Nothing Special   »   [go: up one dir, main page]

KR20240049812A - 뇌암을 치료하기 위한 조합 요법 - Google Patents

뇌암을 치료하기 위한 조합 요법 Download PDF

Info

Publication number
KR20240049812A
KR20240049812A KR1020247007702A KR20247007702A KR20240049812A KR 20240049812 A KR20240049812 A KR 20240049812A KR 1020247007702 A KR1020247007702 A KR 1020247007702A KR 20247007702 A KR20247007702 A KR 20247007702A KR 20240049812 A KR20240049812 A KR 20240049812A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
seq
subject
acid sequence
psma
htert
Prior art date
Application number
KR1020247007702A
Other languages
English (en)
Inventor
에이미-리 브레드라우
이스라엘 로위
제프리 스콜닉
지안 얀
버나데트 페라로
즈웰 월터스
3세 앨버트 제이. 실베스터
킴벌리 에이. 크래이냐크
매튜 피. 모로우
엘리자베스 길레스피
Original Assignee
이노비오 파마수티컬즈, 인크.
리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 이노비오 파마수티컬즈, 인크., 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 filed Critical 이노비오 파마수티컬즈, 인크.
Publication of KR20240049812A publication Critical patent/KR20240049812A/ko

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/20—Interleukins [IL]
    • A61K38/208—IL-12
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A61K39/001152—Transcription factors, e.g. SOX or c-MYC
    • A61K39/001153—Wilms tumor 1 [WT1]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A61K39/001154—Enzymes
    • A61K39/001157—Telomerase or TERT [telomerase reverse transcriptase]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A61K39/001193—Prostate associated antigens e.g. Prostate stem cell antigen [PSCA]; Prostate carcinoma tumor antigen [PCTA]; PAP or PSGR
    • A61K39/001195—Prostate specific membrane antigen [PSMA]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K41/00—Medicinal preparations obtained by treating materials with wave energy or particle radiation ; Therapies using these preparations
    • A61K41/0047—Sonopheresis, i.e. ultrasonically-enhanced transdermal delivery, electroporation of a pharmacologically active agent
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61N—ELECTROTHERAPY; MAGNETOTHERAPY; RADIATION THERAPY; ULTRASOUND THERAPY
    • A61N5/00—Radiation therapy
    • A61N5/10—X-ray therapy; Gamma-ray therapy; Particle-irradiation therapy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2818—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD28 or CD152
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6869—Methods for sequencing
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
    • C12Q1/6886—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material for cancer
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55516—Proteins; Peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55522—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K2039/55527—Interleukins
    • A61K2039/55538—IL-12
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/57—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/58—Medicinal preparations containing antigens or antibodies raising an immune response against a target which is not the antigen used for immunisation
    • A61K2039/585—Medicinal preparations containing antigens or antibodies raising an immune response against a target which is not the antigen used for immunisation wherein the target is cancer
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/70—Multivalent vaccine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/158—Expression markers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/178—Oligonucleotides characterized by their use miRNA, siRNA or ncRNA

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Radiology & Medical Imaging (AREA)

Abstract

본 명세서에는 대상체에서 뇌암을 치료하는 방법이 제공되며, 이 방법은 뇌암을 갖는 대상체로부터의 하나 이상의 생물학적 샘플을 miRNA의 존재에 대해서 평가하는 단계 및 인터류킨-12(IL-12); 상기 대상체가 대조군 대상체 집단에 비해서 mIR-331-3p miRNA 또는 이의 isomiR 및 miR-1537-3p miRNA 또는 이의 isomiR의 증가된 발현 수준을 갖는 경우 인터류킨-12(IL-12); 인간 텔로머라제 역전사효소(hTERT), 빌름스 종양-1(WT-1) 및 전립선 특이적 막 항원(PSMA)의 면역원성 조성물; 및 항-세포 예정사 수용체 1(PD-1) 항체를 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 또한 본 명세서에는 대상체에서 뇌암을 치료하는 방법이 제공되며, 이 방법은 대상체로부터의 종양 샘플에서 SYNGR3, OTX1, GABBR2, LHX1, CADM3, MLLT11, MNX1, GRB14, SLC34A2, PHYHIP, WNT10B, SLC17A6, CRLF1, HOXD13, TGFβR3, UBA7, SFRP4 또는 이들의 임의의 조합으로부터 선택된 적어도 하나의 mRNA 바이오마커의 발현 수준을 측정하는 단계; 및 (b) SYNGR3, OTX1, GABBR2, LHX1, CADM3, MLLT11, MNX1, GRB14, SLC34A2, PHYHIP, WNT10B, SLC17A6, CRLF1 및 HOXD13의 발현 수준이 감소되는 경우 또는 TGFβR3, UBA7, SFRP4의 발현 수준이 증가되는 경우 상기 대상체에게 IL-12; hTERT, WT-1 및 PSMA의 면역원성 조성물; 및 항-PD-1 항체를 투여하는 단계를 포함한다.

