KR20030036867A

KR20030036867A - 글루코피라노실옥시벤질벤젠 유도체 및 그것을 함유하는의약조성물

Info

Publication number: KR20030036867A
Application number: KR10-2003-7004588A
Authority: KR
Inventors: 히데키 후지쿠라; 노부히코 후시미; 도시히로 니시무라; 가즈야 다타니; 마사유키 이사지
Original assignee: 깃세이 야쿠힌 고교 가부시키가이샤
Priority date: 2000-09-29
Filing date: 2001-09-21
Publication date: 2003-05-09
Also published as: JP3798375B2; ES2269456T3; NO20031407L; PL205607B1; NZ524917A; UA73606C2; NO327182B1; PL362177A1; CZ303544B6; ATE335753T1; BR0114310A; US6872706B2; HUP0301178A3; AU2001290257B2; PE20020476A1; CY1106076T1; SK3342003A3; DE60122193T2; JPWO2002028872A1; KR100647204B1

Abstract

본 발명은, 경구 흡수성이 개선되고, 생체내에서 우수한 사람 SGLT2 활성저해작용을 발휘하는, 당뇨병, 당뇨병성 합병증, 비만증 등의 고혈당증에 기인하는 질환의 예방 또는 치료제로서 유용한, 화학식 I

(화학식 I)

(식중의 P는 프로드러그를 구성하는 기이고, R은 저급 알킬기, 저급 알콕시기, 저급 알킬티오기, 저급 알콕시 저급 알킬기, 저급 알콕시 저급 알콕시기 또는 저급 알콕시 저급 알킬티오기이다)로 표시되는 글루코피라노실옥시벤질벤젠 유도체 및 그것을 함유하는 의약조성물에 관한 것이다.

Description

글루코피라노실옥시벤질벤젠 유도체 및 그것을 함유하는 의약조성물{GLUCOPYRANOSYLOXYBENZYLBENZENE DERIVATIVES AND MEDICINAL COMPOSITIONS CONTAINING THE SAME}

당뇨병은 식생활의 변화나 운동부족을 배경으로 한 생활 습관병의 하나이다. 그러므로, 당뇨병 환자에게는 식사요법이나 운동요법이 실시되고 있는데, 충분한 콘트롤이나 계속적 실시가 곤란한 경우, 약물요법이 병용되고 있다. 현재, 당뇨병 치료약으로서는, 비구아나이드 약, 술포닐우레아 약이나 인슐린 저항성 개선약 등이 사용되고 있다. 그렇지만, 비구아나이드 약에는 락트산 아시도시스, 술포닐우레아 약에는 저혈당, 인슐린 저항성 개선약에는 부종 등의 부작용이 인정되는 일이 있는 점에서, 비만화를 촉진시키는 것이 우려되고 있다. 그 때문에, 이와 같은 문제를 해소해기 위해 새로운 작용 메커니즘에 의한 당뇨병 치료제의 개발이 촉망되고 있다.

근래, 신장에서 과잉한 당의 재흡수를 저해함으로써 요당의 배설을 촉진시켜서 혈당치를 저하시키는, 새로운 타입의 당뇨병 치료약의 연구개발이 추진되고 있다(J. Clin. Invest., Vol. 79, pp. 1510-1515(1987)). 또, 신장의 근위요세관의 S1 영역에 SGLT2(나트륨 의존성 글루코스 수송체2)가 존재하고, 이 SGLT2가 사구체 여과된 당의 재흡수에 주로 관여하고 있는 것이 보고되어 있다(J. Clin. Invest., Vol. 93, pp. 397-404(1994)). 그러므로, 사람 SGLT2를 저해함으로써 신장에서의 과잉한 당의 재흡수를 억제하고, 오줌으로부터 과잉한 당을 배설시켜서 혈당치를 정상화 할 수 있다. 따라서 강력한 사람 SGLT2 활성저해작용을 가지고, 새로운 작용 메커니즘에 의한 당뇨병 치료약의 조기개발이 요망된다. 게다가, 이와 같은 요당 배설촉진제는 과잉한 혈당을 오줌으로부터 배설하기 때문에, 체내에서의 당의 축적이 감소하므로, 비만화의 방지효과도 기대할 수 있다.

본 발명은, 의약품으로서 유용한 글루코피라노실옥시벤질벤젠 유도체 및 그것을 함유하는 의약조성물에 관한 것이다.

더욱 상세하게 말하면, 본 발명은, 당뇨병, 당뇨병성 합병증, 비만증 등의 고혈당증에 기인하는 질환의 예방 또는 치료제로서 유용한, 사람 SGLT2 활성저해작용을 갖는, 화학식 II

(식중의 R은 저급 알킬기, 저급 알콕시기, 저급 알킬티오기, 저급 알콕시 저급 알킬기, 저급 알콕시 저급 알콕시기 또는 저급 알콕시 저급 알킬티오기이다)로 표시되는 글루코피라노실옥시벤질벤젠 유도체를 활성 본체로 하는, 화학식 I

본 발명자들은, 사람 SGLT2 활성저해작용을 갖는 화합물을 찾아내기 위해 예의 검토한 결과, 상기 화학식 I로 표시되는 화합물이, 하기와 같이 생체내에서 활성 본체인 상기 화학식 II로 표시되는 글루코피라노실옥시벤질벤젠 유도체로 변환되어 우수한 사람 SGLT2 저해활성을 나타낸다는 식견을 얻어, 본 발명을 이룩하게 되었다.

본 발명은, 생체내에서 사람 SGLT2 활성저해작용을 발휘하고, 신장에서의 당의 재흡수를 억제하고 과잉한 당을 오줌중에 배설시킴으로써, 우수한 혈당 저하작용을 발현하는, 하기의 글루코피라노실옥시벤질벤젠 유도체 및 그것을 함유하는 의약조성물을 제공하는 것이다.

즉, 본 발명은, 화학식 I

(화학식 I)

(식중의 P는 프로드러그를 구성하는 기이고, R은 저급 알킬기, 저급 알콕시기, 저급 알킬티오기, 저급 알콕시 저급 알킬기, 저급 알콕시 저급 알콕시기 또는 저급 알콕시 저급 알킬티오기이다)로 표시되는 글루코피라노실옥시벤질벤젠 유도체에 관한 것이다.

본 발명은, 상기 화학식 I로 표시되는 글루코피라노실옥시벤질벤젠 유도체를 유효성분으로서 함유하는 의약조성물에 관한 것이다.

본 발명은, 상기 화학식 I로 표시되는 글루코피라노실옥시벤질벤젠 유도체를 유효성분으로서 함유하는 사람 SGLT2 저해제에 관한 것이다.

본 발명은, 상기 화학식 I로 표시되는 글루코피라노실옥시벤질벤젠 유도체를 유효성분으로서 함유하는, 고혈당증에 기인하는 질환의 예방 또는 치료제에 관한 것이다.

본 발명은, 상기 화학식 I로 표시되는 글루코피라노실옥시벤질벤젠 유도체를 유효량 투여한 것으로 이루어지는, 고혈당증에 기인하는 질환의 예방 또는 치료방법에 관한 것이다.

본 발명은, 고혈당증에 기인하는 질환의 예방 또는 치료용의 의약조성물을 제조하기 위한, 상기 화학식 I로 표시되는 글루코피라노실옥시벤질벤젠 유도체의사용에 관한 것이다.

