KR20200123169A

KR20200123169A - B7-h4 항체 투약 섭생법

Info

Publication number: KR20200123169A
Application number: KR1020207026649A
Authority: KR
Inventors: 산딥 피 이남다르; 헬렌 엘 콜린스; 샹 장; 홍 샹
Original assignee: 파이브 프라임 테라퓨틱스, 인크.
Priority date: 2018-02-21
Filing date: 2019-02-21
Publication date: 2020-10-28
Also published as: CA3091161A1; WO2019165075A1; JP2021513997A; BR112020016990A2; JP7258038B2; MA51902A; SG11202007820QA; CN111868089A; AU2019226009A1; US20210070862A1; MX2020008730A; EP3755719A1; JP2023089063A; US20230287123A1; US20240317864A1; JP7258038B6; IL276623A

Abstract

본 개시내용은 인간 B7-H4에 특이적으로 결합하는 항체 및 이의 항원-결합 단편을, 이를 필요로 하는 대상체, 예를 들어, 암 환자에게 투여하는 방법을 제공한다.

Description

B7-H4 항체 투약 섭생법

1. 분야

본 개시내용은 일반적으로 암과 같은 질환의 치료를 위하여 인간 B7-H4에 특이적으로 결합하는 항체의 투여 방법에 관한 것이다. 유리한 용량 섭생법이 제공된다.

2. 배경

(B7x, B7-S1, 및 VTCN1로도 공지된) B7-H4는, PD-L1을 포함하는, 다른 B7 패밀리 일원과 상동성을 공유하는 면역 조절 분자이다. 두 IgV 및 IgC 엑토도메인으로 구성된 I 형 막관통 단백질이다. 건강한 조직에서의 B7-H4 발현이 단백질 수준에서 상대적으로 제한되는 반면, B7-H4는 유방, 난소, 및 자궁내막의 부인과 암종과 같은 여러 고형 종양으로 발현된다. 종양내 B7-H4의 발현은 불량한 예후와 상관관계가 있는 경향이다. B7-H4를 위한 수용체는 알려져 있지 않지만, T 세포에서 발현된다고 여겨진다. B7-H4는 T 세포 활성을 직접적으로 억제시킨다고 여겨진다.

B7-H4의 발현 및 기능을 고려해 볼 때, B7-H4에 특이적으로 결합하는 항체는 B7-H4 활성의 조절을 관여시키는 요법, 예를 들면, 암의 치료를 위하여 개발 중이다. 따라서, 그와 같은 항체의 효과적인 투여를 위한 투약 섭생법이 필요하다.

3. 개요

치료적으로 유효한 용량 섭생법을 사용하여 B7-H4 항체 및 이의 항원-결합 단편을 투여하는 방법이 본원에서 제공된다.

특정 양태에서, 인간 대상체에서 고형 종양을 치료하는 방법은 인간 B7-H4에 특이적으로 결합하고 20502 항체의 중쇄 가변 영역 (VH) 상보성 결정 영역 (CDR) 1, VH CDR2, VH CDR3 및 경쇄 가변 영역 (VL) CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 서열을 포함하는 약 0.005 내지 약 20 mg/kg의 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.

특정 양태에서, 인간 대상체에서 고형 종양을 치료하는 방법은 (i) 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 및 (ii) 약제학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는 약제학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하되, 여기서 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간 B7-H4에 특이적으로 결합하고 20502 항체의 중쇄 가변 영역 (VH) 상보성 결정 영역 (CDR) 1, VH CDR2, VH CDR3 및 경쇄 가변 영역 (VL) CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 서열을 포함하고 상기 조성물에서 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 적어도 95%는 아푸코실화되고, 약 0.005 내지 약 20 mg/kg의 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 투여된다.

특정 양태에서, CDR는 카밧-정의된 CDR, 초티아-정의된 CDR, 또는 AbM-정의된 CDR이다. 특정 양태에서, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및 CDR3 서열은 서열번호:5-10 각각에서 제시된 아미노산 서열을 포함한다.

특정 양태에서, 약 20 mg/kg 또는 20 mg/kg의 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 대상체에게 투여된다. 특정 양태에서, 약 10 mg/kg 또는 10 mg/kg의 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 대상체에게 투여된다. 특정 양태에서, 약 3 mg/kg 또는 3 mg/kg의 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 대상체에게 투여된다. 특정 양태에서, 약 1 mg/kg 또는 1 mg/kg의 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 대상체에게 투여된다. 특정 양태에서, 약 0.3 mg/kg 또는 0.3 mg/kg의 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 대상체에게 투여된다. 특정 양태에서, 약 0.1 mg/kg 또는 0.1 mg/kg의 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 대상체에게 투여된다. 특정 양태에서, 여기서 약 0.03 mg/kg 또는 0.03 mg/kg의 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 대상체에게 투여된다. 특정 양태에서, 약 0.01 mg/kg 또는 0.01 mg/kg의 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 대상체에게 투여된다. 특정 양태에서, 약 0.005 mg/kg 또는 0.005 mg/kg의 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 대상체에게 투여된다.

특정 양태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 3주마다 약 1회 투여된다.

특정 양태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 정맥내로 투여된다.

특정 양태에서, B7-H4는 투여에 앞서 면역조직화학 (IHC)를 사용하여 고형 종양에서 검출되었다.

특정 양태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호:11에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 및/또는 서열번호:12에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 특정 양태에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 중쇄 불변 영역 및/또는 경쇄 불변 영역을 포함한다. 특정 양태에서, 중쇄 불변 영역은 인간 면역글로불린 IgG₁ 중쇄 불변 영역이고/거나 경쇄 불변 영역은 인간 면역글로불린 IgGκ 경쇄 불변 영역이다. 특정 양태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호:25에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 불변 영역 및/또는 서열번호:23에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 불변 영역을 포함한다. 특정 양태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호:21에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및/또는 서열번호:22에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.

특정 양태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.

특정 양태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 아푸코실화된다.

특정 양태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 전장 항체이다. 특정 양태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 항원 결합 단편이다. 특정 양태에서, 항원 결합 단편은 Fab, Fab', F(ab')₂, 단일 쇄 Fv (scFv), 디설파이드 연결된 Fv, V-NAR 도메인, IgNar, 인트라바디, IgGΔCH2, 미니바디, F(ab')₃, 테트라바디, 트리아바디, 디아바디, 단일-도메인 항체, DVD-Ig, Fcab, mAb², (scFv)₂, 또는 scFv-Fc이거나 또는 이를 포함한다.

특정 양태에서, 푸코실화는 상기 조성물에서 검출불가능하다.

특정 양태에서, 고형 종양은 B7-H4를 발현시킨다.

특정 양태에서, 고형 종양은 절제불가능하거나, 국소 진행되어 있거나, 또는 전이성이다.

특정 양태에서, 고형 종양은 유방암, 관상 암종, 자궁내막 암종, 난소암, 요로상피세포암, 비-소세포 폐암, 췌장암, 갑상선암, 신장암 및 방광암으로 이루어지는 군으로부터 선택된다. 특정 양태에서, 고형 종양은 유방암, 난소암, 자궁내막암, 또는 요로상피세포암이다. 특정 양태에서, 유방암은 진행된 유방암이다. 특정 양태에서, 유방암은 HER2-음성이다. 특정 양태에서, 유방암은 삼중 음성 유방암이다. 특정 양태에서, 유방암은 호르몬 수용체 (HR)-양성 유방암이다. 특정 양태에서, 비-소세포 폐암은 편평상피 세포 암종이다. 특정 구현예에서, 대상체는 PD-1/PD-L1 길항제가 있는 사전 요법을 받지 않았다.

특정 양태에서, 본 방법은 추가로 종양에서 면역 세포의 수를 모니터링하는 단계를 포함한다. 특정 양태에서, 본 방법은 추가로 종양에서 자연 살해 (NK) 세포, CD4+ 세포, 및/또는 CD8+ 세포의 수를 모니터링하는 단계를 포함한다. 특정 양태에서, 본 방법은 추가로 대상체에서 사이토카인 수준을 모니터링하는 단계를 포함한다. 특정 양태에서, 본 방법은 추가로 대상체에서 IL-2, IL-6, IL-10, TNF, 및/또는 인터페론 감마 (IFNγ) 수준을 모니터링하는 단계를 포함한다.

특정 양태에서, 인간 대상체에서 고형 종양을 치료하는 방법은 인간 B7-H4에 특이적으로 결합하고 서열번호:11에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호:12에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 약 20 mg/kg의 이의 항체를 3주마다 약 1회 대상체에게 정맥내로 투여하는 단계를 포함한다.

특정 양태에서, 인간 대상체에서 고형 종양을 치료하는 방법은 (i) 인간 B7-H4에 특이적으로 결합하고 서열번호:11에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호:12에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 항체 및 (ii) 약제학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는 약제학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하되, 상기 조성물에서 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 적어도 95%는 아푸코실화되고, 여기서 약 20 mg/kg의 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 3주마다 약 1회 정맥내로 투여된다.

특정 양태에서, 항체는 서열번호:21에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호:22에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 특정 양태에서, 고형 종양은 유방암, 난소암, 자궁내막암, 또는 요로상피세포암이다.

4. 도면의 간단한 설명
도 1은 다양한 B7-H4 발현 수준을 가진 세포에 대해 푸코실화된 및 아푸코실화된 B7-H4 항체의 ADCC 활성을 도시한다. (실시예 3을 참고한다.)
도 2는 B7-H4를 발현시키기 위해 조작된 CT26 암 세포에서 발생하는 종양을 가진 마우스에서 종양 성장 억제에 관한 B7-H4 항체의 효과를 도시한다. (실시예 4를 참고한다.)
도 3은 1a 및 1b 상의 연구 계획을 도시한다. CNS = 중추 신경계; DLT = 용량 제한 독성; IV = 정맥내; LTFU = 장기 경과관찰; MTD = 최대 내약 용량; PD = 진행성 질환; Q3W = 3주마다 1회; TNBC = 삼중 음성 유방암; RD = 권장된 용량. (실시예 7 및 8을 참고한다.)

5. 상세한 설명

B7-H4 (예를 들면, 인간 B7-H4)에 특이적으로 결합하는 항체 (예를 들면, 단클론성 항체) 및 이의 항원-결합 단편의 투여 방법이 본원에서 제공된다. 항-B7-H4 항체 및 이의 항원-결합 단편은, 예를 들어, 대상체에서 고형 종양을 치료하기 위해 투여될 수 있다. 특정 구현예에서, 약 20 mg/kg, 약 10 mg/kg, 약 3 mg/kg, 약 1 mg/kg, 약 0.3 mg/kg, 약 0.1 mg/kg, 약 0.03 mg/kg, 약 0.01 mg/kg, 또는 약 0.005 mg/kg의 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 대상체에게 투여되고, 예를 들면, 여기서 투여는 약 3 주마다 발생한다.

5.1 전문용어

본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "B7-H4"는 천연 B7-H4 폴리펩타이드 및 B7-H4 폴리펩타이드의 동형체를 비롯한 포유류 B7-H4 폴리펩타이드를 지칭하지만, 이에 제한되지는 않는다. "B7-H4"는 전장, 미가공된 B7-H4 폴리펩타이드 뿐만 아니라 세포 내의 가공에서 발생한 B7-H4 폴리펩타이드의 형태를 포괄한다. 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "인간 B7-H4"는 서열번호:1의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드를 지칭한다. "B7-H4 폴리뉴클레오타이드", "B7-H4 뉴클레오타이드", 또는 "B7-H4 핵산"은 B7-H4를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드를 지칭한다.

용어 "항체"는 면역글로불린 분자의 가변 영역 내에서 적어도 하나의 항원 인식 부위를 통해 표적, 예컨대 단백질, 폴리펩타이드, 펩타이드, 탄수화물, 폴리뉴클레오타이드, 지질, 또는 전술한 것들의 조합에 특이적으로 결합하고 상기를 인식하는 면역글로불린 분자를 의미한다. 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "항체"는 항체가 원하는 생물학적 활성을 나타내는 한 온전한 다클론성 항체, 온전한 단클론성 항체, 키메라 항체, 인간화된 항체, 인간 항체, 항체를 포함하는 융합 단백질, 및 임의의 다른 변형된 면역글로불린 분자를 포괄한다. 항체는, 알파, 델타, 엡실론, 감마, 및 뮤 각각으로 지칭되는 중-쇄 불변 도메인의 동일성에 기반하여, 면역글로불린의 5개 주요 클래스: IgA, IgD, IgE, IgG, 및 IgM, 또는 이의 서브클래스 (아이소타입) (예를 들면 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2) 중 임의의 것일 수 있다. 면역글로불린의 상이한 클래스는 상이하고 널리 공지된 서브유닛 구조 및 3차원 배치형태를 갖는다. 항체는 다른 분자 예컨대 독소, 방사성 동위원소, 등에 접합될 수 있거나 노출될 수 있다.

용어 "항체 단편"은 온전한 항체의 한 부분을 지칭한다. "항원-결합 단편", "항원-결합 도메인", 또는 "항원-결합 영역"은 항원에 결합하는 온전한 항체의 한 부분을 지칭한다. 항원-결합 단편은 온전한 항체의 항원 인식 부위 (예를 들면, 항원을 특이적으로 결합시키는데 충분한 상보성 결정 영역 (CDR))를 함유할 수 있다. 항체의 항원-결합 단편의 예는 비제한적으로 Fab, Fab', F(ab')2, 및 Fv 단편, 선형 항체, 및 단일 쇄 항체를 포함한다. 항체의 항원-결합 단편은 임의의 동물 종, 예컨대 설치류 (예를 들면, 마우스, 랫트, 또는 햄스터) 및 인간으로부터 유래될 수 있거나 인공적으로 생산될 수 있다.

용어 "항-B7-H4 항체", "B7-H4 항체" 및 "B7-H4에 결합하는 항체"는 항체가 B7-H4 표적화에서 진단 및/또는 치료 제제로서 유용하도록 충분한 친화성으로 B7-H4를 특이적으로 결합할 수 있는 항체를 지칭한다. 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "특이적으로 결합하는", "면역특이적으로 결합하는", "면역특이적으로 인식하는", 및 "특이적으로 인식하는"은 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 맥락에서 유사한 용어이다. 이들 용어는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 그것의 항원-결합 도메인을 통해 에피토프에 결합하고 상기 결합이 항원 결합 도메인과 에피토프 사이 일부 상보성을 수반한다는 것을 나타낸다. 따라서, 인간 B7-H4 (서열번호:1)에 "특이적으로 결합하는" 항체는 또한 다른 종으로부터 B7-H4 (예를 들면, 사이노몰구스 원숭이, 마우스, 및/또는 랫트 B7-H4) 및/또는 다른 인간 대립유전자로부터 생산된 B7-H4 단백질에 결합할 수 있지만, 관련 없는, 비-B7-H4 단백질 (예를 들면, 다른 B7 단백질 패밀리 일원 예컨대 PD-L1)에 대한 결합의 정도는, 예를 들면, 방사선면역검정 (RIA)에 의해 측정된 바와 같이 B7-H4에 대한 항체 결합의 약 10% 미만이다. 특정 구현예에서, 인간, 사이노몰구스 원숭이, 마우스, 및 랫트 B7-H4에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 본원에서 제공된다.

"단클론성" 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 단일 항원성 결정인자, 즉 에피토프의 고도로 특이적 결합에 관여된 동종 항체 또는 항원-결합 단편 모집단을 지칭한다. 이것은 상이한 항원성 결정인자에 관한 상이한 항체를 전형적으로 포함하는 다클론성 항체와 대조적이다. 용어 "단클론성" 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 두 온전한 및 전장 단클론성 항체 뿐만 아니라 항체 단편 (예컨대 Fab, Fab', F(ab')2, Fv), 단일 쇄 (scFv) 돌연변이체, 항체 부분을 포함하는 융합 단백질, 및 항원 인식 부위를 포함하는 임의의 다른 변형된 면역글로불린 분자를 포괄한다. 또한, "단클론성" 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 비제한적으로 하이브리도마, 파아지 선택, 재조합 발현, 및 형질전환 동물을 포함하는 임의의 수의 방식으로 만들어진 그와 같은 항체 및 이의 항원-결합 단편을 지칭한다.

본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "가변 영역" 또는 "가변 도메인"은 호환적으로 사용되고 당업계에서 통상적이다. 가변 영역은 항체의 한 부분, 일반적으로, 경쇄 또는 중쇄의 한 부분, 전형적으로 성숙 중쇄에서 약 아미노-말단 110 내지 120개의 아미노산 또는 110 내지 125개의 아미노산 그리고 성숙 경쇄에서 약 90 내지 115개의 아미노산을 전형적으로 지칭하고, 이는 항체 중에서 서열이 상이하고 그것의 특정 항원용 특정 항체의 결합 및 특이성에서 사용된다. 서열의 가변성은 상보성 결정 영역 (CDR)로 불리는 그들 영역에 집중되는 반면 가변 도메인에서 더욱 고도로 보존된 영역은 프레임워크 영역 (FR)로 불린다. 임의의 특정 기전 또는 이론에 의한 구속됨의 바램 없이, 경쇄 및 중쇄의 CDR이 항원과 항체의 상호작용 및 특이성을 주로 담당한다고 여겨진다. 특정 구현예에서, 가변 영역은 인간 가변 영역이다. 특정 구현예에서, 가변 영역은 설치류 또는 쥣과 CDR 및 인간 프레임워크 영역 (FRs)를 포함한다. 특정 구현예에서, 가변 영역은 영장류 (예를 들면, 비-인간 영장류) 가변 영역이다. 특정 구현예에서, 가변 영역은 설치류 또는 쥣과 CDR 및 영장류 (예를 들면, 비-인간 영장류) 프레임워크 영역 (FRs)을 포함한다.

용어 "VL" 및 "VL 도메인"은 항체의 경쇄 가변 영역을 지칭하기 위해 호환적으로 사용된다.

용어 "VH" 및 "VH 도메인"은 항체의 중쇄 가변 영역을 지칭하기 위해 호환적으로 사용된다.

용어 "카밧 넘버링" 및 유사 용어는 종래 기술에서 인식되고 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 중쇄 및 경쇄 가변 영역에서 아미노산 잔기 넘버링의 시스템을 지칭한다. 특정 양태에서, CDR는 카밧 넘버링 시스템에 따라 결정될 수 있다 (예를 들면, Kabat EA & Wu TT (1971) Ann NY Acad Sci 190: 382-391 and Kabat EA 등, (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242 참고). 카밧 넘버링 시스템을 사용하여, 항체 중쇄 분자 내의 CDR는 전형적으로 아미노산 위치 31 내지 35에 존재하고, 이는 선택적으로, 35 (카밧 넘버링 체계에서 35A 및 35B로서 지칭됨) (CDR1), 아미노산 위치 50 내지 65 (CDR2), 및 아미노산 위치 95 내지 102 (CDR3)에 따라, 1 또는 2개 추가의 아미노산을 포함할 수 있다. 카밧 넘버링 시스템을 사용하여, 항체 경쇄 분자 내의 CDR는 전형적으로 아미노산 위치 24 내지 34 (CDR1), 아미노산 위치 50 내지 56 (CDR2), 및 아미노산 위치 89 내지 97 (CDR3)에 존재한다. 특정 구현예에서, 본원에 기재된 항체의 CDR는 카밧 넘버링 체계에 따라 결정되어 왔다.

대신에 초티아는 구조적 루프의 위치를 지칭한다 (Chothia and Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)). 카밧 넘버링 관례를 사용하여 넘버링된 경우 초티아 CDR-H1 루프의 단부는 루프의 길이에 따라 H32와 H34 사이에서 다양하다 (이것은 카밧 넘버링 체계가 H35A 및 H35B에서 삽입을 배치하기 때문이고; 35A도 35B도 존재하지 않으면, 루프는 32에서 끝나고; 35A만 존재하면, 루프는 33에서 끝나고; 35A 및 35B 둘 모두가 존재하면, 루프는 34에서 끝난다). AbM 초가변 영역은 카밧 CDR와 초티아 구조적 루프 사이에서 절충을 나타내고, Oxford Molecular's AbM 항체 모델링 소프트웨어에 의해 사용된다.

본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "불변 영역" 및 "불변 도메인"은 호환성이고 당업계에서 그들의 통상적인 의미를 갖는다. 불변 영역은 항원에 대한 항체의 결합에 직접적으로 관여되지 않지만 다양한 이펙터 기능, 예컨대 Fc 수용체와의 상호작용을 나타낼 수 있는 항체 부분, 예를 들면, 경쇄 및/또는 중쇄의 카르복실 말단 부분이다. 면역글로불린 분자의 불변 영역은 일반적으로 면역글로불린 가변 도메인에 비해 더욱 보존된 아미노산 서열을 갖는다. 특정 양태에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 항체-의존적 세포-매개된 세포독성 (ADCC)에 충분한 불변 영역 또는 이의 부분을 포함한다.

