RU2797538C2 - Поливалентная вакцина для животных семейства кошачьих - Google Patents
Поливалентная вакцина для животных семейства кошачьих Download PDFInfo
- Publication number
- RU2797538C2 RU2797538C2 RU2020122007A RU2020122007A RU2797538C2 RU 2797538 C2 RU2797538 C2 RU 2797538C2 RU 2020122007 A RU2020122007 A RU 2020122007A RU 2020122007 A RU2020122007 A RU 2020122007A RU 2797538 C2 RU2797538 C2 RU 2797538C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- feline
- leu
- ser
- fcv
- thr
- Prior art date
Links
Abstract
Настоящее изобретение относится к биотехнологии, вирусологии и ветеринарии. Предложена иммуногенная композиция, содержащая РНК-репликонную частицу альфавируса венесуэльского энцефалита лошадей (VEE), которая кодирует капсидный белок кошачьего кальцивируса (FCV) и модифицированный живой патоген животного семейства кошачьих, выбранный из группы, состоящей из модифицированного живого вируса кошачьего вирусного ринотрахеита (FVR), модифицированного живого вируса кошачьей панлейкопении (FPLV), модифицированных живых Chlamydophila felis и любой их комбинации. Предложена вакцина для способствования предупреждению заболевания вследствие FCV, содержащая указанную иммуногенную композицию, и способ иммунизации животного семейства кошачьих против патогенного FCV. Изобретение позволяет получить поливалентные вакцины для животных семейства кошачьих. 3 н. и 11 з.п. ф-лы, 3 табл., 2 пр.
Description
ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ
По настоящей заявке испрашивается приоритет согласно 35 U.S.C. § 119(e) временной заявке США с серийным номером № 62/599401, поданной 15 декабря 2017 года, временной заявке США с серийным номером № 62/596508, поданной 8 декабря 2017 года, временной заявке США с серийным номером № 62/582050, поданной 6 ноября 2017 года и временной заявке США № 62/581955, поданной 6 ноября 2017 года, содержание которых включено в настоящее описание в качестве ссылки в полном объеме.
ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Настоящее изобретение относится к новым поливалентным вакцинам для животных семейства кошачьих. Также предусматриваются способы получения и применения поливалентных вакцин отдельно или в комбинации с другими защитными средствами.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Респираторные заболевания кошек включают заболевания, характеризующиеся риносинуситом, конъюнктивитом, слезоотделением, слюноотделением и язвами полости рта. Двумя наиболее распространенными патогенами, ассоциированными с заболеваниями верхних дыхательных путей у кошек, являются кошачий кальцивирус (FCV) и вирус кошачьего вирусного ринотрахеита (FVR), который также известен как кошачий вирус герпеса 1 типа (FHV-1). Эти два вируса животных семейства кошачьих считаются ответственными приблизительно за 80% всех респираторных заболеваний у кошек по всему миру. Бактерия Chlamydophila felis является третьим патогеном, который также играет роль в респираторных заболеваниях кошек. Соответственно, в настоящее время коммерчески доступны вакцины против этих трех патогенов.
FVR представляет собой альфагерпесвирус, который является родственным вирусу герпеса 1 собак и, возможно, является наиболее важным среди респираторных патогенов кошек. FVR представляет собой крупный оболочечный ДНК-вирус, который является чрезвычайно контагиозным и может приводить к тяжелому заболеванию у котят, а также у кошек. Таким образом, большинство кошек сталкиваются с FVR в ходе их жизни. Коммерчески доступная вакцина Feline-1 Nobivac ® содержит модифицированный живой вирус кошачьего ринотрахеита.
Наиболее частой характеристикой и клиническими признаками инфекции FCV являются развитие везикул (язв) на языке и слизистой оболочке полости рта, которые начинаются как мелкие отдельные язвы, но могут распространяться и поражать большую часть языка. Часто у инфицированных кошек наблюдается лихорадка. Определенные штаммы FCV также вызывают заболевание у кошек, известное как синдром хромоты, который характеризуется лихорадкой, болезненностью суставов и мышц (хромота) и иногда изъязвлением языка/полости рта. Кроме того, некоторые штаммы FCV ассоциированы с хроническим стоматитом у инфицированных кошек. Кошки, инфицированные FCV, могут стать постоянно инфицированными и могут выделять инфекционный вирус в течение длительных периодов времени.
Изоляты FCV являются с антигенной точки зрения в высокой степени вариабельными и антитела от кошек, вакцинированных более ранними вакцинными штаммами FCV, такими как FCV F9, не осуществляют эффективную нейтрализацию всех современных полевых изолятов. Более того, идентифицированы новые штаммы FCV, ассоциированные с системным заболеванием и высокой смертностью [см. например, U.S. 7449323 B2]. Эти "вирулентные системные" (VS-FCV) изоляты ответственны за локализованные вспышки и современные вакцины также, по-видимому, не защищают кошек от заболевания, вызываемого этими штаммами.
FCV содержит одноцепочечный РНК-геном с положительной смысловой цепью, состоящий из трех открытых рамок считывания (ORF). Геном является полиаденилированным на 3’-конце и связан с кодируемым вирусом белком на 5’-конце. Первая открытая рамка считывания кодирует вирусную протеазу и РНК-зависимую РНК-полимеразу, которые экспрессируются на одном полипептиде. Затем этот полипептид подвергается посттрансляционному расщеплению вирусной протеазой. Вторая открытая рамка считывания кодирует основной капсидный белок (т.е. капсидный белок FCV), который имеет шесть областей, обозначаемых как A-F [Scott et al., 60 Am. J. Vet. Res.:652-658 (1999)]. Область A расщепляется с образованием зрелого капсидного белка. В то время как области B, D и F ORF2 являются относительно консервативными между изолятами FCV, области C и E являются вариабельными, причем область E ORF2 содержит основные B-клеточные эпитопы [см., Radford et al., 38(2) Vet Res.:319-335 (2007)]. ORF 3 кодирует малый структурный белок [Sosnovtsev and Green, 277 Virology: 193-203 (2000)].
Chlamydophila felis представляет собой бактерию, которая является эндемичной среди домашних кошек по всему миру.C. felis может приводить к воспалению конъюнктивы, риниту и респираторным проблемам у инфицированных кошек. C. felis имеет относительно небольшой геном, который кодирует только приблизительно тысячу белков. Эта бактерия также содержит плазмиду, содержащую 75000 пар оснований. Коммерчески доступная вакцина Feline-1 Nobivac ® содержит модифицированные живые Chlamydophila felis.
В дополнение к тремя патогенам, связанным с респираторным заболеванием у животных семейства кошачьих, описанным выше, кошек также часто вакцинируют против трех других вирусов: вируса кошачьего лейкоза (FeLV), вируса кошачьей панлейкопении (FPV или FPLV) и вируса бешенства. Вирус кошачьего лейкоза представляет собой ретровирус, который инфицирует домашних кошек, вызывая значительную заболеваемость и смертность по всему миру. Хотя он в основном передается через слюну, также описано, что FeLV распространяется через контакт с жидкостями организма [Pacitti et al., Vet Rec 118:381-384 (1986) doi:10,1136/vr.118,14.381; Levy et al., J Feline Med Surg 10:300-316 (2008) doi:10,1016/j.jfms.2008.03.002]. Клинические признаки у кошек, наблюдаемые в ходе инфекций FeLV, включают: цитопролиферативные нарушения (лимфоидные или миелоидные опухоли), цитосупрессивные нарушения (инфекционные заболевания, ассоциированные с иммуносупрессией, анемией, миелосупрессией), воспалительные нарушения, неврологические нарушения, выкидыши и энтериты [Hoover et al., J Am Vet Med Assoc 199:1287-1297 (1991); Levy and Crawford, Textbook of Veterinary Internal Medicine, 6th ed (Ettinger SJ, Feldman EC., eds.) WB Saunders, Philadelphia, PA. (2005)]. Распространенность антигенемии может варьироваться от 1-5% у здоровых кошек до 15-30% у страдающих от заболевания кошек [Hosie et al. Veterinary Records, 128: 293-297 (1989); Braley, Feline Practice 22: 25-29 (1994); Malik et al., Australian Veterinary Journal 75:323-327 (1997); Arjona et al., Journal of Clinical Microbiology 38:3448-3449 (2000)]. FeLV часто вызывает длительную инфекцию с сопутствующей персистирующей виремией, что часто приводит к смерти кошки-хозяина.
Одноцепочечный РНК-геном FeLV кодирует только три гена: (i) ген ENV, который кодирует гликопротеин оболочки, (ii) ген GAG, который кодирует основные структурные компоненты вируса, и (iii) ген POL, который кодирует РНК-полимеразу [Thomsen et al., Journal of General Virology 73:1819-1824 (1992)]. Ген оболочки FeLV (ENV) кодирует белок-предшественник gp85, который протеолитически процессируется одним или несколькими клеточными ферментами с образованием основного гликопротеина оболочки gp70 и ассоциированного с ним трансмембранного белка p15E [DeNoronha, et al., Virology 85:617-621 (1978); Nunberg et al., PNAS 81:3675-3679 (1983)]. Трансмембранный белок p15E содержит последовательность, являющуюся консервативной среди гамма-ретровирусов с иммуносупрессивными свойствами [Mathes et al., Nature 274:687-689 (1978)]. Недавно комитет по медицинским продуктам для ветеринарного применения (CVMP) Европейского агентства по оценке лекарственных средств принял положительное заключение по вакцине, содержащей рекомбинантный антиген оболочки FeLV p45, происходящий из поверхностного гликопротеина gp70 подгруппы A FeLV, который экспрессируется в Escherichia coli, в качестве активного вещества. Гликопротеин оболочки FeLV является мишенью ответов FeLV-специфических цитотоксических T-клеток, а также нейтрализующих антител и, таким образом, одним из основных иммуногенов FeLV [Flynn et al., J. Virol. 76(5): 2306-2315 (2002)].
Кошачья панлейкопения (FPV или FPLV) является в высокой степени контагиозным вирусным заболеванием кошек, которое часто является летальным. Название панлейкопении происходит от низкого количества белых кровяных клеток (лейкоцитов) у страдающих ей животных. FPLV инфицирует и активно разрушает делящиеся клетки в лимфоидных тканях, костном мозге, эпителии кишечника и у очень молодых котят в сетчатке и мозжечке. Вирус также может распространяться у беременных кошек трансплацентарно, вызывая резорбцию эмбрионов, мумификацию плодов, мертворождение или выкидыш. Инфицированные кошки выделяют вирус в моче, стуле и носовых секретах, что приводит к инфицированию восприимчивых кошек, когда они контактируют с этими секретами или блохами инфицированных кошек. Клинические признаки инфекции FPLV также называют кошачьей чумкой или кошачьим парвовирусом.
Вирус кошачьей парлейкопении является представителем рода Parvovirus семейства Parvoviridae. Таким образом FPLV является близкородственным вирусу энтерита норок и собачьему парвовирусу 2 типа (CPV-2). FPLV имеет одноцепочечный ДНК-геном, который был отсеквенирован [см., Liu et al., Genome Announc. Mar-Apr; 3(2) (2015): e01556-14]. Коммерчески доступная вакцина Feline-1 Nobivac ® содержит модифицированный живой вирус кошачьей панлейкопении.
Бешенство представляет собой предотвратимое зоонозное заболевание, которое приводит к воспалению головного мозга у человека и других млекопитающих. Клиническое бешенство представляет собой острый прогрессирующий энцефалит, который обычно подразделяют на буйное или паралитическое бешенство. Буйное бешенство характеризуется беспокойством, раздражительностью и агрессией. Паралитическое бешенство характеризуется чрезмерным слюноотделением, глубоким затрудненным дыханием, параличом и в конечном итоге комой. Этиологическим фактором бешенства является вирус бешенства, который способен инфицировать большинство млекопитающих и поддерживает резервуар заболевания в диких и восприимчивых домашних животных.
Вирус бешенства представляет собой оболочечный РНК-вирус, который кодирует пять структурных белков: нуклеопротеин (N), фосфопротеин (P), матриксный белок (M), гликопротеин (G) и РНК-зависимую РНК-полимеразу [Dietzschold et al., Crit Rev Immunol 10:427-439 (1991)]. Гликопротеин (G) считается защитным антигеном, который индуцирует нейтрализующие вирус антитела [Cox et al., Infect Immun 16:754-759 (1977)]. Для борьбы с этим заболеванием было получено несколько типов вакцин. В США наиболее часто используются цельно-вирионные вакцины на основе происходящего из инактивированной клеточной культуры убитого вируса бешенства. Эти цельно-вирионные вакцины на основе убитого вируса бешенства требуют высокого уровня антигена и, таким образом, требуют адъюванта. К сожалению, это применение адъюванта ассоциировано с реактивностью области инъекции, гиперчувствительностью и даже с предполагаемым риском сарком в области инъекции у кошек. Недавно модифицированную живую вакцину успешно использовали с приманками для пероральных вакцин для иммунизации диких животных [Mahl et al., Vet Res 45(1):77 (2014)]. Кроме того, рекомбинантная вакцина, экспрессирующая гликопротеин (G), в настоящее время продается в США для применения у кошек. Вакцины на основе нуклеиновых кислот также использовали в лабораторных испытаниях, хотя ни одна из них не была лицензирована в США.
Ряд векторных стратегий используют в вакцинах на протяжении лет в попытках защитить против определенных патогенов животных. Одна такая векторная стратегия включает использование происходящих из альфавирусов РНК-репликонных частиц (RP) [Vander Veen, et al. Anim Health Res Rev. 13(1):1-9. (2012) doi: 10,1017/ S1466252312000011; Kamrud et al., J Gen Virol. 91(Pt 7):1723-1727 (2010)], которые были разработаны из нескольких различных альфавирусов, включая вирус венесуэльского энцефалита лошадей (VEE) [Pushko et al., Virology 239:389-401 (1997)], Синдбис (SIN) [Bredenbeek et al., Journal of Virology 67:6439-6446 (1993)] и вирус леса Семлики(SFV) [Liljestrom and Garoff, Biotechnology (NY) 9:1356-1361 (1991)]. RP-вакцины доставляют РНК-репликоны альфавируса с дефектом увеличения в количестве в клетки-хозяева и обеспечивают экспрессию желаемого антигенного трансгена(ов) in vivo [Pushko et al., Virology 239(2):389-401 (1997)]. RP имеют привлекательный профиль безопасности и эффективности по сравнению с некоторыми традиционными вакцинными составами [Vander Veen, et al. Anim Health Res Rev. 13(1):1-9. (2012)]. Платформу RP используют для кодирования патогенных антигенов, и она является основой для нескольких лицензированных USDA вакцин для свиней и птиц.
Примечательно, что было описано, что РНК-репликонные частицы альфавирусов и, в частности, РНК-репликонные частицы альфавируса венесуэльского энцефалита лошадей (VEE), катализируют системное противовирусное состояние и защищают против летальной вирусной нагрузки [Konopka et al., J. Virol., 83 (29):12432-12442 (2009)] и, более конкретно, индуцируют быструю защиту против вируса ящура [Segundo et al., J. Virol., 87 (10):5447-5460 (2013)]. Таким образом, поскольку РНК-репликонные частицы альфавирусов усиливают врожденный иммунный ответ против живого вируса, может оказаться, что их не следует комбинировать с модифицированным живым вирусом в вакцине, поскольку можно ожидать, что это будет вредным для иммунного ответа.
Цитирование любых ссылок в настоящем описании не следует истолковывать как признание того, что такая ссылка доступна в качестве "уровня техники" для настоящей заявки.
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Таким образом, настоящее изобретение относится к иммуногенным композициям, которые содержат РНК-репликонные частицы альфавирусов, которые кодируют один или несколько антигенов из одного или нескольких патогенов животных семейства кошачьих вместе с одним или несколькими модифицированными живыми патогенами животных семейства кошачьих. Все из иммуногенных композиций по настоящему изобретению также можно использовать в поливалентных вакцинах. В конкретном варианте осуществления этого типа вакцинируемым индивидуумом является животное семейства кошачьих. В более конкретном варианте осуществления вакцинируемым индивидуумом является домашняя кошка. Также предусматриваются способы получения и применения иммуногенных композиций и вакцин по настоящему изобретению.
В конкретных вариантах осуществления иммуногенные композиции содержат РНК-репликонные частицы альфавирусов, которые кодируют один или несколько антигенов кошачьего кальцивируса (FCV) и модифицированный живой патоген животных семейства кошачьих. В других вариантах осуществления иммуногенные композиции содержат РНК-репликонные частицы альфавирусов, которые кодируют один или несколько антигенов вируса кошачьего лейкоза (FeLV) и модифицированный живой патоген животного семейства кошачьих. В других вариантах осуществления иммуногенные композиции содержат РНК-репликонные частицы альфавирусов, которые кодируют один или несколько антигенов вируса бешенства и модифицированный живой патоген животного семейства кошачьих. В определенных вариантах осуществления модифицированный живой патоген животного семейства кошачьих представляет собой вирус кошачьего вирусного ринотрахеита (FVR). В других вариантах осуществления модифицированный живой патоген животного семейства кошачьих представляет собой вирус кошачьей панлейкопении (FPLV). В других вариантах осуществления модифицированный живой патоген животного семейства кошачьих представляет собой модифицированные живые Chlamydophila felis. В других вариантах осуществления модифицированный живой патоген животного семейства кошачьих представляет собой модифицированный живой F9-подобный кошачий кальцивирус (FCV F9-подобный). В других вариантах осуществления модифицированный живой патоген животного семейства кошачьих представляет собой модифицированные живые Bordetella bronchiseptica. Настоящее изобретение, кроме того, относится к иммуногенным композициям, которые содержат любую комбинацию этих РНК-репликонных частиц альфавирусов и модифицированные живые патогены животных семейства кошачьих. В конкретных вариантах осуществления этого типа иммуногенная композиция содержит РНК-репликонные частицы альфавирусов, кодирующие антиген FCV, РНК-репликонные частицы альфавирусов, кодирующие антиген FeLV, модифицированный живой FVR, модифицированный живой FPLV и модифицированные живые Chlamydophila felis.
В определенных вариантах осуществления этого типа иммуногенные композиции содержат РНК-репликонные частицы альфавирусов, которые кодируют капсидный белок FCV. В более конкретных вариантах осуществления капсидный белок FCV представляет собой капсидный белок F9-подобного FCV. В других вариантах осуществления РНК-репликонная частица альфавируса кодирует антигенный фрагмент капсидного белка F9-подобного FCV. В других вариантах осуществления капсидный белок FCV представляет собой вирулентный системный капсидный белок FCV (VS-FCV). В других вариантах осуществления РНК-репликонная частица альфавируса кодирует антигенный фрагмент капсидного белка VS-FCV. В других вариантах осуществления РНК-репликонная частица альфавируса кодирует как капсидный белок F9-подобного FCV или его антигенный фрагмент, так и капсидный белок VS-FCV или его антигенный фрагмент.
В других вариантах осуществления иммуногенные композиции содержат РНК-репликонные частицы альфавирусов, которые кодируют капсидный белок VS-FCV или его антигенный фрагмент, где капсидный белок VS-FCV содержит аминокислотную последовательность, обладающую 95% или более идентичностью с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 2. В более конкретных вариантах осуществления капсидный белок VS-FCV содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2. В еще более конкретных вариантах осуществления капсидный белок VS-FCV кодируется нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 12. В сходных вариантах осуществления РНК-репликонная частица альфавируса по настоящему изобретению кодирует капсидный белок F9-подобного FCV или его антигенный фрагмент. В конкретных вариантах осуществления этого типа капсидный белок F9-подобного FCV содержит аминокислотную последовательность, обладающую 95% или более идентичностью с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 4. В более конкретных вариантах осуществления капсидный белок F9-подобного FCV содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4. В еще более конкретном варианте осуществления этого типа капсидный белок F9-подобного FCV кодируется нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 3 или SEQ ID NO: 13.
В сходных вариантах осуществления иммуногенные композиции содержат РНК-репликонные частицы альфавирусов, которые кодируют один или несколько антигенов вируса кошачьего лейкоза (FeLV). В определенных вариантах осуществления антиген FeLV представляет собой гликопротеин FeLV (например, gp85). В других вариантах осуществления РНК-репликонная частица альфавируса кодирует антигенный фрагмент gp85 FeLV. В более конкретных вариантах осуществления этого типа антигенный фрагмент гликопротеина FeLV представляет собой gp70 FeLV. В родственном варианте осуществления антигенный фрагмент гликопротеина FeLV представляет собой gp45 FeLV. В более конкретных вариантах осуществления этого типа gp85 FeLV содержит аминокислотную последовательность, обладающую 95% или более идентичностью с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 6. В более конкретных вариантах осуществления этого типа gp85 FeLV содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6. В еще более конкретных вариантах осуществления этого типа gp85 FeLV кодируется нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 5 или SEQ ID NO: 14. В сходных вариантах осуществления gp70 FeLV содержит аминокислотную последовательность, обладающую 95% или более идентичностью с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 8. В более конкретных вариантах осуществления этого типа gp70 FeLV содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8. В еще более конкретных вариантах осуществления этого типа gp70 FeLV кодируется нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 7 или SEQ ID NO: 15.
