KR20110045351A

KR20110045351A - 올레아노닉산을 함유하는 치매 예방 또는 치료용 조성물

Info

Publication number: KR20110045351A
Application number: KR1020090101896A
Authority: KR
Inventors: 양현옥; 권학철; 정성권; 박진수; 양민철; 천윤선
Original assignee: 한국과학기술연구원
Priority date: 2009-10-26
Filing date: 2009-10-26
Publication date: 2011-05-04
Also published as: WO2011052968A3; WO2011052968A2

Abstract

본 발명은 올레아노닉산(oleanonic acid)을 함유하는 치매 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다. 보다 구체적으로 본 발명은 마타리(Patrinia scabiosaefolia) 또는 백화사설초(Oldenlandia diffusa)로부터 분리 정제 되거나, 올레아놀산의 산화반응을 통하여 다량 제조될 수 있는 올레아노닉산의 치매 예방 또는 치료를 위한 용도에 관한 것이다. 본 발명에서의 올레아노닉산은 치매 특히 알츠하이머병의 원인물질로 알려진 베타-아밀로이드의 생성을 억제할 수 있어, 이를 유효성분으로 함유하는 조성물은 치매의 예방 또는 치료에 효과적으로 사용될 수 있다.

올레아노닉산, oleanonic acid, 백화사설초, 마타리

Description

올레아노닉산을 함유하는 치매 예방 또는 치료용 조성물 {Composition comprising oleanonic acid for preventing and treating dementia}

본 발명은 올레아노닉산 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 치매 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다. 보다 구체적으로 본 발명은 치매 예방 또는 치료를 위한 올레아노닉산의 용도에 관한 것이다. 또한 본 발명은 올레아노닉산을 유효성분으로 함유하는 백화사설초 또는 마타리 추출물의 치매 예방 또는 치료를 위한 용도에 관한 것이다.

대표적인 퇴행성 신경 질환의 하나인 치매(dementia)는 각종 원인에 의해 발생하는 뇌세포 손상에 의해 정상이던 기억력, 사고력, 이해력, 계산능력, 학습능력, 언어능력 및 판단력 등의 지능을 포함하는 뇌 기능이 저하된 증상을 말한다. 노인성 치매(senile dementia)는 노년에 따른 뇌의 퇴행성 변화의 결과 나타나게 되는 노년성 정신 장애로서, 65세 전후부터 70세의 노년기에 주로 발생한다.

특히, 알츠하이머병(Alzheimer's disease)은 노인성 치매 중에서도 가장 중 요하게 대두되고 있는 질환으로, 베타-아밀로이드(β-amyloid)의 뇌내 축적과 그로 인한 신경독성이 발병의 중요한 원인으로 알려져 있다(Probst A. et al., Brain Pathol., 1:229-239, 1991). 특히 베타-아밀로이드(β-amyloid)는 단백질이 뇌에 축적되어 엉키게 되는 플라그를 만들고 이로 인해 알츠하이머병이 발병하는 것으로 알려져 있다(Breimer LH, et al. Nature, 326: 749-750, 1987). 상기 알츠하이머병에 걸리게 되면, 뇌의 전반적인 위축, 뇌실의 확장, 신경섬유의 다발성 병변(neurofibrillary tangle) 및 신경반(senile plaque) 등과 같은 병리조직학적 특징이 나타나고, 기억력, 판단력 및 언어능력 등의 지적 기능 감퇴와 행동 양상 장애가 나타나게 되며, 심하게 되면 우울증과 같은 정신의학적 증세도 동반된다. 또한, 상기와 같은 증세들이 점진적으로 진행되어 발병 후 6 내지 8년 정도가 지나면 죽음에 이를 수 있다.

상기 베타-아밀로이드(β-amyloid)는 아밀로이드 전구체(amyloid precursor protein, APP)가 막단백 가수분해 효소인 베타-세크리테아제(BACE1)와 감마-세크리테아제의 연속적인 작용으로 만들어지는 것으로 알려져 있다(Vassa and Citron, Neuron 27, 419-422, 2000). 이러한 베타-아밀로이드(β-amyloid)는 크게 2가지 유형, 즉 40개 또는 42개의 아미노산으로 이루어진 Aβ40과 Aβ42로 나눌 수 있다. 베타-아밀로이드 중에서도 Aβ40이 그 대부분을 차지하지만, 상대적으로 적게 만들어지는 Aβ42가 플라그를 쉽게 만들기 때문에 가장 중요한 병인물질로 지목되고 있다(Selkoe, Science 298: 789-891, 2002).

지금까지 알려진 대표적인 치매 치료제로서 타크린(tacrine; Cognex, 1994) 과 도네피질(donepezil; Aricept, 1996)이 미국 FDA의 승인을 받아 사용되고 있다. 상기 약품들의 작용기전은 중추신경전달계에 중심적인 역할을 하는 아세틸콜린의 분해효소인 아세틸콜린에스터라제(AChE) 효소의 활성억제를 통해 신경전달물질인 아세틸콜린의 농도를 증가시킴으로써 치매를 예방 및 치료하는 것으로 알려져 있다. 하지만, 상기 타크린은 효능에 비하여 가격이 비싸고 심각한 간독성의 문제점이 있으며, 도네피질은 간독성은 없으나 부교감신경을 자극하여 구토, 오심, 설사 등과 같은 여러 가지 부작용이 문제점으로 알려져 있다. 또한, 상기 약물들은 뇌병변의 개선과 같은 원인적인 치료를 위한 약물이 아니라, 기억력 감퇴와 같은 치매의 주요 증상을 완화하려는 약물에 불과하다는 문제점이 있다.

