Nothing Special   »   [go: up one dir, main page]

RU2629388C2 - Способ забора конденсата выдыхаемого воздуха новорожденных, находящихся на искусственной вентиляции - Google Patents

Способ забора конденсата выдыхаемого воздуха новорожденных, находящихся на искусственной вентиляции Download PDF

Info

Publication number
RU2629388C2
RU2629388C2 RU2015152935A RU2015152935A RU2629388C2 RU 2629388 C2 RU2629388 C2 RU 2629388C2 RU 2015152935 A RU2015152935 A RU 2015152935A RU 2015152935 A RU2015152935 A RU 2015152935A RU 2629388 C2 RU2629388 C2 RU 2629388C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
newborns
condensate
exhaled air
sampling
ventilation
Prior art date
Application number
RU2015152935A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2015152935A (ru
Inventor
Алексей Сергеевич Кононихин
Наталия Леонидовна Стародубцева
Виталий Викторович Чаговец
Андрей Юрьевич Рындин
Олег Вадимович Ионов
Ксения Николаевна Крохина
Владимир Евгеньевич Франкевич
Евгений Николаевич Николаев
Игорь Алексеевич Попов
Дмитрий Николаевич Дегтярев
Original Assignee
Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова" Министерства здравоохранения Российской Федерации
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова" Министерства здравоохранения Российской Федерации filed Critical Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова" Министерства здравоохранения Российской Федерации
Priority to RU2015152935A priority Critical patent/RU2629388C2/ru
Publication of RU2015152935A publication Critical patent/RU2015152935A/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2629388C2 publication Critical patent/RU2629388C2/ru

Links

Images

Classifications

    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/483Physical analysis of biological material
    • G01N33/497Physical analysis of biological material of gaseous biological material, e.g. breath
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61BDIAGNOSIS; SURGERY; IDENTIFICATION
    • A61B10/00Instruments for taking body samples for diagnostic purposes; Other methods or instruments for diagnosis, e.g. for vaccination diagnosis, sex determination or ovulation-period determination; Throat striking implements
    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N1/00Sampling; Preparing specimens for investigation
    • G01N1/02Devices for withdrawing samples
    • G01N1/10Devices for withdrawing samples in the liquid or fluent state
    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N1/00Sampling; Preparing specimens for investigation
    • G01N1/28Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
    • G01N1/40Concentrating samples

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Hydrology & Water Resources (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Surgery (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Measurement Of The Respiration, Hearing Ability, Form, And Blood Characteristics Of Living Organisms (AREA)
  • Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)

Abstract

Изобретение относится к области медицины, а именно - к неонатологии, к способам мониторинга состава конденсата выдыхаемого воздуха новорожденных, находящихся на искусственной вентиляции, с целью мониторинга состояния пациента. Способ забора конденсата выдыхаемого воздуха (КВВ) новорожденных, находящихся на искусственной вентиляции легких, заключается в том, что используют систему сбора конденсата и вспомогательный измерительный модуль для контроля параметров сбора. Система сбора конденсата содержит два соосных цилиндра, изготовленных из стекла и имеющих раздельные выходы сверху, причем данную систему термостатируют хладагентом в виде охлажденной предварительно жидкости, залитой в сосуд Дьюар типа термос. Во время процедуры сбора пробы КВВ постоянно измеряют температуру хладагента с помощью вспомогательного измерительного модуля, в качестве которого используют цифровой термометр с термопарным датчиком температуры, который обладает функцией сохранения показаний температуры с заданной периодичностью и функцией хронометра. Изобретение позволяет неинвазивно и безопасно проводить отбор проб КВВ у новорожденных, находящихся на искусственной вентиляции, для их дальнейшего анализа, не внося каких-либо изменений в режим вентиляции. 4 ил., 3 табл., 5 пр.