Description

뇌암을 치료하기 위한 조합 요법
본 발명은 뇌암을 치료하기 위한 조합 요법 및 방법에 관한 것이다.
요법의 발전에도 불구하고, 교모세포종(glioblastoma: GBM)은 가장 치명적인 암 중 하나로 남아 있다. GBM에 대한 현재의 표준 치료법은 수술, 이어서 동시 방사선 요법(RT) 및 RT 동안 및 그 다음 선택 환자에게 RT 완료 후 6 내지 12회의 유지(보조제) 주기 동안 매일 투여되는 테모졸로마이드(TMZ) 화학요법이다[Stupp R, Mason WP, van den Bent MJ, et al. Radiotherapy plus concomitant and adjuvant temozolomide for glioblastoma. N Engl J Med 2005, 352:987-996].
세포 예정사-1(programmed cell death-1: PD-1) 저해제와 같은 관문 저해제(checkpoint inhibitor)는 많은 암에서 증가된 반응률을 갖지만, GBM에서는 아직 임상적 이점을 나타내지 않았다.
따라서, 질환의 임상적 관리 및 진행을 용이하게 하는 GBM의 치료 방법 예후에 대한 식별 및 개발의 필요성이 존재한다.
본 명세서에는 대상체에서 뇌암을 치료하는 방법이 제공되며, 이 방법은 (a) 뇌암을 갖는 대상체로부터의 생물학적 샘플에서 서열번호 30을 포함하는 miR-331-3p miRNA 또는 이의 isomiR 및 서열번호 31을 포함하는 miR-1537-3p miRNA 또는 이의 isomiR의 발현 수준을 측정하는 단계; 및 (b) 상기 대상체가 대조군 대상체 집단에 비해서 miR-331-3p miRNA 또는 이의 isomiR 및 miR-1537-3p miRNA 또는 이의 isomiR의 증가된 발현 수준을 갖는 경우 인터류킨-12(IL-12); 인간 텔로머라제 역전사효소(human telomerase reverse transcriptase: hTERT), 빌름스 종양-1(Wilms Tumor-1: WT-1) 및 전립선 특이적 막 항원(prostate specific membrane antigen: PSMA)의 면역원성 조성물; 및 항-세포 예정사 수용체 1(PD-1) 항체를 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 특정 실시형태에서, miRNA의 존재는 RNA 서열결정에 의해서 결정된다. 특정 실시형태에서, 생물학적 샘플은 혈장 샘플이다. 특정 실시형태에서, 생물학적 샘플은 IL-12; hTERT, WT-1 및 PSMA의 면역원성 조성물; 및 항-PD-1 항체의 투여 전에 대상체로부터 채취된다.
또한 본 명세서에는 대상체에서 뇌암을 치료하는 방법이 제공되며, 이 방법은 (a) 뇌암을 갖는 대상체로부터의 생물학적 샘플에서 서열번호 30을 포함하는 miR-331-3p miRNA 또는 이의 isomiR 및 서열번호 31을 포함하는 miR-1537-3p miRNA 또는 이의 isomiR의 발현 수준을 측정하는 단계; 및 (b) 상기 대상체가 대조군 대상체 집단에 비해서 miR-331-3p miRNA 또는 이의 isomiR 및 miR-1537-3p miRNA 또는 이의 isomiR의 증가된 발현 수준을 갖는 경우 인터류킨-12(IL-12); 인간 텔로머라제 역전사효소(human telomerase reverse transcriptase: hTERT), 빌름스 종양-1(Wilms Tumor-1: WT-1) 및 전립선 특이적 막 항원(prostate specific membrane antigen: PSMA)의 면역원성 조성물; 및 항-세포 예정사 수용체 1(PD-1) 항체를 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 특정 실시형태에서, 생물학적 샘플은 원발성 종양 샘플이다. 특정 실시형태에서, 생물학적 샘플은 IL-12; hTERT, WT-1 및 PSMA의 면역원성 조성물; 및 항-PD-1 항체의 투여 전에 대상체로부터 채취된다.
특정 실시형태에서, IL-12; hTERT, WT-1 및 PSMA의 면역원성 조성물; 및 항-PD-1 항체의 투여는 투여 후 18개월에 생존을 초래한다. 특정 실시형태에서, 대조군 대상체 집단은 IL-12; hTERT, WT-1 및 PSMA의 면역원성 조성물; 및 항-PD-1 항체의 투여 후 18개월에 감소된다. 특정 실시형태에서, 대상체는 비메틸화 MGMT 유전자 프로모터를 갖는다.
특정 실시형태에서, IL-12는 DNA 플라스미드, 예를 들어 INO-9012 또는 이의 바이오시밀러 또는 생물학적 등가물에 의해 암호화된다. 특정 실시형태에서, hTERT, WT-1 및 PSMA는 하나 이상의 DNA 플라스미드, 예를 들어, INO-5401 또는 이의 바이오시밀러 또는 생물학적 등가물에 의해 암호화된다. 특정 실시형태에서, 항-PD-1 항체는 세미플리맙(cemiplimab) 또는 이의 바이오시밀러 또는 생물학적 등가물이다. 특정 실시형태에서, 방법은 방사선 요법 및/또는 화학치료제, 예를 들어, 테모졸로마이드(temozolomide) 또는 이의 생물학적 등가물을 투여하는 것을 추가로 포함한다.
과제의 해결 수단, 뿐만 아니라 이하 상세한 설명은 첨부된 도면과 함께 읽을 때 더 잘 이해된다. 개시된 방법을 예시할 목적으로, 이의 예시적인 실시형태가 도면에 도시되지만; 방법은 개시된 특정 실시형태에 제한되지 않는다. 도면에서:
도 1은 실시예에 대한 연구 설계를 예시한다.
도 2A 및 도 2B는 18개월(도 2A) 및 42개월(도 2B) 분석 시점의 실시예에 대한 연구 집단 인구통계를 도시한다.
도 3은 부종 또는 종양을 시사하는, INO-5401 + INO-9012 및 세미플리맙-rwlc의 1차 용량 후의 시점에서 MRI 신호의 증가를 입증하는 두 환자의 대표적인 MRI 영상을 나타낸다. 몇몇 환자에 대한 생검은 괴사 및 혼합 염증; 유사분열 활성의 부재; 및 생존 가능한 종양의 증거 없음에 의해 치료 관련 변화를 나타낸다. 하단 패널의 MRI 영상을 나타내는 대상체는 제9주에 질환 진행의 증거를 나타내었지만 제21주에 해결되었다. MRI에서 유사한 소견을 가진 절제된 대상체는 생존 가능한 종양의 부재 하에 면역 침윤물만을 나타내었다.
도 4는 12개월 데이터 컷오프에서 얻은 9명의 대상체 중 적어도 하나의 항원 및 5/11명의 대상체 중 3가지 항원 전부에 대해 기준선을 초과하는 IFN-g 규모로 인해 INO-5401과 세미플리맙-rwlc의 조합을 면역원성으로서 지지하는 ELISpot 결과를 입증한다.
도 5A, 도 5B 및 도 5C는 12개월 데이터 컷오프에서 얻은 용해 잠재성(그랜자임 A, 퍼포린 발현)을 갖는 살아있는 항원 특이적 활성화(CD38+) CD3+CD8+ T 세포의 빈도를 입증하는 용해 과립 로딩 검정 결과를 도시한다. 도 5A는 치료 전(pre) 및 INO-5401 및 세미플리맙-rwlc로 처리 후 가장 큰 규모(피크(peak))의 용해 잠재성(그랜자임 A, 퍼포린 발현)을 갖는 살아있는 항원 특이적 활성화(CD38+) CD3+CD8+ T 세포의 빈도를 도시한다. 각각의 대상체는 열린 원으로 표시되고, 막대는 평균을 나타낸다. 치료전으로부터 피크까지의 차이인 델타는 각각의 항원 그래프에 대해, 뿐만 아니라 검정된 8명의 대상체에 대해 함께(도 5B) 및 제12주까지 샘플이 이용 가능한 5명의 대상체에 대해(도 5C) 표시된다. INO-5401은 WT1, PSMA 및 hTERT의 총합이다. 박스 플롯은 25번째 백분위수에서 75번째 백분위수까지 연장되며, 수평선이 중앙값이고 "+"는 평균이다.
도 6은 종양 세포에 비메틸화 O6-메틸구아닌 메틸트랜스퍼라제 유전자 프로모터를 갖는 환자인 코호트 A에 대한 제6개월의 무진행 생존(PFS6)의 캐플란-마이어 추정량의 시각적 표현을 나타낸다. 곡선은 특정 시간 간격에서 사건의 확률을 나타낸다. 사건의 확률은 y축에 숫자로 표시되고 시간 간격은 x축에 표시된다. 표시된 사건은 무진행 생존이다. 무진행 생존은 주어진 대상체에서 주어진 시점에서의 질환 진행의 부재이다.
도 7은 종양 세포에 메틸화 O6-메틸구아닌 메틸트랜스퍼라제 유전자 프로모터를 갖는 환자인 코호트 B에 대한 제6개월의 무진행 생존(PFS6)의 캐플란-마이어 추정량의 시각적 표현을 나타낸다. 곡선은 특정 시간 간격에서 사건의 확률을 나타낸다. 사건의 확률은 y축에 숫자로 표시되고 시간 간격은 x축에 표시된다. 표시된 사건은 무진행 생존이다. 무진행 생존은 주어진 대상체에서 주어진 시점에서의 질환 진행의 부재이다.
도 8은 종양 세포에 메틸화되지 않거나 메틸화 O6-메틸구아닌 메틸트랜스퍼라제 유전자 프로모터를 갖는 환자인 코호트 A 및 코호트 B에 대한 제6개월의 무진행 생존(PFS6)의 캐플란-마이어 추정량의 시각적 표현을 나타낸다. 곡선은 특정 시간 간격에서 사건의 확률을 나타낸다. 사건의 확률은 y축에 숫자로 표시되고 시간 간격은 x축에 표시된다. 표시된 사건은 무진행 생존이다. 무진행 생존은 주어진 대상체에서 주어진 시점에서의 질환 진행의 부재이다.
도 9는 코호트 A, 코호트 B 및 조합된 두 코호트에 대한 6개월의 무진행 생존(PFS6)의 캐플란-마이어 추정량을 표로 나타낸 표현을 나타낸다. 코호트당 총 대상체 수, 사건 수, 사건의 추정값(PFS6) 및 사건의 수치적 추정값(PFS6)이 존재하는 95% 신뢰 구간(CI)이 모두 제공된다.
도 10A는 종양 세포에 비메틸화 O6-메틸구아닌 메틸트랜스퍼라제 유전자 프로모터를 갖는 환자에 대한 코호트 A의 12개월에 걸친 전체 생존 확률의 캐플란-마이어 추정량의 시각적 표현을 나타낸다. 단계적 곡선은 최대 특정 시점 및 그 이상까지 생존할 확률을 나타낸다. 생존 확률은 y축에 숫자로 표시되고 x축에는 생존 시간(일)으로 표시된다. 도 10B는 종양 세포에 비메틸화 O6-메틸구아닌 메틸트랜스퍼라제 유전자 프로모터가 있는 환자에 대한 코호트 A의 18개월에 걸친 전체 생존 확률의 캐플란-마이어 추정량의 시각적 표현을 나타낸다. 단계적 곡선은 최대 특정 시점 및 그 이상까지 생존할 확률을 나타낸다. 생존 확률은 y축에 숫자로 표시되고 x축에는 생존 시간(일)으로 표시된다. 코호트 A의 중앙 추적관찰 기간은 17.8개월이다. mITT는 1회 이상의 연구 요법 용량을 투여받은 임의의 대상체를 포함한다. 음영은 해당 시점에서 생존의 점 추정치에 대한 신뢰 대역을 나타낸다. 도 10C는 제42개월까지 MGMT 비메틸화(miTT) 환자(코호트 A)에 대한 전체 생존의 캐플란-마이어 분석의 시각적 표현을 나타낸다.
도 11A는 종양 세포에 메틸화 O6-메틸구아닌 메틸트랜스퍼라제 유전자 프로모터를 갖는 환자에 대한 코호트 B의 12개월에 걸친 전체 생존 확률의 캐플란-마이어 추정량의 시각적 표현을 나타낸다. 단계적 곡선은 최대 특정 시점 및 그 이상까지 생존할 확률을 나타낸다. 생존 확률은 y축에 숫자로 표시되고 x축에는 생존 시간(일)으로 표시된다. 도 11B는 종양 세포에 메틸화 O6-메틸구아닌 메틸트랜스퍼라제 유전자 프로모터를 갖는 환자에 대한 코호트 B의 18개월에 걸친 전체 생존 확률의 캐플란-마이어 추정량의 시각적 표현을 나타낸다. 단계적 곡선은 최대 특정 시점 및 그 이상까지 생존할 확률을 나타낸다. 생존 확률은 y축에 숫자로 표시되고 x축에는 생존 시간(일)으로 표시된다. 코호트 B의 중앙 추적관찰 기간은 15.6개월이다. 검열; 코호트 B의 2명의 대상체는 제3주 추적관찰에 대한 동의를 철회하였다. mITT는 1회 이상의 연구 요법 용량을 투여받은 임의의 대상체를 포함한다. 음영은 해당 시점에서의 생존에 대한 점 추정치의 신뢰 대역을 나타낸다. 도 11C는 제42개월까지 MGMT 메틸화(miTT) 환자(코호트 B)에 대한 전체 생존의 캐플란-마이어 분석의 시각적 표현을 나타낸다.
도 12는 조합된 코호트 A + B에 대한 12개월에 걸친 전체 생존 확률의 캐플란-마이어 추정량의 시각적 표현을 나타낸다. 단계적 곡선은 최대 특정 시점 및 그 이상까지 생존할 확률을 나타낸다. 생존 확률은 y축에 숫자로 표시되고 x축에는 생존 시간(일)으로 표시된다.
도 13은 코호트 A, 코호트 B 및 조합에 대한 12개월 및 18개월에서의 전체 생존의 효능 데이터를 나타낸다. 도면은 12개월 및 18개월에 살아있는 것으로 보고된 대상체의 총 수를 나타낸다. 총 대상체 수, 사건의 추정(OS12 또는 OS18), 사건의 수치적 추정치(OS12 또는 OS18)가 존재하는 95% 신뢰구간(CI)이 모두 제공된다. 95% CI는 정확도 클로퍼-피어슨(exact Clopper-Pearson) 방법을 사용하여 계산하였다.
도 14는 18개월 분석 시점에 실시예로부터 임상 연구 프로토콜에 의해 NCI CTCAE 3 등급 이상으로 정의된 모든 이상 사례를 예시한다.
도 15는 18개월 분석 시점에 실시예로부터 임상 연구 프로토콜에 의해 정의된 면역 관련 이상 사례를 예시한다.
도 16A 및 도 16B는 18개월 데이터 컷오프에서 코호트에 의한 ELISpot 결과를 제공한다. 코호트 A에서, 지금까지 시험된 19/22(86%)명의 대상체는 하나 이상의 항원 INO-5401에 대해 기준선보다 높은 IFN-g 규모를 가졌다(도 16A). 코호트 B에서, 지금까지 시험된 16/17(94%)명의 대상체는 INO-5401의 하나 이상의 항원에 대해 기준선보다 높은 IFN-g 규모를 가졌다(도 16B). 치료 후 피크 시점의 기준선 값이 플로팅된다. 샘플은 Q3주x4회 및 그 다음 Q12주에 수집되었다.
도 17A 및 도 17B는 18개월 데이터 컷오프에서 유세포 분석(용해 잠재성에 의한 항원 특이적 CD8+ T 세포의 확장)에 의한 코호트의 INO-5401 후 말초 면역 반응의 평가 결과를 제공한다. 코호트 A에서, 지금까지 시험된 13/19명(68%)의 대상체는 INO-5401에서 하나 이상의 항원에 대해 기준선보다 높은 CD38+GrzA+Prf+ CD8+T 세 포의 빈도를 가졌다(도 17A). 코호트 B에서, 지금까지 시험된 8/10명(80%)의 대상체들은 INO-5401에서 하나 이상의 항원에 대해 기준선보다 높은 CD38+GrzA+Prf+ CD8+T 세포의 빈도를 가졌다(도 17B). 치료 후 피크 시점으로부터의 기준선 값이 플로팅된다. 샘플은 Q3주×4회, 그 다음 Q12주에 수집되었다.
도 18A 및 도 18B는 종양 절제 후 18개월에 살아있는 대상체 대비 종양 절제 후 18개월에 감소된 대상체에 대한 miR-1537-3p(도 18A) 및 miR-331-3p(도 18B)에 대한 정규화된 전사체를 나타낸다.
도 19는 종양 절제 후 18개월에 살아있는 대상체 대비 종양 절제 후 18개월에 감소된 대상체에 대한 miR-1537-3p(x축) 및 miR-331-3p(y축)에 대한 이중 축 miRNA 분리 데이터를 나타낸다.
도 20은 OS18 평가(n=31명의 환자)(15명 살아있음, 16명 감소됨)에 따라서 분류된 코호트 A(MGMT 비메틸화) 환자로부터의 원발성 종양의 전사체 분석을 제공한다. 각각의 대상체는 열린 원으로 표시된다. 박스 플롯은 25번째 백분위수에서 75번째 백분위수까지 연장되며, 수평선이 중앙값이고 "+"는 평균이다.
도 21은 진행성(Post-) 대 원발성(Pre-) 종양 조직에서 코호트 A(MGMT 메틸화되지 않음)의 6명의 환자로부터의 면역 세포 조절제 및 하위세트에 대한 종양 항원 표적 및 마커에 대한 유전자 발현 수준의 변화를 log2(배수 변화)로 표현한 것을 도시하며; 적색은 유전자 발현 수준의 증가를 나타내고 녹색은 감소를 나타낸다.
개시된 핵산 분자, 단백질, 백신 및 방법은 본 개시내용의 일부를 형성하는 첨부 도면과 관련하여 취해진 다음의 상세한 설명을 참조함으로써 더 쉽게 이해될 수 있다. 개시된 핵산 분자, 단백질, 백신 및 방법은 본 명세서에 기재 및/또는 제시된 특정 핵산 분자, 단백질, 백신 및 방법으로 제한되지 않으며, 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어는 특정 실시형태를 단지 예시적으로 설명하기 위한 목적이며, 청구된 핵산 분자, 단백질, 백신 및 방법을 제한하려는 것이 아니다.
달리 구체적으로 언급되지 않는 한, 개선에 대한 가능한 작용 메커니즘 또는 방식 또는 이유에 관한 임의의 설명은 단지 예시를 의미하며, 개시된 핵산 분자, 단백질, 백신 및 방법은 이와 같이 제안된 개선에 대한 임의의 작용 메커니즘 또는 방식 또는 이유의 정확성 또는 부정확성에 의해 제한되지 않아야 한다.
본 명세서에서 수치 범위를 언급하는 경우, 그 사이에 개재되는 각각의 숫자는 동일한 정밀도로 명시적으로 고려된다. 예를 들어, 6 내지 9 범위의 경우, 숫자 7 및 8이 6 및 9 외에 추가로 고려되며, 6.0 내지 7.0 범위의 경우, 숫자 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9 및 7.0이 명시적으로 고려된다.
명확성을 위해, 별도의 실시형태의 맥락에서 본 명세서에 기재된 개시된 핵산 분자, 단백질, 백신 및 방법의 특정 특징은 또한 단일 실시형태에 조합으로 제공될 수 있음이 이해되어야 한다.
반대로, 간략화를 위해, 단일 실시형태의 맥락에서 기재된 개시된 핵산 분자, 단백질, 백신 및 방법의 다양한 특징은 또한 개별적으로 또는 임의의 하위조합으로 제공될 수 있다.
달리 정의되지 않는 한, 본 명세서에서 사용되는 모든 기술 및 과학 용어는 당업자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 충돌이 있는 경우, 정의를 포함한 본 서류가 우선할 것이다. 예시적인 방법 및 재료는 이하에 기술되지만, 본 명세서에 기재된 것과 유사하거나 동등한 방법 및 재료가 본 발명의 실시 또는 시험에 사용될 수 있다. 본 명세서에 언급된 모든 간행물, 특허 출원, 특허 및 기타 참고문헌은 그 전체가 참조에 의해 원용된다. 본 명세서에 개시된 재료, 방법 및 실시예는 단지 예시적이며 제한하려는 의도가 아니다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어는 단지 특정한 실시형태를 설명하기 위해 사용된 것으로서, 제한하려는 의도가 아니다.
본 명세서 전반에 걸쳐, 상세한 설명은 조성물 및 상기 조성물을 사용하는 방법을 언급한다. 본 개시내용이 조성물과 연관된 특징 또는 실시형태를 기술하거나 청구하는 경우, 이러한 특징 또는 실시형태는 상기 조성물을 사용하는 방법에 동일하게 적용 가능하다. 마찬가지로, 본 개시내용이 조성물을 사용하는 방법과 연관된 특징 또는 실시형태를 설명하거나 청구하는 경우, 이러한 특징 또는 실시형태는 조성물에도 동일하게 적용 가능하다.
특정 용어
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 바와 같은 용어 "포함한다(comprise(s))", "포함한다(include(s))", "갖는", "갖는다", "할 수 있다", "함유한다(contain(s))" 및 이의 변형어는 부가적인 행위 또는 구조의 가능성을 배제하지 않는 개방형의 과도기적 어구, 용어 또는 단어인 것으로 의도된다. 단수 표현은 문맥에서 명확하게 달리 지시하지 않는 한 복수의 지시대상을 포함한다. 본 개시내용은 또한 명시적으로 설명되는지 여부에 관계없이, 본 명세서에 제시된 실시형태 또는 요소를 "포함하는", "이루어진" 및 "본질적으로 이루어진" 다른 실시형태도 고려한다.
본 명세서에 제공된 일부 정량적 표현은 "약"이라는 용어에 의해 수식되지 않는다. "약"이라는 용어가 명시적으로 사용되는지 여부에 관계없이 주어진 모든 양은 실제 주어진 값을 지칭하기 위한 것이며, 또한, 그러한 값에 대한 실험적 및/또는 측정 조건으로 인한 근사치를 포함하는, 본 기술분야의 통상의 기술에 근거하여 합리적으로 추론될 수 있는 그러한 주어진 값에 대한 근사값을 지칭하는 것을 의미하는 것으로 이해된다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "보조제"는 이하에 기재된 암호화 핵산 서열 및 핵산 분자에 의해 암호화된 항원의 면역원 성을 향상시키기 위해 본 명세서에 기재된 면역원성 조성물에 첨가된 임의의 분자를 의미한다.
"바이오시밀러"(승인된 기준 제품/생물학적 약물, 즉, 참조 나열된 약물에 대한 것)는 하기로부터 유래되는 데이터에 기초하여, 안전성, 순도 및 효능 측면에서 바이오시밀러와 기준 제품 간에 임상적으로 의미있는 차이 없이, 임상적 비활성 성분의 사소한 차이에도 불구하고 기준 제품과 매우 유사한 생물학적 생성물을 지칭한다: (a) 임상적 비활성 성분의 사소한 차이에도 불구하고, 생물학적 생성물이 기준 제품과 매우 유사함을 입증하는 분석 연구; (b) 동물 연구(독성 평가 포함); 및/또는 (c) 기준 제품이 허가되고 사용되도록 의도되고 바이오시밀러에 대해 추구되는 라이센스에 대해 적절한 하나 이상의 사용 조건에서 안전성, 순도 및 효능을 입증하기에 충분한 임상 연구 또는 연구들(면역원성 및 약동학 또는 약력학 평가 포함). 바이오시밀러는 처방 의료 전문가의 개입 없이 약국에서 기준 제품을 대체할 수 있는 상호 교환 가능한 제품일 수 있다. "상호 교환성"이라는 부가적인 기준을 충족하기 위해, 바이오시밀러는 임의의 주어진 환자에서 기준 제품과 동일한 임상 결과를 나타낼 것으로 예상되어야 하며, 바이오시밀러가 개체에게 1회 초과로 투여되는 경우, 바이오시밀러와 기준 제품의 사용 사이에 대체 또는 교환 시 효능 감소 또는 안전성 측면의 위험은 이러한 대체 또는 교환 없이 기준 제품 사용 시의 위험보다 크지 않다. 바이오시밀러는 기준 제품에 대해 메커니즘이 알려진 정도까지 제안된 사용 조건에서 동일한 작용 메커니즘을 활용한다. 바이오시밀러에 대해 제안된 라벨링에 규정, 권장 또는 제안된 사용 조건 또는 조건들은 기준 제품에 대해 이전에 승인된 것이다. 투여 경로, 투여 형태 및/또는 바이오시밀러의 강도는 기 준 제품과 동일하며, 바이오시밀러가 계속 안전하고 순수하며 강력하도록 설계된 표준을 충족하는 시설에서 바이오시밀러가 제조, 가공, 포장 또는 보관된다. 바이오시밀러는 이 바이오시밀러 성능을 변경할 것으로 예상되지 않는 N- 또는 C-말단 절단과 같이, 기준 제품과 비교 시, 아미노산 서열에 사소한 변형을 포함할 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "항체"는 이황화 결합에 의해 상호연결된 2개의 중쇄(H) 및 2개의 경쇄(L)인 4개의 폴리펩타이드 쇄, 뿐만 아니라 이의 다량체(예를 들어, IgM)를 포함하는 면역글로불린 분자를 포함한다. 전형적인 항체에서, 각각의 중쇄는 중쇄 가변 영역(본 명세서에서 HCVR 또는 VH로 약칭됨) 및 중쇄 불변 영역을 포함한다. 중쇄 불변 영역은 3개의 도메인, CH1, CH2 및 CH3을 포함한다. 각각의 경쇄는 경쇄 가변 영역(본 명세서에서 LCVR 또는 VL로 약칭됨) 및 경쇄 불변 영역을 포함한다. 경쇄 불변 영역은 하나의 도메인(CL1)을 포함한다. VH 및 VL 영역은 프레임워크 영역(FR)이라고 하는 보다 보존적인 영역이 사이에 배치된 상보성 결정 영역(CDR)이라고 하는 초가변 영역으로 더 세분화될 수 있다. 각각의 VH 및 VL은 3개의 CDR과 4개의 FR로 구성되며, 이는 아미노 말단부터 카복시 말단까지 다음과 같은 순서로 배열된다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. 본 발명의 상이한 실시형태에서, 항체의 FR(또는 이의 항원 결합 부분)은 인간 생식계열 서열과 동일할 수 있거나 또는 자연적으로 또는 인공적으로 변형될 수 있다. 아미노산 공통 서열은 2개 이상의 CDR의 병렬 분석(side-by-side analysis)에 기초하여 정의될 수 있다.
본 명세서에 사용된, 용어 "항체"는 또한 완전한 항체 분자의 항원-결합 단편을 포함한다. 본 명세서에 사용된, 용어 항체의 "항원-결합 부분", 항체의 "항원-결합 단편" 등은 항원에 특이적으로 결합하여 복합체를 형성하는, 임의의 자연 발생, 효소적으로 수득 가능한, 합성 또는 유전자 조작된 폴리펩타이드 또는 당단백질을 포함한다. 항체의 항원-결합 단편은, 예를 들어, 항체 가변 및 선택적으로 불변 도메인을 암호화하는 DNA의 조작 및 발현을 수반하는 재조합 유전 공학 기술 또는 단백분해적 분해와 같은 임의의 적합한 표준 기술을 사용하여 완전한 항체 분자로부터 유래될 수 있다. 이러한 DNA는 공지되어 있고/있거나, 예를 들어, 상업적 공급원, DNA 라이브러리(예를 들어, 파지-항체 라이브러리 포함)로부터 쉽게 입수 가능하거나 또는 합성될 수 있다. DNA는, 예를 들어, 하나 이상의 가변 및/또는 불변 도메인을 적절한 구성으로 배열하거나 또는 코돈을 도입하고, 시스테인 잔기를 생성하고, 아미노산을 변형, 부가 또는 결실시키는 등의 화학적 기술 또는 분자 생물학 기술에 의해 서열결정 및 조작될 수 있다.
항원 결합 단편의 비제한적인 예는 다음을 포함한다: (i) Fab 단편; (ii) F(ab')2 단편; (iii) Fd 단편; (iv) Fv 단편; (v) 단일쇄 Fv(scFv) 분자; (vi) dAb 단편; 및 (vii) 항체의 초가변 영역(예를 들어, CDR3 펩타이드와 같은 단리된 상보성 결정 영역(CDR)) 또는 제약된 FR3-CDR3-FR4 펩타이드를 모방하는 아미노산 잔기로 이루어진 최소 인식 단위. 다른 조작된 분자, 예컨대, 도메인 특이적 항체, 단일 도메인 항체, 도메인 결실된 항체, 키메라 항체, CDR 이식된 항체, 다이아바디, 트리아바디, 테트라바디, 미니바디, 나노바디(예를 들어, 1가 나노바디, 2가 나노바디 등), 작은 모듈형 면역약제(SMIP) 및 상어 가변 IgNAR 도메인은 또한 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "항원 결합 단편"이라는 표현 내에 포괄된다.
항체의 항원-결합 단편은 전형적으로 적어도 하나의 가변 도메인을 포함할 것이다. 가변 도메인은 임의의 크기 또는 아미노산 조성일 수 있고, 일반적으로 하나 이상의 프레임워크 서열에 인접하거나, 이것과 프레임 내에 있는 적어도 하나의 CDR을 포함할 것이다. VL 도메인과 연관된 VH 도메인을 갖는 항원 결합 단편에서, VH 및 VL 도메인은 임의의 적합한 배열로 서로에 대해 위치할 수 있다. 예를 들어, 가변 영역은 이량체일 수 있고 VH-VH, VH-VL 또는 VL-VL 이량체를 함유할 수 있다. 대안적으로, 항체의 항원 결합 단편은 단량체 VH 또는 VL 도메인을 함유할 수 있다.
특정 실시형태에서, 항체의 항원 결합 단편은 적어도 하나의 불변 도메인에 공유 연결된 적어도 하나의 가변 도메인을 함유할 수 있다. 본 발명의 항체의 항원-결합 단편 내에서 발견될 수 있는 가변 및 불변 도메인의 비제 한적이고 예시적인 구성은 다음을 포함한다: (i) VH-CH1; (ii) VH-CH2; (iii) VH-CH3; (iv) VH-CH1-CH2; (V) VH-CH1-CH2-CH3; VH-CH2-CH3; (vii) VH-CL; (Viii) VL-CH1; (ix) VL-CH2; (x) VL-CH3; (xi) VL-CH1-CH2; (xii) VL-CH2-CH2-CH3; (xiii) VL-CH2-CH3; 및 (xiv) VL-CL. 상기 열거된 예시적인 구성 중 임의의 것을 포함하는 가변 및 불변 도메인의 임의의 구성에서, 가변 및 불변 도메인은 서로 직접 연결될 수 있거나 또는 완전 한 또는 부분 힌지 또는 링커 영역에 의해 연결될 수 있다. 힌지 영역은 단일 폴리펩타이드 분자에서 인접한 가변 및/또는 불변 도메인 사이에 가요성 또는 반가요성 연결을 초래하는 적어도 2개(예를 들어, 5, 10, 15, 20, 40, 60개 또는 그 초과)의 아미노산으로 이루어질 수 있다. 더욱이, 본 발명의 항체의 항원-결합 단편은 서로 및/또는 하나 이상의 단량체 VH 또는 VL 도메인과 비공유 결합(예를 들어, 이황화 결합(들)에 의해)으로 상기에 열거된 가변 및 불변 도메인 구성 중 임의의 것의 동종이량체 또는 이종이량체(또는 다른 다량체)를 포함할 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "암호 서열" 또는 "암호화 핵산"은 단백질을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산(RNA 또는 DNA 분자)을 의미한다. 암호 서열은 핵산이 투여되는 개체 또는 포유동물의 세포에서 발현을 지시할 수 있는 프로모터 및 폴리아데닐화 신호를 포함하는 조절 요소에 작동 가능하게 연결된 개시 및 종결 신호를 추가로 포함할 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "보체" 또는 "상보적"은 핵산이 핵산 분자의 뉴클레오타이드 또는 뉴클레오타이드 유사체 사이에 왓슨-크릭(Watson-Crick)(예를 들어, A-T/U 및 C-G) 또는 후그스틴(Hoogsteen) 염기 쌍형성을 할 수 있음을 의미한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "공통" 또는 "공통 서열"은 상이한 유기체로부터의 동일한 유전자에 대한 다중 서열의 정렬 분석에 기초한 폴리펩타이드 서열을 의미한다. 공통 폴리펩타이드 서열을 암호화하는 핵산 서열이 제조될 수 있다. 공통 서열을 포함하는 단백질 및/또는 이러한 단백질을 암호화하는 핵산 분자를 포함하는 면역원성 조성물은 항원에 대한 광범위한 면역성을 유도하기 위해 사용될 수 있다.
본 명세서에서 상호교환적으로 사용되는 "전기천공", "전기투과성" 또는 "전기동력학적 향상"("EP")은 생체막에서 미시적 경로(기공)를 유도하기 위한 막관통 전기장 펄스의 사용을 의미하고; 이들의 존재는 플라스미드, 올리고뉴클레오타이드, siRNA, 약물, 이온 및 물과 같은 생체분자가 세포막의 한쪽에서 다른 쪽으로 통과할 수 있도록 한다.
핵산 서열과 관련하여 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "단편"은 본 명세서에 개시된 항원과 교차 반응하는 포유동물의 면역 반응을 유발할 수 있는 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산 서열 또는 이의 일부를 의미한다. 단편은 이하에 제시된 단백질 단편을 암호화하는 다양한 뉴클레오타이드 서열 중 적어도 하나로부터 선택된 DNA 단편일 수 있다. 단편은 다음에 제시된 하나 이상의 핵산 서열의 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90% 또는 적어도 95%를 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 단 편은 이하에 제시된 적어도 하나의 핵산 서열 중 적어도 20개 뉴클레오타이드 또는 그 초과, 적어도 30개 뉴클레오타이드 또는 그 초과, 적어도 40개 뉴클레오타이드 또는 그 초과, 적어도 50개 뉴클레오타이드 또는 그 초과, 적어도 60개 뉴클레오타이드 또는 그 초과, 적어도 70개 뉴클레오타이드 또는 그 초과, 적어도 80개 뉴클레 오타이드 또는 그 초과, 적어도 90개 뉴클레오타이드 또는 그 초과, 적어도 100개 뉴클레오타이드 또는 그 초과, 적어도 150개 뉴클레오타이드 또는 그 초과, 적어도 200개 뉴클레오타이드 또는 그 초과, 적어도 250개 뉴클레오타이드 또는 그 초과, 적어도 300개 뉴클레오타이드 또는 그 초과, 적어도 350개 뉴클레오타이드 또는 그 초과, 적어도 400개 뉴클레오타이드 또는 그 초과, 적어도 450개 뉴클레오타이드 또는 그 초과 또는 적어도 500개 뉴클레오타이드 또는 그 초과, 적어도 550개 뉴클레오타이드 또는 그 초과, 적어도 600개 뉴클레오타이드 또는 그 초과, 적어도 650개 뉴클레오타이드 또는 그 초과, 적어도 700개 뉴클레오타이드 또는 그 초과, 적어도 750개 뉴클레오타이드 또는 그 초과, 적어도 800개 뉴클레오타이드 또는 그 초과, 적어도 850개 뉴클레오타이드 또는 그 초과, 적어도 900개 뉴클레오타이드 또는 그 초과, 적어도 950개 뉴클레오타이드 또는 그 초과 또는 적어도 1000개 뉴클레오타이드 또는 그 초과를 포함할 수 있다.
폴리펩타이드 서열과 관련하여 "단편" 또는 "면역원성 단편"은 본 명세서에 개시된 항원과 교차 반응하는 포유동물에서 면역 반응을 유발할 수 있는 폴리펩타이드를 의미한다. 단편은 이하의 다양한 아미노산 서열 중 적어도 하나로부터 선택된 폴리펩타이드 단편일 수 있다. 공통 단백질의 단편은 공통 단백질의 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90% 또는 적어도 95%를 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 공통 단백질의 단편은 본원에 개시된 단백질 서열의 적어 도 20개 아미노산 또는 그 초과, 적어도 30개 아미노산 또는 그 초과, 적어도 40개 아미노산 또는 그 초과, 적 어도 50개 아미노산 또는 그 초과, 적어도 60개 아미노산 또는 그 초과, 적어도 70개 아미노산 또는 그 초과, 적어도 80개 아미노산 또는 그 초과, 적어도 90개 아미노산 또는 그 초과, 적어도 100개 아미노산 또는 그 초과, 적어도 110개 아미노산 또는 그 초과, 적어도 120개 아미노산 또는 그 초과, 적어도 130개 아미노산 또는 그 초과, 적어도 140개 아미노산 또는 그 초과, 적어도 150개 아미노산 또는 그 초과, 적어도 160개 아미노산 또는 그 초과, 적어도 170개 아미노산 또는 그 초과, 적어도 180개 아미노산 또는 그 초과를 포함할 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "유전자 작제물"은 단백질을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 DNA 또는 RNA 분자를 지칭한다. 암호 서열은 핵산 분자가 투여된 개체의 세포에서 발현을 지시할 수 있는 프로모터 및 폴리아데닐화 신호를 포함하는 조절 요소에 작동 가능하게 연결된 개시 및 종결 신호를 포함한다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "발현가능한 형태"는 개체의 세포에 존재할 때 암호 서열이 발현될 수 있도록, 단백질을 암호화하는 암호 서열에 작동 가능하게 연결된 필수 조절 요소를 함유하는 유전자 작제물을 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "상동성"은 상보성의 정도를 지칭한다. 여기에는 부분 uc21상동성 또는 완전 상동성(즉, 동일성)이 있을 수 있다. 완전 상보성 서열이 표적 핵산에 혼성화하지 못하도록 적어도 부분적으로 저해하는 부분 상보성 서열은 기능 용어 "실질적으로 상동성"을 사용하는 것을 지칭한다. cDNA 또는 게놈 클론과 같이 이중 가닥 핵산 서열과 관련하여 사용되는 경우 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "실질적으로 상동성"은 낮은 엄중도 조건 하에 이중 가닥 핵산 서열의 한 가닥에 혼성화할 수 있는 프로브를 지칭한다. 단일 가닥 핵산 서열과 관련하여 사용되는 경우, 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "실질적으로 상동성"은 낮은 엄중도 조건 하에 단일 가닥 핵산 주형 서열에 혼성화할 수 있는(즉, 보체임) 프로브를 지칭한다.
2개 이상의 핵산 또는 폴리펩타이드 서열의 맥락에서 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "동일한" 또는 "동일성"은 서열이 특정 영역에 걸쳐 동일한 잔기의 특정 백분율을 갖는다는 것을 의미한다. 백분율은 두 서열을 최적으로 정렬하고, 특정 영역에 걸쳐 두 서열을 비교하고, 두 서열에서 동일한 잔기가 발생하는 위치의 수를 결정하여 매칭된 위치의 수를 산출하고, 매칭된 위치의 수를 특정 영역에 있는 위치의 총 수로 나누고, 그 결과에 100을 곱하여 서열 동일성의 백분율을 산출하여 계산할 수 있다. 두 서열의 길이가 다르거나 정렬이 하나 이상의 엇갈린 끝을 생성하고 특정 비교 영역이 단일 서열만을 포함하는 경우, 단일 서열의 잔기는 계산의 분자가 아닌 분모에 포함된다. DNA와 RNA를 비교하는 경우, 티민(T)과 우라실(U)은 동등한 것으로 간주할 수 있다. 동일성은 수동으로 수행하거나 또는 BLAST 또는 BLAST 2.0과 같은 컴퓨터 서열 알고리즘을 사용하여 수행할 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "실질적으로 상보적인"은 제1 서열이 제2 서열의 보체에 대해 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 180, 270, 360, 450, 540개 이상의 뉴클레오타이드 또는 아미노산의 영역에 걸쳐 적어도 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일하거나 또는 두 서열이 엄격한 혼성화 조건 하에 혼성화하는 것을 의미한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "실질적으로 동일한"은 제1 서열이 제2 서열의 보체에 실질적으로 상보적이라면, 제1 서열과 제2 서열이 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 180, 270, 360, 450, 540개 이상의 뉴클레오타이드 또는 아미노산의 영역에 걸쳐 또는 핵산과 관련하여, 적어도 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 것을 의미한다.