В других вариантах осуществления иммуногенные композиции содержат РНК-репликонные частицы альфавирусов, которые кодируют гликопротеин (G) вируса бешенства. В других вариантах осуществления РНК-репликонные частицы альфавирусов кодируют антигенный фрагмент G вируса бешенства. В более конкретных вариантах осуществления этого типа G вируса бешенства содержит аминокислотную последовательность, обладающую 95% или более идентичностью с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 10. В еще более конкретных вариантах осуществления этого типа G вируса бешенства содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10. В еще более конкретных вариантах осуществления этого типа G вируса бешенства кодируется нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 9 или SEQ ID NO: 16.
В конкретных вариантах осуществления РНК-репликонная частица альфавируса представляет собой РНК-репликонную частицу альфавируса венесуэльского энцефалита лошадей (VEE). В еще более конкретных вариантах осуществления РНК-репликонная частица альфавируса VEE представляет собой РНК-репликонную частицу альфавируса VEE TC-83. В других вариантах осуществления РНК-репликонная частица альфавируса представляет собой РНК-репликонную частицу альфавируса Синдбис (SIN). В других вариантах осуществления РНК-репликонная частица альфавируса представляет собой РНК-репликонную частицу альфавируса леса Семлики (SFV). В альтернативном варианте осуществления вектор с голой ДНК кодирует один или несколько антигенов, которые происходят из одного или нескольких патогенов кошек. В конкретных вариантах осуществления этого типа векторы с голой ДНК кодируют капсидный белок FCV или его антигенный фрагмент. В конкретных вариантах осуществления этого типа векторы с голой ДНК кодируют капсидный белок VS-FCV или его антигенный фрагмент. В других вариантах осуществления этого типа векторы с голой ДНК кодируют gp85 FeLV или его антигенный фрагмент.
В определенных вариантах осуществления иммуногенные композиции могут включать по меньшей мере один модифицированный живой патоген животного семейства кошачьих и РНК-репликонные частицы альфавирусов, которые кодируют один или несколько капсидных белков FCV или их антигенных фрагментов, один или несколько гликопротеинов FeLV или их антигенных фрагментов, и/или один или несколько белков G вируса бешенства или их антигенных фрагментов. В конкретных вариантах осуществления этого типа РНК-репликонные частицы альфавирусов кодируют как капсидный белок VS-FCV или его антигенный фрагмент, так и капсидный белок FCV F9-подобного вируса или его антигенный фрагмент. В сходных вариантах осуществления РНК-репликонные частицы альфавирусов кодируют как капсидный белок VS-FCV или его антигенный фрагмент, так и gp85 FeLV или его антигенный фрагмент. В других вариантах осуществления РНК-репликонные частицы альфавирусов кодируют как капсидный белок F9-подобного FCV или его антигенный фрагмент, так и gp85 FeLV или его антигенный фрагмент. В альтернативных вариантах осуществления РНК-репликонные частицы альфавирусов кодируют как капсидный белок VS-FCV или его антигенный фрагмент, так и белок G вируса бешенства или его антигенный фрагмент. В других вариантах осуществления РНК-репликонные частицы альфавирусов кодируют капсидный белок F9-подобного FCV или его антигенный фрагмент, и белок G вируса бешенства или его антигенный фрагмент. В других вариантах осуществления РНК-репликонные частицы альфавирусов кодируют капсидный белок VS-FCV или его антигенный фрагмент, gp85 FeLV или его антигенный фрагмент, и белок G вируса бешенства или его антигенный фрагмент. В альтернативных вариантах осуществления РНК-репликонные частицы альфавирусов кодируют капсидный белок VS-FCV или его антигенный фрагмент, капсидный белок F9-подобного FCV или его антигенный фрагмент, и gp85 FeLV или его антигенный фрагмент. В других вариантах осуществления РНК-репликонные частицы альфавирусов кодируют капсидный белок VS-FCV или его антигенный фрагмент, gp85 FeLV или его антигенный фрагмент, белок G вируса бешенства или его антигенный фрагмент, и капсидный белок F9-подобногов FCV или его антигенный фрагмент. В других вариантах осуществления РНК-репликонные частицы альфавирусов кодируют gp85 FeLV или его антигенный фрагмент, и белок G вируса бешенства или его антигенный фрагмент. В других вариантах осуществления РНК-репликонные частицы альфавирусов кодируют gp85 FeLV или его антигенный фрагмент, капсидный белок F9-подобного FCV или его антигенный фрагмент, и белок G вируса бешенства или его антигенный фрагмент.
Таким образом, настоящее изобретение относится к иммуногенным композициям, которые включают по меньшей мере один модифицированный живой патоген и любую одну или несколько из РНК-репликонных частиц альфавирусов по настоящему изобретению, которые кодируют множество антигенов патогенов кошек, и/или любую одну или несколько РНК-репликонных частиц альфавирусов по настоящему изобретению, которые кодируют один антиген патогена кошек. В конкретных вариантах осуществления модифицированный живой патоген животного семейства кошачьих представляет собой модифицированный живой FVR. В других вариантах осуществления модифицированный живой патоген животного семейства кошачьих представляет собой модифицированный живой FPLV. В других вариантах осуществления модифицированный живой патоген животного семейства кошачьих представляет собой модифицированные живые Chlamydophila felis. В других вариантах осуществления модифицированный живой патоген животного семейства кошачьих представляет собой модифицированный живой F9-подобный FCV. В других вариантах осуществления модифицированный живой патоген животного семейства кошачьих представляет собой модифицированные живые Bordetella bronchiseptica. В конкретных вариантах осуществления в иммуногенную композицию включено два или более живых патогенов кошек. В конкретных вариантах осуществления этого типа иммуногенная композиция содержит модифицированный живой FVR и модифицированные живые Chlamydophila. В других вариантах осуществления в иммуногенную композицию включены три или более модифицированных живых патогенов кошек. В конкретных вариантах осуществления этого типа иммуногенная композиция содержит модифицированный живой FVR, модифицированные живые Chlamydophila, и модифицированный живой патоген животного семейства кошачьих представляет собой FPLV. В других вариантах осуществления в иммуногенную композицию включено четыре или более модифицированных живых патогенов кошек. В конкретных вариантах осуществления этого типа иммуногенная композиция содержит модифицированный живой FVR, модифицированные живые Chlamydophila, модифицированный живой FPLV, и модифицированный живой F9-подобный FCV. В конкретных вариантах осуществления все из РНК-репликонных частиц альфавирусов в иммуногенной композиции представляют собой РНК-репликонные частицы альфавируса венесуэльского энцефалита лошадей (VEE). В еще более конкретных вариантах осуществления все из РНК-репликонных частиц альфавирусов VEE в иммуногенных композициях представляют собой РНК-репликонные частицы альфавирусов TC-83 VEE.
В дополнительных вариантах осуществления РНК-репликонные частицы альфавирусов могут кодировать белковые антигены (или их антигенные фрагменты), которые происходят из других патогенов кошек. В конкретных вариантах осуществления этого типа белковый антиген происходит из пневмовируса кошек (FPN). В других вариантах осуществления белковый антиген происходит из парвовируса кошек (FPV). В других вариантах осуществления белковый антиген происходит из вируса инфекционного перитонита кошек (FIPV). В других вариантах осуществления белковый антиген происходит из вируса иммунодефицита кошек. В других вариантах осуществления белковый антиген происходит из вируса болезни Борна (BDV). В других вариантах осуществления белковый антиген происходит из вируса кошачьего гриппа. В других вариантах осуществления белковый антиген происходит и кошачьего коронавируса (FCoV).
Кроме того, настоящее изобретение относится к иммуногенным композициям и/или вакцинам (поливалентные вакцины), которые включают РНК-репликонные частицы альфавирусов по настоящему изобретению вместе с одним или несколькими модифицированными живыми (например, аттенуированными) патогенами кошек по настоящему изобретению, вместе с убитым кошачьим патогеном. В конкретных вариантах осуществления иммуногенные композиции, кроме того, могут содержать убитые Chlamydophila felis, и/или убитый FVR, и/или убитый F9-подобный FCV, и/или убитый VS-FCV, и/или убитый FeLV, и/или убитый FPLV. В определенных вариантах осуществления вакцины содержат иммунологически эффективное количество одной или нескольких из этих иммуногенных композиций.
Кроме того, настоящее изобретение относится к вакцинам и поливалентным вакцинам, которые содержат иммуногенные композиции по настоящему изобретению. В конкретных вариантах осуществления поливалентные вакцины представляют собой неадъювантные вакцины. В определенных вариантах осуществления вакцина способствует предупреждению заболевания вследствие FCV, и/или FeLV, и/или FVR, и/или FPLV, и/или вируса бешенства, и/или Chlamydophila felis. В сходных вариантах осуществления антитела индуцируются с кошки, когда кошку иммунизируют вакциной. Настоящее изобретение, кроме того, относится ко всем из РНК-репликонных частиц альфавирусов и векторов с голой ДНК по настоящему изобретению.
Также настоящее изобретение также относится к способам иммунизации животного семейства кошачьих против патогена животного семейства кошачьих, например, FCV, включающему введение животному семейства кошачьих иммунологически эффективного количества вакцины или поливалентной вакцины по настоящему изобретению. В конкретных вариантах осуществления вакцину вводят посредством внутримышечной инъекции. В альтернативных вариантах осуществления вакцину вводят посредством подкожной инъекции. В других вариантах осуществления вакцину вводят посредством внутривенной инъекции. В других вариантах осуществления вакцину вводят посредством внутрикожной инъекции. В других вариантах осуществления вакцину вводят посредством чрескожной инъекции. В других вариантах осуществления вакцину вводят посредством перорального введения. В других вариантах осуществления вакцину вводят посредством интраназального введения. В конкретных вариантах осуществления животное семейства кошачьих представляет собой домашнюю кошку.
Вакцины или поливалентные вакцины по настоящему изобретению можно вводить в качестве примирующей вакцины и/или в качестве бустерной вакцины. В конкретных вариантах осуществления вакцину по настоящему изобретению вводят в качестве однократной вакцины (одна доза), без необходимости в последующих введениях. В случае введения как примирующей вакцины, так и бустерной вакцины, в определенных вариантах осуществления примирующую вакцину и бустерную вакцину можно вводить одним и тем же путем. В других вариантах осуществления этого типа, как примирующую вакцину, так и бустерную вакцину, вводят посредством подкожной инъекции. В альтернативных вариантах осуществления введение примирующей вакцины можно проводить одним путем, а введение бустерной вакцины можно проводить другим путем. В определенных вариантах осуществления этого типа примирующую вакцину можно вводить посредством подкожной инъекции, и бустерную вакцину можно вводить перорально.
Кроме того, изобретение относится к способу иммунизации животного семейства кошачьих против FCV, включающему инъекцию животному семейства кошачьих иммунологически эффективного количества описанных выше вакцин по изобретению. В конкретных вариантах осуществления вакцина может включать, например, от приблизительно 1×104 до приблизительно 1×1010 RP или более. В более конкретных вариантах осуществления вакцины могут включать от приблизительно 1×105 до приблизительно 1×109 RP. В еще более конкретных вариантах осуществления вакцины могут включать от приблизительно 1×106 до приблизительно 1×108 RP. В конкретных вариантах осуществления животное семейства кошачьих представляет собой домашнюю кошку.
В определенных вариантах осуществления вакцины по настоящему изобретению вводят в дозах от 0,05 мл до 3 мл. В конкретных вариантах осуществления вакцины по настоящему изобретению вводят в дозах от 0,05 мл до 3 мл. В более конкретных вариантах осуществления вводимая доза составляет от 0,1 мл до 2 мл. В еще более конкретных вариантах осуществления вводимая доза составляет от 0,2 мл до 1,5 мл. В еще более конкретных вариантах осуществления вводимая доза составляет от 0,3 до 1,0 мл. В еще более конкретных вариантах осуществления вводимая доза составляет от 0,4 мл до 0,8 мл.
Эти и другие аспекты настоящего изобретения станут лучше понятными с помощью приведенного ниже подробного описания.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Настоящее изобретение относится к безопасным и эффективным поливалентным вакцинам. В конкретных вариантах осуществления вакцина является безадъювантной. В этом аспекте изобретения вакцины не индуцируют саркомы в области инъекции у животного семейства кошачьих, и тем не менее способствуют защите посредством вакцин от заболевания, вызываемого инфекциями кошачьего кальцивируса (FCV) и/или вируса кошачьего лейкоза (FeLV), и инфекциями вирусом кошачьего вирусного ринотрахеита (FVR) и/или вирусом кошачьей панлейкопении (FPLV), и/или живыми Chlamydophila felis.
Несмотря на известное усиление врожденной иммунной системы РНК-репликонными частицами альфавирусов, поливалентные вакцины по настоящему изобретению, которые содержат как РНК-репликонные частицы альфавирусов, так и модифицированные живые вирусы, неожиданно являются безопасными и эффективными, без значительного препятствования РНК-репликонными частицами альфавирусов иммунологическому эффекту модифицированных живых вирусов.
Действительно, известно, что РНК-репликонные частицы альфавирусов и, в частности, РНК-репликонные частицы альфавируса венесуэльского энцефалита лошадей (VEE), катализируют системное противовирусное состояние и защищают против летальной вирусной нагрузки [Konopka et al., J. Virol., 83 (29):12432-12442 (2009)]. Более того, было описано, что РНК-репликонные частицы альфавирусов VEE индуцируют быструю защиту против вируса ящура [Segundo et al., J. Virol., 87 (10):5447-5460 (2013)]. Таким образом, можно ожидать, что вакцины, содержащие как РНК-репликонные частицы альфавирусов, так и модифицированные живые вирусы, могут привести к значительному ингибированию иммунологического эффекта модифицированных живых вирусов. Однако неожиданно было показано, что усиление врожденного иммунного ответа вследствие присутствия РНК-репликонных частиц альфавирусов не является неблагоприятным для иммунного ответа, индуцируемого сопутствующими модифицированными живыми вирусами.
Таким образом, в конкретном аспекте настоящее изобретение относится к вакцинам, которые содержат РНК-репликонные частицы альфавирусов, которые кодируют капсидный белок FCV или его антигенный фрагмент, и/или gp85 FeLV или его антигенный фрагмент, вместе с модифицированным живым кошачьим FVR, и/или модифицированным живым FPLV, и/или модифицированными живыми Chlamydophila felis. В другом аспекте настоящего изобретения вакцины содержат векторы с голой ДНК, которые кодируют капсидный белок FCV или его антигенный фрагмент, и/или gp85 FeLV или его антигенный фрагмент, вместе с модифицированным живым кошачьим FVR, и/или модифицированным живым FPLV, и/или модифицированными живыми Chlamydophila felis.
Вакцины по настоящему изобретению можно вводить животному семейства кошачьих в отсутствии адъюванта, и они все еще могут способствовать защите вакцинированного животного семейства кошачьих от FCV.
Для более полного понимания изобретения приводятся следующие определения.
Использование терминов в единственном числе для удобства в описании никоим образом не предназначено для ограничения. Таким образом, например, указание на композицию, содержащую "полипептид", включает указание на один или несколько таких полипептидов. Кроме того, указание на "РНК-репликонную частицу альфавирусов" включает указание на множество таких РНК-репликонных частиц альфавирусов, если нет иных указаний.
Как используют в рамках изобретения, термин "примерно" используют взаимозаменяемо с термином термин "приблизительно", и он означает, что величина находится в пределах пятидесяти процентов от указанной величины, т.е. композиция, содержащая "примерно" 1×108 РНК-репликонных частиц альфавирусов на миллилитр, содержит от 5×108 до 1,5×108 РНК-репликонных частиц альфавирусов на миллилитр.
Как используют в рамках изобретения, термин "животное семейства кошачьих" относится к любому представителю семейства Felidae. Все из домашних кошек, чистокровных и/или беспородных кошек-компаньонов, и диких или бездомных кошек являются животными семейства кошачьих.
Как используют в рамках изобретения, термин "репликон" относится к модифицированному вирусному РНК-геному, который лишен одного или несколько элементов (например, кодирующих последовательностей для структурных белков), которые, если бы они присутствовали, обеспечивали бы успешное увеличение в количестве родительского вируса в клеточных культурах или в животных-хозяевах. В подходящем клеточном контексте репликон будет амплифцироваться и может продуцировать один или несколько типов субгеномной РНК.
Как используют в рамках изобретения, термин "РНК-репликонная частица альфавируса", сокращенно обозначаемый как "RP", представляет собой происходящий из альфавируса РНК-репликон, упакованный в структурные белки, например, капсид и гликопротеины, которые также происходят из альфавирусов, например, как описано в Pushko et al., [Virology 239(2):389-401 (1997)]. RP не может увеличиваться в количестве в клеточных культурах или в животных-хозяевах (без плазмиды-помощника или аналогичного компонента), поскольку репликон не кодирует структурные компоненты альфавируса (например, капсид и гликопротеины).
Термины "FCV F9-подобный" и "F9-подобный FCV" используются взаимозаменяемо друг с другом и с термином "классический FCV" и, как используют в рамках изобретения, он представляет собой FCV, который может быть охарактеризован как более ранний и ранее универсальный вакцинный штамм FCV, для которого штамм FCV F9 считается типичным представителем. Напротив, FCV, называемый вирулентным системным "VS-FCV" или, как используют в рамках изобретения взаимозаменяемо, "(VS) FCV", представляет собой более новый класс FCV, который является необычно вирулентным и не может быть нейтрализован антителами, направленными против F9-подобных штаммов FCV [см., U.S. 7449323; Radford et al., 38(2) Vet res. 319-335 (2007)].
Термины "происходить из", "происходит из" и "происходящий из" используют взаимозаменяемо в отношении данного белкового антигена и патогена или штамма этого патогена, который в природе кодирует его, и, как используют в рамках изобретения, означает, что немодифицированная и/или укороченная аминокислотная последовательность данного белкового антигена кодируется этим патогеном или штаммом этого патогена. Кодирующую последовательность в конструкции нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению для белкового антигена, происходящего из патогена, можно подвергать генетическому манипулированию, чтобы достигнуть модификации и/или укорочения аминокислотной последовательности экспрессируемого белка относительно соответствующей последовательности этого белкового антигена в патогене или штамме патогена (включая естественным образом ослабленные штаммы), из которого она происходит.
Как используют в рамках изобретения, термины "защита" или "обеспечение защиты" или "индукция защитного иммунитета" или "способствует предупреждению заболевания" и "способствует защите" не требуют полной защиты от какого-либо признака инфекции. Например, "способствует защите" может означать, что защита является достаточной, так что после заражения симптомы основной инфекции по меньшей мере уменьшаются, и/или что один или несколько из основных клеточных, физиологических или биохимических этиологических факторов или механизмов, вызывающих симптомы, уменьшаются и/или устраняются. Понятно, что "уменьшенный" как используют в этом контексте, означает относительно состояния инфекции, включая молекулярное состояние инфекции, не только физиологическое состояние инфекции.
Как используют в рамках изобретения, "вакцина" представляет собой композицию, которая является пригодной для применения у животного, например, у животного семейства кошачьих (включая, в определенных вариантах осуществления людей, в то время как в других вариантах осуществления для применения конкретно не у человека), содержащую один или несколько антигенов, как правило в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем, таким как жидкость, содержащая воду, который при введении животному индуцирует иммунный ответ, достаточно сильный, чтобы способствовать защите от заболевания, возникающего в результате инфицирования микроорганизмом дикого типа, т.е. достаточно сильный, чтобы способствовать предупреждению заболевания и/или предупреждению, смягчению или излечению заболевания.
Как используют в рамках изобретения, поливалентная вакцина представляет собой вакцину, которая содержит два или более различных антигена. В конкретном варианте осуществления этого типа поливалентная молекула стимулирует иммунную систему реципиента против двух или нескольких различных патогенов.
Термины "адъювант" и "иммунный стимулятор" используют в настоящем описании взаимозаменяемо, и их определяют как одно или несколько веществ, которые вызывают стимуляцию иммунной системы. В этом контексте адъювант используют для усиления иммунного ответа на один или несколько вакцинных антигенов/изолятов. Таким образом, "адъюванты" представляют собой средства, которые неспецифически повышают иммунный ответ на конкретный антиген, таким образом, снижая количество антигена, необходимое в любой данной вакцине, и/или частоту инъекций, необходимых для индукции надлежащего иммунного ответа на представляющий интерес антиген. В этом контексте адъювант используют для усиления иммунного ответа на один или несколько антигенов/изолятов вакцин. В Feline Vaccination Guidelines от American Association of Feline Practitioners, например, предлагается применение безадъювантных вакцин против FeLV [AAFP Feline Advisory Panel, 15: 785-808 (2013)].
