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KR20210016056A - 항-bcma 항체 및 그 용도 - Google Patents

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KR20210016056A KR1020217002319A KR20217002319A KR20210016056A KR 20210016056 A KR20210016056 A KR 20210016056A KR 1020217002319 A KR1020217002319 A KR 1020217002319A KR 20217002319 A KR20217002319 A KR 20217002319A KR 20210016056 A KR20210016056 A KR 20210016056A
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Abstract

BCMA에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 이를 제조하는 방법, 및 그의 용도를 제공한다. 이에 따르면, 암을 효과적으로 예방 또는 치료하는데 이용할 수 있다.

Description

항-BCMA 항체 및 그 용도
B 세포 성숙 항원(B Cell Maturation Antigen: BCMA) 단백질에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 이를 제조하는 방법, 및 그의 용도에 관한 것이다.
B 세포 성숙 항원(B Cell Maturation Antigen: BCMA)은 약 20 KDa의 단백질로서 종양괴사인자 수용체(Tumor Necrosis Factor receptor: TNFR)에 속하는 단백질이다. BCMA는 B 세포 활성화 인자(B-cell Activating Factor belonging to the Tumor Necrosis Factor family: BAFF)와 증식 유도 리간드(A Proliferation Inducing Ligand: APRIL)의 리간드로 알려져 있다. 병리적 상황에서 BCMA는 다발성 골수종(multiple myeloma: MM) 환자의 종양 형질 세포(neoplastic plasma cell)에서 발현하며, 다발성 골수종 환자군의 생존률은 BCMA 발현이 높을수록 낮아진다(Moreaux et al., Eur J Haematol 2009; 83:119-129).
다발성 골수종은 형질세포의 단클론성의 증식으로 인하여 발생하는 종양성 질환으로, 그동안 탈리도마이드(thalidomide), 보르테조밉(bortezomib), 레날리도마이드(lenalidomide) 등의 약제의 개발과 치료방법의 발달로 초기 치료 반응율은 증가하였으나, 아직까지 생존기간에 있어서 뚜렷한 향상성을 보이지 못하고 있는 실정이다. 최근, 다발성 골수종의 치료제로 CD38과 CS-1/SLAMF7을 표적으로 하는 모노클론 항체가 FDA에 승인을 받았으나, 재발성, 난치성 다발성 골수종 환자 (relapsed/refractory patients)를 포함한 일부군에선 효과가 미미하며, 특히 CD38이 림프구를 포함한 면역세포 뿐만 아니라 적혈구의 표면에서도 일부 발현이 되어 CD38에 대한 항체 처리시 각종 수혈전검사에서 위양성을 보이는 경우가 보고되고 있다. 따라서, 기존 약물대비 부작용이 적으며, 효능이 증가된 다발성 치료제의 개발이 필요한 실정이다.
정상세포에서의 제한적인 발현과 병리적 상황에서의 특이적 발현 양상을 보이는 BCMA는 다발성 골수종 치료제의 주요 타겟 후보물질 중 하나로 고려되고 있다. 따라서, BCMA를 특이적으로 인식하여 이의 기능을 억제 또는 조절할 수 있는 항체를 개발할 필요가 있다.
BCMA에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다.
BCMA의 활성화 또는 과생성과 관련된 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
BCMA에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제조하는 방법을 제공한다.
BCMA 단백질의 활성화 또는 과생성과 관련된 암을 예방 또는 치료하는 방법을 제공한다.
서열번호 27 내지 55로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역;
서열번호 56 내지 84 및 120 내지 128로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역;
또는 상기 중쇄 가변 영역 및 상기 경쇄 가변영역을 포함하는 B 세포 성숙 항원(B Cell Maturation Antigen: BCMA)에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다.
상기 중쇄(heavay chain)는 5가지(γ, δ, α, μ, ε) 종류가 있으며 중쇄가 항체의 종류를 결정짓는다. α와 γ는 450개, μ 와 ε는 550개의 아미노산으로 구성되어 있다. 중쇄는 두 영역 즉 가변 영역과 불변 영역이 있다.
상기 경쇄(light chain)는 λ, κ 2가지 종류가 있으며 대략 211 내지 217개의 아미노산으로 구성되어 있다. 사람의 항체 각각에는 모두 동일하게 1가지의 사슬(chain)만이 존재한다. 경쇄는 불변 영역과 가변 영역이 연속적으로 이루어져 있다.
상기 가변 영역(variable region)은 항체에서 항원이 결합하는 영역을 말한다.
상기 중쇄 가변 영역은 서열번호 27 내지 34로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 상보성 결정 영역(complementarity determining region: CDR)-H1; 서열번호 35 내지 45로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및 서열번호 46 내지 55로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함할 수 있다. 용어 "상보성　결정 영역(Complementarity-determining region: CDR)"은 항체의 가변 부위 중에서 항원과의 결합 특이성을 부여하는 부위를 말한다. 예를 들어, 상기 중쇄 가변 영역은 서열번호 5 내지 15로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
상기 경쇄 가변 영역은 서열번호 56 내지 65, 120, 121, 및 124 내지 128로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1; 서열번호 66 내지 74로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및 서열번호 75 내지 84, 122, 및 123로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함할 수 있다. 예를 들어, 상기 경쇄 가변 영역은 서열번호 16 내지 26 및 107 내지 119으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
상기 항체는 서열번호 27로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열번호 35로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 서열번호 46으로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3, 서열번호 56으로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열번호 66으로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열번호 75로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 항체일 수 있다.
상기 항체는 서열번호 28로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열번호 36으로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 서열번호 47로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3, 서열번호 57로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열번호 67로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열번호 76으로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 항체일 수 있다.
상기 항체는 서열번호 29로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열번호 37로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 서열번호 48로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3, 서열번호 58로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열번호 68로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열번호 77로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 항체일 수 있다.
상기 항체는 서열번호 30으로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열번호 38로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 서열번호 49로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3, 서열번호 59로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열번호 68로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열번호 78로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 항체일 수 있다.
상기 항체는 서열번호 31로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열번호 39로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 서열번호 48로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3, 서열번호 60으로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열번호 69로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열번호 79로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 항체일 수 있다.
상기 항체는 서열번호 31로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열번호 40으로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 서열번호 50으로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3, 서열번호 61로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열번호 70으로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열번호 80으로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 항체일 수 있다.
상기 항체는 서열번호 32로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열번호 41로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 서열번호 51로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3, 서열번호 62로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열번호 71로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열번호 81로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 항체일 수 있다.
상기 항체는 서열번호 33으로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열번호 42로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 서열번호 52로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3, 서열번호 63으로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열번호 72로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열번호 82로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 항체일 수 있다.
상기 항체는 서열번호 33으로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열번호 43으로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 서열번호 53으로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3, 서열번호 64로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열번호 73으로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열번호 83으로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 항체일 수 있다.
상기 항체는 서열번호 33으로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열번호 44로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 서열번호 54로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3, 서열번호 63으로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열번호 72로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열번호 82로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 항체일 수 있다.
상기 항체는 서열번호 34로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열번호 45로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 서열번호 55로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3, 서열번호 65로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열번호 74로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열번호 84로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 항체일 수 있다.
상기 항체는 서열번호 28로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열번호 36으로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 서열번호 47로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3, 서열번호 120으로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열번호 67로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열번호 76으로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 항체일 수 있다.
상기 항체는 서열번호 28로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열번호 36으로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 서열번호 47로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3, 서열번호 121로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열번호 67로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열번호 76으로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 항체일 수 있다.
상기 항체는 서열번호 28로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열번호 36으로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 서열번호 47로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3, 서열번호 57로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열번호 67로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열번호 122로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 항체일 수 있다.
상기 항체는 서열번호 28로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열번호 36으로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 서열번호 47로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3, 서열번호 57로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열번호 67로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열번호 123으로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 항체일 수 있다.
상기 항체는 서열번호 28로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열번호 36으로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 서열번호 47로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3, 서열번호 120으로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열번호 67로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열번호 122로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 항체일 수 있다.
상기 항체는 서열번호 28로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열번호 36으로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 서열번호 47로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3, 서열번호 120으로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열번호 67로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열번호 123으로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 항체일 수 있다.
상기 항체는 서열번호 28로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열번호 36으로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 서열번호 47로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3, 서열번호 121로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열번호 67로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열번호 122로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 항체일 수 있다.
상기 항체는 서열번호 28로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열번호 36으로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 서열번호 47로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3, 서열번호 121로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열번호 67로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열번호 123으로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 항체일 수 있다.
상기 항체는 서열번호 29로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열번호 37로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 서열번호 48로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3, 서열번호 124로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열번호 68로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열번호 77로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 항체일 수 있다.
상기 항체는 서열번호 29로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열번호 37로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 서열번호 48로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3, 서열번호 125로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열번호 68로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열번호 77로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 항체일 수 있다.
상기 항체는 서열번호 29로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열번호 37로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 서열번호 48로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3, 서열번호 126으로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열번호 68로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열번호 77로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 항체일 수 있다.
상기 항체는 서열번호 29로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열번호 37로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 서열번호 48로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3, 서열번호 127로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열번호 68로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열번호 77로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 항체일 수 있다.
상기 항체는 서열번호 29로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열번호 37로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2, 서열번호 48로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3, 서열번호 128로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열번호 68로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열번호 77로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 항체일 수 있다.
상기 서열번호 120 내지 128 중 하나 이상의 경쇄 CDR을 포함하는 항체는 각각의 야생형 항체에 비해 표적 항원 결합능이 향상된 것일 수 있다.
상기 B 세포 성숙 항원(B Cell Maturation Antigen: BCMA)는 BCMA 폴리펩티드 또는 그의 단편일 수 있다. BCMA는 TNFRSF17(tumor necrosis factor receptor superfamily member 17), BCM, CD269, 또는 TNFRSF13A, TNF 수용체 수퍼패밀리 멤버 17로도 불릴 수 있다. 상기 BCMA 폴리펩티드는 GenBank Accession No. NP_001183의 인간 아미노산 서열, 또는 GenBank Accession No. NP_035738의 마우스 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 상기 BCMA 폴리펩티드는 GenBank Accession No. NM_001192의 폴리뉴클레오티드(인간), 또는 GenBank Accession No. NM_011608의 폴리뉴클레오티드(마우스)에 의해 암호화되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 상기 단편은 BCMA 폴리펩티드의 일부 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드일 수 있다.
상기 BCMA에 특이적으로 결합하는 것은 BCMA 폴리펩티드 또는 그의 단편에 친화도를 갖는 것일 수 있다. 상기 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 BCMA의 세포외 도메인에 친화도를 갖는 것일 수 있다. 상기 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열번호 1에서 N 말단으로부터 1 내지 54번째 아미노산 서열 중 어느 아미노산에 특이적으로 결합할 수 있다.
상기 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 BCMA 단백질과 BCMA 단백질에 특이적으로 결합하는 물질의 결합을 저해할 수 있다. 상기 BCMA 단백질에 특이적으로 결합하는 물질은 리간드(ligand)로도 지칭될 수 있고, 예를 들면 B 세포 활성화 인자(B-cell Activating Factor belonging to the Tumor Necrosis Factor family: BAFF), 증식 유도 리간드(A Proliferation Inducing Ligand: APRIL), 또는 이들의 조합이다.
상기 용어 "항체(antibody)"는 용어 "면역글로불린(immunoglobulin: Ig)"과 상호교환적으로 사용된다. 완전한 항체는 2개의 전장(full length) 경쇄 및 2개의 전장 중쇄를 가지는 구조이며 각각의 경쇄는 중쇄와 이황화 결합(disulfide bond: SS-bond)로 결합한다. 항체는 예를 들면, IgA, IgD, IgE, IgG, 또는 IgM일 수 있다. 상기 항체는 모노클론 항체 또는 폴리클론 항체일 수 있다. 상기 항체는 동물 유래 항체, 마우스-인간 키메릭 항체(chimeric antibody), 인간화 항체(humanized antibody), 또는 인간 항체일 수 있다.
상기 용어 "항원 결합 단편(antigen-binding fragment)"은 면역글로불린 전체 구조에 대한 그의 단편으로, 항원이 결합할 수 있는 부분을 포함하는 폴리펩티드의 일부를 말한다. 예를 들어, 항원 결합 단편은 scFv, (scFv)2, Fv, Fab, Fab', Fv F(ab')2, 또는 이들의 조합일 수 있다.
