KR20160114304A - 해마 추출물을 유효성분으로 함유하는 아토피 피부 개선용 피부 외용제 - Google Patents

Abstract

본 발명은 해마 추출물을 유효성분으로 함유하는 아토피 개선용 피부 외용제로서, 황색 포도상구균(스타필로코커스 아우레우스)에 대하여 우수한 항균력을 갖고 염증성 사이토카인 발현 억제 효과가 우수하며, 피부 보습 효과 및 장벽 기능 강화효과가 우수하다.

Description

해마 추출물을 유효성분으로 함유하는 아토피 피부 개선용 피부 외용제{SKIN EXTERNAL COMPOSITION FOR IMPROVING ATOPIC DERMATITIS CONTAINING EXTRACTS OF HIPPOCAMPUS CORONATUS AS ACTIVE INGREDIENT}

본 발명은 해마 추출물을 유효성분으로 함유하는 아토피 개선용 피부 외용제에 관한 것이다.

일반적으로, 피부는 외부환경과 항상 접하고 있는 기관으로서, 수분손실을 막는 보호 장벽으로서의 역할을 수행한다. 표피의 각질층 역시 피부에 가장 외측에 존재하면서 피부 밖으로 수분과 전해질이 소실되는 것을 억제함으로써, 피부의 건조를 막아 피부가 정상적인 대사과정을 수행할 수 있도록 환경을 제공한다. 또한, 외부의 물리적 손상과 화학물질로부터 인체를 보호하거나 세균, 바이러스 등이 피부로 침입하는 것을 막아주는 중요한 역할을 한다.

이러한 피부에 환경적, 유전적인 문제로 인하여 기능이 저하되어 생기는 질환이 아토피 피부염이다. 아토피성 피부염은 피부 장벽기능장애와 알르레기원과 미생물과 같은 환경 인자 사이의 복잡한 상호작용과 관련된 유일한 질병이다(Incovaria et al., Clin. Exp. Immunol., 153: 27-29, 2003). 멜라닌세포(melanocyte)와 각질세포(keratinocyte)를 포함하는 모든 피부세포는 활성산소종(reactive oxygen species, ROS)와 활성질소종(reactive nitrogen species, RNS)을 생산한다(Pelle et al., J. Invest. Dermatol., 124: 793-797, 2005;Kornina and Pastore, Front. Biosci. 1: 123-141, 2005). 덧붙여, 피부세포로부터 생성된 ROS는 또한 지질 분자 또는 리폭시게나제(lipoxigenase)와 시클로옥시게나제(cyclooxygenase)와 같은 산화환원-민감성 지질대사 효소와 반응함으로써 지질 라디칼(lipid radical), 과산화물(peroxide), 하이드로과산화물(hydroperoxide)와 같은 활성지질종(reactive lipid species) 또는 알데히드를 생산할 수 있다. 만성 염증질환인 아토피성 피부염은 그러한 산화 환원균형을 붕괴시켜서 ROS, RNS의 과잉생산과 지질 과산화물의 높은 수준을 야기하는데, 이는 결국 질병상태를 악화시키고 Th2-편향된 면역반응 쪽으로 치우치게 한다(Briganti and Picardo, J. Eur. Acad. Dermatol., 17: 663-669, 2003; Wu et al., Clin. Exp. Immunol., 135: 194-199, 2004).

