RU2739987C2 - Множественные олигонуклеотидные фрагменты на пептидном носителе - Google Patents
Множественные олигонуклеотидные фрагменты на пептидном носителе Download PDFInfo
- Publication number
- RU2739987C2 RU2739987C2 RU2016150629A RU2016150629A RU2739987C2 RU 2739987 C2 RU2739987 C2 RU 2739987C2 RU 2016150629 A RU2016150629 A RU 2016150629A RU 2016150629 A RU2016150629 A RU 2016150629A RU 2739987 C2 RU2739987 C2 RU 2739987C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- pmo
- rxrrbr
- cpp
- aon
- peptide
- Prior art date
Links
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 title claims abstract description 11
- 239000012634 fragment Substances 0.000 title claims description 15
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title description 18
- SLXKOJJOQWFEFD-UHFFFAOYSA-N 6-aminohexanoic acid Chemical group NCCCCCC(O)=O SLXKOJJOQWFEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 55
- UCMIRNVEIXFBKS-UHFFFAOYSA-N beta-alanine Chemical group NCCC(O)=O UCMIRNVEIXFBKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 26
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 claims abstract description 21
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims abstract description 14
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims abstract description 11
- 229940000635 beta-alanine Drugs 0.000 claims abstract description 10
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims abstract description 9
- 229930028154 D-arginine Natural products 0.000 claims abstract description 6
- 125000002038 D-arginyl group Chemical group N[C@@H](C(=O)*)CCCNC(=N)N 0.000 claims abstract description 6
- 229960002684 aminocaproic acid Drugs 0.000 claims abstract description 6
- 125000000218 acetic acid group Chemical group C(C)(=O)* 0.000 claims abstract 3
- 102000020313 Cell-Penetrating Peptides Human genes 0.000 claims description 81
- 108010051109 Cell-Penetrating Peptides Proteins 0.000 claims description 81
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 53
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 claims description 29
- 230000007017 scission Effects 0.000 claims description 29
- 239000000074 antisense oligonucleotide Substances 0.000 claims description 21
- 238000012230 antisense oligonucleotides Methods 0.000 claims description 21
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 claims description 20
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 19
- 108020000948 Antisense Oligonucleotides Proteins 0.000 claims description 17
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 17
- 102000005600 Cathepsins Human genes 0.000 claims description 15
- 108010084457 Cathepsins Proteins 0.000 claims description 15
- 125000000291 glutamic acid group Chemical group N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)* 0.000 claims description 14
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 14
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 14
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 13
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 12
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 12
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 11
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 claims description 11
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 102100021158 Double homeobox protein 4 Human genes 0.000 claims description 8
- 101000968549 Homo sapiens Double homeobox protein 4 Proteins 0.000 claims description 8
- 108010006035 Metalloproteases Proteins 0.000 claims description 7
- 102000005741 Metalloproteases Human genes 0.000 claims description 7
- 102000018658 Myotonin-Protein Kinase Human genes 0.000 claims description 7
- 108010052185 Myotonin-Protein Kinase Proteins 0.000 claims description 7
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 claims description 6
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 claims description 5
- 102100026802 72 kDa type IV collagenase Human genes 0.000 claims description 4
- 102100033676 CUGBP Elav-like family member 1 Human genes 0.000 claims description 4
- 108010001483 Glycogen Synthase Proteins 0.000 claims description 4
- 102100039264 Glycogen [starch] synthase, liver Human genes 0.000 claims description 4
- 102100039262 Glycogen [starch] synthase, muscle Human genes 0.000 claims description 4
- 101000627872 Homo sapiens 72 kDa type IV collagenase Proteins 0.000 claims description 4
- 101000944448 Homo sapiens CUGBP Elav-like family member 1 Proteins 0.000 claims description 4
- 101001036117 Homo sapiens Glycogen [starch] synthase, liver Proteins 0.000 claims description 4
- 101001036130 Homo sapiens Glycogen [starch] synthase, muscle Proteins 0.000 claims description 4
- 101000990902 Homo sapiens Matrix metalloproteinase-9 Proteins 0.000 claims description 4
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims description 4
- PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N Maleimide Chemical compound O=C1NC(=O)C=C1 PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 102100030412 Matrix metalloproteinase-9 Human genes 0.000 claims description 4
- 102000004264 Osteopontin Human genes 0.000 claims description 4
- 108010081689 Osteopontin Proteins 0.000 claims description 4
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 claims description 4
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 claims description 4
- 102000009618 Transforming Growth Factors Human genes 0.000 claims description 4
- 108010009583 Transforming Growth Factors Proteins 0.000 claims description 4
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 claims description 4
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 claims description 4
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 claims description 4
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 claims description 4
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 claims description 3
- RTINQKRHLKCKBZ-UHFFFAOYSA-N diaminophosphinic acid;morpholine Chemical compound NP(N)(O)=O.C1COCCN1 RTINQKRHLKCKBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229930182847 D-glutamic acid Natural products 0.000 claims 1
- 125000004077 D-glutamic acid group Chemical group [H]N([H])[C@@]([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C([H])([H])C(N([H])[H])=O 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 8
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N D-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N 0.000 abstract 1
- 239000000562 conjugate Substances 0.000 description 79
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 64
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 26
- 229930064664 L-arginine Natural products 0.000 description 23
- 235000014852 L-arginine Nutrition 0.000 description 23
- 125000002059 L-arginyl group Chemical group O=C([*])[C@](N([H])[H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])N([H])C(=N[H])N([H])[H] 0.000 description 23
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 22
- RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N thymine Chemical compound CC1=CNC(=O)NC1=O RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 19
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 18
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 18
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical compound NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 238000000034 method Methods 0.000 description 14
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 description 12
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 11
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 11
- 229940113082 thymine Drugs 0.000 description 11
- -1 for example Chemical compound 0.000 description 10
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 10
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 10
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 10
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 10
- KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 7H-purine Chemical compound N1=CNC2=NC=NC2=C1 KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 9
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 description 9
- ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N Uracil Chemical compound O=C1C=CNC(=O)N1 ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 8
- SJRJJKPEHAURKC-UHFFFAOYSA-N N-Methylmorpholine Chemical compound CN1CCOCC1 SJRJJKPEHAURKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 7
- 150000003230 pyrimidines Chemical class 0.000 description 7
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 6
- 108700011259 MicroRNAs Proteins 0.000 description 6
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 6
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 6
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 6
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 6
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 6
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 6
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 description 6
- 239000002213 purine nucleotide Substances 0.000 description 6
- 239000002719 pyrimidine nucleotide Substances 0.000 description 6
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 6
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 5
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 5
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 5
- 108091070501 miRNA Proteins 0.000 description 5
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 5
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 5
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 description 5
- 125000000561 purinyl group Chemical group N1=C(N=C2N=CNC2=C1)* 0.000 description 5
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 5
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 5
- 229940035893 uracil Drugs 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 229960002173 citrulline Drugs 0.000 description 4
- 210000000172 cytosol Anatomy 0.000 description 4
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 4
- 230000037433 frameshift Effects 0.000 description 4
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 210000004165 myocardium Anatomy 0.000 description 4
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 4
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 4
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 4
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 4
- ALBODLTZUXKBGZ-JUUVMNCLSA-N (2s)-2-amino-3-phenylpropanoic acid;(2s)-2,6-diaminohexanoic acid Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O.OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 ALBODLTZUXKBGZ-JUUVMNCLSA-N 0.000 description 3
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108091005508 Acid proteases Proteins 0.000 description 3
- 101710159080 Aconitate hydratase A Proteins 0.000 description 3
- 101710159078 Aconitate hydratase B Proteins 0.000 description 3
- 101000898643 Candida albicans Vacuolar aspartic protease Proteins 0.000 description 3
- 101000898783 Candida tropicalis Candidapepsin Proteins 0.000 description 3
- 101000898784 Cryphonectria parasitica Endothiapepsin Proteins 0.000 description 3
- 102000005927 Cysteine Proteases Human genes 0.000 description 3
- 108010005843 Cysteine Proteases Proteins 0.000 description 3
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010013801 Duchenne Muscular Dystrophy Diseases 0.000 description 3
- 102000044126 RNA-Binding Proteins Human genes 0.000 description 3
- 101710105008 RNA-binding protein Proteins 0.000 description 3
- 101000933133 Rhizopus niveus Rhizopuspepsin-1 Proteins 0.000 description 3
- 101000910082 Rhizopus niveus Rhizopuspepsin-2 Proteins 0.000 description 3
- 101000910079 Rhizopus niveus Rhizopuspepsin-3 Proteins 0.000 description 3
- 101000910086 Rhizopus niveus Rhizopuspepsin-4 Proteins 0.000 description 3
- 101000910088 Rhizopus niveus Rhizopuspepsin-5 Proteins 0.000 description 3
- 101000898773 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) Saccharopepsin Proteins 0.000 description 3
- 102000012479 Serine Proteases Human genes 0.000 description 3
- 108010022999 Serine Proteases Proteins 0.000 description 3
- 102000035100 Threonine proteases Human genes 0.000 description 3
- 108091005501 Threonine proteases Proteins 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 3
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 3
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 3
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 3
- 238000013461 design Methods 0.000 description 3
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 3
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 3
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 210000002027 skeletal muscle Anatomy 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010069091 Dystrophin Proteins 0.000 description 2
- 102000001039 Dystrophin Human genes 0.000 description 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- 101800005149 Peptide B Proteins 0.000 description 2
- 108091093037 Peptide nucleic acid Proteins 0.000 description 2
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 108091046869 Telomeric non-coding RNA Proteins 0.000 description 2
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 2
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 2
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 2
- RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N anisole Chemical compound COC1=CC=CC=C1 RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- 210000004413 cardiac myocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 2
- 125000000753 cycloalkyl group Chemical group 0.000 description 2
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 2
- 239000012055 enteric layer Substances 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 231100000221 frame shift mutation induction Toxicity 0.000 description 2
- BXWNKGSJHAJOGX-UHFFFAOYSA-N hexadecan-1-ol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCO BXWNKGSJHAJOGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 231100000171 higher toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 230000002132 lysosomal effect Effects 0.000 description 2
- 210000003712 lysosome Anatomy 0.000 description 2
- 230000001868 lysosomic effect Effects 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 2
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 2
- 238000002663 nebulization Methods 0.000 description 2
- 239000000863 peptide conjugate Substances 0.000 description 2
- 229940124531 pharmaceutical excipient Drugs 0.000 description 2
- 150000008298 phosphoramidates Chemical class 0.000 description 2
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 210000002363 skeletal muscle cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 239000008247 solid mixture Substances 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 2
- ASJSAQIRZKANQN-CRCLSJGQSA-N 2-deoxy-D-ribose Chemical group OC[C@@H](O)[C@@H](O)CC=O ASJSAQIRZKANQN-CRCLSJGQSA-N 0.000 description 1
- 125000004200 2-methoxyethyl group Chemical group [H]C([H])([H])OC([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 244000215068 Acacia senegal Species 0.000 description 1
- 239000004925 Acrylic resin Substances 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- 241000416162 Astragalus gummifer Species 0.000 description 1
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 229920000084 Gum arabic Polymers 0.000 description 1
- 108091027305 Heteroduplex Proteins 0.000 description 1
- 101001053946 Homo sapiens Dystrophin Proteins 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- RHGKLRLOHDJJDR-BYPYZUCNSA-N L-citrulline Chemical group NC(=O)NCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O RHGKLRLOHDJJDR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 229920000168 Microcrystalline cellulose Polymers 0.000 description 1
- YNAVUWVOSKDBBP-UHFFFAOYSA-N Morpholine Chemical group C1COCCN1 YNAVUWVOSKDBBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 206010068871 Myotonic dystrophy Diseases 0.000 description 1
- RHGKLRLOHDJJDR-UHFFFAOYSA-N Ndelta-carbamoyl-DL-ornithine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=O RHGKLRLOHDJJDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010067482 No adverse event Diseases 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Chemical group 0.000 description 1
- 235000019483 Peanut oil Nutrition 0.000 description 1
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 1
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N Pyrimidine Chemical compound C1=CN=CN=C1 CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- 229920001800 Shellac Polymers 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229920001615 Tragacanth Polymers 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000205 acacia gum Substances 0.000 description 1
