KR20060128117A

KR20060128117A - 발효녹용추출물을 포함하는 조성물

Info

Publication number: KR20060128117A
Application number: KR1020050049303A
Authority: KR
Inventors: 김동현; 김현수; 박호재; 김재환; 정재성
Original assignee: 김현수
Priority date: 2005-06-09
Filing date: 2005-06-09
Publication date: 2006-12-14

Abstract

본 발명은 뛰어난 아미노산 함량, 장내유산균 증가 효과, 장 내용물의 효소 활성 증가 효과, 애버란트 크립트(Aberrant crypt) 생성 억제 효과 및 면역증강효과를 갖는 발효녹용추출물을 유효성분으로 함유하는 조성물에 관한 것으로서, 본 발명의 발효녹용추출물은 대장암 유도 모델 마우스에서 대장암화 표지자로 알려진 애버란트 크립트(Aberrant crypt)의 생성 억제 효과를 나타내고, 탄소청정시험에서 뛰어난 탄소 청정 활성을 갖으며, 복수암에 대한 효능 실험에서 생명연장효과를 나타내는바 면역증강, 장기능 강화와 암예방 및 치료를 위한 의약품과 건강기능식품에 유용하게 사용될 수 있다.

발효녹용, 장내유산균, 애버란트 크립트(Aberrant crypt), 항암활성, 면역증강

Description

발효녹용추출물을 포함하는 조성물{A composition comprising the fermented velvet antlers extract}

도 1은 녹용추출물 및 발효녹용추출물 투여가 마우스의 베타글루코시다제의 활성에 주는 영향을 나타낸 도이고,

도 2는 녹용추출물 및 발효녹용추출물 투여가 마우스의 베타 글루쿠로니다제의 활성에 주는 영향을 나타낸 도이며,

도 3은 녹용추출물 및 발효녹용추출물 투여가 마우스의 트립토판나제의 활성에 주는 영향을 나타낸 도이고,

도 4는 녹용추출물 및 발효녹용추출물 투여가 마우스의 체중증가에 주는 영향을 나타낸 도이며,

도 5는 녹용추출물 및 발효녹용추출물의 투여가 마우스의 장내유산균에 미치는 효과를 나타낸 도이다.

본 발명은 약리학적 활성 효과를 갖는 녹용발효추출물의 용도에 관한 것이다. 더욱 상세하게는, 본 발명은 녹용을 절단한 덩어리를 증류수에 넣어 멸균하여 만든 녹용배지에 바실러스(Bacillus) P-92균주를 이식하여 배양한 후 멸균하여 여과한 여액인 발효녹용추출물이 장내유산균을 증가시키고, 장 내용물의 효소 활성을 증가시키며, 애버란트 크립트(Aberrant crypt) 생성을 억제시키는 장기능 강화와 암예방 및 치료 효과를 갖는 조성물에 관한 것이다.

녹용(velvet antlers)은 숫사슴의 갓 자란, 골질화되지 않은 어린뿔을 채취하여 가공한 것으로, 매년 3월 중순경부터 떨어지는 골질화된 늙은 뿔인 녹각이나, 뿔이 돋아난 이듬해에 저절로 떨어진 뿔인 낙각과 구별하여 사용된다.

한편, 산지 및 사슴의 종류에 따라 마록, 매화록, 시베리아산 대록, 뉴질랜드산 직록 및 순록 등으로 구분되는 각종 녹용은 최근 들어 소아의 성장 발육촉진의 효과, 노화억제의 효과, 조혈기능의 효과, 심장기능 개선의 효과, 항근육피로의 효과, 항통증의 효과 등을 발하는 성분을 다량 함유하고 있는 것으로 알려지고 있다. 특히, 한방에서는 녹용을 오래전부터 최고의 보혈강장제로 여기고 있고, 대개는 얇게 저며 물에 넣은 후 장시간 다려서 복용하는 방법이 널리 이용되고 있으며, 때에 따라서는 삼계탕 등의 음식물에 부가적으로 첨가되고 있다.

