RU2694230C1 - Method for prediction of anxiety level - Google Patents
Method for prediction of anxiety level Download PDFInfo
- Publication number
- RU2694230C1 RU2694230C1 RU2018100491A RU2018100491A RU2694230C1 RU 2694230 C1 RU2694230 C1 RU 2694230C1 RU 2018100491 A RU2018100491 A RU 2018100491A RU 2018100491 A RU2018100491 A RU 2018100491A RU 2694230 C1 RU2694230 C1 RU 2694230C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- anxiety
- level
- gene
- tph2
- genotypes
- Prior art date
Links
- 208000019901 Anxiety disease Diseases 0.000 title claims abstract description 80
- 230000036506 anxiety Effects 0.000 title claims abstract description 67
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 30
- 101000830742 Homo sapiens Tryptophan 5-hydroxylase 1 Proteins 0.000 claims abstract description 31
- 101000851865 Homo sapiens Tryptophan 5-hydroxylase 2 Proteins 0.000 claims abstract description 30
- QZAYGJVTTNCVMB-UHFFFAOYSA-N serotonin Chemical compound C1=C(O)C=C2C(CCN)=CNC2=C1 QZAYGJVTTNCVMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 30
- 102100024971 Tryptophan 5-hydroxylase 1 Human genes 0.000 claims abstract description 29
- 102100036474 Tryptophan 5-hydroxylase 2 Human genes 0.000 claims abstract description 28
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 23
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims abstract description 19
- 229940076279 serotonin Drugs 0.000 claims abstract description 15
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims abstract description 7
- 238000003205 genotyping method Methods 0.000 claims abstract description 7
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 claims abstract description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims abstract description 6
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 4
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 claims abstract description 4
- 101000892398 Homo sapiens Tryptophan 2,3-dioxygenase Proteins 0.000 claims abstract 4
- 241001342895 Chorus Species 0.000 claims 2
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 claims 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- HAORKNGNJCEJBX-UHFFFAOYSA-N cyprodinil Chemical compound N=1C(C)=CC(C2CC2)=NC=1NC1=CC=CC=C1 HAORKNGNJCEJBX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 abstract description 13
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 abstract description 7
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 abstract description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 abstract description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 3
- 101150066742 TRI1 gene Proteins 0.000 abstract 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract 2
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 19
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 10
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 10
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 8
- 208000020016 psychiatric disease Diseases 0.000 description 8
- 101150058700 Tph1 gene Proteins 0.000 description 7
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 7
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 6
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 6
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 5
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 5
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 101150115335 TPH2 gene Proteins 0.000 description 4
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 4
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 4
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 4
- 239000013615 primer Substances 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 230000002996 emotional effect Effects 0.000 description 3
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003155 DNA primer Substances 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010222 PCR analysis Methods 0.000 description 2
- 101710183568 Serine/threonine-protein kinase PknK Proteins 0.000 description 2
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 2
- BKHZIBWEHPHYAI-UHFFFAOYSA-N chloroform;3-methylbutan-1-ol Chemical compound ClC(Cl)Cl.CC(C)CCO BKHZIBWEHPHYAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical group NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 2
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 239000003792 electrolyte Substances 0.000 description 2
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 2
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical class O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- PHTQWCKDNZKARW-UHFFFAOYSA-N isoamylol Chemical compound CC(C)CCO PHTQWCKDNZKARW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 230000004630 mental health Effects 0.000 description 2
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 2
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N thymine Chemical group CC1=CNC(=O)NC1=O RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 1
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007400 DNA extraction Methods 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 101150092324 TPP1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150088456 TRN1 gene Proteins 0.000 description 1
- KJADKKWYZYXHBB-XBWDGYHZSA-N Topiramic acid Chemical compound C1O[C@@]2(COS(N)(=O)=O)OC(C)(C)O[C@H]2[C@@H]2OC(C)(C)O[C@@H]21 KJADKKWYZYXHBB-XBWDGYHZSA-N 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000009223 counseling Methods 0.000 description 1
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 206010015037 epilepsy Diseases 0.000 description 1
- DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N ethyl mercaptane Natural products CCS DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 238000012252 genetic analysis Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 1
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 description 1
- 239000002858 neurotransmitter agent Substances 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 230000001314 paroxysmal effect Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 210000005105 peripheral blood lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000002205 phenol-chloroform extraction Methods 0.000 description 1
- 229920006254 polymer film Polymers 0.000 description 1
- 102000054765 polymorphisms of proteins Human genes 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 229940113082 thymine Drugs 0.000 description 1
- 229960004394 topiramate Drugs 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical compound [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 1
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
Предлагаемое изобретение относится к генетике поведения и психогенетике, и может быть использовано для прогнозирования уровня тревожности с целью предупреждения развития острых психических нарушений.The present invention relates to the genetics of behavior and psychogenetics, and can be used to predict the level of anxiety to prevent the development of acute mental disorders.
В современном мире патологическая тревожность является одним из наиболее распространенных нарушений психического здоровья, о чем говорят данные исследований Всемирной организации здравоохранения [Kessler R.C., Aguilar-Gaxiola S., Alonso J., Chatterji S., Lee S., Ormel J.,
Существует несколько методик по определению уровня тревожности. Коротковым К.Г. был разработан способ определения уровня тревожности человека, основанный на фиксации структур газоразрядного свечения вокруг исследуемой части одного и того же участка кожного покрова человека через полимерную пленку и без нее, и на основании полученной совокупности параметров каждой структуры в виде точек в многомерном пространстве параметров можно было судить об уровне тревожности индивида. Согласно этой методике, чем меньше расстояние между точками для структур, тем ниже уровень тревожности и, следовательно, чем больше это расстояние - тем выше показатели [Способ определения уровня тревожности человека // Патент РФ №2210982, 2003. / Коротков К.Г.]. Однако работа с газоразрядным свечением подразумевает использование токсичных компонентов и, как следствие, может оказать влияние на испытуемого, а также возникает необходимость в разработке соответствующей инфраструктуры по их сбору и утилизации.There are several methods for determining the level of anxiety. Korotkov K.G. A method of determining the level of human anxiety was developed, based on the fixation of gas-discharge glow structures around the investigated part of the same human skin area through the polymer film and without it, and based on the obtained set of parameters of each structure in the form of points in a multidimensional parameter space, it was possible to judge about the level of anxiety of the individual. According to this technique, the smaller the distance between points for structures, the lower the level of anxiety and, therefore, the greater this distance - the higher the indicators [Method of determining the level of human anxiety // Patent RF №2210982, 2003. / Korotkov KG] . However, working with a gas-discharge luminescence implies the use of toxic components and, as a result, can have an impact on the subject, and also there is a need to develop an appropriate infrastructure for their collection and disposal.
