RU2093827C1 - Method of determination of the mouth cavity neutrophil phagocytic activity - Google Patents
Method of determination of the mouth cavity neutrophil phagocytic activity Download PDFInfo
- Publication number
- RU2093827C1 RU2093827C1 RU93050911A RU93050911A RU2093827C1 RU 2093827 C1 RU2093827 C1 RU 2093827C1 RU 93050911 A RU93050911 A RU 93050911A RU 93050911 A RU93050911 A RU 93050911A RU 2093827 C1 RU2093827 C1 RU 2093827C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- neutrophils
- oral
- phagocytic activity
- minutes
- phagocytic
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использовано для оценки защитных свойств слюны. The invention relates to medicine, namely to immunology, and can be used to assess the protective properties of saliva.
Состояние иммунной защиты в полости рта является одним из ведущих факторов в патогенезе основных стоматологических заболеваний (кариес, болезни пародонта). В настоящее время для оценки иммунного статуса полости рта определяют не только соотношение количества лейкоцитов и эпителиальных клеток в оральном смыве проба Ясиновского [1] но и их физиологическую активность, в частности, адгезивную активность всех клеток, фагоцитарную активность нейтрофилов и так далее [2] Наиболее информативным для оценки клеточного иммунитета полости рта является показатель фагоцитарной активности нейтрофилов. The state of immune defense in the oral cavity is one of the leading factors in the pathogenesis of major dental diseases (caries, periodontal disease). Currently, to assess the immune status of the oral cavity, not only the ratio of the number of leukocytes and epithelial cells in the oral washout of the Yasinovsky sample [1] is determined, but also their physiological activity, in particular, the adhesive activity of all cells, the phagocytic activity of neutrophils and so on [2] The most informative for assessing cellular immunity of the oral cavity is an indicator of the phagocytic activity of neutrophils.
Важно отметить, что клеточный материал для исследования фагоцитоза в полости рта получают, в основном, путем оральных смывов и саму реакцию фагоцитоза проводят в смывной жидкости. Получение фагоцитов из цельной слюны и постановка реакции в цельной слюне практически невозможны ввиду образования после центрифугирования слюны осадка муцина, склеивающего все клетки в единый конгломерат. It is important to note that cellular material for the study of phagocytosis in the oral cavity is obtained mainly by oral swabs and the phagocytosis reaction itself is carried out in a washout fluid. Obtaining phagocytes from whole saliva and staging the reaction in whole saliva is practically impossible due to the formation of a mucin precipitate after centrifugation of saliva, which sticks together all cells into a single conglomerate.
Известен способ определения фагоцитарной активности нейтрофилов полости рта, взятой нами в качестве прототипа [2] Способ представляет собой микрометод оценки клеточного иммунитета по Лебедеву К. А. Понякиной И. Д. адаптированный к условиям полости рта, и состоит из двух этапов: получение клеточного материала и постановка реакции фагоцитоза. A known method for determining the phagocytic activity of neutrophils of the oral cavity, taken as a prototype [2] The method is a micromethod for assessing cellular immunity according to Lebedev K. A. Ponyakina I. D. adapted to the conditions of the oral cavity, and consists of two stages: obtaining cellular material and formulation of the phagocytosis reaction.
Клеточный материал получают путем смыва полости рта 5-ю мл раствора Хенкса и осаждения центрифугированием. Осадок промывают этим же раствором и ресуспендируют. После этого клетки вновь осаждают, к осадку добавляют 0,3 мл раствора Хенкса и ресуспендируют. Полученную взвесь клеток используют для постановки реакции фагоцитоза. Cellular material is obtained by washing the oral cavity with 5 ml of Hanks solution and sedimentation by centrifugation. The precipitate is washed with the same solution and resuspended. After this, the cells are pelleted again, 0.3 ml of Hanks solution is added to the pellet and resuspended. The resulting suspension of cells is used to set the phagocytosis reaction.
К 0,05 мл полученной суспензии клеток добавляют 0,05 мл 0.05%-ной суспензии индикаторных частиц (пекарские дрожжи, стафилококки, латекс). Центрифугируют при 200g в течении 5 минут, инкубируют при 4 12oC 30 минут. Из осадка делают мазок на предметном стекле, фиксируют, окрашивают и микроскопируют.0.05 ml of a 0.05% suspension of indicator particles (baker's yeast, staphylococcus, latex) is added to 0.05 ml of the obtained cell suspension. Centrifuged at 200g for 5 minutes, incubated at 4 12 o C for 30 minutes. From the sediment make a smear on a glass slide, fix, stain and microscope.
