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KR20180080181A - 다낭포성 신장 질환의 치료 방법 - Google Patents

다낭포성 신장 질환의 치료 방법 Download PDF

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KR20180080181A
KR20180080181A KR1020187007997A KR20187007997A KR20180080181A KR 20180080181 A KR20180080181 A KR 20180080181A KR 1020187007997 A KR1020187007997 A KR 1020187007997A KR 20187007997 A KR20187007997 A KR 20187007997A KR 20180080181 A KR20180080181 A KR 20180080181A
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South Korea
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mir
certain embodiments
quot
modified oligonucleotide
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KR1020187007997A
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존 알. 안드로사비치
비. 넬슨 차우
비샬 디. 파텔
Original Assignee
레굴루스 테라퓨틱스 인크
보드 오브 리전츠 오브 더 유니버시티 오브 텍사스 시스템
보드 오브 리전츠 오브 더 유니버시티 오브 텍사스 시스템
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Abstract

miR-17에 표적화된 변형된 올리고뉴클레오타이드를 이용하여, 상염색체 우성 다낭포성 신장 질환을 포함하는, 다낭포성 신장 질환의 치료 방법이 본 명세서에서 제공된다.

Description

다낭포성 신장 질환의 치료 방법
본원은 미국 가출원 번호 62/210,031 (2015년 8월 26일 출원, 본 명세서에서 그 전문이 임의의 목적으로 참고로 편입됨)의 우선권의 이점을 주장한다.
다낭포성 신장 질환의 치료용 방법 및 조성물이 본 명세서에서 제공된다.
다낭포성 신장 질환은 다중 유체-채워진 낭포가 신장에서, 그리고 신체의 다른 곳에서 발생하는 유전적 장애이다. 다낭포성 신장 질환은 상염색체 열성 (ARPKD) 또는 상염색체 우성 (ADPKD)으로서 선천적일 수 있다. 상염색체 우성 다낭포성 신장 질환은 PKD1 또는 PKD2 유전자에서 돌연변이에 의해 야기된다. ADPKD는 낭포 형성 및 신장 확장이 60세까지 환자의 50%에서 신장 기능부전 및 결국 말기 신장 질환으로 이어지는 진행성 질환이다. ADPKD 환자는 평생 동안 투석 및/또는 신장 이식이 필요할 수 있다. ADPKD 치료를 위하여 승인된 치료제는 현재 없다.
발명의 요약
8 내지 25개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성되는 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 화합물의 치료적 유효량을 필요로 하는 대상체에 투여하는 것을 포함하는 다낭포성 신장 질환의 치료 방법이 여기에서 제공되고, 여기서 변형된 올리고뉴클레오타이드의 상기 핵염기 서열은 miR-17에 상보성이다. 특정 구현예에서, 대상체는 다낭포성 신장 질환을 갖는다. 특정 구현예에서, 대상체는 다낭포성 신장 질환을 갖는 것으로 의심된다.
특정 구현예에서, 대상체는 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 화합물 투여에 앞서 다낭포성 신장 질환을 갖는 것으로서 진단되어 있다. 일부 구현예에서, 대상체는, 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 화합물의 투여에 앞서, 대상체의 신장, 소변 또는 혈액에서 miR-17의 증가된 수준을 갖는 것으로 결정되었다.
특정 구현예에서, 다낭포성 신장 질환은 상염색체 우성 다낭포성 신장 질환 (ADPKD)이다. 일부 구현예에서, 다낭포성 신장 질환은 상염색체 열성 다낭포성 신장 질환 (ARPKD)이다. 일부 구현예에서, 대상체는 PKD1 유전자에서 돌연변이를 갖는다. 일부 구현예에서, 대상체는 PKD2 유전자에서 돌연변이를 갖는다.
특정 구현예에서, 대상체는 증가된 총 신장 용적을 갖는다. 일부 구현예에서, 대상체는 고혈압을 갖는다. 일부 구현예에서, 대상체는 손상된 신장 기능을 갖는다. 일부 구현예에서, 대상체는 개선된 신장 기능이 필요하다.
본 명세서에서 제공된 임의의 구현예에서, 다낭포성 신장 질환을 갖는 대상체에, miR-17에 상보성인 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 화합물의 투여는 대상체에서 신장 기능을 개선; 대상체에서 신장 기능의 악화를 지연; 대상체에서 총 신장 용적을 감소; 대상체에서 총 신장 용적의 증가를 둔화; 대상체에서 낭포 성장을 억제; 대상체에서 낭포 성장의 증가를 둔화; 대상체에서 신장 통증을 감소; 대상체에서 신장 통증의 증가를 둔화; 대상체에서 신장 통증의 개시를 지연; 대상체에서 고혈압을 감소; 대상체에서 고혈압의 악화를 둔화; 대상체에서 고혈압의 개시를 지연; 대상체의 신장에서 섬유증을 감소; 대상체의 신장에서 섬유증의 악화를 둔화; 대상체에서 말기 신장 질환의 개시를 지연; 대상체를 위한 투석 시간을 지연; 대상체를 위한 신장 이식 시간을 지연; 및/또는 대상체의 기대 수명을 개선시킬 수 있다.
본 명세서에서 제공된 임의의 구현예에서, 다낭포성 신장 질환을 갖는 대상체에, miR-17에 상보성인 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 화합물의 투여는 대상체에서 단백뇨를 감소; 대상체에서 단백뇨의 악화를 둔화; 대상체에서 단백뇨의 개시를 지연; 대상체에서 혈뇨를 감소; 대상체에서 혈뇨의 악화를 둔화; 대상체에서 혈뇨의 개시를 지연; 대상체에서 혈액 요소 질소를 감소; 대상체의 혈액에서 크레아티닌을 감소; 대상체에서 크레아티닌 청소율을 개선; 대상체에서 알부민:크레아티닌 비를 감소; 대상체에서 사구체 여과율을 개선; 대상체에서 사구체 여과율의 악화를 둔화; 대상체의 소변에서 호중구 젤라티나제 관련 리포칼린 (NGAL) 단백질을 감소; 및/또는 대상체의 소변에서 신장 손상 분자-1 (KIM-1) 단백질을 감소시킬 수 있다.
본 명세서에서 제공된 임의의 구현예는 대상체에서 총 신장 용적 측정; 대상체에서 고혈압 측정; 대상체에서 신장 통증 측정; 대상체의 신장에서 섬유증 측정; 대상체의 혈액에서 혈액 요소 질소 측정; 대상체의 혈액에서 크레아티닌 측정; 대상체에서 크레아티닌 청소율 측정; 대상체에서 단백뇨 측정; 대상체에서 알부민:크레아티닌 비 측정; 대상체에서 사구체 여과율 측정; 대상체의 소변에서 호중구 젤라티나제 관련 리포칼린 (NGAL) 단백질 측정; 및/또는 대상체의 소변에서 신장 손상 분자-1 (KIM-1) 단백질 측정을 포함할 수 있다.
특정 구현예에서, 총 신장 용적은 높이 조정된 신장 용적이다.
특정 구현예에서, 낭포는 대상체의 신장에서 존재한다. 일부 구현예에서, 낭포는 대상체의 신장 및 간에서 존재한다.
본 명세서에서 제공된 임의의 구현예는 항-고혈압 제제인 적어도 하나의 추가의 요법 투여를 포함할 수 있다.
본 명세서에서 제공된 임의의 구현예는 하기로부터 선택되는 적어도 하나의 추가의 요법 투여를 포함할 수 있다: 안지오텐신 II 전환 효소 (ACE) 억제제, 안지오텐신 II 수용체 차단제 (ARB), 이뇨제, 칼슘 채널 차단제, 키나아제 억제제, 아드레날린 수용체 길항제, 혈관확장제, 벤조디아제핀, 레닌 억제제, 알도스테론 수용체 길항제, 엔도텔린 수용체 차단제, 라파마이신 (mTOR) 억제제의 포유동물 표적, 호르몬 유사체, 바소프레신 수용체 2 길항제, 알도스테론 수용체 길항제, 투석, 및 신장 이식.
특정 구현예에서, 바소프레신 수용체 2 길항제는 톨밥탄이다.
특정 구현예에서, 안지오텐신 II 전환 효소 (ACE) 억제제는 카프토프릴, 에날라프릴, 리시노프릴, 벤나제프릴, 퀴나프릴, 포시노프릴, 라미프릴, 실라자프릴, 페린도프릴, 및 트란돌라프릴으로부터 선택된다.
특정 구현예에서, 안지오텐신 II 수용체 차단제 (ARB)는 칸데사르탄, 이르베사르탄, 올메사르탄, 로사르탄, 발사르탄, 텔미사르탄, 및 에프로사르탄으로부터 선택된다.
특정 구현예에서, ACE 억제제는 0.5 내지 1 mg/m2/일, 1 내지 6 mg/m2/일, 1 내지 2 mg/m2/일, 2 내지 4 mg/m2/일, 또는 4 내지 8 mg/m2/일 범위의 용량으로 투여된다.
특정 구현예에서, ARB는 6.25 내지 150 mg/m2/일 범위의 용량으로 투여된다. 임의의 이들 구현예에서, ARB는 6.25 mg/m2/일, 10 mg/m2/일, 12.5 mg/m2/일, 18.75 mg/m2/일, 37.5 mg/m2/일, 50 mg/m2/일, 또는 150 mg/m2/일의 용량으로 투여된다.
특정 구현예에서, 적어도 하나의 추가의 요법은 알도스테론 수용체 길항제이다. 특정 구현예에서, 알도스테론 수용체 길항제는 스피로노락톤이다. 특정 구현예에서, 스피로노락톤은 매일 10 내지 35 mg 범위의 용량으로 투여된다. 특정 구현예에서, 스피로노락톤은 매일 25 mg의 용량으로 투여된다.
특정 구현예에서, 키나아제 억제제는 보수티닙 및 KD019로부터 선택된다.
특정 구현예에서, mTOR 억제제는 에버롤리무스, 라파마이신, 및 시롤리무스로부터 선택된다.
특정 구현예에서, 호르몬 유사체는 소마토스타틴 및 부신피질 자극 호르몬으로부터 선택된다.
본 명세서에서 제공된 임의의 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드의 핵염기 서열은 하기에 적어도 90% 상보성, 적어도 95% 상보성, 또는 100% 상보성이다: miR-17의 핵염기 서열 (서열 식별 번호:1).
본 명세서에서 제공된 임의의 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드의 핵염기 서열은 하기를 포함하고: 핵염기 서열 5’-GCACTTTG-3’ (서열 식별 번호:3), 상기 핵염기 서열에서 각각의 T가 T 및 U로부터 독립적으로 선택되는, 방법.
본 명세서에서 제공된 임의의 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 8 내지 25, 8 내지 12, 12 내지 25, 15 내지 25, 또는 17 내지 23개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성된다. 본 명세서에서 제공된 임의의 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 8, 9, 10, 11 또는 12개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성된다. 본 명세서에서 제공된 임의의 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 또는 25개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성된다. 본 명세서에서 제공된 임의의 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 또는 25개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성된다. 본 명세서에서 제공된 임의의 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 17, 18, 19, 20, 21, 22, 또는 23개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성된다.
본 명세서에서 제공된 임의의 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 적어도 하나의 변형된 뉴클레오사이드를 포함한다. 변형된 뉴클레오사이드는 S-cEt 뉴클레오사이드, 2’-O-메톡시에틸 뉴클레오사이드, 및 LNA 뉴클레오사이드로부터 선택될 수 있다. 변형된 올리고뉴클레오타이드는 적어도 하나의 변형된 뉴클레오사이드간 연결을 포함할 수 있다. 변형된 올리고뉴클레오타이드의 각각의 뉴클레오사이드간 연결은 변형된 뉴클레오사이드간 연결일 수 있다. 특정 구현예에서, 변형된 뉴클레오사이드간 연결은 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결이다.
본 명세서에서 제공된 임의의 구현예에서, 화합물은 변형된 올리고뉴클레오타이드로 구성된다.
본 명세서에서 제공된 임의의 구현예에서, miR-17에 상보성인 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 화합물의 치료적 유효량은 대상체에 투여된다.
8 내지 25개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성되는 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 화합물의 용도가 본 명세서에서 제공되고, 여기서 변형된 올리고뉴클레오타이드의 핵염기 서열은 다낭포성 신장 질환의 치료를 위하여 miR-17에 상보성이다.
도면의 간단한 설명
도 1A-B. (A) miR-17~92 및 그것의 이원성 클러스터 miR-106a~363 및 miR-106b~25의 게놈 조직화; (B) miR-17, miR-18, miR-19, 및 miR-92 microRNA 패밀리.
도 2A-B. 항-miR-17로 Pcy 마우스의 치료는 (A) 신장 중량 대 바디 중량 비 및 (B) 낭포성 지수의 감소로 이어진다.
상세한 설명
달리 정의되지 않는 한, 본 명세서에서 사용된 모든 기술 및 과학 용어들은 본 발명이 속하는 당해 분야의 숙련가에 의해 통상적으로 이해되는 바와 동일한 의미를 갖는다. 특이적인 정의가 제공되지 않는 한, 본 명세서에서 기재된 분석 화학, 합성 유기 화학, 및 의학 및 제약 화학과 관련하여 이용된 명명법, 그리고 상기의 절차 및 기술은 당해 분야에서 공지되고 통상적으로 사용된다. 본 명세서에서 용어들에 대하여 복수의 정의가 있는 경우에서, 이 부문의 것이 우세하다. 표준 기술은 화학 합성, 화학 분석, 약제학적 제조, 제형 및 전달, 및 대상체의 치료에 사용될 수 있다. 특정 상기 기술 및 절차는 예를 들어 하기에서 찾아질 수 있고: “Carbohydrate Modifications in Antisense Research” Edited by Sangvi and Cook, American Chemical Society, Washington D.C.,1994; 및 “Remington's Pharmaceutical Sciences,” Mack Publishing Co., Easton, Pa., 18th edition, 1990; 상기는 임의의 목적으로 참고로 이로써 편입된다. 허용된 경우, 본 명세서에서 전체 개시내용 내내 언급되는 모든 특허, 특허 출원, 공개 출원 및 공보, 유전자은행 서열, 웹사이트 및 다른 공개된 물질은, 달리 명시되지 않는 한, 그 전문이 참고로 편입된다. URL 또는 다른 그러한 식별자 또는 주소가 언급되는 경우, 상기 식별자가 변화할 수 있고 인터넷상의 특정한 정보가 변화할 수 있다는 것이 이해되지만, 동등 정보는 인터넷 검색에 의해 찾아질 수 있다. 그에 대한 참조는 상기 정보의 이용가능성 및 공공 전파를 입증한다.
본 조성물 및 방법이 개시되고 기재되기 전에, 본 명세서에서 사용된 전문용어는 특정한 구현예만의 기재 목적용이고 제한되는 의도가 아니라는 것이 이해되어야 한다. 명세서 및 첨부된 청구항에서 사용된 바와 같이, 단수 형태 “한”, “하나” 및 “그”는 맥락이 명확히 달리 지시하지 않는 한 복수의 지시대상을 포함하는 것이 주목되어야 한다.
정의
“다낭포성 신장 질환” 또는 “PKD”는 다중 낭포가 감염된 신장(들)의 확장 및 신장 기능의 진행성 손실로 이어지는, 적어도 하나의 신장에서 발생하는 신장 질환의 선천적 형태이다.
“상염색체 우성 다낭포성 신장 질환” 또는 “ADPKD”는 PKD1 및/또는 PKD2 유전자에서 하나 이상의 유전적 돌연변이에 의해 전형적으로 야기된다. ADPKD의 85%는 염색체 16에 위치하는, PKD1내 돌연변이에 의해 야기되고, 다수의 잔존 ADPKD 사례는 염색체 4에 위치하는, PKD2내 돌연변이에 의해 야기된다.
“상염색체 열성 다낭포성 신장 질환” 또는 “ARPKD”는, 염색체 6에 위치하는, PKHD1 유전자에서 하나 이상의 유전적 돌연변이에 의해 전형적으로 야기된다. ARPKD를 가진 신생아의 최대 50%는 자궁내 신장 질환의 합병증으로 사망하고, 생존한 이들의 3분의 1은 10 년 이내 말기 신장 질환 (ESRD)을 발병한다.
“총 신장 용적” 또는 “TKV”는 자기 공명 영상 (MRI), 전산화단층촬영법 (CT) 스캔, 또는 초음파 (US) 이미지형성에 의해 결정될 수 있는 총 신장 용적, 및 표준 방법론, 예컨대 타원체 용적 방정식에 의해 (초음파용), 또는 정량적 입체 또는 경계 추적에 의해 (CT/MRI용) 계산된 용적의 측정이다. TKV는, 신장 기능의 쇠퇴와 연관하는 증가와 함께, ADPKD 환자에서 일반적으로 꾸준히 증가한다.
“높이 조정된 총 신장 용적” 또는 “HtTKV”는 단위 높이당 총 신장 용적의 측정이다. HtTKV 값 ≥ 600 ml/m를 가진 환자는 8 년 이내 3기 만성 신장 질환을 발병하는 것으로 예상된다.
“신장 통증”은 병가, 약리학적 치료 (마약 또는 최후수단 진통제), 또는 침습성 개입이 필요한 임상적으로 상당한 신장 통증을 의미한다.
“고혈압 악화”는 고혈압 치료에서 증가를 요구하는 혈압의 변화를 의미한다.
“섬유증”은 하기에서 과잉의 섬유질 결합 조직의 형성 또는 발생을 의미한다:
장기 또는 조직.특정 구현예에서, 섬유증은 회복 또는 반응성 과정으로서 발생한다. 하기에서: 특정
구현예, 섬유증은 부상 또는 손상에 반응하여 발생한다. 용어 “섬유증”은, 장기 또는 조직의 정상 구성요소로서 섬유질 조직의 형성과는 대조적으로, 회복 또는 반응성 과정으로서 장기 또는 조직에서 과잉의 섬유질 결합 조직의 형성 또는 발생으로서 이해된다.
“혈뇨”는 소변에서 적혈구의 존재를 의미한다.
“단백뇨”는 소변에서 과잉의 알부민의 존재를 의미하고, 제한 없이, 정상 단백뇨, 고 정상 단백뇨, 미세단백뇨 및 현성단백뇨를 포함한다. 정상적으로, 발세포, 사구체 기저막 및 내피 세포로 구성되는, 사구체 여과 투과도 장벽은 소변 속에 누출로부터 혈청 단백질을 예방한다. 단백뇨는 사구체 여과 투과도 장벽의 손상을 반영할 수 있다. 단백뇨는 24-시간 소변 샘플, 밤새 소변 샘플 또는 단회-소변 샘플로부터 계산될 수 있다.