용어 "치료적 유효량"은 인간 대상체에서 치료 효과를 생성할 수 있는 생물학적 제제, 화합물 또는 조성물의 치료적 유효량을 지칭한다. 치료적 유효량은 식별된 질환 또는 상태를 치료, 호전 또는 예방할 수 있거나 또는 검출 가능한 치료 효과를 나타낼 수 있는 양이다. 치료적 유효량은 다음 중 하나 이상을 초래하는 양이다: (a) 암, 예를 들어 교모세포종의 증상 또는 적응증의 중증도 또는 기간의 감소; (b) 종양 성장의 저해 또는 종양 괴사, 종양 수축 및/또는 종양 소실의 증가; (c) 종양 성장 및 발달의 지연; (d) 종양 전이의 저해; (e) 종양 성장의 재발 방지; (f) 암에 걸린 대상체의 생존 증가; 및/또는 (g) 미치료 대상체 또는 단독요법으로서 항암 요법이 투여된 대상체와 비교하여 통상적인 항암 요법에 대한 사용 또는 필요성의 감소(예를 들어, 화학치료제 또는 세포독성제의 사용 감소 또는 제거). 대상체의 정확한 유효량은 대상체의 체중, 크기 및 건강; 상태의 성 격과 정도; 및 투여를 위해 선택된 치료제에 따라 달라질 것이다. 주어진 상황에 대한 치료적 유효량은 임상의의 기술 및 판단 내에 있는 일상적인 실험에 의해 결정될 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "치료 효과"는 임의의 종류의 의학적 치료의 결과이며, 그 결과는 바람직하고 유익한 것으로 판단된다. 이는 결과가 예상된 것이든, 예상치 못한 것이든, 심지어 치료에서 의도하지 않은 결과이든 상관 없이 사실이다. 치료 효과는 또한 임상의 또는 다른 자격을 갖춘 관찰자에 의해 인지된 바와 같이, 객관적으로 식별 가능한 개선일 수도 있다.
핵산과 관련하여 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "변이체"는 (i) 기준 뉴클레오타이드 서열의 부분 또는 단편; (ii) 기준 뉴클레오타이드 서열의 보체 또는 이의 부분; (iii) 기준 핵산 또는 이의 보체와 실질적으로 동일한 핵산; 또는 (iv) 엄격한 조건 하에 기준 핵산, 이의 보체 또는 이와 실질적으로 동일한 서열에 혼성화하는 핵산을 의미한 다. 변이체는 전체 유전자 서열 또는 이의 단편의 전체 길이에 걸쳐 실질적으로 동일한 핵산 서열일 수 있다. 핵산 서열은 유전자 서열의 전체 길이 또는 이의 단편에 걸쳐 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성일 수 있다.
폴리펩타이드 측면에서 "변이체"는 아미노산의 삽입, 결실 또는 보존적 치환에 의해 아미노산 서열이 다르지만, 기준 폴리펩타이드의 적어도 하나의 생물학적 활성을 유지하는 것이다. 변이체는 또한 적어도 하나의 생물학적 활성을 유지하는 아미노산 서열을 갖는 기준 단백질과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 갖는 단백질을 의미할 수 있다. 변이체는 아미노산 서열 또는 이의 단편의 전체 길이에 걸쳐 실질적으로 동일한 아미노산 서열일 수 있다. 아미노산 서열은 아미노산 서열 또는 이의 단편의 전체 길이에 걸쳐 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성일 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "벡터"는 복제 기점을 함유하는 핵산 서열을 의미한다. 벡터는 바이러스 벡터, 박테리오파지, 박테리아 인공 염색체 또는 효모 인공 염색체일 수 있다. 벡터는 DNA 또는 RNA 벡터일 수 있다. 벡터는 자가-복제 염색체외 벡터일 수 있고, 일 실시형태에 따르면, 발현 플라스미드이다. 벡터는 하나 이상의 이종 핵산 서열을 함유하거나 포함할 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "면역 반응"은 항원의 도입에 반응하여 숙주의 면역계, 예를 들어, 포유동물의 면역계의 활 성화를 의미한다. 면역 반응은 세포성 또는 체액성 반응 또는 둘 다의 형태일 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "핵산" 또는 "올리고뉴클레오타이드" 또는 "폴리뉴클레오타이드"는 함께 공유적으로 연결된 적어도 2개의 뉴클레오타이드를 의미한다. 단일 가닥의 묘사는 또한 상보적 가닥의 서열을 정의한다. 따라서, 핵산은 도시된 단일 가닥의 상보적 가닥도 포괄한다. 핵산의 많은 변이체는 주어진 핵산과 동일한 목적에 사용될 수 있다. 따라서, 핵산은 또한 실질적으로 동일한 핵산 및 이의 보체를 포괄한다. 단일 가닥은 엄격한 혼성 화 조건 하에 표적 서열에 혼성화할 수 있는 프로브를 제공한다. 따라서, 핵산은 또한 엄격한 혼성화 조건 하에 혼성화하는 프로브를 포괄한다.
핵산은 단일 가닥 또는 이중 가닥일 수 있거나, 이중 가닥 및 단일 가닥 서열 둘 다의 부분을 함유할 수 있다. 핵산은 게놈성 및 cDNA 둘 다인 DNA, RNA 또는 혼성체(hybrid)일 수 있으며, 여기서 핵산은 데옥시리보뉴클레오타이드 및 리보뉴클레오타이드의 조합 및 우라실, 아데닌, 티민, 시토신, 구아닌, 이노신, 크산틴 하이포크산틴, 아이소시토신 및 아이소구아닌을 포함하는 염기의 조합을 함유할 수 있다. 핵산은 화학적 합성 방법 또는 재조합 방법에 의해 수득될 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "작동 가능하게 연결된"은 유전자의 발현이, 공간적으로 연결된 프로모터의 제어 하에 있음을 의미한다. 프로모터는 이의 제어 하에 있는 유전자의 5'(상류) 또는 3'(하류)에 위치할 수 있다. 프로모터와 유전자 사이의 거리는 그 프로모터와 이 프로모터가 유래된 유전자 내에서 프로모터가 제어하는 유전자 사이의 거리와 대략 동일할 수 있다. 본 기술분야에 공지된 바와 같이, 이 거리의 변동은 프로모터 기능의 상실 없이 수용될 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "펩타이드", "단백질" 또는 "폴리펩타이드"는 아미노산의 연결된 서열을 의미할 수 있고, 천연, 합성 또는 천연 및 합성의 변형 또는 조합일 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "프로모터"는 세포에서 핵산의 발현을 부여, 활성화 또는 향상시킬 수 있는 합성 또는 자연 유래 분자를 의미한다. 프로모터는 하나 이상의 특정 전사 조절 서열을 포함하여 발현을 추가로 향상시키고/시키거나 이의 공간적 발현 및/또는 시간적 발현을 변경할 수 있다. 프로모터는 또한 전사의 시작 부위로부터 수 천 개의 염기쌍만큼의 위치에 있을 수 있는 원위의 인핸서 또는 리프레서(repressor) 요소를 포함할 수 있다. 프로모터는 바이러스, 박테리아, 진균, 식물, 곤충 및 동물을 포함하는 공급원으로부터 유래될 수 있다. 프로모터는 발현이 일어나는 세포, 조직 또는 기관에 대해 또는 발현이 발생하는 발달 단계에 대해 또는 생리적 스트레스, 병원체, 금속 이온 또는 유도제와 같은 외부 자극에 대한 반응으로 구성적으로 또는 차등적으로 유전자 성분의 발현을 조절할 수 있다. 프로모터의 대표적인 예로는 박테리오파지 T7 프로모터, 박테리오파지 T3 프로모터, SP6 프로모터, lac 오퍼레이터-프로모터, tac 프로모터, SV40 후기 프로모터, SV40 초기 프로모터, RSV-LTR 프로모터, CMV IE 프로모터, SV40 초기 프로모터 또는 SV40 후기 프로모터 및 CMV IE 프로모터를 포함한다.
"신호 펩타이드" 및 "리더 서열"은 본 명세서에서 상호교환적으로 사용되며 본 명세서에 제시된 단백질의 아미노 말단에서 연결될 수 있는 아미노산 서열을 지칭한다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 신호 펩타이드/리더 서열은 생성되는 세포로부터 단백질의 분비를 촉진할 수 있다. 신호 펩타이드/리더 서열은 세포로부터 분비 시, 종종 성숙 단백질이라 지칭되는 단백질의 나머지로부터 종종 절단된다. 신호 펩타이드/리더 서열은 단백질의 아미노 말단(즉, N 말단)에 연결된다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 표현 "이를 필요로 하는 대상체"는 뇌암의 하나 이상의 증상 또는 적응증을 나타내고/거나, 예를 들어 교모세포종을 포함하는 뇌암으로 진단되었고, 상기에 대해 치료를 필요로 하는 인간 또는 비-인간 포유동물을 의미한다. 많은 실시형태에서, "대상체"라는 용어는 "환자"라는 용어와 상호 교환적으로 사용될 수 있다. 예를 들어, 인간 대상체는 원발성 또는 전이성 종양 및/또는 비제한적으로 설명할 수 없는 체중 감소, 전반 적인 쇠약, 지속적인 피로, 식욕 부진, 발열, 야간 발한, 뼈 통증, 숨가쁨, 복부 부종, 흉통/압박, 비장 비대 및 암 관련 바이오마커(예를 들어, CA125) 수준의 상승을 포함하는 하나 이상의 증상 또는 적응증으로 진단될 수 있다. 이 표현은 원발성 또는 확립된 종양을 갖는 대상체를 포함한다. 이 용어는 원발성 또는 전이성 종양 (진행성 악성종양)이 있는 대상체를 포함한다. 예를 들어, 이 표현은 새롭게 진단된 대상체를 포함한다. 일부 실시형태에서, 이 표현은 개시된 방법에 따른 치료가 초기 치료(예를 들어, 환자가 암에 대한 전신 치료를 사전에 받은 적이 없는 "1차(first line)" 치료)인 대상체를 포함한다. 특정 실시형태에서, 이 표현은 개시된 방법에 따른 치료가 "2차(second-line)" 치료인 대상체를 포함하며, 여기서 환자는 이전에 화학요법, 수술 및 방사선을 포함하나 이에 제한되지 않는 "치료 표준(standard-of-care)" 요법으로 치료받은 적이 있다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "치료하다", "치료하는" 등은 증상을 완화하고, 일시적 또는 영구적 기준으로 증상의 원인을 제거하고, 종양 성장을 지연 또는 저해하고, 종양 세포 부하 또는 종양 부담을 감소시키고, 종양 퇴행을 촉진하고, 종양 수축, 괴사 및/또는 소실을 유발하고, 종양 재발을 예방하고, 전이를 예방 또는 저해하고, 전이성 종양 성장을 저해하고/하거나 대상체의 생존 기간을 증가시키는 것을 의미한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 바와 같이, 어구 "~와 조합으로"는 암 항원 hTERT, PSMA 및 WT-1이 보조제, 예정사 수용체- 1(PD-1) 관문 저해제, 방사선 요법 및/또는 화학치료제의 투여와 동시에, 직전 또는 직후에 대상체에게 투여됨을 의미한다. 특정 실시형태에서, 암 항원은 보조제와 공동제형으로서 투여된다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 바와 같이, 달리 명시되지 않는 한, "임상적으로 입증된"이라는 용어(독립적으로 사용되거나 "안전한" 및/또는 "효과적인"이라는 용어를 수식하기 위해 사용됨)는 임상 시험이 미국 식품의약국(FDA), EMA 또는 해당 국가 규제 기관의 승인 표준을 충족하는 임상 시험에 의해 입증되었음을 의미한다. 예를 들어, 본 명세서에 제공된 실시예에 설명된 임상 시험에 의해 증거가 제공될 수 있다.
용어 "임상적으로 안전한 것으로 입증된"은 암 항원 hTERT, PSMA, WT1(예를 들어, INO-5401 또는 이의 바이오시밀러 또는 생물학적 등가물로서 투여됨)을 보조제, 예컨대, IL-12(예를 들어, INO-9012 또는 이의 바이오시밀러 또는 생물학적 등가물로서 투여됨) 및 예정사 수용체-1(PD-1) 관문 저해제, 예컨대, 항-PD-1 항체(예를 들어, 항-PD-1 항체 REGN2810 또는 이의 바이오시밀러 또는 생물학적 등가물)와 조합으로 사용하는 용량, 투여 요법, 치료 또는 방법에 관한 것인 경우, 치유 표준 또는 다른 비교인자(comparator)와 비교하여 치료 후 이상 사례(AE 또는 TEAE라고 함)의 허용가능한 빈도 및/또는 허용가능한 중증도를 갖는 유리한 유해:유익 비율을 지칭한다. 이상 사례는 의약품을 투여받은 환자에서의 예기치 않은 의학적 발생이다. 안전성의 한 가지 지표는 이상 사례에 대한 일반 독성 기준 CTCAE v4.03에 따라 등급이 매겨진 NCI(National Cancer Institute)의 이상 사례(AE) 발생률이다.
용량, 투여 요법, 치료 또는 방법의 맥락에서 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "임상적으로 입증된 효능" 및 "임상적으로 효과적인 것으로 입증된"은 특정 용량, 투여량 또는 치료 요법의 유효성을 지칭한다. 효능은 본 발명의 작용 제에 반응하여 질환 경과의 변화에 기초하여 측정할 수 있다. 예를 들어, 항-PD-1 항체(예를 들어, 항-PD-1 항체 세미플리맙 또는 이의 바이오시밀러 또는 생물학적 등가물)와 같은 PD-1 관문 저해제와 암 항원 hTERT, PSMA, WT1 및 보조제의 조합(예를 들어, INO-9012 또는 이의 바이오시밀러 또는 생물학적 등가물과 조합된 INO-5401 또는 이의 바이오시밀러 또는 생물학적 등가물)은 치료 중인 장애의 중증도를 반영하는 적어도 하나의 지표의 개선, 바람직하게는 지속적인 개선을 유도하기에 충분한 양 및 시간 동안 환자에게 투여된다. 대상체의 병, 질환 또는 상태의 정도를 반영하는 다양한 지표는 치료 양 및 시간이 충분한 지의 여부를 결정하기 위해 평가될 수 있다. 이러한 지표는, 예를 들어, 질환 중증도, 증상 또는 문제 장애의 징후의 임상적으로 인식된 지표를 포함한다. 개선의 정도는 일반적으로 증후, 증상, 생검 또는 다른 시험 결과에 기초하여 이 결정을 할 수 있고, 또한 대상체에게 실시되는 설문지, 예컨대, 주어진 질환에 대해 개발된 삶의 질 설문지를 이용할 수 있는 의사에 의해 결정된다. 예를 들어, 항-PD-1 항체(예를 들어, 항-PD-1 항체 세미플리맙 또는 이의 바이오시밀러 또는 생물학적 등가물)와 암 항원 hTERT, PSMA, WT1 및 보조제의 조합(예를 들어, INO-9012 또는 이의 바이오시밀러 또는 생물학적 등가물과 조합된 INO-5401 또는 이의 바이오시밀러 또는 생물학적 등가물)은 교모세포종(GBM)과 같은 뇌암과 관련된 환자 상태의 개선을 달성하기 위해 투여될 수 있다. 개선은 질환 활성 지수의 개선에 의해, 임상 증상의 호전에 의해 또는 질환 활성의 임의의 다른 척도에 의해 표시될 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "INO-5401"은 다음 3가지 DNA 플라스미드의 면역학적 조성물을 지칭한다: 프로모터에 의해 작동 가능하게 제어되는 hTERT를 암호화하는 삽입체를 포함하는 DNA 플라스미드, 프로모터에 의해 작동 가능하게 제어되는 WT1을 암호화하는 삽입체를 포함하는 DNA 플라스미드 및 프로모터에 의해 작동 가능하게 제어되는 PSMA를 암호화하는 삽입체를 포함하는 DNA 플라스미드.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "XRT"라고도 지칭되는 용어 "방사선 요법" 일반적으로 항암 요법의 일부로서 암 세포를 사멸시키는 이온화 방사선을 사용하는 것을 의미한다. 이온화 방사선을 생성하기 위해, X선, 감마선 또는 하전 입자(예를 들어, 양성자 또는 전자)가 사용된다.
방사선 요법은 환자의 신체 외부에 배치된 기계(외부 빔 방사선 요법) 또는 환자의 신체 내부에 배치된 공급원(내부 방사선 요법 또는 근접요법)에 의해 또는 정맥내 또는 경구로 전달된 전신 방사성 동위원소를 통해(전신 방사성 동위원소 요법) 전달될 수 있다. 방사선 요법은 투여할 방사선의 선량과 위치를 정확하게 결정하기 위해 컴퓨터 단층 촬영(CT), 자기 공명 영상술(MRI)과 같은 영상 기반 기술과 함께 계획되어 실시될 수 있다. 다양한 실시형태에서, 방사선 요법은 전신(total all-body) 방사선 요법, 통상적인 외부 빔 방사선 요법, 정위 방사선 수술, 정위 신체 방사선 요법, 3-D 등각 방사선 요법, 강도 변조 방사선 요법, 영상 유도 방사선 요법, 토모테라피(tomotherapy), 근접요법 및 전신(systemic) 방사선 요법으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 의도에 따라, 특정 실시형태에서, 방사선 요법은 치유적, 보조적 또는 완화적이다. 특정 실시형태에서, 용어 "방사선 요법"은 저분할 방사선 요법(hypofractionated radiation therapy)을 지칭한다. 저분할 방사선 요법은 총 방사선량을 큰 선량으로 나누어, 하루에 한 번 또는 종종 더 적게 치료를 제공하는 방사선 치료 일정을 지칭한다. 저분할 방사선요법 은 표준 방사선요법보다 더 적은 수의 선량으로, 선량당 더 많은 방사선을 제공할 수 있다. 다양한 실시형태에서, 각각의 분획(fraction)은 2 내지 20 Gy를 포함한다. 예를 들어, 50Gy의 방사선량은 각각 5Gy를 포함하는 10회의 분획으로 분할될 수 있다. 특정 실시형태에서, 2회 이상의 분획이 연속적 또는 후속적 날에 투여된다. 특정 다른 실시형태에서, 2회 이상의 분획은 2일에 1회, 3일에 1회, 4일에 1회, 5일에 1회, 6일에 1회, 7일에 1회 또는 이들의 조합으로 투여된다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "isomiR"은 표준(성숙) miRNA의 아이소타입을 지칭한다. IsomiR은 표준 miRNA로부터 다음 변형을 가질 수 있다: (1) 표준 miRNA의 5'-단부에서 뉴클레오타이드의 첨가 및/또는 결실; (2) 표준 miRNA의 3'-단부에서 뉴클레오타이드(들)의 첨가 및/또는 결실; (3) 표준 miRNA의 5'- 및 3'-단부 둘 다에서 뉴클레오타이드의 첨가 및/또는 결실; 및 (4) 표준 miRNA 서열 내의 뉴클레오타이드 치환.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "감도"는 정의된 TMM 역치를 충족하지 않는 치료받은 뇌암 대상체의 비율을 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "특이성"은 정의된 TMM 역치를 충족하는 뇌암 대상체의 비율을 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "음성 예측 값"은 개시된 요법으로 치료하기 전에 개시된 요법에 임상적으로 반응할 대상체를 정확하게 선택하는 능력을 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "양성 예측 값"은 개시된 요법을 사용한 치료에 대한 반응 부족을 정확하게 예측하는 능력을 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "정의된 TMM 역치" 또는 "정의된 역치"는 실시예에 기재된 분류 및 회귀 트리(Classification and Regression Tree: CART) 분석에 따라 음성 및 양성 예측 값뿐만 아니라 감도 및 특이성이 70%를 초과하게 만드는 TMM 값을 지칭한다.
치료, 사용 및 진단 방법
본 명세서에는 백신 및 암을 예방 또는 치료하기 위한 이의 사용 방법이 제공된다. 또한 본 명세서에는 뇌암 요법을 위해서 대상체를 선택하는 방법이 제공된다. 암은 뇌암, 예를 들어, 교모세포종일 수 있다. 백신은 바람직하게는 적어도 3개의 암 항원, 즉, hTERT, WT-1 및 PSMA를 포함한다. 특정 실시형태에서, 백신은 보조제, 예컨대, IL-12 및 항-PD-1 항체를 포함한다. 방법은 암 항원인 hTERT, WT-1 및 PSMA, 보조제 및 PD-1 관문 저해제, 예컨대, 항-PD-1 항체를 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시형태에서, 방법은 종양 성장을 예방한다. 일부 실시형태에서, 방법은 종양 성장 및/또는 질량을 감소시킬 수 있다. 일부 실시형태에서, 방법은 종양 세포의 전이를 예방할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 방법은 대상체에서 세포성 면역 반응을 증가시킬 수 있다. 일부 실시형태에서, 방법은 대상체의 무종양 생존, 무진행 생존, 전체 생존 또는 이들의 임의의 조합을 증가시킨다.
특정 실시형태에서, 개시된 방법 및 용도는 (1) B 세포 반응을 통해 체액성 면역을 유도하여 단핵구 화학유인 단백질-1(MCP-1) 생산을 차단하는 항체를 생성함으로써 골수 유래 골수 억제 세포(MDSC)를 지연시키고 종양 성장을 억제하거나; (2) CD8+(CTL)과 같은 세포독성 T 림프구를 증가시켜 종양 세포를 공격하고 사멸시키거나; (3) T 헬퍼 세포 반응을 증가시키거나; (4) IFN-γ 및 TFN-α를 통해 염증 반응을 증가시키거나; 또는 (5) 이들의 임의의 조합에 의해서 종양 세포의 제거를 매개하거나 종양 세포의 성장을 저해할 수 있다. 방법은 무진행 생존을 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44% 및 45%만큼 증가시킬 수 있다. 방법은 면역화 후 종양 종괴를 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59% 및 60% 감소시킬 수 있다. 방법은 골수 유래 억제 세포에 의해서 분비되는 사이토카인인 단핵구 화학유인 단백질 1(MCP-1)의 증가를 예방하고 차단할 수 있다. 방법은 종양 생존을 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59% 및 60% 증가시킬 수 있다.
개시된 방법 및 용도는 이 방법이 투여되지 않거나 치료 표준 치료 방법이 투여된 대상체의 세포 면역 반응과 비교할 때 대상체의 세포 면역 반응을 약 50배 내지 약 6000배, 약 50배 내지 약 5500배, 약 50배 내지 약 5000배, 약 50배 내지 약 4500배, 약 100배 내지 약 6000배, 약 150배 내지 약 6000배, 약 200배 내지 약 6000배, 약 250배 내지 약 6000배 또는 약 300배 내지 약 6000배 증가시킬 수 있다. 일부 실시형태에서 방법은 이 방법이 투여되지 않거나 치료 표준 치료 방법이 투여된 대상체의 세포 면역 반응과 비교할 때 대상체의 세포 면역 반응을 약 50배, 100배, 150배, 200배, 250배, 300배, 350배, 400배, 450배, 500배, 550배, 600배, 650배, 700배, 750배, 800배, 850배, 900배, 950배, 1000배, 1100배, 1200배, 1300배, 1400배, 1500배, 1600배, 1700배, 1800배, 1900배, 2000배, 2100배, 2200배, 2300배, 2400배, 2500배, 2600배, 2700배, 2800배, 2900배, 3000배, 3100배, 3200배, 3300배, 3400배, 3500배, 3600배, 3700배, 3800배, 3900배, 4000배, 4100배, 4200배, 4300배, 4400배, 4500배, 4600배, 4700배, 4800배, 4900배, 5000배, 5100배, 5200배, 5300배, 5400배, 5500배, 5600배, 5700배, 5800배, 5900배 또는 6000배 증가시킬 수 있다.
일부 실시형태에서, 개시된 방법 및 용도는 대상체에서 무종양 생존을 증가시킬 수 있거나, 종양 종괴를 감소시킬 수 있거나, 무진행 생존을 증가시킬 수 있거나, 전체 생존을 증가시킬 수 있거나 이들의 조합일 수 있다. 방법은 대상체에서 무종양 생존을 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59% 및 60% 증가시킬 수 있다. 방법은 대상체에서 종양 종괴를 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69% 및 70% 감소시킬 수 있다. 방법은 대상체에서 무진행 생존을 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59% 및 60% 증가시킬 수 있다. 방법은 대상체에서 전체 생존을 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59% 및 60% 증가시킬 수 있다.
특정 실시형태에서, IL-12; hTERT, WT-1 및 PSMA의 면역원성 조성물; 및 항-PD-1 항체의 투여는 투여 후 1개월, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월, 6개월, 7개월, 8개월, 9개월, 10개월, 11개월, 12개월, 13개월, 14개월, 15개월, 16개월, 17개월, 18개월, 19개월, 20개월, 21개월, 22개월, 23개월, 24개월, 25개월, 26개월, 27개월, 28개월, 29개월, 30개월, 31개월, 32개월, 33개월, 34개월, 35개월, 36개월, 37개월, 38개월, 39개월, 40개월, 41개월 또는 42개월에 생존 또는 개선된 전체 생존을 초래한다.
특정 실시형태에서, IL-12; hTERT, WT-1 및 PSMA의 면역원성 조성물; 및 항-PD-1 항체의 투여는 투여 후 18개월에 생존을 초래한다. 추가 실시형태에서, IL-12; hTERT, WT-1 및 PSMA의 면역원성 조성물; 및 항-PD-1 항체의 투여는 투여 후 18개월에 개선된 전체 생존을 초래한다. 추가 실시형태에서, IL-12; hTERT, WT-1 및 PSMA의 면역원성 조성물; 및 항-PD-1 항체의 투여는 위약이 투여된 뇌암을 갖는 환자 집단에 비해서 투여 후 18개월에 개선된 전체 생존을 초래한다. 특정 실시형태에서, 상기 hTERT, WT-1 및 PSMA; 및 항-PD-1 항체의 투여는 hTERT, WT-1 및 PSMA의 면역원성 조성물; 및 항-PD-1 항체가 투여되지 않은 뇌암을 갖는 환자 집단에 비해서 투여 후 18개월에 개선된 전체 생존을 초래한다. 특정 실시형태에서, 상기 hTERT, WT-1 및 PSMA; 및 항-PD-1 항체의 투여는 IL-12; hTERT, WT-1 및 PSMA의 면역원성 조성물; 및 항-PD-1 항체의 투여 후 18개월에 감소된 뇌암을 갖는 환자 집단에 비해서 투여 후 18개월에 개선된 전체 생존을 초래한다.
특정 실시형태에서, IL-12; hTERT, WT-1 및 PSMA의 면역원성 조성물; 및 항-PD-1 항체의 투여는 투여 후 12개월에 생존을 초래한다. 추가 실시형태에서, IL-12; hTERT, WT-1 및 PSMA의 면역원성 조성물; 및 항-PD-1 항체의 투여는 투여 후 12개월에 개선된 전체 생존을 초래한다. 추가 실시형태에서, IL-12; hTERT, WT-1 및 PSMA의 면역원성 조성물; 및 항-PD-1 항체의 투여는 위약이 투여된 뇌암을 갖는 환자 집단에 비해서 투여 후 12개월에 개선된 전체 생존을 초래한다. 특정 실시형태에서, 상기 hTERT, WT-1 및 PSMA; 및 항-PD-1 항체의 투여는 hTERT, WT-1 및 PSMA의 면역원성 조성물; 및 항-PD-1 항체가 투여되지 않은 뇌암을 갖는 환자 집단에 비해서 투여 후 12개월에 개선된 전체 생존을 초래한다. 특정 실시형태에서, 상기 hTERT, WT-1 및 PSMA; 및 항-PD-1 항체의 투여는 IL-12; hTERT, WT-1 및 PSMA의 면역원성 조성물; 및 항-PD-1 항체의 투여 후 12개월에 감소된 뇌암을 갖는 환자 집단에 비해서 투여 후 12개월에 개선된 전체 생존을 초래한다.
특정 실시형태에서, IL-12; hTERT, WT-1 및 PSMA의 면역원성 조성물; 및 항-PD-1 항체의 투여는 개선된 중앙값 전체 생존을 초래한다. 추가 실시형태에서, IL-12; hTERT, WT-1 및 PSMA의 면역원성 조성물; 및 항-PD-1 항체의 투여는 위약이 투여된 뇌암을 갖는 환자 집단에 비해서 개선된 중앙값 전체 생존을 초래한다. 특정 실시형태에서, 상기 hTERT, WT-1 및 PSMA; 및 항-PD-1 항체의 투여는 hTERT, WT-1 및 PSMA의 면역원성 조성물; 및 항-PD-1 항체가 투여되지 않은 뇌암을 갖는 환자 집단에 비해서 개선된 중앙값 전체 생존을 초래한다. 특정 실시형태에서, 상기 hTERT, WT-1 및 PSMA; 및 항-PD-1 항체의 투여는 IL-12; hTERT, WT-1 및 PSMA의 면역원성 조성물; 및 항-PD-1 항체의 투여 후 감소된 뇌암을 갖는 환자 집단에 비해서 개선된 중앙값 전체 생존을 초래한다. 특정 실시형태에서, IL-12; hTERT, WT-1 및 PSMA의 면역원성 조성물; 및 항-PD-1 항체의 투여는 약 19.5개월의 중앙값 전체 생존을 초래한다. 특정 실시형태에서, IL-12; hTERT, WT-1 및 PSMA의 면역원성 조성물; 및 항-PD-1 항체의 투여는 약 17.9개월의 비메틸화 MGMT 프로모터를 갖는 대상체에서의 중앙값 전체 생존을 초래한다. 특정 실시형태에서, IL-12; hTERT, WT-1 및 PSMA의 면역원성 조성물; 및 항-PD-1 항체의 투여는 약 32.5개월의 메틸화 MGMT 프로모터를 갖는 대상체에서의 중앙값 전체 생존을 초래한다.
재조합 암 항원은 항원 특이적 T 세포 및/또는 고역가 항체 반응을 유도하여, 항원을 발현하는 암 또는 종양에 대해 지향되거나 이에 반응하는 면역 반응을 유도하거나 초래할 수 있다. 일부 실시형태에서, 유도되거나 초래된 면역 반응은 세포성, 체액성 또는 세포성 및 체액성 면역 반응 둘 다일 수 있다. 일부 실시형태에서, 유도되거나 초래된 세포성 면역 반응은 인터페론-감마(IFN-γ) 및/또는 종양 괴사 인자 알파(TNF-α)의 유도 또는 분비를 포함할 수 있다. 다른 실시형태에서, 유도되거나 초래된 면역 반응은 항원을 발현하는 종양 또는 암의 성장을 촉진하는 하나 이상의 면역 억제 인자, 예를 들어, 비제한적으로 MHC 제시를 하향 조절하는 인자, 항원 특이적 조절 T 세포(Treg)를 상향 조절하는 인자, PD-L1, FasL, 사이토카인, 예컨대, IL-10 및 TFG-β, 종양 연관 대식세포, 종양 연관 섬유아세포, 면역 억제 세포에 의해 생산되는 가용성 인자, CTLA-4, PD-1, MDSC, MCP-1 및 면역 관문 분자를 감소시키거나 저해할 수 있다.
특정 실시형태에서, IL-12는 DNA 플라스미드, 예를 들어 INO-9012 또는 이의 바이오시밀러 또는 생물학적 등가물에 의해 암호화된다. 특정 실시형태에서, hTERT, WT-1 및 PSMA는 하나 이상의 DNA 플라스미드, 예를 들어, INO-5401 또는 이의 바이오시밀러 또는 생물학적 등가물에 의해 암호화된다. 추가 실시형태에서, hTERT는 DNA 플라스미드에 의해서 암호화되고/되거나, WT-1은 DNA 플라스미드에 의해서 암호화되고/되거나, PSMA는 DNA 플라스미드에 의해서 암호화된다. 더 추가의 실시형태에서, hTERT, WT-1 및 PSMA는 동일한 DNA 플라스미드에 의해서 암호화되거나; hTERT, WT-1 및 PSMA 중 둘은 동일한 DNA 플라스미드에 의해서 암호화되거나; hTERT, WT-1 및 PSMA는 각각 상이한 DNA 플라스미드에 의해서 암호화된다.
특정 실시형태에서, 항-PD-1 항체는 세미플리맙 또는 이의 바이오시밀러 또는 생물학적 등가물이다. 특정 실시형태에서, 방법은 방사선 요법 및/또는 화학치료제, 예를 들어, 테모졸로마이드 또는 이의 생물학적 등가물을 투여하는 것을 추가로 포함한다. 특정 실시형태에서, 항-PD-1 항체는 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(HCVR)의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR1, HCDR2 및 HCDR3) 및 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(LCVR)의 3개의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)을 포함하거나; 3개의 HCDR(HCDR1, HCDR2 및 HCDR3) 및 3개의 LCDR(LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)을 포함하고, HCDR1은 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR1은 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하거나; 서열번호 1과 90% 서열 동일성을 갖는 HCVR을 포함하거나; 서열번호 2와 90% 서열 동일성을 갖는 LCVR을 포함하거나; 서열번호 1과 90% 서열 동일성을 갖는 HCVR 및 서열번호 2와 90% 서열 동일성을 갖는 LCVR을 포함하거나; 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR 및 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR을 포함하거나; 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하거나; IgG4 항체이거나; REGN2810 또는 이의 바이오시밀러 또는 생물학적 등가물이다.
특정 실시형태에서, IL12 p35 소단위는 서열번호 23의 아미노산 서열을 포함하거나; IL12 p40 소단위는 서열번호 25의 아미노산 서열을 포함하거나; IL12 p35 소단위는 서열번호 23의 아미노산 서열을 포함하고 IL12 p40 소단위는 서열번호 25의 아미노산 서열을 포함하거나; IL12 p35 소단위는 서열번호 22의 핵산 서열에 의해서 암호화되거나; IL12 p40 소단위는 서열번호 24의 핵산 서열에 의해서 암호화되거나; IL12 p35 소단위는 서열번호 22의 핵산 서열에 의해서 암호화되고 IL12 p40 소단위는 서열번호 24의 핵산 서열에 의해서 암호화된다.
특정 실시형태에서, hTERT는 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하거나 서열번호 19의 핵산 서열에 의해서 암호화되고/되거나; WT-1은 서열번호 26의 아미노산 서열을 포함하거나 서열번호 27의 핵산 서열에 의해서 암호화되고/되거나; PSMA는 서열번호 28의 아미노산 서열을 포함하거나 서열번호 29의 핵산 서열에 의해서 암호화된다.
암은 뇌암, 예를 들어, 교모세포종일 수 있다. 특정 실시형태에서, 뇌암은 MGMT-메틸화 교모세포종이다. 특정 실시형태에서, 뇌암은 MGMT-비메틸화 교모세포종이다.
MicroRNA(miRNA) 및 IsomiR
MicroRNA(miRNA)는 전형적으로 19 내지 24개 뉴클레오타이드 범위의 내인성 소형 비암호 RNA 클래스이다. 마이크로리보핵단백질(miRNP) 또는 RNA 유도 침묵 복합체(RNA induced silencing complex: RISC)에 로딩되면, miRNA는 mRNA 표적 상의 miRNA 인식 요소(MRE)에 결합하여 전사 후 및/번역 메커니즘을 통해 유전자 조절을 발휘한다. 현재까지 주어진 질환 상태에 대한 면역요법에 대한 반응을 예측할 수 있는 방식으로 사용된 miRNA 또는 miRNA 그룹은 알려져 있지 않다.
변경된 miRNA 생합성의 산물인 것으로 생각되는 isomiR은 표준 miRNA의 5'-, 3'- 또는 양쪽 단부에 첨가 또는 결실을 가질 수 있다. 일부 드문 경우에, isomiR은 표준 서열 내에서 일부 뉴클레오타이드가 대체될 수 있다(다형성 isomiR). 원래 서열결정 아티팩트로 오인되었던 이러한 isomiR은 최근 다중 병렬 서열결정 및 생물정보학 연구에 의해서 진정한 miRNA 종으로 확인되어 miRNA 레퍼토리를 크게 확장하였다.
