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KR20200104299A - 항 lag-3 항체 및 이의 용도 - Google Patents

항 lag-3 항체 및 이의 용도 Download PDF

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KR20200104299A
KR20200104299A KR1020207017696A KR20207017696A KR20200104299A KR 20200104299 A KR20200104299 A KR 20200104299A KR 1020207017696 A KR1020207017696 A KR 1020207017696A KR 20207017696 A KR20207017696 A KR 20207017696A KR 20200104299 A KR20200104299 A KR 20200104299A
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KR
South Korea
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antibody
lag
ser
amino acid
antigen
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KR1020207017696A
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샤오니우 먀오
후아징 후
앤디 춘
준지안 리우
샤오린 리우
Original Assignee
이노벤트 바이오로직스 (쑤저우) 컴퍼니, 리미티드
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Abstract

본 발명은 ALG-3에 특이적으로 결합하는 신규 항체 및 이의 항체 단편, 및 상기 항체 또는 상기 항체 단편을 포함하는 조성물에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 항체 또는 이의 항체 단편을 암호화하는 핵산, 상기 핵산을 포함하는 숙주 세포, 및 관련 용도에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 항체 및 항체 단편의 치료 및 진단 용도에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 본 출원에 기재된 항체 및 항체 단편을 다른 치료제, 예컨대 항 PD-1 또는 항 PD-L1 항체와의 병용 요법에 관한 것이다.

Description

항 LAG-3 항체 및 이의 용도
본 발명은 LAG-3에 특이적으로 결합하는 신규 항체, 이의 항체 단편, 및 상기 항체 또는 상기 항체 단편을 포함하는 조성물에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 상기 항체 또는 이의 항체 단편을 암호화하는 핵산, 상기 핵산을 포함하는 숙주 세포, 및 관련 용도에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 항체 및 항체 단편의 치료 및 진단 용도에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 이들 항체 및 항체 단편과 다른 요법, 예를 들어, 항 PD-1 또는 항 PD-L1 항체와 같은 치료 양식 또는 치료제의 조합 요법에 관한 것이다.
CD223으로도 알려진 림프구-활성화 유전자 3(LAG-3)은 인체에서 LAG3 유전자에 의해 암호화되는 I형 막관통 단백질이다. LAG-3의 분자 특성 및 생물학적 기능은 잘 특성화되고 기재되어 있다(예를 들어, Sierro et al., Expert Opin Ther Targets (2011) 15 (1): 91-101 참조). LAG-3은 T 세포(특히 활성화된 T 세포), 자연 살해 세포, B 세포 및 형질세포양 수지상 세포의 표면 상에 발현되는 CD4-유사 단백질이다. LAG-3은 음성 공동자극 수용체, 즉 억제 수용체인 것으로 밝혀졌다.
LAG-3은 수지상 세포, 대식세포 및 B 세포와 같은 항원-제시 세포(APC)의 표면 상에 높은 수준으로 구성적으로 발현하는 분자의 패밀리인 MHC 클래스 II 분자에 결합한다(Baixeras et al. (1992) J. Exp. Med. 176: 327-337; Huard et al. (1996) Eur. J. Immunol, 26: 1180-1186). LAG-3의 기능은 MHC 클래스 II 분자에 대한 이의 결합 및 이의 세포질 도메인을 통한 신호 전달에 의존한다. MHC 클래스 II 분자에 대한 LAG-3의 직접 결합은 CD4+ T 림프구의 항원 의존성 자극을 하향 조절하는 역할을 하는 것으로 제안되었다(Huard et al. (1994) Eur. J. Immunol. 24: 3216-3221). LAG3과 MHC 클래스 II 분자 사이의 상호작용은 또한 수지상 세포의 기능을 조절하는 역할을 하는 것으로 여겨진다(Andreae et al. J Immunol 168: 3874-3880, 2002). 최근의 전임상 연구는 또한 CD8 T-세포 고갈에서 LAG-3의 역할을 기록하였다(Blackburn et al. Nat Immunol 10: 29-37, 2009).
연구는 만성 바이러스 감염 후 소모된 CD8+ T 세포가 다중 억제 수용체(예를 들어, PD-1, CD160, 및 2B4)를 발현하는 것을 보여주었다. LAG-3은 LCMV 감염 후 높은 수준에서 발현되고, PD-1/PD-L1 경로의 차단 및 LAG-3의 차단은 만성적으로 감염된 마우스에서 바이러스 부하를 상당히 감소시키는 것으로 밝혀졌다(Blackburn et al., Nat Immunol (2009) 10: 29-37). 또한, PD-1/PD-L1 경로 및 LAG-3 차단의 조합된 억제가 항 종양 효능을 제공한다는 것이 밝혀졌다(Jing et al., Journal for ImmunoTherapy of Cancer (2015)3: 2).
LAG-3의 상기 언급된 중요한 역할의 관점에서, LAG-3, 활성을 조절하기 위해 새로운 항 LAG-3 항체, 특히 인간화 또는 인간 항체를 개발할 필요가 있다. 이러한 항체는 종양 및 감염과 같은 다른 질환을 치료하는데 더 유익하게 사용될 수 있다. 또한, 종양, 특히 전이성 또는 난치성 종양을 치료하거나, 또는 감염, 예컨대 만성 감염을 치료하기 위해 다른 요법(예를 들어, 항 PD-1 또는 항 PD-L1 항체와 같은 치료제)과 조합하여 사용될 수 있는 새로운 항 LAG-3 항체를 개발하는 것이 바람직하다. 또한, 항체의 생체 내 생물학적 활성의 연구를 용이하게 하기 위해 마우스 모델에서 사용될 수 있는 항 마우스 LAG-3 항체가 요구된다.
본 출원에서는 LAG-3에 결합하는 항체 분자, 예컨대 완전 인간 또는 인간화 항체 분자가 개시된다. 또한, 항체 또는 이의 항체 단편을 암호화하는 핵산, 및 발현 벡터, 숙주 세포 및 항체 분자의 제조 방법이 제공된다. 또한, 면역접합체, 다중특이성 또는 이중특이성 항체 분자, 및 항 LAG-3 항체 분자를 포함하는 제약 조성물이 제공된다. 본 출원에 개시된 항 LAG-3 항체 분자는 단독으로 또는 치료제(예를 들어, 항 PD-1 항체 또는 항 PD-L1 항체) 또는 치료 양식과 같은 다른 요법과 조합하여 신생물성 질환 및 감염성 질환을 치료, 예방 및/또는 진단하는데 사용될 수 있다. 또한, 본 출원에서는 항 LAG-3 항체 분자의 조성물 및 LAG-3을 검출하기 위한 방법 및 항 LAG-3 항체 분자로 다양한 질환(종양 및/또는 감염성 질환을 포함함)을 치료하기 위한 방법이 개시된다.
따라서, 일부 실시양태에서, 본 출원에 개시된 항체 또는 이의 단편은 (특이적으로) LAG-3에 결합한다. 일부 실시양태에서, 본 출원에 개시된 항체 또는 이의 단편은 (특이적으로) 인간 LAG-3 또는 마우스 LAG-3, 또는 이의 단편에 결합한다.
일부 실시양태에서, 본 출원에 개시된 항 LAG-3 항체 또는 이의 단편은 높은 친화도로, 예를 들어 약 100nM 이하, 바람직하게는 약 50nM 이하, 특히 바람직하게는 약 20nM 이하, 및 더욱 특히 바람직하게는 약 10nM, 9nM, 8nM, 7nM, 6nM, 5nM, 4nM, 3nM, 또는 2nM 이하, 및 가장 바람직하게는 약 1nM, 0.9nM, 0.8nM, 또는 0.7nM 이하의 평형 해리상수(KD)로 LAG-3(예를 들어, 인간 LAG-3)에 결합한다. 일부 실시양태에서, 본 출원에 개시된 항 LAG-3 항체는 0.1-20nM, 바람직하게는 0.5-20nM, 더욱 바람직하게는 0.5-10nM, 0.5-8nM, 또는 0.5-5nM, 가장 바람직하게는 0.5-1nM, 0.5-0.8nM, 0.5-0.7nM, 또는 0.6-0.7nM의 KD로 LAG-3에 결합한다. 일부 실시양태에서, LAG-3은 인간 LAG-3이다. 일부 실시양태에서, LAG-3은 마우스 LAG-3이다. 일부 실시양태에서, 항체 결합 친화도는 생물학적 광학 간섭법(예를 들어, 포테바이오 친화도 분석)을 사용하여 결정된다.
일부 실시양태에서, 본 출원에 개시된 항체 또는 이의 단편은 인간 LAG-3을 발현하는 세포, 예를 들어 약 3.3nM, 3nM, 2nM, 1.5nM, 1.4nM, 1.3nM, 1.2nM, 1.1nM, 1nM, 0.9nM, 0.8nM, 0.7nM, 0.6nM, 또는 0.5nM 이하의 EC50으로 결합한다. 일부 실시양태에서, 결합은 유세포 분석법(예를 들어, FACS)을 사용하여 측정된다. 일부 실시양태에서, 인간 LAG-3을 발현하는 세포는 인간 LAG-3을 발현시키는 293 세포(예를 들어, HEK293 세포)이다.
일부 실시양태에서, 본 출원에 개시된 항체 또는 이의 단편은 마우스 LAG-3을 발현하는 세포, 예를 들어 약 15,000nM, 14,000nM, 또는 13,000nM 이하의 EC50으로 결합한다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 항체 또는 이의 단편은 , 예를 들어 약 50nM 이하의 EC50, 예를 들어 약 40 내지 50nM, 약 40 또는 45nM, 또는 약 42nM의 EC50의 마우스 LAG-3을 발현하는 세포와 결합한다. 일부 실시양태에서, 결합은 유세포 분석법(예를 들어, FACS)을 사용하여 측정된다. 일부 실시양태에서, 마우스 LAG-3을 발현하는 세포는 마우스 LAG-3을 발현시키는 중국 햄스터 난소(CHO) 세포이다.
일부 실시양태에서, 본 출원에 개시된 항체 또는 이의 단편은 예를 들어 약 20nM, 10nM, 9nM, 8nM, 7nM, 6nM, 또는 5nM 이하, 및 바람직하게는 약 1 내지 6nM, 1 내지 5nM, 4nM, 4.5nM, 5nM , 5.1nM, 5.2nM, 5.3nM, 5.4nM, 5.5nM, 5.6nM, 5.7nM, 5.8nM, 5.9nM 또는 6nM의 IC50으로 LAG-3의 관련 활성을 억제한다. 일부 실시양태에서, LAG-3의 관련 활성은 MHC 클래스 II 분자의 LAG-3과의 결합을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 본 출원에 개시된 항체 또는 이의 단편은 약 20nM, 10nM, 9nM, 8nM, 7nM, 6nM, 또는 5nM 이하, 및 바람직하게는 약 1 내지 6nM, 1 내지 5nM, 4nM, 4.5nM, 5nM , 5.1nM, 5.2nM, 5.3nM, 5.4nM, 5.5nM, 5.6nM, 5.7nM, 5.8nM, 5.9nM, 또는 6nM의 IC50으로 MHC 클래스 II 분자를 발현하는 세포 상의 MHC 클래스 II 분자에 대한 LAG-3의 결합을 억제한다. 일부 실시양태에서, MHC 클래스 II 분자는 HLA-DR이다. 일부 실시양태에서, 세포는 CHO 세포이다. 일부 실시양태에서, 본 출원에 개시된 항체 또는 이의 단편에 의한 LAG-3의 관련 활성에 대한 억제는 유세포 분석법(예를 들어, FACS)을 사용하여 측정된다.
일부 실시양태에서, 본 출원에 개시된 항체 또는 이의 단편은 활성화된 CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포의 표면 상의 내인성 LAG-3에, 예를 들어, 약 35pM, 30pM, 25pM, 20pM, 15pM, 14pM 및 13pM 이하, 및 바람직하게는 약 1 내지 20pM, 5 내지 20pM, 5 내지 15pM, 10 내지 15pM , 11 내지 13pM, 10pM, 11pM, 12pM 또는 13pM의 EC50으로 결합한다. 일부 실시양태에서, 활성화된 CD4+ T 세포는 활성화된 인간 CD4+T 세포이다. 일부 실시양태에서, 결합은 유세포 분석법(예를 들어, FACS)에 의해 결정된다. 일부 실시양태에서, 유세포 분석은 Accuri C6 시스템에서 수행된다.
일부 실시양태에서, 본 출원에 개시된 항체 또는 이의 단편은 LAG-3의 하나 이상의 활성을 억제하며, 예를 들어 하기 중 하나 이상을 생성한다: CD4+ T 림프구의 증가된 항원 의존성 자극; 증가된 T 세포 증식; 활성화 항원(예를 들어, CD25)의 증가된 발현; 사이토카인(예를 들어, 인터페론, 인터류킨-2(IL-2) 또는 인터류킨-4(IL-4))의 증가 발현; 케모카인(예를들면, CCL3, CCL4 또는 CCL5)의 증가발현; 조절 T 세포의 억제 활성의 감소; 증가된 T-세포 항상성; 종양-침윤 림프구의 증가; 또는 암 세포에 의한 면역 회피의 감소.
일부 실시양태에서, 본 출원에 개시된 항 LAG-3 항체 또는 이의 단편은 항체 의존성 세포 매개 세포독성(ADCC)을 유도할 수 있다.
일부 실시양태에서, 본 출원에 개시된 항 LAG-3 항체는 단독으로 또는 다른 요법(예를 들어, 치료 양식 및/또는 치료제)과 조합하여 종양(예를 들어, 암) 또는 감염성 질환(예를 들어, 만성 감염)을 효과적으로 치료할 수 있다. 바람직하게는, 본 출원에 개시된 항 LAG-3 항체는 항 PD-1 또는 항 PD-L1 항체와 조합하여 종양, 특히 전이성 또는 난치성 종양을 치료할 수 있다. 일부 실시양태에서, 종양은 암이다. 일부 실시양태에서, 종양은 위장관 신생물이다. 일부 실시양태에서, 암은 결장암이다.
일부 실시양태에서, 본 출원에 개시된 항 LAG-3 항체 또는 이의 단편의 중쇄 및/또는 경쇄는 신호 펩티드 서열, 예컨대 METDTLLLWVLLLWVPGSTG(서열 48)을 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 출원에 개시된 항체는 또한 항 LAG-3 항체의 아미노산 서열의 변이체, 및 상기 기재된 항 LAG-3 항체 중 임의의 것과 동일한 에피토프에 결합하는 항체 또는 이의 단편을 포함한다.
특정 실시양태에서, LAG-3 또는 이의 단편에 결합하는 항체 또는 항체 단편(바람직하게는 항원 결합 단편)이 제공되며, 여기서 항체 또는 항체의 단편은 LAG-3 내의 에피토프에 결합한다.
일부 실시양태에서, 본 출원에 개시된 항 LAG-3 항체는 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA1, IgA2, IgD, 또는 IgE 유형이다. 일부 실시양태에서, 본 출원에 개시된 항 LAG-3 항체는, 예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA1, IgA2, IgD, 및 IgE의 중쇄 불변 영역으로부터, 특히, 예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4의 중쇄 불변 영역으로부터, 및 더욱 특히 예를 들어 인간 IgG1, IgG2 및 IgG4와 같은 IgG1, IgG2 및 IgG4의 중쇄 불변 영역으로부터 선택된 중쇄 불변 영역을 포함한다. 한 실시양태에서, 중쇄 불변 영역은 인간 IgG1 또는 인간 IgG4의 중쇄 불변 영역이다. 한 실시양태에서, 중쇄 불변 영역은 인간 IgG4의 중쇄 불변 영역이다. 또 다른 실시양태에서, 항 LAG-3 항체 분자는 예를 들어 카파 또는 람다 경쇄 불변 영역, 및 바람직하게는 카파(예를 들어, 인간 카파) 경쇄 불변 영역을 갖는다.
또 다른 실시양태에서, 항 LAG-3 항체 분자는 IgG4(예를 들어, 인간 IgG4)의 중쇄 불변 영역을 포함한다. 한 실시양태에서, 인간 IgG4는 EU 넘버링에 따른 위치 228에서의 치환(예를 들어, Ser의 Pro로의 치환)을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 인간 IgG4는 114번 내지 115번 위치(EU 넘버링)에서 AA에 대한 돌연변이를 함유한다(Armour KL1, Clark MR, Hadley AG, Williamson LM, Eur J Immunol., Aug., 1999; 29(8): 2613-24, Recombinant human IgG molecules lacking Fcgamma receptor I binding and monocyte triggering activities). 한 실시양태에서, 중쇄 불변 영역은 서열식별번호: 46으로 나타낸 아미노산 서열, 또는 그와 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 동일성을 갖는 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
다른 실시양태에서, 항 LAG-3 항체 분자는 카파 경쇄 불변 영역, 예를 들어, 인간 카파 중쇄 불변 영역을 포함한다. 한 실시양태에서, 경쇄 불변 영역은 서열 47로서 나타낸 아미노산 서열, 또는 이와 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 동일성을 갖는 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
또 다른 실시양태에서, 항 LAG-3 항체 분자는 IgG4의 중쇄 불변 영역(예를 들어, 인간 IgG4의 중쇄 일정 영역) 및 카파 경쇄 불변 영역(예를 들어, 인간 카파 측쇄 불변 영역)을 포함한다. 한 실시양태에서, 불변 영역은 돌연변이된 IgG4, 예를 들어 돌연변이된 인간 IgG4의 불변 영역이다(예를 들어, S228P 돌연변이와 같은 EU 넘버링에 따른 위치 228에서의 돌연변이를 가짐). 일부 실시양태에서, 인간 IgG4의 중쇄 불변 영역은 서열식별번호: 46으로 나타낸 아미노산 서열, 또는 그와 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 동일성을 갖는 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 한 실시양태에서, 인간 카파 경쇄 불변 영역은 서열 47로서 나타낸 아미노산 서열, 또는 이와 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 동일성을 갖는 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
한 실시양태에서, 항 LAG-3 항체 분자는 단리되거나 재조합된다.
일부 실시양태에서, 항 LAG-3 항체는 단일클론 항체 또는 단일특이성 항체이다. 항 LAG-3 항체 분자는 또한 인간화, 키메라, 카멜리드, 상어 또는 시험관 내 생성된 항체 분자일 수 있다. 일부 실시양태에서, 항 LAG-3 항체는 인간화 항체이다. 일부 실시양태에서, 항 LAG-3 항체는 인간 항체이다. 일부 실시양태에서, 항 LAG-3 항체의 프레임워크 서열의 적어도 일부는 인간 컨센서스 프레임워크 서열이다. 한 실시양태에서, 본 발명의 항 LAG-3 항체는 또한 이의 항체 단편, 및 바람직하게는 하기로부터 선택된 항체 단편을 포함한다: Fab, Fab', Fab'-SH, Fv, 단일-쇄 가변 단편(예를 들어, scFv) 또는 (Fab')2, 단일 도메인 항체, 디아바디(dAb), 및 선형 항체.
일부 실시양태에서, 항 LAG-3 항체 분자는 이중특이성 또는 다중특이성 항체 분자의 형태이다. 한 실시양태에서, 이중특이성 항체 분자는 LAG-3에 대한 제1 결합 특이성 및 PD-1, TIM-3, CEACAM(예를 들어, CEACAM-1 및/또는 CEACAM-5), PD-L1, 또는 PD-L2에 대해 제2 결합 특이성을 갖는다. 한 실시양태에서, 이중특이성 항체 분자는 LAG-3 및 PD-1에 결합한다. 한 실시양태에서, 이중특이성 항체 분자는 LAG-3 및 PD-L1에 결합한다. 또 다른 실시양태에서, 이중특이성 항체 분자는 LAG-3 및 PD-L2에 결합한다. 상기 분자의 임의의 조합은 다중특이성 항체 분자에서 생성될 수 있다. 삼중특이성 항체 분자와 같은 다중특이성 항체 분자는 LAG-3에 대한 제1 결합 특이성과 PD-1, TIM-3, CEACAM(예를 들어, CEACAM-1 또는 CEACAM-5), PD-L1, 또는 PD-L2의 하나 이상의 분자에 대한 제2 및 제3 결합 특이성을 포함한다.
다른 실시양태에서, 항 LAG-3 항체 분자는 PD-1, TIM-3, CEACAM(예를 들어, CEACAM-1 또는 CEACAM-5), PD-L1 또는 PD-L2 중 하나 이상을 포함하는 이중특이성 분자와 조합하여 사용된다.
한 측면에서, 본 발명은 임의의 상기 항 LAG-3 항체 또는 이의 단편을 암호화하는 핵산을 제공한다. 한 실시양태에서, 핵산을 포함하는 벡터가 제공된다. 한 실시양태에서, 벡터는 발현 벡터이다. 한 실시양태에서, 핵산 또는 벡터를 포함하는 숙주 세포가 제공된다. 한 실시양태에서, 숙주 세포는 진핵 세포이다. 또 다른 실시양태에서, 숙주 세포는 효모 세포, 포유동물 세포(예를 들어, CHO 세포 또는 293 세포), 및 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제조하기에 적합한 다른 세포로부터 선택된다. 또 다른 실시양태에서, 숙주 세포는 원핵생물, 예컨대 대장균 세포이다.
한 실시양태에서, 본 발명은 항체 또는 이의 단편(바람직하게는 항원 결합 단편)을 암호화하는 핵산의 발현에 적합한 조건 하에 숙주 세포를 배양하는 단계, 및 임의로 항체 또는 이의 단편(바람직하게는 항원 결합 단편)를 단리하는 단계를 포함하는, 항 LAG-3 항체 또는 그것의 단편(바람직하게는 항원결합 단편)의 제조 방법을 제공한다. 특정 실시양태에서, 상기 방법은 숙주 세포로부터 항 LAG-3 항체 또는 이의 단편(바람직하게는 항원 결합 단편)을 단리하는 단계를 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 본 출원에 제공된 임의의 항 LAG-3 항체 및 다른 물질, 예컨대 세포독성제 또는 마커를 포함하는 면역접합체를 제공한다. 일부 실시양태에서, 면역접합체는 종양(예를 들어, 암) 또는 감염성 질환을 예방 또는 치료하는 데 사용된다. 바람직하게는, 종양은 위장관 신생물(예를 들어, 암), 예컨대 결장암이다. 바람직하게는, 감염성 질환은 만성 감염이다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 본 출원에 기재된 항 LAG-3 항체 중 임의의 것 또는 이의 단편(바람직하게는 이의 항원 결합 단편) 또는 이의 면역접합체를 포함하는 조성물을 제공하며, 여기서 바람직하게는 조성물은 제약 조성물이다. 한 실시양태에서, 조성물은 제약 보조제를 추가로 포함한다. 한 실시양태에서, 조성물, 예컨대 제약 조성물은 본 출원에 개시된 항 LAG-3 항체 또는 이의 단편 또는 이의 면역접합체, 및 1종 이상의 다른 치료제(예를 들어, 화학요법제, 세포독성제, 백신, 다른 항체, 항 감염성 활성제, 또는 면역조절제(예컨대 공동자극 분자의 활성화제 또는 면역 체크포인트 분자의 억제제), 및 바람직하게는 항 PD-1 항체, 항 PD-L1 항체, 또는 항 PD-L2 항체)의 조합을 포함한다.
일부 실시양태에서, 제약 조성물은 종양(예를 들어, 암) 또는 감염을 예방하거나 치료하기 위해 사용된다. 바람직하게는, 종양은 위장관 신생물(예를 들어, 암), 예컨대 결장암이다. 바람직하게는, 감염성 질환은 만성 감염이다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 대상체 또는 개체에서 종양(예를 들어, 암) 또는 감염성 질환을 예방 또는 치료하는 방법에 관한 것으로, 상기 방법은 대상체에게 유효량의 임의의 항 LAG-3 항체 또는 이의 단편, 제약 조성물, 또는 본 출원에 기재된 면역접합체를 투여하는 것을 포함한다. 한 실시양태에서, 종양은 위장관 신생물(예를 들어, 암), 예컨대 결장암이다. 한 실시양태에서, 감염성 질환은 만성 감염이다. 또 다른 측면에서, 본 발명은 또한 대상체에서 종양(예를 들어, 암) 또는 감염을 치료하기 위한 의약품 제조에서의 본 출원에 기재된 항 LAG-3 항체 중 임의의 것 또는 이의 단편의 용도에 관한 것이다. 한 실시양태에서, 종양은 위장관 신생물(예를 들어, 암), 예컨대 결장암이다. 한 실시양태에서, 감염성 질환은 만성 감염이다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 대상체 또는 개체에서 종양(예를 들어, 암) 또는 감염성 질환을 예방 또는 치료하는 방법에 관한 것이며, 여기서 상기 방법은 상기 대상체에게 본 출원에 기재된 항 LAG-3 항체 또는 이의 단편, 상기 제약 조성물, 또는 상기 면역접합체 중 임의의 것의 유효량을 PD-1 축 결합 길항제 또는 상기 PD-1 축 결합 길항제를 포함하는 약제 또는 활성제와 조합하여 투여하는 단계를 포함한다. 한 실시양태에서, 종양은 위장관 신생물(예를 들어, 암), 예컨대 결장암이다. 한 실시양태에서, 감염성 질환은 만성 감염이다. 또 다른 측면에서, 본 발명은 또한 대상체에서 종양(예를 들어, 암) 또는 감염성 질환을 치료하기 위한 의약 제조에서의, PD-1 축 결합 길항제와 조합된, 본 출원에 기재된 임의의 항 LAG-3 항체 또는 이의 단편의 용도에 관한 것이다. 한 실시양태에서, 종양은 위장관 신생물(예를 들어, 암), 예컨대 결장암이다. 한 실시양태에서, 감염성 질환은 만성 감염이다.
일부 실시양태에서, PD-1 축 결합 길항제는 예를 들어 항 PD-1 항체 또는 항 PD-L1 항체 또는 항 PD-L2 항체를 포함한다.
일부 추가 실시양태에서, 본 출원에 기재된 예방 또는 치료 방법은 대상체 또는 개인에게 하나 이상의 요법(예를 들어, 치료 양식 및/또는 다른 치료제)을 투여하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 치료 양식은 수술 치료 및/또는 방사선 요법을 포함한다. 일부 실시양태에서, 다른 치료제는 화학요법제, 세포독성제, 백신, 다른 항체, 항감염 활성제, 및 면역조절제(예컨대 공동자극 분자의 활성화제 또는 면역 체크포인트 분자의 억제제)로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 대상체 또는 개체는 비 인간 동물이다. 일부 실시양태에서, 대상체 또는 개체는 포유동물, 바람직하게는 인간이다.
한 측면에서, 본 발명은 (a) 샘플을 본 출원에 기재된 임의의 항 LAG-3 항체 또는 이의 단편과 접촉시키는 단계; 및 (b) 항 LAG-3 항체 및 이의 단편의 LAG-3과의 복합체의 형성을 검출하는 단계를 포함하는, 샘플 중 LAG-3를 검출하는 방법에 관한 것이다. 한 실시양태에서, 항 LAG-3 항체는 검출 가능하게 표지된다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 본 출원에 기재된 임의의 항 LAG-3 항체 또는 이의 단편을 포함하는 키트 또는 제품에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 키트 또는 제품은 본 출원에 기재된 항 LAG-3 항체 또는 이의 단편 및 임의의 제약 보조제를 포함한다. 일부 실시양태에서, 키트 또는 제품은 종양 또는 감염을 치료하기 위해 약물을 투여하기 위한 설명서를 추가로 포함한다.
본 발명은 또한 본 출원에 기재된 실시양태의 임의의 조합을 포함한다. 본 출원에 기재된 임의의 실시양태, 또는 이의 임의의 조합은 본 출원에 기재된 항 LAG-3 항체 또는 이의 단편, 방법, 및 용도 중 임의의 것 및 모두에 적용 가능하다.
도 1은 유세포 분석법에 의해 측정된 세포 표면 상의 hLAG-3에 대한 모 항체의 결합 능력을 나타낸다.
도 2는 유세포 분석법에 의해 측정된 세포 표면 상의 hLAG-3에 대한 친화성-성숙 항체의 결합 능력을 나타낸다.
도 3은 유세포 분석법에 의해 측정된 바와 같은 항 LAG-3 항체에 의한 인간 MHC II(HLA-DR)와 LAG-3 사이의 상호작용의 차단을 나타낸다.
도 4는 유세포 분석법에 의해 측정된 바와 같은 활성화된 인간 CD4+ T 세포에 대한 항 LAG-3 항체의 결합 능력을 나타낸다.
도 5는 세포 표면 상에서 유세포 분석법에 의해 측정되는 항 LAG-3 항체의 마우스 LAG-3에 대한 결합 능력을 나타낸다.
도 6은 CT26 이식된 종양 모델에서 항 PD-1 항체와 병용하여 사용되는 항 LAG-3 항체의 종양 억제 효과를 나타낸다.
도 7은 NOG 모델에서 항 PD-1 항체 또는 항 PD-L1 항체와 병용하여 사용되는 항 LAG-3 항체의 종양 억제 효과를 나타낸다.
도 8은 IL-2 표준 곡선을 나타낸다.
도 9는 활성화된 인간 CD4+ T 세포로부터의 IL-2 분비에 대한 항체 또는 항체의 조합의 효과를 나타낸다.
약어
달리 언급되지 않는 한, 본 명세서의 약어는 하기 의미를 갖는다:
하기 약어가 사용된다:
ADCC 항체 의존성 세포 매개 세포독성
CDC 보체 의존성 세포독성
CDR 이뮤노글로불린의 가변 영역 내의 상보성 결정 영역
CHO 중국 햄스터 난소
EC50 50% 효능 또는 결합을 초래하는 농도
KD 평형 해리상수
ELISA 효소-연결된 면역 흡착 분석
FR 항체 골격 영역
IC50 50% 억제를 일으키는 농도
Ig 면역글로불린
Kabat Elvin A. Kabat에 의해 확립된 면역글로불린 정렬 및 넘버링 시스템((1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Edition Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md.)
mAb/Mab/MAb 단일클론 항체
PCR 폴리머라제 연쇄 반응
IFN 인터페론
VL 경쇄 가변 영역
VH 중쇄 가변 영역
LC 경쇄
HC 중쇄
CDR 중쇄 상보성 결정 영역
LCDR 경쇄 상보성 결정 영역
정의
본 발명을 하기에 상세히 기술하기 전에, 본 발명은 본 출원에 기술된 특정 방법, 프로토콜 및 시약에 제한되지 않으며, 이는 이들이 달라질 수 있음을 이해해야 한다. 또한, 본 출원에서 사용된 용어는 단지 특정 실시양태를 기술하기 위한 것이며, 첨부된 특허청구범위에 의해서만 제한될 본 발명의 범위를 제한하려는 것이 아님을 이해해야 한다. 달리 정의되지 않는 한, 본 출원에서 사용되는 모든 기술적 및 과학적 용어는 본 발명이 속하는 분야의 숙련가에 의해 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다.
본 명세서를 설명하기 위해 다음의 정의가 사용될 것이고, 적절한 경우 단수로 사용된 용어는 또한 복수를 포함할 수 있고, 이의 반대도 가능하다. 본 명세서에서 사용된 용어는 특정 실시예들만을 설명하기 위한 것이며, 제한하려고 의도된 것이 아님을 이해해야 한다.
수치와 함께 사용되는 용어 "약"은 명시된 수치 미만의 하한 5% 내지 명시된 수치 초과의 상한 5% 범위의 수치를 포함하는 것으로 의도된다.
친화성은 분자(예를 들어, 항체)의 단일 결합 부위와 이의 결합 파트너(예를 들어, 항원) 사이의 모든 비공유 상호작용 총합의 강도를 지칭한다. 달리 언급되지 않는 한, 본 출원에서 사용될 때, "결합 친화도"는 결합 쌍의 구성원(예를 들어, 항체 및 항원) 사이의 1:1 상호작용을 반영하는 고유 결합 친화도를 지칭한다. 파트너 Y에 대한 분자 X의 친화도는 일반적으로 평형 해리상수(KD)로 나타낼 수 있다. 친화도는 종래 기술에 공지되고 본 출원에 기재된 것을 포함하여, 당업계에 공지된 통상의 방법에 의해 측정될 수 있다.
용어 "림프구-활성화 유전자-3" 또는 "LAG-3"은 모든 이소형, 포유동물(예를 들어, 인간) LAG-3, 인간 LAG-3의 종 동족체, 및 적어도 하나의 공통 에피토프 LAG-3를 포함하는 유사체를 포함한다. LAG-3(예를 들어, 인간 LAG-3)의 아미노산 및 뉴클레오티드 서열은 당업계에 공지되어 있으며, 예를 들어 Triebel et al., (1990) J. Exp. Med. 171: 1393-1405 참조. 일부 실시양태에서, 용어 "인간 LAG-3"은 인간 서열 LAG-3, 예컨대 Genbank accession No. NP_002277을 갖는 인간 LAG3의 완전한 아미노산 서열을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 용어 "마우스 LAG-3"은 마우스 서열 LAG-3, 예컨대 Genbank accession No. NP_032505을 갖는 마우스 LAG3의 완전한 아미노산 서열을 지칭한다. LAG-3은 또한, 예를 들어 CD223으로서 당업계에 공지되어 있다. 인간 LAG-3 서열은, 예를 들어 보존 돌연변이 또는 비보존 영역의 돌연변이에 의해 Genbank accession No. NP_002277를 갖는 인간 LAG-3과 상이할 수 있고, LAG-3는 Genbank accession No. NP_002277를 갖는 인간 LAG3와 실질적으로 동일한 생물학적 기능을 갖는다. 예를 들어, 인간 LAG-3의 생물학적 기능은 본 출원에 개시된 항체가 특이적으로 결합하는 LAG-3의 세포외 도메인에 에피토프를 갖는 것, 또는 인간 LAC-3의 생물학적으로 기능은 MHC 클래스 II 분자에 결합하는 것이다.
본 출원에서 사용된 용어 "항 LAG-3 항체", "항 LAG-3", "LAG-3 항체", 또는 "LAG-3-결합 항체"는 LAG-3 단백질 또는 이의 단편에 충분한 친화도로 결합할 수 있는 항체를 지칭한다. 한 실시양태에서, 항 LAG-3 항체는, 예를 들어, 방사선면역측정법(RIA), 생물학적 광학 간섭측정법 또는 MSD 분석법에 의해 측정 시, LAG-3에 대한 항체 결합의 약 10%, 약 20%, 약 30%, 약 40%, 약 50%, 약 60%, 약 70%, 약 80%, 또는 약 90% 이상 보다 적게 비 LAG-3, 단백질에 결합한다.
