KR20240161961A - Gprc5d 및 cd3에 특이적으로 결합하는 항원 결합 분자 및 이의 의약적 용도 - Google Patents
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Abstract
GPRC5D 및 CD3에 특이적으로 결합하는 항원 결합 분자 및 이의 의약적 용도를 제공한다. 상기 항원 결합 분자는 종양 관련 질환을 치료하는 데 사용될 수 있다.
Description
본 개시는 생물기술 분야에 속하며, 보다 구체적으로 본 개시는 항원 결합 분자 및 이의 응용에 관한 것이다.
여기에 진술하는 내용은 단지 본 개시와 관련되는 배경 정보를 제공하는 것으로서, 종래기술을 필연적으로 구성하는 것은 아니다.
다발성 골수종(MM)은 두 번째로 흔한 혈액 악성 종양으로, 5년 생존율이 약 53.9%이며, 전 세계 인구가 노령화됨에 따라 발병 집단도 증가할 것으로 예상된다.
GPRC5D는 G 단백질-커플링된 고아 수용체이자 7차 막관통 단백질로서 다발성 골수종 환자에서 특이적으로 고 발현되며 환자의 좋지 않은 예후와 관련이 있는 반면, 대부분의 정상 조직에서는 거의 발현되지 않는다. 또한, 새로 확진된 MM이든 재발성/불응성 MM 환자이든 GPR5CD의 발현량은 정상인보다 훨씬 높다. 또한, 1(q)gain 환자 또는 13(q)del 환자 모두에서 다양한 이상 세포 유형의 GPRC5D 발현에는 차이가 없었다. GPRC5D의 과발현과 암의 연관성은 GPRC5D가 암에 대한 우수한 치료 표적으로 작용할 가능성을 보여준다.
MM의 경우 면역 조절제(IMID), 프로테아제 억제제(PI) 및 단클론 항체 약물을 포함하는 현재 임상적으로 사용되는 많은 치료 약물이 존재하며, 이러한 약물은 실제로 MM 환자의 임상적 상황을 개선했지만, 이러한 치료법은 각각 단점이 있는데, 예컨대 IMID의 경우 선천성 결함, 신경 독성, 중증 혈전증을 유발하는 한편, PI의 경우 말초 신경 독성 발생 위험이 높은 것이다. CD38 및 SLAMF7의 단클론 항체는 적혈구 및 백혈구 세포의 감소로 인해 심각한 감염 및 빈혈을 유발할 수 있는 동시에 항원 손실로 인해 약물 내성을 유발할 수도 있다. 현재 어떤 치료법도 MM을 완전히 치료할 수 없으며 환자는 결국 재발하게 된다. 따라서 새로운 표적면역치료법의 개발은 임상적으로 중요한 의의를 갖는다.
본 개시는 GPRC5D 및 CD3에 특이적으로 결합하는 항원 결합 분자 및 GPRC5D에 특이적으로 결합하는 항체를 제공한다.
일 측면에서, 본 개시는 GPRC5D 및 CD3에 특이적으로 결합하는 항원 결합 분자를 제공하며, 이는 GPRC5D에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 항원 결합 모듈 및 CD3에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 항원 결합 모듈을 포함하고, 상기 GPRC5D에 특이적으로 결합하는 항원 결합 모듈은 중쇄 가변 영역 GPRC5D-VH 및 경쇄 가변 영역 GPRC5D-VL을 포함하고, 상기 CD3에 특이적으로 결합하는 항원 결합 모듈은 중쇄 가변 영역 CD3-VH 및 경쇄 가변 영역 CD3-VL을 포함한다. 일 측면에서, 본 개시는 GPRC5D 및 CD3에 특이적으로 결합하는 항원 결합 분자를 제공하며, 이는 GPRC5D에 특이적으로 결합하는 한 개 또는 두 개의 항원 결합 모듈 및 CD3에 특이적으로 결합하는 한 개 또는 두 개의 항원 결합 모듈을 포함하고, 상기 GPRC5D에 특이적으로 결합하는 항원 결합 모듈은 중쇄 가변 영역 GPRC5D-VH 및 경쇄 가변 영역 GPRC5D-VL을 포함하고, 상기 CD3에 특이적으로 결합하는 항원 결합 모듈은 중쇄 가변 영역 CD3-VH 및 경쇄 가변 영역 CD3-VL을 포함한다.
일 측면에서, 본 개시는 GPRC5D 및 CD3에 특이적으로 결합하는 항원 결합 분자를 제공하며, 이는 GPRC5D에 특이적으로 결합하는 하나의 항원 결합 모듈 및 CD3에 특이적으로 결합하는 하나의 항원 결합 모듈을 포함하고, 상기 GPRC5D에 특이적으로 결합하는 항원 결합 모듈은 중쇄 가변 영역 GPRC5D-VH 및 경쇄 가변 영역 GPRC5D-VL을 포함하고, 상기 CD3에 특이적으로 결합하는 항원 결합 모듈은 중쇄 가변 영역 CD3-VH 및 경쇄 가변 영역 CD3-VL을 포함한다.
일 측면에서, 본 개시는 GPRC5D 및 CD3에 특이적으로 결합하는 항원 결합 분자를 제공하며, 이는 GPRC5D에 특이적으로 결합하는 두 개의 항원 결합 모듈 및 CD3에 특이적으로 결합하는 두 개의 항원 결합 모듈을 포함하고, 상기 GPRC5D에 특이적으로 결합하는 항원 결합 모듈은 중쇄 가변 영역 GPRC5D-VH 및 경쇄 가변 영역 GPRC5D-VL을 포함하고, 상기 CD3에 특이적으로 결합하는 항원 결합 모듈은 중쇄 가변 영역 CD3-VH 및 경쇄 가변 영역 CD3-VL을 포함한다.
본 개시에서 제공되는 GPRC5D 및 CD3에 특이적으로 결합하는 항원 결합 분자의 실시양태에서, 상기 GPRC5D에 특이적으로 결합하는 항원 결합 모듈은 Fab일 수 있고, 이는 중쇄 가변 영역 GPRC5D-VH, 중쇄 불변 영역 CH1, 경쇄 가변 영역 GPRC5D-VL 및 경쇄 불변 영역 CL을 포함한다.
본 개시에서 제공되는 GPRC5D 및 CD3에 특이적으로 결합하는 항원 결합 분자의 실시양태에서, 상기 CD3에 특이적으로 결합하는 항원 결합 모듈은 대체된 Fab일 수 있고, 이는 중쇄 가변 영역 CD3-VH, Obscurin 사슬, 경쇄 가변 영역 CD3-VL 및 Titin 사슬을 포함한다.
본 개시에서 제공되는 GPRC5D 및 CD3에 특이적으로 결합하는 항원 결합 분자의 실시양태에서, 상기 CD3에 특이적으로 결합하는 항원 결합 모듈은 scFv일 수 있고, 이는 중쇄 가변 영역 CD3-VH 및 경쇄 가변 영역 CD3-VL을 포함한다.
일부 실시양태에서, 앞서 기재된 바와 같은 항원 결합 분자에 있어서:
(i) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 15의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR1, SEQ ID NO: 16의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR2 및 SEQ ID NO: 17의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR3을 갖고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 137, 18, 135, 136 또는 138의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR1, SEQ ID NO: 19의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR2 및 SEQ ID NO: 20의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR3을 갖거나; 또는
(ii) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 9의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR1, SEQ ID NO: 134, 10 또는 133의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR2 및 SEQ ID NO: 11의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR3을 갖고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 130, 12, 129, 131 또는 132의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR1, SEQ ID NO: 13의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR2 및 SEQ ID NO: 14의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR3을 갖거나; 또는
(iii) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 21의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR1, SEQ ID NO: 140, 22 또는 139의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR2 및 SEQ ID NO: 23의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR3을 갖고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 24의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR1, SEQ ID NO: 25의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR2 및 SEQ ID NO: 26의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR3을 갖거나; 또는
(iv) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 27의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR1, SEQ ID NO: 28의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR2 및 SEQ ID NO: 29의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR3을 갖고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 144, 30, 141, 142 또는 143의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR1, SEQ ID NO: 31의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR2 및 SEQ ID NO: 32의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR3을 갖는다.
일부 실시양태에서, 상기 GPRC5D-HCDR1, GPRC5D-HCDR2, GPRC5D-HCDR3, GPRC5D-LCDR1, GPRC5D-LCDR2 및 GPRC5D-LCDR3은 Kabat, IMGT, Chothia, AbM 또는 Contact 넘버링 규칙에 따라 정의된다.
일부 실시양태에서, 앞서 기재된 바와 같은 항원 결합 분자에 있어서:
(i) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 15의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR1, SEQ ID NO: 16의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR2 및 SEQ ID NO: 17의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR3을 갖고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 137의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR1, SEQ ID NO: 19의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR2 및 SEQ ID NO: 20의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR3을 갖거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 15의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR1, SEQ ID NO: 16의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR2 및 SEQ ID NO: 17의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR3을 갖고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 18의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR1, SEQ ID NO: 19의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR2 및 SEQ ID NO: 20의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR3을 갖거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 15의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR1, SEQ ID NO: 16의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR2 및 SEQ ID NO: 17의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR3을 갖고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 138의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR1, SEQ ID NO: 19의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR2 및 SEQ ID NO: 20의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR3을 갖거나; 또는
(ii) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 9의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR1, SEQ ID NO: 134의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR2 및 SEQ ID NO: 11의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR3을 갖고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 130의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR1, SEQ ID NO: 13의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR2 및 SEQ ID NO: 14의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR3을 갖거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 9의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR1, SEQ ID NO: 134의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR2 및 SEQ ID NO: 11의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR3을 갖고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 12의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR1, SEQ ID NO: 13의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR2 및 SEQ ID NO: 14의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR3을 갖거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 9의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR1, SEQ ID NO: 134의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR2 및 SEQ ID NO: 11의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR3을 갖고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 129의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR1, SEQ ID NO: 13의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR2 및 SEQ ID NO: 14의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR3을 갖거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 9의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR1, SEQ ID NO: 133의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR2 및 SEQ ID NO: 11의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR3을 갖고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 130의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR1, SEQ ID NO: 13의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR2 및 SEQ ID NO: 14의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR3을 갖거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 9의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR1, SEQ ID NO: 133의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR2 및 SEQ ID NO: 11의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR3을 갖고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 12의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR1, SEQ ID NO: 13의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR2 및 SEQ ID NO: 14의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR3을 갖거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 9의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR1, SEQ ID NO: 133의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR2 및 SEQ ID NO: 11의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR3을 갖고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 129의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR1, SEQ ID NO: 13의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR2 및 SEQ ID NO: 14의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR3을 갖거나; 또는
(iii) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 21의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR1, SEQ ID NO: 140의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR2 및 SEQ ID NO: 23의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR3을 갖고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 24의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR1, SEQ ID NO: 25의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR2 및 SEQ ID NO: 26의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR3을 갖거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 21의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR1, SEQ ID NO: 139의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR2 및 SEQ ID NO: 23의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR3을 갖고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 24의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR1, SEQ ID NO: 25의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR2 및 SEQ ID NO: 26의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR3을 갖거나; 또는
(iv) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 27의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR1, SEQ ID NO: 28의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR2 및 SEQ ID NO: 29의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR3을 갖고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 144의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR1, SEQ ID NO: 31의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR2 및 SEQ ID NO: 32의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR3을 갖는다.
일부 실시양태에서, 앞서 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항원 결합 분자에 있어서:
(i) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 15의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR1, SEQ ID NO: 16의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR2 및 SEQ ID NO: 17의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR3을 갖고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 137의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR1, SEQ ID NO: 19의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR2 및 SEQ ID NO: 20의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR3을 갖거나; 또는
(ii) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 9의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR1, SEQ ID NO: 134의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR2 및 SEQ ID NO: 11의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR3을 갖고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 130의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR1, SEQ ID NO: 13의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR2 및 SEQ ID NO: 14의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR3을 갖는다.
일부 실시양태에서, 앞서 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항원 결합 분자에 있어서:
상기 GPRC5D-VH는 아미노산 서열이 SEQ ID NO: 9에 제시된 바와 같은 GPRC5D-HCDR1, 아미노산 서열이 SEQ ID NO: 134에 제시된 바와 같은 GPRC5D-HCDR2 및 아미노산 서열이 SEQ ID NO: 11에 제시된 바와 같은 GPRC5D-HCDR3을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 아미노산 서열이 SEQ ID NO: 130에 제시된 바와 같은 GPRC5D-LCDR1, 아미노산 서열이 SEQ ID NO: 13에 제시된 바와 같은 GPRC5D-LCDR2 및 아미노산 서열이 SEQ ID NO: 14에 제시된 바와 같은 GPRC5D-LCDR3을 포함한다.
본 개시의 GPRC5D 및 CD3에 특이적으로 결합하는 항원 결합 분자의 실시양태에 있어서:
(i) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 15에 제시된 GPRC5D-HCDR1, SEQ ID NO: 16에 제시된 GPRC5D-HCDR2 및 SEQ ID NO: 17에 제시된 GPRC5D-HCDR3을 포함하며, 및
상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 137, 18, 135, 136 또는 138에 제시된 GPRC5D-LCDR1, SEQ ID NO: 19에 제시된 GPRC5D-LCDR2 및 SEQ ID NO: 20에 제시된 GPRC5D-LCDR3을 포함하거나; 또는
(ii) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 9에 제시된 GPRC5D-HCDR1, SEQ ID NO: 134, 10 또는 133에 제시된 GPRC5D-HCDR2 및 SEQ ID NO: 11에 제시된 GPRC5D-HCDR3을 포함하며, 및
상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 130, 12, 129, 131 또는 132에 제시된 GPRC5D-LCDR1, SEQ ID NO: 13에 제시된 GPRC5D-LCDR2 및 SEQ ID NO: 14에 제시된 GPRC5D-LCDR3을 포함하거나; 또는
(iii) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 21에 제시된 GPRC5D-HCDR1, SEQ ID NO: 140, 22 또는 139에 제시된 GPRC5D-HCDR2 및 SEQ ID NO: 23에 제시된 GPRC5D-HCDR3을 포함하며, 및
상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 24에 제시된 GPRC5D-LCDR1, SEQ ID NO: 25에 제시된 GPRC5D-LCDR2 및 SEQ ID NO: 26에 제시된 GPRC5D-LCDR3을 포함하거나; 또는
(iv) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 27에 제시된 GPRC5D-HCDR1, SEQ ID NO: 28에 제시된 GPRC5D-HCDR2 및 SEQ ID NO: 29에 제시된 GPRC5D-HCDR3을 포함하며, 및
상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 144, 30, 141, 142 또는 143에 제시된 GPRC5D-LCDR1, SEQ ID NO: 31에 제시된 GPRC5D-LCDR2 및 SEQ ID NO: 32에 제시된 GPRC5D-LCDR3을 포함하며;
바람직하게는,
(i) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 15에 제시된 GPRC5D-HCDR1, SEQ ID NO: 16에 제시된 GPRC5D-HCDR2 및 SEQ ID NO: 17에 제시된 GPRC5D-HCDR3을 포함하며, 및
상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 137에 제시된 GPRC5D-LCDR1, SEQ ID NO: 19에 제시된 GPRC5D-LCDR2 및 SEQ ID NO: 20에 제시된 GPRC5D-LCDR3을 포함하거나; 또는
(ii) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 9에 제시된 GPRC5D-HCDR1, SEQ ID NO: 134에 제시된 GPRC5D-HCDR2 및 SEQ ID NO: 11에 제시된 GPRC5D-HCDR3을 포함하며, 및
상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 130에 제시된 GPRC5D-LCDR1, SEQ ID NO: 13에 제시된 GPRC5D-LCDR2 및 SEQ ID NO: 14에 제시된 GPRC5D-LCDR3을 포함한다.
일부 실시양태에서, 앞서 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항원 결합 분자에 있어서:
상기 GPRC5D-VH는 아미노산 서열이 SEQ ID NO: 15에 제시된 바와 같은 GPRC5D-HCDR1, 아미노산 서열이 SEQ ID NO: 16에 제시된 바와 같은 GPRC5D-HCDR2 및 아미노산 서열이 SEQ ID NO: 17에 제시된 바와 같은 GPRC5D-HCDR3을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 아미노산 서열이 SEQ ID NO: 137에 제시된 바와 같은 GPRC5D-LCDR1, 아미노산 서열이 SEQ ID NO: 19에 제시된 바와 같은 GPRC5D-LCDR2 및 아미노산 서열이 SEQ ID NO: 20에 제시된 바와 같은 GPRC5D-LCDR3을 포함한다.
일부 실시양태에서, 상기 GPRC5D-HCDR1, GPRC5D-HCDR2, GPRC5D-HCDR3, GPRC5D-LCDR1, GPRC5D-LCDR2 및 GPRC5D-LCDR3은 Kabat 넘버링 규칙에 따라 정의된다.
일부 실시양태에서, 앞서 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항원 결합 분자에 있어서:
(i) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 44, 3, 42 또는 43의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 49, 4, 45, 46, 47, 48 또는 50의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
(ii) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 35, 1, 33 또는 34의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 39, 2, 36, 37, 38, 40 또는 41의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
(iii) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 55, 5, 51, 52, 53 또는 54의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 56, 6 또는 57의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
(iv) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 67, 7, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66 또는 68의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 75, 8, 69, 70, 71, 72, 73 또는 74의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 앞서 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항원 결합 분자에 있어서:
(i) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 44의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 49의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 43의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 46의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 43의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 49의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 43의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 50의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 44의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 46의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 44의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 50의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 3의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 4의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
(ii) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 35의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 39의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 34의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 36의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 34의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 38의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 34의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 39의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 35의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 36의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 35의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 38의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 1의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 2의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
(iii) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 55의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 56의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 54의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 56의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 54의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 57의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 55의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 57의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 5의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 6의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
(iv) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 67의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 75의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 61의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 75의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 62의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 75의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 64의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 75의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 65의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 75의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 7의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 8의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 앞서 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항원 결합 분자에 있어서:
(i) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 44의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 49의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
(ii) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 35의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 39의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
(iii) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 55의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 56의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
(iv) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 67의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 75의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 앞서 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항원 결합 분자에 있어서:
(i) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 44의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 49의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
(ii) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 35의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 39의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 앞서 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항원 결합 분자에 있어서:
상기 GPRC5D-VH의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 35에 제시된 바와 같고, 상기 GPRC5D-VL의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 39에 제시된 바와 같다.
일부 실시양태에서, 앞서 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항원 결합 분자에 있어서:
상기 GPRC5D-VH의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 44에 제시된 바와 같고, 상기 GPRC5D-VL의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 49에 제시된 바와 같다.
본 개시의 GPRC5D 및 CD3에 특이적으로 결합하는 항원 결합 분자의 실시양태에 있어서, 상기 GPRC5D에 특이적으로 결합하는 항원 결합 모듈은 다음을 포함한다:
(i) SEQ ID NO: 44, 3, 42 또는 43에 제시된 GPRC5D-VH 및 SEQ ID NO: 49, 4, 45, 46, 47, 48 또는 50에 제시된 GPRC5D-VL; 또는
(ii) SEQ ID NO: 35, 1, 33 또는 34에 제시된 GPRC5D-VH 및 SEQ ID NO: 39, 2, 36, 37, 38, 40 또는 41에 제시된 GPRC5D-VL; 또는
(iii) SEQ ID NO: 55, 5, 51, 52, 53 또는 54에 제시된 GPRC5D-VH 및 SEQ ID NO: 56, 6 또는 57에 제시된 GPRC5D-VL; 또는
(iv) SEQ ID NO: 67, 7, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66 또는 68에 제시된 GPRC5D-VH 및 SEQ ID NO: 75, 8, 69, 70, 71, 72, 73 또는 74에 제시된 GPRC5D-VL;
바람직하게는,
(i) SEQ ID NO: 44에 제시된 GPRC5D-VH, 및 SEQ ID NO: 49에 제시된 GPRC5D-VL; 또는
SEQ ID NO: 43에 제시된 GPRC5D-VH, 및 SEQ ID NO: 46에 제시된 GPRC5D-VL; 또는
SEQ ID NO: 43에 제시된 GPRC5D-VH, 및 SEQ ID NO: 49에 제시된 GPRC5D-VL; 또는
SEQ ID NO: 43에 제시된 GPRC5D-VH, 및 SEQ ID NO: 50에 제시된 GPRC5D-VL; 또는
SEQ ID NO: 44에 제시된 GPRC5D-VH, 및 SEQ ID NO: 46에 제시된 GPRC5D-VL; 또는
SEQ ID NO: 44에 제시된 GPRC5D-VH, 및 SEQ ID NO: 50에 제시된 GPRC5D-VL; 또는
SEQ ID NO: 3에 제시된 GPRC5D-VH, 및 SEQ ID NO: 4에 제시된 GPRC5D-VL; 또는
(ii) SEQ ID NO: 35에 제시된 GPRC5D-VH, 및 SEQ ID NO: 39에 제시된 GPRC5D-VL; 또는
SEQ ID NO: 34에 제시된 GPRC5D-VH, 및 SEQ ID NO: 36에 제시된 GPRC5D-VL; 또는
SEQ ID NO: 34에 제시된 GPRC5D-VH, 및 SEQ ID NO: 38에 제시된 GPRC5D-VL; 또는
SEQ ID NO: 34에 제시된 GPRC5D-VH, 및 SEQ ID NO: 39에 제시된 GPRC5D-VL; 또는
SEQ ID NO: 35에 제시된 GPRC5D-VH, 및 SEQ ID NO: 36에 제시된 GPRC5D-VL; 또는
SEQ ID NO: 35에 제시된 GPRC5D-VH, 및 SEQ ID NO: 38에 제시된 GPRC5D-VL; 또는
SEQ ID NO: 1에 제시된 GPRC5D-VH, 및 SEQ ID NO: 2에 제시된 GPRC5D-VL; 또는
(iii) SEQ ID NO: 55에 제시된 GPRC5D-VH, 및 SEQ ID NO: 56에 제시된 GPRC5D-VL; 또는
SEQ ID NO: 54에 제시된 GPRC5D-VH, 및 SEQ ID NO: 56에 제시된 GPRC5D-VL; 또는
SEQ ID NO: 54에 제시된 GPRC5D-VH, 및 SEQ ID NO: 57에 제시된 GPRC5D-VL; 또는
SEQ ID NO: 55에 제시된 GPRC5D-VH, 및 SEQ ID NO: 57에 제시된 GPRC5D-VL; 또는
SEQ ID NO: 5에 제시된 GPRC5D-VH, 및 SEQ ID NO: 6에 제시된 GPRC5D-VL; 또는
(iv) SEQ ID NO: 67에 제시된 GPRC5D-VH, 및 SEQ ID NO: 75에 제시된 GPRC5D-VL; 또는
SEQ ID NO: 61에 제시된 GPRC5D-VH, 및 SEQ ID NO: 75에 제시된 GPRC5D-VL; 또는
SEQ ID NO: 62에 제시된 GPRC5D-VH, 및 SEQ ID NO: 75에 제시된 GPRC5D-VL; 또는
SEQ ID NO: 64에 제시된 GPRC5D-VH, 및 SEQ ID NO: 75에 제시된 GPRC5D-VL; 또는
SEQ ID NO: 65에 제시된 GPRC5D-VH, 및 SEQ ID NO: 75에 제시된 GPRC5D-VL; 또는
SEQ ID NO: 7에 제시된 GPRC5D-VH, 및 SEQ ID NO: 8에 제시된 GPRC5D-VL; 또는
보다 바람직하게는, 상기 GPRC5D에 특이적으로 결합하는 항원 결합 모듈은 다음을 포함한다:
(i) SEQ ID NO: 44에 제시된 GPRC5D-VH, 및 SEQ ID NO: 49에 제시된 GPRC5D-VL; 또는
(ii) SEQ ID NO: 35에 제시된 GPRC5D-VH, 및 SEQ ID NO: 39에 제시된 GPRC5D-VL.
일부 실시양태에서, 앞서 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항원 결합 분자에 있어서, 상기 항원 결합 분자는 Fc 영역을 추가로 포함하고, 상기 Fc 영역은 바람직하게는 IgG Fc 영역, 보다 바람직하게는 IgG1 Fc 영역이다. 일부 실시양태에서, 상기 Fc 영역은 야생형 Fc 영역과 비교하여 하나 이상의 아미노산 치환을 포함하고, 상기 아미노산 치환은 Fc 수용체에 대한 결합, 특히 Fcγ 수용체에 대한 결합을 감소시킬 수 있다. 일부 실시양태에서, 상기 Fc 영역은 Fcγ 수용체에 대한 Fc 영역의 결합을 감소시키는 하나 이상의 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 Fc 영역은 인간 IgG1 Fc 영역이고, 위치 234 및 235에 있는 아미노산 잔기는 EU 인덱스에 따라 넘버링된 A이다. 일부 실시양태에서, 상기 Fc 영역은 SEQ ID NO: 97의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 앞서 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항원 결합 분자에 있어서, 상기 항원 결합 분자는 Fc 영역을 포함하고, 상기 Fc 영역은 서로 결합 가능한 제1 서브유닛(Fc1) 및 제2 서브유닛(Fc2)을 포함하고, 상기 Fc1 및 Fc2는 각각 독립적으로 Fc 영역의 동종이량체화를 감소시키는 하나 이상의 아미노산 치환을 갖는다. 일부 실시양태에서, 상기 Fc1 및 Fc2는 각각 독립적으로 놉-인투-홀 기술에 따른 하나 이상의 아미노산 치환을 갖는다. 일부 실시양태에서, 상기 Fc1이 놉-인투-홀 기술에 따른 놉 구조를 갖고, 상기 Fc2가 놉-인투-홀 기술에 따른 홀 구조를 갖거나, 또는 상기 Fc1이 놉-인투-홀 기술에 따른 홀 구조를 갖고, 상기 Fc2가 놉-인투-홀 기술에 따른 놉 구조를 갖고; 바람직하게는, 상기 Fc1이 놉-인투-홀 기술에 따른 놉 구조를 갖고, 상기 Fc2가 놉-인투-홀 기술에 따른 홀 구조를 갖는다. 일부 실시양태에서, 상기 Fc1의 위치 366에 있는 아미노산이 EU 인덱스에 따라 넘버링된 W이고; 상기 Fc2의 위치 366에 있는 아미노산이 EU 인덱스에 따라 넘버링된 S이고, 위치 368에 있는 아미노산이 EU 인덱스에 따라 넘버링된 A이고, 위치 407에 있는 아미노산이 EU 인덱스에 따라 넘버링된 V이고; 그 반대의 경우도 마찬가지이다. 일부 실시양태에서, 상기 Fc1의 위치 354에 있는 아미노산이 EU 인덱스에 따라 넘버링된 C이고; 상기 Fc2의 위치 349에 있는 아미노산이 EU 인덱스에 따라 넘버링된 C이고; 그 반대의 경우도 마찬가지이다. 일부 실시양태에서, 상기 Fc1의 위치 354에 있는 아미노산이 EU 인덱스에 따라 넘버링된 C이고, 위치 366에 있는 아미노산이 EU 인덱스에 따라 넘버링된 W이고; 상기 Fc2의 위치 349에 있는 아미노산이 EU 인덱스에 따라 넘버링된 C이고, 위치 366에 있는 아미노산이 EU 인덱스에 따라 넘버링된 S이고, 위치 368에 있는 아미노산이 EU 인덱스에 따라 넘버링된 A이고; 위치 407에 있는 아미노산이 EU 인덱스에 따라 넘버링된 V이고; 그 반대의 경우도 마찬가지이다. 일부 실시양태에서, 상기 Fc1은 SEQ ID NO: 92의 아미노산 서열을 갖고, 상기 Fc2는 SEQ ID NO: 93의 아미노산 서열을 갖는다.
일부 실시양태에서, 앞서 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항원 결합 분자에 있어서, 상기 항원 결합 분자는 GPRC5D에 특이적으로 결합하는 한 개 또는 두 개의 항원 결합 모듈 및 CD3에 특이적으로 결합하는 한 개 또는 두 개의 항원 결합 모듈을 포함한다. 일부 실시양태에서, 앞서 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항원 결합 분자에 있어서, 상기 항원 결합 분자는 GPRC5D에 특이적으로 결합하는 하나의 항원 결합 모듈 및 CD3에 특이적으로 결합하는 하나의 항원 결합 모듈을 포함한다. 일부 실시양태에서, 앞서 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항원 결합 분자에 있어서, 상기 항원 결합 분자는 GPRC5D에 특이적으로 결합하는 두 개의 항원 결합 모듈 및 CD3에 특이적으로 결합하는 두 개의 항원 결합 모듈을 포함한다.
일부 실시양태에서, 앞서 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항원 결합 분자에 있어서, 상기 GPRC5D에 특이적으로 결합하는 항원 결합 모듈은 Fab이고; 상기 CD3에 특이적으로 결합하는 항원 결합 모듈은 대체된 Fab 또는 scFv이다. 일부 실시양태에서, 앞서 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항원 결합 분자에 있어서, 상기 GPRC5D에 특이적으로 결합하는 항원 결합 모듈은 Fab이고; 상기 CD3에 특이적으로 결합하는 항원 결합 모듈은 대체된 Fab이다. 일부 실시양태에서, 앞서 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항원 결합 분자에 있어서, 상기 GPRC5D에 특이적으로 결합하는 항원 결합 모듈은 Fab이고; 상기 CD3에 특이적으로 결합하는 항원 결합 모듈은 scFv이다. 일부 실시양태에서, 상기 대체된 Fab는 Fab의 원래 CH1 및 CL이 각각 Obscurin 사슬 및 Titin 사슬에 의해 대체되는 것이거나, 또는 Fab의 원래 CH1 및 CL이 각각 Titin 사슬 및 Obscurin 사슬에 의해 대체되는 것이다.
일부 실시양태에서, 앞서 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항원 결합 분자에 있어서, 상기 GPRC5D에 특이적으로 결합하는 항원 결합 모듈 또는 상기 CD3에 특이적으로 결합하는 항원 결합 모듈은 이량체를 형성할 수 있는 Titin 사슬 및 Obscurin 사슬을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 Titin 사슬은 SEQ ID NO: 145 내지 SEQ ID NO: 163으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 Obscurin 사슬은 SEQ ID NO: 164 내지 SEQ ID NO: 204로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 Titin 사슬은 SEQ ID NO: 163 또는 161의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 Obscurin 사슬은 SEQ ID NO: 198 또는 199의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 Titin 사슬은 SEQ ID NO: 163의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 Obscurin 사슬은 SEQ ID NO: 198의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 Titin 사슬은 SEQ ID NO: 161의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 Obscurin 사슬은 SEQ ID NO: 199의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 상기 항원 결합 분자는 GPRC5D에 특이적으로 결합하는 하나의 항원 결합 모듈 및 CD3에 특이적으로 결합하는 하나의 항원 결합 모듈을 포함하고, 상기 GPRC5D에 특이적으로 결합하는 항원 결합 모듈은 Fab이고; 상기 CD3에 특이적으로 결합하는 항원 결합 모듈은 이량체를 형성할 수 있는 Titin 사슬과 Obscurin 사슬을 포함하는 대체된 Fab이고, 바람직하게는, 상기 대체된 Fab는 Fab의 원래 CH1 및 CL이 각각 Obscurin 사슬 및 Titin 사슬에 의해 대체되는 것이거나, 또는 Fab의 원래 CH1 및 CL이 각각 Titin 사슬 및 Obscurin 사슬에 의해 대체되는 것이다.
일부 실시양태에서, 여기서 상기 GPRC5D에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 항원 결합 모듈 및 CD3에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 항원 결합 모듈은 CH1 또는 Obscurin 사슬의 C-말단을 통해 직접적으로 또는 링커를 통해 Fc1 또는 Fc2 서브유닛의 N-말단에 연결되고, 상기 Fc1 및 Fc2 서브유닛의 N-말단에서 이황화 결합을 통해 이종이량체를 결합한다.
일부 실시양태에서, 상기 항원 결합 분자는 식 (a)로 표시되는 구조를 갖는 하나의 제1 사슬, 식 (b)로 표시되는 구조를 갖는 하나의 제2 사슬, 식 (c)로 표시되는 구조를 갖는 하나의 제3 사슬 및 식 (d)로 표시되는 구조를 갖는 하나의 제4 사슬을 포함하며,
(a) [GPRC5D-VH]-[CH1]-[Fc1],
(b) [GPRC5D-VL]-CL,
(c) [CD3-VH]-[Obscurin 사슬]-[Fc2],
(d) [CD3-VL]-[Titin 사슬],
식 (a), (b), (c) 및 (d)로 표시되는 구조는 N 단으로부터 C 단까지 배열된다.
일부 실시양태에서, 앞서 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항원 결합 분자에 있어서, 제1 사슬의 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 35의 아미노산 서열을 포함하고; 제2 사슬의 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 39의 아미노산 서열을 포함하고; 제3 사슬의 상기 Obscurin 사슬은 SEQ ID NO: 198의 아미노산 서열을 포함하고; 제4 사슬의 상기 Titin 사슬은 SEQ ID NO: 163의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 상기 항원 결합 분자는 SEQ ID NO: 118의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제1 사슬, SEQ ID NO: 102의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제2 사슬, SEQ ID NO: 86의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제3 사슬 및 SEQ ID NO: 87의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제4 사슬을 갖는다.
일부 실시양태에서, 상기 항원 결합 분자는 식 (e)로 표시되는 구조를 갖는 하나의 제1 사슬, 식 (d)로 표시되는 구조를 갖는 하나의 제2 사슬, 식 (f)로 표시되는 구조를 갖는 하나의 제3 사슬 및 식 (b)로 표시되는 구조를 갖는 하나의 제4 사슬을 포함하며,
(e) [CD3-VH]-[Obscurin 사슬]-[Fc1],
(d) [CD3-VL]-[Titin 사슬],
(f) [GPRC5D-VH]-[CH1]-[Fc2],
(b) [GPRC5D-VL]-CL,
식 (e), (d), (f) 및 (b)로 표시되는 구조는 N 단으로부터 C 단까지 배열된다.