상기 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 변형된 것일 수 있다. 예를 들면, 상기 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 접합(conjugation) 또는 결합, 당화(glycosylation), 탈아미드화(deamidation), 태그 부착, 또는 이들의 조합으로 변형된 것일 수 있다.
상기 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 항암제와 같은 다른 약물과 접합될 수 있다. 예를 들면, 상기 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 호스라디쉬 퍼옥시다아제(horseradish peroxidase: HRP), 알칼린 포스파타아제, 햅텐(hapten), 비오틴, 스트렙타비딘, 형광 물질, 방사성 물질, 양자점, 폴리에틸렌 글리콜(Polyethylene glycol: PEG), 히스티딘 태그, 또는 이들의 조합과 결합된 것일 수 있다. 상기 형광 물질은 Alexa Fluor®532, Alexa Fluor®546, Alexa Fluor®568, Alexa Fluor®680, Alexa Fluor®750, Alexa Fluor®790, 또는 Alexa Fluor™350일 수 있다.
BCMA에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 포함하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
상기 항체, 항원 결합 단편, 및 BCMA는 전술한 바와 같다.
상기 암은 BCMA 단백질의 활성화 또는 과생성과 관련된 질병일 수 있다. 상기 암은 고형암 또는 비고형암일 수 있다. 고형암은 예를 들어 간, 폐, 유방, 피부 등 장기에 암 종양이 발생한 것을 말한다. 비고형암은 혈액 내에서 발생한 암이고, 혈액암으로도 불린다. 상기 암은 다발성 골수종일 수 있다.
상기 용어 "예방"은 상기 약학적 조성물의 투여에 의해 암을 억제하거나 그의 발병을 지연시키는 모든 행위를 말한다. 상기 용어 "치료"는 상기 약학적 조성물의 투여에 의해 암의 증세가 호전되거나 이롭게 변경하는 모든 행위를 말한다.
상기 약학적 조성물은 약학적으로 허용가능한 담체를 포함할 수 있다. 상기 담체는 부형제, 희석제 또는 보조제를 포함하는 의미로 사용된다. 상기 담체는 예를 들면, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 소르비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리트리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알기네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로스, 메틸 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 생리식염수, PBS와 같은 완충액, 메틸히드록시 벤조에이트, 프로필히드록시 벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트, 및 미네랄 오일로 이루어진 군으로부터 선택된 것일 수 있다. 상기 조성물은 충진제, 항응집제, 윤활제, 습윤제, 풍미제, 유화제, 보존제, 또는 이들의 조합을 포함할 수 있다.
상기 약학적 조성물은 통상의 방법에 따라 임의의 제형으로 준비될 수 있다. 상기 조성물은 예를 들면, 경구 투여 제형(예를 들면, 분말, 정제, 캡슐, 시럽, 알약, 또는 과립), 또는 비경구 제형(예를 들면, 주사제)으로 제형화될 수 있다. 또한, 상기 조성물은 전신 제형, 또는 국부 제형으로 제조될 수 있다.
상기 약학적 조성물은 상기 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 항암제, 또는 이들의 조합을 유효한 양으로 포함할 수 있다. 용어 "유효한 양"은 예방 또는 치료를 필요로 하는 개체에게 투여되는 경우 예방 또는 치료의 효과를 나타내기에 충분한 양을 말한다. 상기 유효한 양은 당업자가 선택되는 세포 또는 개체에 따라 적절하게 선택할 수 있다. 질환의 중증도, 환자의 연령, 체중, 건강, 성별, 환자의 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료 기간, 사용된 조성물과 배합 또는 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 상기 유효한 양은 상기 약학적 조성물 당 약 0.5 ㎍ 내지 약 2 g일 수 있다.
상기 약학적 조성물의 투여량은 예를 들어, 성인 기준으로 약 0.001 ㎎/kg 내지 약 100 ㎎/kg의 범위 내 일 수 있다. 상기 투여는 1일 1회, 1일 다회, 또는 1주일 내지 4주일에 1회, 또는 1년에 1회 내지 12회 투여될 수 있다.
BCMA에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 개체에게 투여하는 단계를 포함하는 암을 예방 또는 치료하는 방법을 제공한다.
상기 항체, 항원 결합 단편, BCMA, 암, 예방, 및 치료는 전술한 바와 같다.
상기 개체는 포유동물, 예를 들면, 인간, 소, 말, 돼지, 개, 양, 염소 또는 고양이일 수 있다. 상기 개체는 BCMA 단백질의 활성화 또는 과생성과 관련된 질병, 예를 들어 암을 앓거나 앓을 가능성이 큰 개체일 수 있다.
상기 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 항암제, 또는 이들의 조합은 예를 들면, 경구, 정맥내, 근육내, 경피(transdermal), 점막, 코안(intranasal), 기관내(intratracheal) 또는 피하 투여와 같은, 임의의 수단에 의하여 개체로 직접적으로 투여될 수 있다. 상기 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 항암제, 또는 이들의 조합는 전신적으로 또는 국부적으로 투여될 수 있고, 단독으로 또는 다른 약학적 활성 화합물과 함께 투여될 수 있다.
상기 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 항암제, 또는 이들의 조합의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물 형태, 투여 경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 상기 투여량은 예를 들어, 성인 기준으로 약 0.001 ㎎/kg 내지 약 100 ㎎/kg의 범위 내 일 수 있다. 상기 투여는 1일 1회, 1일 다회, 또는 1주일 내지 4주일에 1회, 또는 1년에 1회 내지 12회 투여될 수 있다.
BCMA에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편 및 그의 용도에 따르면, 암을 효과적으로 예방 또는 치료하는데 이용할 수 있다.
도 1a는 1H, 2G, 및 5G 항체의 인간 BCMA 또는 원숭이 BCMA에 대한 결합력을 ELISA로 측정한 결과를 나타낸 그래프이고, 도 1b는 B58, 2C6, 5C3, 5B5, 5A6, 5D5, 2F8 및 4H9 항체의 인간 BCMA에 대한 결합력을 ELISA로 측정한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 2a는 H929(다발성 골수종 세포), OPM-2(다발성 골수종 세포), 및 인간 BCMA가 과발현된 CHOK1-hBCMA 세포주에서 세포 표면 BCMA에 대한 선별된 항체의 결합력을 FACS로 측정한 그래프이고, 도 2b는 BCMA 발현을 하지 않는 Raji(B-림프구 암세포주), 및 CHOK1 세포주에서 세포 표면 BCMA에 대한 선별된 항체의 결합력을 FACS로 측정한 그래프이다.
도 3은 인간, 원숭이, 마우스 및 레트의 BCMA에 대하여 B58, 5A6, 5D5, 및 5B5 항체의 결합력을 ELISA로 측정한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 4는 인간 BCMA, 인간 TACI, 및 인간 BAFF-수용체에 대하여 B58, 5A6, 5D5, 및 5B5 항체의 결합력을 ELISA로 측정한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 5a 내지 5d는 각각 B58, 5A6, 5D5, 및 5B5 항체를 다른 항체와 인간 BCMA와 경쟁적으로 결합시킨 결과를 나타낸 그래프이다(Ref. Ab: J6MO 항체).
도 6a는 인간 BCMA에 대한 APRIL 리간드와 항체를 경쟁적으로 결합시킨 결과를 나타낸 그래프이고, 도 6b는 인간 BCMA에 대한 BAFF 리간드와 항체를 경쟁적으로 결합시킨 결과를 나타낸 그래프이다.
도 7은 H929 세포 및 Raji 세포에서 B58, 5A6, 5D5, 5B5, 및 5A6(DANA) 항체의 항체-의존성 세포독성 평가(ADCC) 결과를 나타낸 그래프이다.
도 8a 내지 8c는 각각 다발성 골수종 암세포주 H929 주사 후 시간(일)에 따른 종양의 크기(㎣), 항체별 종양의 크기(㎣), 및 항체별 종양의 무게(g)를 나타낸 그래프이다.
도 9a 내지 9c는 각각 다발성 골수종 암세포주 OPM-2 주사 후 시간(일)에 따른 종양의 크기(㎣), 항체별 종양의 크기(㎣), 및 항체별 종양의 무게(g)를 나타낸 그래프이다.
도 10a 및 10b는 돌연변이 5A6, 5D5와 각각의 야생형 항체의 표적 항원에 대한 결합력을 나타낸 결과이고, 도 10c 및 10d는 돌연변이 5A6, 5D5와 각각의 야생형 항체의 세포 표면 BCMA에 대한 선별된 항체의 결합력을 FACS로 측정한 그래프이다.
도 11은 돌연변이 5A6 LM6, 5D5 LM4와 각각의 야생형 항체를 이용하여 재조합 인간 BCMA 항원에 대한 결합력을 나타낸 그래프이다.
도 12는 돌연변이 5A6 LM6, 5D5 LM4와 각각의 야생형 항체의 항체-의존성 세포독성 평가(ADCC) 결과를 나타낸 그래프이다.
도 13은 다발성 골수종 암세포주인 H929를 마우스에 주입하고 돌연변이 5A6 LM6, 5D5 LM4와 각각의 야생형 항체의 투여한 경우, 시간(일)에 따른 종양의 크기(㎣)를 나타낸 그래프이다.
이하 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나, 이들 실시예는 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.
실시예 1. 항-BCMA 항체의 준비
1. 항원의 제조
항-BCMA 항체의 제조를 위해 항원을 다음과 같이 제조하였다. 인간 BCMA(NP_001183.2, 서열번호 1)의 아미노산 서열에서 N-말단으로부터 5 내지 54번째 잔기, 1 내지 51번째 잔기, 1 내지 54 번째 잔기, 및 4 내지 48 번째 잔기를 포함하는 항원을 각각 사용하였다.
구체적으로, 인간 BCMA 5 내지 54번째 잔기(Genscript®, Z02731)를 포함하는 항원("인간 BCMA(5-54)"), 인간 BCMA 1-51(자체 제작, CHO 세포에서 발현시킴)를 인간 IgG1의 Fc 영역에 융합시킨 항원("인간 BCMA-Fc(1-51)), C 말단에 Fc 영역 및 His 태그가 융합된 인간 BCMA 1-51 항원(10620-H03H, Sino Biological Inc.)("인간 BCMA-Fc/His(1-51)"), 및 인간 BCMA 4-48(자체 제작, HEK293 세포에서 발현시킴)을 Fc 영역에 융합시킨 항원("인간 BCMA-Fc(4-48)")을 준비하였다.
인간 BCMA-Fc(4-48)은 하기와 같이 제조하였다. 인간 BCMA 4 내지 48 번째 잔기를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 CMV 프로모터를 포함하는 동물세포 발현용 벡터인 pAB1-Fc에 클로닝하였다. 클로닝된 벡터를 HEK293E 세포에 형질전환시키고, 단백질 A 친화성 크로마토그래피를 사용하여 인간 BCMA-Fc(4-48)을 정제하였다. 인간 BCMA-Fc(1-51)도 같은 방법으로 제조하였다.
또한, 종간 교차반응성을 확인하기 위해, 인간 IgG1의 Fc 영역이 융합된 원숭이(Rhesus) BCMA(1-53)(90103-C02H, Sino Biological Inc.), 마우스 BCMA(1-49)(50076-M01H, Sino Biological Inc.), 및 레트 BCMA(1-49)(80156-R01H, Sino Biological Inc.)를 사용하였다. 원숭이 BCMA(1-53), 마우스 BCMA, 및 래트 BCMA의 아미노산 서열을 하기 표 1에 기재하였다.
항원 아미노산 서열(N->C) 서열번호
원숭이 BCMA (1-53) MLQMARQCSQNEYFDSLLHDCKPCQLRCSSTPPLTCQRYCNASMTNSVKGMNA 2
마우스 BCMA (1-49) MAQQCFHSEYFDSLLHACKPCHLRCSNPPATCQPYCDPSVTSSVKGTYT 3
레트 BCMA (1-49) MAQRCFHSEYFDSLLHACKPCRLRCSNPPAPCQPYCDPSMTSSVRGTYT 4
2. 라이브러리 파아지(Library phage) 준비 및 파아지 디스플레이 패닝(panning)다양한 항원에 대해 결합 가능성을 가지는 인간 유래 ScFv(Single-chain variable fragment) 파아지 라이브러리 세포(Mol. Cells OT, 225-235, February 28, 2009)를 준비하였다. 준비된 파아지 라이브러리에 헬퍼 파아지(helper phage)를 감염시킨 후 파아지 패킹을 유도하였다. 그 후 배양액을 4℃에서 4500 rpm으로 15분 동안 원심분리 한 후, 상등액에 4%(w/v) PEG 6000(Fluka, 81253)과 3% NaCl(Sigma, S7653)을 첨가하여 잘 녹인 후, 얼음에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 이를 다시 4℃에서 8000 rpm으로 20분간 원심분리 한 후, 펠렛을 PBS로 현탁한 후, 다시 4℃에서 12000 rpm으로 10분간 원심분리하여 라이브러리 파아지를 포함하는 상등액을 수득하였다. 수득된 라이브러리 파아지는 사용시까지 4℃에서 보관하였다.
