KR20110025178A - Ｐｍ00104 및 다른 항종양제를 이용한 복합 치료법 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 PM00104와 다른 항종양 약물의 복합제, 암을 치료하는데 있어서의 이들 복합제의 용도에 관한 것이다.
Description
본 발명은 PM00104와 다른 항암 약물, 특히 항종양 백금 배위 착화합물, 항대사산물, 유사분열 억제제, 안트라사이클린, 국소이성화효소(topoisomerase) I 및/또는 II 억제제, 항종양 모노클로날 항체, mTOR 억제제, 및 티로신 키나아제 억제제 중에서 선택되는 다른 항암 약물과의 복합제에 관한 것이다.
암은 신체 일부의 세포들이 제어되지 않은 채로 성장할 때 발생한다. 암에는 여러가지 유형이 있지만, 이들 모두는 비정상적인 세포들의 통제되지 않은 성장에서 비롯된다. 암세포들은 주변 조직에 침투하여 혈류와 신체의 다른 부분의 임파계를 통해 퍼질 수 있다. 암의 주요한 유형에는 몇 가지가 있다. 암종(carcinoma)은 통제되지 않은 채 비정상적인 성장을 거듭하는 악성 신생물로서 상피 세포로부터 유래한다. 상피 세포는 장기, 도관 내벽 및 기타 소강(small cavities)을 비롯한 신체 내외부 표면을 덮고 있다. 육종(sarcoma)은 뼈, 연골, 지방, 근육, 혈관, 또는 기타 연결 조직 또는 지지 조직의 세포에서 발생하는 암이다. 백혈병은 골수와 같은 혈액 형성 조직으로부터 발생하는 암으로서, 생성 및 혈류 내로 유입될 다수의 비정상적인 혈액 세포를 유발한다. 임파종과 다발성 골수종은 면역계의 세포로부터 발생하는 암이다.
이에 더하여, 암은 침습적이며 주변 조직에 침윤하여 전이를 일으킨다. 이것은 주변 조직 내로 곧바로 확산될 수 있으며 림프계와 순환계를 통하여 신체의 다른 부분으로 퍼질 수 있다.
외과수술 및 질병 국소화를 위한 방사능 요법, 화학 요법 등 암을 치료하기 위하여 여러가지 처치 수단을 이용할 수 있다. 그러나, 여러가지 암 유형에 대하여 이용가능한 처리법의 효능은 제한적이므로, 임상적으로 효과가 있는 새롭고 개선된 유형의 처리법이 요구되고 있다. 이는 질병이 깊어지고 및/또는 전이성 질환을 나타내는 환자들과, 이전에 확립된 치료법으로 치료받은 바 있으나 그에 대한 내성 획득 또는 관련된 독성으로 인한 약물 투여의 제한으로 인해 그 치료가 효과가 없어지거나 더 이상 관용하지 못하게 되어, 질병의 진행과 재발을 겪는 환자에게서 특히 그러하다.
1950년대 이래로, 암의 화학치료법은 크게 발전하였다. 불행히도, 전체 암 환자의 50% 이상은 초기 치료법에 응답하지 않거나 치료에 대한 초기 응답 후 재발을 경험하여 종국적으로 진행성 전이 질환으로 사망한다. 따라서, 새로운 항암제의 설계와 발견을 위한 지속적인 노력이 극히 중요하다.
이상적인 항종양 약물은 암세포만을 선택적으로 죽이고 비암세포에 대한 독성에 대해 광범위한 인덱스를 갖는 한편, 장기간 그 약물에 노출되는 경우에도, 암세포에 대한 효능을 견지할 수 있어야 한다. 불행히도, 공지 약물을 이용하는 현행 화학요법 중 어느 것도 이러한 이상적인 프로파일을 제공하지 못하고 있다. 대부분은 매우 좁은 치료 인덱스를 가지며, 이에 더하여, 이들 화학요법제의 약간의 준치사농도에 암세포가 노출도리 경우 이러한 약제에 내성을 일으켜서 수종의 다른 항종양제에 대하여 교차내성을 종종 일으키게 된다.
PM00104는 조루마이신과 레니에라마이신과 연관된 알칼로이드로서 사프라신과 사프라마이신 화합물에도 관계된 것이다. 조루마이신은 태평양 갯민숭달팽이 (Pacific nudibranch) 조루나 퓨네브리스(Jorunna funebris)의 점막과 피부로부터 분리된 천연 화합물이다(Fontana A., et al ., Tetrahedron (2000), 56, 7305-8). 또한, 레니에라마이신과는 해면 및 피낭류로부터 분리되는 것으로 보고되어 있다 (James M.F. et al . J. Am. Chem. Soc. (1982), 104, 265-269; Oku N., et al . Journal Natural Products (2003), 66, 1136-9). 사프라신과 사프라마이신 화합물은 문헌 Manzanares I., et al . Curr. Med. Chem. Anti-Cancer Agents (2001), 1, 257-276 및 WO 00/18233과 WO 01/87894에 기재되어 있다.
PM00104는 고형 종양 세포주와 비고형 종양 세포주에 대하여 유의적인 시험관내 활성을 나타내며 또한 유방 및 전립선과 같은, 마우스 내의 수종의 이종이식된 인간 세포주에서도 유의적인 생체내 활성을 나타낸 것으로 입증된 바 있다. PM00104의 작용 메카니즘에 대한 예비 연구 결과 세포 주기 변화, DNA 결합 특성 및 전사 억제를 나타내는 것으로 밝혀졌다. 이 화합물은 다음의 화학 구조식을 갖는다:
PM00104에 관한 상세는 WO 01/87894에서 찾아볼 수 있다. 이에 더하여, WO 2007/052076 및 WO 2008/135792에는 PM00104의 의약 조성물과 투여량 및 투여 스케쥴 등에 대하여 상세히 설명되어 있으며 이들 문헌은 모두 본 발명에 참고로 통합되었다.
암은 동물과 인간에 있어서 주요한 사망 원인이기 때문에 암에 걸린 환자들에게 투여될 안전하고도 효과적인 치료법을 달성하기 위해 다양한 연구가 행해져 왔고 현재도 연구가 진행되고 있다. 본 발명이 해결하고자 하는 과제는 암 치료에 유용한 항암 요법을 제공하는 데 있다.
발명의 개요
본 발명은 PM00104가 다른 항암제, 특히 항종양 백금 배위 착화합물, 항대사산물, 유사분열 억제제, 안트라사이클린, 국소이성화효소(topoisomerase) I 및/또는 II 억제제, 항종양 모노클로날 항체, mTOR 억제제, 및 티로신 키나아제 억제제 중에서 선택된 다른 항암제의 항종양 활성을 증강시키는 것과 이에 따라, PM00104와 다른 항암제들의 암 치료용 복합 요법에 있어서의 성공적 사용을 확립하여준다.
따라서, 본 발명은 복합 요법용 의약을 제조하는데 있어서의 PM00104의 용도, 의약 조성물, 키트, 복합 요법을 이용한 암 치료법에 관한 것이다.
본 발명의 한가지 구체예에 따라, 본 발명자들은 PM00104 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염과, 다른 항암 약물의 사용에 기반하여, 암 치료를 위한 효과적인 복합 요법을 제공한다.
또 다른 실시 상태에서, 본 발명은 치료적 유효량의 PM00104, 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염과, 치료적 유효량의 다른 항암 약물을 PM00104의 투여 전, 투여 중, 또는 투여 후에, 치료를 요하는 환자에게 투여하는 것을 포함하여 이루어지는 암의 치료 방법을 포괄한다. 이들 두가지 약물은 동일한 조성물의 일부를 구성할 수도 있고, 동시에 또는 이시(異時)에 투여될 별개 조성물로서 제공될 수도 있다.
또 다른 실시 상태에서, 본 발명은 암 치료에 있어서 항암 약물의 치료 효능을 증가 또는 증강시키는 방법을 포괄하며, 이 방법은 치료를 필요로 하는 환자에게 PM00104 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염의 치료적 유효량을 투여하는 것을 포함하여 이루어진다. PM00104는 다른 항암 약물의 투여 전, 투여 중 또는 투여 후에 투여된다.
또 다른 실시 상태에서, 본 발명은 다른 항암 약물과의 복합 요법용 암 치료를 위한 의약 제조에 있어서의, PM00104, 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염의 용도를 포괄한다.
또 다른 실시 상태에서, 본 발명은 PM00104, 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염, 및/또는 다른 항암 약물 및 약학적으로 허용가능한 담체 또는 부형제를 포함하는, 암 치료를 위한 복합 요법에 사용될 의약 조성물을 포함한다.
본 발명은 또한 PM00104, 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염의 투여 제형 및/또는 다른 항암 약물의 투여 제형, 및 이 두가지 약물의 복합 사용을 위한 지침서를 포함하는, 암 치료용 키트를 포괄한다.
바람직한 한가지 구체예에서, 본 발명은 PM00104, 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염와 다른 항암 약물과의 상승적 복합제에 관한 것이다.
발명의 상세한 설명
본 발명자들은 PM00104가 다른 항암 약물과 함께 병용될 경우, 이들 다른 항암 약물들의 항암 활성을 크게 증강시킨다는 것을 발견하였다. 따라서, 본 발명은 PM00104, 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염과, 다른 항암 약물과의 복합 사용에 기반한, 암의 효과적인 치료방법에 관한 것이다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 PM00104, 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염과, 다른 항암 약물을 사용하는데 따른 상승적 복합제에 관한 것이다. 이러한 상승적 복합제는 실시예 1 내지 24에 설명된 방법론의 적용 및 상승적 복합제에 대한 결과를 분석함으로써 달성될 수 있다.
본 발명에서 "암(cancer)"이라 함은 종양(tumors), 신생물(neoplasias) 및 악성 조직 또는 세포를 유발하는 기타 악성 질환을 포괄하는 것이다.
본 발명에서 "치료하다/처리하다"라는 용어는 달리 언급하지 않는 한, 질환의 증상이나 병인을 역전, 완화, 진행 억제, 약화시키거나, 또는 이러한 질환 또는 병태를 예방하거나, 이러한 증상이나 질환의 병태의 한 가지 이상의 증상을 예방하는 것을 의미한다. 본 발명에서 "치료/처리"라는 용어는 달리 언급하지 않는 한, 전술한 "치료하다/처리하다"라는 행위를 가리키는 것이다.
"병용/복합(combination)"이라는 용어는 본 발명 명세서 전반에 걸쳐, 암을 앓는 환자에게 상기 명시한 치료제들을 동일 또는 별개의 약학적 포뮬레이션으로서, 동시에 또는 서로 다른 시간에 투여하는 것을 포함한다. 서로 다른 시간에 치료제들을 투여할 경우, 증강 또는 상승 반응이 제공되는데 충분히 근접한 시간 이내에 투여되어야만 한다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 PM00104, 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염을 다른 항암 약물과 사용하는 병용 요법에 의해, 암을 효과적으로 치료하기 위한 약제의 제조에 사용하기 위한, PM00104, 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염의 용도에 관한 것이다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 치료를 필요로 하는 환자에게 PM00104, 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염를, 치료적 유효량의 다른 항암 약물과 복합적으로 투여하는 것을 포함하여 이루어지는, 암의 치료 방법에 관한 것이다.
종양의 유형과 질병의 진행 상태에 따라, 본 발명의 치료 방법의 항암 효과로는 종양 성장의 억제, 종양 성장 지연, 종양 퇴행, 종양 수축, 종양 크기 및/또는 종양 마커의 감소, 질병의 진행 속도 완화, 및 전이 방지를 들 수 있으나 이에 한정되지 않는다. 본 발명의 치료 방법을 인간 환자와 같은, 치료를 필요로 하는 환자에게 적용할 경우, 상기 치료 방법에 의하여 예컨대, 항암 효과의 정도, 반응 속도, 질병 진행에 걸리는 시간 또는 생존률에 의해 측정되는 바와 같이 항암 효과를 나타낼 것이다. 특히, 본 발명의 치료 방법은 인간 환자에 적합하며, 특히 이전의 화학요법에 불응성이거나 질병이 재발하는 환자에 있어서 특히 적합하다. 주치료법(first line therapy) 역시도 고려된다.
전술한 바와 같이, PM00104는 해양 화합물인 조루마이신과 레니에라마이신에 관한 것이며, 사프라신과 사프라마이신 화합물에도 관한 것으로서, 다음 구조식을 갖는다:
본 발명에서 "PM00104"이라는 용어에는 환자에게 투여될 경우 본 명세서에 설명된 바와 같은 상기 화합물을 (직접 또는 간접적으로) 제공할 수 있는, 약학적으로 허용가능한 모든 염, 용매화합물, 수화물, 전구약물 또는 기타 화합물이 모두 포괄된다. 염, 용매화합물, 수화물 및 전구약물은 본 발명이 속한 기술 분야에 알려지 방법에 의해 제조할 수 있다.
약학적으로 허용가능한 염은 염기성 또는 산성 부분을 함유하는 모화합물로부터 통상적인 화학적 방법에 의해 합성될 수 있다. 일반적으로, 이러한 염은 예컨대 이들 화합물의 유리산 또는 유리 염기 형태를 물 또는 유기 용매 또는 이들 양자의 혼합물 중에서 화학량론적 양의 적절한 염기 또는 산과 반응시킴으로써 제조한다. 일반적으로, 에테르, 에틸 아세테이트, 에탄올, 이소프로판올 또는 아세토니트릴과 같은 비수성 매질이 바람직하다. 산부가염의 예로는 예컨대 히드로클로라이드, 히드로브로마이드, 히드로요오다이드, 설페이트, 니트레이트, 포스페이트와 같은 무기산 부가염, 및 예컨대 아세테이트, 트리플루오로아세테이트, 말리에이트, 푸마레이트, 시트레이트, 옥살레이트, 숙시네이트, 타르트레이트, 말레이트, 만델레이트, 메탄설폰네이트 및 p-톨루엔설포네이트와 같은 유기산 부가염을 들 수 있다. 알칼리 부가염의 예로는 예컨대 소듐, 포타슘, 칼슘 및 암모늄염과 같은 무기염, 및 예컨대 에틸렌디아민, 에탄올아민, N,N-디알킬렌에탄올아민, 트리에탄올아민 및 염기성 아미노산 염과 같은 유기 알칼리염을 들 수 있다.
PM00104의 전구약물 역시 모두 본 발명의 정신과 범위에 포함된다. 본 발명에서 "전구약물"이라는 용어는 생체내에서 PM00104로 전환되는 유도체들을 모두 포괄하는 최광의로 사용된다. 전구약물은 가수분해되거나, 산화되거나 또는 생물학적 조건하에서 반응하여 PM00104를 제공할 수 있다. 전구약물의 예로는, 생물가수분해가능한 아미드, 생물가수분해가능한 에스테르, 생물가수분해가능한 카바메이트, 생물가수분해가능한 카보네이트, 생물가수분해가능한 유레이드(ureides) 및 생물가수분해가능한 포스페이트 유사체와 같은 생물가수분해가능한 부분을 포함하는 PM00104의 유도체 및 대사산물을 들 수 있으나 이에 한정되지 않는다. 전구약물은 일반적으로 Burger "Medicinal Chemistry and Drug Discovery 6th ed. (Donald J. Abraham ed., 2001, Wiley) 및 "Design and Applications of Prodrugs"(H. Bundgaard ed., 1985, Harwood Academic Publishers)에 설명된 것과 같은 공지 방법을 이용하여 제조할 수 있다.
또한, 본 발명에서 언급된 모든 약들은 유리 화합물 또는 용매화합물 (예컨대 수화물)로서 결정 형태로 존재할 수 있으며 이들 두가지 형태 모두 본 발명의 범위에 포괄된다. 용매화 방법은 기술 분야에 일반적으로 알려져 있다.
본 발명에 따라 사용되는 PM00104는 WO 01/87894에 기재된 합성 공정에 따라 제조할 수 있으며 이 방법은 본 발명에 참조로 통합된다.
사용가능한 PM00104의 의약 조성물에는 정맥 투여에 적합한 부형제와 함께 조성된 용액, 현탁액, 에멀젼, 동결건조된 조성물 등이 포함된다. 바람직하게는, PM00104는 치료 용도로 적합한 포뮬레이션으로서 PM00104와 부형제를 포함하는 멸균 동결건조 제품으로서 공급 및 보관된다. 특히 적절한 pH로 완충된 인산염과 수크로스를 함유하는 포뮬레이션이 좋다. PM00104 포뮬레이션에 대한 추가의 안내 지침은 WO 2007/052076에 기재되어 있으며 이 문헌 역시 그 내용 전체가 본 발명에 참고로 통합된다.
PM00104, 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염 또는 이 화합물들을 함유하는 의약 조성물은 정맥내 주입 (intravenous infusion)에 의해 투여되는 것이 좋다. 주입 시간은 최대 72 시간으로 할 수 있으며, 더욱 바람직하게는 1 내지 24 시간, 예컨대 약 1시간, 약 3시간 또는 약 24 시간이 가장 바람직하다. 병원에서 하룻밤 지내야 할 필요 없이 짧은 시간 동안 주입하여 치료할 수 있다면 특히 바람직하다. 그러나, 필요에 따라서는 24 시간 이상 주입해야만 할 수도 있다.
바람직하게는, PM00104의 투여를 여러 사이클로 수행하는 것이 좋다. 바람직한 투여 방법에서 PM00104의 정맥내 주입은 일반적으로 환자에게 제1일 각 사이클을 투여한 다음 사이클의 나머지 분량을 환자가 보충할 수 있도록 투여하는 것이 좋다. 각 사이클의 바람직한 기간은 일반적으로 3주 또는 4주이며; 필요에 따라 복수회의 사이클을 이용할 수 있다. 개개 환자의 병태와 치료에 대한 관용성에 따라, 투약 지연 및/또는 투약 감소 및 스케쥴 조정을 수행할 수 있다. PM00104 투여 및 투여량에 대한 상세한 지침은 예컨대 WO 2008/135792에 설명되어 있으며 이 문헌은 특별 참조문헌으로서 본 발명에 통합된다.
본 발명에서, 특히 바람직한 것은 PM00104, 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염와, 폐암, 육종, 악성 흑색종, 흉막 중피종, 방광암종, 전립선암, 췌장암종, 위암종, 난소암, 간암, 유방암, 결장암, 신장암, 식도암, 부신암, 이하선암, 두경부암종, 자궁경부암, 중피종, 백혈병 및 림프종 중에서 선택된 암을 치료하기 위한 기타의 항암 약물과의 복합제이다.
또한, 특히 바람직한 것은 PM00104, 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염와, 암을 치료하기 위한 다른 항암 약물, 특히, 폐암, 육종, 악성 흑색종, 흉막 중피종, 방광암종, 전립선암, 췌장암종, 위암종, 난소암, 간암, 유방암, 결장암, 신장암, 식도암, 부신암, 이하선암, 두경부암종, 자궁경부암, 중피종, 백혈병 및 림프종 중에서 선택된 암을 치료하기 위한 항종양 백금 배위 착화합물, 항대사산물, 유사분열 억제제, 안트라사이클린, 국소이성화효소 I 및/또는 II 억제제, 항종양 모노클로날 항체, mTOR 억제제, 및 티로신 키나아제 억제제 중에서 선택된 다른 항암 약물과의 복합제이다.
바람직한 실시 상태에서, 본 발명은 암, 특히 위장암, 방광암종, 폐암 및 결장암 중에서 선택된 암을 치료하는데 있어서 PM00104, 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염와, 항종양 백금 배위 착화합물과의 복합제에 관한 것이다. 이 화학요법치료군의 예로는 시스플라틴, 옥살리플라틴, 카보플라틴, BBR3464, 사트라플라틴, 테트라플라틴, 오미플라틴, 및 이프로플라틴을 들 수 있으나 이에 한정되지 않는다. 특히 바람직한 것은 PM00104, 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염와 시스플라틴, 옥살리플라틴, 카보플라틴, BBR3464, 사트라플라틴, 테트라플라틴, 오미플라틴, 및 이프로플라틴과의 복합제이며, 더욱 바람직한 것은 암, 특히 위장암종과 방광암종, 폐암 및 결장암 중에서 선택된 암을 치료하는데 있어서 시스플라틴 및 옥살리플라틴과의 복합제이다.
또 다른 바람직한 실시 상태에서, 본 발명은 PM00104, 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염와 암, 특히 위장암, 췌장암종, 방광암종, 결장암, 페암, 유방암 및 중피종 중에서 선택된 암을 치료하는데 있어서 PM00104, 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염와, 항대사산물과의 복합제에 관한 것이다. 이 화학요법치료군의 예로는 5-플루오로우라실, 겜시타빈, 시타라빈, 카페시타빈, 데시타빈, 플록수리딘, 6-머캅토퓨린, 메토트렉세이트, 플루다라빈, 아미노프테린, 페메트렉세드, 랄티트렉세드, 클라드리빈, 클로파라빈, 플루다라빈, 머캅토퓨린, 펜토스타틴 및 티오구아닌을 들 수 있으나 이에 한정되지 않는다. 특히 바람직한 것은 암, 특히 위장암종, 췌장 암종, 방광암종, 대장암, 폐암, 유방암, 및 중피종 중에서 선택된 암을 치료하는데 있어서, PM00104, 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염와 5-플루오로우라실, 겜시타빈, 시타라빈, 카페시타빈, 데시타빈, 플록수리딘, 머캅토퓨린, 펜토스타틴 및 티오구아닌과의 복합제이며, 더욱 바람직한 것은 5-플루오로우라실, 페메트렉세드, 및 겜시타빈과의 복합제이다.
또 다른 바람직한 실시 상태에서, 본 발명은 암, 특히 위장암종, 방광암종, 폐암, 및 유방암 중에서 선택된 암을 치료하는데 있어서, PM00104, 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염와 유사분열 억제제와의 복합제에 관한 것이다. 이 화학요법치료군의 예로는 파클리탁셀, 도세탁셀, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 빈데신 및 비노렐빈을 들 수 있으나 이에 한정되지 않는다. 특히 바람직한 것은 암, 특히 위장암종, 방광암종, 폐암, 및 유방암을 치료하는데 있어서, PM00104, 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염와 파클리탁셀 및 도세탁셀과의 복합제이다.
또 다른 바람직한 실시 상태에서,본 발명은 암, 특히 위장암종과 유방암을 치료하는데 있어서, PM00104, 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염와 안트라사이클린과의 복합제에 관한 것이다. 이 화학요법치료제의 예로는 다우노루비신, 독소루비신, 에피루비신, 이다루비신, 미토잔트론, 피잔트론 및 발루비신을 들 수 있으나 이에 한정되지 않는다. 특히 바람직한 것은, 암, 특히 위장암종과 유방암을 치료하는데 있어서, PM00104, 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염와 다우노루비신, 독수루비신, 에피루비신, 이다루비신, 미토잔트론, 피잔트론 및 발루비신과의 복합제, 더욱 바람직하게는 독소루비신과의 복합제이다.
또 다른 바람직한 실시 상태에서, 본 발명은 암, 특히 위장암종과 대장암을 치료하는데 있어서, PM00104, 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염와 국소이성화효소(topoisomerase) I 및/또는 II 억제제와의 복합제에 관한 것이다. 이 화학요법치료군의 예로는 토포테칸, SN-38, 이리노테칸, 캄토테신, 루비테칸, 에토포시드 및 테니포시드와의 복합제를 들 수 있으나 이에 한정되지 않는다. 특히 바람직한 것은 암, 특히 위장암종과 대장암을 치료하는데 있어서 PM00104, 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염와 토포테칸, SN-38, 이리노테칸, 캄토테신, 루비테칸, 에토포시드 및 테니포시드와의 복합제, 더욱 바람직하게는 SN-38 및 이리노테칸과의 복합제이다.
또 다른 바람직한 실시 상태에서, 본 발명은 암, 특히 난소암과 폐암을 치료하는데 있어서, PM00104, 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염와 항종양 모노클로날 항체와의 복합제에 관한 것이다. 이 호학요법치료군의 예로는 베바시주맙, 세툭시맙, 파니투무맙, 트라스투주맙, 리툭시맙, 토시투모맙, 알렘투주맙, 및 겜투주맙을 들 수 있으나 이에 한정되지 않는다. 특히 바람직한 것은 암, 특히 난소암과 폐암을 치료하는데 있어서, PM00104, 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염와 베바시주맙, 세툭시맙, 파니투무맙, 트라스투주맙, 리툭시맙, 토시투모맙, 알렘투주맙 및 겜투주맙과의 복합제이며, 더욱 바람직한 것은 베바시주맙과의 복합제이다.
또 다른 바람직한 실시 상태에서, 본 발명은 암, 특히 간암과 췌장암종을 치료하는데 있어서 PM00104, 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염와, 티로신 키나아제 억제제와의 복합제에 관한 것이다. 이 화학요법치료군의 예로는 얼로티닙, 소라페닙, 악시티닙, 보수티닙, 세디라닙, 다사티닙, 게피티닙, 이마티닙, 카네르티닙, 라파티닙, 레스타우르티닙, 닐로티닙, 세막사닙, 수니티닙 및 반데타닙을 들 수 있으나 이에 한정되지 않는다. 특히 바람직한 것은, 암, 특히 간암과 췌장암을 치료하는데 있어서, PM00104, 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염와 얼로티닙, 소라페닙, 악시티닙, 보수티닙, 세디라닙, 다사티닙, 게피티닙, 이마티닙, 카네르티닙, 라파티닙, 레스타우르티닙, 닐로티닙, 세막사닙, 수니티닙 및 반데타닙과의 복합제, 더욱 바람직하게는 얼로티닙과 소라페닙과의 복합제이다.
또 다른 바람직한 실시 상태에서, 본 발명은 암, 더욱 구체적으로는 폐암을 치료하는데 있어서 PM00104, 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염와 mTOR 억제제와의 복합제에 관한 것이다. 이 화학요법치료군의 예로는 템시롤리무스, 시롤리무스(라파마이신), 에베롤리무스 및 데포롤리무스를 들 수 있으나 이에 한정되지 않는다. 특히 바람직한 것은 암, 더욱 구체적으로는 폐암을 치료하는데 있어서 PM00104, 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염와 템시롤리무스, 시롤리무스(라파마이신), 에베롤리무스 및 데포롤리무스와의 복합제이다.
본 발명은 전술한 통상적인 화학적 방법에 의해 모화합물로부터 합성될 수 있는, 약학적으로 허용가능한 모든 염을 포괄한다.
PM00104, 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염 및, 다른 항암 약물은 동시에 또는 이시에 투여되기 위한 별도의 약제들로서 제공될 수 있다. 바람직하게는 PM00104와 다른 항암 약물은 이시에 투여되기 위한 별개 약제들로서 제공되는 것이 좋다. 별개로, 그리고 이시에, 즉 서로 다른 시간에 투여되는 경우, PM00104나 또는 다른 약물 중 하나를 먼저 투여할 수 있다. 또한, 이들 두 가지 약물들을 같은 날 투여할 수도 있고, 다른 날 투여해도 좋으며 처리 사이클 동안 동일한 스케쥴 또는 다른 스케쥴을 이용하여 투약할 수 있다. 따라서, 본 발명의 의약 조성물은 모든 성분들(약물들)을 약학적으로 허용가능한 하나의 단일 포뮬레이션에 포함할 수 있다. 별법으로, 이들 성분들은 별도로 조성되어 서로 함께 배합되어 투여될 수 있다. 당업자에게 잘 알려진 약학적으로 허용가능한 포뮬레이션들을 본 발명에 이용할 수 있다. 나아가, 복합제의 약물들은 서로 다른 투여 경로로 투약될 수도 있다. 예컨대, 약물들 중 1종은 경구 투여용으로 적합한 형태, 예컨대 정제 또는 캡슐일 수 있고, 다른 종은 비경구 주사 (정맥내, 피하, 근육내, 혈관내 또는 주입)에 적합한 형태, 예컨대 멸균 용액, 현탁액 또는 에멀젼 형태일 수 있다. 또는, 두가지 약물 모두 동일 투여 경로에 의해 주어질 수 있다. 본 발명에 사용하기에 적합한 포뮬레이션의 선택은 투여 경로 및 조성물의 개개 성분들의 용해도 특성에 따라 당업자가 통상적으로 정할 수 있다.
복합제의 화합물들의 정확한 투여량은 특정 포뮬레이션, 투여 방식 및 치료될 특정 투여 부위, 환자 및 종양에 따라 달라질 수 있다. 연령, 체중, 성별, 식이요법, 투여 시간, 배설률, 환자의 병태, 약물 조합, 반응 민감성 및 질병의위중도와 같은 기타 인자들 역시 고려되어야 한다. 최대 관용 투여량 내에서 동시에 또는 주기적으로 투여를 실시할 수 있다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 적어도 1회 사이클분의 투여 단위만큼의 PM00104, 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염 공급원 및 복합제 중의 두 가지 약물 모두의 사용에 관한 지침을 적은 인쇄물을 포함하는, 암 치료를 위한, PM00104, 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염 및 다른 항암 약물을 투여하기 위한 키트에 관한 것이다.
관련 구체예에서, 본 발명은 적어도 1회 사이클분의 투여 단위만큼의 PM00104, 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염 공급원, 적어도 1회 사이클분의 투여 단위만큼의 다른 항암 약물 공급원, 및 복합제 중의 두 가지 약물 모두의 사용에 관한 지침을 적은 인쇄물을 포함하는, 암 치료를 위한, PM00104, 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염 및 다른 항암 약물을 투여하기 위한 키트에 관한 것이다.
관련 구체예에서, 본 발명은 암을 치료하는데 있어서, 다른 항암 약물과 복합적으로 사용되는, PM00104, 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염 및 약학적으로 허용가능한 담체 또는 부형제를 포함하여 이루어지는 의약 조성물을 제공한다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 암을 치료하는데 사용되기 위한, PM00104, 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염, 다른 항암 약물 및 약학적으로 허용가능한 담체 또는 부형제를 포함하여 이루어지는 의약 조성물을 제공한다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 다른 항암제와의 복합 요법에 사용되는 암 치료용 약제 제조를 위한, PM00104, 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염의 용도를 제공한다.
관련 구체예에서, 본 발명은 또한 암 치료용 약제를 제조하는데 있어서, 다른 항암 약물과 복합 사용되는 PM00104, 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염의 용도에 관한 것이다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 PM00104, 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염와 치료적 유효량의 다른 항암 약물을 복합적으로 투여하는 것을 포함하는, 암을 치료하기 위한 PM00104, 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염을 제공한다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 치료학적 유효량의 PM00104, 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염를 치료학적 유효량의 다른 항암 약물과 복합적으로 투여 (여기서 이 복합제는 함께 투여해도 좋고 별도로 투여해도 좋다)하는 것을 포함하여 이루어지는, 암의 치료 방법을 제공한다. 본 발명의 바람직한 실시 상태에서, PM00104, 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염 및 기타 항암 약물은 상승적으로 효과적인 양으로 투여한다.
한가지 실시 상태에서, 암세포를 PM00104, 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염와 다른 항암 약물과의 복합제와 접촉시키거나 또는 이 복합제로 처리한다. 암세포는 인간의 세포인 것이 좋으며 암종 세포, 육종 세포, 백혈병 세포, 및 림프종 세포가 여기에 포함된다. 더욱 바람직하게는, 암 세포는 폐암, 육종, 악성 흑색종, 흉막 중피종, 방광암종, 전립선압, 췌장암종, 위암종, 난소암, 간암, 유방암, 대장암, 신장암, 식도암, 부신암, 이하선암, 두경부암종, 자궁경부암, 중피종, 백혈병 및 림프종의 세포인 것이 좋다. 특히, 암세포는 인간의 위암종 세포, 인간의 방광암종 세포 및 인간의 췌장암종 세포인 것이 좋다. 이에 더해서, 복합제는 암세포, 특히 인간의 위장 암종세포, 인간의 방광암종 세포, 인간의 췌장암종 세포, 인간의 폐암 세포, 인간의 대장암 세포 및 인간의 유방암 세포에 대한 상승 억제 효과를 제공하는 것이 좋다.예를 들어서, 복합제는 접촉된 암세포의 증식 또는 생존을 억제한다. 접촉된 암세포의 증식 또는 생존이 접촉되지 않은 암세포의 경우에 비해 더 낮다는 사실은 PM00104, 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염와 선택된 다른 항암 약물과의 복합제가 암 환자를 치료하는데 효과적임을 뒷받침하는 것이다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 암세포를 유효량의 PM00104, 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염와 다른 항암 약물과 함께 또는 별도로 접촉시키는 것을 포함하는 암세포의 성장을 억제하는 방법을 제공한다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 암세포를 PM00104, 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염 및 다른 항암 약물과의 상승적 복합제(함께 또는 별도로)와 접촉시키는 것을 포함하는 암세포의 성장을 억제하는 방법을 제공하며, 여기서 상기 복합제는 (i) 다른 항암 약물 없이 PM00104, 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염만 사용하는 경우, 또는 (ii) PM00104 없이 다른 항암 약물만 사용하는 경우에 비해 암세포 성장을 더욱 효과적으로 억제시킨다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 암세포의 성장 억제를 위하여 다른 항암 약물과 복합적으로 사용되기 위한, PM00104, 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염의 유효량을 포함하는 의약 조성물을 제공한다.
관련 구체예에서, 본 발명은 암세포의 성장 억제를 위하여, PM00104, 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염과 다른 항암 약물과의 유효한 복합제를 포함하는 의약 조성물을 제공한다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 암 성장 억제를 위한 다른 항암 약물과 PM00104, 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염과의 상승적 복합제를 포함하는 의약 조성물을 제공하며, 여기서 상기 복합제는 (i) 다른 항암 약물 없이 PM00104, 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염만 사용하는 경우, 또는 (ii) PM00104 없이 다른 항암 약물만 사용하는 경우에 비해 암세포 성장을 더욱 효과적으로 억제시킨다.
또 다른 구체예에서, PM00104, 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염와 다른 항암 약물과의 복합제는 생체내에서 종양 성장을 억제하거나 또는 종양의 크기를 감소시킨다. 특히, 이 복합제는 암종 세포, 육종 세포, 백혈병 세포 및 림프종 세포의 생체내 성장을 억제한다. 바람직하게는, 이 복합제는 폐암, 육종, 악성 흑색종, 흉막 중피종, 방광암종, 전립선암, 췌장암종, 위암종, 난소암, 간암, 유방암, 대장암, 신장암, 식도암, 부신암, 이하선암, 두경부암종, 자궁경부암, 중피종, 백혈병 및 림프종의 세포들의 생체내 성장을 억제하는 것이 좋다. 특히, 암 세포는 인간의 위암종 세포, 인간의 방광암종 세포, 인간의 췌장 암종 세포, 인간의 간암 세포, 인간의 폐암 세포, 인간의 중피종 세포, 및 인간의 난소암 세포를 포함한다. 마찬가지로, 이 복합제는 암종, 육종, 백혈병 및 림프종 종양의 크기를 생체내에서 감초시킨다. 바람직하게는, 복합제가 폐암, 육종, 백혈병, 및 림프종 종양의 크기를 생체내에서 감소시키는 것이 좋다. 바람직하게는, 복합제가 폐암, 육종, 악성 흑색종, 흉막 중피종, 방광암종, 전립선암, 췌장 암종, 위장암종, 난소암, 간암, 유방암, 대장암, 신장암, 식도암, 부신암, 이하선암, 두경부암, 자궁경부암, 중피종, 백혈병, 및 림프종의 크기를 감소시키는 것이 좋다. 특히, 복합제는 인간의 간암, 중피종, 위암, 방광암, 체장암, 폐암 및 난소 종양의 크기를 생체내에서 감소시킨다.
예를 들어, 본 발명의 복합제는 동물 모델에서, 인간의 암 이종이식편, 특히 인간 간암, 중피종, 위종양, 방광 종양, 췌 종양, 폐 종양 및 난소 종양 이종이식편을 억제한다. 본 발명의 복합제가 투여된 동물 모델에서 인간 암 이종이식편의 성장이나 크기가 감소되었다는 것은 PM00104, 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염 및 다른 항암 약물과의 복합제가 암 환자를 치료하는데 효과적임을 부가적으로 뒷받침하는 것이다.
본 발명의 한가지 실시 상태에 따라, 두가지 약물 (PM00104 및 다른 약물)을 병용하여 치료한 경우의 평균 종양 중량과, 다른 약물 1종 만을 단독처리 (monotherapy treatment)한 경우의 평균 종양 중량을 비교하였다. 복합 요법의 증강(potentiation) 및 가산도(degree of additivity)의 평가 기준 및 정의는 다음과 같다:
- 복합 치료에 사용된 것과 동일한 투약 스케쥴과 동일한 투약량을 사용한 경우 단일 약제(단독요법:monotherapy)로서 가장 우수한 활성을 나타내는 약물의 최고 반응보다, 복합요법의 반응이 더 좋은 경우 증강 효과가 있다고 결정할 수 있다.
- 가산성(additivity)은 단독요법의 종양 성장 억제 PM00104를 다음과 같은 복합 치료의 경우와 비교함으로써 결정한다:
1. 복합제에 사용되는 것과 동일한 투여량으로 단독요법으로서 투여되는 경우의 각각의 약물의 100-% T/C로서의 종양 성장 억제%를 측정. % T/C는 처리군(T)의 평균 종양 중량을 대조군(C)의 평균 종양 중량과 비교함으로써 얻는다 (T/C x 100%).
2. 각각의 약제가 단독요법으로 투약된 경우와 동일한 반응을 나타낼 경우, 두 개의 점수를 합산하여 "예상 반응 (expected response)"을 측정한다.
3. 이 "예상 반응"을 복합치료군에 대해 측정된 종양 성장 억제 %로부터 뺀다. 그 결과:
a. 얻어진 숫자가 음수이면, 두 가지 약물을 병용한 경우의 효과가 단순 가산한 경우보다 저조함을 의미한다.
b. 얻어진 숫자가 0에 가까우면, 두 가지 약물을 병용한 효과를 단순 가산 정도로 본다.
c. 얻어진 숫자가 양수이면, 두 가지 약물을 병용한 효과가 단순 가산한 경우보다 더 좋음을 의미한다.
따라서, 복합 요법이 가산 효과보다 우수할 경우 상승 효과를 내는 것에 상응하며, 여기서 두 가지 약물의 병용 효과는 각각의 약물을 단독으로 투약할 때 기대되는 효과보다 치료적으로 더 우수한 것이다.
따라서, 또 다른 구체예에서, 본 발명은 유효량의 PM00104, 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염를 다른 항암 약물과 함께, 또는 별도로 병용 투여하는 것을 포함하여 이루어지는, 종양의 크기를 감소시키는 방법을 제공한다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 유효량의 PM00104, 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염를 다른 항암 약물과 복합하여 투여하는 것을 포함하는 종양 성장을 억제하는 방법을 제공한다.
