KR20090097210A

KR20090097210A - 키네신 방추체 단백질 (ｅｇ－５) 억제제로서의 이미다졸 유도체

Info

Publication number: KR20090097210A
Application number: KR1020097016289A
Authority: KR
Inventors: 러스텀 보이쎄; 에릭 마틴; 웨이보 왕; 홍 양; 폴 에이. 바르산티
Original assignee: 노파르티스 아게
Priority date: 2007-01-05
Filing date: 2008-01-03
Publication date: 2009-09-15
Also published as: CN101622247A; AU2008205169B2; CR10879A; US7820646B2; CO6561828A2; CA2674318A1; PE20081850A1; JP2010515687A; US20110003791A1; MX2009007260A; WO2008086122A3; GEP20125415B; US20080207589A1; AR064760A1; SV2009003325A; AU2008205169A1; NI200900134A; HN2009001262A; SMP200900065B; US20120189623A1

Abstract

본 발명은 하기 화학식 I의 신규의 치환된 이미다졸 화합물 및 그의 제약상 허용가능한 염, 에스테르 또는 전구약물, 제약상 허용가능한 담체를 함께 포함하는 상기 화합물의 조성물 및 상기 화합물의 용도에 관한 것이다.

<화학식 I>

치환된 이미다졸 화합물, 키네신 방추체 단백질 (KSP), KSP 매개 질환

Description

키네신 방추체 단백질 (ＥＧ－５) 억제제로서의 이미다졸 유도체 {IMIDAZOLE DERIVATIVES AS KINESIN SPINDLE PROTEIN INHIBITORS (EG-5)}

관련 출원에 대한 교차-참조

본 출원은 그 전체가 본원에 참조로 포함된, 35 U.S.C.§119(e)에 따라 2007년 1월 5일에 출원된 미국 가출원 일련 번호 60/883,740의 이점을 주장한다.

본 발명은 치환된 이미다졸 화합물 및 그의 제약상 허용가능한 염, 에스테르 또는 전구약물에 관한 것이다. 본 발명은 또한 제약상 허용가능한 담체를 함께 포함하는 상기 화합물의 조성물 및 상기 화합물의 용도에 관한 것이다.

키네신은 아데노신 트리포스페이트를 사용하여 미세소관에 결합하고, 기계적인 힘을 발생시키는 모터 단백질이다. 키네신은 약 350개의 아미노산 잔기를 갖는 모터 도메인에 의해 특징화된다. 다수의 키네신 모터 도메인의 결정 구조가 밝혀졌다.

현재, 약 100개의 키네신-관련 단백질 (KRP)이 확인되었다. 키네신은 세포소기관 및 소포의 수송, 및 소포체의 존속을 포함하는 다양한 세포 생물학적 과정에 관련되어 있다. 일부 KRP는 유사분열 방추체의 미세소관과, 또는 염색체와 직 접 상호작용하고, 세포 주기의 유사분열 단계에서 중추적 역할을 담당하는 것으로 보인다. 상기 유사분열의 KRP는 암 치료제 개발에 있어서 특히 관심의 대상이다.

키네신 방추체 단백질 (KSP) (Eg5, HsEg5, KNSL1 또는 KIF11로도 알려짐)은 유사분열 방추체에 국지화되고, 양극성 유사분열 방추체의 형성 및/또는 기능에 필요한 것으로 공지된 일부 키네신-유사 모터 단백질 중 하나이다.

1995년에, KSP의 C 말단에 대한 항체를 사용한 KSP의 고갈은 미세소관의 단일성상체 배열을 갖는 유사분열 중 HeLa 세포를 정지시키는 것으로 밝혀졌다 (문헌 [Blangy et al., Cell 83:1159 1169, 1995]). KSP의 동족체로 생각되는 bimC 및 cut7 유전자에서의 돌연변이는 아스퍼질러스 니듈란스 (Aspergillus nidulans) (문헌 [Enos, A.P. and N.R. Morris, Cell 60:1019 1027, 1990]) 및 스키조사카로마이시스 폼베 (Schizosaccharomyces pombe) (문헌 [Hagan, I. and M. Yanagida, Nature 347:563 566, 1990])에서 중심체가 분리하지 못하게 한다. 단백질 수준에서 KSP 발현을 감소시키는 ATRA (모두 트랜스-레티노산) 또는 안티센스 올리고뉴클레오티드를 이용하는 KSP의 고갈을 이용한 세포의 치료는 DAN-G 췌장 암종 세포에서의 상당한 성장 억제를 밝혀냈는데, 이는 KSP가 모든 트랜스-레티노산의 항증식성 작용에 관련되어 있을 수 있다는 것을 나타낸다 (문헌 [Kaiser, A., et al., J. Biol. Chem. 274, 18925 18931, 1999]). 흥미롭게도, 제노푸스 라에비스 오로라 (Xenopus laevis Aurora)-관련 단백질 키나제 pEg2는 XlEg5와 결합하고 인산화시키는 것으로 밝혀졌다 (문헌 [Giet, R., et al., J. Biol. Chem. 274:15005 15013, 1999]). 오로라-관련 키나제의 잠재적인 기질은 특히 암 약물 개발을 위한 관심의 대상이다. 예를 들어, 오로라 1 및 2 키나제는 단백질에서 과발현되고, RNA 수준 및 유전자는 결장 암 환자에서 증폭된다.

KSP에 대한 제1 세포 투과성 소분자 억제제인 "모나스트롤 (monastrol)"은 통상의 화학치료제, 예컨대 탁산 및 빈카 알칼로이드가 그렇듯이 미세소관 중합에 영향을 주지 않고 단극성 방추체로 세포를 정지시키는 것으로 나타났다 (문헌 [Mayer, T.U., et al., Science 286:971 974, 1999]). 모나스트롤은 표현형-기반 스크린에서 억제제로 확인되었고, 상기 화합물은 항암 약물 개발을 위한 선도적인 역할을 담당할 수 있다는 사실이 제안되었다. 상기 억제는 아데노신 트리포스페이트에 대해 경쟁적이지 않고, 신속하게 가역적인 것으로 확인되었다 (문헌 [DeBonis, S., et al., Biochemistry, 42:338 349, 2003]; 및 [Kapoor, T.M., et al., J. Cell Biol., 150:975 988, 2000]).

증가된 화학치료제의 중요성의 관점에서, KSP 및 KSP-관련 단백질의 효과적인 생체내 억제제인 KSP 억제제에 대한 필요성이 존재한다.

발명의 요약

본 발명은 하기 화학식 I의 치환된 이미다졸 화합물, 그의 제약상 허용가능한 염, 에스테르 또는 전구약물, 그의 제조, 상기 화합물을 포함하는 제약 조성물 및 KSP 매개 질환 치료를 위한 그의 용도에 관한 것이다.

식 중,

R¹은 알킬 및 치환된 알킬로 구성된 군으로부터 선택되고;

R²는 수소, 알킬 및 치환된 알킬로 구성된 군으로부터 선택되고;

L은

a) -O-;

b) -OCH₂-, -CH₂O-, -C(O)NR⁷-;

c) -CH₂OCH₂-, -CH₂NR⁷CH₂-, -CH₂CH₂O-, -C(O)NR⁷CH₂- 및 -CH₂CH₂NR⁷-로 구성된 군으로부터 선택되고;

R³ 및 R⁴는 할로, 알킬 및 치환된 알킬로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;

R⁵ 및 R⁶은 시아노, 알킬, 치환된 알킬, 알콕시, 치환된 알콕시, 할로 및 히드록시로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;

R⁷은 수소, 알킬 및 -SO₂알킬로 구성된 군으로부터 선택되고;

m은 0, 1, 2 또는 3이고;

n은 0, 1, 2 또는 3이고;

p는 0 또는 1이다.

A. 본 발명의 화합물

본 발명의 화합물은 하기 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염, 에스테르 또는 전구약물을 포함한다.

<화학식 I>

식 중,

R¹은 알킬 및 치환된 알킬로 구성된 군으로부터 선택되고;

L은

a) -O-;

b) -OCH₂-, -CH₂O-, -C(O)NR⁷-;

m은 0, 1, 2 또는 3이고;

n은 0, 1, 2 또는 3이고;

p는 0 또는 1이다.

일 실시양태에서, R¹ 및 R²는 알킬이다. 일 측면에서, R¹ 및 R²는 메틸이다.

일 실시양태에서, R¹은 알킬이고, R²는 수소이다. 일부 측면에서, R¹은 이소프로필, t-부틸 및 프로필로 구성된 군으로부터 선택된다.

일 실시양태에서, p는 0이다.

또다른 실시양태에서, p는 1이다. 일부 측면에서, R³은 알킬, 예컨대 메틸이다. 다른 측면에서, R³은 할로이다.

p가 1일 때, R³은 L의 치환가능한 탄소 원자를 포함하여, 치환에 적합한 고리의 임의의 탄소 원자에 부착될 수 있다. 일 실시양태에서, R³은 예를 들어, 하기 화학식에서와 같이 R⁴가 부착된 탄소 원자 상에 있을 수 있다:

식 중, R¹, R³, R⁴, R⁵, R⁶, n 및 m은 화학식 I에 대해 정의된 것과 같다.

치환기 R³ 및 R⁴는 고리화하여 스피로 고리를 형성하는 기를 포함하지 않는다. 상기 고리는 알킬 및 치환된 알킬의 정의에 포함되지 않는다.

일 실시양태에서, R⁴는 치환된 알킬이다. 일부 측면에서, R⁴는 아미노, 치환된 아미노, 할로, 알콕시, 치환된 알콕시 및 히드록시로 구성된 군으로부터 선택된 1 내지 5개의 치환기로 치환된 알킬이다.

일 실시양태에서, R⁴는 할로, -CH₂NH₂, -(CH₂)₂NH₂, -(CH₂)₃NH₂ 및 -CH₂OH로 구성된 군으로부터 선택된다.

일 실시양태에서, 그리고 R⁴와 독립적으로, R³은 할로, -CH₂NH₂, -(CH₂)₂NH₂, -(CH₂)₃NH₂ 및 -CH₂OH로 구성된 군으로부터 선택된다.

일 실시양태에서, m은 0이다.

일 실시양태에서, R⁶은 할로이다.

일 실시양태에서, R⁶ 및 그가 부착된 페닐 고리는 페닐, 3-브로모페닐, 3-클로로페닐, 4-시아노페닐, 2,5-디플루오로페닐, 3-플루오로페닐, 2-메톡시페닐, 3-메톡시페닐, 4-메톡시페닐, 4-메틸페닐, 2-트리플루오로메틸페닐 및 3-트리플루오로메틸페닐로 구성된 군으로부터 선택된다.

링커 (linker) L은 2가의 링커이고, -C(O)-L-CHR⁴-의 배열에서 본원에서 공개되었다.

일 실시양태에서, L 및 그가 (R³)_p 및 R⁴와 함께 연결된 원자는

로 구성된 군으로부터 선택된 고리를 형성한다.

일 실시양태에서, 하기 화학식 Ia의 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염, 에스테르 또는 전구약물이 제공된다.

식 중 R¹, R³, R⁴, R⁵, R⁶, n, m 및 p는 화학식 I에 대해 정의된 것과 같다.

일 실시양태에서, 하기 화학식 Ib 내지 Id의 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염, 에스테르 또는 전구약물이 제공된다.

식 중, R¹, R³, R⁴, R⁵, R⁶, n, m 및 p는 화학식 I에 대해 정의된 것과 같다.

일 실시양태에서, 하기 화학식 Ie 내지 Ii의 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염, 에스테르 또는 전구약물이 제공된다.

화학식 Ia 내지 Ii의 화합물의 일 실시양태에서, R¹은 알킬이다. 또다른 실시양태에서, R¹은 이소프로필, t-부틸 및 프로필로 구성된 군으로부터 선택된다.

일 실시양태에서, R⁴는 치환된 알킬이다. 일부 측면에서, R⁴는 아미노, 치 환된 아미노, 할로, 알콕시, 치환된 알콕시 및 히드록시로 구성된 군으로부터 선택되는 1 내지 5개의 치환기로 치환된 알킬이다.

일부 측면에서, m은 1이다. 일 실시양태에서, R⁵는 할로이다.

일 실시양태에서, m은 0이다.

일부 측면에서, n은 1 또는 2이다. 일 실시양태에서, R⁶은 할로이다.

일 실시양태에서, 하기 표 1의 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염, 에스테르 또는 전구약물이 제공된다. 일 실시양태에서, 표 1의 화합물들 중 임의의 한 화합물의 입체이성질체가 제공된다. 일 측면에서, 상기 입체이성질체는 거울상이성질체이다. 또다른 측면에서, 상기 입체이성질체는 부분입체이성질체이다.

본 발명의 방법 및 조성물

또한, 화학식 I 또는 Ia 내지 Ii의 화합물 (그의 혼합물 및/또는 염을 포함함) 및 제약상 허용가능한 부형제 또는 담체를 포함하는 조성물을 제공한다.

또다른 측면에서, 본 발명은 적어도 부분적으로라도 KSP에 의해 매개되는 장애로 고통받는 포유류 환자의 치료 방법을 제공한다. 따라서, 본 발명은 치료적 유효량의 화학식 I 또는 Ia 내지 Ii의 화합물 (이들의 혼합물을 포함함)을 단독으로 또는 기타 항암제와 함께 포유류 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 치료를 필요로 하는 포유류 환자의 치료 방법을 제공한다.

B. 정의 및 개괄

상기 논의한 것과 같이, 본 발명은 부분적으로 신규의 치환된 피라졸 및 트리아졸 화합물에 관한 것이다.

본원에서 사용된 용어는 단지 특정 실시양태를 기술하기 위한 것이지 본 발명의 범위를 한정하기 위한 것이 아니라는 점을 이해하여야 한다. 본원 및 청구 범위에서 사용된 것과 같이, 단수 형태인 "a" 및 "the"는 문맥상 분명하게 다르게 지시하지 않는 한 복수의 지시 대상도 포함한다는 것을 주목해야 한다. 본 명세서 및 하기 청구 범위에서, 다음 의미를 갖는 것으로 정의된 다수의 용어들을 참고할 것이다:

본원에서 사용된 것과 같이, "알킬"은 1 내지 6개의 탄소 원자 및 바람직하게는 1 내지 3개의 탄소 원자를 갖는 1가의 포화 지방족 히드로카르빌 기를 가리킨다. 상기 용어의 예로는, 예컨대 메틸, 에틸, n-프로필, iso-프로필, n-부틸, t-부틸, n-펜틸 등의 기가 있다.

"치환된 알킬"은 알콕시, 치환된 알콕시, 아실, 아실아미노, 아실옥시, 아미노, 치환된 아미노, 아미노아실, 아릴, 치환된 아릴, 아릴옥시, 치환된 아릴옥시, 시아노, 할로겐, 히드록시, 니트로, 카르복실, 카르복실 에스테르, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 스피로시클로알킬, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 헤테로시클릭, 치환된 헤테로시클릭, -SO₂-알킬 및 -SO₂-치환된 알킬로 구성된 군으로부터 선택된 1 내지 3개의, 바람직하게는 1 또는 2개의 치환기를 갖는 알킬 기를 가리킨다.

"알킬렌"은 직쇄 또는 분지쇄인 1 내지 5개의, 바람직하게는 1 내지 3개의 탄소 원자를 갖는 2가의 포화 지방족 히드로카르빌 기를 가리킨다. 상기 용어의 예로는, 예컨대 메틸렌 (-CH₂-), 에틸렌 (-CH₂CH₂-), n-프로필렌 (-CH₂CH₂CH₂-), iso-프로필렌 (-CH₂CH(CH₃)-) 또는 (-CH(CH₃)CH₂-) 등의 기가 있다.

"알콕시"는 예로서 메톡시, 에톡시, n-프로폭시, iso-프로폭시, n-부톡시, t-부톡시, sec-부톡시, n-펜톡시 등을 포함하는 "알킬-O-" 기를 가리킨다.

"치환된 알콕시"는 "치환된 알킬-O-" 기를 가리킨다.

"아실"은 H-C(O)-, 알킬-C(O)-, 치환된 알킬-C(O)-, 알케닐-C(O)-, 치환된 알케닐-C(O)-, 알키닐-C(O)-, 치환된 알키닐-C(O)-, 시클로알킬-C(O)-, 치환된 시클로알킬-C(O)-, 아릴-C(O)-, 치환된 아릴-C(O)-, 헤테로아릴-C(O)-, 치환된 헤테로아릴-C(O)-, 헤테로시클릭-C(O)- 및 치환된 헤테로시클릭-C(O)- 기를 가리키고, 여기서, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 헤테로시클릭 및 치환된 헤테로시클릭은 본원에서 정의된 것과 같다.

"아미노아실"은 -C(O)NRR 기를 가리키고, 여기서 각각의 R은 독립적으로 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴, 치환된 아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 헤테로시클릭, 치환된 헤테로시클릭으로 구성된 군으로부터 선택되고, R은 각각 질소 원자와 결합하여 함께 헤테로시클릭 또는 치환된 헤테로시클릭 고리를 형성하고, 여기서, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 헤테로시클릭 및 치환된 헤테로시클릭은 본원에서 정의된 것과 같다.

"아실옥시"는 알킬-C(O)O-, 치환된 알킬-C(O)O-, 알케닐-C(O)O-, 치환된 알케닐-C(O)O-, 알키닐-C(O)O-, 치환된 알키닐-C(O)O-, 아릴-C(O)O-, 치환된 아릴-C(O)O-, 시클로알킬-C(O)O-, 치환된 시클로알킬-C(O)O-, 헤테로아릴-C(O)O-, 치환된 헤테로아릴-C(O)O-, 헤테로시클릭-C(O)O- 및 치환된 헤테로시클릭-C(O)O- 기를 가리키고, 여기서, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 헤테로시클릭 및 치환된 헤테로시클릭은 본원에서 정의된 것과 같다.

"옥시아실" 또는 "카르복실 에스테르"는 -C(O)O-알킬, -C(O)O-치환된 알킬, -C(O)O-알케닐, -C(O)O-치환된 알케닐, -C(O)O-알키닐, -C(O)O-치환된 알키닐, -C(O)O-아릴, -C(O)O-치환된 아릴, -C(O)O-시클로알킬, -C(O)O-치환된 시클로알킬, -C(O)O-헤테로아릴, -C(O)O-치환된 헤테로아릴, -C(O)O-헤테로시클릭 및 -C(O)O-치환된 헤테로시클릭 기를 가리키고, 여기서, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 헤테로시클릭 및 치환된 헤테로시클릭은 본원에서 정의된 것과 같다.

"알케닐"은 2 내지 6개의 탄소 원자, 바람직하게는 2 내지 4개의 탄소 원자를 갖고, 하나 이상, 바람직하게는 1 또는 2개의 알케닐 불포화 위치를 갖는 알케닐 기를 가리킨다. 상기 기의 예로는 비닐, 알릴, 부트-3-엔-1-일 등이 있다.

"치환된 알케닐"는 임의의 히드록시 치환은 비닐 (불포화) 탄소 원자에 부착되지 않는다는 조건 하에, 알콕시, 치환된 알콕시, 아실, 아실아미노, 아실옥시, 아미노, 치환된 아미노, 아미노아실, 아릴, 치환된 아릴, 아릴옥시, 치환된 아릴옥시, 시아노, 할로겐, 히드록시, 니트로, 카르복실, 카르복실 에스테르, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 헤테로시클릭 및 치환된 헤테로시클릭으로 구성된 군으로부터 선택되는 1 내지 3개의 치환기, 바람직하게는 1 또는 2개의 치환기를 갖는 알케닐 기를 가리킨다.

"알키닐"은 2 내지 6개의 탄소 원자, 바람직하게는 2 또는 3개의 탄소 원자를 갖고, 하나 이상, 바람직하게는 1 또는 2개의 알키닐 불포화 위치를 갖는 알키닐 기를 가리킨다.

"치환된 알키닐"은 임의의 히드록시 치환은 아세틸렌 탄소 원자에 부착되지 않는다는 조건 하에, 알콕시, 치환된 알콕시, 아실, 아실아미노, 아실옥시, 아미노, 치환된 아미노, 아미노아실, 아릴, 치환된 아릴, 아릴옥시, 치환된 아릴옥시, 시아노, 할로겐, 히드록시, 니트로, 카르복실, 카르복실 에스테르, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 헤테로시클릭 및 치환된 헤테로시클릭으로 구성된 군으로부터 선택되는 1 내지 3개의 치환기, 바람직하게는 1 또는 2개의 치환기를 갖는 알키닐 기를 가리킨다.

"아미노"는 -NH₂ 기를 가리킨다.

"시아노"는 -CN 기를 가리킨다.

"치환된 아미노"는 R' 및 R"가 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴, 치환된 아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 헤테로시클릭, 치환된 헤테로시클릭, -SO₂-알킬, -SO₂-치환된 알킬로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고, R' 및 R"가 모두 수소가 아닌 경우 R' 및 R"가 그들이 결합된 질소와 함께 결합하여 헤테로시클릭 또는 치환된 헤테로시클릭 기를 형성하는 -NR'R" 기를 가리킨다. R'가 수소이고, R"가 알킬일 때, 치환된 아미노 기는 본원에서 종종 알킬아미노를 가리킨다. R' 및 R"가 알킬일 때, 치환된 아미노 기는 본원에서 종종 디알킬아미노를 가리킨다. 일치환된 아미노를 가리킬 때, R' 또는 R"가 수소이나, 둘 다 수소는 아닌 것을 의미한다. 이치환된 아미노를 가리킬 때, R' 또는 R"가 모두 수소가 아닌 것을 의미한다.

