RU2342400C2 - Противотуберкулезная вакцина с улучшенной эффективностью - Google Patents
Противотуберкулезная вакцина с улучшенной эффективностью Download PDFInfo
- Publication number
- RU2342400C2 RU2342400C2 RU2005136354/13A RU2005136354A RU2342400C2 RU 2342400 C2 RU2342400 C2 RU 2342400C2 RU 2005136354/13 A RU2005136354/13 A RU 2005136354/13A RU 2005136354 A RU2005136354 A RU 2005136354A RU 2342400 C2 RU2342400 C2 RU 2342400C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- cell
- domain
- nucleic acid
- acid molecule
- polypeptide
- Prior art date
Links
- 229960002109 tuberculosis vaccine Drugs 0.000 title description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 87
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 59
- 201000008827 tuberculosis Diseases 0.000 claims abstract description 49
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 44
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims abstract description 41
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims abstract description 41
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 39
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims abstract description 37
- 108010046334 Urease Proteins 0.000 claims abstract description 32
- 241000186359 Mycobacterium Species 0.000 claims abstract description 27
- 210000000680 phagosome Anatomy 0.000 claims abstract description 27
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims abstract description 26
- 230000002950 deficient Effects 0.000 claims abstract description 25
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims abstract description 23
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 16
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims abstract description 12
- 239000013543 active substance Substances 0.000 claims abstract description 3
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 3
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 48
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 48
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 48
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 23
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 23
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 claims description 22
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 18
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 18
- 241000186366 Mycobacterium bovis Species 0.000 claims description 17
- 230000004927 fusion Effects 0.000 claims description 12
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 10
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 claims description 9
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 9
- 101710088334 Diacylglycerol acyltransferase/mycolyltransferase Ag85B Proteins 0.000 claims description 8
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 8
- 238000003780 insertion Methods 0.000 claims description 6
- 230000037431 insertion Effects 0.000 claims description 6
- 241001312372 Mycobacterium canettii Species 0.000 claims description 5
- 241000186365 Mycobacterium fortuitum Species 0.000 claims description 5
- 241000187492 Mycobacterium marinum Species 0.000 claims description 5
- 241000187919 Mycobacterium microti Species 0.000 claims description 5
- 241000187480 Mycobacterium smegmatis Species 0.000 claims description 5
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 claims description 5
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 claims description 4
- 241000186781 Listeria Species 0.000 claims description 4
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 4
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 4
- 244000045947 parasite Species 0.000 claims description 4
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims description 4
- 101710088335 Diacylglycerol acyltransferase/mycolyltransferase Ag85A Proteins 0.000 claims description 3
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 3
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 claims description 3
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 claims description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 3
- 101710166488 6 kDa early secretory antigenic target Proteins 0.000 claims description 2
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 claims description 2
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 claims description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 claims description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 claims description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 2
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 claims description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 claims description 2
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 claims description 2
- 208000014794 superficial urinary bladder carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims 3
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 abstract description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 4
- 230000036039 immunity Effects 0.000 abstract description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 101150014144 ureC gene Proteins 0.000 description 34
- 101150073660 glmM gene Proteins 0.000 description 32
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 15
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 14
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 13
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 11
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 10
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 10
- 102000043129 MHC class I family Human genes 0.000 description 9
- 108091054437 MHC class I family Proteins 0.000 description 9
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 9
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 8
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 7
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 6
- 241001646725 Mycobacterium tuberculosis H37Rv Species 0.000 description 5
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 5
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 5
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 5
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- 241000186779 Listeria monocytogenes Species 0.000 description 3
- 238000011579 SCID mouse model Methods 0.000 description 3
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 3
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 3
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 3
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 3
- 210000000172 cytosol Anatomy 0.000 description 3
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 3
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 3
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 3
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 3
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 3
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 3
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 2
- 206010006049 Bovine Tuberculosis Diseases 0.000 description 2
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 2
- 108700018351 Major Histocompatibility Complex Proteins 0.000 description 2
- 102100028389 Melanoma antigen recognized by T-cells 1 Human genes 0.000 description 2
- 241000187479 Mycobacterium tuberculosis Species 0.000 description 2
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 2
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 2
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 2
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 2
- 230000007124 immune defense Effects 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 2
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 2
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 2
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 2
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 2
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 2
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 210000003046 sporozoite Anatomy 0.000 description 2
- 230000020382 suppression by virus of host antigen processing and presentation of peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 101150061086 ureB gene Proteins 0.000 description 2
- 210000003934 vacuole Anatomy 0.000 description 2
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 230000004584 weight gain Effects 0.000 description 2
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 2
- 102100034540 Adenomatous polyposis coli protein Human genes 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- 102000006303 Chaperonin 60 Human genes 0.000 description 1
- 108010058432 Chaperonin 60 Proteins 0.000 description 1
- 108010041986 DNA Vaccines Proteins 0.000 description 1
- 229940021995 DNA vaccine Drugs 0.000 description 1
- 102100036242 HLA class II histocompatibility antigen, DQ alpha 2 chain Human genes 0.000 description 1
- 101710147195 Hemolysin A Proteins 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000930801 Homo sapiens HLA class II histocompatibility antigen, DQ alpha 2 chain Proteins 0.000 description 1
- 101000578784 Homo sapiens Melanoma antigen recognized by T-cells 1 Proteins 0.000 description 1
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 1
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 1
- 241000589248 Legionella Species 0.000 description 1
- 241000589242 Legionella pneumophila Species 0.000 description 1
- 208000007764 Legionnaires' Disease Diseases 0.000 description 1
- 241000092431 Listeria monocytogenes EGD Species 0.000 description 1
- 108700027766 Listeria monocytogenes hlyA Proteins 0.000 description 1
- 206010024641 Listeriosis Diseases 0.000 description 1
- 108010010995 MART-1 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 101100191385 Mus musculus Prkdc gene Proteins 0.000 description 1
- 241001467552 Mycobacterium bovis BCG Species 0.000 description 1
- 108010061100 Nucleoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000011931 Nucleoproteins Human genes 0.000 description 1
- 102000043276 Oncogene Human genes 0.000 description 1
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 description 1
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 description 1
- 108010056995 Perforin Proteins 0.000 description 1
- 102000004503 Perforin Human genes 0.000 description 1
- 241000224016 Plasmodium Species 0.000 description 1
- 241000223960 Plasmodium falciparum Species 0.000 description 1
- 108091058545 Secretory proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000040739 Secretory proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008038 Synthetic Vaccines Proteins 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 102000002938 Thrombospondin Human genes 0.000 description 1
- 108060008245 Thrombospondin Proteins 0.000 description 1
- 241000223996 Toxoplasma Species 0.000 description 1
- 241000223997 Toxoplasma gondii Species 0.000 description 1
- 108010078814 Tumor Suppressor Protein p53 Proteins 0.000 description 1
- 101150057950 aph gene Proteins 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960000190 bacillus calmette–guérin vaccine Drugs 0.000 description 1
- 102000015736 beta 2-Microglobulin Human genes 0.000 description 1
- 108010081355 beta 2-Microglobulin Proteins 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 210000001163 endosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 230000002440 hepatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 1
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 1
- 208000026278 immune system disease Diseases 0.000 description 1
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 description 1
- 229940124589 immunosuppressive drug Drugs 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 229940115932 legionella pneumophila Drugs 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 210000002752 melanocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 230000036457 multidrug resistance Effects 0.000 description 1
- 229940092253 ovalbumin Drugs 0.000 description 1
- 230000000242 pagocytic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 208000008128 pulmonary tuberculosis Diseases 0.000 description 1
- 229940124551 recombinant vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000022532 regulation of transcription, DNA-dependent Effects 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 230000000284 resting effect Effects 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 239000013605 shuttle vector Substances 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 210000001635 urinary tract Anatomy 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
- C07K14/35—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Mycobacteriaceae (F)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
- A61P31/06—Antibacterial agents for tuberculosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Oncology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Virology (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- AIDS & HIV (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Изобретение относится к биотехнологии. Описана дефицитная по уреазе клетка Mycobacterium, которая является продуцентом слитого полипептида и которая содержит рекомбинантную молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую слитый полипептид, включающий в себя как минимум один домен из полипептида, который способен вызывать иммунный ответ у млекопитающих, и домен выхода из фаголизосом. Раскрыта фармацевтическая композиция, представляющая собой живую вакцину, содержащая в качестве активного агента описанную клетку, обеспечивающая защитный иммунитет против туберкулеза. Представлен способ живой вакцины. Раскрыт способ приготовления описанной клетки Mycobacterium. Настоящее изобретение позволяет получать более безопасную вакцину против туберкулеза. 7 н. и 28 з.п. ф-лы, 4 ил.