Как используют в рамках изобретения, "безадъювантная вакцина" представляет собой вакцину или поливалентную вакцину, которая не содержит адъювант.
Как используют в рамках изобретения, термин "фармацевтически приемлемый" используют в качестве прилагательного для обозначения того, что определяемое им существительное является пригодным для применения в фармацевтическом продукте. Когда его используют, например, для описания эксципиента в фармацевтической вакцине, он характеризует эксципиент как совместимый с другими ингредиентами композиции и не причиняющий вреда предполагаемому животному-реципиенту, например, животному семейства кошачьих.
"Парентеральное введение" включает подкожные инъекции, подслизистые инъекции, внутривенные инъекции, внутримышечные инъекции, внутрикожные инъекции и инфузию.
Как используют в рамках изобретения, термин "антигенный фрагмент" в отношении конкретного белка (например, белкового антигена) представляет собой фрагмент этого белка, который является антигенным, т.е. способен специфически взаимодействовать с распознающей антиген молекулой иммунной системы, такой как иммуноглобулин (антитело) или рецептор T-клеточного антигена. Например, антигенный фрагмент капсидного белка FCV представляет собой фрагмент капсидного белка, который является антигенным. Предпочтительно, антигенный фрагмент по настоящему изобретению является иммунодоминантным для распознавания антителом и/или T-клеточным рецептором. В конкретных вариантах осуществления антигенный фрагмент в отношении данного белкового антигена представляет собой фрагмент этого белка, который сохраняет по меньшей мере 25% антигенности полноразмерного белка. В предпочтительных вариантах осуществления антигенный фрагмент сохраняет по меньшей мере 50% антигенности полноразмерного белка. В более предпочтительных вариантах осуществления антигенный фрагмент сохраняет по меньшей мере 75% антигенности полноразмерного белка. Антигенные фрагменты могут составлять только 20 аминокислот или наоборот могут представлять собой крупные фрагменты, в которых отсутствует всего одна аминокислота из полноразмерного белка. В конкретных вариантах осуществления антигенный фрагмент содержит от 25 до 150 аминокислотных остатков. В других вариантах осуществления антигенный фрагмент содержит от 50 до 250 аминокислотных остатков. Например, для FeLV гликопротеин gp45 FeLV и гликопротеин gp70 FeLV являются антгенными фрагментами гликопротеина gp85 FeLV, в то время как для FCV один антигенный фрагмент капсидного белка FCV содержит область E ORF2.
Как используют в рамках изобретения одна аминокислотная последовательность на 100% "идентична" или обладает 100% "идентичностью" со второй аминокислотной последовательностью, когда аминокислотные остатки обеих последовательностей идентичны. Таким образом, аминокислотная последовательность является на 50% "идентичной" второй аминокислотной последовательности, когда 50% аминокислотных остатков двух аминокислотных последовательностей являются идентичными. Сравнение последовательностей проводят на протяжении непрерывного блока аминокислотных остатков, составляющих данный белок, например, белок или часть полипептида, подвергаемые сравнению. В конкретном варианте осуществления учитывают выбранные делеции или инсерции, которые в остальном могут изменять соответствие между двумя аминокислотными последовательностями.
Как используют в рамках изобретения, процентную идентичность нуклеотидных и аминокислотных последовательностей можно определять с использованием алгоритма C, MacVector (MacVector, Inc. Cary, NC 27519), Vector NTI (Informax, Inc. MD), Oxford Molecular Group PLC (1996) и Clustal W с параметрами выравнивания по умолчанию и параметрами по умолчанию для идентичности. Эти коммерчески доступные программы также можно использовать для определения сходства последовательностей с использованием одних и тех же или аналогичных параметров по умолчанию. Альтернативно можно использовать поиск Advanced Blast с условиями фильтра по умолчанию, например, с использованием программы GCG (Genetics Computer Group, Program Manual for the GCG Package, Version 7, Madison, Wisconsin) pileup с использованием параметров по умолчанию.
Как используют в рамках изобретения, термин "инактивированный" микроорганизм используют взаимозаменяемо с термином "убитый" микроорганизм. Для целей настоящего изобретения "инактивированный" микроорганизм представляет собой организм, который способен индуцировать иммунный ответ у животного, но который не способен инфицировать животное. Антиген по настоящему изобретению (например, инактивированный кошачий кальцивирус) может быть инактивирован средство, выбранным из группы, состоящей из бинарного этиленимина, формалина, бета-пропиолактона, тимеросала или нагревания. В конкретном варианте осуществления инактивированные изоляты кошачьего кальцивируса в комбинации с RP по настоящему изобретению инактивированы посредством бинарного этиленимина.
РНК-репликонные частицы альфавирусов по настоящему изобретению можно лиофилизировать и регидратировать посредством стерильного водного разбавителя. С другой стороны, когда РНК-репликонные частицы альфавирусов хранят по отдельности, но предполагается их смешение с другими компонентами вакцины перед введением, РНК-репликонные частицы альфавирусов можно хранить в стабилизирующем растворе этих компонентов, например, в растворе с высоким содержанием сахарозы.
Вакцину по настоящему изобретению можно без труда вводить любым стандартным путем, включая внутривенную, внутримышечную, подкожную, пероральную, интраназальную, внутрикожную и/или внутрибрюшинную вакцинацию. Специалисту в данной области будет понятно, что вакцинную композицию предпочтительно составляют надлежащим образом для каждого типа реципиентного животного и пути введения.
Таким образом, настоящее изобретение также относится к способам иммунизации животного семейства кошачьих против кошачьих патогенов. Один такой способ включает инъекцию животному семейства кошачьих иммунологически эффективного количества вакцины по настоящему изобретению, так что у животного семейства кошачьих продуцируются надлежащие антитела против патогена.
ПОЛИВАЛЕНТНЫЕ ВАКЦИНЫ
Таким образом, настоящее изобретение относится к поливалентным вакцинам, содержащим по меньшей мере один модифицированный живой кошачий патоген и одну или несколько РНК-репликонных частиц альфавирусов. Например, кодирующую последовательность белкового антигена или его антигенного фрагмента или комбинацию таких кодирующих последовательностей белковых антигенов, пригодных в вакцинах для животных семейства кошачьих, можно добавлять к РНК-репликонной частице альфавируса (RP) или комбинировать в одной RP, в качестве RP, которая кодирует, например, капсидный белок FCV и/или гликопротеин (gp85) FeLV в поливалентной вакцине.
В конкретных вариантах осуществления вакцины содержат по меньшей мере один модифицированный живой кошачий патоген и РНК-репликонную частицу альфавируса, которая кодирует капсидный белок F9-подобного FCV или его антигенный фрагмент, и/или капсидный белок VS-FCV или его антигенный фрагмент, с другой РНК-репликонной частицей альфавируса, которая кодирует gp85 FeLV или его антигенный фрагмент. В других вариантах осуществления вакцины содержат по меньшей мере один модифицированный живой кошачий патоген и одну РНК-репликонную частицу альфавируса, которая кодирует капсидный белок VS-FCV или его антигенный фрагмент, другую РНК-репликонную частицу альфавируса, которая кодирует gp85 FeLV или его антигенный фрагмент, и третью РНК-репликонную частицу альфавируса, которая кодирует капсидный белок F9-подобного FCV или его антигенный фрагмент. В других вариантах осуществления вакцины содержат по меньшей мере один модифицированный живой кошачий патоген и РНК-репликонную частицу альфавируса, которая кодирует капсидный белок F9-подобного FCV или его антигенный фрагмент, капсидный белок VS-FCV или его антигенный фрагмент, и gp85 FeLV или его антигенный фрагмент.
Примеры патогенов, из которых могут происходить один или несколько таких белковых антигенов, включают вирус кошачьего вирусного ринотрахеита (FVR), вирус кошачьего лейкоза (FeLV), вирус кошачьей панлейкопении (FPL), кошачий вирус герпеса (FHV), другие штаммы FCV, кошачий парвовирус (FPV), вирус кошачьего инфекционного перитонита (FIPV), вирус кошачьего иммунодефицита, вирус болезни Борна (BDV), вирус бешенства, вирус кошачьего гриппа, вирус собачьего гриппа, вирус птичьего гриппа, собачий пневмовирус, кошачий пневмовирус, Chlamydophila felis (FKA Chlamydophila psittaci), Bordetella bronchiseptica и Bartonella spp. (например, B. henselae). В конкретных вариантах осуществления кодирующая последовательность для капсидного белка или аналогичного белка из одного или нескольких из этих кошачьих или собачьих патогенов может быть встроена в одну и ту же RP в качестве антигена FCV. Альтернативно или в комбинации, кодирующая последовательность для капсидного белка или аналогичного белка из одного или нескольких из этих кошачьих или собачьих патогенов может быть встроена в одну или несколько других RP, которые могут быть скомбинированы в вакцине с RP, которая кодирует капсидный белок F9-подобного FCV или его антигенный фрагмент, и/или капсидный белок VS-FCV или его антигенный фрагмент.
Таким образом, настоящее изобретение относится к вакцинам, содержащим одну или несколько РНК-репликонных частиц альфавирусов (RP) по настоящему изобретению [например, капсидный белок VS-FCV или его антигенный фрагмент] вместе с одним или несколькими модифицированными живыми (аттенуированными) изолятами вируса, например, живым аттенуированным более ранним вакцинным штаммом FCV, таким как живой аттенуированный FCV F9, и/или живой аттенуированный кошачий вирус герпеса, и/или живой аттенуированный кошачий парвовирус, и/или живой аттенуированный вирус кошачьего лейкоза, и/или живой аттенуированный вирус кошачьего инфекционного перитонита, и/или живой аттенуированный вирус кошачьего иммунодефицита, и/или живой аттенуированный вирус болезни Борна, и/или живой аттенуированный вирус бешенства, и/или живой аттенуированный вирус кошачьего гриппа, и/или живой аттенуированный вирус собачьего гриппа, и/или живой аттенуированный вирус птичьего гриппа, и/или живой аттенуированный собачий пневмовирус, и/или живой аттенуированный кошачий пневмовирус. Кроме того, также в такие поливалентные вакцины могут быть включены живые аттенуированные Chlamydophila felis, и/или живые аттенуированные Bordetella bronchiseptica, и/или живые аттенуированные Bartonella spp. (например, B. henselae).
Более того, вакцины по настоящему изобретению, содержащие одну или несколько РНК-репликонных частиц альфавирусов по настоящему изобретению [например, кодирующих капсидный белок VS-FCV или его антигенный фрагмент] с одним или несколькими модифицированными живыми изолятами вируса, кроме того, могут содержать один или несколько убитых изолятов вируса, таких как убитый штамм FCV и/или убитый кошачий вирус герпеса, и/или убитый кошачий парвовирус, и/или убитый вирус кошачьего лейкоза, и/или убитый вирус кошачьего инфекционного перитонита, и/или убитый вирус кошачьего иммунодефицита, и/или убитый вирус болезни Борна, и/или убитый вирус бешенства, и/или убитый вирус кошачьего гриппа, и/или убитый вирус собачьего гриппа, и/или убитый вирус птичьего гриппа, и/или убитый собачий пневмовирус, и/или убитый кошачий пневмовирус. Кроме того, также в такие поливалентные вакцины могут быть включены бактерины Chlamydophila felis, и/или Bordetella bronchiseptica, и/или Bartonella spp. (например, B. henselae).
Также следует понимать, что настоящее изобретение не ограничивается конкретными конфигурациями, стадиями процесса и материалами, описанными в настоящем описании, поскольку такие конфигурации, стадии процесса и материалы могут в некоторой степени варьироваться. Также следует понимать, что терминологию, используемую в настоящем описании, используют только для описания конкретных вариантов осуществления, и она не предназначена для ограничения, поскольку объем настоящего изобретения ограничивается только прилагаемой формулой изобретения и ее эквивалентами.
ТАБЛИЦА ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
| SEQ ID NO: | Описание | Тип |
| 1 | Кошачий кальцивирус (VS-FCV) | нуклеиновая кислота ДНК |
| 2 | Кошачий кальцивирус (VS-FCV) | Аминокислотная |
| 3 | Кошачий кальцивирус (F9-подобный) | нуклеиновая кислота ДНК |
| 4 | Кошачий кальцивирус (F9-подобный) | Аминокислотная |
| 5 | гликопротеин (gp85) вируса FeLV | нуклеиновая кислота ДНК |
| 6 | гликопротеин (gp85) вируса FeLV | аминокислотная |
| 7 | гликопротеин (gp70) вируса FeLV | нуклеиновая кислота ДНК |
| 8 | гликопротеин (gp70) вируса FeLV | аминокислотная |
| 9 | Гликопротеин вируса бешенства | нуклеиновая кислота ДНК |
| 10 | Гликопротеин вируса бешенства | аминокислотная |
| 11 | GGCGCGCCGCACC | нуклеиновая кислота |
| 12 | Кошачий кальцивирус (VS-FCV) | нуклеиновая кислота РНК |
| 13 | Кошачий кальцивирус (F9-подобный) | нуклеиновая кислота РНК |
| 14 | гликопротеин (gp85) вируса FeLV | нуклеиновая кислота РНК |
| 15 | гликопротеин (gp70) вируса FeLV | нуклеиновая кислота РНК |
| 16 | Гликопротеин вируса бешенства | нуклеиновая кислота РНК |
| TTAATTAA | нуклеиновая кислота |
ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ
Капсид кошачьего кальцивируса (VS-FCV) SEQ ID NO: 1
atggctgacgacggatctgtgaccaccccagaacaaggaacaatggtcggaggagtgattgccgaacccagcgctcagatgtcaactgcggcggacatggcctccggaaagtcggtggactccgagtgggaagccttcttctcgttccacacgtccgtgaactggagcacctccgaaacccaaggaaagatcctcttcaagcagtccctgggtcccctgctgaacccgtacctggagcacatcagcaagctgtacgtcgcttggagcgggtcgatcgaagtgcgattttccatctcgggaagcggcgtgttcggtggtaaactggccgccatcgtcgtgccgcctggtgtcgaccctgtccagtcaacctccatgctgcagtacccgcacgtcctgttcgacgcaagacaagtggagccagtgatcttctccatcccggacctccgcaacagcctgtatcacttgatgtccgataccgataccacttccctcgtgatcatggtgtacaacgatctgatcaacccgtacgccaatgactccaacagctcgggttgcatcgtgaccgtcgaaacgaagcctggcatcgatttcaagtttcatctgctgaaaccgcccggatccatgcttactcacgggtccatcccttccgatctgatccccaagagctcctccctgtggattgggaaccgccactggaccgatattaccgatttcgtgattcggcctttcgtgttccaagccaaccggcacttcgacttcaaccaggagactgccggctggtcaactccacggttccgcccattggccgtgactgtgtcgcagtcaaagggagccaagctcgggaacggcatcgccaccgactacattgtgcctggaatccccgacggatggcctgatactaccatccccaccaagctgacccctaccggagattacgccatcacctcctccgacggcaatgatattgaaaccaagctggaatacgagaacgcggacgtgattaagaacaacaccaacttccgctccatgtatatctgcggaagcctccagagggcttggggcgacaagaagatcagcaacaccgggttcatcactaccggagtgatttctgacaactccatcagcccttcgaacacaattgaccagtccaagatcgtggtgtaccaggacaaccatgtcaattcggaggtccagactagcgacatcactcttgccatcctgggctacaccggaattggagaagaggccataggcgccaaccgggactccgtcgtgagaatttccgtgcttccggaaactggagcaaggggcggaaatcaccccatcttctacaaaaattccatgaagctgggctacgtgatctcctccattgacgtgttcaactcccaaatcctccacacctcgcgccagctgtcactgaacaactacttgttgccccctgactccttcgcggtgtaccggattattgacagcaacggatcatggttcgacattgggattgacagcgatgggttttcattcgtgggcgtgtcgtcatttccaaagctggagtttccgctgtccgcctcatacatgggcatccagctcgcaaagatccggctggcgtccaacatccggtcatccatgactaagctgtga
Капсид кошачьего кальцивируса (VS-FCV) SEQ ID NO: 2
MADDGSVTTPEQGTMVGGVIAEPSAQMSTAADMASGKSVDSEWEAFFSFHTSVNWSTSETQGKILFKQSLGPLLNPYLEHISKLYVAWSGSIEVRFSISGSGVFGGKLAAIVVPPGVDPVQSTSMLQYPHVLFDARQVEPVIFSIPDLRNSLYHLMSDTDTTSLVIMVYNDLINPYANDSNSSGCIVTVETKPGIDFKFHLLKPPGSMLTHGSIPSDLIPKSSSLWIGNRHWTDITDFVIRPFVFQANRHFDFNQETAGWSTPRFRPLAVTVSQSKGAKLGNGIATDYIVPGIPDGWPDTTIPTKLTPTGDYAITSSDGNDIETKLEYENADVIKNNTNFRSMYICGSLQRAWGDKKISNTGFITTGVISDNSISPSNTIDQSKIVVYQDNHVNSEVQTSDITLAILGYTGIGEEAIGANRDSVVRISVLPETGARGGNHPIFYKNSMKLGYVISSIDVFNSQILHTSRQLSLNNYLLPPDSFAVYRIIDSNGSWFDIGIDSDGFSFVGVSSFPKLEFPLSASYMGIQLAKIRLASNIRSSMTKL
Капсид кошачьего кальцивируса (VS-FCV) (SEQ ID NO: 12)
auggcugacgacggaucugugaccaccccagaacaaggaacaauggucggaggagugauugccgaacccagcgcucagaugucaacugcggcggacauggccuccggaaagucgguggacuccgagugggaagccuucuucucguuccacacguccgugaacuggagcaccuccgaaacccaaggaaagauccucuucaagcagucccuggguccccugcugaacccguaccuggagcacaucagcaagcuguacgucgcuuggagcgggucgaucgaagugcgauuuuccaucucgggaagcggcguguucggugguaaacuggccgccaucgucgugccgccuggugucgacccuguccagucaaccuccaugcugcaguacccgcacguccuguucgacgcaagacaaguggagccagugaucuucuccaucccggaccuccgcaacagccuguaucacuugauguccgauaccgauaccacuucccucgugaucaugguguacaacgaucugaucaacccguacgccaaugacuccaacagcucggguugcaucgugaccgucgaaacgaagccuggcaucgauuucaaguuucaucugcugaaaccgcccggauccaugcuuacucacggguccaucccuuccgaucugauccccaagagcuccucccuguggauugggaaccgccacuggaccgauauuaccgauuucgugauucggccuuucguguuccaagccaaccggcacuucgacuucaaccaggagacugccggcuggucaacuccacgguuccgcccauuggccgugacugugucgcagucaaagggagccaagcucgggaacggcaucgccaccgacuacauugugccuggaauccccgacggauggccugauacuaccauccccaccaagcugaccccuaccggagauuacgccaucaccuccuccgacggcaaugauauugaaaccaagcuggaauacgagaacgcggacgugauuaagaacaacaccaacuuccgcuccauguauaucugcggaagccuccagagggcuuggggcgacaagaagaucagcaacaccggguucaucacuaccggagugauuucugacaacuccaucagcccuucgaacacaauugaccaguccaagaucgugguguaccaggacaaccaugucaauucggagguccagacuagcgacaucacucuugccauccugggcuacaccggaauuggagaagaggccauaggcgccaaccgggacuccgucgugagaauuuccgugcuuccggaaacuggagcaaggggcggaaaucaccccaucuucuacaaaaauuccaugaagcugggcuacgugaucuccuccauugacguguucaacucccaaauccuccacaccucgcgccagcugucacugaacaacuacuuguugcccccugacuccuucgcgguguaccggauuauugacagcaacggaucaugguucgacauugggauugacagcgauggguuuucauucgugggcgugucgucauuuccaaagcuggaguuuccgcuguccgccucauacaugggcauccagcucgcaaagauccggcuggcguccaacauccggucauccaugacuaagcuguga