따라서, 상기와 같은 부작용이 없으면서도 원인적인 치료가 가능한 새로운 형태의 치매를 포함하는 퇴행성 신경질환의 치료제를 개발하기 위한 연구가 활발히 진행되고 있다. 그 중 하나로 알츠하이머병의 원인물질로 알려진 베타-아밀로이드(β-amyloid)의 생성을 차단할 수 있는 물질을 개발하려는 노력이 계속되고 있으나, 아직까지 효과적인 치료제가 개발되지 못하고 있는 실정이다.

본 발명자들은 뇌신경 보호 등의 치료 효과가 우수하면서도 부작용이 없으며 원인적 치료까지 가능한 퇴행성 신경질환 치료제를 개발하고자 연구하던 중, 올레아노닉산이 베타-아밀로이드의 생성을 억제함으로써 퇴행성 신경질환의 예방 및/또는 치료제의 유효한 성분으로 사용될 수 있음을 확인하였으며, 또한 백화사설초 또는 마타리의 추출물이 올레아노닉산을 함유하여 베타-아밀로이드의 생성을 억제함으로써 퇴행성 신경질환의 예방 및/또는 치료 효과를 가짐을 확인하여 본 발명을 완성하였다.

따라서, 본 발명의 일례는 하기 화학식 1의 올레아노닉산(oleanonic acid) 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 퇴행성 신경질환 예방 또는 치료용 조성물을 제공한다.

<화학식 1>

또 다른 예는 마타리 추출물, 상기 추출물의 건조물 및 상기 추출물의 농축물로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 유효성분으로 함유하는 퇴행성 신경질환 예방 또는 치료용 조성물을 제공한다.

또 다른 예는 백화사설초 추출물, 상기 추출물의 건조물 및 상기 추출물의 농축물로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 유효성분으로 함유하는 퇴행성 신경질환 예방 또는 치료용 조성물을 제공한다.

상기 마타리 추출물 및 백화사설초 추출물은 상기 화학식 1의 올레아노닉산을 포함하는 것을 특징으로 한다.

또 다른 예는 상기 화학식 1의 올레아노닉산, 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 마타리 추출물, 백화사설초 추출물, 및 상기 추출물의 건조물 및 농축물로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 함유하는 퇴행성 신경질환 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다.

또 다른 예는 마타리 또는 백화사설초로부터 상기 화학식 1의 올레아노닉산을 분리하는 방법을 제공하는 것이다.

상기와 같은 과제를 해결하기 위하여, 본 발명은 하기 화학식 1의 올레아노닉산(oleanonic acid) 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 퇴행성 신경질환 예방 또는 치료용 조성물을 제공한다.

<화학식 1>

올레아노닉산은 아메리카와 아프리카 열대지역이 원산지인 란타나 (Lantana camara)의 주성분 중 하나이며, 국내 자생 식물중에서는 모시물통이 (Kwon HC et al., Arch. Pharm. Res. 20: 180-183, 1997), 대추 (Lee SM et al., Biol. Pharm. Bull. 27: 1883-1886, 2004), 백화사설초 (Lu H et al., Tianran Chanwu Yanjiu Yu Kaifa, 8:34-37, 1996) 및 마타리 (Choi JS et al., Arch. Pharm. Res. 7: 121-126, 1984) 등에서 분리 보고된 바 있다. 올레아노닉산의 생리활성으로는 주로 암세포독성 (Kwon HC et al., Arch. Pharm. Res. 20: 180-183, 1997), 항암작용 (Huang D et al., Cancer Lett. 233: 289-296, 2006), 자궁수축작용 (Sewram V et al., J. Pharm. Biomed. Anal. 24: 133-145, 2000), 항염증작용 (Giner-Larza EM et al., Eur. J. Pharmacol. 428: 137-143, 2001), 항보체활성 (An RB et al., Nat. Prod. Sci. 14: 249-253, 2008) 및 사상충에 대한 살충작용 (Namita M et al. Parasitol. Res. 20: 180-183, 1997) 등이 보고되었다. 또한 올레아노닉산은 올레아놀산의 산화반응을 통하여 제조될 수 있는 것으로 알려져 있다 (Araki Y et al., JP 07316188, 1995; Li J et al., CN 101298466, 2008; Ma CM et al., Chem. Pharm. Bull. 48: 1681-1688, 2000; Wen X et al., J. Med. Chem. 51: 3540-3554, 2008). 그러나 상기 올레아노닉산은 뇌세포 보호 작용, 뇌세포 생성 촉진 작용, 뇌기능 향상 효과, 기억력 증진 효과, 치매를 포함하는 퇴행성 신경질환 예방 및 치료 효과가 있는 것으로는 전혀 알려진 바가 없다.

본 발명에서는 상기 올레아노닉산이 베타-아밀로이드 생성 저해 활성이 우수함을 확인하여 (시험예 1 참조), 상기 화합물이 치매를 포함하는 퇴행성 신경질환의 예방 및/또는 치료에 유용하게 사용될 수 있음을 확인하였다.