본 발명에서, 프로드러그란, 생체내에서 활성 본체인 상기 화학식 II로 표시되는 글루코피라노실옥시벤질벤젠 유도체로 변환되는 화합물을 말하며, 프로드러그를 구성하는 기로서는, 예를 들면, 저급 아실기, 저급 알콕시 저급 아실기, 저급 알콕시 카르보닐 저급 아실기, 저급 알콕시 카르보닐기, 저급 알콕시 저급 알콕시 카르보닐기 등의 프로드러그에서 통상 사용할 수 있는 수산기에 대해 붙여지는 보호기를 들 수 있다.

또, 본 발명에서, 저급 알킬기란, 메틸기, 에틸기, 프로필기, 이소프로필기, 부틸기, 이소부틸기, sec-부틸기, tert-부틸기, 펜틸기, 이소펜틸기, 네오펜틸기, tert-펜틸기, 헥실기 등의 탄소수 1∼6의 직쇄상 또는 분기상의 알킬기를 말하고, 저급 알콕시기란, 메톡시기, 에톡시기, 프로폭시기, 이소프로폭시기, 부톡시기, 이소부톡시기, sec-부톡시기, tert-부톡시기, 펜틸옥시기, 이소펜틸옥시기, 네오 펜틸옥시기, tert-펜틸옥시기, 헥실옥시기 등의 탄소수 1∼6의 직쇄상 또는 분기상의 알콕시기를 말하고, 저급 알킬티오기이란, 메틸티오기, 에틸티오기, 프로필티오기, 이소프로필티오기, 부틸티오기, 이소부틸티오기, sec-부틸티오기, tert-부틸티오기, 펜틸티오기, 이소펜틸티오기, 네오펜틸티오기, tert-펜틸티오기, 헥실티오기 등의 탄소수 1∼6의 직쇄상 또는 분기상의 알킬티오기를 말한다. 저급 알콕시 저급 알킬기란, 상기 저급 알콕시기로 치환된 상기 저급 알킬기를 말하고, 저급 알콕시 저급 알콕시기란, 상기 저급 알콕시기로 치환된 상기 저급 알콕시기를 말하고, 저급 알콕시 저급 알킬티오기란, 상기 저급 알콕시기로 치환된 상기 저급 알킬티오기를 말한다. 저급 아실기란, 아세틸기, 프로피오닐기, 부티릴기, 이소부티릴기, 피발로일기, 헥사노닐기, 시클로 헥실 카르보닐기 등의 탄소수 2∼7의 직쇄상, 분기상 또는 환상의 아실기를 말하고, 저급 알콕시 저급 아실기란, 상기 저급 알콕시기로 치환된 상기 저급 아실기을 말한다. 또, 저급 알콕시 카르보닐기란, 메톡시 카르보닐기, 에톡시 카르보닐기, 이소프로필옥시 카르보닐기, 이소부틸옥시 카르보닐기, 시클로헥실옥시 카르보닐기 등의 탄소수 2∼7의 직쇄상, 분기상 또는 환상의 알콕시 카르보닐기를 말하고, 저급 알콕시 카르보닐 저급 아실기란, 3-(에톡시 카르보닐)프로피오닐기 등의 상기 저급 알콕시 카르보닐기로 치환된 상기 저급 아실기를 말하고, 저급 알콕시 저급 알콕시 카르보닐기란, 2-메톡시 에톡시 카르보닐기 등의 상기 저급 알콕시기로 치환된 상기 저급 알콕시 카르보닐기를 말한다.

치환기 R에 있어서는, 바람직하게는 저급 알킬기 또는 저급 알콕시기이고, 더욱 바람직하게는 탄소수 1∼4의 직쇄상 또는 분기상의 알킬기 또는 탄소수 1∼3의 직쇄상 또는 분기상의 알콕시기이고, 가장 바람직하게는 에틸기 또는 메톡시기이다. 치환기 P에 있어서는, 바람직하게는 저급 아실기 또는 저급 알콕시 카르보닐기이다. 저급 아실기로서는, 바람직하게는 탄소수 4∼6의 직쇄상 또는 분기상의 아실기이고, 더욱 바람직하게는 부티릴기 또는 헥사노닐기이다. 저급 알콕시 카르보닐기로서는, 바람직하게는 탄소수 2∼5의 직쇄상 또는 분기상의 알콕시 카르보닐기이고, 더욱 바람직하게는 메톡시 카르보닐기 또는 에톡시 카르보닐기이다.

본 발명의 화합물은, 상기 화학식 II로 표시되는 글루코피라노실옥시벤질벤젠 유도체의 수산기에, 상법에 따라 통상 프로드러그에서 사용가능한 수산기의 보호기를 도입함으로써 제조할 수 있다. 예를 들면, 본 발명의 상기 화학식 I로 표시되는 화합물은, 상기 화학식 II로 표시되는 글루코피라노실옥시벤질벤젠 유도체를 사용하여, 이하의 방법에 따라 제조할 수 있다.

(식중의 X는 브롬 원자, 염소 원자 등의 이탈기이고, R 및 P는 상기와 동일한 의미를 가짐)

상기 화학식 II로 표시되는 글루코피라노실옥시벤질벤젠 유도체의 수산기를 상기 화학식 I로 표시되는 보호화시약을 사용하여, 불활성 용매중 또는 무용매하에서, 피리딘, 트리에틸 아민, N,N-디이소프로필에틸 아민, 피콜린, 루티딘, 콜리딘, 퀴누클리딘, 1, 2, 2, 6, 6-펜타메틸 피페리딘, 1, 4-디아자비시클로[2. 2. 2]옥탄 등의 염기의 존재하에 보호함으로써 상기 화학식 I로 표시되는 프로드러그를 제조할 수 있다. 사용되는 용매로서는, 예를 들면, 염화메틸렌, 아세토니트릴, 아세트산 에틸, 디이소프로필 에테르, 클로로포름, 테트라히드로푸란, 1, 2-디메톡시 에탄, 1, 4-디옥산, 아세톤, tert-부탄올, 그들의 혼합용매 등을 들 수 있고, 반응온도는 통상 -40℃∼환류온도이고, 반응시간은 사용하는 원료물질이나 용매, 반응온도 등에 따라 다르지만, 통상 30분간∼2일간이다.

상기 제조방법에서 출발물질로서 사용되는 본 발명의 상기 화학식 II로 표시되는 화합물은, 예를 들면, 이하의 방법에 따라 제조할 수 있다.

(식중 M은 수산기의 보호기이고, X¹은 트리클로로아세토이미도일옥시기, 아세톡시기, 브롬 원자, 불소 원자 등의 이탈기이고, Y 및 Z는 어느 한 쪽이 MgBr, MgCl, MgI 또는 리튬 원자이고, 다른 쪽이 포르밀기이고, R은 상기와 동일한 의미를 가진다)

공정1

상기 화학식 IV로 표시되는 벤즈 알데히드 유도체와 상기 화학식 V로 표시되는 그리냐르 시약 또는 리튬 시약 혹은 상기 화학식 IV로 표시되는 그리냐르 시약 또는 리튬 시약과 상기 화학식 V로 표시되는 벤즈알데히드 유도체를, 불활성 용매중, 축합시킴으로써 상기 화학식 VI로 표시되는 화합물을 제조할 수 있다. 사용되는 용매로서는, 예를 들면, 테트라히드로푸란, 디에틸에테르, 그들의 혼합용매 등을 들 수 있고, 반응온도는 통상 -78℃∼환류온도이고, 반응시간은 사용하는 원료물질이나 용매, 반응온도 등에 따라 다르지만, 통상 10분간∼1일간이다.