본 출원에서 사용된 바와 같이, "단일클론 항체" 또는 "mAb" 또는 "Mab"는 단일 카피 또는 클론, 예를 들어 진핵, 원핵 또는 파지 클론으로부터 유도된 항체를 지칭하며, 이들이 생성되는 방법은 아니다. 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 예를 들어 하이브리도마 기술, 재조합 기술, 파지 디스플레이 기술, 합성 기술, 예컨대 CDR 그라프팅, 또는 이러한 기술 또는 당업계에 공지된 다른 기술의 조합에 의해 제조될 수 있다.
자연 항체는 상이한 구조의 자연 면역글로불린 분자를 지칭한다. 예를 들어, 자연 IgG 항체는 이황화 결합으로 결합된 2개의 동일한 경쇄 및 2개의 동일 중쇄로 이루어진, 약 150,000 달톤의 이종사량체 당단백질이다. N-말단으로부터 C-말단까지, 각각의 중쇄는 가변 영역(VH)을 가지며, 이는 또한 가변 중쇄 도메인 또는 중쇄 가변 도메인으로 지칭되고, 이어서 3개의 불변 도메인(CH1, CH2, 및 CH3)이 이어진다. 유사하게, N-말단으로부터 C-말단까지, 각각의 경쇄는 가변 영역(VL)을 가지며, 이는 또한 가변 경쇄 도메인 또는 경쇄 가변 도메인으로 지칭되고, 이어서 불변 경쇄(CL) 도메인을 갖는다. 항체의 경쇄는 이의 불변 도메인의 아미노산 서열을 기준으로 카파(κ) 및 람다(λ)로 불리는 2가지 유형 중 하나에 할당될 수 있다. "자연 서열의 Fc 영역"은 자연에서 발견되는 Fc 영역의 아미노산 서열과 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 자연 서열의 인간 Fc 영역은 자연 서열(비 A 알로타입 및 A 알로타입)의 인간 IgG1 Fc 영역, 자연 서열의 인간 IgG2 Fc 영역의 자연 서열, 인간 IgG3 Fc 영역과 자연 서열의 인간의 IgG4 Fc 영역 및 이의 자연-발생 변이체를 포함한다.
"항체 단편"은 온전한 항체와 상이한 분자를 지칭하며, 이는 온전하지 않은 항체의 일부를 포함하고 온전한 항체가 결합하는 항원에 결합한다. 항체 단편의 예는 Fv, Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2; 디아바디; 선형 항체; 단일 사슬 가변 단편(예를 들어, scFv); 단일 도메인 항체; 2가 또는 이중특이성 항체 또는 이의 단편; 카멜리드 항체; 및 항체 단편으로부터 형성된 이중특이성 항체, 또는 다중특이성 항체를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.
본 출원에서 사용된 용어 "에피토프"는 항체 분자와 특이적으로 상호작용하는 항원(예를 들어, 인간 LAG-3)의 모이어티를 지칭한다. 이러한 모이어티(본 출원에서 항원 결정자로 지칭됨)는 일반적으로 아미노산 측쇄 또는 당 측쇄와 같은 요소를 포함하거나, 또는 이의 일부이다. 항원 결정기는 당업계에 공지되거나 본 출원에 개시된 방법을 사용하여(예를 들어, 결정학(crystallography) 또는 수소-중수소 교환에 의해) 정의될 수 있다. 항원 결정기와 특이적으로 상호작용하는 항체 분자의 적어도 하나 또는 일부 모이어티는 일반적으로 CDR 내에 위치한다. 일반적으로, 에피토프는 특정한 3차원 구조 특성을 갖는다. 일반적으로, 에피토프는 특정 전하 특성을 갖는다. 일부 에피토프는 선형 에피토프인 반면, 다른 에피토프는 입체형태적 에피토프이다.
참조 항체로서 "동일하거나 중첩하는 에피토프에 결합하는 항체"는 경쟁 분석에서 이의 항원에 대한 참조 항체의 결합의 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 95% 이상을 차단하거나, 또는 반대로 경쟁 분석에서는 이의 항원에 대해 항체 결합의 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 95% 이상을 차단하는 항체를 지칭한다.
이의 항원에 결합하는 기준 항체와 경쟁하는 항체는 경쟁 분석에서 이의 항원에 대한 기준 항체 결합의 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 95% 이상을 차단하는 항체를 지칭한다. 반대로, 참조 항체는 경쟁 분석에서 항체 항원에 대한 결합의 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 95% 이상을 차단한다. 항체가 다른 것과 경쟁하는지 여부를 결정하기 위해 다양한 유형의 경쟁적 결합 분석, 예컨대 직접 또는 간접 고상 방사면역분석(RIA), 직접 또는 간접적으로 고상 효소 면역분석(EIA), 및 샌드위치 경쟁 분석이 사용될 수 있다(예를 들어, Stahli et al., 1983, Methods in Enzymology 9: 242-253 참조).
참조 항체와 이의 항원에 대한 결합을 억제(예를 들어, 경쟁적으로 억제)하는 항체는 참조 항체와 이의 항원에 대한 결합의 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 95% 이상을 억제하는 항체를 지칭한다. 반대로, 참조 항체는 이의 항원에 대한 항체 결합의 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 95% 이상을 억제한다. 항체의 항원에 대한 결합은 친화성(예를 들어, 평형 해리상수)에 의해 측정될 수 있다. 친화도를 측정하는 방법은 당업계에 공지되어 있다.
참조 항체와 동일하거나 유사한 결합 친화성 및/또는 특이성을 나타내는 항체는 참조 항체의 결합 친화성 또는 특이성의 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 95% 이상을 가질 수 있는 항체를 지칭한다. 이는 결합 친화성 및/또는 특이성을 결정하기 위해 당업계에 공지된 임의의 방법에 의해 결정될 수 있다.
"상보성 결정 영역" 또는 "CDR 영역" 또는 "CDR"은 서열에서 매우 가변적이고 구조적으로 정의된 루프("초가변 루프")를 형성하고/거나 항원 접촉 잔기("항원 접촉 포인트")를 포함하는 항체 가변 도메인 내의 영역이다. CDR은 주로 에피토프에 대한 결합을 담당한다. 중쇄 및 경쇄의 CDR은 일반적으로 CDR1, CDR2 및 CDR3으로 지칭되며, N-말단으로부터 순차적으로 넘버링된다. 항체 중쇄의 가변 도메인에 위치한 CDR은 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3으로 지칭되고, 항체 경쇄의 가변 도메인 내에 위치한 CDR들은 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3으로 지칭된다. 경쇄 가변 영역 또는 중쇄 가변 영역의 주어진 아미노산 서열에서, CDR의 정확한 아미노산 서열 경계는 예를 들어 항체의 3차원 구조 및 CDR 루프의 토폴로지를 기초로 하는 Chothia(Chothia et al. (1989) Nature 342: 877-883; Al-Lazikani et al., "Standard conformations for the canonical structures of immunoglobulins", Journal of Molecular Biology, 273, 927-948 (1997)), 항체 서열 가변성에 기초한 Kabat(Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 4th edition, U.S. Department of Health and Human Services, National Institutes of Health (1987)), AbM (University of Bath), Contact(University College London), International ImMunoGeneTics database(IMGT) (World Wide Web상의 imgt.cines.fr/), 및 다수의 결정 구조를 사용하는 친화도 전파 클러스터링에 기초한 North CDR 정의를 포함하는 많은 잘 알려진 항체 CDR 어사인먼트 중 임의의 하나 또는 이들의 조합을 사용하여 결정될 수 있다.
예를 들어, 상이한 CDR 결정 방식에 따르면, 각 CDR의 잔기는 다음과 같다.
Figure pct00001
CDR은 또한 기준 CDR 서열과 동일한 Kabat 넘버링 위치를 갖는 것에 기초하여 결정될 수 있다(예를 들어, 본 발명의 예시적인 CDR 중 임의의 것).
달리 언급되지 않는 한, 본 발명에서, 용어 "CDR" 또는 "CDR 서열"은 상기 기재된 임의의 방식에 의해 결정된 CDR 서열을 포함한다.
달리 언급되지 않는 한, 본 발명에서, 항체 가변 영역 내 잔기(중쇄 가변 영역 내의 잔기 및 경쇄 가변 영역 내에 잔기를 포함함)의 위치를 언급할 때, 이는 Kabat 넘버링 시스템에 따른 넘버링 위치를 지칭한다(Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)).
한 실시양태에서, 본 출원에 개시된 항체의 CDR의 경계는 Kabat 규칙, IMGT 규칙 또는 AbM 규칙, 또는 이들의 조합에 의해 결정된다. 예를 들어, CDR의 서열을 표 1에서 나타난다.
상이한 어사인먼트에 의해 수득된 항체의 가변 영역의 CDR의 경계는 상이할 수 있음을 주목해야 한다. 즉, 상이한 어사인먼트에 의해 정의된 항체의 가변 영역의 CDR 서열은 상이하다. 따라서, 본 발명에서 정의된 특정 CDR 서열을 갖는 항체를 정의하는 경우, 항체의 범위는 또한 가변 영역 서열이 특정 CDR 서열을 포함하지만, 상이한 프로토콜(예를 들어, 상이한 어사인먼트 규칙 또는 이들의 조합)로서 본 발명에 의해 정의된 특정 CDR 경계와 상이한 청구된 CDR 경계를 갖는 항체를 포함한다.
상이한 특이성(즉, 상이한 항원에 대한 상이한 결합 부위)을 갖는 항체는 (동일한 어사인먼트 하에서) 상이한 CDR을 갖는다. 그러나, 비록 CDR이 항체에 대한 항체와 상이하지만, CDR 내의 제한된 수의 아미노산 위치만이 항원 결합에 직접 관련된다. 최소 중첩 영역은 Kabat, Chothia, AbM, Contact, 및 North 방식 중 적어도 2개를 사용하여 결정될 수 있고, 이에 의해 항원 결합을 위한 "최소 결합 유닛"을 제공한다. 최소 결합 유닛은 CDR의 서브-부분일 수 있다. 당업자에게 명백한 바와 같이, 나머지 CDR 서열의 잔기는 항체 구조 및 단백질 폴딩에 의해 결정될 수 있다. 따라서, 본 명세서에 주어진 CDR의 임의의 변형 또한 본 발명에서 고려될 것이다. 예를 들어, 하나의 CDR 변이체에서, 최소 결합 유닛 내의 아미노산 잔기는 불변으로 유지될 수 있는 반면, Kabat 또는 Chothia에 의해 정의된 다른 CDR 잔기는 보존적 아미노산 잔기에 의해 치환될 수 있다.
항체의 5가지 주요 부류가 당업계에 공지되어 있다: IgA, IgD, IgE, IgG, 및 IgM, 및 이들 부류 중 몇몇은 하위부류(이소형), 예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, 및 IgA2로 추가로 나누어질 수 있다. 상이한 부류의 면역글로불린에 상응하는 중쇄 불변 도메인은 각각 α, δ, ε, γ, and μ로 지칭된다.
"IgG 형태의 항체"는 IgG 형태에 속하는 항체의 중쇄 불변 영역을 지칭한다. 동일한 유형의 모든 항체의 중쇄 불변 영역은 동일하고, 상이한 유형의 항체의 중쇄 일정 영역은 상이하다. 예를 들어, IgG4 형태의 항체는 IgG4의 Ig 도메인인 중쇄 불변 영역의 Ig 도메인을 지칭한다.
용어 "PD-1 축 결합 길항제"는 PD-1축 결합 파트너와 이의 결합 파트너 중 하나 이상의 상호작용을 억제하여, PD-1 신호 전달 축 상의 신호 전달로부터 초래되는 T 세포 기능 장애를 제거하는 분자를 지칭하며, 여기서 하나의 결과는 T 세포 기능(예를 들어, 증식, 사이토카인 생성, 및 표적 세포 사멸)을 회복 또는 증강시킨다. 본 출원에서 사용된 바와 같이, PD-1 축 결합 길항제는 PD-1 결합 길항제(예를 들어, 항 PD-1 항체), PD-L1 결합 길항제(예를 들어 항 PD-L1 항체) 및 PD-L2 결합 길항제(예를 들어 항 PD-L2 항체)를 포함한다.
용어 "PD-1 결합 길항제"는 PD-1과 하나 이상의 이의 결합 파트너(예컨대 PD-L1 및 PD-L2)의 상호작용으로 인한 신호 전달을 감소시키거나, 차단하거나, 억제하거나, 제거하거나 방해하는 분자를 지칭한다. 일부 실시양태에서, PD-1 결합 길항제는 하나 이상의 이의 결합 파트너에 대한 PD-1의 결합을 억제하는 분자이다. 특정 측면에서, PD-1 결합 길항제는 PD-L1 및/또는 PD-L2에 대한 PD-1의 결합을 억제한다. 예를 들어, PD-1 결합 길항제는 항 PD-1 항체, 이의 항원 결합 단편, 면역어드헤신, 융합 단백질, 올리고펩티드, 및 PD-L1 및/또는 PD-L2와 PD-1의 상호작용으로부터 초래되는 신호 전달을 감소시키거나, 차단하거나, 억제하거나, 제거하거나 방해하는 다른 분자를 포함한다. 한 실시양태에서, PD-1 결합 길항제는 T 림프구 상에서 발현되는 세포 표면 단백질에 의해 또는 이를 통해 매개되는 음성 공동자극 신호를 감소시켜(PD-1을 통해 매개되는 신호 전달), 기능장애성 T 세포의 기능장애성을 완화한다(예를 들어, 항원 인식에 대한 이펙터 반응을 증진시킴). 일부 실시양태에서, PD-1 결합 길항제는 항 PD-1 항체이다. 특정 실시양태에서, PD-1 결합 길항제는 WO 2015/095423에 개시된 MDX-1106(니볼루맙), MK-3475(펨브롤리주맙) 또는 CT-011(피딜리주마브), 또는 AMP-224이다. 특정 실시양태에서, 항 PD-1 항체는 WO 2017/133540에 개시된 "항체 C"이다. 또 다른 특정 실시양태에서, 항 PD-1 항체는 WO 2017/025016에 개시된 "항체 D"이다.
용어 "PD-L1 결합 길항제"는 PD-L1과 이의 결합 파트너(예컨대 PD-1 및 B7-1) 중 하나 이상과의 상호작용으로 인한 신호 전달을 감소, 차단, 억제, 제거 또는 방해하는 분자를 지칭한다. 일부 실시양태에서, PD-L1 결합 길항제는 이의 결합 파트너에 대한 PD-1의 결합을 억제하는 분자이다. 특정 측면에서, PD-L1 결합 길항제는 PD-1 및/또는 B7-1에 대한 PD-L1의 결합을 억제한다. 일부 실시양태에서, PD-L1 결합 길항제는 항 PD-L1 항체, 이의 항원 결합 단편, 면역어드헤신, 융합 단백질, 올리고펩티드, 및 PD-1과 이의 결합 파트너(예컨대 PD-1, 및 B7-1) 중 하나 이상과의 상호작용으로부터 생성된 신호 전달을 감소시키거나, 차단하거나, 억제하거나, 제거하거나 방해하는 다른 분자를 포함한다. 한 실시양태에서, PD-L1 결합 길항제는 T 림프구 상에서 발현되는 세포 표면 단백질에 의해 또는 이를 통해 매개되는 음성 공동자극 신호를 감소시켜(PD- L1을 통해 매개되는 신호 전달), 기능장애성 T 세포의 기능장애성을 완화한다(예를 들어, 항원 인식에 대한 이펙터 반응을 증진시킴). 일부 실시양태에서, PD-L1 결합 길항제는 항 PD-L1 항체이다. 특정 측면에서, 항 PD-L1 항체는 WO 2015/095423에 개시된 YW243.55.S70, MDX-1105, MPDL3280A, 또는 MEDI4736이다.
용어 "PD-L2 결합 길항제"는 PD-L2와 하나 이상의 이의 결합 파트너(예컨대 PD-1)의 상호작용으로 인한 신호 전달을 감소시키거나, 차단하거나, 억제하거나, 제거하거나 방해하는 분자를 지칭한다. 일부 실시양태에서, PD-L2 결합 길항제는 하나 이상의 이의 결합 파트너에 대한 PD-L2의 결합을 억제하는 분자이다. 특정 측면에서, PD-L2 결합 길항제는 PD-1에 대한 PD-L2의 결합을 억제한다. 일부 실시양태에서, PD-L2 길항제는 항 PD- L2 항체, 이의 항원 결합 단편, 면역어드헤신, 융합 단백질, 올리고펩티드, 및 PD-2와 이의 결합 파트너(예컨대 PD-1) 중 하나 이상과의 상호작용으로부터 생성된 신호 전달을 감소시키거나, 차단하거나, 억제하거나, 제거하거나 방해하는 다른 분자를 포함한다. 한 실시양태에서, PD-L2 결합 길항제는 T 림프구 상에서 발현되는 세포 표면 단백질에 의해 또는 이를 통해 매개되는 음성 공동자극 신호를 감소시켜(PD- L2을 통해 매개되는 신호 전달), 기능장애성 T 세포의 기능장애성을 줄인다(예를 들어, 항원 인식에 대한 이펙터 반응을 증진시킴). 일부 실시양태에서, PD-L2 결합 길항제는 면역어드헤신이다.
용어 "항체 의존성 세포 매개 세포독성" 또는 "ADCC"는 특정 세포독성 세포(예를 들어, NK 세포, 호중구 및 대식세포) 상에 존재하는 Fc 수용체(FcR)에 결합하는 분비된 면역글로불린이 이들 세포독성 이펙터 세포로 하여금 항원-함유 표적 세포에 특이적으로 결합하고 이어서 표적 세포를 세포독소로 사멸시킬 수 있도록 하는 세포독성의 형태를 지칭한다. ADCC, NK 세포를 매개하는 1차 세포는 FcyRIII만을 발현하는 반면, 단구는 FcyRI, FcyRII, 및 FcyRIII을 발현한다. Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9: 457-92 (1991)의 464 페이지 표 3은 조혈 세포 상의 FcR 발현을 요약한다. Patent No. 5,500,362 또는 5,821,337, 또는 미국 특허 번호 6,737,056(Presta)에 기재된 바와 같이, 시험관내 ADCC 분석을 수행하여 관심 분자의 ADCC 활성을 평가할 수 있다. 이러한 분석에 사용될 수 있는 이펙터 세포는 PBMC 및 NK 세포를 포함한다. 임의로/대안적으로, 관심 분자의 ADCC 활성은 생체 내에서, 예를 들어, Clynes et al., PNAS (USA) 95: 652-656 (1998)에 개시된 것과 같은 동물 모델에서 평가될 수 있다.
본 발명에서 사용되는 용어 "세포독성제" 또는 "세포 독성 인자"는 세포 기능을 억제 또는 예방하고/하거나 세포 사멸 또는 파괴를 야기하는 물질을 지칭한다. 세포독성제의 예는 WO2015/153513, WO2016/028672 또는 WO2015/138920에 개시되어 있다.
본 출원에 기재된 바와 같은 용어 "치료제"는 화학요법제, 세포독성제, 백신, 다른 항체, 항감염 활성제 또는 면역조절제, 예컨대 항 LAG-3 항체와 조합하여 사용될 수 있는 WO2016/028672 또는 WO2015/138920에 개시된 임의의 물질을 포함하는, 종양(예컨대 암) 및 감염(예컨대 만성 감염)을 예방하거나 치료하는 데 효과적인 임의의 물질을 포함한다.
"화학요법제"는 암의 치료에 유용한 화학적 화합물을 포함한다. 화학요법제의 예는 WO2015/153513, WO2016/028672 또는 WO2015/138920에 개시되어 있다.
용어 "사이토카인"은 세포 집단에 의해 방출되고 또 다른 세포 상에서 세포간 매개체로서 작용하는 단백질에 대한 일반적인 용어이다. 이러한 사이토카인의 예는 림포카인 및 모노카인; 인터류킨(IL), 예컨대 IL-1, IL-1α, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-11, IL-12, 및 IL-15; 종양 괴사 인자, 예컨대 TNF-α 또는 TNF-β; 및 LIF 및 키트 리간드(KL) 및 γ-인터페론을 포함하는 다른 폴리펩티드 인자이다. 본 출원에서 사용된 용어 사이토카인은 자연 공급원으로부터의 단백질 또는 재조합 세포 배양물로부터의 단백질, 및 인공 합성에 의해 생성된 소분자 엔터티를 포함하는 자연 서열의 사이토카인의 생물학적으로 활성인 등가물, 및 이의 약리학적으로 허용되는 유도체 및 염을 포함한다.
용어 "공동자극 분자"는 T 세포 상의 공동자극 리간드에 특이적으로 결합하고 따라서 T-세포-매개 공동자극 반응(예를 들어, 증식, 하지만 이에 제한되지는 않음)을 허용하는 관련 결합 파트너를 지칭한다. 공동자극 분자는 매우 효율적인 면역 반응을 위해 요구되는 항원 수용체 또는 이의 리간드 이외의 세포 표면 분자이다. 공동자극 분자는 MHC 클래스 I 분자, TNF 수용체 단백질, 면역글로불린-유사 단백질, 사이토카인 수용체, 인테그린, 신호전달 림프구 활성화 분자(SLAM 단백질), NK 세포 활성화 수용체, BTLA, 톨 리간드 수용체, OX40, CD2, CD7, CD27, CD28, CD30, CD40, CDS, ICAM-1, LFA-1 (CD11a/CD18), 4-1BB (CD137), B7-H3, CDS, ICAM-1, ICOS (CD278), GITR, BAFFR, LIGHT, HVEM (LIGHTR), KIRDS2, SLAMF7, NKp80 (KLRF1), NKp44, NKp30, NKp46, CD19, CD4, CD8α, CD8β, IL2Rβ, IL2Rγ, IL7Rα, ITGA4, VLA1, CD49a, ITGA4, IA4, CD49D, ITGA6, VLA-6, CD49f, ITGAD, CD11d, ITGAE, CD103, ITGAL, CD11a, LFA-1, ITGAM, CD11b, ITGAX, CD11c, ITGB1, CD29, ITGB2, CD18, LFA-1, ITGB7, NKG2D, NKG2C, TNFR2, TRANCE/RANKL, DNAM1 (CD226), SLAMF4 (CD244, 2B4), CD84, CD96 (Tactile), CEACAM1, CRTAM, Ly9 (CD229), CD160 (BY55), PSGL1, CD100 (SEMA4D), CD69, SLAMF6 (NTB-A, Ly108), SLAM (SLAMF1, CD150, IPO-3), BLAME (SLAMF8), SELPLG (CD162), LTBR, LAT, GADS, SLP-76, PAG/Cbp, CD19a, 및 CD83에 특이적으로 결합하는 리간드를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.
용어 "활성화제" 또는 "작용제"는 주어진 분자(예를 들어, 공동자극 분자)의 특정 파라미터(예를 들어, 활성)를 증가시키는 물질을 포함한다. 예를 들어, 이 용어는 주어진 분자의 활성(예를 들어, 공동자극 활성)을 적어도 5%, 10%, 25%, 50%, 75% 이상 증가시키는 물질을 포함한다.
용어 "면역 체크포인트 분자"는 CD4 T 세포 및 CD8 T 세포의 세포 표면 상의 분자의 군을 지칭한다. 이들 분자는 항종양 면역 반응을 하향 조절하거나 억제하는 "브레이크"로서 효과적으로 작용할 수 있다. 면역 체크포인트 분자는 면역 세포를 직접 억제하는 프로그램화된 사멸 수용체 1(PD-1), 세포독성 T 림프구 항원 4(CTLA-4), B7H1, B7H4, OX-40, CD137, CD40, 및 LAG-3을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.
용어 "억제제" 또는 "길항제"는 주어진 분자(예를 들어, 면역 체크포인트 억제 단백질)의 특정 파라미터(예를 들어, 활성)를 감소시키는 물질을 포함한다. 예를 들어, 이 용어는 주어진 분자의 활성(예를 들어, PD-1 또는 PD-L1 활성)을 적어도 5%, 10%, 20%, 30%, 40% 이상 억제하는 물질을 포함한다. 따라서, 억제 효과는 100%일 필요는 없다.
용어 "디아바디"는 2개의 항원 결합 부위를 갖는 항체 단편을 지칭하며, 상기 단편은 하나의 폴리펩티드 쇄(VH-VL) 내의 경쇄 가변 도메인(VL)에 연결된 중쇄 가변 도메인(VH)을 포함한다. 동일한 쇄에서 2개의 도메인을 페어링하기에는 너무 짧은 링커를 사용함으로써, 도메인은 다른 쇄의 상보성 도메인과 강제로 페어링되어 2개의 항원 결합 부위를 형성한다. 디아바디는 2가 또는 이중특이성일 수 있다. 디아바디는 예를 들어 EP 404,097; WO 1993/01161; Hudson et al., Nat. Med. 9:129-134 (2003); 및 Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:6444-6448 (1993)에 보다 상세히 기재되어 있다. 트리바디 및 테트라바디는 또한 Hudson et al., Nat. Med. 9:129-134 (2003)에 보다 상세히 기재되어 있다.
"기능성 Fc 영역"은 자연 서열의 Fc 영역의 "이펙터 기능"을 갖는다. 예시적인 "이펙터 기능"은 C1q 결합, CDC, Fc 수용체 결합, ADCC, 식세포작용, 세포 표면 수용체(예를 들어, B 세포 수용체, 또는 BCR) 하향 조절 등을 포함한다. 이러한 이펙터 기능은 일반적으로 Fc 영역이 결합 도메인(예를 들어, 항체 가변 도메인)과 회합되는 것을 필요로 하고, 본 출원에 개시된 것들과 같은 다양한 분석을 사용하여 평가될 수 있다.
"이펙터 기능"은 항체 Fc 영역에 기인할 수 있고 항체 이소형에 따라 달라질 수 있는 생물학적 활성을 지칭한다. 항체 이펙터 기능의 예는 C1q 결합 및 보체 의존성 세포독성(CDC), Fc 수용체 결합, 항체 의존성 세포 매개 세포독성(ADCC), 식세포작용, 세포 표면 수용체(예를 들어, B 세포 수용체) 하향 조절, 및 B 세포 활성화를 포함한다.
"인간 이펙터 세포"는 하나 이상의 FcR을 발현하고 이펙터 기능을 실행하는 백혈구를 지칭한다. 특정 실시양태에서, 세포는 적어도 Fc 이펙터를 발현하고 ADCC의 이펙터 기능을 실행한다. 인간 백혈구 매개 ADCC의 예는 말초 혈액 단핵 세포(PBMC), 자연 살해(NK) 세포, 단핵구, 세포독성 T 세포 및 호중구를 포함한다. 이펙터 세포는 혈액과 같은 자연 공급원으로부터 단리될 수 있다.
용어 "유효량"은 단일 또는 다중 용량으로 환자에게 투여된 후 치료 또는 예방을 필요로 하는 환자에서 예상된 효과를 생성하는 본 발명의 항체 또는 단편 또는 접합체 또는 조성물의 양 또는 용량을 지칭한다. 유효량은 다음과 같은 다양한 인자를 고려함으로써 당업자가 주치의에 의해 쉽게 결정될 수 있다: 포유동물과 같은 종; 이의 크기, 연령 및 전반적인 건강; 관련된 특정 질환; 질환의 정도 또는 중증도; 개별 환자에서의 반응; 투여되는 특정 항체; 투여 경로; 투여되는 제제의 생체이용률 특징; 선택된 용량 요법; 및 임의의 동반 요법의 용도.
"치료학적으로 유효한 양"은 원하는 기간 동안 필요한 투여량으로 원하는 치료 결과를 달성하기에 효과적인 양을 지칭한다. 항체 또는 항체 단편, 또는 이의 접합체 또는 조성물의 치료학적으로 유효한 양은 개체의 병적 상태, 연령, 성별 및 체중, 및 개체에서 원하는 반응을 유도하는 항체 또는 항체의 능력과 같은 다양한 인자에 따라 달라질 수 있다. 치료학적으로 유효한 양은 또한 항체 또는 항체 단편, 또는 이의 접합체 또는 조성물의 임의의 독성 또는 바람직하지 않은 효과가 치료적 유익한 효과보다 열등한 양이다. "치료학적으로 유효한 양"은 측정가능한 파라미터(예를 들어, 종양 성장 속도)를 치료되지 않은 대상체에 대해 바람직하게는 적어도 약 20%, 보다 바람직하게는 적어도 약 40%, 보다 더 바람직하게는 적어도 약 50%, 60%, 또는 70%, 보다 더욱 바람직하게는 약 80% 이상 억제한다. 측정 가능한 파라미터(예를 들어, 암)를 억제하는 화합물의 능력은 인간 종양에서의 효능을 예측하는 동물 모델 시스템에서 평가될 수 있다. 임의로, 조성물의 이러한 특성은 화합물의 억제 능력을 검사함으로써 평가될 수 있으며, 이는 당업자에게 공지된 분석에 의해 시험관내 측정될 수 있다.
"예방학적으로 유효한 양"은 원하는 기간 동안 필요한 투여량으로 원하는 예방 결과를 달성하기에 효과적인 양을 지칭한다. 일반적으로, 예방학적으로 유효한 양이 질환의 이전 또는 초기 단계에 대상체에서 투여되기 때문에, 예방학적으로 유효한 양은 치료학적으로 유효한 양보다 적다.
본 발명에 적합한 "항체 및 이의 항원 결합 단편"은 폴리클로날, 모노클로날, 1가, 이중특이성, 이종접합체, 다중특이성, 재조합, 이종, 이종하이브리드, 키메라, 인간화(특히, CDR-이식), 탈면역화, 또는 인간 항체, Fab 단편, Fab' 단편, F (ab')2 단편, Fab 발현 라이브러리로부터 생성된 단편, Fd, Fv, 이황화-절제된 Fv(dsFv), 단일-쇄 항체(예를 들어, scFv); 디아바디 또는 테트라바디(Holliger P. et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90 (14), 6444-6448), 나노바디(단일 도메인 항체로도 지칭됨), 항 이디오타입(항 Id) 항체(예컨대, 본 발명의 항체에 대한 항 Id 항체를 포함함), 및 상기 중 임의의 것의 에피토프 결합 단편을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
"Fab" 단편은 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인을 포함하고, 또한 경쇄의 불변 도메인 및 중쇄의 제1 불변 도메인(CH1)을 포함한다. Fab' 단편은 중쇄 CH1 도메인의 카르복실 말단에 일부 잔기(항체 힌지 영역으로부터의 하나 이상의 시스테인을 포함함)의 첨가로 인해 Fab 단편과 상이하다. Fab'-SH는 불변 도메인의 시스테인 잔기가 유리 티올기를 보유하는 Fab'를 지칭한다. F(ab')2 항체 단편을 Fab' 단편 사이에 힌지 시스테인을 갖는 쌍을 이룬 Fab' 단편으로서 원래 생성시켰다. 항체 단편의 다른 화학적 커플링이 또한 공지되어 있다.
용어 "Fc 영역"은 본 출원에서 불변 영역의 적어도 일부를 포함하는 면역글로불린 중쇄의 C-말단 영역을 정의하기 위해 사용된다. 상기 용어는 자연 서열의 Fc 영역 및 변이 Fc 영역을 포함한다. 특정 실시양태에서, 인간 IgG 중쇄 Fc 영역은 Cys226 또는 Pro230으로부터 중쇄의 카르보닐 말단까지 연장된다. 그러나, Fc 영역의 C-말단 리신(Lys447)은 존재하거나 존재하지 않을 수 있다. 달리 언급되지 않는 한, Fc 영역 또는 불변 영역 내의 아미노산 잔기의 넘버링은 Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991에 의해 기술된 바와 같은 EU 지수로도 불리는 EU 넘버링 시스템에 기초한다.
"가변 영역" 또는 "가변 도메인"이라는 용어는 항원에 대한 항체의 결합에 관여하는 항체의 중쇄 또는 경쇄의 도메인을 지칭한다. 자연 항체의 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인은 종종 유사한 구조를 가지며, 각각의 도메인은 4개의 보존된 프레임워크 영역(FR) 및 3개의 상보성 결정 영역(CDR)을 함유한다. (예를 들어., Kindt et al., Kuby Immunology, 6th Ed., W.H. Freeman and Co. p91 (2007) 참조). 단일 VH 또는 VL 도메인은 항원 결합 특이성을 제공하기에 충분할 수 있다. 또한, 특정 항원에 결합하는 항체로부터의 VH 또는 VL 도메인을 사용하여 항원에 결합하는 항체를 단리하여 각각 상보성 VL 또는 VH 도메인의 라이브러리를 스크리닝할 수 있다. 예를 들어, Portolano et al., J. Immunol., 150:880-887 (1993); Clarkson et al., Nature, 352:624-628 (1991) 참조.
"골격" 또는 "FR"은 상보성 결정 영역(CDR) 잔기 이외의 가변 도메인 잔기를 지칭한다. 가변 도메인의 FR은 일반적으로 4개의 FR 도메인, 즉 FR 1, FR 2 FR 3 및 FR 4로 구성된다. 따라서, CDR 및 FR 서열은 일반적으로 중쇄 가변 도메인(VH) (또는 경쇄 가변 도메인(VL))의 하기 서열에서 나타난다: FR1-HCDR1 (LCDR1)-FR2-HCDR2 (LCDR2)-FR3-HCDR3 (LCDR3)-FR4.
달리 언급되지 않는 한, 항체의 다양한 도메인 내의 잔기의 넘버링은 Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Science Health, Bethesda, MD, 1991에 의해 기술된 바와 같은 EU 지수로도 불리는 EU 넘버링 시스템에 기초한다.
용어 "전장 항체", "전체 항체" 및 "온전한 항체"는 자연 항체 구조와 실질적으로 유사한 구조를 갖는 항체 또는 본 출원에 정의된 바와 같은 Fc 영역을 함유하는 중쇄를 갖는 항체를 지칭하기 위해 본 출원에서 상호교환적으로 사용된다.
