KR102465155B1 - 바실러스 튜린지엔시스 rti545 조성물 및 식물 생장 이득 및 식물 해충 방제를 위한 사용 방법 - Google Patents

Abstract

식물 생장에 이득이 되고 식물 해충을 방제하는데 사용하기 위한, RTI545 표시된 신규의 바실러스 튜린지엔시스(Bacillus thuringiensis) 균주를 포함하는 조성물을 제공한다. 특히, 상기 RTI545 균주는 식물 선충, 곤충 및 진균 해충의 방제에 유용하다. 상기 조성물은 상기 RTI545 균주로 코팅된 식물 종자를 포함한다. 상기 조성물을 단독으로 또는 다른 미생물학적, 생물학적 또는 화학적 살충제, 살진균제, 살선충제, 살균제, 제초제, 식물 추출물, 식물 생장 조절제, 또는 비료와 함께 적용할 수 있다. 일례로, 식재시에 화학적 살충제, 예를 들어 바이펜트린 및 액체 비료의 조합을 RTI545로 처리된 식물 또는 종자에 전달함으로써 증대된 생장 및 곤충 방제가 제공된다.

Description

바실러스 튜린지엔시스 RTI545 조성물 및 식물 생장 이득 및 식물 해충 방제를 위한 사용 방법

관련 출원에 대한 상호참조

본 출원은 2016년 10월 5일자로 출원된 미국 가출원 제 62/404,275 호를 우선권 주장하며, 상기 출원의 개시는 내용 전체가 본 명세서에 참고로 인용된다.

기술 분야

본 명세서에 개시된 발명의 요지는 식물 생장에 이득이 되고 식물 해충을 방제하기 위해 식물 종자 및 뿌리, 및 식물 주변 토양에 적용하기 위한 단리된 바실러스 튜린지엔시스(Bacillus thuringiensis) 세균 균주를 포함하는 조성물에 관한 것이다.

특히 뿌리층에서 식물과 함께 살거나(근권-관련된 세균), 상기 식물내에서 내생식물로서 거주하는, 식물 생장 및 건강에 이로운 효과를 갖는 다수의 미생물들이 토양 중에 존재하는 것으로 공지되어 있다. 이들의 이로운 식물 생장 촉진 성질은 질소 고정, 철 킬레이트화, 포스페이트 용해, 이롭지 않은 미생물의 억제, 해충에 대한 내성 또는 해충의 차단, 유발된 전신 내성(ISR), 전신획득저항성(SAR), 유용한 토양 유기물질을 증가시키기 위한 토양 중 식물 물질의 분해, 및 식물 생장, 발달 및 가뭄과 같은 환경적 스트레스에 대한 반응을 자극하는 식물호르몬, 예를 들어 인돌-아세트산(IAA), 아세토인 및 2,3-부탄다이올의 합성을 포함한다. 또한, 이들 미생물은 전구체 분자, 1-아미노사이클로프로판-1-카복실레이트(ACC)를 절단하여 식물 생장을 자극하고 열매 숙성을 늦춤으로써 식물의 에틸렌 스트레스 반응을 방해할 수 있다. 이들 이로운 미생물은 토양질, 식물 생장, 수율 및 작물의 품질을 개선시킬 수 있다. 다양한 미생물들이 식물 질병의 방제에 유용한 바와 같은 생물 활성을 나타낸다. 상기와 같은 생물농약(살아있는 유기체 및 상기 유기체에 의해 자연적으로 생성되는 화합물)은 일반적으로 합성 비료 및 살충제보다 더 안전하고 더 생물분해성인 것으로 간주된다.

예를 들어, 근권이고 내생성인 이로운 식물관련 세균은 숙주 식물에, 질병 및 해충에 대한 내성에서부터 저온, 염분 및 가뭄 스트레스를 포함한 환경적 스트레스에 이르는 다수의 이득을 제공하는 것으로 공지되어 있다. 식물 생장 촉진 세균이 접종된 식물이 예를 들어 보다 양호하게 발달된 근계로 인해 토양으로부터 보다 많은 물과 양분을 획득함에 따라, 상기 식물은 보다 건강하게 생장하고 생물 및 무생물 스트레스에 덜 민감하다. 이와 같이 작물 생산성을 극대화하기 위해 본 발명의 미생물 조성물을 단독으로 또는 현행의 작물 관리 투입물, 예를 들어 화학비료, 제초제, 및 살충제와 함께 적용할 수 있다. 식물 생장 촉진 효과는 보다 빠르게 생장하는 식물로 번역되며 초기 활력 개선에 적용될 수 있는 성질인 지상 바이오매스를 증가시킨다. 개선된 초기 활력의 한 가지 이점은 식물이 보다 경쟁적이고 잡초를 능가한다는 것이며, 이는 노동력 및 제초제 적용을 최소화함으로써 잡초 관리 비용을 직접적으로 감소시킨다. 식물 생장 촉진 효과는 또한 물 및 양분의 흡수와 관련된 보다 많은 미세 뿌리와 함께 보다 깊고 보다 넓은 뿌리를 포함하여, 개선된 뿌리 발달로 번역된다. 상기 성질은 농업 자원의 보다 양호한 사용, 및 관개 요구 및/또는 비료 적용에 사용되는 물의 감소를 허용한다. 뿌리 발달 및 뿌리 구조의 변화는 식물과, 다른 토양성 미생물, 예를 들어 질소 고정 및 포스페이트 용해를 포함하여 식물의 양분 흡수를 돕는 이로운 진균 및 세균과의 상호작용에 영향을 미친다. 이러한 이로운 미생물들은 또한 식물 병원체과 경쟁하여 전체적인 식물 건강을 증가시키고 화학적 살진균제 및 살충제의 필요성을 감소시킨다. 보다 발달된 근계는 또한 해충이 존재할 때 개선된 수율을 허용한다.

진균성 식물병원체, 예를 들어 비제한적으로 보트리티스 스페시즈(Botrytis spp.)(예를 들어 보트리티스 시네레아(Botrytis cinerea)), 푸사리움 스페시즈(Fusarium spp.)(예를 들어 푸사리움 옥시스포룸(Fusarium oxysporum) 및 푸사리움 그라미네아룸(Fusarium graminearum)), 리조크토니아 스페시즈(Rhizoctonia spp.)(예를 들어 리조크토니아 솔라니(Rhizoctonia solani), 마그나포르테 스페시즈(Magnaporthe spp.), 마이코스파에렐라 스페시즈(Mycosphaerella spp.), 푸키니아 스페시즈(Puccinia spp.)(예를 들어 푸키니아 레콘디타(Puccinia recondita)), 피토프토라 스페시즈(Phytopthora spp.) 및 파코프소라 스페시즈(Phakopsora spp.)(예를 들어 파코프소라 파키리지(Phakopsora pachyrhizi))가 농업 및 원예업 산업에서 심각한 경제적 손실을 야기할 수 있는 식물 해충의 한 유형이다. 화학작용제를 사용하여 진균성 식물병원체를 방제할 수 있으나, 화학작용제의 사용은 고비용, 해충의 내성 균주의 발생, 및 잠재적으로 바람직하지 못한 환경 영향을 포함한 단점들이 문제가 된다. 또한, 상기와 같은 화학적 처리는 상기 처리가 표적으로 하는 식물 해충 외에 이로운 세균, 진균 및 절지동물에게도 불리한 영향을 미칠 수 있다. 두 번째 유형의 식물 해충은 농업 및 원예학 산업에서 심각한 경제적 손실을 야기하는 세균성 병원체, 예를 들어 비제한적으로 에르위니아 스페시즈(Erwinia spp.)(예를 들어 에르위니아 크리산테미(Erwinia chrysanthemi)), 판토에아 스페시즈(Pantoea spp.)(예를 들어 판토에아 시트레아(Pantoea citrea)), 잔토모나스(Xanthomonas)(예를 들어 잔토모나스 캄페스트리스(Xanthomonas campestris)), 슈도모나스 스페시즈(Pseudomonas spp.)(예를 들어 슈도모나스 시린가에(Pseudomonas syringae)) 및 랄스토니아 스페시즈(Ralstonia spp.)(예를 들어 랄스토니아 솔레아세아룸(Ralstonia soleacearum))이다. 병원성 진균과 유사하게, 이들 세균성 병원체를 처리하기 위한 화학작용제의 사용은 단점들이 문제가 된다. 바이러스 및 바이러스-유사 유기체들은, 방제하기 어렵지만 세균성 미생물이 유발된 전신 내성(ISR)을 통해 식물에 내성을 제공할 수 있는 세번 째 유형의 식물 질병-유발인자를 포함한다. 따라서, 병원성 진균, 바이러스 및 세균을 방제하기 위해 생물비료 및/또는 생물농약으로서 적용될 수 있는 미생물이 농업 지속가능성을 개선시키기에 바람직하며 수요가 많다. 최종 유형의 식물 병원체는 식물 병원성 선충류 및 곤충류를 포함하며, 이들은 식물의 심각한 손상 및 손실 및 수율의 감소를 야기할 수 있다.

바실러스 종의 일부 구성원들은 생물학적 방제 균주로서 보고되었으며, 일부는 상업적인 제품에 적용되었다(문헌[Joseph W. Kloepper, et al. 2004, Phytopathology Vol. 94, No. 11, 1259-1266]). 예를 들어, 현재 상업적인 생물학적 방제 제품에 사용되는 균주는 바이엘 크랍 사이언스(BAYER CROP SCIENCE)에 의해 제조된, 소나타(SONATA) 및 발라드 플러스(BALLAD-PLUS)에 활성 성분으로서 사용된 바실러스 푸밀루스(Bacillus pumilus) 균주 QST2808; 바이엘 크랍 사이언스에 의해 제조된, 일드쉴드(YIELDSHIELD)에 활성 성분으로서 사용된 바실러스 푸밀루스 균주 GB34; 바이엘 크랍 사이언스에 의해 제조된, 세레네이드(SERENADE)에 활성 성분으로서 사용된 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) 균주 QST713; 헬레나 케미칼 캄파니(HELENA CHEMICAL COMPANY)에 의해 제조된, 코디악(KODIAK) 및 시스템(SYSTEM)3에 활성 성분으로서 사용된 바실러스 서브틸리스 균주 GBO3을 포함한다. 바실러스 튜린지엔시스 및 바실러스 피르무스(Bacillus firmus)의 다양한 균주들이 선충류 및 곤충류에 대한 생물학적 방제제로서 적용되었으며 이들 균주는 발렌트 바이오사이언시즈 코포레이션(VALENT BIOSCIENCES CORPORATION)에 의해 제조된, 바실러스 튜린지엔시스 서브스페시즈 쿠르스타키(kurstaki) 균주를 포함하는 다이펠(DIPEL), 및 바이엘 크랍 사이언스에 의해 제조된, 바실러스 피르무스 균주를 포함하는 노르티카(NORTICA) 및 폰초-보티보(PONCHO-VOTIVO)를 포함한 다수의 상업적으로 입수할 수 있는 생물학적 방제 제품의 토대로서 제공된다. 또한, 현재 상업적인 생물자극제 제품에 사용되는 바실러스 균주는 ABiTEP GmbH에 의해 제조된, 리조바이탈(RHIZOVITAL) 42에 활성 성분으로서 사용된 바실러스 서브틸리스 품종 아밀로리퀘파시엔스(amyloliquefaciens) 균주 FZB42뿐만 아니라, JH바이오텍 인코포레이티드에 의해 제조된 풀자임(FULZYME)과 같은 생물자극제 제품 중 발효 추출물을 포함하여 완전 세포로서 포함되는 다양한 다른 바실러스 서브틸리스 종을 포함한다.

그러나, 식물 생장에 이득이 되고 식물 해충을 방제하는 신규의 조성물 및 방법을 개발하는 것이 바람직하다.

본 명세서에 개시된 발명의 요지는 미생물 조성물 및 식물 생장에 이득이 되고 식물 해충을 방제함에 있어서 그의 사용 방법을 제공한다.

하나의 실시태양에서, 감수성 식물에서 식물 생장에 이득이 되거나 식물에서 식물 해충에 대한 보호를 부여하거나 이 둘 모두를 위해 식물에 적용하기 위한, ATCC 번호 PTA-122161로서 기탁된 바실러스 튜린지엔시스 RTI545 또는 그의 모든 식별 특징을 갖는 그의 돌연변이체의 생물학적으로 순수한 배양물을 포함하는 조성물을 제공한다.

하나의 실시태양에서, 감수성 식물에서 식물 생장에 이득이 되거나 식물 해충에 대한 보호를 부여하거나 이 둘 모두를 위한 방법을 제공하며, 상기 방법은 ATCC 번호 PTA-122161로서 기탁된 바실러스 튜린지엔시스 RTI545 또는 그의 모든 식별 특징을 갖는 그의 돌연변이체의 생물학적으로 순수한 배양물을 포함하는 조성물을 식물, 식물 부분, 상기 식물의 종자, 상기 식물의 뿌리, 상기 식물 또는 상기 식물의 종자 주변의 토양 또는 생육 배지, 또는 상기 식물의 식재 또는 상기 식물 종자의 파종 전의 토양 또는 생육 배지에, 상기 감수성 식물에서 상기 식물 생장에 이득이 되고/되거나 상기 식물 해충에 대한 보호를 부여하기에 적합한 양으로 전달함을 포함한다.

하나의 실시태양에서, 감수성 식물에서 식물 생장에 이득이 되거나 식물 해충에 대한 보호를 부여하거나 이 둘 모두를 위한 방법을 제공하며, 상기 방법은 상기 식물, 식물 부분, 상기 식물의 종자, 상기 식물의 뿌리, 상기 식물 또는 상기 식물의 종자 주변의 토양 또는 생육 배지, 또는 상기 식물의 식재 또는 상기 식물 종자의 파종 전의 토양 또는 생육 배지에, 상기 감수성 식물에서 상기 식물 생장에 이득이 되고/되거나 상기 식물 해충에 대한 보호를 부여하기에 적합한 양의 ATCC 번호 PTA-122161로서 기탁된 바실러스 튜린지엔시스 RTI545 또는 그의 모든 식별 특징을 갖는 그의 돌연변이체의 생물학적으로 순수한 배양물을 포함하는 조성물; 및 살충제, 살진균제, 살선충제, 살균제, 생물자극제, 제초제, 식물 추출물, 미생물 추출물, 식물 생장 조절제, 또는 비료 중 하나 또는 이들의 조합의 조합을 상기 감수성 식물에서 상기 식물 생장에 이득이 되고/되거나 상기 식물 해충에 대한 보호를 부여하기에 적합한 양으로 전달함을 포함한다.

하나의 실시태양에서, 감수성 식물에서 상기 식물 생장에 이득이 되고/되거나 상기 식물 해충에 대한 보호를 부여하기에 적합한 양으로 존재하는, ATCC 번호 PTA-122161로서 기탁된 바실러스 튜린지엔시스 RTI545 또는 그의 모든 식별 특징을 갖는 그의 돌연변이체의 생물학적으로 순수한 배양물의 포자를 포함하는 조성물로 코팅된 식물 종자를 제공한다.

하나의 실시태양에서, 감수성 식물에서 식물 생장에 이득이 되거나 식물 해충에 대한 보호를 부여하거나 이 둘 모두를 위한 방법을 제공하며, 상기 방법은 상기 식물의 종자를 식재함을 포함하고, 여기에서 상기 종자는 ATCC 번호 PTA-122161로서 기탁된 바실러스 튜린지엔시스 RTI545 또는 그의 모든 식별 특징을 갖는 그의 돌연변이체의 생물학적으로 순수한 배양물을 포함하는 조성물로 코팅되었으며, 여기에서 상기 종자로부터 상기 식물의 생장이 이득이 되고/되거나 상기 식물 해충에 대한 보호가 부여된다.

