RU2005488C1

RU2005488C1 - Agent for connective tissue diseases treatment

Info

Publication number: RU2005488C1
Authority: RU
Inventors: Т.П. Уваркина; Т.И. Данилова; Т.А. Матюшина
Original assignee: Российская фармацевтическая компания "Фарма"
Priority date: 1992-06-16
Filing date: 1992-06-16
Publication date: 1994-01-15

Abstract

FIELD: medicine. SUBSTANCE: medicinal agent has enzyme hyaluronidase produced by strain Streptomyces actinocidus-77 and mannitol (0,09-0,11 g/300 IU enzyme activity). Agent shows the following advantages as compared with preparation ronidase: enhanced activity, solubility, bioavalability, high clinical efficacy. EFFECT: enhanced properties of agent. 2 tbl

Description

Изобретение относится к медицине, а именно к лекарственным средствам, применяемым в травматологии, ортопедии, хирургии для лечения болезней соединительной ткани, таких как склеродермия, ревматоидный артрит, рубцы, контрактуры Дюпюитрена, тугоподвижность и контрактуры суставов. The invention relates to medicine, namely to medicines used in traumatology, orthopedics, surgery for the treatment of connective tissue diseases such as scleroderma, rheumatoid arthritis, scars, Dupuytren's contracture, stiffness and joint contracture.

Для лечения перечисленных заболеваний получают средство, которое обладает большей активностью, растворимостью и повышенной биодоступностью. Средство содержит в качестве фермента гиалуронидазу (гиалуронатлиазу КФ 4.2.2.1), продуцируемую штаммом Streptomyces actinocidus 77, а в качестве наполнителя маннит в количестве 0,09-0,11 г на 300 МЕ активности фермента. При этом полученный препарат имеет активность более 2000 МЕ/г. For the treatment of these diseases, a tool is obtained that has greater activity, solubility and increased bioavailability. The product contains hyaluronidase (KF hyaluronatliase 4.2.2.1) as an enzyme produced by the Streptomyces actinocidus 77 strain, and mannitol in the amount of 0.09-0.11 g per 300 IU of enzyme activity as an excipient. Moreover, the resulting preparation has an activity of more than 2000 IU / g.

Гиалуронидаза Streptomyces actinocidus 77 относится по номенклатуре ферментов к классу лиаз в отличие от тестикулярной гиалуронидазы (ронидаза), которая относится к классу гидролаз, и поэтому механизмы расщепления субстратов и продукты этих реакций различны. Гиалуронидаза Streptomyces actinocidus расщепляет только гиалуроновую кислоту по реакции β-элиминирования с образованием ненасыщенных тетра- и гексасахаридов. Тестикулярная гиалуронидаза способна гидролизовать и другие мукополисахариды (хондроитин, хондроитинсульфаты). According to the nomenclature of enzymes, Streptomyces actinocidus 77 hyaluronidase belongs to the class of lyases, in contrast to testicular hyaluronidase (ronidase), which belongs to the class of hydrolases, and therefore the mechanisms of substrate cleavage and the products of these reactions are different. Streptomyces actinocidus hyaluronidase breaks down only hyaluronic acid by the β-elimination reaction to form unsaturated tetra- and hexasaccharides. Testicular hyaluronidase is also able to hydrolyze other mucopolysaccharides (chondroitin, chondroitin sulfates).

Способ получения гиалуронатлиазы включает выращивание продуцента Streptomyces actinocidus 77 глубинным способом, отделение мицелия, хроматографическую очистку на карбоксильном катионите КМ-2п кислотного гидролиза (биокарб К), обесцвечивание активированным углем. A method for producing hyaluronatliase involves growing the producer of Streptomyces actinocidus 77 in a deep manner, separating the mycelium, chromatographic purification on the carboxylic cation exchanger KM-2p of acid hydrolysis (biocarb K), decolorizing with activated carbon.

