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KR20170117450A - 암 치료를 위한 면역 요법 및 사이토카인 조절 요법의 조합 - Google Patents

암 치료를 위한 면역 요법 및 사이토카인 조절 요법의 조합 Download PDF

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KR20170117450A
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KR
South Korea
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cell
cells
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apoptotic
car
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KR1020177024561A
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샤이 노빅
드롤 메보라츠
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엔리벡스 테라퓨틱스 리미티드
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Abstract

본원에 개시되는 조성물, 그리고 이의 사용 방법은 CAR T-세포 요법을 받는 대상에서 사이토카인 방출 증후군 또는 사이토카인 폭풍의 발생을 억제 또는 감소시키기 위한 것을 포함하는데, 여기에서 대상은 세포사멸 세포 또는 세포사멸 세포 상등액을 포함하는 조성물이 투여된다. 특정 예에서 본원에 개시되는 조성물 및 이의 사용 방법은 CAR T-세포 암 요법의 효능을 감소시키지 않는다. 또한, 세포사멸 세포 또는 세포사멸 세포 상등액을 포함하는 조성물의 투여를 포함하는, 사이토카인 방출 증후군 또는 사이토카인 폭풍을 경험하는 대상에서 사이토카인 생산을 저하 또는 억제시키기 위한 조성물 및 이의 사용 방법이 본원에 개시된다.

Description

암 치료를 위한 면역 요법 및 사이토카인 조절 요법의 조합
CAR T-세포 암 요법을 받는 대상에서 사이토카인 방출 증후군(cytokine release syndrome, CRS) 또는 사이토카인 폭풍(cytokine storm)의 발생을 억제 또는 감소시키기 위한 조성물 및 이의 방법이 본원에 개시된다. 또한, 사이토카인 방출 증후군 또는 사이토카인 폭풍을 경험하는 대상에서 사이토카인 생산을 저하 또는 억제시키기 위한 조성물 및 이의 방법이 본원에 개시된다. 본원에 개시되는 방법은 CAR T-세포 요법과 조합하여, 세포사멸 세포 또는 세포사멸 세포 상등액을 포함하는 조성물의 투여를 포함하는 것을 포함한다.
암의 표준 치료법은 수술, 화학요법, 및 방사선 요법인 한편, 표적화된 면역 요법과 같은 개선된 방법이 현재 개발 및 시험 중이다. 한 가지 유망한 기법은 양자 세포 전이(adoptive cell transfer, ACT)를 사용하는데, 여기에서는 면역 세포가 이의 종양을 인식하고 공격하도록 변형된다. ACT의 일례는 환자 자신의 세포독성 T-세포, 또는 공여자의 것이 종양 세포의 표면에서 발현되는 종양 특이적 항원을 표적으로 하는 키메라 항원 수용체(CAR T-세포)를 발현하도록 조작되는 때이다. 그러면 이들 CAR T-세포는 종양 특이적 항원을 발현하는 세포에만 세포독성으로 된다. 임상 시험에서는 CAR T-세포 요법이, 다른 것들 중에서도 후기 급성 림프모구 백혈병(acute lymphoblastic leukemia, ALL) 및 림프종을 조절하는 데 큰 가능성이 있음을 보여주었다.
그러나, CAR T-세포 요법 및 다른 면역 요법을 받는 일부 환자는 사이토카인 방출 증후군(CRS)으로 불리는 위험하고 때때로 생명을 위협하는 부작용을 경험하는데, 여기에서는 주입된 활성화된 T-세포가 사이토카인의 신속하고 다량의 혈류로의 방출이 있는 전신적 면역 반응을 생성하여, 위험한 저혈압, 고열 및 오한을 유도한다.
중증 CRS의 경우, 환자는 사이토카인 폭풍(사이토카인 캐스케이드 또는 고사이토카인혈증으로도 알려진)을 경험하는데, 여기에서는 고도로 상승된 수준의 사이토카인과 함께 사이토카인과 백혈구 사이의 양성 피드백 루프가 존재한다. 이것은 심장 기능장애, 성인 호흡 장애 증후군, 신경 독성, 신 및/또는 간 부전, 폐부종 및 파종성 혈관내 응고를 포함하는 잠재적으로 생명을 위협하는 합병증을 유도할 수 있다.
예를 들어, 최근의 I 상 임상 시험에서 T-세포 상의 CD28 수용체에 결합하는 단클론 항체 TGN1412를 투여받은 6 인의 환자가 중증의 사이토카인 폭풍 및 다중-기관 부전을 나타냈다. 이것은 TGN1412 용량이 동물에서 안전한 것으로 밝혀진 것보다 500-배 더 낮았다는 사실에도 불구하고 일어났다(St. Clair EW: The calm after the cytokine storm: Lessons from the TGN1412 trial. J Clin Invest 118: 1344-1347, 2008).
지금까지는, 코르티코스테로이드, 항-IL6 요법과 같은 생물학적 요법 및 항-염증성 약물이 CAR T-세포 요법이 투여된 환자에서 사이토카인 방출 증후군을 조절하는 것으로 평가되고 있다. 그러나, 스테로이드는 CAR T-세포의 활성 및/또는 증식에 영향을 미칠 수 있고 환자를 패혈증 및 기회 감염의 위험에 빠트릴 수 있다. 항-염증성 약물은 사이토카인 방출 증후군 또는 사이토카인 폭풍을 조절하는 데 효과적이지 않을 수 있는데, 사이토카인 폭풍이 매우 많은 수의 사이토카인을 포함하는 한편 항-염증성 약물을 환자에 주입하는 능력에는 제한이 있기 때문이다. CAR T-세포 요법의 가능성을 실현하기 위해서는 사이토카인 방출 증후군, 및 특히 사이토카인 폭풍을 조절하기 위한 새로운 전략이 필요하다.
사이토카인 폭풍은 다른 감염성 및 비-감염성 자극 이후에도 문제가 된다. 사이토카인 폭풍에서는, 인터류킨-1(IL-1), IL-6, g-인터페론(g-IFN), 및 종양 괴사 인자-α(TNFα)와 같은 많은 전염증성 사이토카인이 방출되어, 저혈압, 출혈, 그리고 궁극적으로 다기관 부전을 야기한다. 1918 H1N1 인플루엔자 유행시, 그리고 보다 최근의 조류 독감 H5N1 감염시, 아마도 건강한 면역 시스템을 갖고 있을 젊은 사람에서의 비교적 높은 사망율은 사이토카인 폭풍에 기인한다. 이 증후군은 중증 급성 호흡기 증후군(severe acute respiratory syndrome, SARS), 엡스타인-바르(Epstein-Barr) 바이러스-관련 혈구포식성 림프조직구증식증, 그람-음성 패혈증, 말라리아 및 에볼라(Ebola) 감염을 포함하는 많은 다른 감염성 질환의 후기 또는 말기의 경우에도 일어나는 것으로 알려져 있다.
사이토카인 폭풍은 또한 급성 췌장염, 중증 화상 또는 외상, 또는 급성 호흡 장애 증후군과 같은 비-감염성 원인으로부터 유발될 수 있다. 따라서, 사이토카인 방출 증후군, 그리고 특히 사이토카인 폭풍을 조절하기 위해서는 새로운 전략이 요구된다.
일 양태에서는, 키메라 항원 수용체-발현 T-세포(CAR T-세포), 및 세포사멸 세포 또는 세포사멸 세포 상등액의 어느 하나, 및 약제학적으로 허용 가능한 부형제를 포함하는 조성물이 본원에 개시된다. 관련된 양태에서, 세포사멸 세포는 초기 세포사멸 상태의 세포사멸 세포를 포함한다. 다른 관련된 양태에서, 세포사멸 세포는 혼합된 제3자 공여 세포를 포함한다. 관련된 양태에서, 세포사멸 세포 상등액은 (a) 세포사멸 세포를 제공하고, (b) 단계 (a)의 세포를 배양하고, 그리고 (c) 세포로부터 상등액을 분리하는 단계를 포함하는 방법에 의해 수득된다. 관련된 양태에서, 세포사멸 세포 상등액은 세포사멸 세포-백혈구 상등액이고 상기 수득은 다음 단계를 추가로 포함한다: (d) 백혈구를 제공하고, (e) 선택적으로, 세포사멸 세포 및 백혈구를 세척하고, (f) 세포사멸 세포 및 백혈구를 공동-배양하는데, 여기에서 단계 (d)-(f)는 단계 (b)를 대신한다. 다른 관련된 양태에서, 제공되는 백혈구는 포식세포, 대식세포, 수지상 세포, 단핵구, B 세포, T 세포, 및 NK 세포로 구성되는 그룹으로부터 선택된다.
관련된 양태에서, CAR T-세포 및 세포사멸 세포 또는 세포사멸 세포 상등액의 어느 하나는 별개의 조성물에 포함된다.
관련된 양태에서, 조성물은 CTLA-4 차단제, 알파-1 항-트립신 또는 이의 단편 또는 이의 유사체, 텔루륨-기반 화합물, 또는 면역 조절제를 포함하는 그룹으로부터 선택되는 부가적 물질, 또는 이의 임의의 조합을 추가로 포함한다. 다른 관련된 양태에서, 부가적 물질 또는 이의 임의의 조합은 CAR T-세포와 함께, 또는 세포사멸 세포 또는 세포사멸 세포 상등액의 어느 하나와 함께 조성물에 포함되거나, 또는 다른 관련된 양태에서는 별개의 조성물에 포함된다.
일 양태에서는, 세포사멸 세포 또는 세포사멸 세포 상등액을 포함하는 조성물을 상기 대상에 투여하는 단계를 포함하는, 키메라 항원 수용체-발현 T-세포(CAR T-세포) 암 요법을 받는 대상에서 사이토카인 방출 증후군(CRS) 또는 사이토카인 폭풍의 발생을 억제 또는 감소시키는 방법이 본원에 개시되는데, 여기에서 상기 투여는 대상에서 CRS 또는 사이토카인 폭풍의 발생을 억제 또는 감소시킨다. 관련된 양태에서, 세포사멸 세포는 초기-세포사멸 상태의 세포사멸 세포를 포함한다. 다른 관련된 양태에서, 세포사멸 세포는 대상에 대하여 자가이거나, 또는 혼합된 제3자 공여 세포이다. 다른 관련된 양태에서, 상기 세포사멸 세포 또는 상기 세포사멸 세포 상등액을 포함하는 상기 조성물의 투여는 CAR T-세포 요법 이전, 이와 동시, 또는 이후에 일어난다. 다른 관련된 양태에서, 세포사멸 세포 상등액은 다음 단계를 포함하는 방법에 의해 수득된다: (a) 세포사멸 세포를 제공하고, (b) 단계 (a)의 세포를 배양하고, 그리고 (c) 세포로부터 상등액을 분리하는 단계. 다른 관련된 양태에서, 상기 세포사멸 세포 상등액은 세포사멸 세포-백혈구 상등액이고 상기 방법은 다음 단계를 추가로 포함한다: (d) 백혈구를 제공하고, (e) 선택적으로, 세포사멸 세포 및 백혈구를 세척하고, (f) 세포사멸 세포 및 백혈구를 공동-배양하는데, 여기에서 단계 (d)-(f)는 단계 (b)를 대신한다. 다른 관련된 양태에서, 제공되는 백혈구는 포식세포, 대식세포, 수지상 세포, 단핵구, B 세포, T 세포, 및 NK 세포로 구성되는 그룹으로부터 선택된다.
다른 관련된 양태에서, 본 방법은 CTLA-4 차단제, 알파-1 항-트립신 또는 이의 단편 또는 이의 유사체, 텔루륨-기반 화합물, 또는 면역 조절제를 포함하는 그룹으로부터 선택되는 부가적 물질, 또는 이의 임의의 조합을 투여하는 것을 추가로 포함한다. 다른 관련된 양태에서, 상기 부가적 물질의 투여는 CAR T-세포 요법 이전, 이와 동시, 또는 이후에 일어난다. 다른 관련된 양태에서, 대상에서 전-염증성 사이토카인의 수준은, CAR T-세포 암 요법을 받고 상기 세포사멸 세포 또는 상기 세포사멸 세포 상등액을 투여받지 않은 대상과 비교하여 감소된다.
일 양태에서는, 세포사멸 세포 또는 세포사멸 세포 상등액을 포함하는 조성물을 대상에 투여하는 단계를 포함하는, 사이토카인 방출 증후군 또는 사이토카인 폭풍을 경험하거나 사이토카인 방출 증후군 또는 사이토카인 폭풍에 취약한 대상에서 사이토카인 생산을 저하 또는 억제시키는 방법이 본원에 개시되는데, 여기에서 상기 투여는 상기 대상에서 사이토카인 생산을 저하 또는 억제시킨다. 관련된 양태에서는, 상기 대상에서 적어도 하나의 전-염증성 사이토카인의 생산은, 사이토카인 방출 증후군 또는 사이토카인 폭풍을 경험하거나 사이토카인 방출 증후군 또는 사이토카인 폭풍에 취약하고 세포사멸 세포 또는 세포사멸 세포 상등액을 투여받지 않은 대상과 비교하여 저하 또는 억제된다. 다른 관련된 양태에서, 대상은 CAR T-세포 암 요법을 받는 중이고, 상기 방법은 상기 CAR T-세포 암 요법의 효능을 감소시키지 않는다.
관련된 양태에서는, 상기 사이토카인 방출 증후군 또는 사이토카인 폭풍의 원인이 감염성 자극, 병태, 또는 증후군을 포함하는 것이 본원에 개시된다. 다른 관련된 양태에서, 감염성 자극, 병태 또는 증후군은 인플루엔자, 조류 독감, 중증 급성 호흡기 증후군(SARS), 엡스타인-바르(Epstein-Barr) 바이러스-관련 혈구포식성 림프조직구증식증(HLH), 패혈증, 그람-음성 패혈증, 말라리아, 에볼라(Ebola) 바이러스, 천연두 바이러스, 전신적 그람-음성 박테리아 감염, 또는 야리쉬-헤륵스하이머 증후군(Jarisch-Herxheimer syndrome)을 포함한다.
관련된 양태에서, 상기 사이토카인 방출 증후군 또는 사이토카인 폭풍의 원인은 비-감염성 자극, 병태, 또는 증후군을 포함한다. 다른 관련된 양태에서, 비-감염성 자극, 병태, 또는 증후군은 혈구포식성 림프조직구증식증(HLH), 산발성 HLH, 대식세포 활성화 증후군(MAS), 만성 관절염, 전신적 소아 특발성 관절염(systemic Juvenile Idiopathic Arthritis, sJIA), 스틸병(Still's Disease), 크리오피린-관련 주기성 증후군(Cryopyrin-associated Periodic Syndrome, CAPS), 가족성 한냉 자가-염증성 증후군(Familial Cold Auto-inflammatory Syndrome, FCAS), 가족성 한냉 두드러기(Familial Cold Urticaria, FCU), 머클-웰 증후군(Muckle-Well Syndrome, MWS), 만성 영아 신경 피부 관절(Chronic Infantile Neurological Cutaneous and Articular, CINCA) 증후군, NLRP3 유전자에서 기능적 돌연변이의 유전적 또는 신규 획득을 포함하는 크리오피린증(cryopyrinopathy), 유전적 자가-염증성 장애, 급성 췌장염, 중증 화상, 외상, 급성 호흡 장애 증후군, 면역요법, 단클론 항체 요법, 약물 사용에 따른 것, 즉 독소의 흡입에 따른 것, 리포폴리사카라이드(LPS), 그람-양성 독소, 진균 독소, 글리코실포스파티딜이노시톨(GPI), 또는 RIG-1 유전자 발현의 조절이다.
본원에 개시되는 주제는 명세서의 결론 부분에서 특별히 지적되고 명백하게 청구된다. 그러나, 본원에 개시되는 조성물 및 방법은 둘 다 작동 방법 및 구성에 있어서, 이의 목적, 특징 및 이점과 함께 다음의 상세한 설명을 참고하여 첨부된 도면과 함께 읽을 때 가장 잘 이해될 수 있을 것이다.
도 1a-1b. 표준 CAR T-세포 요법을 보여주는 모식도(도 1a) 및 세포사멸 세포 또는 세포사멸 세포 상등액을 생산하기 위해 환자 자신의 세포(자가)를 이용한, 환자에서 안전하고 효과적인 CAR T-세포 암 요법의 방법의 구현예(도 1b).
도 2. 세포사멸 세포 또는 세포사멸 상등액을 생산하기 위해 공여 세포를 이용한, 환자에서 안전하고 효과적인 CAR T-세포 암 요법의 방법의 구현예를 보여주 는 모식도.
도 3. 형질도입된 T4+ CAR-T 세포의 항-CD124 분석의 유동 세포분석 결과를 보여주는 T-세포의 형질도입의 입증.
도 4. T4 + CAR T-세포는 SKOV3 -luc 난소 선암 세포의 증식을 감소시켰다. SKOV3-luc 세포의 단층이 비-형질도입된 T 세포에 의하거나, 또는 T4+ CAR-T 세포에 의해 배양되는 세포독성 분석의 결과는 막대그래프로 나타낸다.
도 5. 세포사멸 세포는 T4 + CAR-T 세포 항-종양 활성을 없애지 않는다. 결과는 세포독성 분석을 기반으로 하는데, 여기에서 SKOV3-luc 세포의 단층은 비-형질도입된 T 세포와 함께, 또는 T4+ CAR-T 세포와 함께 비히클(하트만 용액), 또는 세포사멸 세포(Apocell), 또는 세포사멸 세포의 상등액(ApoSup), 또는 세포사멸 세포 및 단핵구/대식세포의 공동-배양의 상등액(ApoMon Sup)의 존재 중에 배양되었다.
도 6. 세포독성 중 높은 수준으로 분비된 Il -6은 세포사멸 세포에 의해 하향-조절된다. 여기에서 보여주는 결과는 세포사멸 세포(ApoCell), 또는 ApoCell 상등액(ApoSup), 또는 세포사멸 세포 및 단핵구/대식세포 공동-배양(ApoMon Sup)에 노출된 SKOV3-luc 및 인간 단핵구/대식세포의 공동-배양의 효과를 보여준다.
도 7. CAR-T 세포 요법 중 세포사멸 세포 또는 세포사멸 세포 상등액 또는 세포사멸 세포 및 단핵구의 공동-배양에 이어서 LPS 노출의 효과. 극히 높은 IL-6의 분비는 리포폴리사카라이드(LPS)가 세포독성 분석에 첨가되었을 때 기록되었다. 결과는 세포사멸 세포(Apocell), 또는 세포사멸 세포의 상등액(ApoSup) 또는 세포사멸 세포 및 단핵구/대식세포의 공동-배양의 상등액(ApoMon Sup)에 대한 노출이 IL-6을 하향 조절시키는 것을 보여주는데, 여기에서 IL-6은 허용 가능한 수준까지 감소되었다.
예시의 단순성 및 명확성을 위해, 도면에서 보여주는 요소는 일정한 비율로 도시될 필요가 없음이 인정될 것이다. 예를 들어, 요소의 일부 치수는 명확성을 위해 다른 요소에 비해 과장될 수 있다. 또한, 적절하게 고려된다면 참조 번호는 상응하거나 유사한 요소를 나타내기 위해 도면 사이에 반복될 수 있다.
본 출원은 2015년 2월 18일자 출원된 미국 특허 가출원 번호 62/117,752; 2015년 3월 2일자 출원된 62/127,218, 2015년 4월 16일자 출원된 62/148,227; 및 2015년 5월 11일자 출원된 62/159,365의 이익을 주장한다. 이들 출원은 본원에 그 전체가 참조로 이에 도입된다.
다음의 상세한 설명에서, 수치를 특정한 세부 사항이 본원에 개시되는 방법의 완전한 이해를 제공하기 위해 제시된다. 그러나, 이들 방법은 이들 특정한 세부 사항 없이 실시될 수 있음이 해당 분야의 당업자에 의해 이해될 것이다. 다른 예에서, 잘 알려진 방법, 절차, 및 성분은 본원에 개시되는 방법을 모호하게 하지 않도록 구체적으로 기술되지 않는다.
면역 세포의 유전적 변형은 암에 대한 면역-세포 요법을 위한 전략으로서 잘 알려져 있다. 이들 면역-세포 요법은 필요로 하는 대상에 자가 또는 동종 면역 세포의 조작 및 투여를 기반으로 한다. 면역-세포 기반 요법은 자연 살해 세포 요법, 수지상 세포 요법, 그리고 미처리(naive) T-세포, T-헬퍼 세포로도 알려진 주효 T-세포, 세포독성 T-세포, 및 조절 T-세포(Treg)를 이용하는 것을 포함하는 T-세포 면역요법을 포함한다.
일 구현예에서는, 유전적으로 변형된 면역 세포를 포함하는 조성물이 본원에 개시된다. 다른 구현예에서, 유전적으로 변형된 면역 세포는 T-세포이다. 다른 구현예에서, T-세포는 미처리 T-세포이다. 다른 구현예에서, T-세포는 미처리 CD4+ T-세포이다. 다른 구현예에서, T-세포는 미처리 T-세포이다. 다른 구현예에서, T-세포는 미처리 CD8+ T-세포이다. 다른 구현예에서, 유전적으로 변형된 면역 세포는 자연 살해(natural killer, NK) 세포이다. 다른 구현예에서, 유전적으로 변형된 면역 세포는 수지상 세포이다. 또 다른 구현예에서, 유전적으로 변형된 T-세포는 세포독성 T 림프구(CTL 세포)이다. 다른 구현예에서, 유전적으로 변형된 T-세포는 조절 T-세포(Treg)이다. 다른 구현예에서, 유전적으로 변형된 T-세포는 키메라 항원 수용체(CAR) T-세포이다. 다른 구현예에서, 유전적으로 변형된 T-세포는 유전적으로 변형된 T-세포 수용체(TCR) 세포이다.
일 구현예에서는, 유전적으로 변형된 면역 세포 및 세포사멸 세포를 포함하는 조성물이 본원에 개시된다. 다른 구현예에서는, 유전적으로 변형된 면역 세포 및 세포사멸 세포로부터의 상등액을 포함하는 조성물이 본원에 개시된다. 다른 구현예에서, 유전적으로 변형된 면역 세포는 T-세포이다. 다른 구현예에서, 유전적으로 변형된 면역 세포는 자연 살해(NK) 세포이다. 또 다른 구현예에서, 유전적으로 변형된 면역 세포는 세포독성 T 림프구(CTL 세포)이다. 다른 구현예에서, 유전적으로 변형된 면역 세포는 조절 T 림프구(Treg 세포)이다.
일 구현예에서는, 유전적으로 변형된 T-세포 및 세포사멸 세포를 포함하는 조성물이 본원에 개시된다. 다른 구현예에서는, 유전적으로 변형된 T-세포 및 세포사멸 세포의 상등액을 포함하는 조성물이 본원에 개시된다. 다른 구현예에서, 유전적으로 변형된 T-세포는 키메라 항원 수용체(CAR) T-세포이다. 다른 구현예에서, 유전적으로 변형된 T-세포는 유전적으로 변형된 T-세포 수용체(TCR) 세포이다.
일 구현예에서는, CAR T-세포 및 세포사멸 세포를 포함하는 조성물이 본원에 개시된다. 다른 구현예에서는, 유전적으로 변형된 T-세포 수용체 세포(TCR) 및 세포사멸 세포를 포함하는 조성물이 본원에 개시된다. 다른 구현예에서는, CAR T-세포 및 세포사멸 세포로부터의 상등액를 포함하는 조성물이 본원에 개시된다. 다른 구현예에서는, 유전적으로 변형된 T-세포 수용체 세포(TCR) 및 세포사멸 세포의 상등액을 포함하는 조성물이 본원에 개시된다.
특정 구현예에서, 유전적으로 변형된 면역 세포 및 세포사멸 세포 또는 세포사멸 세포 상등액은 단일 조성물 내에 포함된다. 다른 구현예에서, 유전적으로 변형된 면역 세포 및 세포사멸 세포 또는 세포사멸 세포 상등액은 별개의 조성물에 포함된다.
일 구현예에서는, 유전적으로 변형된 면역 세포, 및 CTLA-4 차단제, 알파-1 항-트립신 또는 이의 단편 또는 이의 유사체, 텔루륨-기반 화합물, 또는 면역 조절제를 포함하는 그룹으로부터 선택되는 부가적 물질, 또는 이의 임의의 조합을 포함하는 조성물이 본원에 개시된다. 다른 구현예에서는, 유전적으로 변형된 면역 세포, 세포사멸 세포, 및 CTLA-4 차단제, 알파-1 항-트립신 또는 이의 단편 또는 이의 유사체, 텔루륨-기반 화합물, 또는 면역 조절제를 포함하는 그룹으로부터 선택되는 부가적 물질, 또는 이의 임의의 조합을 포함하는 조성물이 본원에 개시된다. 다른 구현예에서는, 유전적으로 변형된 면역 세포, 및 CTLA-4 차단제, 알파-1 항-트립신 또는 이의 단편 또는 이의 유사체, 텔루륨-기반 화합물, 또는 면역 조절제를 포함하는 그룹으로부터 선택되는 부가적 물질, 또는 이의 임의의 조합을 포함하는 조성물이 본원에 개시된다. 다른 구현예에서는, 유전적으로 변형된 면역 세포, 세포사멸 세포로부터의 상등액, 및 CTLA-4 차단제, 알파-1 항-트립신 또는 이의 단편 또는 이의 유사체, 텔루륨-기반 화합물, 또는 면역 조절제를 포함하는 그룹으로부터 선택되는 부가적 물질, 또는 이의 임의의 조합을 포함하는 조성물이 본원에 개시된다. 다른 구현예에서, 유전적으로 변형된 면역 세포는 T-세포이다. 다른 구현예에서, 유전적으로 변형된 면역 세포는 자연 살해(NK) 세포이다. 또 다른 구현예에서, 유전적으로 변형된 면역 세포는 세포독성 T 림프구(CTL 세포)이다.
일 구현예에서는, 유전적으로 변형된 T-세포, 및 CTLA-4 차단제, 알파-1 항-트립신 또는 이의 단편 또는 이의 유사체, 텔루륨-기반 화합물, 또는 면역 조절제를 포함하는 그룹으로부터 선택되는 부가적 물질, 또는 이의 임의의 조합을 포함하는 조성물이 본원에 개시된다. 다른 구현예에서는, 유전적으로 변형된 T-세포, 세포사멸 세포, 및 CTLA-4 차단제, 알파-1 항-트립신 또는 이의 단편 또는 이의 유사체, 텔루륨-기반 화합물, 또는 면역 조절제를 포함하는 그룹으로부터 선택되는 부가적 물질, 또는 이의 임의의 조합을 포함하는 조성물이 본원에 개시된다. 다른 구현예에서는, 유전적으로 변형된 T-세포, 및 CTLA-4 차단제, 알파-1 항-트립신 또는 이의 단편 또는 이의 유사체, 텔루륨-기반 화합물, 또는 면역 조절제를 포함하는 그룹으로부터 선택되는 부가적 물질, 또는 이의 임의의 조합을 포함하는 조성물이 본원에 개시된다. 다른 구현예에서는, 유전적으로 변형된 T-세포, 세포사멸 세포의 상등액, 및 CTLA-4 차단제, 알파-1 항-트립신 또는 이의 단편 또는 이의 유사체, 텔루륨-기반 화합물, 또는 면역 조절제를 포함하는 그룹으로부터 선택되는 부가적 물질, 또는 이의 임의의 조합을 포함하는 조성물이 본원에 개시된다. 다른 구현예에서, 유전적으로 변형된 T-세포는 키메라 항원 수용체(CAR) T-세포이다. 다른 구현예에서, 유전적으로 변형된 T-세포는 유전적으로 변형된 T-세포 수용체(TCR) 세포이다.
일 구현예에서는, CAR T-세포, 및 CTLA-4 차단제, 알파-1 항-트립신 또는 이의 단편 또는 이의 유사체, 텔루륨-기반 화합물, 또는 면역 조절제를 포함하는 그룹으로부터 선택되는 부가적 물질, 또는 이의 임의의 조합을 포함하는 조성물이 본원에 개시된다. 다른 구현예에서는, CAR T-세포, 세포사멸 세포, 및 CTLA-4 차단제, 알파-1 항-트립신 또는 이의 단편 또는 이의 유사체, 텔루륨-기반 화합물, 또는 면역 조절제를 포함하는 그룹으로부터 선택되는 부가적 물질, 또는 이의 임의의 조합을 포함하는 조성물이 본원에 개시된다. 다른 구현예에서는, 유전적으로 변형된 T-세포 수용체(TCR), 및 CTLA-4 차단제, 알파-1 항-트립신 또는 이의 단편 또는 이의 유사체, 텔루륨-기반 화합물, 또는 면역 조절제를 포함하는 그룹으로부터 선택되는 부가적 물질, 또는 이의 임의의 조합을 포함하는 조성물이 본원에 개시된다. 다른 구현예에서는, 유전적으로 변형된 T-세포 수용체(TCR), 세포사멸 세포, 및 CTLA-4 차단제, 알파-1 항-트립신 또는 이의 단편 또는 이의 유사체, 텔루륨-기반 화합물, 또는 면역 조절제를 포함하는 그룹으로부터 선택되는 부가적 물질, 또는 이의 임의의 조합을 포함하는 조성물이 본원에 개시된다. 다른 구현예에서는, 유전적으로 변형된 T-세포 수용체(TCR), 세포사멸 세포 상등액, 및 CTLA-4 차단제, 알파-1 항-트립신 또는 이의 단편 또는 이의 유사체, 텔루륨-기반 화합물, 또는 면역 조절제를 포함하는 그룹으로부터 선택되는 부가적 물질, 또는 이의 임의의 조합을 포함하는 조성물이 본원에 개시된다.
일 구현예에서, 세포사멸 세포를 포함하는 조성물의 투여는 암 또는 종양을 치료, 예방, 억제, 이의 발생을 감소, 개선, 또는 완화하는 CAR T-세포의 효능에 영향을 미치지 않는다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포를 포함하는 조성물의 투여는 상기 암 또는 상기 종양을 치료, 예방, 억제, 이의 발생을 감소, 개선, 또는 완화하는 CAR T-세포의 효능을 약 5%보다 많이 감소시키지 않는다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포를 포함하는 조성물의 투여는 상기 암 또는 상기 종양을 치료, 예방, 억제, 이의 발생을 감소, 개선, 또는 완화하는 CAR T-세포의 효능을 약 10%보다 많이 감소시키지 않는다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포를 포함하는 조성물의 투여는 상기 암 또는 상기 종양을 치료, 예방, 억제, 이의 발생을 감소, 개선, 또는 완화하는 CAR T-세포의 효능을 약 15%보다 많이 감소시키지 않는다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포를 포함하는 조성물의 투여는 상기 암 또는 상기 종양을 치료, 예방, 억제, 이의 발생을 감소, 개선, 또는 완화하는 CAR T-세포의 효능을 약 20%보다 많이 감소시키지 않는다.
다른 구현예에서, 세포사멸 세포 상등액을 포함하는 조성물의 투여는 상기 암 또는 상기 종양을 치료, 예방, 억제, 이의 발생을 감소, 개선, 또는 완화하는 CAR T-세포의 효능을 약 5%보다 많이 감소시키지 않는다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 상등액을 포함하는 조성물의 투여는 상기 암 또는 상기 종양을 치료, 예방, 억제, 이의 발생을 감소, 개선, 또는 완화하는 CAR T-세포의 효능을 약 10%보다 많이 감소시키지 않는다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 상등액을 포함하는 조성물의 투여는 상기 암 또는 상기 종양을 치료, 예방, 억제, 이의 발생을 감소, 개선, 또는 완화하는 CAR T-세포의 효능을 약 15%보다 많이 감소시키지 않는다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 상등액을 포함하는 조성물의 투여는 상기 암 또는 상기 종양을 치료, 예방, 억제, 이의 발생을 감소, 개선, 또는 완화하는 CAR T-세포의 효능을 약 20%보다 많이 감소시키지 않는다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 상등액을 포함하는 조성물의 투여는 상기 암 또는 상기 종양을 치료, 예방, 억제, 이의 발생을 감소, 개선, 또는 완화하는 CAR T-세포의 효능에 영향을 미치지 않는다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 상등액을 포함하는 조성물의 투여는 상기 암 또는 상기 종양을 치료, 예방, 억제, 이의 발생을 감소, 개선, 또는 완화하는 CAR T-세포의 효능을 감소시키지 않는다.
다른 구현예에서는, CAR T-세포 암 요법을 받는 대상에서 사이토카인 방출 증후군(CRS) 또는 사이토카인 폭풍의 발생을 억제 또는 감소시키는 방법이 본원에 개시된다. 다른 구현예에서, 본원에 개시되는 방법은 CAR T-세포 암 요법을 받는 대상에서 사이토카인 생산을 저하 또는 방지하여, 대상에서 사이토카인 방출 증후군(CRS) 또는 사이토카인 폭풍의 발생을 억제 또는 감소시킨다. 다른 구현예에서, CAR T-세포 암 요법을 받는 대상에서 사이토카인 방출 증후군(CRS) 또는 사이토카인 폭풍의 발생을 억제 또는 감소시키는 본원에 개시되는 방법은, 암 요법을 받는 대상에 세포사멸 세포를 포함하는 조성물을 투여하는 단계를 포함한다. 또 다른 구현예에서, CAR T-세포 암 요법을 받는 대상에서 사이토카인 생산을 저하 또는 억제시키는 본원에 개시되는 방법은, 암 요법을 받는 대상에 세포사멸 세포를 포함하는 조성물을 투여하는 단계를 포함한다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포를 포함하는 조성물의 투여는 CAR T-세포 요법의 효능에 영향을 미치지 않는다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 또는 세포사멸 상등액을 포함하는 조성물의 투여는 CAR T-세포 요법의 효능을 감소시키지 않는다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 또는 세포사멸 상등액을 포함하는 조성물의 투여는 CAR T-세포 요법의 효능을 5%보다 많이 감소시키지 않는다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 또는 세포사멸 상등액을 포함하는 조성물의 투여는 CAR T-세포 요법의 효능을 10%보다 많이 감소시키지 않는다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 또는 세포사멸 상등액을 포함하는 조성물의 투여는 CAR T-세포 요법의 효능을 15%보다 많이 감소시키지 않는다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 또는 세포사멸 상등액을 포함하는 조성물의 투여는 CAR T-세포 요법의 효능을 20%보다 많이 감소시키지 않는다.
다른 구현예에서는, 본원에 개시되는 세포사멸 세포 상등액 또는 상기 세포사멸 세포 상등액을 포함하는 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 사이토카인 방출 증후군 또는 사이토카인 폭풍을 경험하거나 사이토카인 방출 증후군 또는 사이토카인 폭풍에 취약한 대상에서 사이토카인 생산을 저하 또는 억제시키는 방법이 본원에 개시된다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 상등액은 세포사멸 세포-포식세포 상등액을 포함한다.
또 다른 구현예에서, CAR T-세포 암 요법을 받는 대상에서 사이토카인 생산을 저하 또는 억제시키기 위한 본원에 개시되는 방법은 본원에 개시되는 방법은, 암 요법을 받는 대상에 세포사멸 세포 상등액을 포함하는 조성물을 투여하는 단계를 포함한다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 상등액을 포함하는 조성물의 투여는 CAR T-세포 요법의 효능에 영향을 미치지 않는다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 상등액을 포함하는 조성물의 투여는 CAR T-세포 요법의 효능을 감소시키지 않는다.
일 구현예에서, 키메라 항원 수용체-발현 T-세포(CAR T-세포) 암 요법을 받는 대상에서 사이토카인 방출 증후군(CRS) 또는 사이토카인 폭풍의 발생을 억제 또는 감소시키는 방법은 세포사멸 세포 또는 세포사멸 상등액을 포함하는 조성물을 상기 대상에 투여하는 단계를 포함한다. 다른 구현예에서, 키메라 항원 수용체-발현 T-세포(CAR T-세포) 암 요법을 받는 대상에서 사이토카인 방출 증후군(CRS) 또는 사이토카인 폭풍의 발생을 억제 또는 감소시키는 방법은 대상에서 적어도 하나의 전-염증성 사이토카인의 생산을 저하 또는 억제시킨다.
키메라 항원 수용체-발현 T-세포(CAR T-세포)
일 구현예에서, 키메라 항원 수용체(CAR)는, 가장 통상적으로는 단클론 항체로부터의 단일-사슬 가변 단편(scFv)인 세포외 종양-결합 부분에 융합된 세포내 T-세포 신호전달 도메인으로 구성되는 항원-표적화 수용체의 유형이다. CAR는 MHC-매개의 제시와 무관하게 세포 표면 항원을 직접적으로 인식하여, 모든 환자에서 임의의 주어진 항원에 특이적인 단일 수용체 구성체의 사용을 허용한다. 초기 CAR는 T-세포 수용체(TCR) 복합체의 CD3ζ 활성화 사슬에 대한 항원-인식 도메인에 융합하였다. 이들 최초 세대 CAR는 시험관내에서 T-세포 효과기 기능을 유도한 한편, 생체내에서는 불량한 항암 효능에 의해 크게 제한되었다. 그 다음의 CAR 신판은, CD28 또는 다양한 TNF 수용체 패밀리 분자, 예를 들어 4-1BB(CD137) 및 OX40(CD134)으로부터의 세포내 도메인을 포함하여, CD3ζ와 함께 제2 공동자극 신호를 포함하였다. 또한, 제3 세대 수용체는 CD3ζ에 추가하여, 가장 통상적으로는 CD28 및 4-1BB로부터의 2 개의 공동자극 신호를 포함하였다. 제2 및 제3 세대 CAR는 항암 효능을 극적으로 개선하였으며, 일부 경우 후기 암 환자에서 완전한 차도를 유도하였다.
일 구현예에서, CAR T-세포는 이의 수용체가 이의 항원에 결합할 때 활성화되는 항원 수용체를 포함하는 면역반응성 세포이다.
일 구현예에서, 본원에 개시되는 조성물 및 방법에 사용되는 CAR T-세포는 제1 세대 CAR T-세포이다. 다른 구현예에서, 본원에 개시되는 조성물 및 방법에 사용되는 CAR T-세포는 제2 세대 CAR T-세포이다. 다른 구현예에서, 본원에 개시되는 조성물 및 방법에 사용되는 CAR T-세포는 제3 세대 CAR T-세포이다. 다른 구현예에서, 본원에 개시되는 조성물 및 방법에 사용되는 CAR T-세포는 제4 세대 CAR T-세포이다. 일 구현예에서, 각 세대의 CAR T-세포는 전기 세대의 CAR T-세포보다 더 강력하다.
일 구현예에서, 제1-세대 CAR는 하나의 신호전달 도메인, 전형적으로는 CD3 TCRζ 사슬의 세포질 신호전달 도메인을 갖는다.
다른 구현예에서, 본원에 개시되는 CAR T-세포는 제2 세대 CAR T-세포이다. 다른 구현예에서, 본원에 개시되는 CAR T-세포는 3분(tripartite) 키메라 수용체(TPCR)를 포함한다. 일 구현예에서, 본원에 개시되는 CAR T-세포는 공동-자극과 무관한 방식으로 미처리 T-세포를 활성화시키는 하나 이상의 신호전달 부분을 포함한다. 다른 구현예에서, CAR T-세포는 종양 괴사 인자 수용체 패밀리의 하나 이상의 구성원을 추가로 암호화하는데, 이는 일 구현예에서 CD27, 4-1BB(CD137), 또는 OX40(CD134), 또는 이의 조합이다.
제3-세대 CAR T-세포는 다음 2 개의 공동자극 도메인의 신호전달 포텐셜을 활용하도록 시도한다: 일 구현예에서, CD28 도메인에 이어서 4-1BB 또는 OX-40 신호전달 도메인 중 하나. 다른 구현예에서, 본원에 개시되는 조성물 및 방법에 사용되는 CAR T-세포는 공동-자극 신호전달 도메인을 추가로 암호화하는데, 이는 일 구현예에서 CD28이다. 다른 구현예에서, 신호전달 도메인은 CD3ζ-사슬, CD97, GDI la-CD18, CD2, ICOS, CD27, CD154, CDS, OX40, 4-1BB, CD28 신호전달 도메인, 또는 이의 조합이다.
일 구현예에서, 텔로미어 길이 및 복제 능력은 양자 전이된 T-세포주의 이식 효율 및 항암 효능과 상관된다. 일 구현예에서, CD28 자극은 T-세포에서 텔로미어 길이를 유지시킨다.
일 구현예에서, CAR-변형된 T-세포 효능은 증식성 사이토카인(즉, IL-12) 또는 공동자극 리간드(즉, 4-1BBL)을 암호화하는 것을 포함하는 부가적 유전자의 도입, 이에 따라 "장갑(armored)" 제4-세대 CAR-변형된 T-세포의 생산을 통해 추가로 증진될 수 있다. 일 구현예에서, "장갑 CAR T-세포"는 억제성 종양 미세환경으로부터 보호되는 CAR T-세포이다. 다른 구현예에서, "장갑" CAR 기법은 전신적 부작용을 최소화시키는 목적으로 종양 미세환경 내에서 면역 반응을 증폭시키기 위해 가용성 신호전달 단백질의 국소적 분비를 도입한다. 일 구현예에서, 신호전달 단백질 신호는 IL-12로, 이는 T-세포 활성화 및 모집을 자극할 수 있다. 일 구현예에서, "장갑" CAR 기법은 고형 종양 지표에 특히 유용한데, 여기에서는 미세환경 및 강력한 면역억제성 기전이 활발한 항-종양 반응의 확립을 더 도전적으로 만들 가능성을 갖는다.
일 구현예에서, CAR T-세포는 세포사멸의 방지, 종양 미세환경의 재형성, 항상성 증식의 유도에 관여하는 분자, 및 지시된 T-세포 귀소를 촉진하는 케모카인 수용체를 암호화하도록 유전적으로 변형된다.
다른 구현예에서, 본원에 개시되는 조성물 및 방법에 사용되는 CAR T-세포 요법은 사이토카인 이식유전자의 발현, 단클론 항체, 또는 소형 분자 억제제와의 조합 요법을 사용하여 증진된다. 다른 구현예에서, 종양 세포를 더욱 특이적으로 표적화하기 위해 이중 CAR 및 케모카인 수용체를 사용하는 것을 포함하는, CAR T-세포 요법의 개선을 목표로 하는 다른 전략은 본원에 개시되는 CAR T-세포 요법 및 CAR T-세포의 일부로 고려될 것이다.
일 구현예에서, 본원에 개시되는 조성물 및 방법의 CAR T-세포는 CAR T-세포의 정상 세포에 대한 암세포의 특이성을 증가시키기 위해, 억제성 또는 증폭 신호를 유도할 수 있는 제2 결합 도메인을 포함한다. 예를 들어, CAR T-세포는 하나의 표적 단백질의 존재로 촉발되도록 조작될 수 있지만, 제2 단백질이 존재할 경우 억제될 것이다. 대안으로서, 최대 활성화를 위해 2 개의 표적 단백질이 요구되도록 조작될 수도 있다. 이들 접근법은 정상 조직과 비교하여 종양에 대한 CAR의 특이성을 증가시킬 수 있다.
일 구현예에서, 본원에 개시되는 조성물 및 방법에 사용되는 CAR T-세포는 면역수용체 티로신-기반 활성화 모티브로 구성되는 신호 변환 모듈을 암호화하는 세포액 도메인 및 항체-기반 외부 수용체 구조를 암호화한다.
일 구현예에서, CAR T-세포는 면역억제 활성을 갖는 폴리펩티드에 결합하는 단일-사슬 가변 단편(scFv)을 추가로 암호화한다. 다른 구현예에서, 면역억제 활성을 갖는 폴리펩티드는 CD47, PD-1, CTLA-4, 또는 이의 조합이다.
일 구현예에서, CAR T-세포는 면역자극 활성을 갖는 폴리펩티드에 결합하는 단일-사슬 가변 단편(scFv)을 추가로 암호화한다. 다른 구현예에서, 면역자극 활성을 갖는 폴리펩티드는 CD28, OX-40, 4-1 BB 또는 이의 조합이다. 다른 구현예에서, CAR T-세포는 CD40 리간드(CD40L)를 추가로 암호화하는데, 이는 일 구현예에서 항원의 면역자극 활성을 증진시킨다.
일 구현예에서, 면역 세포는 세포독성이다. 다른 구현예에서, 유전자 변형을 위한 세포독성 세포는 대상 또는 공여자의 골수로부터 수득될 수 있다. 다른 경우에, 세포는 줄기세포로부터 수득된다. 예를 들어, 세포독성 세포는 인간 배아 줄기세포와 같은 인간 다능성 줄기세포 또는 인간 유도의 다능성 T-세포로부터 유도될 수 있다. 유도된 다능성 줄기세포(induced pluripotent stem cell, IPSC)의 경우, 이러한 다능성 T-세포는 대상으로부터의 체세포를 사용하여 수득될 수 있는데, 여기에 유전적으로 변형된 세포독성 세포가 제공될 것이다. 일 구현예에서, 면역 세포는 정맥천자에 의해, 성분채집 방법에 의해, 백혈구 동원에 이어지는 성분채집 또는 정맥천자에 의해, 또는 골수 흡인에 의해 세포를 수확함으로써 대상 또는 공여자로부터 수득될 수 있다.