Известен способ психодиагностической оценки тревожности у детей, основанный на психологическом тестировании детей, родителей и учителей, где образуется три блока результатов, определяющих взаимоотношение ребенка с родителями, с одноклассниками и учителями, и полученные усредненные данные с учетом несовпадений оцениваются по четырехбалльной шкале. При общем среднем числе несовпадений менее 30% судят о низком уровне тревожности, при числе несовпадений от 30 до 60% говорят о повышенной тревожности, а значение больше 60% свидетельствуют о высоком уровне тревожности [Способ психодиагностической оценки тревожности у детей // Патент РФ №2160047, 2000. / Крупенин Б.Л.]. Недостатками метода являются его использование только в детской возрастной группе и вовлечение большого числа респондентов для оценки тревожности одного индивида.There is a method of psychodiagnostic assessment of anxiety in children, based on psychological testing of children, parents and teachers, where there are three blocks of results that determine the relationship of the child with parents, with classmates and teachers, and the averaged data obtained taking into account the discrepancies are evaluated on a four-point scale. With a total average number of discrepancies of less than 30%, a low level of anxiety is judged, with a number of discrepancies ranging from 30 to 60%, an increased anxiety is indicated, and a value of more than 60% indicates a high level of anxiety [Method of psychodiagnostic assessment of anxiety in children // Patent RF №2160047 , 2000. / Krupenin B.L.]. The disadvantages of the method are its use only in the children's age group and the involvement of a large number of respondents to assess the anxiety of one individual.
Более целесообразным представляет применение методик для диагностики уровня тревожности, отличающихся компактностью и возможностью их применения в разных возрастных группах. К этой группе относится способ определения уровня тревожности Ч.Д. Спилбергера в адаптации Ю.Л. Ханина [Барканова О.В. Методики диагностики эмоциональной сферы: психологический практикум // Красноярск: Литера-принт, 2009. - с. 215-222].More appropriate is the use of methods for diagnosing anxiety levels that are compact and can be used in different age groups. This group includes a method for determining the level of anxiety. Spielberger in the adaptation of Yu.L. Khanina [Barkanova OV Methods for diagnosing the emotional sphere: a psychological workshop // Krasnoyarsk: Litera-print, 2009. - p. 215-222].
Прототипом изобретения является способ диагностики уровня тревожности, основанный на анкетировании респондентов по шкале Спилбергера-Ханина с определением уровня реактивной и личностной тревожности, с учетом такого физиологического показателя организма, как частота пульса [Способ диагностики уровня тревожности // Патент РФ №2402268, 2010. / Воронова О.А., Герасимова Н.М., Фарленкова Е.Ю.]. На основании полученных данных рассчитывают уровень тревожности и при значениях от 6,0 до 8,0 диагностируют низкий уровень тревожности, от 8,01 до 11,0 - средний уровень, более 11,01 - высокий уровень тревожности.The prototype of the invention is a method of diagnosing anxiety level, based on questioning respondents on the Spielberger-Khanin scale with determining the level of reactive and personal anxiety, taking into account such a physiological indicator of the body as pulse rate [Method for diagnosing anxiety level // RF patent №2402268, 2010. / Voronova, OA, Gerasimova, NM, Farlenkova, E.Yu.]. Based on the obtained data, the level of anxiety is calculated and, with values from 6.0 to 8.0, a low level of anxiety is diagnosed, from 8.01 to 11.0 - an average level, more than 11.01 - a high level of anxiety.
Недостатком прототипа является возможное влияние эмоциональных, социальных и физиологических факторов на индивида в момент тестирования, что может отразиться на точности и достоверности полученных результатов. Кроме того, частота сердечных сокращений - это физиологический признак, отличающийся большой вариабельностью в популяции, что усложняет выделение групп на его основе и существенно влияет на достоверность результатов диагностики.The disadvantage of the prototype is the possible impact of emotional, social and physiological factors on the individual at the time of testing, which may affect the accuracy and reliability of the results. In addition, the heart rate is a physiological trait, characterized by large variability in the population, which complicates the selection of groups based on it and significantly affects the reliability of diagnostic results.
Техническим результатом предлагаемого изобретения является повышение точности и достоверности способа прогнозирования уровня тревожности ввиду применения молекулярно-генетических методов, которые позволяют избежать влияния побочных факторов на индивида в момент тестирования.The technical result of the invention is to improve the accuracy and reliability of the method of predicting the level of anxiety due to the use of molecular genetic methods that avoid the influence of adverse factors on an individual at the time of testing.
Указанный технический результат достигается тем, что в способе прогнозирования уровня тревожности, согласно изобретению, выделяют ДНК из лимфоцитов периферической венозной крови, проводят генотипирование полиморфных локусов А218С гена фермента биосинтеза серотонина триптофангидроксилазы-1 (ТРН1) и G-703T гена фермента биосинтеза серотонина триптофангидроксилазы-2 (ТРН2) методом полимеразной цепной реакции синтеза ДНК с последующей рестрикцией, и при выявлении сочетания генотипов ТРН1 А/А и TPH2 T/G прогнозируют высокий уровень тревожности, а при выявлении сочетания генотипов ТРН1 С/С и TPH2 G/G - низкий уровень тревожности.This technical result is achieved by the fact that in the method for predicting the level of anxiety according to the invention, DNA is isolated from peripheral venous blood lymphocytes, and the genotyping of the A218C polymorphic loci of the serotonin tryptophan hydroxylase-1 biosynthesis gene of the heart-less, is-ats without the synthesis of the heart-to-soth cell synthesis, and (TPH2) by the method of polymerase chain reaction of DNA synthesis followed by restriction, and when a combination of the TPH1 A / A genotypes and TPH2 T / G is detected, a high level of anxiety is predicted, and When identifying combinations TRN1 genotypes C / C, and TPH2 G / G - low level of anxiety.