"아실아미노"는 -NRC(O)알킬, -NRC(O)치환된 알킬, -NRC(O)시클로알킬, -NRC(O)치환된 시클로알킬, -NRC(O)알케닐, -NRC(O)치환된 알케닐, -NRC(O)알키닐, -NRC(O)치환된 알키닐, -NRC(O)아릴, -NRC(O)치환된 아릴, -NRC(O)헤테로아릴, -NRC(O)치환된 헤테로아릴, -NRC(O)헤테로시클릭 및 -NRC(O)치환된 헤테로시클릭 기를 가리키고, 여기서, R은 수소 또는 알킬이고, 식 중, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 헤테로시클릭 및 치환된 헤테로시클릭은 본원에서 정의된 것과 같다.

"니트로"는 -NO₂ 기를 가리킨다.

"아릴" 또는 "아르"는 단일 고리 (예를 들어, 페닐) 또는 다중 축합 고리 (예를 들어, 나프틸 또는 안트릴)를 갖는 6 내지 14개의 탄소 원자의 1가의 방향족 카르보시클릭 기를 가리키고, 여기서 축합 고리는 부착 지점이 방향족 탄소 원자에 있는 경우 방향족 (예를 들어, 2-벤즈옥사졸리논, 2H-1,4-벤족사진-3(4H)-온-7-일 등)일 수도, 아닐 수도 있다. 바람직한 아릴은 페닐 및 나프틸을 포함한다.

"치환된 아릴"은 히드록시, 아실, 아실아미노, 아실옥시, 알킬, 치환된 알킬, 알콕시, 치환된 알콕시, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아미노, 치환된 아미노, 아미노아실, 아릴, 치환된 아릴, 아릴옥시, 치환된 아릴옥시, 카르복실, 카르복실 에스테르, 시아노, 티올, 알킬티오, 치환된 알킬티오, 아릴티오, 치환된 아릴티오, 헤테로아릴티오, 치환된 헤테로아릴티오, 시클로알킬티오, 치환된 시클로알킬티오, 헤테로시클릭티오, 치환된 헤테로시클릭티오, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 할로, 니트로, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 헤테로시클릭, 치환된 헤테로시클릭, 헤테로아릴옥시, 치환된 헤테로아릴옥시, 헤테로시클릴옥시, 치환된 헤테로시클릴옥시, 아미노 술포닐 (NH₂-SO₂-) 및 치환된 아미노 술포닐로 구성된 군으로부터 선택되는 1 내지 3개의 치환기, 바람직하게는 1 또는 2개의 치환기로 치환된 아릴 기를 가리킨다.

"아릴옥시"는, 예를 들어 페녹시, 나프톡시 등을 포함하는 아릴-O- 기를 가리킨다.

"치환된 아릴옥시"는 치환된 아릴-O- 기를 가리킨다.

"카르복실"은 -COOH 또는 그의 염을 가리킨다.

"시클로알킬"은, 예를 들어 아다만틸, 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로옥틸 등을 포함하는, 단일 또는 다중 시클릭 고리를 갖는 3 내지 10개의 탄소 원자의 시클릭 알킬 기를 가리킨다.

"스피로시클로알킬"은 하기 예시된 것과 같은 구조식의 스피로 결합 (상기 고리의 유일한 공통 구성원인 단일 원자에 의해 형성된 결합)의 시클로알킬 고리를 갖는 3 내지 10개의 탄소 원자의 시클릭 기를 가리킨다.

"치환된 시클로알킬"은 알킬, 치환된 알킬, 옥소 (=O), 티옥소 (=S), 알콕시, 치환된 알콕시, 아실, 아실아미노, 아실옥시, 아미노, 치환된 아미노, 아미노아실, 아릴, 치환된 아릴, 아릴옥시, 치환된 아릴옥시, 시아노, 할로겐, 히드록시, 니트로, 카르복실, 카르복실 에스테르, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로아릴, 치환된 헤테로아릴, 헤테로시클릭, 치환된 헤테로시클릭, -SO₂-알킬 및 -SO₂-시클로알킬로 구성된 군으로부터 선택되는 1 내지 5개의 치환기를 갖는 시클로알킬 기를 가리킨다.

"할로" 또는 "할로겐"은 플루오로, 클로로, 브로모 및 요오도를 가리키고, 바람직하게는 플루오로 또는 클로로이다.

"히드록시"는 -OH 기를 가리킨다.

"헤테로아릴"은 고리 내에 1 내지 10개의 탄소 원자, 및 산소, 질소 및 황으로 구성된 군으로부터 선택된 1 내지 4개의 헤테로원자의 방향족 기를 가리킨다. 상기 헤테로아릴 기는 단일 고리 (예를 들어, 피리디닐 또는 푸릴) 또는 다중 축합 고리 (예를 들어, 인돌리지닐 또는 벤조티에닐)를 가질 수 있고, 여기서 상기 축합 고리는 방향족이거나 또는 아닐 수 있고/거나 부착 지점이 방향족 헤테로아릴 기의 원자에 있는 경우 헤테로원자를 포함할 수 있다. 일 실시양태에서, 헤테로아릴 기의 질소 및/또는 황 고리 원자(들)는 임의로 산화되어 N-옥시드 (N→O), 술피닐 또는 술포닐 모이어티를 제공한다. 바람직한 헤테로아릴은 피리디닐, 피롤릴, 인돌릴, 티오페닐 및 푸라닐을 포함한다.

"치환된 헤테로아릴"은 치환된 아릴에 대해 정의된 동일한 치환기의 군으로부터 선택되는 1 내지 3개의 치환기로 치환된 헤테로아릴 기를 가리킨다.

"질소-포함 헤테로아릴" 및 "질소-포함 치환된 헤테로아릴"은 하나 이상의 질소 고리 원자 및 임의로 기타 비-질소 헤테로 고리 원자, 예컨대 황, 산소 등을 포함하는 헤테로아릴 기 및 치환된 헤테로아릴 기를 가리킨다.

"헤테로아릴옥시"는 -O-헤테로아릴 기를 가리키고, "치환된 헤테로아릴옥시"는 -O-치환된 헤테로아릴 기를 가리키고, 여기서 헤테로아릴 및 치환된 헤테로아릴은 본원에서 정의된 것과 같다.

"헤테로사이클" 또는 "헤테로시클릭" 또는 "헤테로시클로알킬" 또는 "헤테로시클릴"은 융합된 가교 및 스피로 고리계를 포함하는, 고리 내에 1 내지 10개의 탄소 원자, 및 질소, 황 또는 산소로 구성된 군으로부터 선택되는 1 내지 4개의 헤테로 원자의 단일 고리 또는 다중 축합 고리를 갖는 포화 또는 불포화 (그러나, 방향족은 아님) 기를 가리키고, 여기서, 부착 지점이 헤테로시클릭 고리에 있는 경우 융합된 고리계 중 하나 이상의 고리는 시클로알킬, 아릴 또는 헤테로아릴일 수 있다. 일 실시양태에서, 헤테로시클릭 기의 질소 및/또는 황 원자(들)는 임의로 산화되어 N-옥시드, 술피닐 및 술포닐 모이어티를 제공한다.

"치환된 헤테로시클릭" 또는 "치환된 헤테로시클로알킬" 또는 "치환된 헤테로시클릴"은 치환된 시클로알킬에 대해 정의된 것과 동일한 1 내지 3개의 치환기로 치환된 헤테로시클릴 기를 가리킨다.

헤테로시클릴 및 헤테로아릴의 예로는, 이들로 한정되지는 않지만, 아제티딘, 피롤, 이미다졸, 피라졸, 피리딘, 피라진, 피리미딘, 피리다진, 인돌리진, 이소인돌, 인돌, 디히드로인돌, 인다졸, 퓨린, 퀴놀리진, 이소퀴놀린, 퀴놀린, 프탈라진, 나프틸피리딘, 퀴녹살린, 퀴나졸린, 시놀린, 프테리딘, 카르바졸, 카르볼린, 페난트리딘, 아크리딘, 페난트롤린, 이소티아졸, 페나진, 이속사졸, 페녹사진, 페노티아진, 이미다졸리딘, 이미다졸린, 피페리딘, 피페라진, 인돌린, 프탈이미드, 1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린, 4,5,6,7-테트라히드로벤조[b]티오펜, 티아졸, 티아졸리딘, 티오펜, 벤조[b]티오펜, 모르폴리닐, 티오모르폴리닐 (티아모르폴리닐로도 지칭됨), 1,1-디옥소티오모르폴리닐, 피페리디닐, 피롤리딘, 테트라히드로푸라닐 등을 포함한다.

"질소-포함 헤테로시클릭" 및 "질소-포함 치환된 헤테로시클릭"은 하나 이상의 질소 고리 원자 및 임의로 기타 비-질소 헤테로 고리 원자, 예컨대 황, 산소 등을 포함하는 헤테로시클릭 기 및 치환된 헤테로시클릭 기를 가리킨다.

"티올"은 -SH 기를 가리킨다.

"알킬티오" 또는 "티오알콕시"는 -S-알킬 기를 가리킨다.

"치환된 알킬티오" 또는 "치환된 티오알콕시"는 -S-치환된 알킬 기를 가리킨다.

"아릴티오"는 -S-아릴 기를 가리키고, 여기서 아릴은 상기 정의되어 있다.

"치환된 아릴티오"는 -S-치환된 아릴 기를 가리키고, 여기서 치환된 아릴은 상기 정의되어 있다.

"헤테로아릴티오"는 -S-헤테로아릴 기를 가리키고, 여기서 헤테로아릴은 상기 정의되어 있다.

"치환된 헤테로아릴티오"는 -S-치환된 헤테로아릴 기를 가리키고, 여기서 치환된 헤테로아릴은 상기 정의되어 있다.

"헤테로시클릭티오"는 -S-헤테로시클릭 기를 가리키고, "치환된 헤테로시클릭티오"는 -S-치환된 헤테로시클릭 기를 가리키고, 여기서 헤테로시클릭 및 치환된 헤테로시클릭은 상기 정의되어 있다.

"헤테로시클릴옥시"는 헤테로시클릴-O- 기를 가리키고, "치환된 헤테로시클릴옥시"는 치환된 헤테로시클릴-O- 기를 가리키고, 여기서 헤테로시클릴 및 치환된 헤테로시클릴은 상기 정의되어 있다.

"시클로알킬티오"는 -S-시클로알킬 기를 가리키고, "치환된 시클로알킬티오"는 -S-치환된 시클로알킬 기를 가리키고, 여기서 시클로알킬 및 치환된 시클로알킬은 상기 정의되어 있다.

"생물학적 활성"은 본원에서 사용된 것과 같이 본원에 약술된 하나 이상의 분석에서 시험할 때, 그리고 그의 하나 이상의 실시예에서 정의된 것과 같은 억제 농도를 가리킨다.

본원에서 사용된 것과 같이, 용어 "제약상 허용가능한 염"은 화학식 I 및 Ia 내지 Ii의 화합물의 비독성 산 또는 알칼리 토금속 염을 가리킨다. 상기 염들은 화학식 I 및 Ia 내지 Ii의 화합물의 최종 단리 및 정제 중 반응계에서 제조할 수 있거나 또는 별도로 염기 또는 산 관능기를 적합한 유기산 또는 유기염기 또는 무기산 또는 무기염기와 각각 반응시켜 제조할 수 있다. 대표적인 염은, 이들로 한정되지는 않지만, 아세테이트, 아디페이트, 알기네이트, 시트레이트, 아스파르테이트, 벤조에이트, 벤젠술포네이트, 바이술페이트, 부티레이트, 캄포레이트, 캄포술포네이트, 디글루코네이트, 시클로펜탄프로피오네이트, 도데실술페이트, 에탄술포네이트, 글루코헵타노에이트, 글리세로포스페이트, 헤미-술페이트, 헵타노에이트, 헥사노에이트, 푸마레이트, 히드로클로라이드, 히드로브로마이드, 히드로요오다이드, 2-히드록시에탄술포네이트, 락테이트, 말레에이트, 메탄술포네이트, 니코티네이트, 2-나프탈렌술포네이트, 옥살레이트, 파모에이트, 펙티네이트, 퍼술페이트, 3-페닐프로피오네이트, 피크레이트, 피발레이트, 프로피오네이트, 숙시네이트, 술페이트, 타르트레이트, 티오시아네이트, p-톨루엔술포네이트 및 운데카노에이트를 포함한다. 또한, 염기성의 질소-포함 기는 알킬 할로겐화물, 예컨대 메틸, 에틸, 프로필 및 부틸 클로라이드, 브로마이드 및 요오다이드; 디알킬 술페이트, 예컨대 디메틸, 디에틸, 디부틸 및 디아밀 술페이트, 장쇄 할로겐화물, 예컨대 데실, 라우릴, 미리스틸 및 스테아릴 클로라이드, 브로마이드 및 요오다이드, 아랄킬 할로겐화물, 예컨대 벤질 및 페네틸 브로마이드 및 기타 작용제로 4차화시킬 수 있다. 그 결과, 수용성 또는 지용성 또는 분산성 생성물을 수득한다.

제약상 허용가능한 산 부가염을 형성하는데 사용할 수 있는 산의 예로는 무기산, 예컨대 염산, 황산 및 인산, 및 유기산, 예컨대 옥살산, 말레산, 메탄술폰산, 숙신산 및 시트르산을 포함한다. 염기 부가염은 화학식 I 및 Ia 내지 Ii의 화합물의 최종 단리 및 정제 중 반응계에서 제조하거나, 또는 별도로 카르복실산 모이어티를 적합한 염기, 예컨대 제약상 허용가능한 금속 양이온의 수산화물, 탄산염 또는 중탄산염과, 또는 암모니아 또는 1차, 2차 또는 3차의 유기 아민과 반응시켜 제조할 수 있다. 제약상 허용가능한 염은, 이들로 한정되지는 않지만, 알칼리 및 알칼리 토금속, 예컨대 나트륨, 리튬, 칼륨, 칼슘, 마그네슘, 알루미늄 염 등뿐만 아니라, 이들로 한정되지는 않지만, 암모늄, 테트라메틸암모늄, 테트라에틸암모늄, 메틸아민, 디메틸아민, 트리메틸아민, 트리에틸아민, 에틸아민 등을 포함하는 암모늄, 4차 암모늄 및 아민 양이온에 기초한 양이온을 포함한다. 염기 부가염의 형성에 유용한 기타 대표적인 유기 아민은 디에틸아민, 에틸렌디아민, 에탄올아민, 디에탄올아민, 피페라진 등을 포함한다.

본원에서 사용된 것과 같이, 용어 "제약상 허용가능한 에스테르"는 생체내에서 가수분해하는 에스테르를 가리키고, 인간 신체 내에서 분해하여 모 화합물을 떠나는 에스테르, 그의 염, 또는 제약 활성의 대사 산물을 포함한다. 적합한 에스테르 기는, 예를 들어 제약상 허용가능한 지방족 카르복실산, 특히 알카노익 산, 알케노익 산, 시클로알카노익 산 및 알칸디오익 산으로부터 유도되는 에스테르 기를 포함하고, 여기서 각각의 알킬 또는 알케닐 모이어티는 유리하게는 6개 이하의 탄소 원자를 갖는다. 특정 에스테르의 대표적인 예로는, 이들로 한정되지는 않지만, 포르메이트, 아세테이트, 프로피오네이트, 부티레이트, 아크릴레이트 및 에틸숙시네이트를 포함한다.

용어 "제약상 허용가능한 전구약물"은 본원에서 사용된 것과 같이 정상적인 의학적 판단의 범위 내에서 과도한 독성, 자극, 알레르기성 반응 등 없이 인간 및 저급 동물의 조직과 접촉하는 용도에 적합하고, 합리적인 이익/위험 비율을 갖고, 그의 의도된 용도에 효과적인 본 발명의 화합물의 전구약물뿐만 아니라, 가능한 경우, 본 발명의 화합물의 쯔비터 이온 형태를 가리킨다. 용어 "전구약물"은 생체내에서 빠르게 변환하여, 예를 들어 혈액 내에서 가수분해에 의해 화학식 I 또는 Ia 내지 Ii의 모 화합물 또는 제약 활성의 대사 산물을 수득하는 화합물을 가리킨다. 문헌 [T. Higuchi and V. Stella, Pro-drugs as Novel Delivery Systems, Vol. 14 of the A.C.S. Symposium Series] 및 [Edward B. Roche, ed., Bioreversible Carriers in Drug Design, American Pharmaceutical Association and Pergamon Press, 1987]에 관련 논의가 제공되어 있으며, 두 문헌 모두 본원에 참조로 포함되었다.

본원에서 사용된 것과 같이 "항암제" 또는 "암 치료제"는, 예를 들어 세포 사멸을 유발하는 작용제; 폴리뉴클레오티드 (예를 들어, 리보자임); 폴리펩티드 (예를 들어, 효소); 약물; 생물학적 모방체; 알칼로이드; 알킬화제; 항종양 항생제; 항대사 산물; 호르몬; 백금 화합물; 항암 약물, 독소 및/또는 방사성 핵종과 접합된 모노클로날 항체; 생물학적 반응 변경자 (예를 들어, 인터페론 및 인터류킨 등); 입양 면역요법제; 조혈 성장 인자; 종양 세포 분화를 유발하는 작용제 (예를 들어, 올-트랜스-레티노산 등); 유전자요법 시약; 안티센스 요법 시약 및 뉴클레오티드; 종양 백신; 혈관신생의 억제제 등을 포함하는 작용제를 가리킨다. 기타 다양한 작용제들이 당업자의 영역 내에 있다.

상기 정의된 모든 치환된 기에서, 추가의 치환기를 갖는 치환기를 그 자신으로 지정하여 생성된 중합체 (예를 들어, 그 자체가 치환된 아릴 기로 치환된, 치환된 아릴 기를 치환기로 갖는 치환된 아릴 등)는 본원에 포함되지 않는 것으로 이해된다. 그러한 경우에, 상기 치환기의 최대 개수는 3개이다. 다시 말해서 상기 정의는 각각 한정되는데, 예를 들어 치환된 아릴 기는 -치환된 아릴-(치환된 아릴)-치환된 아릴로 제한된다.

유사하게, 상기 정의는 허용되지 않는 치환 유형 (예를 들어, 5개의 플루오로 기로, 또는 에테닐 또는 아세틸렌 불포화의 알파 위치에 있는 히드록시로 치환된 메틸)은 포함하지 않는 것으로 이해된다. 상기 허용되지 않는 치환 유형은 당업자에게 공지되어 있다.

본 발명의 화합물은 화합물 내에 하나 이상의 비대칭 또는 키랄 중심이 존재하는 덕분에 입체이성질체 특징을 보일 수 있다. 본 발명은 다양한 입체이성질체 및 이들의 혼합물을 계획한다. 화학식 I 및 Ia 내지 Ii의 화합물의 도시는 특정 입체 중심의 입체 화학이 다르게 명시되지 않는 한 그의 입체이성질체를 포함한다. 일부 본 발명의 화합물은 비대칭으로 치환된 탄소 원자를 포함한다. 상기 비대칭으로 치환된 탄소 원자로 인해 본 발명의 화합물은 비대칭으로 치환된 특정 탄소 원자에서의 입체 이성질체의 혼합물 또는 단일 입체이성질체를 포함할 수 있게 된다. 결과적으로, 본 발명의 화합물의 라세미체 혼합물, 부분입체이성질체의 혼합물, 단일 거울상이성질체뿐만 아니라 단일 부분입체이성질체도 본 발명에 포함된다. 용어 "S" 및 "R" 배열은, 본원에서 사용된 것과 같이, 문헌 [IUPAC 1974 "RECOMMENDATIONS FOR SECTION E, FUNDAMENTAL STEREOCHEMISTRY", Pure Appl. Chem. 45:13 30, 1976]에 정의된 것과 같다. 의도한 거울상이성질체는 상업적으로 이용가능한 키랄 출발 물질로부터 당업계에 공지된 방법에 의해 키랄 합성하여 수득하거나, 또는 공지된 기술을 사용하여 거울상이성질체의 혼합물로부터 의도한 거울상이성질체를 분리하여 수득할 수 있다.

본 발명의 화합물은 또한 기하 이성질체 특징을 보일 수 있다. 기하 이성질체는 알케닐 또는 알케닐레닐 모이어티를 갖는 시스 및 트랜스 형태의 본 발명의 화합물을 포함한다. 본 발명은 개별 기하 이성질체 및 입체이성질체 및 이들의 혼합물을 포함한다.