최근 연구에서는 이러한 isomiR이 종 전체에 걸쳐 보존되고 조절된 세포 특이적 방식으로 또는 특정 발달 단계에서 생산될 수 있다는 사실이 점점 더 많이 밝혀졌다. IsomiR은 miRNP/RISC에 로딩될 수도 있고, 길이 및 서열의 변화로 인해 잠재적으로 중요하고 다른 생물학적 기능으로 표적 선택, miRNA 로딩 및 안정성이 변경될 수 있다.
분자생물학적 기술이 발전함에 따라 다양한 플랫폼을 사용하여 miRNA를 검출할 수 있다. 대부분의 최신 miRNA 연구는 정량적 역전사 중합효소 연쇄 반응(qRT-PCR), 마이크로어레이 및 고속대량처리 서열결정을 사용하여 보고된다. 차세대 서열결정을 사용하면 표준 성숙한 miRNA 서열의 변이체인 miRNA 아이소폼(isomiR)이 발견되었다.
본 명세서에는 대상체에서 뇌암을 치료하는 방법이 제공되며, 이 방법은 (a) 뇌암을 갖는 대상체로부터의 생물학적 샘플에서 서열번호 30을 포함하는 miR-331-3p miRNA 또는 이의 isomiR 및 서열번호 31을 포함하는 miR-1537-3p miRNA 또는 이의 isomiR의 발현 수준을 측정하는 단계; 및 (b) 대상체가 대조군 대상체 집단에 비해서 miR-331-3p miRNA 또는 이의 isomiR 및 miR-1537-3p miRNA 또는 이의 isomiR의 증가된 발현 수준을 갖는 경우 상기 대상체에게 IL-12; hTERT, WT-1 및 PSMA의 면역원성 조성물; 및 항-세포 예정사 수용체 1(PD-1) 항체를 투여하는 단계를 포함하거나, 이루어지거나, 본질적으로 이루어진다.
또한 본 명세서에는 뇌암 요법을 위해서 대상체를 선택하는 방법이 제공되며, 이 방법은 (a) 뇌암을 갖는 대사체로부터의 하나 이상의 생물학적 샘플을 서열번호 30을 포함하는 miR-331-3p miRNA 또는 이의 isomiR 및 서열번호 31을 포함하는 miR-1537-3p miRNA 또는 이의 isomiR의 존재에 대해서 평가하는 단계; 및 (b) 대상체가 대조군 대상체 집단에 비해서 miR-331-3p miRNA 또는 이의 isomiR 및 miR-1537-3p miRNA 또는 이의 isomiR의 증가된 발현 수준을 갖는 경우 대상체를 IL-12; hTERT, WT-1 및 PSMA의 면역원성 조성물; 및 항-PD-1 항체를 사용한 뇌암 요법에 대한 후보자로서 특징규명하는 단계를 포함하거나, 이들로 이루어지거나, 이들로 본질적으로 이루어진다.
추가로 본 명세서에는 뇌암을 갖고 서열번호 30을 포함하는 miR-331-3p miRNA 또는 이의 isomiR 및 서열번호 31을 포함하는 miR-1537-3p miRNA 또는 이의 isomiR을 보유하는 대상체에서 뇌암의 치료에 사용하기 위한 백신이 제공되며, mIR-331-3p miRNA 및 miR-1537-3p miRNA의 발현 수준은 대조군 대상체 집단에 비해서 증가되고, 백신은 hTERT, WT-1 및 PSMA의 면역원성 조성물; 및 항-PD-1 항체를 포함한다.
더 추가로 본 명세서에는 뇌암을 갖고 서열번호 30을 포함하는 miR-331-3p miRNA 또는 이의 isomiR 및 서열번호 31을 포함하는 miR-1537-3p miRNA 또는 이의 isomiR을 보유하는 대상체에서 뇌암을 치료하기 위한 의약에 제조에서의 백신의 용도가 제공되며, mIR-331-3p miRNA 및 miR-1537-3p miRNA의 발현 수준은 대조군 대상체 집단에 비해서 증가되고, 백신은 hTERT, WT-1 및 PSMA의 면역원성 조성물; 및 항-PD-1 항체를 포함한다.
특정 실시형태에서, 생물학적 샘플은 기준선에서, 예를 들어, 치료 조성물의 투여 전에 대상체로부터 채취된다. 특정 실시형태에서, 대조군 대상체 집단 대비 증가는 대상체 및 대조군 대상체 집단 둘 다에 대해서 기준선에서, 예를 들어, 치료 조성물의 투여 전에 측정된다.
특정 실시형태에서, 생물학적 샘플은 IL-12; hTERT, WT-1 및 PSMA의 면역원성 조성물; 및 항-PD-1 항체의 투여 전에 대상체로부터 채취된다. 특정 실시형태에서, 생물학적 샘플은 IL-12; hTERT, WT-1 및 PSMA의 면역원성 조성물; 및 항-PD-1 항체의 투여 전에 대조군 대상체 집단으로부터 채취된다. 특정 실시형태에서, 생물학적 샘플은 IL-12; hTERT, WT-1 및 PSMA의 면역원성 조성물; 및 항-PD-1 항체의 투여 전에 대상체로부터 그리고 대조군 대상체 집단으로부터 채취된다.
특정 실시형태에서, IL-12; hTERT, WT-1 및 PSMA의 면역원성 조성물; 및 항-PD-1 항체의 투여는 투여 후 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 또는 18개월에 생존 또는 개선된 전체 생존을 초래한다. 특정 실시형태에서, IL-12; hTERT, WT-1 및 PSMA의 면역원성 조성물; 및 항-PD-1 항체의 투여는 투여 후 18개월에 생존 또는 개선된 전체 생존을 초래한다. 특정 실시형태에서, IL-12; hTERT, WT-1 및 PSMA의 면역원성 조성물; 및 항-PD-1 항체의 투여는 투여 후 12개월에 생존 또는 개선된 전체 생존을 초래한다.
추가 실시형태에서, 대조군 대상체 집단은 IL-12; hTERT, WT-1 및 PSMA의 면역원성 조성물; 및 항-PD-1 항체의 투여 후 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 또는 18개월에 감소된다. 특정 실시형태에서, 대조군 대상체 집단은 IL-12; hTERT, WT-1 및 PSMA의 면역원성 조성물; 및 항-PD-1 항체의 투여 후 18개월에 감소된다. 특정 실시형태에서, 대조군 대상체 집단은 IL-12; hTERT, WT-1 및 PSMA의 면역원성 조성물; 및 항-PD-1 항체의 투여 후 12개월에 감소된다.
본 개시내용의 일부 양상에서, 생물학적 샘플은 말초 혈액 샘플이다. 특정 실시형태에서, 생물학적 샘플은 혈장 샘플이다.
본 개시내용의 일부 양상에서, 방법은 하나 이상의 생물학적 샘플을 평가하는 것을 포함한다. 특정 실시형태에서, 방법은 하나의 생물학적 샘플을 평가하는 것을 포함한다. 특정 실시형태에서, 방법은 2개의 생물학적 샘플을 평가하는 것을 포함한다. 특정 실시형태에서, 방법은 3개의 생물학적 샘플을 평가하는 것을 포함한다. 특정 실시형태에서, 방법은 4개의 생물학적 샘플을 평가하는 것을 포함한다. 특정 실시형태에서, 방법은 5개의 생물학적 샘플을 평가하는 것을 포함한다.
특정 실시형태에서, 대상체는 비메틸화 MGMT 유전자 프로모터를 갖는다. 추가 실시형태에서, 대상체는 메틸화 MGMT 유전자 프로모터를 갖는다.
메신저 RNA(mRNA)
본 명세서에는 대상체에서 뇌암을 치료하는 방법이 제공되며, 이 방법은 (a) 뇌암을 갖는 대상체로부터의 종양 샘플에서 SYNGR3, OTX1, GABBR2, LHX1, CADM3, MLLT11, MNX1, GRB14, SLC34A2, PHYHIP, WNT10B, SLC17A6, CRLF1, HOXD13, TGFβR3, UBA7, SFRP4 또는 이들의 임의의 조합으로부터 선택된 적어도 하나의 mRNA 바이오마커의 발현 수준을 측정하는 단계; 및 (b) SYNGR3, OTX1, GABBR2, LHX1, CADM3, MLLT11, MNX1, GRB14, SLC34A2, PHYHIP, WNT10B, SLC17A6, CRLF1 및 HOXD13의 발현 수준이 대조군 대상체 집단에 비해서 감소되는 경우 또는 TGFβR3, UBA7, SFRP4의 발현 수준이 증가되는 경우 상기 대상체에게 IL-12; hTERT, WT-1 및 PSMA의 면역원성 조성물; 및 항-PD-1 항체를 투여하는 단계를 포함하거나, 이들로 이루어지거나, 이들로 본질적으로 이루어진다.
또한 본 명세서에는 뇌암 요법을 위해서 대상체를 선택하는 방법이 제공되며, 이 방법은 (a) 뇌암을 갖는 대상체로부터의 종양 샘플에서 SYNGR3, OTX1, GABBR2, LHX1, CADM3, MLLT11, MNX1, GRB14, SLC34A2, PHYHIP, WNT10B, SLC17A6, CRLF1, HOXD13, TGFβR3, UBA7, SFRP4 또는 이들의 임의의 조합으로부터 선택된 적어도 하나의 mRNA 바이오마커의 발현 수준을 측정하는 단계; 및 (b) SYNGR3, OTX1, GABBR2, LHX1, CADM3, MLLT11, MNX1, GRB14, SLC34A2, PHYHIP, WNT10B, SLC17A6, CRLF1 및 HOXD13의 발현 수준이 대조군 대상체 집단에 비해서 감소되는 경우 또는 TGFβR3, UBA7, SFRP4의 발현 수준이 증가되는 경우 대상체를 IL-12; hTERT, WT-1 및 PSMA의 면역원성 조성물; 및 항-PD-1 항체를 사용한 뇌암 요법에 대한 후보자로서 특징규명하는 단계를 포함하거나, 이들로 이루어지거나, 이들로 본질적으로 이루어진다.
추가로 본 명세서에는 뇌암을 갖고, 비메틸화 MGMT 유전자 프로모터를 갖고, SYNGR3, OTX1, GABBR2, LHX1, CADM3, MLLT11, MNX1, GRB14, SLC34A2, PHYHIP, WNT10B, SLC17A6, CRLF1, HOXD13, TGFβR3, UBA7, SFRP4 또는 이들의 임의의 조합으로부터 선택된 적어도 하나의 mRNA 바이오마커를 보유하는 대상체에서 뇌암을 치료하는 데 사용하기 위한 백신이 제공되며, SYNGR3, OTX1, GABBR2, LHX1, CADM3, MLLT11, MNX1, GRB14, SLC34A2, PHYHIP, WNT10B, SLC17A6, CRLF1 및 HOXD13의 발현 수준은 대조군 대상체 집단에 비해서 감소되거나 TGFβR3, UBA7, SFRP4의 수준은 증가된다.
더 추가로 본 명세서에는 뇌암을 갖고, 비메틸화 MGMT 유전자 프로모터를 갖고, SYNGR3, OTX1, GABBR2, LHX1, CADM3, MLLT11, MNX1, GRB14, SLC34A2, PHYHIP, WNT10B, SLC17A6, CRLF1, HOXD13, TGFβR3, UBA7, SFRP4 또는 이들의 임의의 조합으로부터 선택된 적어도 하나의 mRNA 바이오마커를 보유하는 대상체에서 뇌암을 치료하기 위한 의약의 제조에서의 백신의 용도가 제공되며, SYNGR3, OTX1, GABBR2, LHX1, CADM3, MLLT11, MNX1, GRB14, SLC34A2, PHYHIP, WNT10B, SLC17A6, CRLF1 및 HOXD13의 발현 수준은 대조군 대상체 집단에 비해서 감소되거나 TGFβR3, UBA7, SFRP4의 수준은 증가된다.
특정 실시형태에서, 생물학적 샘플은 기준선에서, 예를 들어, 치료 조성물의 투여 전에 대상체로부터 채취된다. 특정 실시형태에서, 대조군 대상체 집단 대비 증가는 대상체 및 대조군 대상체 집단 둘 다에 대해서 기준선에서, 예를 들어, 치료 조성물의 투여 전에 측정된다.
특정 실시형태에서, 생물학적 샘플은 IL-12; hTERT, WT-1 및 PSMA의 면역원성 조성물; 및 항-PD-1 항체의 투여 전에 대상체로부터 채취된다. 특정 실시형태에서, 생물학적 샘플은 IL-12; hTERT, WT-1 및 PSMA의 면역원성 조성물; 및 항-PD-1 항체의 투여 전에 대조군 대상체 집단으로부터 채취된다. 특정 실시형태에서, 생물학적 샘플은 IL-12; hTERT, WT-1 및 PSMA의 면역원성 조성물; 및 항-PD-1 항체의 투여 전에 대상체로부터 그리고 대조군 대상체 집단으로부터 채취된다.
특정 실시형태에서, IL-12; hTERT, WT-1 및 PSMA의 면역원성 조성물; 및 항-PD-1 항체의 투여는 투여 후 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 또는 18개월에 생존 또는 개선된 전체 생존을 초래한다. 특정 실시형태에서, IL-12; hTERT, WT-1 및 PSMA의 면역원성 조성물; 및 항-PD-1 항체의 투여는 투여 후 18개월에 생존 또는 개선된 전체 생존을 초래한다. 특정 실시형태에서, IL-12; hTERT, WT-1 및 PSMA의 면역원성 조성물; 및 항-PD-1 항체의 투여는 투여 후 12개월에 생존 또는 개선된 전체 생존을 초래한다.
추가 실시형태에서, 대조군 대상체 집단은 IL-12; hTERT, WT-1 및 PSMA의 면역원성 조성물; 및 항-PD-1 항체의 투여 후 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 또는 18개월에 감소된다. 특정 실시형태에서, 대조군 대상체 집단은 IL-12; hTERT, WT-1 및 PSMA의 면역원성 조성물; 및 항-PD-1 항체의 투여 후 18개월에 감소된다. 특정 실시형태에서, 대조군 대상체 집단은 IL-12; hTERT, WT-1 및 PSMA의 면역원성 조성물; 및 항-PD-1 항체의 투여 후 12개월에 감소된다.
특정 실시형태에서, 생물학적 샘플은 원발성 종양 샘플이다.
특정 실시형태에서, 대상체는 비메틸화 MGMT 유전자 프로모터를 갖는다. 추가 실시형태에서, 대상체는 메틸화 MGMT 유전자 프로모터를 갖는다.
치료 조성물
본 명세서에는 암 항원 hTERT, WT-1 및 PSMA의 최적화된 공통 서열이 개시된다. 일 실시형태에서, 최적화된 공통 서열에 의해 암호화된 항원은 포유동물에서 면역 반응을 유발할 수 있다. 일 실시형태에서, 최적화된 공통 서열에 의해 암호화된 항원은 면역 반응이 유도될 수 있는 면역원으로서 특히 효과적이게 하는 에피토프(들)를 포함할 수 있다.
일 실시형태에서, 천연 인간 PSMA에 대한 내성을 깨도록 설계된 최적화된 공통 PSMA가 제공된다. 일 실시형태에서, 인간 최적화된 공통 PSMA 암호화 서열은 서열번호 11, 서열번호 12, 서열번호 21 또는 서열번호 28에 제시된 바와 같다. 일 실시형태에서, 인간 최적화된 공통 PSMA 암호화된 항원은 서열번호 13, 서열번호 14 또는 서열번호 28에 제시된 아미노산 서열을 갖는다.
일 실시형태에서, 최적화된 공통 WT-1은 천연 인간 WT-1에 대한 내성을 깨도록 설계된다. 일 실시형태에서, 인간 최적화된 공통 WT-1 암호화 서열은 서열번호 15 또는 서열번호 27에 제시된 바와 같다. 일 실시형태에서, 인간 최적화된 공통 WT-1 암호화된 항원은 서열번호 16 또는 서열번호 26에 제시된 아미노산 서열을 갖는다.
일 실시형태에서, 최적화된 공통 TERT는 천연 인간 TERT에 대한 내성을 깨도록 설계된다. 일 실시형태에서, 인간 최적화된 공통 TERT 암호화 서열은 서열번호 17 또는 서열번호 19에 제시된 바와 같다. 일 실시형태에서, 인간 최적화된 공통 TERT 암호화 항원은 서열번호 18 및 서열번호 20에 제시된 아미노산 서열을 갖는다.
개시된 백신은 보조제를 추가로 포함할 수 있다. 특정 실시형태에서, 개시된 치료 방법은 대상체에게 보조제를 투여하는 것을 추가로 포함한다. 특정 실시형태에서, 보조제는 IL12이다. IL12는 이의 p35 및 p40 소단위의 형태로 백신에 포함될 수 있다. 보조제 IL 12는 이의 p35 및 p40 소단위로서 대상체에게 투여될 수 있다. IL12 p35 및 p40 소단위는 동일한 발현 벡터에 의해 또는 별도의 발현 벡터에 의해 암호화될 수 있다. 일 실시형태에서, IL12 p35 암호화 서열은 서열번호 22에 제시된 바와 같다. 일 실시형태에서, IL12 p35 소단위는 서열번호 23에 제시된 아미노산 서열을 갖는다. 일 실시형태에서, IL12 p40 암호화 서열은 서열번호 24에 제시된 바와 같다. 일 실시형태에서, IL12 p40 소단위는 서열번호 25에 제시된 아미노산 서열을 갖는다.
암 항원 TERT, WT-1, PSMA 및/또는 보조제는 백신에 존재할 수 있거나 또는 폴리펩타이드, 이의 단편, 이의 변이체, 폴리펩타이드, 이의 단편 또는 변이체를 암호화하는 핵산 서열 또는 이의 임의의 조합으로서 대상체에게 투여될 수 있다. 암 항원은 대상체에서 면역 반응을 유도하는 임의의 형태일 수 있다. 핵산 서열은 DNA, RNA, cDNA, 이들의 변이체, 이들의 단편 또는 이들의 조합일 수 있다. 핵산 서열은 또한 펩타이드 결합에 의해 항원에 연결된 링커 또는 태그 서열을 암호화하는 추가 서열을 포함할 수 있다. 아미노산 서열은 단백질, 펩타이드, 이의 변이체, 이의 단편 또는 이들의 조합일 수 있다.
암 항원 TERT, WT-1, PSMA 및/또는 보조제는 백신에 포함될 수 있거나 또는 폴리펩타이드, 이의 단편, 이의 변이체, 폴리펩타이드, 이의 단편 또는 변이체를 암호화하는 핵산 서열 또는 이의 임의의 조합으로서 대상체에게 투여될 수 있다. 암 항원은 대상체에서 면역 반응을 유도하는 임의의 형태일 수 있다. 핵산 서열은 DNA, RNA, cDNA, 이들의 변이체, 이들의 단편 또는 이들의 조합일 수 있다. 핵산 서열은 또한 펩타이드 결합에 의해 항원에 연결된 링커 또는 태그 서열을 암호화하는 추가 서열을 포함할 수 있다. 아미노산 서열은 단백질, 펩타이드, 이의 변이체, 이의 단편 또는 이들의 조합일 수 있다.
암 항원 TERT, WT-1, PSMA 및/또는 IL-12는 백신에 포함될 수 있거나 또는 하나 이상의 핵산 분자, 예를 들어, 비제한적으로, 발현 벡터(들)로서 투여될 수 있다. 발현 벡터는 원형 플라스미드 또는 선형 핵산일 수 있다. 발 현 벡터는 적절한 대상체 세포에서 특정 뉴클레오타이드 서열의 발현을 지시할 수 있다. 발현 벡터는 종결 신호에 작동 가능하게 연결될 수 있는 항원-암호화 뉴클레오타이드 서열에 작동 가능하게 연결된 프로모터를 가질 수 있다. 발현 벡터는 또한 뉴클레오타이드 서열의 적절한 해독에 필요한 서열을 함유할 수 있다. 관심 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 발현 벡터는 키메라성일 수 있으며, 이는 그 구성요소 중 적어도 하나가 이의 다른 구성요소 중 적어도 하나에 대해 이종성임을 의미한다. 발현 카세트에서 뉴클레오타이드 서열의 발현은 구성적 프로모터 또는 유도성 프로모터의 제어 하에 있을 수 있으며, 이는 숙주 세포가 일부 특정 외부 자극에 노출될 때에만 전사를 개시한다. 다세포 유기체의 경우, 프로모터는 또한 특정 조직 또는 기관 또는 발달 단계에 특이 적일 수 있다.
일 실시형태에서, 핵산은 RNA 분자이다. 따라서, 일 실시형태에서, 본 발명은 하나 이상의 관심 폴리펩타이드를 암호화하는 RNA 분자를 제공한다. RNA는 플러스 가닥일 수 있다. 따라서, 일부 실시형태에서, RNA 분자는 역전사와 같은 임의의 개입성 복제 단계 필요 없이 세포에 의해 해독될 수 있다. 일 실시형태에서, RNA 분자는 벡터 내에 포함된다. 본 발명에 유용한 RNA 분자는 5' 캡(예를 들어, 7-메틸구아노신)을 가질 수 있다. 이 캡은 RNA의 생체내 해독을 향상시킬 수 있다. 본 발명에 유용한 RNA 분자의 5' 뉴클레오타이드는 5' 트라이포스페이트기를 가질 수 있다. 캡핑된 RNA에서 이것은 5'-대-5' 가교를 통해 7-메틸구아노신에 연결될 수 있다. RNA 분자는 3' 폴리-A 꼬리를 가질 수 있다. 또한, 3' 말단 부근에 폴리-A 폴리머라제 인식 서열(예를 들어, AAUAAA)을 포함할 수 있다. 본 발명에 유용한 RNA 분자는 단일 가닥일 수 있다. 일부 실시형태에서, RNA 분자는 네이키드(naked) RNA 분자이다. 일 실시형태에서, RNA 분자는 벡터 내에 포함된다.
일 실시형태에서, RNA는 5' 및 3' UTR을 갖는다. 일 실시형태에서, 5' UTR은 길이가 0 내지 3000개 뉴클레오타이드이다. 암호 영역에 부가될 5' 및 3' UTR 서열의 길이는 UTR의 서로 다른 영역에 어닐링하는 PCR용 프라이머를 설계하는 것을 포함하지만, 이에 제한되지 않는 서로 다른 방법에 의해 변경될 수 있다. 이 접근법을 사용하여, 당업자는 전사된 RNA의 형질감염 후 최적의 해독 효율을 달성하는 데 필요한 5' 및 3' UTR 길이를 변형시킬 수 있다.
5' 및 3' UTR은 관심 유전자에 대한 자연 발생의 내인성 5' 및 3' UTR일 수 있다. 대안적으로, 관심 유전자에 내인성이 아닌 UTR 서열은 UTR 서열을 정방향 및 역방향 프라이머에 혼입시킴으로써 또는 주형의 임의의 다른 변형에 의해 부가될 수 있다. 관심 유전자에 내인성이 아닌 UTR 서열의 사용은 RNA의 안정성 및/또는 해독 효율을 변형시키는 데 유용할 수 있다. 예를 들어, 3' UTR 서열의 AU-풍부 요소는 RNA의 안정성을 감소시킬 수 있는 것으로 알려져 있다. 따라서, 3' UTR은 본 기술분야에 잘 알려진 UTR의 특성에 기초하여 전사된 RNA의 안정성을 증가시키도록 선택되거나 설계될 수 있다.
일 실시형태에서, 5' UTR은 내인성 유전자의 코작(Kozak) 서열을 함유할 수 있다. 대안적으로, 관심 유전자에 내인성이 아닌 5' UTR이 전술한 바와 같이 PCR에 의해 부가되는 경우, 공통 코작 서열은 5' UTR 서열을 부 가함으로써 재설계될 수 있다. 코작 서열은 일부 RNA 전사체의 해독 효율을 증가시킬 수 있지만, 모든 RNA가 효율적인 해독을 가능하게 하는 데 필요한 것으로 보이지는 않는다. 많은 RNA에 대한 코작 서열에 대한 요건은 본 기술분야에 공지되어 있다. 다른 실시형태에서, 5' UTR은 RNA 게놈이 세포에서 안정한 RNA 바이러스로부터 유래될 수 있다. 다른 실시형태에서, 다양한 뉴클레오타이드 유사체는 RNA의 엑소뉴클레아제 분해를 방해하기 위해 3' 또는 5' UTR에 사용될 수 있다.
일 실시형태에서, RNA는 리보솜 결합, 해독 개시 및 세포 내 RNA의 안정성을 결정하는 5' 단부 상의 캡 및 3' 폴리(A) 꼬리를 모두 갖는다.
일 실시형태에서, RNA는 뉴클레오사이드-변형된 RNA이다. 뉴클레오사이드-변형된 RNA는, 예를 들어, 증가된 안정성, 낮은 선천적 면역원성 또는 선천적 면역원성 부재 및 향상된 해독을 비롯한, 비변형된 RNA에 비해 특별한 이점을 갖는다.
발현 벡터는 세포 게놈 내로 혼입에 의해 표적 세포를 형질전환시킬 수 있거나 또는 염색체외에 존재할 수 있는(예를 들어, 복제 기점이 있는 자가 복제 플라스미드) 원형 플라스미드일 수 있다. 벡터는 pVAX, pcDNA3.0 또는 provax 또는 항원을 암호화하는 DNA를 발현할 수 있고 세포가 서열을 면역계에 의해 인식되는 항원으로 해독할 수 있게 하는 임의의 다른 발현 벡터일 수 있다.
또한, 본 명세서에는 전기천공을 통해 대상체에게 효율적으로 전달될 수 있고 하나 이상의 원하는 항원을 발현할 수 있는 선형 핵산 면역원성 조성물 또는 선형 발현 카세트("LEC")가 제공된다. LEC는 임의의 포스페이트 골격이 없는 임의의 선형 DNA일 수 있다. DNA는 하나 이상의 항원을 암호화할 수 있다. LEC는 프로모터, 인트론, 정지 코돈 및/또는 폴리아데닐화 신호를 함유할 수 있다. 항원의 발현은 프로모터에 의해 제어될 수 있다. LEC는 임의의 항생제 내성 유전자 및/또는 포스페이트 골격을 함유하지 않을 수 있다. LEC는 원하는 항원 유전자 발현과 관련이 없는 다른 뉴클레오타이드 서열을 함유하지 않을 수 있다. LEC는 선형화될 수 있는 임의의 플라스미드로부터 유래될 수 있다. 플라스미드는 항원을 발현할 수 있다. 플라스미드는 pNP(Puerto Rico/34) 또는 pM2(New Caledonia/99)일 수 있다. 플라스미드는 WLV009, pVAX, pcDNA3.0 또는 provax 또는 항원을 암호화하는 DNA를 발현할 수 있고 세포가 서열을 면역계에 의해 인식되는 항원으로 해독할 수 있게 하는 임의의 다른 발현 벡터일 수 있다. LEC는 pcrM2일 수 있다. LEC는 pcrNP일 수 있다. pcrNP 및 pcrMR은 각각 pNP(Puerto Rico/34) 및 pM2(New Caledonia/99)에서 유래될 수 있다.
벡터는 상기에 기재된 항원을 암호화하는 이종 핵산을 포함할 수 있고, 하나 이상의 암 항원 암호화 서열(들)의 상류일 수 있는 개시 코돈 및 전술한 항원의 암호 서열(들)의 하류일 수 있는 정지 코돈을 추가로 포함할 수 있다.
벡터는 프로모터를 가질 수 있다. 프로모터는 유전자 발현을 유도하고 단리된 핵산의 발현을 조절할 수 있는 임의의 프로모터일 수 있다. 이러한 프로모터는 본 명세서에 기재된 항원 서열을 전사하는 DNA 의존성 RNA 폴리머 라제를 통한 전사에 필요한 시스-작용성 서열 요소이다. 이종 핵산의 발현을 지시하는 데 사용되는 프로모터의 선택은 특정 적용예에 따라 달라진다. 프로모터는 이의 천연 환경에서의 전사 시작 부위와 같이 벡터의 전사 시작으로부터 거의 동일한 거리에 위치할 수 있다. 그러나, 이 거리의 변동은 프로모터 기능의 상실 없이 수용될 수 있다.
개시 및 종결 코돈은 전술한 항원의 암호 서열(들)과 프레임 내에 있을 수 있다. 벡터는 또한 상기 기재된 항원의 암호 서열(들)에 작동 가능하게 연결된 프로모터를 포함할 수 있다. 전술한 항원의 암호 서열(들)에 작동 가능하게 연결된 프로모터는 시미안 바이러스 40(SV40)의 프로모터, 마우스 유방 종양 바이러스(MMTV) 프로모터, 인간 면역결핍 바이러스(HIV) 프로모터, 예컨대, 소 면역결핍 바이러스(BIV) 장말단 반복(LTR) 프로모터, 몰로니(Moloney) 바이러스 프로모터, 조류 백혈병 바이러스(ALV) 프로모터, 거대세포바이러스(CMV) 프로모터, 예컨대, CMV 극초기 프로모터, 엡스타인 바 바이러스(EBV) 프로모터 또는 루스(Rous) 육종 바이러스(RSV) 프로모터일 수 있다. 프로모터는 또한 인간 액틴, 인간 미오신, 인간 헤모글로빈, 인간 근육 크레아틴 또는 인간 메탈로티오네인과 같은 인간 유전자 유래의 프로모터일 수 있다. 프로모터는 또한 천연 또는 합성인 근육 또는 피부 특이적 프로모터와 같은 조직 특이적 프로모터일 수 있다. 이러한 프로모터의 예는 미국 특허 출원 공개 번 호 US20040175727에 기재되어 있고, 이의 내용은 전체가 본 명세서에 포함된다.
벡터는 또한 전술한 항원 및/또는 항체의 암호 서열(들)의 하류일 수 있는 폴리아데닐화 신호를 포함할 수 있다. 폴리아데닐화 신호는 SV40 폴리아데닐화 신호, LTR 폴리아데닐화 신호, 소 성장 호르몬(bGH) 폴리아데닐화 신호, 인간 성장 호르몬(hGH) 폴리아데닐화 신호 또는 인간 β-글로빈 폴리아데닐화 신호일 수 있다. SV40 폴리아데닐화 신호는 pCEP4 벡터(Invitrogen, 미국 캘리포니아주 샌디에고 소재)로부터의 폴리아데닐화 신호일 수 있다.
벡터는 또한 전술한 항원의 상류에 인핸서를 포함할 수 있다.
인핸서는 발현에 필수적일 수 있다. 인핸서는 인간 액틴, 인간 미오신, 인간 헤모글로빈, 인간 근육 크레아틴 또는 CMV, HA, RSV 또는 EBV와 같은 바이러스의 인핸서일 수 있다.
벡터는 인핸서 및 기능적 스플라이스 공여체 및 수용체 부위를 갖는 인트론을 포함할 수 있다. 벡터는 효율적인 종결을 제공하기 위해 구조 유전자의 하류에 전사 종결 영역을 함유할 수 있다. 종결 영역은 프로모터 서열과 동일한 유전자로부터 획득될 수 있거나 상이한 유전자로부터 획득될 수 있다.
개시된 방법은 단일 플라스미드와 같은 단일 핵산 분자의 복수의 카피 또는 2개 이상의 상이한 플라스미드와 같은 2개 이상의 상이한 핵산 분자의 복수의 카피의 투여를 포함할 수 있다. 예를 들어, 방법은 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 이상의 상이한 핵산 분자의 투여를 포함할 수 있다.
플라스미드와 같이, 개시된 방법에 따라 사용되는 핵산 분자는 단일 항원 또는 다중 항원에 대한 암호 서열을 집합적으로 함유할 수 있다. 일 예로서, 일 실시형태에 따르면, 항원은 TERT 및 하나 이상의 부가적인 암 항원으로부터 선택되는 다중 항원이다. 하나의 예시적인 실시형태에서, 항원은 TERT 및 WT-1이다. 하나의 예시적인 실시형태에서, 항원은 TERT 및 PSMA이다. 하나의 예시적인 실시형태에서, 항원은 PSMA 및 하나 이상의 부가적인 암 항원이다. 하나의 예시적인 실시형태에서, 항원은 PSMA 및 WT-1이다. 또 다른 예시적인 실시형태에서, 항원은 TERT, WT-1 및 PSMA이다.
벡터는 염색체 내로 통합되는 것을 저해하는 요소 또는 시약을 추가로 포함할 수 있다. 벡터는 이 벡터를 염색 체외로 유지하고 세포에서 벡터의 다중 카피를 생성하기 위해 포유동물의 복제 기점을 포함할 수 있다. 벡터는 Invitrogen(미국 캘리포니아주 샌디에고 소재)의 pVAX1, pCEP4 또는 pREP4일 수 있고, 이는 통합 없이 높은 카피의 에피솜 복제를 생성할 수 있는 엡스타인 바 바이러스 복제 기점 및 핵 항원 EBNA-1 암호 영역을 포함할 수 있다. 벡터는 pVAX1 또는 본 명세서에 기재된 변이체 플라스미드와 같은 변화가 있는 pVax1 변이체일 수 있다. 변이체 pVax1 플라스미드는 골격 벡터 플라스미드 pVAX1(Invitrogen, 미국 캘리포니아주 칼스배드 소재)의 2998 염기 쌍 변이체이다. CMV 프로모터는 염기 137 내지 724에 위치한다. T7 프로모터/프라이밍 부위는 염기 664 내지 683에 존재한다. 다중 클로닝 부위는 염기 696-811에 존재한다.
소 GH 폴리아데닐화 신호는 염기 829-1053에 있다. 카나마이신 내성 유전자는 염기 1226 내지 2020에 존재한다. pUC 기점은 염기 2320 내지 2993에 존재한다.
Invitrogen으로부터 입수가능한 pVAX1의 서열에 기초하여, 본 명세서에 기재된 플라스미드 1 내지 6에 대한 골격으로서 사용된 pVAX1의 서열에서는 다음 돌연변이가 발견되었다:
CMV 프로모터에서 C>G 241
소 성장 호르몬 폴리아데닐화 신호(bGHpolyA)의 하류에서 C>T 1942 골격
카나마이신 유전자의 하류에서 A> -2876 골격
pUC 복제 기점(Ori) 높은 카피 수 돌연변이에서 C>T 3277(문헌[Nucleic Acid Research 1985] 참조)
RNASeH 부위의 상류 pUC Ori의 가장 단부에서 G>C 3753.
염기쌍 2, 3 및 4는 CMV 프로모터의 상류 골격에서 ACT로부터 CTG로 변경된다.
벡터의 골격은 pAV0242일 수 있다. 벡터는 복제 결함 아데노바이러스 타입 5(Ad5) 벡터일 수 있다.
벡터는 또한 벡터가 투여된 포유동물 또는 인간 세포에서 유전자 발현에 매우 적합할 수 있는 조절 서열을 포함할 수 있다. 본 명세서에 개시된 하나 이상의 암 항원 서열은 숙주 세포에서 암호 서열의 보다 효율적인 전사를 허용할 수 있는 코돈을 포함할 수 있다.
벡터는 에세리키아 콜라이(Escherichia coli)(이.콜라이(E. coli))에서 단백질 생산에 사용될 수 있는 pSE420(Invitrogen, 미국 캘리포니아주 샌디에고 소재)일 수 있다. 벡터는 또한 효모의 사카로마이세스 세레비지애(Saccharomyces cerevisiae) 균주에서 단백질 생산에 사용될 수 있는 pYES2(Invitrogen, 미국 캘리포니아주 샌디에고 소재)일 수 있다. 벡터는 또한 곤충 세포에서 단백질 생산에 사용될 수 있는 MAXBAC™ 완전한 바큘로바이러스 발현 시스템(Invitrogen, 미국 캘리포니아주 샌디에고 소재)일 수 있다. 벡터는 또한 중국 햄스터 난소(CHO) 세포와 같은 포유동물 세포에서 단백질 생산에 사용될 수 있는 pcDNA I 또는 pcDNA3(Invitrogen, 미국 캘리포니아주 샌디에고 소재)일 수 있다. 벡터는 본 명세서에 전체가 참조에 의해 원용되는 문헌[Sambrook et al., Molecular Cloning and Laboratory Manual, Second Ed., Cold Spring Harbor (1989)]에 포함되는 통상적인 기술 및 입수 가능한 출발 물질에 의해 단백질을 생산하는 발현 벡터 또는 시스템일 수 있다.
암 항원 hTERT, WT-1 및/또는 PSMA를 암호화하는 예시적인 DNA 플라스미드는 2019년 9월 12일자로 출원된 미국 출원 번호 제62/899,543호에 개시되어 있으며, 이의 전체 내용은 본 명세서에 참조에 의해 개시된다.
투여 및 투여 경로
개시된 방법 및 용도에 따르면, 대상체는 항원 또는 항원들을 암호화하는 핵산 분자(들) 약 5 나노그램 내지 약 20㎎을 투여받을 수 있다. 일부 실시형태에서, 대상체는 항원 또는 항원을 암호화하는 핵산 분자(들) 약 5㎎ 내지 약 15㎎을 투여받을 수 있다. 일부 실시형태에서, 대상체는 항원 또는 항원을 암호화하는 핵산 분자(들) 약 9㎎ 내지 약 11㎎을 투여받을 수 있다. 일부 실시형태에서, 대상체는 항원 또는 항원을 암호화하는 핵산 분자(들) 약 10㎎을 투여받을 수 있다.
특정 실시형태에서, 개시된 방법 및 용도는 대상체에게 hTERT를 암호화하는 DNA 플라스미드 3㎎, PSMA를 암호화하는 DNA 플라스미드 3㎎, WT-1을 암호화하는 DNA 플라스미드 3㎎ 및 IL-12를 암호화하는 플라스미드 1㎎을 투여하는 것을 포함한다.
특정 실시형태에서, IL-12와 면역원성 조성물은 4회 용량 동안 3주마다, 그 다음 9주마다 근육내 주사에 의해서 공동 투여된다. 추가 실시형태에서, 개시된 방법 및 용도는 각각의 근육내 주사 후에 전기천공을 추가로 포함한다.
DNA 플라스미드(들)는 다양한 경로를 통해서 전달될 수 있다. 전형적인 전달 경로는 비경구 투여, 예를 들어, 피부내, 근육내 또는 피하 전달을 포함한다. 다른 경로로는 경구 투여, 비강내 및 질내 경로를 포함한다. 특히 백신의 DNA인 경우, 백신은 개체 조직의 간질 공간으로 전달될 수 있다(Felgner 등의 미국 특허 제5,580,859호 및 제5,703,055호, 이들 모두의 내용은 전체가 본 명세서에 참조에 의해 원용됨). 또한, DNA 플라스미드(들)는 근육에 투여될 수 있거나, 피내 또는 피하 주사를 통해 또는 이온영동법과 같은 경피를 통해 투여될 수 있다. DNA 플라스미드(들)의 표피 투여가 또한 사용될 수 있다. 표피 투여는 자극제에 대한 면역 반응을 자극하기 위해 표피의 최외층을 기계적으로 또는 화학적으로 자극하는 것을 수반할 수 있다(Carson 등의 미국 특허 제5,679,647호, 이의 내용은 전체가 본 명세서에 참조에 의해 원용됨).
DNA 플라스미드(들)는 현탁액, 시럽 또는 엘릭서와 같은 액체 제제일 수 있다. 백신은 또한 멸균 현탁액 또는 에멀션과 같은 비경구, 피하, 피내, 근육내 또는 정맥내 투여(예를 들어, 주입가능한 투여)를 위한 제제일 수 있다.
DNA 플라스미드(들)는 리포솜, 마이크로스피어 또는 다른 중합체 매트릭스에 혼입될 수 있다(Felgner 등의 미국 특허 제5,703,055호; 문헌[Gregoriadis, Liposome Technology, Vols. I to III (2nd ed. 1993)], 이의 내용은 그 전체가 본 명세서에 참조에 의해 원용됨). 리포솜은 인지질 또는 기타 지질로 이루어질 수 있으며, 제조 및 투여가 비교적 간단한 무독성, 생리학적 허용성 및 대사가능한 담체일 수 있다.
DNA 플라스미드(들)는 내용이 본 명세서에 참조에 의해 원용되는 미국 특허 제7,664,545호에 기재된 방법과 같 은 전기천공을 통해 투여될 수 있다. 전기천공은 미국 특허 제6,302,874호; 제5,676,646호; 제6,241,701호; 제6,233,482호; 제6,216,034호; 제6,208,893호; 제6,192,270호; 제6,181,964호; 제6,150,148호; 제6,120,493호; 제6,096,020호; 제6,068,650호; 및 제5,702,359호에 기재된 방법 및/또는 장치에 의해 이루어질 수 있고, 이들 문헌의 내용은 그 전체가 본 명세서에 참조에 의해 원용된다. 전기천공은 최소 침습 장치를 통해 수행될 수 있다.
최소 침습 전기천공 장치("MID")는 전술한 백신 및 관련 유체를 신체 조직 내로 주입하기 위한 장치일 수 있다. 장치는 중공 바늘, DNA 카세트 및 유체 전달 수단을 포함할 수 있으며, 여기서 장치는 바늘을 상기 신체 조직 내로 삽입 동안 DNA를 신체 조직 내로 동시에(예를 들어, 자동으로) 주입하기 위한 용도의 유체 전달 수단을 가 동하기 위해 조정된다. 이것은 바늘이 삽입되어 있는 동안 DNA 및 관련 유체를 점진적으로 주입하는 능력이 신체 조직을 통해 유체의 보다 균일한 분포를 야기하는 이점이 있다. 주입 동안 경험한 통증은 더 넓은 영역에 걸쳐 주입되는 DNA의 분포로 인해 감소될 수 있다.