Капсид кошачьего кальцивируса (F9-подобного) (SEQ ID NO: 3)
atgactgccccggaacaaggaacgatggtcggaggagtgattgcagaaccgtcagcacagatgtccaccgctgccgacatggccactggaaagagcgtggactccgaatgggaagccttcttctccttccacacttcggtcaactggtcgactagcgaaacccaggggaagattttgttcaagcaatccctcggccctctgctgaacccctacctggagcatctggccaagctgtacgtggcatggtcgggcagcatcgaagtgcgctttagcatttccggctccggagtgttcgggggaaagcttgctgccattgtcgtgccgccaggagtggacccggtgcagtccacttctatgctccaatacccgcatgtcctgttcgacgccagacaggtggagcctgtgatcttttgcctgccggatctcaggtccaccctgtatcacctcatgtccgacaccgacaccacctcgctcgtgatcatggtgtacaacgacctgatcaacccctacgctaacgacgccaacagctcaggttgcattgtgactgtcgaaaccaagccaggccctgacttcaagtttcatttgctgaagccgcccggttccatgctgacccacggctcgatcccatccgacctgatccccaagacgagctccctgtggatcggaaaccgctactggtccgatattaccgacttcgtgatcagaccattcgtgttccaagccaaccgccatttcgacttcaaccaggaaaccgcaggatggtcgacccctcgattccgcccgatttcagtgaccatcaccgaacagaacggcgcgaagctgggaattggcgtggcgaccgactacatcgtgccgggaatcccggatggatggcctgatacgaccattcccggggagctgatccctgccggggactacgccatcaccaacggtactggaaacgacatcaccactgccaccggttacgacaccgccgacatcataaagaacaacaccaacttcagaggaatgtacatttgcggctccctgcaacgcgcttggggtgacaaaaagatctcgaacactgccttcatcacaacagcgactctggacggcgataacaacaacaagatcaatccttgtaataccatcgaccagtccaaaatcgtggtgttccaggataaccacgtgggaaagaaggcgcagacctccgacgacactctggcgctgcttggctacaccgggatcggcgagcaggccattggaagcgatcgggatcgggtcgtgcggatctccaccctccccgagactggagcaaggggaggcaaccaccccatcttttacaaaaacagcattaagctcggatacgtcatccgctccatcgatgtgttcaactctcaaatcctgcacacttcgcggcagctgtccctgaaccactacctcttgccgcccgactccttcgccgtctaccggatcattgattcgaacgggagctggttcgacatcggcattgatagcgatggcttctcgtttgtgggcgtgtcgggcttcgggaagctggagttcccactgagcgcctcatacatgggtatccagctggccaagatcaggctggcctccaacatccgctcacctatgactaagctgtga
Капсид кошачьего кальцивируса (F9-подобный) (SEQ ID NO: 4)
MTAPEQGTMVGGVIAEPSAQMSTAADMATGKSVDSEWEAFFSFHTSVNWSTSETQGKILFKQSLGPLLNPYLEHLAKLYVAWSGSIEVRFSISGSGVFGGKLAAIVVPPGVDPVQSTSMLQYPHVLFDARQVEPVIFCLPDLRSTLYHLMSDTDTTSLVIMVYNDLINPYANDANSSGCIVTVETKPGPDFKFHLLKPPGSMLTHGSIPSDLIPKTSSLWIGNRYWSDITDFVIRPFVFQANRHFDFNQETAGWSTPRFRPISVTITEQNGAKLGIGVATDYIVPGIPDGWPDTTIPGELIPAGDYAITNGTGNDITTATGYDTADIIKNNTNFRGMYICGSLQRAWGDKKISNTAFITTATLDGDNNNKINPCNTIDQSKIVVFQDNHVGKKAQTSDDTLALLGYTGIGEQAIGSDRDRVVRISTLPETGARGGNHPIFYKNSIKLGYVIRSIDVFNSQILHTSRQLSLNHYLLPPDSFAVYRIIDSNGSWFDIGIDSDGFSFVGVSGFGKLEFPLSASYMGIQLAKIRLASNIRSPMTKL
Капсид кошачьего кальцивируса (F9-подобного) (SEQ ID NO: 13)
augacugccccggaacaaggaacgauggucggaggagugauugcagaaccgucagcacagauguccaccgcugccgacauggccacuggaaagagcguggacuccgaaugggaagccuucuucuccuuccacacuucggucaacuggucgacuagcgaaacccaggggaagauuuuguucaagcaaucccucggcccucugcugaaccccuaccuggagcaucuggccaagcuguacguggcauggucgggcagcaucgaagugcgcuuuagcauuuccggcuccggaguguucgggggaaagcuugcugccauugucgugccgccaggaguggacccggugcaguccacuucuaugcuccaauacccgcauguccuguucgacgccagacagguggagccugugaucuuuugccugccggaucucagguccacccuguaucaccucauguccgacaccgacaccaccucgcucgugaucaugguguacaacgaccugaucaaccccuacgcuaacgacgccaacagcucagguugcauugugacugucgaaaccaagccaggcccugacuucaaguuucauuugcugaagccgcccgguuccaugcugacccacggcucgaucccauccgaccugauccccaagacgagcucccuguggaucggaaaccgcuacugguccgauauuaccgacuucgugaucagaccauucguguuccaagccaaccgccauuucgacuucaaccaggaaaccgcaggauggucgaccccucgauuccgcccgauuucagugaccaucaccgaacagaacggcgcgaagcugggaauuggcguggcgaccgacuacaucgugccgggaaucccggauggauggccugauacgaccauucccggggagcugaucccugccggggacuacgccaucaccaacgguacuggaaacgacaucaccacugccaccgguuacgacaccgccgacaucauaaagaacaacaccaacuucagaggaauguacauuugcggcucccugcaacgcgcuuggggugacaaaaagaucucgaacacugccuucaucacaacagcgacucuggacggcgauaacaacaacaagaucaauccuuguaauaccaucgaccaguccaaaaucgugguguuccaggauaaccacgugggaaagaaggcgcagaccuccgacgacacucuggcgcugcuuggcuacaccgggaucggcgagcaggccauuggaagcgaucgggaucgggucgugcggaucuccacccuccccgagacuggagcaaggggaggcaaccaccccaucuuuuacaaaaacagcauuaagcucggauacgucauccgcuccaucgauguguucaacucucaaauccugcacacuucgcggcagcugucccugaaccacuaccucuugccgcccgacuccuucgccgucuaccggaucauugauucgaacgggagcugguucgacaucggcauugauagcgauggcuucucguuugugggcgugucgggcuucgggaagcuggaguucccacugagcgccucauacauggguauccagcuggccaagaucaggcuggccuccaacauccgcucaccuaugacuaagcuguga
Гликопротеин (gp85) оболочки вируса кошачьего лейкоза SEQ ID NO: 5
atggagtcaccaacacaccctaaaccttctaaagacaaaaccctctcgtggaatctcgccttccttgtgggcatcctgttcacaatcgacatcggcatggccaacccttcgccgcatcagatctacaatgtgacatgggtcattactaatgtgcagacaaacacccaggcaaatgctacttctatgcttggtactctgactgatgcttatccaaccctgcacgtcgacctttgcgatctcgtcggtgacacatgggagcccatcgtgctgaatccaactaatgtcaaacatggtgccaggtattcttctagcaaatacgggtgtaagaccactgatcggaagaaacagcaacaaacctacccattctacgtgtgcccgggtcacgcaccgtccctgggtccgaagggaacacattgtgggggagcccaagacggtttttgcgctgcttggggttgtgaaacaaccggagaagcctggtggaagcctacctcatcttgggactacattactgtgaaaagaggctctagccaggataacagctgcgaaggaaagtgtaatcccctggtgcttcaattcacccagaaaggccggcaggcatcatgggatggaccgaaaatgtggggacttagactctatcgcaccggatacgaccccatcgctctgtttactgtgtcacgccaagtctccaccattactccgccacaggccatggggccgaatctggtcctccccgatcagaagccaccctcacggcaaagtcaaaccggctcaaaagtggccacccaacggccccagacaaatgagtccgcacctaggtcagtggcacctacaacaatgggtccaaagcggatcggaaccggagacaggctcattaacctcgtgcaagggacttatctggcccttaacgctactgaccccaacaagaccaaggattgctggctctgccttgtgagcagacctccttactatgaggggatcgccattctcggaaactactcaaatcagaccaacccccctccgtcgtgtctgagcaccccccagcacaagcttactatttcagaagtcagtggacagggaatgtgcatcggaaccgtgccaaagactcatcaagccctttgcaacaaaactcaacaagggcacactggagctcattatctcgccgcacctaacgggacctactgggcttgcaatactggattgaccccgtgtatctctatggccgtgctgaattggacttccgacttctgcgtgcttattgagctttggcctagagtgacataccatcagcctgagtacgtctatacccatttcgccaaggcagtcagattccggcgggagcctatctccctgactgtggccttgatgctcggtggactgacagtgggaggaattgcagctggagtcggaactggaaccaaggccctgctcgaaactgctcagttccggcagctgcagatggccatgcacactgacatccaggctctggaggaatcaatttcagcccttgagaaaagcttgacctcgctgtctgaagtggtcctccaaaacaggcgcggtttggacatcctgttccttcaagagggtggtctgtgcgccgctctcaaggaggaatgctgtttctacgctgaccataccgggctggtgcgcgataacatggcaaagctgcgggaacgcttgaaacagaggcagcaactgttcgactctcagcagggatggttcgagggctggtttaacaagagcccatggtttaccactctgatctcttcaatcatgggtccactgctcatcctgcttctgattcttctcttcggaccgtgtattctcaacaggctggtgcagtttgtcaaggacagaatctcggtggtccaggccctgattcttactcagcagtatcagcagattaagcagtacgaccccgatcggccttga
Гликопротеин (gp85) оболочки вируса кошачьего лейкоза SEQ ID NO: 6
MESPTHPKPSKDKTLSWNLAFLVGILFTIDIGMANPSPHQIYNVTWVITNVQTNTQANATSMLGTLTDAYPTLHVDLCDLVGDTWEPIVLNPTNVKHGARYSSSKYGCKTTDRKKQQQTYPFYVCPGHAPSLGPKGTHCGGAQDGFCAAWGCETTGEAWWKPTSSWDYITVKRGSSQDNSCEGKCNPLVLQFTQKGRQASWDGPKMWGLRLYRTGYDPIALFTVSRQVSTITPPQAMGPNLVLPDQKPPSRQSQTGSKVATQRPQTNESAPRSVAPTTMGPKRIGTGDRLINLVQGTYLALNATDPNKTKDCWLCLVSRPPYYEGIAILGNYSNQTNPPPSCLSTPQHKLTISEVSGQGMCIGTVPKTHQALCNKTQQGHTGAHYLAAPNGTYWACNTGLTPCISMAVLNWTSDFCVLIELWPRVTYHQPEYVYTHFAKAVRFRREPISLTVALMLGGLTVGGIAAGVGTGTKALLETAQFRQLQMAMHTDIQALEESISALEKSLTSLSEVVLQNRRGLDILFLQEGGLCAALKEECCFYADHTGLVRDNMAKLRERLKQRQQLFDSQQGWFEGWFNKSPWFTTLISSIMGPLLILLLILLFGPCILNRLVQFVKDRISVVQALILTQQYQQIKQYDPDRP*
Гликопротеин (gp85) оболочки вируса кошачьего лейкоза SEQ ID NO: 14
auggagucaccaacacacccuaaaccuucuaaagacaaaacccucucguggaaucucgccuuccuugugggcauccuguucacaaucgacaucggcauggccaacccuucgccgcaucagaucuacaaugugacaugggucauuacuaaugugcagacaaacacccaggcaaaugcuacuucuaugcuugguacucugacugaugcuuauccaacccugcacgucgaccuuugcgaucucgucggugacacaugggagcccaucgugcugaauccaacuaaugucaaacauggugccagguauucuucuagcaaauacggguguaagaccacugaucggaagaaacagcaacaaaccuacccauucuacgugugcccgggucacgcaccgucccuggguccgaagggaacacauugugggggagcccaagacgguuuuugcgcugcuugggguugugaaacaaccggagaagccugguggaagccuaccucaucuugggacuacauuacugugaaaagaggcucuagccaggauaacagcugcgaaggaaaguguaauccccuggugcuucaauucacccagaaaggccggcaggcaucaugggauggaccgaaaauguggggacuuagacucuaucgcaccggauacgaccccaucgcucuguuuacugugucacgccaagucuccaccauuacuccgccacaggccauggggccgaaucugguccuccccgaucagaagccacccucacggcaaagucaaaccggcucaaaaguggccacccaacggccccagacaaaugaguccgcaccuaggucaguggcaccuacaacaauggguccaaagcggaucggaaccggagacaggcucauuaaccucgugcaagggacuuaucuggcccuuaacgcuacugaccccaacaagaccaaggauugcuggcucugccuugugagcagaccuccuuacuaugaggggaucgccauucucggaaacuacucaaaucagaccaaccccccuccgucgugucugagcaccccccagcacaagcuuacuauuucagaagucaguggacagggaaugugcaucggaaccgugccaaagacucaucaagcccuuugcaacaaaacucaacaagggcacacuggagcucauuaucucgccgcaccuaacgggaccuacugggcuugcaauacuggauugaccccguguaucucuauggccgugcugaauuggacuuccgacuucugcgugcuuauugagcuuuggccuagagugacauaccaucagccugaguacgucuauacccauuucgccaaggcagucagauuccggcgggagccuaucucccugacuguggccuugaugcucgguggacugacagugggaggaauugcagcuggagucggaacuggaaccaaggcccugcucgaaacugcucaguuccggcagcugcagauggccaugcacacugacauccaggcucuggaggaaucaauuucagcccuugagaaaagcuugaccucgcugucugaagugguccuccaaaacaggcgcgguuuggacauccuguuccuucaagaggguggucugugcgccgcucucaaggaggaaugcuguuucuacgcugaccauaccgggcuggugcgcgauaacauggcaaagcugcgggaacgcuugaaacagaggcagcaacuguucgacucucagcagggaugguucgagggcugguuuaacaagagcccaugguuuaccacucugaucucuucaaucauggguccacugcucauccugcuucugauucuucucuucggaccguguauucucaacaggcuggugcaguuugucaaggacagaaucucggugguccaggcccugauucuuacucagcaguaucagcagauuaagcaguacgaccccgaucggccuuga
Гликопротеин (gp70) оболочки вируса кошачьего лейкоза SEQ ID NO: 7
aatcctagtccacaccaaatatataatgtaacttgggtaataaccaatgtacaaactaacacccaagctaacgccacctctatgttaggaaccttaaccgatgcctaccctaccctacatgttgacttatgtgacctagtgggagacacctgggaacctatagtcctaaacccaaccaatgtaaaacacggggcacgttactcctcctcaaaatatggatgtaaaactacagatagaaaaaaacagcaacagacataccccttttacgtctgccccggacatgccccctcgttggggccaaagggaacacattgtggaggggcacaagatgggttttgtgccgcatggggatgtgagaccaccggagaagcttggtggaagcccacctcctcatgggactatatcacagtaaaaagagggagtagtcaggacaatagctgtgagggaaaatgcaaccccctggttttgcagttcacccagaagggaagacaagcctcttgggacggacctaagatgtggggattgcgactataccgtacaggatatgaccctatcgctttattcacggtgtcccggcaggtatcaaccattacgccgcctcaggcaatgggaccaaacctagtcttacctgatcaaaaacccccatcccgacaatctcaaacagggtccaaagtggcgacccagaggccccaaacgaatgaaagcgccccaaggtctgttgcccccaccaccatgggtcccaaacggattgggaccggagataggttaataaatttagtacaagggacatacctagccttaaatgccaccgaccccaacaaaactaaagactgttggctctgcctggtttctcgaccaccctattacgaagggattgcaatcttaggtaactacagcaaccaaacaaacccccccccatcctgcctatctactccgcaacacaaactaactatatctgaagtatcagggcaaggaatgtgcatagggactgttcctaaaacccaccaggctttgtgcaataagacacaacagggacatacaggggcgcactatctagccgcccccaacggcacctattgggcctgtaacactggactcaccccatgcatttccatggcggtgctcaattggacctctgatttttgtgtcttaatcgaattatggcccagagtgacttaccatcaacccgaatatgtgtacacacattttgccaaagctgtcaggttccgaaga
Гликопротеин (gp70) оболочки вируса кошачьего лейкоза SEQ ID NO: 8
NPSPHQIYNVTWVITNVQTNTQANATSMLGTLTDAYPTLHVDLCDLVGDTWEPIVLNPTNVKHGARYSSSKYGCKTTDRKKQQQTYPFYVCPGHAPSLGPKGTHCGGAQDGFCAAWGCETTGEAWWKPTSSWDYITVKRGSSQDNSCEGKCNPLVLQFTQKGRQASWDGPKMWGLRLYRTGYDPIALFTVSRQVSTITPPQAMGPNLVLPDQKPPSRQSQTGSKVATQRPQTNESAPRSVAPTTMGPKRIGTGDRLINLVQGTYLALNATDPNKTKDCWLCLVSRPPYYEGIAILGNYSNQTNPPPSCLSTPQHKLTISEVSGQGMCIGTVPKTHQALCNKTQQGHTGAHYLAAPNGTYWACNTGLTPCISMAVLNWTSDFCVLIELWPRVTYHQPEYVYTHFAKAVRFRR
Гликопротеин (gp70) оболочки вируса кошачьего лейкоза SEQ ID NO: 15
aauccuaguccacaccaaauauauaauguaacuuggguaauaaccaauguacaaacuaacacccaagcuaacgccaccucuauguuaggaaccuuaaccgaugccuacccuacccuacauguugacuuaugugaccuagugggagacaccugggaaccuauaguccuaaacccaaccaauguaaaacacggggcacguuacuccuccucaaaauauggauguaaaacuacagauagaaaaaaacagcaacagacauaccccuuuuacgucugccccggacaugcccccucguuggggccaaagggaacacauuguggaggggcacaagauggguuuugugccgcauggggaugugagaccaccggagaagcuugguggaagcccaccuccucaugggacuauaucacaguaaaaagagggaguagucaggacaauagcugugagggaaaaugcaacccccugguuuugcaguucacccagaagggaagacaagccucuugggacggaccuaagauguggggauugcgacuauaccguacaggauaugacccuaucgcuuuauucacggugucccggcagguaucaaccauuacgccgccucaggcaaugggaccaaaccuagucuuaccugaucaaaaacccccaucccgacaaucucaaacaggguccaaaguggcgacccagaggccccaaacgaaugaaagcgccccaaggucuguugcccccaccaccaugggucccaaacggauugggaccggagauagguuaauaaauuuaguacaagggacauaccuagccuuaaaugccaccgaccccaacaaaacuaaagacuguuggcucugccugguuucucgaccacccuauuacgaagggauugcaaucuuagguaacuacagcaaccaaacaaacccccccccauccugccuaucuacuccgcaacacaaacuaacuauaucugaaguaucagggcaaggaaugugcauagggacuguuccuaaaacccaccaggcuuugugcaauaagacacaacagggacauacaggggcgcacuaucuagccgcccccaacggcaccuauugggccuguaacacuggacucaccccaugcauuuccauggcggugcucaauuggaccucugauuuuugugucuuaaucgaauuauggcccagagugacuuaccaucaacccgaauauguguacacacauuuugccaaagcugucagguuccgaaga
G ВИРУСА БЕШЕНСТВА (SEQ ID NO: 9)
atggtgccgcaggctctcctgtttgtcccccttctggtctttccattgtgttttgggaaattccctatctacacaattccggacaagttgggaccctggagcccaattgacattcatcatctcagctgcccgaacaatttggtcgtggaggacgaaggatgcaccaacctgtcggggttctcctacatggaattgaaagtcggatacatcagtgccattaagatgaacgggttcacttgcacaggcgtcgtgactgaagctgagacatacactaacttcgtgggatatgtcactaccactttcaaaagaaagcatttccgccctactcctgatgcttgtagggccgcatacaactggaagatggccggtgaccccagatatgaggaatcacttcacaatccgtaccctgactaccactggcttcggactgtcaaaaccaccaaggagtcactcgtgatcattagtccaagtgtggctgatcttgacccatacgaccggtcacttcactcacgggtgttcccgggggggaattgctctggtgtcgcagtgtcgtcaacctactgctccacaaaccacgattacaccatttggatgccagaaaatcctcggcttggtatgtcatgtgacattttcaccaattctcgggggaagagggcttccaaagggtctgaaacttgcggctttgtcgatgagcggggcttgtataagtcacttaaaggtgcttgcaaactcaagctttgtggtgtcttgggattgagattgatggatggaacttgggtcgcaatgcagacttctaacgaaaccaaatggtgccctcccggacagcttgtgaatttgcatgactttcgctctgacgaaattgagcatcttgtcgtcgaggagttggtcaagaagcgggaagagtgtctggatgctttggaatcaatcatgaccaccaagtcagtgtctttcagacggctctcacatcttaggaaattggtgccaggttttggaaaagcatataccattttcaacaagacccttatggaagccgatgctcactacaagtctgtcaggacttggaatgagatcatcccgtctaaagggtgtcttagggtcggagggagatgtcatcctcatgtcaacggagtctttttcaatggtatcattcttggacctgacggaaatgtccttatccctgagatgcaatcttccctcctccagcaacacatggaacttcttgtctcatcggtcatcccccttatgcaccccctggctgacccatcaaccgtgttcaagaacggtgacgaggcagaggattttgtcgaggtccaccttcccgatgtgcatgaacggatctctggtgtcgaccttggactccctaactggggaaagtatgtccttctgtcggcaggagccctgactgccttgatgttgattatcttcctgatgacttgttggaggagagtcaatcggtcggagccaacacaacataatctcagaggaacaggaagggaggtgtcagtcacaccccaaagcgggaagatcatttcgtcttgggagtcatacaagagcggaggtgaaaccggactgtga
G ВИРУСА БЕШЕНСТВА (SEQ ID NO: 10)
MVPQALLFVPLLVFPLCFGKFPIYTIPDKLGPWSPIDIHHLSCPNNLVVEDEGCTNLSGFSYMELKVGYISAIKMNGFTCTGVVTEAETYTNFVGYVTTTFKRKHFRPTPDACRAAYNWKMAGDPRYEESLHNPYPDYHWLRTVKTTKESLVIISPSVADLDPYDRSLHSRVFPGGNCSGVAVSSTYCSTNHDYTIWMPENPRLGMSCDIFTNSRGKRASKGSETCGFVDERGLYKSLKGACKLKLCGVLGLRLMDGTWVAMQTSNETKWCPPGQLVNLHDFRSDEIEHLVVEELVKKREECLDALESIMTTKSVSFRRLSHLRKLVPGFGKAYTIFNKTLMEADAHYKSVRTWNEIIPSKGCLRVGGRCHPHVNGVFFNGIILGPDGNVLIPEMQSSLLQQHMELLVSSVIPLMHPLADPSTVFKNGDEAEDFVEVHLPDVHERISGVDLGLPNWGKYVLLSAGALTALMLIIFLMTCWRRVNRSEPTQHNLRGTGREVSVTPQSGKIISSWESYKSGGETGL*
G ВИРУСА БЕШЕНСТВА (SEQ ID NO: 16)
auggugccgcaggcucuccuguuugucccccuucuggucuuuccauuguguuuugggaaauucccuaucuacacaauuccggacaaguugggacccuggagcccaauugacauucaucaucucagcugcccgaacaauuuggucguggaggacgaaggaugcaccaaccugucgggguucuccuacauggaauugaaagucggauacaucagugccauuaagaugaacggguucacuugcacaggcgucgugacugaagcugagacauacacuaacuucgugggauaugucacuaccacuuucaaaagaaagcauuuccgcccuacuccugaugcuuguagggccgcauacaacuggaagauggccggugaccccagauaugaggaaucacuucacaauccguacccugacuaccacuggcuucggacugucaaaaccaccaaggagucacucgugaucauuaguccaaguguggcugaucuugacccauacgaccggucacuucacucacggguguucccgggggggaauugcucuggugucgcagugucgucaaccuacugcuccacaaaccacgauuacaccauuuggaugccagaaaauccucggcuugguaugucaugugacauuuucaccaauucucgggggaagagggcuuccaaagggucugaaacuugcggcuuugucgaugagcggggcuuguauaagucacuuaaaggugcuugcaaacucaagcuuuguggugucuugggauugagauugauggauggaacuugggucgcaaugcagacuucuaacgaaaccaaauggugcccucccggacagcuugugaauuugcaugacuuucgcucugacgaaauugagcaucuugucgucgaggaguuggucaagaagcgggaagagugucuggaugcuuuggaaucaaucaugaccaccaagucagugucuuucagacggcucucacaucuuaggaaauuggugccagguuuuggaaaagcauauaccauuuucaacaagacccuuauggaagccgaugcucacuacaagucugucaggacuuggaaugagaucaucccgucuaaagggugucuuagggucggagggagaugucauccucaugucaacggagucuuuuucaaugguaucauucuuggaccugacggaaauguccuuaucccugagaugcaaucuucccuccuccagcaacacauggaacuucuugucucaucggucaucccccuuaugcacccccuggcugacccaucaaccguguucaagaacggugacgaggcagaggauuuugucgagguccaccuucccgaugugcaugaacggaucucuggugucgaccuuggacucccuaacuggggaaaguauguccuucugucggcaggagcccugacugccuugauguugauuaucuuccugaugacuuguuggaggagagucaaucggucggagccaacacaacauaaucucagaggaacaggaagggaggugucagucacaccccaaagcgggaagaucauuucgucuugggagucauacaagagcggaggugaaaccggacuguga
Следующие примеры служат для обеспечения дальнейшего понимания изобретения, но они не предназначены для ограничения каким-либо образом эффективного объема изобретения.