C. 화합물의 제조

본 발명의 화합물은 하기의 일반적 방법 및 과정을 사용하여 쉽게 이용가능한 출발 물질로부터 제조할 수 있다. 달리 언급하지 않는 한, 출발 물질은 상업적으로 이용가능하고, 당업계에 공지되어 있다. 적합한 출발 물질은 WO2006/002236로 공개된 PCT/US2005/022062 및 WO2007/021794로 공개된 PCT/US2006/031129에서와 같이 제조할 수 있고, 둘 모두 전체가 본원에 참조로 포함되어 있다. 전형적인 또는 바람직한 제조 조건 (즉, 반응 온도, 시간, 반응물의 몰비, 용매, 압력)이 주어진 경우, 다르게 언급되지 않는 한, 기타 제조 조건을 또한 사용할 수 있다는 것이 인정될 것이다. 최적의 반응 조건은 사용되는 특정 반응물 또는 용매에 따라 변화할 수 있으나, 상기 조건들은 보통의 최적의 과정에 의해 당업자에 의해 결정될 수 있다.

추가로, 당업자에게 명백한 것과 같이, 일부 관능기가 의도하지 않은 반응을 하지 않도록 하기 위해서 통상의 보호기가 필요할 것이다. 다양한 관능기에 적합한 보호기뿐만 아니라 특정 관능기를 보호하고, 탈보호하기 위한 적합한 조건들이 당업계에 공지되어 있다. 예를 들어, 다수의 보호기가 문헌 [T. W. Greene 및 P. G. M. Wuts, Protecting Groups in Organic Synthesis, Second Edition, Wiley, New York, 1991] 및 그 안에 언급된 참고 문헌에 기술되어 있다.

게다가, 본 발명의 화합물은 하나 이상의 키랄 중심을 포함할 수 있다. 따라서, 의도된 경우, 상기 화합물은 순수한 입체이성질체, 즉, 개별 거울상이성질체 또는 부분입체이성질체로, 또는 입체이성질체-풍부 혼합물로 제조되거나 또는 분리될 수 있다. 상기 모든 입체이성질체 (및 풍부 혼합물)는 달리 언급하지 않는 한 본 발명의 범위 내에 포함된다. 순수한 입체이성질체 (또는 풍부 혼합물)는, 예를 들어 당업계에 공지된 광학 활성 출발 물질 또는 입체선택적 시약을 사용하여 제조할 수 있다. 별법으로, 상기 화합물의 라세미체 혼합물은, 예를 들어 키랄 컬럼 크로마토그래피, 키랄 분할 작용제 등을 사용하여 분리할 수 있다.

중간체는 반응 혼합물로부터 회수한 후 다음 단계에서 바로 사용하거나, 또는 임의로 중간체를 통상의 수단으로 재결정화하거나 정제한 후 다음 단계에서 사용할 수 있다. 모든 R 기는 화학식 I에 대해 정의된 것과 같다.

단계 A: 케토-에스테르 합성

구체적으로, 단계 A에서, 적절하게 보호된 아미노산 1a를 적당량의 비활성 용매, 예컨대 메탄올, 에탄올 또는 아세톤에 용해시켰다. 적합한 보호기 (PG)는 공지된 Boc 보호기를 포함한다. 아미노산 1a는 α,α-이치환된 아미노산 (PG-NH-C(R¹)(R²)-COOH)으로, 전형적으로 상업적으로 이용가능하다는 것을 유념해야 한다. 1a에 화학량론적 양의 1가의 양이온, 예컨대 탄산세슘 (Cs₂CO₃) 및 탄산칼륨 (K₂CO₃)을 첨가하여 카르복실레이트 염 (제시되지 않음)을 형성한다. 반응이 실질적으로 완결되자마자, 전형적으로는 약 15분 내지 약 2 시간 동안, 과량의 용매를 감압 하에 증발시켜 제거한다. 이후, 잔류 세슘염을 적합한 용매, 예컨대 DMF에 재용해시킨 후, 1 내지 4 당량의 적절한 α-할로-케톤 1b (1 당량), 예를 들어 2-브로모아세토페논으로 처리하고, 반응이 실질적으로 완결될 때까지 실온에서 교반하였다. 별법으로, 화합물 1a 및 1b를 KI를 포함하는 아세톤에서 K₂CO₃와 혼합하여 화합물 1c를 수득할 수 있다.

이후, 생성물 1c를 통상의 방법, 예컨대 추출, 여과, 증발 등으로 회수하거나, 또는 별법으로 추가 정제 및/또는 단리 없이 다음 단계에서 바로 사용한다.

단계 B: 이미다졸의 형성

적당량의 비활성 용매, 예컨대 톨루엔 및 크실렌 중 단계 A로부터의 케토-에스테르 1c의 교반 용액에 과량의 암모늄 아세테이트를, 전형적으로는 약 2 내지 약 20 당량, 바람직하게는 약 5 당량을 첨가하였다. 일 실시양태에서, 딘-스탁 (Dean-Stark) 트랩을 첨가하고, 반응이 실질적으로 완결될 때까지 반응 혼합물을 약 120 ℃내지 약 160 ℃로 가열하였다. 또다른 실시양태에서, 딘-스탁 트랩 없이 톨루엔을 사용하였다. 반응이 실질적으로 완결되면, 혼합물을 실온으로 냉각하도록 두었다. 이후, 생성물인 이미다졸 1d를 통상의 방법, 예컨대 추출, 여과, 증발 등으로 회수하였다. 이는 일반적으로 다음 단계에서 바로 사용할 수 있을 정도로 순수하다.

단계 C: 이미다졸의 N-알킬화

이미다졸 1d를 적절한 아릴- 또는 헤테로아릴-치환된 알킬 할로겐화물, 예컨대 벤질 브로마이드와 반응시킨다. 전형적으로, 상기 반응은 이미다졸 1d를 과량의 탄산칼륨 및 DMF와 교반한 후, 동몰량 이상의 아릴- 또는 헤테로아릴-치환된 알킬 할로겐화물을 첨가하여 실시할 수 있다. 반응이 실질적으로 완결되면, N-알킬 이미다졸 1e를 통상의 방법, 예컨대 추출, 여과, 증발, 재결정화 등에 의해 회수한다.

어느 경우에나, 이미다졸 1e는 하기 단계 D에서 사용된다.

단계 D: 유리 아민으로의 탈보호

보호기인 PG를 통상의 기술로 제거하여 아민 1f를 제공한 후, 통상의 방법, 예컨대 추출, 여과, 증발 등으로 임의로 정제한다. 아민 1f를 다음 단계에서 바로 사용한다.

단계 E: 아민 헤테로사이클의 형성

다양한 고리 형성 방법을 이용하여 아민 1f를 화학식 I의 화합물로 변환한다. 상기 방법들 중 일부가 반응식 1 내지 9 및 실시예 1 내지 26에 설명되어 있다. 반응식에서, 아민 1f의 이미다조일 모이어티는 "Ar"로 약자로 표시되어 있다. 또한, 본 발명의 화합물을 제조하기 위해서 상기 방법을 변형하거나 또는 개조할 수 있다. 상기 변형은 당업자에게 명백할 것이다.

반응식 1은, 예를 들어 L이 -O- 또는 -CH₂O-이고, p가 0인 화학식 I의 화합물의 합성을 보여준다. 아민 1f를 루이스 산, 예컨대 Yb(OTf)₃의 존재 하에 에폭시드 1.1 (R⁴는 화학식 I에 대해 앞서 정의된 것과 같음)과 반응시켜 아미노 알코올 1.2를 수득한다. 고리화 조건 하에서 1.2를 포스겐 또는 포스겐 등가물로 처리하여 5-원의 카바메이트 1.3을 수득한다. 상기 변형의 예가 실시예 3에 제시되어 있다. 별법으로, 유기 염기, 예컨대 트리에틸아민의 존재 하에 1.2를 클로로아세틸 클로라이드와 반응시켜 6-원의 락탐 1.4를 수득한다.

반응식 2는, 예를 들어 L이 -CH₂O-이고, p가 1인 화학식 I의 화합물의 합성을 보여준다. 아미노 알코올 1.2를 아실화 조건 하에서 화합물 2.1 (X 및 X'는 이탈기, 예컨대 염소이고, R³은 앞서 정의된 것과 같음)과 반응시켜 아미드 2.2를 수득한다. 2.2를 염기성 조건, 예컨대 CsCO₃ 및 임의로 DMF 중 촉매 TBAI (t-부틸 암모늄 요오다이드)의 존재 하에 노출시켜 락탐 2.3을 수득한다.

반응식 3은, 예를 들어 L이 -OCH₂인 화학식 I의 화합물의 합성을 보여준다. 아민 1.2를 환원성 아민화 조건 하에 알데히드 3.1 (Pg는 산소 보호기이고, R⁴는 화학식 I에 대해 앞서 정의된 것과 같음)과 반응시켜 상응하는 아민을 수득한다. 적합한 환원성 아민화 조건은 염화메틸렌 중 1.2와 3.1을 축합한 후 나트륨 트리아세톡시보로히드라이드와 같은 보로히드라이드로 이민을 환원시키는 것을 포함한다. 생성된 아민으로부터 산소 보호기를 제거하여 아미노 알코올 3.2를 수득한다. 3.2 를 고리화 조건 하에 포스겐 또는 포스겐 등가물과 반응시켜 6-원의 카바메이트 3.3을 수득한다.

반응식 4는, 예를 들어 L이 -C(O)NR⁷인 화학식 I의 화합물의 합성을 보여준다. 아민 1.2를 환원성 아민화 조건 하에 알데히드 4.1 (Pg는 질소 보호기, 예컨대 Boc이고, R⁴는 화학식 I에 대해 앞서 정의된 것과 같음)과 반응시켜 상응하는 아민 4.2를 수득한다. 적합한 환원성 아민화 조건은 염화메틸렌 중 1.2와 4.1을 축합한 후, 나트륨 트리아세톡시보로히드라이드와 같은 보로히드라이드로 이민을 환원시키는 것을 포함한다. 아민 4.2를 트리에틸 아민의 존재 하에 옥살릴 클로라이드 ClC(O)C(O)Cl와 반응시켜 상응하는 아미드를 수득한다. 중간체 아미드의 단리 및 보호기의 제거 후 가열하여 고리화된 디-케토 화합물 4.3을 수득하고, 이후 공지된 방법을 사용하여 관능화시켜 4.4를 형성할 수 있다. 상기 방법은 알킬 할로겐화물로 아민을 알킬화시키거나 또는 알킬 술포닐 할로겐화물과 반응시켜 상응하는 술폰아미드를 수득하는 것을 포함한다.

반응식 5는, 예를 들어 L이 -CH₂CH₂NR⁷-인 화학식 I의 화합물의 합성을 보여준다. 아민 1.2를 환원성 아민화 조건 하에 알데히드 5.1 (Pg는 질소 보호기, 예컨대 Boc이고, R⁴는 화학식 I에 대해 앞서 정의된 것과 같음)과 반응시켜 상응하는 아민을 수득한다. 적합한 환원성 아민화 조건은 염화메틸렌 중 1.2와 5.1을 축합한 후, 나트륨 트리아세톡시보로히드라이드와 같은 보로히드라이드로 이민을 환원시키는 것을 포함한다. 보호기를 제거하여 5.2를 수득한 후, 5.3 (X는 이탈기, 예컨대 염소임)과 반응시킨다. 이후, 생성된 아미드 중간체를 산, 예컨대 트리플루오로아세트산으로 처리하여 마이클 (Michael) 첨가 생성물 5.4를 수득한다. 공지된 방법을 이용하여 5.4를 관능화시켜 5.5를 수득한다. 상기 방법은 아민을 알킬 할로겐화물로 알킬화시키거나 또는 알킬 술포닐 할로겐화물과 반응시켜 상응하는 술폰아미드를 수득하는 것을 포함한다.

반응식 6은, 예를 들어 L이 -CH₂CH₂O-인 화학식 I의 화합물의 합성을 보여준다. 아민 1.2를 환원성 아민화 조건 하에 알데히드 6.1 (R⁴는 화학식 I에 대해 앞서 정의된 것과 같음)과 반응시켜 상응하는 아민 6.2를 수득한다. 적합한 환원성 아민화 조건은 염화메틸렌 중 1.2와 6.1을 축합한 후 나트륨 트리아세톡시보로히드라이드와 같은 보로히드라이드로 이민을 환원시키는 것을 포함한다. 아민 2.2를 아크롤레인 화합물 6.3 (X는 이탈기, 예컨대 염소임)과 반응시켜 상응하는 아미드 6.4를 수득한다. 6.4를 아세트산 수은, 예컨대 트리플루오로아세트산 수은과 반응시킨 후, 고리화 조건 하에 나트륨 보로히드라이드와 반응시켜 6.5를 수득한다.

반응식 7은, 예를 들어 L이 -CH₂OCH₂-인 화학식 I의 화합물의 합성을 보여준다. 아민 1.2를 환원성 아민화 조건 하에 알데히드 7.1 (Pg는 산소 보호기이고, R⁴는 화학식 I에 대해 앞서 정의된 것과 같음)와 반응시켜 상응하는 아민을 수득한다. 적합한 환원성 아민화 조건은 염화메틸렌 중 1.2와 7.1을 축합한 후 나트륨 트리아세톡시보로히드라이드와 같은 보로히드라이드로 이민을 환원시키는 것을 포함한다. 아민 7.2를 클로로아세틸 클로라이드와 반응시켜 상응하는 아미드 7.3을 수득한다. 7.3으로부터 보호기를 제거하고, 생성된 알코올을 고리화 조건, 예컨대 CsCO₃ 및 DMF 중 임의로 촉매 TBAI (t-부틸 암모늄 요오다이드)에 노출시켜 락탐 7.4를 수득한다.

반응식 8은, 예를 들어 L이 -CH₂NR⁷CH₂-인 화학식 I의 화합물의 합성을 보여준다. 아민 1.2를 환원성 아민화 조건 하에 알데히드 8.1 (Pg는 질소 보호기, 예컨대 Boc이고, R⁴는 화학식 I에 대해 앞서 정의된 것과 같음)과 반응시켜 상응하는 아민 8.2를 수득한다. 적합한 환원성 아민화 조건은 염화메틸렌 중 1.2와 8.1을 축합한 후, 나트륨 트리아세톡시보로히드라이드와 같은 보로히드라이드로 이민을 환원시키는 것을 포함한다. 아민 8.2를 클로로아세틸 클로라이드와 반응시켜 상응하는 아미드 8.3을 수득한다. 8.3으로부터 보호기를 제거하고, 생성된 아민을 고리화 조건에 노출시켜, 예컨대 극성 용매 중에서 가열하여 락탐 8.4를 수득하고, 이를 공지된 방법을 이용하여 추가로 관능화시켜 8.5를 형성할 수 있다. 상기 방법은 알킬 할로겐화물로 아민을 알킬화시키거나 또는 알킬 술포닐 할로겐화물과 반응시켜 상응하는 술폰아미드를 수득하는 것을 포함한다.

반응식 9는, 예를 들어 L이 -C(O)NR⁷CH₂-이고 R⁴가 CH₂OH인 화학식 I의 화합물의 합성을 보여준다. 아민 1.2를 환원성 아민화 조건 하에 알데히드 9.1 (Pg는 산소 보호기임)과 반응시켜 상응하는 아민 9.2를 수득한다. 적합한 환원성 아민화 조건은 염화메틸렌 중 1.2와 9.1을 축합한 후 나트륨 트리아세톡시보로히드라이드와 같은 보로히드라이드로 이민을 환원시키는 것을 포함한다. 아민 9.2를 메틸-2- 클로로-2-옥소아세테이트와 반응시켜 상응하는 아미드 9.3을 수득한다. 9.3으로부터 보호기를 제거하고, 생성된 디올을 고리화 조건, 예컨대 CsCO₃ 및 임의로 DMF 중 촉매 TBAI (t-부틸 암모늄 요오다이드)에 노출시켜 락탐 9.4을 수득한다. 9.4를 미쯔노부 (Mitsunobu) 조건 하에 PPh₃, 디이소프로필아조디카르복실레이트 (DIAD) 및 (EtO)₂P(O)NHBoc으로 처리하여 보호된 아민 9.5를 수득한다. 보호기를, 예를 들어 산성 조건에 노출시켜 제거하여 재배열된 디케토 화합물 9.6을 수득하고, 이를 추가로 관능화시켜 추가로 화학식 I의 화합물을 수득할 수 있다.

또다른 실시양태에서, 화합물의 산 부가염을 염기와 반응시켜 상응하는 유리 염기를 형성하는 것을 포함하는, 화학식 I 또는 Ia 내지 Ii의 화합물의 유리 염기의 제조 방법을 제공한다.

또다른 실시양태에서,

a) 화학식 I 또는 Ia 내지 Ii의 화합물의 유리 염기를 산과 반응시켜 산 부가염을 수득하거나; 또는

b) 화학식 I 또는 Ia 내지 Ii의 화합물의 염을 화학식 I 또는 Ia 내지 Ii의 화합물의 또다른 염으로 변환시키는

것을 포함하는, 화학식 I 또는 Ia 내지 Ii의 화합물의 염의 제조 방법을 제공한다.

D. 제약 제제

제약으로 사용될 때, 본 발명의 화합물은 일반적으로 제약 조성물의 형태로 투여된다. 상기 조성물은 경구, 비경구, 경피, 국소, 직장 및 비강내를 포함하는 다양한 경로로 투여될 수 있다. 이들 화합물은, 예를 들어 주사용 조성물 및 경구 조성물로서 둘 다 유용하다. 상기 조성물은 제약업계에 공지된 방법에 의해 제조되고, 하나 이상의 활성 화합물을 포함한다.

본 발명은 또한 활성 성분으로 하나 이상의 상기 본 발명의 화합물을 제약상 허용가능한 담체와 함께 포함하는 제약 조성물을 포함한다. 본 발명의 조성물을 제조하는 경우, 상기 활성 성분은 일반적으로 부형제와 혼합되고, 부형제에 의해 희석되거나, 또는 캡슐, 사세 (sachet), 종이 또는 기타 용기의 형태일 수 있는 상기 담체 내에 담긴다. 상기 사용되는 부형제는 전형적으로는 인간 대상체 또는 기타 포유동물의 투여에 적합한 부형제이다. 부형제를 희석제로 사용하는 경우, 부형제는 활성 성분에 대한 비히클, 담체 또는 매질로 작용하는 고체, 반-고체 또는 액체 물질일 수 있다. 따라서, 상기 조성물은 정제, 환제, 산제, 로젠지제, 사세제, 카세제, 엘릭시르제, 현탁액제, 에멀젼, 액제, 시럽제, 에어로졸 (고체로 또는 액체 매질 중), 활성 화합물을, 예를 들어 10 중량%까지 포함하는 연고, 연질 및 경질 젤라틴 캡슐, 좌제, 멸균의 주사가능 액제 및 멸균 포장된 산제의 형태일 수 있다.

제제의 제조에 있어서, 기타 성분과 조합하기 전에 적절한 입자 크기를 제공하기 위하여 활성 화합물을 분쇄하는 것이 필요할 수 있다. 활성 화합물이 실질적으로 불용성인 경우, 일반적으로 200 메쉬 미만의 입자 크기로 분쇄한다. 활성 화합물이 실질적으로 수용성인 경우, 일반적으로 제제 내에서 실질적으로 균일한 분 포를 제공하도록, 예를 들어 약 40 메쉬로 분쇄하여 입자 크기를 조절한다.

적합한 부형제의 일부 예로는 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 소르비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 검, 칼슘 포스페이트, 알기네이트, 트래거캔스, 젤라틴, 칼슘 실리케이트, 미세결정성 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 멸균수, 시럽 및 메틸 셀룰로스를 포함한다. 상기 제제는 추가로 윤활제, 예컨대 탈크, 스테아르산마그네슘 및 광유; 습윤제; 유화제 및 현탁제; 보존제, 예컨대 메틸 및 프로필히드록시-벤조에이트; 감미제; 및 풍미제를 포함할 수 있다. 상기 본 발명의 조성물은 당업계에 공지된 절차에 따라 환자에게 투여한 후 활성 성분이 신속한, 지속적인 또는 지연성 방출을 제공하도록 제제화할 수 있다.

제약 조성물 및 그의 단위 제형 내의 본 발명에 따른 화합물인 활성 성분의 양은 변경할 수 있거나 또는 특정 용도, 특정 화합물의 효과 및 의도한 농도에 따라 일반적으로 조절할 수 있다.

상기 조성물은 바람직하게는 각각의 투여량이 약 1 내지 약 500 mg, 일반적으로 약 5 내지 약 100 mg, 때로는 약 10 내지 약 30 mg의 활성 성분을 포함하는 단위 제형으로 제제화된다. 용어 "단위 제형"은 물리적으로 인간 대상체 및 기타 포유동물에 대한 단위 투여로 적합한 개별 단위를 가리키고, 각각의 단위는 의도한 치료 효과를 일으킬 수 있도록 계산된 활성 물질의 예정된 양을 적합한 제약 부형제와 함께 포함한다. 바람직하게는, 상기 본 발명의 화합물은 제약상 비활성인 담체(들)을 발란스로 하여 제약 조성물의 약 20 중량% 이하, 보다 바람직하게는 약 15 중량% 이하로 사용된다.

