KR20060046978A - Composition for protecting and improving viral diseases comprising chaga mushroom extracts - Google Patents
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Abstract
본 발명은 차가버섯 추출물을 유효성분으로 함유하는 바이러스 질환의 예방 및 개선을 위한 조성물에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는, 사람 면역결핍 바이러스(HIV), 헤르페스 심플렉스 바이러스(HSV), PMWS 바이러스, PRRS 바이러스, PED 바이러스, TGE 바이러스, 파보 바이러스 및 디스템퍼 바이러스에 대해 우수한 항바이러스 활성을 갖는 차가버섯 추출물을 포함하는 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a composition for the prevention and improvement of viral diseases containing chaga extract as an active ingredient, more specifically, human immunodeficiency virus (HIV), herpes simplex virus (HSV), PMWS virus, PRRS A composition comprising chaga extract having good antiviral activity against viruses, PED viruses, TGE viruses, parvoviruses and distemper viruses.
본 발명의 차가버섯 추출물은 천연물 유래의 물질로써 독성 및 부작용을 나타내지 않으면서도, 다양한 바이러스에 대해 탁월한 항바이러스 활성을 나타내므로, 이를 포함하는 조성물은 바이러스 질환의 예방 및 개선에 효과적이고 안전한 식품 또는 사료용 조성물로 유용하게 이용될 수 있다. The chaga extract of the present invention is a natural-derived material, and exhibits excellent antiviral activity against various viruses without showing toxicity and side effects, so that the composition comprising the same is effective and safe for the prevention and improvement of viral diseases for food or feed. It can be usefully used as a composition.
차가버섯, 항바이러스, HIV, HSVChaga, Antiviral, HIV, HSV
Description
도 1은 본 발명의 차가버섯 추출물의 추출 과정을 도시한 것이다.Figure 1 illustrates the extraction process of chaga extract of the present invention.
본 발명은 차가버섯 추출물을 유효성분으로 함유하는 바이러스 질환의 예방 및 개선을 위한 조성물에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는, 사람 면역결핍 바이러스(HIV), 헤르페스 심플렉스 바이러스(HSV), PMWS 바이러스, PRRS 바이러스, PED 바이러스, TGE 바이러스, 파보 바이러스 및 디스템퍼 바이러스에 대해 우수한 항바이러스 활성을 갖는 차가버섯 추출물을 포함하는 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a composition for the prevention and improvement of viral diseases containing chaga extract as an active ingredient, more specifically, human immunodeficiency virus (HIV), herpes simplex virus (HSV), PMWS virus, PRRS A composition comprising chaga extract having good antiviral activity against viruses, PED viruses, TGE viruses, parvoviruses and distemper viruses.
바이러스는 여러 가지 질환의 원인이 되며, 이 중 사람 면역결핍 바이러스(human immunodefficiency virus; 이하 'HIV'라 함)는 국제적인 과제로 대두되고 있는 인체의 후천성 면역결핍증(AIDS)를 유발하는 것으로 알려져 있다 (Barre, F. et al., Science, 220:868, 1983). AIDS는 세계적으로 확산되고 있는 면역 억제 질병으로, 치명적인 기회 감염(opportunistic infections)과 악성 종양(malignancies)을 유발한다. HIV는 크게 HIV-1과 HIV-2의 두 가지 형으로 분류되며, HIV-1은 다시 그룹 M과 그룹 O의 두 개의 그룹으로 분류된다. 그룹 M형이 전세계적으로 가장 많이 발견되며 그룹 O형은 주로 중앙 아프리카의 서부지역에 분포한다. HIV-2형은 서아프리카에서 주로 발견되었으나, 점차적으로 전세계로 확산되고 있다 (Charneau, P. et al., Virology, 205:247, 1994; Gould, K. et al., Lancet, 348:680, 1996). The virus causes various diseases, of which human immunodefficiency virus (HIV) is known to cause AIDS in the human body, which is emerging as an international challenge. Barre, F. et al., Science , 220: 868, 1983). AIDS is a spreading immunosuppressive disease that causes fatal opportunistic infections and malignancies. HIV is largely classified into two types, HIV-1 and HIV-2, and HIV-1 is further classified into two groups, group M and group O. Group M is the most common worldwide, and group O is mainly distributed in western Africa. HIV-2 is mainly found in West Africa, but is gradually spreading around the world (Charneau, P. et al., Virology , 205: 247, 1994; Gould, K. et al., Lancet , 348: 680, 1996).
한편, AIDS에 대한 효과적인 치료요법의 고안에 상당한 노력이 경주되고 있지만, 아직까지 AIDS에 대한 항바이러스 치료 약물은 존재하지 않는다. 이런 약물을 개발하기 위한 시도는 HIV 바이러스 생명주기의 몇몇 단계에 초점을 맞추고 있다. 숙주세포 단백질을 간섭하는 경우 유해한 부작용이 발생할 가능성이 있으므로, HIV 바이러스의 생명 주기를 간섭하기 위한 다양한 바이러스 표적이 제안되고 있는데, 일예로 HIV 바이러스에 대하여 길항활성을 보이는 2,3-디데옥시뉴클레오시드 유사체, 예를 들어 AZT(azidothymidine), ddI(2',3'-dideoxy inosine), ddC(2',3'-dideoxycytidine), d4T를 비롯한 다수의 역-전사효소-표적약물이 개발되고 있다 (Mitsuya, H. et al., Science, 249:1533, 1991). HIV-1 바이러스에 대한 신규한 치료 섭생에서 HIV 프로테아제 저해물질과 병용하는 아지도티미딘(AZT), 라미부딘(3TC), 디데옥시이노신(ddI), 디데옥시시토신(ddC)과 같은 역전사효소를 표적으로 하는 항-HIV 바이러스 복합 화합물은 AZT 단독에 비하여, 훨씬 향상된 효과를 보인 다는 것이 밝혀졌다. 그러나, 이들 약물의 혼합물을 장기적으로 사용할 경우에는, 골수에 독성을 유발할 가능성이 높으며, 장기간의 세포독성 요법은 살생 세포활성 및 억제인자, 주로 란테스(rantes), MIP-1α, MIP-1β의 방출에 의해 HIV 바이러스의 조절에 필수적인 CD8+ T세포를 억제하게 된다. 또한, 장기간의 항레트로바이러스 화학요법은 부분 또는 완전 저항성을 보유한 HIV 돌연변이를 발생시킬 가능성이 높다 (Blazevic, V. et al., AIDS Res., 11:1335, 1995; Cocchi, F. et al., Science, 270:1811, 1995).On the other hand, considerable efforts have been made to devise effective therapies for AIDS, but there are no antiviral therapeutic drugs for AIDS yet. Attempts to develop such drugs have focused on several stages of the HIV virus life cycle. Since harmful side effects may occur when interfering with host cell proteins, various viral targets have been proposed to interfere with the life cycle of the HIV virus. For example, 2,3-dideoxynucleosides showing antagonistic activity against the HIV virus are proposed. Numerous reverse-transcriptase-targeting agents have been developed, including seed analogs such as azidothymidine (AZT), ddI (2 ', 3'-dideoxy inosine), ddC (2', 3'-dideoxycytidine), d4T (Mitsuya, H. et al., Science , 249: 1533, 1991). Targeting reverse transcriptases such as azidomidine (AZT), lamivudine (3TC), dideoxyinosine (ddI), and dideoxycytosine (ddC) in combination with HIV protease inhibitors in novel treatment regimens for the HIV-1 virus It was found that the anti-HIV virus complex compound showed a much improved effect compared to AZT alone. However, long-term use of a mixture of these drugs is likely to cause toxicity to the bone marrow, and long-term cytotoxic therapies may be due to the action of biocidal and inhibitory factors, mainly rantes, MIP-1α and MIP-1β. Release inhibits CD8 + T cells, which are essential for the regulation of the HIV virus. In addition, long-term antiretroviral chemotherapy is likely to cause HIV mutations with partial or complete resistance (Blazevic, V. et al., AIDS Res ., 11: 1335, 1995; Cocchi, F. et al. , Science , 270: 1811, 1995).