일 구현예에서, 본원에 개시되는 방법은 대상으로부터 면역 세포를 수득하고, 그리고 키메라 항원 수용체를 발현하도록 면역 세포를 유전적으로 변형시키는 것을 포함한다. 다른 구현예에서, 본원에 개시되는 방법은 대상으로부터 면역 세포를 수득하고, 키메라 항원 수용체를 발현하도록 면역 세포를 유전적으로 변형시키고, 그리고 세포사멸 세포 집단과 조합하여, 대상에서 감소된 사이토카인 생산을 야기하지만, 세포사멸 세포 집단을 투여받지 않은 CAR를 발현하는 면역 세포와 비교하여 실질적으로 영향을 받지 않은 세포독성을 야기하는 것을 포함한다(도 1a-1b 및 2). 다른 구현예에서, 본원에 개시되는 방법은 대상으로부터 면역 세포를 수득하고, 키메라 항원 수용체를 발현하도록 면역 세포를 유전적으로 변형시키고, 그리고 세포사멸 세포 상등액 또는 이 상등액을 포함하는 조성물과 조합하여, 대상에서 감소된 사이토카인 생산을 야기하지만, 세포사멸 세포 상등액을 투여받지 않은 CAR를 발현하는 면역 세포와 비교하여 실질적으로 영향을 받지 않은 세포독성을 야기하는 것을 포함한다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 집단 또는 세포사멸 세포로부터의 상등액의 투여는 키메라 항원 수용체를 발현하는 면역 세포의 효능을 감소시키지 않는다.
따라서, 본원에 개시되는 일 구현예는, 이에 의해 세포가 자신의 세포독성 기능을 유지하는, 키메라 항원 수용체(CAR)를 포함하는 세포독성 면역 세포(예를 들어, NK 세포 또는 T-세포)와 관련된다. 다른 구현예에서, 키메라 항원 수용체는 T-세포에 대해 외인성이다. 다른 구현예에서, CAR는 재조합으로 발현된다. 다른 구현예에서, CAR는 벡터로부터 발현된다.
일 구현예에서, CAR T-세포를 생성하도록 이용되는 T-세포는 미처리 CD4+ T-세포이다. 다른 구현예에서, CAR T-세포를 생성하도록 이용되는 T-세포는 미처리 CD8+ T-세포이다. 다른 구현예에서, CAR T-세포를 생성하도록 이용되는 T-세포는 주효 T-세포이다. 다른 구현예에서, CAR T-세포를 생성하도록 이용되는 T-세포는 조절 T-세포(Treg)이다. 다른 구현예에서, CAR T-세포를 생성하도록 이용되는 T-세포는 세포독성 T-세포이다.
유전적으로 변형된 면역 세포, 예를 들어 T 세포를 위한 공급원은 문헌에 광범위하게 기술되어 있으며, 예를 들어 Themelli et al. (2015) New Cell Sources for T Cell Engineering and Adoptive Immunotherapy. Cell Stem Cell 16: 357-366; Han et al. (2013) Journal of Hematology & Oncology 6:47-53; Wilkie et al. (2010) J Bio Chem 285(33):25538-25544; 및 van der Stegen et al. (2013) J. Immunol 191: 4589-4598을 참조한다. CAR T-세포는 Creative Biolabs(NY USA)와 같은 상업적 공급원으로부터 주문하여 이용 가능한데, 여기에서는 키메라 항원 수용체(CAR)에 대한 맞춤 제작 및 생산 서비스를 제공하고 또한 미리 만들어진 CAR 구성체 재고를 제공하는데, 이는 재조합 아데노바이러스 백신에 의해 암호화되는 보호적 면역을 유도할 수 있다. 맞춤 제작된 CAR T-세포는 또한 Promab Biotechnologies(CA USA)로부터 수득될 수 있으며, 여기에서는 특이적으로 고안된 CAR T-세포를 제공할 수 있다.
항원 표적화
일 구현예에서, CAR는 항원으로 향하는 항체 또는 항체 단편을 통해 항원의 에피토프에 결합한다. 다른 구현예에서, 항체는 단클론 항체이다. 다른 구현예에서, 항체는 다클론 항체이다. 다른 구현예에서, 항체 단편은 단일-사슬 가변 단편(scFv)이다.
다른 구현예에서, 본원에 개시되는 조성물의 CAR T-세포는 종양 관련 항원(tumor associated antigen, TAA)에 결합한다. 다른 구현예에서, 상기 종양 관련 항원은 다음과 같다: 뮤신 1, 세포 표면 관련(MUC1) 또는 다형 상피 뮤신(PEM), 알기닌-풍부, 초기 단계 종양에서 돌연변이(Armet) 단백질, 열 쇼크 단백질 60(HSP60), 칼넥신(CANX), 메틸렌테트라하이드로폴레이트 데하이드로게나제(NADP+ 의존성) 2, 메테닐테트라하이드로폴레이트 사이클로하이드롤라제(MTHFD2), 섬유아세포 활성화 단백질(FAP), 기질 금속펩티다제(MMP6), B 흑색종 항원-1(BAGE-1), 이상 전사 N-아세틸 글루코사미닐 트랜스퍼라제 V(GnTV), Q5H943, 암배아 항원(CEA), Pmel, 칼리크레인-4, 마마글로빈-1, MART-1, GPR143-OA1, 전립선 특이적 항원(PSA), TRP1, 티로시나제, FGP-5, NEU 프로토-종양유전자, Aft, MMP-2, 전립선 특이적 멤브레인 항원(PSMA), 텔로머라제-관련 단백질-2, 전립선 산성 인산화효소(PAP), 유로플라킨 II 또는 프로테이나제 3.
다른 구현예에서, CAR는 백혈병에서 B 세포를 파괴하고자 할 경우 B 세포를 표적으로 하는 CD19 또는 CD20에 결합한다. 다른 구현예에서, CAR는 ROR1, CD22, 또는 GD2에 결합한다. 다른 구현예에서, CAR는 NY-ESO-1에 결합한다. 다른 구현예에서, CAR는 MAGE 패밀리 단백질에 결합한다. 다른 구현예에서, CAR는 메소텔린에 결합한다. 다른 구현예에서, CAR는 c-erbB2에 결합한다. 다른 구현예에서, CAR는 BRAFV600E 돌연변이 및 BCR-ABL 전이와 같은 종양 특이적인 돌연변이 항원에 결합한다. 다른 구현예에서, CAR는 HD에서 EBV, 자궁경부암에서 HPV, 그리고 Merkel 암에서 폴리오마바이러스와 같은 종양-특이적인 바이러스 항원에 결합한다. 다른 구현예에서, CAR T-세포는 Her2/neu에 결합한다. 다른 구현예에서, CAR T-세포는 EGFRvIII에 결합한다.
일 구현예에서, 키메라 항원 수용체(CAR) T-세포는 CD19 항원에 결합한다. 다른 구현예에서, CAR는 CD22 항원에 결합한다. 다른 구현예에서, CAR는 알파 폴레이트 수용체에 결합한다. 다른 구현예에서, CAR는 CAIX에 결합한다. 다른 구현예에서, CAR는 CD20에 결합한다. 다른 구현예에서, CAR는 CD23에 결합한다. 다른 구현예에서, CAR는 CD24에 결합한다. 다른 구현예에서, CAR는 CD30에 결합한다. 다른 구현예에서, CAR는 CD33에 결합한다. 다른 구현예에서, CAR는 CD38에 결합한다. 다른 구현예에서, CAR는 CD44v6에 결합한다. 다른 구현예에서, CAR는 CD44v7/8에 결합한다. 다른 구현예에서, CAR는 CD123에 결합한다. 다른 구현예에서, CAR는 CD171에 결합한다. 다른 구현예에서, CAR는 암 배아 항원(CEA)에 결합한다. 다른 구현예에서, CAR는 EGFRvIII에 결합한다. 다른 구현예에서, CAR는 EGP-2에 결합한다. 다른 구현예에서, CAR는 EGP-40에 결합한다. 다른 구현예에서, CAR는 EphA2에 결합한다. 다른 구현예에서, CAR는 Erb-B2에 결합한다. 다른 구현예에서, CAR는 Erb-B 2, 3, 4에 결합한다. 다른 구현예에서, CAR는 Erb-B3/4에 결합한다. 다른 구현예에서, CAR는 FBP에 결합한다. 다른 구현예에서, CAR는 태아 아세틸콜린 수용체에 결합한다. 다른 구현예에서, CAR는 GD2에 결합한다. 다른 구현예에서, CAR는 GD3에 결합한다. 다른 구현예에서, CAR는 HER2에 결합한다. 다른 구현예에서, CAR는 HMW-MAA에 결합한다. 다른 구현예에서, CAR는 IL-11R알파에 결합한다. 다른 구현예에서, CAR는 IL-13R알파 1에 결합한다. 다른 구현예에서, CAR는 KDR에 결합한다. 다른 구현예에서, CAR는 카파-경쇄에 결합한다. 다른 구현예에서, CAR는 Lewis Y에 결합한다. 다른 구현예에서, CAR는 L1-세포 부착 분자에 결합한다. 다른 구현예에서, CAR는 MAGE-A1에 결합한다. 다른 구현예에서, CAR는 메소텔린에 결합한다. 다른 구현예에서, CAR는 CMV 감염된 세포에 결합한다. 다른 구현예에서, CAR는 MUC1에 결합한다. 다른 구현예에서, CAR는 MUC16에 결합한다. 다른 구현예에서, CAR는 NKG2D 리간드에 결합한다. 다른 구현예에서, CAR는 NY-ESO-1(아미노산 157-165)에 결합한다. 다른 구현예에서, CAR는 종양태아성 항원(h5T4)에 결합한다. 다른 구현예에서, CAR는 PSCA에 결합한다. 다른 구현예에서, CAR는 PSMA에 결합한다. 다른 구현예에서, CAR는 ROR1에 결합한다. 다른 구현예에서, CAR는 TAG-72에 결합한다. 다른 구현예에서, CAR는 VEGF-R2 또는 다른 VEGF 수용체에 결합한다. 다른 구현예에서, CAR는 B7-H6에 결합한다. 다른 구현예에서, CAR는 CA9에 결합한다. 다른 구현예에서, CAR는 αvβ6 인테그린에 결합한다. 다른 구현예에서, CAR는 8H9에 결합한다. 다른 구현예에서, CAR는 NCAM에 결합한다. 다른 구현예에서, CAR는 태아 아세틸콜린 수용체에 결합한다.
다른 구현예에서, 키메라 항원 수용체(CAR) T-세포는 CD19 항원을 표적으로 하고, B-세포 악성종양, ALL, 여포성 림프종, CLL, 및 림프종이 있는 대상에서 치료 효과를 갖는다. 다른 구현예에서, CAR T-세포는 CD22 항원을 표적으로 하고, B-세포 악성종양이 있는 대상에서 치료 효과를 갖는다. 다른 구현예에서, CAR T-세포는 알파 폴레이트 수용체 또는 폴레이트 수용체 알파를 표적으로 하고, 난소암 또는 상피암이 있는 대상에서 치료 효과를 갖는다. 다른 구현예에서, CAR T-세포는 CAIX 또는 G250/CAIX를 표적으로 하고, 신장 세포 암종이 있는 대상에서 치료 효과를 갖는다. 다른 구현예에서, CAR T-세포는 CD20을 표적으로 하고, 림프종, B-세포 악성종양, B-세포 림프종, 외투 세포 림프종 및 무통성 B-세포 림프종이 있는 대상에서 치료 효과를 갖는다. 다른 구현예에서, CAR T-세포는 CD23을 표적으로 하고, CLL이 있는 대상에서 치료 효과를 갖는다. 다른 구현예에서, CAR T-세포는 CD24를 표적으로 하고 췌장 선암종이 있는 대상에서 치료 효과를 갖는다. 다른 구현예에서, CAR T-세포는 CD30을 표적으로 하고, 림프종 또는 호지킨(Hodgkin) 림프종이 있는 대상에서 치료 효과를 갖는다. 다른 구현예에서, CAR T-세포는 CD33을 표적으로 하고, AML이 있는 대상에서 치료 효과를 갖는다. 다른 구현예에서, CAR T-세포는 CD38을 표적으로 하고, 비-호지킨 림프종이 있는 대상에서 치료 효과를 갖는다. 다른 구현예에서, CAR T-세포는 CD44v6를 표적으로 하고, 몇 가지 악성종양이 있는 대상에서 치료 효과를 갖는다. 다른 구현예에서, CAR T-세포는 CD44v7/8을 표적으로 하고, 자궁경부 암종이 있는 대상에서 치료 효과를 갖는다. 다른 구현예에서, CAR T-세포는 CD123를 표적으로 하고, 골수 악성종양이 있는 대상에서 치료 효과를 갖는다. 다른 구현예에서, CAR T-세포는 CEA를 표적으로 하고, 대장암이 있는 대상에서 치료 효과를 갖는다. 다른 구현예에서, CAR T-세포는 EGFRvIII를 표적으로 하고, 교아종이 있는 대상에서 치료 효과를 갖는다. 다른 구현예에서, CAR T-세포는 EGP-2를 표적으로 하고, 다중 악성종양이 있는 대상에서 치료 효과를 갖는다. 다른 구현예에서, CAR T-세포는 EGP-40를 표적으로 하고, 대장암이 있는 대상에서 치료 효과를 갖는다. 다른 구현예에서, CAR T-세포는 EphA2를 표적으로 하고, 교아종이 있는 대상에서 치료 효과를 갖는다. 다른 구현예에서, CAR T-세포는 Erb-B2 또는 ErbB3/4를 표적으로 하고, 유방암 등, 전립선암, 결장암, 다양한 종양이 있는 대상에서 치료 효과를 갖는다. 다른 구현예에서, CAR T-세포는 Erb-B 2, 3, 4를 표적으로 하고, 유방암 등이 있는 대상에서 치료 효과를 갖는다. 다른 구현예에서, CAR T-세포는 FBP를 표적으로 하고, 난소암이 있는 대상에서 치료 효과를 갖는다. 다른 구현예에서, CAR T-세포는 태아 아세틸콜린 수용체를 표적으로 하고, 횡문근육종이 있는 대상에서 치료 효과를 갖는다. 다른 구현예에서, CAR T-세포는 GD2를 표적으로 하고, 신경아세포종, 흑색종 또는 유윙 육종(Ewing's sarcoma)이 있는 대상에서 치료 효과를 갖는다. 다른 구현예에서, CAR T-세포는 GD3를 표적으로 하고, 흑색종이 있는 대상에서 치료 효과를 갖는다. 다른 구현예에서, CAR T-세포는 HER2를 표적으로 하고, 수모세포종, 췌장 선암종, 교아종, 골육종, 또는 난소암이 있는 대상에서 치료 효과를 갖는다. 다른 구현예에서, CAR T-세포는 HMW-MAA를 표적으로 하고, 흑색종이 있는 대상에서 치료 효과를 갖는다. 다른 구현예에서, CAR T-세포는 IL-11R알파를 표적으로 하고, 골육종이 있는 대상에서 치료 효과를 갖는다. 다른 구현예에서, CAR T-세포는 IL-13R알파1를 표적으로 하고, 신경교종, 교아종, 또는 수모세포종이 있는 대상에서 치료 효과를 갖는다. 다른 구현예에서, CAR T-세포는 IL-13 수용체 알파2를 표적으로 하고, 몇 가지 악성종양이 있는 대상에서 치료 효과를 갖는다. 다른 구현예에서, CAR T-세포는 KDR를 표적으로 하고, 종양 신생혈관을 표적으로 하는 것에 의해 종양이 있는 대상에서 치료 효과를 갖는다. 다른 구현예에서, CAR T-세포는 카파-경쇄를 표적으로 하고, B-세포 악성종양(B-NHL, CLL)이 있는 대상에서 치료 효과를 갖는다. 다른 구현예에서, CAR T-세포는 Lewis Y를 표적으로 하고, 다양한 암종 또는 상피-유래 종양이 있는 대상에서 치료 효과를 갖는다. 다른 구현예에서, CAR T-세포는 L1-세포 부착 분자를 표적으로 하고, 신경아세포종이 있는 대상에서 치료 효과를 갖는다. 다른 구현예에서, CAR T-세포는 MAGE-A1 또는 HLA-A1 MAGE A1을 표적으로 하고, 흑색종이 있는 대상에서 치료 효과를 갖는다. 다른 구현예에서, CAR T-세포는 메소텔린을 표적으로 하고, 중피종이 있는 대상에서 치료 효과를 갖는다. 다른 구현예에서, CAR T-세포는 CMV 감염된 세포를 표적으로 하고, CMV가 있는 대상에서 치료 효과를 갖는다. 다른 구현예에서, CAR T-세포는 MUC1를 표적으로 하고, 유방 또는 난소암이 있는 대상에서 치료 효과를 갖는다. 다른 구현예에서, CAR T-세포는 MUC16을 표적으로 하고, 난소암이 있는 대상에서 치료 효과를 갖는다. 다른 구현예에서, CAR T-세포는 NKG2D 리간드를 표적으로 하고, 골수종, 난소 및 다른 종양이 있는 대상에서 치료 효과를 갖는다. 다른 구현예에서, CAR T-세포는 NY-ESO-1(157-165) 또는 HLA-A2 NY-ESO-1을 표적으로 하고, 다발성 골수종이 있는 대상에서 치료 효과를 갖는다. 다른 구현예에서, CAR T-세포는 종양태아 항원(h5T4)을 표적으로 하고, 다양한 종양이 있는 대상에서 치료 효과를 갖는다. 다른 구현예에서, CAR T-세포는 PSCA를 표적으로 하고, 전립선 암종이 있는 대상에서 치료 효과를 갖는다. 다른 구현예에서, CAR T-세포는 PSMA를 표적으로 하고, 전립선 암/종양 맥관구조가 있는 대상에서 치료 효과를 갖는다. 다른 구현예에서, CAR T-세포는 ROR1를 표적으로 하고, B-CLL 및 외투 세포 림프종이 있는 대상에서 치료 효과를 갖는다. 다른 구현예에서, CAR T-세포는 TAG-72를 표적으로 하고, 선암종 또는 위장관암이 있는 대상에서 치료 효과를 갖는다. 다른 구현예에서, CAR T-세포는 VEGF-R2 또는 다른 VEGF 수용체를 표적으로 하고, 종양 신생혈관구조를 표적으로 하는 것에 의해 종양이 있는 대상에서 치료 효과를 갖는다. 다른 구현예에서, CAR T-세포는 CA9를 표적으로 하고, 신장 세포 암종이 있는 대상에서 치료 효과를 갖는다. 다른 구현예에서, CAR T-세포는 CD171을 표적으로 하고, 신장 신경아세포종이 있는 대상에서 치료 효과를 갖는다. 다른 구현예에서, CAR T-세포는 NCAM을 표적으로 하고, 신경아세포종이 있는 대상에서 치료 효과를 갖는다. 다른 구현예에서, CAR T-세포는 태아 아세틸콜린 수용체를 표적으로 하고, 횡문근육종이 있는 대상에서 치료 효과를 갖는다. 다른 구현예에서, CAR는 본원에 전체가 참조로 도입되는 Sadelain et al.(Cancer Discov. 2013 Apr; 3(4): 388398)의 표 1에 수록된 표적 항원 중 하나에 결합한다. 다른 구현예에서, CAR T-세포는 탄수화물 또는 글리코리피드 구조에 결합한다.
일 구현예에서 CAR는 혈관형성 인자에 결합하고, 이에 의해 종양 맥관구조를 표적으로 한다. 일 구현예에서, 혈관형성 인자는 VEGFR2이다. 다른 구현예에서, 혈관형성 인자는 엔도글린이다. 다른 구현예에서, 본원에 개시되는 혈관형성 인자는 안지오제닌; 안지오포이에틴-1; Del-1; 섬유아세포 성장 인자: 산성(aFGF) 및 염기성(bFGF); 폴리스타틴; 과립구 콜로니-자극 인자(G-CSF); 간세포 성장 인자(HGF)/산란 인자(SF); 인터류킨-8(IL-8); 렙틴; 미드카인; 태반 성장 인자; 혈소판-유래 내피 세포 성장 인자(PD-ECGF); 혈소판-유래 성장 인자-BB(PDGF-BB); 플레이오트로핀(PTN); 프로그래뉼린; 프롤리페린; 형질전환 성장 인자-알파(TGF-알파); 형질전환 성장 인자-베타(TGF-베타); 종양 괴사 인자-알파(TNF-알파); 혈관 내피 성장 인자(VEGF)/혈관 투과성 인자(VPF)이다. 다른 구현예에서, 혈관형성 인자는 혈관형성 단백질이다. 일 구현예에서, 성장 인자는 혈관형성 단백질이다. 일 구현예에서, 본원에 개시되는 조성물 및 방법에서의 사용을 위한 혈관형성 단백질은 섬유아세포 성장 인자(FGF); VEGF; VEGFR 및 뉴로필린 1(NRP-1); 안지오포이에틴 1(Ang1) 및 Tie2; 혈소판-유래 성장 인자(PDGF; BB-호모다이머) 및 PDGFR; 형질전환 성장 인자-베타(TGF-β), 엔도글린 및 TGF-β 수용체; 단핵구 화학주성 단백질-1(MCP-1); 인테그린 αVβ3, αVβ5 및 α5β1; VE-카데린 및 CD31; 에프린; 플라스미노겐 활성화인자; 플라스미노겐 활성화인자 억제제-1; 산화질소 합성효소(NOS) 및 COX-2; AC133; 또는 Id1/Id3이다. 일 구현예에서, 본원에 개시되는 조성물 및 방법에서의 사용을 위한 혈관형성 단백질은 안지오포이에틴으로, 이는 일 구현예에서 안지오포이에틴 1, 안지오포이에틴 3, 안지오포이에틴 4 또는 안지오포이에틴 6이다. 일 구현예에서, 엔도글린은 또한 CD105; EDG; HHT1; ORW; 또는 ORW1으로도 알려져있다. 일 구현예에서, 엔도글린은 TGF베타 공동-수용체이다.
다른 구현예에서, CAR T-세포는 감염성 물질과 관련된 항원에 결합한다. 일 구현예에서, 감염성 물질은 마이코박테리움 투버쿨로시스 (Mycobacterium tuberculosis)이다. 일 구현예에서, 상기 마이코박테리움 투버쿨로시스 (Mycobacterium tuberculosis) 관련 항원은 다음과 같다: 항원 85B, 리포단백질 IpqH, ATP 의존성 헬리카제 추정의 비특성화된 단백질 Rv0476/MTO4941 전구체 또는 비특성화된 단백질 Rv1334/MT1376 전구체.
다른 구현예에서, CAR는 항체에 결합한다. 일 구현예에서, CAR T-세포는 "항체-결합된 T-세포 수용체"(ACTR)이다. 이 구현예에 따르면, CAR T-세포는 보편적 CAR T-세포이다. 다른 구현예에서, 항체 수용체를 갖는 CAR T-세포는 항체가 투여되기 전, 후 또는 동시에 투여되고, 다음에 항체와 결합하여 T-세포를 종양 또는 암에 인접하도록 한다. 다른 구현예에서, 항체는 종양 세포 항원에 대하여 지시된다. 다른 구현예에서, 항체는 CD20에 대하여 지시된다. 다른 구현예에서, 항체는 리툭시맙이다.
다른 구현예에서, 항체는 트라스투주맙(Herceptin; Genentech): 인간화 IgG1으로, ERBB2에 대하여 지시된다. 다른 구현예에서, 항체는 베바시주맙(Avastin; Genentech/Roche): 인간화 IgG1으로, VEGF에 대하여 지시된다. 다른 구현예에서, 항체는 세툭시맙(Erbitux; Bristol-Myers Squibb): 키메라 인간-뮤린 IgG1으로, EGFR에 대하여 지시된다. 다른 구현예에서, 항체는 파니투무맙(Vectibix; Amgen): 인간 IgG2로, EGFR에 대하여 지시된다. 다른 구현예에서, 항체는 이필리무맙(Yervoy; Bristol-Myers Squibb): IgG1으로, CTLA4에 대하여 지시된다.
다른 구현예에서, 항체는 알렘투주맙(Campath; Genzyme): 인간화 IgG1으로, CD52에 대하여 지시된다. 다른 구현예에서, 항체는 오파투무맙(Arzerra; Genmab): 인간 IgG1으로, CD20에 대하여 지시된다. 다른 구현예에서, 항체는 젬투주맙 오조가미신(Mylotarg; Wyeth): 인간화 IgG4로, CD33에 대하여 지시된다. 다른 구현예에서, 항체는 브렌툭시맙 베도틴(Adcetris; Seattle Genetics): 키메라 IgG1으로, CD30에 대하여 지시된다. 다른 구현예에서, 항체는 90Y-표지된 이브리투모맙 티욱세탄(Zevalin; IDEC Pharmaceuticals): 뮤린 IgG1으로, CD20에 대하여 지시된다. 다른 구현예에서, 항체는 131I-표지된 토시투모맙(Bexxar; GlaxoSmithKline): 뮤린 IgG2로, CD20에 대하여 지시된다.
다른 구현예에서, 항체는 라무시루맙으로, 혈관 내피 성장 인자 수용체-2(VEGFR-2)에 대하여 지시된다. 다른 구현예에서, 항체는 라무시루맙(Cyramza Injection, Eli Lilly and Company), 블리나투모맙(BLINCYTO, Amgen Inc.), 펨브롤리주맙(KEYTRUDA, Merck Sharp & Dohme Corp.), 오비누투주맙(GAZYVA, Genentech, Inc.; 이전에 GA101로서 알려짐), 페르투주맙 주사(PERJETA, Genentech, Inc.), 또는 데노수맙(Xgeva, Amgen Inc.)이다. 다른 구현예에서, 항체는 바실릭시맙(Simulect; Novartis)이다. 다른 구현예에서, 항체는 다클리주맙(Zenapax; Roche)이다.
다른 구현예에서, CAR T-세포가 결합되는 항체는 본원에 기술되고/되거나 해당 분야에 알려진 종양 또는 암 항원 또는 이의 일부로 지시된다. 다른 구현예에서, CAR T-세포가 결합되는 항체는 종양-관련 항원으로 지시된다. 다른 구현예에서, CAR T-세포가 결합되는 항체는 종양 관련 항원 또는 혈관형성 인자인 이의 일부로 지시된다.
다른 구현예에서, CAR T-세포가 결합되는 항체는, 본원에 기술되고/되거나 해당 분야에 알려진 종양 또는 암 항원 또는 이의 일부로 지시된다.
사이토카인 폭풍 및 사이토카인 방출 증후군
일 구현예에서, 본원에 개시되는 방법은 대상에서 일어날 수 있는 독성 사이토카인 방출 또는 "사이토카인 방출 증후군"(CRS) 또는 "중증 사이토카인 방출 증후군"(sCRS) 또는 "사이토카인 폭풍"을 저하시키기 위해 적어도 하나의 부가적 물질과 함께, 조작된 키메라 항원 수용체를 포함하는, NK 세포 또는 T-세포와 같은 면역 세포를 제공하는 것을 포함한다. 다른 구현예에서 CRS, sCRS 또는 사이토카인 폭풍은 면역 세포의 투여의 결과로서 일어난다. 다른 구현예에서, CRS, sCRS 또는 사이토카인 폭풍은 면역 세포와 별개의 자극, 병태, 또는 증후군의 결과이다(아래 참조). 다른 구현예에서, 사이토카인 폭풍, 사이토카인 캐스케이드, 또는 고사이토카인혈증은 사이토카인 방출 증후군의 보다 중증인 형태이다.
일 구현예에서, 유해한 사이토카인 방출을 저하시키기 위한 부가적 물질은 세포사멸 세포 또는 상기 세포사멸 세포를 포함하는 조성물을 포함한다. 다른 구현예에서, 유해한 사이토카인 방출을 저하시키기 위한 부가적 물질은 세포사멸 세포 상등액 또는 상기 상등액을 포함하는 조성물을 포함한다. 다른 구현예에서, 유해한 사이토카인 방출을 저하시키기 위한 부가적 물질은 CTLA-4 차단제를 포함한다. 다른 구현예에서, 유해한 사이토카인 방출을 저하시키기 위한 부가적 물질은 세포사멸 세포 또는 세포사멸 세포 상등액 또는 이의 조성물, 및 CTLA-4 차단제를 포함한다. 다른 구현예에서, 유해한 사이토카인 방출을 저하시키기 위한 부가적 물질은 알파-1 항-트립신 또는 이의 단편 또는 이의 유사체를 포함한다. 다른 구현예에서, 유해한 사이토카인 방출을 저하시키기 위한 부가적 물질은 세포사멸 세포 또는 세포사멸 세포 상등액 또는 이의 조성물, 및 알파-1 항-트립신 또는 이의 단편 또는 이의 유사체를 포함한다. 다른 구현예에서, 유해한 사이토카인 방출을 저하시키기 위한 부가적 물질은 텔루륨-기반 화합물을 포함한다. 다른 구현예에서, 유해한 사이토카인 방출을 저하시키기 위한 부가적 물질은 세포사멸 세포 또는 세포사멸 세포 상등액 또는 이의 조성물, 및 텔루륨-기반 화합물을 포함한다. 다른 구현예에서, 유해한 사이토카인 방출을 저하시키기 위한 부가적 물질은 면역 조절제를 포함한다. 다른 구현예에서, 유해한 사이토카인 방출을 저하시키기 위한 부가적 물질은 세포사멸 세포 또는 세포사멸 세포 상등액 또는 이의 조성물, 및 면역 조절제를 포함한다.
당업자는 독성 사이토카인 방출 또는 독성 사이토카인 수준을 저하시키는 것이 대상에서 독성 사이토카인 수준의 생산을 저하 또는 억제, 또는 대상에서 사이토카인 방출 증후군 또는 사이토카인 폭풍의 발생을 억제 또는 감소시키는 것을 포함한다는 것을 인정할 것이다. 다른 구현예에서 독성 사이토카인 수준은 CRS 또는 사이토카인 폭풍 중에 감소된다. 다른 구현예에서, 독성 사이토카인 수준의 생산을 저하 또는 억제시키는 것은 CRS 또는 사이토카인 폭풍을 치료하는 것을 포함한다. 다른 구현예에서, 독성 사이토카인 수준의 생산을 저하 또는 억제시키는 것은 CRS 또는 사이토카인 폭풍을 방지하는 것을 포함한다. 다른 구현예에서, 독성 사이토카인 수준의 생산을 저하 또는 억제시키는 것은 CRS 또는 사이토카인 폭풍을 완화하는 것을 포함한다. 다른 구현예에서, 독성 사이토카인 수준의 생산을 저하 또는 억제시키는 것은 CRS 또는 사이토카인 폭풍을 개선하는 것을 포함한다. 다른 구현예에서, 독성 사이토카인은 전-염증성 사이토카인을 포함한다. 다른 구현예에서, 전-염증성 사이토카인은 IL-6을 포함한다. 다른 구현예에서, 전-염증성 사이토카인은 IL-1β를 포함한다. 다른 구현예에서, 전-염증성 사이토카인은 TNF-α를 포함한다. 다른 구현예에서, 전-염증성 사이토카인은 IL-6, IL-1β, 또는 TNF-α, 또는 이의 임의의 조합을 포함한다.
일 구현예에서, 사이토카인 방출 증후군은 저혈압, 고열 및 오한과 같은, 대상에서 부정적인 신체 반응 및 몇 가지 염증성 사이토카인의 상승된 수준을 특징으로 한다. 다른 구현예에서, 염증성 사이토카인은 IL-6, IL-1β, 및 TNF-α를 포함한다. 다른 구현예에서, CRS는 IL-6, IL-1β, 또는 TNF-α, 또는 이의 임의의 조합의 상승된 수준을 특징으로 한다. 다른 구현예에서, CRS는 IL-8, 또는 IL-13, 또는 이의 임의의 조합의 상승된 수준을 특징으로 한다. 다른 구현예에서, 사이토카인 폭풍은 TNF-알파, IFN-감마, IL-1베타, IL-2, IL-6, IL-8, IL-10, IL-13, GM-CSF, IL-5, 프랙탈카인, 또는 이의 조합 또는 이의 서브셋에서의 증가를 특징으로 한다. 또 다른 구현예에서, IL-6는 CRS 또는 사이토카인 폭풍의 마커를 포함한다. 다른 구현예에서, IFN-γ는 CRS 또는 사이토카인 폭풍의 마커를 포함한다. 다른 구현예에서, 더 큰 종양 부담을 갖는 환자는 사이토카인 방출 증후군의 더 높은 발생 및 중증도를 갖는다.
다른 구현예에서, 인간 및 마우스에서 CRS 또는 사이토카인 폭풍 중 증가된 사이토카인은 아래 표 1 및 2에 수록된 사이토카인의 임의의 조합을 포함할 수 있다.
표 1: 인간 및/또는 마우스에서 CRS 또는 사이토카인 폭풍 중 증가된 사이토카인의 패널
Figure pct00001
일 구현예에서, 표 1의 사이토카인 Flt-3L, 프랙탈카인, GM-CSF, IFN-γ, IL-1β, IL-2, IL-2Rα, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-12, 및 IL-13은 CRS 또는 사이토카인 폭풍에서 유의미한 것으로 고려된다. 다른 구현예에서, 표 1의 IFN-α, IFN-β, IL-1, 및 IL-1Rα는 CRS 또는 사이토카인 폭풍에서 중요한 것으로 보인다. 다른 구현예에서, M-CSF는 미지의 중요성을 갖는다. 다른 구현예에서, 표 1에 수록된 임의의 사이토카인 또는 이의 조합은 CRS 또는 사이토카인 폭풍의 마커로서 사용될 수 있다.
표 2: 인간 및/또는 마우스에서 CRS 또는 사이토카인 폭풍 중 증가된 사이토카인의 패널
Figure pct00002
일 구현예에서, 표 2의 IL-15, IL-17, IL-18, IL-21, IL-22, IP-10, MCP-1, MIP-1α, MIP-1β, 및 TNF-α는 CRS 또는 사이토카인 폭풍에서 유의미한 것으로 고려된다. 다른 구현예에서, 표 2의 IL-27, MCP-3, PGE2, RANTES, TGF-β, TNF-αR1, 및 MIG는 CRS 또는 사이토카인 폭풍에서 중요한 것으로 보인다. 다른 구현예에서, IL-23 및 IL-25는 미지의 중요성을 갖는다. 다른 구현예에서, 표 2에 수록된 임의의 사이토카인, 또는 이의 조합은 CRS 또는 사이토카인 폭풍의 마커로서 사용될 수 있다.
당업자는 용어 "사이토카인"이 사이토카인(예를 들어, 인터페론 감마, 과립구 대식세포 콜로니 자극 인자, 종양 괴사 인자 알파), 케모카인(예를 들어, MIP 1 알파, MIP 1 베타, RANTES), 및 다른 가용성 염증 매개체, 예를 들어 반응성 산소 종 및 산화 질소를 포괄할 수 있음을 인정할 것이다.
일 구현예에서, 특정 사이토카인의 증가된 방출은, 유의미하거나, 중요하거나, 또는 미지의 중요성을 갖는지 여부와 무관하게, 특정 사이토카인이 사이토카인 폭풍의 일부임을 연역적으로 의미하지 않는다. 일 구현예에서, 적어도 하나의 사이토카인의 증가는 사이토카인 폭풍 또는 CRS의 결과가 아니다. 다른 구현예에서, CAR T-세포는 특정 사이토카인 또는 일군의 사이토카인의 증가된 수준의 공급원일 수 있다.
다른 구현예에서, 사이토카인 방출 증후군은 임의의 또는 모든 다음 증상을 특징으로 한다: 오한이 있거나 없는 발열, 병감, 피로, 식욕부진, 근육통, 관절통, 오심, 구토, 두통 피부 발적, 오심, 구토, 설사, 빠른 호흡, 저산소혈증, 심혈관 심계항진, 확장된 맥압, 저혈압, 증가된 심박출(초기), 잠재적으로 감소된 심박출(후기), 상승된 D-다이머, 출혈이 있거나 없는 저피브리노겐혈증, 질소혈증 간 트랜스아미나제 증가, 고빌리루빈혈증, 두통, 정신 상태 변화, 혼란, 섬망, 단어 찾기 장애 또는 노골적 실어증, 환각, 진전, 운동조절실조, 보행 변화, 발작. 다른 구현예에서, 사이토카인 폭풍은 IL-2 방출 및 림프구증식을 특징으로 한다. 다른 구현예에서, 사이토카인 폭풍은 CAR T-세포에 의해 방출되는 사이토카인의 증가를 특징으로 한다. 다른 구현예에서, 사이토카인 폭풍은 CAR T-세포 이외의 세포에 의해 방출되는 사이토카인의 증가를 특징으로 한다.
다른 구현예에서, 사이토카인 폭풍은 심장 기능장애, 성인 호흡 장애 증후군, 신경 독성, 신 및/또는 간 부전, 및 파종성 혈관내 응고를 포함하는, 잠재적으로 생명을 위협하는 합병증을 유도할 수 있다.
당업자는 사이토카인 방출 증후군(CRS) 또는 사이토카인 폭풍의 특징이 CRS 또는 사이토카인 폭풍의 촉발 이후 수 일 내지 수 주일에 일어나는 것으로 추정됨을 인정할 것이다. 일 구현예에서, CAR T-세포는 CRS 또는 사이토카인 폭풍의 촉발제이다. 다른 구현예에서, CRS 또는 사이토카인 폭풍의 촉발제는 CAR T-세포가 아니다.
일 구현예에서, 사이토카인 폭풍의 지표로서 사이토카인 수준 또는 농도의 측정은 사이토카인 수준 또는 농도에 있어서 -배 증가, 백분율(%) 증가, 순(net) 증가 또는 변화율로서 표현될 수 있다. 다른 구현예에서, 특정 수준 또는 농도 위의 절대 사이토카인 수준 또는 농도는 사이토카인 폭풍을 겪는 중이거나 곧 경험할 대상의 지표일 수 있다. 다른 구현예에서, 특정 수준 또는 농도, 예를 들어 CAR-T 세포 요법을 받지 않은 대조 대상에서 정상적으로 발견되는 수준 또는 농도의 절대 사이토카인 수준 또는 농도는 CAR T-세포를 받는 대상에서 사이토카인 폭풍의 발생을 억제 또는 감소시키기 위한 방법의 지표가 될 수 있다.
당업자는 용어 "사이토카인 수준"이 농도의 측정, 배수 변화의 측정, 백분율(%) 변화의 측정, 또는 비율 변화의 측정을 포괄할 수 있음을 인정할 것이다. 또한, 혈액, 타액, 혈청, 뇨, 및 혈장에서 사이토카인을 측정하기 위한 방법은 해당 분야에 잘 알려져 있다.
일 구현예에서는, 사이토카인 폭풍이 몇 가지 염증성 사이토카인의 상승과 관련된다는 인식에도 불구하고, IL-6 수준은 사이토카인 폭풍의 통상적 척도로서, 그리고/또는 사이토카인 폭풍 치료의 유효성의 통상적 척도로서 사용될 수 있다. 당업자는 다른 사이토카인이 사이토카인 폭풍의 마커로서 사용될 수 있음을 인정할 것으로, 예를 들어 TNF-α, IB-1α, IL-6, IL-8, IL-13, 또는 INF-γ 중 임의의 것, 또는 위의 임의의 조합이 CRS 또는 사이토카인 폭풍의 마커로서 사용될 수 있다. 또한, 사이토카인을 측정하기 위한 분석 방법은 해당 분야에 잘 알려져 있다. 당업자는 사이토카인 폭풍에 영향을 주는 방법이 사이토카인 방출 증후군(CRS)에 유사하게 영향을 줄 수 있음을 인정할 것이다.
일 구현예에서는, 사이토카인 방출 증후군 또는 사이토카인 폭풍을 경험하는 대상에서 사이토카인 생산을 저하 또는 억제시키는 방법이 본원에 개시된다. 다른 구현예에서는, 사이토카인 방출 증후군 또는 사이토카인 폭풍을 경험하기 쉬운 대상에서 사이토카인 생산을 저하 또는 억제시키는 방법이 본원에 개시된다. 다른 구현예에서, 본원에 개시되는 방법은 사이토카인 방출 증후군 또는 사이토카인 폭풍을 경험하는 대상에서 사이토카인 생산을 저하 또는 억제시키는데, 여기에서는 표 1 및/또는 2에 수록된 임의의 사이토카인 또는 일군의 사이토카인의 생산이 저하 또는 억제된다. 다른 구현예에서는, 사이토카인 IL-6 생산이 저하 또는 억제된다. 다른 구현예에서는, 사이토카인 IL-베타1 생산이 저하 또는 억제된다. 다른 구현예에서는, 사이토카인 IL-8 생산이 저하 또는 억제된다. 다른 구현예에서는, 사이토카인 IL-13 생산이 저하 또는 억제된다. 다른 구현예에서는, 사이토카인 TNF-알파 생산이 저하 또는 억제된다. 다른 구현예에서는, 사이토카인 IL-6 생산, IL-1베타 생산, 또는 TNF-알파 생산, 또는 이의 임의의 조합이 저하 또는 억제된다.
일 구현예에서, 사이토카인 방출 증후군은 등급이 나누어진다. 다른 구현예에서, 등급 1은 증상이 생명을 위협하지 않고, 예를 들어 발열, 오심, 피로, 두통, 근육통, 병감의 증상 치료만을 요하는 사이토카인 방출 증후군을 기술한다. 다른 구현예에서, 등급 2 증상은 산소, 수액 또는 저혈압에 대한 승압약과 같은 중등도 개입을 요구하고 이에 반응한다. 다른 구현예에서, 등급 3 증상은 적극적인 개입을 요구하고 이에 반응한다. 다른 구현예에서, 등급 4 증상은 생명을 위협하는 증상이고 산소호흡기를 요구하고 환자는 기관 독성을 나타낸다.
다른 구현예에서, 사이토카인 폭풍은 IL-6 및 인터페론 감마 방출을 특징으로 한다. 다른 구현예에서, 사이토카인 폭풍은 IL-6 방출을 특징으로 한다. 다른 구현예에서, 사이토카인 폭풍은 인터페론 감마 방출을 특징으로 한다. 다른 구현예에서, 사이토카인 폭풍은 표 1 및 2에 수록된 임의의 사이토카인 또는 이의 조합의 방출을 특징으로 한다. 다른 구현예에서, 사이토카인 폭풍은 해당 분야에 알려진 임의의 사이토카인 또는 이의 조합의 방출을 특징으로 한다.
일 구현예에서, 증상 개시는 주입 시작 수 분 내지 수 시간 후에 시작된다. 다른 구현예에서, 증상은 피크 사이토카인 수준과 일치한다.
일 구현예에서, CAR T-세포 암 요법을 받는 대상에서 사이토카인 방출 증후군(CRS) 또는 사이토카인 폭풍의 발생을 억제 또는 감소시키는 방법은 세포사멸 세포 집단 또는 세포사멸 세포 상등액 또는 이의 조합을 투여하는 것을 포함한다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 집단 또는 세포사멸 세포 상등액 또는 이의 조합은 CAR T-세포 요법을 보조할 수 있다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 집단 또는 세포사멸 세포 상등액 또는 이의 조합은 CRS 또는 사이토카인 폭풍의 발생을 억제 또는 감소시키는 데 보조할 수 있다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 집단 또는 세포사멸 세포 상등액 또는 이의 조합은 CRS 또는 사이토카인 폭풍을 치료하는 데 보조할 수 있다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 집단 또는 세포사멸 세포 상등액 또는 이의 조합은 CRS 또는 사이토카인 폭풍을 예방하는 데 보조할 수 있다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 집단 또는 세포사멸 세포 상등액 또는 이의 조합은 CRS 또는 사이토카인 폭풍을 개선하는 데 보조할 수 있다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 집단 또는 세포사멸 세포 상등액 또는 이의 조합은 CRS 또는 사이토카인 폭풍을 완화시키는 데 보조할 수 있다.
일 구현예에서, CAR T-세포 암 요법을 받는 대상에서 사이토카인 방출 증후군(CRS) 또는 사이토카인 폭풍의 발생을 억제 또는 감소시키는 방법은 부가적 물질을 투여하는 것을 포함한다. 다른 구현예에서, 부가적 물질은 CAR T-세포 요법을 보조할 수 있다. 일 구현예에서, TCR T-세포 암 요법을 받는 대상에서 사이토카인 방출 증후군(CRS) 또는 사이토카인 폭풍의 발생을 억제 또는 감소시키는 방법은 부가적 물질을 투여하는 것을 포함한다. 다른 구현예에서, 부가적 물질은 TCR T-세포 요법을 보조할 수 있다. 일 구현예에서, 수지상 세포 요법을 받는 대상에서 사이토카인 방출 증후군(CRS) 또는 사이토카인 폭풍의 발생을 억제 또는 감소시키는 방법은 부가적 물질을 투여하는 것을 포함한다. 다른 구현예에서, 부가적 물질은 수지상 세포 요법을 보조할 수 있다. 일 구현예에서, NK 세포 요법을 받는 대상에서 사이토카인 방출 증후군(CRS) 또는 사이토카인 폭풍의 발생을 억제 또는 감소시키는 방법은 부가적 물질을 투여하는 것을 포함한다. 다른 구현예에서, 부가적 물질은 NK 세포 요법을 보조할 수 있다.