В препарате подсчитывают фагоцитарный индекс (ФИ) процент фагоцитирующих нейтрофилов (на 50-100 клеток) при увеличении 40, при правильной настройки света по Келлеру. In the preparation, the phagocytic index (PI) is calculated as the percentage of phagocytic neutrophils (by 50-100 cells) with an increase of 40, with the correct Keller light setting.
Однако, способ определения фагоцитарной активности нейтрофилов полости рта по описанной методике недостаточно точен. Фагоцитарная активность в оральном смыве при оценке данным способом в 4 раза ниже, чем в крови и в два раза ниже, чем в десневой жидкости (см. таблицу). Снижение фагоцитарной активности ротовых нейтрофилов авторы способа прототипа объясняют меньшей, чем в десневой жидкости, жизнеспособностью ротовых нейтрофилов и тем, что миграция в полость рта является завершающим этапом жизненного цикла нейтрофила. However, the method for determining the phagocytic activity of neutrophils of the oral cavity by the described method is not accurate enough. When evaluated by this method, phagocytic activity in an oral flush is 4 times lower than in blood and two times lower than in gingival fluid (see table). The reduction in the phagocytic activity of oral neutrophils by the prototype method is explained by the lower viability of oral neutrophils than in the gingival fluid and the fact that migration to the oral cavity is the final stage of the neutrophil life cycle.
Но фагоцитоз важнейшая (основная) функция нейтрофила и она сохраняется высокой на протяжении всей жизни клетки [3)] Кроме того, данные самих авторов прототипа [2, с.14] свидетельствуют об отсутствии статистически достоверных различий в количестве жизнеспособных нейтрофилов в десневой жидкости и в оральном смыве. But phagocytosis is the most important (main) function of the neutrophil and it remains high throughout the life of the cell [3)]. In addition, the data of the authors of the prototype [2, p. oral flushing.
Для повышения точности способа определения фагоцитарной активности в полости рта за счет создания условий проведения реакции фагоцитоза, максимально близких к физиологическим, предлагается проводить последнюю в отцентрифугированной смешанной слюне пациента, лишенной муцина. To improve the accuracy of the method for determining phagocytic activity in the oral cavity by creating conditions for the phagocytosis reaction as close as possible to physiological, it is proposed to carry out the latter in a centrifuged mixed saliva of a patient lacking mucin.
Способ осуществляется следующим образом. The method is as follows.
После предварительного очищения полости рта от механических примесей, в рот набирают 10 мл раствора Хенкса и интенсивно полощут в течение одной минуты, после чего смывную жидкость возвращают в пробирку. Клетки смыва осаждают центрифугированием при 200g в течение 10 минут. К осадку добавляют 0,3 мл смешанной слюны пациента, полученной после забора смыва и отцентрифугированной при 200g в течение 15 минут. Тщательно ресуспендировав клеточный осадок, смешивают 0,1 мл полученной суспензии лейкоцитов с 0,1 мл 0,05 ной суспензии микробных клеток. Центрифугируют смесь при 200g в течение 5 минут, инкубируют при 37oC 30 минут. Клетки осадка фиксируют, окрашивают по стандартной методике (азур-эозин Романовского-Гимза) и микроскопируют при световой иммерсии х90.After preliminary cleaning of the oral cavity from mechanical impurities, 10 ml of Hanks solution is added to the mouth and rinsed intensively for one minute, after which the flushing liquid is returned to the tube. Flush cells are pelleted by centrifugation at 200 g for 10 minutes. 0.3 ml of mixed saliva of the patient obtained after collection of the washout and centrifuged at 200g for 15 minutes was added to the precipitate. After carefully resuspending the cell pellet, 0.1 ml of the obtained leukocyte suspension is mixed with 0.1 ml of the 0.05 microbial cell suspension. Centrifuge the mixture at 200g for 5 minutes, incubate at 37 o C for 30 minutes. Cells of the sediment are fixed, stained according to standard methods (azure-eosin Romanovsky-Giemsa) and microscopied by light immersion x90.
В мазке подсчитывают фагоцитарный индекс (ФИ) фагоцитирующих нейтрофилов на 100 клеток и фагоцитарное число (ФЧ) среднее число микробов, поглощенных одним нейтрофилом. In a smear, the phagocytic index (PI) of phagocytic neutrophils per 100 cells and the phagocytic number (PS) are the average number of microbes absorbed by one neutrophil.