사람에게 병원성을 나타내는 헤르페스 심플렉스 바이러스(herpes simplex virus; 이하 'HSV'라 함)는 헤르페스바이러스과의 알파 아군에 속하며, 크게 제1형과 제2형으로 구분되며, 제1형은 구강 및 얼굴 등에 주로 피진상태의 병변을 나타내고, 제2형은 성기 및 항문 등에 병을 일으키는데, 아주 약학 병변에서부터 치명적인 병변 현상까지 폭넓게 나타난다. 주요 특징적인 병변으로는 구내염, 치육염, 포진성 습진, 비균성 수막염, 헤르페스성 각결막염, 급성 궤양, 식도염, 원발성 비정형 폐렴 및 태아의 뇌염 등이다. HSV는 사람의 분비물과 이성간의 밀접한 접촉에 의한 전염 이외에 식생활에 필요한 가사도구 등의 간단한 오염으로부터도 쉽게 전염되며, 성인의 85% 이상이 체내에 잠복기 상태로 있어서 면역이 약한 태아와 신생아에게 쉽게 감염된다 (Dressman, G.R. et al., Nature, 283:591, 1980). 그러나, HSV에 대한 백신의 개발은 아직까지 미비한 실정이다.Herpes simplex virus (hereinafter referred to as 'HSV'), which is pathogenic to humans, belongs to the alpha subgroup of the herpes virus family, and is classified into
한편, PMWS는 이유자돈의 전신소모성증후군(post-weaning multisystemic wasting syndrome)으로, 주요 증상으로는 체중감소로 인한 식욕결핍, 전신쇠약, 호 흡곤란, 황달 등이며, 가끔씩 설사, 기침을, 때로는 중추신경계 장애를 나타내기도 하며 주로 전신 임파장기에 다발성 병변을 일으키는 것이 특징인 소모성 질병을 말한다 (Harding, J.C., Proc. West. Can. Assoc. Swine. Pract., 58:503, 1996). PMWS의 정확한 발병원인에 대해서는 아직 일부 논란이 있긴 하지만 PMWS 발생돈에서 공통적으로 돼지써코바이러스 2형(porcine circovirus type 2; PCV2)의 감염이 증명되어 왔기 때문에 PCV2가 PMWS의 1차적인 원인체로 인정되고 있으며, 최근에는 PMWS 이외에도 다양한 질병 증후군들, 즉 번식장애 질병, 돼지 피부염신증증후군(PDNS), 돼지호흡기질병복합감염증(PRDC), 증식성괴사성폐렴(PNP), 선천성진전증(congenital tremors) 등 다양한 질병과 PCV2가 연관성이 있는 것으로 보고되고 있다. On the other hand, PMWS is a post-weaning multisystemic wasting syndrome of main weaning pigs.The main symptoms are appetite deficiency, systemic weakness, dyspnea, jaundice due to weight loss, and sometimes diarrhea, cough, and sometimes the central nervous system It is a consumable disease that is disordered and is characterized primarily by the development of multiple lesions in the general lymphatic system (Harding, JC, Proc. West. Can. Assoc. Swine. Pract. , 58: 503, 1996). Although the exact cause of PMWS is still controversial, PCV2 is recognized as the primary cause of PMWS because the infection of porcine circovirus type 2 (PCV2) has been common in PMWS. Recently, in addition to PMWS, various disease syndromes such as reproductive disorders, swine dermatitis syndrome (PDNS), swine respiratory disease complex infection (PRDC), proliferative necrotic pneumonia (PNP), congenital tremors, etc. It has been reported that PCV2 is associated with disease.
돼지 생식기 및 호흡기 증후군(porcine reproductive and respiratory syndrome; PRRS)은 아르테리비리대(arteriviridae)과의 막이 있는 양성 가닥 RNA 바이러스(enveloped positive-stranded virus)에 의해서 유발된다 (Snijder, E.F. and Meulenberg, J.J.M., J. of General Virology, 79:961, 1998). PRRS 바이러스는 호흡, 성취, 물린 상처 또는 바늘에 의해서 감염되며, 점막, 폐 또는 국소부위의 대식세포(macrophage)에서 번식한다. 준임상적으로 상기 질병은 분해 또는 지속적으로 감염으로 귀착되며, 지속적으로 감염된 동물은 경구/인두의 체액, 혈액, 배설물, 소변 및 정액에서 바이러스를 방출한다. Porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) is caused by an enveloped positive-stranded virus with a membrane of arteririridae (Snijder, EF and Meulenberg, JJM, J. of General Virology , 79: 961, 1998). The PRRS virus is infected by breathing, achievement, bite wounds or needles, and multiplies in the macrophage of the mucous membranes, lungs or local areas. Subclinically the disease results in degradation or persistent infection, and the persistently infected animal releases the virus in the fluids, blood, feces, urine and semen of the oral / pharyngeal.
돼지 유행성 설사증(porcine ephidemic diarrhea; PED)의 원인체는 코로나바이러스에 속하는 돼지 유행성 설사 바이러스이며, 이 코로나바이러스는 TGE 바이러 스와는 항원적으로 전혀 관련성이 없는 코로나바이러스이다. 바이러스의 증식은 소장과 결장의 상피세포 및 장간막 림프절에서 이루어진다. PED 바이러스는 일부 TGE(transmissible gastroententis; 돼지전염성 위장염)와 복합감염되어 피해를 증가시키고 있으며, 일령에 관계없이 모돈 돼지에 감염되어 발병된다. 돼지전염성 위장염(TGE)의 병원체는 코로나바이러스에 속하는 TGE 바이러스이며 햇빛, 고온에 쉽게 사멸하고 포르말린, 가성소다, 요오드용액, 에테르 및 클로로포름에서 쉽게 불활화된다. TGE의 발생양상은 PED와 거의 유사하지만, 온도가 높은 계절에는 발생하지 않으며 주로 겨울철에 발생한다. The causative agent of porcine ephidemic diarrhea (PED) is the swine epidemic diarrhea virus belonging to the coronavirus, a coronavirus that is not antigenically related to the TGE virus. The virus propagates in epithelial cells of the small intestine and colon and mesenteric lymph nodes. The PED virus is combined with some transmissible gastroententis (TGE) to increase the damage, and is caused by sows of pigs regardless of age. The pathogen of porcine infectious gastroenteritis (TGE) is a TGE virus belonging to the coronavirus and is easily killed by sunlight, high temperature and is easily inactivated in formalin, caustic soda, iodine solution, ether and chloroform. The development of TGE is almost similar to that of PED, but it does not occur in hot seasons, but mainly in winter.