관련 구체예에서, 본 발명은 PM00104, 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염 및 항암 약물을 함께 또는 별도로 효과적으로 복합 투여하는 것을 포함하여 이루어지는, 종양 성장을 억제하는 방법에 관한 것이다.
다음의 실시예들은 본 발명을 더욱 구체적으로 설명한다. 그러나 본 발명의 범위가 이들 실시예 범위로 한정되는 것으로 해석되어서는 아니된다.
보다 간편한 설명을 위해서, 어떤 정량적 표현들은 "약"이라는 용어로 표현하지 않았다. 그러나, "약"이라는 표현이 명시적으로 사용되었건, 그렇지 않건 간에, 본 발명에 사용된 모든 양은 실제로 주어진 값을 의미하는 것이며, 주어진 값과 관련한 실험 조건 및/또는 측정 조건으로 인한 근사치와 등가를 비롯한, 본 발명이 속한 기술 분야의 일반적인 기술에 기반하여 합리적으로 추론가능한, 이러한 값에 대한 근사치 역시 포괄하는 것이다.
도 1-3. Hs746T (도 1), AGS (도 2), 및 HGC-27 (도 3) 세포에 있어서의PM00104 및 시스플라틴 복합제의 억제 효과.
도 4-6. Hs746T (도 4), AGS (도 5), 및 HGC-27 (도 6) 세포에 있어서의 PM00104 및 SN38 복합제의 억제 효과.
도7 -9. Hs746T (도 7), AGS (도 8), 및 HGC-27 (도 9) 세포에 있어서의 PM00104 및 5-FU 복합제의 억제 효과.
도 10-12. Hs746T (도 10), AGS (도 11), 및 HGC-27 (도 12) 세포에 있어서의 PM00104 및 독소루비신 복합제의 억제 효과.
도 13-15. Hs746T (도 13), AGS (도 14), 및 HGC-27 (도 15) 세포에 있어서의 PM00104 및 도세탁셀 복합제의 억제 효과.
도 16-18. Hs746T (도 16), AGS (도 17), 및 HGC-27 (도 18) 세포에 있어서의 PM00104 및 옥살리플라틴 복합제의 억제 효과.
도 19-20. 5637 (도 19) 및 UM-UC-3 (도 20) 세포에 있어서의 PM00104 및 겜시타빈(Gemzar
) 복합제의 억제 효과.
도 21-22. 5637 (도 21) 및 UM-UC-3 (도 22) 세포에 있어서의 PM00104 및 시스플라틴 복합제의 억제 효과.
도 23-26. BxPC-3 (도 23), PANC-1 (도 24), MIA PaCa-2 (도 25), 및 SW1990 (도 26) 세포에 있어서의 PM00104 및 겜시타빈(Gemzar
) 복합제의 억제 효과.
도 27. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 겜시타빈 (140 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 겜시타빈으로 치료된 마우스에 있어서의 MIA PaCa-2 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 28. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 얼로티닙 (100 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 얼로티닙으로 치료된 마우스에 있어서의 MIA PaCa-2 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 29. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 얼로티닙 (50 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 얼로티닙으로 치료된 마우스에 있어서의 MIA PaCa-2 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 30. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 겜시타빈 (180 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 겜시타빈으로 치료된 마우스에 있어서의 BxPC-3 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 31. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 얼로티닙 (50 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 얼로티닙으로 치료된 마우스에 있어서의 BxPC-3 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 32. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 얼로티닙 (30 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 얼로티닙으로 치료된 마우스에 있어서의 BxPC-3 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 33. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 얼로티닙 (15 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 얼로티닙으로 치료된 마우스에 있어서의 BxPC-3 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 34. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 시스플라틴 (5 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 시스플라틴으로 치료된 마우스에 있어서의 UM-UC-3 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 35. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 겜시타빈 (180 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 겜시타빈으로 치료된 마우스에 있어서의 UM-UC-3 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 36. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 파클리탁셀 (15 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 파클리탁셀로 치료된 마우스에 있어서의 UM-UC-3 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 37. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 시스플라틴 (5 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 시스플라틴으로 치료된 마우스에 있어서의 Hs746T 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 38. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 파클리탁셀 (10 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 파클리탁셀로 치료된 마우스에 있어서의 Hs746T 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 39. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 5-FU (50/100 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 5-FU로 치료된 마우스에 있어서의 Hs746T 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 40. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 이리노테칸 (20 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 이리노테칸으로 치료된 마우스에 있어서의 Hs746T 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 41. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 독소루비신 (6 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 독소루비신으로 치료된 마우스에 있어서의 Hs746T 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 42. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 도세탁셀 (16 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 도세탁셀로 치료된 마우스에 있어서의 Hs746T 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 43. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 도세탁셀 (8 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 도세탁셀로 치료된 마우스에 있어서의 Hs746T 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 44. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 옥살리플라틴 (8 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 옥살리플라틴으로 치료된 마우스에 있어서의 Hs746T 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 45. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 옥살리플라틴 (4 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 옥살리플라틴으로 치료된 마우스에 있어서의 Hs746T 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 46. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 5-FU (100 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 5-FU으로 치료된 마우스에 있어서의 MRI-H-254 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 47. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 5-FU (50 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 5-FU로 치료된 마우스에 있어서의 MRI-H-254 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 48. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 도세탁셀 (16 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 도세탁셀로 치료된 마우스에 있어서의 MRI-H-254 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 49. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 도세탁셀 (8 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 도세탁셀로 치료된 마우스에 있어서의 MRI-H-254 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 50. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 옥살리플라틴 (8 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 옥살리플라틴으로 치료된 마우스에 있어서의 MRI-H-254 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 51. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 옥살리플라틴 (4 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 옥살리플라틴으로 치료된 마우스에 있어서의 MRI-H-254 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 52. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 독소루비신 (6 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 독소루비신으로 치료된 마우스에 있어서의 MRI-H-254 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 53. 대조군, PM00104 (0.45 mg/kg/일), 독소루비신 (6 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 독소루비신으로 치료된 마우스에 있어서의 MRI-H-254 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 54. 대조군, PM00104 (0.23 mg/kg/일), 독소루비신 (6 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 독소루비신으로 치료된 마우스에 있어서의 MRI-H-254 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 55. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 파클리탁셀 (12.5 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 파클리탁셀로 치료된 마우스에 있어서의 MRI-H-254 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 56. 대조군, PM00104 (0.45 mg/kg/일), 파클리탁셀 (12.5 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 파클리탁셀로 치료된 마우스에 있어서의 MRI-H-254 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 57. 대조군, PM00104 (0.23 mg/kg/일), 파클리탁셀 (12.5 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 파클리탁셀로 치료된 마우스에 있어서의 MRI-H-254 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 58. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 시스플라틴 (5 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 시스플라틴로 치료된 마우스에 있어서의 MRI-H-254 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 59. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 시스플라틴 (3 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 시스플라틴으로 치료된 마우스에 있어서의 MRI-H-254 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 60. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 이리노테칸 (18 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 이리노테칸으로 치료된 마우스에 있어서의 MRI-H-254 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 61. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 이리노테칸 (10 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 이리노테칸으로 치료된 마우스에 있어서의 MRI-H-254 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 62. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 파클리탁셀 (25 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 파클리탁셀로 치료된 마우스에 있어서의 MRI-H-254 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 63. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 파클리탁셀 (12.5 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 파클리탁셀로 치료된 마우스에 있어서의 MRI-H-254 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 64. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 소라페닙 (60 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 소라페닙으로 치료된 마우스에 있어서의 HepG2 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 65. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 소라페닙 (30 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 소라페닙으로 치료된 마우스에 있어서의 HepG2 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 66. 대조군, PM00104 (0.6 mg/kg/일), 소라페닙 (60 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 소라페닙으로 치료된 마우스에 있어서의 HepG2 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 67. 대조군, PM00104 (0.6 mg/kg/일), 소라페닙 (30 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 소라페닙으로 치료된 마우스에 있어서의 HepG2 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 68. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 소라페닙 (60 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 소라페닙으로 치료된 마우스에 있어서의 HepG2 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 69. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 소라페닙 (30 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 소라페닙으로 치료된 마우스에 있어서의 PLC/PRF/5 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 70. 대조군, PM00104 (0.45 mg/kg/일), 소라페닙 (60 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 소라페닙으로 치료된 마우스에 있어서의 PLC/PRF/5 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 71. 대조군, PM00104 (0.45 mg/kg/일), 소라페닙 (30 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 소라페닙으로 치료된 마우스에 있어서의 PLC/PRF/5 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 72. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 베바시주맙 (5 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 베바시주맙으로 치료된 마우스에 있어서의 SK-OV-3 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 73. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 베바시주맙 (2.5 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 베바시주맙으로 치료된 마우스에 있어서의 SK-OV-3 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 74-76. 폐암 세포주: A-549 (도 74), NCI-H460 (도 75), 및 NCI-H23 (도 76) 세포에 있어서, 겜시타빈과의 복합제로서의 PM00104의 억제 효과.
도 77-79. 폐암 세포주: A-549 (도 77), NCI-H460 (도 78), 및 NCI-H23 (도 79) 세포에 있어서, 파클리탁셀과의 복합제로서의 PM00104의 억제 효과.
도 80-82. 폐암 세포주: A-549 (도 80), NCI-H460 (도 81), 및 NCI-H23 (도 82) 세포에 있어서, 시스플라틴과의 복합제로서의 PM00104의 억제 효과.
도 83-85. 유방암 세포주: MDA-MB-231 (도 83), BT-474 (도 84), 및 MCF-7 (도 85) 세포에 있어서, 겜시타빈과의 복합제로서의 PM00104의 억제 효과.
도 86-88. 유방암 세포주: MDA-MB-231 (도 86), BT-474 (도 87), 및 MCF-7 (도 88) 세포에 있어서, 파클리탁셀과의 복합제로서의 PM00104의 억제 효과.
도 89-91. 유방암 세포주: MDA-MB-231 (도 89), BT-474 (도 90), 및 MCF-7 (도 91) 세포에 있어서, 독소루비신과의 복합제로서의 PM00104의 억제 효과.
도 92-94. 결장암 세포주: HCT-116 (도 92), LoVo (도 93), 및 HT-29 (도 94) 세포에 있어서, 5-플루오로우라실 (5-FU)과의 복합제로서의 PM00104의 억제 효과.
도 95-97. 결장암 세포주: HCT-116 (도 95), LoVo (도 96), 및 HT-29 (도 97) 세포에 있어서, 옥살리플라틴과의 복합제로서의 PM00104의 억제 효과.
도 98-100. 결장암 세포주: HCT-116 (도 98), LoVo (도 99), 및 HT-29 (도 100) 세포에 있어서, 이리노테칸과의 복합제로서의 PM00104의 억제 효과.
도 101. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 베바시주맙 (5 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 베바시주맙으로 치료된 마우스에 있어서의의 NCI-H460 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 102. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 베바시주맙 (2.5 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 베바시주맙으로 치료된 마우스에 있어서의의 NCI-H460 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 103. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), temsirolimus (20 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 템시롤리무스로 치료된 마우스에 있어서의의 NCI-H460 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 104. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), temsirolimus (10 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 템시롤리무스로 치료된 마우스에 있어서의의 NCI-H460 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 105. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 겜시타빈 (180 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 겜시타빈으로 치료된 마우스에 있어서의의 NCI-H460 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 106. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 겜시타빈 (90 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 겜시타빈으로 치료된 마우스에 있어서의의 NCI-H460 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 107. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 겜시타빈 (180 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 겜시타빈으로 치료된 마우스에 있어서의 CaLu-6 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 108. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 겜시타빈 (90 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 겜시타빈으로 치료된 마우스에 있어서의 CaLu-6 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 109. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 페메트렉세드 (125 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 페메트렉세드로 치료된 마우스에 있어서의 CaLu-6 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 110. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 페메트렉세드 (100 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 페메트렉세드로 치료된 마우스에 있어서의 CaLu-6 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 111. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 페메트렉세드 (125 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 페메트렉세드로 치료된 마우스에 있어서의 NCI-H460 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 112. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 페메트렉세드 (100 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 페메트렉세드로 치료된 마우스에 있어서의 NCI-H460 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 113. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 페메트렉세드 (100 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 페메트렉세드로 치료된 마우스에 있어서의 H-Meso-1 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 114. 대조군, PM00104 (0.45 mg/kg/일), 페메트렉세드 (100 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 페메트렉세드로 치료된 마우스에 있어서의 H-Meso-1 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 4-6. Hs746T (도 4), AGS (도 5), 및 HGC-27 (도 6) 세포에 있어서의 PM00104 및 SN38 복합제의 억제 효과.
도7 -9. Hs746T (도 7), AGS (도 8), 및 HGC-27 (도 9) 세포에 있어서의 PM00104 및 5-FU 복합제의 억제 효과.
도 10-12. Hs746T (도 10), AGS (도 11), 및 HGC-27 (도 12) 세포에 있어서의 PM00104 및 독소루비신 복합제의 억제 효과.
도 13-15. Hs746T (도 13), AGS (도 14), 및 HGC-27 (도 15) 세포에 있어서의 PM00104 및 도세탁셀 복합제의 억제 효과.
도 16-18. Hs746T (도 16), AGS (도 17), 및 HGC-27 (도 18) 세포에 있어서의 PM00104 및 옥살리플라틴 복합제의 억제 효과.
도 19-20. 5637 (도 19) 및 UM-UC-3 (도 20) 세포에 있어서의 PM00104 및 겜시타빈(Gemzar
도 21-22. 5637 (도 21) 및 UM-UC-3 (도 22) 세포에 있어서의 PM00104 및 시스플라틴 복합제의 억제 효과.
도 23-26. BxPC-3 (도 23), PANC-1 (도 24), MIA PaCa-2 (도 25), 및 SW1990 (도 26) 세포에 있어서의 PM00104 및 겜시타빈(Gemzar
도 27. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 겜시타빈 (140 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 겜시타빈으로 치료된 마우스에 있어서의 MIA PaCa-2 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 28. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 얼로티닙 (100 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 얼로티닙으로 치료된 마우스에 있어서의 MIA PaCa-2 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 29. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 얼로티닙 (50 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 얼로티닙으로 치료된 마우스에 있어서의 MIA PaCa-2 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 30. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 겜시타빈 (180 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 겜시타빈으로 치료된 마우스에 있어서의 BxPC-3 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 31. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 얼로티닙 (50 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 얼로티닙으로 치료된 마우스에 있어서의 BxPC-3 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 32. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 얼로티닙 (30 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 얼로티닙으로 치료된 마우스에 있어서의 BxPC-3 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 33. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 얼로티닙 (15 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 얼로티닙으로 치료된 마우스에 있어서의 BxPC-3 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 34. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 시스플라틴 (5 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 시스플라틴으로 치료된 마우스에 있어서의 UM-UC-3 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 35. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 겜시타빈 (180 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 겜시타빈으로 치료된 마우스에 있어서의 UM-UC-3 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 36. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 파클리탁셀 (15 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 파클리탁셀로 치료된 마우스에 있어서의 UM-UC-3 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 37. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 시스플라틴 (5 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 시스플라틴으로 치료된 마우스에 있어서의 Hs746T 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 38. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 파클리탁셀 (10 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 파클리탁셀로 치료된 마우스에 있어서의 Hs746T 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 39. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 5-FU (50/100 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 5-FU로 치료된 마우스에 있어서의 Hs746T 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 40. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 이리노테칸 (20 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 이리노테칸으로 치료된 마우스에 있어서의 Hs746T 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 41. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 독소루비신 (6 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 독소루비신으로 치료된 마우스에 있어서의 Hs746T 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 42. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 도세탁셀 (16 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 도세탁셀로 치료된 마우스에 있어서의 Hs746T 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 43. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 도세탁셀 (8 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 도세탁셀로 치료된 마우스에 있어서의 Hs746T 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 44. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 옥살리플라틴 (8 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 옥살리플라틴으로 치료된 마우스에 있어서의 Hs746T 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 45. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 옥살리플라틴 (4 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 옥살리플라틴으로 치료된 마우스에 있어서의 Hs746T 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 46. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 5-FU (100 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 5-FU으로 치료된 마우스에 있어서의 MRI-H-254 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 47. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 5-FU (50 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 5-FU로 치료된 마우스에 있어서의 MRI-H-254 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 48. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 도세탁셀 (16 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 도세탁셀로 치료된 마우스에 있어서의 MRI-H-254 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 49. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 도세탁셀 (8 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 도세탁셀로 치료된 마우스에 있어서의 MRI-H-254 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 50. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 옥살리플라틴 (8 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 옥살리플라틴으로 치료된 마우스에 있어서의 MRI-H-254 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 51. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 옥살리플라틴 (4 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 옥살리플라틴으로 치료된 마우스에 있어서의 MRI-H-254 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 52. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 독소루비신 (6 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 독소루비신으로 치료된 마우스에 있어서의 MRI-H-254 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 53. 대조군, PM00104 (0.45 mg/kg/일), 독소루비신 (6 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 독소루비신으로 치료된 마우스에 있어서의 MRI-H-254 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 54. 대조군, PM00104 (0.23 mg/kg/일), 독소루비신 (6 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 독소루비신으로 치료된 마우스에 있어서의 MRI-H-254 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 55. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 파클리탁셀 (12.5 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 파클리탁셀로 치료된 마우스에 있어서의 MRI-H-254 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 56. 대조군, PM00104 (0.45 mg/kg/일), 파클리탁셀 (12.5 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 파클리탁셀로 치료된 마우스에 있어서의 MRI-H-254 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 57. 대조군, PM00104 (0.23 mg/kg/일), 파클리탁셀 (12.5 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 파클리탁셀로 치료된 마우스에 있어서의 MRI-H-254 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 58. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 시스플라틴 (5 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 시스플라틴로 치료된 마우스에 있어서의 MRI-H-254 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 59. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 시스플라틴 (3 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 시스플라틴으로 치료된 마우스에 있어서의 MRI-H-254 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 60. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 이리노테칸 (18 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 이리노테칸으로 치료된 마우스에 있어서의 MRI-H-254 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 61. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 이리노테칸 (10 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 이리노테칸으로 치료된 마우스에 있어서의 MRI-H-254 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 62. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 파클리탁셀 (25 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 파클리탁셀로 치료된 마우스에 있어서의 MRI-H-254 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 63. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 파클리탁셀 (12.5 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 파클리탁셀로 치료된 마우스에 있어서의 MRI-H-254 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 64. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 소라페닙 (60 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 소라페닙으로 치료된 마우스에 있어서의 HepG2 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 65. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 소라페닙 (30 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 소라페닙으로 치료된 마우스에 있어서의 HepG2 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 66. 대조군, PM00104 (0.6 mg/kg/일), 소라페닙 (60 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 소라페닙으로 치료된 마우스에 있어서의 HepG2 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 67. 대조군, PM00104 (0.6 mg/kg/일), 소라페닙 (30 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 소라페닙으로 치료된 마우스에 있어서의 HepG2 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 68. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 소라페닙 (60 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 소라페닙으로 치료된 마우스에 있어서의 HepG2 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 69. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 소라페닙 (30 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 소라페닙으로 치료된 마우스에 있어서의 PLC/PRF/5 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 70. 대조군, PM00104 (0.45 mg/kg/일), 소라페닙 (60 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 소라페닙으로 치료된 마우스에 있어서의 PLC/PRF/5 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 71. 대조군, PM00104 (0.45 mg/kg/일), 소라페닙 (30 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 소라페닙으로 치료된 마우스에 있어서의 PLC/PRF/5 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 72. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 베바시주맙 (5 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 베바시주맙으로 치료된 마우스에 있어서의 SK-OV-3 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 73. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 베바시주맙 (2.5 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 베바시주맙으로 치료된 마우스에 있어서의 SK-OV-3 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 74-76. 폐암 세포주: A-549 (도 74), NCI-H460 (도 75), 및 NCI-H23 (도 76) 세포에 있어서, 겜시타빈과의 복합제로서의 PM00104의 억제 효과.
도 77-79. 폐암 세포주: A-549 (도 77), NCI-H460 (도 78), 및 NCI-H23 (도 79) 세포에 있어서, 파클리탁셀과의 복합제로서의 PM00104의 억제 효과.
도 80-82. 폐암 세포주: A-549 (도 80), NCI-H460 (도 81), 및 NCI-H23 (도 82) 세포에 있어서, 시스플라틴과의 복합제로서의 PM00104의 억제 효과.
도 83-85. 유방암 세포주: MDA-MB-231 (도 83), BT-474 (도 84), 및 MCF-7 (도 85) 세포에 있어서, 겜시타빈과의 복합제로서의 PM00104의 억제 효과.
도 86-88. 유방암 세포주: MDA-MB-231 (도 86), BT-474 (도 87), 및 MCF-7 (도 88) 세포에 있어서, 파클리탁셀과의 복합제로서의 PM00104의 억제 효과.
도 89-91. 유방암 세포주: MDA-MB-231 (도 89), BT-474 (도 90), 및 MCF-7 (도 91) 세포에 있어서, 독소루비신과의 복합제로서의 PM00104의 억제 효과.
도 92-94. 결장암 세포주: HCT-116 (도 92), LoVo (도 93), 및 HT-29 (도 94) 세포에 있어서, 5-플루오로우라실 (5-FU)과의 복합제로서의 PM00104의 억제 효과.
도 95-97. 결장암 세포주: HCT-116 (도 95), LoVo (도 96), 및 HT-29 (도 97) 세포에 있어서, 옥살리플라틴과의 복합제로서의 PM00104의 억제 효과.
도 98-100. 결장암 세포주: HCT-116 (도 98), LoVo (도 99), 및 HT-29 (도 100) 세포에 있어서, 이리노테칸과의 복합제로서의 PM00104의 억제 효과.
도 101. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 베바시주맙 (5 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 베바시주맙으로 치료된 마우스에 있어서의의 NCI-H460 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 102. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 베바시주맙 (2.5 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 베바시주맙으로 치료된 마우스에 있어서의의 NCI-H460 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 103. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), temsirolimus (20 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 템시롤리무스로 치료된 마우스에 있어서의의 NCI-H460 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 104. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), temsirolimus (10 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 템시롤리무스로 치료된 마우스에 있어서의의 NCI-H460 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 105. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 겜시타빈 (180 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 겜시타빈으로 치료된 마우스에 있어서의의 NCI-H460 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 106. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 겜시타빈 (90 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 겜시타빈으로 치료된 마우스에 있어서의의 NCI-H460 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 107. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 겜시타빈 (180 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 겜시타빈으로 치료된 마우스에 있어서의 CaLu-6 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 108. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 겜시타빈 (90 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 겜시타빈으로 치료된 마우스에 있어서의 CaLu-6 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 109. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 페메트렉세드 (125 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 페메트렉세드로 치료된 마우스에 있어서의 CaLu-6 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 110. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 페메트렉세드 (100 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 페메트렉세드로 치료된 마우스에 있어서의 CaLu-6 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 111. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 페메트렉세드 (125 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 페메트렉세드로 치료된 마우스에 있어서의 NCI-H460 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 112. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 페메트렉세드 (100 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 페메트렉세드로 치료된 마우스에 있어서의 NCI-H460 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 113. 대조군, PM00104 (0.9 mg/kg/일), 페메트렉세드 (100 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 페메트렉세드로 치료된 마우스에 있어서의 H-Meso-1 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
도 114. 대조군, PM00104 (0.45 mg/kg/일), 페메트렉세드 (100 mg/kg/일) 또는 PM00104 플러스 페메트렉세드로 치료된 마우스에 있어서의 H-Meso-1 종양의 종양 부피 평가 (평균±SEM).
실시예
실시예 1. 화학요법치료제와 병용시 인간 위암종 세포주에 PM00104의 미치는 효과 측정을 위한 시험관내 연구
이 연구의 목적은 위암종 치료에 사용되는 화학요법제의 항종양 활성을 증강시키기 위한 PM00104의 능력을 측정하기 위한 것이었다.
다음의 약제들을 PM00104와 병용하여 평가하였다: 시스플라틴, 7-에틸-10-히드록시캄토테신 (SN38), 5-플루오로우라실 (5-FU), 독소루비신, 도세탁셀, 및 옥살리플라틴. 이 분석에 선택된 인간 위암종 세포주는 다음과 같았다: Hs746T, HGC-27, 및 AGS 세포주. Hs746T 및 AGS 세포주를, 10% 소태아 혈청 (FBS), 1.5 g/L 중탄산나트륨, 4.5 g/L 글루코스 및 4 mM L-글루타민이 보강된 둘베코 변형 이글 배지 (DMEM:Dulbecco's modified Eagle's medium)에서 배양시켰다. HGC-27 세포주는 20% FBS 및 2 mM L-글루타민이 보강된 이스코브 변형 둘베코 배지 (IMDM: Iscove's modified Dulbecco's medium)에서 배양하였다.
다음의 두 부분으로 스크리닝을 실시하였다:
a. 제1 세트 분석에서는, 각각의 종양 세포주를 약물에 72 시간 노출시킨 후, 각 약물에 대한 IC50 값을 측정하였다.
모든 세포주들을 37℃, 5% CO2 및 98% 습도 조건에서 각각 배양 배지에서 유지시켰다. 성장 배지 포뮬레이션에는 항생제를 함유시키지 않았다. 도말 전 날, 세포에 신선하고 완전한 성장 배지를 공급하였다. 수확 (도말/플레이팅) 당일에, 세포들을 트리판 블루 배제 염색법에 의해 계수하였다.
세포들을 수확하고, 150 μL의 배지 중에 10,000 세포 밀도로 96 웰 마이크로타이터 플레이트에 접종한 다음 24시간 인큐베이션시켜, 약물 첨가 전에 세포들을 부착시켰다. 레퍼런스 데이타를 수집하기 위해서, 제0시 (24시간 세포를 인큐베이션한 후)에 미처리 세포들에 대한 MTS 분석을 실시하였다.
2.0 mg/mL의 100% DMSO 중의 플레이트에 첨가하기 직전에 PM00104, 시스플라틴, SN38, 및 5-FU의 스톡 용액들을 준비하였다. 독소루비신 및 옥살리플라틴의 스톡 용액들은 두 가지 약물 모두 2.0 mg/mL에서 조직 배양하기 위해 멸균수 중에 준비하였다. 도세탁셀의 스톡 용액은 2.0 mg/mL로 에탄올 중에 준비하였다. 무혈청 RPMI 1640 배지에서 부가적으로 계대 희석을 실시하여 최종적으로 4x 처리 농도를 얻었다. 각각의 희석된 시험 물질 50 μL씩을 각각의 웰에 첨가하였다.
살아있는 세포들의 수를 측정하기 위한 비색측정법인 MTS 분석법 (테트라졸륨)에 의하여 세포독성 효과를 측정하였다. 인큐베이션 기간 (제0일 플레이트는 24시간, 시험 플레이트와 대조군 플레이트는 72시간) 후에, 25 μL의 MTS+PMS 용액을 각각의 마이크로타이터 웰에 첨가하고 37℃에서 4 시간 동안 인큐베이션시켰다. 이어서, 플레이트를 인큐베이터로부터 제거하고 플레이트 진탕기 상에서 5분간 진탕시켰다 (빛으로부터 보호하기 위해 알루미늄 호일로 덮었다). 분광광도계 플레이트 판독기를 이용하여 490 nm에서의 광학 밀도를 측정하였다.
각각의 시험 물질에 대해 2 내지 4회 측정한 값의 평균값으로부터 IC50 값을 구하였다. SoftMax 프로그램을 이용한 회귀 곡선을 작성한 다음, 50% 억제 농도 (mg/mL)를 수동으로 내삽하였다.
각각의 세포주에 대한 각 약제의 개별적인 IC50 값을 다음 표 1에 나타내었다.
| 각 약물의 IC50값( mg/mL) | |||||||
| 세포주 | PM00104 | 시스플라틴 | SN38 | 5- FU | 독소루비신 | 도세탁셀 | 옥살리플라틴 |
| Hs746T | 5.34E-06 | 3.92E-02 | 5.82E-05 | 5.46E-03 | 8.97E-03 | 4.42E-02 | 8.14E-03 |
| AGS | 5.21E-06 | 2.55E-02 | 5.49E-06 | 5.32E-04 | 1.56E-04 | 1.99E-03 | 2.89E-04 |
| HGC-27 | 3.71E-06 | 2.56E-02 | 2.46E-04 | 4.34E-04 | 1.77E-04 | 6.54E-03 | 1.92E-04 |
b. 제2 세트 분석에서는, 각각의 세포주들을 다음의 고유의 IC50 농도의 조합으로, PM00104와 상기 제제들과 함께 인큐베이션시켰다:
전술한 바와 같이 세포 배양 및 세포 도말을 실시하였다. 각각의 약물의 스톡 용액들 역시 전술한 바와 같이 약물 농도 1.0 mg/mL로 제조하였다. 이들 스톡 용액들을 필요에 따라 추가로 계대 희석하여 출발 농도를 얻었다. 부가적인 계대 희석은 무혈청 RPMI 1640 배지에서 수행하였으며 최종 8x 처리 농도를 얻었다. 각각의 웰에, 희석된 시험 물질 25 μL 씩을 첨가하였다.
전술한 바와 같이 MTS 분석에 의해 세포독성 효과를 측정하였다. 데이터는 다음과 같이 분석하였다:
1. 프리즘 (그래프화) 소프트웨어 프로그램을 이용하여 대조군 값에 대하여 데이터를 정규화시켰다 (100% = 물질 (약물) 부재시의 세포 성장; 0% = 블랭크 대조군).
2. 정규화된 데이터를 x/y 그래프로 작성하였다. 각각의 물질 (약물)에 대한 100% IC50 값들을 연결하는 선을 그었다. 값이 상기 선 보다 많이 위에 위치하면 길항성(antagonism)을 나타내며, 아래에 위치하는 경우에는 상승효과를 나타내고, 선상에 있는 경우에는 가산성(additivity)을 나타낸다.
종양 세포에 대한 상승적 세포 독성효과는 최적 효과이며 PM00104와 다른 약물과의 조합이 각각의 약물의 단독 사용시보다 더 효과적임을 의미하는 것이다. 통계적으로 유의적인 관찰은 복합제 (PM00104 + 다른 약물)의 흡수도 값과 두개 모두의 종점 값들 (PM00104 및 다른 약물 단독) 간에 차이가 존재할 것을 요구한다. 대다수의 값이 통계적으로 선(종점) 위 또는 선 아래에 있으면, 각각 길항성 또는 상승성을 의미하며, 그렇지 않으면 그 패턴은 가산적인 상호반응에 더 일치하는 것이다.
이 분석에 의하여 다음 사실이 밝혀졌다:
a. PM00104와 시스플라틴과의 복합제는 인간의 위장암종 세포에서 Hs746T (도 1), AGS (도 2) 및 HGC-27 (도 3) 세포주에서 거의 모든 투여량 비율에서 모두 상승적이었다.
b. Hs746T 세포주 (도 4)에서 PM00104와 SN38과의 복합제는 거의 모든 투여량 비율에서 상승적이었으며, AGS 세포주 (도 5)에서는 75/25-60/40 투여량 비율에서 상승적 경향을 보였고, HGC-27 세포주 (도 6)에서는 70/30 및 60/40의 투여량 비율에서 상승적 경향을 나타내었다.
c. PM00104와 5-FU와의 복합제는 Hs746T 세포주 (도 7)에서 75/25-40/60의 투여량 비율의 경우, 그리고 AGS 세포주 (도 8)에서는 75/25-60/40 투여량 비율에서 상승적 경향을 나타내었다. HGC-27 세포주 (도 9)의 경우, 상기 복합제는 가산적 경향을 나타내었다.
d. PM00104와 독소루비신과의 복합제는 Hs746T 세포주 (도 10)에서 거의 모든 투여량 비율에서 상승적이었고, AGS (도 11) 및 HGC-27 (도 12) 세포주에서는 가산적 경향을 나타내었다.
e. PM00104와 도세탁셀과의 복합제는 Hs746T 세포주 (도 13)에서 상승적이었고, AGS 세포주 (도 14)에서는 가산적이었으며, HGC-27 세포주 (도 15)에서는 길항적이었다.
f. PM00104와 옥살리플라틴과의 복합제는 Hs746T (도 16), AGS (도 17) 및 HGC-27 (도 18) 세포주에서 가산적 경향을 나타내었다.
실시예 2. 화학요법치료제와 병용시 인간의 방광암종 세포주에 미치는 PM00104의 효과 측정을위한 시험관내 연구.
이 연구의 목적은 방광암종 치료에 사용되는 화학요법치료제의 항종양 활성을 증강시키는 PM00104의 능력을 측정하기 위한 것이다.
다음의 물질들을 PM00104와 병용하여 평가하였다: 겜시타빈 (Gemzar
) 및 시스플라틴. 이 분석을 위한 인간의 방광암종 세포주는 다음으로부터 선택하였다: 5637 및 UM-UC-3 세포주. 5637 세포주는 10% FBS, 1.5 g/L 중탄산나트륨, 4.5 g/L 글루코스, 10 mM HEPES, 1 mM 피루브산나트륨, 및 2 mM L-글루타민이 보강된 RPMI 1640 배지에서 배양시켰다. UM-UC-3 세포주는 10% FBS 및 2 mM L-글루타민이 보강된 MEM 이글 배지에서 배양하였다.
실시예 1에 설명된 바와 같이 두 부분으로 나누어서 스크리닝을 실시하였다:
a. 제1 세트의 분석에서는, 각각의 종양 세포주들을 약물에 72 시간 노출 시킨 후, 각각의 약물의 IC50 값을 측정하였다. 실시예 1에 설명된 것과 동일한 방법론을 이용하였다.
PM00104 및 시스플라틴의 스톡 용액들을 2.0 mg/mL로 100% DMSO 중에 제조하였다. 겜시타빈의 스톡 용액은 2.0 mg/mL의 조직 배양을 위해 멸균수 중에서 제조하였다. 부가적인 계대 희석물을 무혈청 RPMI 1640 배지 중에서 만들어서 최종 4x 처리 통도로 하였다. 웰 당, 각각의 희석된 시험 물질 50μL 씩을 첨가하였다.
시험 물질 각각에 대한 2 내지 4회의 분석의 평균값으로부터 IC50 값을 구하였다. 각 세포주에 대한 각각의 제제의 개별적인 IC50 값을 표 2에 나타내었다.
| 각 약물의 IC50값( mg/mL) | |||
| 세포주 | PM00104 | 겜시타빈 | 시스플라틴 |
| 5637 | 5.6E-06 | 1.9E-05 | 2.4E-03 |
| UM-UC-3 | 6.9E-06 | 2.2E-05 | 5.3E-04 |
b. 제2 세트의 분석에서, 각각의 세포주들을 실시예 1에 설명된 것과 동일한 투여량 비율의, PM00104와 전술한 각 물질과의 복합제와 함께 인큐베이션시켰다.
이 두번째 스크리닝 부분에 사용된 방법론은 실시예 1에 설명된 것과 동일하였다.
역시, 각 약물의 스톡 용액을 2.0 mg/mL의 약물 농도로 전술한 바와 같이 제조하였다. 이 스톡 용액들을 필요에 따라 더ㅓ 계대 희석하여 출발 농도를 얻었다. 부가적인 계대 희석물을 무혈청 RPMI 1640 배지에서 제조하여 최종 8x 처리 농도를 얻었다. 각 웰에 각각의 희석된 시험 물질 25 μL 씩을 첨가하였다.
이 분석에 따라 다음 사실이 밝혀졌다:
a. 인간의 방광암종 세포에서, PM00104와 겜시타빈과의 복합제는 5637 세포주 (도 19)에서 상승적이었고, UM-UC-3 세포주 (도 20)에서는 가산적이어다.
b. PM00104와 시스플라틴과의 복합제는 5637 세포주 (도 21)에서는 상승적이었고, UM-UC-3 세포주 (도 22)에서는 60/40, 30/70, 및 25/75의 투여량 비율에서 가산적이었다.
실시예 3. 화학요법치료제와 병용시 인간의 췌장암종 세포주에 미치는 PM00104의 효과 측정을 위한 시험관내 연구
이 연구의 목적은 췌장암종 치료에 사용되는 화학요법치료제의 항종양 활성을 증강시키는 PM00104의 능력을 측정하기 위한 것이었다.
PM00104와 병용 평가한 약물은 겜시타빈 (Gemzar
)이었다. 이 연구 분석을 위해 선택한 인간의 췌장암종 세포주는 다음과 같았다: BxPC-3, PANC-1, MIA PaCA-2, 및 SW1990 세포주. BxPC-3 세포주를 10% FBS, 1.5 g/L 중탄산나트륨, 4.5 g/L 글루코스, 10 mM HEPES, 1 mM 피루브산나트륨, 및 2 mM L-글루타민이 보강된 RPMI 1640 배지에서 배양시켰다. PANC-1 세포주는 10% FBS, 1.5 g/L 중탄산나트륨, 4.5 g/L 글루코스, 및 4 mM L-글루타민이 보강된 DMEM에서 배양하였다. MIA PaCA-2 세포주는 10% FBS, 1.5 g/L 중탄산나트륨, 4.5 g/L 글루코스, 2.5% 말 혈청, 및 2 mM L-글루타민이 보강된 DMEM에서 배양하였다. SW1990 세포주는 10% FBS 및 2 mM L-글루타민이 보강된 RPMI 1640 배지에서 배양하였다.
실시예 1에 설명된 바와 같이 두 부분으로 나누어서 스크리닝을 수행하였다:
a. 제1 세트의 분석에서, 각 종양 세포주에 약물을 72 시간 노출시킨 후 각각의 약물에 대한 IC50 값을 측정하였다. 실시예 1에 기재된 것과 동일한 방법론을이용하였다.
PM00104의 스톡 용액을 2.0 mg/mL에서 100% DMSO 중에 제조하였다. 겜시타빈의 스톡 용액은 조직배양을 위해 2.0 mg/mL에서 멸균수 중에서 제조하였다. 부가적인 계대 희석물을 무혈청 RPMI 1640 배지에서 제조하여 최종 4x 처리 농도로 하였다. 각 웰마다 각각의 시험 물질 50 μL씩을 첨가하였다.
각각의 시험 물질에 대한 3회 분석치의 평균값으로부터 IC50 값을 구하였다. 각 세포주에 대한 각각의 약물의 개별적인 IC50 값은 다음 표 3에 나타낸 바와 같다.
| 각 약물의 IC50값( mg/mL) | ||
| 세포주 | PM00104 | 겜시타빈 |
| BxPC-3 | 3.6E-05 | 8.4E-04 |
| PANC-1 | 1.5E-05 | 1.1E-01 |
| MIA PaCA-2 | 9.3E-05 | 7.9E-05 |
| SW1990 | 5.1E-06 | 1.2E-05 |
b. 제2 세트의 분석에서, 각각의 세포주를 실시예 1에 설명된 것과 동일 투여량 비율의 PM00104 및 겜시타빈과의 복합제와 함께 인큐베이션시켰다.