"Fv"는 온전한 항원 결합 부위를 함유하는 가장 작은 항체 단편이다. 한 실시양태에서, 이중-쇄 Fv는 하나의 중쇄 가변 도메인 및 하나의 경쇄 가변 도메인으로 구성되고, 이는 치밀하고, 비공유적으로 결합된 이량체이다. 단일-쇄 Fv(scFv)에서, 하나의 중쇄 가변 도메인 및 하나의 경쇄 가변 도메인은 경쇄 및 중쇄가 이중-쇄 유형의 "이량체" 구조와 유사한 구조와 연관될 수 있도록 가요성 펩티드 링커를 통해 공유 결합될 수 있다. 이 구성에서, VH-VL 이량체의 표면 상에 항원 결합 부위를 정의하는 것은 각각의 가변 도메인의 3개의 CDR이다. 요약하면, 6개의 CDR은 항체에 항원 결합 특이성을 부여한다. 그럼에도 불구하고, 단일 가변 도메인(또는 항원에 특이적인 3개의 CDR의 절반 Fv만을 함유함)도, 친화도가 온전한 결합 부위보다 낮지만, 항원을 인식하고 항원에 결합하는 능력을 갖는다. scFv의 검토를 위해, 예를 들어, Pluckthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, Vol. 113, Edited by Rosenburg and Moore, (Springer-Verlag, New York, 1994), 269-315 페이지 참조.
"숙주 세포", "숙주 세포주" 및 "숙주 세포 배양물"이라는 용어는 상호 교환적으로 사용되며, 외인성 핵산이 도입된 세포, 예컨대 이러한 세포의 생성을 지칭한다. 숙주 세포는 "형질전환물질" 및 "형질변환된 세포"를 포함하며, 이는 계대 수에 상관없이 1차 형질전환된 세포 및 그로부터 유도된 세대를 포함한다. 세대는 모 세포와 핵산 함량이 완전히 동일하지 않을 수 있지만, 돌연변이를 포함할 수 있다. 최초 형질전환된 세포로부터 스크리닝되거나 선택된 동일한 기능 또는 생물학적 활성을 갖는 돌연변이 세대가 본 출원에 포함된다.
"인간 항체"는 인간 또는 인간 세포에 의해 생성되거나 인간 항체 라이브러리 또는 다른 인간 항체 암호화 서열을 이용하는 비 인간 공급원으로부터 유래된 항체의 아미노산 서열에 상응하는 아미노산 서열을 갖는 항체를 지칭한다. 인간 항체의 이러한 정의는 비 인간 항원 결합 잔기를 함유하는 인간화된 항체를 명시적으로 배제한다.
"인간 컨센서스 프레임워크"는 인간 면역글로불린 VL 또는 VH 프레임워크 서열의 선택에서 가장 빈번하게 발생하는 아미노산 잔기를 나타내는 프레임워크를 지칭한다. 일반적으로, 인간 면역글로불린 VL 또는 VH 서열의 선택은 가변 도메인 서열의 서브타입으로부터 선택된다. 일반적으로, 상기 서열의 서브타입은 Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, NIH Public Publication 91-3242, Bethesda MD (1991), Volumes 1-3에 개시된 서브타입이다. 한 실시양태에서, VL에 대해, 서브타입은 Kabat et al.에서와 같이 서브타입 카파 I이다. (상기 참조). 한 실시양태에서, VH의 경우, 서브타입은 Kabat et al.에서와 같이 서브타입 III이다. (상기 참조).
"인간화된" 항체는 비 인간 CDR로부터의 아미노산 잔기 및 인간 FR로부터의 아미노산 잔기를 포함하는 키메라 항체를 지칭한다. 일부 실시양태에서, 인간화 항체는 적어도 1개, 전형적으로 2개의 가변 도메인의 실질적으로 전부를 포함할 것이며, 여기서 모든 또는 실질적으로 모든 CDR(예를 들어, CDR)은 비 인간 항체의 CDR에 상응하고, 모든 또는 실질적으로 모든 FR은 인간 항체의 CDR에 상응한다. 인간화 항체는 임의로 인간 항체로부터 유래된 항체 불변 영역의 적어도 일부를 포함할 수 있다. 항체(예를 들어, 비 인간 항체)의 "인간화된 형태"는 인간화된 항체를 지칭한다.
용어 "암" 및 "암성(cancerous)"은 전형적으로 조절되지 않은 세포 성장을 특징으로 하는 포유동물에서의 생리학적 질환을 지칭하거나 기술한다. 암의 예는 암종, 림프종, 모세포종, 육종, 및 백혈병 또는 림프성 악성종양을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 이러한 암의 보다 구체적인 예는 편평 세포 암종(예를 들어, 상피 편평 세포암종), 폐암(소세포 폐암, 비 소 세포 폐암, 폐 선암종 및 폐 편평 세포 암 포함), 복막암, 간세포 암종, 위암(위장암 및 위장관 기질암 포함) 및 췌장암, 교모세포종, 자궁경부암, 난소암, 간암, 방광암, 요로암, 간 종양, 유방암, 결장암, 직장암, 결장직장암, 자궁내막 또는 자궁암, 타액선암, 신장암, 전립선암, 외음부 암, 갑상선암, 폐암, 항문암, 음경암, 흑색종, 표재성 미만성 흑색종, 흑색결장 흑색종, 두경 흑색종, 결절 흑색종, 다발성 골수종 및 B-세포 림프종, 만성 림프구성 백혈병(CLL), 급성 림프아구성 백혈병(ALL), 모발상 세포 백혈병, 만성 골수성 백혈병 및 이식후 림프증식성 장애(PTLD), 뿐만 아니라 임파종증과 관련된 비정상적인 혈관 증식, 부종(예를 들어, 뇌 종양과 관련된 것들), 및 Meigs 증후군, 뇌종양 및 뇌암, 및 두경부 암 및 관련된 전이를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.
용어 "세포 증식성 장애" 및 "증식성 장애"는 특정 정도의 비정상적인 세포 증식과 관련된 장애를 지칭한다. 한 실시양태에서, 세포 증식성 장애는 암을 지칭한다.
용어 "종양"은 악성인지 양성인지에 관계없이 모든 종양 세포 성장 및 증식, 및 모든 전암성 및 암성 세포 및 조직을 지칭한다. "암", "암성", "세포 증식성 장애", "증식성 장애" 및 "종양"이라는 용어는 본 출원에서 언급될 때 상호 배타적이지 않다.
용어 "감염성 질환"은 예를 들어 바이러스 감염, 박테리아 감염, 진균 감염, 또는 기생충 감염과 같은 원생생물을 포함하는 병원체에 의해 유발된 질환을 지칭한다.
용어 "만성 감염"은 감염원(예를 들어, 병원체, 예컨대 바이러스, 박테리아, 원충, 예컨대 기생충, 진균 등)이 감염된 숙주에서 면역 반응을 유도하지만, 급성 감염에서와 같이 숙주로부터 제거되거나 제거되지 않은 감염을 지칭한다. 만성 감염은 지속적, 잠복성이 있거나 느릴 수 있다. 급성 감염은 일반적으로 수일 또는 수주 내에 면역계에 의해 분해되지만(예컨대, 플루), 지속적 감염은 수개월, 수년, 수십년 동안 지속될 수 있거나, 또는 상대적으로 낮은 수준에서의 수명(예컨대 B형 간염)을 지속할 수 있다. 대조적으로, 잠복 감염은 장기간 무증상 활성을 특징으로 하고, 과감염을 빠르게 증가시키고 병원체 수준(예컨대, 단순 포진)을 상승시킴으로써 때때로 중단된다. 마지막으로, 느린 감염은 질병 증상의 점진적이고 연속적인 진행, 예컨대 긴 인큐베이션 기간, 이어서 임상 증상의 개시 후 장기적이고 점진적인 임상 과정을 특징으로 한다. 잠복성 및 지속성 감염과 달리, 만성 감염은 바이러스 증식의 급성기(예를 들어, 피코나바이러스 감염, 비스나 바이러스, 스크래피, 크로이츠펠트-야코브 질환)에서 시작하지 않을 수 있다. 만성 감염을 유도할 수 있는 예시적인 감염성 작용제는 바이러스(예를 들어, 사이토메갈로바이러스, EB 바이러스, B형 간염 바이러스, C형 간염바이러스, 단순 포진 바이러스 유형 I 및 II, 인간 면역결핍 바이러스 유형 1 및 2, 인간 유두종 바이러스, 인간 T 림프구 바이러스 유형1 및 2 및 수두 대상포진 바이러스 등), 박테리아(예를 들어, 마이코박테리움 튜버쿨로시스, 리스테리아 spp., 클레브시엘라 뉴모니애, 스트렙토코커스 뉴모니아, 스타필로코커시 아우레우스, 보렐리아 spp., 헬리코박터 파이로리 등), 기생충과 같은 원생생물(예를 들어, 리슈마니아 spp., 플라스모듐 팔시파럼, 주혈흡충 spp., 톡소플라스마 spp., 트리파노소마 spp., 탈니아 카세이셉스, 등), 및 진균(예를 들어, 아스페르길루스 spp., 칸디다 알비칸스, 콕시디오이데스 임미티스, 히스토플라스마 캅술라텀, 뉴모시스티스 카리니이 등)을 포함한다. 추가의 감염제는 프리온 또는 미스폴딩된 단백질을 포함하며, 이는 이들 조직에서 미스폴링되는 단백질을 추가로 증식시킴으로써 뇌 또는 뉴런 구조에 영향을 미치고, 아밀로이드 플라크의 형성(세포 사멸, 조직 손상, 및 결국 사멸을 야기함)을 유도한다. 프리온 감염에 의해 야기되는 질환의 예는 크로이츠펠트-야코브 질환 및 이의 변종, 게르스트만-스트라우스슬러-셰인커 증후군(GSS), 치사성 가족성 불면증(sFI), 쿠루병, 스크래피, 소해면상 뇌병증(BSE)(이른바 "광우병" 질환), 및 다양한 동물 형태의 다양한 다른 뇌병증[예를 들어, 전염성 밍크 뇌병증(TME), 흰꼬리사슴, 엘크 및 뮬사슴의 만성 소모성 질환(CWD), 고양이 해면상을 포함하는 뇌병증, 나이알라, 오리엑스 및 대형 쿠두의 외래성 뇌병증(EUE) 및 타조의 해면상으로 된 뇌병증]을 포함한다.
"면역접합체"는 세포독성제 또는 표지를 포함하지만 이에 제한되지 않는 하나 이상의 다른 물질에 접합된 항체이다.
본 출원에서 사용된 용어 "표지"는 폴리뉴클레오티드 프로브 또는 항체와 같은 작용제에 직접 또는 간접적으로 접합되거나 융합되고, 접합되거나 융합된 작용제의 검출을 용이하게 하는 화합물 또는 조성물을 지칭한다. 표지 자체는 검출 가능하거나(예를 들어, 방사성 동위원소 표지 또는 형광 표지), 또는 효소 표지의 경우에 검출가능 기질 화합물 또는 조성물의 화학적 변화에 대한 촉매로 작용할 수 있다. 상기 용어는 검출 가능한 물질을 프로브 또는 항체에 커플링(즉, 물리적 연결)시킴으로써 프로브 또는 항체를 직접 표지하는 것 및 직접 표지되는 다른 시약과 반응시킴으로써 프로브 또는 항체의 간접 표지를 포함하는 것으로 의도된다. 간접 표지의 예는 형광 표지된 2차 항체를 사용한 1차 항체의 검출, 및 형광 표지된 스트렙타비딘으로 검출될 수 있도록 하는 바이오티닐화된 DNA 프로브의 말단 표지를 포함한다.
"개체" 또는 "대상체"는 포유동물을 포함한다. 포유동물은 가축(예를 들어, 소, 염소, 고양이, 개 및 말), 영장류(예를 들어, 인간 및 비 인간 영장류, 예컨대 원숭이), 토끼, 및 설치류(예를 들어, 마우스 및 랫트)를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 일부 실시양태에서, 개체 또는 대상체는 인간이다.
"단리된" 항체는 이의 자연 환경의 성분으로부터 분리된 것이다. 일부 실시양태에서, 항체는, 예를 들어 전기영동[예를 들어, SDS-PAGE, 등전 집속(IEF), 모세관 전기영동] 또는 크로마토그래피(예를 들어 이온 교환 또는 역상 HPLC)에 의해 결정 시 95% 또는 99% 이상의 순도로 정제된다. 항체 순도를 평가하기 위한 방법의 검토를 위해, 예를 들어, Flatman et al., J. Chromatogr., B848:79-87 (2007) 참조.
"단리된" 핵산은 이의 자연 환경의 성분으로부터 분리된 핵산 분자를 지칭한다. 단리된 핵산은 정상적으로 핵산 분자를 함유하지만 염색체외로 또는 이의 자연 염색체 위치와 상이한 염색체 위치에 존재하는 세포에 함유된 핵산 분자를 포함한다.
"항 LAG-3 항체 또는 이의 단편을 인코딩하는 단리된 핵산"은 단일 벡터 또는 개별 벡터 내의 이러한 핵산 분자, 및 숙주 세포 내의 하나 이상의 위치에 존재하는 이러한 핵산 분자를 포함하는 항체 중쇄 또는 경쇄(또는 이의 단편)를 암호화하는 하나 이상의 핵산 분자를 지칭한다.
용어 "핵산", "핵산 서열", "뉴클레오티드 서열" 또는 "폴리뉴클레오티드 서열" 및 "폴리뉴클레오티드"는 상호교환적으로 사용된다. 이들은 중합체 형태 또는 이의 유사체에서 임의의 길이의 뉴클레오티드(데옥시리보뉴클레오티드 또는 리보뉴클레오티드)를 지칭한다. 폴리뉴클레오티드는 단일 가닥 또는 이중 가닥일 수 있고, 단일 가닥인 경우, 암호화 또는 비암호화(안티센스) 가닥일 수도 있다. 폴리뉴클레오티드는 변형된 뉴클레오티드, 예컨대 메틸화된 뉴클레오티드 및 뉴클레오티드 유사체를 포함할 수 있다. 뉴클레오티드 서열은 비 뉴클레오티드 성분에 의해 중단될 수 있다. 폴리뉴클레오티드는 중합 후에, 예를 들어 표지 성분과의 접합에 의해 추가로 변형될 수 있다. 핵산은 재조합 폴리뉴클레오티드 또는 자연적으로 존재하지 않거나, 또는 게놈 공급원, cDNA 공급원, 반합성 공급원 또는 합성 공급원으로부터의 또 다른 폴리뉴클레오티드에 비자연 레이아웃으로 연결된 폴리뉴클레오티드일 수 있다.
용어 "폴리펩티드", "펩티드" 및 "단백질"(단일 쇄인 경우)은 본 출원에서 상호교환적으로 사용되며, 임의의 길이의 아미노산 중합체를 지칭한다. 중합체는 선형 또는 분지형일 수 있고, 변형된 아미노산을 포함할 수 있으며, 비 아미노산에 의해 중단될 수 있다. 상기 용어는 또한 변형된 아미노산 중합체(예를 들어, 이황화 결합의 형성, 글리코실화, 지질화, 아세틸화, 인산화, 또는 임의의 다른 조작, 예컨대 표지 성분과의 접합)를 포함한다. 폴리펩티드는 자연 공급원으로부터 단리될 수 있고, 재조합 기술을 통해 진핵 또는 원핵 숙주로부터 제조될 수 있으며, 합성 방법의 생성물일 수 있다.
서열간 서열 동일성의 산출은 이하와 같이 진행된다.
2개의 아미노산 서열 또는 2개의 핵산 서열의 동일성 퍼센트를 결정하기 위해, 서열들은 최적의 비교 목적을 위해 정렬된다(예를 들어, 최적의 정렬을 위해, 갭은 제1 및 제2 아미노산 서열, 또는 핵산 서열 중 하나 또는 둘 모두에 도입될 수 있거나, 또는 비 상동성 서열은 비교 목적을 위하여 폐기될 수 있다). 한 바람직한 실시양태에서, 비교 목적을 위해, 정렬된 기준 서열의 길이는 기준 서열의 길이의 30% 이상, 바람직하게는 40% 이상, 보다 바람직하게는 50% 이상, 60% 이상, 및 보다 더 바람직하게는 70%, 80%, 90%, 100% 이상이다. 이어서, 상응하는 아미노산 위치 또는 뉴클레오티드 위치에서의 아미노산 잔기 또는 뉴클레오티드를 비교한다. 제1 서열 내의 위치가 제2 서열 내의 상응하는 위치에서 동일한 아미노산 잔기 또는 뉴클레오티드에 의해 점유될 때, 분자는 이 위치에서 동일하다.
수학 알고리즘을 사용하여 서열 비교 및 두 서열 사이의 퍼센트 동일성의 계산을 달성할 수 있다. 한 바람직한 실시양태에서, 2개의 아미노산 서열 사이의 퍼센트 동일성은 Blossom 62 매트릭스 또는 PAM250 매트릭스 및 16, 14, 12, 10, 8, 6, 또는 4의 갭 가중치 및 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6의 길이 가중치를 사용하여 GCG 소프트웨어 패키지의 GAP 프로그램에 통합된 Needlema and Wunsch [(1970) J.Mol. Biol., 48:444-453] 알고리즘(http://www.gcg.com에서 확인 가능)을 사용하여 결정되었다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 2개의 뉴클레오티드 산 서열 사이의 퍼센트 동일성은 NWSgapdna.CMP 매트릭스 및 40, 50, 60, 70 또는 80의 갭 중량 및 1, 2, 3, 4, 5 또는 6의 길이 중량을 사용하여 GCG 소프트웨어 패키지의 GAP 프로그램(http://www.gcg.com에서 확인 가능)으로 결정된다. 특히 바람직한 파라미터 세트(및 달리 언급되지 않는 한 사용되어야 하는 파라미터 세트)는 12의 갭 페널티, 4의 갭 연장 패널티, 및 5의 프레임시프트 갭 패널티를 갖는 Blossom 62 스코어링 매트릭스이다.
2개의 아미노산 서열 또는 뉴클레오티드 서열 사이의 퍼센트 동일성은 또한 정렬 프로그램(버전 2.0)((1989) CABIOS, 4:11-17)에 혼입된 E. Meyers 및 W. Miller 알고리즘을 사용하여 PAM120 가중 나머지 표, 12의 갭 길이 페널티 및 4의 갭 패널티로 결정될 수 있다.
추가적으로 또는 대안적으로, 본 출원에 기재된 핵산 서열 및 단백질 서열은 예를 들어 다른 패밀리 구성원 서열 또는 관련 서열을 확인하기 위해 공개 데이터베이스에 대한 검색을 수행하기 위해 "질의 서열"로서 추가로 사용될 수 있다. 예를 들어, 이러한 검색은 Altschul et al., (1990) J.Mol. Biol., 215:403-10.의 NBLAST 및 XBLAST 프로그램으로 수행될 수 있다. BLAST 뉴클레오티드 검색은 본 발명의 핵산 분자에 상동성인 뉴클레오티드 서열을 얻기 위해 NBLAST 프로그램, 스코어 = 100, 워드 길이 = 12로 수행될 수 있다. BLAST 단백질 탐색은 본 발명의 단백질 분자에 상동성인 아미노산 서열을 얻기 위해 XBLAST 프로그램, 스코어 = 50, 워드 길이 = 3으로 수행될 수 있다. 비교 목적을 위해 갭형 정렬 결과를 얻기 위해, 갭형 BLAST가 Altschul et al. (1997) Nucleic Acids Res. 25:3389-3402.에 기재된 바와 같이 사용될 수 있다. BLAST 및 갭형 BLAST 프로그램을 사용할 때, 각각의 프로그램(예를 들어, XBLAST 및 NBLAST)의 기본 파라미터가 사용될 수 있다. http://www.ncbi.nlm.nih.gov 참조.
본 출원에서 사용된 용어 "낮은 엄격도, 중간 엄격도, 높은 엄격도 또는 극단적인 엄격도의 조건 하에서의 혼성화"는 혼성화 및 세척 조건을 기술한다. 혼성화 반응을 수행하기 위한 지시 사항은 참조로 포함된 Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, N.Y. (1989), 6.3.1-6.3.6에서 발견될 수 있다. 수성 및 비 수성 방법이 참조문헌에 기재되어 있고, 어떠한 방법도 사용될 수 있다. 본 출원에 언급된 특이적 혼성화 조건은 하기와 같다: 1) 낮은 엄격성 혼성화 조건은 약 45℃의 6 X 염화나트륨/시트르산나트륨(SSC)에 있고, 이어서 최소 50℃의 0.2 X SSC, 0.1% SDS에서 2회 세척되고(낮은 엄격성 조건의 경우, 세척 온도는 55℃로 증가될 수 있음); 2) 중간 엄격성 혼성화 조건은 약 45℃에서 6 X SSC에 있고, 이어서 약 60℃의 0.2 X SSC, 0.1% SDS에서 1회 이상 세척되고; 3) 높은 엄격성 혼성화 조건은 약 45℃에서는 6 X SSC에 있고, 이어서 65℃의 0.2 X SSC, 0.1% SDS에서 1회 이상 세척되며; 바람직하게는 4) 극한 엄격성 혼성화 조건은 0.5M 인산나트륨에 있고/있거나 65℃에서는 7% SDS에 있으며; 이어서 65℃의 0.2 X SSC, 0.1% SDS에서 1회 이상의 세척한다. 극단적인 엄격한 조건 (4)는 바람직한 조건이며, 달리 언급되지 않는 한 사용되어야 하는 조건이다.
용어 "제약 조성물"은 그 안에 함유된 활성 성분의 생물학적 활성이 효과적이도록 하는 형태로 존재하고, 조성물이 투여되는 대상체에 허용되지 않는 독성을 갖는 추가의 성분을 함유하지 않는 조성물을 지칭한다.
용어 "약제학적 보충 물질"은 활성 물질과 공동투여되는 희석제, 보조제(예를 들어, 프로인트 보조제(완전 및 불완전)), 담체, 부형제 또는 안정화제 등을 지칭한다.
본 출원에서 사용되는 "치료"(또는 "치료하다" 또는 "치료하는")는 기존의 증상, 장애, 병태 또는 질환의 진행 또는 중증도를 늦추거나, 중단하거나, 저지하거나, 완화시키거나, 중단시키거나, 감소시키거나, 역전시키는 것을 지칭한다.
본 출원에서 사용된 "예방"(또는 "예방하다" 또는 "예방하는")은 질환 또는 장애의 발병 또는 진행 또는 특정 질환 또는 장애 증상의 억제를 포함한다. 일부 실시양태에서, 암의 가족력을 갖는 대상체는 예방 요법의 후보이다. 일반적으로, 암의 맥락에서, 용어 "예방"은 암의 징후 또는 증상의 개시 전에, 특히 암의 위험이 있는 대상체에서의 약물의 투여를 지칭한다.
용어 "항감염제"는 바이러스, 박테리아, 진균 또는 원생생물, 예를 들어 기생충과 같은 미생물의 성장을 특이적으로 억제하거나 제거하는 임의의 분자를 포함하고, 투여 농도 및 투여 간격에서 숙주에 치명적이지 않다. 본 출원에서 사용되는 용어 항감염제는 항생제, 항균제, 항바이러스제, 항진균제 및 항원충제를 포함한다. 한 특정 양태에서, 항감염제는 투여 농도 및 투여 간격으로 숙주에 대하여 비독성이다.
항감염제 또는 항균제는 살균(즉, 직접 사멸) 또는 정균(즉, 분할 방지)으로 광범위하게 분류될 수 있다. 항균 항감염제는 좁은 스펙트럼의 항균제(즉, 그람 음성 등과 같은 제한된 박테리아 아형에만 영향을 미침) 또는 넓은 스펙트럼의 항균제(즉, 광범위한 종에 영향을 미침)로 더 분류될 수 있다. 그 예로서 아미카신, 겐타마이신, 겔다나마이신, 허비마이신, 무피로신, 푸란토인, 피라진아미드, 퀴누프리스틴/달포프리스틴, 리팜피신/리팜핀, 이소니아지드 및 피라진 아미드 정제, 또는 티니다졸을 포함한다.
용어 "항바이러스"는 바이러스의 성장, 병원성, 및/또는 생존을 억제하거나 제거하는 임의의 물질을 포함한다. 이는 예를 들어, 아시클로비르, 시도포비르, 지도부딘, 디다노신(ddI, VIDEX), 잘시타빈(ddC, HIVID), 스타부딘(d4T, 제리트), 라미부딘(3TC, 에피비르), 아바카비르(지아겐), 엠트리시타빈(엠트리바) 등을 포함한다.
용어 "항진균"은 진균의 성장, 병원성, 및/또는 생존을 억제 또는 제거하는 임의의 물질을 포함한다. 이는, 예를 들어, 나타마이신, 리모시딘, 필리핀, 니스타틴, 암포테리신 B, 칸디신, 파포일리, 님(neem) 종자유, 코코넛유 등을 포함한다.
용어 "항원충제"는 원생생물 유기체(예를 들어, 기생충)의 성장, 병원성 및/또는 생존을 억제 또는 제거하는 임의의 물질을 포함한다. 항원충제의 예는 퀴닌, 퀴니딘 등과 같은 항말라리아제를 포함한다.
예시적인 항박테리아제, 항바이러스제, 항진균제 및 항원충제에 대해, 예를 들어, WO2010/077634 등을 참조한다. 항감염제의 경우, 또한 예를 들어, WO2014/008218, WO 2016/028672 또는 WO 2015/138920을 참조한다.
본 출원에서 사용된 용어 "벡터"는 그것이 연결된 다른 핵산을 증식시킬 수 있는 핵산 분자를 지칭한다. 상기 용어는 자가 복제 핵산 구조로서 작용하는 벡터뿐만 아니라 이들이 도입된 숙주 세포의 게놈에 결합하는 벡터를 포함한다. 일부 벡터는 작동 가능하게 연결된 핵산의 발현을 지시할 수 있다. 이러한 벡터는 본 출원에서 "발현 벡터"로 지칭된다.
"대상체/환자 샘플"은 환자 또는 대상체로부터 수득된 세포 또는 유체의 수집물을 지칭한다. 조직 또는 세포 샘플의 공급원은, 예를 들어 신선하고, 동결되고/거나 보존된 장기 또는 조직 샘플 또는 생검 샘플 또는 천자 샘플로부터의 고체 조직; 혈액 또는 임의의 혈액 성분; 뇌척수액, 양수, 복막액, 또는 간질액과 같은 체액; 임신 또는 발생 동안 임의의 시점에서 대상체로부터의 세포일 수 있다. 조직 샘플은 조직과 자연적으로 혼합되지 않는 화합물, 예컨대 보존제, 항응고제, 완충제, 고정제, 영양소, 항생제 등을 포함할 수 있다. 종양 샘플의 예는 종양 생검, 미세 바늘 흡인물, 기관지 세척액, 흉막액, 모세포, 소변, 수술 표본, 순환 종양 세포, 혈청, 혈장, 순환 혈장 단백질, 복수, 종양으로부터 유도되거나 종양-유사 특성을 나타내는 일차 세포 배양물 또는 세포주, 및 보존된 종양 샘플, 예컨대 포르말린-고정된 파라핀-매립된 종양 샘플들 또는 동결된 종양 샘플들을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.
용어 "패키지 삽입물"은 치료제의 상업적 패키지에 일반적으로 포함된 지침서를 지칭하는데 사용되며, 이는 이러한 치료제의 적용과 관련된 징후, 사용, 용량, 투여, 병용 요법, 금기 및/또는 경고에 관한 정보를 포함한다.
본 발명의 항체
따라서, 일부 실시양태에서, 본 발명의 항체 또는 이의 단편은 LAG-3에 결합한다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 항체 또는 이의 단편은 포유동물 LAG-3, 예컨대 인간 LAG-3 또는 마우스 LAG-3에 결합한다. 예를 들어, 항체 분자는 LAG-3의 에피토프(예를 들어, 선형 또는 입체형태적 에피토프)에 특이적으로 결합한다. 일부 실시양태에서, 항체 분자는 LAG-3의 하나 이상의 세포외 Ig-유사 도메인(예를 들어, LAG-3의 제1, 제2, 제3 또는 제4 세포외 Ig-유사 도메인)에 결합한다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항 LAG-3 항체 또는 이의 단편은 하기 특성 중 하나 이상을 갖는다:
(1) 본 발명의 항 LAG-3 항체 또는 이의 단편은 높은 친화도로 LAG-3(예를 들어, 인간 LAG-3)에 결합하며, 예를 들어 약 100nM 이하, 바람직하게는 약 50nM 이하, 특히 바람직하게는 약 20nM 이하, 보다 바람직하게는 약 10nM, 9nM, 8nM, 7nM, 6nM, 5nM, 4nM, 3nM, 또는 2nM 이하, 가장 바람직하게는 약 1nM, 0.9nM, 0.8nM, 및 0.7nM 이하의 평형 해리상수(KD)로 LAG-3에 결합한다. 일부 실시양태에서, 본 출원에 개시된 항 LAG-3 항체는 0.1-20nM, 바람직하게는 0.5-20nM, 더욱 바람직하게는 0.5-10nM, 0.5-8nM, 또는 0.5-5nM, 가장 바람직하게는 0.5-1nM, 0.5-0.8nM, 0.5-0.7nM, 또는 0.6-0.7nM의 KD로 LAG-3에 결합한다. 일부 실시양태에서, LAG-3은 인간 LAG-3이다. 일부 실시양태에서, LAG-3은 마우스 LAG-3이다. 일부 실시양태에서, 항체 결합 친화도는 생물학적 광학 간섭법(예를 들어, 포테바이오 친화도 분석)을 사용하여 결정된다.
(2) 본 발명의 항체 또는 이의 단편은 인간 LAG-3을 발현하는 세포, 예를 들어 약 3.3nM, 3nM, 2nM, 1.5nM, 1.4nM, 1.3nM, 1.2nM, 1.1nM, 1nM, 0.9nM, 0.8nM, 0.7nM, 0.6nM 또는 0.5nM 이하의 EC50으로 결합한다. 일부 실시양태에서, 결합은 유세포 분석법(예를 들어, FACS)을 사용하여 측정된다. 일부 실시양태에서, 인간 LAG-3을 발현하는 세포는 인간 LAG-3을 발현시키는 293 세포(예를 들어, HEK293 세포)이다.
(3) 본 발명의 항체 또는 이의 단편은 마우스 LAG-3을 발현하는 세포에, 예를 들어 약 15000nM, 14000nM 또는 13000nM 이하의 EC50으로 결합한다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 항체 또는 이의 단편은 예를 들어 약 50nM 이하의 EC50, 예를 들어 약 40-50nM, 약 40-45nM, 또는 약 42nM의 EC50 마우스 LAG-3을 발현하는 세포와 결합한다. 일부 실시양태에서, 결합은 유세포 분석법(예를 들어, FACS)을 사용하여 측정된다. 일부 실시양태에서, 마우스 LAG-3을 발현하는 세포는 마우스 LAG-3을 발현시키는 중국 햄스터 난소(CHO) 세포이다.
(4) 본 발명의 항체 또는 이의 단편은 LAG-3의 관련 활성, 예를 들어 약 20nM, 10nM, 9nM, 8nM, 7nM, 6nM 또는 5nM 이하의 IC50, 바람직하게는 약 1-6nM, 1-5nM, 4nM, 4.5nM, 5nM, 5.1nM, 5.2nM, 5.3nM, 5.4nM, 5.5nM, 5.6nM, 5.7nM, 5.8nM, 5.9nM 또는 6nM의 IC50을 억제한다. 일부 실시양태에서, LAG-3의 관련 활성은 MHC 클래스 II 분자의 LAG-3과의 결합을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 항체 또는 이의 단편은 약 20nM, 10nM, 9nM, 8nM, 7nM, 6nM, 또는 5nM 이하의 IC50, 바람직하게는 약 1-6nM, 1-5nM, 4nM, 4.5nM, 5nM, 5.1nM, 5.2nM, 5.3nM, 5.4nM, 5.5nM, 5.6nM, 5.7nM, 5.8nM, 5.9nM, 및 6nM의 IC50)을 갖는 MHC 클래스 II 분자를 발현하는 세포 상의 MHC 클래스 II 분자에 대한 LAG-3의 결합을 억제한다. 일부 실시양태에서, MHC 클래스 II 분자는 HLA-DR이다. 일부 실시양태에서, 세포는 CHO 세포이다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 항체 또는 이의 단편에 의한 LAG-3의 관련 활성의 억제는 유세포 분석법(예를 들어, FACS)을 사용하여 측정된다.
(5) 본 발명의 항체 또는 이의 단편은 활성화된 CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포의 표면 상의 내인성 LAG-3에, 예를 들어, 약 35pM, 30pM , 25pM, 20pM, 15pM, 14pM, 또는 13pM 이하의 EC50, 바람직하게는 약 1-20pM, 5-20pM, 5-15pM, 10-15pM, 11-13pM, 10pM, 11pM, 12pM 또는 13pM 이하의 EC50에 결합한다. 일부 실시양태에서, 활성화된 CD4+ T 세포는 활성화된 인간 CD4+T 세포이다. 일부 실시양태에서, 결합은 유세포 분석법(예를 들어, FACS)에 의해 결정된다. 일부 실시양태에서, 유세포분석은 Accuri C6 시스템에서 수행된다.
(6) 본 발명의 항체 또는 이의 단편은 LAG-3의 하나 이상의 활성을 억제하며, 예를 들어 하기 중 하나 이상을 야기시킨다: CD4+ T 림프구의 증가된 항원 의존성 자극; 증가된 T 세포 증식; 활성화 항원(예를 들어, CD25)의 증가된 발현; 사이토카인(예를 들어, 인터페론-γ(IFN-γ), 인터류킨-2(IL-2), 또는 인터류킨-4(IL-4))의 증가 발현; 케모카인(예를 들어, CCL3, CCL4, 또는 CCL5)의 증가 발현을 억제함; 조절 T 세포의 감소된 억제 활성; 증가된 T-세포 항상성; 증가된 종양-침윤 림프구; 또는 암 세포의 감소된 면역 회피.