개 파보바이러스(carnine parvo virus; CPV)는 파보바이러스과(pravoviridae), 파보바이러스속(parvovirus)에 속하며 고양이 파보바이러스(feline parvovirus)의 일종에 속한다. 파보바이러스에 의한 주요증상으로는 경구감염 5일 후 중증이 되며 감수성 개가 바이러스에 노출될 경우, 개의 100%가 감염되고 약 75%가 불현성 감염, 25%가 치사율이 높은 임상증상을 갖는다. Canine parvovirus (CPV) belongs to the genus parvovirus (pravoviridae), parvovirus (parvovirus) and belongs to a kind of feline parvovirus (feline parvovirus). The main symptoms caused by parvovirus are severe after 5 days of oral infection. When susceptible dogs are exposed to the virus, 100% of the dogs are infected, about 75% of them are non-infectious, and 25% have high mortality.
또한, 개 디스템퍼바이러스(carnine distemper virus; CDV) 감염증은 개를 비롯한 육식동물에서 전염성이 매우 높은 급성 또는 아급성의 열성전염병이며, 전세계적으로 애완견에서 뿐만 아니라, 개과 동물인 개, 여우, 늑대, 너구리과 동물인 너구리, 팬다 등과 족제비과 동물인 족제비, 오소리, 스컹크, 흰족제비 등의 육식동물에 감염되어 높은 이환율과 폐사율을 나타내는 바이러스성 질병이다. 개 디스템퍼바이러스 감염증의 병원체는 디스템퍼바이러스로서 파라믹소바이러스과(paramyxoviridae)의 모르비리바이러스속(morbillivirus)에 속하며, 임상증상은 다 양하나 대개 호흡기, 소화기, 피부 및 신경 등 4가지 증상이 단독 또는 복합적으로 나타난다. 개 디스템퍼바이러스 감염증에 대한 치료법은 거의 없는 실정이며, 가끔 혈청요법으로 혈청제제가 이용되지만 사용시기를 놓치기 쉽기 때문에 실용성이 거의 없다. In addition, canine distemper virus (CDV) infection is a highly infectious acute or subacute recessive disease in predators, including dogs, and canine, dogs, foxes, wolves, Raccoon is a viral disease that shows high morbidity and mortality due to infection with predators such as raccoons, pandas and weasels, weasels, badgers, skunks and ferrets. The pathogen of canine distempervirus infection is a distemper virus, which belongs to the family of paramyxoviridae, morbillivirus, and has various clinical symptoms. appear. There are few treatments for canine distemper virus infection, and serum preparations are sometimes used as serum therapy, but they are not practical because they are easy to miss.
한편, 차가버섯은 자작나무류(Betula sp.), 특히 자작나무(Betula platyphylla var. japonica)에서 발생한다. 자작나무류에 검은 암 덩어리처럼 붙어 있다가 그 덩어리가 점차 커지면서 자작나무류가 점차 죽어가는 반활물 반사물 기생버섯이다. 차가버섯은 죽은 나무의 목질을 분해하여 영양공급원으로 삼는 타 약용버섯과 달리, 살아있는 자작나무에서 10~15년 동안 기생하면서, 풍부한 영양성분을 흡수하여 오랫동안 분해하여 저장해 왔으므로, 완벽한 영양성분을 가지고 있다. 차가버섯의 효능으로는 항종양(抗腫瘍) 활성, 혈당 강하작용, 활성산소 제거 작용, 혈압 강하, 콜레스테롤 저하, 정장 작용 및 동맥 경화의 개선 등이 있다.Chaga, on the other hand, occurs in Betula sp. , In particular in birch ( Betula platyphylla var. Japonica). It is a semi-reflective parasitic mushroom that is attached to a birch tree like a black rock mass, and the birch tree gradually dies as the mass grows larger. Chaga mushroom, unlike other medicinal mushrooms that break down the wood of the dead tree as a nutrient source, has lived in the birch for 10 to 15 years, absorbs the rich nutrients, and has been decomposed and stored for a long time. have. Chaga's efficacy includes anti-tumor activity, lowering blood sugar, removing free radicals, lowering blood pressure, lowering cholesterol, intestinal action, and improving atherosclerosis.
최근에는 여러 가지 부작용을 야기하는 화학약품과 달리, 수천년 동안 그 약효가 인정되어 왔으며, 독성 및 부작용이 적은 천연물로부터 활성성분을 얻으려는 연구가 활발히 진행되고 있다. 이러한 예로써, 한국특허출원 제10-2003-0011238호는 아프리카산 영지버섯 추출물의 B형 간염 바이러스(HBV) 및 사람 면역결핍 바이러스(HIV)에 대한 항바이러스 활성에 대하여 개시하고 있으며, 한국특허출원 제10-2003-0024419호는 백화사설초를 함유하는 HIV/AIDS 환자 치료용 조성물에 관하여 개시하고 있다. 또한, 미국특허 제5,178,865호는 황련, 천궁, 붓순나무, 대청, 단삼, 정공등, 세주오가피, 소, 목향 및 인동 등의 10가지 생약제의 항-HIV 활성에 대하여 개시하고 있으며, 미국특허 제5,989,556호는 야고, 새깃아재비근, 천리광, 호장근, 연교 및 여정실 등을 포함하는 바이러스 감염 치료용 조성물에 관하여 개시하고 있다. In recent years, unlike chemicals that cause various side effects, the drug has been recognized for thousands of years, and active research is being conducted to obtain active ingredients from natural products with low toxicity and side effects. As an example, Korean Patent Application No. 10-2003-0011238 discloses antiviral activity against hepatitis B virus (HBV) and human immunodeficiency virus (HIV) of African Ganoderma lucidum extract, and Korean patent application 10-2003-0024419 discloses a composition for treating HIV / AIDS patients containing chlorosis. In addition, U.S. Patent No. 5,178,865 discloses the anti-HIV activity of ten herbal medicines such as Huangyan, Cheongung, Isolum Tree, Daecheong, Dansam, Sukjeong, Sejugapi, Bovine, Mokyang, and Indong. No. discloses a composition for the treatment of viral infections, including jago, smuttweed, cheonnwanggwang, hojanggeun, duct bridge and trekking chamber.