공정 2

상기 화학식 VI으로 표시되는 화합물을, 불활성 용매중, Dess-Martin 시약을 사용하여 산화함으로써 상기 화학식 VII로 표시되는 화합물을 제조할 수 있다. 사용되는 용매로서는, 예를 들면, 염화메틸렌, 클로로포름, 아세토니트릴, 그들의 혼합용매 등을 들 수 있고, 반응온도는 통상 0℃∼환류온도이고, 반응시간은 사용한 원료물질이나 용매, 반응온도 등에 따라 다르지만, 통상 1시간∼1일간이다.

공정 3

상기 화학식 VI으로 표시되는 화합물을, 불활성 용매중, 염산 등의 산의 존재하 또는 비존재하에서, 팔라듐탄소 분말 등의 팔라듐계 촉매를 사용하여 접촉 환원한 후, 필요에 따라서 보호기를 상법에 따라 제거함으로써, 상기 화학식 VIII의 화합물을 제조할 수 있다. 접촉 환원에서 사용되는 용매로서는, 예를 들면, 메탄올, 에탄올, 테트라히드로푸란, 아세트산 에틸, 아세트산, 이소프로판올, 그들의 혼합용매 등을 들 수 있고, 반응온도는 통상 실온∼환류온도이고, 반응시간은 사용하는 원료물질이나 용매, 반응온도 등에 따라 다르지만, 통상 30분간∼1일간이다.또, 상기 화학식 VIII의 화합물은, 상법에 따라 나트륨염, 칼륨염 등의 염으로 변환할 수 있다.

공정 4

상기 화학식 VII로 표시되는 화합물의 보호기 M을 상법에 따라 제거한 후, 불활성 용매중, 트리에틸 아민, 디이소프로필에틸 아민, 4-(N,N-디메틸 미노)피리딘 등의 염기의 존재하에, 클로로포름산메틸과 축합하고, 얻어진 탄산 에스테르 유도체를 수소화붕소 나트륨 등의 환원제를 사용하여 환원함으로써, 상기 일반식 (VIlI)의 화합물을 제조할 수 있다. 축합반응에서, 사용되는 용매로서는, 예를 들면, 테트라히드로푸란, 염화메틸렌, 아세토니트릴, 아세트산 에틸, 디에틸 에테르, 그들의 혼합용매 등을 들 수 있고, 반응온도는 통상 0℃∼환류온도이고, 반응시간은 사용하는 원료물질이나 용매, 반응온도 등에 따라 다르지만, 통상 30분간∼1일간이다. 환원반응에 있어, 사용되는 용매로서는, 예를 들면, 테트라히드로푸란과 물과의 혼합용매 등을 들 수 있고, 반응온도는 통상 0℃∼환류온도이고, 반응시간은 사용하는 원료물질이나 용매, 반응온도 등에 따라 다르지만, 통상 1시간∼1일간이다. 또, 상기 화학식 VIII의 화합물은, 상법에 따르고 나트륨염, 칼륨염 등의 염으로 변환할 수 있다.

공정 5

상기 화학식 VIII로 표시되는 벤질페놀 유도체 또는 그 염을 2, 3, 4, 6-테트라-O-아세틸-1-O-트리클로로아세토이미도일 -α-D-글루코피라노스, 1, 2, 3, 4, 6-펜타-O-아세틸-β-D-글루코피라노스, 2, 3, 4, 6-테트라-O-아세틸-α-D-글루코피라노실브로미드, 2, 3, 4, 6-테트라-O-아세틸-β-D-글루코피라노실플루오리드 등의 상기 화학식 IX로 표시되는 당 공여체를 사용하여, 불활성 용매중, 3불화붕소-디에틸에테르 착체, 트리플루오로메탄술폰산 은, 염화 제2주석, 트리플루오로메탄술폰산 트리메틸실릴 등의 활성화제의 존재하에 배당화시킴으로써, 상기 화학식 X으로 표시되는 배당체를 제조할 수 있다. 사용되는 용매로서는, 예를 들면, 염화메틸렌, 톨루엔, 아세토니트릴, 니트로 메탄, 아세트산 에틸, 디에틸 에테르, 클로로포름, 그들의 혼합용매 등을 들 수 있고, 반응온도는 통상 -30℃∼환류온도이고, 반응시간은 사용하는 원료물질이나 용매, 반응온도 등에 따라 다르지만, 통상 10분간∼1일간이다.

공정 6

상기 일반식(X)으로 표시되는 배당체를 알칼리 가수분해시켜서 수산기의 보호기를 제거함으로써, 상기 화학식 II로 표시되는 글루코피라노실옥시벤질벤젠 유도체를 제조할 수 있다. 사용되는 용매로서는, 예를 들면, 물, 메탄올, 에탄올, 테트라히드로푸란, 그들의 혼합용매 등을 들 수 있고, 알칼리성 물질로서는, 예를 들면, 수산화나트륨, 나트륨메톡시드, 나트륨에톡시드 등을 사용할 수 있다. 처리온도는 통상 O℃∼환류온도이고, 처리시간은 사용하는 원료물질이나 용매, 처리온도 등에 따라 다르지만, 통상 30분간∼6시간 이다.

상기 제조방법에서 얻어지는 본 발명의 화합물은, 관용의 분리수단인 분별 재결정법, 크로마토그래피를 사용한 정제법, 용매 유출법, 고상추출법 등에 의해 단리 정제할 수 있다.

상기 화학식 I로 표시되는 본 발명의 프로드러그에는, 수화물이나 에탄올 등의 의약품으로서 허용되는 용매와의 용매화물도 포함된다.

상기 화학식 I로 표시되는 본 발명의 프로드러그는, 생체내에서 활성 본체인 상기 화학식 II로 표시되는 글루코피라노실옥시벤질벤젠 유도체로 변환되고, 우수한 사람 SGLT2 활성저해작용을 발휘할 수 있다. 또, 상기 화학식 I로 표시되는 본 발명의 프로드러그는, 경구흡수성이 개선되어 있고, 당해 프로드러그를 유효성분으로서 함유하는 의약조성물은, 경구투여제제로서도 높은 유용성을 갖는다. 그러므로, 본 발명의 프로드러그는, 당뇨병, 당뇨병성 합병증, 비만증 등의 고혈당증에 기인하는 질환의 예방 또는 치료제로서 극히 유용하다.

본 발명의 의약조성물을 실제의 치료에 사용하는 경우, 용법에 따라서 여러 가지의 제형의 것이 사용된다. 이와 같은 제형으로서는 예를 들면, 산제, 과립제, 세립제, 드라이 시럽제, 정제, 캡슐제, 주사제, 물약, 연고제, 좌제, 접착제 등을 들 수 있고, 경구 또는 비경구적으로 투여된다.

이들의 의약조성물은, 그 제형에 따라 조제학상 사용되는 수법에 의해 적당한 부형제, 붕괴제, 결합제, 활택제, 희석제, 완충제, 등장화제, 방부제, 습윤제, 유화제, 분산제, 안정화제, 용해보조제 등의 의약품 첨가물과 적절히 혼합 또는 희석·용해하고, 상법에 따라 조제함으로써 제조할 수 있다.

본 발명의 의약조성물을 실제의 치료에 사용하는 경우, 그 유효성분인 본 발명의 화합물의 투여량은 환자의 연령, 성별, 체중, 질환 및 치료의 정도 등에 따라 적절하게 결정되는데, 경구투여의 경우 성인 1일당 대개 0.1∼1000mg의 범위이고,비경구 투여의 경우는, 성인 1일당 대개 0.01∼300mg의 범위이고, 1회 또는 수회로 나누어서 적절하게 투여할 수 있다.