본원에서 사용된 바와 같이, 항체와 관련하여 사용된 경우 용어 "중쇄"는 불변 도메인의 아미노산 서열에 기반하는 임의의 구별되는 유형, 예를 들면, 알파 (α), 델타 (δ), 엡실론 (ε), 감마 (γ), 및 뮤 (μ)를 지칭할 수 있으며, 이들은 IgG의 서브클래스, 예를 들면, IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4를 비롯하여 항체의 IgA, IgD, IgE, IgG, 및 IgM 클래스 각각을 발생시킨다. 중쇄 아미노산 서열은 종래 기술에서 널리 공지된다. 특정 구현예에서, 중쇄는 인간 중쇄이다.

본원에서 사용된 바와 같이, 항체와 관련하여 사용된 경우 용어 "경쇄"는 불변 도메인의 아미노산 서열에 기반하여 임의의 구별되는 유형, 예를 들면, 카파 (κ) 또는 람다 (λ)를 지칭할 수 있다. 경쇄 아미노산 서열은 당업계에서 널리 공지된다. 특정 구현예에서, 경쇄는 인간 경쇄이다.

용어 "키메라" 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 아미노산 서열이 2개 이상의 종으로부터 유래되는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 지칭한다. 전형적으로, 경쇄 및 중쇄 둘 모두의 가변 영역은 원하는 특이성, 친화성, 및 능력을 가진 포유동물 (예를 들면 마우스, 랫트, 토끼, 등) 중 하나의 종으로부터 유래된 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 가변 영역에 해당하는 반면 불변 영역은 그 종에서 면역 반응 유발을 피하기 위해 또 다른 종 (일반적으로 인간)으로부터 유래된 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 서열과 상동성이다.

용어 "인간화된" 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 최소 비-인간 (예를 들면, 쥣과) 서열을 함유하는 특이적 면역글로불린 쇄, 키메라 면역글로불린, 또는 이의 단편인 비-인간 (예를 들면 쥣과) 항체 또는 항원-결합 단편의 형태를 지칭한다. 전형적으로, 인간화된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 상보성 결정 영역 (CDR)로부터의 잔기가 원하는 특이성, 친화성, 및 능력을 가지고 있는 비-인간 종 (예를 들면 마우스, 랫트, 토끼, 햄스터)의 CDR로부터의 잔기로 대체되는 ("CDR 그라프팅된") 인간 면역글로불린이다 (Jones 등, Nature 321:522-525 (1986); Riechmann 등, Nature 332:323-327 (1988); Verhoeyen 등, Science 239:1534-1536 (1988)). 일부 경우에, 인간 면역글로불린의 특정 Fv 프레임워크 영역 (FR) 잔기는 원하는 특이성, 친화성, 및 능력을 가지고 있는 비-인간 종으로부터의 항체 또는 단편에서 상응하는 잔기로 대체된다. 인간화된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 항체 또는 이의 항원-결합 단편 특이성, 친화성, 및/또는 능력을 개선 및 최적화하기 위해 Fv 프레임워크 영역에서 및/또는 비-인간 CDR 잔기 내에서 추가의 잔기 치환으로 추가 변형될 수 있다. 일반적으로, 인간화된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 비-인간 면역글로불린에 해당하는 모든 또는 실질적으로 모든 CDR 영역을 함유하는 가변 도메인을 포함할 것이고 반면에 모든 또는 실질적으로 모든 FR 영역은 인간 면역글로불린 공통 서열이다. 인간화된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 또한 면역글로불린 불변 영역 또는 도메인 (Fc)의 적어도 한 부분, 전형적으로 인간 면역글로불린의 것을 포함할 수 있다. 인간화된 항체를 생성하는데 사용된 방법의 예는 미국 특허 5,225,539; Roguska 등, Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 91(3):969-973 (1994), 및 Roguska 등, Protein Eng. 9(10):895-904 (1996)에서 기재된다. 일부 구현예에서, "인간화된 항체"는 재표면화된 항체이다.

용어 "인간" 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간 면역글로불린 유전자 좌로부터 유래된 아미노산 서열을 갖는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 의미하고, 여기에서 그와 같은 항체 또는 항원-결합 단편은 종래 기술에서 공지된 임의의 기법을 사용하여 만들어진다. 인간 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 이 정의는 온전한 또는 전장 항체 및 이의 단편을 포함한다.

"아푸코실화된" 항체 또는 이의 항원-결합 단편 혹은 "푸코스 결핍된" 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 그것의 불변 영역 글리코실화에서 푸코스가 결핍되는 IgG1 또는 IgG3 아이소타입 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 지칭한다. 인간 IgG1 또는 IgG3의 글리코실화는 최대 2개의 Gal 잔기로 말단화된 코어 푸코실화된 바이안테너리 복합 올리고당 글리코실화로서 Asn297에서 일어난다. 일부 구현예에서, 아푸코실화된 항체는 Asn297에서 푸코스가 결핍된다. 이들 구조는, 말단 Gal 잔기의 양에 따라, G0, G1 (1,6 또는 1,3), 또는 G2 글리칸 잔기로서 지정된다. 예를 들면, Raju, T. S., BioProcess Int. 1: 44-53 (2003)를 참고한다. 항체 Fc의 CHO 형 글리코실화는, 예를 들면, Routier, F. FL, Glycoconjugate J. 14: 201-207 (1997)에서 기재된다.

푸코스의 측정 방법은 종래 기술에서 공지된 임의의 방법을 포함한다. 본원에서 목적으로, 푸코스는, 그 전체가 본원에서 참고로 편입되는, WO2015/017600의 실시예 1에서 기재된 방법으로 검출된다. 간단히, 글리칸 분석은 항체로부터 글리칸을 (예를 들면, 효소적 방출로) 방출시키고, 글리칸을 안트라닐산 (2-AA)로 표지시키고, 그 다음 표지된 글리칸을 정제시킴으로써 수행된다. 형광 검출이 있는 정상 HPLC는 항체에서 글리칸을 분리시키고 각 글리칸의 상대량을 측정하는데 사용된다. 글리칸은 질량 분광분석법에 의해 결핍 또는 봉입 푸코스로서 양성으로 확인될 수 있다. 일부 구현예에서, 푸코스는 복수의 아푸코실화된 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 조성물에서 검출불가능하다. 일부 구현예에서, 아푸코실화된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 Fc 감마 RIIIA에 대하여 향상된 친화성을 가지고 있다. 일부 구현예에서, 아푸코실화된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 Fc 감마 RIIIA(V158)에 대하여 향상된 친화성을 가지고 있다. 일부 구현예에서, 아푸코실화된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 Fc 감마 RIIIA(F158)에 대하여 향상된 친화성을 가지고 있다.

"결합 친화성"은 일반적으로 분자 (예를 들면, 항체 또는 이의 항원-결합 단편)의 단일 결합 부위와 그것의 결합 파트너 (예를 들면, 항원) 사이의 비-공유 상호작용의 총계의 강도를 지칭한다. 달리 명시되지 않는 한, 본원에서 사용된 바와 같이, "결합 친화성"은 결합 쌍의 구성원 (예를 들면, 항체 또는 이의 항원-결합 단편 및 항원) 사이 1:1 상호작용을 반영하는 고유 결합 친화성을 지칭한다. 분자 X의, 그의 파트너 Y에 대한 친화성은 일반적으로 해리 상수 (K_D)로 제시될 수 있다. 친화성은 비제한적으로 평형 해리 상수 (K_D), 및 평형 결합 상수 (K_A)를 포함하는, 종래 기술에서 공지된 수많은 방식으로 측정 및/또는 표현될 수 있다. K_D는 k_off/k_on의 몫으로부터 계산되고, 반면에 K_A는 k_on/k_off의 몫으로부터 계산된다. k_on은 예를 들면 항원에 대한 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 결합 속도 상수를 지칭하고, k_off는 예를 들면 항원으로부터 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 해리를 지칭한다. k_on 및 k_off는 당업계의 숙련가에 공지된 기법, 예컨대 BIAcore® 또는 KinExA로 결정될 수 있다.

본원에서 사용된 바와 같이, "에피토프"는 당업계의 용어이고 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 특이적으로 결합할 수 있는 항원의 국소화된 영역을 지칭한다. 에피토프는, 예를 들어, 폴리펩타이드의 인접 아미노산일 수 있거나 (선형 또는 인접 에피토프) 또는 에피토프는 예를 들어, 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들의 2개 이상의 비-인접 영역으로부터 합칠 수 있다 (형태적, 비-선형, 불연속, 또는 비-인접 에피토프). 특정 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 특이적으로 결합하는 에피토프는 예를 들면, NMR 분광법, X-선 회절 결정학 연구, ELISA 검정, 질량 분광분석법 (예를 들면, 액체 크로마토그래피 전기분무 질량 분광분석법)과 커플링된 수소/중수소 교환, 어레이-기반 올리고-펩타이드 스캐닝 검정, 및/또는 돌연변이유발 맵핑 (예를 들면, 부위-지향된 돌연변이유발 맵핑)으로 결정될 수 있다. X-선 결정학의 경우, 결정화는 당업계에서 공지된 임의의 방법 (예를 들면,

R 등, (1994) Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 50(Pt 4): 339-350; McPherson A (1990) Eur J Biochem 189: 1-23; Chayen NE (1997) Structure 5: 1269-1274; McPherson A (1976) J Biol Chem 251: 6300-6303)을 사용하여 달성될 수 있다. 항체/이의 항원-결합 단편:항원 결정은 널리 공지된 X-선 회절 기법을 사용하여 연구될 수 있고 컴퓨터 소프트웨어 예컨대 X-PLOR (Yale University, 1992, Molecular Simulations, Inc. 배급; 예를 들면, Meth Enzymol (1985) volumes 114 & 115, eds Wyckoff HW 등,; U.S. 2004/0014194 참고), 및 BUSTER (Bricogne G (1993) Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 49(Pt 1): 37-60; Bricogne G (1997) Meth Enzymol 276A: 361-423, ed Carter CW; Roversi P 등, (2000) Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 56(Pt 10): 1316-1323을 참고한다)을 사용하여 개선될 수 있다. 돌연변이유발 맵핑 연구는 종래 기술에서 숙련가에 공지된 임의의 방법을 사용하여 달성될 수 있다. 예를 들면, 알라닌 스캐닝 돌연변이유발 기법을 포함하는, 돌연변이유발 기법의 설명에 대하여 Champe M 등, (1995) J Biol Chem 270: 1388-1394 및 Cunningham BC & Wells JA (1989) Science 244: 1081-1085을 참고한다.

용어 "예정 세포사 단백질 1" 및 "PD-1"은 CD28 계열에 속하는 면역억제 수용체를 지칭한다. PD-1은 이전에 활성화된 생체내 T-세포에서 우세하게 발현되고, 2개의 리간드, PD-L1 및 PD-L2에 결합한다. 본원에서 사용된 바와 같이 용어 "PD-1"은 인간 PD-1 (hPD-1), hPD-1의 자연 발생 변이체 및 동형체, 그리고 hPD-1의 종 동족체를 포함한다. hPD-1 서열은 하기이다:

MQIPQAPWPVVWAVLQLGWRPGWFLDSPDRPWNPPTFSPALLVVTEGDNATFTCSFSNTSESFVLNWYRMSPSNQTDKLAAFPEDRSQPGQDCRFRVTQLPNGRDFHMSVVRARRNDSGTYLCGAISLAPKAQIKESLRAELRVTERRAEVPTAHPSPSPRPAGQFQTLVVGVVGGLLGSLVLLVWVLAVICSRAARGTIGARRTGQPLKEDPSAVPVFSVDYGELDFQWREKTPEPPVPCVPEQTEYATIVFPSGMGTSSPARRGSADGPRSAQPLRPEDGHCSWPL (서열번호:30).

용어 "예정 세포사 1 리간드 1" 및 "PD-L1"은 PD-1에 대한 결합시 T-세포 활성화 및 사이토카인 분비를 하향 조절하는 PD-1을 위한 2개의 세포 표면 당단백질 리간드 중 하나 (다른 것은 PD-L2임)을 지칭한다. 본원에서 사용된 바와 같이 용어 "PD-L1"은 인간 PD-L1 (hPD-L1), hPD-1의 자연 발생 변이체 및 동형체, 그리고 hPD-L1의 종 동족체를 포함한다. hPD-L1 서열은 하기이다:

MRIFAVFIFMTYWHLLNAFTVTVPKDLYVVEYGSNMTIECKFPVEKQLDLAALIVYWEMEDKNIIQFVHGEEDLKVQHSSYRQRARLLKDQLSLGNAALQITDVKLQDAGVYRCMISYGGADYKRITVKVNAPYNKINQRILVVDPVTSEHELTCQAEGYPKAEVIWTSSDHQVLSGKTTTTNSKREEKLFNVTSTLRINTTTNEIFYCTFRRLDPEENHTAELVIPELPLAHPPNERTHLVILGAILLCLGVALTFIFRLRKGRMMDVKKCGIQDTNSKKQSDTHLEET (서열번호:31).

용어 "PD-1/PD-L1 길항제"는 PD-1/PD-L1 신호전달 경로를 방해하는 모이어티를 지칭한다. 일부 구현예에서, 길항제는 PD-1 및/또는 PD-L1에 대한 결합에 의해 PD-1/PD-L1 신호전달 경로를 억제시킨다. 일부 구현예에서, PD-1/PD-L1 길항제는 PD-L2에 또한 결합한다. 일부 구현예에서, PD-1/PD-L1 길항제는 PD-L1 및 임의로 PD-L2에 대한 PD-1의 결합을 차단한다. 비제한의 예시적인 PD-1/PD-L1 길항제는 PD-1 길항제, 예컨대 PD-1에 결합하는 항체, 예를 들면, 니볼루맙 (OPDIVO) 및 펨브롤리주맙 (KEYTRUDA); PD-L1 길항제, 예컨대 PD-L1에 결합하는 항체 (예를 들면, 아테졸리주맙 (TECENTRIQ), 더발루맙 및 아벨루맙); 융합 단백질, 예컨대 AMP-224; 및 펩타이드, 예컨대 AUR-012를 포함한다.

"단리된" 폴리펩타이드, 항체, 폴리뉴클레오타이드, 벡터, 세포, 또는 조성물은 자연에서 발견되지 않는 형태인 폴리펩타이드, 항체, 폴리뉴클레오타이드, 벡터, 세포, 또는 조성물이다. 단리된 폴리펩타이드, 항체, 폴리뉴클레오타이드, 벡터, 세포 또는 조성물은 이들이 자연에서 발견되는 형태로 이들이 더 이상 존재하지 않는 정도로 정제된 것들을 포함한다. 일부 구현예에서, 단리되는 항체, 폴리뉴클레오타이드, 벡터, 세포, 또는 조성물은 실질적으로 순수하다. 본원에서 사용된 바와 같이, "실질적으로 순수한"은 적어도 50% 순수한 (즉, 오염물질이 없는), 적어도 90% 순수한, 적어도 95% 순수한, 적어도 98% 순수한, 또는 적어도 99% 순수한 물질을 지칭한다.

용어 "폴리펩타이드", "펩타이드", 및 "단백질"은 임의의 길이의 아미노산의 중합체를 지칭하기 위해 본원에서 호환적으로 사용된다. 중합체는 선형 또는 분지형일 수 있고, 변형된 아미노산을 포함할 수 있고, 비-아미노산에 의해 차단될 수 있다. 상기 용어는 또한 자연적으로 또는 개입; 예를 들어, 디설파이드 결합 형성, 글리코실화, 지질화, 아세틸화, 인산화, 또는 임의의 다른 조작 또는 변형, 예컨대 표지화 성분과의 접합으로 변형된 아미노산 중합체를 포괄한다. 예를 들어, 아미노산의 하나 이상의 유사체 (예를 들어, 비천연 아미노산, 등 포함), 뿐만 아니라 종래 기술에서 공지된 다른 변형을 함유하는 폴리펩타이드가 본 정의 내에서 또한 포함된다. 본 발명의 폴리펩타이드가 항체에 기반하기 때문에, 특정 구현예에서, 폴리펩타이드가 단일 쇄 또는 회합된 쇄로서 일어날 수 있음이 이해된다.

본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "숙주 세포"는 임의의 유형의 세포, 예를 들면, 일차 세포, 배양물내 세포, 또는 세포주로부터의 세포일 수 있다. 특정 구현예에서, 용어 "숙주 세포"는 핵산 분자로 형질감염된 세포 그리고 그와 같은 세포의 자손 또는 잠재적 자손을 지칭한다. 그와 같은 세포의 자손은, 예를 들면, 숙주 세포 게놈에의 핵산 분자의 계속되는 생성 또는 통합에서 발생할 수 있는 돌연변이 또는 환경 영향으로 인해, 핵산 분자로 형질감염된 모 세포와 동일하지 않을 수 있다.

용어 "약제학적 제형"은 활성 성분의 생물학적 활성을 효과적이게 하기 위한 형태이고 제형이 투여될 대상체에게 허용불가능하게 독성인 추가의 성분을 함유하지 않는 제제를 지칭한다. 상기 제형은 멸균성일 수 있다.

용어 "투여한다," "투여하는," "투여," 및 기타 등등은, 본원에서 사용된 바와 같이, 생물학적 작용의 원하는 부위에 약물, 예를 들면, 항-B7-H4 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 전달을 가능하게 하는데 사용될 수 있는 방법 (예를 들면, 정맥내 투여)을 지칭한다. 본원에 기재된 제제 및 방법과 이용될 수 있는 투여 기법은 예를 들면, Goodman 및 Gilman, The Pharmacological Basis of Therapeutics, current edition, Pergamon; 및 Remington's, Pharmaceutical Sciences, current edition, Mack Publishing Co., Easton, Pa에서 구해진다.

본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "대상체" 및 "환자"는 호환적으로 사용된다. 대상체는 동물일 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 비-인간 동물 (예를 들면, 소, 돼지, 말, 고양이, 개, 랫트, 마우스, 원숭이 또는 다른 영장류, 등)과 같은 포유동물이다. 일부 구현예에서, 대상체는 사이노몰구스 원숭이이다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 인간이다.

용어 "치료적 유효량"은 대상체에서 질환 또는 장애를 치료하는데 효과적인 약물, 예를 들면, 항-B7-H4 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 양을 지칭한다. 암의 경우에, 약물의 치료적 유효량은 암 세포의 수를 감소; 종양 크기 또는 부담을 감소; 주변 기관에, 어느 정도까지, 암 세포 침윤을 억제; 어느 정도까지, 종양 전이를 억제; 어느 정도까지, 종양 성장을 억제; 암과 관련된 하나 이상의 증세를, 어느 정도까지, 완화; 및/또는 양호한 반응 예컨대 증가된 무진행 생존 (PFS), 무질환 생존 (DFS), 전체 생존 (OS), 완전한 반응 (CR), 부분적 반응 (PR), 또는, 일부 경우에, 안정한 질환 (SD), 진행성 질환 (PD)의 감소, 감소된 진행 시간 (TTP), 또는 이들의 임의의 조합을 초래할 수 있다. 약물이 성장을 예방 및/또는 존재하는 암 세포를 사멸시킬 수 있는 정도까지, 세포증식억제성 및/또는 세포독성일 수 있다.

"치료하는," "치료," "치료하기 위해," "경감하는," 및 "경감하기 위해"와 같은 용어는 병리적 상태 또는 장애의 증세를 치유, 둔화, 저감, 및/또는 이의 진행을 중지시키는 치료적 조치를 지칭한다. 따라서, 치료가 필요한 이들은 장애를 갖는 것으로 이미 진단된 또는 의심되는 이들을 포함한다. 특정 구현예에서, 대상체는 환자가 하나 이상의 하기를 나타내면 본 발명의 방법에 따라 암에 대하여 성공적으로 "치료된"다: 암 세포의 수에서의 감소 또는 완전한 부재; 종양 크기에서의 감소; 예를 들어, 암의 연 조직 및 뼈로의 만연을 포함하는 주변 기관에의 암 세포 침윤의 억제 또는 부재; 종양 전이의 억제 또는 부재; 종양 성장의 억제 또는 부재; 특이적 암과 관련된 하나 이상의 증세의 완화; 감소된 이환율 및 사망률; 삶의 질에서의 개선; 종양의 종양형성능, 종양형성 빈도, 또는 종양형성 능력에서의 감소; 종양에서 암 줄기 세포의 수 또는 빈도에서의 감소; 종양형성 세포의 비-종양형성 상태로의 분화; 증가된 무진행 생존 (PFS), 무질환 생존 (DFS), 전체 생존 (OS), 완전한 반응 (CR), 부분적 반응 (PR), 안정한 질환 (SD), 진행성 질환 (PD)에서의 감소, 감소된 진행 시간 (TTP), 또는 이들의 임의의 조합.

용어 "암" 및 "암성"은 세포의 모집단이 조절되지 않은 세포 성장을 특징으로 하는 포유동물내 생리적 상태를 지칭하거나 기재한다. 암의 예는 부인과 암 (예를 들면, 유방암 (삼중 음성 유방암, 관상 암종, 난소암, 및 자궁내막암 포함), 비-소세포 폐암, 췌장암, 갑상선암, 신장암 (예를 들면, 신장 세포 암종) 및 방광암 (예를 들면, 요상피 세포 암종)을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 암은 "B7-H4를 발현시키는 암" 또는 "B7-H4 발현 암"일 수 있다. 그와 같은 용어는 B7-H4를 발현시키는 세포를 포함하는 암을 지칭한다. 암은 B7-H4를 발현시키는 고형 종양일 수 있다. 암은 일차 종양일 수 있거나 또는 진행된 또는 전이성 암일 수 있다.

