (Sartorius) с отсечением 300 кДа суммарно в 25 раз. После завершения концентрирования концентрат диализуют против раствора A (15 мМ Na-P, 600 мМ натрия хлорида, 0,05% полисорбата 80, pH 7,5±0,1, с удельной электропроводностью (УЭП) 55,5±3,5 мСм/см) в объёме 10 диафильтрационных объемов (DV). Следующим шагом является диализ концентрата против раствора B (15 мМ Na-P, 600 мМ натрия хлорида, pH 7,5±0,1, УЭП 55,5±3,5 мСм/см) в объёме 10 DV. Финальным этапом UF/DF стадии является переконцентрирование до 70% от объёма ретентата и вытеснением из кассеты раствором B до 100% объёма ретентата. Таким образом исключаются потери полупродукта в кассете для тангенциальной фильтрации. По завершению стадии полупродукт фильтруют через фильтр с размером пор 0,22 мкм и хранят при температуре 2-8°С. Выход составляет 80%. На данной стадии: происходит концентрирование материала, удаляются все низкомолекулярные примеси (менее 300 кДа), из ВСЖ удаляется краситель (за счет диализа буфером, содержащим полисорбат) и материал подготавливается к последующим стадиям хроматографической очистки.
2.2. Анионообменная хроматография
Стерильный полупродукт после стадии UF/DF 1 проверяют на значение pH и УЭП, которое должно находиться в диапазоне 7,5±0,1 и 53-57 мСм/см соответственно. УЭП титруют 1 М раствором хлорида натрия. Колонку XK 26 (GE Healthcare) с сорбентом Q Sepharose FF (GE Healthcare) санитизируют 1 М раствором гидроксида натрия и перезаряжают сорбент 1 М натрия хлоридом. Далее через колонку с сорбентом пропускают уравновешивающий буфер С (15 мМ Na-P, 600 мМ натрия хлорида, pH 7,5±0,1, УЭП 55,5±3,5 мСм/см) не менее 5-ти колоночных объёмов со скоростью 170 см/ч. Следующем шагом после предварительно уравновешенного сорбента является нанесение подготовленного материала со скоростью 170 см/ч, при этом время контакта с сорбентом составляет около 10 минут. Сбор фракции начинают сразу же после увеличения оптической плотности более 2 мОЕ (единиц оптической плотности). По окончании нанесения сорбент промывают уравновешивающим буферным раствором С со скоростью 170 см/ч до снижения оптической плотности менее 2 мОЕ, на этом этап сбора целевой фракции завершен. Полупродукт с анионообменной стадии хроматографии стерильно фильтруют через фильтр с размером пор 0,22 мкм и хранят при температуре 2-8°С. Данная стадия проводится в режиме фильтрации, что позволяет провести очистку материала от свободной ДНК, которая задерживается на сорбенте.
2.3. Мультимодальная хроматография
Стерильный полупродукт после стадии анионообменной хроматографии проверяют на значение pH и УЭП, которое должно находиться в диапазоне 7,5±0,1 и 54-57 мСм/см соответственно. При необходимости УЭП титруют при помощи раствора 1 М хлорида натрия. Колонку ECO PLUSE TAC 35*500 (YMC) с сорбентом Capto Core 700 (Cytiva) санитизируют 0,5 М гидроксидом натрия с последующим пропусканием через сорбент 30% изопропилового спирта. Далее через колонку с сорбентом пропускают уравновешивающий буфер D (15 мМ натрия фосфата, 600 мМ натрия хлорида, pH 7,50±0,1, УЭП 55,5±3,5 мСм/см) не менее 5-ти колоночных объёмов со скоростью 124 см/ч. Следующим шагом, после уравновешивания сорбента, является нанесение подготовленного материала со скоростью 124 см/ч, при этом время контакта с сорбентом должно составлять не менее 10 минут. Сбор фракции начинают сразу же после увеличения оптической плотности более 2 мОЕ. По окончании нанесения сорбент промывают уравновешивающим буферным раствором D со скоростью 124 см/ч до снижения оптической плотности менее 2 мОЕ, на этом этап сбора целевой фракции завершен. Полупродукт с мультимодальной стадии хроматографии стерильно фильтруют через фильтр с размером пор 0,22 мкм и хранят при температуре 2-8°С. На данной стадии происходит удаление обрывков S- и N-белков вирусной оболочки, что позволяет получить цельнокапсидный вирусный материал.