“고 정상 단백뇨”는 (i) 24 시간당 소변 속에 15 내지 <30 mg의 알부민의 배출 및/또는 (ii) 남성에 있어서 1.25 내지 <2.5 mg/mmol (또는 10 내지 <20 mg/g) 또는 여성에 있어서 1.75 내지 <3.5 mg/mmol (또는 15 내지 <30 mg/g)의 알부민/크레아티닌 비를 특징으로 하는 상승된 단백뇨를 의미한다.
“미세단백뇨”는 (i) 24 시간당 소변 속에 30 내지 300 mg의 알부민의 배출 및/또는 (ii) 남성에 있어서 2.5 내지 <25 mg/mmol (또는 20 내지 <200 mg/g) 또는 여성에 있어서 3.5 내지 <35 mg/mmol (또는 30 내지 <300 mg/g)의 알부민/크레아티닌 비를 특징으로 하는 상승된 단백뇨를 의미한다.
“현성단백뇨”는 24 시간당 소변 속에 300 mg 초과의 알부민의 배출 및/또는 (ii) 남성에 있어서 >25 mg/mmol (또는 >200 mg/g) 또는 여성에 있어서 >35 mg/mmol (또는 >300 mg/g)의 알부민/크레아티닌 비를 특징으로 하는 상승된 단백뇨를 의미한다.
“알부민/크레아티닌 비”는 소변 크레아티닌 (g/dL)당 소변 알부민 (mg/dL)의 비를 의미하고 mg/g으로서 표현된다. 특정 구현예에서, 알부민/크레아티닌 비는 단회 소변 샘플로부터 계산될 수 있고 24 시간 기간 동안 알부민 배출의 추정치로서 사용될 수 있다.
“추정된 사구체 여과율 (eGFR) 또는 “사구체 여과율 (GFR)”은 얼마나 양호하게 신장이 크레아티닌을 필터링하는 중인지의 측정이고, 얼마나 많은 혈액이 분당 사구체를 통과하는지의 추정치로서 사용된다. 정상 결과는 90-120 mL/min/1.73 m2의 범위일 수 있다. 3 개월 이상 동안 60 mL/min/1.73 m2 미만 수준은 지표 만성 신장 질환일 수 있다. 15 mL/min/1.73 m2 미만 수준은 신부전의 지표일 수 있다.
“단백뇨”는 소변에서 과잉의 혈청 단백질의 존재를 의미한다. 단백뇨는 24 시간당 소변 속에 > 250 mg의 단백질 및/또는 ≥ 0.20mg/mg의 소변 단백질 대 크레아티닌 비의 배출을 특징으로 할 수 있다. 단백뇨와 관련하여 상승된 혈청 단백질은, 제한 없이, 알부민을 포함한다.
“혈액 요소 질소” 또는 “BUN”은 우레아의 형태로 혈액에서 질소의 양의 측정을 의미한다. 간은 단백질의 소화의 폐기물로서 요소 대사에서 우레아를 생산하고, 우레아는 신장에 의해 혈액으로부터 제거된다. 정상 인간 성인 혈액은 100 ml (7-21 mg/dL)의 혈액당 7 내지 21 mg의 요소 질소를 함유할 수 있다. 혈액 요소 질소의 측정은 신장 건강의 지표로서 사용된다. 신장이 정상적으로 혈액으로부터 우레아를 제거할 수 없으면, 대상체의 BUN은 높아진다.
“말기 신장 질환 (ESRD)”은 신장 기능의 완전한 또는 거의 완전한 부전을 의미한다.
“손상된 신장 기능”은, 정상 신장 기능에 비하여, 감소된 신장 기능을 의미한다.
“의 악화를 둔화하다” 및 “악화를 둔화하다”는 의료 병태가 진전된 상태를 향해 이동하는 비율을 감소시키는 것을 의미한다.
“투석 시간을 지연하다”는 충분한 신장 기능 유지시켜 이로써 투석 치료에 대한 필요성이 지연되는 것을 의미한다.
“신장 이식 시간을 지연하다”는 충분한 신장 기능을 유지시켜 이로써 신장 이식에 대한 필요성이 지연되는 것을 의미한다.
“기대 수명을 개선하다”는 대상체에서 질환의 하나 이상의 증상 치료에 의해 대상체 수명을 연장하는 것을 의미한다.
“대상체”는 치료 또는 요법을 위하여 선택된 인간 또는 비-인간 동물을 의미한다.
“필요로 하는 대상체”는 요법 또는 치료가 필요한 것으로서 확인되는 대상체를 의미한다.
“갖는 것으로 의심되는 대상체”는 질환의 하나 이상의 임상 지표를 나타내는 대상체를 의미한다.
“투여”는 대상체에 약제학적 제제 또는 조성물 제공을 의미하고, 비제한적으로, 의료 전문가 및 자기-투여에 의한 투여를 포함한다.
“비경구 투여”는 주사 또는 주입을 통한 투여를 의미한다.
비경구 투여는, 비제한적으로, 피하 투여, 정맥내 투여, 및 근육내 투여를 포함한다.
“피하 투여”는 피부 바로 밑 투여를 의미한다.
“정맥내 투여”는 정맥 속에 투여를 의미한다.
“수반하여 투여된”은 둘 모두의 약리적 효과가 환자에서 동시에 명백한 임의의 방식으로 2 이상 제제의 공동-투여를 지칭한다. 수반되는 투여는 양쪽 제제가 단일 약제학적 조성물로, 동일한 복용 형태로, 또는 투여의 동일한 경로에 의해 투여되는 것을 요구하지 않는다. 양쪽 제제의 효과는 동일한 시간에 자체를 명시할 필요 없다. 효과는 단지 일정한 기간 동안 중첩이 필요하고 동연일 필요 없다.
“지속기간”은 활성 또는 이벤트가 계속하는 동안의 기간을 의미한다. 특정 구현예에서, 치료의 지속기간은 약제학적 제제 또는 약제학적 조성물의 용량이 투여되는 동안의 기간이다.
“요법”은 질환 치료 방법을 의미한다. 특정 구현예에서, 요법은, 비제한적으로, 질환을 갖는 대상체에 하나 이상의 약제학적 제제의 투여를 포함한다.
“치료한다”는 질환의 치유 또는 질환의 적어도 하나의 지표인 완화를 위하여 사용된 하나 이상의 구체적인 절차를 적용하는 것을 의미한다. 특정 구현예에서, 구체적인 절차는 하나 이상의 약제학적 제제의 투여이다. 특정 구현예에서, PKD의 치료는, 비제한적으로, 총 신장 용적 감소, 신장 기능 개선, 고혈압 감소, 및/또는 신장 통증 감소를 포함한다.
“완화시키다”는 병태 또는 질환의 적어도 하나의 지표의 중증도를 줄이는 것을 의미한다. 특정 구현예에서, 완화는 병태 또는 질환의 하나 이상의 지표의 진행에서 지연 또는 둔화를 포함한다. 지표의 중증도는 당해 분야의 숙련가에 공지되는 객관적 또는 주관적 측정에 의해 결정될 수 있다.
“의 발생 위험에 처한”은 대상체가 병태 또는 질환 발생에 취약한 상태를 의미한다. 특정 구현예에서, 병태 또는 질환의 발생 위험에 처한 대상체는 병태 또는 질환의 하나 이상의 증상을 나타내지만, 병태 또는 질환으로 진단되는 증상의 충분한 수를 나타내지 않는다. 특정 구현예에서, 병태 또는 질환의 발생 위험에 처한 대상체는 병태 또는 질환의 하나 이상의 증상을 나타내지만, 병태 또는 질환으로 진단되도록 덜한 정도로 요구된다.
“의 개시를 예방한다”는 질환 또는 병태의 발생 위험에 처한 대상체에서 병태 또는 질환의 발생을 예방하는 것을 의미한다. 특정 구현예에서, 질환 또는 병태의 발생 위험에 처한 대상체는 질환 또는 병태를 이미 갖는 대상체에 의해 받았던 치료와 유사한 치료를 받는다.
“의 개시를 지연한다”는 질환 또는 병태의 발생 위험에 처한 대상체에서 병태 또는 질환의 발생을 지연시키는 것을 의미한다. 특정 구현예에서, 질환 또는 병태의 발생 위험에 처한 대상체는 질환 또는 병태를 이미 갖는 대상체에 의해 받았던 치료와 유사한 치료를 받는다.
“치료제”는 질환의 치유, 완화 또는 예방에 사용된 약제학적 제제를 의미한다.
“용량”은 단일 투여에서 제공된 약제학적 제제의 지정된 양을 의미한다. 특정 구현예에서, 용량은 2 이상 볼러스, 정제, 또는 주사로 투여될 수 있다. 예를 들어, 특정 구현예에서, 피하 투여가 요망되는 경우, 요망된 용량은 단일 주사에 의해 쉽게 수용되지 않는 용적을 요구한다. 상기 구현예에서, 2 이상 주사는 요망된 용량을 달성하는데 사용될 수 있다. 특정 구현예에서, 용량은 개체내 주사 부위 반응을 최소화하기 위해 2 이상 주사로 투여될 수 있다. 특정 구현예에서, 용량은 느린 주입으로서 투여된다.
“복용량 단위”는 약제학적 제제가 제공되는 형태를 의미한다. 특정 구현예에서, 복용량 단위는 동결건조된 올리고뉴클레오타이드를 함유하는 바이알이다. 특정 구현예에서, 복용량 단위는 재구성된 올리고뉴클레오타이드를 함유하는 바이알이다.
“치료적 유효량”은 동물에 치료 이점을 제공하는 약제학적 제제의 양을 지칭한다.
“약제학적 조성물”은 약제학적 제제를 포함하는 개체에게 투여에 적합한 서브스턴스의 혼합물을 의미한다. 예를 들어, 약제학적 조성물은 멸균된 수성 용액을 포함할 수 있다.
“약제학적 제제”는 대상체에게 투여된 경우 치료 효과를 제공하는 서브스턴스를 의미한다.
“활성 약제학적 성분”은 요망된 효과를 제공하는 약제학적 조성물내 서브스턴스를 의미한다.
“약제학적으로 허용가능한 염”은 본 명세서에서 제공된 화합물의 생리학적으로 및 약제학적으로 허용가능한 염, 즉, 대상체에게 투여된 경우 요망되지 않는 독물학적 효과를 갖지 않고 화합물의 요망된 생물학적 활성을 보유하는 염을 의미한다. 본 명세서에서 제공된 화합물의 비제한 예시적인 약제학적으로 허용가능한 염은 나트륨 및 칼륨 염 형태를 포함한다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이 용어 “화합물”은 달리 구체적으로 나타내지 않는 한 이의 약제학적으로 허용가능한 염을 포함한다.
“개선된 장기 기능”은 정상 한계를 향하여 장기 기능의 변화를 의미한다. 특정 구현예에서, 장기 기능은 대상체의 혈액 또는 소변에서 발견된 분자 측정에 의해 평가된다. 예를 들어, 특정 구현예에서, 개선된 신장 기능은 혈액 요소 질소의 감소, 단백질소변의 감소, 단백뇨의 감소, 등에 의해 측정된다.
“허용가능한 안전성 프로파일”은 임상적으로 허용가능한 한계 내에 있는 부작용의 패턴을 의미한다.
“부작용”은 요망된 효과 이외의 치료에 기인하는 생리적 반응을 의미한다. 특정 구현예에서, 부작용은, 제한 없이, 주사 부위 반응, 간 기능 시험 비정상, 신장 기능 비정상, 간 독성, 신장 독성, 중추신경계 비정상, 및 근병증을 포함한다. 상기 부작용은 직접적으로 또는 간접적으로 검출될 수 있다. 예를 들어, 혈청에서 증가된 아미노기전달효소 수준은 간 독성 또는 간 기능 비정상을 표시할 수 있다. 예를 들어, 증가된 빌리루빈은 간 독성 또는 간 기능 비정상을 표시할 수 있다.
“대상체 순응도”는 대상체에 의해 권고된 또는 처방된 요법에 처방 준수를 의미한다.
“순응한다”는 대상체에 의해 권고된 요법으로 처방 준수를 의미한다.
“권고된 요법”은 질환의 치료, 완화, 또는 예방을 위하여 의료 전문가에 의해 권고된 치료를 의미한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이 용어 “혈액”은 전혈 및 혈액 분획, 예컨대 혈청 및 혈장을 포괄한다.
“항-miR”은 microRNA에 상보성인 핵염기 서열을 갖는 올리고뉴클레오타이드를 의미한다. 특정 구현예에서, 항-miR은 변형된 올리고뉴클레오타이드이다.
“miR-X”가 특정한 microRNA를 지정하는 “항-miR-X”는 miR-X에 상보성인 핵염기 서열을 갖는 올리고뉴클레오타이드를 의미한다. 특정 구현예에서, 항-miR-X는 하기이다: 완전히 상보성 (즉,100% 상보성) miR-X에.특정 구현예에서, 항-miR-X는 miR-X에 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95% 상보성이다. 특정 구현예에서, 항-miR-X는 변형된 올리고뉴클레오타이드이다.
“miR-17”은 하기를 갖는 성숙한 miRNA를 의미한다: 핵염기 서열 CAAAGUGCUUACAGUGCAGGUAG (서열 식별 번호:1).
“miR-17 줄기-루프 서열”은 하기를 갖는 줄기-루프 서열을 의미한다: 핵염기 서열 GUCAGAAUAAUGUCAAAGUGCUUACAGUGCAGGUAGUGAUAUGUGCAUCUACUGCAGUGAAGGCACUUGUAGCAUUAUGGUGAC (서열 식별 번호:2).
“miR-17 2-7 씨드 서열”은 하기의 위치 2 내지 7로부터 핵염기 서열을 의미한다: 서열 식별 번호:1, AAAGUG.
“miR-17 패밀리 구성원”은 miR-17 2-7 씨드 서열을 포함하는 핵염기 서열을 갖는 성숙한 miRNA를 의미한다.
“miR-17 패밀리”는 miR-17 2-7 씨드 서열을 포함하는 핵염기 서열을 각각 갖는, miRNAs의 그룹을 의미한다.
“표적 핵산”은 올리고머성 화합물이 하이브리드화하도록 설계되는 핵산을 의미한다.
“표적화”는 핵산을 표적하도록 하이브리드화될 핵염기 서열의 설계 및 선택의 과정을 의미한다.
“에 표적화된”은 핵산을 표적하도록 하이브리드화를 허용하는 핵염기 서열을 갖는 것을 의미한다.
“조절"은 기능, 양, 또는 활성의 작은 변화를 의미한다. 특정 구현예에서, 조절은 기능, 양, 또는 활성의 증가를 의미한다. 특정 구현예에서, 조절은 기능, 양, 또는 활성의 감소를 의미한다.
“발현”은 유전자의 코딩된 정보가 세포에서 존재하는 및 작동하는 구조 속으로 전환되는 임의의 기능 및 단계를 의미한다.
“핵염기 서열”은, 임의의 당, 연결, 및/또는 핵염기 변형과 독립적으로, 5’에서 3’ 방향으로 전형적으로 열거된, 올리고머성 화합물 또는 핵산에서 인접 핵염기의 순서를 의미한다.
“인접 핵염기”는 핵산에서 서로에 바로 인접한 핵염기를 의미한다.
“핵염기 상보성”은 수소 결합을 통해 비-공유결합으로 짝짓기하는 2 핵염기의 능력을 의미한다.
“상보성”은 하나의 핵산이 또 다른 핵산 또는 올리고뉴클레오타이드에 하이브리드화할 수 있다는 것을 의미한다. 특정 구현예에서, 상보성은 표적 핵산에 하이브리드화할 수 있는 올리고뉴클레오타이드를 지칭한다.
“완전히 상보성”은 올리고뉴클레오타이드의 각각의 핵염기가 표적 핵산에 있어서 각각의 대응하는 위치에서 핵염기와 짝짓기할 수 있다는 것을 의미한다. 특정 구현예에서, 올리고뉴클레오타이드는 microRNA에 완전히 상보성이다, 즉 올리고뉴클레오타이드의 각각의 핵염기는 microRNA에 있어서 대응하는 위치에서 핵염기에 상보성이다. 변형된 올리고뉴클레오타이드는 microRNA에 완전히 상보성일 수 있고, microRNA의 길이 미만인 연결된 뉴클레오사이드의 수를 가질 수 있다. 예를 들어, 올리고뉴클레오타이드의 각각의 핵염기가 microRNA에 있어서 대응하는 위치에서 핵염기에 상보성인, 16 연결된 뉴클레오사이드를 가진 올리고뉴클레오타이드는 microRNA에 완전히 상보성이다. 특정 구현예에서, 각각의 핵염기가 microRNA 줄기-루프 서열의 영역 이내 핵염기에 상보성을 갖는 올리고뉴클레오타이드는 microRNA 줄기-루프 서열에 완전히 상보성이다.
“퍼센트 상보성”은 표적 핵산의 동일-길이 부분에 상보성인 올리고뉴클레오타이드의 핵염기의 백분율을 의미한다. 퍼센트 상보성은 올리고뉴클레오타이드에 있어서 핵염기의 총 수로 표적 핵산에 있어서 대응하는 위치에서 핵염기에 상보성인 올리고뉴클레오타이드의 핵염기의 수를 분할함으로써 계산된다.
“동일성 퍼센트”는, 제1 핵산에서 핵염기의 총 수로 분할된, 제2 핵산에 있어서 대응하는 위치에서 핵염기에 동일한 제1 핵산에 있어서 핵염기의 수를 의미한다. 특정 구현예에서, 제1 핵산은 microRNA이고 제2 핵산은 microRNA이다. 특정 구현예에서, 제1 핵산은 올리고뉴클레오타이드이고 제2 핵산은 올리고뉴클레오타이드이다.
“하이브리드화하다”는 핵염기 상보성을 통해 발생하는 상보성 핵산의 어닐링을 의미한다.
“미스매치”는 제2 핵산의 대응하는 위치에서 핵염기와 왓슨-크릭 짝짓기를 할 수 없는 제1 핵산의 핵염기를 의미한다.
핵염기 서열의 문맥에서 “동일한”은, 당, 연결, 및/또는 핵염기 변형과 독립적인 그리고 존재하는 임의의 피리미딘의 메틸 상태와 독립적인, 동일한 핵염기 서열을 갖는 것을 의미한다.
“MicroRNA”는, 효소 Dicer에 의해 전-microRNA의 절단의 생성물인, 18 내지 25 핵염기 길이의 내인성 비-코딩 RNA를 의미한다. 성숙한 microRNAs의 예는 miRBase (http://microrna.sanger.ac.uk/)로서 공지된 microRNA 데이터베이스에서 찾아진다. 특정 구현예에서, microRNA는 “microRNA” 또는 “miR”로 약칭된다.