하나의 실시태양에서, 식물 생장에 이득이 되는 조성물을 제공하며, 상기 조성물은 ATCC 번호 PTA-122161로서 기탁된 바실러스 튜린지엔시스 RTI545 또는 그의 모든 식별 특징을 갖는 그의 돌연변이체의 생물학적으로 순수한 배양물; 및 바이펜트린 살충제를 포함한다.

본 명세서에 개시된 발명의 요지를 일반적인 용어로 상기와 같이 기재하였지만, 이제 하기에 기재된 첨부 도면을 참조할 것이다.
도 1의 A는 맨 왼쪽에 수평 표시로 나타낸 식물 근권 중의 식물 해충과 함께 화학적 살충제(내부 원을 둘러싸는 어두운 밴드)로 코팅된 식물 종자(내부 원)를 도시하는 개략도이다. 상기 도해의 가운데 부분은 해충으로부터 상기 식물 종자의 뿌리를 보호하는 확산된 살충제와 함께 발아된 식물 종자를 도시한다(보호를 "X" 표시로 나타낸다). 상기 도해의 맨 오른쪽은 상기 뿌리가 상기 화학적 살충제의 확산 대역을 벗어나 생장함에 따라 상기 해충으로부터 상기 식물 종자의 뿌리의 보호가 감소됨을 도시한다.
도 1의 B는 본 개시의 하나 이상의 실시태양에 따른, 상기 식물 종자상의 코팅에 또는 상기 식물 종자 주변의 토양에 바실러스 튜린지엔시스 RTI545가 첨가된, 도 1A의 개략도를 도시한다. 상기 도해의 맨 오른쪽은 상기 식물 근권 중의 바실러스 튜린지엔시스 RTI545의 확립의 결과로서, 상기 뿌리가 상기 화학적 살충제의 확산 대역을 벗어나 생장하는 경우에 조차 상기 해충으로부터 상기 식물 종자의 뿌리의 보호가 계속됨을 도시한다.
도 2는 본 개시의 하나 이상의 실시태양에 따른, 하우스키핑 유전자 rpoB를 사용하는 RTI545 균주의 계통발생을 도시하는 개략도이다. 부트스트랩값은 1000의 반복을 가리킨다. 외집단 서열은 극호열성 고세균 파이로코커스 퓨리오수스(Pyrococcus furiosus) DSM3638로부터 유래한다.
도 3의 A는 본 개시의 하나 이상의 실시태양에 따른, 관주 관개에 의한 식재시 바실러스 튜린지엔시스 균주 RTI545의 영양세포로 처리된 종자의 식재로부터 12일 지난 옥수수 묘목의 상이다.
도 3의 B는 도 3의 A의 경우와 유사하게 처리되지만 바실러스 튜린지엔시스 RTI545 세포의 첨가가 없는 종자의 식재로부터 12일 지난 옥수수 묘목의 상이다.
도 4는 본 개시의 하나 이상의 실시태양에 따른, 옥수수 묘목의 선택 피딩 분석에서 남부 옥수수 뿌리벌레(SCRW) 유충을 퇴치하는 바실러스 튜린지엔시스 RTI545 세포의 능력을 도시하는 상이다. 상기 상에서, 왼쪽의 여과지는 바실러스 튜린지엔시스 균주 RTI545 세포로 처리되었고 오른쪽의 여과지는 대조용으로서 물로 처리되었다.
도 5는 본 개시의 하나 이상의 실시태양에 따른, 대조용 및 토양 처리: 비데이트(Vydate)(듀퐁(DUPONT); A.I. = 옥사밀[메토일 N'N'-다이메틸-N-[(메틸 카바모일)옥실)옥시]-1-티오옥스아미미데이트), 바이오액트(BIOACT)(바이엘 크랍사이언시즈 LP; 파에실로마이세스 릴라시누스(Paecilomyces lilacinus) 균주 251), 카렉스(CAREX)(뉴팜(NUFARM), 피리다벤), 및 HD-1(바실러스 튜린지엔시스 서브스페시즈 쿠르스타키 HD-1)과 비교된, 글로보데라 스페시즈(Globodera sp.) 선충류로 자연적으로 감염되고 토양 리터당 10⁹ cfu 포자의 바실러스 튜린지엔시스 RTI545 세포(RTI545)로 향상된 토양에 심은 감자 식물의 뿌리 바이오매스의 g당 포낭의 수를 도시하는 그래프이다.
도 6의 A는 선충류에 대한 시험 샘플의 유인/퇴치를 분석하기 위한 주화성 시험 아레나의 개략적인 평면도를 도시한다. 도 6의 B는 100 ㎍/㎖로 시험된 카노사민 분석의 사진이며, 여기에서 선충 위치를 나타내는 점들은 중립 분포를 나타낸다. 도 6의 C는 100% 강도로 시험된 RTI545 상등액의 분석 사진이며, 여기에서 선충 위치를 나타내는 점들은 기피 분포를 나타낸다.

본 명세서 및 청구항 전체를 통해, "구성하다", 및 "구성하는"이란 용어는 문맥상 달리 요구하는 경우를 제외하고 배타적이지 않은 의미로 사용된다. 마찬가지로, "포함하다" 및 그의 문법적 변형들은 비제한적임을 의미하며, 따라서 목록 중의 항목의 인용은 상기 나열된 항목들에 치환되거나 추가될 수 있는 다른 유사한 항목들의 제외가 아니다.

본 명세서 및 첨부된 청구항의 목적을 위해서, "약"이란 용어는 하나 이상의 숫자 또는 숫자 범위와 관련하여 사용될 때 일정 범위의 모든 숫자를 포함한 모든 상기와 같은 숫자를 지칭하는 것으로 이해되어야 하며 경계를 나열된 수치의 위 아래로 연장시킴으로써 상기 범위를 변형시킨다. 종점에 의한 숫자 범위의 인용은 상기 범위내에 포함된 모든 숫자, 예를 들어 정수 및 그의 분수들(예를 들어 1 내지 5의 인용은 1, 2, 3, 4 및 5뿐만 아니라 그의 분수, 예를 들어 1.5, 2.25, 3.75, 4.1 등을 포함한다) 및 상기 범위내의 임의의 범위를 포함한다. 일정 범위가 하한의 목록으로부터 상한의 목록까지인 것으로 인용되는 경우, 범위는 상기 인용된 하한의 임의의 하나로부터 상기 인용된 상한의 임의의 하나까지인 것으로 정의된다.

상표명은 본 명세서에서 대문자로 나타낸다.

본 명세서 및 청구항의 목적을 위해 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 하나의 실시태양에서, "바실러스 튜린지엔시스 RTI545의 생물학적으로 순수한 배양물"이란 어구는 상기 세균 균주의 생물학적으로 순수한 발효 배양물의 포자, 상기 세균 균주의 생물학적으로 순수한 발효 배양물의 영양세포, 상기 세균 균주의 생물학적으로 순수한 발효 배양물의 하나 이상의 생성물, 상기 세균 균주의 생물학적으로 순수한 발효 배양물의 배양 고체, 상기 세균 균주의 생물학적으로 순수한 발효 배양물의 배양 상등액, 및 상기 세균 균주의 생물학적으로 순수한 발효 배양물의 무세포 추출물 중 하나 또는 이들의 조합을 지칭한다.

또 다른 실시태양에서, "바실러스 튜린지엔시스 RTI545의 생물학적으로 순수한 배양물"이란 어구는 상기 세균 균주의 생물학적으로 순수한 발효 배양물의 포자, 상기 세균 균주의 생물학적으로 순수한 발효 배양물의 영양세포, 상기 세균 균주의 생물학적으로 순수한 발효 배양물의 하나 이상의 생성물, 및 상기 세균 균주의 생물학적으로 순수한 발효 배양물의 배양 고체 중 하나 또는 이들의 조합을 지칭한다. 상기 실시태양의 하나의 변형에서, 상기 어구는 상기 세균 균주의 생물학적으로 순수한 발효 배양물의 포자를 지칭할 수도 있다.

더욱 또 다른 실시태양에서, "바실러스 튜린지엔시스 RTI545의 생물학적으로 순수한 배양물"이란 어구는 상기 세균 균주의 생물학적으로 순수한 발효 배양물의 배양 상등액, 및 상기 세균 균주의 생물학적으로 순수한 발효 배양물의 무세포 추출물 중 하나 또는 이들의 조합을 지칭한다.

현저하게, "바실러스 튜린지엔시스 RTI545의 생물학적으로 순수한 배양물"은 상기 생물학적으로 순수한 배양물의 포자, 영양세포 또는 무세포 추출물의 형태로 존재할 수 있다.

본 명세서 및 청구항의 목적을 위해 본 명세서에 사용되는 바와 같이, "식물 해충"이란 어구는 식물에 유해하고/하거나 병원성인 임의의 해충, 예를 들어 비제한적으로 식물 해충, 예를 들어 곤충, 기생충, 선충, 진균, 세균 또는 바이러스를 지칭한다.

페스큐 그라스의 토양으로부터 단리된 신규의 식물-관련된 세균을 본 명세서에 제공하며 "RTI545"라 칭한다. 상기 균주는 바실러스 튜린지엔시스 균주에서 종종 발견되는 결정 단백질에 대한 유전자가 없지만, 서열 분석을 근거로 바실러스 튜린지엔시스 균주인 것으로 동정되었다. 뜻밖에도, 상기 RTI545 균주는 강한 곤충 퇴치 활성을 나타내지만, 직접적인 접촉 및 선택 피딩 분석에서 상기 곤충 유충을 죽이지 못한다. 본 명세서에서 식물 생장에 이득이 되고 식물 해충에 대한 보호를 부여하기 위해서 식물, 식물 부분, 식물 종자, 식물 뿌리, 또는 토양에 전달하기 위한 상기 바실러스 튜린지엔시스 RTI545의 생물학적으로 순수한 배양물을 포함하는 조성물 및 방법을 제공한다. 상기 생장 이득 및 부여되는 보호는 개선된 묘목 활력, 개선된 뿌리 발달, 개선된 식물 생장, 개선된 식물 건강, 증가된 수율, 개선된 외관, 개선된 식물 해충 내성, 감소된 병원성 감염, 또는 이들의 조합을 포함한다.

상기 식물 또는 식물 부분에의 상기 조성물의 전달은 상기 식물의 임의의 부분, 예를 들어 지상 부분, 예를 들어 잎 부분, 및 상기 식물의 번식을 위한 식물의 부분, 예를 들어 묘목, 이식물, 꺾꽂이순(예를 들어 줄기, 뿌리, 잎 등), 뿌리줄기, 포자, 순(예를 들어 사탕수수의), 알뿌리, 둥근줄기, 덩이줄기, 또는 이들의 부분, 또는 완전한 식물이 수득될 수 있는 다른 식물 조직에의 전달을 포함한다. 상기 식물, 또는 상기 식물 또는 상기 식물의 종자 주변의 토양 또는 생육 배지, 또는 상기 식물의 식재 또는 상기 식물의 종자의 파종 전 토양 또는 생육 배지에의 전달은 식재시 상기 조성물의 고랑-내 적용을 포함하며, 상기 조성물과 상기 토양 또는 생육 배지와의 혼입 또는 혼합, 토양 관주 등에 의한 것과 같은 상기 토양 또는 생육 배지의 표면에의 상기 조성물의 적용을 포함한다.

하나의 실시태양에서, 상기 바실러스 튜린지엔시스 RTI545 균주를 식물 근권 중에 상기 RTI545 균주의 확립을 통한 화학적 살충제의 방제를 연장하기 위해서 상기 화학적 살충제와 함께 식물, 식물 부분, 식물 종자, 식물 뿌리 또는 토양에 전달한다. 상기 RTI545 균주에 의한 상기 곤충 방제의 제안된 기전을 도 1에 예시한다. 도 1A는 화학적 살충제 단독(즉 RTI545 없이)으로 종자를 코팅함에 의한 곤충 방제를 도시한다. 살충제(내부 원을 둘러싸고 있는 어두운 밴드)로 코팅된 식물 종자(내부 원)를 도 1A 도해의 맨 왼쪽에 도시하며, 상기 종자는 상기 식물 근권 중에서 수평 표시로 나타내는 식물 해충에 의해 둘러싸여 있다. 상기 도해의 가운데 부분은 해충으로부터 상기 식물 종자의 뿌리를 보호하는 확산된 살충제와 함께 발아된 식물 종자를 도시한다(보호를 "X" 표시로 나타낸다). 상기 도해의 맨 오른쪽은 상기 뿌리가 상기 화학적 살충제의 확산 대역을 벗어나 생장함에 따라 상기 해충으로부터 상기 식물 종자의 뿌리의 보호가 감소됨을 도시한다. 도 1B의 도해는 바실러스 튜린지엔시스 RTI545 포자의 상기 식물 종자상의 코팅에 또는 고랑내 적용으로서의 첨가가 상기 살충제 코팅 단독 사용에 비해 곤충 방제를 어떻게 개선시키는지에 대해 제안된 기전을 예시한다. 구체적으로, 도 1B 도해의 맨 오른쪽은 상기 식물 근권 중의 바실러스 튜린지엔시스 RTI545의 확립의 결과로서, 상기 뿌리가 상기 화학적 살충제의 확산 대역을 벗어나 생장하는 경우에 조차 상기 해충으로부터 상기 식물 종자의 뿌리의 보호가 계속됨을 도시한다. 일례로, 식물 생장에 이득이 되고 해충을 방제하기 위해서 RTI545 세포로 코팅되거나 달리 RTI545로 처리된 종자를 화학적 살충제, 바이펜트린, 및 액체 비료의 적용과 함께 식재한다.

상기 RTI545 균주의 단리 및 특성화를 본 명세서에 제공된 실시예에 보다 구체적으로 기재한다. 실시예 1은 BLAST를 사용하여 상기 RTI545 균주의 16S rDNA(서열번호 1) 및 rpoB(서열번호 2) 유전자의 서열을 NCBI 및 RDP 데이터베이스 중의 다른 공지된 세균 균주의 서열과의 비교를 기재한다. 상기 분석은 균주 RTI545를 바실러스 세레우스/튜린지엔시스/안트라시스 계통군내에 놓았다. 추가로 상기 RTI545 균주 및 관련된 바실러스 종의 계통발생적 분석을 rpoB 유전자에 대한 부트스트랩 일치 가계도(1000 반복)를 사용하여 수행하였다. 상기 rpoB 유전자의 일치 가계도를 도 2에 도시한다. 도 2에서 알 수 있는 바와 같이, 상기 RTI545 균주는 바실러스 세레우스/튜린지엔시스/안트라시스 계통군 내 별도의 가지를 형성하며, 이는 RTI545가 상기 바실러스 세레우스/튜린지엔시스/안트라시스 계통군내에 있는 새로운 균주임을 가리킨다. 추가적인 서열 분석은 상기 RTI545 균주가 바실러스 튜린지엔시스 균주에서 종종 발견되는 결정 단백질에 대한 유전자가 없음을 밝혀내었다.