일부 실시양태에서, 앞서 기재된 바와 같은 항원 결합 분자에 있어서, 제1 사슬의 상기 Obscurin 사슬은 SEQ ID NO: 198의 아미노산 서열을 포함하고; 제2 사슬의 상기 Titin 사슬은 SEQ ID NO: 163의 아미노산 서열을 포함하고; 제3 사슬의 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 44의 아미노산 서열을 포함하고; 제4 사슬의 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 49의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 상기 항원 결합 분자는 SEQ ID NO: 89의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제1 사슬, SEQ ID NO: 87의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제2 사슬, SEQ ID NO: 121의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제3 사슬 및 SEQ ID NO: 106의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제4 사슬을 갖는다.
일부 실시양태에서, 상기 항원 결합 분자는 식 (a)로 표시되는 구조를 갖는 하나의 제1 사슬, 식 (b)로 표시되는 구조를 갖는 하나의 제2 사슬, 식 (g)로 표시되는 구조를 갖는 하나의 제3 사슬 및 식 (h)로 표시되는 구조를 갖는 하나의 제4 사슬을 포함하며,
(a) [GPRC5D-VH]-[CH1]-[Fc1],
(b) [GPRC5D-VL]-CL,
(g) [CD3-VH]-링커 1-[Obscurin 사슬]-[Fc2],
(h) [CD3-VL]-링커 2-[Titin 사슬],
식 (a), (b), (g) 및 (h)로 표시되는 구조는 N 단으로부터 C 단까지 배열되고, 상기 링커 1과 링커 2는 동일하거나 상이한 펩티드 링커이다.
일부 실시양태에서, 앞서 기재된 바와 같은 항원 결합 분자에 있어서, 제1 사슬의 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 35, 44, 55 또는 67의 아미노산 서열을 포함하고; 제2 사슬의 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 39, 49, 56 또는 75의 아미노산 서열을 포함하고; 제3 사슬의 상기 Obscurin 사슬은 SEQ ID NO: 199의 아미노산 서열을 포함하고; 제4 사슬의 상기 Titin 사슬은 SEQ ID NO: 161의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 링커 1 및/또는 링커 2는 (GGGGS)n의 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 n은 1~5이고; 바람직하게는, n은 1, 2 또는 3이고; 가장 바람직하게는, n은 1이다.
일부 실시양태에서, 앞서 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항원 결합 분자에 있어서, 제1 사슬의 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 35의 아미노산 서열을 포함하고; 제2 사슬의 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 39의 아미노산 서열을 포함하고; 제3 사슬의 상기 Obscurin 사슬은 SEQ ID NO: 199의 아미노산 서열을 포함하고; 제4 사슬의 상기 Titin 사슬은 SEQ ID NO: 161의 아미노산 서열을 포함하고; 링커 1 및 링커 2의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 90에 제시된 바와 같다. 일부 실시양태에서, 앞서 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항원 결합 분자에 있어서, 제1 사슬의 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 44의 아미노산 서열을 포함하고; 제2 사슬의 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 49의 아미노산 서열을 포함하고; 제3 사슬의 상기 Obscurin 사슬은 SEQ ID NO: 199의 아미노산 서열을 포함하고; 제4 사슬의 상기 Titin 사슬은 SEQ ID NO: 161의 아미노산 서열을 포함하고; 링커 1 및 링커 2의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 90에 제시된 바와 같다. 일부 실시양태에서, 앞서 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항원 결합 분자에 있어서, 제1 사슬의 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 55의 아미노산 서열을 포함하고; 제2 사슬의 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 56의 아미노산 서열을 포함하고; 제3 사슬의 상기 Obscurin 사슬은 SEQ ID NO: 199의 아미노산 서열을 포함하고; 제4 사슬의 상기 Titin 사슬은 SEQ ID NO: 161의 아미노산 서열을 포함하고; 링커 1 및 링커 2의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 90에 제시된 바와 같다. 일부 실시양태에서, 앞서 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항원 결합 분자에 있어서, 제1 사슬의 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 67의 아미노산 서열을 포함하고; 제2 사슬의 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 75의 아미노산 서열을 포함하고; 제3 사슬의 상기 Obscurin 사슬은 SEQ ID NO: 199의 아미노산 서열을 포함하고; 제4 사슬의 상기 Titin 사슬은 SEQ ID NO: 161의 아미노산 서열을 포함하고; 링커 1 및 링커 2의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 90에 제시된 바와 같다.
일부 실시양태에서, 상기 항원 결합 분자는 SEQ ID NO: 118의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제1 사슬, SEQ ID NO: 102의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제2 사슬, SEQ ID NO: 84의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제3 사슬 및 SEQ ID NO: 85의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제4 사슬을 갖거나; 또는
상기 항원 결합 분자는 SEQ ID NO: 120의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제1 사슬, SEQ ID NO: 106의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제2 사슬, SEQ ID NO: 84의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제3 사슬 및 SEQ ID NO: 85의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제4 사슬을 갖거나; 또는
상기 항원 결합 분자는 SEQ ID NO: 122의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제1 사슬, SEQ ID NO: 110의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제2 사슬, SEQ ID NO: 84의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제3 사슬 및 SEQ ID NO: 85의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제4 사슬을 갖거나; 또는
상기 항원 결합 분자는 SEQ ID NO: 124의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제1 사슬, SEQ ID NO: 117의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제2 사슬, SEQ ID NO: 84의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제3 사슬 및 SEQ ID NO: 85의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제4 사슬을 갖는다.
일부 실시양태에서, 상기 항원 결합 분자는 식 (i)로 표시되는 구조를 갖는 하나의 제1 사슬, 식 (j)로 표시되는 구조를 갖는 하나의 제2 사슬, 식 (f)로 표시되는 구조를 갖는 하나의 제3 사슬 및 식 (b)로 표시되는 구조를 갖는 하나의 제4 사슬을 포함하며,
(i) [CD3-VH]-링커 3-[Obscurin 사슬]-[Fc1],
(j) [CD3-VL]-링커 4-[Titin 사슬],
(f) [GPRC5D-VH]-[CH1]-[Fc2],
(b) [GPRC5D-VL]-CL,
식 (i), (j), (f) 및 (b)로 표시되는 구조는 N 단으로부터 C 단까지 배열되고, 상기 링커 3과 링커 4는 동일하거나 상이한 펩티드 링커이다.
일부 실시양태에서, 앞서 기재된 바와 같은 항원 결합 분자에 있어서, 제1 사슬의 상기 Obscurin 사슬은 SEQ ID NO: 199의 아미노산 서열을 포함하고; 제2 사슬의 상기 Titin 사슬은 SEQ ID NO: 161의 아미노산 서열을 포함하고; 제3 사슬의 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 35, 44, 55, 61, 62, 64, 65 또는 67의 아미노산 서열을 포함하고; 제4 사슬의 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 39, 49, 56 또는 75의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 링커 3 및/또는 링커 4는 (GGGGS)n의 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 n은 1~5이고; 바람직하게는, n은 1, 2 또는 3이고; 가장 바람직하게는, n은 1이다.
일부 실시양태에서, 앞서 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항원 결합 분자에 있어서, 제1 사슬의 상기 Obscurin 사슬은 SEQ ID NO: 199의 아미노산 서열을 포함하고; 제2 사슬의 상기 Titin 사슬은 SEQ ID NO: 161의 아미노산 서열을 포함하고; 제3 사슬의 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 35의 아미노산 서열을 포함하고; 제4 사슬의 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 39의 아미노산 서열을 포함하고; 링커 3 및 링커 4의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 90에 제시된 바와 같다. 일부 실시양태에서, 앞서 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항원 결합 분자에 있어서, 제1 사슬의 상기 Obscurin 사슬은 SEQ ID NO: 199의 아미노산 서열을 포함하고; 제2 사슬의 상기 Titin 사슬은 SEQ ID NO: 161의 아미노산 서열을 포함하고; 제3 사슬의 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 44의 아미노산 서열을 포함하고; 제4 사슬의 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 49의 아미노산 서열을 포함하고; 링커 3 및 링커 4의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 90에 제시된 바와 같다. 일부 실시양태에서, 앞서 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항원 결합 분자에 있어서, 제1 사슬의 상기 Obscurin 사슬은 SEQ ID NO: 199의 아미노산 서열을 포함하고; 제2 사슬의 상기 Titin 사슬은 SEQ ID NO: 161의 아미노산 서열을 포함하고; 제3 사슬의 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 55의 아미노산 서열을 포함하고; 제4 사슬의 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 56의 아미노산 서열을 포함하고; 링커 3 및 링커 4의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 90에 제시된 바와 같다. 일부 실시양태에서, 앞서 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항원 결합 분자에 있어서, 제1 사슬의 상기 Obscurin 사슬은 SEQ ID NO: 199의 아미노산 서열을 포함하고; 제2 사슬의 상기 Titin 사슬은 SEQ ID NO: 161의 아미노산 서열을 포함하고; 제3 사슬의 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 61, 62, 64, 65 또는 67의 아미노산 서열을 포함하고; 제4 사슬의 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 75의 아미노산 서열을 포함하고; 링커 3 및 링커 4의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 90에 제시된 바와 같다.
일부 실시양태에서, 상기 항원 결합 분자는 SEQ ID NO: 88의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제1 사슬, SEQ ID NO: 85의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제2 사슬, SEQ ID NO: 116의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제3 사슬 및 SEQ ID NO: 117의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제4 사슬을 갖거나; 또는
상기 항원 결합 분자는 SEQ ID NO: 88의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제1 사슬, SEQ ID NO: 85의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제2 사슬, SEQ ID NO: 121의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제3 사슬 및 SEQ ID NO: 106의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제4 사슬을 갖거나; 또는
상기 항원 결합 분자는 SEQ ID NO: 88의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제1 사슬, SEQ ID NO: 85의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제2 사슬, SEQ ID NO: 123의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제3 사슬 및 SEQ ID NO: 110의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제4 사슬을 갖거나; 또는
상기 항원 결합 분자는 SEQ ID NO: 88의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제1 사슬, SEQ ID NO: 85의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제2 사슬, SEQ ID NO: 119의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제3 사슬 및 SEQ ID NO: 102의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제4 사슬을 갖거나; 또는
상기 항원 결합 분자는 SEQ ID NO: 88의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제1 사슬, SEQ ID NO: 85의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제2 사슬, SEQ ID NO: 115의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제3 사슬 및 SEQ ID NO: 117의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제4 사슬을 갖거나; 또는
상기 항원 결합 분자는 SEQ ID NO: 88의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제1 사슬, SEQ ID NO: 85의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제2 사슬, SEQ ID NO: 112의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제3 사슬 및 SEQ ID NO: 117의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제4 사슬을 갖거나; 또는
상기 항원 결합 분자는 SEQ ID NO: 88의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제1 사슬, SEQ ID NO: 85의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제2 사슬, SEQ ID NO: 113의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제3 사슬 및 SEQ ID NO: 117의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제4 사슬을 갖거나; 또는
상기 항원 결합 분자는 SEQ ID NO: 88의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제1 사슬, SEQ ID NO: 85의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제2 사슬, SEQ ID NO: 114의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제3 사슬 및 SEQ ID NO: 117의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제4 사슬을 갖거나; 또는
상기 항원 결합 분자는 SEQ ID NO: 88의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제1 사슬, SEQ ID NO: 85의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제2 사슬, SEQ ID NO: 227의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제3 사슬 및 SEQ ID NO: 223의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제4 사슬을 갖는다.
일부 실시양태에서, 여기서 상기 항원 결합 분자는 GPRC5D에 특이적으로 결합하는 두 개의 항원 결합 모듈 및 CD3에 특이적으로 결합하는 두 개의 항원 결합 모듈을 포함하고, 상기 GPRC5D에 특이적으로 결합하는 항원 결합 모듈은 Fab이고; 상기 CD3에 특이적으로 결합하는 항원 결합 모듈은 scFv이다.
일부 실시양태에서, 상기 항원 결합 분자는 식 (k)로 표시되는 구조를 갖는 두 개의 제1 사슬 및 식 (b)로 표시되는 구조를 갖는 두 개의 제2 사슬을 포함하며,
(k) [GPRC5D-VH]-[CH1]-[CD3-VH]-링커 5-[CD3-VL]-링커 6-[Fc3],
(b) [GPRC5D-VL]-CL,
식 (k) 및 (b)로 표시되는 구조는 N 단으로부터 C 단까지 배열되고, 상기 링커 5와 링커 6은 동일하거나 상이한 펩티드 링커이다.
일부 실시양태에서, 앞서 기재된 바와 같은 항원 결합 분자에 있어서, 제1 사슬의 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 35, 34, 44, 43, 55 또는 54의 아미노산 서열을 포함하고; 제2 사슬의 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 39, 36, 38, 49, 46, 50, 56 또는 57의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 링커 5 및/또는 링커 6은 (GGGGS)n의 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 n은 1~5이고; 바람직하게는, n은 1, 2 또는 3이고; 가장 바람직하게는, n은 1 또는 3이다.
일부 실시양태에서, 앞서 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항원 결합 분자에 있어서, 제1 사슬의 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 35 또는 34의 아미노산 서열을 포함하고; 제2 사슬의 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 39, 36 또는 38의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 링커 5의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 94에 제시된 바와 같고; 링커 6의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 95에 제시된 바와 같다. 일부 실시양태에서, 앞서 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항원 결합 분자에 있어서, 제1 사슬의 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 44 또는 43의 아미노산 서열을 포함하고; 제2 사슬의 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 49, 46 또는 50의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 링커 5의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 94에 제시된 바와 같고; 링커 6의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 95에 제시된 바와 같다. 일부 실시양태에서, 앞서 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항원 결합 분자에 있어서, 제1 사슬의 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 55 또는 54의 아미노산 서열을 포함하고; 제2 사슬의 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 56 또는 57의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 링커 5의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 94에 제시된 바와 같고; 링커 6의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 95에 제시된 바와 같다.
일부 실시양태에서, 앞서 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항원 결합 분자에 있어서, 제1 사슬의 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 35의 아미노산 서열을 포함하고; 제2 사슬의 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 39의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 링커 5의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 94에 제시된 바와 같고; 링커 6의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 95에 제시된 바와 같다.
일부 실시양태에서, 앞서 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항원 결합 분자에 있어서, 제1 사슬의 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 44의 아미노산 서열을 포함하고; 제2 사슬의 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 49의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 링커 5의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 94에 제시된 바와 같고; 링커 6의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 95에 제시된 바와 같다.
일부 실시양태에서, 앞서 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항원 결합 분자에 있어서, 제1 사슬의 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 55의 아미노산 서열을 포함하고; 제2 사슬의 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 56의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 링커 5의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 94에 제시된 바와 같고; 링커 6의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 95에 제시된 바와 같다.
일부 실시양태에서, 상기 항원 결합 분자는 SEQ ID NO: 98의 아미노산 서열을 포함하는 두 개의 제1 사슬 및 SEQ ID NO: 100의 아미노산 서열을 포함하는 두 개의 제2 사슬을 갖거나; 또는
상기 항원 결합 분자는 SEQ ID NO: 98의 아미노산 서열을 포함하는 두 개의 제1 사슬 및 SEQ ID NO: 101의 아미노산 서열을 포함하는 두 개의 제2 사슬을 갖거나; 또는
상기 항원 결합 분자는 SEQ ID NO: 98의 아미노산 서열을 포함하는 두 개의 제1 사슬 및 SEQ ID NO: 102의 아미노산 서열을 포함하는 두 개의 제2 사슬을 갖거나; 또는
상기 항원 결합 분자는 SEQ ID NO: 99의 아미노산 서열을 포함하는 두 개의 제1 사슬 및 SEQ ID NO: 100의 아미노산 서열을 포함하는 두 개의 제2 사슬을 갖거나; 또는
상기 항원 결합 분자는 SEQ ID NO: 99의 아미노산 서열을 포함하는 두 개의 제1 사슬 및 SEQ ID NO: 101의 아미노산 서열을 포함하는 두 개의 제2 사슬을 갖거나; 또는
상기 항원 결합 분자는 SEQ ID NO: 99의 아미노산 서열을 포함하는 두 개의 제1 사슬 및 SEQ ID NO: 102의 아미노산 서열을 포함하는 두 개의 제2 사슬을 갖거나; 또는
상기 항원 결합 분자는 SEQ ID NO: 103의 아미노산 서열을 포함하는 두 개의 제1 사슬 및 SEQ ID NO: 105의 아미노산 서열을 포함하는 두 개의 제2 사슬을 갖거나; 또는
상기 항원 결합 분자는 SEQ ID NO: 103의 아미노산 서열을 포함하는 두 개의 제1 사슬 및 SEQ ID NO: 106의 아미노산 서열을 포함하는 두 개의 제2 사슬을 갖거나; 또는
상기 항원 결합 분자는 SEQ ID NO: 103의 아미노산 서열을 포함하는 두 개의 제1 사슬 및 SEQ ID NO: 107의 아미노산 서열을 포함하는 두 개의 제2 사슬을 갖거나; 또는
상기 항원 결합 분자는 SEQ ID NO: 104의 아미노산 서열을 포함하는 두 개의 제1 사슬 및 SEQ ID NO: 105의 아미노산 서열을 포함하는 두 개의 제2 사슬을 갖거나; 또는
상기 항원 결합 분자는 SEQ ID NO: 104의 아미노산 서열을 포함하는 두 개의 제1 사슬 및 SEQ ID NO: 106의 아미노산 서열을 포함하는 두 개의 제2 사슬을 갖거나; 또는
상기 항원 결합 분자는 SEQ ID NO: 104의 아미노산 서열을 포함하는 두 개의 제1 사슬 및 SEQ ID NO: 107의 아미노산 서열을 포함하는 두 개의 제2 사슬을 갖거나; 또는
상기 항원 결합 분자는 SEQ ID NO: 108의 아미노산 서열을 포함하는 두 개의 제1 사슬 및 SEQ ID NO: 110의 아미노산 서열을 포함하는 두 개의 제2 사슬을 갖거나; 또는
상기 항원 결합 분자는 SEQ ID NO: 109의 아미노산 서열을 포함하는 두 개의 제1 사슬 및 SEQ ID NO: 110의 아미노산 서열을 포함하는 두 개의 제2 사슬을 갖거나; 또는
상기 항원 결합 분자는 SEQ ID NO: 108의 아미노산 서열을 포함하는 두 개의 제1 사슬 및 SEQ ID NO: 111의 아미노산 서열을 포함하는 두 개의 제2 사슬을 갖거나; 또는
상기 항원 결합 분자는 SEQ ID NO: 109의 아미노산 서열을 포함하는 두 개의 제1 사슬 및 SEQ ID NO: 111의 아미노산 서열을 포함하는 두 개의 제2 사슬을 갖거나; 또는
상기 항원 결합 분자는 SEQ ID NO: 224의 아미노산 서열을 포함하는 두 개의 제1 사슬 및 SEQ ID NO: 217의 아미노산 서열을 포함하는 두 개의 제2 사슬을 갖거나; 또는
상기 항원 결합 분자는 SEQ ID NO: 225의 아미노산 서열을 포함하는 두 개의 제1 사슬 및 SEQ ID NO: 219의 아미노산 서열을 포함하는 두 개의 제2 사슬을 갖거나; 또는
상기 항원 결합 분자는 SEQ ID NO: 226의 아미노산 서열을 포함하는 두 개의 제1 사슬 및 SEQ ID NO: 221의 아미노산 서열을 포함하는 두 개의 제2 사슬을 갖는다.
다른 일 측면에서, 본 개시는 또한 GPRC5D에 특이적으로 결합할 수 있는 분리된 항체를 제공하고, 상기 분리된 항체는 중쇄 가변 영역 GPRC5D-VH 및 경쇄 가변 영역 GPRC5D-VL을 포함하며, 여기서
(i) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 15의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR1, SEQ ID NO: 16의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR2 및 SEQ ID NO: 17의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR3을 갖고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 137, 18, 135, 136 또는 138의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR1, SEQ ID NO: 19의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR2 및 SEQ ID NO: 20의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR3을 갖거나; 또는
(ii) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 9의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR1, SEQ ID NO: 134, 10 또는 133의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR2 및 SEQ ID NO: 11의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR3을 갖고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 130, 12, 129, 131 또는 132의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR1, SEQ ID NO: 13의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR2 및 SEQ ID NO: 14의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR3을 갖거나; 또는
(iii) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 21의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR1, SEQ ID NO: 140, 22 또는 139의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR2 및 SEQ ID NO: 23의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR3을 갖고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 24의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR1, SEQ ID NO: 25의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR2 및 SEQ ID NO: 26의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR3을 갖거나; 또는
(iv) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 27의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR1, SEQ ID NO: 28의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR2 및 SEQ ID NO: 29의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR3을 갖고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 144, 30, 141, 142 또는 143의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR1, SEQ ID NO: 31의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR2 및 SEQ ID NO: 32의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR3을 갖는다.
일부 실시양태에서, 상기 GPRC5D-HCDR1, GPRC5D-HCDR2, GPRC5D-HCDR3, GPRC5D-LCDR1, GPRC5D-LCDR2 및 GPRC5D-LCDR3은 Kabat, IMGT, Chothia, AbM 또는 Contact 넘버링 규칙에 따라 정의된다.
일부 실시양태에서, 앞서 기재된 바와 같은 분리된 항체에 있어서:
(i) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 15의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR1, SEQ ID NO: 16의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR2 및 SEQ ID NO: 17의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR3을 갖고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 137의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR1, SEQ ID NO: 19의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR2 및 SEQ ID NO: 20의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR3을 갖거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 15의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR1, SEQ ID NO: 16의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR2 및 SEQ ID NO: 17의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR3을 갖고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 18의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR1, SEQ ID NO: 19의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR2 및 SEQ ID NO: 20의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR3을 갖거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 15의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR1, SEQ ID NO: 16의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR2 및 SEQ ID NO: 17의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR3을 갖고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 138의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR1, SEQ ID NO: 19의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR2 및 SEQ ID NO: 20의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR3을 갖거나; 또는
(ii) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 9의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR1, SEQ ID NO: 134의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR2 및 SEQ ID NO: 11의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR3을 갖고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 130의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR1, SEQ ID NO: 13의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR2 및 SEQ ID NO: 14의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR3을 갖거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 9의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR1, SEQ ID NO: 134의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR2 및 SEQ ID NO: 11의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR3을 갖고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 12의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR1, SEQ ID NO: 13의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR2 및 SEQ ID NO: 14의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR3을 갖거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 9의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR1, SEQ ID NO: 134의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR2 및 SEQ ID NO: 11의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR3을 갖고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 129의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR1, SEQ ID NO: 13의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR2 및 SEQ ID NO: 14의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR3을 갖거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 9의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR1, SEQ ID NO: 133의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR2 및 SEQ ID NO: 11의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR3을 갖고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 130의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR1, SEQ ID NO: 13의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR2 및 SEQ ID NO: 14의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR3을 갖거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 9의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR1, SEQ ID NO: 133의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR2 및 SEQ ID NO: 11의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR3을 갖고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 12의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR1, SEQ ID NO: 13의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR2 및 SEQ ID NO: 14의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR3을 갖거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 9의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR1, SEQ ID NO: 133의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR2 및 SEQ ID NO: 11의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR3을 갖고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 129의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR1, SEQ ID NO: 13의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR2 및 SEQ ID NO: 14의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR3을 갖거나; 또는
(iii) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 21의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR1, SEQ ID NO: 140의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR2 및 SEQ ID NO: 23의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR3을 갖고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 24의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR1, SEQ ID NO: 25의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR2 및 SEQ ID NO: 26의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR3을 갖거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 21의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR1, SEQ ID NO: 139의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR2 및 SEQ ID NO: 23의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR3을 갖고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 24의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR1, SEQ ID NO: 25의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR2 및 SEQ ID NO: 26의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR3을 갖거나; 또는
(iv) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 27의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR1, SEQ ID NO: 28의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR2 및 SEQ ID NO: 29의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR3을 갖고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 144의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR1, SEQ ID NO: 31의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR2 및 SEQ ID NO: 32의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR3을 갖는다.
일부 실시양태에서, 앞서 기재된 바와 같은 분리된 항체에 있어서:
(i) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 15의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR1, SEQ ID NO: 16의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR2 및 SEQ ID NO: 17의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR3을 갖고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 137의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR1, SEQ ID NO: 19의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR2 및 SEQ ID NO: 20의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR3을 갖거나; 또는
(ii) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 9의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR1, SEQ ID NO: 134의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR2 및 SEQ ID NO: 11의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR3을 갖고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 130의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR1, SEQ ID NO: 13의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR2 및 SEQ ID NO: 14의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR3을 갖는다.
일부 실시양태에서, GPRC5D에 특이적으로 결합할 수 있는 분리된 항체를 제공하고, 상기 항체는 중쇄 가변 영역 GPRC5D-VH 및 경쇄 가변 영역 GPRC5D-VL을 포함하며, 여기서:
(i) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 15에 제시된 GPRC5D-HCDR1, SEQ ID NO: 16에 제시된 GPRC5D-HCDR2 및 SEQ ID NO: 17에 제시된 GPRC5D-HCDR3을 포함하며, 및
상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 137, 18, 135, 136 또는 138에 제시된 GPRC5D-LCDR1, SEQ ID NO: 19에 제시된 GPRC5D-LCDR2 및 SEQ ID NO: 20에 제시된 GPRC5D-LCDR3을 포함하거나; 또는
(ii) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 9에 제시된 GPRC5D-HCDR1, SEQ ID NO: 134, 10 또는 133에 제시된 GPRC5D-HCDR2 및 SEQ ID NO: 11에 제시된 GPRC5D-HCDR3을 포함하며, 및
상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 130, 12, 129, 131 또는 132에 제시된 GPRC5D-LCDR1, SEQ ID NO: 13에 제시된 GPRC5D-LCDR2 및 SEQ ID NO: 14에 제시된 GPRC5D-LCDR3을 포함하거나; 또는
(iii) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 21에 제시된 GPRC5D-HCDR1, SEQ ID NO: 140, 22 또는 139에 제시된 GPRC5D-HCDR2 및 SEQ ID NO: 23에 제시된 GPRC5D-HCDR3을 포함하며, 및
상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 24에 제시된 GPRC5D-LCDR1, SEQ ID NO: 25에 제시된 GPRC5D-LCDR2 및 SEQ ID NO: 26에 제시된 GPRC5D-LCDR3을 포함하거나; 또는
(iv) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 27에 제시된 GPRC5D-HCDR1, SEQ ID NO: 28에 제시된 GPRC5D-HCDR2 및 SEQ ID NO: 29에 제시된 GPRC5D-HCDR3을 포함하며, 및
상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 144, 30, 141, 142 또는 143에 제시된 GPRC5D-LCDR1, SEQ ID NO: 31에 제시된 GPRC5D-LCDR2 및 SEQ ID NO: 32에 제시된 GPRC5D-LCDR3을 포함하며;
바람직하게는,
(i) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 15에 제시된 GPRC5D-HCDR1, SEQ ID NO: 16에 제시된 GPRC5D-HCDR2 및 SEQ ID NO: 17에 제시된 GPRC5D-HCDR3을 포함하며,
상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 137에 제시된 GPRC5D-LCDR1, SEQ ID NO: 19에 제시된 GPRC5D-LCDR2 및 SEQ ID NO: 20에 제시된 GPRC5D-LCDR3을 포함하거나; 또는
(ii) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 9에 제시된 GPRC5D-HCDR1, SEQ ID NO: 134에 제시된 GPRC5D-HCDR2 및 SEQ ID NO: 11에 제시된 GPRC5D-HCDR3을 포함하며,
상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 130에 제시된 GPRC5D-LCDR1, SEQ ID NO: 13에 제시된 GPRC5D-LCDR2 및 SEQ ID NO: 14에 제시된 GPRC5D-LCDR3을 포함한다.
일부 실시양태에서, 앞서 기재된 바와 같은 분리된 항체에 있어서:
상기 GPRC5D-VH는 아미노산 서열이 SEQ ID NO: 9에 제시된 바와 같은 GPRC5D-HCDR1, 아미노산 서열이 SEQ ID NO: 134에 제시된 바와 같은 GPRC5D-HCDR2 및 아미노산 서열이 SEQ ID NO: 11에 제시된 바와 같은 GPRC5D-HCDR3을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 아미노산 서열이 SEQ ID NO: 130에 제시된 바와 같은 GPRC5D-LCDR1, 아미노산 서열이 SEQ ID NO: 13에 제시된 바와 같은 GPRC5D-LCDR2 및 아미노산 서열이 SEQ ID NO: 14에 제시된 바와 같은 GPRC5D-LCDR3을 포함한다. 일부 실시양태에서, 앞서 기재된 바와 같은 분리된 항체에 있어서:
상기 GPRC5D-VH는 아미노산 서열이 SEQ ID NO: 15에 제시된 바와 같은 GPRC5D-HCDR1, 아미노산 서열이 SEQ ID NO: 16에 제시된 바와 같은 GPRC5D-HCDR2 및 아미노산 서열이 SEQ ID NO: 17에 제시된 바와 같은 GPRC5D-HCDR3을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 아미노산 서열이 SEQ ID NO: 137에 제시된 바와 같은 GPRC5D-LCDR1, 아미노산 서열이 SEQ ID NO: 19에 제시된 바와 같은 GPRC5D-LCDR2 및 아미노산 서열이 SEQ ID NO: 20에 제시된 바와 같은 GPRC5D-LCDR3을 포함한다.
일부 실시양태에서, 상기 GPRC5D-HCDR1, GPRC5D-HCDR2, GPRC5D-HCDR3, GPRC5D-LCDR1, GPRC5D-LCDR2 및 GPRC5D-LCDR3은 Kabat 넘버링 규칙에 따라 정의된다.
일부 실시양태에서, 앞서 기재된 바와 같은 분리된 항체에 있어서:
(i) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 44, 3, 42 또는 43의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 49, 4, 45, 46, 47, 48 또는 50의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
(ii) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 35, 1, 33 또는 34의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 39, 2, 36, 37, 38, 40 또는 41의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
(iii) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 55, 5, 51, 52, 53 또는 54의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 56, 6 또는 57의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
(iv) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 67, 7, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66 또는 68의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 75, 8, 69, 70, 71, 72, 73 또는 74의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 앞서 기재된 바와 같은 분리된 항체에 있어서:
(i) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 44의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 49의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 43의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 46의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 43의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 49의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 43의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 50의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 44의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 46의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 44의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 50의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 3의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 4의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
(ii) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 35의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 39의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 34의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 36의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 34의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 38의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 34의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 39의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 35의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 36의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 35의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 38의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 1의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 2의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
(iii) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 55의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 56의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 54의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 56의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 54의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 57의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 55의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 57의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 5의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 6의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
(iv) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 67의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 75의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 61의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 75의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 62의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 75의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 64의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 75의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 65의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 75의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 7의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 8의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 앞서 기재된 바와 같은 분리된 항체에 있어서:
(i) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 44의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 49의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
(ii) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 35의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 39의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
(iii) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 55의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 56의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
(iv) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 67의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 75의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 앞서 기재된 바와 같은 분리된 항체에 있어서:
(i) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 44의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 49의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
(ii) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 35의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 39의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 앞서 기재된 바와 같은 분리된 항체에 있어서:
상기 GPRC5D-VH의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 35에 제시된 바와 같고, 상기 GPRC5D-VL의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 39에 제시된 바와 같다.
일부 실시양태에서, 앞서 기재된 바와 같은 분리된 항체에 있어서:
상기 GPRC5D-VH의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 44에 제시된 바와 같고, 상기 GPRC5D-VL의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 49에 제시된 바와 같다.