본 발명의 내용을 이하의 참고예, 실시예 및 시험예에서 더욱 상세히 설명하지만, 본 발명은 그 내용에 한정되는 것은 아니다.

(참고예 1)

2-(4-이소부틸 벤질)페놀

2- 벤질옥시-1-브로모벤젠(0.20g), 금속 마그네슘(0.026g), 촉매량의 요오드 및 테트라히드로푸란(1mL)로 상법에 따라 그리냐르 시약을 조제했다. 얻어진 그리냐르 시약을 4-이소부틸벤즈알데히드(0.16g)의 테트라히드로푸란(2mL) 용액에 가하고, 실온에서 30분간 교반했다. 반응 혼합물을 아미노프로필 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(용출용매: 테트라히드로푸란)로 정제하여, 디페닐 메탄올체(0.23g)를 얻었다. 얻어진 디페닐 메탄올체를 에탄올(3mL) 및 농염산(0.1mL)에 용해하고, 촉매량의 10%팔라듐카본 분말을 가하고, 수소 분위기하에 실온에서 하루밤 교반했다. 촉매를 여과 제거하고, 감압하에 농축했다. 잔사를 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(용출용매: 염화메틸렌/헥산=1/1)로 정제하고 2-(4-이소부틸헥실)페놀(0.10g)을 얻었다.

(참고예 2)

2-(4-이소프로폭시 벤질)페놀

4-이소부틸벤즈 알데히드 대신에 4-이소프로폭시벤즈 알데히드를 사용하여, 참고예 1과 동일한 방법으로 표기화합물을 합성했다.

(참고예 3)

2-(4-에톡시 벤질)페놀

1-브로모-4-에톡시벤젠(1.5g), 금속 마그네슘(0.19g), 촉매량의 요오드 및 테트라히드로푸란(2mL)로 상법에 따라 그리냐르 시약을 조제했다. 얻어진 그리냐르 시약 용액에 2- 벤질옥시벤즈 알데히드(1.1g)의 테트라히드로푸란(15mL) 용액을 적하하고, 실온에서 30분간 교반했다. 포화 염화암모늄 수용액(10mL) 및 물(20mL)를 가하고, 아세트산 에틸(100mL)로 추출했다. 추출액을 물(20mL) 및 포화 식염 수(20mL)로 세척했다. 무수 황산나트륨으로 건조 후, 감압하에 용매를 증류 제거했다. 잔사를 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(용출용매: 헥산/아세트산 에틸=5/1)로 정제하여, 디페닐 메탄올체(1.7g)를 얻었다. 얻어진 디페닐 메탄올체(1.7g)를 에탄올(25mL)에 용해하고, 농염산(0.42mL) 및 촉매량의 10%팔라듐카본 분말을 가하고, 수소 분위기하에, 실온에서 18시간 교반했다. 촉매를 여과 제거하여, 감압하에 농축했다. 잔사에 아세트산 에틸(100mL)을 가하고, 포화 중조수(30mL) 및 포화 식염수(30mL)로 세척했다. 유기층을 무수 황산 나트륨으로 건조하고, 용매를 감압하에 증류 제거했다. 잔사를 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(용출용매: 헥산/아세트산 에틸=8/1)로 정제하여, 2-(4-에톡시 벤질)페놀(0.85g)을 얻었다.

(참고예 4)

2-(4-에틸티오 벤질)페놀

1-브로모-4-에틸티오 벤젠(1.1g), 금속 마그네슘(0.12g), 촉매량의 요오드 및 테트라히드로푸란(5mL)으로 상법에 따라 그리냐르 시약을 조제했다. 얻어진 그리냐르 시약 용액에 2-(메톡시메톡시)벤즈알데히드(0.56g)의 테트라히드로푸란(12mL) 용액을 가하고, 65℃에서 10분간 교반했다. 실온으로 냉각 후, 포화 염화암모늄 수용액(5mL) 및 물(20mL)을 가하고, 아세트산 에틸(80mL)로 추출했다. 추출액을 물(20mL) 및 포화 식염수(20mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조 후, 용매를 감압하에 증류 제거했다. 잔사를 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(용출용매: 헥산/아세트산 에틸=4/1)로 정제하여, 디페닐 메탄올체(0.91g)을 얻었다. 얻어진 디페닐메탄올체(0.9Og)를 염화메틸렌(15mL)에 용해하고, Dess-Martin 시약(1, 1, 1-트리아세톡시-1, 1-디히드로-1, 2-벤즈이오독솔-3(1H)-온)(1.5g) 가하고, 25℃에서 26시간 교반했다. 반응 혼합물에 디에틸 에테르(75mL) 및 1mo1/L의 수산화나트륨 수용액(30mL)을 가하여 격하게 교반 후, 유기층을 분취했다. 유기층을 1mo1/L의 수산화나트륨 수용액(30mL),물(30mL×3회) 및 포화 식염수(30mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조 후, 용매를 감압하에 증류 제거했다. 잔사를 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(용출용매: 헥산/아세트산 에틸=15/1∼9/1)로 정제하여, 케톤체(0.82g)을 얻었다. 얻어진 케톤체(0.81g), p-톨루엔술폰산 1수화물(0.10g) 및 메탄올(14mL)의 혼합물을 60℃에서 4시간 교반했다. 실온으로 냉각 후, 반응 혼합물을 감압하에 농축했다. 잔사를 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(용출용매: 헥산/아세트산 에틸=15/1)로 정제하여, 탈보호체(0.69g)를 얻었다. 얻어진 탈보호체(0.68g)를 테트라히드로푸란(11mL)에 용해하고, 트리에틸 아민(0.41mL) 및 클로로포름산 메틸(0.22mL)을 가하고, 25℃에서 1시간 교반했다. 또한 트리에틸 아민(0.11mL) 및 클로로포름산 메틸(0.061mL)을 가하고, 30분간 교반했다. 반응 혼합물을 여과하고, 여과액을 감압하에 농축했다. 잔사를 테트라히드로푸란(14mL) 및 물(7mL)에 용해하고, 수소화 붕소 나트륨(0.40g)을 가하고, 25℃에서 7시간 교반했다. 1mo1/L의 염산(15mL)을 적하하고, 아세트산 에틸(75mL)로 추출했다. 추출액을 물(20mL), 포화 중조수(20mL) 및 포화 식염수(20mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조 후, 용매를 감압하에 증류 제거했다. 잔사를 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(용출용매: 헥산/아세트산 에틸=8/1)로 정제하여, 2-(4-에틸티오 벤질)페놀(0.62g)을 얻었다.

(참고예 5)

2-(4-메톡시 벤질)페닐 2, 3, 4, 6-테트라-O-아세틸-β-D-글루코피라노시드

2-(4-메톡시 벤질)페놀(46mg)과 2, 3, 4, 6-테트라-O-아세틸-1-O-트리클로로아세토이미도일-α-D-글루코피라노스(0.13g)의 염화메틸렌(2mL) 용액에, 3불화붕소-디에틸 에테르 착체(0.033mL)를 가하고 실온에서 1시간 교반했다. 반응 혼합물을 아미노프로필 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(용출용매: 염화메틸렌)로 정제하여, 2-(4-메톡시 벤질)페닐 2, 3, 4, 6-테트라-O-아세틸-β-D-글루코피라노시드(0.11g)를 얻었다.