추가로, MUMmer- 및 BLASTn-기반 평균 뉴클레오타이드 일치성(ANI) 및 UNIPEPT 분석을 모두 사용하여 전체 게놈 서열 분석을 수행하여 상기 RTI545 균주를 상기 바실러스 종의 밀접하게 관련된 균주들과 비교하여 그의 계통발생적 분류를 확인하였다. 상기 MUMmer 및 BLASTn 기반 ANI 산정의 결과를 하기 표 I에 나타낸다. 상기 ANI 및 UNIPEPT(데이터 도시 안됨) 분석은 모두 RTI545와, 바실러스 세레우스 및 바실러스 튜린지엔시스 모두로서 나타낸 균주들의 공개된 서열간의 상당한 정도의 서열 유사성을 밝혀내었다. 인지된 유형의 균주에 대해 가장 높은 서열 유사성은 상기 인지된 유형의 균주 바실러스 튜린지엔시스 베를리너(Berliner) ATCC10792에 대한 것이다. 다시, 전체 게놈 서열 중 상기 앞서 공개된 서열들로부터의 차이는 RTI545가 바실러스 세레우스/튜린지엔시스/안트라시스 계통군내에 있는 신규의 바실러스 튜린지엔시스 균주임을 가리킨다.

상기 서열 분석을 근거로, 상기 RTI545 균주는 신규의 균주로서 동정되었으며, 본 명세서에서 바실러스 튜린지엔시스 균주라 칭한다.

상기 RTI545의 균주는 특허 절차를 목적으로 미생물 기탁의 국제적인 인정에 대한 부다페스트 조약하에서 2015년 5월 12일에 미국 버지니아주 머내서스 소재의 아메리칸 타입 컬쳐 컬렉션(ATCC)에 기탁되었으며 특허 수탁번호 PTA-122161을 갖는다.

다양한 식물 중에서, 시험관내, 온실 및 실지 시험 연구를 포함한 다양한 조건하에서 상기 바실러스 튜린지엔시스 RTI545 균주의 생장 촉진, 항균, 및 곤충 및 선충 및 진균 방제 활성을 입증하는 실험 연구들을 본 명세서의 도 3 내지 5 및 실시예 2 내지 17에 제공한다. 구체적으로, 상기 바실러스 튜린지엔시스 RTI545 균주는 식물 생장에 이득이 되고 남부 옥수수 뿌리벌레(SCRW), 방아벌레, 예를 들어 밀 방아벌레 및 옥수수 방아벌레, 굼벵이 집합 해충, 토양에 사는 구더기, 예를 들어 종자 옥수수 구더기 및 종자 구더기, 노린재, 예를 들어 서부 노린재(WPB), 선충류 및 진균 병원체, 예를 들어 리조크토니아 스페시즈(Rhizoctonia spp.)를 포함한 식물 해충에 대한 방제를 부여하는 것으로 나타났다. 일부의 경우에, 상기 바실러스 튜린지엔시스 RTI545 균주에 의한 종자 처리는 생물학적 및 화학적 활성제의 조합 또는 화학적 활성제 단독에 기반한 상업적으로 입수할 수 있는 제품에 비해 균등하거나 우수한 결과를 제공하였다.

플레이트 분석에서 다수의 주요 식물 병원체에 대한 상기 바실러스 튜린지엔시스 RTI545의 길항작용성 성질을 실시예 2에 기재하며 상기 균주의 표현형적 특성, 예를 들어 식물호르몬 생성, 아세토인 및 인돌 아세트산(IAA), 및 양분 순환을 실시예 3에 기재한다.

실시예 4는 종자 발아, 뿌리 발달 및 조기 생장에 대한 옥수수 종자와 RTI545 세포와의 배양의 긍정적인 효과를 기재한다. 상기 결과를 도 3A 및 도 3B에 나타내며, 상기 도면들은 상기 RTI545 균주의 존재(도 3A) 및 부재(도 3B)하에서 생장한지 12일 후의 옥수수 묘목의 상들이다. 상기 도면들에서 알 수 있는 바와 같이, 상기 RTI545 균주의 존재는 상당한 생장 이점을 생성시켰다.

실시예 5는 조기 식물 생장 및 활력에 대한 RTI545 세포에 의한 옥수수 종자 접종의 양의 접종 효과를 기재한다. 표면 살균된 발아된 옥수수 종자에 2일간 실온에서 10⁸ CFU/㎖의 RTI545의 현탁액을 접종하고 후속적으로 상기 접종된 종자를 포트에 식재하고 온실에서 배양하였다. 상기 옥수수 싹튼 바이오매스의 습윤 및 건조 중량을 42일 생장 후에 측정하였다. 상기 옥수수 싹튼 바이오매스의 습윤 중량 및 건조 중량은 접종되지 않은 대조용에 비해 상기 바실러스 튜린지엔시스 RTI545 균주로 접종된 식물에서 증가하였다. 상기 습윤 및 건조 바이오매스의 현저한 증가로부터 알 수 있는 바와 같이, 상기 RTI545 균주의 존재는 상당한 생장 이점을 생성시켰다.

실시예 6은 상기 RTI545 균주의 뜻밖의 곤충 퇴치 활성을 기재한다. 서부 노린재(WPB)에 대한 길항작용에 대해서, 바실러스 튜린지엔시스 RTI545를 배지 블랭크, 화학 활성제(O,S-다이메틸 아세틸포스포아미도티오에이트), 및 바실러스 튜린지엔시스 서브스페시즈 쿠르스타키 HD-1(HD-1)을 포함하는 대조용과 함께 직접 분무, 선택 피딩, 및 비-선택 피딩 분석에서 평가하였다. 예상된 바와 같이, 상기 배지 블랭크 또는 HD-1 처리의 경우 현저한 사망률(직접 분무 및 비-선택 피딩 분석) 또는 퇴치(선택 피딩 분석)가 관찰되지 않은 반면, 상기 화학적 대조용은 상기 WPB를 죽이고(직접 분무 및 비-선택 피딩 분석) 퇴치하였다(선택 피딩 분석). 바실러스 튜린지엔시스 RTI545는 적용시 직접 분무 및 비-선택 피딩 분석 모두에서 WPB에 대해 현저한 사망률을 제공하지 않았지만; 뜻밖에도, RTI545는 WPB를 선택 분석 아레나에 둔 후 124시간째에 퇴치 양상을 나타내었다. 구체적으로, 상기 WPB를 처리된 및 비-처리된 먹이 소스를 함유하는 용기에 두었을 때, WPB는 상기 비-처리된 먹이 소스에서만 먹이를 먹는 것으로 관찰되었다(데이터 도시 안 됨).

남부 옥수수 뿌리벌레(SCRW) 유충에 대한 길항작용에 대해서, 바실러스 튜린지엔시스 RTI545 세포를 옥수수 묘목의 선택 피딩 분석에서 평가하고 수 대조용과 비교하였다. 상기 수 대조용과 비교되는 추가적인 처리는 i) 바실러스 튜린지엔시스 서브스페시즈 쿠르스타키 HD-1(HD-1), ii) 화학적 대조용 캡처(CAPTURE) LFR(A.I. = 17.15% 바이펜트린), 및 iii) 869 배지였다. 여과지를 절반으로 잘라 각 조각을 페트리 디쉬에 넣고, 여기에 처리 또는 탈이온수를 상기 여과지의 각 절반에 적용하였다. 하나의 발아된 옥수수 종자가 각각의 촉촉한 여과지 절반상에 위치하였다. 10초-령 유충을 처리된 및 비처리된 여과지 사이의 중심선에 두었다. 디쉬를 밀봉하고 6일간 유지시켰다. 6일 후에 상기 RTI545 세포가 있는 플레이트 분석의 상을 도 4에 도시하며, 상기 모든 플레이트 분석으로부터의 데이터를 표 IV에 요약한다. WPB에 대한 상기 분석에서 관찰된 바와 같이, 상기 RTI545는 뜻밖에도 SCRW 유충을 퇴치하였으나 죽이지는 못했다. 도 4 및 표 IV에서 알 수 있는 바와 같이, 상기 RTI545 배양물은 상기 SCRW 유충의 퇴치에 탁월하였으며; 상기 여과지의 수-처리된 절반상에서는 상기 유충의 100%가 존재하였고 상기 RTI545 처리된 여과지상에서는 상기 유충이 아무도 존재하지 않았다. 대조적으로, 상기 유충은 HD-1 균주에 대해 처리 및 수 대조용간에 통계학적으로 균일하게 분할되었다. 상기 화학적 대조용은 상기 처리된 여과지상에 유충의 약 19%가 존재하게 하였다. 표 V는 유사한 결과를 나타낸다. 상기 결과는 상기 RTI545 균주가 뜻밖에도 상기 옥수수 종자로부터 상기 곤충을 퇴치함에 있어서 상기 화학적 살충제보다 우수하였지만, 상기 곤충을 죽이지는 못했음을 보인다.

표 VI은 카노사민 및 바실러스 튜린지엔시스 RTI545 및 FD30의 SCRW에 대한 퇴치 효과를 비교하며, 이는 곤충에 대한 RTI545의 퇴치 양상이 카노사민의 생성에 기인할 수 있음을 나타낸다.

실시예 7은 카노사민과 비교된, RT545 상등액에 노출된 뿌리혹 선충의 퇴치 및 부화 억제를 나타낸다. 표 VII 및 VIII에 요약된 결과는 상기 선충에 대한 RTI545의 효과가 카노사민의 생성에 의해 야기되지 않는 듯함을 암시한다.

실시예 8은 곤충 압박하의 실지 및 온실 시험에서 옥수수 및 대두 종자를 바실러스 튜린지엔시스 RTI545의 포자로 처리함으로써 생장 및 수율에 대한 긍정적인 효과를 기재한다. 상기 생장, 수율, 및 옥수수 해충, 방아벌레 및 종자 구더기의 방제에 대한 효과를 미국 위스콘신주에서 실지 시험으로 측정하였다. 추가적인 실험을 온실에서 수행하여 방이벌레 존재하에서의 조기 식물 생장에 대한 효과를 측정하였다.

실지 시험 실험에서, 옥수수 종자를 1) 맥심(MAXIM) + 에이프론(APRON) XL을 포함하는 화학적 진균 방제 처리("FC"라 지칭됨); 2) FC + 살충제 바이펜트린 0.125 ㎎/종자; 3) FC + 폰초 250(클로티아니딘 1.25 ㎎/종자) 및 보티보(바실러스 피르무스 I-1582); 4) FC + 폰초 250(클로티아니딘 0.25 ㎎/종자); 5) FC + 폰초 500(클로티아니딘 0.5 ㎎/종자) 및 보티보(바실러스 피르무스 I-1582) 및 6) FC + 바이펜트린(0.125 ㎎/종자) + 바실러스 튜린지엔시스 RTI545의 포자를 함유하는 슬러리로 처리하였다. 상기 처리된 옥수수 종자를 미국 위스콘신주에서 별도의 실지 시험으로 방아벌레 및 종자 구더기 감염된 토양에 식재하였다. 상기 결과를 하기 표 IX에 나타낸다. 상기 살충제 바이펜트린과 함께 상기 바실러스 튜린지엔시스 RTI545의 포함은 바이펜트린 단독으로 처리된 종자에 비해 발아 퍼센트, 식물 스탠드, 활력 및 방아벌레 및 종자 구더기 모두의 방제에서 상당한 개선을 생성시켰다. 또한, 상기 바실러스 튜린지엔시스 RTI545와 바이펜트린과의 조합의 결과는 방아벌레 방제에서 제품 폰초 1250 보티보와 통계학적으로 균등하였으며 종자 구더기의 방제에서 상기 제품보다 개선을 나타내었다. 이들 데이터는 바실러스 튜린지엔시스 RTI545 및 화학적 살충제, 예를 들어 바이펜트린의 조합에 의한 옥수수 종자 처리가 화학적 살충제 단독의 포함에 비해 곤충 방제를 현저하게 개선시키며 일부 유형의 곤충 방제를 위한 상업적으로 입수할 수 있는 제품보다 우수함을 가리킨다.

두 번째 실지 시험에서, 옥수수 종자를 1) 화학적 대조용 맥심 + 에이프론 XL("FC"라 지칭됨); 2) FC + 바이펜트린; 3) FC + 폰초 1250 보티보; 4) FC + 폰초 250; 및 5) FC + 바이펜트린 + RTI545의 포자를 함유하는 상기 첫 번째 시험과 동일한 슬러리로 처리하였다. 상기 처리된 옥수수 종자를 미국 위스콘신주에서 별도의 실지 시험으로, 방아벌레는 존재하지만 종자 구더기는 없이 식재하였다. 방아벌레 피딩으로부터의 옥수수 뿌리의 손상을 식재후 41일째에 평가하였다. 상기 결과를 하기 표 X에 나타내며 상기 결과는 선행 시험과 유사한 결과를 나타낸다. 구체적으로, 상기 살충제 바이펜트린과 함께 상기 바실러스 튜린지엔시스 RTI545의 포함은 바이펜트린 단독으로 처리된 종자에 비해 발아 퍼센트, 식물 스탠드, 활력 및 방아벌레의 방제에서 상당한 개선을 생성시켰다. 또한, 상기 바실러스 튜린지엔시스 RTI545와 바이펜트린과의 조합의 결과는 방아벌레 방제에서 제품 폰초 1250 보티보와 통계학적으로 균등하거나 더 우수하였다.

화학적 살충제와 RTI545의 포자와의 조합에 의한 종자 처리후 옥수수 실지 시험에서 평균 수율을 폰초 보티보와 비교하여 또한 측정하였다. 상기 결과를 하기 표 XI에 나타낸다. 상기 살충제 바이펜트린과 함께 상기 바실러스 튜린지엔시스 RTI545의 포함은 바이펜트린 단독으로 처리된 종자에 비해 수율의 상당한 개선을 생성시켰다. 또한, RTI545와 바이펜트린과의 조합은 수율 13 부셸/에이커(각각 180.5에서 193.7 및 185.5에서 193.7 부셸/에이커)를 증가시킴으로써(각각 6.8% 및 4.2%의 곡물 수율의 증가를 나타낸다) 폰초 500 보티보 및 폰초 1250 보티보 모두를 능가하였다. 이들 데이터는 RTI545 및 화학적 살충제, 예를 들어 바이펜트린의 조합에 의한 옥수수 종자 처리가 화학적 살충제 단독의 포함에 비해 수율을 상당히 개선시키고, 곤충에 의한 손상을 억제하기 위해 보다 많은 양의 화학적 살충제를 고랑내에 적용해야 하는 필요성을 감소시킴을 가리킨다.

옥수수 종자를 RTI545의 포자로 처리함에 의한 곤충 압박하의 생장에 대한 효과를 추가로 평가하였다. 일습의 온실 연구에서, 옥수수 종자를 먼저 하기와 같이 기재된 바와 같은 종자 처리 슬러리로 처리하고 이어서 토양이 방아벌레를 함유하지 않는 대조용 세트와 함께, 해충 방아벌레로 감염된 토양에 식재하였다(하나의 종자에 대해서 포트당 10마리의 방아벌레). 상기 종자 처리 슬러리는 하기와 같았다: 1) 화학적 대조용 맥심 + 에이프론 XL("FC"라 지칭됨); 2) FC; 3) FC + 바이펜트린(처리된 모든 처리에 대해서 0125 ㎎/종자); 4) FC + 바이펜트린 + RTI545 5.0x10⁶; 5) FC + 바이펜트린 + RTI545 5.0x10⁶ 열-처리된; 6) FC + 바이펜트린 + RTI545 1.0x10⁶; 7) FC + RTI545 5.0x10⁶; 및 8) FC + 폰초 1250. 상기 처리된 종자들을 발아 퍼센트에 대해 평가하였다.

