KR20200101114A - 구절초 추출물을 유효성분으로 함유하는 근육세포 보호용 건강기능식품 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 피로개선용 건강기능식품에 관한 것으로 구절초의 꽃, 줄기 및 뿌리를 혼합한 혼합 추출물을 유효성분으로 함유함으로써, 피로의 축적을 감소시키고 개선시키는 효과가 있다. 또한, 독성이 없으므로 식품의 형태로 섭취할 수 있다.
Description
본 발명은 피로를 개선할 수 있는 구절초 추출물을 유효성분으로 함유하는 건강기능식품에 관한 것이다.
피로는 육체적 피로와 정신적 피로로 나눌 수 있고, 정상의 경우 7~9시간의 휴식에 의해 쉽게 없어지나, 피로가 과도하게 누적된 경우 수면이나 휴식만으로는 쉽게 풀리지 않는다.
불규칙적으로 장기간 과도하게 유발되는 육체적 피로는 근과 골격계의 성능 저하로 이어지고, 근육통, 몸살, 졸림 현상 등 다양하게 나타나며 정신적 피로 증상을 동반한 만성피로 증후군을 유발할 수 있다.
바쁜 생활 속의 현대인들은 활동량의 부족, 정신적인 스트레스, 게으른 습관 및 비만 등으로 인해 피로가 쉽게 나타나, 질병 없이 건강을 유지하고자 하는 관심과 욕구는 점점 높아지고 있다.
일반적으로 육체적 피로는 과도한 운동이나 육체노동으로 초래되며, 이는 과도한 에너지 대사로 인한 산화적 스트레스로부터 활성산소종의 증가, 지질 과산화물 축적 등의 요인으로 근육세포의 손상을 초래함으로써, 젖산(lactate)의 생성과 축적으로 인하여 피로를 유발하게 된다. 그러므로 산화적 스트레스로부터 방어할 수 있는 에너지원 보충과 피로물질 누적을 감소시키는 것이 대표적인 피로개선 효과로 간주할 수 있다.
이에, 만성피로에 시달리는 현대인들은 피로회복과 건강증진 및 질병예방을 위한 영양물질을 보충하고자 건강기능식품의 섭취를 선호하고 있는 실정이다.
한편, 구절초는 항당뇨 등 효과가 알려져 있을 뿐으로 피로개선 관련 효능이 알려져 있지 않은 실정이다. 이에 본 발명에서는 구절초 추출물을 마우스 유래 근아세포에 처리하여 산화적 스트레스를 유발 후 근육세포 보호효과를 확인하였으며, 이를 바탕으로 본 발명은 구절초 추출물을 이용하여 피로개선용 건강기능성식품을 제공하고자 한다.
본 발명의 목적은 피로를 개선시킬 수 있는 구절초의 꽃, 줄기 및 뿌리를 혼합한 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 건강기능식품을 제공하는데 있다.
상기한 목적을 달성하기 위한 본 발명의 피로를 개선시킬 수 있는 건강기능식품은 구절초의 꽃, 줄기 및 뿌리를 혼합한 혼합 추출물을 유효성분으로 함유할 수 있다.
상기 구절초 혼합 추출물은 구절초의 꽃, 줄기 및 뿌리를 1 : 1-3 : 0.5-1의 중량비로 혼합한 것일 수 있다.
본 발명의 구절초 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 건강기능식품은 피로개선 효과가 우수하다.
특히, 구절초는 천연 약용식물로서 식용이 가능하므로 이로부터 유래한 추출물을 유효성분으로 포함하는 본 발명의 조성물은 장기간 사용에도 안전한 이점을 가진다.
도 1은 본 발명의 구절초 혼합 추출물을 사용 시 근아세포에서 활성산소에 대한 형광 광도를 나타낸 그래프이다.
본 발명은 피로를 개선시킬 수 있도록 구절초 추출물을 유효성분으로 함유하는 건강기능식품에 관한 것이다.
이하, 본 발명을 상세하게 설명한다.
본 발명의 피로를 개선시킬 수 있는 건강기능식품은 구절초의 꽃, 줄기 및 뿌리를 혼합한 혼합 추출물을 유효성분으로 함유한다.
