KR20210022575A

KR20210022575A - 심장-특이적 표적화-펩티드 (ctp), 조성물, 및 그의 용도

Info

Publication number: KR20210022575A
Application number: KR1020207036623A
Authority: KR
Inventors: 말리하 자히드
Original assignee: 유니버시티 오브 피츠버그 - 오브 더 커먼웰쓰 시스템 오브 하이어 에듀케이션
Priority date: 2018-05-23
Filing date: 2019-05-22
Publication date: 2021-03-03
Also published as: CN112512546A; EP3811451A1; US20210206805A1; WO2019226785A8; EP3811451A4; CA3100943A1; AU2019275044A1; JP2021525246A; WO2019226785A1; US20230406882A1

Abstract

진단제 및 잠재적으로는 치료제 둘 다를 심장으로 전달하기 위한, 세포 투과 펩티드의 보다 큰 부류에 속하는 합성, 비-자연 발생 12-아미노산 펩티드, 심장 표적화 펩티드가 개시되어 있다. 다른 적용 중에서 심방 세동 또는 심실 세동 치료를 위해 대상체에게 항부정맥제를 CTP-매개 전달하기 위한, 수축기 심부전 (SHF) 치료를 위해 뉴레귤린-1β, 및 확장기 울혈성 심부전 치료를 위해 제토-쉴러 펩티드를 CTP-매개 전달하기 위한, 개선되고, 더 높은 심장 흡수율을 갖는, 상기 심장 표적화 펩티드의 후속 세대가 또한 개시되어 있다.

Description

심장-특이적 표적화-펩티드 (CTP), 조성물, 및 그의 용도

관련 출원에 대한 상호 참조

본 출원은 2018년 5월 23일에 출원된 미국 특허 가출원 번호 62/675,307; 2018년 12월 11일에 출원된 미국 특허 가출원 번호 62/778,033; 및 2019년 2월 27일에 출원된 미국 특허 가출원 번호 62/811,077의 이익 및 우선권을 주장하며; 이들 가출원 각각의 개시내용은 모든 목적을 위해 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.

서열 목록

본 출원은 ASCII 포맷으로 전자 제출되었고 그 전문이 본원에 참조로 포함되는 서열 목록을 함유한다. 2019년 5월 21일에 작성된 상기 ASCII 카피는 명칭이 UPB-013WO_ST25.txt이고, 그 크기가 11,293 바이트이다.

본 발명의 분야

본 발명은 심방 세동 또는 심실 세동의 치료를 위한 항부정맥 특성을 갖는 모이어티의 심장-특이적 표적화 펩티드 (CTP)-매개 전달, 및 수축기 심부전 (SHF)의 치료를 위한 뉴레귤린-1β의 CTP-매개 전달에 관한 것이다. 본 발명은 또한 심장-특이적 표적화 펩티드 (CTP_6aa), CTP_6aa의 조성물, 심장 병태를 치료하는 방법에서의 CTP_6aa 또는 그의 조성물의 용도, 및 분자 카고(cargo)를 심장 세포로 특이적으로 전달하는데 있어서 CTP_6aa의 용도에 관한 것이다.

심방 세동 (AFib 또는 AF로도 명명)은 응혈, 뇌졸중, 심부전 및 다른 심장-관련 합병증을 야기할 수 있는 떨리거나 또는 불규칙적인 심장박동 (부정맥)이다. 적어도 270만명의 미국인들이 AFib를 가지고 살고 있다. 심실 세동 (VFib)은 생명을 위협하는 리듬이며 심장 돌연사의 공통 원인인 중증의 심장 장애이다. 이는 치명적일 수 있다. 이러한 병태를 앓는 다수의 사람들의 경우, 불규칙적인 심장 리듬이 처음이자 유일한 관상 동맥 질환의 징후이다. VFib 및 AFib는 불규칙적인 심장 리듬을 포함하지만, 이들은 심장의 다른 부분에 침범한다. AFib는 또한 중증의 심장 병태 신호를 보내는 것일 수도 있지만, 이는 전형적으로는 그 자체가 생명을 위협하는 특색이라기보다는 만성적인 문제의 증상이다 (출처: 미국 심장 협회).

AFib 및 VFib에 대해 가장 효과적인 제약 요법 중 하나인 아미오다론은 심각한 전신 독성을 갖고 있으며, 이는 약물의 장기간 사용을 단축시킨다. 본 개시내용은 치료제를 심근세포로 직접 전달하여, 이로써 표적에서 벗어난 효과는 감소시키고, 현존의 효과적인 요법의 사용을 증가시킴으로써, AFib 및/또는 VFib 치료용 심장 치료제의 표적화된 전달에 대한 미충족 의학적 요구를 해결한다.

심장에 특이적인 단백질 형질도입 펩티드는 경색의 경우 재관류 시점에 주어졌을 때 생물학적 제제를 시기적절한 방식으로 심장으로 전달할 수 있을 것이며: 단백질 형질도입 도메인 (PTD)은 세포막을 통과할 수 있고, 배양물 중에서 뿐만 아니라 생체내에서도 큰 생물학적으로 활성인 분자를 포유동물 세포 내로 수송할 수 있는 작은 양이온 펩티드이다. PTD의 한계는 모든 조직 유형의 비-특이적 형질도입이며, 간 및 신장과 같은 일부 조직의 경우, PTD가 심장 조직보다도 훨씬 더 많이 흡수된다는 점이다. 따라서, 치료적 잠재력이 있는 생물제제의 전달을 위해 심장 조직을 특이적으로 표적화할 수 있는 펩티드를 확인하는 것이 요구되고 있다.

비록 현재까지 발전되어 오긴 했지만, 치료적 잠재력이 있는 생물제제 및/또는 카고의 전달을 위해 심장 조직을 특이적으로 표적화할 수 있는 새롭고 효과적인 펩티드에 대해 여전히 계속적으로 요구되고 있다.

한 측면에서, 본 개시내용은 항부정맥 특성을 갖는 모이어티 (예를 들어, 아미오다론 (IUPAC 명칭: (2-부틸-1-벤조푸란-3-일)-[4-[2-(디에틸아미노)에톡시]-3,5-디아이오도페닐]메타논; 분자식: C₂₅H₂₉I₂NO₃))에 연결된, Ala-Pro-Trp-His-Leu-Ser-Ser-Gln-Tyr-Ser-Arg-Thr (서열식별번호(SEQ ID NO): 1)의 서열을 갖는 12개 아미노산 심장-특이적 표적화-펩티드 (CTP_12aa), SQYSRT (서열식별번호: 5)의 서열을 갖는 6개 아미노산 CTP (CTP_6aa), 또는 AAWHLSSQYSRT의 서열을 갖는 12개 아미노산 CTP (서열식별번호: 2 (CTP-P2A))를 포함하는 펩티드를 제공한다. 일부 실시양태에서, 항부정맥 특성을 갖는 모이어티 (예를 들어, 아미오다론)는 CTP (CTP_12aa, CTP_6aa, 또는 CTP-P2A)의 N-말단의 상류에 연결된다.

한 측면에서, 서열식별번호: 1, 2, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 28, 29, 또는 34의 CTP를 포함하는 펩티드는 항부정맥 특성을 갖는 모이어티에 연결된다. 항부정맥 특성을 갖는 모이어티는 본 윌리엄스(Vaughan Williams) 분류 체계 하에 4개 주요 부류의 항부정맥제 (클래스 I, II, III, 및 IV)로 분류될 수 있는 화합물을 포함한다. 본 윌리엄스 분류 체계는 항부정맥제를 그의 지배적인 세포 전기 생리학적 효과 및 작용 기전에 따라 분류한다.

클래스 I 화합물은 빠른-채널 조직에서 (예를 들어, 작동하는 심방 및 심실 근세포에서, 및 히스-푸르키녜(His-Purkinje) 시스템에서) 전도를 저속화시키면서, 빠른 나트륨 채널을 차단할 수 있는 나트륨 채널 차단제 (막-안정화 약물)를 포함한다. 클래스 I 화합물은 서브클래스 a, b, 및 c로 세분화될 수 있으며, 여기서 서브클래스 a 화합물 (예를 들어, 항콜린제 예컨대 퀴니딘, 프로카인아미드, 및 디소피라미드)은 중간 정도의 효과를 가지며, 서브클래스 b 화합물 (예를 들어, 리도카인 및 리도카인 유사체 (토카이니드 및 멕실레틴 포함))은 약한 효과를 가지며, 서브클래스 c 화합물 (예를 들어, 플레카이니드, 프로파페논, 및 모라시진)은 강력한 효과를 갖는다.

클래스 II 화합물은, 자동성의 심박수를 감소시키고, 전도 속도를 저속화시키고, 불응성을 연장시킴으로써, 주로 느린-채널 조직 (예를 들어, 동방 (SA) 및 동실 (AV) 결절 조직)에 영향을 줄 수 있는 베타-차단제를 포함한다. 클래스 II 화합물의 예는 카르테올롤, 카베딜롤, 라베탈롤, 나돌롤, 펜부톨롤, 핀돌롤, 프로프라놀롤, 소탈롤, 티모롤, 아세부톨롤, 아테놀롤, 베탁솔롤, 비소프롤롤, 에스모롤, 메토프로롤, 및 네비볼롤을 포함한다.

클래스 III 화합물은 느린-채널 및 빠른-채널 조직에서 활동 전위 지속기간 및 불응성을 연장시킬 수 있는 칼륨 채널 차단제를 포함한다. 클래스 III 화합물의 예는 아미오다론, 드로네다론, 브레틸리움, 소탈롤, 이부틸리드, 및 도페틸리드를 포함한다.

클래스 IV 화합물은, 자동성의 심박수를 감소시키고, 전도 속도를 저속화시키고, 불응성을 연장시키면서, 느린-채널 조직에서 칼슘-의존성 활동 전위를 억압시킬 수 있는 칼슘 채널 차단제, 예를 들어, 디히드로피리딘 및 비-디히드로피리딘 칼슘 채널 차단제를 포함한다.

클래스 IV 디히드로피리딘 화합물은 암로디핀, 펠로디핀, 이스라디핀, 니카르디핀, 니페디핀, 니모디핀, 및 니트렌디핀을 포함한다. 클래스 IV 비-디히드로피리딘 화합물을 베라파밀 및 딜티아젬을 포함한다.

본원에 기재된, 항부정맥 특성을 갖는 모이어티는 클래스 I 항부정맥제, 클래스 II 항부정맥제, 클래스 III 항부정맥제, 및 클래스 IV 항부정맥제로서 분류되는 활성 제약 화합물을 포함한다. 본 개시내용의 CTP에 접합된 예시적인 항부정맥제는 아미오다론 (동의어: 아미오다로나(Amiodarona), 아미오다로눔(Amiodaronum), 코다론(Cordarone), 파세론(Pacerone)), 플레카이니드 (탬보코(Tambocor)), 이부틸리드 (코버트(Corvert)), 리도카인 (크시로카인(Xylocaine)), 프로카인아미드 (프로칸(Procan), 프로칸비드(Procanbid)), 프로파페논 (리스몰(Rythmol)), 퀴니딘, 및 토카이니드 (토노카리드(Tonocarid))를 포함한다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 본 개시내용은 심방 부정맥 및/또는 심실 부정맥 (예를 들어, 조기 심실 수축, 심실 빈맥, 심방 세동, 또는 심실 세동)을 치료하는 방법으로서, 환자, 예를 들어, 치료를 필요로 하는 환자에게 아미오다론에 연결된 CTP (예를 들어, 서열식별번호: 1, 2, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 28, 29, 또는 34의 CTP)를 포함하는 펩티드를 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공한다.

특정 실시양태에서, 서열식별번호: 1의 CTP를 포함하는 펩티드는 항부정맥 특성을 갖는 모이어티, 예를 들어, 아미오다론에 연결되고, 심장 조직 또는 심장 병태의 치료를 필요로 하는 대상체에서 심장 조직 또는 심장 병태를 치료하는 방법에서 사용된다. 특정 실시양태에서, 서열식별번호: 2의 CTP를 포함하는 펩티드는 항부정맥 특성을 갖는 모이어티, 예를 들어, 아미오다론에 연결되고, 심장 조직 또는 심장 병태의 치료를 필요로 하는 대상체에서 심장 조직 또는 심장 병태를 치료하는 방법에서 사용된다. 특정 실시양태에서, 서열식별번호: 5의 CTP를 포함하는 펩티드는 항부정맥 특성을 갖는 모이어티, 예를 들어, 아미오다론에 연결되고, 심장 조직 또는 심장 병태의 치료를 필요로 하는 대상체에서 심장 조직 또는 심장 병태를 치료하는 방법에서 사용된다. 특정 실시양태에서, 심장 병태는 심방 부정맥, 예를 들어, 심방 세동이다. 특정 실시양태에서, 심장 병태는 심실 부정맥, 예를 들어, 심실 빈맥이다.

한 측면에서, 서열식별번호: 1, 2, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 28, 29, 또는 34의 CTP를 포함하는 펩티드는 뉴레귤린-1β에 연결되고, 심장 조직 또는 심장 병태의 치료를 필요로 하는 대상체에서 심장 조직 또는 심장 병태를 치료하는 방법에서 사용된다. 특정 실시양태에서, 심장 병태는 수축기 심부전 (SHF)이다. 따라서, 일부 실시양태에서, 본 개시내용은 심부전, 예를 들어, SHF를 치료하는 방법으로서, 환자, 예를 들어, 치료를 필요로 하는 환자에게 뉴레귤린-1β에 연결된 CTP (예를 들어, 서열식별번호: 1, 2, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 28, 29, 또는 34의 CTP)를 포함하는 펩티드를 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공한다.

한 측면에서, 본 발명은 항부정맥 특성을 갖는 모이어티, 예를 들어, 아미오다론에, 또는 뉴레귤린-1β에 연결된, Xaa₁ Xaa₂ Y Xaa₃ Xaa₄ T (서열식별번호: 4)의 서열을 포함하는 CTP_6aa를 포함하는 펩티드로서, 여기서 Xaa₁, Xaa₂,Xaa₃, 및 Xaa₄는 임의의 자연 발생 아미노산인 펩티드를 제공한다. 일부 실시양태에서, 항부정맥 특성을 갖는 모이어티 또는 뉴레귤린-1β는 CTP_6aa의 N-말단의 상류에 연결된다. 특정 실시양태에서, 서열식별번호: 4의 CTP_6aa에서 Xaa₁은 세린 (S)이다. 특정 실시양태에서, 서열식별번호: 4의 CTP_6aa에서 Xaa₂는 글루타민 (Q)이다. 특정 실시양태에서, 서열식별번호: 4의 CTP_6aa에서 Xaa₃은 세린 (S)이다. 특정 실시양태에서, 서열식별번호: 4의 CTP_6aa에서 Xaa₄는 아르기닌 (R)이다. 특정 실시양태에서, 서열식별번호: 4의 CTP_6aa에서 Xaa₁ 및 Xaa₂는 각각 세린 (S) 및 글루타민 (Q)이다. 특정 실시양태에서, 서열식별번호: 4의 CTP_6aa에서 Xaa₁ 및 Xaa₃은 둘 다 세린 (S)이다. 특정 실시양태에서, 서열식별번호: 4의 CTP_6aa에서 Xaa₁ 및 Xaa₄는 각각 세린 (S) 및 아르기닌 (R)이다. 특정 실시양태에서, 서열식별번호: 4의 CTP_6aa에서 Xaa₂ 및 Xaa₃은 각각 글루타민 (Q) 및 세린 (S)이다. 특정 실시양태에서, CTP_6aa는 서열 SQYSRT (서열식별번호: 5)를 포함한다. 특정 실시양태에서, 항부정맥 특성을 갖는 모이어티, 예를 들어, 아미오다론에, 또는 뉴레귤린-1β에 연결된, Xaa₁ Xaa₂ W Xaa₃ Xaa₄ T (서열식별번호: 23)의 서열을 포함하는 CTP_6aa를 포함하는 펩티드로서, 여기서 Xaa₁, Xaa₂,Xaa₃, 및 Xaa₄는 임의의 자연 발생 아미노산인 펩티드.

한 측면에서, 본 발명은 항부정맥 특성을 갖는 모이어티, 예를 들어, 아미오다론에 연결된, S Q Xaa₁ S R Xaa₂ (서열식별번호: 6)의 서열을 포함하는 CTP_6aa를 포함하는 펩티드를 제공한다. 일부 실시양태에서, 항부정맥 특성을 갖는 모이어티, 예를 들어, 아미오다론은 CTP_6aa의 N-말단의 상류에 연결된다.

한 측면에서, 본 발명은 뉴레귤린-1β에 연결된, S Q Xaa₁ S R Xaa₂ (서열식별번호: 6)의 서열을 포함하는 CTP_6aa를 포함하는 펩티드를 제공한다. 일부 실시양태에서, 뉴레귤린-1β는 CTP_6aa의 N-말단의 상류에 연결된다.

특정 실시양태에서, 서열식별번호: 6의 CTP_6aa에서 Xaa₁은 알라닌 (A)이고, CTP_6aa는 SQASRXaa₂ (서열식별번호: 7)의 서열을 포함하거나, 또는 임의적으로, 서열식별번호: 6의 CTP_6aa에서 Xaa₁은 트립토판 (W)이고, CTP_6aa는 SQWSRXaa₂ (서열식별번호: 8)의 서열을 포함하거나, 또는 서열식별번호: 6의 CTP_6aa에서 Xaa₁은 티로신 (Y)이고, CTP_6aa는 SQYSRXaa₂ (서열식별번호: 9)의 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 서열식별번호: 6의 CTP_6aa에서 Xaa₂는 트레오닌 (T)이고, 서열식별번호: 6의 CTP_6aa에서 Xaa₁은 알라닌 (A), 트립토판 (W), 또는 티로신 (Y)이며, 각각 SQASRT (서열식별번호: 10), SQWSRT(서열식별번호: 11), 또는 SQYSRT(서열식별번호: 5)의 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 서열식별번호: 6의 CTP_6aa에서 Xaa₂는 알라닌 (A)이다. 특정 실시양태에서, 서열식별번호: 6의 CTP_6aa에서 Xaa₁은 티로신 (Y)이고, Xaa₂는 알라닌 (A)이다. 특정 실시양태에서, CTP_6aa는 서열 SQYSRT (서열식별번호: 5)를 포함한다.

특정 실시양태에서, 서열식별번호: 4 내지 서열식별번호: 6, 예를 들어, 서열식별번호: 5의 CTP_6aa를 포함하는 펩티드는 재조합 또는 합성적으로 제조된 펩티드이다.

일부 실시양태에서, 제2 펩티드 서열, 단백질, 또는 소분자는 CTP (CTP_12aa, CTP_6aa, 또는 CTP-P2A)의 N-말단의 상류에 연결된다. 일부 실시양태에서, 연결된 펩티드는 CTP와 제2 펩티드 서열, 단백질, 또는 소분자 사이에 에스테르 연결을 포함할 수 있고, 에스테르 연결은 오직 세포내 에스테라제에 의해서만 절단될 수 있다.

일부 실시양태에서, 항부정맥 특성을 갖는 모이어티, 예를 들어, 아미오다론에 연결된 CTP (CTP_12aa, CTP_6aa, 또는 CTP-P2A)를 포함하는 펩티드는 C- 및 N-말단 둘 다에서 임의적으로 추가로 표지될 수 있다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 펩티드는 녹색 형광 모이어티, 예를 들어, 6-카르복시플루오로세인, 및 적색 형광 모이어티, 예를 들어, Cy5.5로 표지된다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 펩티드는 그의 N-말단에서 녹색 형광 모이어티로, 및 그의 C-말단에서 적색 형광 모이어티로 표지된다. 일부 실시양태에서, 펩티드는 그의 N-말단에서 적색 형광 모이어티로, 및 그의 C-말단에서 녹색 형광 모이어티로 표지된다.

상기 서열식별번호: 1-35의 CTP 펩티드 중 임의의 것은, 예를 들어, 수용성 중합체, 예를 들어, 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)에 접합될 수 있다는 것도 고려된다. 특정 실시양태에서, 서열식별번호: 5의 CTP_6aa는 수용성 중합체, 예를 들어, 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)에 접합된다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 상기 서열식별번호: 1-35의 CTP 펩티드 중 어느 하나를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 단리된 핵산을 제공한다. 특정 실시양태에서, 뉴클레오티드 서열은 숙주 세포, 예를 들어, 에스케리키아 콜라이(Escherichia coli) 세포에서의 발현을 위해 코돈 최적화된다. 본 발명은 또한 상기 뉴클레오티드 서열 중 어느 하나를 포함하는 발현 벡터를 제공한다. 유사하게, 본 발명은 상기 발현 벡터 중 하나 이상을 포함하는, 숙주 세포, 예를 들어, 에스케리키아 콜라이 세포를 제공한다. 펩티드는 발현 벡터 중 단리물로 또는 개재 에스테르 연결을 포함하거나, 또는 연속성을 지닌, 전달하고자 하는 펩티드/단백질의 C-말단에서 융합 펩티드/단백질로서 제조될 수 있다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 서열식별번호: 1-35 중 어느 하나의 펩티드 및 임의의 변이체, 및 적어도 하나의 제약상 허용되는 담체 및/또는 부형제를 포함하는 제약 조성물을 제공한다. 펩티드는 가용성 형태 또는 결정 형태일 수 있다. 추가로, 조성물은 pH 증가제를 포함할 수 있다. 제약 조성물은, 예를 들어, 경구용 투여 형태 또는 비경구용 투여 형태로 제제화될 수 있다는 것이 고려된다. 특정 실시양태에서, 조성물은 경구적으로 투여될 수 있는 분제, 과립제, 펠릿, 마이크로펠릿, 또는 미니정제로서, 또는 정맥 주사를 위한 생리 염수 또는 탈이온수 중에 재구성될 수 있는 동결건조된 분제로서 제제화된다.

본 발명의 이들 및 다른 측면 및 특색은 하기 상세한 설명 및 청구범위에서 기재된다.