활성 화합물은 넓은 투여 범위에서 효과적이고, 일반적으로 제약상 유효량 또는 치료적 유효량으로 투여된다. 그러나, 실질적으로 투여되는 상기 화합물의 양은 치료될 상태, 치료될 상태의 정도, 선정된 투여 경로, 투여되는 실질적인 화합물, 개별 환자의 연령, 체중 및 반응성, 환자 증상의 정도 등을 포함하는 관련 상황의 관점에서 전문의에 의해 결정된다는 점이 이해될 것이다.

포유동물에서 암을 치료하거나 또는 퇴치하는 치료학적 용도에서, 상기 화합물 또는 그의 제약 조성물은 치료를 받는 포유동물에서 치료상 효과적일 활성 성분의 농도, 즉, 양 또는 혈액-수준을 얻고 유지할 수 있는 투여량으로 임의의 적절한 경로로, 예컨대 경구, 국소, 경피, 및/또는 비경구로 투여될 것이다. 일반적으로, 상기 활성 성분의 치료적 유효량의 투여량 (즉, 효과적인 투여량)은 약 0.1 내지 약 100, 보다 바람직하게는 약 1.0 내지 약 50 mg/체중kg/일이다.

고체 조성물, 예컨대 정제의 제조를 위해서, 주요 활성 성분을 제약 부형제와 혼합하여 본 발명의 화합물의 균질 혼합물을 포함하는 고형 예비제형 조성물을 형성한다. 상기 예비제형 조성물을 균질하다고 언급하는 경우, 상기 활성 성분이 조성물에 균등하게 분산되어 있어서 상기 조성물이 동등하게 효과적인 단위 제형, 예컨대 정제, 환제 및 캡슐제로 쉽게 세분될 수 있다는 것을 의미한다. 이후, 상기 고형 예비제형은, 예를 들어 0.1 내지 약 500 mg의 본 발명의 활성 성분을 포함하는 상기 기술된 유형의 단위 제형으로 세분된다.

본 발명의 정제 또는 환제는 코팅하거나 또는 그렇지 않으면 지속 작용을 가능하게 하는 제형을 제공하도록 제제화할 수 있다. 예를 들어, 정제 또는 환제는 내부 투여 및 외부 투여 성분을 포함할 수 있고, 외부 투여 성분은 내부 투여 성분을 덮고 있는 형태이다. 상기 두 성분은 위에서의 분해에 견디고, 내부 성분이 손상되지 않은 채로 십이지장으로 통과하도록 하거나, 또는 방출이 지연되도록 하는 장용성 피막에 의해 분리될 수 있다. 상기 장용성 피막 또는 코팅에 다양한 물질을 사용할 수 있으며, 상기 물질은 다수의 중합체 산 및 중합체 산과 셸락, 세틸 알코올 및 셀룰로스 아세테이트와 같은 물질의 혼합물을 포함한다.

본 발명의 신규 조성물이 경구 투여로 또는 주입에 의해 혼입되는 액체 형태는 수용액, 적합하게는 가미 시럽, 수성 또는 오일 현탁액 및 식용 오일, 예컨대 콘 오일, 목화씨 오일, 참깨 오일, 코코넛 오일 또는 땅콩유로 가미한 에멀젼뿐만 아니라 엘릭시르제 및 유사한 제약 비히클을 포함한다.

흡입 또는 취입용 조성물은 제약상 허용가능한, 수성 또는 유기 용매 중의 용액 및 현탁액, 또는 이들의 혼합물 및 분말을 포함한다. 상기 액체 또는 고체 조성물은 상기 기술된 것과 같은 적합한 제약상 허용가능한 부형제를 포함할 수 있다. 바람직하게는 상기 조성물은 국소 또는 전신성 효과를 위해 경구 또는 비강 호흡 경로로 투여된다. 바람직하게 제약상 허용가능한 용매 중의 조성물을 비활성 기체를 이용하여 분무할 수 있다. 분무된 용액을 직접 분무기로부터 흡입하거나, 또는 분무기를 안면 마스크 텐트 또는 간헐성의 양압 호흡기에 부착할 수 있다. 용액, 현탁액 또는 분말 조성물은 상기 제제를 적절한 방법으로 전달하는 기기로부터 바람직하게는 경구로 또는 비강으로 투여할 수 있다.

하기 제제의 예는 대표적인 본 발명의 제약 조성물을 설명한다.

제제의 예 1

하기 성분을 포함하는 경질의 젤라틴 캡슐을 제조한다.

상기 성분을 혼합하고, 340 mg 분량으로 경질의 젤라틴 캡슐에 채운다.

제제의 예 2

정제 제형은 하기 성분을 사용하여 제조한다.

상기 성분을 혼합하고, 압축하여 각각의 무게가 240 mg인 정제를 형성한다.

제제의 예 3

하기 성분을 포함하는 건식 분말 흡입 제제를 제조한다.

상기 활성 성분을 락토스와 혼합하고, 혼합물을 건식 분말 흡입기에 첨가한다.

제제의 예 4

활성 성분을 각각 30 mg 포함하는 정제를 다음과 같이 제조한다.

상기 활성 성분, 전분 및 셀룰로스를 No. 20 메쉬 U.S 체에 통과시키고, 완전히 혼합한다. 폴리비닐피롤리돈의 용액을 상기 생성된 분말과 혼합한 후, 16 메쉬 U.S. 체에 통과시킨다. 그렇게 생성된 과립을 50 ℃ 내지 60 ℃에서 건조시키고, 16 메쉬 U.S. 체에 통과시킨다. No. 30 메쉬 U.S. 체에 먼저 통과시킨 나트륨 카르복시메틸 전분, 스테아르산 마그네슘 및 활석을 과립에 첨가하고, 혼합한 후, 정제기에서 압축하여 각각의 무게가 120 mg인 정제를 생산한다.

제제의 예 5

약을 각각 40 mg 포함하는 캡슐을 다음과 같이 제조한다.

상기 활성 성분, 전분 및 스테아르산 마그네슘을 혼합하고, No. 20 메쉬 U.S. 체에 통과시키고, 150 mg 분량으로 경질의 젤라틴 캡슐에 채운다.

제제의 예 6

각각 25 mg의 활성 성분을 포함하는 좌제를 하기와 같이 제조한다.

상기 활성 성분을 No. 60 메쉬 U.S. 체에 통과시키고, 필요한 최소의 열을 사용하여 먼저 녹인 포화 지방산 글리세리드에 현탁시킨다. 이어서, 혼합물을 2.0 g 공칭 용량의 좌제 틀에 붓고, 냉각하도록 둔다.

제제의 예 7

5.0 mL 투여량 당 각각 50 mg의 약을 포함하는 현탁액을 하기와 같이 제조한다.

상기 활성 성분, 수크로스 및 산탄 검을 혼합하고, No. 10 메쉬 U.S. 체에 통과시킨 후, 먼저 제조한 물 중 미세결정질 셀룰로스 및 나트륨 카르복시메틸 셀룰로스의 용액과 혼합한다. 벤조산나트륨, 풍미제 및 착색제를 약간의 물로 희석하고, 교반하면서 첨가한다. 이후, 충분한 물을 첨가하여 필요한 부피를 생산한다.

제제의 예 8

상기 활성 성분, 전분 및 스테아르산 마그네슘을 혼합하고, No. 20 메쉬 U.S. 체에 통과시키고, 425.0 mg 분량으로 경질의 젤라틴 캡슐에 채운다.

제제의 예 9

피하 제제는 다음과 같이 제조할 수 있다.

제제의 예 10

국소 제제는 다음과 같이 제조할 수 있다.

백색 연질 파라핀을 용융할 때까지 가열한다. 액체 파라핀 및 유화 왁스를 혼합하고, 용해할 때까지 교반한다. 활성 성분을 첨가하고, 분산될 때까지 교반을 계속한다. 이어서, 고체가 될 때까지 혼합물을 냉각시킨다.

제제의 예 11

정맥내 제제는 다음과 같이 제조할 수 있다.

본 발명의 방법에서 사용된 또다른 바람직한 제제는 경피 전달 장치 ("패치")를 이용한다. 상기 경피 패치는 본 발명의 화합물의 연속 또는 불연속 주입을 양을 조절하여 제공하는데 사용될 수 있다. 제약 제제의 전달을 위한 경피 패치의 구성 및 용도는 당업계에 공지되어 있다. 예를 들어, 본원에 참조로 포함된, 1991년 6월 11일에 발행된 미국 특허 5,023,252를 참고하라. 상기 패치를 제약 제제를 연속적으로, 박동성으로 또는 즉시 응답형으로 전달하도록 구성할 수 있다.

빈번하게, 상기 제약 조성물을 직접적으로 또는 간접적으로 뇌로 주입하는 것이 바람직하거나 또는 필요할 수 있다. 직접 주입 기술은 일반적으로 혈액-뇌 관문을 우회하기 위해서 숙주의 심실계에 약물 전달 카테터를 설치하는 것을 포함한다. 생물학적 인자를 신체의 특정 해부학적 위치로 수송하기 위해서 사용되는 임의의 상기 이식형 전달 체계는 본원에 참조로 포함된 미국 특허 5,011,472에 기술되어 있다.

일반적으로 바람직한 간접 주입 기술은 보통 조성물을 제제화하여 친수성 약물을 지용성 약물로 변환시켜 약물 잠재화를 제공하는 것을 포함한다. 잠재화는 일반적으로 약물에 존재하는 히드록시, 카르보닐, 술페이트 및 1차 아민 기를 차단하여 상기 약물이 보다 지용성으로 되도록 하고, 혈액-뇌 관문간 수송을 따르도록 함으로써 가능하다. 별법으로, 친수성 약물의 전달은 혈액-뇌 관문을 일시적으로 열 수 있는 고장성 용액의 동맥내 주입에 의해 향상될 수 있다.

본 발명에서의 용도를 위한 기타 적합한 제제를 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Philadelphia, PA, 17th ed. (1985)]에서 발견할 수 있다.

E. 투여량 및 투여

상기 명시된 것과 같이, 본원에 기술된 화합물은 상기 기술된 다양한 약물 전달 체계에서의 용도를 위해 적합하다. 추가로, 투여된 화합물의 생체내 혈청 반감기를 높히기 위해서, 화합물을 캡슐화하고, 리포솜 내강에 도입하고, 콜로이드로 제조하거나, 또는 기타 통상의 기술을 사용하여 화합물의 확장된 혈청 반감기를 제공할 수 있다. 각각 본원에 참조로 포함된, 예를 들어 미국 특허 Nos. 4,235,871, 4,501,728 및 4,837,028 (Szoka, et al.)에 기술된 것과 같은, 리포솜 제조를 위한 다양한 방법이 이용가능하다.

본 발명의 화합물은 적어도 부분적으로라도 KSP의 활성에 의해 매개되는 장애를 억제하거나 또는 치료하는데 유용하다. 한 측면에서, 적어도 부분적으로라도 KSP에 의해 매개되는 장애는 세포 증식성 장애이다. 용어 "세포 증식성 장애"는, 예를 들어 암, 종양, 증식증, 재협착, 심장 비대증, 면역성 장애 및 염증을 포함하는 질환을 가리킨다. 본 발명은 치료적 유효량의 화학식 I 또는 Ia 내지 Ii의 화합물을 단독으로 또는 기타 함암제와 조합하여 인간 또는 포유류의 대상체에 투여하는 것을 포함하는, 상기 치료를 필요로 하는 상기 대상체를 치료하는 방법을 제공한다. 기타 측면에서, KSP 매개 장애의 치료용 의약의 제조에서 화학식 I 또는 Ia 내지 Ii의 화합물의 용도가 제공된다.

본 발명의 화합물은 또한 KSP 키네신 억제의 상대적 활성을 평가하는 분석에서 유용하다. 상기 분석에서, 화학식 I 또는 Ia 내지 Ii의 화합물을 사용하여 임의의 시험 화합물, 예컨대 또다른 화학식 I 또는 Ia 내지 Ii의 화합물 또는 또다른 KSP 억제제의 상대적 억제 활성을 측정할 수 있다. 그렇게 사용될 때, 화학식 I 또는 Ia 내지 Ii의 화합물을 당업자가 KSP 키네신의 억제를 검출하기에 충분한 양으로 사용한다. 상기 분량은 본원에서 종종 "효과적 억제량"으로 지칭된다. 바람직한 실시양태에서, 상기 억제량은 화학식 I 또는 Ia 내지 Ii의 화합물의 부존재 하에서의 활성과 비교하여 KSP 키네신 활성을 대략 50% 감소시키는 양이다. 이후, 상대적 활성의 순위를 제공하기 위해서 동일 농도에서 더 큰 또는 더 작은 억제를 제공하는 것으로 시험 화합물을 평가할 수 있다. 상기 정보는 그의 활성을 향상시키기 위한 시험 화합물의 구조적 변화 및 기타 변형을 결정하는데 유용하다. 따라서, 본 발명은 KSP 키네신의 활성을 억제하기 위한 방법을 제공하고, 상기 방법은 상기 KSP 키네신을 효과적 억제량의 화학식 I 또는 Ia 내지 Ii의 화합물과 접촉시키는 것을 포함한다. 또한, 세포 내 KSP 키네신의 활성을 억제하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 상기 세포를 효과적 억제량의 화학식 I 또는 Ia 내지 Ii의 화합물과 접촉시키는 것을 포함한다.

본 발명의 화합물은 시험관내 또는 생체내에서 암 세포의 성장을 억제하는데 유용하다. 용어 "암"은, 예를 들어 폐 및 기관지; 전립선; 유방; 췌장; 결장 및 직장; 갑상선; 위; 간 및 간내담관; 신장 및 신우; 방광; 자궁 체부; 자궁 경부; 난소; 다발성 골수종; 식도; 급성 골수성 백혈병; 만성 골수성 백혈병; 림프구성 백혈병; 골수성 백혈병; 뇌; 구강 및 인두; 후두; 소장; 비-호지킨 (hodgkin) 림프종; 흑색종; 및 결장의 융모 선종을 포함하는 암 질환을 가리킨다.

암은 또한 암종, 선암종, 육종 및 혈액종양으로 구성된 군으로부터 선택된 종양 또는 신생물을 포함한다.

추가로, 암의 유형은 고형 종양/악성 종양, 점액양 및 원형 세포 암종의 성장, 국소 진행형 종양, 인간 연질 조직 암종, 암 전이, 편평세포 암종, 식도 편평세포 암종, 경구 암종, 경피 T 세포 림프종, 호지킨 림프종, 비-호지킨 림프종, 부신성 피질암, ACTH-생성 종양, 비소세포 암, 유방암, 위장암, 요로암, 여성생식기 악성 종양, 남성생식기 악성 종양, 신장암, 뇌암, 골암, 피부암, 갑상선 암, 망막아종 신경아세포종, 복막 유출, 악성 흉막유출, 중피종, 윌름스 (Wilms's) 종양, 담낭암, 영양아세포 신생물, 혈관외피세포종 및 카포지 육종으로 구성된 군으로부터 선택될 수 있다.

본 발명의 화합물 또는 조성물은 적합한 경로로, 예컨대 경구, 정맥내, 비경구, 경피, 국소, 직장 또는 비강내로 포유동물에 투여할 수 있다.

포유동물은, 예를 들어 인간 및 기타 영장류, 애완 또는 반려 동물, 예컨대 개 및 고양이, 실험 동물, 예컨대 래트, 마우스 및 토끼, 및 농장 동물, 예컨대 말, 돼지, 양 및 소를 포함한다.

종양 또는 신생물은 세포의 증식이 비제어되고 진행성인 조직 세포의 성장을 포함한다. 상기 일부 성장은 양성이나, 일부는 "악성"으로 불리고, 유기체의 사망 을 야기할 수 있다. 악성 신생물 또는 "암"은 공격적 세포 증식을 보이는 것에 추가하여 주변 조직을 침습하고, 전이할 수 있다는 점에서 양성 성장과 구분된다. 게다가, 악성 신생물은 임의의 또다른 조직 및 주변 조직에 상대적으로 보다 큰 손실의 분화 (보다 큰 "탈분화") 및 유기조직화를 나타낸다는 점에서 특징화된다. 상기 특성은 "퇴화"로 불린다.

바람직한 생물학적 활성을 갖는 화합물은 필요에 따라 조절하여 바람직한 특성, 예컨대 향상된 약리학적 특성 (예를 들어, 생체내 안정성, 생체-유용성) 또는 진단적 적용에서 검출되는 능력을 제공한다. 안정성은 다양한 방식으로, 예컨대 펩티다제 또는 인간 혈장 또는 혈청과 배양 중 화합물의 반감기를 측정하여 분석할 수 있다.

진단학적 목적으로, 광범위한 표지를 화합물에 연결하여 직접적으로 또는 간접적으로 검출 신호를 제공할 수 있다. 따라서, 본 발명의 화합물 및/또는 조성물을 생물학적 활성을 계속 유지하면서 다양한 최종 목적을 위해 다양한 방식으로 변형할 수 있다. 또한, 다양한 반응성 부위를 도입하여 입자, 고체 기질, 거대 분자 등에 연결할 수 있다.

표지된 화합물은 다양한 생체내 또는 시험관내 용도로 사용될 수 있다. 광범위한 표지, 예컨대 방사성 핵종 (예를 들어, 감마-방출 방사성동위원소, 예컨대 테크네튬-99 또는 인듐-111), 형광 물질 (예를 들어, 플루오레세인), 효소, 효소 기질, 효소 보조인자, 효소 억제제, 화학발광 화합물, 생체발광 화합물 등을 사용할 수 있다. 당업자는 착체에 결합하기에 적합한 기타 표지에 대해서 알거나 또는 통상적인 실험을 통해 그것을 확인할 수 있을 것이다. 상기 표지의 결합은 당업자에게 일반적인 표준 기술을 사용하여 실시한다.

본 발명의 제약 조성물은 다양한 약물 운송 체계에서의 용도에 적합하다. 본 발명의 용도에 적합한 제제는 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences, Mace Publishing Company, Philadelphia, Pa., 17th ed. (1985)]에서 찾을 수 있다.

환자에게 투여되는 양은 투여되는 것, 투여 목적, 예컨대 예방 또는 요법, 환자의 상태, 투여 방법 등에 따라 변화할 것이다. 치료적 용도에서, 조성물은 질환 및 그의 합병증의 진행 또는 증상을 치료하거나 또는 부분적으로라도 정지시키기에 충분한 양으로 상기 질환으로 이미 고통받고 있는 환자에게 투여된다. 이를 달성하기에 적당한 양이 "치료적 효과량"으로 정의된다. 상기 용도를 위해 효과적인 양은 치료될 질환 상태뿐만 아니라, 인자, 예컨대 질환, 장애 또는 상태의 정도, 환자의 연령, 체중 및 일반 상태 등에 따른 주치의의 판단에 의해 결정될 것이다.

환자에게 투여되는 화합물은 전형적으로는 상기 기술된 제약 조성물의 형태이다. 상기 조성물을 통상의 멸균 기술로 멸균하거나 또는 멸균 여과할 수 있다. 생성된 수용액을 사용하기 위해 그대로 또는 동결건조시킨 상태로 포장할 수 있고, 동결건조시킨 제조품은 투여 전에 멸균 수성 담체와 합한다. 화합물 제조품의 pH는 전형적으로는 약 3 내지 11, 보다 바람직하게는 약 5 내지 9 및 가장 바람직하게는 약 7 내지 8 사이일 것이다. 상기 부형제, 담체 또는 안정화제 중 일부를 사 용하여 제약 염을 형성한다는 것이 이해될 것이다.

본 발명의 화합물 및/또는 조성물의 치료적 투여량은, 예를 들어 치료 대상에 대한 특정 용도, 화합물의 투여 방법, 환자의 건강 및 상태 및 처방 전문의의 판단에 따라 변화할 것이다. 예를 들어, 경구 투여에 대해서, 투여량은 전형적으로는 1일 체중 kg 당 약 5 μg 내지 약 50 mg, 바람직하게는 1일 체중 kg 당 약 1 mg 내지 약 10 mg일 것이다. 별법으로, 정맥내 투여에 대해서, 투여량은 전형적으로는 체중 kg 당 약 5 μg 내지 약 50 mg, 바람직하게는 체중 kg 당 약 500 μg 내지 약 5000 μg일 것이다. 계획된 투여의 대체 경로는, 이들로 한정되지는 않지만, 비강내, 경피, 흡입, 피하 및 근육내를 포함한다. 효과적 투여량은 시험관내 또는 동물 모델 시험 체계에서 유도된 투여량-반응 곡선으로부터 외삽법에 의해 추정할 수 있다.

일반적으로, 본 발명의 화합물 및/또는 조성물은 유사한 효용을 나타내는 작용제의 임의의 용인된 투여 방법에 의해 치료적 유효량으로 투여될 것이다. 상기 화합물의 독성 및 치료학적 효능은 세포 배양 또는 시험 동물에 있어서 표준 제약 과정에 의해, 예를 들어 LD₅₀ (50%의 개체수에 치명적인 투여량) 및 ED₅₀ (50%의 개체수에서 치료에 효과적인 투여량)를 측정하여 결정될 수 있다. 독성 및 치료학적 효과 간 투여량 비는 치료 지수이고, LD₅₀/ED₅₀ 비로 표현될 수 있다. 큰 치료 지수를 나타내는 화합물이 바람직하다.