Description
Уровень техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение касается новых рекомбинантных вакцин, обеспечивающих защитный иммунитет, в особенности против туберкулеза.
Уровень техники
Туберкулез (ТВ), который вызывается микроорганизмом Mycobacterium tuberculosis, остается существенной глобальной проблемой. Подсчитано, что каждый третий представитель мирового населения инфицирован M.tuberculosis (Kochi, 1991). Во многих странах единственным способом контроля заболеваемости ТВ являлась вакцинация с использованием бациллы M.bovis Calmette-Guerin (BCG). Однако средняя общая эффективность вакцины BCG против ТВ составляет примерно 50%, и значения ее сильно варьируются в пределах от 0% до 80% в разных конкретных случаях (Roche et al., 1995). Таким образом, BCG должна быть улучшена, например, посредством генной инженерии с целью получения вакцины, позволяющей лучше контролировать заболеваемость ТВ (Murray et al., 1996; Hess and Kaufmann, 1993). Такая широко распространенная опасность, как множественная лекарственная устойчивость штаммов M.tuberculosis, дополнительно подчеркивает срочную необходимость в новых ТВ вакцинах (Grange, 1996).
M.tuberculosis относится к группе внутриклеточных бактерий, которые размножаются внутри фагоцитарных вакуолей покоящихся макрофагов, таким образом, защита против ТВ зависит от Т-клеточного иммунитета (Kaufmann, 1993). Однако некоторые исследования, проведенные на мышах и человеке, показали, что Mycobacteria стимулируют антиген-специфичные CD4 и CD8 Т-клетки, несущие главный комплекс гистосовместимости (МНС) класса II или класса I по рестрикции соответственно (Kaufmann, 1993).
Важная роль CD8 Т-клеток, несущих МНС класса I по рестрикции, была убедительно продемонстрирована посредством неудавшегося эксперимента по контролю экспериментального инфицирования микроорганизмами M.tuberculosis мышей, дефицитных по β2-микроглобулину (β2m) (Flynn et al., 1993). Поскольку эти мутантные мыши не имеют МНС класса I, функциональные CD8 Т-клетки не могут развиваться. В отличие от инфекции M.tuberculosis β2m-дефицитные мыши способны усваивать определенные инфекционные дозы вакцины на основе штамма BCG (Flynn et al., 1993; Ladel et al., 1995). Более того, BCG вакцинация β2m-дефицитных мышей продлевала срок их выживания после последующего инфицирования M.tuberculosis, когда BCG-иммунизированные C57BL/6 демонстрировали устойчивость к ТВ (Flynn et al., 1993). Такая различная CD8 Т-клеточная зависимость между M.tuberculosis и BCG может быть объяснена следующим: антигены M.tuberculosis имеют лучший доступ в цитоплазму, нежели антигены из BCG, что приводит к более выраженной представленности МНС класса I (Hess and Kaufmann, 1993). Следовательно, более эффективный CD8 Т-клеточный ответ генерируется M.tuberculosis. Данное предположение было позже подтверждено повышенной представленностью МНС класса I в случае не относящегося к делу антигена, овальбумина, совместной с M.tuberculosis, лучше, чем с BCG, инфекцией антиген-представляющих клеток (АРС) (Mazzaccaro et al., 1996).
Секретируемые белки M.tuberculosis включают ценный источник антигенов для представления МНС класса I. Недавно, ДНК вакцина, кодирующая секретируемый антиген Ag85A, вызвала ответы CD8 Т-клеток, несущих МНС класса I по рестрикции у мышей, которые могут способствовать защите от ТВ (Huygen et al., 1996). Вообще, накопленные данные показывают, что иммунизация секретируемыми белковыми антигенами M.tuberculosis индуцирует некоторую защиту от ТВ у морских свинок и мышей (Horwitz et al., 1995; Andersen, 1994). Следовательно, важной задачей на пути к разработке улучшенных ТВ вакцин на основе BCG, является увеличение доступности цитоплазмы инфицированных АРС для секретируемых, BCG-специфичных антигенов. Последующая доставка пептидов, являющихся производными этих секретируемых белков, в последовательность событий представления МНС класса I может привести к усилению уже существующего BCG-специфичного иммунного ответа, предупреждающего заболевание ТВ.
Высвобождение из фаголизосом L.monocytogenes представляет собой уникальный механизм усиления представления листериальных антигенов МНС класса I (Berche et al., 1987; Portnoy et al., 1988). Листериолизин (Hlу), порообразующий сульфгидрил-активируемый цитолизин, необходим для высвобождения микроорганизмов L.monocytogenes из фаголизосомальных вакуолей в цитозоль клетки хозяина (Gaillard et al., 1987; Portnoy et al., 1988). Данная функция высвобождения была недавно передана штамму Bacillus subtilis и ослабленному в своей вирулентности штамму Salmonella ssp. (Bielecki et al., 1991; Gentschev et al., 1995; Hess and Kaufmann, 1997). Экспрессия Hlу мутантным штаммом неспорообразующих В. subtilis или Salmonella ssp. приводила, в результате, к высвобождению бактерий из фаголизосом в цитозоль J774 макрофаг-подобных клеток (Bielecki et al., 1991; Gentschev et al., 1995; Hess and Kaufmann, 1997).
WO 99/101496 и Hess et al. (1998) описывают рекомбинантные штаммы Mycobacterium bovis, которые секретируют биологически активные листериолизин-слитые белки. Было показано, что данные штаммы M.bovis являются эффективными вакцинами против ТВ в случае нескольких животных моделей.
Раскрытие изобретения
В соответствии с настоящим изобретением Hlу был экспрессирован в дефицитных по уреазе штаммах BCG. Эти дефицитные по уреазе штаммы BCG демонстрируют повышенную активность Hlу в фагосомах и, в свою очередь, повышенную эффективность порообразования в мембранах эндосом, что свидетельствует об их превосходной эффективности иммунной защиты. Кроме того, дефицитные по уреазе штаммы BCG-Hlу вовлечены в процессы апоптоза, которые могут также вносить свой вклад в наблюдаемое усиление иммунной защиты. Таким образом, имеются широкие возможности по созданию вакцин на основе дефицитных по уреазе штаммов BCG. Кроме того, было неожиданно обнаружено, что дефицитные по уреазе штаммы BCG являются более безопасными по сравнению с родительскими штаммами BCG и, таким образом, могут применяться, в частности, для вакцинации пациентов, страдающих иммунодефицитом.