Description

Изобретение относится к области медицины, а именно к неонатологии, к способам забора конденсата выдыхаемого воздуха новорожденных, находящихся на искусственной вентиляции с целью мониторинга состояния пациента.
В последние годы анализ летучих и нелетучих компонентов в конденсате выдыхаемого воздуха (КВВ) превратился в новое средство для неинвазивного исследования окислительных маркеров и медиаторов воспаления в дыхательных путях [1]. Этот метод успешно используется в исследованиях по изучению маркеров оксидативного стресса у детей с бронхиальной астмой [2]. Для оценки оксидативного стресса и воспаления дыхательный путей у новорожденных стандартным шагом является забор образца с помощью трахеальной аспирации. Однако это весьма инвазивная процедура для рутинного использования у новорожденных, особенно тех, кто родился преждевременно [3]. Корреляция антиоксидантного статуса между образцами, полученными с использование трахеальной аспирации, и образцами КВВ была показана только совсем недавно [4]. В настоящее время исследования по оценке состояния новорожденных с использованием КВВ только начинают проводиться и представляют большой интерес ввиду неинвазивности процедуры сбора КВВ.
В качестве прототипа предлагаемого способа проведения анализа протеомного состава конденсата выдыхаемого воздуха новорожденных, находящихся на искусственной вентиляции, взят метод, описанный в [4], согласно которому отбор проб КВВ новорожденных осуществлялся посредством включения системы сбора КВВ (Rtube, США) в выходной тракт аппарата искусственной вентиляции легких. Недостатком данного способа является необходимость адаптации стандартизированной для взрослых пациентов трубки Rtube. При этом авторы не указывают, использовали ли они в своей финальной конструкции такой стандартный компонент Rtube, как клапан на выдох, по типу «гусиный клюв». Известно, что выходной клапан - «гусиный клюв» - создает дополнительное сопротивление и требует создания избыточного давления, что в случае сбора КВВ у новорожденных, находящихся на искусственной вентиляции, является дополнительный фактором риска и требует особой оговорки. В инструкции использования Rtube для взрослых пациентов отдельно оговаривается возможная закупорка клапана «гусиный клюв» и рекомендуется каждый раз, до использования, визуально проверять свободное открытие клапана. Вторым, не столь существенным недостатком системы Rtube является полимерный материал, из которого изготовлено устройство. Данный материал привносит примеси в виде полимеров при сборе КВВ, которые затем легко видны при хромато-масс-спектрометрическом анализе пробы. Третий существенный недостаток - это одноразовый тип устройств Rtube - после сбора пробы КВВ трубка утилизируется при том, что цена ее составляет 100 долларов США. Стоит также отметить, что у авторов в самой системе сбора отсутствовало какое-либо вспомогательное измерительное оборудование для контроля параметров сбора КВВ - наиболее важный параметр это температура охлаждения конденсора.
Задачей, разрабатываемой нами системы для сбора КВВ новорожденных, было устранения вышеперечисленных недостатков. Разработанное устройство состоит из системы сбора конденсата и вспомогательного измерительного модуля для контроля параметров сбора, как показано на Фиг. 1. Система сбора конденсата в общем виде представляет собой два соосных цилиндра, имеющих раздельные выходы сверху (Фиг. 2). Снизу внешний цилиндр запаян. Конденсация выдыхаемого воздуха осуществляется на внешнем цилиндре, который соприкасается с хладагентом. Внутренний цилиндр служит для транспортировки воздуха внутрь устройства и для увеличения пути выдыхаемого воздуха, что повышает эффективность функционирования. Хладагент, как и его начальная температура, определяются исходя из поставленных задач. Для повышения стабильности системы и увеличения длительности отбора система может помещаться в теплоизолирующий сосуд.