В качестве стабилизаторов-наполнителей ферментных препаратов широко используются спирты и углероды. В качестве наполнителей исследовались лактоза, маннит и поливинилпирролидон (мол. м. 12600). Препарат с лактозой инактивировался на 25-30% в течение 1 года. Присутствие поливинилпирролидона затрудняло определение белка, а, следовательно и удельной активности препарата. Результаты сведены в табл. 1. Alcohols and carbons are widely used as stabilizers-fillers of enzyme preparations. As excipients, lactose, mannitol and polyvinylpyrrolidone were studied (mol. M. 12600). The drug with lactose was inactivated by 25-30% for 1 year. The presence of polyvinylpyrrolidone made it difficult to determine the protein, and, consequently, the specific activity of the drug. The results are summarized in table. 1.

Активность заявляемого препарата при рН 6,5, близком к рН физиологических жидкостей и, следовательно, обеспечивающем увеличение биодоступности препарата - превосходит активность ронидазы более чем в 10 раз. The activity of the claimed drug at a pH of 6.5, close to the pH of physiological fluids and, therefore, providing an increase in the bioavailability of the drug, exceeds the activity of ronidase by more than 10 times.

Заявляемый препарат по растворимости превосходит ронидазу в 1000 раз: для растворения 1 г его требуется 10-30 мл воды, а для растворения 1 г ронидазы 10000 мл (практически не растворима). The claimed preparation by solubility exceeds ronidase 1000 times: to dissolve 1 g it requires 10-30 ml of water, and to dissolve 1 g of ronidase 10,000 ml (practically insoluble).

Данные по активности обоих препаратов в зависимости от рН среды приведены в табл. 2. Data on the activity of both drugs depending on the pH of the medium are given in table. 2.

Из табл. 2 следует, что рН-оптимум ронидазы составляет 4,5 и значительно отличается от рН-оптимума заявляемого препарата, равного 6,5. Последний приближается к рН физиологических жидкостей человека и животных, что обусловливает увеличение биодоступности препарата. From the table. 2 it follows that the pH optimum of ronidase is 4.5 and significantly different from the pH optimum of the claimed drug, equal to 6.5. The latter approaches the pH of physiological fluids of humans and animals, which leads to an increase in the bioavailability of the drug.

Удельная активность заявляемого препарата (30-70 МЕ/мг белка) в 7-17 раз превосходит удельную активность ронидазы (4 МЕ/мг белка), что свидетельствует о высокой степени чистоты заявляемого препарата по сравнению с ронидазой. The specific activity of the claimed drug (30-70 IU / mg protein) is 7-17 times higher than the specific activity of ronidase (4 IU / mg protein), which indicates a high degree of purity of the claimed drug compared to ronidase.

Заявляемый препарат в 7 раз менее токсичен по сравнению с ронидазой. При изучении общетоксических свойств заявляемого препарата в течение 62 дн в дозах, превышающих терапевтическую 28,6 раза, каких-либо существенных изменений в функциональном состоянии и морфологии различных органов не обнаружено. Слабая аллергическая активность заявляемого препарата в дозах, превышающих терапевтическую в 4-8 раз, сопоставима с таковой других применяемых в медицине ферментных препаратов (ронидаза, солизим, амилаза). The claimed drug is 7 times less toxic than ronidase. When studying the general toxic properties of the claimed drug for 62 days in doses exceeding the therapeutic 28.6 times, no significant changes in the functional state and morphology of various organs were found. Weak allergic activity of the claimed drug in doses 4-8 times higher than the therapeutic one is comparable with that of other enzyme preparations used in medicine (ronidase, solysim, amylase).

Заявляемый препарат при наружном применении в терапевтических дозах (300± 60 МЕ) не оказывает воздействия на гуморальный иммунный ответ, не проявляет эмбриотоксических, тератогенных и мутагенных свойств. The inventive drug for external use in therapeutic doses (300 ± 60 IU) does not affect the humoral immune response, does not exhibit embryotoxic, teratogenic and mutagenic properties.

Заявляемый препарат рекомендуется применять наружно в виде повязок или методом электрофореза. The inventive preparation is recommended to be applied externally in the form of dressings or by electrophoresis.