일부 실시양태에서, 상기 분리된 항체는 다음을 포함한다:
(i) SEQ ID NO: 44, 3, 42 또는 43에 제시된 GPRC5D-VH 및 SEQ ID NO: 49, 4, 45, 46, 47, 48 또는 50에 제시된 GPRC5D-VL; 또는
(ii) SEQ ID NO: 35, 1, 33 또는 34에 제시된 GPRC5D-VH 및 SEQ ID NO: 39, 2, 36, 37, 38, 40 또는 41에 제시된 GPRC5D-VL; 또는
(iii) SEQ ID NO: 55, 5, 51, 52, 53 또는 54에 제시된 GPRC5D-VH 및 SEQ ID NO: 56, 6 또는 57에 제시된 GPRC5D-VL; 또는
(iv) SEQ ID NO: 67, 7, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66 또는 68에 제시된 GPRC5D-VH 및 SEQ ID NO: 75, 8, 69, 70, 71, 72, 73 또는 74에 제시된 GPRC5D-VL;
바람직하게는, 상기 항체는 다음을 포함한다:
(i) SEQ ID NO: 44에 제시된 GPRC5D-VH, 및 SEQ ID NO: 49에 제시된 GPRC5D-VL, 또는
SEQ ID NO: 43에 제시된 GPRC5D-VH, 및 SEQ ID NO: 46에 제시된 GPRC5D-VL, 또는
SEQ ID NO: 43에 제시된 GPRC5D-VH, 및 SEQ ID NO: 49에 제시된 GPRC5D-VL, 또는
SEQ ID NO: 43에 제시된 GPRC5D-VH, 및 SEQ ID NO: 50에 제시된 GPRC5D-VL, 또는
SEQ ID NO: 44에 제시된 GPRC5D-VH, 및 SEQ ID NO: 46에 제시된 GPRC5D-VL, 또는
SEQ ID NO: 44에 제시된 GPRC5D-VH, 및 SEQ ID NO: 50에 제시된 GPRC5D-VL; 또는
SEQ ID NO: 3에 제시된 GPRC5D-VH, 및 SEQ ID NO: 4에 제시된 GPRC5D-VL; 또는
(ii) SEQ ID NO: 35에 제시된 GPRC5D-VH, 및 SEQ ID NO: 39에 제시된 GPRC5D-VL; 또는
SEQ ID NO: 34에 제시된 GPRC5D-VH, 및 SEQ ID NO: 36에 제시된 GPRC5D-VL, 또는
SEQ ID NO: 34에 제시된 GPRC5D-VH, 및 SEQ ID NO: 38에 제시된 GPRC5D-VL, 또는
SEQ ID NO: 34에 제시된 GPRC5D-VH, 및 SEQ ID NO: 39에 제시된 GPRC5D-VL, 또는
SEQ ID NO: 35에 제시된 GPRC5D-VH, 및 SEQ ID NO: 36에 제시된 GPRC5D-VL, 또는
SEQ ID NO: 35에 제시된 GPRC5D-VH, 및 SEQ ID NO: 38에 제시된 GPRC5D-VL, 또는
SEQ ID NO: 1에 제시된 GPRC5D-VH, 및 SEQ ID NO: 2에 제시된 GPRC5D-VL; 또는
(iii) SEQ ID NO: 55에 제시된 GPRC5D-VH, 및 SEQ ID NO: 56에 제시된 GPRC5D-VL, 또는
SEQ ID NO: 54에 제시된 GPRC5D-VH, 및 SEQ ID NO: 56에 제시된 GPRC5D-VL, 또는
SEQ ID NO: 54에 제시된 GPRC5D-VH, 및 SEQ ID NO: 57에 제시된 GPRC5D-VL, 또는
SEQ ID NO: 55에 제시된 GPRC5D-VH, 및 SEQ ID NO: 57에 제시된 GPRC5D-VL; 또는
SEQ ID NO: 5에 제시된 GPRC5D-VH, 및 SEQ ID NO: 6에 제시된 GPRC5D-VL; 또는
(iv) SEQ ID NO: 67에 제시된 GPRC5D-VH, 및 SEQ ID NO: 75에 제시된 GPRC5D-VL, 또는
SEQ ID NO: 61에 제시된 GPRC5D-VH, 및 SEQ ID NO: 75에 제시된 GPRC5D-VL, 또는
SEQ ID NO: 62에 제시된 GPRC5D-VH, 및 SEQ ID NO: 75에 제시된 GPRC5D-VL, 또는
SEQ ID NO: 64에 제시된 GPRC5D-VH, 및 SEQ ID NO: 75에 제시된 GPRC5D-VL, 또는
SEQ ID NO: 65에 제시된 GPRC5D-VH, 및 SEQ ID NO: 75에 제시된 GPRC5D-VL; 또는
SEQ ID NO: 7에 제시된 GPRC5D-VH, 및 SEQ ID NO: 8에 제시된 GPRC5D-VL; 또는
보다 바람직하게는, 상기 항체는 다음을 포함한다:
(i) SEQ ID NO: 44에 제시된 GPRC5D-VH, 및 SEQ ID NO: 49에 제시된 GPRC5D-VL, 또는
(ii) SEQ ID NO: 35에 제시된 GPRC5D-VH, 및 SEQ ID NO: 39에 제시된 GPRC5D-VL.
일부 실시양태에서, 전술한 어느 한 항에 기재된 항원 결합 분자 또는 전술한 어느 한 항에 기재된 분리된 항체는 이중특이성 항체이다.
일부 실시양태에서, 상기 이중특이성 항체는 GPRC5D 및 CD3에 특이적으로 결합한다.
일부 실시양태에서, 전술한 어느 한 항에 기재된 항원 결합 분자 또는 전술한 어느 한 항에 기재된 분리된 항체에 있어서, 상기 항원 결합 분자 또는 항체는 E2 펩티드, E3 펩티드 및 E4 펩티드에 결합하지 않고, 여기서 상기 E2 펩티드는 SEQ ID NO: 206의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 E3 펩티드는 SEQ ID NO: 207의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 E4 펩티드는 SEQ ID NO: 208의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 전술한 어느 한 항에 기재된 항원 결합 분자 또는 전술한 어느 한 항에 기재된 분리된 항체는 인간 GPRC5D의 아미노 말단 영역에 결합하고, 여기서 상기 인간 GPRC5D의 아미노 말단 영역은 SEQ ID NO: 205의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 전술한 어느 한 항에 기재된 항원 결합 분자 또는 전술한 어느 한 항에 기재된 분리된 항체에 있어서, 상기 항원 결합 분자 또는 항체는 E2 펩티드, E3 펩티드 및 E4 펩티드에 결합하지 않고, 인간 GPRC5D의 아미노 말단 영역에 결합하고, 여기서 상기 E2 펩티드는 SEQ ID NO: 206의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 E3 펩티드는 SEQ ID NO: 207의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 E4 펩티드는 SEQ ID NO: 208의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 아미노 말단 영역은 SEQ ID NO: 205의 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 전술한 어느 한 항에 기재된 항원 결합 분자 또는 전술한 어느 한 항에 기재된 분리된 항체에 있어서, 상기 항원 결합 분자 또는 항체는 E2 펩티드, E3 펩티드 및 E4 펩티드에 결합하지 않고, 인간 GPRC5D의 아미노 말단 영역에 결합하고, 여기서 상기 E2 펩티드의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 206에 제시된 바와 같고, 상기 E3 펩티드의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 207에 제시된 바와 같고, 상기 E4 펩티드의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 208에 제시된 바와 같고, 상기 아미노 말단 영역의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 205에 제시된 바와 같다.
일부 실시양태에서, 본 개시는 치료 유효량의 전술한 어느 한 항에 기재된 항원 결합 분자 또는 전술한 어느 한 항에 기재된 분리된 항체, 및 하나 이상의 약학적으로 허용 가능한 담체, 희석제, 완충제 또는 부형제를 함유하는 약학적 조성물을 제공한다. 일부 실시양태에서, 상기 약학적 조성물은 또한 적어도 하나의 제2 치료제를 포함한다.
다른 일 측면에서, 본 개시는 또한 전술한 어느 한 항에 기재된 항원 결합 분자 또는 전술한 어느 한 항에 기재된 분리된 항체를 코딩하는 분리된 핵산을 제공한다.
다른 일 측면에서, 본 개시는 또한 전술한 핵산을 포함하는 숙주 세포를 제공한다.
다른 일 측면에서, 본 개시는 또한 질환을 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 치료 유효량의 전술한 어느 한 항에 기재된 항원 결합 분자 또는 전술한 어느 한 항에 기재된 분리된 항체 또는 이의 조성물을 피험자에게 투여하는 단계를 포함한다.
다른 일 측면에서, 본 개시는 또한 질환을 치료하는 약물의 제조에 있어서 전술한 어느 한 항에 기재된 항원 결합 분자 또는 전술한 어느 한 항에 기재된 분리된 항체 또는 이의 조성물의 용도를 제공한다.
다른 일 측면에서, 본 개시는 또한 약물로서 사용되는 전술한 어느 한 항에 기재된 항원 결합 분자 또는 전술한 어느 한 항에 기재된 분리된 항체 또는 이의 조성물을 제공한다. 일부 실시양태에서, 상기 약물은 질환을 치료 또는 예방하는 데 사용된다.
일부 실시양태에서, 앞서 어느 한 항에 기재된 바와 같은 질환은 증식성 질환(종양, 암 포함) 또는 자가면역 질환이다.
일부 실시양태에서, 앞서 어느 한 항에 기재된 바와 같은 질환은 혈액 악성 종양 또는 고형 종양이다. 일부 실시양태에서, 상기 혈액 악성 종양은 다발성 골수종, 재발성/불응성 다발성 골수종, 무증상 다발성 골수종, 단클론성 감마병증(MGUS)(예를 들어, 진단적 의의가 명확하지 않은 단클론성 감마병증), 급성 림프모구 백혈병(ALL), 미만성 거대 B 세포 림프종(DLBCL), 버킷 림프종(BL), 여포성 림프종(FL), 외투세포 림프종(MCL), 발덴스트롬 거대글로불린혈증, 형질세포 백혈병, 경쇄 아밀로이드증(AL), 전구체 B 세포 림프모구 백혈병, 급성 골수성 백혈병(AML), 골수이형성증후군(MDS), 만성 림프구성 백혈병(CLL), B 세포 악성 종양, 만성 골수성 백혈병(CML), 털세포 백혈병(HCL), 모세포 형질세포양 수지상 세포 종양, 호지킨 림프종, 비호지킨 림프종, 변연부 B 세포 림프종(MZBL), 점막 관련 림프조직 림프종(MALT), 형질세포 백혈병 또는 역형성 대세포 림프종(ALCL)이다. 일부 실시양태에서, 상기 고형 종양은 난소암, 폐암(비소세포폐암 및 소세포폐암), 위암, 전립선암, 신장암, 간암, 결장직장암(예컨대, 결장암 및 직장암), 식관암(식도암), 방광암, 자궁경부암 또는 흑색종이다.
일부 실시양태에서, 상기 질환은 다발성 골수종, 재발성/불응성 다발성 골수종, 무증상 다발성 골수종, 단클론성 감마병증(MGUS)(예를 들어, 진단적 의의가 명확하지 않은 단클론성 감마병증), 급성 림프모구 백혈병(ALL), 미만성 거대 B 세포 림프종(DLBCL), 버킷 림프종(BL), 여포성 림프종(FL), 외투세포 림프종(MCL), 발덴스트롬 거대글로불린혈증, 형질세포 백혈병, 경쇄 아밀로이드증(AL), 전구체 B 세포 림프모구 백혈병, 급성 골수성 백혈병(AML), 골수이형성증후군(MDS), 만성 림프구성 백혈병(CLL), B 세포 악성 종양, 만성 골수성 백혈병(CML), 털세포 백혈병(HCL), 모세포 형질세포양 수지상 세포 종양, 호지킨 림프종, 비호지킨 림프종, 변연부 B 세포 림프종(MZBL), 점막 관련 림프조직 림프종(MALT), 형질세포 백혈병, 역형성 대세포 림프종(ALCL), 난소암, 폐암, 위암, 전립선암, 신장암, 간암, 결장직장암, 식관암, 방광암, 자궁경부암 또는 흑색종이다.
일부 실시양태에서, 상기 질환은 다발성 골수종이다.
일부 실시양태에서, 상기 질환은 재발성/불응성 다발성 골수종이다.
일부 실시양태에서, 전술한 질환은 GPRC5D와 관련된 질환이고; 일부 실시양태에서, 전술한 질환은 GPRC5D를 발현하는 질환이다.
본 개시에서 제공되는 항원 결합 분자는 높은 친화력, 체외 사멸 활성, 치료 활성 및 안전성의 특징을 갖는다.
도 1A는 식 2의 구조적 개략도를 나타내며;
도 1B는 식 2-0G4S의 구조적 개략도를 나타내며;
도 1C는 식 4의 구조적 개략도를 나타내며;
도 1D는 식 4-0G4S의 구조적 개략도를 나타내며;
도 1E는 식 11의 구조적 개략도를 나타내며;
도 2는 항체 F2-1의 NCIH929 피하 이식 종양 모델에서의 약효를 나타낸다.
도 1B는 식 2-0G4S의 구조적 개략도를 나타내며;
도 1C는 식 4의 구조적 개략도를 나타내며;
도 1D는 식 4-0G4S의 구조적 개략도를 나타내며;
도 1E는 식 11의 구조적 개략도를 나타내며;
도 2는 항체 F2-1의 NCIH929 피하 이식 종양 모델에서의 약효를 나타낸다.
용어
본원에서 사용되는 용어는 단지 실시양태를 설명하기 위한 목적일 뿐, 한정하려는 것은 아니다. 별도로 정의하지 않는 한, 본원에 사용되는 모든 기술적 및 과학적 용어는 본 개시가 속하는 분야의 당업자가 통상적으로 이해하는 것과 동일한 의미를 갖는다.
문맥에서 별도로 명확히 요구하지 않는 한, 명세서 및 청구범위 전반에서 "포함하다", "갖다", "함유하는" 등의 단어는 배타적이거나 철저한 의미가 아니라 포괄적인 의미를 가지며, 즉 "포함하나 이에 한정되지 않는다"는 의미로 이해해야 한다. 별도로 설명하지 않는 한, "포함하다"는 "...으로 이루어지다"가 포함된다. 예를 들어, SEQ ID NO: 1의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR1의 경우, 아미노산 서열이 SEQ ID NO: 1에 제시된 바와 같은 GPRC5D-HCDR1을 명확하게 망라한다.
본 개시에서 사용되는 아미노산 세글자 코드와 한글자 코드는 J.biol.chem, 243, p3558(1968)에 기재된 바와 같다.
"X 및/또는 Y"와 같은 용어 "및/또는"은 "X 및 Y" 또는 "X 또는 Y"를 의미하는 것으로 이해되어야 하며 두 가지 또는 임의의 하나의 의미에 대한 명확한 지원을 제공하는 데 사용되어야 한다.
용어 "아미노산"은 천연적으로 존재하는 아미노산과 합성된 아미노산뿐만 아니라 천연적으로 존재하는 아미노산과 유사한 방식으로 기능하는 아미노산 유사체 및 아미노산 모사체를 가리킨다. 천연적으로 존재하는 아미노산은 유전자 코드에 의해 코딩되는 아미노산일 뿐만 아니라 히드록시프롤린, γ-카르복시글루탐산 및 O-포스포세린과 같이 나중에 변형된 아미노산이다. 아미노산 유사체는 호모세린, 노르루신, 메티오닌 설폭시드, 메티오닌 메틸설포늄과 같이 천연적으로 존재하는 아미노산과 동일한 기본 화학 구조(즉, 수소, 카르복실, 아미노 및 R 그룹에 결합된 α 탄소)를 갖는 화합물을 가리킨다. 이와 같은 유사체는 변형된 R 그룹(예를 들어, 노르루신) 또는 변형된 펩티드 백본을 갖지만 천연적으로 존재하는 아미노산과 동일한 기본 화학 구조를 유지한다. 아미노산 모사체는 아미노산의 일반적인 화학 구조와는 다른 구조를 갖지만 천연적으로 존재하는 아미노산과 유사한 방식으로 기능하는 화합물을 가리킨다.
용어 "아미노산 돌연변이"는 아미노산 치환, 결실, 삽입 및 변형을 포함한다. 최종 작제물이 Fc 수용체에 대한 결합을 감소하는 것과 같은 원하는 특성을 보유하는 한, 치환, 결실, 삽입 및 변형의 임의의 조합을 통해 최종 작제물을 구현할 수 있다. 아미노산 서열의 결실 및 삽입은 폴리펩티드 사슬의 아미노단 및/또는 카르복실 단에서의 결실 및 삽입을 포함한다. 특정 아미노산 돌연변이는 아미노산 치환일 수 있다. 일 실시양태에서, 아미노산 돌연변이는 비보존적인 아미노산 치환, 즉 하나의 아미노산이 구조적 및/또는 화학적 특성이 상이한 또 다른 하나의 아미노산으로 대체되는 것이다. 아미노산 치환은 비천연적으로 존재하는 아미노산 또는 20가지 천연 아미노산의 유도체(예를 들어, 4-히드록시프롤린, 3-메틸히스티딘, 오르니틴, 호모세린, 5-히드록시라이신)에 의한 대체를 포함한다. 아미노산 돌연변이는 당업계에서 공지된 유전적 또는 화학적 방법을 사용하여 생성될 수 있다. 유전적 방법에는 위치 지정 돌연변이(site-directed mutagenesi), PCR, 유전자 합성 등이 포함될 수 있다. 아미노산 측쇄 그룹을 변경시키는 방법은 유전자 공학 이외에도 화학적 변형과 같은 방법을 이용할 수 있는 것으로 예상된다. 본원에서는 다양한 명칭을 사용하여 동일한 아미노산 돌연변이를 지칭할 수 있다. 본원에서, 특정 위치의 아미노산 잔기는 366W와 같이, 위치+아미노산 잔기로 표시할 수 있는데, 이는 366 부위에 있는 아미노산 잔기가 W임을 나타낸다. T366W는 366번째 부위에 있는 아미노산 잔기가 원래의 T에서 W로 돌연변이되었음을 나타낸다.
용어 "항원 결합 분자"는 가장 넓은 의미로 사용되며, 원하는 항원 결합 활성을 나타내기만 하면 항원에 특이적으로 결합하는 다양한 분자를 망라하며, 항체, 항원 결합 활성을 갖는 기타 폴리펩티드 및 둘의 융합에 의해 형성된 항체 융합 단백질이 포함되나 이에 한정되지 않는다. 본원의 항원 결합 분자는 가변 영역(VH) 및 가변 영역(VL)을 포함하며, 이들은 함께 항원 결합 도메인을 구성한다. 예시적으로, 본원의 항원 결합 분자는 이중특이성 항원 결합 분자(예를 들어: 이중특이성 항체)이다.
용어 "항체"는 가장 넓은 의미로 사용되고, 원하는 항원 결합 활성을 나타내기만 하면 단클론 항체, 다클론 항체, 단일특이성 항체, 다중특이성 항체(예를 들어, 이중특이성 항체), 전장 항체 및 항체 단편(또는 항원 결합 단편 또는 항원 결합 모이어티)이 포함되나 이에 한정되지 않는다. 예를 들어, 천연 IgG 항체는 이황화 결합에 의해 결합된 두 개의 동일한 경쇄와 두 개의 동일한 중쇄로 구성된 약 150,000 달톤의 이종사량체 당단백질이다. N 단으로부터 C 단까지, 각 중쇄는 가변 중쇄 도메인, 중쇄 가변 영역이라고도 하는 가변 영역(VH) 하나를 가지며, 이어서 세 개의 불변 영역(CH1, CH2 및 CH3)이 있다. 이와 유사하게, N 단으로부터 C 단까지, 각 경쇄는 가변 경쇄 도메인 또는 경쇄 가변 도메인이라고도 하는 가변 영역(VL) 하나를 가지며, 이어서 불변 경쇄 도메인(경쇄 불변 영역, CL)이 있다.
용어 "이중특이성 항체"는 두 개의 서로 다른 항원 또는 동일한 항원의 적어도 두 개의 서로 다른 항원 에피토프에 특이적으로 결합할 수 있는 항체(항체 또는 이의 항원 결합 단편 포함, 예를 들어 단쇄 항체)를 가리킨다. 다양한 구조의 이중특이성 항체는 종래기술에 개시되어 있으며, IgG 분자의 완전성에 따라 IgG 유사 이중특이성 항체 및 항체 단편형 이중특이성 항체로 나눌 수 있고, 항원 결합 영역의 수에 따라 2가, 3가, 4가 또는 그 이상의 이중특이성 항체로 나눌 수 있으며, 구조가 대칭인지 여부에 따라 대칭구조 이중특이성 항체와 비대칭구조 이중특이성 항체로 나눌 수 있다. 여기서, Fc 단편이 결여된 Fab 단편과 같이 항체 단편을 기반으로 하는 이중특이성 항체는 한 분자에 2개 이상의 Fab 단편을 결합하여 이중특이성 항체를 형성하며, 면역원성이 낮고, 분자량이 작으며, 종양 조직 침투성이 높고, 해당 유형의 전형적인 항체 구조는 F(ab)2, scFv-Fab, (scFv)2-Fab와 같고; IgG 유사 이중특이성 항체(예를 들어, Fc 단편을 갖음), 이러한 유형의 항체는 상대 분자량이 크고, Fc 단편은 항체를 정제하여 이의 용해성, 안정성을 증가시키는 데 유용하며, Fc 부분은 또한 수용체 FcRn에 결합하여 항체의 혈청 반감기를 증가시킬 수 있고, 전형적인 이중특이성 항체 구조 모델은 KiH, CrossMAb, Triomab quadroma, FcAdp, ART-Ig, BiMAb, Biclonics, BEAT, DuoBody, Azymetric, XmAb, 2:1 TCBs, 1Fab-IgG TDB, FynomAb, two-in-one/DAF, scFv-Fab-IgG, DART-Fc, LP-DART, CODV-Fab-TL, HLE-BiTE, F(ab)2-CrossMAb, IgG-(scFv)2, Bs4Ab, DVD-Ig, Tetravalent-DART-Fc, (scFv)4-Fc, CODV-Ig, mAb2, F(ab)4-CrossMAb 등(Aran F. Labrijn 등, Nature Reviews Drug Discovery volume 18, pages585-608(2019); Chen S1 등, J Immunol Res. 2019 Feb 11; 2019:4516041 참조)과 같다.
용어 "가변 영역" 또는 "가변 도메인"은 항원에 결합하는 항원 결합 분자의 도메인을 가리킨다. 본원에서 GPRC5D에 특이적으로 결합하는 항원 결합 모듈의 중쇄 가변 영역을 GPRC5D-VH로 표시하고, 경쇄 가변 영역을 GPRC5D-VL로 표시하고; CD3에 특이적으로 결합하는 항원 결합 모듈의 중쇄 가변 영역을 CD3-VH로 표시하고, 경쇄 가변 영역을 CD3-VL로 표시한다. VH 및 VL은 각각 네 개의 보존적 프레임워크 영역(FR)과 세 개의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함한다. 여기서, 용어 "상보성 결정 영역" 또는 "CDR"은 가변 도메인 내에서 항원과의 결합에 주로 기여하는 영역을 가리키고, "프레임" 또는 "FR"은 CDR 잔기 이외의 가변 도메인 잔기를 가리킨다. VH는 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3의 3개 CDR 영역을 포함하고; VL은 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3의 3개 CDR 영역을 포함한다. 본원에서 GPRC5D-VH의 3개 CDR 영역이 각각 GPRC5D-HCDR1, GPRC5D-HCDR2 및 GPRC5D-HCDR3으로 표시되고; GPRC5D-VL의 3개 CDR 영역은 각각 GPRC5D-LCDR1, GPRC5D-LCDR2 및 GPRC5D-LCDR3으로 표시되며; CD3-VH의 3개 CDR 영역은 각각 CD3-HCDR1, CD3-HCDR2 및 CD3-HCDR3으로 표시되고; CD3-VL의 3개 CDR 영역은 각각 CD3-LCDR1, CD3-LCDR2 및 CD3-LCDR3으로 표시된다. 각 VH 및 VL은 N 단으로부터 C 단까지 순차적으로는 FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4이다. 단일 VH 또는 VL은 항원 결합 특이성을 부여하는 데 충분할 수 있다.
CDR의 아미노산 서열 경계는 공지된 다양한 방안, 예를 들어 "Kabat" 넘버링 규칙(Kabat 등(1991). "Sequences of Proteins of Immunological Interest", 제5판, Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD 참조), "Chothia" 넘버링 규칙, "ABM" 넘버링 규칙, "contact" 넘버링 규칙(Martin, ACR. Protein Sequence and Structure Analysis of Antibody Variable Domains[J]. 2001 참조) 및 ImMunoGenTics(IMGT) 넘버링 규칙(Lefranc, M.P. 등, Dev. Comp. Immunol., 27, 55-77(2003); Front Immunol. 2018 Oct 16;9:2278) 등을 통해 결정할 수 있으며; 다양한 넘버링 시스템 간의 대응 관계는 당업자가 잘 알고 있는 것이다. 본 개시의 넘버링 규칙은 아래 표 1에 나타난 바와 같다.
별도로 설명하지 않는 한, 본 개시의 실시예에서 가변 영역 및 CDR 서열은 모두 "Kabat" 넘버링 규칙을 적용한다.
용어 "항체 단편"은 온전한 항체와 다른 분자를 가리키며, 이는 온전한 항체의 항원 결합 능력을 유지하는 온전한 항체의 부분을 포함한다. 항체 단편의 예시로는 Fv, Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2, 단일 도메인 항체, 단쇄 Fab(scFab), 이중 항체, 선형 항체, 단쇄 항체 분자(예를 들어, scFv) 및 항체 단편으로 형성되는 다중특이성 항체가 포함되나 이에 한정되지 않는다.
본원에 기재된 바와 같이, 용어 "Fab" 또는 "Fab 단편"은 상호 교환적으로 사용될 수 있으며, VH, VL, CH1 및 CL 도메인으로 이루어진 1가 항체 단편을 가리키며; 본원에서 항체, 예를 들어 항-GPRC5D 항체의 Fab 1가 항체 단편은 CH1의 C-말단을 통해 직접적으로 또는 링커를 통해 Fc1 서브유닛에 연결될 수 있고, 형성된 Fab-Fc1은 Fc1 서브유닛의 N-말단에 있는 이황화 결합을 통해 또 다른 항체 예를 들어, 항-CD3 항체의 Fab-Fc2와 이중특이성 항체를 형성할 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "scFv"는 단쇄 항체(Single-chain variable fragment)를 가리키며, 이는 10~25개의 아미노산으로 이루어진 하나의 짧은 유연한 펩티드(linker)로 연결된 항체의 중쇄 가변 영역(VH)과 경쇄 가변 영역(VL)으로 구성되고, 가장 작은 형태의 재조합 항체이다.
용어 "Fc 영역" 또는 "단편 결정화 가능한 영역"은 항체 중쇄의 C 말단 영역을 정의하는 데 사용되며, 천연 Fc 영역 및 개조된 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, Fc 영역은 동일하거나 상이한 두 개의 서브유닛을 포함한다. 일부 실시양태에서, 인간 IgG 중쇄의 Fc 영역은 Cys226 위치에 있는 아미노산 잔기 또는 Pro230으로부터 이의 카르복실 말단까지 연장되는 것으로 정의된다. 본원에 기재된 항체의 사용에 적합한 천연 서열 Fc 영역은 인간 IgG1, IgG2(IgG2A, IgG2B), IgG3 및 IgG4의 Fc 영역을 포함한다. 별도로 설명하지 않는 한, Fc 영역에 대한 넘버링 규칙은 EU 인덱스이다.
용어 "Titin 사슬"은 Titin Ig-유사 152 도메인을 포함하는 78~118개의 아미노산 길이를 갖는 Titin 단백질의 펩티드 단편 또는 이의 기능적 변이체를 가리키며, 상기 Titin 사슬은 Obscurin Ig-유사 1 또는 Obscurin-유사 Ig-유사 1 도메인에 결합하여 이량체화 복합체를 형성할 수 있다. 용어 "Obscurin 사슬"은 Obscurin Ig-유사 1 도메인을 포함하는 87~117개의 아미노산 길이를 갖는 Obscurin 단백질의 펩티드 단편 또는 이의 기능적 변이체, 또는 Obscurin-유사 Ig-유사 1 도메인을 포함하는 78~118개의 아미노산 길이를 갖는 Obscurin-유사 1 단백질의 펩티드 단편 또는 이의 기능적 변이체를 가리키며, 상기 Obscurin 사슬은 Titin Ig-유사 152 도메인에 결합하여 이량체화 복합체를 형성할 수 있다. 본 개시의 Titin 사슬 및 Obscurin 사슬은 Fab 내의 CH1 및 CL을 대체하여 대체된 Fab(Fab-S)를 형성하는데 사용될 수 있으며, 해당 대체는 항원 결합 분자와 항원의 결합에 영향을 미치지 않는다.
용어 "키메라" 항체는 항체 중 중쇄 및/또는 경쇄의 일부가 특정 공급원 또는 물종으로부터 유래되되, 중쇄 및/또는 경쇄의 나머지 부분은 다른 공급원 또는 물종으로부터 유래되는 항체를 가리킨다.
용어 "인간화" 항체는 비인간 항체의 반응성을 유지하면서 인간에서의 면역원성이 비교적 낮은 항체를 가리킨다. 예를 들어, 비인간 CDR 영역을 유지하고 항체의 나머지 부분을 이의 인간 대응 부분(즉, 불변 영역과 가변 영역의 프레임워크 영역 부분)으로 대체함으로써 구현할 수 있다.
용어 "친화력"은 분자(예를 들어, 항체)의 단일 결합 부위와 이의 결합 리간드(예를 들어, 항원) 사이의 비공유 결합의 상호작용의 전반적인 강도를 가리킨다. 별도로 명시하지 않는 한, 본원에 사용된 바와 같이, "결합 친화력"은 결합 쌍(예를 들어, 항체와 항원)의 구성원 사이의 1:1 상호작용을 반영하는 내부 결합 친화력을 가리킨다. 분자 X가 이의 리간드 Y에 대한 친화력은 통상적으로 평형 해리 상수(KD)로 표현될 수 있다. 친화력은 당업계에서 알려진 일반적인 방법(본원에 기재된 방법을 포함)에 의해 측정될 수 있다. 용어 "kassoc" 또는 "ka"는 특정 항체-항원의 상호작용의 결합율을 가리키고, 본원에 사용된 바와 같이 용어 "kdis" 또는 "kd"는 특정 항체-항원의 상호작용의 해리율을 가리키는 것을 의미한다. 본원에 사용된 바와 같이, 용어 "KD"는 kd 대 ka의 비율(즉, kd/ka)로부터 획득하고 몰 농도(M)로 표시되는 평형 해리 상수를 가리킨다. 항체의 KD 값은 표면 플라즈몬 공명법, ELISA 또는 용액 평형 적정(SET)과 같은 당업계에서 알려진 방법을 사용하여 측정될 수 있다.
용어 "단클론 항체"는 실질적으로 균질한 항체 집단을 가리키며, 즉, 해당 집단에 포함된 항체 분자는 소량으로 존재할 수 있는 천연 돌연변이를 제외하고는 아미노산 서열이 동일하다. 대조적으로, 다클론 항체 제제는 통상적으로 상이한 에피토프에 특이적인 가변 도메인에서 서로 다른 아미노산 서열을 갖는 다양한 항체를 포함한다. "단클론"은 실질적으로 균질한 항체 집단으로부터 획득한 항체의 특징을 나타내며 항체가 어느 한 특정 방법을 통해 생산되어야 한다는 의미로 해석되어서는 안 된다. 일부 실시양태에서, 본 개시에서 제공되는 항체는 단클론 항체이다.
용어 "항원"은 항원 결합 단백질(예를 들어 항체)의 선택적 결합제에 의해 결합될 수 있는 분자 또는 분자의 일부를 가리킨다. 항원은 다양한 항원 결합 단백질(예를 들어, 항체)과 상호작용할 수 있는 하나 이상의 에피토프가 있을 수 있다.
용어 "에피토프"는 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 특이적으로 결합할 수 있는 항원의 영역(영역 또는 부위)을 가리킨다. 에피토프는 연속적인 아미노산(선형 에피토프)으로 형성되거나 비연속적인 아미노산(구조적 에피토프)을 포함할 수 있는데, 예를 들어 항원의 접힘으로 인해(즉, 단백질성 항원의 3차 접힘을 통해) 비연속적인 아미노산을 공간적으로 근접하게 하는 것이다. 구조적 에피토프는 변성 용매가 존재할 때 구조적 에피토프에 대한 항체 결합이 없어진다는 점에서 선형 에피토프와 다르다. 에피토프는 독특한 공간적 구조로 존재하는 적어도 3개, 적어도 4개, 적어도 5개, 적어도 6개, 적어도 7개 또는 8~10개의 아미노산을 포함한다. 특정 에피토프에 결합하는 항체(즉, 동일한 에피토프에 결합하는 항체)에 대한 스크리닝은 당업계에서 관례적 방법을 사용하여 수행될 수 있고, 알라닌 스캐닝, 펩티드 블롯팅(Meth. Mol. Biol. 248(2004)443-463 참조), 펩티드 절단 분석, 에피토프 절제, 에피토프 추출, 항원의 화학적 변형(Prot. Sci. 9(2000) 487-496 참조) 및 교차 차단("Antibodies", Harlow and Lane (Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harb., NY) 참조)을 예로 들 수있으나 이에 한정되지 않는다.
용어 "특이적으로 결합할 수 있는", "특이적으로 결합" 또는 "결합"은 항체가 다른 항원 또는 에피토프에 비해 더 높은 친화력으로 특정 항원 또는 에피토프에 결합할 수 있는 것을 가리킨다. 통상적으로, 항체는 약 1×10-7M 또는 그 이하(예를 들어, 약 1×10-8M 또는 그 이하)의 평형 해리 상수(KD)로 항원 또는 에피토프에 결합한다. 일부 실시양태에서, 항원에 결합하는 항체의 KD는 비특이적 항원(예를 들어, BSA, 카제인)에 결합된 해당 항체 KD의 10% 또는 그 이하이다(예를 들어, 1%). KD는 알려진 방법을 사용하여 측정될 수 있는데 예를 들어, FACS 또는 표면 플라즈몬 공명 분석법을 사용하여 측정하는 것이다.그러나, 항원 또는 항원 내 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체는 다른 관련 항원에 대해 교차 반응할 수 있는데, 예를 들어 다른 종(상동종)(예컨대 인간 또는 원숭이, 예를 들어 마카카 파시쿨라리스(Macaca fascicularis)(cynomolgus, cyno), 판 트로글로다이트스(Pan troglodytes)(chimpanzee, chimp)) 또는 칼리스테릭스 자쿠스(Callithrix jacchus)(commonmarmoset, marmoset)로부터 유래된 상응 항원에 대해 교차 반응할 수 있다.
용어 "결합하지 않는다"는 항체가 상술한 특이적 결합 방식으로 특정 항원 또는 해당 항원 내의 에피토프에 결합할 수 없다는 것을 가리킨다. 예를 들어, 항체가 약 1×10-6M 또는 그 이상의 평형 해리 상수(KD)로 항원 또는 항원 내의 에피토프에 결합한다.