본 발명에 사용되는 구절초(Chrysanthemum zawadskii var. latilobum (Maxim.) Kitam.)는 국화과의 다년생 초본으로 야국(野菊), 선모초(仙母草), 고봉(苦蓬), 들국화라고도 한다. 전국 각처의 산지와 고원지에서 자생하고 중국, 러시아, 몽골, 일본 등지에서 자라며 민간에서 줄기와 잎을 가을에 채취하여 환의 형태, 혹은 달여서 부인 대부증 또는 건위제로 사용하여 왔다. 땅 속의 뿌리줄기가 옆으로 뻗으면서 번식하며, 개화기는 8-10월이며 결실기는 10-11월이다. 구절초 전초의 생약명은 선모초, 구절초라 하며, 꽃은 단아하고 아름다워 경관조성용으로 널리 재배되고 있다. 구절초 전초와 꽃 이삭은 폐렴, 기관지염, 기침, 감기, 부인병, 냉증, 위장병 및 고혈압 등에 사용되어 왔다.
본 발명에 따른 구절초 추출물은 구절초의 꽃, 줄기 및 뿌리를 혼합한 혼합 추출물로서, 상기 구절초 혼합 추출물은 구절초의 꽃, 줄기 및 뿌리를 1 : 1-3 : 0.5-1의 중량비, 바람직하게는 1 : 1-2 : 0.6-0.8의 중량비로 혼합하여 추출한 것이다. 구절초의 꽃을 기준으로 줄기 및 뿌리의 함량이 상기 범위를 벗어나는 경우에는 피로개선의 효과가 저조할 수 있다.
본 발명의 구절초 혼합 추출물을 사용하지 않고, 구절초 꽃 추출물, 구절초 줄기 추출물 또는 구절초 뿌리 추출물을 사용하는 경우에는 구절초 혼합 추출물에 비하여 피로개선 효과가 현저히 저하될 수 있다. 특히, 구절초 꽃 추출물은 피로개선 효과가 거의 발생하지 않는다.
본 발명의 추출물은 60 내지 90 ℃에서 5 내지 10시간, 바람직하게는 7 내지 8시간 동안 추출한 추출물이다. 추출 온도 및 시간이 상기 하한치 미만인 경우에는 유효성분이 추출되지 않을 수 있으며, 상기 상한치 초과인 경우에는 탄맛이 강하고 영양성분이 파괴될 수 있다.
상기 추출용매로는 특별히 한정하는 것은 아니지만, 물, 탄소수 1 내지 4의 저급알코올 또는 이들의 혼합용매를 들 수 있으며, 물로 추출된 추출물이 유기 용매로 추출된 추출물에 비하여 피로개선 효과가 우수하므로 물을 추출용매로 사용하는 것이 바람직하다.
상기와 같이 제조된 구절초 혼합 추출물은 추출물 자체로 이용하거나 사용이 편리하도록 분말화하여 이용할 수 있다. 상기 구절초 혼합 추출물을 분말화하는 방법은 추출물을 감압 농축하여 부피를 줄인 후 동결건조기로 동결건조하여 분말화한다.
본 발명의 구절초 혼합 추출물은 광의로는 구절초 꽃, 줄기 및 뿌리를 혼합한 혼합물을 동물에게 투여할 수 있도록 제형화된 구절초 혼합 가공물, 예컨대, 구절초 꽃, 줄기 및 뿌리를 혼합한 혼합 분말도 포함하는 의미를 갖는다. 비록 본 발명에서 구절초 꽃, 줄기 및 뿌리를 혼합한 혼합 추출물로 실험을 진행하긴 하였으나, 구절초 꽃, 줄기 및 뿌리를 혼합한 혼합 가공물과 같은 형태로도 목적하는 효과를 달성할 수 있음은 당업자라면 예상가능할 것이다.