Заявляемый препарат, включающий микробную гиалуронидазу и маннит при соотношении 0,09-0,11 г на 300 МЕ активности фермента в виде порошка в пенициллиновом флаконе растворяют в 5-10 мл (30-60 МЕ/мл) стерильного изотонического раствора натрия хлорида или кипяченой воды комнатной температуры. Этим раствором смачивают стерильную марлевую салфетку, сложенную в 4-5 слоев, которую накладывают на пораженный участок, покрывают вощаной бумагой и фиксируют мягкой повязкой. The inventive preparation, including microbial hyaluronidase and mannitol at a ratio of 0.09-0.11 g per 300 IU of enzyme activity in the form of a powder in a penicillin vial, is dissolved in 5-10 ml (30-60 IU / ml) of a sterile isotonic sodium chloride solution or boiled water at room temperature. This solution is moistened with a sterile gauze napkin, folded in 4-5 layers, which is applied to the affected area, covered with wax paper and fixed with a soft bandage.

Количество применяемого препарата зависит от площади поражения и составляет 20-60 МЕ на 1 см² поверхности, в среднем - 300 МЕ на повязку. При необходимости доза может быть увеличена в 4-8 раз. Повязку накладывают ежедневно на 16-18 ч в течение 15-60 дн. При длительном применении препарата через каждые 2 нед делают перерыв на 3-4 дн.The amount of the drug used depends on the area of the lesion and is 20-60 IU per 1 cm ² surface, an average of 300 IU per dressing. If necessary, the dose can be increased 4-8 times. A bandage is applied daily for 16-18 hours for 15-60 days. With prolonged use of the drug every 2 weeks take a break for 3-4 days.

При применении препарата методом электрофореза содержимое флакона (300 МЕ) растворяют в 60 мл дистиллированной воды, добавляют 2-3 капли 0,1 н. раствора соляной кислоты и вводят с анода на пораженный участок в течение 20-30 мин. Курс лечения составляет 15-20 сеансов. When using the drug by electrophoresis, the contents of the vial (300 IU) are dissolved in 60 ml of distilled water, 2-3 drops of 0.1 N are added. hydrochloric acid solution and injected from the anode into the affected area for 20-30 minutes The course of treatment is 15-20 sessions.

Аппликационный способ применения можно чередовать с электрофорезом. Приготовленный раствор препарата должен быть использован в течение 24 ч. The application method of application can be alternated with electrophoresis. The prepared solution of the drug should be used within 24 hours.

Применение препарата сочетают с другими способами лечения - лечебной гимнастикой, противовоспалительными, анальгезирующими средствами и др. The use of the drug is combined with other methods of treatment - therapeutic exercises, anti-inflammatory, analgesic agents, etc.

При лечении рубцов (келоидных, атрофических, гипертрофических) препарат вводили методом электрофореза. Курс лечения составлял 15 сеансов по 20 мин. Электрофорез проводили каждый день. Эффективность лечения оценивали на основании изменений клинических данных (инфильтрация, плотность, цвет, размеры рубцов) и субъективных данных (болезненность при пальпации, зуд, жжение, боль). У всех больных, страдающих келоидными рубцами, которых беспокоил зуд, жжение, болезненность уже после пятой процедуры перечисленные субъективные ощущения проходили. Объективно: рубцы становились бледнее, менее плотные, практически безболезненные при пальпации и абсолютно безболезненные в покое. После десяти процедур электрофореза в 100% случаев рубцы становились бледными, мягкими на ощупь, уплощались, были безболезненными при глубокой пальпации. По окончании курса лечения площадь келоидных рубцов уменьшалось по сравнению с исходной до лечения до 40% . Ни у одного из больных не наблюдалось никаких побочных эффектов от лечения. In the treatment of scars (keloid, atrophic, hypertrophic), the drug was administered by electrophoresis. The course of treatment was 15 sessions of 20 minutes. Electrophoresis was performed every day. The effectiveness of the treatment was evaluated on the basis of changes in clinical data (infiltration, density, color, scar size) and subjective data (soreness on palpation, itching, burning, pain). In all patients suffering from keloid scars, who were worried about itching, burning, pain, after the fifth procedure, the listed subjective sensations passed. Objectively: the scars became paler, less dense, almost painless on palpation and completely painless at rest. After ten electrophoresis procedures, in 100% of cases, the scars became pale, soft to the touch, flattened, and were painless with deep palpation. At the end of the course of treatment, the area of keloid scars decreased compared to the initial one before treatment to 40%. None of the patients showed any side effects from treatment.