세포 배양 분석 및 동물 연구로부터 얻어지는 데이타는 인간에서의 용도를 위한 투여량의 범위를 공식화하는데 사용될 수 있다. 상기 화합물의 투여량은 바람직하게는 약간의 독성 또는 무독성의 ED₅₀을 포함하는 순환 농도 범위 내에 있다. 투여량은 사용된 제형 및 이용된 투여 경로에 따라 상기 범위 내에서 변화할 수 있다. 본 발명의 방법에서 사용된 임의의 화합물 및/또는 조성물에 대해서, 치료적 유효 투여량은 초기에는 세포 배양 분석으로부터 평가할 수 있다. 투여량은 동물 모델에서 공식화되어 세포 배양에서 결정된 것과 같은 IC₅₀ (활성의 최대치절반 억제를 달성하는 시험 화합물의 농도)을 포함하는 순환 혈장 농도 범위을 얻을 수 있다. 상기 정보를 이용하여 더욱 정확하게 인간에서의 유용한 투여량을 결정할 수 있다. 혈장 내 수준은, 예를 들어 고성능 액체 크로마토그래피로 측정할 수 있다.

하기 합성 및 생물학적 실시예는 본 발명을 설명하기 위해 제공된 것이며, 본 발명의 범위를 한정하는 어떠한 방식으로도 해석되어서는 안된다.

하기 실시예와 관련하여, 본 발명의 화합물을 본원에 기술된 방법 또는 당업계에 공지된 기타 방법을 이용하여 합성하였다.

상기 화합물 및/또는 중간체를 2690 분리 모듈을 갖는 워터스 밀레니엄 (Waters Millenium) 크로마토그래피 시스템 (미국 매사추세츠주 밀포드 소재)을 이용하는 고성능 액체 크로마토그래피 (HPLC)로 특징화하였다. 분석 컬럼은 알텍 (Alltech) (미국 일리노이주 디어필드 소재)의 알티마 (Alltima) C-18 (역상, 4.6×250 mm)을 사용했다. 전형적으로 5%의 아세토니트릴/95%의 물로 시작하여 40분 간 100%의 아세토니트릴로 진행하는 구배 용리를 사용하였다. 모든 용매는 0.1%의 트리플루오로아세트산 (TFA)을 포함하였다. 화합물을 220 또는 254 nm에서의 자외선 (UV) 흡수에 의해 검출하였다. HPLC 용매는 버딕 & 잭슨 (Burdick and Jackson) (미국 미시건주 무스케간 소재) 또는 피셔 사이언티픽 (Fisher Scientific) (미국 펜실베니아주 피츠버그 소재)으로부터 구하였다. 일부 경우, 유리 또는 플라스틱 뒷판의 실리카겔 플레이트, 예를 들어 베이커-플렉스 (Baker-Flex) 실리카겔 1B2-F 연질 박판을 사용하는 박막 크로마토그래피 (TLC)를 이용하여 순도를 평가하였다. TLC 결과는 자외선 하에서 시각적으로 또는 공지된 요오드 증기 및 기타 다양한 염색 기술을 사용하여 쉽게 검출된다.

질량분광분석은 하기 2종의 LC/MS 기기들 중 하나에서 실시하였다: 워터스 시스템 (Waters System) (얼라이언스 (Alliance) HT HPLC 및 마이크로매스 (Micromass) ZQ 질량 분석계; 컬럼: 에클립스 (Eclipse) XDB-C18, 2.1×50 mm; 용매 체계: 0.05%의 TFA와 물 중 아세트니트릴 5→95% (또는 35→95% 또는 65→95% 또는 95→95%); 유속 0.8 mL/분; 분자량 범위 500-1500; 콘 (cone) 전압 20 V; 컬럼 온도 40 ℃) 또는 휴렛 패커드 시스템 (Hewlett Packard System) (시리즈 1100 HPLC; 컬럼: 에클립스 XDB-C18, 2.1×50 mm; 용매 체계: 0.05%의 TFA와 물 중 아세토니트릴 1→95%; 유속 0.4 mL/분; 분자량 범위 150-850; 콘 전압 50 V; 컬럼 온도 30 ℃). 모든 질량은 양성자화된 모 이온의 질량으로 보고되었다.

GC/MS 분석은 휴렛 패커드 기기 (질량 선택적 검출기 5973을 갖춘 HP6890 시리즈 가스 크로마토그래프; 주입기 부피: 1 mL; 초기 컬럼 온도: 50 ℃; 최종 컬럼 온도: 250 ℃; 경사 시간: 20 분; 가스 유속: 1 mL/분; 컬럼: 5%의 페닐 메틸 실록산, 모델 No. HP 190915-443, 규모: 30.0 m×25 m×0.25 m)에서 실시하였다.

핵 자기 공명 (NMR) 분석은 배리언 (Varian) 300 MHz NMR (미국 캘리포니아주 팔로 알토 소재)로 일부 화합물에서 실시하였다. 스펙트럼 기준은 TMS 또는 용매의 공지된 화학적 이동이다. 일부 화합물 샘플을 높은 샘플 용해도를 촉진시키기 위해 승온 (예를 들어, 75 ℃)에서 돌렸다.

일부 본 발명 화합물의 순도를 기초 분석 (데저트 어낼리틱스 (Desert Analytics), 미국 아리조나주 투산 소재)으로 평가하였다

융점은 래보래토리 디바이시즈 멜-템프 (Laboratory Devices Mel-Temp) 기기 (미국 매사추세츠주 홀리스톤 소재)로 측정하였다.

정제용 분리는 플래쉬 40 크로마토그래피 시스템 및 KP-Sil, 60A (바이오티지 (Biotage), 미국 버지니아주 샤를로츠빌 소재) 또는 실리카겔 (230-400 메쉬) 충전 물질을 사용하는 플래쉬 컬럼 크로마토그래피 또는 C-18 역상 컬럼을 사용하는 HPLC로 실시하였다. 플래쉬 40 바이오티지 시스템 및 플래쉬 컬럼 크로마토그래피에 사용되는 전형적인 용매는 디클로로메탄, 메탄올, EtOAc, 헥산, 아세톤, 수성 히드록시아민 및 트리에틸 아민이다. 역상 HPLC에 사용되는 전형적인 용매는 0.1%의 트리플루오로아세트산과 가변 농도의 아세토니트릴 및 물이다.

다르게 언급되지 않는 한, 모든 온도는 섭씨 온도이다. 또한, 실시예 및 기타 부분에서, 약어는 다음 의미를 갖는다:

AcOH = 아세트산

aq. = 수성

ATP = 아데노신 트리포스페이트

Boc = tert-부틸옥시카르보닐

BSA = 소 혈청 알부민

CAM = 세륨 암모늄 몰리브데이트

DCM = 디클로로메탄

DIAD = 디이소프로필 아조디카르복실레이트

DIBAL = 디이소부틸알루미늄 히드라이드

DIEA = 디이소프로필에틸아민

DIPEA = 디이소프로필에틸아민

DMAP = 디메틸아미노피리딘

DMF = 디메틸포름아미드

DMSO = 디메틸술폭시드

DTT = 디티오트레이톨

eq. = 당량

Et₂O = 디에틸 에테르

Et₃N = 트리에틸 아민

EtOAc = 에틸 아세테이트

EtOH = 에탄올

g = 그램

h = 시간

HPLC = 고성능 액체 크로마토그래피

L = 리터

LC/MS = 액체 크로마토그래피/ 질량 분석법

M = 몰

m = 미터

m/z = 질량/전하 비

MeNH₂ = 메틸 아민

mg = 밀리그램

min = 분

mL = 밀리리터

mm = 밀리미터

mM = 밀리몰농도

mmol = 밀리몰

mol = 몰

N = 노르말

nm = 나노미터

nM = 나노몰농도

NMR = 핵 자기 공명

PPh₃ = 트리페닐 포스핀

PhCF₃ = 트리플루오로메틸벤젠

psi = 파운드/인치²

RT = 실온

sat. = 포화

TEA = 트리에틸아민

THF = 테트라히드로푸란

TFA = 트리플루오로아세트산

TLC = 박층 크로마토그래피

TMS = 트리메틸실릴

TMSCl = 트리메틸실릴 클로라이드

Yb(OTf)₃= 이테르븀 (III) 트리플루오로메탄술포네이트

μg = 마이크로그램

μL = 마이크로리터

μM = 마이크로몰농도.

실시예 1

(R)-1-(1-벤질-4-페닐-1H-이미다졸-2-일)-2,2-디메틸프로판-1-아민 (1-5)

단계 A

EtOH (10 mL) 중 적절한 N-Boc-산 (4.0 mmol), 예를 들어 tert -부틸 루신 1-1의 교반 용액을 Cs₂CO₃ (2.0 mmol)로 처리하였다. 45분 후, EtOH을 감압 하에 증발시켜 제거하였다. 잔류 세슘염을 DMF (15 mL)에 재용해시킨 후, 적절한 α-할로-케톤, 예를 들어 2-브로모아세토페논 (4.0 mmol)으로 처리하고, 반응이 완결될 때까지 실온에서 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 EtOAc와 H₂O 사이에 분배하고, 유기물을 분리한 후, H₂O (×3) 및 염수 (×3)로 세척하고, 건조시키고 (Na₂SO₄), 여과하고, 감압 하에 증발시켜 다음 단계에서 바로 사용하기에 충분히 순수한 케토 에스테르 1-2를 수득하였다.

단계 B

크실렌 (40 mL) 중 케토-에스테르 1-2 (4.0 mmol)의 교반 용액에 암모늄 아세테이트 (20 mmol)를 첨가하였다. 딘-스탁 트랩을 더하고, 반응물을 140 ℃로 가열하였다. 반응이 완결되면, 혼합물을 실온으로 냉각하도록 둔 후, EtOAc와 포화 수성 NaHCO₃ 사이에 분배하였다. 유기물을 분리한 후, 포화 수성 NaHCO₃ (×2), H₂O (×3) 및 염수 (×3)로 세척하고, 건조시키고 (Na₂SO₄), 여과하고, 감압 하에 증발시켜 다음 단계에서 바로 사용하기에 충분히 순수한 페닐 이미다졸 1-3을 수득하였다.

단계 C

DMF (10 mL) 중 이미다졸 1-3 (4.0 mmol) 및 K₂CO₃ (8.0 mmol)의 교반 용액/ 현탁액에 벤질화제, 예를 들어 벤질 브로마이드 (4.40 mmol)를 첨가하였다. 반응이 완결되면, 혼합물을 EtOAc와 H₂O 사이에 분배하였다. 유기층을 분리하고 H₂O (×3) 및 염수 (×3)로 세척한 후, 건조시키고 (Na₂SO₄), 여과하고, 감압 하에 증발시켜 조질의 벤질화된 페닐 이미다졸을 수득하였다. 이후, 조질의 반응 물질을 결정화하여 (EtOAc, 헥산) 순수한 생성물 1-4를 수득하였다.

단계 D

Boc-보호된 아민 1-4 (1.0 mmol)을 DCM (5 mL) 중 10%의 TFA로 처리하였다. 반응이 완결되면, 반응 혼합물을 진공 하에 농축시킨 다음, EtOAc와 포화 수성 NaHCO₃사이에 분배하였다. 유기물을 분리한 후, 포화 수성 NaHCO₃ (×2), H₂O (×2) 및 염수 (×2)로 세척하고, 건조시키고 (Na₂SO₄), 여과하고, 감압 하에 증발시켜 페닐 이미다졸 유리 아민 1-5를 수득하였다.

실시예 2

(R)-1-(1-벤질-4-(2,5-디플루오로페닐)-1H-이미다졸-2-일)-2,2-디메틸프로판-1-아민 (2-6)

단계 A: 화합물 2-3의 제조

1 당량의 화합물 2-1를 담고 있는 5-목 플라스크에 0.7 당량의 K₂CO₃를 첨가하여 0.25 M의 아세톤 중 K₂CO₃의 용액을 수득하였다. N₂ 대기 하에 45분간 교반한 후, 1 M의 아세톤 중 1.0 당량의 화합물 2-2를 첨가하고 5 M의 아세톤 중 0.2 당량의 KI를 첨가하였다. 반응이 완결되면 (약 3 시간), 반응 혼합물을 빙조로 냉각시켰다. 온도가 15 ℃를 초과하지 않을 속도로 얼음물 (반응에서 사용된 아세톤의 대략 2.5× 부피와 동일)을 적하 깔때기로 첨가하였다. 빙조에서 1 시간 동안 교반한 후, 생성물을 진공 여과하여 수집하였다. 필터 케이크를 20%의 아세톤으로 3회 및 물로 3회 세척하였다. 필터 케이크를 공기-건조시키고, 일정한 무게에 도달할 때까지 추가로 50 ℃/5 torr에서 오븐에서 건조시켰다. 수율 92.7 g (96%). HPLC 순도: 99%.

단계 B: 화합물 2-4의 제조

반응 플라스크 중 2-3의 0.19 M의 톨루엔 용액에 20 당량의 NH₄OAc를 첨가하 였다. 반응이 완결될 때까지 (약 8 시간), 혼합물을 환류 하에 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 물 (반응에서 사용된 톨루엔 부피의 대략 1/4과 동일)을 첨가하였다. 유기상을 분리하고 물 및 포화 NaHCO₃로 세척하고, MgSO₄로 건조시켰다. 용매를 진공에서 제거하여 2-4를 수득하였다. 수율: 59.50 g (99.6%). HPLC 순도: 91.4%.

단계 C: 화합물 2-5의 제조

2-4의 0.5 M의 DMF 및 K₂CO₃ 용액을 담고 있는 플라스크를 N₂ 하에 30분간 0-5 ℃에서 교반한 후, 1.1 당량의 PhCH₂Br을 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 이후, 얼음물 (반응에서 사용된 DMF 부피와 대략 동일)을 적가하는 동안 빙조에서 교반하였다. 생성물을 진공 여과하여 수집하고, 50%의 DMF로 2회, 25%의 DMF로 2회 및 물로 3회 세척하였다. 고체를 50 ℃/ 5 torr에서 오븐에서 건조시켰다. 수율: 69.20 g (95%). HPLC 순도: 94%.

단계 D: 화합물 2-6의 제조

MeOH를 플라스크에 더하고, 빙조에 두었다. 여기에, 9.85 당량의 CH₃COCl를 30분간 적가한 후, 1 당량의 2-5를 첨가하여 0.25 M의 MeOH 중 2-5의 용액을 형성하였다. 반응이 완결될 때까지 (약 12 시간), 혼합물을 실온에서 교반하였다. 용매를 감압 하에 제거한 후, 수득한 고체를 MeOH (반응에서 사용된 MeOH 부피의 대략 1/2과 동일)에 현탁시키고, 0-5 ℃에서 교반하였다. pH가 약 10에 도달할 때까지, 상기 혼합물에 2.5 M의 NaOH/ MeOH 용액을 적가한 후, 물을 첨가하였다. 0-5 ℃에서 1시간 동안 교반한 후, 생성물 2-6을 여과하여 수집하였다. 50 ℃/ 5 torr에서 오븐에서 건조시켰다. 수율: 26.12 g (90.5%). HPLC 순도: 97.0%. 광학 순도는 > 99% (거울상이성질체 잉여 (ee))로 측정되었다.

실시예 3

(5R)-5-(2-아미노에틸)-3-[(1R)-1-(1-벤질-4-페닐-1H-이미다졸-2-일)-2,2-디메틸프로필]-1,3-옥사졸리딘-2-온 (1) 및 (5R)-5-(2-아미노에틸)-3-[(1R)-1-(1-벤질-4-페닐-1H-이미다졸-2-일)-2,2-디메틸프로필]-1,3-옥사졸리딘-2-온 (2)

단계 A

염화메틸렌 중 아민 3-1 (1 당량)의 용액에 실온에서 에폭시드 3-2 (1 당량)를 첨가한 후, Yb(OTf)₃ (1 당량)을 첨가하였다. 반응물을 40 ℃에서 14 시간 동안 가열하였다. 반응이 완결된 후, EtOAc를 첨가하고 물(2×)로 세척하였다. 유기물을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 조 생성물을 0→100%의 EtOAc/헥산 구배 용리를 갖는 실리카겔상에서 정제하여 화합물 3-3을 수득하였다.

단계 B

염화메틸렌 중 아민 3-3 (1 당량)의 용액에 실온에서 포스겐 용액 (1.1 당량)을 첨가한 후, 트리에틸아민 (20 당량)을 첨가하였다. 고리화가 완결된 것이 관찰될 때까지, 반응물을 30 ℃에서 가열하였다. 반응물을 물로 세척하고, 유기층을 분리하고, 건조시키고, 농축하고 0→100%의 EtOAc/헥산 구배 용리를 갖는 실리카겔상에서 정제하여 화합물 3-4을 수득하였다.

단계 C

EtOH 중 프탈아미드 3-4 (1 당량)의 용액에 실온에서 히드라진 (25 당량)을 첨가하였다. 반응물을 60 ℃에서 가열하였다. 완결되자마자, 냉각시킨 반응물을 여과하고 농축하였다. 생성된 오일을 역상 HPLC로 정제하여 의도한 화합물 1 및 2를 수득하였다; MH+ 433.2.

실시예 4

5-(아미노메틸)-3-{(1R)-1-[1-벤질-4-(3-클로로페닐)-1H-이미다졸-2-일]-2-메틸프로필}-1,3-옥사졸리딘-2-온 (3)

단계 A

염화메틸렌 중 4-1 아민 (1 당량; 실시예 1 및 3과 유사한 방법으로 제조함)의 용액에 포스겐 용액 (1.1 당량)을 첨가한 후, 트리에틸아민 (20 당량)을 첨가하였다. 고리화가 완결된 것이 관찰될 때까지, 반응물을 30 ℃에서 가열하였다. 반응물을 물로 세척하고, 유기층 분리하고, 건조시키고, 농축하고 0→100%의 EtOAc/헥산 구배 용리를 갖는 실리카겔상에서 정제하여 화합물 4-2을 수득하였다.

단계 B

EtOH 중 프탈아미드 4-2 (1 당량)의 용액에 실온에서 히드라진 (25 당량)을 첨가하였다. 반응물을 60 ℃에서 가열하였다. 완결되자마자, 냉각시킨 반응물을 여과하고 농축하였다. 생성된 오일을 역상 HPLC로 정제하여 의도한 화합물 3을 수득하였다; MH+ 439.2.

실시예 5

(5S)-5-(아미노메틸)-3-[(1R)-1-(1-벤질-4-페닐-1H-이미다졸-2-일)-2,2-디메 틸프로필]-1,3-옥사지난-2-온 (4) 및 (5R)-5-(아미노메틸)-3-[(1R)-1-(1-벤질-4-페닐-1H-이미다졸-2-일)-2,2-디메틸프로필]-1,3-옥사지난-2-온 (5)

단계 A

염화메틸렌 중 아민 1-5 및 알데히드 5-1 (1.1 당량)의 용액에 실온에서 나트륨 트리아세톡시보로히드라이드 (5 당량)를 나누어 첨가하였다. 상기 반응물을 12 시간 동안 교반하고, 물로 켄칭하였다. 유기층을 분리하고, 황산마그네슘으로 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 생성된 잔류물을 0→100%의 EtOAc/헥산 구배 용리를 갖는 실리카겔상에서 정제하여 화합물 5-2을 수득하였다.

단계 B

염화메틸렌 중 아민 5-2 (1 당량)의 용액에 실온에서 포스겐 용액 (1.1 당량)을 첨가한 후, 트리에틸아민 (20 당량)을 첨가하였다. 고리화가 완결된 것이 관찰될 때까지, 반응물을 30 ℃에서 가열하였다. 반응물을 물로 세척하고, 유기층을 분리하고, 건조시키고, 농축하고, 0→100%의 EtOAc/헥산 구배 용리를 갖는 실리카겔상에서 정제하여 화합물 5-3을 수득하였다.

단계 C

THF 중 알코올 5-3 (1 당량)의 용액에 수지 결합 PPh₃ (2 당량)을 첨가한 후, 실온에서 10분간 교반하였다. 이후, 상기 반응물에 프탈아미드 (2 당량) 및 DIAD (2 당량)를 첨가하였다. 반응물을 40 ℃에서 30분간 가열하고, 냉각시키자마자 EtOAc로 희석하고, 셀라이트 플러그로 여과하고, 농축하고, 역상 HPLC로 정제하 여 화합물 5-4를 수득하였다.

단계 D

EtOH 중 프탈아미드 5-4 (1 당량)의 용액에 실온에서 히드라진 (25 당량)을 첨가하였다. 반응물을 60 ℃에서 가열하였다. 완결되자마자, 냉각시킨 반응물을 여과하고 농축하였다. 생성된 오일을 역상 HPLC로 정제하여 의도한 화합물 4 및 5를 수득하였다; MH+ 433.2.