피부에 나타나는 염증 반응은 붉어짐, 따끔거림, 화끈거림, 팽윤, 조직의 변화와 같은 5가지 현상으로 나타나는데, 이는 해로운 주위 환경, 즉 세균과 같은 외부 물질의 침입과 기계적 손상으로부터 생체를 보호하려는 생리적인 반응이다. 염증과 관계되는 대표적인 피부 트러블의 형태로는 아토피와 여드름 등이 있다. 특히, 아토피에 대해서 설한다면, 아토피는 심한 가려움증이 특징적인데 피부에 자극을 가하면 가려움증이 더욱 심해지고, 자꾸 더 긁다보면 상처가 나게된다. 이로 인해 세균감염(황색포도상구균, 연쇄상구균 등)이 일어나게 되어 염증이 발생한다. 아토피의 문제 중에 중요한 인자의 하나는 이때 일어나는 2차 감염 및 초항원 독소이다. 아토피 환자의 80~90%는 피부에 황색포도상구균(Staphylococcus aureus)과 연쇄상구균(Stereptococcus pyogenes)의 감염이 있는데, 이때 anti- Staphylococcus, IgE가 만들어지며, 이는 T-cell반응을 자극하는 초항원 독소에 의해 유발된다. 보다 구체적으로, 이러한 황색포도상구균의 초항원 독소는 랑게르한스 세포내 항원제시세포를 통하여 T임파구를 선택적으로 자극하여 인터루킨-1과 TNF-alpha를 생산하게 하고, 이들에 의해 자극된 T-cell에서 여러 가지 세포내 사이토카인이라는 독소를 분비하여 염증을 일으키게 된다. 즉, 초항원 독소는 인터루킨-4와 인터루틴-5의 분비를 촉진하여 IFN-gamma의 분비는 저해하고, CLA의 수를 증가시켜 결국 IgE의 생성을 촉진시킨다. 이러한 IgE에 의하여 호염구에서 히스타민이라는 물질이 분비되어 아토피 피부염이 악화된다.

일반적으로 아토피 피부염 환자는 정상인에 비하여 세균, 바이러스, 곰팡이에 의한 피부 감염이 잘 발생하는 것으로 알려져 있다. 특히 아토피 환자의 90%가 피부에 황색 포도상 구균(Staphylococcus aureus)이 집적되어 번식하고 있으며, 아토피 환자의 상피세포는 황색 포도상 구균이 감염되어 있다는 것이 많은 연구 결과들을 통해 알려져 있다. 그러나 이런 아토피 환자에게 상피세포에 포도상 구균의 감염 및 번식하는 기전은 명확하지 않다. 아토피성 질환 부모의 소아에서 아토피성 피부염의 빈도가 높아 유전적인 소인이 있는 것으로 추정되고, 아토피성 피부염을 가진 모체로부터 수유기간이 증가할수록 아토피성 피부염의 발생 빈도도 증가하는 것으로 알려지고 있다

이들 포도상구균에 의한 피부 감염증은 주로 각질층 내의 세라마이드(Ceramides)의 함량을 감소시킴으로써 발생한다. 아토피는 각질층의 수분유지기능이 떨어짐에 따라 피부가 건조되어 각질이 다량 일어나며, 피부장벽 기능이 저하됨에 따라 자극유발물질이 각질층 내로 침입하여 자극을 유발시켜 정상피부에서는 침입하기 어려운 항원 단백질이 침입하며, 피부 알러지 등이 용이하게 발생하여 심한 소양증을 나타낸다. 따라서, 아토피 환자의 90% 이상이 포도상구균에 감염되어 있으며, 이것은 환자가 가려움을 참지 못하여 긁어서 생기기도 하지만 세균의 외독소가 우리 몸의 면역체계를 자극하여 알레르기를 일으키는 화학물질을 나오게 하여 아토피를 악화시킨다.

이러한 문제를 해결하기 위하여, 현재 일반적으로 사용되고 있는 아토피 피부를 치료하는 방법으로는 보습제 사용, 타르제제 사용, 바르거나 먹는 스테로이드제제 사용, 자외선 치료, 클린다마이신, 디클록사시린(dicloxacilline)과 같은 항생제, 항소양제, 과망간산칼리(potassium permanganate), 세트리마이드(cetrimide), 클로르헥시딘(chlorhexidine), 로옥시레놀(chloroxylenol), 디브로모프로파미딘(dibromopropamidine), 폴리녹시린(polynoxylin), 포비돈 아이오다인(povidone iodine), 트리클로산 (triclosan) 과 같은 항균제, 면역 관련 치료제, 식품, 향기, 한방 등의 방법을 사용하고 있다.

그러나, 타르제제는 알코올 성분이 있어 냄새가 좋지 않고 건조한 피부를 자극하는 단점이 있고, 스테로이드 제제는 발진, 피부색 변화 고혈압, 백내장 등의 부작용이 심각하며, 자외선 치료는 햇볕의 화상, 가려움증 유발, 색소 침착과 장기간 치료 시에는 피부의 조기 노화와 암의 위험이 높고, 항생제는 주로 내복약으로 사용되는 단점이 있다.

