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KR20030074690A - 건조에 의한 피부 상해의 억제제 또는 회복제 및 이들의평가방법 - Google Patents

건조에 의한 피부 상해의 억제제 또는 회복제 및 이들의평가방법 Download PDF

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KR20030074690A
KR20030074690A KR10-2003-7008784A KR20037008784A KR20030074690A KR 20030074690 A KR20030074690 A KR 20030074690A KR 20037008784 A KR20037008784 A KR 20037008784A KR 20030074690 A KR20030074690 A KR 20030074690A
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KR10-2003-7008784A
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가따기리찌까
히라오데쯔지
후지따히로시
고가노부요시
Original Assignee
가부시키가이샤 시세이도
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Publication date
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Abstract

기상 노출에 의한 배양 인간 케라티노사이트의 필라그린 유전자 발현의 저하를 방지할 수 있는 물질, 예컨대 베타인, 폴리올, 생약류 또는 항산화 작용을 갖는 물질을 유효성분으로 함유하여 이루어진 피부 외용제가 제공된다.

Description

건조에 의한 피부 상해의 억제제 또는 회복제 및 이들의 평가방법 {AGENTS FOR INHIBITING OR RESTORING SKIN DAMAGE CAUSED BY DRYING AND METHOD OF EVALUATING THE SAME}
각질층 수분량 유지에 천연보습인자(NMF)가 중요한 기능을 한다(Blank I.H. J.I. Dermatol., 18, 433(1952), Blank I.H. J.I. Dermatol., 21, 259(1953)). NMF의 주성분인 아미노산은 케라토히알린(keratohyalin) 과립에서 유래되는 필라그린(fillaggrin) 단백질의 분해에 의해 생산되는 것으로 보고되어 있다(Scott I.R. et al., Biochem Biophys. Acta., 719, 110-117(1982), Horii I. et al., J. Dermatol., 10, 25-33(1983)). 필라그린은 317개의 아미노산으로 이루어진 단백질이다. NMF의 주성분인 아미노산이 필라그린에서 유래되는 것으로 밝혀진 이후, 건조피부를 띠는 병태와 필라그린의 관련성에 대한 연구가 진행되고 있다. 최근, 노인성 건조증, 아토피성 질환 등과 같은 건조피부에서 각질층 내의 아미노산이 감소되는 것(Horii I. et al., Br. J. Dermatol., 121, 587-592(1989),Tanaka M. et al., Br. J. Dermatol., 139, 618-621(1998)) 및 필라그린 발현이 감소되는 것(Tezuka T. et al., Dermatology, 188, 21-24(1994), Seguchi T, et al., Arch. Dermatol. Res. 288, 442-446(1996))이 밝혀지고 있다. 또한, 건조 환경에 의해 피부 거침 등의 피부 트러블을 발생시키는 것은 잘 알려져 있다.
이와 같은 배경 때문인지 FR2 777 185-A1에는, 보수기능 조절에 유리하게 작용하기 위한 필라그린 합성을 자극하는 물질을 다른 활성물질과 조합한 주름 처치용 조성물이 제안되어 있다. 그러나, 필라그린 합성을 자극하는 물질이 구체적으로 어떠한 물질인지에 대해서는 기재되어 있지 않다. 또, 일본 공개특허공보 2000-26272호에는, 백색 루핀[또는 화이트 루핀(Lupinus albus)] 종자의 분말에서 유래되는 단백질 분해처리물이 인간 케라티노사이트의 필라그린의 mRNA를 증가시켜 각질층의 두께를 증가시키는 작용이 있다는 취지가 기재되어 있다. 또한, WO99/47117에는, 비타민B3 화합물을 함유하는 조성물이 보습제로 작용하고 그리고 필라그린, 케라틴 및 인보클린에서 선택된 피부 단백질 수준을 증가시켜 각질층으로의 수분 흡착 또는 흡수기능을 높이는 것으로 기재되어 있다.
본 발명은 건조에 의한 피부 상해(또는 피부 거침)의 억제 또는 회복을 위한 화장품 또는 피부과용 조제제, 그리고 그와 같은 조제제에 함유되는 물질의 평가방법에 관한 것이다.
도 1은 배양 인간 케라티노사이트의 건조(기상 노출)에 의한 필라그린 단백질 수준의 상대적인 시간 경과에 따른 변화를 나타내는 그래프이다. 식 행 n=4∼5에 평균±SEM 값으로 표시되어 있다. 또, **는 p＜0.01을 의미한다.
도 2는 배양 인간 케라티노사이트의 건조(기상 노출)에 의한 필라그린 유전자의 시간 경과에 따른 발현 수준의 변화를 나타내는 그래프이다. 식 행 n=4∼6에 평균±SEM 값으로 표시되어 있다. 또, **는 p＜0.01을, *는 p＜0.05를 의미한다.
도 3은 배양 인간 케라티노사이트의 건조(기상 노출)에 의한 필라그린 단백질 수준의 저하를 억제하는 글리세린의 효과를 나타내는 그래프이다. 쌍으로 되어 있는 막대의 우측이 10% 글리세린 존재 하에서의 배양예를 나타낸다(좌측은 대조임). 식 행 n=3∼6에 평균±SEM 값으로 표시되어 있다. 또, **는 p＜0.01을, *는 p＜0.05를 의미한다.
도 4는 배양 인간 케라티노사이트의 건조에 의한 필라그린 유전자 발현 저하에 대한 글리세린 및 트리메틸글리신의 효과를 나타내는 그래프이다. 식 행 n=3에 평균±SEM 값으로 표시되어 있다. 또, **는 p＜0.01이다.
도 5는 약제로서 생약을 사용하는 것 이외에는, 도 4와 동일한 의미를 갖는 그래프이다. 한편, 각 약제 농도는 건조 잔분 농도 0.0025%이다. 또, n=3이고, *는 p＜0.05, **는 p＜0.01, ***는 p＜0.001을 의미한다.
도 6은 약제로서 아스코르브산 및 글루타치온을 각각 1mM 농도로 사용한 것 이외에는, 도 4와 동일한 의미를 갖는 그래프이다. 또, ***는 p＜0.001이고, **는 p＜0.01을 의미한다.
도 7은 약제로서 하이포타우린을 사용한 것 이외에는, 도 4와 동일한 의미를 갖는 그래프이다. *는 p＜0.05를 의미한다.
발명의 개시
상기 기술한 바와 같이 종래부터 필라그린의 생산량을 상승시켜 각질층의 두께를 증가시키거나 또는 각질층으로의 수분 흡수기능을 높이는 물질이 제안되었다. 그러나, 필라그린 생산에 관여하며 또한 건강한 피부 상태를 유지시킨다는 보다 광범위한 관점에서 유효성이 확인되는 물질 또는 화합물의 제공은 여전히 요구될 것이다.
본 발명자들은 인간 케라티노사이트에서 건조와 각질층 수분량에 관여하는 인자에 대해서 검토한 결과, 필라그린 단백질 수준과 이 유전자 발현이 건조에 의해 저하됨을 발견하였다.
또한, 임의의 일정한 배양 인간 케라티노사이트를 기상 노출한 경우에, 필라그린 유전자 발현량이 유의하게 저하되고, 이 현상이 상기 건조에 의한 피부 상해와 상관성을 갖고 있음을 발견하였다. 그리고, 이 배양 인간 케라티노사이트를 사용하는 배양계에서, 기상 노출에 의한 필라그린 유전자 발현량의 저하를 유의하게 억제할 수 있는 물질이, 상기 건조에 의한 피부 상해를 억제 내지는 회복시킬 수 있음을 발견하였다.
본 발명은 이러한 지견에 의거한 것이다.
따라서, 본 발명에 따르면, 배양 인간 케라티노사이트의 기상 노출에 의한 필라그린 유전자 발현능의 저하를 유의하게 억제할 수 있는 물질을 인간 피부의 각질층의 배리어기능의 저하를 억제하는 데에 충분한 양, 그리고 화장품 및/또는 피부과용 제제에서의 사용이 허용되는 기초제 또는 첨가제를 함유하여 이루어진 피부외용제가 제공된다.
본 발명의 바람직한 태양에서는 상기 필라그린 유전자 발현능의 저하를 유의하게 억제할 수 있는 물질이 베타인 화합물 및 이들 유도체, 폴리올 및 이들 유도체, 생약, 그리고 항산화 작용을 갖는 물질로 이루어진 군에서 선택된 1 종류 또는 2 종류 이상인 피부외용제가 제공된다.
또, 본 발명은 배양 인간 케라티노사이트의 기상 노출에 의한 필라그린 유전자 발현능의 저하를 유의하게 억제할 수 있는 물질인, 인간 피부의 각질층의 배리어기능 및 보습기능의 저하를 억제할 수 있는 피부외용제의 조제를 위한 사용에 관한 것이도 하다.
게다가, 본 발명은 베타인 화합물 및 이들 유도체, 폴리올 및 이들 유도체, 생약, 그리고 항산화 작용을 갖는 물질로 이루어진 군에서 선택된 1 종류 또는 2 종류 이상을 함유하는 조성물을 인간 피부에 도포하는 단계를 포함하여 이루어진 건조에 의한 피부 상해의 억제 또는 회복방법에 관한 것이도 하다.