2.4. Стадия ультрафильтрации/диафильтрации 2 (UF/DF 2)
Фильтрат с предыдущей стадии, предварительно согретый до 18-25°, концентрируют в 2 раза. Затем материал диализуют против раствора E (15 мМ Na-P, 140 мМ натрия хлорида, pH 7,2±0,1 УЭП 15,0±2,0 мСм/см) в объёме 10 DV. Далее материал при необходимости концентрируют до объема равного 1/50 от начального объема входящей в процесс ВСЖ. Для вытеснения материала с кассеты Pellicon 2 MAXI (MERCK) активную фармацевтическую субстанцию (АФС) переконцентрируют до 70% от объёма ретентата и вытесняют из кассеты раствором Е до 100% объёма ретентата. Таким образом исключаются потери полупродукта в кассете для тангенциальной фильтрации. По завершению стадии полупродукт фильтруют через фильтр с размером пор 0,22 мкм с получением очищенного вирусного антигена в концентрации не менее 30 мкг/мл и хранят при температуре 2-8°С. На данной стадии корректируется концентрация антигена в АФС, а также проводится формуляция продукта в итоговый буфер хранения, который используют для получения готовых форм вакцинной композиции в Примере 3.
Пример 3 Анализ полученного продукта и формулирование готовой вакцинной композиции
3.1. Проводят аналитическую оценку полученного согласно Примеру 2 продукта
3.1.1. Методика «Количественное определение белка», основанная на методике ELISA с использованием моноклональных антител к шиповидному белку SARS-CoV-2 (CR3022, GTX01555, GeneTex). По данным SDS-PAGE АФС характеризовалась высокой чистотой продукта - более чем 96% и по данным SE-HPLC незначительным количеством агрегатов - менее 4%.
3.1.2. Методика «Определение подлинности», основанная на методе ИФА. Продукт индуцировал образование специфических антител к коронавирусу SARS-CoV-2 при иммунизации мышей линии Balb/c. Выраженный иммунный ответ регистрировали при однократном и двукратном внутримышечном введении композиций в дозе 0,5 мл/животное с пиком титра специфических антител на 18-й день эксперимента и с сохранением до 40-го дня. Появление специфических антител регистрировали через 14 дней после первой вакцинации животных.
3.1.3. Методика «Определение остаточных белков культуры клеток» с использованием наборов F975 (Cygnus Technologies). На данный момент очисткой достигается остаточное содержание примесных белков менее 200 нг/мл (100 нг/доза).
3.1.4. Методика «Определение остаточной ДНК культуры клеток» с использованием наборов Vero Host Cell DNA Residue Detection Kit (Yeasen Biotechnology). На данный момент очисткой достигается остаточное содержание примесной ДНК в количестве менее 20 нг/мл (10 нг/доза).
3.1.5. Методика «Специфическая безопасность (полнота инактивации) in vitro». Производят засев клеток Vero в 6 луночые планшеты/культуральные чашки. При достижении монослоя меняют питательную среду и в лунки с клетками вносят различные концентрации инактивированной вирусной суспензии. Далее каждую лунку покрывают карбоксиметилцеллюлозой и инкубируют в течение 3 дней. По окончании инкубации из всех лунок удаляют покрывающую смесь, клетки фиксируют 4% параформальдегидом и окрашивают с помощью раствора красителя кристаллического фиолетового. После окрашивания клетки промывают водой очищенной и производят подсчет БОЕ для каждой концентрации инактивированной вирусной суспензии. По результатам проверки БОЕ отсутствуют для каждой концентрации.
3.1.6. Методика «Определение токсичности in vivo».
По результатам проведения двух доклинических исследований (ДКИ) «Доклиническое исследование токсичности, безопасности и иммуногенности вакцинного препарата при двукратном внутримышечном введении макакам резус (GLP)» и «Исследование токсичности инактивированной сорбированной вакцины против новой коронавирусной инфекции COVID-19 при повторном введении кроликам» были получены результаты, подтверждающие безопасность вакцины, поскольку не было выявлено иммунотоксичности и аллергенности вакцины.
3.2. Получение готовых форм вакцинной композиции
Перед розливом готового продукта в флаконы, в асептических условиях АФС смешивают с комплексным адъювантом и разбавляют формулирующим буферным раствором до получения целевой концентрации (см. Таблицы 1-3). При необходимости препарат лиофильно высушивают, концентрация компонентов в Таблицах 1-3 указана до начала сушки.
Пример 4 Оценка иммуногенных и протективных свойств образцов инактивированной очищенной сорбированной ковидной вакцины, содержащих различные дозы антигенов вируса SARS-CoV-2 и различные адъюванты.
I. Используемые материалы:
1. Образцы вакцины: 30/0/0; 30/500/0; 30/500/10; 15/0/0; 15/500/0; 15/500/10; 7,5/500/10, где первая цифра - концентрация вирусного антигена (мкг на дозу), вторая - концентрация гидроксида алюминия (мкг на дозу) и третья - концентрация CpG-ODN в составе образцов вакцины (мкг на дозу).
