Claims (41)
1. Способ получения композиции, включающей смесь клеток, происходящих из ткани печени человека, при этом смесь содержит обогащенную популяцию клеток-предшественников печени человека, причем способ включает (a) получение [по существу одноклеточной] суспензии клеток ткани печени человека, включающей смесь клеток различных размеров, включая незрелые клетки и зрелые клетки, (b) разделение суспензии в условиях, позволяющих удалить зрелые клетки и клетки относительно большого размера, оставив незрелые клетки и клетки относительно малого размера, и (c) отбор клеток, которые сами по себе, их потомство или их более зрелые формы демонстрируют наличие одного или более маркеров, указывающих на экспрессию альфа-фетопротеина, альбумина или обоих, для получения смеси клеток, состоящей из обогащенной популяции клеток-предшественников печени человека.1. A method for producing a composition comprising a mixture of cells derived from human liver tissue, the mixture comprising an enriched population of human liver progenitor cells, the method comprising (a) preparing a [substantially unicellular] suspension of human liver tissue cells, comprising a mixture of cells of various sizes, including immature cells and mature cells, (b) separation of the suspension under conditions allowing the removal of mature cells and cells of a relatively large size, leaving immature cells and cells of a relatively small size a, and (c) selection of cells that themselves, their offspring or their more mature forms demonstrate the presence of one or more markers indicating the expression of alpha-fetoprotein, albumin, or both, to obtain a mixture of cells consisting of an enriched population of cells - human liver precursors.
2. Способ по п.1, в котором ткань печени получают от плода, новорожденного, младенца, ребенка, подростка или взрослого человека.2. The method according to claim 1, in which the liver tissue is obtained from the fetus, newborn, infant, child, adolescent or adult.
3. Способ по п.1, в котором незрелые клетки имеют диаметр менее, чем около 15 микрон.3. The method according to claim 1, wherein the immature cells have a diameter of less than about 15 microns.
4. Способ по п.1, в котором обогащенная популяция включает диплоидные клетки печени человека.4. The method according to claim 1, in which the enriched population includes diploid cells of a human liver.
5. Способ по п.1, в котором клетки-предшественники печени представляют собой печеночные клетки-предшественники, гемопоэтические клетки-предшественники, мезенхимные клетки-предшественники или их смеси.5. The method of claim 1, wherein the liver progenitor cells are hepatic progenitor cells, hematopoietic progenitor cells, mesenchymal progenitor cells, or mixtures thereof.
6. Способ по п.1, в котором альфа-фетопротеин представляет собой полноразмерный альфа-фетопротеин.6. The method according to claim 1, in which alpha-fetoprotein is a full-sized alpha-fetoprotein.
7. Способ по п.1, в котором разделение суспензии включает разделение по размеру клеток, плавучей плотности или по комбинации этих параметров.7. The method according to claim 1, in which the separation of the suspension includes separation by cell size, floating density or a combination of these parameters.
8. Способ по п.1, в котором стадия разделения суспензии включает центрифужную элютриацию, центрифугирование в градиенте плотности, пэннинг, аффинную хроматографию, мечение флуоресцентными метками, противоточную проточную цитометрию, непрерывное центрифугирование, зональное центрифугирование, использование магнитных гранул или комбинацию этих методов.8. The method according to claim 1, wherein the step of separating the suspension comprises centrifugal elution, density gradient centrifugation, panning, affinity chromatography, fluorescence labeling, counterflow flow cytometry, continuous centrifugation, zone centrifugation, the use of magnetic beads, or a combination of these methods.
9. Способ по п.1, который включает также селективный лизис зрелых клеток.9. The method according to claim 1, which also includes selective lysis of mature cells.
10. Клетка-предшественник печени человека, изолированная способом по п.1.10. A human liver precursor cell isolated by the method of claim 1.