또, 다른 태양의 본 발명에 따르면, 화합물 등이 건조에 의한 피부 상해를 방지할 수 있는지의 여부를 평가하기 위한 방법이 제공된다. 이 평가방법은
(A) 배양 인간 케라티노사이트를 준비하고,
(B) 피험물의 존재 하에서 이 배양 인간 케라티노사이트를 기상 노출한 후, 이 케라티노사이트의 필라그린 유전자의 발현능을 검출하고, 그리고
(C) 검출된 필라그린 유전자의 발현능을 대조하는 그것과 비교하여 발현능의 많고 적음을 이 피부 상해의 억제기능의 지표로 하는
것을 특징으로 하는 것이다.
발명을 실시하기 위한 최선의 형태
본 발명에서 말하는 「배양 인간 케라티노사이트의 기상 노출에 의한 필라그린 유전자 발현능의 저하를 유의하게 억제할 수 있다」는 것은, 후술하는 평가방법으로 평가했을 때에 대조(피험물질 포함하지 않음) 계에서의 상기 발현능의 저하에비해 피험물질 함유계에서의 상기 발현능의 저하를 통계적으로 유의하게 억제할 수 있음을 의미한다.
또, 본 발명에서 말하는 「피부 상해」란 피부 거침이나 피부의 잔주름 형성, 피부의 유연성 저하 등 건강한 피부에서 볼 수 없는 각종 태양의 변화, 피부 트러블을 의미한다.
본 발명에서는 상기 발현능의 저하를 유의하게 억제할 수 있는 것이면, 모두 본 발명에 따른 외용제, 사용 및 방법에서의 유효성분에 포함된다. 그러나, 이와 같은 유효성분의 구체적인 것으로는, 베타인 화합물 및 이들 유도체, 폴리올 및 이들 유도체, 생약, 및 항산화 작용을 갖는 물질을 들 수 있다.
「베타인 화합물 및 이들 유도체」는 본 발명의 목적에 따르는 것이면, 베타인(또한, 글리신 베타인이라고도 함) 및 그 유도체, 그리고 대응하는 술테인(베타인의 카르복실이 술포로 바뀌는 것)의 양성 이온 화합물에 포함되는 어떠한 화합물일 수도 있다. 이와 같은 유도체의 대표적인 것으로는, 글리신베타인의 N-메틸기의 1∼3개가 다른 분기될 수도 있는 포화 또는 불포화 탄화수소사슬 또는 다음 식: (CnH2nCONH(CH2)m -)로 표시되는 아미드 결합으로 중단된 이 탄화수소사슬 (식 중, m 및 n은 독립적으로 1∼30 정수임)로 바뀌거나, 또는 제4급암모늄기와 카르복실기 또는 술포기 사이의 탄화수소 사슬의 길이가 변동(예컨대, 탄소원자수 2∼6)되거나, 또는 베타인 잔기를 펜던트기로서 복수개 갖는 중합체를 들 수 있다. 또한, 이들은 고리형 화합물일 수도 있다. 한정되지 않지만, 이와 같은 유도체의 구체예로는, 상기한 것 이외에 γ-부티로베타인, 데실베타인, 라우릴베타인, 미리스틸베타인, 세틸베타인, 스테아릴베타인, 베헤닐베타인, 라우라미드프로필베타인, 올레아미드프로필베타인, 팔미타미드프로필베타인, 라우릴술타인, 코코술타인, 폴리(메타크릴로일옥시에틸베타인), 폴리(메타크릴로일옥시에틸베타인코-2-히드록시에틸메타크릴산) 등을 들 수 있다. 바람직한 것은 글리신베타인, 술테인, 폴리(메타크릴로일옥시에틸베타인), 폴리(메타크릴로일옥시에틸베타인코-2-히드록시에틸메타크릴산)이다.
「폴리올 및 이들 유도체」는 1분자 당 2개 이상의 수산기를 갖는 화합물 및 이들 유도체, 예컨대 에틸렌옥시드 부가물 등을 들 수 있다. 이러한 폴리올의 구체적인 것으로는, 글리세린, 1,3-프로판디올, 2-메틸-1,3-프로판디올, 1,4-부탄디올, 1,5-펜탄디올, 디글리세린, 에리트리톨, 글루콘산, 1,2,6-헥산트리올, 이노시톨, 락티톨, 말티톨, 만니톨, 자일리톨 등을 들 수 있다. 특히, 글리세린과 자일리톨을 비롯한 당 알코올의 조합 사용이 바람직하다.
「생약」이란 의약품 또는 민간약 또는 그 원료로서 식물 유래의 소재에 건조, 절단, 분쇄나 추출 등의 조작을 실시하여 수득한 것을 말하고, 본 발명의 목적에 따른 것이라면 식물의 과 또는 속을 문제삼지 않는다. 그러나, 한정되지 않지만, 구체적으로는 생약으로서, 국화과(Compositae)의 바카리스속(Baccharis) 식물, 특히 바카리스 제니스텔로이드(Baccharis genistelloids)에서 유래되는 생약 카르퀘자[carqueja(남미)], 아키로클리네속(Achyrocline) 식물, 특히 아키로클리네 사츄레오이디스(Achyrocline satureoides)에서 유래되는 생약마셀라미스타[macelamista(남미)] 및 톱풀속(Achillea) 식물, 특히 서양톱풀(Achillea millefoliumL.)에서 유래되는 생약 서양톱풀; 꿀풀과(Labiatae)의 백리향속(Thymus) 식물, 특히 백리향(Thymus serphyllumLinne subsp. serphyllum)에서 유래되는 생약 백리향 추출물, 오레가노속(Origanum) 식물, 특히 마조람(Origanum majoranaL.)에서 유래되는 생약 마요라나 추출물, 골무꽃속(Scutellaria) 식물, 특히 황금(Scutellaria baicalensisGeorgi)에서 유래되는 생약 황금 및 라벤더속(Lavandula) 식물, 특히 라벤더(Lavandula officinalls)에서 유래되는 생약 라벤더유; 장미과(Rosaceae)의 장미속(Rosa) 식물, 특히 이자요 장미(Rosa roxburghii)에서 유래되는 생약 이자요 장미 과실 및 벚나무속(Prunus) 식물, 특히 사토벚나무(Prunus lannesiana(Corr.) Wilson var.Spciosa(Koidz) Makino)에서 유래되는 생약 벚나무잎 추출물; 조록나무과(Hamamelidaceae)의 풍년화속(Hamamelis) 식물, 특히 하마멜리스(Hamamelis virginianaL.)에서 유래되는 생약 하마멜리스; 노루발과(Pyrolaceae)의 노루발속(Pyrola) 식물, 특히 노루발(Pyrola japonicusKlenze)에서 유래되는 생약 노루발; 그리고 콩과(Leguminosae)의 에이센하드티아속(Eysenhardtia) 식물, 특히 에이센하드티아 폴리스타키아(Eysenhardtia polistachya)에서 유래되는 생약 팔로 아즐[palo azul(남미)] 등을 들 수 있다. 바람직한 생약은 한정되지 않지만, 생약 팔로 아즐, 생약 마셀라미스타 및 생약 카르퀘자이다.
「항산화 작용을 갖는 물질」은 피부에 악영향을 미치지 않고 본 발명의 목적을 달성할 수 있는 것이면, 어떠한 화합물 또는 물질(혼합물, 조성물 등)일 수도 있다. 피부에 악영향을 미치지 않는다는 관점에서 보면, 구체적인 것으로는 예컨대 화장료 분야에서 항산화제로서 이미 사용되고 있거나 또는 사용되는 것이 제안되어 있는 것을 포함하는 화합물 또는 물질을 들 수 있다.
이와 같은 화합물로는 한정되지 않지만, 아스코르브산 및 그 염 또는 유도체를 들 수 있다. 염 또는 유도체로는, 예컨대 아스코르브산 마그네슘, 아스코르브산 나트륨 등, 아스코르브산 알킬에스테르, 아스코르브산 인산에스테르, 아스코르브산 황산에스테르, 아스코르브산 글루코시드 등과 같은 아스코르브산 유도체를 들 수 있다. 더 구체적으로는 아스코르브산 알킬에스테르로는, 팔미틴산 아스코르빌, 이소팔미틴산 아스코르빌, 디팔미틴산 아스코르빌, 디이소팔미틴산 아스코르빌, 스테아르산 아스코르빌, 이소스테아르산 아스코르빌, 디스테아르산 아스코르빌, 미리스틴산 아스코르빌, 이소미리스틴산 아스코르빌, 디미리스틴산 아스코르빌, 디이소미리스틴산 아스코르빌, 2-에틸헥산 아스코르빌, 디2-에틸헥산산 아스코르빌, 올레인산 아스코르빌, 디올레인산 아스코르빌 등을 들 수 있고, 그 밖의 유도체로는, 아스코르브산 폴리펩티드, 인산 아스코르빌마그네슘, 메틸실란올아스코르베이트, 인산 아스코르빌토코페릴칼륨 등을 들 수 있다.
또한, 토코페롤 및 그 유도체, 이 유도체로는 한정되지 않지만, 아세트산 토코페릴, 리놀레산 토코페릴, 니코틴산 토코페릴, 숙신산 토코페릴 등과 같은 토코페롤 에스테르, 그리고 토코페레스-5, 토코페레스-10, 토코페레스-12 등과 같은 토코페롤의 에틸렌옥시드 부가물을 들 수 있다. 또, 황함유 아미노산 함유 화합물(황함유 아미노산 그 자체를 포함함) 및 이들 중간대사물, 예컨대 아세틸시스테인, 메티오닌, 시스테인, 호모시스테인, 글루타치온, 하이포타우린, 시스테인술핀산, 시스테인산, 티오시스테인, 타우린, 디엔코올산, 시스타티오닌, S-알릴시스테인, 렌티오닌, 에티오닌 등을 들 수 있다.