그러나, 상기 문헌 어디에도 차가버섯 추출물의 항바이러스 활성에 대해서는 어떠한 교시나 개시된 바 없다.However, none of the literature discloses any teaching about the antiviral activity of chaga extract.
이에 본 발명자들은 무독성이면서 이상적인 효능을 가지고 있는 차가버섯의 사람 면역결핍 바이러스(HIV), 헤르페스 심플렉스 바이러스(HSV), PMWS 바이러스, PRRS 바이러스, PED 바이러스, TGE 바이러스, 파보 바이러스 및 디스템퍼 바이러스에 대한 신규한 항바이러스 효과를 확인하고, 본 발명을 완성하였다.Therefore, the inventors of the present invention are new to the non-toxic and ideal efficacy of chaga mushroom human immunodeficiency virus (HIV), herpes simplex virus (HSV), PMWS virus, PRRS virus, PED virus, TGE virus, parvovirus and distemper virus One antiviral effect was identified and the present invention was completed.
결국, 본 발명의 주된 목적은 항바이러스 활성을 갖는 차가버섯 추출물을 유효성분으로 함유하는 바이러스 질환의 예방 및 개선을 위한 식품 또는 사료용 조성물을 제공하는데 있다.
After all, the main object of the present invention is to provide a food or feed composition for the prevention and improvement of viral diseases containing chaga extract having antiviral activity as an active ingredient.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 항바이러스 활성을 갖는 차가버섯 추출물 및 식품학적으로 허용 가능한 식품보조 첨가제를 포함하는 바이러스 질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다.In order to achieve the above object, the present invention provides a food composition for the prevention or improvement of viral diseases, including chaga mushroom extract having antiviral activity and a food supplement acceptable food supplement.
본 발명은 또한, 상기의 차가버섯 추출물을 포함하는 바이러스 질환의 예방 또는 개선용 사료 조성물을 제공한다.The present invention also provides a feed composition for the prevention or improvement of viral diseases comprising the chaga extract.
본 발명에 있어서, 상기 추출물은 C1~C4의 저급알코올, 물 또는 이들의 혼합용매, 바람직하게는 50~99%의 에탄올에 가용한 추출물인 것을 특징으로 할 수 있다.In the present invention, the extract may be characterized in that the extract soluble in C 1 ~ C 4 lower alcohol, water or a mixed solvent thereof, preferably 50 to 99% ethanol.
본 발명에 있어서, 상기 추출물은 차가버섯 또는 이의 건조물에 C1~C4의 저급알코올을 가하고 실온에서 12~36시간 동안 환류추출한 다음, 진공여과 및 감압농축하여 수득되는 것을 특징으로 할 수 있다.In the present invention, the extract may be obtained by adding a lower alcohol of C 1 ~ C 4 to chaga or dried products thereof, and reflux extraction at room temperature for 12-36 hours, followed by vacuum filtration and concentration under reduced pressure.
본 발명에 있어서, 상기 바이러스는 사람 면역결핍 바이러스 1형(HIV-1), 사람 면역결핍 바이러스 2형(HIV-2), 헤르페스 심플렉스 바이러스 1형(HSV-1), 헤르페스 심플렉스 바이러스 2형(HSV-2), PMWS(post-weaning multisystemic wasting syndrome) 바이러스, PRRS(porcine reproductive and respiratory syndrome) 바이러스, PED(porcine ephidemic diarrhea) 바이러스, TGE(transmissible gastroententis) 바이러스, CP(carnine parvo) 바이러스 또는 CD(carnine distemper) 바이러스인 것을 특징으로 할 수 있다. In the present invention, the virus is human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1), human immunodeficiency virus type 2 (HIV-2), herpes simplex virus type 1 (HSV-1), herpes simplex virus type 2 (HSV-2), post-weaning multisystemic wasting syndrome (PMWS) virus, porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) virus, porcine ephidemic diarrhea (PED) virus, transmissible gastroententis (TGE) virus, carnine parvo (CP) virus, or CD (carnine distemper) can be characterized as a virus.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.
본 발명의 차가버섯 추출물은 하기와 같이 수득될 수 있다.Chaga mushroom extract of the present invention can be obtained as follows.
본 발명의 차가버섯을 구입하여 분쇄한 후, 차가버섯 시료 중량의 약 2~10배, 바람직하게는 약 3~6배에 달하는 부피의 물 및 메탄올, 에탄올, 부탄올 등과 같은 C1~C4의 저급알코올의 극성 용매 또는 이들의 약 1:0.1~1:10의 혼합비를 갖는 혼합용매로, 바람직하게는 50~99%의 에탄올로 실온에서 약 1일~5주간, 바람직하게는 1일~5일 동안 열수 추출, 냉침 추출, 환류 냉각 추출 또는 초음파 추출 등의 추출방법을 사용하여 추출한 후, 상층액을 모으고 감압농축하여 차가버섯 조추출물 및 잔류물을 수득할 수 있다. 또한, 상기 차가버섯 잔류물에 시료 중량의 약 2~10배, 바람직하게는 약 3~6배에 달하는 부피의 물 및 메탄올, 에탄올, 부탄올 등과 같은 C1~C4의 저급알코올의 극성 용매 또는 이들의 약 1:0.1~1:10의 혼합비를 갖는 혼합용매로, 바람직하게는 물로 50~100℃에서 약 12시간~5일, 바람직하게는 12시간~2일 동안 열수 추출, 냉침 추출, 환류 냉각 추출 또는 초음파 추출 등의 추출방법을 사용하여 추출한 후, 상층액으로 모으고 감압농축한 다음, 얻어진 수득물에 0.1~10배, 바람직하게는 1~10배의 에탄올을 첨가하여 원심분리한 후, 투석 및 감압하에 동결건조하여 차가버섯 추출물을 수득할 수 있다. After purchasing and pulverizing the chaga mushroom of the present invention, a volume of water and a C 1 ~ C 4 such as methanol, ethanol, butanol, etc., which are about 2 to 10 times, preferably about 3 to 6 times the weight of the chaga mushroom sample A polar solvent of lower alcohol or a mixed solvent having a mixing ratio of about 1: 0.1 to 1:10, preferably 50 to 99% of ethanol at room temperature for about 1 to 5 weeks, preferably 1 to 5 After extracting by using an extraction method such as hot water extraction, cold needle extraction, reflux cooling extraction or ultrasonic extraction for one day, the supernatant can be collected and concentrated under reduced pressure to obtain crude chaga extract and residue. In addition, a polar solvent of water and a C 1 to C 4 lower alcohol, such as methanol, ethanol, butanol, or the like, having a volume of about 2-10 times, preferably about 3-6 times, the sample weight in the chaga residue, or These are mixed solvents having a mixing ratio of about 1: 0.1 to 1:10, preferably hot water extraction, cold needle extraction and reflux for about 12 hours to 5 days, preferably 12 hours to 2 days at 50 to 100 ° C with water. After extraction using an extraction method such as cooling extraction or ultrasonic extraction, the mixture is collected into a supernatant, concentrated under reduced pressure, and then centrifuged by adding 0.1-10 times, preferably 1-10 times, ethanol to the obtained product. Lyophilized under dialysis and reduced pressure may yield chaga extract.