Изобретение иллюстрируется фигурой, на которой изображены сочетания генотипов полиморфных локусов генов ТРН1 (А218С) и ТРН2 (G-703T) в выборке лиц с различными показателями ситуативной тревожности.The invention is illustrated by the figure, which depicts combinations of genotypes of the polymorphic loci of the TPH1 (A218C) and TPH2 genes (G-703T) in a sample of individuals with various indicators of situational anxiety.
Предлагаемый способ осуществляется следующим образом.The proposed method is as follows.
ДНК выделяют из лимфоцитов периферической крови. Для получения ДНК необходимой степени чистоты используют метод выделения ДНК из крови фенольно-хлороформной экстракцией, описанный Мэтью [Mathew С.С. The isolation of high molecular weight eucariotic DNA // Methods in Molecular Biology. / Ed. Walker J.M., N.Y., L.: Human Press.; - 1984. - V. 2. - P. 31-34].DNA is isolated from peripheral blood lymphocytes. To obtain DNA of the required degree of purity, the method of DNA extraction from blood by phenol-chloroform extraction described by Matthew [Mathew S.S. The isolation of high molecular weight eucariotic DNA // Methods in Molecular Biology. / Ed. Walker J.M., N.Y., L .: Human Press .; - 1984. - V. 2. - P. 31-34].
1. Смешивают 4 мл крови с 10 мл холодного лизирующего буфера (для приготовления буфера использовали 109,4 г сахарозы, 25 мл (2М) MgCl2, 10 мл тритона, 10 мл Трис-HCl).1. Mix 4 ml of blood with 10 ml of cold lysing buffer (109.4 g of sucrose, 25 ml (2M) MgCl 2 , 10 ml of triton, 10 ml of Tris-HCl were used to prepare the buffer).
2. Смесь центрифугируют в течение 30 минут при 1500 об./мин.2. The mixture is centrifuged for 30 minutes at 1500 rpm.
3. Надосадочную жидкость сливают до 7 мл; к образовавшемуся осадку приливают 7 мл лизирующего буфера, промывают осадок и охлаждают в холодильнике в течение 10 минут.3. The supernatant is drained to 7 ml; 7 ml of lysis buffer are added to the precipitate formed, the precipitate is washed and cooled in the refrigerator for 10 minutes.
4. Охлажденную смесь центрифугируют в течение 30 минут при 1500 об./мин.4. The cooled mixture is centrifuged for 30 minutes at 1500 rpm.
5. Надосадочную жидкость сливают полностью; к осадку приливают 14 мл лизирующего буфера и смесь центрифугируют в течение 20 минут при 1500 об./мин.5. The supernatant is drained completely; 14 ml of lysis buffer are poured into the precipitate and the mixture is centrifuged for 20 minutes at 1500 rpm.
6. Надосадочную жидкость сливают полностью. Образовавшийся ядерный осадок ресуспензируют в 400 мкл буфера для протеинкиназы К (Solin EDTA).6. The supernatant is drained completely. The resulting nuclear pellet is resuspended in 400 μl of protein kinase K buffer (Solin EDTA).
7. Осадок с Solin EDTA переносят в эппендорф на 1,5 мл, приливают 40 мкл 10% SDS и 30 мкл протеинкиназы К (10 мг/мл). Смесь перемешивают на шейкере.7. The precipitate with Solin EDTA is transferred to 1.5 ml Eppendorf, 40 μl of 10% SDS and 30 μl of protein kinase K (10 mg / ml) are added. The mixture is stirred on a shaker.
8. Смесь инкубируют при 37°С в течение 12 часов. Экстракцию ДНК осуществляют в следующем порядке:8. The mixture is incubated at 37 ° C for 12 hours. Extraction of DNA is carried out in the following order:
1. К смеси приливают 500 мкл забуференного фенола (для получения 500 мкл тщательно смешивают 100 мкл фенол-Трис-HCl и 400 мкл меркаптоэтанола). Смесь центрифугируют в течение 8 минут при 10000 об./мин.1. 500 μl of buffered phenol is poured into the mixture (to obtain 500 μl, 100 μl of phenol-Tris-HCl and 400 μl of mercaptoethanol are mixed thoroughly.) The mixture is centrifuged for 8 minutes at 10,000 rpm.
2. Надосадочную жидкость переносят в новый эппендорф; приливают добавляли 250 мкл забуференного фенола и 250 мкл хлороформа - изоамилового спирта (24 мл хлороформа к 1 мл изоамилового спирта). Смесь центрифугировали в течение 8 минут при 10000 об./мин.2. The supernatant is transferred to a new Eppendorf; 250 μl of buffered phenol and 250 μl of chloroform - isoamyl alcohol (24 ml of chloroform to 1 ml of isoamyl alcohol) are added. The mixture was centrifuged for 8 minutes at 10,000 rpm.
3. Надосадочную жидкость переносят в новый эппендорф и приливают 500 мкл хлороформа - изоамилового спирта. Смесь центрифугируют в течение 30 минут при 12000 об./мин.3. The supernatant is transferred to a new Eppendorf and 500 μl of chloroform - isoamyl alcohol is added. The mixture is centrifuged for 30 minutes at 12,000 rpm.
4. Надосадочную жидкость переносят в новый эппендорф, добавляют 800-1000 мкл охлажденного (при -20°С) 96% этанола (2 объема). Перемешивают, наблюдая преципитацию ДНК.4. The supernatant is transferred to a new Eppendorf, 800-1000 μl of cooled (at -20 ° C) 96% ethanol (2 volumes) is added. Mix, observing the precipitation of DNA.
5. Центрифугируют в течение 10 минут при 10000 об./мин. Осадок промывают 1 мл 70% спирта для удаления солей (2 раза). Вновь центрифугируют в течение 10 минут при 10000 об./мин.5. Centrifuged for 10 minutes at 10,000 rpm. The precipitate is washed with 1 ml of 70% alcohol to remove salts (2 times). Re-centrifuge for 10 minutes at 10,000 rpm.
6. Спирт сливают и высушивают ДНК при комнатной температуре. Затем ДНК растворяют в воде для инъекций.6. Alcohol is drained and dried DNA at room temperature. The DNA is then dissolved in water for injection.