- 235000010489 acacia gum Nutrition 0.000 description 1
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 1
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 229940081735 acetylcellulose Drugs 0.000 description 1
- 150000001252 acrylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000011149 active material Substances 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 238000012443 analytical study Methods 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 239000003125 aqueous solvent Substances 0.000 description 1
- 150000001510 aspartic acids Chemical class 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 239000003124 biologic agent Substances 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 239000000378 calcium silicate Substances 0.000 description 1
- 229910052918 calcium silicate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960003340 calcium silicate Drugs 0.000 description 1
- 235000012241 calcium silicate Nutrition 0.000 description 1
- OYACROKNLOSFPA-UHFFFAOYSA-N calcium;dioxido(oxo)silane Chemical compound [Ca+2].[O-][Si]([O-])=O OYACROKNLOSFPA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 229920002301 cellulose acetate Polymers 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 229960000541 cetyl alcohol Drugs 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 235000013477 citrulline Nutrition 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 239000003240 coconut oil Substances 0.000 description 1
- 235000019864 coconut oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000002285 corn oil Substances 0.000 description 1
- 235000005687 corn oil Nutrition 0.000 description 1
- 235000012343 cottonseed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000002385 cottonseed oil Substances 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 229940124447 delivery agent Drugs 0.000 description 1
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 1
- 238000003795 desorption Methods 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 210000001198 duodenum Anatomy 0.000 description 1
- 239000008157 edible vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 230000001804 emulsifying effect Effects 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 239000002702 enteric coating Substances 0.000 description 1
- 239000012054 flavored emulsion Substances 0.000 description 1
- 235000020375 flavoured syrup Nutrition 0.000 description 1
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 229940014259 gelatin Drugs 0.000 description 1
- 239000007903 gelatin capsule Substances 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000404 glutamine group Chemical group N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 1
- 229960004198 guanidine Drugs 0.000 description 1
- PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N guanidinium chloride Chemical compound [Cl-].NC(N)=[NH2+] PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008240 homogeneous mixture Substances 0.000 description 1
- 239000011261 inert gas Substances 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 1
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 1
- 239000011344 liquid material Substances 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 239000007937 lozenge Substances 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 230000013011 mating Effects 0.000 description 1
- 238000001840 matrix-assisted laser desorption--ionisation time-of-flight mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 231100000682 maximum tolerated dose Toxicity 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 description 1
- UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N methoxybenzene Substances CCCCOC=C UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 1
- 125000000325 methylidene group Chemical group [H]C([H])=* 0.000 description 1
- 235000019813 microcrystalline cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008108 microcrystalline cellulose Substances 0.000 description 1
- 229940016286 microcrystalline cellulose Drugs 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 1
- 210000003470 mitochondria Anatomy 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 231100000989 no adverse effect Toxicity 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 239000000312 peanut oil Substances 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 108010082406 peptide permease Proteins 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Chemical group 0.000 description 1
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 150000003141 primary amines Chemical class 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- LZFIOSVZIQOVFW-UHFFFAOYSA-N propyl 2-hydroxybenzoate Chemical class CCCOC(=O)C1=CC=CC=C1O LZFIOSVZIQOVFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003212 purines Chemical class 0.000 description 1
- VMXUWOKSQNHOCA-UKTHLTGXSA-N ranitidine Chemical compound [O-][N+](=O)\C=C(/NC)NCCSCC1=CC=C(CN(C)C)O1 VMXUWOKSQNHOCA-UKTHLTGXSA-N 0.000 description 1
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000011894 semi-preparative HPLC Methods 0.000 description 1
- 239000012056 semi-solid material Substances 0.000 description 1
- 150000003355 serines Chemical class 0.000 description 1
- 239000004208 shellac Substances 0.000 description 1
- 229940113147 shellac Drugs 0.000 description 1
- ZLGIYFNHBLSMPS-ATJNOEHPSA-N shellac Chemical compound OCCCCCC(O)C(O)CCCCCCCC(O)=O.C1C23[C@H](C(O)=O)CCC2[C@](C)(CO)[C@@H]1C(C(O)=O)=C[C@@H]3O ZLGIYFNHBLSMPS-ATJNOEHPSA-N 0.000 description 1
- 235000013874 shellac Nutrition 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000011343 solid material Substances 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 235000010356 sorbitol Nutrition 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 1
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 1
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000012222 talc Nutrition 0.000 description 1
- 125000005931 tert-butyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(OC(*)=O)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 150000003588 threonines Chemical class 0.000 description 1
- 238000001269 time-of-flight mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000196 tragacanth Substances 0.000 description 1
- 235000010487 tragacanth Nutrition 0.000 description 1
- 229940116362 tragacanth Drugs 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 125000002221 trityl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1C([*])(C1=C(C(=C(C(=C1[H])[H])[H])[H])[H])C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 238000009827 uniform distribution Methods 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 125000002987 valine group Chemical group [H]N([H])C([H])(C(*)=O)C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 235000012431 wafers Nutrition 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
- A61K31/712—Nucleic acids or oligonucleotides having modified sugars, i.e. other than ribose or 2'-deoxyribose
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
- A61K47/549—Sugars, nucleosides, nucleotides or nucleic acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
- A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K19/00—Hybrid peptides, i.e. peptides covalently bound to nucleic acids, or non-covalently bound protein-protein complexes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/111—General methods applicable to biologically active non-coding nucleic acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/11—Antisense
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
- C12N2310/314—Phosphoramidates
- C12N2310/3145—Phosphoramidates with the nitrogen in 3' or 5'-position
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
- C12N2310/323—Chemical structure of the sugar modified ring structure
- C12N2310/3233—Morpholino-type ring
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/35—Nature of the modification
- C12N2310/351—Conjugate
- C12N2310/3513—Protein; Peptide
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2320/00—Applications; Uses
- C12N2320/30—Special therapeutic applications
- C12N2320/32—Special delivery means, e.g. tissue-specific
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к пригодному в медицине конъюгату, выбранному из: Ac-(RXRRBR)2XFKE(PMO)G(PMO), Ac-(RXRRBR)2XFD(d-Glu)(PMO)E(PMO)G(PMO), Ac-E(PMO)(RXRRBR)2XFKG(PMO), Ac-E(PMO)(RXRRBR)2XFKE(PMO)G(PMO), Ac-E(PMO)(RXRRBR)2XFK(d-Glu)(PMO)E(PMO)G(PMO), Ac-(d-Glu)(PMO)E(PMO)(RXRRBR)2XFKG, Ac-(dGlu)(PMO)E(PMO)(RXRRBR)2XFKG(PMO), Ac-(RXRRBR)2XE(PMO)G(PMO), Ac-(d-Glu)(PMO)E(PMO)(RXRRBR)2XFKE(PMO)G(PMO), Ac-(d-Glu)(PMO)E(PMO)(RXRRBR)2XFK(d-Glu)(PMO)E(PMO)G(PMO) и Ac-(RXRRBR)2XE(PMO)G(PMO), Ac-(RXRRBR)2XFKE(PMO)G(PMO), Ac-E(PMO)(RXRRBR)2XFKE(PMO)G(PMO), где Ac - ацетил, R - D-аргинин, X - 6-аминогексановая кислота, B - β-аланин, E - глутаминовая кислота, G - глицин, d-Glu - D-глутаминовая кислота, D - аспарагиновая кислота, K - лизин, F - фенилаланин, PMO - олигонуклеотид из 15-30 субъединиц формулы:,где B выбран из C, G, A или T, последовательность PMO выбрана из SEQ ID NO: 85. Предложены новые конъюгаты, эффективные для модулирования экспрессии гена. 2 н. и 5 з.п. ф-лы, 3 ил., 4 табл., 1 пр.
Description
ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННУЮ ЗАЯВКУ
[001] Настоящая заявка испрашивает приоритет предварительной заявки на патент США № 62/002 296, поданной 23 мая 2014 года, которая включена в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Область техники, к которой относится данное изобретение
[002] Настоящее раскрытие относится к антисмысловым олигонуклеотидам (AON), таким как, но не ограничиваясь ими, фосфородиамидатные морфолиновые олигонуклеотиды (PMO). Настоящее изобретение далее относится к конъюгированию множественных PMO с катионными проникающими в клетку пептидами (СРР) с целью стимулирования всасывания РМО интересующими тканями, такими как клетки скелетных и сердечной мышц. Настоящее раскрытие охватывает такие конъюгаты, а также способы их применения, включая, например, их применение для модуляции экспрессии генов. Настоящее раскрытие дополнительно включает способы лечения различных патологических состояний путем введения человеку или животному, нуждающемуся в этом, указанных множественных конъюгатов PMO-CPP.
Краткое описание изобретения
[003] Было показано, что AON успешно модулируют экспрессию генов как in vitro, так и in vivo, при различных патологических состояниях, включая, например, мышечную дистрофию Дюшенна (МДД). В частности, PMO предназначены для выявления и удаления экзона 23 внутри рамки, и под их действием была успешно восстановлена функция дистрофина в мышиной mdx модели МДД.
[004] Однако было показано, что AON характеризуются плохим профилем всасывания в клетках скелетных и сердечной мышц, что затрудняет их способность воздействовать на транскрипцию и трансляцию мРНК (WO 2009/147368). В частности, PMO, 2-O-метил олигонуклеотиды и пептидные нуклеиновые кислоты (PNA) не накапливаются в заметном количестве в скелетных мышцах и их всасывание сердечной мышцей незначительно.
[005] Проникающие в клетку пептиды (СРР) были открыты в конце 1980-х. [Frankel and Pabo Cell 1988; Green and Loewenstein Cell 1988] Эти соединения помогают транспорту различных частиц сквозь клеточные мембраны, которые в противном случае с трудом самостоятельно проникают сквозь клеточную мембрану. Примерно через 20 лет после открытия СРР в нескольких исследованиях было показано, что СРР под названием "К" (RXRRXRRXRRXRXB, SEQ ID NO.: 43) и "B" (RXRRBRRXRRBRXB, SEQ ID NO.: 44), связанные с одиночным PMO, предназначенным пропускать экзон 23 (PMO23) на мРНК, кодирующей дистрофин, в значительной степени усилили пропуск экзона в скелетных и сердечной мышцах в случае применения в мышиной mdx модели. [Jearawiriyapaisarn et al Mol Therapy 2008] Результаты этих исследований показали, что одиночный конъюгат PMO-CPP продемонстрировал пропуск экзона 23 >85% в скелетных мышцах, в то время как PMO соединение только само по себе приводит к пропуску экзона <15%. Умеренный эффект наблюдали также и в сердечной мышце (~60%) по сравнению с PMO самим по себе, который не влияет на пропуск экзона 23 в сердечной мышце. [Цитируемый лит. источник].
[006] WO 2009/144481 относится к конструкции, включающей в себя пептид клеточной доставки в комплексе с биологически активным соединением, таким как AON, включая, например, РМО. WO 2004/097017 (US 2004/0265879 и US 2009/0082547) относятся к способу стимулирования доставки молекул, включая раскрытие конъюгата биологичекого агента, такого как PMO, и пептидного переносчика. В WO 2009/147368 раскрыты новые СРР, которые могут быть конъюгированы, например, с PNA и PMO. В US 2010/0130591 раскрыты PMO, которые способны связываться с выбранным целевым сайтом в гене человеческого дистрофина, который может быть конъюгирован с CPP.
[007] Несмотря на улучшенную эффективность, наблюдаемую у одиночных PMO-CPP конъюгатов, конъюгаты обладают повышенной токсичностью по сравнению с РМО самими по себе. [ссылка] Например, в исследованиях пропуска экзона 23 на мышиной mdx модели с использованием CPP-PMO23B или CPP-PMO23K было показано, что максимальная переносимая доза составляет 30 мг/кг. При 60 мг/кг мыши теряли вес, а дозы в размере 150 мг/кг были смертельными. [Amantana et al Bioconjugate Chem 2007] В отличие от этого, сам по себе PMO23 можно вводить в количествах вплоть до 250 мг/кг без какого-либо заметного токсического эффекта [цитируемый лит. источник]. В WO 2009/005793 раскрывается, что CPP с менее чем четырьмя остатками X (6-аминогексановая кислота), включая CPP "B", продемонстрировали более низкую токсичность, чем ранее выявленные CPP. Как показано выше, однако, если эти СРР присоединены к одиночному РМО, то они по-прежнему проявляют неприемлемый уровень токсичности по сравнению РМО самими по себе [цитируемый лит. источник и Moulton and Moulton Biochemica et Biophysica Acta 2010].
[008] В соответствии с этим первостепенной целью настоящего раскрытия является преодоление проблем, связанных с плохим всасыванием РМО самих по себе и повышенной токсичностью, присущей одиночным PMO-CPP конструкциям. Множественные сайты конъюгирования на СРР получают введением глутаминовой кислоты в D- или L-энантиомерное положение для снижения пространственной затрудненности множественных РМО вблизи концов СРР. Применение сайта пептидазного расщепления с аминокислотами фенилаланин-лизин в положениях P1, - P1 вводят между СРР и РМО. Расщепление сайта пептидазного расщепления отсоединяет РМО от СРР. Например, СРР может быть присоединен к РМО через малеимидный этерифицированный линкер с сайтом ферментативного расщепления фенилаланин-лизин или валин-цитруллин, которые можно вводить в положение цистеина. СРР можно также присоединять, используя амидную связь.
[009] Интернализация клеткой с использованием пептида может приводить к тому, что внутриклеточная протеаза, включая лизосомальный фермент, расщепляет сайт расщепления и высвобождаемый PMO будет менее пространственно затруднен вследствие конъюгирования пептидной связи. Эта меньшая пространственная затрудненность может повысить эффективность пропуска экзона при меньшей токсичности в отношении ядра и цитозоли.
[010] По меньшей мере в одном аспекте это достигается благодаря открытию множественных PMO-CPP конъюгатов, как описано здесь далее. Настоящее раскрытие также рассматривает способ повышения коэффициента безопасности одиночного конъюгата PMO-CPP путем замещения конъюгатов согласно настоящему раскрытию. Настоящее раскрытие дополнительно включает способы модуляции экспрессии генов, как те, которые кодируют гликогенсинтазу (GYS1 или GYS2), трансформирующий фактор роста (TGFβ), матриксную металлопептидазу (MMP2 или MMP9), остеопонтин, протеинкиназу миотонической дистрофии (DMPK), 2 член семейства Elav-подобных (также известный как триплетный CUG-повтор РНК-связывающего белка или CUGBP), двойной гомеобоксный 4 (DUX4) и/или (Frzl). Следующие гены: гликогенсинтаза (GYS1 or GYS2), трансформирующий фактор роста (TGFβ), матриксная металлопептидаза (MMP2 или MMP9), остеопонтин, протеинкиназа миотонической дистрофии (DMPK), 2 член семейства Elav-подобных (также известный как триплетный CUG-повтор РНК-связывающего белка или CUGBP), двойной гомеобоксный 4 (DUX4), и/или (Frzl) могут служить мишенью через посредство конъюгатов PMO-CPP настоящего изобретения с целью опосредования пропуска экзона для создания мутации со сдвигом рамки. Любая мутация со сдвигом рамки может приводить к функциональному уменьшению количества мРНК, которая является мишенью для последовательности AON. В объем настоящего раскрытия также включено применение множественных конъюгатов PMO-CPP с целью подавления микроРНК при различных патологических состояниях. В другом аспекте настоящее раскрытие включает способы лечения различных заболеваний и/или состояний, как те, которые связаны с генами и микроРНК, упомянутыми выше.