“전-microRNA” 또는 “전-miR”는, Drosha로서 공지된 이중-가닥 RNA-특이적인 리보뉴클레아제에 의해 프리(pri)-miR의 절단의 생성물인, 헤어핀 구조를 갖는 비-코딩 RNA를 의미한다.
“줄기-루프 서열”은 헤어핀 구조를 갖는 그리고 성숙한 microRNA 서열을 함유하는 RNA를 의미한다. 전-microRNA 서열 및 줄기-루프 서열은 겹칠 수 있다. 줄기-루프 서열의 예는 miRBase (http://microrna.sanger.ac.uk/)로서 공지된 microRNA 데이터베이스에서 찾아진다.
“프리-microRNA” 또는 “프리-miR”은 이중-가닥 RNA-특이적인 리보뉴클레아제 Drosha의 기질인 헤어핀 구조를 갖는 비-코딩 RNA를 의미한다.
“microRNA 전구체”는 게놈 DNA에서 기원하는 그리고 하나 이상의 microRNA 서열을 포함하는 비-코딩, 구조화된 RNA를 포함하는 전사체를 의미한다. 예를 들어, 특정 구현예에서 microRNA 전구체는 전-microRNA이다. 특정 구현예에서, microRNA 전구체는 프리-microRNA이다.
“microRNA-조절된 전사체”는 microRNA에 의해 조절되는 전사체를 의미한다.
“씨드 서열”은 성숙한 microRNA 서열의 5’-말단의 핵염기 1 내지 9의 6 내지 8 인접 핵염기를 포함하는 핵염기 서열을 의미한다.
“씨드 매치 서열”은 씨드 서열에 상보성이고, 씨드 서열과 동일한 길이인 핵염기 서열을 의미한다.
“올리고머성 화합물”은 복수의 연결된 모노머성 하위단위를 포함하는 화합물을 의미한다. 올리고머성 화합물은 올리고뉴클레오타이드를 포함한다.
“올리고뉴클레오타이드”는, 각각의 이들이 서로 독립적으로 변형 또는 미변형될 수 있는, 복수의 연결된 뉴클레오사이드를 포함하는 화합물을 의미한다.
“자연 발생 뉴클레오사이드간 연결”은 뉴클레오사이드 사이 3’에서 5’ 포스포디에스테르 연결을 의미한다.
“천연 당”은 DNA (2’-H) 또는 RNA (2’-OH)에서 찾아진 당을 의미한다.
“뉴클레오사이드간 연결”은 인접한 뉴클레오사이드 사이 공유 연결을 의미한다.
“연결된 뉴클레오사이드”는 공유 연결에 의해 연결된 뉴클레오사이드를 의미한다.
“핵염기”는 또 다른 핵염기와 비-공유결합으로 짝짓기할 수 있는 복소환형 모이어티를 의미한다.
“뉴클레오사이드”는 당 모이어티에 연결된 핵염기를 의미한다.
“뉴클레오타이드”는 뉴클레오사이드의 당 부분에 공유결합으로 연결된 포스페이트 기를 갖는 뉴클레오사이드를 의미한다.
다수의 연결된 뉴클레오사이드”로 구성되는 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 화합물”은 연결된 뉴클레오사이드의 지정된 수를 갖는 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 화합물을 의미한다. 따라서, 화합물은 추가의 치환체 또는 콘주게이트를 포함할 수 있다. 달리 나타내지 않는 한, 화합물은 변형된 올리고뉴클레오타이드의 것을 넘어서 임의의 추가의 뉴클레오사이드를 포함하지 않는다. 예를 들어, 달리 나타내지 않는 한, 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 화합물은 변형된 올리고뉴클레오타이드에 하이브리드화된 상보성 가닥을 포함하지 않는다 (즉, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 단일가닥 변형된 올리고뉴클레오타이드이다).
“변형된 올리고뉴클레오타이드”는 자연 발생 말단, 당, 핵염기, 및/또는 뉴클레오사이드간 연결에 비하여 하나 이상의 변형을 갖는 올리고뉴클레오타이드를 의미한다. 변형된 올리고뉴클레오타이드는 미변형된 뉴클레오사이드를 포함할 수 있다.
“단일가닥 변형된 올리고뉴클레오타이드”는 상보성 가닥에 하이브리드화되지 않는 변형된 올리고뉴클레오타이드를 의미한다.
“변형된 뉴클레오사이드”는 자연 발생 뉴클레오사이드로부터 임의의 변화를 갖는 뉴클레오사이드를 의미한다. 변형된 뉴클레오사이드는 변형된 당 및 미변형된 핵염기를 가질 수 있다. 변형된 뉴클레오사이드는 변형된 당 및 변형된 핵염기를 가질 수 있다. 변형된 뉴클레오사이드는 천연 당 및 변형된 핵염기를 가질 수 있다. 특정 구현예에서, 변형된 뉴클레오사이드는 2환식 뉴클레오사이드이다. 특정 구현예에서, 변형된 뉴클레오사이드는 비-2환식 뉴클레오사이드이다.
“변형된 뉴클레오사이드간 연결”은 자연 발생 뉴클레오사이드간 연결로부터 임의의 변화를 의미한다.
“포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결”은 비-브릿징 원자 중 하나가 황 원자인 뉴클레오사이드 사이 연결을 의미한다.
“변형된 당 모이어티”는 천연 당으로부터 치환 및/또는 임의의 변화를 의미한다.
“미변형된 핵염기"는 RNA 또는 DNA의 자연 발생 복소환형 염기를 의미한다: 퓨린 염기 아데닌 (A) 및 구아닌 (G), 및 피리미딘 염기 티민 (T), 시토신 (C) (5-메틸시토신 포함), 및 우라실 (U).
“5-메틸시토신”은 5 위치에 부착된 메틸 기를 포함하는 시토신을 의미한다.
“비-메틸레이트화된 시토신”은 5 위치에 부착된 메틸 기를 갖지 않는 시토신을 의미한다.
“변형된 핵염기”는 미변형된 핵염기가 아닌 임의의 핵염기를 의미한다.
“당 모이어티”는 자연 발생 푸라노실 또는 변형된 당 모이어티를 의미한다.
“변형된 당 모이어티”는 치환된 당 모이어티 또는 당 대용물을 의미한다.
“2’-O-메틸 당” 또는 “2’-OMe 당”은 2’ 위치에서 O-메틸 변형을 갖는 당을 의미한다.
“2’-O-메톡시에틸 당” 또는 “2’-MOE 당”은 2’ 위치에서 O-메톡시에틸 변형을 갖는 당을 의미한다.
“2’-플루오로” 또는 “2’-F”는 2’ 위치의 플루오로 변형을 갖는 당을 의미한다.
“2환식 당 모이어티”는, 2환식 구조를 초래하는, 제2 고리를 형성하기 위해 4 내지 7 원 고리의 2 원자를 연결하는 브릿지를 포함하는 4 내지 7 원 고리를 포함하는 (비제한적으로 푸라노실을 포함하는) 변형된 당 모이어티를 의미한다. 특정 구현예에서, 4 내지 7 원 고리는 당 고리이다. 특정 구현예에서 4 내지 7 원 고리는 푸라노실이다. 특정 상기 구현예에서, 브릿지는 푸라노실의 2’-탄소 및 4’-탄소를 연결한다. 비제한 예시적인 2환식 당 모이어티는 LNA, ENA, cEt, S-cEt, 및 R-cEt를 포함한다.
“잠금 핵산 (LNA) 당 모이어티”는 4’ 및 2’ 푸라노오스 고리 원자 사이 (CH2)-O 브릿지를 포함하는 치환된 당 모이어티를 의미한다.
“ENA 당 모이어티”는 4’ 및 2’ 푸라노오스 고리 원자 사이 (CH2)2-O 브릿지를 포함하는 치환된 당 모이어티를 의미한다.
“구속된 에틸 (cEt) 당 모이어티”는 4' 및 2' 푸라노오스 고리 원자 사이 CH(CH3)-O 브릿지를 포함하는 치환된 당 모이어티를 의미한다. 특정 구현예에서, CH(CH3)-O 브릿지는 S 배향에서 구속된다. 특정 구현예에서, (CH2)2-O는 R 배향에서 구속된다.
“S-cEt 당 모이어티”는 4' 및 2' 푸라노오스 고리 원자 사이 S-구속된 CH(CH3)-O 브릿지를 포함하는 치환된 당 모이어티를 의미한다.
“R-cEt 당 모이어티”는 4' 및 2' 푸라노오스 고리 원자 사이 R-구속된 CH(CH3)-O 브릿지를 포함하는 치환된 당 모이어티를 의미한다.
“2’-O-메틸 뉴클레오사이드”는 2’-O-메틸 당 변형을 갖는 2’-변형된 뉴클레오사이드를 의미한다.
“2’-O-메톡시에틸 뉴클레오사이드”는 2’-O-메톡시에틸 당 변형을 갖는 2’-변형된 뉴클레오사이드를 의미한다. 2’-O-메톡시에틸 뉴클레오사이드는 변형된 또는 미변형된 핵염기를 포함할 수 있다.
“2’-플루오로 뉴클레오사이드”는 2’-플루오로 당 변형을 갖는 2’-변형된 뉴클레오사이드를 의미한다. 2’-플루오로 뉴클레오사이드는 변형된 또는 미변형된 핵염기를 포함할 수 있다.
“2환식 뉴클레오사이드”는 2환식 당 모이어티를 갖는 2’-변형된 뉴클레오사이드를 의미한다. 2환식 뉴클레오사이드는 변형된 또는 미변형된 핵염기를 가질 수 있다.
“cEt 뉴클레오사이드”는 cEt 당 모이어티를 포함하는 뉴클레오사이드를 의미한다. cEt 뉴클레오사이드는 변형된 또는 미변형된 핵염기를 포함할 수 있다.
“S-cEt 뉴클레오사이드”는 S-cEt 당 모이어티를 포함하는 뉴클레오사이드를 의미한다.
“R-cEt 뉴클레오사이드”는 R-cEt 당 모이어티를 포함하는 뉴클레오사이드를 의미한다.
“β-D-데옥시리보뉴클레오사이드”는 자연 발생 DNA 뉴클레오사이드를 의미한다.
“β-D-리보뉴클레오사이드”는 자연 발생 RNA 뉴클레오사이드를 의미한다.
“LNA 뉴클레오사이드”는 LNA 당 모이어티를 포함하는 뉴클레오사이드를 의미한다.
“ENA 뉴클레오사이드”는 ENA 당 모이어티를 포함하는 뉴클레오사이드를 의미한다.
개요
다낭포성 신장 질환 (PKD) 은 유체-채워진 낭포가 신장에서 발생하여, 신장 확장, 신장 기능부전, 및 종종 말기 신장 질환으로 이어지는 신장 질환의 선천적 형태이다. 낭포의 과도한 증식은 PKD의 홀마크 병리적 특징이다. PKD의 관리에서, 치료용 주요 목표는 신장 기능을 유지하는 것 그리고 말기 신장 질환 (ESRD)의 개시를 예방하는 것이고, 이는 PKD를 가진 대상체의 기대 수명을 차례로 개선한다.
microRNAs의 miR-17~92 클러스터의 다중 구성원은 PKD의 마우스 모델에서 상향조절된다. PKD의 마우스 모델에서 miR-17~92 클러스터의 유전적 결실은 신장 낭포 성장을 감소시키고, 신장 기능을 개선시키고, 생존을 연장시킨다 (Patel 등, PNAS, 2013; 110(26): 10765-10770). miR-17~92 클러스터는, 구별되는 서열을 각각 가지는, 6 상이한 microRNAs를 함유한다: miR-17, miR-18a, miR-19a, miR-19-b-1 및 miR-92a-1. 따라서, 전체 클러스터의 유전적 결실은 6 상이한 microRNA 유전자를 결실한다. 상기 유전적 결실 실험이 입증하지 못하는 것은 클러스터에서 microRNAs의 서브셋의 억제가 PKD의 임상 마커에서 동일한 개선을 생산하는지 여부이다.
miR-17에 표적화된 변형된 올리고뉴클레오타이드가 PKD의 실험적 모델에서 신장 기능을 개선시키고 신장 중량을 감소시킨다는 것이 본 명세서에서 실증된다. 또한, miR-17 억제는 또한 인간 공여체의 낭포로부터 유래된 1차 배양액의 증식 및 낭포 성장을 억제시켰다. 이들 데이터는 miR-17에 표적화된 변형된 올리고뉴클레오타이드가 PKD의 치료에 유용하다는 것을 입증한다.
본 발명의 특정 용도
PKD를 갖는 또는 갖는 것으로 의심되는 대상체에 miR-17에 상보성인 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 화합물을 투여하는 것을 포함하는, 다낭포성 신장 질환 (PKD)의 치료 방법이 본 명세서에서 제공된다.
특정 구현예에서, 대상체는 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 화합물의 투여에 앞서 PKD를 갖는 것으로서 진단되고 있다. PKD의 진단은, 제한 없이, 대상체의 가족력, (제한 없이 고혈압, 단백뇨, 혈뇨, 및 손상된 GFR을 포함하는) 임상 특징, 및 (제한 없이 MRI, 초음파, 및 CT 스캔을 포함하는) 신장 영상화 연구를 포함하는 파라미터의 평가를 통해 달성될 수 있다. PKD의 진단은 하나 이상의 PKD1, PKD2, 또는 PKHD1 유전자에서 돌연변이 선별을 또한 포함할 수 있다.
ADPKD를 갖는 또는 갖는 것으로 의심되는 대상체는 PKD1 유전자에서 돌연변이 또는 PKD2 유전자에서 돌연변이를 가질 수 있다. ARPKD를 갖는 또는 갖는 것으로 의심되는 대상체는 PKHD1 유전자에서 돌연변이를 가질 수 있다.
특정 구현예에서 대상체는 증가된 총 신장 용적을 갖는다. 특정 구현예에서, 총 신장 용적은 높이 조정된 총 신장 용적 (HtTKV)이다. 특정 구현예에서, 대상체는 고혈압을 갖는다. 특정 구현예에서, 대상체는 손상된 신장 기능을 갖는다. 특정 구현예에서, 대상체는 개선된 신장 기능을 필요로 한다. 특정 구현예에서, 대상체는 손상된 신장 기능을 갖는 것으로서 확인된다.
특정 구현예에서, miR-17의 수준은 PKD를 갖는 대상체의 신장에서 증가된다. 특정 구현예에서, 투여에 앞서, 대상체는 신장에서 miR-17의 증가된 수준을 갖도록 결정된다. miR-17 수준은 신장 생검 물질로부터 측정될 수 있다. 특정 구현예에서, 투여에 앞서, 대상체는 대상체의 소변 또는 혈액에서 miR-17의 증가된 수준을 갖도록 결정된다.
특정 구현예에서, miR-17에 상보성인 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 화합물의 투여는 하나 이상의 임상적으로 유익한 결과를 초래한다. 특정 구현예에서 투여는 대상체에서 신장 기능을 개선시킨다. 특정 구현예에서 투여는 대상체에서 신장 기능의 악화를 지연시킨다. 특정 구현예에서 투여는 대상체에서 총 신장 용적을 감소시킨다. 특정 구현예에서 투여는 대상체에서 총 신장 용적의 증가를 둔화시킨다. 특정 구현예에서, 투여는 높이 조정된 총 신장 용적 (HtTKV)를 감소시킨다. 특정 구현예에서, 투여는 HtTKV의 증가를 둔화시킨다.
특정 구현예에서 투여는 대상체에서 낭포 성장을 억제시킨다. 특정 구현예에서 투여는 대상체에서 낭포 성장의 증가를 둔화시킨다. 일부 구현예에서, 낭포는 대상체의 신장에서 존재한다. 일부 구현예에서, 낭포는 대상체의 간 및 신장 모두에서 존재한다.
특정 구현예에서 투여는 대상체에서 신장 통증을 감소시킨다. 특정 구현예에서 투여는 대상체에서 신장 통증의 증가를 둔화시킨다. 특정 구현예에서 투여는 대상체에서 신장 통증의 개시를 지연시킨다.
특정 구현예에서 투여는 대상체에서 고혈압을 감소시킨다. 특정 구현예에서 투여는 대상체에서 고혈압의 악화를 둔화시킨다. 특정 구현예에서 투여는 대상체에서 고혈압의 개시를 지연시킨다.
특정 구현예에서 투여는 대상체의 신장에서 섬유증을 감소시킨다. 특정 구현예에서 투여는 대상체의 신장에서 섬유증을 둔화시킨다.
특정 구현예에서 투여는 대상체에서 말기 신장 질환의 개시를 지연시킨다. 특정 구현예에서 투여는 대상체를 위한 투석 시간을 지연시킨다. 특정 구현예에서 투여는 대상체를 위한 신장 이식 시간을 지연시킨다. 특정 구현예에서 투여는 대상체의 기대 수명을 개선시킨다.
특정 구현예에서 투여는 대상체에서 단백뇨를 감소시킨다. 특정 구현예에서 투여는 대상체에서 단백뇨의 악화를 둔화시킨다. 특정 구현예에서 투여는 대상체에서 단백뇨의 개시를 지연시킨다. 특정 구현예에서 투여는 대상체에서 혈뇨를 감소시킨다. 특정 구현예에서 투여는 대상체에서 혈뇨의 악화를 둔화시킨다. 특정 구현예에서 투여는 대상체에서 혈뇨의 개시를 지연시킨다. 특정 구현예에서 투여는 대상체에서 혈액 요소 질소를 감소시킨다. 특정 구현예에서 투여는 대상체의 혈액에서 크레아티닌을 감소시킨다. 특정 구현예에서 투여는 대상체에서 크레아티닌 청소율을 개선시킨다. 특정 구현예에서 투여는 대상체에서 알부민:크레아티닌 비를 감소시킨다. 특정 구현예에서 투여는 대상체에서 사구체 여과율을 개선시킨다. 특정 구현예에서, 투여는 대상체에서 사구체 여과율의 악화를 둔화시킨다. 일부 구현예에서, 사구체 여과율의 악화는 사구체 여과율의 쇠퇴 비율의 계산에 의해 평가된다. 특정 구현예에서 투여는 대상체의 소변에서 호중구 젤라티나제 관련 리포칼린 (NGAL) 단백질을 감소시킨다. 특정 구현예에서 투여는 대상체의 소변에서 신장 손상 분자-1 (KIM-1) 단백질을 감소시킨다.