본 발명에 따른 상기 올레아노닉산은 그 자체 또는 염의 형태, 바람직하게는 약학적으로 허용 가능한 염의 형태로 사용될 수 있다. 상기 염으로는 약학적으로 허용 가능한 유리산(free acid)에 의하여 형성된 산 부가염이 바람직하다. 상기 유리산은 유기산과 무기산을 사용할 수 있다. 상기 유기산은 이에 제한되는 것은 아니나, 구연산, 초산, 젖산, 주석산, 말레인산, 푸마르산, 포름산, 프로피온산, 옥살산, 트리플로오로아세트산, 벤조산, 글루콘산, 메타술폰산, 글리콜산, 숙신산, 4-톨루엔술폰산, 글루탄산 및 아스파르트산을 포함한다. 또한, 상기 무기산은 이에 제한되는 것은 아니나 염산, 브롬산, 황산 및 인산을 포함한다.

상기 올레아노닉산은 당업계에 공지된 추출 및 분리방법에 따라 상기 화합물이 함유된 천연물로부터 분리하거나 당업계에 공지된 합성 방법에 따라 화학적으로 합성하여 제조할 수도 있다. 이에 한정되지 않지만 바람직하게는 마타리 또는 백화사설초로부터 추출 및 분리하여 제조하거나, 올레아놀산의 산화반응을 통하여 제조할 수 있다.

또 다른 예에서, 마타리 추출물, 상기 추출물의 건조물 및 상기 추출물의 농축물로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 함유하는 치매 예방 또는 치료용 조성물이 제공된다. 또한, 백화사설초 추출물, 상기 추출물의 건조물, 및 상기 추출물의 농축물로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 함유하는 치매 예방 또는 치료용 조성물이 제공된다.

마타리과 식물(Patrinia sp.)는 국내 각처 양지에서 자라는 다년초로서 어린순을 나물로 하며, 국내에 자생하는 동속식물로서 마타리 (Patrinia scabiosaefolia), 돌마타리(Patrinia rupestris), 금마타리(Patrinia saniculaefolia) 및 뚝갈(Patrinia villosa) 등이 있다. 마타리의 전초는 민간에서 염증, 어혈 또는 고름의 치료에 사용되어 왔다 (이창복, 대한식물도감, 향문사, 713-714, 1989). 또한 상기 뚝갈의 전초 또는 마타리를 포함한 상기 동속식물의 전초는 패장이라는 생약명으로서 오종, 부종, 농, 산후복통, 장염 또는 충수염의 치료에 사용되어왔다 (김창민 외 번역, 중약대사전, 정담, 5834-5837, 1998). 그러나 본 발명의 마타리를 포함하여 상기 동속식물 돌마타리, 금마타리 및 뚝갈의 뇌세포 보호, 뇌기능향상 또는 치매 등의 퇴행성 신경질환에 대한 효능은 전혀 알려진 바 없다.

또한 본 발명의 백화사설초는 백운산밑에서 처음 발견되었기 때문에 백운풀이라고 하고 Oldenlandia diffusa 또는 Hedyotis diffusa의 두가지 학명으로 보고되었으며, 주로 국내 남부지방에 자생하고 있다. 국내에 자생하는 동속식물로서 긴잎백운풀(Hedyotis diffusa var. longipes), 낚시돌풀(Hedyotis biflora var. parvifolia) 및 탐라풀 (Hedyotis lindleyana var. hirsute)이 있고 (이창복, 대한식물도감, 향문사, 693, 1989), 이 중에서도 긴잎백운풀은 백운풀의 변종으로, 본 발명에서는 백화사설초는 백운풀(Oldenlandia diffusa)과 긴잎백운풀(Hedyotis diffusa var. longipes)을 포함하는 개념으로 사용한다. 생약명은 백화사설초로서 전초를 편도선염, 인후염, 충수염, 이질, 황달, 골반염, 부속기염, 간염, 폐렴, 부스럼, 암종 및 독사에 물린상처 등의 치료에 사용되어 왔다 사용되어왔다 (김창민 외 번역, 중약대사전, 정담, 2254-2256, 1998). 그러나 본 발명의 백화사설초(Oldenlandia diffusa 또는 Hedyotis diffusa)를 포함하여 상기 동속식물 긴잎백운풀, 낚시돌풀 및 탐라풀의 뇌세포 보호, 뇌기능향상 또는 치매 등의 퇴행성 신경질환에 대한 효능은 전혀 알려진 바 없다.

상기한 바와 같은 마타리(Patrinia saniculaefolia) 추출물과 백화사설초(Oldenlandia diffusa) 추출물에 화학식 1의 올레아노닉산이 함유된 것을 확인하고 (실시예 2 참조), 상기 추출물의 베타-아밀로이드 생성 억제 활성을 확인하였다 (시험예 2 참조).

상기 마타리(Patrinia saniculaefolia) 추출물은 이에 한정되지 않지만 뿌리 또는 뿌리를 포함하는 전초를 이용하여 당업계에 공지된 추출방법에 따라 제조될 수 있다. 또한 상기 백화사설초 추출물은 이에 한정되지 않지만 전초 또는 지상부를 이용하여 당업계에 공지된 추출방법에 따라 제조될 수 있다. 구체적으로 가열 추출법, 초음파 추출법, 여과법, 가압추출법, 환류추출법, 초임계 추출법 및 전기적 추출법 등 통상적으로 사용되는 추출법을 사용할 수 있다.

또한 필요한 경우 상기 추출 후, 당업계에 공지된 농축 또는 동결건조 방법을 추가적으로 사용할 수 있다. 본 발명에서 사용된 추출물의 건조물 또는 추출물의 농축물은 상기와 같이 공지된 방법으로 건조 또는 농축된 것을 의미한다.