이 제2 스크리닝 부분에 사용된 방법은 실시에 1에 설명된 것과 동일하였다.
역시, 각 약물의 스톡 용액을 2.0 mg/mL의 약물 농도로 전술한 바와 같이 제조하였다. 이 스톡 용액들을 필요에 따라 더ㅓ 계대 희석하여 출발 농도를 얻었다. 부가적인 계대 희석물을 무혈청 RPMI 1640 배지에서 제조하여 최종 8x 처리 농도를 얻었다. 각 웰에 각각의 희석된 시험 물질 25 μL 씩을 첨가하였다.
이 분석에 따라, 인간 췌장암종 세포에 있어서 PM00104와 겜시타빈과의 복합제는 모든 세포주 (BxPC-3 (도 23), PANC-1 (도 24), MIA PaCA-2 (도 25), 및 SW1990 (도 26) 세포주에서 상승적인 것으로 밝혀졌다.
실시예 4. 얼로티닙 및 겜시타빈과 병용시 인간의 췌장 종양 이종이식편에 미치는 PM00104의효과를 측정하기 위한 생체내 연구
이 연구의 목적은 인간 췌장 암종 이종이식편모델을 이용함으로써 얼로티닙과 겜시타빈의 항종양 활성을 증가하는데 있어서의 PM00104의 능력을 평가하기위한 것이었다.
모든 실험에 암컷 무흉선 누드 마우스(Harlan Sprague Dawley, Madison, WI)를 이용하였다. 마우스들을 물과 음식물을 마음껏 먹을 수 있도록 하면서 통기시설이 된 랙 케이지에 가두었다. 마우스들을 종양 세포 현탁액으로 종양을 이식하기 적어도 5일 전에 순응시켰다. 비히클 대조군은 15마리의 마우스를 포함하였으며 처리군은 각각 10 마우스/군으로 이루어졌다.
이 연구에 사용된 종양 모델은 MIAPaCA-2 세포주였으며, 이것은 ATCC (Manassas, VA)로부터 수득하였다.
10% FBS, 1.5 g/L 중탄산나트륨, 4.5 g/L 글루코스, 2.5% Horse Serum, 및 4 mM L-글루타민이 보강된 DMEM에서 MIA PaCA-2 세포를 배앙하였다. 투관침을 이용하여 각 동물의 오른쪽 옆구리에 50% 마트리겔(Matrigel)/50% 무혈청 배지 (항생제 없음)의 0.2 mL 현탁액 중, 시험관내 패시지 18로부터, 1x107 MIAPaCA-2 세포를 피하(SC) 이식하였다. 마트리겔은 3℃에서는 액체이고 37℃에서는 고체인 생물학적 세포외 매트릭스로서, 세포를 국소 부위 중에 근접하게 유지시킴으로써 종양 성장을 촉진한다. 이식을 위해 준비된 세포 분주액에 대하여 세균 배양을 실시하였다. 모든 배양물은 이식한 지 24시간 및 48시간 후 세균 감염되지 않았다.
버니어 캘리퍼를 이용하여 종양을 측정하였다. 장형 타원체에 대한 부피 산출을 위한 방정식을 이용하여 2차원 종양 측정치로부터 종양 부피 (mm3)를 구하였다: 종양 부피 (mm3) = [L x W2] ÷ 2, (여기서 L은 길이로서, mm 단위로 나타낸 종양의 최장 직경이고, W는 폭으로서, mm 단위로 나타낸 종양의 최단 직경이다). 단위 밀도를 상정하여, 부피를 중량으로 변환하였다 (즉, 1 mm3 = 1 mg). 종양이 175 ± 100 mm3 (평균 ± SD)의 크기 범위 이내에서 적절한 부피에 도달하였을 때, LabCat
In Life module V 8.0 SP1 종양 추적 및 측정 소프트웨어를 이용함으로써 종양의 무게에 기반하여 처리군과 대조군으로 마우스들을 무작위적으로 나누었다.
DPI (이식 후 경과일수: Day Post Implantation) 13에 처리를 개시하였다. 이 실험에서, 복합요법군은 두 가지 약물들을 동시에 투여함으로써 처리하였으며, 순차 치료는 시도하지 않았다.
PM00104는 동결건조된 PM00104 분말의 바이알 형태로 제공하여 주사용수와 재조성시켜 사용하였다. 얼로티닙은 정제 형태로 제공되었으며 0.5% 카복시메틸셀룰로스/0.4% Tween-80/염수에 용해시켰다. 겜시타빈은 겜시타빈 HCl을 함유하는 고상의 백색 분말 형태로서 제공하였으며, 0.9% 염수에 재조성하여 사용하였다. 연구 그룹과 처리 방식을 표 4에 요약하였다.
| 군 | 투여량 | 경로 | 스케쥴 | 시험물질 |
| G1 (대조군) |
10 ml/kg/일 | IV | A | 염수 중0.18% 위약 |
| G2 | 0.90 mg/kg/일 | IV | A | PM00104 |
| G3 | 100 mg/kg/일 | PO | B | 얼로티닙 |
| G4 | 50 mg/kg/일 | PO | B | 얼로티닙 |
| G5 | 140 mg/kg/일 | IP | A | 겜시타빈 |
| G6 | 0.90 mg/kg/일 140 mg/kg/일 |
IV IP |
A A |
PM00104 겜시타빈 |
| G7 | 0.90 mg/kg/일 100 mg/kg/일 |
IV PO |
A B |
PM00104 얼로티닙 |
| G8 | 0.90 mg/kg/일 50 mg/kg/일 |
IV PO |
A B |
PM00104 얼로티닙 |
IP: 복강내 투여; PO: 경구 투여; IV: 정맥내 투여
A: DPI 13, 20, 및 27; B: DPI 13-16, 19-23, 26-30, 33-36
위약(Placebo):500 mg 수크로스 + 34 mg 인산칼륨 + 인산 q.s. pH 3.8-4.4
연구가 종결될 때까지 처리 개시일로부터 일주일에 2회씩 종양 크기 측정치를 기록하였다. 서로 다른 분석 농도에서 얼로티닙 또는 겜시타빈 평균 종양 중량 각각에 대한 복합제 (PM00104와 얼로티닙 또는 PM00104와 겜시타빈) 중의 2종의 약제 간의 평균 종양 중량을 비교함으로써 종양 성장 억제율을 평가하였다.
평균, 평균의 표준 편차 및 표준 오차를 모든 평가시마다 모든 동물군에 대한 종양 부피에 대해 측정하였다. 연구 종기를 포함하여 각각의 측정일에서 종양 부피에 대하여 Student's t 테스트를 실시하여, 복합 치료군과 단일 단독요법 치료군 사이에 통계적으로 유의적인 차이가 있는지를 분석하였다.
증강 효과 및 복합 요법에 대한 가산성 정도의 평가를 위한 정의 및 기준은 다음과 같았다:
- 복합 치료에 사용된 것과 동일한 투약 스케쥴과 동일한 투약량을 사용한 경우 단일 약제(단독요법:monotherapy)로서 가장 우수한 활성을 나타내는 약물의 최고 반응보다, 복합요법의 반응이 더 좋은 경우 증강 효과가 있다고 결정하였다.
- 가산성(additivity)은 단독요법의 종양 성장 억제 PM00104를 다음과 같은 복합 치료의 경우와 비교함으로써 결정하였다:
1. 복합제에 사용되는 것과 동일한 투여량으로 단독요법으로서 투여되는 경우의 각각의 약물의 100-% T/C로서의 종양 성장 억제%를 측정. % T/C는 처리군(T)의 평균 종양 중량을 대조군(C)의 평균 종양 중량과 비교함으로써 얻었다 (T/C x 100%).
2. 각각의 약제가 단독요법으로 투약된 경우와 동일한 반응을 나타낼 경우, 두 개의 점수를 합산하여 "예상 반응 (expected response)"을 측정하였다.
3. 이 "예상 반응"을 복합치료군에 대해 측정된 종양 성장 억제 %로부터 뺐다. 그 결과:
a. 얻어진 숫자가 음수이면, 두 가지 약물을 병용한 경우의 효과가 단순 가산한 경우보다 저조함을 의미하였다.
b. 얻어진 숫자가 0에 가까우면, 두 가지 약물을 병용한 효과를 단순 가산 정도로 본다.
c. 얻어진 숫자가 양수이면, 두 가지 약물을 병용한 효과가 단순 가산한 경우보다 더 좋음을 의미한다.
따라서, 복합 요법이 가산 효과보다 우수할 경우 상승 효과를 내는 것에 상응하며, 여기서 두 가지 약물의 병용 효과는 각각의 약물을 단독으로 투약할 때 기대되는 효과보다 치료적으로 더 우수한 것이다.
표 5는 각각의 처리시 얻어진 %T/C 값을 나타낸 것이고, 도 27-29는 여러가지 투여량의 대조군(비히클), PM00104, 겜시타빈, PM00104 플러스 겜시타빈, 또는 PM00104 플러스 얼로티닙으로 처리된 마우스에 있어서, MIAPaCA-2 종양의 종양 부피 평가 (평균 ±SEM) 결과를 도시한 것이다.
| % T/C | ||||||||
| 군 | 제13일 | 제15일 | 제19일 | 제22일 | 제27일 | 제29일 | 제33일 | 제36일 |
| G1 (대조군) |
- | - | - | - | - | - | - | - |
| G2 | 99.1 | 87.1 | 77.2 | 60.8 | 69.2 | 60.0 | 63.9 | 56.6 |
| G3 | 103.3 | 115.4 | 122.5 | 96.4 | 96.0 | 96.4 | 102.7 | 106.0 |
| G4 | 101.5 | 96.7 | 113.2 | 104.4 | 148.6 | 132.0 | 115.3 | 117.7 |
| G5 | 100.0 | 105.7 | 97.0 | 85.5 | 89.5 | 86.3 | 87.7 | 100.3 |
| G6 | 101.0 | 82.7 | 66.0 | 48.8 | 44.2 | 43.2 | 43.3 | 63.7 |
| G7 | 96.9 | 61.7 | 42.1 | 32.7 | 35.3 | 29.5 | 30.3 | 46.0 |
| G8 | 100.2 | 72.6 | 62.3 | 51.6 | 49.7 | 46.1 | 44.3 | 75.7 |
표 6은 PM00104 및 겜시타빈을 단독 약제로서 투여하였을 경우 및 0.9 mg/kg/일의 투여량의 PM00104와 140 mg/kg/일의 투여량의 겜시타빈과의 복합제로서 투여하였을 경우의 종양 성장 억제%를 보여준다. 부가적으로, 상기 투여량에 있어서의 PM00104와 겜시타빈과의 복합제의 가산 정도 및 증강 효과도 제공한다.
| 일 | % 억제 | 예상 반응 | 실제 반응 | 증강 효과 | 반응 정도 | ||
| G2 | G5 | G6 | |||||
| 13 | 0.9 | 0.0 | -1.0 | 0.94 | -1.92 | 없음 | - |
| 15 | 12.9 | -5.7 | 17.3 | 7.13 | 10.2 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 19 | 22.8 | 3.0 | 34.0 | 25.85 | 8.18 | 있음 | 합 |
| 22 | 39.2 | 14.5 | 51.2 | 53.75 | -2.51 | 있음 | 합 |
| 27 | 30.8 | 10.5 | 55.8 | 41.27 | 14.5 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 29 | 40.0 | 13.7 | 56.8 | 53.69 | 3.15 | 있음 | 합 |
| 33 | 36.1 | 12.3 | 56.7 | 48.45 | 8.29 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 36 | 43.4 | -0.3 | 36.3 | 43.07 | -6.77 | 없음 | - |
표 7은 PM00104 및 얼로티닙을 단독 약제로서 투여하였을 경우 및 0.9 mg/kg/일의 투여량의 PM00104와 100 mg/kg/일의 투여량의 얼로티닙과의 복합제로서 투여하였을 경우의 종양 성장 억제%를 보여준다. 부가적으로, 상기 투여량에 있어서의 PM00104와 얼로티닙과의 복합제의 가산 정도 및 증강 효과도 제공한다.
| 일 | % 억제 | 예상 반응 | 실제 반응 | 증강 효과 | 반응 정도 | ||
| G2 | G3 | G7 | |||||
| 13 | 0.9 | -3.3 | 3.1 | -2.37 | 5.47 | 있음 | 가산값 |
| 15 | 12.9 | -15.4 | 38.3 | -2.54 | 40.84 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 19 | 22.8 | -22.5 | 57.9 | 0.37 | 57.53 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 22 | 39.2 | 3.6 | 67.3 | 42.85 | 24.45 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 27 | 30.8 | 4.0 | 64.7 | 34.76 | 29.94 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 29 | 40.0 | 3.7 | 70.5 | 43.61 | 26.89 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 33 | 36.1 | -2.7 | 69.7 | 33.44 | 36.26 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 36 | 43.4 | -6.0 | 54.0 | 37.37 | 16.63 | 있음 | 가산값보다 큼 |
표 8은 PM00104 및 얼로티닙을 단독 약제로서 투여하였을 경우 및 0.9 mg/kg/일의 투여량의 PM00104와 50 mg/kg/일의 투여량의 얼로티닙과의 복합제로서 투여하였을 경우의 종양 성장 억제%를 보여준다. 부가적으로, 상기 투여량에 있어서의 PM00104와 얼로티닙과의 복합제의 가산 정도 및 증강 효과도 제공한다.
| 일 | % 억제 | 예상 반응 | 실제 반응 | 증강 효과 | 반응 정도 | ||
| G2 | G4 | G8 | |||||
| 13 | 0.9 | -1.5 | -0.2 | -0.56 | 0.36 | no | - |
| 15 | 12.9 | 3.3 | 27.4 | 16.2 | 11.2 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 19 | 22.8 | -13.2 | 37.7 | 9.62 | 28.08 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 22 | 39.2 | -4.4 | 48.4 | 34.78 | 13.62 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 27 | 30.8 | -48.6 | 50.3 | -17.82 | 68.12 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 29 | 40.0 | -32.0 | 53.9 | 7.94 | 45.96 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 33 | 36.1 | -15.4 | 55.7 | 20.76 | 34.94 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 36 | 43.4 | -17.7 | 24.3 | 25.69 | -1.39 | no | - |
이 분석에 따라 다음 사실이 밝혀졌다:
a. PM00104와 겜시타빈과의 복합제는 대조군과 비교할 때 통계적으로 유의적인 (p≤0.001) 항종양 활성을 나타내었다. 이 복합 요법은 단독 약제군에서 얻어진 결과를 통계적으로 유의적으로 (p<0.001) 증강시키는 능력을 나타내었다. 이 처리 말기에 이러한 증강 효과는 가산값보다 더 큰 것으로 측정되었다.
b. PM00104와 얼로티닙과의 복합제 (두가지 투여량의 얼로티닙 모두에 있어서)는 대조군에 비해 통계적으로 유의적인 (p≤0.001) 항종양 활성을 나타내었을 뿐만 아니라, 단독 약제군에서 얻어진 결과를 통계적으로 유의적으로 (p<0.001) 증강시키는 능력을 나타내었다. 이 처리 말기에 이러한 증강 효과는 가산값보다 더 큰 것으로 측정되었다.
실시예 5. 겜시타빈과 병용시 인간의 췌장 종양 이종이식편에 미치는 PM00104의 효과를 측정하기 위한 생체내 연구.
이 연구의 목적은 인간의 췌장암종의 이종이식편 모델을 이용함으로써 겜시타빈의 항종양 활성을 증강시키는 PM00104의 능력을 평가하기 위한 것이었다.
모든 실험에 암컷 CB17.SCID 마우스 (Charles River Lab.)를 사용하였다. 마우스들을 물과 음식물을 마음껏 먹을 수 있도록 하면서 통기시설이 된 랙 케이지에 가두었다. 마우스들을 종양 세포 현탁액으로 종양을 이식하기 적어도 5일 전에 순응시켰다. 비히클 대조군은 15마리의 마우스를 포함하였으며 처리군은 각각 10 마우스/군으로 이루어졌다.
이 연구에 사용된 종양 모델은 BxPC-3 세포주였으며, 이것은 ATCC (Manassas, VA)로부터 수득하였다.
항생제 없이, 10% FBS 및 L-글루타민이 보강된 완전 RPMI 1640에서 BxPC-3 세포를 배양시켰다. 각각의 동물들을 13G 투관침 및 1 cc 시린지를 이용하여, Matrigel 및 RPMI 1640 무혈청 배지 (항생제 없음)의 0.2 mL 현탁액 중 시험관내 패시지 12로부터 1x107 BxPC-3 세포를 오른쪽 옆구리에 SC 이식하였다. 이식용으로 준비된 세포 분주액에 대하여 세균 배양을 실시하였다. 모든 배양물은 이식한지 24시간과 48시간 후 모두에서 세균 오염이 없었다.
실시예 4에 설명된 바와 같이 종양 측정을 실시하였다.
종양이 175 ± 100 mm3 (평균 ± SD)의 크기 범위 이내에서 적절한 부피에 도달하였을 때, LabCat
In Life module V 8.0 SP1 종양 추적 및 측정 소프트웨어를 이용함으로써 종양의 무게에 기반하여 처리군과 대조군으로 마우스들을 무작위적으로 나누었다. DPI 14에 처리를 개시하였다.
PM00104는 동결건조된 PM00104 분말의 바이알 형태로 제공하여 주사용수와 재조성시켜 사용하였다. 겜시타빈은 겜시타빈 HCl을 함유하는 고상의 백색 분말 형태로서 제공하였으며, 0.9% 염수에 재조성하여 사용하였다.
연구 그룹과 처리 방식을 표 4에 요약하였다.
| 군 | 투여량 | 경로 | 스케쥴 | 시험 물질 |
| G1 (대조군) |
10 ml/kg/일 | IV | A | 염수 중0.18% 위약 |
| G2 | 0.90 mg/kg/일 | IV | A | PM00104 |
| G3 | 180 mg/kg/일 | IP | A | 겜시타빈 |
| G4 | 0.90 mg/kg/일 180 mg/kg/일 |
IV IP |
A A |
PM00104 겜시타빈 |
A: DPI 14, 21, 및 28; 위약: 500 mg 수크로스 + 34 mg 인산칼륨 +
인산 q.s. pH 3.8-4.4
연구가 종결될 때까지 처리 개시일로부터 일주일에 2회씩 종양 크기 측정치를 기록하였다. 겜시타빈 평균 종양 중량 각각에 대한 복합제 (PM00104와 겜시타빈) 중의 2종의 약제 간의 평균 종양 중량을 비교함으로써 종양 성장 억제율을 평가하였다.
평균, 평균의 표준 편차 및 표준 오차를 모든 평가시마다 모든 동물군에 대한 종양 부피에 대해 측정하였다. 연구 종기를 포함하여 각각의 측정일에서 종양 부피에 대하여 Student's t 테스트를 실시하여, 복합 치료군과 단일 단독요법 치료군 사이에 통계적으로 유의적인 차이가 있는지를 분석하였다. 복합요법의 증강 효과 및 가산 정도의 평가를 위한 기준과 정의는 실시에 4에 설명된 것과 동일하다.
표 10은 각각의 처리시 얻어진 %T/C 값을 나타낸 것이고, 도 30은 대조군(비히클), PM00104, 겜시타빈, 및 PM00104 플러스 겜시타빈으로 처리된 마우스에 있어서, BxPC-3 종양의 종양 부피 평가 (평균 ±SEM) 결과를 도시한 것이다.
| % T/C on day | ||||||||
| 군 | 14 | 16 | 19 | 22 | 26 | 29 | 34 | 40 |
| G1 (대조군) |
- | - | - | - | - | - | - | - |
| G2 | 100.9 | 140.3 | 126.1 | 116.5 | 92.2 | 106.3 | 116.8 | 126.3 |
| G3 | 96.9 | 144.6 | 115.6 | 74.5 | 106.1 | 79.3 | 68.7 | 133.9 |
| G4 | 98.3 | 98.1 | 79.7 | 70.1 | 74.7 | 46.9 | 55.8 | 96.9 |
표 11은 PM00104 및 겜시타빈을 단독 약제로서 투여하였을 경우 및 0.9 mg/kg/일의 투여량의 PM00104와 180 mg/kg/일의 투여량의 겜시타빈과의 복합제로서 투여하였을 경우의 종양 성장 억제%를 보여준다. 부가적으로, 상기 투여량에 있어서의 PM00104와 겜시타빈과의 복합제의 가산 정도 및 증강 효과도 제공한다.
| 일 | % 억제 | 예상 반응 | 실제 반응 | 증강 효과 | 반응 정도 | ||
| G2 | G3 | G4 | |||||
| 14 | -0.9 | 3.1 | 1.7 | 2.2 | -0.5 | no | - |
| 16 | -40.3 | -44.6 | 1.9 | -84.9 | 86.8 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 19 | -26.1 | -15.6 | 20.3 | -41.7 | 62 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 22 | -16.5 | 25.5 | 29.9 | 9 | 20.9 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 26 | 7.8 | -6.1 | 25.3 | 1.7 | 23.6 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 29 | -6.3 | 20.7 | 53.1 | 14.4 | 38.7 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 34 | -16.8 | 31.3 | 44.2 | 14.5 | 29.7 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 40 | -26.3 | -33.9 | 3.1 | -60.2 | 63.3 | 있음 | 가산값보다 큼 |
이 분석에 따라, PM00104와 겜시타빈과의 복합제는 대조군과 비교할 때 통계적으로 유의적인 (p≤0.05) 항종양 활성을 나타내는 것으로 밝혀졌다. 또한, 이 복합 요법은 가산값보다 큰 활성 증강 효과를 나타내었다.
실시예 6. 얼로티닙과 병용시 인간 췌장 종양 이종이식편에 미치는 PM00104의 효과를 측정하기 위한 생체내 연구
이 연구의 목적은 인간 췌장 암종의 이종이식편 모델을 이용함으로써 얼로티닙의 항종양 활성을 증강시키는 PM00104의 능력을 평가하기 위한 것이었다.
모든 실험에 암컷 CB17.SCID 마우스 (Charles River Lab.)를 사용하였다. 마우스들을 물과 음식물을 마음껏 먹을 수 있도록 하면서 통기시설이 된 랙 케이지에 가두었다. 마우스들을 종양 세포 현탁액으로 종양을 이식하기 적어도 5일 전에 순응시켰다. 비히클 대조군은 15마리의 마우스를 포함하였으며 처리군은 각각 10 마우스/군으로 이루어졌다.
이 연구에 사용된 종양 모델은 BxPC-3 세포주였으며, 이것은 ATCC (Manassas, VA)로부터 수득하였다. 이 세포주를 실시예 5에 설명된 바와 같이 배양하여 동물에게 이식하였다.
종양 측정은 실시예 4에 설명된 바와 같이 행하였다. 종양이 175 ± 100 mm3 (평균 ± SD)의 크기 범위 이내에서 적절한 부피에 도달하였을 때, LabCat
In Life module V 8.0 SP1 종양 추적 및 측정 소프트웨어를 이용함으로써 종양의 무게에 기반하여 처리군과 대조군으로 마우스들을 무작위적으로 나누었다. DPI 9에 처리를 개시하였다.
PM00104는 동결건조된 PM00104 분말의 바이알 형태로 제공하여 주사용수와 재조성시켜 사용하였다. 얼로티닙은 정제 형태로 제공하여 0.5% 카복시메틸셀룰로스/0.4% Tween-80/염수 (CTS)에 용해시켰다. 연구 그룹과 처리 방법을 표 12에 요약하였다.
| 군 | 투여량 | 경로 | 스케쥴 | 시험 물질 |
| G1 (대조군) |
10 ml/kg/일 10 ml/kg/일 |
PO IV |
A B |
CTS 염수 중 0.18% 위약 |
| G2 | 0.90 mg/kg/일 | IV | B | PM00104 |
| G3 | 50 mg/kg/일 | PO | A | 얼로티닙 |
| G4 | 30 mg/kg/일 | PO | A | 얼로티닙 |
| G5 | 15 mg/kg/일 | PO | A | 얼로티닙 |
| G6 | 0.90 mg/kg/일 50 mg/kg/일 |
IV PO |
B A |
PM00104 얼로티닙 |
| G7 | 0.90 mg/kg/일 30 mg/kg/일 |
IV PO |
B A |
PM00104 얼로티닙 |
| G8 | 0.90 mg/kg/일 15 mg/kg/일 |
IV PO |
B A |
PM00104 얼로티닙 |
A: 사이클 1= DPI 9-13; 사이클 2= DPI 16-20; 사이클 3=DPI 23-27
B: DPI 9, 16, 및 23
위약: 500 mg 수크로스 + 34 mg 인산칼륨 + 인산 q.s. pH 3.8-4.4
연구가 종결될 때까지 처리 개시일로부터 일주일에 2회씩 종양 크기 측정치를 기록하였다. 여러가지 측정 농도에서의 얼로티닙 평균 종양 중량 각각에 대한 복합제 (PM00104와 얼로티닙) 중의 2종의 약제 간의 평균 종양 중량을 비교함으로써 종양 성장 억제율을 평가하였다.
평균, 평균의 표준 편차 및 표준 오차를 모든 평가시마다 모든 동물군에 대한 종양 부피에 대해 측정하였다. 연구 종기를 포함하여 각각의 측정일에서 종양 부피에 대하여 Student's t 테스트를 실시하여, 복합 치료군과 단일 단독요법 치료군 사이에 통계적으로 유의적인 차이가 있는지를 분석하였다. 복합요법의 증강 효과 및 가산 정도의 평가를 위한 기준과 정의는 실시에 4에 설명된 것과 동일하다.
표 13은 각각의 처리시 얻어진 %T/C 값을 나타낸 것이고, 도 31-33은 대조군(비히클), PM00104, 얼로티닙, 및 PM00104 플러스 얼로티닙으로 처리된 마우스에 있어서, BxPC-3 종양의 종양 부피 평가 (평균 ±SEM) 결과를 도시한 것이다.
| % T/C on day | |||||||||
| 군 | 9 | 12 | 15 | 19 | 21 | 26 | 29 | 33 | 40 |
| G1 (대조군) |
- | - | - | - | - | - | - | - | - |
| G2 | 103.8 | 90.0 | 120.0 | 98.6 | 69.9 | 82.6 | 69.4 | 82.2 | 85.8 |
| G3 | 102.5 | 84.9 | 114.2 | 102.6 | 84.5 | 91.0 | 59.3 | 87.9 | 84.6 |
| G4 | 104.2 | 84.9 | 105.8 | 93.5 | 83.7 | 114.2 | 84.8 | 87.0 | 85.5 |
| G5 | 99.5 | 75.9 | 92.2 | 79.0 | 66.2 | 92.5 | 83.8 | 92.1 | 81.2 |
| G6 | 105.8 | 39.5 | 19.9 | 18.8 | 25.4 | 27.0 | 42.0 | 48.6 | 49.9 |
| G7 | 103.0 | 38.7 | 19.6 | 23.1 | 29.9 | 29.7 | 41.5 | 65.0 | 75.6 |
| G8 | 106.1 | 40.2 | 34.6 | 23.7 | 14.0 | 14.3 | 27.4 | 43.6 | 51.7 |
표 14는 PM00104 및 얼로티닙을 단독 약제로서 투여하였을 경우 및 0.9 mg/kg/일의 투여량의 PM00104와 50 mg/kg/일의 투여량의 얼로티닙과의 복합제로서 투여하였을 경우의 종양 성장 억제%를 보여준다. 부가적으로, 상기 투여량에 있어서의 PM00104와 얼로티닙의 복합제의 가산 정도 및 증강 효과도 제공한다.
| 일 | % 억제 | 예상 반응 | 실제 반응 | 증강 효과 | 반응 정도 | ||
| G2 | G3 | G6 | |||||
| 9 | -3.8 | -2.5 | -5.8 | -6.3 | 0.5 | 없음 | - |
| 12 | 10.0 | 15.1 | 60.5 | 25.1 | 35.4 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 15 | -20.0 | -14.2 | 80.1 | -34.2 | 114.3 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 19 | 1.4 | -2.6 | 81.2 | -1.2 | 82.4 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 21 | 30.1 | 15.5 | 74.6 | 45.6 | 29.0 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 26 | 17.4 | 9.0 | 73.0 | 26.4 | 46.6 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 29 | 30.6 | 40.7 | 58.0 | 71.3 | -13.3 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 33 | 17.8 | 12.1 | 51.4 | 29.9 | 21.5 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 40 | 14.2 | 15.4 | 50.1 | 29.6 | 20.5 | 있음 | 가산값보다 큼 |
표 15는 PM00104 및 얼로티닙을 단독 약제로서 투여하였을 경우 및 0.9 mg/kg/일의 투여량의 PM00104와 30 mg/kg/일의 투여량의 얼로티닙과의 복합제로서 투여하였을 경우의 종양 성장 억제%를 보여준다. 부가적으로, 상기 투여량에 있어서의 PM00104와 얼로티닙과의 복합제의 가산 정도 및 증강 효과도 제공한다.
| 일 | % 억제 | 예상 반응 | 실제 반응 | 증강 효과 | 반응 정도 | ||
| G2 | G4 | G7 | |||||
| 9 | -3.8 | -4.2 | -3.0 | -8.0 | 5.0 | 없음 | - |
| 12 | 10.0 | 15.1 | 61.3 | 25.1 | 36.2 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 15 | -20.0 | -5.8 | 80.4 | -25.8 | 106.2 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 19 | 1.4 | 6.5 | 76.9 | 7.9 | 69.0 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 21 | 30.1 | 16.3 | 70.1 | 46.4 | 23.7 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 26 | 17.4 | -14.2 | 70.3 | 3.2 | 67.1 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 29 | 30.6 | 15.2 | 58.5 | 45.8 | 12.7 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 33 | 17.8 | 13.0 | 35.0 | 30.8 | 4.2 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 40 | 14.2 | 14.5 | 24.4 | 28.7 | -4.3 | 있음 | 가산값 |
표 16은 PM00104 및 얼로티닙을 단독 약제로서 투여하였을 경우 및 0.9 mg/kg/일의 투여량의 PM00104와 15 mg/kg/일의 투여량의 얼로티닙과의 복합제로서 투여하였을 경우의 종양 성장 억제%를 보여준다. 부가적으로, 상기 투여량에 있어서의 PM00104와 얼로티닙과의 복합제의 가산 정도 및 증강 효과도 제공한다.
| 일수 | % 억제 | 예상 반응 | 실제 반응 | 증강 효과 | 반응 정도 | ||
| G2 | G5 | G8 | |||||
| 9 | -3.8 | 0.5 | -6.1 | -3.3 | -2.8 | 없음 | - |
| 12 | 10.0 | 24.1 | 59.8 | 34.1 | 25.7 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 15 | -20.0 | 7.8 | 65.4 | -12.2 | 77.6 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 19 | 1.4 | 21.0 | 76.3 | 22.4 | 53.9 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 21 | 30.1 | 33.8 | 86 | 63.9 | 22.1 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 26 | 17.4 | 7.5 | 85.7 | 24.9 | 60.8 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 29 | 30.6 | 16.2 | 72.6 | 46.8 | 25.8 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 33 | 17.8 | 7.9 | 56.4 | 25.7 | 30.7 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 40 | 14.2 | 18.8 | 48.3 | 33.0 | 15.3 | 있음 | 가산값보다 큼 |
이 분석에 따르면, PM00104와 얼로티닙과의 복합제는 시험된 3가지 투여량에서, 항종양 활성의 가산적 효과보다 더 큰 효과를 나타내었음이 밝혀졌다.
실시예 7. 시스플라틴, 파클리탁셀, 및 겜시타빈과 병용시 인간의 방광 종양 이종이식편에 미치는 PM00104의 효과를 측정하기 위한 생체내 연구.
이 연구의 목적은 인간의 방광암의 이종이식편 모들엘 사용함으로써 시스플라틴, 파클리탁셀, 및 겜시타빈의 항종양 활성을 증강시키는데 있어서의 PM00104의 능력을 평가하기 위한 것이었다.
모든 실험에 암컷 무흉선 누드 마우스(Harlan Sprague Dawley, Madison, WI)를 이용하였다. 마우스들을 물과 음식물을 마음껏 먹을 수 있도록 하면서 통기시설이 된 랙 케이지에 가두었다. 마우스들을 종양 세포 현탁액으로 종양을 이식하기 적어도 5일 전에 순응시켰다. 비히클 대조군은 15마리의 마우스를 포함하였으며 처리군은 각각 10 마우스/군으로 이루어졌다.
이 연구에 사용된 종양 모델은 UM-UC-3 세포주였으며, 이것은 ATCC (Manassas, VA)로부터 수득하였다.
UM-UC-3 세포를 10% FBS, 1.5 g/L 중탄산나트륨, 0.1 mM 비필수 아미노산, 1 mM 피루브산나트륨, 및 2 mM L-글루타민이 보강된 최소 필수 배지(Eagle's)에서 배양시켰다. 각각의 동물의 오른쪽 옆구리에 50% 마트리겔(Matrigel) 및 50% 무혈청 배지 (항생제 없음)의 0.2 mL 현탁액 중, 시험관내 패시지 17로부터, 5x106 UM-UC-3 세포를 피하(SC) 이식하였다. 이식을 위해 준비된 세포 분주액에 대하여 세균 배양을 실시하였다. 모든 배양물은 이식한 지 24시간 및 48시간 후 세균 감염되지 않았다.
실시예 4에 설명된 바와 같이 종양 측정을 실시하였다. 종양이 175 ± 100 mm3 (평균 ± SD)의 크기 범위 이내에서 적절한 부피에 도달하였을 때, LabCat
In Life module V 8.0 SP1 종양 추적 및 측정 소프트웨어를 이용함으로써 종양의 무게에 기반하여 처리군과 대조군으로 마우스들을 무작위적으로 나누었다. DPI 15에 처리를 개시하였다.
PM00104는 동결건조된 PM00104 분말의 바이알 형태로 제공하여 주사용수와 재조성시켜 사용하였다. 겜시타빈은 겜시타빈 HCl을 함유하는 고상의 백색 분말 형태로서 제공하였으며, 0.9% 염수에 재조성하여 사용하였다. 시스플라틴과 파클리탁셀은 고체로서 제공되었으며 이를 0.9% 염수에 추가 희석하였다.
연구 그룹과 처리 방법을 표 17에 정리하였다.
| 군 | 투여량 | 경로 | 스케쥴 | 시험 물질 |
| G1 (대조군) |
10 ml/kg/일 | IV | A | 염수 중 0.18% 위약 |
| G2 | 0.90 mg/kg/일 | IV | A | PM00104 |
| G3 | 5 mg/kg/일 | IP | A | 시스플라틴 |
| G4 | 180 mg/kg/일 | IP | A | 겜시타빈 |
| G5 | 15 mg/kg/일 | IP | B | 파클리탁셀 |
| G6 | 0.90 mg/kg/일 5 mg/kg/일 |
IV IP |
A A |
PM00104 시스플라틴 |
| G7 | 0.90 mg/kg/일 180 mg/kg/일 |
IV IP |
A A |
PM00104 겜시타빈 |
| G8 | 0.90 mg/kg/일 15 mg/kg/일 |
IV IP |
A B |
PM00104 파클리탁셀 |
A: DPI 15, 22, 및 29; B: DPI 15, 19, 및 23
위약: 500 mg 수크로스 + 34 mg 인산칼륨 + 인산 q.s. pH 3.8-4.4
연구가 종결될 때까지 처리 개시일로부터 일주일에 2회씩 종양 크기 측정치를 기록하였다. 여러가지 측정 농도에서의 시스플라틴, 겜시타빈 또는 파클리탁셀 평균 종양 중량 각각에 대한 복합제 (PM00104와 시스플라틴, PM00104와 겜시타빈 또는 PM00104와 파클리탁셀) 중의 2종의 약제 간의 평균 종양 중량을 비교함으로써 종양 성장 억제율을 평가하였다.
평균, 평균의 표준 편차 및 표준 오차를 모든 평가시마다 모든 동물군에 대한 종양 부피에 대해 측정하였다. 연구 종기를 포함하여 각각의 측정일에서 종양 부피에 대하여 Student's t 테스트를 실시하여, 복합 치료군과 단일 단독요법 치료군 사이에 통계적으로 유의적인 차이가 있는지를 분석하였다.
복합요법의 증강 효과 및 가산 정도의 평가를 위한 기준과 정의는 실시에 4에 설명된 것과 동일하다.