В качестве измерительного модуля температуры был выбран цифровой термометр с термопарным датчиком температуры. Модуль обладает функциями сохранения показаний температуры с заданной периодичностью, функцией хронометра и возможностью передачи сохраненных данных на персональный компьютер через USB-порт. Это позволяет регистрировать параметры, характеризующие отбор проб КВВ, и учитывать их при дальнейшем анализе полученных образцов.
Для реализации заявляемого способа сбора КВВ можно использовать любое типовое устройство для сбора КВВ из инертного материала, например, из стекла, с соответствующей конструкцией, подходящей для адаптации к ИВЛ. Нами был выбран концентрический стеклянный сосуд типового производства (Lenz Laborglasinstrumente, Wertheim, Germany), схематичное изображение которого представлено на Фиг. 2. Стеклянный сосуд подсоединялся с использованием тефлоновых трубок к типовым соединениям ИВЛ. Во время процедуры сбора стеклянный сосуд помещался в термос с охлаждающей жидкостью (хладагентом), предварительно охлажденном до оптимальной
температуры (Табл. 1). Путем повторных экспериментов с варьированием времени сбора (12-20 мин) определялось время, необходимое для сбора достаточного количества конденсата (около 1 мл) для дальнейшего анализа с использованием метода жидкостной хромато-масс-спектрометрии.
Возможность реализации заявляемого изобретения с получением заявленного технического результата иллюстрируют нижеследующие примеры 1-5 осуществления сбора КВВ у новорожденных, находящихся на ИВЛ, при использовании различных хладагентов и варьировании времени сбора (Табл. 1).
КВВ забирался у новорожденных, находящихся на традиционной вспомогательной ИВЛ, т.е. каждое дыхательное усилие пациента поддерживалось аппаратным вдохом.
В аппарате AVEA использовали следующие виды вспомогательной ИВЛ:
- вентиляция цикличная по времени с ограничением по давлению (TCPL - time cycled pressure limited). Этот режим используется по умолчанию для новорожденных, инспираторный поток для новорожденных установлен по умолчанию 8 л/мин,
- вспомогательно-принудительный режим вентиляции по давлению (Pessure А/С), инспираторный поток подбирается самим аппаратом в диапазоне 6-10 л/мин,
- вспомогательно-принудительный режим вентиляции по объему (Volume А/С), инспираторный поток устанавливается по умолчанию 8 л/мин.
На примерах 1-5 показано, что с использованием предложенного способа и устройства забора КВВ, изображенного на Фиг. 1, возможно осуществить забор пробы конденсата выдыхаемого воздуха необходимого объема (от 0.5 мл до 1 мл) при использовании различных хладагентов и варьировании времени сбора от 10 до 20 мин. В таблице 1 приведены условия экспериментов с использованием различных хладагентов: лед с добавлением соли (NaCl), лед, этанол (-80°С). Показано, что лучше всего использовать этанол, охлажденный до низкой температуры -80°С. При изменении времени сбора пробы КВВ от 10 мин до 20 мин показано, что оптимальный является время сбора 20 мин. За период времени 20 мин удается собрать объем пробы порядка 1.2 мл, что является оптимальным для дальнейшего анализа молекулярного состава пробы КВВ с использованием, например, метода жидкостной хромато-масс-спектрометрии.
Повторные эксперименты показывают (см. Пример 4-5), что существенных изменений в объеме конденсата не наблюдается при соблюдении хорошего уплотнения в соединительных местах контура.
Figure 00000001
На примере 4 показано, что с использованием разработанных подходов может быть проведен анализ протеомного состава конденсата выдыхаемого воздуха (КВВ) у 6-ти новорожденных, находящихся на искусственной вентиляции в отделении реанимации и интенсивной терапии. Показано, что в течение 20 минут в режиме ИВЛ удается собрать необходимое количество КВВ объемом 1.2 мл для дальнейшего протеомного анализа с использованием хромато-масс-спектрометрии. Удалось идентифицировать характерные белки в составе выдыхаемого воздуха новорожденных на разных стадиях развития и с различными патологиями. В конденсате, собранном в режиме с ИВЛ, присутствовал постоянный спектр инвариантных белков кератинов 1, 10, 2, 9, которые являются экзогенными белками, как нами было показано ранее при исследовании КВВ взрослых пациентов [5]. Также в пробах КВВ новорожденных были идентифицированы некератиновые белковые компоненты, содержание которых вариабельно у разных пациентов, в зависимости от стадии развития и патологии (Табл. 2, Фиг. 3).