녹용에는 인체에 유익한 물질들이 많이 함유되어 있다. 그 중에서도 지금까지 알려진 바로는 필수 아미노산을 포함한 16종의 아미노산, 지질, 당성분, 미량원소 및 그 밖에 성분들이 보고 되고 있다.

본 발명자들은 상기와 같은 점을 착안하여 발효시킨 녹용 추출물로부터 장내 유산균 증가효과, 장 내용물의 효소 활성 증가효과, 면역증강효과 및 항암활성을 조사함으로써 본 발명을 완성하였다.

따라서 본 발명의 목적은 뛰어난 아미노산 함량, 장내유산균 증가 효과, 장 내용물의 효소 활성 증가 효과, 애버란트 크립트(Aberrant crypt) 생성 억제 효과 및 면역증강효과를 갖는 발효녹용추출물을 유효성분으로 함유하는 면역증강, 장기능 강화와 암예방 및 치료를 위한 조성물을 제공함에 있다.

본 발명의 목적은 녹용의 발효추출물의 장내유산균 증가 효과, 장 내용물의 효소 활성 증가 효과, 암세포 표지자인 애버란트 크립트(Aberrant crypt) 생성 억제 효과 및 면역증강효과에 관한 것으로, 본 발명의 발효녹용 추출물을 수득하여 마우스에 투여한 후 장내유산균과 장 내용물의 효소활성측정, 대장암 모델의 마우스에서의 애버란트 크립트의 생성억제효과 측정 및 탄소청정시험을 수행하여 발효녹용추출물이 장내 유산균을 증가시키고, 장내 효소활성을 높이며, 애버란트 크립트의 생성억제효과를 갖고, 뛰어난 탄소 청정 효과를 나타내어 발효녹용추출물을 유효성분으로 함유하는 면역증강, 장기능 강화와 암예방 및 치료를 위한 조성물을 제공함에 있다.

상기 목적을 달성하기 위해 본 발명은 면역증강, 장기능 강화와 암예방 및 치료 효과를 갖는 발효녹용추출물을 유효성분으로 함유하는 약학조성물을 제공한다.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명의 발효녹용추출물은 녹용을 마쇄한 후, 마쇄한 시료의 중량의 약 10 내지 60배, 바람직하게는 약 30 내지 40배 분량의 증류수에 넣어 멸균하여 만든 녹용배지에 바실러스 P-92균주를 이식하여 3 내지 10일간, 바람직하게는 5 내지 7일간 배양한 후 멸균 및 여과함으로써 본 발명의 발효녹용추출물을 수득할 수 있다.

본 발명은 상기의 제조공정으로 얻어진 발효녹용추출물을 유효성분으로 함유하는 조성물을 제공한다.

상기와 같은 방법으로 얻어진 발효녹용추출물은 장내유산균 증가 효과, 장 내용물의 효소 활성 증가 효과, 암세포 표지자인 애버란트 크립트 생성 억제 효과 및 면역증강효과를 갖는 바, 면역증강, 장기능 강화와 암예방 및 치료효과를 나타냄을 확인할 수 있었다.

본 발명의 면역증강, 장기능 강화와 암예방 및 치료를 위한 약학조성물은, 조성물 총 중량에 대하여 상기 추출물을 0.1 내지 50 중량%로 포함한다.

본 발명의 추출물을 포함하는 약학조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 발효녹용추출물을 포함하는 약학조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구 형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 발효녹용추출물을 포함하는 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 추출액에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.

본 발명의 발효녹용추출물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나 바람직한 효과를 위해서, 본 발명의 추출물은 1일 0.0001 내지 100 mg/kg으로, 바람직하게는 0.001 내지 100 mg/kg으로 투여하는 것이 좋다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

본 발명의 발효녹용추출물은 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내(intracerebroventricular) 주사에 의해 투여될 수 있다.