[011] Дополнительные цели и преимущества настоящего раскрытия будут изложены частично в описании, которое следует далее, и частично будут очевидны из описания или могут быть изучены посредством реализации на практике раскрываемых вариантов осуществления изобретения. Цели и преимущества настоящего раскрытия будут реализованы и достигнуты посредством элементов и комбинаций, особым образом указанных в прилагаемой формуле изобретения.
[012] Следует понимать, что как приведенное выше общее описание, так и последующее подробное описание являются только иллюстративными и пояснительными и не ограничивают заявленное изобретение.
[013] Прилагаемые графические материалы, которые включены в данное описание и составляют его часть, иллюстрируют один (несколько) вариант(ов) осуществления настоящего изобретения и, вместе с описанием, служат для объяснения принципов настоящего изобретения.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
[014] На Фигуре 1 представлена схема конфигураций множественных AON, присоединенных к одиночному СРР.
[015] На Фигуре 2 представлена схема различных антисмысловых олигонуклеотидных субъединиц, которые могут подвергаться олигомеризации и использоваться в конфигурации множественных AON данного изобретения.
[016] На Фигуре 3 показано воздействие некоторых конъюгатов CPP-PMO на пропуск экзона 23 у мышей дикого типа.
ОПИСАНИЕ ВАРИАНТОВ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[017] Как отмечалось ранее, одной целью настоящего раскрытия является улучшение профиля безопасности одиночных конъюгатов CPP-PMO без ухудшения всасывания конъюгатов целевыми клетками. В общем случае предпочтительно иметь по меньшей мере 10-кратный запас безопасности между эффективной дозой и уровнем, при котором не наблюдается вредное воздействие (УННВВ). В экспериментах mdx/экзон 23, описанных выше, было найдено, что эффективная доза составляет 30 мг/кг, и УННВВ также был равен 30 мг/кг. Поэтому запаса безопасности либо не существовало, либо он был незначительным. По меньшей мере в одном варианте осуществления настоящего раскрытия множественный конъюгат PMO-CPP имеет запас безопасности лучше, чем в экспериментах mdx/экзон 23, описанных выше, как, например, лучше чем 2-кратный, как, например, лучше чем 5-кратный, как, например, лучше чем 6-кратный, как, например, лучше чем 10-кратный. 10-кратный запас безопасности означает, что эффективная доза в 10 раз ниже, чем УННВВ. Так, при испытании в подходящей модели, множественные конъюгаты PMO-CPP согласно настоящему раскрытию могут иметь запас безопасности не менее чем в 2 раза лучше, чем соответственный одиночный конъюгат PMO-CPP. Настоящее изобретение включает в себя множественный AON, включая PMO AON, присоединенный к одиночному CPP.
[018] В по меньшей мере одном варианте осуществления настоящего раскрытия множественный конъюгат AON-СРР дополнительно содержит расщепляемый линкер. В некоторых вариантах осуществления линкер представляет собой последовательность, содержащую расщепляемый фрагмент. В некоторых вариантах осуществления расщепляемый фрагмент может расщепляться любым гидролитическим ферментом. В некоторых вариантах осуществления расщепляемый фрагмент может расщепляться пептидазой или протеазой, такими как катепсин или трипсин. В некоторых вариантах осуществления линкер может предназначаться для включения расщепляемого фрагмента, распознаваемого определенной сериновой протеазой, треониновой протеазой, цистеиновой протеазой, аспартат-протеазой, протеазой глутаминовой кислоты или металлопротеазой, или группой из более чем одной пептидазы. В некоторых вариантах осуществления линкер может включать в себя два или более расщепляемых фрагмента, которые перекрываются или не перекрываются между собой. В некоторых вариантах осуществления линкер может не содержать расщепляемый фрагмент. В некоторых вариантах осуществления линкер может быть сконструирован так, что расщепляется менее чем 100%, менее чем 75%, менее чем 50%, или менее чем 10% линкеров. В некоторых вариантах осуществления линкер сконструирован так, что расщепляется более чем 90% или 99% линкеров.
[019] По меньшей мере в одном варианте осуществления настоящего раскрытия множественный конъюгат AON-CPP дополнительно включает в себя расщепляемый линкер, такой как FK, в положении P1/P1' или в другом варианте осуществления - FX в положении P1/P1', где X представляет собой любую встречающуюся в природе аминокислоту. Расщепляемый линкер, где указанный линкер расщепляется таким гидролитическим ферментом, как, например, катепсин, может находиться между AON и CPP, или он может находиться в последовательности, такой как AON-расщепляемый линкер-AON-расщепляемый линкер-CPP. В другом варианте осуществления множественный конъюгат РМО-CPP дополнительно включает в себя расщепляемый линкер, такой как катепсин или FK, в положении P1/P1' или в другом варианте осуществления - FX в положении P1/P1', где X представляет собой любую встречающуюся в природе аминокислоту. Расщепляемый линкер может находиться между PMO и CPP, или он может находиться в такой последовательности, как PMO-расщепляемый линкер-PMO-расщепляемый линкер-CPP, например, как PMO-катепсиновый линкер-PMO-катепсиновый линкер-CPP. Настоящее раскрытие не ограничивает порядок расположения AON (включая PMO), расщепляемых линкеров и CPP, и специалист в данной области техники сможет сконструировать подходящий множественный конъюгат AON-CPP, содержащий не менее одного расщепляемого катепсином сайта согласно формуле изобретения, используя раскрываемую здесь информацию.
[020] Неожиданно было обнаружено, что множественные конъюгаты PMO-CPP с сайтами расщепляемого линкера согласно данному раскрытию в некоторых случаях демонстрируют даже еще большую эффективность, чем множественные конъюгаты PMO-CPP без них. Этот результат был неожиданным, поскольку ранее было показано, что одиночные конъюгаты РМО-СРР всасываются в лизосому и могут остаться там, если пептидный фрагмент разлагается слишком быстро. Другими словами, если СРР часть одиночного конъюгата РМО-СРР быстро разлагается, РМО "застревает" в лизосоме и не может достигнуть своей клеточной цели, тем самым снижая эффективность. (Youngblood et al. 2007) Можно было бы ожидать, что в результате данного явления введение сайта расщепляемого линкера в конъюгат будет способствовать разложению CPP, приводя к снижению эффективности. Оказалось, однако, что это не так в случае определенных множественных конъюгатов PMO-CPР, содержащих сайты расщепляемого линкера согласно данному изобретению, как будет описано ниже на конкретных примерах. Так, в по меньшей мере одном варианте осуществления настоящего раскрытия множественный конъюгат РМО-СРР содержит не менее одного сайта расщепляемого линкера. В по меньшей мере одном другом варианте осуществления настоящего раскрытия множественный конъюгат РМО-СРР содержит не менее одного сайта расщепляемого катепсином линкера.
[021] Настоящее раскрытие дополнительно включает способы модуляции экспрессии генов, как те, которые кодируют гликогенсинтазу (GYS1 или GYS2), трансформирующий фактор роста (TGFβ), матриксную металлопептидазу (MMP2 или MMP9), остеопонтин, протеинкиназу миотонической дистрофии (DMPK), 2 член семейства Elav-подобных (также известный как триплетный CUG-повтор РНК-связывающего белка или CUGBP), двойной гомеобоксный 4 (DUX4), и/или (Frzl), где множественные конъюгаты AON-CPP настоящего изобретения предназначены опосредовать пропуск экзона для создания мутации со сдвигом рамки. Любая мутация со сдвигом рамки может приводить к нокдауну целевой мРНК. В объем настоящего раскрытия также включено применение множественных конъюгатов PMO-CPP с целью подавления микроРНК при различных патологических состояниях. По меньшей мере в одном варианте осуществления настоящее раскрытие включает способы лечения различных заболеваний и/или состояний, как те, которые связаны с генами и микроРНК, упомянутыми выше. Множественные конъюгаты CPP-PMO настоящего раскрытия можно вводить нуждающемуся в этом человеку или животному любыми подходящими способами. Тип введения субъекту человеку или животному можно выбирать из парентерального, внутримышечного, внутримозгового, внутрисосудистого, подкожного или чрескожного введения. По меньшей мере в одном варианте осуществления путь введения осуществляют путем инъекции, такой как внутривенная или внутримышечная. Лечащий врач должен быть в состоянии определить подходящий путь введения.
[022] При использовании в качестве фармацевтических средств раскрываемые здесь антисмысловые олигонуклеотиды множественных конъюгатов СРР-РМО можно составлять в фармацевтические композиции вместе с фармацевтически приемлемыми вспомогательными веществами или носителями.
[023] При использовании в качестве фармацевтических средств антисмысловые олигонуклеотиды множественных конъюгатов СРР-РМО можно вводить в виде фармацевтических композиций. Эти соединения можно вводить различными путями, включая пероральный, ректальный, чрескожный, подкожный, внутривенный, внутримышечный и внутриносовой. Эти соединения эффективны как в композициях для инъекций, так и для перорального введения. Такие композиции готовят способами, хорошо известными в фармацевтике, и содержат не менее одного активного соединения.
[024] Данное изобретение также включает фармацевтические композиции, которые в качестве активного начала содержат один или несколько антисмысловых олигонуклеотидов множественных конъюгатов СРР-РМО в сочетании с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми вспомогательными веществами или носителями. При изготовлении композиций данного изобретения активное начало обычно смешивают со вспомогательным веществом или носителем, разбавляют вспомогательным веществом или носителем или заключают во вспомогательное вещество или носитель, которые могут быть в виде капсулы, пакетика, бумаги или другого контейнера. Если вспомогательное вещество или носитель выполняют роль разбавителя, он может быть твердым, полутвердым или жидким материалом, который выполняет роль доставляющего вещества, носителя или среды для активного начала. Так композиции могут быть в виде таблеток, пилюль, порошков, лепешек, пакетиков, облаток, эликсиров, суспензий, эмульсий, растворов, сиропов, аэрозолей (в качестве твердой или жидкой среды), мазей, содержащих, например, массовую долю активного соединения вплоть до 10%, мягких и жестких желатиновых капсюль, суппозиториев, стерильных растворов для инъекций и упакованных стерильных порошков.
[025] При приготовлении составов может возникнуть необходимость в измельчении активного соединения для получения частиц подходящего размера перед объединением с другими ингредиентами. Если активное соединение практически нерастворимо, его обычно измельчают до частиц с размером менее 200 меш. Если активное соединение хорошо растворяется в воде, то размер частиц обычно изменяют при измельчении так, чтобы получить по существу равномерное распределение в составе, например, примерно 40 меш.
[026] Некоторые примеры пригодных вспомогательных веществ или носителей включают лактозу, декстрозу, сахарозу, сорбит, маннит, крахмалы, аравийскую камедь, фосфат кальция, альгинаты, трагакант, желатин, силикат кальция, микрокристаллическую целлюлозу, поливинилпирролидон, целлюлозу, стерильную воду, сироп и метилцеллюлозу. Составы могут дополнительно включать: смазывающие агенты, такие как тальк, стеарат магния или минеральное масло; смачивающие агенты; эмульгирующие и суспендирующие агенты; консерванты, такие как метил- и пропилгидроксибензоаты; подсластители; и вкусовые добавки. Композиции изобретения можно составлять так, чтобы обеспечивать быстрое, равномерное или замедленное высвобождение активного начала после введения пациенту с использованием процедур, известных в области техники.
[027] Композиции предпочтительно составляют в форме стандартной дозы, причем каждая доза содержит от примерно 5 мг до примерно 100 мг или более, как, например, любое количество от примерно 5 мг до примерно 10 мг, от примерно 5 мг до примерно 20 мг, от примерно 5 мг до примерно 30 мг, от примерно 5 мг до примерно 40 мг, от примерно 5 мг до примерно 50 мг, от примерно 5 мг до примерно 60 мг, от примерно 5 мг до примерно 70 мг, от примерно 5 мг до примерно 80 мг или от примерно 5 мг до примерно 90 мг, включительно, включая любые количества в пределах этих значений, активного начала. Термин "формы стандартной дозы" относится к физическим отдельным единицам, пригодным в качестве разовых доз для индивидуальных лиц, при этом каждая единица содержит предварительно определенное количество активного материала, рассчитанное для оказания желаемого терапевтического эффекта, в сочетании с пригодным фармацевтическим вспомогательным веществом или носителем.
[028] Антисмысловые олигонуклеотиды множественных конъюгатов СРР-РМО эффективны в широком интервале дозировок и их обычно вводят в терапевтически эффективных количествах. Однако, следует понимать, что количество фактически вводимых антисмысловых олигонуклеотидов множественных конъюгатов СРР-РМО будет определяться лечащим врачом в применении к соответствующим обстоятельствам, включая состояние, подлежащее лечению, выбранный путь введения, конкретное вводимое соединение, возраст, вес и реакцию конкретного пациента, тяжесть симптомов у пациента и т.п.
[029] Для приготовления твердых композиций, таких как таблетки, главное активное начало/антисмысловой олигонуклеотид множественных конъюгатов СРР-РМО смешивают с фармацевтическим вспомогательным веществом или носителем с образованием твердой предварительной композиции, содержащей гомогенную смесь соединения настоящего изобретения. Если такие предварительные композиции упоминаются как гомогенные, то это означает, что активное начало равномерно диспергировано по всей композиции так, что композицию можно легко поделить на такие одинаково эффективные стандартные дозы, как таблетки, пилюли или капсюли.