(7) 본 발명의 항 LAG-3 항체 또는 이의 단편은 항체 의존성 세포 매개 세포독성(ADCC)을 유도할 수 있다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항 LAG-3 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 하기 특성 중 하나 이상을 갖는다:
(i) 본 발명의 항체(예를 들어, 표 3에 열거된 항체 중 임의의 것)와 비교하여 LAG-3에 대해 동일하거나 유사한 결합 친화성 및/또는 특이성을 나타내는 특성;
(ii) 본 발명의 항체(예를 들어, 표 3에 열거된 항체 중 임의의 것)의 LAG-3에 대한 결합을 억제(예를 들어, 경쟁적으로 억제)하는 특성;
(iii) 본 발명의 항체(예를 들어, 표 3에 열거된 항체 중 임의의 것)와 동일하거나 중첩하는 에피토프에 결합하는 특성;
(iv) LAG-3에 대한 결합에 대해 본 발명의 항체(예를 들어, 표 3에 열거된 항체 중 임의의 것)와 경쟁하는 특성;
(v) 본 발명의 항체(예를 들어, 표 3에 열거된 항체 중 임의의 것)의 하나 이상의 생물학적 특징을 갖는 특성.
예시 항체
일부 실시양태에서, 본 발명의 항 LAG-3 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 중쇄 가변 영역(VH)을 포함하며, 여기서 VH는 하기를 포함한다:
(i) 표 B에 열거된 항체들 중 임의의 항체의 VH에 함유된 3개의 상보성 결정 영역(CDR), 또는
(ii) (i)의 서열과 비교하여, 3개의 CDR 영역 내의 총 1개 이상 5개, 4개, 3개, 2개 또는 1개 이하의 아미노산 교대(바람직하게는 아미노산 치환, 바람직하게는 보존적 치환)를 포함하는 서열.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항 LAG-3 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하며, 여기서 VL은 하기를 포함한다:
(i) 표 B에 열거된 항체들 중 어느 하나의 VL에 포함된 3개의 상보성 결정 영역(CDR), 또는
(ii) (i)의 서열과 비교하여, 3개의 CDR 영역 내의 총 1개 이상 5개, 4개, 3개, 2개 또는 1개 이하의 아미노산 교대(바람직하게는 아미노산 치환, 바람직하게는 보존적 치환)를 포함하는 서열.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항 LAG-3 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 중쇄 가변 영역 VH 및/또는 경쇄 가변 영역 VL을 포함하며, 여기서
(a) 상기 VH는 하기를 포함한다:
(i) 표 B에 열거된 항체들 중 임의의 항체의 VH에 함유된 3개의 상보성 결정 영역(CDR), 또는
(ii) (i)의 서열과 비교하여, 3개의 CDR 영역 내의 총 1개 이상 5개, 4개, 3개, 2개 또는 1개 이하의 아미노산 교대(바람직하게는 아미노산 치환, 바람직하게는 보존적 치환)를 포함하는 서열; 및/또는
(b) 상기 VL은 하기를 포함한다:
(i) 표 B에 열거된 항체들 중 어느 하나의 VL에 포함된 3개의 상보성 결정 영역(CDR), 또는
(ii) (i)의 서열과 비교하여, 3개의 CDR 영역 내의 총 1개 이상 5개, 4개, 3개, 2개 또는 1개 이하의 아미노산 교대(바람직하게는 아미노산 치환, 바람직하게는 보존적 치환)를 포함하는 서열.
바람직한 실시양태에서, VH는 서열 번호 22, 23, 24 및 25로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
바람직한 실시양태에서, VL은 서열 번호 26, 27, 28 및 29로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하거나 구성된다.
바람직한 실시양태에서, 본 발명의 항 LAG-3 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 하기를 포함한다:
서열 번호 22, 23, 24, 또는 25에 기재된 중쇄 가변 영역의 3개의 상보성 결정 영역(HCDR), 및 서열 번호 26, 27, 28 또는 29에 기재된 경쇄 가변 영역의 3개의 상보성 결정 영역(LCDR).
일부 실시양태에서, 본 발명의 항 LAG-3 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 중쇄 가변 영역(VH) 및/또는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하며, 여기서
(i) 상기 VH는 상보성 결정 영역(CDR) HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하거나 이로 구성되며, 여기서 상기 HCDR 1은 서열 번호 1, 2, 3, 4 및 17로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 또는 상기 HCDR 1은 상기 서열 번호 1, 2, 3, 4 내지 17로부터 선택되는 아미노산 서열과 비교하여 1개, 2개 또는 3개의 변경(바람직하게는 아미노산 치환, 및 바람직하게는 보존적 치환)을 갖는 아미노산 서열을 포함하고; 상기 HCDR 2는 서열 번호 5, 6, 7 및 18로부터 선택되는 아미노산을 포함하거나 이로 구성되고, 또는 HCDR 2은 서열 번호 5, 6, 7 및 18으로부터 선택되는 아미노산 서열에 비하여 1개 또는 2개 내지 3개의 변형(바람직하게는, 아미노산 치환 및 바람직하게는 보존적 치환)를 갖는 아미노산 서열을 포함하고; 상기 HCDR3은 서열 번호 8, 9, 10 및 19로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되거나, HCDR3은 서열 번호 8, 9, 10 및 19으로부터 선택된 아미노산 서열과 비교하여 1, 2 또는 3개의 변경(바람직하게는 아미노산 치환, 및 바람직하게는 보존적 치환)을 갖는 아미노산 서열을 포함하고;
및/또는
(ii) VL은 상보성 결정 영역(CDR) LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하거나 이들로 구성되고, 여기서 LCDR1은 서열 번호 11, 12 및 20으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 구성되고, 또는 LCDR1는 서열 번호 11, 12 및 20으로부터 선택된 아미노산 서열과 비교하여 1, 2 또는 3개의 변경(바람직하게는 아미노산 치환, 바람직하게는 보존적 치환)을 갖는 아미노산 서열을 포함하고; LCDR2는 서열 번호 13으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하거나 이것으로 구성되고, 또는 LCDR2는 서열 번호 13으로부터 선택된 아미노산 서열과 비교하여, 1, 2, 또는 3개의 변경(바람직하게는 아미노산 치환, 바람직하게는 보존적 치환)을 갖는 아미노산 서열을 포함하고; LCDR3은 서열 번호 14, 15, 16 및 21로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하거나 이것으로 구성되고, 또는 LCDR3은 서열 번호 14, 15, 16 및 21로부터 선택되는 아미노산 서열과 비교하여 1, 2 또는 3개의 변경(바람직하게는 아미노산 치환, 및 바람직하게는 보존적 치환)을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
바람직한 실시양태에서, 본 발명은 중쇄 가변 영역(VH) 및/또는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는 항 LAG-3 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제공하며, 여기서
(a) 상기 VH는 하기를 포함한다:
(i) 표 A에 나타낸 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3의 조합; 또는
(ii) 3개의 CDR 영역에서 총 적어도 1개 및 5개, 4개, 3개, 2개 또는 1개 이하의 아미노산 변경(바람직하게는 아미노산 치환, 및 바람직하게는 보존적 치환)을 포함하는, (i)의 HCDR 조합의 변이체;
및/또는
(b) 상기 VL은 하기를 포함한다:
(i) 표 A에 나타낸 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3의 조합; 또는
(ii) 상기 (I)의 LCDR 조합의 변이체로서, 상기 3개의 CDR 영역 내의 총 적어도 1개 및 5, 4, 3, 2 또는 1개 이하의 아미노산 변경(바람직하게는 아미노산 치환, 및 바람직하게는 보존적 치환)을 포함하는, 상기 LCDR 조합의 변이체.
바람직한 실시양태에서, 본 발명은 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는 항 LAG-3 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제공하며, 여기서 VH는 상보성 결정 영역(CDR) HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하고; VL은 상보성 결정 영역(CDR) LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하며; 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 함유된 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3의 조합이 하기 표(표 A)에 표시되어 있다.
표 A: 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편에서 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3의 예시적인 조합
Figure pct00002
일부 실시양태에서, 본 발명의 항 LAG-3 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 중쇄 가변 영역 VH 및/또는 경쇄 가변 영역 VL을 포함하며, 여기서
(a) 중쇄 가변 영역 VH
(i) 서열 번호 22, 23, 24 및 25로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고; 또는
(ii) 서열 번호 22, 23, 24 및 25로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고; 또는
(iii) 서열 번호 22, 23, 24 및 25로부터 선택된 아미노산 서열과 비교하여 1개 이상(바람직하게는 10개 이하, 더욱 바람직하게는 5, 4, 3, 2 또는 1개 이하)의 아미노산 변화(바람직하게는 아미노산 치환, 더욱 바람직하게 아미노산 보존적 치환)를 갖는 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 바람직하게는, 아미노산 변화는 CDR에서 발생하지 않고;
및/또는
(b) 경쇄 가변 영역 VL
(i) 서열 번호 26, 27, 28 및 29로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고;
(ii) 서열 번호 26, 27, 28 및 29로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고; 또는
(iii) 서열 번호 26, 27, 28 및 29로부터 선택된 아미노산 서열과 비교하여 1개 이상(바람직하게는 10개 이하, 더욱 바람직하게는 5개, 4개, 3개, 2개 또는 1개 이하)의 아미노산 변화(바람직하게는 아미노산 치환, 더욱 바람직하게 아미노산 보존적 치환)를 갖는 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 바람직하게는 아미노산 변화는 CDR에서 발생하지 않는다.
바람직한 실시양태에서, 본 발명은 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는 항 LAG-3 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제공하며, 여기서 항체 또는 이의 항원 결합된 단편에 함유된 중쇄 가변 영역의 조합 VH 및 경쇄 변수 영역 VL은 하기 표(표 B)에 나타나 있다.
표 B: 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편에서 중쇄 가변 영역 VH 및 경쇄 가변 영역 VL의 예시적인 조합
Figure pct00003
일부 실시양태에서, 본 발명의 항 LAG-3 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 중쇄 및/또는 경쇄를 포함하며, 여기서
(a) 중쇄
(i) 서열 번호 30, 31, 32 및 33으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고;
(ii) 서열 번호 30, 31, 32 및 33로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고; 또는
(iii) 서열 번호 30, 31, 32 및 33으로부터 선택된 아미노산 서열과 비교하여 1개 이상(바람직하게는 20 또는 10 이하, 더욱 바람직하게는 5, 4, 3, 2 또는 1개 이하)의 아미노산 변화(바람직하게는 아미노산 치환, 더욱 바람직하게 아미노산 보존적 치환)를 갖는 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 바람직하게는, 아미노산 변화는 중쇄의 CDR에서 발생하지 않고, 더욱 더 바람직하게는 아미노산 변화가 중쇄 가변 영역에서 발생하지 않으며;
및/또는
(b) 경쇄
(i) 서열 번호 34, 35, 36 및 37으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고;
(ii) 서열 번호 34, 35, 36 및 37로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고; 또는
(iii) 서열 번호 34, 35, 36 및 37로부터 선택되는 아미노산 서열에 대하여, 1개 이상(바람직하게는 20 또는 10 이하, 보다 바람직하게는 5, 4, 3, 2 또는 1개 이하)의 아미노산 변이(바람직하게는 아미노산 치환, 보다 바람직하게는 아미노산 보존적 치환)를 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 바람직하게는, 상기 아미노산 변이는 경쇄의 CDR에 발생하지 않고, 보다 더 바람직하게는, 아미노산 변이가 경쇄 가변 영역에 발생하지 않는다.
바람직한 실시양태에서, 본 발명은 중쇄 및 경쇄를 포함하는 항 LAG-3 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제공하며, 여기서 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 함유된 중쇄 및 중쇄의 조합은 하기 표(표 C)에 나타나 있다.
표 C: 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편에서 중쇄 및 경쇄의 예시적인 조합
Figure pct00004
일부 실시양태에서, 본 출원에 개시된 항 LAG-3 항체 또는 이의 단편의 중쇄 및/또는 경쇄는 신호 펩티드 서열, 예컨대 METDTLLLWVLLLWVPGSTG(서열 48)을 추가로 포함한다.
본 발명의 한 실시양태에서, 본 출원에 기재된 아미노산 변형은 아미노산 치환, 삽입 또는 결실을 포함한다. 바람직하게는, 본 출원에 기재된 아미노산 변형은 아미노산 치환, 바람직하게는 보존적 치환이다.
바람직한 실시양태에서, 본 출원에 기재된 아미노산 변화는 CDR 이외의 영역(예를 들어, FR)에서 일어난다. 보다 바람직하게는, 본 출원에 기재된 아미노산 변화는 중쇄 가변 영역 외부 및/또는 경쇄 가변 영역 외부의 영역에서 일어난다.
임의로, 본 발명의 항 LAG-3 항체는 경쇄 가변 영역, 중쇄 가변 영역 또는 경쇄에 대한 번역후 변형을 포함한다. 예시적인 번역 후 변형은 디술피드 결합 형성, 글리코실화, 지질화, 아세틸화, 인산화, 또는 임의의 다른 조작, 예컨대 표지 성분과의 접합을 포함한다.
일부 실시양태에서, 치환은 보존적 치환이다. 보존적 치환은 동일한 부류의 또 다른 아미노산에 의한 아미노산의 치환, 예를 들어, 또 다른 산성 아미노산에 의해 산성 아미노산을 치환하거나, 또 하나의 염기성 아미노산으로 염기성 아미노산을 치환시키거나, 또는 또 다른 중성 아미노산으로 중성 아미노산을 치환하는 것을 지칭한다. 예시적인 치환이 하기 표 D에 나타나 있다.
표 D
Figure pct00005
특정 실시양태에서, 본 출원에 제공된 항체는 항체가 글리코실화되는 정도를 증가 또는 감소시키도록 변경된다. 항체에 대한 글리코실화 부위의 부가 또는 결실은 하나 이상의 글리코실화 부위가 생성되거나 제거되도록 아미노산 서열을 변경함으로써 편리하게 달성될 수 있다.
예를 들어, 하나 이상의 아미노산 치환은 하나 이상의 가변 영역 프레임워크 글리코실화 부위를 제거하기 위해 수행될 수 있고, 이에 의해 그 부위에서 글리코실화를 제거한다. 이러한 당화는 항원에 대한 항체의 친화도를 증가시킬 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 번호 5,714,350 및 6,350,861에 기재되어 있다. 감소된 양의 푸코실 잔기를 갖는 저-푸코실화된 항체 또는 증가된 이등분 GlcNac 구조를 갖는 항체와 같이, 변경된 부류의 글리코실화를 갖는 항체가 제조될 수 있다. 이러한 변경된 글리코실화 패턴은 항체의 ADCC를 증가시키는 능력을 나타내었다. 이러한 탄수화물 변형은 예를 들어, 변경된 글리코실화 시스템을 갖는 숙주 세포에서 항체를 발현시킴으로써 달성될 수 있다. 변경된 당화 시스템을 갖는 세포는 당업계에 기술되었고, 본 발명의 항체가 발현되어 변경된 당화를 갖는 항체를 생성하는 숙주 세포로서 사용될 수 있다. 예를 들어, 세포주 Ms 704, Ms 705 및 Ms 709는 푸코실트랜스퍼라제 유전자 FUT8(알파-(1,6)-푸코실트랜스페라제)가 결여되어, 세포주 Ms 704, Ms 705 및 Ms 709에서 발현되는 항체는 그들의 탄수화물에서 푸코스가 결여된다. 세포주 Ms 704, Ms 705 및 Ms 709 FUT8-/-는 2개의 대체 벡터를 사용하여 CHO/DG44 세포에서 FUT8 유전자의 표적화된 파괴에 의해 생성된다(미국 특허 공개 20040110704 및 Yamane-Ohnuki et al. (2004) Biotechnol Bioeng 87: 614-22 참조). EP 1,176,195는 푸코실트랜스퍼라제를 암호화하는 기능적으로 파괴된 FUT8 유전자를 갖는 세포주를 기재하고, 따라서 세포주에서 발현되는 항체는 α-1,6 결합-관련 효소를 감소시키거나 제거함으로써 낮은 푸코실을 나타낸다. EP 1,176,195는 또한 랫트 골수종 세포주 YB2/0(ATCC CRL 1662)와 같은 항체의 Fc 영역에 결합하는 N-아세틸글루코사민에 푸코스를 첨가하는 효소 활성이 낮거나 없는 세포주를 기재하고 있다. PCT 공개 WO 03/035835는 Asn(297)-연결된 탄수화물에 푸코스를 부착하는 능력이 감소되어, 또한 숙주 세포에서 발현되는 항체의 낮은 푸코실화를 유도하는 변이 CHO 세포주 Lec13 세포를 기재하고 있다(Shields et al. (2002) J. Biol. Chem. 277: 26733-26740). 변형된 글리코실화 프로파일을 갖는 항체는 또한 PCT 공개 WO 06/089231에 기재된 바와 같이 알에서 생산될 수 있다. 대안적으로, 변형된 글리코실화 프로파일을 갖는 항체는 렘나와 같은 식물 세포에서 생산될 수 있다. 식물 시스템에서 항체를 생산하는 방법은 Alston and Bird LLP 변호사 문서 번호 040989/314911에 해당하는 2006년 8월 11일자로 출원된 미국 특허 출원에 개시되어 있다. PCT 공개 WO 99/54342는 당단백질 변형 글리코실트랜스퍼라제(예컨대,
Figure pct00006
(1,4)-N-아세틸글루코사미닐트랜스퍼라제 III(GnTIII))를 발현하도록 조작된 세포주를 기재하고, 이에 의해 조작된 세포주에서 발현되는 항체는 증가된 이등분 GlcNac 구조를 나타내고, 이는 항체의 증가된 ADCC 활성을 초래한다(Umana et al. (1999) Nat. Biotech. 17:176-180 또한 참조). 대안적으로, 푸코시다제는 항체로부터 푸코실 잔기를 절단하는데 사용될 수 있다; 예를 들어, α-L-푸코시다제가 항체로부터 푸코실 잔기들을 제거한다(Tarentino et al. (1975) Biochem. 14:5516-23).
본 발명의 한 실시양태에서, 본 발명의 항체 또는 단편은 조작된 효모 N-연결 글리칸 또는 CHO N-연결 글리칸으로 글리코실화된다.
본 출원에 기재된 항체 또는 이의 단편에 대한 본 발명에 포함되는 또 다른 변형은 페길레이션이다. 항체는 예를 들어, 페길레이션될 수 있다. 항체의 생물학적(예를 들어, 혈청) 반감기를 증가시킨다. 항체를 페길레이션시키기 위해, 항체 또는 이의 단편은 전형적으로 하나 이상의 PEG기가 항체 또는 항체 단편에 부착되는 조건에서 폴리에틸렌 글리콜(PEG)(예컨대, PEG의 반응성 에스테르 또는 알데히드 유도체)과 반응한다. 바람직하게는, 페길레이션는 반응성 PEG 분자(또는 유사한 반응성 수용성 중합체)를 사용하는 아실화 반응 또는 알킬화 반응을 통해 수행된다. 본 출원에 사용된 용어 "폴리에틸렌 글리콜"은 다른 단백질, 예컨대 모노(C1-C10) 알콕시- 또는 아릴옥시 폴리에틸렌 글리콜 또는 폴리에틸렌 글리콜-말레이미드를 유도체화하기 위해 사용된 임의의 형태의 PEG를 포함하는 것으로 의도된다. 특정 실시양태에서, 페길레이션될 항체는 아글리코실화된 항체이다. 단백질의 페길레이션 방법은 당업계에 공지되어 있고, 예를 들어 EP 0154316 및 EP 0401384를 참조하여 본 발명의 항체에 적용될 수 있다.
특정 실시양태에서, 하나 이상의 아미노산 변형이 본 출원에 제공된 항체의 Fc 영역 내로 도입될 수 있고, 이에 의해, 예를 들어, 암 또는 세포 증식성 질환을 치료하는데 있어서 항체의 효능이 증강되도록 Fc 영역의 변이체를 생성한다. 본 출원에 개시된 항 LAG-3 항체 및 이의 항원 결합 단편은 또한 변경된 이펙터 기능을 제공하기 위해 변형된(또는 폐쇄된) Fc 영역을 갖는 항체 및 단편을 포함한다. 예를 들어, 미국 특허 번호 5,624,821, WO2003/086310, WO2005/120571, WO2006/0057702 참조. 이러한 변형은 면역계의 다양한 반응을 향상 또는 억제하는데 사용될 수 있고, 진단 및 치료에 유익한 효과를 가질 수 있다. Fc 영역의 변형은 아미노산 변경(치환, 결실 및 삽입), 글리코실화 또는 탈글리코실화, 및 다중 Fc의 첨가를 포함한다. Fc에 대한 변형은 또한 치료 항체에서 항체의 반감기를 변경시킬 수 있고, 이에 의해 빈번한 투여를 줄여, 결과적으로 편리성을 향상시키고 물질 사용을 감소한다. Presta (2005) J. Allergy Clin. Immunol. 116:731, 734-735 페이지 참조.
한 실시양태에서, 항체의 시스테인 잔기의 수는 항체 특성을 변형시키도록 변경될 수 있다. 예를 들어, CH1의 힌지 영역은 힌지 영역 내의 시스테인 잔기의 수를 변화(예를 들어, 증가 또는 감소)시키도록 변형된다. 이 방법은 미국 특허 번호 5,677,425에 보다 자세히 기재되어 있다. CH1의 힌지 영역 내의 시스테인 잔기의 수는, 예를 들어 경쇄 및 중쇄의 조립을 용이하게 하거나, 항체의 안정성을 증가 또는 감소시키도록 변화될 수 있다.
특정 실시양태에서, 본 출원에 제공된 항체는 당업계에 공지되어 있고 용이하게 입수 가능한 다른 비 단백질 부분을 함유하도록 추가로 변형될 수 있다. 항체 유도체화에 적합한 부분은 수용성 중합체를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 수용성 중합체의 비제한적인 예는 폴리에틸렌 글리콜(PEG), 에틸렌 글리콜/프로필렌 글리콜 공중합체, 카복시메틸 셀룰로스, 덱스트란, 폴리비닐 알콜, 폴리비닐피롤리돈, 폴리-1,3-디옥산, 폴리-1,3,6-트리옥산, 에틸렌/말레산 무수물 공중합체, 폴리아미노산(호모중합체 또는 랜덤 공중합체), 및 덱스트란 또는 폴리(n-에틸렌 메틸피롤리돈) 폴리에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜 단독중합체, 폴리프로필렌 옥사이드/에틸렌 옥사이드 공중합체, 폴리옥시에틸렌화된 폴리올(예컨대 글리세롤), 폴리비닐 알코올, 및 이들의 혼합물을 포함하지만, 이로 제한되지 않는다. 중합체는 임의의 분자량을 가질 수 있고, 분지되거나 분지되지 않을 수 있다. 항체에 부착된 중합체의 수는 다양할 수 있고, 하나 이상의 중합체가 부착된 경우, 이들은 동일하거나 상이한 분자일 수 있다. 일반적으로, 유도체화에 사용되는 중합체의 수 및/또는 유형은 개선될 항체의 특정 특성 또는 기능, 항체 유도체가 규정된 조건에서 치료에 사용될 것인지 여부 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는 고려사항에 기초하여 결정될 수 있다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 항 LAG-3 항체의 단편을 포함한다. 항체 단편의 예는 Fv, Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2, 디아바디, 선형 항체, 단일-쇄 가변 단편(예를 들어, scFv), 및 항체 단편으로부터 형성된 이중특이성 항체를 포함하지만, 이로 제한되지 않는다.
예를 들어, 항체 분자는 중쇄(HC) 가변 도메인 서열 및 경쇄(LC) 가변성 도메인 서열을 포함할 수 있다. 한 실시양태에서, 항체 분자(본 출원에서 불완전 항체로 지칭됨)는 중쇄 및 경쇄를 포함하거나 이로 구성된다. 또 다른 예에서, 항체 분자는 2개의 중쇄 가변 도메인 서열 및 2개의 경쇄 가변 도메인 서열을 포함하여, 2개의 항원 결합 부위, 예컨대 Fab, Fab', F(ab')2, Fc, Fd, Fd', Fv, 단일-쇄 가변 단편(예를 들어, scFv), 단일 도메인 항체, 디아바디(Dab)(2가 및 이중특이성), 및 키메라(예를 들어, 인간화) 항체를 형성하고, 이는 재조합 DNA 기술을 사용하여 온전한 항체를 변형시키거나 새로이(de novo) 합성함으로써 생성될 수 있다. 이들 기능성 항체 단편은 이의 상응하는 항원 또는 수용체에 선택적으로 결합하는 능력을 보유한다. 항체 및 항체 단편은 임의의 항체 부류, 예컨대 IgG, IgA, IgM, IgD 및 IgE, 및 임의의 항체 하위부류(예컨대, IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4)로부터 유래될 수 있지만, 이에 제한되지는 않는다. 항체 분자의 제조는 모노클로날 또는 폴리클로날일 수 있다. 항체는 인간 항체, 인간화된 항체, 키메라 항체, CDR-이식된 항체, 또는 시험관내에서 생산된 항체일 수 있다. 항체는, 예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4로부터 선택된 중쇄 불변 영역을 가질 수 있다. 항체는 또한 예를 들어 카파 및 람다로부터 선택된 경쇄를 가질 수 있다.
본 발명의 항체는 또한 단일 도메인 항체일 수 있다. 단일 도메인 항체는 이의 상보성 결정 영역이 단일 도메인 폴리펩티드의 일부인 항체를 포함할 수 있다. 예는 중쇄 항체, 경쇄가 자연적으로 없는 항체, 단일 도메인 항체 또는 통상적인 4-쇄 항체로부터 유도된 조작된 항체를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 단일 도메인 항체는 선행 기술의 임의의 항체, 또는 미래에 임의의 단일 도메인 항체일 수 있다. 단일 도메인 항체는 마우스, 인간, 카멜, 알파카, 어류, 상어, 염소, 토끼 및 소를 포함하지만 이에 제한되지 않는 임의의 종으로부터 유도될 수 있다. 본 발명의 또 다른 측면에 따르면, 단일 도메인 항체는 자연 발생 단일 도메인 항체이며, 이는 경쇄가 없는 중쇄 항체로 지칭된다. 이러한 단일 도메인 항체는 예를 들어, WO 94/04678에 개시되어 있다. 단일 도메인 항체 또는 나노바디는 카멜, 알파카, 드로메데리, 라마 및 구아나코와 같은 카멜리드 종으로부터 생성된 항체일 수 있다. 카멜 이외의 종은 자연적으로 경쇄가 없는 중쇄 항체를 생산할 수 있고; 이러한 단일 도메인 항체는 본 발명의 범위 내에 있다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항 LAG-3 항체는 인간화 항체이다. Almagro 및 Fransson에 의해 요약된 바와 같이, 항체를 인간화하기 위한 상이한 방법이 당업자에게 공지되어 있으며, 이의 내용은 본 출원에 참고로 포함된다(Almagro J.C. and Fransson J (2008) Frontiers in Bioscience 13: 1619-1633). Almagro & Fransson은 합리적인 접근법과 경험적 접근법을 구별한다. 합리적인 접근법은 적은 수의 조작된 항체 변이체를 생성하고 이들의 결합 또는 임의의 다른 관심 특성을 평가하는 것을 특징으로 한다. 설계의 변형들이 예상된 결과들을 생성하지 않으면, 새로운 라운드의 설계 및 통합 평가가 시작된다. 합리적인 접근법은 CDR 그라프팅, 리서페이싱, 초인간화, 및 인간 스트링 콘텐츠 최적화를 포함한다. 대조적으로, 실험적 방법은 대형 인간화된 변이체 라이브러리를 생성하는 것에 기초하며, 농축 기술 또는 고처리량 스크리닝을 사용하여 최상의 클론을 선택한다. 따라서, 경험적 접근법은 다수의 항체 변이체를 검색할 수 있는 신뢰할 수 있는 선택 및/또는 스크리닝 시스템에 의존한다. 파지 디스플레이 및 리보솜 디스플레이와 같은 시험관내 디스플레이 기술은 이러한 요건을 충족시키고, 당업자에게 잘 알려져 있다. 경험적 접근법은 FR 라이브러리 구성, 가이드된 선택, 프레임워크-셔플링 및 인명을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항 LAG-3 항체는 인간 항체이다. 인간 항체는 당업계에 공지된 다양한 기술을 통해 제조될 수 있다. 인간 항체는 일반적으로 van Dijk and van de Winkel, Curr. Opin. Pharmacol 5: 368-74 (2001) and Lonberg, Curr. Opin. Immunol 20: 450-459 (2008)에 기재되어 있다. 예를 들어, 마우스 시스템보다는 인간 면역글로불린 유전자를 보유하는 트랜스제닉 마우스를 인간 단일클론 항체의 제조에 사용할 수 있다(예를 들어, Wood et al., International Application WO 91/00906; Kucherlapati et al., PCT Publication WO 91/10741; Lonberg et al., International Application WO 92/03918; Kay et al., International Application 92/03917; Lonberg, N. et al., 1994 Nature 368: 856-859; Green, L.L. et al., 1994 Nature Genet. 7: 13-21; Morrison, S.L. et al., 1994 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81: 6851-6855; Bruggeman et al., 1993 Year Immunol 7: 33-40; Tuaillon et al., 1993 PNAS 90: 3720-3724; and Bruggeman et al., 1991 Eur J Immunol 21: 1323-1326 참조).
일부 실시양태에서, 본 출원에 개시된 항 LAG-3 항체는 비 인간 항체, 예컨대 설치류(마우스 또는 랫트) 항체, 염소 항체, 영장류(예를 들어, 원숭이) 항체 및 카멜 항체이다. 바람직하게는, 비 인간 항체는 설치류(마우스 또는 랫트) 항체이다. 설치류 항체의 제조 방법은 당업계에 공지되어 있다.
본 발명의 항체는 원하는 활성을 갖는 항체에 대한 조합 라이브러리를 스크리닝함으로써 단리될 수 있다. 예를 들어, 파지 디스플레이 라이브러리를 생성하고 원하는 결합 특성을 갖는 항체에 대해 라이브러리를 스크리닝하는 다양한 방법이 당업계에 공지되어 있다. 이들 방법은 예를 들어, Hoogenboom et al., Methods in Molecular Biology 178: 1-37(O' Brien et al., Human Press, Totowa, NJ, 2001에 의하여 편집됨)의 방법에 기재되어 있고, 예를 들어 McCafferty et al., Nature 348: 552-554; Clackso et al., Nature 352: 624-628 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol. 222: 581-597 (1992); Marks and Bradbury, Methods in Molecular Biology 248: 161-175(Lo, Human Press, Totowa, NJ, 2003에 의하여 편집됨); Sidhu et al., J. Mol. Biol. 338 (2): 299-310 (2004); Lee et al., J. Mol. Biol 340 (5): 1073-1093 (2004); Fellouse, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101 (34): 12467-12472 (2004); and Lee et al., J. Immunol. Methods 284 (1-2): 119-132 (2004)에 추가 기재되어 있다.
한 실시양태에서, 항체 분자는 단일특이성 항체 분자이고 단일 에피토프에 결합한다. 예를 들어, 단일특이성 항체 분자는 각각 동일한 에피토프에 결합하는 복수의 면역글로불린 가변 도메인 서열을 포함한다.
한 실시양태에서, 항체 분자는 다중특이성 항체 분자이고, 예를 들어 항체 분자는 복수의 면역글로불린 가변 도메인 서열을 포함하고, 여기서 복수의 면역글로불린 변수 도메인 서열 중 제1 면역글로불린 가변 도메인의 서열은 제1 에피토프에 대해 결합 특이성을 갖고, 복수의 면역글로불린 변수의 도메인 서열 중의 제2 면역글로불린 가변 도메인을 제2 에피토프에 대해 결합 특이성을 갖는다. 한 실시양태에서, 제1 및 제2 에피토프는 동일한 항원(예를 들어, 동일한 단백질 또는 다량체 단백질의 동일한 서브유닛) 상에 있다. 한 실시양태에서, 제1 및 제2 에피토프는 중첩된다. 한 실시양태에서, 제1 및 제2 에피토프는 중첩되지 않는다. 한 실시양태에서, 제1 및 제2 에피토프는 상이한 항원(예를 들어, 상이한 단백질 또는 다량체 단백질의 상이한 서브유닛) 상에 위치한다. 한 실시양태에서, 다중특이성 항체 분자는 제3, 제4 또는 제5 면역글로불린 가변 도메인을 포함한다. 한 실시양태에서, 다중특이성 항체 분자는 이중특이성 항체 분자 또는 삼중특이성 항체분자 또는 사특이성 항체이다.
한 실시양태에서, 다중특이성 항체 분자는 이중특이성 항체 분자이다. 이중특이성 항체는 2개 이하의 항원에 대해 특이적이다. 이중특이성 항체 분자는 제1 에피토프에 대해 결합 특이성을 갖는 제1 면역글로불린 가변 도메인 서열 및 제2 에피토프에 대한 결합 특이성을 가지는 제2 면역글로불린 가변 도메인을 특징으로 한다. 한 실시양태에서, 제1 및 제2 에피토프는 동일한 항원(예를 들어, 동일한 단백질 또는 다량체 단백질의 동일한 서브유닛) 상에 있다. 한 실시양태에서, 제1 및 제2 에피토프는 중첩된다. 한 실시양태에서, 제1 및 제2 에피토프는 중첩되지 않는다. 한 실시양태에서, 제1 및 제2 에피토프는 상이한 항원(예를 들어, 상이한 단백질 또는 다량체 단백질의 상이한 서브유닛) 상에 위치한다. 한 실시양태에서, 이중특이성 항체 분자는 제1 에피토프에 대해 결합 특이성을 갖는 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열, 및 제2 에피토프에 대해 결합제 특이성을 갖는 경쇄 및 중쇄 가변 도메인 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, 이중특이성 항체 분자는 제1 에피토프에 대해 결합 특이성을 갖는 불완전 항체, 및 제2 에피토프에 대해 결합 특이성을 갖는 불완전한 항체를 포함한다. 한 실시양태에서, 이중특이성 항체 분자는 제1 에피토프에 대해 결합 특이성을 갖는 불완전 항체 또는 이의 단편, 및 제2 에피토프에 대해 결합 특이성을 갖는 불완전한 항체 또는 이의 단편을 포함한다. 한 실시양태에서, 이중특이성 항체 분자는 제1 에피토프에 대해 결합 특이성을 갖는 scFv 또는 이의 단편, 및 제2 에피토프에 대해 결합 특이성을 갖는 scFv 또는 이의 단편을 포함한다. 한 실시양태에서, 제1 에피토프는 LAG-3 상에 있고, 제2 에피토프는 PD-1, TIM-3, CEACAM(예를 들어, CE
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CAM-1 및/또는 CEACAM-5), PD-L1, 또는 PD-L2 상에 있다. 바람직한 실시양태에서, 제2 에피토프는 PD-1 상에 있다.