Figure 00000002
Figure 00000003
На примере 5 показана возможность обнаружения в собранных пробах КВВ новорожденных некоторых групп летучих альдегидов, преимущественно алканалы, 2-алкеналы, 4-гидрокси-2-алкеналы, которые могут являться метаболитами при перекис-ном окислении липидов, содержащих остатки полиненасыщенных жирных кислот (Табл. 3, Фиг. 4). Было предложено использовать их содержание в биологических жидкостях для оценки уровня окислительного стресса, т.е. эти вещества могут выступать в качестве биомаркеров окислительного стресса[7, 8].
Figure 00000004
Figure 00000005
Возможность реализации заявляемого изобретения с получением заявленного технического результата продемонстрирована на примерах 1-5. Показано, что изобретение позволяет эффективно проводить отбор пробы КВВ объемом не менее 1 мл за время 20 мин у новорожденных, находящихся на искусственной вентиляции, не внося каких-либо изменений в режим вентиляции. Показано на примерах 1-5, что систему сбора КВВ можно термостатировать хладагентом в виде охлажденной предварительно жидкости (этанол, -80°С), залитой в сосуд Дьюар. На примерах 1-5 показано, что данный способ может быть реализован в условиях неонатальных отделений, занимающихся интенсивной реанимацией, выхаживанием и лечением недоношенных новорожденных. На примерах 4-5 показано, что данный способ позволяет неинвазивно получать биоматериал от пациента и проводить протеомный и метаболомный анализ проб для получения дополнительной информации о состоянии пациентов с целью уточнения диагноза и тактики лечения.
Таким образом, изобретение позволяет неинвазивным и безопасным способом собрать необходимый объем конденсата выдыхаемого воздуха у новорожденных, находящихся на искусственной вентиляции, для дальнейшего анализа молекулярного состава КВВ с целью получения дополнительной информации о состоянии пациентов с целью уточнения диагноза и тактики лечения.
На Фиг. 1 показана схема установки по сбору КВВ в системе с подключение к аппарату с искусственной вентиляцией легких (ИВЛ).
На Фиг. 2 показано схематичное изображение концентрического стеклянного сосуда для сбора КВВ.
На Фиг. 3 показан пример автоматизированного хромато-масс-спектрометрического анализа КВВ пробы. Вверху - хроматограмма. В центре - масс-спектра в момент времени, выделенный на хроматограмме. Внизу: масс-спектр столкновительно фрагментация (CID) пика, выделенного в масс-спектре.
На Фиг. 4 показан пример масс-спектра конденсата выдыхаемого воздуха, (а) - обзорный масс-спектр, (б)-(ж) увеличенные области масс, соответствующие отдельным (б), (в) 2-алкеналам, (г)-(ж) 4-гидрокси-2-алкеналам.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Filippone М, Bonetto G, Corradi M, et al. Evidence of unexpected oxidative stress in airways of adolescents born very pre-term. Eur Respir J. 2012. 40 (5). pp. 1253-9.
2. Ahsman M.J., Tibboel D., Mathot R.A.A., et al. Sample collection, biobanking, and analysis. Handbook of Experimental Pharmacology. 2011. 205. pp. 203-217.
3. Marraro GA, Chen C, Piga MA, et al. Acute respiratory distress syndrome in the pediatric age: an update on advanced treatment. Zhongguo Dang Dai Er Ke Za Zhi. 2014. 16 (5). pp. 437-47.
4. Rosso MI, Roark S, Taylor E, et al. Exhaled breath condensate in intubated neonates-a window into the lung’s glutathione status. Respiratory Research. 2014. 15:1.
5. В.С. Курова, А.С. Кононихин, И.А. Попов и др. Экзогенные белки в конденсате выдыхаемого человеком воздуха. Биоорганическая химия. 2011. Т. 37. №1. с. 48-52.
6. Hakim, М.; Broza, Y. Y.; Barash, О.; Peled, N.; Phillips, M.; Amann, A.; Haick, H. Chem. Rev. 2012, 112, 5949-5966.
7. Gueraud, F.; Atalay, M.; Bresgen, N.; Cipak, A.; Eckl, P. M.; Huc, L.; Jouanin, I.; Siems, W.; Uchida, K. Free Radical Res. 2010, 44, 1098-1124.