상기 마타리 또는 백화사설초 추출물은 물 및 C₁ 내지 C₄의 저급알코올로 이루어진 군에서 선택된 일종 이상을 사용하여 추출함으로써 제조될 수 있다. 상기 물 또는 C₁ 내지 C₄의 저급알코올은 이에 한정되지 않지만 바람직하게는 마타리 또는 백화사설초 시료 부피의 1 내지 5배 부피로 사용될 수 있고, 추출 시간은 이에 한정되지 않지만 바람직하게는 1 내지 12시간으로 할 수 있으며 가장 바람직하게는 2 내지 5시간으로 할 수 있다.

상기 마타리 추출물 또는 백화사설초 추출물은 추가로 아세톤, 아세토니트릴, 및 C₁ 내지 C₄의 알코올로 이루어진 군에서 선택된 유기 용매와 물의 혼합 용액으로 분획하여 얻어진 분획물일 수 있다. 상기 C₁ 내지 C₄의 알코올은 메탄올일 수 있다. 상기 유기 용매와 물과의 혼합비는 부피비로 1:1 ~ 19:1 (유기용매 부피:물 부피), 바람직하게는 7:3 ~ 19:1, 보다 바람직하게는 7:1 내지 19:1, 더욱 바람직하게는 7:1 내지 11:1일 수 있다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 마타리의 뿌리를 포함한 전초 또는 백화사설초의 전초에 80 내지 100%(v/v) 농도의 메탄올을 첨가하고 감압 농축하여 메탄올 추출물을 제조할 수 있다(실시예 1 참조). 또한 상기 제조된 추출물을 C₁ 내지 C₄의 알코올, 바람직하게는 메탄올과 물을 부피비로 4:1 ~ 19:1(알코올 부피:물 부피), 바람직하게는 7:1 내지 19:1, 더욱 바람직하게는 7:1 내지 11:1로 혼합한 용매를 사용하여 역상 컬럼 크로마토그래피를 수행하여 올레아노닉산을 다량 함유하는 소분획물을 제조할 수 있다 (실시예 2 참조).

한편 본 발명의 일 실험예에서는 상기 올레아노닉산을 아밀로이드 전구체(amyloid precursor protein, APP)가 형질감염(transfection)된 HeLa 세포주에 처리한 결과, 베타-아밀로이드 생성이 효과적으로 억제되어 뇌신경세포 보호 활성이 발휘됨을 확인하였다(실험예 1 참조).

또한 본 발명의 일 실험예에서는 상기 마타리 또는 백화사설초의 메탄올 추출물을 아밀로이드 전구체(amyloid precursor protein, APP)가 형질감염(transfection)된 HeLa 세포주에 투여한 결과, 베타-아밀로이드 생성이 효과적으로 억제되어 뇌신경세포 보호 활성이 발휘됨을 확인하였다(실험예 2 참조).

이상 살펴본 바와 같이, 상기 올레아노닉산은 치매 특히 알츠하이머병의 원인물질로 알려진 베타-아밀로이드(Aβ40, Aβ42)의 생성을 효과적으로 억제할 수 있는 활성을 가지고 있어, 치매 예방 또는 치료용 약학적 조성물의 유효한 성분으로 사용될 수 있다. 또한 상기 마타리 추출물 또는 백화사설초 추출물도 올레아노닉산을 함유하고 있으며, 치매 특히 알츠하이머병의 원인물질로 알려진 베타-아밀로이드(Aβ40, Aβ42)의 생성을 효과적으로 억제할 수 있는 활성을 가지고 있어, 치매 예방 또는 치료용 약학적 조성물의 유효한 성분으로 사용될 수 있다.

본 발명의 퇴행성 신경질환은 신경, 특히 뇌신경의 퇴행에 의하여 발생하는 모든 질환을 포함하며, 예컨대, 치매(dementia), 파킨슨병(Parkinson's disease), 알츠하이머병(Alzheimer's disease), 헌팅톤병(Huntington's disease), 픽병(Pick's Disease), 및 파킨슨-ALS(amyotrophic lateral sclerosis)-치매 복합증 등으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있다. 본 발명의 구체예에서, 상기 퇴행성 신경 질환은 치매, 특히 알츠하이머병일 수 있다.

상기 조성물 내의 유효성분으로서의 상기 올레아노닉산의 함량은 사용 형태 및 목적, 환자 상태, 증상의 종류 및 경중 등에 의하여 적절하게 조절할 수 있으며, 조성물 중량 기준으로 0.00001 내지 99.9 중량%, 바람직하게는 0.001 내지 50 중량%일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.

또한 본 발명에 따른 약학적 조성물 내의 유효성분으로서의 마타리 또는 백화사설초 추출물의 함량도 사용 형태 및 목적, 환자 상태, 증상의 종류 및 경중 등에 의하여 적절하게 조절할 수 있으며, 고형분 중량 기준으로 0.001 내지 99.9 중량%, 바람직하게는 0.1 내지 50 중량%일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. 상기 '고형분 중량'은 추출물 중 용매 성분을 제거하고 남은 성분의 중량을 말한다.