2. Образцы для контроля адъювантов: 0/0/0; 0/500/0; 0/500/10, где первая цифра - концентрация вирусного антигена (мкг на дозу), вторая - концентрация гидроксида алюминия (мкг на дозу) и третья - концентрация CpG-ODN в составе образцов вакцины (мкг на дозу).
3. Сирийские хомячки массой 40-60 г - 200 голов;
4. Инфицирующий материал: вирус SARS-CoV-2, вариант А, штамм nCoV-19/Russia/SP48-1339/2021, культура штамма прошла 3 пассажа на культуре клеток Vero В, субстрат накопления - культура клеток Vero В, хранится в криопробирках при температуре от минус 18 °C до минус 22 °C, биологическая активность - 6,8 1g БОЕ/мл.
II. Методика проведения опыта
1. Иммунизация
Образцы вакцины приготовлены на основе разных доз антигена вируса SARS-CoV-2: 30, 15 и 7,5 мкг белка в одной дозе. Кроме того, образцы с дозами 30 и 15 мкг белка представлены в трех вариантах: без адъювантов, с гидроксидом алюминия (500 мкг), с гидроксидом алюминия (500 мкг) в сочетании с CpG (10 мкг). Сирийских хомячков разделили на 10 групп по 20 голов в каждой. Животным каждой группы вводили один из образцов вакцины внутримышечно по 0,5 мл двукратно с интервалом 21 сутки. Через 21 сутки после второй иммунизации по 5 животных из каждой группы иммунизировали теми же образцами в тех же дозах и тем же путем третий раз.
2 Оценка протективных свойств антигенов
Через 21 сутки после второй иммунизации по 10 особей из каждой группы инфицировали вирулентным штаммом интаназальным путем в дозе 1⋅105 БОЕ/особь. На 2 сутки (по 3 головы), 4 сутки (по 4 головы) и 6 сутки (по 3 головы) животных в каждой группе умерщвляли и брали пробы легких с соблюдением правил асептики. Пробы легких в каждой группе на каждый срок объединяли, ткани затем подвергали гомогенизации в стерилизованных охлаждённых фарфоровых ступках с добавлением стерилизованного речного песка. Из полученного гомогената готовили 10 % суспензию на растворе Хенкса с добавлением 2 % ФТС и антибиотиков (стрептомицина сульфата и бензилпенициллина натриевой соли по 200 ЕД/мл). Для титрования использовали суточный монослой клеток Vero В, который, после удаления ростовой среды инфицировали последовательными 10-кратными разведениями вируссодержащего материала, внося по 0,5 мл соответствующего разведения на 2 флакона с культурой клеток. Покачивая флакон, равномерно распределяли инокулят по всему монослою. Флаконы укладывали горизонтально, при этом поверхность с инфицированным клеточным монослоем находилась внизу. Флаконы инкубировали в термостате при температуре 37,0±0,5 °C в течение 60 минут. После инкубирования инокулят удаляли пипеткой и в каждый флакон вносили по 10 мл первичного агарового покрытия. Далее флаконы снова укладывали горизонтально (поверхность с инфицированным монослоем находилась внизу). После затвердевания покрытия флаконы переворачивали монослоем вверх и помещали в термостат при температуре 37,0±0,5° С на 48 часов. По истечении срока инкубации с целью окрашивания монослоя культуры клеток во флаконы вносили по 10 мл вторичного агарового покрытия, содержащего нейтральный красный, и продолжали инкубировать при температуре 37,0±0,5 °C в течение 24 часов, после чего подсчитывали количество негативных колоний.
Протективные свойства к коронавирусу оценивали по концентрации вируса в легких вакцинированных сирийских хомячков на 2, 4 и 6 сутки после интраназального заражения вирулентным штаммом в дозе 105 БОЕ/особь. Защищенность животных оценивали с помощью вирусологического индекса защиты легких на 2, 4 и 6 сутки после инфицирования по снижению концентрации коронавируса в легких иммунизированных сирийских хомячков по сравнению с концентрацией в легких не иммунизированных животных.
3 Оценка иммуногенности антигенов
Через 21 сутки после второй иммунизации и через 21 сутки после третьей иммунизации у 5 животных из каждой группы тотально брали кровь, из которой получали сыворотки крови для определения титра специфических вируснейтрализующих антител в реакции нейтрализации с вирулентным вирусом SARS-CoV-2, по снижению бляшкообразующей активности вируса на монослойной культуре клеток Vero под агаровым покрытием (вариант постановки реакции - постоянная доза вируса и разведения сыворотки).
Исследовали сыворотки крови опытных животных, а также положительный контрольный образец (сыворотку крови переболевшего человека, заведомо содержащую специфические антитела к вирусу SARS- CoV-2 в титре 1:40).