Первым аспектом настоящего изобретения является бактериальная клетка, а именно дефицитная по уреазе клетка Mycobacterium, содержащая рекомбинантную молекулу нуклеиновой кислоты, которая кодирует слитый полипептид, включающий (а) как минимум один домен из полипептида, в котором данный полипептидный домен способен вызывать иммунный ответ у млекопитающих, и (б) домен, ответственный за высвобождение из фаголизосом. Предпочтительно, чтобы клетка была способна экспрессировать молекулу нуклеиновой кислоты, являющуюся предметом настоящего изобретения. Более предпочтительно, чтобы клетка была способна секретировать слитый полипептид и/или предоставлять его в форме, пригодной для распознавания антигена МНС класса I по рестрикции.
Бактериальная клетка, являющаяся предметом настоящего изобретения, - это клетка, дефицитная по уреазе, например грамотрицательная либо грамположительная бактериальная клетка, предпочтительно клетка Mycobacterium. Дефицитность по уреазе может быть достигнута посредством частичной, либо полной инактивации одной или нескольких клеточных молекул нуклеиновой кислоты, кодирующих субъединицы уреазы, в частности ureA, кодирующей А субъединицу уреазы, ureB, кодирующей В субъединицу уреазы, и/или ureC, кодирующей С субъединицу уреазы. Последовательности ureA, ureB и ureC у Mycobacteria, в частности у M.bovis и M.tuberculosis, а также кодируемые ими белки описаны в работах Reyrat et al. (1995) и Clemens et al. (1995), которые включены в данное описание во всей своей полноте путем отсылки.
Предпочтительно, когда дефицитный по уреазе бактериальный штамм получен посредством делеций и/или вставок одного либо нескольких нуклеотидов в последовательности нуклеиновой кислоты, которые кодируют субъединицы уреазы, и/или в последовательности, контролирующие их экспрессию. Делеции и/или вставки могут быть получены в результате гомологичной рекомбинации, вставки транспозона либо применения других подходящих методов.
В рамках особо предпочтительного воплощения настоящего изобретения инактивирована последовательность ureC, например, посредством конструирования вектора-самоубийцы, включающего ген ureC, нарушенный с помощью селективного маркерного гена, трансформации клетки мишени данным вектором и скринингом с целью отбора положительных по селективному маркеру клеток, имеющих негативный по уреазе фенотип, как описано в Reyrat et al. (1995).
Клетка, являющаяся предметом настоящего изобретения, - это предпочтительно клетка M.bovis, клетка M.tuberculosis, в частности ослабленная в своей вирулентности клетка M.tuberculosis, либо другая Mycobacteria, например M.microti, M.smegmatis, M.canettii, M.marinum или M.fortuitum или Mycobacteria, как описано в Reyrat et al. (1995).
Клетка Mycobacterium, являющаяся предметом настоящего изобретения, содержит рекомбинантную молекулу нуклеиновой кислоты, например молекулу нуклеиновой кислоты, SEQ ID No.1. Данная молекула нуклеиновой кислоты включает последовательность, кодирующую сигнальный пептид (нуклеотид 1-120), последовательность, кодирующую иммуногенный домен (нуклеотид 121-153), последовательность, кодирующую пептидный линкер (нуклеотид 154-210), последовательность, кодирующую фаголизосомный домен (нуклеотид 211-1722), еще одну последовательность, кодирующую пептидный линкер (нуклеотид 1723-1800), и последовательность, кодирующую случайный пептид (нуклеотид 1801-1870). Соответствующая аминокислотная последовательность представлена в SEQ ID No.2.
Нуклеиновая кислота содержит как минимум один иммуногенный домен из полипептида. Иммуногенный домен может быть выделен из организма рода Mycobacterium, предпочтительно из Mycobacterium tuberculosis или из Mycobacterium bovis. Этот домен имеет длину как минимум 6 или предпочтительно как минимум 8 аминокислот. Иммуногенный домен - это предпочтительно часть нативного полипептида Mycobacterium. Тем не менее, в объем настоящего изобретения включен также модифицированный иммуногенный домен, полученный из нативного иммуногенного домена посредством замены, делеции и/или вставки одной либо нескольких аминокислот.
Иммуногенный домен, однако, не ограничивается антигеном Mycobacterium и может быть выбран из числа аутоантигенов, раковых антигенов и антигенов патогена, таких как вирусные антигены, антигены паразитов, антигены бактерий вообще и их иммуногенные фрагменты. Специфические примеры подходящих раковых антигенов - это антигены рака человека, такие как продукт гена супрессора опухоли р53 (Houbiers et al., 1993) и антигены дифференциации меланоцитов, например Melan-A/MART-1 и gp100 (van Elsas et al., 1996). Специфические примеры подходящих вирусных антигенов - это антигены вируса опухоли человека, такие как антигены вируса палилломы человека, например антигены Е6 и Е7 (Bosch et al., 1991); антигены вируса гриппа, например нуклеопротеин вируса гриппа (Matsui et al., 1995; Fu et al., 1997); или антигены ретровирусов, такие как HIV антигены, например HIV-1 антигены р17, р24, RT и Env (Harrer et al., 1996; Haas et al., 1996). Конкретные примеры подходящих антигенов паразитов - это антигены Plasmodium, такие как антиген печеночной стадии (LSA-1), белок круглого спорозоита (CS (circumsporozoite) или аллельные варианты ср26 или ср29); тромбоспондин - связанный безымянный белок (TRAP), треонин- и аспарагин-богатый белок спорозоита (STARP) Plasmodium falciparum (Aidoo et al., 1995) и антигены Toxoplasma, такие как р30 из Toxoplasma gondii (Khan et al., 1991; Bulowand Boothroyd, 1991). Конкретные примеры подходящих бактериальных антигенов - это антигены Legionella, такие как Главный белок-помощник (Major secretary protein) из Legionella pneumophila (Blander and Horwitz, 1991).
Иммуногенный домен способен вызывать иммунный ответ в млекопитающих. Данный иммунный ответ может быть опосредован В-клеточным иммунным ответом. Предпочтительно, тем не менее, если иммуногенный домен способен вызывать опосредованный Т-клетками иммунный ответ, более предпочтительно CD8 Т-клеточный ответ МНС класса I по рестрикции.
Домен, способный вызывать иммунный ответ, наиболее предпочтительно выбирается из иммуногенных пептидов либо полипептидов из M.bovis или M.tuberculosis, или из их иммуногенных фрагментов. Специфические примеры подходящих антигенов - это Ag85B (р30) из M.tuberculosis (Harth et al., 1996), Ag85B (α-antigen) из BCG M.bovis (Matsuo et al., 1988), Ag85A из M.tuberculosis (Huygen et al., 1996) и ESAT-6 из M.tuberculosis (Sorensen et al., 1996, Harboe et al., 1996 and Andersen et al., 1995). Более предпочтительно, когда иммуногенный домен получен из антигена Ag85B. Наиболее предпочтительно, когда иммуногенный домен содержит последовательность из аминокислот с 41 до 51 в последовательности SEQ ID No.2.