용어 "항원 결합 모듈"은 목표 항원에 특이적으로 결합하는 폴리펩티드 분자를 가리킨다. 구체적인 항원 결합 모듈은 항체의 항원 결합 도메인, 예를 들어 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 용어 "GPRC5D에 특이적으로 결합하는 항원 결합 모듈"은 해당 모듈을 함유하는 분자가 GPRC5D를 표적으로 하는 진단제 및/또는 치료제로 사용될 수 있도록 충분한 친화력으로 GPRC5D에 결합할 수 있는 모듈을 가리킨다. 예를 들어, GPRC5D에 특이적으로 결합하는 항원 결합 모듈은 이하 평형 해리 상수(KD)를 갖는다: <약 10nM(표면 플라즈몬 공명 측정법으로 측정). 항원 결합 모듈은 Fab, 대체된 Fab 또는 scFv와 같은 본원에 정의된 바와 같은 항체 단편을 포함한다.
용어 "링커"는 두 개의 폴리펩티드 단편을 연결하는 연결 유닛을 가리킨다. 본원에서, 동일한 구조식에 나타나는 링커는 동일할 수도 있고 상이할 수도 있다. 링커는 하나 이상의 아미노산, 전형적으로 약 1~30개, 2~24개 또는 3~15개의 아미노산을 포함하는 펩티드 링커일 수 있다. 본원에 사용되는 링커는 동일할 수도 있고 상이할 수도 있다. 구조식에 "-"가 나타나면 양쪽의 유닛이 공유 결합을 통해 직접적으로 연결되어 있음을 나타낸다.
"Tm"은 용해 변성 온도(내인성 형광)이다. 단백질이 변성되면(가열 또는 변성제 작용) 3차 구조가 열리고 방향족 아미노산의 미세환경이 변화하는 것으로 인해 방출 형광 스펙트럼이 변하게 된다. 본 개시에서 Tm1은 형광이 최대값의 절반으로 변화하는 온도를 가리킨다.
"Tonset"는 변성 시작 온도이다. 단백질이 변성되기 시작하는 온도, 즉 형광값이 변화하기 시작하는 온도를 의미한다.
"Tagg"는 응집 시작 온도이다. 정적 광산란에 의해 응집체는 266nm와 473nm의 두 파장에서 검출되며 샘플이 응집되기 시작하는 온도가 모니터링된다. Tagg 266은 266nm에서 모니터링되는 응집 시작 온도를 가리킨다.
용어 "핵산"은 본원에서 용어 "폴리뉴클레오티드"와 상호 교환적으로 사용될 수 있으며, 단일 가닥 또는 이중 가닥 형태의 데옥시리보뉴클레오티드 또는 리보뉴클레오티드 및 이의 중합체를 가리킨다. 상기 용어는 알려진 뉴클레오티드 유사체 또는 변형된 백본 잔기 또는 결합을 함유하는 핵산을 망라하며, 상기 핵산은 합성, 천연적으로 존재 및 비천연적으로 존재하는 것이고, 참조 핵산과 유사한 결합 특성을 가지며, 참조 뉴클레오티드와 유사한 방식으로 대사한다. 이와 같은 유사체의 예시로는 포스포로티오에이트, 포스포르아미데이트, 메틸포스포네이트, 키랄-메틸포스포네이트, 2-O-메틸리보뉴클레오티드, 펩티드 핵산(PNA)이 포함되나 이에 한정되지 않는다. "분리된" 핵산은 천연 환경에서의 성분으로부터 분리된 핵산 분자를 가리킨다. 분리된 핵산은 통상적으로 핵산 분자가 함유되지만 염색체 외로 또는 천연 염색체 위치와 다른 염색체 위치에 존재하는 세포에 함유된 핵산 분자를 포함한다. 상기 항원 결합 분자를 코딩하는 분리된 핵산은 항체 중쇄 및 경쇄(또는 이의 단편)를 코딩하는 하나 이상의 핵산 분자를 가리키며, 단일 벡터 또는 별도의 벡터에 있는 이러한 하나 이상의 핵산 분자와, 숙주 세포의 하나 이상의 위치에 존재하는 이러한 하나 이상의 핵산 분자를 포함한다. 별도로 설명하지 않는 한, 특정 핵산 서열은 또한 보존적으로 변형된 변이체(예를 들어, 축퇴성 코돈 치환)와 상보성 서열 및 명확히 지적된 서열을 암묵적으로 망라한다. 구체적으로, 아래에 상세히 설명되는 바와 같이, 축퇴성 코돈 치환은 다음과 같은 서열을 생성함으로써 획득할 수 있는데, 이러한 서열에 있어서, 하나 이상의 선택된(또는 모든) 코돈의 3번째 위치가 축퇴 염기 및/또는 데옥시노신 잔기에 의해 치환된다.
용어 "폴리펩티드" 및 "단백질"은 본원에서 상호 교환적으로 사용될 수 있으며, 아미노산 잔기의 중합체를 가리킨다. 해당 용어는 하나 이상의 아미노산 잔기가 천연적으로 존재하는 아미노산의 상응하는 인공 화학적 모사체인 아미노산 중합체뿐만 아니라 천연적으로 존재하는 아미노산 중합체 및 비천연적으로 존재하는 아미노산 중합체에도 적용된다. 별도로 설명하지 않는 한, 특정 폴리펩티드 서열은 또한 이의 보존적으로 변형된 변이체도 암묵적으로 망라한다.
용어 서열 "동일성"은 두 개의 서열에 대한 최적 정렬을 수행할 때, 두 개의 서열의 아미노산/핵산이 동등한 위치에서의 동일한 정도(백분율)를 가리킨다. 정렬 과정에서 최대 서열 동일성 백분율을 획득하기 위해 필요한 경우 간격이 도입되도록 허용될 수 있지만 그 어떠한 보존적 치환은 서열 동일성의 일부를 형성하는 것으로 간주되지 않는다. 서열 동일성의 백분율을 측정하기 위해, 정렬은 당업계에 알려진 기술, 예를 들어 BLAST, BLAST-2, ALIGN, ALIGN-2 또는 Megalign(DNASTAR)소프트웨어와 같은 공개적으로 획득 가능한 컴퓨터 소프트웨어를 사용하여 구현될 수 있다. 당업자는 정렬 측정에 적합한 파라미터를 결정할 수 있는 것으로서, 비교 대상인 서열 전장에서 최대 정렬을 달성하기 위해 필요한 모든 알고리즘을 포함한다.
용어 "융합" 또는 "연결"은 구성 요소(예를 들어, 항원 결합 모듈 및 Fc 도메인)가 직접적으로 또는 링커를 통해 공유적으로 연결된다는 것을 가리킨다.
용어 "벡터"는 이에 연결된 다른 폴리뉴클레오티드를 운반할 수 있는 폴리뉴클레오티드 분자를 의미한다. 벡터 유형 중 하나는 "플라스미드"로서, 추가된 DNA 세그먼트를 연결할 수 있는 고리형 이중 가닥 DNA 루프를 가리킨다. 다른 한 가지 유형의 벡터는 아데노 관련 바이러스 벡터(AAV 또는 AAV2)와 같은 바이러스 벡터로서, 바이러스 게놈에 별도의 DNA 세그먼트가 연결될 수 있다. 특정 벡터는 도입된 숙주 세포에서 자율적으로 복제할 수 있다(예를 들어, 박테리아 복제 개시점을 갖는 박테리아 벡터 및 부가형 포유동물 벡터). 기타 벡터(예를 들어, 비부가형 포유동물 벡터)는 숙주 세포에 도입된 후, 숙주 세포의 게놈에 통합됨으로써, 숙주 게놈과 함께 복제될 수 있다. 용어 "발현 벡터" 또는 "발현 작제물"은 숙주 세포를 형질전환시키기에 적용되고, 또한 이에 작동 가능하게 연결된 하나 이상의 이종 코딩 영역의 발현을 지시 및/또는 제어(숙주 세포와 함께)하는 핵산 서열을 함유하는 벡터를 가리킨다. 발현 작제물는 전사, 번역에 영향을 미치거나 제어하는 서열, 및 인트론이 존재하는 경우 이에 작동 가능하게 연결된 코딩 영역의 RNA 스플라이싱에 영향을 미치는 서열이 포함될 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.
용어 "숙주 세포", "숙주 세포주" 및 "숙주 세포 배양물"은 상호 교환적으로 사용될 수 있고, 외인성 핵산이 도입된 세포를 가리키며, 이와 같은 세포의 자손을 포함한다. 숙주 세포는 계대 횟수에 관계없이 일차 형질전환된 세포 및 이로부터 유래된 자손을 포함하는 "형질전환체"와 "형질전환된 세포"를 포함한다. 자손의 핵산 내용물이 부모 세포와 완전히 동일하지 않을 수 있으나, 돌연변이를 함유할 수 있다. 본원에서, 해당 용어는 일차 형질전환 세포로부터 스크리닝 또는 선택된 세포와 동일한 기능 또는 생물학적 활성을 갖는 돌연변이체 자손을 포함한다. 숙주 세포는 원핵 세포와 진핵 숙주 세포를 포함하며, 여기서 진핵 숙주 세포는 포유동물 세포, 곤충 세포계 식물 세포 및 진균 세포가 포함되나 이에 한정되지 않는다. 포유동물 숙주 세포는 인간, 마우스, 래트, 견, 원숭이, 돼지, 염소, 소, 말 및 햄스터의 세포를 포함하며, 중국 햄스터 난소(CHO) 세포, NSO, SP2 세포, HeLa 세포, 어린 햄스터 신장(BHK) 세포, 원숭이 신장 세포(COS), 인간 간암 세포(예를 들어, Hep G2), A549 세포, 3T3 세포 및 HEK-293 세포가 포함되나 이에 한정되지 않는다. 진균 세포는 효모 및 사상 진균 세포를 포함하며, 예를 들어 피키아 파스토리스(Pichiapastoris), 피키아 핀란디카(Pichia finlandica), 피키아 트레할로필라(Pichia trehalophila), 피키아 코클라마에(Pichia koclamae), 피키아 멤브라나에파시엔스(Pichia membranaefaciens), 피키아 미누타(Pichia minuta)(Ogataea minuta, Pichia lindneri), 피키아 오푼티아에(Pichiaopuntiae), 피키아 써모톨레란스(Pichia thermotolerans), 피키아 살리크타리아(Pichia salictaria), Pichia guercuum, 피키아 피페리(Pichia pijperi), 피키아 스팁티스(Pichia stiptis), 피키아 메탄올리카(Pichia methanolica), 피키아 속, 사카로마이세스 세레비시애(Saccharomycescerevisiae), 사카로마이세스 세레비시애 속, 한세눌라 폴리모르파(Hansenula polymorpha), 클루이버마이세스 속, 클루이버마이세스 락티스(Kluyveromyces lactis), 칸디다 알비칸스(Candida albicans), 아스페르길루스 니둘란스(Aspergillus nidulans), 아스페르길루스 니거(Aspergillus niger), 아스페르길루스 오리제(Aspergillus oryzae), 트리코데르마 리세이(Trichoderma reesei), 크리소포리움 럭노웬세(Chrysosporium lucknowense), 푸사리움 속(Fusarium sp.), 푸사리움 그라미넘(Fusarium gramineum), 푸사리움 베네나툼(Fusarium venenatum), 피스코미트렐라 파텐스(Physcomitrella patens) 및 뉴로스포라 크라사(Neurospora crassa)를 포함한다. 피키아 속, 임의의 사카로마이세스 세레비시애 속, 한세눌라 폴리모르파(Hansenula polymorpha), 임의의 클루이버마이세스 속, 칸디다 알비칸스(Candida albicans), 임의의 아스페르길루스 속, 트리코데르마 리세이(Trichoderma reesei), 크리소스포리움 럭노우엔세(Chrysosporium lucknowense), 임의의 푸사리움 속, 야로비아 리폴리티카(Yarrowia lipolytica) 및 뉴로스포라 크라사(Neurospora crassa)이다. 본 특허의 숙주 세포에는 특허법에 따라 승인되지 않은 객체는 포함되지 않는다.
본 출원에 사용된 바와 같이, 표현 "세포", "세포주" 및 "세포 배양물"은 상호 교환적으로 사용될 수 있으며, 이러한 모든 명칭은 자손을 포함한다. 따라서, 단어 "형질전환체" 및 "형질전환된 세포"는 계대 횟수에 관계없이 일차 피험자 세포 및 이로부터 유래된 이의 배양물을 포함한다. 또한, 유의적 또는 무의적 돌연변이로 인해 모든 자손의 DNA 내용물은 완전히 똑같지 않을 수도 있다는 점을 이해해야 한다. 돌연변이가 스크리닝된 원래의 형질전환 세포와 동일한 기능 또는 생물학적 활성을 갖는 돌연변이 자손이 포함된다.
"선택적" 또는 "선택적으로"는 이어서 설명되는 사건 또는 환경이 발생할 수 있으나 반드시 발생하는 것은 아님을 의미하는 것으로서, 해당 설명은 해당 사건 또는 환경이 발생하거나 또는 발생하지 않는 상황을 포함한다.
용어"약학적 조성물"은 본원에 기재된 하나 이상의 항원 결합 분자 또는 항체 및 생리학적/약학적으로 사용 가능한 담체 및 부형제와 같은 다른 화학적 성분을 함유하는 혼합물을 나타낸다.
용어 "약학적으로 허용 가능한 담체"는 활성 성분과 구별되고 피험자에게 독성이 없는 약학적 제제의 성분을 가리킨다. 약학적으로 허용 가능한 담체는 완충제, 부형제, 안정제 또는 방부제가 포함되나 이에 한정되지 않는다.
용어 "피험자" 또는 "개체"는 인간 및 비인간 동물을 포함한다. 비인간 동물은 비인간 영장류(예를 들어, 시노몰구스 원숭이), 양, 견, 소, 닭, 양서류 동물 및 파충류 동물과 같은 모든 척추동물(예를 들어, 포유동물 및 비포유동물)을 포함한다. 별도로 명시되지 않는 한, 상기 용어 "환자" 또는 "피험자"는 본원에서 상호 교환적으로 사용될 수 있다. 본원에 사용된 바와 같이, 용어 "시노(cyno)" 또는 "시노몰구스(cynomolgus)"는 마카카 파시쿨라리스(Macaca Fascularis)를 가리킨다. 특정 실시양태에서, 개체 또는 피험자는 인간이다.
"투여" 또는 "투약"은, 동물, 인간, 실험 피험자, 세포, 조직, 기관 또는 생물 유체에 적용될 때, 외인성 약물, 치료제, 진단제 또는 조성물이 동물, 인간, 피험자, 세포, 조직, 기관 또는 생물 유체와의 접촉을 가리킨다.
용어 "샘플"은 피험자로부터 분리된 유사한 유체, 세포 또는 조직의 채집물일뿐만 아니라 피험자 체내에 존재하는 유체, 세포 또는 조직을 가리킨다. 예시적인 샘플은 혈액, 혈청 및 장막액, 혈장, 림프액, 소변, 타액, 낭종액, 누액, 배설물, 가래, 분비 조직 및 기관의 점막 분비물, 질 분비물, 복수, 흉막, 심낭, 복막, 복강 및 기타 체강의 유체, 기관지 세척액으로부터 수집된 유체, 윤활액, 피험자 또는 생물학적 공급원과 접촉하는 액체 용액과 같은 생물 유체이며, 예를 들어, 세포 및 기관 배지(세포 또는 기관 조건 배지 포함), 세척액, 등이며, 조직 생검 샘플, 미세 바늘 흡인, 수술로 절제한 조직, 기관 배양물 또는 세포 배양물이다.
"치료(treatment와 treat)" 및 "처리"(및 문법적 변형)는 치료 대상의 개체의 투여하려고 시도하는 임상적 개입을 가리키며, 또한 예방 목적을 위해 또는 임상 병리학적 과정에서 수행될 수 있다. 치료의 바람직한 효과는 질환의 발병 또는 재발 예방, 증상의 경감, 질환의 직간접적 병리학적 결과의 경감/감소, 전이 예방, 질환의 진행 속도 감소, 질환 상태의 개선 또는 경감 및 소퇴 또는 개선의 예후가 포함되나 이에 한정되지 않는다. 일부 실시양태에서, 본 개시의 분자를 사용하여 질환의 발생을 지연시키거나 질환의 진행을 완화시킨다.
"유효량"은 일반적으로 증상의 심각도 및/또는 빈도를 줄이고, 이러한 증상 및/또는 잠재적인 발병 원인을 없애고, 증상 및/또는 잠재적인 발병 원인의 발생을 예방하고, 및/또는 질환 상태로 인한 또는 이와 관련된 부상(예를 들어, 폐질환)을 개진하거나 개선하기에 충분한 양이다. 일부 실시예에서, 유효량은 치료 유효량 또는 예방 유효량이다. "치료 유효량"은 질환 상태 또는 증상, 특히 해당 질환 상태와 관련된 상태 또는 증상을 치료하거나, 해당 질환의 상태 또는 해당 질환과 어떤 식으로든 관련된 다른 바람직하지 않은 증상의 진행을 예방, 방해, 지연 또는 역전시키기에 충분한 양이다. "예방 유효량"은 피험자에게 투여할 경우, 해당 질환 상태의 발병(또는 재발)을 예방 또는 지연시키거나 해당 질환 상태 또는 관련 증상의 발병(또는 재발)의 가능성을 낮추는 것과 같이 예정되는 예방 효과를 가질 양이다. 완전한 치료 효과 또는 예방 효과는 1회 용량 투여 후에 일어나지 않을 수 있으며, 일련의 용량으로 투여한 후에 일어날 수 있다. 따라서, 치료 유효량 또는 예방 유효량은 1회 이상의 투여 방식으로 투여될 수 있다. "치료 유효량" 및 "예방 유효량"은 개체의 질환 상태, 연령, 성별과 체중뿐만 아니라 치료제 또는 치료제 조합이 개체에서 원하는 응답을 유발하는 능력과 같은 다양한 요인에 따라 달라질 수 있다. 효과적인 치료제 또는 치료제 조합의 예시적인 지표로는 환자의 개선된 건강 상태 등이 포함된다.
본 개시의 항원 결합 분자
본 개시는 GPRC5D 및 GPRC5D-발현 세포에 대한 높은 친화력, 체외 사멸 활성, 치료 활성 및 안전성과 같은 수많은 유리한 특성을 갖는 항원 결합 분자를 제공한다.
예시적인 항원 결합 분자
본 개시의 항원 결합 분자는 GPRC5D 및 CD3에 특이적으로 결합하는 이중특이성 항원 결합 분자(예를 들어, 이중특이성 항체) 및 항-GPRC5D 항체를 포함한다. 특히, 본 개시의 항원 결합 분자는 다음과 같은 임의의 성질을 갖는다:
a. GPRC5D에 대한 높은 친화력; 일부 실시양태에서 50nM 미만(예를 들어, 25nM 미만, 20nM 미만, 15nM 미만, 10nM 미만, 5nM 미만, 2.5nM 미만, 1nM 미만, 0.5nM 미만)의 EC50으로 인간 GPRC5D에 결합하고/결합하거나 50nM 미만(예를 들어, 25nM 미만, 10nM 미만, 5nM 미만, 2nM 미만, 1nM 미만, 0.5nM 미만)의 EC50으로 CynoGPRC5D와 양효한 교차 결합 활성을 갖으며, 상기 EC50은 유세포 분석법으로 검출됨;
b. 인간 CCR8 및 인간 GIPR에 결합하지 않으며 우수한 특이성을 갖음;
c. GPRC5D를 발현하는 세포에 대한 체외 특이적 사멸 활성;
d. 낮은 수준의 사이토카인(IL6 및 IFNγ) 방출을 유도함; 및/또는
e. 체내에서 더 강한 치료 활성.
본 개시는 항원 결합 분자를 제공하며, 이는 GPRC5D에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 항원 결합 모듈 및 CD3에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 항원 결합 모듈을 포함하고, 상기 GPRC5D에 특이적으로 결합하는 항원 결합 모듈은 GPRC5D-VH 및 GPRC5D-VL을 포함하고, 상기 CD3에 특이적으로 결합하는 항원 결합 모듈은 CD3-VH 및 CD3-VL을 포함한다.
본 개시는 또한 GPRC5D에 특이적으로 결합할 수 있는 분리된 항체를 제공하며, 상기 항체는 GPRC5D-VH 및 GPRC5D-VL을 포함한다. 구체적으로, 본원의 실시예는 항체 시리즈 1, 24, 30 및 45를 개시한다. 본원의 항체는 항체 1 및 24를 예로 사용하여 아래에 설명되어 있다.
GPRC5D 및 CD3에 특이적으로 결합하는 항원 결합 분자 또는 항-GPRC5D 항체에 있어서, 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 9의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR1, SEQ ID NO: 134의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR2 및 SEQ ID NO: 11의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR3을 갖고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 130의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR1, SEQ ID NO: 13의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR2 및 SEQ ID NO: 14의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR3을 갖는다.
GPRC5D 및 CD3에 특이적으로 결합하는 항원 결합 분자 또는 항-GPRC5D 항체에 있어서, 상기 GPRC5D-VH는 아미노산 서열이 SEQ ID NO: 9에 제시된 바와 같은 GPRC5D-HCDR1, 아미노산 서열이 SEQ ID NO: 134에 제시된 바와 같은 GPRC5D-HCDR2, 아미노산 서열이 SEQ ID NO: 11에 제시된 바와 같은 GPRC5D-HCDR3, 및 아미노산 서열이 SEQ ID NO: 130에 제시된 바와 같은 GPRC5D-LCDR1, 아미노산 서열이 SEQ ID NO: 13에 제시된 바와 같은 GPRC5D-LCDR2, 아미노산 서열이 SEQ ID NO: 14에 제시된 바와 같은 GPRC5D-LCDR3을 갖는다.
GPRC5D 및 CD3에 특이적으로 결합하는 항원 결합 분자 또는 항-GPRC5D 항체에 있어서, 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 15의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR1, SEQ ID NO: 16의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR2 및 SEQ ID NO: 17의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR3을 갖고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 137의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR1, SEQ ID NO: 19의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR2 및 SEQ ID NO: 20의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR3을 갖는다.
GPRC5D 및 CD3에 특이적으로 결합하는 항원 결합 분자 또는 항-GPRC5D 항체에 있어서, 상기 GPRC5D-VH는 아미노산 서열이 SEQ ID NO: 15에 제시된 바와 같은 GPRC5D-HCDR1, 아미노산 서열이 SEQ ID NO: 16에 제시된 바와 같은 GPRC5D-HCDR2, 아미노산 서열이 SEQ ID NO: 17에 제시된 바와 같은 GPRC5D-HCDR3, 및 아미노산 서열이 SEQ ID NO: 137에 제시된 바와 같은 GPRC5D-LCDR1, 아미노산 서열이 SEQ ID NO: 19에 제시된 바와 같은 GPRC5D-LCDR2, 아미노산 서열이 SEQ ID NO: 20에 제시된 바와 같은 GPRC5D-LCDR3을 갖는다.
일부 실시양태에서, 앞서 기재된 바와 같은 항원 결합 분자 또는 항체로서, 상기 GPRC5D-VH 및/또는 상기 GPRC5D-VL은 마우스 유래 또는 인간화된 것이다.
일부 실시양태에서, 상기 GPRC5D-VH 및/또는 상기 GPRC5D-VL은 인간화된 것이다.
일부 실시양태에서, 상기 GPRC5D-VH는 IGHV3-21*01로부터 유래된 FR1, FR2, FR3 및 IGHJ6*01로부터 유래된 FR4를 갖고, 이는 비치환된 것이거나 49A 및 93T로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 아미노산 대체를 갖고; 및/또는 상기 GPRC5D-VL은 IGKV2-29*02로부터 유래된 FR1, FR2, FR3 및 IGKJ2*01로부터 유래된 FR4를 갖고, 이는 비치환된 것이거나 2V 및 45K로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 아미노산 대체를 갖는다. 일부 실시양태에서, 상술한 가변 영역 및 CDR은 Kabat 넘버링 규칙에 따라 정의된 것이다.
일부 실시양태에서, 앞서 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항원 결합 분자 또는 항체에 있어서, 상기 GPRC5D-VH의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 35, 1, 33 또는 34와 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 갖고, 상기 GPRC5D-VL의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 39, 2, 36, 37, 38, 40 또는 41과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 갖는다.
일부 실시양태에서, 상기 GPRC5D-VH 및/또는 상기 GPRC5D-VL은 인간화된 것이다.
일부 실시양태에서, 상기 GPRC5D-VH는 IGHV1-46*01로부터 유래된 FR1, FR2, FR3 및 IGHJ6*01로부터 유래된 FR4를 갖고, 이는 비치환된 것이거나 1E, 24V, 37M, 69W, 71A, 73K 및 93S로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 아미노산 대체를 갖고; 및/또는 상기 GPRC5D-VL은 IGKV2-30*02로부터 유래된 FR1, FR2, FR3 및 IGKJ4*01로부터 유래된 FR4를 갖고, 이는 비치환된 것이거나 4L, 28T, 28S, 29L, 29V, 36L 및 37L로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 아미노산 대체를 갖는다. 일부 실시양태에서, 상술한 가변 영역 및 CDR은 Kabat 넘버링 규칙에 따라 정의된 것이다.
일부 실시양태에서, 앞서 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항원 결합 분자 또는 항체에 있어서, 상기 GPRC5D-VH의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 44, 3, 42 또는 43과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 갖고, 상기 GPRC5D-VL의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 49, 4, 45, 46, 47, 48 또는 50과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 갖는다.
일부 실시양태에서, 상기 GPRC5D-VH의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 35, 1, 33 또는 34에 제시된 바와 같고, 상기 GPRC5D-VL의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 39, 2, 36, 37, 38, 40 또는 41에 제시된 바와 같다.
일부 실시양태에서, 상기 GPRC5D-VH의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 35, 33 또는 34에 제시된 바와 같고, 상기 GPRC5D-VL의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 39, 36, 37, 38, 40 또는 41에 제시된 바와 같다.
일부 실시양태에서, 상기 GPRC5D-VH의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 44, 3, 42 또는 43에 제시된 바와 같고, 상기 GPRC5D-VL의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 49, 4, 45, 46, 47, 48 또는 50에 제시된 바와 같다.
일부 실시양태에서, 상기 GPRC5D-VH의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 44, 42 또는 43에 제시된 바와 같고, 상기 GPRC5D-VL의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 49, 45, 46, 47, 48 또는 50에 제시된 바와 같다.
일부 실시양태에서, 앞서 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항원 결합 분자 또는 항체로서, 여기서
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 35의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 39의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 34의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 36의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 34의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 38의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 34의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 39의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 35의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 36의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 35의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 38의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 1의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 2의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 앞서 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항원 결합 분자 또는 항체에 있어서, 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 35의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 39의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 앞서 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항원 결합 분자 또는 항체에 있어서, 상기 GPRC5D-VH의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 35에 제시된 바와 같고, 상기 GPRC5D-VL의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 39에 제시된 바와 같다.
일부 실시양태에서, 앞서 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항원 결합 분자 또는 항체로서, 여기서
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 44의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 49의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 43의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 46의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 43의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 49의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 43의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 50의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 44의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 46의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 44의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 50의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 3의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 4의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 앞서 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항원 결합 분자 또는 항체에 있어서, 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 44의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 49의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 앞서 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항원 결합 분자 또는 항체에 있어서, 상기 GPRC5D-VH의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 44에 제시된 바와 같고, 상기 GPRC5D-VL의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 49에 제시된 바와 같다.
일부 실시양태에서, 앞서 기재된 바와 같은 항원 결합 분자로서, 상기 CD3-VH는 아미노산 서열이 SEQ ID NO: 76에 제시된 바와 같은 CD3-HCDR1, 아미노산 서열이 SEQ ID NO: 77에 제시된 바와 같은 CD3-HCDR2, 및 아미노산 서열이 SEQ ID NO: 78에 제시된 바와 같은 CD3-HCDR3을 갖고; 상기 CD3-VL은 아미노산 서열이 SEQ ID NO: 79에 제시된 바와 같은 CD3-LCDR1, 아미노산 서열이 SEQ ID NO: 80에 제시된 바와 같은 CD3-LCDR2, 및 아미노산 서열이 SEQ ID NO: 81에 제시된 바와 같은 CD3-LCDR3을 갖는다.
일부 실시양태에서, 앞서 어느 한 항에 기재된 바와 같은 항원 결합 분자로서, 상기 CD3-VH 및/또는 상기 CD3-VL은 마우스 유래 또는 인간화된 것이다.
일부 실시양태에서, 상기 CD3-VH 및/또는 상기 CD3-VL은 인간화된 것이다.
일부 실시양태에서, 상기 CD3-VH의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 82에 제시된 바와 같고, 상기 CD3-VL의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 83에 제시된 바와 같다.
일부 실시양태에서, 상술한 가변 영역 및 CDR은 Kabat 넘버링 규칙에 따라 정의된 것이다.
본원의 실시예에 개시된 항체 시리즈 30 및 45의 기술 방안에 따르면, 이러한 항체는 위에 설명된 항체 1 및 24와 유사한 기술 방안 범위를 갖는다.
항원 결합 분자의 구조
본 개시의 이중특이성 항원 결합 분자는 원하는 항원 결합 기능을 갖는 한 특정 분자 구조에 한정되지 않는다. 예를 들어, 본원에서 이중특이성 항원 결합 분자는 2가(1+1), 3가(2+1) 또는 4가(2+2)일 수 있다. 항원 결합 분자의 항원 결합 모듈은 항원 결합 활성을 갖는 임의의 항체 단편일 수 있으며, 이는 펩티드 링커를 통해 융합된다. 본 개시의 펩티드 링커(예를 들어, 링커 1 내지 6)는 항원 결합 분자가 원하는 항원 결합 활성을 나타낼 수 있는 한, 임의의 적합한 펩티드 사슬일 수 있다. 예를 들어, 펩티드 링커는 1~50개 또는 3~20개의 아미노산 잔기의 유연한 펩티드일 수 있다. 일부 실시양태에서, 상기 펩티드 링커는 각각 독립적으로 L1-(GGGGS)n-L2의 구조를 가지며, 여기서 L1은 결합, A, GS, GGS, GGGS(SEQ ID NO: 213)이고, n은 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10이고, L2는 결합, G, GG, GGG(SEQ ID NO: 95) 또는 GGGG(SEQ ID NO: 214)이고, 상기 펩티드 링커는 결합이 아니다. 일부 실시양태에서, 상기 펩티드 링커의 길이는 3~15개의 아미노산 잔기이다. 일부 실시양태에서, 상기 펩티드 링커는 각각 독립적으로 (GGGGS)n의 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 n은 1~5이고; 바람직하게는, n은 1, 2 또는 3이다. 일부 실시양태에서, 상기 펩티드 링커는 GGGGS(SEQ ID NO: 90), GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO: 94), 또는 GGG(SEQ ID NO: 95)이다. 일부 실시양태에서, 상기 링커 1, 링커 2, 링커 3 및 링커 4의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 90에 제시된 바와 같고; 상기 링커 5의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 94에 제시된 바와 같고; 링커 6의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 95에 제시된 바와 같다.
예시적으로, 본 개시의 상기 항원 결합 분자는 식 (i)로 표시되는 구조를 갖는 하나의 제1 사슬, 식 (j)로 표시되는 구조를 갖는 하나의 제2 사슬, 식 (k-1)로 표시되는 구조를 갖는 하나의 제3 사슬 및 식 (l-1)로 표시되는 구조를 갖는 하나의 제4 사슬을 포함하며,
(a) [GPRC5D-VH]-[CH1]-[Fc1],
(b) [GPRC5D-VL]-CL,
(g-1) [CD3-VH]-[GGGGS]-[Obscurin 사슬]-[Fc2],
(h-1) [CD3-VL]-[GGGGS]-[Titin 사슬],
식 (a), (b), (g-1) 및 (h-1)로 표시되는 구조는 N 단으로부터 C 단까지 배열된다.
예시적으로:
상기 항원 결합 분자는 SEQ ID NO: 118의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제1 사슬, SEQ ID NO: 102의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제2 사슬, SEQ ID NO: 84의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제3 사슬 및 SEQ ID NO: 85의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제4 사슬을 갖거나; 또는
상기 항원 결합 분자는 SEQ ID NO: 120의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제1 사슬, SEQ ID NO: 106의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제2 사슬, SEQ ID NO: 84의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제3 사슬 및 SEQ ID NO: 85의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제4 사슬을 갖거나; 또는
상기 항원 결합 분자는 SEQ ID NO: 122의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제1 사슬, SEQ ID NO: 110의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제2 사슬, SEQ ID NO: 84의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제3 사슬 및 SEQ ID NO: 85의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제4 사슬을 갖거나; 또는
상기 항원 결합 분자는 SEQ ID NO: 124의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제1 사슬, SEQ ID NO: 117의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제2 사슬, SEQ ID NO: 84의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제3 사슬 및 SEQ ID NO: 85의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제4 사슬을 갖는다.
항원 결합 분자의 변이체
특정 실시양태에서, 본원에 제공된 항원 결합 분자의 아미노산 서열 변이체가 망라된다. 예를 들어, 항체의 결합 친화력 및/또는 기타 생물학적 특성이 개선되기를 기대할 수 있다. 항체를 코딩하는 뉴클레오티드 서열에 적절한 변형을 도입하거나, 또는 펩티드 합성을 통해 항체의 아미노산 서열 변이체를 제조할 수 있다. 이와 같은 변형은 예를 들어 항원 결합 분자의 아미노산 서열 내에 있는 잔기에 대한 삭제, 및/또는 삽입 및/또는 치환을 포함한다. 최종 작제물이 항원 결합 특성과 같은 원하는 특징을 보유하는 한, 삭제, 삽입 및 치환의 모든 조합을 통해 최종 작제물을 얻을 수 있다.