표 18은 각각의 처리시 얻어진 %T/C 값을 나타낸 것이고, 도 34-36은 대조군(비히클), PM00104, 시스플라틴, 겜시타빈, 파클리탁셀 및 대응하는 복합제로 처리된 마우스에 있어서, UM-UC-3 종양의 종양 부피 평가 (평균 ±SEM) 결과를 도시한 것이다.
| % T/C on day | ||||||||
| 군 | 15 | 20 | 22 | 26 | 29 | 34 | 40 | 43 |
| G1 (대조군) |
- | - | - | - | - | - | - | - |
| G2 | 100.8 | 47.2 | 47.8 | 39.8 | 50.4 | 49.3 | 62.9 | 64.9 |
| G3 | 102.2 | 77.0 | 75.8 | 61.8 | 66.0 | 44.7 | 63.8 | 67.0 |
| G4 | 105.0 | 94.2 | 104.8 | 104.2 | 98.8 | 88.6 | 88.5 | 78.8 |
| G5 | 98.7 | 53.1 | 46.0 | 38.6 | 33.9 | 39.5 | 52.5 | 59.0 |
| G6 | 101.6 | -1.8 | 1.1 | -1.1 | 1.1 | -0.7 | 2.7 | 4.4 |
| G7 | 106.1 | 17.1 | 25.1 | 17.7 | 26.4 | 24.9 | 45.6 | 51.9 |
| G8 | 105.0 | 10.5 | 4.4 | 2.2 | 2.7 | 6.4 | 18.8 | 24.0 |
표 19는 PM00104 및 시스플라틴을 단독 약제로서 투여하였을 경우 및 0.9 mg/kg/일의 투여량의 PM00104와 5 mg/kg/일의 투여량의 시스플라틴과의 복합제로서 투여하였을 경우의 종양 성장 억제%를 보여준다. 부가적으로, 상기 투여량에 있어서의 PM00104와 시스플라틴과의 복합제의 가산 정도 및 증강 효과도 제공한다.
| 일 | % 억제 | 예상 반응 | 실제 반응 | 증강 효과 | 반응정도 | ||
| G2 | G3 | G6 | |||||
| 15 | -0.8 | -2.2 | -1.6 | -3.0 | 1.4 | 없음 | - |
| 20 | 52.8 | 23.0 | 101.8 | 75.8 | 26.0 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 22 | 52.2 | 24.2 | 98.9 | 76.4 | 22.5 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 26 | 60.2 | 38.2 | 101.1 | 98.4 | 2.7 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 29 | 47.4 | 34.0 | 98.9 | 81.4 | 17.5 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 34 | 50.7 | 55.3 | 100.7 | 106.0 | -5.3 | 있음 | 가산값 |
| 40 | 37.1 | 36.2 | 97.3 | 73.3 | 24.0 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 43 | 35.1 | 33.0 | 95.6 | 68.1 | 27.5 | 있음 | 가산값보다 큼 |
표 20은 PM00104 및 겜시타빈을 단독 약제로서 투여하였을 경우 및 0.9 mg/kg/일의 투여량의 PM00104와 180 mg/kg/일의 투여량의 겜시타빈과의 복합제로서 투여하였을 경우의 종양 성장 억제%를 보여준다. 부가적으로, 상기 투여량에 있어서의 PM00104와 겜시타빈과의 복합제의 가산 정도 및 증강 효과도 제공한다.
| 일 | % 억제 | 예상 반응 | 실제 반응 | 증강 효과 | 반응 정도 | ||
| G2 | G4 | G7 | |||||
| 15 | -0.8 | -5.0 | -6.1 | -5.8 | -0.3 | 없음 | - |
| 20 | 52.8 | 5.8 | 82.9 | 58.6 | 24.3 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 22 | 52.2 | -4.8 | 74.9 | 47.4 | 27.5 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 26 | 60.2 | -4.2 | 82.3 | 56.0 | 26.3 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 29 | 47.4 | 1.2 | 73.6 | 48.6 | 25.0 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 34 | 50.7 | 11.4 | 75.1 | 62.1 | 13.0 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 40 | 37.1 | 11.5 | 54.4 | 48.6 | 5.8 | 있음 | 가산값 |
| 43 | 35.1 | 21.2 | 48.1 | 56.3 | -8.2 | 있음 | 가산값보다 작음 |
표 21은 PM00104 및 파클리탁셀을 단독 약제로서 투여하였을 경우 및 0.9 mg/kg/일의 투여량의 PM00104와 15 mg/kg/일의 투여량의 파클리탁셀과의 복합제로서 투여하였을 경우의 종양 성장 억제%를 보여준다. 부가적으로, 상기 투여량에 있어서의 PM00104와 파클리탁셀과의 복합제의 가산 정도 및 증강 효과도 제공한다.
| 일 | % 억제 | 예상 반응 | 실제 반응 | 증강 효과 | 반응 정도 | ||
| G2 | G5 | G8 | |||||
| 15 | -0.8 | 1.3 | -5.0 | 0.5 | -5.5 | 없음 | - |
| 20 | 52.8 | 46.9 | 89.5 | 99.7 | -10.2 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 22 | 52.2 | 54.0 | 95.6 | 106.2 | -10.6 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 26 | 60.2 | 61.4 | 97.8 | 121.6 | -23.8 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 29 | 47.4 | 64.6 | 97.2 | 112.0 | -14.8 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 34 | 50.7 | 60.5 | 93.6 | 111.2 | -17.6 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 40 | 37.1 | 47.5 | 81.2 | 84.6 | -3.4 | 있음 | 가산값 |
| 43 | 35.1 | 41.0 | 76.0 | 76.1 | -0.1 | 있음 | 가산값 |
이 분석에 따라 다음 사실이 밝혀졌다:
a. PM00104와 시스플라틴과의 복합제는 항종양 활성의 가산적인 증강 효과보다 통계적으로 유의적으로 (p<0.001) 더 큰 효과를 나타내었다.
b. PM00104와 겜시타빈과의 복합제는 대조군에 비교할 때 통계적으로 유의적인 (p≤0.001) 항종야 활성을나타내었다. 처리 기간 말기(DPI 29)에는 증강 효과가 가산값보다 더 큰 것으로 나타났다.
c. PM00104와 파클리탁셀과의 복합제는 단독요법 대조군에 비교할 때, 항종양 활성의 통계적으로 유의적인 증강 (p<0.001)을 결과시켰다. 이러한 증강 효과는 실허머 말기에 가산적인 것으로 측정되었다.
실시예 8. 시스플라틴 및 파클리탁셀과 병용시 인간의 위장 종양 이종이식편에 미치는 PM00104의 효과를 측정하기 위한 생체내 연구.
이 연구의 목적은 인간의 위장암종의 이종이식편 모델을 이용함으로써 시스플라틴 및 파클리탁셀의 항종양 활성을 증강시키는 PM00104의 능력을 평가하기 위한 것이었다.
모든 실험에 암컷 무흉선 누드 마우스(Harlan Sprague Dawley, Madison, WI)를 이용하였다. 마우스들을 물과 음식물을 마음껏 먹을 수 있도록 하면서 통기시설이 된 랙 케이지에 가두었다. 마우스들을 종양 세포 현탁액으로 종양을 이식하기 적어도 5일 전에 순응시켰다. 비히클 대조군은 11마리의 마우스를 포함하였고, 그룹 2-4는 7 마리의 마우스를, 나머지 그룹은 8 마리의 마우스로 이루어졌다.
이 연구에 사용된 종양 모델은 Hs746T 세포주였으며, 이것은 ATCC (Manassas, VA)로부터 수득하였다.
Hs746T 세포를 10% FBS, 1.5 g/L 중탄산나트륨, 4.5 g/L 글루코스, 및 4 mM L-글루타민이 보강된 DMEM에서 배양하였다. 각각의 동물의 오른쪽 옆구리에 50% 마트리겔(Matrigel) 및 50% 무혈청 배지 (항생제 없음)의 0.2 mL 현탁액 중, 시험관내 패시지 18로부터, 5x106 Hs746T 세포를 피하(SC) 이식하였다. 이식을 위해 준비된 세포 분주액에 대하여 세균 배양을 실시하였다. 모든 배양물은 이식한 지 24시간 및 48시간 후 세균 감염되지 않았다.
실시예 4에 설명된 바와 같이 종양 측정을 실시하였다. 종양이 175 ± 100 mm3 (평균 ± SD)의 크기 범위 이내에서 적절한 부피에 도달하였을 때, LabCat
In Life module V 8.0 SP1 종양 추적 및 측정 소프트웨어를 이용함으로써 종양의 무게에 기반하여 처리군과 대조군으로 마우스들을 무작위적으로 나누었다. DPI 16에 처리를 개시하였다.
PM00104는 동결건조된 PM00104 분말의 바이알 형태로 제공하여 주사용수와 재조성시켜 사용하였다. 시스플라틴과 파클리탁셀은 용액으로서 제공되었으며 이들은 0.9% 염수에 추가로 희석하였다.
연구 그룹 및 처리 방법을 표 22에 요약하였다.
| 군 | 투여량 | 경로 | 스케쥴 | 시험 물질 |
| G1 (대조군) |
10 ml/kg/일 | IV | A | 염수 중 0.18% 위약 |
| G2 | 0.90 mg/kg/일 | IV | A | PM00104 |
| G3 | 5 mg/kg/일 | IP | B | 시스플라틴 |
| G4 | 10 mg/kg/일 | IP | C | 파클리탁셀 |
| G5 | 0.90 mg/kg/일 5 mg/kg/일 |
IV IP |
A B |
PM00104 시스플라틴 |
| G6 | 0.90 mg/kg/일 10 mg/kg/일 |
IV IP |
A C |
PM00104 파클리탁셀 |
A: DPI 16, 23, 및 30; B: DPI 16, 26, 및 33; C: DPI 16, 20, 24
위약: 500 mg 수크로스 + 34 mg 인산칼륨 + 인산 q.s. pH 3.8-4.4
연구가 종결될 때까지 처리 개시일로부터 일주일에 2회씩 종양 크기 측정치를 기록하였다. 여러가지 측정 농도에서의 시스플라틴 또는 파클리탁셀 평균 종양 중량 각각에 대한 복합제 (PM00104와 시스플라틴 또는 PM00104와 파클리탁셀) 중의 2종의 약제 간의 평균 종양 중량을 비교함으로써 종양 성장 억제율을 평가하였다.
평균, 평균의 표준 편차 및 표준 오차를 모든 평가시마다 모든 동물군에 대한 종양 부피에 대해 측정하였다. 연구 종기를 포함하여 각각의 측정일에서 종양 부피에 대하여 Student's t 테스트를 실시하여, 복합 치료군과 단일 단독요법 치료군 사이에 통계적으로 유의적인 차이가 있는지를 분석하였다.
복합요법의 증강 효과 및 가산 정도의 평가를 위한 기준과 정의는 실시에 4에 설명된 것과 동일하다.
표 23은 각각의 처리시 얻어진 %T/C 값을 나타낸 것이고, 도 37-38은 대조군(비히클), PM00104, 시스플라틴, 파클리탁셀 및 대응하는 복합제로 처리된 마우스에 있어서, Hs746T 종양의 종양 부피 평가 (평균 ±SEM) 결과를 도시한 것이다.
| % T/C on day | |||||||
| 군 | 16 | 20 | 23 | 26 | 29 | 33 | 36 |
| G1 (대조군) |
- | - | - | - | - | - | - |
| G2 | 98.0 | 65.6 | 50.3 | 42.8 | 40.9 | 50.2 | 68.6 |
| G3 | 96.8 | 60.5 | 51.7 | 44.2 | 43.3 | 46.7 | 46.3 |
| G4 | 96.4 | 63.3 | 47.7 | 34.7 | 21.4 | 23.2 | 30.1 |
| G5 | 102.9 | 32.3 | 24.5 | 12.5 | 6.4 | 5.4 | 3.9 |
| G6 | 103.5 | 37.3 | 26.7 | 10.1 | 3.9 | 3.2 | 3.3 |
표 24는 PM00104 및 시스플라틴을 단독 약제로서 투여하였을 경우 및 0.9 mg/kg/일의 투여량의 PM00104와 5 mg/kg/일의 투여량의 시스플라틴과의 복합제로서 투여하였을 경우의 종양 성장 억제%를 보여준다. 부가적으로, 상기 투여량에 있어서의 PM00104와 시스플라틴과의 복합제의 가산 정도 및 증강 효과도 제공한다.
| 일 | % 억제 | 예상 반응 | 실제 반응 | 증강 효과 | 반응 정도 | ||
| G2 | G3 | G5 | |||||
| 16 | 2.0 | 3.2 | -2.9 | 5.2 | -8.1 | 없음 | - |
| 20 | 34.4 | 39.5 | 67.7 | 73.9 | -6.2 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 23 | 49.7 | 48.3 | 75.5 | 98.0 | -22.5 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 26 | 57.2 | 55.8 | 87.5 | 113.0 | -25.5 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 29 | 59.1 | 56.7 | 93.6 | 115.8 | -22.2 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 33 | 49.8 | 53.3 | 94.6 | 103.1 | -8.5 | 있음 | 가산값 |
| 36 | 31.4 | 53.7 | 96.1 | 85.1 | 11.0 | 있음 | 가산값보다 큼 |
표 25는 PM00104 및 파클리탁셀을 단독 약제로서 투여하였을 경우 및 0.9 mg/kg/일의 투여량의 PM00104와 10 mg/kg/일의 투여량의 파클리탁셀과의 복합제로서 투여하였을 경우의 종양 성장 억제%를 보여준다. 부가적으로, 상기 투여량에 있어서의 PM00104와 파클리탁셀과의 복합제의 가산 정도 및 증강 효과도 제공한다.
| 일 | % 억제 | 예상 반응 | 실제 반응 | 증강 효과 | 반응 정도 | ||
| G2 | G4 | G6 | |||||
| 16 | 2.0 | 3.6 | -3.5 | 5.6 | -9.1 | 없음 | - |
| 20 | 34.4 | 36.7 | 62.7 | 71.1 | -8.4 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 23 | 49.7 | 52.3 | 73.3 | 102.0 | -28.7 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 26 | 57.2 | 65.3 | 89.9 | 122.5 | -32.6 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 29 | 59.1 | 78.6 | 96.1 | 137.7 | -41.6 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 33 | 49.8 | 76.8 | 96.8 | 126.6 | -29.8 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 36 | 31.4 | 69.9 | 96.7 | 101.3 | -4.6 | 있음 | 가산값 |
이 분석에 따라 다음 사실이 밝혀졌다:
a. PM00104와 시스플라틴과의 복합제는 각 단독 약제 대조군의 경우 얻어진 결과들 보다 통계적으로 유의적인 (p<0.01) 항종양 활성 증강 효과를 나타내어, 복합제군에 있어서 거의 완전한 종양의 퇴행이 초래되었다. 팔로우업 기간 말기에, 증강 효과는 가산값보다 큰 것으로 분석되었다.
b. 처리 기간 중에는 물론 팔로우업 기간에도, PM00104와 파클리탁셀과의 복합제는 각 단독 약제 대조군의 경우 얻어진 결과들 보다 통계적으로 유의적인 (p≤0.01) 항종양 활성 증강 효과를 나타내어, 종양의 거의 완전환 퇴행을 야기하였다.
실시예 9. 플루오로우라실 (5-FU), 이리노테칸, 및 독소루비신과 병용시 인간의 위종양 이종이식편에 미치는 PM00104의 효과 측정을 위한 생체내 연구.
이 연구의 목적은 인간의 위장암종의 이종이식편 모델을 이용함으로써 5-FU, 이리노테칸, 및 독소루비신의 항종양 활성을 증강시키는 PM00104의 능력을 평가하기 위한 것이었다.
모든 실험에 암컷 무흉선 누드 마우스(Harlan Sprague Dawley, Madison, WI)를 이용하였다. 마우스들을 물과 음식물을 마음껏 먹을 수 있도록 하면서 통기시설이 된 랙 케이지에 가두었다. 마우스들을 종양 세포 현탁액으로 종양을 이식하기 적어도 5일 전에 순응시켰다. 비히클 대조군은 15마리의 마우스를 포함하였고, 처리군은 각각 10 마우스/군으로 이루어졌다.
이 연구에 사용된 종양 모델은 Hs746T 세포주였으며, 이것은 ATCC (Manassas, VA)로부터 수득하였다. 이 세포주를 실시예 8에 설명된 방법에 따라 배양하여 동물에 이식하였다.
실시예 4에 설명된 바와 같이 종양 측정을 실시하였다. 종양이 175 ± 100 mm3 (평균 ± SD)의 크기 범위 이내에서 적절한 부피에 도달하였을 때, LabCat
In Life module V 8.0 SP1 종양 추적 및 측정 소프트웨어를 이용함으로써 종양의 무게에 기반하여 처리군과 대조군으로 마우스들을 무작위적으로 나누었다. DPI 15에 처리를 개시하였다.
PM00104는 동결건조된 PM00104 분말의 바이알 형태로 제공하여 주사용수와 재조성시켜 사용하였다. 5-FU는 용액으로서 제공하여 주사용수로 추가 희석하였다. 이리노테칸은 이리노테칸 HCl 삼수화물을 함유하는 용액 형태로 제공되어으며, 이를 0.9% 염수에 추가로 희석하였다. 독소루비신은 동결건조된 분말 형태로 제공되었으며 이를 0.9% 염수에 재조성하였다.
연구 그룹 및 처리 방법을 표 26에 요약하였다.
| 군 | 투여량 | 경로 | 스케쥴 | 시험 물질 |
| G1 (대조군) |
10 ml/kg/일 | IV | A | 염수 중 0.18% 위약 |
| G2 | 0.90 mg/kg/일 | IV | A | PM00104 |
| G3 | 50 mg/kg/일 100 mg/kg/일 |
IP | B C |
5-FU 5-FU |
| G4 | 20 mg/kg/일 | IP | A | 이리노테칸 |
| G5 | 6 mg/kg/일 | IP | D | 독소루비신 |
| G6 | 0.90 mg/kg/일 50 mg/kg/일 100 mg/kg/일 |
IV IP IP |
A B C |
PM00104 5-FU 5-FU |
| G7 | 0.90 mg/kg/일 20 mg/kg/일 |
IV IP |
A A |
PM00104 이리노테칸 |
| G8 | 0.90 mg/kg/일 6 mg/kg/일 |
IV IP |
A D |
PM00104 독소루비신 |
A: DPI 15, 22, 및 29; B: DPI 15; C: DPI 22 및 29; D: DPI 15, 19, 및 23
위약: 500 mg 수크로스 + 34 mg 인산칼륨 + 인산 q.s. pH 3.8-4.4
연구가 종결될 때까지 처리 개시일로부터 일주일에 2회씩 종양 크기 측정치를 기록하였다. 여러가지 측정 농도에서의 5-FU, 이리노테칸 또는 독소루비신 평균 종양 중량 각각에 대한 복합제 (PM00104와 5-FU, PM00104와 이리노테칸 또는 PM00104와 독소루비신) 중의 2종의 약제 간의 평균 종양 중량을 비교함으로써 종양 성장 억제율을 평가하였다.
평균, 평균의 표준 편차 및 표준 오차를 모든 평가시마다 모든 동물군에 대한 종양 부피에 대해 측정하였다. 연구 종기를 포함하여 각각의 측정일에서 종양 부피에 대하여 Student's t 테스트를 실시하여, 복합 치료군과 단일 단독요법 치료군 사이에 통계적으로 유의적인 차이가 있는지를 분석하였다.
복합요법의 증강 효과 및 가산 정도의 평가를 위한 기준과 정의는 실시에 4에 설명된 것과 동일하다.
표 27은 각각의 처리시 얻어진 %T/C 값을 나타낸 것이고, 도 39-41은 대조군(비히클), PM00104, 5-FU, 이리노테칸, 독소루비신 및 대응하는 복합제로 처리된 마우스에 있어서, Hs746T 종양의 종양 부피 평가 (평균 ±SEM) 결과를 도시한 것이다.
| % T/C on day | ||||||
| 군 | 15 | 19 | 22 | 26 | 29 | 33 |
| G1 (대조군) |
- | - | - | - | - | - |
| G2 | 106.6 | 55.8 | 60.9 | 54.2 | 58.6 | 80.8 |
| G3 | 102.3 | 96.4 | 88.0 | 93.4 | 94.5 | 95.3 |
| G4 | 103.4 | 72.3 | 57.9 | 64.6 | 64.2 | 79.0 |
| G5 | 104.2 | 79.8 | 47.4 | 48.9 | 40.2 | 51.4 |
| G6 | 104.4 | 103.4 | 72.1 | 63.6 | 58.3 | 58.6 |
| G7 | 105.9 | 52.7 | 30.4 | 25.1 | 28.9 | 20.5 |
| G8 | 100.3 | 61.2 | 34.1 | 25.5 | 23.4 | 18.1 |
표 28은 PM00104 및 5-FU를 단독 약제로서 투여하였을 경우 및 0.9 mg/kg/일의 투여량의 PM00104와 DPI 15에서 50 mg/kg/일의 투여량의 5-FU 및 DPI 22 & 29에서 100 mg/kg/일의 투여량의 5-FU와의 복합제로서 투여하였을 경우의 종양 성장 억제%를 보여준다. 부가적으로, 상기 투여량에 있어서의 PM00104와 5-FU와의 복합제의 가산 정도 및 증강 효과도 제공한다.
| 일 | % 억제 | 예상 반응 | 실제 반응 | 증강 효과 | 반응 정도 | ||
| G2 | G3 | G6 | |||||
| 15 | -6.6 | -2.3 | -4.4 | -8.9 | 4.5 | 없음 | - |
| 19 | 44.2 | 3.6 | -3.4 | 47.8 | -51.2 | 없음 | - |
| 22 | 39.1 | 12.0 | 27.9 | 51.1 | -23.2 | 없음 | - |
| 26 | 45.8 | 6.6 | 36.4 | 52.4 | -16.0 | 없음 | - |
| 29 | 41.4 | 5.5 | 41.7 | 46.9 | -5.2 | 없음 | - |
| 33 | 19.2 | 4.7 | 41.4 | 23.9 | 17.5 | 있음 | 가산값보다 큼 |
표 29는 PM00104 및 이리노테칸을 단독 약제로서 투여하였을 경우 및 0.9 mg/kg/일의 투여량의 PM00104와 20 mg/kg/일의 투여량의 이리노테칸과의 복합제로서 투여하였을 경우의 종양 성장 억제%를 보여준다. 부가적으로, 상기 투여량에 있어서의 PM00104와 이리노테칸과의 복합제의 가산 정도 및 증강 효과도 제공한다.
| 일 | % 억제 | 예상 반응 | 실제 반응 | 증강 효과 | 반응 정도 | ||
| G2 | G4 | G7 | |||||
| 15 | -6.6 | -3.4 | -5.9 | -10.0 | 4.1 | 없음 | - |
| 19 | 44.2 | 27.7 | 47.3 | 71.9 | -24.6 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 22 | 39.1 | 42.1 | 69.6 | 81.2 | -11.6 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 26 | 45.8 | 35.4 | 74.9 | 81.2 | -6.3 | 있음 | 가산값 |
| 29 | 41.4 | 35.8 | 71.1 | 77.2 | -6.1 | 있음 | 가산값 |
| 33 | 19.2 | 21.0 | 79.5 | 40.2 | 39.3 | 있음 | 가산값보다 큼 |
표 30은 PM00104 및 독소루비신을 단독 약제로서 투여하였을 경우 및 0.9 mg/kg/일의 투여량의 PM00104와 6 mg/kg/일의 투여량의 독소루비신과의 복합제로서 투여하였을 경우의 종양 성장 억제%를 보여준다. 부가적으로, 상기 투여량에 있어서의 PM00104와 독소루비신과의 복합제의 가산 정도 및 증강 효과도 제공한다.
| 일 | % 억제 | 예상 반응 | 실제 반응 | 증강 효과 | 반응 정도 | ||
| G2 | G5 | G8 | |||||
| 15 | -6.6 | -4.2 | -0.3 | -10.8 | 10.5 | 없음 | - |
| 19 | 44.2 | 20.2 | 38.8 | 64.4 | -25.6 | 없음 | - |
| 22 | 39.1 | 52.6 | 65.9 | 91.7 | -25.8 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 26 | 45.8 | 51.1 | 74.5 | 96.9 | -22.4 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 29 | 41.4 | 59.8 | 76.6 | 101.2 | -24.6 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 33 | 19.2 | 48.6 | 81.9 | 67.8 | 14.1 | 있음 | 가산값보다 큼 |
이 분석에 따라, 다음 사실이 밝혀졌다:
a. PM00104와 5-FU와의 복합제는 처리 기간 중 항종양 활성을 가산적으로 증강시켰으며 관찰 기간 말기에는 가산값보다 큰 효과를 나타내는 것으로 측정되었다.
b. PM00104와 이리노테칸과의 복합제는 각각의 단독 약제 대조군의 경우 얻어진 결과보다 통계적으로 매우 유의적인 (p<0.001) 항종양 활성 증강 효과를 나타냈으며, 실험 말기에 가산값보다 그 증강 정도가 더 큰 것으로 등급이 매겨졌다.
c. PM00104와 독소루비신과의 복합제는 각각의 단독 약제 대조군의 경우 얻어진 결과보다 통계적으로 유의적인 (p<0.01) 항종양 활성 증강 효과를 나타냈으며, 실험 말기에 가산값보다 그 증강 정도가 더 큰 것으로 등급이 매겨졌다.
실시예 10. 도세탁셀 및 옥살리플라틴과 병용시 인간의 위 종양 이종이식편에 미치는 PM00104의 효과를 측정하기 위한 생체내 연구.
이 연구의 목적은 인간의 위장암종의 이종이식편 모델을 이용함으로써 도세탁셀 및 옥살리플라틴의 항종양 활성을 증강시키는 PM00104의 능력을 평가하기 위한 것이었다.
모든 실험에 암컷 무흉선 누드 마우스(Harlan Sprague Dawley, Madison, WI)를 이용하였다. 마우스들을 물과 음식물을 마음껏 먹을 수 있도록 하면서 통기시설이 된 랙 케이지에 가두었다. 마우스들을 종양 세포 현탁액으로 종양을 이식하기 적어도 5일 전에 순응시켰다. 비히클 대조군은 15마리의 마우스를 포함하였고, 처리군은 각각 10 마우스/군으로 이루어졌다.
이 연구에 사용된 종양 모델은 Hs746T 세포주였으며, 이것은 ATCC (Manassas, VA)로부터 수득하였다. 이 세포주를 실시예 8에 설명된 방법에 따라 배양하여 동물에 이식하였다.
실시예 4에 설명된 바와 같이 종양 측정을 실시하였다. 종양이 175 ± 100 mm3 (평균 ± SD)의 크기 범위 이내에서 적절한 부피에 도달하였을 때, LabCat
In Life module V 8.0 SP1 종양 추적 및 측정 소프트웨어를 이용함으로써 종양의 무게에 기반하여 처리군과 대조군으로 마우스들을 무작위적으로 나누었다. DPI 14에 처리를 개시하였다.
PM00104는 동결건조된 PM00104 분말의 바이알 형태로 제공하여 주사용수와 재조성시켜 사용하였다. 도세탁셀은 희석용 농축물로서 제공되었으며 주사용수 (wfi: water for injection) 중 13% 에탄올로 추가로 희석하였다. 옥살리플라틴은 고체로서 제공되었으며, 5% 덱스트로스 주사용, USP으로 추가 희석하였다.
연구 그룹과 처리 방법을 표 31에 수록하였다.
| 군 | 투여량 | 경로 | 스케쥴 | 시험 물질 |
| G1 (대조군) |
10 ml/kg/일 10 ml/kg/일 |
IV IP |
A A |
염수 중 0.18% 위약 wfi 중 0.52% 에탄올 |
| G2 | 0.90 mg/kg/일 | IV | A | PM00104 |
| G3 | 16 mg/kg/일 | IP | A | 도세탁셀 |
| G4 | 8 mg/kg/일 | IP | A | 도세탁셀 |
| G5 | 8 mg/kg/일 | IP | A | 옥살리플라틴 |
| G6 | 4 mg/kg/일 | IP | A | 옥살리플라틴 |
| G7 | 0.90 mg/kg/일 16 mg/kg/일 |
IV IP |
A A |
PM00104 도세탁셀 |
| G8 | 0.90 mg/kg/일 8 mg/kg/일 |
IV IP |
A A |
PM00104 도세탁셀 |
| G9 | 0.90 mg/kg/일 8 mg/kg/일 |
IV IP |
A A |
PM00104 옥살리플라틴 |
| G10 | 0.90 mg/kg/일 4 mg/kg/일 |
IV IP |
A A |
PM00104 옥살리플라틴 |
A: DPI 14, 21, 및 28; 위약: 500 mg 수크로스 + 34 mg 인산칼륨 +
인산 q.s. pH 3.8-4.4
연구가 종결될 때까지 처리 개시일로부터 일주일에 2회씩 종양 크기 측정치를 기록하였다. 여러가지 측정 농도에서의 도세탁셀 또는 옥살리플라틴 평균 종양 중량 각각에 대한 복합제 (PM00104와 도세탁셀 또는 PM00104와 옥살리플라틴) 중의 2종의 약제 간의 평균 종양 중량을 비교함으로써 종양 성장 억제율을 평가하였다.
평균, 평균의 표준 편차 및 표준 오차를 모든 평가시마다 모든 동물군에 대한 종양 부피에 대해 측정하였다. 연구 종기를 포함하여 각각의 측정일에서 종양 부피에 대하여 Student's t 테스트를 실시하여, 복합 치료군과 단일 단독요법 치료군 사이에 통계적으로 유의적인 차이가 있는지를 분석하였다.
복합요법의 증강 효과 및 가산 정도의 평가를 위한 기준과 정의는 실시에 4에 설명된 것과 동일하다.
표 32는 각각의 처리시 얻어진 %T/C 값을 나타낸 것이고, 도 42-45는 대조군(비히클), PM00104, 도세탁셀, 옥살리플라틴 및 대응하는 복합제로 처리된 마우스에 있어서, Hs746T 종양의 종양 부피 평가 (평균 ±SEM) 결과를 도시한 것이다.
| % T/C on day | |||||||
| 군 | 14 | 19 | 22 | 26 | 29 | 32 | 39 |
| G1 (대조군) |
- | - | - | - | - | - | - |
| G2 | 99.9 | 54.9 | 40.8 | 39.5 | 30.4 | 47.6 | 80.3 |
| G3 | 100.3 | 33.6 | 21.3 | 7.2 | 3.5 | 1.5 | -0.6 |
| G4 | 100.8 | 49.0 | 41.6 | 32.5 | 29.4 | 39.4 | 55.1 |
| G5 | 99.6 | 83.5 | 84.9 | 89.1 | 84.5 | 91.2 | 102.9 |
| G6 | 99.9 | 79.9 | 83.8 | 78.6 | 84.2 | 87.5 | 108.4 |
| G7 | 105.2 | 26.1 | 9.5 | 2.5 | 0.3 | 0.0 | -1.3 |
| G8 | 99.2 | 25.3 | 10.7 | 3.9 | 1.5 | 1.3 | 0.4 |
| G9 | 100.8 | 28.3 | 17.5 | 14.3 | 13.0 | 17.5 | 34.9 |
| G10 | 98.4 | 41.8 | 25.5 | 22.0 | 20.9 | 30.9 | 67.8 |
표 33은 PM00104 및 도세탁셀을 단독 약제로서 투여하였을 경우 및 0.9 mg/kg/일의 투여량의 PM00104와 16 mg/kg/일의 투여량의 도세탁셀과의 복합제로서 투여하였을 경우의 종양 성장 억제%를 보여준다. 부가적으로, 상기 투여량에 있어서의 PM00104와 도세탁셀과의 복합제의 가산 정도 및 증강 효과도 제공한다.
| 일 | % 억제 | 예상 반응 | 실제 반응 | 증강 효과 | 반응 정도 | ||
| G2 | G3 | G7 | |||||
| 14 | 0.1 | -0.3 | -5.2 | -0.2 | -5.0 | 없음 | - |
| 19 | 45.1 | 66.4 | 73.9 | 111.5 | -37.6 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 22 | 59.2 | 78.7 | 90.5 | 137.9 | -47.4 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 26 | 60.5 | 92.8 | 97.5 | 153.3 | -55.8 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 29 | 69.6 | 96.5 | 99.7 | 166.1 | -66.4 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 32 | 52.4 | 98.5 | 100.0 | 150.9 | -50.9 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 39 | 19.7 | 100.6 | 101.3 | 120.3 | -19.0 | 있음 | 가산값보다 작음 |
표 34는 PM00104 및 도세탁셀을 단독 약제로서 투여하였을 경우 및 0.9 mg/kg/일의 투여량의 PM00104와 8 mg/kg/일의 투여량의 도세탁셀과의 복합제로서 투여하였을 경우의 종양 성장 억제%를 보여준다. 부가적으로, 상기 투여량에 있어서의 PM00104와 도세탁셀과의 복합제의 가산 정도 및 증강 효과도 제공한다.
| 일 | % 억제 | 예상 반응 | 실제 반응 | 증강 효과 | 반응 정도 | ||
| G2 | G4 | G8 | |||||
| 14 | 0.1 | -0.8 | 0.8 | -0.7 | 1.5 | 없음 | - |
| 19 | 45.1 | 51.0 | 74.7 | 96.1 | -21.4 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 22 | 59.2 | 58.4 | 89.3 | 117.6 | -28.3 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 26 | 60.5 | 67.5 | 96.1 | 128.0 | -31.9 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 29 | 69.6 | 70.6 | 98.5 | 140.2 | -41.7 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 32 | 52.4 | 60.6 | 98.7 | 113.0 | -14.3 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 39 | 19.7 | 44.9 | 99.6 | 64.6 | 35.0 | 있음 | 가산값보다 큼 |
표 35는 PM00104 및 옥살리플라틴을 단독 약제로서 투여하였을 경우 및 0.9 mg/kg/일의 투여량의 PM00104와 8 mg/kg/일의 투여량의 옥살리플라틴과의 복합제로서 투여하였을 경우의 종양 성장 억제%를 보여준다. 부가적으로, 상기 투여량에 있어서의 PM00104와 옥살리플라틴과의 복합제의 가산 정도 및 증강 효과도 제공한다.
| 일 | % 억제 | 예상 반응 | 실제 반응 | 증강 효과 | 반응 정도 | ||
| G2 | G5 | G9 | |||||
| 14 | 0.1 | 0.4 | -0.8 | 0.5 | -1.3 | 없음 | - |
| 19 | 45.1 | 16.5 | 71.7 | 61.6 | 10.1 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 22 | 59.2 | 15.1 | 82.5 | 74.3 | 8.2 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 26 | 60.5 | 10.9 | 85.7 | 71.4 | 14.3 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 29 | 69.6 | 15.5 | 87.0 | 85.1 | 1.9 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 32 | 52.4 | 8.8 | 84.9 | 61.2 | 23.7 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 39 | 19.7 | -2.9 | 65.1 | 16.8 | 48.3 | 있음 | 가산값보다 큼 |
표 36은 PM00104 및 옥살리플라틴을 단독 약제로서 투여하였을 경우 및 0.9 mg/kg/일의 투여량의 PM00104와 4 mg/kg/일의 투여량의 옥살리플라틴과의 복합제로서 투여하였을 경우의 종양 성장 억제%를 보여준다. 부가적으로, 상기 투여량에 있어서의 PM00104와 옥살리플라틴과의 복합제의 가산 정도 및 증강 효과도 제공한다.
| 일 | % 억제 | 예상 반응 | 실제 반응 | 증강 효과 | 반응 정도 | ||
| G2 | G6 | G10 | |||||
| 14 | 0.1 | 0.1 | 1.6 | 0.2 | 1.4 | 없음 | - |
| 19 | 45.1 | 20.1 | 58.2 | 65.2 | -7.0 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 22 | 59.2 | 16.2 | 74.5 | 75.4 | -0.9 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 26 | 60.5 | 21.4 | 78.0 | 81.9 | -3.9 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 29 | 69.6 | 15.8 | 79.1 | 85.4 | -6.3 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 32 | 52.4 | 12.5 | 69.1 | 64.9 | 4.2 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 39 | 19.7 | -8.4 | 32.2 | 11.3 | 20.9 | 있음 | 가산값보다 큼 |
이 분석에 따라 다음 사실이 밝혀졌다:
a. PM00104와 도세탁셀과의 복합제는 단일 약제 대조군으로서의 PM00104에서 얻어진 결과보다는 통계적으로 유의적인 (p<0.01) 항종양 활성의 증강 효과를 나타내었으나, 단일 약제 대조군으로서의 도세탁셀의 경우와 비교하여서는 그렇지 못하였으며, 16 mg/kg/일의 도세탁셀의 경우 실험 말기에 증강 효과는 가산값보다 작은 것으로 나타났고, 8 mg/kg/일의 도세탁셀의 경우 실험 말기에 가산값보다 큰 것으로 나타났다.
b. PM00104와 옥살리플라틴과의 복합제는 각각의 단일 약제 대조군에서 얻어진 결과보다 통계적으로 유의적인 (p<0.001) 항종양 활성의 증강 효과를 나타내었으며, 실험 말기에 가산값보다 증강 효과가 더 큰 것으로 등급매겨졌다.
실시예 11. 5-플루오로우라실 (5-FU)과 병용시 인간의 위종양 이종이식편에 미치는 PM00104의 효과를 측정하기 위한 생체내 연구.
이 연구의 목적은 인간의 위장암종의 이종이식편 모델을 이용함으로써 5-FU의 항종양 활성을 증강시키는 PM00104의 능력을 평가하기 위한 것이었다.
모든 실험에 암컷 무흉선 누드 마우스(Harlan Sprague Dawley, Madison, WI)를 이용하였다. 마우스들을 물과 음식물을 마음껏 먹을 수 있도록 하면서 통기시설이 된 랙 케이지에 가두었다. 마우스들을 종양 세포 현탁액으로 종양을 이식하기 적어도 5일 전에 순응시켰다. 비히클 대조군은 15마리의 마우스를 포함하였고, 처리군은 각각 10 마우스/군으로 이루어졌다.
이 연구에 사용된 종양 모델은 MRI-H-254 세포주였으며, 이것은 DCT Tumor Bank로부터 수득하였다.
MRI-H-254 단편을 도너 동물로부터 제거하여 조직으로부터 막 및 출혈부분과 괴사부분을 모두 제거하고, 생체내 패시지 5로부터 3-4 mm3 단편을 13G 투관침을 이용하여 각 동물의 오른쪽 옆구리에 SC 이식하였다. 이식을 위해 준비된 세포 분주액에 대하여 세균 배양을 실시하였다. 모든 배양물은 이식한 지 24시간 및 48시간 후 세균 감염되지 않았다.
실시예 4에 설명된 바와 같이 종양 측정을 실시하였다. 종양이 175 ± 100 mm3 (평균 ± SD)의 크기 범위 이내에서 적절한 부피에 도달하였을 때, LabCat
In Life module V 8.0 SP1 종양 추적 및 측정 소프트웨어를 이용함으로써 종양의 무게에 기반하여 처리군과 대조군으로 마우스들을 무작위적으로 나누었다. DPI 20에 처리를 개시하였다.
PM00104는 동결건조된 PM00104 분말의 바이알 형태로 제공하여 주사용수와 재조성시켜 사용하였다. 5-FU는 용액으로서 제공하여 주사용수로 추가 희석하였다.
연구 그룹 및 처리 방법을 표 37에 요약하였다.
| 군 | 투여량 | 경로 | 스케쥴 | 시험 물질 |
| G1 (대조군) |
10 ml/kg/일 | IV IP |
A B |
염수 중 0.18% 위약 0.9% 염수 |
| G2 | 0.90 mg/kg/일 | IV | A | PM00104 |
| G3 | 100 mg/kg/일 | IP | A | 5-FU |
| G4 | 50 mg/kg/일 | IP | A | 5-FU |
| G5 | 0.90 mg/kg/일 100 mg/kg/일 |
IV IP |
A A |
PM00104 5-FU |
| G6 | 0.90 mg/kg/일 50 mg/kg/일 |
IV IP |
A A |
PM00104 5-FU |
A: DPI 20, 27, 및 34; B: DPI 20, 24, 및 28
위약: 500 mg 수크로스 + 34 mg 인산칼륨 + 인산 q.s. pH 3.8-4.4
연구가 종결될 때까지 처리 개시일로부터 일주일에 2회씩 종양 크기 측정치를 기록하였다. 여러가지 측정 농도에서의 5-FU 평균 종양 중량 각각에 대한 복합제 (PM00104와 5-FU) 중의 2종의 약제 간의 평균 종양 중량을 비교함으로써 종양 성장 억제율을 평가하였다.