이들 중에서 하이포타우린은 인간을 포함한 많은 포유류의 주요 장기, 예컨대 심장, 뇌, 간장 등에 함유되는 것이다. 또한, 피부에 대한 자극, 가려움, 독오름 등의 부작용도 보고되어 있지 않아 매우 안전성이 우수한 아미노에틸 화합물이다. 또, 하이포타우린은 시스테인 등을 입수할 수 있는 티오화합물로부터 통상 공지된 방법으로 제조하여 사용할 수 있고, 시판품을 사용할 수도 있다. 따라서, 본 발명자들은 하이포타우린의 사용을 특히 적극적으로 기획하고 있다.
본 발명에 따르면, 상기 유효성분은 상기에 바람직한 것으로 열거한 생약과 다른 유효성분의 조합, 보다 바람직하게는 생약으로서의 팔로 아즐(palo azul)과 글리세린 및 탄소수 4∼6의 당 알코올 중 어느 하나의, 생약으로서의 팔로 아즐과 글리세린 및 글루타치온 또는 하이포타우린의, 생약으로서의 생약 팔로 아즐과 글리세린 및 아스코르브산을 또는 생약으로서의 생약 팔로 아즐과 글리세린 및 베타인 화합물 또는 그 유도체의 조합 사용을 들 수 있다. 한편, 글리세린 및 탄소수 4∼6의 당 알코올 중 어느 하나와 상기에 구체적인 것으로 열거한 생약, 특히 생약 카르퀘자[carqueja(남미)], 생약 마셀라미스타[macelamista(남미)] 및/또는 생약 팔로 아즐[palo azul(남미)]의 조합도, 유효성분을 조합하여 사용하는 경우에 바람직한 태양이다.
또, 이상과 같은 제약 조제는 그 자체 공지된 방법, 예컨대 히로카와 약용 식물 대사전, 편집자 오오시마 마사오 외, 소화 55년(1980년), ㈜히로카와 서점 발행에 기재된 방법에 준하여 실시할 수 있다.
본 발명의 외용제에는, 상기 유효성분 이외에 화장품 및/또는 피부과용 제제에 통상 사용되고 있는 기초제 또는 첨가물, 또는 다른 유효성분을 함유시킬 수도 있다.
본 발명의 외용제에서는, 유효성분으로서의 베타인 화합물, 폴리올류 또는 항산화 작용을 갖는 물질을, 외용제의 총 중량 당 0.0001∼20 중량%, 바람직하게는 0.01∼1.0 중량%로 할 수 있다. 또한, 생약은 그 제형에 따라 유효성분 함량이 변동되므로 한정할 수 없지만, 조제제의 총 생산량 당 0.0001∼20 중량%(건조물 환산으로 약 5×10-7∼2×10-1중량%), 바람직하게는 0.01∼1.0 중량%(건조물 환산으로 약 5×10-5∼5×10-3중량%)로 할 수 있다. 어느 것이든 각각 특유한 사용 태양에 대해서 후술하는 시험방법 또는 평가방법에 따라 얻어지는 결과를 기초로, 또한 시험적으로 자원봉사자들에 실제로 사용한 결과 등을 감안하면, 피부 과학 분야의 전문가는 상기 유효성분이 효능을 발휘하기에 가장 적합한 사용량을 쉽게 결정할 수 있을 것이다.
본 발명의 외용제는, 화장료, 의약품, 의약부외품으로 피부에 적용되는 것을 말하고, 따라서 그 제형도 수용액계, 가용화계, 유화계, 분말계, 겔계, 연고계, 크림, 물-오일 2층계, 물-오일-분말 3층계 등 폭넓은 형태를 취할 수 있다. 즉,기초 화장품이라면, 세안료, 화장수, 유액, 크림, 젤, 에센스(미용액), 팩, 마스크 등의 형태로 상기 다양한 제형에서 널리 적용할 수 있다. 메이크업 화장품이라면, 파운데이션 등의 형태로 널리 적용할 수 있다. 또한, 의약품 또는 의약부외품이라면, 각종 연고 등의 형태로 널리 적용할 수 있다. 그리고, 이들 제형 및 형태로 본 발명의 피부외용제가 취할 수 있는 형태가 한정되지는 않는다.
상기 기초제 성분은 이들 제형 및 형태에 따라 선택할 수 있고, 그리고 기초제 성분 또는 첨가제로는, 물, 저급 알칸올, 액체 유지, 고체 유지, 납류, 에스테르유, 탄화수소유, 실리콘수지, 실리콘, 음이온성 계면활성제, 어니온계 계면활성제, 양이온성 계면활성제, 양성 계면활성제, 비이온성 계면활성제, 저급알코올, 스테롤류, 수용성 고분자, 금속이온 봉쇄제, 중화제, pH 조정제, 항균제, 향료, 색소 등을 들 수 있다.
이상으로 설명한 외용제는 자원봉사자에게 직접 적용하여 효능을 확인할 수 있지만, 그에 앞서 본 발명의 또 하나의 태양인, 건조에 의한 피부 상해를 억제할 수 있는지의 여부에 대한 물질의 평가방법에 따라 확인할 수도 있다.
이러한 평가방법에서 사용되는 인간 케라티노사이트는 피험물질의 존재 하와 비존재 하에서 각각 배양함으로써, 필라그린 단백질량 및 유전자 발현량의 변동을 유의하게 식별할 수 있다면 어떠한 세포라도 된다. 그러나, 바람직하게는 인간 포피(包皮) 유래의 정상 세포와 피더 레이어(지지 세포)로서 마우스 유래의 3T3 세포(ATCC CRL-1658)로 이루어진 배양세포계를 적절히 사용할 수 있다. 이들 세포계는, 예컨대 Rheinwald et al., Cell 6, 331-344(1975)에 기재된 방법에 따라3T3 세포를 적당한 샤알레에서 배양하고, 마이토마이신 C로 처리하며, 이렇게 해서 지지 세포층을 형성한 후에, 이 층 위에 인간 정상 케라티노사이트를 파종하고, 예컨대 95% 공기-5% 탄산가스 환경 하, 37℃에서 융합(confluent)될 때까지 배양함으로써 만들 수 있다.
통상 피험물질의 비존재 하에서 배양되는 계(대조)는, 피험물질의 존재 하에서 배양하면(시험계) 평행 처리되는 것이 바람직하지만, 미리 피험물질의 비존재 하의 각종 조건 하에서 배양을 실시하고, 이어서 기상 노출한 후의 필라그린 단백질량이나 필라그린 유전자 발현량의 값을 얻은 후, 이들 값을 대조로 할 수도 있다.
또, 시험계로의 피험물질 첨가는 배양 인간 케라티노사이트가 융합된 후 실시하고, 그대로 단시간 동안(예컨대 30분간) 인큐베이트하는 양식이 바람직하다.
이와 같은 배양 인간 케라티노사이트의 기상 노출은, 바람직하게는 배지를 제거한 후에, 예컨대 95% 공기-5% 탄산가스 환경 하, 37℃에서 인큐베이트함으로써 실시할 수 있다. 이와 같은 기상 노출은 통상 약 6시간 이내에 완료시킬 수 있다.
이렇게 해서 기상 노출된 배양 인간 케라티노사이트는 필라그린 단백질량 또는 필라그린 유전자 발현량의 그 자체 공지된 측정법에 제공함으로써, 기상 노출에 의해 인간 케라티노사이트가 받는 상해 정도 또는 이 상해에 대한 피험물의 효능 정도를 평가할 수 있다. 이와 같은 평가방법은 건조에 의한 인간 케라티노사이트의 생채 내 (in vivo) 에서의 필라그린 저하에 부수하는 피부 상해를 방지할 수있는 유해물질의 스크리닝에도 유용하다.
다음에, 구체예를 들어 본 발명을 더 설명하는데, 이들 예는 본 발명을 한정하는 것을 의도하는 것이 아니다. 설명 중에 사용되는 퍼센티지는 특별히 기재하지 않는 한 중량 기준이다.
필라그린 유전자 발현량의 측정시험:
(1) 배양세포
인간 포피 유래의 정상 케라티노사이트와 마우스 유래의 3T3 세포를 사용하였다.
(2) 배양세포용 배지
배지는 DMEM-Ham's F12(3:1)에 하이드로코르티존, 콜레라엔테로톡신, 상피증식인자, 인슐린 및 10% FBS를 함유한다.
(3) 배양
Rheinwald et al., Cell 6, 331-344(1975)에 기재된 방법에 따라 배양한다.
개요를 다음에 나타낸다. 3T3 세포를 마이토마이신 C로 처리하여 피더 레이어(지지 세포)로서 사용하였다. 인간 정상 케라티노사이트 1×105개 세포를마이토마이신 C로 처리한 3T3 세포 상에 파종하고, 95% 공기-5% 탄산가스 환경 하, 37℃에서 융합될 때까지 배양하였다. 배양 상등액을 제거함으로써 기상 노출을 실시하였다. 또, 각 피험물은 기상 노출 30분 전에 첨가하고 37℃에서 배양하였다. 피험물을 첨가하지 않은 것을 대조로 하였다. 기상 노출은 37℃에서 0∼6시간 동안 실시하였다.