또한, 항균제는 농도 따른 피부 자극이 있으며, 면역조절, 억제제 등은 수두, 대상포진 등의 바이러스에 감염된 얼굴에 사용해서는 안 되는 등의 사용상에 어려움이 있어 그 사용에 한계가 있으며, 또한 식품요법, 한방치료, 기타 향기 요법 등은 사용상의 부작용은 없지만 그 효과가 미비한 경우가 많아서 근본적인 치료가 되기 어려워 사용상에 그 한계가 있을 수 있다.

한국 공개특허 제10-2009-0043656호는 해마 추출물을 함유한 항산화용 조성물에 관한 것으로, 해마 추출물의 DPPH 라디칼, 히드록실 라디칼, 슈퍼옥사이드 라디칼 및 페록실 라디칼 제거 활성을 개시하고 있다.

이에, 본 발명자들은 해마 추출물의 화장품으로의 응용 가능성을 확인하기 위해 해마 발효 추출물을 제조하여 염증성 사이토카인 발현 억제 효과, 항균효과, 보습효과, 피부장벽 기능 강화효과를 측정한 결과, 그 효능이 매우 우수하다는 것을 발견하게 되었다.

본 발명의 목적은 해마 추출물을 함유하여 염증성 사이토카인 발현 억제 효과, 항균효과, 보습효과, 피부장벽 기능 강화효과 등을 나타내는 피부 외용제를 제공하는데 있다.

본 발명은 해마(Hippocampus coronatus) 추출물을 유효성분으로 함유하는 아토피 피부 개선용 피부 외용제에 관한 것이다.

바람직하게는, 상기 피부 외용제는 황색 포도상구균에 대하여 항균력을 갖는다.

바람직하게는, 상기 피부 외용제는 염증성 사이토카인 발현 억제 효과를 갖는다.

바람직하게는, 상기 피부 외용제는 피부 보습효과를 갖는다.

바람직하게는, 상기 피부 외용제는 피부장벽 기능 강화 효과를 갖는다.

바람직하게는, 상기 피부 외용제는 아토피 피부 개선 효과를 갖는다.

바람직하게는, 상기 해마 추출물은 상기 피부 외용제의 전체 중량에 대하여 0.0001 ~ 30.0 중량% 함유된다.

바람직하게는, 상기 해마 추출물은 (a) 물, 탄소수 1-4의 무수 또는 함수 저급 알코올, 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜, 글리세린, 아세톤, 에틸 아세테이트, 클로로포름, 부틸 아세테이트, 디에틸에테르, 디클로로메탄, 헥산 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되는 추출용매를 이용한 용매 추출법, (b) 초임계 추출법, 및 (c) 초음파 추출법을 포함하는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 한다.

본 발명은 해마 추출물을 유효성분으로 함유하는 아토피 개선용 피부외용제로서, 황색 포도상구균(스타필로코커스 아우레우스)에 대하여 우수한 항균력을 갖고(실험예 1), 염증성 사이토카인 발현 억제 효과가 우수하고(실험예 2), 피부의 보습력을 강화시키며(실험예 3) 피부장벽 강화효과가 우수하다(실험예 4).

또한, 본 발명에 따르면, 해마 추출물을 효능을 극대화하기 위해 초음파 및 초임계추출 공정을 통해 항균효과, 염증성 사이토카인 발현 억제 효과, 보습효과, 피부장벽 기능 강화효과, 아토피 피부개선효과 등을 더욱 증진시켜준다.

본 발명의 피부 외용제 중 유효 성분으로 사용되는 해마는 영문표기가 학명으로는 Hippocampus coronatus로 표기되고 있다. 해마는 실고기과에 속하는 경골어류로서 세계적으로 36종이 서식하는 것으로 알려져 있다. 몸길이 6∼10.5cm이다. 눈의 가시가 뚜렷하고 등지느러미의 기저(base:기관 또는 부속기관과 몸통과 연결되는 부위) 길이가 매우 짧은 것이 가장 큰 특징이다. 가늘고 긴 주둥이는 눈 뒤쪽의 머리 길이와 같고 머리가 다른 어류에 비하여 거의 직각으로 구부러져 있으며 몸은 많은 골판으로 구성되어 있다. 머리에는 관처럼 생긴 돌기가 뚜렷하게 튀어나와 있고 목에 해당되는 부분에 돌기 모양의 갈고리가 있다. 해안 가까이에 서식한다. 한국·일본 등 아열대 해역에 분포한다.