(참고예 6)

2-(4-메틸 벤질)페닐 2, 3, 4, 6-테트라-O-아세틸-β-D-글루코피라노시드

2-(4-메톡시 벤질)페놀 대신에 2-(4-메틸 벤질)페놀을 사용하고, 참고예 5와 동일한 방법으로 표기화합물을 합성했다.

(참고예 7)

2-(4-에틸 벤질)페닐 2, 3, 4, 6-테트라-O-아세틸-β-D-글루코피라노시드

2-(4-메톡시 벤질)페놀 대신에 2-(4-에틸 벤질)페놀을 사용하고, 참고예 5와 동일한 방법으로 표기화합물을 합성했다.

(참고예 8)

2-(4-이소부틸 벤질)페닐 2, 3, 4, 6-테트라-O-아세틸-β-D-글루코피라노시드

2-(4-메톡시 벤질)페놀 대신에 2-(4-이소부틸 벤질)페놀을 사용하고, 참고예 5와 동일한 방법으로 표기화합물을 합성했다.

(참고예 9)

2-(4-에톡시 벤질)페닐 2, 3, 4, 6-테트라-O-아세틸-β-D-글루코피라노시드

2-(4-메톡시 벤질)페놀 대신에 2-(4-에톡시 벤질)페놀을 사용하고, 참고예 5와 동일한 방법으로 표기화합물을 합성했다.

(참고예 10)

2-(4-이소프로폭시 벤질)페닐 2, 3, 4, 6-테트라-O-아세틸-β-D-글루코피라노시드

2-(4-메톡시 벤질)페놀 대신에 2-(4-이소프로폭시 벤질)페놀을 사용하고, 참고예 5와 동일한 방법으로 표기화합물을 합성했다.

(참고예 11)

2-(4-메톡시 벤질)페닐 β-D-글루코피라노시드

2-(4-메톡시 벤질)페닐 2, 3, 4, 6-테트라-O-아세틸-β-D-글루코피라노시드 (0.11g)의 메탄올(4mL)용액에, 나트륨 메톡시드(28%메탄올 용액, 0.12mL)를 가하고, 실온에서 30분간 교반했다. 용매를 감압하에 증류 제거하고, 잔사를 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(용출용매: 염화메틸렌/메탄올=10/1)로 정제하여, 2-(4-메톡시벤질)페닐 β-D-글루코피라노시드(65mg)를 얻었다.

(참고예 12)

2-(4-메틸 벤질)페닐 β-D-글루코피라노시드

2-(4-메톡시 벤질)페닐 2, 3, 4, 6-테트라-O-아세틸-β-D-글루코피라노시드 대신에 2-(4-메틸 벤질)페닐 2, 3, 4, 6-테트라-O-아세틸-β-D-글루코피라노시드를 사용하고, 참고예 11과 동일한 방법으로 표기화합물을 합성했다.

(참고예 13)

2-(4-에틸 벤질)페닐 β-D-글루코피라노시드

2-(4-메톡시 벤질)페닐 2, 3, 4, 6-테트라-O-아세틸-β-D-글루코피라노시드 대신에 2-(4-에틸 벤질)페닐 2, 3, 4, 6-테트라-O-아세틸-β-D-글루코피라노시드를 사용하고, 참고예 11과 동일한 방법으로 표기화합물을 합성했다.

(참고예 14)

2-(4-이소부틸 벤질)페닐 β-D-글루코피라노시드

2-(4-메톡시 벤질)페닐 2, 3, 4, 6-테트라-O-아세틸-β-D-글루코피라노시드 대신에 2-(4-이소부틸 벤질)페닐 2, 3, 4, 6-테트라-O-아세틸-β-D-글루코피라노시드를 사용하고, 참고예 1과 동일한 방법으로 표기화합물을 합성했다.

(참고예 15)

2-(4-에톡시 벤질)페닐 β-D-글루코피라노시드

2-(4-메톡시 벤질)페닐 2, 3, 4, 6-테트라-O-아세틸-β-D-글루코피라노시드 대신에 2-(4-에톡시 벤질)페닐 2, 3, 4, 6-테트라-O-아세틸-β-D-글루코피라노시드를 사용하고, 참고예 11과 동일한 방법으로 표기화합물을 합성했다.

(참고예 16)

2-(4-이소프로폭시 벤질)페닐 β-D-글루코피라노시드

2-(4-메톡시 벤질)페닐 2, 3, 4, 6-테트라-O-아세틸-β-D-글루코피라노시드 대신에 2-(4-이소프로폭시 벤질)페닐 2, 3, 4, 6-테트라-O-아세틸-β-D-글루코피라노시드를 사용하고, 참고예 11과 동일한 방법으로 표기화합물을 합성했다.

(참고예 17)

2-(4-에틸티오 벤질)페닐 β-D-글루코피라노시드

2-(4-에틸티오 벤질)페놀(0.51g) 및 1, 2, 3, 4, 6-펜타-O-아세틸-β-D-글루코피라노스(2.4g)의 톨루엔(6.3mL) 및 염화메틸렌(2.7mL) 용액에, 3불화붕소-디에틸 에테르 착체(0.78mL)를 가하고, 실온에서 9시간 교반했다. 반응 혼합물에 아세트산 에틸(70mL)과 포화 중조수(25mL)를 가하여 유기층을 분취했다. 유기층을 포화 식염수(25mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조 후, 용매를 감압하에 증류 제거했다. 잔사를 메탄올(10.5mL)에 용해하고, 나트륨 메톡시도(28%메탄올 용액, 0.08mL)를 가하고, 25℃에서 18시간 교반했다. 반응 혼합물에 아세트산 에틸(75mL)과 물(20mL)을 가하고, 유기층을 분취했다. 유기층을 포화 식염수(20mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조 후, 용매를 감압하에 증류 제거했다. 잔사를 실리카겔 컬럼 크로마토그래피 (용출용매: 염화메틸렌/메탄올=10/1)로 정제했다. 용매를 감압하에 증류 제거하고, 잔사에 디에틸에테르를 가하고, 석출물을 여과하여 취했다. 얻어진 무색의 고체를 디에틸 에테르로 세척 후, 감압하에 건조하고, 2-(4-에틸티오 벤질)페닐 β-D-글루코피라노시드(0.51g)를 얻었다.

(실시예 1)

2-(4-메톡시 벤질)페닐 6-O-에톡시 카르보닐-β-D-글루코피라노시드

2-(4-메톡시 벤질)페닐 β-D-글루코피라노시드(0.075g)의 2, 4, 6-트리메틸피리딘(2mL) 용액에, 실온에서 클로로포름산 에틸(0.04mL)을 가했다. 실온에서 16시간 교반 후, 반응 혼합물에 포화 시트르산 수용액을 가하고 아세트산 에틸로 추출했다. 추출물을 물로 세척한 후, 무수 황산마그네슘으로 건조하고, 용매를 감압하에 증류 제거했다. 잔사를 실리카겔 분취 박상(薄相) 크로마토그래피(용출용매: 염화메틸렌/메탄올;10/1)로 정제하여, 2-(4-메톡시 벤질)페닐 6-O-에톡시 카르보닐-β-D-글루코피라노시드(0.032g)를 아몰포스로서 얻었다.

(실시예 2)

2-(4-메톡시 벤질)페닐 6-O-메톡시카르보닐-β-D-글루코피라노시드

클로로포름 에틸 대신에, 클로로포름산 메틸을 사용하고, 실시예 1과 동일한방법으로 표기화합물을 합성했다.