상기 결과를 하기 표 XIII에 나타낸다. 상기 살충제 바이펜트린과 함께 상기 바실러스 튜린지엔시스 RTI545의 포함은 100% 발아를 생성시켰으며, 이는 바이펜트린 단독의 포함에 비해 개선이었고 방아벌레 없는 대조용 및 상기 FC + 폰초 1250 화학적 처리와 균등한 결과를 제공하였다. 방아벌레 피딩은 뿌리를 잘라내어 옥수수 식물 왜화를 야기하며 RTI545 단독 또는 바이펜트린과 RTI545는 살아있는 식물에서 식물 왜화를 감소시켰다. RTI545는 단독으로 식물 손실 방지에 대한 활성을 나타내었으나 왜화에 대한 조기 보호를 제공함에 있어서는 살충제 바이펜트린보다 열등하였다. 그러나, RTI545는 상기 식물이 생장함에 따라 식물 왜화를 방지하는데 보다 유효하였다(데이터 도시 안 됨). 이들 데이터는 옥수수 종자 처리에서 RTI545 포자의 단독 또는 화학적 살충제, 예를 들어 바이펜트린과의 포함이 상기 해충 방아벌레 존재하에서의 식물 건강을 현저하게 개선시킴을 가리킨다.

바실러스 튜린지엔시스 RTI545의 포자 외에, 화학적 살충제와 함께 화학적 활성 성분의 표준 살진균 조합에 의해 대두 종자를 처리함으로써 수율에 대한 효과를 측정하는 실험을 수행하였다. 상기 실험을 하기에 기재된 바와 같이 수행하였다. 실험에서, 대두 종자를 1) 화학적 대조용 플루디옥소닐/TPM/메페녹삼("FC"); 2) FC + 살충제 티아메톡삼; 및 3) FC + 티아메톡삼 + 바실러스 튜린지엔시스 RTI545의 포자를 함유하는 용액과 혼합하였다. 상기 처리된 대두 종자를 방아벌레 감염된 3개의 부위(N=3)에 식재하고, 수율을 분석하였다. 상기 결과를 하기 표 XIII에 나타낸다. 상기 티아메톡삼과 함께 RTI545 포자의 포함은 티아메톡삼 단독으로 처리된 종자에 비해 수율의 상당한 개선을 생성시켰다. 이들 데이터는 RTI545 및 화학적 살충제의 조합에 의한 대두 종자 처리가 살충제 단독의 포함에 비해 수율을 상당히 개선시키며, 곤충에 의한 손상을 억제하기 위해 보다 많은 양의 화학적 살충제를 고랑내에 적용해야 하는 필요성을 감소시킴을 나타낸다.

실시예 9는 대두 및 감자에서 선충 감염을 감소시키는 바실러스 튜린지엔시스 RTI545 균주의 능력을 기재한다. 온실 연구를, RTI545 세포로 처리된 및 상기 세포 없이 처리된 종자로부터의, 남부 뿌리혹 선충(멜로이도지네 인코그니타(Meloidogyne incognita))으로 감염된 토양에 포팅된 대두 식물로 수행하였다. 종자 처리는 제품 폰초 보티보(바이엘 크랍사이언스 LP; A.I. = 40.3% 클로티아니딘, 8.1% 바실러스 피르무스 I-1582) 및 아빅타 컴플리트(AVICTA COMPLETE)(신젠타(SYNGENTA); A.I. = 11.7% 티아메톡삼, 10.3% 아바멕틴, 2.34% 티아벤다졸, 0.3% 플루디옥소닐, 0.23% 메페녹삼, 0.12% 아족시스트로빈)를 포함하였다. 상기 결과를 하기 표 XIV에 나타낸다. 개시 후 63일 째에, RTI545 세포로 처리된 종자 및 화학적 조합 아빅타 컴플리트로 처리된 종자에 대해 포트당 선충난의 수는 통계학적 차이가 없었다. 그러나, RTI545 세포로 처리된 종자에 대한 포트당 선충난의 수는 폰초 보티보로 처리된 종자의 경우보다 적었다. 이는 바실러스 튜린지엔시스 RTI545에 의해 제공된 대두상의 선충 방제에 대한 긍정적인 효과를 입증하며, 이는 상업적으로 입수할 수 있는 생물학적 + 화학적- 및 화학적 활성-기재 제품에 비해 우수한 방제와 균등함을 제공한다.

온실 연구를 글로보데라 스페시즈(Globodera sp.) 선충으로 자연 감염된 토양에 심은 감자 식물로 수행하여 바실러스 튜린지엔시스 RTI545 세포에 의한 상기 토양의 처리 효과를 측정하였다. 감자(선충 민감성 품종 "빈체(Bintje)")를, 글로보데라 스페시즈(대조용)로 감염되고 토양 리터당 10⁹ cfu의 RTI545 포자로 향상된 토양에 식재하였다. 상기 결과를 도 5의 그래프에 나타낸다. 추가적인 토양 처리를 상기 연구에 포함시켰다: 비데이트(VYDATE) 제품(듀퐁; A.I. = 옥사밀[메토일 N'N'-다이메틸-N-[(메틸 카바모일)옥실)옥시]-1-티오옥스아미미데이트), 바이오액트 제품(바이엘 크랍사이언시즈 LP; 파에실로마이세스 릴라시누스 균주 251), 카렉스 제품(뉴팜, 피리다벤), 및 바실러스 튜린지엔시스 서브스페시즈 쿠르스타키 HD-1). 상기 제품들을 제품 표지상에 표시된 비율로 적용하였다. 도 5에서 알 수 있는 바와 같이, RTI545 세포로 처리된 토양에 대한 뿌리 바이오매스의 g당 포낭의 수가 화학적 활성 성분을 함유하는 제품을 포함하는 모든 처리에 비해 현저하게 감소되었다. 이는 바실러스 튜린지엔시스 RTI545에 의해 제공된 감자에 대한 선충 방제에 대해 긍정적인 효과를 입증하며, 이는 상업적으로 입수할 수 있는 생물학적- 및 화학적 활성 기재 제품에 비해 우수한 방제를 제공한다.

실시예 10은 종자를 병원체 방제를 위해 화학적 활성제 외에 RTI545 균주로 처리했을 때 리조크토니아 질병 압박의 존재하에서 발아, 뿌리 질병, 및 목화 수율에 대한 효과를 조사하기 위해 수행된 실험을 기재한다.

구체적으로, 목화에서의 실험을 하기와 같이 설정하였다: 1) 종자를 처리하지 않았다(UTC); 2) 종자를 제조사의 표지에 따라 플루디옥소닐 + 메페녹삼 + 이미다클로프리드의 베이스 조합으로 처리하였다("B"라 칭한다); 3) 종자를 베이스 + 5 x 10⁵ cfu/종자의 RTI545로 처리하였다(B + RTI545); 및 4) 종자를 표지 설명에 따라 베이스 + 비브란체(VIBRANCE)(활성 성분 세닥산; 신젠타 크랍 프로텍션 인코포레이티드(SYNGENTA CROP PROTECTION, INC))로 처리하였다(B + 비브란체). 실지 시험을 미국 조지아주에서 수행하였다. 상기 시험은 건조된 접종물을 식재시 종자와, 상기 종자가 생장을 개시했을 때 감염을 제공하기 위해 처방된 비율로 혼합함으로써 리조크토니아로 접종하였다. 평균 목화 발아 퍼센트를 하기 표 XV에 나타낸다.

상기 표 XV의 결과는 상기 베이스 외에 RTI545 포자로 처리한 결과 화학적 베이스 단독의 경우에 비해 발아 퍼센트가 상당히 개선되었음을 나타낸다. 또한, 베이스 + 화학적으로 활성인 상업적인 제품 비브란체뿐만 아니라 RTI545 처리를 수행하였다. 따라서, RTI545에 의한 종자 처리는 심한 병원체 압박 조건하에서조차 발아의 상당한 개선을 제공할 수 있다.

실시예 11은 바실러스 튜린지엔시스 RTI545의 포자로 처리된 밀 종자 및 RTI545 + 병원체 방제를 위한 화학적 활성제로 처리된 종자에 의한 곤충 압박하의 생장 및 수율에 대한 효과를 조사하기 위한 실험을 기재한다. 보다 구체적으로, 생장, 수율, 및 밀 해충, 방아벌레 및 굼벵이의 방제에 대한 효과를 미국 위스콘신주에서 실지 시험으로 측정하였다. 밀 종자를 1) 화학적 살진균제 베이스 다이페노코나졸/테부코나졸/TPM/메페녹산("FC"라 칭함); 2) FC + 바실러스 튜린지엔시스 RTI545의 포자(RTI545 1x10⁶ cfu/g 종자); 3) FC + 바이펜트린(20 g/종자); 4) FC + 바이펜트린(20 g/종자) + RTI545 1x10⁶ cfu/g 종자; 5) FC + 바이펜트린(50 g/종자); 및 6) FC + 바이펜트린(50 g/종자) + RTI545 1x10⁶ cfu/g 종자를 함유하는 슬러리로 처리하였다. 상기 결과를 하기 표 XVI에 나타낸다. 상기 바실러스 튜린지엔시스 RTI545 포자 각각에 의한 종자 처리, 및 상기 살진균제 베이스 단독 또는 상기 살충제, 바이펜트린과 함께 중 어느 하나와 함께 RTI545 포자에 의한 처리는 발아 퍼센트, 활력, 방아벌레 및 굼벵이의 방제 및 수율의 상당한 개선을 생성시켰다. 시험된 모든 경우에, 상기 밀 종자 처리에의 상기 RTI545 포자의 포함은 생장, 활력, 해충 방제 및 수율의 상당한 개선을 생성시켰다.

실시예 12는 리조크토니아 진균 병원체에 대한 생장 및 수율에 대한 RTI545 대두 종자 처리의 영향을 나타낸다. 표 XVII은 베이스 처리 단독 및 상기 베이스 처리 + 또 다른 화학 활성 성분과 비교된, 상기 베이스 화학 종자 처리에 첨가된 RTI545의 비교를 나타낸다. 상기 베이스 화학 처리에 대한 RTI545의 첨가는 상기 화학적 베이스에 비해 스탠드, 활력 및 수율의 상당한 증가를 생성시켰다.

실시예 13은 방아벌레 및 종자 구더기에 대한 생장 및 수율에 대한 RTI545 옥수수 종자 처리의 영향을 나타낸다. 표 XVIII은 RTI545가 클로티니딘, 바이펜트린 및 클로르안트라닐리프롤과 같은 화학적 살충제에 첨가될 때 약간의 보호를 제공하고 상기 해충에 대한 살충 보호를 증대시킴을 나타낸다.

실시예 14는 표 XIX 및 XX에 나타낸 바와 같이, RTI545가 옥수수 방아벌레 및 옥수수 뿌리벌레에 대해 고랑내 적용에 유효하며, 그 결과 단독으로 및 특히 화학적 살충제 바이펜트린과 함께 증가된 수율 및 감소된 뿌리 손상을 생성시킴을 나타낸다.

실시예 15는 리조크토니아 진균 병원체에 대한 생장 및 수율에 대한 RTI545 땅콩 종자 처리의 영향을 나타낸다. 표 XXI은 베이스 처리 단독과 비교된, 상기 베이스 화학적 종자 처리에 첨가된 RTI545의 비교를 나타낸다. 상기 베이스 화학 처리에의 RTI545의 첨가는 상기 화학적 베이스에 비해 스탠드, 활력 및 수율의 상당한 증가를 생성시켰다.

실시예 16은 썩이 선충에 대한 RTI545 옥수수 종자 처리의 온실 분석을 나타낸다. 표 XXII은 베이스 처리 단독 및 상기 베이스 처리 + 폰초/보티보와 비교된, 상기 베이스 살진균제 화학적 종자 처리에 첨가된 RIT545의 비교를 나타낸다. RTI545 + 상기 베이스 처리는 상기 베이스 처리 + 폰초/보티보에 의해 제공된 경우와 비교하여 상기 처리되지 않은 것보다 우수한 뿌리 길이 증가를 제공하였다. 표 XXIII은 RTI545 + 베이스 처리가 상기 베이스 처리 및 상기 베이스 처리 + 폰초/보티보와 비교하여 우수한 침투 감소 및 신선한 상부 중량을 제공하였음을 나타낸다. 상기 표는 또한 RT545를 다른 생물학적 방제제와 병용할 때의 결과를 나타낸다.

실시예 17은 대두 포낭 선충에 대한 RTI545 대두 종자 처리의 토양 관주 분석을 나타낸다. 표 XXIV는 처리되지 않은 대조용과 비교된 포낭의 감소를 나타낸다.

실시예 18 및 19는 RTI545(표 XXV) 및 RTI545 + 바이펜트린(표 XXVI 및 XXVII)의 현탁액 농축물 제형을 나타낸다. 표 XXVIII은 SC 제형 중 포자가 상승된 온도에서 2주의 보관에 걸쳐 안정하게 남아있었음을 나타낸다.

본 개시의 하나의 실시태양에서, 감수성 식물에서 식물 생장에 이득이 되거나 식물에서 식물 해충에 대한 보호를 부여하거나 이 둘 모두를 위해 식물에 적용하기 위한, ATCC 번호 PTA-122161로서 기탁된 바실러스 튜린지엔시스 RTI545 또는 그의 모든 식별 특징을 갖는 그의 돌연변이체의 생물학적으로 순수한 배양물을 포함하는 조성물을 제공한다.

또 다른 실시태양에서, 감수성 식물에서 식물 생장에 이득이 되거나 식물 해충에 대한 보호를 부여하거나 이 둘 모두를 위한 방법을 제공하며, 상기 방법은 ATCC 번호 PTA-122161로서 기탁된 바실러스 튜린지엔시스 RTI545 또는 그의 모든 식별 특징을 갖는 그의 돌연변이체의 생물학적으로 순수한 배양물을 포함하는 조성물을 식물, 식물 부분, 상기 식물의 종자, 상기 식물의 뿌리, 상기 식물 또는 상기 식물의 종자 주변의 토양 또는 생육 배지, 또는 상기 식물의 식재 또는 상기 식물 종자의 파종 전의 토양 또는 생육 배지에, 상기 감수성 식물에서 상기 식물 생장에 이득이 되고/되거나 상기 식물 해충에 대한 보호를 부여하기에 적합한 양으로 전달함을 포함한다.

본 개시의 조성물 및 방법에서, 상기 식물의 생장 이득 및/또는 상기 부여된 보호는 개선된 묘목 활력, 개선된 뿌리 발달, 개선된 식물 생장, 개선된 식물 건강, 증가된 수율, 개선된 외관, 개선된 식물 해충 내성, 감소된 병원성 감염, 또는 이들의 조합에 의해 나타날 수 있다.

본 발명의 조성물 및 방법은 광범위하게 다양한 식물, 예를 들어 비제한적으로 외떡잎 식물, 쌍떡잎 식물, 곡물, 예를 들어 옥수수, 스위트 콘, 팝콘, 종자 옥수수, 옥수수 사일리지, 가축 사료용 옥수수, 쌀, 밀, 보리, 수수, 아스파라거스, 산딸기류 열매들, 예를 들어 블루 베리, 블랙 베리, 라즈 베리, 로건 베리, 허클 베리, 크랜 베리, 구스 베리, 엘더 베리, 커런트, 케인 베리, 부쉬 베리, 브라시카 채소들, 예를 들어 브로콜리, 양배추, 컬리플라워, 방울 양배추, 콜라드, 케일, 겨자잎, 콜라비, 호로과 채소들, 예를 들어 오이, 캔털루프, 멜론, 머스크 멜론, 애호박, 수박, 호박, 가지, 뿌리 채소들, 예를 들어 양파, 마늘, 샬롯, 감귤류 과일들, 예를 들어 오렌지, 자몽, 레몬, 귤, 탄젤로, 퍼멜로, 과채료들, 예를 들어 고추, 토마토, 꽈리, 토마틸로, 오크라, 포도, 허브, 향신료, 잎줄기 채소들, 예를 들어 양상추, 셀러리, 시금치, 파슬리, 적색 치커리, 콩과 식물 또는 채소류들, 예를 들어 콩류, 예를 들어 껍질 콩, 완두, 셸빈, 대두, 말린콩, 가르반조 콩, 리마 콩, 완두류, 병아리 콩, 쪼개서 말린 완두, 렌틸 콩, 유지작물들, 예를 들어 카놀라, 캐스터, 코코넛, 목화, 아마, 기름야자나무, 올리브, 땅콩, 유채씨, 잇꽃, 참깨, 해바라기, 대두, 배열매들, 예를 들어 사과, 크랩 애플, 배, 마르멜로, 메이호, 뿌리, 덩이줄기 및 알줄기 채소, 예를 들어 당근, 감자, 고구마, 카사바, 비트, 생강, 양고추냉이, 래디쉬, 인삼, 순무, 핵과, 예를 들어 살구, 체리, 넥타린, 복숭아, 자두, 프룬, 딸기, 견과류, 예를 들어 아몬드, 피스타치오, 피칸, 호두, 개암열매, 밤, 캐슈, 비치넛, 버터넛, 마카다미아, 키위, 바나나, (청)아가베, 그라스, 터프 그라스, 장식용 식물, 포인세티아, 경삽, 예를 들어 밤나무, 오크, 단풍나무, 사탕수수, 및 사탕무에 이롭다. 하나 이상의 실시태양에서, 상기 식물은 옥수수, 대두, 감자, 목화, 토마토, 후추, 조롱박, 사탕수수, 땅콩 또는 밀; 또는 대두, 목화, 밀, 옥수수 또는 감자를 포함할 수 있다.