В соответствии с настоящим изобретением рекомбинантная молекула нуклеиновой кислоты также включает домен выхода из фаголизосом, то есть полипептидный домен, который осуществляет высвобождение слитого полипептида из фаголизосом в цитозоль клетки млекопитающего. Предпочтительно, когда домен выхода из фаголизосом является доменом выхода из фаголизосом Listeria, который описан в US 5733151, который включен в данное описание во всей своей полноте путем отсылки. Более предпочтительно, когда домен выхода из фаголизосом выделен из организма L.monocytogenes. Наиболее предпочтительно, когда домен выхода из фаголизосом кодируется молекулой нуклеиновой кислоты, выбранной из: (а) последовательности нуклеотидов, включающей нуклеотиды 211-1722, как показано в SEQ ID No.1, (b) последовательности нуклеотидов, которая кодирует ту же аминокислотную последовательность, что и последовательность из (а), и (с) последовательности нуклеотидов, которая в жестких условиях гибридизуется с последовательностями из (а) или (b).
Помимо последовательности нуклеотидов, представленной как SEQ ID No.1, настоящее изобретение также включает в себя гибридизующиеся с ней последовательности нуклеиновых кислот. В рамках настоящего изобретения термин "гибридизация" используется, как это определено в Sambrook et al. (Molecular Cloning. A laboratory manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989), 1.101-1.104). В соответствии с настоящим изобретением термин "гибридизация" используется в том случае, когда положительный гибридизационный сигнал может все еще наблюдаться после отмывки в течение одного часа с использованием 1 X SSC и 0,1% SDS при 55°С, предпочтительно при 62°С и более предпочтительно при 68°С, и особенно в случае 1 часа в 0,2 X SSC и 0,1% SDS при 55°С, предпочтительно при 62°С и более предпочтительно при 68°С. Последовательность, гибридизующаяся при таких условиях отмывки с последовательностью нуклеотидов, представленной как SEQ ID No.1, является последовательностью нуклеотидов, кодирующей домен выхода из фаголизосом предпочтительной для настоящего изобретения.
Последовательность нуклеотидов, кодирующая домен выхода из фаголизосом, как описано выше, может быть прямо получена из организма Listeria, либо из любого рекомбинантного источника, например рекомбинантных клеток E.coli, содержащих соответствующую молекулу нуклеиновой кислоты Listeria или ее вариант, как описано выше.
Предпочтительно, когда рекомбинантная молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая слитый полипептид, включает последовательность, кодирующую сигнальный пептид. Более предпочтительно, когда сигнальная последовательность является сигнальной последовательностью активной в Mycobacteria, предпочтительно в M.bovis, например нативной сигнальной последовательностью M.bovis. Предпочтительным примером подходящей сигнальной последовательности является последовательность нуклеотидов, кодирующая сигнальный пептид Ag85B, которая представлена в SEQ ID No.1 с нуклеотида 1 по 120.
Кроме того, предпочтительно, чтобы пептидный линкер был введен между иммуногенным доменом и доменом выхода из фаголизосом. Предпочтительно, когда такой пептидный линкер имеет длину от 5 до 50 аминокислот. Более предпочтительно, когда последовательность кодирует линкер, соответствующий показанному в SEQ ID No.1 с нуклеотида 154 по 210, либо когда последовательность соответствует ей с учетом вырождения генетического кода.
Нуклеиновая кислота может быть расположена в рекомбинантном векторе. Предпочтительно, когда рекомбинантный вектор является прокариотическим вектором, то есть вектором, содержащим необходимые элементы для репликации и/или интеграции в геном в клетке прокариот. Предпочтительно, когда рекомбинантный вектор несет молекулу нуклеиновой кислоты, являющуюся предметом настоящего изобретения, действенно связанную с последовательностью, контролирующей экспрессию. Предпочтительно, когда контролирующая экспрессию последовательность является контролирующей экспрессию последовательностью активной в Mycobacteria, в частности в M.bovis. Вектор может являться внехромосомным вектором, либо вектором, пригодным для интеграции в хромосому. Примеры таких векторов хорошо известны профессионалам в данной области и, кроме того, описаны в работах Sambrook et al.
Следующим аспектом настоящего изобретения являются дефицитные по уреазе клетки бактерий, например клетки Mycobacterium, предпочтительно клетки M.bovis, которые содержат хотя бы одну молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую пептид либо полипептид выхода из фаголизосом. Даже в том случае, когда пептид либо полипептид выхода из фаголизосом не является слитым с антигеном, обнаруживается удивительное улучшение иммуногенных свойств.
Рекомбинантная бактериальная клетка, представленная в соответствии с данным дополнительным аспектом настоящего изобретения, может содержать как минимум один дополнительный рекомбинант, например молекулу инородной нуклеиновой кислоты, кодирующую пептид либо полипептид, способный вызывать иммунный ответ в млекопитающих. Такой дополнительный иммуногенный пептид либо полипептид может быть отобран из числа антигенов Mycobacterium или, в широком смысле, из аутоантигенов, опухолевых антигенов, антигенов патогенов и их иммуногенных фрагментов. Молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая дополнительный пептид либо полипептид, может быть расположена в том же векторе, что и слитый ген. Однако она также может располагаться, к примеру, на другой плазмиде, независимо от слитого гена, или быть интегрированной в хромосому.
Было неожиданно обнаружено, что соответствующая настоящему изобретению клетка Mycobacterium имеет такую внутриклеточную стабильность в зараженных клетках, например макрофагах, которая одинакова или меньше, нежели внутриклеточная стабильность соответствующей нативной клетки Mycobacterium, не содержащей рекомбинантную молекулу нуклеиновой кислоты.
Настоящее изобретение также касается фармацевтической композиции, содержащей в качестве активного агента описанную выше клетку, необязательно вместе с фармацевтически приемлемыми растворителями, носителями и адъювантами. Предпочтительно, когда композиция является живой вакциной, пригодной для введения млекопитающим, предпочтительно человеку. Фактически выбранный способ вакцинации зависит от выбора вакцинного вектора. Введение может осуществляться посредством введения единичной дозы либо повторяющихся доз через определенные интервалы времени. Подходящая дозировка зависит от различных параметров, таких как вакцинный вектор сам по себе, или способ введения. Может быть выбран способ введения через поверхность слизистой оболочки (например, глазной, интраназальный, оральный, желудочный, кишечный, ректальный, вагинальный или через мочевые пути), либо по парентеральному пути (например, подкожно, внутрикожно, внутримышечно, внутривенно или внутрибрюшинно).
Кроме того, настоящее изобретение касается способа приготовления рекомбинантных клеток бактерий, как описано выше. В соответствии с первым аспектом настоящего изобретения данный способ включает такие стадии как (i) получение дефицитной по уреазе бактериальной клетки, в частности клетки Mycobacterium, (ii) вставка рекомбинантной молекулы нуклеиновой кислоты в эту бактериальную клетку, причем данная молекула нуклеиновой кислоты кодирует слитый полипептид, включающий в себя (а) как минимум один домен из полипептида, в котором этот домен способен вызывать иммунный ответ в клетках млекопитающих и (б) домен выхода из фаголизосом, и (iii) культивирование клеток, полученных в соответствии со стадией (ii) при подходящих условиях. Предпочтительно, когда получена клетка, которая способна экспрессировать описанную молекулу нуклеиновой кислоты. Более предпочтительно, когда клетка является клеткой M.bovis.
В соответствии со следующим аспектом настоящего изобретения данный способ включает в себя такие стадии, как (i) получение дефицитной по уреазе бактериальной клетки, в частности клетки Mycobacterium, (ii) вставка рекомбинантной молекулы нуклеиновой кислоты в эту бактериальную клетку, причем данная молекула нуклеиновой кислоты кодирует пептид либо полипептид выхода из фаголизосом, и (iii) культивирование клеток, полученных в соответствии со стадией (ii) при подходящих условиях.