(실시예 3)

2-(4-메톡시 벤질)페닐 6-O-[2-(메톡시)에틸옥시카르보닐]-β-D-글루코피라노시드

클로로포름산 에틸 대신에, 클로로포름산 2-(메톡시)에틸을 사용하고, 실시예 1과 동일한 방법으로 표기화합물을 합성했다.

(실시예 4)

2-(4-메톡시 벤질)페닐 6-O-헥사노일-β-D-글루코피라노시드

2-(4-메톡시 벤질)페닐 β-D-글루코피라노시드(0.10g)의 2, 4, 6-트리메틸 피리딘(2mL) 용액에, 0℃에서 헥사노일클로라이드(0.072g)를 가하고, 3시간 교반했다. 반응 혼합물에 10%시트르산 수용액을 가하고, 아세트산 에틸로 추출했다. 유기층을 10%시트르산 수용액 및 포화 식염수로 세척했다. 유기층을 황산 마그네슘으로 건조 후, 용매를 감압하에 증류 제거했다. 잔사를 실리카겔 분취 박층 크로마토그래피(전개 용매: 염화메틸렌/메탄올=10/1)로 정제하여, 2-(4-메톡시 벤질)페닐 6-헥사노일-β-D-글루코피라노시드(0.030g)를 얻었다.

(실시예 5)

2-(4-메톡시 벤질)페닐 6-O-프로피오닐-β-D-글루코피라노시드

헥사노일 클로라이드 대신에, 프로피오닐 클로라이드를 사용하고, 실시예 4와 동일한 방법으로 표기화합물을 합성했다.

(실시예 6)

2-(4-메톡시 벤질)페닐 6-O-부틸-β-D-글루코피라노시드

헥사노일 클로라이드 대신에, 부티릴 클로라이드를 사용하고, 실시예 4와 동일한 방법으로 표기화합물을 합성했다.

(실시예 7)

2-(4-메톡시 벤질)페닐 6-O-아세틸-β-D-글루코피라노시드

헥사노일 클로라이드 대신에, 아세틸 클로라이드를 사용하고, 실시예 4와 동일한 방법으로 표기화합물을 합성했다.

(실시예 8)

2-(4-메톡시 벤질)페닐 6-O-이소부티릴-β-D-글루코피라노시드

헥사노일 클로라이드 대신에, 이소부티릴 클로라이드를 사용하고, 실시예 4와 동일한 방법으로 표기화합물을 합성했다.

(실시예 9)

2-(4-메톡시 벤질)페닐 6-O-에틸숙시닐-β-D-글루코피라노시드

헥사노일 클로라이드 대신에, 에틸숙시닐 클로라이드를 사용하고, 실시예 4와 동일한 방법으로 표기화합물을 합성했다.

(실시예 10)

2-(4-메톡시 벤질)페닐 6-O-이소프로필옥시카르보닐-β-D-글루코피라노시드

이소프로판올(0.12g)의 2, 4, 6-트리메틸 피리딘(2mL) 용액에, 0℃에서 트리 포스겐(0.022g)을 가하고 교반했다. 1시간후, 2-(4-메톡시 벤질)페닐 β-D-글루코피라노시드(0.075g)를 가하고, 실온에서 하루밤 교반했다. 반응 혼합물에 10%시트르산 수용액을 가하고, 아세트산 에틸로 추출했다. 유기층을 10%시트르산 수용액, 물로 세척하고, 황산 마그네슘으로 건조 후, 용매를 감압하에 증류 제거했다. 잔사를 실리카겔 분취 박층 크로마토그래피(전개 용매: 염화메틸렌/메탄올=10/1)로 정제하여, 2-(4-메톡시 벤질)페닐 6-이소프로필 옥시 카르보닐-β-D-글루코피라노시드(0.024g)를 얻었다.

(실시예 11∼22)

참고예 12∼17에서 얻어진 화합물을 사용하고, 실시예 1 또는 2와 동일한 방법으로 하기 표 1기재의 화합물을 합성했다.

실시예	R	P
11	메틸	에톡시카르보닐
12	메틸	메톡시카르보닐
13	에틸	에톡시카르보닐
14	에틸	메톡시카르보닐
15	이소부틸	에톡시카르보닐
16	이소부틸	메톡시카르보닐
17	에톡시	에톡시카르보닐
18	에톡시	메톡시카르보닐
19	이소프로필	에톡시카르보닐
20	이소프로필	메톡시카르보닐
21	에틸티오	에톡시카르보닐
22	에틸티오	메톡시카르보닐

(시험예 1)

사람 SGLT2 활성저해작용 확인시험

1) 사람 SGLT2 발현 플라스미드 백터의 제작

SUPERSCRIPT Preampllfication System(Gibco-BRL: LIFE TECHNOLOGIES 제)을 사용하고, 사람 신장유래의 total RNA(Ori gene 제)를 올리고 dT를 프라이머로서 역전사하고, PCR 증폭용 cDNA 라이브러리를 제작했다. 상기 사람 신장 cDNA 라이브러리를 주형으로 하여, 배열번호 1 및 2로 표시되는 하기의 올리고 뉴클레오티드0702F 및 0712R을 프라이머에 사용하고, Pfu DNA Polymerase(Stratagene사제)를 사용한 PCR 반응에 의해 사람 SGLT2를 코딩하는 DNA 단편을 증폭했다. 증폭된 DNA 단편을 클로닝용 벡터 pCR-Blunt(Invitrogen 제)에 이 키트의 표준법에 따라 라이게이션 했다. 상법에 의해 대장균 HB101 컴피턴트 셀(도요보(주)제)에 도입한 후, 형질전환주를 카나마이신 50μg/mL를 포함하는 LB 한천 배양지에서 선택했다. 이 형질전환주중 1개로 플라스미드 DNA를 추출 정제하고, 배열번호 3 및 4로 표시되는 하기의 올리고 뉴클레오티드, 0714F 및 0715R을 프라이머로서 사용하고, Pfu DNA Polymerase(Stratagene 사제)를 사용한 PCR 반응에 의해 사람 SGLT2를 코딩하는 DNA 단편을 증폭했다. 증폭된 DNA 단편을 제한효소 XhoI 및 Hind III로 소화한 후, Wizard Purification System(Promega 제)에 의해 정제했다. 이 정제한 DNA 단편을 융합화 단백질 발현용 벡터 pcDNA3.1(-)Myc/His-B(Invitrogen 제)가 대응하는 제한효소 부위에 편입했다. 상법에 의해 대장균 HB101 컴피턴트 셀(도요보(주)제)에 도입한 후, 형질전환주를 암피실린 100μg/mL를 포함하는 LB 한천배양지에서 선택했다. 이 형질전환주로부터 플라스미드 DNA를 추출 정제하고, 벡터 pcDNA3.1(-)Myc/His-B의 멀티 클로닝 부위에 삽입된 DNA 단편의 염기배열을 조사했다. Wells들에 의해 보고된 사람 SGLT2(Am. J. Physio1., Vol, 263, pp.459-465(1992))에 대하여, 이 클론은 1염기의 치환(433번째의 이소로이신을 코딩하는 ATC가 GTC로 치환)을 갖고 있었다. 이 결과 433번째의 잔기의 이소로이신이 발린으로 치환된 클론을 얻었다. 이 카르복시 말단측 최종 잔기인 알라닌 다음부터 배열번호 5로 표시되는 펩티드를 융합화한 사람 SGLT2를 발현하는 플라스미드 벡터를 KL29로 했다.