인간 BCMA, 인간 BCMA 및 원숭이 BCMA에 교차 반응성이 있는 항체를 스크리닝 하기 위해 다음과 같은 방법으로 총 3회 패닝을 수행하였다. 면역 시험관(immunotube, maxisorp 444202)에 5 ㎍의 실시예 1.1에서 준비된 항원을 가하고, 4℃에서 16시간 동안 인큐베이션하여 시험관 표면에 단백질을 코팅하였다. 상등액을 제거하고, 비특이적 결합을 차단하기 위해 BSA(Bovine serum albumin)를 가하여 블로킹하였다.
실시예 1.2에서 준비된 1012 CFU의 파아지 라이브러리를 1.5%(w/v)의 BSA를 혼합하고, 항원 단백질이 코팅된 면역시험관에 가한 후 37℃에서 1시간 동안 반응시켜 BCMA-특이적인 파아지가 항원에 결합하도록 하였다. 이어 PBS-T(phosphate buffered saline-0.05% Tween 20) 용액으로 다회 세척 후, 100 mM 트리에틸아민 용액을 사용하여 BCMA에 결합한 파아지를 회수하였다. 회수된 파아지를 1M Tris 완충액(pH 7.4)으로 중화시킨 후, K12 ER2738 대장균에 감염시키고, 다시 파아지를 회수하는 과정을 4회 반복하여 파아지를 패닝하였다. 패닝 라운드가 진행될수록 PBS-T를 이용한 세척회수를 증가시켜 항원-특이적 파아지를 증폭 및 농축하였다.
3. 단일클론 파아지 항체 선별 (single clone screening)
파아지 풀(Phage pool)로부터 BCMA에 특이적으로 결합하는 단일클론 항체를 선별하기 위해 단일 클론 파아지 항체 선별 과정을 수행하였다.
구체적으로, 실시예 1.2에서 수득한 파아지 풀(phage pool)을 순차 희석하고, LB-테트라사이클린/카베니실린을 함유한 고체 배지에서 배양하여 단일 콜로니를 확보하였다. 각 콜로니를 96-deep 웰 플레이트에서 배양하여 OD600이 0.5 내지 0.7이 되도록 배양하였다. 상기 배양액에 20 MOI 헬퍼 파아지를 가하고, 37℃에서 1시간 동안 반응시켰다. 이후, 배양액에 카나마이신을 가하고, 30℃에서 밤새 배양하였다. 다음날 배양액을 원심분리하여 상등액을 취한 후, 이를 이용하여 BCMA 특이적 파아지를 선별하기위한 ELISA를 수행하였다. 각 웰 당 100 ng의 재조합 BCMA를 ELISA 플레이트에 코팅하고, 비특이적 결합을 방지하기 위해 3% BSA로 코팅한 후 플레이트를 PBS로 세척하였다. 준비된 단일 클론 파아지를 각 웰에 가한 후 37℃에서 1시간 동안 인큐베이션하고, 플레이트를 PBS-T로 3회 세척하였다. HRP(horseradish peroxidase)가 접합된 항-HA(hemagglutinin) 항체와 TMB(Tetramethylbenzidine, Sigma, T0440)를 사용하여 ELISA를 수행하였다. 450 nm에서의 흡광도가 0.5 이상이면서, 항-HA HRP 단독인 대조군의 흡광도와 비교하여 5배 이상의 흡광도가 증가된 클론을 선별하였다. 인간 BCMA에 특이적으로 결합하는 항체 클론 11종(B58, 5A6, 5D5, 5B5, 2C6, 2F8, 4H9, 1H, 2G, 5G, 및 5C3)을 선별하였다.
선별된 항체를 암호화하는 핵산 서열로부터 항체 중쇄 가변영역의 아미노산 서열(서열번호 5 내지 15) 및 경쇄 가변영역의 아미노산 서열(서열번호 16 내지 26)을 분석하고, Kabat 정의에 따라 상보성 결정 영역(complementarity determining region: CDR)을 결정하였다. 결정된 중쇄 및 경쇄의 CDR 아미노산 서열(N->C)을 각각 표 2 및 표 3에 나타내었다.
항체 CDR-H1 CDR-H2 CDR-H3
B58 NYDMS (서열번호 27) WIYPSDSSIYYADSVKG (서열번호 35) RGPFANKYRQFDY (서열번호 46)
5A6 NYGVH (서열번호 28) YISYSGGTYYNPSLKS (서열번호 36) RDSDDFGFDY (서열번호 47)
5D5 DYGLS (서열번호 29) LIDSSGSSTFYADSVKG (서열번호 37) KEHGLFDS (서열번호 48)
5B5 GHYWS (서열번호 30) TVSGSGGDTFYADSVKG (서열번호 38) RGHSVMDV (서열번호 49)
2C6 NYGMS (서열번호 31) SIDYNGSTYYNPSLKS (서열번호 39) KEHGLFDS (서열번호 48)
2F8 NYGMS (서열번호 31) EIIPIFDTSNYAQKFQG (서열번호 40) KIPGNRHDY (서열번호 50)
4H9 GYSMS (서열번호 32) SIYHTGYTYYNPSLKS (서열번호 41) RYKSGAFDI (서열번호 51)
1H NYAMS (서열번호 33) GISHSGSSTYYADSVKG (서열번호 42) HVYIIEFESLDI (서열번호 52)
2G NYAMS (서열번호 33) AISSSGSTIYYADSVKG (서열번호 43) AGYYGSIYAFDY (서열번호 53)
5G NYAMS (서열번호 33) GISQSGSSTYYADSVKG (서열번호 44) HAYIIEFESMDI (서열번호 54)
5C3 DYYIH (서열번호 34) AISGSGGSTYYADSVKG (서열번호 45) SDLGDTTFDS (서열번호 55)
항체 CDR-L1 CDR-L2 CDR-L3
B58 SGSSSNIGSNSVS (서열번호 56) ADSKRPS (서열번호 66) GSWDYSLSGYV (서열번호 75)
5A6 QGDSLRSYYVN (서열번호 57) DHSKRPT (서열번호 67) QSYDSSTV (서열번호 76)
5D5 KASQDIDDDIN (서열번호 58) DASLRAT (서열번호 68) QQSLRTPI (서열번호 77)
5B5 RASQGIDSYVA (서열번호 59) DASLRAT (서열번호 68) QQYNSWPI (서열번호 78)
2C6 RVSQSISSYLN (서열번호 60) DASTRAI (서열번호 69) QQVNSYPIT (서열번호 79)
2F8 TRMQRQSD (서열번호 61) DNNKRPL (서열번호 70) QSYDSNAYVV (서열번호 80)
4H9 RASQSVSRNLA (서열번호 62) GVSS (서열번호 71) QQYGSSPPT (서열번호 81)
1H RASQSISNWLN (서열번호 63) AASSLQS (서열번호 72) QQSYSTPWT (서열번호 82)
2G RASQSISSYLN (서열번호 64) ATSRLQS (서열번호 73) QQSSSFPWT (서열번호 83)
5G RASQSISNWLN (서열번호 63) AASSLQS (서열번호 72) QQSYSTPWT (서열번호 82)
5C3 QASDDISNYLN (서열번호 65) GVSNRAS (서열번호 74) QQSYSTPPI (서열번호 84)
중쇄 가변 영역을 암호화하는 핵산 서열 및 경쇄 가변 영역을 암호화하는 핵산 서열은 하기 표 4에 나타내었다.
항체 중쇄 가변 영역을 암호화하는 핵산 서열 경쇄 가변 영역을 암호화하는 핵산 서열
B58 서열번호 85 서열번호 96
5A6 서열번호 86 서열번호 97
5D5 서열번호 87 서열번호 98
5B5 서열번호 88 서열번호 99
2C6 서열번호 89 서열번호 100
2F8 서열번호 90 서열번호 101
4H9 서열번호 91 서열번호 102
1H 서열번호 92 서열번호 103
2G 서열번호 93 서열번호 104
5G 서열번호 94 서열번호 105
5C3 서열번호 95 서열번호 106
4. 선별된 항-BCMA Phage로부터 항-BCMA IgG 항체의 생산
실시예 1.3에서 선별된 항체를 암호화하는 핵산 서열을 갖는 폴리뉴클레오티드를 합성하였다. 준비된 폴리뉴클레오티드를 동물세포 배양용 벡터(중쇄 발현 벡터: pAB1-HC, 경쇄 발현 벡터: pAB1-LC)에 클로닝하였다. 상기 11종의 항체 클론(B58, 5A6, 5D5, 5B5, 2C6, 2F8, 4H9, 1H, 2G, 5G, 및 5C3)에 대하여 각각 중쇄 및 경쇄를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한 총 22개의 벡터를 제조하였다. 준비된 벡터는 IgG1 타입 서열을 포함한다.
CHO-S 세포를 CD-CHO (Gibco, 10743) 배지에서 배양하고, 준비된 벡터는 폴리에틸렌이민(polyethylenimine: PEI)을 사용하여 CHO-S 세포에 도입하였다. 형질도입된 CHO-S 세포를 CD-CHO 배지에서 8% CO2, 37℃, 및 110 rpm의 조건에서 약 7일 동안 배양하였다.
평형화 완충액(50 mM Tris-HCl, pH7.5, 100 mM NaCl)으로 평형화된 MabSelect SuRe 컬럼(GE healthcare, 5 ㎖)에 준비된 CHO-S 세포 배양액을 통과시켜, 발현된 항체가 컬럼에 결합하도록 하였다. 항체를 50 mM Na-시트르산염(pH 3.4) 및 100 mM NaCl의 용액으로 용출시킨 후, 1M Tris-HCl(pH 9.0)으로 중화시켜 최종 pH가 7.2가 되게 하였다. 이후 완충액을 PBS(pH 7.4)로 교환하여 사용시까지 항-BCMA IgG 항체인 B58, 5A6, 5D5, 5B5, 2C6, 2F8, 4H9, 1H, 2G, 5G, 및 5C3를 4℃에서 보관하였다.
5. 5A6 및 5D5의 돌연변이의 제조
선별된 5A6 항체 및 5D5 항체의 생산성을 개선하기 위해, 표 4의 핵산 서열을 이용하여, 항체의 경쇄 CDR 중 1개 내지 2개 아미노산 잔기를 돌연변이시킨 돌연변이 항체를 제조하였다.
5A6 돌연변이 항체의 경쇄 가변영역(서열번호 107 내지 114) 및 5D5 돌연변이 항체의 경쇄 가변영역(서열번호 115 내지 119) 중 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3의 아미노산 서열을 각각 표 5 및 표 6에 나타내었다. 표 5 및 6에서, 밑줄 및 굵은 글씨로 표시된 아미노산 잔기가 돌연변이된 부분이다(WT: 야생형, LM: 경쇄 돌연변이).