한편, 본 명세서에서 용어 '유효성분으로 함유하는'이란 구절초 꽃, 줄기 및 뿌리를 혼합한 혼합 추출물의 효능 또는 활성을 달성하는 데 충분한 양을 포함하는 것을 의미한다. 일예로, 상기 구절초 꽃, 줄기 및 뿌리를 혼합한 혼합물은 10 내지 1500 ㎍/㎖, 바람직하게는 100 내지 1000 ㎍/㎖의 농도로 사용된다. 구절초 꽃, 줄기 및 뿌리를 혼합한 혼합물은 천연물로서 과량 투여하여도 인체에 부작용이 없으므로 본 발명의 조성물 내에 포함되는 구절초 꽃, 줄기 및 뿌리를 혼합한 혼합물의 양적 상한은 당업자가 적절한 범위 내에서 선택하여 실시할 수 있다.
본 발명은 구절초 꽃, 줄기 및 뿌리를 혼합한 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하여 피로를 개선시킬 수 있는 식품 조성물을 제공한다.
본 발명에 따른 식품 조성물은 기능성 식품으로 이용하거나, 각종 식품에 첨가할 수 있다. 본 발명의 조성물을 첨가할 수 있는 식품으로는 예를 들어, 음료류, 알코올 음료류, 과자류, 다이어트바, 유제품, 육류, 초코렛, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류, 비타민 복합제, 건강보조식품류 등이 있다.
본 발명의 식품 조성물은 유효성분으로서 구절초 꽃, 줄기 및 뿌리를 혼합한 혼합 추출물을 포함하는 혼합물뿐만 아니라, 식품 제조 시에 통상적으로 첨가되는 성분을 포함할 수 있으며, 예를 들어, 단백질, 탄수화물, 지방, 영양소, 조미제 및 향미제를 포함한다. 상술한 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스, 올리고당 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 사이클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 향미제로서 천연 향미제 [타우마틴, 스테비아 추출물 (예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등]) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 사용할 수 있다. 예컨대, 본 발명의 식품 조성물이 드링크제와 음료류로 제조되는 경우에는 본 발명의 구절초 꽃 추출물 또는 구절초 줄기 추출물을 포함하는 혼합물 이외에 구연산, 액상과당, 설탕, 포도당, 초산, 사과산, 과즙, 및 각종 식물 추출액 등을 추가로 포함시킬 수 있다.
본 발명은 상기 구절초 꽃, 줄기 및 뿌리를 혼합한 혼합 추출물을 유효성분으로 포함하는 피로개선을 위한 식품 조성물을 포함하는 건강기능식품을 제공한다. 건강기능식품이란, 구절초 꽃, 줄기 및 뿌리를 혼합한 혼합 추출물을 포함하는 혼합물을 음료, 차류, 향신료, 껌, 과자류 등의 식품소재에 첨가하거나, 캡슐화, 분말화, 현탁액 등으로 제조한 식품으로, 이를 섭취할 경우 건강상 특정한 효과를 가져오는 것을 의미하나, 일반 약품과는 달리 식품을 원료로 하여 약품의 장기 복용시 발생할 수 있는 부작용 등이 없는 장점이 있다. 이와 같이 하여 얻어지는 본 발명의 건강기능식품은, 일상적으로 섭취하는 것이 가능하기 때문에 매우 유용하다. 이와 같은 건강기능식품에 있어서의 구절초 꽃, 줄기 및 뿌리를 혼합한 혼합 추출물의 첨가량은, 대상인 건강기능식품의 종류에 따라 달라 일률적으로 규정할 수 없지만, 식품 본래의 맛을 손상시키지 않는 범위에서 첨가하면 되며, 대상 식품에 대하여 통상 0.01 내지 50 중량%, 바람직하기로는 0.1 내지 20 중량%의 범위이다. 또한, 환제, 과립제, 정제 또는 캡슐제 형태의 건강기능식품의 경우에는 통상 0.1 내지 100 중량% 바람직하기로는 0.5 내지 80 중량%의 범위에서 첨가하면 된다. 한 구체예에서, 본 발명의 건강기능식품은 환제, 정제, 캡슐제 또는 음료의 형태일 수 있다.
또한, 본 발명은 피로개선을 위한 식품의 제조를 위한 구절초 꽃, 줄기 및 뿌리를 혼합한 혼합 추출물의 용도를 제공한다. 상기한 바와 같이 구절초 꽃, 줄기 및 뿌리를 혼합한 혼합 추출물은 피로개선을 위한 용도로 이용될 수 있다.