(4) 필라그린 단백질량의 측정
상기 배양계에 각 피험물을 첨가한 후 일정 시간 동안 기상 노출한 세포로부터 단백질을 추출하였다. 통상적인 방법에 따라 웨스턴 블로팅으로 필라그린 단백질 또는 필라그린 단백질 전구체(프로필라그린)를 정량하였다. 개요를 다음에 나타낸다. 추출한 단백질을 SDS-PAGE로 영동시킨 후에, PDVF막에 전사하고, 1차 항체로서 필라그린에 특이한 마우스 모노클로날 항체(anti-HUMAN Filaggrin MAb)를 사용하여 항원-항체 반응을 실시하였다. 그 이후, 2차 항체에 호스라디쉬 퍼옥시드(Horseradish peroxidase) 나 알칼린 포스파타제(Alkaline phosphatase) 로 표식한 항체를 사용하여 항원-항체 반응을 실시하였다. 반응 후 표지 효소에 대응하는 색소원 기질을 사용하여 효소 반응을 실시하는 발색법 또는 화학발색법으로 측정하였다. 밴드의 정량은 NIH 이미지(해석 프로그램)를 사용하여 실시하였다.
(5) 필라그린 유전자 발현량의 측정
상기 배양계에 각 피험물을 첨가한 후 일정 시간 동안 기상 노출한 세포로부터 AGPC법으로 RNA를 추출하였다. 이들 RNA에 대하여 다음과 같이 RT-PCR을 실시하였다. 필라그린에 특이한 프라이머를 McKinley-Grant L.J. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 86, 4848-4852(1989)가 보고하고 있는 필라그린의 염기서열에 따라 작성하였다. RT-PCR은 mRNA를 한번에 역전사 효소로 cDNA로 하고, 이를 주형으로 하여 상기 프라이머를 사용하여 폴리머라아제 반응(공지된 반응)을 실시하여 필라그린의 mRNA를 측정하였다. PCR 산물은 아가오로스 겔로 전기영동하고, 전기영동 후의 겔을 에티듐브로마이드 용액에 침지시킨 후에 DNA를 측정하였다. DNA 밴드의 정량은 NIH 이미지(해석 프로그램)를 사용하여 실시하였다. 보정은 글리셀알데히드-3-인산 디히드로게나아제(G3PDH)를 사용하여 실시하였다.
(6) 결과
(6-1) 인간 케라티노사이트를 기상 노출했을 때 필라그린 단백질량의 시간 경과에 따른 변동을 도 1에 나타낸다. 도면에 의해, 건조에 의해 인간 케라티노사이트의 필라그린 단백질은 유의하게 저하됨을 알 수 있다.
(6-2) 상기 기상 노출에 의해 인간 케라티노사이트의 필라그린 유전자 발현량의 시간 경과에 따른 변동을 도 2에 나타낸다. 도면에 의해, 건조에 의해 인간 케라티노사이트의 필라그린 단백질 발현은 유의하게 저하됨을 알 수 있다. 또, 그 저하는 비교적 단시간 동안에 발생되었다.
(6-3) 인간 케라티노사이트의 기상 노출(건조 자극)에 의한 필라그린 단백질량으로의 상해를 억제하는 작용을, 배양계로의 상기 시료(10% 글리세린)의 첨가 유무에 따른 필라그린 단백질량으로 평가하였다. 결과를 도 3에 나타낸다.
(6-4) 인간 케라티노사이트의 기상 노출(건조 자극)에 의한 필라그린 단백질발현을 저해시키는 상해를 억제하는 작용을, 배양계로의 상기 시료(글리세린 및 트리메틸글리신)의 첨가 유무에 따른 필라그린 유전자 발현량으로 평가하였다. 결과를 도 4에 나타낸다.
(6-5) 인간 케라티노사이트의 건조에 의한 필라그린 유전자 발현을 저하시키는 상해를 억제하는 작용을, 배양계로의 생약 추출물의 첨가 유무에 따른 필라그린 유전자 발현량으로 평가하였다. 결과를 도 5에 나타낸다.
(6-6) 인간 케라티노사이트의 건조에 의한 필라그린 유전자 발현을 저하시키는 상해를 억제하는 작용을, 배양계로의 아스코르브산 및 글루타치온의 첨가 유무에 따른 필라그린 유전자 발현량으로 평가하였다. 결과를 도 6에 나타낸다.
(6-7) 인간 케라티노사이트의 건조에 의한 필라그린 유전자 발현을 저하시키는 상해를 억제하는 작용을, 배양계로의 하이포타우린의 첨가 유무에 따른 필라그린 유전자 발현량의 변동을 도 7에 나타낸다. 농도 의존성도 동시에 나타낸다.
(6-8) 배양 인간 케라티노사이트의 건조에 의한 필라그린 유전자 발현 저하에 대한 그 밖의 유효성분 및 유효성분의 조합 효능을 다음 표 1 및 표 2에 각각 나타낸다. 표에서는 건조 전의 유전자 발현을 100%, 건조 후의 유전자 발현을 0%로 하고, 약제 첨가에 따른 유전자 발현 저하의 억제율을 %로 나타냈다. 표 1에서는 유효성분이 추출물 농도로서 0.5% 첨가되었다. 또, 표 2에서는 여기에 표시되어 있는 유효성분 및 농도(중량%)의 조성물을 사용하여 시험되었다.
생약 회복률(%)
서양톱풀 41.9
마요라나 30.8
백리향 추출물 19.9
노루발 13.0
라벤더 8.6
하마멜리스 37.4
황금 리퀴드 65.0
벚나무잎 30.8
이자요 장미 과실 53.1
피험물질 필라그린 유전자 발현 상대값(%)
평균 표준오차 회복률(%)
무처리 100 6
건조 자극만 47 4
0.025% 팔로 아즐 추출물 60 6 24.5
0.15% 글리세린 51 13 7.5
0.30% 글리세린 79 7 60.4
0.15% 자일리톨 50 23 5.7
0.30% 자일리톨 67 16 37.7
0.15% 글리세린+0.15% 자일리톨 78 14 58.5
0.025% 팔로 아즐 추출물+0.15% 글리세린+0.15% 자일리톨 94 5 88.7
한편, 상기 회복률(%)은 각각 피험물질의 첨가에 따라 건조 자극을 가하지 않은 무처리군에서 필라그린 유전자 발현 수준까지 어느 정도 회복했는지를 나타낸다.
이들 도면 및 표에서 본 발명에 따른 조제제는, 인간 케라티노사이트가 건조에 의해 받는 각질층 수분량의 저하를, 각질층 수분을 유지하기 위해 필수적인 아미노산의 원재료가 되는 필라그린의 단백질량과 유전자 발현의 저하를 유의하게 억제할 수 있음을 확인할 수 있다.
다음에, 본 발명에 따른 조제제의 처방예를 나타낸다. 모두 통상적인 방법에 따라 조제할 수 있다. 한편, 조제제의 각 성분의 함유율은 특별히 기재하지 않는 한 중량%를 의미한다.
처방예 1(크림)
베헤닐알코올 1.0
스테아릴알코올 2.0
스쿠알렌 10.0
테트라옥탄산펜타에리티틸 5.0
라놀린 5.0
파라벤 0.3
폴리옥시에틸렌베헤닐알코올 1.0
글리세린 10.0
생약 추출물(생약 카르퀘자(carqueja)) 0.2
아세틸히알루론산나트륨 0.1
정제수 잔부
처방예 2(크림)
스쿠알렌 10.0
미리스틴산 이소프로필 20.0
데카메틸시클로펜탄헥산 35.0
알킬 변성 카르복시비닐폴리머 0.05
소르비탄모노올레이트 5.0
디프로필렌글리콜 3.0
생약 추출물(생약 마셀라미스타(macelamista)) 1.0
정제수 잔부
처방예 3(크림)
유동 파라핀 10.0
옥타메틸시클로테트라실록산 5.0
1,3-부틸글리콜 10.0
글리세린 3.0
아스코르브산 유도체 3.0
트리메틸글리신 0.5
카르복시비닐폴리머 0.15
크산탄 검 0.25
스테아르산 1.5
세틸알코올 0.5
폴리옥시에틸렌(10)모노올레인산에스테르 1.0
스테아르산모노글리세리드 1.0
에탄올 3.0
향료 적당량
정제수 잔부
처방예 4(크림)
세토스테아릴알코올 3.5
스쿠알렌 20.0
밀랍 3.0
라놀린 5.0
파라벤 0.3
폴리옥시에틸렌(20)소르비탄모노팔미틴산에스테르 2.0
스테아르산모노글리세리드 2.0
식물 추출액(생약 팔로 아즐(palo azul)) 2.0
비타민A 2.0
향료 적당량
정제수 잔부
처방예 5(크림)
탤크 3.0
이산화티탄 5.0
철단 (bengala) 0.5
황산화철 1.4
흑산화철 1.0
모노스테아르산 폴리옥시에틸렌소르비탄 0.9
트리에탄올아민 1.0
프로필렌글리콜 5.0