Фагоцитарная активность ротовых нейтрофилов оценена предлагаемым способом у 50 здоровых доноров с санированной полостью рта (см. таблицу). The phagocytic activity of oral neutrophils was evaluated by the proposed method in 50 healthy donors with a sanitized oral cavity (see table).
Крайне низкая фагоцитарная активность ротовых нейтрофилов в прототипе связана с постановкой реакции фагоцитоза в нефизиологической для клеток среде смывной жидкости (раствор Хенкса). Как известно, для осуществления начальных стадий фагоцитоза (опсонизация, хемотаксис, адгезия) необходимо наличие в реакционной среде особых гуморальных факторов опсонинов (опсонировать "делать съедобным"). Такими опсонинами, определяющими фагоцитарную активность нейтрофилов, являются иммуноглобулины, компоненты комплемента, лизоцим и некоторые другие. Постановка реакции фагоцитоза в отцентрифугированной слюне, содержащей все необходимые факторы, отражает истинную фагоцитарную активность ротовых нейтрофилов. The extremely low phagocytic activity of oral neutrophils in the prototype is associated with the formulation of the phagocytosis reaction in a non-physiological medium of flushing fluid for the cells (Hanks solution). As is known, for the initial stages of phagocytosis (opsonization, chemotaxis, adhesion), the presence of special humoral factors of opsonins in the reaction medium is necessary (to opsonize "make edible"). Such opsonins that determine the phagocytic activity of neutrophils are immunoglobulins, complement components, lysozyme and some others. The reaction of phagocytosis in a centrifuged saliva containing all the necessary factors reflects the true phagocytic activity of oral neutrophils.
Как видно из таблицы, фагоцитарная активность нейтрофилов орального смыва по предлагаемому способу достоверно выше, чем в прототипе и практически не отличается от активности клеток десневой жидкости, что подтверждает физиологичность нашего способа и позволяет отказаться от трудоемкого микрометода анализа фагоцитарной активности в десневой жидкости. As can be seen from the table, the phagocytic activity of oral washout neutrophils by the proposed method is significantly higher than in the prototype and practically does not differ from the activity of gum fluid cells, which confirms the physiology of our method and allows us to abandon the laborious micromethod of phagocytic activity analysis in gum fluid.
Пример конкретного выполнения. An example of a specific implementation.
У пациента Б. 30 лет, получили оральный смыв 10-ю мл раствора Хенкса в течение одной минуты, отцентрифугировали при 200g десять минут, слили надосадочную жидкость. Пациент в это время собирал в другую пробирку свою слюну (5 минут). К клеточному осадку смыва добавили 0,3 мл надосадочной жидкости из пробирки со слюной, предварительно отцентрифугированной при 200 g в течение 15 минут. Тщательно ресуспендировав осадок, забрали 0,1 мл полученной суспензии лейкоцитов и добавили 0,1 мл 0.05%-ной суспензии пекарских дрожжей. Центрифугировали смесь при 200g в течение пяти минут, инкубировали при 37oC в термостате 30 минут. Затем сделали мазок на предметном стекле, зафиксировали метанолом (5 минут), окрасили азур-эозином (15 минут). При микроскопии мазка (увеличение 90) были подсчитаны ФИ и ФЧ.Patient B., 30 years old, received an oral washout of 10 ml of Hanks solution for one minute, centrifuged at 200g for ten minutes, and the supernatant was drained. At this time, the patient collected his saliva into another tube (5 minutes). 0.3 ml of supernatant from a saliva tube previously centrifuged at 200 g for 15 minutes was added to the cell washout pellet. After carefully resuspending the pellet, 0.1 ml of the obtained leukocyte suspension was taken and 0.1 ml of a 0.05% baker's yeast suspension was added. The mixture was centrifuged at 200g for five minutes, incubated at 37 ° C in an incubator for 30 minutes. Then a smear was made on a glass slide, fixed with methanol (5 minutes), stained with azure-eosin (15 minutes). Microscopy of the smear (magnification 90) was calculated PI and PS.
У пациента Б. ФИ оказался равным 29% ФЧ 2.6
Источники информации
1. Быкова И. А. Кирюхина С. А. Чумаченко В. А. "Оценка функциональной активности нейтрофилов при патологии тканей пародонта: Методические рекомендации", Москва, 1984.Patient B. FI turned out to be equal to 29% of FP 2.6
Sources of information
1. Bykova I. A. Kiryukhina S. A. Chumachenko V. A. "Assessment of the functional activity of neutrophils in the pathology of periodontal tissues: Methodological recommendations", Moscow, 1984.