ПРИМЕРЫ
ПРИМЕР 1
ВКЛЮЧЕНИЕ КОДИРУЮЩИХ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ ДЛЯ КАПСИДНЫХ БЕЛКОВ FCV В РНК-РЕПЛИКОННЫЕ ЧАСТИЦЫ АЛЬФАВИРУСОВ
ВВЕДЕНИЕ
РНК-вирусы можно использовать в качестве векторных носителей для введения вакцинных антигенов, которые встроены способами генной инженерии в их геномы. Однако их применение на сегодняшний день ограничено в основном включением вирусных антигенов в РНК-вирус, а затем введением вируса в хозяина-реципиента. Результатом является индукция защитных антител против включенных вирусных антигенов. РНК-репликонные частицы альфавирусов используют для кодирования патогенных антигенов. Такие платформы репликонов альфавирусов разработаны на основе нескольких различных альфавирусов, включая вирус венесуэльского энцефалита лошадей (VEE) [Pushko et al., Virology 239:389-401 (1997)], вирус Синдбис (SIN) [Bredenbeek et al., Journal of Virology 67:6439-6446 (1993), содержание которой включено в настоящее описание в качестве ссылки в полном объеме], и вирус леса Семлики (SFV) [Liljestrom and Garoff, Biotechnology (NY) 9:1356-1361 (1991), содержание которой включено в настоящее описание в качестве ссылки в полном объеме]. Более того, РНК-репликонные частицы альфавирусов являются основой для нескольких лицензированных USDA вакцин для свиней и птиц. Они включают вакцину от эпидемической диареи свиней, РНК-частицы (код продукта 19U5.P1), вакцину против свиного гриппа, РНК (код продукта 19A5.D0), вакцину против птичьего гриппа, РНК (код продукта 19O5.D0) и рецептурный препарат, РНК-частицы (код продукта 9PP0.00).
КОНСТРУИРОВАНИЕ РНК-РЕПЛИКОННОЙ ЧАСТИЦЫ АЛЬФАВИРУСА
RP-FCV:
Аминокислотные последовательности для капсидных белков FCV использовали для получения кодон-оптимизированных (использование кодонов у животных семейства кошачьих) нуклеотидных последовательностей in silico. Оптимизированные последовательности получали в качестве синтезированной ДНК от коммерческого поставщика (ATUM, Newark, CA). Таким образом, синтетические гены конструировали на основе аминокислотных последовательностей капсидного белка VS-FCV и капсидного белка F9-подобного FCV, соответственно. Конструкции, кодирующие аминокислотную последовательность [SEQ ID NO: 2] для капсидного белка VS-FCV, или [SEQ ID NO: 4] для капсидного белка F9-подобного FCV, подвергали оптимизации кодонов для животных семейства кошачьих, с фланкирующей последовательностью, пригодной для клонирования в репликонную плазмиду альфавируса.
Репликонные векторы VEE, сконструированные для экспрессии капсидных белков FCV, конструировали, как описано ранее [см., U.S. 9441247 B2; содержание которой включено в настоящее описание в качестве ссылки] со следующими модификациями. Происходящий из TC-83 репликонный вектор "pVEK" [раскрытый и описанный в U.S. 9441247 B2] расщепляли ферментами рестрикции AscI и PacI. ДНК-плазмиду, содержавшую кодон-оптимизированную нуклеотидную последовательность открытой рамки считывания генов капсида FCV с 5’-фланкирующей последовательностью (5’-GGCGCGCCGCACC-3’) [SEQ ID NO: 11] и 3’-фланкирующей последовательностью (5’-TTAATTAA-3’), аналогичным образом расщепляли ферментами рестрикции AscI и PacI. Затем синтетическую кассету лигировали в расщепленный вектор pVEK.
Получение РНК-репликонных частиц (RP) TC-83 проводили способами, описанными ранее [U.S. 9441247 B2 и U.S. 8460913 B2; содержание которых включено в настоящее описание в качестве ссылки]. В кратком изложении, ДНК репликонного вектора pVHV и хелперные ДНК-плазмиды линеаризовывали с использованием фермента рестрикции NotI перед транскрипцией in vitro с использованием РНК-полимеразы T7 MegaScript и аналога кэпа (Promega, Madison, WI). Важно, что хелперные РНК, использованные для получения, не имели субгеномной промоторной последовательности VEE, как описано ранее [Kamrud et al., J Gen Virol. 91(Pt 7):1723-1727 (2010)]. Очищенную РНК для репликонного и хелперного компонентов комбинировали и смешивали с суспензией клеток Vero, подвергали электропорации в 4-мм кюветах и возвращали в среду для культивирования клеток OptiPro® SFM (Thermo Fisher, Waltham MA). После инкубации в течение ночи РНК-репликонные частицы альфавирусов очищали из клеток и среды, пропуская суспензию через глубинный фильтр ZetaPlus BioCap (3M, Maplewood, MN), промывая фосфатно-солевым буфером, содержащим 5% сахарозу (масс./об.), и, наконец, элюируя задержанные RP посредством буфера из 400 мМ NaCl. Элюированные RP составляли до конечной концентрации сахарозы 5% (масс./об.), пропускали через 0,22-микронный мембранный фильтр, и распределяли на аликвоты для хранения. Титр функциональных RP определяли с использованием иммунофлуоресцентного анализа на инфицированных монослоях клеток Vero.
RP-FeLV:
Аминокислотную последовательность gp85 FeLV использовали для получения кодон-оптимизированных (использование кодонов животными семейства кошачьих) нуклеотидных последовательностей in silico. Оптимизированные последовательности получали в качестве синтезированной ДНК от коммерческого поставщика (ATUM, Newark, CA). Таким образом, синтетические гены конструировали на основе аминокислотной последовательности gp85. Конструкция (gp85_wt) представляла собой аминокислотную последовательность дикого типа [SEQ ID NO: 2], кодон-оптимизированную для животных семейства кошачьих, с фланкирующей последовательностью, пригодной для клонирования в репликонную плазмиду альфавируса.
Репликонные векторы VEE, сконструированные для экспрессии gp85 FeLV, конструировали, как описано ранее [см. U.S. 9441247 B2; содержание которой включено в настоящее описание в качестве ссылки в полном объеме], со следующими модификациями. Происходящий из TC-83 репликонный вектор "pVEK" [раскрытый и описанный в U.S. 9441247 B2] расщепляли ферментами рестрикции AscI и PacI. ДНК-плазмиду, содержавшую кодон-оптимизированную нуклеотидную последовательность открытой рамки считывания генов gp85 FeLV с 5’-фланкирующей последовательностью (5’-GGCGCGCCGCACC-3’) [SEQ ID NO: 11] и 3’-фланкирующей последовательностью (5’-TTAATTAA-3’), аналогичным образом расщепляли ферментами рестрикции AscI и PacI. Затем синтетическую генную кассету лигировали в расщепленный вектор pVEK и полученный клон переименовывали как "pVHV-FeLV gp85". Номенклатура вектора "pVHV" была выбрана для отнесения к происходящим из pVEK репликонным векторам, содержащим трансгенные кассеты, клонированные через участки AscI и PacI в участок множественного клонирования pVEK.
Получение РНК-репликонных частиц (RP) TC-83 проводили способами, описанными ранее [U.S. 9441247 B2 и U.S. 8460913 B2; содержание которых включено в настоящее описание в качестве ссылки]. В кратком изложении, ДНК репликонного вектора pVHV и хелперные ДНК-плазмиды линеаризовывали с использованием фермента рестрикции NotI перед транскрипцией in vitro с использованием РНК-полимеразы T7 MegaScript и аналога кэпа (Promega, Madison, WI). Важно, что хелперные РНК, использованные для получения, не имели субгеномной промоторной последовательности VEE, как описано ранее [Kamrud et al., J Gen Virol. 91(Pt 7):1723-1727 (2010)]. Очищенную РНК для репликонного и хелперного компонентов комбинировали и смешивали с суспензией клеток Vero, подвергали электропорации в 4-мм кюветах и возвращали в среду для культивирования клеток OptiPro® SFM (Thermo Fisher, Waltham MA). После инкубации в течение ночи РНК-репликонные частицы альфавирусов очищали из клеток и среды, пропуская суспензию через глубинный фильтр ZetaPlus BioCap (3M, Maplewood, MN), промывая фосфатно-солевым буфером, содержащим 5% сахарозу (масс./об.), и, наконец, элюируя задержанные RP посредством буфера из 400 мМ NaCl. Элюированные RP составляли до конечной концентрации сахарозы 5% (масс./об.), пропускали через 0,22-микронный мембранный фильтр, и распределяли на аликвоты для хранения. Титр функциональных RP определяли с использованием иммунофлуоресцентного анализа на инфицированных монослоях клеток Vero.
RP-RV
Получали вакцину, содержащую РНК-репликонную частицу альфавируса, кодирующую гликопротеин (G) вируса бешенства, из вируса бешенства (RV), упакованного в капсидный белок, и гликопротеинов авирулентного штамма TC-83 вируса венесуэльского энцефалита лошадей. Нуклеотидную последовательность белка G вируса бешенства подвергали кодон-оптимизации для человека. Полученная последовательность обладает только ~85% идентичностью нуклеотидов с последовательностью гликопротеина (G) живого вируса бешенства, несмотря на наличие 100% идентичности аминокислот. Вакцину можно использовать в качестве однократной дозы, вводимой млекопитающему, например, подкожно кошкам и собакам в возрасте 12 недель или старше, или альтернативно в качестве многократных доз, включающих первичное введение, за которым следует одно или несколько вспомогательных введений.
Аминокислотную последовательность гликопротеина (G) вируса бешенства использовали для получения кодон-оптимизированных (использование кодонов человека) нуклеотидных последовательностей in silico. Оптимизированные последовательности получали в качестве синтетической ДНК от коммерческого поставщика (ATUM, Newark, CA). Таким образом, конструировали синтетический ген [SEQ ID NO: 9] на основе аминокислотной последовательности гликопротеина вируса бешенства. Конструкция (RABV-G) представляла собой аминокислотную последовательность дикого типа [SEQ ID NO: 10], кодон-оптимизированную для человека, с фланкирующей последовательностью, пригодной для клонирования в репликонную плазмиду альфавируса.
Репликонные векторы VEE, сконструированные для экспрессии G вируса бешенства, конструировали, как описано выше [см., U.S. 9441247 B2; содержание которой включено в настоящее описание в качестве ссылки], со следующими модификациями. Происходящий из TC-83 репликонный вектор "pVEK" [раскрытый и описанный в U.S. 9441247 B2] расщепляли ферментами рестрикции AscI и PacI. ДНК-плазмиду, содержавшую нуклеотидную последовательность кодон-оптимизированной открытой рамки считывания гена G бешенства с 5’-фланкирующей последовательностью (5’-GGCGCGCCGCACC-3’) [SEQ ID NO: 11] и 3’-фланкирующей последовательностью (5’-TTAATTAA-3’), аналогичным образом расщепляли ферментами рестрикции AscI и PacI. Затем синтетическую генную кассету лигировали в расщепленный вектор pVEK и полученный клон переименовали как "pVHV-RABV-G". Номенклатура вектора "pVHV" была выбрана для указания на происходящие из pVEK репликонные векторы, содержащие трансгенные кассеты, клонированные через участки AscI и PacI в участок множественного клонирования pVEK.
Получение РНК-репликонных частиц (RP) TC-83 проводили способами, описанными ранее [U.S. 9441247 B2 и U.S. 8460913 B2; содержание которых включено в настоящее описание в качестве ссылок]. В кратком изложении, ДНК репликонного вектора pVHV и ДНК плазмид-помощников линеаризовывали с использованием фермента рестрикции NotI перед транскрипцией in vitro с использованием РНК-полимеразы MegaScript T7 и аналога кэпа (Promega, Madison, WI). Важно, что РНК-помощники, использованные для получения, лишены субгеномной промоторной последовательности VEE, как описано ранее [Kamrud et al., J Gen Virol. 91(Pt 7):1723-1727 (2010)]. Очищенную РНК для репликонных и хелперных компонентов объединяли и смешивали с суспензией клеток Vero, подвергали электропорации в кюветах размером 4 мм и возвращали в клеточную культуральную среду OptiPro® SFM (Thermo Fisher, Waltham, MA). После инкубации в течение ночи РНК-репликонные частицы альфавирусов очищали от клеток и среды, пропуская суспензию через глубинный фильтр ZetaPlus BioCap® (3M, Maplewood, MN), промывая фосфатно-солевым буфером, содержащим 5% сахарозу (масс./об.), и, наконец, элюируя оставшиеся RP 400 мМ буфером NaCl. Элюированные RP составляли до конечного содержания сахарозы 5% (масс./об.), пропускали через 0,22-микронный мембранный фильтр и распределяли на аликвоты для хранения. Титр функциональных RP определяли с использованием иммунофлуоресцентного анализа монослоев инфицированных клеток Vero.
ПРИМЕР 2
ОЦЕНКА БЕЗОПАСНОСТИ КОМБИНИРОВАННОЙ ВАКЦИНЫ, СОДЕРЖАЩЕЙ ДВЕ КОНСТРУКЦИИ RP И ТРИ МОДИФИЦИРОВАННЫХ ЖИВЫХ ФРАКЦИИ, У КОШЕК
Различные составы и способы восстановления лиофилизированной пятивалентной комбинированной вакцины для животных семейства кошачьих оценивали в отношении их безопасности у кошек. Желаемым способом предоставления пятивалентной вакцины является доза 0,5 мл, оптимальным составом и способом заполнения является заполнение 0,5 мл. Стабилизатор содержал 1,1% NZ-амин (ферментативный гидролиза казеина), 1,1% желатин и 7,5% сахарозу, причем проценты соответствуют конечным концентрациям. Если ограничения по объему и конечной эффективности для добавления пяти фракций требуют объема более 0,5 мл, продукт можно составлять и заполнять в количестве 1,0 мл и восстанавливать 0,5 мл разбавителя. Это удваивает концентрацию стабилизирующих компонентов во введенной дозе. Безопасность такой концентрированной дозы стабилизатора с этими антигенами ранее еще не тестировали у кошек.
Также тестировали третью возможность объема заполнения 1,0 мл с гидратацией посредством 1,0 мл разбавителя на случай, если формат заполнение 1,0 мл/регидратация 0,5 мл оказался бы не безопасным у кошек. Вакцины смешивали, а затем лиофилизировали. Вакцины содержали РНК-репликонную частицу альфавируса, которая кодирует гликопротеин вируса кошачьего лейкоза (RP-FeLV), и РНК-репликонную частицу альфавируса, которая кодирует капсидный белок кошачьего кальцивируса (RP-FCV), вместе с компонентами коммерчески доступной вакцины Feline-1 Nobivac ® , т.е. модифицированным живым (MLV) вирусом кошачьей панлейкопении (FPL), модифицированным живым вирусом кошачьего вирусного ринотрахеита (FVR) и модифицированными живыми Chlamydophila felis в стабилизаторе, содержавшем 1,1% желатин, 1,1% NZ-амин и 7,5% сахарозу. Различные составы пятивалентной комбинированной вакцины для животных семейства кошачьих получали и восстанавливали, как описано в таблице 1 ниже:
ТАБЛИЦА 1
СОСТАВЫ ПЯТИВАЛЕНТНОЙ КОМБИНИРОВАННОЙ ВАКЦИНЫ
| Группа введения | № кошек | Антигены тестируемого продукта | Объем лиофилизированного кека (заполнения) | Объем разбавителя (регидратации) |
| 1 | 6 | RP-FCV, RP-FeLV, FPL, FVR и C. felis | 1,0 мл | 1,0 мл |
| 2 | 6 | 1,0 мл | 0,5 мл | |
| 3 | 6 | 0,5 мл | 0,5 мл | |
| 4 | 2 | Только разбавитель | NA | 1,0 мл |
Вакцины составляли, чтобы они содержали одну и ту же дозу каждого антигена (вакцину с кеком объемом 0,5 мл составляли с двукратной концентрацией каждого антигена), стабилизатор использовали с постоянной концентрацией во всех составах (вакцина с кеком 1,0 мл, регидратируемая 0,5 мл разбавителя, содержавшего двукратную концентрацию стабилизатора при регидратации).
Экспериментальных кошек вакцинировали указанным объемом соответствующей тестируемой вакцины в возрасте 7-8 недель (как правило, имеющих минимальный возраст вакцинации для базовой вакцинации животных семейства кошачьих) и вновь через 21 сутки. За кошками наблюдали в течение 15 минут после каждой вакцинации в отношении реакций на тестируемую вакцину, которые могут включать боль или дискомфорт, такой как издавание звуков, жжение, зуд, кусание, внезапное движение при инъекции вакцин или любую необычную реакцию (см. таблицы 2 и 3 ниже). Клиническая оценка проводилась ветеринаром через 4-6 часов после вакцинации и каждые сутки в течение трех суток после вакцинации.