본 발명에 있어서, 해마 추출물은 해마의 다양한 기관 또는 부분으로부터 추출하여 얻은 것을 의미한다.

본 발명에서 해마 추출물은 다양한 추출용매, 예를 들어, 물, 탄소수 1-4의 무수 또는 함수 저급 알코올 (예를 들면, 메탄올, 에탄올, 프로판올 및 부탄올), 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 글리세린, 아세톤, 디에틸에테르, 에틸 아세테이트, 부틸아세테이트, 디클로로메탄, 클로로포름, 헥산 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되는 1종 이상의 추출 용매를 사용하여 얻을 수 있으며, 바람직하게는 에탄올, 70%(v/v) 에탄올 또는 물을 사용하여 얻어진 것이고, 가장 바람직하게는 70%(v/v) 에탄올을 사용하여 얻어진 것이다.

한편, 본 발명의 해마 추출물은 상기한 추출 용매뿐만 아니라, 다른 추출 용매를 이용하여도 실질적으로 동일한 효과를 나타내는 추출물이 얻어질 수 있다는 것은 당업자에게 자명한 것이다.

또한, 본 발명의 해마 추출물은 상술한 추출 용매에 의한 추출물뿐만 아니라, 통상적인 정제 과정을 거친 추출물도 포함한다. 예컨대, 이산화탄소에 의한 감압, 고온에 의한 초임계추출법에 의한 추출, 초음파를 이용한 추출법에 의한 추출, 일정한 분자량 컷-오프 값을 갖는 한외 여과막을 이용한 분리, 다양한 크로마토그래피 (크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 분리를 위해 제작된 것)에 의해 분리하거나 자연 상태나 각종 미생물을 이용한 발효 산물에 의한 추출물 등, 추가적으로 실시된 다양한 정제 및 추출방법을 통해 얻어진 활성 분획도 본 발명의 추출물에 포함된다.

또한, 본 발명은 상기 추출물이 상온에서 냉침, 가열 여과하여 얻어진 액상물, 추가로 용매를 감압농축 또는 동결 건조하여 얻은 것임을 특징으로 하는 피부외용제를 제공한다.

상기 이산화탄소에 의한 감압, 고온에 의한 초임계추출법에 의한 추출법은 초임계 유체 추출법(supercritical fluid extraction)을 의미하는 것으로, 일반적으로 초임계 유체는 기체가 고온 고압 조건에서 임계점에 도달하였을 때 갖는 액체 및 기체의 성질을 지니고 있으며, 화학적으로 비극성 용매와 유사한 극성을 지니고 있으며 이러한 특성으로 인해 초임계 유체는 지용성 물질의 추출에 사용되고 있다(J. Chromatogr. A. 1998;479:200-205).

이산화탄소는 초임계 유체기기의 작동으로 압력 및 온도가 임계점까지 이르는 과정을 거치면서 액체 및 기체 성질을 동시에 지닌 초임계 유체가 되고 그 결과 지용성 용질에 대한 용해도가 증가한다. 초임계 이산화탄소가 일정량의 시료를 함유한 추출 용기를 통과하게 되면 시료에 함유된 지용성 물질은 초임계 이산화탄소에 추출되어 나온다.

지용성 물질을 추출한 후 추출 용기에 남아있는 시료에 다시 소량의 공용매가 함유된 초임계 이산화탄소를 흘려 통과시키면 순수한 초임계 이산화탄소만으로는 추출되지 않았던 성분들이 추출되어 나오게 할 수 있다.

본 발명의 초임계추출법에 사용되는 초임계 유체는 초임계 이산화탄소 또는 이산화탄소에 추가적으로 공용매를 혼합한 혼합유체를 사용함으로써 효과적으로 유효 성분을 추출할 수 있다.