MID는 바늘의 사용 없이 DNA 플라스미드(들)를 조직 내로 주입할 수 있다. MID는 백신이 조직의 표면을 뚫고 기저 조직 및/또는 근육으로 들어갈 정도의 힘으로 백신을 작은 스트림으로서 또는 분사물(jet)로서 주입할 수 있다. 작은 스트림 또는 분사물 뒤의 힘은 이산화탄소와 같은 압축 가스의 팽창에 의해 몇 분의 1초 내에 마이크로-오리피스를 통해 제공될 수 있다. 최소 침습적 전기천공 장치의 예 및 이를 사용하는 방법은 공개된 미국 특허 출원 제20080234655호; 미국 특허 제6,520,950호; 제7,171,264호; 제6,208,893호; 제6,009,347호; 제6,120,493호; 제7,245,963호; 제7,328,064호; 및 제6,763,264호에 기재되어 있으며, 이들 각각의 내용은 본 명세서에 참조에 의해 원용된다.
MID는 통증 없이 조직을 뚫는 액체의 고속 제트를 생성하는 주입기를 포함할 수 있다. 이러한 무바늘 주입기는 상업적으로 입수 가능하다. 본 명세서에서 이용될 수 있는 무바늘 주입기의 예는 미국 특허 제3,805,783호; 제4,447,223호; 제5,505,697호; 및 제4,342,310호에 기재된 것을 포함하며, 이들 각각의 내용은 본 명세서에 참조에 의해 원용된다.
직접 또는 간접 전기수송에 적합한 형태의 바람직한 백신은 일반적으로 작용제 분사물의 전달을 가동하기 위해 주입기와 조직 표면을, 조직 내로 백신의 침투를 유발하기에 충분한 힘으로 접촉시킴으로써, 무바늘 주입기를 사용하여 치료할 조직 내로 도입(예를 들어, 주입)될 수 있다. 예를 들어, 치료할 조직이 점막, 피부 또는 근육인 경우, 작용제는 각질층을 통해 피부 층 내로 또는 기저 조직 및 근육 내로 각각 침투하도록 하기에 충분한 힘으로, 점막 또는 피부 표면 쪽으로 투입된다.
무바늘 주입기는 모든 유형의 조직, 특히 피부 및 점막으로 DNA 플라스미드(들)를 전달하기에 매우 적합하다. 일부 실시형태에서, 무바늘 주입기는 DNA 플라스미드(들)를 함유하는 액체를 표면으로, 그리고 대상체의 피부 또는 점막 내로 추진시키는 데 사용될 수 있다. 본 발명의 방법을 사용하여 치료할 수 있는 다양한 유형의 조직의 대표적인 예는 췌장, 후두, 비인두, 하인두, 구인두, 입술, 목구멍, 폐, 심장, 신장, 근육, 유방, 결장, 전립선, 흉선, 고환, 피부, 점막 조직, 난소, 혈관 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다.
MID는 조직을 전기천공하는 바늘 전극을 가질 수 있다. 다중 전극 어레이, 예를 들어, 직사각형 또는 정사각형패턴의 셋업에서 여러 전극 쌍 사이를 펄싱함으로써 한 쌍의 전극 사이를 펄싱한 것보다 개선된 결과를 제공한다. 예를 들어, "약물 및 유전자의 중재된 전달을 위한 바늘 전극"이라는 명칭의 미국 특허 제5,702,359호에는 치료적 치료 동안 여러 바늘 쌍이 펄싱될 수 있는 바늘 어레이가 개시된다. 전부 설명되지만, 본 명세서에 참조에 의해 원용되는 상기 출원에서, 바늘은 원형 어레이로 배치되었지만, 바늘 전극의 대향하는 쌍 사이를 펄싱할 수 있게 하는 커넥터 및 교환 장치를 갖는다. 재조합 발현 벡터를 세포로 전달하기 위한 한 쌍의 바늘 전극이 사용될 수 있다. 이러한 장치 및 시스템은 미국 특허 제6,763,264호에 기재되어 있으며, 그 내용은 본 명세서에 참조에 의해 원용된다. 대안적으로, 일반 주입 바늘을 닮은 단일 바늘에 의한 DNA의 주입 및 전기천공을 허용하고 현재 사용되는 장치에 의해 전달되는 것보다 낮은 전압의 펄스를 인가하여 환자가 겪는 전기 감각을 감소시키는, 단일 바늘 장치가 사용될 수 있다.
MID는 하나 이상의 전극 어레이를 포함할 수 있다. 어레이는 동일한 직경 또는 상이한 직경의 2개 이상의 바늘을 포함할 수 있다. 바늘은 균일하거나 불균일하게 이격될 수 있다. 바늘은 0.005 인치 내지 0.03 인치 사이, 0.01 인치 내지 0.025 인치 사이일 수 있고; 또는 0.015 인치 내지 0.020 인치 사이일 수 있다. 바늘은 직경이0.0175 인치일 수 있다. 바늘은 0.5㎜, 1.0㎜, 1.5㎜, 2.0㎜, 2.5㎜, 3.0㎜, 3.5㎜, 4.0㎜ 또는 그 초과 이격되어 있을 수 있다.
MID는 단일 단계로 DNA 플라스미드(들) 및 전기천공 펄스를 전달하는 펄스 발생기 및 2개 이상의 바늘 주입기로 이루어질 수 있다. 펄스 발생기는 플래시 카드로 작동되는 개인용 컴퓨터를 통해 펄스 및 주입 매개변수의 유연한 프로그래밍뿐만 아니라 전기천공 및 환자 데이터의 포괄적인 기록 및 저장을 허용할 수 있다. 펄스 발생기는 짧은 시간 동안 다양한 볼트 펄스를 전달할 수 있다. 예를 들어, 펄스 발생기는 지속 시간이 100ms인 3회의 15볼트 펄스를 전달할 수 있다. 이러한 MID의 예는 Inovio Biomedical Corporation의 Elgen 1000 시스템이며, 이는 그 내용이 본 명세서에 참조에 의해 원용되는 미국 특허 제7,328,064호에 기재되어 있다.
MID는 신체 또는 식물의 선택된 조직의 세포 내로 DNA와 같은 거대분자의 도입을 용이하게 하는 모듈형 전극 시스템인 CELLECTRA®(Inovio Pharmaceuticals, 펜실베니아주 블루 벨 소재) 장치 및 시스템일 수 있다. 모듈형 전극 시스템은 복수의 바늘 전극; 피하 바늘; 프로그래밍 가능한 정전류 펄스 제어기로부터 복수의 바늘 전극으로 전도성 링크를 제공하는 전기 커넥터; 및 전원을 포함할 수 있다. 시술자는 지지 구조물에 장착된 복수의 바늘전극을 잡아 신체나 식물의 선택된 조직에 확실하게 삽입할 수 있다. 그 다음, 피하주입 바늘을 통해 선택된 조직 내로 거대분자가 전달된다. 프로그램 가능한 정전류 펄스 제어기가 활성화되고 정전류 전기 펄스가 복수의 바늘 전극에 인가된다. 인가된 정전류 전기 펄스는 복수의 전극 사이의 세포 내로 거대분자의 도입을 용이하게 한다. 세포 과열로 인한 세포 사멸은 정전류 펄스로 인해 조직의 전력 소산을 제한하여 최소화된다. CELLECTRA® 장치 및 시스템은 미국 특허 제7,245,963호에 기술되어 있으며, 그 내용은 본 명세서에 참조에 의해 원용된다.
MID는 Elgen 1000 시스템(Inovio Pharmaceuticals)일 수 있다. Elgen 1000 시스템은 중공 바늘; 및 유체 전달 수단을 제공하는 장치를 포함할 수 있고, 여기서 장치는 바늘이 신체 조직 내로 삽입된 동안 상기 신체 조직 내로 유체, 본 명세서에 기재된 DNA 플라스미드(들)를 동시에(예를 들어, 자동으로) 주입하기 위한 용도의 유체전달 수단을 가동시키도록 조정된다. 장점은 바늘이 삽입되어 있는 동안 유체를 점진적으로 주입하는 능력이 신체 조직을 통해 유체의 보다 균일한 분포를 야기한다는 것이다. 또한, 주입하는 동안 겪는 통증은 더 넓은 영역에 걸쳐 주입되는 유체의 부피 분포로 인해 감소되는 것으로 여겨진다.
또한, 유체의 자동 주입은 주입된 유체의 실제 용량의 자동 모니터링 및 등록을 용이하게 한다. 이 데이터는 원하는 경우 문서화 목적으로 제어 장치에 저장될 수 있다.
주입 속도는 선형 또는 비선형일 수 있고 주입은 치료할 대상체의 피부를 통해 바늘이 삽입된 후, 그리고 바늘이 체조직 내로 더 삽입되는 동안 수행될 수 있음을 인식할 것이다.
본 발명의 장치에 의해 유체가 주입될 수 있는 적합한 조직은 종양 조직, 피부 또는 간 조직을 포함하지만, 근육 조직일 수 있다.
장치는 신체 조직 내로 바늘의 삽입을 안내하기 위한 바늘 삽입 수단을 추가로 포함한다. 유체 주입 속도는 바늘 삽입 속도에 의해 제어된다. 이것은 바늘 삽입 및 유체 주입이 모두 제어되어, 삽입 속도가 원하는 경우 주입 속도에 매칭될 수 있다는 이점이 있다. 또한, 이것은 사용자가 장치를 더 쉽게 조작할 수 있도록 한다. 원하는 경우, 바늘을 신체 조직 내로 자동으로 삽입하는 수단이 제공될 수 있다.
사용자는 유체 주입을 시작할 때를 선택할 수 있다. 그러나, 이상적으로는, 바늘의 끝이 근육 조직에 도달했을 때 주입이 시작되며, 장치는 바늘이 유체 주입을 시작하기에 충분한 깊이로 삽입되었을 때를 감지하는 수단을 포함할 수 있다. 이는 바늘이 원하는 깊이(일반적으로 근육 조직이 시작되는 깊이)에 도달했을 때, 유체 주입이 자동으로 시작되도록 프롬프트될 수 있음을 의미한다. 근육 조직이 시작되는 깊이는, 예를 들어, 바늘이 피부층을 통과하기에 충분한 것으로 간주되는 4㎜ 값과 같은 사전설정된 바늘 삽입 깊이로 취해질 수 있다.
감지 수단은 초음파 프로브를 포함할 수 있다. 감지 수단은 임피던스 또는 저항의 변화를 감지하기 위한 수단을 포함할 수 있다. 이 경우, 수단은 신체 조직 중 바늘의 깊이를 기록할 수 있는 것이 아니라, 바늘이 서로 다른 유형의 신체 조직으로부터 근육으로 이동할 때 임피던스 또는 저항의 변화를 감지하도록 조정될 것이다. 이러한 대안 중 하나는 주입이 시작될 수 있음을 감지하는 비교적 정확하고 작동이 간단한 수단을 제공한다. 바늘의 삽입 깊이는 원하는 경우 추가로 기록될 수 있으며, 바늘 삽입 깊이가 기록될 때 주입될 유체의 부피가 결정되도록 유체의 주입을 제어하는 데 사용될 수 있다.
장치는 바늘을 지지하기 위한 베이스; 및 베이스를 내부에 수용하기 위한 하우징을 추가로 포함할 수 있고, 여기서 베이스는 하우징에 대해 제1 후방 위치에 있을 때 바늘이 하우징 내에서 후퇴하고, 베이스가 하우징 내 제2의 전방 위치에 있을 때 바늘이 하우징 외부로 연장되도록 하우징에 대해 이동 가능하다. 이것은 하우징이 환자의 피부에 정렬될 수 있고, 그 다음 베이스에 대해 하우징을 이동시킴으로써 바늘이 환자의 피부 내로 삽입될 수 있기 때문에 사용자에게 유리하다.
상기에 언급한 바와 같이, 유체가 피부에 삽입될 때 바늘의 길이에 걸쳐 유체가 균일하게 분포되도록 유체 주입의 제어된 속도를 달성하는 것이 바람직하다. 유체 전달 수단은 제어된 속도로 유체를 주입하도록 조정된 피스톤 구동 수단을 포함할 수 있다. 피스톤 구동 수단은, 예를 들어, 서보 모터(servo motor)에 의해 활성화될 수 있다. 그러나, 피스톤 구동 수단은 하우징에 대해 축 방향으로 이동하는 베이스에 의해 가동될 수 있다. 유체 전달을 위한 대안적인 수단이 제공될 수 있음을 이해할 것이다. 따라서, 예를 들어, 제어되거나 제어되지 않은 속도로 유체 전달을 위해 압착될 수 있는 밀폐된 용기가 주사기 및 피스톤 시스템 대신에 제공될 수 있다.
전술한 장치는 임의의 유형의 주입에 사용될 수 있다. 그러나, 이는 전기천공 분야에서 특히 유용할 것으로 예상되고, 따라서 바늘에 전압을 인가하기 위한 수단을 추가로 포함할 수 있다. 이를 통해 바늘은 주입을 위해서 뿐만 아니라 전기천공 동안 전극으로서 사용될 수 있다. 이것은 전기장이 주입된 유체와 동일한 영역에 적용된다는 것을 의미하기 때문에 특히 유리하다. 전통적으로, 전기천공은 전극을 이전에 주입된 유체와 정확하게 정렬하는 것이 매우 어렵다는 점에서 문제가 있고, 이에 따라 사용자는 필요한 것보다 더 많은 양의 유체를 더 넓은 영역에 주입하여, 주입된 물질과 전기장 사이에 중첩을 보장하기 위한 시도로 더 큰 영역 상에 전기장을 인가하는 경향이 있었다. 본 발명을 사용하면, 전기장과 유체 사이에 양호한 일치성(fit)을 달성하면서 주입된 유체의 부피 및 인가된 전기장의 크기를 모두 감소시킬 수 있다.
암 항원 hTERT, PSMA 및 WT-1을 암호화하는 핵산 분자(들)를 대상체에게 투여하면, 형질감염된 세포는 하나 이상의 암 항원을 발현하고 분비할 것이다. 이러한 분비된 단백질 또는 합성 항원은 면역계에 의해 이물질로 인식될 것이며, 이는 다음을 포함할 수 있는 면역 반응을 높일 것이다: 하나 이상의 암 항원에 대해 만들어진 항체 및 하나 이상의 암 항원에 특이적으로 대항하는 T 세포 반응. 일부 실시예에서, 본 명세서에 논의된 면역원성 조성물이 투여된 포유동물은 프라이밍된 면역계를 가질 것이고, 본 명세서에 개시된 바와 같은 하나 이상의 암항원으로 공격된 경우, 프라이밍된 면역계는 체액성, 세포성 또는 세포성 및 체액성 면역 반응 둘 다의 여부에 상관없이, 본 명세서에 개시된 바와 같은 후속 암 항원을 빠르게 제거할 것이다.
재조합 암 항원은 항원-특이적 T 세포 및/또는 고역가 항체 반응을 유도할 수 있어, 항원을 발현하는 암 또는 종양에 대해 지시되거나 반응성인 면역 반응을 유도하거나 유발할 수 있다. 일부 실시형태에서, 유도되거나 초래된 면역 반응은 세포성, 체액성 또는 세포성 및 체액성 면역 반응 둘 다일 수 있다. 일부 실시형태에서, 유도되거나 초래된 세포성 면역 반응은 인터페론-감마(IFN-γ) 및/또는 종양 괴사 인자 알파(TNF-α)의 유도 또는 분비를 포함할 수 있다. 다른 실시형태에서, 유도되거나 초래된 면역 반응은 항원을 발현하는 종양 또는 암의 성장을 촉진하는 하나 이상의 면역 억제 인자, 예를 들어, 비제한적으로 MHC 제시를 하향 조절하는 인자, 항원 특이적 조절 T 세포(Treg)를 상향 조절하는 인자, PD-L1, FasL, 사이토카인, 예컨대, IL-10 및 TFG-β, 종양 연관 대식세포, 종양 연관 섬유아세포, 면역 억제 세포에 의해 생산되는 가용성 인자, CTLA-4, PD-1, MDSC, MCP-1 및 면역 관문 분자를 감소시키거나 저해할 수 있다.
항-PD-1 항체와의 조합물
개시된 백신은 항-PD-1 항체를 추가로 포함할 수 있다. 개시된 치료 방법은 대상체에게 항-PD-1 항체를 투여하는 것을 추가로 포함할 수 있다. 본 발명의 특정 실시형태에 따르면, 항-PD-1 항체는 전체 내용이 본원에 포함되는 미국 특허 공개 제20150203579호에 설명된 바와 같은 임의의 항-PD-1 항체의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(HCVR), 경쇄 가변 영역(LCVR) 및/또는 상보성 결정 영역(CDR)을 포함한다. 예시적인 특정 실시형태에서, 개시된 방법의 맥락에서 사용될 수 있는 항-PD-1 항체는 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(HCVR)의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR) 및 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(LCVR)의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR)을 포함한다. 특정 실시형태에 따르면, 항-PD-1 항체는 3개의 HCDR(HCDR1, HCDR2 및 HCDR3) 및 3개의 LCDR(LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)을 포함하고, 여기서 HCDR1은 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하고; HCDR2는 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하며; HCDR3은 서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하고; LCDR1은 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하고; LCDR2는 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하며; LCDR3은 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함한다. 또 다른 실시형태에서, 항-PD-1 항체는 서열번호 1을 포함하는 HCVR 및 서열번호 2를 포함하는 LCVR을 포함한다. 특정 실시형태에서, 본 발명의 방법은 항-PD-1 항체의 사용을 포함하고, 여기서 항체는 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다. 일부 실시형태에서, 항-PD-1 항체는 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 예시적인 항체는 REGN2810으로 알려져 있고, 또한 세미플리맙 또는 세미플리맙-rwlc로도 알려져 있는 완전 인간 항-PD-1 항체이다.
특정 예시적인 실시형태에 따르면, 본 발명의 방법은 REGN2810 또는 이의 바이오시밀러 또는 생물학적 등가물의 용도를 포함한다. 본 명세서에 사용된 용어 "생물학적 등가물"은 유사한 실험 조건 하에 동일한 몰 용량으로 단일 용량 또는 다중 용량으로 투여했을 때 흡수 속도 및/또는 정도가 REGN2810과 유의적인 차이를 보이지 않는 약제학적 등가물 또는 약제학적 대용물인 항-PD-1 항체 또는 PD-1-결합 단백질 또는 이의 단편을 지칭한다. 본 발명의 맥락에서, 이 용어는 안전성, 순도 및/또는 효능에서 REGN2810과 임상적으로 의미 있는 차이가 없는 PD-1에 결합하는 항원 결합 단백질을 지칭한다.
본 발명의 특정 실시형태에 따르면, 항-인간 PD-1 항체는 서열번호 1에 대해 90%, 95%, 98% 또는 99% 서열 동일성을 갖는 HCVR을 포함한다.
본 발명의 특정 실시형태에 따르면, 항-인간 PD-1 항체는 서열번호 2에 대해 90%, 95%, 98% 또는 99% 서열 동일성을 갖는 LCVR을 포함한다.
본 발명의 특정 실시형태에 따르면, 항-인간 PD-1 항체는 5개 이하의 아미노산 치환을 갖는 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR을 포함한다. 본 발명의 특정 실시형태에 따르면, 항-인간 PD-1 항체는 2개 이하의 아미노산 치환을 갖는 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR을 포함한다.
서열 동일성은 본 기술분야에 공지된 임의의 방법(예를 들어, GAP, BESTFIT 및 BLAST)에 의해 측정될 수 있다.
본 발명은 또한 암을 치료하는 방법에 사용되는 항-PD-1 항체의 용도를 포함하며, 여기서 항-PD-1 항체는 하나이상의 보존적 아미노산 치환을 갖는 본 명세서에 개시된 HCVR, LCVR 및/또는 CDR 아미노산 서열 중 임의의 서열의 변이체를 포함한다. 예를 들어, 본 발명은 본 명세서에 개시된 HCVR, LCVR 및/또는 CDR 아미노산 서열 중 임의의 서열에 비해, 예를 들어 10개 이하, 8개 이하, 6개 이하, 4개 이하 등의 보존적 아미노산 치환이 있는 HCVR, LCVR 및/또는 CDR 아미노산 서열을 갖는 항-PD-1 항체의 용도를 포함한다.
개시된 방법에 따라 대상체에게 투여되는 항-PD-1 항체의 양은 치료적 유효량일 수 있다. 본 명세서에 사용된 바와 같이, 항-PD-1 항체의 "치료적 유효량"이라는 어구는 다음 중 하나 이상을 초래하는 양이다: (a) 암, 예를 들어 교모세포종의 증상 또는 징후의 중증도 또는 지속시간의 감소; (b) 종양 성장의 저해 또는 종양 괴사, 종양 수축 및/또는 종양 소실의 증가; (c) 종양 성장 및 발달 지연; (d) 종양 전이의 저해; (e) 종양 성장의 재발 방지; (f) 암에 걸린 대상체의 생존 증가; 및/또는 (g) 치료되지 않은 대상체 또는 단일요법으로서 항체가 투여된 대상체와 비교하여 통상적인 항암 요법에 대한 사용 또는 필요성의 감소(예를 들어, 화학치료제 또는 세포독성제의 사용 감소 또는 제거).
항-PD-1 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 경우, 치료적 유효량은 약 0.05㎎ 내지 약 600㎎, 약 1㎎ 내지 약 500㎎, 약 10㎎ 내지 약 450㎎, 약 50㎎ 내지 약 400㎎, 약 75㎎ 내지 약 350㎎ 또는 약 100㎎ 내지 약 300㎎의 항체일 수 있다. 예를 들어, 다양한 실시형태에서, 항-PD-1 항체의 양은 약 0.05㎎, 약 0.1㎎, 약 1.0㎎, 약 1.5㎎, 약 2.0㎎, 약 10㎎, 약 20㎎, 약 30㎎, 약 40㎎, 약 50㎎, 약 60㎎, 약 70㎎, 약 80㎎, 약 90㎎, 약 100㎎, 약 110㎎, 약 120㎎, 약 130㎎, 약 140㎎, 약 150㎎, 약 160㎎, 약 170㎎, 약 180㎎, 약 190㎎, 약 200㎎, 약 210㎎, 약 220㎎, 약 230㎎, 약 240㎎, 약 250㎎, 약 260㎎, 약 270㎎, 약 280㎎, 약 290㎎, 약 300㎎, 약 310㎎, 약 320㎎, 약 330㎎, 약 340㎎, 약 350㎎, 약 360㎎, 약 370㎎, 약 380㎎, 약 390㎎, 약 400㎎, 약 410㎎, 약 420㎎, 약 430㎎, 약 440㎎, 약 450㎎, 약 460㎎, 약 470㎎, 약 480㎎, 약 490㎎, 약 500㎎, 약 510㎎, 약 520㎎, 약 530㎎, 약 540㎎, 약 550㎎, 약 560㎎, 약 570㎎, 약 580㎎, 약 590㎎ 또는 약 600㎎의 항-PD-1 항체일 수 있다. 일 실시형태에서, 250㎎의 항-PD-1 항체는 본 발명의 방법에 따라 투여된다. 일 실시형태에서, 200㎎의 항-PD-1 항체는 본 발명의 방법에 따라 투여된다. 일 실시형태에서, 350㎎의 항-PD-1 항체가 본 발명의 방법에 따라 투여된다.
항-PD-1 항체는, 예를 들어, 특정 치료적 투약 요법의 일부로서, 다중 용량으로 대상체에게 투여될 수 있다. 예를 들어, 치료적 투약 요법은 항-PD-1 항체의 1회 이상의 용량을 약 1일 1회, 2일에 1회, 3일에 1회, 4일에 1회, 5일에 1회, 6일에 1회, 1주에 1회, 2주에 1회, 3주에 1회, 4주에 1회, 1개월에 1회, 2개월에 1회, 3개월에 1회, 4개월에 1회 또는 더 적은 빈도로 대상체에게 투여하는 것을 포함할 수 있다.
일부 실시형태에서, 항-PD-1 항체는 약제학적 조성물 내에 함유된다. 본 발명의 약제학적 조성물은 적절한 전이, 전달, 내성 등을 제공하는 적절한 담체, 부형제 및 기타 작용제와 함께 제형화될 수 있다. 많은 적절한 제형은 모든 약제 화학자에게 알려진 처방집에서 찾을 수 있다: 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, Pa]. 이러한 제형으로는, 예를 들어, 분말, 페이스트, 연고, 젤리, 왁스, 오일, 지질, 지질(양이온 또는 음이온) 함유 소포(예컨대, LIPOFECTIN™), DNA 접합체, 무수 흡수 페이스트, 수중유 및 유중수 에멀션, 에멀션 카보왁스(다양한 분자량의 폴리에틸렌 글리콜), 반고체 겔 및 카보왁스를 함유한 반고체 혼합물을 포함한다. 또한, 문헌[Powell et al. "Compendium of excipients for parenteral formulations" PDA (1998) J Pharm Sci Technol 52:238-311]에 기재되어 있다.
다양한 전달 시스템은 공지되어 있고 항-PD-1 항체를 투여하는 데 사용될 수 있으며, 예를 들어 리포솜내 캡슐화, 마이크로입자, 마이크로캡슐, 돌연변이체 바이러스를 발현할 수 있는 재조합 세포, 수용체 매개 세포내이입이 있다(예를 들어, 문헌[Wu et al., 1987, J. Biol. Chem. 262: 4429-4432] 참조). 투여 방법으로는 피내, 근육내, 복강내, 정맥내, 피하, 비강내, 경막외 및 경구 경로를 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다. 조성물은 임의의 편리한 경로, 예를 들어, 주입 또는 볼러스 주입, 상피 또는 점막피부 내벽(예를 들어, 구강 점막, 직장 및 장 점막 등)을 통한 흡수에 의해 투여될 수 있고, 다른 생물학적 활성제와 함께 투여될 수 있다.
항-PD-1 항체는 표준 바늘 및 주사기를 사용하여 피하로 또는 정맥내로 전달될 수 있다. 또한, 피하 전달과 관련하여, 펜 전달 장치는 항-PD-1 항체 전달에 쉽게 적용성이 있다. 이러한 펜 전달 장치는 재사용 가능하거나 일회용일 수 있다. 재사용가능한 펜 전달 장치는 일반적으로 항-PD-1 항체의 약제학적 조성물을 함유하는 교체 가능한 카트리지를 사용한다. 카트리지 내의 모든 약제학적 조성물이 투여되고 카트리지가 비면, 빈 카트리지는 쉽게 폐기하고 약제학적 조성물이 들어 있는 새 카트리지로 교체할 수 있다. 그러면 펜 전달 장치를 재사용할 수 있다. 일회용 펜 전달 장치에는 교체 가능한 카트리지가 없다. 오히려, 일회용 펜 전달 장치는 장치 내의 저장소에 보유된 약제학적 조성물이 미리 채워져 제공된다. 저장소에서 약제학적 조성물이 비워지면 전체 장치를 폐기한다.
특정 상황에서, 항-PD-1 항체는 제어 방출 시스템으로 전달될 수 있다. 일 실시형태에서, 펌프가 사용될 수 있다. 또 다른 실시형태에서, 중합체 물질이 사용될 수 있다; 문헌[Medical Applications of Controlled Release, Langer and Wise (eds.), 1974, CRC Pres., Boca Raton, Fla]를 참조한다. 또 다른 실시형태에서, 제어 방출 시스템은 표적 부근에 위치할 수 있으므로 전신 용량의 일부만을 필요로 한다(예를 들어, 문헌 [Goodson, 1984, in Medical Applications of Controlled Release, supra, vol. 2, pp. 115-138] 참조). 다른 제어 방출 시스템은 문헌[Langer, 1990, Science 249:1527-1533]의 리뷰에서 논의되어 있다.
항-PD-1 항체의 주입용 제제는 정맥내, 피하, 피내 및 근육내 주입, 점적 주입 등을 위한 투여 형태를 포함할 수 있다. 이러한 주입가능한 제제는 공지된 방법에 의해 제조될 수 있다. 예를 들어, 주입가능한 제제는, 예를 들어, 주입에 통상적으로 사용되는 멸균 수성 매질 또는 유성 매질에 전술한 항체 또는 이의 염을 용해, 현탁 또는 유화시킴으로써 제조될 수 있다. 주입용 수성 매질로는, 예를 들어, 생리식염수, 포도당 및 기타 보조제를 함유하는 등장액 등이 있으며, 이는 알코올(예를 들면, 에탄올), 폴리알코올(예를 들어, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜), 비이온성 계면활성제[예를 들어, 폴리소르베이트 80, HCO-50(수소화 피마자유의 폴리옥시에틸렌(50㏖) 부가물)] 등과 같은 적절한 가용화제와 조합으로 사용될 수 있다. 유성 매질로서, 예를 들어, 참깨유, 대두유 등이 이용되며, 이는 벤질 벤조에이트, 벤질 알코올 등과 같은 가용화제와 조합으로 사용될 수 있다. 이렇게 제조된 주사제는 바람직하게는 적절한 앰플에 충전된다.
특정 실시형태에서, 항-PD-1 항체는 정맥내 투여에 사용하기 위한 약제학적 조성물로 제형화된다.
방사선 요법 또는 화학요법과의 조합
특정 실시형태에서, 방법은 대상체에게 방사선 요법을 투여하는 것을 추가로 포함한다. 특정 실시형태에서, 방사선 요법의 1회 이상의 선량은 1일 약 1회, 2일에 1회, 3일에 1회, 4일에 1회, 5일에 1회, 6일에 1회, 1주에 1회, 2주에 1회, 3주에 1회, 4주에 1회, 1개월에 1회, 2개월에 1회, 3개월에 1회, 4개월에 1회 또는 더 적은 빈도로 대상체에게 투여된다.
특정 실시형태에서, 방사선 요법은 저분할 방사선 요법이다. 일부 실시형태에서, 방사선 요법의 각각의 선량은 20 내지 50Gy를 포함한다. 일부 실시형태에서, 대상체는 2 내지 20회 분획으로 20 내지 50Gy를 투여받는다. 일부 실시형태에서, 방사선 요법의 각각의 선량은 20 내지 60Gy를 포함한다. 일부 실시형태에서, 대상체는 2 내지 20회 분획으로 20 내지 60Gy를 투여받는다. 특정 실시형태에서, 분할 방사선 요법(fractionated radiation therapy)은 15회 분획으로 40 Gy를 포함한다.
특정 실시형태에서, 저분할 방사선 요법은 15회 분획을 포함한다. 특정 실시형태에서, 15회 분획은 연속 15 내지 25일에 투여된다. 특정 실시형태에서, 15회 분획은 연속 21일에 투여된다.
특정 실시형태에서, 방법은 화학치료제, 예를 들어 테모졸로마이드(TMZ)를 대상체에게 투여하는 것을 추가로 포함한다. 화학치료제는 방사선 요법과 함께 투여될 수 있다. 예를 들어, TMZ는 저분할 방사선 요법과 함께 75㎎/㎡의 일일 용량으로 투여된다. 일부 실시형태에서, 메틸화 MGMT 프로모터가 있는 종양을 갖는 대상체는 화학치료제의 유지 요법을 투여받을 것이다. 예를 들어, 방사선 요법 후, 메틸화 MGMT 프로모터가 있는 종양을 갖는 대상체는 TMZ를 28일 주기의 처음 5일(5일 "온", 23일 "오프")에 6주기 동안 150㎎/㎡/일의 시작 용량으로 투여받고, 50㎎/㎡/용량 내지 최대 200㎎/㎡/용량씩 증가된 각각의 유지 주기로 혈액학적 독성의 부재 하에 투여받을 수 있다. 일부 실시형태에서, 유지 요법은 방사선 요법의 마지막 선량 후, 대략 3주 내지 5주 후, 바람직하게는 약 4주 후에 시작할 것이다.
실시예
본 명세서에 기재된 실시예 및 실시형태는 단지 설명을 위한 것이며, 당업자에게 제안된 다양한 변형 또는 변경은 본 출원의 사상 및 범위 및 첨부된 청구범위의 범주 내에 포함되어야 한다.
실시예 1: 새로 진단된 교모세포종(GBM)에서 세미플리맙(REGN2810)과 조합하여 전기천공(EP)에 의해서 전달되는 INO-5401 및 INO-9012의 연구
새로 진단된 교모세포종(GBM)을 갖는 대상체에서 세미플리맙(REGN2810), 방사선 및 화학요법과 조합된 INO-5401 및 INO-9012의 안전성, 면역원성 및 예비 효능을 평가하기 위한 1/2상 시험의 비제한적인 예가 본 명세서에 제공된다.
목적
1차 목적: 새로 진단된 GBM을 갖는 성인 대상체에서 세미플리맙-rwlc와 조합으로, 근육내(IM) 주입에 이어 CELLECTRA® 2000을 이용한 EP에 의해 전달된 INO-5401 및 INO-9012의 안전성 및 내약성을 평가하기 위함.
1차 평가변수(들) 및 평가:
이상 사례의 일반 독성 기준(CTCAE) v4.03에 따라 등급이 매겨지고, 시스템 기관 클래스, 선호 용어, 중증도 및 시험 치료에 대한 관계에 의해 분류된, 이상 사례(AE)의 빈도.
기준선에서 안전성 실험실 매개변수의 임상적으로 유의미한 변화.
2차 목적:
새로 진단된 GBM이 있는 성인 대상체에서 세미플리맙-rwlc와 조합으로, IM 주입에 이어 CELLECTRA® 2000을 이용한 EP에 의해 전달된 INO-5401 및 INO-9012의 예비 임상 효능 및 면역원성을 평가하기 위함.
새로 진단된 GBM이 있는 성인 대상체에서 REGN2810과 조합으로 IM 주사에 이어 CELLECTRA®2000을 이용한 EP에 의해 전달된 INO-5401 및 INO-9012의 예비 면역원성을 평가하기 위함.
2차 평가변수(들) 및 평가:
18개월에서의 전체 생존(OS18);
하기에 의해 평가된 항원 특이적 세포 면역 반응:
ELISpot에 의한 말초 혈액 단핵 세포(PBMC) 중 인터페론-γ 분비 T 림프구;
유세포 분석에 의한 PBMC 중 T 세포 표현형(예를 들어, 활성화 및 세포용해 세포, 골수 유래 억제 세포 빈도(MDSC));
다양성 및 추정상의 항원 특이성을 평가하기 위한 PBMC로부터의 T 세포 수용체(TCR) 서열결정;
항원 특이적 체액 반응(예를 들어, B 세포 활성화/항체 분비).
탐색 목적(들):
임상 효능과 종양 유전학 및/또는 바이오마커 간의 상관적 관련성을 탐색하기 위함.
새로 진단된 GBM이 있는 성인 대상체에서 REGN2810 및 저분할 방사선 요법과 조합으로, IM 주입에 이어 CELLECTRA® 2000을 이용한 EP에 의해 전달되는 INO-5401 및 INO-9012의 효능을 추가로 평가하기 위함. 탐색적 평가변수(들):
실현가능한 경우, 종양 침윤 림프구(TIL) 및 면역억제 인자;
IHC, 면역형광(IF) 또는 게놈 서열결정에 의한 hTERT, WT1 및 PSMA의 종양 발현을 포함하지만, 이에 제한되지 않는 종양의 종양단백질 발현;
혈장 및/또는 혈청의 MicroRNA 특징;
실현가능한 경우, 말초혈액으로부터의 순환 종양 세포, 순환 내피 세포 및/또는 순환 암 관련된 대식세포 유사 세포;
RNAseq에 의한 종양 관련 항원(TAA) 특이적 말초 T 세포의 평가;
혈장 및/또는 혈청으로부터의 사이토카인 프로파일 평가;
RANO(신경종양학에서의 반응 평가) 기준 및 신경종양학에서의 면역요법 반응 평가(iRANO) 기준에 의해 평가된 무진행 생존;
전체 생존(OS).
연구 설계
본 실시예에 설명된 연구는 ClinicalTrials_gov 식별자 NCT03491683에 해당한다. 이 연구와 관련된 것으로서 본 명세서에 제시된 데이터는 이 출원 당시의 본 연구의 상태를 반영한다. 본 연구에서는 PD-1 관문 저해제, 세미플리맙-rwlc와 함께, 항원 특이적 T 세포 생성 요법인 INO-9012와 조합된 INO-5401에 이어, CELLECTRA® 2000 장치를 이용한 전기침투를, 새로 진단된 GBM이 있는 환자에게 방사선 및 테모졸로마이드와 함께 제공하여, 이의 조합의 내약성, 면역원성 및 항종양 활성을 평가하였다. NYU 윤리 위원회에 의한 윤리 승인; 승인 번호 i17-00764.
이것은 새로 진단된 GBM이 있는 대상체에서 세미플리맙(REGN2810으로도 알려짐)과 조합된 INO-5401 및 INO-9012의 안전성, 면역원성 및 예비 효능을 평가하기 위한 1/2 상, 공개 표지, 다기관 시험이다. 모든 환자는 서면 동의서를 제공하였다.
대상체는 GBM의 최종 조직병리학적 진단 및 외과적 개입으로부터 적당한 회복 시에 REGN2810에 의한 면역요법을 시작하였다. 대상체는 RT 완료 전에 이용 가능한, CLIA 인증 실험실에서 수행된 MGMT 유전자 메틸화 검정의 결과에 기초한 코호트로 할당되었다. 면역요법의 시작은 0일로 지정된다. REGN2810은 iRANO(신경 종양학의 면역 반응 평가)에 의해 정의된 질환 진행, 허용될 수 없는 독성, 동의 철회 또는 사망 시까지 3주마다 정맥내(IV) 투여하였다.
제0일에, 대상체는 INO-5401 및 INO-9012를 근육내(IM)에 이어 전기천공(EP)에 의해 투여받았다. INO-5401 및 INO-9012가 투여되었고, 이어서 EP를 3주마다 4회 선량으로 투여한 다음, iRANO에 의해 정의된 질환 진행, 허용될 수 없는 독성, 동의 철회 또는 사망 시까지 9주마다 투여하였다.
테모졸로마이드는 방사선 요법 동안, 임상적으로 금기인 경우를 제외하고, MGMT 프로모터 메틸화가 있거나 없는 모든 대상체에게 투여하였다. 방사선 요법(RT)은 외과적 개입 후 42일 이내에 시작하였다. 방사선 요법은 0일 후 대략 1 내지 2주에 시작하였고, 대략 3주 동안 지속하였다. 테모졸로마이드(TMZ)는 방사선 요법 동안 매일 제공하였다(TMZ/RT). MGMT 프로모터 메틸화가 있는 대상체는 TMZ/RT로부터 회복 후, 6 주기 동안 유지(보조제) TMZ를 투여받았다. 유지(보조제) TMZ는 28일 주기의 처음 5일 동안 투여하였다. 이 연구는 2개의 코호트를 갖고 있었다: 비메틸화 MGMT 프로모터를 갖는 대상체로 이루어진 코호트 A 및 메틸화 MGMT 프로모터를 갖는 대상체로 이루어진 코호트 B.
연구 집단
각 잠재적 대상체는 연구에 등록하기 위해 다음 기준을 모두 충족하였다: 환자 적격성 개요
최종 수술 후 표준 요법을 받을 수 있는 새로 진단된 GBM이 있는 성인. 대상체의 추정 수: 52명. 코호트 A: 비메틸화 MGMT 프로모터(N=32, 평가가능한 대상체 30명). 코호트 B: 메틸화 MGMT 프로모터(N=20, 평가 가능한 대상체 19명).
포함 기준:
대상체는 기관 지침에 따라 서면으로 된 IRB 승인 정보 동의서를 제공해야 한다;
정보 동의서에 서명한 날짜에 18세 이상이고 모든 시험 절차를 준수할 능력과 의지가 있어야 한다;
교모세포종(GBM)의 조직병리학적 진단이 있는 새로 진단된 뇌암;
기준선에서 70 이상의 Karnofsky 수행 상태(KPS) 등급;
0일 전 3일 이상 동안 안정적이거나 감소된, 1일당 2㎎ 이하인 덱사메타손 등가 용량의 수령;
조사자에 의해 정의된 이전 GBM 수술의 영향으로부터 회복;
정보 동의 양식(ICF)에 서명한 후 28일 이내에 수행된 조사자에 의해 평가된, 임상적으로 유의미한 소견이 없는 ECG;
1차 시험 치료 전 28일 이내에 수득한, 이하 표에 정의된 혈액학적, 신장, 간 매개변수에 의해 입증된 적절한 기관 기능;
시험 동안 남성은 아버지 또는 아이가 아니고, 여성은 임신을 할 수 없거나 또는 임신 가능성이 있는 경우 임신하지 않아야 하는 데 동의한다. 대상체는 임산 가능성이 없고(호르몬 대체 요법이 아닌 경우, 난포 자극 호르몬[FSH]에 의해 확인된 비요법 유도 무월경이 12개월 이상임); 또는 외과적 불임이고(남성의 경우 정관수술 또는 여성의 경우 난소 및/또는 자궁의 부재); 또는 치료 기간 동안 및 마지막 용량 후 적어도 12주까지 연간 1% 미만의 실패율을 초래하는 1가지 매우 효과적인 또는 복합 피임 방법을 사용하는 데 동의해야 한다. 주기적인 금욕(예를 들어, 일정, 배란, 증상체온 또는 배란후 방법) 및 철회는 허용되는 피임 방법이 아니다. 예상 실패율이 연간 1% 미만인 피임 방법의 예로는 남성 불임술 및 호르몬 이식을 포함한다. 대안적으로, 조합된 경구 또는 주입식 호르몬 피임 및 특정 자궁내 장치(IUD) 또는 2가지 방법(예를 들어, 콘돔 및 자궁경부 캡과 같은 2가지 장벽 방법)의 적절한 사용은 연간 1% 미만의 실패율을 달성하기 위해 조합될 수 있다(장벽 방법은 항상 살정자제의 사용에 의해 보완되어야 함).