항체 CDR-L1 CDR-L2 CDR-L3
5A6 WT QGDSLRSYYVN (서열번호 57) DHSKRPT (서열번호 67) QSYDSSTV (서열번호 76)
5A6 LM1 QG E SLRSYYVN (서열번호 120) DHSKRPT (서열번호 67) QSYDSSTV (서열번호 76)
5A6 LM2 QGD A LRSYYVN (서열번호 121) DHSKRPT (서열번호 67) QSYDSSTV (서열번호 76)
5A6 LM3 QGDSLRSYYVN (서열번호 57) DHSKRPT (서열번호 67) QSY E SSTV (서열번호 122)
5A6 LM4 QGDSLRSYYVN (서열번호 57) DHSKRPT (서열번호 67) QSYD A STV (서열번호 123)
5A6 LM5 QG E SLRSYYVN (서열번호 120) DHSKRPT (서열번호 67) QSY E SSTV (서열번호 122)
5A6 LM6 QG E SLRSYYVN (서열번호 120) DHSKRPT (서열번호 67) QSYD A STV (서열번호 123)
5A6 LM7 QGD A LRSYYVN (서열번호 121) DHSKRPT (서열번호 67) QSY E SSTV (서열번호 122)
5A6 LM8 QGD A LRSYYVN (서열번호 121) DHSKRPT (서열번호 67) QSYD A STV (서열번호 123)
항체 CDR-L1 CDR-L2 CDR-L3
5D5 WT KASQDIDDDIN (서열번호 58) DASLRAT (서열번호 68) QQSLRTPI (서열번호 77)
5D5 LM1 KASQDID N DIN (서열번호 124) DASLRAT (서열번호 68) QQSLRTPI (서열번호 77)
5D5 LM2 KASQDID E DIN (서열번호 125) DASLRAT (서열번호 68) QQSLRTPI (서열번호 77)
5D5 LM3 KASQDID A DIN (서열번호 126) DASLRAT (서열번호 68) QQSLRTPI (서열번호 77)
5D5 LM4 KASQDIDD A IN (서열번호 127) DASLRAT (서열번호 68) QQSLRTPI (서열번호 77)
5D5 LM5 KASQDIDD E IN (서열번호 128) DASLRAT (서열번호 68) QQSLRTPI (서열번호 77)
실시예 2. 항-BCMA IgG 항체의 동역학적 분석
1. 항-BCMA IgG 항체의 BCMA에 대한 결합력의 확인
(1) 재조합 BCMA에 대한 결합력의 확인
실시예 1.4에서 분리된 항-BCMA IgG 항체의 재조합 BCMA 단백질에 대한 특이적 결합력을 ELISA 방법으로 분석하였다.
항원으로는 재조합 인간 BCMA 또는 원숭이 BCMA를 사용하고, 2차 항체로서 HRP-접합된 Fab 다중클로날 항체 시약(Pierce, 31414)을 사용하여, 실시예 1.3에 기재된 바와 같이 ELISA를 수행하였다. 항체의 농도에 따른 450 nm에서 흡광도를 도 1a 및 도 1b에 나타내었다. 도 1a는 1H, 2G, 및 5G 항체의 인간 BCMA 또는 원숭이 BCMA에 대한 결합력을 나타낸 그래프이고, 도 1b는 B58, 2C6, 5C3, 5B5, 5A6, 5D5, 4H9, 및 2F8 항체의 인간 BCMA에 대한 결합력을 나타낸 그래프이다.
도 1a에 나타난 바와 같이, 1H, 2G 및 5G 항체는 인간 BCMA 및 원숭이 BCMA에 대해 농도 의존적으로 결합하였다. 인간 BCMA에 대한 결합력은 2G, 1H, 및 5G 항체의 순서로 높았고, 원숭이 BCMA에 대한 결합력은 1H가 가장 좋았으며, 2G와 5G항체는 동등한 수준이었다. 도 1b에 나타난 바와 같이, 8종(B58, 2C6, 5C3, 5B5, 5A6, 5D5, 4H9, 및 2F8)의 항-BCMA 항체가 모두 인간 BCMA에 대해 농도 의존적으로 결합함을 확인하였다.
(2) 세포 표면의 BCMA에 대한 결합력의 확인
선별된 항-BCMA IgG 항체들이 세포 표면에 발현된 BCMA에 결합하는 정도를 FACS 시스템을 통해 분석하였다.
BCMA가 발현되는 것으로 알려진 다발성 골수종 암세포인 H929(ATCC, CRL-9068TM) 및 OPM-2 세포주(DSMZ, ACC 50)를 준비하고, 인간 BCMA가 과발현 되어 있는 CHOK1-hBCMA 세포주(ABIBio 제조)를 준비하였다. 비교군으로 BCMA 발현을 하지 않는 CHOK1(ATCC, CRL-9618) 및 Raji(B-lymphocyte cancer cell line)(ATCC, CCL-86TM) 세포주를 사용하였다.
상기 준비된 세포에 실시예 1.4에서 정제된 7종(B58, 5A6, 5D5, 5B5, 1H, 2G 및 5G)의 IgG 항체 10 ㎍/㎖를 가하고, 4℃에서 1시간 동안 인큐베이션한 후, PBS 완충액으로 2회 세척하였다. 항-인간 Fc FITC를 1:400으로 희석하여 다시, 4℃에서 1시간 동안 인큐베이션한 후 PBS 완충액으로 세척하는 과정을 반복하였다. FACSCalibur 기기를 이용하여 세포의 형광 강도를 측정하여 도 2a 및 2b에 나타내었다(MFI: 평균 형광 강도).
도 2a 및 2b에 나타난 바와 같이, 선별된 항체는 모두 세포 표면에 발현된 BCMA에 특이적으로 결합하고, BCMA가 발현되지 않는 세포에는 결합하지 않음을 확인하였다. 따라서, 선별된 항체는 재조합 BCMA 단백질뿐만 아니라 세포 표면에 발현된 BCMA의 세포 외 도메인에 특이적인 결합능이 있고, 이 항-BCMA 항체를 이용하여 BCMA 발현 암세포주를 선택적으로 타겟팅할 수 있음을 확인하였다.
2. 항-BCMA IgG 항체의 인간 BCMA 및 원숭이 BCMA에 대한 친화도 분석
선별된 11종의 항-BCMA 항체의 인간 BCMA 및 원숭이 BCMA에 대한 친화도를 분석하였다.
Biosensor 트레이 케이스에 96 웰 블랙 마이크로 플레이트를 장착하고 8개 웰 각각에 1XKB 200 ul를 넣은 후, Ni-NTA biosensor(Fortebio) 8개를 꽂아서 Hydration을 10분간 수행하였다. 항원 고정을 위하여, 5 ㎍/㎖의 재조합 인간 BCMA-His(Sino Biological Inc.)을 1XKB를 사용하여 희석하였다. 역치 0.5 내지 1.0 nm로 고정하여 실험하고, Octet Data Acquisition 9.0 소프트웨어를 활성화하여 Octet 프로그램 템플레이트를 작성하였다. 첫 번째 단계는 Baseline 1, 두 번째 단계는 적재 단계(loading)이며 역치를 0.5 내지 1.0 nm로 고정하였다. 세번째 단계는 Baseline 2로 5분 동안 결합(Association) 및 20분 동안 해리(Dissociation) 과정을 수행하였다. 플레이트의 온도는 30℃로 고정하고, Octet 프로그램 템플레이트에 맞추어 새로운 96 웰 블랙 마이크로 플레이트에 준비된 완충액을 순서에 맞게 넣었다. Baseline 1로 사용되는 1XKB, 200 ㎕와 적재할 항원으로서 재조합 인간 BCMA-Fc/His을 5 ㎍/㎖로 희석하여 200 ㎕ 넣었다. Baseline 2로 사용되는 1XKB를 200 ㎕ 넣은 후, 항원과 반응시킬 항체를 200 ㎕씩 분주하고, 기기를 작동시켰다. 실험 종료 후 Octet Analysis 9.0 소프트웨어로 각 항체에 대한 흡착율 상수(association constant: kon), 분리율 상수(dissociation constant: kdis) 및 평형 분리 상수(equilibrium dissociation constant: KD)를 분석 및 산출하였으며. 그 내용은 표 7에 나타내었다.
항체 KD(M) kon(1/Ms) kdis(1/s) Chi R2
B58 2.73E-11 7.35E+05 2.00E-05 0.932 0.996
2C6 3.70E-10 1.09E+06 4.03E-04 1.227 0.989
2F8 1.04E-07 1.47E+05 1.52E-02 0.097 0.951
4H9 1.29E-09 1.38E+06 1.79E-03 1.256 0.895
1H 1.45E-09 4.09E+05 5.92E-04 0.317 0.988
2G 1.08E-09 7.20E+05 7.80E-04 0.933 0.982
5G 3.61E-07 3.97E+04 1.43E-02 0.177 0.948
5A6 2.12E-11 5.09E+05 1.08E-05 0.147 0.995
5B5 2.02E-10 1.24E+06 2.50E-04 0.929 0.991
5D5 1.14E-10 9.19E+05 1.05E-04 0.587 0.993
5C3 1.64E-08 5.91E+05 9.66E-03 0.269 0.936
표 7에 나타난 바와 같이, B58 및 5A6 항체의 친화도는 약 10-11의 KD 값을 갖고, 2C6, 5B5, 및 5D5 항체가 약 10-10의 KD 값을 가져, 선별된 항체들이 인간 BCMA 단백질에 대해 높은 결합력을 갖는 것을 확인하였다. 이들 중, 세포 표면의 인간 BCMA에 대한 결합력이 미미한 2C6 항체와 원숭이 BCMA에 대한 친화력이 없는 B58 항체를 제외한 3종의 항체(5A6, 5B5, 5D5)를 이용하여 원숭이 BCMA에 대한 친화도를 추가로 확인하고, 그 결과를 표 8에 나타내었다.
항체 KD(M) kon(1/Ms) kdis(1/s) Chi R2
5A6 4.51E-09 3.61E+05 1.63E-03 0.526 0.9943
5B5 4.61E-10 4.79E+06 2.21E-03 0.0652 0.9685
5D5 3.46E-10 1.69E+06 5.85E-04 0.0477 0.9945
표 8에 나타난 바와 같이, 5A6, 5B5, 및 5D5 항체가 인간 BCMA 뿐만 아니라 원숭이 BCMA에 대해서도 높은 친화력을 갖는다는 것을 확인하였다.
3. 항-BCMA 항체의 종간 교차 반응성 분석
선별된 항체들 중 B58, 5A6, 5D5, 및 5B5 항체의 종간 교차 결합 여부를 ELISA 방법으로 분석하였다.
실시예 1.1에서 준비된 인간, 원숭이, 마우스 및 레트 BCMA 항원 100 ng을 플레이트 바닥에 코팅한 후, 3% BSA로 코팅하여 비특이적인 결합을 차단하였다. 1차 항체로서 선별된 항-BCMA IgG 항체 및 2차 항체로서 항-인간 Fab HRP(1:20000 희석)을 사용하고, 실시예 1.3에 기재된 바와 같이 ELISA 분석법을 수행하였다.
마이크로플레이트 리더에서 측정된 450 nm에서의 흡광도를 도 3에 나타내고, 50% 최대 유효 농도(Half maximal effective concentration: EC50)(nM)을 표 9에 나타내었다.
항원 5A6 항체 B58 항체 5D5 항체 5B5 항체
인간 BCMA 100 79 140 63
원숭이 BCMA 153 - 94 82
마우스 BCMA - - 150 110
레트 BCMA - - 98 65
도 3 및 표 9에 나타난 바와 같이, B58 항체는 인간 BCMA에만 결합력을 가졌고, 5A6 항체는 인간 및 원숭이 BCMA에 결합력을 가졌다. 5D5 항체와 5B5 항체는 분석한 모든 종의 BCMA(인간, 원숭이, 마우스, 및 레트)에 결합력을 갖는 것을 확인하였다.
4. 항-BCMA IgG의 BCMA의 특이도 확인
BCMA는 B 세포의 성숙화 과정에 관여한다고 알려져 있고, 이 성숙화 과정에 TACI 및 BAFF-수용체가 관여하는 것으로 알려져 있다. 선별된 항체가 BCMA 관련 단백질에 결합되는지 여부를 ELISA 기법을 통해 분석하였다.
구체적으로, 인간 BCMA-Fc(R&D system, 193-BC-050), TACI-Fc(R&D system, 174-TC), 및 BAFF-수용체(R&D system, 1162-BR)를 PBS 버퍼를 이용하여 희석한 후, ELISA 플레이트에 웰 당 100 ng씩 코팅하였다. 1차 항체로서 선별된 항-BCMA IgG 항체 및 2차 항체로서 항-인간 Fab HRP(1:20000 희석)을 사용하고, 실시예 1.4(1)에 기재된 바와 같이 ELISA 분석법을 수행하였다. 비교군으로서 항-BCMA 모노클론 항체 J6MO(GSK)를 사용하였다. 마이크로플레이트 리더에서 측정된 450 nm에서의 흡광도를 도 4에 나타내었다.
도 4에 나타난 바와 같이, B58, 5A6, 5D5, 및 5B5 항체는 TACI 및 BAFF-수용체에는 결합하지 않으나, BCMA에만 결합하였다. 따라서, 선별된 4종의 항-BCMA 항체 B58, 5A6, 5D5, 및 5B5 항체는 BCMA에 특이적으로 결합함을 확인하였다.
5. 항-BCMA 항체의 항체 별 에피토프 상대 비교
선별된 4종의 항체(IgG)를 사용하여 BCMA에 결합하는 부위를 상대비교 하기 위해, 선별된 항체들 간의 인간 BCMA에 대한 경쟁적 결합능을 분석하였다.