При желании, способ, являющийся предметом настоящего изобретения, включает в себя вставку в бактериальную клетку как минимум одной дополнительной рекомбинантной молекулы нуклеиновой кислоты, причем данная молекула нуклеиновой кислоты кодирует пептид либо полипептид, способный вызывать иммунный ответ у млекопитающих.
Наконец, данное изобретение касается способа приготовления живой вакцины, содержащей разработанные рекомбинантные клетки в фармацевтически эффективном количестве вместе с фармацевтически приемлемыми растворителями, носителями и/или адъювантами.
Благодаря высокой безопасности дефицитных по уреазе бактериальных клеток, которая была продемонстрирована на двух различных животных моделях (Пример 3), живая вакцина, являющаяся объектом настоящего изобретения, может быть в отдельных случаях пригодной для введения испытуемым с иммунодефицитом, например испытуемым, страдающим от инфекции или субъектам, подверженным действию иммуносупрессорных препаратов. В особо предпочтительном воплощении живая вакцина, являющаяся объектом настоящего изобретения, используется как туберкулезная вакцина для испытуемых с иммунодефицитом.
В следующем предпочтительном воплощении живая вакцина используется как опухолевая вакцина, например, как вакцина против поверхностного рака мочевого пузыря. В следующем еще более предпочтительном воплощении настоящего изобретения живая вакцина используется в области ветеринарии, например, как вакцина против листериоза, туберкулида или бычьего туберкулеза.
Настоящее изобретение будет далее проиллюстрировано нижеследующими фигурами и списком последовательностей.
Фигура 1: демонстрирует защитную способность rBCG ureC Hlу в аэрозольной модели мышечного туберкулеза. BALB/c мыши были внутривенно иммунизованы с использованием 1×106 CFU (koe) rBCG ureC Hlу, BCG P ureC, либо нативной BCG "Pasteur". Спустя 120 дней после вакцинации в организм животных было введено H37Rv (200 организм/легкие) посредством аэрозоля. Содержание бактерий в инфицированных органах (селезенка и легкие) было оценено через 30, 60 и 90 дней после введения. Каждая точка соответствует 10 животным.
Фигура 2: демонстрирует число микроорганизмов в легких (Фигура 2А) либо в селезенке (Фигура 2B). Rag1-/- мыши были инфицированы родительским штаммом BCG (дикий тип), либо штаммом rBCG ureC Hlу (urea-Hlу). Содержание бактерий в инфицированном органе было оценено через 30, 60 и 90 дней после инфекции.
Фигура 3: демонстрирует коэффициент выживания SCID мышей, инфицированных с использованием BCG "Pasteur" и rBCG delta ureC Hlу.
SEQ ID No.1: показывает последовательность нуклеотидов молекулы нуклеиновой кислоты в соответствии с настоящим изобретением.
SEQ ID No.2: показывает соответствующую последовательность аминокислот молекулы нуклеиновой кислоты из SEQ ID No.1.
Осуществление изобретения
Пример 1. Получение дефицитных по уреазе штаммов BCG Hlу и тесты на мышиной модели
1. Инактивация уреазной активности BCG delta ureC.
С целью увеличить защитную способность штамма BCG, содержащего белок Hlу (rBCG-Hlу), уреазная активность была удалена.
Для получения дефицитного по уреазе мутанта, Reyrat et al. сконструировали вектор-самоубийцу, включающий в себя ген ureC, нарушенный канамициновым маркером (ген aph). Два микрограмма данного конструкта было линеаризовано с использованием Sac I рестриктазы и введено в М.bovis BCG путем электропорации. Устойчивые к канамицину трансформанты, подверглись отбору на негативный по уреазе фенотип (cf. Reyrat et al., 1995).
2. Конструирование "челночного" mycobacterial E. coli экспрессионного вектора pMV306:Hlу.
Для передачи функции выхода из фагосомы (опосредованной Hlу L.monocytogenes EGD Sv 1/2a) BCG Pasteur (1173 Р3) delta ureC, был использован Е. coli-mycobacterial "челночный вектор". Встраивающаяся в геном плазмида рМУ306, предшественник вектора pMV361, делает возможной стабильную хромосомную экспрессию Hlу.
Выделенный из plLH-1 1,7 - т.п.н. PstI фрагмент ДНК, кодирующий открытую рамку считывания (ORF) hly-hlyA (E. coli рHlу152-специфичный гемолизин А) был вставлен в PstI сайт плазмиды рАТ261. Полученный в результате слитый ген обеспечивал экспрессию секреторных белков, направляемых в супернатант посредством BCG-специфичного сигнального пептида Ag85B. Данный конструкт был назван рАТ261:Hlу и его ДНК экспрессионная кассета XbaI-SalI, находящаяся под транскрипционным контролем hsp60 микобактериального промотора, была последовательно использована для вставки в родительский вектор рМV306, приведшей к получению конструкта pMV306:Hlу. Была проанализирована последовательность ДНК hlу-специфичных сайтов вставки в обеих микобактериальных экспрессионных плазмидах. Предположительно зрелый Hlу-слитый белок содержит 30 аминокислот на N конце и 52 аминокислоты в С-концевой части слитого белка, которые частично совпадают с HlуA Е. coli.
3. Защитная способность в рамках мышиной модели.
Экспрессионный вектор pMV306:Hlу был трансформирован в дефицитный по уреазе штамм BCG pasteur (BCG P ureC). Полученный в результате штамм был обозначен как rBCG ureC Hlу. Защитная способность этого дефицитного по уреазе штамма микобактерий, в сравнении с родительским BCG Pasteur и BCG Pasteur ureC, в случае модели мышечного туберкулеза показана на фигуре 1. Было неожиданно обнаружено, что rBCG ureC Hlу вызывал усиленную защиту уже в ранних временных точках (день 30 после инфекции), которая продолжалась в течение всего срока наблюдения (до дня 90).
Был предпринят следующий эксперимент по длительной защите с использованием rBCG ureC Hlу. BALB/c мыши были внутривенно вакцинированы с использованием rBCG ureC Hlу, rBCG-Hlу или родительского BCG и обработаны с использованием аэрозоля на 120 день после вакцинации М. tuberculosis H37Rv, RBCG-Hlу и родительские BCG вызывали соизмеримую по эффективности защиту против М.tuberculosis H37Rv к дню 90. В отличие от них rBCG ureC Hlу вызывал усиленную защиту уже в ранних временных точках, начиная со дня 30 после инфекции. Более того, данная усиленная защита длилась в течение всего периода наблюдения и показывала уменьшение содержания М. tuberculosis H37Rv в легких на 90 день после инфекции в более чем 2 log CFU (koe), в сравнении с нативными мышами, и в более чем 1 log CFU (koe) no сравнению с мышами, вакцинированными родительским BCG.
Похожие результаты были получены после заражения клиническим изолятом М.tuberculosis Beijing. BALB/c мыши были внутривенно иммунизированы с использованием rBCG ureC Hlу, BCG-Hlу или родительского BCG и обработаны с помощью аэрозоля на 120 день после вакцинации М.tuberculosis Beijing. Вакцинация с использованием BCG ureC Hlу вызывала усиленную защиту против М.tuberculosis Beijing уже в ранних временных точках (день 30), которая продолжалась в течение всего срока наблюдения до дня 90 после инфекции. В сравнении с вакцинацией родительским BCG, вакцинация с использованием rBCG ureC Hlу вела к уменьшению содержания М.tuberculosis Beijing в легких в 1 log CPU (koe).