본 명세서에서 제공된 임의의 구현예에서, 대상체는 대상체에서 질환의 정도를 평가하기 위해 특정 시험에 적용될 수 있다. 상기 시험은, 제한 없이, 하기를 포함한다: 대상체에서 총 신장 용적의 측정; 대상체에서 고혈압의 측정; 대상체에서 신장 통증의 측정; 대상체의 신장에서 섬유증의 측정; 대상체에서 혈액 요소 질소의 측정; 대상체의 혈액에서 크레아티닌 측정; 대상체의 혈액에서 크레아티닌 청소율 측정; 대상체에서 단백뇨 측정; 대상체에서 알부민:크레아티닌 비 측정; 대상체에서 사구체 여과율 측정; 대상체의 소변에서 호중구 젤라티나제 관련 리포칼린 (NGAL) 단백질의 측정; 및/또는 대상체의 소변에서 신장 손상 분자-1 (KIM-1) 단백질의 측정
특정 추가의 요법
본 명세서에서 열거된 다낭포성 신장 질환 또는 임의의 병태 치료는 1 초과 요법을 포함할 수 있다. 이와 같이, 특정 구현예에서 miR-17에 상보성인 핵염기 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 화합물 투여에 더하여 적어도 하나의 요법 투여를 포함하는 다낭포성 신장 질환을 갖는 또는 갖는 것으로 의심되는 대상체 치료 방법이 본 명세서에서 제공된다.
특정 구현예에서, 적어도 하나의 추가의 요법은 약제학적 제제를 포함한다.
특정 구현예에서, 적어도 하나의 추가의 요법은 항-고혈압 제제이다. 항-고혈압 제제는 대상체의 혈압을 제어하는데 사용된다.
특정 구현예에서, 약제학적 제제는 바소프레신 수용체 2 길항제이다. 특정 구현예에서, 바소프레신 수용체 2 길항제는 톨밥탄이다.
특정 구현예에서, 약제학적 제제는 안지오텐신 II 수용체 차단제 (ARB)를 포함한다. 특정 구현예에서, 안지오텐신 II 수용체 차단제는 칸데사르탄, 이르베사르탄, 올메사르탄, 로사르탄, 발사르탄, 텔미사르탄, 또는 에프로사르탄이다. 특정 구현예에서, ARB는 6.25 내지 150 mg/m2/일 범위의 용량으로 투여된다. 임의의 이들 구현예에서, ARB는 6.25 mg/m2/일, 10 mg/m2/일, 12.5 mg/m2/일, 18.75 mg/m2/일, 37.5 mg/m2/일, 50 mg/m2/일, 또는 150 mg/m2/일의 용량으로 투여된다.
특정 구현예에서, 약제학적 제제는 안지오텐신 II 전환 효소 (ACE) 억제제를 포함한다. 특정 구현예에서, ACE 억제제는 카프토프릴, 에날라프릴, 리시노프릴, 벤나제프릴, 퀴나프릴, 포시노프릴, 또는 라미프릴이다. 특정 구현예에서, ACE 억제제는 0.5 내지 1 mg/m2/일, 1 내지 6 mg/m2/일, 1 내지 2 mg/m2/일, 2 내지 4 mg/m2/일, 또는 4 내지 8 mg/m2/일 범위의 용량으로 투여된다.
특정 구현예에서, 약제학적 제제는 이뇨제이다. 특정 구현예에서, 약제학적 제제는 칼슘 채널 차단제이다.
특정 구현예에서, 약제학적 제제는 키나아제 억제제이다. 특정 구현예에서, 키나아제 억제제는 보수티닙 또는 KD019이다.
특정 구현예에서, 약제학적 제제는 아드레날린 수용체 길항제이다.
특정 구현예에서, 약제학적 제제는 알도스테론 수용체 길항제이다. 특정 구현예에서, 알도스테론 수용체 길항제는 스피로노락톤이다. 특정 구현예에서, 스피로노락톤은 매일 10 내지 35 mg 범위의 용량으로 투여된다. 특정 구현예에서, 스피로노락톤은 매일 25 mg의 용량으로 투여된다.
특정 구현예에서, 약제학적 제제는 라파마이신 (mTOR) 억제제의 포유동물 표적이다. 특정 구현예에서, mTOR 억제제는 에버롤리무스, 라파마이신, 또는 시롤리무스이다.
특정 구현예에서, 약제학적 제제는 호르몬 유사체이다. 특정 구현예에서, 호르몬 유사체는 소마토스타틴 또는 부신피질 자극 호르몬이다.
특정 구현예에서, 추가의 요법은 항-섬유성 제제이다. 특정 구현예에서, 항-섬유성 제제는 miR-21에 상보성인 변형된 올리고뉴클레오타이드이다.
특정 구현예에서, 추가의 요법은 투석이다. 특정 구현예에서, 추가의 요법은 신장 이식이다.
특정 구현예에서, 약제학적 제제는 항-염증제를 포함한다. 특정 구현예에서, 항-염증제는 스테로이드 항-염증제이다. 특정 구현예에서, 스테로이드 항-염증제는 코르티코스테로이드이다. 특정 구현예에서, 코르티코스테로이드는 프레드니손이다. 특정 구현예에서, 항-염증제는 비-스테로이드 항-염증성 약물이다. 특정 구현예에서, 비-스테로이드 항-염증제는 이부프로펜, COX-I 억제제, 또는 COX-2 억제제이다.
특정 구현예에서, 약제학적 제제는 섬유형성 신호에 하나 이상의 반응을 차단하는 약제학적 제제이다.
특정 구현예에서, 추가의 요법은, 항원 및 아쥬반트의 다량체 제시를 조합하는 백신 제형을 포함하는, 저-용량 사이클로포스파마이드, 티모스티물린, 비타민 및 영양 보충물 (예를 들면, 비타민 A, C, E, 베타-카로텐, 아연, 셀레늄, 글루타티온, 조효소 Q-10 및 에키네시아를 포함하는, 산화방지제), 및 백신, 예를 들면, 면역자극 복합체 (ISCOM)를 포함하는, 신체 면역계를 향상시키는 약제학적 제제일 수 있다.
특정 구현예에서, 추가의 요법은 본 발명의 하나 이상의 약제학적 조성물의 부작용을 치료 또는 완화시키도록 선택된다. 상기 부작용은, 제한 없이, 주사 부위 반응, 간 기능 시험 비정상, 신장 기능 비정상, 간 독성, 신장 독성, 중추신경계 비정상, 및 근병증을 포함한다. 예를 들어, 혈청에서 증가된 아미노기전달효소 수준은 간 독성 또는 간 기능 비정상을 표시할 수 있다. 예를 들어, 증가된 빌리루빈은 간 독성 또는 간 기능 비정상을 표시할 수 있다.
특정 MicroRNA 핵염기 서열
본 명세서에서 기재된 변형된 올리고뉴클레오타이드는 하기를 갖는다: miR-17에 상보성인 핵염기 서열 (서열 식별 번호:1), 또는 이의 전구체 (서열 식별 번호:2). 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드의 각각의 핵염기는 miR-17의 핵염기 서열, 또는 이의 전구체에 있어서 각각의 대응하는 위치에서 핵염기와 염기-짝짓기를 실행할 수 있다. 특정 구현예에서 변형된 올리고뉴클레오타이드의 핵염기 서열은 miR-17의 핵염기 서열 또는 전구체 서열에 대하여 하나 이상의 미스매치된 염기 쌍을 가질 수 있고, 그것의 표적 서열에 하이브리드화할 수 있게 남아있다.
miR-17 서열이 miR-17 전구체 서열 내에 함유됨에 따라, miR-17에 상보성인 핵염기 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오타이드는 또한 miR-17 전구체의 영역에 상보성이다.
특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 miR-17의 길이와 동일한 다수의 연결된 뉴클레오사이드로 구성된다.
특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드의 다수의 연결된 뉴클레오사이드는 miR-17의 길이 미만이다. 변형된 올리고뉴클레오타이드의 각각의 핵염기가 miR-17의 대응하는 위치에서 각각의 핵염기에 상보성인, miR-17의 길이 미만인 다수의 연결된 뉴클레오사이드를 갖는 변형된 올리고뉴클레오타이드는 miR-17 서열의 영역에 완전히 상보성인 핵염기 서열을 갖는 변형된 올리고뉴클레오타이드인 것으로 간주된다. 예를 들어, 각각의 핵염기가 22 핵염기 길이인 miR-17의 대응하는 위치에 상보성인, 19 연결된 뉴클레오사이드로 구성되는 변형된 올리고뉴클레오타이드는 miR-17의 19 핵염기 영역에 완전히 상보성이다. 그와 같은 변형된 올리고뉴클레오타이드는 miR-17의 19 핵염기 분절에 100% 상보성을 갖고 (또는 상기에 완전히 상보성이고), miR-17에 100% 상보성 (또는 상기에 완전히 상보성)인 것으로 간주된다.
특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 씨드 서열에 상보성인 핵염기 서열을 포함한다, 즉 변형된 올리고뉴클레오타이드는 씨드-매치 서열을 포함한다. 특정 구현예에서, 씨드 서열은 헥사머 씨드 서열이다. 특정 상기 구현예에서, 씨드 서열은 miR-17의 핵염기 1-6이다. 특정 상기 구현예에서, 씨드 서열은 miR-17의 핵염기 2-7이다. 특정 상기 구현예에서, 씨드 서열은 miR-17의 핵염기 3-8이다. 특정 구현예에서, 씨드 서열은 헵타머 씨드 서열이다. 특정 상기 구현예에서, 헵타머 씨드 서열은 miR-17의 핵염기 1-7이다. 특정 상기 구현예에서, 헵타머 씨드 서열은 miR-17의 핵염기 2-8이다. 특정 구현예에서, 씨드 서열은 옥타머 씨드 서열이다. 특정 상기 구현예에서, 옥타머 씨드 서열은 miR-17의 핵염기 1-8이다. 특정 구현예에서, 옥타머 씨드 서열은 miR-17의 핵염기 2-9이다.
miR-17은 miR-17 패밀리로서 공지된 microRNAs의 패밀리의 구성원이다. miR-17 패밀리는 miR-17, miR-20a, miR-20b, miR-93, miR-106a, 및 miR-106b를 포함한다. miR-17 패밀리의 각각의 구성원은 핵염기 서열 5’-AAAGUG-3’를 포함하는 핵염기 서열, 또는 하기의 위치 2 내지 7에서 핵염기 서열인, miR-17 씨드 영역을 갖는다: 서열 식별 번호:1. 추가로, miR-17 패밀리의 각각의 구성원은 씨드 영역 외부에서 일부 핵염기 서열 동일성을 공유한다. 따라서, miR-17에 상보성인 변형된 올리고뉴클레오타이드는, miR-17에 더하여, miR-17 패밀리의 microRNAs를 표적할 수 있다. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 miR-17 패밀리의 2 이상 microRNAs를 표적한다. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 miR-17 패밀리의 3 이상 microRNAs를 표적한다. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 miR-17 패밀리의 4 이상 microRNAs를 표적한다. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 miR-17 패밀리의 5 이상 microRNAs를 표적한다. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 miR-17 패밀리의 microRNAs의 6개를 표적한다.
특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 하기를 포함한다: 핵염기 서열 5’-GCACTTTG-3’ (서열 식별 번호:3). 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 하기를 포함한다: 핵염기 서열 5’-AGCACTTT-3’ (서열 식별 번호:4). 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 하기를 포함한다: 핵염기 서열 5’-AGCACTTTG-3’(서열 식별 번호:5). 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 하기를 포함한다: 핵염기 서열 5’-AAGCACTTTG-3’(서열 식별 번호:6). 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 하기를 포함한다: 핵염기 서열 5’-TAAGCACTTTG-3’ (서열 식별 번호:7). 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 하기를 포함한다: 핵염기 서열 5’-GTAAGCACTTTG-3’ (서열 식별 번호:8). 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 하기를 포함한다: 핵염기 서열 5’-TGTAAGCACTTTG-3’ (서열 식별 번호:9). 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 하기를 포함한다: 핵염기 서열 5’-CTGTAAGCACTTTG-3’ (서열 식별 번호:10). 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 하기를 포함한다: 핵염기 서열 5’-ACTGTAAGCACTTTG-3’ (서열 식별 번호:11). 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 하기를 포함한다: 핵염기 서열 5’-CACTGTAAGCACTTTG-3’ (서열 식별 번호:12). 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 하기를 포함한다: 핵염기 서열 5’-GCACTGTAAGCACTTTG-3’ (서열 식별 번호:13). 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 하기를 포함한다: 핵염기 서열 5’-TGCACTGTAAGCACTTTG-3’ (서열 식별 번호:14). 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 하기를 포함한다: 핵염기 서열 5’-CTGCACTGTAAGCACTTTG-3’ (서열 식별 번호:15). 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 하기를 포함한다: 핵염기 서열 5’-CCTGCACTGTAAGCACTTTG-3’ (서열 식별 번호:16). 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 하기를 포함한다: 핵염기 서열 5’-ACCTGCACTGTAAGCACTTTG-3’ (서열 식별 번호:17). 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 하기를 포함한다: 핵염기 서열 5’-CACCTGCACTGTAAGCACTTTG-3’ (서열 식별 번호:18). 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 하기를 포함한다: 핵염기 서열 5’-CTACCTGCACTGTAAGCACTTTG-3’ (서열 식별 번호:19). 임의의 이들 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 서열 식별 번호 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 및 18 중 어느 하나로부터 선택되는 핵염기 서열로 구성된다. 각각의 핵염기 서열에서, T는 T 및 U 로부터 독립적으로 선택된다.
특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 miR-17의 핵염기 서열에 대하여 1 미스매치를 갖는 핵염기 서열, 또는 이의 전구체를 갖는다. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 miR-17의 핵염기 서열에 대하여 2 미스매치를 갖는 핵염기 서열, 또는 이의 전구체를 갖는다. 특정 상기 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 miR-17의 핵염기 서열에 대하여 2 이하 미스매치를 갖는 핵염기 서열, 또는 이의 전구체를 갖는다. 특정 상기 구현예에서, 미스매치된 핵염기는 인접이다. 특정 상기 구현예에서, 미스매치된 핵염기는 인접이 아니다.
특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드의 연결된 뉴클레오사이드의 수는 miR-17의 길이보다 더 크다. 특정 상기 구현예에서, 추가의 뉴클레오사이드의 핵염기는 miR-17 줄기-루프 서열의 핵염기에 상보성이다. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드의 연결된 뉴클레오사이드의 수는 miR-17의 길이보다 1 더 크다. 특정 상기 구현예에서, 추가의 뉴클레오사이드는 올리고뉴클레오타이드의 5’ 말단에 있다. 특정 상기 구현예에서, 추가의 뉴클레오사이드는 올리고뉴클레오타이드의 3’ 말단에 있다. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드의 연결된 뉴클레오사이드의 수는 miR-17의 길이보다 2 더 크다. 특정 상기 구현예에서, 2 추가의 뉴클레오사이드는 올리고뉴클레오타이드의 5’ 말단에 있다. 특정 상기 구현예에서, 2 추가의 뉴클레오사이드는 올리고뉴클레오타이드의 3’ 말단에 있다. 특정 상기 구현예에서, 1 추가의 뉴클레오사이드는 5’ 말단에 위치하고 1 추가의 뉴클레오사이드는 올리고뉴클레오타이드의 3’ 말단에 위치한다. 특정 구현예에서, 올리고뉴클레오타이드의 영역은 miR-17의 핵염기 서열에 완전히 상보성일 수 있지만, 전체 변형된 올리고뉴클레오타이드는 miR-17에 완전히 상보성이 아니다. 예를 들어, 뉴클레오사이드 1 내지 22의 핵염기가 22 핵염기 길이인 miR-17의 대응하는 위치에 각각 상보성인, 24개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성되는 변형된 올리고뉴클레오타이드는 miR-17의 핵염기 서열에 완전히 상보성이고 miR-17의 핵염기 서열에 대략 92% 전체 상보성인 22개의 뉴클레오사이드 부분을 갖는다.
특정 변형된 올리고뉴클레오타이드
특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 8 내지 25개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성된다. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 8 내지 12개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성된다. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 12 내지 25개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성된다. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 15 내지 25개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성된다. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 15 내지 19 연결된 뉴클레오사이드로 구성된다. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 15 내지 16 연결된 뉴클레오사이드로 구성된다. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 17 내지 23개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성된다. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 19 내지 23개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성된다.
특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 8 연결된 뉴클레오사이드로 구성된다. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 9 연결된 뉴클레오사이드로 구성된다. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 10 연결된 뉴클레오사이드로 구성된다. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 11개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성된다. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 12개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성된다. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 13개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성된다. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 14개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성된다. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 15개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성된다. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 16 연결된 뉴클레오사이드로 구성된다. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 17 연결된 뉴클레오사이드로 구성된다. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 18 연결된 뉴클레오사이드로 구성된다. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 19 연결된 뉴클레오사이드로 구성된다. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 20 연결된 뉴클레오사이드로 구성된다. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 21개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성된다. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 22개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성된다. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 23개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성된다. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 24개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성된다. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 25개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성된다.
특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 하나 이상의 5-메틸시토신을 포함한다. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드의 각각의 시토신은 5-메틸시토신을 포함한다.
특정 변형
특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 올리고뉴클레오타이드는 핵염기, 당, 및/또는 뉴클레오사이드간 연결에 하나 이상의 변형을 포함할 수 있고, 그 자체로 변형된 올리고뉴클레오타이드이다. 변형된 핵염기, 당, 및/또는 뉴클레오사이드간 연결은 뉴클레아제의 존재하에 바람직한 특성 예컨대, 예를 들어, 향상된 세포 흡수, 다른 올리고뉴클레오타이드 또는 핵산 표적에 대하여 향상된 친화성 및 증가된 안정성 때문에 미변형된 형태를 누르고 선택될 수 있다.
특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 하나 이상의 변형된 뉴클레오사이드를 포함한다. 특정 상기 구현예에서, 변형된 뉴클레오사이드는 안정화 뉴클레오사이드이다. 안정화 뉴클레오사이드의 예는 당-변형된 뉴클레오사이드이다.
특정 구현예에서, 변형된 뉴클레오사이드는 당-변형된 뉴클레오사이드이다. 특정 상기 구현예에서, 당-변형된 뉴클레오사이드는 추가로 천연 또는 변형된 복소환형 염기 모이어티 및/또는 천연 또는 변형된 뉴클레오사이드간 연결을 포함할 수 있고 당 변형으로부터 독립적인 추가 변형을 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 당 변형된 뉴클레오사이드는 2’-변형된 뉴클레오사이드이고, 여기서 상기 당 고리는 천연 리보오스 또는 2’-데옥시-리보오스로부터 2’ 탄소에서 변형된다.