실시예 2.2에 기재된 바와 같이, Octet 분석 시스템을 이용하여 항체들 간의 결합능을 분석하였다. Octet 프로그램 템플레이트에서, 첫 번째 단계는 baseline1, 두 번째 단계는 로딩으로 하며 문턱값을 0.3 nm로 고정하였다. 세 번째 단계는 Baseline으로 두었다. 네 번째, 및 다섯 번째는 각각의 항체를 반응시키며, 시간은 10분으로 설정하였다. Octet program template에 맞추어서 새로운 96 웰 블랙 마이크로플레이트에 준비된 완충액을 순서에 맞게 넣었다. Baseline1으로 사용되는 1XKB를 200 ㎕ 넣었다. 로딩할 항원인 재조합 인간 BCMA(Fc and His tag fused)을 5 ㎍/㎖로 희석하여 200 ㎕씩 넣었다. Baseline2로 사용되는 1XKB, 200 ㎕를 넣었다. 항원과 첫 번째 결합할 항체 200 ㎕씩을 넣었다. 두번째 항체를 200 ㎕씩 넣었다. 실험 플레이트의 온도는 30℃로 고정하였다. 시료를 모두 넣은 후, 기기를 작동하였다. 실험이 종료 후, Octet analysis 9.0 소프트웨어로 첫 번째 항체와 두 번째 항체 간의 경쟁을 분석하고, 그 결과를 도 5a 내지 5d에 나타내었다(Ref. Ab: J6MO 항체).
도 5a 내지 5d에 나타난 바와 같이, B58 항체와 5A6 항체는 항원에 대한 대한 결합 부위 즉 에피토프가 상이하였고, 5B5 항체와 5D5 항체는 에피토프가 동일한 것으로 확인되었다. 또한, 5B5 항체와 5D5 항체의 에피토프는 B58의 에피토프와 부분적으로 동일한 것으로 확인되었다. 따라서, 선별된 4종의 항체는 항원인 BCMA에 결합하는 부위가 다양함을 확인하였다.
실시예 3. 항-BCMA IgG 항체의 암세포에 대한 효과
1. 항-BCMA IgG 항체의 중화 효과
선별된 항-BCMA 항체들이 BCMA와 리간드(APRIL 및 BAFF)의 결합을 방해할 수 있는지 여부를 ELISA 기반 용액 경쟁시험으로 확인하였다.
구체적으로, 인간 BCMA-Fc(R&D system, 193-BC-050)를 PBS 버퍼를 이용하여 희석한 후, ELISA 플레이트에 웰 당 100 ng씩 코팅하였다. 코팅 후 플레이트를 비우고 1% BSA가 포함된 PBST를 각 웰당 100 ㎕씩 가하고 37℃에서 2시간 동안 인큐베이션하였다. 50 ㎍/㎖ 내지 0.00028 ㎍/㎖의 농도로 희석된 항체와 10 ng/㎖의 APRIL 단백질(R&D, 5860-AP-010/CF) 또는 200 ng/㎖의 BAFF(R&D, 2149-BF-010/CF)를 혼합하였다. 음성 대조군으로 IgG1 항체를 사용하고, 비교군으로 J6MO 항체를 사용하였다.
2차 항체로서 항-HA-HRP(Roche, 12013819001) 또는 항-His-HRP(Roche, 11965085001)을 사용하고, 실시예 1.4(1)에 기재된 바와 같이 ELISA 분석법을 수행하였다. 비교군으로서 항-BCMA 모노클론 항체 J6MO(GSK)를 사용하였다. 450 nm에서 흡광도를 측정하고, 그 결과를 도 6a 및 6b에 나타내었다.
도 6a 및 6b에 나타난 바와 같이, B58 항체는 BCMA와 BAFF의 결합을 효과적으로 저해하고, BCMA와 APRIL의 결합 또한 방해하는 것으로 확인하였다. 5A6, 5B5, 및 5D5 항체는 BCMA에 대한 APRIL의 결합능을 저해할 수 없으나, BAFF의 결합능은 일부 저해하는 것으로 확인되었다. 따라서, 선별된 항체들은 타겟 항원BCMA에 대한 결합부위가 상이하여 BCMA 리간드 결합능 저해 정도에 차이가 있으나, 리간드의 결합을 조절 및 억제하여, 암세포의 성장을 효과적으로 억제할 가능성이 있음을 확인되었다.
2. 항-BCMA IgG 항체의 항체-의존성 세포독성 평가(ADCC: Antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity)
ADCC bioassay core kit(Promega, G0718)를 사용하여, 선별된 항체의 항체-의존성 세포독성을 측정하였다.
구체적으로, 인간 BCMA를 많이 발현하고 있는 H929(ATCC, CRL-9068TM)와 적게 발현하는 Raji (ATCC, CCL-86TM)를 표적 세포로 사용하였다. 항-BCMA 항체로 B58, 5A6, 5D5, 및 5B5 항체를 준비하였다.
또한, 항체 의존성 세포독성에 관여하는 Fc 부분에 기능 저해를 유발하여 음성 대조군으로 사용하기 위해, 5A6 Fc 부분의 265번의 아스파르트산 아미노산 잔기를 알라닌으로 치환("D265A")하고, 297번의 아스파라긴 잔기를 알라닌으로 치환("N297A")한 5A6 DANA 돌연변이 항체를 준비하였다(Cancer Cell, vol.19, issue 1, pp.101-113).
ADCC 분석 완충액은 RPMI/1640(Promega, G708A) 및 4% 저-IgG 혈청(Promega, AX20A)을 첨가하여 제조하였다. ADCC 분석 완충액에 재현탁한 H929와 Raji 세포주를 96웰 플레이트(white, flat bottom, Corning, CLS3917)에 웰 당 5000개의 세포(25 ㎕)로 첨가하였다. 항-BCMA 항체는 ADCC 분석 완충액으로 133.3 nM(20 ㎍/㎖)부터 1/8씩 순차 희석하여 준비하였다. 준비된 항체를 각 웰 당 25 ㎕씩 첨가하였다. 3.6 ㎖의 ADCC 분석 완충액를 15 ㎖ 튜브에 담은 후, 액화질소 탱크에서 ADCC Bioassay Effector cell(Promega, G701A)를 꺼내어 37℃ 수조에서 빠르게 녹인 후 ADCC 분석 완충액이 담긴 15 ㎖ 튜브에 흘려 넣었다. Effector cell을 잘 섞어준 후 25 ㎕씩 튜브에 조심스럽게 가하고, 37℃, 5% CO2의 조건에서 세포를 약 6시간 동안 배양하였다. 그 사이 Bio-GloTM 루시퍼라제 분석 완충액(Promega, G720A)를 상온에서 녹인 후 Bio-GloTM 루시퍼라제 분석 기질(Promega, G719A)에 넣어 잘 섞어 Bio-GloTM 루시퍼라제 분석 시약을 제조하였다. 세포 배양 후 96웰 플레이트를 상온에서 약 10분간 방치한 후, 각 웰에 25 ㎕의 Bio-GloTM 루시퍼라제 분석 시약을 조심스럽게 가하였다. 상온에서 5분간 방치한 후 PHERAstar FS BMG LABTECH 기기에서 발광 강도를 측정하였다. 결과값은 GraphPad Prism을 이용하여 비선형 회귀분석법(Curve fit)으로 분석하고, 그 결과를 도 7에 나타내었다.
도 7에 나타난 바와 같이, BCMA의 발현이 높은 H929 세포에서 선별된 항- BCMA 항체가 농도의존적으로 항체-의존성 세포독성을 유발하였다(B58 > 5A6 = 5D5 > 5B5). Fc 영역의 기능 저해를 유발한 5A6 DANA 돌연변이 항체의 경우, ADCC가 유발되지 않아, ADCC는 항체의 Fc 영역에 의해 야기됨을 확인하였다. 한편, BCMA의 발현이 관찰되지 않은 Raji에 대해서는 ADCC가 유발되지 않았다. 따라서, 선별된 B58, 5A6, 5D5, 및 5B5 항체는 BCMA가 발현된 암세포에만 특이적으로 결합하여 Fc 기능에 의한 항체 세포 독성을 유발할 수 있음을 확인하였다.
3. 항-BCMA IgG 항체의 암세포주 이식 마우스 모델에서의 종양 성장 억제 평가
(1) 다발성 골수종 암세포주 H929-이식 마우스 모델에서의 종양 성장 억제 평가
6주령 수컷 CB17-SCID 마우스를 7일간 순화기간을 거친 후 동물실험에 사용하였다. 세포이식 전 마우스 세포이식 부위의 제모를 진행하였고, 귀에는 개체식별을 위한 귀 태그를 부착하였다.
세포이식날 조건에 맞게 배양된 다발성 골수종 암세포주 H929를 수집하여 PBS에서 Beckman coulter로 세포수/생존도를 측정하였다. 최종적으로 100 ㎕의 PBS 당 투여 세포수(1 x 107 세포/마리)가 되도록 준비하였다. 세포 현탁액과 동일 부피로 matrigel(BD)을 가하여 파이펫으로 혼합하였다. 마우스를 이소플루란 흡입마취한 후, 제모가 되어있는 우측 등쪽 피하에 200 ㎕의 세포 현탁액을 투여하였다. 마우스를 케이지에 넣고, 마취가 깨어 활동에 문제가 없는지 최종 확인하였다. 종양크기는 캘리퍼를 사용하여 종양의 장축과 단축을 측정하였고, 하기 식을 이용하여 최종 종양 크기를 계산하였다.
종양 크기(㎣)=(0.5)x(장축)x(단축)2
약물 투여는 종양 크기가 평균 269 ㎣일 때부터 투여를 시작하였다. 투여 약물은 대조군(PBS) 및 항-BCMA IgG 항체 4종(B58, 5A6, 5D5, 및 5B5)의 5 그룹(각 n=7)으로 진행하였다. 약물은 2 ㎎/㎖(20 g 기준; 100 ㎕/head)로 준비하였다. 투여 용량은 10 ㎎/kg으로 주 2회씩 총 5회 꼬리정맥 투여하였다. 체중은 동물용 체중계를 사용하여 측정하였다. 체중 및 종양 크기는 주 2회 측정하였다. 약물 투여 후 21일째 체중 및 종양 크기 측정 후 안락사시킨 뒤 각 개체별 종양을 적출하여 무게를 측정하였다.
종양 주사 후 시간(일)에 따른 종양의 크기(㎣), 항체별 종양의 크기(㎣), 및 항체별 종양의 무게(g)를 나타낸 그래프를 도 8a 내지 8c에 나타내었다(화살표: 약물 투여 시점). 각 항체의 대조군 대비 부피 감소율(%) 및 무게 감소율(%)을 표 10에 나타내었다(p<0.001).
항체 부피 감소율(%) 무게 감소율(%)
5B5 51.7 51.2
5D5 65.7 63.9
5A6 67.4 66.8
B58 63.8 60.2
도 8a 내지 8c 및 표 10에 나타난 바와 같이, H929 이식 마우스 모델에서 대조군(PBS)에 비해 항 BCMA IgG 항체 4종(B58, 5A6, 5D5, 및 5B5)을 투여한 군에서 종양 성장 억제 효과가 나타났다. 각 군의 종양의 크기를 최종 분석한 결과, 대조군의 종양 크기 대비 본원의 항체 처리군의 종양이 약 51.7% 내지 약 67.4% 감소하였다. 일원배치 분산분석 결과, 대조군(PBS) 대비 항-BCMA IgG 항체 4종에서 통계학적 유의성이 나타났다(p<0.001). 따라서, 다발성 골수종 선별된 항체를 처리할 경우 유의하게 종양의 성장을 억제할 수 있음을 증명하였다. 또한 5D5와 5A6의 경우 항체-의존성 세포독성 평가 내지 BCMA 관련 리간드 결합 방해 결과에서 B58 항체 대비 낮은 활성을 보였지만, 생체 내(in vivo) 활성 평가에서 B58과 동등 이상의 효과를 보였다. 이는 상기 두 항체가 종양 성장 저해에 유리한 에피토프를 인지하거나, 항체 자체의 물성이 우수할 수 있음을 의미한다.
(2) 다발성 골수종 암세포주 OPM-2-이식 마우스 모델에서의 종양 성장 억제 평가
실시예 3.3(1)에 기재된 바와 같이, 마우스에 다발성 골수종 암세포주 OPM2를 이식하고, 항체의 투여에 의한 종양 성장 억제를 평가하였다.