Клиническая оценка включала пальпацию области инъекции и наблюдение каких-либо локальных реакций, включая боль при прикосновении, опухание, покраснение или абсцесс. Кошек также наблюдали в отношении каких-либо системных реакций, таких как депрессия, вялость, хромота, рвота, тремор, возбуждение и диарея. Также измеряли температуру тела, и ее регистрировали через 4-6 часов после вакцинации и каждые сутки в течение двух суток после каждой вакцинации. Кроме того, проводили пальпацию областей инъекции в отношении локальных реакций три раза в неделю с 7 суток по 21 сутки после каждой вакцинации.
Было выявлено, что все вакцинные составы и протоколы регидратации являются безопасными. Ни у одной из кошек не наблюдали локальных или системных реакций. Температура тела в каждый момент измерения для всех кошек была нормальной за исключением одной кошки в группе введения 3 (0,5 мл кека/ 0,5 мл разбавителя), которая имела температуру тела 103,6° (39,8°С) через пять часов после вакцинации. Таким образом, было выявлено, что все три препарата пятивалентной вакцины являются приемлемыми.
ТАБЛИЦА 2
НЕМЕДЛЕННЫЕ РЕАКЦИИ НА ВАКЦИНАЦИЮ ПЯТИВАЛЕНТНОЙ КОМБИНИРОВАННОЙ ВАКЦИНОЙ
| Группа введения | ID вакцины | Издавание звуков | Кусание (в ходе инъекции) | Внезапное движение от инъекции | Чесание области инъекции (после инъекции) | ||||
| 1-я вакцинация | 2-я вакцинация | 1-я вакцинация | 2-я вакцинация | 1-я вакцинация | 2-я вакцинация | 1-я вакцинация | 2-я вакцинация | ||
| 1 | Пятивалентная вакцина для животных семейства кошачьих 1,0 мл кека/1,0 мл разбавителя | 0/6 | 1/6 | 0/6 | 0/6 | 0/6 | 0/6 | 0/6 | 0/6 |
| 2 | Пятивалентная вакцина для животных семейства кошачьих 1,0 мл кека/0,5 мл разбавителя | 0/6 | 0/6 | 0/6 | 0/6 | 0/6 | 0/6 | 0/6 | 0/6 |
| 3 | Пятивалентная вакцина для животных семейства кошачьих 0,5 мл кека/0,5 мл разбавителя | 0/6 | 0/6 | 0/6 | 0/6 | 0/6 | 0/6 | 0/6 | 0/6 |
| 4 | Только разбавитель, 1,0 мл | 1/2 | 1/2 | 0/2 | 0/2 | 1/2 | 1/2 | 0/2 | 0/2 |
ТАБЛИЦА 3
ЛОКАЛЬНЫЕ/СИСТЕМНЫЕ РЕАКЦИИ НА ВАКЦИНАЦИЮ ПЯТИВАЛЕНТНОЙ КОМБИНИРОВАННОЙ ВАКЦИНОЙ
| Группа введения | ID вакцины | Локальные реакции (покраснение, боль при прикосновении, опухание или абсцесс) | Системные реакции (рвота, хромота, депрессия, вялость, тремор, возбуждение или диарея) |
Температура тела ≥103,5° (39,8°С) после вакцинации |
|||
| 1-я вакцинация | 2-я вакцинация | 1-я вакцинация | 2-я вакцинация | 1-я вакцинация | 2-я вакцинация | ||
| 1 | Пятивалентная вакцина для животных семейства кошачьих 1,0 мл кека/1,0 мл разбавителя | 0/6 | 0/6 | 0/6 | 0/6 | 0/6 | 0/6 |
| 2 | Пятивалентная вакцина для животных семейства кошачьих 1,0 мл кека/0,5 мл разбавителя | 0/6 | 0/6 | 0/6 | 0/6 | 0/6 | 0/6 |
| 3 | Пятивалентная вакцина для животных семейства кошачьих 0,5 мл кека/0,5 мл разбавителя | 0/6 | 0/6 | 0/6 | 0/6 | 0/6 | 1/6 |
| 4 | Только разбавитель, 1,0 мл | 0/2 | 0/2 | 0/2 | 0/2 | 0/2 | 0/2 |
Объем настоящего изобретения не ограничивается конкретными вариантами осуществления, описанными в настоящем описании. Действительно, различные модификации изобретения в дополнение к модификациям, описанным в настоящем описании, станут понятными специалистам в данной области из приведенного выше описания. Подразумевается, что такие модификации входят в объем прилагаемой формулы изобретения.
Кроме того, должно быть понятно, что все размеры оснований или размеры аминокислот, и все величины молекулярного веса или молекулярной массы, приведенные для нуклеиновых кислот или полипептидов, являются приблизительными и предоставлены для описания.
--->
Перечень последовательностей
SEQUENCE LISTING
<110> Intervet, Inc.
Intervet International BV
Xu, Zhichang
Lafleur, Rhonda
Tarpey, Ian
<120> Multivalent Feline Vaccine
<130> 24553
<150> 62/599,401
<151> 2017-12-15
<150> 62/596,508
<151> 2017-12-08
<150> 62/582,050
<151> 2017-11-06
<150> 62/581,955
<151> 2017-11-06
<160> 16
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 1638
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> codon optimized for feline
<400> 1
atggctgacg acggatctgt gaccacccca gaacaaggaa caatggtcgg aggagtgatt 60
gccgaaccca gcgctcagat gtcaactgcg gcggacatgg cctccggaaa gtcggtggac 120
tccgagtggg aagccttctt ctcgttccac acgtccgtga actggagcac ctccgaaacc 180
caaggaaaga tcctcttcaa gcagtccctg ggtcccctgc tgaacccgta cctggagcac 240
atcagcaagc tgtacgtcgc ttggagcggg tcgatcgaag tgcgattttc catctcggga 300
agcggcgtgt tcggtggtaa actggccgcc atcgtcgtgc cgcctggtgt cgaccctgtc 360
cagtcaacct ccatgctgca gtacccgcac gtcctgttcg acgcaagaca agtggagcca 420
gtgatcttct ccatcccgga cctccgcaac agcctgtatc acttgatgtc cgataccgat 480
accacttccc tcgtgatcat ggtgtacaac gatctgatca acccgtacgc caatgactcc 540
aacagctcgg gttgcatcgt gaccgtcgaa acgaagcctg gcatcgattt caagtttcat 600
ctgctgaaac cgcccggatc catgcttact cacgggtcca tcccttccga tctgatcccc 660
aagagctcct ccctgtggat tgggaaccgc cactggaccg atattaccga tttcgtgatt 720
cggcctttcg tgttccaagc caaccggcac ttcgacttca accaggagac tgccggctgg 780
tcaactccac ggttccgccc attggccgtg actgtgtcgc agtcaaaggg agccaagctc 840
gggaacggca tcgccaccga ctacattgtg cctggaatcc ccgacggatg gcctgatact 900
accatcccca ccaagctgac ccctaccgga gattacgcca tcacctcctc cgacggcaat 960
gatattgaaa ccaagctgga atacgagaac gcggacgtga ttaagaacaa caccaacttc 1020
cgctccatgt atatctgcgg aagcctccag agggcttggg gcgacaagaa gatcagcaac 1080
accgggttca tcactaccgg agtgatttct gacaactcca tcagcccttc gaacacaatt 1140
gaccagtcca agatcgtggt gtaccaggac aaccatgtca attcggaggt ccagactagc 1200
gacatcactc ttgccatcct gggctacacc ggaattggag aagaggccat aggcgccaac 1260
cgggactccg tcgtgagaat ttccgtgctt ccggaaactg gagcaagggg cggaaatcac 1320
cccatcttct acaaaaattc catgaagctg ggctacgtga tctcctccat tgacgtgttc 1380
aactcccaaa tcctccacac ctcgcgccag ctgtcactga acaactactt gttgccccct 1440
gactccttcg cggtgtaccg gattattgac agcaacggat catggttcga cattgggatt 1500
gacagcgatg ggttttcatt cgtgggcgtg tcgtcatttc caaagctgga gtttccgctg 1560
tccgcctcat acatgggcat ccagctcgca aagatccggc tggcgtccaa catccggtca 1620
tccatgacta agctgtga 1638
<210> 2
<211> 545
<212> PRT
<213> Feline calicivirus
<400> 2
Met Ala Asp Asp Gly Ser Val Thr Thr Pro Glu Gln Gly Thr Met Val
1 5 10 15
Gly Gly Val Ile Ala Glu Pro Ser Ala Gln Met Ser Thr Ala Ala Asp
20 25 30
Met Ala Ser Gly Lys Ser Val Asp Ser Glu Trp Glu Ala Phe Phe Ser
35 40 45
Phe His Thr Ser Val Asn Trp Ser Thr Ser Glu Thr Gln Gly Lys Ile
50 55 60
Leu Phe Lys Gln Ser Leu Gly Pro Leu Leu Asn Pro Tyr Leu Glu His
65 70 75 80
Ile Ser Lys Leu Tyr Val Ala Trp Ser Gly Ser Ile Glu Val Arg Phe
85 90 95
Ser Ile Ser Gly Ser Gly Val Phe Gly Gly Lys Leu Ala Ala Ile Val
100 105 110
Val Pro Pro Gly Val Asp Pro Val Gln Ser Thr Ser Met Leu Gln Tyr
115 120 125
Pro His Val Leu Phe Asp Ala Arg Gln Val Glu Pro Val Ile Phe Ser
130 135 140
Ile Pro Asp Leu Arg Asn Ser Leu Tyr His Leu Met Ser Asp Thr Asp
145 150 155 160
Thr Thr Ser Leu Val Ile Met Val Tyr Asn Asp Leu Ile Asn Pro Tyr
165 170 175
Ala Asn Asp Ser Asn Ser Ser Gly Cys Ile Val Thr Val Glu Thr Lys
180 185 190
Pro Gly Ile Asp Phe Lys Phe His Leu Leu Lys Pro Pro Gly Ser Met
195 200 205
Leu Thr His Gly Ser Ile Pro Ser Asp Leu Ile Pro Lys Ser Ser Ser
210 215 220
Leu Trp Ile Gly Asn Arg His Trp Thr Asp Ile Thr Asp Phe Val Ile
225 230 235 240
Arg Pro Phe Val Phe Gln Ala Asn Arg His Phe Asp Phe Asn Gln Glu
245 250 255
Thr Ala Gly Trp Ser Thr Pro Arg Phe Arg Pro Leu Ala Val Thr Val
260 265 270
Ser Gln Ser Lys Gly Ala Lys Leu Gly Asn Gly Ile Ala Thr Asp Tyr
275 280 285
Ile Val Pro Gly Ile Pro Asp Gly Trp Pro Asp Thr Thr Ile Pro Thr
290 295 300
Lys Leu Thr Pro Thr Gly Asp Tyr Ala Ile Thr Ser Ser Asp Gly Asn
305 310 315 320
Asp Ile Glu Thr Lys Leu Glu Tyr Glu Asn Ala Asp Val Ile Lys Asn
325 330 335
Asn Thr Asn Phe Arg Ser Met Tyr Ile Cys Gly Ser Leu Gln Arg Ala
340 345 350
Trp Gly Asp Lys Lys Ile Ser Asn Thr Gly Phe Ile Thr Thr Gly Val
355 360 365
Ile Ser Asp Asn Ser Ile Ser Pro Ser Asn Thr Ile Asp Gln Ser Lys
370 375 380
Ile Val Val Tyr Gln Asp Asn His Val Asn Ser Glu Val Gln Thr Ser
385 390 395 400
Asp Ile Thr Leu Ala Ile Leu Gly Tyr Thr Gly Ile Gly Glu Glu Ala
405 410 415
Ile Gly Ala Asn Arg Asp Ser Val Val Arg Ile Ser Val Leu Pro Glu
420 425 430
Thr Gly Ala Arg Gly Gly Asn His Pro Ile Phe Tyr Lys Asn Ser Met
435 440 445
Lys Leu Gly Tyr Val Ile Ser Ser Ile Asp Val Phe Asn Ser Gln Ile
450 455 460
Leu His Thr Ser Arg Gln Leu Ser Leu Asn Asn Tyr Leu Leu Pro Pro
465 470 475 480
Asp Ser Phe Ala Val Tyr Arg Ile Ile Asp Ser Asn Gly Ser Trp Phe
485 490 495
Asp Ile Gly Ile Asp Ser Asp Gly Phe Ser Phe Val Gly Val Ser Ser
500 505 510
Phe Pro Lys Leu Glu Phe Pro Leu Ser Ala Ser Tyr Met Gly Ile Gln
515 520 525
Leu Ala Lys Ile Arg Leu Ala Ser Asn Ile Arg Ser Ser Met Thr Lys
530 535 540
Leu
545
<210> 3
<211> 1629
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> codon optimized for feline
<400> 3
atgactgccc cggaacaagg aacgatggtc ggaggagtga ttgcagaacc gtcagcacag 60
atgtccaccg ctgccgacat ggccactgga aagagcgtgg actccgaatg ggaagccttc 120
ttctccttcc acacttcggt caactggtcg actagcgaaa cccaggggaa gattttgttc 180
aagcaatccc tcggccctct gctgaacccc tacctggagc atctggccaa gctgtacgtg 240
gcatggtcgg gcagcatcga agtgcgcttt agcatttccg gctccggagt gttcggggga 300
aagcttgctg ccattgtcgt gccgccagga gtggacccgg tgcagtccac ttctatgctc 360
caatacccgc atgtcctgtt cgacgccaga caggtggagc ctgtgatctt ttgcctgccg 420
gatctcaggt ccaccctgta tcacctcatg tccgacaccg acaccacctc gctcgtgatc 480
atggtgtaca acgacctgat caacccctac gctaacgacg ccaacagctc aggttgcatt 540
gtgactgtcg aaaccaagcc aggccctgac ttcaagtttc atttgctgaa gccgcccggt 600
tccatgctga cccacggctc gatcccatcc gacctgatcc ccaagacgag ctccctgtgg 660
atcggaaacc gctactggtc cgatattacc gacttcgtga tcagaccatt cgtgttccaa 720
gccaaccgcc atttcgactt caaccaggaa accgcaggat ggtcgacccc tcgattccgc 780
ccgatttcag tgaccatcac cgaacagaac ggcgcgaagc tgggaattgg cgtggcgacc 840
gactacatcg tgccgggaat cccggatgga tggcctgata cgaccattcc cggggagctg 900
atccctgccg gggactacgc catcaccaac ggtactggaa acgacatcac cactgccacc 960
ggttacgaca ccgccgacat cataaagaac aacaccaact tcagaggaat gtacatttgc 1020
ggctccctgc aacgcgcttg gggtgacaaa aagatctcga acactgcctt catcacaaca 1080
gcgactctgg acggcgataa caacaacaag atcaatcctt gtaataccat cgaccagtcc 1140
aaaatcgtgg tgttccagga taaccacgtg ggaaagaagg cgcagacctc cgacgacact 1200
ctggcgctgc ttggctacac cgggatcggc gagcaggcca ttggaagcga tcgggatcgg 1260
gtcgtgcgga tctccaccct ccccgagact ggagcaaggg gaggcaacca ccccatcttt 1320
tacaaaaaca gcattaagct cggatacgtc atccgctcca tcgatgtgtt caactctcaa 1380
atcctgcaca cttcgcggca gctgtccctg aaccactacc tcttgccgcc cgactccttc 1440
gccgtctacc ggatcattga ttcgaacggg agctggttcg acatcggcat tgatagcgat 1500
ggcttctcgt ttgtgggcgt gtcgggcttc gggaagctgg agttcccact gagcgcctca 1560
tacatgggta tccagctggc caagatcagg ctggcctcca acatccgctc acctatgact 1620
aagctgtga 1629
<210> 4
<211> 542
<212> PRT
<213> Feline calicivirus
<400> 4
Met Thr Ala Pro Glu Gln Gly Thr Met Val Gly Gly Val Ile Ala Glu
1 5 10 15
Pro Ser Ala Gln Met Ser Thr Ala Ala Asp Met Ala Thr Gly Lys Ser
20 25 30
Val Asp Ser Glu Trp Glu Ala Phe Phe Ser Phe His Thr Ser Val Asn
35 40 45
Trp Ser Thr Ser Glu Thr Gln Gly Lys Ile Leu Phe Lys Gln Ser Leu
50 55 60
Gly Pro Leu Leu Asn Pro Tyr Leu Glu His Leu Ala Lys Leu Tyr Val
65 70 75 80
Ala Trp Ser Gly Ser Ile Glu Val Arg Phe Ser Ile Ser Gly Ser Gly
85 90 95
Val Phe Gly Gly Lys Leu Ala Ala Ile Val Val Pro Pro Gly Val Asp
100 105 110
Pro Val Gln Ser Thr Ser Met Leu Gln Tyr Pro His Val Leu Phe Asp
115 120 125
Ala Arg Gln Val Glu Pro Val Ile Phe Cys Leu Pro Asp Leu Arg Ser
130 135 140
Thr Leu Tyr His Leu Met Ser Asp Thr Asp Thr Thr Ser Leu Val Ile
145 150 155 160
Met Val Tyr Asn Asp Leu Ile Asn Pro Tyr Ala Asn Asp Ala Asn Ser
165 170 175
Ser Gly Cys Ile Val Thr Val Glu Thr Lys Pro Gly Pro Asp Phe Lys
180 185 190
Phe His Leu Leu Lys Pro Pro Gly Ser Met Leu Thr His Gly Ser Ile
195 200 205
Pro Ser Asp Leu Ile Pro Lys Thr Ser Ser Leu Trp Ile Gly Asn Arg
210 215 220
Tyr Trp Ser Asp Ile Thr Asp Phe Val Ile Arg Pro Phe Val Phe Gln
225 230 235 240
Ala Asn Arg His Phe Asp Phe Asn Gln Glu Thr Ala Gly Trp Ser Thr
245 250 255
Pro Arg Phe Arg Pro Ile Ser Val Thr Ile Thr Glu Gln Asn Gly Ala
260 265 270
Lys Leu Gly Ile Gly Val Ala Thr Asp Tyr Ile Val Pro Gly Ile Pro
275 280 285
Asp Gly Trp Pro Asp Thr Thr Ile Pro Gly Glu Leu Ile Pro Ala Gly
290 295 300
Asp Tyr Ala Ile Thr Asn Gly Thr Gly Asn Asp Ile Thr Thr Ala Thr
305 310 315 320
Gly Tyr Asp Thr Ala Asp Ile Ile Lys Asn Asn Thr Asn Phe Arg Gly
325 330 335
Met Tyr Ile Cys Gly Ser Leu Gln Arg Ala Trp Gly Asp Lys Lys Ile
340 345 350
Ser Asn Thr Ala Phe Ile Thr Thr Ala Thr Leu Asp Gly Asp Asn Asn
355 360 365
Asn Lys Ile Asn Pro Cys Asn Thr Ile Asp Gln Ser Lys Ile Val Val
370 375 380
Phe Gln Asp Asn His Val Gly Lys Lys Ala Gln Thr Ser Asp Asp Thr
385 390 395 400
Leu Ala Leu Leu Gly Tyr Thr Gly Ile Gly Glu Gln Ala Ile Gly Ser
405 410 415
Asp Arg Asp Arg Val Val Arg Ile Ser Thr Leu Pro Glu Thr Gly Ala
420 425 430
Arg Gly Gly Asn His Pro Ile Phe Tyr Lys Asn Ser Ile Lys Leu Gly
435 440 445
Tyr Val Ile Arg Ser Ile Asp Val Phe Asn Ser Gln Ile Leu His Thr
450 455 460
Ser Arg Gln Leu Ser Leu Asn His Tyr Leu Leu Pro Pro Asp Ser Phe
465 470 475 480
Ala Val Tyr Arg Ile Ile Asp Ser Asn Gly Ser Trp Phe Asp Ile Gly
485 490 495
Ile Asp Ser Asp Gly Phe Ser Phe Val Gly Val Ser Gly Phe Gly Lys
500 505 510
Leu Glu Phe Pro Leu Ser Ala Ser Tyr Met Gly Ile Gln Leu Ala Lys
515 520 525
Ile Arg Leu Ala Ser Asn Ile Arg Ser Pro Met Thr Lys Leu
530 535 540
<210> 5
<211> 1929
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> codon optimized for feline
<400> 5
atggagtcac caacacaccc taaaccttct aaagacaaaa ccctctcgtg gaatctcgcc 60
ttccttgtgg gcatcctgtt cacaatcgac atcggcatgg ccaacccttc gccgcatcag 120
atctacaatg tgacatgggt cattactaat gtgcagacaa acacccaggc aaatgctact 180
tctatgcttg gtactctgac tgatgcttat ccaaccctgc acgtcgacct ttgcgatctc 240
gtcggtgaca catgggagcc catcgtgctg aatccaacta atgtcaaaca tggtgccagg 300
tattcttcta gcaaatacgg gtgtaagacc actgatcgga agaaacagca acaaacctac 360
ccattctacg tgtgcccggg tcacgcaccg tccctgggtc cgaagggaac acattgtggg 420
ggagcccaag acggtttttg cgctgcttgg ggttgtgaaa caaccggaga agcctggtgg 480
aagcctacct catcttggga ctacattact gtgaaaagag gctctagcca ggataacagc 540
tgcgaaggaa agtgtaatcc cctggtgctt caattcaccc agaaaggccg gcaggcatca 600
tgggatggac cgaaaatgtg gggacttaga ctctatcgca ccggatacga ccccatcgct 660
ctgtttactg tgtcacgcca agtctccacc attactccgc cacaggccat ggggccgaat 720