11. Способ получения композиции, включающей обогащенную популяцию клеток-предшественников печени человека, включающий (a) получение по существу одноклеточной суспензии клеток ткани печени человека, и (b) осуществление позитивной или негативной иммуноселекции в суспензии с получением смеси клеток, состоящей из обогащенной популяции клеток-предшественников печени человека, которые сами по себе, их потомство или их более зрелые формы демонстрируют наличие одного или более маркеров, указывающих на экспрессию альфа-фетопротеина, альбумина или их обоих.11. A method of obtaining a composition comprising an enriched population of human liver precursor cells, comprising (a) obtaining an essentially unicellular suspension of human liver tissue cells, and (b) performing positive or negative immunoselection in suspension to obtain a mixture of cells consisting of an enriched population of cells β-human liver precursors, which in themselves, their offspring or their more mature forms demonstrate the presence of one or more markers indicating the expression of alpha-fetoprotein, albumin and and both of them.
12. Способ по п.11, в котором клетки-предшественники печени представляют собой печеночные клетки-предшественники, гемопоэтические клетки-предшественники, мезенхимные клетки-предшественники или их комбинации.12. The method of claim 11, wherein the liver progenitor cells are hepatic progenitor cells, hematopoietic progenitor cells, mesenchymal progenitor cells, or combinations thereof.
13. Способ по п.11, в котором иммуноселекция включает отбор клеток, экспрессирующих маркеры, связанные с гемопоэтическими клетками, клеток, экспрессирующих маркеры, связанные с печеночными клетками, клеток, экспрессирующих маркеры, связанные с мезенхимными клетками, или их комбинаций.13. The method according to claim 11, in which the immunoselection includes the selection of cells expressing markers associated with hematopoietic cells, cells expressing markers associated with hepatic cells, cells expressing markers associated with mesenchymal cells, or combinations thereof.
14. Способ по п.11, в котором иммуноселекция включает отбор из суспензий таких клеток, которые сами по себе, их потомство или их более зрелые формы демонстрируют наличие одного или более маркеров, указывающих на экспрессию альфа-фетопротеина, альбумина или их обоих.14. The method according to claim 11, in which immunoselection includes the selection from suspensions of such cells, which themselves, their offspring or their more mature forms demonstrate the presence of one or more markers indicating the expression of alpha-fetoprotein, albumin, or both of them.
15. Способ по п.14, включающий также отбор таких клеток, которые сами по себе, их потомство или их более зрелые формы продуцируют мРНК полноразмерного альфа-фетопротеина.15. The method according to 14, which also includes the selection of such cells, which themselves, their offspring or their more mature forms produce mRNA of full-length alpha-fetoprotein.
16. Способ по п.11, в котором иммуноселекция включает отбор из суспензий таких клеток, которые экспрессируют маркер, специфичный для клеток взрослой печени.16. The method according to claim 11, in which immunoselection includes the selection from suspensions of such cells that express a marker specific for adult liver cells.
17. Способ по п.11, в котором иммуноселекция включает отбор таких клеток, которые сами по себе, их потомство или их более зрелые формы экспрессируют CD14, CD34, CD38, ICAM, CD45, CD117, гликофорин А, коннексин 32, остеопонтин, костный сиалопротеин, коллаген I, коллаген II, коллаген III, коллаген IV или их комбинации.17. The method according to claim 11, in which the immunoselection includes the selection of such cells, which themselves, their offspring or their more mature forms express CD14, CD34, CD38, ICAM, CD45, CD117, glycophorin A, connexin 32, osteopontin, bone sialoprotein, collagen I, collagen II, collagen III, collagen IV, or a combination thereof.
18. Способ по п.11, в котором иммуноселекция включает отбор таких клеток, которые сами по себе, их потомство или их более зрелые формы экспрессируют также альфа- фетопротеиноподобную иммунореактивность, альбуминоподобную иммунореактивность или комбинацию этих признаков.18. The method of claim 11, wherein the immunoselection includes selecting those cells that themselves, their offspring, or their more mature forms also express alpha-fetoprotein-like immunoreactivity, albumin-like immunoreactivity, or a combination of these features.