일 구현예에서, CAR T-세포 암 요법을 받고, 세포사멸 세포 집단 또는 세포사멸 세포 상등액 또는 이의 조합을 투여받는 대상에서 사이토카인 방출 증후군(CRS) 또는 사이토카인 폭풍의 발생을 억제 또는 감소시키는 방법은 부가적 물질을 투여하는 것을 포함한다. 다른 구현예에서, 부가적 물질은 CAR T-세포 요법을 보조할 수 있다. 다른 구현예에서, 부가적 물질은 CRS 또는 사이토카인 폭풍의 발생을 억제 또는 감소시키는 데 보조할 수 있다. 다른 구현예에서, 부가적 물질은 CRS 또는 사이토카인 폭풍을 치료하는 데 보조할 수 있다. 다른 구현예에서, 부가적 물질은 CRS 또는 사이토카인 폭풍을 예방하는 데 보조할 수 있다. 다른 구현예에서, 부가적 물질은 CRS 또는 사이토카인 폭풍을 개선하는 데 보조할 수 있다. 다른 구현예에서, 부가적 물질은 CRS 또는 사이토카인 폭풍을 완화시키는 데 보조할 수 있다.
일 구현예에서, CAR T-세포 암 요법을 받는 대상에서 사이토카인 방출 증후군(CRS) 또는 사이토카인 폭풍의 발생을 억제 또는 감소시키는 방법은 부가적 물질을 투여하는 것을 포함한다. 다른 구현예에서, 부가적 물질은 CAR T-세포 요법을 보조할 수 있다. 다른 구현예에서, 부가적 물질은 CRS 또는 사이토카인 폭풍의 발생을 억제 또는 감소시키는 데 보조할 수 있다. 다른 구현예에서, 부가적 물질은 CRS 또는 사이토카인 폭풍을 치료하는 데 보조할 수 있다. 다른 구현예에서, 부가적 물질은 CRS 또는 사이토카인 폭풍을 예방하는 데 보조할 수 있다. 다른 구현예에서, 부가적 물질은 CRS 또는 사이토카인 폭풍을 개선하는 데 보조할 수 있다. 다른 구현예에서, 부가적 물질은 CRS 또는 사이토카인 폭풍을 완화시키는 데 보조할 수 있다.
일 구현예에서, 유해한 사이토카인 방출을 저하시키기 위한 부가적 물질은 세포사멸 세포 또는 상기 세포사멸 세포를 포함하는 조성물을 포함한다. 다른 구현예에서, 유해한 사이토카인 방출을 저하시키기 위한 부가적 물질은 세포사멸 세포 상등액 또는 상기 상등액을 포함하는 조성물을 포함한다. 다른 구현예에서, 유해한 사이토카인 방출을 저하시키기 위한 부가적 물질은 CTLA-4 차단제를 포함한다. 다른 구현예에서, 유해한 사이토카인 방출을 저하시키기 위한 부가적 물질은 세포사멸 세포 또는 세포사멸 세포 상등액 또는 이의 조합, 및 CTLA-4 차단제를 포함한다. 다른 구현예에서, 유해한 사이토카인 방출을 저하시키기 위한 부가적 물질은 알파-1 항-트립신 또는 이의 단편 또는 이의 유사체를 포함한다. 다른 구현예에서, 유해한 사이토카인 방출을 저하시키기 위한 부가적 물질은 세포사멸 세포 또는 세포사멸 세포 상등액 또는 이의 조합, 및 알파-1 항-트립신 또는 이의 단편 또는 이의 유사체를 포함한다. 다른 구현예에서, 유해한 사이토카인 방출을 저하시키기 위한 부가적 물질은 텔루륨-기반 화합물을 포함한다. 다른 구현예에서, 유해한 사이토카인 방출을 저하시키기 위한 부가적 물질은 세포사멸 세포 또는 세포사멸 세포 상등액 또는 이의 조합, 및 텔루륨-기반 화합물을 포함한다. 다른 구현예에서, 유해한 사이토카인 방출을 저하시키기 위한 부가적 물질은 면역 조절제를 포함한다. 다른 구현예에서, 유해한 사이토카인 방출을 저하시키기 위한 부가적 물질은 세포사멸 세포 또는 세포사멸 세포 상등액 또는 이의 조합, 및 면역 조절제를 포함한다. 다른 구현예에서, 유해한 사이토카인 방출을 저하시키기 위한 부가적 물질은 Treg 세포를 포함한다. 다른 구현예에서, 유해한 사이토카인 방출을 저하시키기 위한 부가적 물질은 세포사멸 세포 또는 세포사멸 세포 상등액 또는 이의 조합, 및 Treg 세포를 포함한다.
다른 구현예에서, 본원에 개시되는 조성물 및 방법은 CAR T-세포와 이필리무맙과 같은 하나 이상의 CTLA-4-차단제의 조합 요법을 이용한다. 다른 구현예에서, CTLA-4는 자기-관용의 유지를 돕는 T-세포 활성화의 강력한 억제제이다. 다른 구현예에서, 다른 구현예에서 항체인, 항-CTLA-4 차단제의 투여는 T-세포 활성화의 순(net) 효과를 생산한다. 다른 구현예에서, 본원에 개시되는 조성물 및 방법은 세포사멸 세포, CAR T-세포, 및 하나 이상의 CTLA-4-차단제를 포함하는 조합 요법을 이용한다.
다른 구현예에서, 본원에 개시되는 조성물 및 방법에 의해 치료, 예방, 억제, 개선, 발생 감소 또는 완화될 수 있는 CAR T-세포 또는 NK 세포 투여로부터 야기되는 다른 독성은 B 세포 형성부전 또는 종양 용해 증후군(TLS)을 포함한다.
일 구현예에서, CAR T-세포 암 요법을 받는 대상에서 사이토카인 방출 증후군(CRS) 또는 사이토카인 폭풍의 발생을 억제 또는 감소시키는 방법은 CAR T-세포 요법의 효능에 영향을 미치지 않는다. 다른 구현예에서, CAR T-세포 암 요법을 받는 대상에서 사이토카인 방출 증후군(CRS) 또는 사이토카인 폭풍의 발생을 억제 또는 감소시키는 방법은 CAR T-세포 요법의 효능을 5%보다 많이 감소시키지 않는다. 다른 구현예에서, CAR T-세포 암 요법을 받는 대상에서 사이토카인 방출 증후군(CRS) 또는 사이토카인 폭풍의 발생을 억제 또는 감소시키는 방법은 CAR T-세포 요법의 효능을 10%보다 많이 감소시키지 않는다. 다른 구현예에서, CAR T-세포 암 요법을 받는 대상에서 사이토카인 방출 증후군(CRS) 또는 사이토카인 폭풍의 발생을 억제 또는 감소시키는 방법은 CAR T-세포 요법의 효능을 15%보다 많이 감소시키지 않는다. 다른 구현예에서, CAR T-세포 암 요법을 받는 대상에서 사이토카인 방출 증후군(CRS) 또는 사이토카인 폭풍의 발생을 억제 또는 감소시키는 방법은 CAR T-세포 요법의 효능을 20%보다 많이 감소시키지 않는다.
세포독성을 정량화하는 임의의 적절한 방법은, CAR를 발현하도록 변형된 면역 세포에서 활성이 실질적으로 변화하지 않고 유지되는지 여부를 결정하기 위해 사용될 수 있다. 예를 들어, 세포독성은 실시예에 기술된 세포독성 분석과 같은 세포 배양-기반 분석을 사용하여 정량화될 수 있다. 세포독성 분석은 사멸된 세포의 DNA를 우선적으로 염색하는 염료를 이용할 수 있다. 다른 경우, 세포 집단에서 생존 세포와 사멸된 세포의 상대적 수를 측정하는 형광 및 발광 분석이 사용될 수 있다. 이러한 분석에서, 프로테아제 활성은 세포 생존 능력 및 세포 독성에 대한 마커로서 작용하고, 표지된 세포 투과성 펩티드는 샘플 중 생존 세포의 수에 비례하는 형광 신호를 발생한다. 다양한 세포독성 분석을 위한 키트가 Promega 및 Life Technologies와 같은 제조자로부터 상업적으로 입수 가능하다. 다른 구현예에서, 세포독성의 측정은 정성적일 수 있다. 다른 구현예에서, 세포독성의 측정은 정량적일 수 있다. 추가의 구현예에서 세포독성의 측정은 세포독성 사이토카인의 발현에서의 변화와 관련될 수 있다.
일 구현예에서, 본원에 개시되는 방법은 동종의 공여 세포의 거부를 극복하는데 유용한 추가적 단계를 포함한다. 일 구현예에서 이 방법은, 일 구현예에서 동종 CAR T-세포인, CAR T-세포의 투여 전에 완전 또는 부분적 림프구고갈의 단계를 포함한다. 다른 구현예에서, 림프구고갈은 상기 동종 T-세포가 지시되는 종양을 공격하는 것을 허용하기에 충분한 기간 동안, 그러나 골수 이식에 의한 숙주 면역 시스템의 구조를 요하는 데는 불충분한 정도까지 숙주 대 이식편 반응을 지연시키도록 조정된다. 다른 구현예에서, 림프절로부터 동종 T-세포의 퇴거를 지연시키는 물질, 예를 들어 2-아미노-2-[2-(4-옥틸페닐)에틸]프로판-1,3-디올(FTY720), 5-[4-페닐-5-(트리플루오로메틸)티오펜-2-일]-3-[3-(트리플루오로메틸)페닐]1,2,4-옥사디아졸(SEW2871), 3-(2-(헥실페닐아미노)-2-옥소에틸아미노)프로판산(W123), 2-암모니오-4-(2-클로로-4-(3-페녹시페닐티오)페닐)-2-(하이드록시메틸)부틸 하이드로겐 포스페이트(KRP-203 포스페이트) 또는 해당 분야에 알려진 다른 물질이, 효능을 갖고 이식편 대 숙주병의 개시 없는 동종 CAR T-세포의 사용을 허용하도록 본원에 개시되는 조성물 및 방법의 일부로서 사용될 수 있다. 일 구현예에서, 동종 T-세포에 의한 MHC 발현은 동종 세포의 거부를 감소시키기 위해 침묵시킨다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포는 동종 세포의 거부를 방지한다.
CAR T-세포 요법과 관련된 사이토카인 방출
일 구현예에서, 사이토카인 방출은 CAR T-세포 요법과 같은 면역 요법의 투여후 수 일 내지 2 주 사이에 일어난다. 일 구현예에서, 저혈압 및 다른 증상이 사이토카인 방출 이후, 즉 수 일 내지 수 주 사이에 뒤따른다. 따라서, 일 구현예에서, 세포사멸 세포 또는 세포사멸 세포 상등액은 예방으로서 면역 요법과 동시에 대상에 투여된다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 또는 상등액은 면역 요법의 투여 2 내지 3 일 후에 대상에 투여된다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 또는 상등액은 면역 요법의 투여 7 일 후에 대상에 투여된다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 또는 상등액은 면역 요법의 투여 10 일 후에 대상에 투여된다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 또는 상등액은 면역 요법의 투여 14 일 후에 대상에 투여된다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 또는 상등액은 면역 요법의 투여 2 내지 14 일 후에 대상에 투여된다.
다른 구현예에서, 세포사멸 세포 또는 세포사멸 세포 상등액은 면역 요법의 투여 2 내지 3 시간 후에 대상에 투여된다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 또는 상등액은 면역 요법의 투여 7 시간 후에 대상에 투여된다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 또는 상등액은 면역 요법의 투여 10 시간 후에 대상에 투여된다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 또는 상등액은 면역 요법의 투여 14 시간 후에 대상에 투여된다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 또는 상등액은 면역 요법의 투여 2 내지 14 시간 후에 대상에 투여된다.
대안의 구현예에서, 세포사멸 세포 또는 세포사멸 세포 상등액은 예방으로서 면역 요법 전에 대상에 투여된다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 또는 상등액은 면역 요법의 투여 1 일 전에 대상에 투여된다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 또는 상등액은 면역 요법의 투여 2 내지 3 일 전에 대상에 투여된다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 또는 상등액은 면역 요법의 투여 7 일 전에 대상에 투여된다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 또는 상등액은 면역 요법의 투여 10 일 전에 대상에 투여된다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 또는 상등액은 면역 요법의 투여 14 일 전에 대상에 투여된다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 또는 상등액은 면역 요법의 투여 2 내지 14 일 전에 대상에 투여된다.
다른 구현예에서, 세포사멸 세포 또는 세포사멸 세포 상등액은 면역 요법의 투여 2 내지 3 시간 전에 대상에 투여된다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 또는 상등액은 면역 요법의 투여 7 시간 전에 대상에 투여된다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 또는 상등액은 면역 요법의 투여 10 시간 전에 대상에 투여된다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 또는 상등액은 면역 요법의 투여 14 시간 전에 대상에 투여된다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 또는 상등액은 면역 요법의 투여 2 내지 14 시간 전에 대상에 투여된다.
다른 구현예에서, 세포사멸 세포 또는 세포사멸 세포 상등액은, 일단 사이토카인 방출 증후군이 일어나면 치료적으로 투여될 수 있다. 일 구현예에서, 세포사멸 세포 또는 상등액은, 일단 사이토카인 방출 증후군의 시작에 이르거나 입증되는 사이토카인 방출이 검출되면 투여될 수 있다. 일 구현예에서, 세포사멸 세포 또는 상등액은 증가된 사이토카인 수준, 또는 사이토카인 방출 증후군을 종결시킬 수 있고, 그 후유증을 방지할 수 있다.
다른 구현예에서, 세포사멸 세포 또는 세포사멸 세포 상등액은 복수의 시점에서 치료적으로 투여될 수 있다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 또는 세포사멸 세포 상등액의 투여는 본원에 기술되는 적어도 2 시점이다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 또는 세포사멸 세포 상등액의 투여는 본원에 기술되는 적어도 3 시점이다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 또는 세포사멸 세포 상등액의 투여는 CRS 또는 사이토카인 폭풍 이전, 그리고 일단 사이토카인 방출 증후군이 일어나면, 그리고 이의 임의의 조합이다.
일 구현예에서, 키메라 항원 수용체-발현 T-세포(CAR T-세포) 요법 및 세포사멸 세포 요법 또는 상등액은 함께 투여된다. 다른 구현예에서, CAR T-세포 요법은 세포사멸 세포 요법 또는 상등액 이후에 투여된다. 다른 구현예에서, CAR T-세포 요법은 세포사멸 세포 요법 또는 상등액 이전에 투여된다. 이 양태에 따르면 일 구현예에서, 세포사멸 세포 요법 또는 상등액은 CAR T-세포 요법의 대략 2 내지 3 주 후에 투여된다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 요법 또는 상등액은 CAR T-세포 요법의 대략 6 내지 7 주 후에 투여된다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 요법 또는 상등액은 CAR T-세포 요법의 대략 9 주 후에 투여된다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 요법은 CAR T-세포 요법 이후 수 개월까지 투여된다.
따라서, 일 구현예에서, 세포사멸 세포 또는 세포사멸 세포 상등액은 예방으로서 면역 요법과 동시에 대상에 투여된다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 또는 상등액은 면역 요법의 투여 2 내지 3 일 후에 대상에 투여된다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 또는 상등액은 면역 요법의 투여 7 일 후에 대상에 투여된다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 또는 상등액은 면역 요법의 투여 10 일 후에 대상에 투여된다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 또는 상등액은 면역 요법의 투여 14 일 후에 대상에 투여된다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 또는 상등액은 면역 요법의 투여 2 내지 14 일 후에 대상에 투여된다.
다른 구현예에서, 세포사멸 세포 또는 세포사멸 세포 상등액은 면역 요법의 투여 2 내지 3 시간 후에 대상에 투여된다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 또는 상등액은 면역 요법의 투여 7 시간 후에 대상에 투여된다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 또는 상등액은 면역 요법의 투여 10 시간 후에 대상에 투여된다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 또는 상등액은 면역 요법의 투여 14 시간 후에 대상에 투여된다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 또는 상등액은 면역 요법의 투여 2 내지 14 시간 후에 대상에 투여된다.
대안의 구현예에서, 세포사멸 세포 또는 세포사멸 세포 상등액은 예방으로서 면역 요법 전에 투여된다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 또는 상등액은 면역 요법의 투여 1 일 전에 대상에 투여된다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 또는 상등액은 면역 요법의 투여 2 내지 3 일 전에 대상에 투여된다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 또는 상등액은 면역 요법의 투여 7 일 전에 대상에 투여된다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 또는 상등액은 면역 요법의 투여 10 일 전에 대상에 투여된다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 또는 상등액은 면역 요법의 투여 14 일 전에 대상에 투여된다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 또는 상등액은 면역 요법의 투여 2 내지 14 일 전에 대상에 투여된다.
다른 구현예에서, 세포사멸 세포 또는 세포사멸 세포 상등액은 면역 요법의 투여 2 내지 3 시간 전에 대상에 투여된다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 또는 상등액은 면역 요법의 투여 7 시간 전에 대상에 투여된다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 또는 상등액은 면역 요법의 투여 10 시간 전에 대상에 투여된다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 또는 상등액은 면역 요법의 투여 14 시간 전에 대상에 투여된다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 또는 상등액은 면역 요법의 투여 2 내지 14 시간 전에 대상에 투여된다.
다른 구현예에서, 세포사멸 세포 또는 세포사멸 세포 상등액은, 일단 사이토카인 방출 증후군이 일어나면 치료적으로 투여될 수 있다. 일 구현예에서, 세포사멸 세포 또는 상등액은, 일단 사이토카인 방출 증후군의 시작에 이르거나 입증되는 사이토카인 방출이 검출되면 투여될 수 있다. 일 구현예에서, 세포사멸 세포 또는 상등액은 증가된 사이토카인 수준, 또는 사이토카인 방출 증후군을 종결시킬 수 있고, 그 후유증을 방지할 수 있다.
다른 구현예에서, 세포사멸 세포 또는 세포사멸 세포 상등액은 복수의 시점에서 치료적으로 투여될 수 있다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 또는 세포사멸 세포 상등액의 투여는 본원에 기술되는 적어도 2 시점이다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 또는 세포사멸 세포 상등액의 투여는 본원에 기술되는 적어도 3 시점이다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 또는 세포사멸 세포 상등액의 투여는 CRS 또는 사이토카인 폭풍 이전, 그리고 일단 사이토카인 방출 증후군이 일어나면, 그리고 이의 임의의 조합이다.
일 구현예에서, 키메라 항원 수용체-발현 T-세포(CAR T-세포) 요법 및 세포사멸 세포 요법 또는 상등액은 함께 투여된다. 다른 구현예에서, CAR T-세포 요법은 세포사멸 세포 요법 또는 상등액 이후에 투여된다. 다른 구현예에서, CAR T-세포 요법은 세포사멸 세포 요법 또는 상등액 이전에 투여된다. 이 양태에 따르면 일 구현예에서, 세포사멸 세포 요법 또는 상등액은 CAR T-세포 요법의 대략 2 내지 3 주 후에 투여된다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 요법 또는 상등액은 CAR T-세포 요법의 대략 6 내지 7 주 후에 투여된다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 요법 또는 상등액은 CAR T-세포 요법의 대략 9 주 후에 투여된다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 요법은 CAR T-세포 요법 이후 수 개월까지 투여된다.
다른 구현예에서, 부가적 물질은 예방으로서 면역 요법과 동시에 대상에 투여된다. 일 구현예에서 부가적 물질은 세포사멸 세포, 세포사멸 상등액, CTLA-4 차단제, 알파-1 항-트립신 또는 이의 단편 또는 이의 유사체, 또는 텔루륨-기반 화합물, 또는 면역-조절 화합물, 또는 이의 임의의 조합을 포함한다. 다른 구현예에서, 부가적 물질은 면역 요법의 투여 2 내지 3 일 후에 대상에 투여된다. 다른 구현예에서, 부가적 물질은 면역 요법의 투여 7 일 후에 대상에 투여된다. 다른 구현예에서, 부가적 물질은 면역 요법의 투여 10 일 후에 대상에 투여된다. 다른 구현예에서, 부가적 물질은 면역 요법의 투여 14 일 후에 대상에 투여된다. 다른 구현예에서, 부가적 물질은 면역 요법의 투여 2 내지 14 일 후에 대상에 투여된다.
다른 구현예에서, 부가적 물질은 면역 요법의 투여 2 내지 3 시간 후에 대상에 투여된다. 다른 구현예에서, 부가적 물질은 면역 요법의 투여 7 시간 후에 대상에 투여된다. 다른 구현예에서, 부가적 물질은 면역 요법의 투여 10 시간 후에 대상에 투여된다. 다른 구현예에서, 부가적 물질은 면역 요법의 투여 14 시간 후에 대상에 투여된다. 다른 구현예에서, 부가적 물질은 면역 요법의 투여 2 내지 14 시간 후에 대상에 투여된다.
대안의 구현예에서, 부가적 물질은 예방으로서 면역 요법 이전에 대상에 투여된다. 다른 구현예에서, 부가적 물질은 면역 요법의 투여 1 일 전에 대상에 투여된다. 다른 구현예에서, 부가적 물질은 면역 요법의 투여 2 내지 3 일 전에 대상에 투여된다. 다른 구현예에서, 부가적 물질은 면역 요법의 투여 7 일 전에 대상에 투여된다. 다른 구현예에서, 부가적 물질은 면역 요법의 투여 10 일 전에 대상에 투여된다. 다른 구현예에서, 부가적 물질은 면역 요법의 투여 14 일 전에 대상에 투여된다. 다른 구현예에서, 부가적 물질은 면역 요법의 투여 2 내지 14 일 전에 대상에 투여된다.
다른 구현예에서, 부가적 물질은 면역 요법의 투여 2 내지 3 시간 전에 대상에 투여된다. 다른 구현예에서, 부가적 물질은 면역 요법의 투여 7 시간 전에 대상에 투여된다. 다른 구현예에서, 부가적 물질은 면역 요법의 투여 10 시간 전에 대상에 투여된다. 다른 구현예에서, 부가적 물질은 면역 요법의 투여 14 시간 전에 대상에 투여된다. 다른 구현예에서, 부가적 물질은 면역 요법의 투여 2 내지 14 시간 전에 대상에 투여된다.
다른 구현예에서, 부가적 물질은, 일단 사이토카인 방출 증후군이 일어나면 치료적으로 투여된다. 일 구현예에서, 부가적 물질은, 일단 사이토카인 방출 증후군의 시작에 이르거나 입증되는 사이토카인 방출이 검출되면 투여된다. 일 구현예에서, 부가적 물질은 증가된 사이토카인 수준, 또는 사이토카인 방출 증후군을 종결시킬 수 있고, 그 후유증을 방지할 수 있다.
다른 구현예에서, 부가적 물질은 복수의 시점에서 치료적으로 투여될 수 있다. 다른 구현예에서, 부가적 물질의 투여는 본원에 기술되는 적어도 2 시점이다. 다른 구현예에서, 부가적 물질의 투여는 본원에 기술되는 적어도 3 시점이다. 다른 구현예에서, 부가적 물질의 투여는 CRS 또는 사이토카인 폭풍 이전, 그리고 일단 사이토카인 방출 증후군이 일어나면, 그리고 이의 임의의 조합이다.
일 구현예에서, 키메라 항원 수용체-발현 T-세포(CAR T-세포) 요법 및 부가적 물질은 함께 투여된다. 다른 구현예에서, CAR T-세포 요법은 부가적 물질 이후에 투여된다. 다른 구현예에서, CAR T-세포 요법은 부가적 물질 이전에 투여된다. 이 양태에 따르면 일 구현예에서, 부가적 물질은 CAR T-세포 요법의 대략 2 내지 3 주 후에 투여된다. 다른 구현예에서, 부가적 물질은 CAR T-세포 요법의 대략 6 내지 7 주 후에 투여된다. 다른 구현예에서, 부가적 물질은 CAR T-세포 요법의 대략 9 주 후에 투여된다. 다른 구현예에서, 부가적 물질은 CAR T-세포 요법 이후 수 개월까지 투여된다.
일 구현예에서, CAR T-세포는 대상에 대하여 이종이다. 일 구현예에서, CAR T-세포는 하나 이상의 공여자로부터 유래된다. 일 구현예에서, CAR T-세포는 하나 이상의 골수 공여자로부터 유래된다. 다른 구현예에서, CAR T-세포는 하나 이상의 혈액 은행 기증으로부터 유래된다. 일 구현예에서, 공여자는 일치되는 공여자이다. 일 구현예에서, CAR T-세포는 보편적 동종의 CAR T-세포이다. 다른 구현예에서, CAR T-세포는 공통유전자 CAR T-세포이다. 다른 구현예에서, CAR T-세포는 일치되지 않는 제3 공여자로부터 유래된다. 다른 구현예에서, CAR T-세포는 혼합된 제3자 공여 T-세포로부터 유래된다. 일 구현예에서, 공여자는 골수 공여자이다. 다른 구현예에서, 공여자는 혈액 은행 공여자이다. 일 구현예에서, 본원에 기술되는 조성물 및 방법의 CAR T-세포는 하나 이상의 MHC 무제한 종양-유도 키메라 수용체이다. 일 구현예에서, 비-자가 T-세포는 본원에 전체가 참조로 도입되는 미국 특허출원 제20130156794호에 기술된 것과 같이, 자가면역 반응을 방지 또는 최소화하기 위해 해당 분야에 알려진 프로토콜에 따라 조작 또는 투여될 수 있다.
다른 구현예에서, CAR T-세포는 대상에 대하여 자가이다. 일 구현예에서, 환자 자신의 세포가 사용된다. 이 구현예에서, 환자 자신의 세포가 사용될 경우, CAR T-세포 요법은 세포사멸 세포 요법 이후에 투여된다.
일 구현예에서, 세포사멸 세포는 대상에 대하여 이종이다. 일 구현예에서, 세포사멸 세포는 하나 이상의 공여자로부터 유래된다. 일 구현예에서, 세포사멸 세포는 하나 이상의 골수 공여자로부터 유래된다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포는 하나 이상의 혈액 은행 기증으로부터 유래된다. 일 구현예에서, 공여자는 일치되는 공여자이다. 일 구현예에서, 세포사멸 세포는 일치되지 않는 제3 공여자로부터 유래된다. 일 구현예에서, 세포사멸 세포는 보편적 동종의 세포사멸 세포이다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포는 공통유전자 공여자로부터 유래된다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포는 혼합된 제3자 공여 세포로부터 유래된다. 일 구현예에서, 공여자는 골수 공여자이다. 다른 구현예에서, 공여자는 혈액 은행 공여자이다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포는 대상에 대하여 자가이다. 이 구현예에서는 환자 자신의 세포가 사용된다.
일부 구현예에 따르면, 본원에 개시되는 치료적 단핵-풍부 세포 제제 또는 세포사멸 세포 상등액은 대상에 전신적으로 투여된다. 다른 구현예에서, 투여는 정맥내 경로를 통한다. 대안으로서, 치료적 단핵 풍부 세포 또는 상등액은 비경구, 복막내, 관절내, 근육내 및 피하 경로를 포함하지만, 이에 한정되지 않는 다른 다양한 경로에 따라 대상에 투여될 수 있다. 각각의 가능성은 본원에 개시되는 별개의 구현예를 나타낸다.
일부 구현예에 따르면, 본원에 개시되는 치료적 단핵-풍부 세포 제제 또는 부가적 물질은 대상에 전신적으로 투여된다. 다른 구현예에서, 투여는 정맥내 경로를 통한다. 대안으로서, 치료적 단핵 풍부 세포 또는 부가적 물질은 비경구, 복막내, 관절내, 근육내 및 피하 경로를 포함하지만, 이에 한정되지 않는 다른 다양한 경로에 따라 대상에 투여될 수 있다. 각각의 가능성은 본원에 개시되는 별개의 구현예를 나타낸다.
일 구현예에서, 제제는 전신적보다는 국소적 방식으로, 예를 들어, 환자의 신체의 특정 영역으로 직접 제제의 주사를 통해 투여된다. 다른 구현예에서, 특정 영역은 종양 또는 암을 포함한다.
다른 구현예에서, 치료적 단핵 풍부 세포 또는 상등액은, 이에 한정되지 않는 예를 들어 식염수, PBS, HBSS 등과 같은 적절한 생리적 완충액에 현탁되어 대상에 투여된다. 또한 현탁 매체는 세포의 생존 능력을 유지하는 데 도움이 되는 보충제를 추가로 포함할 수 있다. 다른 구현예에서, 부가적 물질은, 이에 한정되지 않는 예를 들어 식염수, PBS, HBSS 등과 같은 적절한 생리적 완충액에 현탁되어 대상에 투여된다.
일부 구현예에 따르면, 약제학적 조성물은 정맥내 투여된다. 다른 구현예에 따르면, 약제학적 조성물은 단일 용량으로 투여된다. 대안의 구현예에 따르면, 약제학적 조성물은 복수 용량으로 투여된다. 다른 구현예에 따르면, 약제학적 조성물은 2 용량으로 투여된다. 다른 구현예에 따르면, 약제학적 조성물은 3 용량으로 투여된다. 다른 구현예에 따르면, 약제학적 조성물은 4 용량으로 투여된다. 다른 구현예에 따르면, 약제학적 조성물은 5 이상의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에 따르면, 약제학적 조성물은 정맥내 주사로 제형화된다.
일 구현예에서, 대상에 변형된 CAR-발현 면역 세포를 제공하는 임의의 적절한 방법이 본원에 기술되는 방법을 위해 사용될 수 있다. 일 구현예에서, 대상에 세포를 제공하기 위한 방법은 조혈 세포 이식(hematopoietic cell transplantation, HCT), 공여자-유래 NK 세포의 암 환자로의 주입 또는 이의 조합을 포함한다.
다른 구현예에서는, 대상에 세포사멸 세포를 포함하는 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 키메라 항원 수용체-발현 T-세포(CAR T-세포) 요법을 받는 대상에서 사이토카인 방출 증후군 또는 사이토카인 폭풍의 발생을 억제 또는 감소시키는 방법이 본원에 제공된다.
다른 구현예에서는, 대상에 세포사멸 세포-포식세포 상등액과 같은 세포사멸 세포 상등액을 투여하는 단계를 포함하는, 키메라 항원 수용체-발현 T-세포(CAR T-세포) 요법을 받는 대상에서 사이토카인 방출 증후군 또는 사이토카인 폭풍의 발생을 억제 또는 감소시키는 방법이 본원에 제공된다.
다른 구현예에서는, 대상에 적어도 하나의 부가적 물질을 투여하는 단계를 포함하는, 키메라 항원 수용체-발현 T-세포(CAR T-세포) 요법을 받는 대상에서 사이토카인 방출 증후군 또는 사이토카인 폭풍의 발생을 억제 또는 감소시키는 방법이 본원에 제공된다.
특정 구현예에서, CAR T-세포 요법은 CAR T-세포 및 세포사멸 세포 또는 세포사멸 세포 상등액 중 하나, 또는 다른 것 또는 본원에 개시되는 부가적 물질의 조합을 포함하는 본원에 개시되는 조성물을 투여하는 것을 포함한다. 대안의 구현예에서, CAR T-세포 요법은 세포사멸 세포 또는 세포사멸 세포 상등액 중 하나, 또는 부가적 물질 또는 본원에 개시되는 이의 조합을 포함하는 조성물 및 CAR T-세포를 포함하는 본원에 개시되는 조성물을 투여하는 것을 포함한다.
비 CAR T-세포 응용과 관련된 사이토카인 방출
일 구현예에서는, 세포사멸 세포 또는 세포사멸 상등액을 포함하는 조성물을 대상에 투여하는 단계를 포함하는, 사이토카인 방출 증후군 또는 사이토카인 폭풍을 경험하거나 사이토카인 방출 증후군 또는 사이토카인 폭풍에 취약한 대상에서 사이토카인 생산을 저하 또는 억제시키는 방법이 본원에 개시되는데, 여기에서 상기 투여는 상기 대상에서 사이토카인 생산을 저하 또는 억제시킨다. 다른 구현예에서, 사이토카인 생산의 저하 또는 억제는 사이토카인 방출 증후군 또는 사이토카인 폭풍을 경험하거나 사이토카인 방출 증후군 또는 사이토카인 폭풍에 취약하고 세포사멸 세포 또는 세포사멸 상등액을 투여받지 않은 대상과 비교한다. 다른 구현예에서, 사이토카인 생산을 저하 또는 억제시키는 방법은 전-염증성 사이토카인 생산을 저하 또는 억제시킨다. 다른 구현예에서, 사이토카인 생산을 저하 또는 억제시키는 방법은 적어도 하나의 전-염증성 사이토카인의 생산을 저하 또는 억제시킨다. 다른 구현예에서, 사이토카인 생산을 저하 또는 억제시키는 방법은 적어도 사이토카인 IL-6의 생산을 저하 또는 억제시킨다. 다른 구현예에서, 사이토카인 생산을 저하 또는 억제시키는 방법은 적어도 사이토카인 IL-1베타의 생산을 저하 또는 억제시킨다. 다른 구현예에서, 사이토카인 생산을 저하 또는 억제시키는 방법은 적어도 사이토카인 TNF-알파의 생산을 저하 또는 억제시킨다. 다른 구현예에서, 사이토카인 생산을 저하 또는 억제시키는 본원에 개시되는 방법은, 사이토카인 방출 증후군 또는 사이토카인 폭풍을 경험하거나 사이토카인 방출 증후군 또는 사이토카인 폭풍에 취약하고 세포사멸 세포 또는 세포사멸 상등액을 투여받지 않은 대상과 비교하여, 상기 대상에서 사이토카인 IL-6, IL-1β, 또는 TNF-α, 또는 임의의 조합의 생산의 감소 또는 억제를 초래한다.
암 또는 종양은 또한 전-염증성 사이토카인을 포함하는 사이토카인의 절대 수준에 영향을 미칠 수 있다. 대상에서 종양 부담의 수준은 사이토카인 수준, 특히 전-염증성 사이토카인에 영향을 미칠 수 있다. 당업자는 구절 "저하 또는 억제시키다" 또는 이의 문법적 변형이 사이토카인 생산의 배수 저하 또는 억제, 또는 사이토카인 생산의 순 저하 또는 억제, 또는 백분율(%) 저하 또는 억제를 포괄할 수 있거나, 사이토카인 생산의 저하 또는 억제의 변화 비율을 포괄할 수 있음을 인정할 것이다.
다른 구현예에서는, 세포사멸 세포 또는 세포사멸 세포를 포함하는 조성물을 대상에 투여하는 단계를 포함하는, 사이토카인 방출 증후군 또는 사이토카인 폭풍을 경험하거나 사이토카인 방출 증후군 또는 사이토카인 폭풍에 취약한 대상에서 사이토카인 생산을 저하 또는 억제시키는 방법이 본원에 개시된다.
다른 구현예에서는, 세포사멸 세포-포식세포 상등액과 같은 세포사멸 세포 상등액, 또는 상기 상등액을 포함하는 조성물을 대상에 투여하는 단계를 포함하는, 사이토카인 방출 증후군 또는 사이토카인 폭풍을 경험하거나 사이토카인 방출 증후군 또는 사이토카인 폭풍에 취약한 대상에서 사이토카인 생산을 저하 또는 억제시키는 방법이 본원에 개시된다.
다른 구현예에서는, 세포사멸 세포, 세포사멸 상등액, CTLA-4 차단제, 알파-1 항-트립신 또는 이의 단편 또는 이의 유사체, 텔루륨-기반 화합물, 또는 면역 조절제를 포함하는 그룹으로부터 선택되는 부가적 물질, 또는 이의 임의의 조합과 같은 세포사멸 세포 상등액, 또는 상기 상등액을 포함하는 조성물을 대상에 투여하는 단계를 포함하는, 사이토카인 방출 증후군 또는 사이토카인 폭풍을 경험하거나 사이토카인 방출 증후군 또는 사이토카인 폭풍에 취약한 대상에서 사이토카인 생산을 저하 또는 억제시키는 방법이 본원에 개시된다.
일 구현예에서, 감염은 대상에서 사이토카인 방출 증후군 또는 사이토카인 폭풍의 원인이 된다. 일 구현예에서, 감염은 인플루엔자 감염이다. 일 구현예에서, 인플루엔자 감염은 H1N1이다. 다른 구현예에서, 인플루엔자 감염은 H5N1 조류 독감이다. 다른 구현예에서, 감염은 중증의 급성 호흡기 증후군(SARS)이다. 다른 구현예에서, 대상은 엡스타인-바르 바이러스-관련 혈구포식성 림프조직구증식증(HLH)이 있다. 다른 구현예에서, 감염은 패혈증이다. 일 구현예에서, 패혈증은 그람-음성이다. 다른 구현예에서, 감염은 말라리아이다. 다른 구현예에서, 감염은 에볼라 바이러스 감염이다. 다른 구현예에서, 감염은 천연두 바이러스이다. 다른 구현예에서, 감염은 전신적 그람-음성 박테리아 감염이다. 다른 구현예에서, 감염은 야리쉬-헤륵스하이머(Jarisch-Herxheimer) 증후군이다.
일 구현예에서, 대상에서 사이토카인 방출 증후군 또는 사이토카인 폭풍의 원인은 혈구포식성 림프조직구증식증(HLH)이다. 다른 구현예에서, HLH는 산발적 HLH이다. 다른 구현예에서, HLH는 대식세포 활성화 증후군(MAS)이다. 다른 구현예에서, 대상에서 사이토카인 방출 증후군 또는 사이토카인 폭풍의 원인은 MAS이다.
일 구현예에서, 대상에서 사이토카인 방출 증후군 또는 사이토카인 폭풍의 원인은 만성 관절염이다. 다른 구현예에서, 대상에서 사이토카인 방출 증후군 또는 사이토카인 폭풍의 원인은 스틸병(Still's Disease)으로도 알려진 전신적 소아 특발성 관절염(systemic Juvenile Idiopathic Arthritis, sJIA)이다.
일 구현예에서, 대상에서 사이토카인 방출 증후군 또는 사이토카인 폭풍의 원인은 크리오피린-관련 주기성 증후군(Cryopyrin-associated Periodic Syndrome, CAPS)이다. 다른 구현예에서, CAPS는 가족성 한냉 두드러기(Familial Cold Urticaria, FCU)로도 알려진 가족성 한냉 자가-염증성 증후군(Familial Cold Auto-inflammatory Syndrome, FCAS)을 포함한다. 다른 구현예에서, CAPS는 머클-웰 증후군(Muckle-Well Syndrome, MWS)을 포함한다. 다른 구현예에서, CAPS는 만성 영아 신경 피부 관절(Chronic Infantile Neurological Cutaneous and Articular, CINCA) 증후군을 포함한다. 또 다른 구현예에서, CAPS는 FCAS, FCU, MWS, 또는 CINCA 증후군, 또는 이의 임의의 조합을 포함한다. 다른 구현예에서, 대상에서 사이토카인 방출 증후군 또는 사이토카인 폭풍의 원인은 FCAS이다. 다른 구현예에서, 대상에서 사이토카인 방출 증후군 또는 사이토카인 폭풍의 원인은 FCU이다. 다른 구현예에서, 대상에서 사이토카인 방출 증후군 또는 사이토카인 폭풍의 원인은 MWS이다. 다른 구현예에서, 대상에서 사이토카인 방출 증후군 또는 사이토카인 폭풍의 원인은 CINCA 증후군이다. 또 다른 구현예에서, 대상에서 사이토카인 방출 증후군 또는 사이토카인 폭풍의 원인은 FCAS, FCU, MWS, 또는 CINCA 증후군, 또는 이의 임의의 조합이다.
다른 구현예에서, 대상에서 사이토카인 방출 증후군 또는 사이토카인 폭풍의 원인은, CIASI 유전자로도 알려진 NLRP3 유전자에서 기능적 돌연변이의 유전적 또는 신규 획득을 포함하는 크리오피린증(cryopyrinopathy)이다.
일 구현예에서, 대상에서 사이토카인 방출 증후군 또는 사이토카인 폭풍의 원인은 유전적 자가-염증성 장애이다.
일 구현예에서, 염증성 사이토카인의 방출의 촉발제는 리포폴리사카라이드(LPS), 그람-양성 독소, 진균 독소, 글리코실포스파티딜이노시톨(GPI), 또는 RIG-1 유전자 발현의 조절이다.
다른 구현예에서, 사이토카인 방출 증후군 또는 사이토카인 폭풍을 경험하는 대상은 감염성 질환을 갖지 않는다. 일 구현예에서, 대상은 급성 췌장염을 갖는다. 다른 구현예에서, 대상은 조직 장해를 갖는데, 이는 일 구현예에서 중증 화상 또는 외상이다. 다른 구현예에서, 대상은 급성 호흡 장애 증후군을 갖는다. 다른 구현예에서, 대상은 물질 사용에 따른 사이토카인 방출 증후군 또는 사이토카인 폭풍을 갖는다. 다른 구현예에서, 대상은 독소 흡입에 따른 사이토카인 방출 증후군 또는 사이토카인 폭풍을 갖는다.
다른 구현예에서, 대상은 면역요법의 수용에 따른 사이토카인 방출 증후군 또는 사이토카인 폭풍을 갖는데, 이는 일 구현예에서 초효능제(superagonistic) CD28-특이적 단클론 항체(CD28SA)의 면역요법이다. 일 구현예에서, CD28SA는 TGN1412이다. 다른 구현예에서, 면역요법은 CAR T-세포 요법이다. 다른 구현예에서, 면역요법은 수지상 세포 요법이다.
다른 구현예에서, 세포사멸 세포 또는 상등액 또는 CTLA-4 차단제, 알파-1 항-트립신 또는 이의 단편 또는 이의 유사체, 텔루륨-기반 화합물, 또는 면역 조절제, 또는 이의 임의의 조합이 약제학적 조성물의 투여로부터 야기되는 사이토카인 방출 증후군 또는 사이토카인 폭풍을 조절하기 위해 사용될 수 있다. 일 구현예에서, 약제학적 조성물은 옥살리플라틴, 시타라빈, 레날리도마이드, 또는 이의 조합이다.
다른 구현예에서, 세포사멸 세포 또는 상등액 또는 CTLA-4 차단제, 알파-1 항-트립신 또는 이의 단편 또는 이의 유사체, 텔루륨-기반 화합물, 또는 면역 조절제, 또는 이의 임의의 조합이 항체의 투여로부터 야기되는 사이토카인 방출 증후군 또는 사이토카인 폭풍을 조절하기 위해 사용될 수 있다. 일 구현예에서, 항체는 단클론 항체이다. 다른 구현예에서, 항체는 다클론이다. 일 구현예에서, 항체는 리툭시맙이다. 다른 구현예에서, 항체는 오르토클론 OKT3(무로모납-CD3)이다. 다른 구현예에서, 항체는 알렘투주맙, 토시투주맙, CP-870,893, LO-CD2a/BTI-322 또는 TGN1412이다.
다른 구현예에서, 염증성 사이토카인 생산의 조절이 유리할 수 있는 질환의 예로는 암, 알러지, 임의 유형의 감염, 독소 충격 증후군, 패혈증, 임의 유형의 자가면역 질환, 관절염, 크론병(Crohn's disease), 낭창, 건선, 또는 전형적 특징이 대상에서 유해한 작용을 야기하는 독성 사이토카인 방출인 임의의 다른 질환을 포함한다.
T-세포 수용체( TCR )
다른 구현예에서, 본원에 개시되는 조성물 및 방법은 세포사멸 세포 또는 세포사멸 세포 상등액, 또는 CTLA-4 차단제, 알파-1 항-트립신 또는 이의 단편 또는 이의 유사체, 텔루륨-기반 화합물, 또는 면역 조절제, 또는 이의 임의의 조합, 및 CAR T-세포를 대신하거나 이에 추가된 디자이너 T-세포 수용체의 조합 요법을 이용한다. 일 구현예에서, TCR 요법은 관심 있는 단백질의 에피토프에 특이적인 T-세포 수용체(TCR)를 T-세포로 도입하는 것을 포함한다. 다른 구현예에서, 관심 있는 단백질은 종양-관련 항원이다. 다른 구현예에서, 유전자 조작된 TCR은 T-세포 활성화 도메인과 함께 종양 세포에서 주조직적합성 복합체(MHC)에 의해 제시되는 종양 항원 에피토프를 인식한다. 다른 구현예에서, T-세포 수용체는 이의 세포내 또는 멤브레인 국재화와 무관하게 항원을 인식한다. 다른 구현예에서, TCR은 종양 관련 항원을 세포내 발현하는 종양 세포를 인식한다. 일 구현예에서 TCR은 내부 항원을 인식한다. 유전적으로 변형된 다양한 T-세포 수용체 및 이의 생산 방법이 해당 분야에 알려져 있다.