본 발명의 조성물 및 방법에서, 상기 식물 손상은 예를 들어 비제한적으로 식물 해충, 예를 들어 서부 노린재(WPB) 라이구스 헤스페루스(Lygus hesperus), 콜레오프테라 스페시즈(Coleoptera sp.), 디아브로티카 스페시즈(Diabrotica sp.), 예를 들어 서부(디아브로티카 비르기페라(Diabrotica virgifera)), 남부(디아브로티카 운데심푼크타타(Diabrotica undecimpunctata)) 및 북부(디아브로티카 바르베리(Diabrotica barberi) 옥수수 뿌리벌레), 디아브로티카 발테아타(Diabrotica balteata) 및 디아브로티카 롱기코르니스(Diabrotica longicornis), 멜라노투스 스페시즈(Melanotus spp.)(옥수수 방아벌레, 멜라노투스 콤뮤니스(Melanotus communis) 및 멜라노투스 크리불로수스(Melanotus cribulosus) 포함), 필로파가 스페시즈(Phyllophaga spp.)(굼벵이, 방아벌레, 가짜 방아벌레 및 필로파가 루고사(Phyllophaga rugosa) 포함), 리모니우스 스페시즈(Limonius spp.)(사탕무 방아벌레 및 리모니우스 아그로누스(Limonius agronus)), 아그리오테스 스페시즈(Agriotes spp.)(밀 방아벌레 아그리오테스 만쿠스(Agriotes mancus), 옥수수 방아벌레, 굼벵이 및 종자 구더기 포함), 레피도프테라 스페시즈(Lepidoptera sp.), 페리드로마 스페시즈(Peridroma spp.)(다양한 거세미 포함), 육소아 스페시즈(Euxoa spp.)(아미 거세미 포함), 아그로티스 스페시즈(Agrotis spp.)(검거세미 아그로티스 이프실론(Agrotis ipsilon) 포함), 디프테라 스페시즈(Diptera sp.), 하일레미야 스페시즈(Hylemya spp.)(종자옥수수 구더기 델리아 플라투라(Delia platura) 마이겐 및 하일레미야 실리크루라(Hylemya cilicrura) 포함), 테타노프스 스페시즈(Tetanops spp.)(사탕무 뿌리 구더기 포함), 호모프테라 스페시즈(Homoptera sp.), 펨피구스 스페시즈(Pemphigus sp.)(사탕무 뿌리 진딧물, 거세미, 및 굼벵이 포함), 아피스 스페시즈(Aphis spp.)(옥수수 뿌리 진딧물 포함), 종자 옥수수 딱정벌레 아고노데루스 레콘테이(Agonoderus lecontei), 펠티아 서브고티카(Feltia subgothica) 또는 이들의 조합을 포함하는 광범위하게 다양한 식물 해충에 의해 야기될 수 있다.

본 발명의 조성물 및 방법에서, 상기 식물 해충은 예를 들어 비제한적으로 식물 병원성 선충, 콩팥모양 선충, 로틸렌쿨루스 스페시즈(Rotylenchulus　spp.), 뽕나무 선충, 자이피네마 스페시즈(Xiphinema　spp.), 창모양 선충, 호플롤라이무스 스페시즈(Hoplolaimus　spp.), 핀(썩이) 선충, 파라틸렌쿠스 스페시즈(Paratylenchus spp.), 고리 선충,　크리코네모이데스 스페시즈(Criconemoides　spp.), 뿌리혹 선충, 멜로이도지네 스페시즈(Meloidogyne　spp.), 칼집 선충,　헤미사이클리오포라 스페시즈(Hemicycliophora　spp.), 나선형 선충, 헬리코틸렌쿠스 스페시즈(Helicotylenchus　spp.), 토막뿌리 선충,　트리코도루스 스페시즈(Trichodorus spp.), 포낭 선충, 헤테로데라 스페시즈(Heterodera　spp.) 및 글로보데라 스페시즈(Globodera spp.), 독침 선충,　벨로놀라이무스 스페시즈(Belonolaimus spp.), 왜화 선충,　및 틸렌코린쿠스 스페시즈(Tylenchorhynchus　spp.), 줄무늬 선충, 라도폴루스 스페시즈(Radopholus spp.) 또는 이들의 조합일 수 있다. 주목할만한 선충은 뿌리혹 선충(멜로이도지네 스페시즈), 썩이 선충, (파라틸렌쿠스 스페시즈(Paratylenchus spp.)) 및 포낭 선충(헤테로데라 스페시즈(Heterodera　spp.) 및 글로보데라 스페시즈(Globodera spp.)를 포함한다.

본 발명의 조성물 및 방법에서, 상기 식물 해충은 예를 들어 비제한적으로 식물 진균성 병원체 또는 식물 세균성 병원체, 예를 들어 녹병균, 보트리티스 스페시즈(Botrytis spp.), 에르위니아 스페시즈, 딕케야 스페시즈(Dickeya spp.), 아그로박테리움 스페시즈(Agrobacterium spp.), 잔토모나스 스페시즈(Xanthomonas spp.), 자일렐라 스페시즈(Xylella spp.), 칸디다투스 스페시즈(Candidatus spp.), 푸사리움 스페시즈(Fusarium spp.), 스클레로티니아 스페시즈(Sclerotinia spp.), 세르코스포라/세르코스포리디움 스페시즈(Cercospora/Cercosporidium spp.), 운시눌라 스페시즈(Uncinula spp.), 포도스파에라 스페시즈(Podosphaera spp.)(흰가루병), 포모프시스 스페시즈(Phomopsis spp.), 알테르나리아 스페시즈(Alternaria spp.), 슈도모나스 스페시즈(Pseudomonas spp.), 피토프토라 스페시즈(Phytophthora spp.), 파코프소라 스페시즈(Phakopsora spp.), 아스퍼질러스 스페시즈(Aspergillus spp.), 유로마이세스 스페시즈(Uromyces spp.), 예를 들어 유로마이세스 아펜디큘라투스(Uromyces appendiculatus), 클라도스포리움 스페시즈(Cladosporium spp.), 리조푸스 스페시즈(Rhizopus spp.), 페니실리움 스페시즈(Penicillium spp.), 리조크토니아 스페시즈, 마크로포미나 파세올리나(Macrophomina phaseolina), 마이코스파에렐라 스페시즈(Mycosphaerella spp.), 마그나포르테 스페시즈(Magnaporthe spp.), 예를 들어 마그나포르테 오리자에(Magnaporthe oryzae) 또는 마그나포르테 그리세아(Magnaporthe grisea), 모닐리니아 스페시즈(Monilinia spp.), 콜레토트리쿰 스페시즈(Colletotrichum spp.), 디아포르테 스페시즈(Diaporthe spp.), 코리네스포라 스페시즈(Corynespora spp.), 짐노스포란지움 스페시즈(Gymnosporangium spp.), 스키조티리움 스페시즈(Schizothyrium spp.), 글로에오데스 스페시즈(Gloeodes spp.), 보트리오스파에리아 스페시즈(Botryosphaeria spp.), 네오파브라에아 스페시즈(Neofabraea spp.), 윌소노마이세스 스페시즈(Wilsonomyces spp.), 스파에로테카 스페시즈(Sphaerotheca spp.), 에리시페 스페시즈(Erysiphe spp.), 스타고노스포라 스페시즈(Stagonospora spp.), 피티움 스페시즈(Pythium spp.), 벤투리아 스페시즈(Venturia spp.), 우스틸라고 스페시즈(Ustilago spp.), 클라비셉스 스페시즈(Claviceps spp.), 틸레티아 스페시즈(Tilletia spp.), 포마 스페시즈(Phoma spp.), 코클리오볼루스 사티부스(Cocliobolus sativus), 가에우마노마이세스 가미니스(Gaeumanomyces gaminis), 린코스포리움 스페시즈(Rhynchosporium spp.), 비오폴라리스 스페시즈(Biopolaris spp.) 및 헬민토스포리움 스페시즈(Helminthosporium spp.) 또는 이들의 조합에 의해 특성화될 수 있다.

주목할만한 진균 병원체는 아스퍼질러스 플라부스(Aspergillus flavus), 보트리티스 스페시즈(Botrytis spp.), 예를 들어 보트리티스 시네레아(Botrytis cinerea), 푸사리움 스페시즈(Fusarium spp.), 예를 들어 푸사리움 콜모룸(Fusarium colmorum), 푸사리움 옥시스포룸(Fusarium oxysporum) 또는 푸사리움 비르굴리포르메(Fusarium virguliforme), 피토프토라 스페시즈(Phytophthora spp.), 예를 들어 피토프토라 캅시치(Phytophthora capsici), 리조크토니아 스페시즈, 예를 들어 리조크토니아 솔라니(Rhizoctonia solani), 마그나포르테 스페시즈, 예를 들어 마그나포르테 그리세아(Magnaporthe grisea) 및 마그나포르테 오리자에(Magnaporthe oryzae) 및 피티움 스페시즈(Pythium spp.), 예를 들어 피티움 아파니데르마툼(Pythium aphanidermatum) 및 피티움 실바티움(Pythium sylvatium), 모닐리니아 스페시즈(Monilinia spp.), 예를 들어 모닐리니아 프럭티콜라(Monilinia fructicola), 콜레토트리쿰 스페시즈(Colletotrichum spp.), 예를 들어 콜레토트리쿰 글로에오스포리오이데스(Colletotrichum gloeosporioides)(유성 단계 글로메렐라 신굴라타(Glomerella cingulata)), 즉 탄저병, 스클레로티니아 스페시즈(Sclerotinia spp.), 예를 들어 스클레로티니아 스클레로티오룸(Sclerotinia sclerotiorum) 및 스클레로티니아 호메오카르파(Sclerotinia homeocarpa); 보다 주목할만하게는 리조크토니아 스페시즈를 포함한다. 주목할만한 세균성 병원체는 에르위니아 스페시즈, 예를 들어 에르위니아 아밀로보라(Erwinia amylovora)를 포함한다.

본 개시의 조성물 및 방법에서, 상기 RTI545 균주를 포함하는 조성물은 액체, 현탁 농축물, 오일 분산액, 분진, 건조 습윤성 분말, 확산성 과립, 또는 건조 습윤성 과립의 형태로 존재할 수 있다. 실시태양에서, 상기 바실러스 튜린지엔시스 RTI545는 약 1.0x10⁸ CFU/㎖ 내지 약 1.0x10¹² CFU/㎖의 농도로 상기 조성물 중에 존재할 수 있다. 실시태양에서, 상기 바실러스 튜린지엔시스 RTI545는 약 1.0x10⁸ CFU/g 내지 약 1.0x10¹² CFU/g의 양으로 존재할 수 있다. 상기 바실러스 튜린지엔시스 RTI545는 포자 또는 영양세포의 형태로 존재할 수 있다.

본 개시의 조성물 및 방법에서, 상기 RTI545 균주를 포함하는 조성물은 보조제, 예를 들어 담체, 결합제, 계면활성제, 분산제 또는 효모 추출물 중 하나 또는 이들의 조합을 포함할 수 있다. 상기 담체, 결합제, 계면활성제, 분산제 및/또는 효모 추출물은 식물 생장에 이득이 되고/되거나 식물 해충에 대한 보호를 부여하는데 사용하기 위해 상기 조성물의 성질을 개선시키기 위해 포함되며, 상기 성질은 상기 RTI545 균주의 개선된 취급 성질, 개선된 습윤성, 개선된 유동성, 개선된 종자 부착성, 상기 RTI545 균주의 개선된 안정성, 및 식물 종자, 뿌리 또는 토양에의 전달 또는 적용 후 상기 RTI545 균주의 개선된 활성 중 하나 이상을 포함한다. 상기 효모 추출물을 약 0.01% 내지 0.2% w/w 범위의, 식물 생장에 이득이 되는 비율로 전달할 수 있다.

상기 RTI545 균주를 포함하는 조성물은 식재 기질의 형태로 존재할 수 있다. 상기 식재 기질은 포팅 토양 혼합물의 형태로 존재할 수 있다.

본 개시의 조성물 및 방법에서, 상기 조성물은 감수성 식물에서 상기 식물의 생장에 이득이 되고/되거나 상기 식물 해충에 대한 보호를 부여하기에 적합한 양으로 존재하는 추가적인 농업 작용제, 예를 들어 살충제, 살진균제, 살선충제, 살균제, 생물자극제, 제초제, 식물 추출물, 미생물 추출물, 식물 생장 조절제, 비료 또는 작물 영양소 제품 중 하나 또는 이들의 조합을 추가로 포함할 수 있다. 하나의 실시태양에서, 상기 바실러스 튜린지엔시스 RTI545의 생물학적으로 순수한 배양물 및 상기 살충제, 살진균제, 살선충제, 살균제, 생물자극제, 제초제, 식물 추출물, 미생물 추출물, 식물 생장 조절제, 비료 또는 작물 영양소 제품 중 하나 또는 이들의 조합을 포함하는 조성물을 함께 제형화한다. 상기 추가적인 농업 작용제들 중 임의의 것은 생물제 또는 화학제일 수 있다. 다른 실시태양에서 상기 RTI545 균주를 포함하는 조성물을 상기 추가적인 농업 작용제(상기도 또한 제형화될 수 있다)와 별도로 제형화하며, 이어서 상기 추가적인 농업 작용제와, 예를 들어 탱크 혼합물 중에서 혼합할 수 있다.

상기 비료는 액체 비료일 수 있다. "액체 비료"란 용어는 다양한 비의 질소, 인 및 칼륨(예를 들어 비제한적으로 5 내지 15%, 예를 들어 10%의 질소, 20 내지 50%, 예를 들어 34%의 인 및 0 내지 15%, 예를 들어 0%의 칼륨), 및 임의로, 인이 많고 빠르고 활력있는 뿌리 생장을 촉진하는 스타터 비료로서 통상적으로 공지된 2차 영양소 및/또는 미량영양소를 함유하는 유체 또는 액체 형태의 비료를 지칭한다.

본 명세서에 사용되는 바와 같이, "생물자극제"란 용어는 그의 영양소 함량과 관계없이, 작물 활력, 수율 및/또는 영양소 함량, 외관 및 유통기한과 같은 작물 품질을 개선시키기 위해 영양소 흡수, 영양 효율, 및/또는 무생물 스트레스 관용을 증대시킬 목적으로 식물에 적용되는 물질 또는 미생물을 지칭한다. 생물자극제는 비료와 다른 기전을 통해 작동하며 해충 또는 질병에 대한 직접적인 작용을 갖지 않는다.