19. Клетка-предшественник печени человека, изолированная способом по п.14.19. A human liver precursor cell isolated by the method of claim 14.
20. Композиция, включающая обогащенную популяцию клеток-предшественников печени человека, их потомство или их более зрелые формы, причем эти клетки печени человека демонстрируют наличие одного или более маркеров, указывающих на экспрессию альфа-фетопротеина, альбумина или их обоих.20. A composition comprising an enriched population of human liver precursor cells, their offspring, or their more mature forms, wherein these human liver cells show the presence of one or more markers indicative of expression of alpha-fetoprotein, albumin, or both of them.
21. Композиция по п.20, в которой клетки-предшественники включают печеночные клетки предшественники, гемопоэтические клетки-предшественники, мезенхимные клетки-предшественники или их комбинации.21. The composition of claim 20, wherein the progenitor cells include hepatic progenitor cells, hematopoietic progenitor cells, mesenchymal progenitor cells, or combinations thereof.
22. Композиция по п.20, в которой клетки-предшественники, их потомство или их более зрелые формы экспрессируют CD14, CD34, CD38, CD117, ICAM или их комбинации.22. The composition according to claim 20, in which the progenitor cells, their offspring or their more mature forms express CD14, CD34, CD38, CD117, ICAM, or combinations thereof.
23. Композиция по п.20, в которой клетки-предшественники содержат экзогенную нуклеиновую кислоту.23. The composition according to claim 20, in which the precursor cells contain exogenous nucleic acid.
24. Композиция по п.23, в которой экзогенная нуклеиновая кислота кодирует, по меньшей мере, один полипептид по настоящему изобретению.24. The composition according to item 23, in which the exogenous nucleic acid encodes at least one polypeptide of the present invention.
25. Композиция по п.23, в которой экзогенная нуклеиновая кислота стимулирует экспрессию, по меньшей мере, одного полипептида по настоящему изобретению.25. The composition according to item 23, in which the exogenous nucleic acid stimulates the expression of at least one polypeptide of the present invention.
26. Способ лечения дисфункции печени или болезни, поддающейся лечению клетками-предшественниками печени, у субъекта, нуждающегося в этом, включающий введение этому субъекту эффективного количества клеток-предшественников печени человека, их потомства, их более зрелых форм или комбинаций этих клеток, в фармацевтически приемлемом носителе, и лечение дисфункции печени или болезни.26. A method of treating liver dysfunction or a disease treatable by liver progenitor cells in a subject in need thereof, comprising administering to the subject an effective amount of human liver progenitor cells, their progeny, their more mature forms or combinations of these cells, in a pharmaceutically acceptable carrier, and treatment of liver dysfunction or disease.
27. Способ по п.26, в котором клетки-предшественники печени человека включают печеночные клетки-предшественники, гемопоэтические клетки-предшественники, мезенхимные клетки-предшественники или их комбинации.27. The method of claim 26, wherein the human liver progenitor cells include hepatic progenitor cells, hematopoietic progenitor cells, mesenchymal progenitor cells, or combinations thereof.
28. Способ по п.26, включающий также введение одновременно или последовательно в любом порядке эффективного количества клеток-предшественников печени взрослого человека, их потомства, их более зрелых форм или комбинаций этих клеток.28. The method of claim 26, further comprising administering simultaneously or sequentially in any order an effective amount of adult liver progenitor cells, their offspring, their more mature forms, or combinations of these cells.
29. Способ по п.26, в котором клетки-предшественники печени человека вводят парентерально.29. The method of claim 26, wherein the human liver progenitor cells are administered parenterally.