일 구현예에서, TCR 요법은 혈액학적(림프종 및 백혈병) 및 고형 종양(난치성 흑색종, 육종)을 갖는 것을 포함하는 후기 전이성 질환을 치료, 예방, 억제, 개선, 이의 발생을 감소, 또는 완화시키기 위해 사용된다. 다른 구현예에서, T-세포 수용체는 NY-ESO-1 에피토프에 결합하도록 유전적으로 변형되고, TCR-조작된 T-세포는 항-NY-ESO-1이다. 다른 구현예에서, T-세포 수용체는 HPV-16 E6 에피토프에 결합하도록 유전적으로 변형되고, TCR-조작된 T-세포는 항-HPV-16 E6이다. 다른 구현예에서, T-세포 수용체는 HPV-16 E7 에피토프에 결합하도록 유전적으로 변형되고, TCR-조작된 T-세포는 항-HPV-16 E7이다. 다른 구현예에서, T-세포 수용체는 MAGE A3/A6 에피토프에 결합하도록 유전적으로 변형되고, TCR-조작된 T-세포는 항-MAGE A3/A6이다. 다른 구현예에서, T-세포 수용체는 MAGE A3 에피토프에 결합하도록 유전적으로 변형되고, TCR-조작된 T-세포는 항-MAGE A3이다. 다른 구현예에서, T-세포 수용체는 SSX2 에피토프에 결합하도록 유전적으로 변형되고, TCR-조작된 T-세포는 항-SSX2이다.
일 구현예에서, 본원에 개시되는 조성물 및 방법에 사용되는 TCR 요법은 Sadelain et al.,(ibid)의 표 1에 수록된 악성종양을 치료한다.
수지상 세포
다른 구현예에서, 세포사멸 세포 또는 세포사멸 상등액 또는 CTLA-4 차단제, 알파-1 항-트립신 또는 이의 단편 또는 이의 유사체, 텔루륨-기반 화합물, 또는 면역 조절제, 또는 이의 임의의 조합은 수지상 세포와 함께 면역요법의 안전성을 증가시키기 위해 사용될 수 있다. 일 구현예에서, 수지상 세포(dentritic cell, DC)는 항원 물질을 처리하고 이를 면역 시스템의 T-세포의 세포 표면으로 제시하고 이에 의해 신규 및 기억 항원 둘 다에 대해 T-세포를 감작시킬 수 있는 포유류 면역 시스템의 항원-생산 및 제시 세포이다. 다른 구현예에서, DC는 가장 강력한 항원-생산 세포로, 선천적 및 적응 면역 시스템 사이의 전달자이다. DC 세포는, 일 구현예에서, 종양을 공격하고 용해시키는 주효 세포의 생성을 통해 특이적 항종양 면역성을 준비시키기 위해 사용될 수 있다.
수지상 세포는 외부 환경, 예를 들어 피부(여기에는 랑게르한스(Langerhans) 세포로 불리는 전문화된 수지상 세포 유형이 있다) 및 코, 폐, 위장 및 장관의 내벽과 접촉하는 조직에 존재한다. 이들은 또한 혈액에서 미성숙 상태로 발견될 수도 있다. 일단 활성화되면, 이들은 적응 면역 반응을 개시하고 형성하기 위해 이들이 T-세포 및 B 세포와 상호작용하는 림프절로 이동한다. 특정 발달 단계에서, 이들은 세포에 그 이름을 부여한 분지된 돌기인 수지를 성장시킨다. 수지상 세포는 특정 종양 항원을 발현하도록 조작될 수 있다.
T-세포 활성화에 요구되는 3 가지 신호는 다음과 같다: (i) 자기 MHC 분자에서 동족 항원의 제시; (ii) 멤브레인-결합된 수용체-리간드 쌍에 의한 동시자극; 그리고 (iii) 뒤따르는 면역 반응의 분극화를 지시하는 가용성 인자. 수지상 세포(DC)는 T-세포 활성화에 필요한 3 가지 신호 모두를 제공할 수 있어 이들을 우수한 암 백신 플랫폼으로 만든다.
따라서, 다른 구현예에서는, 수지상 세포 및 세포사멸 세포 또는 세포사멸 상등액 또는 CTLA-4 차단제, 알파-1 항-트립신 또는 이의 단편 또는 이의 유사체, 텔루륨-기반 화합물, 또는 면역 조절제, 또는 이의 임의의 조합을 포함하는 조성물이 본원에 개시된다.
다른 구현예에서는, 세포사멸 세포 또는 세포사멸 상등액 또는 CTLA-4 차단제, 알파-1 항-트립신 또는 이의 단편 또는 이의 유사체, 텔루륨-기반 화합물, 또는 면역 조절제, 또는 이의 임의의 조합을 포함하는 조성물을 대상에 투여하는 단계를 포함하는, 수지상 세포 요법을 받는 대상에서 사이토카인 방출 증후군 또는 사이토카인 폭풍의 발생을 억제 또는 감소시키는 방법이 본원에 개시된다. 다른 구현예에서, 수지상 세포 요법을 받는 대상에서 사이토카인 방출 증후군 또는 사이토카인 폭풍을 치료하는 방법은, 세포사멸 세포 또는 세포사멸 상등액 또는 CTLA-4 차단제, 알파-1 항-트립신 또는 이의 단편 또는 이의 유사체, 텔루륨-기반 화합물, 또는 면역 조절제, 또는 이의 임의의 조합을 포함하는 조성물을 상기 대상에 투여하는 단계를 포함한다. 다른 구현예에서, 수지상 세포 요법을 받는 대상에서 사이토카인 방출 증후군 또는 사이토카인 폭풍을 예방하는 방법은, 세포사멸 세포 또는 세포사멸 상등액 또는 CTLA-4 차단제, 알파-1 항-트립신 또는 이의 단편 또는 이의 유사체, 텔루륨-기반 화합물, 또는 면역 조절제, 또는 이의 임의의 조합을 포함하는 조성물을 상기 대상에 투여하는 단계를 포함한다. 다른 구현예에서, 수지상 세포 요법을 받는 대상에서 사이토카인 방출 증후군 또는 사이토카인 폭풍을 개선하는 방법은, 세포사멸 세포 또는 세포사멸 상등액 또는 CTLA-4 차단제, 알파-1 항-트립신 또는 이의 단편 또는 이의 유사체, 텔루륨-기반 화합물, 또는 면역 조절제, 또는 이의 임의의 조합을 포함하는 조성물을 상기 대상에 투여하는 단계를 포함한다. 다른 구현예에서, 수지상 세포 요법을 받는 대상에서 사이토카인 방출 증후군 또는 사이토카인 폭풍을 완화하는 방법은, 세포사멸 세포 또는 세포사멸 상등액 또는 CTLA-4 차단제, 알파-1 항-트립신 또는 이의 단편 또는 이의 유사체, 텔루륨-기반 화합물, 또는 면역 조절제, 또는 이의 임의의 조합을 포함하는 조성물을 상기 대상에 투여하는 단계를 포함한다.
일 구현예에서는, 수지상 세포 및 부가적 물질을 포함하는 조성물이 본원에 개시되는데, 여기에서 상기 부가적 물질은 세포사멸 세포, 세포사멸 상등액, CTLA-4 차단제, 알파-1 항-트립신 또는 이의 단편 또는 이의 유사체, 텔루륨-기반 화합물, 또는 면역 조절제, 또는 이의 임의의 조합을 포함한다.
다른 구현예에서는, 세포사멸 세포 또는 세포사멸 세포 상등액 또는 CTLA-4 차단제, 알파-1 항-트립신 또는 이의 단편 또는 이의 유사체, 텔루륨-기반 화합물, 또는 면역 조절제, 또는 이의 임의의 조합을 포함하는 조성물을 대상에 투여하는 단계를 포함하는, 사이토카인 방출 증후군 또는 사이토카인 폭풍을 경험하거나 사이토카인 방출 증후군 또는 사이토카인 폭풍에 취약한 대상에서 사이토카인 생산을 저하 또는 억제시키는 방법이 본원에 개시된다.
다른 구현예에서는, 자가면역 독성의 발생을 억제 또는 감소시키는 방법이 본원에 개시되는데, 상기 방법은 세포사멸 세포 또는 세포사멸 세포 집단, 또는 세포사멸 세포 상등액 또는 이의 조성물 또는 CTLA-4 차단제, 알파-1 항-트립신 또는 이의 단편 또는 이의 유사체, 텔루륨-기반 화합물, 또는 면역 조절제, 또는 이의 임의의 조합을 포함하는 조성물을 상기 대상에 투여하는 단계를 포함한다.
알파-1- 항트립신 ( AAT )
알파-1-항트립신(AAT)은 주로 간에서 생산되는 순환 52-kDa 당단백질이다. AAT는 원래 세린 프로테아제 억제제로 알려져 있고 유전자 SERPINA1에 의해 암호화된다. AAT는 호중구 엘라스타제를 억제하고, 순환 AAT의 유전적 결핍은 폐-조직 악화 및 간 질환을 야기한다. 건강한 개체에서 혈청 AAT 농도는 염증 중에 2 배 증가한다.
AAT 수준과 몇 가지 염증성 질환의 중증도 사이에는 음성적 관련이 있다. 예를 들어, AAT의 감소된 수준 또는 활성이 HIV 감염, 당뇨병, C형 간염 감염-유도의 만성 간 질환, 및 몇 가지 유형의 맥관염이 있는 환자에서 기술되어 있다.
인간 혈청 유래의 알파-1-항-트립신(AAT)이 전-염증성 사이토카인의 생산을 감소시키고, 항-염증성 사이토카인을 유도하고, 또한 수지상 세포의 성숙을 방해한다는 것을 보여주는 증거가 증가하고 있다.
사실, 인간 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)로의 AAT 첨가는 LPS 유도의 TNF-α 및 IL-1β 방출을 억제하지만 IL-1 수용체 길항제(IL-1Ra) 및 IL-10 생산을 증가시킨다.
AAT는 시험관내 IL-1β-매개의 췌장 섬 독성을 감소시키고, 또한 AAT 단독요법은 마우스에서 섬 동종이식 생존을 연장시키고 항원-특이적 면역 용인을 촉진하고, 그리고 비-비만 당뇨병(NOD) 마우스에서 당뇨병의 발생을 지연시킨다. AAT는 실험적 모델에서 LPS-유도의 급성 폐 장해를 억제하는 것을 보여주었다. 최근, AAT는 급성 심근 허혈-재관류 장해의 마우스 모델에서 심부전의 중증도 및 경색의 크기를 감소시키는 것을 보여주었다.
본원에 참조로 도입되는 바와 같이, 임상-등급 인간 AAT(hAAT)의 단독요법은 순환 전-염증성 사이토카인을 감소시키고, 이식편 대 숙주병(Graft vs Host Disease, GvHD) 중증도를 약화시키고, 또한 실험적 동종 골수 전이 후 동물 생존을 연장시켰다(Tawara et al., Proc Natl Acad Sci U S A. 2012 Jan 10;109(2):564-9). AAT 처치는 동종반응성 T 주효 세포의 팽창을 감소시켰지만 T 조절 T-세포(Treg)의 회수를 증진시켜, 공여 T 주효 세포 대 T 조절 세포의 비율을 병리적 과정의 감소에 유리하게 변형시켰다. 시험관내에서 AAT는 TNF-α 및 IL-1β와 같은 전염증성 사이토카인의 LPS-유도 시험관내 분비를 억제하고, 항-염증성 사이토카인 IL-10의 생산을 증진시키고, 숙주 수지상 세포에서 NF-κβ 전좌를 손상시켰다. 본원에 참조로 도입되는 Marcondes, Blood. 2014(Oct 30;124(18):2881-91)에서는 AAT 처치가 GvHD를 개선할 뿐만 아니라 이식편 대 백혈병(graft vs leukemia, GVL) 효과를 보존하고 아마도 증진시키는 것을 보여주었다.
일 구현예에서는, 키메라 항원 수용체-발현 T-세포(CAR T-세포) 및 알파-1-항트립신(AAT)을 포함하는 조성물이 본원에 제공된다. 다른 구현예에서, CAR T-세포 및 알파-1-항트립신(AAT)은 별개의 조성물에 존재한다. 다른 구현예에서, AAT는 전장 AAT 또는 이의 기능적 단편을 포함한다. 다른 구현예에서, AA는 전장 AAT의 유사체 또는 이의 기능적 단편을 포함한다. 다른 구현예에서, AAT를 포함하는 조성물은 세포사멸 세포 또는 세포사멸 세포 상등액을 추가로 포함한다.
다른 구현예에서는, 알파-1-항트립신(AAT)을 포함하는 조성물을 대상에 투여하는 단계를 포함하는, 키메라 항원 수용체-발현 T-세포(CAR T-세포) 요법을 받는 대상에서 사이토카인 방출 증후군 또는 사이토카인 폭풍의 발생을 억제 또는 감소시키는 방법이 본원에 개시된다. 다른 구현예에서, 키메라 항원 수용체-발현 T-세포(CAR T-세포) 요법을 받는 대상에서 사이토카인 방출 증후군 또는 사이토카인 폭풍을 치료하는 방법은 알파-1-항트립신(AAT)을 포함하는 조성물을 상기 대상에 투여하는 단계를 포함한다. 다른 구현예에서, 키메라 항원 수용체-발현 T-세포(CAR T-세포) 요법을 받는 대상에서 사이토카인 방출 증후군 또는 사이토카인 폭풍을 예방하는 방법은 알파-1-항트립신(AAT)을 포함하는 조성물을 상기 대상에 투여하는 단계를 포함한다. 다른 구현예에서, 키메라 항원 수용체-발현 T-세포(CAR T-세포) 요법을 받는 대상에서 사이토카인 방출 증후군 또는 사이토카인 폭풍을 개선하는 방법은 알파-1-항트립신(AAT)을 포함하는 조성물을 상기 대상에 투여하는 단계를 포함한다. 다른 구현예에서, 키메라 항원 수용체-발현 T-세포(CAR T-세포) 요법을 받는 대상에서 사이토카인 방출 증후군 또는 사이토카인 폭풍을 완화하는 방법은 알파-1-항트립신(AAT)을 포함하는 조성물을 상기 대상에 투여하는 단계를 포함한다.
다른 구현예에서는, 알파-1-항트립신(AAT)을 포함하는 조성물을 대상에 투여하는 단계를 포함하는, 사이토카인 방출 증후군 또는 사이토카인 폭풍을 경험하거나 사이토카인 방출 증후군 또는 사이토카인 폭풍에 취약한 대상에서 사이토카인 생산을 저하 또는 억제시키는 방법이 본원에 개시된다.
일 구현예에서, AAT는 사이토카인 방출을 조절하기 위해 단독으로 투여된다. 다른 구현예에서, AAT 및 세포사멸 세포 또는 이의 조성물, 또는 세포사멸 세포 상등액 또는 이의 조성물 둘 다 사이토카인 방출을 조절하기 위해 투여된다.
면역-조절제
당업자는 면역-조절제가 세포외 매개자, 수용체, 세포내 신호전달 경로의 매개자, 및 번역과 전사의 조절자를 포괄할 수 있음을 인정할 것이다. 일 구현예에서, 본원에 개시되는 부가적 물질은 해당 분야에 알려진 면역-조절제이다. 다른 구현예에서, 본원에 개시된 방법에서 면역-조절제의 사용은 적어도 하나의 사이토카인의 수준을 감소시킨다. 다른 구현예에서, 본원에 개시되는 방법에서 면역-조절제의 사용은 CRS 또는 사이토카인 폭풍을 감소 또는 억제시킨다.
일 구현예에서, 면역-조절제는 사이토카인 또는 케모카인의 방출을 차단, 억제 또는 감소시키는 화합물을 포함한다. 다른 구현예에서, 면역-조절제는 IL-21 또는 IL-23, 또는 이의 조합의 방출을 차단, 억제 또는 감소시키는 화합물을 포함한다. 다른 구현예에서, 면역-조절제는 케모카인 수용체-5(CCR5) 수용체 길항제 계열의 항레트로바이러스 약물, 예를 들어 마라비록((maraviroc)을 포함한다. 다른 구현예에서, 면역-조절제는 항-DNAM-1 항체를 포함한다. 다른 구현예에서, 면역-조절제는 헤파린 설페이트, ATP, 및 요산, 또는 이의 임의의 조합을 포함하는 그룹으로부터 선택되는 손상/병원균-관련 분자(DAMP/PAMP)를 포함한다. 다른 구현예에서, 면역-조절제는 시알산 결합 Ig-유사 렉틴(Siglecs)를 포함한다. 다른 구현예에서, 면역-조절제는 용인의 세포 매개자, 예를 들어 조절 CD4+ CD25+ T 세포(Treg) 또는 불변체 자연 살해 T 세포(iNK T-세포)를 포함한다. 다른 구현예에서, 면역-조절제는 룩솔리티닙 및 토파시티닙을 포함하는 그룹으로부터 선택되는 JAK2 또는 JAK3 억제제를 포함한다. 다른 구현예에서, 면역-조절제는 비장 티로신 키나제(Syk)의 억제제, 예를 들어 포스타마티닙을 포함한다. 다른 구현예에서, 면역-조절제는 히스톤 데아세틸라제 억제제 보리노스타트 아세틸화된 STAT3을 포함한다. 다른 구현예에서, 면역-조절제는 네딜화(neddylation) 억제제, 예를 들어 MLN4924를 포함한다. 다른 구현예에서, 면역-조절제는 miR-142 길항제를 포함한다. 다른 구현예에서, 면역-조절제는 시티딘의 화학적 유사체, 예를 들어 아자시티딘을 포함한다. 다른 구현예에서, 면역-조절제는 히스톤 데아세틸라제의 억제제, 예를 들어 보리노스타트를 포함한다. 다른 구현예에서, 면역-조절제는 히스톤 메틸화의 억제제를 포함한다.
텔루륨 -기반 화합물
텔루륨은 인간 신체에서 발견되는 미량 원소이다. 다양한 텔루륨 화합물이 면역-조절 특성을 갖고, 다양한 전임상 및 임상 연구에서 유익한 효과를 갖는 것을 보여주었다. 일 구현예에서, 본원에 개시되는 방법은 부가적 물질로서 텔루륨-기반 화합물의 투여를 포함한다.
일 구현예에서, 텔루륨-기반 화합물은 적어도 하나의 사이토카인의 분비를 억제한다. 다른 구현예에서, 텔루륨-기반 화합물은 적어도 하나의 사이토카인의 분비를 감소시킨다. 다른 구현예에서, 텔루륨-기반 화합물은 사이토카인 방출 증후군(CRS) 또는 사이토카인 폭풍을 억제 또는 감소시킨다.
일 구현예에서는, 키메라 항원 수용체-발현 T-세포(CAR T-세포) 및 텔루륨-기반 화합물을 포함하는 조성물이 본원에 개시된다. 다른 구현예에서, CAR T-세포 및 텔루륨-기반 화합물은 별개의 조성물에 존재한다. 다른 구현예에서, AAT는 전장 AAT 또는 이의 기능적 단편을 포함한다. 다른 구현예에서, AA는 전장 AAT의 유사체 또는 이의 기능적 단편을 포함한다.
다른 구현예에서는, 텔루륨-기반 화합물을 포함하는 조성물을 대상에 투여하는 단계를 포함하는, 키메라 항원 수용체-발현 T-세포(CAR T-세포) 요법을 받는 대상에서 사이토카인 방출 증후군 또는 사이토카인 폭풍의 발생을 억제 또는 감소시키는 방법이 본원에 개시된다. 다른 구현예에서, 키메라 항원 수용체-발현 T-세포(CAR T-세포) 요법을 받는 대상에서 사이토카인 방출 증후군 또는 사이토카인 폭풍을 치료하는 방법은 텔루륨-기반 화합물을 포함하는 조성물을 상기 대상에 투여하는 단계를 포함한다. 다른 구현예에서, 키메라 항원 수용체-발현 T-세포(CAR T-세포) 요법을 받는 대상에서 사이토카인 방출 증후군 또는 사이토카인 폭풍을 예방하는 방법은 텔루륨-기반 화합물을 포함하는 조성물을 상기 대상에 투여하는 단계를 포함한다. 다른 구현예에서, 키메라 항원 수용체-발현 T-세포(CAR T-세포) 요법을 받는 대상에서 사이토카인 방출 증후군 또는 사이토카인 폭풍을 개선하는 방법은 텔루륨-기반 화합물을 포함하는 조성물을 상기 대상에 투여하는 단계를 포함한다. 다른 구현예에서, 키메라 항원 수용체-발현 T-세포(CAR T-세포) 요법을 받는 대상에서 사이토카인 방출 증후군 또는 사이토카인 폭풍을 완화하는 방법은 텔루륨-기반 화합물을 포함하는 조성물을 상기 대상에 투여하는 단계를 포함한다.
다른 구현예에서는, 텔루륨-기반 화합물을 포함하는 조성물을 대상에 투여하는 단계를 포함하는, 사이토카인 방출 증후군 또는 사이토카인 폭풍을 경험하거나 사이토카인 방출 증후군 또는 사이토카인 폭풍에 취약한 대상에서 사이토카인 생산을 저하 또는 억제시키는 방법이 본원에 개시된다.
일 구현예에서, 텔루륨-기반 화합물은 사이토카인 방출을 조절하기 위해 단독으로 투여된다. 다른 구현예에서, 텔루륨-기반 화합물 및 세포사멸 세포 또는 이의 조성물, 또는 세포사멸 세포 상등액 또는 이의 조성물 둘 다 사이토카인 방출을 조절하기 위해 투여된다.
유전자 변형
일 구현예에서, T-세포, 수지상 세포, 및/또는 세포사멸 세포의 유전자 변형은 RNA, DNA, 재조합 바이러스, 또는 이의 조합을 사용하여 달성될 수 있다. 일 구현예에서, 감마 레트로바이러스 또는 렌티바이러스로부터 유래된 벡터가 본원에 개시되는 조성물 및 방법에 사용된다. 다른 구현예에서, 이들 벡터는 이식유전자의 잠재적인 영구적 발현을 갖고 숙주 게놈으로 통합될 수 있고 낮은 내재적 면역원성을 갖는다. 다른 구현예에서, 숙주 게놈으로 통합되고/되거나 낮은 내재적 면역원성을 갖는 다른 벡터가 본원에 개시되는 조성물 및 방법에 사용될 수 있다. 다른 구현예에서, 비-바이러스-벡터-매개의 잠꾸러기 트랜스포존 시스템이 CAR 및 다른 유전자를 T-세포로 삽입하기 위해 사용된다. 다른 구현예에서는, "자살 유전자"가 T-세포로 통합되어, 여기에서 전-세포사멸 유전자의 발현이 전신적으로 전달된 약물에 대하여 반응성인 유도 가능한 프로모터의 조절 하에 놓이게 된다.
일 구현예에서, 유전자 변형은 일시적일 수 있다. 다른 구현예에서, 유전자 변형은 전령 RNA(mRNA)를 이용할 수 있다. 다른 구현예에서, 다수의 세포가 일시적으로 조작된 T-세포, 예를 들어 mRNA-형질감염된 T-세포로 여러 경우에 주입될 수 있다. 다른 구현예에서, 시험관내-전사된 mRNA를 사용한 림프구의 RNA-기반 전기천공은 대략 1 주일 동안 단백질의 일시적 발현을 매개하고 바이러스 벡터의 통합 위험을 제거한다. 다른 구현예에서, mRNA-전사된 수지상 세포 또는 mRNA-전기천공된 T 및 NK 림프구.
유전적으로 변형된 T-세포는 부작용 없이 10 년 넘게 양자 전이 후 지속될 수 있어, 유전적으로 변형된 인간 T-세포가 근본적으로 안전한 것을 나타낸다.
다른 구현예에서, 본원에 개시되는 조성물 및 방법에서의 유전자 변형은 해당 분야에 알려진 임의의 방법일 수 있다.
세포사멸 세포
일 구현예에서, 본원에 개시되는 조성물 및 방법에서의 사용을 위한 세포사멸 세포("Apocell")는, 본원에 참조로 전체가 도입되는, WO 2014/087408에 기술되어 있다. 다른 구현예에서, 본원에 개시되는 조성물 및 방법에서의 사용을 위한 세포사멸 세포는 해당 분야에 알려진 임의의 방법으로 생산된다. 다른 구현예에서, 본원에 개시되는 조성물 및 방법에서의 사용을 위한 세포사멸 세포는 요법을 받는 대상에 대하여 자가이다. 다른 구현예에서, 본원에 개시되는 조성물 및 방법에서의 사용을 위한 세포사멸 세포는 요법을 받는 대상과 동종이다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포를 포함하는 조성물은 본원에 개시되거나 해당 분야에 알려진 세포사멸 세포를 포함한다.
일 구현예에서, 세포사멸 세포는 단핵-풍부 세포를 포함하는 세포 제제를 포함하는데, 여기에서 제제는 적어도 85% 단핵 세포를 포함하고, 제제에서 세포의 적어도 40%는 초기-세포사멸 상태이고, 제제에서 세포의 적어도 85%는 생존 세포이고, 제제는 15% 이하의 CD15high 발현 세포를 포함한다.
당업자는 용어 "초기-세포사멸 상태"가 세포사멸의 후기 징후 없이 세포사멸의 초기 징후를 보이는 세포를 포괄할 수 있음을 인정할 것이다. 세포에서 세포사멸의 초기 징후의 예는 포스파티딜세린(PS)의 노출 및 미토콘드리아 멤브레인 전위의 손실을 포함한다. 후기 사건의 예는 세포로 요오드화 프로피디움(PI)의 진입 허용 및 최종 DNA 절단을 포함한다. 세포가 "초기 세포사멸" 상태에 있음을 기록하기 위해, 일 구현예에서, 아넥신-V 및 PI 염색에 의한 PS 노출 검출이 사용되고, 아넥신 V로 염색되지만 PI로는 염색되지 않는 세포가 "초기 세포사멸 세포"로 고려된다. 다른 구현예에서, 아넥신-V FITC 및 PI 둘 다에 의해 염색되는 세포는 "후기 세포사멸 세포"로 고려된다. 다른 구현예에서, 아넥신-V 또는 PI로 염색되지 않는 세포는 비-세포사멸 생존 세포로 고려된다.
일 구현예에서, 세포사멸 세포는 초기 세포사멸 상태에 있는 세포를 포함한다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포는 상기 세포의 적어도 90%가 초기 세포사멸 상태에 있는 세포를 포함한다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포는 상기 세포의 적어도 80%가 초기 세포사멸 상태에 있는 세포를 포함한다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포는 상기 세포의 적어도 70%가 초기 세포사멸 상태에 있는 세포를 포함한다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포는 상기 세포의 적어도 60%가 초기 세포사멸 상태에 있는 세포를 포함한다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포는 상기 세포의 적어도 50%가 초기 세포사멸 상태에 있는 세포를 포함한다.
일 구현예에서, 세포사멸 세포를 포함하는 조성물은 항-응고제를 추가로 포함한다.
일 구현예에서, 항-응고제는 다음으로 구성되는 그룹으로부터 선택된다: 헤파린, 시트르산 덱스트로스(ACD) 제형 A 및 이의 조합.
일 구현예에서, 조성물은 메틸프레드니솔론을 추가로 포함한다. 일 구현예에서, 메틸프레드니솔론의 농도는 30 ㎍/mL를 초과하지 않는다. 일 구현예에서, 약 140 X 106 내지 210 X 106 세포사멸 세포가 투여된다.
일 구현예에서, 세포사멸 세포는 고용량으로 사용된다. 일 구현예에서, 세포사멸 세포는 고농도로 사용된다. 일 구현예에서, 인간 세포사멸 다형핵 호중구(polymorphonuclear neutrophil, PMN)가 사용된다. 일 구현예에서, 50%가 세포사멸 세포인 일군의 세포가 사용된다. 일 구현예에서, 세포사멸 세포는 메이-김자-염색된(May-Giemsa-stained) 세포제제(cytopreps)에 의해 입증된다. 일 구현예에서, 세포의 생존능력은 트리판 블루 배제에 의해 평가된다. 일 구현예에서, 세포의 세포사멸 및 괴사 상태는 아넥신 V/요오드화 프로피디움 염색에 의해 FACS 검출로 확인된다.
일 구현예에서, 10x106 세포사멸 세포의 용량이 투여된다. 다른 구현예에서, 10x107 세포사멸 세포의 용량이 투여된다. 다른 구현예에서, 10x108 세포사멸 세포의 용량이 투여된다. 다른 구현예에서, 10x109 세포사멸 세포의 용량이 투여된다. 다른 구현예에서, 10x1010 세포사멸 세포의 용량이 투여된다. 다른 구현예에서, 10x1011 세포사멸 세포의 용량이 투여된다. 다른 구현예에서, 10x1012 세포사멸 세포의 용량이 투여된다. 다른 구현예에서, 10x105 세포사멸 세포의 용량이 투여된다. 다른 구현예에서, 10x104 세포사멸 세포의 용량이 투여된다. 다른 구현예에서, 10x103 세포사멸 세포의 용량이 투여된다. 다른 구현예에서, 10x102 세포사멸 세포의 용량이 투여된다.
일 구현예에서, 고용량의 세포사멸 세포가 투여된다. 일 구현예에서, 35x106 세포사멸 세포의 용량이 투여된다. 다른 구현예에서, 210x106 세포사멸 세포의 용량이 투여된다. 다른 구현예에서, 70x106 세포사멸 세포의 용량이 투여된다. 다른 구현예에서, 140x106 세포사멸 세포의 용량이 투여된다. 다른 구현예에서, 35 내지 210x106 세포사멸 세포의 용량이 투여된다.
일부 구현예에 따르면, 본원에 개시되는 생산 방법에 따라 단핵-풍부 세포 조성물을 수득하는 것은 백혈구성분채집술에 의해 수행된다. 당업자는 용어 "백혈구성분채집술(leukapheresis)"이 백혈구가 공여자의 혈액으로부터 분리되는 성분채집술 절차를 포괄할 수 있음을 인정할 것이다. 일부 구현예에 따르면, 공여자의 혈액은 백혈구성분채집술을 받고, 이에 따라 단핵-풍부 세포 조성물이 본원에 개시되는 생산 방법에 따라 수득된다. 해당 분야에 알려진 바와 같이, 수집된 세포의 응고를 방지하기 위해 백혈구성분채집술 중에 적어도 하나의 항응고제의 사용이 요구된다는 것이 주목된다.
일부 구현예에 따르면, 백혈구성분채집술 절차는 본원에 개시되는 생산 방법에 따른 단핵-풍부 세포 조성물의 수집을 허용하도록 구성된다. 일부 구현예에 따르면, 백혈구성분채집술에 의해 수득되는 세포 수집물은 적어도 65%, 다른 구현예에서는, 적어도 70%, 또는 적어도 80% 단핵 세포를 포함한다. 각각의 가능성은 본원에 개시되는 별개의 구현예를 나타낸다. 일부 구현예에 따르면, 세포-공여자로부터의 혈장은 본원에 개시되는 생산 방법에 따른 단핵-풍부 세포 조성물의 수득과 병행하여 수집된다. 일부 구현예에 따르면, 세포-공여자로부터의 혈장 약 300 내지 600 mL가 본원에 개시되는 생산 방법에 따른 단핵-풍부 세포 조성물의 수득과 병행하여 수집된다. 일부 구현예에 따르면, 본원에 개시되는 생산 방법에 따른 단핵-풍부 세포 조성물의 수득과 병행하여 수집되는 혈장은 동결 및/또는 배양 배지의 일부로서 사용된다. 각각의 가능성은 본원에 개시되는 별개의 구현예를 나타낸다. 본원에 개시되는 조성물 및 방법에서의 사용을 위한 세포사멸 세포의 풍부한 집단을 수득하는 추가의 구체적인 방법은, 그 전체가 본원에 참조로 도입되는 WO 2014/087408에서 발견될 수 있다.
일부 구현예에 따르면, 초기 단핵-풍부 세포 제제는 적어도 65% 단핵 세포, 적어도 70%, 또는 적어도 80% 단핵 세포를 포함하는 한편, 본원에 개시되는 최종 약제학적 조성물은 본원에 개시되는 생산 방법에 따라 적어도 85%, 다른 구현예에서, 적어도 90%, 또는 적어도 95% 단핵 세포를 포함하는 것이 주목될 것이다. 각각의 가능성은 본원에 개시되는 별개의 구현예를 나타낸다.
일 구현예에서, 세포사멸 세포는 정맥내, 피하, 결절내, 종양내, 척추강내, 흉막내, 복막내 및 흉선으로 직접 투여를 포함하지만 이에 제한되지 않는, 해당 분야에 알려진 임의의 방법에 의해 투여될 수 있다.
일 구현예에서, 세포사멸 세포는 동종이다. 일 구현예에서 세포사멸 세포는 혼합된 제3자 공여자로부터 유래된다. 일 구현예에서, 본원에 개시되는 방법은, 그 전체가 본원에 참조로 도입되는 미국 특허출원 20130156794에 기술된 하나 이상의 단계를 포함하는, 동종 공여자 세포의 거부를 극복하는 데 유용한 추가적 단계를 포함한다. 일 구현예에서, 이 방법은, 일 구현예에서 동종 세포사멸 세포인, 세포사멸 세포의 투여 전 완전 또는 부분적 림프구고갈의 단계를 포함한다. 일 구현예에서, 림프구고갈은 동종 세포사멸 세포가 사이토카인 방출을 조절하는 것을 허용하기에 충분한 시기 동안 숙주 대 이식편 반응을 지연시키도록 조정된다. 다른 구현예에서, 이 방법은 림프절로부터 동종 세포사멸 T-세포의 퇴거를 지연시키는 물질, 예를 들어 2-아미노-2-[2-(4-옥틸페닐)에틸]프로판-1,3-디올(FTY720), 5-[4-페닐-5-(트리플루오로메틸)티오펜-2-일]-3-[3-(트리플루오로메틸)페닐]1,2,4-옥사디아졸(SEW2871), 3-(2-(헥실페닐아미노)-2-옥소에틸아미노)프로판산(W123), 2-암모니오-4-(2-클로로-4-(3-페녹시페닐티오)페닐)-2-(하이드록시메틸)부틸 하이드로겐 포스페이트(KRP-203 포스페이트) 또는 해당 분야에 알려진 다른 물질을 투여하는 단계를 포함하고, 효능을 갖고 이식편 대 숙주병의 개시 없는 동종 세포사멸 세포의 사용을 허용하도록 본원에 개시되는 조성물 및 방법의 일부로서 사용될 수 있다. 다른 구현예에서, 동종 세포사멸 T-세포에 의한 MHC 발현은 동종 세포의 거부를 감소시키기 위해 침묵시킨다.
다른 구현예에서, 이 방법은 수용자에 투여 전 공여자로부터의 WBC 유래 세포사멸 세포를 방사선 조사하는 단계를 포함한다. 일 구현예에서, 세포는 세포사멸 세포 집단 내에 잔류된 생존 가능 세포의 증식 및/또는 활성화를 회피할 방식으로 방사선 조사된다. 다른 구현예에서, 방사선 조사된 세포사멸 세포는 이들의 모든 초기 세포사멸-, 면역 조절-, 안정성-특성을 보존한다. 다른 구현예에서, 방사선 조사 단계는 UV 조사를 사용한다. 다른 구현예에서, 방사선 조사 단계는 감마 조사를 사용한다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포는 저하된 백분율의 살아있는 비-세포사멸 세포를 포함하거나, 세포사멸 세포 제제 내에 존재하는 임의의 살아있는 비-세포사멸 세포의 억제된 세포 활성화를 갖는 제제를 포함하거나, 또는 세포사멸 세포 제제 내에 존재하는 임의의 살아있는 비-세포사멸 세포의 감소된 증식을 갖는 제제를 포함하거나, 또는 이의 임의의 조합이다.
일 구현예에서, 초기 세포사멸 단계의 단핵 세포를 포함하는 혼합된 단핵 세포사멸 세포 제제, 여기에서 상기 혼합된 단핵 세포사멸 세포는 저하된 백분율의 살아있는 비-세포사멸 세포, 임의의 살아있는 비-세포사멸 세포의 억제된 세포 활성화를 갖는 제제, 또는 임의의 살아있는 비-세포사멸 세포의 감소된 증식을 갖는 제제, 또는 이의 임의의 조합을 포함한다. 다른 구현예에서, 혼합된 단핵 세포사멸 세포는 방사선 조사된다. 다른 구현예에서는, 일부 구현예에서, 공여된 혈액으로부터 수득된 백혈구 분획(WBC)으로부터 유래되는 혼합된 단핵 세포사멸 세포 제제가 본원에 개시된다.
일 구현예에서, 세포사멸 세포 제제는 방사선 조사된다. 다른 구현예에서, 상기 방사선 조사는 감마 조사 또는 UV 조사를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 방사선 조사된 제제는 비-방사선 조사된 세포사멸 세포 제제와 비교하여 감소된 수의 비-세포사멸 세포를 갖는다. 다른 구현예에서, 방사선 조사된 제제는 비-방사선 조사된 세포사멸 세포 제제와 비교하여 감소된 수의 증식 세포를 갖는다. 다른 구현예에서, 방사선 조사된 제제는 비-방사선 조사된 세포사멸 세포 제제와 비교하여 감소된 수의 잠재적 면역학적 활성 세포를 갖는다.
일 구현예에서, 혼합된 혈액은 공여자와 수용자 사이에 일치되지 않는 제3자 혈액을 포함한다.
당업자는 용어 "혼합된(pooled)"이 복수의 공여자로부터 수집되고, 준비되고 가능하게는 이후의 사용을 위해 저장된 혈액을 포괄할 수 있음을 인정할 것이다. 이러한 혈액의 조합된 집단은 이후 혼합된 단핵 세포사멸 세포 제제를 생산하도록 처리될 수 있다. 다른 구현예에서, 혼합된 단핵 세포사멸 세포 제제는 단핵 세포사멸 세포의 용이하게 이용 가능한 공급이 가능하도록 보장한다. 다른 구현예에서, 세포는 세포사멸이 유도되는 배양 단계 직전에 혼합된다. 다른 구현예에서, 세포는 배양 단계 이후 재현탁의 단계에서 혼합된다. 다른 구현예에서, 세포는 방사선 조사 단계 직전에 혼합된다. 다른 구현예에서, 세포는 방사선 조사 단계 이후에 혼합된다. 다른 구현예에서, 세포는 제제의 방법에서 임의의 단계에 혼합된다.
일 구현예에서, 혼합된 세포사멸 세포 제제는 약 2 내지 25 단위 사이의 혈액에 존재하는 세포로부터 유래된다. 다른 구현예에서, 상기 혼합된 세포사멸 세포 제제는 약 2 내지 5, 2 내지 10, 2 내지 15, 2 내지 20, 5 내지 10, 5 내지 15, 5 내지 20, 5 내지 25, 10 내지 15, 10 내지 20, 10 내지 25, 6 내지 13, 또는 6 내지 25 단위 사이의 혈액에 존재하는 세포로 구성된다. 다른 구현예에서, 상기 혼합된 세포사멸 세포 제제는 약 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 또는 25 단위의 혈액에 존재하는 세포로 구성된다. 요구되는 혈액의 단위 수는 또한 혈액으로부터의 WBC 회수 효율에 의존한다. 예를 들어, 저효율 WBC 회수는 추가적 단위의 요구를 유도할 것인 한편, 고효율 WBC 회수는 더 적은 단위 요구를 유도할 것이다. 일부 구현예에서, 각각의 단위는 혈액의 백(bag)이다. 다른 구현예에서, 혼합된 세포사멸 세포 제제는 적어도 25 단위의 혈액, 적어도 50 단위의 혈액, 또는 적어도 100 단위의 혈액에 존재하는 세포로 구성된다. 각각의 가능성은 본원에 개시되는 별개의 구현예를 나타낸다.
일 구현예에서, 혈액의 단위는 혈액 기증으로부터의 백혈구(WBC) 분획을 포함한다. 다른 구현예에서, 기증은 혈액 센터 또는 혈액 은행으로부터 유래될 수 있다. 다른 구현예에서, 기증은 혼합된 세포사멸 세포 제제의 제조시 모아진 병원내 공여자로부터 유래될 수 있다. 다른 구현예에서, 복수의 공여자로부터의 WBC를 포함하는 혈액의 단위는 본원에 개시되는 조성물 및 이의 방법의 목적을 위해 생성된 독립적 혈액 은행에 저장 및 보존된다. 다른 구현예에서, 본원에 개시되는 조성물 및 이의 방법의 목적을 위해 개발된 혈액 은행은 복수의 공여자로부터의 WBC를 포함하는 혈액의 단위를 공급할 수 있고 백혈구성분채집 단위를 포함한다.
일 구현예에서, 혼합된 WBC의 단위는 HLA 일치에 의해 제한되지 않는다. 그러므로, 생성된 혼합된 세포사멸 세포 제제는 HLA 일치에 의해 제한되지 않는 세포 집단을 포함한다. 따라서, 특정 구현예에서 혼합된 단핵 세포사멸 세포 제제는 동종 세포를 포함한다.
HLA 일치에 의해 제한되지 않는 혼합된 WBC로부터 유래된 혼합된 단핵 세포사멸 세포 제제의 장점은 용이하게 이용 가능한 WBC의 공급원이고 WBC를 수득하는 비용이 감소된다는 것이다.
일 구현예에서, 혼합된 혈액은 HLA 일치와 무관한 복수의 공여자로부터의 혈액을 포함한다. 다른 구현예에서, 혼합된 혈액은 수용자와의 HLA 일치가 고려된 복수의 공여자로부터의 혈액을 포함한다. 예를 들어, 여기에서는 공여자와 수용자 사이에 1 HLA 대립형질, 2 HLA 대립형질, 3 HLA 대립형질, 4 HLA 대립형질, 5 HLA 대립형질, 6 HLA 대립형질, 또는 7 HLA 대립형질이 일치한다. 다른 구현예에서는, 복수의 공여자가 부분적으로 일치하는데, 예를 들어 공여자의 일부는 HLA 일치되어, 여기에서는 1 HLA 대립형질, 2 HLA 대립형질, 3 HLA 대립형질, 4 HLA 대립형질, 5 HLA 대립형질, 6 HLA 대립형질, 또는 7 HLA 대립형질이 수용자와 공여자의 일부 사이에 일치한다. 각각의 가능성은 본원에 개시되는 구현예를 포함한다.
특정 구현예에서, 일부 생존 가능한 비-세포사멸 세포(세포사멸 저항성)는 아래 기술되는 세포사멸 단계의 유도 이후 유지될 수 있다. 이들 생존 가능한 비-세포사멸 세포의 존재는, 일 구현예에서, 방사선 조사 단계 이전에 관찰되었다. 이들 생존 가능한 비-세포사멸 세포는 증식 또는 활성화될 수 있다. 일 구현예에서, 복수의 공여자로부터 유래된 혼합된 세포사멸 세포 제제는 숙주에 대하여 활성화되거나, 서로에 대하여 활성화되거나, 또는 둘 다일 수 있다.
일 구현예에서, 본원에 개시되는 방사선 조사된 세포 제제는 비-방사선 조사된 세포 제제와 비교하여 억제된 세포 활성화 및 감소된 증식을 갖는다. 다른 구현예에서, 방사선 조사는 감마 조사 또는 UV 조사를 포함한다. 다른 구현예에서, 방사선 조사된 세포 제제는 비-방사선 조사된 세포 제제와 비교하여 감소된 수의 비-세포사멸 세포를 갖는다. 다른 구현예에서, 방사선 조사는 약 15 그레이 단위(Gy)를 포함한다. 다른 구현예에서, 방사선 조사는 약 20 그레이 단위(Gy)를 포함한다. 다른 구현예에서, 방사선 조사는 약 25 그레이 단위(Gy)를 포함한다. 다른 구현예에서, 방사선 조사는 약 30 그레이 단위(Gy)를 포함한다. 다른 구현예에서, 방사선 조사는 약 35 그레이 단위(Gy)를 포함한다. 다른 구현예에서, 방사선 조사는 약 40 그레이 단위(Gy)를 포함한다. 다른 구현예에서, 방사선 조사는 약 45 그레이 단위(Gy)를 포함한다. 다른 구현예에서, 방사선 조사는 약 50 그레이 단위(Gy)를 포함한다. 다른 구현예에서, 방사선 조사는 약 55 그레이 단위(Gy)를 포함한다. 다른 구현예에서, 방사선 조사는 약 60 그레이 단위(Gy)를 포함한다. 다른 구현예에서, 방사선 조사는 약 65 그레이 단위(Gy)를 포함한다. 다른 구현예에서, 방사선 조사는 2500 Gy까지 포함한다. 다른 구현예에서, 방사선 조사된 혼합된 세포사멸 세포 제제는 비-방사선 조사된 혼합된 세포사멸 세포 제제와 동일 또는 유사한 세포사멸 프로파일, 안정성 및 효능을 유지한다.
일 구현예에서, 본원에 개시되는 혼합된 단핵 세포사멸 세포 제제는 24 시간까지 안정하다. 다른 구현예에서, 혼합된 단핵 세포사멸 세포 제제는 적어도 24 시간 동안 안정하다. 다른 구현예에서, 혼합된 단핵 세포사멸 세포 제제는 24 시간보다 오래 안정하다. 또 다른 구현예에서, 본원에 개시되는 혼합된 단핵 세포사멸 세포 제제는 36 시간까지 안정하다. 또 다른 구현예에서, 혼합된 단핵 세포사멸 세포 제제는 적어도 36 시간 동안 안정하다. 추가의 구현예에서, 혼합된 단핵 세포사멸 세포 제제는 36 시간보다 오래 안정하다. 다른 구현예에서, 본원에 개시되는 혼합된 단핵 세포사멸 세포 제제는 48 시간까지 안정하다. 다른 구현예에서, 혼합된 단핵 세포사멸 세포 제제는 적어도 48 시간 동안 안정하다. 다른 구현예에서, 혼합된 단핵 세포사멸 세포 제제는 48 시간보다 오래 안정하다.