"난치성" 암은 항-종양 치료, 예컨대 화학요법이 암 환자에 투여됨에도 진행하는 암이다.

"재발성" 암은, 원래 부위에서 또는 원위 부위에서, 초기 요법에 대한 반응 후 재성장된 암이다.

본 개시내용 및 청구항에서 사용된 바와 같이, 단수 형태 "한", "하나", 및 "상기"는 문맥이 달리 명확히 명시하지 않는 한 복수 형태를 포함한다.

구현예가 언어 "포함하는"으로 본원에서 기재되는 모든 경우에 "으로 이루어지는" 및/또는 "으로 본질적으로 이루어지는" 용어로 기재된 것을 달리하고 유사한 구현예가 또한 제공되는 것으로 이해된다. 본 개시내용에서, "포함한다", "포함하는", "함유하는" 및 "갖는" 그리고 기타 등등은 미국 특허법에서 이들에 부여된 의미를 가질 수 있고 "포괄한다", "포괄하는", 및 기타 등등을 의미할 수 있고; "으로 본질적으로 이루어지는" 또는 "본질적으로 이루어지는"은 마찬가지로 미국 특허법에서 부여된 의미를 갖고 상기 용어는, 인용된 것의 기본적 또는 신규한 특성이 인용된 것을 넘어서는 존재에 의해 변화되지 않는다면 인용된 것을 넘어서는 존재를 허용하는 개방형이지만, 선행기술의 구현예를 배제한다.

구체적으로 언급되지 않는 한 또는 문맥으로부터 명백하지 않는 한, 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "또는"은 포괄적인 것으로 이해된다. 어구에서 사용된 경우 용어 "및/또는" 예컨대 본원에서 "A 및/또는 B"는 "A 및 B", "A 또는 B", "A", 및 "B" 모두를 포함하기 위한 것이다. 마찬가지로, 어구에서 사용된 경우 용어 "및/또는" 예컨대 "A, B, 및/또는 C"는 각각의 하기 구현예를 포괄하기 위한 것이다: A, B, 및 C; A, B, 또는 C; A 또는 C; A 또는 B; B 또는 C; A 및 C; A 및 B; B 및 C; A (단독); B (단독); 및 C (단독).

본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "약" 및 "대략"은, 수치 또는 수치 범위를 변형시키는데 사용된 경우에 값 또는 범위 5% 내지 10% 위 그리고 5% 내지 10% 아래의 편차가 인용된 값 또는 범위의 의도된 의미 내에 남아 있는 것을 나타낸다.

본원에서 제공된 임의의 조성물 또는 방법은 본원에서 제공된 하나 이상의 임의의 다른 조성물 및 방법과 조합될 수 있다.

5.2 암의 치료 방법

일 양태에서, 본원에 기재된 항-B7-H4 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 본원에 기재된 바와 같이 이의 약제학적 조성물을 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 인간 대상체에서 암을 치료하는 방법이 본원에서 제시된다.

일 양태에서, 인간 대상체에서 암을 치료하는 방법은 본원에 기재된 항-B7-H4 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 본원에 기재된 바와 같이 이의 약제학적 조성물을 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하되, 여기서 약 0.005 내지 약 20 mg/kg의 항-B7-H4 항체 또는 항원-결합 단편은 예를 들면, 3주마다 약 1회 투여된다.

일 양태에서, 인간 대상체에서 암을 치료하는 방법은 본원에 기재된 항-B7-H4 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 본원에 기재된 바와 같은 이의 약제학적 조성물을 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하되, 여기서 약 0.005 mg/kg의 항-B7-H4 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 예를 들면, 3주마다 약 1회 투여된다. 일 양태에서, 인간 대상체에서 암을 치료하는 방법은 본원에 기재된 항-B7-H4 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 본원에 기재된 바와 같이 이의 약제학적 조성물을 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하되, 여기서 약 0.01 mg/kg의 항-B7-H4 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 예를 들면, 3주마다 약 1회 투여된다. 일 양태에서, 인간 대상체에서 암을 치료하는 방법은 본원에 기재된 항-B7-H4 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 본원에 기재된 바와 같이 이의 약제학적 조성물을 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하되, 여기서 약 0.03 mg/kg의 항-B7-H4 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 예를 들면, 3주마다 약 1회 투여된다. 일 양태에서, 인간 대상체에서 암을 치료하는 방법은 본원에 기재된 항-B7-H4 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 본원에 기재된 바와 같이 이의 약제학적 조성물을 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하되, 여기서 약 0.1 mg/kg의 항-B7-H4 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 예를 들면, 3주마다 약 1회 투여된다. 일 양태에서, 인간 대상체에서 암을 치료하는 방법은 본원에 기재된 항-B7-H4 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 본원에 기재된 바와 같이 이의 약제학적 조성물을 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하되, 여기서 약 0.3 mg/kg의 항-B7-H4 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 예를 들면, 3주마다 약 1회 투여된다. 일 양태에서, 인간 대상체에서 암을 치료하는 방법은 본원에 기재된 항-B7-H4 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 본원에 기재된 바와 같이 이의 약제학적 조성물을 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하되, 여기서 약 1 mg/kg의 항-B7-H4 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 예를 들면, 3주마다 약 1회 투여된다. 일 양태에서, 인간 대상체에서 암을 치료하는 방법은 본원에 기재된 항-B7-H4 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 본원에 기재된 바와 같이 이의 약제학적 조성물을 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하되, 여기서 약 3 mg/kg의 항-B7-H4 항체 또는 항원-결합 단편은, 예를 들면, 3주마다 약 1회 투여된다. 일 양태에서, 인간 대상체에서 암을 치료하는 방법은 본원에 기재된 항-B7-H4 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 본원에 기재된 바와 같이 이의 약제학적 조성물을 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하되, 여기서 약 10 mg/kg의 항-B7-H4 항체 또는 항원-결합 단편은, 예를 들면, 3주마다 약 1회 투여된다. 일 양태에서, 인간 대상체에서 암을 치료하는 방법은 본원에 기재된 항-B7-H4 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 본원에 기재된 바와 같이 이의 약제학적 조성물을 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하되, 여기서 약 20 mg/kg의 항-B7-H4 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 예를 들면, 3주마다 약 1회 투여된다.

일 양태에서, 인간 대상체에서 암을 치료하는 방법은 본원에 기재된 항-B7-H4 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 본원에 기재된 바와 같이 이의 약제학적 조성물을 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하되, 여기서 0.005 mg/kg의 항-B7-H4 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 예를 들면, 3주마다 1회 투여된다. 일 양태에서, 인간 대상체에서 암을 치료하는 방법은 본원에 기재된 항-B7-H4 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 본원에 기재된 바와 같이 이의 약제학적 조성물을 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하되, 여기서 0.01 mg/kg의 항-B7-H4 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 예를 들면, 3주마다 1회 투여된다. 일 양태에서, 인간 대상체에서 암을 치료하는 방법은 본원에 기재된 항-B7-H4 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 본원에 기재된 바와 같이 이의 약제학적 조성물을 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하되, 여기서 0.03 mg/kg의 항-B7-H4 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 예를 들면, 3주마다 1회 투여된다. 일 양태에서, 인간 대상체에서 암을 치료하는 방법은 본원에 기재된 항-B7-H4 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 본원에 기재된 바와 같이 이의 약제학적 조성물을 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하되, 여기서 0.1 mg/kg의 항-B7-H4 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 예를 들면, 3주마다 1회 투여된다. 일 양태에서, 인간 대상체에서 암을 치료하는 방법은 본원에 기재된 항-B7-H4 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 본원에 기재된 바와 같이 이의 약제학적 조성물을 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하되, 여기서 0.3 mg/kg의 항-B7-H4 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 예를 들면, 3주마다 1회 투여된다. 일 양태에서, 인간 대상체에서 암을 치료하는 방법은 본원에 기재된 항-B7-H4 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 본원에 기재된 바와 같이 이의 약제학적 조성물을 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하되, 여기서 1 mg/kg의 항-B7-H4 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 예를 들면, 3주마다 1회 투여된다. 일 양태에서, 인간 대상체에서 암을 치료하는 방법은 본원에 기재된 항-B7-H4 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 본원에 기재된 바와 같이 이의 약제학적 조성물을 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하되, 여기서 3 mg/kg의 항-B7-H4 항체 또는 항원-결합 단편은, 예를 들면, 3주마다 1회 투여된다. 일 양태에서, 인간 대상체에서 암을 치료하는 방법은 본원에 기재된 항-B7-H4 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 본원에 기재된 바와 같이 이의 약제학적 조성물을 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하되, 여기서 10 mg/kg의 항-B7-H4 항체 또는 항원-결합 단편은, 예를 들면, 3주마다 1회 투여된다. 일 양태에서, 인간 대상체에서 암을 치료하는 방법은 본원에 기재된 항-B7-H4 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 본원에 기재된 바와 같이 이의 약제학적 조성물을 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하되, 여기서 20 mg/kg의 항-B7-H4 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 예를 들면, 3주마다 1회 투여된다.

본원에서 제공된 방법에 따르면, 항-B7-H4 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 항-B7-H4 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약제학적 조성물은 정맥내로 투여될 수 있다.

특정 구현예에서, 하기로 이루어지는 군으로부터 선택된 암의 치료 방법이 본원에서 제공된다: 유방암 (예를 들면, 진행된 유방암, 삼중 음성 유방암, 또는 관상 암종), 자궁내막 암종, 난소암, 요로상피세포암, 비-소세포 폐암 (예를 들면, 편평상피 세포 암종), 췌장암, 갑상선암, 신장암 (예를 들면, 신장 세포 암종), 및 방광암 (예를 들면, 요로상피 세포 암종). 특정 구현예에서, 진행된 유방암 (삼중-음성 유방암 포함), 난소암, 자궁내막암, 또는 요로상피세포암의 치료 방법이 본원에서 제공된다. 특정 구현예에서, 유방암의 치료 방법이 본원에서 제공된다. 특정 구현예에서, 호르몬-수용체 (HR)-양성 유방암의 치료 방법이 본원에서 제공된다. 특정 구현예에서, 난소암의 치료 방법이 본원에서 제공된다. 특정 구현예에서, 자궁내막암의 치료 방법이 본원에서 제공된다. 특정 구현예에서, 요로상피세포암의 치료 방법이 본원에서 제공된다. 본원에서 제공된, 특정 구현예에서, 대상체는 PD-1/PD-L1 길항제가 있는 사전 요법을 받지 않았다. 특정 구현예에서, 그와 같은 방법은 본원에서 제공된 항-B7-H4 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 또는 본원에서 제공된 항-B7-H4 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약제학적 조성물을 필요로 하는 환자 (예를 들면, 인간 환자)에게 투여하는 단계를 포함한다.

일부 구현예에서, 암은 B7-H4 발현 암이다. 특정 구현예에서, 암은 B7-H4를 발현시키는 고형 종양 고형 종양이다. 특정 구현예에서, B7-H4는 대상체로부터 수득된 생물학적 샘플에서 (예를 들면, 면역조직화학 (IHC)를 사용하여) 검출되었다.

생물학적 샘플은 대상체, 세포주, 조직, 또는 B7-H4를 잠재적으로 발현시키는 세포의 다른 공급원으로부터 수득된 임의의 생물학적 샘플일 수 있다. 인간으로부터 조직 생검 및 체액의 수득 방법은 종래 기술에서 널리 공지된다_. 생물학적 샘플은 주변 단핵 혈액 세포를 포함한다. 생물학적 샘플은 또한 혈액 샘플일 수 있고, 여기에서 순환 종양 세포 (또는 "CTC")는 B7-H4를 발현시킬 수 있고 검출될 수 있다.

B7-H4 단백질의 발현 수준에 대한 검정은 직접적으로 (예를 들면, 절대 단백질 수준의 결정 또는 추정에 의해) 또는 비교적으로 (예를 들면, 제2 생물학적 샘플에서의 단백질 수준과 비교에 의해) 제1 생물학적 샘플에서 B7-H4 단백질의 수준을 정성적으로 또는 정량적으로 측정 또는 추정하는 것을 포함하기 위한 것이다. 제1 생물학적 샘플에서 B7-H4 폴리펩타이드 발현 수준은 측정 또는 추정될 수 있고 표준 B7-H4 단백질 수준과 비교될 수 있으며, 상기 표준은 이환되지 않은 제2 생물학적 샘플로부터 결정되거나 이환되지 않은 샘플의 모집단으로부터 수준의 평균화에 의해 결정된다. 종래 기술에서 인정되는 바와 같이, 일단 "표준" B7-H4 폴리펩타이드 수준이 공지되면, 이것은 비교용 표준으로서 반복적으로 사용될 수 있다.

또 다른 구현예에서, 항-B7-H4 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 또는 약제학적 조성물은 환자에서 T 세포, CD4⁺ T 세포, 또는 CD8⁺ T 세포의 증식을 증가시키기 위해 암으로 진단된 환자 (예를 들면, 인간 환자)에게 투여된다. 또 다른 구현예에서, 항-B7-H4 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 또는 약제학적 조성물은 환자에서 인터페론-감마 (IFNγ) 생산을 증가시키기 위해 암으로 진단된 환자 (예를 들면, 인간 환자)에게 투여된다. 또 다른 구현예에서, 항-B7-H4 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 또는 약제학적 조성물은 환자에서 T 세포에 대한 B7-H4의 억제 활성을 차단하기 위해 암으로 진단된 환자 (예를 들면, 인간 환자)에게 투여된다. 또 다른 구현예에서, 항-B7-H4 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 또는 약제학적 조성물은 환자에서 B7-H4 발현 암 세포를 고갈시키기 위해 암으로 진단된 환자 (예를 들면, 인간 환자)에게 투여된다.

일부 구현예에서, 본 발명은 약제로서 사용하기 위하여 본원에서 제공된 항-B7-H4 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 약제학적 조성물에 관한 것이고, 여기서 약제는 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 약 0.005 mg/kg 내지 약 20 mg/kg (예를 들면, 약 0.005 mg/kg, 약 0.01 mg/kg, 약 0.03 mg/kg, 약 0.1 mg/kg, 약 0.3 mg/kg, 약 1 mg/kg, 약 3 mg/kg, 약 10 mg/kg, 또는 약 20 mg/kg)으로 투여용이다. 일부 양태에서, 본 발명은, 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 약 0.005 mg/kg 내지 약 20 mg/kg (예를 들면, 약 0.005 mg/kg, 약 0.01 mg/kg, 약 0.03 mg/kg, 약 0.1 mg/kg, 약 0.3 mg/kg, 약 1 mg/kg, 약 3 mg/kg, 약 10 mg/kg, 또는 약 20 mg/kg)이 투여되는 암의 치료를 위한 방법에서 사용하기 위하여, 본원에서 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 약제학적 조성물에 관한 것이다. 일부 양태에서, 본 발명은, 본원에서 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 약제학적 조성물의 약 0.005 mg/kg 내지 약 20 mg/kg (예를 들면, 약 0.005 mg/kg, 약 0.01 mg/kg, 약 0.03 mg/kg, 약 0.1 mg/kg, 약 0.3 mg/kg, 약 1 mg/kg, 약 3 mg/kg, 약 10 mg/kg, 또는 약 20 mg/kg)을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 암의 치료를 위한 방법에서 사용하기 위하여, 본원에서 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 약제학적 조성물에 관한 것이다.

일부 구현예에서, 본 발명은 약제로서 사용하기 위하여 본원에서 제공된 항-B7-H4 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 약제학적 조성물에 관한 것이고, 여기서 약제는 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 0.005 mg/kg 내지 20 mg/kg (예를 들면, 0.005 mg/kg, 0.01 mg/kg, 0.03 mg/kg, 0.1 mg/kg, 0.3 mg/kg, 1 mg/kg, 3 mg/kg, 10 mg/kg, 또는 20 mg/kg)으로 투여용이다. 일부 양태에서, 본 발명은, 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 0.005 mg/kg 내지 20 mg/kg (예를 들면, 0.005 mg/kg, 0.01 mg/kg, 0.03 mg/kg, 0.1 mg/kg, 0.3 mg/kg, 1 mg/kg, 3 mg/kg, 10 mg/kg, 또는 20 mg/kg)이 투여되는 암의 치료를 위한 방법에서 사용하기 위하여, 본원에서 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 약제학적 조성물에 관한 것이다. 일부 양태에서, 본 발명은, 본원에서 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 약제학적 조성물의 0.005 mg/kg 내지 20 mg/kg (예를 들면, 0.005 mg/kg, 0.01 mg/kg, 0.03 mg/kg, 0.1 mg/kg, 0.3 mg/kg, 1 mg/kg, 3 mg/kg, 10 mg/kg, 또는 20 mg/kg)을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 암의 치료를 위한 방법에서 사용하기 위하여, 본원에서 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 약제학적 조성물에 관한 것이다.

5.3 B7-H4 항체 및 이의 항원-결합 단편

B7-H4 (예를 들면, 인간 B7-H4)에 특이적으로 결합하는 항체 (예를 들면, 단클론성 항체, 예컨대 키메라, 인간화된, 또는 인간 항체) 및 이의 항원-결합 단편을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 인간 대상체에서 암을 치료하는 방법이 본원에서 제공된다. 본원에 제공된 방법에서 사용될 수 있는 예시적 B7-H4 항체 및 이의 항원-결합 단편은 종래 기술에서 공지된다. 인간, 사이노몰구스 원숭이, 쥣과, 및 랫트 B7-H4용 아미노산 서열은 종래 기술에서 공지되고 서열번호:1-4, 각각에 의해 제시된 바와 같이 본원에서 또한 제공된다.

인간 B7-H4:

MASLGQILFWSIISIIIILAGAIALIIGFGISGRHSITVTTVASAGNIGEDGILSCTFEPDIKLSDIVIQWLKEGVLGLVHEFKEGKDELSEQDEMFRGRTAVFADQVIVGNASLRLKNVQLTDAGTYKCYIITSKGKGNANLEYKTGAFSMPEVNVDYNASSETLRCEAPRWFPQPTVVWASQVDQGANFSEVSNTSFELNSENVTMKVVSVLYNVTINNTYSCMIENDIAKATGDIKVTESEIKRRSHLQLLNSKASLCVSSFFAISWALLPLSPYLMLK (서열번호:1)

사이노몰구스 원숭이 B7-H4:

MASLGQILFWSIISIIFILAGAIALIIGFGISGRHSITVTTVASAGNIGEDGILSCTFEPDIKLSDIVIQWLKEGVIGLVHEFKEGKDELSEQDEMFRGRTAVFADQVIVGNASLRLKNVQLTDAGTYKCYIITSKGKGNANLEYKTGAFSMPEVNVDYNASSETLRCEAPRWFPQPTVVWASQVDQGANFSEVSNTSFELNSENVTMKVVSVLYNVTINNTYSCMIENDIAKATGDIKVTESEIKRRSHLQLLNSKASLCVSSFLAISWALLPLAPYLMLK (서열번호:2)

쥣과 B7-H4

MASLGQIIFWSIINIIIILAGAIALIIGFGISGKHFITVTTFTSAGNIGEDGTLSCTFEPDIKLNGIVIQWLKEGIKGLVHEFKEGKDDLSQQHEMFRGRTAVFADQVVVGNASLRLKNVQLTDAGTYTCYIRTSKGKGNANLEYKTGAFSMPEINVDYNASSESLRCEAPRWFPQPTVAWASQVDQGANFSEVSNTSFELNSENVTMKVVSVLYNVTINNTYSCMIENDIAKATGDIKVTDSEVKRRSQLQLLNSGPSPCVFSSAFVAGWALLSLSCCLMLR (서열번호:3)

랫트 B7-H4

MASLGQIIFWSIINVIIILAGAIVLIIGFGISGKHFITVTTFTSAGNIGEDGTLSCTFEPDIKLNGIVIQWLKEGIKGLVHEFKEGKDDLSQQHEMFRGRTAVFADQVVVGNASLRLKNVQLTDAGTYTCYIHTSKGKGNANLEYKTGAFSMPEINVDYNASSESLRCEAPRWFPQPTVAWASQVDQGANFSEVSNTSFELNSENVTMKVVSVLYNVTINNTYSCMIENDIAKATGDIKVTDSEVKRRSQLELLNSGPSPCVSSVSAAGWALLSLSCCLMLR (서열번호:4)

특정 구현예에서, 본원에 기재된 방법에서 사용하기 위한 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간 B7-H4에 특이적으로 결합한다. 특정 구현예에서, 본원에 기재된 방법에서 사용하기 위한 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간 및 사이노몰구스 원숭이 B7-H4에 특이적으로 결합한다. 특정 구현예에서, 본원에 기재된 방법에서 사용하기 위한 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간, 쥣과, 및 랫트 B7-H4에 특이적으로 결합한다. 특정 구현예에서, 본원에 기재된 방법에서 사용하기 위한 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간, 사이노몰구스 원숭이, 쥣과, 및 랫트 B7-H4에 특이적으로 결합한다.