배열번호 1 ATGGAGGAGCACACAGAGGC

배열번호 2 GGCATAGAAGCCCCAGAGGA

배열번호 3 AACCTCGAGATGGAGGAGCACACAGAGGC

배열번호 4 AACAAGCTTGGCATAGAAGCCCCAGAGGA

배열번호 5 KLGPEQKLISEEDLNSAVDHHHHHH

2) 사람 SGLT2 일과성 발현세포의 조제

사람 SGLT2 발현 플라스미드 KL29를 전기 천공법에 의해 C0S-7 세포(RIKEN CELL BANK RCB0539)에 도입했다. 전기 천공법은 진 펄서 II(Bio-Rad Laboratories 제)를 사용하고, OPTI-MEM I 배지(Gibco-BRL: LIFE TECHNOL0GIES 제) 5O0μL에 대하여 COS-7 세포 2×10⁶개와 KL2920μg을 포함하는 0.4cm 큐베트 내에서 0.290kV, 975μF의 조건하에 행했다. 유전자 도입 후, 세포를 원심분리에 의해 회수하고 세포 1큐베트 분에 대하여 1mL의 OPTI-MEM I 배지를 가하여 현탁했다. 이 세포 현탁액을 96웰 플레이트의 1웰당 125μL씩 분주했다. 37℃, 5%CO₂의 조건하에 하루밤 배양한 후, 10% 소 태아 혈청(산코준야쿠(주)제), 10Ounits/mL 페니실린G나트륨(Gibco-BRL: LIFE TECHNOLOGIES 제), 100μg/mL 황산스트랩토마이신(Gibco-BRL: LIFE TECHN0LOGIES 제)을 포함하는 DMEM 배지(Gibco-BRL: LIFE TECHNOLOGIES 제)를 1웰당 125μL씩 가했다. 다음날까지 배양하고 메틸-α-D-글루코피라노시드 편입 저해활성의 측정에 제공했다.

3) 메틸-α-D-글루코피라노시드 편입 저해활성의 측정

시험화합물을 디메틸 술폭시드에 용해하고, 편입용 완충액(140mM 염화나트륨, 2mM 염화칼륨, 1mM 염화칼슘, 1mM 염화마그네슘, 5mM 메틸-α-D-글루코피라노시드, 10mM2-[4-(2-히드록시 에틸)-1-피페라지닐]에탄 술폰산, 5mM 트리스(히드록시 메틸)아미노 메탄을 포함하는 완충액 pH7.4)로 희석하고, 저해활성 측정용의 검체로 했다. 사람 SGLT2 일과성 발현 COS-7 세포의 배양기를 제거하고, 1웰당 전처치용 완충액(140mM 염화콜린, 2mM 염화칼륨, 1mM 염화칼슘, 1mM 염화마그네슘, 10mM2-[4-(2-히드록시 에틸)-1-피페라지닐]에탄 술폰산, 5mM 트리스(히드록시 메틸)아미노 메탄을 포함하는 완충액 pH7.4)를 200μL 가하고, 37℃에서 10분간 정치 했다. 전처치용 완충액을 제거하고, 재차 동일 완충액을 200μL 가하고, 37℃에서 10분간 정치했다. 제작한 검체 525μL에 7μL의 메틸-α-D-(U-14C)글루코피라노미드(Amersham pharmacia Biotech)를 가하고 혼합하여, 측정용 완충액으로 했다. 대조군용으로 시험화합물을 포함하지 않는 측정용 완충액을 조제했다. 또 시험화합물 비존재하 및 나트륨 비존재하의 기초 취입측정용에 염화나트륨으로 바꾸어서 140mM의 염화콜린을 포함하는 기초 취입측정용 완충액을 동일하게 조제했다. 전처치용 완충액을 제거하고, 측정용 완충액을 1웰당 75μL씩 가하고 37℃에서 2시간 정치했다. 측정용 완충액을 제거하고, 세척용 완충액(140mM 염화콜린, 2mM 염화칼륨, 1mM 염화칼슘, 1mM 염화마그네슘, 10mM 메틸-α-D-글루코피라노시드, 10mM2-[4-(2-히드록시 에틸)-1-피페라지닐]에탄 술폰산, 5mM 트리스(히드록시 메틸)아미노 메탄을 포함하는 완충액 pH7.4)을 1웰당 200μL씩 가하고 즉시 제거했다. 이 세척조작을 2회 더 행하고, 0.2N 수산화나트륨을 1웰당 75μL씩 가하여 세포를 가용화했다. 가용화액을 피코플레이트(Packard)에 옮기고, 15OμL의 마이크로신티 40(Packard)를 가하고 마이크로 플레이트 신틸레이션 카운터 톱 카운트(Packard)로 방사활성을 계측했다. 대조군의 편입양에서 기초 편입양을 공제한 값을 100%로 하고, 편입양의 50%저해한 농도(IC₅₀값)를 농도-저해 곡선으로하고 최소자승법에 의해 산출했다. 그 결과는 이하의 표 2와 같다.

시험화합물	IC₅₀값(nM)
참고예 11	350
참고예 12	450
참고예 13	140
참고예 14	500
참고예 15	330
참고예 16	370
참고예 17	110

(시험예 2)

경구흡수성 확인시험

1) 꼬리정맥내 투여에 의한 약물농도 측정용 검체의 제작

실험동물로서 하루밤 절식한 SD계 래트(일본 구레아, 수컷 5주령, 14O∼170g)를 사용했다. 시험화합물 60mg을 에탄올 1.8mL에 현탁 또는 용해시키고, 폴리에틸렌 글리콜 400 7.2mL 및 생리식염수 9mL를 가하고 용해하여, 3.3mg/mL 용액을 조제했다. 래트의 체중을 측정하고, 시험화합물 용액을 3mL/kg의 용량(10mg/kg)으로 무마취하에 꼬리정맥내 투여했다. 꼬리정맥내 투여는 26G 주사바늘 및 1mL 실린지를 사용하여 행했다. 채혈시간은 꼬리정맥내 투여 후 2, 5, 10, 20, 30, 60, 120분으로 했다. 혈액을 원심분리하고 혈장을 혈중 약물농도 측정용 검체로 했다.

2) 경구 투여에 의한 약물 농도 측정용 검체의 제작

실험 동물로서 하루밤 절식한 SD계 래트(일본 구레아, 수컷 5주령, 140∼170g)를 사용했다. 시험화합물을 활성 본체로 하여 1mg/mL이 되도록 0.5%카르복시메틸 셀룰로스나트륨 수용액에 현탁 또는 용해시켰다. 래트의 체중을 측정하고, 상기 시험화합물액을 10mL/kg의 용량(활성 본체로서 10mg/kg)으로 경구투여했다. 경구투여는 래트용 존데 및 2.5mL 실린지를 사용하여 행했다. 채혈시간은 경구투여 후 15, 30, 60, 120 및 240분으로 했다. 혈액을 원심분리하고 혈장을 혈 중 약물농도 측정정용 검체로 했다.

3) 약물 농도의 측정

상기 1) 및 2)에 의해 얻어진 혈장 0.1mL에 내부 표준물질로서, 참고예 15 기재의 2-(4-에톡시 벤질)페닐 β-D-글루코피라노시드 1μg을 첨가한 후, 메탄올 1μL를 가하고, 단백질 제거를 행했다. 원심분리 후, 메탄올 층을 질소기류하에서 증발 건고했다. 이동상 300μL로 희석하고, 그 30μL를 HPLC에 주입했다. 혈중 약물농도는 HPLC법에 의해 이하의 조건으로 측정했다.