본 발명은 하기 도면을 참조함으로써 더욱 완전하게 이해될 수 있다.
도 1a, 도 1b, 도 1c, 및 도 1d는 Cy5.5로 표지된 심장-특이적 표적화 펩티드 알라닌 돌연변이체가 형질도입된 H9C2 세포의 형광 강도를 정량화하는 막대 그래프이다. 각각의 명시된 알라닌 돌연변이체에 대한 서열은 하기 표 2에 제공되어 있다.
도 2는 Cy5.5 표지된 심장-특이적 표적화 펩티드 변이체와 함께 인큐베이션된 다양한 세포 유형의 형질도입 효율 및 생존능을 제시하는 막대 그래프 시리즈이다. 도 2a는 제1 실험에서 H9C2 세포의 형질도입을 제시한다. 도 2b는 제2 실험에서 H9C2 세포의 형질도입을 제시한다. 도 2c는 H9C2 세포 및 MEF 세포의 형질도입을 제시한다. 도 2d는 H9C2 및 3T3 세포의 형질도입을 제시한다. 도 2e는 Cy5.5 표지된 심장-특이적 표적화 펩티드 변이체가 형질도입된 H9C2 세포 및 MEF 세포의 생존능을 제시한다. CTP (전장): NH₂-APWHLSSQYSRT-COOH (서열식별번호: 1); CTP-A: NH₂-APWHLS-COOH (서열식별번호: 24); CTP-B: NH₂-SQYSRT-COOH (CTP_6aa; 서열식별번호: 5); 시클릭: 명시된 펩티드의 고리화된 버전; CTP-랜덤: 랜덤, 선형, 12-아미노산 펩티드 (RAN: NH₂-STLMKFCYVEQN-COOH ((서열식별번호: 26)); DMSO: 디메틸 술폭시드.
도 3은 로다민 카고가 전장 CTP (예를 들어, CTP_6aa)의 C-말단에 접합되는 경우의 심근세포의 세포내 구획으로의 로다민 카고의 전달을 제시한다. 이중-표지된 카르복시플루오레세인 (녹색) 및 로다민 (적색) 심장-특이적 표적화 펩티드가 형질도입된 인간 iPSC 유래 박동 심근세포의 면역조직화학적 특징화를 수행하였다. iPSC 유래 심근세포는 트로포닌 (도 3a), 칼슘 과도 (도 3b), 및 로다민 카고의 강건한 전달에 대한 염색을 나타낸 반면, CTP의 N-말단에 접합된 카르복시플루오레세인은 세포로부터 유리/분비되는 것으로 보인다 (도 3c). 도 3d는 세포 구조의 암시야 영상이다. 스케일 바는 30 μm를 나타낸다.
도 4는 Cy5.5 표지된 심장-특이적 표적화 펩티드 변이체와 함께 인큐베이션된 H9C2 세포의 형질도입 효율을 제시하는 막대 그래프 시리즈이다. CTP (전장): NH₂-APWHLSSQYSRT-COOH (서열식별번호: 1); CTP-A: NH₂-APWHLS-COOH (서열식별번호: 24); CTP-B: NH₂-SQYSRT-COOH (CTP_6aa; 서열식별번호: 5); 시클릭: 펩티드의 고리화된 버전; RAN: 랜덤, 선형, 12-아미노산 펩티드 (RAN: NH₂-STLMKFCYVEQN-COOH (서열식별번호: 26)); DMSO: 디메틸 술폭시드.
도 5는 CTP-Cy5.5, 또는 Cy5.5에 융합된 대조군 랜덤 펩티드 서열 (RAN-Cy5.5) 주사 후 다양한 시점 (15, 30, 45, 60, 90 또는 360분)에서 마우스 심근 조직에서의 Cy5.5 강도 (임의 단위 ("AU"))를 제시하는 막대 그래프이다.
도 6a 및 도 6b는 CTP 구축물 (CTP, CTP-B, H4A, 또는 P2A) 또는 랜덤 대조군 펩티드 서열 (RAN)이 주사된 심장 조직에서 측정된 평균 형광 강도를 제시하는 막대 그래프이다.

본 발명은, 부분적으로는, 효율적인 심장-조직 특이적 형질도입/세포 투과 특성, 및 사실상, 효율적인 심장-조직 특이적 카고-전달 및 치료적 특성을 갖는 6개 아미노산 심장-특이적 표적화-펩티드 (CTP_6aa)에 대한 예상치 못한 발견에 기반한다. 본 개시내용의 CTP_6aa는 미국 특허 번호 9,249,184에 기재된 전장 CTP보다 더 적은 개수의 아미노산을 가지며, 따라서, 전장 CTP보다 면역원성은 더 작을 것이다. 본 개시내용은 본 개시내용의 CTP_6aa가 전장 CTP 또는 CTP의 N-말단 단편과 비교 시, 카고 및/또는 치료제를 포유동물 대상체 (예를 들어, 인간)의 심장 조직으로 전달하는데 있어서 이로울 것이라는 것을 제공한다.

본 발명의 다양한 특색 및 측면은 하기에서 더욱 상세하게 논의된다.

특정 실시양태에서, 본 개시내용은 심장 질환 및/또는 병태를 치료하기 위한, 치료적 모이어티에 연결된, 본원의 하기 표 1의 CTP 펩티드를 제공한다.

표 1

서열식별번호: 1-35 중 어느 하나의 CTP는 재조합 또는 합성적으로 제조된 펩티드이다.

I. 6개 아미노산 심장-특이적 표적화 -펩티드 ( CTP _6aa )

본 개시내용은 심장 표적화 펩티드 ("CTP")를 제공한다. 특정의 비-제한적인 실시양태에서, CTP는 심장 조직을 특이적으로 표적화한다. "심장 조직을 특이적으로 표적화한다"는 것은 카고 분자에 연결되어 CTP-카고 복합체를 형성한 상기 CTP가 포유동물 내로 주사되는 경우에, CTP-카고 복합체는 다른 조직, 예컨대, 예를 들어, 간, 신장, 폐, 골격근, 또는 뇌 내로 형질도입되는 것보다 훨씬 더 높은 수준으로 심장 조직 내로 형질도입된다는 것을 의미한다. 특정 실시양태에서, 간, 신장, 폐, 골격근 또는 뇌 대비 심장 조직으로 "심장 조직을 특이적으로 표적화하는" CTP의 형질도입 비는 적어도 2:1이거나, 또는 적어도 3:1이다.

한 측면에서, 본 발명은, 부분적으로는, Xaa₁ Xaa₂ Y Xaa₃ Xaa₄ T (서열식별번호: 4)의 서열을 포함하는 6개 아미노산 심장-특이적 표적화-펩티드 (CTP_6aa)의 발견에 기반한다. 특정 실시양태에서, 서열식별번호: 4의 CTP_6aa에서 Xaa₁은 세린 (S)이다. 특정 실시양태에서, 서열식별번호: 4의 CTP_6aa에서 Xaa₂는 글루타민 (Q)이다. 특정 실시양태에서, 서열식별번호: 4의 CTP_6aa에서 Xaa₃은 세린 (S)이다. 특정 실시양태에서, 서열식별번호: 4의 CTP_6aa에서 Xaa₄는 아르기닌 (R)이다. 특정 실시양태에서, 서열식별번호: 4의 CTP_6aa에서 Xaa₁ 및 Xaa₂는 각각 세린 (S) 및 글루타민 (Q)이다. 특정 실시양태에서, 서열식별번호: 4의 CTP_6aa에서 Xaa₁ 및 Xaa₃은 둘 다 세린 (S)이다. 특정 실시양태에서, 서열식별번호: 4의 CTP_6aa에서 Xaa₁ 및 Xaa₄는 각각 세린 (S) 및 아르기닌 (R)이다. 특정 실시양태에서, 서열식별번호: 4의 CTP_6aa에서 Xaa₂ 및 Xaa₃은 각각 글루타민 (Q) 및 세린 (S)이다. 특정 실시양태에서, CTP_6aa는 서열 SQYSRT (서열식별번호: 5)를 포함한다.

한 측면에서, 본 발명은, 부분적으로는, S Q Xaa₁ S R Xaa₂ (서열식별번호: 6)의 서열을 포함하는 6개 아미노산 심장-특이적 표적화-펩티드 (CTP_6aa)의 발견에 기반한다. 특정 실시양태에서, 서열식별번호: 6의 CTP_6aa에서 Xaa₁은 알라닌 (A)이고, CTP_6aa는 SQASRXaa₂ (서열식별번호: 7)의 서열을 포함하거나, 또는 임의적으로, 서열식별번호: 6의 CTP_6aa에서 Xaa₁은 트립토판 (W)이고, CTP_6aa는 SQWSRXaa₂ (서열식별번호: 8)의 서열을 포함하거나, 또는 서열식별번호: 6의 CTP_6aa에서 Xaa₁은 티로신 (Y)이고, CTP_6aa는 SQYSRXaa₂ (서열식별번호: 8)의 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 서열식별번호: 6의 CTP_6aa에서 Xaa₂는 트레오닌 (T)이고, 서열식별번호: 6의 CTP_6aa에서 Xaa₁은 알라닌 (A), 트립토판 (W), 또는 티로신 (Y)이며, 각각 SQASRT (서열식별번호: 10), SQWSRT(서열식별번호: 11), 또는 SQYSRT(서열식별번호: 5)의 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 서열식별번호: 6의 CTP_6aa에서 Xaa₂는 알라닌 (A)이다. 특정 실시양태에서, 서열식별번호: 6의 CTP_6aa에서 Xaa₁은 티로신 (Y)이고, Xaa₂는 알라닌 (A)이다. 특정 실시양태에서, CTP_6aa는 서열 SQYSRT (서열식별번호: 5)를 포함한다.

한 측면에서, 서열식별번호: 4, 6, 7, 8, 5, 9, 10, 또는 11의 CTP_6aa는 나노입자에 접합된다. 특정 실시양태에서, 서열식별번호: 5의 CTP_6aa는 나노입자에 접합된다.

특정의 비-제한적인 실시양태에서, CTP_6aa는 pH=7에서 약 +0.8 내지 +1.2인 순전하를 갖는다. 특정의 비-제한적인 실시양태에서, CTP_6aa 펩티드는 pH=7에서 약 1.1인 순전하를 갖는다.

특정의 비-제한적인 실시양태에서, CTP_6aa는 pH 8 내지 pH 9에서 등전점을 갖는다. 특정의 비-제한적인 실시양태에서, CTP_6aa 펩티드는 pH 8.56에서 등전점을 갖는다.

특정의 비-제한적인 실시양태에서, CTP_6aa는 -0.2 내지 -0.6의 평균 친수성 지수를 갖는다. 특정의 비-제한적인 실시양태에서, CTP_6aa 펩티드는 -0.4의 평균 친수성 지수를 갖는다.

특정의 비-제한적인 실시양태에서, 서열식별번호: 1-35 중 어느 하나의 CTP는 (L) 아미노산으로 구성된다.

특정의 비-제한적인 실시양태에서, 서열식별번호: 1-35 중 어느 하나의 CTP는 (D) 아미노산으로 구성된다.

특정 실시양태에서, 서열식별번호: 1-35 중 어느 하나의 상기 CTP 펩티드 중 임의의 것은 단리된 것일 수 있다. 예를 들어, 특정 실시양태에서, 서열식별번호: 1, 2, 또는 5의 CTP_6aa는 단리된 것이다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 서열식별번호: 5의 야생형 CTP_6aa에 상응하는 위치에 적어도 하나의 (예를 들어, 1 또는 2개) 돌연변이(들)를 포함하는 CTP_6aa로서, 여기서 적어도 하나의 돌연변이는 위치 3 또는 6에 존재하는 것인 CTP_6aa를 제공한다. 특정 실시양태에서, 돌연변이는 서열식별번호: 5의 야생형 CTP_6aa 대비 보존적 치환일 수 있는 반면, 특정의 다른 실시양태에서, 돌연변이는 서열식별번호: 5의 야생형 CTP_6aa 대비 비보존적 치환일 수 있다.

본원에 사용된 바와 같이, 용어 "보존적 치환"은 구조상 유사한 아미노산으로의 치환을 지칭한다. 비보존적 치환은 보존적 치환이 아닌 아미노산 치환이다.

본원에 개시된 바와 같이, 서열식별번호: 5-9 중 어느 하나, 예를 들어, 서열식별번호: 5의 CTP_6aa는 서열식별번호: 1 또는 24의 것보다 더 높은 형질도입/투과 활성을 갖는다. 예를 들어, 서열식별번호: 5 또는 6의 CTP_6aa는 서열식별번호: 1 또는 24의 것보다 2-50배 더 높은 형질도입 활성을 가질 수 있다. 특정 실시양태에서, 서열식별번호: 5-9 중 어느 하나, 예를 들어, 서열식별번호: 5의 CTP_6aa는 서열식별번호: 1 또는 2의 것보다 약 2 내지 약 50, 약 2 내지 약 40, 약 2 내지 약 30, 약 2 내지 약 20, 약 2 내지 약 10, 약 2 내지 약 5, 약 5 내지 약 50, 약 5 내지 약 40, 약 5 내지 약 30, 약 5 내지 약 20, 약 5 내지 약 10, 약 10 내지 약 50, 약 10 내지 약 40, 약 10 내지 약 30, 약 10 내지 약 20, 약 20 내지 약 50, 약 20 내지 약 40, 약 20 내지 약 30, 약 30 내지 약 50, 약 30 내지 약 40, 약 40 내지 약 50, 약 2, 약 5, 약 10, 약 20, 약 30, 약 40, 또는 약 50배 더 높은 형질도입 활성을 갖는다.

서열식별번호: 1-35 중 어느 하나, 예를 들어, 서열식별번호: 1, 2, 또는 5의 개시된 CTP는 변형되거나, 조작되거나, 또는 화학적으로 접합될 수 있다는 것이 고려된다. 예를 들어, 개시된 서열식별번호: 1-35 중 어느 하나, 예를 들어, 서열식별번호: 1, 2, 또는 5의 CTP는 표준 시험관내 접합 화학을 이용하여 이펙터 작용제에 접합될 수 있다는 것이 고려된다. 이펙터 작용제가 또 다른 폴리펩티드일 경우, 서열식별번호: 1-35 중 어느 하나, 예를 들어, 서열식별번호: 1, 2, 또는 5의 CTP는 이펙터에 화학적으로 접합될 수 있거나, 또는 융합 단백질로서 이펙터에 연결될 수 있다. 융합 단백질 구축은 관련 기술분야의 통상의 기술 내에 있다.

특정 실시양태에서, 개시된 서열식별번호: 1-35 중 어느 하나, 예를 들어, 서열식별번호: 1, 2, 또는 5의 CTP는 특정한 투여 모드 또는 활성 부위에 의존하여, 그의 안정화 및/또는 예를 들어, 혈액, 혈청 또는 다른 조직에서의 순환 중 체류를 개선시키는 모이어티로 변형될 수 있다. 예를 들어, 개시된 서열식별번호: 1-35 중 어느 하나, 예를 들어, 서열식별번호: 1, 2, 또는 5의 CTP는 중합체, 예를 들어, 실질적으로 비-항원성 중합체, 예컨대 폴리알킬렌 옥시드 또는 폴리에틸렌 옥시드에 접합될 수 있다. 특정 실시양태에서, 개시된 서열식별번호: 1-35 중 어느 하나, 예를 들어, 서열식별번호: 1, 2, 또는 5의 CTP는 수용성 중합체, 예를 들어, 친수성 폴리비닐 중합체, 예를 들어, 폴리비닐알콜 또는 폴리비닐피롤리돈에 접합된다. 이러한 중합체의 예는 폴리알킬렌 옥시드 동종중합체 예컨대 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 또는 폴리프로필렌 글리콜, 폴리옥시에틸화된 폴리올, 그의 공중합체 및 그의 블록 공중합체를 포함한다. 추가적인 유용한 중합체는 폴리옥시알킬렌 예컨대 폴리옥시에틸렌, 폴리옥시프로필렌, 및 폴리옥시에틸렌 및 폴리옥시프로필렌의 블록 공중합체, 폴리메타크릴레이트, 카르보머, 및 분비형 또는 비분지형 폴라사카라이드를 포함한다.

또 다른 측면에서, 서열식별번호: 4, 6, 7, 8, 5, 9, 10, 또는 11의 CTP_6aa는 검출가능한 작용제에 접합된다. 특정 실시양태에서, 서열식별번호: 5의 CTP_6aa는 검출가능한 작용제에 접합된다. 특정 실시양태에서, 서열식별번호: 4, 6, 7, 8, 5, 9, 10, 또는 11의 CTP_6aa는 에스테르 연결을 통해 검출가능한 작용제에 접합된다.

특정 실시양태에서, 서열식별번호: 4, 6, 7, 8, 5, 9, 10, 또는 11의 CTP_6aa는 방사성핵종 또는 방사성 모이어티, 비오틴, 루시페라제, 효소, 로다민, 형광단, 나노입자, 마이크로버블, 리포솜 또는 발광 모이어티에 접합된다. 특정 실시양태에서, 서열식별번호: 5의 CTP_6aa는 방사성핵종 또는 방사성 모이어티, 비오틴, 루시페라제, 효소, 로다민, 형광단, 나노입자, 마이크로버블, 리포솜 또는 발광 모이어티에 접합된다. 특정 실시양태에서, 서열식별번호: 4, 6, 7, 8, 5, 9, 10, 또는 11의 CTP_6aa는 에스테르 연결을 통해 방사성핵종 또는 방사성 모이어티, 비오틴, 루시페라제, 효소, 로다민, 형광단, 나노입자, 마이크로버블, 리포솜 또는 발광 모이어티에 접합된다.

또 다른 측면에서, 본 개시내용은 조직을 영상화 또는 검출하는 방법으로서, 검출가능한 작용제-접합된 서열식별번호: 4, 6, 7, 8, 5, 9, 10, 또는 11의 CTP_6aa를 포함하는 조성물의 유효량을 대상체에게 투여하고; 대상체를 CTP_6aa 접합체의 검출에 도움이 되는 조건에 노출시키고; 영상을 획득하는 것을 포함하는 방법을 제공한다. 특정 실시양태에서, 검출가능한 작용제-접합된 서열식별번호: 5의 CTP_6aa는 조직을 영상화 또는 검출하는 방법에서 사용된다.

또 다른 측면에서, 본 개시내용은 전달 비히클/작용제로서 제제화된 서열식별번호: 4, 6, 7, 8, 5, 9, 10, 또는 11의 CTP_6aa를 제공한다. 특정 실시양태에서, 서열식별번호: 4, 6, 7, 8, 5, 9, 10, 또는 11의 CTP_6aa는 약물 또는 치료제, 나노입자, 펩티드, 단백질, 또는 검출가능한 작용제에 접합된다. 특정 실시양태에서, 서열식별번호: 4, 6, 7, 8, 5, 9, 10, 또는 11의 CTP_6aa는 에스테르 연결을 통해 약물 또는 치료제, 나노입자, 펩티드, 단백질, 또는 검출가능한 작용제에 접합된다. 특정 실시양태에서, 서열식별번호: 5의 CTP_6aa는 전달 비히클/작용제로서 제제화된다.

특정 실시양태에서, 서열식별번호: 4, 6, 7, 8, 5, 9, 10, 또는 11의 CTP_6aa는 에스테르 연결, 디술피드 또는 프로테아제 감수성 링커를 통해 약물 또는 치료제, 나노입자, 펩티드, 단백질, 또는 검출가능한 작용제에 연결/접합된다. 특정 실시양태에서, 서열식별번호: 5의 CTP_6aa는 에스테르 연결, 디술피드, 또는 프로테아제 감수성 링커를 통해 약물 또는 치료제, 나노입자, 펩티드, 단백질, 또는 검출가능한 작용제에 연결/접합된다.

특정 실시양태에서, 서열식별번호: 4, 6, 7, 8, 5, 9, 10, 또는 11의 CTP_6aa에 접합된 나노입자는 항체 또는 그의 단편, SB239063, 슈퍼옥시드 디스뮤타제, HGF, FGF-1, FGF-2, NF-ĸB 억제제, NSD 펩티드, 헴 옥시게나제, 항산화제, iNOS, S100A1, 카탈라제, 글루타티온 퍼옥시다제, TGFβ 억제제, VEGF, 소닉 헤지호그 단백질, HGF, IAP, 프로스타글란딘, 피르비늄 파모에이트, 및 디프로틴 A, 제토-쉴러 펩티드, 시클로스포린, 아미오다론으로부터 선택되는 약물 또는 치료제를 포함한다.

또 다른 측면에서, 본 개시내용은 심장 조직 또는 심장 병태의 치료를 필요로 하는 대상체에서 심장 조직 또는 심장 병태를 치료하는 방법으로서, 대상체에게 서열식별번호: 4, 6, 7, 8, 5, 9, 10, 또는 11의 CTP_6aa를 포함하는 조성물의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공한다. 특정 실시양태에서, 서열식별번호: 5의 CTP_6aa는 심장 조직 또는 심장 병태의 치료를 필요로 하는 대상체에서 심장 조직 또는 심장 병태를 치료하는 방법에서 사용된다.

또 다른 측면에서, 본 개시내용은 카고를 심장 근육 세포 내로 도입하는 방법으로서, 심장 근육 세포에, 카고를 심장 근육 세포 내로 도입하는데 효과적인, 카고에 연결된 서열식별번호: 4, 6, 7, 8, 5, 9, 10, 또는 11의 CTP_6aa를 포함하는 복합체의 소정량을 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공한다. 특정 실시양태에서, 카고는 방사성동위원소, 형광 마커, 가돌리늄 마커, 루시페라제 마커, 마이크로구체 또는 나노입자를 포함한다. 특정 실시양태에서, 서열식별번호: 5의 CTP_6aa는 카고를 심장 근육 세포 내로 도입하는 방법에서 사용된다. 특정 실시양태에서, 서열식별번호: 4, 6, 7, 8, 5, 9, 10, 또는 11의 CTP_6aa는 에스테르 연결을 통해 카고에 접합된다.

또 다른 측면에서, 본 개시내용은 심근 경색을 앓는 인간 대상체를 치료하는 방법으로서, 인간 대상체에게, 카고에 연결된 서열식별번호: 4, 6, 7, 8, 5, 9, 10, 또는 11의 CTP_6aa를 포함하는 복합체의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함하여 카고를 심장 근육 세포 내로 도입하는 것을 포함하며, 여기서 카고는 세포 사멸을 억제하거나, 부정맥을 억제하거나, 수축성을 개선시키거나, 대상체 생존을 연장시키거나, 또는 그의 조합인 방법을 제공한다. 특정 실시양태에서, 카고는 NF-ĸB 억제제, NSD 펩티드, 헴 옥시게나제, 항산화제, iNOS, S100A1, 슈퍼옥시드 디스뮤타제, 카탈라제, 글루타티온 퍼옥시다제, TGFβ 억제제, VEGF, FGF-1, FGF-2, 소닉 헤지호그 단백질, HGF 및 IAP로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 서열식별번호: 5의 CTP_6aa는 심근 경색을 앓는 인간 대상체를 치료하는 방법에서 사용된다. 특정 실시양태에서, 서열식별번호: 4, 6, 7, 8, 5, 9, 10, 또는 11의 CTP_6aa는 에스테르 연결을 통해 카고에 접합된다.

또 다른 측면에서, 본 개시내용은 심근 경색을 앓는 인간 대상체를 치료하는 방법으로서, 인간 대상체에게 카고에 연결된 서열식별번호: 4, 6, 7, 8, 5, 9, 10, 또는 11의 CTP_6aa를 포함하는 복합체의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함하여 카고를 심장 근육 세포 내로 도입하는 것을 포함하며, 여기서 카고는 세포 사멸을 억제하거나, 부정맥을 억제하거나, 수축성을 개선시키거나, 대상체 생존을 연장시키거나, 또는 그의 조합인 방법을 제공한다. 특정 실시양태에서, 카고는 NF-ĸB 억제제, NBD 펩티드, 헴 옥시게나제, 항산화제, iNOS, S100A1, 슈퍼옥시드 디스뮤타제, 카탈라제, 글루타티온 퍼옥시다제, TGFβ 억제제, VEGF, FGF-1, FGF-2, 소닉 헤지호그 단백질, HGF 및 IAP로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 서열식별번호: 4, 6, 7, 8, 5, 9, 10, 또는 11의 CTP_6aa는 에스테르 연결을 통해 카고에 연결/접합된다.