평균, 평균의 표준 편차 및 표준 오차를 모든 평가시마다 모든 동물군에 대한 종양 부피에 대해 측정하였다. 연구 종기를 포함하여 각각의 측정일에서 종양 부피에 대하여 Student's t 테스트를 실시하여, 복합 치료군과 단일 단독요법 치료군 사이에 통계적으로 유의적인 차이가 있는지를 분석하였다.
복합요법의 증강효과 및 가산 정도의 평가를 위한 기준과 정의는 실시에 4에 설명된 것과 동일하다.
표 38은 각각의 처리시 얻어진 %T/C 값을 나타낸 것이고, 도 46-47은 대조군(비히클), PM00104, 5-FU 및 대응하는 복합제로 처리된 마우스에 있어서, MRI-H-254 종양의 종양 부피 평가 (평균 ±SEM) 결과를 도시한 것이다.
| % T/C on day | ||||||||||
| 군 | 20 | 23 | 26 | 30 | 34 | 36 | 43 | 49 | 56 | 63 |
| G1(대조군) | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - |
| G2 | 98.7 | 95.9 | 83.7 | 75.3 | 53.1 | 46.5 | 26.9 | 36.7 | 50.6 | 81.3 |
| G3 | 101.8 | 55.2 | 47.1 | 36.3 | 31.6 | 23.0 | 30.9 | 54.6 | 96.3 | 107.8 |
| G4 | 96.0 | 52.3 | 47.9 | 55.3 | 45.0 | 45.7 | 58.1 | 100.0 | 117.6 | 123.9 |
| G5 | 99.0 | 47.8 | 34.8 | 19.4 | 16.1 | 14.1 | 14.2 | 19.3 | 29.1 | 54.8 |
| G6 | 100.4 | 65.0 | 46.5 | 25.3 | 21.2 | 16.8 | 15.3 | 30.2 | 60.2 | 78.0 |
표 39는 PM00104 및 5-FU를 단독 약제로서 투여하였을 경우 및 0.9 mg/kg/일의 투여량의 PM00104와 100 mg/kg/일의 투여량의 5-FU와의 복합제로서 투여하였을 경우의 종양 성장 억제%를 보여준다. 부가적으로, 상기 투여량에서의 PM00104와 5-FU와의 복합제의 가산 정도 및 증강 효과도 제공한다.
| 일 | % 억제 | 예상 반응 | 실제 반응 | 증강 효과 | 반응 정도 | ||
| G2 | G3 | G5 | |||||
| 20 | 1.3 | -1.8 | 1.0 | -0.5 | 1.5 | 없음 | - |
| 23 | 4.1 | 44.8 | 52.2 | 48.9 | 3.3 | 있음 | 가산값 |
| 26 | 16.3 | 52.9 | 65.2 | 69.2 | -4.0 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 30 | 24.7 | 63.7 | 80.6 | 88.4 | -7.8 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 34 | 46.9 | 68.4 | 83.9 | 115.3 | -31.4 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 36 | 53.5 | 77.0 | 85.9 | 130.5 | -44.6 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 43 | 73.1 | 69.1 | 85.8 | 142.2 | -56.4 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 49 | 63.3 | 45.4 | 80.7 | 108.7 | -28.0 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 56 | 49.4 | 3.7 | 70.9 | 53.1 | 17.8 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 63 | 18.7 | -7.8 | 45.2 | 10.9 | 34.3 | 있음 | 가산값보다 큼 |
표 40은 PM00104 및 5-FU를 단독 약제로서 투여하였을 경우 및 0.9 mg/kg/일의 투여량의 PM00104와 50 mg/kg/일의 투여량의 5-FU와의 복합제로서 투여하였을 경우의 종양 성장 억제%를 보여준다. 부가적으로, 상기 투여량에서의 PM00104와 5-FU와의 복합제의 가산 정도 및 증강 효과도 제공한다.
| 일 | % 억제 | 예상 반응 | 실제 반응 | 증강 효과 | 반응 정도 | ||
| G2 | G4 | G6 | |||||
| 20 | 1.3 | 4.0 | -0.4 | 5.3 | -5.7 | 없음 | - |
| 23 | 4.1 | 47.7 | 35.0 | 51.8 | -16.8 | 없음 | - |
| 26 | 16.3 | 52.1 | 53.5 | 68.4 | -14.9 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 30 | 24.7 | 44.7 | 74.7 | 69.4 | 5.3 | 있음 | 가산값 |
| 34 | 46.9 | 55.0 | 78.8 | 101.9 | -23.1 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 36 | 53.5 | 54.3 | 83.2 | 107.8 | -24.6 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 43 | 73.1 | 41.9 | 84.7 | 115.0 | -30.3 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 49 | 63.3 | 0.0 | 69.8 | 63.3 | 6.5 | 있음 | 가산값 |
| 56 | 49.4 | -17.6 | 39.8 | 31.8 | 8.0 | 없음 | - |
| 63 | 18.7 | -23.9 | 22.0 | -5.2 | 27.2 | 있음 | 가산값보다 큼 |
이 분석에 따라, PM00104와 5-FU와의 복합제는 단일 약제 대조군들에서 얻어진 결과보다 통계적으로 유의적인 (p<0.01) 항종양 활성의 증강효과를 나타내었으며, 실험 말기에 증강효과는 가산값보다 큰 것으로 등급 매겨졌다.
실시예 12. 도세탁셀 및 옥살리플라틴과 병용시 인간 위종양 이종이식편에 미치는 PM00104의 효과를 측정하기 위한 생체내 연구.
이 연구의 목적은 인간의 위장암종을 이용함으로서 도세탁셀 및 옥살리플라틴의 항종양 활성을 증가시키는 PM00104의 능력을 평가하기 위한 것이었다.
모든 실험에 암컷 무흉선 누드 마우스(Harlan Sprague Dawley, Madison, WI)를 이용하였다. 마우스들을 물과 음식물을 마음껏 먹을 수 있도록 하면서 통기시설이 된 랙 케이지에 가두었다. 마우스들을 종양 세포 현탁액으로 종양을 이식하기 적어도 5일 전에 순응시켰다. 비히클 대조군은 15마리의 마우스를 포함하였고, 처리군은 각각 10 마우스/군으로 이루어졌다.
이 연구에 사용된 종양 모델은 MRI-H-254 세포주였으며, 이것은 DCT Tumor Bank로부터 수득하였다. 이 세포주를 실시예 11에 설명된 바와 같이 배양하여 동물에게 이식하였다.
실시예 4에 설명된 바와 같이 종양 측정을 실시하였다. 종양이 175 ± 100 mm3 (평균 ± SD)의 크기 범위 이내에서 적절한 부피에 도달하였을 때, LabCat
In Life module V 8.0 SP1 종양 추적 및 측정 소프트웨어를 이용함으로써 종양의 무게에 기반하여 처리군과 대조군으로 마우스들을 무작위적으로 나누었다. DPI 20에 처리를 개시하였다.
PM00104는 동결건조된 PM00104 분말의 바이알 형태로 제공하여 주사용수와 재조성시켜 사용하였다. 도세탁셀은 희석용 농축물로서 제공되었으며 주사용수 중 13% 에탄올에 추가로 희석하였다. 옥살리플라틴은 용액으로서 제공되었으며 5% 덱스트로스 주사제, USP로 추가 희석하였다.
연구 그룹 및 처리 방법을 표 41에 요약하였다.
| 군 | 투여량 | 경로 | 스케쥴 | 시험 물질 |
| G1 (대조군) |
10 ml/kg/일 10 ml/kg/일 |
IV IP |
A A |
염수 중 0.18% 위약 wfi 중 0.52% 에탄올 |
| G2 | 0.90 mg/kg/일 | IV | A | PM00104 |
| G3 | 16 mg/kg/일 | IP | A | 도세탁셀 |
| G4 | 8 mg/kg/일 | IP | A | 도세탁셀 |
| G5 | 8 mg/kg/일 | IP | A | 옥살리플라틴 |
| G6 | 4 mg/kg/일 | IP | A | 옥살리플라틴 |
| G7 | 0.90 mg/kg/일 16 mg/kg/일 |
IV IP |
A A |
PM00104 도세탁셀 |
| G8 | 0.90 mg/kg/일 8 mg/kg/일 |
IV IP |
A A |
PM00104 도세탁셀 |
| G9 | 0.90 mg/kg/일 8 mg/kg/일 |
IV IP |
A A |
PM00104 옥살리플라틴 |
| G10 | 0.90 mg/kg/일 4 mg/kg/일 |
IV IP |
A A |
PM00104 옥살리플라틴 |
A: DPI 20, 27, 및 34; 위약: 500 mg 수크로스 + 34 mg 인산칼륨 + 인산q.s. pH 3.8-4.4
연구가 종결될 때까지 처리 개시일로부터 일주일에 2회씩 종양 크기 측정치를 기록하였다. 여러가지 측정 농도에서의 도세탁셀 또는 옥살리플라틴 평균 종양 중량 각각에 대한 복합제 (PM00104와 도세탁셀 또는 PM00104와 옥살리플라틴U) 중의 2종의 약제 간의 평균 종양 중량을 비교함으로써 종양 성장 억제율을 평가하였다.
평균, 평균의 표준 편차 및 표준 오차를 모든 평가시마다 모든 동물군에 대한 종양 부피에 대해 측정하였다. 연구 종기를 포함하여 각각의 측정일에서 종양 부피에 대하여 Student's t 테스트를 실시하여, 복합 치료군과 단일 단독요법 치료군 사이에 통계적으로 유의적인 차이가 있는지를 분석하였다.
복합요법의 증강효과 및 가산 정도의 평가를 위한 기준과 정의는 실시에 4에 설명된 것과 동일하다.
표 42는 각각의 처리시 얻어진 %T/C 값을 나타낸 것이고, 도 48-51은 대조군(비히클), PM00104, 도세탁셀, 옥살리플라틴 및 대응하는 복합제로 처리된 마우스에 있어서, MRI-H-254 종양의 종양 부피 평가 (평균 ±SEM) 결과를 도시한 것이다.
| % T/C on day | ||||||||
| 군 | 20 | 23 | 27 | 30 | 33 | 36 | 40 | 48 |
| G1(대조군) | - | - | - | - | - | - | - | - |
| G2 | 100.2 | 109.3 | 71.6 | 65.4 | 54.2 | 50.0 | 36.1 | 26.9 |
| G3 | 101.4 | 115.4 | 90.9 | 117.1 | 115.8 | 108.4 | 100.4 | 76.7 |
| G4 | 97.7 | 122.8 | 93.1 | 102.6 | 114.1 | 119.2 | 120.1 | 97.3 |
| G5 | 95.1 | 100.9 | 77.2 | 81.7 | 75.0 | 71.1 | 67.5 | 55.9 |
| G6 | 94.5 | 118.5 | 113.6 | 117.1 | 107.6 | 115.1 | 115.0 | 92.4 |
| G7 | 95.7 | 96.7 | 72.9 | 56.3 | 25.4 | 15.4 | 10.9 | 8.9 |
| G8 | 101.6 | 109.4 | 67.0 | 63.8 | 34.5 | 19.5 | 21.3 | 16.5 |
| G9 | 98.3 | 99.0 | 59.7 | 49.0 | 22.4 | 13.2 | 12.2 | 14.3 |
| G10 | 95.3 | 111.9 | 68.4 | 57.9 | 30.3 | 16.7 | 15.9 | 18.7 |
표 43은 PM00104 및 도세탁셀을 단독 약제로서 투여하였을 경우 및 0.9 mg/kg/일의 투여량의 PM00104와 16 mg/kg/일의 투여량의 도세탁셀과의 복합제로서 투여하였을 경우의 종양 성장 억제%를 보여준다. 부가적으로, 상기 투여량에서의 PM00104와 도세탁셀과의 복합제의 가산 정도 및 증강 효과도 제공한다.
| 일 | % 억제 | 예상 반응 | 실제 반응 | 증강 효과 | 반응 정도 | ||
| G2 | G3 | G7 | |||||
| 20 | -0.2 | -1.4 | 4.3 | -1.6 | 5.9 | 있음 | 가산값 |
| 23 | -9.3 | -15.4 | 3.3 | -24.7 | 28.0 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 27 | 28.4 | 9.1 | 27.1 | 37.5 | -10.4 | 없음 | - |
| 30 | 34.6 | -17.1 | 43.7 | 17.5 | 26.2 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 33 | 45.8 | -15.8 | 74.6 | 30.0 | 44.6 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 36 | 50.0 | -8.4 | 84.6 | 41.6 | 43.0 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 40 | 63.9 | -0.4 | 89.1 | 63.5 | 25.6 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 48 | 73.1 | 23.3 | 91.1 | 96.4 | -5.3 | 있음 | 가산값 |
표 44는 PM00104 및 도세탁셀을 단독 약제로서 투여하였을 경우 및 0.9 mg/kg/일의 투여량의 PM00104와 8 mg/kg/일의 투여량의 도세탁셀과의 복합제로서 투여하였을 경우의 종양 성장 억제%를 보여준다. 부가적으로, 상기 투여량에서의 PM00104와 도세탁셀과의 복합제의 가산 정도 및 증강 효과도 제공한다.
| 일 | % 억제 | 예상 반응 | 실제 반응 | 증강 효과 | 반응 정도 | ||
| G2 | G4 | G8 | |||||
| 20 | -0.2 | 2.3 | -1.6 | 2.1 | -3.7 | 없음 | - |
| 23 | -9.3 | -22.8 | -9.4 | -32.1 | 22.7 | 없음 | - |
| 27 | 28.4 | 6.9 | 33.0 | 35.3 | -2.3 | 있음 | 가산값 |
| 30 | 34.6 | -2.6 | 36.2 | 32.0 | 4.2 | 있음 | 가산값 |
| 33 | 45.8 | -14.1 | 65.5 | 31.7 | 33.8 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 36 | 50.0 | -19.2 | 80.5 | 30.8 | 49.7 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 40 | 63.9 | -20.1 | 78.7 | 43.8 | 34.9 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 48 | 73.1 | 2.7 | 83.5 | 75.8 | 7.7 | 있음 | 가산값보다 큼 |
표 45는 PM00104 및 옥살리플라틴을 단독 약제로서 투여하였을 경우 및 0.9 mg/kg/일의 투여량의 PM00104와 8 mg/kg/일의 투여량의 옥살리플라틴과의 복합제로서 투여하였을 경우의 종양 성장 억제%를 보여준다. 부가적으로, 상기 투여량에 있어서의 PM00104와 옥살리플라틴과의 복합제의 가산 정도 및 증강 효과도 제공한다.
| 일 | % 억제 | 예상 반응 | 실제 반응 | 증강 효과 | 반응 정도 | ||
| G2 | G5 | G9 | |||||
| 20 | -0.2 | 4.9 | 1.7 | 4.7 | -3.0 | 없음 | - |
| 23 | -9.3 | -0.9 | 1.0 | -10.2 | 11.2 | 없음 | - |
| 27 | 28.4 | 22.8 | 40.3 | 51.2 | -10.9 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 30 | 34.6 | 18.3 | 51.0 | 52.9 | -1.9 | 있음 | 가산값 |
| 33 | 45.8 | 25.0 | 77.6 | 70.8 | 6.8 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 36 | 50.0 | 28.9 | 86.8 | 78.9 | 7.9 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 40 | 63.9 | 32.5 | 87.8 | 96.4 | -8.6 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 48 | 73.1 | 44.1 | 85.7 | 117.2 | -31.5 | 있음 | 가산값보다 작음 |
표 46은 PM00104 및 옥살리플라틴을 단독 약제로서 투여하였을 경우 및 0.9 mg/kg/일의 투여량의 PM00104와 4 mg/kg/일의 투여량의 옥살리플라틴과의 복합제로서 투여하였을 경우의 종양 성장 억제%를 보여준다. 부가적으로, 상기 투여량에 있어서의 PM00104와 옥살리플라틴과의 복합제의 가산 정도 및 증강 효과도 제공한다.
| 일 | % 억제 | 예상 반응 | 실제 반응 | 증강 효과 | 반응 정도 | ||
| G2 | G6 | G10 | |||||
| 20 | -0.2 | 5.5 | 4.7 | 5.3 | -0.6 | 없음 | - |
| 23 | -9.3 | -18.5 | -11.9 | -27.8 | 15.9 | 없음 | - |
| 27 | 28.4 | -13.6 | 31.6 | 14.8 | 16.8 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 30 | 34.6 | -17.1 | 42.1 | 17.5 | 24.6 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 33 | 45.8 | -7.6 | 69.7 | 38.2 | 31.5 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 36 | 50.0 | -15.1 | 83.3 | 34.9 | 48.4 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 40 | 63.9 | -15.0 | 84.1 | 48.9 | 35.2 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 48 | 73.1 | 7.6 | 81.3 | 80.7 | 0.6 | 있음 | 가산값 |
이 분석에 따라 다음 사실이 밝혀졌다:
a. PM00104와 도세탁셀과의 복합제는 통계적으로 유의적인 (p<0.01) 항종양 활성의 증강효과를 나타냈다. 이 증강효과는 가산값보다 큰 것으로 나타났다.
b. PM00104와 옥살리플라틴과의 복합제는 통계적으로 유의적인 (p<0.01) 항종양 활성의 증강효과를 나타냈다. 이 증강효과는 가산값보다 큰 것으로 나타났다.
실시예 13. 독소루비신 및 파클리탁셀과 병용시 인간의 위종양 이종이식편에 미치는 PM00104의 효과를 측정하기 위한 생체내 연구.
이 연구의 목적은 인간의 위장암종의 이종이식편 모델을 이용함으로써 독소루비신 및 파클리탁셀의 항종양 활성을 증강시키는 PM00104의 능력을 평가하기 위한 것이었다.
모든 실험에 암컷 무흉선 누드 마우스(Harlan Sprague Dawley, Madison, WI)를 이용하였다. 마우스들을 물과 음식물을 마음껏 먹을 수 있도록 하면서 통기시설이 된 랙 케이지에 가두었다. 마우스들을 종양 세포 현탁액으로 종양을 이식하기 적어도 5일 전에 순응시켰다. 비히클 대조군은 11마리의 마우스를 포함하였고, 그룹 2-6은 8마리의 마우스를, 나머지 그룹은 9 마리/그룹으로 이루어졌다.
이 연구에 사용된 종양 모델은 MRI-H-254 세포주였으며, 이것은 DCT Tumor Bank로부터 수득하였다. 이세포주를 실시예 11에 설명된 바와 같이 배양하여 동물에게 이식하였다.
실시예 4에 설명된 바와 같이 종양 측정을 실시하였다. 종양이 175 ± 100 mm3 (평균 ± SD)의 크기 범위 이내에서 적절한 부피에 도달하였을 때, LabCat
In Life module V 8.0 SP1 종양 추적 및 측정 소프트웨어를 이용함으로써 종양의 무게에 기반하여 처리군과 대조군으로 마우스들을 무작위적으로 나누었다. DPI 16에 처리를 개시하였다.
PM00104는 동결건조된 PM00104 분말의 바이알 형태로 제공하여 주사용수와 재조성시켜 사용하였다. 독소루비신은 동결건조된 분말 형태로 제공하였으며 이를 0.9% 염수에 ㅈ재조성시켰다. 파클리탁셀은 용액으로서 제공하였고 이를 0.9% 염수에 추가로 희석하였다.
연구 그룹 및 처리 방법을 표 47에 요약하였다.
| 군 | 투여량 | 경로 | 스케쥴 | 시험 물질 |
| G1 (대조군) |
10 ml/kg/일 10 ml/kg/일 |
IV IP |
A B |
염수 중 0.18% 위약 0.9% 염수 |
| G2 | 0.90 mg/kg/일 | IV | A | PM00104 |
| G3 | 0.45 mg/kg/일 | IV | A | PM00104 |
| G4 | 0.23 mg/kg/일 | IV | A | PM00104 |
| G5 | 6 mg/kg/일 | IP | B | 독소루비신 |
| G6 | 12.5 mg/kg/일 | IP | B | 파클리탁셀 |
| G7 | 0.90 mg/kg/일 6 mg/kg/일 |
IV IP |
A B |
PM00104 독소루비신 |
| G8 | 0.90 mg/kg/일 12.5 mg/kg/일 |
IV IP |
A B |
PM00104 파클리탁셀 |
| G9 | 0.45 mg/kg/일 6 mg/kg/일 |
IV IP |
A B |
PM00104 독소루비신 |
| G10 | 0.45 mg/kg/일 12.5 mg/kg/일 |
IV IP |
A B |
PM00104 파클리탁셀 |
| G11 | 0.23 mg/kg/일 6 mg/kg/일 |
IV IP |
A B |
PM00104 독소루비신 |
| G12 | 0.23 mg/kg/일 12.5 mg/kg/일 |
IV IP |
A B |
PM00104 파클리탁셀 |
A: DPI 17, 24, 및 31; B: DPI 17, 21, 25
위약: 500 mg 수크로스 + 34 mg 인산칼륨 + 인산 q.s. pH 3.8-4.4
연구가 종결될 때까지 처리 개시일로부터 일주일에 2회씩 종양 크기 측정치를 기록하였다. 여러가지 측정 농도에서의 독소루비신 또는 파클리탁셀 평균 종양 중량 각각에 대한 복합제 (PM00104와 독소루비신 또는 PM00104와 파클리탁셀) 중의 2종의 약제 간의 평균 종양 중량을 비교함으로써 종양 성장 억제율을 평가하였다.
평균, 평균의 표준 편차 및 표준 오차를 모든 평가시마다 모든 동물군에 대한 종양 부피에 대해 측정하였다. 연구 종기를 포함하여 각각의 측정일에서 종양 부피에 대하여 Student's t 테스트를 실시하여, 복합 치료군과 단일 단독요법 치료군 사이에 통계적으로 유의적인 차이가 있는지를 분석하였다.
복합요법의 증강효과 및 가산 정도의 평가를 위한 기준과 정의는 실시에 4에 설명된 것과 동일하다.
표 48은 각각의 처리시 얻어진 %T/C 값을 나타낸 것이고, 도 52-57은 대조군(비히클), PM00104, 독소루비신, 파클리탁셀 및 대응하는 복합제로 처리된 마우스에 있어서, MRI-H-254 종양의 종양 부피 평가 (평균 ±SEM) 결과를 도시한 것이다.
| % T/C on day | ||||||||
| 군 | 17 | 20 | 24 | 27 | 32 | 35 | 39 | 47 |
| G1(대조군) | - | - | - | - | - | - | - | - |
| G2 | 98.5 | 95.6 | 56.9 | 46.4 | 31.2 | 22.6 | 14.5 | 9.5 |
| G3 | 100.0 | 109.2 | 91.3 | 71.0 | 51.8 | 38.4 | 31.8 | 21.5 |
| G4 | 97.5 | 113.0 | 89.9 | 75.9 | 72.7 | 62.4 | 57.6 | 66.8 |
| G5 | 98.2 | 93.5 | 76.2 | 64.4 | 56.3 | 24.8 | 19.7 | 15.7 |
| G6 | 99.5 | 86.2 | 71.9 | 77.2 | 67.9 | 52.3 | 51.7 | 69.0 |
| G7 | 96.6 | 90.4 | 57.4 | 40.3 | 16.4 | 8.5 | 5.7 | 4.1 |
| G8 | 94.1 | 96.4 | 64.4 | 44.8 | 20.2 | 13.8 | 9.2 | 6.9 |
| G9 | 100.0 | 92.1 | 60.0 | 50.2 | 21.3 | 12.4 | 8.0 | - |
| G10 | 99.9 | 102.2 | 76.4 | 61.2 | 32.5 | 22.1 | 17.2 | 12.0 |
| G11 | 98.0 | 86.6 | 51.3 | 48.1 | 28.4 | 19.7 | 16.1 | 11.3 |
| G12 | 97.2 | 94.1 | 72.1 | 63.6 | 37.3 | 29.6 | 24.7 | 34.2 |
표 49는 PM00104 및 독소루비신을 단독 약제로서 투여하였을 경우 및 0.9 mg/kg/일의 투여량의 PM00104와 6 mg/kg/일의 투여량의 독소루비신과의 복합제로서 투여하였을 경우의 종양 성장 억제%를 보여준다. 부가적으로, 상기 투여량에 있어서의 PM00104와 독소루비신과의 복합제의 가산 정도 및 증강 효과도 제공한다.
| 일 | % 억제 | 예상 반응 | 실제 반응 | 증강 효과 | 반응 정도 | ||
| G2 | G5 | G7 | |||||
| 14 | 1.5 | 1.8 | 3.4 | 3.3 | 0.1 | 있음 | 가산값 |
| 20 | 4.4 | 6.5 | 9.6 | 10.9 | -1.3 | 있음 | 가산값 |
| 24 | 43.1 | 23.8 | 42.6 | 66.9 | -24.3 | 없음 | - |
| 27 | 53.6 | 35.6 | 59.7 | 89.2 | -29.5 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 32 | 68.8 | 43.7 | 83.6 | 112.5 | -28.9 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 35 | 77.4 | 75.2 | 91.5 | 152.6 | -61.1 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 39 | 85.5 | 80.3 | 94.3 | 165.8 | -71.5 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 47 | 90.5 | 84.3 | 95.9 | 174.8 | -78.9 | 있음 | 가산값보다 작음 |
표 50은 PM00104 및 독소루비신을 단독 약제로서 투여하였을 경우 및 0.45 mg/kg/일의 투여량의 PM00104와 6 mg/kg/일의 투여량의 독소루비신과의 복합제로서 투여하였을 경우의 종양 성장 억제%를 보여준다. 부가적으로, 상기 투여량에 있어서의 PM00104와 독소루비신과의 복합제의 가산 정도 및 증강 효과도 제공한다.
| 일 | % 억제 | 예상 반응 | 실제 반응 | 증강 효과 | 반응 정도 | ||
| G3 | G5 | G9 | |||||
| 14 | 0.0 | 1.8 | 0.0 | 1.8 | -1.8 | 없음 | - |
| 20 | -9.2 | 6.5 | 7.9 | -2.7 | 10.6 | 있음 | 가산값 |
| 24 | 8.7 | 23.8 | 40.0 | 32.5 | 7.5 | 있음 | 가산값 |
| 27 | 29.0 | 35.6 | 49.8 | 64.6 | -14.8 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 32 | 48.2 | 43.7 | 78.7 | 91.9 | -13.2 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 35 | 61.6 | 75.2 | 87.6 | 136.8 | -49.2 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 39 | 68.2 | 80.3 | 92.0 | 148.5 | -56.5 | 있음 | 가산값보다 작음 |
표 51은 PM00104 및 독소루비신을 단독 약제로서 투여하였을 경우 및 0.23 mg/kg/일의 투여량의 PM00104와 6 mg/kg/일의 투여량의 독소루비신과의 복합제로서 투여하였을 경우의 종양 성장 억제%를 보여준다. 부가적으로, 상기 투여량에 있어서의 PM00104와 독소루비신과의 복합제의 가산 정도 및 증강 효과도 제공한다.
| 일 | % 억제 | 예상 반응 | 실제 반응 | 증강 효과 | 반응 정도 | ||
| G4 | G5 | G11 | |||||
| 14 | 2.5 | 1.8 | 2.0 | 4.3 | -2.3 | 없음 | 가산값 |
| 20 | -13.0 | 6.5 | 13.4 | -6.5 | 19.9 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 24 | 10.1 | 23.8 | 48.7 | 33.9 | 14.8 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 27 | 24.1 | 35.6 | 51.9 | 59.7 | -7.8 | 있음 | 가산값 |
| 32 | 27.3 | 43.7 | 71.6 | 71.0 | 0.6 | 있음 | 가산값 |
| 35 | 37.6 | 75.2 | 80.3 | 112.8 | -32.5 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 39 | 42.4 | 80.3 | 83.9 | 122.7 | -38.8 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 47 | 33.2 | 84.3 | 88.7 | 117.5 | -28.8 | 있음 | 가산값보다 작음 |
표 52는 PM00104 및 파클리탁셀을 단독 약제로서 투여하였을 경우 및 0.90 mg/kg/일의 투여량의 PM00104와 12.5 mg/kg/일의 투여량의 파클리탁셀과의 복합제로서 투여하였을 경우의 종양 성장 억제%를 보여준다. 부가적으로, 상기 투여량에 있어서의 PM00104와 파클리탁셀과의 복합제의 가산 정도 및 증강 효과도 제공한다.
| 일 | % 억제 | 예상 반응 | 실제 반응 | 증강 효과 | 반응 정도 | ||
| G2 | G6 | G8 | |||||
| 14 | 1.5 | 0.5 | 5.9 | 2.0 | 3.9 | 없음 | - |
| 20 | 4.4 | 13.8 | 3.6 | 18.2 | -14.6 | 없음 | - |
| 24 | 43.1 | 28.1 | 35.6 | 71.2 | -35.6 | 없음 | - |
| 27 | 53.6 | 22.8 | 55.2 | 76.4 | -21.2 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 32 | 68.8 | 32.1 | 79.8 | 100.9 | -21.1 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 35 | 77.4 | 47.7 | 86.2 | 125.1 | -38.9 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 39 | 85.5 | 48.3 | 90.8 | 133.8 | -43.0 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 47 | 90.5 | 31.0 | 93.1 | 121.5 | -28.4 | 있음 | 가산값보다 작음 |
표 53은 PM00104 및 파클리탁셀을 단독 약제로서 투여하였을 경우 및 0.45 mg/kg/일의 투여량의 PM00104와 12.5 mg/kg/일의 투여량의 파클리탁셀과의 복합제로서 투여하였을 경우의 종양 성장 억제%를 보여준다. 부가적으로, 상기 투여량에 있어서의 PM00104와 파클리탁셀과의 복합제의 가산 정도 및 증강 효과도 제공한다.
| 일 | % 억제 | 예상 반응 | 실제 반응 | 증강 효과 | 반응 정도 | ||
| G3 | G6 | G10 | |||||
| 14 | 0.0 | 0.5 | 0.1 | 0.5 | -0.4 | 없음 | - |
| 20 | -9.2 | 13.8 | -2.2 | 4.6 | -6.8 | 없음 | - |
| 24 | 8.7 | 28.1 | 23.6 | 36.8 | -13.2 | 없음 | - |
| 27 | 29.0 | 22.8 | 38.8 | 51.8 | -13.0 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 32 | 48.2 | 32.1 | 67.5 | 80.3 | -12.8 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 35 | 61.6 | 47.7 | 77.9 | 109.3 | -31.4 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 39 | 68.2 | 48.3 | 82.8 | 116.5 | -33.7 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 47 | 78.5 | 31.0 | 88.0 | 109.5 | -21.5 | 있음 | 가산값보다 작음 |
표 54는 PM00104 및 파클리탁셀을 단독 약제로서 투여하였을 경우 및 0.23 mg/kg/일의 투여량의 PM00104와 12.5 mg/kg/일의 투여량의 파클리탁셀과의 복합제로서 투여하였을 경우의 종양 성장 억제%를 보여준다. 부가적으로, 상기 투여량에 있어서의 PM00104와 파클리탁셀과의 복합제의 가산 정도 및 증강 효과도 제공한다.
| 일 | % 억제 | 예상 반응 | 실제 반응 | 증강 효과 | 반응 정도 | ||
| G4 | G6 | G12 | |||||
| 14 | 2.5 | 0.5 | 2.8 | 3.0 | -0.2 | 없음 | - |
| 20 | -13.0 | 13.8 | 5.9 | 0.8 | 5.1 | 없음 | - |
| 24 | 10.1 | 28.1 | 27.9 | 38.2 | -10.3 | 없음 | - |
| 27 | 24.1 | 22.8 | 36.4 | 46.9 | -10.5 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 32 | 27.3 | 32.1 | 62.7 | 59.4 | 3.3 | 있음 | 가산값 |
| 35 | 37.6 | 47.7 | 70.4 | 85.3 | -14.9 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 39 | 42.4 | 48.3 | 75.3 | 90.7 | -15.4 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 47 | 33.2 | 31.0 | 65.8 | 64.2 | 1.6 | 있음 | 가산값 |
이 분석에 따라 다음 사실이 밝혀졌다:
a. PM00104와 독소루비신과의 복합제는 항종양 활성을 증강시켰다. 이러한 증강효과는 가산값보다는 작은 것으로 밝혀졌다. 또한, 평가된 투여량과 투약 스케쥴에서, 복합제는 동물의 50% 사망률과 함께 독성 징후를 나타냈다.
b. PM00104와 파클리탁셀과의 복합제는 통계적으로 유의적인 (p < 0.001) 항종양 활성 증강 효과를 나타냈다. 이 증강효과는 가산값보다는 작았으며, PM00104의 투여량이 낮은 경우에 가장 우수한 결과가 관찰되었다.
실시예 14. 시스플라틴, 파클리탁셀, 및 이리노테칸과 병용시 인간의 위종양 이종이식편에 미치는 PM00104의 효과를 측정하기 위한 생체내 연구.
이 연구의 목적은 인간의 위장암종의 이종이식편 모델을 이용함으로써 시스플라틴, 파클리탁셀, 및 이리노테칸의 항종양 활성을 증강시키는 PM00104의 능력을 평가하기 위한 것이었다.
모든 실험에 암컷 무흉선 누드 마우스(Harlan Sprague Dawley, Madison, WI)를 이용하였다. 마우스들을 물과 음식물을 마음껏 먹을 수 있도록 하면서 통기시설이 된 랙 케이지에 가두었다. 마우스들을 종양 세포 현탁액으로 종양을 이식하기 적어도 5일 전에 순응시켰다. 비히클 대조군은 15마리의 마우스를 포함하였고, 처리군은 각각 9 마우스/군으로 이루어졌다.
이 연구에 사용된 종양 모델은 MRI-H-254T 세포주였으며, 이것은 DCT Tumor Bank로부터 수득하였다. 이 세포주를 실시예 11에 설명된 방법에 따라 배양하여 동물에 이식하였다.
실시예 4에 설명된 바와 같이 종양 측정을 실시하였다. 종양이 175 ± 100 mm3 (평균 ± SD)의 크기 범위 이내에서 적절한 부피에 도달하였을 때, LabCat
In Life module V 8.0 SP1 종양 추적 및 측정 소프트웨어를 이용함으로써 종양의 무게에 기반하여 처리군과 대조군으로 마우스들을 무작위적으로 나누었다. DPI 16에 처리를 개시하였다.
PM00104는 동결건조된 PM00104 분말의 바이알 형태로 제공하여 주사용수와 재조성시켜 사용하였다. 시스플라틴과 파클리탁셀은 용액으로서 제공하여 0.9% 염수로 추가 희석하였다. 이리노테칸은 이리노테칸 HCl 삼수화물을 함유하는 용액 형태로 제공되어으며, 이를 0.9% 염수에 추가로 희석하였다.
연구 그룹 및 처리 방법을 표 55에 요약하였다.
| 군 | 투여량 | 경로 | 스케쥴 | 시험 물질 |
| G1 (대조군) |
10 ml/kg/일 10 ml/kg/일 |
IV IP |
A B |
염수 중 0.18% 위약 0.9% 염수 |
| G2 | 0.90 mg/kg/일 | IV | A | PM00104 |
| G3 | 5 mg/kg/일 | IV | A | 시스플라틴 |
| G4 | 3 mg/kg/일 | IV | A | 시스플라틴 |
| G5 | 18 mg/kg/일 | IP | A | 이리노테칸 |
| G6 | 10 mg/kg/일 | IP | A | 이리노테칸 |
| G7 | 25 mg/kg/일 | IP | B | 파클리탁셀 |
| G8 | 12.5 mg/kg/일 | IP | B | 파클리탁셀 |
| G9 | 0.90 mg/kg/일 5 mg/kg/일 |
IV IP |
A A |
PM00104 시스플라틴 |
| G10 | 0.90 mg/kg/일 3 mg/kg/일 |
IV IP |
A A |
PM00104 시스플라틴 |
| G11 | 0.90 mg/kg/일 18 mg/kg/일 |
IV IP |
A A |
PM00104 이리노테칸 |
| G12 | 0.90 mg/kg/일 10 mg/kg/일 |
IV IP |
A A |
PM00104 이리노테칸 |
| G13 | 0.90 mg/kg/일 25 mg/kg/일 |
IV IP |
A B |
PM00104 파클리탁셀 |
| G14 | 0.90 mg/kg/일 12.5 mg/kg/일 |
IV IP |
A B |
PM00104 파클리탁셀 |
A: DPI 16, 23, 및 30; B: DPI 16, 20, 24
위약: 500 mg 수크로스 + 34 mg 인산칼륨 + 인산 q.s. pH 3.8-4.4
연구가 종결될 때까지 처리 개시일로부터 일주일에 2회씩 종양 크기 측정치를 기록하였다. 여러가지 측정 농도에서의 시스플라틴, 이리노테칸 또는 파클리탁셀 평균 종양 중량 각각에 대한 복합제 (PM00104와 시스플라틴, PM00104와 이리노테칸 또는 PM00104와 파클리탁셀) 중의 2종의 약제 간의 평균 종양 중량을 비교함으로써 종양 성장 억제율을 평가하였다.
평균, 평균의 표준 편차 및 표준 오차를 모든 평가시마다 모든 동물군에 대한 종양 부피에 대해 측정하였다. 연구 종기를 포함하여 각각의 측정일에서 종양 부피에 대하여 Student's t 테스트를 실시하여, 복합 치료군과 단일 단독요법 치료군 사이에 통계적으로 유의적인 차이가 있는지를 분석하였다.
복합요법의 증강효과 및 가산 정도의 평가를 위한 기준과 정의는 실시에 4에 설명된 것과 동일하다.