약물 투여는 종양 크기가 평균 172 ㎣일 때부터 투여를 시작하였다. 투여 약물은 대조군(PBS) 및 항-BCMA IgG 항체 4종(B58, 5A6, 및 5D5)의 4 그룹(각 n=9)으로 진행하였다. 투여 용량이 10 ㎎/kg이 되도록 투여 약물을 2 ㎎/㎖(20 g 기준; 100 ㎕/head)로 준비하였다. 투여 용량은 10 ㎎/kg으로 주 2회씩 총 5회 꼬리정맥 투여하였다. 약물 투여 후 27일째 체중 및 종양 크기를 측정하고 안락사시킨 뒤, 각 개체에서 종양을 적출하여 무게를 측정하였다.
종양 주사 후 시간(일)에 따른 종양의 크기(mm3), 항체별 종양의 크기(mm3), 및 항체별 종양의 무게(g)를 나타낸 그래프를 도 9a 내지 9c에 나타내었다(화살표: 약물 투여 시점). 각 항체의 대조군 대비 종양의 부피 감소율(%) 및 무게 감소율(%)을 표 11에 나타내었다(p<0.001).
항체 부피 감소율(%) 무게 감소율(%)
5D5 38.5 40.5
5A6 35.4 35.1
B58 42.5 41.4
도 9a 내지 9c 및 표 11에 나타난 바와 같이, OPM-2 이식 마우스 모델에서 대조군(PBS)에 비해 항 BCMA IgG 항체 3종(B58, 5A6, 및 5D5)을 투여한 군에서 종양 성장 억제 효과가 나타났다. 각 군의 종양의 크기를 최종 분석한 결과, 각 군의 대조군 대비 종양억제 정도는 각각 B58 42.5%, 5A6 35.4%, 5D5 38.5%로 측정이 되었으며, 무게를 측정시 대조군 대비하여 각각 B58 41.4%, 5A6 35.1%, 5D5 40.5%의 무게 감소율을 보였다. 일원배치 분산 분석 결과 대조군 대비 항-BCMA IgG 3종의 항-종양 효과는 통계적 유의성이 보였으며(p<0.001), 3종 항체 간의 종양 크기 및 종양 무게의 차이는 통계학적으로 유의적 차이가 관찰되지 않았다. 도 6 및 도 7에 나타난 바와 같이, 5D5와 5A6의 경우 항체-의존성 세포독성 평가 내지 BCMA 관련 리간드 결합 방해 분석 결과에서 B58 항체 대비 낮은 활성을 보였지만, 생체 내(in vivo) 효능 평가에서 B58과 동등 정도의 효과를 보였다. 이는 상기 두 항체가 종양 성장 저해에 유리한 에피토프를 인지하거나, 항체 자체의 물성이 우수할 가능성이 있음을 의미한다.
4. 돌연변이 도입 5A6와 5D5의 타겟 항원에 대한 결합력 확인
(1) 야생형 5A6, 5D5와 돌연변이 5A6, 5D5의 재조합 BCMA에 대한 결합력 확인
실시예 1.5에 기재된 내용과 같이, 항-BCMA 항체 5A6와 5D5에 돌연변이를 도입하여, 5A6에서 8종의 돌연변이 항체 및 5D5에서 5종의 돌연변이 항체를 제조 및 정제하였다. 이를 각각의 야생형 항체와 함께 재조합 단백질에 대한 결합력을 분석하였고 그 결과를 도 10a 및 10b에 나타내었다.
도 10a 및 10b에 나타난 바와 같이, 5A6에서 8종 돌연변이 항체 중 6종의 항체(5A6 LM1, 5A6 LM3, 5A6 LM4, 5A6 LM5, 5A6 LM7, 및 5A6 LM8)는 야생형에 비해 결합 활성이 동등하거나 낮아졌으나, 2종의 항체(5A6 LM2 및 5A6 LM6)는 야생형에 비해 증가된 항원 결합력을 보였다. 5D5의 경우, 5종의 돌연변이 항체 중 2종의 항체 (5D5 LM1 및 5D5 LM2)는 야생형 5D5에 비해 항원 결합 활성이 감소하였으나, 나머지 3종(5D5 LM3, 5D5 LM4, 및 5D5 LM5)은 야생형 5D5와 동등한 항원 결합 활성을 보였다. 각 항체의 50% 최대 유효 농도(Half maximal effective concentration: EC50)(nM)를 표 12에 나타내었다.
클론명 EC50 (nM) 클론명 EC50 (nM)
5A6 WT (플레이트 1) 0.0631 5A6 LM7 0.105
5A6 WT (플레이트 2) 0.0643 5A6 LM8 0.068
5A6 WT (플레이트 3) 0.077 5D5 WT (플레이트 1) 0.0708
5A6 LM1 0.0818 5D5 WT (플레이트 2) 0.0652
5A6 LM2 0.0509 5D5 LM1 0.0939
5A6 LM3 0.133 5D5 LM2 0.0858
5A6 LM4 0.0823 5D5 LM3 0.0593
5A6 LM5 0.103 5D5 LM4 0.0708
5A6 LM6 0.0537 5D5 LM5 0.0763
(2) 야생형 5A6, 야생형 5D5, 및 이들의 돌연변이의 세포 표면 BCMA에 대한 결합력 확인
야생형 항체와 그의 돌연변이 항체 간의 세포 표면 항원에 대한 결합력을 비교하였다.
BCMA가 고발현된 다발성 골수종 암세포 H929(ATCC, CRL-9068TM)에 야생형 5A6 항체, 야생형 5D5 항체, 및 이들의 돌연변이 항체를 가하고, 항체의 세포 표면 결합 수준을 FACS 분석을 통해서 측정하였다. 세포 표면의 형광 강도를 측정하고 그 결과를 도 10c 및 10d에 나타내고, 각 항체의 평균 형광 강도(Mean Fluorescence Intensity: MFI) 값은 표 13에 나타내었다.
클론명 MFI 클론명 MFI
5A6 WT 68.25 5D5 WT 36.35
5A6 LM1 83.42 5D5 LM1 32
5A6 LM2 66.65 5D5 LM2 29
5A6 LM3 84.64 5D5 LM3 31.5
5A6 LM4 77.14 5D5 LM4 62.3
5A6 LM5 81.44 5D5 LM5 73.6
5A6 LM6 78.9
5A6 LM7 71.08
5A6 LM8 68.61
도 10c, 도 10d, 및 표 13에 나타난 바와 같이, 5A6의 경우, 5종의 돌연변이 항체(5A6 LM1, 5A6 LM3, 5A6 LM4, 5A6 LM5, 및 5A6 LM6)의 세포 결합력은 야생형 5A6 항체의 세포 결합력에 비해 증가된 세포 결합력을 보였다. 또한 5D5의 2종의 돌연변이 항체(5D5 LM4 및 5D5 LM5)의 세포 결합력은 야생형 5D5 항체의 세포 결합력에 비해 확연히 증가하였다. 따라서, 야생형 항체의 CDR 아미노산의 일부 변경으로 인해, 재조합 BCMA 및 세포표면 BCMA에 대한 결합력이 일부 개선되었음을 확인하였다.
(3) 5A6 LM6와 5D5 LM4의 인간 BCMA에 대한 친화도 분석
단량체(monomer) 인간 BCMA 항원에 결합하는 5A6 LM6와 5D5 LM4와 각각의 야생형 항체의 표적 항원 결합 친화도를 분석하였다.
구체적으로, 1x HPS-EP 완충액(GE Healthcare, BR-1006-69)을 사용하여 준비된 항체를 희석하였다. 표적 항원 결합 친화도 분석은 Biacore T200(GE Healthcare)을 사용하였다. 접촉 시간 60 초, 안정화 시간 30 초, 및 30 ㎕/분의 유속으로 단백질 A 칩에 흘려 캡쳐 수준이 128 RU(response unit)에 도달하도록 하여, 항체가 캡쳐된 단백질 A 칩을 준비하였다.
항원은 1x HPS-EP 완충액을 사용하여 100 nM에서 6.25 nM까지 2배씩 순차 희석하여 총 6개의 시료를 준비하였고, 음성 대조군(blank)으로 1x HPS-EP 완충액을 이용하였다.
항체가 캡쳐된 단백질 A 칩에 준비된 항원을 30 ㎕/분의 유속으로 결합 시간 60초 및 해리 시간 180초로 흘려주었다. 재생(Regeneration)은 10 mM 글리신-HCL, pH 1.5 완충액(GE Healthcare, BR-1003-54)를 사용하였으며, 유속 30 ㎕/분, 접촉 시간 30초로 수행하였다.
반응 시간(초)에 따른 반응(response unit: RU)을 나타낸 그래프를 도 11에 나타내고, 이로부터 산출된 항체의 표적 항원 결합 친화도를 표 14에 나타내었다.
항체명 적합 모델 캡쳐 수준(표적=128 RU) ka(1/Ms) kd(1/s) KD(M) R최대(RU)(표적=12.5 RU) Chi2
5A6 WT 1:1 결합 110.9~113.3 3.99 x 105 2.49 x 10-2 6.24 x 10-8 10.45 0.0436
5A6 LM6 1:1 결합 120.6~122.6 5.09 x 105 0.922 x 10-2 1.81 x 10-8 13.21 0.0304
5D5 WT 1:1 결합 107.6~108.1 2.632 x 106 6.013 x 10-2 2.284 x 10-8 11.00 0.0186
5D5 LM4 1:1 결합 98.9~99.4 4.169 x 106 5.937 x 10-2 1.424 x 10-8 11.62 0.0131
도 11 및 표 14에 나타난 바와 같이, 5A6 LM6은 야생형 5A6에 비해 BCMA에 결합 후 해리되는 속도(dissociation rate)가 낮아졌다. 5D5 LM4는 야생형 5A6에 비해 BCMA에 결합하는 속도(association rate)가 증가하였다. 따라서, 5A6 LM6 항체와 5D5 LM4 항체는 각각의 야생형 항체에 비해 개선된 표적 항원 친화도를 갖는다는 것을 확인하였다.
5. 5A6 LM6와 5D5 LM4의 항체-의존성 세포독성 평가(ADCC: Antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity)
5A6 LM6와 5D5 LM4의 항체-의존성 세포독성 평가를 각각의 야생형 항체와 비교 측정하기 위해 실시예 3.2에 기재된 방법으로 측정하고, 측정된 항체-의존성 세포독성(ADCC) 결과를 도 12에 나타내었다.
도 12에 나타난 바와 같이, 5A6 LM6 항체와 5D5 LM4 항체는 BCMA 고발현 세포주인 H929에 대해 야생형 항체보다 증가된 항체-의존성 세포독성 정도를 보였다(도 12 왼쪽). 반면에, 5A6 WT 항체 및 5D5 WT 항체뿐만 아니라, 이들의 돌연변이 항체도 BCMA가 미발현된 Jurkat 세포주에 대해서는 항체-의존성 세포독성을 야기하지 못했다(도 12 오른쪽).
또한, 야생형 항체로부터 Fc 영역의 기능 저해를 유발한 돌연변이 항체 5A6 NA 돌연변이 및 5D5 NA 돌연변이의 경우 BCMA 고발현 H929 세포주에 대해 항체-의존성 세포독성이 야기되지 않았다(도 12 왼쪽).
따라서, 5A6 LM6 항체 및 5D5 LM4 항체는 각각의 야생형 항체에 비해 증가된 BCMA 의존적인 세포독성 유발능을 보이며 이는 실시예 3.4에서 증명된 항원 결합 개선에 의해 증가와 일치하는 결과이다. 그러므로, 돌연변이 5A6 LM6 항체와 5D5 LM4 항체는 각각의 야생형 항체에 비해 효과적인 암세포 성장 저해능을 야기할 수 있음을 보여준다.
6. 5A6 LM6 항체 또는 5D5 LM4의 암세포주 이식 마우스 모델에서의 종양 성장 억제 평가
중증 면역 복합 면역결핍증(severe combined immunodeficiency: SCID) 마우스 모델에 BCMA를 고발현하는 인간 골수종 NIH-H929 세포주를 생쥐의 옆구리에 1x107 cells/head씩 이식하여 인간 암 이식 종양 생쥐를 제작하였다. 이식 후, 종양 크기가 평균 180 mm3에 도달하였을 때, 군 분리를 실시하였다(제1일).