ctggtcctcc ccgatcagaa gccaccctca cggcaaagtc aaaccggctc aaaagtggcc 780
acccaacggc cccagacaaa tgagtccgca cctaggtcag tggcacctac aacaatgggt 840
ccaaagcgga tcggaaccgg agacaggctc attaacctcg tgcaagggac ttatctggcc 900
cttaacgcta ctgaccccaa caagaccaag gattgctggc tctgccttgt gagcagacct 960
ccttactatg aggggatcgc cattctcgga aactactcaa atcagaccaa cccccctccg 1020
tcgtgtctga gcacccccca gcacaagctt actatttcag aagtcagtgg acagggaatg 1080
tgcatcggaa ccgtgccaaa gactcatcaa gccctttgca acaaaactca acaagggcac 1140
actggagctc attatctcgc cgcacctaac gggacctact gggcttgcaa tactggattg 1200
accccgtgta tctctatggc cgtgctgaat tggacttccg acttctgcgt gcttattgag 1260
ctttggccta gagtgacata ccatcagcct gagtacgtct atacccattt cgccaaggca 1320
gtcagattcc ggcgggagcc tatctccctg actgtggcct tgatgctcgg tggactgaca 1380
gtgggaggaa ttgcagctgg agtcggaact ggaaccaagg ccctgctcga aactgctcag 1440
ttccggcagc tgcagatggc catgcacact gacatccagg ctctggagga atcaatttca 1500
gcccttgaga aaagcttgac ctcgctgtct gaagtggtcc tccaaaacag gcgcggtttg 1560
gacatcctgt tccttcaaga gggtggtctg tgcgccgctc tcaaggagga atgctgtttc 1620
tacgctgacc ataccgggct ggtgcgcgat aacatggcaa agctgcggga acgcttgaaa 1680
cagaggcagc aactgttcga ctctcagcag ggatggttcg agggctggtt taacaagagc 1740
ccatggttta ccactctgat ctcttcaatc atgggtccac tgctcatcct gcttctgatt 1800
cttctcttcg gaccgtgtat tctcaacagg ctggtgcagt ttgtcaagga cagaatctcg 1860
gtggtccagg ccctgattct tactcagcag tatcagcaga ttaagcagta cgaccccgat 1920
cggccttga 1929
<210> 6
<211> 642
<212> PRT
<213> Feline leukemia virus
<400> 6
Met Glu Ser Pro Thr His Pro Lys Pro Ser Lys Asp Lys Thr Leu Ser
1 5 10 15
Trp Asn Leu Ala Phe Leu Val Gly Ile Leu Phe Thr Ile Asp Ile Gly
20 25 30
Met Ala Asn Pro Ser Pro His Gln Ile Tyr Asn Val Thr Trp Val Ile
35 40 45
Thr Asn Val Gln Thr Asn Thr Gln Ala Asn Ala Thr Ser Met Leu Gly
50 55 60
Thr Leu Thr Asp Ala Tyr Pro Thr Leu His Val Asp Leu Cys Asp Leu
65 70 75 80
Val Gly Asp Thr Trp Glu Pro Ile Val Leu Asn Pro Thr Asn Val Lys
85 90 95
His Gly Ala Arg Tyr Ser Ser Ser Lys Tyr Gly Cys Lys Thr Thr Asp
100 105 110
Arg Lys Lys Gln Gln Gln Thr Tyr Pro Phe Tyr Val Cys Pro Gly His
115 120 125
Ala Pro Ser Leu Gly Pro Lys Gly Thr His Cys Gly Gly Ala Gln Asp
130 135 140
Gly Phe Cys Ala Ala Trp Gly Cys Glu Thr Thr Gly Glu Ala Trp Trp
145 150 155 160
Lys Pro Thr Ser Ser Trp Asp Tyr Ile Thr Val Lys Arg Gly Ser Ser
165 170 175
Gln Asp Asn Ser Cys Glu Gly Lys Cys Asn Pro Leu Val Leu Gln Phe
180 185 190
Thr Gln Lys Gly Arg Gln Ala Ser Trp Asp Gly Pro Lys Met Trp Gly
195 200 205
Leu Arg Leu Tyr Arg Thr Gly Tyr Asp Pro Ile Ala Leu Phe Thr Val
210 215 220
Ser Arg Gln Val Ser Thr Ile Thr Pro Pro Gln Ala Met Gly Pro Asn
225 230 235 240
Leu Val Leu Pro Asp Gln Lys Pro Pro Ser Arg Gln Ser Gln Thr Gly
245 250 255
Ser Lys Val Ala Thr Gln Arg Pro Gln Thr Asn Glu Ser Ala Pro Arg
260 265 270
Ser Val Ala Pro Thr Thr Met Gly Pro Lys Arg Ile Gly Thr Gly Asp
275 280 285
Arg Leu Ile Asn Leu Val Gln Gly Thr Tyr Leu Ala Leu Asn Ala Thr
290 295 300
Asp Pro Asn Lys Thr Lys Asp Cys Trp Leu Cys Leu Val Ser Arg Pro
305 310 315 320
Pro Tyr Tyr Glu Gly Ile Ala Ile Leu Gly Asn Tyr Ser Asn Gln Thr
325 330 335
Asn Pro Pro Pro Ser Cys Leu Ser Thr Pro Gln His Lys Leu Thr Ile
340 345 350
Ser Glu Val Ser Gly Gln Gly Met Cys Ile Gly Thr Val Pro Lys Thr
355 360 365
His Gln Ala Leu Cys Asn Lys Thr Gln Gln Gly His Thr Gly Ala His
370 375 380
Tyr Leu Ala Ala Pro Asn Gly Thr Tyr Trp Ala Cys Asn Thr Gly Leu
385 390 395 400
Thr Pro Cys Ile Ser Met Ala Val Leu Asn Trp Thr Ser Asp Phe Cys
405 410 415
Val Leu Ile Glu Leu Trp Pro Arg Val Thr Tyr His Gln Pro Glu Tyr
420 425 430
Val Tyr Thr His Phe Ala Lys Ala Val Arg Phe Arg Arg Glu Pro Ile
435 440 445
Ser Leu Thr Val Ala Leu Met Leu Gly Gly Leu Thr Val Gly Gly Ile
450 455 460
Ala Ala Gly Val Gly Thr Gly Thr Lys Ala Leu Leu Glu Thr Ala Gln
465 470 475 480
Phe Arg Gln Leu Gln Met Ala Met His Thr Asp Ile Gln Ala Leu Glu
485 490 495
Glu Ser Ile Ser Ala Leu Glu Lys Ser Leu Thr Ser Leu Ser Glu Val
500 505 510
Val Leu Gln Asn Arg Arg Gly Leu Asp Ile Leu Phe Leu Gln Glu Gly
515 520 525
Gly Leu Cys Ala Ala Leu Lys Glu Glu Cys Cys Phe Tyr Ala Asp His
530 535 540
Thr Gly Leu Val Arg Asp Asn Met Ala Lys Leu Arg Glu Arg Leu Lys
545 550 555 560
Gln Arg Gln Gln Leu Phe Asp Ser Gln Gln Gly Trp Phe Glu Gly Trp
565 570 575
Phe Asn Lys Ser Pro Trp Phe Thr Thr Leu Ile Ser Ser Ile Met Gly
580 585 590
Pro Leu Leu Ile Leu Leu Leu Ile Leu Leu Phe Gly Pro Cys Ile Leu
595 600 605
Asn Arg Leu Val Gln Phe Val Lys Asp Arg Ile Ser Val Val Gln Ala
610 615 620
Leu Ile Leu Thr Gln Gln Tyr Gln Gln Ile Lys Gln Tyr Asp Pro Asp
625 630 635 640
Arg Pro
<210> 7
<211> 1233
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> codon optimized for feline
<400> 7
aatcctagtc cacaccaaat atataatgta acttgggtaa taaccaatgt acaaactaac 60
acccaagcta acgccacctc tatgttagga accttaaccg atgcctaccc taccctacat 120
gttgacttat gtgacctagt gggagacacc tgggaaccta tagtcctaaa cccaaccaat 180
gtaaaacacg gggcacgtta ctcctcctca aaatatggat gtaaaactac agatagaaaa 240
aaacagcaac agacataccc cttttacgtc tgccccggac atgccccctc gttggggcca 300
aagggaacac attgtggagg ggcacaagat gggttttgtg ccgcatgggg atgtgagacc 360
accggagaag cttggtggaa gcccacctcc tcatgggact atatcacagt aaaaagaggg 420
agtagtcagg acaatagctg tgagggaaaa tgcaaccccc tggttttgca gttcacccag 480
aagggaagac aagcctcttg ggacggacct aagatgtggg gattgcgact ataccgtaca 540
ggatatgacc ctatcgcttt attcacggtg tcccggcagg tatcaaccat tacgccgcct 600
caggcaatgg gaccaaacct agtcttacct gatcaaaaac ccccatcccg acaatctcaa 660
acagggtcca aagtggcgac ccagaggccc caaacgaatg aaagcgcccc aaggtctgtt 720
gcccccacca ccatgggtcc caaacggatt gggaccggag ataggttaat aaatttagta 780
caagggacat acctagcctt aaatgccacc gaccccaaca aaactaaaga ctgttggctc 840
tgcctggttt ctcgaccacc ctattacgaa gggattgcaa tcttaggtaa ctacagcaac 900
caaacaaacc cccccccatc ctgcctatct actccgcaac acaaactaac tatatctgaa 960
gtatcagggc aaggaatgtg catagggact gttcctaaaa cccaccaggc tttgtgcaat 1020
aagacacaac agggacatac aggggcgcac tatctagccg cccccaacgg cacctattgg 1080
gcctgtaaca ctggactcac cccatgcatt tccatggcgg tgctcaattg gacctctgat 1140
ttttgtgtct taatcgaatt atggcccaga gtgacttacc atcaacccga atatgtgtac 1200
acacattttg ccaaagctgt caggttccga aga 1233
<210> 8
<211> 411
<212> PRT
<213> Feline leukemia virus
<400> 8
Asn Pro Ser Pro His Gln Ile Tyr Asn Val Thr Trp Val Ile Thr Asn
1 5 10 15
Val Gln Thr Asn Thr Gln Ala Asn Ala Thr Ser Met Leu Gly Thr Leu
20 25 30
Thr Asp Ala Tyr Pro Thr Leu His Val Asp Leu Cys Asp Leu Val Gly
35 40 45
Asp Thr Trp Glu Pro Ile Val Leu Asn Pro Thr Asn Val Lys His Gly
50 55 60
Ala Arg Tyr Ser Ser Ser Lys Tyr Gly Cys Lys Thr Thr Asp Arg Lys
65 70 75 80
Lys Gln Gln Gln Thr Tyr Pro Phe Tyr Val Cys Pro Gly His Ala Pro
85 90 95
Ser Leu Gly Pro Lys Gly Thr His Cys Gly Gly Ala Gln Asp Gly Phe
100 105 110
Cys Ala Ala Trp Gly Cys Glu Thr Thr Gly Glu Ala Trp Trp Lys Pro
115 120 125
Thr Ser Ser Trp Asp Tyr Ile Thr Val Lys Arg Gly Ser Ser Gln Asp
130 135 140
Asn Ser Cys Glu Gly Lys Cys Asn Pro Leu Val Leu Gln Phe Thr Gln
145 150 155 160
Lys Gly Arg Gln Ala Ser Trp Asp Gly Pro Lys Met Trp Gly Leu Arg
165 170 175
Leu Tyr Arg Thr Gly Tyr Asp Pro Ile Ala Leu Phe Thr Val Ser Arg
180 185 190
Gln Val Ser Thr Ile Thr Pro Pro Gln Ala Met Gly Pro Asn Leu Val
195 200 205
Leu Pro Asp Gln Lys Pro Pro Ser Arg Gln Ser Gln Thr Gly Ser Lys
210 215 220
Val Ala Thr Gln Arg Pro Gln Thr Asn Glu Ser Ala Pro Arg Ser Val
225 230 235 240
Ala Pro Thr Thr Met Gly Pro Lys Arg Ile Gly Thr Gly Asp Arg Leu
245 250 255
Ile Asn Leu Val Gln Gly Thr Tyr Leu Ala Leu Asn Ala Thr Asp Pro
260 265 270
Asn Lys Thr Lys Asp Cys Trp Leu Cys Leu Val Ser Arg Pro Pro Tyr
275 280 285
Tyr Glu Gly Ile Ala Ile Leu Gly Asn Tyr Ser Asn Gln Thr Asn Pro
290 295 300
Pro Pro Ser Cys Leu Ser Thr Pro Gln His Lys Leu Thr Ile Ser Glu
305 310 315 320
Val Ser Gly Gln Gly Met Cys Ile Gly Thr Val Pro Lys Thr His Gln
325 330 335
Ala Leu Cys Asn Lys Thr Gln Gln Gly His Thr Gly Ala His Tyr Leu
340 345 350
Ala Ala Pro Asn Gly Thr Tyr Trp Ala Cys Asn Thr Gly Leu Thr Pro
355 360 365
Cys Ile Ser Met Ala Val Leu Asn Trp Thr Ser Asp Phe Cys Val Leu
370 375 380
Ile Glu Leu Trp Pro Arg Val Thr Tyr His Gln Pro Glu Tyr Val Tyr
385 390 395 400
Thr His Phe Ala Lys Ala Val Arg Phe Arg Arg
405 410
<210> 9
<211> 1575
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> codon optimized for human
<400> 9
atggtgccgc aggctctcct gtttgtcccc cttctggtct ttccattgtg ttttgggaaa 60
ttccctatct acacaattcc ggacaagttg ggaccctgga gcccaattga cattcatcat 120
ctcagctgcc cgaacaattt ggtcgtggag gacgaaggat gcaccaacct gtcggggttc 180
tcctacatgg aattgaaagt cggatacatc agtgccatta agatgaacgg gttcacttgc 240
acaggcgtcg tgactgaagc tgagacatac actaacttcg tgggatatgt cactaccact 300
ttcaaaagaa agcatttccg ccctactcct gatgcttgta gggccgcata caactggaag 360
atggccggtg accccagata tgaggaatca cttcacaatc cgtaccctga ctaccactgg 420
cttcggactg tcaaaaccac caaggagtca ctcgtgatca ttagtccaag tgtggctgat 480
cttgacccat acgaccggtc acttcactca cgggtgttcc cgggggggaa ttgctctggt 540
gtcgcagtgt cgtcaaccta ctgctccaca aaccacgatt acaccatttg gatgccagaa 600
aatcctcggc ttggtatgtc atgtgacatt ttcaccaatt ctcgggggaa gagggcttcc 660
aaagggtctg aaacttgcgg ctttgtcgat gagcggggct tgtataagtc acttaaaggt 720
gcttgcaaac tcaagctttg tggtgtcttg ggattgagat tgatggatgg aacttgggtc 780
gcaatgcaga cttctaacga aaccaaatgg tgccctcccg gacagcttgt gaatttgcat 840
gactttcgct ctgacgaaat tgagcatctt gtcgtcgagg agttggtcaa gaagcgggaa 900
gagtgtctgg atgctttgga atcaatcatg accaccaagt cagtgtcttt cagacggctc 960
tcacatctta ggaaattggt gccaggtttt ggaaaagcat ataccatttt caacaagacc 1020
cttatggaag ccgatgctca ctacaagtct gtcaggactt ggaatgagat catcccgtct 1080
aaagggtgtc ttagggtcgg agggagatgt catcctcatg tcaacggagt ctttttcaat 1140
ggtatcattc ttggacctga cggaaatgtc cttatccctg agatgcaatc ttccctcctc 1200
cagcaacaca tggaacttct tgtctcatcg gtcatccccc ttatgcaccc cctggctgac 1260
ccatcaaccg tgttcaagaa cggtgacgag gcagaggatt ttgtcgaggt ccaccttccc 1320
gatgtgcatg aacggatctc tggtgtcgac cttggactcc ctaactgggg aaagtatgtc 1380
cttctgtcgg caggagccct gactgccttg atgttgatta tcttcctgat gacttgttgg 1440
aggagagtca atcggtcgga gccaacacaa cataatctca gaggaacagg aagggaggtg 1500
tcagtcacac cccaaagcgg gaagatcatt tcgtcttggg agtcatacaa gagcggaggt 1560
gaaaccggac tgtga 1575
<210> 10
<211> 524
<212> PRT
<213> Rabies virus
<400> 10
Met Val Pro Gln Ala Leu Leu Phe Val Pro Leu Leu Val Phe Pro Leu
1 5 10 15
Cys Phe Gly Lys Phe Pro Ile Tyr Thr Ile Pro Asp Lys Leu Gly Pro
20 25 30
Trp Ser Pro Ile Asp Ile His His Leu Ser Cys Pro Asn Asn Leu Val
35 40 45
Val Glu Asp Glu Gly Cys Thr Asn Leu Ser Gly Phe Ser Tyr Met Glu
50 55 60
Leu Lys Val Gly Tyr Ile Ser Ala Ile Lys Met Asn Gly Phe Thr Cys
65 70 75 80
Thr Gly Val Val Thr Glu Ala Glu Thr Tyr Thr Asn Phe Val Gly Tyr
85 90 95
Val Thr Thr Thr Phe Lys Arg Lys His Phe Arg Pro Thr Pro Asp Ala
100 105 110
Cys Arg Ala Ala Tyr Asn Trp Lys Met Ala Gly Asp Pro Arg Tyr Glu
115 120 125
Glu Ser Leu His Asn Pro Tyr Pro Asp Tyr His Trp Leu Arg Thr Val
130 135 140
Lys Thr Thr Lys Glu Ser Leu Val Ile Ile Ser Pro Ser Val Ala Asp
145 150 155 160
Leu Asp Pro Tyr Asp Arg Ser Leu His Ser Arg Val Phe Pro Gly Gly
165 170 175
Asn Cys Ser Gly Val Ala Val Ser Ser Thr Tyr Cys Ser Thr Asn His
180 185 190
Asp Tyr Thr Ile Trp Met Pro Glu Asn Pro Arg Leu Gly Met Ser Cys
195 200 205
Asp Ile Phe Thr Asn Ser Arg Gly Lys Arg Ala Ser Lys Gly Ser Glu
210 215 220
Thr Cys Gly Phe Val Asp Glu Arg Gly Leu Tyr Lys Ser Leu Lys Gly
225 230 235 240
Ala Cys Lys Leu Lys Leu Cys Gly Val Leu Gly Leu Arg Leu Met Asp
245 250 255
Gly Thr Trp Val Ala Met Gln Thr Ser Asn Glu Thr Lys Trp Cys Pro
260 265 270
Pro Gly Gln Leu Val Asn Leu His Asp Phe Arg Ser Asp Glu Ile Glu
275 280 285
His Leu Val Val Glu Glu Leu Val Lys Lys Arg Glu Glu Cys Leu Asp
290 295 300
Ala Leu Glu Ser Ile Met Thr Thr Lys Ser Val Ser Phe Arg Arg Leu
305 310 315 320
Ser His Leu Arg Lys Leu Val Pro Gly Phe Gly Lys Ala Tyr Thr Ile
325 330 335
Phe Asn Lys Thr Leu Met Glu Ala Asp Ala His Tyr Lys Ser Val Arg
340 345 350
Thr Trp Asn Glu Ile Ile Pro Ser Lys Gly Cys Leu Arg Val Gly Gly
355 360 365
Arg Cys His Pro His Val Asn Gly Val Phe Phe Asn Gly Ile Ile Leu
370 375 380
Gly Pro Asp Gly Asn Val Leu Ile Pro Glu Met Gln Ser Ser Leu Leu
385 390 395 400
Gln Gln His Met Glu Leu Leu Val Ser Ser Val Ile Pro Leu Met His
405 410 415
Pro Leu Ala Asp Pro Ser Thr Val Phe Lys Asn Gly Asp Glu Ala Glu
420 425 430
Asp Phe Val Glu Val His Leu Pro Asp Val His Glu Arg Ile Ser Gly
435 440 445
Val Asp Leu Gly Leu Pro Asn Trp Gly Lys Tyr Val Leu Leu Ser Ala
450 455 460
Gly Ala Leu Thr Ala Leu Met Leu Ile Ile Phe Leu Met Thr Cys Trp
465 470 475 480
Arg Arg Val Asn Arg Ser Glu Pro Thr Gln His Asn Leu Arg Gly Thr
485 490 495
Gly Arg Glu Val Ser Val Thr Pro Gln Ser Gly Lys Ile Ile Ser Ser
500 505 510
Trp Glu Ser Tyr Lys Ser Gly Gly Glu Thr Gly Leu
515 520
<210> 11
<211> 13
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 5 'flanking sequence
<400> 11
ggcgcgccgc acc 13
<210> 12
<211> 1638
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> codon optimized for feline
<400> 12
auggcugacg acggaucugu gaccacccca gaacaaggaa caauggucgg aggagugauu 60
gccgaaccca gcgcucagau gucaacugcg gcggacaugg ccuccggaaa gucgguggac 120
uccgaguggg aagccuucuu cucguuccac acguccguga acuggagcac cuccgaaacc 180
caaggaaaga uccucuucaa gcagucccug gguccccugc ugaacccgua ccuggagcac 240
aucagcaagc uguacgucgc uuggagcggg ucgaucgaag ugcgauuuuc caucucggga 300
agcggcgugu ucggugguaa acuggccgcc aucgucgugc cgccuggugu cgacccuguc 360
cagucaaccu ccaugcugca guacccgcac guccuguucg acgcaagaca aguggagcca 420
gugaucuucu ccaucccgga ccuccgcaac agccuguauc acuugauguc cgauaccgau 480
accacuuccc ucgugaucau gguguacaac gaucugauca acccguacgc caaugacucc 540
aacagcucgg guugcaucgu gaccgucgaa acgaagccug gcaucgauuu caaguuucau 600
cugcugaaac cgcccggauc caugcuuacu cacgggucca ucccuuccga ucugaucccc 660
aagagcuccu cccuguggau ugggaaccgc cacuggaccg auauuaccga uuucgugauu 720
cggccuuucg uguuccaagc caaccggcac uucgacuuca accaggagac ugccggcugg 780
ucaacuccac gguuccgccc auuggccgug acugugucgc agucaaaggg agccaagcuc 840
gggaacggca ucgccaccga cuacauugug ccuggaaucc ccgacggaug gccugauacu 900
accaucccca ccaagcugac cccuaccgga gauuacgcca ucaccuccuc cgacggcaau 960
gauauugaaa ccaagcugga auacgagaac gcggacguga uuaagaacaa caccaacuuc 1020
cgcuccaugu auaucugcgg aagccuccag agggcuuggg gcgacaagaa gaucagcaac 1080
accggguuca ucacuaccgg agugauuucu gacaacucca ucagcccuuc gaacacaauu 1140