또 다른 측면에서, 본 개시내용은 심장을 손상시키는 대사 결함을 앓는 대상체를 치료하는 방법으로서, 대상체에게, 카고에 연결된 서열식별번호: 4, 6, 7, 8, 5, 9, 10, 또는 11의 CTP_6aa를 포함하는 복합체의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함하여 카고를 인간 대상체의 심장 근육 세포 내로 도입하는 것을 포함하며, 여기서 카고는 대사 결함을 교정하는 것인 방법을 제공한다. 특정 실시양태에서, 대사 결함은 고셔병이고, 카고는 글루코세레브로시다제이다. 특정 실시양태에서, 서열식별번호: 5의 CTP_6aa는 심장을 손상시키는 대사 결함을 앓는 대상체를 치료하는 방법에서 사용된다. 특정 실시양태에서, 서열식별번호: 4, 6, 7, 8, 5, 9, 10, 또는 11의 CTP_6aa는 에스테르 연결을 통해 카고에 연결/접합된다.

또 다른 측면에서, 본 개시내용은 검출가능한 카고를 심장 근육 세포 내로 도입하는 방법으로서, 심장 근육 세포에, 카고를 심장 근육 세포 내로 도입하는데 효과적인, 카고에 연결된 서열식별번호: 4, 6, 7, 8, 5, 9, 10, 또는 11의 CTP_6aa를 포함하는 복합체의 소정량을 투여하는 것을 포함하며, 여기서 카고는 검출가능한 화합물을 포함하는 것인 방법을 제공한다. 특정 실시양태에서, 검출가능한 화합물은 검출가능한 방사성동위원소, 형광 마커, 가돌리늄 마커, 또는 루시페라제 마커를 포함한다. 특정 실시양태에서, 서열식별번호: 5의 CTP_6aa는 검출가능한 카고를 심장 근육 세포 내로 도입하는 방법에서 사용된다. 특정 실시양태에서, 서열식별번호: 4, 6, 7, 8, 5, 9, 10, 또는 11의 CTP_6aa는 에스테르 연결을 통해 카고에 연결/접합된다.

또 다른 측면에서, 본 개시내용은 검출가능한 카고를 심장 근육 세포 내로 도입하는 방법으로서, 심장 근육 세포에, 카고를 심장 근육 세포 내로 도입하는데 효과적인, 카고에 연결된 서열식별번호: 4, 6, 7, 8, 5, 9, 10, 또는 11의 CTP_6aa를 포함하는 복합체의 소정량을 투여하는 것을 포함하며, 여기서 카고는 검출가능한 화합물을 포함하는 것인 방법을 제공한다. 특정 실시양태에서, 검출가능한 화합물은 검출가능한 방사성동위원소, 형광 마커, 가돌리늄 마커, 또는 루시페라제 마커를 포함한다. 특정 실시양태에서, 서열식별번호: 5의 CTP_6aa는 검출가능한 카고를 심장 근육 세포 내로 도입하는 방법에서 사용된다. 특정 실시양태에서, 서열식별번호: 4, 6, 7, 8, 5, 9, 10, 또는 11의 CTP_6aa는 에스테르 연결을 통해 카고에 접합된다.

또 다른 측면에서, 본 발명은, 예를 들어, 실시예 1에 기재된 조건 하에서 서열식별번호: 1 또는 서열식별번호: 24의 펩티드의 형질도입과 비교 시 더 높은 심장 형질도입 수준을 갖는, 서열식별번호: 5-9 중 어느 하나, 예를 들어, 서열식별번호: 5의 CTP_6aa를 제공한다.

상기 서열식별번호: 4-11의 CTP_6aa 펩티드 중 임의의 것은, 예를 들어, 서열식별번호: 1 또는 서열식별번호: 24의 펩티드와 비교 시 5-20배 더 높은 형질도입 능력을 가질 수 있다는 것이 고려된다.

II. 카고

본 발명에 따르면, 서열식별번호: 1-35 중 어느 하나, 예를 들어, 서열식별번호: 5의 CTP는 임의적으로 링커 분자 또는 분자들을 통해 카고 분자와 연결되어 복합체를 형성한다. 카고 분자는 단백질 (당단백질 포함), 핵산, 탄수화물, 지질, 또는 그의 조합일 수 있다. 일부 실시양태에서, 카고 분자는 활성 제약 성분, 예를 들어, 항부정맥 특성을 갖는 활성 제약 성분일 수 있다. 예를 들어, 본원에 기재된 일부 실시양태에서, 카고 분자는 클래스 I 항부정맥 화합물 (예를 들어, 서브클래스 a 화합물, 서브클래스 b 화합물, 또는 서브클래스 c 화합물), 클래스 II 항부정맥 화합물, 클래스 III 항부정맥 화합물, 클래스 IV 항부정맥 화합물, 나트륨 채널 차단제, 항콜린성 화합물, 퀴니딘, 아즈말린, 히드로퀴니딘, 로라즈민, 프라즈말린, 스파르테인, 프로카인아미드, 디소피라미드, 리도카인, 리도카인 유사체, 페니토인, 토카이니드, 멕실레틴, 플레카이니드, 인데카이니드, 로르카이니드, 엔카이니드, 에타시진, 프로파페논, 모라시진, 베타-차단제, 카르테올롤, 카베딜롤, 라베탈롤, 나돌롤, 펜부톨롤, 핀돌롤, 프로프라놀롤, 소탈롤, 티모롤, 아세부톨롤, 아테놀롤, 베탁솔롤, 비소프롤롤, 에스모롤, 메토프로롤, 네비볼롤, 칼륨 채널 차단제, 아미오다론, 드로네다론, E-4031, 베르나칼란트, 니페칼란트, 브레틸리움, 부나프틴, 셀리바론, 소탈롤, 이부틸리드, 도페틸리드, 테디사밀, 칼슘 채널 차단제, 디히드로피리딘 칼슘 채널 차단제, 비-디히드로피리딘 칼슘 채널 차단제, 암로디핀, 펠로디핀, 이스라디핀, 니카르디핀, 니페디핀, 니모디핀, 니트렌디핀, 베라파밀, 딜티아젬, 아데노신, 벤조디아제핀, 바르비투레이트, 무스카린성 길항제, 무스카린성 효능제, 디곡신, 디기톡신, 우아바인, 황산마그네슘, 또는 아트로핀이다.

특정의 비-제한적인 실시양태에서, 카고는 단백질이다. 특정의 비-제한적인 실시양태에서, 단백질은 시토카인, 성장 인자, 효소, 이온 채널, 및 항염증성 단백질로 이루어진 군으로부터 선택된다.

특정의 비-제한적인 실시양태에서, 카고는 항산화제이다.

특정의 비-제한적인 실시양태에서, 카고는 핵산이다. 이러한 핵산의 비-제한적인 예는 DNA, RNA, 안티센스 RNA, 간섭 RNA, 마이크로RNA, 촉매적 RNA, 및 촉매적 DNA를 포함한다.

본 개시내용은 뉴레귤린-1β-CTP 또는 항부정맥 특성을 갖는 모이어티, 예를 들어, 아미오다론에 연결/접합된 심장 표적화 펩티드 ("CTP")를 제공한다. 특정의 비-제한적인 실시양태에서, APWHLSSQYSRT (서열식별번호: 1)의 서열을 포함하는 CTP_12aa, SQYSRT (서열식별번호: 5)의 서열을 갖는 CTP_6aa, 또는 AAWHLSSQYSRT (서열식별번호: 2 (CTP-P2A))의 서열을 갖는 CTP_12aa의 N-말단은 뉴레귤린-1β-CTP 또는 항부정맥 특성을 갖는 모이어티, 예를 들어, 아미오다론에 연결/접합된다. 특정 실시양태에서, CTP는 항부정맥 특성을 갖는 제2 모이어티, 예를 들어, 아미오다론에 연결/접합된다.

특정의 비-제한적인 실시양태에서, 치료적 모이어티에 연결된 CTP는 심장 조직을 특이적으로 표적화한다. "심장 조직을 특이적으로 표적화한다"는 것은 제2 펩티드 서열, 단백질, 또는 소분자에 연결되어 접합된 단백질을 형성한 상기 CTP 접합체가 포유동물 내로 주사되는 경우에, 접합된 단백질은 다른 조직, 예컨대, 예를 들어, 간, 신장, 폐, 골격근, 또는 뇌 내로 형질도입되는 것보다 훨씬 더 높은 수준으로 심장 조직 내로 형질도입된다는 것을 의미한다.

특정의 비-제한적인 실시양태에서, CTP (예를 들어, 서열식별번호: 5의 CTP_6aa)는 -0.2 내지 -0.6의 평균 친수성 지수를 갖는다. 특정의 비-제한적인 실시양태에서, CTP (예를 들어, 서열식별번호: 5의 CTP)는 -0.4의 평균 친수성 지수를 갖는다.

특정의 비-제한적인 실시양태에서, 서열식별번호: 1, 2, 3, 4, 또는 5의 CTP는 (L) 아미노산으로 구성된다. 특정의 비-제한적인 실시양태에서, 서열식별번호: 1, 2, 3, 4, 또는 5의 CTP는 (D) 아미노산으로 구성된다.

본 개시내용은, 부분적으로는, 심장 세포, 예를 들어, 심근세포로의 펩티드 전달을 표적화하는 CTP를 사용하여 뉴레귤린-1β 또는 항부정맥 특성을 갖는 모이어티, 예를 들어, 아미오다론을 심장으로 직접적으로 전달하는 것에 기반한다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 본 발명은 뉴레귤린-1β 또는 항부정맥 특성을 갖는 모이어티, 예를 들어, 아미오다론을 대상체의 심장 세포, 예를 들어, 대상체의 심근세포로 전달하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 대상체는 포유동물, 예를 들어, 영장류, 예를 들어, 인간이다. 따라서, 일부 실시양태에서, 본 발명은 뉴레귤린-1β 또는 항부정맥 특성을 갖는 모이어티, 예를 들어, 아미오다론을 인간 대상체의 심장 세포, 예를 들어, 인간 대상체의 심근세포로 전달하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 발명은, 예를 들어, 쉬프 염기 화학에 의해 항부정맥제에 접합된 CTP를 포함하는 펩티드를 대상체에게 투여함으로써, 뉴레귤린-1β 또는 항부정맥 특성을 갖는 모이어티, 예를 들어, 아미오다론을 대상체의 심장 세포, 예를 들어, 대상체의 심근세포로 전달하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 펩티드는 CTP 서열을 코딩하는 핵산을 포함하는 세포 또는 바이러스에 의해 도입될 수 있다.

특정 실시양태에서, 본 발명은 펩티드 조성물, 예를 들어, 항부정맥 모이어티-CTP 조성물 또는 뉴레귤린-1β-CTP 조성물을 시험관내에서 세포로 뿐만 아니라 정맥내 관류를 통해 동물에게 전달하기 위한 안정적인 제제로 제제화하는 것을 제공한다. 특정 실시양태에서, 본 발명은 제제화된 조성물을 포유동물 심근모세포 세포로 전달하고, 세포 생존능 검정법을 수행함으로써 세포 독성에 대해 모니터링하는 것을 제공한다. 특정 실시양태에서, 본 발명은 펩티드, 예를 들어, 항부정맥 모이어티-CTP 또는 뉴레귤린-1β-CTP를 포유동물 심근모세포 세포주로 전달하는 것을 제공한다. 특정 실시양태에서, 본 발명은 항부정맥 모이어티-CTP를 부정맥, 예를 들어, 심방 및/또는 심실 세동을 앓는 포유동물에게 전달하는 것을 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 또한 전달 및/또는 치료 전에, 동안, 및/또는 후에 다양한 시점에서 확장기 이완을 평가하기 위해 하나 이상의 심장 초음파 파라미터, 예를 들어, 좌심실 벽 두께, 좌심실 기능, 및/또는 승모판 유체-유입 패턴을 관찰하는 것을 포함한다. 특정 실시양태에서, 본 발명은 항부정맥 모이어티-CTP 또는 뉴레귤린-1β-CTP를, 예를 들어, 6-12주 동안 매주 정맥내로 투여하고, 혈액 화학 및/또는 조직학을 이용하여 간, 신장, CNS, 및/또는 심장 독성에 대해 평가하는 것을 제공한다.

특정 실시양태에서, 본 발명은 항부정맥 특성을 갖는 제2 모이어티에 연결/접합된 CTP를 포함하는 펩티드 조성물을 시험관내에서 세포로 뿐만 아니라 정맥내 관류를 통해 동물에게 전달하기 위한 안정적인 제제로 제제화하는 것을 제공한다. 특정 실시양태에서, 본 발명은 제제화된 조성물을 포유동물 심근모세포 세포로 전달하고, 세포 생존능 검정법을 수행함으로써 세포 독성에 대해 모니터링하는 것을 제공한다. 특정 실시양태에서, 본 발명은 항부정맥 특성을 갖는 제2 모이어티에 연결/접합된 CTP를 포함하는 펩티드를 포유동물 심근모세포 세포주로 전달하는 것을 제공한다. 특정 실시양태에서, 본 개시내용은 항부정맥 특성을 갖는 제2 모이어티에 연결/접합된 CTP를 포함하는 펩티드를 투여하는 방법으로서, 여기서 투여는 지정된 기간 동안 예를 들어, 6-12주 동안 매주 정맥내 투여로 수행되는 것인 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 방법은 혈액 화학 및/또는 조직학을 이용하여 간, 신장, CNS, 및/또는 심장 독성에 대해 평가하는 것을 추가로 포함한다.

또 다른 측면에서, 본 개시내용은 또한 뉴레귤린-1β 또는 항부정맥 특성을 갖는 모이어티에 연결/접합된 심장-특이적 표적화-펩티드 (CTP)를 포함하는 펩티드를 전달하는데 주사용으로 적합한 지속형 방출 제제 (장기-지속 제제)를 제공한다.

또 다른 측면에서, 본 개시내용은 항부정맥 특성을 갖는 모이어티에 연결/접합된 CTP를 포함하는 펩티드를 대상체에게 투여하고; 대상체를 펩티드 검출에 도움이 되는 조건에 노출시키고; 영상을 획득함으로써, 심장 조직 (예를 들어, 인간 심장 조직)을 영상화 또는 검출하는 방법을 제공한다.

실시양태에서, 본 발명은 반응성 산소 종 (ROS) 스캐빈징 특성을 갖는 제2 펩티드 서열, 단백질, 또는 소분자에 연결/접합된 Ala-Pro-Trp-His-Leu-Ser-Ser-Gln-Tyr-Ser-Arg-Thr (서열식별번호: 1)의 서열을 포함하는 12개 아미노산 심장-특이적 표적화-펩티드 (CTP_12aa)를 포함하는 펩티드를 제공한다. 일부 실시양태에서, 제2 펩티드 서열, 단백질, 또는 소분자는 CTP 펩티드의 N-말단의 상류에 접합된다. 일부 실시양태에서, 펩티드는 CTP와 제2 펩티드 서열, 단백질, 또는 소분자 사이에 에스테르 연결을 포함할 수 있고, 에스테르 연결은 오직 세포내 에스테라제에 의해서만 절단될 수 있다. ROS 스캐빈징 특성을 갖는 펩티드 서열, 단백질, 및 소분자의 예는 헴-옥시게나제 1, 레스베라트롤, N-아세틸-시스테인, N-tert-부틸-α-페닐니트론, 및 4-히드록시-2,2,6,6-테트라메틸피페리딘-1-옥실을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.

일부 실시양태에서, 펩티드는 C- 및 N-말단 둘 다에서 임의적으로 추가로 표지된다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 펩티드는 녹색 형광 모이어티, 예를 들어, 6-카르복시플루오레세인, 및 적색 형광 모이어티, 예를 들어, Cy5.5로 표지된다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 펩티드는 그의 N-말단에서 녹색 형광 모이어티로, 및 그의 C-말단에서 적색 형광 모이어티로 표지된다. 일부 실시양태에서, 펩티드는 그의 N-말단에서 적색 형광 모이어티로, 및 그의 C-말단에서 녹색 형광 모이어티로 표지된다.

본 개시내용은, 부분적으로는, 심장 세포, 예를 들어, 심근세포로의 펩티드 전달을 표적화하는 CTP를 사용하여 ROS 스캐빈징 펩티드 (예를 들어, SS-31 또는 SS-02), 단백질, 또는 소분자를 심장으로 직접적으로 전달하는 것에 기반한다. ROS 스캐빈징 펩티드는, 티로신 또는 디메틸티로신을 비롯한, 교대 방향족 및 염기성 아미노산을 함유하고, 고도로 세포 투과성인 제토-쉴러 (SS) 펩티드 (예를 들어, SS-01, SS-02, 및 SS-31)를 포함한다. SS 펩티드는 문헌 [Szeto HH, (2006) "Cell-permeable, Mitochondrial-targeted, Peptide Antioxidants" The AAPS Journal 8(2):E277-E283 (상기 문헌의 전체 내용이 본원에 참조로 포함됨)]에 기재되어 있다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 ROS 스캐빈징 펩티드 (예를 들어, SS-31 또는 SS-02), 단백질, 또는 소분자를 대상체의 심장 세포, 예를 들어, 대상체의 심근세포로 전달하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 대상체는 포유동물, 예를 들어, 영장류, 예를 들어, 인간이다. 따라서, 일부 실시양태에서, 본 발명은 ROS 스캐빈징 펩티드 (예를 들어, SS-31 또는 SS-02), 단백질, 또는 소분자를 인간 대상체의 심장 세포, 예를 들어, 인간 대상체의 심근세포로 전달하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 발명은, 예를 들어, 에스테르 연결에 의해 ROS 스캐빈징 펩티드 (예를 들어, SS-31 또는 SS-02), 단백질, 또는 소분자에 연결/접합된 CTP를 포함하는 펩티드를 대상체에게 투여함으로써, ROS 스캐빈징 펩티드 (예를 들어, SS-31 또는 SS-02), 단백질, 또는 소분자를 대상체의 심장 세포, 예를 들어, 대상체의 심근세포로 전달하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 펩티드는 CTP 연결/접합된 펩티드 서열을 코딩하는 핵산을 포함하는 세포 또는 바이러스에 의해 도입될 수 있다.

일부 측면에서, 본 발명은 세포 배양물 (예를 들어, 세포 및/또는 세포 배양 배지)을, ROS 스캐빈징 특성을 갖는 제2 펩티드 서열, 단백질, 또는 소분자에 연결/접합된 CTP를 포함하는 펩티드에 노출시킴으로써 세포 배양물에서 ROS를 스캐빈징하는 방법을 제공한다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 본 발명은 세포 배양물을, SS-31에 연결/접합된 CTP (SS-CTP-31) 또는 SS-02에 접합된 CTP (SS-CTP-02)를 포함하는 펩티드에 노출시킴으로써 세포 배양물에서 ROS를 스캐빈징하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 세포 배양물을, ROS 스캐빈징 특성을 갖는 제2 펩티드 서열, 단백질, 또는 소분자에 연결/접합된 CTP를 포함하는 펩티드에 노출시키는 것은 세포 배양물 중 하나 이상의 세포에서 펩티드를 발현시킴으로써 및/또는 바이러스 감염에 의해 달성된다.

특정 실시양태에서, 본 발명은 펩티드 조성물, 예를 들어, SS-CTP 조성물을 시험관내에서 세포로 뿐만 아니라 정맥내 관류를 통해 동물에게 전달하기 위한 안정적인 제제로 제제화하는 것을 제공한다. 특정 실시양태에서, 본 발명은 제제화된 조성물을 포유동물 심근모세포 세포로 전달하고, 세포 생존능 검정법을 수행함으로써 세포 독성에 대해 모니터링하는 것을 제공한다. 특정 실시양태에서, 본 발명은 펩티드, 예를 들어, SS-CTP를, 스트레스 인자로서 산화 스트레스로 챌린지된 포유동물 심근모세포주 (예를 들어, 과산화수소를 이용하여 산화 스트레스로 챌린지된 심근모세포 세포주)로 전달하는 것을 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 또한 씨홀스(Seahorse) 분석기 (애질런트 테크놀러지즈, 인크.(Agilent Technologies, Inc.), 미국 캘리포니아주 산타클라라)를 이용하여 기준선에서, H₂O₂를 이용한 스트레스 하에서 및 H₂O₂로 챌린지하기 전 SS-CTP로 처리된 세포에서 미토콘드리아 기능을 평가하는 것을 포함한다. 특정 실시양태에서, 본 발명은 SS-CTP를 확장기 심부전 (DHF)을 앓는 포유동물에게 전달하는 것을 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 또한 전달 및/또는 치료 전에, 동안, 및/또는 후에 다양한 시점에서 확장기 이완을 평가하기 위해 하나 이상의 심장 초음파 파라미터, 예를 들어, 좌심실 벽 두께, 좌심실 기능, 및/또는 승모판 유체-유입 패턴을 관찰하는 것을 포함한다. 특정 실시양태에서, 본 발명은 SS-CTP를, 예를 들어, 6-12주 동안 매주 정맥내로 투여하고, 혈액 화학 및/또는 조직학을 이용하여 간, 신장, CNS, 및/또는 심장 독성에 대해 평가하는 것을 제공한다.

특정 실시양태에서, 본 발명은 ROS 스캐빈징 특성을 갖는 제2 펩티드 서열, 단백질, 또는 소분자에 연결/접합된 CTP를 포함하는 펩티드 조성물을 시험관내에서 세포로 뿐만 아니라 정맥내 관류를 통해 동물에게 전달하기 위한 안정적인 제제로 제제화하는 것을 제공한다. 특정 실시양태에서, 본 발명은 제제화된 조성물을 포유동물 심근모세포 세포로 전달하고, 세포 생존능 검정법을 수행함으로써 세포 독성에 대해 모니터링하는 것을 제공한다. 특정 실시양태에서, 본 발명은 ROS 스캐빈징 특성을 갖는 제2 펩티드 서열, 단백질, 또는 소분자에 연결/접합된 CTP를 포함하는 펩티드를 스트레스 인자로서 산화 스트레스로 챌린지된 포유동물 심근모세포주 (예를 들어, 과산화수소를 이용하여 산화 스트레스로 챌린지된 심근모세포 세포주)로 전달하는 것을 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 또한 씨홀스를 이용하여 기준선에서, H₂O₂를 이용한 스트레스 하에서 및 H₂O₂로 챌린지하기 전 펩티드로 처리된 세포에서 미토콘드리아 기능을 평가하는 것을 포함한다. 특정 실시양태에서, 본 발명은 ROS 스캐빈징 특성을 갖는 제2 펩티드 서열, 단백질, 또는 소분자에 연결/접합된 CTP를 포함하는 펩티드를 확장기 심부전 (DHF)을 앓는 포유동물에게 전달하는 것을 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 또한 전달 및/또는 치료 전에, 동안, 및/또는 후에 다양한 시점에서 확장기 이완을 평가하기 위해 하나 이상의 심장 초음파 파라미터, 예를 들어, 좌심실 벽 두께, 좌심실 기능, 및/또는 승모판 유체-유입 패턴을 관찰하는 것을 포함한다. 특정 실시양태에서, 본 발명은 ROS 스캐빈징 특성을 갖는 제2 펩티드 서열, 단백질, 또는 소분자에 연결/접합된 CTP를 포함하는 펩티드를, 예를 들어, 6-12주 동안 매주 정맥내로 투여하고, 혈액 화학 및/또는 조직학을 이용하여 간, 신장, CNS, 및/또는 심장 독성에 대해 평가하는 것을 제공한다.