В дальнейшем полученную ДНК используют в качестве матрицы для полимеразной цепной реакции (ПЦР) полиморфных локусов генов серотониновой нейромедиаторной системы. Специфические последовательности олигонуклеотидных праймеров и условия ПЦР-анализа полиморфного локуса триптофангидроксилазы-1 (ТРН1, А218С) приведены в работе Rujescu D. с соавт. [Rujescu D. Association of anger-related traits with SNPs in the TPH gene / Rujescu D., Giegling I., Bondy В., Gietl A., Zill P.,
Нуклеотидную замену аденина на цитозин в положении 218 гена ТРН1 выявляют при помощи рестрикционного анализа. Для этого 10 мкл амплификата смешивают с 0,1 ед. эндонуклеазы рестрикции NheI и 1 ед. буфера White, смесь выдерживают при 30°С в течение 16 часов в термостате. Затем проводят электрофорез в вертикальном 7% полиакриламидном геле. В качестве электролита для электрофореза применяют трис-боратный буфер.The nucleotide replacement of adenine by cytosine at position 218 of the TPH1 gene is detected by restriction analysis. To this end, 10 μl of amplification is mixed with 0.1 units. restriction endonucleases NheI and 1 unit. buffer White, the mixture is maintained at 30 ° C for 16 hours in a thermostat. This is followed by electrophoresis in a vertical 7% polyacrylamide gel. Tris-borate buffer is used as electrolyte for electrophoresis.
Электрофорез проводят при постоянном напряжении 10 вольт/см после 20-минутного преэлектрофореза. Детекцию результатов проводят путем окрашивания полиакриламидного геля бромистым этидием в течение 3 минут с последующей визуализацией в ультрафиолетовом свете. Генотипы типируются по критерию присутствия или отсутствия сайта рестрикции и соответствующего фрагмента на электрофорезе так, что при наличии фрагмента размером 918 пар нуклеотидов (пн) идентифицируется аллель А и гомозиготный генотип А/А; при наличии четырех фрагментов размером 918, 615, 245 и 58 пн идентифицируется гетерозиготный генотип А/С; при наличии фрагментов размером 615, 245 и 58 пн идентифицируется гомозиготный генотип С/С.Electrophoresis is carried out at a constant voltage of 10 volts / cm after a 20-minute pre-electrophoresis. The detection of results is carried out by staining the polyacrylamide gel with ethidium bromide for 3 minutes, followed by visualization in ultraviolet light. Genotypes are typed by the criterion of the presence or absence of a restriction site and the corresponding fragment on electrophoresis, so that in the presence of a fragment of 918 nucleotide pairs (mon), the allele A and the homozygous genotype A / A are identified; in the presence of four fragments of size 918, 615, 245 and 58 mon, the heterozygous genotype A / C is identified; in the presence of fragments of size 615, 245 and 58 mon, the homozygous genotype C / C is identified.
Специфические последовательности олигонуклеотидных праймеров и условия ПЦР-анализа полиморфного локуса триптофангидроксилазы-2 (ТРН2, G-703T) приведены в работе Чукановой А.С. с соавт. [Чуканова А.С.Анализ связи полиморфизмов генов SERT и ТРН2 с побочными эффектами на фоне терапии топираматом с учетом тендерных особенностей / А.С. Чуканова, М.А. Тушканов, В.И. Барский, И.К. Граждан, Е.В. Крикова, М.Г. Аксенова, С.Г. Бурд, Е.И. Гусев // Эпилепсия и пароксизмальные состояния, 2011. - Том 3, №2. - стр. 45-54]. Состав реакционной смеси для ПЦР был следующим: 1,2 мкл геномной ДНК, 3,5 мкл Screen-mix, 1,5 мкл Н20, 4 мкл праймеров, 20-30 мкл минерального масла. Амплификация включала в себя 35 циклов, каждый из которых состоял из денатурации, отжига праймеров и синтеза ДНК. Смесь прогревают 5 минут при 94°С. Режим амплификации: 35 циклов со следующими параметрами: 94°С - 20 секунд, 58°С - 20 секунд, 72°С - 10 секунд. После 35-го цикла проводили инкубацию при 72°С в течение 30 секунд.The specific sequences of oligonucleotide primers and the conditions for the PCR analysis of the polymorphic tryptophan hydroxylase-2 locus (TPH2, G-703T) are given in A. Chukanova. et al. [Chukanova, AS. Analysis of the relationship between polymorphisms of the SERT and TPH2 genes with side effects during therapy with topiramate, taking into account gender-specific features / A.S. Chukanova, M.A. Tushkanov, V.I. Barsky, I.K. Citizens, E.V. Cricova, M.G. Aksenov, S.G. Burd, E.I. Gusev // Epilepsy and paroxysmal states, 2011. - Volume 3, №2. - pp. 45-54]. The composition of the reaction mixture for PCR was as follows: 1.2 μl of genomic DNA, 3.5 μl of Screen-mix, 1.5 μl of H20, 4 μl of primers, 20-30 μl of mineral oil. The amplification included 35 cycles, each of which consisted of denaturation, primer annealing, and DNA synthesis. The mixture is heated for 5 minutes at 94 ° C. Amplification mode: 35 cycles with the following parameters: 94 ° C - 20 seconds, 58 ° C - 20 seconds, 72 ° C - 10 seconds. After the 35th cycle, incubation was carried out at 72 ° C for 30 seconds.
Нуклеотидную замену гуанина на тимин в положении 703 гена ТРН2 выявляют при помощи рестрикционного анализа. Для этого 10 мкл амплификата смешивают с 0,1 ед. эндонуклеазы рестрикции Acsl, 0,1 ед. BSA и 1 ед. буфера Tango, смесь выдерживают при 50°С в течение 16 часов в термостате. Затем проводят электрофорез в вертикальном 7% полиакриламидном геле. В качестве электролита для электрофореза применяют трис-боратный буфер.The nucleotide substitution of guanine for thymine at position 703 of the TPH2 gene is detected by restriction analysis. To this end, 10 μl of amplification is mixed with 0.1 units. restriction endonucleases Acsl, 0.1 units. BSA and 1 unit. buffer Tango, the mixture is maintained at 50 ° C for 16 hours in a thermostat. This is followed by electrophoresis in a vertical 7% polyacrylamide gel. Tris-borate buffer is used as electrolyte for electrophoresis.