특정 구현예에서, 2’-변형된 뉴클레오사이드는 2환식 당 모이어티를 갖는다. 특정 상기 구현예에서, 2환식 당 모이어티는 알파 입체배치에서 D 당이다. 특정 상기 구현예에서, 2환식 당 모이어티는 베타 입체배치에서 D 당이다. 특정 상기 구현예에서, 2환식 당 모이어티는 알파 입체배치에서 L 당이다. 특정 상기 구현예에서, 2환식 당 모이어티는 베타 입체배치에서 L 당이다.
상기 2환식 당 모이어티를 포함하는 뉴클레오사이드는 2환식 뉴클레오사이드 또는 BNAs로서 지칭된다. 특정 구현예에서, 2환식 뉴클레오사이드는, 비제한적으로, 이하에 묘사된 바와 같이 하기를 포함한다: (A) α-L-메틸렌옥시 (4’-CH2-O-2’) BNA; (B) β-D-메틸렌옥시 (4’-CH2-O-2’) BNA; (C) 에틸렌옥시 (4’-(CH2)2-O-2’) BNA; (D) 아미노옥시 (4’-CH2-O-N(R)-2’) BNA; (E) 옥시아미노 (4’-CH2-N(R)-O-2’) BNA; (F) 메틸(메틸렌옥시) (4’-CH(CH3)-O-2’) BNA (또한 구속된 에틸 또는 cEt로서 지칭됨); (G) 메틸렌-티오 (4’-CH2-S-2’) BNA; (H) 메틸렌-아미노 (4’-CH2-N(R)-2’) BNA; (I) 메틸 탄소환형 (4’-CH2-CH(CH3)-2’) BNA; (J) c-MOE (4’-CH(CH2-OMe)-O-2’) BNA 및 (K) 프로필렌 탄소환형 (4’-(CH2)3-2’) BNA.
Figure pct00001
여기서 Bx는 핵염기 모이어티이고 R은, 독립적으로, H, 보호 기, 또는 C1-C12 알킬이다.
특정 구현예에서, 2’-변형된 뉴클레오사이드는 F, OCF3, O-CH3, OCH2CH2OCH3, 2'-O(CH2)2SCH3, O-(CH2)2-O-N(CH3)2, -O(CH2)2O(CH2)2N(CH3)2, 및 O-CH2-C(=O)-N(H)CH3 로부터 선택되는 2’-치환기를 포함한다.
특정 구현예에서, 2’-변형된 뉴클레오사이드는 F, O-CH3, 및 OCH2CH2OCH3 로부터 선택되는2’-치환기를 포함한다.
특정 구현예에서, 당-변형된 뉴클레오사이드는 4’-티오 변형된 뉴클레오사이드이다. 특정 구현예에서, 당-변형된 뉴클레오사이드는 4’-티오-2’-변형된 뉴클레오사이드이다. 4'-티오 변형된 뉴클레오사이드는 4'-O가 4'-S로 대체된 β-D-리보뉴클레오사이드를 갖는다. 4'-티오-2'-변형된 뉴클레오사이드는 2'-치환기로 대체된 2'-OH를 갖는 4'-티오 변형된 뉴클레오사이드이다. 적합한 2’-치환기는 2'-OCH3, 2'-O-(CH2)2-OCH3, 및 2'-F를 포함한다.
특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 하나 이상의 뉴클레오사이드간 변형을 포함한다. 특정 상기 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드의 각각의 뉴클레오사이드간 연결은 변형된 뉴클레오사이드간 연결이다. 특정 구현예에서, 변형된 뉴클레오사이드간 연결은 인 원자를포함한다.
특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 적어도 하나의 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결을 포함한다. 특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드의 각각의 뉴클레오사이드간 연결은 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결이다.
특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 하나 이상의 변형된 핵염기를 포함한다. 특정 구현예에서, 변형된 핵염기는 5-하이드록시메틸 시토신, 7-데아자구아닌 및 7-데아자아데닌으로부터 선택된다. 특정 구현예에서, 변형된 핵염기 는 7-데아자-아데닌, 7-데아자구아노신, 2-아미노피리딘 및 2-피리돈으로부터 선택된다. 특정 구현예에서, 변형된 핵염기는, 2 아미노프로필아데닌, 5-프로피닐우라실 및 5-프로피닐시토신을 포함하는, N-2, N-6 및 O-6 치환된 퓨린 그리고 5-치환된 피리미딘, 6-아자피리미딘으로부터 선택된다.
특정 구현예에서, 변형된 핵염기는 다환형 복소환을 포함한다. 특정 구현예에서, 변형된 핵염기는 삼환형 복소환을 포함한다. 특정 구현예에서, 변형된 핵염기는 펜옥사진 유도체를 포함한다. 특정 구현예에서, 펜옥사진은 G-클램프로서 당해 분야에서 공지된 핵염기를 형성하기 위해 추가로 변형될 수 있다.
특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 수득한 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 활성, 세포 분포 또는 세포 흡수를 향상시키는 하나 이상의 모이어티에 접합된다. 특정 상기 구현예에서, 모이어티는 콜레스테롤 모이어티이다. 특정 구현예에서, 모이어티는 지질 모이어티이다. 콘주게이션용 추가의 모이어티는 탄수화물, 인지질, 바이오틴, 펜아진, 폴레이트, 펜안트리딘, 안트라퀴논, 아크리딘, 플루오레신, 로다민, 쿠마린, 및 염료를 포함한다. 특정 구현예에서, 탄수화물 모이어티는 N-아세틸-D-갈락토사민 (GalNac)이다. 특정 구현예에서, 콘주게이트 기는 올리고뉴클레오타이드에 직접적으로 부착된다. 특정 구현예에서, 콘주게이트 기는 아미노, 하이드록실, 카복실산, 티올, 불포화 (예를 들면, 이중 또는 삼중 결합), 8-아미노-3,6-디옥사옥탄 산 (ADO), 석신이미딜 4-(N-말레이미도메틸) 사이클로헥산-1-카복실레이트 (SMCC), 6-아미노헥산산 (AHEX 또는 AHA), 치환된 C1-C10 알킬, 치환된 또는 비치환된 C2-C10 알케닐, 및 치환된 또는 비치환된 C2-C10 알키닐로부터 선택되는 연결 모이어티에 의해 변형된 올리고뉴클레오타이드에 부착된다. 특정 상기 구현예에서, 치환기는 하이드록실, 아미노, 알콕시, 카복시, 벤질, 페닐, 니트로, 티올, 티오알콕시, 할로겐, 알킬, 아릴, 알케닐 및 알키닐로부터 선택된다.
특정 상기 구현예에서, 화합물은 특성 예컨대, 예를 들어, 뉴클레아제 안정성을 향상시키기 위해 변형된 올리고뉴클레오타이드의 한쪽 또는 양쪽 말단에 부착되는 하나 이상의 안정화 기를 갖는 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함한다. 캡 구조물이 안정화 기에 포함된다. 이들 말단 변형은 엑소뉴클레아제 열화로부터 변형된 올리고뉴클레오타이드를 보호하고, 세포 내에서 전달 및/또는 국재화를 도울 수 있다. 캡은 5'-말단 (5'-캡)에서, 또는3'-말단 (3'-캡)에서 존재할 수 있거나, 양쪽 말단에서 존재할 수 있다. 캡 구조물은, 예를 들어, 역전된 데옥시 무염기성 캡을 포함한다.
특정 약제학적 조성물
약제학적 조성물이 본 명세서에서 제공된다. 특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 약제학적 조성물은 8 내지 25개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성되는 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함하고 miR-17에 상보성인 핵염기 서열을 갖는 화합물을 포함한다. 특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 약제학적 조성물은 8 내지 12개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성되는 변형된 올리고뉴클레오타이드로 구성되고 miR-17에 상보성인 핵염기 서열을 갖는 화합물을 포함한다. 특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 약제학적 조성물은 15 내지 25개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성되는 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함하고 miR-17에 상보성인 핵염기 서열을 갖는 화합물을 포함한다. 특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 약제학적 조성물은 17 내지 23개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성되는 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함하고 miR-17에 상보성인 핵염기 서열을 갖는 화합물을 포함한다.
적합한 투여 경로는, 비제한적으로, 경구, 직장, 경점막, 장, 장관, 국소, 좌약, 흡입을 통해, 척추강내, 심장내, 심실내, 복강내, 비강내, 안구내, 종양내, 및 비경구 (예를 들면, 정맥내, 근육내, 수질내, 및 피하)를 포함한다. 특정 구현예에서, 약제학적 척추강내제는 전신 노출 보다 국부를 달성하기 위해 투여된다. 예를 들어, 약제학적 조성물은 요망된 효과의 영역에서 (예를 들면, 신장 속에) 직접적으로 주사될 수 있다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 복용량 단위 (예를 들면, 정제, 캡슐, 볼러스, 등)의 형태로 투여된다. 일부 구현예에서, 약제학적 조성물은 25 mg 내지 800 mg, 25 mg 내지 700 mg, 25 mg 내지 600 mg, 25 mg 내지 500 mg, 25 mg 내지 400 mg, 25 mg 내지 300 mg, 25 mg 내지 200 mg, 25 mg 내지 100 mg, 100 mg 내지 800 mg, 200 mg 내지 800 mg, 300 mg 내지 800 mg, 400 mg 내지 800 mg, 500 mg 내지 800 mg, 600 mg 내지 800 mg, 100 mg 내지 700 mg, 150 mg 내지 650 mg, 200 mg 내지 600 mg, 250 mg 내지 550 mg, 300 mg 내지 500 mg, 300 mg 내지 400 mg, 및 400 mg 내지 600 mg으로부터 선택되는 용량으로 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 상기 약제학적 조성물은 25 mg, 30 mg, 35 mg, 40 mg, 45 mg, 50 mg, 55 mg, 60 mg, 65 mg, 70 mg, 75 mg, 80 mg, 85 mg, 90 mg, 95 mg, 100 mg, 105 mg, 110 mg, 115 mg, 120 mg, 125 mg, 130 mg, 135 mg, 140 mg, 145 mg, 150 mg, 155 mg, 160 mg, 165 mg, 170 mg, 175 mg, 180 mg, 185 mg, 190 mg, 195 mg, 200 mg, 205 mg, 210 mg, 215 mg, 220 mg, 225 mg, 230 mg, 235 mg, 240 mg, 245 mg, 250 mg, 255 mg, 260 mg, 265 mg, 270 mg, 270 mg, 280 mg, 285 mg, 290 mg, 295 mg, 300 mg, 305 mg, 310 mg, 315 mg, 320 mg, 325 mg, 330 mg, 335 mg, 340 mg, 345 mg, 350 mg, 355 mg, 360 mg, 365 mg, 370 mg, 375 mg, 380 mg, 385 mg, 390 mg, 395 mg, 400 mg, 405 mg, 410 mg, 415 mg, 420 mg, 425 mg, 430 mg, 435 mg, 440 mg, 445 mg, 450 mg, 455 mg, 460 mg, 465 mg, 470 mg, 475 mg, 480 mg, 485 mg, 490 mg, 495 mg, 500 mg, 505 mg, 510 mg, 515 mg, 520 mg, 525 mg, 530 mg, 535 mg, 540 mg, 545 mg, 550 mg, 555 mg, 560 mg, 565 mg, 570 mg, 575 mg, 580 mg, 585 mg, 590 mg, 595 mg, 600 mg, 605 mg, 610 mg, 615 mg, 620 mg, 625 mg, 630 mg, 635 mg, 640 mg, 645 mg, 650 mg, 655 mg, 660 mg, 665 mg, 670 mg, 675 mg, 680 mg, 685 mg, 690 mg, 695 mg, 700 mg, 705 mg, 710 mg, 715 mg, 720 mg, 725 mg, 730 mg, 735 mg, 740 mg, 745 mg, 750 mg, 755 mg, 760 mg, 765 mg, 770 mg, 775 mg, 780 mg, 785 mg, 790 mg, 795 mg, 및 800 mg으로부터 선택되는 용량으로 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함한다. 특정 상기 구현예에서, 의 약제학적 조성물은 25 mg, 50 mg, 75 mg, 100 mg, 150 mg, 200 mg, 250 mg, 300 mg, 350 mg, 400 mg, 500 mg, 600 mg, 700 mg, 및 800mg으로부터 선택되는 변형된 올리고뉴클레오타이드의 용량을 포함한다.
특정 구현예에서, 약제학적 제제는 적합한 희석제, 예를 들면, 주사용 멸균수 또는 주사용 멸균된 염수로 재구성되는 멸균된 동결건조된 변형된 올리고뉴클레오타이드이다. 재구성된 생성물은 염수 속에 희석 이후 정맥내 주입으로서 또는 피하 주사로서 투여된다. 동결건조된 의약품은 주사용 물에서, 또는 주사용 염수에서 제조되었고, 제조 동안 산 또는 염기로 pH 7.0-9.0로 조정되었고 그 다음 동결건조되었던 변형된 올리고뉴클레오타이드로 구성된다. 동결건조된 변형된 올리고뉴클레오타이드는 25-800 mg의 올리고뉴클레오타이드일 수 있다. 이것이 25, 50, 75, 100, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 275, 300, 325, 350, 375, 425, 450, 475, 500, 525, 550, 575, 600, 625, 650, 675, 700, 725, 750, 775, 및 800 mg의 변형된 동결건조된 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 것임이 이해된다. 또한, 일부 구현예에서, 동결건조된 변형된 올리고뉴클레오타이드는 25 mg 내지 800 mg, 25 mg 내지 700 mg, 25 mg 내지 600 mg, 25 mg 내지 500 mg, 25 mg 내지 400 mg, 25 mg 내지 300 mg, 25 mg 내지 200 mg, 25 mg 내지 100 mg, 100 mg 내지 800 mg, 200 mg 내지 800 mg, 300 mg 내지 800 mg, 400 mg 내지 800 mg, 500 mg 내지 800 mg, 600 mg 내지 800 mg, 100 mg 내지 700 mg, 150 mg 내지 650 mg, 200 mg 내지 600 mg, 250 mg 내지 550 mg, 300 mg 내지 500 mg, 300 mg 내지 400 mg, 및 400 mg 내지 600 mg으로부터 선택되는 범위 내에서 올리고뉴클레오타이드의 양이다. 동결건조된 의약품은 (황산암모늄-처리된) 2 mL 유형 I, 깨끗한 유리 바이알에서 포장될 수 있고, 브로모부틸 고무 마개로 막아질 수 있고 알루미늄 FLIP-OFF® 오버실(overseal)로 밀봉될 수 있다.
특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 약제학적 조성물은 그것의 기술-확립된 용법 수준에서 약제학적 조성물에 있어서 종래에 발견된 다른 보조물 성분을 추가로 함유할 수 있다. 따라서, 예를 들어, 조성물은 추가의, 양립가능한, 약제학적으로-활성 물질 예컨대, 예를 들어, 가려움약, 수렴제, 국부 마취제 또는 항-염증제를 함유할 수 있거나, 본 발명의 조성물의 다양한 복용 형태를 물리적으로 제형화에 유용한 추가의 물질, 예컨대 염료, 풍미제, 보존제, 산화방지제, 불투명제, 증점제 및 안정제를 함유할 수 있다. 그러나, 상기 물질은, 첨가된 경우, 본 발명의 조성물의 성분의 생물학적 활성을 지나치게 방해하지 않아야 한다. 제형은 멸균될 수 있고, 요망하는 경우, 보조제, 예를 들면, 윤활제, 보존제, 안정제, 습윤제, 유화제, 삼투압에 영향을 미치는 염, 완충액, 착색제, 풍미제 및/또는 방향족 서브스턴스 그리고 제형의 올리고뉴클레오타이드(들)과 유해하게 상호작용하지 않는 동종의 것과 혼합될 수 있다.
지질 모이어티는 다양한 방법으로 핵산 요법에서 사용되어 왔다. 하나의 방법에서, 핵산은 양이온성 지질 및 중성 지질의 혼합물로 제조된 사전형성된 리포좀 또는 리포플렉스 속에 도입된다. 또 다른 방법에서, 모노- 또는 폴리-양이온성 지질을 가진 DNA 복합체는 중성 지질의 존재 없이 형성된다. 특정 구현예에서, 지질 모이어티는 특정한 세포 또는 조직에 약제학적 제제의 분포를 증가시키도록 선택된다. 특정 구현예에서, 지질 모이어티는 지방 조직에 약제학적 제제의 분포를 증가시키도록 선택된다. 특정 구현예에서, 지질 모이어티는 근육 조직에 약제학적 제제의 분포를 증가시키도록 선택된다.
특정 구현예에서, INTRALIPID는 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 약제학적 조성물을 제조하는데 사용된다. Intralipid는 정맥내 투여용으로 제조된 지방 에멀젼이다. 10% 대두 오일, 1.2% 계란 노른자 인지질, 2.25% 글리세린, 및 주사용 물로 구성된다. 또한, 수산화나트륨은 최종 생성물 pH 범위가 6 내지 8.9이도록 pH를 조정하기 위해 첨가되어 왔다.
특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 약제학적 조성물은 핵산으로 복합체화된 지질 모이어티 또는 폴리아민 화합물을 포함한다. 특정 구현예에서, 상기 제제는 식 (Z)로 정의된 구조를 갖는 각각 개별적으로 하나 이상의 화합물 또는 약제학적으로 허용가능한 그것의 염을 포함한다,
Figure pct00002
여기서 각각의 Xa 및 Xb는, 각각의 경우에, 독립적으로 C1-6 알킬렌이고; n은 0, 1, 2, 3, 4, 또는 5이고; 각각의 R은 독립적으로 H이고, 여기서 제조에서 식 (Z)의 화합물의 분자의 적어도 약 80%에서 R 모이어티의 적어도 n + 2는 H가 아니고; m은 1, 2, 3 또는 4이고; Y는 O, NR2, 또는 S이고; R1은 알킬, 알케닐, 또는 알키닐이고; 각각의 이들은 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환되고; R2는 H, 알킬, 알케닐, 또는 알키닐이고; 각각의 이들은 선택적으로 치환되고 각각의 이들은 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환되고; 단, n = 0이면, R 모이어티의 적어도 n + 3은 H가 아니다. 상기 제제는, 지질 제제의 개시내용에 대하여 그 전문이 참고로 본 명세서에서 편입되는, PCT 공개 WO/2008/042973에 기재된다. 특정 추가의 제제는 하기에 기재된다: Akinc 등, Nature Biotechnology 26, 561 - 569 (01 May 2008), 지질 제제의 개시내용에 대하여 그 전문이 참고로 본 명세서에서 편입됨.