실시예 6

(6S)-6-(아미노메틸)-4-[(1R)-1-(1-벤질-4-페닐-1H-이미다졸-2-일)-2,2-디메틸프로필]모르폴린-3-온 (6) 및 (6R)-6-(아미노메틸)-4-[(1R)-1-(1-벤질-4-페닐-1H-이미다졸-2-일)-2,2-디메틸프로필]모르폴린-3-온 (7)

단계 A

염화메틸렌 중 아민 6-1 (1 당량)의 용액에 실온에서 에폭시드 6-2 (1 당량)를 첨가한 후, Yb(OTf)₃ (1 당량)을 첨가하였다. 반응물을 40 ℃에서 14 시간 동안 가열하였다. 반응이 완결된 후, EtOAc를 첨가한 후, 물 (2×)로 세척하였다. 유기물을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 조 생성물을 0→100%의 EtOAc/헥산 구배 용리를 갖는 실리카겔상에서 정제하여 화합물 6-3을 수득하였다.

단계 B

염화메틸렌 중 아민 6-3 (1 당량)의 용액에 0 ℃에서 트리에틸아민 (3 당량)을 첨가한 후, 클로로아세틸 클로라이드 (1.5 당량)를 첨가하였다. 반응이 완결될 때까지 반응물을 실온에서 교반하고, 상기 용액을 물로 켄칭한 후, 염화메틸렌으로 추출하였다. 합한 유기물을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 조 생성물을 0→100%의 EtOAc/헥산 구배 용리를 갖는 실리카겔상에서 정제하여 중간체 아미드 화합물을 수득하였다. 아미드의 DMF 용액에 CsCO₃ (1 당량) 및 TBAI (촉매량)를 첨가하였다. 반응물을 50 ℃에서 5 시간 동안 가열하고, 완결되자마자 중탄산나트륨 (포화 수성)을 첨가하여 켄칭하고, EtOAc로 추출 (3×)하였다. 합한 유기물을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 조 생성물을 0→100%의 EtOAc/헥산 구배 용리를 갖는 실리카겔상에서 정제하여 화합물 6-4를 수득하였다.

단계 C

EtOH 중 프탈아미드 6-4 (1 당량)의 용액에 실온에서 히드라진 (25 당량)을 첨가하였다. 반응물을 60 ℃에서 가열하였다. 완결되자마자, 냉각시킨 반응물을 여과하고 농축하였다. 생성된 오일을 역상 HPLC로 정제하여 의도한 화합물 6 및 7을 수득하였다; MH+ 433.2.

실시예 7

(6R)-6-(아미노메틸)-4-{(1R)-1-[1-벤질-4-(3-클로로페닐)-1H-이미다졸-2-일]-2-메틸프로필}모르폴린-3-온 (8) 및 (6S)-6-(아미노메틸)-4-{(1R)-1-[1-벤질-4-(3-클로로페닐)-1H-이미다졸-2-일]-2-메틸프로필}모르폴린-3-온 (9)

화합물 8 및 9를 실시예 6과 유사한 방법으로 제조하였다; MH+ 453.2

실시예 8

(6R)-6-(2-아미노에틸)-4-[(1R)-1-(1-벤질-4-페닐-1H-이미다졸-2-일)-2,2-디메틸프로필]모르폴린-3-온 (10) 및 (6S)-6-(2-아미노에틸)-4-[(1R)-1-(1-벤질-4-페닐-1H-이미다졸-2-일)-2,2-디메틸프로필]모르폴린-3-온 (11)

화합물 10 및 11을 실시예 6과 유사한 방법으로 제조하였다; MH+ 447.3.

실시예 9

(6S)-6-(2-아미노에틸)-4-{(1R)-1-[1-벤질-4-(3-클로로페닐)-1H-이미다졸-2-일]-2-메틸프로필}모르폴린-3-온 (12) 및 (6R)-6-(2-아미노에틸)-4-{(1R)-1-[1-벤질-4-(3-클로로페닐)-1H-이미다졸-2-일]-2-메틸프로필}모르폴린-3-온 (13)

화합물 12 및 13을 실시예 6과 유사한 방법으로 제조하였다; MH+ 467.2.

실시예 10

(2S,6R)-6-(아미노메틸)-4-{(1R)-1-[1-벤질-4-(3-플루오로페닐)-1H-이미다졸-2-일]-2,2-디메틸프로필}-2-메틸모르폴린-3-온 (14) 및 (2R,6R)-6-(아미노메틸)-4-{(1R)-1-[1-벤질-4-(3-플루오로페닐)-1H-이미다졸-2-일]-2,2-디메틸프로필}-2-메틸모르폴린-3-온 (15)

단계 A

염화메틸렌 중 아민 10-1 및 에피클로로히드린 10-2의 용액에 실온에서 Yb(OTf)₃을 첨가하였다. 출발 물질이 모두 소진될 때까지, 반응물을 45 ℃로 가열하였다. 반응물을 농축하고 생성된 잔류물을 0→100%의 EtOAc/헥산 구배 용리를 갖는 실리카겔상에서 정제하여 화합물 10-3을 수득하였다.

단계 B

MeOH 중 아민 10-3 (1 당량)의 용액에 실온에서 NaN₃ (4 당량)를 첨가하였다. 반응물을 3일간 교반하고 농축하여 10-4를 수득하고, 이를 추가로 정제하지 않고 다음 단계에서 사용하였다.

단계 C

염화메틸렌 중 조질의 아민 10-4 (1 당량)의 용액에 0 ℃에서 트리에틸아민 (5 당량)을 첨가한 후, 2-클로로프로피오닐 클로라이드 (2.5 당량)를 첨가하였다. 반응이 완결될 때까지 반응물을 실온에서 교반하고, 상기 용액을 물로 켄칭한 후, 염화메틸렌으로 추출하였다. 합한 유기물을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 조 생성물을 0→100%의 EtOAc/헥산 구배 용리를 갖는 실리카겔상에서 정제하여 화합물 10-5를 수득하였다.

단계 D

DMF 중 알코올 10-5의 용액에 CsCO₃ (1 당량) 및 TBAI (촉매량)를 첨가하였다. 반응물을 50 ℃에서 5 시간 동안 가열하고, 완결되자마자 중탄산나트륨 (포화 수성)을 첨가하여 켄칭하고 EtOAc로 추출 (3×)하였다. 합한 유기물을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 조 생성물을 0→100%의 EtOAc/헥산 구배 용리를 갖는 실리카겔상에서 정제하여 화합물 10-6을 수득하였다.

단계 E

THF/H₂O 중 아지드 10-6의 용액에 실온에서 트리페닐포스핀을 첨가하였다. 반응물을 40 ℃에서 14 시간 동안 가열하고, 여기에 TFA (10 당량)를 첨가하고, 반응물을 40 ℃에서 추가로 1 시간 동안 가열한 후, 80 ℃에서 1 시간 동안 가열하였다. 이후, 반응물을 실온으로 냉각시키고, 아세토니트릴/물 중 LiOH의 용액으로 처리하였다. 상기 반응물을 10분간 초음파 처리한 후, 셀라이트 패드로 여과하였다. 여과액을 농축하고 역상 HPLC로 정제하여 의도한 생성물 14 및 15를 수득하였다; MH+ 465.3.

실시예 11a

(5R)-5-(아미노메틸)-1-[(1R)-1-(1-벤질-4-페닐-1H-이미다졸-2-일)-2,2-디메틸프로필]피페라진-2,3-디온 (16)

단계 A

실시예 13에서와 같이 제조된 염화메틸렌 중 아민 11-1의 용액에 실온에서 트리에틸아민 (5 당량)을 첨가한 후, 옥살릴 클로라이드 (2.5 당량)를 실온에서 첨가하였다. 출발 물질이 완전히 소진된 것이 관찰될 때까지, 반응물을 실온에서 교반하였다. 이후, 반응물을 물로 세척하고, 유기층 분리하고, 건조시키고 농축하였다. 생성된 조질의 물질을 염화메틸렌 중 50%의 TFA로 처리하고, 고리화가 완결될 때까지 40 ℃에서 가열하였다. 이어서, 반응물을 농축하고 조질의 오일을 THF에 용해시키고, TBAF (2.5 당량; THF 중 1 M)로 처리하였다. 반응물을 40 ℃에서 가열하고, 탈보호가 완료되자마자 농축하고 역상 HPLC로 정제하여 11-2를 수득하였다.

단계 B 및 C

THF 중 알코올 11-2 (1 당량)의 용액에 수지 결합 PPh₃ (2 당량)을 첨가한 후, 실온에서 10분간 교반하였다. 이후, 상기 반응물에 프탈아미드 (2 당량) 및 DIAD (2 당량)를 첨가하였다. 반응물을 40 ℃에서 30분간 가열하고, 냉각하자마자 EtOAc로 희석하고, 셀라이트 플러그로 여과하고, 농축하고 역상 HPLC로 정제하였다. 이후, 히드라진 (25 당량)을 실온에서 프탈아미드 (1 당량)의 EtOH 용액에 첨가하였다. 반응물을 60 ℃에서 가열하였다. 완결되자마자, 냉각시킨 반응물을 여과하고 농축하였다. 생성된 오일을 역상 HPLC로 정제하여 16을 수득하였다; MH+ 446.2.

실시예 11b

(5S)-5-(아미노메틸)-1-[(1R)-1-(1-벤질-4-페닐-1H-이미다졸-2-일)-2,2-디메틸프로필]피페라진-2,3-디온 (17)

실시예 11a와 유사한 방법으로 제조하였으나, Boc-D-세린 메틸 에스테르로부터 출발하였다; MH+ 446.2.

실시예 12

(5R)-5-(아미노메틸)-1-[(1R)-1-(1-벤질-4-페닐-1H-이미다졸-2-일)-2,2-디메틸프로필]-4-메틸피페라진-2,3-디온 (18)

단계 A

디옥산 중 CsCO₃ (3 당량)의 현탁액에 실시예 11에서와 같이 제조한 아미드 12-1를 실온에서 첨가하고, 반응물을 10분간 교반하였다. 이후, 메틸 요오다이드를 첨가한 후, 1 시간 동안 교반하였다. 반응물을 물로 켄칭하고, 유기물을 분리하고, Na₂SO₄로 건조시키고 농축하였다. 조 생성물을 0→100%의 EtOAc/헥산 구배 용리를 갖는 실리카겔상에서 정제하여 화합물 12-2를 수득하였다.

단계 B

알코올 12-2를 THF에 용해시키고, TBAF (2.5 당량, THF 중 1 M)로 처리하였 다. 반응물을 40 ℃에서 가열하고, 탈보호가 완료되자마자 농축하고 역상 HPLC로 정제하여 12-3을 수득하였다.

단계 C 및 D

THF 중 알코올 12-3 (1 당량)의 용액에 수지 결합 PPh₃ (2 당량)를 첨가한 후, 실온에서 10분간 교반하였다. 이후, 상기 반응물에 프탈아미드 (2 당량) 및 DIAD (2 당량)를 첨가하였다. 반응물을 40 ℃에서 30분간 가열하고, 냉각하자마자 EtOAc로 희석하고, 셀라이트 플러그로 여과하고, 농축하고 역상 HPLC로 정제하였다. EtOH 중 프탈아미드 (1 당량)의 용액에 실온에서 히드라진 (25 당량)을 첨가하였다. 반응물을 60 ℃에서 가열하였다. 완결되자마자, 냉각시킨 반응물을 여과하고 농축하였다. 생성된 오일을 역상 HPLC로 정제하여 의도한 화합물 18을 수득하였다; MH+ 460.3.

실시예 13

(2S)-4-[(1R)-1-(1-벤질-4-페닐-1H-이미다졸-2-일)-2,2-디메틸프로필]-2-(히드록시메틸)-1,4-디아제판-5-온 (19)

단계 A

DMF 중 알코올 13-1 (1 당량)의 용액에 트리에틸아민 (3 당량), DMAP (0.2 당량) 및 TBDMSCl (2.2 당량)을 첨가하였다. 반응물을 5 시간 동안 실온에서 교반하고, 완결되자마자 중탄산나트륨 (포화 수성)을 첨가하여 켄칭하고, EtOAc로 추출 (3×)하였다. 합한 유기물을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 조 생성물을 0→100%의 EtOAc/헥산 구배 용리를 갖는 실리카겔상에서 정제하여 화합물 13-2를 수득하였다.

단계 B

톨루엔 중 BOC-L-세린 메틸 에스테르 13-2의 용액에 0 ℃에서 DIBAL-H (3 당량, 톨루엔 중 2.5 M)를 첨가하였다. 변환이 완결된 것이 관찰될 때까지 반응물을 실온으로 데웠다. 이후, 반응물을 메탄올로 처리하고, 농축하였다. 상기 잔류물 에 2 M의 칼륨 나트륨 타르트레이트 용액 (포화 수성)을 첨가하고, 30분간 힘차게 교반하였다. 생성된 잔류물을 EtOAc와 물 사이에 분배하고, 층을 분리하고 수성 층을 EtOAc로 3회 추출하였다. 합한 유기물을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 조 생성물을 0→100%의 EtOAc/헥산 구배 용리를 갖는 실리카겔상에서 정제하여 화합물 13-3을 수득하였다.

단계 C

무수 염화메틸렌 중 옥살릴 클로라이드 (1.4 당량)의 용액에 -78 ℃에서 DMSO (2.2 당량)를 첨가한 후, 10분간 교반하였다. 이후, 염화메틸렌 중 알코올 13-3 (1 당량)의 용액을 적가하고 5분간 반응하도록 두었다. 트리에틸아민 (5 당량)을 천천히 도입하고, 첨가가 완료되자마자 반응물을 -78 ℃에서 10분간 교반한 후, 30분간 실온에서 교반하였다. 변환이 완결되자마자, 반응물을 EtOAc로 희석하고 중탄산나트륨 (포화 수성)으로 3회 세척하였다. 유기물을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 조 생성물을 0→100%의 EtOAc/헥산 구배 용리를 갖는 실리카겔상에서 정제하여 화합물 13-4를 수득하였다.

단계 D

염화메틸렌 중 알데히드 13-4 및 아민 1-5 (1.1 당량)의 용액에 실온에서 나트륨 트리아세톡시보로히드라이드 (5 당량)를 나누어 첨가하였다. 상기 반응물을 12 시간 동안 교반하고, 물로 켄칭하였다. 유기층을 분리하고, 황산마그네슘으로 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 생성된 잔류물을 0→100%의 EtOAc/헥산 구배 용리를 갖는 실리카겔상에서 정제하여 화합물 13-5를 수득하였다.

단계 E

염화메틸렌 중 아민 13-5의 용액에 실온에서 트리에틸아민 (5 당량)을 첨가한 후, 실온에서 아크릴로일 클로라이드 (3.3 당량)를 첨가하였다. 출발 물질이 완전히 소진된 것이 관찰될 때까지, 반응물을 실온에서 교반하였다. 이후, 반응물을 물로 세척하고, 유기층을 분리하고, 건조시키고 농축하였다. 이후, 생성된 조질의 물질을 염화메틸렌 중 50%의 TFA로 처리하고, 고리화에 영향을 미치기 위해서 필요한 시간 동안 40 ℃에서 가열하였다. 이후, 반응물을 농축하고 조질의 오일을 THF에 용해시키고, TBAF (2.5 당량, THF 중 1 M)로 처리하였다. 반응물을 40 ℃에서 가열하고, 탈보호가 완결되자마자 농축하고 역상 HPLC로 정제하여 19를 수득하였다; MH+ 447.3.

실시예 14

(2R)-2-(아미노메틸)-4-[(1R)-1-(1-벤질-4-페닐-1H-이미다졸-2-일)-2,2-디메틸프로필]-1,4-디아제판-5-온 (20)

단계 A

MeOH 중 실시예 13에서 제조된 것과 같은 아민 14-1의 용액에 0 ℃에서 BOC-무수물 (1.2 당량)을 첨가한 후, 트리에틸아민 (3 당량)을 첨가하였다. 출발 물질이 완전히 소진된 것이 관찰될 때까지, 반응물을 실온에서 교반하였다. 반응물을 농축하고 생성된 잔류물을 0→100%의 EtOAc/헥산 구배 용리를 갖는 실리카겔상에서 정제하여 화합물 14-2를 수득하였다.

단계 B

THF 중 알코올 14-2 (1 당량)의 용액에 수지 결합 PPh₃ (2 당량)를 첨가한 후, 실온에서 10분간 교반하였다. 이후, 상기 반응물에 프탈아미드 (2 당량) 및 DIAD (2 당량)를 첨가하였다. 반응물을 40 ℃에서 30분간 가열하고, 냉각시키자마자 EtOAc로 희석하고, 셀라이트 플러그로 여과하고, 농축하고 역상 HPLC로 정제하였다. EtOH 중 프탈아미드 (1 당량)의 용액에 실온에서 히드라진 (25 당량)을 첨가하였다. 반응물을 60 ℃에서 가열하였다. 완결되자마자, 냉각시킨 반응물을 여과하고 농축하였다. 생성된 오일을 염화메틸렌 중 20%의 TFA에 용해시키고, 탈보호가 완결될 때까지 40 ℃에서 가열하였다. 이어서, 반응물을 농축하고 역상 HPLC로 정제하여 20을 수득하였다; MH+ 446.3.

실시예 15

(2R)-2-(아미노메틸)-4-[(1R)-1-(1-벤질-4-페닐-1H-이미다졸-2-일)-2,2-디메틸프로필]-1-(메틸술포닐)-1,4-디아제판-5-온 (21)

단계 A

염화메틸렌 중 실시예 13에서 제조된 것과 같은 아민 15-1 (1 당량)의 용액에 0 ℃에서 트리에틸아민 (5 당량)을 첨가한 후, 메탄 술포닐 클로라이드 (2.5 당량)를 첨가하였다. 반응이 완결될 때까지 반응물을 실온에서 교반하고, 상기 용액을 물로 켄칭한 후, 염화메틸렌으로 추출하였다. 합한 유기물을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 조 생성물을 0→100%의 EtOAc/헥산 구배 용리를 갖는 실리카겔상에서 정제하여 화합물 15-2를 수득하였다.

단계 B

술폰아미드 15-2를 THF에 용해시키고, TBAF (2.5 당량, THF 중 1 M)로 처리하였다. 반응물을 40 ℃에서 가열하고, 탈보호가 완결되자마자 농축하고 역상 HPLC로 정제하여 15-3을 수득하였다.

단계 C

THF 중 알코올 15-3 (1 당량)의 용액에 수지 결합 PPh₃ (2 당량)를 첨가한 후, 실온에서 10분간 교반하였다. 이후, 상기 반응물에 프탈아미드 (2 당량) 및 DIAD (2 당량)를 첨가하였다. 반응물을 40 ℃에서 30분간 가열하고, 냉각시키자마자 EtOAc로 희석하고, 셀라이트 플러그로 여과하고, 농축하고 역상 HPLC로 정제하여 15-4를 수득하였다.

단계 D

EtOH 중 프탈아미드 15-4 (1 당량)의 용액에 실온에서 히드라진 (25 당량)을 첨가하였다. 반응물을 60 ℃에서 가열하였다. 완결되자마자, 냉각시킨 반응물을 여과하고 농축하였다. 생성된 오일을 역상 HPLC로 정제하여 21을 수득하였다; MH+ 524.3.

실시예 16

(2S)-2-(아미노메틸)-4-[(1R)-1-(1-벤질-4-페닐-1H-이미다졸-2-일)-2,2-디메틸프로필]-1,4-옥사제판-5-온 (22) 및 (2R)-2-(아미노메틸)-4-[(1R)-1-(1-벤질-4-페닐-1H-이미다졸-2-일)-2,2-디메틸프로필]-1,4-옥사제판-5-온 (23)

단계 A

염화메틸렌 중 16-1 아민 및 알데히드 16-2 (1.1 당량)의 용액에 실온에서 나트륨 트리아세톡시보로히드라이드 (5 당량)를 나누어 첨가하였다. 상기 반응물을 12 시간 동안 교반하고, 물로 켄칭하였다. 유기층을 분리하고, 황산마그네슘으로 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 생성된 잔류물을 0→100%의 EtOAc/헥산 구배 용리를 갖는 실리카겔상에서 정제하여 화합물 16-3를 수득하였다.

단계 B

염화메틸렌 중 아민 16-2 (1 당량)의 용액에 0 ℃에서 트리에틸아민 (5 당량)을 첨가한 후, 아크릴로일 클로라이드 (2.5 당량)을 첨가하였다. 반응이 완결 될 때까지 반응물을 실온에서 교반하고, 상기 용액을 물로 켄칭한 후, 염화메틸렌으로 추출하였다. 합한 유기물을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 조 생성물을 0→100%의 EtOAc/헥산 구배 용리를 갖는 실리카겔상에서 정제하여 화합물 16-3를 수득하였다.

단계 C

THF 중 아미드 16-3의 용액에 실온에서 수은(II) 트리플루오로아세테이트 (1 당량)를 첨가하고, 반응물을 1 시간 동안 교반하였다. 이후, 반응물을 0 ℃로 냉각시키고, 2 N의 NaOH (2 당량)로 처리한 후, NaBH₄ (0.6 당량, 2 N의 NaOH 중 0.5 N)로 처리하였다. 변환이 완결된 것이 관찰될 때까지 반응물을 교반하고, EtOAc로 희석하고 물로 세척하였다. 유기물을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 조질의 물질을 역상 HPLC로 정제하여 16-4를 수득하였다.