Электрофорез проводят при постоянном напряжении 10 вольт/см после 20-минутного преэлектрофореза. Детекцию результатов проводят путем окрашивания полиакриламидного геля бромистым этидием в течение 3 минут с последующей визуализацией в ультрафиолетовом свете на транс-иллюминаторе. Генотипы типируются по критерию присутствия или отсутствия сайта рестрикции и соответствующего фрагмента на электрофорезе так, что при наличии фрагмента размером 113 пар нуклеотидов (пн) идентифируется аллель Т и гомозиготный генотип Т/Т; при наличии трех фрагментов размером 113, 91 и 22 пн идентифицируется гетерозиготный генотип T/G; при наличии фрагментов размером 91 и 22 пн идентифицируется гомозиготный генотип G/G.Electrophoresis is carried out at a constant voltage of 10 volts / cm after a 20-minute pre-electrophoresis. The detection of results is carried out by staining a polyacrylamide gel with ethidium bromide for 3 minutes, followed by visualization in ultraviolet light on a trans-illuminator. Genotypes are typed by the criterion of the presence or absence of a restriction site and the corresponding fragment on electrophoresis, so that in the presence of a fragment with a size of 113 nucleotides (pn), the allele T and the homozygous T / T genotype are identified; if there are three fragments of size 113, 91 and 22 mon, the heterozygous genotype T / G is identified; in the presence of fragments of size 91 and 22 mon, the homozygous genotype G / G is identified.
Для подтверждения полученных генетических критериев было проведено психологическое тестирование по определению уровня тревожности согласно методике Спилбергера-Ханина. Основой теста является шкала STAI (State Trait Anxiety Inventory), которая разделена на два блока и на 20 заданий в каждом. Первый блок (STAI: Х-1) определяет то, как человек чувствует себя в момент тестирования (шкала ситуативной тревожности), а задания второго блока (STAI: Х-2) определяют то, как человек чувствует себя в обычной обстановке (шкала личностной тревожности). После обработки результатов подсчитывается сумма баллов по каждой шкале. Данная сумма позволяет судить об уровне тревожности: до 30 баллов - низкий уровень, 31-44 баллов - умеренный уровень, 45 и более баллов - высокий уровень тревожности [Барканова О.В. Методики диагностики эмоциональной сферы: психологический практикум // Красноярск: Литера-принт, 2009. - с. 215-222].To confirm the obtained genetic criteria, psychological testing was conducted to determine the level of anxiety according to the Spielberger-Hanin method. The test is based on the STAI (State Trait Anxiety Inventory) scale, which is divided into two blocks and 20 assignments in each. The first block (STAI: X-1) determines how a person feels at the moment of testing (situational anxiety scale), and the tasks of the second block (STAI: X-2) determine how a person feels in a normal situation (personal anxiety scale ). After processing the results, the sum of points for each scale is calculated. This amount allows you to judge the level of anxiety: up to 30 points - a low level, 31-44 points - a moderate level, 45 points or more - a high level of anxiety [Barkanova OV Methods for diagnosing the emotional sphere: a psychological workshop // Krasnoyarsk: Litera-print, 2009. - p. 215-222].
Было обследовано 207 студентов в возрасте от 17 до 24 лет, проходивших обучение на Естественно-географическом факультете Башкирского государственного педагогического университета им. М. Акмуллы г. Уфы. Из общей группы студентов были выделены индивиды с высоким уровнем ситуативной (40 чел.) и личностной (70 чел.) тревожности, со средним уровнем ситуативной (143 чел.) и личностной (124 чел.) тревожности и с низким уровнем ситуативной (24 чел.) и личностной (13 чел.) тревожности. Результаты молекулярно-генетического анализа полиморфных локусов А218С гена ТРН1 и G-703T гена ТРН2 у студентов представлены в таблицах 1 и 2.A total of 207 students aged from 17 to 24 years old who studied at the Faculty of Natural Geography of the Bashkir State Pedagogical University named after. M. Akmulla Ufa. Individuals with a high level of situational (40 people) and personal (70 people) anxiety, with an average level of situational (143 people) and personal (124 people) anxiety and with a low level situational (24 people .) and personal (13 people) anxiety. The results of the molecular genetic analysis of the A218C polymorphic loci of the TPH1 gene and the G-703T TPH2 gene of students are presented in Tables 1 and 2.
Исследование полиморфного локуса А218С гена ТРН1 выявило существенные различия в частотах аллелей у студентов с высокими и низкими показателями ситуативной тревожности. Достоверно чаще в группе студентов с высокими показателями ситуативной тревожности встречался аллель А (54,55%), по сравнению с группой студентов с низкими показателями ситуативной тревожности, где его частота составила - 26,92% (χ2=3,9968; р=0,0457). На основании полученных результатов можно сделать вывод об ассоциации аллеля А полиморфного локуса А218С гена ТРН1 с высокими показателями тревожности (см. табл. 1).The study of the A218C polymorphic locus of the TPH1 gene revealed significant differences in allele frequencies among students with high and low indicators of situational anxiety. Significantly more often in the group of students with high rates of situational anxiety was the allele A (54.55%), compared to the group of students with low rates of situational anxiety, where its frequency was 26.92% (χ2 = 3.9968; p = 0 , 0457). Based on the obtained results, it can be concluded that the allele A of the TPP1 gene polymorph A218C gene is associated with high levels of anxiety (see Table 1).
Исследование полиморфного локуса G-703T гена ТРН2 выявило существенные различия в частотах генотипов у студентов с низкими и средними показателями ситуативной тревожности. Достоверно чаще в группе студентов с низкими показателями ситуативной тревожности встречался генотип G/G (61,54%), по сравнению с группой студентов со средними показателями ситуативной тревожности, где его частота составила - 23,73% (χ2=5,5061; р=0,0195). Также в группе студентов со средними показателями ситуативной тревожности достоверно чаще встречался генотип G/T (72,88%), нежели в группе с низкими показателями (23,08%; χ2=9,3968; р=0,0031). На основании полученных результатов можно сделать вывод об ассоциации аллеля G и генотипа G/G полиморфного локуса G-703T гена ТРН2 с низкими показателями тревожности (см. табл. 2).The study of the polymorphic locus G-703T of the TPN2 gene revealed significant differences in the frequencies of genotypes among students with low and medium indices of situational anxiety. Significantly more often in the group of students with low indicators of situational anxiety, the genotype G / G (61.54%) was encountered, compared to the group of students with average indicators of situational anxiety, where its frequency was 23.73% (χ2 = 5.5061; p = 0,0195). Also in the group of students with average situational anxiety, the G / T genotype (72.88%) was significantly more common than in the group with low rates (23.08%; χ2 = 9.3968; p = 0.0031). Based on the obtained results, it can be concluded that the allele G and the G / G genotype of the TPH2 polymorphism G-703T gene are associated with low levels of anxiety (see Table 2).