Пример 2. Длительная защита против М.tuberculosis H37Rv в морских свинках
Поскольку мыши являются относительно устойчивыми к инфекции М.tuberculosis, морские свинки, как более восприимчивая животная модель были использованы для проверки на вакцинационную способность rBCG ureC Hlу. Морские свинки были подкожно иммунизированы с использованием соответствующего вакцинного штамма микобактерий, rBCG ureC Hlу или родительского BCG, и привес, также как и CFU наблюдались после введения М.tuberculosis H37Rv. Морские свинки, иммунизированные с использованием rBCG ureC Hlу, показывали одинаковый привес с теми животными, которые были вакцинированы родительским штаммом BCG вплоть до дня 120, в то время как невакцинированные животные страдали от ТВ, о чем свидетельствовало падение привеса тела.
Визуальная проверка легких и селезенки перед анализом CFU показала, что туберкулы на поверхности обоих органов, взятых у BCG-иммунизированных морских свинок, были намного больше по размеру и более многочисленны чем те, что были взяты у BCG ureC Hlу-вакцинированных животных.
Пример 3. Оценка безопасности BCG ureC Hlv
Мыши Rag 1-/-, дефицитные по Т- и В-клеткам были инфицированы 106 микроорганизмами родительского штамма BCG (дикий тип) или штамма rBCG ureC Hlу. Наблюдалось присутствие микроорганизмов в легких и селезенке. Значительно уменьшенное CFU rBCG ureC Hlу было отмечено в легких (фигура 2А). В селезенке слегка уменьшенные значения CFU было отмечено после инфекции rBCG ureC Hlу в сравнении с инфекцией родительским BCG (фигура 2B).
Далее, безопасность BCG ureC Hlу была протестирована на иммунодефицитных SCID мышах. Для этой цели SCID мыши были внутривенно привиты с использованием 107-108 микроорганизмов rBCG ureC Hlу или родительского штамма BCG. В то время как SCID мыши, привитые родительским штаммом, умирали в срок до 25 после инъекции, мыши, привитые rBCG ureC Hlу, выживали до 150 дня после инъекции (фигура 3).
Данные эксперименты продемонстрировали, что BCG ureC Hlу является более безопасной по сравнению с родительским штаммом BCG.
Claims (34)
1. Дефицитная по уреазе клетка Mycobacterium, которая является продуцентом слитого полипептида и которая содержит рекомбинантную молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую слитый полипептид, включающий в себя (а) как минимум один домен из полипептида, который способен вызывать иммунный ответ у млекопитающих, и (b) домен выхода из фаголизосом.
2. Клетка по п.1, в которой инактивированна как минимум одна последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая субъединицу клеточной уреазы.
3. Клетка по п.2, в которой инактивированна как минимум кодирующая С субъединицу клеточной уреазы последовательность.
4. Клетка по п.1, в которой указанный домен выхода из фаголизосом является доменом выхода из фаголизосом Listeria.
5. Клетка по п.1, в которой указанный домен выхода из фаголизосом кодируется молекулой нуклеиновой кислоты, выбранной из:
(а) последовательности нуклеотидов, включающей нуклеотиды 211-1722, как показано в SEQ ID No.1,
(б) последовательности нуклеотидов, которая кодирует ту же аминокислотную последовательность, что и последовательность из (а), и
(в) последовательности нуклеотидов, которая в жестких условиях гибридизуется с последовательностями из (а) или (б).
6. Клетка по п.1, в которой домен, способный вызывать иммунный ответ, является пептидом либо полипептидом, способным вызывать ответ МНС рестрицирующихся по классу I CD8 Т клеток.
7. Клетка по п.1, в которой домен, способный вызывать иммунный ответ, является частью полипептида из Mycobacterium.
8. Клетка по п.7, в которой домен, способный вызывать иммунный ответ, является выбранным из антигенов Mycobacterium: Ag85B (M.tuberculosis), Ag85B (M.bovis), Ag85A (M.tuberculosis) и ESAT-6 (M.tuberculosis), либо их иммуногенных фрагментов.
9. Клетка по п.8, в которой домен, способный вызывать иммунный ответ, является антигеном Ag85B, либо его иммуногенным фрагментом.
10. Клетка по п.1, в которой слитый полипептид содержит в своем начале сигнальную пептидную последовательность
11. Клетка по п.1, в которой пептидный линкер расположен между вызывающим иммунный ответ доменом и доменом выхода из фаголизосом.
12. Клетка по п.1, в которой молекула нуклеиновой кислоты операбельно связана с последовательностью, контролирующей экспрессию.
13. Клетка по п.12, в которой указанная последовательность, контролирующая экспрессию, активна в указанной клетке.
14. Клетка по п.1, в которой указанная молекула нуклеиновой кислоты расположена в векторе.
15. Клетка по п.1, которая является клеткой Mycobacterium bovis.
16. Дефицитная по уреазе клетка Mycobacterium, которая является продуцентом слитого белка и которая содержит хотя бы одну рекомбинантную молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую слитый пептид, включающий в себя (а) как минимум один домен полипептида, который способен вызывать иммунный ответ у млекопитающих и (b) домен выхода из фаголизосом.
17. Клетка по п.16, которая содержит как минимум одну дополнительную рекомбинантную молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую пептид либо полипептид, способный вызывать иммунный ответ в млекопитающих.
18. Клетка по п.17, которая является клеткой Mycobacterium bovis.
19. Клетка по п.1 или 16, в которой домен, либо пептид, либо полипептид, способный вызывать иммунный ответ, отобран из числа аутоантигенов, опухолевых антигенов, вирусных антигенов, антигенов паразитов, бактериальных антигенов и их иммуногенных фрагментов.
20. Клетка по п.1 или 16, которая способна экспрессировать как минимум одну указанную рекомбинантную молекулу нуклеиновой кислоты.
21. Клетка по п.20, которая способна секретировать полипептид, закодированный как минимум одной указанной молекулой нуклеиновой кислоты.
22. Клетка по п.1 или 21, которая имеет такую внутриклеточную стабильность в зараженных макрофагах, которая одинакова или меньше, чем внутриклеточная стабильность нативной клетки Mycobacterium.
23. Фармацевтическая композиция, представляющая собой живую вакцину, содержащая в качестве активного агента клетку по п.1 или 16, вместе с фармацевтически приемлемыми растворителями и адьювантами, предназначенная для иммунизации млекопитающих против Mucobacterium, выбранной из группы, состоящей из М.Tuberculosis, М.Bovis, М.Microti, М.Smegmatis. М.canettii, М.marinum и М.fortuitum.
24. Композиция по п.23, которая является пригодной для введения через поверхность слизистой оболочки либо по парентеральному пути.
25. Способ приготовления живой вакцины, охарактеризованной в п.23, включающий стадии:
обеспечение клеток по п.1 или 16;
помещение эффективного количества указанных клеток в фармацевтически приемлемый разбавитель, носитель и адъювант.
26. Способ приготовления рекомбинантной клетки Mycobacterium по п.1, включающий стадии:
(i) получение дефицитной по уреазе клетки Mycobacterium;
(ii) вставку рекомбинантной молекулы нуклеиновой кислоты в указанную клетку Mycobacterium, причем эта молекула нуклеиновой кислоты кодирует слитый полипептид, включающий (а) как минимум один домен из полипептида, причем этот домен способен вызывать иммунный ответ в клетках млекопитающих и (б) домен выхода из фаголизосом; и
(iii) культивирование клеток, полученных в соответствии со стадией (ii) при подходящих условиях.