Разведения сывороток готовили на растворе Хенкса с 2% ФТС и антибиотиками (стрептомицина сульфат и бензилпенициллина натриевая соль) по 200 ЕД/мл двукратным шагом, начиная с разведения 1:10. Рабочее разведение вируса готовили на той же разводящей жидкости. В приготовленном разведении концентрация вируса SARS-CoV-2 составила 200 БОЕ/мл.
Смесь равных объемов сыворотки и рабочего разведения культуры вируса SARS-CoV-2 инкубировали в пробирках в течение 60 минут при температуре от 36,5 до 37,5 °C, затем вносили по 0,5 мл во флаконы с монослоем клеток Vero В, предварительно удалив из них ростовую среду. После адсорбции комплекса АГ+АТ на клетках в течение 60 минут при температуре от 36,5 до 37,5 °C инокулят декантировали, затем наносили первичное агаровое покрытие, разработанное для вируса SARS-CoV-2, и проводили дальнейшее инкубирование монослоя при температуре от 36,5 до 37,5°C в течение двух суток.
Через трое суток на инфицированный монослой клеток с целью окрашивания 0,1 % раствором нейтрального красного наносили вторичное агаровое покрытие и инкубировали в течение 24 часов при температуре от 36,5 до 37,5 °C, затем проводили визуальный учет негативных колоний во флаконах.
За титр антител исследуемой сыворотки принимали высшее разведение сыворотки крови, в котором выявляли подавление негативных колоний, образованных вирусом SARS-CoV-2, на 50% и более по сравнению с отрицательным контролем (вирус + разводящая жидкость).
III. Результаты эксперимента
Результаты оценки протективных и иммуногенных свойств антигенов представлены в таблицах 4 и 5.
Наиболее выраженной протективной активностью обладали образцы вакцины 30/500/10 и 15/500/10. После заражения двукратно иммунизированных данными образцами хомячков вирулентным штаммом вируса SARS-CoV-2 в дозе 105 БОЕ/особь в легких животных вирус не выделяли на протяжении всего периода наблюдения: 2, 4 и 6 сутки после заражения. Титры антител у большинства животных составляли величину >1:40 при уровне сероконверсии от 80 до 100 %.
Образцы вакцины без адъювантов обладали наименьшей протективной активностью. Добавление гидроксида алюминия усиливало протективные свойства антигенов в дозах 15 и 30 мкг на дозу. Титры антител не превышали значений 1:20, сероконверсия составляла от 60 до 100 %. Оба адъюванта не влияли на уровень накопления вируса в легких, то есть не утяжеляли процесса.
По результатам данного эксперимента доза вирусного антигена 15 мкг на дозу является оптимальной по протективным и иммуногенным свойствам.
Также были изучены иммуногенные свойства исследуемой вакцины против разных штаммов вируса SARS-CoV-2, известных как «Дельта» и «Омикрон», у обезьян по уровню вируснейтрализующих антител. Согласно полученным данным по результатам ДКИ «Исследование иммуногенности и безопасности, инактивированной сорбированной вакцины от новой коронавирусной инфекции COVID-19 при моделировании заболевания SARS-CoV-2 на макаках-резус» предложенная вакцина обладает высокой иммуногенностью и эффективностью, в том числе перекрестной.
| Таблицы Таблица 1 - Состав вакцинной композиции в расчете на 1 дозу (0,5 мл) (вариант 1) |
|
| Компоненты вакцины | Количество, мкг |