При исследовании межгенных взаимодействий полиморфных локусов генов триптофангидроксилазы ТРН1 (А218С) и ТРН2 (G-703T) с помощью программы GMDR была определена двухфакторная модель взаимодействия ДНК-локусов, приводящая к формированию фенотипических различий по признаку «ситуативная тревожность». Тестируемая сбалансированная точность (Bal. Acc.) данной модели составила 0,7413; чувствительность (Se) - 0,8529; специфичность (Sp) - 0,6296; повторяемость результата (CV Consistency) - 10/10, р=0,0107. Полученная модель свидетельствовала о том, что сочетание генотипов ТРН1 А/А и TPH2 T/G определяет высокий уровень тревожности, а сочетание ТРН1 С/С и TPH2 G/G - низкий уровень ситуативной тревожности (см. фигуру). На основании полученных данных можно сделать вывод о возможности использования данных сочетаний генотипов для диагностики и прогнозирования уровня тревожности.In the study of intergenic interactions of polymorphic loci of tryptophan hydroxylase TPH1 (A218C) and TPH2 (G-703T) genes using the GMDR program, a two-factor model of interaction of DNA loci was determined, leading to the formation of phenotypic differences on the basis of “situational anxiety”. The tested balanced accuracy (Bal. Acc.) Of this model was 0.7413; sensitivity (Se) - 0,8529; specificity (Sp) - 0.6296; repeatability of the result (CV Consistency) - 10/10, p = 0.0107. The obtained model testified that the combination of TPH1 A / A and TPH2 T / G genotypes determines a high level of anxiety, and the combination of TPH1 C / C and TPH2 G / G - a low level of situational anxiety (see figure). Based on the data obtained, it can be concluded that these combinations of genotypes can be used to diagnose and predict the level of anxiety.
В доступной научно-медицинской и патентной литературе отсутствуют сведения о способе прогнозирования уровня тревожности у студентов, заключающегося в выделении ДНК из лимфоцитов периферической венозной крови, генотипировании полиморфных локусов А218С гена фермента биосинтеза серотонина триптофангидроксилазы-1 (ТРН1) и G-703T гена фермента биосинтеза серотонина триптофангидроксилазы-2 (ТРН2) методом полимеразной цепной реакции синтеза ДНК с последующей рестрикцией, и при выявлении сочетания генотипов ТРН1 А/А и TPH2 T/G прогнозируется высокий уровень тревожности, а при выявлении сочетания генотипов ТРН1 С/С и TPH2 G/G - низкий уровень тревожности. Таким образом, заявляемое изобретение соответствует критерию «новизна».In the available scientific, medical and patent literature there is no information about a method for predicting the level of anxiety in students, which consists in isolating DNA from peripheral venous blood lymphocytes, genotyping polymorphic A218C loci of the serotonin tryptophan hydroxylase-1 biosynthesis enzyme, and G-703T gene, which is not the same as the G-703T gene, which is not used for the serotonin tryptophan-hydroxylase-1 biosynthesis gene GTPA, G-703T, and 703TT. tryptophan hydroxylase-2 (TPH2) by the method of polymerase chain reaction of DNA synthesis followed by restriction, and when a combination of the TPH1 A / A genotypes and TPH2 T / G is detected, a high level of anxiety, and when identifying a combination of genotypes TPH1 C / C and TPH2 G / G - a low level of anxiety. Thus, the claimed invention meets the criterion of "novelty."
Исследованиями авторов доказано, что выявление сочетания генотипов ТРН1 А/А и TPH2 T/G позволяет осуществить достоверный прогноз высокого уровня тревожности, и выявление сочетания генотипов ТРН1 С/С и TPH2 G/G - низкий уровень тревожности, при отсутствии у индивидов яркой клинической симптоматики и тревожных тенденций. Таким образом, заявляемое изобретение соответствует критерию «изобретательский уровень».Research by the authors proved that identifying a combination of TPH1 A / A and TPH2 T / G genotypes makes it possible to make a reliable prediction of a high level of anxiety, and identifying a combination of TPH1 C / C genotypes and TPH2 G / G - a low level of anxiety, in the absence of bright clinical symptoms in individuals and disturbing trends. Thus, the claimed invention meets the criterion of "inventive step".
Предлагаемое изобретение иллюстрируется следующими примерами.The invention is illustrated by the following examples.
Пример 1.Example 1
Студент в возрасте 22-х лет, 1994 года рождения (г. Уфа, Республика Башкортостан), не страдающий выраженными психическими расстройствами и отрицающий у себя отягощенную наследственность психическими заболеваниями.A student aged 22 years old, born in 1994 (Ufa, Republic of Bashkortostan), who does not suffer from severe mental disorders and denies the burdened heredity of mental illness.
При молекулярно-генетическом исследовании полиморфных локусов А218С гена фермента биосинтеза серотонина триптофангидроксилазы-1 (ТРН1) и G-703T гена фермента биосинтеза серотонина триптофангидроксилазы-2 (ТРН2) у индивида было выявлено сочетание генотипов ТРН1 А/А и TPH2 T/G. Наличие данного сочетания генотипов позволило прогнозировать предрасположенность к высокому уровню тревожности.A molecular genetic study of the A218C polymorphic loci of the serotonin biosynthesis enzyme tryptophanhydroxylase-1 (TPH1) gene and the G-703T gene of the serotonin biosynthesis enzyme tryptophanhydroxylase-2 gene (TPH2) was found in a combination of the hp, it was used by a program, and it was checked by a program. The presence of this combination of genotypes made it possible to predict a predisposition to a high level of anxiety.