또한, 본 발명은 포유동물에게 유효량의 구절초 꽃, 줄기 및 뿌리를 혼합한 혼합 추출물을 투여하는 것을 포함하는 피로개선 방법을 제공한다.
여기에서 사용된 용어 "포유동물"은 치료, 관찰 또는 실험의 대상인 포유동물을 말하며, 바람직하게는 인간을 말한다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시하나, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐 본 발명의 범주 및 기술사상 범위 내에서 다양한 변경 및 수정이 가능함은 당업자에게 있어서 명백한 것이며, 이러한 변형 및 수정이 첨부된 특허청구범위에 속하는 것도 당연한 것이다.
실시예 1. 구절초 혼합 추출물
구절초 꽃, 줄기 및 뿌리를 각각 세척하여 동결건조한 후 분쇄하여 각각의 분말을 수득한 후 구절초 꽃 분말, 구절초 줄기 분말 및 구절초 뿌리 분말을 1 : 1.2 : 0.7의 중량비로 혼합하였다. 상기 혼합 분말 100 g과 정제수 900 ml를 혼합하여 80 ℃의 중탕에서 8시간 동안 추출한 후 감압 여과하고 농축 및 동결건조하여 구절초 혼합 추출물 분말을 수득하였다.
비교예 1. 구절초 꽃 추출물
상기 실시예 1과 동일하게 실시하되, 구절초 꽃, 줄기 및 뿌리를 혼합한 혼합물 대신 구절초 꽃만 사용하여 구절초 꽃 추출물 분말을 수득하였다.
비교예 2. 구절초 줄기 추출물
상기 실시예 1과 동일하게 실시하되, 구절초 꽃, 줄기 및 뿌리를 혼합한 혼합물 대신 구절초 줄기만 사용하여 구절초 줄기 추출물 분말을 수득하였다.
비교예 3. 구절초 뿌리 추출물
상기 실시예 1과 동일하게 실시하되, 구절초 꽃, 줄기 및 뿌리를 혼합한 혼합물 대신 구절초 뿌리만 사용하여 구절초 뿌리 추출물 분말을 수득하였다.
비교예 4. 함량
상기 실시예 1과 동일하게 실시하되, 구절초 꽃, 줄기 및 뿌리를 1 : 0.5 : 3의 중량비로 혼합하여 구절초 혼합 추출물 분말을 수득하였다.
<시험예>
시험예 1. 수율 측정
실시예 1에 따라 제조된 구절초 혼합 추출물에 대한 수율을 하기 [수학식 1]에 따라 계산하였다.
[수학식 1]
수율(%) = (동결건조 분말의 무게(g) / 시료의 무게(g)) X 100
| 구분 | 시료의 무게(g) | 동결건조 분말의 무게(g) | 수율(%) |
| 실시예 1 | 100 | 12.03 | 12.03 |
| 비교예 1 | 100 | 9.15 | 9.15 |
| 비교예 2 | 100 | 10.49 | 10.49 |
| 비교예 3 | 100 | 13.15 | 13.15 |
| 비교예 4 | 100 | 11.89 | 11.89 |
위 표 1에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 실시예 1에 따라 제조된 구절초 혼합 추출물의 수율은 약 12%인 것을 확인하였다.
시험예 2. 세포독성 평가
실시예 및 비교예에서 제조된 구절초 추출물이 마우스 유래 근아세포(C2C12 cell line)에 미치는 세포독성을 확인하였다.
구절초 추출물의 세포독성은 MTT{3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide}assay를 이용하여 분석하였다. 마우스 유래 근아세포에 10% FBS(Fetal bovine serum, 소태아혈청)가 첨가된 DMEM 배지에서 37 ℃ 조건으로 배양시킨 후 배양된 세포를 96-well plate에 10% FBS가 첨가된 DMEM 배지를 사용하여 1X10⁴ cell/ml의 농도로 접종하고 24시간 동안 배양한 다음 각 well에 실시예 1에서 제조된 구절초 혼합 추출물을 DMEM 배지에 1000 μg/mL로 처리하여 24시간 동안 배양하였다. 이후 5 mg/ml 농도의 MTT 시약을 각 well에 10 μL씩 처리한 후 3시간 뒤 배양액을 제거하여 각 well에 DMSO(dimethyl sulfoxide)를 100 μL씩 분주한 후 595 nm에서 흡광도를 측정하였다.