일 구현예에서, 방사선 조사 단계를 포함하는, 혼합된 세포 제제를 생산하는 방법은, 세포 제제가 방사선 조사 단계를 포함할 수 없는 단일 일치 공여자로부터 유래되는 세포사멸 제제에서 관찰되는 초기 세포사멸, 면역 조절, 및 안정성 특성을 보존한다. 다른 구현예에서, 본원에 개시되는 혼합된 단핵 세포사멸 세포 제제는 이식편 대 숙주병(GVHD) 반응을 이끌어내지 않는다.
세포 제제의 방사선 조사는 해당 분야에서 안전한 것으로 고려된다. 방사선 조사 절차는 현재 WBC에 대한 반응을 방지하도록 공여된 혈액에 대한 일상적 기준으로 수행된다.
다른 구현예에서, 본원에 개시되는 혼합된 단핵 세포사멸 세포 제제에서 세포사멸 세포의 백분율은 100%에 가깝고, 이에 의해 세포 제제에서 살아있는 비-세포사멸 세포의 부분을 감소시킨다. 일 구현예에서, 세포사멸 세포의 백분율은 적어도 40%이다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포의 백분율은 적어도 50%이다. 또 다른 구현예에서, 세포사멸 세포의 백분율은 적어도 60%이다. 또 다른 구현예에서, 세포사멸 세포의 백분율은 적어도 70%이다. 추가의 구현예에서, 세포사멸 세포의 백분율은 적어도 80%이다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포의 백분율은 적어도 90%이다. 또 다른 구현예에서, 세포사멸 세포의 백분율은 적어도 99%이다. 따라서, 살아있는 비-세포사멸 세포가 감소되거나 비-존재하는 부분을 포함하는 세포 제제는 일 구현예에서, 수용자에서 GVHD를 이끌어내지 않는 혼합된 단핵 세포사멸 세포 제제를 제공할 수 있다. 각각의 가능성은 본원에 개시되는 구현예를 나타낸다.
대안으로서, 다른 구현예에서, 살아있는 비-세포사멸 WBC의 백분율은, 예를 들어 표적화된 침전에 의해, 살아있는 세포 집단을 특이적으로 제거하는 것에 의해 감소된다. 다른 구현예에서, 살아있는 비-세포사멸 세포의 백분율은 포스파티딜세린에 결합하는 자석 비드를 사용하여 감소될 수 있다. 다른 구현예에서, 살아있는 비-세포사멸 세포의 백분율은 비-세포사멸 세포의 세포 표면에서의 마커에 결합하지만 세포사멸 세포에서는 아닌 자석 비드를 사용하여 감소될 수 있다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포의 세포 표면에서의 마커에 결합하지만 비-세포사멸 세포에서는 아닌 자석 비드를 사용하여 세포사멸 세포가 추가의 제제를 위해 선택될 수 있다. 또 다른 구현예에서, 살아있는 비-세포사멸 WBC의 백분율은 초음파의 사용에 의해 감소된다.
일 구현예에서 세포사멸 세포는 혼합된 제3자 공여자로부터 유래된다.
일 구현예에서, 혼합된 세포 제제는 다음으로 구성되는 그룹으로부터 선택되는 적어도 하나의 세포 유형을 포함한다: 림프구, 단핵구 및 자연 살해 세포. 다른 구현예에서, 혼합된 세포 제제는 단핵 세포 풍부 집단을 포함한다. 일 구현예에서, 혼합된 단핵 풍부 세포 제제는 다음으로 구성되는 그룹으로부터 선택되는 세포 유형을 포함한다: 림프구, 단핵구 및 자연 살해 세포. 다른 구현예에서, 단핵 풍부 세포 제제는 15% 이하, 대안으로서 10% 이하, 전형적으로 5% 이하의 과립구(즉, 호중구, 호염기구 및 호산구)로도 알려진 다형핵 백혈구를 포함한다. 다른 구현예에서, 혼합된 단핵 세포 제제는 과립구가 없다. 각각의 가능성은 본원에 개시되는 별개의 구현예를 나타낸다.
다른 구현예에서, 혼합된 단핵 풍부 세포 제제는 15% 이하, 대안으로서 10% 이하, 전형적으로 5% 이하의 CD15high 발현 세포를 포함한다. 일 구현예에서, 혼합된 세포사멸 세포 제제는 15% 미만의 CD15 고 발현 세포를 포함한다. 각각의 가능성은 본원에 개시되는 별개의 구현예를 나타낸다.
일 구현예에서, 본원에 개시되는 혼합된 단핵 풍부 세포 제제는 적어도 80% 단핵 세포, 적어도 85% 단핵 세포, 대안으로서 적어도 90% 단핵 세포, 또는 적어도 95% 단핵 세포를 포함하는데, 여기에서 각각의 가능성은 본원에 개시되는 별개의 구현예를 나타낸다. 일부 구현예에 따르면, 본원에 개시되는 혼합된 단핵 풍부 세포 제제는 적어도 85% 단핵 세포를 포함한다.
다른 구현예에서, 적어도 80%의 최종 혼합된 단핵 세포 백분율을 갖는 임의의 혼합된 세포 제제는 본원에 개시되는 혼합된 단핵 풍부 세포 제제로 고려된다. 따라서, 결과로서 생성된 "풀(pool)"이 적어도 80% 단핵 세포를 갖는 높은 단핵 세포의 세포 제제와 함께 증가된 다형핵 세포(PMN)를 갖는 혼합 세포 제제는 본원에 개시되는 제제를 포함한다. 일부 구현예에 따르면, 단핵 세포는 림프구 및 단핵구를 포함한다.
당업자는 용어 "단핵 세포"가 1 엽의 핵을 갖는 백혈구를 포괄할 수 있음을 인정할 것이다. 다른 구현예에서, 본원에 개시되는 혼합된 세포사멸 세포 제제는 5% 미만의 다형핵 백혈구를 포함한다.
일 구현예에서, 세포사멸 세포는 T-세포이다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포는 CAR T-세포와 동일한 혼합된 제3자 공여 T-세포로부터 유래된다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포는 CAR T-세포 집단으로부터 유래된다.
놀랍게도, 세포사멸 세포는 IL-6과 같은 사이토카인 폭풍과 관련된 사이토카인의 생산을 감소시킨다. 일 구현예에서, 세포사멸 세포는 대식세포 및 DC에서 사이토카인 발현 수준에 영향을 미치지만, T-세포 자신에서는 사이토카인 발현 수준에 영향을 미치지 않는다. 따라서, 세포사멸 세포가 CAR T-세포 요법 또는 수지상 세포 요법을 증진시키는 데 유용할 것으로는 예상되지 않았다.
다른 구현예에서, 세포사멸 세포는 T-세포의 사멸을 촉발하지만, 사이토카인 발현 수준의 변화를 통해서는 아니다.
다른 구현예에서, 세포사멸 세포는, 다르게는 사이토카인 폭풍을 증폭시킬, 사이토카인을 분비하는 대식세포 및 수지상 세포의 준비에 길항한다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포는 염증성 반응을 억제하고/하거나 사이토카인의 과도한 방출을 방지하는 Treg을 증가시킨다.
일 구현예에서, 세포사멸 세포의 투여는 하나 이상의 전-염증성 사이토카인을 억제한다. 일 구현예에서, 전-염증성 사이토카인은 IL-1베타, IL-6, TNF-알파, 또는 IFN-감마, 또는 이의 임의의 조합을 포함한다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포의 투여는 하나 이상의 항-염증성 사이토카인의 분비를 촉진한다. 일 구현예에서, 항-염증성 사이토카인은 TGF-베타, IL10, 또는 PGE2, 또는 이의 임의의 조합을 포함한다.
다른 구현예에서, 세포사멸 세포의 투여는 TLR 리간드에 대한 노출 이후의 수지상 세포 성숙을 억제한다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포의 투여는 잠재적으로 면역관용원인 수지상 세포를 생성하는데, 이는 일 구현예에서 이동할 수 있고, 일 구현예에서 이동은 CCR7에 기인한다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포의 투여는, 일 구현예에서 항원-제시 세포에서 염증을 억제하는, 일 구현예에서 TAM 수용체 신호전달(Tyro3, Axl 및 Mer)인 다양한 신호전달 사건을 이끌어낸다.
일 구현예에서, Tyro-3, Axl, 및 Mer는 키나제 도메인 및 부착 분자-유사 세포외 도메인 내에서 보존된 서열을 특징으로 하는 수용체 티로신 키나제(RTK)의 TAM 패밀리를 구성한다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포의 투여는 MerTK를 통한 신호전달을 활성화시킨다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포의 투여는, 일 구현예에서 NF-κB를 음성적으로 조절하는, 포스파티딜이노시톨 3-키나제(PI3K)/AKT 경로를 활성화시킨다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포의 투여는, 일 구현예에서 전-염증성 사이토카인 분비, DC 성숙, 또는 이의 조합을 유도하는 인플라마솜을 음성적으로 조절한다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포의 투여는 Nr4a , Thbs1, 또는 이의 조합과 같은 항-염증성 유전자의 발현을 상향조절한다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포의 투여는, 일 구현예에서, 파넥신1-의존성 방식으로 축적되는 높은 수준의 AMP를 유도한다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포의 투여는 염증을 억제한다.
세포사멸 세포 상등액( ApoSup 및 ApoSup Mon)
일 구현예에서, 본원에 개시되는 방법 및 처치에서의 사용을 위한 조성물은 본원에 개시되는 세포사멸 세포 상등액을 포함한다.
일 구현예에서, 세포사멸 세포 상등액은 a) 세포사멸 세포를 제공하고, b) 단계 a)의 세포사멸 세포를 배양하고, 그리고 c) 세포로부터 상등액을 분리하는 단계를 포함하는 방법에 의해 수득된다.
일 구현예에서, 본원에 개시되는 세포사멸 세포 상등액을 만드는 데 사용하기 위한 세포사멸 세포는 요법을 받는 대상에 대하여 자가이다. 다른 구현예에서, 본원에 개시되는 세포사멸 세포 상등액을 만드는 데 사용하기 위한 세포사멸 세포는 요법을 받는 대상과 동종이다.
세포사멸 세포 상등액이 얻어지는 "세포사멸 세포"는 해당 분야의 당업자에게 알려진 세포사멸을 유도하는 방법을 받는, 대상의 임의의 세포 유형, 또는 상업적으로 이용 가능한 임의의 세포주로부터 선택된 세포일 수 있다. 세포사멸을 유도하는 방법은 저산소, 오존, 열, 방사, 화학물질, 삼투압, pH 변화, X-전 조사, 감마-선 조사, UV 조사, 혈청 박탈, 코르티코이드 또는 이의 조합, 또는 본원에 기술되거나 해당 분야에 알려진 임의의 다른 방법일 수 있다. 다른 구현예에서, 세포사멸을 유도하는 방법은 초기 세포사멸 상태의 세포사멸 세포를 생산한다.
일 구현예에서, 세포사멸 세포는 백혈구이다.
일 구현예에서, 상기 세포사멸 백혈구는 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)로부터 유래된다. 다른 구현예에서, 상기 백혈구는 혼합된 제3자 공여자로부터 유래된다. 다른 구현예에서, 상기 백혈구는 동종이다.
일 구현예에 따르면, 세포사멸 세포는 비-부착성 백혈구를 선택하고 이들이 세포사멸 유도를 받도록 한 다음, 배양 배지에서의 세포 배양 단계에 의해 제공된다. 세포사멸 세포-포식세포 상등액을 만드는 데 사용되는 "백혈구"는, 수지상 세포, 대식세포, masT-세포, 호염기구, 조혈 줄기세포, 골수 세포, 자연 살해 세포 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는 면역 시스템 및/또는 조혈 시스템의 유핵 세포의 임의의 계통, 또는 서브-계통으로부터 유래될 수 있다. 백혈구는 응용 및 목적, 원하는 백혈구 계통 등에 따라, 임의의 다양한 통상적으로 실시되는 방법에 따라, 임의의 다양한 적절한 해부학적 구획으로부터 임의의 다양한 적절한 방법으로 유래 또는 수득될 수 있다. 일 구현예에서, 백혈구의 공급원은 1차 백혈구이다. 다른 구현예에서, 백혈구 공급원은 1차 말초 혈액 백혈구이다.
1차 백혈구 및 단핵구는 말초 혈액으로부터 편리하게 유래될 수 있다. 말초 혈액 백혈구는 70 내지 95 퍼센트의 림프구 및 5 내지 25 퍼센트의 단핵구이다.
혈액으로부터 특정 유형의 백혈구 공급원을 수득하는 방법은 일상적으로 실시된다. 림프구 및/또는 단핵구 공급원을 수득하는 것은, 예를 들어, 헤파린 또는 시트레이트와 같은 항응고제의 존재 중 혈액을 수확하는 것에 의해 달성될 수 있다. 수확된 혈액은 다음에 Ficoll 쿠션 위에서 원심분리하여 구배 계면에서 림프구와 단핵구를, 그리고 펠릿에서 호중구와 적혈구를 분리한다.
백혈구는 표준 면역자기성 선택 또는 면역형광 유동 세포분석 기법을 통해 이들의 특이적 표면 마커에 따라, 또는 원심분리 세정을 통해 서로 분리될 수 있다. 예를 들어, 단핵구는 CD14+ 분획으로 선택될 수 있고, T-림프구는 CD3+ 분획으로 선택될 수 있고, B-림프구는 CD19+ 분획으로, 대식세포는 CD206+ 분획으로 선택될 수 있다.
림프구 및 단핵구는, 조직 배양-처리된 배양 수용부에서의 정치 배양과 같은 기질-부착 조건에서 이들 세포를 처리하는 것에 의해 서로 분리될 수 있는데, 이는 세포-부착 기질에 대한 단핵구의 선택적 부착을 야기하지만 림프구는 아니다.
백혈구는 또한 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)로부터 수득될 수 있으며, 이는 본원에 기술된 바와 같이 분리될 수 있다.
해당 분야의 당업자는 본원에 개시되는 배양된 백혈구 공급원의 원하는 양을 생성하도록 1차 백혈구를 적절히 배양하기 위해 필요한 기술을 소유할 것이고, 이러한 배양 방법을 실시하기 위한 많은 안내서는 해당 분야의 문헌에서 이용 가능하다.
해당 분야의 당업자는 세포사멸 백혈구가 유래되는 적절한 확립된 백혈구 세포주를 확립, 구입, 또는 다르게는 수득하는 데 필요한 기술을 추가로 소유할 것이다. 적절한 백혈구 세포주는 American Tissue Type Collection(ATCC)와 같은 상업적 공급자로부터 수득할 수 있다. 백혈구 공급원은 세포사멸 백혈구를 생산하는 능력을 유의미하게 방해하는 기법을 통해 수득될 수 없다는 것이 해당 분야의 당업자에게 명백할 것이다.
일 구현예에서, 세포사멸 세포는 단핵-풍부 세포를 포함하는 세포 제제를 포함하는데, 여기에서 제제는 적어도 85% 단핵 세포를 포함하고, 제제에서 세포의 적어도 40%는 초기-세포사멸 상태이고, 제제에서 세포의 적어도 85%는 생존 가능 세포이고, 제제는 15% 이하의 CD15high 발현 세포를 포함한다.
다른 구현예에서, 세포사멸 세포는 세포사멸 림프구일 수 있다. 1차 림프구와 같은 림프구의 세포사멸은 1차 림프구를 혈청 박탈, 코르티코스테로이드, 또는 방사선 조사로 처리하는 것에 의해 유도될 수 있다. 다른 구현예에서, 코르티코스테로이드 처치를 통해 1차 림프구의 세포사멸을 유도하는 것은 1차 림프구를 덱사메타손으로, 다른 구현예에서 약 1 마이크로몰의 농도에서 덱사메타손으로, 처치하는 것에 의해 시행된다. 다른 구현예에서, 방사선 조사를 통해 1차 림프구의 세포사멸을 유도하는 것은 1차 림프구를 감마-방사선 조사, 다른 구현예에서 약 66 rad의 용량으로, 처치하는 것에 의해 시행된다. 이러한 처치는 포식세포와의 공동-배양 단계에 적절한 세포사멸 림프구의 생성을 초래한다.
추가의 구현예에서, 세포사멸 세포는 1차 단핵구와 같은 세포사멸 단핵구일 수 있다. 세포사멸 단핵구를 생성하기 위해, 단핵구는 혈청 박탈의 조건 하에서 기질/표면-부착의 시험관내 조건의 적용을 받는다. 이러한 처치는 포식세포와의 공동-배양 단계에 적절한 비-전-염증성 세포사멸 단핵구의 생성을 초래한다.
다른 구현예에서, 세포사멸 세포는 동종 세포사멸 세포, 제3자 세포사멸 세포, 및 세포사멸 세포의 집단을 포함하는, 본원에 기술되는 임의의 세포사멸 세포일 수 있다.
다른 구현예에서, 세포사멸 세포 상등액는 세포사멸 세포와 다른 세포의 공동-배양을 통해 수득될 수 있다.
따라서, 일 구현예에서, 세포사멸 세포 상등액은 a) 세포사멸 세포를 제공하고, b) 다른 세포를 제공하고, c) 선택적으로, 단계 a) 및 b)로부터의 세포를 세척하고, d) 단계 a) 및 b)의 세포를 공동-배양하고, 그리고 선택적으로, e) 세포로부터 상등액을 분리하는 단계를 포함하는 방법에 의해 수득되는 세포사멸 세포 상등액이다.
일 구현예에서, 세포사멸 세포와 공동-배양되는 다른 세포는 백혈구이다.
따라서, 일 구현예에서, 세포사멸 세포 상등액은 a) 세포사멸 세포를 제공하고, b) 백혈구를 제공하고, c) 선택적으로, 단계 a) 및 b)로부터의 세포를 세척하고, d) 단계 a) 및 b)의 세포를 공동-배양하고, 그리고 선택적으로, e) 세포로부터 상등액을 분리하는 단계를 포함하는 방법에 의해 수득되는 세포사멸 세포-백혈구 상등액이다.
일 구현예에서, 백혈구는 대식세포, 단핵구 또는 수지상 세포와 같은 포식세포일 수 있다.
일 구현예에서, 백혈구는 B 세포, T-세포, 또는 자연 살해 세포(NK 세포)일 수 있다.
따라서, 일 구현예에서, 본원에 개시되는 방법 및 처치에서의 사용을 위한 조성물은, 본원에 그 전체가 참조로 도입되는 WO 2014/106666에 기술된 것과 같은 세포사멸 세포-포식세포 상등액을 포함한다. 다른 구현예에서, 본원에 개시되는 조성물 및 방법에서의 사용을 위한 세포사멸 세포-포식세포 상등액은 해당 분야에 알려진 임의의 방법으로 생산된다.
일 구현예에서, 세포사멸 세포-포식세포 상등액은 포식세포와 세포사멸 세포의 공동-배양으로부터 수득된다.
일 구현예에서, 세포사멸 세포-포식세포 상등액은 a) 포식세포를 제공하고, b) 세포사멸 세포를 제공하고, c) 선택적으로, 단계 a) 및 b)로부터의 세포를 세척하고, d) 단계 a) 및 b)의 세포를 공동-배양하고, 그리고 선택적으로, e) 세포로부터 상등액을 분리하는 단계를 포함하는 방법에 의해 수득된다.
용어 "포식세포"는 유해한 외래 입자, 박테리아, 및 죽거나 죽어가는 세포를 섭취(포식작용)하는 것에 의해 신체를 보호하는 세포를 의미한다. 포식세포는, 예를 들어 호중구, 단핵구, 대식세포, 수지상 세포, 및 비만 T-세포, 우선적으로 수지상 세포 및 단핵구/대식세포로 불리는 세포를 포함한다. 포식세포는 수지상 세포(CD4+ HLA-DR+ 계통- BDCA1 /BDCA3+), 대식세포(CD14+ CD206+ HLA-DR+)일 수 있거나, 또는 단핵구(CD14+)로부터 유래될 수 있다. 이들 상이한 포식세포를 구분하기 위한 기법은 해당 분야의 당업자에게 알려져 있다.
일 구현예에서, 단핵구는 플라스틱 부착 단계에 의해 수득된다. 상기 단핵구는 B 및 T-세포로부터 마커 CD14+로 구분될 수 있는데, 원치 않는 B 세포는 CD19+를 발현하고 T-세포는 CD3+를 발현한다. 대식세포 콜로니 자극 인자(M-CSF) 유도된 성숙 이후 수득된 대식세포는, 일 구현예에서 마커 CD14+, CD206+, HLA-DR+에 양성이다.
일 구현예에서, 상기 포식세포는 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)로부터 유래된다.
포식세포는 해당 분야에 알려진 포식세포를 수득하기 위한 임의의 방법에 의해 제공될 수 있다. 일 구현예에서, 대식세포 또는 수지상 세포와 같은 포식세포는 대상으로부터 직접적으로 분리되거나, 성숙 단계에 의해 전구 세포로부터 유래될 수 있다.
일 구현예에서, 대식세포는 대상의 복막강으로부터 직접적으로 분리될 수 있고 완전 RRPMI 배지에서 배양될 수 있다. 대식세포는 또한 비장으로부터 분리될 수 있다.
포식세포는 또한 말초 혈액 단핵구로부터 수득될 수 있다. 상기 예에서, 단핵구는 배양시, 이에 제한되지 않는 예를 들어, 대식세포 콜로니 자극 인자(M-CSF)를 세포 배양 배지에 첨가하여, 단핵구-유래 대식세포로 분화한다.
예를 들어, 포식세포는 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)로부터 유래될 수 있다. 예를 들어, PBMC는 세포성분채집 백으로 개체로부터 Ficoll 구배 원심분리를 통해, 완전 RPMI 배양 배지(10% FBS, 1 % 페니실린/스트렙토마이신)에서 90 분 동안 세포-부착 단계로 플레이팅하여 분리될 수 있다. 비-부착 T-세포는 플라스틱 부착 단계에 의해 제거되고, 부착 T-세포는 재조합 인간 M-CSF 보충된 완전 RPMI 환경에서 배양된다. 배양 시기 이후, 단핵구-유래 대식세포가 수득된다.
포식세포는 세포-부착 단계에 의해 선택될 수 있다. 상기 "세포 부착 단계"는 포식세포로 성숙할 수 있는 세포 또는 포식세포가, 배양된 세포의 표면, 세포 부착 표면(예를 들어, 적절한 유형의 나일론 또는 플라스틱을 갖는 조직 배양 접시, 매트릭스, 주머니 또는 백)으로의 부착을 허용하는 배양 조건을 통해 선택된다. 당업자는 용어 "세포 부착 표면"이 친수성 및 음으로 하전된 것을 포괄할 수 있고, 해당 분야에 알려진 임의의 다양한 방법으로, 다른 구현예에서는, 예를 들어 코로나 방전 또는 가스-플라스마를 사용하여 폴리스티렌 표면을 변형시키는 것에 의해, 수득될 수 있음을 인정할 것이다. 이들 과정은, 표면이 친수성이고 음으로 하전되도록 표면 폴리스티렌 사슬로 접합하는 높은 에너지의 산소 이온을 생성한다. 세포-부착을 용이하게 하도록 고안된 배양 수용부는 다양한 상업적 공급자(예를 들어, Corning, Perkin-Elmer, Fisher Scientific, Evergreen Scientific, Nunc, 등)로부터 입수 가능하다.
B 세포, T-세포 및 NK 세포는 이러한 세포를 수득하기 위한 해당 분야에 알려진 임의의 방법에 의해 제공될 수 있다. 일 구현예에서, B 세포, T-세포 또는 NK 세포는 대상으로부터 직접적으로 분리되거나, 성숙 단계에 의해 전구 세포로부터 유래될 수 있다. 다른 구현예에서, B, T 또는 NK 세포는 B, T 또는 NK 세포주로부터 유래될 수 있다. 해당 분야의 당업자는 적절한 확립된 B 세포, T-세포 및 NK 세포주를 확립, 구입, 또는 다르게는 수득하기 위해 필요한 기술을 소유할 것이다. 적절한 세포주는 American Tissue Type Collection(ATCC)와 같은 상업적 공급자로부터 수득될 수 있다.
일 구현예에서, 상기 세포사멸 세포 및 상기 백혈구, 예를 들어 포식세포, B, T 또는 NK 세포는 공동-배양 단계 d) 이전에 개별적으로 배양된다.
포식세포의 세포 성숙은 세포 배양 중에, 예를 들어 배지에 성숙 인자의 첨가에 의해 일어난다. 일 구현예에서 상기 성숙 인자는 M-CSF로, 이는 예를 들어 단핵구-유래 대식세포를 수득하기 위해 사용될 수 있다.
포식세포의 성숙 또는 선택을 위해 사용되는 배양 단계는 수 시간 내지 수 일이 걸릴 것이다. 다른 구현예에서 상기 미숙 포식세포는 적절한 배양 배지에서 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58 시간 동안 배양된다.
포식세포를 위한 배양 배지는 해당 분야의 당업자에게 알려져 있고, 이에 제한되지 않는 예를 들어, RPMI, DMEM, X-vivo 및 Ultraculture milieus일 수 있다.
일 구현예에서, 세포사멸 세포 및 포식세포의 공동-배양은 생리적 용액에서 일어난다.
이러한 "공동-배양"에 앞서, 세포는 세척 단계를 받을 수 있다. 일 구현예에서, 백혈구(예를 들어, 포식세포) 및 세포사멸 세포는 공동-배양 단계 전에 세척된다. 다른 구현예에서, 세포는 PBS로 세척된다.
상기 공동-배양 중에 백혈구(예를 들어, 포식세포, 예를 들어 대식세포, 단핵구, 또는 포식세포, 또는 B, T 또는 NK 세포) 및 세포사멸 세포는 10:1, 9:1, 8:1, 7:1, 6:1, 5:1, 4:1, 3:1, 2:1, 또는 1:1의 비율로, 또는 (백혈구:세포사멸 세포)1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, 1:7, 1:8, 1:9, 또는 1:10의 비율로 혼합될 수 있다. 일례로, 백혈구 대 세포사멸 세포의 비율은 1:5이다.
세포의 공동-배양은 수 시간 내지 수 일 동안일 것이다. 일부 구현예에서, 상기 세포사멸 세포는 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52 시간 동안 배양된다. 해당 분야의 당업자는 항-염증성 화합물의 존재, 백혈구의 생존 가능한 양 및 지금까지 제거되지 않은 세포사멸 세포의 양을 측정하는 것에 의해 공동-배양의 최적 시간을 평가할 수 있다.
포식세포에 의한 세포사멸 세포의 제거는 세포사멸 세포의 소실로 인해 광학 현미경으로 관찰 가능하다.
일 구현예에서, 세포사멸 세포의 배양, 예를 들어 백혈구(예를 들어, 포식세포, 예를 들어 대식세포, 단핵구, 또는 포식세포, 또는 B, T 또는 NK 세포)와의 공동-배양은 배양 배지에서, 그리고/또는 투여, 예를 들어 대상에 대한 주사제에 혼화 가능한 생리적 용액에서 일어난다.
당업자는 "생리적 용액"이 배양 시간 내에 백혈구의 사멸을 유도하지 않는 용액을 포괄할 수 있음을 인정할 것이다. 일부 구현예에서, 생리적 용액은 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52 시간, 다른 구현예에서는 48 시간, 또는 30 시간 넘게 사멸을 유도하지 않는다.
일 구현예에서, 백혈구(예를 들어, 포식세포, 예를 들어 대식세포, 단핵구, 또는 포식세포, 또는 B, T 또는 NK 세포) 및 세포사멸 세포는 생리적 용액에서 적어도 30 분 동안 배양된다. 이 배양 시간은 포식작용 개시 및 사이토카인과 다른 유익한 물질의 분비를 허용한다.
일 구현예에서, 이러한 생리적 용액은 백혈구-유래 대식세포에 의한 세포사멸 백혈구 제거를 억제하지 않는다.
배양 또는 공동-배양 단계의 종결시, 상등액은 선택적으로 배양된 세포사멸 세포 또는 공동-배양된 세포로부터 분리된다. 세포로부터 상등액을 분리하기 위한 기법은 해당 분야에 알려져 있다. 예를 들어, 상등액은 세포 및 파편을 제거하도록 수집 및/또는 여과 및/또는 원심분리될 수 있다. 예를 들어, 상기 상등액은 이를 세포로부터 분리하기 위해 3000 rpm으로 15 분 동안 실온에서 원심분리될 수 있다.
상등액은 사용 전, 예를 들어 방사선 조사에 의해, "비활성화"될 수 있다. 따라서, 세포사멸 세포 상등액을 제조하는 방법은 선택적인 부가적 방사선 조사 단계 f)를 포함할 수 있다. 상기 "방사선 조사" 단계는, 혈액 산물을 비활성화시키기 위해 일상적으로 수행되듯이, 미생물을 죽이기에 충분한 비율로 X-선 조사(25 내지 45 Gy)를 사용하는 살균 방법으로서 고려될 수 있다.
상등액의 방사선 조사는 해당 분야에서 안전한 것으로 고려된다. 방사선 조사 절차는 WBC에 대한 반응을 방지하도록 공여된 혈액에 일상적인 기준으로 현재 수행된다.
일 구현예에서, 세포사멸 세포 상등액은 본원에 구체적으로 기술되는 바와 같이, 대상에 투여하기 적절한 약제학적 조성물로 제형화된다.
일 구현예에서, 최종 산물은 +4℃에서 저장된다. 다른 구현예에서, 최종 산물은 다음 48 시간만에 사용된다.
일 구현예에서, 세포사멸 세포 상등액, 예를 들어 세포사멸 세포-포식세포 상등액, 또는 상등액을 포함하는 약제학적 조성물은, 예를 들어 -80℃에서 저장을 위해 동결건조될 수 있다.
하나의 특정 구현예에서, WO 2014/106666의 실시예 1에 기술된 바와 같이, 세포사멸 세포-포식세포 상등액은 흉선 세포를 세포사멸 세포로서 사용하여 만들어질 수 있다. 분리 후, 흉선 세포는 방사선 조사되고(예를 들어, 35 X-Gray 조사로) 완전 DMEM 배양 배지에서, 예를 들어 6 시간 동안 세포사멸이 일어나도록 배양된다. 병행하여, 대식세포를 복막강으로부터 분리하고, 세척 및 완전 RPMI(10% FBS, 페니실린-스트렙토마이신, EAA, Hepes, NaP 및 2-머캡토에탄올)에서 배양한다. 대식세포 및 세포사멸 세포를 다음에 세척하고 추가로 48 시간 동안 무-페놀 X-vivo 배지에서 1/5 대식세포/세포사멸 세포 비율로 공동-배양한다. 다음에, 상등액을 수집하고, 원심분리하여 파편을 제거하고 보존을 위해 동결 또는 동결건조할 수 있다. 대식세포 풍부는 FACS에 의한 F4/80의 양성 염색을 사용하여 확인될 수 있다. 세포사멸은 FACS에 의해, 아넥신-V 및 7AAD 배제의 양성 염색을 사용하여 확인될 수 있다.
일 구현예에서, 세포사멸 세포 상등액은, 별개로 배양된 대식세포 또는 세포사멸 세포로부터 수득된 상등액과 비교하여, 활성 및 잠재 형태의 TGF-β 둘 다의 TGF-β 수준이 풍부하다. 일 구현예에서, IL-10 수준 또한 단독 배양된 대식세포와 비교하여 증가하고 단독 배양된 세포사멸 세포와 비교하여 극적으로 증가한다. 다른 구현예에서, IL-6과 같은 염증성 사이토카인은 검출 가능하지 않고 IL-1β 및 TNF는 불검출 또는 매우 낮은 수준이다.
일 구현예에서, 세포사멸 세포 상등액은, 단독 배양된 대식세포 또는 단독 배양된 세포사멸 세포로부터의 상등액과 비교할 때, TGF-β 및 IL-10에 더하여, 염증을 조절하는 상등액의 면역관용 역할에 연루될 수 있을 것인 IL-1ra, TIMP-1, CXCL1/KC 및 CCL2/JE/MCP1의 증가된 수준을 갖는다.
다른 특정 구현예에서, WO 2014/106666의 실시예 3에 기술된 바와 같이, 인간 세포사멸 세포-포식세포 상등액은 세포사멸 PBMC와 배양된 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)로부터 유래된 대식세포의 공동-배양으로부터 만들어질 수 있다. 따라서, PBMC는 건강한 지원자로부터, 예를 들어 Ficoll 구배 원심분리를 통해, 세포성분채집 백으로부터 분리된다. 다음에 PBMC를 90 분 동안 완전 RPMI 배양 배지(10% FBS, 1% 페니실린/스트렙토마이신)에서 플레이팅한다. 다음에, 비-부착 T-세포를 제거하고, 예를 들어 35 Gy 용량의 X-선 조사를 사용하여, 세포사멸로 만들고 완전 RPMI 환경에서 4 일 동안 배양(배양 최초 48 시간 후에 세포 세척을 포함)하여 세포사멸을 허용한다. 병행하여, 부착 T-세포를 50 ㎍/mL의 재조합 인간 M-CSF로 보충된 완전 RPMI 환경에서, 최초 48 시간 후의 세포 세척을 포함하여 4 일 동안 배양한다. 4-일 배양 시기 종결시, 단핵구-유래 대식세포 및 세포사멸 세포를 세척하고 함께 X-vivo 배지에서 다시 48 시간 동안 1 대식세포 대 5 세포사멸 세포 비율로 배양한다. 다음에 후자 배양물로부터의 상등액을 수집하고, 원심분리하여 세포 및 파편을 제거하고, 보존 및 후속 사용을 위해 동결 또는 동결건조할 수 있다.
일 구현예에서, WO 2014/106666에 기술된 바와 같이, 인간 세포사멸 세포-포식세포 상등액은 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)로부터 6 일만에 수득될 수 있다. 배지에 M-CSF 첨가를 사용하여 PBMC- 유래 대식세포를 얻기 위한 4 일, 그리고 0 일째에 분리되는 비-부착 PBMC에 상응하는 PBMC-유래 대식세포와 세포사멸 세포의 공동-배양을 위한 추가 2 일.
일 구현예에서, WO 2014/106666에 기술된 바와 같이, 표준화된 인간 세포사멸 세포-포식세포 상등액은 공여자 또는 PBMC의 공급원(세포성분채집술 또는 백혈구 연층(buffy coat))과 무관하게 수득될 수 있다. 플라스틱-부착 단계는 풍부한 단핵구의 상당한 개시 집단(플라스틱 배양 접시에 부착 후 20 내지 93%의 CD14+ 세포)을 수득하기에 충분하다. 또한, 이러한 부착 T-세포는 매우 낮은 B 및 T-세포의 존재를 나타낸다(1.0%의 CD19+ B 세포 및 12.8%의 CD3+ T-세포). M-CSF의 존재 중 부착 T-세포의 배양 4 일 후, 단핵구-유래 대식세포의 비율은 0.1%로부터 77.7%의 CD14+CD206+HLA-DR+ 대식세포로 상당히 증가한다. 이 시기에, 단핵구-유래 대식세포는 세포사멸 세포-포식세포 상등액을 생산하도록 48 시간 동안 세포사멸 비-부착 PBMC(아넥신 V 염색 및 7AAD 배제에 의해 나타난 47.6% 세포사멸)와 공동-배양될 수 있다.
일 구현예에서, 수집된 세포사멸 세포-포식세포 상등액은, 단핵구-유래 대식세포 단독 또는 염증 조건(+ LPS)으로 처치된 단핵구-유래 대식세포의 배양 상등액에서보다 유의미하게 더 잠재적인 TGF를 포함하고, 단지 흔적 또는 낮은 수준의 IL-1β 또는 TNF와 같은 염증성 사이토카인을 포함한다.
일 구현예에서, 세포사멸 세포 상등액을 포함하는 조성물은 항-응고제를 추가로 포함한다. 일 구현예에서, 항-응고제는 다음으로 구성되는 그룹으로부터 선택된다: 헤파린, 시트르산 덱스트로스(ACD) 제형 A 및 이의 조합.
일 구현예에서, 세포사멸 세포 상등액을 포함하는 조성물은 메틸프레드니솔론을 추가로 포함한다. 일 구현예에서, 메틸프레드니솔론의 농도는 30 ㎍/mL를 초과하지 않는다.
일 구현예에서, 조성물은 체중(70 kg 대상에서) 킬로그램 당 약 200 백만 세포와 동등한 세포성분채집술에 의해 수득된 약 14x109의 CD45+ 세포의 공동-배양으로부터 유래된 세포사멸 세포 상등액의 총 용량 또는 분액으로 사용될 수 있다. 일 구현예에서, 이러한 총 용량은 체중 킬로그램 당 약 100 백만 세포로부터 유래되는 상등액의 단위 용량으로서 투여되고/되거나 1 주일 간격으로 단위 용량으로서 투여되고, 다른 구현예에서는 둘 다이다. 이 구현예에 따른 적절한 총 용량은 체중 킬로그램 당 약 10 백만 내지 약 4 십억 세포로부터 유래되는 상등액의 총 용량을 포함한다. 다른 구현예에서, 상등액은 체중 킬로그램 당 약 40 백만 내지 약 1 십억 세포로부터 유래된다. 또 다른 구현예에서, 상등액은 체중 킬로그램 당 약 80 백만 내지 약 500 백만 세포로부터 유래된다. 또 다른 구현예에서, 상등액은 체중 킬로그램 당 약 160 백만 내지 약 250 백만 세포로부터 유래된다. 이 구현예에 따른 적절한 단위 용량은 체중 킬로그램 당 약 4 백만 내지 약 400 백만 세포로부터 유래되는 상등액의 단위 용량을 포함한다. 다른 구현예에서, 상등액은 체중 킬로그램 당 약 8 백만 내지 약 200 백만 세포로부터 유래된다. 다른 구현예에서, 상등액은 체중 킬로그램 당 약 16 백만 내지 약 100 백만 세포로부터 유래된다. 또 다른 구현예에서, 상등액은 체중 킬로그램 당 약 32 백만 내지 약 50 백만 세포로부터 유래된다.
다른 구현예에서, 약 10x106 세포사멸 세포의 공동-배양으로부터 유래된 세포사멸 세포 상등액의 용량이 투여된다. 다른 구현예에서, 10x107 세포사멸 세포로부터 유래된 용량이 투여된다. 다른 구현예에서, 10x108 세포사멸 세포로부터 유래된 용량이 투여된다. 다른 구현예에서, 10x109 세포사멸 세포로부터 유래된 용량이 투여된다. 다른 구현예에서, 10x1010 세포사멸 세포로부터 유래된 용량이 투여된다. 다른 구현예에서, 10x1011 세포사멸 세포로부터 유래된 용량이 투여된다. 다른 구현예에서, 10x1012 세포사멸 세포로부터 유래된 용량이 투여된다. 다른 구현예에서, 10x105 세포사멸 세포로부터 유래된 용량이 투여된다. 다른 구현예에서, 10x104 세포사멸 세포로부터 유래된 용량이 투여된다. 다른 구현예에서, 10x103 세포사멸 세포로부터 유래된 용량이 투여된다. 다른 구현예에서, 10x102 세포사멸 세포로부터 유래된 용량이 투여된다.
일 구현예에서, 35x106 세포사멸 세포로부터 유래된 세포사멸 세포 상등액의 용량이 투여된다. 다른 구현예에서, 210x106 세포사멸 세포로부터 유래된 용량이 투여된다. 다른 구현예에서, 70x106 세포사멸 세포로부터 유래된 용량이 투여된다. 다른 구현예에서, 140x106 세포사멸 세포로부터 유래된 용량이 투여된다. 다른 구현예에서, 35-210x106 세포사멸 세포로부터 유래된 용량이 투여된다.
일 구현예에서, 세포사멸 세포 상등액, 또는 상기 세포사멸 세포 상등액을 포함하는 조성물은, 본원에서 구체적으로 논의되는 바와 같이 정맥내, 피하, 결절내, 종양내, 척추강내, 흉막내, 복막내 및 흉선으로 직접 투여를 포함하지만 이에 제한되지 않는, 해당 분야에 알려진 임의의 방법에 의해 투여될 수 있다.
놀랍게도, 세포사멸 세포-포식세포 상등액과 같은 세포사멸 세포 상등액은, 사이토카인 폭풍에 관련되는 IL-6과 같은 사이토카인의 생산을 감소시킨다. 다른 사이토카인 IL-2는 비록 DC 및 대식세포에 의해 소량으로 분비되지만 사이토카인 방출 증후군에 연루되지 않는다. 그러나, 이것은 CAR-T-세포의 생존 및 증식을 위해 요구되고 주로 이들 T-세포에 의해 생산된다. 예상치 못하게, 세포사멸 세포-포식세포 상등액과 같은 세포사멸 세포 상등액은 CAR T-세포의 생존에 부정적으로 영향을 주기에 충분하도록 IL-2 수준을 감소시키지 않는다.
일 구현예에서, 세포사멸 세포-포식세포 상등액과 같은 세포사멸 세포 상등액은 대식세포 및 DC에서 사이토카인 발현 수준에 영향을 미치지만, T-세포 자신에서 사이토카인 발현 수준에는 영향을 미치지 않는다. 따라서, 세포사멸 세포 상등액이 CAR T-세포 요법 또는 수지상 세포 요법을 증진시키는 데 유용할 것임은 예상치 못한 것이었다.
다른 구현예에서, 세포사멸 세포 상등액은 T-세포의 사멸을 촉발시키지만, 사이토카인 발현 수준에서의 변화를 통해서는 아니다.
다른 구현예에서, 세포사멸 세포-포식세포 상등액과 같은 세포사멸 세포 상등액은, 다르게는 사이토카인 폭풍을 증폭시킬, 사이토카인 분비를 위한 대식세포 및 수지상 세포의 대비에 길항한다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 상등액은 염증성 반응을 억제하고/하거나 사이토카인의 과도한 분비를 방지하는 Treg을 증가시킨다.
일 구현예에서, 세포사멸 세포-포식세포 상등액과 같은 세포사멸 세포 상등액은 하나 이상의 전-염증성 사이토카인을 억제한다. 일 구현예에서, 전-염증성 사이토카인은 IL-1베타, IL-6, TNF-알파, 또는 IFN-감마, 또는 이의 임의의 조합을 포함한다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 상등액의 투여는 하나 이상의 항-염증성 사이토카인의 분비를 촉진시킨다. 일 구현예에서, 항-염증성 사이토카인은 TGF-베타, IL10, 또는 PGE2, 또는 이의 임의의 조합을 포함한다.
다른 구현예에서, 세포사멸 세포-포식세포 상등액과 같은 세포사멸 세포 상등액의 투여는 TLR 리간드에 대한 노출 후 수지상 세포 성숙을 억제한다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 상등액의 투여는, 일 구현예에서 이동할 수 있고, 일 구현예에서 이동은 CCR7에 기인하는, 면역관용 수지상 세포를 잠재적으로 생성한다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 상등액의 투여는, 일 구현예에서 항원-제시 세포에서 염증을 억제하는, 일 구현예에서 TAM 수용체 신호전달(Tyro3, Axl 및 Mer)인, 다양한 신호전달 사건을 이끌어낸다. 일 구현예에서, Tyro-3, Axl, 및 Mer는 키나제 도메인 및 부착 분자-유사 세포외 도메인 내에서 보존된 서열을 특징으로 하는 수용체 티로신 키나제(RTK)의 TAM 패밀리를 구성한다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 상등액의 투여는 MerTK를 통한 신호전달을 활성화시킨다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 상등액의 투여는, 일 구현예에서 NF-κB를 음성적으로 조절하는, 포스파티딜이노시톨 3-키나제(PI3K)/AKT 경로를 활성화시킨다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 상등액의 투여는, 일 구현예에서 전-염증성 사이토카인 분비, DC 성숙, 또는 이의 조합을 유도하는 인플라마솜을 음성적으로 조절한다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 상등액의 투여는 Nr4a , Thbs1, 또는 이의 조합과 같은 항-염증성 유전자의 발현을 상향조절한다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 상등액의 투여는, 일 구현예에서, 파넥신1-의존성 방식으로 축적되는 높은 수준의 AMP를 유도한다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 상등액의 투여는 염증을 억제한다.
조성물
일 구현예에서는, 본원에 기술되는 병태 또는 질환의 치료를 위한 약제학적 조성물이 본원에 개시된다. 다른 구현예에서, 약제학적 조성물은 유전적으로 변형된 면역 세포 또는 유전적으로 변형된 이의 수용체를 포함한다. 다른 구현예에서, 유전적으로 변형된 면역 세포는 T-세포를 포함한다. 다른 구현예에서, 유전적으로 변형된 면역 세포는 키메라 항원 수용체 CAR T-세포를 포함한다. 다른 구현예에서, 유전적으로 변형된 면역 세포는 세포독성 T 림프구를 포함한다. 다른 구현예에서, 유전적으로 변형된 면역 세포는 수지상 세포를 포함한다. 다른 구현예에서, 유전적으로 변형된 면역 세포는 자연 살해 세포를 포함한다. 다른 구현예에서, 유전적으로 변형된 수용체는 T-세포 수용체를 포함한다.