본 발명은 면역증강, 장기능 강화와 암예방 및 치료의 효과를 나타내는 상기 발효녹용추출물 및 식품학적으로 허용 가능한 식품보조 첨가제를 포함하는 건강보조식품을 제공한다. 추출물을 첨가할 수 있는 식품으로는, 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강 기능성 식품류, 분말, 과립, 정제, 캡슐 또는 음료 등이 있다.

또한, 면역증강, 장기능 강화와 암예방 및 치료 효과를 목적으로 식품 또는 음료에 첨가될 수 있다. 이 때, 식품 또는 음료 중의 상기 추출물의 양은 전체 식품 중량의 0.01 내지 15 중량%로 가할 수 있으며, 건강 음료 조성물은 100 ㎖를 기준으로 0.02 내지 5 g, 바람직하게는 0.3 내지 1 g의 비율로 가할 수 있다.

본 발명의 건강 기능성 음료 조성물은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 발효녹용추출물을 함유하는 외에는 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ㎖당 일반적으로 약 1 내지 20g, 바람직하게는 약 5 내지 12g이다.

상기 외에 본 발명의 발효녹용추출물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 추출물은 천연 과일 주스 및 과일 주스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 발명의 추출물 100 중량부 당 0 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

이하, 본 발명을 하기 참고예, 실시예 및 실험예에 의해 상세히 설명한다.

단, 하기 참고예, 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실험예에 의해 한정되는 것은 아니다.

참고예 1. 실험동물의 준비

실험동물은 ICR계 웅성 마우스(15g)를 40마리를 4군으로 나누고, 1군은 생리식염수를 투여하고, 2 내지 4군은 DMH(20mg/kg)를 8주 동안 매주 투여하였다. 1군 및 2군은 분말사료를 80g(10마리당)을, 3군은 분말사료 80g에 녹용추출물 4ml를 넣어 잘 섞은 사료를, 4군은 분말사료 80g에 발효녹용 4ml를 넣어 잘 섞어 만든 사료를 매일 투여하였다. 물은 자유롭게 먹을 수 있도록 하였다.

실시예 1 . 녹용추출액 및 발효녹용추출액의 제조

1-1. 녹용추출액의 제조

뉴질랜드산 녹용을 분쇄기로 적당히 분쇄한 덩어리 15g을 중량의 30 내지 40배의 증류수에 넣어 20분간 가압멸균하고, 여과한 여액을 녹용추출액으로 사용하였다.

1-2. 발효녹용추출액의 제조

발효녹용추출액은 바실러스 P-92균주를 뉴질랜드산 녹용을 적당히 절단한 덩어리 15g을 중량의 30 내지 40배의 증류수에 넣어 멸균하여 만든 녹용배지에 이식하여 5 내지 7일간 배양한 후 멸균하여 여과한 여액을 발효녹용추출액으로 사용하였다.

실험예 1. 장 내용물의 효소활성 측정

2주간 녹용추출물을 투여한 군, 대조군, 2주간 발효녹용추출을 투여한 군의 마우스의 신선한 분변을 채취한 후, 생리식염수로 10배 희석하여 현탁시킨 후 상등액을 효소액으로 하여 효소활성을 측정하였다.

1-1. 베타글루코시다제(β-glucosidase) 활성 측정

2mM p-니트로페닐-β-D-글루코피라노시드 0.2ml, 0.1M 포스페이트 완충액 0.3ml 및 효소액 0.1ml를 넣은 혼합액을 20분간 배양한 후 0.25M NaOH 0.4ml를 넣어 반응을 정지시킨 후 원심분리하여 405nm에서 흡광도를 측정하였다.

그 결과 도 1에서 보여 지는 바와 같이 베타글루코시다제는 녹용추출물 투여군에서 115% 유도가 일어난 반면, 상기 실시예 1-1에서 제조된 발효녹용추출물 투여군의 경우는 대조군의 92%를 나타냈다.

1-2. 베타글루쿠로니다제(β-glucuronidase) 활성 측정

10mM p-니트로페닐-β-D-글루쿠로니드 20㎕, 0.1M 포스페이트 완충액 0.38㎖와 효소액 0.1㎖를 넣은 혼합액을 20분간 배양한 후 0.25M NaOH 0.4㎖를 넣어 반응을 정지시킨 후, 원심분리하여 405nm에서 흡광도를 측정하였다.