[수학식 2]
세포 생존율(%) = (A/B)X100
A : 열수추출물 처리군의 흡광도
B : 대조군의 흡광도
| 구분 | 농도(mg/ml) | |||||
| 0 | 0.01 | 0.05 | 0.1 | 0.5 | 1 | |
| 실시예 1 | 100 | 99.9 | 99.9 | 99.8 | 96.8 | 97.8 |
| 비교예 1 | 100 | 98.9 | 98.6 | 97.1 | 97.4 | 96.9 |
| 비교예 2 | 100 | 98.6 | 98.1 | 98.3 | 97.6 | 97.0 |
| 비교예 3 | 100 | 97.5 | 98.0 | 97.7 | 97.1 | 96.1 |
| 비교예 4 | 100 | 98.6 | 99.0 | 98.1 | 97.5 | 96.8 |
위 표 2에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 실시예 1에 따라 제조된 구절초 혼합 추출물 및 비교예 1 내지 4의 추출물은 C2C12 근아세포에서 0 내지 1000 μg/mL의 모든 농도에 따른 세포독성이 나타나지 않는 것으로 확인하였다.
따라서 향후 실험은 높은 농도인 1000 μg/mL를 사용하여 수행하였다.
시험예 3. 산화적 스트레스로부터 세포보호 효과 확인
실시예 및 비교예에서 제조된 구절초 추출물이 산화적 스트레스로부터 마우스 유래 근아세포(C2C12 cell line)보호 효과를 확인하기 위하여, 실시예 및 비교예의 구절초 추출물의 산화적 스트레스 억제능을 측정하였다.
산화적 스트레스로부터 근육세포 보호효과는 배양된 세포를 96-well plate에 10% FBS가 첨가된 DMEM 배지를 사용하여 1X10⁴ cell/ml의 농도로 접종하고 24시간 동안 배양한 후, 각 well에 실시예 1에서 제조된 구절초 혼합 추출물을 DMEM 배지에 1000 μg/mL로 1시간 전에 처리하고 H2O2 500 μM를 처리하여 24시간 동안 반응시켜 산화적 스트레스를 유도하였다. 이후 5 mg/ml 농도의 MTT 시약을 각 well에 10 μL씩 처리한 후 3시간 뒤 배양액을 제거하여 각 well에 DMSO(dimethyl sulfoxide)를 100 μL씩 분주한 후 595 nm에서 흡광도를 측정하였다.
하기 표 3은 근아세포에서 산화적 스트레스로부터 근육세포의 세포 생존율을 측정한 것이며, 하기 표 4는 실시예 및 비교예의 구절초 추출물이 근아세포에서 산화적 스트레스로부터 근육세포 보호효과를 나타낸 것이다.
| 구분 | 대조군 | H2O2처리 농도(mM) | ||
| 1 | 0.5 | 0.25 | ||
| 세포 생존율(%) | 100 | 40.1 | 63.1 | 82.5 |
| 구분(세포 생존율, %) | 대조군 | H2O2 0.5 mM 처리 | |
| 0 ㎍/㎖ | 1000 ㎍/㎖ | ||
| 실시예 1 | 100 | 63.1 | 75.8 |
| 비교예 1 | 100 | 63.1 | 63.4 |
| 비교예 2 | 100 | 63.1 | 63.7 |
| 비교예 3 | 100 | 63.1 | 63.1 |
| 비교예 4 | 100 | 63.1 | 66.8 |
위 표 3 및 표 4에 나타낸 바와 같이, H2O2는 근육세포에 산화적 스트레스를 유도하여 낮은 세포 생존율을 보였으며, 실시예 1에 따라 제조된 구절초 혼합 추출물(1000 μg/mL) 처리군의 세포 생존율은 75.8%로 H2O2로 유도된 세포손상에 대해 약 19% 유의적인 보호 효과를 나타내었다.