단계 D

EtOH 중 아미드 16-4의 용액에 실온에서 Pd/C (0.5 당량)를 첨가하였다. 수소 가스를 10분간 혼합물에 버블링하고, H₂ 대기 하에 반응물을 3 시간 동안 교반하였다. 이후, 반응물을 셀라이트 패드로 여과하고, 농축하고 역상 HPLC로 정제하여 22 및 23을 수득하였다; MH+ 447.3.

실시예 17

(2,2-디메틸-[1,3]디옥산-5-일)-메탄올

트리올 17-1 (1 당량)을 대략 0.5 M의 농도로 DMF에 용해시키고, 2,2-디메톡시프로판 (1.16 당량) 및 p-톨루엔술폰산 일수화물 (0.03 당량)을 첨가하였다. 용액을 하루 이상 교반하고, TEA (0.5 당량)로 켄칭하였다. 가능한 많은 용매를 진공에서 제거하고, 진공 하에 증류시켜 17-2를 정제하였다.

실시예 18

2,2-디메틸-1,3-디옥산-5-카르브알데히드

N₂ 대기 하에, 옥살릴 클로라이드 (1.4 당량)를 DCM에 용해시킨 후, -78 ℃로 냉각시켰다. DMSO (2.2 당량)를 적가하였다. 상기 용액을 약 10분간 교반한 후, 18-1 (1 당량)을 추가의 DCM에 용해시켜 총 농도가 0.2 M이 되도록 하였다. 5분간 반응시킨 후, TEA (5 당량)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 10분간 -78 ℃에서 교반한 후, 다시 10분간 실온에서 교반하였다. 전개 용매로 1:1 비율의 헥산 대 에틸 아세테이트를 사용하고 CAM 착색으로 결과를 시각화하는 TLC로 상기 반응을 최적으로 모니터하였다. 18-2를 포함하는 상기 반응 혼합물을 추가로 워크업하지 않고 사용하였다.

실시예 19

(6S)-6-(아미노메틸)-4-[(1R)-1-(1-벤질-4-페닐-1H-이미다졸-2-일)-2,2-디메틸프로필]-1,4-옥사제판-3-온 (24) 및 (6R)-6-(아미노메틸)-4-[(1R)-1-(1-벤질-4-페닐-1H-이미다졸-2-일)-2,2-디메틸프로필]-1,4-옥사제판-3-온 (25)

(R)-6-(아미노메틸)-4-((R)-1-(1-벤질-3-페닐-1H-1,2,4-트리아졸-5-일)-2,2- 디메틸프로필)-1,4-옥사제판-3-온

단계 A: 환원성 아민화

아민 19-1 (1 당량)을 DCM에 용해시키고, 총 농도가 0.1 내지 0.15 M가 되도록 알데히드 18-2에 첨가하였다. 5분 후, 반응물을 0 ℃로 냉각시키고, Na(OAc)₃BH (1.5 당량) 및 빙초산 (1 당량)을 첨가하였다. LCMS로 반응의 완결 정도를 모니터하였다. 반응물을 에틸 아세테이트로 희석한 후, 물 중 포화 중탄산나트륨 용액으로 3회 세척하였다. 최종적으로, 생성물을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 용매를 진공에서 제거하였다.

단계 B: 아세틸화

아민 19-2를 DCM에 용해시켜 0.2 M의 용액을 제조하고, 0 ℃로 냉각시켰다. TEA (5 당량)를 천천히 첨가하고, 5분간 교반하였다. 클로로아세틸 클로라이드 (3 당량)를 적가하였다. 반응물을 에틸 아세테이트로 희석한 후, 물 중 포화 중탄산 나트륨 용액으로 3회 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고 진공에서 농축하였다. 생성물 19-3을 크로마토그래피 (헥산 중 에틸 아세테이트의 구배: 약 0→70%)로 정제하였다.

단계 C: 디올 탈보호

클로라이드 19-3을 아세토니트릴에 용해시키고, 0 ℃로 냉각시켰다. 3 N의 HCl을 적가하고, 반응을 LCMS로 모니터하면서, 탈보호가 완결될 때까지 추가로 HCl을 첨가하였다. 용액을 진공에서 농축하고, 에틸 아세테이트로 희석하고, 물 중 포화 중탄산나트륨 용액으로 3회 세척하였다. 최종적으로, 생성물 19-4를 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 용매를 진공에서 제거하였다.

단계 D: 고리화

탈보호된 알코올 19-4를 DMF에 용해시켜 0.1 M의 용액을 제조하였다. 1 당량의 Cs₂CO₃ 및 촉매량의 TBAI (테트라부틸 암모늄 요오다이드)를 첨가하였다. 반 응물을 대략 40 내지 55 ℃로 4 내지 6 시간 동안 가열하였다. 완결되자마자, 반응물을 진공에서 농축하고, EtOAc로 희석하고, 포화 중탄산염으로 세척하였다. EtOAc 층을 진공에서 농축하고 크로마토그래피 (헥산 중 에틸 아세테이트의 구배: 약 0→75%)로 정제하여 19-5를 수득하였다.

단계 E. 알코올을 라세미화하기 위한 알데히드의 형성

N₂ 가스 하에, 옥살릴 클로라이드 (1.4 당량)를 DCM에 용해시킨 후, -78 ℃로 냉각시켰다. DMSO (2.2 당량)를 적가하였다. 상기 용액을 약 10분간 교반한 후, 알코올 19-5 (1 당량)를 추가의 DCM에 용해시켜 총 농도가 0.2 M가 되도록 하였다. 5분간 반응시킨 후, TEA (5 당량)를 첨가하였다. 이 혼합물을 10분간 -78 ℃에서 교반한 후, 다시 10분간 실온에서 교반하였다. 반응물을 에틸 아세테이트로 희석한 후, 물 중 포화 중탄산나트륨 용액으로 3회 세척하였다. 최종적으로, 생성물 19-6을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 용매를 진공에서 제거하였다.

단계 F: (R) 및 (S) 알코올로의 변환

알데히드 19-6을 메탄올에 용해시켜 0.2 M의 용액을 형성하고, 0 ℃로 냉각시켰다. 나트륨 보로히드라이드 (1.5 당량)를 첨가하고, 반응을 5 내지 10분간 유지하였다. 용액을 진공에서 농축하고, EtOAc로 희석하고 포화 중탄산염으로 세척하였다. EtOAc 층을 진공에서 농축하고 크로마토그래피로 정제하였다. 상기 단계에서, 알코올의 두 부분입체이성질체를 역상 HPLC로 분리하였다.

단계 G: 아민으로의 변환

건식 THF에 용해시킨 분할된 알코올 부분입체이성질체 각각에 5 당량의 수지 결합 PPh₃, 5 당량의 프탈이미드 및 5 당량의 DIAD를 첨가하였다. 반응물을 30분간 약 55 ℃로 데웠다. 프탈이미도 유도체로의 변환이 완결되자마자, 반응물을 EOAc로 희석하고, 셀라이트로 여과하고, 포화 NaHCO₃로 세척하였다. EtOAc 층을 무수 Na₂SO₄로 건조시키고, 진공에서 농축하고, HPLC로 정제하였다. 정제된 프탈이미도 유도체를 60 ℃에서 약 1 시간 동안 메탄올 (용매로 사용됨) 중 2 M의 MeNH₂로 최종적으로 탈보호 단계를 거쳤다. 조 생성물을 역상 HPLC로 정제하였다; MH+ 447.3.

실시예 20

(6R)-6-(아미노메틸)-4-{(1R)-1-[1-(3,5-디플루오로벤질)-4-(3-플루오로페닐)-1H-이미다졸-2-일]-2,2-디메틸프로필}-1,4-옥사제판-3-온 (26)

화합물 26을 실시예 19와 유사한 방법으로 제조하였다; MH+ 501.2.

실시예 21

(6R)-6-(아미노메틸)-4-{(1R)-1-[1-벤질-4-(3-플루오로페닐)-1H-이미다졸-2-일]-2,2-디메틸프로필}-1,4-옥사제판-3-온 (27)

화합물 27을 실시예 19와 유사한 방법으로 제조하였다; MH+ 465.3.

실시예 22

(6R)-6-(아미노메틸)-4-{(1R)-1-[1-(3-플루오로벤질)-4-(3-플루오로페닐)-1H-이미다졸-2-일]-2,2-디메틸프로필}-1,4-옥사제판-3-온 (28) 및 (6S)-6-(아미노메틸)-4-{(1R)-1-[1-(3-플루오로벤질)-4-(3-플루오로페닐)-1H-이미다졸-2-일]-2,2-디메틸프로필}-1,4-옥사제판-3-온 (29)

화합물 28 및 29를 실시예 19와 유사한 방법으로 제조하였다; MH+ 483.2.

실시예 23

(6S)-6-(아미노메틸)-1-[(1R)-1-(1-벤질-4-페닐-1H-이미다졸-2-일)-2,2-디메 틸프로필]-1,4-디아제판-2,3-디온 (30)

단계 A

염화메틸렌 중 아민 19-2 (1 당량)의 용액에 0 ℃에서 트리에틸아민 (5 당량)을 첨가한 후, 메틸-2-클로로-2-옥소아세테이트 (2.5 당량)를 첨가하였다. 반응이 완결될 때까지 반응물을 실온에서 교반하고, 상기 용액을 물로 켄칭한 후, 염화메틸렌으로 추출하였다. 합한 유기물을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 조 생성물을 0→100%의 EtOAc/헥산 구배 용리를 갖는 실리카겔상에서 정제하여 화합물 23-1을 수득하였다

단계 B

아세토니트릴 (1 당량) 중 아미드 23-1의 용액에 0 ℃에서 HCl (3 N, 수성) (15 당량)을 적가하였다. 반응물을 실온에서 교반하고, 변환이 완결되자마자 반응물을 EtOAc로 희석하고, 중탄산나트륨 (포화 수성)으로 3회 세척하였다. 유기물을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 조 생성물을 0→100%의 EtOAc/헥산 구배 용리를 갖는 실리카겔상에서 정제하여 디올을 수득하고, 이를 이후 정제하고, DMF에 현탁시키고, CsCO₃ (1 당량) 및 TBAI (촉매량)로 처리하였다. 반응물을 5 시간 동안 50 ℃에서 가열하고, 완결되자마자 중탄산나트륨 (포화 수성)을 추가하여 켄칭하고, EtOAc로 추출 (3×)하였다. 합한 유기물을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 조 생성물을 0→100%의 EtOAc/헥산 구배 용리를 갖는 실리카겔상에서 정제하여 화합물 23-2를 수득하였다.

단계 C

THF 중 알코올 23-2 (1 당량)의 용액에 수지 결합 PPh₃ (2 당량)를 첨가한 후, 실온에서 10분간 교반하였다. 이후, 상기 반응물에 N-BOC 포스포네이트 (2 당량) 및 DIAD (2 당량)를 첨가하였다. 반응물을 40 ℃에서 30분간 가열하고, 냉각시키자마자 EtOAc로 희석하고, 셀라이트 플러그로 여과하고, 농축하고 역상 HPLC로 정제하여 23-3을 수득하였다.

단계 D

벤젠 중 20%의 HCl 중 아미드 23-3의 용액을 실온에서 교반하였다. 변환이 완결된 후, 반응물을 EtOAc로 희석하고 물로 세척하였다. 유기물을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 조 생성물을 0→100%의 EtOAc/헥산 구배 용리를 갖는 실리카겔상에서 정제하여 화합물 23-4를 수득하였다.

단계 E

THF 중 알코올 23-4 (1 당량)의 용액에 수지 결합 PPh₃ (2 당량)을 첨가한 후, 실온에서 10분간 교반하였다. 이후, 상기 반응물에 프탈아미드 (2 당량) 및 DIAD (2 당량)를 첨가하였다. 반응물을 30분간 40 ℃에서 가열하고, 냉각시키자마자 EtOAc로 희석하고, 셀라이트 플러그로 여과하고, 농축하고 역상 HPLC로 정제하였다. EtOH 중 생성된 프탈아미드 (1 당량)의 용액에 실온에서 히드라진 (25 당량)을 첨가하였다. 반응물을 60 ℃에서 가열하였다. 완결되자마자, 냉각시킨 반응물을 여과하고 농축하였다. 생성된 오일을 역상 HPLC로 정제하여 30을 수득하였다; MH+ 460.3.

실시예 24

(6R)-1-[(1R)-1-(1-벤질-4-페닐-1H-이미다졸-2-일)-2,2-디메틸프로필]-6-플루오로-1,4-디아제판-2-온 (31) 및 (32)

단계 A

염화메틸렌 중 실시예 25에서와 같이 제조된 아민 25-6의 용액에 0 ℃에서 트리에틸아민 (5 당량)을 첨가한 후, 클로로아세틸 클로라이드 (2.5 당량)를 첨가하였다. 반응이 완결될 때까지 반응물을 실온에서 교반하고, 상기 용액을 물로 켄칭한 후, 염화메틸렌으로 추출하였다. 합한 유기물을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 조 생성물을 0→100%의 EtOAc/헥산 구배 용리를 갖는 실리카겔상에서 정제하여 클로라이드 24-2를 수득하였다.

단계 B

DMSO 중 클로라이드 24-2 (1 당량)의 용액에 테트라졸 (10 당량) 및 NaOH (10 당량)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 16 시간 동안 교반하도록 둔 후, 상기 용액을 물로 켄칭하고 EtOAc로 추출하였다. 합한 유기물을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 이후, 조질의 물질을 염화메틸렌 중 50%의 TFA로 처리하고, 완결되자마자 농축하고 역상 HPLC로 정제하여 의도한 화합물 32를 수득하였다; MH+ 435.2.

다른 부분입체이성질체 31을 기타 플루오로-측쇄 부분입체이성질체인 24-1로부터 출발하여 유사한 방법으로 제조하였다; MH+ 435.2.

실시예 25

tert-부틸 (S)-3-((R)-1-(1-벤질-4-페닐-1H-이미다졸-2-일)-2,2-디메틸프로필아미노)-2-플루오로프로필카바메이트의 합성

단계 E: 환원성 아민화

실시예 1, 단계 D로부터의 페닐 이미다졸 1-5 (1 당량, 2.0 g)를 30 mL의 염화메틸렌 중 알데히드 (1.3 당량, 1.56 g) 및 나트륨 트리아세톡시보로히드라이드 (2 당량, 2.65 g)와 합하였다. 이후, 아세트산 (2 당량, 0.72 mL)을 합하고, 반응물을 질소 하에 밤새 실온에서 교반하였다. 반응물을 물, 포화 중탄산나트륨 그리고 포화 염화나트륨으로 워크업하였다. 유기층을 황산마그네슘으로 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 상기 물질을 컬럼 상에서 정제하여 생성물 25-1 (2.15 g)을 백색 고체로 수득하였다.

실시예 26

(R)-5-(아미노메틸)-3-((R)-1-(1-벤질-4-(2,5-디플루오로페닐)-1H-이미다졸-2-일)-2,2-디메틸프로필)옥사졸리딘-2-온 및

(S)-5-(아미노메틸)-3-((R)-1-(1-벤질-4-(2,5-디플루오로페닐)-1H-이미다졸-2-일)-2,2-디메틸프로필)옥사졸리딘-2-온의 합성

DMF (0.1 M) 중 벤질 2,3-디히드록시프로필카바메이트의 용액에 실온에서 TBDMSCl (2.2 당량) 및 이미다졸 (2.5 당량)을 첨가하였다. 20 시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 EtOAc로 워크업하고, 물과 염수로 세척하였다. 유기층을 분리하고, 건조시키고 농축하여 조질의 비스-실릴화 생성물을 수득하고, 이를 메탄올 (0.16 M)에 용해시킨 후 0 ℃에서 p-톨루엔술폰산 (0.1 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 1.5 시간 동안 동일한 온도에서 교반하였다. 포화 NaHCO₃ 수용액으로 켄칭한 후, 반응 혼합물을 EtOAc로 추출하고, 물과 염수로 세척하였다. 유기층을 분리하고, 건조시키고, 농축하고, 0→100%의 EtOAc/헥산 구배 용리를 갖는 실리카겔상에서 정제하여 순수한 벤질 2-(tert-부틸디메틸실릴옥시)-3-히드록시프로필카바메이트를 수득하였다.

디클로로메탄 (0.1 M) 중 벤질 2-(tert-부틸디메틸실릴옥시)-3-히드록시프로필카바메이트 (1.0 당량)의 용액에 0 ℃에서 피리딘 (5.0 당량) 및 데스-마틴 (Dess-Martin) 퍼요오디난^® (Periodinane^®)(1.5 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 3 시간 동안 교반하고, 5%의 NaHCO₃ 수용액 및 1.0 M의 수성 Na₂S₂O₃ 용액으로 켄칭하였다. 1 시간 동안 교반한 후, 유기층을 분리하고, 물과 염수로 세척하고, 건조시키고 농축하였다. 조질의 알데히드를 디클로로메탄 (0.2 M) 중 앞서 보고된 일반적인 방법에 따라 제조된 (R)-1-(1-벤질-4-(2,5-디플루오로페닐)-1H-이미다졸-2-일)-2,2-디메틸프로판-1-아민 (1.2 당량)의 용액에 실온에서 한 방울의 아세트산과 함께 첨가하였다. 0.5 시간 동안 교반한 후, 나트륨 트리아세톡시보로히드라이드 (1.5 당량)를 0 ℃에서 반응 혼합물에 첨가한 후, 1 시간 동안 실온으로 데웠다. 포화 NaHCO₃ 수용액으로 켄칭한 후, 반응 혼합물을 EtOAc로 워크업하고 물과 염수로 세척하였다. 유기층을 분리하고, 건조시키고 농축하였다. 조질의 부분입체이성질체 혼합물을 20%의 EtOAc/헥산 용리의 실리카겔상에서 분리하여 순수한 부분입체이성질체인 벤질 (S)-3-((R)-1-(1-벤질-4-(2,5-디플루오로페닐)-1H-이미다졸-2-일)-2,2-디메틸프로필아미노)-2-(tert-부틸디메틸실릴옥시)프로필카바메이트 및 벤질 (R)-3-((R)-1-(1-벤질-4-(2,5-디플루오로페닐)-1H-이미다졸-2-일)-2,2-디메틸프로필아미노)-2-(tert-부틸디메틸실릴옥시)프로필카바메이트를 수득하고, 여기서 산소 원자에 부착된 탄소에서의 입체 화학은 임의로 지정되었다 (TLC 상에서 (R,R) 부분입체이성질체가 (R,S) 이성질체보다 더 극성임).

THF (0.1 M) 중 적절한 TBDMS로 보호된 화합물 (1.0 당량)의 용액에 실온에서 TBAF (5 당량)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 20 시간 동안 교반하였다. 포화 NH₄Cl 수용액으로 켄칭한 후, 반응 혼합물을 EtOAc로 워크업하고, 물과 염수로 세척하였다. 유기층을 분리하고, 건조시키고 농축하였다. 조 생성물을 30→50%의 EtOAc/헥산 구배 용리의 실리카겔상에서 정제하여 순수한 알코올 (벤질 (S)-3-((R)-1-(1-벤질-4-(2,5-디플루오로페닐)-1H-이미다졸-2-일)-2,2-디메틸프로필아미노)-2-히드록시프로필카바메이트 및 벤질 (R)-3-((R)-1-(1-벤질-4-(2,5-디플루오로페닐)-1H-이미다졸-2-일)-2,2-디메틸프로필아미노)-2-히드록시프로필카바메이트)를 수득하였다.

디클로로메탄 (0.3 M) 중 적절한 알코올 (1.0 당량)의 용액에 트리포스겐 (1.5 당량) 및 트리에틸아민 (2.5 당량)을 실온에서 순차적으로 첨가하였다. 1 시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 포화 NaHCO₃ 수용액으로 켄칭하고, 디클로로메탄으로 워크업하였다. 유기층을 분리하고, 건조시키고 농축하였다. 조 생성물을 아세토니트릴 (0.1 M)에 용해시킨 후, 요오도트리메틸실란 (10 당량)을 첨가하였다. 1 시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 수성 Na₂S₂O₃ 용액으로 켄칭하고 EtOAc로 워크업하였다. 유기층을 분리하고, 건조시키고 농축하였다. 생성된 오일을 역상 HPLC로 정제하고 동결건조시켜 의도한 화합물을 TFA 염으로 수득하였다.

(R)-5-(아미노메틸)-3-((R)-1-(1-벤질-4-(2,5-디플루오로페닐)-1H-이미다졸-2-일)-2,2-디메틸프로필)옥사졸리딘-2-온, LCMS (m/z): 455.2 (MH⁺); LC R_t=3.66분

(S)-5-(아미노메틸)-3-((R)-1-(1-벤질-4-(2,5-디플루오로페닐)-1H-이미다졸 -2-일)-2,2-디메틸프로필)옥사졸리딘-2-온, LCMS (m/z): 455.1 (MH⁺); LC R_t=3.68분

실시예 27

KSP 활성 측정을 위한 분석

상기 실시예는 시험관내 KSP 활성 측정을 위한 대표적인 시험관내 분석을 제공한다. 소 뇌로부터 얻은 정제된 미세소관을 사이토스켈레톤 인크 (Cytoskeleton Inc.) (미국 콜로라도주 덴버 소재)로부터 구입하였다. 인간 KSP (Eg 5, KNSL1)의 모터 도메인을 클로닝하고, 발현시키고 균질성이 95%를 초과하도록 정제하였다. 바이오몰 그린 (Biomol Green)을 어피너티 리서치 프로덕츠 리미티드 (Affinity Research Products Ltd.) (영국 데본 엑서터 맷포드 코트 소재)로부터 구입하였다. 미세소관 및 KSP 모터 단백질 (즉, KSP 모터 도메인)을 분석 버퍼 (20 mM의 트리스-HCl (pH 7.5), 1 mM의 MgCl₂, 10 mM의 DTT 및 0.25 mg/mL의 BSA)에서 희석하여 최종 농도가 35 μg/mL의 미세소관 및 45 nM의 KSP가 되도록 하였다. 이후, 미세소관/KSP 혼합물을 37 ℃에서 10분간 전배양하여 KSP의 미세소관에의 결합을 촉진시켰다.