그 결과 도 2에서 보여 지는 바와 같이 베타글루쿠로니다제 효소의 경우 녹용추출물 투여군은 대조군에 비교해 약 193%의 유도가 일어난 반면, 본 발명의 실시예 1-1의 발효녹용추출물을 투여한 군에서는 약 151%를 나타냈다.

1-3. 트립토판나제(tryptophanase) 활성 측정

20mM 트립토판 0.2㎖, 트립토판나제 반응 혼합물(pyridoxal 5- phosphate 40㎍/㎖와 BSA 200㎍/㎖를 포함한 0.1M bicine 완충액, pH 7.5) 0.2㎖를 넣고 37℃에서 30분간 반응시킨 후 발색시약(p-dimethylaminobenzaldehyde 14.7g, 95% 에탄올 948㎖, c-H2SO4 52㎖)2㎖를 넣고 반응시킨 후 550nm에서 흡광도를 측정하였다.

그 결과 도 3에서 보여 지는 바와 같이 본 발명의 실시예 1-1의 발효녹용추출물을 투여한 군에서는 대조군과 비교해 약 139%의 유도를 나타내었으며, 녹용추출물을 투여한 군에서는 대조군의 약 148%를 나타냈다.

실험예 2. 장내 유산균의 증식효과 측정

대조군, 2주간 녹용추출물을 투여한 군, 2주간 발효녹용추출물을 투여한 군의 마우스의 대장의 장 내용물을 혐기성 희석용 배지에 현탁하고 적당히 희석한 후 GAM 한천배지와 BL 한천배지에 이식하여 37℃에서 2 내지 3일간 혐기적 상태에서 배양한 후 총균수와 유산균수를 측정하였다. 결과는 도 4에 나타낸 바와 같이 대조군의 마우스의 경우 총균수에 대한 유산균의 수는 약 16%정도인 반면, 녹용추출물을 투여한 경우는 26%정도였으며, 발효녹용추출물을 투여한 결과 총균수에 대해 약 37%의 유산균이 검출되었다.

실험예 3. 대장암에 대한 효능 측정

3-1. 애버란트 크립트(Aberrant crypt)의 측정

생리식염수 또는 DMH를 8주간 투여한 후 1 내지 4군 모두 5주간 일반사료를 먹이면서 사육하였다. 이후 마우스를 에테르로 마취하여 맹장부터 항문까지 절개하고, 여지에 부착한 후 10% 완충된 포르말린으로 24시간 고정한 후 0.2% 메틸렌 블루로 염색하여 각각을 횡행결장(transverse colon), 하행결장(descending colon), 직장(rectum)으로 나누고 광학현미경을 이용하여 애버란트 크립트(Aberrant crypt, 이하 AC라 명명함)와 ACF(Aberrant crypt foci)를 관찰하였다.

각 군의 마우스의 대장에 대하여 AC를 측정한 결과는 표 1에 나타내었다. 대조군에 비해 대장암 모델 동물군에서는 현저한 AC의 증가를 나타냈다. 그러나 발효녹용을 투여한 3군 및 녹용을 투여한 4군에서는 현저한 AC생성억제효과를 나타냈다. DMH를 투여한 모델동물에서 AC생성부위별 발생율을 보면 직장이 가장 높고, 그 다음이 하행결장, 횡행결장 순이었다. 그러나 녹용 또는 발효녹용을 투여한 경우 횡행결장보다는 직장에서의 발생율을 크게 억제하였다. 또한 AC와 대장암발생과 밀접한 관계가 있는 것으로 알려진 다섯 개 이상으로 구성된 AC생성억제는 발효녹용이 녹용투여군보다 우수했으며, 특히 하행결장에서의 발생을 크게 억제하였다.