[030] На таблетки или пилюли настоящего изобретения можно наносить покрытие или они могут быть составлены другим образом, чтобы создавать форму дозирования, предоставляющую преимущество пролонгированного действия. Например, таблетка или пилюля может содержать внутренний компонент дозы и внешний компонент дозы, причем последнее в виде оболочки, окружающей первое. Два компонента можно разделять энтеросолюбильным слоем, который препятствует разрушению в желудке и позволяет внутреннему компоненту проследовать в неразрушенном виде в двенадцатиперстную кишку или замедлить высвобождение. Для таких энтеросолюбильных слоев или покрытий можно использовать различные материалы, такие материалы включают ряд полимерных кислот и смесей полимерных кислот с такими материалами, как шеллак, цетиловый спирт и ацетат целлюлозы.
[031] Жидкие формы, в которые можно включать новые композиции настоящего изобретения для перорального введения или инъекций включают водные растворы, сиропы с подходящим вкусом, водные или масляные суспензии и ароматизированные эмульсии с такими съедобными маслами, как кукурузное масло, хлопковое масло, тахинное масло, кокосовое масло или арахисовое масло, а также формы в виде эликсиров и сходных с ними фармацевтических веществ для доставки.
[032] Композиции для ингаляции или инсуфляции включают растворы и суспензии в фармацевтически приемлемых водных или органических растворителях или их смесях и порошках. Жидкие или твердые композиции могут содержать подходящие фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества, описанные выше. Композиции можно вводить пероральным или назальным респираторным путем для местного или системного действия. Композиции в фармацевтически приемлемых растворителях можно распылять с применением инертных газов. Распыляемые растворы можно вдыхать непосредственно из распыляющего устройства или распыляющее устройство может быть присоединено к закрывающей лицо маске или к аппарату перемежающейся вентиляции легких с положительным давлением. Растворные, суспензионные или порошковые композиции также можно вводить перорально или назально из устройств, доставляющих состав соответствующим образом.
[033] Дневная доза вводимых множественных конъюгатов CPP-AON, включая CPP-PMO, согласно настоящему раскрытию может составлять от 1- 200__ мг/кг, например, от 10_-50 мг/кг. Конъюгат CPP-AON, включая CPP-PMO, можно вводить в болюсной форме или в продолжение длительного периода инъекции. Например, дневную дозу можно вводить одной болюсной дозой. Альтернативно, дневную дозу можно вводить инъекционно, например, внутривенно, или подкожно. В другом варианте осуществления дневную дозу можно делить на несколько введений, например, два раза, три раза или четыре раза в день. Дозирование можно повторять ежедневно по мере необходимости, как определено лечащим врачом. Лечение может быть кратковременным, например, короче 6 месяцев. В другом варианте осуществления лечение может быть долговременным, например, дольше 6 месяцев, например, дольше 1 года, например, дольше 10 лет, например, в продолжение жизни человека или животного, нуждающегося в лечении.
[034] Множественный конъюгат AON, включая PMO-CPP конъюгаты настоящего раскрытия, специфически гибридизируются с одним или несколькими пре-мРНК, мРНК, и/или микроРНК, или длинными некодирующими РНК, транскрибированными из целевого гена или локуса. В данном контексте множественный конъюгат PMO-CPP специфично гибридизируется с целевым полинуклеотидом, таким как пре-мРНК или мРНК, когда множественный конъюгат PMO-CPP гибридизируется с целью в физиологических условиях. В контексте настоящего раскрытия гибридизация происходит по водородной связи, которая может быть водородной связью Уотсона-Крика, связью Хугстена или обратной водородной связью Хугстена между комплементарными пуриновым и пиримидиновым основаниями. Например, аденин (А) и тимин (Т) являются комплементарными нуклеотидными основаниями, которые спариваются вследствие образования водородных связей. Согласно настоящему раскрытию РМО часть множественного конъюгата PMO-CPP специфично гибридизируется с целевым нуклеотидом. CPP фрагмент может оставаться связанным с множественным конъюгатом PMO-CPP, или он может отщепляться перед гибридизацией, как, например, по расщепляемому катепсином сайту.
[035] РМО соединения настоящего раскрытия комплементарны целевому полинуклеотиду, такому как пре-мРНК, мРНК, и/или микроРНК, или длинной некодирующей РНК, если гибридизация происходит согласно обычно принятым правилам спаривания оснований, например, аденин (A)-тимин (T), цитозин (C)-гуанин (G), аденин (A)-урацил (U). В частности, "комплементарный" в данном контексте относится к способности к точному спариванию между двумя нуклеотидными основаниями. Например, если основание (В) в определенном положении РМО соединения способно образовывать водородную связь с нуклеотидом в том же положении пре-мРНК или мРНК молекулы, тогда считают, что РМО и молекула целевого полинуклеотида комплементарны друг другу в этом положении. PMO соединение и молекула целевого полинуклеотида комплементарны друг другу, если достаточное число соответствующих положений в каждой молекуле заняты основаниями, которые могут образовывать водородную связь друг с другом. Так, "специфически гибридизирующийся" и "комплементарно" являются терминами, используемыми для обозначения достаточной степени комплементарности или точного спаривания, т.е. происходит устойчивое и специфическое образование связей между РМО и полинуклеотидной мишенью. Абсолютная комплементарность, т.е. 100%-ное соответствие пар оснований, не требуется при условии, что гетеродуплекс, образующийся между молекулой целевого полинуклеотида и РМО, обладает требуемой стабильностью для оказания желаемого эффекта. Согласно настоящему раскрытию РМО способен специфически гибридизироваться, если связывание РМО соединения с молекулой целевого полинуклеотида изменяет нормальную функцию молекулы целевого полинуклеотида, и существует достаточная степень комплементарности, позволяющая избежать нежелательного неспецифического связывания РМО с нецелевой последовательностью в условиях, при которых должно происходить специфичное связывание, например, в физиологических условиях для применений in vivo, или в условиях, при которых проводят аналитические исследования для применений in vitro.
[036] Такая гибридизация между РМО и молекулой целевого полинуклеотида, такой как мРНК или пре-мРНК, мешает осуществлению их нормальных функций, таких как трансляция белка из мРНК и сплайсинг пре-мРНК с получением одного или более видов мРНК. В по меньшей мере одном варианте осуществления настоящего раскрытия гибридизация между РМО и пре-мРНК влияет на сплайсинг пре-мРНК для образования РНК. В другом варианте осуществления гибридизация влияет на трансляцию белка из мРНК. В другом варианте осуществления настоящего раскрытия гибридизация множественного конъюгата СРР-AON с сайтом связывания микроРНК на пре-мРНК или мРНК может высвобождать пре-мРНК-мишень или мРНК-мишень из-под последующего регулирования со стороны микроРНК. В этом случае эффект может заключаться в усилении экспрессии генного продукта, кодируемого пре-мРНК или мРНК. В противоположность этому, если множественные СРР-AON, например множественный СРР-РМО, должны служить мишенью для последовательностей в микроРНК таким образом, чтобы биологическая активность микроРНК нарушалась, то эффектом скорее всего будет усиленная экспрессия нескольких генных продуктов, подавляемых этой конкретной микроРНК.
[037] Общим эффектом от такого вмешательства в целевой полинуклеотид является выборочная модуляция экспрессии гена. В контексте настоящего раскрытия "модуляция" означает либо повышение (стимуляцию), либо снижение (подавление) экспрессии гена.
[038] AON согласно данному раскрытию включают РМО соединения, а также PNA соединения, фосфорамидатные соединения, метиленметилиминные ("MMI") соединения, 2-О-метиловые соединения и 2-метоксиэтиловые соединения, где олигонуклеотидная основа каждой из субъединиц приведена на Фигуре 1. Олигонуклеотидные соединения представляют собой синтетические аналоги природных нуклеиновых кислот. В частности, вместо колец деоксирибозы и фосфатных связей олигонуклеотидные соединения содержат субъединицы, состоящие из соответствующих олигонуклеотидных субъединиц, приведенных ниже:
[039] 
[040] 
[041] 
[042] 
[043] 
[044] 
[045] В случае каждой Формулы 1-VI, B представляет собой нуклеотидное основание. Главными нуклеотидными основаниями являются цитозин (ДНК и РНК), гуанин (ДНК и РНК), аденин (ДНК и РНК), тимин (ДНК) и урацил (РНК), сокращенно обозначаемые как C, G, A, T и U, соответственно. A, G, C и T присутствуют в ДНК, эти молекулы называют ДНК-основаниями; A, G, C и U называют РНК-основаниями. Урацил заменяет тимин в РНК. Эти два основания идентичны за исключением того, что в урациле отсутствует 5' метильная группа. Аденин и гуанин относятся к классу молекул с двумя циклами, называемыми пуринами (сокращенно обозначаемые как R). Цитозин, тимин и урацил - все являются пиримидинами (сокращенно обозначаемые как Y).
[046] РМО соединения содержат субъединицы, состоящие из морфолиновых циклов и фосфородиамидатных связывающих групп, соответственно. Например, настоящее раскрытие включает PMO соединение, состоящее из 15-30 субъединиц Формулы (II): 
где R представляет собой алкильную группу, и B представляет собой встречающееся в природе пуриновое или пиримидиновое нуклеотидное основание, выбранное из цитозина (C), гуанина (G), аденина (A) или тимина (T).
[047] PNA соединения содержат субъединицы, состоящие из субъединиц Формулы I. Настоящее раскрытие включает PNA соединение, состоящее из 15-30 субъединиц Формулы I:
[048] 
[049] где B представляет собой пуриновое или пиримидиновое нуклеотидное основание, выбранное из цитозина (C), гуанина (G), аденина (A) или тимина (T).
[050] Фосфорамидатные соединения содержат субъединицы, состоящие из субъединиц Формулы III. Настоящее раскрытие включает фосфорамидатное соединение, состоящее из 15-30 субъединиц Формулы III:
[051] 
[052] где B представляет собой пуриновое или пиримидиновое нуклеотидное основание, выбранное из цитозина (C), гуанина (G), аденина (A) или тимина (T).
[053] MMI соединения содержат субъединицы, состоящие из субъединиц Формулы IV. Например, настоящее раскрытие включает MMI соединение, состоящее из 15-30 субъединиц Формулы (IV):
[054]
[055] 
[056] где B представляет собой пуриновое или пиримидиновое нуклеотидное основание, выбранное из цитозина (C), гуанина (G), аденина (A) или тимина (T).
[057] 2-ОМе соединения содержат субъединицы, состоящие из Формулы V. Например, настоящее раскрытие включает 2-OМе соединение, состоящее из 15-30 субъединиц Формулы (V):
где B представляет собой пуриновое или пиримидиновое нуклеотидное основание, выбранное из цитозина (C), гуанина (G), аденина (A) или тимина (T).
[058] 2-МОЕ соединения содержат субъединицы, состоящие из Формулы VI. Например, настоящее раскрытие включает 2MOE соединение, состоящее из 15-30 субъединиц Формулы (VI):
[059]
[060] 
где B представляет собой пуриновое или пиримидиновое нуклеотидное основание, выбранное из цитозина (C), гуанина (G), аденина (A) или тимина (T).
[061] Данное выше описание каждого из классов AON может быть заменено в случаях, где в описании приведены AON-CPP, например, 2MOE-CPP, MMI-CPP, 2-OMe-CPP, PNA-CPP и форсфорамидат-CPP.
[062] По меньшей мере в одном варианте осуществления AON соединение содержит 15-25 субъединиц формулы (I), (II), (III), (IV), (V) или (VI). В другом варианте осуществления AON соединение содержит 20-25 субъединиц формулы (I), (II), (III), (IV), (V) или (VI). Еще в одном варианте осуществления AON соединение содержит около 25 субъединиц формулы (I), (II), (III), (IV), (V) или (VI), например, 24-26 субъединиц.
[063] Согласно данному раскрытию множественные конъюгаты PMO-CPP содержат менее 60% субъединиц PMO, если нуклеотидное основание (B) представляет собой C или G. По меньшей мере в одном варианте осуществления множественный конъюгат PMO-CPP содержит менее 50% субъединиц PMO, если нуклеотидное основание представляет собой C или G.
[064] Согласно данному раскрытию множественные конъюгаты AON-CPP содержат менее 60% субъединиц (формулы (I), (II), (III), (IV), (V) или (VI)) AON, если нуклеотидное основание (B) представляет собой C или G. По меньшей мере в одном варианте осуществления множественный конъюгат AON-CPP содержит менее 50% субъединиц AON, если нуклеотидное основание представляет собой C или G.
[065] Множественные конъюгаты PMO-CPP настоящего раскрытия содержат по меньшей мере два PMO соединения, имеющие 0-3 повторяющихся субъединиц, если нуклеотидное основание представляет собой G. По меньшей мере в одном варианте осуществления множественный конъюгат PMO-CPP содержит 0 повторяющихся субъединиц, если B представляет собой G. В другом варианте осуществления множественный конъюгат PMO-CPP содержит 1, 2 или 3 повторяющиеся субъединицы, если B представляет собой G. Сайты множественных конъюгирований CPP создают путем введения глутаминовой кислоты в D- или L- энантиомерное положение для снижения пространственной затрудненности множественных РМО вблизи концов CPP. Применение сайта пептидазного расщепления с аминокислотами фенилаланин-лизин в положениях P1, - P1 вводят между СРР и РМО. Расщепление сайта пептидазного расщепления отсоединяет РМО от СРР. Например, СРР может быть присоединен к РМО через малеимидный этерифицированный линкер с сайтом ферментативного расщепления фенилаланин-лизин или валин-цитруллин, которые можно вводить в положение цистеина. СРР можно присоединять, используя амидную связь.