또한 상기 얻어진 차가버섯 추출물을 이용하여 추가로 통상의 분획 공정을 수행할 수도 있다 (Harborne, J.B., A guide to modern techniques of plant analysis, 3:6, 1998). In addition, the chaga extract obtained above may be further subjected to a conventional fractionation process (Harborne, JB, A guide to modern techniques of plant analysis, 3: 6, 1998).
상기와 같은 방법으로 얻어진 차가버섯 추출물의 항바이러스 효과를 검색한 결과, HIV, HSV, PMWS 바이러스, PRRS 바이러스, PED 바이러스, TGE 바이러스, 파보 바이러스 및 디스템퍼 바이러스에 대해 탁월한 항바이러스 활성을 나타내는 것을 확인할 수 있었다. 또한, 차가버섯은 오랫동안 생약으로 사용되어 오던 약재로 서 이로부터 추출된 본 발명의 추출물들 역시 독성 및 부작용 등의 문제가 없다. Searching for the antiviral effect of chaga extract obtained by the above method, it can be seen that it shows excellent antiviral activity against HIV, HSV, PMWS virus, PRRS virus, PED virus, TGE virus, parvovirus and distemper virus. there was. In addition, chaga mushroom has been used as a herbal medicine for a long time, the extracts of the present invention extracted therefrom also have no problems such as toxicity and side effects.
상기 본 발명의 항바이러스 활성을 갖는 차가버섯 추출물을 함유하는 조성물은 바이러스 질환의 예방 및 개선을 위한 식품 또는 사료용 조성물로 유용하게 이용될 수 있다.The composition containing chaga extract having the antiviral activity of the present invention can be usefully used as a food or feed composition for the prevention and improvement of viral diseases.
본 발명의 차가버섯 추출물은 바이러스 질환의 예방 및 개선 효과를 위하여 다양한 식품에 첨가될 수 있다. 상기 추출물을 첨가할 수 있는 식품으로는, 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강 기능성 식품류 등이 있다.Chaga extract of the present invention can be added to a variety of foods for the prevention and improvement effect of viral diseases. Examples of the food to which the extract can be added include various foods, beverages, gums, teas, vitamin complexes, and health functional foods.
본 발명의 건강 기능성 음료 조성물은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 추출물을 함유하는 외에는 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알코올이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100㎖당 일반적으로 약 1~20g, 바람직하게는 약 5~12g이다.The health functional beverage composition of the present invention is not particularly limited to other ingredients except for having the extract as an essential ingredient in the indicated ratio, and may contain various flavors or natural carbohydrates, etc. as additional ingredients, as in general beverages. Examples of the above-mentioned natural carbohydrates include monosaccharides such as glucose, fructose and the like; Disaccharides such as maltose, sucrose and the like; And conventional sugars such as polysaccharides such as dextrin, cyclodextrin, and sugar alcohols such as xylitol, sorbitol, and erythritol. As flavoring agents other than those described above, natural flavoring agents (tauumatin, stevia extract (e.g., Rebaudioside A, glycyrrhizin, etc.) and synthetic flavoring agents (saccharin, aspartame, etc.) can be advantageously used. The proportion of natural carbohydrates is generally about 1-20 g, preferably about 5-12 g per 100 ml of the composition of the present invention.
상기 외에 본 발명의 추출물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 추출물들은 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 발명의 추출물 100 중량부 당 0~20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.In addition to the above, the extract of the present invention includes various nutrients, vitamins, minerals (electrolytes), flavors such as synthetic flavors and natural flavors, coloring and neutralizing agents (such as cheese and chocolate), pectic acid and salts thereof, alginic acid and its Salts, organic acids, protective colloidal thickeners, pH adjusting agents, stabilizers, preservatives, glycerin, alcohols, carbonation agents used in carbonated beverages, and the like. In addition, the extracts of the present invention may contain flesh for the production of natural fruit juices and fruit juice beverages and vegetable beverages. These components can be used independently or in combination. The proportion of such additives is not so critical but is usually selected in the range of 0 to 20 parts by weight per 100 parts by weight of the extract of the present invention.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지는 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to Examples. These examples are only for illustrating the present invention, it will be apparent to those skilled in the art that the scope of the present invention is not to be construed as being limited by these examples.
실시예 1: 차가버섯 추출물의 제조 Example 1 Preparation of Chaga Extract
건조된 차가버섯을 구입하여 분쇄한 후, 차가버섯 분말에 95% 에탄올을 가한 다음, 실온에서 24시간 동안 환류추출한 후, 진공여과하여 상층액을 회수하였다. 이 과정을 3회 반복하여 상층액을 모은 후, 감압 농축하여 차가버섯 추출물 및 잔류물을 수득하였으며, 수득된 차가버섯 추출물은 "CHP7"로 명명하고 하기 실험에 사용하였다. After purchasing and grinding the dried chaga, 95% ethanol was added to the chaga powder, and then refluxed at room temperature for 24 hours, followed by vacuum filtration to recover the supernatant. This process was repeated three times to collect the supernatant, and then concentrated under reduced pressure to obtain chaga extract and residue. The chaga extract was named "CHP7" and used in the following experiment.
실시예 2: 차가버섯 추출물의 제조 Example 2: Preparation of Chaga Extract
상기 실시예 1에서 얻은 차가버섯 잔류물에 물을 가한 다음, 100℃에서 3시 간 동안 환류추출한 후, 진공여과하여 상층액을 회수하였다. 이 과정을 3회 반복하여 상층액을 모은 다음 여과하고, 얻어진 여과물에 4배의 95% 에탄올을 첨가하여 원심분리하였다. 얻어진 수득물은 물에 용해시켜 투석시킨 다음 감압하에 동결건조하여 차가버섯 추출물을 수득하였으며, 수득된 차가버섯 추출물은 "C2"로 명명하고 하기 실험에 사용하였다.Water was added to the chaga residue obtained in Example 1, followed by reflux extraction at 100 ° C. for 3 hours, and then the supernatant was recovered by vacuum filtration. This process was repeated three times to collect the supernatant and then filtered, and centrifuged by adding four times 95% ethanol to the filtrate obtained. The obtained product was dissolved in water, dialyzed and lyophilized under reduced pressure to obtain chaga extract. The chaga extract obtained was named "C2" and used in the following experiment.
실시예 3: 항-HIV(human immunodefficiency virus) 효과 Example 3: anti-HIV (human immunodefficiency virus) effect
상기 실시예 1 및 2에서 얻은 차가버섯 추출물의 항-HIV 효과를 알아보기 위하여 CPE 저해법을 이용하여 하기와 같이 실험하였다.In order to determine the anti-HIV effect of the chaga extract obtained in Examples 1 and 2 were tested as follows using the CPE inhibition method.