이러한 공용매는 클로로포름, 에탄올, 메탄올, 물, 에틸아세테이트, 헥산 및 디에틸에테르로 이루어진 군에서 선택되는 1종 또는 2종 이상의 혼합물을 사용할 수 있다.

추출된 시료는 대부분 이산화탄소를 함유하고 있는데 이산화탄소는 실온에서 공기 중으로 휘발되므로 상기 방법으로 얻은 추출물을 피부 외용제로서 사용할 수 있으며, 공용매는 감압증발기로 제거할 수 있다.

또한 상기 초음파 추출법은 초음파 진동에 의해 발생되는 에너지를 이용하는 추출방법으로, 초음파가 수용성 용매 속에서 시료에 포함된 불용성인 용매를 파괴시킬 수 있으며, 이때 발생되는 높은 국부온도로 인하여 주위에 위치하는 반응물 입자들의 운동에너지를 크게 하기 때문에 반응에 필요한 충분한 에너지를 얻게 되고, 초음파 에너지의 충격효과로 높은 압력을 유도하여 시료에 함유된 물질과 용매의 혼합 효과를 높여주어 추출효율을 증가시키게 된다.

초음파 추출법에 사용할 수 있는 추출용매는 클로로포름, 에탄올, 메탄올, 물, 에틸아세테이트, 헥산 및 디에틸에테르로 이루어진 군에서 선택되는 1종 또는 2종 이상의 혼합물을 사용할 수 있다. 추출된 시료는 진공 여과하여 여과액을 회수한 후 감압증발기로 제거하고, 동결 건조하는 통상의 추출물 제조방법을 통해 추출물을 얻을 수 있다.

본 발명에 따르면, 상기 해마 추출물은 피부 외용제의 전체 중량에 대해서 0.0001 ~ 30.0 중량% 함유되며, 더욱 바람직하게는, 상기 해마 추출물은 피부 외용제의 전체 중량에 대해서 0.01 ~ 10 중량% 함유되는 것을 특징으로 한다. 상기 추출물의 함량이 0.0001 중량% 미만인 경우에는 피부 개선 효과가 나타나지 않으며, 30.0 중량%를 초과하는 경우에는 함유량 증가에 대한 피부 개선 효과 증대 정도가 미미하며, 제형상의 안전 및 안정성에 문제가 있으며 경제적이지도 못하다.

따라서, 이러한 다양한 기능을 가진 해마 추출물을 포함하는 본 발명의 피부 외용제는 황색포도상구균에 대한 우수한 항균 효과, 염증성 사이토카인 발현 억제효과, 피부 보습 효과, 피부장벽 기능 강화효과, 아토피 피부 개선효과를 갖는 것을 특징으로 한다.

본 발명의 조성물에 포함되는 성분은 상기 유효 성분 이외에 피부 외용제 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함한다.

의약품에 적용할 경우에는 본 발명에 따른 해마 추출물을 유효성분으로 하여 사용되는 무기 또는 유기의 담체를 가하여 고체, 반고체 또는 액상의 형태로 경구투여제 혹은 비경구 투여제로 제제화 할 수 있다.

경구투여율을 위한 제제로서는 정제, 환제, 과랍제, 연, 경 캡슐제, 산제, 세립제, 분제, 유탁제, 시럽제, 필렛제 등을 들 수 있다. 비경구 투여를 위한 제재로는 주사제, 점적제, 연고, 로션, 스프레이, 현탁액, 유제, 좌제 등을 들 수가 있다. 본 발명의 유효성분을 제제화하기 위해서는 상법에 따라서 실시하면 용이하게 제제화할 수 있으며 계면활성제, 부형제, 착색료, 향신료, 보존제, 안정제, 완충제, 현탁제, 기타 상용화하는 보조제를 적당히 사용할 수 있다.