본 발명의 약학적 조성물은 인간을 포함하는 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여 방식은 통상적으로 사용되는 모든 방식일 수 있으며, 예컨대, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내 (intracerebroventricular) 주사에 의해 투여될 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 경피제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태의 비경구 제형 등으로 제형화하여 사용될 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물은 상기 올레아노닉산 또는 상기 마타리 추출물 또는 백화사설초 추출물 이외에 약제학적으로 적합하고 생리학적으로 허용되는 담체, 부형제 및 희석제 등의 보조제를 추가로 함유하는 것일 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용할 수 있다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형 제제는 상기 올레아노닉산 또는 상기 마타리 추출물 또는 상기 백화사설초 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제, 경피제 등이 포함된다. 비수성용제, 현탁 제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈 (tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물은 인간에게 단독으로 투여될 수 있으나, 일반적으로 투여방식과 표준 약제학적 관행(standard phamaceutical practice)을 고려하여 선택된 약제학적 담체와 혼합되어 투여될 수 있다. 예를 들면, 본 발명의 약학적 조성물은 전분 또는 락토오즈를 함유하는 정제 형태로, 또는 단독 또는 부형제를 함유하는 캡슐 형태로, 또는 맛을 내거나 색을 띄게 하는 화학 약품을 함유하는 엘릭시르 또는 현탁제 형태로 경구, 구강내 또는 혀밑 투여될 수 있다. 이러한 액체 제제는 현탁제(예를 들면, 메틸셀룰로오즈, 위텝솔(witepsol)과 같은 반합성 글리세라이드 또는 행인유(apricot kernel oil)와 PEG-6 에스테르의 혼합물 또는 PEG-8과 카프릴릭/카프릭 글리세라이드의 혼합물과 같은 글리세라이드 혼합물)와 같은 약제학적으로 허용 가능한 첨가제와 함께 제형화될 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물의 투여 용량은 환자의 나이, 몸무게, 성별, 투여형태, 건강상태 및 질환 정도에 따라 달라질 수 있으며, 의사 또는 약사의 판단에 따라 일정 시간간격으로 1일 1회 내지 수회로 분할 투여할 수도 있다. 예컨대, 유효성분 함량을 기준으로 1일 투여량이 0.5 내지 50㎎/kg, 바람직하게는 1 내지 30㎎/kg일 수 있다. 상기한 투여량은 평균적인 경우를 예시한 것으로서 개인적인 차이에 따라 그 투여량이 높거나 낮을 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물의 1일 투여량 이 상기 투여 용량 미만이면 유의성 있는 효과를 얻을 수 없으며, 그 이상을 초과하는 경우 비경제적일 뿐만 아니라 상용량의 범위를 벗어나므로 바람직하지 않은 부작용이 나타날 우려가 발생할 수 있으므로, 상기 범위로 하는 것이 바람직하다.

또 다른 예에 있어서, 상기 화학식 1의 올레아노닉산, 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 마타리 추출물, 백화사설초 추출물, 및 상기 추출물의 건조물 및 농축물로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 함유하는 치매 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다.

상기 식품 조성물은 일반 식품, 기능성 식품(functional food), 영양보조제(nutritional supplement), 건강 식품(health food) 및 식품 첨가제(food additives) 등의 모든 형태를 포함한다. 상기 유형의 식품 조성물은 당업계에 공지된 통상적인 방법에 따라 다양한 형태로 제조할 수 있다.

예를 들면, 건강 식품으로는 상기 올레아노닉산 또는 상기 마타리 또는 상기 백화사설초 추출물 자체를 차, 쥬스 및 드링크의 형태로 제조하여 음용하도록 하거나, 과립화, 캡슐화 및 분말화하여 섭취할 수 있다. 또한, 상기 올레아노닉산 또는 상기 마타리 추출물 또는 상기 백화사설초 추출물과 치매 개선 효과가 있다고 알려진 공지의 활성 성분과 함께 혼합하여 조성물의 형태로 제조할 수 있다.

또한, 식품 조성물로는 음료(알콜성 음료 포함), 과실 및 그의 가공식품(예: 과일통조림, 병조림, 잼, 마아말레이드 등), 어류, 육류 및 그 가공식품(예: 햄, 소시지 콘비이프 등), 빵류 및 면류(예: 우동, 메밀국수, 라면, 스파게이트, 마카로니 등), 과즙, 각종 드링크, 쿠키, 엿, 유제품(예: 버터, 치이즈 등), 식용식물 유지, 마아가린, 식물성 단백질, 레토르트 식품, 냉동식품, 각종 조미료(예: 된장, 간장, 소스 등) 등에 상기 올레아노닉산 또는 상기 마타리 추출물 또는 상기 백화사설초 추출물을 첨가하여 제조할 수 있다.

또한, 상기 올레아노닉산 또는 상기 마타리 추출물 또는 상기 백화사설초을 식품 첨가제의 형태로 사용하기 위해서는 분말 또는 농축액 형태로 제조하여 사용할 수 있다.

본 발명의 식품 조성물 중 상기 올레아노닉산 또는 상기 마타리 추출물 또는 상기 백화사설초 추출물의 바람직한 함유량으로는 식품 100g당 약 0.001∼20g이다. 바람직하게는, 본 발명에서의 상기 올레아노닉산 또는 상기 마타리 추출물 또는 상기 백화사설초 추출물을 유효성분으로 함유하는 식품 조성물은 특히, 치매 개선 효과가 있는 것으로 알려진 활성 성분과 함께 혼합하여 건강 식품의 형태로 제조할 수 있다.