특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 약제학적 조성물은 하나 이상의 변형된 올리고뉴클레오타이드 및 하나 이상의 부형제를 포함한다. 특정 상기 구현예에서, 부형제는 물, 염 용액, 알코올, 폴리에틸렌 글리콜, 젤라틴, 락토오스, 아밀라아제, 스테아르산마그네슘, 탈크, 규산, 점성 파라핀, 하이드록시메틸셀룰로오스 및 폴리비닐피롤리돈으로부터 선택된다.
특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 약제학적 조성물은, 비제한적으로 혼합, 용해, 과립화, 당의정-제조, 분말화, 에멀젼화, 캡슐화, 포획화 또는 정제화 공정을 포함하는, 공지된 기술을 이용하여 제조된다.
특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 약제학적 조성물은 액체 (예를 들면, 현탁액, 엘릭시르 및/또는 용액)이다. 상기 구현예의 몇몇에서, 액체 약제학적 조성물은, 비제한적으로, 물, 글리콜, 오일, 알코올, 풍미제, 보존제, 및 착색제를 포함하는, 당해 분야에서 공지된 성분을 이용하여 제조된다.
특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 약제학적 조성물은 고형물 (예를 들면, 분말, 정제, 및/또는 캡슐)이다. 상기 구현예의 몇몇에서, 하나 이상의 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 고체 약제학적 조성물은, 비제한적으로, 전분, 당, 희석제, 과립화제, 윤활제, 결합제, 및 붕해제를 포함하는, 당해 분야에서 공지된 성분을 이용하여 제조된다.
특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 약제학적 조성물은 데포 제제로서 제형화된다. 특정 상기 데포 제제는 비-데포 제제보다 전형적으로 더 오래 작용한다. 특정 구현예에서, 상기 제제는 이식으로 (예를 들어 피하로 또는 근육내로) 또는 근육내 주사로 투여된다. 특정 구현예에서, 데포 제제는 적합한 폴리머 또는 소수성 물질 (예를 들어 허용가능한 오일에서 에멀젼) 또는 이온교환수지를 이용하여, 또는 난용성 유도체로서, 예를 들어, 난용성 염으로서 제조된다.
특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 약제학적 조성물은 전달 시스템을 포함한다. 전달 시스템의 예는, 비제한적으로, 리포좀 및 에멀젼을 포함한다. 특정 전달 시스템은 소수성 화합물을 포함하는 것을 포함하는 특정 약제학적 조성물 제조에 유용하다. 특정 구현예에서, 특정 유기 용매 예컨대 디메틸설폭사이드가 사용된다.
특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 약제학적 조성물은 특이적인 조직 또는 세포 유형에 본 발명의 하나 이상의 약제학적 제제를 전달하도록 설계된 하나 이상의 조직-특이적 전달 분자를 포함한다. 예를 들어, 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 조직-특이적인 항체로 코팅된 리포좀을 포함한다.
특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 약제학적 조성물은 지속-방출 시스템을 포함한다. 그와 같은 지속-방출 시스템의 비-제한적인 예는 고체 소수성 폴리머의 세미-침투성 매트릭스이다. 특정 구현예에서, 지속-방출 시스템은, 그것의 화학 성질에 의존하여, 일정 시간, 일, 주 또는 개월 동안 약제학적 제제를 방출할 수 있다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 (예를 들면, 정맥내, 피하, 근육내, 등) 주사에 의한 투여용으로 제조된다. 상기 구현예의 몇몇에서, 약제학적 조성물은 캐리어를 포함하고 수성 용액, 예컨대 물 또는 생리학적으로 양립가능한 완충액 예컨대 항크 용액, 링거 용액, 또는 생리적 염수 완충액에서 제형화된다. 특정 구현예에서, 다른 성분 (예를 들면, 용해도에 도움이 되거나 보존제로서 작용하는 성분)은 포함된다. 특정 구현예에서, 주사가능 현탁액은 적절한 액체 캐리어, 현탁화제 및 동종의 것을 이용하여 제조된다. 주사용 특정 약제학적 조성물은 단위 복용 형태로, 예를 들면, 앰풀로 또는 다중-용량 컨테이너로 존재한다. 주사용 특정 약제학적 조성물은 유성 또는 수성 비히클내 현탁액, 용액 또는 에멀젼이고, 제형제 예컨대 현탁제, 안정화제 및/또는 분산제를 함유할 수 있다. 주사용 약제학적 조성물에서 사용에 적합한 특정 용매는, 비제한적으로, 친유성 용매 및 지방 오일, 예컨대 참께 오일, 합성 지방산 에스테르, 예컨대 에틸 올레이트 또는 트리글리세라이드, 및 리포좀을 포함한다. 수성 주사 현탁액은 현탁액의 점도를 증가시키는 서브스턴스, 예컨대 나트륨 카복시메틸 셀룰로오스, 소르비톨, 또는 덱스트란을 함유할 수 있다. 선택적으로, 상기 현탁액은 또한 고농축 용액의 제조를 허용하기 위해 약제학적 제제의 용해도를 증가시키는 제제 또는 적합한 안정제를 함유할 수 있다.
특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 약제학적 조성물은 치료적 유효량으로 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함한다. 특정 구현예에서, 치료적 유효량은 치료받는 대상체의 생존을 연장시키는데 또는 질환의 증상을 예방, 경감 또는 완화시키는데 충분하다. 치료적 유효량의 결정은 양호하게 당해 분야의 숙련가의 능력 내이다.
특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 하나 이상의 변형된 올리고뉴클레오타이드는 전구약물로서 제형화된다. 특정 구현예에서, 생체내 투여시, 전구약물은 올리고뉴클레오타이드의 생물학적으로, 약제학적으로 또는 치료적으로 더욱 활성 형태로 화학적으로 전환된다. 특정 구현예에서, 전구약물은 이들이 대응하는 활성 형태보다 투여하기 더 쉽기 때문에 유용하다. 예를 들어, 특정 경우에서, 전구약물은 대응하는 활성 형태보다 (예를 들면, 경구 투여를 통해) 더욱 생체이용가능할 수 있다. 특정 경우에서, 전구약물은 대응하는 활성 형태에 비교되는 개선된 용해도를 가질 수 있다. 특정 구현예에서, 전구약물은 대응하는 활성 형태보다 덜 수용성이다. 특정 경우에서, 상기 전구약물은 세포 막을 거쳐 우월한 전달을 보유하고, 여기에서 수용성은 이동도에 해롭다. 특정 구현예에서, 전구약물은 에스테르이다. 특정 상기 구현예에서, 에스테르는 투여시 카복실산으로 대사작용으로 가수분해된다. 특정 경우에서 카복실산 함유 화합물은 대응하는 활성 형태이다. 특정 구현예에서, 전구약물은 산 기에 결합된 짧은 펩타이드 (폴리아미노산)을 포함한다. 상기 구현예의 몇몇에서, 펩타이드는 대응하는 활성 형태를 형성하기 위해 투여시 절단된다.
특정 구현예에서, 전구약물은 활성 화합물이 생체내 투여시 재생될 수 있도록 약제학적으로 활성 화합물 변형에 의해 생산된다. 전구약물은 약물의 수송 특징 또는 대사 안정성을 변경하도록, 부작용 또는 독성을 마스킹하도록, 약물의 풍미를 개선하도록 또는 약물의 다른 특징 또는 특성을 변경하도록 설계될 수 있다. 생체내 약동학적 과정 및 약물 대사의 지식 덕분에, 당해 분야의 숙련가는, 일단 약제학적으로 활성 화합물이 공지되면, 하기의 전구약물을 설계할 수 있다: 화합물 (참조, 예를 들면,Nogrady (1985) Medicinal Chemistry A Biochemical Approach, Oxford University Press, New York, 페이지 388-392).
특정 키트
본 발명은 또한 키트를 제공한다. 일부 구현예에서, 키트는 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 본 발명의 하나 이상의 화합물을 포함하고, 여기서 올리고뉴클레오타이드의 핵염기 서열은 miR-17의 핵염기 서열에 상보성이다. 화합물은 본 명세서에서 기재된 임의의 뉴클레오사이드 패턴을 가질 수 있다. 일부 구현예에서, 화합물은 바이알 내에 존재할 수 있다. 복수의 바이알, 예컨대 10개는, 예를 들어, 조제 팩에 존재할 수 있다. 일부 구현예에서, 바이알은 주사기로 접근가능해지도록 제조된다. 키트는 또한 화합물 이용 지침을 함유할 수 있다.
일부 구현예에서, 키트는 대상체에게 화합물 투여용으로 사용될 수 있다. 그와 같은 사례에서, miR-17에 상보성인 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 화합물에 더하여, 키트는 추가로 하나 이상의 하기를 포함할 수 있다: 주사기, 알코올 면봉, 면 볼, 및/또는 거즈 패드.일부 구현예에서, 화합물은, 바이알에서 보다, 미리 충전된 주사기 (예컨대, 예를 들어, 바늘 보호덮개를 가진 27 게이지, ½ 인치 바늘을 가진 단일-용량 주사기)에서 존재할 수 있다. 복수의 미리 충전된 주사기, 예컨대 10개는, 예를 들어, 조제 팩에서 존재할 수 있다. 키트는 또한 miR-17에 상보성인 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 화합물 투여용 지침을 함유할 수 있다.
특정 실험적 모델
특정 구현예에서, 본 발명은 실험적 모델에서 본 발명의 변형된 올리고뉴클레오타이드 이용 및/또는 시험 방법을 제공한다. 당해 분야에서 기술을 가진 이들은 본 발명의 약제학적 제제를 평가하기 위한 상기 실험적 모델에 대하여 프로토콜을 선택 및 변형할 수 있다.
일반적으로, 변형된 올리고뉴클레오타이드는 배양된 세포에서 먼저 시험된다. 적합한 세포 유형은 변형된 올리고뉴클레오타이드의 전달이 생체내 요망되는 세포 유형에 관련되는 것을 포함한다. 예를 들어, 본 명세서에서 기재된 방법의 연구에 적합한 세포 유형은 1차 또는 배양된 세포를 포함한다.
특정 구현예에서, 변형된 올리고뉴클레오타이드가 miR-17의 활성을 방해하는 정도는 배양된 세포에서 평가된다. 특정 구현예에서, microRNA 활성의 억제는 microRNA의 수준 측정에 의해 평가될 수 있다. 대안적으로, 예상된 또는 입증된 microRNA-조절된 전사체의 수준은 측정될 수 있다. microRNA 활성의 억제는 miR-17-조절된 전사체, 및/또는 miR-17-조절된 전사체에 의해 인코딩된 단백질에서 증가를 초래할 수 있다. 또한, 특정 구현예에서, 특정 표현형 결과는 측정될 수 있다.
몇 개의 동물 모델은 인간 질환의 모델에서 miR-17의 연구를 위하여 숙련가에 이용가능하다. 다낭포성 신장 질환의 모델은, 비제한적으로, Pkd1 및/또는 Pkd2에서 돌연변이 및/또는 결실을 가진 모델; 및 다른 유전자에서 돌연변이를 포함하는 모델을 포함한다. Pkd1 및/또는 Pkd2에서 돌연변이 및/또는 결실을 포함하는 PKD의 비제한 예시적인 모델은 저차형태 모델, 예컨대 Pkd1에서 미스센스 돌연변이를 포함하는 모델 및 Pkd2의 감소된 또는 불안정한 발현을 가진 모델; 유도성 조건적 녹아웃 모델; 및 조건적 녹아웃 모델을 포함한다. Pkd1 및 Pkd2 이외의 유전자에서 돌연변이를 포함하는 비제한 예시적인 PKD 모델은 Pkhd1, Nek8, Kif3a, 및/또는 Nphp3에서 돌연변이를 가진 모델을 포함한다. PKD 모델은, 예를 들면, 하기에서 검토된다: Shibazaki 등, HumanMol.Genet.,2008; 17(11): 1505-1516; Happe and Peters, Nat Rev Nephrol.,2014; 10(10): 587-601; and Patel 등, PNAS, 2013; 110(26): 10765-10770.
특정 정량화 검정
특정 구현예에서, microRNA 수준은 시험관내 또는 생체내 세포 또는 조직에서 정량화된다. 특정 구현예에서, microRNA 수준의 변화는 마이크로어레이 분석에 의해 측정된다. 특정 구현예에서, microRNA 수준의 변화는 몇 개의 상업적으로 입수가능한 PCR 검정 중 하나, 예컨대 TaqMan® MicroRNA 검정 (Applied Biosystems)에 의해 측정된다.
항-miR 또는 microRNA 모방체로 microRNA 활성의 조절은 mRNAs의 마이크로어레이 프로파일링에 의해 평가될 수 있다. 항-miR 또는 microRNA 모방체에 의해 조절되는 (증가 또는 감소되는) mRNAs의 서열은 microRNA의 표적이 아닌 mRNAs의 조절과 microRNA의 표적인 mRNAs의 조절을 비교하기 위해, microRNA 씨드 서열에 대하여 검색된다. 이런 식으로, miR-17과 항-miR, 또는 그것의 표적과 miR-17 모방체의 상호작용은 평가될 수 있다. 항-miR의 경우에서, 발현 수준이 증가되는 mRNAs는 항-miR이 상보성인 microRNA에 씨드 매치를 포함하는 mRNA 서열을 위하여 선별된다.
항-miR-17 화합물로 microRNA 활성의 조절은, mRNA 자체의 수준, 또는 그로부터 전사된 단백질 측정에 의해, miR-17의 mRNa 표적의 수준을 측정함으로써 평가될 수 있다. microRNA의 안티센스 억제는 일반적으로 microRNA의 mRNa 표적의 단백질 및/또는 mRNA의 수준에서 증가를 초래한다.
실시예
하기 실시예는 본 발명의 일부 구현예를 더욱 완전히 실증하기 위해 제공된다. 이들은, 그러나, 본 발명의 넓은 범위를 제한하는 것으로 결코 해석되지 않아야 한다.
당해 분야의 숙련가는 본 발명의 취지에서 이탈 없이 다양한 화합물을 설계하기 위해 이 발견의 근원적인 원리를 쉽게 채택할 것이다.
실시예 1: 다낭포성 신장 질환의 모델에서 항-miR-17
Pkhd1/cre;Pkd2 F/F 마우스는 자발적으로 다낭포성 신장 질환을 발생시키고, ADPKD의 모델로서 사용되었다. 참고 Patel 등, PNAS, 2013; 110(26): 10765-10770.
miR-17에 상보성인 변형된 올리고뉴클레오타이드 (항-miR-17 화합물)은 ADPKD의 Pkhd1/cre;Pkd2 F/F 마우스 모델에서 시험되었다. 야생형 마우스는 대조군 마우스로서 사용되었다. miR-17에 관련없는 miRNA에 상보성인 올리고뉴클레오타이드는 특이성에 대한 치료 대조군 (항-miR-대조군)으로서 사용되었다. 항-miR-17 화합물은 하기이다: 19 연결된 뉴클레오사이드 길이의 완전히 포스포로티오에이트화된 올리고뉴클레오타이드 (5’-CTGCACTGTAAGCACTTTG-3’; 서열 식별 번호:15), DNA, 2’-MOE 및 S-cEt 당 모이어티를 가짐.
10 내지 12 일령, 성별-매치된 한배새끼의 마우스는, 총 3개의 1일 용량으로, 항-miR-17 (20 mg/kg) 또는 PBS로 치료되었다. 19 일령에서, 마우스는 항-miR-17 (20 mg/kg) 또는 PBS의 제4 용량으로 치료되었다. 항-miR-17은 피하로 투여되었다. (1) Pkhd1/cre;Pkd2 F/F 마우스, PBS 투여, n = 8; (2) Pkhd1/cre;Pkd2 F/F 마우스, 항-miR-대조군 투여, n = 8; (3) Pkhd1/cre;Pkd2 F/F 마우스, 항-miR-17 투여, n = 8.마우스는 28 일에 희생되었고, 신장 중량, 낭포 지수, 신장 기능, 및 신장 마커는 측정되었다. 통계적 유의도는 웰치 t-시험으로 계산되었다.
항-miR-17로 치료된 Pkhd1/cre;Pkd2 F/F 마우스에서 신장 중량 대 바디 중량의 평균 비는 Pkhd1/cre;Pkd2 F/F 마우스 투여된 항-miR-대조군 또는 PBS 단독에서 신장 중량 대 바디 중량의 평균 비보다 17% 낮았다 (p = 0.017). 항-miR-17로 치료된 Pkhd1/cre;Pkd2 F/F 마우스는, 비록 차이가 통계적으로 유의미하지 않았어도, Pkhd1/cre;Pkd2 F/F 마우스 투여된 항-miR-대조군 또는 PBS와 비교된 낭포 지수에서 평균 6% 감소를 보여주었다 (p = 0.072). 낭포 지수는 총 신장 면적에 비한 낭포성 면적의 조직학적 측정이다. 항-miR-17로 치료된 Pkhd1/cre;Pkd2 F/F 마우스에서 평균 혈청 크레아티닌 수준은, 비록 결과가 통계적으로 유의미하지 않았어도, Pkhd1/cre;Pkd2 F/F 마우스 투여된 항-miR-대조군 또는 PBS에서 보다 25% 낮았다 (p = 0.069). Kim1 발현은 항-miR-대조군 또는 PBS에 비해 항-miR-17로 치료된 Pkhd1/cre;Pkd2 F/F 마우스에서 33%만큼 감소되었고 (p = 0.024), Ngal 발현은 항-miR-대조군 또는 PBS에 비해 항-miR-17로 치료된 Pkhd1/cre;Pkd2 F/F 마우스에서 36%만큼 감소되었다 (p = 0.028). 마지막으로, 혈액 요소 질소 (BUN) 수준은 항-miR-대조군 또는 PBS에 비해 항-miR-17로 치료된 Pkhd1/cre;Pkd2 F/F 마우스에서 20%만큼 감소되었다 (p = 0.006). BUN은 신장 기능의 혈액 마커이다. 더 높은 BUN은 더욱 좋지 못한 신장 기능과 연관한다. BUN의 감소는 감소된 신장 손상 및 손상 및 개선된 기능의 지표이다.
이들 결과는 항-miR-17 치료가 기본적인 치료 종점, 신장 용적에서 Pkhd1/cre;Pkd2 F/F 마우스의 양성 결과로 이어진다는 것을 입증한다. 항-miR-17 치료는 Pkhd1/cre;Pkd2 F/F 마우스에서 신장 손상 mRNA 바이오마커, Kim1 및 Ngal의 BUN 및 발현을 또한 상당히 감소시켰다. 마지막으로, 항-miR-17 치료는 Pkhd1/cre;Pkd2 F/F 마우스에서 감소된 혈청 크레아티닌 및 감소된 낭포 지수에 대한 추세를 초래하였다. 이들 결과는, 이들이 구체적으로 miR-17 억제 때문이라는 것을 표시하는, 항-miR-대조군으로 관측되지 않았다.