В ходе психологического тестирования для определения уровня тревожности по методике Спилбергера-Ханина у индивида был выявлен высокий уровень ситуативной (52 балла по шкале СТ) и личностной (51 балл по шкале ЛТ) тревожности.In the course of psychological testing to determine the level of anxiety according to the Spielberger-Khanin method, an individual showed a high level of situational (52 points on the CT scale) and personal (51 points on the RT scale) anxiety.
Таким образом, на основании генотипирования полиморфных локусов А218С гена ТРН1 и G-703T гена ТРН2 и выявления у индивида сочетания генотипов ТРН1 А/А и TPH2 T/G дан прогноз о повышенном уровне тревожности, что было подтверждено результатами психологического тестирования.Thus, based on the genotyping of polymorphic loci A218C of the TPH1 gene and G-703T of the TPN2 gene and identifying the combination of the TPH1 A / A genotype and TPH2 T / G genotypes in an individual, the prediction of an increased level of anxiety was confirmed, which was confirmed by the results of psychological testing.
Пример 2.Example 2
Студент в возрасте 20-ти лет, 1996 года рождения (г. Уфа, Республика Башкортостан), не страдающий выраженными психическими расстройствами и отрицающий у себя отягощенную наследственность психическими заболеваниями.A student aged 20 years old, born in 1996 (Ufa, Republic of Bashkortostan), who does not suffer from severe mental disorders and denies the burdened heredity of mental illness.
При молекулярно-генетическом исследовании полиморфных локусов А218С гена фермента биосинтеза серотонина триптофангидроксилазы-1 (ТРН1) и G-703T гена фермента биосинтеза серотонина триптофангидроксилазы-2 (ТРН2) у индивида было выявлено сочетание генотипов ТРН1 А/С и TPH2 T/G. Наличие данного сочетания генотипов позволило предположить, что у индивида может наблюдаться средний уровень тревожности.A molecular genetic study of the A218C polymorphic loci of the serotonin biosynthesis enzyme tryptophanhydroxylase-1 (TPH1) gene and the G-703T gene of the serotonin biosynthesis enzyme tryptophanhydroxylase-2 gene (TPH2) was found in a combination of a volume of 100 hp; The presence of this combination of genotypes suggests that an individual may experience an average level of anxiety.
В ходе психологического тестирования для определения уровня тревожности по методике Спилбергера-Ханина у индивида был выявлен средний уровень ситуативной (34 балла по шкале СТ) и личностной (36 баллов по шкале ЛТ) тревожности.In the course of psychological testing to determine the level of anxiety by the Spielberger-Khanin method, an individual was found to have an average level of situational (34 points on a scale of CT) and personal (36 points on a scale of RT) anxiety.
Таким образом, на основании генотипирования полиморфных локусов А218С гена ТРН1 и G-703T гена ТРН2 и выявления у индивида сочетания генотипов ТРН1 А/С и TPH2 T/G дан прогноз о среднем уровне тревожности, что было подтверждено результатами психологического тестирования.Thus, based on the genotyping of the A218C polymorphic loci of the TPH1 gene and G-703T of the TPH2 gene and identifying the combination of the TPH1 A / C genotypes and TPH2 T / G genotypes in an individual, a prediction of the average level of anxiety was confirmed, which was confirmed by the results of psychological testing.
Пример 3.Example 3
Студент в возрасте 22-х лет, 1994 года рождения (г. Уфа, Республика Башкортостан), не страдающий выраженными психическими расстройствами и отрицающий у себя отягощенную наследственность психическими заболеваниями.A student aged 22 years old, born in 1994 (Ufa, Republic of Bashkortostan), who does not suffer from severe mental disorders and denies the burdened heredity of mental illness.
При молекулярно-генетическом исследовании полиморфных локусов А218С гена фермента биосинтеза серотонина триптофангидроксилазы-1 (ТРН1) и G-703T гена фермента биосинтеза серотонина триптофангидроксилазы-2 (ТРН2) у индивида было выявлено сочетание генотипов ТРН1 С/С и TPH2 G/G. Наличие данного сочетания генотипов позволило предположить, что у индивида может наблюдаться низкий уровень тревожности.A molecular genetic study of the A218C polymorphic loci of the serotonin biosynthesis enzyme tryptophanhydroxylase-1 (TPH1) gene and the G-703T gene of the serotonin biosynthesis enzyme tryptophanganhydroxylase-2 gene (TPH2) was found in a combination of the hp, it was used by a program, and it has been assigned by a program to be assigned by a reg of a polymorphism. The presence of this combination of genotypes suggested that the individual may experience a low level of anxiety.
В ходе психологического тестирования для определения уровня тревожности по методике Спилбергера-Ханина у индивида был выявлен низкий уровень ситуативной (24 балла по шкале СТ) и личностной (27 баллов по шкале ЛТ) тревожности.In the course of psychological testing to determine the level of anxiety by the Spielberger-Khanin method, an individual was found to have a low level of situational (24 points on a scale of ST) and personal (27 points on a scale of RT) of anxiety.
Таким образом, на основании генотипирования полиморфных локусов А218С гена ТРН1 и G-703T гена ТРН2 и выявления у индивида сочетания генотипов ТРН1 С/С и TPH 2G/G дан прогноз о низком уровне тревожности, что было подтверждено результатами психологического тестирования.Thus, based on the genotyping of the A218C polymorphic loci of the TPH1 gene and G-703T of the TPN2 gene and identifying the combination of the TPH1 C / C genotype and TPH 2G / G genotypes in an individual, a prediction of a low level of anxiety was confirmed, which was confirmed by the results of psychological testing.
Предлагаемый способ легко воспроизводим и при его использовании достигается указанный технический результат. Таким образом, заявляемое изобретение соответствует критерию «промышленная применимость».The proposed method is easily reproducible and when it is used, the specified technical result is achieved. Thus, the claimed invention meets the criterion of "industrial applicability".
Таблица 1Table 1
Распределение частот генотипов и аллелей маркера A218C гена TPH1 в группах с низкими и высокими показателями тревожностиFrequency distribution of genotypes and alleles of the A218C marker of the TPH1 gene in the low and high anxiety groups
* где СТ - ситуативная тревожность, ЛТ - личностная тревожность, m - ошибка среднего арифметического значения, χ2 - критерий значимости различий популяций по распределениям частот генотипов и аллелей, р - вероятность ошибки при отклонении нулевой гипотезы.* where CT is situational anxiety, LT is personal anxiety, m is the arithmetic average error, χ 2 is the criterion of significance of population differences in the frequency distribution of genotypes and alleles, p is the probability of error when the null hypothesis rejects.