또 다른 측면에서, 본 개시내용은 ROS 스캐빈징 특성을 갖는 제2 펩티드 서열, 단백질, 또는 소분자에 연결/접합된 CTP를 포함하는 펩티드 (예를 들어, SS-CTP 접합체)를 대상체에게 투여하고; 대상체를 펩티드 검출에 도움이 되는 조건에 노출시키고; 영상을 획득함으로써, 심장 조직 (예를 들어, 인간 심장 조직)을 영상화 또는 검출하는 방법을 제공한다.

특정 실시양태에서, 서열식별번호: 4, 6, 7, 8, 5, 9, 10, 또는 11의 CTP_6aa는 타파진 펩티드에 연결/접합되거나, 또는 융합된다. 특정 실시양태에서, 서열식별번호: 4, 6, 7, 8, 5, 9, 10, 또는 11의 CTP_6aa는 폴리펩티드 링커를 통해 타파진 펩티드에 연결/접합되거나, 또는 융합된다. 특정 실시양태에서, 서열식별번호: 5의 CTP_6aa는 타파진 펩티드에 접합되거나, 또는 융합된다.

특정 실시양태에서, 카고의 한 구체적인 비-제한적인 예는 NF-ĸB 억제제, 예를 들어, NBD 펩티드 TALDWSWLQTE (서열식별번호: 35)이다. 카고의 한 구체적인 비-제한적인 예는 헴 옥시게나제, 예를 들어, 인간 헴 옥시게나제이다. 카고의 한 구체적인 비-제한적인 예는 유도성 산화질소 신타제 ("iNOS"), 예를 들어, 인간 iNOS이다.

특정 실시양태에서, 카고의 한 구체적인 비-제한적인 예는 S100A1 (심근 수축성의 근수축성 조절인자)이다. 카고의 한 구체적인 비-제한적인 예는 세포외 슈퍼옥시드 디스뮤타제이다. 카고의 추가의 구체적인 비-제한적인 예는 Cu/Zn-SOD, Mn-SOD, 카탈라제, 및 글루타티온 퍼옥시다제를 포함한다. 카고의 한 구체적인 비-제한적인 예는 전환 성장 인자 베타 ("TGFβ") 타입 II 수용체 (Ad.CAG-s TGFβII), TGFβ의 경쟁적 억제제이다. 카고의 한 구체적인 비-제한적인 예는 VEGF (혈관 내피 성장 인자), 예를 들어, 인간 VEGF이다. 카고의 한 구체적인 비-제한적인 예는 섬유모세포 성장 인자 (FGF), 예를 들어, 인간 FGF-1 또는 FGF-2이다. 카고의 한 구체적인 비-제한적인 예는 간세포 성장 인자 ("HGF")가 있다. 한 세트의 카고의 비-제한적인 예는 아폽토시스 억제제, 예컨대, 소위 아폽토시스의 억제제 ("IAP")로 불리는 것 중 하나, 예를 들어, 인간 IAPs c-IAP1, c-IAP2, 및 XIAP이다. 카고의 한 구체적인 비-제한적인 예는 소닉 헤지호그 단백질이다. 카고의 한 구체적인 비-제한적인 예는 글루코세레브로시다제, 예를 들어, 고셔병 치료에 사용되는 인간 글루코세레브로시다제이다. 카고의 한 구체적인 비-제한적인 예는 TGFβ의 발현을 억제하는 RNAi이다.

또 다른 세트의 비-제한적인 실시양태에서, 카고는 진단제 또는 치료제를 함유하는 나노입자 또는 마이크로구체이다. 또 다른 세트의 비-제한적인 실시양태에서, 카고는 치료적 유전자를 포함하는 벡터, 예를 들어, 아데노바이러스 벡터 또는 렌티바이러스 벡터이다. 또 다른 세트의 비-제한적인 실시양태에서, 카고는 허혈성 손상 후 생존가능한 심장 세포 대 비-생존가능한 세포에서의 흡수 분석을 위한 검출가능한 화합물이다. 검출가능한 화합물의 비-제한적인 예는 플루오로데옥시글루코스, 테크네튬-99 또는 다른 방사성동위원소-표지된 카고, 형광 마커, 가돌리늄 마커 등을 포함한다. 방사성동위원소-표지된 카고의 한 비-제한적인 예는 리간드 메톡시이소부틸이소니트릴 ("MIBI")과 방사성동위원소 테크네튬-99m의 배위 착물인 세스타미비(Sestamibi)이다.

III. 링커

서열식별번호: 1-35 중 어느 하나, 예를 들어, 서열식별번호: 1, 2, 또는 5의 CTP, 및 카고는 임의적으로, 하나 이상의 링커 분자를 통해 공유적으로 또는 비공유적으로 연결된다. 결합이 공유 결합인 경우, 임의적으로, 그 사이에 링커(들)를 포함하는 서열식별번호: 1-35 중 어느 하나의 CTP 및 카고는 관련 기술분야에 일반적으로 및 널리 공지된 방법에 따라 생성될 수 있는 하나 이상의 펩티드 결합, 티오에스테르 결합, 티오에테르 결합, 카르바메이트 결합 등을 통해 연결될 수 있다.

특정 실시양태에서, 링커는 효소적 또는 화학적 절단 시 그의 카고로부터 서열식별번호: 1-35 중 어느 하나, 예를 들어, 서열식별번호: 5의 CTP를 유리시킬 수 있는 절단 부위를 포함할 수 있다. 특정의 비-제한적인 실시양태에서, 링커는 리간드 쌍일 수 있다. 한 구체적인 예로서, 링커는 아비딘/비오틴 쌍일 수 있다.

따라서, 본 발명은 카고에 연결된, 서열식별번호: 1-35 중 어느 하나, 예를 들어, 서열식별번호: 1, 2, 또는 5의 CTP를 포함하는 복합체를 제공한다. 복합체는 추가적인 요소를 포함할 수 있다. 예를 들어, 서열식별번호: 1-35 중 어느 하나, 예를 들어, 서열식별번호: 1, 2, 또는 5의 CTP, 및/또는 카고는 전달 또는 안정성을 개선시키는 하나 이상의 추가적인 분자에 접합될 수 있다. 한 비-제한적인 예로서, 서열식별번호: 1-35 중 어느 하나, 예를 들어, 서열식별번호: 1, 2, 또는 5의 CTP, 및/또는 카고는 PEG화될 수 있다. 또 다른 비-제한적인 예로서, 카고는 핵 수송 펩티드에 연결될 수 있다. 또 다른 비-제한적인 예로서, 카고는 검출가능한 화합물에 연결될 수 있다.

IV. 카고 를 도입하는 방법

또 다른 측면에서, 본 개시내용은 카고를 심장 조직 내로 도입하는 방법으로서, 카고 분자에 연결된 서열식별번호: 1-35 중 어느 하나, 예를 들어, 서열식별번호: 1, 2, 또는 5의 CTP를 포함하는 복합체를 심장 조직에 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공한다.

본 개시내용은 카고를 심장 근육 세포 내로 도입하는 방법으로서, 카고 분자에 연결된 서열식별번호: 1-35 중 어느 하나, 예를 들어, 서열식별번호: 1, 2, 또는 5의 CTP를 포함하는 복합체를 심장 근육 세포에 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공한다. 예를 들어, 본 개시내용은 카고를 심장 근육 세포 내로 도입하는 방법으로서, 심장 근육 세포에, 카고를 심장 근육 세포 내로 도입하는데 효과적인, 카고에 연결된 서열식별번호: 1-35 중 어느 하나, 예를 들어, 서열식별번호: 1, 2, 또는 5의 CTP를 포함하는 복합체의 소정량을 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공한다. 특정 실시양태에서, 카고는 방사성동위원소, 형광 마커, 가돌리늄 마커, 루시페라제 마커, 마이크로구체 또는 나노입자를 포함한다.

본 개시내용은 대상체에서 카고를 심장 조직으로 선택적으로 전달하는 방법으로서, 카고에 연결된 서열식별번호: 1-35 중 어느 하나, 예를 들어, 서열식별번호: 1, 2, 또는 5의 CTP를 포함하는 복합체를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공한다. 본 개시내용은 대상체에서 카고를 심장 근육 세포로 선택적으로 전달하는 방법으로서, 카고에 연결된 서열식별번호: 1-35 중 어느 하나, 예를 들어, 서열식별번호: 1, 2, 또는 5의 CTP를 포함하는 복합체를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공한다.

또 다른 측면에서, 본 개시내용은 검출가능한 카고를 심장 근육 세포 내로 도입하는 방법으로서, 심장 근육 세포에, 카고를 심장 근육 세포 내로 도입하는데 효과적인, 카고에 연결된 서열식별번호: 1-35 중 어느 하나, 예를 들어, 서열식별번호: 5의 CTP를 포함하는 복합체의 소정량을 투여하는 것을 포함하며, 여기서 카고는 검출가능한 화합물을 포함하는 것인 방법을 제공한다. 특정 실시양태에서, 검출가능한 화합물은 검출가능한 방사성동위원소, 형광 마커, 가돌리늄 마커, 또는 루시페라제 마커를 포함한다.

V. 사용 방법

한 측면에서, 본 개시내용은 심장 조직 또는 심장 병태의 치료를 필요로 하는 대상체에서 심장 조직 또는 심장 병태를 치료하는 방법으로서, 대상체에게 심장 질환 및/또는 병태의 치료용 치료제에 연결된, 서열식별번호: 1-35 중 어느 하나, 예를 들어, 서열식별번호: 1, 2, 또는 5의 CTP를 포함하는 조성물의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공한다.

특정 실시양태에서, 본 개시내용은 항부정맥 특성을 갖는 모이어티를 심장 근육 세포 내로 도입하는 방법으로서, 심장 근육 세포에 항부정맥 특성을 갖는 모이어티, 예를 들어, 아미오다론에 접합된, APWHLSSQYSRT (서열식별번호: 1)의 서열을 포함하는 CTP_12aa, SQYSRT (서열식별번호: 5)의 서열을 갖는 CTP_6aa, 또는 AAWHLSSQYSRT (서열식별번호: 2 (CTP-P2A))의 서열을 갖는 CTP_12aa를 항부정맥 특성을 갖는 모이어티를 심장 근육 세포 내로 도입하는데 효과적인 양으로 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공한다. 특정 실시양태에서, 펩티드는 마이크로구체 또는 나노입자를 추가로 포함한다.

특정 실시양태에서, 본 개시내용은 심방 및/또는 심실 부정맥을 앓는 인간 대상체를 치료하는 방법으로서, 인간 대상체에게 항부정맥 특성을 갖는 모이어티, 예를 들어, 아미오다론에 접합된, APWHLSSQYSRT (서열식별번호: 1)의 서열을 포함하는 CTP_12aa, SQYSRT (서열식별번호: 5)의 서열을 갖는 CTP_6aa, 또는 AAWHLSSQYSRT (서열식별번호: 2 (CTP-P2A))의 서열을 갖는 CTP_12aa를 투여함으로써 카고를 인간 대상체의 심장 근육 세포 내로 도입하는 것을 포함하는 방법을 제공한다. 특정 실시양태에서, 본 개시내용은 인간 대상체에게 항부정맥 특성을 갖는 모이어티, 예를 들어, 아미오다론에 접합된, APWHLSSQYSRT (서열식별번호: 1)의 서열을 포함하는 CTP_12aa, SQYSRT (서열식별번호: 5)의 서열을 갖는 CTP_6aa, 또는 AAWHLSSQYSRT (서열식별번호: 2 (CTP-P2A))의 서열을 갖는 CTP_12aa를 투여함으로써 조기 심실 수축, 심실 빈맥, 및 심실 세동으로부터 선택되는 심실 부정맥을 치료하는 방법을 제공한다.

특정 실시양태에서, 본 개시내용은 SHF를 앓는 인간 대상체를 치료하는 방법으로서, 인간 대상체에게 뉴레귤린-1β에 접합된, APWHLSSQYSRT (서열식별번호: 1)의 서열을 포함하는 CTP_12aa, SQYSRT (서열식별번호: 5)의 서열을 갖는 CTP_6aa, 또는 AAWHLSSQYSRT (서열식별번호: 2 (CTP-P2A))의 서열을 갖는 CTP_12aa를 투여함으로써 카고를 인간 대상체의 심장 근육 세포 내로 도입하는 것을 포함하는 방법을 제공한다.

특정 실시양태에서, 본 개시내용은 대상체에게, 예를 들어, 서열식별번호: 1, 2, 4, 또는 5를 포함하는 CTP의 접합체 (예를 들어, 항부정맥제-CTP 또는 뉴레귤린-1β-CTP)를 투여하고, 평면 또는 SPECT 영상화를 통해 접합체의 대상체의 심장으로의 전달을 모니터링함으로써 대상체의 심근 관류 분석을 수행하는 방법을 제공한다.

특정 실시양태에서, 본 개시내용은 심장 조직을 영상화 또는 검출하는 방법으로서, 대상체에게, 예를 들어, 서열식별번호: 1을 포함하는 CTP의 접합체 (예를 들어, 항부정맥제-CTP 또는 뉴레귤린-1β-CTP)를 투여하고; 대상체를 CTP 접합체의 검출에 도움이 되는 조건에 노출시키고; 영상을 획득하는 것을 포함하는 방법을 제공한다. 본 측면에서, 항부정맥제-CTP는 검출가능한 모이어티를 임의적으로 추가로 포함한다. 특정 실시양태에서, 항부정맥제-CTP는 검출가능한 모이어티를 추가로 포함한다.

예를 들어, 서열식별번호: 1을 포함하는 CTP의 접합체 (예를 들어, 항부정맥제-CTP 또는 뉴레귤린-1β-CTP)를 대상체에게 투여하는 경우, 대상체는 인간 대상체 또는 비-인간 대상체, 예컨대 영장류, 애완 동물 (예를 들어, 개, 고양이, 말), 실험실용 동물 (예를 들어, 마우스, 래트, 토끼 또는 기니아 피그) 또는 가축 (소, 염소 등)일 수 있다.

예를 들어, 서열식별번호: 1, 2, 4, 또는 5를 포함하는 CTP의 접합체 (예를 들어, 항부정맥제-CTP 또는 뉴레귤린-1β-CTP)는 정맥내, 심방내, 복강내, 피하, 경구, 직장 등을 포함하나 이에 제한되지는 않는 임의의 경로에 의해 투여될 수 있다.

본 개시내용은 치료제에 연결된, 예를 들어, 서열식별번호: 1, 2, 4, 또는 5를 포함하는 CTP (예를 들어, 항부정맥제-CTP 또는 뉴레귤린-1β-CTP), 및 적합한 제약 담체, 예를 들어, 물 또는 생리 염수를 포함하는 제약 조성물을 제공한다.

본원에 개시된 서열식별번호: 1-35 중 어느 하나, 예를 들어, 서열식별번호: 1, 2, 또는 5의 CTP를 사용하여 대상체에서 심장 조직 또는 근육과 연관된 다양한 질환 또는 장애를 치료할 수 있다. 특정 실시양태에서, 본 방법은 개시된 서열식별번호: 1-35 중 어느 하나, 예를 들어, 서열식별번호: 1, 2, 또는 5의 CTP의 유효량을 단독으로, 또는 또 다른 치료제와 함께 조합하여 대상체에게 경구적으로 투여하여 대상체에서 질환 또는 장애를 치료하는 것을 포함한다.

특정 실시양태에서, 서열식별번호: 1-35 중 어느 하나, 예를 들어, 서열식별번호: 1, 2, 또는 5의 CTP는 타파진 펩티드에 접합되거나 또는 융합된다. 특정 실시양태에서, 서열식별번호: 1-35 중 어느 하나, 예를 들어, 서열식별번호: 1, 2, 또는 5의 CTP는 폴리펩티드 링커를 통해 타파진 펩티드에 접합되거나 또는 융합된다.

또 다른 측면에서, 본 개시내용은 타파진 결핍 또는 리모델링된 카디오리핀 결핍과 연관된 장애를 앓는 대상체를 치료하는 방법으로서, 대상체에게 타파진-접합된 서열식별번호: 1-35 중 어느 하나, 예를 들어, 서열식별번호: 1, 2, 또는 5의 CTP를 포함하는 조성물의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공한다. 특정 실시양태에서, 서열식별번호: 5의 타파진-접합된 CTP_6aa는 타파진 결핍 또는 리모델링된 카디오리핀 결핍과 연관된 장애를 앓는 대상체를 치료하는데 사용된다.

또 다른 측면에서, 본 개시내용은 바르트 증후군을 앓거나, 또는 그를 발병할 위험이 있는 대상체를 치료하는 방법으로서, 대상체에게 타파진-접합된 서열식별번호: 1-35 중 어느 하나, 예를 들어, 서열식별번호: 5의 CTP를 포함하는 조성물의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공한다.

특정 실시양태에서, 본 개시내용은 바르트 증후군을 앓거나, 또는 그를 발병할 위험이 있는 대상체를 치료하는 방법으로서, 대상체에게 타파진-접합된 서열식별번호: 4, 6, 7, 8, 5, 9, 10, 또는 11의 CTP_6aa를 포함하는 조성물의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공한다. 특정 실시양태에서, 타파진-접합된 서열식별번호: 5의 CTP_6aa는 바르트 증후군을 앓거나, 또는 그를 발병할 위험이 있는 대상체를 치료하기 위해 사용된다.

한 측면에서, 본 개시내용은 심장 조직 또는 심장 병태의 치료를 필요로 하는 대상체에서 심장 조직 또는 심장 병태를 치료하는 방법으로서, 대상체에게 항부정맥 특성을 갖는 모이어티, 예를 들어, 아미오다론에 연결된 나노입자-접합된 서열식별번호: 1-35 중 어느 하나의 CTP를 포함하는 조성물의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공한다. 특정 실시양태에서, 서열식별번호: 1, 2, 또는 5의 CTP는 심장 조직 또는 심장 병태의 치료를 필요로 하는 대상체에서 심장 조직 또는 심장 병태를 치료하는데 사용되며, 이는 대상체에게 항부정맥 특성을 갖는 모이어티, 예를 들어, 아미오다론에 연결된, 나노입자-접합된, 서열식별번호: 1, 2, 또는 5의 CTP를 포함하는 조성물의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함한다.

또 다른 측면에서, 본 개시내용은 심근 경색을 앓는 인간 대상체를 치료하는 방법으로서, 인간 대상체에게 카고에 연결된 서열식별번호: 1-35 중 어느 하나, 예를 들어, 서열식별번호: 5의 CTP를 포함하는 복합체의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함하여 카고를 인간 대상체의 심장 근육 세포 내로 도입하는 것을 포함하며, 여기서 카고는 세포 사멸을 억제하거나, 부정맥을 억제하거나, 수축성을 개선시키거나, 대상체 생존을 연장시키거나, 또는 그의 조합인 방법을 제공한다. 특정 실시양태에서, 카고는 NF-ĸB 억제제, NSD 펩티드, 헴 옥시게나제, 항산화제, iNOS, S100A1, 슈퍼옥시드 디스뮤타제, 카탈라제, 글루타티온 퍼옥시다제, TGFβ 억제제, VEGF, FGF-1, FGF-2, 소닉 헤지호그 단백질, HGF 및 IAP로부터 선택된다.

또 다른 측면에서, 본 개시내용은 심장을 손상시키는 대사 결함을 앓는 대상체를 치료하는 방법으로서, 대상체에게 카고에 연결된 서열식별번호: 1-35 중 어느 하나, 예를 들어, 서열식별번호: 5의 CTP를 포함하는 복합체의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함하여 카고를 인간 대상체의 심장 근육 세포 내로 도입하는 것을 포함하며, 여기서 카고는 대사 결함을 교정하는 것인 방법을 제공한다. 특정 실시양태에서, 대사 결함은 고셔병이고, 카고는 글루코세레브로시다제이다.

본 개시내용은 심근 경색을 앓는 대상체를 치료하는 방법으로서, 대상체에게 카고에 연결된 서열식별번호: 1-35 중 어느 하나, 예를 들어, 서열식별번호: 5의 CTP를 포함하는 복합체의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함하며, 여기서 카고 (카고의 생물학적 기능을 의미함)는 세포 사멸을 억제하거나, 부정맥을 억제하거나, 수축성을 개선시키거나, 대상체 생존을 연장시키거나, 또는 그의 조합인 방법을 제공한다.

본 개시내용은 협심증을 앓는 대상체를 치료하는 방법으로서, 대상체에게 카고에 연결된 서열식별번호: 1-35 중 어느 하나, 예를 들어, 서열식별번호: 5의 CTP를 포함하는 복합체의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함하며, 여기서 카고는 심근 경색의 위험을 감소시키거나, 세포 사멸을 억제하거나, 부정맥을 제한하거나, 수축성을 개선시키거나, 대상체 생존을 연장시키거나, 또는 그의 조합인 방법을 제공한다.

심근 경색 및/또는 협심증을 치료하는데 사용될 수 있는 카고의 비-제한적인 예는 NF-ĸB 억제제, NBD 펩티드, 헴 옥시게나제, 항산화제, iNOS, S100A1, 슈퍼옥시드 디스뮤타제, 카탈라제, 글루타티온 퍼옥시다제, TGFβ 억제제, VEGF, 소닉 헤지호그 단백질, FGF-1, FGF-2, HGF, 및 IAP를 포함한다.

본 개시내용은 심장을 손상시키는 대사 결함을 앓는 대상체를 치료하는 방법으로서, 대상체에게 카고에 연결된 서열식별번호: 1-35 중 어느 하나, 예를 들어, 서열식별번호: 5의 CTP를 포함하는 복합체의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함하며, 여기서 카고는 대사 결함을 교정하는 것인 방법을 제공한다.

본 개시내용은 고셔병을 앓는 대상체를 치료하는 방법으로서, 대상체에게 글루코세레브로시다제에 연결된 서열식별번호: 1-35 중 어느 하나, 예를 들어, 서열식별번호: 5의 CTP를 포함하는 복합체의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공한다.

서열식별번호: 1-35 중 어느 하나, 예를 들어, 서열식별번호: 5의 CTP/카고 복합체가 대상체에게 투여되는 경우, 대상체는 인간 대상체 또는 비-인간 대상체, 예컨대 영장류, 애완 동물 (예를 들어, 개, 고양이, 말), 실험실용 동물 (예를 들어, 마우스, 래트, 토끼 또는 기니아 피그) 또는 가축 (소, 염소 등)일 수 있다.

서열식별번호: 1-35 중 어느 하나, 예를 들어, 서열식별번호: 5의 CTP-카고 복합체는 정맥내, 동맥내, 복강내, 피하, 경구, 직장 등을 포함하나 이에 제한되지는 않는 임의의 경로에 의해 투여될 수 있다.

본 개시내용은 서열식별번호: 1-35 중 어느 하나, 예를 들어, 서열식별번호: 5의 CTP-카고, 및 적합한 제약 담체, 예를 들어, 물, 생리 염수를 포함하는 제약 조성물을 제공한다.