또 다른 구현예에서, 본원에 기술되는 병태 또는 질환의 치료를 위한 약제학적 조성물은, 약제학적으로 허용 가능한 부형제에 본원에 기술되는 바와 같은, 유효량의 유전적으로 변형된 면역 세포 또는 유전적으로 변형된 이의 수용체를 포함한다. 다른 구현예에서, 본원에 기술되는 병태 또는 질환의 치료를 위한 약제학적 조성물은, 약제학적으로 허용 가능한 부형제에 본원에 기술되는 바와 같은, 유효량의 CAR T-세포를 포함한다. 다른 구현예에서, 본원에 기술되는 병태 또는 질환의 치료를 위한 약제학적 조성물은, 약제학적으로 허용 가능한 부형제에 본원에 기술되는 바와 같은, 유효량의 세포독성 T 세포를 포함한다. 다른 구현예에서, 본원에 기술되는 병태 또는 질환의 치료를 위한 약제학적 조성물은, 약제학적으로 허용 가능한 부형제에 본원에 기술되는 바와 같은, 유효량의 유전적으로 변형된 수지상 세포를 포함한다. 다른 구현예에서, 본원에 기술되는 병태 또는 질환의 치료를 위한 약제학적 조성물은, 약제학적으로 허용 가능한 부형제에 본원에 기술되는 바와 같은, 유효량의 유전적으로 변형된 자연 살해 세포를 포함한다. 다른 구현예에서, 본원에 기술되는 병태 또는 질환의 치료를 위한 약제학적 조성물은, 약제학적으로 허용 가능한 부형제에 본원에 기술되는 바와 같은, 유효량의 유전적으로 변형된 T-세포 수용체를 포함한다.
다른 구현예에서, 본원에 기술되는 병태 또는 질환은 종양 또는 암이다. 다른 구현예에서는, 본원에 기술되는 관심 있는 단백질 또는 펩티드에 결합하는, 유전적으로 변형된 면역 세포 또는 이의 수용체, 예를 들어 CAR T-세포를 포함하는 조성물이 본원에 개시된다. 다른 구현예에서, 관심 있는 단백질 또는 펩티드는 종양 항원 또는 이의 단편을 포함한다.
다른 구현예에서, 본원에 개시되는 방법에 사용되고 본원에 개시되는 조성물은 세포사멸 세포 또는 세포사멸 세포 상등액, 및 약제학적으로 허용 가능한 부형제를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 유효량의 유전적으로 변형된 면역 세포 또는 유전적으로 변형된 이의 수용체를 포함하는 조성물은 세포사멸 세포 집단 또는 세포사멸 세포 상등액을 포함하는 동일한 조성물일 수 있다. 다른 구현예에서, 유효량의 CAR T-세포, 또는 세포독성 T-세포, 또는 유전적으로 변형된 수지상 세포, 또는 유전적으로 변형된 자연 살해 세포를 포함하는 조성물은 세포사멸 세포 집단 또는 세포사멸 세포 상등액을 포함하는 동일한 조성물일 수 있다. 또 다른 구현예에서, 유효량의 유전적으로 변형된 T-세포 수용체를 포함하는 조성물은 세포사멸 세포 집단 또는 세포사멸 세포 상등액을 포함하는 동일한 조성물일 수 있다. 또 다른 구현예에서, CAR T-세포, 세포독성 T-세포, 자연 살해 세포, 또는 수지상 세포를 포함하는 그룹으로부터 선택되는 유전적으로 변형된 면역 세포의 유효량을 포함하는 조성물은 세포사멸 세포 집단 또는 세포사멸 세포 상등액을 포함하는 동일한 조성물이 아니다. 다른 구현예에서, 조성물은 키메라 항원 수용체-발현 T-세포(CAR T-세포) 및 세포사멸 세포 또는 세포사멸 세포 상등액 중 어느 하나, 그리고 약제학적으로 허용 가능한 부형제를 포함한다. 다른 구현예에서, 유효량의 유전적으로 변형된 T-세포 수용체를 포함하는 조성물은 세포사멸 세포 집단 또는 세포사멸 세포 상등액을 포함하는 동일한 조성물이 아니다.
다른 구현예에서, 조성물에 포함되는 세포사멸 세포는 초기 세포사멸 상태의 세포사멸 세포를 포함한다. 다른 구현예에서, 조성물에 포함되는 세포사멸 세포는 혼합된 제3자 공여 세포이다. 다른 구현예에서, 본원에 개시되는 조성물에 포함되는 세포사멸 세포 상등액은 초기 세포사멸 세포로부터 수집된다. 다른 구현예에서, 본원에 개시되는 조성물에 포함되는 세포사멸 세포 상등액은 혼합된 제3자 공여 세포로부터 수집된다.
일 구현예에서, 유전적으로 변형된 면역 세포, 예를 들어 CAR T-세포를 포함하는 조성물은 사이토카인 방출 증후군이 있거나 사이토카인 폭풍을 경험하는 환자에서 사이토카인 방출을 예방, 억제, 또는 조절하기 위한 부가적 약제학적 조성물을 추가로 포함한다. 다른 구현예에서, 유전적으로 변형된 면역 세포, 예를 들어 CAR T-세포, 및 세포사멸 세포를 포함하는 조성물은 사이토카인 방출 증후군이 있거나 사이토카인 폭풍을 경험하는 환자에서 사이토카인 방출을 예방, 억제, 또는 조절하기 위한 부가적 약제학적 조성물을 추가로 포함한다. 다른 구현예에서, 유전적으로 변형된 면역 세포, 예를 들어 CAR T-세포, 및 세포사멸 세포 상등액을 포함하는 조성물은 사이토카인 방출 증후군이 있거나 사이토카인 폭풍을 경험하는 환자에서 사이토카인 방출을 예방, 억제, 또는 조절하기 위한 부가적 약제학적 조성물을 추가로 포함한다.
일 구현예에서, 유전적으로 변형된 면역 세포, 예를 들어 TCR T-세포를 포함하는 조성물은 사이토카인 방출 증후군이 있거나 사이토카인 폭풍을 경험하는 환자에서 사이토카인 방출을 예방, 억제, 또는 조절하기 위한 부가적 약제학적 조성물을 추가로 포함한다. 다른 구현예에서, 유전적으로 변형된 면역 세포, 예를 들어 TCR T-세포, 및 세포사멸 세포를 포함하는 조성물은 사이토카인 방출 증후군이 있거나 사이토카인 폭풍을 경험하는 환자에서 사이토카인 방출을 예방, 억제, 또는 조절하기 위한 부가적 약제학적 조성물을 추가로 포함한다. 다른 구현예에서, 유전적으로 변형된 면역 세포, 예를 들어 TCR T-세포, 및 세포사멸 세포 상등액을 포함하는 조성물은 사이토카인 방출 증후군이 있거나 사이토카인 폭풍을 경험하는 환자에서 사이토카인 방출을 예방, 억제, 또는 조절하기 위한 부가적 약제학적 조성물을 추가로 포함한다.
일 구현예에서, 유전적으로 변형된 면역 세포, 예를 들어 수지상 세포를 포함하는 조성물은 사이토카인 방출 증후군이 있거나 사이토카인 폭풍을 경험하는 환자에서 사이토카인 방출을 예방, 억제, 또는 조절하기 위한 부가적 약제학적 조성물을 추가로 포함한다. 다른 구현예에서, 유전적으로 변형된 면역 세포, 예를 들어 수지상 세포, 및 세포사멸 세포를 포함하는 조성물은 사이토카인 방출 증후군이 있거나 사이토카인 폭풍을 경험하는 환자에서 사이토카인 방출을 예방, 억제, 또는 조절하기 위한 부가적 약제학적 조성물을 추가로 포함한다. 다른 구현예에서, 유전적으로 변형된 면역 세포, 예를 들어 수지상 세포, 및 세포사멸 세포 상등액을 포함하는 조성물은 사이토카인 방출 증후군이 있거나 사이토카인 폭풍을 경험하는 환자에서 사이토카인 방출을 예방, 억제, 또는 조절하기 위한 부가적 약제학적 조성물을 추가로 포함한다.
일 구현예에서, 유전적으로 변형된 면역 세포, 예를 들어 NK 세포를 포함하는 조성물은 사이토카인 방출 증후군이 있거나 사이토카인 폭풍을 경험하는 환자에서 사이토카인 방출을 예방, 억제, 또는 조절하기 위한 부가적 약제학적 조성물을 추가로 포함한다. 다른 구현예에서, 유전적으로 변형된 면역 세포, 예를 들어 NK 세포, 및 세포사멸 세포를 포함하는 조성물은 사이토카인 방출 증후군이 있거나 사이토카인 폭풍을 경험하는 환자에서 사이토카인 방출을 예방, 억제, 또는 조절하기 위한 부가적 약제학적 조성물을 추가로 포함한다. 다른 구현예에서, 유전적으로 변형된 면역 세포, 예를 들어 NK 세포, 및 세포사멸 세포 상등액을 포함하는 조성물은 사이토카인 방출 증후군이 있거나 사이토카인 폭풍을 경험하는 환자에서 사이토카인 방출을 예방, 억제, 또는 조절하기 위한 부가적 약제학적 조성물을 추가로 포함한다.
일 구현예에서, 부가적 약제학적 조성물은, 일 구현예에서 이필리무맙인, CTLA-4 차단제를 포함한다. 다른 구현예에서, 부가적 약제학적 조성물은 본원에 개시되는 알파-1 항-트립신, 또는 이의 단편, 또는 이의 유사체를 포함한다. 다른 구현예에서, 부가적 약제학적 조성물은 본원에 개시되는 텔루륨-기반 화합물을 포함한다. 다른 구현예에서, 부가적 약제학적 조성물은 본원에 개시되는 면역 조절제를 포함한다. 다른 구현예에서, 부가적 약제학적 조성물은 CTLA-4 차단제, 알파-1 항-트립신 또는 이의 단편 또는 이의 유사체, 텔루륨-기반 화합물, 또는 면역 조절제, 또는 이의 임의의 조합을 포함한다.
일 구현예에서, 유전적으로 변형된 면역 세포, 예를 들어 CAR T-세포, 및 CTLA-4 차단제, 알파-1 항-트립신 또는 이의 단편 또는 이의 유사체, 세포사멸 세포, 또는 세포사멸 세포 상등액, 텔루륨-기반 화합물, 또는 면역 조절제 중 임의의 하나를 포함하는 약제학적 조성물을 포함하는 조성물은 단일 조성물을 포함한다. 다른 구현예에서, 유전적으로 변형된 면역 세포, 예를 들어 CAR T-세포, 및 CTLA-4 차단제, 알파-1 항-트립신 또는 이의 단편 또는 이의 유사체, 세포사멸 세포, 또는 세포사멸 세포 상등액, 텔루륨-기반 화합물, 또는 면역 조절제 중 임의의 하나, 또는 이의 임의의 조합을 포함하는 약제학적 조성물을 포함하는 조성물은 복수의 조성물을 포함하는데, 여기에서, 일 구현예에서 CAR T-세포인 유전적으로 변형된 면역 세포, CTLA-4 차단제, 알파-1 항-트립신 또는 이의 단편 또는 이의 유사체, 세포사멸 세포, 세포사멸 세포 상등액, 텔루륨-기반 화합물, 또는 면역 조절제, 또는 이의 임의의 조합은 각각 별개의 조성물에 포함된다. 또 다른 구현예에서는, 일 구현예에서 CAR T-세포인 유전적으로 변형된 면역 세포, 및 CTLA-4 차단제, 알파-1 항-트립신 또는 이의 단편 또는 이의 유사체, 세포사멸 세포, 세포사멸 세포 상등액, 텔루륨-기반 화합물, 또는 면역 조절제 중 임의의 하나, 또는 이의 임의의 조합을 포함하는 약제학적 조성물을 포함하는 조성물은 복수의 조성물을 포함하는데, 여기에서, 일 구현예에서 CAR T-세포인 유전적으로 변형된 면역 세포, CTLA-4 차단제, 또는 알파-1 항-트립신 또는 이의 단편 또는 이의 유사체, 텔루륨-기반 화합물, 또는 면역 조절제, 또는 이의 임의의 조합, 또는 이의 임의의 조합은 유전적으로 변형된 면역 세포, 예를 들어 CAR T-세포, 조성물에 존재하고, 세포사멸 세포, 또는 세포사멸 세포 상등액은 별개의 조성물에 포함된다.
일 구현예에서, 유전적으로 변형된 면역 세포, 예를 들어 TCR T-세포, 및 CTLA-4 차단제, 알파-1 항-트립신 또는 이의 단편 또는 이의 유사체, 세포사멸 세포, 또는 세포사멸 세포 상등액, 텔루륨-기반 화합물, 또는 면역 조절제 중 임의의 하나를 포함하는 약제학적 조성물을 포함하는 조성물은 단일 조성물을 포함한다. 다른 구현예에서, 유전적으로 변형된 면역 세포, 예를 들어 TCR T-세포, 및 CTLA-4 차단제, 알파-1 항-트립신 또는 이의 단편 또는 이의 유사체, 세포사멸 세포, 또는 세포사멸 세포 상등액, 텔루륨-기반 화합물, 또는 면역 조절제 중 임의의 하나, 또는 이의 임의의 조합을 포함하는 약제학적 조성물을 포함하는 조성물은 복수의 조성물을 포함하는데, 여기에서, 일 구현예에서 TCR T-세포인 유전적으로 변형된 면역 세포, CTLA-4 차단제, 알파-1 항-트립신 또는 이의 단편 또는 이의 유사체, 세포사멸 세포, 세포사멸 세포 상등액, 텔루륨-기반 화합물, 또는 면역 조절제, 또는 이의 임의의 조합은 각각 별개의 조성물에 포함된다. 또 다른 구현예에서는, 일 구현예에서 TCR T-세포인 유전적으로 변형된 면역 세포, 및 CTLA-4 차단제, 알파-1 항-트립신 또는 이의 단편 또는 이의 유사체, 세포사멸 세포, 세포사멸 세포 상등액, 텔루륨-기반 화합물, 또는 면역 조절제 중 임의의 하나, 또는 이의 임의의 조합을 포함하는 약제학적 조성물을 포함하는 조성물은 복수의 조성물을 포함하는데, 여기에서, 일 구현예에서 TCR T-세포인 유전적으로 변형된 면역 세포, CTLA-4 차단제, 또는 알파-1 항-트립신 또는 이의 단편 또는 이의 유사체, 텔루륨-기반 화합물, 또는 면역 조절제, 또는 이의 임의의 조합, 또는 이의 임의의 조합은 유전적으로 변형된 면역 세포, 예를 들어 TCR T-세포, 조성물에 존재하고, 세포사멸 세포, 또는 세포사멸 세포 상등액은 별개의 조성물에 포함된다.
일 구현예에서, 유전적으로 변형된 면역 세포, 예를 들어 수지상 세포, 및 CTLA-4 차단제, 알파-1 항-트립신 또는 이의 단편 또는 이의 유사체, 세포사멸 세포, 또는 세포사멸 세포 상등액, 텔루륨-기반 화합물, 또는 면역 조절제 중 임의의 하나를 포함하는 약제학적 조성물을 포함하는 조성물은 단일 조성물을 포함한다. 다른 구현예에서, 유전적으로 변형된 면역 세포, 예를 들어 수지상 세포, 및 CTLA-4 차단제, 알파-1 항-트립신 또는 이의 단편 또는 이의 유사체, 세포사멸 세포, 또는 세포사멸 세포 상등액, 텔루륨-기반 화합물, 또는 면역 조절제 중 임의의 하나, 또는 이의 임의의 조합을 포함하는 약제학적 조성물을 포함하는 조성물은 복수의 조성물을 포함하는데, 여기에서, 일 구현예에서 수지상 세포인 유전적으로 변형된 면역 세포, CTLA-4 차단제, 알파-1 항-트립신 또는 이의 단편 또는 이의 유사체, 세포사멸 세포, 세포사멸 세포 상등액, 텔루륨-기반 화합물, 또는 면역 조절제, 또는 이의 임의의 조합은 각각 별개의 조성물에 포함된다. 또 다른 구현예에서는, 일 구현예에서 수지상 세포인 유전적으로 변형된 면역 세포, 및 CTLA-4 차단제, 알파-1 항-트립신 또는 이의 단편 또는 이의 유사체, 세포사멸 세포, 세포사멸 세포 상등액, 텔루륨-기반 화합물, 또는 면역 조절제 중 임의의 하나, 또는 이의 임의의 조합을 포함하는 약제학적 조성물을 포함하는 조성물은 복수의 조성물을 포함하는데, 여기에서, 일 구현예에서 수지상 세포인 유전적으로 변형된 면역 세포, CTLA-4 차단제, 또는 알파-1 항-트립신 또는 이의 단편 또는 이의 유사체, 텔루륨-기반 화합물, 또는 면역 조절제, 또는 이의 임의의 조합, 또는 이의 임의의 조합은 유전적으로 변형된 면역 세포, 예를 들어 수지상 세포, 조성물에 존재하고, 세포사멸 세포, 또는 세포사멸 세포 상등액은 별개의 조성물에 포함된다.
일 구현예에서, 유전적으로 변형된 면역 세포, 예를 들어 NK 세포, 및 CTLA-4 차단제, 알파-1 항-트립신 또는 이의 단편 또는 이의 유사체, 세포사멸 세포, 또는 세포사멸 세포 상등액, 텔루륨-기반 화합물, 또는 면역 조절제 중 임의의 하나를 포함하는 약제학적 조성물을 포함하는 조성물은 단일 조성물을 포함한다. 다른 구현예에서, 유전적으로 변형된 면역 세포, 예를 들어 NK 세포, 및 CTLA-4 차단제, 알파-1 항-트립신 또는 이의 단편 또는 이의 유사체, 세포사멸 세포, 또는 세포사멸 세포 상등액, 텔루륨-기반 화합물, 또는 면역 조절제 중 임의의 하나, 또는 이의 임의의 조합을 포함하는 약제학적 조성물을 포함하는 조성물은 복수의 조성물을 포함하는데, 여기에서, 일 구현예에서 NK 세포인 유전적으로 변형된 면역 세포, CTLA-4 차단제, 알파-1 항-트립신 또는 이의 단편 또는 이의 유사체, 세포사멸 세포, 세포사멸 세포 상등액, 텔루륨-기반 화합물, 또는 면역 조절제, 또는 이의 임의의 조합은 각각 별개의 조성물에 포함된다. 또 다른 구현예에서는, 일 구현예에서 NK 세포인 유전적으로 변형된 면역 세포, 및 CTLA-4 차단제, 알파-1 항-트립신 또는 이의 단편 또는 이의 유사체, 세포사멸 세포, 세포사멸 세포 상등액, 텔루륨-기반 화합물, 또는 면역 조절제 중 임의의 하나, 또는 이의 임의의 조합을 포함하는 약제학적 조성물을 포함하는 조성물은 복수의 조성물을 포함하는데, 여기에서, 일 구현예에서 NK 세포인 유전적으로 변형된 면역 세포, CTLA-4 차단제, 또는 알파-1 항-트립신 또는 이의 단편 또는 이의 유사체, 텔루륨-기반 화합물, 또는 면역 조절제, 또는 이의 임의의 조합, 또는 이의 임의의 조합은 유전적으로 변형된 면역 세포, 예를 들어 NK 세포, 조성물에 존재하고, 세포사멸 세포, 또는 세포사멸 세포 상등액은 별개의 조성물에 포함된다.
당업자는 "약제학적 조성물"이, 생리적으로 적절한 담체 및 부형제와 같은 다른 화학적 성분을 갖는, 본원에 기술되는 하나 이상의 활성 성분의 제제를 포괄할 수 있음을 인정할 것이다. 약제학적 조성물의 목적은 유기체로 화합물의 투여를 용이하게 하는 것이다.
당업자는 구절 "생리적으로 허용 가능한 담체", "약제학적으로 허용 가능한 담체", "생리적으로 허용 가능한 부형제", 및 "약제학적으로 허용 가능한 부형제"이 상호교환적으로 사용될 수 있고, 유기체에 상당한 자극을 야기하지 않고, 투여되는 활성 성분의 생물학적 활성 및 특성을 없애지 않는 담체, 부형제, 또는 희석제를 포괄할 수 있음을 인정할 것이다.
당업자는 "부형제"가 활성 성분의 투여를 추가로 용이하게 하도록 약제학적 조성물에 첨가되는 불활성 물질을 포괄할 수 있음을 인정할 것이다. 일 구현예에서, 부형제는 탄산칼슘, 인산칼슘, 다양한 당 및 전분의 유형, 셀룰로오스 유도체, 젤라틴, 식물유 및 폴리에틸렌글리콜을 포함한다.
물질의 투여 및 제형화를 위한 기법은, 본원에 참조로 도입되는 "Remington's Pharmaceutical Sciences," Mack Publishing Co., Easton, PA, 최근판에서 발견된다.
일 구현예에서, 조성물은 동시에 투여된다. 대안의 구현예에서, 조성물은 상이한 시간에 투여된다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포를 포함하는 조성물은 유전적으로 변형된 면역 세포 또는 이의 수용체의 주입 전에 투여된다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포를 포함하는 조성물은 CAR- T-세포 주입 전에 투여된다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포를 포함하는 조성물은 세포독성 T-세포 주입 전에 투여된다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포를 포함하는 조성물은 자연 살해 세포 주입 전에 투여된다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포를 포함하는 조성물은 수지상 세포 주입 전에 투여된다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포를 포함하는 조성물은 유전적으로 변형된 T-세포 수용체의 주입 전에 투여된다.
다른 구현예에서, 세포사멸 세포 상등액을 포함하는 조성물은 유전적으로 변형된 면역 세포 또는 이의 수용체의 주입 전에 투여된다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 상등액을 포함하는 조성물은 CAR- T-세포 주입 전에 투여된다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 상등액을 포함하는 조성물은 세포독성 T-세포 주입 전에 투여된다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 상등액을 포함하는 조성물은 자연 살해 세포 주입 전에 투여된다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 상등액을 포함하는 조성물은 수지상 세포 주입 전에 투여된다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 상등액을 포함하는 조성물은 유전적으로 변형된 T-세포 수용체의 주입 전에 투여된다.
다른 구현예에서, 세포사멸 세포 상등액을 포함하는 조성물은 유전적으로 변형된 면역 세포 또는 이의 수용체의 주입 전에 투여된다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포를 포함하는 조성물은 유전적으로 변형된 면역 세포 또는 이의 수용체 주입 약 24 시간 전에 투여된다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포를 포함하는 조성물은 CAR T-세포, 또는 세포독성 T-세포, 또는 자연 살해 세포, 또는 수지상 세포 또는 유전적으로 변형된 T-세포 수용체 주입 약 24 시간 전에 투여된다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 상등액을 포함하는 조성물은 CAR T-세포 또는 세포독성 T-세포, 또는 자연 살해 세포, 또는 수지상 세포 또는 유전적으로 변형된 T-세포 수용체 주입 약 24 시간 전에 투여된다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포를 포함하는 조성물은 CAR- T-세포 또는 세포독성 T-세포, 또는 자연 살해 세포, 또는 수지상 세포 또는 유전적으로 변형된 T-세포 수용체 주입 약 2 시간, 4 시간, 6 시간, 8 시간, 10 시간, 12 시간, 14 시간, 16 시간, 18 시간, 20 시간, 22 시간, 24 시간, 36 시간, 48 시간, 60 시간, 또는 72 시간 전에 투여된다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 상등액을 포함하는 조성물은 CAR T-세포 또는 세포독성 T-세포, 또는 자연 살해 세포, 또는 수지상 세포 또는 유전적으로 변형된 T-세포 수용체 주입 약 2 시간, 4 시간, 6 시간, 8 시간, 10 시간, 12 시간, 14 시간, 16 시간, 18 시간, 20 시간, 22 시간, 24 시간, 36 시간, 48 시간, 60 시간, 또는 72 시간 전에 투여된다. 각각의 가능성은 본원에 개시되는 별개의 구현예를 나타낸다.
다른 구현예에서, 세포사멸 세포를 포함하는 조성물은 유전적으로 변형된 면역 세포 또는 이의 유전적으로 변형된 수용체의 주입 후에 투여된다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포를 포함하는 조성물은 CAR T-세포 또는 세포독성 T-세포, 또는 자연 살해 세포, 또는 수지상 세포 또는 유전적으로 변형된 T-세포 수용체 주입 후에 투여된다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 상등액을 포함하는 조성물은 유전적으로 변형된 면역 세포 또는 이의 유전적으로 변형된 수용체의 주입 후에 투여된다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 상등액을 포함하는 조성물은 CAR T-세포 또는 세포독성 T-세포, 또는 자연 살해 세포, 또는 수지상 세포 또는 유전적으로 변형된 T-세포 수용체 주입 후에 투여된다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포를 포함하는 조성물은 CAR T-세포 또는 세포독성 T-세포, 또는 자연 살해 세포, 또는 수지상 세포 또는 유전적으로 변형된 T-세포 수용체 주입 약 24 시간 후에 투여된다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포를 포함하는 조성물은 유전적으로 변형된 면역 세포 또는 이의 유전적으로 변형된 수용체의 주입 후에 투여된다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 상등액을 포함하는 조성물은 CAR T-세포 또는 세포독성 T-세포, 또는 자연 살해 세포, 또는 수지상 세포 또는 유전적으로 변형된 T-세포 수용체 주입 약 24 시간 후에 투여된다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포를 포함하는 조성물은 CAR- T-세포 또는 세포독성 T-세포, 또는 자연 살해 세포, 또는 수지상 세포 또는 유전적으로 변형된 T-세포 수용체 주입 약 2 시간, 4 시간, 6 시간, 8 시간, 10 시간, 12 시간, 14 시간, 16 시간, 18 시간, 20 시간, 22 시간, 24 시간, 36 시간, 48 시간, 60 시간, 또는 72 시간 후에 투여된다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 상등액을 포함하는 조성물은 CAR T-세포 또는 세포독성 T-세포, 또는 자연 살해 세포, 또는 수지상 세포 또는 유전적으로 변형된 T-세포 수용체 주입 약 2 시간, 4 시간, 6 시간, 8 시간, 10 시간, 12 시간, 14 시간, 16 시간, 18 시간, 20 시간, 22 시간, 24 시간, 36 시간, 48 시간, 60 시간, 또는 72 시간 후에 투여된다. 각각의 가능성은 본원에 개시되는 별개의 구현예를 나타낸다.
제형
유전적으로 변형된 면역반응성 세포를 포함하거나 세포사멸 세포를 포함하거나 세포사멸 세포 상등액을 포함하거나, 또는 이의 임의의 조합인 본원에 개시되는 조성물은, 선택된 pH로 완충될 수 있는, 멸균된 액체 제제, 예를 들어 등장성 수성 용액, 현탁액, 유액, 분산액, 또는 점성 조성물로서 편리하게 제공될 수 있으며, 액체 제제가 겔제, 다른 점성 조성물, 및 고형 조성물보다 보통 조제하기가 더 용이하다. 또한, 액체 조성물은, 특히 주사에 의해, 투여하기에 좀 더 편리하다. 반면, 점성 조성물은 특정 조직과 더 긴 접촉 기간을 제공하도록 적절한 점도 범위 내에서 제형화될 수 있다. 액체 또는 점성 조성물은, 예를 들어 물, 식염수, 인산 완충된 식염수, 폴리올(예를 들어, 글리세롤, 프로필렌글리콜, 액체 폴리에틸렌글리콜 등) 및 이의 적절한 혼합물을 포함하는 용매 또는 분산 매질일 수 있는 담체를 포함할 수 있다.
멸균된 주사 가능 용액은 본원에 개시되는 방법을 실시하는 데 이용되는 유전적으로 변형된 면역반응 세포 또는 세포사멸 세포 상등액을, 요구되는 양의 적절한 용매에, 요망될 경우 다양한 양의 다른 성분과 함께 도입시키는 것에 의해 제조될 수 있다. 이러한 조성물은 멸균수, 생리적 식염수, 포도당, 덱스트로스 등과 같은 적절한 담체, 희석제, 또는 부형제와 혼합될 수 있다. 조성물은 또한 동결건조될 수 있다. 조성물은 투여 경로 및 원하는 제제에 따라, 습윤제, 분산제, 또는 유화제(예를 들어, 메틸셀룰로오스), pH 완충제, 겔화제 또는 점도 증가 첨가제, 보존제, 풍미제, 착색제 등과 같은 보조 성분을 포함할 수 있다. 본원에 참조로 도입되는 "REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCE", 17th edition, 1985와 같은 표준 문서가 부당한 실험 없이 적절한 제제를 제조하기 위해 참조될 수 있다.
항미생물 보존제, 항산화제, 킬레이트화제, 및 완충제를 포함하는, 조성물의 안정성 및 무균성을 증진시키는 다양한 첨가제가 첨가될 수 있다. 미생물 활동의 방지는 다양한 항박테리아 및 항진균 물질, 예를 들어 파라벤, 클로로부탄올, 페놀, 소르빈산 등에 의해 보장될 수 있다. 주사 가능한 약제학적 형태의 지속적 흡수는 흡수를 지연시키는 물질, 예를 들어 알루미늄 모노스테아레이트 및 젤라틴의 사용에 의해 초래될 수 있다. 그러나, 본원의 개시에 따르면, 사용되는 임의의 비히클, 희석제, 또는 첨가제는 유전적으로 변형된 면역반응 세포 또는 이들의 전구체와 혼화 가능하여야 할 것이다.
조성물은 등장성일 수 있는데, 즉 이들은 혈액 및 눈물 유체와 동일한 삼투압을 가질 수 있다. 본원에 개시되는 조성물의 요망되는 등장성은 염화나트륨, 또는 덱스트로스, 붕산, 주석산나트륨, 프로필렌글리콜 또는 다른 무기 또는 유기 용질과 같이 다른 약제학적으로 허용 가능한 물질을 사용하여 달성될 수 있다. 염화나트륨은 나트륨 이온을 포함하는 완충액에 특히 바람직할 수 있다.
조성물의 점성은, 요망될 경우, 약제학적으로 허용 가능한 점증제를 사용하여 선택된 수준으로 유지될 수 있다. 메틸셀룰로오스는 쉽고 경제적으로 입수 가능하고 취급하기 용이하기 때문에 바람직할 수 있다
다른 적절한 점증제는, 예를 들어, 잔탄검, 카복시메틸 셀룰로오스, 하이드록시프로필 셀룰로오스, 카보머 등을 포함한다. 점증제의 바람직한 농도는 선택된 물질에 의존할 것이다. 중요한 점은 선택된 점도를 달성할 양을 사용하는 것이다. 명백히, 적절한 담체 및 다른 첨가제의 선택은 정확한 투여의 경로 및 특정 제형, 예를 들어, 액체 제형의 성질(예를 들어, 조성물이 용액, 현탁액, 겔 또는 다른 액체 형태, 예를 들어 경시적 방출 형태 또는 액체-충전 형태로 제형화되는지 여부)에 의존할 것이다.
해당 분야의 당업자는 조성물의 성분이 화학적으로 불활성이 되도록 선택되어야 하고 본원에 개시되는 방법에서 기술되는 유전적으로 변형된 면역반응 세포의 효능 또는 생존 능력에 영향을 미치지 않을 것임을 인정할 것이다. 이것은 화학적 및 약제학적 원리에 익숙한 당업자에게 어떠한 문제도 제시하지 않을 것이고, 본 개시 및 본원에 인용된 문헌으로부터 간단한 실험(부당한 실험을 포함하지 않는)에 의하거나 표준 문서를 참고하여 문제를 용이하게 회피할 수 있다.
본원에 개시되는 유전적으로 변형된 면역반응 세포의 치료적 용도에 관련된 하나의 고려 사항은 최적의 효과를 달성하기 위해 필요한 세포의 양이다. 투여되는 세포의 양은 치료되는 대상에 따라 변할 것이다. 일 구현예에서는, 104 내지 1010 사이, 105 내지 109 사이, 또는 106 내지 108 사이의 본원에 개시되는 유전적으로 변형된 면역반응 세포가 인간 대상에 투여된다. 더 효과적인 세포는 훨씬 더 적은 수로 투여될 수 있다. 일부 구현예에서는, 적어도 약 1 x 108, 2 x 108, 3 x 108, 4 x 108, 및 5 x l08의 본원에 개시되는 유전적으로 변형된 면역반응 세포가 인간 대상에 투여된다. 유효 용량에 고려될 정확한 결정은 대상의 크기, 연령, 성별, 체중, 및 특정 대상의 병태를 포함하는 각 대상에 대한 개별적인 인자를 기반으로 할 수 있다. 투여량은 본 개시 및 해당 분야의 지식으로부터 해당 분야의 당업자에 의해 용이하게 확인될 수 있다.
당업자는 조성물에서, 그리고 본원에 개시되는 방법에서 투여되는 세포 및 선택적 첨가제, 비히클, 및/또는 담체의 양을 용이하게 결정할 수 있다. 전형적으로, 임의의 첨가제(활성 세포(들) 및/또는 물질(들)에 추가하여)는 인산염 완충 식염수에서 0.001 내지 50%(중량) 용액으로 존재하고, 활성 성분은 약 0.0001 내지 약 5 wt%와 같은 마이크로그램 내지 밀리그램 자릿수로 존재한다. 다른 구현예에서는 약 0.0001 내지 약 1 wt%. 또 다른 구현예에서는 약 0.0001 내지 약 0.05 wt% 또는 약 0.001 내지 약 20 wt%. 추가의 구현예에서는, 약 0.01 내지 약 10 wt%. 다른 구현예에서는, 약 0.05 내지 약 5 wt%. 물론, 동물 또는 인간에 투여되는 임의의 조성물에서, 그리고 임의의 특정 투여 방법에서는, 이에 따라 다음을 결정하는 것이 바람직하다: 적절한 동물 모델, 예를 들어, 마우스와 같은 설치류에서 치사량(LD) 및 LD50을 결정하는 것에 의한 독성; 그리고, 적절한 반응을 이끌어내는 조성물(들)의 용량, 그 안에 있는 성분의 농도 및 조성물(들)의 투여 시기. 이러한 결정은 당업자의 지식, 본 개시 및 본원에 인용되는 문헌으로부터 부당한 실험을 필요로 하지 않는다. 그리고, 순차적 투여를 위한 시간은 부당한 실험 없이 확인될 수 있다.
핵산 서열, 벡터, 세포
일 구현예에서는, 본원에 개시되는 조성물 및 방법에서의 사용을 위해 본원에 기술되는 키메라 항원 수용체(CAR)를 암호화하는 분리된 핵산 서열이 본원에 개시된다.
다른 구현예에서는, 본원에 기술되는 키메라 항원 수용체(CAR)를 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 벡터가 본원에 개시된다.
일 구현예에서는, 본원에 개시되는 조성물 및 방법에서의 사용을 위해 본원에 기술되는 유전적으로 변형된 T-세포 수용체(TCR)를 암호화하는 분리된 핵산 서열이 본원에 개시된다. 다른 구현예에서는, 본원에 기술되는 유전적으로 변형된 T-세포 수용체(TCR)를 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 벡터가 본원에 개시된다.
면역반응 세포(예를 들어, T-세포, CTL 세포, NK 세포)의 유전적 변형은 실질적으로 동종의 세포 조성물을 재조합 DNA 구성체로 형질도입하는 것에 의해 달성될 수 있다. 일 구현예에서, 레트로바이러스 벡터(감마- 레트로바이러스 또는 렌티바이러스 벡터 중 어느 하나)가 세포로 DNA 구성체의 도입을 위해 이용된다. 예를 들어, 항원(예를 들어, 종양 항원, 또는 이의 변종, 또는 단편)에 결합하는 수용체를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 레트로바이러스 벡터로 클로닝할 수 있고, 발현은 이의 내인성 프로모터로부터, 레트로바이러스의 긴 말단 반복으로부터, 또는 관심 있는 표적 T-세포 유형에 대한 특이적 프로모터로부터 유도될 수 있다. 비-바이러스 벡터도 사용될 수 있다.
비-바이러스 접근법도 세포에서 단백질의 발현을 위해 이용될 수 있다. 예를 들어, 핵산 분자는 리포펙틴의 존재 중에 핵산을 투여하는 것에 의해(Feigner et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 84:7413, 1987; Ono et al., Neuroscience Letters 17:259, 1990; Brigham et al, Am. J. Med. Sci. 298:278, 1989; Staubinger et al, Methods in Enzymology 101 :512, 1983), 아시알로오로소뮤코이드-폴리리신 접합(Wu et al., Journal of Biological Chemistry 263: 14621, 1988; Wu et al., Journal of Biological Chemistry 264:16985, 1989), 또는 수술 조건 하에 현미-주사에 의해(Wolff et al., Science 247: 1465, 1990) 세포로 도입될 수 있다. 유전자 전이를 위한 다른 비-바이러스 수단은 인산칼슘, DEAE 덱스트란, 전기천공, 및 원형질 융합을 사용한 시험관내 형질감염을 포함한다. 리포솜 또한 DNA의 세포내 전달에 잠재적으로 유익할 수 있다. 대상의 환부 조직으로의 정상적인 유전자의 이식 또한 생체외 배양 가능한 세포 유형(예를 들어, 자가 또는 이종 1차 세포 또는 이의 자손)으로 정상적인 핵산을 전사하고, 이후 세포(또는 이의 자손)를 표적 조직으로 주사하거나 전신적으로 주사하는 것에 의해 달성될 수 있다. 재조합 수용체 또한 유전자전위효소 또는 표적 뉴클레아제(예를 들어, 징크 핑거 뉴클레아제(Zinc finger nuclease), 메가뉴클레아제, 또는 TALE 뉴클레아제)를 사용하여 유도되거나 수득될 수 있다. 일시적 발현은 RNA 전기천공에 의해 수득될 수 있다. 폴리뉴클레오티드 요법 방법에서의 사용을 위한 cDNA 발현은 임의의 적절한 프로모터(예를 들어, 인간 사이토메갈로바이러스(CMV), 유인원 바이러스 40(SV40), 또는 메탈로티오네인 프로모터)로부터 직접적으로 지시되고, 임의의 적절한 포유류 조절 요소 또는 인트론(예를 들어, 연장 인자 la 인핸서/프로모터/인트론 구조)에 의해 조절될 수 있다. 예를 들어, 요망될 경우, 특정 세포 유형에서 유전자 발현을 우선적으로 지시하는 것으로 알려진 인핸서가 핵산의 발현을 지시하도록 사용될 수 있다. 사용되는 인핸서는 조직- 또는 세포-특이적 인핸서로서 특징지어진 것을 포함할 수 있지만, 이로써 제한되지 않는다. 대안으로서, 게놈 클론이 치료적 구성체로서 사용될 경우, 조절은 동족 조절 서열에 의해, 또는 요망되는 경우, 위에 기술된 임의의 프로모터 또는 조절 요소를 포함하는, 이종 공급원으로부터 유래되는 조절 서열에 의해 매개될 수 있다.
다른 구현예에서는, 본원에 개시되는 키메라 항원 수용체(CAR)를 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 벡터를 포함하는 세포가 본원에 개시된다.
키트
일 구현예에서는, 키메라 항원 수용체-발현 T-세포(CAR T-세포) 암 요법을 받는 대상에서 사이토카인 방출 증후군(CRS) 또는 사이토카인 폭풍의 발생을 억제 또는 감소시키는 키트가 본원에 개시되는데, 키트는 본원에 개시되는 세포사멸 세포 및 CAR T-세포를 별개로, 또는 사전-혼합으로 포함한다.
다른 구현예에서는, 키메라 항원 수용체-발현 T-세포(CAR T-세포) 암 요법을 받는 대상에서 사이토카인 방출 증후군(CRS) 또는 사이토카인 폭풍의 발생을 억제 또는 감소시키는 키트가 본원에 개시되는데, 키트는 본원에 개시되는 세포사멸 세포 상등액 및 CAR T-세포를 별개로, 또는 사전-혼합으로 포함한다.
종양 형성, 병원체 감염, 면역 장애 또는 동종 이식의 치료 또는 예방에 의해, 또는 암 또는 종양을 치료, 예방, 억제, 이의 발생을 감소, 개선, 또는 완화시키는 것에 의해 생성되는 사이토카인 방출 증후군(CRS) 또는 사이토카인 폭풍의 발생을 억제 또는 감소시키기 위한 키트가 본원에 개시된다. 일 구현예에서, 키트는 본원에 개시되는 세포사멸 세포 및 면역억제 세포의 유효량을 포함하는 치료적 또는 예방적 조성물을 단위 제형의 형태로 포함한다. 다른 구현예에서, 키트는 본원에 개시되는 세포사멸 세포 상등액 및 면역억제 세포의 유효량을 포함하는 치료적 또는 예방적 조성물을 단위 제형의 형태로 포함한다. 특정 구현예에서, 키트는 공동-자극 리간드를 추가로 포함한다. 다른 구현예에서, 키트는 CTLA-4 차단제, 알파-1 항-트립신 또는 이의 단편 또는 이의 유사체, 텔루륨-기반 화합물, 또는 면역 조절제, 또는 이의 임의의 조합을 포함하는 그룹으로부터 선택되는 부가적 물질을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 키트는 치료적 또는 예방적 백신을 포함하는 멸균 용기를 포함하는데; 이러한 용기는 상자, 앰플, 병, 바이알, 튜브, 백, 파우치, 블리스터-팩, 또는 해당 분야에 알려진 다른 적절한 용기 형태일 수 있다. 이러한 용기는 플라스틱, 유리, 적층 종이, 금속 호일, 또는 약제를 보관하기에 적절한 다른 재료로 만들어질 수 있다.
요망되는 경우, 면역반응 세포 및 세포사멸 세포 또는 세포사멸 세포 상등액은, 종양 형성, 병원체 감염, 면역 장애 또는 동종 이식 또는 종양 또는 암이 있거나 이의 발생 위험이 있는 대상에 세포를 투여하기 위한 설명서와 함께 제공된다. 설명서는 일반적으로 종양 형성, 병원체 감염, 면역 장애, 동종 이식, 종양 또는 암의 치료 또는 예방을 위한 조성물의 사용에 관한 정보를 포함한다. 다른 구현예에서, 설명서는 다음 중 적어도 하나를 포함한다: 치료제의 설명; 종양 형성, 병원체 감염, 면역 장애 또는 동종 이식, 암, 종양, 또는 이의 증상의 치료 또는 예방을 위한 투여 및 투약 계획; 주의 사항; 경고; 적응증; 금기; 과량 투약 정보; 부정적 반응; 동물 약물학; 임상 연구; 및/또는 참고. 설명서는 용기에 직접(제공시), 또는 용기에 적용되는 라벨로서, 또는 용기 안이나 용기와 함께 제공되는 별개의 시트, 팸플릿, 카드, 또는 접책으로서 인쇄될 수 있다.
당업자는 용어 "항원 인식 수용체"가 항원 결합에 반응하여 면역 세포(예를 들어, T-세포)를 활성화시킬 수 있는 수용체를 포괄할 수 있음을 인정할 것이다. 예시적인 항원 인식 수용체는, 종양 항원-결합 도메인이 면역 세포(예를 들어, T-세포)를 활성화시킬 수 있는 세포내 신호전달 도메인에 융합된, 자생 또는 내인성 T-세포 수용체 또는 키메라 항원 수용체일 수 있다.
당업자는 용어 "항체"가 온전한 항체 분자뿐 아니라 면역원-결합 능력을 보유하는 항체 분자의 단편을 의미한다는 것을 인정할 것이다. 이러한 단편은 또한 해당 분야에 잘 알려져 있고 시험관내 및 생체내 둘 다에서 정규적으로 이용된다. 따라서, 당업자는 용어 "항체"가 온전한 면역글로불린 분자뿐 아니라 잘 알려진 활성 단편 F(ab')2, 및 Fab을 의미한다는 것을 인정할 것이다. 온전한 항체의 Fc 단편이 결여된 F(ab')25 및 Fab 단편은 순환으로부터 신속하게 제거되고, 온전한 항체의 덜 비-특이적 조직 결합을 가질 수 있다(Wahl et al., J. Nucl. Med. 24:316-325 (1983). 본원에 개시되는 항체는 전체 자생 항체, 이중특이적 항체; 키메라 항체; Fab, Fab', 단일 사슬 V 영역 단편(scFv), 융합 폴리펩티드, 및 비전형(unconventional) 항체를 포함한다.