| Очищенный инактивированный вирусный антиген из штамма nCoV-19/Russia/SP48-1339/2021 вируса SARS-Cov-2 | 3 |
| гидроксид алюминия | 100 |
| CpG-содержащий олигодезоксинуклеотид (CpG-ODN) | 1 |
| Фосфатно-солевой буферный раствор (PBS) | остальное |
| Таблица 2 - Состав вакцинной композиции в расчете на 1 дозу (0,5 мл) (вариант 2) | |
| Компоненты вакцины | Количество, мкг |
| Очищенный инактивированный вирусный антиген из штамма nCoV-19/Russia/SP48-1339/2021 вируса SARS-Cov-2 | 15 |
| гидроксид алюминия | 500 |
| CpG-содержащий олигодезоксинуклеотид (CpG-ODN) | 10 |
| Фосфатно-солевой буферный раствор (PBS) | остальное |
| Таблица 3. Состав вакцинной композиции в расчете на 1 дозу (0,5 мл) (вариант 3) | |
| Компоненты вакцины | Количество, мкг |
| Очищенный инактивированный вирусный антиген из штамма nCoV-19/Russia/SP48-1339/2021 вируса SARS-Cov-2 | 60 |
| гидроксид алюминия | 1000 |
| CpG-содержащий олигодезоксинуклеотид (CpG-ODN) | 100 |
| Фосфатно-солевой буферный раствор (PBS) | остальное |
| Таблица 4 - Результаты оценки протективных свойств образцов вакцины от коронавирусной инфекции при двукратной иммунизации по схеме (0+21) | |||||||||
| Шифр образца вакцины | Кол-во антигена в дозе, мкг | Наличие адъювантов, доза, мкг | Кол-во животных | Уровень накопления вируса в легких, 1g БОЕ/мл | Индекс защиты легких на … сутки после инфицирования | ||||
| 2 | 4 | 6 | 2 | 4 | 6 | ||||
| 0/0/01 | 0 | нет | 20 | 5,3 | 4,7 | 3,6 | - | - | - |
| 0/500/0 | А1(ОН)3,500 | 20 | 5,1 | 5,1 | 3,7 | - | - | - | |
| 0/500/10 | А1(ОН)3, 500 + CpG, 10 | 20 | 3,7 | 5,0 | 3,1 | - | - | - | |
| 30/0/0 | 30 | нет | 20 | 4,3 | 4,8 | 2,3 | 1,0 | 0 | 1,3 |
| 30/500/0 | А1(ОН)з, 500 | 20 | 3,4 | 1,8 | 1,2 | 1,9 | 2,9 | 2,4 | |
| 30/500/10 | А1(ОН)з, 500 + CpG, 10 | 20 | 0 | 0 | 0 | >5,3 | >4,7 | >3,6 | |
| 15/0/0 | 15 | нет | 20 | 5,3 | 4,2 | 1,4 | 0 | 0,5 | 2,2 |
| 15/500/0 | А1(ОН)3,500 | 20 | 2,9 | 2,0 | 0 | 2,4 | 2,7 | >3,6 | |
| 15/500/10 | А1(ОН)з,500 + CpG, 10 | 20 | 0 | 0 | 0 | >5,3 | >4,7 | >3,6 | |
| 7,5/500/10 | 7,5 | А1(ОН)з,500 +CpG, 10 | 20 | 3,3 | 1,0 | 0 | 2,0 | 3,7 | >3,6 |
| Контроль стада (не иммунизированные, без заражения) |
6 | 0 | 0 | 0 | - | - | - | ||
| 1Примечание. За контрольную группу принимали 0/0/0 - животных, которым вводили двукратно разводящую жидкость без адъювантов. | |||||||||
| Таблица 5 - Результаты оценки титров вируснейтрализующих антител в сыворотках крови иммунизированных хомячков | ||||||||||||||||
| Шифр антигена | № сыворотки крови хомячка | Разведение сыворотки | Кол-во флаконов | Кол-во БОЕ/ флакон |
Титр антител | Сероконверсия, % | ||||||||||
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | |||||||||
| 0/0/0 | 1 | 1:10 | 2 | 116 | 120 | <1:10 | 0% | |||||||||
| 2 | 1:10 | 2 | 118 | 124 | <1:10 | |||||||||||
| 3 | 1:10 | 2 | 127 | 120 | <1:10 | |||||||||||
| 4 | 1:10 | 2 | 116 | 119 | <1:10 | |||||||||||
| 5 | 1:10 | 2 | 121 | 117 | <1:10 | |||||||||||
| 0/500/0 | 6 | 1:10 | 2 | 123 | 126 | <1:10 | 0% | |||||||||
| 7 | 1:10 | 2 | 114 | 127 | <1:10 | |||||||||||
| 8 | 1:10 | 2 | 124 | 122 | <1:10 | |||||||||||
| 9 | 1:10 | 2 | 125 | 128 | <1:10 | |||||||||||