실시예 3: 하기에서 항-miR 분포: Pkhd1/cre; Pkd2 F/F 마우스의 신장
올리고뉴클레오타이드 (항-miR 화합물 포함), 는 신장 내에서 몇 개의 세포 유형에 기인하는 것으로 공지된다. 하기에 의해 보고된 바와 같이: Chau 등, Sci Transl Med., 2012, 121ra18, 정상 마우스 또는 신장 손상이 적용된 마우스 (편측성 요관 폐색, 사이질 섬유증의 모델)에 Cy3-표지된 항-miR의 투여 이후, 신장에서 가장 큰 형광 강도는 근위 세관 상피에서이었다. 내피, 혈관주위세포, 근섬유아세포, 및 대식세포는 또한 모두 Cy3-표지된 항-miR의 검출가능한 양을 함유하였다. 그러나, 사구체, 특히 발세포는 화학적으로 변형된 올리고뉴클레오타이드의 공지된 분포와 일치하는 항-miR의 상당한 양을 차지하는 것처럼 보이지 않았다 (Masarjian 등, Oligonucleotides, 2004, 14, 299-310).
다낭포성 신장 질환의 마우스 모델에서 항-miR의 분포를 조사하기 위해, 항-miR-17 화합물은 Pkhd1/cre;Pkd2 F/F 마우스의 2 상이한 그룹, 10 일령에서 시작하는 것 (n = 4; 전낭포성으로 간주됨) 및 21 일령에서 시작하는 것 (n = 4; 낭포성으로 간주됨)에 그리고 21 일령에 시작하는 야생형 마우스의 하나의 그룹 (n = 4)에 투여되었다. 각각의 그룹에서, 화합물은 3개 용량으로 매일 20 mg/kg으로 투여되었다. 마우스는 마지막 용량후 3일에 희생되었고 신장은 수확되었고 조직학적 분석을 위하여 가공되었다. 항-miR-17은 포스포로티오에이트화된 올리고뉴클레오타이드를 인지하는 항체를 이용하여 검출되었다.
신장 조직의 부문은 항-miR-17 화합물용 마커로서 포스포로티오에이트화된 올리고뉴클레오타이드, 또는 집합관용 마커로서 돌리코스 바이플로러스 응집소 (DBA)를 인지하는 항체로 염색되었다. 모든 그룹에서, 다수의 염색은 집합관 외부에서, 가능하게는 근위 세관 상피에서 찾아졌다. 항-miR-17은 수많은 낭포가 신장에서 이미 형성된 후 투여된 경우조차 집합관 낭포에 또한 전달되었다. 집합관에서 염색은, 화합물의 전달이 질환 상태와 함께 증가할 수 있다는 것을 시사하는, 정상 집합관에 비교된 낭포에서 더 큰 것처럼 보였다.
작용성 전달을 확인하기 위해, RT-qPCR은 항-let-7 화합물에 의해 유도된 유전자 발현 변화를 측정하는데 사용되었다. 36 let-7 표적 유전자의 패널은 Pkhd1/cre;Pkd2 F/F 마우스의 뿐만 아니라 항-let-7로 투여된 야생형 마우스로부터 양쪽 전낭포성 및 낭포성 신장에서 발현의 유의미한 증가를 보여주었다.
이들 결과는 항-miR 화합물이 miRNAs를 억제시키기 위해 낭포성 신장에 성공적으로 전달될 수 있다는 것을 입증한다.
실시예 3: miR-17 패밀리 구성원의 억제
다수의 microRNAs는 씨드 서열 동일성을 공유하고, 따라서 microRNA 패밀리의 구성원이다. microRNA의 씨드 영역이 표적 특이성에 대한 결정 인자임에 따라, microRNA 패밀리 구성원은 종종 메신저 RNA 표적의 유사한 세트를 규제한다. 씨드 영역 외부에서, microRNA 패밀리 구성원은 서열 동일성의 가변 정도를 공유한다.
하나의 상기 패밀리는, miR-17, miR-20a, miR-20b, miR-93, miR-106a, 및 miR-106b를 포함하는, miR-17 패밀리이다. 상기 microRNA 패밀리의 개별 microRNAs는, 3 상이한 microRNA 클러스터 내에서, 3 상이한 염색체상에서 위치한다. miR-17 및 miR-20a는 인간 염색체 13에서 miR-17~92 클러스터 내에 거주하고; miR-20b 및 miR-106a는 인간 X 염색체에서 miR-106a~363 클러스터 내에 거주하고, miR-93 및 miR-106b는 인간 염색체 7에서 miR-106b~25 클러스터 내에 거주한다 (도 1A). 각각의 이들 3 클러스터는 miR-17 패밀리의 구성원이 아닌 다른 microRNAs를 함유하고, 따라서 miR-17 2-7 씨드 서열을 포함하지 않는다. 이들 microRNAs는, 그러나, 도 1B에서 나타낸 바와 같이, 다른 miR 패밀리의 구성원이다. miR-17 패밀리 구성원은, 볼드체의 miR-17 2-7 씨드 서열로, 도 1B에서 제공된다. miR-18 패밀리 구성원 (miR-18a 및 miR-18b)의 씨드 서열은 miR-17 2-7 씨드 서열에 비하여 하나의 핵염기 차이를 함유하지만, 씨드 영역 외부에서 서열은 다르다.
microRNA 패밀리 구성원 중에서 서열 동일성 때문에, 그리고 microRNA 서열에 100% 상보성 미만을 가진 변형된 올리고뉴클레오타이드가 여전히 그 microRNA의 활성을 억제시킬 수 있기 때문에, 패밀리의 제1 구성원의 핵염기 서열에 100% 상보성인 핵염기 서열을 가진, 그리고 패밀리의 하나 이상의 다른 구성원에 100% 미만 상보성인 변형된 올리고뉴클레오타이드는, microRNA 패밀리의 제1 구성원의 활성 억제에 더하여, 패밀리의 하나 이상의 다른 구성원을 억제시킬 수 있다. 예를 들어, 하기를 가진 변형된 올리고뉴클레오타이드: miR-17에 100% 상보성인 핵염기 서열 (5’-CTGCACTGTAAGCACTTTG-3’; 서열 식별 번호:15), 및 miR-17 패밀리의 다른 구성원에 100% 미만 상보성인 (표 1), 는 miR-17 패밀리의 다른 구성원을 억제시키는 것으로 기대된다.
Figure pct00003
miR-17 패밀리 구성원의 억제를 시험하기 위해, 루시퍼라아제 리포터 검정은 사용되었다. miR-17, miR-20a, miR-20b, miR-93, 및 miR-106b의 각각에 대하여 루시퍼라아제 리포터 플라스미드는, 루시퍼라아제 유전자의 3’-UTR에서 완전히 상보성 microRNA 결합 부위로, 작제되었다. 각각의 microRNA에 대하여, HeLa 세포는 microRNA 모방체 및 그것의 동족 루시퍼라아제 리포터로 형질감염되었고, 그 다음 항-miR-17로 형질감염되었다. miR-17, miR-20a, miR-20b, miR-93, 및 miR-106b의 각각은 항-miR-17 화합물에 의해 억제되었고, 항-miR-17과 microRNA 서열 사이 존재하는 미스매치가 있는 경우 조차, 항-miR-17 화합물이 miR-17 패밀리의 다중 구성원을 억제시킨다는 것을 증명한다.
별도의 검정, microRNA 폴리솜 시프트 검정 (miPSA)은 항-miR-17 화합물이 miR-17 패밀리, miR-17, miR-20b 및 miR-106a의 3 구성원을 직접적으로 관여한다는 것을 확인하였다 (Androsavich 등, Nucleic Acids Research, 2015, 44:e13). miPSA는 활성 miRNAs가 번역적으로 활성 고분자량 (HMW) 폴리솜에서 그것의 mRNa 표적에 결합하는 원리에 의존하고, 반면에 억제된 miRNAs는 낮은 MW (LMW) 폴리솜에 거주한다. 항-miR로 치료는 HMW 폴리솜에서 LMW 폴리솜으로 microRNA의 시프트를 초래한다. 따라서, miPSA는 상보성 항-miR에 의한 microRNA 표적 참여의 직접적인 측정을 제공한다. 안드로사비치 등(Androsavich et al.)은 비-miR-17 패밀리 miRNAs가, 다른 한편으로, 하나를 제외하고, 비교하자면 미반응성이었다는 것을 추가로 확인하였다: miR-18a는 단지 단일 뉴클레오타이드 A/G 차이를 갖는 miR-17 및 miR-18 씨드 서열에 의해 설명될 수 있는) 더 높은 용량에서 강한 교차-반응성을 예상외로 보여주었다 (도 1).
따라서, 항-miR-17 화합물로 치료는, 항-miR-17과 microRNA 서열 사이 존재하는 미스매치가 있는 경우조차, miR-17 패밀리의 모든 구성원을 억제시킨다.
실시예 4: 인간 ADPKD 낭포에서 miR-17 억제
miR-17 억제의 효과는 인간 ADPKD 낭포로부터 유래된 1차 배지에서 연구되었다. 냉동된 인간 1차 ADPKD 세포는 캔자스 대학 의료 센타 (KUMC)에서 PKD 연구 생체적합물질 및 세포 모델 코어에 의해 제공되었다. 인간 1차 ADPKD 세포는, 이전에 기재된 바와 같이, 5% FBS, 5 ug/ml 인슐린, 5 ug/ml 트랜스페린 및 5 ng/ml 나트륨 셀레나이트 (ITS) (Lonza)로 보충된 DMEM:F12 배지 (Gibco)에서 성장되었다 (Yamaguchi 등, Am J Physiol Renal Physiol, 2010, 299:F944-951).
증식 검정
80% 밀집도에서, 인간 ADPKD 세포는 Ca+2내 트립신 및 Mg+2 자유 PBS의 1:10 희석을 이용하여 트립신화되었다. 세포는 96-웰 플레이트에서 2500 세포/웰의 밀도로 제조자의 프로토콜에 따라 RNAiMAX (Life Technologies)로 형질감염되었다. 치료는 아래와 같았다:
● 항-miR-17 (3 nM, 10nM, 또는 30 nM의 용량으로; 각각의 치료에 대하여 n=5)
● 대조군 올리고뉴클레오타이드 (표 3에서 지시된 용량으로; 각각의 치료에 대하여 n=5). 대조군 치료를 다양화하기 위해, 2 상이한 대조군 그룹은 사용되었다. 공여체 1-4로부터 유래된 배양액에 대하여, 3 또는 5 대조군 올리고뉴클레오타이드는, 각각30 nM의 단일 용량에서, 시험되었다. 공여체 5로부터 유래된 세포에 대하여, 단일 대조군 올리고뉴클레오타이드는 3 상이한 용량에서 시험되었다.
● RNAiMAX (n=5)로 모의-형질감염
● PBS (n=5)
세포 생존력은 제조자의 프로토콜에 따라 3일째에 MTT 검정 (Promega)을 이용하여 측정되었다. 결과는 표 2에서 제공된다. 각각의 항-miR-17 치료 그룹 또는 대조군 올리고뉴클레오타이드 치료 그룹에 대한 평균은 모의 치료 그룹에 대한 평균으로 정규화된다. 평균의 표준 오차는 제공된다. 통계적인 분석은 쌍별 비교용 스튜던트 t-시험 또는 변동의 분석 (ANOVA) 그 다음 다중 비교용 터키 사후 검증을 이용하여 수행되었다. P 값은 아래와 같다: *는 P<0.05를 표시하고, **는 P<0.01을 표시하고, ***는 P<0.005를 표시하고, ****는 P<0.001을 표시한다. 항-miR-17 치료에 대하여, P-값은 모의 치료에 비하여 유의성을 표시한다. 대조군 올리고뉴클레오타이드 치료에 대하여, 2 상이한 P-값, 모의 치료에 비하여 유의성을 표시하는 것 (표 2에서 P-값 1) 그리고 항-miR-17 30 nM 치료에 비하여 유의성을 표시하는 다른 것 (표 2에서 P-값 2)는 제공된다. N.t.는 시험되지 않음을 표시한다.
항-miR-17로 치료는, 모의 형질감염 치료에 비하여, 낭포 상피의 증식에서 용량-의존적 감소를 생산하였다. 항-miR-17로 치료와 달리, 다수의 대조군 올리고뉴클레오타이드 치료는 통계적으로 상당한 양만큼 증식을 일관되게 감소시키지 않았다.
예로서, 30 nM 항-miR-17로 공여체 1로부터 낭포 상피성 배양액의 치료는, 모의 형질감염에 비하여, 47%만큼 세포 증식을 감소시켰고 (P < 0.0001), 반면에 대조군 올리고뉴클레오타이드로 치료는 통계적으로 상당한 양만큼 세포 증식을 감소시키지 않았다. 또한, 동일한 공여체로부터 낭포 상피성 배양액에 대하여, 항-miR-17 30 nM 치료 대 각각의 3 대조군 치료의 비교는 또한 항-miR-17 치료에 의한 세포 증식에서 통계적으로 상당한 감소를 드러낸다 (P < 0.0001).
Figure pct00004
시험관내 낭포 형성
인간 1차 ADPKD 세포는 80% 밀집도로 성장되었고 Ca+2내 트립신 및 Mg+2 자유 PBS의 1:10 희석을 이용하여 트립신화되었다. 1일째에, 세포는 6-웰 플레이트 포멧으로 RNAiMAX를 이용하여 형질감염되었다. 치료 그룹은 아래와 같았다:
● 1 nM, 5 nM, 또는 20 nM의 용량으로 항-miR-17 (각각의 용량에 대하여 n=3)
● 20 nM의 각각 용량으로, 5 대조군 올리고뉴클레오타이드 (각각의 대조군 올리고뉴클레오타이드에 대하여 n=3)
● RNAiMAX (n=3)으로 모의-형질감염
● PBS
형질감염후 24 시간에, 세포는 단일 세포 현탁액으로 트립신화되었고, 카운트되었고 4:5 비로 130 μl의 배지 플러스 매트리겔에서 4000 세포/웰 밀도로 96-웰 플레이트에서 플레이팅되었다. 매트리겔 고형화시, 완전한 성장 배지는 웰에 첨가되었다. 배지는 낭포 크기 및 수가 측정된 경우 8 일 후-플레이팅까지 매 72 시간 보충되었다.
각각의 웰은 Olympus D8 광학 현미경을 이용하여 낭포 증식에 대하여 점검되었다. 이미지는 72 dpi로 2448x1920 픽셀의 28개 24-비트 컬러 TIFF 이미지로서 (z-축에서) 웰 밑으로, 150 μm 이격해서, 28 초점면으로부터 Olympus DP26 카메라 (Olympus Corporation)로 기록되었다. 각각의 웰로부터 각각의 초점면의 이미지는 하기를 이용하여 가공되었다: 커스텀 R 스크립트 (R Core Team 2015 R:A language and environment for statistical computing.R Foundation for Statistical Computing, Vienna, Austria,found at www.R-project.org.) (EBImage Bioconductor package 15를 사용함). 상기 스크립트는 자동화된 및 재생가능한 방식으로 낭포를 검출하였고 모든 공여체에서 모든 매트리겔 검정에 적용되었다. 간단히, 각각의 이미지는 인공물에 대하여 마스킹되었고, 고역 라플라시안 필터를 통해 여과되었고, 적응성 역치로 분절되었다. 분절된 이미지에서 검출된 목적은 픽셀 팽창, 홀-충전, 및 픽셀 침식에 의해 추가로 가공되었다. 각각의 분절된 객체에서 크기, 반경 및 이심성 통계는 수집되었다. 이들이 15 픽셀 이하의 평균 반경을 가졌다면, 또는 200 픽셀 초과 평균 객체 반경, 또는 0.2 초과의 반경의 변동 계수이었다면, 또는 검출된 객체의 이심성이 0.75 초과이었다면, 객체는 여과 제거되었다. 낭포가 초점면 사이 거리보다 종종 더 컸기 때문에, 1회 초과 상기 낭포 카운팅은 회피되었다. 하나의 이미지에서 낭포 객체가 인접하는 이미지 동일한 x- 및 y-좌표 내에 (예를 들면, z-축에서 하나의 초점면 위에) 해당하면, 이것은 동일한 낭포로서 카운팅되었다. 각각의 웰에서 모든 이미지는 z-축에서 이런 식으로 순차적으로 가공되었다. 마지막으로, 각각의 낭포의 용적은 4/3πr3 곱하기 최대 객체의 평균 반경에 의해 추정되었고, 각각의 낭포 추정은 구형체이다.
결과는 표 3에서 제공된다. 각각의 항-miR-17 치료 그룹 또는 대조군 올리고뉴클레오타이드 치료 그룹에 대한 평균은 모의 치료 그룹에 대한 평균으로 정규화된다. 평균의 표준 오차는 제공된다. 통계적인 분석은 쌍별 비교용 스튜던트 t-시험 또는 변동의 분석 (ANOVA) 그 다음 다중 비교용 터키 사후 검증을 이용하여 수행되었다. P 값은 아래와 같다: *는 P<0.05를 표시하고, **는 P<0.01을 표시하고, ***는 P<0.005를 표시하고, ****는 P<0.001을 표시한다. 항-miR-17 치료에 대하여, P-값은 모의 치료에 비하여 유의성을 표시한다. 대조군 올리고뉴클레오타이드 치료에 대하여, 2 상이한 P-값, 모의 치료에 비하여 유의성을 표시하는 것 (표 3에서 P-값 1) 그리고 항-miR-17 30 nM 치료에 비하여 유의성을 표시하는 다른 것 (표 3에서 P-값 2)는 제공된다.
항-miR-17로 치료는, 모의 형질감염 치료에 비하여, 낭포 카운트에서 용량-의존적 감소를 생산하였다. 항-miR-17로 치료와 달리, 다수의 대조군 올리고뉴클레오타이드 치료는 통계적으로 상당한 양만큼 낭포 카운트를 일관되게 감소시키지 않았다.