생약 추출물(또는 트리메틸글리신 또는 네오트레할로오스) 1.0
스테아르산 2.2
이소헥사데실알코올 7.0
스테아르산모노글리세리드 2.0
라놀린 2.0
파라핀 8.0
파라벤 적당량
향료 적당량
처방예 6(크림)
유동 파라핀 5.0
바세린 2.0
메틸폴리실록산 1.0
스테아릴알코올 2.0
베헤닐알코올 2.0
경화유 1.0
스쿠알렌 5.0
스테아르산 2.0
2-에틸헥산산세틸 4.0
자기유화형 모노스테아르산 글리세린 2.0
4-tert-4'-메톡시벤조일메탄 0.1
마카데미아유 1.0
메타인산나트륨 0.02
플라센탈 추출물 1.0
파라벤 적당량
색제 적당량
글리세린 5.0
디프로필렌글리콜 5.0
1,3-부틸렌글리콜 3.0
식물 추출액(생약 팔로 아즐(palo azul)) 1.0
식물 추출액(식물 이자요 장미 과실) 0.5
정제수 잔부
처방예 7(크림)
메틸폴리실록산 2.0
데카메틸시클로펜타실록산 10.0
폴리옥시에틸렌ㆍ메틸폴리실록산 공중합체 3.0
디메틸디스테아릴암모늄헥토라이트 3.0
정부 소정 변성 알코올 2.0
글리세린 5.0
디프로필렌글리콜 3.0
폴리에틸렌글리콜 1.0
메타인산나트륨 0.05
식물 추출액(생약 팔로 아즐(palo azul)) 2.0
식물 추출액(생약 벚나무잎 추출물) 1.0
파라벤 적당량
에데트산3나트륨 0.05
색제 적당량
향료 적당량
정제수 잔부
처방예 8(크림)
메틸폴리실록산 5.0
데카메틸시클로펜타실록산 10.0
폴리옥시에틸렌ㆍ메틸폴리실록산 공중합체 0.5
폴리(옥시에틸렌ㆍ옥시프로필렌)ㆍ메틸폴리실록산 공중합체 0.5
구형상 폴리아크릴산알킬 2.0
글리세린 5.0
식물 추출액(생약 팔로 아즐(palo azul)) 0.05
식물 추출액(생약 황금 리퀴드 SE) 2.0
1,3-부틸렌글리콜 5.0
염화나트륨 2.0
메타인산나트륨 0.05
페녹시에탄올 적당량
에데트산3나트륨 0.05
색제 적당량
향료 적당량
정제수 잔부
처방예 9(크림)
메틸폴리실록산 5.0
데카메틸시클로펜타실록산 15.0
베헤닐알코올 1.0
바틸알코올 1.0
표백밀랍 2.0
트리2-에틸헥산산 글리세릴 2.0
옥탄산세틸 2.0
글리세린 4.0
식물 추출액(생약 팔로 아즐(palo azul)) 0.1
식물 추출액(생약 하마멜리스) 0.2
디프로필렌글리콜 6.0
에데트산3나트륨 0.05
파라벤 적당량
향료 적당량
정제수 잔부
처방예 10(크림)
바세린 1.0
메틸폴리실록산 2.0
스쿠알렌 2.0
글리세린 5.0
디프로필렌글리콜 3.0
1,3-부틸렌글리콜 3.0
폴리에틸렌글리콜 2.0
식물 추출액(생약 팔로 아즐(palo azul)) 2.0
식물 추출액(생약 황금 리퀴드 SE) 1.0
수산화칼륨 0.25
메타인산나트륨 0.05
색제 적당량
파라벤 적당량
크산탄 검 0.1
아크릴산ㆍ메타크릴산알킬 공중합체 0.1
카르복시비닐폴리머 0.5
정제수 잔부
처방예 11(크림)
유동 파라핀 8.0
바세린 2.0
메틸폴리실록산 2.0
스테아릴알코올 2.0
베헤닐알코올 2.0
테트라옥탄산펜타에리트리트 3.0
이소스테아르산 폴리옥시에틸렌글리세릴 2.0
모노스테아르산 폴리옥시에틸렌글리세린 2.0
친유(親油)형 모노스테아르산 글리세린 2.0
4-tert-부틸-4'-메톡시벤조일메탄 0.05
파라메톡시신남산2-에틸헥실 0.5
히드록시에틸셀룰로오스 0.5
카르복시비닐폴리머 0.04
에데트산3나트륨 0.05
식물 추출액(생약 팔로 아즐(palo azul)) 1.0
식물 추출액(생약 라벤더유) 1.0
글리세린 5.0
디프로필렌글리콜 5.0
향료 적당량
파라벤 적당량
정제수 잔부
처방예 12(크림)
바세린 2.0
메틸폴리실록산 2.0
베헤닐알코올 0.5
바틸알코올 0.5
호호바유 3.0
스쿠알렌 2.0
테트라옥탄산펜타에리트리트 1.0
폴리옥시에틸렌 경화피마자유 0.5
정부 소정 변성 알코올 5.0
식물 추출액(생약 팔로 아즐(palo azul)) 1.5
식물 추출액(생약 노루발) 0.5
글리세린 5.0
1,3-부틸렌글리콜 5.0
폴리에틸렌글리콜 2.0
수산화칼륨 0.09
파라벤 적당량
에데트산3나트륨 0.05
색제 적당량
크산탄 검 0.05
메타인산나트륨 0.05
카르복시비닐폴리머 0.25
정제수 잔부
처방예 13(크림)
유동 파라핀 10.0
메틸폴리실록산 5.0
스쿠알렌 5.0
테트라2-에틸헥산산펜타에리트리트 5.0
식물 추출액(생약 팔로 아즐(palo azul)) 0.05
식물 추출액(생약 백리향 추출물) 2.0
1,3-부틸렌글리콜 5.0
에리트리톨 5.0
폴리에틸렌글리콜 5.0
수산화칼륨 0.1
메타인산나트륨 0.05
파라벤 적당량
페녹시에탄올 적당량
히드록시프로필메틸셀룰로오스 0.2
폴리비닐알코올 0.2
카르복시비닐폴리머 0.1
아크릴산ㆍ메타크릴산알킬 공중합체 0.1
색제 적당량
향료 적당량
정제수 잔부
처방예 14(크림)
유동 파라핀 5.0
바세린 5.0
세레신 2.0
스쿠알렌 15.0
밀랍 0.5
디이소스테아르산 폴리글리세릴 5.0
식물 추출액(생약 팔로 아즐(palo azul)) 0.05
식물 추출액(생약 마요라나 추출물) 1.0
폴리에틸렌분말 적당량
프로필렌글리콜 적당량
글루타민산나트륨 적당량
세린 적당량
글리신 적당량
알란토인 적당량
향료 적당량
염화나트륨 적당량
정제수 잔부
처방예 15(크림)
올레핀올리고머 8.0
바세린 5.0
세레신 4.0
스쿠알렌 18.0
밀랍 1.0
디이소스테아르산 폴리글리세릴 5.0
세린 적당량
메타인산나트륨 0.05
식물 추출액(생약 팔로 아즐(palo azul)) 0.5
식물 추출액(생약 서양톱풀) 1.0
글리세린 2.0
1,3-부틸렌글리콜 5.0
염화나트륨 적당량
폴리에틸렌분말 0.1
파라벤 적당량
향료 적당량
색제 적당량
정제수 잔부
처방예 16(크림)
올레핀올리고머 6.0
데카메틸시클로펜탄실록산 18.0
폴리옥시에틸렌ㆍ메틸폴리실록산 공중합체 2.0
메틸페닐폴리실록산 1.0
스테아릴알코올 0.5
베헤닐알코올 1.3
마카데미아유 지방산 피토스테릴 0.3
N-스테아로일-L-글루타민산나트륨 0.9
디메틸디스테아릴암모늄헥토라이트 0.8
글리세린 4.0
식물 추출액(생약 팔로 아즐(palo azul)) 5.0
1,3-부틸렌글리콜 5.0
염화나트륨 0.05
파라벤 적당량
페녹시에탄올 적당량
색제 적당량
향료 적당량
정제수 잔부
처방예 17(유액)
메틸폴리실록산 2.0
데카메틸시클로펜탄실록산 2.0
스쿠알렌 2.0
정부 소정 변성 알코올 5.0
글리세린 5.0
1,3-부틸렌글리콜 5.0
폴리옥시에틸렌메틸글리코시드 5.0
식물 추출액(생약 팔로 아즐(palo azul)) 0.02
수산화칼륨 0.1
메타인산나트륨 0.05
파라벤 적당량
색제 적당량
카르복시비닐폴리머 0.15
아크릴산ㆍ메타크릴산알킬 공중합체 0.1
정제수 잔부
처방예 18(유액)
메틸폴리실록산 2.0
베헤닐알코올 0.5
바틸알코올 0.5
경화유 3.0
스쿠알렌 6.0
테트라2-에틸헥산산펜타에리트리트 2.0
이소스테아르산 폴리옥시에틸렌글리세릴 1.5
모노스테아르산 폴리옥시에틸렌글리세린 1.5
글리세린 5.0
1,3-부틸렌글리콜 5.0
에리트리톨 3.0
식물 추출액(생약 팔로 아즐(palo azul)) 0.05
수산화칼륨 0.05
메타인산나트륨 0.03
페녹시에탄올 적당량
카르복시비닐폴리머 0.12
정제수 잔부
처방예 19(유액)
유동 파라핀 8.0
바세린 3.0
데카메틸시클로펜타실록산 1.0
베헤닐알코올 2.0
호호바유 1.0
스테아르산 1.0
베헤닐산 0.5
테트라2-에틸헥산산펜타에리트리트 3.0
2-에틸헥산산세틸 3.0
자기유화형 모노스테아르산 글리세린 1.5
파라메톡시신남산2-에틸헥실 0.1
글리세린 8.0
식물 추출액(생약 팔로 아즐(palo azul)) 5.0