У больных, страдающих гипертрофическими рубцами, наблюдалась аналогичная клиническая картина изменений объективных данных, при этом эффект был более выражен у больных с гипертрофическими рубцовыми изменениями кожи лица после угревой сыпи. In patients with hypertrophic scars, a similar clinical picture of changes in objective data was observed, while the effect was more pronounced in patients with hypertrophic cicatricial changes in the skin of the face after acne.

У больных, страдающих атрофическими рубцами, которые слегка выступали над уровнем кожи лица уже после пятой процедуры рубец уплощался, становится мягким и сравнивался с уровнем здоровой кожи. In patients suffering from atrophic scars, which protruded slightly above the level of the skin of the face after the fifth procedure, the scar flattened, becomes soft and compared with the level of healthy skin.

Препарат применяли на послеожоговые рубцы в качестве предоперационной подготовки и как метод консервативного лечения. Послеожоговые рубцы преимущественно располагались на верхних и нижних конечностях после заживления ожоговых ран II-III А и III А-Б степени в сроки от 1 до 12 мес. После лечения у больных отмечалось послабление рубцов, уменьшение болей, зуда, увеличение подвижности тканей, что способствовало более свободному перемещению их при местной пластике. При консервативном лечении гипертрофических послеожоговых рубцов исчезла отечность, уменьшалась болезненность, рубцы становились бледнее. Более выраженное терапевтическое действие выявлено при чередовании повязок с электрофорезом. The drug was used on post-burn scars as a preoperative preparation and as a method of conservative treatment. Post-burn scars were mainly located on the upper and lower extremities after healing of burn wounds of the II-III A and III AB levels in the period from 1 to 12 months. After treatment, the patients showed weakening of scars, reduction of pain, itching, increased tissue mobility, which contributed to their more free movement with local plastic. With conservative treatment of hypertrophic post-burn scars, puffiness disappeared, pain decreased, and the scars became paler. A more pronounced therapeutic effect was revealed by alternating dressings with electrophoresis.

Посттравматические рубцы располагались на лице, шее, верхних и нижних конечностях, со сроком давности от 1 до 2 лет. После применения препарата отмечалось уменьшение натяжения тканей и, соответственно, снижение болевой реакции. Post-traumatic scars were located on the face, neck, upper and lower extremities, with a limitation period of 1 to 2 years. After the use of the drug, a decrease in tissue tension and, accordingly, a decrease in pain response were noted.

При лечении больных ревматоидным артритом и остеохондрозом с хроническим течением процесса препарат вводили методом электрофореза. Основным параметром для определения терапевтического эффекта служило определение угла подвижности сустава (в градусах). В среднем подвижность одного сустава после лечения препаратом увеличивалась на 17,2 ±1,5 (p < <0,05). Контролем служило определение угла подвижности в симметрично пораженном суставе, на который препарат не наносился. При обследовании контрольных суставов угол подвижности увеличился в среднем в одном суставе на 7,1±0,5 (p > >0,05). In the treatment of patients with rheumatoid arthritis and osteochondrosis with a chronic course of the process, the drug was administered by electrophoresis. The main parameter for determining the therapeutic effect was the determination of the angle of joint mobility (in degrees). On average, the mobility of one joint after treatment with the drug increased by 17.2 ± 1.5 (p <<0.05). The control was the determination of the angle of mobility in a symmetrically affected joint, on which the drug was not applied. When examining control joints, the mobility angle increased on average in one joint by 7.1 ± 0.5 (p>> 0.05).