| 10 | 1:10 | 2 | 116 | 120 | <1:10 | |||||||||||
| 0/500/10 | 11 | 1:10 | 2 | 112 | 125 | <1:10 | 0% | |||||||||
| 12 | 1:10 | 2 | 116 | 127 | <1:10 | |||||||||||
| 13 | 1:10 | 2 | 111 | 123 | <1:10 | |||||||||||
| 14 | 1:10 | 2 | 119 | 130 | <1:10 | |||||||||||
| 15 | 1:10 | 2 | 121 | 128 | <1:10 | |||||||||||
| 30/0/0 | 16 | 1:10 | 2 | 114 | 119 | <1:10 | 0% | |||||||||
| 1:20 | 2 | 118 | 113 | |||||||||||||
| 1:40 | 2 | 112 | 115 | |||||||||||||
| 17 | 1:10 | 2 | 123 | 115 | <1:10 | |||||||||||
| 1:20 | 2 | 116 | 111 | |||||||||||||
| 1:40 | 2 | 114 | 108 | |||||||||||||
| 30/0/0 | 18 | 1:10 | 2 | 116 | 122 | <1:10 | ||||||||||
| 1:20 | 2 | 104 | 109 | |||||||||||||
| 1:40 | 2 | 118 | 113 | |||||||||||||
| 19 | 1:10 | 2 | 109 | 117 | <1:10 | |||||||||||
| 1:20 | 2 | 118 | 115 | |||||||||||||
| 1:40 | 2 | 120 | 115 | |||||||||||||
| 20 | 1:10 | 2 | 117 | 105 | <1:10 | |||||||||||
| 1:20 | 2 | 111 | 108 | |||||||||||||
| 1:40 | 2 | 114 | 112 | |||||||||||||
| 30/500/0 | 21 | 1:10 | 2 | 0 | 0 | >1:40 | 100% | |||||||||
| 1:20 | 2 | 3 | 3 | |||||||||||||
| 1:40 | 2 | 17 | 15 | |||||||||||||
| 22 | 1:10 | 2 | 54 | 56 | 1:10 | |||||||||||
| 1:20 | 2 | 77 | 79 | |||||||||||||
| 1:40 | 2 | 126 | 120 | |||||||||||||
| 23 | 1:10 | 2 | 52 | 56 | 1:10 | |||||||||||
| 1:20 | 2 | 80 | 75 | |||||||||||||
| 1:40 | 2 | 119 | 114 | |||||||||||||
| 24 | 1:10 | 2 | 60 | 53 | 1:10 | |||||||||||
| 1:20 | 2 | 115 | 117 | |||||||||||||
| 1:40 | 2 | 118 | 120 | |||||||||||||
| 25 | 1:10 | 2 | 55 | 52 | 1:10 | |||||||||||
| 1:20 | 2 | 90 | 82 | |||||||||||||
| 1:40 | 2 | 116 | 123 | |||||||||||||
| 30/500/10 | 26 | 1:10 | 2 | 0 | 0 | >1:40 | 80% | |||||||||
| 1:20 | 2 | 0 | 0 | |||||||||||||
| 1:40 | 2 | 0 | 0 | |||||||||||||
| 30/500/10 | 27 | 1:10 | 2 | 0 | 0 | >1:40 | ||||||||||
| 1:20 | 2 | 0 | 0 | |||||||||||||
| 1:40 | 2 | 0 | 0 | |||||||||||||
| 28 | 1:10 | 2 | 71 | 69 | <1:10 | |||||||||||
| 1:20 | 2 | 118 | 116 | |||||||||||||
| 1:40 | 2 | 121 | 126 | |||||||||||||
| 29 | 1:10 | 2 | 0 | 0 | >1:40 | |||||||||||
| 1:20 | 2 | 0 | 0 | |||||||||||||
| 1:40 | 2 | 0 | 0 | |||||||||||||
| 30 | 1:10 | 2 | 0 | 0 | >1:40 | |||||||||||
| 1:20 | 2 | 0 | 0 | |||||||||||||
| 1:40 | 2 | 5 | 2 | |||||||||||||
| 15/0/0 | 31 | 1:10 | 2 | 94 | 79 | <1:10 | 0% | |||||||||
| 1:20 | 2 | 101 | 102 | |||||||||||||
| 1:40 | 2 | >100 | >100 | |||||||||||||
| 32 | 1:10 | 2 | 81 | 92 | <1:10 | |||||||||||
| 1:20 | 2 | >100 | >100 | |||||||||||||
| 1:40 | 2 | >100 | >100 | |||||||||||||
| 33 | 1:10 | 2 | >100 | >100 | <1:10 | |||||||||||
| 1:20 | 2 | >100 | >100 | |||||||||||||
| 1:40 | 2 | >100 | >100 | |||||||||||||
| 34 | 1:10 | 2 | >100 | >100 | <1:10 | |||||||||||
| 1:20 | 2 | >100 | >100 | |||||||||||||
| 1:40 | 2 | >100 | >100 | |||||||||||||
| 35 | 1:10 | 2 | >100 | >100 | <1:10< | |||||||||||
| 1:20 | 2 | >100 | >100 | |||||||||||||
| 1:40 | 2 | >100 | >100 | |||||||||||||
| 15/500/0 | 36 | 1:10 | 2 | 4 | 3 | 1:20(1:30) | 60% | |||||||||
| 1:20 | 2 | 17 | 28 | |||||||||||||
| 1:40 | 2 | 58 | 59 | |||||||||||||
| 37 | 1:10 | 2 | 89 | 78 | <1:10 | |||||||||||
| 1:20 | 2 | >100 | >100 | |||||||||||||