돌연변이가 도입된 5A6 LM6 항체 및 5D5 LM4 항체와 각각의 야생형 항체 5A6 WT, 5D5 WT, 음성대조군인 인간 IgG1(InVivo Plus human IgG1 isotype control, BioXCell)의 총 5종의 항체를 주 2회 10 mg/kg씩 총 4회 1 mL 실린지를 이용하여 꼬리정맥으로 투여하였다(제1일, 제4일, 제7일, 및 제11일). 생쥐에 이식된 종양 크기와 체중은 첫 투여 후 주 2회 디지털 캘리퍼와 동물용 저울을 이용하여 측정하였다(제1일, 제4일, 제7일, 제11일, 제18일, 제22일, 및 제25일).
실험물질 투여 종료 2주 후(제25일), 생쥐를 CO2 가스를 이용하여 희생하고 종양을 적출한 다음, 적출된 종양 부피 및 무게를 측정하였다. 시간에 따른 종양 부피를 도 13에 나타내고, 음성 대조군 대비 투여군의 종양 부피 감소율(%) 및 종양 무게 감소율(%)을 표 15에 나타내었다.
항체 부피 감소율(%) 무게 감소율(%)
5A6 WT 90.3 84.1
5A6 LM6 81.5 71.1
5D5 WT 61.9 51.9
5D5 LM4 65.8 55.8
도 13에 나타난 바와 같이, 항 BCMA 항체 4종(5A6 WT, 5A6 LM6, 5D5 WT, 및 5D5 LM4)은 음성 대조군인 인간 IgG1 항체 대비 종양 성장을 현저히 감소시켰다. 또한, 표 15에 나타난 바와 같이, 투여된 항 BCMA 항체 4종은 음성대조군 대비 암세포 성장 저해율(% of tumor growth inhibition: TGI%)에 대해 통계학적 유의성을 보였다 (일원배치 분산 분석, P-값 < 0.05). 다만, 야생형 항체와 그의 돌연변이 항체 간(5A6 WT vs 5A6 LM6, 및 5D5 WT vs 5D5 LM4)에는 종양 크기 감소가 동등한 정도로 분석이 되었으며 군 간에 통계학적 유의성은 없었다.
이로써, 돌연변이 5A6 LM6 항체와 5D5 LM4 항체는 각각의 야생형 항체에 비해 증가된 시험관 내(in vitro) 활성(표적 항원 결합능 및 항체-의존성 세포독성 유발)을 보였으나, 생체 내(in vivo) 활성 평가에 대해서는 각각의 야생형 항체와 동일한 수준의 암세포 성장 저해능이 있음을 확인하였다.
<110> ABL BIO, INC. <120> Anti-BCMA antibody and its use <130> PX-59715-PCT <150> KR 10-2018-0073320 <151> 2018-06-26 <160> 128 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 184 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Human BCMA(NP_001183.2) <400> 1 Met Leu Gln Met Ala Gly Gln Cys Ser Gln Asn Glu Tyr Phe Asp Ser 1 5 10 15 Leu Leu His Ala Cys Ile Pro Cys Gln Leu Arg Cys Ser Ser Asn Thr 20 25 30 Pro Pro Leu Thr Cys Gln Arg Tyr Cys Asn Ala Ser Val Thr Asn Ser 35 40 45 Val Lys Gly Thr Asn Ala Ile Leu Trp Thr Cys Leu Gly Leu Ser Leu 50 55 60 Ile Ile Ser Leu Ala Val Phe Val Leu Met Phe Leu Leu Arg Lys Ile 65 70 75 80 Asn Ser Glu Pro Leu Lys Asp Glu Phe Lys Asn Thr Gly Ser Gly Leu 85 90 95 Leu Gly Met Ala Asn Ile Asp Leu Glu Lys Ser Arg Thr Gly Asp Glu 100 105 110 Ile Ile Leu Pro Arg Gly Leu Glu Tyr Thr Val Glu Glu Cys Thr Cys 115 120 125 Glu Asp Cys Ile Lys Ser Lys Pro Lys Val Asp Ser Asp His Cys Phe 130 135 140 Pro Leu Pro Ala Met Glu Glu Gly Ala Thr Ile Leu Val Thr Thr Lys 145 150 155 160 Thr 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240 cttcaaatga acagtctgag agctgaggac actgccgttt attattgtgc aaaggaacat 300 ggtcttttcg actcatgggg acagggaaca ctggtgaccg tatcttcc 348 <210> 88 <211> 348 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Polynucleotide encoding heavy chain variable region of anti-BCMA antibody 5B5 <400> 88 gaggtccagt tgttggaaag cggtggtggt ttggttcaac caggcggtag cctcagactc 60 tcctgcgctg cctccgggtt tactttctca gggcactatt ggtcctgggt ccgtcaggca 120 cctggtaagg gacttgaatg ggtatctaca gtttccggct ccggtggaga cactttttat 180 gcagacagcg ttaaggggcg ctttactata agtcgtgata attccaaaaa tactctctat 240 ctccaaatga actccctccg tgctgaagat accgctgtgt actactgcgc tcgaggtcac 300 tcagtcatgg acgtatgggg gcagggcaca ctggtgaccg tatcttcc 348 <210> 89 <211> 345 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Polynucleotide encoding heavy chain variable region of anti-BCMA antibody 2C6 <400> 89 gaggtccagt tgttggaaag cggtggtggt ttggttcaac caggcggtag cctcagactc 60 tcctgcgctg cctccgggtt tactttctct aactatggta tgtcatgggt ccgacaggca 120 ccagggaagg gactggaatg ggtctcctct atagactata atggctctac atattacaac 180 ccaagtttga aaagccgttt tactatatct agggataaca gcaagaatac cctctacctc 240 caaatgaatt ctctgagagc agaggacact gctgtctact attgtgctaa agagcatggc 300 ctcttcgatt cttggggaca aggaacactc gtaacagtat cttcc 345 <210> 90 <211> 351 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Polynucleotide encoding heavy chain variable region of anti-BCMA antibody 2F8 <400> 90 gaggtccagc tgctggagtc cggcggcggt cttgtgcaac caggcggaag tttgcgcttg 60 tcatgtgcag cttccgggtt cacctttagc aattacggaa tgagttgggt acggcaggct 120 cctggtaaag gtctggaatg ggtttccgaa atcatcccta tctttgacac ctcaaactat 180 gcccagaaat tccaaggtag gttcaccatt agcagggata actctaaaaa tacactttac 240 ctccagatga atagccttcg tgctgaggat actgccgtat attactgcgc taaaattcca 300 ggcaataggc atgactattg gggacaaggg acattggtga cggtcagctc a 351 <210> 91 <211> 348 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Polynucleotide encoding heavy chain variable region of anti-BCMA antibody 4H9 <400> 91 gaggtgcaac ttcttgaaag 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Artificial Sequence <220> <223> Polynucleotide encoding heavy chain variable region of anti-BCMA antibody 2G <400> 93 gaggtgcagc ttgtcgaaag tgggggaggt ctggtgcaac ccggtggcag tctgaggctc 60 tcctgtgccg catctggctt tacctttagt aattacgcca tgagctgggt taggcaggca 120 cctggaaaag gtctggagtg ggtttctgcc atcagcagtt cagggtcaac tatttattac 180 gccgattcag ttaagggtcg ttttactata agtagggata actcaaaaaa taccctttat 240 ctgcaaatga atagtctgag agctgaggat actgccgtct attattgtgc taaagcaggc 300 tattacgggt ctatttatgc tttcgactat tggggtcaag gaactctggt cacagtgtcc 360 agt 363 <210> 94 <211> 363 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Polynucleotide encoding heavy chain variable region of anti-BCMA antibody 5G <400> 94 gaggtacagc tcgttgaatc tggaggggga ctggtccagc ctggagggtc tcttcgtctg 60 tcatgcgcag catcagggtt cacattcagt aattacgcca tgtcctgggt acgtcaggca 120 cctgggaagg gtttggagtg ggtcagtggg atctcccaaa gcgggtcctc tacatattat 180 gcagactccg taaagggtcg gttcaccata agtagagaca acagtaagaa tactctctat 240 ctgcaaatga atagtttgag ggcagaggac actgctgtct actactgtgc taaacacgca 300 tatatcatag aatttgaatc aatggatatt tggggccagg gtactcttgt cactgtgagt 360 agc 363 <210> 95 <211> 354 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Polynucleotide encoding heavy chain variable region of anti-BCMA antibody 5C3 <400> 95 gaggtccagt tgttggaaag cggtggtggt ttggttcaac caggcggtag cctcagactc 60 tcctgcgctg cctccgggtt tactttctca gactattata tacactgggt gcggcaggca 120 cctggcaagg gcctcgaatg ggtttctgct atatctggta gtggtggttc tacttactac 180 gccgatagtg tcaagggtcg atttactatt tcacgggata acagcaaaaa taccctctat 240 ctccaaatga actctctccg tgcagaggac actgctgttt actattgtgc tagtgatttg 300 ggtgacacaa catttgatag ctggggccag ggtacactcg taacagtatc ttcc 354 <210> 96 <211> 333 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Polynucleotide encoding light chain variable region of anti-BCMA antibody B58 <400> 96 cagtccgtgc tgacccagcc cccctccgcc tccggcaccc ccggccagcg ggtgaccatc 60 tcctgctccg gctcctcctc caacatcggc tccaactccg tgtcctggta ccagcagctg 120 cccggcaccg cccccaagct gctgatctac gccgactcca agcggccctc cggcgtgccc 180 gaccggttct ccggctccaa gtccggcacc tccgcctccc tggccatctc cggcctgcgg 240 tccgaggacg aggccgacta ctactgcggc tcctgggact actccctgtc cggctacgtg 300 ttcggcggcg gcaccaagct gaccgtgctg ggc 333 <210> 97 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Polynucleotide encoding light chain variable region of anti-BCMA antibody 5A6 <400> 97 caatctgtcc ttacacagcc tccaagcgca agcggcaccc ccggacaaag ggtaacaata 60 tcatgccagg gggattctct tcgcagctat tacgtgaatt ggtatcagca gttgcccggc 120 actgccccca aacttttgat atacgatcac tccaagcgcc ccacaggagt gcctgatagg 180 ttcagcggat ctaagtctgg aacatccgct tctttggcaa tctctgggct gcgaagtgag 240 gacgaggcag actactactg ccagtcttat gacagctcta ctgtagtctt cggaggcggt 300 acaaaactga cagtgctcgg t 321 <210> 98 <211> 324 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Polynucleotide encoding light chain variable region of anti-BCMA antibody 5D5 <400> 98 gaaatagtac ttacacagtc ccctggaact ctgtcacttt cccctgggga gcgagctaca 60 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gaaatcgttc tcactcaatc ccctggcacc ctctccttga gccctggtga gcgcgcaact 60 ctgtcatgtc gggtcagtca aagcattagc agctacttga attggtacca gcagaaacct 120 gggcaggcac cccgactgct tatatatgat gcaagcactc gagccatagg cattcccgac 180 agattttctg ggagtggcag tggtacagat tttactttga caatctcaag attggagccc 240 gaagattttg ctgtctatta ctgtcaacaa gtaaattcct atcccataac tttcggacaa 300 gggaccaagg tcgagatcaa aaga 324 <210> 101 <211> 315 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Polynucleotide encoding light chain variable region of anti-BCMA antibody 2F8 <400> 101 cagagcgtac ttacccaacc tcccagtgca agcggaaccc ccggacagag agtcaccatt 60 tcctgtacca ggatgcagag gcagtctgac tggtatcaac agctgccagg aaccgcccct 120 aaactcctca tatacgacaa caataagcgc ccactcggag tccccgatag gttcagtggc 180 tccaagtctg ggactagtgc ttcactcgct atatctggcc ttcgatctga ggacgaagca 240 gattattatt gccagagtta cgactctaat gcttatgtcg tgttcggagg cgggaccaaa 300 ttgacagtcc ttggt 315 <210> 102 <211> 324 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Polynucleotide encoding light chain variable region of anti-BCMA antibody 4H9 <400> 102 gagattgtac tgactcaatc tcctggcacc ctgtctctta gcccaggtga aagggctacc 60 ctctcttgca gggcatccca atctgtctcc cggaacctgg catggtacca acaaaaaccc 120 ggtcaagcac ctcgactcct gatctacggc gtctcctctc gcgcaaccgg cattcccgac 180 cgtttctctg ggtcagggtc aggtactgat ttcactttga caattagtcg gcttgaacct 240 gaggattttg ccgtatatta ctgtcagcaa tacggcagtt cccccccaac attcgggcag 300 gggacaaagg ttgaaattaa acgc 324 <210> 103 <211> 324 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Polynucleotide encoding light chain variable region of anti-BCMA antibody 1H <400> 103 gacattcaga tgactcagag tccctcatcc ctgtcagcat cagtgggcga ccgagtcacc 60 atcacctgtc gcgcctcaca aagcatctca aattggctca actggtacca acaaaagcca 120 ggaaaagcac ccaagctgtt gatctatgcc gcatcaagtc tgcaatcagg tgttccttca 180 aggttctcag gtagtgggag tggaaccgat tttaccttga caataagctc cttgcagccc 240 gaggattttg ccacttatta ttgccaacaa agttatagca ccccttggac cttcgggcaa 300 ggaaccaagg tggaaattaa gcgg 324 <210> 104 <211> 324 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Polynucleotide encoding light chain variable region of anti-BCMA antibody 2G <400> 104 gatatacaaa tgactcaaag cccctcaagc cttagtgcca gcgttggcga tcgggttact 60 ataacatgtc gggcctctca gtctatatcc tcctacctca actggtatca acaaaaacca 120 ggcaaagccc ccaaactttt gatttacgcc acctctcgac tccaatcagg cgtccctagt 180 agattcagcg ggtccggttc cggtactgat ttcaccctca ctatatcttc cctccaacct 240 gaagattttg ctacctacta ctgccagcaa tcatcctcct tcccttggac ttttggtcaa 300 gggacaaaag ttgaaatcaa acgt 324 <210> 105 <211> 324 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Polynucleotide encoding light chain variable region of anti-BCMA antibody 5G <400> 105 gacattcaaa tgactcaatc acccagctcc ctgagtgcct ctgtaggtga tcgagttact 60 attacctgtc gcgccagtca aagtatctct aactggctta attggtatca acagaagcca 120 ggaaaagctc ctaagctcct tatatatgca gcttcctccc tgcagagcgg tgtgccttct 180 cgcttctcag ggtctggttc aggaaccgac ttcacattga ctattagcag cctgcagccc 240 gaagattttg ctacatatta ttgtcaacag tcatatagca ccccctggac tttcggacag 300 ggaacaaaag ttgaaatcaa acgc 324 <210> 106 <211> 327 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Polynucleotide encoding light chain variable region of anti-BCMA antibody 5C3 <400> 106 gaaatagtac ttacacagtc ccctggaact ctgtcacttt cccctgggga gcgagctaca 60 ctgagctgtc aagccagcga cgatatttca aactacttga attggtatca acaaaaacct 120 gggcaagcac cccggctcct tatatatggt gtttctaacc gtgccagtgg aatcccagac 180 cgcttttccg gatcaggtag tgggactgat ttcacactca caattagtag gttggaacca 240 gaagacttcg ctgtctacta ctgtcaacag tcctactcta ctccaccaat tacattcggc 300 caggggacaa aactggagat aaagcgt 327 <210> 107 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Mutant for Light chain variable region of SEQ ID NO: 17 <400> 107 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Gln Gly Glu Ser Leu Arg Ser Tyr Tyr Val 20 25 30 Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr 35 40 45 Asp His Ser Lys Arg Pro Thr Gly Val Pro Asp Arg 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Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Leu Arg Thr Pro Ile 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 100 105 <210> 116 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Mutant for Light chain variable region of SEQ ID NO: 18 <400> 116 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asp Glu Asp 20 25 30 Ile Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Leu Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Leu Arg Thr Pro Ile 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 100 105 <210> 117 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Mutant for Light chain variable region of SEQ 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Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Leu Arg Thr Pro Ile 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 100 105 <210> 119 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Mutant for Light chain variable region of SEQ ID NO: 18 <400> 119 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asp Asp Glu 20 25 30 Ile Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Leu Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Leu Arg Thr Pro Ile 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 100 105 <210> 120 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Mutant for Light chain CDR1 of SEQ ID NO: 57 <400> 120 Gln Gly Glu Ser Leu Arg Ser Tyr Tyr Val Asn 1 5 10 <210> 121 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Mutant for Light chain CDR1 of SEQ ID NO: 57 <400> 121 Gln Gly Asp Ala Leu Arg Ser Tyr Tyr Val Asn 1 5 10 <210> 122 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Mutant for Light chain CDR3 of SEQ ID NO: 76 <400> 122 Gln Ser Tyr Glu Ser Ser Thr Val 1 5 <210> 123 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Mutant for Light chain CDR3 of SEQ ID NO: 76 <400> 123 Gln Ser Tyr Asp Ala Ser Thr Val 1 5 <210> 124 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Mutant for Light chain CDR1 of SEQ ID NO: 58 <400> 124 Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asp Asn Asp Ile Asn 1 5 10 <210> 125 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Mutant for Light chain CDR1 of SEQ ID NO: 58 <400> 125 Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asp Glu Asp Ile Asn 1 5 10 <210> 126 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Mutant for Light chain CDR1 of SEQ ID NO: 58 <400> 126 Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asp Ala Asp Ile Asn 1 5 10 <210> 127 <211> 11 <212> PRT <213> 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Claims (13)