B7-H4는 IgC 엑토도메인 (서열번호:1의 아미노산 153-241) 및 IgV 엑토도메인 (서열번호:1의 아미노산 35-146)을 함유한다. 특정 구현예에서, 본원에 기재된 방법에서 사용하기 위한 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간 B7-H4의 IgV 도메인에 특이적으로 결합한다. 따라서, 서열번호:1의 아미노산 35-146으로 이루어지는 폴리펩타이드에 특이적으로 결합하는 항체 및 이의 항원-결합 단편의 투여 방법이 본원에서 제공된다.

특정 구현예에서, 본원에 기재된 방법에서 사용하기 위한 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간 B7-H4에 특이적으로 결합하고 표 1 및 2에서 제공된 바와 같이 열거된 20502 항체의 6개 CDR를 포함한다. "20502"는 본원에서 기재된 20502 항체를 지칭한다.

특정 구현예에서, 본원에 기재된 방법에서 사용하기 위한 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간 B7-H4에 특이적으로 결합하고 표 3에서 열거된 20502 항체의 VH를 포함한다.

특정 구현예에서, 본원에 기재된 방법에서 사용하기 위한 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간 B7-H4에 특이적으로 결합하고 표 4에서 열거된 20502의 VL을 포함한다.

특정 구현예에서, 본원에 기재된 방법에서 사용하기 위한 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간 B7-H4에 특이적으로 결합하고 표 3 및 4에서 열거된 20502 항체의 VH 및 VL을 포함한다.

특정 구현예에서, 본원에 기재된 방법에서 사용하기 위한 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간 B7-H4에 특이적으로 결합하고 표 5에서 열거된 20502 항체의 VH 프레임워크 영역을 포함한다.

특정 구현예에서, 본원에 기재된 방법에서 사용하기 위한 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간 B7-H4에 특이적으로 결합하고 표 6에서 열거된 20502 항체의 VL 프레임워크 영역을 포함한다.

특정 구현예에서, 본원에 기재된 방법에서 사용하기 위한 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간 B7-H4에 특이적으로 결합하고 표 5 및 6에서 열거된 20502 항체의 4개 VH 프레임워크 영역 및 4개 VL 프레임워크 영역을 포함한다.

특정 구현예에서, 본원에 기재된 방법에서 사용하기 위한 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간 B7-H4에 특이적으로 결합하고 표 7에서 열거된 20502 항체의 중쇄 서열을 포함한다.

특정 구현예에서, 본원에 기재된 방법에서 사용하기 위한 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간 B7-H4에 특이적으로 결합하고 표 8에서 열거된 20502 항체의 경쇄 서열을 포함한다.

특정 구현예에서, 본원에 기재된 방법에서 사용하기 위한 항체 또는 항원-결합 단편은 인간 B7-H4에 특이적으로 결합하고 표 7 및 8에서 열거된 20502 항체의 중쇄 서열 및 경쇄 서열을 포함한다.

특정 양태에서, 본원에 기재된 방법에서 사용하기 위한 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 그것의 VL 도메인 단독, 또는 그것의 VH 도메인 단독에 의해, 또는 그것의 3개 VL CDR 단독, 또는 그것의 3개 VH CDR 단독으로 기재된다. 예를 들어, 최초 항체의 친화성만큼 높은 또는 보다 더 높은 친화성을 갖는 인간화된 항체 변이체를 초래하는, 인간 경쇄 또는 중쇄 라이브러리로부터, 보완 경쇄 또는 중쇄, 각각을 확인함으로써 마우스 항-αvβ3 항체의 인간화를 기재하는, 그 전체가 본원에서 참고로 편입되는, Rader C 등, (1998) PNAS 95: 8910-8915을 참고한다. 특이적 VL 도메인 (또는 VH 도메인)의 사용 그리고 상보성 VH 도메인 또는 (VL 도메인)용 라이브러리의 스크리닝에 의해 특이적 항원을 특이적으로 결합하는 항체의 생산 방법을 기재하고 그 전체가 본원에서 참고로 편입된 Clackson T 등, (1991) Nature 352: 624-628을 또한 참고한다. 스크린은, ELISA에 의해 결정된 경우, 강한 결합제이었던, 특이적 VH 도메인에 대하여 14개의 신규한 파트너 그리고 특이적 VL 도메인에 대하여 13개의 신규한 파트너를 생산하였다. 특이적 VH 도메인의 사용 그리고 상보성 VL 도메인용 라이브러리 (예를 들면, 인간 VL 라이브러리)의 스크리닝에 의해 특이적 항원을 특이적으로 결합하되; 다음에 선택된 VL 도메인이 추가의 상보성 (예를 들면, 인간) VH 도메인의 선택을 안내하는데 사용될 수 있는 항체의 생산 방법을 기재하고 그 전체가 본원에서 참고로 편입된 Kim SJ & Hong HJ, (2007) J Microbiol 45: 572-577을 또한 참고한다.

특정 양태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 CDR은 면역글로불린 구조적 루프의 위치를 지칭하는, 초티아 넘버링 체계에 따라 결정될 수 있다 (예를 들면, Chothia C & Lesk AM, (1987), J Mol Biol 196: 901-917; Al-Lazikani B 등, (1997) J Mol Biol 273: 927-948; Chothia C 등, (1992) J Mol Biol 227: 799-817; Tramontano A 등, (1990) J Mol Biol 215(1): 175-82; 및 미국 특허 번호 7,709,226를 참고한다). 전형적으로, 카밧 넘버링 관례를 사용하는 경우, 초티아 CDR-H1 루프는 중쇄 아미노산 26 내지 32, 33, 또는 34에 존재하고, 초티아 CDR-H2 루프는 중쇄 아미노산 52 내지 56에 존재하고, 초티아 CDR-H3 루프는 중쇄 아미노산 95 내지 102에 존재하고, 반면 초티아 CDR-L1 루프는 경쇄 아미노산 24 내지 34에 존재하고, 초티아 CDR-L2 루프는 경쇄 아미노산 50 내지 56에 존재하고, 초티아 CDR-L3 루프는 경쇄 아미노산 89 내지 97에 존재한다. 카밧 넘버링 관례를 사용하여 넘버링된 경우 초티아 CDR-H1 루프의 단부는 루프의 길이에 따라 H32와 H34 사이 다양하다 (이것은 카밧 넘버링 체계가 H35A 및 H35B에 삽입을 배치하기 때문이고; 35A도 35B도 존재하지 않으면, 루프는 32에서 끝나고; 35A만 존재하면, 루프는 33에서 끝나고; 35A 및 35B 둘 모두가 존재하면, 루프는 34에서 끝난다).

특정 양태에서, B7-H4 (예를 들면, 인간 B7-H4)에 특이적으로 결합하고 표 3 및 4에서 열거된 20502 항체의 초티아 VH 및 VL CDR를 포함하는 항체 및 이의 항원-결합 단편을 투여하는 방법이 본원에서 제공된다. 특정 구현예에서, B7-H4 (예를 들면, 인간 B7-H4)에 특이적으로 결합하고, 초티아 및 카밧 CDR가 동일한 아미노산 서열을 가지고 있는, 하나 이상의 CDR를 포함하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 투여하는 방법이 본원에서 제공된다. 특정 구현예에서, B7-H4 (예를 들면, 인간 B7-H4)에 특이적으로 결합하고 카밧 CDR 및 초티아 CDR의 조합을 포함하는 항체 및 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약제학적 조성물이 본원에서 제공된다.

특정 양태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 CDR는 Lefranc M-P, (1999) The Immunologist 7: 132-136 및 Lefranc M-P 등, (1999) Nucleic Acids Res 27: 209-212에서 기재된 바와 같이 IMGT 넘버링 시스템에 따라 결정될 수 있다. IMGT 넘버링 체계에 따르면, VH-CDR1은 26 내지 35 위치에 있고, VH-CDR2는 51 내지 57 위치에 있고, VH-CDR3은 93 내지 102 위치에 있고, VL-CDR1은 27 내지 32 위치에 있고, VL-CDR2는 50 내지 52 위치에 있고, VL-CDR3은 89 내지 97 위치에 있다. 특정 구현예에서, B7-H4 (예를 들면, 인간 B7-H4)에 특이적으로 결합하고, 표 3 및 4에서 열거된, 예를 들어, Lefranc M-P (1999) 상기 및 Lefranc M-P 등, (1999) 상기)에서 기재된 바와 같이 20502 항체의 IMGT VH 및 VL CDR를 포함하는 항체 및 이의 항원-결합 단편을 투여하는 방법이 본원에서 제공된다.

특정 양태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 CDR는 MacCallum RM 등, (1996) J Mol Biol 262: 732-745에 따라 결정될 수 있다. 예를 들면, Martin A. "Protein Sequence and Structure Analysis of Antibody Variable Domains", in Antibody Engineering, Kontermann and

, eds., Chapter 31, pp. 422-439, Springer-Verlag, Berlin (2001)를 또한 참고한다. 특정 구현예에서, B7-H4 (예를 들면, 인간 B7-H4)에 특이적으로 결합하고 MacCallum RM 등에서의 방법에 의해 결정된 바와 같이 표 3 및 4에서 열거된 20502 항체의 VH 및 VL CDR를 포함하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 투여하는 방법이 본원에서 제공된다.

특정 양태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 CDR은 카밧 CDR와 초티아 구조적 루프 사이 절충을 나타내고, Oxford Molecular의 AbM 항체 모델링 소프트웨어 (Oxford Molecular Group, Inc.)에 의해 사용되는 AbM 초가변 영역을 지칭하는, AbM 넘버링 체계에 따라 결정될 수 있다. 특정 구현예에서, B7-H4 (예를 들면, 인간 B7-H4)에 특이적으로 결합하고 AbM 넘버링 체계에 의해 결정된 바와 같이 표 3 및 4에서 열거된 20502 항체의 VH 및 VL CDR를 포함하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 투여하는 방법이 본원에서 제공된다.

특이적 양태에서, 중쇄 및 경쇄를 포함하는 항체를 투여하는 방법이 본원에서 제공된다.

경쇄에 대하여, 특정 구현예에서, 본원에 기재된 항체의 경쇄는 카파 경쇄이다. 인간 카파 경쇄의 불변 영역은 하기 아미노산 서열을 포함할 수 있다:

RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (서열번호:23).

인간 카파 경쇄의 불변 영역은 하기 뉴클레오타이드 서열에 의해 인코딩될 수 있다:

CGGACCGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGT (서열번호:24).

특정 구현예에서, 본원에 기재된 방법에서 사용하기 위한 B7-H4 폴리펩타이드 (예를 들면, 인간 B7-H4)에 면역특이적으로 결합하는 항체는 경쇄를 포함하되 여기서 VL 도메인의 아미노산 서열이 표 4에서 제시된 서열을 포함하고, 여기서 경쇄의 불변 영역은 인간 카파 경쇄 불변 영역의 아미노산 서열을 포함한다.

특정 구현예에서, 본원에 기재된 방법에서 사용하기 위한 B7-H4 (예를 들면, 인간 B7-H4)에 면역특이적으로 결합하는 항체는 중쇄를 포함하되 여기서 VH 도메인의 아미노산 서열은 표 3에서 제시된 아미노산 서열을 포함하고 여기서 중쇄의 불변 영역은 인간 감마 (γ) 중쇄 불변 영역의 아미노산 서열을 포함한다.

인간 IgG₁중쇄의 불변 영역은 하기 아미노산 서열을 포함할 수 있다:

ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열번호:25).

인간 IgG₁중쇄의 불변 영역은 하기 뉴클레오타이드 서열에 의해 인코딩될 수 있다:

GCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGGGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA. (서열번호:26)

특정 구현예에서, 본원에 기재된 방법에서 사용하기 위한 B7-H4 (예를 들면, 인간 B7-H4)에 면역특이적으로 결합하는 항체는 본원에 기재된 임의의 VH 및 VL 도메인의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 VL 도메인을 포함하고, 여기서 불변 영역은 IgG (예를 들면, 인간 IgG) 면역글로불린 분자의 불변 영역의 아미노산 서열을 포함한다. 또 다른 특정 구현예에서, 본원에 기재된 방법에서 사용하기 위한 B7-H4 (예를 들면, 인간 B7-H4)에 면역특이적으로 결합하는 항체는 본원에 기재된 임의의 VH 및 VL 도메인의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 VL 도메인을 포함하고, 여기서 불변 영역은 IgG₁ (예를 들면 인간 IgG₁) 면역글로불린 분자의 불변 영역의 아미노산 서열을 포함한다.

감소된 푸코스 함량을 가진 항체는 Fc 수용체, 예컨대, 예를 들면, FcγRIIIA에 대하여 증가된 친화성을 갖는 것으로 보고되어 왔다. 따라서, 특정 구현예에서, 본원에 기재된 방법에서 사용하기 위한 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 감소된 푸코스 함량을 갖거나 푸코스가 결핍된다 (즉, "아푸코실화된"다). 그와 같은 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 종래 기술에서 숙련가에 공지된 기법을 사용하여 생산될 수 있다. 예를 들어, 이들은 푸코실화하는 능력이 부족한 또는 결핍된 세포에서 발현될 수 있다. 특정 예에서, α1,6-푸코실전달효소 유전자 (FUT8)의 두 대립유전자의 녹아웃이 있는 세포주는 감소된 푸코스 함량을 가진 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 생산하는데 사용될 수 있다. Potelligent^® 시스템 (Lonza)는 감소된 푸코스 함량을 가진 항체 및 이의 항원-결합 단편을 생산하는데 사용될 수 있는 그와 같은 시스템의 예이다. 대안적으로, 푸코스 함량이 감소되거나 푸코스 함량이 없는 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 예를 들면, 하기에 의해 생산될 수 있다: (i) 푸코실화를 예방 또는 감소하는 조건 하에서 세포의 배양; (ii) (예를 들면, 푸코시다제 효소를 이용한) 푸코스의 번역후 제거; (iii) 예를 들면, 비-글리코실화된 당단백질의 재조합 발현 후, 원하는 탄수화물의 번역후 첨가; 또는 (iv) 푸코실화되지 않는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 선택하기 위한 당단백질의 정제. 예를 들면, 푸코스 함량이 없거나 푸코스 함량이 감소된 이의 항체의 생산 방법에 대하여 Longmore GD & Schachter H (1982) Carbohydr Res 100: 365-92 및 Imai-Nishiya H 등, (2007) BMC Biotechnol. 7: 84를 참고한다.

일부 구현예에서, 아푸코실화된 B7-H4 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 동일한 아미노산 서열을 갖는 푸코실화된 B7-H4 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 비교하여 시험관내 향상된 ADCC 활성을 가지고 있다. 일부 구현예에서, 아푸코실화된 B7-H4 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 푸코실화된 B7-H4 항체를 이용한 특이적 세포용해보다 적어도 10, 적어도 15, 적어도 20, 적어도 25, 적어도 30, 적어도 35, 적어도 40, 적어도 45, 적어도 50, 적어도 60, 적어도 65, 적어도 70, 또는 적어도 75 퍼센트 포인트 더 큰 특이적 세포용해를 야기시킨다. 특이적 세포용해는 본원 실시예 2에 기재된 바와 같이 결정될 수 있다.

일부 구현예에서, B7-H4 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 동일한 아미노산 서열을 갖는 푸코실화된 B7-H4 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 비교하여 Fc 감마 RIIIA에 대하여 향상된 친화성을 가지고 있다. 일부 구현예에서, 아푸코실화된 B7-H4 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 푸코실화된 B7-H4 항체 또는 이의 항원-결합 단편보다 적어도 2-배, 적어도 3-배, 적어도 4-배, 적어도 5-배, 적어도 7-배, 적어도 10-배, 적어도 12-배, 적어도 15-배, 적어도 17-배, 또는 적어도 20-배 더 큰 친화성으로 Fc 감마 RIIIA에 결합한다. 일부 구현예에서, Fc 감마 RIIIA에 대한 친화성은 표면 플라즈몬 공명을 사용하여 결정된다. 일부 구현예에서, Fc 감마 RIIIA는 Fc 감마 RIIIA(V158) 및 Fc 감마 RIIIA(F158)로부터 선택된다. 일부 구현예에서, Fc 감마 RIIIA는 Fc 감마 RIIIA(V158)이다.

일부 구현예에서, 푸코스의 존재는 고성능 액체 크로마토그래피 (HPLC), 모세관 전기영동, 또는 MALDI-TOF 질량 분광분석법을 포함하는 방법으로 결정될 수 있다.

특정 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 (i) 20502의 CDR 서열, 20502의 VH 및 VL 서열, 또는 20502의 중쇄 및 경쇄 서열을 포함하고 (ii) 아푸코실화된다.

특정 구현예에서, 조성물은 (i) 20502의 CDR 서열, 20502의 VH 및 VL 서열, 또는 20502의 중쇄 및 경쇄 서열을 포함하고 (ii) 아푸코실화되는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하고, 예를 들면, 여기서 조성물에서 항체의 적어도 95%는 아푸코실화되거나 여기서 푸코실화는 조성물에서 검출불가능하다.

조작된 글리코형은, 비제한적으로 이펙터 기능 향상 또는 감소를 비롯한 다양한 목적에 유용할 수 있다. 본원에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편에서 조작된 글리코형의 생성 방법은, 예를 들면,

등, (1999) Nat Biotechnol 17: 176-180; Davies J 등, (2001) Biotechnol Bioeng 74: 288-294; Shields RL 등, (2002) J Biol Chem 277: 26733-26740; Shinkawa T 등, (2003) J Biol Chem 278: 3466-3473; Niwa R 등, (2004) Clin Cancer Res 1: 6248-6255; Presta LG 등, (2002) Biochem Soc Trans 30: 487-490; Kanda Y 등, (2007) Glycobiology 17: 104-118; 미국 특허 번호 6,602,684; 6,946,292; 및 7,214,775; 미국 특허 공개 번호 US 2007/0248600; 2007/0178551; 2008/0060092; 및 2006/0253928; 국제 공개 번호 WO 00/61739; WO 01/292246; WO 02/311140; 및 WO 02/30954; Potelligent™ 기술 (Biowa, Inc. Princeton, N.J.); 및 GlycoMAb® 글리코실화 조작 기술 (Glycart biotechnology AG, Zurich, Switzerland)에서 개시된 것들을 비제한적으로 포함한다. 예를 들면, Ferrara C 등, (2006) Biotechnol Bioeng 93: 851-861; 국제 공개 번호 WO 07/039818; WO 12/130831; WO 99/054342; WO 03/011878; 및 WO 04/065540를 또한 참고한다.

특정 구현예에서, 본원에 기재된 임의의 불변 영역 돌연변이 또는 변형은 2개의 중쇄 불변 영역을 갖는 본원에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 한쪽 또는 양쪽 중쇄 불변 영역에 도입될 수 있다.

또 다른 특정 구현예에서, 본원에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 B7-H4 (예를 들면, 인간 B7-H4)에 면역특이적으로 결합하며, 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 여기서 (i) 중쇄는 표 1에서 열거된 20502 항체의 VH CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인을 포함하고; (ii) 경쇄는 표 2에서 열거된 20502 항체의 VL CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하고; (iii) 중쇄는 추가로 인간 IgG₁ 중쇄의 불변 도메인의 아미노산 서열을 포함하는 불변 중쇄 도메인을 포함하고; (iv) 경쇄는 추가로 인간 카파 경쇄의 불변 도메인의 아미노산 서열을 포함하는 불변 경쇄 도메인을 포함한다.

또 다른 특정 구현예에서, 본원에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 B7-H4 (예를 들면, 인간 B7-H4)에 면역특이적으로 결합하며 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 여기서 (i) 중쇄는 표 3에서 열거된 20502 항체의 VH 도메인의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인을 포함하고; (ii) 경쇄는 표 4에서 열거된 20502 항체의 VL 도메인의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하고; (iii) 중쇄는 추가로 인간 IgG₁ 중쇄의 불변 도메인의 아미노산 서열을 포함하는 불변 중쇄 도메인을 포함하고; (iv) 경쇄는 추가로 인간 카파 경쇄의 불변 도메인의 아미노산 서열을 포함하는 불변 경쇄 도메인을 포함한다.

특정 구현예에서, 본원에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 B7-H4 (예를 들면, 인간 B7-H4)에 면역특이적으로 결합하고 T 세포 관문 차단 활성을 나타낸다. 특정 구현예에서, 본원에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 B7-H4 (예를 들면, 인간 B7-H4)에 면역특이적으로 결합하고 T 세포에서 인터페론-감마 (IFNγ) 생산을 증가시킨다. 특정 구현예에서, 본원에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 B7-H4 (예를 들면, 인간 B7-H4)에 면역특이적으로 결합하는 것으로, T 세포 증식을 증가시킨다. 특정 구현예에서, 본원에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 B7-H4 (예를 들면, 인간 B7-H4)에 면역특이적으로 결합하는 것으로, CD4+ T 세포 증식을 증가시킨다. 특정 구현예에서, 본원에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 B7-H4 (예를 들면, 인간 B7-H4)에 면역특이적으로 결합하는 것으로, CD8+ T 세포 증식을 증가시킨다.