표 56은 각각의 처리시 얻어진 %T/C 값을 나타낸 것이고, 도 58-63은 대조군(비히클), PM00104, 시스플라틴, 이리노테칸, 파클리탁셀 및 대응하는 복합제로 처리된 마우스에 있어서, MRI-H-254 종양의 종양 부피 평가 (평균 ±SEM) 결과를 도시한 것이다.
| % T/C on day | ||||||||
| 군 | 16 | 20 | 23 | 26 | 29 | 33 | 40 | 48 |
| G1(대조군) | - | - | - | - | - | - | - | - |
| G2 | 98.0 | 93.9 | 56.1 | 40.6 | 38.3 | 28.0 | 18.2 | 15.6 |
| G3 | 100.5 | 97.8 | 75.3 | 59.9 | 54.3 | 39.5 | 23.8 | 17.1 |
| G4 | 98.4 | 93.4 | 83.0 | 81.5 | 73.0 | 68.6 | 55.3 | 49.2 |
| G5 | 98.1 | 92.1 | 84.0 | 75.0 | 71.0 | 60.2 | 40.1 | 34.9 |
| G6 | 98.4 | 92.5 | 93.0 | 90.2 | 88.6 | 74.3 | 49.2 | 41.4 |
| G7 | 96.1 | 78.9 | 51.6 | 40.5 | 36.4 | 26.1 | 21.2 | 19.3 |
| G8 | 99.9 | 98.6 | 69.6 | 68.5 | 65.3 | 60.7 | 63.1 | 59.9 |
| G9 | 96.8 | 77.6 | 37.9 | 19.7 | 13.8 | 6.4 | 2.0 | 1.9 |
| G10 | 96.7 | 89.3 | 54.6 | 31.7 | 21.7 | 12.8 | 4.7 | 4.2 |
| G11 | 101.3 | 83.8 | 47.1 | 31.8 | 22.4 | 12.1 | 6.6 | 5.3 |
| G12 | 101.9 | 79.5 | 44.2 | 28.3 | 19.9 | 13.5 | 9.7 | 6.2 |
| G13 | 95.4 | 80.0 | 42.3 | 41.1 | 19.6 | 14.2 | 6.3 | 6.8 |
| G14 | 99.7 | 87.6 | 47.7 | 41.0 | 27.4 | 20.4 | 12.6 | 9.5 |
표 57은 PM00104 및 시스플라틴을 단독 약제로서 투여하였을 경우 및 0.9 mg/kg/일의 투여량의 PM00104와 5 mg/kg/일의 투여량의 시스플라틴과의 복합제로서 투여하였을 경우의 종양 성장 억제%를 보여준다. 부가적으로, 상기 투여량에 있어서의 PM00104와 시스플라틴과의 복합제의 가산 정도 및 증강 효과도 제공한다.
| 일 | % 억제 | 예상 반응 | 실제 반응 | 증강 효과 | 반응 정도 | ||
| G2 | G3 | G9 | |||||
| 16 | 2.0 | -0.5 | 3.2 | 1.5 | 1.7 | 없음 | - |
| 20 | 6.1 | 2.2 | 22.4 | 8.3 | 14.1 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 23 | 43.9 | 24.7 | 62.1 | 68.6 | -6.5 | 있음 | 가산값 |
| 26 | 59.4 | 40.1 | 80.3 | 99.5 | -19.2 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 29 | 61.7 | 45.7 | 86.2 | 107.4 | -21.2 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 33 | 72.0 | 60.5 | 93.6 | 132.5 | -38.9 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 40 | 81.8 | 76.2 | 98.0 | 158.0 | -60.0 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 48 | 84.4 | 82.9 | 98.1 | 167.3 | -69.2 | 있음 | 가산값보다 작음 |
표 58은 PM00104 및 시스플라틴을 단독 약제로서 투여하였을 경우 및 0.9 mg/kg/일의 투여량의 PM00104와 3 mg/kg/일의 투여량의 시스플라틴과의 복합제로서 투여하였을 경우의 종양 성장 억제%를 보여준다. 부가적으로, 상기 투여량에 있어서의 PM00104와 시스플라틴과의 복합제의 가산 정도 및 증강 효과도 제공한다.
| 일 | % 억제 | 예상 반응 | 실제 반응 | 증강 효과 | 반응 정도 | ||
| G2 | G4 | G10 | |||||
| 16 | 2.0 | 1.6 | 3.3 | 3.6 | -0.3 | 없음 | - |
| 20 | 6.1 | 6.6 | 10.7 | 12.7 | -2.0 | 있음 | 가산값 |
| 23 | 43.9 | 17.0 | 45.4 | 60.9 | -15.5 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 26 | 59.4 | 18.5 | 68.3 | 77.9 | -9.6 | 있음 | 가산값 |
| 29 | 61.7 | 27.0 | 78.3 | 88.7 | -10.4 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 33 | 72.0 | 31.4 | 87.2 | 103.4 | -16.2 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 40 | 81.8 | 44.7 | 95.3 | 126.5 | -31.2 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 48 | 84.4 | 50.8 | 95.8 | 135.2 | -39.4 | 있음 | 가산값보다 작음 |
표 59는 PM00104 및 이리노테칸을 단독 약제로서 투여하였을 경우 및 0.9 mg/kg/일의 투여량의 PM00104와 18 mg/kg/일의 투여량의 이리노테칸과의 복합제로서 투여하였을 경우의 종양 성장 억제%를 보여준다. 부가적으로, 상기 투여량에 있어서의 PM00104와 이리노테칸과의 복합제의 가산 정도 및 증강 효과도 제공한다.
| 일 | % 억제 | 예상 반응 | 실제 반응 | 증강 효과 | 반응 정도 | ||
| G2 | G5 | G11 | |||||
| 16 | 2.0 | 1.9 | -1.3 | 3.9 | -5.2 | 없음 | - |
| 20 | 6.1 | 7.9 | 16.2 | 14.0 | 2.2 | 있음 | 가산값 |
| 23 | 43.9 | 16.0 | 52.9 | 59.9 | -7.0 | 있음 | 가산값 |
| 26 | 59.4 | 25.0 | 68.2 | 84.4 | -16.2 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 29 | 61.7 | 29.0 | 77.6 | 90.7 | -13.1 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 33 | 72.0 | 39.8 | 87.9 | 111.8 | -23.9 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 40 | 81.8 | 59.9 | 93.4 | 141.7 | -48.3 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 48 | 84.4 | 65.1 | 94.7 | 149.5 | -54.8 | 있음 | 가산값보다 작음 |
표 60은 PM00104 및 이리노테칸을 단독 약제로서 투여하였을 경우 및 0.9 mg/kg/일의 투여량의 PM00104와 10 mg/kg/일의 투여량의 이리노테칸과의 복합제로서 투여하였을 경우의 종양 성장 억제%를 보여준다. 부가적으로, 상기 투여량에 있어서의 PM00104와 이리노테칸과의 복합제의 가산 정도 및 증강 효과도 제공한다.
| 일 | % 억제 | 예상 반응 | 실제 반응 | 증강 효과 | 반응 정도 | ||
| G2 | G6 | G12 | |||||
| 16 | 2.0 | 1.6 | -1.9 | 3.6 | -5.5 | 없음 | - |
| 20 | 6.1 | 7.5 | 20.5 | 13.6 | 6.9 | 있음 | 가산값 |
| 23 | 43.9 | 7.0 | 55.8 | 50.9 | 4.9 | 있음 | 가산값 |
| 26 | 59.4 | 9.8 | 71.7 | 69.2 | 2.5 | 있음 | 가산값 |
| 29 | 61.7 | 11.4 | 80.1 | 73.1 | 7.0 | 있음 | 가산값 |
| 33 | 72.0 | 25.7 | 86.5 | 97.7 | -11.2 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 40 | 81.8 | 50.8 | 90.3 | 132.6 | -42.3 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 48 | 84.4 | 58.6 | 93.8 | 143.0 | -49.2 | 있음 | 가산값보다 작음 |
표 61은 PM00104 및 파클리탁셀을 단독 약제로서 투여하였을 경우 및 0.9 mg/kg/일의 투여량의 PM00104와 25 mg/kg/일의 투여량의 파클리탁셀과의 복합제로서 투여하였을 경우의 종양 성장 억제%를 보여준다. 부가적으로, 상기 투여량에 있어서의 PM00104와 파클리탁셀과의 복합제의 가산 정도 및 증강 효과도 제공한다.
| 일 | % 억제 | 예상 반응 | 실제 반응 | 증강 효과 | 반응 정도 | ||
| G2 | G7 | G13 | |||||
| 16 | 2.0 | 3.9 | 4.6 | 5.9 | -1.3 | 없음 | - |
| 20 | 6.1 | 21.1 | 20 | 27.2 | -7.2 | 없음 | - |
| 23 | 43.9 | 48.4 | 57.7 | 92.3 | -34.6 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 26 | 59.4 | 59.5 | 58.9 | 118.9 | -60.0 | 없음 | - |
| 29 | 61.7 | 63.6 | 80.4 | 125.3 | -44.9 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 33 | 72.0 | 73.9 | 85.8 | 145.9 | -60.1 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 40 | 81.8 | 78.8 | 93.7 | 160.6 | -66.9 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 48 | 84.4 | 80.7 | 93.2 | 165.1 | -71.9 | 있음 | 가산값보다 작음 |
표 62는 PM00104 및 파클리탁셀을 단독 약제로서 투여하였을 경우 및 0.9 mg/kg/일의 투여량의 PM00104와 12.5 mg/kg/일의 투여량의 파클리탁셀과의 복합제로서 투여하였을 경우의 종양 성장 억제%를 보여준다. 부가적으로, 상기 투여량에 있어서의 PM00104와 파클리탁셀과의 복합제의 가산 정도 및 증강 효과도 제공한다.
| 일 | % 억제 | 예상 반응 | 실제 반응 | 증강 효과 | 반응 정도 | ||
| G2 | G8 | G14 | |||||
| 16 | 2.0 | 0.1 | 0.3 | 2.1 | -1.8 | 없음 | - |
| 20 | 6.1 | 1.4 | 12.4 | 7.5 | 4.9 | 있음 | 가산값 |
| 23 | 43.9 | 30.4 | 52.3 | 74.3 | -22.0 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 26 | 59.4 | 31.5 | 59.0 | 90.9 | -31.9 | 없음 | - |
| 29 | 61.7 | 34.7 | 72.6 | 96.4 | -23.8 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 33 | 72.0 | 39.3 | 79.6 | 111.3 | -31.7 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 40 | 81.8 | 36.9 | 87.4 | 118.7 | -31.3 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 48 | 84.4 | 40.1 | 90.5 | 124.5 | -34.0 | 있음 | 가산값보다 작음 |
이 분석에 따라 다음 사실이 밝혀졌다:
a. PM00104와 시스플라틴과의 복합제는 단일 약제 대조군으로서의 시스플라틴에서 얻어진 결과보다는 통계적으로 유의적인 (p<0.001) 항종양 활성의 증강효과를 나타내었으나, 단일 약제 대조군으로서의 PM00104의 경우와 비교하여서는 그렇지 못하였으며, 그 증강 효과는 실험 말기에 가산값보다 작은 것으로 등급 매겨졌다.
b. PM00104와 이리노테칸과의 복합제는 단일 약제 대조군으로서의 이리노테칸에서 얻어진 결과보다는 통계적으로 유의적인 (p<0.001) 항종양 활성의 증강효과를 나타내었으나, 단일 약제 대조군으로서의 PM00104의 경우와 비교하여서는 그렇지 못하였으며, 그 증강 효과는 실험 말기에 가산값보다 작은 것으로 등급 매겨졌다.
c. PM00104와 파클리탁셀과의 복합제는 항종양 활성을 증강시켰으며, 이는 파클리탁셀 투여량 12.5 mg/kg/일에서 통계적으로 유의적이었다 (p<0.001). 이러한 증강효과는 가산값보다는 낮은 것으로 등급 매겨졌다.
실시예 15. 소라페닙과의 병용시 인간 간암 이종이식편에 미치는 PM00104의 효과를 측정하기 위한 생체내 연구.
이 연구의 목적은 인간 간암의 이종이식편 모델을 이용함으로써 소라페닙의 항종양 활성을 증강시키는 PM00104의 능력을 평가하기 위한 것이었다.
모든 실험에 암컷 무흉선 누드 마우스(Harlan Sprague Dawley, Madison, WI)를 이용하였다. 마우스들을 물과 음식물을 마음껏 먹을 수 있도록 하면서 통기시설이 된 랙 케이지에 가두었다. 마우스들을 종양 세포 현탁액으로 종양을 이식하기 적어도 5일 전에 순응시켰다. 비히클 대조군은 15마리의 마우스를 포함하였고, 처리군은 각각 9 마우스/군으로 이루어졌다.
이 연구에 사용된 종양 모델은 HepG2 세포주였으며, 이것은 ATCC (Manassas, VA)로부터 수득하였다.
HepG2 세포주를 10% FBS, 1.5 g/L 중탄산나트륨, 0.1 mM 비필수 아미노산, 1.0 mM 피루브산나트륨, 및 2 mM L-글루타민이 보강된 MEM에서 배양하였다. 각 동물의 오른쪽 옆구리에, 13G 투관침을 이용하여, 50% Matrigel 및 50% 무혈청 배지 (항생제 없음)의 0.2 mL현탁액 중의 5x106 HepG2 세포를 SC 이식하였다. 이식용으로 제조된 세포 분주액에 대하여 세균 배양을 실시하였다. 모든 배양물은 이식 후 24시 및 48시에 세균 오염이 없는 것으로 나타났다.
실시예 4에 설명된 바와 같이 종양 측정을 실시하였다. 종양이 175 ± 100 mm3 (평균 ± SD)의 크기 범위 이내에서 적절한 부피에 도달하였을 때, LabCat
In Life module V 8.0 SP1 종양 추적 및 측정 소프트웨어를 이용함으로써 종양의 무게에 기반하여 처리군과 대조군으로 마우스들을 무작위적으로 나누었다. DPI 19에 처리를 개시하였다.
PM00104는 동결건조된 PM00104 분말의 바이알 형태로 제공하여 주사용수와 재조성시켜 사용하였다. 소라페닙은 정제 형태로서 제공되었으며 Cremophor EL/에탄올/물 (CEW) (12.5, 12.5, 75)의 최종 비율 중에 용해시켰다.
연구 그룹과 처리 방법을 표 63에 요약하였다.
| 군 | 투여량 | 경로 | 스케쥴 | 시험 물질 |
| G1 (대조군) |
10 ml/kg/일 10 ml/kg/일 |
IV PO |
A B |
염수 중 0.18% 위약 0.9% 염수 |
| G2 | 0.90 mg/kg/일 | IV | A | PM00104 |
| G3 | 0.60 mg/kg/일 | IV | A | PM00104 |
| G4 | 60 mg/kg/일 | PO | B | 소라페닙 |
| G5 | 30 mg/kg/일 | PO | B | 소라페닙 |
| G6 | 0.90 mg/kg/일 60 mg/kg/일 |
IV PO |
A B |
PM00104 소라페닙 |
| G7 | 0.90 mg/kg/일 30 mg/kg/일 |
IV PO |
A B |
PM00104 소라페닙 |
| G8 | 0.60 mg/kg/일 60 mg/kg/일 |
IV PO |
A B |
PM00104 소라페닙 |
| G9 | 0.60 mg/kg/일 30 mg/kg/일 |
IV PO |
A B |
PM00104 소라페닙 |
A: DPI 19, 26, 및 33; B: DPI 19-33
위약: 500 mg 수크로스 + 34 mg 인산칼륨 + 인산 q.s. pH 3.8-4.4
연구가 종결될 때까지 처리 개시일로부터 일주일에 2회씩 종양 크기 측정치를 기록하였다. 여러가지 측정 농도에서의 소라페닙 평균 종양 중량 각각에 대한 복합제 (PM00104와 소라페닙) 중의 2종의 약제 간의 평균 종양 중량을 비교함으로써 종양 성장 억제율을 평가하였다.
평균, 평균의 표준 편차 및 표준 오차를 모든 평가시마다 모든 동물군에 대한 종양 부피에 대해 측정하였다. 연구 종기를 포함하여 각각의 측정일에서 종양 부피에 대하여 Student's t 테스트를 실시하여, 복합 치료군과 단일 단독요법 치료군 사이에 통계적으로 유의적인 차이가 있는지를 분석하였다.
복합요법의 증강효과 및 가산 정도의 평가를 위한 기준과 정의는 실시에 4에 설명된 것과 동일하다.
표 64는 각각의 처리시 얻어진 %T/C 값을 나타낸 것이고, 도 64-67은 대조군(비히클), PM00104, 소라페닙 및 대응하는 복합제로 처리된 마우스에 있어서, HepG2 종양의 종양 부피 평가 (평균 ±SEM) 결과를 도시한 것이다.
| % T/C on day | |||||
| 군 | 19 | 22 | 26 | 30 | 33 |
| G1 (대조군) |
- | - | - | - | - |
| G2 | 91.5 | 59.7 | 40.5 | 23.9 | 27.0 |
| G3 | 91.6 | 71.9 | 51.7 | 40.8 | 37.6 |
| G4 | 88.8 | 78.7 | 60.1 | 61.8 | 66.2 |
| G5 | 101.4 | 123.5 | 91.3 | 100.9 | 90.4 |
| G6 | 96.4 | 75.9 | 41.1 | 33.3 | 19.2 |
| G7 | 97.9 | 83.5 | 43.7 | 32.4 | 22.6 |
| G8 | 94.1 | 97.1 | 55.0 | 46.8 | 30.9 |
| G9 | 85.5 | 90.5 | 58.4 | 42.4 | 33.3 |
표 65는 PM00104 및 소라페닙을 단독 약제로서 투여하였을 경우 및 0.9 mg/kg/일의 투여량의 PM00104와 60 mg/kg/일의 투여량의 소라페닙과의 복합제로서 투여하였을 경우의 종양 성장 억제%를 보여준다. 부가적으로, 상기 투여량에 있어서의 PM00104와 소라페닙과의 복합제의 가산 정도 및 증강 효과도 제공한다.
| 일 | % 억제 | 예상 반응 | 실제 반응 | 증강 효과 | 반응 정도 | ||
| G2 | G4 | G6 | |||||
| 19 | 8.5 | 11.2 | 3.6 | 19.7 | -16.1 | 없음 | - |
| 22 | 40.3 | 21.3 | 24.1 | 61.6 | -37.5 | 없음 | - |
| 26 | 59.5 | 39.9 | 58.9 | 99.4 | -40.5 | 없음 | - |
| 30 | 76.1 | 38.2 | 66.7 | 114.3 | -47.6 | 없음 | - |
| 33 | 73.0 | 33.8 | 80.8 | 106.8 | -26.0 | 있음 | 가산값보다 작음 |
표 66은 PM00104 및 소라페닙을 단독 약제로서 투여하였을 경우 및 0.9 mg/kg/일의 투여량의 PM00104와 30 mg/kg/일의 투여량의 소라페닙과의 복합제로서 투여하였을 경우의 종양 성장 억제%를 보여준다. 부가적으로, 상기 투여량에 있어서의 PM00104와 소라페닙과의 복합제의 가산 정도 및 증강 효과도 제공한다.
| 일 | % 억제 | 예상 반응 | 실제 반응 | 증강 효과 | 반응 정도 | ||
| G2 | G5 | G7 | |||||
| 19 | 8.5 | -1.4 | 2.1 | 7.1 | -5.0 | 없음 | - |
| 22 | 40.3 | -23.5 | 16.5 | 16.8 | -0.3 | 없음 | - |
| 26 | 59.5 | 8.7 | 56.3 | 68.2 | -11.9 | 없음 | - |
| 30 | 76.1 | -0.9 | 67.6 | 75.2 | -7.6 | 없음 | - |
| 33 | 73.0 | 9.6 | 77.4 | 82.6 | -5.2 | 있음 | 가산값 |
표 67은 PM00104 및 소라페닙을 단독 약제로서 투여하였을 경우 및 0.6 mg/kg/일의 투여량의 PM00104와 60 mg/kg/일의 투여량의 소라페닙과의 복합제로서 투여하였을 경우의 종양 성장 억제%를 보여준다. 부가적으로, 상기 투여량에 있어서의 PM00104와 소라페닙과의 복합제의 가산 정도 및 증강 효과도 제공한다.
| 일 | % 억제 | 예상 반응 | 실제 반응 | 증강 효과 | 반응 정도 | ||
| G2 | G4 | G8 | |||||
| 19 | 8.4 | 11.2 | 5.9 | 19.6 | -13.7 | 없음 | - |
| 22 | 28.1 | 21.3 | 2.9 | 49.4 | -46.5 | 없음 | - |
| 26 | 48.3 | 39.9 | 45.0 | 88.2 | -43.2 | 없음 | - |
| 30 | 59.2 | 38.2 | 53.2 | 97.4 | -44.2 | 없음 | - |
| 33 | 62.4 | 33.8 | 69.1 | 96.2 | -27.1 | 있음 | 가산값보다 작음 |
표 68은 PM00104 및 소라페닙을 단독 약제로서 투여하였을 경우 및 0.6 mg/kg/일의 투여량의 PM00104와 30 mg/kg/일의 투여량의 소라페닙과의 복합제로서 투여하였을 경우의 종양 성장 억제%를 보여준다. 부가적으로, 상기 투여량에 있어서의 PM00104와 소라페닙과의 복합제의 가산 정도 및 증강 효과도 제공한다.
| 일 | % 억제 | 예상 반응 | 실제 반응 | 증강 효과 | 반응 정도 | ||
| G2 | G5 | G9 | |||||
| 19 | 8.4 | -1.4 | 14.5 | 7.0 | 7.5 | 있음 | 가산값 |
| 22 | 28.1 | -23.5 | 9.5 | 4.6 | 4.9 | 없음 | - |
| 26 | 48.3 | 8.7 | 41.6 | 57.0 | -15.4 | 없음 | - |
| 30 | 59.2 | -0.9 | 57.6 | 58.3 | -0.7 | 없음 | - |
| 33 | 62.4 | 9.6 | 66.7 | 72.0 | -5.3 | 있음 | 가산값 |
이 분석에 따라 PM00104와 소라페닙과의 복합제는 소라페닙 대조군의 경우 얻은 항종양 활성을 통계적으로 유의적으로 (p<0.01) 증강시킨 것으로 밝혀졌다. 관찰된 증강효과는 가산값보다는 낮은 것으로 나타났다.
실시예 16. 소라페닙과 병용시 인간의 간암 이종이식편에 미치는 PM00104의 효과를 측정하기 위한 생체내 연구.
이 연구의 목적은 인간 간암의 이종이식편 모델을 이용함으로써 소라페닙의 항종양 활성을 증강시키는 PM00104의 능력을 평가하기 위한 것이었다.
모든 실험에 암컷 무흉선 누드 마우스(Harlan Sprague Dawley, Madison, WI)를 이용하였다. 마우스들을 물과 음식물을 마음껏 먹을 수 있도록 하면서 통기시설이 된 랙 케이지에 가두었다. 마우스들을 종양 세포 현탁액으로 종양을 이식하기 적어도 5일 전에 순응시켰다. 비히클 대조군은 15마리의 마우스를 포함하였고, 처리군은 각각 9 마우스/군으로 이루어졌다.
이 연구에 사용된 종양 모델은 PLC/PRF/5 세포주였으며, 이것은 ATCC (Manassas, VA)로부터 수득하였다.
PLC/PRF/5 세포주를 10% FBS 및 1% L-글루타민이 보강된 Eagle 최소 필수 배지에서 배양시켰다. 각 동물의 오른쪽 옆구리에, 13G 투관침을 이용하여, 50% Matrigel 및 50% 무혈청 배지 (항생제 없음)의 0.2 mL현탁액 중의 5x106 PLC/PRF/5 세포를 SC 이식하였다. 이식용으로 제조된 세포 분주액에 대하여 세균 배양을 실시하였다. 모든 배양물은 이식 후 24시 및 48시에 세균 오염이 없는 것으로 나타났다.
실시예 4에 설명된 바와 같이 종양 측정을 실시하였다. 종양이 175 ± 100 mm3 (평균 ± SD)의 크기 범위 이내에서 적절한 부피에 도달하였을 때, LabCat
In Life module V 8.0 SP1 종양 추적 및 측정 소프트웨어를 이용함으로써 종양의 무게에 기반하여 처리군과 대조군으로 마우스들을 무작위적으로 나누었다. DPI 14에 처리를 개시하였다.
PM00104는 동결건조된 PM00104 분말의 바이알 형태로 제공하여 주사용수와 재조성시켜 사용하였다. 소라페닙은 정제 형태로서 제공되었으며 Cremophor EL/에탄올/물 (CEW) (12.5, 12.5, 75)의 최종 비율 중에 용해시켰다.
연구 그룹과 처리 방법을 표 69에 요약하였다.
| 군 | 투여량 | 경로 | 스케쥴 | 시험 물질 |
| G1 (대조군) |
10 ml/kg/일 10 ml/kg/일 |
IV PO |
A B |
염수 중 0.18% 위약 12.5/12.5/75 CEW |
| G2 | 0.90 mg/kg/일 | IV | A | PM00104 |
| G3 | 0.45 mg/kg/일 | IV | A | PM00104 |
| G4 | 60 mg/kg/일 | PO | B | 소라페닙 |
| G5 | 30 mg/kg/일 | PO | B | 소라페닙 |
| G6 | 0.90 mg/kg/일 60 mg/kg/일 |
IV PO |
A B |
PM00104 소라페닙 |
| G7 | 0.90 mg/kg/일 30 mg/kg/일 |
IV PO |
A B |
PM00104 소라페닙 |
| G8 | 0.45 mg/kg/일 60 mg/kg/일 |
IV PO |
A B |
PM00104 소라페닙 |
| G9 | 0.45 mg/kg/일 30 mg/kg/일 |
IV PO |
A B |
PM00104 소라페닙 |
A: DPI 14, 21 및 28; B: DPI 14-34
위약: 500 mg 수크로스 + 34 mg 인산칼륨 + 인산 q.s. pH 3.8-4.4
연구가 종결될 때까지 처리 개시일로부터 일주일에 2회씩 종양 크기 측정치를 기록하였다. 여러가지 측정 농도에서의 소라페닙 평균 종양 중량 각각에 대한 복합제 (PM00104와 소라페닙) 중의 2종의 약제 간의 평균 종양 중량을 비교함으로써 종양 성장 억제율을 평가하였다.
평균, 평균의 표준 편차 및 표준 오차를 모든 평가시마다 모든 동물군에 대한 종양 부피에 대해 측정하였다. 연구 종기를 포함하여 각각의 측정일에서 종양 부피에 대하여 Student's t 테스트를 실시하여, 복합 치료군과 단일 단독요법 치료군 사이에 통계적으로 유의적인 차이가 있는지를 분석하였다.
복합요법의 증강효과 및 가산 정도의 평가를 위한 기준과 정의는 실시에 4에 설명된 것과 동일하다.
표 70은 각각의 처리시 얻어진 %T/C 값을 나타낸 것이고, 도 68-71은 대조군(비히클), PM00104, 소라페닙 및 대응하는 복합제로 처리된 마우스에 있어서, PLC/PRF/5 종양의 종양 부피 평가 (평균 ±SEM) 결과를 도시한 것이다.
| % T/C on day | |||||||||
| 군 | 14 | 18 | 22 | 25 | 28 | 32 | 35 | 39 | 42 |
| G1 (대조군) | - | - | - | - | - | - | - | - | - |
| G2 | 100.8 | 78.8 | 66.7 | 71.0 | 52.9 | 45.6 | 54.9 | 77.1 | 70.1 |
| G3 | 106.5 | 71.1 | 73.5 | 80.4 | 67.3 | 79.7 | 71.7 | 89.2 | 85.7 |
| G4 | 98.5 | 73.6 | 52.2 | 53.4 | 43.4 | 42.9 | 36.5 | 50.2 | 55.4 |
| G5 | 99.5 | 76.1 | 79.5 | 70.7 | 72.4 | 69.9 | 54.7 | 59.3 | 72.0 |
| G6 | 101.7 | 34.7 | 27.0 | 23.3 | 20.9 | 31.2 | 23.2 | 33.9 | 34.3 |
| G7 | 102.9 | 55.5 | 41.0 | 41.7 | 36.0 | 40.9 | 34.4 | 47.4 | 45.0 |
| G8 | 95.4 | 45.1 | 28.5 | 23.5 | 25.6 | 31.3 | 18.4 | 24.9 | 29.8 |
| G9 | 100.3 | 43.9 | 40.8 | 43.6 | 45.3 | 41.5 | 29.3 | 41.7 | 42.4 |
표 71은 PM00104 및 소라페닙을 단독 약제로서 투여하였을 경우 및 0.9 mg/kg/일의 투여량의 PM00104와 60 mg/kg/일의 투여량의 소라페닙과의 복합제로서 투여하였을 경우의 종양 성장 억제%를 보여준다. 부가적으로, 상기 투여량에 있어서의 PM00104와 소라페닙과의 복합제의 가산 정도 및 증강 효과도 제공한다.
| 일 | % 억제 | 예상 반응 | 실제 반응 | 증강 효과 | 반응 정도 | ||
| G2 | G4 | G6 | |||||
| 14 | -0.8 | 1.5 | -1.7 | 0.7 | -2.4 | 없음 | - |
| 18 | 21.2 | 26.4 | 65.3 | 47.6 | 17.7 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 22 | 33.3 | 47.8 | 73.0 | 81.1 | -8.1 | 있음 | 가산값 |
| 25 | 29.0 | 46.6 | 76.7 | 75.6 | 1.1 | 있음 | 가산값 |
| 28 | 47.1 | 56.6 | 79.1 | 103.7 | -24.6 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 32 | 54.4 | 57.1 | 68.8 | 111.5 | -42.7 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 35 | 45.1 | 63.5 | 76.8 | 108.6 | -31.8 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 39 | 22.9 | 49.8 | 66.1 | 72.7 | -6.6 | 있음 | 가산값 |
| 42 | 29.9 | 44.6 | 65.7 | 74.5 | -8.8 | 있음 | 가산값 |
표 72는 PM00104 및 소라페닙을 단독 약제로서 투여하였을 경우 및 0.9 mg/kg/일의 투여량의 PM00104와 30 mg/kg/일의 투여량의 소라페닙과의 복합제로서 투여하였을 경우의 종양 성장 억제%를 보여준다. 부가적으로, 상기 투여량에 있어서의 PM00104와 소라페닙과의 복합제의 가산 정도 및 증강 효과도 제공한다.
| 일 | % 억제 | 예상 반응 | 실제 반응 | 증강 효과 | 반응 정도 | ||
| G2 | G5 | G7 | |||||
| 14 | -0.8 | 0.5 | -2.9 | -0.3 | -2.6 | 없음 | - |
| 18 | 21.2 | 23.9 | 44.5 | 45.1 | -0.6 | 있음 | 가산값 |
| 22 | 33.3 | 20.5 | 59.0 | 53.8 | 5.2 | 있음 | 가산값 |
| 25 | 29.0 | 29.3 | 58.3 | 58.3 | 0.0 | 있음 | 가산값 |
| 28 | 47.1 | 27.6 | 64.0 | 74.7 | -10.7 | 있음 | 가산값 |
| 32 | 54.4 | 30.1 | 59.1 | 84.5 | -25.4 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 35 | 45.1 | 45.3 | 65.6 | 90.4 | -24.8 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 39 | 22.9 | 40.7 | 52.6 | 63.6 | -11.0 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 42 | 29.9 | 28.0 | 55.0 | 57.9 | -2.9 | 있음 | 가산값 |
표 73은 PM00104 및 소라페닙을 단독 약제로서 투여하였을 경우 및 0.45 mg/kg/일의 투여량의 PM00104와 60 mg/kg/일의 투여량의 소라페닙과의 복합제로서 투여하였을 경우의 종양 성장 억제%를 보여준다. 부가적으로, 상기 투여량에 있어서의 PM00104와 소라페닙과의 복합제의 가산 정도 및 증강 효과도 제공한다.
| 일 | % 억제 | 예상 반응 | 실제 반응 | 증강 효과 | 반응 정도 | ||
| G2 | G4 | G8 | |||||
| 14 | -6.5 | 1.5 | 4.6 | -5.0 | 9.6 | 없음 | - |
| 18 | 28.9 | 26.4 | 54.9 | 55.3 | -0.4 | 있음 | 가산값 |
| 22 | 26.5 | 47.8 | 71.5 | 74.3 | -2.8 | 있음 | 가산값 |
| 25 | 19.6 | 46.6 | 76.5 | 66.2 | 10.3 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 28 | 32.7 | 56.6 | 74.4 | 89.3 | -14.9 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 32 | 20.3 | 57.1 | 68.7 | 77.4 | -8.7 | 있음 | 가산값 |
| 35 | 28.3 | 63.5 | 81.6 | 91.8 | -10.2 | 있음 | 가산값 |
| 39 | 10.8 | 49.8 | 75.1 | 60.6 | 14.5 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 42 | 14.3 | 44.6 | 70.2 | 58.9 | 11.3 | 있음 | 가산값보다 큼 |
표 74는 PM00104 및 소라페닙을 단독 약제로서 투여하였을 경우 및 0.45 mg/kg/일의 투여량의 PM00104와 30 mg/kg/일의 투여량의 소라페닙과의 복합제로서 투여하였을 경우의 종양 성장 억제%를 보여준다. 부가적으로, 상기 투여량에 있어서의 PM00104와 소라페닙과의 복합제의 가산 정도 및 증강 효과도 제공한다.
| 일 | % 억제 | 예상 반응 | 실제 반응 | 증강 효과 | 반응 정도 | ||
| G2 | G5 | G9 | |||||
| 14 | -6.5 | 0.5 | -1.5 | -6.0 | 4.5 | 없음 | - |
| 18 | 28.9 | 23.9 | 56.9 | 52.8 | 4.1 | 있음 | 가산값 |
| 22 | 26.5 | 20.5 | 59.2 | 47.0 | 12.2 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 25 | 19.6 | 29.3 | 56.4 | 48.9 | 7.5 | 있음 | 가산값 |
| 28 | 32.7 | 27.6 | 54.7 | 60.3 | -5.6 | 있음 | 가산값 |
| 32 | 20.3 | 30.1 | 58.5 | 50.4 | 8.1 | 있음 | 가산값 |
| 35 | 28.3 | 45.3 | 70.7 | 73.6 | -2.9 | 있음 | 가산값 |
| 39 | 10.8 | 40.7 | 58.3 | 51.5 | 6.8 | 있음 | 가산값 |
| 42 | 14.3 | 28.0 | 57.6 | 42.3 | 15.3 | 있음 | 가산값보다 큼 |
이 분석에 따라 PM00104와 소라페닙과의 복합제는 소라페닙 대조군에서 얻어진 항종양 활성을 통계적으로 유의적으로 (p<0.01) 증강시키는 것으로 나타났으며, 두가지 약물 모두 저투여량에서 가장 우수한 결과가 얻어졌다. 이 최우수 증강효과는 가산값보다 큰 것으로 나타났다.
실시예 17. 베바시주맙과의 병용시 인간 난소 종양 이종이식편에 미치는 PM00104의 효과의 측정을 위한 생체내 연구.
이 연구의 목적은 인간의 난소암의 이종이식편 모델을 이용함으로써 베바시주맙의 항종양 활성을 증강시키는 PM00104의 능력을 평가하기 위한 것이었다.
모든 실험에 암컷 무흉선 누드 마우스(Harlan Sprague Dawley, Madison, WI)를 이용하였다. 마우스들을 물과 음식물을 마음껏 먹을 수 있도록 하면서 통기시설이 된 랙 케이지에 가두었다. 마우스들을 종양 세포 현탁액으로 종양을 이식하기 적어도 5일 전에 순응시켰다. 비히클 대조군은 15마리의 마우스를 포함하였고, 처리군은 각각 10 마우스/군으로 이루어졌다.
이 연구에 사용된 종양 모델은 SK-OV-3 세포주였으며, 이것은 ATCC (Manassas, VA)로부터 수득하였다.
SK-OV-3 단편을 도너 동물로부터 제거하여 조직으로부터 막 및 출혈부분과 괴사부분을 모두 제거하고, 생체내 패시지 2로부터 3-4 mm3 단편을 13G 투관침을 이용하여 각 동물의 오른쪽 옆구리에 SC 이식하였다. 이식을 위해 준비된 세포 분주액에 대하여 세균 배양을 실시하였다. 모든 배양물은 이식한 지 24시간 및 48시간 후 세균 감염되지 않았다.
실시예 4에 설명된 바와 같이 종양 측정을 실시하였다. 종양이 175 ± 100 mm3 (평균 ± SD)의 크기 범위 이내에서 적절한 부피에 도달하였을 때, LabCat
In Life module V 8.0 SP1 종양 추적 및 측정 소프트웨어를 이용함으로써 종양의 무게에 기반하여 처리군과 대조군으로 마우스들을 무작위적으로 나누었다. DPI 14에 처리를 개시하였다.
PM00104는 동결건조된 PM00104 분말의 바이알 형태로 제공하여 주사용수와 재조성시켜 사용하였다. 베바시주맙은 용액으로서 제공되어 0.9% 염수에 추가 희석하였다.
연구 그룹과 처리 방법을 표 75에 요약하였다.
| 군 | 투여량 | 경로 | 스케쥴 | 시험 물질 |
| G1 (대조군) |
10 ml/kg/일 10 ml/kg/일 |
IV IP |
A B |
0.18% 위약 0.9% 염수 |
| G2 | 0.90 mg/kg/일 | IV | A | PM00104 |
| G3 | 5 mg/kg/일 | IP | B | 베바시주맙 |
| G4 | 2.5 mg/kg/일 | IP | B | 베바시주맙 |
| G5 | 0.90 mg/kg/일 5 mg/kg/일 |
IV IP |
A B |
PM00104 베바시주맙 |
| G6 | 0.90 mg/kg/일 2.5 mg/kg/일 |
IV IP |
A B |
PM00104 베바시주맙 |
A: DPI 14, 21, 및 28; B: DPI 14, 17, 21, 24, 28, 및 31
위약: 500 mg 수크로스 + 34 mg 인산칼륨 + 인산 q.s. pH 3.8-4.4
연구가 종결될 때까지 처리 개시일로부터 일주일에 2회씩 종양 크기 측정치를 기록하였다. 여러가지 측정 농도에서의 베바시주맙 평균 종양 중량 각각에 대한 복합제 (PM00104와 베바시주맙) 중의 2종의 약제 간의 평균 종양 중량을 비교함으로써 종양 성장 억제율을 평가하였다.
평균, 평균의 표준 편차 및 표준 오차를 모든 평가시마다 모든 동물군에 대한 종양 부피에 대해 측정하였다. 연구 종기를 포함하여 각각의 측정일에서 종양 부피에 대하여 Student's t 테스트를 실시하여, 복합 치료군과 단일 단독요법 치료군 사이에 통계적으로 유의적인 차이가 있는지를 분석하였다.
복합요법의 증강효과 및 가산 정도의 평가를 위한 기준과 정의는 실시에 4에 설명된 것과 동일하다.