반면, 비교예 1 내지 4에 따라 제조된 추출물은 H2O2로 유도된 세포손상에 대해 보호 효과를 나타내지 못하는 것으로 확인되었다.
즉, 실시예 1의 구절초 혼합 추출물은 H2O2로 유도된 산화적 스트레스로부터 근육세포 보호효과가 있음을 확인하였다.
시험예 4. 세포내 활성산소 함량 분석
생체 내에서 유해활성산소의 형성은 산소를 사용하는 과정에서 자연스레 생성된다. 산소는 전자를 획득하기 쉬운 상태가 되어 강력한 산화제가 될 수 있다. 이러한 활성산소종(Reactive oxygen species, ROS) 발생 정도를 DCFH-DA(Dichlorofluorescin diacetate)법을 이용하여 측정하였다.
산화적 스트레스로부터 발생한 ROS 제거능 효과는 배양된 근육세포를 96-well black plate에 10% FBS가 첨가된 DMEM 배지를 사용하여 1X10⁴ cell/ml의 농도로 접종하고 24시간 동안 배양한 후, 각 well에 실시예 1에서 제조된 구절초 혼합 추출물을 DMEM 배지에 1000 ug/mL로 1시간 전에 처리하고 H2O2 500 uM를 처리하여 2시간 동안 반응시켜 산화적 스트레스를 유도하였다. 이후, 10 uM/ml 농도의 DCFH-DA 시약을 각 well에 20 uL씩 처리하여 30분 후, fluorometer를 사용하여 λ excitation 485 nm, λ emission 535 nm 조건에서 형광도를 측정하였다.
도 1은 본 발명의 구절초 혼합 추출물을 사용 시 근아세포에서 활성산소에 대한 형광 광도를 나타낸 그래프이다.
하기 표 5는 실시예 및 비교예의 추출물을 사용 시 근아세포에서 활성산소에 대한 면적을 나타낸 것이다.
| 구분(ROSX106) | 대조군 | H2O2 0.5 mM 처리 | |
| 0 ㎍/㎖ | 1000 ㎍/㎖ | ||
| 실시예 1 | 7.5 | 42.8 | 24.9 |
| 비교예 1 | 7.5 | 42.8 | 41.7 |
| 비교예 2 | 7.5 | 42.8 | 41.8 |
| 비교예 3 | 7.5 | 42.8 | 42.3 |
| 비교예 4 | 7.5 | 42.8 | 38.5 |
도 1 및 위 표 5에 나타낸 바와 같이, H2O2는 근육세포에 산화적 스트레스를 유도하였으며 구절초 추출물 생략(H2O2 처리; 0+H2O2)은 대조군에 비해 세포내 ROS 발생양이 유의적으로 증가하였으나, 실시예 1에 따라 제조된 구절초 혼합 추출물(1000 μg/mL)을 처리한 군에서는 구절초 추출물 생략한 군에 비해 ROS 발생양이 유의적으로 감소하는 결과를 확인하였다.
반면, 비교예 1 내지 4의 추출물은 구절초 추출물 생략한 군에 비해 ROS 발생양이 감소하지 않는 것을 확인하였다.
즉, 실시예 1의 구절초 혼합 추출물은 H2O2로 유도된 산화적 스트레스로부터 ROS 발생양을 유의적으로 감소시킴으로써 근육세포 보호효과가 있음을 확인하였다.
시험예 5. 항산화 성분 분석
5-1. 총 폴리페놀 함량(mgGA/g): Folin-Denis 법을 이용하여 실시예 1에서 제조한 구절초 혼합 추출물의 총 폴리페놀 함량을 측정하였다. 1 mg의 시료에 증류수를 첨가해 1 mL가 되도록 시험용액을 준비하였다. 0.5 mL의 시험용액(1 mg/mL)에 2% Na2CO3 용액 1 mL, Folin-Ciocalteu's 시약 50 μL를 차례로 첨가한 다음 Spectrophotometer로 720 nm에서 흡광도를 측정한 후 측정된 흡광도를 Gallic acid equivalent Standard curve로부터 환산하여 함량으로 나타내었다.