변이체의 치환, 삽입 및 삭제
특정 실시양태에서, 하나 이상의 아미노산 치환을 갖는 항원 결합 분자 변이체를 제공한다. CDR 및 FR에서 치환할 수 있다. 보존적 치환은 표 2의 "바람직한 치환"이라는 제목 아래에 표시된다. 보다 실질적인 변화는 표 2의 "예시적인 치환"이라는 제목 아래에 제공되어 있으며, 아미노산 측쇄 유형을 참조하여 아래에 추가로 설명된 바와 같다. 아미노산 치환을 관심이 있는 항체에 도입하고, 보존/개선된 항원 결합, 감소된 면역원성 또는 개선된 ADCC 또는 CDC와 같은 원하는 활성에 대해 생성물을 스크리닝할 수 있다.
흔히 보이는 측쇄 특성에 따라 아미노산은 다음과 같이 그룹을 나눌 수 있다:
(1) 소수성: 노르루신, Met, Ala, Val, Leu, Ile;
(2) 중성, 친수성: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln;
(3) 산성: Asp, Glu;
(4) 염기성: His, Lys, Arg;
(5) 쇄 방향 확정에 영향을 미치는 잔기: Gly, Pro;
(6) 방향족: Trp, Tyr, Phe.
비보존적 치환은 한 유형의 구성원을 다른 유형의 구성원으로 대체하는 것이다.
한 유형의 치환 변이체는 부모 항체(예를 들어, 인간화 또는 인간 항체)의 하나 이상의 CDR 잔기를 치환하는 것에 관한다. 일반적으로, 추가 연구를 위해 선택을 거쳐 얻어진 변이체는 부모 항체에 비해 특정 생물학적 특성(예를 들어, 상승된 친화력, 감소된 면역원성)에 대한 변화(예를 들어, 개선)를 가지고, 및/또는 부모 항체의 특정 생물학적 특성을 실질적으로 보존할 것이다. 예시적인 치환 변이체는 친화력이 성숙된 항체이며, 예를 들어, 파지 디스플레이에 기반한 친화력 성숙 기술(본원에 기재된 기술과 같음)을 사용하여 상기 항체를 편리하게 생성할 수 있다. 요약하면, 하나 이상의 CDR 잔기를 돌연변이시키고, 변이체 항체를 파지에 디스플레이하여 이에 대해 특정 생물학적 활성(예를 들어, 결합 친화력)을 스크리닝한다. 예를 들어, 항체 친화력을 개선하기 위해 CDR를 변경(예를 들어, 치환)시킬 수 있다. 이와 같은 변화는 CDR "핫스팟"에 대해, 즉 체세포 성숙 과정에서, 높은 빈도로 돌연변이를 겪는 코돈에 의해 코딩된 잔기 및/또는 항원과 접촉하는 잔기에 대해 이루어질 수 있는 동시에, 얻어진 변이체의 VH 또는 VL에 대해 결합 친화력을 시험할 수 있다. 친화력 성숙의 일부 실시양태에서, 다양한 방법(예를 들어, 오류 유발 PCR, 사슬 셔플링, 또는 올리고뉴클레오티드 지정 돌연변이 유발) 중 어느 한 방법을 통해, 성숙을 위해 선택되는 가변 유전자에 다양성을 도입한다. 그 다음, 2차 라이브러리를 구축한다. 그 다음, 원하는 친화력을 갖는 임의의 항체 변이체를 감정하기 위해 라이브러리를 스크리닝한다. 다양성을 도입하는 또 다른 방법은 여러 개의 CDR 잔기(예를 들어, 한 번에 4~6개의 잔기)가 무작위화되는 CDR-지정 접근법에 관한 것이다. 예를 들어 알라닌 스캐닝 돌연변이 유발 또는 모델링을 사용하여 항원 결합에 관여하는 CDR 잔기를 특이적으로 감정할 수 있다.
특정 실시양태에서, 이와 같은 변화가 항체의 항원 결합 능력을 실질적으로 감소시키지 않는 한, 치환, 삽입 또는 결실은 하나 이상의 CDR 내에서 발생할 수 있다. 예를 들어, 결합 친화력을 실질적으로 감소시키지 않는 보존적 변화(예를 들어, 본원에서 제공하는 바와 같은 보존적 치환)를 CDR에 수행할 수 있다. 위에 제공된 변이체 VH 및 VL 서열의 특정 실시양태에서, 각 CDR은 변경되지 않거나 1, 2 또는 3개 이하의 아미노산 치환을 함유한다.
돌연변이 유발 표적 부위로 삼을 수 있는 항체 내의 잔기 또는 영역을 감정하는 데 사용할 수 있는 방법을 "알라닌 스캐닝 돌연변이 유발"이라고 한다. 이러한 방법에서, 잔기 또는 잔기 그룹(예를 들어, Arg, Asp, His, Lys 및 Glu와 같은 전하를 띤 잔기)을 감정하고, 중성 또는 음전하를 띤 아미노산(예를 들어, Ala 또는 폴리알라닌)으로 대체하여, 해당 항체와 항원의 상호작용이 영향을 받았는지 여부를 확인한다. 초기 치환에 대한 기능적 민감성을 나타내는 아미노산 위치에 추가 치환을 도입할 수 있다. 또한, 항원-항체 복합체의 결정 구조를 연구함으로써 항체와 항원 사이의 접촉점을 감정할 수 있다. 이러한 접촉 잔기와 인접한 잔기는 치환 후보로서 표적화되거나 제거될 수 있다. 원하는 특성을 함유하는지 여부를 확인하기 위해 변이체를 스크리닝할 수 있다.
아미노산 서열 삽입은, 아미노 및/또는 카르복실 단에서 융합이 1개 잔기 또는 길이가 100개 이상의 잔기인 폴리펩티드, 및 단일 또는 복수의 아미노산 잔기의 서열 내 삽입을 포함한다. 말단 삽입의 예로는 N 단 메티오닐 잔기를 갖는 항체를 포함한다. 항체 분자의 다른 삽입 변이체는 항체의 N 단 또는 C 단에 융합된 효소(또는 항체의 혈청 반감기를 연장하는 폴리펩티드)의 융합물을 포함한다.
Fab의 개조
일 측면에서, 본 개시의 항원 결합 분자에서 상기 GPRC5D에 특이적으로 결합하는 항원 결합 모듈과 상기 CD3에 특이적으로 결합하는 항원 결합 모듈 중 하나는 대체된 Fab이고, 상기 대체된 Fab는 중쇄 가변 영역, 경쇄 가변 영역, Titin 사슬 및 Obscurin 사슬을 포함한다. 대체된 Fab에서는 Fab의 원래 CH1과 CL이 Titin 사슬과 Obscurin 사슬에 의해 대체된다(예를 들어, Fab의 원래 CH1 및 CL이 각각 Obscurin 사슬 및 Titin 사슬에 의해 대체되거나, 또는 Fab의 원래 CH1 및 CL이 각각 Titin 사슬 및 Obscurin 사슬에 의해 대체됨). 예시적으로, Titin 사슬과 Obscurin 사슬의 서열은 표 3-1 및 표 3-2에 나타난 바와 같다.
Fc 영역의 개조
일 측면에서, 본 개시의 항원 결합 분자의 Fc 영역은 하나 이상의 아미노산 치환을 포함하며, 상기 하나 이상의 아미노산 치환은 Fc 수용체와의 결합, 예를 들어 Fcγ 수용체와의 결합을 감소시키고 이펙터 기능을 낮추거나 제거한다. 천연 IgG Fc 영역, 구체적으로 IgG1 Fc 영역 또는 IgG4 Fc 영역은 본 개시의 항원 결합 분자가 항원을 발현하는 세포보다는 Fc 수용체를 발현하는 세포를 표적으로 하는 결과를 초래할 수 있다. 본 개시의 개조된 Fc 영역은 Fc 수용체에 대한 감소된 결합 친화력 및/또는 감소된 이펙터 기능을 나타낸다. 일부 실시양태에서, 개조된 Fc 영역은 천연 Fc 영역에 비해 Fc 수용체에 대한 결합 친화력이 50%, 80%, 90% 또는 95% 이상 감소된다. 일부 실시양태에서, 상기 Fc 수용체는 Fcγ 수용체이다. 일부 실시양태에서, 상기 Fc 수용체는 FcγRI, FcγRIIa, FcγRIIB, FcγRIIIa와 같은 인간 Fcγ 수용체이다. 일부 실시양태에서, 개조된 Fc 영역은 천연 Fc 영역에 비해 C1q와 같은 보체에 대한 결합 친화력도 감소된다. 일부 실시양태에서, 개조된 Fc 영역은 천연 Fc 영역에 비해 신생아 Fc 수용체(FcRn)에 대한 결합 친화력이 감소되지 않는다. 일부 실시예에서, 개조된 Fc 영역은 감소된 이펙터 기능을 가지며, 상기 감소된 이펙터 기능은 감소된 보체 의존성 세포 독성(CDC), 감소된 항체 의존성 세포에 의해 매개된 세포 독성(ADCC), 감소된 항체 의존성 세포 식균(ADCP), 감소된 사이토카인 분비, 감소된 면역 복합체에 의해 매개된 항원 제시 세포의 항원 섭취, 감소된 NK 세포와의 결합, 감소된 대식세포와의 결합, 감소된 단핵세포와의 결합, 감소된 다형 핵세포와의 결합, 감소된 직접적인 신호 전달에 의한 세포 사멸, 감소된 수지상 세포 성숙 또는 감소된 T 세포에 의한 유발 중 하나 이상을 포함할 수 있으나 이에 한정되지 않는다. IgG1의 Fc 영역의 경우, 위치 238, 265, 269, 270, 297, 327 및 329 등에 있는 아미노산 잔기의 치환은 이펙터 기능을 감소시킬 수 있다. 일부 실시양태에서, 상기 Fc 영역은 인간 IgG1 Fc 영역이고, 위치 234 및 235에 있는 아미노산 잔기는 EU 인덱스에 따라 넘버링된 A이다. IgG4의 Fc 영역의 경우, 위치 228 등에 있는 아미노산 잔기 치환은 이펙터 기능을 감소시킬 수 있다.
항원 결합 분자는 또한 제1 서브유닛의 354C 및 제2 서브유닛의 349C와 같은 이황화 결합 개조를 포함할 수 있다. 항원 결합 분자의 혈청 반감기를 증가시키기 위해, 돌연변이 252Y, 254T 및 256E를 도입할 수 있다.
항원 결합 분자가 Fc 영역의 두 개의 서브유닛에 융합된 서로 다른 결합 모듈을 포함하는 경우, 원하지 않은 동종이량체화를 초래할 수 있다. 따라서 수율 및 순도를 향상시키기 위해, 본 개시의 항원 결합 분자의 Fc 영역에 이종이량체화를 촉진하는 변형을 도입하는 것이 유리할 것이다. 일부 실시양태에서, 본 개시의 Fc 영역은 놉-인투-홀(knob-into-hole, KIH) 기술에 의한 개조를 포함하며, 해당 방법은 제1 서브유닛의 인터페이스에 놉 구조(knob)를 도입하고 제2 서브유닛의 인터페이스에 홀 구조(hole)를 도입하는 것에 관여한다. 이로써 상기 놉 구조가 홀 구조에 위치 고정될 수 있어, 이종이량체의 형성을 촉진하고 동종이량체의 생성을 억제하도록 한다. 놉 구조는 제1 서브유닛의 인터페이스로부터 유래된 작은 아미노산 측쇄를 더 큰 측쇄(예를 들어 티로신 또는 트립토판)로 치환함으로써 구축된 것이다. 홀 구조는 제2 서브유닛의 인터페이스에서 큰 아미노산 측쇄를 더 작은 아미노산 측쇄(예를 들어 알라닌 또는 트레오닌)로 치환함으로써 구축된 것이다. 놉 구조 및 홀 구조는 폴리펩티드를 코딩하는 핵산을 변경시킴으로써 제조된 것이며, 선택적인 아미노산 치환은 아래 표에 나타난 바와 같다:
놉-인투-홀 기술 이외에, 이종이량체화를 구현하기 위해 중쇄의 CH3 도메인을 변형시키는 데 사용되는 다른 기술, 예를 들어 WO96/27011, WO98/050431, EP1870459, WO2007/110205, WO2007/147901, WO2009/089004, WO2010/129304, WO2011/90754, WO2011/143545, WO2012/058768, WO2013/157954 및 WO013/096291 등 역시 당업계에서 알려져 있다.
Fc 영역의 C 말단은 아미노산 잔기 PGK로 끝나는 온전한 C 말단일 수 있고; 예를 들어 한 개 또는 두 개의 C 말단 아미노산 잔기가 제거된 단축된 C 말단일 수 있다. 바람직한 측면에서, 중쇄의 C 말단은 PG로 끝나는 단축된 C 말단이다. 따라서, 일부 실시양태에서, 온전한 항체의 조성물은 모든 K447 잔기 및/또는 G446+K447 잔기가 제거된 항체 집단을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 온전한 항체의 조성물은 K447 잔기 및/또는 G446+K447 잔기가 제거되지 않은 항체 집단을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 온전한 항체의 조성물은 K447 잔기 및/또는 G446+K447 잔기가 있거나 없는 항체 혼합물의 항체 집단을 갖는다.
재조합 방법
항원 결합 분자는 재조합 방법을 사용하여 생성될 수 있다. 이러한 방법에 대하여, 항원 결합 분자를 코딩하는 하나 이상의 분리된 핵산이 제공된다.
천연 항체, 천연 항체 단편 또는 동종이량체 중쇄를 갖는 이중특이성 항체의 경우, 두 개의 핵산이 필요하며, 하나는 경쇄 또는 이의 단편에 사용되고 다른 하나는 중쇄 또는 이의 단편에 사용된다. 이와 같은 핵산은 항체 VL을 포함하는 아미노산 서열 및/또는 항체 VH를 포함하는 아미노산 서열(예를 들어, 항체의 경쇄 및/또는 중쇄)을 코딩한다. 이들 핵산은 동일한 발현 벡터에 있을 수도 있고 상이한 발현 벡터에 있을 수도 있다.
이종이량체 중쇄를 갖는 이중특이성 항체의 경우, 예를 들어 네 개의 핵산이 필요하며, 하나는 제1 경쇄에 사용되고, 하나는 제1 이종 단량체 Fc 영역 폴리펩티드를 포함하는 제1 중쇄에 사용되고, 하나는 제2 경쇄에 사용되고, 하나는 제2 이종 단량체 Fc 영역 폴리펩티드를 포함하는 제2 중쇄에 사용된다. 이들 네 개의 핵산은 하나 이상의 핵산 분자 또는 발현 벡터에 포함될 수 있으며, 통상적으로 이러한 핵산은 두 개 또는 세 개의 발현 벡터에 위치하고, 즉, 하나의 벡터는 이러한 핵산 중 두 개 이상을 포함할 수 있다.
일 실시양태에서, 본 개시는 앞서 기재된 바와 같은 항체를 코딩하는 분리된 핵산을 제공한다. 이와 같은 핵산은 독립적으로 전술한 임의의 폴리펩티드 사슬을 코딩할 수 있다. 다른 일 측면에서, 본 개시는 이와 같은 핵산을 포함하는 하나 이상의 벡터(예를 들어, 발현 벡터)를 제공한다. 다른 일 측면에서, 본 개시는 이와 같은 핵산을 포함하는 숙주 세포를 제공한다. 일 실시양태에서, 항원 결합 분자를 제조하는 방법이 제공되며, 여기서, 상기 방법은, 항체 발현에 적합한 조건 하에서, 상기 항체를 코딩하는 핵산을 포함하는 숙주 세포(앞서 제공된 바와 같음)를 배양하고, 선택적으로 상기 항체를 숙주 세포(또는 숙주 세포 배지)로부터 회수하는 단계를 포함한다.
항원 결합 분자를 재조합하여 생성하기 위해, 단백질를 코딩하는 핵산을 분리시키고 숙주 세포에서의 추가 클로닝 및/또는 발현을 위해 하나 이상의 벡터에 삽입시킨다. 이와 같은 핵산은 일반적인 절차를 사용하여 쉽게 분리하고 시퀀싱할 수 있거나(예를 들어, 항체 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 유전자에 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오티드 프로브를 사용하여), 또는 재조합 방법을 통해 생성하거나 화학적 합성을 통해 획득할 수 있다.
항체를 코딩하는 벡터를 클로닝하거나 발현시키기에 적합한 숙주 세포는 본원에 설명된 원핵 세포 또는 진핵 세포를 포함한다. 예를 들어, 항체가 특히 글리코실화 및 Fc 이펙터 기능이 필요하지 않은 경우 항체는 박테리아에서 생성될 수 있다. 발현된 후, 항체는 박테리아 세포 페이스트로부터 가용성 분획으로 분리될 수 있고 추가로 정제될 수 있다.
원핵 생물 외에도, 사상 진균 또는 효모와 같은 진핵 미생물도 진균 및 효모 균주를 포함한 항체를 코딩하는 벡터에 적합한 클로닝 또는 발현 숙주이고, 이의 글리코실화 경로는 이미 "인간화"되어 부분적 또는 완전한 인간 글리코실화 패턴을 가진 항체를 생성할 수 있게 되었다. (글리코실화) 항체의 발현에 적합한 숙주 세포는 또한 다세포 유기체(무척추동물 및 척추동물)로부터 유래될 수 있으며, 무척추동물 세포의 예로는 식물 및 곤충 세포를 포함한다. 특히, 스포도프테라 프루기페르다(Spodoptera frugiperda) 세포의 형질감염을 위해 곤충 세포와 함께 사용할 수 있는 많은 바큘로바이러스 균주가 이미 검증되었고; 또한 식물 세포 배양물을 숙주로 사용할 수 있는데, 예를 들어 US5959177, US6040498, US6420548, US7125978 및 US6417429; 또한 척추동물 세포를 숙주로 사용할 수 있으며, 예를 들어 현탁액에서 성장하도록 적응된 포유동물 세포주이다. 적합한 포유동물 숙주 세포주의 다른 예로는 SV40 형질전환된 원숭이 신장 CVl 세포주(COS-7); 인간 배아 신장 세포주(293 또는 293T 세포); 아기 햄스터 신장 세포(BHK); 마우스 세르톨리(Sertoli) 세포(TM4 세포); 원숭이 신장 세포(CV1); 아프리카 녹색 원숭이 신장 세포(VERO-76); 인간 자궁경부암 세포(HELA); 견 신장 세포(MDCK); 버팔로 래트(buffalo rat) 간 세포(BRL3A); 인간 폐세포(W138); 인간 간세포(Hep G2); 마우스 유방 종양(MMT 060562); TRI 세포; MRC 5 세포 및 FS4 세포 등이 있다. 다른 적합한 포유동물 숙주 세포주는 DHFR-CHO 세포를 포함한 중국 햄스터 난소(CHO) 세포 및 Y0, NS0 및 Sp2/0과 같은 골수종 세포주를 포함한다. 항체 생성에 적합한 특정 포유동물 숙주 세포주에 대한 검토는 예를 들어 Yazaki, P. 및 Wu, A.M., Methods in Molecular Biology, Vol. 248, Lo, B.K.C.(편집), Humana Press, Totowa, NJ(2004), 제255-268페이지를 참조한다.
면역접합체
본 개시는 또한 면역접합체를 제공하며, 이는 하나 이상의 세포 독성제와 접합된 항원 결합 분자를 포함하고, 상기 하나 이상의 세포 독성제는 예컨대 화학 치료제 또는 약물, 성장 억제제, 독소(예를 들어, 박테리아, 진균, 식물 또는 동물 유래의 단백질 독소, 효소 활성 독소, 또는 이들의 단편) 또는 방사성 동위원소이다.
진단 및 치료용 조성물
특정 실시양태에서, 본 개시에서 제공되는 항원 결합 분자는 생물학적 샘플에서 GPRC5D 및/또는 CD3의 존재를 검출하는데 사용될 수 있다. 본원에 사용된 용어 "검출"은 정량적 또는 정성적 검출을 포함한다. 특정 실시양태에서, 생물학적 샘플은 종양 조직과 같은 세포 또는 조직을 포함한다.
일 실시양태에서, 진단 또는 검출 방법에 사용하기 위한 항원 결합 분자가 제공된다. 또 다른 일 측면에서, 생물학적 샘플에서 GPRC5D 및/또는 CD3의 존재를 검출하는 방법이 제공된다. 특정 실시양태에서, 해당 방법은 적절한 조건 하에서 생물학적 샘플을 항원 결합 분자와 접촉시키고 검출 시약과 항원 사이에 복합체가 형성되는지 여부를 검출하는 단계를 포함한다. 이와 같은 방법은 체외 또는 체내 방법일 수 있다. 일 실시양태에서, 항원 결합 분자는 치료에 적합한 피험자를 선택하는 데 사용되며, 예를 들어 GPRC5D 및/또는 CD3은 환자를 선택하는 데 사용되는 바이오마커이다.
본 개시의 항원 결합 분자를 사용하여 진단할 수 있는 예시적인 병증의 예로는 종양 또는 암 등을 들 수 있다.
특정 실시양태에서, 표지된 항원 결합 분자가 제공된다. 마커는 직접적으로 검출할 수 있는 마커 또는 모듈(예컨대, 형광, 발색, 전자 밀도, 화학발광 및 방사성 마커)과 간접적으로 검출할 수 있는 모듈(예를 들어, 효소 또는 리간드와 같이, 효소 반응 또는 분자의 상호작용을 통한 간접적으로 검출하는 모듈)이 포함되나 이에 한정되지는 않는다.
다른 측면에서, 예를 들어 이하 임의의 치료 방법에 사용하기 위한 상기 항원 결합 분자를 포함하는 약학적 조성물이 제공된다. 일 측면에서, 약학적 조성물은 본원에 제공된 임의의 항원 결합 분자 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함한다. 또 다른 측면에서, 약학적 조성물은 본원에 제공된 임의의 항원 결합 분자 및 적어도 하나의 별도의 치료제를 포함한다.
본 개시에 기재된 항원 결합 분자의 약학적 조성물은 원하는 순도를 갖는 이와 같은 항원 결합 분자를 하나 이상의 선택적으로 약학적으로 허용 가능한 담체와 혼합함으로써 제조되며, 상기 약학적 조성물은 동결건조된 조성물 또는 수용액의 형태로 존재한다. 체내 투여를 위한 제제는 일반적으로 무균되어 있다. 무균은 예를 들어 무균 막을 통한 여과를 통해 쉽게 구현할 수 있다.
치료 방법 및 투여 경로
본원에 제공된 임의의 항원 결합 분자는 치료 방법에 사용될 수 있다.
또 다른 측면에서, 본 개시는 약물의 제조 또는 준비에 있어서, 항원 결합 분자의 용도를 제공한다. 일 실시양태에서, 상기 약물은 종양 또는 암을 치료하는 데 사용된다. 또한 상기 약물은 상술한 질환에 유효량의 형태로 존재한다. 일부 실시양태에서, 상기 유효량은 단위 일일 용량 또는 단위 주간 용량이다. 이와 같은 일 실시양태에서, 상기 용도는 피험자에게 유효량의 적어도 한 가지의 별도의 치료제(예를 들어, 한 가지, 두 가지, 세 가지, 네 가지, 다섯 가지 또는 여섯 가지의 별도의 치료제)를 투여하는 것을 추가로 포함한다. 앞서 임의의 실시양태에 따른 "피험자"는 인간일 수 있다.
또 다른 측면에서, 상기 항원 결합 분자를 포함하는 약학적 조성물이 제공되며, 예를 들어 이상 임의의 제약 용도 또는 치료 방법에 사용된다. 다른 일 실시양태에서, 약학적 조성물은 또한 적어도 하나의 별도의 치료제를 포함한다.
본 개시의 항원 결합 분자는 단독으로 사용하거나 다른 시약과 함께 치료에 사용될 수 있다. 예를 들어, 본 개시의 항원 결합 분자는 적어도 하나의 별도의 치료제와 공동으로 투여될 수 있다.
본 개시의 항원 결합 분자(및 임의의 별도의 치료제)는 비경구, 폐내 및 비강내 투여를 포함한 임의의 적합한 수단으로 투여될 수 있고, 국소 치료가 필요하는 경우 병변 내에 투여하면 된다. 비경구 주사는 근육 내, 정맥 내, 동맥 내, 복막 내 또는 피하 투여를 포함한다. 투약은 임의의 적절한 경로, 예를 들어 정맥 내 또는 피하 주사와 같은 주사(이 부분은 투여가 단기적인지 장기적인지에 따라 결정)를 통해 투약될 수 있다. 본원에서는 다양한 투약 시점 방안이 고려되는데, 한 번 또는 여러 시점에서 여러 번 투여, 푸시 주사 투여 및 펄스 주사가 포함되나 이에 한정되지 않는다.
본 개시의 항원 결합 분자는 양호한 의료 실천에 부합되는 방식으로 배합, 투약 및 투여된다. 이러한 배경에서 고려되는 요소는 치료받는 구체적인 병증, 치료받는 구체적인 포유동물, 개인 환자의 임상적 상황, 병증의 기인, 시약의 전달 부위, 투여 방법, 투여 시간 배치 및 의학 종사자가 알려진 기타 요소를 포함한다. 항원 결합 분자는 반드시 그럴 필요는 없으나 선택적으로 상기 병증을 예방 또는 치료하기 위해 현재 사용되고 있는 하나 이상의 시약과 함께 배합된다. 이와 같은 다른 시약의 유효량은 약학적 조성물에 존재하는 항원 결합 분자의 양, 병증 또는 치료 유형 및 위에 토론한 기타 요소에 따라 결정된다. 이들은 통상적으로 본원에 기재된 것과 동일한 용량 및 투여 경로로 사용되거나, 또는 본원에 기재된 용량의 약 1 내지 99%로 사용되거나, 또는 임의의 용량으로 사용되고, 경험/임상에 의해 적절하다고 판단되는 임의의 경로를 통해 사용된다.
질환을 예방 또는 치료하기 위해, 본 개시의 항원 결합 분자(단독으로 사용되거나 하나 이상의 다른 별도의 치료제와 조합하여 사용되는 경우)의 적절한 용량은 치료할 질환의 유형, 치료 분자의 유형, 질환의 심각도 및 병정, 예방이나 치료 목적으로 투여되는지 여부, 이전의 치료, 환자의 임상 병력 및 치료 분자에 대한 반응, 및 주치 의사의 판단에 따라 결정될 것이다. 치료 분자는 한 번의 치료 또는 일련의 치료에 걸쳐 환자에게 적절하게 투여된다. 질환의 유형 및 심각도에 따라, 약 1μg/kg 내지 15mg/kg의 항원 결합 분자가 환자에게 투여하기 위한 초기 후보 용량일 수 있으며, 예를 들어 1회 이상의 개별 투여 또는 연속 주사로 투여할 수 있다. 전형적인 일일 용량은 위에 언급한 요인에 따라 약 1μg/kg 내지 100mg/kg 이상 범위일 수 있다. 상응하게, 체중 50kg을 예로 들면, 예시적인 단위 일일 용량은 50μg~5g이다.
제조품
본 개시의 다른 일 측면에서, 상술한 병증을 치료, 예방 및/또는 진단하기 위한 재료를 포함하는 제조품이 제공된다. 해당 제조품은 용기와 용기에 있거나 용기와 함께 있는 라벨 또는 포장 삽입 페이지(package insert)를 포함한다. 적합한 용기는 예를 들어 병, 튜브형 바이알, 주사기 및 IV 용액 백 등을 포함한다. 용기는 유리 또는 플라스틱과 같은 다양한 재료로 형성될 수 있다. 용기에는 단독으로 또는 다른 조성물과 조합하여 질환을 효과적으로 치료, 예방 및/또는 진단하는 조성물이 담겨 있고, 무균 접근 개구가 있을 수 있다(예를 들어, 용기는 피하 주사 바늘로 뚫을 수 있는 마개를 갖는 정맥 내 용액 백 또는 튜브형 바이알일 수 있음). 조성물 중 적어도 하나의 활성제는 본 개시의 항원 결합 분자이다. 라벨 또는 패키지 삽입 페이지는 선택된 병세를 치료하기 위해 해당 조성물을 사용하라는 점을 지시한다. 또한, 제조품은 (a) 본 개시의 항원 결합 분자를 포함하는 조성물이 담긴 제1 용기; 및 (b) 별도의 세포 독성제 또는 다른 측면의 치료제를 포함하는 조성물이 담긴 제2 용기를 포함할 수 있다. 본 개시의 해당 실시양태의 제조품은, 상기 조성물이 특정 병세를 치료하는 데 사용될 수 있다는 점을 지시하는 패키지 삽입 페이지를 추가로 포함할 수 있다. 대안적으로 또는 추가적으로, 제조품은 약학적으로 허용 가능한 완충액을 포함하는 제2(또는 제3) 용기를 추가로 포함할 수 있다. 이는 기타 완충제, 희석제, 필터, 바늘 및 주사기를 비롯한 상업적 및 사용자 관점에서 볼 때 필요한 기타 재료를 추가로 포함할 수 있다.
실시예 및 시험예
아래는 실시예와 시험예를 결부하여 본 개시를 추가로 설명할 것이나, 이러한 실시예와 시험예는 본 개시의 범위를 제한하는 것이 아니다. 본 개시의 실시예와 시험예에서 구체적인 조건이 명시되지 않은 실험 방법은 통상적으로, 콜드 스프링 하버(Cold Spring Harbor)의 항체 기술 실험 매뉴얼, 분자 클론 매뉴얼과 같은 일반적인 조건에 따르거나 원료 또는 제조품의 제조업체에서 권장하는 조건에 따른다. 구체적인 출처가 명시되지 않은 시약은 시판되는 일반적인 시약이다.
실시예 1. Titin 사슬/Obscurin 사슬을 함유하는 항원 결합 분자
본 개시의 Titin 사슬/Obscurin 사슬은 WO2021139758(본원에 전체 내용이 참조로 통합됨) 및 CN202110527339.7 및 이를 우선권 문서로 하는 특허(본원에 전체 내용이 참조로 통합됨)로부터 유래된 폴리펩티드를 포함하는 임의의 적합한 폴리펩티드로부터 유래될 수 있다. 이중특이성 항체 구축에 있어서, CL은 WO2021139758의 kappa 경쇄 불변 영역이고, Titin 사슬 및 Obscurin 사슬의 아미노산 서열은 표 3-1 및 3-2를 참조하고, 링커 서열은 GGGGS(SEQ ID NO: 90), ASTKG(SEQ ID NO: 209) 또는 RTVAS(SEQ ID NO: 210)를 포함하며, 본 실시예의 Fc1, Fc2 및 CH1의 아미노산 서열은 다음과 같다.
>실시예 1-Fc1(knob, SEQ ID NO: 92):
DKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
>실시예 1-Fc2(hole, SEQ ID NO: 93):
DKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
>실시예 1-CH1(SEQ ID NO: 91):
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC
1.1 DI 이중특이성 항체
WO2021139758의 실시예 5를 참조하여, 항hNGF 및 hRANKL의 DI 이중특이성 항체: DI-2 내지 DI-20을 구축하였고, 이는 다음과 같은 제1 중쇄, 제2 중쇄, 제1 경쇄 및 제2 경쇄를 포함한다:
N 단으로부터 C 단까지 순차적으로는 [VH1-I]-[링커 1]-[Obscurin 사슬]-[Fc2]인 제1 중쇄,
N 단으로부터 C 단까지 순차적으로는 [VL1-I]-[링커 2]-[Titin 사슬]인 제1 경쇄,
N 단으로부터 C 단까지 순차적으로는 [VH2-D]-[CH1]-[Fc1]인 제2 중쇄, 및
N 단으로부터 C 단까지 순차적으로는 [VL2-D]-[CL]인 제2 경쇄;
여기서, VH1-I 및 VL1-I는 각각 WO2021139758에서 I0의 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역이고, VH2-D 및 VL2-D는 각각 WO2021139758에서 D0의 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역이다. 본 실시예의 DI 이중특이성 항체의 Obscurin 사슬, Titin 사슬, 링커 1, 링커 2의 구조는 아래 표를 참조한다.
비고: 표의 Titin 사슬과 Obscurin 사슬의 번호는 표 3-1 및 표 3-2를 참조함.WO2021139758의 시험예 4의 방법을 채택하여 DI-2 내지 DI-20 이중특이성 항체 및 이의 항원의 결합 활성을 검출하였다. 항체의 열 안정성 연구가 수행되었다. 연구 방법: 항체의 농도를 PBS를 사용하여 5mg/mL로 희석하고, 고처리량 시차 주사 형광계(UNCHAINED, 사양모델: Unit)를 채택하여 이의 열 안정성을 측정하였다. 실험 결과는 개조 후의 이중특이성 항체의 항원에 대한 결합 활성이 현저한 변화가 없고; DI-2와 비교하여 DI-4 내지 DI-8, DI-10 내지 DI-16, DI-20의 Tm1(℃), Tonset(℃)이 유의하게 향상하였으며 이중특이성 항체의 열 안정성이 더 우수한 것을 보여준다.
10mM 아세트산, pH 5.5, 9% 수크로스 완충액을 채택하여 DI 이중특이성 항체가 함유된 용액을 배합하고, 용액을 40℃ 인큐베이터에 놓고 4주 동안 인큐베이션한 후 항체 농도를 인큐베이션 시작 시 농도로 농축하고 용액의 침전 상황을 관찰한다. 실험 결과는 DI-2 이중특이성 항체 그룹 용액이 침전되었고 DI-3 내지 DI-7이 DI-2보다 안정성이 더 나은 것을 보여준다.