표 76은 각각의 처리시 얻어진 %T/C 값을 나타낸 것이고, 도 72-73은 대조군(비히클), PM00104, 베바시주맙 및 대응하는 복합제로 처리된 마우스에 있어서, SK-OV-3 종양의 종양 부피 평가 (평균 ±SEM) 결과를 도시한 것이다.
| % T/C on day | ||||||||||
| 군 | 14 | 17 | 21 | 24 | 29 | 32 | 36 | 43 | 50 | 57 |
| G1 (대조군) | - | - | - | - | - | - | - | - | ||
| G2 | 100.9 | 87.6 | 79.4 | 78.8 | 73.5 | 73.1 | 72.7 | 81.5 | 93.8 | 100.4 |
| G3 | 100.2 | 76.6 | 64.0 | 42.6 | 28.0 | 25.8 | 30.7 | 43.8 | 42.5 | 46.1 |
| G4 | 100.5 | 85.0 | 61.0 | 48.4 | 32.1 | 29.6 | 40.3 | 48.7 | 47.5 | 70.0 |
| G5 | 100.9 | 78.1 | 40.5 | 31.2 | 22.6 | 22.2 | 29.5 | 39.2 | 32.0 | 44.3 |
| G6 | 103.4 | 73.0 | 43.8 | 45.2 | 22.4 | 29.3 | 26.3 | 34.6 | 42.0 | 41.0 |
표 77은 PM00104 및 베바시주맙을 단독 약제로서 투여하였을 경우 및 0.9 mg/kg/일의 투여량의 PM00104와 5 mg/kg/일의 투여량의 베바시주맙과의 복합제로서 투여하였을 경우의 종양 성장 억제%를 보여준다. 부가적으로, 상기 투여량에 있어서의 PM00104와 베바시주맙과의 복합제의 가산 정도 및 증강 효과도 제공한다.
| 일 | % 억제 | 예상 반응 | 실제 반응 | 증강 효과 | 반응의 정도 | ||
| G2 | G3 | G5 | |||||
| 14 | -0.9 | -0.2 | -0.9 | -1.1 | 0.2 | 없음 | - |
| 17 | 12.4 | 23.4 | 21.9 | 35.8 | -13.9 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 21 | 20.6 | 36.0 | 59.5 | 56.6 | 2.9 | 있음 | 가산값 |
| 24 | 21.2 | 57.4 | 68.8 | 78.6 | -9.8 | 있음 | 가산값 |
| 29 | 26.5 | 72.0 | 77.4 | 98.5 | -21.1 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 32 | 26.9 | 74.2 | 77.8 | 101.1 | -23.3 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 36 | 27.3 | 69.3 | 70.5 | 96.6 | -26.1 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 43 | 18.5 | 56.2 | 60.8 | 74.7 | -13.9 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 50 | 6.2 | 57.5 | 68.0 | 63.7 | 4.3 | 있음 | 가산값 |
| 57 | -0.4 | 53.9 | 55.7 | 53.5 | 2.2 | 있음 | 가산값 |
표 78은 PM00104 및 베바시주맙을 단독 약제로서 투여하였을 경우 및 0.9 mg/kg/일의 투여량의 PM00104와 2.5 mg/kg/일의 투여량의 베바시주맙과의 복합제로서 투여하였을 경우의 종양 성장 억제%를 보여준다. 부가적으로, 상기 투여량에 있어서의 PM00104와 베바시주맙과의 복합제의 가산 정도 및 증강 효과도 제공한다.
| 일 | % 억제 | 예상 반응 | 실제 반응 | 증강 효과 | 반응 정도 | ||
| G2 | G4 | G6 | |||||
| 14 | -0.9 | -0.5 | -3.4 | -1.4 | -2.0 | 없음 | - |
| 17 | 12.4 | 15.0 | 27.0 | 27.4 | -0.4 | 있음 | 가산값 |
| 21 | 20.6 | 39.0 | 56.2 | 59.6 | -3.4 | 있음 | 가산값 |
| 24 | 21.2 | 51.6 | 54.8 | 72.8 | -18.0 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 29 | 26.5 | 67.9 | 77.6 | 94.4 | -16.8 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 32 | 26.9 | 70.4 | 70.7 | 97.3 | -26.6 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 36 | 27.3 | 59.7 | 73.7 | 87.0 | -13.3 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 43 | 18.5 | 51.3 | 65.4 | 69.8 | -4.4 | 있음 | 가산값 |
| 50 | 6.2 | 52.5 | 58.0 | 58.7 | -0.7 | 있음 | 가산값 |
| 57 | -0.4 | 30.0 | 59.0 | 29.6 | 29.4 | 있음 | 가산값보다 큼 |
이 분석에 따라, PM00104와 베바시주맙과의 복합제는 단일 약제 대조군들의 항종양 활성을 증강시키는 것으로 나타났다. 분석 말기에, 이 증강 효가는 저투여량의 베바시주맙에서 가산값보다 큰 것으로 나타났다.
실시예 18. 화학요법치료제와 병용시 인간의 폐암, 유방암 및 결장암 세포주에 미치는 PM00104의 효과를 측정하기 위한 시험관내 연구.
이 연구의 목적은 폐암, 유방암 및 결장암 치료에 사용되는 화학요법치료제의 항종양 활성을 증강시키는 PM00104의 능력을 측정하기 위한 것이었다.
다음의 시약들을 PM00104와 병용하여 평가하였다: 파클리탁셀, 시스플라틴, 겜시타빈, 독소루비신, 5-플루오로우라실 (5-FU), 이리노테칸, 및 옥살리플라틴. ㅇ이 분석을 위하여 선택된 인간의 암세포주들은 다음과 같았다: A-549 (폐암), NCI-H460 (폐암), NCI-H23 (폐암), MDA-MB-231 (유방암), BT-474 (유방암), MCF-7 (유방암), LoVo (결장암), HCT-116 (결장암), 및 HT-29 (결장암) 세포주.
- A-549, NCI-H460, MDA-MB-231, MCF-7, LoVo 및 HT-29 세포를 10% 소 태아 혈청 (FBS), 1% 페니실린/스트렙토마이신 및 2 mM L-글루타민이 보강된 둘베코 변형 이글 배지 (DMEM)에서 배양하였다.
- NCI-H23 세포는 10% 소 태아 혈청 (FBS), 1% 페니실린/스트렙토마이신 및 2 mM L-글루타민이 보강된 RPMI에서 배양하였다.
- BT-474 세포는 1% ITS (인슐린, 트랜스페린, 및 셀레늄), 10% 소 태아 혈청 (FBS), 1% 페니실린/스트렙토마이신 및 2 mM L-글루타민이 보강된 RPMI에서 배양하였다.
- HCT-116 세포는 10% 소 태아 혈청 (FBS), 1% 페니실린/스트렙토마이신 및 2 mM L-글루타민이 보강된 McCoy 배지에서 배양하였다.
스크리닝은 다음의 두 부분으로 실시하였다:
a. 제1 세트의 분석에서, 각각의 종양 세포주들에게 약물을 72시간 노출 시킨 후 각 약물의 IC50 값을 측정하였다.
모든 세포주들은 37℃, 5% CO2 및 98% 습도에서 해당 배양 배지에서 유지시켰다. 도말 전 날, 세포에 신선하고 완전한 성장 배지를 공급하고, 자동 유식세포측정기를 이용하여 세포 수를 측정하였다.
세포들을 수확하고, 150 μL의 배지 중에 적절한 세포 밀도 (5,000 - 10,000 세포)로 96 웰 마이크로타이터 플레이트에 접종한 다음 24시간 인큐베이션시켜, 약물 첨가 전에 세포들을 부착시켰다.
PM00104, 파클리탁셀, 겜시타빈, 독소루비신, 5-플루오로우라실(5-FU) 및 이리노테칸의 스톡 용액을 1.0 mg/mL의 100% DMSO 중에 준비하였다. 시스플라틴과 옥살리플라틴의 스톡 용액들은 조직 배양을 위해 1.0 mg/mL로 이중 멸균수에서 준비하였다. 최종 4x 처리 농도를 달성하기 위해 무혈청 배야야 배지에서 부가적인 계대 희석을 실시하였다. 웰 당 각각의 희석된 시험 물질 50 μL 씩을 첨가하였다.
살아있는 세포들의 수를 측정하기 위한 비색측정법인 MTS 분석법 (테트라졸륨)에 의하여 세포독성 효과를 측정하였다. 인큐베이션 기간 (72 시간) 후, 50 μL의 MTT 용액을 각각의 마이크로타이터 웰에 첨가하고 37℃에서 8 시간 동안 인큐베이션시켰다. 이어서, 배양 배지를 제거하고 50 μL의 DMSO를 첨가하여 MTT 결정을 용해시켰다. 분광광도계 플레이트 판독기를 이용하여 540 nm에서의 광학 밀도를 측정하였다.
각각의 시험 물질에 대해 2 내지 4회 측정한 값의 평균값으로부터 IC50 값을 구하였다. Prism v5.02 소프트웨어 (GraphPad)를 이용한 회귀 곡선을 작성한 다음, 50% 억제 농도 (mg/mL)를 자동으로 내삽하였다.
각각의 세포주에 대한 각 약제의 개별적인 IC50 값을 다음 표 79에 나타내었다.
| 각 약제의 IC50 값 (Molar) | ||
| 세포주 | 화합물 | IC50 |
| A-549 | PM00104 | 7.2E-09 |
| 겜시타빈 | 5.0E-10 | |
| 파클리탁셀 | 4.7E-08 | |
| 시스플라틴 | 5.0E-05 | |
| NCI-H460 | PM00104 | 7.2E-09 |
| 겜시타빈 | 1.0E-09 | |
| 파클리탁셀 | 1.2E-08 | |
| 시스플라틴 | 2.5E-05 | |
| NCI-H23 | PM00104 | 5.0E-09 |
| 겜시타빈 | 2.8E-10 | |
| 파클리탁셀 | 4.7E-08 | |
| 시스플라틴 | 1.0E-05 | |
| MDA-MB-231 | PM00104 | 6.0E-09 |
| 겜시타빈 | 2.4E-08 | |
| 파클리탁셀 | 6.0E-09 | |
| 독소루비신 | 1.9E-06 | |
| BT-474 | PM00104 | 1.0E-09 |
| 겜시타빈 | 1.4E-08 | |
| 파클리탁셀 | 1.7E-09 | |
| 독소루비신 | 2.5E-06 | |
| MCF-7 | PM00104 | 1.0E-09 |
| 겜시타빈 | 1.3E-09 | |
| 파클리탁셀 | 7.0E-08 | |
| 독소루비신 | 4.0E-06 | |
| HCT-116 | PM00104 | 9.0E-09 |
| 5-플루오로우라실 | 6.0E-06 | |
| 옥살리플라틴 | 1.4E-04 | |
| 이리노테칸 | 8.0E-06 | |
| LOVO | PM00104 | 3.0E-09 |
| 5-플루오로우라실 | 1.8E-06 | |
| 옥살리플라틴 | 3.2E-06 | |
| 이리노테칸 | 6.0E-06 | |
| HT-29 | PM00104 | 6.0E-09 |
| 5-플루오로우라실 | 4.0E-06 | |
| 옥살리플라틴 | 3.8E-05 | |
| 이리노테칸 | 1.8E-05 | |
b. 제2 세트 분석에서, 각각의 세포주들을 다음의 고유의 IC50 농도의 조합으로, PM00104와 상기 제제들과 함께 인큐베이션시켰다:
전술한 바와 같이 세포 배양 및 세포 도말을 실시하였다. 각각의 약물의 스톡 용액들 역시 전술한 바와 같이 약물 농도 1.0 mg/mL로 제조하였다. 이들 스톡 용액들을 필요에 따라 추가로 계대 희석하여 출발 농도를 얻었다. 부가적인 계대 희석은 무혈청 배지에서 수행하였으며 최종 8x 처리 농도를 얻었다. 각각의 웰에, 희석된 시험 물질 25 μL 씩을 첨가하였다.
전술한 바와 같이 MTT 분석에 의해 세포독성 효과를 측정하였다. 데이터는 다음과 같이 분석하였다:
1. Prism v5.02 소프트웨어 (Graphpad) 프로그램을 이용하여 대조군 값에 대하여 데이터를 정규화시켰다 (100% = 약물 부재시 (비히클 단독)의 세포 성장; 0% = 블랭크 대조군).
2. 정규화된 데이터를 x/y 그래프로 작성하였다. 각각의 물질 (약물)에 대한 100% IC50 값들을 연결하는 선을 그었다. 값이 상기 선 보다 많이 위에 위치하면 길항성(antagonism)을 나타내며, 아래에 위치하는 경우에는 상승효과를 나타내고, 선상에 있는 경우에는 가산성을 나타낸다.
종양 세포에 대한 상승적 세포 독성효과는 최적 효과이며 PM00104와 다른 약물과의 조합이 각각의 약물의 단독 사용시보다 더 효과적임을 의미하는 것이다. 통계적으로 유의적인 관찰은 복합제 (PM00104 + 다른 약물)의 흡수도 값과 두개 모두의 종점 값들 (PM00104 및 다른 약물 단독) 간에 차이가 존재할 것을 요구한다. 대다수의 값이 통계적으로 선(종점) 위 또는 선 아래에 있으면, 각각 길항성 또는 상승성을 의미하며, 그렇지 않으면 그 패턴은 가산적인 상호반응에 더 부합하는 것이다.
이 분석에 의하여 다음 사실이 밝혀졌다:
a. PM00104와 겜시타빈과의 복합제는 인간의 폐암 세포 중, 60/40, 70/30 및 75/25 투여량 비율에서 NCI-H23 (도 76)에서 상승적이었고 세포주 NCI-H460 (도 75) 세포주에서는 75/25 투여량 비율에서 상승저거 효과를 갖는 가산적 경향을 나타냈다. 또한, A549 (도 74) 세포주에서는 이 복합제는 가산적 경향을 보였다.
b. PM00104와 파클리탁셀과의 복합제는 인간의 폐암 세포 중 NCI-H23 (도 79) 세포주에서 상승적이었고, NCI-H460 (도 78) 및 A549 (도 77) 세포주에서 가산적 경향을 나타냈다.
c. PM00104와 시스플라틴과의 복합제는 인간의 폐암 세포 중 30/70 및 50/50 의 투여량 비율에서 NCI-H460 (도 81) 세포주에서 상승적이었다. A549 (도 80) 세포주에서는 가산적 경향을 나타냈고 NCI-H23 (도 82) 세포주에서는 길항적 경향을 나타냈다.
d. PM00104와 겜시타빈과의 복합제는 인간의 유방암 세포 중 MDA-MB-231 (도 83), BT-474 (도 84) 및 MCF-7 (도 85) 세포주에서 상승적이었다.
e. PM00104와 파클리탁셀과의 복합제는 인간의 유방암 세포 중 MCF-7 (도 88) 세포주에서 상승적이었고, MDA-MB-231 (도 86) 및 BT-474 (도 87) 세포주에서는 가산적 경향을 나타냈다.
f. PM00104와 독소루비신과의 복합제는 인간의 유방암 세포 중 MDA-MB-231 (도 89), BT-474 (도 90) 및 MCF-7 (도 91) 세포주에서 상승적이었다.
g. PM00104와 5-플루오로우라실과의 복합제는 결장암 세포 중 HT-29 (도 94) 및 LoVo (도 93) 세포주에서 모든 투여량 비율 또는 거의 모든 투여량 비율에서 상승적이었으며, HCT-116 (도 92)에서는 가산적 경향을 나타냈다.
h. PM00104와 옥살리플라틴과의 복합제는 인간의 결장암 세포 중 LoVo (도 96), HT-29 (도 97) 및 HCT-116 (도 95) 세포주에서 가산적 경향을 나타냈다.
i. PM00104와 이리노테칸과의 복합제는 인간의 결장암 세포 중 LoVo (도 99) 세포주에서 상승적이었고, HT-29 (도 100) 및 HCT-116 (도 98) 세포주에서는 가산적 경향을 나타냈다.
실시예 19. 템시롤리무스 및 베바시주맙과 병용시 인간의 폐암 이종이식편에 미치는 PM00104의 효과를 측정하기 위한 생체내 연구.
모든 실험에 암컷 무흉선 누드 마우스(Harlan Sprague Dawley, Madison, WI)를 이용하였다. 마우스들을 물과 음식물을 마음껏 먹을 수 있도록 하면서 통기시설이 된 랙 케이지에 가두었다. 마우스들을 종양 세포 현탁액으로 종양을 이식하기 적어도 5일 전에 순응시켰다. 비히클 대조군은 15마리의 마우스를 포함하였으며 처리군은 각각 10 마우스/군으로 이루어졌다.
이 연구에 사용된 종양 모델은 ATCC (Manassas, VA)로부터 수득한 인간의 NSCLC 세포주인 인간 NCI-H460 세포주였다. 10% FBS, 10 mM Hepes, 1 mM 피루브산나트륨, 4.5 g/l 글루코스, 1.5 g/l 중탄산나트륨 및 2 mM L-글루타민이 보강된 RPMI-1640 배지에서, NCI-H460 세포를 배양하였다. 13G 투관침이 구비된 1 ml 시린지를 이용하여 각 동물의 오른쪽 옆구리에 50% 마트리겔(Matrigel)/50% RPMI 배지 (항생제나 혈청 없음)의 0.2 mL 현탁액 중, 5x106 세포/마우스의 비율로 NCI-H460 세포를 피하(SC) 이식하였다. 이식을 위해 준비된 세포 분주액에 대하여 세균 배양을 실시하였다. 모든 배양물은 이식 후 24시간 및 48시간 후 세균 감염되지 않았다.
종양 측정은 실시예 4에 설명된 바와 같이 행하였다. 종양이 139 ± 36 mm3 (평균 ± SD)의 크기 범위 이내에서 적절한 부피에 도달하였을 때, LabCat
In Life module V 8.0 SP1 종양 추적 및 측정 소프트웨어를 이용함으로써 종양의 무게에 기반하여 처리군과 대조군으로 마우스들을 무작위적으로 나누었다. DPI 9에 처리를 개시하였다.
PM00104는 동결건조된 PM00104 분말의 바이알 형태로 제공하여 주사용수와 재조성시켜 사용하였다. 템시롤리무스는 비수성 에탄올 용액 형태로 제공되었으며 이것은 폴리소르베이트 80 (40% w/v), 폴리에틸렌 글리콜 400 (42.8% w/v) 및 탈수 알코올 (19.9% w/v)을 함유하는 희석 용액으로 추가 희석한 다음, 투약 농도에 달하도록 0.9% 염수에서 추가 희석하였다. 베바시주맙은 용액으로서 제공되었으며 0.9% 염수로 추가 희석하였다.
연구 그룹과 처리 방법을 표 80에 정리하였다.
| 군 | 투여량 | 경로 | 스케쥴 | 시험 물질 |
| G1 (대조군) |
10 ml/kg/일 10 ml/kg/일 |
IV IP |
A B |
0.18% 위약 0.9% 염수 |
| G2 | 0.9 mg/kg/일 | IV | A | PM00104 |
| G3 | 5 mg/kg/일 | IP | C | 베바시주맙 |
| G4 | 2.5 mg/kg/일 | IP | C | 베바시주맙 |
| G5 | 20 mg/kg/일 | IP | B | 템시롤리무스 |
| G6 | 10 mg/kg/일 | IP | B | 템시롤리무스 |
| G7 | 0.9 mg/kg/일 5 mg/kg/일 |
IV IP |
A C |
PM00104 베바시주맙 |
| G8 | 0.9 mg/kg/일 2.5 mg/kg/일 |
IV IP |
A C |
PM00104 베바시주맙 |
| G9 | 0.9 mg/kg/일 20 mg/kg/일 |
IV IP |
A B |
PM00104 템시롤리무스 |
| G10 | 0.9 mg/kg/일 10 mg/kg/일 |
IV IP |
A B |
PM00104 템시롤리무스 |
A: DPI 9, 16, 및 23; B: DPI 9-13, 16-20, 및 23-27; C: DPI 9, 13, 16,20, 23, 및 27
위약: 500 mg 수크로스 + 34 mg 인산칼륨 + 인산 q.s. pH 3.8-4.4
연구가 종결될 때까지 처리 개시일로부터 일주일에 2~3회씩 종양 크기 측정치를 기록하였다. 여러가지 측정 농도에서의 베바시주맙 또는 템시롤리무스 평균 종양 중량 각각에 대한 복합제 (PM00104와 베바시주맙 또는 PM00104와 템시롤리무스) 중의 2종의 약제 간의 평균 종양 중량을 비교함으로써 종양 성장 억제율을 평가하였다.
평균, 평균의 표준 편차 및 표준 오차를 모든 평가시마다 모든 동물군에 대한 종양 부피에 대해 측정하였다. 연구 종기를 포함하여 각각의 측정일에서 종양 부피에 대하여 Student's t 테스트를 실시하여, 복합 치료군과 단일 단독요법 치료군 사이에 통계적으로 유의적인 차이가 있는지를 분석하였다.
복합요법의 증강효과 및 가산 정도의 평가를 위한 기준과 정의는 실시에 4에 설명된 것과 동일하다.
표 81은 각각의 처리시 얻어진 %T/C 값을 나타낸 것이고, 도 101-104는 대조군(비히클), PM00104, 베바시주맙, 템시롤리무스 및 대응하는 복합제로 처리된 마우스에 있어서, NCI-H460 종양의 종양 부피 평가 (평균 ±SEM) 결과를 도시한 것이다.
| % T/C on day | |||||||||
| 군 | 9 | 13 | 16 | 21 | 24 | 27 | 30 | 38 | 41 |
| G1 | - | - | - | - | - | - | - | - | |
| G2 | 96.3 | 97.8 | 75.9 | 73.2 | 66.8 | 43.8 | 45.1 | 125.1 | 132.5 |
| G3 | 102.1 | 91.3 | 87.6 | 74.2 | 68.3 | 38.7 | 43.7 | 116.9 | 121.6 |
| G4 | 99.4 | 81.7 | 74.3 | 59.7 | 52.0 | 26.9 | 43.3 | 96.8 | 104.7 |
| G5 | 104.4 | 66.4 | 68.4 | 46.8 | 35.9 | 15.9 | 23.9 | 61.2 | 65.2 |
| G6 | 101.9 | 60.4 | 55.5 | 40.5 | 18.9 | 12.9 | 22.0 | 52.0 | 66.4 |
| G7 | 104.1 | 62.3 | 50.2 | 38.2 | 22.7 | 16.4 | 25.2 | 69.5 | 77.9 |
| G8 | 105.5 | 63.1 | 66.4 | 50.5 | 25.6 | 18.5 | 36.5 | 83.4 | 91.4 |
| G9 | 100.5 | 33.0 | 28.2 | 18.0 | 5.3 | 3.4 | 8.8 | 34.0 | 47.9 |
| G10 | 103.0 | 11.7 | 29.2 | 22.3 | 8.3 | 4.5 | 11.2 | 40.1 | 41.7 |
표 82는 PM00104 및 베바시주맙을 단독 약제로서 투여하였을 경우 및 0.9 mg/kg/일의 투여량의 PM00104와 5 mg/kg/일의 투여량의 베바시주맙과의 복합제로서 투여하였을 경우의 종양 성장 억제%를 보여준다. 부가적으로, 상기 투여량에 있어서의 PM00104와 베바시주맙의 복합제의 가산 정도 및 증강 효과도 제공한다.
| 일 | % 억제 | 예상 반응 | 실제 반응 | 증강 효과 | 반응 정도 | ||
| G2 | G3 | G7 | |||||
| 9 | 3.7 | -2.1 | -4.1 | 1.6 | -5.7 | 없음 | - |
| 13 | 2.2 | 8.7 | 37.7 | 10.9 | 26.8 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 16 | 24.1 | 12.4 | 49.8 | 36.5 | 13.3 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 21 | 26.8 | 25.8 | 61.8 | 52.6 | 9.2 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 24 | 33.2 | 31.7 | 77.3 | 64.9 | 12.4 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 27 | 56.2 | 61.3 | 83.6 | 117.5 | -33.9 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 30 | 54.9 | 56.3 | 74.8 | 111.2 | -36.4 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 38 | -25.1 | -16.9 | 30.5 | -42.0 | 72.5 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 41 | -32.5 | -21.6 | 22.1 | -54.1 | 76.2 | 있음 | 가산값보다 큼 |
표 83은 PM00104 및 베바시주맙을 단독 약제로서 투여하였을 경우 및 0.9 mg/kg/일의 투여량의 PM00104와 2.5 mg/kg/일의 투여량의 베바시주맙과의 복합제로서 투여하였을 경우의 종양 성장 억제%를 보여준다. 부가적으로, 상기 투여량에 있어서의 PM00104와 베바시주맙의 복합제의 가산 정도 및 증강 효과도 제공한다.
| 일 | % 억제 | 예상 반응 | 실제 반응 | 증강 효과 | 반응 정도 | ||
| G2 | G4 | G8 | |||||
| 9 | 3.7 | 0.6 | -5.5 | 4.3 | -9.8 | 없음 | - |
| 13 | 2.2 | 18.3 | 36.9 | 20.5 | 16.4 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 16 | 24.1 | 25.7 | 33.6 | 49.8 | -16.2 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 21 | 26.8 | 40.3 | 49.5 | 67.1 | -17.6 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 24 | 33.2 | 48.0 | 74.4 | 81.2 | -6.8 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 27 | 56.2 | 73.1 | 81.5 | 129.3 | -47.8 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 30 | 54.9 | 56.7 | 63.5 | 111.6 | -48.1 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 38 | -25.1 | 3.2 | 16.6 | -21.9 | 38.5 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 41 | -32.5 | -4.7 | 8.6 | -37.2 | 45.8 | 있음 | 가산값보다 큼 |
표 84는 PM00104 및 템시롤리무스를 단독 약제로서 투여하였을 경우 및 0.9 mg/kg/일의 투여량의 PM00104와 20 mg/kg/일의 투여량의 템시롤리무스와의 복합제로서 투여하였을 경우의 종양 성장 억제%를 보여준다. 부가적으로, 상기 투여량에 있어서의 PM00104와 템시롤리무스의 복합제의 가산 정도 및 증강 효과도 제공한다.
| 일 | % 억제 | 예상 반응 | 실제 반응 | 증강 효과 | 반응 정도 | ||
| G2 | G5 | G9 | |||||
| 9 | 3.7 | -4.4 | -0.5 | -0.7 | 0.2 | 없음 | - |
| 13 | 2.2 | 33.6 | 67.0 | 35.8 | 31.2 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 16 | 24.1 | 31.6 | 71.8 | 55.7 | 16.1 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 21 | 26.8 | 53.2 | 82.0 | 80.0 | 2.0 | 있음 | 가산값 |
| 24 | 33.2 | 64.1 | 94.7 | 97.3 | -2.6 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 27 | 56.2 | 84.1 | 96.6 | 140.3 | -43.7 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 30 | 54.9 | 76.1 | 91.2 | 131.0 | -39.8 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 38 | -25.1 | 38.8 | 66.0 | 13.7 | 52.3 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 41 | -32.5 | 34.8 | 52.1 | 2.3 | 49.8 | 있음 | 가산값보다 큼 |
표 85는 PM00104 및 템시롤리무스를 단독 약제로서 투여하였을 경우 및 0.9 mg/kg/일의 투여량의 PM00104와 10 mg/kg/일의 투여량의 템시롤리무스와의 복합제로서 투여하였을 경우의 종양 성장 억제%를 보여준다. 부가적으로, 상기 투여량에 있어서의 PM00104와 템시롤리무스의 복합제의 가산 정도 및 증강 효과도 제공한다.
| 일 | % 억제 | 예상 반응 | 실제 반응 | 증강 효과 | 반응 정도 | ||
| G2 | G6 | G10 | |||||
| 9 | 3.7 | -1.9 | -3.0 | 1.8 | -4.8 | 없음 | - |
| 13 | 2.2 | 39.6 | 88.3 | 41.8 | 46.5 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 16 | 24.1 | 44.5 | 70.8 | 68.6 | 2.2 | 있음 | 가산값 |
| 21 | 26.8 | 59.5 | 77.7 | 86.3 | -8.6 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 24 | 33.2 | 81.1 | 91.7 | 114.3 | -22.6 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 27 | 56.2 | 87.1 | 95.5 | 143.3 | -47.8 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 30 | 54.9 | 78.0 | 88.8 | 132.9 | -44.1 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 38 | -25.1 | 48.0 | 59.9 | 22.9 | 37.0 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 41 | -32.5 | 33.6 | 58.3 | 1.1 | 57.2 | 있음 | 가산값보다 큼 |
이 분석에 따라, PM00104와 베바시주맙과의 복합제는 단일 약제 대조군들에서 얻어진 항종양 활성을 증강시키는 것으로 나타났다. 분석 말기에 두 가지 투여량 모두에서 베바시주맙은 가산값보다 큰 효과를 나타냈다.
이 분석에 따라, PM00104와 템시롤리무스와의 복합제는 단일 약제 대조군들에서 얻어진 항종양 활성을 증강시키는 것으로 나타났다. 분석 말기에 두 가지 투여량 모두에서 템시롤리무스는 가산값보다 큰 효과를 나타냈다.
실시예 20. 겜시타빈과의 병용시 인간의 폐암 이종이식편에 미치는 PM00104의 효과를 측정하기 위한 생체내 연구.
모든 실험에 암컷 무흉선 누드 마우스(Harlan Sprague Dawley, Madison, WI)를 이용하였다. 마우스들을 물과 음식물을 마음껏 먹을 수 있도록 하면서 통기시설이 된 랙 케이지에 가두었다. 마우스들을 종양 세포 현탁액으로 종양을 이식하기 적어도 5일 전에 순응시켰다. 비히클 대조군은 15마리의 마우스를 포함하였으며 처리군은 각각 9 마우스/군으로 이루어졌다.
이 연구에 사용된 종양 모델은 ATCC (Manassas, VA)로부터 수득한 인간의 NSCLC 세포주인 인간 NCI-H460 세포주였다. 이 세포주를 실시예 19에 설명된 방법에 따라 배양하여 동물에게 이식하였다. 시험관내 패시지 9로부터의 세포들을 연구 마우스 내로 SC 이식하였다.
종양 측정은 실시예 4에 설명된 바와 같이 행하였다. 종양이 175 ± 100 mm3 (평균 ± SD)의 크기 범위 이내에서 적절한 부피에 도달하였을 때, LabCat
In Life module V 8.0 SP1 종양 추적 및 측정 소프트웨어를 이용함으로써 종양의 무게에 기반하여 처리군과 대조군으로 마우스들을 무작위적으로 나누었다. DPI 8에 처리를 개시하였다.
PM00104는 동결건조된 PM00104 분말의 바이알 형태로 제공하여 주사용수와 재조성시켜 사용하였다. 겜시타빈은 겜시타빈 HCl을 함유하는 고상의 백색 분말 형태로서 제공되었으며 이를 0.9% 염수에 재조성시켰다.
연구 그룹과 처리 방법을 표 86에 정리하였다.
| 군 | 투여량 | 경로 | 스케쥴 | 시험 물질 |
| G1 (대조군) |
10 ml/kg/일 10 ml/kg/일 |
IV IP |
A A |
0.18% 위약 0.9% 염수 |
| G2 | 0.9 mg/kg/일 | IV | A | PM00104 |
| G3 | 180 mg/kg/일 | IP | A | 겜시타빈 |
| G4 | 90 mg/kg/일 | IP | A | 겜시타빈 |
| G5 | 0.9 mg/kg/일 180 mg/kg/일 |
IV IP |
A A |
PM00104 겜시타빈 |
| G6 | 0.9 mg/kg/일 90 mg/kg/일 |
IV IP |
A A |
PM00104 겜시타빈 |
A: DPI 8, 15, 및 22; 위약: 500 mg 수크로스 + 34 mg 인산칼륨 + 인산 q.s.pH 3.8-4.4
연구가 종결될 때까지 처리 개시일로부터 일주일에 2~3회씩 종양 크기 측정치를 기록하였다. 여러가지 측정 농도에서의 겜시타빈 평균 종양 중량 각각에 대한 복합제 (PM00104와 겜시타빈) 중의 2종의 약제 간의 평균 종양 중량을 비교함으로써 종양 성장 억제율을 평가하였다.
평균, 평균의 표준 편차 및 표준 오차를 모든 평가시마다 모든 동물군에 대한 종양 부피에 대해 측정하였다. 연구 종기를 포함하여 각각의 측정일에서 종양 부피에 대하여 Student's t 테스트를 실시하여, 복합 치료군과 단일 단독요법 치료군 사이에 통계적으로 유의적인 차이가 있는지를 분석하였다.
복합요법의 증강효과 및 가산 정도의 평가를 위한 기준과 정의는 실시에 4에 설명된 것과 동일하다.
표 87은 각각의 처리시 얻어진 %T/C 값을 나타낸 것이고, 도 105-106은 대조군, PM00104, 겜시타빈 및 대응하는 복합제로 처리된 마우스에 있어서, NCI-H460 종양의 종양 부피 평가 (평균 ±SEM) 결과를 도시한 것이다.
| % T/C on day | |||||||
| 군 | 8 | 11 | 14 | 18 | 21 | 25 | 28 |
| G1 | - | - | - | - | - | - | - |
| G2 | 103.0 | 98.5 | 85.6 | 90.8 | 81.2 | 76.7 | 77.3 |
| G3 | 101.3 | 47.4 | 67.5 | 52.0 | 69.3 | 58.7 | 56.8 |
| G4 | 108.6 | 83.2 | 90.2 | 65.3 | 73.4 | 63.2 | 76.9 |
| G5 | 100.8 | 35.5 | 78.3 | 54.3 | 56.8 | 43.2 | 49.4 |
| G6 | 100.1 | 45.9 | 55.5 | 45.0 | 51.8 | 42.6 | 55.2 |
표 88은 PM00104 및 겜시타빈을 단독 약제로서 투여하였을 경우 및 0.9 mg/kg/일의 투여량의 PM00104와 180 mg/kg/일의 투여량의 겜시타빈과의 복합제로서 투여하였을 경우의 종양 성장 억제%를 보여준다. 부가적으로, 상기 투여량에 있어서의 PM00104와 겜시타빈의 복합제의 가산 정도 및 증강 효과도 제공한다.
| 일 | % 억제 | 예상 반응 | 실제 반응 | 증강 효과 | 반응 정도 | ||
| G2 | G3 | G5 | |||||
| 8 | -3.0 | -1.3 | -0.8 | -4.3 | 3.5 | 없음 | - |
| 11 | 1.5 | 52.6 | 64.5 | 54.1 | 10.4 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 14 | 14.4 | 32.5 | 21.7 | 46.9 | -25.2 | 없음 | - |
| 18 | 9.2 | 48.0 | 45.7 | 57.2 | -11.5 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 21 | 18.8 | 30.7 | 43.2 | 49.5 | -6.3 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 25 | 23.3 | 41.3 | 56.8 | 64.6 | -7.8 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 28 | 22.7 | 43.2 | 50.6 | 65.9 | -15.3 | 있음 | 가산값보다 작음 |
표 89는 PM00104 및 겜시타빈을 단독 약제로서 투여하였을 경우 및 0.9 mg/kg/일의 투여량의 PM00104와 90 mg/kg/일의 투여량의 겜시타빈과의 복합제로서 투여하였을 경우의 종양 성장 억제%를 보여준다. 부가적으로, 상기 투여량에 있어서의 PM00104와 겜시타빈의 복합제의 가산 정도 및 증강 효과도 제공한다.
| 일 | % 억제 | 예상 반응 | 실제 반응 | 증강 효과 | 반응 정도 | ||
| G2 | G4 | G6 | |||||
| 8 | -3.0 | -8.6 | -0.1 | -11.6 | 11.5 | 없음 | - |
| 11 | 1.5 | 16.8 | 54.1 | 18.3 | 35.8 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 14 | 14.4 | 9.8 | 44.5 | 24.2 | 20.3 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 18 | 9.2 | 34.7 | 55.0 | 43.9 | 11.1 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 21 | 18.8 | 26.6 | 48.2 | 45.4 | 2.8 | 있음 | 가산값 |
| 25 | 23.3 | 36.8 | 57.4 | 60.1 | -2.7 | 있음 | 가산값 |
| 28 | 22.7 | 23.1 | 44.8 | 45.8 | -1.0 | 있음 | 가산값 |
이 분석에 따르면 PM00104와 겜시타빈과의 복합제는 항종양 활성을 증강시키는 것으로 밝혀졌다. 저투여량의 겜시타빈을 함유하는 복합제의 증강효과는 연구 말기 가산값 정도인 것으로 등급이 매겨졌다.
실시예 21. 겜시타빈과의 병용시 인간의 폐암 이종이식편에 미치는 PM00104의 영향을 측정하기 위한 생체내 연구.
모든 실험에 암컷 무흉선 누드 마우스(Harlan Sprague Dawley, Madison, WI)를 이용하였다. 마우스들을 물과 음식물을 마음껏 먹을 수 있도록 하면서 통기시설이 된 랙 케이지에 가두었다. 마우스들을 종양 세포 현탁액으로 종양을 이식하기 적어도 5일 전에 순응시켰다. 비히클 대조군은 13마리의 마우스를 포함하였으며 처리군은 각각 9 마우스/군으로 이루어졌다.
이 연구에 사용된 종양 모델은 ATCC (Manassas, VA)로부터 수득한 인간의 폐암 세포주인 CaLu-6 세포주였다. 10% FBS 및 2 mM L-글루타민이 보강된 이글 최소 필수 배지 (MEM)에서, CaLu-6 세포를 배양하였다. 13G 투관침이 구비된 1 ml 시린지를 이용하여 마우스에게 50% 마트리겔(Matrigel)/50% MEM 배지 (항생제나 혈청 없음)의 0.2 mL 현탁액 중, 5x106 세포/마우스의 비율로 CaLu-6 세포를 SC 이식하였다. 이식을 위해 준비된 세포 분주액에 대하여 세균 배양을 실시하였다. 모든 배양물은 이식 후 24시간 및 48시간 후 세균 감염되지 않았다.
종양 측정은 실시예 4에 설명된 바와 같이 행하였다. 종양이 99 ± 17 mm3 (평균 ± SD)의 크기 범위 이내에서 적절한 부피에 도달하였을 때, LabCat
In Life module V 8.0 SP1 종양 추적 및 측정 소프트웨어를 이용함으로써 종양의 무게에 기반하여 처리군과 대조군으로 마우스들을 무작위적으로 나누었다. DPI 9에 처리를 개시하였다.
PM00104는 동결건조된 PM00104 분말의 바이알 형태로 제공하여 주사용수와 재조성시켜 사용하였다. 겜시타빈은 겜시타빈 HCl을 함유하는 고상의 백색 분말 형태로서 제공되었으며 이를 0.9% 염수에 재조성시켰다.