예로서, 30 nM 항-miR-17로 공여체 3으로부터 낭포 상피성 배양액의 치료는, 모의 형질감염에 비하여, 63%만큼 세포 증식을 감소시켰고 (P < 0.0001), 반면에 대조군 올리고뉴클레오타이드로 치료는 통계적으로 상당한 양만큼 낭포 카운트를 일관되게 감소시키지 않았다. 또한, 동일한 공여체로부터 낭포 카운트에 대하여, 항-miR-17 30 nM 치료 대 각각의 3 대조군 치료의 비교는 또한 항-miR-17 치료에 의해 세포 증식에서 통계적으로 상당한 감소를 드러낸다 (P < 0.0001).
Figure pct00005
이들 데이터는 항-miR-17로 치료가 인간 ADPKD 환자로부터 유래된 낭포의 증식을 억제시킨다는 것을 입증한다.
실시예 5: PKD의 Pcy 모델에서 항-miR-17
Nphp3에서 돌연변이를 갖는 Pcy 마우스는, Pkhd1/cre;Pkd2 F/F 마우스에서 관측된 것보다 질환의 더 둔화된 진행으로, 다낭포성 신장 질환을 자발적으로 발생시킨다. Pcy 모델은 인간 PKD의 모델, 뿐만 아니라 콩팥황폐증/수질 낭성 신장 질환 (NPH/MCD) 복합체의 _모델로서 사용된다. miR-17에 상보성인 변형된 올리고뉴클레오타이드 (항-miR-17 화합물)은 Pcy 마우스 모델에서 시험되었다. 야생형 마우스는 대조군 마우스로서 사용되었다. miR-17에 관련없는 miRNA에 상보성인 올리고뉴클레오타이드는 특이성에 대한 치료 대조군 (항-miR-대조군)으로서 사용되었다. 항-miR-17 화합물은 하기이다: 19 연결된 뉴클레오사이드 길이의 완전히 포스포로티오에이트화된 올리고뉴클레오타이드 (5’-CTGCACTGTAAGCACTTTG-3’; 서열 식별 번호:15), DNA, 2’-MOE 및 S-cEt 당 모이어티를 가짐.
Pcy 마우스 (CD1-pcylusm)는 PreClinOmic으로부터 수득되었다. 4주령부터, Pcy 마우스는, 총 26 용량으로, 주당 1회 항-miR-17 (피하 주사를 통해 50 mg/kg) 또는 PBS로 치료되었다. 항-miR-17 그룹은 12 마우스를 함유하였고, PBS 대조군 그룹은 11 마우스를 함유하였다.
추가의 대조군 그룹은, Charles River Laboratories로부터 수득된, 연령-매치된 CD1 마우스를 포함하였다. CD1 마우스는, 총 26 주 동안, 주당 1회 PBS로 피하로 주사되었다.
26 주 치료 기간의 마지막에, 마우스는 희생되었고, 하나의 신장이 추출 및 계량되었고 다른 것은 조직학적 분석을 위하여 가공되었다. 혈액 요소 질소 (BUN) 및 혈청 크레아티닌은 측정되었다.
조직학적 분석을 위하여, 하나의 신장은 차가운 PBS 및 4% (wt/vol) 파라포름알데하이드로 살포되었고 그 다음 수확되었다. 신장은 2 시간 동안 4% 파라포름알데하이드로 고정되었고 그 다음, 부문화를 위하여 파라핀에 포매되었다. 신장의 시상 부문은 헤마톡실린 및 에오신 (H&E)으로 염색되었다. 모든 이미지 처리 단계는 자동화되었고 자유롭게 이용가능한 및 오픈 소스 소프트웨어에서 발생되었다: 사용하였던 R1 스크립트는 이미지 처리 도구의 EBImage Bioconductor package2 및 ImageMagick3 세트로부터 기능한다. Aperio SVS 포멧으로 신장 H&E 이미지는 TIFF 이미지로 전환되었고, 제1 프레임은 이미지 분석을 위하여 유지되었다. 먼저, 총 신장 부문 면적은 이미지 분절화를 이용하여 계산되었다. 이미지 분절화는 신장 낭포를 포함하는 모든 내부 구조를 찾는데 유사하게 사용되었다. 필터는 3 픽셀의 평균 반경 미만의 모든 객체를 제거하는데 적용되었다. 낭포성 지수는 총 신장 면적에 의해 분할된 낭포와 관련된 이미지 영역이다. 낭포성 지수는 각각의 개별 동물용 종방향 및 횡행 신장 부문에 대하여 개별적으로 계산되었다. 개별 동물의 조합된 낭포성 지수는 각각의 치료 그룹에 대하여 비교되었다.
PBS-치료된 CD1 마우스로부터 결과는 비-질환 모델에서 각각의 파라미터 (신장 중량/바디 중량 비, 낭포성 지수, 혈액 요소 질소 및 혈청 크레아티닌)에 기준점을 제공하는데 사용되었다. 기대된 대로, 치료된 CD1 마우스는 PKD와 관련된 임의의 병리학을 나타내지 않았다.
항-miR-17로 치료된 Pcy 마우스에서 신장 중량 대 바디 중량의 평균 비는 PBS 단독 투여된 Pcy 마우스에서 신장 중량 대 바디 중량의 평균 비보다 19% 낮았다 (p = 0.0003) (도 2A). 항-miR-17로 치료된 Pcy 마우스는 PBS 단독 투여된 Pcy 마우스에 비교된 낭포 지수에서 평균 28% 감소를 제공하였다 (p = 0.008) (도 2B). BUN 또는 혈청 크레아티닌에서 유의미한 변화는 관측되지 않았다. 던넷 다중 비교 정정 이후 일방 ANOVA 분석의 P-값은 제공된다.
이들 데이터는, PKD의 추가의 모델에서, 항-miR-17로 치료가 신장 중량 및 낭포 지수의 감소로 이어진다는 것을 입증한다.
<110> REGULUS THERAPEUTICS INC. 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a T and a U <400> 5 agcactttg 9 <210> 6 <211> 10 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified oligonucleotide <220> <221> misc_feature <222> (1)..(10) <223> T is independently selected from a T and a U <400> 6 aagcactttg 10 <210> 7 <211> 11 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified oligonucleotide <220> <221> misc_feature <222> (1)..(11) <223> T is independently selected from a T and a U <400> 7 taagcacttt g 11 <210> 8 <211> 12 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified oligonucleotide <220> <221> misc_feature <222> (1)..(12) <223> T is independently selected from a T and a U <400> 8 gtaagcactt tg 12 <210> 9 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified oligonucleotide <220> <221> misc_feature <222> (1)..(13) <223> T is independently selected from a T and a U <400> 9 tgtaagcact ttg 13 <210> 10 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified oligonucleotide <220> <221> misc_feature <222> (1)..(14) <223> T is independently selected from a T and a U <400> 10 ctgtaagcac tttg 14 <210> 11 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified oligonucleotide <220> <221> misc_feature <222> (1)..(15) <223> T is independently selected from a T and a U <400> 11 actgtaagca ctttg 15 <210> 12 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified oligonucleotide <220> <221> misc_feature <222> (1)..(16) <223> T is independently selected from a T and a U <400> 12 cactgtaagc actttg 16 <210> 13 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified oligonucleotide <220> <221> misc_feature <222> (1)..(17) <223> T is independently selected from a T and a U <400> 13 gcactgtaag cactttg 17 <210> 14 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified oligonucleotide <220> <221> misc_feature <222> (1)..(18) <223> T is independently selected from a T and a U <400> 14 tgcactgtaa gcactttg 18 <210> 15 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified oligonucleotide <220> <221> misc_feature <222> (1)..(19) <223> T is independently selected from a T and a U <400> 15 ctgcactgta agcactttg 19 <210> 16 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified oligonucleotide <220> <221> misc_feature <222> (1)..(20) <223> T is independently selected from a T and a U <400> 16 cctgcactgt aagcactttg 20 <210> 17 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified oligonucleotide <220> <221> misc_feature <222> (1)..(21) <223> T is independently selected from a T and a U <400> 17 acctgcactg taagcacttt g 21 <210> 18 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified oligonucleotide <220> <221> misc_feature <222> (1)..(22) <223> T is independently selected from a T and a U <400> 18 cacctgcact gtaagcactt tg 22 <210> 19 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified oligonucleotide <220> <221> misc_feature <222> (1)..(23) <223> T is independently selected from a T and a U <400> 19 ctacctgcac 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<213> Homo sapiens <400> 32 aauugcacgg uauccaucug ua 22

Claims (45)

  1. 8 내지 25개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성되는 변형된 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 화합물을 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 다낭포성 신장 질환의 치료 방법으로서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드의 상기 핵염기 서열이 miR-17에 상보성인, 방법.
  2. 청구항 1에 있어서, 상기 대상체가 다낭포성 신장 질환을 갖는, 방법.
  3. 청구항 1에 있어서, 상기 대상체가 다낭포성 신장 질환을 갖는 것으로 의심되는, 방법.
  4. 청구항 1에 있어서 상기 대상체가 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드 투여에 앞서 다낭포성 신장 질환을 갖는 것으로 서 진단되어 있는, 방법.
  5. 청구항 1에 있어서 상기 대상체가, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드의 투여에 앞서, 상기 대상체의 상기 신장, 소변 또는 혈액에서 miR-17의 증가된 수준을 갖는 것으로 결정되었던, 방법.
  6. 청구항 1 내지 5 중 어느 한 항에 있어서, 상기 다낭포성 신장 질환이 상염색체 열성 다낭포성 신장 질환 또는 상염색체 우성 다낭포성 신장 질환인, 방법.
  7. 청구항 1 내지 6 중 어느 한 항에 있어서, 상기 다낭포성 신장 질환이 상염색체 우성 다낭포성 신장 질환인, 방법.
  8. 청구항 1 내지 7 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체가 상기 PKD1 유전자에서 돌연변이 또는 상기 PKD2 유전자에서 돌연변이로부터 선택되는 돌연변이를 갖는, 방법.
  9. 청구항 1 내지 8 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체가 증가된 총 신장 용적을 갖는, 방법.
  10. 청구항 1 내지 9 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체가 고혈압을 갖는, 방법.
  11. 청구항 1 내지 10 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체가 손상된 신장 기능을 갖는, 방법.
  12. 청구항 1 내지 11 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체가 개선된 신장 기능을 필요로 하는, 방법.
  13. 청구항 1 내지 13 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투여가 하기인, 방법:
    a) 상기 대상체에서 신장 기능 개선;
    b) 상기 대상체에서 신장 기능의 악화 지연;
    c) 상기 대상체에서 총 신장 용적 감소;
    d) 상기 대상체에서 총 신장 용적의 증가 둔화;
    e) 상기 대상체에서 낭포 성장 억제;
    f) 상기 대상체에서 낭포 성장의 증가 둔화;
    g) 상기 대상체에서 신장 통증 감소;
    h) 상기 대상체에서 신장 통증의 증가 둔화;
    i) 상기 대상체에서 신장 통증의 개시 지연;
    j) 상기 대상체에서 고혈압 감소;
    k) 상기 대상체에서 고혈압의 악화 둔화;
    l) 상기 대상체에서 고혈압의 개시 지연;
    m) 상기 대상체의 상기 신장에서 섬유증 감소;
    n) 상기 대상체의 상기 신장에서 섬유증의 악화 둔화;
    o) 상기 대상체에서 말기 신장 질환의 개시 지연;
    p) 상기 대상체에 대한 투석 시간 지연;
    q) 상기 대상체에 대한 신장 이식 시간 지연; 및/또는
    r) 상기 대상체의 기대 수명 개선.
  14. 청구항 1 내지 13 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투여가 하기인, 방법:
    a) 상기 대상체에서 단백뇨 감소;
    b) 상기 대상체에서 단백뇨의 악화 둔화;
    c) 상기 대상체에서 단백뇨의 개시 지연;
    d) 상기 대상체에서 혈뇨 감소;
    e) 상기 대상체에서 혈뇨의 악화 둔화;
    f) 상기 대상체에서 혈뇨의 개시 지연;
    g) 상기 대상체에서 혈액 요소 질소 감소;
    h) 상기 대상체의 상기 혈액에서 크레아티닌 감소;
    i) 상기 대상체에서 크레아티닌 청소율 개선;
    j) 상기 대상체에서 알부민:크레아티닌 비 감소;
    k) 상기 대상체에서 사구체 여과율 개선;
    l) 상기 대상체에서 사구체 여과율의 악화 둔화;
    m) 상기 대상체의 상기 소변에서 호중구 젤라티나제 관련 리포칼린 (NGAL) 단백질 감소; 및/또는
    n) 상기 대상체의 상기 소변에서 신장 손상 분자-1 (KIM-1) 단백질 감소.
  15. 청구항 1 내지 14 중 어느 한 항에 있어서, 하기를 포함하는, 방법:
    a) 상기 대상체에서 총 신장 용적 측정;
    b) 상기 대상체에서 고혈압 측정;
    c) 상기 대상체에서 신장 통증 측정;
    d) 상기 대상체의 상기 신장에서 섬유증 측정;
    e) 상기 대상체의 상기 혈액에서 혈액 요소 질소 측정;
    f) 상기 대상체의 상기 혈액에서 크레아티닌 측정;
    g) 상기 대상체에서 크레아티닌 청소율 측정;
    h) 상기 대상체에서 단백뇨 측정;
    i) 상기 대상체에서 알부민:크레아티닌 비 측정;
    j) 상기 대상체에서 사구체 여과율 측정;
    k) 상기 대상체의 상기 소변에서 호중구 젤라티나제 관련 리포칼린 (NGAL) 단백질 측정; 및/또는
    l) 상기 대상체의 상기 소변에서 신장 손상 분자-1 (KIM-1) 단백질 측정.
  16. 청구항 9, 13, 및 15 중 어느 한 항에 있어서, 상기 총 신장 용적이 높이 조정된 신장 용적인, 방법.
  17. 청구항 13에 있어서, 상기 낭포가 상기 대상체에 있어서 하나 이상의 신장에서 존재하는, 방법.
  18. 청구항 13에 있어서, 상기 낭포가 상기 대상체의 상기 간에서 존재하는, 방법.
  19. 청구항 1 내지 18 중 어느 한 항에 있어서, 항-고혈압 제제인 적어도 하나의 추가의 요법 투여를 포함하는, 방법.
  20. 청구항 1 내지 19 중 어느 한 항에 있어서, 하기로부터 선택되는 적어도 하나의 추가의 요법 투여를 포함하는, 방법: 안지오텐신 II 전환 효소 (ACE) 억제제, 안지오텐신 II 수용체 차단제 (ARB), 이뇨제, 칼슘 채널 차단제, 키나아제 억제제, 아드레날린 수용체 길항제, 혈관확장제, 벤조디아제핀, 레닌 억제제, 알도스테론 수용체 길항제, 엔도텔린 수용체 차단제, 라파마이신 (mTOR) 억제제의 포유동물 표적, 호르몬 유사체, 바소프레신 수용체 2 길항제, 알도스테론 수용체 길항제, 투석, 및 신장 이식.
  21. 청구항 20에 있어서 상기 안지오텐신 II 전환 효소 (ACE) 억제제가 카프토프릴, 에날라프릴, 리시노프릴, 벤나제프릴, 퀴나프릴, 포시노프릴, 및 라미프릴로부터 선택되는, 방법.
  22. 청구항 20에 있어서 상기 안지오텐신 II 수용체 차단제 (ARB)가 칸데사르탄, 이르베사르탄, 올메사르탄, 로사르탄, 발사르탄, 텔미사르탄, 및 에프로사르탄으로부터 선택되는, 방법.
  23. 청구항 20에 있어서 상기 바소프레신 수용체 2 길항제가 톨밥탄인, 방법.
  24. 청구항 20에 있어서, 상기 알도스테론 수용체 길항제가 스피로노락톤인, 방법.
  25. 청구항 20에 있어서, 상기 키나아제 억제제가 보수티닙 및 KD019로부터 선택되는, 방법.
  26. 청구항 20에 있어서, 상기 mTOR 억제제가 에버롤리무스, 라파마이신, 및 시롤리무스로부터 선택되는, 방법.
  27. 청구항 20에 있어서, 상기 호르몬 유사체가 소마토스타틴 및 부신피질 자극 호르몬으로부터 선택되는, 방법.
  28. 청구항 1 내지 27 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드의 상기 핵염기 서열이 miR-17의 상기 핵염기 서열 (서열 식별 번호:1)에 적어도 90% 상보성, 적어도 95% 상보성, 또는 100% 상보성인, 방법.
  29. 청구항 1 내지 28 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드의 상기 핵염기 서열이 하기를 포함하는, 방법으로서: 상기 핵염기 서열 5’-GCACTTTG-3’ (서열 식별 번호:3), 상기 핵염기 서열에서 각각의 T가 T 및 U로부터 독립적으로 선택되는, 방법.
  30. 청구항 1 내지 29 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드가 8 내지 12개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성되는, 방법.
  31. 청구항 1 내지 29 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드가 12 내지 25개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성되는, 방법.
  32. 청구항 1 내지 29 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드가 15 내지 25개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성되는, 방법.
  33. 청구항 1 내지 29 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드가 17 내지 23개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성되는, 방법.
  34. 청구항 1 내지 29 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드가 8, 9, 10, 11 또는 12개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성되는, 방법.
  35. 청구항 1 내지 29 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드가 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 또는 25개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성되는, 방법.
  36. 청구항 1 내지 29 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드가 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 또는 22개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성되는, 방법.
  37. 청구항 1 내지 29 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드가 17, 18, 19, 20, 21, 22, 또는 23개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성되는, 방법.
  38. 청구항 1 내지 37 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드가 적어도 하나의 변형된 뉴클레오사이드를 포함하는, 방법.
  39. 청구항 38에 있어서, 상기 변형된 뉴클레오사이드가 S-cEt 뉴클레오사이드, 2’-O-메톡시에틸 뉴클레오사이드, 및 LNA 뉴클레오사이드로부터 선택되는, 방법.
  40. 청구항 1 내지 39 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드가 적어도 하나의 변형된 뉴클레오사이드간 연결을 포함하는, 방법.
  41. 청구항 1 내지 40 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드의 각각의 뉴클레오사이드간 연결이 변형된 뉴클레오사이드간 연결인, 방법.
  42. 청구항 40 또는 41에 있어서, 상기 변형된 뉴클레오사이드간 연결이 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 연결인, 방법.
  43. 청구항 1 내지 42 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물이 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드로 구성되는, 방법.
  44. 청구항 1 내지 43 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물의 치료적 유효량 투여를 포함하는, 방법.
  45. 8 내지 25개의 연결된 뉴클레오사이드로 구성되는 변형된 올리고뉴클레오타이드의 용도로서, 상기 변형된 올리고뉴클레오타이드의 상기 핵염기 서열이, 다낭포성 신장 질환의 치료를 위하여, miR-17에 상보성인, 용도.
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