그룹	ACF^*/콜론(colon)
	대조군			DMH^**군 발현률(%)			대조군			DMH^**군 발현률(%)
	R¹⁾	D²⁾	T³⁾	R¹⁾	D²⁾	T³⁾	R¹⁾	D²⁾	T³⁾	R¹⁾	D²⁾	T³⁾
1	0	9	0	0	25	0	0	0	0	0	0	0
2	30	43	28	90	70	60	3	3	3	27	27	27
3	82	2	18	9	36	45	1	0	3	9	0	45
4	2	12	2	18	27	18	0	2	1	0	27	9
^;aberrant crypt foci, ^*;1,2-dimethylhydrazine, ¹⁾;직장, ²⁾;하행결장, ³⁾;횡행결장

실험예 4. 아미노산 함량 측정

녹용, 발효녹용 및 35% 에탄올 팅크(tincture)에 대하여 아미노산의 양을 측정한 결과를 표 2에 나타내었으며 프롤린, 티로신, 페닐알라닌을 제외하고는 발효녹용의 경우가 훨씬 많은 아미노산 함량을 나타내었다.

아미노산	녹용	발효녹용	35%에탄올추출물
L-아스파르트산	0.18+0.01	1.64+0.02	0.03+0.05
L-트레오닌	0.06+0.00	0.02+0.00	0.32+0.01
L-세린	0.12+0.01	0.24+0.00	0.42+0.02
L-글루타민산	0.98+0.05	14.34+0.34	1.90+0.08
L-프롤린	1.50+0.03	N.D.^*	0.76+0.02
글리신	0.58+0.03	3.50+0.07	1.01+0.05
β-알라닌	0.51+0.03	0.82+0.02	1.34+0.05
L-시트틴	N.D.	0.23+0.01	N.D.
L-발린	0.06+0.01	0.05+0.02	0.32+0.20
L-메티오닌	N.D.	1.53+0.23	0.32+0.05
L-이소루이신	0.08+0.01	0.05+0.04	0.25+0.03
L-루이신	N.D.	0.28+0.02	0.72+0.05
L-티로신	0.04+0.02	N.D.	0.19+0.01
L-페닐알라닌	0.14+0.02	N.D.	0.21+0.01
L-히스티딘	0.06+0.01	0.41+0.01	0.13+0.01
L-리신	0.46+0.11	2.71+0.04	0.48+0.04
L-아르기닌	0.02+0.01	0.12+0.18	0.49+0.04
DL(+)-알로-δ-히드록시리신L-아르기닌	0.02+0.00	2.81+0.04	0.04+0.00
	4.81(51)	28.75(308)	9.32(100)
^*;검출되지 않음.

실험예 5. 면역관련 효능 측정

5-1.중성구에 대한 효과

녹용과 발효녹용추출물을 2주간 투여한 후 복강내에 카제인을 투여하여 18시간 경과 후 복강내 중성구의 동원능력에 대한 영향을 측정한 결과, 대조군(0.69× 107 세포)에 비교해서 중성구는 녹용추출물을 투여한 경우 288%(p < 0.05)증가하였으며, 발효녹용추출물을 투요한 경우는 341%(p < 0.05)증가를 보였다.

5-2. 탄소청정시험(carbon clearance)

탄소청정시험은 비오찌(Biozzi)와 와그너(Wagner)의 방법으로 측정하였다. 한군을 마우스 10마리로 하여 대조군, 녹용추출물 투여군, 발효녹용추출물 투여군으로 나누고 검체를 13일간 투여하고 투여 14일째에 각군의 마우스에게 탄소현탁액(pilot ink)을 0.1㎖/g의 비율로 꼬리 정맥으로 투여한 후, 10분, 15분 및 20분 후에 각각 헤파린을 처리한 모세관을 사용하여 안와정맥총으로부터 혈액 5㎕를 채혈하여 즉시 시험관에 넣고 증류수 1㎖에 넣고 용혈시킨 후 650nm에서 흡광도를 측정하였다. 측정된 흡광도의 log치를 구하여 회귀율(regression coefficient: R.C.=log O.D.1-log O.D.2/t1-t2)을 각각 계산한 후 그 상대회귀율(relative R.C.=시험군 R.C./대조군의 R.C.)을 구하였다. 결과는 표 3에 나타낸 바와 같이 녹용추출물을 투여한 결과 상대회귀율은 1.06으로 약간의 증강효과를 나타낸 반면에 발효녹용추출물을 투여한 경우 상대회귀율은 1.63으로서 탄소 청정 활성이 뛰어나므로 발효녹용추출물이 녹용추출물보다 면역증강작용이 우수한 것으로 나타났다.