또한, 마타리 또는 백화사설초로부터 올레아노닉산을 제조하는 방법을 제공한다. 상기 제조 방법은 다음의 단계를 포함할 수 있다:

(a) 마타리 또는 백화사설초를 물 및 C₁ 내지 C₄의 저급알코올로 이루어진 군에서 선택된 일종 이상을 사용하여 추출하는 단계; 및

(b) 상기 (a) 단계에서 제조된 추출물에 아세톤, 아세토니트릴 및 메탄올로 이루어진 군에서 선택된 유기용매와 물을 부피비로 1:1 ~ 19:1 (유기용매 부피:물 부피), 바람직하게는 7:3 ~ 19:1, 보다 바람직하게는 7:1 내지 19:1, 더욱 바람직 하게는 7:1 내지 11:1로 혼합한 용매를 사용하여 역상 컬럼 크로마토그래피를 수행하는 단계

를 포함할 수 있다.

상기한 바와 같이, 단계 (a)는 80 내지 100%(v/v) 농도의 메탄올을 추출 용매로 하여 수행되는 것일 수 있고, 단계 (b)는 C₁ 내지 C₄의 알코올, 바람직하게는 메탄올과 물을 부피비로 4:1 ~ 19:1(알코올 부피:물 부피), 바람직하게는 7:1 내지 19:1, 더욱 바람직하게는 7:1 내지 11:1로 혼합한 용매를 사용하는 역상 컬럼 크로마토그래피에 의하여 수행되는 것일 수 있다.

이와 같은 단계를 수행하면 화학식 1의 올레아노닉산 또는 올레아노닉산을 다량 함유하는 소분획물이 얻어진다.

또한 올레아노닉산은 시판하는 올레아놀산을 아세톤, 염화메틸렌 및 피리딘 중 선택된 일종의 용매에 녹인 후, 크롬산 및 피리디늄-크롬계 산화제 등의 산화크롬(VI)을 기반으로 하는 산화제 또는 과망간산염을 사용하는 산화반응을 통하여 제조될 수 있다 (Araki Y et al., JP 07316188, 1995; Li J et al., CN 101298466, 2008; Ma CM et al., Chem. Pharm. Bull. 48: 1681-1688, 2000; Wen X et al., J. Med. Chem. 51: 3540-3554, 2008).

이상 살펴본 바와 같이, 본 발명에서의 올레아노닉산 또는 이를 함유하는 마 타리 추출물 또는 백화사설초 추출물은 치매 특히 알츠하이머병의 원인물질로 알려진 베타-아밀로이드의 생성을 억제할 수 있어, 이를 유효성분으로 함유하는 본 발명의 조성물은 치매의 예방 또는 치료에 효과적으로 사용될 수 있다.

이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다.

단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.

< 실시예 1> 마타리 또는 백화사설초 추출물의 제조

<1-1> 마타리 메탄올 추출물의 제조

마타리 (Patrinia scabiosaefolia) 전초를 건조하여 제조된 시료 200g을 세절한 후 추출 용기에 넣은 다음, 95%(v/v) 메탄올을 상기 시료 부피의 2배로 가한 후 3시간 동안 환류추출하고 상온에서 식힌 후, 여과하였다. 상기 여과된 추출액을 용매가 완전히 증발할 때까지 감압 하에 40℃에서 농축기를 사용하여 농축함으로써, 에탄올 추출물 50g을 수득하였다.

<1-2> 백화사설초 메탄올 추출물의 제조

건조된 백화사설초 (Oldenlandia diffusa) 시료(전초) 200g을 세절한 후 상기 실시예 <1-1>에서와 같은 방법으로 추출하여 백화사설초 메탄올 추출물 30g을 수득하였다.

< 실시예 2> 화합물의 분리 및 동정

상기 실시예 1에서 수득한 마타리 추출물 또는 백화사설초 추출물을 메탄올과 물을 부피를 기준으로 9:1의 비율로 혼합한 혼합용액을 용리액으로 사용하고 C18 역상 컬럼을 이용하는 고속유체크로마토그래피 분리법을 통하여 유효 화합물을 정제하였다. 상기 수행 결과, 마타리 메탄올 추출물 또는 백화사설초 메탄올 추출물 200g으로부터 머무름시간 12분에 해당하는 화합물을 상기 마타리 추출물 및 백화사설초 추출물 각각에 대하여 10mg (0.005%)수율 및 2 mg (수율 0.001%)을 정제하였다.

상기 정제된 화합물의 구조를 동정하기 위하여 NMR 분석 및 질량 분석을 실시하였다.

구체적으로 분자량 및 분자식은 Agilent 1100 고속유체크로마토그래피-질량 분광계(HPLC-ESI-MS)를 이용한 MS 측정을 통하여 분자량을 456으로 결정하였으며, 핵자기공명기(Varian 500 ㎒ NMR)를 이용한 ¹H NMR 스펙트럼(도 2 참조)을 기존문헌과 비교하여 (An RB et al. Nat. Prod. Sci. 14: 249-253, 2008), 그 구조를 하기 화학식 1과 같이 올레아노닉산으로 동정하였으며, 구체적인 분석결과는 다음과 같다

<화학식 1>

백색 분말상; 분자식 C₃₀H₄₈NO₃; ESI-MS: m/z 479 [M+Na]⁺;