한 측면에서, 본 개시내용은 심방 및/또는 심실 부정맥을 앓는 인간 대상체를 치료하는 방법으로서, 인간 대상체에게 항부정맥 특성을 갖는 모이어티, 예를 들어, 아미오다론에 접합된, APWHLSSQYSRT (서열식별번호: 1)의 서열을 포함하는 CTP_12aa, SQYSRT (서열식별번호: 5)의 서열을 갖는 CTP_6aa, 또는 AAWHLSSQYSRT (서열식별번호: 2 (CTP-P2A))의 서열을 갖는 CTP_12aa를 투여함으로써 카고를 인간 대상체의 심장 근육 세포 내로 도입하는 것을 포함하는 방법을 제공한다. 특정 실시양태에서, 본 개시내용은 인간 대상체에게 항부정맥 특성을 갖는 모이어티, 예를 들어, 아미오다론에 접합된, APWHLSSQYSRT (서열식별번호: 1)의 서열을 포함하는 CTP_12aa, SQYSRT (서열식별번호: 5)의 서열을 갖는 CTP_6aa, 또는 AAWHLSSQYSRT (서열식별번호: 2 (CTP-P2A))의 서열을 갖는 CTP_12aa를 투여함으로써 조기 심실 수축, 심실 빈맥, 및 심실 세동으로부터 선택되는 심실 부정맥을 치료하는 방법을 제공한다.

한 측면에서, 본 개시내용은 SHF를 앓는 인간 대상체를 치료하는 방법으로서, 인간 대상체에게 뉴레귤린-1β에 접합된, APWHLSSQYSRT (서열식별번호: 1)의 서열을 포함하는 CTP_12aa, SQYSRT (서열식별번호: 5)의 서열을 갖는 CTP_6aa, 또는 AAWHLSSQYSRT (서열식별번호: 2 (CTP-P2A))의 서열을 갖는 CTP_12aa를 투여함으로써 카고를 인간 대상체의 심장 근육 세포 내로 도입하는 것을 포함하는 방법을 제공한다.

한 측면에서, 본 개시내용은 대상체에게, 예를 들어, 서열식별번호: 1, 2, 4, 또는 5를 포함하는 CTP의 접합체 (예를 들어, 항부정맥제-CTP 또는 뉴레귤린-1β-CTP)를 투여하고, 평면 또는 SPECT 영상화를 통해 접합체의 대상체의 심장으로의 전달을 모니터링함으로써 대상체의 심근 관류 분석을 수행하는 방법을 제공한다.

또 다른 측면에서, 본 개시내용은 심장 조직을 영상화 또는 검출하는 방법으로서, 대상체에게, 예를 들어, 서열식별번호: 1을 포함하는 CTP의 접합체 (예를 들어, 항부정맥제-CTP 또는 뉴레귤린-1β-CTP)를 투여하고; 대상체를 CTP 접합체의 검출에 도움이 되는 조건에 노출시키고; 영상을 획득하는 것을 포함하는 방법을 제공한다. 본 측면에서, 항부정맥제-CTP는 검출가능한 모이어티를 임의적으로 추가로 포함한다.

본 개시내용은, 예를 들어, 서열식별번호: 1, 2, 4, 또는 5를 포함하는 CTP의 접합체 (예를 들어, 항부정맥제-CTP 또는 뉴레귤린-1β-CTP), 및 적합한 제약 담체, 예를 들어, 물 또는 생리 염수를 포함하는 제약 조성물을 제공한다.

VI. 제약 조성물

치료적 사용을 위해, 본원에 기재된, 치료제 (예를 들어, 아미오다론)에 연결된, 서열식별번호: 1-35 중 어느 하나, 예를 들어, 서열식별번호: 5의 CTP는 바람직하게는 제약상 허용되는 담체와 조합된다. 본원에 사용된 바와 같이, 용어 "제약상 허용되는"은 타당한 의학적 판단의 범주에서, 과도한 독성, 자극, 알레르기 반응, 또는 다른 문제 또는 합병증 없이, 합리적인 이익/위험 비에 알맞게 인간 및 동물의 조직과의 접촉 사용에 적합한, 상기 화합물, 물질, 조성물, 및/또는 투여 형태를 지칭한다.

본원에 사용된 바와 같이, 용어 "제약상 허용되는 담체"는 과도한 독성, 자극, 알레르기 반응, 또는 다른 문제 또는 합병증 없이, 합리적인 이익/위험 비에 알맞게 인간 및 동물의 조직과의 접촉 사용에 적합한, 완충제, 담체, 및 부형제를 지칭한다. 제약상 허용되는 담체는 표준 제약 담체 중 임의의 것, 예컨대 포스페이트 완충처리된 염수 용액, 물, 에멀젼 (예를 들어, 예컨대, 오일/물 또는 물/오일 에멀젼), 및 각종 유형의 습윤화제를 포함한다. 조성물은 또한 안정화제 및 보존제를 포함할 수 있다. 담체, 안정화제 및 아주반트의 예에 대해서는, 예를 들어, 문헌 [Martin, Remington's Pharmaceutical Sciences, 15th Ed., Mack Publ. Co., Easton, PA [1975]]를 참조한다. 제약상 허용되는 담체는 제약 투여와 상용성인 완충제, 용매, 분산 매질, 코팅제, 등장화제 및 흡수 지연제 등을 포함한다. 제약상 활성인 물질을 위한 이러한 매질 및 작용제 사용은 관련 기술분야에 공지되어 있다.

특정 실시양태에서, 치료제 (예를 들어, 아미오다론)에 연결된, 서열식별번호: 1-35 중 어느 하나, 예를 들어, 서열식별번호: 5의 CTP는, 예를 들어, 산성 환경에서, 예를 들어, 위장관내에서 서열식별번호: 1-35 중 어느 하나, 예를 들어, 서열식별번호: 5의 CTP의 안정성을 증진시키기 위해, pH 증가제, 예를 들어, 단백질 펌프 억제제 (PPI)와 함께 제제화되거나, 또는 예를 들어, 소화관내 경로에 의해 (예를 들어, 경구적으로) (동시에 또는 순차적으로) 공동-투여될 수 있다.

양성자 펌프 억제제는 그의 주요 작용이 위산 생산의 명백하고 장기-지속적 감소인 약물 군이다. 양성자 펌프 억제제는 위벽 세포의 수소/칼륨 아데노신 트리포스파타제 효소 시스템 (H⁺/K⁺ ATPase, 또는 더욱 일반적으로는 바로 위 양성자 펌프라고 하는 것)을 차단함으로써 작용한다. 양성자 펌프는 위산 분비에서 최종 스테이지로서, H⁺ 이온의 위 내강 내로의 분비를 직접적으로 담당하는데, 이는 산 분지를 억제함에 있어서 이상적인 표적이 된다. 양성자 펌프 억제제의 예는 오메프라졸(Omeprazole) (상표명: 로섹(LOSEC)^®, 프리로섹(PRILOSEC)^®, 제게리드(ZEGERID)^®); 란소프라졸(Lansoprazole) (상표명: 프레바시드(PREVACID)^®, 조톤(ZOTON)^®, 인히비톨(INHIBITOL)^®); 에스오메프라졸(Esomeprazole) (상표명: 넥시움(NEXIUM)^®); 및 판토프라졸(Pantoprazole) (상표명: 프로토닉스(PROTONIX)^®, 소막(SOMAC)^®, 판토록(PANTOLOC)^®)을 포함한다.

본원에 개시된, 치료제 (예를 들어, 아미오다론)에 연결된 서열식별번호: 1-35 중 어느 하나, 예를 들어, 서열식별번호: 5의 CTP를 함유하는 제약 조성물은 투여 단위 형태로 제공될 수 있고, 임의의 적합한 방법에 의해 제조될 수 있다. 제약 조성물은 그의 의도된 투여 경로와 상용성을 가져야 한다. 제약 조성물은 다양한 형태로 존재할 수 있다. 이들은, 예를 들어, 액체, 반-고체, 및 고체 투여 형태, 예컨대 액체 액제 (예를 들어, 주사용 및 주입용 액제), 분산제 또는 현탁제, 정제, 환제, 분제, 리포솜 및 좌제를 포함한다. 바람직한 형태는 의도된 투여 모드 및 치료적 적용에 의존할 것이다.

비록 조성물이 소화관내 (예를 들어, 경구) 투여용으로 제제화되지만, 이러한 조성물은 비경구적 모드 (예를 들어, 정맥내, 피하, 복강내, 또는 근육내 주사)에 의해 투여될 수 있다. 본원에 사용된 바와 같이, 어구 "비경구적 투여" 및 "비경구적으로 투여되는"은 소화관내 및 국소 투여 이외의 다른 투여 모드로서, 보통은 주사에 의해 이루어지는 것을 의미하고, 제한 없이, 정맥내, 근육내, 동맥내, 경막내, 피막내, 안와내, 심장내, 진피내, 복강내, 경기관, 피하, 피부하, 관절내, 피막하, 지주막하, 척수내, 경막외 및 흉골하 주사 및 주입을 포함한다.

조성물은 액제, 마이크로에멀젼, 분산제, 리포솜, 또는 고농도로 안정적으로 보관하는데 적합한 다른 질서정연한 구조로 제제화될 수 있다. 멸균 주사용 액제는 적절한 용매 중에 필요한 양의 본원에 기재된 작용제를 필요에 따라, 상기 열거된 성분 중 하나 또는 그의 조합과 함께 혼입시킨 후, 여과 멸균함으로써 제조될 수 있다. 일반적으로, 분산제는 본원에 기재된 작용제를, 기초 분산 매질 및 상기 열거된 것으로부터의 필요한 다른 성분을 함유하는 멸균 비히클 내로 혼입시킴으로써 제조된다. 멸균 주사용 액제 제조를 위한 멸균 분제의 경우, 바람직한 제조 방법은 진공 건조 및 냉동 건조시켜 이전의 그의 멸균 여과된 액제로부터 본원에 기재된 작용제와 임의의 추가적인 원하는 성분으로 이루어진 분제를 수득하는 것이다. 액제의 적절한 유동성은, 예를 들어, 코팅제, 예컨대 레시틴을 사용함으로써, 분산제인 경우, 필요한 입자 크기를 유지시킴으로써, 및 계면활성제를 사용함으로써 유지될 수 있다. 흡수 지연제, 예를 들어, 모노스테아레이트 염 및 젤라틴을 조성물 중에 포함시킴으로써 주사용 조성물을 장기간 동안 흡수시킬 수 있다.

투여 모드에 따라, 예를 들어, 비경구적 투여인 경우, 멸균 제약 제제를 제조하는 것이 바람직할 수 있다. 멸균은 임의의 적합한 방법, 예를 들어, 멸균 여과 막을 통한 여과에 의해 달성될 수 있다. 조성물이 동결건조되는 경우, 필터 멸균은 동결건조 및 재구성 전에 또는 후에 수행될 수 있다.

특정 실시양태에서, 개시된 조성물은, 예를 들어, 치료제 (예를 들어, 아미오다론)에 연결된, 서열식별번호: 1-35 중 어느 하나, 예를 들어, 서열식별번호: 5의 CTP를 코팅할 수 있는 다가이온성 시약을 포함하고, 즉, 조성물은 다가이온성 코팅제를 포함한다. 예시적인 다가이온성 시약은 PSS (폴리(소듐 4-스티렌술포네이트), PAA (폴리 아크릴산 나트륨 염), PMG (폴리(메틸렌-코-구아니딘) 히드로클로라이드), DS (덱스트란 술페이트), PMA (폴리(메틸 아크릴레이트)), 또는 PVS (폴리비닐실록산)를 포함한다.

동결건조된 제제

본 개시내용의 치료 방법에서 사용하기 위한 동결건조된 제제는 약물 또는 치료제 (예를 들어, 아미오다론) 및 동결건조보호제에 연결된 심장-특이적 표적화-펩티드 (CTP) (예를 들어, 서열식별번호: 1-35 중 어느 하나)를 포함한다. 특정 실시양태에서, 본 개시내용의 치료 방법에서 사용하기 위한 동결건조된 제제는 약물 또는 치료제 (예를 들어, 아미오다론) 및 동결건조보호제에 연결된 서열식별번호: 1의 CTP_12aa를 포함한다. 특정 실시양태에서, 본 개시내용의 치료 방법에서 사용하기 위한 동결건조된 제제는 약물 또는 치료제 (예를 들어, 아미오다론) 및 동결건조보호제에 연결된 서열식별번호: 2의 CTP_12aa를 포함한다. 특정 실시양태에서, 본 개시내용의 치료 방법에서 사용하기 위한 동결건조된 제제는 약물 또는 치료제 (예를 들어, 아미오다론) 및 동결건조보호제에 연결된 서열식별번호: 5의 CTP_6aa를 포함한다. 특정 실시양태에서, 동결건조보호제는 당, 예를 들어, 디사카라이드일 수 있다. 특정 실시양태에서, 동결건조보호제는 수크로스 또는 말토스일 수 있다. 특정 실시양태에서, 동결건조된 제제는 또한 완충화제, 계면활성제, 벌크화제 및/또는 보존제 중 하나 이상을 포함할 수 있다.

동결건조된 약물 제품의 안정화에 유용한 수크로스 또는 말토스의 양은 단백질 대 수크로스 또는 말토스 중량비 적어도 1:2일 수 있다. 특정 실시양태에서, 단백질 대 수크로스 또는 말토스 중량비는 1:2 내지 1:5일 수 있다.

특정 실시양태에서, 동결건조 전 제제의 pH는 제약상 허용되는 산 및/또는 염기 첨가에 의해 설정될 수 있다. 특정 실시양태에서, 제약상 허용되는 산은 염산일 수 있다. 특정 실시양태에서, 제약상 허용되는 염기는 수산화나트륨일 수 있다.

동결건조 전, 본 개시내용의 단백질을 함유하는 용액의 pH는 약 6 내지 약 8로 조정될 수 있다. 특정 실시양태에서, 동결건조된 약물 제품의 pH 범위는 약 7 내지 약 8일 수 있다.

특정 실시양태에서, 염 또는 완충제 성분은 약 10 mM - 약 200 mM 양으로 첨가될 수 있다. 염 또는 완충제는 제약상 허용되는 것이고, "염기 형성" 금속 또는 아민과 각종의 공지된 산 (무기산 및 유기산)으로부터 유도된 것이다. 특정 실시양태에서, 완충제는 포스페이트 완충제일 수 있다. 특정 실시양태에서, 완충제는 글리시네이트, 카르보네이트, 시트레이트 완충제일 수 있고, 이러한 경우, 나트륨, 칼륨, 또는 암모늄 이온은 반대이온으로서 작용할 수 있다.

특정 실시양태에서, "벌크화제"가 첨가될 수 있다. "벌크화제"는 동결건조된 혼합물에 질량을 가하고, 동결건조된 케이크의 물리적 구조에 기여하는 (예를 들어, 개방 기공 구조를 유지하는 본질적으로 균일한 동결건조된 케이크의 생산을 촉진시키는) 화합물이다. 예시적인 벌크화제는 만닛톨, 글리신, 폴리에틸렌 글리콜 및 소르비톨을 포함한다. 본 개시내용의 동결건조된 제제는 이러한 벌크화제를 함유할 수 있다.

박테리아 작용을 감소시키기 위해 본원의 제제에 보존제를 임의적으로 첨가할 수 있다. 보존제 첨가는, 예를 들어, 다회-사용 (다중-투약) 제제의 생산을 촉진시킬 수 있다.

특정 실시양태에서, 본 개시내용의 치료 방법에서 사용하기 위한 동결건조된 약물 제품은 수성 담체로 구성될 수 있다. 본원의 관심 수성 담체는 제약상 허용되고 (예를 들어, 인간에게 투여하는데 안전하고, 비독성이고), 동결건조 후, 액체 제제의 제조에 유용한 것이다. 예시적인 희석제는 멸균 주사용수 (SWFI), 정균 주사용수 (BWFI), pH 완충처리된 용액 (예를 들어, 포스페이트-완충처리된 염수), 멸균 염수 용액, 링거 용액 또는 덱스트로스 용액을 포함한다.

특정 실시양태에서, 본 개시내용의 동결건조된 약물 제품은 멸균 주사용수, USP (SWFI) 또는 0.9% 염화나트륨 주사액, USP으로 재구성된다. 재구성 동안, 동결건조된 분제는 용액 내로 용해된다.

특정 실시양태에서, 본 개시내용의 동결건조된 단백질 제품은 약 4.5 mL 주사용수로 구성되고, 0.9% 염수 용액 (염화나트륨 용액)으로 희석된다.

액체 제제

실시양태에서, 본 개시내용의 약물 또는 치료제 (예를 들어, 아미오다론)에 연결된 심장-특이적 표적화-펩티드 (CTP) (예를 들어, 서열식별번호: 1-35 중 어느 하나)는 본원에 기재된 치료 방법에서 사용하기 위한 액체 제제로 제제화된다. 액체 제제는 10 mg/mL 농도로, 고무 마개로 막고, 알루미늄 크림프 실 클로우저로 실링된 USP / Ph Eur 타입 I 50R 바이알로 제공될 수 있다. 마개는 USP 및 Ph Eur에 준하는 엘라스토머로 제조될 수 있다. 특정 실시양태에서, 바이알은 추출가능한 부피를 허용하기 위해 약물 또는 치료제 용액에 접합된 CTP의 유효량으로 충전될 수 있다. 특정 실시양태에서, 액체 제제는 0.9% 염수 용액로 희석될 수 있다.

특정 실시양태에서, 본 개시내용의 방법에서 사용하기 위한 액체 제제는 안정화 수준으로 당과 함께 조합된 액제로 제조될 수 있다. 특정 실시양태에서, 액체 제제는 수성 담체 중에 제조될 수 있다. 특정 실시양태에서, 안정화제는 정맥내 투여에 바람직하지 않거나 또는 적합하지 않은 점성을 초래할 수 있는 양보다 더 크지 않은 양으로 첨가될 수 있다. 특정 실시양태에서, 당은 디사카라이드, 예를 들어, 수크로스일 수 있다. 특정 실시양태에서, 액체 제제는 또한 완충화제, 계면활성제, 및 보존제 중 하나 이상을 포함할 수 있다.

특정 실시양태에서, 액체 제제의 pH는 제약상 허용되는 산 및/또는 염기 첨가에 의해 설정될 수 있다. 특정 실시양태에서, 제약상 허용되는 산은 염산일 수 있다. 특정 실시양태에서, 제약상 허용되는 염기는 수산화나트륨일 수 있다.

응집 이외에도, 탈아미드화는 발효, 수거/세포 정화, 정제, 약물 물질/약물 제품 보관 동안 및 샘플 분석 동안 발생할 수 있는, 펩티드 및 단백질의 일반적인 제품 변형이다. 탈아미드화는 가수분해될 수 있는 숙신이미드 중간체를 형성하는, 단백질로부터의 NH₃의 손실이다. 숙신이미드 중간체는 모체 펩티드의 17 단위 질량 감소를 초래한다. 이어진 가수분해를 통해 18 단위 질량 증가가 초래된다. 숙신이미드 중간체는 수성 조건 하에서 불안정하기 때문에 단리가 어렵다. 따라서, 탈아미드화는 전형적으로 1 단위 질량 증가로서 검출가능하다. 아스파라긴의 탈아미드화는 아스파르트산 또는 이소아스파르트산을 생성한다. 탈아미드화의 속도에 영향을 파라미터는 pH, 온도, 용매 유전 상수, 이온 강도, 1차 서열, 국소 폴리펩티드 입체형태 및 3차 구조를 포함한다. 펩티드 쇄에서 Asn에 인접한 아미노산 잔기가 탈아미드화 속도에 영향을 준다. 단백질 서열에서 Asn 다음의 Gly 및 Ser은 탈아미드화에 대해 더 높은 감수성을 초래한다.

특정 실시양태에서, 본 개시내용에 기재된 치료 방법에서 사용하기 위한 액체 제제는 단백질 제품의 탈아미드화를 막는 pH 및 습도 조건 하에서 보존될 수 있다.

본원의 관심 수성 담체는 제약상 허용되고 (예를 들어, 인간에게 투여하는데 안전하고 비독성이고), 액체 제제의 제조에 유용한 것이다. 예시적인 담체는 멸균 주사용수 (SWFI), 정균 주사용수 (BWFI), pH 완충처리된 용액 (예를 들어, 포스페이트-완충처리된 염수), 멸균 염수 용액, 링거 용액 또는 덱스트로스 용액을 포함한다.

정맥내 (IV) 제제는, 환자가 이식 후 병원에서 IV 경로를 통해 모든 약물을 받고 있을 때와 같은 특정한 경우에 바람직한 투여 경로일 수 있다. 특정 실시양태에서, 액체 제제는 투여 이전에 0.9% 염화나트륨 용액으로 희석된다. 특정 실시양태에서, 주사를 위해 희석된 약물 제품은 등장성이고, 정맥내 주입에 의한 투여에 적합한 것이다.

특정 실시양태에서, 염 또는 완충제 성분은 10 mM - 200 mM 양으로 첨가될 수 있다. 염 및/또는 완충제는 제약상 허용되는 것이고, "염기 형성" 금속 또는 아민과 각종의 공지된 산 (무기산 및 유기산)으로부터 유도된 것이다. 특정 실시양태에서, 완충제는 포스페이트 완충제일 수 있다. 특정 실시양태에서, 완충제는 글리시네이트, 카르보네이트, 시트레이트 완충제일 수 있고, 이러한 경우, 나트륨, 칼륨, 또는 암모늄 이온은 반대이온으로서 작용할 수 있다.

또 다른 측면에서, 본 개시내용은 또한 뉴레귤린-1β 또는 항부정맥 특성을 갖는 모이어티에 접합된 심장-특이적 표적화-펩티드 (CTP)를 포함하는 것을 전달하기 위해 주사용으로 적합한 지속형 방출 제제 (장기-지속 제제)를 제공한다.

VII. 투여 레지멘

한 측면에서, 본원에서는 약물 또는 치료제 (예를 들어, 아미오다론)에 연결된 심장-특이적 표적화-펩티드 (CTP) (예를 들어, 서열식별번호: 1-35 중 어느 하나)를 포함하는 펩티드의 지속형-전달 제제를 제공한다. 특정 실시양태에서, 제제는 제어형 방출 시스템을 사용한다. 특정 실시양태에서, 제제는 저속 방출 시스템을 사용한다. 특정 실시양태에서, 본 개시내용의 지속형-전달 제제는 치료제 (예를 들어, 아미오다론)에 연결된 CTP_12aa (서열식별번호: 1)를 포함하는 펩티드를 포함한다. 특정 실시양태에서, 본 개시내용의 지속형-전달 제제는 치료제 (예를 들어, 아미오다론)에 연결된 CTP_12aa (서열식별번호: 2)를 포함하는 펩티드를 포함한다. 특정 실시양태에서, 본 개시내용의 지속형-전달 제제는 치료제 (예를 들어, 아미오다론)에 연결된 CTP_6aa (서열식별번호: 5)를 포함하는 펩티드를 포함한다.