1.2 PL 이중특이성 항체
항-hPDL1 및 hCTLA4의 PL 이중특이성 항체: PL-1 내지 PL-19를 구축하였고, 이는 다음과 같은 제1 중쇄, 제2 중쇄, 제1 경쇄 및 제2 경쇄를 포함한다:
N 단으로부터 C 단까지 순차적으로는 [VH1-P]-[링커 1]-[Obscurin 사슬]-[Fc1]인 제1 중쇄,
N 단으로부터 C 단까지 순차적으로는 [VL1-P]-[링커 2]-[Titin 사슬]인 제1 경쇄,
N 단으로부터 C 단까지 순차적으로는 [VH2-L]-[CH1]-[Fc2]인 제2 중쇄, 및
N 단으로부터 C 단까지 순차적으로는 [VL2-L]-[CL]인 제2 경쇄;
여기서, VH1-P 및 VL1-P는 각각 WO2020177733에서 h1831K 항체의 중쇄 가변 영역과 경쇄 가변 영역이고, VH2-L 및 VL2-L의 아미노산 서열은 다음과 같다.
> VH2-L(SEQ ID NO: 191):
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYTMHWVRQAPGKGLEWVTFISYDGNNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAIYYCARTGWLGPFDYWGQGTLVTVSS
> VL2-L(SEQ ID NO: 192):
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVGSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGAFSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPWTFGQGTKVEIK
본 실시예의 PL 이중특이성 항체의 Obscurin 사슬, Titin 사슬, 링커 1, 링커 2의 구조는 아래 표를 참조한다.
비고: 표의 Titin 사슬과 Obscurin 사슬의 번호는 표 3-1 및 표 3-2를 참조함.
WO2021139758의 시험예 4의 ELISA 방법을 참조하여 PL 이중특이성 항체의 결합 활성을 검출하였으며, 여기서 hPDL1 및 hCTLA4 항원은 Sino biology로부터 구입하였다. 항체의 열 안정성 연구가 수행되었다. 방법: 항체의 농도를 PBS를 사용하여 1.4~3mg/mL로 희석하고, 고처리량 시차 주사 형광계(UNCHAINED, 사양 모델: Unit)를 채택하여 이의 열 안정성을 측정하였다. 실험 결과는 PL 이중특이성 항체는 항원에 대해 여전히 양호한 결합 활성을 갖고; PL-1과 비교하여 PL-2 내지 PL-19의 Tm1(℃), Tagg 266(℃), Tonset(℃)이 유의하게 향상하였으며 이중특이성 항체의 열 안정성이 더 우수한 것을 보여준다.
1.3 HJ 이중특이성 항체
항hIL5 및 hTSLP의 HJ 이중특이성 항체: HJ-3 내지 HJ11을 구축하였고, 이는 다음과 같은 제1 중쇄, 제2 중쇄, 제1 경쇄 및 제2 경쇄를 포함한다:
N 단으로부터 C 단까지 순차적으로는 [VH1-H]-[링커 1]-[Titin 사슬]-[Fc1]인 제1 중쇄,
N 단으로부터 C 단까지 순차적으로는 [VL1-H]-[링커 2]-[Obscurin 사슬]인 제1 경쇄,
N 단으로부터 C 단까지 순차적으로는 [VH2-J]-[CH1]-[Fc2]인 제2 중쇄, 및
N 단으로부터 C 단까지 순차적으로는 [VL2-J]-[CL]인 제2 경쇄;
여기서, VH1-H 및 VL1-H는 각각 WO2021139758에서 H0의 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역이고, VH2-J 및 VL2-J는 각각 WO2021139758에서 J1의 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역이다. 본 실시예의 HJ 이중특이성 항체의 Obscurin 사슬, Titin 사슬, 링커 1, 링커 2의 구조는 아래 표를 참조한다.
WO2021139758의 시험예 4의 방법을 참조하여 HJ 이중특이성 항체의 항원 결합 활성을 검출하였다. 항체의 열 안정성에 대해 연구를 수행하였고, 방법은 10mM 아세트산 pH 5.5, 9% 수크로스의 완충액을 사용하여 HJ 이중특이성 항체 희석액을 배합한 다음, 한외여과 농축 방법을 통해 이중특이성 항체를 농축하여 다양한 농도의 HJ 이중특이성 항체 용액(HJ 이중특이성 항체 농도는 표 13-2 참조)을 획득한 다음, 농축액을 40℃ 인큐베이터에서 인큐베이션하고, 0일째(즉, 40℃에서 인큐베이션 시작 전, D0), 7일째(40℃에서 인큐베이션 7일째, D7), 14일째(40℃에서 인큐베이션 14일째, D14), 21일째(40℃에서 인큐베이션 21일째, D21) 및 28일째(40℃에서 인큐베이션 28일째, D28)에 샘플의 SEC 순도를 검출하고, 40℃에서 인큐베이션 28일 후 즉시 샘플을 채취하여 샘플의 CE-SDS 순도를 검출하였다. 실험 결과는 본 개시에서 구축된 HJ 이중특이성 항체의 항원에 대한 결합 활성은 현저한 변화가 없고; HJ-3과 비교하여 HJ-5 내지 HJ-11 이중특이성 항체의 열 안정성이 더 우수한 것을 보여준다.
실시예 2. 재조합 인간 GPRC5D 및 시노몰구스 GPRC5D를 발현하는 세포주의 구축 및 감정
세포 표면 GPRC5D에 잘 결합할 수 있는 항체를 스크리닝하기 위해, 본 개시는 인간 GPRC5D 또는 시노몰구스 GPRC5D를 발현하는 CHOK1-humanGPRC5D, HEK293-humanGPRC5D, CHOK1-cynoGPRC5D 및 HEK293-cynoGPRC5D 세포주를 구축하였다. 인간 GPRC5D 또는 시노몰구스 GPRC5D의 전장 유전자를 포유동물 세포 발현 벡터 pCDH에 클로닝하고, pVSV-G, pCMV-dR8.91 및 pCDH-humanGPRC5D 또는 pCDH-cynoGPRC5D 플라스미드를 사용하여 HEK293T 세포(ATCC® CRL-11268)를 공동 형질감염시켜 바이러스를 패키징하고, 형질감염 48시간 후 바이러스를 수집하여 각각 CHOK1 세포(ATCC® CCL-61) 및 HEK293 세포(ATCC® CRL-1573)를 감염시켰다. 감염 후 72시간에 유세포 선별을 통해 인간 GPRC5D 또는 시노몰구스 GPRC5D를 고 발현하는 단클론 세포를 획득하였다.
실시예 3: 마우스 항-인간 GPRC5D 단클론 항체의 제조
SJL 마우스는 CHOK1-humanGPRC5D 및 CHOK1-cynoGPRC5D 세포를 사용하여 교차 면역하였다. 7번 면역 후, 혈액을 채취하여 혈청 내 항체의 역가를 측정하고, 혈청 내 항체 역가가 높고 역가가 정체되는 경향을 보이는 마우스를 선택하여 비장 세포를 융합시키고, 융합된 하이브리도마 세포를 96웰 세포 배양 플레이트에 도말하고, 37℃, 5%의 CO2 인큐베이터에서 배양하였다. 세포 배양 상청액을 채취하여 mirrorball 및 유세포 선별 기술(FACS)을 통해 검출하였다. 스크리닝된 양성 클론을 증폭시켜 냉동 보존하고, 단세포 클론을 획득할 때까지 두 번 내지 세 번 서브 클로닝하였다. 선택된 하이브리도마 클론은 무혈청 세포 배양법으로 항체를 추가로 제조하고 정제하였다. 얻어진 하이브리도마 항체는FACS로 항체와 CHOK1-humanGPRC5D, CHOK1-cynoGPRC5D, CHOK1 세포의 결합(방법은 본 개시의 시험예 1 참조)을 검출하고, 인간 원숭이 교차 결합 활성이 양호하고 비특이성 결합이 없는 하이브리도마 세포주 mAb1, mAb24, mAb30, mab45를 선별하였다.
하이브리도마 세포주 mAb1, mAb24, mAb30 및 mab45의 단클론 항체 서열을 클로닝하기 위한 과정은, 대수 성장기 하이브리도마 세포를 수집하여 Trizol(Invitrogen, Cat# 15596-018)로 RNA를 추출하여 cDNA로 역전사시켰다. cDNA를 탬플릿으로 하여 PCR 증폭시킨 후 시퀀싱 업체에 보내고 시퀀싱을 진행하였고, 얻어진 DNA 서열에 대응되는 항체의 가변 영역의 아미노산 서열은 다음과 같다:
mAb1의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열:
EVQLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFTFSDYGMHWVRQAPEKGLEWVAFISSGSSTIYYADTVKGRFTISRDNAKNTLFLQMTSLRSEDTAIYYCTRLGPNWYFDVWGTGTTVTVSS
SEQ ID NO: 1
mAb1의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열:
DVVMTQTPLSLSVSLGDQASISCRSSQSLVHSNGNTYLYWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYFCSQSTHVPPLTFGAGTKLELK
SEQ ID NO: 2
mAb24의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열:
QVQLQQSDAELVKPGGSVKISCKVSGYTFTDYPIHWMKQRPEQGLEWMGYVFPRDGSTKYNEKFRVKATWTADKSSSTVYMQLNSLTSDDSAVYFCSRELTAYWGQGTTLRVSS
SEQ ID NO: 3
mAb24의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열:
DVVLTQTPLTLSVTIGQPASISCKSSQSLLHSNGKTYLNWLLQRPGQSPRRLIYLVSKLDSGVPDRFAGSGSGTDFTLKITRVEAEDLGVYYCAQGTHFPRTFGGGSKLEIR
SEQ ID NO: 4
mAb30의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열:
EVQLQQSGPELVKPGGSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNPEWIGLINPYNGGTRNNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCTRWGLRLAMDYWGQGTSVTVSS
SEQ ID NO: 5
mAb30의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열:
DIVMTQSQKFMSTSVGDRVSVTCKASQNVGSNVAWYQQKPGQSPKALIYSASYRYSGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVQSEDLAEYFCHQYNSYPPTFGAGTKLALK
SEQ ID NO: 6
mAb45의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열:
EVKLVESGGGLVQPGDFLSLSCAASGFTFTDYYLSWVRQPPGKALEWLAFIRNRAKGYTTEYSASVKGRFTISRDNSQSILYLQMNVLRAEDSATYYCARMGGKGWHFDVWGTGTTVTVSS
SEQ ID NO: 7
mAb45의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열:
DVLMTQSPLSLPVSLGDQASISCRSSQSIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFFGSGSGTDFTLKINRVEAEDLGVYYCFQGSHVPFTFGGGTKLEIK
SEQ ID NO: 8
비고: 밑줄 친 부분은 Kabat 넘버링 규칙에 따른 CDR이고, 나머지 부분은 FR임.
비고: 표에서 CDR은 Kabat 넘버링 시스템에 따라 확인됨.
실시예 4. 항-인간 GPRC5D 단클론 항체의 인간화 설계
마우스 유래 단클론 항체 인간화는 본 분야의 수많은 문헌에서 공개적으로 개시한 방법에 따라 수행한다. 요약하면, 획득된 마우스 유래 항체 VH/VL CDR의 전형적인 구조를 기반으로 경쇄 가변 영역(VL)과 중쇄 가변 영역(VH)의 상동 서열을 인간 생식 계열 데이터베이스에서 검색하고, 마우스 유래 항체의 CDR 영역을 인간 유래 탬플릿에 이식하고,VL 및 VH의 일부 잔기를 돌연변이시키고 마우스 유래 항체의 불변 영역을 인간 불변 영역으로 대체하여 최종 인간화 분자를 얻었다.
1. mAb1 항체의 인간화
mAb1의 인간화 중쇄 가변 영역의 FR1, FR2 및 FR3은 IGHV3-21*01을 채택하고, FR4는 IGHJ6*01을 채택하고; 경쇄 가변 영역의 FR1, FR2 및 FR3은 IGKV2-29*02를 채택하고, FR4는 IGKJ2*01을 채택한다. 선택적으로, 인간화 항체의 중쇄 가변 영역의 49, 56, 57 및/또는 93번째 위치의 아미노산이 치환되고; 및/또는 인간화 항체의 경쇄 가변 영역의 2, 28, 29 및/또는 45번째 위치의 아미노산이 치환된다.
비고: 예시적으로, Q45K는 Kabat 넘버링 시스템에 따라 위치 45의 Q가 다시 K로 돌연변이된다는 것을 나타냄. 이에 근거하여 유추된다.
항체 가변 영역의 서열은 다음과 같다(밑줄 친 부분이 CDR, 이하 동일함):
>hu1H1(SEQ ID NO: 33):
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYGMHWVRQAPGKGLEWVAFISSGSSTIYYADTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRLGPNWYFDVWGQGTTVTVSS
> hu1H2(SEQ ID NO: 34):
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYGMHWVRQAPGKGLEWVAFISSGSSNIYYADTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRLGPNWYFDVWGQGTTVTVSS
> hu1H3(SEQ ID NO: 35):
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYGMHWVRQAPGKGLEWVAFISSGSSTQYYADTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRLGPNWYFDVWGQGTTVTVSS
> hu1L1(SEQ ID NO: 36):
DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCRSSQSLVHSNGNTYLYWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCSQSTHVPPLTFGQGTKLEIK
> hu1L2(SEQ ID NO: 37):
DVVMTQTPLSLSVTPGQPASISCRSSQSLVHSNGNTYLYWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCSQSTHVPPLTFGQGTKLEIK
> hu1L3(SEQ ID NO: 38):
DVVMTQTPLSLSVTPGQPASISCRSSQSLVHSSGNTYLYWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCSQSTHVPPLTFGQGTKLEIK
> hu1L4(SEQ ID NO: 39):
DVVMTQTPLSLSVTPGQPASISCRSSQSLVHSQGNTYLYWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCSQSTHVPPLTFGQGTKLEIK
> hu1L5(SEQ ID NO: 40):
DVVMTQTPLSLSVTPGQPASISCRSSQSLVHSTGNTYLYWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCSQSTHVPPLTFGQGTKLEIK
> hu1L6(SEQ ID NO: 41):
DVVMTQTPLSLSVTPGQPASISCRSSQSLVHSNVNTYLYWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCSQSTHVPPLTFGQGTKLEIK
인간화 항체에서 대체된 CDR의 아미노산 서열은 아래 표를 참조한다:
2. mAb24 항체의 인간화
mAb24 항체의 인간화 중쇄 가변 영역의 FR1, FR2 및 FR3은 IGHV1-46*01을 채택하고, FR4는 IGHJ6*01을 채택하고; 경쇄 가변 영역의 FR1, FR2 및 FR3은 IGKV2-30*02를 채택하고, FR4는 IGKJ4*01을 채택한다. 선택적으로, 인간화 항체의 중쇄 가변 영역의 1, 24, 37, 69, 71, 73 및/또는 93번째 위치의 아미노산이 치환되고; 및/또는 인간화 항체의 경쇄 가변 영역의 4, 28, 29, 36 및/또는 37번째 위치의 아미노산이 치환된다.
비고: 예시적으로, M4L은 Kabat 넘버링 시스템에 따라 위치 4의 M이 다시 L로 돌연변이된다는 것을 나타냄. 이에 근거하여 유추된다.항체 가변 영역의 서열은 다음과 같다:
>hu24H1(SEQ ID NO: 42):
EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYPIHWVRQAPGQGLEWMGYVFPRDGSTKYNEKFRVRVTMTADTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCSRELTAYWGQGTTVTVSS
>hu24H2(SEQ ID NO: 43):
EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYPIHWVRQAPGQGLEWMGYVFPRDGSTKYNEKFRVRVTWTADKSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCSRELTAYWGQGTTVTVSS
>hu24H3(SEQ ID NO: 44):
EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKVSGYTFTDYPIHWMRQAPGQGLEWMGYVFPRDGSTKYNEKFRVRVTWTADKSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCSRELTAYWGQGTTVTVSS
>hu24L1(SEQ ID NO: 45):
DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCKSSQSLLHSNGKTYLNWFQQRPGQSPRRLIYLVSKLDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCAQGTHFPRTFGGGTKVEIK
>hu24L2(SEQ ID NO: 46):
DVVLTQSPLSLPVTLGQPASISCKSSQSLLHSNGKTYLNWLLQRPGQSPRRLIYLVSKLDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCAQGTHFPRTFGGGTKVEIK
>hu24L3(SEQ ID NO: 47):
DVVLTQSPLSLPVTLGQPASISCKSSQSLLHSNVKTYLNWLLQRPGQSPRRLIYLVSKLDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCAQGTHFPRTFGGGTKVEIK
>hu24L4(SEQ ID NO: 48):
DVVLTQSPLSLPVTLGQPASISCKSSQSLLHSNLKTYLNWLLQRPGQSPRRLIYLVSKLDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCAQGTHFPRTFGGGTKVEIK
>hu24L5(SEQ ID NO: 49):
DVVLTQSPLSLPVTLGQPASISCKSSQSLLHSSGKTYLNWLLQRPGQSPRRLIYLVSKLDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCAQGTHFPRTFGGGTKVEIK
>hu24L6(SEQ ID NO: 50):
DVVLTQSPLSLPVTLGQPASISCKSSQSLLHSTGKTYLNWLLQRPGQSPRRLIYLVSKLDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCAQGTHFPRTFGGGTKVEIK
인간화 항체에서 대체된 CDR의 아미노산 서열은 아래 표를 참조한다:
3. mAb30 항체의 인간화
mAb30 항체의 인간화 중쇄 가변 영역의 FR1, FR2 및 FR3은 IGHV1-3*01을 채택하고, FR4는 IGHJ6*01을 채택하고; 경쇄 가변 영역의 FR1, FR2 및 FR3은 IGKV1-12*01을 채택하고, FR4는 IGKJ2*01을 채택한다. 선택적으로, 인간화 항체의 중쇄 가변 영역의 1, 28, 43, 45, 54, 69, 71, 73 및/또는 93번째 위치의 아미노산이 치환되고; 및/또는 인간화 항체의 경쇄 가변 영역의 43, 46 및/또는 85번째 위치의 아미노산이 치환된다.
비고: 예시적으로, L46A는 Kabat 넘버링 시스템에 따라 위치 46의 L이 다시 A로 돌연변이된다는 것을 나타냄. 이에 근거하여 유추된다.
항체 가변 영역의 서열은 다음과 같다:
>hu30H1(SEQ ID NO: 51):
EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFTGYTMNWVRQAPGQRLEWMGLINPYNGGTRNNQKFKDRVTITVDKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCTRWGLRLAMDYWGQGTTVTVSS
>hu30H2(SEQ ID NO: 52):
EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFTGYTMNWVRQAPGKRPEWMGLINPYNGGTRNNQKFKDRVTITVDKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCTRWGLRLAMDYWGQGTTVTVSS
>hu30H3(SEQ ID NO: 53):
EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFTGYTMNWVRQAPGKRPEWMGLINPYNGGTRNNQKFKDRVTLTVDKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCTRWGLRLAMDYWGQGTTVTVSS
>hu30H4(SEQ ID NO: 54):
EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFTGYTMNWVRQAPGKRPEWMGLINPYSGGTRNNQKFKDRVTLTVDKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCTRWGLRLAMDYWGQGTTVTVSS
>hu30H5(SEQ ID NO: 55):
EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFTGYTMNWVRQAPGKRPEWMGLINPYTGGTRNNQKFKDRVTLTVDKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCTRWGLRLAMDYWGQGTTVTVSS
>hu30L1(SEQ ID NO: 56):
DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCKASQNVGSNVAWYQQKPGKAPKALIYSASYRYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCHQYNSYPPTFGQGTKLEIK
>hu30L2(SEQ ID NO: 57):
DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCKASQNVGSNVAWYQQKPGKSPKALIYSASYRYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFAEYYCHQYNSYPPTFGQGTKLEIK
인간화 항체에서 대체된 CDR의 아미노산 서열은 아래 표를 참조한다:
4. mAb45 항체의 인간화
mAb45 항체의 인간화 중쇄 가변 영역의 FR1, FR2 및 FR3은 IGHV3-7*01을 채택하고, FR4는 IGHJ6*01을 채택하고; 경쇄 가변 영역의 FR1, FR2 및 FR3은 IGKV2-28*01을 채택하고, FR4는 IGKJ4*01을 채택한다. 선택적으로, 인간화 항체의 중쇄 가변 영역의 30, 38, 49, 74, 75, 76 및/또는 77번째 위치의 아미노산이 치환되고; 및/또는 인간화 항체의 경쇄 가변 영역의 2, 28, 29, 45. 63 및/또는 76번째 위치의 아미노산이 치환된다.
비고: 예시적으로, I2V는 Kabat 넘버링 시스템에 따라 위치 2의 I가 다시 V로 돌연변이된다는 것을 나타냄. 이에 근거하여 유추된다.
항체 가변 영역의 서열은 다음과 같다:
>hu45H1(SEQ ID NO: 58):
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDYYLSWVRQAPGKGLEWVAFIRNRAKGYTTEYSASVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARMGGKGWHFDVWGQGTTVTVSS
>hu45H2(SEQ ID NO: 59):
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYYLSWVRQAPGKGLEWVAFIRNRAKGYTTEYSASVKGRFTISRDNSKSSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARMGGKGWHFDVWGQGTTVTVSS
>hu45H3(SEQ ID NO: 60):
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYYLSWVRQAPGKGLEWVAFIRNRAKGYTTEYSASVKGRFTISRDNSQSILYLQMNSLRAEDTAVYYCARMGGKGWHFDVWGQGTTVTVSS
>hu45H4(SEQ ID NO: 61):
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYYLSWVRQAPGKGLEWVAFIRNRAKGYTTEYSASVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARMGGKGWHFDVWGQGTTVTVSS
>hu45H5(SEQ ID NO: 62):
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYYLSWVRQAPGKGLEWVAFIRNRAKGYTTEYSASVKGRFTISRDNSKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARMGGKGWHFDVWGQGTTVTVSS
>hu45H6(SEQ ID NO: 63):
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYYLSWVRQAPGKGLEWVAFIRNRAKGYTTEYSASVKGRFTISRDNAKNILYLQMNSLRAEDTAVYYCARMGGKGWHFDVWGQGTTVTVSS
>hu45H7(SEQ ID NO: 64):
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYYLSWVRQAPGKGLEWVAFIRNRAKGYTTEYSASVKGRFTISRDNAQNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARMGGKGWHFDVWGQGTTVTVSS
>hu45H8(SEQ ID NO: 65):
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYYLSWVKQAPGKGLEWVAFIRNRAKGYTTEYSASVKGRFTISRDNSKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARMGGKGWHFDVWGQGTTVTVSS
>hu45H9(SEQ ID NO: 66):
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYYLSWVKQAPGKGLEWVAFIRNRAKGYTTEYSASVKGRFTISRDNAKNILYLQMNSLRAEDTAVYYCARMGGKGWHFDVWGQGTTVTVSS
>hu45H10(SEQ ID NO: 67):
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYYLSWVKQAPGKGLEWVAFIRNRAKGYTTEYSASVKGRFTISRDNAQNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARMGGKGWHFDVWGQGTTVTVSS
>hu45H11(SEQ ID NO: 68):
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYYLSWVKQAPGKGLEWVGFIRNRAKGYTTEYSASVKGRFTISRDNSQSILYLQMNSLRAEDTAVYYCARMGGKGWHFDVWGQGTTVTVSS
>hu45L1(SEQ ID NO: 69):
DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQGSHVPFTFGGGTKVEIK
>hu45L2(SEQ ID NO: 70):
DVVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQGSHVPFTFGGGTKVEIK
>hu45L3(SEQ ID NO: 71):
DVVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFFGSGSGTDFTLKINRVEAEDVGVYYCFQGSHVPFTFGGGTKVEIK
>hu45L4(SEQ ID NO: 72):
DVVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSIVHSQGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFFGSGSGTDFTLKINRVEAEDVGVYYCFQGSHVPFTFGGGTKVEIK
>hu45L5(SEQ ID NO: 73):
DVVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSIVHSSGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFFGSGSGTDFTLKINRVEAEDVGVYYCFQGSHVPFTFGGGTKVEIK
>hu45L6(SEQ ID NO: 74):
DVVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSIVHSTGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFFGSGSGTDFTLKINRVEAEDVGVYYCFQGSHVPFTFGGGTKVEIK
>hu45L7(SEQ ID NO: 75):
DVVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSIVHSNRNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFFGSGSGTDFTLKINRVEAEDVGVYYCFQGSHVPFTFGGGTKVEIK
인간화 항체에서 대체된 CDR의 아미노산 서열은 아래 표를 참조한다:
실시예 5. 키메라 항체의 구축
마우스 유래 항-GPRC5D 항체 mAb1, mAb24, mAb30 및 mAb45의 가변 영역 서열을 각각 SEQ ID NO: 96에 제시된 경쇄 불변 영역 및 SEQ ID NO: 215에 제시된 중쇄 불변 영역과 조합하여 키메라 항체 Chi-1, Chi-24, Chi-30, Chi-45를 획득하였다. 예시적으로, Chi-1은 mAb1의 마우스 유래 중쇄 가변 영역, 경쇄 가변 영역 및 상기 불변 영역을 포함하는 키메라 항체를 나타내며, 이에 근거하여 유추된다. 키메라 항체의 중쇄 불변 영역과 경쇄 불변 영역의 서열은 다음과 같다:
>중쇄 불변 영역 서열(SEQ ID NO: 215): ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
Chi-1의 중쇄 서열(SEQ ID NO: 216):
EVQLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFTFSDYGMHWVRQAPEKGLEWVAFISSGSSTIYYADTVKGRFTISRDNAKNTLFLQMTSLRSEDTAIYYCTRLGPNWYFDVWGTGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
Chi-1의 경쇄 서열(SEQ ID NO: 217):
DVVMTQTPLSLSVSLGDQASISCRSSQSLVHSNGNTYLYWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYFCSQSTHVPPLTFGAGTKLELKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
Chi-24의 중쇄 서열(SEQ ID NO: 218):
QVQLQQSDAELVKPGGSVKISCKVSGYTFTDYPIHWMKQRPEQGLEWMGYVFPRDGSTKYNEKFRVKATWTADKSSSTVYMQLNSLTSDDSAVYFCSRELTAYWGQGTTLRVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
Chi-24의 경쇄 서열(SEQ ID NO: 219):
DVVLTQTPLTLSVTIGQPASISCKSSQSLLHSNGKTYLNWLLQRPGQSPRRLIYLVSKLDSGVPDRFAGSGSGTDFTLKITRVEAEDLGVYYCAQGTHFPRTFGGGSKLEIRRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
Chi-30의 중쇄 서열(SEQ ID NO: 220):
EVQLQQSGPELVKPGGSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNPEWIGLINPYNGGTRNNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCTRWGLRLAMDYWGQGTSVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
Chi-30의 경쇄 서열(SEQ ID NO: 221):
DIVMTQSQKFMSTSVGDRVSVTCKASQNVGSNVAWYQQKPGQSPKALIYSASYRYSGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVQSEDLAEYFCHQYNSYPPTFGAGTKLALKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
Chi-45의 중쇄 서열(SEQ ID NO: 222):
EVKLVESGGGLVQPGDFLSLSCAASGFTFTDYYLSWVRQPPGKALEWLAFIRNRAKGYTTEYSASVKGRFTISRDNSQSILYLQMNVLRAEDSATYYCARMGGKGWHFDVWGTGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
Chi-45의 경쇄 서열(SEQ ID NO: 223):
DVLMTQSPLSLPVSLGDQASISCRSSQSIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFFGSGSGTDFTLKINRVEAEDLGVYYCFQGSHVPFTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
실시예 6. 항-GPRC5D/CD3 이중특이성 항체의 제조 및 감정
본 개시의 CD3 결합 분자는 임의의 적합한 항체로부터 유래될 수 있다. 특히 적합한 항체는 예를 들어 국제 출원 번호 PCT/CN2019/123548(본원에 전체 내용이 참조로 통합됨)에 설명되어 있다. 구체적으로, 본 개시의 실시예는 S107E를 채택한다.
S107E 가변 영역의 서열은 다음과 같다:
> S107E-VH(SEQ ID NO: 82):
EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNEYISYWAYWGQGTLVTVSS
> S107E-VL(SEQ ID NO: 83):
QTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQKPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL
인간화 항-GPRC5D 항체 가변 영역은 각각 항-CD3 항체 S107E의 가변 영역, IgG1(CH1), Obscurin, Titin 및 IgG1 돌연변이체 IgG1(AA, L234A/L235A)과 조합되었다. 각각은 여러 가지 서로 다른 형태의 이중특이성 항체를 형성하며, 각각 식 2, 식 2-0G4S, 식 4, 식 4-0G4S 및 식 11이다.
식 2(즉, F2)는 네 개의 사슬을 포함하는 비대칭 구조 분자이다:
사슬 1: VH(anti-GPRC5D)-IgG1(CH1)-IgG1Fc(Knob);
사슬 2: VL(anti-GPRC5D)-CL;
사슬 3(OB(A1B0)-linker1-Hole): VH(S107E)-linker1-Obscurin(A1B0)-IgG1Fc(Hole);
사슬 4(VL-linker2-Titin(A1B0)): VL(S107E)-linker2-Titin(A1B0), 이의 개략도는 도 1A에 나타난 바와 같다(OB는 Obscurin을 나타냄).
여기서:
>linker1 또는 linker2: GGGGS(SEQ ID NO: 90)
> OB(A1B0)-linker1-Hole(SEQ ID NO: 84):
EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNEYISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSSGAPRFLTRPKASVVSVGKDATLSCQIVGNPFPQVSWEKDKQPVTAGVRFRLAQDGDLYRLKILDLQLSDSGQYVCRARNAHGEAFACLGLQVDAEADKTHTCPPCPAPE AA GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQV C TLPPSRDELTKNQVSL S C A VKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFL V SKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
비고: Kabat 넘버링 규칙에 따라 획득된 CD3 결합 도메인 CDR은 " "로 표기되고, 중쇄 불변 영역은 "기울임꼴"로 표기되고, linker1은 " "로 표기되고, Obscurin(A1B0)은 " "로 표기되고, 돌연변이 부위(L234A, L235A, Y349C, T366S, L368A, Y407V)는 " "로 표기됨.
> VL-linker2-Titin(A1B0)(SEQ ID NO: 85):
QTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQKPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVLGGGGS GIPPKIECLPIDISIDEGKVLTVASAFTGEPTPEVTWSTGGRKIHSQEQGRFHIENTDDSTTLTIKDVQKQDGGLYTLTLRNEFGSDSATVNIHIRSI
비고: Kabat 넘버링 규칙에 따라 획득된 CD3 결합 도메인 CDR은 " "로 표기되고, linker2는 " "로 표기되고, Titin(A1B0)은 " "로 표기됨.
식 2-0G4S(즉, F2-0G4S)는 네 개의 사슬을 포함하는 비대칭 구조 분자이다:
사슬 1: VH(anti-GPRC5D)-IgG1(CH1)-IgG1Fc(Knob);
사슬 2: VL(anti-GPRC5D)-CL;
사슬 3(OB(A0B2)-Hole): VH(S107E)-OB(A0B2)-IgG1Fc(Hole);
사슬 4(VL-Titin(A0B2)): VL(S107E)-Titin(A0B2), 이의 개략도는 도 1B에 나타난 바와 같다(OB는 Obscurin을 나타냄).
여기서:
> OB(A0B2)-Hole(SEQ ID NO: 86):
EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNEYISYWAYWGQGTLVTVSSSGAPRFLTCPKASVVSVGKDATLSSQIVGNPFPQVSWEKDKQPVTAGVRFRLAQDGDLYRLKILDLQLSDSGQYVSRARNAHGEAFACLGLQVDAEADKTHTCPPCPAPE AA GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQV C TLPPSRDELTKNQVSL S C A VKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFL V SKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
비고: Kabat 넘버링 규칙에 따라 획득된 CD3 결합 도메인 CDR은 " "로 표기되고, 중쇄 불변 영역은 "기울임꼴"로 표기되고, Obscurin(A0B2)은 " "로 표기되고, 돌연변이 부위(L234A, L235A, Y349C, T366S, L368A, Y407V)는 " "로 표기됨.
> VL-Titin(A0B2)(SEQ ID NO: 87):
QTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQKPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVLGIPPKIECLPIDISIDEGKVLTVASCFTGEPTPEVTWSTGGRKIHSQEQGRFHIENTDDSTTLTIKDVQKQDGGLYTLTLRNEFGSDSATVNIHIRSI
비고: Kabat 넘버링 규칙에 따라 획득된 CD3 결합 도메인 CDR은 " "로 표기됨.
Titin(A0B2)은 " "로 표기된다.
식 4(즉, F4)는 네 개의 사슬을 포함하는 비대칭 구조 분자이다:
사슬 1(OB(A1B0)-linker3-Knob): VH(S107E)-linker3-OB (A1B0)-IgG1Fc(Knob);
사슬 2 (VL-linker4-Titin(A1B0)): VL(S107E)-linker4-Titin(A1B0);
사슬 3: VH(anti-GPRC5D)-IgG1(CH1)-IgG1Fc(Hole);
사슬 4: VL(anti-GPRC5D)-CL;
이의 개략도는 도 1C에 나타난 바와 같다(OB는 Obscurin을 나타냄).
>linker3 또는 linker4: GGGGS(SEQ ID NO: 90)
> OB(A1B0)-linker3-Knob(SEQ ID NO: 88):
EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNEYISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSSGAPRFLTRPKASVVSVGKDATLSCQIVGNPFPQVSWEKDKQPVTAGVRFRLAQDGDLYRLKILDLQLSDSGQYVCRARNAHGEAFACLGLQVDAEADKTHTCPPCPAPE AA GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPP C RDELTKNQVSL W CLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
비고: Kabat 넘버링 규칙에 따라 획득된 CD3 결합 도메인 CDR은 " "로 표기되고, 중쇄 불변 영역은 "기울임꼴"로 표기되고, Obscurin(A1B0)은 " "로 표기되고, 돌연변이 부위(L234A, L235A, S354C, T366W)는 " "로 표기되고, linker3은 " "로 표기됨.