[066] Множественные конъюгаты AON-CPP настоящего раскрытия содержат по меньшей мере два AON соединения, имеющие 0-3 повторяющихся субъединиц, если нуклеотидное основание представляет собой G. По меньшей мере в одном варианте осуществления множественный конъюгат AON-CPP содержит 0 повторяющихся субъединиц, если B представляет собой G. В другом варианте осуществления множественный конъюгат AON-CPP содержит 1, 2 или 3 повторяющиеся субъединицы, если B представляет собой G. Сайты множественных конъюгирований CPP создают путем введения глутаминовой кислоты в D- или L- энантиомерное положение для снижения пространственной затрудненности множественных AON вблизи концов CPP. Применение сайта пептидазного расщепления с аминокислотами фенилаланин-лизин в положениях P1, - P1 вводят между СРР и AON. Расщепление сайта пептидазного расщепления отсоединяет AON от СРР. Например, СРР может быть присоединен к AON через малеимидный этерифицированный линкер с сайтом ферментативного расщепления фенилаланин-лизин или валин-цитруллин, которые можно вводить в положение цистеина. СРР можно присоединять, используя амидную связь.
[067] Интернализация клеткой с использованием пептида может приводить к тому, что внутриклеточная протеаза, включая, например, лизосомальный фермент, расщепляет сайт расщепления и высвобождаемый PMO или AON будет менее пространственно затруднен вследствие конъюгирования пептидной связи. Эта меньшая пространственная затрудненность может повысить эффективность пропуска экзона при меньшей токсичности в отношении ядра и цитозоли.
[068] Согласно настоящему раскрытию CPP компонент множественного конъюгата PMO-CPP можно выбирать из известных CPP, таких как те, которые обозначены A-N и имеют последовательности, приведенные в Таблицах 1, 2, на Фигуре 1, или Серии K или серии B описанных здесь CPP.
[069] Согласно настоящему раскрытию CPP компонент множественного конъюгата AON-CPP можно выбирать из известных CPP, таких как те, которые обозначены A-N и имеют последовательности, приведенные в Таблицах 1, 2, на Фигуре 1, или Серии K или серии B описанных здесь CPP.
[070] По меньшей мере в одном варианте осуществления компонент СРР представляет собой пептид К: RXRRXRRXRRXRXB (SEQ ID NO: 43), где R представляет собой D-аргинин, X представляет собой 6-аминогексановую кислоту и B представляет собой β-аланин. В другом варианте осуществления компонент СРР представляет собой пептид В: RXRRBRRXRRBRXB (SEQ ID NO: 44), где R, X и B такие, как указано выше.
[071] Компонент CPP множественных конъюгатов PMO-CPP или AON-CPP настоящего раскрытия может также быть соединением, содержащим формулу изменяющаяся последовательность - спейсер - линкер, где изменяющаяся последовательность представляет собой Ac-R(O)nR, где n ≥ 7; где O представляет собой последовательность из остатков, выбранных из R, X и Z; где R представляет собой L-аргинин, X представляет собой 3-цис-аминоциклогексан, и Z представляет собой цис-2-аминоциклопентан-1-карбонил. В некоторых вариантах осуществления линкер представляет собой последовательность, содержащую расщепляемый фрагмент. В некоторых вариантах осуществления расщепляемый фрагмент может расщепляться любым гидролитическим ферментом. В некоторых вариантах осуществления расщепляемый фрагмент может расщепляться пептидазой или протеазой, такими как катепсин или трипсин. В некоторых вариантах осуществления линкер может предназначаться для включения расщепляемого фрагмента, распознаваемого определенной сериновой протеазой, треониновой протеазой, цистеиновой протеазой, аспартат-протеазой, протеазой глутаминовой кислоты или металлопротеазой, или группой из более чем одной пептидазы. В некоторых вариантах осуществления линкер может включать в себя два или более расщепляемых фрагмента, которые перекрываются или не перекрываются между собой. В некоторых вариантах осуществления линкер может не содержать расщепляемый фрагмент. В некоторых вариантах осуществления линкер может быть сконструирован так, что расщепляется менее чем 100%, менее чем 75%, менее чем 50%, или менее чем 10% линкеров. В некоторых вариантах осуществления линкер сконструирован так, что расщепляется более чем 90% или 99% линкеров.
[072] В некоторых вариантах осуществления СРР может быть соединением, содержащим формулу изменяющаяся последовательность - спейсер - линкер, где изменяющаяся последовательность представляет собой Ac-R(O)nR, где n ≥ 7; где O представляет собой последовательность из остатков, выбранных из R, X и Z; где R представляет собой L-аргинин, X представляет собой 3-цис-аминоциклогексан, и Z представляет собой цис-2-аминоциклопентан-1-карбонил; и где изменяющаяся последовательность содержит α-, β-, γ- или δ-аминокислоту или циклоалкановую структуру.
[073] В некоторых вариантах осуществления СРР может быть соединением, содержащим формулу изменяющаяся последовательность - спейсер - линкер, где изменяющаяся последовательность представляет собой Ac-R(O)nR, где n ≥ 7; где O представляет собой последовательность из остатков, выбранных из R, X и Z; где R представляет собой L-аргинин, X представляет собой 3-цис-аминоциклогексан, и Z представляет собой цис-2-аминоциклопентан-1-карбонил; и где изменяющаяся последовательность является тем, что направляет соединение на ядро.
[074] В некоторых вариантах осуществления СРР может быть соединением, содержащим формулу изменяющаяся последовательность - спейсер - линкер, где изменяющаяся последовательность представляет собой Ac-R(O)nR, где n ≥ 7; где O представляет собой последовательность из остатков, выбранных из R, X и Z; где R представляет собой L-аргинин, X представляет собой 3-цис-аминоциклогексан, и Z представляет собой цис-2-аминоциклопентан-1-карбонил; и где изменяющаяся последовательность является тем, что направляет соединение на цитозоль.
[075] В некоторых вариантах осуществления СРР может быть соединением, содержащим формулу изменяющаяся последовательность - спейсер - линкер, где изменяющаяся последовательность представляет собой Ac-R(O)nR, где n ≥ 7; где O представляет собой последовательность из остатков, выбранных из R, X и Z; где R представляет собой L-аргинин, X представляет собой 3-цис-аминоциклогексан, и Z представляет собой цис-2-аминоциклопентан-1-карбонил; и где изменяющаяся последовательность является тем, что направляет соединение на митохондрию.
[076] В некоторых вариантах осуществления СРР может быть соединением, содержащим формулу изменяющаяся последовательность - спейсер - линкер, где изменяющаяся последовательность представляет собой Ac-R(O)nR, где n ≥ 7; где O представляет собой последовательность из остатков, выбранных из R, X и Z; где R представляет собой L-аргинин, X представляет собой 3-цис-аминоциклогексан, и Z представляет собой цис-2-аминоциклопентан-1-карбонил; и где спейсер содержит аминогексановую кислоту (Ahx).
[077] В некоторых вариантах осуществления СРР может быть соединением, содержащим формулу изменяющаяся последовательность - спейсер - линкер, где изменяющаяся последовательность представляет собой Ac-R(O)nR, где n ≥ 7; где O представляет собой последовательность из остатков, выбранных из R, X и Z; где R представляет собой L-аргинин, X представляет собой 3-цис-аминоциклогексан, и Z представляет собой цис-2-аминоциклопентан-1-карбонил; и где спейсер содержит (Ahx)В, где В выбирают из β-аланина или β-глицина.
[078] В некоторых вариантах осуществления СРР может быть соединением, содержащим формулу изменяющаяся последовательность - спейсер - линкер, где изменяющаяся последовательность представляет собой Ac-R(O)nR, где n ≥ 7; где O представляет собой последовательность из остатков, выбранных из R, X и Z; где R представляет собой L-аргинин, X представляет собой 3-цис-аминоциклогексан, и Z представляет собой цис-2-аминоциклопентан-1-карбонил; и где линкер содержит расщепляемый фрагмент.
[079] В некоторых вариантах осуществления СРР может быть соединением, содержащим формулу изменяющаяся последовательность - спейсер - линкер, где изменяющаяся последовательность представляет собой Ac-R(O)nR, где n ≥ 7; где O представляет собой последовательность из остатков, выбранных из R, X и Z; где R представляет собой L-аргинин, X представляет собой 3-цис-аминоциклогексан, и Z представляет собой цис-2-аминоциклопентан-1-карбонил; где линкер содержит расщепляемый фрагмент; и где расщепляемый фрагмент расщепляется гидролитическим ферментом.
[080] В некоторых вариантах осуществления СРР может быть соединением, содержащим формулу изменяющаяся последовательность - спейсер - линкер, где изменяющаяся последовательность представляет собой Ac-R(O)nR, где n ≥ 7; где O представляет собой последовательность из остатков, выбранных из R, X и Z; где R представляет собой L-аргинин, X представляет собой 3-цис-аминоциклогексан, и Z представляет собой цис-2-аминоциклопентан-1-карбонил; и где линкер содержит FS.
[081] В некоторых вариантах осуществления СРР может быть соединением, содержащим формулу изменяющаяся последовательность - спейсер - линкер, где изменяющаяся последовательность представляет собой Ac-R(O)nR, где n ≥ 7; где O представляет собой последовательность из остатков, выбранных из R, X и Z; где R представляет собой L-аргинин, X представляет собой 3-цис-аминоциклогексан, и Z представляет собой цис-2-аминоциклопентан-1-карбонил; и где линкер содержит FSQ.
[082] В некоторых вариантах осуществления СРР может быть соединением, содержащим формулу изменяющаяся последовательность - спейсер - линкер, где изменяющаяся последовательность представляет собой Ac-R(O)nR, где n ≥ 7; где O представляет собой последовательность из остатков, выбранных из R, X и Z; где R представляет собой L-аргинин, X представляет собой 3-цис-аминоциклогексан, и Z представляет собой цис-2-аминоциклопентан-1-карбонил; и где линкер содержит FSQК.
[083] В некоторых вариантах осуществления СРР может быть соединением, содержащим формулу изменяющаяся последовательность - спейсер - линкер, где изменяющаяся последовательность представляет собой Ac-R(O)nR, где n ≥ 7; где O представляет собой последовательность из остатков, выбранных из R, X и Z; где R представляет собой L-аргинин, X представляет собой 3-цис-аминоциклогексан, и Z представляет собой цис-2-аминоциклопентан-1-карбонил; и где линкер содержит FxyB, x представляет собой любую аминокислоту, y выбирают из глутаминовой кислоты (E), аспарагиновой кислоты (D), лизина (K), серина (S) и треонина (T), и B представляет собой β-аланин.
[084] В некоторых вариантах осуществления СРР может быть соединением, содержащим формулу изменяющаяся последовательность - спейсер - линкер, где изменяющаяся последовательность представляет собой Ac-R(O)nR, где n ≥ 7; где O представляет собой последовательность из остатков, выбранных из R, X и Z; где R представляет собой L-аргинин, X представляет собой 3-цис-аминоциклогексан, и Z представляет собой цис-2-аминоциклопентан-1-карбонил; и где линкер содержит FxyB, x представляет собой любую аминокислоту, y выбирают из глутаминовой кислоты (E), аспарагиновой кислоты (D), лизина (K), серина (S) и треонина (T), и B представляет собой β-аланин; и где y представляет собой искусственный аналог глутаминовой кислоты.
[085] В некоторых вариантах осуществления СРР может быть соединением, содержащим формулу изменяющаяся последовательность - спейсер - линкер, где изменяющаяся последовательность представляет собой Ac-R(O)nR, где n ≥ 7; где O представляет собой последовательность из остатков, выбранных из R, X и Z; где R представляет собой L-аргинин, X представляет собой 3-цис-аминоциклогексан, и Z представляет собой цис-2-аминоциклопентан-1-карбонил; и где линкер содержит FxyB, x представляет собой любую аминокислоту, y выбирают из глутаминовой кислоты (E), аспарагиновой кислоты (D), лизина (K), серина (S) и треонина (T), и B представляет собой β-аланин; и где y представляет собой искусственный аналог аспарагиновой кислоты.
[086] В некоторых вариантах осуществления СРР может быть соединением, содержащим формулу изменяющаяся последовательность - спейсер - линкер, где изменяющаяся последовательность представляет собой Ac-R(O)nR, где n ≥ 7; где O представляет собой последовательность из остатков, выбранных из R, X и Z; где R представляет собой L-аргинин, X представляет собой 3-цис-аминоциклогексан, и Z представляет собой цис-2-аминоциклопентан-1-карбонил; и где линкер содержит FxyB, x представляет собой любую аминокислоту, y выбирают из глутаминовой кислоты (E), аспарагиновой кислоты (D), лизина (K), серина (S) и треонина (T), и B представляет собой β-аланин; и где y представляет собой искусственный аналог лизина.
[087] В некоторых вариантах осуществления СРР может быть соединением, содержащим формулу изменяющаяся последовательность - спейсер - линкер, где изменяющаяся последовательность представляет собой Ac-R(O)nR, где n ≥ 7; где O представляет собой последовательность из остатков, выбранных из R, X и Z; где R представляет собой L-аргинин, X представляет собой 3-цис-аминоциклогексан, и Z представляет собой цис-2-аминоциклопентан-1-карбонил; и где линкер содержит FxyB, x представляет собой любую аминокислоту, y выбирают из глутаминовой кислоты (E), аспарагиновой кислоты (D), лизина (K), серина (S) и треонина (T), и B представляет собой β-аланин; и где y представляет собой искусственный аналог серина.
[088] В некоторых вариантах осуществления СРР может быть соединением, содержащим формулу изменяющаяся последовательность - спейсер - линкер, где изменяющаяся последовательность представляет собой Ac-R(O)nR, где n ≥ 7; где O представляет собой последовательность из остатков, выбранных из R, X и Z; где R представляет собой L-аргинин, X представляет собой 3-цис-аминоциклогексан, и Z представляет собой цис-2-аминоциклопентан-1-карбонил; и где линкер содержит FxyB, x представляет собой любую аминокислоту, y выбирают из глутаминовой кислоты (E), аспарагиновой кислоты (D), лизина (K), серина (S) и треонина (T), и B представляет собой β-аланин; и где y представляет собой искусственный аналог E, D, K, S или T.