gaccagucca agaucguggu guaccaggac aaccauguca auucggaggu ccagacuagc 1200
gacaucacuc uugccauccu gggcuacacc ggaauuggag aagaggccau aggcgccaac 1260
cgggacuccg ucgugagaau uuccgugcuu ccggaaacug gagcaagggg cggaaaucac 1320
cccaucuucu acaaaaauuc caugaagcug ggcuacguga ucuccuccau ugacguguuc 1380
aacucccaaa uccuccacac cucgcgccag cugucacuga acaacuacuu guugcccccu 1440
gacuccuucg cgguguaccg gauuauugac agcaacggau caugguucga cauugggauu 1500
gacagcgaug gguuuucauu cgugggcgug ucgucauuuc caaagcugga guuuccgcug 1560
uccgccucau acaugggcau ccagcucgca aagauccggc uggcguccaa cauccgguca 1620
uccaugacua agcuguga 1638
<210> 13
<211> 1629
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> codon optimized for feline
<400> 13
augacugccc cggaacaagg aacgaugguc ggaggaguga uugcagaacc gucagcacag 60
auguccaccg cugccgacau ggccacugga aagagcgugg acuccgaaug ggaagccuuc 120
uucuccuucc acacuucggu caacuggucg acuagcgaaa cccaggggaa gauuuuguuc 180
aagcaauccc ucggcccucu gcugaacccc uaccuggagc aucuggccaa gcuguacgug 240
gcauggucgg gcagcaucga agugcgcuuu agcauuuccg gcuccggagu guucggggga 300
aagcuugcug ccauugucgu gccgccagga guggacccgg ugcaguccac uucuaugcuc 360
caauacccgc auguccuguu cgacgccaga cagguggagc cugugaucuu uugccugccg 420
gaucucaggu ccacccugua ucaccucaug uccgacaccg acaccaccuc gcucgugauc 480
augguguaca acgaccugau caaccccuac gcuaacgacg ccaacagcuc agguugcauu 540
gugacugucg aaaccaagcc aggcccugac uucaaguuuc auuugcugaa gccgcccggu 600
uccaugcuga cccacggcuc gaucccaucc gaccugaucc ccaagacgag cucccugugg 660
aucggaaacc gcuacugguc cgauauuacc gacuucguga ucagaccauu cguguuccaa 720
gccaaccgcc auuucgacuu caaccaggaa accgcaggau ggucgacccc ucgauuccgc 780
ccgauuucag ugaccaucac cgaacagaac ggcgcgaagc ugggaauugg cguggcgacc 840
gacuacaucg ugccgggaau cccggaugga uggccugaua cgaccauucc cggggagcug 900
aucccugccg gggacuacgc caucaccaac gguacuggaa acgacaucac cacugccacc 960
gguuacgaca ccgccgacau cauaaagaac aacaccaacu ucagaggaau guacauuugc 1020
ggcucccugc aacgcgcuug gggugacaaa aagaucucga acacugccuu caucacaaca 1080
gcgacucugg acggcgauaa caacaacaag aucaauccuu guaauaccau cgaccagucc 1140
aaaaucgugg uguuccagga uaaccacgug ggaaagaagg cgcagaccuc cgacgacacu 1200
cuggcgcugc uuggcuacac cgggaucggc gagcaggcca uuggaagcga ucgggaucgg 1260
gucgugcgga ucuccacccu ccccgagacu ggagcaaggg gaggcaacca ccccaucuuu 1320
uacaaaaaca gcauuaagcu cggauacguc auccgcucca ucgauguguu caacucucaa 1380
auccugcaca cuucgcggca gcugucccug aaccacuacc ucuugccgcc cgacuccuuc 1440
gccgucuacc ggaucauuga uucgaacggg agcugguucg acaucggcau ugauagcgau 1500
ggcuucucgu uugugggcgu gucgggcuuc gggaagcugg aguucccacu gagcgccuca 1560
uacaugggua uccagcuggc caagaucagg cuggccucca acauccgcuc accuaugacu 1620
aagcuguga 1629
<210> 14
<211> 1929
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> codon optimized for feline
<400> 14
auggagucac caacacaccc uaaaccuucu aaagacaaaa cccucucgug gaaucucgcc 60
uuccuugugg gcauccuguu cacaaucgac aucggcaugg ccaacccuuc gccgcaucag 120
aucuacaaug ugacaugggu cauuacuaau gugcagacaa acacccaggc aaaugcuacu 180
ucuaugcuug guacucugac ugaugcuuau ccaacccugc acgucgaccu uugcgaucuc 240
gucggugaca caugggagcc caucgugcug aauccaacua augucaaaca uggugccagg 300
uauucuucua gcaaauacgg guguaagacc acugaucgga agaaacagca acaaaccuac 360
ccauucuacg ugugcccggg ucacgcaccg ucccuggguc cgaagggaac acauuguggg 420
ggagcccaag acgguuuuug cgcugcuugg gguugugaaa caaccggaga agccuggugg 480
aagccuaccu caucuuggga cuacauuacu gugaaaagag gcucuagcca ggauaacagc 540
ugcgaaggaa aguguaaucc ccuggugcuu caauucaccc agaaaggccg gcaggcauca 600
ugggauggac cgaaaaugug gggacuuaga cucuaucgca ccggauacga ccccaucgcu 660
cuguuuacug ugucacgcca agucuccacc auuacuccgc cacaggccau ggggccgaau 720
cugguccucc ccgaucagaa gccacccuca cggcaaaguc aaaccggcuc aaaaguggcc 780
acccaacggc cccagacaaa ugaguccgca ccuaggucag uggcaccuac aacaaugggu 840
ccaaagcgga ucggaaccgg agacaggcuc auuaaccucg ugcaagggac uuaucuggcc 900
cuuaacgcua cugaccccaa caagaccaag gauugcuggc ucugccuugu gagcagaccu 960
ccuuacuaug aggggaucgc cauucucgga aacuacucaa aucagaccaa ccccccuccg 1020
ucgugucuga gcacccccca gcacaagcuu acuauuucag aagucagugg acagggaaug 1080
ugcaucggaa ccgugccaaa gacucaucaa gcccuuugca acaaaacuca acaagggcac 1140
acuggagcuc auuaucucgc cgcaccuaac gggaccuacu gggcuugcaa uacuggauug 1200
accccgugua ucucuauggc cgugcugaau uggacuuccg acuucugcgu gcuuauugag 1260
cuuuggccua gagugacaua ccaucagccu gaguacgucu auacccauuu cgccaaggca 1320
gucagauucc ggcgggagcc uaucucccug acuguggccu ugaugcucgg uggacugaca 1380
gugggaggaa uugcagcugg agucggaacu ggaaccaagg cccugcucga aacugcucag 1440
uuccggcagc ugcagauggc caugcacacu gacauccagg cucuggagga aucaauuuca 1500
gcccuugaga aaagcuugac cucgcugucu gaaguggucc uccaaaacag gcgcgguuug 1560
gacauccugu uccuucaaga ggguggucug ugcgccgcuc ucaaggagga augcuguuuc 1620
uacgcugacc auaccgggcu ggugcgcgau aacauggcaa agcugcggga acgcuugaaa 1680
cagaggcagc aacuguucga cucucagcag ggaugguucg agggcugguu uaacaagagc 1740
ccaugguuua ccacucugau cucuucaauc auggguccac ugcucauccu gcuucugauu 1800
cuucucuucg gaccguguau ucucaacagg cuggugcagu uugucaagga cagaaucucg 1860
gugguccagg cccugauucu uacucagcag uaucagcaga uuaagcagua cgaccccgau 1920
cggccuuga 1929
<210> 15
<211> 1233
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> codon optimized for feline
<400> 15
aauccuaguc cacaccaaau auauaaugua acuuggguaa uaaccaaugu acaaacuaac 60
acccaagcua acgccaccuc uauguuagga accuuaaccg augccuaccc uacccuacau 120
guugacuuau gugaccuagu gggagacacc ugggaaccua uaguccuaaa cccaaccaau 180
guaaaacacg gggcacguua cuccuccuca aaauauggau guaaaacuac agauagaaaa 240
aaacagcaac agacauaccc cuuuuacguc ugccccggac augcccccuc guuggggcca 300
aagggaacac auuguggagg ggcacaagau ggguuuugug ccgcaugggg augugagacc 360
accggagaag cuugguggaa gcccaccucc ucaugggacu auaucacagu aaaaagaggg 420
aguagucagg acaauagcug ugagggaaaa ugcaaccccc ugguuuugca guucacccag 480
aagggaagac aagccucuug ggacggaccu aagauguggg gauugcgacu auaccguaca 540
ggauaugacc cuaucgcuuu auucacggug ucccggcagg uaucaaccau uacgccgccu 600
caggcaaugg gaccaaaccu agucuuaccu gaucaaaaac ccccaucccg acaaucucaa 660
acagggucca aaguggcgac ccagaggccc caaacgaaug aaagcgcccc aaggucuguu 720
gcccccacca ccaugggucc caaacggauu gggaccggag auagguuaau aaauuuagua 780
caagggacau accuagccuu aaaugccacc gaccccaaca aaacuaaaga cuguuggcuc 840
ugccugguuu cucgaccacc cuauuacgaa gggauugcaa ucuuagguaa cuacagcaac 900
caaacaaacc cccccccauc cugccuaucu acuccgcaac acaaacuaac uauaucugaa 960
guaucagggc aaggaaugug cauagggacu guuccuaaaa cccaccaggc uuugugcaau 1020
aagacacaac agggacauac aggggcgcac uaucuagccg cccccaacgg caccuauugg 1080
gccuguaaca cuggacucac cccaugcauu uccauggcgg ugcucaauug gaccucugau 1140
uuuugugucu uaaucgaauu auggcccaga gugacuuacc aucaacccga auauguguac 1200
acacauuuug ccaaagcugu cagguuccga aga 1233
<210> 16
<211> 1575
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> codon optimized for human
<400> 16
auggugccgc aggcucuccu guuugucccc cuucuggucu uuccauugug uuuugggaaa 60
uucccuaucu acacaauucc ggacaaguug ggacccugga gcccaauuga cauucaucau 120
cucagcugcc cgaacaauuu ggucguggag gacgaaggau gcaccaaccu gucgggguuc 180
uccuacaugg aauugaaagu cggauacauc agugccauua agaugaacgg guucacuugc 240
acaggcgucg ugacugaagc ugagacauac acuaacuucg ugggauaugu cacuaccacu 300
uucaaaagaa agcauuuccg cccuacuccu gaugcuugua gggccgcaua caacuggaag 360
auggccggug accccagaua ugaggaauca cuucacaauc cguacccuga cuaccacugg 420
cuucggacug ucaaaaccac caaggaguca cucgugauca uuaguccaag uguggcugau 480
cuugacccau acgaccgguc acuucacuca cggguguucc cgggggggaa uugcucuggu 540
gucgcagugu cgucaaccua cugcuccaca aaccacgauu acaccauuug gaugccagaa 600
aauccucggc uugguauguc augugacauu uucaccaauu cucgggggaa gagggcuucc 660
aaagggucug aaacuugcgg cuuugucgau gagcggggcu uguauaaguc acuuaaaggu 720
gcuugcaaac ucaagcuuug uggugucuug ggauugagau ugauggaugg aacuuggguc 780
gcaaugcaga cuucuaacga aaccaaaugg ugcccucccg gacagcuugu gaauuugcau 840
gacuuucgcu cugacgaaau ugagcaucuu gucgucgagg aguuggucaa gaagcgggaa 900
gagugucugg augcuuugga aucaaucaug accaccaagu cagugucuuu cagacggcuc 960
ucacaucuua ggaaauuggu gccagguuuu ggaaaagcau auaccauuuu caacaagacc 1020
cuuauggaag ccgaugcuca cuacaagucu gucaggacuu ggaaugagau caucccgucu 1080
aaaggguguc uuagggucgg agggagaugu cauccucaug ucaacggagu cuuuuucaau 1140
gguaucauuc uuggaccuga cggaaauguc cuuaucccug agaugcaauc uucccuccuc 1200
cagcaacaca uggaacuucu ugucucaucg gucauccccc uuaugcaccc ccuggcugac 1260
ccaucaaccg uguucaagaa cggugacgag gcagaggauu uugucgaggu ccaccuuccc 1320
gaugugcaug aacggaucuc uggugucgac cuuggacucc cuaacugggg aaaguauguc 1380
cuucugucgg caggagcccu gacugccuug auguugauua ucuuccugau gacuuguugg 1440
aggagaguca aucggucgga gccaacacaa cauaaucuca gaggaacagg aagggaggug 1500
ucagucacac cccaaagcgg gaagaucauu ucgucuuggg agucauacaa gagcggaggu 1560
gaaaccggac uguga 1575
<---
Claims (14)
1. Иммуногенная композиция для способствования предупреждению заболевания вследствие FCV, содержащая РНК-репликонную частицу альфавируса венесуэльского энцефалита лошадей (VEE), которая кодирует капсидный белок кошачьего кальцивируса (FCV) и модифицированный живой патоген животного семейства кошачьих, выбранный из группы, состоящей из модифицированного живого вируса кошачьего вирусного ринотрахеита (FVR), модифицированного живого вируса кошачьей панлейкопении (FPLV), модифицированных живых Chlamydophila felis и любой их комбинации.
2. Иммуногенная композиция по п.1, где капсидный белок FCV выбран из группы, состоящей из капсидного белка F9-подобного FCV, и капсидного белка вирулентного системного FCV (VS-FCV).
3. Иммуногенная композиция по п.2, где капсидный белок FCV представляет собой капсидный белок VS-FCV.
4. Иммуногенная композиция по п.3, где РНК-репликонная частица альфавируса VEE также кодирует антиген, выбранный из группы, состоящей из капсидного белка F9-подобного FCV.
5. Иммуногенная композиция по п.3, которая дополнительно содержит дополнительную РНК-репликонную частицу альфавируса VEE, которая кодирует капсидный белок F9-подобного FCV.
6. Иммуногенная композиция по п.2, где капсидный белок представляет собой F9-подобный капсидный белок FCV.
7. Иммуногенная композиция по пп.1-5 или 6, которая содержит одну или более дополнительных РНК-репликонных частиц альфавируса VEE, которые кодируют антиген, выбранный из группы, состоящей из гликопротеина FeLV (gp85), антигенного фрагмента gp85 и их комбинации.
8. Иммуногенная композиция по пп.1-5 или 6, где РНК-репликонная частица альфавируса VEE, или дополнительная РНК-репликонная частица альфавируса VEE дополнительно кодирует антиген, выбранный из группы, состоящей из гликопротеина (gp85) вируса кошачьего лейкоза (FeLV), антигенного фрагмента gp85 и их комбинации.
9. Иммуногенная композиция по пп.2-5, 7 или 8, где капсидный белок VS-FCV содержит аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 95% идентичностью с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 2.
10. Иммуногенная композиция по пп.2, 4-8 или 9, где капсидный белок F9-подобного FCV содержит аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 95% идентичностью с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 4.
11. Иммуногенная композиция по пп.7-9 или 10, где гликопротеин (gp85) FeLV содержит аминокислотную последовательность, обладающую по меньшей мере 95% идентичностью с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 6.
12. Вакцина для способствования предупреждению заболевания вследствие FCV, содержащая иммуногенную композицию по пп.1-10 или 11, и фармацевтически приемлемый носитель.
13. Вакцинная композиция по п.12, которая представляет собой безадъювантную вакцину.
14. Способ иммунизации животного семейства кошачьих против патогенного FCV, включающий введение животному семейства кошачьих иммунологически эффективного количества вакцины по п.12 или 13.
Applications Claiming Priority (7)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201762582050P | 2017-11-06 | 2017-11-06 | |
| US62/582,050 | 2017-11-06 | ||
| US201762596508P | 2017-12-08 | 2017-12-08 | |
| US62/596,508 | 2017-12-08 | ||
| US201762599401P | 2017-12-15 | 2017-12-15 | |
| US62/599,401 | 2017-12-15 | ||
| PCT/EP2018/080106 WO2019115090A1 (en) | 2017-12-15 | 2018-11-05 | Multivalent feline vaccine |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2023114426A Division RU2023114426A (ru) | 2017-11-06 | 2018-11-05 | Поливалентная вакцина для животных семейства кошачьих |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2020122007A RU2020122007A (ru) | 2022-04-01 |
| RU2797538C2 true RU2797538C2 (ru) | 2023-06-07 |
Family
ID=
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2808965C1 (ru) * | 2023-09-01 | 2023-12-05 | Общество с ограниченной ответственностью "Иннова плюс" | Рекомбинантный белок для иммунизации против коронавируса кошек |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2001066568A2 (en) * | 2000-03-09 | 2001-09-13 | Heska Corporation | Use of recombinant antigens to determine the immune status of an animal |
| US9441247B2 (en) * | 2004-05-18 | 2016-09-13 | Alphavax, Inc. | TC-83-derived alphavirus vectors, particles and methods |
| WO2017109045A1 (en) * | 2015-12-23 | 2017-06-29 | Intervet International B.V. | Feline calicivirus vaccine |
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2001066568A2 (en) * | 2000-03-09 | 2001-09-13 | Heska Corporation | Use of recombinant antigens to determine the immune status of an animal |
| US9441247B2 (en) * | 2004-05-18 | 2016-09-13 | Alphavax, Inc. | TC-83-derived alphavirus vectors, particles and methods |
| WO2017109045A1 (en) * | 2015-12-23 | 2017-06-29 | Intervet International B.V. | Feline calicivirus vaccine |
Non-Patent Citations (1)
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2808965C1 (ru) * | 2023-09-01 | 2023-12-05 | Общество с ограниченной ответственностью "Иннова плюс" | Рекомбинантный белок для иммунизации против коронавируса кошек |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2023179547A (ja) | 多価ネコワクチン | |
| JP2023159325A (ja) | ネコカリシウイルスワクチン | |
| JP2024001076A (ja) | 狂犬病ウイルスワクチン | |
| JP2023159327A (ja) | ネコ白血病ウイルスワクチン | |
| US11730809B2 (en) | Multivalent feline vaccine | |
| US12076392B2 (en) | Feline leukemia virus vaccine | |
| RU2797538C2 (ru) | Поливалентная вакцина для животных семейства кошачьих | |
| RU2792898C2 (ru) | Вакцина против кошачьего калицивируса | |
| RU2784533C2 (ru) | Вакцина против вируса лейкоза кошачьих | |
| RU2782350C2 (ru) | Вакцина против вируса бешенства | |
| US20240269259A1 (en) | Rabies virus vaccine |