2. Робустова Т. Г. Лебедев К. А. Максимовский Ю. М. "Иммунный статус в полости рта: Методические рекомендации", Москва, 1990. 2. Robustova T. G. Lebedev K. A. Maksimovsky Yu. M. "Immune status in the oral cavity: Methodological recommendations", Moscow, 1990.
3. Полянцев В. А. "Нормальная физиология (учебное пособие). -М. Медицина, 1989. 3. Polyantsev V. A. "Normal physiology (textbook). -M. Medicine, 1989.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU93050911A RU2093827C1 (en) | 1993-11-09 | 1993-11-09 | Method of determination of the mouth cavity neutrophil phagocytic activity |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU93050911A RU2093827C1 (en) | 1993-11-09 | 1993-11-09 | Method of determination of the mouth cavity neutrophil phagocytic activity |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU93050911A RU93050911A (en) | 1996-03-20 |
| RU2093827C1 true RU2093827C1 (en) | 1997-10-20 |
Family
ID=20148990
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU93050911A RU2093827C1 (en) | 1993-11-09 | 1993-11-09 | Method of determination of the mouth cavity neutrophil phagocytic activity |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2093827C1 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU214554U1 (en) * | 2022-05-25 | 2022-11-03 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования Санкт-Петербургский государственный университет ветеринарной медицины ФГБОУ ВО СПбГУВМ | Device for determining the phagocytic activity of alveolar macrophages |
-
1993
- 1993-11-09 RU RU93050911A patent/RU2093827C1/en active
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Робустова Т.Г. и др. Иммунный статус в полости рта: Методические рекомендации. - М., 1990. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU214554U1 (en) * | 2022-05-25 | 2022-11-03 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования Санкт-Петербургский государственный университет ветеринарной медицины ФГБОУ ВО СПбГУВМ | Device for determining the phagocytic activity of alveolar macrophages |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Blaxhall et al. | Routine haematological methods for use with fish blood | |
| Kusumi et al. | Rapid detection of pyuria by leukocyte esterase activity | |
| Territo et al. | Monocyte function in man | |
| LUND et al. | Cyclic neutropenia in grey collie dogs | |
| Lichtman et al. | Peripheral cytoplasmic characteristics of leukocytes in monocytic leukemia: relationship to clinical manifestations | |
| Gleich et al. | Selective stimulation and purification of eosinophils and neutrophils from guinea pig peritoneal fluids | |
| Nishimaki et al. | Relationship between the quantity of oral Candida and systemic condition/diseases of the host: Oral Candida increases with advancing age and anemia | |
| Schrek | Studies in vitro on cellular physiology: The effect of x-rays on the survival of cells | |
| Kowolik et al. | Functional integrity of gingival crevicular neutrophil polymorphonuclear leucocytes as demonstrated by nitroblue tetrazolium reduction | |
| Olson et al. | Levamisole: a new treatment for recurrent aphthous stomatitis | |
| RU2093827C1 (en) | Method of determination of the mouth cavity neutrophil phagocytic activity | |
| Butler | Chronic idiopathic immunoneutropenia | |
| Ellepola et al. | Investigative methods for studying the adhesion and cell surface hydrophobicity of Candida species: an overview | |
| Hervig et al. | Endogenous serotonin in human blood platelets: factors that may influence reference values | |
| Thiede et al. | Pregnancy and the lymphocyte | |
| Baumgartner et al. | Detection of immunoglobulins from explant cultures of periapical lesions | |
| KARAVODIN et al. | Inhibition of adherence and cytotoxicity by circulating immune complexes formed in experimental filariasis | |
| SU1749834A1 (en) | Method for phagocytic activity of neutrophils | |
| CN111537733A (en) | Application of CCR1 as COPD diagnostic marker | |
| JPH116831A (en) | Method for detecting and measuring blood platelet including premature rete blood platelet and adoption of the same to clinic | |
| Jacobson et al. | Fluorescence-activated cell analysis of P-fimbriae receptor accessibility on uroepithelial cells of patients with renal scarring | |
| JP2837093B2 (en) | Method of measuring proliferation activity imparting ability | |
| US11774440B2 (en) | Method for detecting chemotaxis of neutrophil | |
| SU876111A1 (en) | Method of diagnosis of abortion risk | |
| Abdollahzadeh et al. | The frequency of ABO blood groups among patients with denture stomatitis |