하나의 실시태양에서, 상기 바실러스 튜린지엔시스 RTI545의 생물학적으로 순수한 배양물을 포함하는 조성물은 화학적 살충제 바이펜트린을 추가로 포함한다.

상기 바실러스 튜린지엔시스 RTI545 균주와 다른 생물방제 균주, 예를 들어 다른 바실러스 튜린지엔시스 균주, 예를 들어 바실러스 튜린지엔시스 서브스페시즈 아이자와이(aizawai) 또는 바실러스 튜린지엔시스 서브스페시즈 쿠르스타키, 바실러스 서브틸리스 균주, 예를 들어 CH201 또는 QST713 또는 MBI600 또는 RTI477, 바실러스 리케니포르미스 균주, 예를 들어 CH200 또는 RTI184, 바실러스 벨레젠시스(Bacillus velezensis) 균주, 예를 들어 RTI301, 바실러스 서브틸리스 변종 아밀로리퀘파시엔스(Bacillus subtilis var. amyloliquefaciens) FZB24, 또는 바실러스 아밀로리퀘파시엔스 D747, 또는 이들의 조합과의 혼합물이 주목된다.

RTI545를 포함한 미생물 균주의 혼합물을 사용하여 특정한 표적 해충에 대한 활성을 증대시킬 수 있지만, 이를 또한 효용의 범위를 증대시키는데 사용할 수 있다. 일례로서, 토양 곤충에 대한 강한 활성을 갖는 균주를 선충, 진균에 대한 강한 활성 또는 강한 식물 생장 이득을 갖는 다른 균주와 병용할 수 있다. 더욱 또한, 상기와 같은 균주들의 혼합물을 또한 가중된 이득을 위해서 합성(화학적) 살충제와 병용할 수 있다.

하나의 실시태양에서, 상기 바실러스 튜린지엔시스 RTI545의 생물학적으로 순수한 배양물을 포함하는 조성물은 ATCC 번호 PTA-121165로서 기탁된 바실러스 아밀로리퀘파시엔스 RTI301(US2016/0186273을 참조하시오)로서 앞서 동정된 균주를 추가로 포함한다. 상기 균주는 최근에 바실러스 벨레젠시스 균주로서 재분류되었다. 본 명세서의 나머지에서, ATCC 번호 PTA-121165로서 기탁된 균주를 "RTI301" 또는 "바실러스 벨레젠시스 RTI301"로서 지칭할 것이다. 하나의 실시태양에서, 상기 RTI545 및 RTI301 균주의 조합은, 상기 균주 중 하나 또는 둘 모두가 식물 진균 병원체를 포함한 식물 해충에 대해 최대의 보호를 제공하는 온도 범위를 확장시키고 증가시킴으로써 상기 이득을 식물 생장 및 식물 해충에 대한 보호까지 확장시킨다.

다른 실시태양에서, 상기 바실러스 튜린지엔시스 RTI545의 생물학적으로 순수한 배양물을 포함하는 조성물은 DSM 17236으로서 기탁된 바실러스 리케니포르미스 CH200 또는 그의 모든 식별 특징을 갖는 그의 돌연변이체의 생물학적으로 순수한 배양물; DSM 17231로서 기탁된 바실러스 서브틸리스 CH201 또는 그의 모든 식별 특징을 갖는 그의 돌연변이체의 생물학적으로 순수한 배양물; ATCC 번호 PTA-121167로서 기탁된 바실러스 서브틸리스 RTI477 또는 그의 모든 식별 특징을 갖는 그의 돌연변이체의 생물학적으로 순수한 배양물; FERM BP-8234로서 기탁된 바실러스 아밀로리퀘파시엔스 D747 균주의 생물학적으로 순수한 배양물; ATCC 번호 PTA-121722로서 기탁된 바실러스 리케니포르미스 RTI184 또는 그의 모든 식별 특징을 갖는 그의 돌연변이체, 또는 RTI301을 또한 포함하는 조합을 포함한 이들의 임의의 조합을 추가로 포함한다.

하나의 실시태양에서, 상기 바실러스 튜린지엔시스 RTI545의 생물학적으로 순수한 배양물을 포함하는 조성물은 화학적 살충제, 바이펜트린을 추가로 포함하며, 상기 조성물을 액체 비료와 함께: 식물, 식물 부분, 상기 식물의 종자, 상기 식물의 뿌리, 상기 식물 또는 상기 식물의 종자 주변의 토양 또는 생육 배지, 또는 상기 식물의 식재 또는 상기 식물 종자의 파종 전의 토양 또는 생육 배지에 전달한다. 식물 생장에 이득이 되도록 액체 비료와 함께 상기 살충제, 바이펜트린을 사용하는 예가 예를 들어 WO 2016/108972 A1(내용 전체가 본 명세서에 참고로 인용된다)에 기재되어 있다.

또 다른 실시태양에서, 감수성 식물에서 식물 생장에 이득이 되거나 식물 해충에 대한 보호를 부여하거나 이 둘 모두를 위한 방법을 제공하며, 상기 방법은 식물, 식물 부분, 상기 식물의 종자, 상기 식물의 뿌리, 상기 식물 또는 상기 식물의 종자 주변의 토양 또는 생육 배지, 또는 상기 식물의 식재 또는 상기 식물 종자의 파종 전의 토양 또는 생육 배지에, 감수성 식물에서 상기 식물 생장에 이득이 되고/되거나 상기 식물 해충에 대한 보호를 부여하기에 적합한 양의, ATCC 번호 PTA-122161로서 기탁된 바실러스 튜린지엔시스 또는 그의 모든 식별 특징을 갖는 그의 돌연변이체의 생물학적으로 순수한 배양물을 포함하는 조성물; 및 상기 감수성 식물에서 상기 식물 생장에 이득이 되고/되거나 상기 식물 해충에 대한 보호를 부여하기에 적합한 양의 살충제, 살진균제, 살선충제, 살균제, 제초제, 식물 추출물, 식물 생장 조절제, 또는 비료와 같은 추가적인 농업 작용제 중 하나 또는 이들의 조합의 조합을 전달함을 포함한다. 상기 추가적인 농업 작용제들 중 임의의 것은 생물제 또는 화학제일 수 있다. 상기 실시태양에서 상기 바실러스 튜린지엔시스 RTI545의 생물학적으로 순수한 배양물 또는 본 명세서에 기재된 바와 같은 추가적인 농업 작용제(들) 중 하나 또는 이들의 조합을 포함하는 조성물을 단일 제형보다는 별도로 상기 감수성 식물에 전달한다.

하나의 실시태양에서, 바실러스 튜린지엔시스 RTI545의 생물학적으로 순수한 배양물을 포함하는 조성물을 액체 비료와 함께 식물, 식물 부분, 상기 식물의 종자, 상기 식물의 뿌리, 상기 식물 또는 상기 식물의 종자 주변의 토양 또는 생육 배지, 또는 상기 식물의 식재 또는 상기 식물 종자의 파종 전의 토양 또는 생육 배지에 전달한다.

하나의 실시태양에서, 바실러스 튜린지엔시스 RTI545의 생물학적으로 순수한 배양물을 포함하는 조성물을 화학적 살충제, 바이펜트린, 및 액체 비료와 함께 식물, 식물 부분, 상기 식물의 종자, 상기 식물의 뿌리, 상기 식물 또는 상기 식물의 종자 주변의 토양 또는 생육 배지, 또는 상기 식물의 식재 또는 상기 식물 종자의 파종 전의 토양 또는 생육 배지에 전달한다.

하나의 실시태양에서, 감수성 식물에서 상기 식물 생장에 이득이 되고/되거나 상기 식물 해충에 대한 보호를 부여하기에 적합한 양으로 존재하는, 추가적인 생물학적 농업 작용제, 예를 들어 ATCC 번호 PTA-121165로서 기탁된 바실러스 벨레젠시스 RTI301 또는 그의 모든 식별 특징을 갖는 그의 돌연변이체의 생물학적으로 순수한 배양물의 포자를 포함하는 조성물로 코팅된 식물 종자를 제공한다. 상기 조성물은 약 1.0x10² CFU/종자 내지 약 1.0x10⁹ CFU/종자량의 바실러스 벨레젠시스 포자를 포함할 수 있다.

본 발명의 코팅된 종자 조성물은 광범위한 식물 종자, 예를 들어 비제한적으로 외떡잎 식물, 쌍떡잎 식물, 곡물, 예를 들어 옥수수, 스위트 콘, 팝콘, 종자 옥수수, 옥수수 사일리지, 가축 사료용 옥수수, 쌀, 밀, 보리, 수수, 아스파라거스, 산딸기류 열매들, 예를 들어 블루 베리, 블랙 베리, 라즈 베리, 로건 베리, 허클 베리, 크랜 베리, 구스 베리, 엘더 베리, 커런트, 케인 베리, 부쉬 베리, 브라시카 채소들, 예를 들어 브로콜리, 양배추, 컬리플라워, 방울 양배추, 콜라드, 케일, 겨자잎, 콜라비, 호로과 채소들, 예를 들어 오이, 캔털루프, 멜론, 머스크 멜론, 애호박, 수박, 호박, 가지, 뿌리 채소들, 예를 들어 양파, 마늘, 샬롯, 감귤류 과일들, 예를 들어 오렌지, 자몽, 레몬, 귤, 탄젤로, 퍼멜로, 과채료들, 예를 들어 고추, 토마토, 꽈리, 토마틸로, 오크라, 포도, 허브, 향신료, 잎줄기 채소들, 예를 들어 양상추, 셀러리, 시금치, 파슬리, 적색 치커리, 콩과 식물 또는 채소류들, 예를 들어 콩류, 예를 들어 껍질 콩, 완두, 셸빈, 대두, 말린콩, 가르반조 콩, 리마 콩, 완두류, 병아리 콩, 쪼개서 말린 완두, 렌틸 콩, 유지작물들, 예를 들어 카놀라, 캐스터, 코코넛, 목화, 아마, 기름야자나무, 올리브, 땅콩, 유채씨, 잇꽃, 참깨, 해바라기, 대두, 배열매들, 예를 들어 사과, 크랩 애플, 배, 마르멜로, 메이호, 뿌리, 덩이줄기 및 알줄기 채소, 예를 들어 당근, 감자, 고구마, 카사바, 비트, 생강, 양고추냉이, 래디쉬, 인삼, 순무, 핵과, 예를 들어 살구, 체리, 넥타린, 복숭아, 자두, 프룬, 딸기, 견과류, 예를 들어 아몬드, 피스타치오, 피칸, 호두, 개암열매, 밤, 캐슈, 비치넛, 버터넛, 마카다미아, 키위, 바나나, (청)아가베, 그라스, 터프 그라스, 장식용 식물, 포인세티아, 경삽, 예를 들어 밤나무, 오크, 단풍나무, 사탕수수, 및 사탕무의 종자에 이롭다. 하나 이상의 실시태양에서, 상기 식물 종자는 옥수수, 대두, 감자, 목화, 토마토, 후추, 조롱박, 사탕수수, 땅콩 또는 밀; 또는 대두, 목화, 밀, 옥수수 또는 감자를 포함할 수 있다.

상기 조성물로 코팅된 식물 종자의 하나의 실시태양에서, 상기 조성물은 상기 감수성 식물에서 상기 식물 생장에 이득이 되고/되거나 상기 식물 해충에 대한 보호를 부여하기에 적합한 양으로 존재하는, 본 명세서에 기재된 바와 같은 추가적인 농업 작용제(들) 중 하나 또는 이들의 조합을 추가로 포함한다.

하나의 실시태양에서, 감수성 식물에서 식물 생장에 이득이 되거나 식물 해충에 대한 보호를 부여하거나 이 둘 모두를 위한 방법을 제공하며, 상기 방법은 상기 식물의 종자를 식재함을 포함하고, 여기에서 상기 종자는 ATCC PTA-122161로서 기탁된 바실러스 튜린지엔시스 RTI545 또는 그의 모든 식별 특징을 갖는 그의 돌연변이체의 생물학적으로 순수한 배양물을 포함하는 조성물로 코팅되었으며, 여기에서 상기 종자로부터 상기 식물의 생장이 이득이 되고/되거나 상기 식물 해충에 대한 보호가 부여된다.

하나의 실시태양에서, 상기 방법은 액체 비료를 상기 식물의 코팅된 종자, 상기 식물의 코팅된 종자 주변의 토양 또는 생육 배지, 또는 상기 식물의 코팅된 종자의 식재 전의 토양 또는 생육 배지에 전달함을 추가로 포함한다.

상기 방법의 하나의 실시태양에서, 상기 식물 종자를 ATCC 번호 PTA-121165로서 기탁된 바실러스 벨레젠시스 RTI301과 같은 추가의 생물학적 농업 작용제를 추가로 포함하는 조성물로 코팅한다. 하나의 실시태양에서, 상기 RTI545 및 상기 RTI301 균주의 조합은, 상기 균주 중 하나 또는 둘 모두가 식물 진균성 병원체를 포함한 식물 해충에 대해 최대의 보호를 제공하는 온도 범위를 확장시키고 증가시킴으로써 상기 이득을 식물 생장 및 식물 해충에 대한 보호까지 확장시킨다.

하나의 실시태양에서, 상기 식물 종자를 화학적 살충제를 추가로 포함하는 조성물로 코팅하며, 상기 방법은 액체 비료를 상기 식물의 코팅된 종자, 상기 식물의 코팅된 종자 주변의 토양 또는 생육 배지, 또는 상기 식물의 코팅된 종자의 식재 전의 토양 또는 생육 배지에 전달함을 추가로 포함한다.

코팅된 종자를 포함하는 본 명세서의 실시태양에서, "종자"란 용어는 진정한 종자뿐만 아니라, 식물을 번식시키기 위한 다른 식물 부분, 예를 들어 묘목, 이식물, 꺾꽂이순(예를 들어 줄기, 뿌리, 잎 등), 포자, 순(예를 들어 사탕수수의), 알뿌리, 둥근줄기, 뿌리줄기, 덩이줄기, 또는 이들의 부분, 또는 완전한 식물이 수득될 수 있는 다른 식물 조직을 지칭한다.

본 개시의 조성물 및 방법에서, 상기 조성물은 살진균제를 포함할 수 있다. 상기 살진균제는 루피누스 알부스(Lupinus albus)로부터의 추출물을 포함할 수 있다. 하나 이상의 실시태양에서, 상기 살진균제는 BLAD 폴리펩타이드를 포함할 수 있다. 상기 BLAD 폴리펩타이드는, 진균 세포벽에 손상을 일으키고 내부 세포막을 붕괴시킴으로써 민감한 진균성 병원체상에 작용하는 스위트 루핀(루피누스 알부스)으로부터의 천연 종자 저장 단백질의 단편일 수 있다. 상기 조성물은 약 20%의 상기 BLAD 폴리펩타이드를 포함할 수 있다.