27. Способ по п.26, в котором указанная клетка является клеткой M.bovis.
28. Способ приготовления рекомбинантной клетки Mycobacterium по п.16, включающий в себя стадии:
(i) получение дефицитной по уреазе клетки Mycobacterium;
(ii) вставку рекомбинантной молекулы нуклеиновой кислоты в указанную клетку Mycobacterium, причем эта молекула нуклеиновой кислоты кодирует слитый пептид, содержащий как минимум один домен полипептида, причем этот домен способен вызывать иммунный ответ у млекопитающих и домен выхода из фаголизосом; и
(iii) культивирование клеток, полученных в соответствии со стадией (ii) при подходящих условиях.
29. Способ по п.28, включающий в себя вставку в клетку Mycobacterium как минимум одной дополнительной рекомбинантной молекулы нуклеиновой кислоты, причем указанная дополнительная рекомбинантная молекула нуклеиновой кислоты кодирует пептид либо полипептид, способный вызывать иммунный ответ у млекопитающих.
30. Способ по п.26 или 28, в котором домен, либо пептид, либо полипептид, способный вызывать иммунный ответ, отобран из числа аутоантигенов, опухолевых антигенов, вирусных антигенов, антигенов паразитов, бактериальных антигенов и их иммуногенных фрагментов.
31. Применение клетки Mycobacterium, охарактеризованной в пп.1-22 для производства живой вакцины против Mucobacterium, выбранной из группы, состоящей из М.Tuberculosis, M.Bovis, M.Microti, M.Smegmatis. М.canettii, M.marinum и M.fortuitum.
32. Применение по п.31 для производства живой вакцины против Mucobacterium, выбранной из группы, состоящей из М.Tuberculosis, М.Bovis, M.Microti, M.Smegmatis. M.canettii, M.marinum и М.fortuitum у лиц, страдающих иммунодефицитом.
34. Применение по п.31 для производства живой вакцины против Mucobacterium, выбранной из группы, состоящей из М.Tuberculosis, М.Bovis, M.Microti, M.Smegmatis. M.canettii, M.marinum и М.fortuitum у лиц, страдающих опухолевым заболеванием.
35. Применение по п.34, где опухоль представляет собой поверхностный рак мочевого пузыря.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US46464403P | 2003-04-23 | 2003-04-23 | |
| US60/464,644 | 2003-04-23 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2005136354A RU2005136354A (ru) | 2006-03-20 |
| RU2342400C2 true RU2342400C2 (ru) | 2008-12-27 |
Family
ID=33310924
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2005136354/13A RU2342400C2 (ru) | 2003-04-23 | 2004-04-23 | Противотуберкулезная вакцина с улучшенной эффективностью |
Country Status (24)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US7988980B2 (ru) |
| EP (1) | EP1618128B1 (ru) |
| JP (1) | JP4662925B2 (ru) |
| KR (1) | KR101101263B1 (ru) |
| CN (1) | CN1798762B (ru) |
| AT (1) | ATE473238T1 (ru) |
| AU (1) | AU2004232485B2 (ru) |
| BR (1) | BRPI0409789B8 (ru) |
| CA (1) | CA2523084C (ru) |
| CU (1) | CU23608A3 (ru) |
| CY (1) | CY1110793T1 (ru) |
| DE (1) | DE602004028000D1 (ru) |
| DK (1) | DK1618128T3 (ru) |
| ES (1) | ES2344698T3 (ru) |
| HK (1) | HK1091217A1 (ru) |
| HR (1) | HRP20100395T1 (ru) |
| MX (1) | MXPA05011360A (ru) |
| PL (1) | PL1618128T3 (ru) |
| PT (1) | PT1618128E (ru) |
| RU (1) | RU2342400C2 (ru) |
| SI (1) | SI1618128T1 (ru) |
| UA (1) | UA91180C2 (ru) |
| WO (1) | WO2004094469A1 (ru) |
| ZA (1) | ZA200508276B (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2520078C1 (ru) * | 2013-04-25 | 2014-06-20 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи" Минздрава России) | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИММУНОГЕННОЙ КОМПОЗИЦИИ НА ОСНОВЕ ГИБРИДНОГО БЕЛКА Ag85A-DBD И ДЕКСТРАНА, РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДА pAg85A-DBD, ШТАММ Escherichia coli [pREP4, pAg85A-DBD], ХИМЕРНЫЙ БЕЛОК Ag85A-DBD |
Families Citing this family (23)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2342400C2 (ru) * | 2003-04-23 | 2008-12-27 | Макс-Планк-Гезельшафт Зур Фердерунг Дер Виссеншафтен Е.В. | Противотуберкулезная вакцина с улучшенной эффективностью |
| EP1649869A1 (en) * | 2004-10-21 | 2006-04-26 | Vakzine Projekt Management GmbH | Combination of a recombinant mycobacterium and a biologically active agent as a vaccine |
| BRPI0518091A2 (pt) | 2004-12-01 | 2008-11-25 | Aeras Global Tb Vaccine Foundation | mycobacterium, mÉtodo para permitir com que uma mycobacterium escape a partir de endossomos e preparaÇço para uma vacina |
| US8741313B2 (en) * | 2008-01-11 | 2014-06-03 | Emory University | Polypeptide vaccine and vaccination strategy against mycobacterium |
| WO2011031139A1 (en) | 2009-09-09 | 2011-03-17 | Universiteit Utrecht Holding B.V. | An ataq protein or a part thereof as a vaccine |
| SA110310855B1 (ar) | 2009-11-13 | 2014-09-16 | Laboratories Leti S L Unipersonal | استخدام مصدر l3 و/ أو l5 كلقاح أو كوسيلة تشخيصية لمرض طفيلي |
| CA2809153C (en) | 2010-08-27 | 2023-09-26 | Pantarhei Bioscience B.V. | Use of hzp3 glycoprotein for treating prostate cancer |
| LT2618837T (lt) * | 2010-09-20 | 2018-09-25 | Vakzine Projekt Management Gmbh | Rekombinantinė mikobakterija, kaip vakcina skirta naudoti žmonėms |
| AR083829A1 (es) | 2010-11-10 | 2013-03-27 | Leti S L Unipersonal Lab | Coadyuvante con potencialidad inmunogenica incrementada |
| PT2656070E (pt) | 2010-12-21 | 2016-06-17 | Max-Planck-Gesellschaft Zur Förderung Der Wss E V | Determinação da eficácia de uma vacinação antimicobacteriana viva recombinante |
| PL2654783T3 (pl) | 2010-12-21 | 2017-08-31 | MAX-PLANCK-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | Rekombinowane Mycobacterium jako szczepionka |
| WO2016080830A2 (en) | 2014-11-18 | 2016-05-26 | Pantarhei Bioscience B.V. | Immunotherapeutic method for treating pancreatic cancer |
| EP3090757A1 (en) * | 2015-05-04 | 2016-11-09 | Vakzine Projekt Management GmbH | Recombinant mycobacterium as an immunotherapeutic agent for the treatment of cancer |
| US20180256633A1 (en) | 2015-09-18 | 2018-09-13 | Rijksuniversiteit Groningen | Long chain inulin for stimulating an immune response |
| KR101825439B1 (ko) | 2016-04-15 | 2018-02-05 | 배재대학교 산학협력단 | 염산 처리에 의한 그람양성 박테리아 고스트의 제조 방법 |
| CN110506108B (zh) * | 2017-04-07 | 2023-10-24 | 成都安永鼎业生物技术有限公司 | 过表达phoP-phoR的重组BCG |
| US10387139B2 (en) * | 2017-07-25 | 2019-08-20 | Aurora Labs Ltd. | Opportunistic software updates during select operational modes |