> VL-linker4-Titin(A1B0)(SEQ ID NO: 85):
QTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQKPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVLGGGGSGIPPKIECLPIDISIDEGKVLTVASAFTGEPTPEVTWSTGGRKIHSQEQGRFHIENTDDSTTLTIKDVQKQDGGLYTLTLRNEFGSDSATVNIHIRSI
비고: Kabat 넘버링 규칙에 따라 획득된 CD3 결합 도메인 CDR은 " "로 표기되고, Titin(A1B0)은 " "로 표기되고, linker4는 " "로 표기됨.
식 4-0G4S(즉, F4-0G4S)는 네 개의 사슬을 포함하는 비대칭 구조 분자이다:
사슬 1(OB(A0B2)-Knob): VH(S107E)-OB(A0B2)-IgG1Fc(Knob);
사슬 2(VL-Titin(A0B2)): VL(S107E)-Titin(A0B2);
사슬 3: VH(anti-GPRC5D)-IgG1(CH1)-IgG1Fc(Hole);
사슬 4: VL(anti-GPRC5D)-CL;
이의 개략도는 도 1D에 나타난 바와 같다(OB는 Obscurin을 나타냄).
> Ob(A0B2)-Knob(SEQ ID NO: 89):
EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNEYISYWAYWGQGTLVTVSSSGAPRFLTCPKASVVSVGKDATLSSQIVGNPFPQVSWEKDKQPVTAGVRFRLAQDGDLYRLKILDLQLSDSGQYVSRARNAHGEAFACLGLQVDAEADKTHTCPPCPAPE AA GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPP C RDELTKNQVSL W CLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
비고: Kabat 넘버링 규칙에 따라 획득된 CD3 결합 도메인 CDR은 " "로 표기되고, 중쇄 불변 영역은 "기울임꼴"로 표기되고, Obscurin(A0B2)은 " "로 표기되고, 돌연변이 부위(L234A, L235A, S354C, T366W)는 " "로 표기됨.
> VL-Titin(A0B2)(SEQ ID NO: 87):
QTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQKPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVLGIPPKIECLPIDISIDEGKVLTVASCFTGEPTPEVTWSTGGRKIHSQEQGRFHIENTDDSTTLTIKDVQKQDGGLYTLTLRNEFGSDSATVNIHIRSI
비고: Kabat 넘버링 규칙에 따라 획득된 CD3 결합 도메인 CDR은 " "로 표기되고, Titin(A0B2)은 " "로 표기됨.
여기서:
> IgG1(CH1)(SEQ ID NO: 91):
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC
> IgG1Fc(Knob)(SEQ ID NO: 92):
DKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
> IgG1Fc(Hole)(SEQ ID NO: 93):
DKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
식 11(즉, F11)은 두 개의 동일한 중쇄(사슬 1) 및 두 개의 동일한 경쇄(사슬 2)를 포함하는 대칭 구조 분자이다.
사슬 1(중쇄): VH(anti-GPRC5D)-IgG1(CH1)-VH(S107E)-linker5-VL(S107E)-linker6-
IgG1(AA)Fc;
사슬 2(경쇄): VL(anti-GPRC5D)-CL; 이의 개략도는 도 1E에 나타난 바와 같다.
여기서:
>linker5: GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO: 94)
>linker6: GGG(SEQ ID NO: 95)
> IgG1(CH1)(SEQ ID NO: 91):
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC
> CL(SEQ ID NO: 96):
RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
> IgG1(AA)Fc(SEQ ID NO: 97):
DKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
mAb1, mAb24, mAb30 및 mAb45 항체의 인간화 항체 아미노산 서열을 기반으로 하여 각각 다음과 같은 이중특이성 항체를 구축하였다.
비고: 표 24에서 F11-1은 해당 분자가 mAb1 및 이의 인간화 항체의 가변 영역을 GPRC5D 결합 도메인으로, 식 11을 분자 구조로 채택함을 나타내고; F2-1은 해당 분자가 mAb1 및 이의 인간화 항체의 가변 영역을 GPRC5D 결합 도메인으로, 식 2를 분자 구조로 채택함을 나타냄.
구체적인 아미노산 서열은 다음과 같다:
F11-1, F11-2, F11-3의 사슬 1(> hu1H2-F11-1(SEQ ID NO: 98)):
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYGMHWVRQAPGKGLEWVAFISSGSSNIYYADTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRLGPNWYFDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCEVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFN KYAMN WVRQAPGKGLEWVA RIRSKYNNYATYYADSVKD RFTISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVR HGNFGNEYISYWAY WGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTC GSSTGAVTSGNYPN WVQQKPGQAPRGLIG GTKFLAP GTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDEAEYYC VLWYSNRWV FGGGTKLTVLGGGDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
F11-4, F11-5, F11-6의 사슬 1(> hu1H3-F11-1(SEQ ID NO: 99)):
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYGMHWVRQAPGKGLEWVAFISSGSSTQYYADTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRLGPNWYFDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCEVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFN KYAMN WVRQAPGKGLEWVA RIRSKYNNYATYYADSVKD RFTISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVR HGNFGNEYISYWAY WGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTC GSSTGAVTSGNYPN WVQQKPGQAPRGLIG GTKFLAP GTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDEAEYYC VLWYSNRWV FGGGTKLTVLGGGDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
F11-1, F11-4의 사슬 2(> hu1L1-CL(SEQ ID NO: 100)):
DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCRSSQSLVHSNGNTYLYWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCSQSTHVPPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
F11-2, F11-5의 사슬 2(> hu1L3-CL(SEQ ID NO: 101)):
DVVMTQTPLSLSVTPGQPASISCRSSQSLVHSSGNTYLYWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCSQSTHVPPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
F11-3, F11-6의 사슬 2(> hu1L4-CL(SEQ ID NO: 102)):
DVVMTQTPLSLSVTPGQPASISCRSSQSLVHSQGNTYLYWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCSQSTHVPPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
F11-7, F11-8, F11-9의 사슬 1(> hu24H2-F11-1(SEQ ID NO: 103)):
EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYPIHWVRQAPGQGLEWMGYVFPRDGSTKYNEKFRVRVTWTADKSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCSRELTAYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCEVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFN KYAMN WVRQAPGKGLEWVA RIRSKYNNYATYYADSVKD RFTISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVR HGNFGNEYISYWAY WGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTC GSSTGAVTSGNYPN WVQQKPGQAPRGLIG GTKFLAP GTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDEAEYYC VLWYSNRWV FGGGTKLTVLGGGDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
F11-10, F11-11, F11-12의 사슬 1(> hu24H3-F11-1(SEQ ID NO: 104)):
EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKVSGYTFTDYPIHWMRQAPGQGLEWMGYVFPRDGSTKYNEKFRVRVTWTADKSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCSRELTAYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCEVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFN KYAMN WVRQAPGKGLEWVA RIRSKYNNYATYYADSVKD RFTISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVR HGNFGNEYISYWAY WGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTC GSSTGAVTSGNYPN WVQQKPGQAPRGLIG GTKFLAP GTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDEAEYYC VLWYSNRWV FGGGTKLTVLGGGDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
F11-7, F11-10의 사슬 2(> hu24L2-CL(SEQ ID NO: 105)):
DVVLTQSPLSLPVTLGQPASISCKSSQSLLHSNGKTYLNWLLQRPGQSPRRLIYLVSKLDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCAQGTHFPRTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
F11-8, F11-11의 사슬 2(> hu24L5-CL(SEQ ID NO: 106)):
DVVLTQSPLSLPVTLGQPASISCKSSQSLLHSSGKTYLNWLLQRPGQSPRRLIYLVSKLDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCAQGTHFPRTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
F11-9, F11-12의 사슬 2(> hu24L6-CL(SEQ ID NO: 107)):
DVVLTQSPLSLPVTLGQPASISCKSSQSLLHSTGKTYLNWLLQRPGQSPRRLIYLVSKLDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCAQGTHFPRTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
F11-13, F11-15의 사슬 1(> hu30H4-F11-1(SEQ ID NO: 108)):
EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFTGYTMNWVRQAPGKRPEWMGLINPYSGGTRNNQKFKDRVTLTVDKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCTRWGLRLAMDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCEVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFN KYAMN WVRQAPGKGLEWVA RIRSKYNNYATYYADSVKD RFTISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVR HGNFGNEYISYWAY WGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTC GSSTGAVTSGNYPN WVQQKPGQAPRGLIG GTKFLAP GTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDEAEYYC VLWYSNRWV FGGGTKLTVLGGGDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
F11-14, F11-16의 사슬 1(> hu30H5-F11-1(SEQ ID NO: 109)):
EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFTGYTMNWVRQAPGKRPEWMGLINPYTGGTRNNQKFKDRVTLTVDKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCTRWGLRLAMDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCEVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFN KYAMN WVRQAPGKGLEWVA RIRSKYNNYATYYADSVKD RFTISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVR HGNFGNEYISYWAY WGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTC GSSTGAVTSGNYPN WVQQKPGQAPRGLIG GTKFLAP GTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDEAEYYC VLWYSNRWV FGGGTKLTVLGGGDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
F11-13, F11-14의 사슬 2(> hu30L1-CL(SEQ ID NO: 110)):
DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCKASQNVGSNVAWYQQKPGKAPKALIYSASYRYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCHQYNSYPPTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
F11-15, F11-16의 사슬 2(> hu30L2-CL(SEQ ID NO: 111)):
DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCKASQNVGSNVAWYQQKPGKSPKALIYSASYRYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFAEYYCHQYNSYPPTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
F4-1의 사슬 3(> hu45H4-CH1-Hole(SEQ ID NO: 112)):
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYYLSWVRQAPGKGLEWVAFIRNRAKGYTTEYSASVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARMGGKGWHFDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
F4-2의 사슬 3(> hu45H5-CH1-Hole(SEQ ID NO: 113)):
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYYLSWVRQAPGKGLEWVAFIRNRAKGYTTEYSASVKGRFTISRDNSKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARMGGKGWHFDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
F4-3의 사슬 3(> hu45H7-CH1-Hole(SEQ ID NO: 114)):
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYYLSWVRQAPGKGLEWVAFIRNRAKGYTTEYSASVKGRFTISRDNAQNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARMGGKGWHFDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
F4-4의 사슬 3(> hu45H8-CH1-Hole(SEQ ID NO: 115)):
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYYLSWVKQAPGKGLEWVAFIRNRAKGYTTEYSASVKGRFTISRDNSKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARMGGKGWHFDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
F4-5의 사슬 3(> hu45H10-CH1-Hole(SEQ ID NO: 116)):
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYYLSWVKQAPGKGLEWVAFIRNRAKGYTTEYSASVKGRFTISRDNAQNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARMGGKGWHFDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
F4-1, F4-2, F4-3, F4-4, F4-5의 사슬 4(> hu45L7-CL(SEQ ID NO: 117)):
DVVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSIVHSNRNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFFGSGSGTDFTLKINRVEAEDVGVYYCFQGSHVPFTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
F2-0G4S-1의 사슬 1(>hu1H3-CH1-Knob(SEQ ID NO: 118)):
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYGMHWVRQAPGKGLEWVAFISSGSSTQYYADTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRLGPNWYFDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
F4-8의 사슬 3(>hu1H3-CH1-Hole(SEQ ID NO: 119)):
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYGMHWVRQAPGKGLEWVAFISSGSSTQYYADTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRLGPNWYFDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
F2-2의 사슬 1(>hu24H3-CH1-Knob(SEQ ID NO: 120)):
EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKVSGYTFTDYPIHWMRQAPGQGLEWMGYVFPRDGSTKYNEKFRVRVTWTADKSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCSRELTAYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
F4-6의 사슬 3(>hu24H3-CH1-Hole(SEQ ID NO: 121)):
EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKVSGYTFTDYPIHWMRQAPGQGLEWMGYVFPRDGSTKYNEKFRVRVTWTADKSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCSRELTAYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
F2-3의 사슬 1(>hu30H5-CH1-Knob(SEQ ID NO: 122)):
EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFTGYTMNWVRQAPGKRPEWMGLINPYTGGTRNNQKFKDRVTLTVDKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCTRWGLRLAMDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
F4-7의 사슬 3(>hu30H5-CH1-Hole(SEQ ID NO: 123)):
EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFTGYTMNWVRQAPGKRPEWMGLINPYTGGTRNNQKFKDRVTLTVDKSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCTRWGLRLAMDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
F2-4의 사슬 1(>hu45H10-CH1-Knob(SEQ ID NO: 124)):
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYYLSWVKQAPGKGLEWVAFIRNRAKGYTTEYSASVKGRFTISRDNAQNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARMGGKGWHFDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
F11-17의 사슬 1(>Chi-1-F11-1)(SEQ ID NO: 224):
EVQLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFTFSDYGMHWVRQAPEKGLEWVAFISSGSSTIYYADTVKGRFTISRDNAKNTLFLQMTSLRSEDTAIYYCTRLGPNWYFDVWGTGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCEVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFN KYAMN WVRQAPGKGLEWVA RIRSKYNNYATYYADSVKD RFTISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVR HGNFGNEYISYWAY WGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTC GSSTGAVTSGNYPN WVQQKPGQAPRGLIG GTKFLAP GTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDEAEYYC VLWYSNRWV FGGGTKLTVLGGGDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
F11-17의 사슬 2(>Chi-1VL-CL)(SEQ ID NO: 217):
DVVMTQTPLSLSVSLGDQASISCRSSQSLVHSNGNTYLYWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYFCSQSTHVPPLTFGAGTKLELKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
F11-18의 사슬 1(>Chi-24-F11-1)(SEQ ID NO: 225):
QVQLQQSDAELVKPGGSVKISCKVSGYTFTDYPIHWMKQRPEQGLEWMGYVFPRDGSTKYNEKFRVKATWTADKSSSTVYMQLNSLTSDDSAVYFCSRELTAYWGQGTTLRVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCEVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFN KYAMN WVRQAPGKGLEWVA RIRSKYNNYATYYADSVKD RFTISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVR HGNFGNEYISYWAY WGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTC GSSTGAVTSGNYPN WVQQKPGQAPRGLIG GTKFLAP GTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDEAEYYC VLWYSNRWV FGGGTKLTVLGGGDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
F11-18의 사슬 2(>Chi-24VL-CL)(SEQ ID NO: 219):
DVVLTQTPLTLSVTIGQPASISCKSSQSLLHSNGKTYLNWLLQRPGQSPRRLIYLVSKLDSGVPDRFAGSGSGTDFTLKITRVEAEDLGVYYCAQGTHFPRTFGGGSKLEIRRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
F11-19의 사슬 1(>Chi-30-F11-1)(SEQ ID NO: 226):
EVQLQQSGPELVKPGGSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNPEWIGLINPYNGGTRNNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCTRWGLRLAMDYWGQGTSVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCEVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFN KYAMN WVRQAPGKGLEWVA RIRSKYNNYATYYADSVKD RFTISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVR HGNFGNEYISYWAY WGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTC GSSTGAVTSGNYPN WVQQKPGQAPRGLIG GTKFLAP GTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDEAEYYC VLWYSNRWV FGGGTKLTVLGGGDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
F11-19의 사슬 2(>Chi-30VL-CL)(SEQ ID NO: 221):
DIVMTQSQKFMSTSVGDRVSVTCKASQNVGSNVAWYQQKPGQSPKALIYSASYRYSGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVQSEDLAEYFCHQYNSYPPTFGAGTKLALKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
F4-9의 사슬 3(>Chi-45-CHI-Hole)(SEQ ID NO: 227):
EVKLVESGGGLVQPGDFLSLSCAASGFTFTDYYLSWVRQPPGKALEWLAFIRNRAKGYTTEYSASVKGRFTISRDNSQSILYLQMNVLRAEDSATYYCARMGGKGWHFDVWGTGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
F4-9의 사슬 4(>Chi-45VL-CL)(SEQ ID NO: 223):
DVLMTQSPLSLPVSLGDQASISCRSSQSIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFFGSGSGTDFTLKINRVEAEDLGVYYCFQGSHVPFTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
본 개시에 사용된 양성 대조 분자는 JNJ-64407564이다. 서열은 다음과 같다(WO2018017786으로부터 유래):
>중쇄(anti-GPRC5D)(SEQ ID NO: 125):
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFTGYTMNWVRQAPGQGLEWMGLINPYNSDTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARVALRVALDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
>경쇄(anti-GPRC5D)(SEQ ID NO: 126):
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQNVATHVGWYQQKPGKAPKRLIYSASYRYSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISNLQPEDFATYYCQQYNRYPYTFGQGTKLEIK
RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
>중쇄(anti-CD3E)(SEQ ID NO: 127):
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFNTYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYAASVKGRFTISRDDSKNSLYLQMNSLKTEDTAVYYCARHGNFGNSYVSWFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFLLYSKLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
>경쇄(anti-CD3E)(SEQ ID NO: 128):
QTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCRSSTGAVTTSNYANWVQQKPGQAPRGLIGGTNKRAPGTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDEAEYYCALWYSNLWVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
>JNJ-64407564의 인간화 항-GPRC5D 항체의 중쇄 가변 영역(SEQ ID NO: 228):
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFTGYTMNWVRQAPGQGLEWMGLINPYNSDTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARVALRVALDYWGQGTLVTVSS
>JNJ-64407564의 인간화 항-GPRC5D 항체의 경쇄 가변 영역(SEQ ID NO: 229):
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQNVATHVGWYQQKPGKAPKRLIYSASYRYSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISNLQPEDFATYYCQQYNRYPYTFGQGTKLEIK
>JNJ7564-huIgG1의 중쇄(SEQ ID NO: 230):
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFTGYTMNWVRQAPGQGLEWMGLINPYNSDTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARVALRVALDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
>JNJ7564-huIgG1의 경쇄(SEQ ID NO: 231):
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQNVATHVGWYQQKPGKAPKRLIYSASYRYSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISNLQPEDFATYYCQQYNRYPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
시험예
시험예 1. GPRC5D에 대한 GPRC5D/CD3 이중특이성 항체의 친화력의 FACS 측정
GPRC5D에 대한 본 개시의 GPRC5D/CD3 이중특이성 항체의 결합 능력을 시험하기 위해, 본 시험예에서는 유세포 분석법으로 GPRC5D/CD3 이중특이성 항체와 GPRC5D를 발현하는 인간 다발성 골수종 세포주 MM.1R(ATCC®CRL-2975 ) 및 시노몰구스 GPRC5D를 발현하는 안정적 형질전환 세포주 CHOK1-cynoGPRC5D의 결합 능력을 검출하였다. 구체적으로 다음과 같다: 상술한 세포를 10% FBS 완전 배지에서 배양한 후 37℃, 5% CO2 인큐베이터에 놓고 2일 동안 배양한 후 웰당 세포 수 1×105개로 세포를 세포 플레이트에 첨가하고, 300g에서 5분 동안 원심분리하고 1% BSA로 1회 세척하였다. 항체를 8개 농도로 구배 희석하고, 세포 플레이트에 웰당 100μL를 첨가하고, 4℃에서 1시간 동안 인큐베이션한 후, 1% BSA로 1회 세척하고, 각 웰에 FITC-Goat Anti-human IgG Fc 형광 2차 항체 희석액(1:400) 100μL를 첨가하고, 4℃에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 플레이트를 1% BSA로 3회 세척하고 각 웰에 100μL PBS를 첨가한 후 플레이트를 판독하였다. 상응하는 세포에 결합하는 각 항체의 EC50(nM)을 아래 표에 나타난 바와 같다.
비고: JNJ7564-huIgG1은 JNJ-64407564의 인간화 항-GPRC5D 항체의 가변 영역 서열을 SEQ ID NO: 96에 제시된 경쇄 불변 영역 및 SEQ ID NO: 215에 제시된 중쇄 불변 영역과 조합하여 획득된 항체이고; "-"는 결합이 검출되지 않았음을 나타냄.
비고: "-"는 결합이 검출되지 않았음을 나타냄.
비고: "-"는 결합이 검출되지 않았음을 나타냄.
비고: "-"는 결합이 검출되지 않았음을 나타냄.결과는 본 개시에서 스크리닝된 GPRC5D 항체를 채택하여 구축된 다양한 GPRC5D 단클론 항체 또는 GPRC5D-/CD3 이중특이성 항체가 모두 우수한 막 표면에서 GPRC5D에 결합하는 능력을 갖고, CynoGPRC5D와의 우수한 교차 결합 활성을 가짐을 보여준다. humanGPRC5D에 대한 JNJ-64407564의 결합 능력은 본 개시의 항체보다 약하며, 이는 주로 매우 낮은 결합 반응 값과 매우 약한 cynoGPRC5D에 대한 친화력으로 반영되며, 결합은 거의 검출되지 않는다.
시험예 2. GPRC5D/CD3 이중특이성 항체와 GPRC5D의 결합 에피토프의 ELISA 측정
본 개시의 GPRC5D/CD3 이중특이성 항체와 GPRC5D의 결합 에피토프를 측정하기 위해, 아미노 말단 펩티드(N-말단 펩티드), E2 펩티드, E3 펩티드, E4 펩티드를 포함하는 인간 GPRC5D의 4개의 세포외 도메인 펩티드를 합성하였다(GenScript에서 합성). 펩티드는 비오티닐화되어 분자내 이황화 결합이 결여된/분자내 이황화 결합을 포함하는 두 가지 형태로 형성되었고, 서열은 표 26을 참고한다. Elisa 플레이트(corning 3590)에 steptavidin(sigma, SA101)을 코팅하고 37℃에서 2시간 동안 방치한 후 플레이트를 세척하고, 5% 탈지우유가 함유된 PBS로 비특이적 결합 부위를 블로킹한 후 37℃에서 2시간 동안 방치한 후 플레이트를 세척하며 각 웰에 1% BSA가 함유된 PBS로 희석된 펩티드 100μL를 첨가하고 37℃에서 1시간 동안 방치한 후 플레이트를 세척한 후 각 웰에 1% BSA가 함유된 PBS를 사용하여 0.003nM~300nM으로 희석된 GPRC5D/CD3 항체 100μL를 첨가하고, 37℃에서 1시간 동안 방치한 후 플레이트를 세척한 다음 여기에 goat anti-humanIgG(H+L)-HRP (Jackson ImmunoResearch, 209-035-088)을 첨가하여 37℃에서 1시간 동안 방치한 후, 플레이트를 세척하고, 각 웰에 TMB(KPL, 5120-0077) 100μL를 첨가하고, 발색 5분 후 1M H2SO4를 첨가하여 중지하고 OD450을 측정하였다. 구체적인 결과는 표 27을 참조한다.
비고: "-"는 결합이 검출되지 않았음을 나타냄.결과는 본 개시의 GPRC5D/CD3 이중특이성 항체 F2-0G4S-1 및 F4-0G4S-1이 펩티드가 분자내 이황화 결합을 형성하는지 여부에 관계없이 인간 GPRC5D의 아미노 말단 펩티드 서열에 결합한다는 것을 보여준다. 동시에, 모든 검출 항체는 E2 펩티드, E3 펩티드 및 E4 펩티드에 결합하지 않는다. 이러한 결과는 GPRC5D에 대한 본 개시의 GPRC5D/CD3 이중특이성 항체 F2-0G4S-1 및 F4-0G4S-1의 결합 에피토프가 인간 GPRC5D의 아미노 말단 영역에 있음을 보여준다.
시험예 3. GPCRA 및 GPCRB 패밀리 구성원에 대한 GPRC5D/CD3 이중특이성 항체의 교차 결합의 FACS 측정
본 개시의 GPRC5D/CD3 이중특이성 항체가 GPCRA 및 GPCRB 패밀리 구성원과 교차 결합하는지 여부를 시험하기 위해, 본 시험예에서는 유세포 분석법을 사용하여 GPRC5D/CD3 이중특이성 항체가 각각 인간 CCR8(GPCR A 패밀리)을 발현하는 CHOK1-인간 CCR8 세포(실시예 2를 참조하여 구축됨) 및 인간 GIPR(GPCR B 패밀리)을 발현하는 CHOK1-인간 GIPR 세포(실시예 2를 참조하여 구축됨)와의 결합 능력을 검출하였다. 구체적으로 다음과 같다: 상술한 세포를 10% FBS의 DMEF/12K 배지에서 배양한 후 37℃, 5% CO2 인큐베이터에 방치하고 2일 동안 배양한 후 웰당 세포 수 1×105개로 세포를 세포 플레이트에 첨가하고, 300g에서 5분 동안 원심분리하고 1% BSA로 1회 세척하였다. 항체를 8개 농도로 구배 희석하고, 세포 플레이트에 웰당 100μL를 첨가하고, 4℃에서 1시간 동안 인큐베이션한 후, 1% BSA로 1회 세척하고, 각 웰에 FITC-Goat Anti-human IgG Fc 형광 2차 항체 희석액(1:400) 100μL를 첨가하고, 4℃에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 플레이트를 1% BSA로 3회 세척하고 각 웰에 100μL PBS를 첨가한 후 플레이트를 판독하였다.
>인간 CCR8 항원(SEQ ID NO: 211):
MDYTLDLSVTTVTDYYYPDIFSSPCDAELIQTNGKLLLAVFYCLLFVFSLLGNSLVILVLVVCKKLRSITDVYLLNLALSDLLFVFSFPFQTYYLLDQWVFGTVMCKVVSGFYYIGFYSSMFFITLMSVDRYLAVVHAVYALKVRTIRMGTTLCLAVWLTAIMATIPLLVFYQVASEDGVLQCYSFYNQQTLKWKIFTNFKMNILGLLIPFTIFMFCYIKILHQLKRCQNHNKTKAIRLVLIVVIASLLFWVPFNVVLFLTSLHSMHILDGCSISQQLTYATHVTEIISFTHCCVNPVIYAFVGEKFKKHLSEIFQKSCSQIFNYLGRQMPRESCEKSSSCQQHSSRSSSVDYIL
>인간 GIPR 항원(SEQ ID NO: 212):
RAETGSKGQTAGELYQRWERYRRECQETLAAAEPPSGLACNGSFDMYVCWDYAAPNATARASCPWYLPWHHHVAAGFVLRQCGSDGQWGLWRDHTQCENPEKNEAFLDQRLILERLQVMYTVGYSLSLATLLLALLILSLFRRLHCTRNYIHINLFTSFMLRAAAILSRDRLLPRPGPYLGDQALALWNQALAACRTAQIVTQYCVGANYTWLLVEGVYLHSLLVLVGGSEEGHFRYYLLLGWGAPALFVIPWVIVRYLYENTQCWERNEVKAIWWIIRTPILMTILINFLIFIRILGILLSKLRTRQMRCRDYRLRLARSTLTLVPLLGVHEVVFAPVTEEQARGALRFAKLGFEIFLSSFQGFLVSVLYCFINKEVQSEIRRGWHHCRLRRSLGEEQRQLPERAFRALPSGSGPGEVPTSRGLSSGTLPGPGNEASRELESYC
결과는 본 개시의 GPRC5D/CD3 이중특이성 항체 F2-1, F2-0G4S-1, F4-6 및 F4-0G4S-1이 무두 인간 CCR8 및 인간 GIPR에 결합하지 않음을 나타내며, 이는 이들의 우수한 특이성을 보여준다.
시험예 4. 본 개시의 이중특이성 항체의 체외 세포 독성 활성
본 시험예는 종양 세포에 대한 T 세포 어댑터 분자로서 본 개시의 이중특이성 항체의 사멸 활성을 연구하였다. GPRC5D를 발현하는 세포주 H929와 GPRC5D를 발현하지 않는 Daudi를 표적 세포로 사용하여 본 개시의 이중특이성 항체의 표적 특이성 세포 독성 활성을 검출하였다. 신선한 PBMC(Milestone Biotechnologies로부터 구입)를 300g에서 10분 동안 원심분리하고 상청액을 버리고 200U IL2가 함유된 1640+10% FBS(A 용액)를 2E6/mL 세포 현탁액으로 재현탁하여 배양 플라스크에 넣어 밤새 배양하였다. 밤새 활성화된 PBMC를 수집하고 원심분리한 후 페놀 레드-프리 1640+4% FBS로 재현탁하고, 다시 원심분리 후 재현탁, 계수하고, 세포 수를 6.25E5 cells/mL로 조정하고, 각 웰에 60μL를 첨가하였다(웰당 PBMC 세포 수는 37500임). 표적 세포 NCI-H929(ATCC, CRL-9068)를 수집하고, 1000rpm에서 3분 동안 원심분리하고, 세포 수를 1.25E5개 세포/mL로 조정하고, 각 웰에 60μL를 첨가하고(웰당 표적 세포 수는 7500임), E:T 비율이 5:1인지 확인하였다. 항체를 페놀 레드-프리 완전 배지에 희석하고, 시작 농도는 500nM(5×최종 농도), 9개 구배로 10배 희석하고, 각 웰에 30μL를 첨가하였다. 그 다음 세포를 37℃, 5% CO2 인큐베이터에서 48시간 동안 배양하였다. 검출 전, 표적 세포만 포함된 두 개의 웰에서 배지 10μL를 흡출한 다음, 10μL Lysis Solution(10×)을 첨가하고, 45분 동안 용해한 후 배양 플레이트를 꺼내서, 1000rpm에서 3분 동안 원심분리하고, 상청액 50μL를 새로운 96웰 플레이트(#3590)에 흡출하고, 용해된 CytoTox 96® Reagent 50μL를 1:1 비율로 첨가하고, 실온에서 0.5시간 동안 인큐베이션한 후 중지 용액 50μL를 첨가하고, FlexStation 3(Molecular Devices)를 사용하여 흡광도(490nm)를 검출하였다. 구체적인 결과는 아래 표를 참조한다.
비고: EC50의 비율(JNJ-64407564와 비교)=EC50(시험 대상 항체)/EC50(JNJ-64407564).결과는 본 개시의 GPRC5D/CD3 이중특이성 항체의 NCI-H929 세포 독성 활성이 JNJ-64407564보다 강하고; 본 개시의 GPRC5D/CD3 이중특이성 항체 F2-2, F2-3, F4-6, F4-7, F2-0G4S-1 및 F4-0G4S-1의 세포 독성 활성은 GPRC5D 표적에 특이적이며, GPRC5D 발현이 없는 Daudi 세포주에서는 사멸 활성이 검출되지 않았으며, 이는 본 개시의 GPRC5D/CD3 이중특이성 항체가 더 나은 안전성을 가짐을 보여준다.
시험예 5. GPRC5D/CD3 이중특이성 항체의 사이토카인 방출 수준
CD3 T 세포 어댑터 분자는 사이토카인 폭풍을 일으킨다. 따라서 CD3 T 세포 어댑터 분자를 개발할 때에는 사이토카인, 특히 약효와는 관련이 없으나 부작용을 일으킬 수 있는 인자인 IL6을 낮은 수준으로 유지하는 것이 필요하다. 본 시험예는 본 개시의 이중특이성 항체의 사이토카인 IFNγ 및 IL6의 방출 수준을 연구하였다. 신선한 PBMC(Milestone Biotechnologies로부터 구입)를 300g에서 10분 동안 원심분리하고 상청액을 버리고 200U IL2가 함유된 1640+10% FBS(A 용액)를 2E6/mL 세포 현탁액으로 재현탁하여 배양 플라스크에 넣어 밤새 배양하였다. 밤새 활성화된 PBMC를 수집하고 원심분리한 후 페놀 레드-프리 1640+4% FBS로 재현탁하고, 다시 원심분리 후 재현탁, 계수하고, 세포 수를 6.25E5개 세포/mL로 조정하고, 각 웰에 60μL를 첨가하였다(웰당 PBMC 세포 수는 37500임). 표적 세포 NCI-H929(ATCC, CRL-9068) 또는 RPMI-8226(ATCC, CRM-CCL-155)을 수집하고, 1000rpm에서 3분 동안 원심분리하고, 세포 수를 1.25E5개 세포/mL로 조정하고, 각 웰에 60μL를 첨가하고(웰당 표적 세포 수는 7500임), E:T 비율이 5:1인지 확인하였다. 항체를 페놀 레드-프리 완전 배지에 희석하고, 시작 농도는 500nM(5×최종 농도), 9개 구배로 10배 희석하고, 각 웰에 30μL를 첨가하였다. 그 다음, 세포를 나중에 사용하기 위해 37℃, 5% CO 2 인큐베이터에서 48시간 동안 배양하였다.
IL6은 ELISA 방법을 채택하여 검출하였다. 상술한 세포 샘플을 1000rpm에서 3분 동안 원심분리하고, 50μL의 세포 상청액을 수집하고 이를 범용 표본 희석액으로 6배 희석하고, IL6 표준 물질도 6배 희석하고 희석된 샘플 또는 다양한 농도의 표준 물질을 검출 플레이트에 첨가하고(100μL/웰), 밀봉 테이프로 반응 웰을 잘 밀봉하고, 37℃에서 90분 동안 인큐베이션한 후, 플레이트를 5회 세척하고, 비오티닐화 항체 작업 용액(100μL/웰)을 첨가하고, 새로운 밀봉 테이프로 반응 웰을 밀봉하고, 37℃에서 60분 동안 인큐베이션한 후, 플레이트를 5회 세척하고, 효소 접합체 작업 용액(100μL/웰)을 첨가하고, 새로운 밀봉 테이프로 반응 웰을 잘 밀봉하고, 37℃에서 30분 동안 인큐베이션한 후, 플레이트를 5회 세척하고, 100μL/웰의 발색 기질(TMB)을 첨가하고, 차광하면서 37℃에서 8분 동안 인큐베이션하고, 100μL/웰의 반응 중지 용액을 첨가하고 고르게 혼합 후 즉시(3분 이내) OD450 값을 측정하였다.