Claims (1)

  1. Способ забора конденсата выдыхаемого воздуха новорожденных, находящихся на искусственной вентиляции легких, отличающийся тем, что используют систему сбора конденсата и вспомогательный измерительный модуль для контроля параметров сбора, причем система сбора конденсата содержит два соосных цилиндра, изготовленных из стекла и имеющих раздельные выходы сверху, данную систему термостатируют хладагентом в виде охлажденной предварительно жидкости, залитой в сосуд Дьюар типа термос, при этом во время процедуры сбора пробы КВВ постоянно измеряют температуру хладагента с помощью вспомогательного измерительного модуля, в качестве которого используют цифровой термометр с термопарным датчиком температуры, который обладает функцией сохранения показаний температуры с заданной периодичностью и функцией хронометра.
RU2015152935A 2015-12-10 2015-12-10 Способ забора конденсата выдыхаемого воздуха новорожденных, находящихся на искусственной вентиляции RU2629388C2 (ru)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2015152935A RU2629388C2 (ru) 2015-12-10 2015-12-10 Способ забора конденсата выдыхаемого воздуха новорожденных, находящихся на искусственной вентиляции

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2015152935A RU2629388C2 (ru) 2015-12-10 2015-12-10 Способ забора конденсата выдыхаемого воздуха новорожденных, находящихся на искусственной вентиляции

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2015152935A RU2015152935A (ru) 2017-06-20
RU2629388C2 true RU2629388C2 (ru) 2017-08-29

Family

ID=59068016

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2015152935A RU2629388C2 (ru) 2015-12-10 2015-12-10 Способ забора конденсата выдыхаемого воздуха новорожденных, находящихся на искусственной вентиляции

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2629388C2 (ru)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2728700C1 (ru) * 2020-02-28 2020-07-30 Общество с ограниченной ответственностью "АЛКОТЕКТОР" Способ подготовки к забору пробы анализатора паров этанола

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SU1529117A1 (ru) * 1987-12-07 1989-12-15 Киевский Медицинский Институт Им.Акад.А.А.Богомольца Способ диагностики респираторных аллергозов
EP0759169A1 (de) * 1994-05-13 1997-02-26 Filt Forschungsgesellschaft Für Lungen- Und Thoraxerkrankungen Mbh Verfahren und vorrichtung zum sammeln von ausgeatmetem atemkondensat

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SU1529117A1 (ru) * 1987-12-07 1989-12-15 Киевский Медицинский Институт Им.Акад.А.А.Богомольца Способ диагностики респираторных аллергозов
EP0759169A1 (de) * 1994-05-13 1997-02-26 Filt Forschungsgesellschaft Für Lungen- Und Thoraxerkrankungen Mbh Verfahren und vorrichtung zum sammeln von ausgeatmetem atemkondensat

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ROSSO MI, ROARK S, TAYLOR E, et al. Exhaled breath condensate in intubated neonates-a window into the lung’s glutathione status, Respiratory Research, 2014. *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2728700C1 (ru) * 2020-02-28 2020-07-30 Общество с ограниченной ответственностью "АЛКОТЕКТОР" Способ подготовки к забору пробы анализатора паров этанола

Also Published As

Publication number Publication date
RU2015152935A (ru) 2017-06-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Rosias Methodological aspects of exhaled breath condensate collection and analysis
Horváth et al. A European Respiratory Society technical standard: exhaled biomarkers in lung disease
Kubáň et al. Exhaled breath condensate: determination of non-volatile compounds and their potential for clinical diagnosis and monitoring. A review
Soyer et al. Comparison of two methods for exhaled breath condensate collection
Vaughan et al. Exhaled breath condensate pH is a robust and reproducible assay of airway acidity
US4671298A (en) Isothermal rebreathing apparatus and method
EP1906829B1 (en) Method and device for measurement of exhaled respiratory gas temperature
Antus et al. Assessment of exhaled breath condensate pH in exacerbations of asthma and chronic obstructive pulmonary disease: a longitudinal study
Hayes et al. Exhaled breath condensate for lung cancer protein analysis: a review of methods and biomarkers
JP2000507462A (ja) 凝縮物比色酸化窒素分析計
CN110146651A (zh) 基于气体传感器的呼出气检测系统
Zamuruyev et al. Effect of temperature control on the metabolite content in exhaled breath condensate
Reinhold et al. Exhaled breath condensate: lessons learned from veterinary medicine
RU2629388C2 (ru) Способ забора конденсата выдыхаемого воздуха новорожденных, находящихся на искусственной вентиляции
Davis et al. Exhaled breath condensate pH assays
Beauchamp et al. Breath sampling and standardization
Hunt Exhaled breath condensate pH assays
Hagens et al. Development and validation of a point-of-care breath test for octane detection
US20180325421A1 (en) Method and device for measurement of exhaled respiratory gas temperature from specific regions of the airway
CN105572214A (zh) 同时监测呼出气中丙泊酚和六氟化硫离子迁移谱仪及应用
Reinhold et al. Evaluation of methodological and biological influences on the collection and composition of exhaled breath condensate
RU2564877C1 (ru) Способ неинвазивной экспресс-диагностики воспалительного процесса в органах дыхания у телят
Davis Exhaled breath condensate and aerosol
RU2563370C1 (ru) Устройство для определения влажности и температуры выдыхаемого человеком воздуха
Gesualdo Sampling and Condensation of Exhaled Breath Air for the Monitoring of Viral Load and Lung Diseases

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20171211

NF4A Reinstatement of patent

Effective date: 20181206

MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20191211

NF4A Reinstatement of patent

Effective date: 20211119