| RU2678175C1 (ru) * | 2018-03-16 | 2019-01-23 | федеральное государственное бюджетное учреждение "Научно-исследовательский институт гриппа имени А.А. Смородинцева" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НИИ гриппа им. А.А. Смородинцева" Минздрава России) | Рекомбинантный штамм вируса гриппа A/PR8/HK-NS80E85A, экспрессирующий фрагменты антигенов ESAT-6 и Ag85A M.tuberculosis, для получения векторной вакцины против туберкулеза |
| CN111979162B (zh) * | 2019-05-22 | 2024-02-13 | 上海市公共卫生临床中心 | 重组卡介苗菌株、其制备方法和用途 |
| WO2021228363A1 (en) | 2020-05-11 | 2021-11-18 | Vakzine Projekt Management Gmbh | Prevention of infectious diseases by modulating the immune system |
| WO2021228768A1 (en) | 2020-05-11 | 2021-11-18 | Vakzine Projekt Management Gmbh | Prevention of infectious diseases by modulating the immune system |
| JP2024530404A (ja) | 2021-07-22 | 2024-08-21 | セラム ライフ サイエンス ヨーロッパ ゲーエムベーハー | 膀胱癌の第二選択療法のための免疫療法剤としての組換えマイコバクテリウム |
| EP4122491A1 (en) | 2021-07-22 | 2023-01-25 | Vakzine Projekt Management GmbH | Recombinant microbacterium as an immunotherapeutic agent for the second-line therapy of bladder carcinoma |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0902086A1 (en) * | 1997-08-22 | 1999-03-17 | Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | Tuberculosis vaccine |
| RU2342400C2 (ru) * | 2003-04-23 | 2008-12-27 | Макс-Планк-Гезельшафт Зур Фердерунг Дер Виссеншафтен Е.В. | Противотуберкулезная вакцина с улучшенной эффективностью |
-
2004
- 2004-04-23 RU RU2005136354/13A patent/RU2342400C2/ru active
- 2004-04-23 SI SI200431506T patent/SI1618128T1/sl unknown
- 2004-04-23 CN CN2004800106640A patent/CN1798762B/zh not_active Expired - Lifetime
- 2004-04-23 MX MXPA05011360A patent/MXPA05011360A/es active IP Right Grant
- 2004-04-23 CA CA2523084A patent/CA2523084C/en not_active Expired - Lifetime
- 2004-04-23 JP JP2006505250A patent/JP4662925B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2004-04-23 WO PCT/EP2004/004345 patent/WO2004094469A1/en active Application Filing
- 2004-04-23 UA UAA200510351A patent/UA91180C2/ru unknown
- 2004-04-23 EP EP04729090A patent/EP1618128B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2004-04-23 DE DE602004028000T patent/DE602004028000D1/de not_active Expired - Lifetime
- 2004-04-23 PT PT04729090T patent/PT1618128E/pt unknown
- 2004-04-23 KR KR1020057020036A patent/KR101101263B1/ko active IP Right Grant
- 2004-04-23 US US10/554,408 patent/US7988980B2/en active Active
- 2004-04-23 AU AU2004232485A patent/AU2004232485B2/en not_active Expired
- 2004-04-23 PL PL04729090T patent/PL1618128T3/pl unknown
- 2004-04-23 BR BRPI0409789A patent/BRPI0409789B8/pt active IP Right Grant
- 2004-04-23 AT AT04729090T patent/ATE473238T1/de active
- 2004-04-23 ES ES04729090T patent/ES2344698T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2004-04-23 DK DK04729090.3T patent/DK1618128T3/da active
-
2005
- 2005-10-13 ZA ZA200508276A patent/ZA200508276B/en unknown
- 2005-10-26 CU CU20050206A patent/CU23608A3/es active IP Right Grant
-
2006
- 2006-10-27 HK HK06111864.4A patent/HK1091217A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2010
- 2010-07-19 HR HR20100395T patent/HRP20100395T1/hr unknown
- 2010-09-16 CY CY20101100846T patent/CY1110793T1/el unknown
-
2011
- 2011-06-22 US US13/165,904 patent/US8545854B2/en not_active Expired - Lifetime
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Clemens et al. Purification, charaterizstion and genetic analysis of Mycobacterium tuberculosis urease, a potentially critical determinant of host-pathogen interaction J. Bacteriology, vol.177, no.19, 1995, p.5644-5652. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2520078C1 (ru) * | 2013-04-25 | 2014-06-20 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи" Минздрава России) | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИММУНОГЕННОЙ КОМПОЗИЦИИ НА ОСНОВЕ ГИБРИДНОГО БЕЛКА Ag85A-DBD И ДЕКСТРАНА, РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДА pAg85A-DBD, ШТАММ Escherichia coli [pREP4, pAg85A-DBD], ХИМЕРНЫЙ БЕЛОК Ag85A-DBD |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2342400C2 (ru) | Противотуберкулезная вакцина с улучшенной эффективностью | |
| ES2274580T3 (es) | Vacuna de la tuberculosis. | |
| Huygen | On the use of DNA vaccines for the prophylaxis of mycobacterial diseases | |
| Mollenkopf et al. | Intracellular bacteria as targets and carriers for vaccination | |
| EP1921149A1 (en) | Microorganisms as carriers of nucleotide sequences coding for antigens and protein toxins, process of manufacturing and uses thereof | |
| JP2009515831A (ja) | ペスト菌（Ｙｅｒｓｉｎｉａｐｅｓｔｉｓ）抗原を含む組成物 | |
| WO2004006952A2 (en) | Therapeutic tuberculosis vaccines | |
| JP5713523B2 (ja) | エンドソームエスケープ能力増強組み換えｂｃｇ株類 | |
| WO2014074635A1 (en) | Facultatively attenuated bacterial species and methods of preparation and use thereof | |
| AU2013341242A1 (en) | Facultatively attenuated bacterial species and methods of preparation and use thereof | |
| Badell et al. | Protection against tuberculosis induced by oral prime with Mycobacterium bovis BCG and intranasal subunit boost based on the vaccine candidate Ag85B-ESAT-6 does not correlate with circulating IFN-γ producing T-cells | |
| Chinchilla et al. | Enhanced immunity to Plasmodium falciparum circumsporozoite protein (PfCSP) by using Salmonella enterica serovar Typhi expressing PfCSP and a PfCSP-encoding DNA vaccine in a heterologous prime-boost strategy | |
| WO2004031356A2 (en) | Recombinant intracellular pathogen immunogenic compositions and methods for use | |
| EP1649869A1 (en) | Combination of a recombinant mycobacterium and a biologically active agent as a vaccine | |
| US10406219B2 (en) | Multivalent Brucella vaccine for protection against mycobacterial infections and methods of using the same | |
| Dietrich et al. | Haemolysin A and listeriolysin–two vaccine delivery tools for the induction of cell-mediated immunity | |
| TW200530399A (en) | Recombinant nucleic acid molecules, expression cassettes, and bacteria, and methods of use thereof | |
| US20110150932A1 (en) | Constructing a DNA Chimera for Vaccine Development Against Leishmaniasis and Tuberculosis | |
| Galen et al. | Engineering of Attenuated Salmonella enterica Serovars for Use as Live Vector Vaccines | |
| Kim | Comparison of DNA delivery systems for vaccination against intracellular bacteria | |
| Nagata et al. | 15 Anti-Infective Vaccine Strategies |