본 발명의 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 팩, 마사지크림 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소 결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 계면활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 조성물이 비누, 계면활성제 함유 클렌징 제형 또는 계면활성제 비함유 클렌징 제형일 경우, 피부에 도포한 후 닦아내거나 떼거나 물로 씻어낼 수도 있다. 구체적인 예로서, 상기 비누는 액상비누, 가루비누, 고형비누 및 오일비누이며, 상기 계면활성제 함유 클렌징 제형은 클렌징 폼, 클렌징 워터, 클렌징 수건 및 클렌징 팩이며, 상기 계면활성제 비 함유 클렌징 제형은 클렌징크림, 클렌징 로션, 클렌징 워터 및 클렌징 겔이며, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 조성물은 단독 또는 중복하여 사용하거나, 본 발명 이외의 다른 조성물과 중복하여 사용할 수 있다. 또한 본 발명에 따른 조성물은 통상적인 사용방법에 따라 사용될 수 있으며, 사용자의 피부 상태 또는 취향에 따라 그 사용횟수를 달리할 수 있다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.

제조예 1: 해마 추출물 제조

세척하여 음건한 해마를 분쇄한 뒤 70% (V/V) 에탄올 수용액으로 5시간씩 3회 환류 추출하고 냉침한 후, 와트만(Whatman) #4 여과지로 여과하였다. 여과된 추출물을 50 ℃ 이하에서 감압 농축 및 동결 건조하였다.

제조예 2 내지 3 : 초임계 유체 추출물 및 초음파 추출물 제조

통상적인 초임계 추출법(약 60℃의 온도에서 약 300 기압의 압력 하에 초임계 상태에서 공용매로서 에탄올을 이용하여 추출함)으로 추출하여 초임계 추출물을 얻었다(제조예 2). 초음파(슈퍼소닉 초음파기기를 이용하여 25KHz의 강도로 30℃에서 약 2시간 동안 추출)를 이용한 추출을 통해 추출물을 얻었다. 단, 제조예 3의 경우에는 공용매로 에탄올을 사용하였다.

실험예 1: 해마 추출물의 미생물에 대한 항균 활성 효과

상기의 제조예로 추출된 해마 추출물에 대한 항균활성을 알아보기 위하여 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus KCTC 1916, KCTC 1928, EML 5757779)을 대상으로 페이퍼 디스크(paper disc)법으로 가시화 실험을 수행하였다.

추출물을 50% 에탄올에 100mg/ml 농도로 녹인 후 50㎍씩 페이퍼 디스크 (Whatman NO.1, 8mm diameter)에 점적한 후, 건조시켰다. 이후 상기 균주가 0.1ml 도말된 한천 플레이트 위에 올려놓고 24시간 동안 완전히 건조하였다. 이후, 저해 구역(inhibitory zone)의 크기를 측정하여 항균 활성을 확인하였으며, 그 결과를 하기 표 1 에 나타내었다.

구분	저해 구역의 크기(mm)
	제조예1	제조예2	제조예3
스타필로코커스 아우레우스	14	15	15

표 1와 같이 스타필로코커스 아우레우스 (Staphylococcus aureus KCTC 1916, KCTC 1928, EML 5757779)을 대상으로 페이퍼 디스크 (paper disc)법으로 항균실험을 확인한 결과, 제조예 1 내지 3에서 항균효과를 보였다.

실험예 2: 해마 추출물의 자외선 조사에 의한 염증성 사이토카인 발현 억제효과

실험예 2는 제조예 1 내지 3을 통하여 수득한 해마 추출물의 자외선 조사에 의해 발현되는 염증성 사이토카인 발현 억제 효과를 평가하기 위한 것으로서, 사람의 표피 조직에서 분리한 섬유아세포(fibroblast)를 24-웰 시험 플레이트에 5X10⁴ 개씩 넣고 24시간 동안 부착시켰다. 각 웰을 PBS로 1회 세척하고 각 웰에 500 ㎕의 PBS를 넣었다. 이 섬유아세포에 자외선B(UVB) 램프 (Model: F15TB, UV B 15W, Sankyo Dennki사 Japan)을 이용하여 자외선 10mj/cm²를 조사한 후 PBS를 덜어내고 세포 배양 배지 (DMEM에 FBS가 첨가되지 않은 배지) 350 ㎕를 첨가하였다. 이에 평가하고자 하는 해마 추출물을 처리한 후 5시간 동안 배양하였다. 배양 상층액을 150 ㎕을 취하여 IL-1 α을 정량함으로서 해마 추출물의, 염증성 사이토카인 발현 억제 효과를 판단하였다. IL-1 α의 양은 효소 면역 분석법(Enzyme-linked immunosorbent assay)을 이용하여 정량화하였으며, 염증성 사이토 카인 (IL-1 α)의 발현 억제율(%)은 하기 수학식 1에 의해 계산하였다.