일부 실시양태에서, 본 출원에 개시된 항체는 키메라 항체(예를 들어, 인간 불변 도메인/마우스 가변 도메인)일 수 있다. 본 출원에서 사용된 "키메라 항체"는 제1 항체로부터의 가변 도메인 및 제2 항체로부터의 불변 도메인을 갖는 항체이며, 여기서 제1 및 제2 항체는 상이한 종이다(미국 특허 번호 4,816,567; 및 Morrison et al. (1984) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81: 6851-6855). 전형적으로, 가변 도메인은 설치류와 같은 실험 동물의 항체("부모 항체")로부터 유래되고, 불변 도메인 서열은 인간 항체로부터 유래되어, 생성된 키메라 항체는 인간 대상체에서 부모(예를 들어, 마우스) 항체보다 불리한 면역 반응을 유발할 가능성이 적다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 다른 물질, 예를 들어 치료 모듈 또는 마커, 예컨대 세포독성제 또는 면역조절제에 접합된 항 LAG-3 단일클론 항체("면역접합체")를 추가로 제공한다. 세포독성제는 세포에 유해한 임의의 제제를 포함한다. 면역접합체를 형성하기에 적합한 세포독성제(예를 들어 화학치료제)는 당업계에 공지되어 있다(예를 들어, WO 05/103081, WO 2015/138920 또는 CN 107001470 A 참조). 예를 들어, 세포독성제는 방사성 동위원소, 예를 들어 요오드(131I 또는 125I), 이트륨(90Y), 루테튬(177Lu), 악티늄(225Ac), 프라세오디뮴, 아스타틴(211At), 레늄(186Re), 비스무트(212Bi 또는 213Bi), 인듐(111In), 테크네륨(99mTc), 인(32P), 로듐(188Rh), 황(35S), 탄소(14C), 트리튬(3H), 크로뮴(51Cr), 염소(36Cl), 코발트(57Co 또는 58Co), 철(59Fe), 셀레늄(75Se), 또는 갈륨(67Ga)을 포함한다. 세포독성제의 예는 또한 화학요법제 또는 기타 치료제, 예컨대 탁솔, 시토칼라신 B, 그라미시딘 D, 에티듐 브로마이드, 에메틴, 미토마이신, 에토포시드, 테니포사이드, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 콜히친, 독소루비신, 다우노마이신, 디히드록시안트라신 디케톤, 미톡산트론, 미트라마이신, 악티노마이신 D, 1-데히드로테스토스테론, 글루코코르티코이드, 프로카인, 테트라카인, 리도카인, 프로프라놀롤, 푸로마이신, 메이타니놀과 같은 메이탄시노이드(미국 특허 번호 5,208,020), 및 CC-1065(미국 특허 번호 5,475,092, 5,585,499 및 5,846,545), 및 이들의 유사체 또는 동족체를 포함한다. 또한, 세포독성제는, 예를 들어, 항대사물질(예를 들어, 메토트렉세이트, 6-메르캅토퓨린, 6-티오구아닌, 시타라빈, 5-플루오로우라실, 및 다카르바진); 알킬화제(예를 들어, 메클로레타민, 티오에파할로라무실, CC-1065, 멜팔란, 카르무스틴(BSNU), 로무스틴(CCNU), 시클로포스파미드, 부설판, 디브로모만니톨, 스트렙토조토신, 미토마이신 C, 및 시스-디클로로디아민플라티늄(II) (DDP) 시스플라틴); 안트라사이클린(예를 들어, 다우노루비신(이전에 다우노마이신으로 공지됨) 및 독소루비신); 항생제(닥티노마이신(이전에 악티노마이신 D로 공지됨); 블레오마이신, 미쓰라마이신, 및 안트라마이신(AMC)); 항유사분열제(예를 들어 빈크리스틴, 빈블라스틴, 탁솔, 및 메이탄시노이드); 성장 억제제; 효소 및 이의 단편, 예컨대 핵산 하이드롤라아제; 항생제; 독소(예를 들어, 소분자 독소, 또는 박테리아, 진균, 식물, 또는 동물 기원의 효소 활성 독소) 및 이들의 단편 및/또는 변이체; 및 다양한 공지된 항종양제 또는 항암제를 포함한다.
본 발명의 핵산 및 이를 포함하는 숙주 세포
한 측면에서, 본 발명은 임의의 상기 항 LAG-3 항체 또는 이의 단편을 암호화하는 핵산을 제공한다. 핵산은 항체의 경쇄 가변 영역 및/또는 중쇄 가변 영역을 포함하는 아미노산 서열, 또는 항체의 경쇄 및/또는 중쇄를 포함하는 아미노산 서열을 암호화할 수 있다.
예를 들어, 본 명세서에 개시된 예시적인 핵산은 서열 번호 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44 및 45로부터 선택된 핵산 서열, 또는 서열 번호 38, 39 및 40으로부터 선택된 핵산 서열과 적어도 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함한다. 예를 들어, 본 명세서에 개시된 핵산은 서열 번호 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36 및 37 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 암호화하는 핵산, 또는 서열 번호 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36 및 37 중 어느 하나부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 인코딩하는 핵산을 포함한다.
본 발명은 엄격한 조건 하에 하기 핵산, 또는 하나 이상의 치환(예를 들어, 보존적 치환), 결실 또는 삽입을 갖는 하기 핵산의 변형과 혼성화되는 핵산을 추가로 제공한다: 서열 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44 및 45로부터 선택된 핵산 서열과 적어도 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하는 핵산, 서열 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44 또는 45로부터 선택되는 핵산; 또는 서열 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36 및 37 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열을 포함한 핵산, 및 서열 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36 및 37 중 어느 것으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 85%, 90% 91%, 92% 및 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 인코딩하는 핵산 서열을 구성하는 핵산.
한 실시양태에서, 핵산을 함유하는 하나 이상의 벡터가 제공된다. 한 실시양태에서, 벡터는 발현 벡터, 예컨대 진핵 발현 벡터이다. 벡터는 바이러스, 플라스미드, 코스미드, 람다 파지, 또는 효모 인공 염색체(YAC)를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 다수의 벡터 시스템이 사용될 수 있다. 예를 들어, 한 부류의 벡터는 동물 바이러스, 예컨대 소 파필로마바이러스, 폴리오마바이러스, 아데노바이러스, 백시니아 바이러스, 바쿨로바이러스, 레트로바이러스(라우스 육종 바이러스, MMTV 또는 MOMLV), 및 SV40 바이러스로부터 유래된 DNA 요소를 사용한다. 또 다른 부류의 벡터는 셈리키삼림열바이러스, 동부 말 뇌염 바이러스 및 플라비바이러스와 같은 RNA 바이러스로부터 유도된 RNA 요소를 사용한다. 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 발현 벡터는 pTT5 발현 벡터이다.
또한, 트랜스펙션된 숙주 세포의 선택을 허용하는 하나 이상의 마커를 도입함으로써, 이의 염색체 내에 안정하게 혼입된 DNA를 갖는 세포를 선택할 수 있다. 마커는 영양요구성 숙주에 대해, 예를 들어, 프로토트로피, 살생물성(예를 들어, 항생제) 저항성, 또는 중금속(예를 들어, 구리) 저항성 등을 제공할 수 있다. 선택 가능한 마커 유전자는 발현될 DNA 서열에 직접 연결되거나, 공동-형질전환을 통해 동일한 세포에 도입될 수 있다. 또한, mRNA의 최적의 합성을 위해 추가의 요소가 요구될 수 있다. 요소는 스플라이싱 신호, 전사 프로모터, 인핸서 및 종결 신호를 포함할 수 있다.
발현을 위한 발현 벡터 또는 DNA 서열이 제조되면, 발현 벡터는 적합한 숙주 세포에 형질감염되거나 도입될 수 있다. 다양한 기법, 예를 들어 원형질체 융합, 인산칼슘 침전, 전기천공, 레트로바이러스 형질도입, 바이러스 형질감염, 바이오리스틱스, 지질-기반 형질감염, 또는 다른 통상적인 기법이 이러한 목적을 위해 사용될 수 있다. 원형질체 융합의 경우, 세포는 배양 배지에서 배양되고 적절한 활성에 대해 스크리닝된다. 생성된 형질감염된 세포를 인큐베이션하고 생성된 항체 분자를 단리하기 위한 방법 및 조건은 당업자에게 공지되어 있고, 본 기술 및 당업계에 공지된 방법에 기초하여 사용되는 특정 발현 벡터 및 특정 포유동물 숙주 세포에 따라 변화되거나 최적화될 수 있다.
한 실시양태에서, 본 출원에 기재된 항체 분자 또는 본 출원에 기재된 벡터를 암호화하는 핵산을 함유하는 숙주 세포가 제공된다. 항체 또는 벡터를 암호화하는 핵산을 클로닝 또는 발현시키기 위한 적합한 숙주 세포는 본 출원에 기재된 바와 같은 원핵 또는 진핵 세포를 포함한다. 예를 들어, 항체는 특히 글리코실화 및 Fc 이펙터 기능이 요구되지 않을 때 박테리아에서 생성될 수 있다. 박테리아에서 항체 단편 및 폴리펩티드의 발현은 예를 들어, 미국 특허 번호 5648237, 5789199 및 5840523에 기재되어 있고, E. coli에서 항체 단편의 발현을 기술하는 Charlton, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B. K. C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ, 2003) 245-254 페이지에도 기술되어 있다. 발현 후, 항체는 가용성 분획의 박테리아 페이스트로부터 단리될 수 있고, 추가로 정제될 수 있다. 한 실시양태에서, 숙주 세포는 E. coli이다.
한 실시양태에서, 숙주 세포는 진핵 세포이다. 또 다른 실시양태에서, 숙주 세포는 효모 세포, 포유동물 세포(예, 인간 세포), 곤충 세포, 식물 세포, 또는 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 제조에 적합한 다른 세포로부터 선택된다. 예를 들어, 사상균 또는 효모와 같은 진핵 미생물은 글리코실화 경로가 "인간화"되어 부분적으로 또는 완전히 인간 글리코실화 패턴을 갖는 항체를 생성하는 진균 및 효모 균주를 포함하는 항체를 암호화하는 벡터에 대한 적합한 클로닝 또는 발현 숙주이다(Gerngross, Nat. Biotech. 22: 1409-1414 (2004), 및 Li et al., Nat. Biotech. 24: 210-215 (2006) 참조). 글리코실화 항체를 발현시키는데 적합한 숙주 세포는 또한 다세포 유기체(비뇨생식체 및 척추동물)로부터 유래된다. 척추동물 세포는 또한 숙주로서 사용될 수 있다. 예를 들어, 현탁액 성장에 적합하도록 조작된 포유동물 세포주가 사용될 수 있다. 유용한 포유동물 숙주 세포주의 다른 예는 SV40으로 형질전환된 원숭이 신장 CV1 세포주(COS-7), 인간 배아 신장 세포주(293 HEK 또는 293 세포, 예를 들어, Graham et al., J. Gen Virol. 36: 59 (1977)) 등에 기재되어 있다. 다른 유용한 포유동물 숙주 세포주는 DHFR-CHO 세포를 포함하는 중국 햄스터 난소(CHO) 세포(Urlaub et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77: 216 (1980)), 및 Y0, NS0, 및 Sp2/0와 같은 골수종 세포주를 포함한다. 항체 생산에 적합한 특정 포유동물 숙주 세포주의 리뷰는 예를 들어, Yazaki and Wu, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B. K. C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ), 255-268페이지(2003)에서 확인할 수 있다. 다른 유용한 숙주 세포는 베로 세포, Hela 세포, COS 세포, CHO 세포, HEK293 세포, BHK 세포, MDCKII 세포, PerC6 세포주(예를 들어, Crucell의 PERC6) 세포, 난모세포, 및 유방 상피 세포와 같은 트랜스제닉 동물로부터의 세포를 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다. 적합한 곤충 세포는 Sf9 세포를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
본 발명의 항체 및 이의 항원 결합 단편의 제조 방법
본 출원에 개시된 항 LAG-3 항체는 재조합적으로 생산될 수 있다. 재조합 항체의 생산을 위한 당업계에 공지된 여러 방법이 있다. 항체의 재조합 생산을 위한 방법의 예시가 미국 특허 번호 4,816,567에 개시되어 있다.
한 실시양태에서, 항 LAG-3 항체의 제조 방법이 제공되며, 여기서 상기 방법은 상기 제공된 바와 같은 항체를 암호화하는 핵산을 함유하는 숙주 세포를 항체를 발현시키기에 적합한 조건 하에 배양하는 단계, 및 임의로, 항체를 숙주 세포(또는 숙주 세포 배양 배지)로부터 단리하는 단계를 포함한다. 항 LAG-3 항체의 재조합 생성을 위해, 항체(예를 들어, 상기 기재된 항체)를 암호화하는 핵산을 단리하고, 숙주 세포에서 추가의 클로닝 및/또는 발현을 위해 하나 이상의 벡터에 삽입한다. 상기 핵산은 통상적인 절차를 사용함으로써(예를 들어, 항체의 중쇄 및 경쇄를 암호화하는 유전자에 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오티드 프로브를 사용함으로써) 쉽게 단리되고 서열분석된다.
한 실시양태에서, 숙주 세포는 항체의 VL의 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 및 항체의 VH의 아미노산 시퀀스를 암호화하는 핵산을 포함하는 벡터를 함유한다. 한 실시양태에서, 숙주 세포는 항체의 VL의 아미노산 서열을 암호화하는 핵산을 포함하는 제1 벡터 및 항체의 VH의 아미노산 서열을 암호화하는 핵산을 포함한 제2 벡터를 함유한다.
분석
본 출원에 제공된 항 LAG-3 항체는 당업계에 공지된 다양한 분석을 통해 이의 물리적/화학적 특성 및/또는 생물학적 활성에 대해 확인, 스크리닝 또는 특성화될 수 있다. 한 측면에서, 본 발명의 항체의 항원 결합 활성은, 예를 들어, 항체 분자로 코팅된 ELISA, 웨스턴 블롯팅, 유세포 분석, 및 자기 비드와 같은 공지된 방법에 의해 시험된다. LAG-3 결합은 당업계에 공지된 방법에 의해 결정될 수 있고, 예시적인 방법이 본 출원에 개시된다. 일부 실시양태에서, 생물학적 광학 간섭법(예를 들어, 포테바이오 친화성 분석), MSD 분석 또는 유세포 분석법이 사용된다.
또 다른 측면에서, 경쟁적 결합 분석은 LAG-3에 대한 결합에 대해 본 출원에 개시된 임의의 항 LAG-3 항체와 경쟁하는 항체를 확인하기 위해 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 이러한 경쟁적 항체는 본 출원에 개시된 항 LAG-3 항체 중 임의의 것과 동일한 에피토프(예를 들어, 선형 또는 입체형태적 에피토프)에 결합한다. 항체 결합 에피토프를 배치하기 위한 상세한 예시적인 방법은 Morris (1996) "Epitope Mapping Protocols", Methods in Molecular Biology vol. 66 (Humana Press, Totowa, NJ)에 기재되어 있다.
본 발명은 추가로 상기 기재된 특성 중 하나 이상을 갖는 항 LAG-3 항체를 확인하기 위한 분석을 제공한다. 생체내 및/또는 시험관내에서 이러한 생물학적 활성을 갖는 항체가 추가로 제공된다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항체는 상기 기재된 특성 중 하나 이상에 대해 시험된다.
임의의 상기 시험관내 분석에서 사용하기 위한 세포는 LAG-3을 자연적으로 발현하거나 LAG-3을 발현하도록 조작된 세포 또는 세포주를 포함한다. 몇몇 세포는 LAG-3을 발현한다. 예를 들어, LAG-3은 활성화된 CD4+ 및 CD8+ T 세포, 조절 T 세포, 자연 살해(NK) 세포, 및 형질세포양 수지상 세포(DC) 상에서 발현된다. LAG-3은 종양 침윤 림프구, 예컨대 두경부 편평 세포 암종(HNSCC)의 침윤 림프구에서 발현된다. LAG-3은 고도로 억제성이고, 유도성이며, 자연 조절 T 세포에서 발현된다. 예를 들어, 고도로 억제성인 FoxP3+nTregs 및 FoxP3-iTregs는 흑색종 및 결장직장암에서 LAG-3에 대해 양성이다(Camisaschi et al. (2010) J. Immunol. 184(11): 6545-6551; Scurr et al. (2014) Mucosal. Immunol. 7 (2): 428-439). 이러한 세포는 또한 LAG-3을 발현하는 세포주 및 LAG-3, 정상적으로는 발현하지 않지만 LAG-3을 암호화하는 핵산으로 형질감염된 세포주를 포함한다.
상기 분석 중 임의의 것은 항 LAG-3 항체 대신에 또는 이에 더하여 본 발명의 면역접합체를 사용함으로써 수행될 수 있을 것으로 이해된다.
상기 분석 중 임의의 것은 항 LAG-3 항체 및 다른 치료제를 사용하여 수행될 수 있을 것으로 이해된다.
제약 조성물 및 제약 제제
본 발명은 추가로 항 LAG-3 항체 또는 이의 단편 또는 면역접합체를 포함하는 조성물(제약 조성물 또는 제약 제제를 포함함), 및 항 LAG-3 항체를 암호화하는 핵산 또는 이의 단편을 포함하는 조성물을 제공한다. 특정 실시양태에서, 상기 조성물은 LAG-3에 결합하는 하나 이상의 항체 또는 이의 단편 또는 면역접합체, 또는 LAG-3, 또는 이의 단편의 하나 이상의 항체를 암호화하는 하나 이상의 핵산을 포함한다. 이러한 조성물은 완충제를 포함하는 당업계에 공지된 제약 담체, 부형제 등과 같은 적합한 제약 보조제를 추가로 포함할 수 있다.
본 발명에 사용하기에 적합한 제약 담체는 멸균 액체, 예컨대 물 및 오일, 예컨대 석유, 또는 동물성, 식물성 또는 합성 공급원의 오일, 예를 들어 땅콩 오일, 대두 오일, 미네랄 오일, 참깨 오일 등일 수 있다. 제약 조성물이 정맥 내로 투여되는 경우 물이 바람직한 담체이다. 식염수 및 수성 덱스트로스 및 글리세롤 용액은 또한 특히 주사 가능한 용액을 위한 액체 담체로서 사용될 수 있다.
적합한 부형제는 전분, 글루코스, 락토스, 수크로스, 젤라틴, 맥아, 쌀, 밀가루, 초크, 실리카 겔, 나트륨 스테아레이트, 글리세롤 모노스테아레이트, 활석, 염화나트륨, 건조 탈지유, 글리세롤, 프로필렌, 글리콜, 물, 에탄올 등을 포함한다. 부형제의 사용의 경우, Handbook of Pharmaceutical Excipients, the fifth edition, R. C. Rowe, P. J. Seskey and S. C. Owen, Pharmaceutical Press, London, Chicago 참조.
조성물은 원한다면 소량의 습윤제 또는 유화제, 또는 pH 완충제를 추가로 포함할 수 있다. 조성물은 용액, 현탁액, 에멀젼, 정제, 환제, 캡슐, 분말, 서방 제제 등의 형태를 취할 수 있다. 경구 제제는 표준 담체 및/또는 부형제, 예컨대 제약 등급 만니톨, 락토스, 전분, 마그네슘 스테아레이트 및 사카린을 포함할 수 있다.
본 명세서에 기재된 항 LAG-3 항체를 포함하는, 바람직하게는 동결건조 제제 또는 수용액의 형태인 제약 제제는 본 발명의 원하는 순도의 항 LAG-3 항체를 하나 이상의 임의의 제약 보조제와 혼합함으로써 제조될 수 있다(Remington's Pharmaceutical Sciences, 16th edition, Osol, A. ed. (1980)).
예시적인 동결 건조된 항체 제제는 미국 특허 번호 6267958에 기재되어 있다. 수성 항체 제제는 미국 특허 번호 6171586 및 WO 2006/044908에 기술되어 있으며, 후자의 제제는 히스티딘-아세테이트 완충제를 포함한다.
본 발명의 제약 조성물 또는 제제는 또한 치료된 특정 지시에 의해 요구되는 하나 이상의 활성 성분, 바람직하게는 서로에 악영향을 미치지 않으면서 상보성 활성을 갖는 활성 성분을 포함할 수 있다. 예를 들어, 화학치료제 및/또는 PD-1 축 결합 길항제(예를 들어, 항 PD-1 항체 또는 항 PD-L1 항체 또는 항 PD-L2 항체)와 같은 다른 항암 활성 성분을 추가로 제공하는 것이 바람직할 수 있다. 활성 성분들은 의도하는 목적에 효과적인 양으로 적절하게 배합된다. 활성 성분은 당업계에 공지되어 있고 화학요법제, 항체 및 기타 치료제를 비롯한 항 LAG-3 항체와 조합될 수 있는 임의의 물질일 수 있다. 활성 성분의 예는, 예를 들어, WO 2016/028672, WO2015/042246, WO 2015/138920 등에서 볼 수 있다.
일부 실시양태에서, 항 PD-1 항체 또는 항 PD-L1 항체 또는 항 PD-L2 항체는 항 인간 PD-1 항체와 항 인간 PD-L1 항체 또는 항 인간 PD-L2 항체, 예를 들어, 인간화 항 인간 PD-1- 항체 또는 항 인간 PD-L1 항체와 항 인간 PD-L2 항체이다.
서방형 제제를 제조할 수 있다. 서방형 제제의 적합한 예는 항체를 포함하는 고체 소수성 중합체의 반투과성 매트릭스를 포함한다. 매트릭스는 성형품, 예를 들어 필름 또는 마이크로캡슐의 형태이다.
항체의 용도
한 측면에서, 본 발명은 대상체에서 면역 반응을 조절하는 방법에 관한 것이다. 상기 방법은 유효량의 항체 분자(예를 들어, 항 LAG-3 항체) 또는 본 출원에 개시된 제약 조성물 또는 면역접합체를 대상체에게 투여하여 대상체에서 면역 반응을 조절하는 것을 포함한다. 한 실시양태에서, 항체 분자(예를 들어, 항 LAG-3 항체 분자의 치료학적으로 유효한 양) 또는 본 출원에 개시된 제약 조성물 또는 면역접합체는 대상체에서 면역 반응을 복원, 증강, 자극 또는 증가시킨다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 대상체에서 종양(예를 들어, 암)을 예방 또는 치료하는 방법에 관한 것으로, 상기 방법은 대상체에게 유효량의 항체 분자(예를 들어, 항 LAG-3 항체) 또는 본 출원에 개시된 제약 조성물 또는 면역접합체를 투여하는 것을 포함한다. 한 실시양태에서, 종양은 위장관 신생물(예를 들어, 암), 예컨대 결장암이다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 대상체에서 감염성 질환을 예방 또는 치료하는 방법에 관한 것으로, 상기 방법은 대상체에게 유효량의 항체 분자(예를 들어, 항 LAG-3 항체) 또는 본 출원에 개시된 제약 조성물 또는 면역접합체를 투여하는 것을 포함한다. 한 실시양태에서, 감염성 질환은 만성 감염이다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 대상체에게 유효량의 항체 분자(예를 들어, 항 LAG-3 항체) 또는 본 출원에 개시된 제약 조성물 또는 면역접합체를 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 항체 의존성 세포 매개 세포독성을 유도하는 방법에 관한 것이다.
대상체는 포유동물, 예를 들어, 영장류, 바람직하게는 고등 영장류, 예컨대 인간(예를 들어, 본 출원에 기재된 질환을 갖거나 가질 위험이 있는 환자)일 수 있다. 한 실시양태에서, 대상체는 증강된 면역 반응을 필요로 한다. 일부 실시양태에서, 본 출원에 기재된 항 LAG-3 항체 분자는 대상체에서 항원 특이성 T 세포 반응, 예를 들어 항원 특이성 T 세포 반응에서 인터류킨-2(IL-2) 또는 인터페론-감마(IFN-감마) 생산을 복원, 증강 또는 자극한다. 일부 실시양태에서, 면역 반응은 항종양 반응이다. 한 실시양태에서, 대상체는 본 출원에 기재된 질환(예를 들어, 본 출원에 기재된 바와 같은 종양 또는 감염성 질환)을 갖거나 가질 위험이 있다. 특정 실시양태에서, 대상체는 면역 저하되거나 면역 저하될 위험이 있다. 예를 들어, 대상체는 화학요법 및/또는 방사선 요법을 받고 있거나 받고 있다. 대안적으로 또는 조합하여, 대상체는 감염으로 인해 면역저하되거나, 감염으로 인하여 면역저하될 위험이 있다.
일부 실시양태에서, 본 출원에 기재된 종양, 예를 들어 암은 고형 종양, 혈액암(예를 들어, 백혈병, 림프종, 및 골수종) 및 이의 전이성 병변을 포함하지만, 이로 제한되지 않는다. 한 실시양태에서, 암은 고형 종양이다. 고형 종양의 예는 악성 종양, 예를 들어, 폐, 유방, 림프, 위장관 또는 결장직장, 생식기, 비뇨생식관(예를 들어, 신장 세포 및 방광 세포), 인두, CNS(예를 들어, 뇌 세포, 신경 세포, 또는 신경교 세포)에 영향을 미치는 것들과 같은 다양한 기관 시스템의 육종 및 암종(예를 들어, 선암종), 피부(예를 들어, 흑색종), 두경부(예를 들어, 두경부 편평 세포 암종(HNCC)), 및 예를 들어 흑색종, 결장암, 위암, 직장암, 신세포 암종, 유방암(예를 들어 1, 2, 또는 모든 에스트로겐 수용체를 발현하지 않는 유방암, 프로게스테론 수용체, 또는 삼중 음성 유방암과 같은 Her2/neu), 간암, 폐암(예를 들어 비 소세포 폐암(NSCLC), 예컨대 편평 및/또는 비 편평 조직학을 갖는 NSCLC, 또는 소세포 간암), 전립선암, 두부 또는 경부암(예를 들어 HPV+ 편평 세포암), 소장암, 및 식도암을 포함하는 췌장을 포함한다. 혈액암의 예는 백혈병(예를 들어, 골수성 백혈병, 림프성 백혈병, 또는 만성 림프구성 백혈병(CLL)), 림프종(예를 들어, 호지킨 림프종(HL), 비 호지킨 림프종(NHL), 미만성 거대 B-세포 림프종(DLBCL), T-세포 임파종, 또는 맨틀 세포 임파계(MCL)) 및 골수종, 예를 들어 다발성 골수종을 포함하지만, 이로 제한되지 않는다. 암은 초기, 중간 또는 진행기 또는 전이성 암에 있을 수 있다.
일부 실시양태에서, 암은 결장직장암(예를 들어, CRC); 흑색종, 예를 들어, 진행기 흑색종(예컨대, 2기-4기 흑색종) 또는 HLA-A2-양성 흑색종; 췌장암, 예컨대 진행된 췌장암; 유방암, 예컨대, 전이성 유방암 또는 삼중 음성 유방암; 두경부암(예를 들어, HNSCC); 식도암; 신세포 암종(RCC), 예를 들어, 신장 투명 세포 암종(ccRCC) 또는 전이성 신장 세포 암종(MRCC); 폐암(예를 들어, NSCLC); 자궁경부암; 방광암; 또는 혈액 악성종양, 예를 들어 백혈병(예를 들어, 림프구성 백혈병) 또는 림프종(예를 들어, 호지킨 림프종(HL), 비 호지킨 림프종(NHL); 미만성 거대 B-세포 림프종(DLBCL), 맨틀 세포 림프종(MCL) 또는 CLL, 예를 들어 재발성 또는 난치성 만성 림프구성백혈병)으로부터 선택된다.
본 출원에 개시된 방법 및 조성물은 상기 언급된 암과 관련된 전이성 병변을 치료하는데 사용될 수 있다.
일부 실시양태에서, 암은 LAG-3을 발현하는 암, 특히 전이성 암이다. 일부 실시양태에서, 암은 PD-L1을 발현하는 암이다. 일부 실시양태에서, 암은 LAG-3 및 PD-L1을 발현하는 암이다.
일부 실시양태에서, 본 출원에 기재된 암은 결장암 및 이의 전이성 암이다.
일부 실시양태에서, 감염은 급성 또는 만성이다. 일부 실시양태에서, 만성 감염은 지속성 감염, 잠복성 감염, 또는 저속 감염이다. 일부 실시양태에서, 만성 감염은 박테리아, 바이러스, 진균 및 원생생물 중 선택된 병원체에 의해 야기된다.
한 실시양태에서, 감염성 질환은 바이러스 감염으로부터 생성된다. 병원성 바이러스의 일부 예는 간염 바이러스(A, B, 및 C형), 인플루엔자 바이러스(A, B, 및 C형), HIV, 헤르페스 바이러스(예를 들어, VZV, HSV-1, HAV-6, HSV-II, CMV, 및 엡스타인 바 바이러스), 아데노바이러스, 플라비바이러스, 에코바이러스, 리노바이러스, 콕사키 바이러스, 코로나 바이러스, 호흡기 세포융합 바이러스, 볼거리 바이러스, 로타바이러스, 홍역 바이러스, 풍진 바이러스, 파보바이러스, 우두 바이러스, HTLV 바이러스, 열매 바이러스, 유두종 바이러스, 연체동물 바이러스, 폴리오 바이러스, 광견병 바이러스, JC 바이러스, 및 절지동물-매개 뇌염 바이러스를 포함한다.
일부 실시양태에서, 감염은 박테리아 감염이다. 박테리아 감염을 야기하는 병원체의 일부 예는 매독균, 클라미디아, 리케차, 마이코박테리아, 스타필로코쿠스, 스트렙토코커스, 폐렴구균, 수막구균, 고노코커서스, 클렙시엘라, 프로테오박테리아, 세라티아, 슈도모나스, 레지오넬라, 코리네박테리움 디프테리아, 살모넬라, 바실리, 콜레라 박테리아, 파상풍 바실리는, 클로스트리디움 보툴리눔, 콜레오트리쿰, 플라스그만 바실러스, 렙토스피라, 및 라임병 스피로케테를 포함한다.
일부 실시양태에서, 감염은 진균 감염이고, 병원성 진균의 일부 칸디다(칸디다 알비칸스, 칸디다 크루세이, 칸디다 글라브라타, 칸디다 트로피칼리스 등), 크립토코커스 네오포르만스, 아스퍼질러스(아스페르길루스 푸미가투스, 아스퍼질러스니거 등), 뮤코랄레스(털곰팡이증, 활털곰팡이 및 거미줄곰팡이), 스포로트릭스 젠키이, 블라스토마이세스 데르마티디스, 파라콕시디오이데스 브라실리엔시스, 콕시디오이데즈 이미티스, 및 히스토플라스마 카프룰라툼을 포함한다.
일부 실시양태에서, 감염은 원생동물 감염, 예컨대 기생충 감염이고, 기생충의 일부 예시는 엔타모에바 히스토리카, 발란티디움 콜라이, 나에글레리아 포울레리, 아칸타모이바 sp., 기아르디아 램브리아, 크립토스포리디움 sp., 뉴모시스티스 카리니, 플라스모듐 비빅스, 바베시아 마이크로티, 트리파노소마 브루케이, 트리파노토소마 크루지, 리슈마니아 도노바니, 톡소플라스마 고니디, 및 니포스트로틸루스 브라실리엔시스를 포함한다.
한 실시양태에서, 감염성 질환은 간염(예를 들어, B형 간염 감염)이다. 항 LAG-3 항체 분자(단독으로 또는 PD-1 축 결합 길항제, 예를 들어 항 PD-1 또는 항 PD-L1 항체와 조합하여)는 치료적 이점을 위해 B형 간염 감염에 대한 통상적인 치료와 조합될 수 있다. 특정 실시양태에서, 항 LAG-3 항체 분자는 B형 간염 항원(예를 들어, 엔게릭스 B) 또는 백신과 조합되어, 및 임의로 알루미늄-함유 보조제와 조합되어 투여된다.
다른 실시양태에서, 감염성 질환은 인플루엔자이다. 특정 실시양태에서, 항 LAG-3 항체 분자는 인플루엔자 항원 또는 백신과 조합하여 투여된다.
본 발명의 항 LAG-3 항체 또는 이의 단편으로 예방 또는 치료되기에 적합한 질환에 대해, WO 2015/138920, WO2016/028672, WO 2015/042246 등이 추가로 참조될 수 있다.
다른 측면에서, 본 발명은 상기 언급된 관련 질환 또는 장애를 치료하기 위한 약품의 준비 또는 제조에서 항 LAG-3 항체 또는 이의 단편 또는 이의 면역접합체의 용도를 제공한다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항체 또는 항체 단편 또는 면역접합체는 병태의 개시 및/또는 병태와 관련된 증상을 지연시킨다.
병용 요법
일부 실시양태에서, 본 출원에 기재된 예방 또는 치료 방법은 PD-1 축 결합 길항제 또는 PD-1 축 결합 길항자를 포함하는 약품 또는 면역접합체와 조합하여, 대상체 또는 개인에게 항체 분자(예를 들어, 항 LAG-3 항체) 또는 본 출원에 개시된 제약 조성물 또는 면역접합체를 투여하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, PD-1 축 결합 길항제는 예를 들어 항 PD-1 항체 또는 항 PD-L1 항체 또는 항 PD-L2 항체를 포함한다.