실험그룹	상대회귀율
대조군	-
녹용	1.06± 0.06
발효녹용	1.63± 0.21

실험예 6. 체중증가에 대한 효과 실험

마우스에 녹용 및 발효녹용추출물을 투여했을 때 체중변화에 주는 영향을 조사한 결과, 도 5에 나타낸 바와 같이 마우스에 일반사료를 먹인 대조군의 경우 24일 후에 체중이 17.3g이 증가하였고, 발효녹용추출물을 투여한 경우에는 대조군에 비해 체중이 증가한 반면에 녹용추출물을 투여했을 경우에는 대조군보다 체중이 감소하는 경향이 있었다. 이러한 체중변화를 나타내는 이유는 녹용추출물을 투여한 군의 경우 설사를 유발하기 때문에 체중이 대조군에 비해 오히려 감소하지만 발효녹용추출물 투여군의 경우 설사를 일으키지 않으므로 체중의 증가를 나타낸다.

실험예 7. 복수암에 대한 효능 측정

사코마(sarcoma) 180을 마우스의 복강에 이식시킨 생쥐에 대하여 녹용 및 발효녹용추출물의 생명연장에 대한 효과를 측정하였다. 결과는 표 4에 나타낸 바와 같이 대조군에 비해 T/C%(추출물 처리군의 평균생존일수/ 대조군의 평균생존일수× 100)가 124.4%로 24.4%가 증가하였으며, 46일 후에 살아남은 마우스는 22%였다. 또한 발효녹용추출물 투여군은 대조군에 비해 T/C%가 139.2%나 증가하였으며, 46일 후에 살아남은 마우스도 33%였다.

실험그룹	실험동물(마리)	생존일±표준편차	T/C^*%	S.R^**
대조군	9	26.6±9.8	100.0	0
녹용추출물	9	33.1±10.4	124.4	22
발효녹용추출물	9	35.9±11.7^***	139.2	33
^;추출물 처리군의 평균생존일수/대조군의 평균생존일수×100, ^*;46일 후 생존율

실험예 8. 급성독성실험

6 주령의 특정병원체부재(specific pathogen-free, SPF) SD계 랫트를 사용하여 급성독성실험을 실시하였다. 각 그룹 당 2마리씩의 동물에 본 발명의 발효녹용추출물을 100 ㎎/㎏의 용량으로 1회 경구투여 하였다. 실험 물질 투여 후 동물의 폐사여부, 임상증상 및 체중변화를 관찰하고 혈액학적 검사와 혈액생화학적 검사를 실시하였으며, 부검하여 육안으로 강장기와 흉강 장기의 이상여부를 관찰하였다.

그 결과, 실험 물질을 투여한 모든 동물에서 특이할 만한 임상증상이나 폐사된 동물은 없었으며, 체중변화, 혈액검사, 혈액생화학 검사 및 부검 소견 등에서도 독성변화는 관찰되지 않았다. 이상의 결과, 본 발명의 추출물은 랫트에서 각각 100 ㎎/㎏까지도 독성변화를 나타내지 않았으며, 경구투여 최소치사량(LD₅₀)은 100 ㎎/㎏이상인 안전한 물질로 판단되었다.

본 발명의 녹용발효추출물을 함유하는 약학조성물의 제제예를 설명하나, 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.

제제예 1. 산제의 제조

발효녹용추출물 20 mg

유당 100 mg

탈크 10 mg

상기의 성분들을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조한다.