자기공명영상술(MRI)을 견딜 수 있는 능력.
제외 기준:
수술 후 MRI에서 1㎝Х1㎝ 초과의 잔존 종양 증강의 존재;
수술 후 MRI에서 다병소 질환 또는 연수막 질환(LM) 질환;
종양의 외과적 절제 후 42일 이내에 방사선 치료를 시작할 수 없음;
1일당 >2㎎의 덱사메타손 등가 용량을 투여받음;
과거 임의의 시점에서 PD-1/PD-L1 경로를 차단하는 작용제에 의한 사전 치료;
이전에 승인되었거나 조사 중인 면역 조절제(예를 들어, 항-TNF, 치료적 항암 백신, 사이토카인 치료제(GCSF 또는 에리트로포이에틴 외에 다른 것) 또는 1차 치료 용량을 투여받은 후 28일 이내에 세포독성 T-림프구 항원 4(CTLA-4), 4-1BB(CD137), PI3K-델타 또는 OX-40)을 표적으로 하는 작용제의 수령;
과거 임의의 시점에서 아이델랄리십(idelalisib)으로 사전 치료를 받은 적이 있음;
종양 치료 장(Optune, NovoTTF)에 의한 과거, 현재 또는 계획된 치료; 종양용해성 바이러스 치료; 또는 화학요법을 위한 Gliadel 웨이퍼(Carmustine) 이식체를 포함하는 연구용 작용제 또는 장치에 대한 사전 노출; 1차 치료 용량을 투여받은 후 28일 이내;
REGN2810 또는 임의의 이의 부형제에 대한 알레르기 또는 과민증;
문서화된 알레르기 반응 또는 항체 치료로 인한 급성 과민 반응의 이력;
전신 면역억제 치료제에 의한 치료를 필요로 하는 자가면역 질환의 진행 중이거나 최근(5년 이내) 증거, 이는 다음을 제외한 면역 관련 이상 사례(irAE)의 위험을 시사할 수 있음: 백반증, 해소된 소아 천식, 1형 당뇨병, 호르몬 대체만을 필요로 하는 잔존 갑상선기능저하증 또는 전신 치료를 필요로 하지 않는 건선;
포함 기준에 명시된 바와 같이, 조사 중인 기저 질환에 대한 덱사메타손 이외에, 1차 시험 치료 용량 전 28일 이내에 면역결핍 진단 또는 전신 면역억제 요법으로의 치료;
인간 면역결핍 바이러스(HIV)에 대한 혈청학적 검사 양성 또는 HIV 감염 병력; 또는 백신 접종에 대한 적절한 면역 반응을 증가시키는 능력을 방해할 수 있는 활성 또는 만성 감염을 나타내는 B형 간염 바이러스 표면 항원(HBV sAg) 또는 C형 간염 바이러스 리보핵산(HCV RNA)에 대한 양성 검사;
적절하게 치료된 기저 또는 편평 세포 피부암 또는 제자리 자궁경부의 암종을 제외하고 3년 이내에 질환의 증거가 없는 다른 부위에서의 현재 악성종양. 이전 악성 종양에 대해 치유적 요법을 받은 적이 있고 3년 동안 질환의 증거가 없고 재발 위험이 낮은 것으로 간주되는 암 생존자는 시험에 적합함;
최대 2주 전에 제공될 수 있는 비활성화된 인플루엔자 백신을 제외한 1차 시험 치료 용량 전 4주 이내에 임의의 백신 수령;
조사자의 판단에 따라 대상체의 안전을 위태롭게 하거나, 시험 평가 또는 평가변수 평가를 방해하거나 또는 시험 결과의 유효성에 달리 영향을 미칠 수 있는 임상적으로 유의미하고 의학적으로 불안정한 질환의 이력(예를 들어, 만성 신부전, 협심증, 심근 허혈 또는 경색, 뉴욕 심장 협회(NYHA) 클래스 III/IV 심장 질환); 또는 임의의 심장 흥분전 증후군(예컨대, 울프-파킨슨-화이트(Wolff-Parkinson-White), 심근병증 또는 임상적으로 유의미한 부정맥);
과거 5년 이내에 폐렴의 병력;
IM 주입 또는 0일의 2주 이내에 혈액 희석제(예를 들어, 처방전 없이 구입할 수 있는 아스피린 또는 이부프로펜과 같은 비스테로이드성 항염증제를 제외한, 항응고제 또는 항혈소판제)의 사용을 금기시할 수 있는 급성 또는 만성 출혈 또는 응고 장애;
삼각근과 전외측 대퇴사두근을 고려한, IM 주입에 이용 가능한 2개 미만의 허용 부위. 다음은 허용되지 않는 부위이다:
o 의도된 치료 부위로부터 2cm 이내에 위치한 문신, 켈로이드 또는 비후성 흉터;
o 삼각근 주입 부위의 동측에 위치하는 심장율동전환기-제세동기 또는 심박조율기(생명을 위협하는 부정맥을 예방하기 위해)(심장 전문의에 의해 허용성으로 간주되지 않는 한);
o 의도한 치료 부위(즉, EP 영역) 내의 금속 이식체 또는 이식형 의료 장치;
조사자의 견해상, 시험 요건 준수를 방해할 수 있는 활성 약물 또는 알코올 사용 또는 의존;
정신과적 또는 신체적(즉, 감염 질환) 병의 치료를 위한 감금 또는 강제 구금(본의 아닌 감금);
임신 중이거나 현재 모유 수유 중인 경우;
조사자에 의해 결정된 것으로서, 대상체의 참여 능력을 방해하거나 대상체의 안전에 영향을 미칠 수 있는 임의의 의학적 또는 심리적 또는 비의학적 상태.
투여량 및 투여
연구용 의약품을 표 2에 제공한다.
INO-5401의 활성 약제학적 성분(API)은 독점권이 있는 합성 공통(SynCon®) 기술을 사용하여 설계 및 작제된 DNA 플라스미드 서열이다. 이 과정은 여러 균주에 걸쳐 공통 유전자를 합성적으로 유도하는 단계 및 인간 세포에서 높은 발현을 허용하는 유전자 수준에서 DNA 삽입을 최적화하는 단계를 수반한다. INO-5401 플라스미드는 다음과 같다:
pGX1108, 전립선 특이적 막 항원(PSMA; 서열번호 28)의 발현을 위한 플라스미드. 각각의 10㎎ 용량의 시험 치료제(INO-5401 + INO-9012)에 3㎎의 pGX1108이 존재할 것이다.
pGX1404, 빌름스(Wilms) 종양 유전자-1(WT1) 항원(서열번호 26) 발현용 플라스미드. 각각의 10㎎ 용량의 시험 치료제에 3㎎의 pGX1404가 존재할 것이다.
pGX1434, 인간 텔로머라제 역전사효소(hTERT)(서열번호 20) 발현용 플라스미드. 각각의 10㎎ 용량의 시험 치료제에 3㎎의 pGX1434가 존재할 것이다.
의약품 INO-9012의 API는 인간 IL-12 p35(서열번호 22) 및 p40(서열번호 25) 소단위 단백질의 발현을 위한 DNA 플라스미드인 pGX6001이다. 각각의 10㎎ 용량의 시험 치료제에는 1㎎의 pGX6001이 존재할 것이다. DNA 플라스미드 제품 INO-5401 및 INO-9012는 둘 다가 주사기 및 연구용 CELLECTRA® 2000 전기천공(EP) 장치를 사용하여 투여된다.
세미플리맙-rwlc(REGN2810)는 2개의 이황화 연결된 인간 중쇄로 이루어진 공유 이종사량체이며, 각각의 중쇄는 이황화 연결을 통해 인간 카파 경쇄에 공유 결합된다. 항체는 1차 서열을 기준으로 대략 143.6 kDa의 분자량을 보유한다. 분자의 Fc 부분의 불변 영역 내에는 각각의 중쇄에 단일 N-연결된 글리코실화 부위가 위치해 있다.
REGN2810 중쇄는 IgG4 아이소타입-불변 영역을 보유한다. 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인은 조합하여 항체 내에 PD-1 결합 부위를 형성한다. VelocImmune® 마우스에 의한 항체 생성은 PD-1로 면역화한 후 표준 기술을 사용하여 수행된다. REGN2810의 중쇄 및 경쇄를 암호화하는 유전자는 CHO 세포에 도입시켰고, 이 항체에 대해 더 높은 역가를 갖는 안정한 발현 세포주(세포주 2)가 개발되었다. 두 세포주 모두에 대해, 재조합 CHO 세포는 현탁 배양물에서 성장하였고, 화학적으로 유도하여 항체 발현 및 세포 배양 배지로의 분비를 개시하였다. 항체는 여과를 통해 수확하고 일련의 정제용 컬럼 크로마토그래피 및 여과 단계를 통해 정제하여 원료의약품을 생성한다. 그 다음, 원료의약품을 제형화하고 멸균 여과하여 최종 의약품을 생산한다.
REGN2810(50㎎/㎖)은 10mM 히스티딘, 5%(w/v) 수크로스, 1.5%(w/v) L-프롤린 및 0.2%(w/v) 폴리소르베이트 80을 함유하는 pH 6.0의 완충 수용액에서 제형화된다. REGN2810은 IV 투여용 10 또는 20㎖ 유리 바이알에 5.5㎖의 멸균 액체 용액으로 공급된다. 250㎎의 REGN2810을 함유하는 각각의 바이알에서 최대 5.0㎖의 부피가 회수될 수 있다. 350㎎ 용량의 REGN2810을 제공하기 위해서는 7㎖가 필요하므로, 5㎖ 바이알에 의해 공급되는 경우에는 2개의 바이알이 사용되어야 한다. REGN2810(50㎎/㎖)은 IV 투여용의 10 또는 20㎖ 유리 바이알 중 7.44㎖의 멸균 액체 용액으로서 공급될 수도 있다. 350㎎의 REGN2810을 함유한 각각의 바이알에서는 최대 7.0㎖의 부피가 회수될 수 있다.
치료
모든 포함 기준을 충족하고 제외 기준은 전혀 충족하지 않는 대상체에게 0일에 REGN2810 및 INO-5401 + INO-9012를 이용한 면역요법을 시작하였다. REGN2810은 iRANO에 의해 정의된 질환 진행, 허용될 수 없는 독성, 동의 철회 또는 사망 시까지 용량 보류 없이, 용량당 350㎎의 용량으로 3주마다 IV 투여하였다. INO-5401 및 INO-9012 IM에 이어 EP를 4회 용량에 대해 3주마다 투여한 다음, iRANO에 의해 정의된 질환 진행, 허용될 수 없는 독성, 동의 철회 또는 사망 시까지 용량 보류 없이, 용량당 10㎎/DNA의 용량으로 9주마다 투여하였다. RT는 외과적 개입 후 42일 이내에 그리고 0일 후 약 1 내지 2주 후에 시작하였다. RT는 대략 3주 동안 계속하였다. RT의 총 선량은 3주에 걸쳐 제공된 40Gy였다.
방사선 요법과 함께 매일 TMZ(TMZ/RT)는 외과적 개입 후 42일 이내에 그리고 0일 후 대략 2주 후 시작하였다. TMZ/RT는 대략 3주 동안 계속하였다. TMZ는 용량 감소 없이 75㎎/㎡/용량의 용량으로 제공하였다. 그 다음, 대상체는 추가 6주기 동안 유지(보조제) TMZ를 투여받아야 한다. 코호트 B는 최대 6주기 동안 방사선 요법 후 TMZ를 투여받았다. 표준 가이드라인 TMZ 치료에 따라 TMZ/RT로부터 말초 혈액 수치 회복 후 28일 주기 중 처음 5일 동안 150 내지 200㎎/㎡/용량으로 유지(보조제) TMZ를 코호트 B의 대상체에게 투여하였다.
0일(INO 5401, INO 9012 및 REGN2810의 1차 용량)는 원발성 종양의 절제 완료 후 적어도 14일이었고, 대상체는 수술에서 회복되었지만 수술 후 28일 이내에 회복되었다.
진행 이외의 이유로 1가지 요법(INO-5401 + INO-9012 또는 REGN2810)을 중단한 대상체의 경우, 의료 모니터와 상의한 후 다른 요법을 계속하도록 하였다.
도 1은 코호트 A 및 B에 대한 시험 설계를 예시한다.
총 10㎎의 DNA에 대해, 1㎎ INO-9012(IL-12)와 조합된 INO-5401(hTERT, WT-1 및 PSMA 플라스미드 각각 3㎎)은 근육내(IM) 주사를 통해 투여한 다음, CELLECTRA® 2000 장치를 이용한 전기천공(EP)을 통해 투여하였고, 4회 용량에 대해 3주마다, 그 다음 9주마다 전달하였다.
화학방사선: 저분획 일정으로 제공된 방사선(RT)(3주에 걸쳐 40Gy)
방사선과 병용되는 테모졸로마이드(TMZ)(코호트 A 및 B), 이어서 6회 유지(보조제) 주기(코호트 B 단독).
세미플리맙-rwlc(REGN2810)는 0일에 시작하여 약 30분에 걸쳐 매 3주마다(Q3W) 350㎎의 용량으로 IV 투여하였고, iRANO에 의해 정의되는 질환 진행, 허용될 수 없는 독성, 동의 철회 또는 사망 시까지 계속하였다.
INO-5401은 WT1, PSMA 및 hTERT 단백질을 표적으로 하는 3가지 별도의 합성 플라스미드의 혼합물이다. 각각의 플라스미드는 INO-5401의 용량당 DNA가 총 9㎎인 경우 3㎎ DNA로 투여되었다. INO-5401은 0일, 3주, 6주 및 9주에 IM으로 투여된 다음, 그 후 9주마다 투여되었고, iRANO에 의해 정의되는 질환 진행, 허용될 수 없는 독성, 동의 철회 또는 사망 시까지 계속되었다. INO-9012는 인간 IL-12를 발현하는 합성 플라스미드이며, 1㎎ DNA의 용량이고 INO-5401과 함께 IM으로 투여되었다. 혼합되어 함께 투여되는 경우 INO-5401 + INO-9012의 각각의 용량 중 DNA의 총 용량은 10㎎이었다. 총 10㎎의 DNA에 대해, 1㎎ INO-9012(IL-12)와 조합된 INO-5401(hTERT, WT-1 및 PSMA 플라스미드 각각 3㎎)은 근육내(IM) 주사를 통해 투여한 다음, CELLECTRA® 2000 장치를 이용한 전기천공(EP)을 통해 투여하였고, 4회 용량에 대해 3주마다, 그 다음 9주마다 전달하였다.
모든 대상체는 총 40 Gy를 15회 분획으로 투여받았다(3주).
저분할 방사선 요법(hfRT)은 수술 후 42일 이내에 시작하였다. 방사선 요법은 3주 동안 제공하였다.
모든 환자는 방사선요법 동안 임상적으로 금기시되지 않는 한, MGMT 메틸화 상태에 관계없이 TMZ를 투여받았다. TMZ는 hfRT 요법과 동시에 21일 동안(3주 동안 주 7일) 경구로 매일 75㎎/㎡로 투여하였다.
방사선 요법 후, MGMT 프로모터 메틸화가 있는 대상체(코호트 B)는 28일 주기의 처음 5일(5일 "온", 23일"오프")에 6주기 동안 150㎎/㎡/일의 시작 용량으로 TMZ 유지 요법을 계속하였고, 혈액학적 독성이 없는 경우, 각각의 유지 주기를 50㎎/㎡/용량 내지 최대 200㎎/㎡/용량씩 증가시켰다. 유지(보조제) TMZ는 TMZ 치료 지침에 따라 RT의 마지막 선량 후 대략 4주 후(±3일) 및 말초 혈구수 회복 후에 시작하였다. 선량은 각각의 치료 주기의 시작 시에 평방 미터로 계산되는 것으로서, 실제 체표면적(BSA)을 사용하여 결정하였다.
일일 용량은 5㎎ 가까이로 반올림하였다.
효능 평가/평가변수 ELISpot, 용해성 과립 로딩, 안전성 평가, 의료 및 임상 평가, 신체 평가, 치료 후 의료 반응 평가, 활력 징후, 체중, 신장 및 체질량 지수, 12-리드 EGC, 임신 검사, 실험실 평가, 말초 혈액 면역원성 평가, 조직 면역학, 임상 평가, 전체 생존 및 진행의 문서화, 신경종양학에서 라노 및 이라노(rano 및 irano)(면역요법) 반응 평가, 신경종양학에서 나노규모 신경학적 평가, 통계 및 분석 계획, 통계 가설, 분석 집단 및 데이터 세트, 대상체 배치 및 안전성 데이터에 대한 자세한 정보는 WO 2021/092019에 설명되어 있으며, 그 전체 내용은 참조에 의해 본 명세서에 포함된다.
탐색적 분석
종양 유전학 및/또는 바이오마커 반응은 mITT 집단 및 프로토콜 순응 집단(per protocol population)에 대해 기준선으로부터의 변화로서, 그리고 각각의 시점에서의 설명적 통계학을 사용하여 제시하였다.
결과
18개월 분석 시점에서 등록된 환자의 인구 통계를 도 2(인구 통계 표)에 제시한다. 42개월 분석 시점에 평가된 바와 같은 업데이트된 환자 인구 통계를 도 2B에 제공한다. 진단 시 종양으로부터 유전자 전사체의 평가는 INO-5401에 의해 암호화된 항원의 발현 및 다양한 면역 유전자 프로파일을 확인시켜 주었다. 평가에 이용 가능한 조직이 있는 47명의 대상체 중 5명(811%)은 INO-5401에 의해 암호화된 하나 이상의 종양 관련 항원(WT1, PSMA 및 hTERT)의 전사체 발현을 나타내었다. 평가에 이용 가능한 조직이 있는 47명의 대상체 중 43명(89%)은 INO-5401에 의해 암호화된 2개 이상의 종양 관련 항원(WT1, PSMA 및 hTERT)의 전사체 발현을 나타내었다. 47명의 대상체 중 19명(40%)은 3가지 종양 관련 항원 모두의 전사체 발현을 나타내었다. 동반되는 PD-L1 발현 없이 PD-1 발현을 나타내는 대상체는 없었다. 47명의 대상체 중 27명(57%)은 PD-1의 동반 발현 없이 PD-L1 발현을 나타내었다. 47명 중 20명(43%)은 PD-1 및 PD-L1의 공동발현을 나타내었다. 정규화된 전사체 판독 수 >1은 "양성"으로 간주되었다.
MRI 영상화
여러 환자가 반복 생검에서 종양의 증거 없이 MRI에서 진행의 방사선학적 증거를 갖는 거짓진행을 경험하였다. 예시 환자로부터의 영상은 INO-5401 + INO-9012 및 세미플리맙-rwlc의 1차 용량 후의 시점에서 MRI 신호의 증가를 입증하며, 이는 부종 또는 종양을 시사한다. 몇몇 환자에 대한 생검은 괴사 및 혼합 염증; 유사분열 활성의 부재; 및 생존 가능한 종양의 증거 없음에 의해 치료 관련 변화를 나타낸다. 두 환자로부터의 대표적인 영상을 도3에 제시한다.
ELISpot
ELISpot은 항원 특이적 T 세포가 말초 혈액 단핵 세포(PBMC) 샘플에 존재하는지 여부에 대한 정성적 측정치를 제공하기 위해 사용되었다. PBMC는 연구 0, 3, 6, 9, 12 및 24주에 대상체로부터 수집하고 IFN-g ELISpot에 의해 검정된다. 12개월 데이터 컷오프에서 100만개의 PBMC당 항원 특이적 IFNg 반점 형성 단위(SFU)는 24주까지의 샘플을 갖는 8명의 대상체로부터 INO-5401 및 세미플리맙-rwlc로의 치료전(pre) 및 치료 후 최고 크기(peak)로 보여준다(도 4). 각각의 대상체는 열린 원으로 표시되고, 막대는 평균을 나타낸다. 치료전(pre)으로부터 피크까지의 차이인 델타는 각각의 항원 그래프에 대해, 뿐만 아니라 검정된 11명의 대상체에 대해 함께 및 제24주까지 샘플이 이용 가능한 8명에 대해 표시된다. INO- 5401은 WT1, PSMA 및 hTERT의 총합이다. 박스 플롯은 25번째 백분위수에서 75번째 백분위수까지 연장되며, 수평선이 중앙값이고 "+"는 평균이다. ELISpot 결과는 INO-5401과 세미플리맙-rwlc의 조합이 도 4에 도시된 바와 같이 5/11명의 대상체에서 3가지 항원 전부 및 9명의 대상체에서 적어도 하나의 항원에 대해 IFN-g 규모가 기준선을 초과하여 면역원성임을 뒷받침한다.
18개월 데이터 컷오프에서 코호트에 의한 INO-5401 후 말초 면역 반응의 평가는 인터페론 감마 ELISpot에 의한 항원-특이적 T 세포 반응(INO-5401의 각각의 성분에 대한 반응으로 사이토카인 생성)을 나타냈다. 코호트에서 ELISpot에 의한 INO-5401 이후 말초 면역 반응의 평가 결과는 도 16A 및 도 16B에 제공된다. 치료 후 피크 시점으로부터의 기준선 값이 플로팅된다. 코호트 A에서, 지금까지 시험된 19명/22명(86%) 대상체는 하나 이상의 INO-5401 항원에 대해 기준선 초과의 IFN-g 규모를 갖고 있었다(도 16A). 코호트 B에서는 지금까지 시험된 16명/17명(94%)의 대상체가 하나 이상의 INO-5401 항원에 대해 기준선을 초과하는 IFN-g 규모를 갖고 있었다(도 16B).
용해성 과립 로딩
용해성 과립 로딩 검정은 연구 0, 3, 6, 9, 12 및 24주에 대상체로부터 수집한 PBMC 샘플에 존재하는 항원 특이적 T 세포의 활성화 상태 및 용해 잠재성을 탐색하기 위해 수행하였다. PBMC는 INO-5401 항원(hTERT, PSMA 및 WT1)에 대한 중첩성 펩타이드 라이브러리 또는 임의의 외인성 사이토카인의 부재 하에 관련 대조군으로 자극하였다. 5일 후, 세포를 항체로 염색하고 유세포 분석으로 평가하였다. 용해 잠재성(그랜자임 A, 퍼포린 발현)이 있는 살아있는 항원 특이적 활성화(CD38+) CD3+CD8+ T 세포의 빈도는 치료 전 기준선(pre) 및 각각의 항원에 대해 8명의 대상체로부터 INO-5401 및 세미플리맙-rwlc 치료 후 최고 규모(peak)로부터 제시된다(도 5A). 각각의 대상체는 열린 원으로 표시되고, 막대는 평균을 나타낸다. 치료전으로부터 피크까지의 차이인 델타는 검정된 8명의 대상체(도 5B) 및 12주까지 샘플이 이용 가능한 5/8명의 대상체(도 5C)에 대해 12개월 데이터 컷오프에서 각각의 항원에 대해, 뿐만 아니라 INO-5401에 대해 제시된다. INO-5401은 WT1, PSMA 및 hTERT의 총합이다. 박스 플롯은 25번째 백분위수에서 75번째 백분위수까지 연장되며, 수평선이 중앙값이고 "+"는 평균이다. 5명의 대상체는 하나보다 많은 항원에 대해 기준선(pre)보다 높은 용해 잠재성(CD38+Prf+GrzA+)이 있는 활성화된 CD8+T 세포의 빈도를 갖고 있었다; 3명의 대상체는 3가지 항원 모두에 대해 기준선보다 높은 용해 잠재성(CD38+Prf+GrzA+)을 갖는 활성화된 CD8+T 세포의 빈도를 갖고 있었다. 3명의 대상체는 임의의 시점에서 임의의 항원에 대해 기준선보다 높은 반응을 나타내지 않았다.
18개월 데이터 컷오프에서 코호트에 의한 INO-5401 후 말초 면역 반응의 평가는 항원-특이적 T 세포 반응을 유세포분석에 의해 나타내었다(용해 잠재성이 있는 항원 특이적 CD8+ T 세포의 확장). 코호트 A에서, 지금까지 시험된 13명/19명(68%)의 대상체는 하나 이상의 INO-5401 항원에 대해 기준선보다 높은 CD38+GrzA+Prf+ CD8+T 세포의 빈도를 갖고 있었다(도 17A). 코호트 B에서, 지금까지 시험된 8명/10명(80%)의 대상체는 하나 이상의 INO-5401 항원에 대해 기준선보다 높은 CD38+GrzA+Prf+ CD8+T 세포의 빈도를 갖고 있었다(도 17B). 샘플은 Q3주 x 4회, 그 다음 Q12주에 수집하였다. 치료 후 피크 시점으로부터 기준선 값이 플로팅된다.
무진행 생존
도 6은 종양 세포에 비메틸화 O6-메틸구아닌 메틸트랜스퍼라제 유전자 프로모터를 갖는 환자인 코호트 A에 대한 제6개월의 무진행 생존(PFS6)의 캐플란-마이어 추정량의 시각적 표현을 나타낸다. 곡선은 특정 시간 간격에서 사건의 확률을 나타낸다. 사건의 확률은 y축에 숫자로 표시되고 시간 간격은 x축에 표시된다. 표시된 사건은 무진행 생존이다. 무진행 생존은 주어진 대상체에서 주어진 시점에서의 질환 진행의 부재이다.
도 7은 종양 세포에 메틸화 O6-메틸구아닌 메틸트랜스퍼라제 유전자 프로모터를 갖는 환자인 코호트 B에 대한 제6개월의 무진행 생존(PFS6)의 캐플란-마이어 추정량의 시각적 표현을 나타낸다. 곡선은 특정 시간 간격에서 사건의 확률을 나타낸다. 사건의 확률은 y축에 숫자로 표시되고 시간 간격은 x축에 표시된다. 표시된 사건은 무진행 생존이다. 무진행 생존은 주어진 대상체에서 주어진 시점에서의 질환 진행의 부재이다.
도 8은 종양 세포에 메틸화되지 않거나 메틸화 O6-메틸구아닌 메틸트랜스퍼라제 유전자 프로모터를 갖는 환자인 코호트 A 및 코호트 B에 대한 제6개월의 무진행 생존(PFS6)의 캐플란-마이어 추정량의 시각적 표현을 나타낸다. 곡선은 특정 시간 간격에서 사건의 확률을 나타낸다. 사건의 확률은 y축에 숫자로 표시되고 시간 간격은 x축에 표시된다. 표시된 사건은 무진행 생존이다. 무진행 생존은 주어진 대상체에서 주어진 시점에서의 질환 진행의 부재이다.
도 9는 코호트 A, 코호트 B 및 조합된 두 코호트에 대한 6개월의 무진행 생존(PFS6)의 캐플란-마이어 추정량을 표로 나타낸 표현을 도시한다. 코호트당 총 대상체 수, 사건 수, 사건의 추정값(PFS6) 및 사건의 수치적 추정값(PFS6)이 존재하는 95% 신뢰 구간(CI)이 모두 제공된다.
확인된 진행성 질환(PD)은 원래 PD 사건으로부터 4주 이상 동안 연속 PD 스캔에 의한 확인에 의해 결정되거나 또는 생검 수술에 따라 진행된다. PD가 아닌 다른 이유로 6개월 이전에 종결된 대상체는 3주에 연구를 중단하고 장기 추적관찰을 거부한 코호트 B의 2명의 대상체를 포함하여 확인된 진행성 사건으로서 포함시켰다.
전체 생존
모든 효능 분석(OS12, OS18 및 캐플란-마이어)은 계획된 치료의 적어도 1회 용량을 투여받은 모든 대상체로 정의되는 수정된 치료 의도(mITT) 집단의 대상체에서 분석되었다. 12개월에 전체 생존(OS12)은 연구 시작 시 사망 위험이 있는 모든 대상체 중 12개월에 살아 있는 대상체의 비율로서 표로 작성되었다. 중퇴한 대상체는 실패(즉, 사망)로 간주되었다. 또한, 12개월 이전에 중퇴한 코호트 A의 모든 대상체들은 12개월의 추적관찰 전에 사망하였다. 95% 신뢰 구간(CI)은 클로퍼-피어슨 정확도 방법을 사용하여 계산한다. 18개월에서의 전체 생존(OS18)은 연구 시작에 사망 위험이 있는 모든 대상체 중 18개월에 생존한 대상체의 비율로서 표로 작성되었다. 95% 신뢰 구간(CI)은 클로퍼-피어슨 정확도 방법을 사용하여 계산된다.
도 10A는 종양 세포에 비메틸화 O6-메틸구아닌 메틸트랜스퍼라제 유전자 프로모터를 갖는 환자에 대한 코호트 A의 12개월에 걸친 전체 생존 확률의 캐플란-마이어 추정량의 시각적 표현을 나타낸다. 단계적 곡선은 최대 특정 시점 및 그 이상까지 생존할 확률을 나타낸다. 생존 확률은 y축에 숫자로 표시되고 x축에는 생존 시간(일)으로 표시된다. 도 10B는 종양 세포에 비메틸화 O6-메틸구아닌 메틸트랜스퍼라제 유전자 프로모터가 있는 환자에 대한 코호트 A의 18개월에 걸친 전체 생존 확률의 캐플란-마이어 추정량의 시각적 표현을 나타낸다. 단계적 곡선은 최대 특정 시점 및 그 이상까지 생존할 확률을 나타낸다. 생존 확률은 y축에 숫자로 표시되고 x축에는 생존 시간(일)으로 표시된다. 코호트 A의 중앙 추적관찰 기간은 17.8개월이다. mITT는 1회 이상의 연구 요법 용량을 투여받은 임의의 대상체를 포함한다. 음영은 해당 시점에서 생존의 점 추정치에 대한 신뢰 대역을 나타낸다.
도 10C는 제42개월까지 MGMT 비메틸화(miTT) 환자(코호트 A)에 대한 전체 생존의 캐플란-마이어 분석의 시각적 표현을 나타낸다. 위험 = OS 평가변수를 충족하지 않았거나 주어진 시점까지 검열되지 않은 수. NR = 도달하지 않음. 도 11A는 종양 세포에 메틸화 O6-메틸구아닌 메틸트랜스퍼라제 유전자 프로모터를 갖는 환자에 대한 코호트 B의 12개월에 걸친 전체 생존 확률의 캐플란-마이어 추정량의 시각적 표현을 나타낸다. 단계적 곡선은 최대 특정 시점 및 그 이상까지 생존할 확률을 나타낸다. 생존 확률은 y축에 숫자로 표시되고 x축에는 생존 시간(일)으로 표시된다. 도 11B는 종양 세포에 메틸화 O6-메틸구아닌 메틸트랜스퍼라제 유전자 프로모터를 갖는 환자에 대한 코호트 B의 18개월에 걸친 전체 생존 확률의 캐플란-마이어 추정량의 시각적 표현을 나타낸다. 단계적 곡선은 최대 특정 시점 및 그 이상까지 생존할 확률을 나타낸다. 생존 확률은 y축에 숫자로 표시되고 x축에는 생존 시간(일)으로 표시된다. 코호트 B의 중앙 추적관찰 기간은 15.6개월이다. 검열; 코호트 B의 2명의 대상체는 3주에 추적관찰에 대한 동의를 철회하였다. mITT는 1회 이상의 연구 요법 용량을 투여받은 임의의 대상체를 포함한다. 음영은 해당 시점에서의 생존에 대한 점 추정치의 신뢰 대역을 나타낸다. 도 11C는 제42개월까지 MGMT 메틸화(miTT) 환자(코호트 B)에 대한 전체 생존의 캐플란-마이어 분석의 시각적 표현을 나타낸다. 위험 = OS 평가변수를 충족하지 않았거나 주어진 시점까지 검열되지 않은 수. NR = 도달하지 않음.
도 12는 조합된 코호트 A + B에 대한 12개월에 걸친 전체 생존 확률의 캐플란-마이어 추정량의 시각적 표현을 나타낸다. 단계적 곡선은 최대 특정 시점 및 그 이상까지 생존할 확률을 나타낸다. 생존 확률은 y축에 숫자로 표시되고 x축에는 생존 시간(일)으로 표시된다.
도 13은 코호트 A, 코호트 B 및 조합에 대한 12개월 및 18개월에서의 전체 생존의 효능 데이터를 나타낸다. 이 도면은 12개월 및 18개월에 생존한 것으로 보고된 총 대상체 수를 보여준다. 총 대상체 수, 사건 추정치(OS12 또는 OS18), 사건의 수치적 추정치(OS12 또는 OS18)가 존재하는 95% 신뢰 구간(CI)이 모두 제공된다. 95% CI는 정확도 클로퍼-피어슨 방법을 사용하여 계산하였다.
42개월 동안 코호트 A와 B에 대한 중앙 전체 생존 값을 표 A에 제공한다.
[표 A]
결론
새로 진단된 GBM이 있는 환자에서, 방사선 및 테모졸로마이드와 함께 제공된 세미플리맙-rwlc와 조합된 INO-5401 + INO-9012는 허용 가능한 안전성 프로파일을 나타내며, 면역원성이고, 새로 진단된 GBM이 있는 환자에서 잠재적으로 효능적이다. 일반적인 AE는 주입 부위 투여 사건을 포함하였다: 3등급 이상의 AE는 주로 TMZ 또는 방사선으로 인한 것이며, 면역 관련 AE는 세미플리맙-rwlc의 프로파일과 일관되었다. SAE는 GBM 환자에서 관찰된 것과 일관되었다(발작).
항원 특이적 T 세포 반응은 지금까지 시험된 거의 모든 환자에서 INO-5401에 포함된 하나 이상의 항원에 대해 관찰되었다. 본 연구에서 PFS6은 MGMT 프로모터 메틸화가 있거나 없는 환자에서 과거 대조군을 초과하고 OS12는 MGMT 프로모터 메틸화가 없는 환자에서 과거 대조군을 초과한다[Stupp R, Mason WP, van den Bent MJ, et al. Radiotherapy plus concomitant and adjuvant temozolomide for glioblastoma. N Engl J Med 2005, 352:987-996]. INO-5401과 함께 MGMT 유전자의 프로모터 영역의 메틸화 없이 대상체를 치료하는 것은 종양의 절제 후 18개월에 50%의 전체 생존율을 초래하였다.
실시예 2: 바이오마커 분석
상기 실시예 1에 기재된 1/2상 시험에서 참조되고 실험실 매뉴얼 지침에 따라 수집된 말초 및 조직 샘플로부터 바이오마커 평가를 수행하였다. 등록된 대상체의 조직 샘플 내 hTERT, WT1 및/또는 PSMA 단백질의 발현에 대한 면역조직화학적 평가는 충분한 샘플 양의 존재 및 이용 가능한 데이터에 의해 뒷받침되는 지속적인 관련성에 따라 이루어졌다. 가능한 경우 종양 조직에 대해 IDH-1 상태를 수행하였다. 질환 진행 과정 및/또는 INO-5401에 의한 치료에 대한 반응뿐만 아니라 INO-5401 유도 변화를 예측하는 질환 및/또는 요법 특이적 시그니처를 결정하기 위해 혈장 및/또는 혈청의 MicroRNA 시그니처를 평가하였다. 이 방법에서 RNAseq를 사용할 수 있다.
MicroRNA 시그니처
교모세포종 치료를 위한 INO-5401에 대한 임상 반응의 새로운 예후 지표인 miRNA
실시예 1에 기재된 시험에서 코호트 A로부터 채취된 혈장 샘플을 치료 과정 동안 miRNA의 동적 조절을 탐색할 목적으로 RNA 서열결정 플랫폼을 사용하여 miRNA의 존재에 대해 사후 방식으로 평가하였다. 그러나, 놀랍게도 INO-5401로의 치료 전에 얻은 miRNA 데이터의 분석은, 특정 miRNA의 존재 및 양이 종양 절제 후 18개월까지 생존하는 형태로 치료에 대한 반응의 예후가 될 수 있음을 시사하였다.
정량적 차이 및 표 형식의 결과의 그래프 표현을 포함하여 INO-5401에 대한 반응의 특정 예후 miRNA 종의 최종 선택:
사후 데이터를 사용하여 INO-5401로 치료하는 동안 18개월에 치료 전 지표로 사용하기 위한 miRNA 종의 최종 선택은 70%를 초과하는 감도 및 특이성뿐만 아니라 음성 및 양성 예측 값을 요구함으로써 달성되었다. 이러한 요구 사항을 충족하는 miRNA 종이 확인되면 각각의 임상 결과를 나타내는 군에 대한 TMM 값을 표 형식으로 출력된 데이터와 함께 개별적으로 그래프로 나타내었다. 이러한 단일 miRNA 종을 "복합" 시그니처로 합치면 예후 값이 높아진다. miR-1537-3p 정규화된 전사체 및 miR-33-3p 정규화된 전사체의 그래프를 각각 도 18A 및 도 18B에 제공한다. 18개월까지의 생존에 기초하여 각각의 miRNA 종의 상대적인 수준을 나타낸 miR-331-3p 및 miR-1537-3p에 대한 이중 축 miRNA 분리의 그래프를 도 19에 제공한다. 두 miRNA 종 모두의 경우, 적어도 18개월에 생존한 대상체는 사망한 대상체보다 특정 miRNA 종의 수준이 더 높았다. 표 3은 miR-331-3p 및 miR-1537-3p에 대한 이중 축 miRNA 분리에 대한 측정 항목 및 결과를 제공한다.
전사체 분석
RNA 서열결정
유전자 발현 수준을 평가하기 위해서, 상기 실시예 1에 기재된 1/2상 시험에서 수집된 코호트 A의 종양 샘플에 대해 RNA 서열결정을 수행하였다. 원발성 종양의 초기 절제 및 진행이 의심되는 경우 2차/3차 절제 중에 채취한 포르말린 고정, 파라핀 포매(FFPE) 조직을 RNA 서열결정을 위해 처리하였다. 간략하면, 하나의 절편을 H&E 염색하였고, 병리학자가 종양 내용에 대해 주석을 달았다. H&E 주석을 인접한 절편으로 옮기고 가능한 경우 주변의 비종양 조직을 제거하기 위해 거대 절개를 수행하였다. AllPrep DNA/RNA FFPE 조직 키트(Qiagen)를 사용하여 핵산의 이중 단리를 수행한 후 크기 분포 평가를 위한 Agilent Tape Station 및 정량을 위한 형광 측정 방법을 사용하여 추출된 핵산의 품질 관리(QC)를 수행하였다. RNA 서열결정 라이브러리는 Stranded RNA Sequencing 키트(Kapa Biosystems)를 사용하여 준비한 후 QC 측정 기준에 따랐다. RNA 서열결정은 페어드-엔드 2×150bp 판독 길이 및 Illumina의 독점 가역 터미네이터 기반 방법을 사용하는 NovaSeq™ 6000(Illumina, 미국 캘리포니아주 샌디에이고 소재) 서열결정기에서 수행하였다. 종양 시편을 1억개의 페어드 엔드 판독값(총 200M 판독값)의 평균 출력으로 서열결정하였다. 각각의 종양 샘플의 유전자 발현 수준을 측정하기 위해 각각의 유전자의 선호되는 전사체에 매핑된 판독값을 계산하였다. 유전자당 원시 가닥 특이적 계수치를 STAR 정렬기에 의해 생성하였다. 백만 개의 매핑된 판독값(CPM)당 개수치를 계산하고 M 값의 절사 평균(TMM)을 사용하여 샘플 전반에 걸쳐 전역적으로 정규화하였다. 전사체 분석을 수행하였다.
전사체 분석-원발성 종양 샘플
코호트 A(MGMT 메틸화되지 않음)의 환자를 OS18 평가에서 생존한 환자(n=15) 또는 사망한 환자(n=16)의 두 군으로 나누었다. 유전자 전사체를 군별로 비교하고 윌콕슨 순위 합계(만-위트니 U) 시험을 사용하여 유전자 발현의 통계적으로 유의한 차이를 평가하였다. 차별적으로 발현된 유전자(DEG)를 기능 및 관련성에 대해 조사하였고, 세미플리맙과 조합하여 INO-5401 및 INO-크9012를 사용한 치료에 반응하여 OS18에서의 생존과 관련될 수 있는 유전자 발현 시그니처를 확인하였다. OS18에 생존한 환자는 OS18에 사망한 환자에 비해서, SYNGR3, OTX1, GABBR2, LHX1, CADM3, MLLT11, MNX1, GRB14, SLC34A2, PHYHIP, WNT10B, SLC17A6, CRLF1 및 HOXD13의 발현 감소 및 TGFβR3, UBA7, SFRP4의 발현 향상을 나타내었다(도 20).
전사체 분석-페어드 종양 샘플
코호트 A(MGMT 메틸화되지 않음)의 6명의 환자로부터 페어드 샘플(원발성 및 진행 조직)을 분석하고 유전자 전사체를 대상체 기준으로 비교하였다. 면역 세포 조절제 및 하위세트에 대한 종양 항원 표적 및 마커에 대해 유전자 발현을 평가하였다(도 21).
6명의 환자는 2차/3차 절제술에 대한 병리학 보고서에 '치료 관련 변화'가 기록되었다. 각각의 환자는 원발성 종양 조직에 비해 진행성 암 조직에서 INO-5401에 의해 암호화된 적어도 2개의 종양 항원 표적의 변경된 유전자 발현을 나타내었다. 2차/3차 절제술의 병리학 보고서에 명시된 치료 관련 변화의 정도(광범위 내지 최소)는 진행성 종양 조직 대 원발성 종양 조직에서 면역 관련 유전자, 특히 T 세포 마커의 발현 수준 변화와 상관관계가 있었다. 3명의 환자(60010003, 60010006, 60010010)는 전반적으로 향상된 발현을 나타냈었고, 1명의 환자(60010009)는 약간 향상된 또는 상대적으로 변하지 않은 발현을 나타내었으며, 2명의 환자(60010005, 60010008)는 진행성 종양 조직 대 원발성 종양 조직에서 면역 세포 조절제 및 하위세트의 전반적인 감소된 발현을 나타내었다.
전술한 상세한 설명 및 첨부된 실시예는 단지 예시적이며 첨부된 청구범위 및 그 등가물에 의해서만 정의되는 본 발명의 범위에 대한 제한으로 간주되어서는 안된다는 것을 이해해야 한다.
개시된 실시형태에 대한 다양한 변경 및 수정은 본 기술분야의 기술자에게 명백할 것이다. 본 발명의 화학 구조, 치환체, 유도체, 중간체, 합성, 조성물, 제형 또는 사용 방법에 관한 것을 제한 없이 포함하는 상기 변경 및 수정은 본 발명의 사상 및 범주를 벗어남이 없이 이루어질 수 있다.
서열 목록