일부 실시양태에서, PD-1 축 결합 길항제는 PD-1 결합 길항제, PD-L1 결합 길항제 및 PD-L2 결합 길항제를 포함하지만, 이로 제한되지 않는다. "PD-1"에 대한 대안적인 명칭은 CD279 및 SLEB2를 포함한다. "PD-L1"에 대한 대안적인 명칭은 B7-H1, B7-4, CD274, 및 B7-H를 포함한다. PD-L2에 대한 대안적인 명칭은 B7-DC, Btdc 및 CD273을 포함한다. 일부 실시양태에서, PD-1, PD-L1, 및 PD-L2는 인간 PD-1, 인간 PD-L1 및 인간 PD-L2이다. 일부 실시양태에서, PD-1 결합 길항제는 PD-1의 이의 리간드/결합 파트너에의 결합을 억제하는 분자이다. 특정 양태에서, PD-1 리간드/결합 파트너는 PD-L1 및/또는 PD-L2이다. 또 다른 실시양태에서, PD-L1 결합 길항제는 PD-1의 이의 결합 파트너에의 결합을 억제하는 분자이다. 특정 측면에서, PD-L1 결합 파트너는 PD-1 및/또는 B7.1이다. 또 다른 실시양태에서, PD-L2 결합 길항제는 PD-L2의 이의 결합 파트너에의 결합을 억제하는 분자이다. 특정 측면에서, PD-L2 결합 파트너는 PD-1이다. 길항제는 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 면역어드헤신, 융합 단백질 또는 올리고펩티드일 수 있다. 일부 실시양태에서, PD-1 결합 길항제는 항 PD-1 항체(예를 들어, 인간 항체, 인간화 항체, 또는 키메라 항체)이다. 일부 실시양태에서, 항 PD-1 항체는 MDX-1106(니볼루맙, 옵디보), 머크 3475(MK-3475, 펨브롤리주맙, 키트루다) 및 CT-011(피딜리주마브)로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, PD-1 결합 길항제는 면역어드헤신(예를 들어, 불변 영역(예컨대, 면역글로불린 서열의 Fc 영역)에 융합된 PD-L1 또는 PD-L2의 세포외 또는 PD-1 결합 부분을 포함하는 면역글로불린)이다. 일부 실시양태에서, PD-1 결합 길항제는 AMP-224이다. 일부 실시양태에서, PD-L1 결합 길항제는 항 PD-L1 항체이다. 일부 실시양태에서, PD-L1 결합 길항제는 YW243.55.S70, MPDL3280A, MEDI4736, 및 MDX-1105로부터 선택된다. BMS-936559로도 알려진 MDX-1105는 WO 2007/005874에 기술된 항 PD-L1 항체이다. 항체 YW243.55.S70(각각 서열 번호 20 및 21로 나타낸 중쇄 가변 영역 서열 및 경쇄 가변 영역 서열을 가짐)은 WO 2010/077634 A1에 기재된 항 PD-L1 항체이다. MDX-1106-04, ONO-4538, BMS-936558, 또는 니볼루맙으로도 알려진 MDX-1106은 WO 2006/121168에 기재된 항 PD-1 항체이다. MK-3475, SCH-900475, 또는 펨브롤리주맙으로도 알려진 머크 3475는 WO 2009/114335에 기재된 항 PD-1 항체이다. hBAT, hBAT-1 또는 피딜리주맙으로도 알려진 CT-011은 WO 2009/101611에 기술된 항 PD-1 항체이다. B7-DCIg로도 알려진 AMP-224는 WO 2010/027827 및 WO 2011/066342에 기술된 PD-L2-Fc 융합 가용성 수용체이다. 일부 실시양태에서, 항 PD-1 항체는 MDX-1106이다. "MDX-1106"에 대한 대안적인 명칭은 MDX-1106-04, ONO-4538, BMS-936558, 또는 니볼루맙을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항 PD-1 항체는 니볼루맙(CAS 등록 번호: 946414-94-4)이다. 바람직한 실시양태에서, 항 PD-1 항체는 본 출원에 기재된 바와 같은 "항체 C" 또는 "항체의 D"이다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항 LAG-3 항체는 항 PD-L1 항체와 조합된 치료에 사용될 수 있다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항 PD-L1 항체는 항 인간 PD- L1 항체이다. 일부 실시양태에서, 본 출원에 개시된 항 PD-L1 항체는 IgG1 항체, IgG2 항체, 또는 IgG4 항체이다. 일부 실시양태에서, 항 PD-L1 항체는 단일클론 항체이다. 일부 실시양태에서, 항 PD-L1 항체는 인간화 항체이다. 일부 실시양태에서, 항 PD-L1 항체는 키메라 항체이다. 일부 실시양태에서, 항 PD-L1 항체의 프레임워크 서열의 적어도 일부는 인간 컨센서스 프레임워크 서열이다. 한 실시양태에서, 본 발명의 항 PD-L1 항체는 또한 이의 항체 단편, 바람직하게는 Fab, Fab', Fab'-SH, Fv, 단일-쇄 가변 단편(예를 들어, scFv) 또는 (Fab')2, 단일 도메인 항체, 디아바디(dAb), 및 선형 항체로부터 선택된 항체 단편을 포함한다.
일부 특정 실시양태에서, 본 발명의 항 PD-L1 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 하기를 포함한다:
(i) 서열 번호 57(HCDR)로 나타낸 중쇄 가변 영역의 3개의 상보성 결정 영역, 및/또는
(ii) 서열 번호 58(LCDR)로 나타낸 경쇄 가변 영역의 3개의 상보성 결정 영역.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항 PD-L1 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 중쇄 가변 영역(VH) 및/또는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하며, 여기서
(i) VH는 상보성 결정 영역(CDR) HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하고, 여기서 HCDR 1은 서열 번호 51의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고; HCDR2는 서열 번호 52로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고 이로 구성되며; 그리고 HCDR3은 서열 번호 53의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되며;
및/또는
(ii) VL은 상보성 결정 영역(CDR) LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하며, 여기서 LCDR1은 서열 번호 54의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고; LCDR2는 서열 번호 55의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되며; LCDR3은 서열 번호 56으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항 PD-L1 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 중쇄 가변 영역 VH 및/또는 경쇄 가변 영역 VL을 포함하며, 여기서,
(a) 중쇄 가변 영역 VH
(i) 서열 번호 57로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고,
(ii) 서열 번호 57로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 또는
(iii) 서열 번호 57로부터 선택된 아미노산 서열과 비교하여 1개 이상(바람직하게는 10개 이하, 더욱 바람직하게는 5개, 4개, 3개, 2개 또는 1개 이하)의 아미노산 변경(바람직하게는 아미노산 치환, 및 더욱 바람직하게는 아미노산 보존적 치환)을 갖는 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 바람직하게는, 아미노산 변경은 CDR에서 발생하지 않고;
및/또는
(b) 경쇄 가변 영역 VL
(i) 서열 번호 58로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고,
(ii) 서열 번호 58의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 또는
(iii) 서열 번호 58로부터 선택된 아미노산 서열과 비교하여 1개 이상(바람직하게는 10개 이하, 보다 바람직하게는 5개, 4개, 3개, 2개 또는 1개 이하)의 아미노산 변경(바람직하게는 아미노산 치환, 및 보다 바람직하게는 아미노산 보존적 치환)을 갖는 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 바람직하게는 아미노산 변경은 CDR에서 발생하지 않는다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항 PD-L1 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 중쇄 및/또는 경쇄를 포함하며, 여기서
(a) 중쇄
(i) 서열 번호 59로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고,
(ii) 서열 번호 59로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 또는
(iii) 서열 번호 59로부터 선택되는 아미노산 서열과 비교하여 1개 이상(바람직하게는 20 또는 10 이하, 보다 바람직하게는 5, 4, 3, 2 또는 1개 이하)의 아미노산 변화(바람직하게는 아미노산 치환, 보다 바람직하게 아미노산 보존적 치환)를 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 바람직하게는, 상기 아미노산 변화는 중쇄의 CDR에서 발생하지 않고, 더 바람직하게는 상기 아미노산 변화가 중쇄 가변 영역에서 발생하지 않고;
및/또는
(b) 경쇄
(i) 서열 번호 60으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고,
(ii) 서열 번호 60으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 또는
(iii) 서열 번호 60으로부터 선택되는 아미노산 서열과 비교하여 1개 이상(바람직하게는 20 또는 10 이하, 보다 바람직하게는 5, 4, 3, 2 또는 1개 이하)의 아미노산 변이(바람직하게는 아미노산 치환, 보다 바람직하게 아미노산 보존 치환)를 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 바람직하게는, 아미노산 변이는 경쇄의 CDR에서 발생하지 않고, 보다 더 바람직하게는 아미노산 변이들은 경쇄 가변 영역에서 발생하지 않는다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항 LAG-3 항체에 대한 변형은 또한 항 PD-L1 항체에 적용 가능하다.
일부 추가 실시양태에서, 항 LAG-3 항체 또는 이의 단편은 단독으로 또는 PD-1 축 결합 길항제와 조합하여, 또한 하나 이상의 다른 요법, 예를 들어 치료 양식 및/또는 치료제와 조합하여 투여될 수 있다.
일부 실시양태에서, 치료 양식은 수술(예를 들어, 종양 절제술), 방사선 요법(예를 들어, 조사 영역이 설계되는 3차원 컨포멀 방사선 요법을 수반하는 외부 빔 요법), 부분 조사(예를 들어, 미리 선택된 표적 또는 장기에 대한 조사), 집속 조사 등을 포함한다. 집속된 조사는 정위적 방사선수술, 분별된 정위적 무선수술, 및 강도-조절된 방사선요법으로부터 선택될 수 있다. 집속된 조사는, 예를 들어, WO 2012/177624에 기재된 바와 같이, 입자 빔(양성자), 코발트-60(광자) 및 선형 가속기(X-선)로부터 선택된 방사선 소스를 가질 수 있다.
방사선 요법은 외부 빔 요법, 내부 방사선 요법, 임플란트 방사선요법, 정위적 방사선수술, 전신 방사선요법, 방사선 요법 및 영구적 또는 일시적 간질성 근접요법을 포함하지만 이에 제한되지 않는 방법들 중 하나 또는 이들의 조합을 통해 수행될 수 있다. 용어 "근접요법"은 종양 또는 다른 증식성 조직 질환의 부위에서 또는 그 부근에서 신체 내로 삽입된 공간적으로 한정된 방사성 물질에 의해 전달된 방사선 요법을 지칭한다. 상기 용어는 방사성 동위원소(예를 들어, At-211, I-131, I-125,Y-90, Re-186, Re-188, Sm-153, Bi-212, P-32, 및 Lu의 방사성 동위원소)에 대한 노출을 포함하지만, 이에 제한되지 않는 것으로 의도된다. 적합한 방사선 공급원은 고체 및 액체를 포함한다. 비 제한적인 예로서, 방사선 공급원은 방사성 핵종, 예컨대 고체 공급원으로서 I-125, I-131, Yb-169 및 Ir-192, 고체 공급원으로서의 I- 125, 또는 광자, 베타 입자, 감마 방사선 또는 다른 치료 광선을 방출하는 다른 방사성 핵물질일 수 있다. 방사성 물질은 또한 임의의 방사성 핵종 용액, 예를 들어 I-125 또는 I-131 용액으로부터 제조된 유체일 수 있거나, 방사성 유체는 고체 방사성 핵종의 작은 입자(예를 들어, Au-198 및 Y-90)를 함유하는 적합한 유체의 슬러리를 사용함으로써 제조될 수 있다. 또한, 방사성 핵종은 겔 또는 방사성 미소구에 함유될 수 있다.
일부 실시양태에서, 치료제는 화학요법제, 세포독성제, 백신, 다른 항체, 항감염 활성제, 및 면역조절제(예컨대 공동자극 분자의 활성화제 또는 면역 체크포인트 분자의 억제제)로부터 선택된다.
예시적인 세포독성제는 항미세소관 약물, 토포아이소머라제 억제제, 항대사물질, 유사분열 억제제, 알킬화제, 안트라사이클린, 빈카 알칼로이드, 인터칼레이터, 신호 전달 경로를 간섭할 수 있는 활성제, 활성 아폽토시스제, 프로테아좀 억제제, 및 조사(예를 들어, 부분 또는 전체 신체 조사(예컨대, 감마 방사선))를 포함한다.
다른 예시 항체는 면역 체크포인트 억제제(예를 들어, 항 CTLA-4, 항 TIM-3, 및 항 CEACAM), 면역 세포를 자극하는 항체(예를 들어, 효능성 GITR 항체 또는 CD137 항체), 항암 항체(예를 들어, 리툭시맙(Rituxan® 또는 MabThera®), 트라스투주맙(Herceptin®), 토시투모맙(Bexxar®), 이브리투모맵(Zevalin®), 알렘투주마브(Campath®), 에프라투주맙(Lymphocide®), 베바시주맙(Avastin®), 에를로티닙(Tarceva®), 세툭시맙(Erbitux®) 등을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.
예시적인 화학치료제는 아나스트로졸(Arimitex®), 비칼루타미드(Casodex®), 블레오마이신 설페이트(Blenoxane®), 부술판(Myleran®), 모술판 주사액(Busulfex®), 카페시타빈(Xeloda®), N4-펜틸옥시카보닐-5-데옥시-5-플루오로시티딘, 카보플라틴(Parapalatin®), 카무스틴(BiCNU®), 람부실(Leukeran®), 시스플라틴(Platinol®), 클라드리빈(Leustatin®), 사이클로포스파미드(Cytoxan® 또는 Neosar®), 사이토신 아라비노사이드, 사이트로신 아베노사이드(Cytosar-U®), 데포사이토시스(DepoCyt®), 다카바진(DTIC-Dome®), 덱티노마이신(액티노마이신 D 및 코스메곤), 다우노마이신 하이드로클로라이드(Cerubidine®), 안노마이신 시트레이트 리포솜 주사액(DaunoXome®), 덱사메타손, 도세탁셀(Taxotere®), 독소루비신 염산염(Adriamycin® 및 Rubex®) 및 에토포시드(Vepesid®), 플루다라빈 포스페이트(Fludara®), 5-플루오로우라실(Adrucil® 및 Efudex®), 플루타미드(Eulexin®), 테자씨티빈, 겜시타빈(디플루오로데옥시시티딘), 히드록시우레아(Hydrea®), 이다마이신(Idamycin®), 이포스파미드(IFEX®), 이리노테칸(Camptosar®), L-아스파라기나제(ELSPAR®), 칼슘 폴리네이트, 멜팔란(Alkran®), 6-메르캅토퓨린(Purinethol®), 메토트렉세이트(Folex®), 미톡산트론, 겜투주마브 오조가미신(미로타그), 파클리탁셀(Taxol®), 포에닉스(이트륨 90/MX-DTPA), 펜토스타틴, 카르무스틴 임플란트(Gliadel®)와 조합한 폴리페프로산 20, 타목시펜 시트레이트(Nolvadex®), 테니포시드(Vumon®), 6-티오구아닌, 티오테파, 티라파자민(Tirazoline®), 주사용 토포테칸 하이드로클로라이드(Hycamptin®), 빈블라스틴(Velban®), 빈크리스틴(Oncovin®), 비노렐빈, 이브루티닙, 지릴라이드(이델라리시브), 및 브렌툭시마브 베도틴을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.
예시적인 백신은 암 백신을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 백신은 DNA-기반 백신, RNA-기반의 백신, 또는 바이러스 형질도입-기반 백신일 수 있다. 암 백신은 예방적 또는 치료적일 수 있다. 일부 실시양태에서, 암 백신은 일부 실시양태에서 개인화된 펩티드 백신인 펩티드 암 백신이다. 일부 실시양태에서, 펩티드 암 백신은 긴 다가 펩티드, 다중 펩티드, 펩티드 혼합물, 하이브리드 펩티드, 또는 펩티드-펄스된 수지상 세포 백신이다(예를 들어, Yamada et al., Cancer Sci, 104: 14-21, 2013 참조).
예시적인 활성 항감염제는 상기 기재된 바와 같은 항바이러스제, 항진균제, 항원충제, 및 항균제, 예컨대 뉴클레오시드 유사체(지도부딘(AST), 간시클로비르, 포스카넷, 또는 시도비르)를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.
면역조절제는 면역 체크포인트 분자의 억제제 및 공동자극 분자의 활성화제를 포함한다.
일부 실시양태에서, 면역 체크포인트 분자의 억제제는 CTLA-4, TIM-3, VISTA, BTLA, TIGIT, LAIR1, CD160, 2B4, CEACAM(예를 들어, CEACAM-1 및/또는 CEACAM-5), 및/ 또는 TGFR의 억제제이다. 분자의 억제는 DNA, RNA, 또는 단백질 수준에서 일어날 수 있다. 일부 실시양태에서, 억제 핵산(예를 들어, dsRNA, siRNA, 또는 shRNA)을 사용하여 면역 체크포인트 분자의 발현을 억제할 수 있다. 다른 실시양태에서, 면역 체크포인트 분자의 억제제는 면역 체크포인트 분자에 결합하는 폴리펩티드, 예를 들어 가용성 리간드 또는 항체 또는 항체 단편이다. 예시적인 TIM-3 항체 분자는 MBG220, MBG227, 및 MBG219를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.
다른 실시양태에서, 면역조절제는 CTLA4의 가용성 리간드(예를 들어, CLTA-4-Ig 또는 TIM-3-Ig) 또는 항체 또는 항체 단편이다. 예를 들어, 항 LAG-3 항체 분자(단독 또는 PD-1 축 결합 길항제를 가짐)는 CTLA-4 항체(예를 들어, 이필리무맙)와 조합하여 투여될 수 있다. 예시적인 항 CTLA-4 항체는 트레멜리무맙(이전에 티실리무맙으로서 공지된, PFIZER 로부터 입수가능한 IgG 2 단일클론 항체, 및 CP-675,206); 및 이필리무맙(MDX-010, CAS 번호 477202-00-9로도 공지된 CTLA4 항체)을 포함한다.
일부 실시양태에서, 면역조절제는 공동자극 분자의 활성화제 또는 효능제이다. 한 실시양태에서, 공동자극 분자의 효능제는 OX40, CD2, CD27, CDS, ICAM-1, LFA-1(CD11a/CD18), ICOS (CD278), 4-1BB(CD137), GITR, CD30, CD40, BAFFR, HVEM, CD7, LIGHT, NKG2C, SLAMF7, NKp80, CD160, B7-H3, 또는 CD83 리간드로부터 선택된 분자의 효능제(예를 들어, 효능성 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 가용성 융합)이다. 또 다른 실시양태에서, 항 LAG-3 항체 또는 이의 단편을 단독으로 또는 PD-1 축 결합 길항제와 조합하여, CD28, CD27, ICOS 및 GITR의 공동자극 도메인을 포함하는 공동자극 분자(예를 들어, 양성 신호와 연관된 효능제)와 조합하여 사용한다. 예시적인 GITR 효능제는 예를 들어, GITR 융합 단백질 및 항 GITR 항체(예를 들어, 2가 항 GITR 항체), 예를 들어 미국 특허 번호 6,111,090, 유럽 특허 번호 090505B1, 미국 특허 번호 8,586,023, 및 PCT 공개 번호 WO 2010/003118 및 2011/090754에 기재된 GITR 융합 단백질을 포함한다. 예시적인 항 GITR 항체는 TRX518이다.
일부 추가 실시양태에서, 항 LAG-3 항체 또는 이의 단편은 단독으로 또는 PD-1 축 결합 길항제와 조합하여 티로신 키나제 억제제(예를 들어, 수용체 티로신 키나제(RTK) 억제제)와 조합하여 사용될 수도 있다. 예시적인 티로신 키나제 억제제는 표피 성장 인자(EGF) 경로 억제제(예를 들어, 표피 성장 인자를 갖는 수용체(EGFR) 억제제), 혈관 내피 성장 인자(VEGF) 경로 억제제(예를 들어 혈관 내피성장 인자를 갖는 인자 수용체(VEGFR) 억제제, 예컨대 VEGFR-1 억제제, VEGFR-2 억제제 및 VEGFR-3 억제제), 혈소판-유래 성장 인자(PDGF) 경로 억제제(예를 들어, 혈소판-유도된 성장 인자 수용체(PDGFR) 억제제, 예를 들어, PDGFR-베타 억제제), RAF-1 억제제, KIT 억제제, 및 RET 억제제를 포함하며, 이에 제한되지 않는다.
일부 실시양태에서, 항 LAG-3 항체 또는 이의 단편은, 단독으로 또는 PD-1 축 결합 길항제와 조합하여, PI3K 억제제, mTOR 억제제, BRAF 억제제, MEK 억제제 및/또는 JAK2 억제제 등과 조합하여 사용될 수 있다.
본 발명의 임의의 방법의 일부 실시양태에서, 본 발명의 항 LAG-3 항체 또는 이의 단편은 단독으로 또는 PD-1 축 결합 길항제와 조합하여, 종양 항원과 조합하여 투여된다. 항원은 예를 들어 종양 항원, 바이러스 항원, 박테리아 항원, 또는 병원체로부터의 항원일 수 있다. 일부 실시양태에서, 종양 항원은 단백질을 포함한다. 일부 실시양태에서, 종양 항원은 핵산을 포함한다. 일부 실시양태에서, 종양 항원은 종양 세포이다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항 LAG-3 항체 또는 이의 단편은, 단독으로 또는 PD-1 축 결합 길항제와 조합하여, 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포(예를 들어, 세포독성 T 세포 또는 CTL)의 양자전이를 포함하는 요법과 조합하여 투여될 수 있다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항 LAG-3 항체 또는 이의 단편은 단독으로 또는 PD-1 축 결합 길항제와 조합하여 항종양제와 조합하여 투여될 수 있다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항 LAG-3 항체 또는 이의 단편은, 단독으로 또는 PD-1 축 결합 길항제와 조합하여, 종양분해 바이러스와 조합하여 투여될 수 있다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항 LAG-3 항체 또는 이의 단편은 단독으로 또는 PD-1 축 결합 길항제와 조합하여 사이토카인과 조합하여 투여될 수 있다. 사이토카인은 항 LAG-3 항체 분자와의 융합 분자로서, 또는 별도의 조성물로서 투여될 수 있다. 한 실시양태에서, 항 LAG-3 항체는 1개, 2개, 3개 또는 이를 초과하는 사이토카인과 조합하여(예를 들어, 융합 분자로서 또는 별개의 조성물로서) 투여된다. 한 실시양태에서, 사이토카인은 IL-1, IL-2, IL-12, IL-15 및 IL-21 중 1, 2, 3 또는 그 이상으로부터 선택된 인터류킨(IL)이다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항체 또는 이의 단편은, 단독으로 또는 PD-1 축 결합 길항제와 조합하여, 당업계에서 통상적인 암 요법과 조합될 수 있고, 통상적인 암 치료는 (i) 방사선 요법(예를 들어, 방사선 요법, X-선 요법, 및 방사선 조사), 또는 이온화 방사선으로 암 세포를 사멸시키고 종양을 감소시킬 수 있고; 방사선 요법은 외부 빔 방사선 요법(EBRT) 또는 내부 상완요법; (ii) 화학요법, 또는 일반적으로 빠르게 분열하는 세포에 영향을 미치는 세포독성 약물의 적용; (iii) 표적화된 요법, 또는 작용제(예를 들어, 티로신 키나제 억제제, 예컨대 이마티닙 및 게피티닙; 단일클론 항체; 광역학적 요법)로 암 세포 단백질의 탈조절에 특이적으로 영향을 미치는 것; (iv) 면역요법, 또는 증강된 숙주 면역 반응(예를 들어, 백신); (v) 호르몬 요법 또는 차단성 호르몬(예컨대, 종양이 호르몬에 민감한 경우); (vi) 혈관신생 억제제, 또는 혈관신생 및 성장을 차단하는 요법; 및 (vii) 완화 관리, 또는 통증, 메스꺼움, 구토, 설사, 및 출혈을 관리하기 위한 건강관리의 품질을 향상시키는 것과 관련된 이러한 요법을 포함하지만, 이에 제한되지 않으며, 여기서 모르핀 및 옥시코돈과 같은 진통제 및 온단세트론 및 아프레피탄트와 같은 구토 억제제가 보다 공격적인 치료 요법을 허용하도록 제공된다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항체 또는 이의 단편은 단독으로 또는 PD-1 축 결합 길항제와 조합하여, 숙주 면역 기능을 향상시키는 통상적인 방법과 조합될 수 있다. 통상적인 방법은 (i) 예를 들어, (a) 이종 MHC 동종항원을 암호화하는 DNA를 종양에 주사하거나, (b) 생검 종양 세포를 면역 항원 인식의 가능성을 증가시키는 유전자(예를 들어, 면역자극성 사이토카인, GM-CSF, 공동자극성 분자 B7.1, 및 공동-촉진성 분자 B7.2)로 형질 감염시킴에 의한 APC 강화, 및 (ii) 입양 세포 면역요법, 또는 활성화된 종양-특이적 T 세포 요법을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 입양 세포 면역요법은 종양-침윤 숙주 T 림프구를 단리하고, 시험관내, 예를 들어 IL-2 또는 종양 또는 둘 다를 통해 집단의 확장을 자극하는 것을 포함하고; 또한, 단리된 기능장애 T 세포는 본 발명의 항체의 시험관내 적용을 통해 활성화될 수 있고, 이어서 활성화된 T 세포는 숙주에 재투여될 수 있다.
상기 기재된 다양한 조합 요법은 치료를 위해 추가로 조합될 수 있다.
항 LAG-3 항체와 다른 치료 양식 또는 작용제의 조합의 더 많은 예는 WO 2015/138920, WO 2016/028672, WO2015/042246 등에서 발견될 수 있다.
이러한 병용 요법은 공동 투여(여기서, 2개 이상의 치료제가 동일한 제형 또는 별도의 제형에 함유됨) 및 별도의 투여 둘 다를 포함하고, 여기서 본 발명의 항체의 투여는 다른 요법, 예를 들어, 치료 양식 또는 치료제의 투여 전에, 그와 동시에, 및/또는 후에 일어날 수 있다. 항체 분자 및/또는 다른 치료제, 예를 들어 치료제 또는 치료 양식은 활성 질환 동안 또는 완화 또는 비교적 경미한 활성 질환 기간 동안 투여될 수 있다. 항체 분자는 다른 치료법 이전에, 다른 치료법과 동시에, 다른 치료요법 이후에, 또는 질병의 완화 과정에서 투여될 수 있다.
한 실시양태에서, 항 LAG-3 항체의 투여 및 다른 요법(예컨대 치료 양식 또는 치료제)의 투여는 서로 약 1개월 내에, 또는 약 1, 2, 또는 3주 내에, 혹은 약 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 또는 6일 내에 이루어진다.
일부 실시양태에서, 본 출원에 기재된 항체 조합물은 별도로 (예를 들어, 별도의 항체로서) 또는 연결로 (예를 들어, 이중특이성 또는 삼중특이성 항체 분자로서) 투여될 수 있다.
항 LAG-3 항체 대신에 또는 이에 더하여 본 발명의 면역접합체를 사용함으로써 임의의 치료법이 수행될 수 있을 것으로 이해됩니다.
투여 경로 및 투여량
본 발명의 항체(또는 항체를 함유하는 제약 조성물 또는 면역접합체, 또는 임의의 다른 치료제)는 비경구 투여, 폐내 투여, 비강내 투여 및 필요한 경우 국소 치료에 의한 병변내 투여를 포함하는 임의의 적합한 수단에 의해 투여될 수 있다. 비경구 주입은 근육내, 정맥내, 동맥내, 복강내 또는 피하 투여를 포함한다. 상기 약제는 주사, 예를 들어, 정맥내 또는 피하 주사와 같은 임의의 적합한 수단에 의해 단기간 또는 장기간 치료에 따라 어느 정도 투여될 수 있다. 단일 투여, 또는 다중 투여, 볼루스 주사, 및 다중 시점에서의 펄스 주입을 포함하지만 이에 제한되지 않는 다양한 투여 스케줄이 본 출원에서 고려된다.
질병을 예방 또는 치료하기 위해, 본 발명의 항체의 적절한 투여량(단독으로 또는 하나 이상의 다른 치료제와 조합하여 사용되는 경우)은 치료되는 질병의 유형, 항체의 유형, 질병의 심각도 및 진행, 항체가 예방 또는 치료 목적으로 투여되는지 여부, 이전의 치료, 환자의 임상 이력 및 항체에 대한 반응, 및 주치의의 판단에 따라 달라질 것이다. 항체는 단일 용량을 통해 또는 일련의 치료를 통해 환자에게 적합하게 투여된다.
일부 실시양태에서, 투여 요법은 최적의 목적하는 반응(예를 들어, 치료 반응)을 제공하도록 조정된다. 예를 들어, 단일 볼루스 주사가 제공될 수 있거나, 수개의 개별 용량이 시간에 걸쳐 투여될 수 있거나 용량이 치료 조건의 임계성에 의해 지시되는 바와 같이 비례하여 감소되거나 증가될 수 있다. 투여량 투여의 용이성 및 균일성을 위해 투여 단위 형태로 비경구 조성물을 제형화하는 것이 특히 유리하다. 본 출원에 사용된 바와 같은 투여 단위 형태는 치료되는 대상체에 대한 단일 용량으로서 적합한 물리적으로 분리된 단위를 지칭하며; 각각의 단위는 소정의 양의 활성 화합물을 함유하고, 이는 요구되는 제약 담체와 함께 목적하는 치료 효과를 생성하도록 계산된다. 본 발명의 투여 단위 형태의 명세는 (a) 활성 화합물의 독특한 특성 및 달성될 특정 치료 효과, 및 (b) 개체에서 감수성 요법을 위해 활성 화합물을 조합하는 분야에서 독특한 제한에 직접적으로 의존한다.
일부 실시양태에서, 항체 분자의 치료학적으로 유효한 양 또는 예방학적으로 유효한 양의 예시적인 비 제한적인 범위는 0.1 내지 30mg/kg, 바람직하게는 1 내지 25mg/kg, 더욱 바람직하게는 5 내지 15mg/kg이다. 항 LAG-3 항체 분자의 용량 및 치료 요법은 당업자에 의해 결정될 수 있다. 특정 실시양태에서, 항 LAG-3 항체 분자는 약 1 내지 40mg/kg, 예를 들어 1 내지 30mg/kg, 예컨대 약 5 내지 25mg/kg, 약 10 내지 20mg/kg,약 1 내지 5mg/kg, 1 내지 10mg/kg, 5 내지 15mg/kg, 10 내지20mg/kg, 15 내지 25mg/kg, 또는 약 3mg/kg의 용량으로 주사(예를 들어, 피하 또는 정맥내)에 의해 투여된다. 상기 요법은 예를 들어 1주 1회 내지 2주, 3주 또는 4주마다 1회 범위일 수 있다. 한 실시양태에서, 항 LAG-3 항체 분자는 약 10 내지 20mg/kg의 용량으로 격주로 투여된다. 항체 분자는 약 35 내지 440mg/m2, 바람직하게는 약 70 내지 310mg/m2, 더욱 바람직하게는 약 110 내지 130mg/m2의 용량을 달성하기 위해, 20mg/분 초과, 예컨대 20 내지 40mg/분의 속도, 바람직하게는 40mg/분 또는 이를 초과하는 속도로 정맥내 주입에 의해 투여될 수 있다. 한 실시양태에서, 약 3mg/kg의 용량은 약 110 내지 130mg/m2의 주입 속도로 달성된다. 한 실시양태에서, 항 LAG-3 항체 분자는 약 3 내지 800mg(예를 들어, 약 3, 20, 80, 240 또는 800mg)의 용량으로 투여(예를 들어, 정맥내 투여)된다. 특정 실시양태에서, 항 LAG-3 항체 분자는 약 20 내지 800mg(예를 들어, 약 3, 20, 80, 240, 또는 800mg)의 용량으로 단독으로 투여된다. 다른 실시양태에서, 항 LAG-3 항체 분자는 제2 활성제 또는 치료 양식(예를 들어, 본 출원에 기재된 제2 활성 작용제 또는 치료 양식들)과 조합하여 약 3 내지 240mg(예를 들어, 약 3, 20, 80 또는 240mg)의 용량으로 투여된다. 한 실시양태에서, 항 LAG-3 항체 분자는 각 8주 주기(예를 들어, 제1주, 제3주, 5주 및 제7주)에 2주마다 투여되며, 예를 들어 96주까지 지속된다.
일부 실시양태에서, 분자는 약 35 내지 440mg/m2, 바람직하게는 약 70 내지 310mg/m2, 더욱 바람직하게는 약 110 내지 130mg/m2의 용량을 달성하기 위해, 20mg/분 초과, 예컨대 20 내지 40mg/분의 속도, 바람직하게는 40mg/분 또는 이를 초과하는 속도로 정맥내 주입에 의해 투여될 수 있다. 한 실시양태에서, 약 3mg/kg의 용량은 약 110 내지 130mg/m2의 주입 속도로 달성된다. 다른 실시양태에서, 항체 분자는 약 1 내지 100mg/m2, 예컨대 약 5 내지 50mg/m2 및 약 7 내지 25mg/m2 바람직하게는 약 10mg/m2의 용량을 달성하기 위해, 10mg/분 미만, 예를 들어 5mg/분 이하의 속도로 정맥내 주입에 의해 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 항체는 약 30분의 기간에 걸쳐 주사된다.
또 다른 실시양태에서, 항 LAG-3 항체 분자는 항 PD-1 항체와 조합되어 투여된다. 사용될 수 있는 항 PD-1 항체 분자의 예시적인 용량은 약 1 내지 10mg/kg(예를 들어, 3mg/kg)의 용량을 포함한다. 항 LAG-3 항체 분자는 약 20 내지 800mg, 예를 들어 약 20, 80, 240 또는 800mg의 용량으로 조합되어 투여될 수 있다. 한 실시양태에서, 항 LAG-3 항체 분자는 각 8주 주기(예를 들어, 제1주, 제3주, 5주 및 제7주)에 2주마다 투여되며, 예를 들어 96주까지 지속된다.
진단 및 검출을 위한 방법 및 조성물
특정 실시양태에서, 본 출원에 제공된 항 LAG-3 항체 또는 이의 항원 결합 단편 중 임의의 것은 생물학적 샘플에서 LAG-3의 존재를 검출하기 위해 사용될 수 있다. 본 출원에서 사용되는 용어 "검출"은 정량적 또는 정성적 검출을 포함하고, 예시적인 검출은 면역조직화학, 면역세포화학, 유세포 분석법(예를 들어, FACS), 항체 분자와 복합체화된 자기 비드, ELISA, 및 PCR 기술(예를 들어, RT-PCR)을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 생물학적 샘플은 생물학적 공급원의 혈액, 혈청 또는 다른 유체 샘플이다. 특정 실시양태에서, 생물학적 샘플은 세포 또는 조직을 포함한다. 일부 실시양태에서, 생물학적 샘플은 증식성 또는 암성 병변으로부터 유래된다.