특정 실시양태에서, 제제는 치료제 (예를 들어, 아미오다론)에 연결된 본 개시내용의 심장-특이적 표적화-펩티드 (CTP) (예를 들어, 서열식별번호: 1-35 중 어느 하나)를 포함하는 펩티드를 적어도 6시간 (예를 들어, 6시간, 7시간, 8시간, 9시간, 10시간, 11시간, 12시간, 13시간, 14시간, 15시간, 16시간, 17시간, 18시간, 19시간, 20시간, 21시간, 22시간, 23시간, 24시간)의 기간에 걸쳐 전달한다. 특정 실시양태에서, 제제는 약물 또는 치료제 (예를 들어, 아미오다론)에 연결된 서열식별번호: 1에 의해 제시된 CTP_12aa를 포함하는 펩티드를 적어도 6시간 (예를 들어, 6시간, 7시간, 8시간, 9시간, 10시간, 11시간, 12시간, 13시간, 14시간, 15시간, 16시간, 17시간, 18시간, 19시간, 20시간, 21시간, 22시간, 23시간, 24시간)의 기간에 걸쳐 전달한다. 특정 실시양태에서, 제제는 약물 또는 치료제 (예를 들어, 아미오다론)에 연결된 서열식별번호: 2에 의해 제시된 CTP_12aa를 포함하는 펩티드를 적어도 6시간 (예를 들어, 6시간, 7시간, 8시간, 9시간, 10시간, 11시간, 12시간, 13시간, 14시간, 15시간, 16시간, 17시간, 18시간, 19시간, 20시간, 21시간, 22시간, 23시간, 24시간)의 기간에 걸쳐 전달한다. 특정 실시양태에서, 제제는 약물 또는 치료제 (예를 들어, 아미오다론)에 연결된 서열식별번호: 5에 의해 제시된 CTP_6aa를 포함하는 펩티드를 적어도 6시간 (예를 들어, 6시간, 7시간, 8시간, 9시간, 10시간, 11시간, 12시간, 13시간, 14시간, 15시간, 16시간, 17시간, 18시간, 19시간, 20시간, 21시간, 22시간, 23시간, 또는 24시간)의 기간에 걸쳐 전달한다.

특정 실시양태에서, 제제는 치료제 (예를 들어, 아미오다론)에 연결된 본 개시내용의 펩티드 (예를 들어, 서열식별번호: 1-35 중 어느 하나)를 6시간, 7시간, 8시간, 9시간, 10시간, 11시간, 12시간, 13시간, 14시간, 15시간, 16시간, 17시간, 18시간, 19시간, 20시간, 21시간, 22시간, 23시간, 또는 24시간의 기간에 걸쳐 전달한다. 특정 실시양태에서, 제제는 약물 또는 치료제 (예를 들어, 아미오다론)에 연결된 서열식별번호: 1에 의해 제시된 CTP_12aa를 포함하는 펩티드를 6시간, 7시간, 8시간, 9시간, 10시간, 11시간, 12시간, 13시간, 14시간, 15시간, 16시간, 17시간, 18시간, 19시간, 20시간, 21시간, 22시간, 23시간, 또는 24시간의 기간에 걸쳐 전달한다. 특정 실시양태에서, 제제는 약물 또는 치료제 (예를 들어, 아미오다론)에 연결된 서열식별번호: 2에 의해 제시된 CTP_12aa를 포함하는 펩티드를 6시간, 7시간, 8시간, 9시간, 10시간, 11시간, 12시간, 13시간, 14시간, 15시간, 16시간, 17시간, 18시간, 19시간, 20시간, 21시간, 22시간, 23시간, 또는 24시간의 기간에 걸쳐 전달한다. 특정 실시양태에서, 제제는 약물 또는 치료제 (예를 들어, 아미오다론)에 연결된 서열식별번호: 5에 의해 제시된 CTP_6aa를 포함하는 펩티드를 6시간, 7시간, 8시간, 9시간, 10시간, 11시간, 12시간, 13시간, 14시간, 15시간, 16시간, 17시간, 18시간, 19시간, 20시간, 21시간, 22시간, 23시간, 또는 24시간의 기간에 걸쳐 전달한다.

특정 실시양태에서, 제제는 치료제 (예를 들어, 아미오다론)에 연결된 본 개시내용의 펩티드 (예를 들어, 서열식별번호: 1-35 중 어느 하나)를 적어도 1일 1회 (예를 들어, 1일 1회, 1일 2회, 1일 3회) 전달한다. 특정 실시양태에서, 제제는 약물 또는 치료제 (예를 들어, 아미오다론)에 연결된 서열식별번호: 1에 의해 제시된 CTP_12aa를 포함하는 펩티드를 적어도 1일 1회 (예를 들어, 1일 1회, 1일 2회, 1일 3회) 전달한다. 특정 실시양태에서, 제제는 약물 또는 치료제 (예를 들어, 아미오다론)에 연결된 서열식별번호: 2에 의해 제시된 CTP_12aa를 포함하는 펩티드를 적어도 1일 1회 (예를 들어, 1일 1회, 1일 2회, 1일 3회) 전달한다. 특정 실시양태에서, 제제는 약물 또는 치료제 (예를 들어, 아미오다론)에 연결된 서열식별번호: 5에 의해 제시된 CTP_6aa를 포함하는 펩티드를 적어도 1일 1회 (예를 들어, 1일 1회, 1일 2회, 1일 3회) 전달한다.

특정 실시양태에서, 치료제 (예를 들어, 아미오다론)에 연결된 본 개시내용의 펩티드 (예를 들어, 서열식별번호: 1-35 중 어느 하나)를 전달하는 제제는 적어도 1주 1회 (예를 들어, 1주 1회, 1주 2회, 1주 3, 4, 5, 6, 7회 또는 그 초과) 투여된다. 특정 실시양태에서, 약물 또는 치료제 (예를 들어, 아미오다론)에 연결된 서열식별번호: 1에 의해 제시된 CTP_12aa를 포함하는 펩티드를 전달하는 제제는 적어도 1주 1회 (예를 들어, 1주 1회, 1주 2회, 1주 3, 4, 5, 6, 7회 또는 그 초과) 투여된다. 특정 실시양태에서, 약물 또는 치료제 (예를 들어, 아미오다론)에 연결된 서열식별번호: 2에 의해 제시된 CTP_12aa를 포함하는 펩티드를 전달하는 제제는 적어도 1주 1회 (예를 들어, 1주 1회, 1주 2회, 1주 3, 4, 5, 6, 7회 또는 그 초과) 투여된다. 특정 실시양태에서, 약물 또는 치료제 (예를 들어, 아미오다론)에 연결된 서열식별번호: 5에 의해 제시된 CTP_6aa를 포함하는 펩티드를 전달하는 제제는 적어도 1주 1회 (예를 들어, 1주 1회, 1주 2회, 1주 3, 4, 5, 6, 7회 또는 그 초과) 투여된다.

일부 실시양태에서, 치료제 (예를 들어, 아미오다론)에 연결된 본 개시내용의 펩티드 (예를 들어, 서열식별번호: 1-35 중 어느 하나)를 전달하는 제제는 약 1개월 1회, 약 2개월마다 1회, 약 3개월마다 1회, 약 2주마다 1회, 약 3주마다 1회, 약 4주마다 1회, 약 5주마다 1회, 약 6주마다 1회, 약 7주마다 1회, 약 8주마다 1회, 약 9주마다 1회, 또는 약 10주마다 1회 투여되는 지속형 방출 제제이다. 특정 실시양태에서, 약물 또는 치료제 (예를 들어, 아미오다론)에 연결된 서열식별번호: 1에 의해 제시된 CTP_12aa를 포함하는 펩티드를 전달하는 제제는 약 1개월 1회, 약 2개월마다 1회, 약 3개월마다 1회, 약 2주마다 1회, 약 3주마다 1회, 약 4주마다 1회, 약 5주마다 1회, 약 6주마다 1회, 약 7주마다 1회, 약 8주마다 1회, 약 9주마다 1회, 또는 약 10주마다 1회 투여되는 지속형 방출 제제이다. 특정 실시양태에서, 약물 또는 치료제 (예를 들어, 아미오다론)에 연결된 서열식별번호: 2에 의해 제시된 CTP_12aa를 포함하는 펩티드를 전달하는 제제는 약 1개월 1회, 약 2개월마다 1회, 약 3개월마다 1회, 약 2주마다 1회, 약 3주마다 1회, 약 4주마다 1회, 약 5주마다 1회, 약 6주마다 1회, 약 7주마다 1회, 약 8주마다 1회, 약 9주마다 1회, 또는 약 10주마다 1회 투여되는 지속형 방출 제제이다. 특정 실시양태에서, 약물 또는 치료제 (예를 들어, 아미오다론)에 연결된 서열식별번호: 5에 의해 제시된 CTP_6aa를 포함하는 펩티드를 전달하는 제제는 약 1개월 1회, 약 2개월마다 1회, 약 3개월마다 1회, 약 2주마다 1회, 약 3주마다 1회, 약 4주마다 1회, 약 5주마다 1회, 약 6주마다 1회, 약 7주마다 1회, 약 8주마다 1회, 약 9주마다 1회, 또는 약 10주마다 1회 투여되는 지속형 방출 제제이다.

일부 실시양태에서, 치료제 (예를 들어, 아미오다론 또는 뉴레귤린-1β)에 연결된 본 개시내용의 펩티드 (예를 들어, 서열식별번호: 1-35 중 어느 하나)는 24시간의 기간, 예를 들어, 처음 24시간 동안의 투여 기간에 걸쳐 약 100 mg, 200 mg, 300 mg, 400 mg, 500 mg, 600 mg, 700 mg, 800 mg, 900 mg, 1000 mg, 1100 mg, 1200 mg, 1300 mg, 1400 mg, 1500 mg, 1600 mg, 1700 mg, 1800 mg, 1900 mg, 또는 2000 mg의 비율로 투여된다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 제제는 24시간의 기간, 예를 들어, 처음 24시간 동안의 투여 기간에 걸쳐 100 mg 내지 500 mg, 100 mg 내지 1000 mg, 500 mg 내지 1000 mg, 700 mg 내지 1000 mg, 700 mg 내지 1500 mg, 1200 mg 내지 1500 mg, 1000 mg 내지 1500 mg, 1000 mg 내지 2000 mg, 1500 mg 내지 2000 mg, 1700 mg 내지 2000 mg, 800 mg 내지 1200 mg, 800 내지 1000 mg, 800 mg 내지 1600 mg, 600 mg 내지 800 mg, 400 mg 내지 600 mg, 또는 900 내지 1200 mg의 비율로 투여된다. 일부 실시양태에서, 치료제 (예를 들어, 아미오다론 또는 뉴레귤린-1β)에 연결된 본 개시내용의 펩티드 (예를 들어, 서열식별번호: 1-35 중 어느 하나)는 경구적으로, 정맥내로, 소화관내로, 비경구적으로, 국부로, 주사에 의해, 근육내로, 동맥내로, 경막내로, 피막내로, 안와내로, 심장내로, 진피내로, 복강내로, 경기관으로, 피하로, 피부하로, 관절내로, 피막하로, 지주막하로, 척수내로, 경막외 또는 흉골하 주사에 의해, 또는 주입에 의해 투여되는 제제 형태로 투여된다.

일부 실시양태에서, 본원에 기재된 제제는 주입 프로토콜에 의해 투여될 수 있다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 제제는, 예를 들어, 염수 용액의 형태로, 예를 들어, 주입에 의해 투여될 수 있으며, 여기서 용액은 치료제 (예를 들어, 아미오다론 또는 뉴레귤린-1β)에 연결된 본 개시내용의 펩티드 (예를 들어, 서열식별번호: 1-35 중 어느 하나)를 포함한다. 일부 실시양태에서, 치료제에 연결된 펩티드는 환자에게 약 25 mg, 50 mg, 75 mg, 100 mg, 110 mg, 125 mg, 130 mg, 140 mg, 150 mg, 160 mg, 175 mg, 200 mg, 225 mg, 250 mg, 275 mg, 300 mg, 325 mg, 350 mg, 360 mg, 375 mg, 400 mg, 450 mg, 500 mg, 600 mg, 700 mg, 720 mg, 750 mg, 0 mg 내지 100 mg, 50 mg 내지 150 mg, 50 mg 내지 100 mg, 100 mg 내지 200 mg, 200 mg 내지 300 mg, 200 mg 내지 400 mg, 200 mg 내지 500 mg, 100 mg 내지 150 mg, 100 mg 내지 500 mg, 150 mg 내지 300 mg, 100 mg 내지 360 mg, 100 mg 내지 400 mg, 300 mg 내지 500 mg, 300 mg 내지 600 mg, 300 mg 내지 600 mg, 또는 300 mg 내지 700 mg의 양으로 약 5분, 10분, 20분, 30분, 40분, 50분, 60분, 90분, 2시간, 3시간, 4시간, 5시간, 6시간, 7시간, 8시간, 9시간, 10시간, 11시간, 12시간, 13시간, 14시간, 15시간, 16시간, 17시간, 18시간, 1일, 2일, 3일 4일, 5일, 6일, 또는 1주 기간에 걸쳐 투여된다.

일부 실시양태에서, 본원에 기재된 제제는 주입 프로토콜에 의해 투여될 수 있다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 제제는, 예를 들어, 염수 용액의 형태로, 예를 들어, 주입에 의해 투여될 수 있으며, 여기서 용액은 치료제 (예를 들어, 아미오다론 또는 뉴레귤린-1β)에 연결된 본 개시내용의 펩티드 (예를 들어, 서열식별번호: 1-35 중 어느 하나)를 포함한다. 일부 실시양태에서, 치료제에 연결된 펩티드는 환자에게 약 25 mg, 50 mg, 75 mg, 100 mg, 110 mg, 125 mg, 130 mg, 140 mg, 150 mg, 160 mg, 175 mg, 200 mg, 225 mg, 250 mg, 275 mg, 300 mg, 350 mg, 400 mg, 450 mg, 500 mg, 0 mg 내지 100 mg, 50 mg 내지 150 mg, 50 mg 내지 100 mg, 100 mg 내지 200 mg, 200 mg 내지 300 mg, 200 mg 내지 400 mg, 200 mg 내지 500 mg, 100 mg 내지 150 mg, 100 mg 내지 500 mg, 또는 150 mg 내지 300 mg의 양으로 약 처음 1분, 3분, 5분, 7분, 10분, 12분, 15분, 20분, 또는 30분의 주입에 걸쳐 투여되고; 그 후, 치료제에 연결된 펩티드는 환자에게 약 25 mg, 50 mg, 75 mg, 100 mg, 110 mg, 125 mg, 130 mg, 140 mg, 150 mg, 160 mg, 175 mg, 200 mg, 225 mg, 250 mg, 275 mg, 300 mg, 325 mg, 350 mg, 360 mg, 375 mg, 400 mg, 450 mg, 500 mg, 600 mg, 700 mg, 720 mg, 750 mg, 0 mg 내지 100 mg, 50 mg 내지 150 mg, 50 mg 내지 100 mg, 100 mg 내지 200 mg, 200 mg 내지 300 mg, 200 mg 내지 400 mg, 200 mg 내지 500 mg, 100 mg 내지 150 mg, 100 mg 내지 500 mg, 150 mg 내지 300 mg, 100 mg 내지 360 mg, 100 mg 내지 400 mg, 300 mg 내지 500 mg, 300 mg 내지 600 mg, 300 mg 내지 600 mg, 또는 300 mg 내지 700 mg의 양으로 다음 1시간, 2시간, 3시간, 4시간, 5시간, 6시간, 7시간, 8시간, 9시간, 10시간, 11시간, 12시간, 13시간, 14시간, 또는 15시간의 주입에 걸쳐 투여되고; 그 후, 치료제에 연결된 펩티드는 환자에게 약 25 mg, 50 mg, 75 mg, 100 mg, 110 mg, 125 mg, 130 mg, 140 mg, 150 mg, 160 mg, 175 mg, 200 mg, 225 mg, 250 mg, 275 mg, 300 mg, 325 mg, 350 mg, 360 mg, 375 mg, 400 mg, 450 mg, 475 mg, 500 mg, 510 mg, 520 mg, 530 mg, 540 mg, 550 mg, 560 mg, 570 mg, 580 mg, 590 mg, 600 mg, 700 mg, 720 mg, 750 mg, 800 mg, 900 mg, 950 mg, 1000 mg, 1050 mg, 1080 mg, 0 mg 내지 100 mg, 50 mg 내지 150 mg, 50 mg 내지 100 mg, 100 mg 내지 200 mg, 200 mg 내지 300 mg, 200 mg 내지 400 mg, 200 mg 내지 500 mg, 100 mg 내지 150 mg, 100 mg 내지 500 mg, 150 mg 내지 300 mg, 100 mg 내지 360 mg, 100 mg 내지 400 mg, 300 mg 내지 500 mg, 300 mg 내지 600 mg, 300 mg 내지 600 mg, 또는 300 mg 내지 700 mg, 100 mg 내지 550 mg, 200 mg 내지 550 mg, 300 mg 내지 550 mg, 400 mg 내지 550 mg, 500 mg 내지 600 mg, 500 mg 내지 700 mg, 500 mg 내지 800 mg, 500 mg 내지 900 mg, 500 mg 내지 1000 mg, 500 mg 내지 1100 mg, 또는 400 mg 내지 1100 mg의 양으로 다음 30분, 1시간, 2시간, 3시간, 4시간, 5시간, 6시간, 7시간, 8시간, 9시간, 10시간, 11시간, 12시간, 13시간, 14시간, 15시간, 16시간, 17시간, 18시간, 19시간, 20시간, 21시간, 22시간, 23시간, 24시간, 30시간, 또는 36시간의 주입에 걸쳐 투여된다. 특정한 실시양태에서, 치료제에 연결된 펩티드는 환자에게 약 150 mg의 양으로 처음 10분의 주입에 걸쳐, 이어서, 360 mg의 양으로 다음 6시간의 주입에 걸쳐, 및 이어서, 540 mg의 양으로 다음 18시간의 주입에 걸쳐 투여된다.

일부 실시양태에서, 본원에 기재된 제제는, 예를 들어, 주입에 의해 투여되며, 여기서 치료제 (예를 들어, 아미오다론 또는 뉴레귤린-1β)에 연결된 본원에 기재된 펩티드 (예를 들어, 서열식별번호: 1-35 중 어느 하나)는 약 처음 24시간의 투여 후 명시된 비율로 투여된다. 예를 들어, 본원에 기재된 일부 실시양태에서, 처음 24시간의 투여 후, 치료제에 연결된 펩티드는 환자에게 약 25 mg, 50 mg, 75 mg, 100 mg, 110 mg, 125 mg, 130 mg, 140 mg, 150 mg, 160 mg, 175 mg, 200 mg, 225 mg, 250 mg, 275 mg, 300 mg, 325 mg, 350 mg, 360 mg, 375 mg, 400 mg, 450 mg, 475 mg, 500 mg, 510 mg, 520 mg, 530 mg, 540 mg, 550 mg, 560 mg, 570 mg, 580 mg, 590 mg, 600 mg, 700 mg, 720 mg, 750 mg, 800 mg, 900 mg, 950 mg, 1000 mg, 1050 mg, 1080 mg, 1100 mg, 1200 mg, 1300 mg, 1400 mg, 1500 mg, 1600 mg, 0 mg 내지 100 mg, 50 mg 내지 150 mg, 50 mg 내지 100 mg, 100 mg 내지 200 mg, 200 mg 내지 300 mg, 200 mg 내지 400 mg, 200 mg 내지 500 mg, 100 mg 내지 150 mg, 100 mg 내지 500 mg, 100 mg 내지 600 mg, 150 mg 내지 300 mg, 100 mg 내지 360 mg, 100 mg 내지 400 mg, 300 mg 내지 500 mg, 300 mg 내지 600 mg, 300 mg 내지 600 mg, 또는 300 mg 내지 700 mg, 100 mg 내지 550 mg, 200 mg 내지 550 mg, 300 mg 내지 550 mg, 400 mg 내지 550 mg, 400 mg 내지 600 mg, 500 mg 내지 600 mg, 500 mg 내지 700 mg, 500 mg 내지 800 mg, 500 mg 내지 900 mg, 500 mg 내지 1000 mg, 500 mg 내지 1100 mg, 600 mg 내지 800 mg, 600 mg 내지 1000 mg, 1000 mg 내지 1500 mg, 1000 mg 내지 1200 mg, 1000 mg 내지 1400 mg, 1100 mg 내지 1500 mg, 또는 400 mg 내지 1100 mg의 양으로 처음 24시간의 투여 후 30분, 1시간, 2시간, 3시간, 4시간, 5시간, 6시간, 7시간, 8시간, 9시간, 10시간, 11시간, 12시간, 13시간, 14시간, 15시간, 16시간, 17시간, 18시간, 19시간, 20시간, 21시간, 22시간, 23시간, 24시간, 27시간, 30시간, 또는 36시간에 걸쳐 투여된다. 본원에 기재된 특정한 실시양태에서, 처음 24시간의 투여 후, 치료제에 연결된 펩티드는 환자에게 약 720 mg의 양으로 처음 24시간의 투여 후 24시간에 걸쳐 투여된다. 본원에 기재된 실시양태에서, 상기 언급된 투여는 약 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 1주, 10일, 12일, 2주, 15일, 18일, 20일, 3주, 4주, 5주, 6주, 7주, 8주 9주, 10주, 11주, 12주, 또는 그 초과의 기간 동안 계속될 수 있다.