¹H NMR (500 MHz, CDCl₃): δ 5.33 (1H, br t, J = 3.0 Hz, H-12), 2.85 (1H, br dd, J = 14.0, 4.0, H-18), 2.55 (1H, ddd, J = 16.0, 11.0, 7.0 Hz, H₂-2), 2.37 (1H, ddd, J = 16.0, 7.0, 3.5 Hz, H₂-2), 1.89 (1H, br ddd, J = 14.0, 7.0, 3.5 Hz, H₂-1), 1.43 (1H, br ddd, J = 14.0, 11.0, 7.0 Hz, H₂-1), 1.65 (1H, m, H₂-19), 1.18 (1H, m, H₂-19), 1.16 (3H, s, H₃-27), 1.07 (3H, s, H₃-23), 1.06 (3H, s, H₃-25), 1.05 (3H, s, H₃-24), 0.95 (3H, s, H₃-30), 0.92 (3H, s, H₃-29), 0.84 (3H, s, H₃-26)

< 실험예 1>

올레아노닉산의 베타-아밀로이드(β- amyloid ) 생성 억제 효과

상기 실시예 2에서 수득한 올레아노닉산의 베타-아밀로이드 생성 억제 효과를 알아보기 위하여, 인간에서 유래된 아밀로이드 전구체(amyloid precursor protein, APP)가 형질감염(transfection)된 HeLa 세포주를 DMEM 배양액 (Cat. # 11995, Gibco, USA)에서 배양하여 사용하였다. 이 세포주는 김태완 교수 (Prof. Tae-Wan Kim, Department of Pathology, Columbia University Medical Center, New York, NY10032, USA)로부터 제공받았다.

구체적으로 상기 세포주가 배양된 세포 배양액에 상기 실시예 2에서 수득한 올레아노닉산을 하기 표 1의 첨가량으로 첨가한 다음, 8시간 동안 37℃에서 배양하고 배양액에 분비된 베타-아밀로이드(β-amyloid)의 양을 측정하였다. 두 가지 유형의 베타-아밀로이드(Aβ40, Aβ42)를 정량하기 위하여 Human β-Amyloid[1-40](Aβ40), Human β-Amyloid [1-42](Aβ42) Colorimetric ELISA 키트를 각각 사용하였다(#KHB3482 및 #KHB3442; BioSource International, Inc., 미국). 상기 베타-아밀로이드(β-amyloid)의 양의 측정 결과를 하기 표 1 및 도 1에 기재하였다. 이때 올레아노닉산을 첨가하지 않은 경우를 음성대조군으로 하였다.

올레아노닉산의 베타-아밀로이드 생성 억제 효과

올레아노닉산의 첨가 농도(μg/ml)	50	25	10	5
음성대조군 (100 %) 대비 Aβ42 생성량(%)	8.3±1.43	21.1±1.15	43.6±2.30	72.3±3.16
음성대조군 (100%) 대비 Aβ40 생성량(%)	29.4±1.24	77.1±1.24	97.5±0.57	103.0±0.01

상기 표 1 및 도 1에 기재된 바와 같이, 올레아노닉산에 의하여, 베타-아밀로이드(Aβ40, Aβ42)의 생성이 농도 의존적으로 억제됨을 알 수 있다.

< 실험예 2> 마타리 추출물 및 백화사설초 추출물의 베타-아밀로이드(β-amyloid) 생성 억제 효과

<2-1> 마타리 추출물의 베타-아밀로이드(β- amyloid ) 생성 억제 효과

상기 실시예 <1-1>에서 수득한 마타리 추출물을 하기의 표 2와 같은 농도로 상기 실험예 1과 동일한 방법으로 시험하여, 베타-아밀로이드(Aβ40, Aβ42)의 생성량을 정량하였다. 얻어진 결과를 표 2에 기재하였다.

마타리 추출물의 베타-아밀로이드 생성 억제 효과

마타리 추출물의 농도 (μg/ml)	200	100	50
음성대조군 (100%) 대비 Aβ42 생성량 (%)	42.0±2.70	66.86±4.43	94.0±3.08
음성대조군 (100%) 대비 Aβ40 생성량(%)	37.1±1.36	70.9±2.38	82.7±1.67

상기 표 2에 기재한 바와 같이, 마타리 추출물에 의하여, 베타-아밀로이드(Aβ40, Aβ42)의 생성이 농도 의존적으로 억제됨을 알 수 있다.

<2-2> 백화사설초 추출물의 베타-아밀로이드(β- amyloid ) 생성 억제 효과

상기 실시예 <1-2>에서 수득한 백화사설초 추출물을 하기의 표 3과 같은 농도로 상기 실험예 1과 동일한 방법으로 시험하여, 베타-아밀로이드(Aβ40, Aβ42)의 생성량을 정량하였다. 그 결과를 표 3에 기재하였다.

백화사설초 추출물의 베타-아밀로이드 생성 억제 효과

백화사설초 추출물의 농도 (μg/ml)	200	100	50
음성대조군 (100%) 대비 Aβ42 생성량 (%)	65.4±6.46	83.23±8.28	98.2±5.70
음성대조군 (100%) 대비 Aβ40 생성량(%)	72.0±2.10	94.0±3.08	98.5±4.34

상기 표 3에 기재한 바와 같이, 백화사설초 추출물에 의하여, 베타-아밀로이드(Aβ40, Aβ42)의 생성이 농도 의존적으로 억제될 수 있음을 알 수 있다.

도 1은 올레아노닉산의 첨가 농도에 따른 베타-아밀로이드(Aβ40, Aβ42) 생성 억제 효과를 측정한 그래프이다.