| 1:40 | 2 | >100 | >100 | |||||||||||||
| 38 | 1:10 | 2 | 8 | 10 | 1:20 | |||||||||||
| 1:20 | 2 | 29 | 31 | |||||||||||||
| 1:40 | 2 | 80 | 62 | |||||||||||||
| 39 | 1:10 | 2 | >100 | >100 | <1:10 | |||||||||||
| 1:20 | 2 | >100 | >100 | |||||||||||||
| 1:40 | 2 | >100 | >100 | |||||||||||||
| 40 | 1:10 | 2 | 11 | 11 | 1:20 | |||||||||||
| 1:20 | 2 | 38 | 35 | |||||||||||||
| 1:40 | 2 | 75 | 85 | |||||||||||||
| 15/500/10 | 41 | 1:10 | 2 | 0 | 0 | >1:40 | 100% | |||||||||
| 1:20 | 2 | 0 | 0 | |||||||||||||
| 1:40 | 2 | 3 | 5 | |||||||||||||
| 42 | 1:10 | 2 | 0 | 1 | >1:40 | |||||||||||
| 1:20 | 2 | 2 | 2 | |||||||||||||
| 1:40 | 2 | 13 | 15 | |||||||||||||
| 43 | 1:10 | 2 | 0 | 0 | >1:40 | |||||||||||
| 1:20 | 2 | 0 | 0 | |||||||||||||
| 1:40 | 2 | 1 | 1 | |||||||||||||
| 44 | 1:10 | 2 | 23 | 24 | 1:10 | |||||||||||
| 1:20 | 2 | 57 | 58 | |||||||||||||
| 1:40 | 2 | 92 | 95 | |||||||||||||
| 15/500/10 | 45 | 1:10 | 2 | 0 | 0 | >1:40 | ||||||||||
| 1:20 | 2 | 0 | 0 | |||||||||||||
| 1:40 | 2 | 0 | 0 | |||||||||||||
| 7,5/500/10 | 46 | 1:10 | 2 | 29 | 14 | 1:20 | 20% | |||||||||
| 1:20 | 2 | 40 | 30 | |||||||||||||
| 47 | 1:10 | 2 | >100 | >100 | <1:10 | |||||||||||
| 1:20 | 2 | >100 | >100 | |||||||||||||
| 48 | 1:10 | 2 | 76 | 76 | <1:10 | |||||||||||
| 1:20 | 2 | 98 | 95 | |||||||||||||
| 49 | 1:10 | 2 | >100 | >100 | <1:10 | |||||||||||
| 1:20 | 2 | >100 | >100 | |||||||||||||
| 50 | 1:10 | 2 | 75 | 74 | <1:10 | |||||||||||
| 1:20 | 2 | 94 | >100 | |||||||||||||
| Контроль положительной сыворотки с титром антител 1:40 | 1:20 | 2 | 30 | 22 | 1:40 | - | ||||||||||
| 1:40 | 2 | 40 | 35 | |||||||||||||
| Контроль (рабочее разведение вируса+ разводящая жидкость 1:1) | 3 | 108 | 115 | 74 | Среднее кол-во БОЕ- 132 |
|||||||||||
| Контроль сыворотки (чистая), разведение 1:2 | 0,5мл разв. аликвоты сыворотки + 0,5 мл среды без сыворотки (выдерживают при 37С, 60 мин.) | 0 Бляшки отсутствуют |
||||||||||||||
| Примечание. Расчетная доза вируса: 100 БОЕ (200 БОЕ 1мл + 1мл разводящей жидкости) выдерживают при 37 ° С в течение 60 минут. | ||||||||||||||||
Claims (9)
1. Вакцина против инфекции, вызываемой вирусом SARS-Cov-2, включающая очищенный инактивированный вирусный антиген возбудителя указанной инфекции и фармацевтически приемлемые эксципиенты, отличающаяся тем, что включает вакцинный антиген из штамма nCoV-19/Russia/SP48-1339/2021 вируса SARS-Cov-2, депонированного в специализированной коллекции эталонных культур штаммов II-IV групп патогенности (арбовирусы и другие) ФГБУ «48 ЦНИИ» Минобороны России под регистрационным № 1339, в эффективном количестве.
2. Вакцина по п.1, где фармацевтически приемлемые эксципиенты в составе вакцины представляют собой адъюванты и фармацевтически приемлемый разбавитель, наполнитель или носитель.
3. Вакцина по п.2, где вакцина содержит указанный вирусный антиген и комплексный адъювант - гидроксид алюминия и CpG-содержащий олигодезоксинуклеотид (CpG-ODN) в фармацевтически приемлемом разбавителе - фосфатно-солевом буфере (PBS).
4. Вакцина по п.3, в которой гидроксид алюминия используется в количестве 100-1000 мкг на одну дозу, а CpG-ODN в количестве 1-100 мкг на одну дозу.