일부 실시양태에서, 본원에 기재된 제제는, 예를 들어, 주입에 의해 또는 피하로 투여되며, 여기서 치료제 (예를 들어, 아미오다론)에 연결된 본원에 기재된 펩티드 (예를 들어, 서열식별번호: 1-35 중 어느 하나)는 투여되어 환자에서 약 10 - 2500 ng/mL의 치료제의 혈청 순환 수준을 달성한다. 예를 들어, 본원에 기재된 일부 실시양태에서, 처음 24시간의 투여 후, 아미오다론에 연결된 펩티드는 환자에게 약 10 ng/mL, 25 ng/mL, 50 ng/mL, 75 ng/mL, 100 ng/mL, 110 ng/mL, 125 ng/mL, 130 ng/mL, 140 ng/mL, 150 ng/mL, 160 ng/mL, 175 ng/mL, 200 ng/mL, 225 ng/mL, 250 ng/mL, 275 ng/mL, 300 ng/mL, 325 ng/mL, 350 ng/mL, 360 ng/mL, 375 ng/mL, 400 ng/mL, 450 ng/mL, 475 ng/mL, 500 ng/mL, 510 ng/mL, 520 ng/mL, 530 ng/mL, 540 ng/mL, 550 ng/mL, 560 ng/mL, 570 ng/mL, 580 ng/mL, 590 ng/mL, 600 ng/mL, 700 ng/mL, 720 ng/mL, 750 ng/mL, 800 ng/mL, 900 ng/mL, 950 ng/mL, 1000 ng/mL, 1050 ng/mL, 1080 ng/mL, 1100 ng/mL, 1200 ng/mL, 1300 ng/mL, 1400 ng/mL, 1500 ng/mL, 1600 ng/mL, 10 ng/mL 내지 100 ng/mL, 50 ng/mL 내지 150 ng/mL, 50 ng/mL 내지 100 ng/mL, 100 ng/mL 내지 200 ng/mL, 200 ng/mL 내지 300 ng/mL, 200 ng/mL 내지 400 ng/mL, 200 ng/mL 내지 500 ng/mL, 100 ng/mL 내지 150 ng/mL, 100 ng/mL 내지 500 ng/mL, 100 ng/mL 내지 600 ng/mL, 150 ng/mL 내지 300 ng/mL, 100 ng/mL 내지 360 ng/mL, 100 ng/mL 내지 400 ng/mL, 300 ng/mL 내지 500 ng/mL, 300 ng/mL 내지 600 ng/mL, 300 ng/mL 내지 600 ng/mL, 또는 300 ng/mL 내지 700 ng/mL, 100 ng/mL 내지 550 ng/mL, 200 ng/mL 내지 550 ng/mL, 300 ng/mL 내지 550 ng/mL, 400 ng/mL 내지 550 ng/mL, 400 ng/mL 내지 600 ng/mL, 500 ng/mL 내지 600 ng/mL, 500 ng/mL 내지 700 ng/mL, 500 ng/mL 내지 800 ng/mL, 500 ng/mL 내지 900 ng/mL, 500 ng/mL 내지 1000 ng/mL, 500 ng/mL 내지 1100 ng/mL, 600 ng/mL 내지 800 ng/mL, 600 ng/mL 내지 1000 ng/mL, 1000 ng/mL 내지 1500 ng/mL, 1000 ng/mL 내지 1200 ng/mL, 1000 ng/mL 내지 1400 ng/mL, 1100 ng/mL 내지 1500 ng/mL, 또는 400 ng/mL 내지 1100 ng/mL의 혈청 순환 수준을 달성하는 양으로 처음 24시간의 투여 후 30분, 1시간, 2시간, 3시간, 4시간, 5시간, 6시간, 7시간, 8시간, 9시간, 10시간, 11시간, 12시간, 13시간, 14시간, 15시간, 16시간, 17시간, 18시간, 19시간, 20시간, 21시간, 22시간, 23시간, 24시간, 27시간, 30시간, 또는 36시간에 걸쳐 투여된다. 본원에 기재된 특정한 실시양태에서, 아미오다론에 연결된 서열식별번호: 1, 2, 또는 5의 펩티드는 환자에게 약 10 내지 2500 ng/mL인 아미오다론의 혈청 순환 수준을 달성하는 양으로 처음 24시간의 투여 후 24시간 내지 7일 동안 투여된다. 본원에 기재된 실시양태에서, 상기 언급된 투여는 약 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 1주, 10일, 12일, 2주, 15일, 18일, 20일, 3주, 4주, 5주, 6주, 7주, 8주 9주, 10주, 11주, 12주, 또는 그 초과의 기간 동안 계속될 수 있다.

VIII. 정의

본원에 사용된 바와 같이, 용어 "CTP"는 심장-특이적 표적화-펩티드를 지칭한다. 특정 실시양태에서, CTP는 6-아미노산 길이 펩티드, CTP_6aa로 구성된다. 특정 실시양태에서, CTP_12aa는 12-아미노산 길이 펩티드로 구성된다. 특정 실시양태에서, CTP는 항부정맥 특성을 갖는 모이어티에 접합된다.

본원에 사용된 바와 같이, 용어 "유효량"은 유익한 또는 원하는 결과를 발휘하는데 충분한 활성제 (예를 들어, 본 개시내용의 서열식별번호: 1-35 중 어느 하나, 예를 들어, 서열식별번호: 1, 2, 또는 5의 CTP)의 양을 지칭한다. 유효량은 하나 이상의 투여, 적용 또는 투여량으로 투여될 수 있고, 특정한 제제 또는 투여 경로로 제한하는 것으로 의도되지 않는다.

본원에 사용된 바와 같이, "치료하다," "치료하는," 및 "치료"는 대상체, 예를 들어, 인간에서 질환을 치료하는 것을 의미한다. 이는 (a) 질환을 억제하는 것, 즉, 그의 발병을 정지시키는 것; 및 (b) 질환을 경감시키는 것, 즉, 질환 상태의 진행을 퇴행시키는 것을 포함한다. 본원에 사용된 바와 같이, 용어 "대상체" 및 "환자"는 본원에 기재된 방법 및 조성물에 의해 치료되는 유기체를 지칭한다. 이러한 유기체는 바람직하게는 포유동물 (예를 들어, 뮤린, 원숭이, 말, 소, 돼지, 개, 고양이 등)을 포함하나 이에 제한되지는 않고, 보다 바람직하게는, 인간을 포함한다.

본원에 기재된 방법 및 조성물은 단독으로 또는 다른 치료제 및/또는 양식과 조합되어 사용될 수 있다. 본원에 사용된 용어 "조합되어" 투여되는 것이란 대상체가 장애를 앓는 동안 2종 (또는 그 초과)의 상이한 치료가 대상체에게 전달되어, 환자에서의 치료의 효과가 시점상 중첩됨을 의미하는 것으로 이해된다. 특정 실시양태에서, 1종의 치료의 전달이 제2의 전달이 시작될 때 여전히 이루어지고 있어, 투여의 관점에서 중첩이 일어난다. 이는 본원에서 때때로 "동시" 또는 "공동 전달"이라 지칭된다. 다른 실시양태에서, 1종의 치료의 전달이 다른 치료의 전달이 시작되기 전에 종료된다. 특정 실시양태에서 어느 경우이든, 치료는 조합 투여이기 때문에 보다 더 유효하다. 예를 들어, 제2 치료는 제1 치료의 부재 하에 제2 치료가 투여되는 경우에 관찰될 것보다 더 유효한데, 예를 들어, 보다 적은 제2 치료로 등가의 효과가 관찰되거나 또는 제2 치료가 증상을 보다 많이 감소시키거나, 또는 제1 치료에 대해서도 유사한 상황이 관찰된다. 특정 실시양태에서, 증상, 또는 장애와 관련된 다른 파라미터에서의 감소가 다른 치료의 부재 하에 전달된 1종의 치료로 관찰될 것보다 더 크도록 전달이 이루어진다. 2종의 치료의 효과는 부분적으로 상가적일 수 있거나, 완전히 상가적일 수 있거나, 또는 상가적인 것보다 더 클 수 있다. 전달된 제1 치료의 효과가 제2 치료가 전달될 때에도 여전히 검출가능하도록 전달이 이루어질 수 있다.

상세한 설명 전반에 걸쳐, 조성물이 특정한 구성요소를 갖거나, 수반하거나, 또는 포함하는 것으로 기재된 경우에, 또는 공정 및 방법이 특정한 단계를 갖거나, 수반하거나, 또는 포함하는 것으로 기재된 경우에, 추가적으로, 열거된 구성요소로 본질적으로 이루어지거나 또는 그로 이루어진 본 개시내용의 조성물이 존재하고, 열거된 가공 단계로 본질적으로 이루어지거나 또는 그로 이루어진 본 개시내용에 따른 공정 및 방법이 존재하는 것으로 고려된다.

본 출원에서, 요소 또는 구성요소가 열거된 요소 또는 구성요소의 목록에 포함되고/거나 그로부터 선택되는 것이라 하는 경우에, 요소 또는 구성요소는 열거된 요소 또는 구성요소 중 어느 하나일 수 있거나, 또는 요소 또는 구성요소는 열거된 요소 또는 구성요소 중 2종 이상으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있는 것으로 이해되어야 한다.

추가로, 본원에 기재된 조성물 또는 방법의 요소 및/또는 특색은, 본원에서 명시적이든 또는 암시적이든, 본 개시내용의 취지 및 범주로부터 벗어나지 않으면서 다양한 방식으로 조합될 수 있는 것으로 이해되어야 한다. 예를 들어, 특정한 화합물이 언급된 경우에, 문맥으로부터 달리 이해되지 않는 한, 그 화합물은 본 개시내용의 조성물 및/또는 본 개시내용의 방법의 다양한 실시양태에서 사용될 수 있다. 다시 말해서, 본 출원 내에서, 실시양태는 분명하고 간결한 출원이 기술되고 묘사되도록 하는 방식으로 기재되고 도시되어 있지만, 실시양태가 본 교시 및 발명(들)으로부터 벗어나지 않으면서 다양하게 조합되거나 또는 분리될 수 있는 것으로 의도되고 인지될 것이다. 예를 들어, 본원에 기재되고 도시된 모든 특색은 본원에 기재되고 도시된 발명(들)의 모든 측면에 적용가능할 수 있는 것으로 인지될 것이다.

표현 "중 적어도 하나"는, 문맥 및 용법으로부터 달리 이해되지 않는 한, 상기 표현 앞에 열거된 객체 각각을 개별적으로 및 열거된 객체 중 2가지 이상의 다양한 조합을 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 3가지 이상의 열거된 객체와 관련하여 표현 "및/또는"은, 문맥으로부터 달리 이해되지 않는 한, 동일한 의미를 갖는 것으로 이해되어야 한다.

그의 문법적 등가물을 포함한, 용어 "포함하다", "포함한다", "포함하는", "갖다", "갖는다", "갖는", "함유하다", "함유한다", 또는 "함유하는"의 사용은, 달리 구체적으로 서술되거나 또는 문맥으로부터 달리 이해되지 않는 한, 일반적으로 개방형으로 및 비-제한적으로, 예를 들어, 추가적인 열거되지 않은 요소 또는 단계를 배제하지 않으면서 이해되어야 한다.

용어 "약"이 정량적 값 앞에 사용된 경우에, 본 개시내용은, 달리 구체적으로 서술되지 않는 한, 특정한 정량적 값 자체를 또한 포함한다. 본원에 사용된 용어 "약"은, 달리 지시되거나 또는 추론되지 않는 한, 공칭 값으로부터 ±10%의 편차를 지칭한다.

단계의 순서 또는 특정 행위를 수행하는 순서는, 본 개시내용이 여전히 조작가능하다면, 중요하지 않은 것으로 이해되어야 한다. 더욱이, 2가지 이상의 단계 또는 행위가 동시에 수행될 수 있다.

본원에서 임의의 및 모든 예, 또는 예시적인 어휘, 예를 들어, "예컨대" 또는 "포함한"의 사용은 단지 본 개시내용을 보다 잘 예시하도록 의도된 것이며, 청구되지 않는 한 본 발명의 범주를 제한하지 않는다. 본 명세서의 어떠한 어휘도 임의의 청구되지 않은 요소가 본 개시내용의 실시에 있어 필수적인 것으로 지시되도록 해석되어서는 안된다.

실시예

하기 실시예는 단지 예시적인 것이며, 어느 방식으로든 본 발명의 범주 또는 내용을 제한하는 것으로 의도되지 않는다.

실시예 1 - 심장-특이적 표적화 펩티드의 알라닌 스캔 분석

본 실시예는 각 아미노산 잔기의 형질도입 활성에의 기여를 결정하기 위한 심장-특이적 표적화 펩티드 변이체의 디자인 및 시험을 기재한다.

이전 연구를 통해서는 심근세포를 형질도입할 수 있는 합성 12-아미노산 펩티드 (APWHLSSQYSRT; 서열식별번호: 1)를 확인하였다. APWHLSSQYSRT (서열식별번호: 1) 서열의 알라닌 스캐닝 분석을 수행함으로써 각 아미노산 잔기의 세포 투과 능력에 대한 중요도 및 상대적인 기여도를 평가하였다.

모든 아미노산이 체계적으로 알라닌으로 돌연변이화된 서열식별번호: 1의 변이체를 유니버시티 오브 피츠버그 펩티드 신테시스 퍼실리티(University of Pittsburgh Peptide Synthesis Facility)에서 합성하였다. 각 변이체를 시아닌5.5 형광 염료 (Cy5.5)에 접합시켰다. 래트 심근세포 세포주 H9C2 (ATCC, 카탈로그 #: CRL-1446)를 37℃에서 30분 동안 대조군으로서 디메틸 술폭시드 (DMSO), 또는 알라닌 펩티드 변이체와 함께 인큐베이션하였다. 이어서, 세포를 PBS로 3회 세척하고, 트립신으로 처리하고, 재현탁시키고, 생존/사멸 세포에 대해 염색한 후, Cy5.5 양성 세포에 대하여 FACS 분류하였다.

시험된 알라닌 변이체가 형질도입된 H9C2 세포의 형광 강도가 도 1a 및 도 1b에 제시되어 있다. 비-돌연변이화된 펩티드 (서열식별번호: 1)로 정규화된, 각 펩티드 변이체에 대한 Cy5.5 양성 H9C2 세포의 백분율은 하기 표 2에 요약되어 있다.

표 2

표 3 (도 1c에 제시된 데이터). 펩티드 사이의 형광차를 위해 H9C2 세포의 형광 활성화된 세포 분류를 대조군으로 정규화하기 위해 분광광도 데이터를 사용하여 측정된 다양한 펩티드의 형광.

표 4 (도 1d에 제시된 데이터): 10 uM의 각종 펩티드와의 30 min 인큐베이션 이후의 H9C2 세포의 형광 활성화된 세포 분류.

이들 결과는 서열식별번호: 1의 C-말단 중의 아미노산 잔기가 펩티드의 형질도입 능력에 크게 기여한다는 것을 입증하였다.

실시예 2 - N- 및 C-말단 심장-특이적 표적화 펩티드의 시험관내 형질도입 및 생존능 연구

실시예 1에 기재된 결과는 심장-특이적 표적화 펩티드 (APWHLSSQYSRT; 서열식별번호: 1)의 세포 투과 능력은 6 C-말단 아미노산 잔기에 존재한다고 제안하였다. 이를 추가로 평가하기 위해, 선형 및 고리화된 6-아미노산 N- 및 C-말단 변이체를 비롯한, 서열식별번호: 1의 변이체를 유니버시티 오브 피츠버그 펩티드 신테시스 퍼실리티에서 합성하였다. 각 변이체를 Cy5.5에 접합시켰다.

고체상 펩티드 합성을 사용하여 전장 형태 (NH₂-APWHLSSQYSRT-COOH (서열식별번호: 1)), 뿐만 아니라 CTP-A (NH₂-APWHLS-COOH (서열식별번호: 24)), 또는 CTP_6aa (NH₂-SQYSRT-COOH (서열식별번호: 5)) 펩티드로 명명되는 N-말단 6 아미노산을 합성하였다. 시클릭 형태의 전장 및 CTP_6aa를 또한 합성하였다. 대조군으로 작용하는 랜덤, 선형, 12-아미노산 길이의 펩티드 (RAN: NH₂-STLMKFCYVEQN-COOH (서열식별번호: 26))를 또한 합성하였다. 모든 펩티드를 시아닌5.5 (Cy5.5)로 형광 표지하였다. 단리된, 박동 신생태아 마우스 심근세포 (CMC)를 37℃에서 30분 동안 10 μM 펩티드와 함께 인큐베이션하고, PBS로 철저하게 세척하고, 공초점 현미경검사를 수행하였다. 추가적으로, H9C2 세포인 래트 심근모세포 세포주를 37℃에서 30분 동안 디메틸 술폭시드 (DMSO)와, 또는 5 μM의, Cy5.5로 표지된 펩티드와 함께 인큐베이션하고, PBS로 3x 세척하고, 트립신으로 처리하고, 재현탁시키고, 생존/사멸 세포에 대해 염색한 후, Cy5.5 양성 세포에 대하여 FACS 분류하였다.

도 2에 제시된 바와 같이, 더 짧은, 선형 버전의 심장-특이적 표적화 펩티드 (APWHLSSQYSRT; 서열식별번호: 1)가 시험된 3개의 세포주를 효율적으로 형질도입시킬 수 있었다. 3개의 세포주 모두에서, 전장 펩티드 뿐만 아니라 선형 6-아미노산 C-말단 펩티드 변이체도 적어도 세포를 형질도입시켰다 (도 2a-2d에서 CTP_6aa와 CTP 비교). 6-아미노산 펩티드 변이체의 고리화는 H9C2 세포의 형질도입 효율을 상당히 감소시켰다 (도 2a-2b). 전장 펩티드 및 DMSO 대조군과 비교 시, 선형 6 아미노산 C-말단 펩티드 변이체에 의한 H9C2 세포 및 MEF의 형질도입은 세포 생존능을 변경시키지 않았다 (도 2e).

이들 결과는 6개의 C-말단 아미노산 잔기 (SQYSRT; 서열식별번호: 5)가 12-아미노산, 전장 심장-특이적 표적화 펩티드 (APWHLSSQYSRT; 서열식별번호: 1)의 세포 투과 능력을 부여하는데 충분하다는 것을 입증하였다.

실시예 3 - 심장-특이적 표적화 펩티드의 C-말단에의 접합을 통한 로다민 카고의 심근세포로의 전달

본 실시예는 로다민 카고를 심근세포의 세포내 구획으로 전달하기 위한, C-말단에의 접합을 통한 심장-특이적 표적화 펩티드의 용도를 기재한다.

심장-특이적 표적화 펩티드를 유니버시티 오브 피츠버그 펩티드 신테시스 퍼실리티에서 합성하고, 에스테르 연결을 통해 N-말단에서는 카르복시플루오레세인 (녹색)으로, 및 C-말단에서는 로다민 (적색)으로 표지하였다. 이어서, 인간 유도 만능성 줄기 세포 (iPSC)로부터 유래된 박동 심근세포를 37℃에서 30분 동안 이중 표지된 펩티드와 함께 인큐베이션하고, PBS로 3x 세척하고, 그 후 즉시, 공초점 현미경검사를 이용하여 생존 세포 영상화를 수행하였다.

도 3c에 제시된 바와 같이, 이중 표지된 펩티드는 박동 인간 iPSC 유래 심근세포로 성공적으로 진입하였고, 또한 카고의 심장-특이적 표적화 펩티드의 C-말단에의 에스테르-연결을 통해 카고는 세포내 에스테라제(들)에 의한 에스테르 연결 절단에 기인하여 세포내 구획으로 전달되었다. 도 3c는 CTP의 C-말단에 접합된 로다민 (적색) 모이어티는 세포 내부에 그대로 유지된 반면, 카르복시플루오레세인 (녹색) 모이어티는 배출되었다는 것을 입증한다. 그러므로, 데이터는 로다민 카고의 심장-특이적 표적화 펩티드 (예를 들어, CTP_6aa)의 C-말단에의 접합은 카고를 세포 내부로 전달한 반면, N-말단에 접합된 카고는 배출되었고, 이는 사실상 내부 대조군으로서 작용한 것으로 제시하였다.

이들 결과는 심장-특이적 표적화 펩티드의 C-말단이 에스테르 연결을 통해 카고, 예컨대 로다민에 접합되었을 때, 카고를 심근세포 내부로 성공적으로 전달하였다는 것을 입증하였다.

실시예 4 - 심근 조직에 의한 Cy5 .5-표지된 CTP의 흡수

심근 조직에 의한 표지된 CTP 펩티드의 흡수율을 분석하기 위해, 6- 내지 8-주령 야생형 CD1 마우스에 Cy5.5-표지된 CTP (CTP-Cy5.5), 또는 Cy5.5로 표지된, 대조군 12 아미노산 랜덤 펩티드 서열 (RAN-Cy5.5)을 10 mg/kg 용량으로 정맥내로 주사하였다. 펩티드를 15, 30, 45, 60, 90, 또는 360 min 동안 순환시킨 후, 마우스를 안락사시키고, 3 mL의 10% 포르말린으로 고정시키고, 심장 조직을 절개하였다. 조직을 고정시키고, 파라핀에 포매시키고, 절편으로 만들었다. 절편을 핵 염색 40,6-디아미디노-2-페닐인돌 (DAPI)로 크로스 염색하고, 탑재하고, 형광 현미경검사를 수행하였다. 이미지J(ImageJ) (미국 국립 보건원, 미국 메릴랜드주 베데스다)를 이용하여 형광을 정량화하였다. 모든 시점 및 펩티드를 삼중으로 실시하였다. CTP-Cy5.5의 강건한 흡수가 관찰되었으며, 주사 후 15분째에 최고점에 도달하였다 (도 5). RAN-Cy5.5의 흡수와 비교 시 각 시점에서 유의적으로 더 많은 CTP-Cy5.5 흡수가 관찰되었다.

추가적으로, 형광-표지된 CTP 변이체 (CTP, CTP-B, H4A, P2A) 또는 형광-표지된 랜덤 펩티드 서열 (RAN)을 마우스에 주사하고, 고정된 심근 조직에서 형광 강도를 측정하였다. 마우스에 펩티드를 주사하고, 주사 후 15분째 심장 조직을 절개하고, 동결절편을 만들고, 염색하고, 형광 강도에 대해 분석하였다. 결과는 도 6a 및 도 6b에 제시되어 있다. 도 6b에서의 결과는 심근 조직에서의 형광 강도는 CTP와 비교 시 CTP-B 또는 P2A 주사 이후에 유의적으로 더 컸다는 것을 제시한다. 이들 결과는 CTP 펩티드는 심근 조직에 의해 빠르게 흡수되고 (주사 후 15분째에 최고 흡수에 도달), 랜덤 펩티드 서열 및 CTP와 비교 시 CTP-B 및 알라닌 펩티드 변이체가 우수한 흡수를 나타낸다는 것을 입증한다.

실시예 5 - 심방 및/또는 심실 부정맥 치료를 위한 아미오다론- CTP

리버티(Liberty) CEM 마이크로웨이브 합성기에서 옥시마/DIC (에틸-(2Z)-2-시아노-2-히드록시이미노아세테이트/N,N 디이소프로필카르보디이미드) 활성화와 함께 플루오레닐메틸옥시카르보닐 (FMOC) 화학을 사용하여 링크 아미드(Rink Amide) MBHA 수지 상에서 CTP 펩티드 합성을 이용하여 아미오다론-CTP 펩티드의 고체상 펩티드 합성 (SPPS)을 수행한다. 펩티드 쇄 어셈블리 완료 후, NH2-CTP-MBHA 수지의 N-말단 아미노 기를 실온에서 밤새도록 DIPEA/TBTU/Hobt/DMF 중 6-(Fmoc-아미노)-헥산산과 접합시킨다. 이어서, 실온에서 30분 동안 20% 피페리딘/DMF를 이용하여 FMOC-헥사노일-CTP 펩티드-MBHA 수지로부터 FMOC-기를 제거한다. 아미오다론-HCL (시그마 알드리치(Sigma Aldrich))을 이민 연결 (쉬프 염기)을 통해 NH2-헥사노일-CTP 펩티드-MBHA 수지의 유리 N-말단에 마이크로웨이브 지원으로 커플링시킨다. 실온에서 2시간 동안 TFA/스캐빈저를 이용하여 아미오다론-헥사노일-CTP 펩티드-MBHA 수지 절단을 수행한 후, 이어서, 디에틸 에테르로 침전시킨다. 잔류 스캐빈저를 3 라운드의 에테르 세척에 의해 조 펩티드로부터 추출한다.