[ 수학식 1]

염증성 사이토카인 발현 억제율(%) = [1-{(St- Bo)/ (Bt-Bo)}]x100

Bo : 자외선 조사하지 않고 시료 처리하지 않은 웰의 IL-1 α 생성량

Bt : 자외선 조사하고 시료 처리하지 않은 웰의 IL-1 α 생성량

St : 자외선 조사하고 시료 처리한 웰의 IL-1 α 생성량

시료명	처리농도(ppm)	염증성 사이토카인 발현 억제율 (%)
제조예1	100	80.74 ± 1.56
제조예2	100	75.18 ± 2.11
제조예3	100	82.84 ± 1.89
인도메타신	100	61.23 ± 0.87

표 2에 따르면, 제조예 1 내지 3에 의해 제조된 해마 추출물은 자외선에 의한 염증성 사이토카인인 IL-1 α의 생성을 100ppm 농도에서 각각 80.74%, 75.18%, 82.84% 억제하는 것을 알 수 있었다. 본 발명에 따른 해마 추출물은 동일 농도에서 염증성 사이토카인 발현 억제물질인 인도메타신보다도 우수한 염증성 사이토카인 발현 억제율을 보임을 알 수 있었다. 따라서 본 발명의 해마 추출물은 자외선 조사에 의한 염증 발생을 낮은 농도에서도 효과적으로 방어함을 알 수 있다.

제형예 1: 해마 추출물을 함유하는 화장료 조성물의 제조

해마 추출물을 포함하는 제형예는 제조예 1 내지 3의 해마 추출물을 각각 포함하는 화장료 조성물(제형예 1 내지 3)를 제조하였으며, 보습제로서 글리세린 및 1,3-부틸렌글리콜을 포함하는 화장료 조성물(비교제형예 1), 추출물이나 보습제를 모두 포함하지 않는 화장료 조성물(비교제형예 2)을 하기 표 3에 나타내었다.

구분	성분	제형예1	제형예2	제형예3	비교 제형예1	비교 제형예2
A	제조예1	3.0	-	-	-	-
	제조예2	-	3.0	-	-	-
	제조예3	-	-	3.0	-	-
	글리세린	-	-	-	5	-
	1,3-부틸렌글리콜	-	-	-	5	-
	EDTA-2Na	0.02	0.02	0.02	0.02	0.02
	정제수	to100	to100	to100	to 100	to 100
B	세토스테아릴알코올	2.0	2.0	2.0	2.0	2.0
	글리세릴스테아레이트	1.5	1.5	1.5	1.5	1.5
	마이크로크리스탈린	0.7	0.7	0.7	0.7	0.7
	스쿠알란	5.0	5.0	5.0	5.0	5.0
	유동파라핀	3.0	3.0	3.0	3.0	3.0
	트리옥타노인	5.0	5.0	5.0	5.0	5.0
	폴리솔베이트	1.2	1.2	1.2	1.2	1.2
	솔비탄스테아레이트	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5
	토코페릴아세테이트	0.2	0.2	0.2	0.2	0.2
	사이클로메치콘	3.0	3.0	3.0	3.0	3.0
	BHT	0.05	0.05	0.05	0.05	0.05
C	향,방부제	적량	적량	적량	적량	적량

실험예 3: 해마 추출물의 보습효과

상기 제형예의 화장료 조성물에 대한 보습효과를 다음과 같이 측정하였다. 설문 조사를 통하여 피부가 건조하다고 느끼는 건강한 남녀 100명을 무작위로 20명씩 5개 그룹(A, B, C, D, E)으로 나눈 후, A, B, C 그룹에는 상기 제형예의 화장료 조성물을, D그룹에는 각각 해마 추출물 대신에 보습제로서 글리세린 및 1,3-부틸렌글리콜을 포함하는 제형(비교제형예 1)을, E 그룹에는 별도의 보습제를 포함하지 않는 제형(비교제형예 2)을 각각 1일 2회씩 4주간 안면에 도포하게 하였다. 보습효과는 실사용 시험 시작 후 매 2주간, 그리고 종료 후의 개선 효과를 Corneomater CM820 (Corage + Khazaka, Germany)를 이용하여 평가하였다. 그 결과는 하기의 표 4에 나타내었다.