한 실시양태에서, 항 LAG-3 항체는 진단 또는 검출 방법에 사용하기 위해 제공된다. 다른 측면에서, 생물학적 샘플에서 LAG-3의 존재를 검출하는 방법이 제공된다. 특정 실시형태에서, 상기 방법은 생물학적 샘플 중의 LAG-3 단백질의 존재를 검출하는 단계를 포함한다. 특정 실시양태에서, LAG-3은 인간 LAG-3이다. 특정 실시양태에서, 상기 방법은 항 LAG-3 항체가 LAG-3에 결합하도록 하는 조건 하에 생물학적 샘플을 본 출원에 기재된 바와 같은 항 LAG-3 항체와 접촉시키는 단계, 및 복합체가 항 LAG-3 항체 및 LAG-3에 의해 형성되는지 여부를 검출하는 단계를 포함한다. 복합체의 형성은 LAG-3의 존재를 나타낸다. 상기 방법은 시험관내 또는 생체내 방법일 수 있다. 한 실시양태에서, 항 LAG-3 항체는 항 LAG-3 항체로 치료하기에 적합한 대상체, 예를 들어, LAG-3은 대상체를 선택하기 위한 바이오마커를 선택하기 위해 사용된다.
한 실시양태에서, 본 발명의 항체는 암 또는 종양을 진단하는데, 예를 들어 대상체에서 본 출원에 기재된 질환(예를 들어, 과증식성 또는 암성 질환)의 치료 또는 진행, 진단 및/또는 병기를 평가(예를 들어, 모니터링)하는데 사용될 수 있다.
특정 실시양태에서, 표지된 항 LAG-3 항체가 제공된다. 표지는 직접적으로 검출되는 표지 또는 모이어티(예를 들어, 형광 표지, 발색단 표지, 전자-밀도 표지, 화학발광 표지, 및 방사성 표지), 뿐만 아니라 예컨대 효소 또는 리간드, 예를 들어 효소 반응 또는 분자 상호작용에 의해 간접적으로 검출되는 모이어티를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 예시적인 표지는 32P, 14C, 125I, 3H, 및 131I의 방사성 동위원소, 형광단(예를 들어, 희토류 킬레이트 또는 루시페린 및 이의 유도체), 로다민 및 이의 유도체와, 단실, 우벨리페론, 루시페라제 [예를 들어 반딧불이 루시퍼라아제 및 박테리아 루시페라아제(미국 특허 번호 4737456)], 루시페린, 2,3-디히드로프탈라진디온, 서양고추냉이 퍼옥시다제(HR), 알칼리성 포스파타제, 베타-갈락토시다제, 글루코아밀라제, 리시제, 탄수화물 옥시다제(예를 들어, 글루코스 옥시다제, 갈락토스 옥시다제 및 글루코스-6-포스페이트 데히드로게나제), 헤테로시클릭 옥시다제(예를 들어 리오카제 및 크산틴 옥시다제), 과산화수소를 이용하여 염료 전구체를 산화시키는 효소(예를 들어 HR, 락토퍼옥시다제 또는 마이크로퍼옥시다아제), 비오틴/아비딘, 스핀 라벨, 파지 라벨, 안정한 자유 라디칼 등을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.
본 출원에 제공된 본 발명의 일부 실시양태에서, 샘플은 항 LAG-3 항체로의 치료 전에 수득된다. 일부 실시양태에서, 샘플은 항암 약물을 사용한 치료 전에 수득된다. 일부 실시양태에서, 샘플은 암이 전이된 후에 수득된다. 일부 실시양태에서, 샘플은 포르말린-고정된, 파라핀-포매된(FFPE) 샘플이다. 일부 실시양태에서, 샘플은 생검(예를 들어, 코어 생검) 시편, 외과용 시편(예를 들어, 외과용 절제술로부터의 시편) 또는 미세-침 흡인물이다.
일부 실시양태에서, LAG-3은 치료 전에, 예를 들어 초기 치료 전에 또는 특정 치료로부터의 간격 후의 치료 전에 검출된다.
일부 실시양태에서, 대상체(예를 들어, 샘플, 예를 들어 대상체의 암 세포를 함유하는 샘플)에서 LAG-3의 존재를 검출함으로써 LAG-3, 값을 결정하는 단계; LAG-3) 값을 기준 값과 비교하는 단계; 및 LAG-3 값이 기준 값보다 큰 경우, 치료학적으로 유효한 양의 항 LAG-3 항체(예를 들어, 본 출원에 기재된 항 LAG-3 항체)를 단독으로 또는 PD-1 축 결합 길항제의 조합으로, 선택적으로 하나 이상의 다른 요법과 조합하여 대상체에게 투여하여 종양 또는 감염을 치료하는 단계를 포함하는, 종양 또는 감염의 치료 방법이 제공된다.
본 발명의 항 LAG-3 항체의 예시적인 서열
표 1. 본 발명의 예시 항체의 중쇄 및 경쇄 가변 영역의 CDR 서열
Figure pct00008
표 2. 본 발명의 예시 항체의 중쇄 및 경쇄 가변 영역의 서열
Figure pct00009
표 3. 본 발명의 예시 항체의 중쇄 및 경쇄 서열
Figure pct00010
표 4. 본 발명의 예시 항체의 중쇄 및 경쇄 가변 영역의 뉴클레오티드 서열
Figure pct00011
표 5. 예시적인 중쇄 및 경쇄 불변 영역
Figure pct00012
본 발명의 이들 및 다른 양태 및 실시예는 도면(도면의 상세한 설명) 및 본 발명의 다음의 상세한 설명에 기술되고, 다음의 실시예에 설명된다. 본 출원 전체에 걸쳐 상기 논의된 임의의 또는 모든 특징들은 본 발명의 다양한 실시예들에서 조합될 수 있다. 하기 실시예는 본 발명을 추가로 예시한다. 그러나, 실시예는 제한이 아니라 예시로서 기술되며, 다양한 변형이 당업자에 의해 이루어질 수 있음을 이해해야 한다.
실시예
실시예 1. 효모 디스플레이에 의한 완전 인간화된 항 LAG-3 항체의 스크리닝
효모-기반 항체 제시 라이브러리를 선행 기술(WO 2009036379, WO 2010105256, 또는 WO 2012009568에 기재됨)에 따라, 라이브러리 당 1Х109의 다양성으로 증폭시켰다. 간략하게, 처음 두 라운드의 스크리닝은 Miltenyi로부터 입수가능한 MACS 시스템을 사용하여 자기-활성화된 세포 분류를 이용하였다. 먼저, 라이브러리로부터의 효모 세포(라이브러리당 ~1 Х 1010 세포)를 실온에서 15분 동안 FACS 완충액(인산염 완충액, 0.1% 소 혈청 알부민 및 100nM 비오틴-표지된 인간 LAG-3 항원(아르코바이오시스템스)을 함유함)에서 별도로 인큐베이션하였다. 이어서, 세포를 50mL의 예비 냉각된 FACS 완충액으로 세척하고, 40mL의 동일한 완충액으로 재현탁시킨 후, 500μL의 스트렙토마이신 마이크로비드(Miltenyi LS)를 첨가하고, 4℃에서 15분 동안 인큐베이션하였다. 혼합물을 1000rpm에서 5분 동안 원심분리하였다. 상층액을 폐기한 후, 세포를 5mL의 FACS 완충액으로 재현탁시켰다. 생성된 세포 현탁액을 Miltenyi LS 컬럼에 로딩하였다. 로딩 후, 컬럼을 매회 3mL의 FACS 완충액으로 3회 세척하였다. Miltenyi LS 컬럼을 자기장으로부터 제거하고 5mL의 성장 배지로 용리시켰다. 용출된 효모 세포를 수집하고 37℃에서 밤새 인큐베이션하였다.
다음 라운드의 분류를 유세포분석기를 사용하여 수행하였고, 여기서 MACS 시스템에 의해 스크리닝된 대략 1Х108개의 효모 세포를 FACS 완충액으로 3회 세척하고 실온에서 저농도의 비오틴(100-1nM)으로 표지된 인간 LAG-3 항원으로 공동-배양하였다. 상등액을 폐기하였다. 세포를 FACS 완충액으로 2회 세척하고, LC-FITC(FITC-표지된 염소 항 인간 면역글로불린 F(ab') 카파 사슬 항체, Southern Biotech)(100-배 희석), 및 SA-633(스트렙타비딘-633, 분자 프로브)(500배 희석) 또는 SA-PE(스트렙타비딘-파이코에리트린, 시그마)(50배 희석) 시약과 혼합한 후, 4℃에서 15분 동안 인큐베이션하였다. 세포를 예비 냉각된 FACS 완충액으로 2회 용출시키고, 0.4mL의 완충액에 재현탁시키고, 필터를 갖는 분리기 튜브로 옮겼다. FACS ARIA(BD Biosciences)를 사용하여 세포를 분류하였다.
스크리닝에 의해 수득된 항 인간 LAG-3 항체를 발현하는 효모 세포를 48시간 동안 30℃에서 진탕시켜 항 인간 LAG-3 항체를 발현시켰다. 인큐베이션 후, 1300rpm으로 10분간 원심 분리에 의해 효모 세포를 제거하고, 상청액을 회수하였다. 상청액 중의 항 인간 LAG-3 항체를 단백질 A를 사용하여 정제하고, 수확하기 전에 pH 2.0에서 아세트산 완충제를 사용하여 용리시켰다. 순도는 95%를 초과하였다.
이 스크리닝으로부터 항체 ADI-26789 및 항체 ADI-26869를 얻었다.
실시예 2. 항 인간 LAG-3 항체에 대한 친화성 최적화
보다 높은 친화도를 갖는 항 인간 LAG-3 항체를 수득하기 위해, 항체 ADI-26789 및 ADI-26869를 하기 방법에 의해 최적화시켰다:
VHmut 스크리닝
이 방법은 통상적인 미스매치 PCR에 의해 항체 중쇄 영역에 돌연변이를 도입하는 것이었다. PCR 공정에서, 염기쌍 미스매치의 확률은 1μM의 고도로 돌연변이된 염기 유사체 dPTP 및 8-옥소-dGTP를 첨가함으로써 약 0.01 bp로 상승하였다.
생성된 미스매치 PCR 생성물을 상동성 재조합에 의해 중쇄 불변 영역을 함유하는 벡터로 구성하였다. 이 방법에 의해, LAG-3 항원 역가, 표지되지 않은 항원 경쟁, 및 모 항체와의 경쟁을 포함하는 스크리닝 압력 하에 1Х107의 용량을 갖는 2차 풀을 수득하였다. 스크리닝의 3회 라운드를 FACS에 의해 성공적으로 수행하였다.
CDRH1/CDRH2 스크리닝
VHmut에 의해 수득된 자손 항체의 CDRH3 유전자를 다양성 1Х108인 CDRH1/CDRH2 유전자 풀로 구축하고, 3 라운드의 스크리닝을 유전자에 대해 수행하였다. 제1 라운드의 스크리닝은 MACS를 채택하였고, 제2 및 제3 라운드는 FACS을 채택하였다. 항체-항원 접합체를 가장 높은 친화도로 항체를 스크리닝하기 위해 가압 스크리닝하였다.
상기 친화성 성숙 과정을 통해, 친화성이 개선된 항 인간 LAG-3 단일클론 항체 ADI-31851 및 ADI-31853을 얻었다.
실시예 3. HEK293 세포에서의 발현 및 정제
본 출원에 개시된 4개의 예시 항체의 CDR 영역, 경쇄 및 중쇄 가변 영역, 중쇄 및 경쇄의 아미노산 서열(ADI-26789, ADI-26869, ADI-31851, ADDI-31853), 뿐만 아니라 상응하는 핵산 서열 및 넘버링이 본 출원의 표 1-4에 기재되어 있다.
항 LAG-3 항체의 경쇄 및 중쇄 아미노산 서열을 암호화하는 cDNA를 당해 분야의 통상적인 방법에 따라 발현 벡터 pTT5에 각각 클로닝하였다.
표적 항체 유전자를 함유하는 발현 벡터 및 형질감염 시약 PEI(Polysciences)를 제조자에 의해 제공된 계획에 따라 인큐베이션된 인간 배아 신장 세포 293(Invitrogen) 내로 일시적으로 형질감염시켰다. 형질감염 후, 배지를 버리고 세포를 새로운 EXPI293 배지(Gibco)로 4Х106/mL로 희석시켰다. 세포를 37℃, 5% CO2에서 7일 동안 인큐베이션하고, 새로운 배지를 48시간마다 공급하였다. 7일 후, 세포를 1300rpm에서 20분 동안 원심분리하였다. 상층액을 단백질 A로 정제하여 95% 초과의 순도를 갖는 항체를 제조하였다.
실시예에 사용된 하기 참조 항체도 HEK293 세포에서 발현되고 정제되었다.
Figure pct00013
이들 중, 25F7은 HEK293 세포에서 일시적으로 발현되는 인간 LAG-3 항체이고, 이의 서열은 미국 특허 번호 US20170137514A1의 "25F7" 항체의 것과 일치한다. BAP050은 HEK293 세포에서 일시적으로 발현되는 항 인간 LAG-3 항체이고, 이의 서열은 미국 특허 번호 WO2015/138920A1의 "BAP050" 항체의 것과 일치한다.
실시예 4. 본 발명의 항 LAG-3 항체의 친화성 분석
인간 LAG-3(hLAG-3)에 대한 본 발명의 상기 4개의 예시 항체의 결합에 대한 평형 해리상수(KD)를 생물학적 광학 간섭법(포테바이오)에 의해 측정하였다.
선행 기술의 포테바이오 친화성 분석(Estep, P., et al, High throughput solution based measurement of antibody-antigen affinity and epitope binning. MAbs, 2013.5(2):270-8)을 간단히 수행하고, 센서를 분석 완충액에서 30분 동안 오프라인으로 평형화시킨 다음, 온라인 검출을 60초 동안 수행하여 기준선을 확립하였다. 상기에서 기술된 바와 같이 수득된 정제된 항체를 포테바이오 친화성 분석을 위해 AHQ 센서(포테바이오) 상에 온라인 로딩하였다. 이어서, 로딩된 항체를 갖는 센서를 5분 동안 100nM의 인간 LAG-3 항원(아르코바이오시스템스)에 노출시킨 후, 해리 속도 측정을 위해 5분 동안의 해리를 위해 센서를 분석 완충제에 전달하였다. 1:1 결합 모델을 사용하여 동역학 분석을 수행하였다.
상기 기술된 분석에서, ADI-26789, ADI-26869, ADI-31851, ADI-31853 및 참조 항체 25F7 및 BAP050의 친화도를 표 6에 나타내었다.
표 6. 생물학적 광학 간섭법에 의해 측정된 본 발명의 항체의 결합 동역학
Figure pct00014
본 발명의 4개의 예시 항체 모두는 매우 높은 친화도를 나타내었으며, 이들 중에서, 항체 ADI-31851 및 ADI-31853은 참조 항체 25F7보다 더 높은 친화도 및 참조 항체 BAP050과 유사한 친화도를 가짐을 알 수 있다.
실시예 5. 본 발명의 항 LAG-3 항체와 인간 LAG-3의 결합
인간 LAG-3에 대한 상기 기재된 본 발명의 4개의 예시 항체의 결합을 유세포측정-기반 분석에서 측정하였다.
인간 배아 신장 293 세포(Invitrogen)를 다중 클로닝 부위(MCS)로 클로닝된 인간 LAG-3 cDNA(Sino Biological)를 보유하는 pCHO1.0 벡터(Invitrogen)로 형질감염시킴으로써, 인간 LAG-3을 과발현하는 293 세포(293-hLAG-3 세포)를 생성하였다.
293-hLAG-3 세포(0.2Х106 세포)를 상기 기재된 바와 같이 제조된 상이한 농도의 항체(ADI-26789, ADI-26869 및 참조 25F7)와 혼합하였다(항체를 0.1% 소 혈청 알부민(BSA)을 함유하는 PBS 중 500nM의 최대 농도로부터 8번째 농도까지 연속적으로 3배 희석시켰다). 세포를 얼음 상에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 이어서, 세포를 1:100으로 희석된 2차 항체(PE-표지된 염소 항 인간 IgG 항체, Southern Biotech, 최종 농도 5μ/mL)의 첨가 전에 적어도 2회 세척하고, 얼음 상에서(광으로부터 보호된) 30분 동안 인큐베이션하였다. 세포를 적어도 2회 세척하고 유세포 분석법에 의해 분석하였다. 유세포 분석을 Accuri C6 시스템(BD Biosciences) 상에서 수행하였고, 농도-의존성 곡선을 평균 형광 강도(MFI)에 따라 그래프패드에 맞추었다.
상기 분석에서, ADI-26789 및 ADI-26869는 각각 2.137nM 및 2.909nM의 EC50 값을 갖는 HEK293 세포 상에서 과발현된 hLAG-3에 결합되고, 이들의 결합 능력은 참조 항체 25F9(3.339nM의 EC50 값)의 결합 능력보다 우수하였다(도 1 참조).
각각 0.501nM 및 0.4332nM의 EC50 값을 갖는 HEK293 세포 상에서 과발현된 HLAG-3에 결합된 최적화된 친화도를 갖는 항 hLAG-3 항체 ADI-31851 및 ADI-31853이었고, 이들의 결합 능력은 항체 25F7 및 BAP050(각각 2.593nM 및 1.409nM의 EC50 값)의 결합 능력보다 우수하였다(도 2 참조).
실시예 6. 본 발명의 항 LAG-3 항체에 의한 인간 LAG-3 리간드 MHC II와 LAG-3, 사이의 상호작용의 차단
세포 표면의 MHC II(HLA)에 대한 인간 LAG-3의 결합을 차단하는 ADI-31851 및 ADI-31853의 능력을 유세포 분석에 의해 측정하였다.
인간 HLA-DR을 과발현하는 CHO 세포(CHO-DR 세포)는 CHO-S 세포(Invitrogen, ExpiCHO?? Expression System Kit, 카탈로그 번호 A29133)에 기술된 서열을 갖는 DNA, HLA-DR-알파 및 HLA-DR 베타 1의 2개의 단편을 보유하는 pCHO1.0 벡터(Invitrogen)를 포함한다.
HLA-DRβ1
Figure pct00015
HLA-DR-N
Figure pct00016
항원 rhLAG3 단백질(huFc)(Sino Biological)을 40nM, 50μL/웰로 희석시켰다. 상기와 같이 하여 조제한 항체(ADI-31851, ADIC-31853, 및 참조 25F9)를, 최대 농도 80nM로부터 총 8개의 희석 구배로 3배 희석하였다. 희석된 항체 50μL를 각 웰에 첨가하고, PBS에서 얼음 상에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 최종 항원 농도는 20nM이었고, 최대 항체 농도는 40nM이었다. CHO-DR 세포를 3 X 105 세포/웰, 100μL/웰로 조절하였다. 세포를 300g에서 5분 동안 원심분리하였다. 상등액을 폐기하였다. 이어서, 세포를 항원-항체 혼합물에 재현탁시켰다. 혼합물을 얼음 상에서 30분 동안 인큐베이션하였다. PBS를 100μL/웰로 첨가하였다. 300g에서 5분 동안 원심분리한 후, 혼합물을 PBS로 1회 세척하였다. 1:100으로 희석된 염소 항 인간 IgG-PE(Southern Biotech) 100μL를 각 웰에 첨가하였다. 20분 얼음 배스 후, PBS를 100μL/웰로 첨가하였다. 혼합물을 300g에서 5분 동안 원심분리한 후, PBS로 1회 세척하였다. 세포를 100μL의 PBS로 재현탁시켰다. 세포 형광 신호값은 유세포 분석법(BD Biosciences)에 의해 측정하였다.
그 결과, ADI-31851 및 ADI-31853은 모두 LAG-3의 리간드 MHC II(HLA-DR)에 대한 결합을 효과적으로 차단할 수 있었으며, 이들의 차단 능력은 참조 항체 25F9의 차단 능력과 일치하였다. 구체적으로, ADI-31851 및 ADI-31853은 각각 5.85nM 및 4.533nM의 IC50을 가지는 MHC II(HLA-DR)에 대한 인간 LAG-3의 결합을 차단하였다. 참조 항체 25F9는 인간 LAG-3의 MHCII(HLA-DR)에의 결합을 5.14nM의 IC50으로 차단하였다(도 3 참조).
실시예 7. 활성화된 T 세포에 대한 항체의 결합
LAG-3 단백질은 활성화시 인간 CD4+ T 세포의 표면 상에서 발현되었다. 활성화된 인간 CD4+ T 세포에 대한 ADI-31851 및 ADI-31853의 결합 능력을 본 연구에서 유세포 분석법에 의해 측정하였다.
PBMC 단리: 2.5배의 PBS를 공여체로부터 50mL의 신선한 혈액에 첨가하였다. 혼합물을 FiColl(Thermo)에 부드럽게 첨가하고, 각 튜브 12.5mL를 갖는 4개의 튜브로 분취하였다. 샘플을 400g에서 30분 동안 원심분리한 후, 감속도 0에서 정지시켰다. 중간 백색 스트립을 PBS에 피펫팅하고 PBS로 2회 세척하였다.
CD4+ T 세포 단리: 이는 "비접촉 CD4+T 세포 단리" 키트 지시(11346D, Invitrogen)에 따라 수행하였다. PBMC를 세포 현탁액을 15mL 원심분리 튜브에 피펫팅하기 전에 2시간 동안 방치하였다. 세포를 200g에서 10분 동안 원심분리하고, 침전물을 500μL의 분리제, 100μL의 AB형 혈청 및 100μL의 정제된 항체로 재현탁시켰다. 혼합물을 4℃에서 20분 동안 인큐베이션하고, 분리제로 1회 세척하였다. 비드 완충액(Invitrogen) 500μL를 15분의 인큐베이션 동안 첨가하고, 이어서 비드를 자기장에 의해 제거하였다. 혼합물을 T 세포 배양 배지로 1회 세척하고, 배양 배지 8mL로 재현탁시켰다. 이어서, 생성된 혼합물을 6% CO2의 존재하에 37℃에서 인큐베이션하였다.
자기 비드 대 CD4+ T 세포의 비가 1:1과 동등함에 따라, 항 CD3/CD28 자기 비드(Gibco)를 CD4+ T 세포에 첨가하여 3일 동안 자극하였다. 세포 밀도는 1
Figure pct00017
106/mL로 조절되었다. 세포를 제1 웰, 150μL/웰, 및 다른 웰, 100μL/웰에 로딩하였다. 상기에서 기술된 바와 같이 제조된 항체 ADI-31851 및 ADI-31853 및 참조 항체 25F7을 각각 웰의 제1 컬럼에 첨가하여 최종 농도가 10nM에 도달하도록 하였다. 샘플을 잘 혼합하였다. 50μL의 혼합물을 웰의 다음 컬럼에 피펫팅하는 것 등을 수행하였다. 각 샘플에 대해 3개의 복제 웰을 제조하였다. 세포를 5분 동안 400g에서 원심분리한 후 얼음조에서 30분간 정지시켰다. PBS 세정을 2회 행한 후, PE-항 인간 Fc 항체(Southern Biotech)를 50μL 첨가하여, 1:100으로 희석하였다. 30분 동안 얼음조 후, 세포를 400g에서 5분 동안 원심분리하고, 이어서 PBS를 2회 세척하였다. 혼합물을 60μL의 PBS에 재현탁시키고, 유세포 분석법에 의해 분석하였다. 유세포 분석을 Accuri C6 시스템(BD Biosciences) 상에서 수행하였고, 농도 의존성 곡선을 평균 형광 강도(MFI)에 따라 그래프패드에 맞추었다.
그 결과, ADI-31851 및 ADI-31853이 각각 0.013nM 및 0.011nM의 EC50 값으로 활성화된 인간 CD4+ T 세포에 결합할 수 있었고, 이들의 결합 능력이 참조 항체 25F7(EC50 값이 0.036nM임)의 결합 능력보다 우수하다는 것을 나타내었다(도 4 참조).
실시예 8. 본 발명의 항 LAG-3 항체와 마우스 LAG-3의 결합
본 발명의 2개의 예시 항체, ADI-31851 및 ADI-31853의 마우스 LAG-3에 대한 결합을 유세포측정-기반 분석에서 측정하였다.
마우스 LAG-3을 과발현하는 CHO 세포(CHO-mLAG-3 세포)는 CHO-S 세포(Invitrogen, ExpiCHO?? Expression System Kit, 카탈로그 번호 A29133)에 기술된 바와 같이, 다중 클로닝 부위(MCS)로 클로닝된 마우스 LAG-3 cDNA(Sino Biological)를 운반하는 pCHO1.0 벡터를 포함한다.
CHO-mLAG-3 세포(0.2Х106 세포)를 상기 기재된 바와 같이 제조된 상이한 농도의 항체(ADI-31851, ADI-31853 및 참조 25F7 및 BAP050)와 혼합하였다(항체를 0.1% 소 혈청 알부민(BSA)을 함유하는 PBS 중 500nM의 최대 농도로부터 8번째 농도까지 연속적으로 3배 희석시켰다). 세포를 얼음 상에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 이어서, 세포를 1:100으로 희석된 2차 항체(PE-표지된 염소 항 인간 IgG 항체, Southern Biotech, 최종 농도 5μ/mL)의 첨가 전에 적어도 2회 세척하고, 얼음 상에서(광으로부터 보호된) 30분 동안 인큐베이션하였다. 세포를 적어도 2회 세척하고 유세포 분석법에 의해 분석하였다. 유세포 분석을 Accuri C6 시스템(BD Biosciences) 상에서 수행하였고, 농도-의존성 곡선을 평균 형광 강도(MFI)에 따라 그래프패드에 맞추었다.
상기 분석에서, 최적화된 친화도를 갖는 항 hLAG-3 항체 ADI-31851 및 ADI-31853은 CHO 세포 상에서 과발현된 마우스 LAG-3에 결합할 수 있었고; ADI-31853(EC50 = 42.33nM)의 결합 능력은 ADI-31851의 결합 능력보다 우수하였다. 참조 항체 25F7 및 BAP050 중 어느 것도 CHO 세포 상에서 과발현된 마우스 LAG-3에 결합할 수 없었다. (도 5 참조)
실시예 9. 본 발명의 항 LAG-3 항체의 항 종양 활성
본 연구에서, 항 인간 LAG-3 항체 ADI-31853 단독 또는 항 마우스 PD-1 항체 "항체 C"(WO2017/133540)와 조합된 항 종양 활성을 CT26 이식 종양의 마우스 모델을 사용하여 연구하였다.
마우스:
BALB/c 마우스(대략 8주령), 암컷을 Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd.로부터 구매하였다.연구 전에, 마우스를 도착 후 7일 동안 적응시켰다.
세포:
마우스 결장암 세포 CT26(ATCC # CRL-2638)을 ATCC로부터 구입하고, 추가의 생체내 분석을 위해 ATCC에 의해 제공된 요건에 따라 엄격하게 계대배양하였다. 세포를 원심분리에 의해 수집하고, 세포 밀도를 5 X 106 세포/mL로 조정하면서 멸균 PBS에 재현탁시켰다. 0일째에, 0.2mL의 세포 현탁액을 BALB/c 마우스의 오른쪽 복부 영역(Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd)에 피하 접종하여 종양-보유 마우스 모델을 확립하였다.
투여:
마우스를 4개의 군으로 나누고(군 당 8마리), 각 군을 하기 용량의 항체로 피하 주사하였다:
(1) 마우스 IgG(equitech-Bio), 10mg/kg;
(2) PD-1(항체 C), 1mg/kg;
(3) LAG-3(ADI-31853), 10mg/kg;
(4) LAG-3(ADI-31853), 10mg/kg 및 PBS+PD-1(항체 C), 1mg/kg.
주입:
이식 후 7일째에, 실험적 요건을 충족시키는 마우스를 무작위로 그룹화하고, 그룹당 8마리의 마우스를 그룹화하였다. 각 군의 마우스에 7, 10, 14 및 17일째에 각각 상기 용량으로 4개의 요법을 투여하였다.
분석
종양 부피 및 체중을 연구 전반에 걸쳐 주 2회 측정하고, 종양이 종말점에 도달했을 때(종양 부피는 2,500 mm3 초과), 또는 마우스가 20% 초과의 체중 감소를 가졌을 때 마우스를 안락사시켰다. 종양의 장축의 최대 길이(L) 및 단축의 최대 길이(W)를 버니어 캘리퍼스로 측정하고, 하기 식을 사용하여 종양 부피를 계산하였다: V=L×W2/2. 다양한 군의 마우스의 시간에 따른 종양 부피를 플롯팅하였다. 통계적 유의성은 분산 분석(ANOVA)을 사용하여 결정되었다. 0.05 미만의 P 값은 모든 분석에서 통계적으로 유의한 것으로 간주되었다. 분석은 프리즘 5 통계 소프트웨어(그래프패드 소프트웨어)를 사용하여 수행하였다.
도 6에 도시된 바와 같이, 항 LAG-3 단일클론 항체 ADI-31853 및 항 PD-1 단일클론 항체 "항체 C"의 조합된 사용이 IgG 조절(equitech-Bio)의 사용 및 2개의 항체의 별개의 사용에 비해 종양 성장을 상당히 억제하였음을 알 수 있다.
실시예 10. 다른 항체와 조합된 본 발명의 항 LAG-3 항체의 항 종양 활성
본 연구에서, 항 인간 LAG-3 항체 ADI-31853 및 항 PD-1 항체 "항체 D"(IBI308, WO2017/025016) 또는 항 PD-L1 항체(HZ3266-IgG1N297A)의 조합된 사용의 항 종양 활성을 마우스 인간화 마우스 모델에서 시험하였다.
본 연구에서, 항 LAG-3 항체의 항 종양 효능은 A375(ATCC) 인간 피부 암 세포를 보유하는 NOG 마우스에서 시험되었다. 인간 PBMC(모든 세포)(2Х106 세포/마우스)를 미리 정맥 주사한 후, 피하 이식에 의해 A375 종양을 갖는 마우스 모델(NOG 모델)을 확립하였다. 종양 형성 후 마우스를 그룹화하고, 상이한 항체를 사용한 치료를 제공하였다. 마우스의 종양 크기 및 체중의 변화를 치료 기간 동안 모니터링하였다. 치료를 총 5회 용량으로 2주 동안 주 2회 제공하였다. 모니터링 빈도는 4주 동안 주 2회였다. 투여량 및 투여 경로를 표 2에 나타내었다. 종양 성장 억제(TGI%)를 치료 종료 후에 계산하였다.
항 PD-L1 항체(HZ3266-IgG1N297A)
당해 분야의 통상적인 방법에 따라, 항 PD-L1 항체 HZ3266-IgG1N297A의 경쇄 및 중쇄 아미노산 서열(표 3)을 암호화하는 cDNA를 발현 벡터pMD20-T(Clontech)에 클로닝하여, 형질감염을 위한 플라스미드를 생성하였다.
293F 세포(Invitrogen)를 목적하는 형질감염 부피에 따라 계대시켰다. 세포 밀도는 트랜스펙션 전날 1.5 X 106 세포/mL로 조절되었다. 형질감염일 세포 밀도는 약 3 X 106 세포/mL이었다. 적절한 양의 플라스미드를 트랜스펙션으로서 최종 부피의 1/10로 F17 배양 배지(Gibco, A13835-01)에 첨가하고, 혼합하였다. 적절한 양의 폴리에틸렌이민(PEI)(Polysciences, 23966)을 혼합물에 첨가하고(293F 세포에서 PEI에 대한 플라스미드의 비 = 1:3), 혼합하고 실온에서 10분 동안 인큐베이션하여, DNA/PEI 혼합물을 생성하였다. DNA/PEI 혼합물로 재현탁한 후, 세포를 36.5℃, 8% CO2에서 도입하였다. 24시간 후, 세포를 트랜스펙션 부피의 2%로 사료(Sigma)로 보충하고, 36.5℃, 8% CO2에서 120rpm으로 인큐베이션하였다. 6일째의 계대배양시 또는 생존율이 60% 미만이 될 때까지 세포를 원심분리하고, 상층액을 수집하여 정제하였다.
정제용 중력 칼럼을 0.5 M NaOH로 밤새 처리한 후 180℃에서 4시간 동안 건조시켜, 정제 칼럼을 얻었다. 유리 용기를 증류수로 세척하고 건조시켰다. 정제 전에, 수집된 배양물을 4500 rpm에서 30분 동안 원심분리하고, 세포를 폐기하였다. 상층액을 0.22μL 필터를 통해 여과하였다. 각각의 튜브를 1mL의 단백질 A로 채우고 10mL의 결합 완충제(인산나트륨 20mM, NaCl150 mM, pH 7.0)로 평형화시켰다. 여과된 상층액을 정제 컬럼에 로딩하고, 이어서 15mL의 결합 완충제로 재평형화시켰다. 5mL의 용리액 완충제(시트르산 + 시트르산나트륨 0.1M, pH 3.5)를 첨가하였다. 용출액을 수집하고, 용출액 mL 당 80μL의 트리스-HCL을 첨가하였다. 수집된 항체의 완충액을 한외여과/투석여과에 의해 PBS(Gibco, 70011-044)로 변경하고, 농도를 측정하였다.
항 PD-L1 항체(HZ3266-IgG1N297A)의 인간 PD- L1에 대한 결합에 대한 평형 해리상수(KD)를 생물학적 광학 간섭법(포테바이오)에 의해 결정하였다. 선행 기술의 포테바이오 친화성 분석을 수행하였다(Estep, P., et al, High throughput solution based measurement of antibody-antigen affinity and epitope binning. MAbs, 2013.5(2):270-8).
실험의 절반 시간 전에, 샘플의 수에 따라 적절한 수의 AMQ(Pall, 1506091)(샘플 검출을 위함) 또는 AHQ(Pall, 1502051)(양성 대조 검출을 위함) 센서를 SD 버퍼(PBS 1X, BSA 0.1%, Tween-20 0.05%)에 담갔다.
각각 100μL의 SD 완충제, 항체 및 항원(모두 아크로바이오시스템스로부터 구매한 인간 PD-L1 포함)을 96-웰 블랙 폴리스티렌 반면적 마이크로플레이트(Greiner, 675076)에 첨가하였다. 센서는 샘플의 위치에 따라 배열된다. 기구 설정은 하기와 같았다: 조작 절차는 기준선, 로딩 ~1nM, 기준선, 회합 및 해리였다. 각 과정의 실행 시간은 회합 및 해리 속도에 의존하였다. 회전수는 400rpm, 온도는 30℃였다. 상기 KD 값을 포테바이오 분석 소프트웨어로 분석하였다. 측정된 KD 값은 0.724nM였다.