5-2. 총 플라보노이드 함량(mg Rutin/g): 실시예 1에서 제조한 구절초 혼합 추출물의 총 플라보노이드 함량을 측정하였다. 1 mg의 시료에 증류수를 첨가해 1 mL가 되도록 시험용액을 준비하였다. 1 mL의 시험용액(1 mg/mL)에 5% NaNO2 용액 75 μL를 첨가한 다음 5분간 실온에서 반응시킨 후 10% AlCl3 용액 30 μL와 1M NaOH 200 μL를 가한 다음 Spectrophotometer로 510 nm에서 흡광도를 측정한 후 측정된 흡광도를 Rutin equivalent Standard curve로부터 환산하여 함량으로 나타내었다.
| 구분 | 실시예 1 | 비교예 1 | 비교예 2 | 비교예 3 | 비교예 4 |
| 폴리페놀의 함량(mgGA/g sample) | 45.36 | 31.15 | 30.89 | 29.02 | 35.94 |
| 플라보노이드의 함량(mg Rutin/g sample) | 38.18 | 22.12 | 22.45 | 20.18 | 26.11 |
위 표 6에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 실시예 1에 따라 제조된 구절초 혼합 추출물(1 mg/mL)은 표준물질 gallic acid 대비 45.36 mg GA/g의 폴리페놀 함량을 나타내었으며, 표준물질 rutin 대비 38.18 mg Rutin/g의 플라보노이드 함량을 나타낸 것을 확인하였다.
반면, 비교예 1 내지 4의 추출물은 실시예 1의 추출물에 비하여 폴리페놀 함량 및 플라보노이드 함량이 낮은 것을 확인하였다.
시험예 6. 항산화 활성 확인
6-1. ABTS 라디칼 소거능 분석: 구절초 추출물의 항산화 활성을 확인하기 위하여 실시예 및 비교예의 추출물에 대해 ABTS{2,2'-azino-bis(3-ethylbenzo-thiazoline-6-sulfonic acid)} 라디칼 소거능을 분석하였다. ABTS 라디칼 소거능은 cation decolorization assay를 이용하여 측정하였다.
70 ℃ 항온수조 안에서 30분 동안 1 mM의 AAPH{2,2'-azobis(2-amidinopropane)dihydrochloride}와 2.5 mM의 ABTS를 1,000 mL의 PBS에 용해시켜 라디칼을 형성시킨 후, 734 nm에서 흡광도를 측정하여 흡광도 값이 0.65가 되도록 PBS로 희석하였다. 희석된 ABTS 라디칼 용액 0.98 mL에 1 mg의 시료에 증류수를 첨가해 1 mL가 되도록 제조한 시험용액 0.02 mL(1 mg/mL)를 가하여 20분 간 반응시킨 후 흡광도의 변화를 측정하였다. 측정된 흡광도는 비타민 C를 이용한 표준곡선으로부터 환산하여 VCEAC(Vitamin C Equivalent Antioxidant Capacity)로 나타내었다.
6-2. DPPH 라디칼 소거능 분석: 구절초 추출물의 항산화 효과를 확인하기 위하여, 실시예 및 비교예의 추출물에 대해 DPPH(α,α-diphenyl-β-picrylhydrazyl) 라디칼 소거능을 분석하였다. DPPH 라디칼 소거능은 DPPH free radical assay를 변형하여 측정하였다.
0.05 mM DPPH 용액 1.45 mL에, 1 mg의 시료에 증류수를 첨가하여 1 mL가 되도록 제조한 시험용액 50 μL(1 mg/mL)를 가하여 암실 상태에서 30분간 반응 시킨 후 흡광도의 변화를 517 nm에서 측정하였다. 측정된 흡광도는 비타민 C를 이용한 표준곡선으로부터 환산하여 VCEAC로 나타내었다.