또한, 하나 이상의 실시태양에서, 본 발명의 조성물 및 방법의 적합한 살충제, 제초제, 살진균제, 및 선충은 하기를 포함할 수 있다:

살충제: A0) 다양한 살충제, 예를 들어 아그리가타, 알-포스파이드, 암블리셔스, 아펠리누스, 아피디우스, 아피돌레테스, 아르티미시닌, 오토그라파 칼리포르니카 NPV, 아조사이클로틴, 바실러스 서브틸리스, 바실러스 튜린지엔시스 서브스페시즈 아이자와이, 바실러스 튜린지엔시스 서브스페시즈 쿠르스타키, 바실러스 튜린지엔시스, 베아우베리아, 베아우베리아 바씨아나, 베타시플루트린, 생물학적 제제, 바이설탭, 프로플루트리네이트, 브로모포스-e, 브로모프로필레이트, Bt-콘-GM, Bt-소야-GM, 캡사이신, 카르탭, 셀라스트루스-추출물, 클로르안트라닐리프롤, 클로르벤주론, 클로르에톡시포스, 클로르플루아주론, 클로르피리포스-e, 크니디아딘, 크리오라이트, 시아노포스, 시안트라닐리프롤, 사이클라닐리프롤, 사이할로트린, 사이헥사틴, 사이페르메트린, 다크누사, DCIP, 다이클로로프로펜, 다이코폴, 다이글리푸스, 다이글리푸스+다크누사, 다이메타카브, 다이티오에테르, 도데실-아세테이트, 에마멕틴, 엔카르시아, EPN, 에레트모세루스, 에틸렌-다이브로마이드, 유칼리프톨, 지방산, 지방산/염, 페나자퀸, 페노부카브(BPMC), 펜피록시메이트, 플루브로사이트리네이트, 플루펜진, 플루피라디푸론, 포르메타네이트, 포르모티온, 퓨라티오카브, 감마-사이할로트린, 갈릭-주스, 과립증-바이러스, 하르모니아, 헬리오티스 아르미제라 NPV, 불활성 세균, 인돌-3-일부티르산, 요오도메탄, 철, 아이소카르보포스, 아이소펜포스, 아이소펜포스-m, 아이소프로카브, 아이소티오에이트, 카올린, 린단, 리우양마이신, 마트린, 메포스폴란, 메트알데하이드, 메타리지움-아니소플리아에, 메트아미도포스, 메톨카브(MTMC), 무기오일, 미렉스, m-아이소티오시아네이트, 모노설탭, 마이로테슘 베루카리아, 날리드, 네오크리소카리스 포르모사, 니코틴, 니코티노이드, 오일, 올레산, 오메토에이트, 오리우스, 옥시마트린, 파에실로마이세스, 파라핀-오일, 파라티온-e, 파스테유리아, 석유-오일, 페로몬, 아인산, 포토라브두스, 폭심, 피토세이울루스, 피리미포스-e, 식물-오일, 플루텔라 자일로스텔라 GV, 다면체병-바이러스, 폴리페놀-추출물, 칼륨-올리에이트, 프로페노포스, 프로슐러, 프로티오포스, 피라클로포스, 피레트린, 피리다펜티온, 피리미디펜, 피리프록시펜, 킬라야 추출물, 퀴노메티오네이트, 유채 오일, 로테논, 사포닌, 사포노지트, 나트륨-화합물, 나트륨-플루오실리케이트, 전분, 스테이네르네마, 스트렙토마이세스, 설플루라미드, 황, 테부피림포스, 테메포스, 테트라디폰, 테트라닐리프롤, 티오파녹스, 티오메톤, 트랜스제닉(예를 들어 Cry3Bb1), 트리아자메이트, 트리코더마, 트리코그라마, 트리플루뮤론, 베르티실리움, 베르트린, 이성질체성 살충제(예를 들어 카파-바이펜트린, 카파-테플루트린), 다이코로메조티아즈, 브로플라닐리드, 피라지플루미드; A1) 카바메이트의 부류, 예를 들어 알디카브, 알라니카브, 벤푸라카브, 카바릴, 카보퓨란, 카보설판, 메티오카브, 메토밀, 옥사밀, 피리미카브, 프로폭슈어 및 티오디카브; A2) 유기포스페이트의 부류, 예를 들어 아세페이트, 아진포스-에틸, 아진포스-메틸, 클로르펜빈포스, 클로르피리포스, 클로르피리포스-메틸, 데메톤-S-메틸, 다이아지논, 다이클로르보스/DDVP, 다이크로토포스, 다이메토에이트, 다이설포톤, 에티온, 페니트로티온, 펜티온, 아이속사티온, 말라티온, 메트아미다포스, 메티다티온, 메빈포스, 모노크로토포스, 옥시메토에이트, 옥시데메톤-메틸, 파라티온, 파라티온-메틸, 펜토에이트, 포레이트, 포살론, 포스메트, 포스파미돈, 피리미포스-메틸, 퀴날포스, 테르부포스, 테트라클로르빈포스, 트라이아조포스 및 트라이클로르폰; A3) 사이클로디엔 유기염소 화합물의 부류, 예를 들어 엔도설판; A4) 피프롤의 부류, 예를 들어 에티프롤, 피프로닐, 피라플루프롤 및 피리프롤; A5) 네오니코티노이드의 부류, 예를 들어 아세트아미프리드, 클로티아니딘, 다이노테푸란, 이미다클로프리드, 니텐피람, 티아클로프리드 및 티아메톡삼; A6) 스피노신의 부류, 예를 들어 스피노사드 및 스핀에토람; A7) 멕틴의 부류로부터의 클로라이드 채널 활성제, 예를 들어 아바멕틴, 에마멕틴 벤조에이트, 아이베르멕틴, 레피멕틴 및 밀베멕틴; A8) 유충 호르몬 모방물, 예를 들어 하이드로프렌, 키노프렌, 메토프렌, 페녹시카브 및 피리프록시펜; A9) 선택성 호모프테란 피딩 차단제, 예를 들어 피메트로진, 플로니카미드 및 피리플루퀴나존; A10) 진드기 성장 억제제, 예를 들어 클로펜테진, 헥시티아족스 및 에톡사졸; A11) 미토콘드리아 ATP 신타제의 억제제, 예를 들어 다이아펜티유론, 펜부타틴 옥사이드 및 프로파자이트; 산화 인산화의 짝풀림제, 예를 들어 클로르페나피르; A12) 니코티닉 아세틸콜린 수용체 채널 차단제, 예를 들어 벤설탭, 카르탭 하이드로클로라이드, 티오사이클람 및 티오설탭 나트륨; A13) 벤조일유레아 부류로부터의 키틴 생합성 유형 0의 억제제, 예를 들어 바이스트리플루론, 다이플루벤주론, 플루페녹슈론, 헥사플루뮤론, 루페뉴론, 노발류론 및 테플루벤주론; A14) 키틴 생합성 1형의 억제제, 예를 들어 부프로페진; A15) 탈피 교란제, 예를 들어 시로마진; A16) 엑디슨 수용체 작용물질, 예를 들어 메톡시페노지드, 테부페노지드, 할로페노지드 및 크로마페노지드; A17) 옥토파민 수용체 작용물질, 예를 들어 아미트라즈; A18) 미토콘드리아 복합체 전자 수송 억제제 피리다벤, 테부펜피라드, 톨펜피라드, 플루페네림, 시에노피라펜, 시플루메토펜, 하이드라메틸논, 아세퀴노실 또는 플루아크리피림; A19) 전압-의존성 나트륨 채널 차단제, 예를 들어 인독사카브 및 메타플루미존; A20) 지질 합성의 억제제, 예를 들어 스피로디클로펜, 스피로메시펜 및 스피로테트라매트; A21) 다이아미드로부터의 라이아노딘 수용체-조절제, 예를 들어 플루벤다이아미드, 프탈아미드 화합물 (R)-3-클로르-N1-{2-메틸-4-[1,2,2,2-테트라플루오르-1-(트라이플루오르메틸)에틸]페닐}-N2-(1-메틸-2-메틸설포닐에틸)프탈아미드 및 (S)-3-클로르-N1-{2-메틸-4-[1,2,2,2-테트라플루오르-1-(트라이플루오르메틸)에틸]페닐}-N2-(1-메틸-2-메틸설포닐에틸)프탈아미드, 클로르안트라닐리프롤, 사이클라닐리프롤 및 시안트라닐리프롤; A22) 미지의 또는 불특정 작용 방식의 화합물, 예를 들어 아자디라크틴, 아미도플루메트, 바이페나제이트, 플루엔설폰, 피페로닐 부톡사이드, 피리달릴, 설폭사플로르; 또는 A23) 피레트로이드의 부류로부터의 나트륨 채널 조절제, 예를 들어 아크리나트린, 알레트린, 바이펜트린, 사이플루트린, 람다-사이할로트린, 사이퍼메트린, 알파-사이퍼메트린, 베타-사이퍼메트린, 제타-사이퍼메트린, 델타메트린, 에스펜발레레이트, 에토펜프록스, 펜프로파트린, 펜발레레이트, 플루시트리네이트, 타우-플루발리네이트, 퍼메트린, 실라플루오펜, 테플루트린 및 트랄로메트린.

곤충 방제를 위해 상기 바실러스 튜린지엔시스 RTI545 균주와 다른 생물방제 균주, 예를 들어 바실러스 서브틸리스 균주, 예를 들어 CH201, 바실러스 리케니포르미스 균주, 예를 들어 CH200, 다른 바실러스 튜린지엔시스 균주, 예를 들어 바실러스 튜린지엔시스 서브스페시즈 아이자와이, 바실러스 튜린지엔시스 서브스페시즈 쿠르스타키, 또는 이들의 조합과의 혼합물이 주목된다.

본 개시의 조성물 및 방법에서, 상기 조성물은 화학적 살충제를 포함할 수 있다. 상기 화학적 살충제는 피레트로이드, 예를 들어 바이펜트린, 테플루트린, 제타-사이퍼메트린, 사이플루트린; 유기포스페이트, 예를 들어 클로르에톡시포스, 클로르피리포스, 테부피림포스, 피프롤, 예를 들어 피프로닐; 네오니코티노이드, 예를 들어 이미다클로프리드, 티아메톡삼, 클로티아니딘; 다이아미드, 예를 들어 클로르안트라닐리프롤, 시안트라닐리프롤, 사이클라닐리프롤; 또는 이들의 혼합물을 포함할 수 있다.

상기 바실러스 튜린지엔시스 RTI545 균주와, 클로르안트라닐리프롤, 클로르에톡시포스, 크로르피리포스-e, 시안트라닐리프롤, 사이클라닐리프롤, 사이퍼메트린, 다이클로로프로펜, 플루피라디푸론, 감마-사이할로트린, 프로페노포스, 테부피림포스, 테플루트린, 카파-바이펜트린, 카파-테플루트린, 카보퓨란, 카보설판, 옥사밀, 티오디카브, 클로르피리포스, 클로르피리포스-e, 클로르피리포스-메틸, 다이아지논, 포레이트, 테르부포스, 피프로닐, 아세트아미프리드, 클로티아니딘, 이미다클로프리드, 티아클로프리드, 티아메톡삼, 아바멕틴, 포니카미드, 플루벤다이아미드, 바이펜트린, 람다-사이할로트린, 사이퍼메트린, 제타-사이퍼메트린, 델타메트린 또는 이들의 임의의 혼합물을 포함하는 화학적 곤충 방제제와의 혼합물이 바람직하다.

상기 바실러스 튜린지엔시스 RTI545 균주와 클로티아니딘, 티아메톡삼, 이미다클로프리드, 테플루트린, 피프로닐, 클로르피리포스-e, 테부피림포스, 바이펜트린, 사이퍼메트린, 제타-사이퍼메트린, 감마-사이할로트린, 옥사밀, 클로르안트라닐리프롤, 사이안트라닐리프롤, 사이클라닐리프롤, 또는 이들의 혼합물과의 혼합물이 보다 바람직하다.

하나의 실시태양에서, 상기 살충제는 바이펜트린을 포함할 수 있으며 상기 조성물을 액체로서 제형화할 수 있다. 하나 이상의 실시태양에서, 상기 살충제는 바이펜트린 및 클로티아니딘을 포함할 수 있다. 하나 이상의 실시태양에서, 상기 살충제는 바이펜트린 및 클로티아니딘을 포함할 수 있고 상기 조성물을 액체로서 제형화할 수 있다. 하나 이상의 실시태양에서, 상기 살충제는 바이펜트린 또는 제타-사이퍼메트린을 포함할 수 있다. 하나 이상의 실시태양에서, 상기 살충제를 액체로서 제형화할 수 있으며 상기 살충제는 바이펜트린 또는 제타-사이퍼메트린을 포함할 수 있다.

하나의 실시태양에서, 상기 화학적 살충제는 바이펜트린을 포함한다. 하나의 실시태양에서, 상기 화학적 살충제는 바이펜트린을 포함하고 상기 조성물은 수화된 알루미늄-마그네슘 실리케이트, 및 슈크로스 에스터, 리그노설포네이트, 알킬폴리글리코사이드, 나프탈렌설폰산 폼알데하이드 농축물 및 포스페이트 에스터로 이루어지는 그룹 중에서 선택된 하나 이상의 분산제를 추가로 포함한다. 상기 바이펜트린 살충제는 0.1 g/㎖ 내지 0.2 g/㎖ 범위의 농도로 존재할 수 있다. 상기 바이펜트린 살충제는 0.17 g/㎖의 농도로 존재할 수 있다. 상기 바이펜트린 살충제의 적용 비율은 약 0.1 g의 바이펜트린/헥타아르(g ai/ha) 내지 약 1000 g ai/ha의 범위, 보다 바람직하게는 약 1 g ai/ha 내지 약 100 g ai/ha의 범위일 수 있다.

상기 바이펜트린은 바람직하게는 상기 조성물 중의 모든 성분들의 전체 중량을 기준으로 1.0 중량% 내지 35 중량%, 보다 특히 15 중량% 내지 25 중량%의 농도로 존재할 수 있다. 상기 바이펜트린 살충제 조성물을 비료와 액체로서의 혼합물에 적합한 방식으로 제형화할 수 있다.