디프로필렌글리콜 5.0
폴리에틸렌글리콜 5.0
수산화칼륨 0.1
메타인산나트륨 0.05
에데트산3나트륨 0.05
파라벤 적당량
색제 적당량
향료 적당량
정제수 잔부
처방예 20(유액)
데카메틸시클로펜탄실록산 15.0
폴리옥시에틸렌ㆍ메틸폴리실록산 공중합체 3.0
마카데미아유 1.0
스쿠알렌 2.0
히드록시스테아르산콜레스테릴 0.2
2-에틸헥산산세틸 2.0
염화디스테아릴디메틸암모늄 0.3
글리세린 8.0
1,3-부틸렌글리콜 5.0
식물 추출액(생약 팔로 아즐(palo azul)) 3.0
말티톨액 2.0
에데트산3나트륨 0.05
규산알루미늄마그네슘 0.3
파라벤 적당량
색제 적당량
이온교환수 잔부
처방예 21(유액)
스쿠알렌 0.2
히드록시스테아르산콜레스테릴 0.1
트리2-에틸헥산산 글리세린 0.4
폴리옥시에틸렌 경화피마자유 0.4
디이소스테아르산 폴리글리세릴 0.3
변성 알코올 5.0
글리세린 2.0
식물 추출액(생약 팔로 아즐(palo azul)) 1.0
디프로필렌글리콜 5.0
폴리에틸렌글리콜 2.0
수산화칼륨 0.6
에데트산3나트륨 0.05
크산탄 검 0.2
히드록시에틸셀룰로오스 0.03
카르복시비닐폴리머 0.3
향료 적당량
파라벤 적당량
정제수 잔부
처방예 22(유액)
바세린 5.0
베헤닐알코올 0.5
경화유 1.5
호호바유 2.5
스쿠알렌 4.0
테트라옥탄산펜타에리트리트 3.0
폴리옥시에틸렌 경화피마자유 0.5
글리세린 5.0
1,3-부틸렌글리콜 5.0
폴리에틸렌글리콜 2.0
식물 추출액(생약 팔로 아즐(palo azul)) 1.0
수산화칼륨 0.07
카르복시비닐폴리머 0.2
파라벤 적당량
색제 적당량
정제수 잔부
처방예 23(유액)
바세린 2.0
메틸폴리실록산 2.0
베헤닐알코올 0.3
바틸알코올 0.3
히드록시스테아르산 콜레스테릴 0.1
4-tert-부틸-4'-메톡시벤조일메탄 0.1
변성 알코올 3.0
글리세린 8.0
식물 추출액(생약 팔로 아즐(palo azul)) 1.0
1,3-부틸렌글리콜 4.0
폴리에틸렌글리콜 3.0
야자유 지방산 가수분해 콜라겐칼륨액 0.2
수산화칼륨 0.08
에데트산3나트륨 0.05
크산탄 검 0.05
카르복시비닐폴리머 0.22
색제 적당량
파라벤 적당량
향료 적당량
정제수 잔부
처방예 24(유액)
바세린 0.7
메틸폴리실록산 0.3
베헤닐알코올 0.7
스쿠알렌 2.0
2-에틸헥산산세틸 0.5
N-스테아로일-L-글루타민산나트륨 0.3
변성 알코올 3.0
글리세린 4.0
디프로필렌글리콜 6.0
1,3-부틸렌글리콜 4.0
식물 추출액(생약 팔로 아즐(palo azul)) 1.0
수산화칼륨 0.07
메타인산나트륨 0.01
크산탄 검 0.02
카르복시비닐폴리머 0.14
색제 적당량
파라벤 적당량
향료 적당량
정제수 잔부
처방예 25(화장수)
1,3-부틸렌글리콜 6.0
글리세린 4.0
올레일알코올 0.1
POE(20)소르비탄모노라우린산에스테르 0.5
POE(15)라우릴알코올에테르 0.5
식물 추출액(생약 팔로 아즐(palo azul)) 1.0
식물 추출액(생약 하마멜리스) 0.5
에탄올 10.0
향료 적당량
색제 적당량
정제수 잔부
처방예 26(화장수)
솔비트 4.0
디프로필렌글리콜 6.0
PEG1500 5.0
POE(20)올레일알코올에테르 0.5
메틸셀룰로오스 0.2
퀸즈시드 추출물 0.1
식물 추출액(생약 팔로 아즐(palo azul)) 0.5
식물 추출액(생약 황금 리퀴드 SE) 0.1
에탄올 10.0
향료 적당량
색제 적당량
정제수 잔부
처방예 27(화장수)
1,3-부틸렌글리콜 6.0
글리세린 3.0
PEG4000 3.0
올리브유 0.5
POE(20)소르비탄모노스테아르산에스테르 1.5
POE(5)올레일알코올에테르 0.3
에탄올 10.0
식물 추출액(생약 팔로 아즐(palo azul)) 0.3
식물 추출액(생약 마요라나 추출물) 1.5
향료 적당량
색제 적당량
정제수 잔부
처방예 28(화장수)
디프로필렌글리콜 1.0
솔비트 1.0
POE(20)올레일알코올에테르 1.0
술포석탄산아연 0.2
시트르산 0.1
에탄올 15.0
식물 추출액(생약 팔로 아즐(palo azul)) 0.3
식물 추출액(생약 이자요 장미 과실) 1.5
향료 적당량
색제 적당량
정제수 잔부
처방예 29(화장수)
1,3-부틸렌글리콜 6.0
디프로필렌글리콜 6.0
PEG400 6.0
POE(20)소르비탄모노라우린산에스테르 1.0
폴리옥시에틸렌 폴리옥시프로필렌 블럭중합체 1.5
에탄올 15.0
식물 추출액(생약 팔로 아즐(palo azul)) 1.0
식물 추출액(생약 황금 리퀴드 SE) 0.5
향료 적당량
색제 적당량
정제수 잔부
처방예 30(크림)
베헤닐알코올 1.0
스테아릴알코올 2.0
스쿠알렌 10.0
테트라옥탄산펜타에리티틸 5.0
라놀린 5.0
파라벤 0.3
폴리옥시에틸렌베헤닐알코올 1.0
글리세린 10.0
하이포타우린 0.1
아세틸히알루론산나트륨 0.1
정제수 잔부
처방예 31(유액)
스쿠알렌 10.0
미리스틴산이소프로필 20.0
데카메틸시클로펜탄헥산 35.0
알킬 변성 카르복시비닐폴리머 0.05
소르비탄모노올레이트 5.0
디프로필렌글리콜 3.0
글루타치온 1.0
정제수 잔부
처방예 32(유액)
유동 파라핀 10.0
옥타메틸시클로테트라실록산 5.0
1,3-부틸렌글리콜 10.0
글리세린 3.0
아스코르브산 유도체 3.0
글루타치온 0.1
카르복시비닐폴리머 0.15
크산탄 검 0.25
스테아르산 1.5
세틸알코올 0.5
폴리옥시에틸렌(10)모노올레인산에스테르 1.0
스테아르산모노글리세리드 1.0
에탄올 3.0
향료 적당량
정제수 잔부
처방예 33(크림)
세토스테아릴알코올 3.5
스쿠알렌 20.0
밀랍 3.0
라놀린 5.0
파라벤 0.3
폴리옥시에틸렌(20)소르비탄모노팔미틴산에스테르 2.0
스테아르산모노글리세리드 2.0
하이포타우린 0.1
비타민A 2.0
향료 적당량
정제수 잔부
처방예 34(파운데이션)
탤크 3.0
이산화티탄 5.0
철단 0.5
황산화철 1.4
흑산화철 1.0
모노스테아르산 폴리옥시에틸렌소르비탄 0.9
트리에탄올아민 1.0
프로필렌글리콜 5.0
하이포타우린 1.0
스테아르산 2.2
이소헥사데실알코올 7.0
스테아르산모노글리세리드 2.0
라놀린 2.0
파라핀 8.0
파라벤 적당량
향료 적당량
처방예 35(크림)
유동 파라핀 3
바세린 1
메틸폴리실록산 1
스테아릴알코올 1.8
베헤닐알코올 1.6
글리세린 8
디프로필렌글리콜 5
마카데미아유 2
경화유 3
스쿠알렌 6
자일리톨 3
스테아르산 2
히드록시스테아르산콜레스테릴 0.5
2-에틸헥산산세틸 4
자기유화형 모노스테아르산 글리세린 3
수산화칼륨 0.15
메타인산나트륨 0.05
트리메틸글리신 2
DL-α-토코페롤2-L-아스코르브산 인산디에스테르칼륨 1
아세트산DL-α-토코페롤 0.1
팔로 아즐 추출액(생약 팔로 아즐(palo azul)) 0.05
첨차(甛茶) 추출물 0.1
파라벤 적당량
에데트산3나트륨 0.05
4-t-부틸-4'-메톡시디벤조일메탄 0.05
디파라메톡시신남산모노-2-에틸헥산산 글리세릴 0.05
철단 적당량
황산화철 적당량
카르복시비닐폴리머 0.05
정제수 잔부
처방예 36(크림)
유동 파라핀 8
바세린 3
메틸폴리실록산 2
스테아릴알코올 3
베헤닐알코올 2
글리세린 5
디프로필렌글리콜 4
자일리톨 1
테트라2-에틸헥산산펜타에리트리트 4
이소스테아르산 폴리옥시에틸렌글리세릴 2
모노스테아르산 폴리옥시에틸렌글리세린 1
친유형 모노스테아르산 글리세린 2
시트르산 0.05
시트르산나트륨 0.05
수산화칼륨 0.015
팔로 아즐 추출액(생약 팔로 아즐(palo azul)) 0.1