연구 그룹 및 처리 방법을 표 90에 요약하였다.
| 군 | 투여량 | 경로 | 스케쥴 | 시험 물질 |
| G1 (대조군) |
10 ml/kg/일 10 ml/kg/일 |
IV IP |
A A |
0.18% 위약 0.9% 염수 |
| G2 | 0.9 mg/kg/일 | IV | A | PM00104 |
| G3 | 180 mg/kg/일 | IP | A | 겜시타빈 |
| G4 | 90 mg/kg/일 | IP | A | 겜시타빈 |
| G5 | 0.9 mg/kg/일 180 mg/kg/일 |
IV IP |
A A |
PM00104 겜시타빈 |
| G6 | 0.9 mg/kg/일 90 mg/kg/일 |
IV IP |
A A |
PM00104 겜시타빈 |
A: DPI 9, 16, 및 23; 위약: 500 mg 수크로스 + 34 mg 인산칼륨 + 인산 q.s.pH 3.8-4.4
연구가 종결될 때까지 처리 개시일로부터 일주일에 2~3회씩 종양 크기 측정치를 기록하였다. 여러가지 측정 농도에서의 겜시타빈 평균 종양 중량 각각에 대한 복합제 (PM00104와 겜시타빈) 중의 2종의 약제 간의 평균 종양 중량을 비교함으로써 종양 성장 억제율을 평가하였다.
평균, 평균의 표준 편차 및 표준 오차를 모든 평가시마다 모든 동물군에 대한 종양 부피에 대해 측정하였다. 연구 종기를 포함하여 각각의 측정일에서 종양 부피에 대하여 Student's t 테스트를 실시하여, 복합 치료군과 단일 단독요법 치료군 사이에 통계적으로 유의적인 차이가 있는지를 분석하였다.
복합요법의 증강효과 및 가산 정도의 평가를 위한 기준과 정의는 실시에 4에 설명된 것과 동일하다.
표 91은 각각의 처리시 얻어진 %T/C 값을 나타낸 것이고, 도 107-108은 대조군(비히클), PM00104, 겜시타빈, 및 대응하는 복합제로 처리된 마우스에 있어서, CaLu-6 종양의 종양 부피 평가 (평균 ±SEM) 결과를 도시한 것이다.
| % T/C on day | |||||||||
| 군 | 9 | 12 | 15 | 19 | 22 | 26 | 29 | 34 | 40 |
| G1 | - | - | - | - | - | - | - | - | |
| G2 | 102.6 | 77.9 | 78.8 | 90.6 | 87.8 | 87.6 | 73.5 | 75.8 | 88.3 |
| G3 | 99.6 | 39.0 | 61.0 | 62.5 | 48.7 | 53.0 | 46.8 | 52.8 | 60.4 |
| G4 | 100.6 | 37.8 | 78.8 | 64.8 | 72.0 | 67.1 | 61.3 | 72.8 | 76.1 |
| G5 | 100.9 | 30.7 | 30.4 | 39.0 | 32.8 | 29.8 | 25.4 | 25.8 | 31.2 |
| G6 | 98.5 | 31.8 | 55.0 | 31.3 | 33.4 | 28.5 | 20.7 | 22.6 | 23.3 |
표 92는 PM00104 및 겜시타빈을 단독 약제로서 투여하였을 경우 및 0.9 mg/kg/일의 투여량의 PM00104와 180 mg/kg/일의 투여량의 겜시타빈과의 복합제로서 투여하였을 경우의 종양 성장 억제%를 보여준다. 부가적으로, 상기 투여량에 있어서의 PM00104와 겜시타빈의 복합제의 가산 정도 및 증강 효과도 제공한다.
| 일 | % 억제 | 예상 반응 | 실제 반응 | 증강 효과 | 반응 정도 | ||
| G2 | G3 | G5 | |||||
| 9 | -2.6 | 0.4 | -0.9 | -2.2 | 1.3 | 없음 | - |
| 12 | 22.1 | 61.0 | 69.3 | 83.1 | -13.8 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 15 | 21.2 | 39.0 | 69.6 | 60.2 | 9.4 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 19 | 9.4 | 37.5 | 61.0 | 46.9 | 14.1 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 22 | 12.2 | 51.3 | 67.2 | 63.5 | 3.7 | 있음 | 가산값 |
| 26 | 12.4 | 47.0 | 70.2 | 59.4 | 10.8 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 29 | 26.5 | 53.2 | 74.6 | 79.7 | -5.1 | 있음 | 가산값 |
| 34 | 24.2 | 47.2 | 74.2 | 71.4 | 2.8 | 있음 | 가산값 |
| 40 | 11.7 | 39.6 | 68.8 | 51.3 | 17.5 | 있음 | 가산값보다 큼 |
표 93은 PM00104 및 겜시타빈을 단독 약제로서 투여하였을 경우 및 0.9 mg/kg/일의 투여량의 PM00104와 90 mg/kg/일의 투여량의 겜시타빈과의 복합제로서 투여하였을 경우의 종양 성장 억제%를 보여준다. 부가적으로, 상기 투여량에 있어서의 PM00104와 겜시타빈의 복합제의 가산 정도 및 증강 효과도 제공한다.
| 일 | % 억제 | 예상 반응 | 실제 반응 | 증강 효과 | 반응 정도 | ||
| G2 | G4 | G6 | |||||
| 9 | -2.6 | -0.6 | 1.5 | -3.2 | 4.7 | 없음 | - |
| 12 | 22.1 | 62.2 | 68.2 | 84.3 | -16.1 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 15 | 21.2 | 21.2 | 45.0 | 42.4 | 2.6 | 있음 | 가산값 |
| 19 | 9.4 | 35.2 | 68.7 | 44.6 | 24.1 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 22 | 12.2 | 28.0 | 66.6 | 40.2 | 26.4 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 26 | 12.4 | 32.9 | 71.5 | 45.3 | 26.2 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 29 | 26.5 | 38.7 | 79.3 | 65.2 | 14.1 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 34 | 24.2 | 27.2 | 77.4 | 51.4 | 26.0 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 40 | 11.7 | 23.9 | 76.7 | 35.6 | 41.1 | 있음 | 가산값보다 큼 |
이 분석에 따르면 PM00104와 겜시타빈과의 복합제는 항종양 활성을 증강시킨 것으로 밝혀졌다. 겜시타빈은 두 가지 투여량 모두에서 분석 말기에 가산값보다 큰 것으로 나타났다.
실시예 22. 페메트렉세드와의 병용시 인간의 폐암 이종이식편에 미치는 PM00104의 효고를 측정하기 위한 생체내 연구.
모든 실험에 암컷 무흉선 누드 마우스(Harlan Sprague Dawley, Madison, WI)를 이용하였다. 마우스들을 물과 음식물을 마음껏 먹을 수 있도록 하면서 통기시설이 된 랙 케이지에 가두었다. 마우스들을 종양 세포 현탁액으로 종양을 이식하기 적어도 5일 전에 순응시켰다. 비히클 대조군은 15마리의 마우스를 포함하였으며 처리군은 각각 10 마우스/군으로 이루어졌다.
이 연구에 사용된 종양 모델은 ATCC (Manassas, VA)로부터 수득한 인간의 폐암 세포주인 CaLu-6 세포주였다. 이 세포주를 실시예 21에 설명된 바와 같이 배양하여 동물에게 이식하였다.
종양 측정은 실시예 4에 설명된 바와 같이 행하였다. 종양이 86 ± 16 mm3 (평균 ± SD)의 크기 범위 이내에서 적절한 부피에 도달하였을 때, LabCat
In Life module V 8.0 SP1 종양 추적 및 측정 소프트웨어를 이용함으로써 종양의 무게에 기반하여 처리군과 대조군으로 마우스들을 무작위적으로 나누었다. DPI 9에 처리를 개시하였다.
PM00104는 동결건조된 PM00104 분말의 바이알 형태로 제공하여 주사용수와 재조성시켜 사용하였다. 페메트렉세드는 페메트렉세드 이나트륨을 함유하는 고상 분말 형태로서 제공되었으며 이를 0.9% 염수에 재조성시켰다.
연구 그룹 및 처리 방법을 표 94에 요약하였다.
| 군 | 투여량 | 경로 | 스케쥴 | 시험 물질 |
| G1 (대조군) |
10 ml/kg/일 10 ml/kg/일 |
IV IP |
A B |
0.18% 위약 0.9% 염수 |
| G2 | 0.9 mg/kg/일 | IV | A | PM00104 |
| G3 | 125 mg/kg/일 | IP | B | 페메트렉세드 |
| G4 | 100 mg/kg/일 | IP | B | 페메트렉세드 |
| G5 | 0.9 mg/kg/일 125 mg/kg/일 |
IV IP |
A B |
PM00104 페메트렉세드 |
| G6 | 0.9 mg/kg/일 100 mg/kg/일 |
IV IP |
A B |
PM00104 페메트렉세드 |
A: DPI 9, 16, 및 23; B: DPI 9-13, 16-20, 및 23-27
위약: 500 mg 수크로스 + 34 mg 인산칼륨 + 인산 q.s. pH 3.8-4.4
연구가 종결될 때까지 처리 개시일로부터 일주일에 2~3회씩 종양 크기 측정치를 기록하였다. 여러가지 측정 농도에서의 페메트렉세드 평균 종양 중량 각각에 대한 복합제 (PM00104와 페메트렉세드) 중의 2종의 약제 간의 평균 종양 중량을 비교함으로써 종양 성장 억제율을 평가하였다.
평균, 평균의 표준 편차 및 표준 오차를 모든 평가시마다 모든 동물군에 대한 종양 부피에 대해 측정하였다. 연구 종기를 포함하여 각각의 측정일에서 종양 부피에 대하여 Student's t 테스트를 실시하여, 복합 치료군과 단일 단독요법 치료군 사이에 통계적으로 유의적인 차이가 있는지를 분석하였다.
복합요법의 증강효과 및 가산 정도의 평가를 위한 기준과 정의는 실시에 4에 설명된 것과 동일하다.
표 95는 각각의 처리시 얻어진 %T/C 값을 나타낸 것이고, 도 109-110은 대조군, PM00104, 페메트렉세드 및 대응하는 복합제로 처리된 마우스에 있어서, CaLu-6 종양의 종양 부피 평가 (평균 ±SEM) 결과를 도시한 것이다.
| % T/C on day | |||||||||
| 군 | 9 | 13 | 16 | 20 | 23 | 27 | 30 | 34 | 42 |
| G1 | - | - | - | - | - | - | - | - | |
| G2 | 104.1 | 106.0 | 111.4 | 115.4 | 116.8 | 93.9 | 80.3 | 81.5 | 77.2 |
| G3 | 99.6 | 116.6 | 86.6 | 104.8 | 98.7 | 87.9 | 90.0 | 89.1 | 94.2 |
| G4 | 103.4 | 126.5 | 103.5 | 120.6 | 111.5 | 101.8 | 105.8 | 102.2 | 100.5 |
| G5 | 99.7 | 103.1 | 89.0 | 74.9 | 59.2 | 62.0 | 49.3 | 47.2 | 54.2 |
| G6 | 102.5 | 82.3 | 84.1 | 81.2 | 57.3 | 62.0 | 54.6 | 47.5 | 51.0 |
표 96은 PM00104 및 페메트렉세드를 단독 약제로서 투여하였을 경우 및 0.9 mg/kg/일의 투여량의 PM00104와 125 mg/kg/일의 투여량의 페메트렉세드와의 복합제로서 투여하였을 경우의 종양 성장 억제%를 보여준다. 부가적으로, 상기 투여량에 있어서의 PM00104와 페메트렉세드와의 복합제의 가산 정도 및 증강 효과도 제공한다.
| 일 | % 억제 | 예상 반응 | 실제 반응 | 증강 효과 | 반응 정도 | ||
| G2 | G3 | G5 | |||||
| 9 | -4.1 | 0.4 | 0.3 | -3.7 | 4.0 | 없음 | - |
| 13 | -6.0 | -16.6 | -3.1 | -22.6 | 19.5 | 없음 | - |
| 16 | -11.4 | 13.4 | 11.0 | 2.0 | 9.0 | 없음 | - |
| 20 | -15.4 | -4.8 | 25.1 | -20.2 | 45.3 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 23 | -16.8 | 1.3 | 40.8 | -15.5 | 56.3 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 27 | 6.1 | 12.1 | 38.0 | 18.2 | 19.8 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 30 | 19.7 | 10.0 | 50.7 | 29.7 | 21.0 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 34 | 18.5 | 10.9 | 52.8 | 29.4 | 23.4 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 42 | 22.8 | 5.8 | 45.8 | 28.6 | 17.2 | 있음 | 가산값보다 큼 |
표 97은 PM00104 및 페메트렉세드를 단독 약제로서 투여하였을 경우 및 0.9 mg/kg/일의 투여량의 PM00104와 100 mg/kg/일의 투여량의 페메트렉세드와의 복합제로서 투여하였을 경우의 종양 성장 억제%를 보여준다. 부가적으로, 상기 투여량에 있어서의 PM00104와 페메트렉세드와의 복합제의 가산 정도 및 증강 효과도 제공한다.
| 일 | % 억제 | 예상 반응 | 실제 반응 | 증강 효과 | 반응 정도 | ||
| G2 | G4 | G6 | |||||
| 9 | -4.1 | -3.4 | -2.5 | -7.5 | 5.0 | 없음 | - |
| 13 | -6.0 | -26.5 | 17.7 | -32.5 | 50.2 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 16 | -11.4 | -3.5 | 15.9 | -14.9 | 30.8 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 20 | -15.4 | -20.6 | 18.8 | -36.0 | 54.8 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 23 | -16.8 | -11.5 | 42.7 | -28.3 | 71.0 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 27 | 6.1 | -1.8 | 38.0 | 4.3 | 33.7 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 30 | 19.7 | -5.8 | 45.4 | 13.9 | 31.5 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 34 | 18.5 | -2.2 | 52.5 | 16.3 | 36.2 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 42 | 22.8 | -0.5 | 49.0 | 22.3 | 26.7 | 있음 | 가산값보다 큼 |
이 분석에 따라 PM00104와 페메트렉세드와의 복합제는 항종양 활성을 증강시키는 것으로 밝혀졌다. 두 가지 투여량 모두에서 페메트렉세드의 증강효과는 분석 말기에 가산값보다 큰 것으로 나타났다.
실시예 23. 페메트렉세드와 병용시 인간의 폐암 이종이식편에 미치는 PM00104의 효과를 평가하기 위한 생체내 연구.
모든 실험에 암컷 무흉선 누드 마우스(Harlan Sprague Dawley, Madison, WI)를 이용하였다. 마우스들을 물과 음식물을 마음껏 먹을 수 있도록 하면서 통기시설이 된 랙 케이지에 가두었다. 마우스들을 종양 세포 현탁액으로 종양을 이식하기 적어도 5일 전에 순응시켰다. 비히클 대조군은 14마리의 마우스를 포함하였으며 처리군은 각각 9 마우스/군으로 이루어졌다.
이 연구에 사용된 종양 모델은 ATCC (Manassas, VA)로부터 수득한 인간의 폐암 세포주인 NCI-H460 세포주였다. 이 세포주를 실시예 19에 설명된 방법에 따라 배양하여 동물에게 이식하였다. 시험관내 패시지 16로부터의 세포들을 연구 마우스 내로 SC 이식하였다.
종양 측정은 실시예 4에 설명된 바와 같이 행하였다. 종양이 118 ± 32 mm3 (평균 ± SD)의 크기 범위 이내에서 적절한 부피에 도달하였을 때, LabCat
In Life module V 8.0 SP1 종양 추적 및 측정 소프트웨어를 이용함으로써 종양의 무게에 기반하여 처리군과 대조군으로 마우스들을 무작위적으로 나누었다. DPI 8에 처리를 개시하였다.
PM00104는 동결건조된 PM00104 분말의 바이알 형태로 제공하여 주사용수와 재조성시켜 사용하였다. 페메트렉세드는 페메트렉세드 이나트륨을 함유하는 고상의 분말 형태로서 제공되었으며 이를 0.9% 염수에 재조성시켰다.
연구 그룹과 처리 방법을 표 98에 정리하였다.
| 군 | 투여량 | 경로 | 스케쥴 | 시험 물질 |
| G1 (대조군) |
10 ml/kg/일 10 ml/kg/일 |
IV IP |
A B |
0.18% 위약 0.9% 염수 |
| G2 | 0.9 mg/kg/일 | IV | A | PM00104 |
| G3 | 125 mg/kg/일 | IP | B | 페메트렉세드 |
| G4 | 100 mg/kg/일 | IP | B | 페메트렉세드 |
| G5 | 0.9 mg/kg/일 125 mg/kg/일 |
IV IP |
A B |
PM00104 페메트렉세드 |
| G6 | 0.9 mg/kg/일 100 mg/kg/일 |
IV IP |
A B |
PM00104 페메트렉세드 |
A: DPI 8, 15, 및 22; B: DPI 8-12, 15-19, 및 22-26
위약: 500 mg 수크로스 + 34 mg 인산칼륨 + 인산 q.s. pH 3.8-4.4
연구가 종결될 때까지 처리 개시일로부터 일주일에 2~3회씩 종양 크기 측정치를 기록하였다. 여러가지 측정 농도에서의 페메트렉세드 평균 종양 중량 각각에 대한 복합제 (PM00104와 페메트렉세드) 중의 2종의 약제 간의 평균 종양 중량을 비교함으로써 종양 성장 억제율을 평가하였다.
평균, 평균의 표준 편차 및 표준 오차를 모든 평가시마다 모든 동물군에 대한 종양 부피에 대해 측정하였다. 연구 종기를 포함하여 각각의 측정일에서 종양 부피에 대하여 Student's t 테스트를 실시하여, 복합 치료군과 단일 단독요법 치료군 사이에 통계적으로 유의적인 차이가 있는지를 분석하였다.
복합요법의 증강효과 및 가산 정도의 평가를 위한 기준과 정의는 실시에 4에 설명된 것과 동일하다.
표 99는 각각의 처리시 얻어진 %T/C 값을 나타낸 것이고, 도 111-112는 대조군, PM00104, 페메트렉세드 및 대응하는 복합제로 처리된 마우스에 있어서, NCI-H460 종양의 종양 부피 평가 (평균 ±SEM) 결과를 도시한 것이다.
| % T/C on day | ||||||||
| 군 | 8 | 10 | 13 | 16 | 20 | 23 | 28 | 31 |
| G1 | - | - | - | - | - | - | - | - |
| G2 | 101.5 | 86.5 | 48.5 | 49.0 | 47.2 | 63.0 | 61.9 | 81.7 |
| G3 | 102.6 | 119.0 | 67.5 | 71.0 | 70.4 | 85.4 | 72.9 | 82.6 |
| G4 | 103.0 | 107.3 | 75.7 | 72.4 | 72.9 | 86.3 | 76.8 | 96.9 |
| G5 | 99.5 | 92.7 | 45.4 | 48.7 | 40.5 | 46.4 | 39.2 | 51.2 |
| G6 | 97.9 | 78.3 | 32.9 | 44.7 | 31.6 | 43.1 | 42.8 | 56.6 |
표 100은 PM00104 및 페메트렉세드를 단독 약제로서 투여하였을 경우 및 0.9 mg/kg/일의 투여량의 PM00104와 125 mg/kg/일의 투여량의 페메트렉세드와의 복합제로서 투여하였을 경우의 종양 성장 억제%를 보여준다. 부가적으로, 상기 투여량에 있어서의 PM00104와 페메트렉세드와의 복합제의 가산 정도 및 증강 효과도 제공한다.
| 일 | % 억제 | 예상 반응 | 실제 반응 | 증강 효과 | 반응 정도 | ||
| G2 | G3 | G5 | |||||
| 8 | -1.5 | -2.6 | 0.5 | -4.1 | 4.6 | 없음 | - |
| 10 | 13.5 | -19.0 | 7.3 | -5.5 | 12.8 | 없음 | - |
| 13 | 51.5 | 32.5 | 54.6 | 84.0 | -29.4 | 없음 | - |
| 16 | 51.0 | 29.0 | 51.3 | 80.0 | -28.7 | 없음 | - |
| 20 | 52.8 | 29.6 | 59.5 | 82.4 | -22.9 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 23 | 37.0 | 14.6 | 53.6 | 51.6 | 2.0 | 있음 | 가산값 |
| 28 | 38.1 | 27.1 | 60.8 | 65.2 | -4.4 | 있음 | 가산값 |
| 31 | 18.3 | 17.4 | 48.8 | 35.7 | 13.1 | 있음 | 가산값보다 큼 |
표 101은 PM00104 및 페메트렉세드를 단독 약제로서 투여하였을 경우 및 0.9 mg/kg/일의 투여량의 PM00104와 100 mg/kg/일의 투여량의 페메트렉세드와의 복합제로서 투여하였을 경우의 종양 성장 억제%를 보여준다. 부가적으로, 상기 투여량에 있어서의 PM00104와 페메트렉세드와의 복합제의 가산 정도 및 증강 효과도 제공한다.
| 일 | % 억제 | 예상 반응 | 실제 반응 | 증강 효과 | 반응 정도 | ||
| G2 | G4 | G6 | |||||
| 8 | -1.5 | -3.0 | 2.1 | -4.5 | 6.6 | 있음 | 가산값 |
| 10 | 13.5 | -7.3 | 21.7 | 6.2 | 15.5 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 13 | 51.5 | 24.3 | 67.1 | 75.8 | -8.7 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 16 | 51.0 | 27.6 | 55.3 | 78.6 | -23.3 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 20 | 52.8 | 27.1 | 68.4 | 79.9 | -11.5 | 있음 | 가산값보다 작음 |
| 23 | 37.0 | 13.7 | 56.9 | 50.7 | 6.2 | 있음 | 가산값 |
| 28 | 38.1 | 23.2 | 57.2 | 61.3 | -4.1 | 있음 | 가산값 |
| 31 | 18.3 | 3.1 | 43.4 | 21.4 | 22.0 | 있음 | 가산값보다 큼 |
이 분석에 따라 PM00104와 페메트렉세드와의 복합제는 항종양 활성을 증강시키는 것으로 밝혀졌다. 두 가지 투여량 모두에서 페메트렉세드의 증강효과는 분석 말기에 가산값보다 큰 것으로 나타났다.
실시예 24. 페메트렉세드와의 병용시 인간의 중피종 이종이식편에 미치는 PM00104의 효과를 측정하기 위한 생체내 연구.
모든 실험에 암컷 무흉선 누드 마우스(Harlan Sprague Dawley, Madison, WI)를 이용하였다. 마우스들을 물과 음식물을 마음껏 먹을 수 있도록 하면서 통기시설이 된 랙 케이지에 가두었다. 마우스들을 종양 세포 현탁액으로 종양을 이식하기 적어도 5일 전에 순응시켰다. 비히클 대조군은 15마리의 마우스를 포함하였으며 처리군은 각각 10 마우스/군으로 이루어졌다.
이 연구에 사용된 종양 모델은 DTP, DCTD 종양 보관소(repository)로부터 수득한 인간의 중피종 세포주인 H-Meso-1 세포주였다. 10% FBS 및 2mM L-글루타민이 보강된 RPMI-1640 배지에서, H-Meso-1 세포를 배양하였다. 13G 투관침이 구비된 1 ml 시린지를 이용하여 각 마우스에게, 50% 마트리겔(Matrigel)/50% RPMI 배지 (항생제나 혈청 없음)의 0.2 mL 현탁액 중, 5x106 세포/마우스의 비율로 H-Meso-1 세포를 피하(SC) 이식하였다. 이식을 위해 준비된 세포 분주액에 대하여 세균 배양을 실시하였다. 모든 배양물은 이식 후 24시간 및 48시간 후 세균 감염되지 않았다.
종양 측정은 실시예 4에 설명된 바와 같이 행하였다. 종양이 175 ± 100 mm3 (평균 ± SD)의 크기 범위 이내에서 적절한 부피에 도달하였을 때, LabCat
In Life module V 8.0 SP1 종양 추적 및 측정 소프트웨어를 이용함으로써 종양의 무게에 기반하여 처리군과 대조군으로 마우스들을 무작위적으로 나누었다. DPI 6에 처리를 개시하였다.
PM00104는 동결건조된 PM00104 분말의 바이알 형태로 제공하여 주사용수와 재조성시켜 사용하였다. 페메트렉세드는 페메트렉세드 이나트륨을 함유하는 고상 분말 형태로 제공되었으며 이를 0.9% 염수에 재조성하였다.
연구 그룹과 처리 방법을 표 102에 정리하였다.
| 군 | 투여량 | 경로 | 스케쥴 | 시험 물질 |
| G1 (대조군) |
10 ml/kg/일 10 ml/kg/일 |
IV IP |
A B |
0.18% 위약 0.9% 염수 |
| G2 | 0.9 mg/kg/일 | IV | A | PM00104 |
| G3 | 0.45 mg/kg/일 | IV | A | PM00104 |
| G4 | 100 mg/kg/일 | IP | B | 페메트렉세드 |
| G5 | 0.9 mg/kg/일 100 mg/kg/일 |
IV IP |
A B |
PM00104 페메트렉세드 |
| G6 | 0.45 mg/kg/일 100 mg/kg/일 |
IV IP |
A B |
PM00104 페메트렉세드 |
A: DPI 6, 13, 및 20; B: DPI 6-10, 13-17, 및 20-24
위약: 500 mg 수크로스 + 34 mg 인산칼륨 + 인산 q.s. pH 3.8-4.4
연구가 종결될 때까지 처리 개시일로부터 일주일에 2~3회씩 종양 크기 측정치를 기록하였다. 여러가지 측정 농도에서의 페메트렉세드 평균 종양 중량 각각에 대한 복합제 (PM00104와 페메트렉세드) 중의 2종의 약제 간의 평균 종양 중량을 비교함으로써 종양 성장 억제율을 평가하였다.
평균, 평균의 표준 편차 및 표준 오차를 모든 평가시마다 모든 동물군에 대한 종양 부피에 대해 측정하였다. 연구 종기를 포함하여 각각의 측정일에서 종양 부피에 대하여 Student's t 테스트를 실시하여, 복합 치료군과 단일 단독요법 치료군 사이에 통계적으로 유의적인 차이가 있는지를 분석하였다.
복합요법의 증강효과 및 가산 정도의 평가를 위한 기준과 정의는 실시에 4에 설명된 것과 동일하다.
표 103은 각각의 처리시 얻어진 %T/C 값을 나타낸 것이고, 도 113-114는 대조군, PM00104, 페메트렉세드 및 대응하는 복합제로 처리된 마우스에 있어서, NCI-H460 종양의 종양 부피 평가 (평균 ±SEM) 결과를 도시한 것이다.
| % T/C on day | ||||||||||
| 군 | 6 | 7 | 9 | 12 | 14 | 16 | 19 | 22 | 26 | 29 |
| G1 | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - |
| G2 | 98.5 | 80.3 | 69.7 | 63.3 | 62.9 | 62.1 | 55.1 | 51.6 | 56.0 | 64.9 |
| G3 | 100.4 | 94.8 | 79.5 | 84.0 | 91.3 | 85.6 | 84.0 | 88.4 | 95.1 | 101.9 |
| G4 | 102.1 | 100.2 | 109.0 | 105.7 | 124.2 | 128.6 | 110.4 | 100.8 | 122.9 | 122.4 |
| G5 | 99.0 | 91.8 | 51.9 | 45.4 | 51.1 | 49.0 | 38.5 | 38.3 | 41.0 | 52.4 |
| G6 | 101.0 | 79.4 | 66.3 | 42.7 | 56.5 | 68.8 | 68.8 | 57.9 | 72.4 | 78.2 |
표 104는 PM00104 및 페메트렉세드를 단독 약제로서 투여하였을 경우 및 0.9 mg/kg/일의 투여량의 PM00104와 100 mg/kg/일의 투여량의 페메트렉세드와의 복합제로서 투여하였을 경우의 종양 성장 억제%를 보여준다. 부가적으로, 상기 투여량에 있어서의 PM00104와 페메트렉세드와의 복합제의 가산 정도 및 증강 효과도 제공한다.
| 일 | % 억제 | 예상 반응 | 실제 반응 | 증강 효과 | 반응 정도 | ||
| G2 | G4 | G5 | |||||
| 6 | 1.5 | -2.1 | 1.0 | -0.6 | 1.6 | 없음 | - |
| 7 | 19.7 | -0.2 | 8.2 | 19.5 | -11.3 | 없음 | - |
| 9 | 30.3 | -9.0 | 48.1 | 21.3 | 26.8 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 12 | 36.7 | -5.7 | 54.6 | 31.0 | 23.6 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 14 | 37.1 | -24.2 | 48.9 | 12.9 | 36.0 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 16 | 37.9 | -28.6 | 51.0 | 9.3 | 41.7 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 19 | 44.9 | -10.4 | 61.5 | 34.5 | 27.0 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 22 | 48.4 | -0.8 | 61.7 | 47.6 | 14.1 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 26 | 44.0 | -22.9 | 59.0 | 21.1 | 37.9 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 29 | 35.0 | -22.4 | 47.6 | 12.6 | 35.0 | 있음 | 가산값보다 큼 |
표 105는 PM00104 및 페메트렉세드를 단독 약제로서 투여하였을 경우 및 0.45 mg/kg/일의 투여량의 PM00104와 100 mg/kg/일의 투여량의 페메트렉세드와의 복합제로서 투여하였을 경우의 종양 성장 억제%를 보여준다. 부가적으로, 상기 투여량에 있어서의 PM00104와 페메트렉세드와의 복합제의 가산 정도 및 증강 효과도 제공한다.
| 일 | % 억제 | 예상 반응 | 실제 반응 | 증강 효과 | 반응 정도 | ||
| G3 | G4 | G6 | |||||
| 6 | -0.4 | -2.1 | -1.0 | -2.5 | 1.5 | 없음 | - |
| 7 | 5.2 | -0.2 | 20.6 | 5.0 | 15.6 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 9 | 20.5 | -9.0 | 33.7 | 11.5 | 22.2 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 12 | 16.0 | -5.7 | 57.3 | 10.3 | 47.0 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 14 | 8.7 | -24.2 | 43.5 | -15.5 | 59.0 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 16 | 14.4 | -28.6 | 31.2 | -14.2 | 45.4 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 19 | 16.0 | -10.4 | 31.2 | 5.6 | 25.6 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 22 | 11.6 | -0.8 | 42.1 | 10.8 | 31.3 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 26 | 4.9 | -22.9 | 27.6 | -18.0 | 45.6 | 있음 | 가산값보다 큼 |
| 29 | -1.9 | -22.4 | 21.8 | -24.3 | 46.1 | 있음 | 가산값보다 큼 |
이 분석에 따르면 PM00104와 페메트렉세드와의 복합제는 항종양 활성을 증강시키는 것으로 밝혀졌다. PM00104의 두 가지 투여량 모두에서 이 증강 효과는 분석 말기에 가산값보다 큰 것으로 나타났다.
Claims (27)
- 암 치료를 필요로 하는 환자에게, 치료적 유효량의 PM00104, 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염와, 항종양 백금 배위 착화합물, 항대사산물, 유사분열 억제제, 안트라사이클린, 국소이성화효소(topoisomerase) I 및/또는 II 억제제, 항종양 모노클로날 항체, mTOR 억제제, 및 티로신 키나아제 억제제 중에서 선택되는 다른 항암 약물의 치료적 유효량을 투여하는 것을 포함하여 이루어지는, 암의 치료 방법.
- 항종양 백금 배위 착화합물, 항대사산물, 유사분열 억제제, 안트라사이클린, 국소이성화효소 I 및/또는 II 억제제, 항종양 모노클로날 항체, mTOR 억제제, 및 티로신 키나아제 억제제 중에서 선택되는 항암 약물의 치료적 효능을 증강시키는 방법으로서, 상기한 치료적 효능의 증강을 필요로 하는 환자에게 상기 항암 약물의 치료적 유효량과 PM00104, 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염의 치료적 유효량을 투여하는 것을 포함하여 이루어지는 방법.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, PM00104, 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염와, 항종양 백금 배위 착화합물, 항대사산물, 유사분열 억제제, 안트라사이클린, 국소이성화효소 I 및/또는 II 억제제, 항종양 모노클로날 항체, mTOR 억제제, 및 티로신 키나아제 억제제 중에서 선택되는 다른 항종양 약물은 동일한 조성물의 일부를 구성하는 것인 방법.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, PM00104, 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염와, 항종양 백금 배위 착화합물, 항대사산물, 유사분열 억제제, 안트라사이클린, 국소이성화효소 I 및/또는 II 억제제, 항종양 모노클로날 항체, mTOR 억제제, 및 티로신 키나아제 억제제 중에서 선택되는 다른 항종양 약물은 동시(同時) 또는 이시(異時)에 투여될 별개의 조성물들로서 제공되는 것인 방법.
- 제4항에 있어서, PM00104, 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염와, 항종양 백금 배위 착화합물, 항대사산물, 유사분열 억제제, 안트라사이클린, 국소이성화효소 I 및/또는 II 억제제, 항종양 모노클로날 항체, mTOR 억제제, 및 티로신 키나아제 억제제 중에서 선택되는 다른 항종양 약물은 서로 다른 시간에 투여되기 위한 별개 조성물들로서 제공되는 것인 방법.
- 전술한 항 중 어느 하나의 항에 있어서, PM00104와 병용되는 항암 약물은 항종양 백금 배위 착화합물인 것인 방법.
- 제6항에 있어서, PM00104와 병용되는 항암 약물은 시스플라틴, 옥살리플라틴, 카보플라틴, BBR3464, 사트라플라틴, 테트라플라틴, 오미플라틴, 및 이프로플라틴 중에서 선택되는 항종양 백금 배위 착화합물인 것인 방법.
- 제1항 내지 제5항 중 어느 하나의 항에 있어서, PM00104와 병용되는 항암 약물은 항대사산물인 것인 방법.
- 제8항에 있어서, PM00104와 병용되는 항암 약물은 5-플루오로우라실, 겜시타빈, 시타라빈, 카페시타빈, 데시타빈, 플록수리딘, 6-머캅토퓨린, 메토트렉세이트, 플루다라빈, 아미노프테린, 페메트렉세드, 랄티트렉세드, 클라드리빈, 클로파라빈, 플루다라빈, 머캅토퓨린, 펜토스타틴 및 티오구아닌 중에서 선택되는 항대사산물인 것인 방법.
- 제1항 내지 제5항 중 어느 하나의 항에 있어서, PM00104와 병용되는 항암 약물은 유사분열 억제제인 것인 방법.
- 제10항에 있어서, PM00104와 병용되는 항암 약물은 파클리탁셀, 도세탁셀, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 빈데신 및 비노렐빈 중에서 선택되는 유사분열 억제제인 것인 방법.
- 제1항 내지 제5항 중 어느 하나의 항에 있어서, PM00104와 병용되는 항암 약물은 안트라사이클린인 것인 방법.
- 제12항에 있어서, PM00104와 병용되는 항암 약물은 다우노루비신, 독소루비신, 에피루비신, 이다루비신, 미토잔트론, 피잔트론 및 발루비신 중에서 선택되는 안트라사이클린인 것인 방법.
- 제1항 내지 제5항 중 어느 하나의 항에 있어서, PM00104와 병용되는 항암 약물은 국소이성화효소(topoisomerase) I 및/또는 II 억제제인 것인 방법.
- 제14항에 있어서, PM00104와 병용되는 항암 약물은 SN-38, 이리노테칸, 캄토테신, 루비테칸, 에토포시드 및 테니포시드 중에서 선택되는 국소이성화효소 I 및/또는 II 억제제인 것인 방법.
- 제1항 내지 제5항 중 어느 하나의 항에 있어서, PM00104와 병용되는 항암 약물은 항종양 모노클로날 항체인 것인 방법.
- 제16항에 있어서, PM00104와 병용되는 항암 약물은 베바시주맙, 세툭시맙, 파니투무맙, 트라스투주맙, 리툭시맙, 토시투모맙, 알렘투주맙, 및 겜투주맙 중에서 선택되는 항종양 모노클로날 항체인 것인 방법.
- 제1항 내지 제5항 중 어느 하나의 항에 있어서, PM00104와 병용되는 항암 약물은 티로신 키나아제 억제제인 것인 방법.
- 제18항에 있어서, PM00104와 병용되는 항암 약물은 얼로티닙, 소라페닙, 악시티닙, 보수티닙, 세디라닙, 다사티닙, 게피티닙, 이마티닙, 카네르티닙, 라파티닙, 레스타우르티닙, 닐로티닙, 세막사닙, 수니티닙 및 반데타닙 중에서 선택되는 티로신 키나아제 억제제인 것인 방법.
- 제1항 내지 제5항 중 어느 하나의 항에 있어서, PM00104와 병용되는 항암 약물은 mTOR 억제제인 것인 방법.
- 제20항에 있어서, PM00104와 병용되는 항암 약물은 템시롤리무스, 시롤리무스, 에베롤리무스 및 데포롤리무스 중에서 선택된 mTOR 억제제인 것인 방법.
- 전술한 항 중 어느 하나의 항에 있어서, 치료하고자 하는 암은 폐암, 육종, 악성 흑색종, 흉막 중피종, 방광암종, 전립선압, 췌장암종, 위암종, 난소암, 간암, 유방암, 대장암, 신장암, 식도암, 부신암, 이하선암, 두경부암종, 자궁경부암, 중피종, 백혈병 및 림프종 중에서 선택되는 것인 방법.
- 제1항 내지 제22항 중 어느 하나의 항에 기재된 방법에 사용되는 약제의 제조를 위한 PM00104, 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염의 용도.
- 제1항 내지 제22항 중 어느 하나의 항에 기재된 방법에 사용되는 약제의 제조를 위한 항종양 백금 배위 착화합물, 항대사산물, 유사분열 억제제, 안트라사이클린, 국소이성화효소 I 및/또는 II 억제제, 항종양 모노클로날 항체, mTOR 억제제, 및 티로신 키나아제 억제제 중에서 선택되는 항암 약물의 용도.
- 제1항 내지 제22항 중 어느 하나의 항에 기재된 방법에 사용되기 위한, PM00104, 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염.
- 제1항 내지 제22항 중 어느 하나의 항에 기재된 방법에 사용되기 위한, 항종양 백금 배위 착화합물, 항대사산물, 유사분열 억제제, 안트라사이클린, 국소이성화효소 I 및/또는 II 억제제, 항종양 모노클로날 항체, mTOR 억제제, 및 티로신 키나아제 억제제 중에서 선택되는 항암 약물.
- PM00104, 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염의 투여 제형 및/또는 항종양 백금 배위 착화합물, 항대사산물, 유사분열 억제제, 안트라사이클린, 국소이성화효소 I 및/또는 II 억제제, 항종양 모노클로날 항체, mTOR 억제제, 및 티로신 키나아제 억제제 중에서 선택되는 다른 항암 약물의 투여 제형, 및 제1항 내지 제22항 중 어느 하나의 항에 기재된 방법에 사용되기 위한 상기 두 가지 약물의 복합 사용을 위한 지침서를 포함하는, 암 치료용 키트.
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