특정 구현예에서, 본원에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 B7-H4 (예를 들면, 인간 B7-H4)에 면역특이적으로 결합하는 것으로, 항체-의존적 세포 독성 (ADCC) 활성을 나타낸다. 특정 구현예에서, 본원에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 B7-H4 (예를 들면, 인간 B7-H4)에 면역특이적으로 결합하는 것으로, 적어도 300,000개의 세포 표면 B7-H4 분자 (예를 들면, SK-BR-3 세포)를 가진 세포주에서 항체-의존적 세포 독성 (ADCC) 활성을 나타낸다. 특정 구현예에서, 본원에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 B7-H4 (예를 들면, 인간 B7-H4)에 면역특이적으로 결합하는 것으로, 적어도 100,000개의 세포 표면 B7-H4 분자 (예를 들면, HCC1569 세포)를 가진 세포주에서 항체-의존적 세포 독성 (ADCC) 활성을 나타낸다. 특정 구현예에서, 본원에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 B7-H4 (예를 들면, 인간 B7-H4)에 면역특이적으로 결합하는 것으로, 적어도 50,000개의 세포 표면 B7-H4 분자 (예를 들면, ZR-75-1 세포)를 가진 세포주에서 항체-의존적 세포 독성 (ADCC) 활성을 나타낸다. 특정 구현예에서, 본원에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 B7-H4 (예를 들면, 인간 B7-H4)에 면역특이적으로 결합하는 것으로, 적어도 30,000개의 세포 표면 B7-H4 분자 (예를 들면, MDA-MB-468 세포)를 가진 세포주에서 항체-의존적 세포 독성 (ADCC) 활성을 나타낸다. 특정 구현예에서, 본원에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 B7-H4 (예를 들면, 인간 B7-H4)에 면역특이적으로 결합하는 것으로, 적어도 15,000개의 세포 표면 B7-H4 분자 (예를 들면, HCC1964 세포)를 가진 세포주에서 항체-의존적 세포 독성 (ADCC) 활성을 나타낸다.

특이적 양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 항원-결합 단편은 B7-H4 (예를 들면, 인간 B7-H4)에 면역특이적으로 결합하는 것으로, Fab, Fab', F(ab')₂, 및 scFv로 이루어지는 군으로부터 선택되고, 여기서 Fab, Fab', F(ab')₂, 또는 scFv는 본원에 기재된 바와 같이 항-B7-H4 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 중쇄 가변 영역 서열 및 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다. Fab, Fab', F(ab')2, 또는 scFv는 종래 기술에서 숙련가에 공지된 임의의 기법으로 생산될 수 있다. 특정 구현예에서, Fab, Fab', F(ab')₂, 또는 scFv는 추가로 생체내 항체의 반감기를 확장시키는 모이어티를 포함한다. 모이어티는 또한 일명 "반감기 확장 모이어티"이다. 생체내 Fab, Fab', F(ab')₂, 또는 scFv의 반감기 확장을 위한 종래 기술에서 숙련가에 공지된 임의의 모이어티는 사용될 수 있다. 예를 들어, 반감기 확장 모이어티는 Fc 영역, 중합체, 알부민, 또는 알부민 결합 단백질 또는 화합물을 포함할 수 있다. 중합체는 천연 또는 합성, 선택적으로 치환된 직선형 또는 분지형 쇄 폴리알킬렌, 폴리알케닐렌, 폴리옥실알킬렌, 다당류, 폴리에틸렌 글리콜, 폴리프로필렌 글리콜, 폴리비닐 알코올, 메톡시폴리에틸렌 글리콜, 락토스, 아밀로스, 덱스트란, 글리코겐, 또는 이들의 유도체를 포함할 수 있다. 치환체는 하나 이상의 하이드록시, 메틸, 또는 메톡시 기를 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, Fab, Fab', F(ab')₂, 또는 scFv는 반감기 확장 모이어티의 부착을 위한 하나 이상의 C-말단 아미노산의 부가로 변형될 수 있다. 특정 구현예에서, 반감기 확장 모이어티는 폴리에틸렌 글리콜 또는 인간 혈청 알부민이다. 특정 구현예에서, Fab, Fab', F(ab')₂, 또는 scFv는 Fc 영역에 융합된다.

5.4 약제학적 조성물

생리학적으로 허용가능한 담체, 부형제, 또는 안정화제에서 원하는 정도의 순도를 갖는 항-B7-H4 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 조성물의 투여 방법이 본원에서 제공된다 (Remington's Pharmaceutical Sciences (1990) Mack Publishing Co., Easton, PA). 허용가능한 담체, 부형제, 또는 안정화제는 이용된 투약량 및 농도에서 수령체에 비독성이다. (예를 들면, Gennaro, Remington: The Science and Practice of Pharmacy with Facts Comparisons: Drugfacts Plus, 20th ed. (2003); Ansel 등, Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, 7th ed., Lippencott Williams and Wilkins (2004); Kibbe 등, Handbook of Pharmaceutical Excipients, 3rd ed., Pharmaceutical Press (2000)를 참고한다). 생체내 투여용으로 사용될 조성물은 멸균성일 수 있다. 이것은, 예를 들면, 멸균 여과막을 통한 여과로 쉽게 달성된다.

일부 구현예에서, 약제학적 조성물의 투여 방법이 제공되고, 여기서 약제학적 조성물은 아푸코실화된 항-B7-H4 항체 또는 이의 항원-결합 단편 및 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함한다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 투여 방법이 제공되고, 여기서 약제학적 조성물은 아푸코실화된 항-B7-H4 항체 또는 항원-결합 단편을 포함하고 예를 들면, 여기서 조성물에서 항체의 적어도 80%는 아푸코실화된다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 투여 방법은 제공되고, 여기서 약제학적 조성물은 아푸코실화된 항-B7-H4 항체 또는 항원-결합 단편을 포함하고 예를 들면, 여기서 조성물에서 항체의 적어도 85%는 아푸코실화된다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 투여 방법은 제공되고, 여기서 약제학적 조성물은 아푸코실화된 항-B7-H4 항체 또는 항원-결합 단편을 포함하고 예를 들면, 여기서 조성물에서 항체의 적어도 90%는 아푸코실화된다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 투여 방법은 제공되고, 여기서 약제학적 조성물은 아푸코실화된 항-B7-H4 항체 또는 항원-결합 단편을 포함하고 예를 들면, 여기서 조성물에서 항체의 적어도 95%는 아푸코실화된다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 투여 방법은 제공되고, 여기서 약제학적 조성물은 아푸코실화된 항-B7-H4 항체 또는 항원-결합 단편을 포함하고 예를 들면, 여기서 조성물에서 항체의 적어도 96%는 아푸코실화된다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 투여 방법은 제공되고, 여기서 약제학적 조성물은 아푸코실화된 항-B7-H4 항체 또는 항원-결합 단편을 포함하고 예를 들면, 여기서 조성물에서 항체의 적어도 97%는 아푸코실화된다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 투여 방법은 제공되고, 여기서 약제학적 조성물은 아푸코실화된 항-B7-H4 항체 또는 항원-결합 단편을 포함하고 예를 들면, 여기서 조성물에서 항체의 적어도 98%는 아푸코실화된다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 투여 방법은 제공되고, 여기서 약제학적 조성물은 아푸코실화된 항-B7-H4 항체 또는 항원-결합 단편을 포함하고 예를 들면, 여기서 조성물에서 항체의 적어도 99%는 아푸코실화된다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 투여 방법은 제공되고, 여기서 약제학적 조성물은 푸코스가 조성물에서 검출불가능한 아푸코실화된 항-B7-H4 항체 또는 항원-결합 단편을 포함한다.

일부 구현예에서, 약제학적 조성물의 투여 방법은 제공되고, 여기서 약제학적 조성물은 (i) (a) 서열번호:5-10 각각의 중쇄 가변 영역 (VH) 상보성 결정 영역 (CDR) 1, VH CDR2, VH CDR3 및 경쇄 가변 영역 (VL) CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열, (b) 서열번호:11의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄 영역 및 서열번호:12의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄 영역, 또는 (c) 서열번호:21의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호:22의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는, 인간 B7-H4에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 및 (ii) 약제학적으로 허용가능한 부형제를 포함한다.

약제학적 조성물의 투여 방법이 본원에서 또한 제공되고, 여기서 약제학적 조성물은 (i) 인간 B7-H4에 특이적으로 결합하고 서열번호:5-10 각각의 중쇄 가변 영역 (VH) 상보성 결정 영역 (CDR) 1, VH CDR2, VH CDR3 및 경쇄 가변 영역 (VL) CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편 및 (ii) 약제학적으로 허용가능한 부형제를 포함하고, 여기서 조성물에서 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% , 또는 적어도 99%는 아푸코실화된다. 일 구현예에서, (i) 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호:11의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄 영역 및 서열번호:12의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄 영역을 포함하거나 (ii) 항체는 서열번호:21의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호:22의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.

5.5 항체 생산 및 폴리뉴클레오타이드

B7-H4 (예를 들면, 인간 B7-H4)에 면역특이적으로 결합하는 항체 및 이의 항원-결합 단편은, 예를 들어, 화학적 합성으로 또는 재조합 발현 기법으로 항체 및 이의 항원-결합 단편의 합성을 위하여 종래 기술에서 공지된 임의의 방법으로 생산될 수 있다. 본원에 기재된 방법은, 달리 나타내지 않는 한, 분자 생물학, 미생물학, 유전적 분석, 재조합 DNA, 유기 화학, 생화학, PCR, 올리고뉴클레오타이드 합성 및 변형, 핵산 혼성화, 및 종래 기술 내의 관련된 분야에서 종래의 기법을 이용한다. 이들 기법은, 예를 들어, 본원에 인용된 참고문헌에서 기재되고 상기 문헌에서 완전하게 설명된다. 예를 들면, Sambrook J 등, (2001) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Ausubel FM 등, Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons (1987 and annual updates); Current Protocols in Immunology, John Wiley & Sons (1987 and annual updates) Gait (ed.) (1984) Oligonucleotide Synthesis: A Practical Approach, IRL Press; Eckstein (ed.) (1991) Oligonucleotides and Analogues: A Practical Approach, IRL Press; Birren B 등, (eds.) (1999) Genome Analysis: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press를 참고한다.

특정 양태에서, 항-B7-H4 항체 또는 항원-결합 단편 또는 이러한 항체 또는 단편을 포함하는 약제학적 조성물을 투여하는 방법이 본원에서 제공되고, 여기서 항체 또는 단편은 숙주 세포에서 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드의 재조합 발현으로 생산된다.

특정 양태에서, 본원에서 제공된 방법에 따라 투여되는 항-B7-H4 항체 또는 항원-결합 단편은 표 9 (즉 서열번호:27)에서 나타난 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드로 인코딩된 중쇄 가변 영역을 포함한다. 특정 양태에서, 본원에서 제공된 방법에 따라 투여되는 항-B7-H4 항체 또는 항원-결합 단편은 표 9 (즉 서열번호:27)에서 나타난 뉴클레오타이드 서열 그리고 인간 감마 (γ) 중쇄 불변 영역을 인코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드로 인코딩된 중쇄 가변 영역을 포함한다. 특정 양태에서, 본원에서 제공된 방법에 따라 투여되는 항-B7-H4 항체 또는 항원-결합 단편은 표 9 (즉 서열번호:27)에서 나타난 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드로 인코딩된 중쇄 가변 영역 그리고 서열번호:26의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드로 인코딩된 중쇄 불변 도메인을 포함한다.

특정 양태에서, 본원에서 제공된 방법에 따라 투여되는 항-B7-H4 항체 또는 항원-결합 단편은 표 10 (즉, 서열번호:28)에서 나타난 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드로 인코딩된 경쇄 가변 영역을 포함한다. 특정 양태에서, 본원에서 제공된 방법에 따라 투여되는 항-B7-H4 항체 또는 항원-결합 단편은 표 10 (즉 서열번호:28)에서 나타난 뉴클레오타이드 서열 그리고 인간 람다 경쇄 불변 영역을 인코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드로 인코딩된 경쇄 가변 영역을 포함한다. 특정 양태에서, 본원에서 제공된 방법에 따라 투여되는 항-B7-H4 항체 또는 항원-결합 단편은 표 10 (즉, 서열번호:28)에서 나타난 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드로 인코딩된 경쇄 가변 영역 그리고 서열번호:24의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드로 인코딩된 경쇄 불변 도메인을 포함한다.

특정 양태에서, 본원에서 제공된 방법에 따라 투여되는 항-B7-H4 항체 또는 항원-결합 단편은 표 9 (즉 서열번호:27)에서 나타난 가변 중쇄-인코딩 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드로 인코딩된 가변 중쇄 그리고 표 10 (즉, 서열번호:28)에서 나타난 가변 경쇄-인코딩 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드로 인코딩된 가변 경쇄를 포함한다.

특정 양태에서, 본원에서 제공된 방법에 따라 투여되는 항-B7-H4 항체 또는 항원-결합 단편은 (i) 표 9 (즉 서열번호:27)에서 나타난 가변 중쇄-인코딩 뉴클레오타이드 서열 그리고 인간 감마 (γ) 중쇄 불변 영역을 인코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드로 인코딩된 중쇄 및 (ii) 표 10 (즉 서열번호:28)에서 나타난 가변 경쇄-인코딩 뉴클레오타이드 서열 그리고 인간 람다 경쇄 불변 영역을 인코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드로 인코딩된 경쇄를 포함한다.

특정 양태에서, 본원에서 제공된 방법에 따라 투여되는 항-B7-H4 항체 또는 항원-결합 단편은 (i) 표 9 (즉 서열번호:27)에서 나타난 가변 중쇄-인코딩 뉴클레오타이드 서열 그리고 서열번호:26의 중쇄 불변 도메인-인코딩 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드로 인코딩된 중쇄 및 (ii) 표 10 (즉, 서열번호:28)에서 나타난 가변 경쇄-인코딩 뉴클레오타이드 서열 그리고 서열번호:24의 경쇄 불변 도메인-인코딩 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드로 인코딩된 경쇄를 포함한다.

특정 양태에서, 본원에서 제공된 방법에 따라 투여되는 항-B7-H4 항체 또는 항원-결합 단편은, 예를 들면, 코돈/RNA 최적화, 이종성 신호 서열로의 대체, 및 mRNA 불안정 요소의 제거로 최적화되는 항-B7-H4 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 이의 도메인을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드로 인코딩된다. mRNA에서 억제 영역의 제거 및/또는 코돈 변화 (예를 들면, 유전자 암호의 축퇴로 인해 동일한 아미노산을 인코딩하는 코돈 변화)의 도입으로 재조합 발현을 위하여 항-B7-H4 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 이의 도메인 (예를 들면, 중쇄, 경쇄, VH 도메인, 또는 VL 도메인)을 인코딩하는 최적화된 핵산의 생성 방법은, 따라서, 예를 들면, 미국 특허 번호 5,965,726; 6,174,666; 6,291,664; 6,414,132; 및 6,794,498에 기재된 최적화 방법을 적용함으로써 수행될 수 있다.

폴리뉴클레오타이드는 예를 들면 RNA의 형태 또는 DNA의 형태일 수 있다. DNA는 cDNA, 게놈 DNA, 및 합성 DNA를 포함한다. DNA는 이중-가닥 또는 단일-가닥일 수 있다. 단일 가닥이면, DNA는 코딩 가닥 또는 비-코딩 (안티-센스) 가닥일 수 있다. 특정 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드는 하나 이상의 인트론이 결핍된 DNA 또는 cDNA이다. 특정 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드는 비-자연 발생 폴리뉴클레오타이드이다. 특정 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드는 재조합으로 생산된다. 특정 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드는 단리된다. 특정 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드는 실질적으로 순수하다. 특정 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드는 천연 성분으로부터 정제된다.

특정 양태에서, 벡터 (예를 들면, 발현 벡터)는 숙주 세포에서, 바람직하게는 포유류 세포에서 재조합 발현을 위하여 항-B7-H4 항체 및 이의 항원-결합 단편 또는 이의 도메인을 인코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 특정 양태에서, 세포, 예를 들면 숙주 세포는 본원에 기재된 항-B7-H4 항체 또는 이의 항원-결합 단편 (예를 들면, 인간 또는 인간화된 항체 또는 이의 항원-결합 단편)을 재조합으로 발현시키기 위한 그와 같은 벡터를 포함한다. 따라서, 본원에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 생산 방법은 숙주 세포에서 그와 같은 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 발현시키는 단계를 포함할 수 있다.

발현 벡터는 종래의 기법으로 세포 (예를 들면, 숙주 세포)에 이전될 수 있고 수득한 세포는 그 다음 종래의 기법으로 배양되어 본원에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편 (예를 들면, 20502의 6개 CDR, VH, VL, VH 및 VL, 중쇄, 경쇄, 또는 중쇄 및 경쇄를 포함하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편) 또는 이의 도메인 (예를 들면, 20502의 VH, VL, VH 및 VL, 중쇄, 또는 경쇄)를 생산할 수 있다.

특정 구현예에서, 본원에서 제공된 방법에 따라 투여되는 항-B7-H4 항체 또는 이의 항원-결합 단편 (예를 들면, 20502의 CDR를 포함하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편)은 Potelligent® CHOK1SV 세포에서 생산된다.

일부 구현예에서, 본원에서 제공된 방법에 따라 투여되는 항-B7-H4 항체 또는 이의 항원-결합 단편 (예를 들면, 20502의 CDR를 포함하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편)은 기능성 알파-1,6-푸코실전달효소 유전자 (FUT8) 유전자가 결핍된 숙주 세포에서 생산된다. 일부 구현예에서, 숙주 세포는 CHO 세포이다.

특정 구현예에서, 본원에서 제공된 방법에 따라 투여되는 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 단리 또는 정제된다. 일반적으로, 단리된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 단리된 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 상이한 항원성 특이성을 가진 다른 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 실질적으로 없는 것이다. 예를 들어, 특정 구현예에서, 본원에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 제제는 세포성 물질 및/또는 화학적 전구체가 실질적으로 없다.

하기 실시예는 예시로서 제공되는 것이고 제한으로 제공되는 것이 아니다.

6. 실시예

본 섹션 (즉, 섹션 6)에서의 실시예는 제공되는 것이고 제한으로 제공되는 것이 아니다.

6.1 실시예 1: 다중 징후에서 B7-H4 발현의 유병률의 평가

B7-H4 마우스 단클론성 항체 A57.1 (ATCC 카탈로그 번호 PTA-5180)은 기록 샘플, 전체 섹션의 혼합물, 및 종양 마이크로어레이에서 B7-H4의 존재를 검출하는데 사용되었다. 샘플은 일차 항체로 처리되었고 DAB (Ventana Medical Systems)에 부착된 폴리머 검출 시스템을 사용하여 검출되었다.

B7-H4는 침습성 관상 암종, 삼중 음성 유방암, 난소암, 비-소세포 폐암 및 자궁내막암을 포함하는 다양한 암 환자로부터 수확된 종양 조직내 사이토졸 및 막에서 쉽게 검출되었다. 게다가, 발현의 빈도는 표 11에서 열거된 징후에서 또한 높았다.

B7-H4은 다른 암, 예컨대 유방암, 신장암 (예를 들면, 신장 세포 암종), 방광암 (예를 들면, 요로상피 세포 암종), 췌장암, 및 갑상선암에서 발현된다. 예를 들면, Zhu, J., 등, Asian Pacific J. Cancer Prev. 14: 3011-3015 (2011), Krambeck A, 등, PNAS 103: 10391-10396 (2006), Fan, M. 등, Int. J. Clin. Exp. Pathol. 7: 6768-6775 (2014), Xu, H., 등, Oncology Letters 11: 1841-1846 (2016), 및 Liu, W., 등, Oncology Letters 8: 2527-2534 (2014)를 참고한다.

6.2 실시예 2: 아푸코실화된 및 푸코실화된 20502 항체

글리칸 모이어티에서 푸코스 함량이 감소된 Fc 영역을 가진 항체는 완전하게 푸코실화된 항체와 비교하여 더 높은 ADCC 활성을 나타낼 수 있다 (Niwa R 등, Clinical Cancer Research 11(6):2327-36 (2005)). B7-H4 항체는 정상적으로 푸코실화된 항체를 생산하기 위해 CHO-x 세포 (Yamane-Ohnuki N, 등 Biotechnology and Bioengineering 87(5): 614-22 (2004))에서 그리고 아푸코실화된 항체 (CHO-y 세포) (상동)를 생산하기 위해 조작된 CHO 세포주에서 생성되었다.

푸코실화된 및 아푸코실화된 20502 항체는 표면 플라즈몬 공명 (SPR)을 특징으로 하였다. 간단히, 항-인간 Fab 항체는 카복실-유도체화된 SPR 칩 표면 상에 고정화되었고, 항-B7-H4 항체는 30 초 동안 5 ug/ml로 수득한 표면 상에 포착되었다. 다양한 농도 (0 nM, 3.7 nM, 11.1 nM, 33.3 nM, 100 nM , 및 300 nM)에서 B7-H4 IgV-huIgG1은 그 다음 표면 위로 유동되었고 결합 단계 동안 항-B7-H4 항체에 이어서 해리 단계 동안 완충액 세정액에 결합하게 되었다.