감초 후라보노이드 0.1
팔미틴레티놀(100만 단위) 0.25
아세트산DL-α-토코페롤 0.1
파라옥시벤조산에스테르 적당량
페녹시에탄올 적당량
디부틸히드록시톨루엔 0.1
에데트산3나트륨 0.05
4-t-부틸-4'-메톡시디벤조일메탄 0.01
파라메톡시신남산2-에틸헥실 0.1
β-카로틴 0.01
폴리비닐알코올 0.5
히드록시에틸셀룰로오스 0.5
카르복시비닐폴리머 0.05
정제수 잔부
향료 적당량
처방예 37(보습크림)
유동 파라핀 10
메틸폴리실록산 2
글리세린 10
1,3-부틸렌글리콜 2
에리트리톨 1
자일리톨 1.5
폴리에틸렌글리콜1500 5
스쿠알렌 15
테트라2-에틸헥산산펜타에리트리트 5
수산화칼륨 0.1
팔로 아즐 추출액(생약 팔로 아즐(palo azul)) 0.08
메타인산나트륨 0.05
아세트산토코페롤 0.05
파라옥시벤조산에스테르 적당량
히드록시프로필메틸셀룰로오스 0.3
폴리비닐알코올 0.1
카르복시비닐폴리머 0.2
아크릴산ㆍ메타크릴산알킬 공중합체 0.1
정제수 잔부
처방예 38(크림(오일 프리))
시클로메티콘 30
폴리옥시에틸렌ㆍ메틸폴리실록산 공중합체 1.5
글리세린 5
디프로필렌글리콜 5
자일리톨 3
탤크 5
파라벤 적당량
팔로 아즐 추출액(생약 팔로 아즐(palo azul)) 0.03
페녹시에탄올 0.3
에데트산3나트륨 0.02
디메틸디스테아릴암모늄헥토라이트 0.5
정제수 잔부
트리메틸실록시규산 0.5
구형상 무수규산 0.5
미립자 산화티탄(소수화 처리품 30㎚) 7
구형상 폴리에틸렌분말 2
폴리(옥시에틸렌ㆍ옥시프로필렌)ㆍ메틸폴리실록산 공중합체 1
처방예 39(유액)
유동 파라핀 7
바세린 3
데카메틸시클로펜타실록산 2
베헤닐알코올 2
글리세린 5
디프로필렌글리콜 7
폴리에틸렌글리콜1500 2
자일리톨 2
호호바유 1
이소스테아르산 0.5
스테아르산 0.5
베헤닌산 0.5
테트라2-에틸헥산산펜타에리트리트 3
2-에틸헥산산세틸 3
모노스테아르산 글리세린 1
모노스테아르산 폴리옥시에틸렌글리세린 1
수산화칼륨 0.1
헥사메타인산나트륨 0.05
글리틸레틴산스테아릴 0.05
L-아르기닌 0.1
로얄제리 추출물 0.1
아세트산토코페롤 0.1
히알루론산나트륨 0.1
팔로 아즐 추출액(생약 팔로 아즐(palo azul)) 0.05
파라벤 적당량
에데트산3나트륨 0.05
4-t-부틸-4'-메톡시디벤조일메탄 0.1
파라메톡시신남산2-에틸헥실 0.1
황산화철 적당량
카르복시비닐폴리머 0.15
정제수 잔부
향료 적당량
처방예 40(유액)
메틸폴리실록산 2
베헤닐알코올 1
바틸알코올 0.5
글리세린 5
1,3-부틸렌글리콜 7
자일리톨 2
에리트리톨 2
경화유 3
스쿠알렌 6
테트라2-에틸헥산산펜타에리트리트 2
이소스테아르산 폴리옥시에틸렌글리세릴 1
모노스테아르산 폴리옥시에틸렌글리세린 1
팔로 아즐 추출액(생약 팔로 아즐(palo azul)) 0.1
수산화칼륨 적당량
헥사메타인산나트륨 0.05
페녹시에탄올 적당량
카르복시비닐폴리머 0.11
정제수 잔부
처방예 41(링클케어용 유액)
데카메틸시클로펜타실록산 15
트리메틸실록시규산 5
폴리옥시에틸렌ㆍ메틸폴리실록산 공중합체 5
글리세린 5
1,3-부틸렌글리콜 5
말티톨액 2
마카데미아유 2
스쿠알렌 2
자일리톨 3
히드록시스테아르산콜레스테릴 0.5
2-에틸헥산산세틸 2
염화디스테아릴디메틸암모늄 0.2
L-아스코르브산 황산에스테르2나트륨 0.1
DL-α-토코페롤2-L-아스코르브산 인산디에스테르칼륨 0.1
아세트산토코페롤 0.05
생선 콜라겐 0.4
콘드로이틴 황산나트륨 0.01
히알루론산나트륨 0.1
팔로 아즐 추출액(생약 팔로 아즐(palo azul)) 0.1
파라벤 적당량
에데트산3나트륨 0.05
디파라메톡시신남산모노-2-에틸헥산산 글리세릴 0.05
규산알루미늄마그네슘 0.3
정제수 잔부
처방예 42(유액)
메틸폴리실록산 3
데카메틸시클로펜타실록산 4
에틸알코올 5
글리세린 6
1,3-부틸렌글리콜 5
폴리옥시에틸렌 메틸글루코시드 3
해바라기유 1
스쿠알렌 2
자일리톨 3
수산화칼륨 0.1
헥사메타인산나트륨 0.05
히드록시프로필-β-시클로덱스트린 0.1
그리칠리틴산디칼륨 0.05
비파나무잎 추출물 0.1
L-글루타민산나트륨 0.05
회향풀 추출물 0.1
라벤더유 0.1
팔로 아즐 추출액(생약 팔로 아즐(palo azul)) 0.05
파라벤 적당량
디모르폴리노피리다진 0.1
철단 적당량
황산화철 적당량
크산탄 검 0.1
카르복시비닐폴리머 0.1
아크릴산ㆍ메타크릴산알킬 공중합체 0.1
정제수 잔부
처방예 43(유액)
바세린 5
베헤닐알코올 0.4
바틸알코올 0.4
글리세린 7
1,3-부틸렌글리콜 7
자일리트 3
폴리에틸렌글리콜20000 2
경화유 2
호호바유 2
스쿠알렌 5
이소스테아르산 0.4
테트라2-에틸헥산산펜타에리트리트 2
폴리옥시에틸렌 경화피마자유 0.5
라우릴디메틸아미노아세트산베타인 0.4
수산화칼륨 적당량
피로아황산나트륨 0.01
헥사메타인산나트륨 0.05
그리칠리틴산디칼륨 0.05
트리메틸글리신 3
알부틴 3
효모 추출물 0.1
아세트산토코페롤 0.1
티오타우린 0.1
팔로 아즐 추출액(생약 팔로 아즐(palo azul)) 0.05
고삼 추출물 0.1
페녹시에탄올 적당량
철단 적당량
퀸즈시드 추출물 0.1
카르복시비닐폴리머 0.2
정제수 잔부
처방예 44(화장수)
에틸알코올 5
글리세린 2
1,3-부틸렌글리콜 5
폴리옥시에틸렌 폴리옥시프로필렌데실 테트라데실에테르 0.2
헥사메타인산나트륨 0.03
트리메틸글리신 1
자일리톨 3
폴리아스파라긴산나트륨 0.1
DL-α-토코페롤2-L-아스코르브산 인산디에스테르칼륨 0.1
티오타우린 0.1
녹차 추출물 0.1
팔로 아즐 추출액(생약 팔로 아즐(palo azul)) 0.05
이리스 뿌리 추출물 0.1
페녹시에탄올 0.12
에틸렌디아민히드록시에틸아세트산3나트륨(HEDTA) 0.07
카르복시비닐폴리머 0.09
정제수 잔부
향료 적당량
처방예 45(화장수)
글리세린 2
1,3-부틸렌글리콜 4
에리트리톨 2
자일리톨 3
팔로 아즐 추출액(생약 팔로 아즐(palo azul)) 0.2
폴리옥시에틸렌 메틸글루코시드 1
폴리옥시에틸렌 경화피마자유 0.5
시트르산 0.02
시트르산나트륨 0.08
페녹시에탄올 0.25
N-야자유 지방산 아실L-아르기닌에틸ㆍDL-피롤리돈카르복실산 0.1
정제수 잔부
처방예 46(화장수)
에틸알코올 5
글리세린 0.1
디프로필렌글리콜 2
1,3-부틸렌글리콜 6
자일리톨 6
로즈마리유 0.001
세이지유 0.001
시트르산 0.02
시트르산나트륨 0.08
헥사메타인산나트륨 0.03
히드록시프로필-β-시클로덱스트린 0.1
무환자나무 추출물 0.1
찔레나무 과실 추출물 0.1
백합 추출물 0.1
황벽나무 추출물 0.1
토게나시 추출물 0.1
라즈베리 추출물 0.1
라벤더유 0.1
복숭아씨 추출물 0.1
팔로 아즐 추출액(생약 팔로 아즐(palo azul)) 0.1
알긴산나트륨 0.001
정제수 잔부
본 발명의 외용제는 인간 케라티노사이트가 건조에 의해 받는 각질층 수분량의 저하를 유의하게 방지할 수 있는 동시에, 각질층의 피부 배리어기능 저하를 억제할 수 있다. 따라서, 본 발명은 화장품 또는 피부과용 제제의 제조업에서 이용할 수 있다.

Claims (23)

  1. 배양 인간 케라티노사이트의 기상 노출에 의한 필라그린 유전자 발현능의 저하를 유의하게 억제할 수 있는 물질을 인간 피부의 각질층의 배리어기능의 저하 및 보습기능의 저하를 억제하는 데에 충분한 양, 및 화장품 및/또는 피부과용 제제에서의 사용이 허용되는 기초제 또는 첨가제를 함유하여 이루어진 피부외용제.