30. Способ по п.26 в котором болезни, нарушения или дисфункции печени включают гепатохолангит, размягчение печени, гепатомегалию, цирроз, фиброз, гепатит, острую печеночную недостаточность, хроническую печеночную недостаточность, рак, гематологические дисфункции или врожденные нарушения метаболизма.30. The method according to p. 26 in which diseases, disorders or dysfunctions of the liver include hepatocholangitis, softening of the liver, hepatomegaly, cirrhosis, fibrosis, hepatitis, acute liver failure, chronic liver failure, cancer, hematological dysfunctions or congenital metabolic disorders.
31. Способ по п.30, в котором рак включает гепатокарциному, гепатобластому или оба этих вида рака. 31. The method of claim 30, wherein the cancer comprises hepatocarcinoma, hepatoblastoma, or both of these types of cancer.
32. Способ по п.30, в котором рак включает метастатическую опухоль в печени, происходящую из места первичной локализации, выбранного из группы, состоящей из кишечника, простаты, молочной железы, почки, поджелудочной железы, кожи, мозга и легкого.32. The method of claim 30, wherein the cancer comprises a metastatic tumor in the liver originating from a primary location selected from the group consisting of the intestine, prostate, breast, kidney, pancreas, skin, brain and lung.
33. Способ по п.30, в котором гематологические нарушения или дисфункции включают анемию, лейкоз или нарушения или дисфункции, вызванные химиотерапией, облучением, лекарствами, вирусами, травмой или комбинацией перечисленного.33. The method according to clause 30, in which hematological disorders or dysfunctions include anemia, leukemia or disorders or dysfunctions caused by chemotherapy, radiation, drugs, viruses, trauma or a combination of the above.
34. Способ лечения болезни у субъекта, нуждающегося в этом, включающий введение эффективного количества печеночных клеток- предшественников человека, их потомства или их более зрелых форм, в котором печеночные клетки-предшественники человека, их потомство или их более зрелые формы содержат экзогенную нуклеиновую кислоту.34. A method of treating a disease in a subject in need thereof, comprising administering an effective amount of human liver progenitor cells, their progeny or their more mature forms, in which human liver progenitor cells, their progeny or their more mature forms contain exogenous nucleic acid.
35. Культура клеток, включающая композицию по п.20, межклеточную матрицу и культуральную среду.35. Cell culture, including the composition according to claim 20, intercellular matrix and culture medium.
36. Фармацевтическая композиция, включающая композицию по п.20 и фармацевтически приемлемый носитель.36. A pharmaceutical composition comprising the composition of claim 20 and a pharmaceutically acceptable carrier.
37. Клетки-предшественники печени человека, их потомство или их более зрелые формы, которые демонстрируют наличие одного или более маркеров, указывающих на экспрессию альфа-фетопротеина, альбумина или их обоих.37. Human liver progenitor cells, their offspring, or their more mature forms, which exhibit the presence of one or more markers indicating the expression of alpha-fetoprotein, albumin, or both.
38. Клетки-предшественники печени человека, их потомство или их более зрелые формы по п.37, которые экспрессируют в своем фенотипе гликофорин A-, CD45-, альфа-фетопротеин+++, альбумин+ и ICAM+.38. The human liver progenitor cells, their offspring, or their more mature forms according to claim 37, which express in their phenotype glycophorin A - , CD45 - , alpha-fetoprotein +++ , albumin + and ICAM + .
39. Клетки-предшественники печени человека по п.37, которые экспрессируют также CD14+, CD34++, CD38++, CD117++ или их комбинации.39. The human liver progenitor cells of claim 37, which also express CD14 + , CD34 ++ , CD38 ++ , CD117 ++, or combinations thereof.
40. Способ по п.3, в котором незрелые клетки имеют диаметр, составляющий более чем около 5 микрон.40. The method according to claim 3, in which the immature cells have a diameter of more than about 5 microns.
41. Способ по п.3, в котором незрелые клетки имеют диаметр, составляющий более чем около 8 микрон.41. The method according to claim 3, in which the immature cells have a diameter of more than about 8 microns.