당업자는 용어 "단일-사슬 가변 단편" 또는 "scFv"가 면역글로불린의 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)이 공유적으로 연결되어 VH::VL 헤테로이량체를 형성한 융합 단백질을 포괄한다는 것을 인정할 것이다. 중쇄(VH) 및 경쇄(VL)는 직접적으로 연결되거나, 또는 VH의 N-말단을 VL의 C-말단에, 또는 VH의 C-말단을 VL의 N-말단에 연결하는 펩티드-암호화 링커(예를 들어, 30, 15, 20, 25 아미노산)에 의해 연결된다. 링커는 보통 유연성을 위해 글리신, 그리고 용해성을 위해 세린 또는 트레오닌이 풍부하다. 불변 영역의 제거 및 링커의 도입에도 불구하고, scFv 단백질은 원래의 면역글로불린의 특이성을 보유한다. 단일 사슬 Fv 폴리펩티드 항체는 Huston, et al.(Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 85:5879-5883, 1988)에 기술된 바와 같이 VH- 및 VL-암호화 서열을 포함하는 핵산으로부터 발현될 수 있다. 또한, 미국 특허 제5,091,513호, 제5,132,405호 및 제4,956,778호; 그리고 미국 특허 공개번호 제20050196754호 및 제20050196754호 참조. 억제 활성을 갖는 길항적 scFv가 기술되어 있다(예를 들어, Zhao et al., Hyrbidoma (Larchmt) 2008 27(6):455-51; Peter et al., J Cachexia Sarcope ia Muscle 2012 August 12; Shieh et al., J Imunol2009 183(4):2277-85; Giomarelli et al., Thromb Haemost 2007 97(6):955-63; Fife eta., J Clin Invst 2006 1 16(8):2252-61; Brocks et al., Immunotechnology 1997 3(3):173-84; Moosmayer et al., Ther Immunol 1995 2(10:31-40) 참조). 자극 활성을 갖는 효능적 scFvs가 기술되어 있다(예를 들어, Peter et al., J Biol Chem 2003 25278(38):36740-7; Xie et al, Nat Biotech 1 97 15(8):768-71; Ledbetter et al., Crit Rev Immunol l997 1 (5-6) -.427-55; Ho et al., BioChim Biophys Acta 2003 1638(3):257-66 참조).
"친화성"은 결합 강도의 척도를 의미한다. 이론에 구애받지 않고, 친화성은 항체 결합 부위와 항원 결정기 사이의 위치화학적 적합성의 접근, 이들 사이의 접촉 면적의 크기, 그리고 하전 및 소수성 그룹의 분포에 의존한다. 친화성은 또한 용어 "결합활성(avidity)"을 포함하는데, 이는 가역적 복합체의 형성 이후 항원-항체 결합의 강도를 말한다. 항원에 대한 항체의 친화성을 계산하는 방법은, 친화성을 계산하기 위한 결합 실험의 사용을 포함하여, 해당 분야에 알려져 있다. 기능적 분석(예를 들어, 유동 세포 분석)에서 항체 활성은 또한 항체 친화성을 반영한다. 항체 및 친화성은 표현형으로 특징지을 수 있고 기능적 분석(예를 들어, 유동 세포 분석)을 사용하여 비교할 수 있다.
당업자는 용어 "키메라 항원 수용체" 또는 "CAR"이 면역 세포를 활성화 또는 자극할 수 있는 세포내 신호전달 도메인에 융합된 항원-결합 도메인을 포괄할 수 있음을 인정할 것이다. 일 구현예에서, CAR의 세포외 결합 도메인은 쥣과 또는 인간화 단클론 항체의 가변 중쇄 및 경쇄 영역의 융합으로부터 유래되는 단일 사슬 가변 단편(scFv)으로 구성된다. 대안으로서, scFv는 Fab(항체 대신, 예를 들어 Fab 라이브러리로부터 얻어진)로부터 유래된 것이 사용될 수 있는데, 다양한 구현예에서, 이 scFv는 막통과 도메인과 그 다음에 세포내 신호전달 도메인에 융합된다. 다양한 구현예에서, CAR는 항원에 대한 높은 친화성 또는 결합활성을 갖도록 선택된다.
폴리펩티드 및 유사체
면역반응 세포에서 발현시 이들의 항-종양 활성을 증진시키는 방식으로 변형된 항-MUC1, CD28, CD3ζ, 및 다양한 scFv 폴리펩티드 또는 이의 단편(예를 들어, 인간화 단클론 항체)이 본원에 개시되는 방법에 또한 포함된다. 특정 구현예에서, 본원에 개시되는 방법은 서열에서 변경을 생성함으로써 의해 아미노산 서열 또는 핵산 서열을 최적화하는 것을 포함한다. 이러한 변경은 특정 돌연변이, 결실, 삽입, 또는 번역-후 변형을 포함할 수 있다. 본원에 제공되는 개시는 본원에 개시되는 임의의 자연적으로 존재하는 폴리펩티드의 유사체를 추가로 포함한다. 유사체는 아미노산 서열 차이에 의해, 번역-후 변형에 의해, 또는 둘 다에 의해 본원에 개시되는 자연적으로 존재하는 폴리펩티드와 상이할 수 있다. 본원에 개시되는 유사체는 일반적으로 본원에 개시되는 자연적으로 존재하는 아미노산 서열의 전체 또는 일부와 적어도 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%>, 또는 99% 이상의 동일성을 나타낼 것이다. 서열 비교의 길이는 적어도 5, 10, 15 또는 20 아미노산 잔기, 다른 구현예에서, 적어도 25, 50, 또는 75 아미노산 잔기, 또 다른 구현예에서, 100보다 많은 아미노산 잔기이다. 다시, 동일성의 정도를 결정하기 위한 예시적인 접근법에서 BLAST 프로그램이 사용될 수 있고, e"3와 e"100 사이의 확률 점수는 밀접하게 관련된 서열을 나타낸다. 변형은 생체내 및 시험관내 폴리펩티드의 화학적 유도체화, 예를 들어 아세틸화, 카복실화, 인산화, 또는 글리코실화를 포함하는데; 이러한 변형은 폴리펩티드 합성 또는 처리 중 또는 분리된 변형 효소 처리 이후 일어날 수 있다. 유사체는 또한 1차 서열의 변경에 의해 본원에 개시되는 자연적으로 존재하는 폴리펩티드와 상이할 수 있다. 이들은 자연적 및 유도된 것(예를 들어, 방사선 조사 또는 에탄메틸 설페이트 노출에 의하거나 Sambrook, Fritsch and Maniatis, Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2d ed.), CSH Press, 1989, 또는 Ausubel et al, supra에 기술된 것과 같은 부위-특이적 돌연변이생성에 의한 무작위 돌연변이생성으로부터 야기된) 둘 다의 유전적 변종을 포함한다. 고리화된 펩티드, 분자, 및 L-아미노산이 아닌 잔기, 예를 들어 D-아미노산 또는 비-자연적으로 존재하거나 합성 아미노산, 예를 들어, 베타(β) 또는 감마(γ) 아미노산을 포함하는 유사체가 또한 포함된다.
비-단백질 유사체는 본원에 개시되는 단백질의 기능적 활성을 모방하도록 디자인된 화학적 구조를 갖는다. 이러한 유사체는 본원에 개시되는 방법에 따라 투여된다. 이러한 유사체는 원래 폴리펩티드의 생리적 활성을 초과할 수 있다. 유사체 디자인의 방법은 해당 분야에 잘 알려져 있고, 유사체의 합성은 생성되는 유사체가 면역반응 세포에서 발현시 원래 폴리펩티드의 항종양 활성을 증가시키도록 화학적 구조를 변형시키는 것에 의해 이러한 방법에 따라 실시될 수 있다. 이들 화학적 변형은, 대안의 R 그룹을 치환시키는 것, 그리고 참조 폴리펩티드의 특이적 탄소 원자에서 포화의 정도를 변경하는 것을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 다른 구현예에서, 단백질 유사체는 비교적 생체내 분해에 저항성으로, 투여시 더 지연된 치료 효과를 초래한다. 기능적 활성을 측정하기 위한 분석은, 아래 실시예에 기술된 것들을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.
용어 "면역억제 활성"은 면역 반응의 저하를 초래하는, 세포(예를 들어, 활성화된 면역반응 세포)에서의 단백질 발현의 변화 또는 신호 변환의 유도를 기술한다. 이들의 결합을 통해 면역 반응을 억제 또는 저하시키는 것으로 알려진 폴리펩티드는 CD47, PD-1, CTLA-4, 그리고 SIRPa, PD-L1, PD-L2, B7-1, 및 B7-2를 포함하는 이들의 상응하는 리간드를 포함한다. 이러한 폴리펩티드는 종양 미세환경에 존재하고 종양형성 세포에 대한 면역 반응을 억제한다. 다양한 구현예에서, 면역억제 폴리펩티드 및/또는 이들의 리간드의 상호작용을 억제, 차단, 또는 길항하는 것은 면역반응 세포의 면역 반응을 증진시킨다.
용어 "면역자극 활성"은 증가된 면역 반응을 초래하는, 세포(예를 들어, 활성화된 면역반응 세포)에서의 단백질 발현의 변화 또는 신호 변환의 유도를 기술한다. 면역자극 활성은 전-염증성 활성을 포함할 수 있다. 이들의 결합을 통해 면역 반응을 자극 또는 증가시키는 것으로 알려진 폴리펩티드는 CD28, OX-40, 4-IBB, 그리고 B7-1, B7-2, OX-40L, 및 4-1BBL를 포함하는 이들의 상응하는 리간드를 포함한다. 이러한 폴리펩티드는 종양 미세환경에 존재하고 종양형성 세포에 대한 면역 반응을 활성화시킨다. 다양한 구현예에서, 전-염증성 폴리펩티드 및/또는 이들의 리간드를 촉진, 자극, 또는 작동시키는 것은 면역반응 세포의 면역 반응을 증진시킨다.
본원에 개시되는 방법에 유용한 핵산 분자는 본원에 개시되는 폴리펩티드 또는 이의 단편을 암호화하는 임의의 핵산 분자를 포함한다. 이러한 핵산 분자는 내인성 핵산 서열과 100% 동일성일 필요는 없지만, 전형적으로 실질적인 동일성을 나타낼 것이다. 내인성 서열과 "실질적 동일성"을 갖는 폴리뉴클레오티드는 전형적으로 이중-가닥 핵산 분자의 적어도 한 가닥과 혼성화할 수 있다. "혼성화하다"는 것은 다양한 스트린전시 조건 하에서, 상보적 폴리뉴클레오티드 서열(예를 들어 본원에 기술되는 유전자), 또는 이의 일부 사이에서 이중-가닥 분자를 형성하도록 쌍을 이루는 것을 의미한다. (예를 들어, Wahl, G. M. and S. L. Berger (1987) Methods Enzymol. 152:399; immel, A. R. (1987) Methods Enzymol. 152:507 참조).
당업자는 용어 "실질적으로 동일한"이 참조 아미노산 서열(예를 들어, 본원에 기술되는 아미노산 서열 중 임의의 하나) 또는 핵산 서열(예를 들어, 본원에 기술되는 핵산 서열 중 임의의 하나)과 적어도 50% 동일성을 나타내는 폴리펩티드 또는 핵산 분자를 포괄할 수 있음을 인정할 것이다. 일 구현예에서, 이러한 서열은 비교를 위해 사용된 서열에 대하여 아미노산 수준 또는 핵산에서 적어도 60%, 80% 또는 85%, 90%, 95% 또는 99% 동일하다.
서열 동일성은 전형적으로 서열 분석 소프트웨어(예를 들어, Genetics Computer Group, University of Wisconsin Biotechnology Center, 1710 University Avenue, Madison, Wis. 53705, BLAST, BESTFIT, GAP, 또는 PILEUP/PRETTYBOX 프로그램의 서열 분석 소프트웨어 패키지)를 사용하여 측정된다. 이러한 소프트웨어는 다양한 치환, 결실, 및/또는 다른 변형에 대한 상동성의 정도를 지정하는 것에 의해 동일 또는 유사 서열을 연결시킨다. 보존적 치환은 전형적으로 다음 그룹 내의 치환을 포함한다: 글리신, 알라닌; 발린, 이소류신, 류신; 아스파르트산, 글루탐산, 아스파라긴, 글루타민; 세린, 트레오닌; 리신, 아르기닌; 및 페닐알라닌, 티로신. 동일성의 정도를 결정하기 위한 예시적인 접근법에서, BLAST 프로그램이 사용될 수 있는데, e-3와 e-100 사이의 확률 점수는 밀접하게 관련된 서열을 나타낸다.
당업자는 용어 "유사체"가 참조 폴리펩티드 또는 핵산 분자의 기능을 갖는 구조적으로 관련된 폴리펩티드 또는 핵산 분자를 포괄할 수 있음을 인정할 것이다.
당업자는 용어 "리간드"가 수용체에 결합하는 분자를 포괄할 수 있음을 인정할 것이다. 특히, 리간드는 다른 세포에서 수용체에 결합하여, 세포-대-세포 인식 및/또는 상호작용을 허용한다.
당업자는 용어 "구성적 발현"이 모든 생리적 조건 하에서의 발현을 포괄할 수 있음을 인정할 것이다.
당업자는 용어 "질환"이 세포, 조직, 또는 기관의 정상적인 기능을 방해하거나 손상을 주는 임의의 병태 또는 장애를 포괄할 수 있음을 인정할 것이다. 질환의 예는 종양형성 또는 세포의 병원체 감염을 포함한다.
당업자는 용어 "유효량"이 치료적 효과를 갖는 데 충분한 양을 포괄할 수 있음을 인정할 것이다. 일 구현예에서, "유효량"은 종양의 지속적 증식, 성장, 또는 전이(예를 들어, 침습 또는 이동)를 저지, 개선, 또는 억제하기에 충분한 양이다.
당업자는 용어 "종양 형성(neoplasia)"이 세포 또는 조직의 병리적 증식 및 이후의 다른 조직 또는 기관으로의 이동 또는 침습을 특징으로 하는 질환을 포괄할 수 있음을 인정할 것이다. 종양 성장은 전형적으로 비조절되고 진행성이고, 정상 세포의 증식을 이끌어내지 못하거나 이의 중단을 야기할 조건 하에서 일어난다. 종양 형성은 다양한 세포 유형, 조직, 또는 방광, 뼈, 뇌, 유방, 연골, 교세포, 식도, 난관, 담낭, 심장, 장관, 신장, 간, 폐, 림프절, 신경 조직, 난소, 췌장, 전립선, 골격근, 피부, 척수, 비장, 위장, 고환, 흉선, 갑상선, 기관, 비뇨생식관, 요관, 요도, 자궁, 및 질로 구성되는 그룹으로부터 선택되는 기관을 포함하지만, 이에 제한되지 않는 기관, 또는 이의 조직 또는 세포 유형에 영향을 미칠 수 있다. 종양 형성은 육종, 암종, 또는 형질세포종(형질 세포의 악성 종양)과 같은 암을 포함한다.
당업자는 용어 "병원체"가 질환을 야기할 수 있는 바이러스, 박테리아, 진균, 기생충 또는 원생동물을 포괄할 수 있음을 인정할 것이다.
당업자는 용어 "종양 항원" 또는 "종양 관련 항원"이 정상적 또는 비- IS 종양 형성 세포와 비교하여 종양 세포에서 유일하게 또는 차등 발현되는 항원(예를 들어, 폴리펩티드)을 포괄할 수 있음을 인정할 것이다. 본원에 개시되는 조성물 및 방법과 관련하여, 종양 항원은 항원 인식 수용체(예를 들어, CD 19, MUCI)를 통해 면역 반응을 활성화 또는 유도할 수 있거나, 수용체-리간드 결합(예를 들어, CD47, PD-L1/L2, B7.1/2)을 통해 면역 반응을 억제할 수 있는 종양에 의해 발현되는 임의의 폴리펩티드를 포함한다.
당업자는 용어 "바이러스 항원"이 면역 반응을 유도할 수 있는 바이러스에 의해 발현되는 폴리펩티드를 포괄할 수 있음을 인정할 것이다.
용어 "포함하다(comprise)", "포함하는(comprising)"은 미국 특허법에서 이들에게 속하는 것으로 생각하는 넓은 의미를 갖도록 의도되고 "포함하다(include)", "포함하는(including)" 등을 의미할 수 있다. 유사하게, 용어 "구성되는(consisting of)" 및 "필수적으로 구성되는(consisting essentially of)"은 미국 특허법에서 이들에게 속하는 것으로 생각하는 의미를 갖는다. 본원에 개시되는 조성물 및 방법은 활성 성분 또는 특정 단계를 포함하거나, 활성 성분 또는 특정 단계로 구성되거나, 또는 활성 성분 또는 특정 단계로 필수적으로 구성되는 것의 하나로 예상된다.
당업자는 용어 "처치"가 처치 받는 개체 또는 세포의 질환 과정을 변경하기 위한 시도의 임상적 간섭을 포괄할 수 있고, 예방을 위해, 또는 임상적 병리의 과정 중에 수행될 수 있음을 인정할 것이다. 처치의 치료적 효과는 질환의 발생 또는 재발의 방지, 증상의 경감, 질환의 임의의 직접적 또는 간접적 병리적 결과의 감소, 전이의 예방, 질환 진행의 속도의 저하, 질환 상태의 개선 또는 완화, 그리고 차도 또는 개선된 예후를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 질환 또는 장애의 진행을 예방하는 것에 의해, 처치는 병에 걸리거나 진단된 대상 또는 장애를 갖는 것으로 의심되는 대상에서 장애로 인한 악화를 예방할 수 있지만, 또한 처치는 장애 위험이 있거나 장애를 갖는 것으로 의심되는 대상에서 장애의 증상 또는 장애의 개시를 방지할 수 있다.
당업자는 용어 "대상"이 척추동물, 일 구현예에서 포유류, 그리고 일 구현예에서 인간을 포괄할 수 있음을 인정할 것이다. 대상은 또한, 일 구현예에서 소, 양, 말, 고양이, 개, 그리고 마우스, 래트, 게르빌루스쥐, 햄스터 등과 같은 실험 동물과 같이 사육된 것을 의미할 수 있다.
일 구현예에서는, CAR가 관심 있는 펩티드를 지시하는 CAR T-세포가 본원에 개시된다. 일 구현예에서, CAR는 관심 있는 펩티드에 결합한다. 다른 구현예에서, CAR는 관심 있는 펩티드를 표적으로 한다. 다른 구현예에서, CAR는 관심 있는 펩티드를 활성화시킨다. 다른 구현예에서, CAR는 관심 있는 펩티드의 리간드이다. 다른 구현예에서, 관심 있는 펩티드는 CAR의 리간드이다. 이들 구현예 각각은 본원에 ㄱ개시되는 일부로 고려된다.
일 구현예에서, 본원에 개시되는 면역 세포는 T-세포가 아니다. 다른 구현예에서, 본원에 개시되는 면역 세포는 NK 세포가 아니다. 다른 구현예에서, 본원에 개시되는 면역 세포는 CTL이 아니다. 다른 구현예에서, 본원에 개시되는 면역 세포는 조절 T-세포가 아니다. 다른 구현예에서, 본원에 개시되는 면역 세포는 인간 배아 줄기세포가 아니다. 다른 구현예에서, 본원에 개시되는 면역 세포는 이로부터 림프계 세포가 분화될 수 있는 다능성 줄기세포가 아니다.
사용의 방법
면역요법의 한 접근법은 종양을 인식하고 공격할 유전적으로 변형된 면역 세포를 생성하도록 환자 자신의 면역 세포를 조작하는 것을 포함한다. 면역 세포는, 예를 들어 면역 세포, 예를 들어 T-세포가 종양 또는 암세포에서 특이적 단백질 항원을 인식하는 것을 허용할 키메라 항원 수용체(CAR)를 이의 세포 표면에 생산하도록, 본원에 기술된 바와 같이 수집되고 유전적으로 변형된다. 팽창된 집단의 유전적으로 변형된 면역 세포, 예를 들어 CAR T-세포는 다음에 환자에 투여된다. 일 구현예에서, 투여된 세포는 환자의 신체에서 증식하고, 이의 표면에 항원을 품은 암 및 종양 세포를 인식하고 살해한다. 다른 구현예에서, 투여된 세포는 환자의 신체에서 증식하고 종양-관련 항원을 인식 및 살해하는데, 이는 암 및 종양 세포의 사멸을 유도한다.
일 구현예에서는, CAR T-세포 요법을 받는 대상에서 사이토카인 방출 증후군 또는 사이토카인 폭풍의 발생을 억제 또는 감소시키는 방법, 및 사이토카인 방출 증후군 또는 사이토카인 폭풍을 경험하는 대상에서 사이토카인 생산을 저하 또는 억제시키는 방법이 개시되는데, 상기 방법은 세포사멸 세포 또는 세포사멸 세포의 상등액을 포함하는 조성물을 투여하는 단계를 포함한다. 다른 구현예에서는, CAR T-세포 요법을 받는 대상에서 사이토카인 방출 증후군 또는 사이토카인 폭풍을 치료하는 방법이 개시된다. 다른 구현예에서는, CAR T-세포 요법을 받는 대상에서 사이토카인 방출 증후군 또는 사이토카인 폭풍을 예방하는 방법이 개시된다. 다른 구현예에서는, CAR T-세포 요법을 받는 대상에서 사이토카인 방출 증후군 또는 사이토카인 폭풍을 완화하는 방법이 개시된다. 다른 구현예에서는, CAR T-세포 요법을 받는 대상에서 사이토카인 방출 증후군 또는 사이토카인 폭풍을 개선하는 방법이 개시된다. 다른 구현예에서, 세포사멸 세포 또는 세포사멸 상등액 또는 이의 조성물의 투여는 CAR T-세포 요법의 효능을 감소시키지 않는다.
일 구현예에서는, 키메라 항원 수용체-발현 T-세포(CAR T-세포) 암 요법을 받는 대상에서 사이토카인 방출 증후군(CRS) 또는 사이토카인 폭풍의 발생을 억제 또는 감소시키는 방법이 개시되는데, 여기에서 이 방법은 세포사멸 세포 또는 세포사멸 세포 상등액 또는 이의 조성물을 포함하는 조성물을 상기 대상에 투여하는 단계를 포함한다. 다른 구현예에서, 사이토카인 방출 증후군(CRS) 또는 사이토카인 폭풍의 발생을 억제 또는 감소시키는 것은 키메라 항원 수용체-발현 T-세포 암 요법을 받고 세포사멸 세포 또는 세포사멸 상등액을 투여받는 대상에서 사이토카인 수준을 측정하는 것에 의해 결정된다. 다른 구현예에서, 사이토카인의 측정된 수준은 CAR T-세포 암 요법을 받지 않는 대상에서의 사이토카인 수준과 비교된다. 다른 구현예에서, 측정된 사이토카인 수준은 세포사멸 세포 또는 세포사멸 상등액을 투여받지 않은 대상에서의 사이토카인 수준과 비교된다. 또 다른 구현예에서, 측정된 사이토카인 수준은 대조 대상과 비교된다.
다른 구현예에서, 대상에서 전-염증성 사이토카인의 수준은 CAR T-세포 암 요법을 받고 상기 세포사멸 세포 또는 상기 세포사멸 세포 상등액 또는 이의 조성물을 투여받지 않은 대상과 비교하여 감소된다. 다른 구현예에서, 본원에 개시되는 방법은 CAR T-세포 암 요법을 받고 상기 세포사멸 세포 또는 상기 세포사멸 세포 상등액 또는 이의 조성물을 투여받지 않은 대상과 비교하여 적어도 하나의 전-염증성 사이토카인의 생산의 수준을 감소 또는 억제시킨다.
다른 구현예에서, 본원에 개시되는 방법은 부가적 물질의 투여를 추가로 포함할 수 있다. 대안으로서, 본원에 개시되는 방법은 부가적 물질의 투여를 포함할 수 있지만 세포사멸 세포 또는 세포사멸 세포 상등액은 아니다. 또한 추가의 구현예에서, 부가적 물질은 CAR T-세포 암 요법을 증진 또는 개선하는, 또는 이의 임의의 조합인 화합물 또는 조성물일 수 있다. 또한 추가의 구현예에서, CAR T-세포 암 요법을 증진 또는 개선하는 부가적 물질은 CTLA-4 차단제, 알파-1 항-트립신 또는 이의 기능적 단편, 또는 이의 유사체, 텔루륨-기반 화합물, 또는 면역 조절제, 또는 이의 임의의 조합을 포함한다. 다른 구현예에서, 부가적 물질은 세포사멸 세포 또는 세포사멸 상등액을 포함한다. 다른 구현예에서, 본원에 기술되는 부가적 물질의 투여는 상기 CAR T-세포 암 요법 이전, 이와 동시, 또는 이후이다.
일 구현예에서는, 일 구현예에서 토실리주맙인 IL-6 수용체 길항제가 본원에 개시되는 조성물 및 방법과 함께 사용된다.
일 구현예에서, 양자 전이된 T-세포는 림프구감소 숙주에 더 효과적으로 이식 및 팽창한다. 따라서, 일 구현예에서, 대상은 CAR T-세포 또는 다른 변형된 면역 세포의 전달 전에 림프구고갈을 받는다. 다른 구현예에서, CAR T-세포를 받는 대상은 T-세포-지지 사이토카인이 주어진다.
일 구현예에서, T-세포는 주효 T-세포이다. 다른 구현예에서, T-세포는 미처리(naive) T-세포이다. 다른 구현예에서, T-세포는 중심 기억(TCM) T-세포이다. 다른 구현예에서, T-세포는 Th17 세포이다. 다른 구현예에서, T-세포는 T 줄기 기억 세포이다. 다른 구현예에서, T-세포는 높은 복제 능력을 갖는다. 다른 구현예에서는, T-세포 팽창이 환자에서 일어난다. 다른 구현예에서, 소수의 세포가 환자에 전달될 수 있다. 다른 구현예에서, T-세포 팽창은 시험관내에서 일어난다. 다른 구현예에서, 다수의 세포가 환자에 전달될 수 있거나, 세포 및/또는 상등액은 환자로 복수의 시기에 전달될 수 있거나, 또는 이의 조합이다.
일 구현예에서, CAR T-세포의 장점은 이들이 세포-표면 분자에 특이적이기 때문에 MHC-제한된 TCR 인식의 제한을 극복하고 항원 제시 또는 인간 백혈구 항원 발현에서의 손상을 통한 종양 탈출을 회피한다는 것이다.
일 구현예에서는, 대상에서 종양 부담을 감소시키는 방법이 본원에 개시되는데, 상기 방법은 본원에 기술되는 임의의 조성물을 상기 대상에 투여하는 단계를 포함한다.
일 구현예에서, 종양 부담을 감소시키는 것은 대상에서 종양 세포의 수를 감소시키는 것을 포함한다. 다른 구현예에서, 종양 부담을 감소시키는 것은 대상에서 종양 크기를 감소시키는 것을 포함한다. 다른 구현예에서, 종양 부담을 감소시키는 것은 대상에서 종양을 박멸시키는 것을 포함한다.
다른 구현예에서는, 대상에서 종양 세포 사멸을 유도하는 방법이 본원에 개시되는데, 상기 방법은 본원에 기술되는 임의의 조성물을 상기 대상에 투여하는 단계를 포함한다. 다른 구현예에서, 대상에서 종양 세포 사멸을 유도하기 위한 본원에 개시되는 방법은, 대상에서 독성 사이토카인 방출 또는 "사이토카인 방출 증후군"(CRS) 또는 "중증 사이토카인 방출 증후군"(sCRS) 또는 "사이토카인 폭풍"을 저하시키기 위해 적어도 하나의 부가적 물질과 함께 조작된 키메라 항원 수용체를 포함하는 면역 세포, 예를 들어 T-세포 또는 NK 세포를 투여하는 것을 포함한다.
다른 구현예에서는, 본원에 기술되는 임의의 조성물을 대상에 투여하는 단계를 포함하는, 종양을 갖는 대상의 생존을 증가 또는 연장시키는 방법이 본원에 개시된다. 다른 구현예에서, 대상의 생존을 증가 또는 연장시키는 방법은, 대상에서 독성 사이토카인 방출 또는 "사이토카인 방출 증후군"(CRS) 또는 "중증 사이토카인 방출 증후군"(sCRS) 또는 "사이토카인 폭풍"을 저하시키기 위해 적어도 하나의 부가적 물질과 함께 조작된 키메라 항원 수용체를 포함하는 면역 세포, 예를 들어 T-세포 또는 NK 세포를 투여하는 것을 포함한다.
다른 구현예에서는, 본원에 기술되는 임의의 조성물을 대상에 투여하는 단계를 포함하는, 종양을 갖는 대상의 생존을 증가 또는 연장시키는 방법이 본원에 개시된다.
다른 구현예에서는, 대상에서 종양 형성을 예방하는 방법이 본원에 개시되는데, 상기 방법은 본원에 기술되는 임의의 조성물을 상기 대상에 투여하는 단계를 포함한다.
일 구현예에서, 종양은 혈액암, B 세포 백혈병, 다발성 골수종, 림프모구 백혈병(ALL), 만성 림프성 백혈병, 비-호지킨 림프종(non-Hodgkin's lymphoma), 난소암, 또는 이의 조합으로 구성되는 그룹으로부터 선택된다.
다른 구현예에서는, 본원에 기술되는 임의의 조성물을 대상에 투여하는 단계를 포함하는, 필요로 하는 대상에서 혈액암을 치료하는 방법이 본원에 개시된다. 일 구현예에서, 혈액암은 B 세포 백혈병, 다발성 골수종, 급성 림프모구 백혈병(ALL), 만성 림프성 백혈병, 및 비-호지킨 림프종(non-Hodgkin's lymphoma)으로 구성되는 그룹으로부터 선택된다.
일 구현예에서, 본원에 개시되는 사이토카인 방출 증후군 또는 사이토카인 폭풍을 경험하거나 사이토카인 방출 증후군 또는 사이토카인 폭풍에 취약한 대상에서 사이토카인 생산을 저하 또는 억제시키는 방법은 사이토카인 생산을 저하 또는 억제시킨다. 다른 구현예에서, 이 방법은 전-염증성 사이토카인 생산을 저하 또는 억제시킨다. 추가의 구현예에서, 이 방법은 적어도 하나의 전-염증성 사이토카인을 저하 또는 억제시킨다. 다른 구현예에서, 대상이 CAR T-세포 암 요법을 받는 경우, 이 방법은 CAR T-세포 요법의 효능을 감소시키지 않는다.
본원에 제공되는 방법은 본원에 개시되는 T-세포, NK 세포, 또는 CTL 세포를, 존재하는 병태의 완화 또는 재발의 방지일, 요망되는 효과를 달성하기 위해 유효한 양으로 투여하는 것을 포함한다. 치료를 위해, 투여되는 양은 요망되는 효과를 생산하는 데 유효한 양이다. 유효량은 하나 또는 일련의 투여로 제공될 수 있다. 유효량은 1 회 또는 연속 관류에 의해 제공될 수 있다.
당업자는 "유효량"(또는 "치료적으로 유효한 양")이 처치후 유익하거나 요망되는 임상적 결과를 발휘하는 데 충분한 양을 포괄할 수 있음을 인식할 것이다. 유효량은 대상에 1 회 이상의 용량으로 투여될 수 있다. 치료의 관점에서, 유효량은 질환의 진행을 완화, 개선, 안정화, 역전 또는 지연시키거나, 다르게는 질환의 병리적 결과를 감소시키기에 충분한 양이다. 유효량은 일반적으로 사례별로 의사에 의해 결정되고 해당 분야의 당업자의 기술 범위 내에 있다. 유효량에 도달하기 위한 적절한 투여량을 결정할 때 전형적으로 몇 가지 인자가 고려된다. 이들 인자는 환자의 연령, 성별 및 체중, 치료되는 병태, 병태의 중증도 및 투여되는 항원-결합 단편의 형태 및 유효 농도를 포함한다.
항원-특이적 T-세포, 예를 들어 CAR T-세포를 사용한 양자 면역요법에서는, 106 내지 1010(예를 들어, 109) 범위의 세포 용량이 전형적으로 주입된다. 숙주에 유전적으로 변형된 세포의 투여 및 이어지는 분화 이후, T-세포는 특이적 항원에 대하여 특이적으로 지시되도록 유도된다. T-세포의 "유도"는 결실 또는 면역성 결여(anergy)에 의해서와 같이 항원-특이적 T-세포의 불활성화를 포함할 수 있다. 불활성화는 자가면역 질환에서와 같이 용인을 확립 또는 재확립하기 위해 특히 유용하다. 변형된 세포는, 정맥내, 피하, 결절내, 종양내, 척추강내, 흉막내, 복막내 및 흉선으로 직접 투여를 포함하지만 이에 제한되지 않는, 해당 분야에 알려진 임의의 방법에 의해 투여될 수 있다. 일 구현예에서, T-세포는 복막내 투여되지 않는다. 일 구현예에서, T-세포는 종양내 투여된다.
본원에 개시되는 유전적으로 변형된 면역반응 세포(예를 들어, T-세포, N 세포, CTL 세포, 또는 이들의 전구 세포)를 포함하는 조성물은 종양, 병원체 감염, 또는 감염성 질환의 치료를 위해 대상에 직접 또는 전신적으로 제공될 수 있다. 일 구현예에서, 본원에 개시되는 세포는 관심 있는 기관(예를 들어, 종양이 발생한 기관)으로 직접적으로 주사된다. 대안으로서, 유전적으로 변형된 면역반응 세포를 포함하는 조성물은 관심 있는 기관에 간접적으로, 예를 들어, 순환계(예를 들어, 종양 맥관 구조)로 투여하는 것에 의해 제공된다. 팽창 및 분화 물질은 시험관내 또는 생체내에서 T-세포, NK 세포, 또는 CTL 세포의 생산을 증가시키기 위해 세포의 투여 전, 도중 또는 후에 제공될 수 있다.
변형된 세포는, 비록 이들이 뼈, 또는 세포가 재생 및 분화를 위해 적절한 위치(예를 틀어, 흉선)를 발견할 수 있는 다른 편리한 위치로 도입될 수도 있지만, 임의의 생리적으로 허용 가능한 비히클에서 보통 맥관 내로 투여될 수 있다. 보통, 적어도 1x105 세포가 투여될 것이고, 궁극적으로 1x1010 이상에 도달한다. 본원에 개시되는 유전적으로 변형된 면역반응 세포는 정제된 세포의 집단을 포함할 수 있다. 해당 분야의 당업자는 집단 내에서 유전적으로 변형된 면역반응 세포의 백분율을, 예를 들어 형광 활성화 세포 분류(FACS)와 같이 잘 알려진 다양한 방법을 사용하여 용이하게 결정할 수 있다. 일부 구현예에서, 유전적으로 변형된 면역반응 세포를 포함하는 집단에서 순도의 범위는 약 50 내지 약 55%, 약 55 내지 약 60%, 및 약 65 내지 약 70%이다. 다른 구현예에서, 순도는 약 70 내지 약 75%, 약 75 내지 약 80%, 약 80 내지 약 85%이다. 추가의 구현예에서, 순도는 약 85 내지 약 90%, 약 90 내지 약 95%, 그리고 약 95 내지 약 100%이다. 투여량은 해당 분야의 당업자에 의해 용이하게 조정될 수 있다(예를 들어, 순도의 감소는 투여량의 증가를 요구할 수 있다). 세포는 주사, 카테터 등에 의해 도입될 수 있다. 요망되는 경우, 인터류킨, 예를 들어, IL-2, IL-3, IL-6, IL-1 1, IL7, IL12, ILIS, IL21뿐 아니라 다른 인터류킨, 콜로니 자극 인자, 예를 들어 G-, M- 및 GM-CSF, 인터페론, 예를 들어, 감마-인터페론 및 에리트로포이에틴을 포함하지만, 이에 제한되지 않는 인자가 또한 포함될 수 있다.
조성물은 유전적으로 변형된 면역반응 세포 또는 이들의 전구 세포 및 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 포함한다. 투여는 자가 또는 이종일 수 있다. 예를 들어, 면역반응 세포 또는 전구 세포는 하나의 대상으로부터 수득될 수 있고, 동일한 대상 또는 상이한 혼화 가능 대상으로 투여될 수 있다. 본원에 개시되는 말초 혈액 유래 면역반응 세포 또는 이들의 후손(예를 들어, 생체내, 생체외 또는 시험관내 유래)은 카테터 투여를 포함하는 국소 주사, 전신적 주사, 국소 주사, 정맥내 주사, 또는 비경구 투여를 통해 투여될 수 있다. 본원에 개시되는 치료적 조성물(예를 들어, 유전적으로 변형된 면역반응 세포를 함유하는 약제학적 조성물)을 투여할 때, 일반적으로 단위 제형 주사 가능 형태(용액, 현탁액, 유액)로 제형화될 것이다.
다른 구현예에서는, CAR T-세포 또는 본원에 개시되는 다른 면역 세포 및 세포사멸 세포 또는 세포사멸 세포 상등액을 포함하는 조성물을 생산하는 방법이 본원에 개시되는데, 이 방법은 관심 있는 항원에 결합하는 CAR를 암호화하는 핵산 서열을 T-세포 또는 면역 세포로 도입하는 것을 포함한다. 대안의 구현예에서, CAR T-세포 또는 본원에 개시되는 다른 면역 세포를 포함하는 조성물은 세포사멸 세포 또는 세포사멸 상등액을 포함하는 조성물과 별개이다.
당업자는 유전적으로 변형된 면역 세포, 예를 들어 CAR-변형 T 세포에 의해 이끌어낸 항-종양 면역 반응이 능동 또는 수동 면역 반응일 수 있음을 인정할 것이다. 또한, CAR 매개의 면역 반응은 CAR-변형된 T-세포가 CAR에서 항원 결합 부분에 특이적인 면역 반응을 유도하는 양자 면역요법 접근법의 일부일 수 있다.
당업자는 면역요법이 암세포를 표적으로 하고 파괴하기 위한 면역 주효 세포 및 분자의 사용을 포괄할 수 있음을 인정할 것이다. 면역 효과기는, 예를 들어, 종양 세포의 표면에서 일부 마커에 특이적인 항체일 수 있다. 항체는 단독으로 요법의 효과기로서 작용할 수 있거나, 실제로 세포 살해를 가져오기 위해 다른 세포를 모집할 수 있다. 항체는 또한 약물 또는 독소(화학요법제, 방사성핵종, 리신 A 사슬, 콜레라 독소, 백일해 독소 등)에 접합할 수 있고, 단지 표적화 물질로서 작용할 수 있다. 대안으로서, 효과기는 종양 세포 표적과 직접적으로나 간접적으로 상호작용하는 표면 분자를 갖는 림프구일 수 있다. 다양한 주효 세포로는 세포독성 T 세포 및 NK 세포가 포함된다.
악성종양
일부 구현예에서, CAR T-세포는 암 또는 종양을 치료, 예방, 억제, 이의 발생을 감소, 개선, 또는 완화하는 방법에 이용되는데, 여기에서 이 방법은 키메라 항원 수용체-발현 T-세포(CAR T-세포)를 투여하는 단계를 포함한다. 본원에 개시되는 바와 같이, 이들 방법은 CRS 또는 사이토카인 폭풍의 발생을 억제 또는 저하시키기 위한 노력으로 부가적 물질을 투여하는 것을 추가로 포함할 수 있다.
일 구현예에서, 암은 B-세포 악성종양이다. 일 구현예에서, B-세포 악성종양은 백혈병이다. 다른 구현예에서, B-세포 악성종양은 급성 림프모구 백혈병(ALL)이다. 다른 구현예에서, B-세포 악성종양은 만성 림프성 백혈병이다.
일 구현예에서, 암은 백혈병이다. 일 구현예에서, 암은 림프종이다. 일 구현예에서, 림프종은 대형 B-세포 림프종이다.
일 구현예에서, 종양은 고형 종양이다. 다른 구현예에서, 고형 종양은 낭포 또는 액체 구역이 결여된 조직의 비정상적 덩어리이다. 다른 구현예에서, 고형 종양은 혈액, 골수 또는 림프 세포 이외의 신체 조직 세포의 비정상적 성장에 의해 형성되는 신생물(세포의 새로운 성장) 또는 병변(해부학적 구조의 손상 또는 생리적 기능의 교란)이다. 다른 구현예에서, 고형 종양은 간, 결장, 유방, 또는 폐와 같은 상이한 조직 유형으로부터 기인할 수 있고, 초기에 이의 세포적 기원의 기관에서 성장하는 비정상적인 세포의 덩어리로 구성된다. 그러나, 이러한 암은 질환의 후기 단계에서 전이성 종양 성장을 통해 다른 기관으로 전파될 수 있다.
일 구현예에서, 종양은 고형 종양이다. 다른 구현예에서, 고형 종양의 예는 육종, 암종, 및 림프종이다.
다른 구현예에서, 고형 종양은 부신피질 종양(선종 및 암종), 암종, 결장직장 암종, 데스모이드 종양, 섬유조직형성 소원형 세포 종양, 내분비 종양, 유잉 육종(Ewing Sarcoma), 생식 세포 종양, 간모세포종, 간세포 암종, 흑색종, 신경모세포종, 골육종, 망막모세포종, 횡문근육종, 횡문근육종 이외의 연조직 육종, 및 빌름스 종양(Wilms Tumor)을 포함한다. 일 구현예에서, 고형 종양은 유방 종양이다. 다른 구현예에서, 고형 종양은 전립선암이다. 다른 구현예에서, 고형 종양은 결장암이다. 일 구현예에서, 종양은 뇌종양이다. 다른 구현예에서, 종양은 췌장 종양이다. 다른 구현예에서, 종양은 결장직장 종양이다.
다른 구현예에서, 본원에 개시되는 조성물 및 방법은 육종 및 암종(예를 들어, 섬유육종, 점액육종, 지방육종, 연골육종, 골원성 육종, 척삭종, 혈관육종, 내피육종, 림프관육종, 림프관내피육종, 활액막종, 중피종, 유잉 종양, 평활근육종, 횡문근육종, 결장 암종, 췌장암, 유방암, 난소암, 전립선암, 편평상피세포 암종, 기저세포 암종, 선암종, 한선 암종, 피지선 암종, 유두상 암종, 유두상 선암종, 낭선암종, 수질 암종, 기관지원성 암종, 신장 세포 암종, 간암, 담관 암종, 융모막 암종, 정상피종, 배아 암종, 빌름스 종양(Wilm's tumor), 자궁경부암, 자궁암, 고환암, 폐암, 소세포 폐암종, 방광 암종, 상피 암종, 신경교종, 성상세포종, 수모세포종, 두개인두종, 상의세포종, 송과체종, 혈관모세포종, 청각 신경종, 희돌기교종, 슈반세포종, 수막종, 흑색종, 신경모세포종, 및 망막모세포종)에 대한 치료적 및/또는 예방적 효능을 갖는다. 본원에 개시되는 조성물 및 방법은 해당 분야에 알려진 임의의 고형 종양을 치료, 예방, 억제, 개선, 이의 발생을 감소, 또는 완화시키기 위해 사용될 수 있다.
다른 구현예에서, 종양은 혈액 종양이다. 일 구현예에서, 혈액 종양은 혈액, 골수, 및 림프절에 작용하는 암 유형이다. 혈액 종양은 두 가지 주요 혈액 세포 계통: 골수 및 림프계 세포주 중 하나로부터 유래될 수 있다. 골수 세포주는 정상적으로 과립구, 적혈구, 혈소판, 대식세포, 및 masT-세포를 생산하는 한편, 림프계 세포주는 B, T, NK 및 혈장 세포를 생산한다. 림프종(예를 들어, 호지킨 림프종), 림프성 백혈병, 및 골수종은 림프계 세포주로부터 유래되는 한편, 급성 및 만성 골수성 백혈병(AML, CML), 골수이형성 증후군 및 골수증식성 질환은 기원이 골수이다.
다른 구현예에서, 본원에 개시되는 조성물 및 방법은 백혈병(예를 들어, 급성 백혈병, 급성 림프구 백혈병, 급성 골수구 백혈병, 급성 골수모구 백혈병, 급성 전골수구 백혈병, 급성 골수단핵구 백혈병, 급성 단핵구 백혈병, 급성 적백혈병, 만성 백혈병, 만성 골수구 백혈병, 만성 림프구 백혈병), 진성 다혈구증, 림프종(호지킨병, 비-호지킨병), 발덴스트롬 거대글로불린혈증(Waldenstrom's macroglobulinemia), 중쇄병에 대하여 치료적 및/또는 예방적 효능을 갖는다. 본원에 개시되는 조성물 및 방법은 해당 분야에 알려진 임의의 혈액 종양을 치료, 예방, 억제, 개선, 이의 발생을 감소, 또는 완화시키기 위해 사용될 수 있다.
일 구현예에서는, 본원에 개시되는 폴리펩티드 또는 펩티드 도메인 중 임의의 하나의 활성 단편이 본원에 제공된다. 당업자는 용어 "단편"이 적어도 5, 10, 13, 또는 15 아미노산을 포괄할 수 있음을 인정할 것이다. 다른 구현예에서 단편은 적어도 20 개의 인접한 아미노산이다. 본원에 개시되는 단편은 해당 분야의 당업자에게 알려진 방법에 의해 생성될 수 있거나 정상적인 단백질 처리(예를 들어, 생물학적 활성에 필요하지 않은 발생기 폴리펩티드로부터의 아미노산의 제거 또는 대안의 mRNA 스플라이싱 또는 대안의 단백질 처리 이벤트에 의한 아미노산의 제거)로부터 초래될 수 있다.
용어 "항체" 및 "면역글로불린"은 가장 넓은 의미에서 상호교환적으로 사용되고 다클론 항체, 단클론 항체, 또는 항체의 결합 활성을 보유하는 이의 임의의 단편을 특이적으로 의미한다. 특정 구현예에서, 본원에 개시되는 방법은 키메라 항체, 인간화 항체, 또는 인간 항체의 사용을 포함한다.