[089] В некоторых вариантах осуществления СРР может быть соединением, содержащим формулу изменяющаяся последовательность - спейсер - линкер, где изменяющаяся последовательность представляет собой Ac-R(O)nR, где n ≥ 7; где O представляет собой последовательность из остатков, выбранных из R, X и Z; где R представляет собой L-аргинин, X представляет собой 3-цис-аминоциклогексан, и Z представляет собой цис-2-аминоциклопентан-1-карбонил; и где спейсер содержит аминогексановую кислоту (Ahx); и где линкер содержит FSQG-OН.
[090] В некоторых вариантах осуществления СРР может быть соединением, содержащим формулу изменяющаяся последовательность - спейсер - линкер, где изменяющаяся последовательность представляет собой Ac-R(O)nR, где n ≥ 7; где O представляет собой последовательность из остатков, выбранных из R, X и Z; где R представляет собой L-аргинин, X представляет собой 3-цис-аминоциклогексан, и Z представляет собой цис-2-аминоциклопентан-1-карбонил; и где линкер содержит FxyB, x представляет собой любую аминокислоту, y выбирают из глутаминовой кислоты (E), аспарагиновой кислоты (D), лизина (K), серина (S) и треонина (T), и B представляет собой β-аланин; и где y представляет собой искусственный аналог треонина; и где n равно 7, и спейсер представляет собой (Ahx).
[091] В некоторых вариантах осуществления СРР может быть соединением, содержащим формулу изменяющаяся последовательность - спейсер - линкер, где изменяющаяся последовательность представляет собой Ac-R(O)nR, где n ≥ 7; где O представляет собой последовательность из остатков, выбранных из R, X и Z; где R представляет собой L-аргинин, X представляет собой 3-цис-аминоциклогексан, и Z представляет собой цис-2-аминоциклопентан-1-карбонил, где изменяющаяся последовательность, спейсер и линкер содержат последовательность, выбранную из: SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 и 11.
[092] В некоторых вариантах осуществления СРР-PMO или CPP-AON может содержать формулу изменяющаяся последовательность - спейсер - линкер, где изменяющаяся последовательность представляет собой Ac-R(O)nR, где n ≥ 7; где O представляет собой последовательность из остатков, выбранных из R, X и Z; где R представляет собой L-аргинин, X представляет собой 3-цис-аминоциклогексан, и Z представляет собой цис-2-аминоциклопентан-1-карбонил, и дополнительно нести в себе нагрузку, конъюгированную с линкером, где нагрузка включает в себя фосфородиамидатный морфолиновый олигомер (PMO).
[093] В некоторых вариантах осуществления СРР-PMO или CPP-AON может быть соединением, содержащим формулу изменяющаяся последовательность - спейсер - линкер, где изменяющаяся последовательность представляет собой Ac-R(O)nR, где n ≥ 7; где O представляет собой последовательность из остатков, выбранных из R, X и Z; где R представляет собой L-аргинин, X представляет собой 3-цис-аминоциклогексан, и Z представляет собой цис-2-аминоциклопентан-1-карбонил, и дополнительно нести в себе нагрузку, конъюгированную с линкером, где нагрузка дополнительно включает в себя один или несколько дополнительных PMO.
[094] В некоторых вариантах осуществления СРР может содержать изменяющуюся последовательность - спейсер - линкер согласно любой из последовательностей в Таблице 1:
Таблица 1
| Попадание | Последовательность | Локализация | SEQ ID NO: |
| 2C4 | Ac-RXXXXXRRR(Ahx)FSQG-OH | Ядро | 1 |
| 4G9 | Ac-RXXXXXXRR(Ahx)FSQG-OH | Ядро | 2 |
| 9F5 | Ac-RXXXRXRXR(Ahx)FSQG-OH | Ядро | 3 |
| 12G4 | Ac-RRXXZXXXR(Ahx)FSQG-OH | Ядро | 4 |
| 12D10 | Ac-RRRXXXXXR(Ahx)FSQG-OH | Ядро | 5 |
| 12D11 | Ac-RXRXXXXXR(Ahx)FSQG-OH | Ядро | 6 |
| 12E4 | Ac-RRZXXXXXR(Ahx)FSQG-OH | Ядро | 7 |
| 21A5 | Ac-RXXXXZXZR(Ahx)FSQG-OH | Ядро | 8 |
| 11G1 | Ac-RXXZXRXXR(Ahx)FSQG-OH | Цитозоль | 9 |
| 12D4 | Ac-RRXRXXXXR(Ahx)FSQG-OH | Цитозоль | 10 |
| 13D2 | Ac-RRZXXZXXR(Ahx)FSQG-OH | Цитозоль | 11 |
[095] В некоторых вариантах осуществления СРР может включать следующие последовательности, приведенные в Таблице 2
Таблица 2
| Попадание | Последовательность | SEQ ID NO: |
| 9H8 | Ac-RXXXXXRXR(Ahx) | 12 |
| 9H9 | Ac-RZXXXXRXR(Ahx) | 13 |
| 9H11 | Ac-RXZXXXRXR(Ahx) | 14 |
| 1A2 | Ac-RRRRRRRRR(Ahx) | 15 |
| 12D12 | Ac-RZRXXXXXR(Ahx) | 16 |
| 13D3 | Ac-RXZXXZXXR(Ahx) | 17 |
| 12D10 | Ac-RRRXXXXXR(Ahx) | 18 |
| 2C4 | Ac-RXXXXXRRR(Ahx) | 19 |
| 4G9 | Ac-RXXXXXXRR(Ahx) | 20 |
| 11F4 | Ac-RXXXXRXXR(Ahx) | 21 |
| 9F5 | Ac-RXXXRXRXR(Ahx) | 22 |
| 12D11 | Ac-RXRXXXXXR(Ahx) | 23 |
| 20B7 | Ac-RXXXXXXZR(Ahx) | 24 |
| 20C4 | Ac-RXXZXXXZR(Ahx) | 25 |
| 5D4 | Ac-RXXXRZXRR(Ahx) | 26 |
| 9H7 | Ac-RRXXXXRXR(Ahx) | 27 |
| 5B1 | Ac-RXXXZXXRR(Ahx) | 28 |
| 4H6 | Ac-RXXZXXXRR(Ahx) | 29 |
| 12D4 | Ac-RRXRXXXXR(Ahx) | 30 |
| 15A8 | Ac-RXXXXXZXR(Ahx) | 31 |
| 12D8 | Ac-RXZRXXXXR(Ahx) | 32 |
| 12E3 | Ac-RZXXXXXXR(Ahx) | 33 |
| 12H2 | Ac-RXXZZXXXR(Ahx) | 34 |
| 4G10 | Ac-RZXXXXXRR(Ahx) | 35 |
| 15H5 | Ac-RXXXXZZXR(Ahx) | 36 |
| 11F1 | Ac-RXRXXRXXR(Ahx) | 37 |
| 21C7 | Ac-RRXXZZXZR(Ahx) | 38 |
| 12E2 | Ac-RXXXXXXXR(Ahx) | 39 |
| 12E4 | Ac-RRZXXXXXR(Ahx) | 40 |
| 12G4 | Ac-RRXXZXXXR(Ahx) | 41 |
| 21A5 | Ac-RXXXXZXZR(Ahx) | 42 |
[096] Специалист в данной области техники сможет сконструировать дополнительные последовательности СРР, которые будут соответствовать цели настоящего раскрытия, а именно - усиливать клеточное проникновение. Вследствие этого раскрытые здесь множественные конъюгаты PMO-CPP и AON-CPP не ограничиваются компонентами СРР, раскрываемыми здесь.
[097] В данном контексте, УННВВ означает уровень дозы, при котором не наблюдаются неблагоприятные эффекты. Другими словами, УННВВ представляет собой максимальную безопасную дозу.
[098] В некоторых вариантах осуществления линкер представляет собой последовательность, содержащую расщепляемый фрагмент. В некоторых вариантах осуществления расщепляемый фрагмент может расщепляться любым гидролитическим ферментом. В некоторых вариантах осуществления расщепляемый фрагмент может расщепляться пептидазой или протеазой, такими как катепсин или трипсин. В данном контексте расщепляемый катепсином линкер синонимичен расщепляемому катепсином сайту. Расщепляемый линкер согласно данному раскрытию способен расщепляться, т.е. разлагаться химически, с помощью внутриклеточных ферментов. В некоторых вариантах осуществления линкер может предназначаться для включения расщепляемого фрагмента, распознаваемого определенной сериновой протеазой, треониновой протеазой, цистеиновой протеазой, аспартат-протеазой, протеазой глутаминовой кислоты или металлопротеазой, или группой из более чем одной пептидазы. В некоторых вариантах осуществления линкер может включать в себя два или более расщепляемых фрагмента, которые перекрываются или не перекрываются между собой. В некоторых вариантах осуществления линкер может не содержать расщепляемый фрагмент. В некоторых вариантах осуществления линкер может быть сконструирован так, что расщепляется менее чем 100%, менее чем 75%, менее чем 50%, или менее чем 10% линкеров. В некоторых вариантах осуществления линкер сконструирован так, что расщепляется более чем 90% или 99% линкеров.
[099] В некоторых вариантах осуществления линкер содержит последовательность FS (SEQ ID NO:45). В некоторых вариантах осуществления линкер содержит последовательность FSQ (SEQ ID NO: 46) или FSQK (SEQ ID NO:47). В некоторых вариантах осуществления линкер содержит последовательность FxyB (SEQ ID NO: 48), где x представляет собой любую аминокислоту, стандартную или нестандартную, y представляет собой глутаминовую кислоту (E), аспарагиновую кислоту (D), лизин (K), серин (S) или треонин (T), и B представляет собой β-аланин или β-глицин. В некоторых вариантах осуществления подходящие расщепляемые катепсином сайты включают FKE (SEQ ID NO: 49), FAE (SEQ ID NO: 50), FVE (SEQ ID NO: 51), FLE (SEQ ID NO: 52), FSE (SEQ ID NO: 53) и V[Cit]E (SEQ ID NO: 54), где F представляет собой фенилаланин, K представляет собой лизин, E представляет собой глутаминовую кислоту, A представляет собой аланин, V представляет собой валин, L представляет собой лейцин, S представляет собой серин, и Cit представляет собой цитруллин. Настоящее раскрытие не ограничивается конкретными катепсиновыми линкерами, раскрываемыми в данном документе, но также включает дополнительные аминокислотные последовательности, способные расщепляться под действием внутриклеточных протеаз.
ПРИМЕРЫ
[0100] Синтез пептидов
[0101] Пептиды синтезировали с использованием автоматизированного пептидного синтезатора Ranin Symphony, используя стандартный Fmoc химический процесс на предварительно загруженной смоле CLEAR (сшитой этоксилированной акрилатной смоле) (Peptides International, Louisville, KY). Аминокислоты (EMD Biosciences, San Diego, CA или Anaspec, San Jose, CA) были ортогонально защищены группами трет-бутоксикарбонила (BOC), трет-бутила (tBu) 2,2,4,6,7-пентаметилдигидро-бензофуран-5-сульфонила (Pbf) или тритила (Trt). Реакции сочетания проводили, используя молярное отношение аминокислота/HCTU/N-метилморфолин/смола, равное 5/5/10/1. 20% пиперидина, 2% 1,8-диазабицикло[5.4.0]-ундец-7-ена (DBU) в DMF использовали для удаления Fmoc из аминного конца в ходе каждого цикла. Ацетилирование по N-концу выполняли на смоле, используя молярное отношение уксусный ангидрид/NMM/смола в DMF, равное 30/8/1. Снятие защиты/отщепление от смолы выполняли, используя смесь 15 мл/0,1 мМ смолы с объемным соотношением 2,5% воды/2,5% TIS/5% анизола/90% TFA в течение 3 ч. Надосадочную жидкость осаждали в диэтиловом эфире (-80°C) и центрифугированием при 3000 об/мин в течение 10 мин. Эфир сливали и осадок снова промывали. Сырой пептид лиофилизировали и очищали, используя полу-препаративную ВЭЖХ с обращенной фазой (XBridge C18, 10×250 мм, размер частиц 5 мкм). Продукт очищали при 5 мл/мин с начальным градиентом 99% буфер-A (вода, 0,1% TFA) и 1% буфер-B (ацетонитрил, 0,1% TFA) (наклонный градиент, 0,3% B/мин). Чистоту пептида >95% определяли с помощью аналитической ВЭЖХ с обращенной фазой и времяпролетной масс-спектрометрии с лазерной ионизацией и десорбцией из матрицы (MALDI-TOF, Waters Synapt). Фракции отбирали, лиофилизировали и повторно растворяли в пригодном для проведения конъюгирования буфере. (Все растворители имели чистоту, пригодную для ВЭЖХ, их приобретали у EMD Biosciences, San Diego, Ca или Sigma Aldrich, St. Louis, MO).
[0102] Конъюгирование пептида (CPP)-PMO
[0103] Заказывали PMO с первичным амином на 5'-конце и пептиды синтезировали, как описано выше. В одиночных конъюгатах PMO-CPP пептид использовали с 2-х молярным избытком по отношению к PMO, а в множественных конъюгатах PMO-CPP количество молей PMO рассчитывали, используя следующее уравнение: (1,2) x (число конъюгатов) x (молей пептида). PMO растворяли в DMSO (5 мМ) и оставляли. Пептиды растворяли в DMF (50 мМ) и смешивали с молярным эквивалентом основанного на аминии связующего реагента 2-(6-хлор-1-H-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметиламиний гексафторфосфата. 4-Метилморфолин (NMM) в количестве 2 молярных эквивалентов добавляли к пептидной смеси и немедленно вносили в раствор PMO. Реакция протекала 1,5 ч при 37°C и ее прекращали, используя 4 объемных эквивалента воды. Смесь вносили в колонку с СМ сефарозой (Sigma Aldrich, St. Louis, MO) и промывали количеством, равным 10 объемам колонки, для удаления не прошедшего конъюгирование РМО и реагентов. Пептидные конъюгаты CPP-PMO элюировали из колонки, используя 1M гуанидин-HCL, 1M NaCl и подвергали диализу против 100 мМ NH4HCO3 с 3 заменами буфера для удаления солей и не прошедшего конъюгирование пептида. Прошедший диализ материал лиофилизировали и анализировали, используя аналитическую ВЭЖХ.