샘플을 원심분리하여 성분을 분리한다. 이어서, 생성된 조 아미오다론-헥사노일-CTP 펩티드-CONH2 펩티드를 대기 건조시키고, 표준 아세토니트릴/0.1% TFA 구배 조건을 이용하여 워터스 델타 프렙(Waters Delta Prep) 4000 크로마토그래피 시스템 상에서 분취용 C-5 RP-HPLC에 의해 정제한다. 워터스 얼라이언스(Waters Alliance) 크로마토그래피 시스템 상에서 분석 C-5 RP-HPLC 특징화를 수행한 후, 이어서, 어플라이드 바이오시스템즈 보이저(Applied Biosystems Voyager) 워크스테이션 상에서 MALDI-Tof 분석을 이용하여 최종 생성물의 예상 순도 및 질량을 확인한다. 쉬프 염기의 가수분해를 통한 아미오다론의 시험관내 유리를 확인하기 위하여, 수용액 중 정제된 아미오다론-헥사노일-CTP 펩티드를 평형화한 후, 이어서, 분석 역상 HPLC 모니터링을 수행한다.

실시예 6 - SHF 치료를 위한 뉴레귤린 - 1β - CTP

뉴레귤린-1β는 그의 수용체 (ErbB2-4)와 함께 정상적인 심장 발생에 요구되며, 이는 당뇨병 뿐만 아니라 경색을 앓는 동물 모델에서 아폽토시스, 심근 섬유화를 감소시키고, 경색 크기를 감소시키는 것으로 제시된 바 있다. 몇몇 소규모 임상 시험은 SHF 환자에서의 재조합 인간 뉴레귤린-1β의 비경구적 처리의 효능을 제시한 바 있다. 그러나, 상기 요법을 진료소로 도입시키는 것은 유의적인 간 독성 뿐만 아니라 저혈당증에 의한 제한으로 진전되지 못했다.

본 실시예는 CTP가 뉴레귤린-1β 하류에 있거나, 또는 그의 C-말단에 부착된, 뉴레귤린-1β 및 CTP 펩티드의 융합 단백질을 제공한다. 뉴레귤린-1β에 대한 프라이머가 디자인되고, CTP의 서열은 역방향 서열에 부가된다. 조합된 융합 단백질 서열은 폐, 간, 또는 신장으로부터 추출된 마우스 게놈 DNA를 이용하여 PCR에 의해 생성된다. 표준 클로닝 기술을 이용하여 생성물을 클로닝 T7 플라스미드로 블런드-말단 라이게이션시킨 후, BL21 박테리아 세포를 형질전환시킨다. 생성된 항생체 내성을 보유하는, 출현된 클로니를 서열분석하고, 올바른 서열을 보유하는 것을 확장시키고, 최선의 형질전환된 세포로서 보존하였다. 단백질 생산을 위해, 상기 세포를 대규모 (~500-1000 ml) 배양 배지 중에서 성장시키고 이소프로필-β-D-티오갈락토시드 자극 하에 융합 단백질을 생산하도록 유도한다. 단백질을 His-태그 및 His-코팅된 비드를 이용하여 단리시키고, 웨스턴 블롯에 의해 특징화한다.

참조로 포함

본원에 언급된 각각의 특허 및 과학 문헌의 전체 개시내용은 모든 목적을 위해 참조로 포함된다.

등가물

본 발명은 그의 취지 또는 필수적인 특징으로부터 벗어나지 않으면서 다른 구체적 형태로 구현될 수 있다. 따라서, 상기 실시양태는 모든 측면에서 본원에 기재된 본 발명을 제한하는 것이 아닌 예시하는 것으로 간주되어야 한다. 그러므로, 본 발명의 범주는 상기 상세한 설명이 아닌 첨부된 청구범위에 의해 지시되고, 청구범위의 등가의 의미 및 범위 내에 있는 모든 변화가 그에 포함되도록 의도된다.

SEQUENCE LISTING <110> University of Pittsburgh - Of the Commonwealth System of Higher Education <120> CARDIAC-SPECIFIC TARGETING-PEPTIDE (CTP), COMPOSITIONS, AND USES THEREOF <130> UPB-013WO <150> 62/675,307 <151> 2018-05-23 <150> 62/778,033 <151> 2018-12-11 <150> 62/811,077 <151> 2019-02-27 <160> 35 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Cardiac Targeting Peptide <400> 1 Ala Pro Trp His Leu Ser Ser Gln Tyr Ser Arg Thr 1 5 10 <210> 2 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Cardiac Targeting Peptide (CTP-P2A) <400> 2 Ala Ala Trp His Leu Ser Ser Gln Tyr Ser Arg Thr 1 5 10 <210> 3 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Cardiac Targeting Peptide (CTP-B), Amiodarone Conjugate <220> <221> BINDING <222> (1)..(1) <223> Amiodarone is bound to N-terminal amino acid <400> 3 Ser Gln Tyr Ser Arg Thr 1 5 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<222> (4)..(4) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 22 Ser Gln Tyr Xaa Arg Thr 1 5 <210> 23 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Cardiac Targeting Peptide <220> <221> VARIANT <222> (1)..(2) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> VARIANT <222> (4)..(5) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 23 Xaa Xaa Trp Xaa Xaa Thr 1 5 <210> 24 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Cardiac Targeting Peptide (CTP-A) <400> 24 Ala Pro Trp His Leu Ser 1 5 <210> 25 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Cardiac Targeting Peptide (CTP-P2A), Amiodarone Conjugate <220> <221> BINDING <222> (1)..(1) <223> Amiodarone is bound to N-terminal amino acid <400> 25 Ala Ala Trp His Leu Ser Ser Gln Tyr Ser Arg Thr 1 5 10 <210> 26 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Cardiac Targeting Peptide (H4A) <400> 26 Ala Pro Trp Ala Leu Ser Ser Gln Tyr Ser Arg Thr 1 5 10 <210> 27 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Cardiac Targeting Peptide (L5A) <400> 27 Ala Pro Trp His Ala Ser Ser Gln Tyr Ser Arg Thr 1 5 10 <210> 28 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Cardiac Targeting Peptide (S6A) <400> 28 Ala Pro Trp His Leu Ala Ser Gln Tyr Ser Arg Thr 1 5 10 <210> 29 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Cardiac Targeting Peptide (S7A) <400> 29 Ala Pro Trp His Leu Ser Ala Gln Tyr Ser Arg Thr 1 5 10 <210> 30 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Cardiac Targeting Peptide (Q8A) <400> 30 Ala Pro Trp His Leu Ser Ser Ala Tyr Ser Arg Thr 1 5 10 <210> 31 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Cardiac Targeting Peptide (Y9A) <400> 31 Ala Pro Trp His Leu Ser Ser Gln Ala Ser Arg Thr 1 5 10 <210> 32 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Cardiac Targeting Peptide (S10A) <400> 32 Ala Pro Trp His Leu Ser Ser Gln Tyr Ala Arg Thr 1 5 10 <210> 33 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Cardiac Targeting Peptide (R11A) <400> 33 Ala Pro Trp His Leu Ser Ser Gln Tyr Ser Ala Thr 1 5 10 <210> 34 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Cardiac Targeting Peptide (T12A) <400> 34 Ala Pro Trp His Leu Ser Ser Gln Tyr Ser Arg Ala 1 5 10 <210> 35 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Cardiac Targeting Peptide (W3A) <400> 35 Ala Pro Ala His Leu Ser Ser Gln Tyr Ser Arg Thr 1 5 10

Claims

항부정맥 특성을 갖는 모이어티에 연결된 서열식별번호: 1, 2, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 28, 29, 또는 34의 서열의 심장-특이적 표적화-펩티드 (CTP)를 포함하는 펩티드.
제1항에 있어서, 모이어티가 클래스 III 항부정맥 화합물 또는 클래스 IV 항부정맥 화합물인 펩티드.
제1항에 있어서, 모이어티가 아미오다론인 펩티드.
제1항에 있어서, CTP가 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 2, 및 서열식별번호: 5로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열을 갖는 것인 펩티드.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 항부정맥 특성을 갖는 모이어티가 쉬프 염기 화학을 사용하여 CTP에 연결되는 것인 펩티드.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 항부정맥 특성을 갖는 모이어티가 CTP 펩티드의 N-말단의 상류에 연결되는 것인 펩티드.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 펩티드가 N- 및/또는 C-말단에서 표지에 임의적으로 추가로 연결되는 것인 펩티드.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 펩티드가 C-말단에서 표지에 임의적으로 추가로 연결되는 것인 펩티드.
제7항 또는 제8항에 있어서, 표지가 녹색 형광 모이어티 또는 적색 형광 모이어티인 펩티드.
제9항에 있어서, 녹색 형광 모이어티가 6-카르복시플루오레세인인 펩티드.
제9항에 있어서, 적색 형광 모이어티가 Cy5.5인 펩티드.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 따른 펩티드 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제제.
제12항에 있어서, 지속형-전달 제제인 제제.
제12항 또는 제13항에 있어서, 제제가 제어형 방출 시스템을 사용하는 것인 제제.
제12항 또는 제13항에 있어서, 제제가 저속 방출 시스템을 사용하는 것인 제제.
제12항 또는 제13항에 있어서, 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 따른 펩티드를 적어도 6시간의 기간에 걸쳐 전달하는 제제.
제12항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 전달이 적어도 12시간의 기간에 걸쳐 이루어지는 것인 제제.
제12항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 전달이 적어도 24시간의 기간에 걸쳐 이루어지는 것인 제제.
제12항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 제제가 적어도 1일 1회 투여되는 것인 제제.
제12항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 제제가 적어도 1주 1회, 2주마다 1회, 1개월 1회, 30일마다 1회, 45일마다 1회, 또는 60일마다 1회 투여되는 것인 제제.
항부정맥 특성을 갖는 모이어티를 심장 근육 세포 내로 도입하는 방법으로서, 심장 근육 세포에 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항의 펩티드 또는 제12항 내지 제20항 중 어느 한 항의 제제를 항부정맥 특성을 갖는 모이어티를 심장 근육 세포 내로 도입하는데 효과적인 양으로 투여하는 것을 포함하는 방법.
제21항에 있어서, 펩티드가 마이크로구체 또는 나노입자를 추가로 포함하는 것인 방법.
심방 및/또는 심실 부정맥을 앓는 인간 대상체를 치료하는 방법으로서, 인간 대상체에게 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항의 펩티드 또는 제12항 내지 제20항 중 어느 한 항에 따른, 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 따른 펩티드를 포함하는 제제를 투여하는 것을 포함하는 방법.
제23항에 있어서, 심실 부정맥이 조기 심실 수축, 심실 빈맥, 및 심실 세동으로부터 선택되는 것인 방법.
제23항에 있어서, 심방 부정맥이 심방 세동인 방법.
Xaa₁ Xaa₂ Y Xaa₃ Xaa₄ T (서열식별번호: 4)의 서열을 포함하는 6개 아미노산 심장-특이적 표적화-펩티드 (CTP_6aa).
제26항에 있어서, S Q Xaa₁ S R Xaa₂ (서열식별번호: 6)의 서열을 포함하는 CTP_6aa.
제26항에 있어서, Xaa₁이 세린 (S)인 CTP_6aa.
제26항에 있어서, Xaa₂가 글루타민 (Q)인 CTP_6aa.
제26항에 있어서, Xaa₃이 세린 (S)인 CTP_6aa.
제26항에 있어서, Xaa₄가 아르기닌 (R)인 CTP_6aa.
제26항에 있어서, Xaa₁ 및 Xaa₂가 각각 세린 (S) 및 글루타민 (Q)인 CTP_6aa.
제26항에 있어서, Xaa₁ 및 Xaa₃가 둘 다 세린 (S)인 CTP_6aa.
제26항에 있어서, Xaa₁ 및 Xaa₄가 각각 세린 (S) 및 아르기닌 (R)인 CTP_6aa.
제26항에 있어서, Xaa₂ 및 Xaa₃이 각각 글루타민 (Q) 및 세린 (S)인 CTP_6aa.
제26항에 있어서, CTP_6aa가 서열 SQYSRT (서열식별번호: 5)를 포함하는 것인 CTP_6aa.
제27항에 있어서, Xaa₁이 알라닌 (A)이고, CTP_6aa가 SQASRXaa₂ (서열식별번호: 7)의 서열을 포함하거나, 또는 임의적으로, Xaa₁이 트립토판 (W)이고, CTP_6aa가 SQWSRXaa₂(서열식별번호: 8)의 서열을 포함하거나, 또는, Xaa₁이 티로신 (Y)이고, CTP_6aa가 SQYSRXaa₂ (서열식별번호: 9)의 서열을 포함하는 것인 CTP_6aa.
제27항에 있어서, Xaa₂가 트레오닌 (T)이고, Xaa₁이 알라닌 (A), 트립토판 (W), 또는 티로신 (Y)이며, 각각 SQASRT (서열식별번호: 10), SQWSRT(서열식별번호: 11), 또는 SQYSRT(서열식별번호: 5)의 서열을 포함하는 것인 CTP_6aa.
제27항에 있어서, Xaa₂가 알라닌 (A)인 CTP_6aa.
제27항에 있어서, Xaa₁이 티로신 (Y)이고, Xaa₂가 알라닌 (A)인 CTP_6aa.
제27항에 있어서, CTP_6aa가 서열 SQYSRT (서열식별번호: 5)를 포함하는 것인 CTP_6aa.
제26항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, CTP_6aa가 항부정맥 특성을 갖는 나노입자 또는 모이어티에 접합되거나 또는 융합되는 것인 CTP_6aa.
심장 조직 또는 심장 병태의 치료를 필요로 하는 대상체에서 심장 조직 또는 심장 병태를 치료하는 방법으로서, 대상체에게 제42항의 접합된 또는 융합된 CTP_6aa를 포함하는 조성물의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함하는 방법.
제26항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, CTP_6aa가 타파진 펩티드에 접합되거나 또는 융합되는 것인 CTP_6aa.
제44항에 있어서, CTP_6aa가 폴리펩티드 링커를 통해 타파진 펩티드에 접합되거나 또는 융합되는 것인 CTP_6aa.
타파진 결핍 또는 리모델링된 카디오리핀 결핍과 연관된 장애를 앓는 대상체를 치료하는 방법으로서, 대상체에게 제44항 또는 제45항의 타파진-접합된 CTP_6aa를 포함하는 조성물의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함하는 방법.
바르트 증후군을 앓거나, 또는 그를 발병할 위험이 있는 대상체를 치료하는 방법으로서, 대상체에게 제44항 또는 제45항의 타파진-접합된 CTP_6aa를 포함하는 조성물의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함하는 방법.
제26항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, CTP_6aa가 검출가능한 작용제에 접합되는 것인 CTP_6aa.
제48항에 있어서, 검출가능한 작용제가 방사성핵종 또는 방사성 모이어티, 비오틴, 루시페라제, 효소, 로다민, 형광단, 나노입자, 마이크로버블, 리포솜 또는 발광 모이어티인 CTP_6aa.
제26항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, 전달 비히클/작용제로서 제제화되는 CTP_6aa.
제50항에 있어서, CTP_6aa가 약물 또는 치료제, 나노입자, 펩티드, 단백질, 또는 검출가능한 작용제에 접합되는 것인 CTP_6aa.
제51항에 있어서, CTP_6aa가 에스테르 연결, 디술피드 또는 프로테아제 감수성 링커를 통해 약물 또는 치료제, 나노입자, 펩티드, 단백질, 또는 검출가능한 작용제에 접합되는 것인 CTP_6aa.
제51항 또는 제52항에 있어서, 나노입자가 약물 또는 치료제를 포함하는 것인 CTP_6aa.
제51항 내지 제53항 중 어느 한 항에 있어서, 약물 또는 치료제가 항체 또는 그의 단편, SB239063, 슈퍼옥시드 디스뮤타제, HGF, FGF-1, FGF-2, NF-ĸB 억제제, NSD 펩티드, 헴 옥시게나제, 항산화제, iNOS, S100A1, 카탈라제, 글루타티온 퍼옥시다제, TGFβ 억제제, VEGF, 소닉 헤지호그 단백질, HGF, IAP, 프로스타글란딘, 피르비늄 파모에이트, 디프로틴 A, 제토-쉴러 펩티드, 시클로스포린, 및 아미오다론으로부터 선택되는 것인 CTP_6aa.
심장 조직 또는 심장 병태의 치료를 필요로 하는 대상체에서 심장 조직 또는 심장 병태를 치료하는 방법으로서, 대상체에게 제54항의 CTP_6aa를 포함하는 조성물의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함하는 방법.
카고(cargo)를 심장 근육 세포 내로 도입하는 방법으로서, 심장 근육 세포에, 카고를 심장 근육 세포 내로 도입하는데 효과적인, 카고에 연결된 제26항 내지 제41항 중 어느 한 항의 CTP_6aa를 포함하는 복합체의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함하는 방법.
제56항에 있어서, 카고가 방사성동위원소, 형광 마커, 가돌리늄 마커, 루시페라제 마커, 마이크로구체 또는 나노입자를 포함하는 것인 방법.
심근 경색을 앓는 인간 대상체를 치료하는 방법으로서, 인간 대상체에게 카고에 연결된 제26항 내지 제41항 중 어느 한 항의 CTP_6aa를 포함하는 복합체의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함하여 카고를 인간 대상체의 심장 근육 세포 내로 도입하는 것을 포함하며, 여기서 카고는 세포 사멸을 억제하거나, 부정맥을 억제하거나, 수축성을 개선시키거나, 대상체 생존을 연장시키거나, 또는 그의 조합인 방법.
제58항에 있어서, 카고가 NF-ĸB 억제제, NSD 펩티드, 헴 옥시게나제, 항산화제, iNOS, S100A1, 슈퍼옥시드 디스뮤타제, 카탈라제, 글루타티온 퍼옥시다제, TGFβ 억제제, VEGF, FGF-1, FGF-2, 소닉 헤지호그 단백질, HGF, 클래스 III 항부정맥 화합물, 클래스 IV 항부정맥 화합물, 및 IAP로부터 선택되는 것인 방법.
심근 경색을 앓는 인간 대상체를 치료하는 방법으로서, 인간 대상체에게 카고에 연결된 제26항 내지 제41항 중 어느 한 항의 CTP_6aa를 포함하는 복합체의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함하여 카고를 인간 대상체의 심장 조직 내로 도입하는 것을 포함하며, 여기서 카고는 세포 사멸을 억제하거나, 부정맥을 억제하거나, 수축성을 개선시키거나, 대상체 생존을 연장시키거나, 또는 그의 조합인 방법.
제60항에 있어서, 카고가 NF-ĸB 억제제, NBD 펩티드, 헴 옥시게나제, 항산화제, iNOS, S100A1, 슈퍼옥시드 디스뮤타제, 카탈라제, 글루타티온 퍼옥시다제, TGFβ 억제제, VEGF, FGF-1, FGF-2, 소닉 헤지호그 단백질, HGF, 클래스 III 항부정맥 화합물, 클래스 IV 항부정맥 화합물, 및 IAP로부터 선택되는 것인 방법.
심장을 손상시키는 대사 결함을 앓는 대상체를 치료하는 방법으로서, 대상체에게 카고에 연결된 제26항 내지 제41항 중 어느 한 항의 CTP_6aa를 포함하는 복합체의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함하여 카고를 인간 대상체의 심장 근육 세포 내로 도입하는 것을 포함하며, 여기서 카고는 대사 결함을 교정하는 것인 방법.
제62항에 있어서, 대사 결함이 고셔병이고, 카고가 글루코세레브로시다제인 방법.
심장을 손상시키는 대사 결함을 앓는 대상체를 치료하는 방법으로서, 대상체에게 카고에 연결된 제26항 내지 제41항 중 어느 한 항의 CTP_6aa를 포함하는 복합체의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함하여 카고를 인간 대상체의 심장 조직 내로 도입하는 것을 포함하며, 여기서 카고는 대사 결함을 교정하는 것인 방법.
제64항에 있어서, 대사 결함이 고셔병이고, 카고가 글루코세레브로시다제인 방법.
SS 펩티드에 연결된 서열식별번호: 1, 2, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 28, 29, 또는 34의 서열의 심장-특이적 표적화-펩티드 (CTP)를 포함하는 펩티드.
제66항에 있어서, SS 펩티드가 CTP 펩티드의 N-말단의 상류에 연결되는 것인 펩티드.
제67항에 있어서, CTP와 SS 펩티드 사이에 에스테르 연결을 포함하는 펩티드.
제68항에 있어서, 에스테르 연결이 세포내 에스테라제에 의해 절단가능한 에스테르 연결인 펩티드.
헴-옥시게나제 1 단백질에 연결된 서열식별번호: 1, 2, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 28, 29, 또는 34의 서열의 심장-특이적 표적화-펩티드 (CTP)를 포함하는 펩티드.
제70항에 있어서, 헴-옥시게나제 1 단백질이 에스테르 연결로 CTP 펩티드의 N-말단의 상류에 연결되는 것인 펩티드.
레스베라트롤, N-아세틸-시스테인, N-tert-부틸-α-페닐니트론, 및 4-히드록시-2,2,6,6-테트라메틸피페리딘-1-옥실로부터 선택되는 소분자에 연결된 서열식별번호: 1, 2, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 28, 29, 또는 34의 서열의 심장-특이적 표적화-펩티드 (CTP)를 포함하는 펩티드.
확장기 심부전 (DHF)을 앓는 인간 대상체를 치료하는 방법으로서, 인간 대상체에게 제66항 내지 제69항 중 어느 한 항의 펩티드를 투여함으로써 카고를 인간 대상체의 심장 근육 세포 내로 도입하는 것을 포함하며, 여기서 SS 펩티드는 H₂O₂, 및 ONOO-, 및/또는 LDL 산화를 스캐빈징하는 것인 방법.
제73항에 있어서, 카고가 SS-02 및 SS-031로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
노화 및/또는 산화 스트레스 관련 질환 및/또는 장애의 치료를 필요로 하는 대상체에서 상기 질환 및/또는 장애를 치료하는 방법으로서, 제66항 내지 제69항 중 어느 한 항의 펩티드를 대상체의 기관 또는 조직 내로 도입하는 것을 포함하는 방법.
제75항에 있어서, 질환 및/또는 장애가 허혈-재관류 손상, 신경변성 질환, 당뇨병, 염증성 질환 예컨대 아테롬성동맥경화증, 관절염, 및 간염으로부터 선택되는 것인 방법.
제66항 내지 제72항 중 어느 한 항에 있어서, Ca²⁺ 과부하로 인한, 미토콘드리아 투과성 전이 (MPT)를 억제함으로써, 미토콘드리아 팽윤을 방지함으로써, 및/또는 시토크롬 c 방출을 감소시킴으로써 대상체를 치료하는 방법에서 사용하기 위한 펩티드.
제66항 내지 제72항 중 어느 한 항에 있어서, 미토콘드리아 투과성 전이 (MPT)-유도 ROS 축적을 최소화하여, 이로써 미토콘드리아에 대한 산화적 손상을 감소시킴으로써 대상체를 치료하는 방법에서 사용하기 위한 펩티드.
심장을 손상시키는 대사 결함을 앓는 대상체를 치료하는 방법으로서, 대상체에게 제66항 내지 제69항 중 어느 한 항의, SS 펩티드에 연결된 CTP를 투여하는 것을 포함하여 ROS 스캐빈징 특성을 갖는 펩티드를 대상체의 심장 근육 세포 내로 도입하는 것을 포함하며, 여기서 SS 펩티드는 대사 결함을 교정하는 것인 방법.
제79항에 있어서, 대사 결함이 고셔병인 방법.