구체적으로, 차가버섯 추출물(CHP7 및 C2)은 10~40㎎/㎖로 100% DMSO에 녹인 다음, PBS 용액에 녹여 -20℃에서 보관하다가 실험당일에 배양액에 시험농도의 1배, 2배로 희석하여 사용하였으며, 웰속의 DMSO의 농도가 각각 0.5%, 1%가 넘지 않도록 하였다. 먼저, MT-4 세포를 원심분리 한 다음, 상등액은 제거하고 세포침전물에 바이러스를 100 CCID50(50% cell culture inhibitory dose)이 되도록 접종한 후, RPMI 1640/10%를 첨가하여 세포를 1×105cells/㎖가 되도록 희석하였으며, mock-infected는 바이러스 첨가없이 그대로 사용하였다. 두 배 희석된 약물이 담겨져 있는 플레이트에 웰당 100㎕의 세포희석액을 첨가하고, 37℃, CO2 배양기에서 5일 동안 배양한 다음, 현미경 관찰과 함께 MTT 검색법을 이용하여 살아남은 세포의 수를 세포 대조군(cell control)과 비교하여 약물의 항바이러스 효과와 독성을 측정하였 다. 즉, 바이러스가 접종되지 않은 세포가 약물에 더해지는 mock-infected 웰의 살아남은 세포수를 약물이 첨가되지 않은 세포 대조군 웰과 비교하여 50%의 세포를 죽도록 한 약물의 농도를 CC50(50% cytotoxic conentration)로 결정하여 약물의 독성을 조사하였으며, 바이러스에 감염된 세포의 50%를 살아남도록 한 약물의 농도를 EC50(50% effective concentration)로 결정하여 항바이러스 효과를 측정하였다. Specifically, chaga extract (CHP7 and C2) is dissolved in 100% DMSO at 10 ~ 40mg / ㎖, dissolved in PBS solution and stored at -20 ℃ and diluted 1 times, twice the test concentration in the culture on the day of the experiment The concentration of DMSO in the wells was 0.5% and 1%, respectively. First, centrifuge the MT-4 cells, remove the supernatant, inoculate the cell precipitate with 100 CCID 50 (50% cell culture inhibitory dose), and add RPMI 1640/10%. Diluted to 10 5 cells / ml, mock-infected was used as it is without the addition of virus. Add 100 μl of cell diluent per well to the plate containing the double diluted drug, incubate for 5 days in a CO 2 incubator at 37 ° C., and then measure the number of surviving cells using MTT screening with microscopy. The antiviral effect and toxicity of the drugs were measured in comparison with the cell control. In other words, the number of surviving cells in the mock-infected wells, in which the non-virus-inoculated cells were added to the drug, was compared to the CC 50 (50% cytotoxic conentration) compared to the cell control wells without the drug. To determine the toxicity of the drug was determined by), the concentration of the drug to survive 50% of virus-infected cells was determined by EC 50 (50% effective concentration) to measure the antiviral effect.
실험결과, 하기 표 1에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 차가버섯 추출물 CHP7은 HIV-1에 대해 높은 항바이러스 활성을 나타내었으며, C2도 HIV-1에 대해 유의적인 항바이러스 효과를 나타내는 것을 확인할 수 있었다.As a result, as shown in Table 1, chaga extract CHP7 of the present invention showed high antiviral activity against HIV-1, C2 also showed a significant antiviral effect against HIV-1. .
SI(selectivity index)=CC50/EC50 Selectivity index (SI) = CC 50 / EC 50
실시예 4: 항-HSV(herpes simplex virus) 효과 Example 4: anti-HSV (herpes simplex virus) effect
상기 실시예 1 및 2에서 얻은 차가버섯 추출물의 항-HSV 효과를 알아보기 위하여 CPE 저해법을 이용하여 하기와 같이 실험하였다.In order to determine the anti-HSV effect of the chaga extract obtained in Examples 1 and 2 were tested as follows using the CPE inhibition method.
즉, 차가버섯 추출물(CHP7 및 C2)은 10~40㎎/㎖로 100% DMSO에 녹인 다음, PBS 용액에 녹여 -20℃에서 보존하다가 실험당일에 배양액에 시험농도의 1배, 2배로 희석하여 사용하였으며, 웰속의 DMSO의 농도가 각각 0.5%, 1%가 넘지 않도록 하 였다. 먼저, 96웰 플레이트에 Vero 세포를 증식시킨 다음, DME/2% FBS 배양액으로 희석된 바이러스를 각 웰에 접종량이 100 CCID50이 되도록 100㎕씩 접종하고, 1시간 동안 37℃에서 흡착시킨 후 배양액을 제거하였다. 각 농도로 희석된 약물을 duplicate로 각 웰에 100㎕씩 첨가하고, 37℃, CO2 배양기에서 3일 동안 배양한 다음 MTT 검색법으로 50%의 세포를 살아남도록 한 약물의 농도를 EC50로 결정하였다. 또한, 약물의 독성을 평가하기 위하여 바이러스 접종시 바이러스가 첨가되지 않은 배양액을 세포에 첨가한 다음(mock-infected), 바이러스로 접종된 세포와 같은 방법으로 처리한 후, MTT 검색법을 이용하여 약물이 첨가된 각 mock-infected 웰의 살아남은 세포의 수를 약물이 첨가되지 않은 세포 대조군 웰과 비교하여 50%의 세포를 죽도록 한 약물의 농도를 CC50로 결정하였다. 표준약물로는 아시크로버(acyclovir, 삼천리제약) 및 시토신 2-d-아라비노퓨라노시드(cytosine 2-d-arabinofuranoside, 시그마사)를 사용하였다. That is, chaga extract (CHP7 and C2) is dissolved in 100% DMSO at 10 ~ 40mg / ㎖, and then dissolved in PBS solution and stored at -20 ℃ and diluted 1 times, twice the test concentration in the culture on the day of the experiment The concentration of DMSO in the wells was less than 0.5% and 1%, respectively. First, Vero cells were propagated in a 96 well plate, and then 100 µl of each virus was inoculated into each well to inoculate 100 CCID 50 of the virus diluted with DME / 2% FBS culture medium, and then adsorbed at 37 ° C. for 1 hour. Was removed. The drug was diluted with each concentration in duplicate to a drug concentration of 50% to survive the cells were added one by 100㎕ to each well, and cultured at 37 ℃, CO 2 incubator for three days and then MTT assay with EC 50 Decided. In addition, in order to evaluate the toxicity of the drug, the virus-free culture medium was added to the cells (mock-infected), treated with the same method as the cells inoculated with the virus, and then the drug was detected using the MTT detection method. The number of surviving cells in each of these added mock-infected wells was compared to the cell control wells in which no drug was added to determine the concentration of drug 50 CC to kill the cells. As standard drugs, acyclovir (cyclosine) and cytosine 2-d-arabinofuranoside (Sigma) were used.