당업자는 용어 "다클론 항체(또는 항체들)"가 동일한 항원의 상이한 결정기(에피토프)에 대하여 지시되는 상이한 항체의 집단을 포괄할 수 있음을 인정할 것이다.
당업자는 용어 "단클론 항체(또는 항체들)"가 실질적으로 동질 항체의 집단, 즉 집단을 구성하는 개별 항체가 소량으로 존재할 수 있는 자연적으로 존재할 가능성이 있는 돌연변이를 제외하고 동일한 것을 포괄할 수 있음을 인정할 것이다. 단클론 항체는 단일 항원 부위에 대하여 지시된다.
본원에 개시되는 단클론 항체는 Kohler et al, Nature, 256: 495 (1975)에 의해 최초로 기술된 하이브리도마 방법을 사용하여 만들어지거나, 또는 재조합 DNA 방법(예를 들어, 미국 특허 제4,816,567호)에 의해 만들어질 수 있다.
하이브리도마 방법에서, 마우스 또는 햄스터와 같은 다른 적절한 숙주 동물은 면역화를 위해 사용되는 단백질에 특이적으로 결합하는 항체를 생산하거나 생산할 수 있는 림프구를 이끌어내도록 면역화된다. 관심 있는 단백질에 대한 항체는 일반적으로 요망되는 관심 있는 단백질 및 애주번트의 피하(sc) 또는 복막내(ip) 주사에 의해 동물에서 사육된다. 일 구현예에서, 동물은 담체 단백질로서 키홀 림펫 헤모시아닌(Keyhole limpet hemocyanin)(KLH, Sigma Aldrich)과 결합된 관심 있는 단백질로 면역화된다.
동물 면역화를 위해 사용되는 관심 있는 단백질은 해당 분야에 잘 알려진 방법을 사용하여 제조된다. 예를 들어, 관심 있는 단백질은 재조합 방법에 의하거나 펩티드 합성 방법에 의해 생산될 수 있다.
대안으로서, 림프구가 시험관내에서 면역화된 다음 폴리에틸렌글리콜과 같은 적절한 융합제를 사용하여 골수종 세포와 융합되어 하이브리도마 세포를 형성할 수 있다(Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, pp. 59-103 (Academic Press, 1986)).
단클론 항체의 결합 친화성은, 예를 들어, Munson et al., Anal Biochem., 107: 220 (1980)의 스캐차드 분석(Scatchard analysis)에 의해 결정될 수 있다.
본원에 개시되는 항체는 요망되는 활성을 갖는 합성 항체 클론을 스크리닝하기 위해 조합 라이브러리를 사용하는 것에 의해 생산될 수 있다. 원칙적으로, 합성 항체 클론은 해당 분야에 잘 알려진 방법을 사용하여 파아지 외피 단백질에 융합된 항체 가변 영역(Fv)의 다양한 단편을 나타내는 파아지를 포함하는 파아지 라이브러리를 스크리닝하는 것에 의해 선택된다.
당업자는 용어 "항체의 결합 활성을 보유하는 이의 임의의 단편"이 온전한 항체의 표적 항원과 결합할 수 있는, 항원-결합 또는 이의 가변 영역을 포함할 수 있는 항체의 일부를 포괄할 수 있음을 인정할 것이다. 항체 단편의 예로는 Fab, Fab', F(ab')2, 및 Fv 단편이 포함된다.
이들 항체 단편은 재조합 기법에 의하거나, 효소적 소화와 같은 전통적인 수단에 의해 생성될 수 있다. 6 항체의 파파인 소화는, 각각 단일의 결합 부위를 갖는 "Fab" 단편으로 불리는 두 개의 동일한 항원-결합 단편 및 나머지 "Fc" 단편을 생산한다. 펩신 처리는 두 개의 항원-결합 부위를 갖고 여전히 항원과 가교할 수 있는 단편인 F(ab')2를 수득한다. "Fv"는 완전한 항원-인식 및 결합 부위를 포함하는 최소 항체 단편이다.
본원에 개시되는 다클론 항체 및 단클론 항체는 해당 분야에 잘 알려진 방법을 사용하여 제조된다.
일 구현예에서는, CAR가 T-세포에 대하여 내인성인 CAR T-세포 또는 관련 조성물이 본원에 개시된다. 일 구현예에서, "내인성"은 세포 또는 조직에서 정상적으로 발현되는 핵산 분자(예를 들어, cDNA, DNA 또는 RNA 분자) 또는 폴리펩티드를 포함한다.
다른 구현예에서는, CAR가 T-세포에 대하여 외인성인 CAR T-세포 또는 관련 조성물이 본원에 개시된다. 일 구현예에서, "외인성"은 세포에 내인성으로 존재하지 않거나 인공적으로 과-발현시 수득되는 기능적 효과를 달성하기 위해 충분한 수준으로 존재하지 않는 핵산 분자 또는 폴리펩티드를 포함한다. 당업자는 용어 "외인성"이 이에 따라, 외래, 이종, 및 과-발현된 핵산 분자 및 폴리펩티드와 같이 세포에서 발현되는 임의의 재조합 핵산 분자 또는 폴리펩티드를 포괄할 수 있음을 인정할 것이다.
일 구현예에서는, 면역 세포, 일 구현예에서 T-세포가 대상에 대하여 자가인 CAR T-세포가 본원에 개시된다. 다른 구현예에서, CAR T-세포는 대상에 대하여 이종이다. 일 구현예에서, CAR T-세포는 동종이다. 일 구현예에서, CAR T-세포는 보편적 동종 CAR T-세포이다. 다른 구현예에서, T-세포는 자가, 동종, 또는 조작된 선조 또는 줄기 세포로부터 시험관내 유래될 수 있다.
다른 구현예에서, CAR T-세포 및 본원에 기술되는 세포사멸 세포는 둘 다 동일한 공급원으로부터 유래된다. 추가의 구현예에서, CAR T-세포 및 본원에 기술되는 세포사멸 세포는 둘 다 대상으로부터 유래된다(도 1). 대안의 구현예에서, CAR T-세포 및 본원에 기술되는 세포사멸 세포는 상이한 공급원으로부터 유래된다. 또 다른 구현예에서, CAR T-세포는 자가이고 본원에 기술되는 세포사멸 세포는 동종이다(도 2). 당업자는 유사하게, 세포사멸 세포 상등액이, 일 구현예에서 자가 세포일 수 있는, CAR T-세포와 동일한 공급원으로부터 유래되는 세포로부터 만들어질 수 있거나, 세포사멸 세포 상등액이 CAR T-세포의 공급원과 상이한 공급원으로부터 유래되는 세포로부터 만들어질 수 있음을 인정할 것이다.
당업자는 용어 "이종"이 상이한 유기체로부터 유래되는 조직, 세포, 핵산 분자 또는 폴리펩티드를 포괄할 수 있음을 인정할 것이다. 일 구현예에서, 이종 단백질은 수용자와 상이한 T-세포 유형 또는 상이한 종으로부터 유래되거나 초기에 클로닝되고, 세포로부터 수득되는 샘플 또는 세포에 정상적으로 존재하지 않는 단백질이다.
당업자는 용어 "자가"가 공여자와 수용자가 동일한 사람인 조직, 세포, 핵산 분자 또는 폴리펩티드를 포괄할 수 있음을 인정할 것이다.
당업자는 용어 "동종"이 동일한 종의 별개 개체로부터 유래되는 조직, 세포, 핵산 분자 또는 폴리펩티드를 포괄할 수 있음을 인정할 것이다. 일 구현예에서, 동종의 공여 세포는 수용자와 유전적으로 구분된다.
다른 구현예에서, 본원에 개시되는 조성물 및 방법은 본원에 개시되는 세포사멸 세포 또는 세포사멸 상등액, 및 이필리무맙과 같은 하나 이상의 CTLA-4-차단제와의 조합 요법을 이용한다. 일 구현예에서, CTLA-4는 자기-관용을 유지하도록 돕는 T-세포의 강력한 억제제이다. 일 구현예에서, 다른 구현예에서 항체인 항-CTLA-4 차단제의 투여는 T-세포 활성화의 순 효과를 생산한다. 다른 구현예에서, 본원에 개시되는 조성물 및 방법은 세포사멸 세포, CAR T-세포, 및 하나 이상의 CTLA-4-차단제를 포함하는 조합 요법을 이용한다.
일부 경우에, 본원에 개시되는 방법에서의 사용을 위한, 그리고 이의 폴리펩티드는 변형되지 않은 아미노산 서열에 대하여 적어도 하나의 보존적 아미노산 치환을 포함한다. 다른 경우, 폴리펩티드는 비-보존적 아미노산 치환을 포함한다. 이러한 경우, 이러한 변형을 갖는 폴리펩티드는 이러한 아미노산 치환이 결여된 폴리펩티드에 비하여 증가된 안정성 또는 더 긴 반감기를 나타낸다.
일 구현예에서, 본원에 개시되는 방법은, 본원에 기술되는 다양한 치료적 및 예방적 목적을 위해 본원에 기술되는 조성물의 사용으로서, 또는 대안으로서 본원에 기술되는 다양한 치료적 및 예방적 목적을 위한 약제 또는 치료적 조성물 또는 조성물의 제조에서 본원에 기술되는 조성물의 사용으로서 나타낼 수 있다.
일 구현예에서, 본원에 개시되는 조성물 및 방법은 다양한 성분 또는 단계를 포함한다. 그러나, 다른 구현예에서, 본원에 개시되는 조성물 및 방법은, 다른 성분 또는 단계가 포함될 수 있는, 다양한 성분 또는 단계로 필수적으로 구성된다. 다른 구현예에서, 본원에 개시되는 조성물 및 방법은 다양한 성분 또는 단계로 구성된다.
일부 구현예에서, 용어 "포함하다"는 해당 분야에 알려질 수 있는 조성물의 효능에 영향을 미치는 조성물의 다른 성분의 포함을 포괄할 수 있다. 일부 구현예에서, 용어 "필수적으로 구성되는"은, 키메라 항원 수용체-발현 T-세포(CAR T-세포), 및 세포사멸 세포 또는 임의의 세포사멸 세포 상등액을 갖는 조성물을 포함한다. 그러나, 조성물의 이용에 직접적으로 연관되지 않은 다른 성분이 포함될 수 있다. 일부 구현예에서, 용어 "구성되는"은, 본원에 기술되는 임의의 형태 또는 구현예로, 키메라 항원 수용체-발현 T-세포(CAR T-세포), 및 본원에 개시되는 세포사멸 세포 또는 세포사멸 세포 상등액을 갖는 조성물을 포괄한다.
일 구현예에서, "치료하는 것"은 치료적 처치를 포함하고 "예방하는 것"은 예방 또는 방지 조치를 포함하는데, 여기에서 목적은 위에 기술되는 표적으로 하는 병리적 상태 또는 장애를 방지 또는 경감시키는 것이다. 따라서, 일 구현예에서, 치료하는 것은 질환, 장애 또는 병태와 관련되는 증상에 직접적으로 작용하거나 이를 치유, 억제, 저해, 방지, 이의 중증도를 감소, 이의 발생을 지연, 감소시키는 것, 또는 이의 조합을 포함할 수 있다. 따라서, 일 구현예에서, "치료하는 것", "개선하는 것", 및 "완화하는 것"은, 그 중에서도, 진행을 지연, 차도를 촉진, 차도를 유도, 차도를 증폭, 회복을 가속화, 대안의 치료제의 효능을 증가 또는 이에 대한 저항성을 저하, 또는 이의 조합을 의미한다. 일 구현예에서, "예방하는 것"은, 그 중에서도, 증상의 개시를 지연, 질환의 재발을 방지, 재발 에피소드의 횟수 또는 빈도를 저하, 증상을 보이는 에피소드 사이의 잠복을 증가, 또는 이의 조합을 의미한다. 일 구현예에서, "억제시키는 것" 또는 "저해하는 것"은, 그 중에서도, 증상의 중증도를 감소, 급성 에피소드의 중증도를 감소, 증상의 횟수를 감소, 질환-관련 증상의 발생을 감소, 증상의 잠복을 감소, 증상을 개선, 2차 증상을 감소, 2차 감염을 감소, 환자 생존을 연장, 또는 이의 조합을 의미한다.
일 구현예에서, 본원에 개시되는 조성물은 1 회 투여된다. 다른 구현예에서, 조성물은 2 회 투여된다. 다른 구현예에서, 조성물은 3 회 투여된다. 다른 구현예에서, 조성물은 4 회 투여된다. 다른 구현예에서, 조성물은 적어도 4 회 투여된다. 다른 구현예에서, 조성물은 4 회보다 많이 투여된다.
일 구현예에서, 본원에 개시되는 CAR T-세포는 1 회 투여된다. 다른 구현예에서, CAR T-세포는 2 회 투여된다. 다른 구현예에서, CAR T-세포는 3 회 투여된다. 다른 구현예에서, CAR T-세포는 4 회 투여된다. 다른 구현예에서, CAR T-세포는 적어도 4 회 투여된다. 다른 구현예에서, 조성물은 4 회보다 많이 투여된다.
일 구현예에서, 본원에 개시되는 조성물은 치료적 조성물이다. 다른 구현예에서, 본원에 개시되는 조성물은 치료적 효능을 갖는다.
일 구현예에서는, CAR T-세포를 단독으로 포함하는 조성물과 비교하여 감소된 염증성 사이토카인 또는 케모카인 방출을 제공하지만, CAR T-세포를 단독으로 포함하는 조성물과 비교하여 비슷한 세포독성을 갖는 조성물이 본원에 개시된다.
당업자는 용어 "약"이 지시된 수 또는 수의 범위로부터 0.0001 내지 5%의 편차값을 포괄할 수 있음을 인정할 것이다. 추가로, 이는 지시된 수 또는 수의 범위로부터 1 내지 10%의 편차값을 포괄할 수 있다. 또한, 이는 지시된 수 또는 수의 범위로부터 25%까지의 편차값을 포괄할 수 있다.
당업자는 단수 형태 "a", "an" 및 "the"가 문맥에서 명백하게 달리 지시하지 않는 한 복수의 언급을 포함하는 것을 인정할 것이다. 예를 들어, 용어 "an 물질" 또는 "적어도 an 물질"은 이의 혼합물을 포함하여 복수의 물질을 포함할 수 있다.
본 출원 전체에 걸쳐, 본원에 개시되는 다양한 구현예는 범위 구성방식으로 제시될 수 있다. 범위 구성방식의 기술은 단지 편의성 및 간결성을 위한 것이고 본 개시의 범위에서 변경할 수 없는 제한으로 해석되어서는 안된다. 따라서, 범위의 기술은 이 범위 내에서 개별적 숫자 값뿐 아니라 모든 가능한 하위 범위를 특히 개시하는 것으로 고려되어야 한다. 예를 들어, 1 내지 6과 같은 범위의 기술은, 1 내지 3, 1 내지 4, 1 내지 5, 2 내지 4, 2 내지 6, 3 내지 6 등과 같은 하위 범위뿐 아니라, 이 범위 내의 개별 숫자, 예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 및 6을 특히 개시하는 것으로 고려되어야 한다. 이는 범위의 폭과 무관하게 적용된다.
숫자 범위가 본원에서 지시될 때마다, 지시된 범위 내 임의의 인용된 숫자(분수 또는 진정수)를 포함하는 것을 의미한다. 제1 지시 숫자와 제2 지시 숫자 "사이의 범위인/범위이다" 및 제1 지시 숫자"로부터" 제2 지시 숫자"까지의 범위인/범위이다"라는 구절은 본원에서 상호교환적으로 사용되고 제1 및 제2 지시 숫자, 그리고 그 사이의 모든 분수 및 진정수를 포함하는 것을 의미한다.
다음 실시예는 본원에 개시되는 구현예를 더욱 완전하게 예시하기 위해 제시된다. 그러나, 이들은 어떤 경우에도 본 개시의 넓은 범위를 제한하는 것으로서 해석되어서는 안된다.
실시예
실시예 1: 세포사멸 세포 요법은 CAR T-세포 요법을 투여받은 대상에서
사이토카인 폭풍을 예방한다
재료 및 방법
재조합 DNA 구성체
CAR는 특이적 종양 관련 항원에 대한 T-세포 특이성을 새로운 표적으로 하여 개발된다. 대조 CAR는 T-세포를 비-관련된 종양 관련 항원으로 향하도록 개발된다. 배경으로 사용되는 CAR는 장갑 CAR T 또는 제4 세대 CAR T-세포이다. 일 구현예에서, 세포는 또한 IL-2 및 IL-15 수용체에 의해 사용되는 베타-사슬의 막관통 및 엔도도메인에 결합된 IL-4 수용체 알파 서브유닛의 엑토도메인을 발현하도록 조작되어, T-세포가 IL-4의 부가에 의해 팽창되도록 허용한다.
레트로바이러스 형질도입 및 T4+ T-세포의 배양
혈액 샘플은 건강한 지원자 및 암 환자로부터 수득한다. T-세포는 CD3/CD28-코팅된 상자성 비드(1:1 비드/세포 비율; Life Technologies) 또는 PHA(5 mg/mL; Sigma-Aldrich)를 사용하여 유전자 전이 전에 활성화시킬 수 있다. 활성화된 T-세포의 레트로바이러스 형질도입은 PG13 레트로바이러스 패키징 세포를 사용하여 수행된다. 표시된 곳에서, 형질도입은 우수의약품제조관리기준(GMP) 하에서 제조된 SFG T4 바이러스 벡터를 사용하여 수행되고, 다음에 가스-투과성 백에서 GMP-등급 IL-4(30 ng/mL)를 사용하여 T-세포의 팽창이 이어진다.
세포 및 세포 배양
반딧불이 루시퍼라제-발현 종양 세포주는 적절한 배지, 예를 들어, 10% FBS(Sigma-Aldrich), GlutaMAX, 및 항생항진균 용액(Life Technologies)으로 보충된 DMEM(Lonza, Basel, Switzerland)에서 증식된다.
유동 세포분석
CAR의 발현은 비오티닐화 Ab 및 스트렙타비딘-PE(Life Technologies)를 사용하여 검출된다. 마우스로부터의 기관에서 종양 항원 발현을 정량화하기 위해, 절개된 조직을 시린지 플런저를 사용하여 PBS에서 균질화하고 100-mm 세포 여과기를 통해 여과한다. 적혈구 용해 용액(Miltenyi Biotec, Bisley, U.K.)으로 처치 후, 세포를 4% 파라포름알데히드(37℃ 10 분 동안)를 사용하여 고정시키고, 빙냉 메탄올을 사용하여 30 분 동안 투과시키고, 40% D10/60% PBS로 세척한다. 다음에, 세포를 토끼 항-종양 항원 항체 또는 대조로서 토끼 혈청(Dako, Ely, U.K.)에 이어서 돼지 F(ab')2 항-토끼 IgG-FITC(Dako)와 함께 배양한다. 대안으로서, 인간 종양 항원 수용체의 발현은 유동 세포분석법에 의해 나타낸다. 모든 경우에, 전방 스캐터/측면 스캐터 게이트가 존재하는 우세한 T-세포 집단을 확인하기 위해 사용된다. 유동 세포분석은 CellQuest Pro 소프트웨어가 구비된 FACS Calibur 유동 세포분석기를 사용하여 수행된다.
사이토카인 분석
상등액 및 혈청을 제조자에 의해 기술된 바와 같이 ELISA 키트, 세포분석 비드 어레이(Th1/Th2/Th17; BD Biosciences)를 사용하여 분석한다. 예를 들어, 분석은 앞서의 전-염증성 사이토카인일 수 있고, 이는 하나의 경우에 IL-6일 것이다.
세포독성 분석
T-세포에 의한 종양 세포 단층의 파괴는 크리스탈 바이올렛 염색으로 가시화된다. 종양 세포 생존 능력은 제조자에 의해 기술된 바와 같이 MTT 분석(Life Technologies)을 사용하여 정량화된다.
시험관내 루시퍼라제 분석
총 0.5 X 106 형질도입된 세포(그리고 대조로서 일치하는 비형질도입된 세포)를 제조자에 의해 기술된 바와 같이 루시퍼라제 분석 시스템 키트(Promega, Madison, WI)를 사용하여 분석한다. 분석은 Omega 소프트웨어를 구비한 마이크로플레이트 판독기를 사용하여 판독한다.
생체내 연구
종양 세포(1 X 106)를 PBS에서 i.p. 또는 200 mL 매트리겔(BD Biosciences)에서 s.c.로 마우스에 접종한다. 종양 이식을 생물발광 이미지화(BLI)에 의해 확인하고 T-세포 투여 전에 마우스를 유사한 신호 강도를 갖는 그룹으로 분류한다. 이미지화는 Living Image 소프트웨어(Perkin Elmer)를 갖는 IVIS Lumina II 또는 Spectrum(Perkin Elmer)을 사용하여, T-세포 이미지화를 위한 대형 비닝을 사용하여 수행된다. T-세포의 생체내 독성을 평가하기 위해, 마우스로부터 기관을 수집하고 포르말린 고정하여 조직병리학적 분석을 받도록 한다.
결과
CAR T-세포는 관심 있는 표적을 발현하는 종양 세포로 지시되고 이를 파괴한다
관심 있는 종양 관련 항원은 낮은 수준으로 건강한 마우스 조직에서 낮은 수준으로, 그리고 마우스에서 발현된 종양에서 발현된다.
시험관내에서, 인간 CAR T는 종양 세포 단층을 신속하게 파괴하는 한편, 조절 T-세포는 종양 세포를 파괴하지 못한다. 추가로, 사이토카인 생산은 종양 관련 항원을 발현하는 종양 세포로 T-세포의 자극 이후 관찰된다. 대조로서, 비-형질전환된 마우스 세포를 인간 CAR T-세포의 활성화에 대하여 시험하였다. 비-형질전환된 마우스 세포는 또한 인간 CAR T-세포를 자극하여, 이들이 또한 종양 관련 항원을 발현하는 것을 나타낸다. 비-형질전환된 마우스 세포는 인간 CAR T-세포를 자극하지 않는다.
CAR T-세포 요법은 사이토카인 방출 증후군을 유도한다
3 개 그룹의 무-종양 마우스뿐 아니라 종양을 갖는 마우스에 증가하는 용량의 CAR T-세포(3x106, 10x106 또는 30x106)를 (i.p. 또는 종양으로 직접) 투여한다. 최고 용량에서, 무-종양 마우스 및 종양을 갖는 마우스는 조용한 행동, 입모, 및 감소된 이동성을 24 시간 이내에 나타내고, 신속한 체중 감소에 이어 48 시간 이내에 사망이 뒤따랐다. 인간 인터페론-감마 및 마우스 IL-6가 최고 용량의 CAR T-세포가 주어진 마우스로부터의 혈액 샘플에서 검출 가능하다. 상이한 종양 항원으로 지시된 CAR T-세포의 높은 용량을 받은 동물은 체중 감소 또는 행동 변화를 보이지 않는다.
세포사멸 세포의 투여는 CAR T-세포 요법에 의해 유도되는 사이토카인 방출 증후군의 발생을 억제 또는 감소시킨다
최고 용량의 CAR T-세포가 주어진 1 그룹의 마우스는, 이전에 안전하고 유효한 용량으로 나타난 2.10x108/kg 세포사멸 세포가 함께 투여된다. 인간 CAR T + 세포사멸 세포를 받은 마우스는 유의미하게 더 낮은 수준의 마우스 IL-6, 더 낮은 체중 감소, 그리고 감소된 사망률을 갖는다.
실시예 2: CAR-T 세포 효능에 대한 부정적 효과가 없는 사이토카인
폭풍에 대한 세포사멸 세포의 효과
목적: 사이토카인 폭풍 마커 사이토카인에 대한 세포사멸 세포 또는 세포사멸 세포로부터 유래된 상등액의 효과 및 종양 또는 암세포에 대한 CAR T-세포 효능을 시험.
방법:
마우스에서 사이토카인 폭풍을 유도하는 것으로 보고된 고형 종양 모델(van der Stegen et al., 2013 ibid)을 이용하였다. 이 모델에서 T 세포는, 두경부 종양 및 난소암과 같은 특정 고형 종양에서 종종 고도로 상향-조절되는, 특정 ErbB 이량체(T4+ CAR-T 세포)를 표적으로 하는 키메라 항원 수용체(CAR)로 조작되었다. CD3 마이크로-비드를 사용하여 말초 혈액으로부터 분리된 PBMC로부터 T-세포를 분리하였다. 키메라 T4+ 수용체를 함유하는 벡터를 구축하고 분리된 T-세포로 형질도입하여, T4+ CAR T-세포를 야기하였다. 본원에서 수행되는 실험을 위해, T4+ CAR T-세포를 구입하였다(Creative Biolabs(NY USA) 또는 Promab Biotechnologies(CA USA)). 도 3은 유동 세포분석 및 항-CD124 단클론 항체를 사용하여 T4+ CAR T-세포에서 4αβ(키메라 사이토카인 수용체)의 세포 표면 발현의 검증을 제시한다(Wilkie et al., ibid). 또한, PCR 절차를 수행하였고 형질도입된 T 세포에서 벡터의 존재를 검증하였다.
SKOV3-luc 난소 선암종 조직 배양 세포를 사용하였다(Wilkie et al., ibid). SKOV3-luc는 ErbB 수용체를 고도로 발현하고 T4+ CAR-T 세포에 대한 표적이다(van der Stegen et al., 2013, ibid). 이들 SKOV3-luc 세포를 구성적으로 반딧불이 루시퍼라제 유전자를 발현하도록 조작하여, 시험관내 세포 증식 및 생체내 종양 성장 및 후퇴의 추적을 가능하게 하였다.
세포사멸 세포
건강한 적격 공여자로부터 풍부한 단핵 세포 분획을 백혈구성분채집 절차를 통해 수집하였다. 이 절차는 Hadassah Ein Kerem 성분채집 유닛으로 수행하였다. 백혈구성분채집 완료 직후 수집된 세포를 처리하고 액체 질소에 보관하였다. 세포사멸 세포(ApoCell)의 조제를 위해, 저온보존된 세포를 해동하고, 세척한 다음 37℃로 5% CO2 중에서 50 mg/mL 메틸프레드니솔론(Pfizer, NY, USA) 및 10% 자가 혈장의 존재 중에 6 시간 동안 배양하였다. 배양 종결시, 세포를 수집하고, 후속 적용에 따른 선택의 완충액으로 세척 및 재현탁하였다. ApoCell의 세포사멸 및 생존 능력을 아넥신V 및 PI(MBL, MA, USA) 염색(각각, ≥40% 및 ≤15%)을 사용하여 유동 세포분석기를 통해 결정하였다. 결과는 FCS express 소프트웨어를 사용하여 분석하였다.
세포사멸 세포 상등액
12-웰 플레이트에 웰 당 8백만 세포사멸 세포를 접종하였다. 24 시간 후 세포를 원심분리하였다(290g, 섭씨 4도, 10 분). 상등액을 수집하고 사용 시까지 -80도에서 부분표본으로 동결시켰다. 상이한 수의 세포를 사용하여 상등액을 만들었다. 일부 부분표본은 농축된 상등액을 포함한다.
단핵구 분리
PBMC는 건강한 적격의 공여자로부터 수득된 말초 혈액/버피 코트로부터 Ficoll(GE healthcare, United Kingdom)을 사용하여 분리하였다. 세포를 RPMI1640 (Gibco, Thermo Fisher Scientific, MA, USA)에서 15x106 세포/mL의 농도로 하고 35 mm 플레이트(Corning, NY, USA)의 중앙에 0.9 mL 적하로 접종하였다. 다음에 플레이트를 37℃에서 5% CO2 중에 1 시간 동안 배양하였다. 배양 종결시, 세포를 PBS (Biological industries, Beit Haemek, Israel)로 3 회 세척하고 광학 현미경을 사용하여 부착을 결정하였다. 다음에 세포를 완전 배지(RPMI1640+ 10% 열 불활성화된 FBS+ 1% Glutamax+ 1% PenStrep, 모두 Gibco로부터 입수)로 배양하였다.
인간 단핵 세포가 밀도 구배 원심분리에 의해 헤파린 처리된 말초 혈액으로부터 분리되는 대안의 단핵구 분리 방법도 사용되었다. 다음에 분리된 단핵 세포를 단핵구, B-세포 및 T-세포 집단으로 분리하는데, 자성 비드 분리(Miltenyi Biotec., Auburn, CA, USA)에 의해 CD14+ 분획으로서 단핵구를 양성적으로 선택하고, CD22+ 분획으로서 B-세포를 양성적으로 선택하고, 그리고 CD14-CD22-분획으로서 T-세포를 음성적으로 선택한다. 순도는 단핵구에서 95퍼센트보다 크다.
대식세포 분화를 위해, 부착의 종결시 세포를 PBS로 3 회 세척한 다음 RPMI1640+ 1% Glutamax+ 1% PenStrep 및 10% 열 불활성화된 인간 AB 혈청(Sigma, MO, USA)으로 배양하였다. 세포를 37℃ 및 CO2에서 7 내지 9 일 동안, 제3 일 및 제6 일에 배지를 교환하면서 배양하였다. 분화는 광학 현미경을 통해 형태학에 의해 결정하였다.
apo + 단핵구로부터의 상등액
CD14+ 단핵구를 위에서 제조한 세포사멸 세포와 함께 1:16의 비율로 24 시간 동안 배양하였다. 단핵구의 수: 12-웰 플레이트에서 웰 당 0.5 백만 세포, 그리고 세포사멸 세포의 수: 12-웰 플레이트에서 웰 당 8 백만 세포였다. 24 시간 동안 배양 후, 세포를 원심분리하였다(290g, 섭씨 4도, 10 분). 상등액을 수집하고 사용 시까지 -80도에서 부분표본으로 동결시켰다. 상이한 비율의 단핵구:세포사멸 세포에서, 그리고/또는 대식세포 및 수지상 세포와 같은 다른 세포 공급원을 사용하여 유사한 절차를 수행할 수 있다.
결과:
단계 1: SKOV3 -luc 종양 세포에 대한 T4 + CAR-T 세포 활성의 검증
T4+ CAR-T 세포 활성을 입증하기 위해, 단층의 SKOV3-luc을 1,000,000(1백만) T4+ CAR-T 세포 또는 1,000,000(1백만) 비-형질도입된 T 세포 중 하나에 노출시켰다. 24 시간 배양 후, T4+ CAR-T 세포는 비-형질도입된 T 세포 대조와 비교하여 SKOV3-luc 증식을 30% 감소시켜(도 4), T4+ CAR-T 세포의 항-종양 활성을 보여준다.
단계 2: SKOV3 -luc 종양 세포에 대한 독립형(stand-alone) T4+ CAR-T 세포의 활성을 세포사멸 세포에 노출 후 활성과 비교하였다
세포사멸 세포(ApoCell) 및 세포사멸 세포 상등액(ApoSup 및 ApoMon Sup)에 대하여, 이들이 T4+ CAR-T 세포 항-종양 활성을 방해하는지를 결정하기 위해 시험하였다. SKOV3-luc 종양 세포를 세포사멸 세포와 함께 1 시간 동안 배양한 다음, T4+ CAR-T 세포(500,000, 50만) 또는 T4+ 비-형질도입된 T 세포(500,000, 50만)(1:2 T4+ CAR-T 세포 대 세포사멸 세포의 비율)를 첨가하였다. 종양 세포/세포사멸 세포/T4+ CAR T-세포를 다음에 48 시간 동안 공동-배양하였다. 대조 SKOV3-luc 종양 세포는 T4+ CAR-T 세포 및 하트만(Hartman) 용액(세포사멸 세포의 비히클)과 함께, 세포사멸 세포 없이, 48 시간 동안 공동-배양하였다.
결과에서는 48 시간 배양 후, T4+ CAR-T 세포 항-종양 활성이 비-형질도입된 T 세포와의 배양에 비하여 우수한 것을 보여주었다. 세포사멸 세포 상등액과 함께 유사한 배양을 수행하였다. 놀랍게도, T4+ CAR T-세포 항-종양 활성은 세포사멸 세포 또는 세포사멸 세포 상등액에 대한 노출이 있거나 없이 비슷하였다. (도 5).
단계 3: CAR-T 처치로부터 야기된 사이토카인 폭풍의 개선, 감소 또는 억제에 대한 세포사멸 세포의 효과
사이토카인 폭풍을 감소시키기 위한 세포사멸 세포의 효과를 다음에 검사하였다. IL-6은 사이토카인 폭풍에서 방출되는 전-염증성 사이토카인 원형이고(Lee DW et al. (2014) Blood 124(2): 188-195) 사이토카인 폭풍 반응의 마커로서 종종 사용된다.
생체내 CAR T-세포 요법 환경을 모방하기 위한 배양을 확립하였다. SKOV3-luc 종양 세포를 인간 단핵구-대식세포 및 T4+ CAR T-세포의 존재 중에 배양하였다. 배양 배지에서 측정된 IL-6의 농도는 대략 500 내지 600 pg/mL였다. 이 IL-6의 농도는 사이토카인 폭풍을 나타내는 것이다.
예상치 못하게, 종양 세포가 이전에 세포사멸 세포와 함께 1 시간 동안 배양된(1:2 T4+ CAR-T 세포 대 세포사멸 세포의 비율), SKOV3-luc 종양 세포, 인간 단핵구-대식세포, T4+ CAR-T 세포의 배양 배지에서 측정된 IL-6 수준은 극적으로 감소되었다. 유사하게, 종양 세포가 이전에 세포사멸 세포 상등액과 함께 1 시간 동안 배양된, SKOV3-luc 종양 세포, 인간 단핵구-대식세포, T4+ CAR-T 세포의 배양 배지에서 측정된 IL-6 수준 또한 극적으로 감소되었다. IL-6의 농도에서 이러한 감소는 사이토카인 폭풍에서의 저하를 나타내는 것이다(도 6).
예상치 못하게, 세포사멸 세포 및 세포사멸 상등액은 종양 세포 증식에서 CAR-T 세포의 효과를 없애지 않는 한편, 동시에 이들은 사망율로 유도하는 주요 사이토카인으로 기술된 IL-6과 같은 전-염증성 사이토카인을 하향 조절한다는 것으로 결론지어졌다.
단계 4: 더 광범위한 사이토카인을 사용한 분석
실험 과정 중에 생성되지 않지만 인간 사이토카인 폭풍 중 임상적 세팅으로 나타나는 사이토카인의 가능한 더 넓은 범위 및 수준에 대한 효과를 추가로 평가하기 위해, LPS(10 ng/mL)를 위에 요약한 SKOV3-luc 배양 조건으로 첨가하였다. LPS의 첨가는 사이토카인 폭풍 수준을 기하급수적으로 증가시키는 것으로 예상된다. 예상된 바와 같이, LPS의 첨가는 사이토카인 폭풍 효과를 증가시켰고 결과로서 IL-6 수준은 대략 30,000 pg/mL까지 증가하였다. 사이토카인 폭풍 중에 높은 수준으로 발현되는 것으로 알려진 다른 사이토카인은 증가된 수준을 보였는데, 예를 들어: TNF-α(250 내지 300 pg/mL), IL-10(200 내지 300 pg/mL), IL1-알파(40 내지 50 pg/mL) 및 IL-18(4 내지 5 pg/mLl). 도 7에 나타낸 바와 같이, 세포사멸 세포에 대한 노출은 IL-6의 수준을 기하급수적 상태의 사이토카인 폭풍 중에도, 임상적 세팅에서 보일 수 있고 CAR T-세포의 실험적 절차에서 항상 보이지는 않는, 거의 정상적 수준까지 극적으로 감소시켰다. 이 효과는, 20 내지 90% 사이의 감소를 갖는 사이토카인 TNF-알파, IL-10, IL1-알파, IL-1베타, 및 IL-18의 수준의 정상화와 함께 다른 전-염증성 사이토카인에 걸쳐 유사하였다. 유사한 결과가 세포사멸 세포 대신 세포사멸 세포 상등액 사용시 발견되었다.
결론
CAR-T 세포 요법은 상당한 수의 환자에서 사이토카인 폭풍을 야기하는 것으로 기록되었다. 본원에 제시된 이들 결과는, 놀랍게도 세포사멸 세포 및 세포사멸 세포 상등액이 종양 세포를 살해하는 CAR-T 세포 효능에 영향을 미치지 않고 사이토카인 폭풍을 저하시킬 수 있음을 나타낸다.
본원에 개시되는 어떤 특징이 본원에 예시되고 기술된 한편, 많은 변형, 치환, 변화, 및 균등물이 이제 해당 분야의 당업자에게 떠오를 것이다. 따라서, 첨부된 청구범위는 본원에 개시되는 진정한 정수 내에 들어오는 이러한 모든 변형 및 변화를 커버하는 것으로 의도됨이 이해될 것이다.

Claims (26)

  1. 키메라 항원 수용체-발현 T-세포(CAR T-세포) 및 세포사멸 세포 또는 세포사멸 세포 상등액의 어느 하나, 및 약제학적으로 허용 가능한 부형제를 포함하는 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 세포사멸 세포는 초기 세포사멸 상태의 세포사멸 세포를 포함하는 것인 조성물.
  3. 제1항에 있어서, 상기 세포사멸 세포는 혼합된 제3자 공여 세포인 조성물.
  4. 제1항에 있어서, 상기 세포사멸 세포 상등액은
    (a) 세포사멸 세포를 제공하고,
    (b) 단계 (a)의 세포를 배양하고, 그리고
    (c) 세포로부터 상등액을 분리하는 단계를 포함하는 방법에 의해 수득되는 것인 조성물.
  5. 제4항에 있어서, 상기 세포사멸 세포 상등액은 세포사멸 세포-백혈구 상등액이고 상기 수득은
    (d) 백혈구를 제공하고,
    (e) 선택적으로, 세포사멸 세포 및 백혈구를 세척하고, 그리고
    (f) 세포사멸 세포 및 백혈구를 공동-배양하는 단계를 추가로 포함하는데,
    여기에서 단계 (d)-(f)는 제4항의 단계 (b)를 대신하는 것인 조성물.
  6. 제5항에 있어서, 상기 제공되는 백혈구는 포식세포, 대식세포, 수지상 세포, 단핵구, B 세포, T 세포, 및 NK 세포로 구성되는 그룹으로부터 선택되는 것인 조성물.
  7. 제1항에 있어서, 상기 CAR T-세포 및 상기 세포사멸 세포 또는 세포사멸 세포 상등액의 어느 하나는 별개의 조성물에 포함되는 것인 조성물.
  8. 제1항에 있어서, CTLA-4 차단제, 알파-1 항-트립신 또는 이의 단편 또는 이의 유사체, 텔루륨-기반 화합물, 또는 면역 조절제를 포함하는 그룹으로부터 선택되는 부가적 물질, 또는 이의 임의의 조합을 추가로 포함하는 조성물.
  9. 제8항에 있어서, 상기 부가적 물질 또는 이의 임의의 조합은 CAR T-세포와 함께, 또는 세포사멸 세포 또는 세포사멸 세포 상등액의 어느 하나와 함께 조성물에 포함되거나, 또는 별개의 조성물에 포함되는 것인 조성물.
  10. 세포사멸 세포 또는 세포사멸 세포 상등액을 포함하는 조성물을 대상에 투여하는 단계를 포함하는, 키메라 항원 수용체-발현 T-세포(CAR T-세포) 암 요법을 받는 대상에서 사이토카인 방출 증후군(CRS) 또는 사이토카인 폭풍의 발생을 억제 또는 감소시키는 방법.
  11. 제10항에 있어서, 상기 세포사멸 세포는 초기-세포사멸 상태의 세포사멸 세포를 포함하는 것인 방법.
  12. 제10항에 있어서, 상기 세포사멸 세포는 대상에 대하여 자가이거나, 또는 혼합된 제3자 공여 세포인 것인 방법.
  13. 제10항에 있어서, 상기 세포사멸 세포 또는 상기 세포사멸 세포 상등액을 포함하는 상기 조성물의 투여는 CAR T-세포 요법 이전, 이와 동시, 또는 이후에 일어나는 것인 방법.
  14. 제10항에 있어서, 상기 세포사멸 세포 상등액은
    (a) 세포사멸 세포를 제공하고,
    (b) 단계 (a)의 세포를 배양하고, 그리고
    (c) 세포로부터 상등액을 분리하는 단계를 포함하는 방법에 의해 수득되는 것인 방법.
  15. 제14항에 있어서, 상기 세포사멸 세포 상등액은 세포사멸 세포-백혈구 상등액이고 상기 방법은
    (d) 백혈구를 제공하고,
    (e) 선택적으로, 세포사멸 세포 및 백혈구를 세척하고, 그리고
    (f) 세포사멸 세포 및 백혈구를 공동-배양하는 단계를 추가로 포함하는데,
    여기에서 단계 (d)-(f)는 제14항의 단계 (b)를 대신하는 것인 방법.
  16. 제15항에 있어서, 상기 제공되는 백혈구는 포식세포, 대식세포, 수지상 세포, 단핵구, B 세포, T 세포, 및 NK 세포로 구성되는 그룹으로부터 선택되는 것인 방법.
  17. 제10항에 있어서, 상기 방법은 CTLA-4 차단제, 텔루륨-기반 화합물, 알파-1 항-트립신 또는 이의 단편 또는 이의 유사체, 또는 면역 조절제를 포함하는 그룹으로부터 선택되는 부가적 물질, 또는 이의 임의의 조합을 투여하는 것을 추가로 포함하는 방법.
  18. 제17항에 있어서, 상기 부가적 물질의 투여는 CAR T-세포 요법 이전, 이와 동시, 또는 이후에 일어나는 것인 방법.
  19. 제10항에 있어서, 대상에서 적어도 하나의 전-염증성 사이토카인의 수준은, CAR T-세포 암 요법을 받고 상기 세포사멸 세포 또는 상기 세포사멸 세포 상등액을 투여받지 않은 대상과 비교하여 감소되는 것인 방법.
  20. 세포사멸 세포 또는 세포사멸 세포 상등액을 포함하는 조성물을 대상에 투여하는 단계를 포함하는, 사이토카인 방출 증후군 또는 사이토카인 폭풍을 경험하거나 사이토카인 방출 증후군 또는 사이토카인 폭풍에 취약한 대상에서 사이토카인 생산을 저하 또는 억제시키는 방법에 있어서, 상기 투여는 상기 대상에서 사이토카인 생산을 저하 또는 억제시키는 방법.
  21. 제20항에 있어서, 상기 대상에서 적어도 하나의 전-염증성 사이토카인의 생산은, 사이토카인 방출 증후군 또는 사이토카인 폭풍을 경험하거나 사이토카인 방출 증후군 또는 사이토카인 폭풍에 취약하고 세포사멸 세포 또는 세포사멸 세포 상등액을 투여받지 않은 대상과 비교하여 저하 또는 억제되는 것인 방법.
  22. 제20항에 있어서, 상기 대상은 CAR T-세포 암 요법을 받는 중이고, 상기 방법은 상기 CAR T-세포 암 요법의 효능을 감소시키지 않는 방법.
  23. 제20항에 있어서, 상기 사이토카인 방출 증후군 또는 사이토카인 폭풍의 원인은 감염성 자극, 병태, 또는 증후군을 포함하는 것인 방법.
  24. 제23항에 있어서, 상기 감염성 자극, 병태 또는 증후군은 인플루엔자, 조류 독감, 중증 급성 호흡기 증후군(SARS), 엡스타인-바르(Epstein-Barr) 바이러스-관련 혈구포식성 림프조직구증식증(HLH), 패혈증, 그람-음성 패혈증, 말라리아, 에볼라(Ebola) 바이러스, 천연두 바이러스, 전신적 그람-음성 박테리아 감염, 또는 야리쉬-헤륵스하이머 증후군(Jarisch-Herxheimer syndrome)을 포함하는 것인 방법.
  25. 제20항에 있어서, 상기 사이토카인 방출 증후군 또는 사이토카인 폭풍의 원인은 비-감염성 자극, 병태, 또는 증후군을 포함하는 것인 방법.
  26. 제25항에 있어서, 상기 비-감염성 자극, 병태, 또는 증후군은 혈구포식성 림프조직구증식증(HLH), 산발성 HLH, 대식세포 활성화 증후군(MAS), 만성 관절염, 전신적 소아 특발성 관절염(systemic Juvenile Idiopathic Arthritis, sJIA), 스틸병(Still's Disease), 크리오피린-관련 주기성 증후군(Cryopyrin-associated Periodic Syndrome, CAPS), 가족성 한냉 자가-염증성 증후군(Familial Cold Auto-inflammatory Syndrome, FCAS), 가족성 한냉 두드러기(Familial Cold Urticaria, FCU), 머클-웰 증후군(Muckle-Well Syndrome, MWS), 만성 영아 신경 피부 관절(Chronic Infantile Neurological Cutaneous and Articular, CINCA) 증후군, NLRP3 유전자에서 기능적 돌연변이의 유전적 또는 신규 획득을 포함하는 크리오피린증(cryopyrinopathy), 유전적 자가-염증성 장애, 급성 췌장염, 중증 화상, 외상, 급성 호흡 장애 증후군, 면역요법, 단클론 항체 요법, 약물 사용에 따른 것, 즉 독소의 흡입에 따른 것, 리포폴리사카라이드(LPS), 그람-양성 독소, 진균 독소, 글리코실포스파티딜이노시톨(GPI), 또는 RIG-1 유전자 발현의 조절을 포함하는 것인 방법.
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