| 구분 | 실시예 1 | 비교예 1 | 비교예 2 | 비교예 3 | 비교예 4 |
| ABTS 라디칼 소거능(mg VCEAC/g) | 30.47 | 11.58 | 12.15 | 10.48 | 14.11 |
| DPPH 라디칼 소거능(mg VCEAC/g) | 24.94 | 9.48 | 10.09 | 8.67 | 13.41 |
위 표 7에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 실시예 1에 따라 제조된 구절초 혼합 추출물(1 mg/mL)은 표준물질인 비타민 C의 항산화 활성과 비교하였을 때 30.47 mg VCEAC/g의 free radical 소거활성을 나타내었으며, 표준물질인 비타민 C의 항산화 활성과 비교하였을 때 24.94 mg VCEAC/g의 free radical 소거활성을 나타낸 것을 확인하였다.
반면, 비교예 1 내지 4의 추출물은 실시예 1의 추출물에 비하여 항산화 활성이 낮은 것을 확인하였다.
이상의 결과로부터 실시예 1에 따라 제조된 구절초 혼합 추출물은 우수한 항산화 활성을 가지며, 또한 산화적 스트레스로부터 근육세포 보호효과가 있는 것을 확인하였다.
하기에 본 발명의 분말을 함유하는 조성물의 제제예를 설명하나, 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.
제제예 1. 기능성 음료의 제조
실시예 1에서 얻은 혼합 추출물 분말 1,000 mg
구연산 1,000 mg
올리고당 100 g
매실농축액 2 g
타우린 1 g
정제수를 가하여 전체 900 mL
통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1 시간 동안 85 ℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2 L 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 기능성 음료 조성물 제조에 사용한다.
상기 조성비는 비교적 기호음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 수요계층, 수요국가, 사용용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.
Claims (2)
- 구절초의 꽃, 줄기 및 뿌리를 혼합한 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 피로개선용 건강기능식품.
- 제1항에 있어서, 상기 구절초 혼합 추출물은 구절초의 꽃, 줄기 및 뿌리를 1 : 1-3 : 0.5-1의 중량비로 혼합한 것을 특징으로 하는 피로개선용 건강기능식품.
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|---|---|---|---|
| KR1020190019342A KR20200101114A (ko) | 2019-02-19 | 2019-02-19 | 구절초 추출물을 유효성분으로 함유하는 근육세포 보호용 건강기능식품 |
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|---|---|---|---|
| KR1020190019342A KR20200101114A (ko) | 2019-02-19 | 2019-02-19 | 구절초 추출물을 유효성분으로 함유하는 근육세포 보호용 건강기능식품 |
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| KR (1) | KR20200101114A (ko) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2024090913A1 (ko) * | 2022-10-26 | 2024-05-02 | 주식회사 에이치엘사이언스 | 아쉬아간다 추출물 및 구절초 추출물의 복합물(asc복합물)을 유효성분으로 포함하는 운동수행능력 증진용 조성물 |
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|---|---|---|---|---|
| KR20180052514A (ko) | 2016-11-10 | 2018-05-18 | 대한민국(농촌진흥청장) | 저온숙성마늘 제조방법 및 상기 방법으로 제조된 저온숙성마늘의 추출물을 유효성분으로 함유하는 피로개선용 조성물 |
| KR101888756B1 (ko) | 2016-10-31 | 2018-09-04 | 어업회사법인 주식회사 해천마 | 빅밸리 해마 가수분해물과 홍삼 추출물의 혼합물을 함유하는 피로개선용 건강 기능성 식품 조성물 |
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| KR20180052514A (ko) | 2016-11-10 | 2018-05-18 | 대한민국(농촌진흥청장) | 저온숙성마늘 제조방법 및 상기 방법으로 제조된 저온숙성마늘의 추출물을 유효성분으로 함유하는 피로개선용 조성물 |
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| WO2024090913A1 (ko) * | 2022-10-26 | 2024-05-02 | 주식회사 에이치엘사이언스 | 아쉬아간다 추출물 및 구절초 추출물의 복합물(asc복합물)을 유효성분으로 포함하는 운동수행능력 증진용 조성물 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| AMND | Amendment | ||
| E601 | Decision to refuse application | ||
| AMND | Amendment | ||
| E902 | Notification of reason for refusal | ||
| X601 | Decision of rejection after re-examination |