[0104] Следующие СРР синтезировали согласно общему протоколу синтеза пептидов, описанному выше:
№ 1215: Ac-(RXRRBR)2XFKEG-OH (SEQ ID NO: 55)
№ 1216: Ac-(RXRRBR)2XFD(d-Glu)EG-OH (SEQ ID NO: 56)
№ 1217: Ac-E(RXRRBR)2XFKG-амид (SEQ ID NO: 57)
№ 1218: Ac-E(RXRRBR)2XFKG-OH (SEQ ID NO: 58)
№ 1219: Ac-E(RXRRBR)2XFKEG-OH (SEQ ID NO: 59)
№ 1220: Ac-E(RXRRBR)2XFK(d-Glu)EG-OH (SEQ ID NO: 60)
№ 1221: Ac-(d-Glu)E(RXRRBR)2xFKG-амид (SEQ ID NO: 61)
№ 1222: Ac-(dGlu)E(RXRRBR)2XFKG-OH (SEQ ID NO: 62)
№ 1223: Ac-(d-Glu)E(RXRRBR)2XFKEG-OH (SEQ ID NO: 63)
№ 1224: Ac-(d-Glu)E(RXRRBR)2XFK((d-Glu)EG-OH (SEQ ID NO: 64)
№ 1225-В: Biot-(RXRRBR)2XFKG-OH (SEQ ID NO: 65)
№ 1225-F: FITC-(RXRRBR)2XFKG-OH (SEQ ID NO: 66)
№ 1226-В: Ac-(RXRRBR)2XFK(Biot)G-OH (SEQ ID NO: 67)
№ 1226-F: Ac-(RXRRBR)2XFK(FITC)G-OH (SEQ ID NO: 68)
где Ac представляет собой ацетил, R представляет собой D-аргинин, X представляет собой 6-аминогексановую кислоту, B представляет собой β-аланин, FK представляет собой расщепляемый катепсином сайт, E представляет собой глутаминовую кислоту, G представляет собой глицин, Biot представляет собой биотин, и FITC представляет собой флуоресцеинизотиоцианат.
[0105] Перечисленные выше CPP сопрягали с PMO23 с образованием конъюгатов PMO-CPP, используя процедуру синтеза, описанную выше. Образовавшиеся согласно данной процедуре конъюгаты имели следующие последовательности:
№ 1215: Ac-(RXRRBR)2XFKE(PMO)G(PMO) (SEQ ID NO: 69)
№ 1216: Ac-(RXRRBR)2XFD(d-Glu)(PMO)E(PMO)G(PMO) (SEQ ID NO: 70)
№ 1217: Ac-E(PMO)(RXRRBR)2XFKG (SEQ ID NO: 71)
№ 1218: Ac-E(PMO)(RXRRBR)2XFKG(PMO) (SEQ ID NO: 72)
№ 1219: Ac-E(PMO)(RXRRBR)2XFKE(PMO)G(PMO) (SEQ ID NO: 73)
№ 1220: Ac-E(PMO)(RXRRBR)2XFK(d-Glu)(PMO)E(PMO)G(PMO) (SEQ ID NO: 74)
№ 1221: Ac-(d-Glu)(PMO)E(PMO)(RXRRBR)2XFKG (SEQ ID NO: 75)
№ 1222: Ac-(dGlu)(PMO)E(PMO)(RXRRBR)2XFKG(PMO) (SEQ ID NO: 76)
№ 1223: Ac-(d-Glu)(PMO)E(PMO)(RXRRBR)2XFKE(PMO)G(PMO) (SEQ ID NO: 77)
№ 1224: Ac-(d-Glu)(PMO)E(PMO)(RXRRBR)2XFK(d-Glu)(PMO)E(PMO)G(PMO) (SEQ ID NO: 78)
№ 1225-B: Biot-(RXRRBR)2XFKG(PMO) (SEQ ID NO: 79)
№ 1226-В: Ac-(RXRRBR)2XFK(Biot)G(PMO) (SEQ ID NO: 80)
[0106] Приведенные выше конъюгаты CPP-PMO, а таже № 1120 (Ac-(RXR)4XFKE-((PEG)2-PMO)G-(PMO)) (SEQ ID NO: 81) и (Ac-(RXRRBR)2XBA-PMO) (SEQ ID NO: 82) внутривенно вводили мышам дикого типа в дозе 2,84 мкМ/кг.
[0107] По окончании дозирования собирали ткани под анастезией и замораживали в жидком азоте. Замороженные сердце и четырехглавую мышцу перерабатывали, чтобы изолировать РНК. Количественные измерения на образцах проводили с использованием спектрофотометра NanoDrop ND1000. Образцы далее разбавляли до концентрации 15 нг/мкл. Образцы амплифицировали, используя праймеры со следующими последовательностями: CAGAATTCTGCCAATTGCTGAG (SEQ ID NO: 83) и TTCTTCAGCTTGTGTCATCC (SEQ ID NO: 84). ПЦР проводили с последовательностью прогонов при 55°C /30 мин; 94°C/2 мин; 94°C/15 сек x 30 раз; 55°C/30 сек; 68°C/1,5 мин.
[0108] Пропуск экзона 23 в процентах для каждого конъюгата показаны в Таблице 3.
Таблица 3
| % пропуска экзона 23 (среднее) | ||
| Конъюгат | Четырехглавая мышца | Сердце |
| PBS буфер (контроль) | 0 | 0 |
| 1120 | 48,7 | 1,3 |
| 1204 | 75,7 | 33,7 |
| 1215 | 25,5 | 0,8 |
| 1216 | 69,5 | 28,5 |
| 1217 | 0 | 0 |
| 1218 | 4,3 | 0 |
| 1219 | 36,5 | 0,8 |
| 1220 | 10,7 | 0,7 |
| 1221 | 11,3 | 5 |
| 1222 | 9,5 | 0 |
| 1223 | 40 | 0 |
| 1224 | 15 | 0 |
| 1225-B | 66,7 | 6,7 |
| 1226-B | 39 | 1,2 |
[0109] PMO, конъюгированные с N-концом CPP, не проявили себя столь же хорошо, как такое же число PMO, конъюгированных с C-концом. Конъюгат № 1212 не проявил себя столь же хорошо, как и K-пептидный конъюгат № 1120. № 1204, содержащий только один PMO, проявил себя лучше, чем конъюгат № 1120, содержащий два PMO. № 1225-B проявил себя лучше, чем № 1226-B.
[0110] Следующие дополнительные конъюгаты CPP-PMO синтезировали согласно указанным выше процедурам. PMO, используемый для приведенных ниже конъюгатов, представляет собой GGCCAAACCTCGGCTTACCTGAAAT (SEQ ID NO: 85).
Серия K (PMO представляет собой PMO23):
№ 1118: Ac-(RXR)4XEG-(PMO) (SEQ ID NO: 86)
№ 1119: Ac-(RXR)4XE-((PEG)2-PMO)G-(PMO) (SEQ ID NO: 87)
№ 1120: Ac-(RXR)4XFKE-((PEG)2-PMO)G-(PMO) (SEQ ID NO: 81)
№ 970-S: Стеарил-(RXR)4XA-PMO (SEQ ID NO: 88)
Серия В (PMO представляет собой PMO23):
№ 1204: Ac-(RXRRBR)2XBA-PMO (SEQ ID NO: 82)
E(PMO)(RXRRBR)2XFKG, "n-конец PPMO-B" (SEQ ID NO: 89)
№ 1239: Ac-(RXRRBR)2XE(PMO)G(PMO) (SEQ ID NO: 90)
Ac-(RXRRBR)2FKEG-(PMO)2, "ди-PMO-B+FK" (SEQ ID NO: 91)
где Ac представляет собой ацетил, R представляет собой D-аргинин, X представляет собой 6-аминогексановую кислоту, B представляет собой β-аланин, FK представляет собой расщепляемый катепсином сайт, E представляет собой глутаминовую кислоту, и G представляет собой глицин.
[0111] В некоторых вариантах осуществления Х также может включать другие типы остатков, такие как пролин, глицин или аланин, или дополнительные модифицированные или нестандартные аминокислоты. В некоторых вариантах осуществления изменяющаяся последовательность включает альфа, бета, гамма или дельта аминокислоты или циклоалкановые структуры. В некоторых вариантах осуществления линкер содержит последовательность FS (SEQ ID NO: 45). В некоторых вариантах осуществления линкер содержит последовательность FSQ (SEQ ID NO: 46) или FSQK (SEQ ID NO: 47), где F представляет собой фенилаланин, S представляет собой серин, K представляет собой лизин, и Q представляет собой глутамин. В некоторых вариантах осуществления линкер содержит последовательность FxyB (SEQ ID NO: 48), где x представляет собой любую аминокислоту, стандартную или нестандартную, y представляет собой глутаминовую кислоту (E), аспарагиновую кислоту (D), и лизин (K), серин (S) или треонин (T), и B представляет собой β-аланин или β-глицин. Мышам дикого типа внутривенно вводили конъюгаты №№ 1204, 1119, 1120, 1239 и 1215 в дозе 2,84 мкМ/кг. Ткани собирали и РНК изолировали, как описано выше. Пропуск экзона 23 в процентах показан в Таблице 4.
Таблица 4
| % пропуска экзона 23 (среднее) | ||
| Конъюгат | Четырехглавая мышца | Сердце |
| PBS буфер (контроль) | 0 | 0 |
| 1204 | 54,3 | 0 |
| 1119 | 44,9 | 0,4 |
| 1120 | 68 | 16,6 |
| 1239 | 2,6 | 0 |
| 1215 | 21,3 | 0 |
[0112] На Фигуре 3 также показано воздействие некоторых множественных конъюгатов CPP-PMO на пропуск экзона 23 у мышей дикого типа.
[0113] Как показано выше, эффективность повышалась при присоединении более чем одного PMO к одиночному CPP-K, но не к CPP-B. Однократная доза CPP-B, доставленная путем ВВ инъекции, конъюгированного с 2 PMO фрагментами экзона 23 (№ 1239), была значительно менее эффективна, чем CPP-B, конъюгированный с одиночным PMO экзона 23 (№ 1204). Неожиданно мы обнаружили, что однократная доза CPP-K, конъюгированного с 2 PMO (№ 1119) совершенно таким же химическим образом, была примерно в два раза более эффективна, чем однократная доза CPP- K, конъюгированного с одиночным PMO экзона 23 (№ 1118). Интересно, что CPP-PMO23B был более эффективен, чем CPP-PMO23K в качестве одномерной конструкции. В исследованиях множественных конъюгатов CPP-PMO, где три PMO присоединяли к CPP, три фрагмента PMO23, конъюгированные с одинарным пептидом B (№ 1216), вдвое увеличивали активность действия по сравнению ди-PMO B (хотя три-PMO23-B был похож на ди-PMO23-K в отношении своей способности пропускать экзон). Полученные результаты говорят о невозможности предсказать заранее, какие из множественных конъюгатов CPP-PMO будут обладать желаемыми свойствами, и вследствие этого специалист в данной области будет вынужден проводить предварительные исследования с использованием способов, описанных в данном раскрытии, чтобы определить эффективность каждого из полученных конъюгатов.
[0114] Другие варианты осуществления изобретения будут понятны специалистам в данной области техники при рассмотрении описания и практического применения описанного здесь изобретения. Предполагается, что описание и примеры должны рассматриваться только как иллюстративные, а действительный охват изобретения и его идея изложены в следующей за этим формуле изобретения.
Claims (27)
1. Конъюгат пептид-антисмысловой олигонуклеотид (пептид-AON) для модулирования экспрессии гена, содержащий катионный проникающий в клетку пептид (CPP), ковалентно конъюгированный с по меньшей мере двумя антисмысловыми олигонуклеотидами (AON),
где конъюгат пептид-AON выбирают из группы, состоящей из:
Ac-(RXRRBR)2XFKE(PMO)G(PMO),
Ac-(RXRRBR)2XFD(d-Glu)(PMO)E(PMO)G(PMO),
Ac-E(PMO)(RXRRBR)2XFKG(PMO),
Ac-E(PMO)(RXRRBR)2XFKE(PMO)G(PMO),
Ac-E(PMO)(RXRRBR)2XFK(d-Glu)(PMO)E(PMO)G(PMO),
Ac-(d-Glu)(PMO)E(PMO)(RXRRBR)2XFKG,
Ac-(dGlu)(PMO)E(PMO)(RXRRBR)2XFKG(PMO),
Ac-(d-Glu)(PMO)E(PMO)(RXRRBR)2XFKE(PMO)G(PMO),
Ac-(d-Glu)(PMO)E(PMO)(RXRRBR)2XFK(d-Glu)(PMO)E(PMO)G(PMO) и
Ac-(RXRRBR)2XE(PMO)G(PMO),
где Ac представляет собой ацетил, R представляет собой D-аргинин, X представляет собой 6-аминогексановую кислоту, B представляет собой β-аланин, E представляет собой глутаминовую кислоту, G представляет собой глицин, d-Glu представляет собой D-глутаминовую кислоту, D представляет собой аспарагиновую кислоту, K представляет собой лизин, F представляет собой фенилаланин, PMO представляет собой фосфородиамидатный морфолиновый олигонуклеотид, содержащий 15-30 субъединиц формулы:
где нуклеотидное основание B выбрано из C, G, A или T, и последовательность нуклеотидов PMO выбрана из SEQ ID NO: 85, причем конъюгат содержит расщепляемый фрагмент для гидролитического фермента.