Для определения анальгезирующего эффекта препарата была подобрана группа больных с остеохондрозом позвоночника и вторичным корешковым синдромом. В группу вошли 12 больных, 5 мужчин и 7 женщин, средний возраст 63±11,2 года. Продолжительность заболевания колебалась от 2 до 10 лет. Препарат вводили при электрофорезе или аппликационно на наиболее болезненные при пальпации зоны позвоночника, паравертебрально или по ходу нервных стволов. Оценка анальгезирующего эффекта проводилась по оригинальной методике количественного определения порога болевой чувствительности. После пальпаторного выявления наиболее болезненных зон осуществлялось давление специальным устройством в области этих зон с измерением площади надавливания и определения силы давления до отчетливого появления боли. Единицы измерения болевого порога выражали в кг/см². Болевой порог рассчитывали в среднем на одну точку. Контролем служила исходная величина порога до лечения препаратом. В среднем на одну точку порог болевой чувствительности увеличивался с 0,9±0,5 до 3,5±0,7 кг/см² (p < 0,05). Положительный эффект выявлен у 10 из 12 больных.To determine the analgesic effect of the drug, a group of patients with spinal osteochondrosis and secondary radicular syndrome was selected. The group included 12 patients, 5 men and 7 women, the average age of 63 ± 11.2 years. The duration of the disease ranged from 2 to 10 years. The drug was administered by electrophoresis or by application to the most painful areas of the spine upon palpation, paravertebrally or along the nerve trunks. Assessment of the analgesic effect was carried out according to the original method of quantitative determination of the threshold of pain sensitivity. After palpation of the most painful areas, pressure was applied using a special device in the area of these areas with measuring the pressure area and determining the pressure force until a distinct appearance of pain. Units of pain threshold were expressed in kg / cm ² . The pain threshold was calculated on average at one point. The control was the initial value of the threshold before treatment with the drug. On average, by one point the threshold of pain sensitivity increased from 0.9 ± 0.5 to 3.5 ± 0.7 kg / cm ² (p <0.05). A positive effect was detected in 10 of 12 patients.

У 14 больных, страдающих тендовагинитами воспалительного и посттравматического характера после лечения препаратом аппликационным способом увеличивался объем движений и исчезали воспалительные отеки. In 14 patients suffering from inflammatory and post-traumatic tendovaginitis after treatment with the drug by the application method, the range of movements increased and inflammatory edema disappeared.

Применение препарата при болезни Дюпюитрена как в до-, так и в послеоперационном периоде показало, что в начальных стадиях болезни лечение препаратом всего в течение 1 курса, т. е. 14 аппликаций, приводит к размягчению рубцовых изменений ладонного апоневроза по локтевому краю ладони. В I-II стадиях заболевания положительный результат наблюдается после 2-3 курсов применения препарата. The use of the drug in Dupuytren’s disease both in the pre- and in the postoperative period showed that in the initial stages of the disease, treatment with the drug for only 1 course, i.e. 14 applications, softens the cicatricial changes in the palmar aponeurosis along the ulnar edge of the palm. In the I-II stages of the disease, a positive result is observed after 2-3 courses of use of the drug.

При лечении препаратом склеродермии положительный эффект выражался в снижении отека и уплотнений кожи. У больной с рубцовыми изменениями кожи лица отмечалось их полное исчезновение после трех курсов, проведенных в течение года. When treated with a scleroderma drug, a positive effect was expressed in a decrease in edema and skin tightening. A patient with cicatricial changes in the skin of the face noted their complete disappearance after three courses conducted during the year.

Все клиники отмечали хорошую переносимость препарата. Отсутствие специфического запаха, способности окрашивать повязку и одежду, хорошая растворимость заявляемого препарата выгодно отличает его от ронидазы. Побочные эффекты в виде гиперемии тканей и крапивницы, быстро проходящие после кратковременного перерыва в лечении, наблюдались лишь в 2,9% случаев (у 7 больных из 241). (56) Авторское свидетельство СССР N 566875, кл. A 61 K 35/48, 1976. All clinics noted good tolerance to the drug. The absence of a specific odor, the ability to stain a bandage and clothing, the good solubility of the inventive preparation distinguishes it from ronidase. Side effects in the form of tissue and urticaria hyperemia, which quickly disappear after a short break in treatment, were observed in only 2.9% of cases (in 7 patients out of 241). (56) Copyright certificate of the USSR N 566875, cl. A 61 K 35/48, 1976.

Claims

Means for treating connective tissue diseases, including an enzyme that breaks down hyaluronic acid and an excipient, characterized in that it contains hyaluronidase produced by Streptomyces actinocidus 77 as an enzyme, and mannitol in the amount of 0.09 - 0.11 per 300 IU of activity enzyme.