도 2는 올레아노닉산의 500 MHz NMR에서 CDCl₃용매를 사용하여 측정한 ¹H NMR 스펙트럼을 나타낸 도이다.

Claims

하기 화학식 1의 올레아노닉산 (oleanonic acid) 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 퇴행성 신경질환 예방 또는 치료용 조성물:

<화학식 1>
마타리(Patrinia scabiosaefolia) 추출물, 상기 추출물의 건조물, 및 상기 추출물의 농축물로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 유효성분으로 함유하는 퇴행성 신경질환 예방 또는 치료용 조성물.
백운풀(Oldenlandia diffusa) 및 긴잎백운풀(Hedyotis diffusa var. longipes)로 이루어진 군에서 선택된 백화사설초 추출물, 상기 추출물의 건조물, 및 상기 추출물의 농축물로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 유효성분으로 함유하는 퇴행성 신경질환 예방 또는 치료용 조성물.
제2항 또는 제3항에 있어서, 상기 마타리 추출물 또는 백화사설초 추출물은 물 및 C₁ 내지 C₄의 알코올로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 사용하여 추출된 것인 퇴행성 신경질환 예방 또는 치료용 조성물.
제4에 있어서, 상기 마타리 추출물 또는 백화사설초 추출물은 아세톤, 아세토니트릴, 및 C₁ 내지 C₄의 알코올로 이루어진 군에서 선택된 유기용매와 물이 부피비로 1:1 내지 19:1 (유기용매 부피:물 부피)로 혼합된 혼합 용액으로 추가로 분획하여 얻어진 분획물인 퇴행성 신경질환 예방 또는 치료용 조성물.
제4에 있어서, 상기 마타리 추출물 또는 백화사설초 추출물은 C₁ 내지 C₄의 알코올과 물이 부피비로 4:1 내지 19:1(알코올 부피:물 부피)로 혼합된 혼합 용액으로 추가로 분획하여 얻어진 분획물인 퇴행성 신경질환 예방 또는 치료용 조성물.
제2항 또는 제3항에 있어서, 상기 마타리 추출물 또는 백화사설초 추출물은 하기 화학식 1로 표시되는 올레아노닉산(oleanonic acid)을 함유하는 것인, 퇴행성 신경질환 예방 또는 치료용 조성물:

<화학식 1>
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 퇴행성 신경질환은 치매(dementia), 파킨슨병(Parkinson's disease), 알츠하이머병(Alzheimer's disease), 헌팅톤병(Huntington's disease), 픽병(Pick's Disease), 및 파킨슨-ALS(amyotrophic lateral sclerosis)-치매 복합증으로 이루어진 군에서 선택된 것인, 퇴행성 신경질환 예방 또는 치료용 조성물.
하기 화학식 1의 올레아노닉산(oleanonic acid) 및 이의 약학적으로 허용 가능한 염;

마타리(Patrinia scabiosaefolia) 추출물, 상기 추출물의 건조물, 및 상기 추출물의 농축물; 및

백운풀(Oldenlandia diffusa) 및 긴잎백운풀(Hedyotis diffusa var. longipes)로 이루어진 군에서 선택된 백화사설초 추출물, 상기 추출물의 건조물, 및 상기 추출물의 농축물

로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 함유하는 퇴행성 신경질환 예방 또는 개선용 식품 조성물:

<화학식 1>
제9항에 있어서, 상기 마타리 추출물 또는 백화사설초 추출물은 물 및 C₁ 내지 C₄의 알코올로 이루어진 군에서 선택된 일종 이상을 사용하여 추출된 것인 퇴행성 신경질환 예방 또는 개선용 식품 조성물.
제10에 있어서, 상기 마타리 추출물 또는 백화사설초 추출물은 아세톤, 아세토니트릴, 및 C₁ 내지 C₄의 알코올로 이루어진 군에서 선택된 유기용매와 물이 부피비로 1:1 내지 19:1 (유기용매 부피:물 부피)으로 혼합된 혼합 용액으로 추가로 분획하여 얻어진 분획물인, 퇴행성 신경질환 예방 또는 개선용 식품 조성물.
제10에 있어서, 상기 마타리 추출물 또는 백화사설초 추출물은 C₁ 내지 C₄의 알코올과 물이 부피비로 4:1 내지 19:1(알코올 부피:물 부피)으로 혼합된 혼합 용액으로 추가로 분획하여 얻어진 분획물인 퇴행성 신경질환 예방 또는 개선용 식품 조성물.
(a) 백운풀(Oldenlandia diffusa) 및 긴잎백운풀(Hedyotis diffusa var. longipes)로 이루어진 군에서 선택된 백화사설초. 또는 마타리(Patrinia scabiosaefolia)를 물 및 C₁ 내지 C₄의 저급알코올로 이루어진 군에서 선택된 일종 이상을 사용하여 추출하는 단계; 및

(b) 상기 단계 (a)에서 제조된 추출물에 아세톤, 아세토니트릴, 및 C₁ 내지 C₄의 알코올로 이루어진 군에서 선택된 유기용매와 물을 부피비로 1:1 ~ 19:1 (유기용매 부피:물 부피)로 혼합한 혼합 용액을 사용하여 역상 컬럼 크로마토그래피를 수행하는 단계

를 포함하는 화학식 1의 올레아노닉산(oleanonic acid)의 제조 방법:

<화학식 1>