5. Вакцина по любому из пп.1-4, в которой количество указанного вирусного антигена в составе вакцины составляет 3-60 мкг на одну дозу.
6. Вакцина по п.5, где вакцина предназначена для внутримышечного введения в дозе 0,5 мл на одно введение субъекту и содержит из расчета на одну дозу указанный вирусный антиген в количестве 15 мкг, гидроксид алюминия в количестве 500 мкг, CpG-ODN в количестве 10 мкг и PBS до 0,5 мл.
7. Применение вакцины по любому из пп.1-6 для индукции специфического иммунного ответа против инфекции, вызываемой вирусом SARS-Cov-2.
8. Применение по п.7, где индукция специфического иммунного ответа против инфекции, вызываемой вирусом SARS-Cov-2, позволяет предупредить развитие указанной инфекции.
9. Применение по п.7, где индукция специфического иммунного ответа против инфекции, вызываемой вирусом SARS-Cov-2, позволяет ослабить по меньшей мере один из симптомов указанной инфекции
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2809375C1 true RU2809375C1 (ru) | 2023-12-11 |
Family
ID=
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2021176434A1 (en) * | 2020-03-01 | 2021-09-10 | Valneva Austria Gmbh | Cpg-adjuvanted sars-cov-2 virus vaccine |
| RU2768749C1 (ru) * | 2021-06-07 | 2022-03-24 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") | Средство специфической профилактики covid-19 для плотоядных животных |
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2021176434A1 (en) * | 2020-03-01 | 2021-09-10 | Valneva Austria Gmbh | Cpg-adjuvanted sars-cov-2 virus vaccine |
| RU2768749C1 (ru) * | 2021-06-07 | 2022-03-24 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") | Средство специфической профилактики covid-19 для плотоядных животных |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Ю.А.Беликова, Ю.В.Самсонов, Е.В.Абакушина, Современные вакцины и коронавирусные инфекции, Исследования и практика в медицине 2020, т.7, N4, с. 135-154. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Sikes et al. | Effective protection of monkeys against death from street virus by post-exposure administration of tissue-culture rabies vaccine | |
| US7052701B2 (en) | Inactivated influenza virus vaccine for nasal or oral application | |
| RU2390351C2 (ru) | Вакцина против вируса гриппа для введения через слизистую и способ предотвращения гриппа | |
| KR100314404B1 (ko) | 베로세포에적응된약독화된일본뇌염바이러스및일본뇌염백신 | |
| US20240050557A1 (en) | Coronavirus vaccine and method for preparation thereof | |
| CA2957472C (en) | Attenuated bovine coronavirus and related vaccines | |
| CN103619349A (zh) | 灭活登革热病毒疫苗 | |
| CN110711247A (zh) | 一种含有BCG-CpG-DNA佐剂的狂犬病疫苗组合物 | |
| JP6985384B2 (ja) | 弱毒変異型ジカウイルスを含むワクチン組成物 | |
| US10590174B2 (en) | Genomic sequences encoding for an attenuated mutant Zika virus | |
| KR101846478B1 (ko) | 재조합 단백질을 포함하는 돼지 마이코플라즈마 감염 예방용 백신 조성물 | |
| EP2075005A1 (en) | Ipv-dpt vaccine | |
| Klockmann et al. | Preclinical investigations of the safety, immunogenicity and efficacy of a purified, inactivated tick-borne encephalitis vaccine | |
| RU2809375C1 (ru) | Цельновирионная инактивированная вакцина против инфекции, вызываемой sars-cov-2, и ее применение | |
| RU2810740C1 (ru) | Способ получения инактивированной вакцины против covid-19 и вакцина, полученная способом | |
| CN110743007A (zh) | 一种联合疫苗及其制备方法、应用 | |
| WO2005014803A1 (ja) | 西ナイルウイルスワクチン | |
| JP5946453B2 (ja) | 変異狂犬病ウイルス及びワクチン | |
| KR101281361B1 (ko) | 북미형 돼지 생식기 호흡기 증후군 바이러스 예방 백신 조성물 및 이를 포함하는 혼합백신 조성물 | |
| EP0386946A1 (en) | Feline infectious peritonitis Vaccine | |
| RU2423995C1 (ru) | Способ производства вакцины против гриппа | |
| US20220347286A1 (en) | Inactivated vaccine for chikungunya virus | |
| KR101191518B1 (ko) | 한국형 돼지 생식기 호흡기 증후군 바이러스 예방 백신 조성물 | |
| US9381241B2 (en) | Mucosal adjuvant composition | |
| KR100693077B1 (ko) | 돼지 복합 호흡기 질환 예방 및 치료용 생물학적 조성물 |