B7-H4 IgV-huIgG1:

MASLGQILFWSIISIIIILAGAIALIIGFGISGRHSITVTTVASAGNIGEDGILSCTFEPDIKLSDIVIQWLKEGVLGLVHEFKEGKDELSEQDEMFRGRTAVFADQVIVGNASLRLKNVQLTDAGTYKCYIITSKGKGNANLEYKTGAFSGSEPKSSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열번호:29)

데이터는 1:1 결합 모델을 사용하여 적합화되었고, 푸코실화된 및 아푸코실화된 20502는 인간 B7-H4에 단백질에 대한 유사한 결합을 나타냈다. 따라서, 결합에서 글리코실화의 영향은 없다.

FcγRIIIa (V158)에 대한 푸코실화된 20502 (Ab-F) 및 아푸코실화된 20502 (Ab-A)의 Fc 영역의 결합 친화도는 표면 플라즈몬 공명 (SPR)을 또한 특징으로 하였다. 간단히, 단백질 A는 차단 시약으로서 100 mM 나트륨 보레이트 완충액, pH 8.0내 100 mM 에틸렌디아민이 있는 아민 커플링 키트를 사용하여 덱스트란 칩에 공유결합되었다. Ab-A 또는 Ab-F는 별도의 유동 세포에서 2개의 밀도로 포착되었고, 단백질 A 유도체화된 유동은 참조 대조군으로서 작용하였다. Fc　감마 RIIIA (V158)은 HBS-P+ 운용 완충액에서 희석되었고 반복하여 6 농도 (0 nM, 1.37 nM, 12.3　nM, 37 nM, 111 nM, 333 nM, 및 1000 nM)에 주입되었다. Ab-A 결합에 대한 결합 상수, 해리 상수, 및 친화성은 Biacore T200 평가 소프트웨어 1:1 결합 모델을 사용하여 계산되었다. Ab-A 및 Ab-F 결합에 대한 친화성 상수는 Biacore T200 평가 소프트웨어 정상 상태 친화성 모델을 사용하여 결정되었다. 아푸코실화된 B7-H4 항체는 푸코실화된 Fc (Ab-F)를 가진 동일한 항체보다 Fc 감마 수용체 IIIA (V158)에 대하여 140-배 더 높은 친화성을 갖는다 (표 12).

푸코실화된 및 아푸코실화된 20502 항체의 T 세포 관문 차단 활성이 또한 특성규명되었다. 이들 실험에서, 일차 인간 T 세포는 제조자의 지침에 기초한 EasySep™ 인간 T 세포 농축 키트를 사용하여 PBMC로부터 농축되었다. 농축된 T 세포는, 37℃에서, 1 비드 / 세포 비로, 항-CD3/항-CD28 Dynabeads를 사용하여 2x10⁵ 세포/mL로 인큐베이션되었다. 6 일후, 비드는 자석으로 제거되었고, T 세포는 세정되었고 37℃에서 10 U/mL IL-2를 사용하여 1x10⁶세포/mL로 인큐베이션되었다. 4 일후, T 세포는 세정되었고 B7-H4 항체 용량 적정의 존재 하에 37℃에서 2x10⁶ 세포/mL 농도로 인공 항원 제시 세포 (aAPC)와 함께 1x10⁶세포/mL로 인큐베이션되었다. aAPC는 37℃에서 1 시간 동안 미토마이신(Mitomycin) C로 처리되었고 그 다음 T 세포 공-배양물에의 첨가에 앞서 철저하게 세정되었다. T 세포, aAPC, 및 B7-H4 항체의 공-배양 72 시간 후, 플레이트는 원심분리되었고 상청액은 수확되었고 ELISA에 의해 IFNγ 생산에 대하여 평가되었다. IFNγ 생산은 항체 농도에 대해 플롯팅되었고 EC50 효력은 비선형 회귀 곡선 맞춤 (GraphPad Prism)을 사용하여 계산되었다.

B7-H4 항체는 IFNγ 생산에서 증가에 의해 측정된 경우 강력한 T 세포 관문 차단 활성을 입증하였다. 게다가, 아푸코실화된 항체와 푸코실화된 항체 사이 효력에서 입증할 수 있는 차이는 없었다 (표 13.)

추가의 실험에서, 푸코실화된 및 아푸코실화된 20502 항체의 ADCC 활성은 B7-H4-발현 표적 세포주에 대해 또한 특성규명되었다. 구체적으로, 일차 인간 PBMC 세포는 37℃에서 200 IU/mL IL-2를 사용하여 1x10⁶세포/mL로 사이토카인 활성화되었다. 다음 날, 세포는 세정되었고 칼세인(Calcein)-AM으로 표지화된 SK-BR-3 표적 세포와 40:1 효과기:표적 비로 인큐베이션되었다. 인큐베이션 4 시간 후, 표적 세포 용해는 형광계를 사용하여 정량화되었다. 트리톤(Triton)/X 처리된 샘플은 최대 용해 대조군 샘플로서 작용하였고, 반면에 배지 단독 처리된 샘플은 배경 용해 대조군 샘플로서 작용하였다. 퍼센트 (%) 특이적 용해는 아래와 같이 계산되었다: [1-((샘플 - 배지 대조군)/(최대 용해 - 배지 대조군))]x100. 퍼센트 (%) 특이적 용해는 항체 농도에 대해 플롯팅되었고 EC50 효력은 비선형 회귀 곡선 맞춤 (GraphPad Prism)을 이용하여 계산되었다.

B7-H4 항체는 내인성 B7-H4 발현 유방 세포주 SK-BR-3에 대해 강력한 용량-의존적 ADCC 활성을 입증하였다. 게다가, 아푸코실화된 항체는 푸코실화된 항체와 비교하여 상당히 더 강한 ADCC 활성을 입증하였다 (표 14).

6.3 실시예 3: 수용체 밀도와 ADCC 활성의 상관관계

B7-H4 밀도는 제조자의 사양에 따라 FACS에 의해 SK-BR-3, HCC1569, ZR-75-1, MDA-MB-48, 및 HCC1964 세포의 표면에서 정량화되었다. 구체적으로, 1x10⁵ 세포는 25 분 동안 빙상에서 15 ㎍/mL B7-H4 항체와 인큐베이션되었다. 병렬적으로, (항-마우스 IgG 포착 항체의 증가하는 농도로 사전-코팅된) 1 방울의 Quantum^TM Simply Cellular (QSC) 마이크로구형체는 25 분 동안 빙상에서 15 ug/mL B7-H4 항체와 또한 인큐베이션되었다. 인큐베이션 이후, 세포 및 QSC 마이크로구형체는 펠릿화 및 세정되었고, 샘플은 흐름 세포측정기에서 획득되었다. 데이터는 FlowJo 소프트웨어를 사용하여 분석되었다. 평균 형광 강도 (MFI)는 계산되었고 QuickCal® 스프레드시트에 기입되었다. 그것의 사전-배정된 항체 결합 수용력 (ABC) 값에 각각의 비드 형광 채널 값을 결합하는 회귀는 자동으로 계산될 것이다. ABC 값은 한번 배정되었고 표지화된 세포에 대하여 MFI 값은 템플레이트에 또한 첨가된다).

B7-H4 항체는 B7-H4 세포 표면 밀도의 상이한 수준을 가진 B7-H4 발현 표적 세포주에 대한 ADCC 활성에 대하여 평가되었다. 구체적으로, 1x10⁴SK-BR-3, HCC1569, ZR-75-1, MDA-MB-468, 또는 HCC1964 표적 세포는 4℃에서 B7-H4 항체의 용량-적정으로 공-인큐베이션되었다. 25 분후, Promega로부터 Jurkat-huCD16 리포터 세포의 단일 용도 바이알은 해동되었고, 7.5x10⁴ 세포는 표적 세포/B7-H4 항체 혼합물에 첨가되었고 37℃에서 인큐베이션되었다. 24 시간후, 샘플은 실온 (RT)로 옮겨지고 Bio-Glo 완충액으로 인큐베이션되었다. 기질 및 발광은 엔비젼(EnVision) 다중-표지 판독기에서 정량화되었다. 데이터는 발광 대 항체 농도로서 플롯팅되었고 EC50 효력은 비선형 회귀 곡선 맞춤 (GraphPad Prism)을 사용하여 계산되었다.

B7-H4 항체 ADCC 활성은 B7-H4 세포 표면 밀도에 의존적이었다: 세포 표면 분자의 수가 줄어들수록, 최대 ADCC 활성의 양은 또한 줄어들었다. 게다가, 아푸코실화된 항체는 푸코실화된 항체와 비교하여, 특히 B7-H4 세포 표면 밀도의 더 낮은 수준을 가진 표적 세포에 대해 개선된 ADCC 활성을 입증하였다 (도 1).

6.4 실시예4: 생체내 항-종양 효능

인간 종양과 달리, 마우스 모델은 B7-H4 단백질의 높은 수준을 내인성으로 발현시키지 않는다. 마우스내 아푸코실화된 20502를 시험하기 위해, B7-H4 단백질을 발현시키도록 조작된 쥣과 종양 세포주를 사용하는 동질유전자 마우스 암 모델은 사용되었다. 7 주령 암컷 BALB/c 마우스는 Charles River Laboratories (Hollister, CA)로부터 구매되었고 연구 시작 전 최대 3 주 동안 순응되었다. 쥣과 결장직장 암종 세포주 CT26은 쥣과 B7H3의 막관통 도메인과 쥣과 B7-H4의 세포외 도메인으로 이루어지는 키메라 단백질을 발현시키도록 조작되었다. 이들 종양 세포는 1.0x10⁶ 세포/200 μL/마우스로 마우스의 오른쪽 옆구리에 피하로 이식되었다. 접종에 앞서, 세포는 10% 열-불활성화된 태아 소과 혈청 (Fetal Bovine Serum; FBS), 2mM L-글루타민으로 보충된 RPMI 1640 배지에서 불과 3개의 병원균 배양으로 배양되었다. 세포는 5% CO₂가 있는 가습된분위기에서 37℃에 성장되었다. 80-85% 합류점 도달시, 세포는 수확되었고 5x10⁶ 세포 / 밀리리터로 무혈청 RPMI 1640 및 매트리겔의 1:1 혼합물에서 재현탁되었다).

마우스는 종양 성장용 세포 이식 이후에 매주 2회 모니터링되었다. 종양 측정으로, 각 종양의 길이 및 폭은 캘리퍼스를 사용하여 측정되었고 부피는 하기 식에 따라 계산되었다: 종양 부피 (mm³) = (폭 (mm) x 길이 (mm²)/2. 치료 개시의 당일에, 모든 종양은 측정되었고, 특이점은 배제되었고, 마우스는 처리 그룹에 무작위로 배정되었다. 항-B7-H4 치료로, 아푸코실화된 20502 항체는 투여되었다. 대조군으로서, 마우스는 다클론성 인간 IgG (Bio X Cell, BE0092) 또는 마우스 IgG2a (Bio X Cell, BE0085)가 투여되었다. 항체는 접종 후 4 또는 5 일째 시작하는 매주 2회 정맥내 (i.v.) 주입을 통해 4회 투여되었다.

종양 부피가 동물 중량의 10%, 또는 대략 2000 mm³를 초과할 때까지 종양은 주당 적어도 2회 계속 측정되었다. 종양 크기의 변화는 동물이 CT26 세포로 접종된 일짜에 대해 개별 종양을 그래프화함으로써 나타난다. P-값은 각각의 연구 일에 계산된 종양 부피의 미짝짓기된 2-테일드 t-시험 분석을 사용하여 계산되었다.

B7-H4 단백질을 발현시키는 조작된 CT26 모델은 1 내지 30 mg/kg의 용량 범위에서 5개의 용량 수준으로 상당한 용량-의존적 종양 성장 억제를 입증하였다 (도 2). 개별 동물에서 가장 흔한 영향은 종양 성장 억제이었다. 그러나, 아푸코실화된 20502 치료는 30　mg/kg 그룹내 15 마리 마우스 중 7 마리에서, 20　mg/kg 그룹내 15 마리 마우스 중 6 마리에서, 그리고 10 mg/kg 그룹내 15 마리 마우스 중 5 마리에서 완전한 종양 퇴화를 초래하였다 (도 2). 아푸코실화된 20502는 음성 대조군 치료 그룹 (인간 IgG)에 비교하여 3 mg/kg 또는 더 낮은 유발된 최소 항-종양 활성으로 투약되었다.

6.5 실시예 5: 비임상 약동학

아푸코실화된 20502의 약동학 (PK) 및 독성역학 (TK)는 마우스, 랫트, 및 사이노몰구스 원숭이에서 단일 및/또는 반복 매주 정맥내 (IV) 투여 이후 평가되었다. 관측된 PK 특성은 모든 연구에 걸쳐서 일관성이었다. 모든 종에서, 아푸코실화된 20502는 용량이 증가함에 따라 노출 (혈청 농도-시간 곡선하 면적 [AUC])에서 용량 비례적 증가 및 선형 PK를 입증하였다. 최초 용량과 최종 용량 사이 20502의 4회 매주 투여 이후 매주 노출 (AUC_0-7일)에서 대략적 2-배 증가가 있었지만; 정상 상태는 달성되지 못했다. 실질적인 성별 차이는 혈청 아푸코실화된 20502 농도-시간 프로파일에서 명백하지 않았다. (2개의 상이한 연구에 걸쳐) 사이노몰구스 원숭이에서, 회복 동물로부터 추정된 반감기는 대략 8.8　일 내지 12　일 범위이었고, 용량 수준은 1 내지 100 mg/kg 범위이었다. 40 mg/kg으로 단일 IV 주입 투여 이후 랫트에서 추정된 반감기는 대략 13.2 일이었다. 동물에서 아푸코실화된 20502의 PK 특성은 3주마다 1회 (Q3W) 용량 섭생법으로 인간내 IV 주입을 지원한다.

6.6 실시예 6: 독성학

아푸코실화된 20502를 이용한 독성학 연구는 랫트 및 사이노몰구스 원숭이에서 수행되었다. 연구는 랫트에서 예비 단일 용량 약동학적 (PK)/내성 연구, 사이노몰구스 원숭이에서 예비 반복-용량 독성 연구, 및 랫트 및 사이노몰구스 원숭이에서 시험용 신약 (IND)-수권 우수 실험실 운영기준 (Good Laboratory Practices; GLP) 반복-용량 독성 연구, 뿐만 아니라 인간, 랫트, 및 사이노몰구스 원숭이 조직에서 GLP 조직 교차-반응성 연구를 포함하였다.

랫트에서 단일 용량 파일럿 내성 연구에서, 동물은 30-분 정맥내 (IV) 주입으로서 최대 40 mg/kg 용량을 받았다. 아푸코실화된 20502는 임상 관찰, 체중, 음식 소비, 임상 병리학 (혈청 화학 또는 혈액학) 평가, 총괄적 관찰, 장기 중량, 또는 조직병리 평가에서 효과가 없었다.

파일럿 반복-용량 독성학 연구에서 사이노몰구스 원숭이는 30-분 IV 주입으로서 아푸코실화된 20502 최대 100 mg/kg의 4개의 매주 IV 용량을 받았다. 모든 용량은 사이노몰구스 원숭이에 의해 양호하게 용인되었다. 임상 관찰, 체중, 임상 병리학, 검시, 장기 중량, 또는 조직병리 파라미터의 평가 동안 아푸코실화된 20502의 투여에 기인된 미계획된 사망률 또는 변화는 없었다.

반복-용량 GLP 독성학 연구에서, 아푸코실화된 20502는 4개의 매주 용량에 대하여 두 랫트 및 사이노몰구스 원숭이에 1, 10, 및 100 mg/kg/용량의 용량 수준으로 IV에 의해 투여되었다. 독성의 가역성은 최종 투여 이후 6-주 회복 기간 동안 평가되었다. 평가용 파라미터는 안과 시험, 임상 관찰, 체온, 체중, 음식 소비, 혈액학, 응고, 임상 화학, 요검사, 장기 중량, 거시적, 및 현미경적 평가를 포함하였다. 사이노몰구스 원숭이 연구에서, 심전도 (ECGs)는 잠재적 심장 독성을 평가하기 위해 또한 측정되었다.

GLP 랫트 연구의 평가 동안, 아푸코실화된 20502는 일반적으로 양호하게 용인되었고, 아푸코실화된 20502에 기인된 독성 효과는 없었다. 스프래그 다우리 랫트에서 무독성량 (NOAEL)은 100　mg/kg/용량인 것으로 간주되었다.

GLP 사이노몰구스 원숭이 연구에서, 아푸코실화된 20502는 일반적으로 양호하게 용인되었고, 평가된 임의의 파라미터에서 관측된 아푸코실화된 20502에 기인된 유해 사례 (AE)는 없었다. 연구 동안, 설사의 더 높은 발병률은 더 높은 용량 그룹에서 투약의 마지막에 관측되었다. 중간 및 높은 용량으로 감염된 동물의 더 높은 발병률, 뿐만 아니라 투약 기간의 후기에서 개시로 인해, 아푸코실화된 20502 노출과의 관계는 가능하다. 설사가 있는 동물을 비롯하여 아푸코실화된 20502로 치료된 동물 내의 장관에서 현미경적 변화는 없었고; 따라서, 이 발견은 부정적이지만 가능하게는 시험품에 관련된 것으로 간주되었다. 연구에서 단일 사망률이 있었다. 중간-용량 회복 그룹에서 1마리 동물은 연구 35 일째, 마지막 용량후 14 일에 죽은채 발견되었다. 임상 관찰, 거시적 및 현미경적 평가는 창자 비틀림의 진단과 일치하였다. 창자 비틀림은 사이노몰구스 원숭이에서 가끔 발생하고, 이것은 이 동물에서 자발적인 병태로 간주되었고 시험품-관련되지 않았다. 사이노몰구스 원숭이에서 NOAEL은 100 mg/kg/용량인 것으로 간주되었다.

생체내 독성학 연구에 더하여, 반응성 연구에 걸쳐 GLP-순응 조직은 랫트, 사이노몰구스 원숭이, 및 인간으로부터 36개 조직의 패널에 대한 아푸코실화된 20502의 결합을 비교하기 위해 수행되었다. 그 결과는 아푸코실화된 20502의 결합 패턴이 3개 종 중에서 유사하였고 유선 상피로 제한되었음을 보여주었다.

따라서, 아푸코실화된 20502는 사이노몰구스 원숭이 및 랫트에서 양호하게 용인되었다. 두 종에서 NOAEL은 4개의 매주 IV 용량으로서 주어진 경우 시험된 최고 용량인, 100 mg/kg/용량인 것으로 간주되었다.

6.7 실시예 7: 1a 상 아푸코실화된 20502 용량 단계적 확대 및 탐구

1a 상 개방-표지 다기관 연구는 아푸코실화된 20502를 사용하여 진행된 고형 종양을 가진 최대 34명의 환자에서 수행된다.

(A) 연구 디자인

1a 상은 용량 단계적 확대 상 및 용량 탐구 상을 포함한다. 1a 상 연구 계획은 도 3에 제공된다. 용량 단계적 확대 및 용량 탐구 상 둘 모두에서, 아푸코실화된 20502는 각 21-일 사이클의 1일째에 3 주마다 (Q3W) 60-분 정맥내 (IV) 주입으로서 투여된다. 아푸코실화된 20502의 용량은 1번째 사이클 1일째에서 체중에 기초한다. 1번째 사이클 후, 환자의 중량이 1번째 사이클, 1일째부터 > 10% 변화해야만 용량은 각각의 주입 방문에서 재계산된다.

1a 상의 용량 단계적 확대는 1b 상용 최대 내약 용량 (MTD) 및/또는 권장된 용량 (RD)이 결정되는 때까지 1 mg/kg 초과 또는 상당 용량 수준에서 초기 촉진된 적정 디자인 이어서 표준 3+3 용량 단계적 확대 디자인을 포함한다. 최대 16 내지 48명의 환자는 용량 단계적 확대에 참가한다. 0.01 (또는 0.005) 내지 20 mg/kg 용량은 표 15에서 설명된 코호트당 투여되고, 환자의 제2 용량은 그들의 제1 용량 후 적어도 21　일이어야 한다.