실험결과, 하기 표 2에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 차가버섯 추출물 CHP7 및 C2는 헤르페스 바이러스 치료용으로 사용되고 있는 아시크로버에 비하여, 세포 독성없이 우수한 항 HSV-2 활성을 나타내었으며, HSV-1에 대하여도 유의적인 항바이러스 효과를 나타내는 것을 확인할 수 있었다. 또한, 시토신 2-d-아라비노퓨라노시드에 비하여는, 본 발명의 차가버섯 추출물은 HSV-1과 HSV-2 모두에서 월등히 향상된 항바이러스 효과를 나타내었다.As a result, as shown in Table 2, chaga extracts CHP7 and C2 of the present invention showed excellent anti-HSV-2 activity without cytotoxicity, compared to the acyclober used for the treatment of herpes virus, and to HSV-1 It was confirmed that also showed a significant antiviral effect. In addition, compared to cytosine 2-d-arabinofuranoside, chaga extract of the present invention showed significantly improved antiviral effect in both HSV-1 and HSV-2.
실시예 5: 항-PMWSV(post-weaning multisystemic wasting syndrome virus) 효과 Example 5: Post-weaning multisystemic wasting syndrome virus (PMWSV) effect
상기 실시예 1에서 얻은 차가버섯 추출물의 PMWS 바이러스 살균효과를 알아보기 위하여, PMWS의 유발 원인체인 돼지써코 바이러스 2형(porcine circovirus type 2; PCV2)의 세포주로 PK 15 세포주를 사용하였으며, 양성대조군 바이러스로는 PCV2 strain DR673(106.0TCID50/0.1㎖ by PCR)을 사용하였다.In order to examine the bactericidal effect of PMWS virus of chaga extract obtained in Example 1, PK 15 cell line was used as a cell line of porcine circovirus type 2 (PCV2), a causative agent of PMWS, and a positive control virus. PCV2 strain DR673 (10 6.0 TCID 50 /0.1ml by PCR) was used.
차가버섯 추출물(CHP7) 시료 1㎖와 바이러스액 1㎖를 가한 후, 살균된 경수를 첨가하여 8㎖가 되도록 한 다음 혼합하여 1:10배로 희석하였다. 상기 희석액 1㎖에 바이러스 액 1㎖를 가하고 살균된 경수를 첨가하여 8㎖가 되도록 한 다음 혼합하여 1:50배로 희석하였다. 상기와 같은 방법을 반복하여 500배, 800배, 1,000배, 1,200배, 1,500배, 2,000배의 희석액을 수득하였다. 수득된 희석액을 4℃에서 30분 동안 배양하였으며, PK-15세포가 제거된 PCV를 포함하는 3개의 96-웰 플레이트는 배지를 제거하고 PBS로 세척하였다. 96-웰 플레이트에 각각의 희석액(800, 1000, 1200, 1500, 2000배) 100㎕를 3회 반복하여 접종한 후, 37℃에서 1시간 동안 배양하였으며, 음성대조군은 배양배지 100㎕를 접종하였다. 배양 후 희석액을 제거하고 PBS로 3회 세척한 다음, 플레이트의 각 웰에 300mM D-글루코사민 50㎕를 접종하여 15분 동안 배양한 후, 바이러스 액을 제거하고 PBS로 3회 세척하였다. 바이러스 액이 제거된 플레이트의 각 웰에 배양 배지를 200㎕ 첨가하여 다시 37℃에서 48시간 동안 배양한 다음 IFA 방법을 이용하여 PMWS 바이러스에 대한 살균효과를 측정하였다. 즉, 각 웰로부터 배양배지를 제거한 후 -20℃에서 2시간 이상 에탄올을 이용하여 96-웰 플레이트를 고정한 다음, 에탄올을 제거하고 30분 동안 플레이트를 건조시켰다. 각 웰에 PCV 양성 혈청 100㎕를 첨가하여 37℃에서 2시간 동안 배양한 다음 혈청을 제거하고, PBS 100㎕로 3회 반복하여 세척한 후, 50㎕ 플루오레세인 컨쥬게이트된 항-돼지 IgG(fluorescein conjugated anti-swine IgG)를 각 웰에 첨가하여 37℃에서 1시간 동안 배양하였다. 각 웰을 다시 한번 세척한 다음, 형광현미경(10X objective lens)을 이용하여 플레이트를 관찰하였다. After adding 1 ml of chaga extract (CHP7) sample and 1 ml of virus solution, sterilized hard water was added to make 8 ml, and the mixture was diluted 1:10 times. 1 ml of the virus solution was added to 1 ml of the diluted solution, sterilized hard water was added to make 8 ml, and the mixture was diluted 1:50 times. The same procedure was repeated to obtain dilutions of 500, 800, 1,000, 1,200, 1,500, and 2,000 times. The resulting dilutions were incubated at 4 ° C. for 30 minutes, and three 96-well plates containing PCV from which PK-15 cells had been removed were removed from the medium and washed with PBS. 100 μl of each dilution (800, 1000, 1200, 1500, 2000 times) was inoculated three times in a 96-well plate, followed by incubation at 37 ° C. for 1 hour, and the negative control group was inoculated with 100 μl of culture medium. . After incubation, the dilutions were removed and washed three times with PBS. After incubating 50 μl of 300 mM D-glucosamine in each well of the plate, the culture solution was incubated for 15 minutes, and then the virus solution was removed and washed three times with PBS. 200 μl of the culture medium was added to each well of the plate from which the virus solution was removed, followed by further incubation for 48 hours at 37 ° C., and then the bactericidal effect against PMWS virus was measured using the IFA method. That is, after removing the culture medium from each well, a 96-well plate was fixed using ethanol for 2 hours or more at -20 ° C, and then ethanol was removed and the plate was dried for 30 minutes. 100 μl of PCV positive serum was added to each well, incubated for 2 hours at 37 ° C., and then serum was removed, washed three times with 100 μl of PBS, followed by 50 μl fluorescein conjugated anti-pig IgG ( Fluorescein conjugated anti-swine IgG) was added to each well and incubated at 37 ° C. for 1 hour. Each well was washed once again and the plates were observed using a fluorescence microscope (10X objective lens).
실험결과, 본 발명의 차가버섯 추출물은 1% 유기물 및 5% 유기물 조건에서 PCV2 바이러스를 1,000배 농도까지 유효하게 살균하는 것을 확인할 수 있었다.(표 3 참조).As a result, the chaga extract of the present invention was confirmed to effectively sterilize the PCV2 virus up to 1,000 times the concentration in 1% organic matter and 5% organic matter conditions (see Table 3).