Claims (35)

  1. 대상체에서 뇌암을 치료하는 방법으로서:
    (a) 뇌암을 갖는 대상체로부터의 생물학적 샘플에서 서열번호 30을 포함하는 miR-331-3p miRNA 또는 이의 isomiR 및 서열번호 31을 포함하는 miR-1537-3p miRNA 또는 이의 isomiR의 발현 수준을 측정하는 단계; 및
    (b) 상기 대상체가 대조군 대상체 집단에 비해서 miR-331-3p miRNA 또는 이의 isomiR 및 miR-1537-3p miRNA 또는 이의 isomiR의 증가된 발현 수준을 갖는 경우 상기 대상체에게 인터류킨-12(IL-12); 인간 텔로머라제 역전사효소(human telomerase reverse transcriptase: hTERT), 빌름스 종양-1(Wilms Tumor-1: WT-1) 및 전립선 특이적 막 항원(prostate specific membrane antigen: PSMA)의 면역원성 조성물; 및 항-세포 예정사 수용체 1(PD-1) 항체를 투여하는 단계
    를 포함하는, 방법.
  2. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 miRNA의 존재는 RNA 서열결정에 의해서 결정되는, 방법.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 생물학적 샘플은 혈장 샘플인, 방법.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 생물학적 샘플은 IL-12; hTERT, WT-1 및 PSMA의 면역원성 조성물; 및 항-PD-1 항체의 투여 전에 상기 대상체로부터 채취되는, 방법.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, IL-12; hTERT, WT-1 및 PSMA의 면역원성 조성물; 및 항-PD-1 항체의 투여는 투여 후 18개월에 생존을 초래하는, 방법.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대조군 대상체 집단은 IL-12; hTERT, WT-1 및 PSMA의 면역원성 조성물; 및 항-PD-1 항체의 투여 후 18개월에 감소되는, 방법.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 비메틸화 O6-메틸구아닌 메틸트랜스퍼라제(MGMT) 유전자 프로모터를 갖는, 방법.
  8. 대상체에서 뇌암을 치료하는 방법으로서,
    (a) 뇌암을 갖는 대상체로부터의 종양 샘플에서 SYNGR3, OTX1, GABBR2, LHX1, CADM3, MLLT11, MNX1, GRB14, SLC34A2, PHYHIP, WNT10B, SLC17A6, CRLF1, HOXD13, TGFβR3, UBA7, SFRP4 또는 이들의 임의의 조합으로부터 선택된 적어도 하나의 mRNA 바이오마커의 발현 수준을 측정하는 단계; 및
    (b) 대조군 대상체 집단에 비해서 상기 SYNGR3, OTX1, GABBR2, LHX1, CADM3, MLLT11, MNX1, GRB14, SLC34A2, PHYHIP, WNT10B, SLC17A6, CRLF1 및 HOXD13의 발현 수준이 감소되거나 상기 TGFβR3, UBA7, SFRP4의 발현 수준이 증가되는 경우 상기 대상체에게 인터류킨-12(IL-12); 인간 텔로머라제 역전사효소(hTERT), 빌름스 종양-1(WT-1) 및 전립선 특이적 막 항원(PSMA)의 면역원성 조성물; 및 항-세포 예정사 수용체 1(PD-1) 항체를 투여하는 단계
    를 포함하는, 방법.
    [청구항 8]
    제8항에 있어서, 상기 대상체는 비메틸화 O6-메틸구아닌 메틸트랜스퍼라제(MGMT) 유전자 프로모터를 갖는, 방법.
  9. 제7항에 있어서, 상기 생물학적 샘플은 원발성 종양 샘플인, 방법.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 생물학적 샘플은 IL-12; hTERT, WT-1 및 PSMA의 면역원성 조성물; 및 항-PD-1 항체의 투여 전에 상기 대상체로부터 채취되는, 방법.
  11. 제7항 또는 제8항에 있어서, IL-12; hTERT, WT-1 및 PSMA의 면역원성 조성물; 및 항-PD-1 항체의 투여는 투여 후 18개월에 생존을 초래하는, 방법.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대조군 대상체 집단은 IL-12; hTERT, WT-1 및 PSMA의 면역원성 조성물; 및 항-PD-1 항체의 투여 후 18개월에 감소되는, 방법.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, IL-12는 DNA 플라스미드에 의해서 암호화되는, 방법.
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, hTERT는 DNA 플라스미드에 의해서 암호화되고/되거나, WT-1은 DNA 플라스미드에 의해서 암호화되고/되거나, PSMA는 DNA 플라스미드에 의해서 암호화되는, 방법.
  15. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, hTERT, WT-1 및 PSMA는 동일한 DNA 플라스미드에 의해서 암호화되거나; hTERT, WT-1 및 PSMA 중 둘은 동일한 DNA 플라스미드에 의해서 암호화되거나; hTERT, WT-1 및 PSMA는 각각 상이한 DNA 플라스미드에 의해서 암호화되는, 방법.
  16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-PD-1 항체는 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(HCVR)의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR1, HCDR2 및 HCDR3) 및 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(LCVR)의 3개의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)을 포함하거나;
    3개의 HCDR(HCDR1, HCDR2 및 HCDR3) 및 3개의 LCDR(LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)을 포함하되, HCDR1은 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR1은 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하거나;
    서열번호 1과 90% 서열 동일성을 갖는 HCVR을 포함하거나;
    서열번호 2와 90% 서열 동일성을 갖는 LCVR을 포함하거나;
    서열번호 1과 90% 서열 동일성을 갖는 HCVR 및 서열번호 2와 90% 서열 동일성을 갖는 LCVR을 포함하거나;
    서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HCVR 및 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 LCVR을 포함하거나;
    서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하거나;
    IgG4 항체이거나;
    REGN2810 또는 이의 바이오시밀러(biosimilar) 또는 생물학적 등가물(bioequivalent)인, 방법.
  17. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-PD-1 항체는 정맥내 또는 피하 투여되는, 방법.
  18. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 350㎎의 상기 항-PD-1 항체가 3주마다 투여되는, 방법.
  19. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서,
    IL12 p35 소단위가 서열번호 23의 아미노산 서열을 포함하거나;
    IL12 p40 소단위가 서열번호 25의 아미노산 서열을 포함하거나;
    IL12 p35 소단위가 서열번호 23의 아미노산 서열을 포함하고 IL12 p40 소단위가 서열번호 25의 아미노산 서열을 포함하거나;
    IL12 p35 소단위가 서열번호 22의 핵산 서열에 의해서 암호화되거나;
    IL12 p40 소단위가 서열번호 24의 핵산 서열에 의해서 암호화되거나;
    IL12 p35 소단위가 서열번호 22의 핵산 서열에 의해서 암호화되고 IL12 p40 소단위가 서열번호 24의 핵산 서열에 의해서 암호화되는, 방법.
  20. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 hTERT는 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하거나 서열번호 19의 핵산 서열에 의해서 암호화되고/되거나;
    상기 WT-1은 서열번호 26의 아미노산 서열을 포함하거나 서열번호 27의 핵산 서열에 의해서 암호화되고/되거나;
    상기 PSMA는 서열번호 28의 아미노산 서열을 포함하거나 서열번호 29의 핵산 서열에 의해서 암호화되는, 방법.
  21. 제19항에 있어서, 상기 대상체에게 hTERT를 암호화하는 DNA 플라스미드 3㎎, PSMA를 암호화하는 DNA 플라스미드 3㎎, WT-1을 암호화하는 DNA 플라스미드 3㎎ 및 IL-12를 암호화하는 플라스미드 1㎎을 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  22. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 IL-12와 상기 면역원성 조성물은 4회 용량 동안 3주마다, 그 다음 9주마다 근육내 주사에 의해서 공동 투여되는, 방법.
  23. 제21항에 있어서, 각각의 근육내 주사 후에 전기천공을 추가로 포함하는, 방법.
  24. 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체에게 1회 이상의 선량의 방사선 요법을 투여하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
  25. 제23항에 있어서, 방사선 요법의 각각의 선량은 20 내지 50Gy를 포함하는, 방법.
  26. 제24항에 있어서, 상기 방사선 요법은 분할 방사선 요법(fractionated radiation therapy)인, 방법.
  27. 제25항에 있어서, 상기 분할 방사선 요법은 2 내지 20회 분획(fraction)을 포함하는, 방법.
  28. 제26항에 있어서, 상기 분할 방사선 요법은 15회 분획으로 40Gy를 포함하는, 방법.
  29. 제27항에 있어서, 상기 분할 방사선요법은 연속 21일에 걸쳐서 제공되는, 방법.
  30. 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체에게 1회 이상의 용량의 화학치료제를 투여하는 단계를 추가로 포함하고; 선택적으로 상기 화학치료제는 테모졸로마이드(temozolomide)인, 방법.
  31. 제29항에 있어서, 75㎎/㎡의 테모졸로마이드를 상기 대상체에게 상기 분할 방사선요법과 함께 연속 21일 동안 매일 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  32. 제29항 또는 제30항에 있어서, 상기 대상체가 메틸화 MGMT 프로모터를 갖는 종양을 갖는 경우 상기 대상체에게 테모졸로마이드 유지 요법을 투여하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
  33. 제1항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 뇌암은 교모세포종인, 방법.
  34. 제32항에 있어서, 상기 뇌암은 MGMT-메틸화 교모세포종인, 방법.
  35. 제32항에 있어서, 상기 뇌암은 MGMT-비메틸화 교모세포종인, 방법.
KR1020247007702A 2021-08-13 2022-08-12 뇌암을 치료하기 위한 조합 요법 KR20240049812A (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US202163232966P 2021-08-13 2021-08-13
US63/232,966 2021-08-13
PCT/US2022/074901 WO2023019240A2 (en) 2021-08-13 2022-08-12 Combination therapy to treat brain cancer