컬럼: Inertsil ODS-2(4.6×250mm)

이동상: 아세토니트릴/10mM 인산완충액(pH3.0)=25:75(v/v)

컬럼온도: 50℃

유량: 1.0mL/분

측정파장: UV232nm

검양선은 블랭크 혈장 0.1mL에 내부 표준물질로서, 참고예 15 기재의 2-(4-에톡시 벤질)페닐 β-D-글루코피라노시드 1μg 및 참고예 11 기재의 2-(4-메톡시 벤질)페닐 β-D-글루코피라노시드를 각 농도(1.0, 0.5, 0.2, 0.1, 0.05 및 0.02μg)로 첨가하고, 상기와 동일하게 조작함으로써 작성했다.

HPLC에 의해 얻어진 각 시간의 플라즈마 농도로, Pharsight Corporation 사제 WinNonlin Standard를 사용하고, 시험화합물의 꼬리정맥내 투여 및 경구투여에 의한 혈장중농도-시간 곡선 하면적을 구하고, 하기 식에 기초하여 생체이용율(%)을 산출했다. 그 결과는 이하의 표 3과 같다.

시험화합물	생체이용율 (%)
실시예 1	46
실시예 4	61
참고예 11	15

(시험예 3)

요당 배설촉진작용 확인시험

실험동물으로서 절식하지 않은 SD계 래트(SLC, 수컷 8주령, 27O∼320g)를 사용했다. 시험화합물을 0.5% 카르복시메틸 수용액에 현탁시키고, 0.3, 1.3mg/mL 현탁액으로 했다. 래트의 체중을 측정하고, 시험 현탁액을 10mL/kg의 용량(3, 10, 30mg/kg)으로 경구투여했다. 대조군용으로 0.5%카르복시메틸 셀룰로스나트륨 수용액만을 10mL/kg의 용량으로 경구투여했다. 경구투여는 래트용 존데 및 2.5mL 실린지를 사용하여 행했다. 1군당의 마리수는 5 또는 6 마리로 했다. 경구투여 종료후부터 대사 케이지에 채뇨를 행했다. 채뇨시간은 경구투여 후 24시간으로 했다. 채뇨 종료후, 오줌양을 기록하고, 오줌중에 포함되는 글루코스 농도를 측정했다. 글루코스 농도는 임상검사용 키트: 글루코스B 테스트와코(와코준야쿠)로 정량했다.오줌양, 오줌중 글루코스 농도 및 체중으로부터 24시간에 체중 200g당의 요당 배설양을 구했다. 그 결과는 이하의 표 4와 같다.

시험화합물	용량(mg/kg)	요당 배설량(mg/24시간ㆍ200g체중)
실시예 1	3	52
	10	239
	30	513

(시험예 4)

급성독성시험

수컷 4주령ICR계 마우스(일본 구레아제, 22∼28g, 1군 5예)에 4시간 절식 후, 시험화합물에 0.5%카르복시메틸 셀룰로오스를 가하여 조제한 현탁액(60mg/mL)을 10mL/kg(600mg/kg)의 용량으로 경구투여했다. 하기의 표 5와 같이, 투여 24시간후, 사망예는 확인되지 않았다.

시험화합물	사망예
실시예 1	0/5

본 발명의 상기 화학식 I로 표시되는 글루코피라노실옥시벤질벤젠 유도체는, 경구흡수성이 개선되어 있고, 경구흡수후 체내에서 활성본체인 상기 화학식 II로 표시되는 글루코피라노실옥시벤질벤젠 유도체로 변환되어 우수한 사람 SGLT2 활성저해작용을 발휘한다. 본 발명에 의해 경구투여제제로서도 매우 적합한, 당뇨병, 당뇨병성 합병증, 비만증 등의 고혈당증에 기인하는 질환의 예방 또는 치료제를 제공할 수 있다.

Claims

화학식

(식중의 P는 프로드러그를 구성하는 기이고, R은 저급 알킬기, 저급 알콕시기, 저급 알킬티오기, 저급 알콕시 저급 알킬기, 저급 알콕시 저급 알콕시기 또는 저급 알콕시 저급 알킬티오기이다)로 표시되는 것을 특징으로 하는 글루코피라노실옥시벤질벤젠 유도체.
제 1 항에 있어서, 화학식

(식중의 R은 저급 알킬기, 저급 알콕시기, 저급 알킬티오기, 저급 알콕시 저급 알킬기, 저급 알콕시 저급 알콕시기 또는 저급 알콕시 저급 알킬티오기 이고, P¹은 저급 아실기, 저급 알콕시 저급 아실기, 저급 알콕시카르보닐 저급 아실기, 저급 알콕시카르보닐기 또는 저급 알콕시 저급 알콕시카르보닐기이다)로 표시되는 것을 특징으로 하는 글루코피라노실옥시벤질벤젠 유도체.
제 2 항에 있어서, 일반식

(식중의 R¹은 저급 알킬기 또는 저급 알콕시기이고, P¹은 저급 아실기, 저급 알콕시 저급 아실기, 저급 알콕시카르보닐 저급 아실기, 저급 알콕시카르보닐기 또는 저급 알콕시 저급 알콕시카르보닐기이다)로 표시되는 것을 특징으로 하는 글루코피라노실옥시벤질벤젠 유도체.
제 2 항에 있어서, 화학식

(식중의 R은 저급 알킬기, 저급 알콕시기, 저급 알킬티오기, 저급 알콕시 저급 알킬기, 저급 알콕시 저급 알콕시기 또는 저급 알콕시 저급 알킬티오기이고, P²는 저급 아실기 또는 저급 알콕시 카르보닐기임)로 표시되는 것을 특징으로 하는 글루코피라노실옥시벤질벤젠 유도체.
제 3 항 또는 제 4 항에 있어서, 화학식

(식중의 R¹은 저급 알킬기 또는 저급 알콕시기이고, P²는 저급 아실기 또는 저급 알콕시카르보닐기이다)로 표시되는 것을 특징으로 하는 글루코피라노실옥시벤질벤젠 유도체.
제 5 항에 있어서, 식

로 표시되는 것을 특징으로 하는 글루코피라노실옥시벤질벤젠 유도체.
제 5 항에 있어서, 식

로 표시되는 것을 특징으로 하는 글루코피라노실옥시벤질벤젠 유도체.
제 1 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항에 기재된 글루코피라노실옥시벤질벤젠 유도체를 유효성분으로 하여 이루어지는 것을 특징으로 하는 의약조성물.
제 8 항에 있어서, 사람 SGLT2 활성저해제인 것을 특징으로 하는 의약조성물.
제 9 항에 있어서, 고혈당증에 기인하는 질환의 예방 또는 치료제인 것을 특징으로 하는 의약조성물.
제 10 항에 있어서, 고혈당증에 기인하는 질환이 당뇨병 또는 당뇨병성 합병증인 것을 특징으로 하는 의약조성물.
제 10 항에 있어서, 고혈당증에 기인하는 질환이 비만증인 것을 특징으로 하는 의약조성물.
제 8 항 내지 제 12 항 중 어느 한 항에 있어서, 경구투여 형태인 것을 특징으로 하는 의약조성물.
제 1 항 내지 제 7 항중 어느한 항에 기재된 글루코피라노실옥시벤질벤젠 유도체를 유효량 투여하는 것으로 이루어지는 고혈당증에 기인하는 질환의 예방 또는 치료방법.
고혈당증에 기인하는 질환의 예방 또는 치료용의 의약조성물을 제조하기 위한, 제 1 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항에 기재된 글루코피라노실옥시벤질벤젠 유도체의 사용.