1a 상의 용량 단계적 확대 동안, 용량-제한 독성 (DLT) 평가는 주입의 시작에서 치료의 첫날에 시작하고 21 일 동안 계속한다. DLT는 (분명히 기저 질환 또는 이질적 원인으로 인한 그들 사건을 제외하고) 속성에 무관하게 임의의 하기로서 정의된다: (i) 치료의 최초 21 일 동안 발생하는 (등급 3 메스꺼움, 구토 및 설사 제외) 등급 3 또는 더 높은 비-혈액성 독성), (ii) 치료의 최초 21 일 내에 발생하는, 최적의 지지 요법에도 불구하고 적어도 72 시간 지속하는 등급 3 메스꺼움, 구토 및 설사, (iii) L 당 1.0 × 10⁹ 미만의 절대 중성구 수 (ANC)가 있는 열병 호중구감소증 및/또는 문서화된 감염, 7 일 초과 동안 지속하는 등급 4 호중구감소증, 등급 4 혈소판감소증 (25.0 × 10⁹ / L 미만), 또는 치료의 최초 21 일 내에 출혈에 의해 동반된 등급 3 혈소판감소증 (50.0-25.0 × 10⁹ / L 미만), (iv) 암이 있는 간 관여에 관련되지 않은 정상인 상한치 (ULN) 3 배 초과 아스파르테이트 아미노기전달효소/알라닌 아미노전이효소 (AST/ALT) 및 2배 초과 ULN 동반 총 빌리루빈, (v) 72 시간 내에 분해하지 않는 임상 유의성이 없는 다른 등급 3 실험실 값, 또는 (vi) 임상 후유증에 무관하게 임의의 등급 4 실험실 값.

각 용량 수준에서 적어도 1명의 환자를 등록하는 촉진된 적정 디자인은 용량 수준 0.01, 0.03, 0.1 및 0.3 mg/kg으로 수행된다. 다음의 용량 수준까지 용량 단계적 확대는 적어도 1명의 환자가 21-일 평가 간격을 완료한 후에 진행한다. 21-일 평가 간격 동안 (임의의 용량 수준에서) 1명의 환자가 DLT를 경험하거나 또는 적어도 2명의 환자가 중간 정도 AEs를 경험하면, 추가의 환자는 현행 용량 수준에서 등록되고, 표준 3+3 용량의 단계적 확대 기준은 그 코호트 뿐만 아니라 모든 후속적 투약 코호트에 적용한다. 중간 정도의 AE는 (분명히 기저 질환 또는 이질적인 원인으로 인한 그들 사건을 제외하고) 속성에 무관하게 ≥등급 2 AE로서 정의된다. 등급 2 실험실 값은 임상 후유증에 의해 동반되지 않는 한 이러한 목적을 위해 중간 정도의 AE로서 간주되지 않는다.

환자내의(intra-patient) 용량의 단계적 확대는 제공된 1 mg/kg 미만 용량 수준으로 등록된 환자에서 허용될 것이다: (i) 환자가 DLT를 경험하지 않았음; (ii) 모든 다른 AE가 용량 단계적 확대에 앞서 등급 1 또는 더 낮은 등급으로 회복하였음; (iii) 환자가 21 일마다 1 용량 수준의 최대치만큼 단지 용량 단계적 확대할 수 있음; 그리고 (iv) 용량 수준이 아래 기재된 바와 같이 표준 3+3 용량 단계적 확대 디자인에 따라 제거될 때까지 환자가 1 mg/kg 용량 수준을 넘어 용량 단계적 확대할 수 없음.

아래 표 16A에서 설명된 알고리즘은 모든 표준 3+3 용량 단계적 확대에 사용된다.

1a 상에 대하여 아푸코실화된 20502의 MTD 및/또는 RD는 전체적인 안전성, 내성, 약력학, 약동학, 및 예비 효능의 평가에 기반하여 확인된다. RD는 DLT 평가 기간 동안 그리고 그 기간을 넘어 모두에서 관측된 독성, 뿐만 아니라 DLT 기준을 충족시키지 않는 독성으로 인한 용량 감소 및 중단을 고려할 것이다. RD는, 따라서, 확인된 MTD와 동일할 수 있거나 아닐 수 있다. 예를 들어, MTD가 도달되지 않으면, 또는 1a 상로부터 치료의 후속적 사이클로부터 데이터가 안전성 프로파일에서 추가의 통찰력을 제공하면, RD는 MTD보다, 더 높지 않아도, 상이한 용량일 수 있다. MTD는 불과 1/6 환자가 DLT를 보고한 용량 수준일 수 있다. RD는 또한 불과 1/6 환자가 DLT를 보고한 용량일 것이지만, MTD보다 더 적을 수 있다. 일부 구현예에서, MTD는 불과 1/3, 1/4, 또는 1/5 환자가 DLT를 보고한 용량 수준일 것이다. RD는 또한 불과 1/3, 1/4, 또는 1/5 환자가 DLT를 보고한 용량일 것이지만, MTD보다 더 적을 수 있다.

1a 상의 용량 탐구 코호트는 3명 넘는　환자 (모든 용량 수준에 걸쳐 최대 10명　추가의 환자)를 등록한다. 기록 종양 조직 (또는 기록 조직이 이용불가능하면 신선한 생검)의 사전-스크리닝은 1a 상 용량 탐구 동안 모든 환자에 대하여 면역조직화학 (IHC)에 의해 B7-H4 발현 수준에 대하여 시험하는데 사용된다. 기록 종양 조직 (또는 신선한 생검)은, 본원에서와 같이, 바이오마커 분석에 사용될 수 있다. 또한, 신선한 생검은 확장된 약력학 분석을 위한 스크리닝 및 후처리 동안 사용된다.

일 구현예에서, 1a 상 단일요법 용량 탐구를 위하여 제안된 용량 코호트는 표 16B에서 나타난다.

일 구현예에서, 권장된 용량은 20 mg/kg이다.

(B) 대상체

하기의 포함 및 제외 기준에 근거하여 총 12 내지 24명의 환자가 확인된다.

1a 상에서 환자는 하기의 포함 기준을 모두 충족한다:

· 원발성 중추 신경계 (CNS) 종양을 제외한 조직학적으로 확인된 고형 종양;

· 절제불가능하거나, 국소 진행되어 있거나, 또는 전이성인 질환;

· 환자의 병태에 임상 이득을 제공하기 위해 공지된 존재하는 요법의 불응성 또는 불내성; 및

· RECIST　v1.1 (고형 종양 1.1에서 반응 평가 기준)에 따른 기준선에서 적어도 하나의 측정가능한 병변; 이전에 조사된 영역에 위치한, 또는 다른 이동-지역성 요법을 거친 종양 부위는 병변에서 진행이 입증되지 않는 한 측정가능한 것으로 간주되지 않음.

제외 기준: 1a 상에서 환자는 항-약물 항체 (ADA)의 이력, 이전의 생물 제제에 대한 심각한 알러지성, 과민성, 또는 다른 주입-관련된 반응을 갖지 않고 아푸코실화된 20502 제형에서 임의의 구성요소에 공지된 하이퍼센시티브이를 갖지 않음.

(C) 결과

등급 3 및 등급 4 유해 사례의 발병률 및 용량 제한 독성으로서 정의된 임상 실험실 비정상은 아푸코실화된 20502가 진행된 고형 종양을 가진 환자에서 안전하고 내성있는 것을 나타내기 위해 평가된다. 유해 사례의 발병률, 임상 실험실 비정상 및 ECG 비정상은 아푸코실화된 20502의 최대 내약 용량 및/또는 권장된 용량을 결정하기 위해 평가된다.

진행된 고형 종양을 가진 환자에서 약동학적 파라미터 (AUC (혈청 농도 시간 곡선하 면적), C_max(최대 혈청 농도), C_min (최소 혈청 농도), 클리어런스 (CL), t_1/2(말단 반감기), V_ss (정상 상태에서 분포의 부피), 및 C_곡저 (용량 간격의 마지막에 곡저 혈청 농도)는 비-구획적 분석을 사용하여 혈청 아푸코실화된 20502 농도-시간 데이터로부터 결정된다. 혈청 아푸코실화된 20502 농도는 효소 결합 면역흡착 검정 (ELISA) 방법을 사용하여 결정된다. 아푸코실화된 20502 노출에서 진행된 고형 종양을 가진 환자내 면역원성 (즉, 아푸코실화된 20502에 대한 항-약물 항체 면역 반응)의 영향은 모든 환자로부터 총 항-아푸코실화된 20502 항체의 측정에 의해 평가된다.

진행된 고형 종양을 가진 환자에서 아푸코실화된 20502의 임상적 이점이 또한 입증된다. 종양 평가는 임상 시험 및 이미지화 (예를 들면, RECIST v 1.1에 따라 적절한 슬라이스 두께로 전산화단층촬영법 (CT) 스캔 또는 자기 공명 영상화 (MRI))를 포함한다. 종양은 스크리닝에, 최초 12 개월 동안 9 주마다, 및 그 후에 12 주 (+/- 2 주)마다 평가되어 종양 성장의 억제 및 종양 퇴화 (예를 들면, 완전한 종양 퇴화)를 나타낸다.

전체적인 반응 속도 (ORR), 반응의 기간 (DOR), 및 무진행 생존 (PFS)는 효능의 측정으로서 또한 결정된다. ORR은 반응에 대하여 평가가능한 환자의 총 수로 나뉜 확인된 반응 (RECIST v.1.1에 따라 완전한 반응 (CR) 또는 부분적인 반응 (PR) 어느 한쪽)을 가진 환자의 총 수로서 정의된다. DOR은 후속으로 확인되는 반응 (CR 또는 PR)의 개시부터 진행성 질환의 최초 관찰 또는 임의의 원인으로 인한 사망까지 시간으로서 정의된다. PFS는 환자의 제1 용량부터 진행성 질환의 최초 관찰 또는 임의의 원인으로 인한 사망까지 시간으로서 정의된다.

약력학적 바이오마커는 또한 관측된다. 분석은 전-처리 및 치료중 종양 생검내 면역 세포 침윤물에서 수행될 수 있다. 예를 들어, (비제한적으로 자연 살해 세포 (NK), CD4, CD8, 및/또는 다른 선택된 면역 바이오마커를 포함하는) 종양 면역 침윤물의 마커에서의 변화는 IHC 및/또는 리보핵산 (RNA) 분석에 의해 평가된다. 또한, 사이토카인 수준 (예를 들면, IL-2, IL-6, IL-10, TNF, 및/또는 인터페론 감마 (IFNγ))에서의 변화는 다중 분석에 의해 평가된다.

환자는 광범위한 용량 수준에 걸쳐 아푸코실화된 20502를 받았다. 세개의 (3) 사전 요법 중 중간으로 그리고 진행된 고형 종양이 있는 B7-H4에 대하여 미선택된 24명의 환자는 아푸코실화된 20502 항체로 치료되었다. 용량 단계적 확대 코호트에서, 18명의 환자는 촉진된 적정, 이어서 3+3 디자인에서 3 주마다 (Q3W) 0.01 mg/kg 내지 20 mg/kg의 용량 수준을 받았다. 환자는 아푸코실화된 20502의 3 (범위 = 1-11) 용량의 중간 수로 치료되었다. 대부분은 어느 한쪽 3 mg/kg (n=8) 또는 10 mg/kg (n=6) 아푸코실화된 20502를 받았다. 용량 단계적 확대 코호트로부터 환자들 중 일곱 (7)은 B7-H4 양성으로서 회고적으로 확인되었다. 별도의 용량 탐구 코호트에서, (총 24명의 환자 중에서) 여섯 (6) B7-H4 양성 환자는 의무적인 사전-치료 생검 및 치료중 생검으로 Q3W 3 mg/kg 또는 10 mg/kg의 용량으로 치료되었다. 용량 감소는 필요 없었고, 용량-제한 독성 또는 치료-관련된 심각한 유해 사례 (SAEs)는 24명의 환자에서 관측되지 않았다. 따라서, 아푸코실화된 20502는 양호한 안전성 프로파일을 입증하였고, 데이터는 20 mg/kg이 권장된 용량으로서 선택될 수 있음을 시사한다.

6.8 실시예 8: 1b 상 아푸코실화된 20502 용량 확장

1b 상 개방-표지 다기관 연구는 면역조직화학 (IHC)에 의해 결정된 B7-H4 발현 수준이 있는 특이적 고형 종양 유형을 가진 최대 210명의 환자에서 아푸코실화된 20502를 사용하여 수행된다. 특이적 고형 종양 유형은 절제불가능 및 전이성 셋팅에서 효과적인 요법의 제한된 이용가능성 및 B7-H4 발현의 그들 높은 유병률에 기반하여 확인되었다.

(A) 연구 디자인

1b 상은 연구의 용량 확장 부분이다. 1b 상 연구 계획은 도 3에서 제공된다. 1b 상 용량 확장에의 등록은 1a 상에서 최대 내약 용량 (MTD) 및/또는 권장된 용량 (RD)의 확인 후 시작한다.

1b 상은 표 17에서 나타낸 바와 같이 최대 30명　환자 각각의 종양-특이적 코호트를 포함한다. 1b 상 연구는 표 17에서 나타난 더 많은 또는 더 적은 코호트를 가질 수 있지만, 7개의 코호트를 초과하지 않는다.

기록 종양 조직 (또는 기록 조직이 이용불가능하면 신선한 생검)은 모든 환자의 사전-스크리닝용 그리고 바이오마커 분석용 면역조직화학 (IHC)에 의한 B7-H4 발현 수준에 대하여 시험하는데 사용된다. 또한, 스크리닝 및 후처리 동안 채집된, 신선한 생검은 환자의 서브셋 (10명 환자 / 30명 환자 코호트)으로부터 확장된 약력학적 분석에 사용된다.

아푸코실화된 20502는 각각의 21-일 사이클의 1 일째에 3 주마다 (Q3W) 60-분 정맥내 (IV) 용량으로서 투여된다. 아푸코실화된 20502의 용량은 1번째 사이클 1 일째에 체중에 기초한다. 1번째 사이클 후, 환자의 중량이 1번째 사이클, 1 일째부터 > 10% 변화해야만 용량은 각각의 주입 방문에서 재계산될 것이다.

(B) 대상체

유방암, 난소암, 자궁내막암, 또는 요로상피세포암을 가진 최대 30명의 환자는 참가할 것이다. 최대 30명 환자 각각의 추가의 종양 유형-특이적 코호트는 또한 참가할 수 있다.

1b 상에서의 환자는하기의 포함 기준을 모두 충족한다:

· 1a 상에 대한 모든 포함 기준 (원발성 중추 신경계 (CNS) 종양을 제외한 조직학적으로 확인된 고형 종양);

· 면역조직화학 (IHC) 검정에 의해 평가된 경우 기록 또는 신선한 종양 샘플에서 B7-H4 발현용 양성;

· 코호트 1b1 - 유방암에 대하여

o 조직학적으로 또는 세포적으로 확인된 전이성 유방암;

o 안트라사이클린 및 탁산 화학요법에서 또는 그 후 또는 상기를 용인할 수 없는 진행성 질환;

o 전이성 셋팅에서 적어도 하나의 전신 화학요법에서 또는 그 후 진행성 질환;

o (ER 및/또는 PR >1%로서 정의된) 에스트로겐 수용체 (ER) 및/또는 프로게스테론 수용체 (PR) 양성 질환을 갖는 환자가 (3개의 순차적 내분비 요법후 진행된) 호르몬 불응성이어야 하거나 증상에 의한 내장 질환을 가짐; 및

o 환자가 HER2-음성 질환을 가짐;

· 코호트 1b1에서 삼중 음성 유방암 (TNBC) 환자에 대하여:

o 조직학적으로 또는 세포적으로 확인된 전이성 TNBC; 및

o 전이성 셋팅에서 투여되고 있는 적어도 1개와 전신 화학요법의 적어도 2개의 라인;

· 코호트 1b1에서 호르몬 수용체 양성 (HR+) 유방암 환자에 대하여:

o 조직학적으로 또는 세포적으로 확인된 전이성 HR+ 유방 암종;

o 환자가 호르몬 요법의 적어도 2개의 라인을 받음; 및

o 환자가 (아쥬반트 또는 전이성 셋팅에서) 전신 화학요법의 적어도 1개의 사전 라인을 받음

· 코호트 1b2 - 난소암에 대하여

o 임상 이득을 제공하기 위해 공지된 존재하는 요법에 불응성인 재발성 상피 난소, 일차 복막, 또는 나팔관 암의 조직학적으로 또는 세포적으로 확인된 진단; 및

o 적어도 하나의 백금-함유 섭생법을 포함하는 치료의 적어도 2개 사전 섭생법에서 또는 그 후, 또는 추가의 화학요법을 용인할 수 없는 진행성 질환;

· 코호트 1b3 - 자궁내막암에 대하여

o 치료적 처치 또는 확립된 치료에 불응성인 조직학적으로 또는 세포적으로 확인된 재발성 또는 지속적 자궁내막암; 및

o 전신 화학요법의 적어도 1개의 사전 섭생법에서 또는 그 후, 또는 전신 화학요법을 용인할 수 없는 진행성 질환;

· 코호트 1b4 - 요로상피세포암에 대하여

o 조직학적으로 또는 세포적으로 확인된 요로상피세포암; 및

o 백금-함유 섭생법 및 PD-1/ PD-L1 지향된 제제에서 또는 그 후 또는 상기에 불내성인 진행성 질환.

1b 상에서 환자는 항-약물 항체 (ADAs)의 이력, 이전의 생물 제제에 대한 심각한 알러지성, 과민성, 또는 다른 주입-관련된 반응을 갖지 않고 아푸코실화된 20502 제형에서 임의의 구성요소에 공지된 과민증을 갖지 않는다.

(C) 결과

유해 사례의 발병률, 임상 실험실 비정상 및 ECG 비정상은 B7-H4-양성 진행된 고형 종양을 가진 환자에서 아푸코실화된 20502의 안전성 및 내성을 입증하기 위해 평가된다.

B7-H4-양성 진행된 고형 종양을 가진 환자에서 약동학적 파라미터 (AUC, C_max, C_min, CL, t_1/2, V_ss (정상 상태에서 분포의 부피))는 비-구획적 분석을 사용하여 혈청 아푸코실화된 20502 농도-시간 데이터로부터 결정된다. 혈청 아푸코실화된 20502 농도는 효소 결합 면역흡착 검정 (ELISA) 방법을 사용하여 결정된다.

약력학적 바이오마커는 또한 관측된다. 예를 들어, (비제한적으로, 자연 살해 세포 (NK), CD4, CD8, 및/또는 다른 선택된 면역 바이오마커를 포함하는) 종양 면역 침윤물의 마커에서의 변화는 IHC 및/또는 리보핵산 (RNA) 분석에 의해 평가된다. 또한, 사이토카인 수준 (예를 들면, IL-2, IL-6, IL-10, TNF, 및/또는 인터페론 감마 (IFNγ))에서의 변화는 다중 분석에 의해 평가된다.

아푸코실화된 20502 노출에서 B7-H4-양성 진행된 고형 종양을 가진 환자에서 면역원성 (즉, 아푸코실화된 20502에 대한 항-약물 항체 면역 반응)의 영향은 모든 환자로부터 총 항-아푸코실화된 20502 항체 측정에 의해 평가된다.

아푸코실화된 20502의 임상 이득은 또한 입증된다. 종양 평가는 임상 시험 및 이미지화 (예를 들면, RECIST v 1.1에 따라 적절한 슬라이스 두께로 전산화단층촬영법 (CT) 스캔 또는 자기 공명 영상화 (MRI))를 포함한다. 종양은 스크리닝에, 최초 12 개월 동안 9 주마다, 및 그 후에 12 주 (+/- 2 주)마다 평가되어 종양 성장의 억제 및 종양 퇴화 (예를 들면, 완전한 종양 퇴화)를 나타낸다.

환자의 최초 용량부터 임의의 원인으로 인한 사망까지 시간으로서 정의된, 전체 생존은 효능의 측정으로서 또한 결정된다. 전체 생존율은 B7-H4-양성 진행된 고형 종양을 가진 환자에서 아푸코실화된 20502의 임상 이득을 입증한다.

* * *

본 발명은 본원에 기재된 특이적 구현예에 의해 범위에서 제한되지 않는다. 사실상, 기재된 것들에 더하여 본 발명의 다양한 변형은 전술한 설명 및 수반되는 도면으로부터 종래 기술에서 숙련가들에게 명백해질 것이다. 그와 같은 변형은 첨부된 청구항들의 범위 내에 해당하기 위한 것이다.

본원에서 인용된 모든 참고문헌 (예를 들면, 공보 또는 특허 또는 특허 출원)은 각각의 개별 참고문헌 (예를 들면, 공보 또는 특허 또는 특허 출원)이 참고로 그 전체가 모든 목적을 위해 편입되도록 구체적으로 및 개별적으로 지시된 것처럼 동일한 정도로 모든 목적을 위하여 그리고 그들 전체가 본원에서 참고로 편입된다.

다른 구현예는 하기 청구항의 범위 내이다.