제제예 2. 정제의 제조

발효녹용추출물 10 mg

옥수수전분 100 mg

유당 100 mg

스테아린산 마그네슘 2 mg

상기의 성분들을 혼합한 후 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조한다.

제제예 3. 캅셀제의 제조

발효녹용추출물 10 mg

결정성 셀룰로오스 3 mg

락토오스 14.8 mg

마그네슘 스테아레이트 0.2 mg

통상의 캡슐제 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조한다.

제제예 4. 주사제의 제조

발효녹용추출물 10 mg

만니톨 180 mg

주사용 멸균 증류수 2974 mg

Na₂HPO₄·12H₂O 26 mg

통상의 주사제의 제조방법에 따라 1 앰플당(2 ㎖) 상기의 성분 함량으로 제조한다.

제제예 5. 액제의 제조

발효녹용추출물 20 mg

이성화당 10 g

만니톨 5 g

정제수 적량

통상의 액제의 제조방법에 따라 정제수에 각각의 성분을 가하여 용해시키고 레몬향을 적량 가한 다음 상기의 성분을 혼합한 다음 정제수를 가하여 전체를 정제수를 가하여 전체 100㎖로 조절한 후 갈색병에 충진하여 멸균시켜 액제를 제조한다.

제제예 6. 건강 식품의 제조

발효녹용추출물 1000 ㎎

비타민 혼합물 적량

비타민 A 아세테이트 70 ㎍

비타민 E 1.0 ㎎

비타민 B1 0.13 ㎎

비타민 B2 0.15 ㎎

비타민 B6 0.5 ㎎

비타민 B12 0.2 ㎍

비타민 C 10 ㎎

비오틴 10 ㎍

니코틴산아미드 1.7 ㎎

엽산 50 ㎍

판토텐산 칼슘 0.5 ㎎

무기질 혼합물 적량

황산제1철 1.75 ㎎

산화아연 0.82 ㎎

탄산마그네슘 25.3 ㎎

제1인산칼륨 15 ㎎

제2인산칼슘 55 ㎎

구연산칼륨 90 ㎎

탄산칼슘 100 ㎎

염화마그네슘 24.8 ㎎

상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.

제제예 7. 건강 음료의 제조

발효녹용추출물 100 ㎎

비타민 C 15 g

비타민 E(분말) 100 g

젖산철 19.75 g

산화아연 3.5 g

니코틴산아미드 3.5 g

비타민 A 0.2 g

비타민 B1 0.25 g

비타민 B2 0.3g

물 정량

통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간동안 85 ℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2 ℓ 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 건강음료 조성물 제조에 사용한다.

상기 조성비는 비교적 기호음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만 수요계층이나, 수요국가, 사용용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.

상기와 같이, 본 발명의 발효녹용추출물은 장내 유산균 증가 효과, 장내 효소활성 증가 효과, 애버란트 크립트의 생성억제효과 및 뛰어난 탄소 청정 효과를 나타내는 바, 면역증강, 장기능 강화와 암예방 및 치료를 위한 의약품 및 건강보조식품에 이용할 수 있다.

Claims

녹용 중량의 약10 내지 60배 분량의 증류수에 분쇄한 녹용을 넣어 멸균하여 만든 녹용배지에 바실러스 P-92균주를 이식하여 5 내지 7일간 배양한 후 멸균 및 여과하는 과정에 의해 수득되는 발효녹용추출물을 유효성분으로 함유하는 면역증강, 장기능 강화와 암예방 및 치료용 약학 조성물.
면역증강, 장기능 강화와 암예방 및 치료 효과를 갖는, 녹용 중량의 약10 내지 60배 분량의 증류수에 분쇄한 녹용을 넣어 멸균하여 만든 녹용배지에 바실러스 P-92균주를 이식하여 5 내지 7일간 배양한 후 멸균 및 여과하는 과정에 의해 수득되는 발효녹용추출물 및 식품학적으로 허용 가능한 식품보조 첨가제를 포함하는 건강보조식품.