마우스: Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd로부터 구매한 NOG 마우스, 암컷, 7-8주령(종양 세포 이식시 연령), 17.6-24.2 g의 체중. 연구 전에, 마우스를 도착 후 7일 동안 적응시켰다.
세포: 인간 피부암 세포 A375(ATCC#CRL-1619)를 ATCC로부터 구입하였고, 추가의 생체내 분석을 위해 ATCC에 의해 제공된 요건에 따라 엄격하게 계대배양하였다. 세포를 원심분리에 의해 수집하고, 세포 밀도를 30 X 106 세포/mL로 조정하면서 멸균 PBS에 재현탁시켰다. NOG 마우스를 인간 PBMC로 정맥내 주사한 후, 0.2mL/마우스로 A375 세포를 우측 등쪽 면도 및 피하 주사하였다. 이식 7일 후 마우스의 종양 부피를 측정하고, 종양 부피 70-71 mm3 범위의 마우스를 선택하고, 종양 부피를 통해 무작위로 그룹으로 나누었다.
투여: 하기 항체를 다양한 군으로 피하 주사하였다:
(1) 인간 IgG(equitech-Bio), 20mg/kg;
(2) PD-1(항체 D, IBI308), 10mg/kg;
(3) LAG-3(ADI-31853), 10mg/kg;
(4) LAG-3(ADI-31853), 10mg/kg + PD-1(항체 D, IBI308),10mg/kg;
(5) PD-L1(HZ3266-IgG1N297A), 10mg/kg;
(6) LAG-3(ADI-31853), 10mg/kg + PD-L1(HZ3266-IgG1N297A),10mg/kg.
이식 후 7일째에, 요건을 충족시키는 평균 종양 크기를 갖는 마우스를 군 당 8마리의 마우스로 무작위로 그룹화하였다. 각 군의 마우스는 각각 상기 용량으로 7, 10, 14 및 17일째에 6회 요법으로 투여하였다.
분석: 종양 부피 및 체중을 연구 전반에 걸쳐 주 2회 측정하고, 종양이 종말점에 도달했을 때 또는 마우스가 20% 초과의 체중 감소를 가졌을 때 마우스를 안락사시켰다. 종양의 장축의 최대 길이(L) 및 단축의 최대 길이(W)를 버니어 캘리퍼스로 측정하고, 하기 식을 사용하여 종양 부피를 계산하였다: V=L*?*W2/2. 다양한 군의 마우스의 시간에 따른 종양 부피를 플롯팅하였다. 통계적 유의성은 분산 분석(ANOVA)을 사용하여 결정되었다. 0.05 미만의 P 값은 모든 분석에서 통계적으로 유의한 것으로 간주되었다.
도 7A에 도시된 바와 같이, 항 LAG-3 단일클론 항체 ADI-31853 및 항 PD-1 단일클론 항체 "항체 D"(IBI308) 또는 항 PD-L1 단일클론 항체 HZ3266-IgG1N297A(HZ3266)의 조합된 사용이 인간 IgG 참조(equitech-Bio)(hIgG)의 사용 및 2개의 항체의 별개의 사용에 비해 종양 성장을 상당히 억제하였음을 알 수 있다.
실시예 11. 항 PD-L1 항체와 조합된 항 LAG-3 항체에 의한 인간 CD4 + T 세포의 활성화
본 실험에서, 인간 T 세포에 대한 ADI-31853의 활성화 효과를 인간 CD4+ T 세포 활성화 방법을 사용하여 검출하였다. 비드 자극을 통해 활성화된 인간 CD4+ T 세포(실시예 7에 기재된 바와 같음) 및 성숙 DC를 상이한 농도의 ADI-31853 및 25F7 단독 및 PD-L1 항체(HZ3266-IgG1N297A, 상기 기재된 바와 같이 제조됨)와 함께 각각 96-웰 U-형 하부 플레이트에서 3일 동안 공동-배양하였다. 마지막으로, 상층액을 IL-2 농도에 대해 검출하였다. ADI-31853 및 25F7 단독 및 PD-L1 항체(HZ3266-IgG1N297A, 상기 기재된 바와 같이 제조됨)의 조합에 의한 T 세포의 활성화를 비교하였다.
실험 절차
DC 제제
인간 PBMC(실시예 7에 기재된 바와 같이 제조됨)를 액체 질소 탱크로부터 취하고, 37℃ 수조에서 신속하게 해동시키고, 20mL의 인간 T 세포 배양 배지(1?? DNase(Sigma)를 함유함)로 옮기고, 400 g에서 10분 동안 원심분리하였다. 그 후, 세포를 20mL의 인간 T 세포 배양 배지(1?? DNAse)에 재현탁시키고, T75 플라스크에 옮기고, 37℃, 5% CO2에서 24시간 동안 세포 인큐베이터에서 배양하였다.
DC 세포 단리: 현탁액을 폐기하였다. DC 배양 배지 9mL를 2일 인큐베이션 동안 나머지 세포에 첨가하고, DC 배양 배지를 다른 3mL로 첨가하였다. 배양 5일째에, rTNFa(1000U/mL), IL-1b(5ng/mL, IL-6(10ng/mL) 및 1μM PGE2(Tocris)를 2일의 또 다른 인큐베이션 동안 첨가하여, 림프구 혼합 반응(MLR)을 위한 DC 세포를 생성하였다.
T 세포 배양 배지 및 DC 세포 배양 배지는 둘 다 CTS AIM V SFM이었다. DC 배양 배지는 IL-4, 1000U/mL 및 GM-CSF, 1000U/mL로 보충되었다. 카탈로그 번호 및 배치 번호는 다음과 같았다:
Figure pct00018
인간 CD4+ T 세포 정제
인간 PBMC 세포(실시예 7에 기재된 바와 같이 제조됨)를 액체 질소 탱크로부터 제거하고, 37℃ 수조에서 신속하게 해동하고, 상기 기재된 바와 같은 인간 T 세포 배양 배지(1％ DNase)로 옮기고, 400g에서 10분 동안 원심분리하였다. 인간 CD4+ T 세포를 실시예 7에 기재된 바와 같은 접촉되지 않은 CD4+ T 세포 단리 키트를 사용하여 단리 및 정제하고, T 세포 증식 및 활성화를 위해 Dynabeads™ 인간 T-활성화제 CD3/CD28에 의해 활성화시키고, 37℃, 5% CO2에서 3일 동안 세포 인큐베이터에서 배양하였다.
샘플 로딩
성숙한 DC 세포를 1웰당 200μL로 CD4+ 세포와 혼합하고, 10000 DC 세포 및 100000 CD4+ 셀과 혼합하였다. 항체(200nM, 4배 연속 희석, SEE(Toxin technology) 1ng/mL)를 첨가하였다. DC 및 CD4+ 세포의 혼합물은 음성 대조로서 작용하였다. 샘플을 3일 동안 인큐베이션하였다.
사용된 항체 농도는 다음과 같았다:
항 LAG-3(ADI-31853) 항체: 200nM의 농도로부터 10번째 농도까지 연속적으로 4배 희석
항 PD-L1 항체: 200nM의 농도로부터 10번째 농도까지 연속적으로 4배 희석
참조 25F7: 200nM의 농도로부터 10번째 농도까지 연속적으로 4배 희석
항 LAG-3(직렬로 200nM의 농도로부터 10번째 농도까지 4배 희석) + 항 PD-L1(12.5nM)
참조 25F7(제10 농도까지 200nM의 농도로부터 연속적으로 4배 희석) + 항 PD-L1(12.5nM)
IL-2 검출
시스바이오 인간 IL-2 키트를 사용하여 배지 중의 IL-2 농도를 측정하였다.
(1) 검출 용액(시약은 모두 인간 IL-2 1000 시험 키트, 시스바이오)의 제조: 30μL의 인간 IL-2 D2 항체(기원)를 570μL의 검출 완충액(기원)에 첨가하고, 30μL의 인간 IL-2 크립테이트 항체(기원)를 570μL의 검출 완충용액에 첨가하여, 얻어진 2개를 1:1의 비율로 혼합하였다.
(2) 표준 용액의 구배 희석
표 7. IL-2 표준 용액의 구배 희석
Figure pct00019
(3) 검출
배양 상등액 및 표준 구배 용액(10μL)을 취하여 96-웰 마이크로플레이트에 첨가하고, 검출 용액 10μL를 각 웰에 첨가하였다. 혼합물을 빛의 부재하에 400g에서 1분 동안 원심분리하고, 실온에서 2시간 동안 인큐베이션하였다.
OD 값을 다기능 마이크로플레이트 판독기를 사용하여 616nM 및 665nM에서 판독하고, 분석하였다.
알고리즘 공식은 다음과 같았다: 비율 = OD665nm/OD616nm Х 104
ΔF% = (비 표준/샘플-비율 표준 0)/비율 표준 0
실험의 결과
IL-2 표준 곡선은 가로 좌표로서 표준의 구배 농도의 델타 비를 사용하고 IL-2 수준을 종축으로서 사용하여 얻었다. 각 군의 인간 CD4+ T 세포의 IL-2 수준은 도 8에 도시된 바와 같이, 표준 곡선에 의해 계산하였다. 도 9에 도시된 바와 같이, 항 PD-L1 항체(HZ3266) 활성화 인간 CD4+ T 세포와 조합된 본 발명의 항 LAG-3 항체(ADI-31853)는 참조(25F7) 또는 단독 항 LAG-3 항체 ADI31853보다 더 유의하게 더 높다.
SEQUENCE LISTING <110> INNOVENT BIOLOGICS (SUZHOU) CO., LTD. <120> Anti-LAG-3 Antibody and Use thereof <130> PF 180591PCT <160> 60 <170> PatentIn version 3.3 <210> 1 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> synthetic <400> 1 Phe Thr Phe Asp Asp Tyr Ala Met His 1 5 <210> 2 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> synthetic <400> 2 Gly Ser Ile Ser Ser Ser Asp Tyr Tyr Trp Gly 1 5 10 <210> 3 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> synthetic <400> 3 Gly Ser Ile Ser Ser Pro Asp Tyr Tyr Trp Gly 1 5 10 <210> 4 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> synthetic <400> 4 Gly Ser Ile Tyr Ser Glu Ser Tyr Tyr Trp Gly 1 5 10 <210> 5 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> synthetic <400> 5 Gly Ile Ser Trp Asn Ser Gly Asp Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 6 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> synthetic <400> 6 Ser Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 1 5 10 15 <210> 7 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial <220> 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<213> Artificial <220> <223> synthetic <400> 15 Gln Gln Val His Ala Leu Pro Pro Trp Thr 1 5 10 <210> 16 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> synthetic <400> 16 Gln Gln Val Leu Glu Leu Pro Pro Trp Thr 1 5 10 <210> 17 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (4)..(4) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (6)..(7) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 17 Gly Ser Ile Xaa Ser Xaa Xaa Tyr Tyr Trp Gly 1 5 10 <210> 18 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (3)..(3) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (7)..(7) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 18 Ser Ile Xaa Tyr Ser Gly Xaa Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 1 5 10 15 <210> 19 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (8)..(9) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 19 Ala Arg Val Arg Thr Trp Asp Xaa Xaa Phe Asp Ile 1 5 10 <210> 20 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (3)..(3) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 20 Gln Ala Xaa Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Asn 1 5 10 <210> 21 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> synthetic <220> <221> misc_feature <222> (4)..(5) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 21 Gln Gln Val Xaa Xaa Leu Pro Pro Trp Thr 1 5 10 <210> 22 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> synthetic <400> 22 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr 20 25 30 Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Gly Ile Ser Trp Asn Ser Gly Asp Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu 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gggcagggca ccatggtgac agtgagcagc 360 <210> 41 <211> 360 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> synthetic <400> 41 cagctgcagc tgcaggaatc aggaccagga ctggtgaagc ctagcgagac actgagcctg 60 acctgtaccg tgtccggagg cagcatctac agcgagagct actattgggg ttggatccgg 120 cagccaccag gaaagggcct ggagtggatt ggcagcatcg tgtacagcgg ctacacctac 180 tacaacccca gcctgaagag ccgcgtgaca atcagcgtgg acaccagcaa gaaccagttc 240 agcctgaagc tgtcttcagt gacagccgcc gacaccgcag tgtactattg cgccagggtg 300 cggacttggg acgccgcctt tgacatttgg ggccagggca caatggtgac agtgagcagc 360 <210> 42 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> synthetic <400> 42 gacatccaga tgacccagag ccctagcagc ctgagcgcca gcgtgggcga tagggtgacc 60 atcacctgcc aggccagcca ggacatcagc aactacctga actggtacca gcagaagccc 120 ggcaaggccc ccaagctgct gatctacgac gccagcaacc tggagaccgg cgtgcctagc 180 agatttagcg gcagcggcag cggcacagac ttcaccttca ccatcagcag cctgcagccc 240 gaggacatcg ccacctacta ctgccagcag gtgctggacc tgcccctgac ctttggcggc 300 ggcaccaagg tggagatcaa g 321 <210> 43 <211> 324 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> synthetic <400> 43 gacatccaga tgacccagag ccctagcagc ctgagcgcca gcgtgggcga tagggtgacc 60 atcacctgcc aggccagcca ggacatcagc aactacctga actggtacca gcagaagccc 120 ggcaaggccc ccaagctgct gatctacgac gccagcaacc tggagaccgg cgtgcctagc 180 agatttagcg gcagcggcag cggcacagac ttcaccttca ccatcagcag cctgcagccc 240 gaggacatcg ccacctacta ctgccagcag gtgcacgccc tgcctccctg gacctttggc 300 ggcggcacca aggtggagat caag 324 <210> 44 <211> 324 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> synthetic <400> 44 gacatccaga tgacccagag ccctagcagc ctgagcgcta gcgtgggaga tagagtgacc 60 atcacttgcc aggccggcca ggacatcagc aactacctga attggtacca gcagaagccc 120 ggcaaggccc ctaagctgct gatctacgac gcctctaatc tggagaccgg cgtgcctagc 180 agattcagcg gaagcggcag cggcacagat ttcaccttca ccatcagcag cctgcagccc 240 gaggacatcg ccacctacta ttgccagcag gtgctggagc tgcctccttg gacattcgga 300 ggaggaacaa aggtggagat caag 324 <210> 45 <211> 324 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> synthetic <400> 45 gacatccaga tgacccagag ccctagcagc ctgagcgcta gcgtgggaga tagagtgacc 60 atcacttgcc aggccagcca ggacatcagc aactacctga attggtacca gcagaagccc 120 ggcaaggccc ctaagctgct gatctacgac gcctctaatc tggagaccgg cgtgcctagc 180 agattcagcg gaagcggcag cggcacagat ttcaccttca ccatcagcag cctgcagccc 240 gaggacatcg ccacctacta ttgccagcag gtgctggagc tgcctccttg gacattcgga 300 ggaggaacaa aggtggagat caag 324 <210> 46 <211> 327 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> synthetic <400> 46 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 115 120 125 Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 130 135 140 Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp 145 150 155 160 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe 165 170 175 Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 180 185 190 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu 195 200 205 Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 210 215 220 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys 225 230 235 240 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 245 250 255 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 260 265 270 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 275 280 285 Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser 290 295 300 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 305 310 315 320 Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 325 <210> 47 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> synthetic <400> 47 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 1 5 10 15 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 20 25 30 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 35 40 45 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 50 55 60 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 65 70 75 80 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 85 90 95 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 100 105 <210> 48 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> synthetic <400> 48 Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro 1 5 10 15 Gly Ser Thr Gly 20 <210> 49 <211> 801 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> synthetic <400> 49 atggtgtgtc tgaagctccc tggaggctcc tgcatgacag cgctgacagt gacactgatg 60 gtgctgagct ccccactggc tttgtctggg gacacccgac cacgtttcct gtggcagcct 120 aagagggagt gtcatttctt caatgggacg gagcgggtgc ggttcctgga cagatacttc 180 tataaccagg aggagtccgt gcgcttcgac agcgacgtgg gggagttccg ggcggtgacg 240 gagctggggc ggcctgacgc tgagtactgg aacagccaga aggacatcct ggagcaggcg 300 cgggccgcgg tggacaccta ctgcagacac aactacgggg ttgtggagag cttcacagtg 360 cagcggcgag tccaacctaa ggtgactgta tatccttcaa agacccagcc cctgcagcac 420 cacaacctcc tggtctgctc tgtgagtggt ttctatccag gcagcattga agtcaggtgg 480 ttcctgaacg gccaggaaga gaaggctggg atggtgtcca caggcctgat ccagaatgga 540 gactggacct tccagaccct ggtgatgctg gaaacagttc ctcgaagtgg agaggtttac 600 acctgccaag tggagcaccc aagcgtgaca agccctctca cagtggaatg gagagcacgg 660 tctgaatctg cacagagcaa gatgctgagt ggagtcgggg gctttgtgct gggcctgctc 720 ttccttgggg ccgggctgtt catctacttc aggaatcaga aaggacactc tggacttcag 780 ccaacaggat tcctgagctg a 801 <210> 50 <211> 765 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> synthetic <400> 50 atggccataa gtggagtccc tgtgctagga tttttcatca tagctgtgct gatgagcgct 60 caggaatcat gggctatcaa agaagaacat gtgatcatcc aggccgagtt ctatctgaat 120 cctgaccaat caggcgagtt tatgtttgac tttgatggtg atgagatttt ccatgtggat 180 atggcaaaga aggagacggt ctggcggctt gaagaatttg gacgatttgc cagctttgag 240 gctcaaggtg cattggccaa catagctgtg gacaaagcca acctggaaat catgacaaag 300 cgctccaact atactccgat caccaatgta cctccagagg taactgtgct cacaaacagc 360 cctgtggaac tgagagagcc caacgtcctc atctgtttca tagacaagtt caccccacca 420 gtggtcaatg tcacgtggct tcgaaatgga aaacctgtca ccacaggagt gtcagagaca 480 gtcttcctgc ccagggaaga ccaccttttc cgcaagttcc actatctccc cttcctgccc 540 tcaactgagg acgtttacga ctgcagggtg gagcactggg gcttggatga gcctcttctc 600 aagcactggg agtttgatgc tccaagccct ctcccagaga ctacagagaa cgtggtgtgt 660 gccctgggcc tgactgtggg tctggtgggc atcattattg ggaccatctt catcatcaag 720 ggattgcgca aaagcaatgc agcagaacgc agggggcctc tgtaa 765 <210> 51 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> synthetic <400> 51 Gly Phe Asn Ile Glu Asp Thr 1 5 <210> 52 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> synthetic <400> 52 Asp Pro Ala Asn Asp Asp 1 5 <210> 53 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> synthetic <400> 53 Gly Leu Gly Arg Trp Phe Ala Tyr 1 5 <210> 54 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> synthetic <400> 54 Lys Ala Ser Gln Asp Val Ile Asn Ala Val Ala 1 5 10 <210> 55 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> synthetic <400> 55 Ser Ala Ser Asn Arg Tyr Thr 1 5 <210> 56 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> synthetic <400> 56 Gln Gln His Tyr Ser Pro Pro Leu Thr 1 5 <210> 57 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> synthetic <400> 57 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Thr Val Lys Ile Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asn Ile Glu Asp Thr 20 25 30 Tyr Ile His Trp Val Gln Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asp Thr Lys Tyr Ala Pro Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Ala Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Gly Arg Gly Leu Gly Arg Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 58 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> synthetic <400> 58 Gly Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ile Asn Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala 65 70 75 80 Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Pro Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 59 <211> 447 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> synthetic <400> 59 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Thr Val Lys Ile Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asn Ile Glu Asp Thr 20 25 30 Tyr Ile His Trp Val Gln Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asp Thr Lys Tyr Ala Pro Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Ala Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Gly Arg Gly Leu Gly Arg Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu 115 120 125 Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys 130 135 140 Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser 145 150 155 160 Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser 165 170 175 Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser 180 185 190 Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn 195 200 205 Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His 210 215 220 Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val 225 230 235 240 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 245 250 255 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 260 265 270 Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 290 295 300 Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320 Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile 325 330 335 Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350 Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 385 390 395 400 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415 Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 60 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> synthetic <400> 60 Gly Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ile Asn Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala 65 70 75 80 Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Pro Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210

Claims (28)

  1. LAG-3에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편으로서, 상기 항체는,
    (i) 서열 번호 22에 나타낸 중쇄 가변 영역의 3개의 상보성 결정 영역(HCDR), 및 서열 번호 26으로 나타내는 경쇄 가변 영역의 3개의 상보성 결정 영역(LCDR), 또는
    (ii) 서열 번호 23로 나타내는 중쇄 가변 영역의 3개의 상보성 결정 영역(HCDR), 및 서열 번호 27로 나타내는 경쇄 가변 영역의 3개의 상보성 결정 영역(LCDR), 또는
    (iii) 서열 번호 24로 나타내는 중쇄 가변 영역의 3개의 상보성 결정 영역(HCDR), 및 서열 번호 28로 나타내는 경쇄 가변 영역의 3개의 상보성 결정 영역(LCDR), 또는
    (iv) 서열 번호 25로 나타내는 중쇄 가변 영역의 3개의 상보성 결정 영역(HCDR), 및 서열 번호 29로 나타내는 경쇄 가변 영역의 3개의 상보성 결정 영역(LCDR)을 포함하는, LAG-3에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  2. LAG-3에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편으로서, 상기 항체는 중쇄 가변 영역의 3개의 상보성 결정 영역(HCDR) 및 경쇄 가변 영역의 3개의 상보성 결정 영역(LCDR)을 포함하며,
    HCDR1은 서열 번호 1, 2, 3, 4 또는 17로 나타내는 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열 번호 5, 6, 7 또는 18로 나타내는 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열 번호 8, 9, 10 또는 19로 나타내는 아미노산을 포함하고, LCDR1는 서열 번호 11, 12 또는 20으로 나타내는 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는서열 번호 13로 나타내는 아미노산 서열을 포함하며, LCDR3은 서열 번호 14, 15, 16 또는 21로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는, LAG-3에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  3. LAG-3에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편으로서, 상기 항체가 중쇄 가변 영역 및/또는 경쇄 가변 영역을 포함하고,
    상기 중쇄 가변 영역이,
    (i) 표 B에 열거된 항체 중 어느 하나의 VH에 함유된 3개의 상보성 결정 영역(HCDR); 또는
    (ii) 표 A로 나타내는 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3의 조합을 포함하는 것;
    및/또는
    상기 경쇄 가변 영역이,
    (i) 표 B에 열거된 항체 중 어느 하나의 VL에 포함된 3개의 상보성 결정 영역(LCDR); 또는
    (ii) 표 A로 나타내는 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3의 조합을 포함하는 것인, LAG-3에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체가, 경쇄 가변 영역 및/또는 중쇄 가변 영역을 포함하고,
    상기 중쇄 가변 영역은 서열 번호 22, 23, 24, 및 25로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는것; 및/또는
    상기 경쇄 가변 영역은 서열 번호 26, 27, 28 및 29로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 것인, 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  5. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체가,
    서열 번호 22, 23, 24 또는 25로 나타내는 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 및/또는 서열 번호 26, 27, 28 및 29로 나타내는 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체가,
    (a) 중쇄로서,
    (i) 서열 번호 30, 31, 32 및 33으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되거나;
    (ii) 서열 번호 30, 31, 32, 및 33으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는, 중쇄;
    및/또는
    (b) 경쇄로서,
    (i) 서열 번호 34, 35, 36 및 37으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되거나;
    (ii) 서열 번호 34, 35, 36 및 37로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는, 경쇄를 포함하는, 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 하기 특징 중 하나 이상을 갖는, LAG-3에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편:
    (1) 높은 친화도로 LAG-3(예를 들어, 인간 LAG-3)에 결합하는 것, 예를 들어 약 8nM 미만의 평형 해리상수(KD)로 LAG-3에 결합하는 것;
    (2) 인간 LAG-3을 발현하는 세포에 결합하는 것, 예를 들어 약 1nM 이하의 EC50으로 결합하는 것;
    (3) 마우스 LAG-3을 발현하는 세포에 결합하는 것, 예를 들어, 약 50nM 이하의 EC50, 예컨대 약 40-50nM의 EC50으로 결합하는 것;
    (4) LAG-3의 관련 활성을 억제하는 것, 예를 들어,약 5nM 이하의 IC50으로MHC II 분자를 발현하는 세포 상의 MHC II 분자에 대한 LAG-3의 결합을 억제하는 것;
    (5) 활성화된 CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포 표면 상의 내인성 LAG-3에 결합하는 특징, 예를 들어, 약 35pM 이하의 EC50으로 결합하는 것;
    (6) 예를 들어, 하기 중 하나 이상을 야기시키는, 하나 이상의 LAG-3 활성을 억제하는 것: CD4+ T 림프구의 증가된 항원 의존성 자극; 증가된 T 세포 증식; 활성화 항원(예를 들어, CD25)의 증가 발현; 사이토카인(예를 들어, 인터페론-γ(IFN-γ), 인터류킨-2(IL-2), 또는 인터류킨-4(IL-4))의 증가 발현; 케모카인(예를 들어, CCL3, CCL4, 또는 CCL5)의 증가 발현; 조절 T 세포의 감소된 억제 활성; 증가된 T-세포 항상성; 증가된 종양-침윤 림프구; 또는 암 세포의 감소된 면역 회피;
    (7) 항체 의존성 세포 매개 세포독성(ADCC)을 유도하는 것;
    (8) 표 3에 열거된 항체들 중 어느 하나와 동일하거나 유사한 LAG-3에 대한 결합 친화성 및/또는 특이성을 나타내는 것;
    (9) LAG-3에 대한 표 3에 열거된 항체들 중 어느 하나의 결합을 억제(예를 들어, 경쟁적으로 억제)하는 것;
    (10) 표 3에 열거된 항체들 중 어느 하나와 동일하거나 중첩하는 에피토프에 결합하는 것;
    (11) LAG-3에 대한 결합에 대해 표 3에 열거된 항체들 중 어느 하나와 경쟁하는 것;
    (12) 표 3에 열거된 항체들 중 어느 하나의 하나 이상의 생물학적 특성을 보유하는 것.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체가 IgG4 또는 이의 항원 결합 단편 형태의 항체이고, 선택적으로 항 LAG-3 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 κ 경쇄 불변 영역, 예를 들어, 인간 κ 중쇄 불변 영역을 포함하는, 항 LAG-3 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체가 단일클론 항체인, 항 LAG-3 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체가 인간화 항체 또는 인간 항체인, 항 LAG-3 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항원 결합 단편이 Fab, Fab', Fab'-SH, Fv, 단일-쇄 항체, 예컨대 scFv, (Fab')2 단편, 단일 도메인 항체, 디아바디(dAb), 및 선형 항체로부터 선택된 항체 단편인, 항 LAG-3 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체가 이중특이성 항체 또는 다중특이성 항체이고, 바람직하게는 상기 이중특이성 항체가 LAG-3 및 PD-1에 결합되거나, LAG-3 및 PD-L1에 결합되거나, LAG-3 및 PD-L2에 결합되거나, 또는 상기 다중특이성 항체가 LAG-3에 대한 제1 결합 특이성 및 PD-1(예를 들어, 인간 PD-1), TIM-3, CEACAM(예를 들어, CEACAM-1 또는 CEACAM-5), PD-L1(예를 들어, 인간 PD-L1), 및 PD-L2(예를 들어, 인간 PD-L2)로부터 선택된 하나 이상의 분자에 대한 제2 및 제3 결합 특이성을 포함하는, 항 LAG-3 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 따른 항 LAG-3 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 암호화하는 단리된 핵산.
  14. 제13항에 따른 핵산을 포함하는 벡터로서, 바람직하게는, 상기 벡터는 발현 벡터, 예컨대 pTT5 벡터인, 벡터.
  15. 제13항에 따른 핵산 또는 제14항에 따른 벡터를 포함하는 숙주 세포로서, 상기 숙주 세포는 바람직하게는 원핵 세포 또는 진핵 세포이고, 더욱 바람직하게는, 상기 숙주 세포는 E. coli 세포, 효모 세포, 포유류 세포, 및 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 제조에 적합한 다른 세포로부터 선택되고, 가장 바람직하게는, 상기 숙주 세포는 293 세포 또는 CHO 세포인, 숙주 세포.
  16. 항 LAG-3 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제조하는 방법으로서, 제15항에 따른 숙주 세포를 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 따른 항 LAG-3 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 암호화하는 핵산의 발현에 적합한 조건에서 인큐베이션하는 단계, 및 선택적으로, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 단리하는 단계를 포함하고; 선택적으로, 상기 방법은 상기 항 LAG-3 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 상기 숙주 세포로부터 단리하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
  17. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 따른 항 LAG-3 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 및 추가의 물질, 예컨대 세포독성제를 포함하는 면역접합체.
  18. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 따른 항 LAG-3 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 제17항에 따른 면역접합체, 및 선택적으로 제약 보충 물질을 포함하는 제약 조성물.
  19. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 따른 항 LAG-3 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 제17항에 따른 면역접합체, 추가의 치료제, 및 선택적으로 제약 보충 물질을 포함하는 제약 조성물로서, 바람직하게는, 상기 추가의 치료제는 화학요법제, 다른 항체, 세포독성제, 백신, 항감염제, 및 면역조절제(예를 들어, 공동자극 분자의 활성화제 또는 면역 체크포인트 분자의 억제제), 바람직하게는 항 PD-1 항체, 항 PD-L1 항체, 및 항 PD-L2 항체, 더욱 바람직하게는 항 인간 PD-1 항체 및 항 인간 PD-L1 항체, 예를 들어, 인간화 항 인간 PD-1 항체 또는 인간화 항 인간 PD-L1 항체로부터 선택되는, 제약 조성물.
  20. 제19항에 있어서, 상기 항 PD-L1 항체가,
    (i) 서열 번호 57로 나타내는 중쇄 가변 영역의 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR), 및/또는
    (ii) 서열 번호 58로 나타내는 중쇄 가변 영역의 3개의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR)을 포함하는, 제약 조성물.
  21. 제19항에 있어서, 상기 항 PD-L1 항체가 중쇄 가변 영역(VH) 및/또는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고,
    (i) 상기 VH는 상보성 결정 영역(CDR) HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하고, 상기 HCDR 1은 서열 번호 51의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 것이고; 상기 HCDR2는 서열 번호 52의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 것이며; 상기 HCDR3은 서열 번호 53의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 것;
    및/또는
    (ii) 상기 VL은 상보성 결정 영역(CDR) LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하고 상기 LCDR1은 서열 번호 54의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 것이고; 상기 LCDR2는 서열 번호 55의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 것이며; 상기 LCDR3은 서열 번호 56의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 것인, 제약 조성물.
  22. 대상체 또는 개체에서 종양 또는 감염성 질환을 예방 또는 치료하기 위한 약물의 제조에 있어서, 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 따른 항 LAG-3 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 제17항에 따른 면역접합체 또는 제18항 또는 제21항에 따른 제약 조성물의 유효량의 용도.
  23. 대상체 또는 개체에서 종양 또는 감염성 질환을 예방 또는 치료하기 위한 약물의 제조에 있어서, 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 따른 항 LAG-3 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 제17항에 따른 면역접합체 또는 제18항 또는 제19항에 따른 제약 조성물, 및 PD-1 축 결합 길항제 또는 상기 PD-1 축 결합 길항제를 함유하는 약물 또는 활성제의 유효량의 용도로서, 상기 PD-1 축 결합 길항제는 바람직하게는 항 PD-1 항체 또는 항 PD-L1 항체, 예를 들어, 항 인간 PD-1 항체 또는 항 인간 PD-L1 항체, 예를 들어, 인간화 항 인간 PD-1 항체 또는 인간화 항 PD-L1 항체인, 용도.
  24. 제22항 또는 제23항에 있어서, 상기 종양이 암, 예컨대, 위장관 종양, 예컨대, 위장암, 예컨대, 결장암이거나; 또는 상기 감염성 질환이 만성 감염인, 용도.
  25. 제22항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 하나 이상의 추가 병합 요법을 부여하는 것을 추가로 포함하며, 상기 요법은, 예를 들어 치료 양식(therapeutic modality) 및/또는 다른 치료제를 포함하고; 바람직하게는, 상기 치료 양식은 수술 치료 및/또는 방사선요법을 포함하거나, 또는 상기 치료제는 화학요법제, 세포독성제, 백신, 다른 항체, 항감염제, 및 면역조절제(예를 들어, 공동자극 분자의 활성화제 또는 면역 체크포인트 분자의 억제제)로부터 선택되고; 바람직하게는, 상기 치료제는 항 PD-1 항체,항 PD-L1 항체, 또는 항 PD-L2 항체이고, 더 바람직하게는, 치료제는 항 인간 PD-1 항체 또는 항 인간 PD-1 항체, 예를 들어, 인간화 항 PD-1 항체 또는 항 인간 PD-L1 항체인 용도.
  26. 제23항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항 PD-L1 항체가,
    (i) 서열 번호 57로 나타내는 중쇄 가변 영역의 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR), 및/또는
    (ii) 서열 번호 58로 나타내는 중쇄 가변 영역의 3개의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR)을 포함하는 용도.
  27. 제23항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항 PD-L1 항체가 중쇄 가변 영역(VH) 및/또는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고,
    (i) 상기 VH는 상보성 결정 영역(CDR) HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하고, 상기 HCDR 1은 서열 번호 51의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 것이고; 상기 HCDR2는 서열 번호 52의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 것이며; 상기 HCDR3은 서열 번호 53의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 것;
    및/또는
    (ii) 상기 VL은 상보성 결정 영역(CDR) LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하고 상기 LCDR1은 서열 번호 54의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 것이고; 상기 LCDR2는 서열 번호 55의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 것이며; 그리고 상기 LCDR3은 서열 번호 56의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 것인, 제약 조성물.
  28. 샘플에서 LAG-3을 검출하는 방법으로서,
    (a) 상기 샘플을 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 따른 항 LAG-3 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 접촉시키는 단계; 및
    (b) 항 LAG-3 항체 또는 이의 항원 결합 단편 및 LAG-3에 의한 복합체의 형성을 검출하는 단계로서, 선택적으로, 상기 항 LAG-3 항체는 검출 가능하게 표지되는 단계;를 포함하는, 방법.
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