<110> FIVE PRIME THERAPEUTICS, INC. <120> B7-H4 Antibody Dosing Regimens <130> 3986.012PC02/EKS/CLD/M-S <150> US 62/802,100 <151> 2019-02-06 <150> US 62/633,527 <151> 2018-02-21 <160> 31 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 282 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Human B7-H4 <400> 1 Met Ala Ser Leu Gly Gln Ile Leu Phe Trp Ser Ile Ile Ser Ile Ile 1 5 10 15 Ile Ile Leu Ala Gly Ala Ile Ala Leu Ile Ile Gly Phe Gly Ile Ser 20 25 30 Gly Arg His Ser Ile Thr Val Thr Thr Val Ala Ser Ala Gly Asn Ile 35 40 45 Gly Glu Asp Gly Ile Leu Ser Cys Thr Phe Glu Pro Asp Ile Lys Leu 50 55 60 Ser Asp Ile Val Ile Gln Trp Leu Lys Glu Gly Val Leu Gly Leu Val 65 70 75 80 His Glu Phe Lys Glu Gly Lys Asp Glu Leu Ser Glu Gln Asp Glu Met 85 90 95 Phe Arg Gly Arg Thr Ala Val Phe Ala Asp Gln Val Ile Val Gly Asn 100 105 110 Ala Ser Leu Arg Leu Lys Asn Val Gln Leu Thr Asp Ala Gly Thr Tyr 115 120 125 Lys Cys Tyr Ile Ile Thr Ser Lys Gly Lys Gly Asn Ala Asn Leu Glu 130 135 140 Tyr Lys Thr Gly Ala Phe Ser Met Pro Glu Val Asn Val Asp Tyr Asn 145 150 155 160 Ala Ser Ser Glu Thr Leu Arg Cys Glu Ala Pro Arg Trp Phe Pro Gln 165 170 175 Pro Thr Val Val Trp Ala Ser Gln Val Asp Gln Gly Ala Asn Phe Ser 180 185 190 Glu Val Ser Asn Thr Ser Phe Glu Leu Asn Ser Glu Asn Val Thr Met 195 200 205 Lys Val Val Ser Val Leu Tyr Asn Val Thr Ile Asn Asn Thr Tyr Ser 210 215 220 Cys Met Ile Glu Asn Asp Ile Ala Lys Ala Thr Gly Asp Ile Lys Val 225 230 235 240 Thr Glu Ser Glu Ile Lys Arg Arg Ser His Leu Gln Leu Leu Asn Ser 245 250 255 Lys Ala Ser Leu Cys Val Ser Ser Phe Phe Ala Ile Ser Trp Ala Leu 260 265 270 Leu Pro Leu Ser Pro Tyr Leu Met Leu Lys 275 280 <210> 2 <211> 282 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Cynomolgus monkey B7-H4 <400> 2 Met Ala Ser Leu Gly Gln Ile Leu Phe Trp Ser Ile Ile Ser Ile Ile 1 5 10 15 Phe Ile Leu Ala Gly Ala Ile Ala Leu Ile Ile Gly Phe Gly Ile Ser 20 25 30 Gly Arg His Ser Ile Thr Val Thr Thr Val Ala Ser Ala Gly Asn Ile 35 40 45 Gly Glu Asp Gly Ile Leu Ser Cys Thr Phe Glu Pro Asp Ile Lys Leu 50 55 60 Ser Asp Ile Val Ile Gln Trp Leu Lys Glu Gly Val Ile Gly Leu Val 65 70 75 80 His Glu Phe Lys Glu Gly Lys Asp Glu Leu Ser Glu Gln Asp Glu Met 85 90 95 Phe Arg Gly Arg Thr Ala Val Phe Ala Asp Gln Val Ile Val Gly Asn 100 105 110 Ala Ser Leu Arg Leu Lys Asn Val Gln Leu Thr Asp Ala Gly Thr Tyr 115 120 125 Lys Cys Tyr Ile Ile Thr Ser Lys Gly Lys Gly Asn Ala Asn Leu Glu 130 135 140 Tyr Lys Thr Gly Ala Phe Ser Met Pro Glu Val Asn Val Asp Tyr Asn 145 150 155 160 Ala Ser Ser Glu Thr Leu Arg Cys Glu Ala Pro Arg Trp Phe Pro Gln 165 170 175 Pro Thr Val Val Trp Ala Ser Gln Val Asp Gln Gly Ala Asn Phe Ser 180 185 190 Glu Val Ser Asn Thr Ser Phe Glu Leu Asn Ser Glu Asn Val Thr Met 195 200 205 Lys Val Val Ser Val Leu Tyr Asn Val Thr Ile Asn Asn Thr Tyr Ser 210 215 220 Cys Met Ile Glu Asn Asp Ile Ala Lys Ala Thr Gly Asp Ile Lys Val 225 230 235 240 Thr Glu Ser Glu Ile Lys Arg Arg Ser His Leu Gln Leu Leu Asn Ser 245 250 255 Lys Ala Ser Leu Cys Val Ser Ser Phe Leu Ala Ile Ser Trp Ala Leu 260 265 270 Leu Pro Leu Ala Pro Tyr Leu Met Leu Lys 275 280 <210> 3 <211> 283 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Murine B7-H4 <400> 3 Met Ala Ser Leu Gly Gln Ile Ile Phe Trp Ser Ile Ile Asn Ile Ile 1 5 10 15 Ile Ile Leu Ala Gly Ala Ile Ala Leu Ile Ile Gly Phe Gly Ile Ser 20 25 30 Gly Lys His Phe Ile Thr Val Thr Thr Phe Thr Ser Ala Gly Asn Ile 35 40 45 Gly Glu Asp Gly Thr Leu Ser Cys Thr Phe Glu Pro Asp Ile Lys Leu 50 55 60 Asn Gly Ile Val Ile Gln Trp Leu Lys Glu Gly Ile Lys Gly Leu Val 65 70 75 80 His Glu Phe Lys Glu Gly Lys Asp Asp Leu Ser Gln Gln His Glu Met 85 90 95 Phe Arg Gly Arg Thr Ala Val Phe Ala Asp Gln Val Val Val Gly Asn 100 105 110 Ala Ser Leu Arg Leu Lys Asn Val Gln Leu Thr Asp Ala Gly Thr Tyr 115 120 125 Thr Cys Tyr Ile Arg Thr Ser Lys Gly Lys Gly Asn Ala Asn Leu Glu 130 135 140 Tyr Lys Thr Gly Ala Phe Ser Met Pro Glu Ile Asn Val Asp Tyr Asn 145 150 155 160 Ala Ser Ser Glu Ser Leu Arg Cys Glu Ala Pro Arg Trp Phe Pro Gln 165 170 175 Pro Thr Val Ala Trp Ala Ser Gln Val Asp Gln Gly Ala Asn Phe Ser 180 185 190 Glu Val Ser Asn Thr Ser Phe Glu Leu Asn Ser Glu Asn Val Thr Met 195 200 205 Lys Val Val Ser Val Leu Tyr Asn Val Thr Ile Asn Asn Thr Tyr Ser 210 215 220 Cys Met Ile Glu Asn Asp Ile Ala Lys Ala Thr Gly Asp Ile Lys Val 225 230 235 240 Thr Asp Ser Glu Val Lys Arg Arg Ser Gln Leu Gln Leu Leu Asn Ser 245 250 255 Gly Pro Ser Pro Cys Val Phe Ser Ser Ala Phe Val Ala Gly Trp Ala 260 265 270 Leu Leu Ser Leu Ser Cys Cys Leu Met Leu Arg 275 280 <210> 4 <211> 282 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Rat B7-H4 <400> 4 Met Ala Ser Leu Gly Gln Ile Ile Phe Trp Ser Ile Ile Asn Val Ile 1 5 10 15 Ile Ile Leu Ala Gly Ala Ile Val Leu Ile Ile Gly Phe Gly Ile Ser 20 25 30 Gly Lys His Phe Ile Thr Val Thr Thr Phe Thr Ser Ala Gly Asn Ile 35 40 45 Gly Glu Asp Gly Thr Leu Ser Cys Thr Phe Glu Pro Asp Ile Lys Leu 50 55 60 Asn Gly Ile Val Ile Gln Trp Leu Lys Glu Gly Ile Lys Gly Leu Val 65 70 75 80 His Glu Phe Lys Glu Gly Lys Asp Asp Leu Ser Gln Gln His Glu Met 85 90 95 Phe Arg Gly Arg Thr Ala Val Phe Ala Asp Gln Val Val Val Gly Asn 100 105 110 Ala Ser Leu Arg Leu Lys Asn Val Gln Leu Thr Asp Ala Gly Thr Tyr 115 120 125 Thr Cys Tyr Ile His Thr Ser Lys Gly Lys Gly Asn Ala Asn Leu Glu 130 135 140 Tyr Lys Thr Gly Ala Phe Ser Met Pro Glu Ile Asn Val Asp Tyr Asn 145 150 155 160 Ala Ser Ser Glu Ser Leu Arg Cys Glu Ala Pro Arg Trp Phe Pro Gln 165 170 175 Pro Thr Val Ala Trp Ala Ser Gln Val Asp Gln Gly Ala Asn Phe Ser 180 185 190 Glu Val Ser Asn Thr Ser Phe Glu Leu Asn Ser Glu Asn Val Thr Met 195 200 205 Lys Val Val Ser Val Leu Tyr Asn Val Thr Ile Asn Asn Thr Tyr Ser 210 215 220 Cys Met Ile Glu Asn Asp Ile Ala Lys Ala Thr Gly Asp Ile Lys Val 225 230 235 240 Thr Asp Ser Glu Val Lys Arg Arg Ser Gln Leu Glu Leu Leu Asn Ser 245 250 255 Gly Pro Ser Pro Cys Val Ser Ser Val Ser Ala Ala Gly Trp Ala Leu 260 265 270 Leu Ser Leu Ser Cys Cys Leu Met Leu Arg 275 280 <210> 5 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH CDR1 <400> 5 Gly 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<400> 13 Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly 20 25 <210> 14 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH FR2 <400> 14 Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly 1 5 10 <210> 15 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH FR3 <400> 15 Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Lys 1 5 10 15 Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 16 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH FR4 <400> 16 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 1 5 10 <210> 17 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL FR1 <400> 17 Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys 20 <210> 18 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL FR2 <400> 18 Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr 1 5 10 15 <210> 19 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL FR3 <400> 19 Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr 1 5 10 15 Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 20 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL FR4 <400> 20 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 1 5 10 <210> 21 <211> 450 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Full-Length Heavy Chain Amino Acid Sequence 20502 <400> 21 Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Lys Ser Gly 20 25 30 Ser Tyr Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 35 40 45 Trp Ile Gly Asn Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser 50 55 60 Leu Arg Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe 65 70 75 80 Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala Arg Glu Gly Ser Tyr Pro Asn Gln Phe Asp Pro Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 195 200 205 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 210 215 220 Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 225 230 235 240 Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 245 250 255 Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 260 265 270 Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 275 280 285 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 290 295 300 Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 305 310 315 320 Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 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Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr His Ser Phe Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 23 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> constant region of a human kappa light chain <400> 23 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 1 5 10 15 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 20 25 30 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 35 40 45 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 50 55 60 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 65 70 75 80 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 85 90 95 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 100 105 <210> 24 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> constant region of a human kappa light chain nucleotide <400> 24 cggaccgtgg ctgcaccatc tgtcttcatc ttcccgccat ctgatgagca gttgaaatct 60 ggaactgcct ctgttgtgtg cctgctgaat aacttctatc ccagagaggc caaagtacag 120 tggaaggtgg ataacgccct ccaatcgggt aactcccagg agagtgtcac agagcaggac 180 agcaaggaca gcacctacag cctcagcagc accctgacgc tgagcaaagc agactacgag 240 aaacacaaag tctacgcctg cgaagtcacc catcagggcc tgagctcgcc cgtcacaaag 300 agcttcaaca ggggagagtg t 321 <210> 25 <211> 330 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> constant region of a human IgG1 heavy chain <400> 25 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 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aacaccaagg tggacaagaa agttgagccc 300 aaatcttgtg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaact cctgggggga 360 ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 420 gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 480 tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac 540 agcacgtacc gggtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag 600 gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 660 aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggatgag 720 ctgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 780 gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 840 ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 900 cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 960 cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa 990 <210> 27 <211> 360 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy Chain Variable Region-Encoding Polynucleotide Sequence 20502 <400> 27 cagctgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60 acctgcactg tctctggtgg ctccatcaaa agtggtagtt actactgggg ctggatccgc 120 cagcccccag ggaaggggct ggagtggatt gggaacatct attatagtgg gagcacctac 180 tacaacccgt ccctcagaag tcgagtcacc atatccgtag acacgtccaa gaaccagttc 240 tccctgaagc tgagttctgt gaccgccgca gacacggcgg tgtactactg cgccagagaa 300 ggatcttacc ccaatcagtt tgatccatgg ggacagggta cattggtcac cgtctcctca 360 360 <210> 28 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Light Chain Variable Region-Encoding Polynucleotide Sequence 20502 <400> 28 gaaatagtga tgacgcagtc tccagccacc ctgtctgtgt ctccagggga aagagccacc 60 ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcaacttag cctggtacca gcagaaacct 120 ggccaggctc ccaggctcct catctatggt gcatccacca gggccactgg tatcccagcc 180 aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagag ttcactctca ccatcagcag cctgcagtct 240 gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag taccactcct tccctttcac ttttggcgga 300 gggaccaagg ttgagatcaa a 321 <210> 29 <211> 385 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> B7-H4 IgV-huIgG1 <400> 29 Met Ala Ser Leu Gly Gln Ile Leu Phe Trp Ser Ile Ile Ser Ile Ile 1 5 10 15 Ile Ile Leu Ala Gly Ala Ile Ala Leu Ile Ile Gly Phe Gly Ile Ser 20 25 30 Gly Arg His Ser Ile Thr Val Thr Thr Val Ala Ser Ala Gly Asn Ile 35 40 45 Gly Glu Asp Gly Ile Leu Ser Cys Thr Phe Glu Pro Asp Ile Lys Leu 50 55 60 Ser Asp Ile Val Ile Gln Trp Leu Lys Glu Gly Val Leu Gly Leu Val 65 70 75 80 His Glu Phe Lys Glu Gly Lys Asp Glu Leu Ser Glu Gln Asp Glu Met 85 90 95 Phe Arg Gly Arg Thr Ala Val Phe Ala Asp Gln Val Ile Val Gly Asn 100 105 110 Ala Ser Leu Arg Leu Lys Asn Val Gln Leu Thr Asp Ala Gly Thr Tyr 115 120 125 Lys Cys Tyr Ile Ile Thr Ser Lys Gly Lys Gly Asn Ala Asn Leu Glu 130 135 140 Tyr Lys Thr Gly Ala Phe Ser Gly Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys 145 150 155 160 Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro 165 170 175 Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser 180 185 190 Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 195 200 205 Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 210 215 220 Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val 225 230 235 240 Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 245 250 255 Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys 260 265 270 Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr 275 280 285 Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr 290 295 300 Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu 305 310 315 320 Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu 325 330 335 Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys 340 345 350 Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 355 360 365 Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 370 375 380 Lys 385 <210> 30 <211> 288 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> hPD-1 sequence <400> 30 Met Gln Ile Pro Gln Ala Pro Trp Pro Val Val Trp Ala 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Claims

인간 대상체에서 고형 종양을 치료하는 방법으로서, 인간 B7-H4에 특이적으로 결합하고 서열번호:5의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (VH) 상보성 결정 영역 (CDR) 1, 서열번호:6의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR2, 서열번호:7의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3, 서열번호:8의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (VL) CDR1, 서열번호:9의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR2, 및 서열번호:10의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR3을 포함하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 약 0.005 내지 약 20 mg/kg로 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
인간 대상체에서 고형 종양을 치료하는 방법으로서, (i) 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 및 (ii) 약제학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는 약제학적 조성물을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하되, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간 B7-H4에 특이적으로 결합하고 서열번호:5의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR1, 서열번호:6의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR2, 서열번호:7의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3, 서열번호:8의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR1, 서열번호:9의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR2, 및 서열번호:10의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR3을 포함하고,
상기 조성물에서 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 적어도 95%가 아푸코실화되고,
상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 약 0.005 내지 약 20 mg/kg로 투여되는, 방법.
제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 약 20 mg/kg로 상기 대상체에게 투여되는, 방법.
제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 약 10 mg/kg로 상기 대상체에게 투여되는, 방법.
제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 약 3 mg/kg로 상기 대상체에게 투여되는, 방법.
제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 약 1 mg/kg로 상기 대상체에게 투여되는, 방법.
제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 약 0.3 mg/kg로 상기 대상체에게 투여되는, 방법.
제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 약 0.1 mg/kg로 상기 대상체에게 투여되는, 방법.
제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 약 0.03 mg/kg로 상기 대상체에게 투여되는, 방법.
제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 약 0.01 mg/kg로 상기 대상체에게 투여되는, 방법.
제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 약 0.005 mg/kg로 상기 대상체에게 투여되는, 방법.
제 1 항 내지 제 11 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 3주마다 약 1회 투여되는, 방법.
제 1 항 내지 제 12 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 정맥내로 투여되는, 방법.
제 1 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항에 있어서, B7-H4가 상기 투여에 앞서 면역조직화학 (IHC)를 사용하여 상기 고형 종양에서 검출되는, 방법.
제 1 항 내지 제 14 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 서열번호:11에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 및/또는 서열번호:12에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는, 방법.
제 1 항 내지 제 15 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 항원-결합 단편이 중쇄 불변 영역 및/또는 경쇄 불변 영역을 포함하는, 방법.
제 16 항에 있어서, 상기 중쇄 불변 영역이 인간 면역글로불린 IgG₁ 중쇄 불변 영역이고/거나 상기 경쇄 불변 영역이 인간 면역글로불린 IgGκ 경쇄 불변 영역인, 방법.
제 1 항 내지 제 17 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 서열번호:25에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 불변 영역 및/또는 서열번호:23에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 불변 영역을 포함하는, 방법.
제 1 항 내지 제 18 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 서열번호:21에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및/또는 서열번호:22에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는, 방법.
제 1 항 내지 제 19 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 인간 항체 또는 이의 항원-결합 단편인, 방법.
제 1 항 및 제 3 항 내지 제 19 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 아푸코실화되는, 방법.
제 1 항 내지 제 21 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 전장 항체인, 방법.
제 1 항 내지 제 21 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 항원 결합 단편인, 방법.
제 23 항에 있어서, 상기 항원 결합 단편이 Fab, Fab', F(ab')₂, 단일 쇄 Fv (scFv), 디설파이드 연결된 Fv, V-NAR 도메인, IgNar, 인트라바디, IgGΔCH2, 미니바디, F(ab')₃, 테트라바디, 트리아바디, 디아바디, 단일-도메인 항체, DVD-Ig, Fcab, mAb², (scFv)₂, 또는 scFv-Fc를 포함하는, 방법.
제 2 항 내지 제 24 항 중 어느 한 항에 있어서, 푸코실화가 상기 조성물에서 검출불가능한, 방법.
제 1 항 내지 제 25 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 고형 종양이 B7-H4를 발현시키는, 방법.
제 1 항 내지 제 26 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 고형 종양이 절제불가능하거나, 국소 진행되어 있거나, 또는 전이성인, 방법.
제 1 항 내지 제 27 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 고형 종양이 유방암, 관상 암종, 자궁내막 암종, 난소암, 요로상피세포암, 비-소세포 폐암, 췌장암, 갑상선암, 신장암 및 방광암으로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 방법.
제 28 항에 있어서, 상기 고형 종양이 유방암, 난소암, 자궁내막암, 또는 요로상피세포암인, 방법.
제 28 항 또는 제 29 항에 있어서, 상기 유방암이 진행된 유방암인, 방법.
제 28 항 내지 제 30 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 유방암이 HER2-음성인, 방법.
제 28 항 내지 제 31 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 유방암이 삼중 음성 유방암인, 방법.
제 28 항 내지 제 31 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 유방암이 호르몬-수용체 (HR)-양성 유방암인, 방법.
제 28 항에 있어서, 상기 비-소세포 폐암이 편평상피 세포 암종인, 방법.
제 1 항 내지 제 34 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체가 PD-1/PD-L1 길항제가 있는 사전 요법(prior therapy)을 받지 않았던, 방법.
제 1 항 내지 제 35 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법이 상기 종양에서 면역 세포의 수를 모니터링하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
제 1 항 내지 제 35 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법이 상기 종양에서 자연 살해 (NK) 세포, CD4+ 세포, 및/또는 CD8+ 세포의 수를 모니터링하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
제 1 항 내지 제 37 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체에서 사이토카인 수준을 모니터링하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
제 1 항 내지 제 37 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체에서 IL-2, IL-6, IL-10, TNF, 및/또는 인터페론 감마 (IFNγ) 수준을 모니터링하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
인간 대상체에서 고형 종양을 치료하는 방법으로서, 인간 B7-H4에 특이적으로 결합하고 서열번호:11에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호:12에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 이의 항체를 약 20 mg/kg로 3주마다 약 1회 상기 대상체에게 정맥내로 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
인간 대상체에서 고형 종양을 치료하는 방법으로서, (i) 인간 B7-H4에 특이적으로 결합하고 서열번호:11에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호:12에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 항체 및 (ii) 약제학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는 약제학적 조성물을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하되,
상기 조성물에서 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 적어도 95%가 아푸코실화되고,
상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 약 20 mg/kg로 3주마다 약 1회 정맥내로 투여되는, 방법.
제 40 항 또는 제 41 항에 있어서, 상기 항체가 서열번호:21에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호:22에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는, 방법.
제 40 항 내지 제 42 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 고형 종양이 유방암, 난소암, 자궁내막암, 또는 요로상피세포암인, 방법.