  2. 제 1 항에 있어서, 상기 필라그린 유전자 발현능의 저하를 유의하게 억제할 수 있는 물질이 베타인 화합물 및 이들 유도체, 폴리올 및 이들 유도체, 생약, 및 항산화 작용을 갖는 물질로 이루어진 군에서 선택되는 1 종 또는 2 종 이상인 피부외용제.
  3. 제 2 항에 있어서, 베타인 화합물 및 이들 유도체가 글리신베타인, 술테인, γ-부티로베타인, 데실베타인, 라우릴베타인, 미리스틸베타인, 세틸베타인, 스테아릴베타인, 베헤닐베타인, 라우라미드프로필베타인, 올레아미드프로필베타인, 팔미타미드프로필베타인, γ-부티로베타인, 라우릴술타인, 코코술타인, 폴리(메타크릴로일옥시에틸베타인) 및 폴리(메타크릴로일옥시에틸베타인코-2-히드록시에틸메타크릴산)으로 이루어진 군에서 선택되는 피부외용제.
  4. 제 2 항에 있어서, 폴리올 및 이들 유도체가, 글리세린, 1,3-프로판디올, 2-메틸-1,3-프로판디올, 1,4-부탄디올, 1,5-펜탄디올, 디글리세린, 에리트리톨, 글루콘산, 1,2,6-헥산트리올, 이노시톨, 락티톨, 말티톨, 만니톨, 자일리톨로 이루어진 군에서 선택된 피부외용제.
  5. 제 2 항에 있어서, 생약이, 국화과(Compositae)의 바카리스속(Baccharis) 식물, 특히 바카리스 제니스텔로이드(Baccharis genistelloids)에서 유래되는 생약 카르퀘자[carqueja(남미)], 아키로클리네속(Achyrocline) 식물, 특히 아키로클리네 사츄레오이디스(Achyrocline satureoides)에서 유래되는 생약 마셀라미스타[macelamista(남미)] 및 톱풀속(Achillea) 식물, 특히 서양톱풀(Achillea millefoliumL.)에서 유래되는 생약 서양톱풀; 꿀풀과(Labiatae)의 백리향속(Thymus) 식물, 특히 백리향(Thymus serphyllumLinne subsp. serphyllum)에서 유래되는 생약 백리향 추출물, 오레가노속(Origanum) 식물, 특히 마조람(Origanum majoranaL.)에서 유래되는 생약 마요라나 추출물, 골무꽃속(Scutellaria) 식물, 특히 황금(Scutellaria baicalensisGeorgi)에서 유래되는 생약 황금 및 라벤더속(Lavandula) 식물, 특히 라벤더(Lavandula officinalls)에서 유래되는 생약 라벤더유; 장미과(Rosaceae)의 장미속(Rosa) 식물, 특히 이자요 장미(Rosa roxburghii)에서 유래되는 생약 이자요 장미 과실 및 벚나무속(Prunus) 식물, 특히 사토벚나무(Prunus lannesiana(Corr.) Wilson var.Spciosa(Koidz) Makino)에서 유래되는 생약 벚나무잎 추출물; 조록나무과(Hamamelidaceae)의 풍년화속(Hamamelis) 식물, 특히하마멜리스(Hamamelis virginianaL.)에서 유래되는 생약 하마멜리스; 노루발과(Pyrolaceae)의 노루발속(Pyrola) 식물, 특히 노루발(Pyrola japonicusKlenze)에서 유래되는 생약 노루발; 그리고 콩과(Leguminosae)의 에이센하드티아속(Eysenhardtia) 식물, 특히 에이센하드티아 폴리스타키아(Eysenhardtia polistachya)에서 유래되는 생약 팔로 아즐[palo azul(남미)]로 이루어진 군에서 선택된 피부외용제.
  6. 제 2 항에 있어서, 항산화 작용을 갖는 물질이 아스코르브산 및 그 염 또는 유도체, 그리고 황함유 아미노산 함유 화합물 및 이들 중간대사물로 이루어진 군에서 선택된 피부외용제.
  7. 제 2 항에 있어서, 항산화 작용을 갖는 물질이 글루타치온 및 하이포타우린에서 선택된 피부외용제.
  8. 제 2 항에 있어서, 생약과, 베타인 화합물 및 이들 유도체, 폴리올 및 이들 유도체, 그리고 항산화 작용을 갖는 물질로 이루어진 군에서 선택된 1 종류 이상의 조합을 포함하여 이루어진 피부외용제.
  9. 제 2 항에 있어서, 생약으로서의 생약 팔로 아즐(palo azul)과 글리세린 및 탄소수 4∼6의 당 알코올 중 어느 하나를, 생약으로서의 팔로 아즐과 글리세린 및글루타치온 또는 하이포타우린을, 생약으로서의 생약 팔로 아즐과 글리세린 및 아스코르브산 또는 그 염 또는 그 유도체를, 또는 생약으로서의 생약 팔로 아즐과 글리세린 및 베타인 화합물 또는 그 유도체를 함유하여 이루어진 피부외용제.
  10. 제 2 항에 있어서, 생약으로서의 생약 팔로 아즐, 글리세린 및 자일리톨을 함유하여 이루어진 피부외용제.
  11. 제 2 항에 있어서, 글리세린 및 탄소수 4∼6의 당 알코올 중 어느 하나와 생약을 함유하여 이루어진 피부외용제.
  12. 생약으로서의 생약 팔로 아즐(palo azul)과 글리세린 및 탄소수 4∼6의 당 알코올 중 어느 하나를, 생약으로서의 팔로 아즐과 글리세린 및 글루타치온 또는 하이포타우린을, 생약으로서의 생약 팔로 아즐과 글리세린 및 아스코르브산 또는 그 염 또는 그 유도체를, 또는 생약으로서의 생약 팔로 아즐과 글리세린 및 베타인 화합물 또는 그 유도체를 함유하여 이루어진 피부외용제.
  13. 제 12 항에 있어서, 생약으로서의 생약 팔로 아즐, 글리세린 및 자일리톨을 함유하여 이루어진 피부외용제.
  14. 배양 인간 케라티노사이트의 기상 노출에 의한 필라그린 유전자 발현능의 저하를 유의하게 억제할 수 있는 물질의 인간 피부의 각질층의 배리어기능의 저하를 억제할 수 있는 피부외용제의 조제를 위한 용도.
  15. 제 14 항에 있어서, 상기 필라그린 유전자 발현능의 저하를 유의하게 억제할 수 있는 물질이 베타인 화합물 및 이들 유도체, 폴리올 및 이들 유도체, 생약, 그리고 항산화 작용을 갖는 물질로 이루어진 군에서 선택되는 1 종 또는 2 종 이상인 용도.
  16. 제 14 항 또는 제 15 항에 있어서, 상기 필라그린 유전자 발현능의 저하를 유의하게 억제할 수 있는 물질이, 생약으로서의 팔로 아즐(palo azul)과 글리세린 및 탄소수 4∼6의 당 알코올 중 어느 하나를, 생약으로서의 팔로 아즐과 글리세린 및 글루타치온 또는 하이포타우린을, 생약으로서의 팔로 아즐과 글리세린 및 아스코르브산 또는 그 염 또는 그 유도체를, 또는 생약으로서의 생약 팔로 아즐과 글리세린 및 베타인 화합물 또는 그 유도체를 함유하여 이루어진 용도.
  17. 베타인 화합물 및 이들 유도체, 폴리올 및 이들 유도체, 생약, 그리고 항산화 작용을 갖는 물질로 이루어진 군에서 선택되는 1 종 또는 2 종 이상을 함유하는 조성물을 인간 피부에 도포하는 단계를 포함하여 이루어진 건조에 의한 피부 상해의 억제 또는 회복방법.
  18. 제 17 항에 있어서, 상기 조성물이, 생약으로서의 팔로 아즐(palo azul)과 글리세린 및 탄소수 4∼6의 당 알코올 중 어느 하나를, 생약으로서의 팔로 아즐과 글리세린 및 글루타치온 또는 하이포타우린을, 생약으로서의 생약 팔로 아즐과 글리세린 및 아스코르브산을, 또는 생약으로서의 생약 팔로 아즐과 글리세린 및 베타인 화합물 또는 그 유도체를 함유하여 이루어진 방법.
  19. 건조에 의한 피부 상해를 억제할 수 있는지 여부에 대한 물질의 평가방법으로,
    (A) 배양 인간 케라티노사이트를 준비하고,
    (B) 피험물의 존재 하에서 이 배양 인간 케라티노사이트를 기상 노출한 후, 이 케라티노사이트의 필라그린 유전자의 발현능을 검출하고, 그리고
    (C) 검출된 필라그린 유전자의 발현능을 대조하는 그것과 비교하여 발현능의 많고 적음을 이 피부 상해의 억제기능의 지표로 하는 것을 특징으로 하는 평가방법.
  20. 제 19 항에 있어서, 필라그린 유전자의 발현능이 상기 인간 케라티노사이트의 필라그린 단백질량 또는 필라그린의 mRNA량의 측정에 따라 결정되는 평가방법.
  21. 제 19 항에 있어서, 배양 인간 케라티노사이트가 인간 포피 유래의 정상 세포를 지지 세포 상에서 배양한 것인 평가방법.
  22. 제 19 항에 있어서, 기상 노출한 후의 상기 케라티노사이트의 필라그린 유전자의 발현능이 피험물의 비존재 하(대조)의 발현능의 저하를 피험물의 존재 하에서 억제되는 경우를, 이 피험물이 건조에 의한 피부 상해를 억제할 수 있는 것으로 평가하는 평가방법.
  23. 제 19 항에 있어서, 기상 노출이 배양 인간 케라티노사이트의 배지를 제거하고 실시되는 평가방법.
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