DMSO 중 1.25 μL의 억제제 또는 시험 화합물 (또는, 대조군의 경우 DMSO만 단독으로)을 포함하는 시험 플레이트 (384-웰 플레이트)의 웰 각각에 25 μL의 ATP 용액 (분석 버퍼 내에서 300 μM의 농도로 희석된 ATP) 및 상기 기술된 25 μL의 미세소관/KSP 용액을 첨가하였다. 플레이트를 실온에서 1 시간 동안 배양하였다. 배양 후, 65 μL의 바이오몰 그린 (무기 포스페이트의 배출을 검출하는 말라카이트 그린-기반 염료)을 각각의 웰에 첨가하였다. 플레이트를 추가로 5 내지 10분간 배양한 후, 630 nm에서의 흡광도를 빅터 (Victor) II 플레이트 판독기를 사용하여 측정하였다. 630 nm에서의 흡광도의 양은 샘플 내 KSP 활성의 양에 해당한다. 이후, 각각의 농도에서 630 nm에서의 흡광도 감소에 기초하여, 엑셀 (Excel)에 대한 XL피트 (XLFit) 또는 그래프패드 소프트웨어 인크 (GraphPad Software Inc.)의 프리즘 (Prism) 데이타 분석 소프트웨어를 이용한 비선형 회귀법에 의해 각각의 억제제 또는 시험 화합물의 IC₅₀을 측정하였다.

본 발명에서 의도한 화합물은 약 25 μM 미만의 생물학적 활성을 갖는 바람직한 실시양태, 약 1000 nM 미만의 생물학적 활성을 갖는 특히 바람직한 실시양태 및 약 100 nM 미만의 생물학적 활성을 갖는 가장 바람직한 실시양태의 실시예에서 기술된 분석에서 약 1 mM 미만의 IC₅₀으로 측정된 생물학적 활성을 갖는다.

실시예 28

KSP 억제제로 처리한 종양 세포주에서의 세포 증식의 억제

세포를 96-웰 플레이트의 웰 당 약 500 세포의 농도로 96-웰 플레이트에 평판 배양하고, 24 시간 동안 성장하도록 두었다. 이후, 상기 세포를 다양한 농도의 화합물로 72 시간 동안 처리하였다. 100 μL의 셀티터 글로 (CellTiter Glo)를 첨가하였다. 셀티터 글로는 시약 3-(4,5-디메틸티아졸-2-일)-5-(3-카르복시메톡시페닐)-2-(4-술포페닐)-2H-테트라졸륨 (MTS) (미국 특허 번호 5,185,450) (프로메가 (Promega) 제품 카탈로그 #G3580, 셀티터 96 수성 일 용액 세포 증식 분석 참조)을 사용하는 테트라졸륨-기반 분석이다. 이후, 상기 세포를 암소에서 30분간 배양하였다. 웰 당 세포 수와 상호 관련이 있는 발광량은 왈록 트리룩스 (Walloc Trilux) 플레이트 판독기를 사용하여 각각의 웰에 대해 측정하였다. DMSO (0.5%)만 수용하는 웰 내 생존 가능한 세포의 수는 0%의 억제 표지로 기능하는 반면, 세포가 없는 웰은 세포 성장의 100%의 억제로 기능한다. 50%의 성장 억제 (GI₅₀)를 일으키는 화합물의 농도는 72 시간의 연속적인 화합물 노출에서 로그-변환된 투여량 값 대 세포 카운트 (대조군의 퍼센트)의 투여량-반응 시그모이드 곡선으로부터 그래프로 결정된다.

상기 사용된 세포주는 하기와 같다.

세포 증식 분석은 상기 기술된 것과 같이 실시하였다.

암 세포주

Colo 205 - 결장 암종

RPMI 1640 + 10%의 FBS + 1%의 L-글루타민 + 1%의 P/S + 1%의 NaPyr. + 헤페스 (Hepes) + 4.5 g/L의 글루코스 + 1%의 NaBicarb.

MDA 435-유방암-고 met

EMEM + 10%의 FBS + 1%의 P/S + 1%의 L-글루타민 + 1%의 NEAA +

1%의 NaPyr. + 1%의 비타민

HCT-15 및 HCT116 -결장 암종

RPMI 1640 + 10%의 FBS + 1%의 L-글루타민 + 1%의 P/S

약물 내성 세포주

KB3.1- 결장 표피성 암종; 모 세포주

Iscove's + 10%의 FBS + 1%의 L-글루타민 + 1%의 P/S

KBV1 -p-당단백질 관련 다중-약물 내성 세포주

RPMI 1640 + 10%의 FBS + 1%의 L-글루타민 + 1%의 P/S +

0.2 ug/mL의 빈블라스틴 (Vinblastine)

KB85 - p-당단백질 관련 다중-약물 내성 세포주

DMEM + 10%의 FBS + 1%의 L-글루타민 +1%의 P/S +

10 ng/mL의 콜히친 (Colchicine)

본 발명의 바람직한 화합물은 약 25 μM 미만의 생물학적 활성을 갖는 일부 실시양태, 약 1000 nM 미만의 생물학적 활성을 갖는 기타 실시양태 및 약 100 nM 미만의 GI₅₀을 갖는 또다른 실시양태로 기술된 분석 프로토콜에서 약 1 mM 미만의 GI₅₀으로 측정된 생물학적 활성을 갖는다.

하기 표 2는 실시예 27 및 28에 기술된 분석에 따라 측정된, 표 1에 열거된 선택된 화합물의 활성을 보여준다. "+"는 명시된 분석에서 화합물이 1 μM를 초과하는 IC₅₀ 또는 GI₅₀을 갖는 것을 나타내고; "++"는 명시된 분석에서 화합물이 1 μM 이하, 100 nM 초과의 IC₅₀ 또는 GI₅₀을 갖는 것을 나타내고; "+++"는 명시된 분석에서 화합물이 100 nM 이하의 IC₅₀ 또는 GI₅₀을 갖는 것을 나타낸다.

실시예 29

집락형성 연질 한천 분석 프로토콜

인간 암 세포를 6-웰 플레이트에서 웰 당 3×10⁵ 세포의 밀도로 평판 배양하였다. 다음날, 특정 농도의 관심 화합물을 각각의 웰에 첨가하였다. 24 시간 및 48 시간 배양 후, 세포를 수확하고, 세척하고 카운트하였다. 멀티멕 (Multimek) 96 로봇을 사용하여 다음 단계를 실시하였다. 이후, 웰 당 500개의 생존가능한 세포를 웰의 바닥에 세포가 부착되는 것을 막기 위해서 폴리헤마 (PolyHema)로 코팅한 96-웰 플레이트에서 평판 배양하였다. 아가로스 (3%의 스톡)를 녹이고, 데운 배지에서 희석하고 최종 농도가 0.5%가 되도록 세포에 첨가하였다. 연질 한천이 굳어진 후, 플레이트를 37 ℃에서 6일간 배양하였다. 알라마 블루 (Alamar blue) 염료를 세포에 첨가하고, 플레이트를 추가로 6 시간 동안 배양하였다. 광학 밀도 변화를 테칸 (Tecan) 플레이트 판독기에서 측정하고, 광학 밀도 변화는 연질 한천에서 형성된 콜로니의 수와 관련이 있는 것으로 간주되었다. 암 세포는 한천에서 성장할 수 있으므로 광학 밀도의 증가를 보일 것이다. 감소된 광학 밀도의 판독은 암 세포가 억제되고 있다는 것을 의미한다. 본 발명의 화합물은 광학 밀도의 감소를 보일 것으로 예상되었다.

Claims

하기 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염, 에스테르 또는 전구약물.

<화학식 I>

식 중,

R¹은 알킬 및 치환된 알킬로 구성된 군으로부터 선택되고;

R²는 수소, 알킬 및 치환된 알킬로 구성된 군으로부터 선택되고;

L은

a) -O-;

b) -OCH₂-, -CH₂O-, -C(O)NR⁷-;

c) -CH₂OCH₂-, -CH₂NR⁷CH₂-, -CH₂CH₂O-, -C(O)NR⁷CH₂- 및 -CH₂CH₂NR⁷-로 구성된 군으로부터 선택되고;

R³ 및 R⁴는 할로, 알킬 및 치환된 알킬로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;

R⁵ 및 R⁶은 시아노, 알킬, 치환된 알킬, 알콕시, 치환된 알콕시, 할로 및 히드록시로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;

R⁷은 수소, 알킬 및 -SO₂알킬로 구성된 군으로부터 선택되고;

m은 0, 1, 2 또는 3이고;

n은 0, 1, 2 또는 3이고;

p는 0 또는 1이다.
제1항에 있어서, R¹ 및 R²가 알킬인 화합물.
제1항에 있어서, R¹이 알킬이고, R²가 수소인 화합물.
제3항에 있어서, R¹이 이소프로필, t-부틸 및 프로필로 구성된 군로부터 선택되는 화합물.
제1항에 있어서, R⁴가 치환된 알킬인 화합물.
제5항에 있어서, R⁴가 아미노, 치환된 아미노, 할로, 알콕시, 치환된 알콕시 및 히드록시로 구성된 군으로부터 선택되는 1 내지 5개의 치환기로 치환된 알킬인 화합물.
제1항에 있어서, R⁴가 할로, -CH₂NH₂, -(CH₂)₂NH₂, -(CH₂)₃NH₂ 및 -CH₂OH로 구성된 군으로부터 선택되는 화합물
제1항에 있어서, m이 0인 화합물.
제1항에 있어서, R⁶이 할로인 화합물.
제1항에 있어서, R⁶ 및 그것이 부착된 페닐 고리가 페닐, 3-브로모페닐, 3-클로로페닐, 4-시아노페닐, 2,5-디플루오로페닐, 3-플루오로페닐, 2-메톡시페닐, 3-메톡시페닐, 4-메톡시페닐, 4-메틸페닐, 2-트리플루오로메틸페닐 및 3-트리플루오로메틸페닐로 구성된 군으로부터 선택되는 화합물.
제1항에 있어서, L 및 그것이 연결된 원자가

로 구성된 군으로부터 선택되는 고리를 형성하는 화합물.
제1항에 있어서, 하기 화학식 Ia의 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염, 에스테르 또는 전구약물.

<화학식 Ia>
제1항에 있어서, 하기 화학식 Ib 내지 Id를 갖는 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염, 에스테르 또는 전구약물.

<화학식 Ib>

<화학식 Ic>

<화학식 Id>
제1항에 있어서, 하기 화학식 Ie 내지 Ii를 갖는 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염, 에스테르 또는 전구약물.

<화학식 Ie>

<화학식 If>

<화학식 Ig>

<화학식 Ih>

<화학식 Ii>
하기 화학식의 (S)-5-(아미노메틸)-3-((R)-1-(1-벤질-4-(2,5-디플루오로페닐)-1H-이미다졸-2-일)-2,2-디메틸프로필)옥사졸리딘-2-온인 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염, 에스테르 또는 전구약물.
하기 화학식의 (R)-5-(아미노메틸)-3-((R)-1-(1-벤질-4-(2,5-디플루오로페닐)-1H-이미다졸-2-일)-2,2-디메틸프로필)옥사졸리딘-2-온인 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염, 에스테르 또는 전구약물.
(5R)-5-(2-아미노에틸)-3-[(1R)-1-(1-벤질-4-페닐-1H-이미다졸-2-일)-2,2-디메틸프로필]-1,3-옥사졸리딘-2-온;

(5S)-5-(2-아미노에틸)-3-[(1R)-1-(1-벤질-4-페닐-1H-이미다졸-2-일)-2,2-디메틸프로필]-1,3-옥사졸리딘-2-온;

5-(아미노메틸)-3-{(1R)-1-[1-벤질-4-(3-클로로페닐)-1H-이미다졸-2-일]-2-메틸프로필}-1,3-옥사졸리딘-2-온;

(5S)-5-(아미노메틸)-3-[(1R)-1-(1-벤질-4-페닐-1H-이미다졸-2-일)-2,2-디메 틸프로필]-1,3-옥사지난-2-온;

(5R)-5-(아미노메틸)-3-[(1R)-1-(1-벤질-4-페닐-1H-이미다졸-2-일)-2,2-디메틸프로필]-1,3-옥사지난-2-온;

(6S)-6-(아미노메틸)-4-[(1R)-1-(1-벤질-4-페닐-1H-이미다졸-2-일)-2,2-디메틸프로필]모르폴린-3-온;

(6R)-6-(아미노메틸)-4-[(1R)-1-(1-벤질-4-페닐-1H-이미다졸-2-일)-2,2-디메틸프로필]모르폴린-3-온;

(6R)-6-(아미노메틸)-4-{(1R)-1-[1-벤질-4-(3-클로로페닐)-1H-이미다졸-2-일]-2-메틸프로필}모르폴린-3-온;

(6S)-6-(아미노메틸)-4-{(1R)-1-[1-벤질-4-(3-클로로페닐)-1H-이미다졸-2-일]-2-메틸프로필}모르폴린-3-온;

(6R)-6-(2-아미노에틸)-4-[(1R)-1-(1-벤질-4-페닐-1H-이미다졸-2-일)-2,2-디메틸프로필]모르폴린-3-온;

(6S)-6-(2-아미노에틸)-4-[(1R)-1-(1-벤질-4-페닐-1H-이미다졸-2-일)-2,2-디메틸프로필]모르폴린-3-온;

(6S)-6-(2-아미노에틸)-4-{(1R)-1-[1-벤질-4-(3-클로로페닐)-1H-이미다졸-2-일]-2-메틸프로필}모르폴린-3-온;

(6R)-6-(2-아미노에틸)-4-{(1R)-1-[1-벤질-4-(3-클로로페닐)-1H-이미다졸-2-일]-2-메틸프로필}모르폴린-3-온;

(2S,6R)-6-(아미노메틸)-4-{(1R)-1-[1-벤질-4-(3-플루오로페닐)-1H-이미다졸 -2-일]-2,2-디메틸프로필}-2-메틸모르폴린-3-온;

(2R,6R)-6-(아미노메틸)-4-{(1R)-1-[1-벤질-4-(3-플루오로페닐)-1H-이미다졸-2-일]-2,2-디메틸프로필}-2-메틸모르폴린-3-온;

(5R)-5-(아미노메틸)-1-[(1R)-1-(1-벤질-4-페닐-1H-이미다졸-2-일)-2,2-디메틸프로필]피페라진-2,3-디온;

(5S)-5-(아미노메틸)-1-[(1R)-1-(1-벤질-4-페닐-1H-이미다졸-2-일)-2,2-디메틸프로필]피페라진-2,3-디온;

(5R)-5-(아미노메틸)-1-[(1R)-1-(1-벤질-4-페닐-1H-이미다졸-2-일)-2,2-디메틸프로필]-4-메틸피페라진-2,3-디온;

(2S)-4-[(1R)-1-(1-벤질-4-페닐-1H-이미다졸-2-일)-2,2-디메틸프로필]-2-(히드록시메틸)-1,4-디아제판-5-온;

(2R)-2-(아미노메틸)-4-[(1R)-1-(1-벤질-4-페닐-1H-이미다졸-2-일)-2,2-디메틸프로필]-1,4-디아제판-5-온;

(2R)-2-(아미노메틸)-4-[(1R)-1-(1-벤질-4-페닐-1H-이미다졸-2-일)-2,2-디메틸프로필]-1-(메틸술포닐)-1,4-디아제판-5-온;

(2S)-2-(아미노메틸)-4-[(1R)-1-(1-벤질-4-페닐-1H-이미다졸-2-일)-2,2-디메틸프로필]-1,4-옥사제판-5-온;

(2R)-2-(아미노메틸)-4-[(1R)-1-(1-벤질-4-페닐-1H-이미다졸-2-일)-2,2-디메틸프로필]-1,4-옥사제판-5-온;

(6S)-6-(아미노메틸)-4-[(1R)-1-(1-벤질-4-페닐-1H-이미다졸-2-일)-2,2-디메 틸프로필]-1,4-옥사제판-3-온;

(6R)-6-(아미노메틸)-4-[(1R)-1-(1-벤질-4-페닐-1H-이미다졸-2-일)-2,2-디메틸프로필]-1,4-옥사제판-3-온;

(6R)-6-(아미노메틸)-4-{(1R)-1-[1-(3,5-디플루오로벤질)-4-(3-플루오로페닐)-1H-이미다졸-2-일]-2,2-디메틸프로필}-1,4-옥사제판-3-온;

(6R)-6-(아미노메틸)-4-{(1R)-1-[1-벤질-4-(3-플루오로페닐)-1H-이미다졸-2-일]-2,2-디메틸프로필}-1,4-옥사제판-3-온;

(6R)-6-(아미노메틸)-4-{(1R)-1-[1-(3-플루오로벤질)-4-(3-플루오로페닐)-1H-이미다졸-2-일]-2,2-디메틸프로필}-1,4-옥사제판-3-온;

(6S)-6-(아미노메틸)-4-{(1R)-1-[1-(3-플루오로벤질)-4-(3-플루오로페닐)-1H-이미다졸-2-일]-2,2-디메틸프로필}-1,4-옥사제판-3-온;

(6S)-6-(아미노메틸)-1-[(1R)-1-(1-벤질-4-페닐-1H-이미다졸-2-일)-2,2-디메틸프로필]-1,4-디아제판-2,3-디온;

(6R)-1-[(1R)-1-(1-벤질-4-페닐-1H-이미다졸-2-일)-2,2-디메틸프로필]-6-플루오로-1,4-디아제판-2-온; 또는

(6S)-1-[(1R)-1-(1-벤질-4-페닐-1H-이미다졸-2-일)-2,2-디메틸프로필]-6-플루오로-1,4-디아제판-2-온

인 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염, 에스테르 또는 전구약물.
치료적 유효량의 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항의 화합물 및 제약상 허용 가능한 담체를 포함하는 제약 조성물.
제18항에 있어서, 하나 이상의 추가의 암 치료제를 더 포함하는 조성물.
제19항에 있어서, 추가의 암 치료제가 이리노테칸, 토포테칸, 젬시타빈, 이마티닙, 트라스투주맙, 5-플루오로우라실, 류코보린, 카르보플라틴, 시스플라틴, 도세탁셀, 파클리탁셀, 테자시타빈, 시클로포스파미드, 빈카 알칼로이드, 안트라사이클린, 리툭시맙 및 트라스투주맙으로 구성된 군으로부터 선택되는 조성물.
치료적 유효량의 제18항의 조성물을 적어도 부분적으로라도 KSP에 의해 매개되는 장애의 치료가 필요한 포유류 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 포유류 환자에 있어서 상기 장애의 치료 방법.
제21항에 있어서, 상기 장애가 세포 증식성 질환인 방법.
제22항에 있어서, 상기 세포 증식성 질환이 암인 방법.
제23항에 있어서, 상기 암이 폐 및 기관지; 전립선; 유방; 췌장; 결장 및 직장; 갑상선; 위; 간 및 간내담관; 신장 및 신우; 방광; 자궁 체부; 자궁 경부; 난소; 다발성 골수종; 식도; 급성 골수성 백혈병; 만성 골수성 백혈병; 림프구성 백 혈병; 골수성 백혈병; 뇌; 구강 및 인두; 후두; 소장; 비-호지킨 림프종; 흑색종; 및 결장의 융모 선종으로 구성된 군으로부터 선택되는 방법.
제23항에 있어서, 하나의 추가의 암 치료제를 상기 포유류 환자에게 투여하는 것을 더 포함하는 방법.
제24항에 있어서, 추가의 암 치료제가 이리노테칸, 토포테칸, 젬시타빈, 이마티닙, 트라스투주맙, 5-플루오로우라실, 류코보린, 카르보플라틴, 시스플라틴, 도세탁셀, 파클리탁셀, 테자시타빈, 시클로포스파미드, 빈카 알칼로이드, 안트라사이클린, 리툭시맙 및 트라스투주맙으로 구성된 군으로부터 선택되는 방법.
효과적 억제량의 제1항의 화합물을 포유류 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 환자에서 KSP 키네신의 억제 방법.
KSP 키네신을 효과적 억제량의 제1항의 화합물과 접촉시키는 것을 포함하는, KSP 키네신의 활성의 억제 방법.
세포와 효과적 억제량의 제1항의 화합물을 접촉시키는 것을 포함하는, 상기 세포에서 KSP 키네신의 활성의 억제 방법.