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20240049812A true KR20240049812A (ko) 2024-04-17

Family

ID=85201006

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020247007702A KR20240049812A (ko) 2021-08-13 2022-08-12 뇌암을 치료하기 위한 조합 요법

Country Status (10)

Country Link
US (1) US20230070723A1 (ko)
EP (1) EP4384642A2 (ko)
JP (1) JP2024531192A (ko)
KR (1) KR20240049812A (ko)
CN (1) CN117999364A (ko)
AU (1) AU2022328341A1 (ko)
CA (1) CA3228663A1 (ko)
IL (1) IL310808A (ko)
MX (1) MX2024001948A (ko)
WO (1) WO2023019240A2 (ko)

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007084364A2 (en) * 2006-01-13 2007-07-26 The Government Of The United States, As Represented By The Secretary Of Health And Human Services, National Institutes Of Health Improved il-12 for expression in mammalian cells
EP2297322A1 (en) * 2008-06-04 2011-03-23 The Board of Regents of The University of Texas System Modulation of gene expression through endogenous small rna targeting of gene promoters
WO2016186987A1 (en) * 2015-05-15 2016-11-24 Trustees Of Dartmouth College Biomarker micrornas and method for determining tumor burden
CN110573173B (zh) * 2016-09-30 2024-11-08 宾夕法尼亚大学理事会 Tert免疫原性组合物及使用其的治疗方法
KR20200115450A (ko) * 2017-08-07 2020-10-07 더 존스 홉킨스 유니버시티 암을 평가하고 치료하기 위한 방법 및 재료
CN114901677A (zh) * 2019-11-04 2022-08-12 艾诺奥医药品有限公司 治疗脑癌的联合疗法

Also Published As

Publication number Publication date
MX2024001948A (es) 2024-05-17
EP4384642A2 (en) 2024-06-19
IL310808A (en) 2024-04-01
JP2024531192A (ja) 2024-08-29
WO2023019240A3 (en) 2023-04-20
AU2022328341A1 (en) 2024-04-04
US20230070723A1 (en) 2023-03-09
CN117999364A (zh) 2024-05-07
CA3228663A1 (en) 2023-02-16
WO2023019240A2 (en) 2023-02-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU2024203144A1 (en) Cancer vaccines and methods of treatment using the same
AU2020380288B2 (en) Combination therapy to treat brain cancer
KR102375327B1 (ko) 관문 분자를 표적으로 하는 dna 단클론성 항체
JP2022179497A (ja) Ｔｅｒｔ免疫原性組成物及びそれを用いた治療方法
KR20150096709A (ko) Ｗｔ１ 백신
US20230414744A1 (en) Vaccines For Recurrent Respiratory Papillomatosis And Methods Of Using The Same
AU2018200638A1 (en) Immunotherapeutic composition, therapeutic method and diagnostic method
US20230070723A1 (en) Combination therapy to treat brain cancer
RU2748903C1 (ru) Противораковые вакцины, нацеленные на prame, и их применения
KR20190082195A (ko) 난포 자극 호르몬 수용체 (fshr)를 표적으로 하는 최적화된 합성 콘센수스 면역원 조성물
RU2777918C2 (ru) Противораковые вакцины, направленные на muc16, и их применение
WO2024081892A1 (en) Vaccines for recurrent respiratory papillomatosis and methods of using the same
US20120219591A1 (en) Use of vectors expressing intracellular polynucleotide binding proteins as adjuvants
KR20230042350A (ko) 암 치료용 조합 요법