IFNγ는 HTRF 방법을 채택하여 검출하였다. 상술한 세포 샘플을 1000rpm에서 3분 동안 원심분리하고 세포 상청액 50μL를 수집한 후 검출 키트를 상온으로 평형을 맞추고 검출 완충액을 사용하여 키트의 두 개의 검출 항체를 희석하였다(20배 희석). 384웰 플레이트에 20배 희석한 샘플 16μL와 IFNγ 표준 물질을 취하고, 희석된 대응하는 검출 항체 4μL를 첨가하고; 밀봉재를 부착하고, 진탕시켜 고르게 혼합하고, 1000rpm에서 1분 동안 원심분리하고, 상온에서 밤새 인큐베이션한 후, 1000rpm에서 1분 동안 원심분리하고 밀봉재를 제거하고, PHERAstar 다기능 마이크로플레이트 리더를 사용하여 665nm 및 620nm에서의 흡수값을 읽고, Graphpad Prism 5를 사용하여 데이터를 처리 분석하였다. 구체적인 결과는 아래 표를 참조한다.
비고: "-"는 검출 하한보다 낮고 검출되지 않음을 나타내며, 이하 동일함.
결과는 본 개시의 GPRC5D/CD3 이중특이성 항체가 JNJ-64407564보다 낮은 수준으로 IL6 및 IFNγ, 특히 IL6을 방출하며, 거의 검출 불가능하다는 것을 보여준다. 본 개시의 GPRC5D/CD3 이중특이성 항체는 더 나은 안전성을 갖는 것을 제시한다.
체내 활성 생물학적 평가
시험예 6. NCIH929 피하 이식 종양 모델에서 GPRC5D/CD3 이중특이성 항체의 약효
본 개시는 인간 골수종 NCI-H929 세포 인간 PBMC NOG 마우스 이종이식 종양 모델을 사용하여 GPRC5D/CD3 이중특이성 항체의 항종양 활성을 평가하였다.
NOG 마우스, 암컷, 8~10주령은 Beijing Weitong Lihua Experimental Animal Technology Co., Ltd.로부터 구입하였다.
인간 다발성 골수종 세포주 NCI-H929는 Shanghai Mingjin Biological Technology Co., Ltd.로부터 구입하였다.
NCI-H929 세포를 10% FBS 및 0.05mM 2-메르캅토에탄올을 함유한 RPMI-1640 배지에 첨가하고, 37℃, 5% CO2 포화 습도 인큐베이터에서 배양하였다. 대수 성장기 NCI-H929 세포를 수집하고 이를 50% 마트리겔이 함유된 RPMI-1640 배지에 재현탁하고 세포 농도를 2×107/mL로 조정하였다. 무균 조건 하에서, 0.1mL의 세포 현탁액을 2×106/0.1mL/마우스의 접종 농도로 마우스의 오른쪽 등 부위에 피하 접종하였다. 종양 세포 접종 1일 후, 액체 질소에 동결 보존된 hPBMC를 부활시키고, 10% HIFBS(FBS, 56℃에서 30분 동안 비활성화됨)가 함유된 PRMI-1640 배지에서 배양하고, 5% CO2가 함유된 37℃ 인큐베이터에서 6시간 동안 인큐베이션하였다. 인큐베이션 후, hPBMC를 수집하고, PBS 완충액에 재현탁하고, 세포 농도를 2.5×107/mL로 조정하였다. 무균 조건 하에서, 0.2mL의 세포 현탁액을 5×106/0.2mL/마우스의 주사 농도로 마우스 체내에 복강 주사하였다. 평균 종양 부피가 약 100mm3에 도달할 때, 각 그룹 간의 종양 부피 차이가 평균값의 10% 미만이 되도록 동물을 종양 부피에 따라 무작위로 그룹을 나누었다. 그룹을 나눈 날을 Day 0으로 기록하고, 동물의 체중에 따라 투약을 시작하였다. 그룹을 나눈 후 즉시 투약하고, 주 1회 복강 투약하고, 연속 2회(IP, qW×2) 투약하고, 종양 부피를 기록하였다.
종양 억제율(%)=1-T/C(%).
T/C(%)=(T-T0)/(C-C0)×100%.
종양 부피(V)=1/2×a×b2, 여기서 a, b는 각각 길이, 너비를 나타낸다.
여기서 T, C는 실험 종료 시 치료 그룹과 대조 그룹의 종양 부피이고; T0, C0은 실험 시작 시의 종양 부피이다.
구체적인 결과는 표 30-1, 30-2, 30-3 및 도 2를 참조하고, 여기서 표에서 계산된 종양 억제율은 모두 마지막 날의 종양 억제율이다.
실험 결과는 본 개시의 GPRC5D/CD3 이중특이성 항체 F2-1, F2-4, F4-6, F4-7, F4-8, F2-0G4S-1 및 F4-0G4S-1의 상기 투약 용량 조건 하에서의 체내 종양 성장을 억제하는 활성이 대응하는 용량의 JNJ-64407564보다 높음을 보여준다. 실험 기간 동안 약물과 관련된 동물 사망이나 기타 유의한 약물 관련 독성 및 부작용은 관찰되지 않았다.
명확한 이해를 돕기 위해, 이미 첨부된 도면과 예시에 의해 상술한 발명을 상세히 설명하였지만, 이러한 설명과 예시는 본 개시의 범위를 제한하는 것으로 해석되어서는 안 된다. 본원에 인용된 모든 특허와 과학 문헌의 개시 내용은 인용을 통해 완전하고 명확하게 통합되어 있다.
서열목록 전자파일 첨부
Claims (20)
- GPRC5D 및 CD3에 특이적으로 결합하는 항원 결합 분자로서, GPRC5D에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 항원 결합 모듈 및 CD3에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 항원 결합 모듈을 포함하고, 상기 GPRC5D에 특이적으로 결합하는 항원 결합 모듈은 중쇄 가변 영역 GPRC5D-VH 및 경쇄 가변 영역 GPRC5D-VL을 포함하고, 상기 CD3에 특이적으로 결합하는 항원 결합 모듈은 중쇄 가변 영역 CD3-VH 및 경쇄 가변 영역 CD3-VL을 포함하며; 여기서:
(i) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 15의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR1, SEQ ID NO: 16의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR2 및 SEQ ID NO: 17의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR3을 갖고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 137, 18, 135, 136 또는 138의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR1, SEQ ID NO: 19의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR2 및 SEQ ID NO: 20의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR3을 갖거나; 또는
(ii) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 9의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR1, SEQ ID NO: 134, 10 또는 133의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR2 및 SEQ ID NO: 11의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR3을 갖고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 130, 12, 129, 131 또는 132의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR1, SEQ ID NO: 13의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR2 및 SEQ ID NO: 14의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR3을 갖거나; 또는
(iii) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 21의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR1, SEQ ID NO: 140, 22 또는 139의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR2 및 SEQ ID NO: 23의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR3을 갖고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 24의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR1, SEQ ID NO: 25의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR2 및 SEQ ID NO: 26의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR3을 갖거나; 또는
(iv) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 27의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR1, SEQ ID NO: 28의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR2 및 SEQ ID NO: 29의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR3을 갖고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 144, 30, 141, 142 또는 143의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR1, SEQ ID NO: 31의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR2 및 SEQ ID NO: 32의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR3을 가지며;
바람직하게는,
(i) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 15의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR1, SEQ ID NO: 16의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR2 및 SEQ ID NO: 17의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR3을 갖고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 137의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR1, SEQ ID NO: 19의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR2 및 SEQ ID NO: 20의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR3을 갖거나; 또는
(ii) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 9의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR1, SEQ ID NO: 134의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR2 및 SEQ ID NO: 11의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR3을 갖고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 130의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR1, SEQ ID NO: 13의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR2 및 SEQ ID NO: 14의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR3을 갖는, 항원 결합 분자. - 제1항에 있어서, 상기 GPRC5D에 특이적으로 결합하는 항원 결합 모듈이 다음을 포함하며:
(i) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 44, 3, 42 또는 43의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 49, 4, 45, 46, 47, 48 또는 50의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
(ii) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 35, 1, 33 또는 34의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 39, 2, 36, 37, 38, 40 또는 41의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
(iii) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 55, 5, 51, 52, 53 또는 54의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 56, 6 또는 57의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
(iv) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 67, 7, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66 또는 68의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 75, 8, 69, 70, 71, 72, 73 또는 74의 아미노산 서열을 포함하며;
바람직하게는,
(i) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 44의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 49의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 43의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 46의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 43의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 49의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 43의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 50의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 44의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 46의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 44의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 50의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 3의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 4의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
(ii) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 35의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 39의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 34의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 36의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 34의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 38의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 34의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 39의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 35의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 36의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 35의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 38의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 1의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 2의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
(iii) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 55의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 56의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 54의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 56의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 54의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 57의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 55의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 57의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 5의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 6의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
(iv) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 67의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 75의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 61의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 75의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 62의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 75의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 64의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 75의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 65의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 75의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 7의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 8의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
보다 바람직하게는,
(i) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 44의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 49의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
(ii) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 35의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 39의 아미노산 서열을 포함하는, 항원 결합 분자. - 제1항 또는 제2항에 있어서, 여기서:
상기 CD3에 특이적으로 결합하는 항원 결합 모듈은 중쇄 가변 영역 CD3-VH 및 경쇄 가변 영역 CD3-VL을 포함하고, 상기 CD3-VH의 CD3-HCDR1, CD3-HCDR2 및 CD3-HCDR3은 각각 SEQ ID NO: 82의 CD3-HCDR1, CD3-HCDR2 및 CD3-HCDR3의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 CD3-VL의 CD3-LCDR1, CD3-LCDR2 및 CD3-LCDR3은 각각 SEQ ID NO: 83의 CD3-LCDR1, CD3-LCDR2 및 CD3-LCDR3의 아미노산 서열을 포함하며;
바람직하게는,
상기 CD3-VH는 SEQ ID NO: 76의 아미노산 서열을 포함하는 CD3-HCDR1, SEQ ID NO: 77의 아미노산 서열을 포함하는 CD3-HCDR2, 및 SEQ ID NO: 78의 아미노산 서열을 포함하는 CD3-HCDR3을 갖고; 상기 CD3-VL은 SEQ ID NO: 79의 아미노산 서열을 포함하는 CD3-LCDR1, SEQ ID NO: 80의 아미노산 서열을 포함하는 CD3-LCDR2, 및 SEQ ID NO: 81의 아미노산 서열을 포함하는 CD3-LCDR3을 가지며;
보다 바람직하게는,
상기 CD3-VH는 SEQ ID NO: 82의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 CD3-VL은 SEQ ID NO: 83의 아미노산 서열을 포함하는, 항원 결합 분자. - 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항원 결합 분자는 Fc 영역을 추가로 포함하고, 상기 Fc 영역은 바람직하게는 IgG Fc 영역, 더욱 바람직하게는 IgG1 Fc 영역이고; 보다 바람직하게는 상기 Fc 영역은 Fcγ 수용체에 대한 Fc 영역의 결합을 감소시킬 수 있는 하나 이상의 아미노산 치환을 포함하며;
가장 바람직하게는 상기 Fc 영역은 인간 IgG1 Fc 영역이고, 위치 234 및 235에 있는 아미노산은 EU 인덱스에 따라 넘버링된 A인, 항원 결합 분자. - 제4항에 있어서, 상기 Fc 영역은 서로 결합 가능한 제1 서브유닛 Fc1 및 제2 서브유닛 Fc2를 포함하고, 상기 Fc1 및 Fc2는 각각 독립적으로 Fc 영역의 동종이량체화를 감소시키는 하나 이상의 아미노산 치환을 가지며;
바람직하게는, 상기 Fc1은 놉-인투-홀 기술에 따른 놉 구조를 갖고, 상기 Fc2는 놉-인투-홀 기술에 따른 홀 구조를 갖거나, 또는 상기 Fc1은 놉-인투-홀 기술에 따른 홀 구조를 갖고, 상기 Fc2는 놉-인투-홀 기술에 따른 놉 구조를 가지며;
보다 바람직하게는, 상기 Fc1의 위치 366에 있는 아미노산이 EU 인덱스에 따라 넘버링된 W이고; 상기 Fc2의 위치 366에 있는 아미노산이 EU 인덱스에 따라 넘버링된 S이고, 위치 368에 있는 아미노산이 EU 인덱스에 따라 넘버링된 A이고, 위치 407에 있는 아미노산이 EU 인덱스에 따라 넘버링된 V인, 항원 결합 분자. - 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 GPRC5D에 특이적으로 결합하는 항원 결합 모듈은 Fab이고; 상기 CD3에 특이적으로 결합하는 항원 결합 모듈은 대체된 Fab이거나, 또는 상기 GPRC5D에 특이적으로 결합하는 항원 결합 모듈은 대체된 Fab이고, 상기 CD3에 특이적으로 결합하는 항원 결합 모듈은 Fab이고; 상기 대체된 Fab는 Fab의 원래 CH1 및 CL이 각각 Obscurin 사슬 및 Titin 사슬에 의해 대체되는 것이거나, 또는 Fab의 원래 CH1 및 CL이 각각 Titin 사슬 및 Obscurin 사슬에 의해 대체되는 것이며;
바람직하게는,
상기 Titin 사슬은 SEQ ID NO: 145 내지 SEQ ID NO: 163으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 Obscurin 사슬은 SEQ ID NO: 164 내지 SEQ ID NO: 204로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하며;
보다 바람직하게는,
상기 Titin 사슬은 SEQ ID NO: 163 또는 161의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 Obscurin 사슬은 SEQ ID NO: 198 또는 199의 아미노산 서열을 포함하며;
가장 바람직하게는,
상기 Titin 사슬은 SEQ ID NO: 163의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 Obscurin 사슬은 SEQ ID NO: 198의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 Titin 사슬은 SEQ ID NO: 161의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 Obscurin 사슬은 SEQ ID NO: 199의 아미노산 서열을 포함하는, 항원 결합 분자. - 제5항 또는 제6항에 있어서, 상기 GPRC5D에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 항원 결합 모듈 및 CD3에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 항원 결합 모듈은 CH1 또는 Obscurin 사슬의 C-말단을 통해 직접적으로 또는 링커를 통해 Fc1 또는 Fc2 서브유닛의 N-말단에 연결되고, 상기 Fc1 및 Fc2 서브유닛의 N-말단에서 이황화 결합을 통해 이종이량체를 결합하는, 항원 결합 분자.
- 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항원 결합 분자는 식 (a)로 표시되는 구조를 갖는 하나의 제1 사슬, 식 (b)로 표시되는 구조를 갖는 하나의 제2 사슬, 식 (c)로 표시되는 구조를 갖는 하나의 제3 사슬 및 식 (d)로 표시되는 구조를 갖는 하나의 제4 사슬을 포함하며,
(a) [GPRC5D-VH]-[CH1]-[Fc1],
(b) [GPRC5D-VL]-CL,
(c) [CD3-VH]-[Obscurin 사슬]-[Fc2],
(d) [CD3-VL]-[Titin 사슬],
식 (a), (b), (c) 및 (d)로 표시되는 구조는 N 단으로부터 C 단까지 배열되며;
바람직하게는,
상기 항원 결합 분자는 SEQ ID NO: 118의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제1 사슬, SEQ ID NO: 102의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제2 사슬, SEQ ID NO: 86의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제3 사슬 및 SEQ ID NO: 87의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제4 사슬을 갖는, 항원 결합 분자. - 제7항에 있어서, 여기서:
상기 항원 결합 분자는 식 (e)로 표시되는 구조를 갖는 하나의 제1 사슬, 식 (d)로 표시되는 구조를 갖는 하나의 제2 사슬, 식 (f)로 표시되는 구조를 갖는 하나의 제3 사슬 및 식 (b)로 표시되는 구조를 갖는 하나의 제4 사슬을 포함하며,
(e) [CD3-VH]-[Obscurin 사슬]-[Fc1],
(d) [CD3-VL]-[Titin 사슬],
(f) [GPRC5D-VH]-[CH1]-[Fc2],
(b) [GPRC5D-VL]-CL,
식 (e), (d), (f) 및 (b)로 표시되는 구조는 N 단으로부터 C 단까지 배열되며;
바람직하게는,
상기 항원 결합 분자는 SEQ ID NO: 89의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제1 사슬, SEQ ID NO: 87의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제2 사슬, SEQ ID NO: 121의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제3 사슬 및 SEQ ID NO: 106의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제4 사슬을 갖는, 항원 결합 분자. - 제7항에 있어서, 여기서:
상기 항원 결합 분자는 식 (a)로 표시되는 구조를 갖는 하나의 제1 사슬, 식 (b)로 표시되는 구조를 갖는 하나의 제2 사슬, 식 (g)로 표시되는 구조를 갖는 하나의 제3 사슬 및 식 (h)로 표시되는 구조를 갖는 하나의 제4 사슬을 포함하며,
(a) [GPRC5D-VH]-[CH1]-[Fc1],
(b) [GPRC5D-VL]-CL,
(g) [CD3-VH]-링커 1-[Obscurin 사슬]-[Fc2],
(h) [CD3-VL]-링커 2-[Titin 사슬],
식 (a), (b), (g) 및 (h)로 표시되는 구조는 N 단으로부터 C 단까지 배열되고, 상기 링커 1과 링커 2는 동일하거나 상이한 펩티드 링커이며;
바람직하게는,
상기 항원 결합 분자는 SEQ ID NO: 118의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제1 사슬, SEQ ID NO: 102의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제2 사슬, SEQ ID NO: 84의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제3 사슬 및 SEQ ID NO: 85의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제4 사슬을 갖거나; 또는
상기 항원 결합 분자는 SEQ ID NO: 120의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제1 사슬, SEQ ID NO: 106의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제2 사슬, SEQ ID NO: 84의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제3 사슬 및 SEQ ID NO: 85의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제4 사슬을 갖거나; 또는
상기 항원 결합 분자는 SEQ ID NO: 122의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제1 사슬, SEQ ID NO: 110의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제2 사슬, SEQ ID NO: 84의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제3 사슬 및 SEQ ID NO: 85의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제4 사슬을 갖거나; 또는
상기 항원 결합 분자는 SEQ ID NO: 124의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제1 사슬, SEQ ID NO: 117의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제2 사슬, SEQ ID NO: 84의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제3 사슬 및 SEQ ID NO: 85의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제4 사슬을 갖는, 항원 결합 분자. - 제7항에 있어서, 여기서:
상기 항원 결합 분자는 식 (i)로 표시되는 구조를 갖는 하나의 제1 사슬, 식 (j)로 표시되는 구조를 갖는 하나의 제2 사슬, 식 (f)로 표시되는 구조를 갖는 하나의 제3 사슬 및 식 (b)로 표시되는 구조를 갖는 하나의 제4 사슬을 포함하며,
(i) [CD3-VH]-링커 3-[Obscurin 사슬]-[Fc1],
(j) [CD3-VL]-링커 4-[Titin 사슬],
(f) [GPRC5D-VH]-[CH1]-[Fc2],
(b) [GPRC5D-VL]-CL,
식 (i), (j), (f) 및 (b)로 표시되는 구조는 N 단으로부터 C 단까지 배열되고, 상기 링커 3과 링커 4는 동일하거나 상이한 펩티드 링커이며;
바람직하게는,
상기 항원 결합 분자는 SEQ ID NO: 88의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제1 사슬, SEQ ID NO: 85의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제2 사슬, SEQ ID NO: 116의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제3 사슬 및 SEQ ID NO: 117의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제4 사슬을 갖거나; 또는
상기 항원 결합 분자는 SEQ ID NO: 88의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제1 사슬, SEQ ID NO: 85의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제2 사슬, SEQ ID NO: 121의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제3 사슬 및 SEQ ID NO: 106의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제4 사슬을 갖거나; 또는
상기 항원 결합 분자는 SEQ ID NO: 88의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제1 사슬, SEQ ID NO: 85의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제2 사슬, SEQ ID NO: 123의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제3 사슬 및 SEQ ID NO: 110의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제4 사슬을 갖거나; 또는
상기 항원 결합 분자는 SEQ ID NO: 88의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제1 사슬, SEQ ID NO: 85의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제2 사슬, SEQ ID NO: 119의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제3 사슬 및 SEQ ID NO: 102의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제4 사슬을 갖거나; 또는
상기 항원 결합 분자는 SEQ ID NO: 88의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제1 사슬, SEQ ID NO: 85의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제2 사슬, SEQ ID NO: 115의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제3 사슬 및 SEQ ID NO: 117의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제4 사슬을 갖거나; 또는
상기 항원 결합 분자는 SEQ ID NO: 88의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제1 사슬, SEQ ID NO: 85의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제2 사슬, SEQ ID NO: 227의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제3 사슬 및 SEQ ID NO: 223의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 제4 사슬을 갖는, 항원 결합 분자. - 제5항에 있어서, 상기 항원 결합 분자는 GPRC5D에 특이적으로 결합하는 두 개의 항원 결합 모듈과 CD3에 특이적으로 결합하는 두 개의 항원 결합 모듈을 포함하고, 상기 GPRC5D에 특이적으로 결합하는 항원 결합 모듈은 Fab이고; 상기 CD3에 특이적으로 결합하는 항원 결합 모듈은 scFv이며;
바람직하게는,
상기 항원 결합 분자는 식 (k)로 표시되는 구조를 갖는 두 개의 제1 사슬 및 식 (b)로 표시되는 구조를 갖는 두 개의 제2 사슬을 포함하며,
(k) [GPRC5D-VH]-[CH1]-[CD3-VH]-링커 5-[CD3-VL]-링커 6-[Fc의 하나의 서브유닛],
(b) [GPRC5D-VL]-CL,
식 (k) 및 (b)로 표시되는 구조는 N 단으로부터 C 단까지 배열되고, 상기 링커 5와 링커 6은 동일하거나 상이한 펩티드 링커이며;
보다 바람직하게는,
상기 항원 결합 분자는 SEQ ID NO: 98의 아미노산 서열을 포함하는 두 개의 제1 사슬 및 SEQ ID NO: 100의 아미노산 서열을 포함하는 두 개의 제2 사슬을 갖거나; 또는
상기 항원 결합 분자는 SEQ ID NO: 98의 아미노산 서열을 포함하는 두 개의 제1 사슬 및 SEQ ID NO: 101의 아미노산 서열을 포함하는 두 개의 제2 사슬을 갖거나; 또는
상기 항원 결합 분자는 SEQ ID NO: 98의 아미노산 서열을 포함하는 두 개의 제1 사슬 및 SEQ ID NO: 102의 아미노산 서열을 포함하는 두 개의 제2 사슬을 갖거나; 또는
상기 항원 결합 분자는 SEQ ID NO: 99의 아미노산 서열을 포함하는 두 개의 제1 사슬 및 SEQ ID NO: 100의 아미노산 서열을 포함하는 두 개의 제2 사슬을 갖거나; 또는
상기 항원 결합 분자는 SEQ ID NO: 99의 아미노산 서열을 포함하는 두 개의 제1 사슬 및 SEQ ID NO: 101의 아미노산 서열을 포함하는 두 개의 제2 사슬을 갖거나; 또는
상기 항원 결합 분자는 SEQ ID NO: 99의 아미노산 서열을 포함하는 두 개의 제1 사슬 및 SEQ ID NO: 102의 아미노산 서열을 포함하는 두 개의 제2 사슬을 갖거나; 또는
상기 항원 결합 분자는 SEQ ID NO: 103의 아미노산 서열을 포함하는 두 개의 제1 사슬 및 SEQ ID NO: 105의 아미노산 서열을 포함하는 두 개의 제2 사슬을 갖거나; 또는
상기 항원 결합 분자는 SEQ ID NO: 103의 아미노산 서열을 포함하는 두 개의 제1 사슬 및 SEQ ID NO: 106의 아미노산 서열을 포함하는 두 개의 제2 사슬을 갖거나; 또는
상기 항원 결합 분자는 SEQ ID NO: 103의 아미노산 서열을 포함하는 두 개의 제1 사슬 및 SEQ ID NO: 107의 아미노산 서열을 포함하는 두 개의 제2 사슬을 갖거나; 또는
상기 항원 결합 분자는 SEQ ID NO: 104의 아미노산 서열을 포함하는 두 개의 제1 사슬 및 SEQ ID NO: 105의 아미노산 서열을 포함하는 두 개의 제2 사슬을 갖거나; 또는
상기 항원 결합 분자는 SEQ ID NO: 104의 아미노산 서열을 포함하는 두 개의 제1 사슬 및 SEQ ID NO: 106의 아미노산 서열을 포함하는 두 개의 제2 사슬을 갖거나; 또는
상기 항원 결합 분자는 SEQ ID NO: 104의 아미노산 서열을 포함하는 두 개의 제1 사슬 및 SEQ ID NO: 107의 아미노산 서열을 포함하는 두 개의 제2 사슬을 갖거나; 또는
상기 항원 결합 분자는 SEQ ID NO: 108의 아미노산 서열을 포함하는 두 개의 제1 사슬 및 SEQ ID NO: 110의 아미노산 서열을 포함하는 두 개의 제2 사슬을 갖거나; 또는
상기 항원 결합 분자는 SEQ ID NO: 109의 아미노산 서열을 포함하는 두 개의 제1 사슬 및 SEQ ID NO: 110의 아미노산 서열을 포함하는 두 개의 제2 사슬을 갖거나; 또는
상기 항원 결합 분자는 SEQ ID NO: 108의 아미노산 서열을 포함하는 두 개의 제1 사슬 및 SEQ ID NO: 111의 아미노산 서열을 포함하는 두 개의 제2 사슬을 갖거나; 또는
상기 항원 결합 분자는 SEQ ID NO: 109의 아미노산 서열을 포함하는 두 개의 제1 사슬 및 SEQ ID NO: 111의 아미노산 서열을 포함하는 두 개의 제2 사슬을 갖거나; 또는
상기 항원 결합 분자는 SEQ ID NO: 224의 아미노산 서열을 포함하는 두 개의 제1 사슬 및 SEQ ID NO: 217의 아미노산 서열을 포함하는 두 개의 제2 사슬을 갖거나; 또는
상기 항원 결합 분자는 SEQ ID NO: 225의 아미노산 서열을 포함하는 두 개의 제1 사슬 및 SEQ ID NO: 219의 아미노산 서열을 포함하는 두 개의 제2 사슬을 갖거나; 또는
상기 항원 결합 분자는 SEQ ID NO: 226의 아미노산 서열을 포함하는 두 개의 제1 사슬 및 SEQ ID NO: 221의 아미노산 서열을 포함하는 두 개의 제2 사슬을 갖는, 항원 결합 분자. - 분리된 항체로서, GPRC5D에 특이적으로 결합할 수 있고, 상기 항체는 중쇄 가변 영역 GPRC5D-VH 및 경쇄 가변 영역 GPRC5D-VL을 포함하고, 여기서:
(i) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 15의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR1, SEQ ID NO: 16의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR2 및 SEQ ID NO: 17의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR3을 갖고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 137, 18, 135, 136 또는 138의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR1, SEQ ID NO: 19의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR2 및 SEQ ID NO: 20의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR3을 갖거나; 또는
(ii) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 9의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR1, SEQ ID NO: 134, 10 또는 133의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR2 및 SEQ ID NO: 11의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR3을 갖고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 130, 12, 129, 131 또는 132의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR1, SEQ ID NO: 13의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR2 및 SEQ ID NO: 14의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR3을 갖거나; 또는
(iii) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 21의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR1, SEQ ID NO: 140, 22 또는 139의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR2 및 SEQ ID NO: 23의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR3을 갖고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 24의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR1, SEQ ID NO: 25의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR2 및 SEQ ID NO: 26의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR3을 갖거나; 또는
(iv) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 27의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR1, SEQ ID NO: 28의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR2 및 SEQ ID NO: 29의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR3을 갖고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 144, 30, 141, 142 또는 143의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR1, SEQ ID NO: 31의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR2 및 SEQ ID NO: 32의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR3을 가지며;
바람직하게는,
(i) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 15의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR1, SEQ ID NO: 16의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR2 및 SEQ ID NO: 17의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR3을 갖고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 137의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR1, SEQ ID NO: 19의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR2 및 SEQ ID NO: 20의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR3을 갖거나; 또는
(ii) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 9의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR1, SEQ ID NO: 134의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR2 및 SEQ ID NO: 11의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-HCDR3을 갖고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 130의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR1, SEQ ID NO: 13의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR2 및 SEQ ID NO: 14의 아미노산 서열을 포함하는 GPRC5D-LCDR3을 갖는, 분리된 항체. - 제13항에 있어서, 여기서:
(i) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 44, 3, 42 또는 43의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 49, 4, 45, 46, 47, 48 또는 50의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
(ii) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 35, 1, 33 또는 34의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 39, 2, 36, 37, 38, 40 또는 41의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
(iii) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 55, 5, 51, 52, 53 또는 54의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 56, 6 또는 57의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
(iv) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 67, 7, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66 또는 68의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 75, 8, 69, 70, 71, 72, 73 또는 74의 아미노산 서열을 포함하며;
바람직하게는,
(i) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 44의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 49의 아미노산 서열을 포함하거나, 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 43의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 46의 아미노산 서열을 포함하거나, 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 43의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 49의 아미노산 서열을 포함하거나, 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 43의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 50의 아미노산 서열을 포함하거나, 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 44의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 46의 아미노산 서열을 포함하거나, 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 44의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 50의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 3의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 4의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
(ii) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 35의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 39의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 34의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 36의 아미노산 서열을 포함하거나, 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 34의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 38의 아미노산 서열을 포함하거나, 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 34의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 39의 아미노산 서열을 포함하거나, 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 35의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 36의 아미노산 서열을 포함하거나, 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 35의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 38의 아미노산 서열을 포함하거나, 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 1의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 2의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
(iii) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 55의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 56의 아미노산 서열을 포함하거나, 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 54의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 56의 아미노산 서열을 포함하거나, 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 54의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 57의 아미노산 서열을 포함하거나, 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 55의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 57의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 5의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 6의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
(iv) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 67의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 75의 아미노산 서열을 포함하거나, 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 61의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 75의 아미노산 서열을 포함하거나, 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 62의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 75의 아미노산 서열을 포함하거나, 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 64의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 75의 아미노산 서열을 포함하거나, 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 65의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 75의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 7의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 8의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
보다 바람직하게는,
(i) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 44의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 49의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
(ii) 상기 GPRC5D-VH는 SEQ ID NO: 35의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 GPRC5D-VL은 SEQ ID NO: 39의 아미노산 서열을 포함하는, 분리된 항체. - 제13항 또는 제14항에 있어서, 상기 항체는 이중특이성 항체이며;
바람직하게는, 상기 이중특이성 항체는 GPRC5D 및 CD3에 특이적으로 결합하는, 분리된 항체. - 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 또는 제13항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항원 결합 분자 또는 분리된 항체는 E2 펩티드, E3 펩티드 및 E4 펩티드에 결합하지 않고, 상기 E2 펩티드는 SEQ ID NO: 206의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 E3 펩티드는 SEQ ID NO: 207의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 E4 펩티드는 SEQ ID NO: 208의 아미노산 서열을 포함하며;
바람직하게는, 상기 항원 결합 분자 또는 분리된 항체는 인간 GPRC5D의 아미노 말단 영역에 결합하고, 상기 인간 GPRC5D의 아미노 말단 영역은 SEQ ID NO: 205의 아미노산 서열을 포함하는, 항원 결합 분자 또는 분리된 항체. - 약학적 조성물로서, 이는:
치료 유효량의 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 따른 항원 결합 분자 또는 제13항 내지 제15항 중 어느 한 항에 따른 분리된 항체, 및 하나 이상의 약학적으로 허용 가능한 담체, 희석제, 완충제 또는 부형제를 함유하며;
바람직하게는, 상기 약학적 조성물에는 또한 적어도 하나의 제2 치료제를 포함하는, 약학적 조성물. - 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 따른 항원 결합 분자 또는 제13항 내지 제15항 중 어느 한 항에 따른 분리된 항체를 코딩하는, 분리된 핵산.
- 제18항에 따른 핵산을 포함하는, 숙주 세포.
- 질환을 치료하는 방법으로서, 상기 방법은 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 따른 항원 결합 분자 또는 제13항 내지 제15항 중 어느 한 항에 따른 분리된 항체 또는 제17항에 따른 약학적 조성물을 피험자에게 투여하는 단계를 포함하며;
바람직하게는, 상기 질환은 종양, 암 또는 자가면역 질환이며;
보다 바람직하게는, 상기 질환은 다발성 골수종, 재발성/불응성 다발성 골수종, 무증상 다발성 골수종, 단클론성 감마병증, 급성 림프모구 백혈병, 미만성 거대 B 세포 림프종, 버킷 림프종, 여포성 림프종, 외투세포 림프종, 발덴스트롬 거대글로불린혈증, 형질세포 백혈병, 경쇄 아밀로이드증, 전구체 B 세포 림프모구 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 골수이형성증후군, 만성 림프구성 백혈병, B 세포 악성 종양, 만성 골수성 백혈병, 털세포 백혈병, 모세포 형질세포양 수지상 세포 종양, 호지킨 림프종, 비호지킨 림프종, 변연부 B 세포 림프종, 점막 관련 림프조직 림프종, 형질세포 백혈병, 역형성 대세포 림프종, 난소암, 폐암, 위암, 전립선암, 신장암, 간암, 결장직장암, 식관암, 방광암, 자궁경부암 또는 흑색종인, 방법.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210245308.7 | 2022-03-14 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20240161961A true KR20240161961A (ko) | 2024-11-13 |
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