  1. 서열번호 27 내지 55로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역;
    서열번호 56 내지 84 및 120 내지 128로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역;
    또는 상기 중쇄 가변 영역 및 상기 경쇄 가변영역을 포함하는 B 세포 성숙 항원(B Cell Maturation Antigen: BCMA)에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편.
  2. 청구항 1에 있어서, 상기 중쇄 가변 영역은
    서열번호 27 내지 34로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 상보성 결정 영역(complementarity determining region: CDR)-H1;
    서열번호 35 내지 45로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및
    서열번호 46 내지 55로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는 것인 항체 또는 그의 항원 결합 단편.
  3. 청구항 2에 있어서, 상기 중쇄 가변 영역은 서열번호 5 내지 15로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 것인 항체 또는 그의 항원 결합 단편.
  4. 청구항 1에 있어서, 상기 경쇄 가변 영역은
    서열번호 56 내지 65, 120, 121, 및 124 내지 128로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1;
    서열번호 66 내지 74로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및
    서열번호 75 내지 84, 122, 및 123으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 것인 항체 또는 그의 항원 결합 단편.
  5. 청구항 4에 있어서, 상기 경쇄 가변 영역은 서열번호 16 내지 26 및 107 내지 119로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 것인 항체 또는 그의 항원 결합 단편.
  6. 청구항 1에 있어서, 상기 항체는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 항체 또는 그의 항원 결합 단편:
    (1) 서열번호 27로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1,
    서열번호 35로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2,
    서열번호 46으로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3,
    서열번호 56으로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1,
    서열번호 66으로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및
    서열번호 75로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 항체;
    (2) 서열번호 28로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1,
    서열번호 36으로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2,
    서열번호 47로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3,
    서열번호 57로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1,
    서열번호 67로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및
    서열번호 76으로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 항체;
    (3) 서열번호 29로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1,
    서열번호 37로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2,
    서열번호 48로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3,
    서열번호 58로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1,
    서열번호 68로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및
    서열번호 77로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 항체;
    (4) 서열번호 30으로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1,
    서열번호 38로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2,
    서열번호 49로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3,
    서열번호 59로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1,
    서열번호 68로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및
    서열번호 78로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 항체;
    (5) 서열번호 31로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1,
    서열번호 39로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2,
    서열번호 48로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3,
    서열번호 60으로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1,
    서열번호 69로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및
    서열번호 79로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 항체;
    (6) 서열번호 31로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1,
    서열번호 40으로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2,
    서열번호 50으로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3,
    서열번호 61로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1,
    서열번호 70으로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및
    서열번호 80으로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 항체;
    (7) 서열번호 32로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1,
    서열번호 41로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2,
    서열번호 51로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3,
    서열번호 62로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1,
    서열번호 71로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및
    서열번호 81로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 항체;
    (8) 서열번호 33으로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1,
    서열번호 42로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2,
    서열번호 52로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3,
    서열번호 63으로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1,
    서열번호 72로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및
    서열번호 82로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 항체;
    (9) 서열번호 33으로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1,
    서열번호 43으로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2,
    서열번호 53으로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3,
    서열번호 64로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1,
    서열번호 73으로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및
    서열번호 83으로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 항체;
    (10) 서열번호 33으로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1,
    서열번호 44로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2,
    서열번호 54로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3,
    서열번호 63으로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1,
    서열번호 72로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및
    서열번호 82로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 항체;
    (11) 서열번호 34로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1,
    서열번호 45로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2,
    서열번호 55로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3,
    서열번호 65로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1,
    서열번호 74로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및
    서열번호 84로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 항체;
    (12) 서열번호 28로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1,
    서열번호 36으로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2,
    서열번호 47로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3,
    서열번호 120으로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1,
    서열번호 67로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및
    서열번호 76으로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 항체;
    (13) 서열번호 28로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1,
    서열번호 36으로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2,
    서열번호 47로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3,
    서열번호 121로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1,
    서열번호 67로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및
    서열번호 76으로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 항체;
    (14) 서열번호 28로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1,
    서열번호 36으로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2,
    서열번호 47로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3,
    서열번호 57로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1,
    서열번호 67로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및
    서열번호 122로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 항체;
    (15) 서열번호 28로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1,
    서열번호 36으로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2,
    서열번호 47로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3,
    서열번호 57로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1,
    서열번호 67로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및
    서열번호 123으로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 항체;
    (16) 서열번호 28로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1,
    서열번호 36으로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2,
    서열번호 47로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3,
    서열번호 120으로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1,
    서열번호 67로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및
    서열번호 122로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 항체;
    (17) 서열번호 28로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1,
    서열번호 36으로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2,
    서열번호 47로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3,
    서열번호 120으로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1,
    서열번호 67로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및
    서열번호 123으로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 항체;
    (18) 서열번호 28로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1,
    서열번호 36으로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2,
    서열번호 47로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3,
    서열번호 121로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1,
    서열번호 67로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및
    서열번호 122로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 항체;
    (19) 서열번호 28로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1,
    서열번호 36으로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2,
    서열번호 47로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3,
    서열번호 121로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1,
    서열번호 67로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및
    서열번호 123으로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 항체;
    (20) 서열번호 29로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1,
    서열번호 37로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2,
    서열번호 48로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3,
    서열번호 124로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1,
    서열번호 68로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및
    서열번호 77로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 항체;
    (21) 서열번호 29로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1,
    서열번호 37로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2,
    서열번호 48로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3,
    서열번호 125로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1,
    서열번호 68로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및
    서열번호 77로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 항체;
    (22) 서열번호 29로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1,
    서열번호 37로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2,
    서열번호 48로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3,
    서열번호 126으로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1,
    서열번호 68로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및
    서열번호 77로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 항체;
    (23) 서열번호 29로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1,
    서열번호 37로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2,
    서열번호 48로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3,
    서열번호 127로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1,
    서열번호 68로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및
    서열번호 77로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 항체; 및
    (24) 서열번호 29로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1,
    서열번호 37로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2,
    서열번호 48로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3,
    서열번호 128로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1,
    서열번호 68로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2, 및
    서열번호 77로 이루어진 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 항체.
  7. 청구항 1에 있어서, 상기 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 BCMA 단백질과 BCMA 단백질에 특이적으로 결합하는 물질의 결합을 저해하는 것인 항체 또는 그의 항원 결합 단편.
  8. 청구항 7에 있어서, 상기 BCMA 단백질에 특이적으로 결합하는 물질은 B 세포 활성화 인자(B-cell Activating Factor belonging to the Tumor Necrosis Factor family: BAFF), 증식 유도 리간드(A Proliferation Inducing Ligand: APRIL), 또는 이들의 조합인 것인 항체 또는 그의 항원 결합 단편.
  9. 청구항 1에 있어서, 상기 항원 결합 단편은 scFv, (scFv)2, Fv, Fab, Fab', F(ab')2, 또는 이들의 조합인 것인 항체 또는 그의 항원 결합 단편.
  10. 청구항 1에 있어서, 상기 항체 또는 항원 결합 단편은 항암제와 접합된 것인 항체 또는 그의 항원 결합 단편.
  11. 청구항 1 내지 청구항 10 중 어느 한 항의 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 포함하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  12. 청구항 11에 있어서, 상기 암은 다발성 골수종(multiple myeloma)인 것인 약학적 조성물.
  13. 청구항 1 내지 청구항 10 중 어느 한 항의 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 개체에게 투여하는 단계를 포함하는 암을 예방 또는 치료하는 방법.
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