2. Конъюгат пептид-антисмысловой олигонуклеотид (CPP-AON) для модулирования экспрессии гена, содержащий по меньшей мере два антисмысловых олигонуклеотида, состоящих из 15-30 субъединиц формулы:
где B выбран из природных нуклеотидных оснований C, G, A или T; и указанные AON соединения конъюгированы с катионным проникающим в клетку пептидом (CPP), и конъюгат дополнительно содержит по меньшей мере один расщепляемый линкер, и конъюгат выбран из:
Ac-(RXRRBR)2XFKE(PMO)G(PMO),
Ac-E(PMO)(RXRRBR)2XFKE(PMO)G(PMO),
Ac-(RXRRBR)2XE(PMO)G(PMO),
где Ac представляет собой ацетил, R представляет собой D-аргинин, X представляет собой 6-аминогексановую кислоту, B представляет собой β-аланин, E представляет собой глутаминовую кислоту, G представляет собой глицин, D представляет собой аспарагиновую кислоту, F представляет собой фенилаланин, K представляет собой лизин, и последовательность PMO выбрана из SEQ ID NO: 85.
3. Конъюгат пептид-AON по п. 1, где расщепляемый фрагмент может быть расщеплен катепсином или трипсином.
4. Конъюгат пептид-AON по любому из пп. 1-3, где расщепляемый фрагмент представляет собой FK или FX в положении P1/P1’, где X представляет собой любую встречающуюся в природе аминокислоту.
5. Конъюгат пептид-AON по любому из пп. 1-4, где каждый AON конъюгирован с CPP через малеимидный этерифицированный линкер.
6. Конъюгат пептид-AON по любому из пп. 1-5, где ген выбирают из группы, состоящей из гликогенсинтазы (GYS1 или GYS2), трансформирующего фактора роста (TGFβ), матриксной металлопептидазы (MMP2 или MMP9), остеопонтина, протеинкиназы миотонической дистрофии (DMPK), 2 члена семейства Elav-подобных (также известного как CUGBP), двойного гомеобокса 4 (DUX4) и/или (Frzl).
7. Конъюгат пептид-AON по п. 6, где ген содержит экзон 23.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201462002296P | 2014-05-23 | 2014-05-23 | |
| US62/002,296 | 2014-05-23 | ||
| PCT/US2015/032142 WO2015179742A1 (en) | 2014-05-23 | 2015-05-22 | Multiple oligonucleotide moieties on peptide carrier |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2020142530A Division RU2020142530A (ru) | 2014-05-23 | 2015-05-22 | Множественные олигонуклеотидные фрагменты на пептидном носителе |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2016150629A RU2016150629A (ru) | 2018-06-25 |
| RU2016150629A3 RU2016150629A3 (ru) | 2018-12-24 |
| RU2739987C2 true RU2739987C2 (ru) | 2020-12-30 |
Family
ID=53366294
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2016150629A RU2739987C2 (ru) | 2014-05-23 | 2015-05-22 | Множественные олигонуклеотидные фрагменты на пептидном носителе |
| RU2020142530A RU2020142530A (ru) | 2014-05-23 | 2015-05-22 | Множественные олигонуклеотидные фрагменты на пептидном носителе |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2020142530A RU2020142530A (ru) | 2014-05-23 | 2015-05-22 | Множественные олигонуклеотидные фрагменты на пептидном носителе |
Country Status (15)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US20170182171A1 (ru) |
| EP (1) | EP3151841B1 (ru) |
| JP (2) | JP6825914B2 (ru) |
| KR (1) | KR102487942B1 (ru) |
| CN (1) | CN106459975B (ru) |
| AR (1) | AR101542A1 (ru) |
| AU (1) | AU2015263963B2 (ru) |
| BR (1) | BR112016027236A2 (ru) |
| CA (1) | CA2949104C (ru) |
| IL (1) | IL249064B (ru) |
| MX (1) | MX2016015156A (ru) |
| RU (2) | RU2739987C2 (ru) |
| SG (2) | SG11201608880VA (ru) |
| TW (1) | TWI726844B (ru) |
| WO (1) | WO2015179742A1 (ru) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2739987C2 (ru) | 2014-05-23 | 2020-12-30 | Джензим Корпорейшн | Множественные олигонуклеотидные фрагменты на пептидном носителе |
| JP7441455B2 (ja) * | 2017-09-22 | 2024-03-01 | ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ コロラド，ア ボディー コーポレイト | 筋ジストロフィーの処置のためのチオモルホリノオリゴヌクレオチド |
| CN112105625A (zh) * | 2018-03-07 | 2020-12-18 | 赛诺菲 | 核苷酸前体、核苷酸类似物以及含其的寡聚化合物 |
| US10758629B2 (en) * | 2018-05-29 | 2020-09-01 | Sarepta Therapeutics, Inc. | Exon skipping oligomer conjugates for muscular dystrophy |
| JP2022547888A (ja) * | 2019-09-05 | 2022-11-16 | サノフイ | ヌクレオチド類似体を含有するオリゴヌクレオチド |
| WO2021211572A1 (en) * | 2020-04-14 | 2021-10-21 | Oregon State University | Antisense therapeutics for the treatment of coronavirus |
| JP2024536721A (ja) * | 2021-09-03 | 2024-10-08 | サレプタ セラピューティクス， インコーポレイテッド | 鏡像ペプチドによるアンチセンスオリゴマーの送達 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1995006056A1 (en) * | 1993-08-20 | 1995-03-02 | University Of Medicine & Dentistry Of New Jersey | Bridged polycationic polymer-oligonucleotide conjugates and methods for preparing same |
| RU2275936C2 (ru) * | 1999-07-28 | 2006-05-10 | Санофи-Авентис Дойчланд Гмбх | Конъюгаты и способ их получения, а также их применение для транспорта молекул через биологические мембраны |
| WO2012177639A2 (en) * | 2011-06-22 | 2012-12-27 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Bioprocessing and bioproduction using avian cell lines |
| WO2014052276A1 (en) * | 2012-09-25 | 2014-04-03 | Genzyme Corporation | Peptide-linked morpholino antisense oligonucleotides for treatment of myotonic dystrophy |
Family Cites Families (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ES2500921T3 (es) | 2003-04-29 | 2014-10-01 | Sarepta Therapeutics, Inc. | Composiciones para potenciar el transporte y la eficacia antisentido de análogos de ácidos nucleicos en células |
| US20100016215A1 (en) * | 2007-06-29 | 2010-01-21 | Avi Biopharma, Inc. | Compound and method for treating myotonic dystrophy |
| JP5864100B2 (ja) | 2007-06-29 | 2016-02-17 | サレプタ セラピューティクス インコーポレイテッド | 組織特異的ペプチドコンジュゲートおよび方法 |
| WO2009144481A2 (en) | 2008-05-30 | 2009-12-03 | Isis Innovation Limited | Conjugates for delivery of biologically active compounds |
| US8575305B2 (en) | 2008-06-04 | 2013-11-05 | Medical Research Council | Cell penetrating peptides |
| US8871918B2 (en) | 2008-10-24 | 2014-10-28 | Sarepta Therapeutics, Inc. | Multiple exon skipping compositions for DMD |
| DK2756080T3 (da) * | 2011-09-14 | 2019-05-20 | Translate Bio Ma Inc | Multimeriske oligonukleotidforbindelser |
| US10358643B2 (en) * | 2014-01-30 | 2019-07-23 | Hoffmann-La Roche, Inc. | Poly oligomer compound with biocleavable conjugates |
| RU2739987C2 (ru) | 2014-05-23 | 2020-12-30 | Джензим Корпорейшн | Множественные олигонуклеотидные фрагменты на пептидном носителе |
-
2015
- 2015-05-22 RU RU2016150629A patent/RU2739987C2/ru active
- 2015-05-22 EP EP15727795.5A patent/EP3151841B1/en active Active
- 2015-05-22 WO PCT/US2015/032142 patent/WO2015179742A1/en active Application Filing
- 2015-05-22 RU RU2020142530A patent/RU2020142530A/ru unknown
- 2015-05-22 JP JP2016567889A patent/JP6825914B2/ja active Active
- 2015-05-22 CN CN201580027369.4A patent/CN106459975B/zh active Active
- 2015-05-22 MX MX2016015156A patent/MX2016015156A/es unknown
- 2015-05-22 TW TW104116447A patent/TWI726844B/zh active
- 2015-05-22 AR ARP150101604A patent/AR101542A1/es unknown
- 2015-05-22 US US15/313,405 patent/US20170182171A1/en not_active Abandoned
- 2015-05-22 CA CA2949104A patent/CA2949104C/en active Active
- 2015-05-22 AU AU2015263963A patent/AU2015263963B2/en active Active
- 2015-05-22 SG SG11201608880VA patent/SG11201608880VA/en unknown
- 2015-05-22 BR BR112016027236A patent/BR112016027236A2/pt not_active Application Discontinuation
- 2015-05-22 SG SG10202004611SA patent/SG10202004611SA/en unknown
- 2015-05-22 KR KR1020167035607A patent/KR102487942B1/ko active IP Right Grant
-
2016
- 2016-11-20 IL IL249064A patent/IL249064B/en unknown
-
2019
- 2019-02-01 US US16/265,883 patent/US11103587B2/en active Active
-
2021
- 2021-01-13 JP JP2021003149A patent/JP7269968B2/ja active Active
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1995006056A1 (en) * | 1993-08-20 | 1995-03-02 | University Of Medicine & Dentistry Of New Jersey | Bridged polycationic polymer-oligonucleotide conjugates and methods for preparing same |
| RU2275936C2 (ru) * | 1999-07-28 | 2006-05-10 | Санофи-Авентис Дойчланд Гмбх | Конъюгаты и способ их получения, а также их применение для транспорта молекул через биологические мембраны |
| WO2012177639A2 (en) * | 2011-06-22 | 2012-12-27 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Bioprocessing and bioproduction using avian cell lines |
| WO2014052276A1 (en) * | 2012-09-25 | 2014-04-03 | Genzyme Corporation | Peptide-linked morpholino antisense oligonucleotides for treatment of myotonic dystrophy |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Peter Jarver et al, Molecular Therapy - Nucleic Acids, 12.06.2012. * |
| Pierce T.L. et al, Mini reviews in medicinal chemistry, 2005, vol. 5, N 1, 41-55. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US11103587B2 (en) | 2021-08-31 |
| US20190388547A1 (en) | 2019-12-26 |
| TWI726844B (zh) | 2021-05-11 |
| JP7269968B2 (ja) | 2023-05-09 |
| SG11201608880VA (en) | 2016-11-29 |
| SG10202004611SA (en) | 2020-06-29 |
| CA2949104C (en) | 2023-09-26 |
| AU2015263963A1 (en) | 2016-12-01 |
| EP3151841B1 (en) | 2022-10-19 |
| CN106459975A (zh) | 2017-02-22 |
| RU2016150629A (ru) | 2018-06-25 |
| AR101542A1 (es) | 2016-12-28 |
| RU2016150629A3 (ru) | 2018-12-24 |
| BR112016027236A2 (pt) | 2017-10-17 |
| JP2021063128A (ja) | 2021-04-22 |
| KR20170005118A (ko) | 2017-01-11 |
| CN106459975B (zh) | 2020-03-27 |
| EP3151841A1 (en) | 2017-04-12 |
| JP6825914B2 (ja) | 2021-02-03 |
| IL249064A0 (en) | 2017-01-31 |
| AU2015263963B2 (en) | 2021-02-18 |
| IL249064B (en) | 2021-07-29 |
| TW201617373A (zh) | 2016-05-16 |
| JP2017517253A (ja) | 2017-06-29 |
| WO2015179742A1 (en) | 2015-11-26 |
| RU2020142530A (ru) | 2021-04-26 |
| US20170182171A1 (en) | 2017-06-29 |
| CA2949104A1 (en) | 2015-11-26 |
| KR102487942B1 (ko) | 2023-01-11 |
| MX2016015156A (es) | 2017-03-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2739987C2 (ru) | Множественные олигонуклеотидные фрагменты на пептидном носителе | |
| RU2582235C2 (ru) | Низкомолекулярные конъюгаты для внутриклеточной доставки нуклеиновых кислот | |
| Tung et al. | Preparation and applications of peptide− oligonucleotide conjugates | |
| JP4974890B2 (ja) | ペプチドが結合された、イノシン置換アンチセンスオリゴマー化合物および方法 | |
| US9302014B2 (en) | Cell-penetrating peptides having a central hydrophobic domain | |
| KR102443631B1 (ko) | Scn9a 안티센스 올리고뉴클레오티드 | |
| WO2021127650A1 (en) | Compositions for delivery of antisense compounds | |
| Albertshofer et al. | Structure− activity relationship study on a simple cationic peptide motif for cellular delivery of antisense peptide nucleic acid | |
| US7598421B2 (en) | Materials for the delivery of biologically-active material to cells | |
| EP2776471A1 (en) | Stable peptide-based furin inhibitors | |
| WO2023026994A1 (ja) | ヒトトランスフェリンレセプター結合ペプチド－薬物コンジュゲート | |
| KR20220167770A (ko) | 타겟 세포 내로 올리고뉴클레오티드를 전달하기 위한 펩타이드-지질의 결합체를 포함하는 나노입자 및 이를 포함하는 약학적 조성물 | |
| WO2003059394A2 (fr) | Compositions pour la vectorisation d'oligonucleotides a travers la barriere hematoencephalique et leur utilisatin pour le traitement des maladies du systeme nerveux central | |
| TW202346591A (zh) | 連結有載體胜肽的核酸 | |
| TWI565476B (zh) | 基於肽之活體內ｓｉＲＮＡ傳遞系統 | |
| EP1506019A1 (en) | Complexes for the delivery of biologically-active material to cells |