Таблица 2table 2
Распределение частот генотипов и аллелей маркера G-703T гена ТРН2 в группах с низкими и средними показателями тревожностиFrequency distribution of genotypes and alleles of the G-703T marker of the TPH2 gene in groups with low and medium anxiety rates
* где СТ - ситуативная тревожность, ЛТ - личностная тревожность, m - ошибка среднего арифметического значения, χ2 - критерий значимости различий популяций по распределениям частот генотипов и аллелей, р - вероятность ошибки при отклонении нулевой гипотезы.* where CT is situational anxiety, LT is personal anxiety, m is the arithmetic average error, χ 2 is the criterion of significance of population differences in the frequency distribution of genotypes and alleles, p is the probability of error when the null hypothesis rejects.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2018100491A RU2694230C1 (en) | 2018-01-09 | 2018-01-09 | Method for prediction of anxiety level |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2018100491A RU2694230C1 (en) | 2018-01-09 | 2018-01-09 | Method for prediction of anxiety level |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2694230C1 true RU2694230C1 (en) | 2019-07-10 |
| RU2018100491A RU2018100491A (en) | 2019-07-16 |
| RU2018100491A3 RU2018100491A3 (en) | 2019-07-17 |
Family
ID=67252376
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2018100491A RU2694230C1 (en) | 2018-01-09 | 2018-01-09 | Method for prediction of anxiety level |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2694230C1 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2749487C1 (en) * | 2020-06-01 | 2021-06-11 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Томский национальный исследовательский медицинский центр Российской академии наук" (Томский НИМЦ) | Method for predicting protracted course of panic disorder |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20090209622A1 (en) * | 2006-11-21 | 2009-08-20 | Smoller Jordan W | Diagnosis of anxiety disorders |
| RU2402268C1 (en) * | 2009-07-21 | 2010-10-27 | Федеральное государственное учреждение "Уральский научно-исследовательский институт дерматовенерологии и иммунопатологии Федерального агентства по высокотехнологичной медицинской помощи" (ФГУ "УрНИИДВиИ Росмедтехнологий") | Diagnostic technique for anxiety level |
-
2018
- 2018-01-09 RU RU2018100491A patent/RU2694230C1/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20090209622A1 (en) * | 2006-11-21 | 2009-08-20 | Smoller Jordan W | Diagnosis of anxiety disorders |
| RU2402268C1 (en) * | 2009-07-21 | 2010-10-27 | Федеральное государственное учреждение "Уральский научно-исследовательский институт дерматовенерологии и иммунопатологии Федерального агентства по высокотехнологичной медицинской помощи" (ФГУ "УрНИИДВиИ Росмедтехнологий") | Diagnostic technique for anxiety level |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| КАЗАНЦЕВА А.В. Молекулярно-генетические основы черт темперамента и личности. Автореф. дисс. на соиск. ст. к.б.н. // Уфа, 2008, 22 с. STEFULJ J. et al. Serotonin IB (5HT-1B) receptor polymorphism (G861C) in suicide victims: association studies in German and Slavic population // Am J Med Genet В Neuropsychiatr Genet. 2004. - V. 127B(1). - P. 48-50. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2749487C1 (en) * | 2020-06-01 | 2021-06-11 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Томский национальный исследовательский медицинский центр Российской академии наук" (Томский НИМЦ) | Method for predicting protracted course of panic disorder |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2018100491A3 (en) | 2019-07-17 |
| RU2018100491A (en) | 2019-07-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Arnold et al. | The fibromyalgia family study: a genome‐wide linkage scan study | |
| Fisher et al. | Developmental dyslexia: genetic dissection of a complex cognitive trait | |
| Bandres‐Ciga et al. | The genetic architecture of Parkinson disease in Spain: characterizing population‐specific risk, differential haplotype structures, and providing etiologic insight | |
| Weese‐Mayer et al. | Idiopathic congenital central hypoventilation syndrome: analysis of genes pertinent to early autonomic nervous system embryologic development and identification of mutations in PHOX2b | |
| Deschauer et al. | A novel Twinkle gene mutation in autosomal dominant progressive external ophthalmoplegia | |
| CN107338324A (en) | For the serum lncRNA marks of acatalepsia reason recurrent miscarriage, primer sets and application and kit | |
| US20110086777A1 (en) | Method for autism prediction | |
| CN103773859A (en) | SNP marker of mitochondria DNA related to asthenospermia with unknown clinical causes and application thereof | |
| Amanat et al. | Genetic inheritance and its contribution to tinnitus | |
| RU2694230C1 (en) | Method for prediction of anxiety level | |
| Shaw et al. | Identical by descent L1CAM mutation in two apparently unrelated families with intellectual disability without L1 syndrome | |
| US20110091899A1 (en) | Combination of risk alleles associated with autism | |
| Rice et al. | A commingling analysis of platelet monoamine oxidase activity | |
| CN105506164A (en) | Kit for detecting susceptibility of hebephrenic schizophrenia | |
| Bidari et al. | Common MEFV mutation analysis in 36 Iranian patients with familial Mediterranean fever: clinical and demographic significance | |
| JP2013126422A (en) | Method for predicting onset risk of age-related macular degeneration | |
| CN105543390A (en) | Primer and kit for detecting susceptibility of paranoia schizophrenia | |
| CN107557468B (en) | Cancer-testis gene genetic marker related to auxiliary diagnosis of primary lung cancer and application thereof | |
| WO2011076783A2 (en) | A method for evaluating a risk for a transmissible neuropsychiatric disorder | |
| CN104774841B (en) | Genetic epilepsy is with febrile seizure plus SCN1A gene new mutations | |
| CN103290006B (en) | A clinically unexplained NOA-related mitochondrial DNA SNP marker and applications thereof | |
| CN107841551B (en) | Application of single nucleotide polymorphism site in wound sepsis risk assessment | |
| JP2009027972A (en) | Method for predicting onset risk of age-related macular degeneration | |
| RU2809912C1 (en) | Method of predicting risk of developing hypertension in men based on results of genetic testing | |
| CN104293958B (en) | A kind of test kit predicting susceptibility of ankylosing spondylitis and method |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20200110 |