구분	사용 전	사용 2주 후	사용 4주 후
제형예 1	30.15	43.48	50.19
제형예 2	29.15	44.15	51.12
제형예 3	28.98	45.19	53.89
비교제형예 1	30.3	42.1	50.9
비교제형예 2	28.5	29.4	28.9

상기 표 4에 나타낸 바와 같이, 일반 다른 보습제를 함유한 비교제형예 1과 비교하여도, 본 발명의 해마 추출물을 함유한 제형예 1 내지 3의 보습효과가 우수함을 확인할 수 있었다.

실험예 4: 해마 추출물의 피부장벽 강화효과

상기 제형예의 화장료 조성물에 대한 피부장벽 강화 효과를 다음과 같이 측정하였다. 설문 조사를 통하여 피부가 건조하다고 느끼는 건강한 남녀 100명을 무작위로 20명씩 5개 그룹(A, B, C, D, E)으로 나눈 후, 팔의 상박 부위를 세정 후 테입 스트리핑(tape stripping)을 실시하여 피부 장벽을 일시적으로 약화시킨 후, A, B, C 그룹에는 상기의 제형예 1내지 3의 화장료 조성물을, D그룹에는 각각 해마 추출물 대신에 보습제로서 글리세린 및 1,3-부틸렌글리콜을 포함하는 제형(비교제형예 1)을, E 그룹에는 별도의 보습제를 포함하지 않는 제형(비교제형예 2)을 각각 1일 2회씩 3일간 도포하게 하였다. 수분증발량 측정기인 Tewameter TM 300(Courage + Khazaka, cologne, Germany)를 이용하여 테입 스트리핑 0시간 후, 48시간 후, 72시간 후의 수분 증발량을 측정하였다. 그 결과는 하기의 표 5에 나타내었다.

구분	0시간 후 수분 증발량(%)	48시간 후 수분 증발량(%)	72시간 후 수분 증발량(%)
제형예 1	100	47.2	32.0
제형예 2	100	48.3	32.8
제형예 3	100	50.2	34.1
비교제형예 1	100	49.3	38.2
비교제형예 2	100	86.5	72.4

상기 표 5에 나타낸 바와 같이, 일반 다른 보습제를 함유한 비교제형예 1과 비교하여도, 본 발명의 해마 추출물을 함유한 제형예 1 내지 3의 피부장벽 강화효과가 우수함을 확인할 수 있었다.

이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 구현예일 뿐이며, 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

Claims (7)

1. 해마(Hippocampus coronatus) 추출물을 유효성분으로 함유하는 아토피 피부 개선용 피부 외용제.
2. 제1항에 있어서,
   상기 피부 외용제는 황색 포도상구균에 대하여 항균력을 갖는, 아토피 피부 개선용 피부 외용제.
3. 제1항에 있어서,
   상기 피부 외용제는 염증성 사이토카인 발현 억제 효과를 갖는, 아토피 피부 개선용 피부 외용제.
4. 제1항에 있어서,
   상기 피부 외용제는 피부 보습효과를 갖는, 아토피 피부 개선용 피부 외용제.
5. 제1항에 있어서,
   상기 피부 외용제는 피부장벽 기능 강화효과를 갖는, 아토피 피부 개선용 피부 외용제.
6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
   상기 해마 추출물은 상기 피부 외용제의 전체 중량에 대하여 0.0001 ~ 30.0 중량% 함유되는, 아토피 피부 개선용 피부 외용제.
7. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
   상기 해마 추출물은 (a) 물, 탄소수 1-4의 무수 또는 함수 저급 알코올, 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜, 글리세린, 아세톤, 에틸 아세테이트, 클로로포름, 부틸 아세테이트, 디에틸에테르, 디클로로메탄, 헥산 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되는 추출용매를 이용한 용매 추출법, (b) 초임계 추출법, 및 (c) 초음파 추출법을 포함하는 군으로부터 선택되는 것인, 아토피 피부 개선용 피부 외용제.