실시예 6: 항바이러스 효과 Example 6: Antiviral Effect
상기 실시예 1에서 얻은 차가버섯 추출물의 PRRS, PED, TGE, CP 및 CD 바이러스 살균 효과를 측정하기 위하여, 하기 표 4의 세포주 및 공시바이러스를 사용하였다. 차가버섯 추출물(CHP7)의 바이러스 살균효과에 대한 실험은 바이러스의 소독제 효력시험지침(한국동물약품협회: http://kahpa.or.kr/index_k.htm, 별표 2의 규정)에 따라 하기와 같이 수행하였다.In order to measure the PRRS, PED, TGE, CP and CD virus bactericidal effect of the chaga extract obtained in Example 1, the cell line and the published virus of Table 4 were used. Experiments on the bactericidal effect of chaga extract (CHP7) according to the virus disinfectant efficacy test guideline (Korea Veterinary Drug Association: http://kahpa.or.kr/index_k.htm, prescribed in Annex 2) Was performed.
구체적으로, 각각의 바이러스에 대한 세포주를 10% FBS를 첨가한 MEM[minimum essential medium; L-글루타민, HEPES 완충액, 비필수아미노산, NaHCO3, 항생물질(antibiotics)]배지에서 계대배양하였으며, 계대배양 중 활력있는 바이러스를 사용하고, 바이러스의 증식이 최대인 시점에서 채독하여 사용직전까지 단시간 동안 얼음물에서 보관하였다. 실험시료와 바이러스를 반응시키기 전에 소독제 효력시험지침 상의 소독제의 희석 방법에 따라 400배, 500배, 600배, 700배, 800배, 900배, 1000배, 1200배로 희석하였다. 상기 증식된 4℃의 바이러스액 1.0㎖를 4℃의 1% 유기물 희석액 19.0㎖에 섞은 후에 1분 간격으로 혼합액 2.5㎖를 꺼내어 4℃에 있는 동량의 시료 희석액이 들어있는 시험관에 넣고 혼합한 다음, 동일온도에서 정확히 30분 동안 반응시켰으며, 반응 중간에 10분마다 혼합하여 주었다. 대조군은 시료 대신에 경수 또는 증류수를 사용하였다. 반응이 끝난 후, 즉시 1.0㎖를 꺼내어 37℃ 동량의 중화배지에 넣고 혼합한 다음, 중화반응액을 희석하고 적합한 양을 세포에 접종하여 바이러스 함량을 측정하였다. 바이러스의 증식여부를 판정하기 위해, 시료를 접종할 단층배양한 플레이트에서 배지를 제거하고 PBS로 세척한 다음, 플레이트의 각 웰에 희석된 시료를 100㎕씩 3회 반복으로 접종하였다. 이 때 음성대조군은 배지성분을 200㎕ 첨가하였으며, 플레이트는 37℃에서 72시간 동안 배양한 후, 세포변성효과(CPE)를 이용하여 바이러스의 증식여부를 관찰하였다. 바이러스 함유량은 Kaerber method를 이용하였으며, 병원체 대조군의 바이러스 함량에서 시료 처리군의 바이러스 함량을 대조로 하여 104 TCID50 불활화가 인정되는 희석농도를 유효농도로 하고, 최종 유효희석배수는 3회 반복 실험결과의 중위수로 하였다.Specifically, MEM [minimum essential medium; 10% FBS to the cell line for each virus; L-glutamine, HEPES buffer, non-essential amino acids, NaHCO 3 , antibiotics] media were used for subculture, using live virus during subculture, and harvesting at the point of maximum virus proliferation and shortly before use. And stored in ice water for a while. Before reacting the test sample with the virus, it was diluted 400 times, 500 times, 600 times, 700 times, 800 times, 900 times, 1000 times, and 1200 times according to the dilution method of the disinfectant in the disinfectant efficacy test guideline. 1.0 ml of the expanded 4 ° C. virus solution was mixed with 19.0 ml of 1% organic matter dilution at 4 ° C., 2.5 ml of the mixed solution was removed at 1 minute intervals, and placed in a test tube containing the same amount of sample dilution at 4 ° C., followed by mixing. The reaction was carried out for exactly 30 minutes at the same temperature, and was mixed every 10 minutes in the middle of the reaction. The control group used hard or distilled water instead of the sample. After the reaction was completed, 1.0 ml was immediately taken out, mixed in a neutralizing medium of 37 ° C. in the same amount, and then diluted. The neutralization reaction solution was diluted and the appropriate amount was inoculated into cells to measure the virus content. To determine the proliferation of the virus, the medium was removed from the monolayer plate to be inoculated with the sample, washed with PBS, and inoculated three times with 100 µl of the diluted sample in each well of the plate. At this time, the negative control group was added 200µl of the media component, the plate was incubated for 72 hours at 37 ℃, and observed the growth of the virus using the cytopathic effect (CPE). The Kaerber method was used for the virus content. The virus concentration of the pathogen control group was compared with the virus content of the sample treatment group, and the dilution concentration for which 10 4 TCID 50 inactivation was recognized was used as an effective concentration. The median of the results was taken.
실험결과, 하기 표 5에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 차가버섯 추출물(CHP7)은 5% 유기물 조건에서 PRRS 바이러스, PED 바이러스, TGE 바이러스 및 개 파보바이러스(CPV)를 1:700농도까지 유효하게 살균하는 것을 확인할 수 있었다. 또한, 개 디스템퍼바이러스(CDV)는 1:400농도까지 유효하게 살균하는 것을 확인할 수 있었다. As a result, as shown in Table 5, chaga extract (CHP7) of the present invention effectively sterilize PRRS virus, PED virus, TGE virus and canine parvovirus (CPV) to 1: 700 concentration under 5% organic matter conditions I could confirm that. In addition, it was confirmed that dog distemper virus (CDV) was effectively sterilized to a concentration of 1: 400.
이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.Having described the specific part of the present invention in detail, it is obvious to those skilled in the art that such a specific description is only a preferred embodiment, thereby not limiting the scope of the present invention. something to do. Thus, the substantial scope of the present invention will be defined by the appended claims and their equivalents.
이상에서 상세히 설명한 바와 같이, 본 발명의 차가버섯 추출물은 천연물 유래의 물질로써 독성 및 부작용을 나타내지 않으면서도, 다양한 바이러스에 대해 탁월한 항바이러스 활성을 나타내므로, 이를 포함하는 조성물은 바이러스 질환의 예방 및 개선에 효과적이고 안전한 식품 또는 사료용 조성물로 유용하게 이용될 수 있다. As described in detail above, the chaga extract of the present invention is a substance derived from natural products, and exhibits excellent antiviral activity against various viruses without showing toxicity and side effects, and the composition comprising the same prevents and improves viral diseases. It can be usefully used as an effective and safe food or feed composition.
Claims (8)
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KR1020040092536A KR20060046978A (en) | 2004-11-12 | 2004-11-12 | Composition for protecting and improving viral diseases comprising chaga mushroom extracts |
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Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR100721703B1 (en) * | 2006-06-29 | 2007-05-25 | 주식회사 알앤엘바이오 | Antiviral composition comprising alnus japonic extracts |
KR20170089602A (en) * | 2016-01-27 | 2017-08-04 | 이문연 | Composition for preventing and improving of ruminants |
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2004
- 2004-11-12 KR KR1020040092536A patent/KR20060046978A/en not_active Application Discontinuation
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