살진균제: B0) 벤조빈다이플루피르, 아니티페로노스포릭스(예를 들어 아메톡트라딘, 아미설브롬, 벤티아발리카브, 시아조파미드, 사이목사닐, 다이메토몰프, 에타복삼, 파목사돈, 페나미돈, 플루메토버, 플루몰프, 플루오피콜리드, 이프로발리카브, 만디프로파미드, 발리페날레이트, 베날락실, 벤라락실-M, 퓨랄락실, 메탈락실 및 메탈락실-M), 아메톡트라딘, 아미설브롬, 구리염(예를 들어 구리 하이드록사이드, 구리 옥시클로라이드, 구리 설페이트, 구리 퍼설페이트), 보스칼리드, 티플루마지드, 플루티아닐, 퓨랄락실, 티아벤다졸, 베노다닐, 메프로닐, 아이소페타미드, 펜퓨람, 빅사펜, 플룩사피록사드, 펜플루펜, 데닥산, 쿠목시스트로빈, 에녹사스트로빈, 플루페녹시스트로빈, 피라옥시스트로빈, 피라메토스트로빈, 트라이클로피리카브, 페나민스트로빈, 메토미노스트로빈, 파이리벤카브, 멥틸디노캅, 펜틴 아세테이트, 펜틴 클로라이드, 펜틴 하이드록사이드, 옥시테트라사이클린, 클로졸리네이트, 클로로네브, 테크나젠, 에트리디아졸, 요오도카브, 프로티오카브, 다양한 바실러스 균주(예를 들어 CH200, CH201, RTI184, RT1301, QST713, FZB24, MBI600, D747로서 동정된 균주들), 멜라류카 알테니폴리아(Melaleuca alternifolia)로부터의 추출물, 루피누스 알부스 도체(Lupinus albus doce)로부터의 추출물, BLAD 폴리펩타이드, 피르아이속사졸, 옥스포코나졸, 에타코나졸, 펜피라자민, 펜피콕사미드, 메펜트라이플루코나졸, 나프티핀, 테르비나핀, 발리다마이신, 피리몰프, 발리페날레이트, 프탈리드, 프로베나졸, 아이소티아닐, 라미나린, 레이노우트리아 사칼리넨시스(Reynoutria sachalinensis)로부터의 추출물, 아인산 및 염, 테클로프탈람, 트라이아족사이드, 피리오페논, 유기오일, 칼륨 바이카보네이트, 클로로탈로닐, 플루오로이미드; B1) 아졸, 예를 들어 바이테르타놀, 브로뮤코나졸, 사이프로코나졸, 다이페노코나졸, 다이니코나졸, 에닐코나졸, 에폭시코나졸, 플루퀸코나졸, 펜부코나졸, 플루실라졸, 플루트리아폴, 헥사코나졸, 이미벤코나졸, 이프코나졸, 메트코나졸, 마이클로부타닐, 펜코나졸, 프로피코나졸, 프로티오코나졸, 시메코나졸, 트라이아디메폰, 트라이아디메놀, 테부코나졸, 테트라코나졸, 트라이티코나졸, 프로클로라즈, 페프라조에이트, 이마잘릴, 트라이플루미졸, 시아조파미드, 베노밀, 카르벤다짐, 티아벤다졸, 퓨베리다졸, 에타복삼, 에트리다이아졸 및 하이멕사졸, 아자코나졸, 다이니코나졸-M, 옥스포코나졸, 파클로부트라졸, 유니코나졸, 1-(4-클로로-페닐)-2-([1,2,4]트라이아졸-1-일)-사이클로헵타놀 및 이마잘릴설페이트; B2) 스트로빌루린, 예를 들어 아족시스트로빈, 다이목시스트로빈, 에네스트로부린, 플루옥사스트로빈, 크레속심-메틸, 메토미노스트로빈, 오리사스트로빈, 피콕시스트로빈, 피라클로스트로빈, 트라이플록시스트로빈, 에네스트로뷰린, 메틸 (2-클로로-5-[1-(3-메틸벤질옥시이미노)에틸]벤질)카바메이트, 메틸 (2-클로로-5-[1-(6-메틸피리딘-2-일메톡시이미노)에틸]벤질)카바메이트 및 메틸 2-(오쏘-(2,5-다이메틸페닐옥시메틸렌)-페닐)-3-메톡시아크릴레이트, 2-(2-(6-(3-클로로-2-메틸-페녹시)-5-플루오로-피리미딘-4-일옥시)-페닐)-2-메톡시이미노-N-메틸-아세트아미드 및 3-메톡시-2-(2-(N-(4-메톡시-페닐)-사이클로프로판카복스이미도일설파닐메틸)-페닐)-아크릴산 메틸 에스터; B3) 카복사미드, 예를 들어 카복신, 베날락실, 벤랄락실-M, 펜헥사미드, 플루톨라닐, 퓨라메트피르, 메프로닐, 메탈락실, 메페녹삼, 오퓨레이스, 옥사딕실, 옥시카복신, 펜티오피라드, 아이소피라잠, 티플루자미드, 티아디닐, 3,4-다이클로로-N-(2-시아노페닐)아이소티아졸-5-카복스아미드, 다이메토몰프, 플루몰프, 플루메토버, 플루오피콜리드(피코벤자미드), 족사미드, 카프로파미드, 다이클로사이메트, 만다이프로파미드, N-(2-(4-[3-(4-클로로페닐)프로프-2-이닐옥시]-3-메톡시페닐)에틸)-2-메탄설포닐-아미노-3-메틸부티르아미드, N-(2-(4-[3-(4-클로로-페닐)프로프-2-이닐옥시]-3-메톡시-페닐)에틸)-2-에탄설포닐아미노-3-메틸부티르아미드, 메틸 3-(4-클로로페닐)-3-(2-아이소프로폭시카보닐-아미노-3-메틸-부틸아미노)프로피오네이트, N-(4'-브로모바이페닐-2-일)-4-다이플루오로메틸-2-메틸티아졸-5-카복스아미드, N-(4'-트라이플루오로메틸-바이페닐-2-일)-4-다이플루오로메틸-2-메틸티아졸-5-카복스아미드, N-(4'-클로로-3'-플루오로바이페닐-2-일)-4-다이플루오로메틸-2-메틸-티아졸-5-카복스아미드, N-(3',4'-다이클로로-4-플루오로바이페닐-2-일)-3-다이플루오로-메틸-1-메틸-피라졸-4-카복스아미드, N-(3',4'-다이클로로-5-플루오로바이페닐-2-일)-3-다이플루오로메틸-1-메틸피라졸-4-카복스아미드, N-(2-시아노-페닐)-3,4-다이클로로아이소티아졸-5-카복스아미드, 2-아미노-4-메틸-티아졸-5-카복스아닐리드, 2-클로로-N-(1,1,3-트라이메틸-인단-4-일)-니코틴아미드, N-(2-(1,3-다이메틸부틸)-페닐)-1,3-다이메틸-5-플루오로-1H-피라졸-4-카복스아미드, N-(4'-클로로-3',5-다이플루오로-바이페닐-2-일)-3-다이플루오로메틸-1-메틸-IH-피라졸-4-카복스아미드, N-(4'-클로로-3',5-다이플루오로-바이페닐-2-일)-3-트라이플루오로메틸-1-메틸-1H-피라졸-4-카복스아미드, N-(3',4'-다이클로로-5-플루오로-바이페닐-2-일)-3-트라이플루오로메틸-1-메틸-1H-피라졸-4-카복스아미드, N-(3',5-다이플루오로-4'-메틸-바이페닐-2-일)-3-다이플루오로메틸-1-메틸-1H-피라졸-4-카복스아미드, N-(3',5-다이플루오로-4'-메틸-바이페닐-2-일)-3-트라이플루오로메틸-1-메틸-1H-피라졸-4-카복스아미드, N-(시스-2-바이사이클로프로필-2-일-페닐)-3-다이플루오로메틸-1-메틸-1H-피라졸-4-카복스아미드, N-(트랜스-2-바이사이클로프로필-2-일-페닐)-3-다이플루오로-메틸-1-메틸-1H-피라졸-4-카복스아미드, 플루오피람, N-(3-에틸-3,5-5- 트라이메틸-사이클로헥실)-3-폼일아미노-2-하이드록시-벤즈아미드, 옥시테트라사이클린, 실티오팜, N-(6-메톡시-피리딘-3-일) 사이클로프로판카복스아미드, 2-요오도-N-페닐-벤즈아미드, N-(2-바이사이클로-프로필-2-일-페닐)-3-다이플루오르메틸-1-메틸피라졸-4-일카복스아미드, N-(3',4',5'-트라이플루오로바이페닐-2-일)-1,3-다이메틸피라졸-4-일카복스아미드, N-(3',4',5'-트라이플루오로바이페닐-2-일)-1,3-다이메틸-5-플루오로피라졸-4-일-카복스아미드, N-(3',4',5'-트라이플루오로바이페닐-2-일)-5-클로로-1,3-다이메틸-피라졸-4-일카복스아미드, N-(3',4',5'-트라이플루오로바이페닐-2-일)-3- 플루오로메틸-1-메틸피라졸-4-일카복스아미드, N-(3',4',5'- 트라이플루오로바이페닐-2-일)-3-(클로로플루오로메틸)-1-메틸피라졸-4-일카복스아미드,N-(3',4',5'-트라이플루오로바이페닐-2-일)-3-다이플루오로메틸-1-메틸피라졸-4-일카복스아미드, N-(3',4',5'-트라이플루오로바이페닐-2-일)-3-다이플루오로메틸-5-플루오로-1-메틸피라졸-4-일카복스아미드, N-(3',4',5'-트라이플루오로바이페닐-2-일)-5-클로로-3-다이플루오로메틸-1-메틸피라졸-4-일카복스아미드, N-(3', 4',5'-트라이플루오로바이페닐-2-일)-3-(클로로다이플루오로메틸)-1-메틸피라졸-4-일카복스아미드, N-(3',4',5'-트라이플루오로바이페닐-2-일)-1-메틸-3-트라이플루오로메틸피라졸-4-일카복스아미드, N-(3',4',5'-트라이플루오로바이페닐-2-일)-5-플루오로-1-메틸-3-트라이플루오로메틸피라졸-4-일카복스아미드, N-(3',4',5'-트라이플루오로바이페닐-2-일)-5-클로로-1-메틸-3- 트라이플루오로메틸피라졸-4-일카복스아미드, N-(2',4',5'-트라이플루오로바이페닐-2-일)-1,3-다이메틸피라졸-4-일카복스아미드, N-(2',4',5'-트라이플루오로바이페닐-2-일)-1,3-다이메틸-5-플루오로피라졸-4-일카복스아미드, N-(2',4',5'-트라이플루오로바이페닐-2-일)-5-클로로-1,3-다이메틸피라졸-4-일카복스아미드, N-(2',4',5'-트라이플루오로바이페닐-2-일)-3-플루오로메틸-1-메틸피라졸-4-일카복스아미드, N-(2',4',5'-트라이플루오로바이페닐-2-일)-3-(클로로플루오로메틸)-1-메틸피라졸-4-일카복스아미드,N-(2',4',5'-트라이플루오로바이페닐-2-일)-3-다이플루오로메틸-1-메틸피라졸-4-일카복스아미드, N-(2',4',5'-트라이플루오로바이페닐-2-일)-3-다이플루오로메틸-5-플루오로-1-메틸피라졸-4-일카복스아미드, N-(2',4',5'-트라이플루오로바이페닐-2-일)-5-클로로-3-다이플루오로메틸-1-메틸피라졸-4-일카복스아미드, N-(2',4',5'-트라이플루오로바이페닐-2-일)-3-(클로로다이플루오로메틸)-1-메틸피라졸-4-일카복스아미드, N-(2',4',5'-트라이플루오로바이페닐-2-일)-1-메틸-3-트라이플루오로메틸피라졸-4-일카복스아미드, N-(2',4',5'-트라이플루오로바이페닐-2-일)-5-플루오로-1-메틸-3-트라이플루오로메틸피라졸-4-일카복스아미드, N-(2',4',5'-트라이플루오로바이페닐-2-일)-5-클로로-1-메틸-3-트라이플루오로메틸피라졸-4-일카복스아미드, N-(3',4'-다이클로로-3-플루오로바이페닐-2-일)-1-메틸-3-트라이플루오로메틸-1H-피라졸-4-카복스아미드, N-(3',4'-다이클로로-3- 플루오로바이페닐-2-일)-1-메틸-3-다이플루오로메틸-1H-피라졸-4-카복스아미드, N-(3',4'-다이플루오로-3-플루오로바이페닐-2-일)-1-메틸-3-트라이플루오로메틸-1H-피라졸-4-카복스아미드, N-(3',4'-다이플루오로-3-플루오로바이페닐-2-일)-1-메틸-5-다이플루오로메틸-1H-피라졸-4-카복스아미드, N-(3'-클로로-4'-플루오로-3-플루오로바이페닐-2-일)-1-메틸-3-다이플루오로메틸-1H-피라졸-4-카복스아미드, N-(3',4'-다이클로로-4-플루오로바이페닐-2-일)-1-메틸-3-트라이플루오로메틸-1H-피라졸-4-카복스아미드, N-(3',4'-다이플루오로-4-플루오로바이페닐-2-일)-1-메틸-S-트라이플루오로메틸-1H-피라졸-4-카복스아미드, N-(3',4'-다이클로로-4-플루오로바이페닐-2-일)-1-메틸-3-다이플루오로메틸-1H-피라졸-4-카복스아미드, N-(3',4'-다이플루오로-4-플루오로바이페닐-2-일)-1-메틸-3-다이플루오로메틸-1H-피라졸-4-카복스아미드, N-(3'-클로로-4'-플루오로-4-플루오로바이페닐-2-일)-1-메틸-5-다이플루오로메틸-1H-피라졸-4-카복스아미드, N-(3',4'-다이클로로-5-플루오로바이페닐-2-일)-1-메틸-3-트라이플루오로메틸-1H-피라졸-4-카복스아미드, N-(3',4'-다이플루오로-5-플루오로바이페닐-2-일)-1-메틸-3-트라이플루오로메틸-1H-피라졸-4-카복스아미드, N-(3',4'-다이클로로-5-플루오로바이페닐-2-일)-1-메틸-S-다이플루오로메틸-1H-피라졸-카복스아미드, N-(3',4'-다이플루오로-5- 플루오로바이페닐-2-일)-1-메틸-3-다이플루오로메틸-1H-피라졸-4-카복스아미드, N-(3',4'-다이클로로-5-플루오로바이페닐-2-일)-1,3-다이메틸-1H-피라졸-4-카복스아미드, N-(3'-클로로-4'-플루오로-5-플루오로바이페닐-2-일)-1-메틸-3-다이플루오로메틸-1H-피라졸-4-카복스아미드, N-(4'-플루오로-4-플루오로바이페닐-2-일)-1-메틸-3-트라이플루오로메틸-1H-피라졸-4-카복스아미드, N-(4'-플루오로-5-플루오로바이페닐-2-일)-1-메틸-3-트라이플루오로메틸-1H-피라졸-4-카복스아미드,N-(4'-클로로-5-플루오로바이페닐-2-일)-1-메틸-3-트라이플루오로메틸-1H-피라졸-4-카복스아미드, N-(4'-메틸-5-플루오로바이페닐-2-일)-1-메틸-3-트라이플루오로메틸-1H-피라졸-4-카복스아미드, N-(4'-플루오로-5-플루오로바이페닐-2-일)-1,3-다이메틸-1H-피라졸-4-카복스아미드, N-(4'-클로로-5-플루오로바이페닐-2-일)-1,3-다이메틸-1H-피라졸-4-카복스아미드, N-(4'-메틸-5-플루오로바이페닐-2-일)-1,3-다이메틸-1H-피라졸-4-카복스아미드, N-(4'-플루오로-6-플루오로바이페닐-2-일)-1-메틸-3-트라이플루오로메틸-1H-피라졸-4-카복스아미드, N-(4'-클로로-6-플루오로바이페닐-2-일)-1-메틸-3-트라이플루오로메틸-1H-피라졸-4-카복스아미드, N-[2-(1,1,2,3,3,3-헥사플루오로프로폭시)-페닐]-3-다이플루오로메틸-1-메틸-1H-피라졸-4-카복스아미드, N-[4'-(트라이플루오로메틸티오)-바이페닐-2-일]-3-다이플루오로메틸-1-메틸-1H-피라졸-4-카복스아미드 및 N-[4'-(트라이플루오로메틸티오)-바이페닐-2-일]-1-메틸-3-트라이플루오로메틸-1-메틸-1H-피라졸-4-카복스아미드, 3-다이플루오로메틸-N-(7-플루오로-1,1,3-트라이메틸-4-인다닐)-1-메틸-4-피라졸카복스아미드(플루인다피르), 4-다이플루오로메틸-N-(7-플루오로-1,1,3-트라이메틸-4-인다닐)-2-메틸-5-티아졸카복스아미드, 3-다이플루오로메틸-1-메틸-N-(1,1,3,7-테트라메틸-4-인다닐)-피라졸카복스아미드, 4-다이플루오로메틸-2-메틸-N-(1,1,3,7-테트라메틸-4-인다닐)-5-티아졸카복스아미드, 3-다이플루오로메틸-1-메틸-N-(7-메톡시-1,1,3-트라이메틸-4-인다닐)-4-피라졸카복스아미드, 4-다이플루오로메틸-2-메틸-N-(7-메톡시-1,1,3-트라이메틸-4-인다닐)-5-티아졸카복스아미드, 3-다이플루오로메틸-1-메틸-N-(7-메틸티오-1,1,3-트라이메틸-4-인다닐)-4-피라졸카복스아미드, 4-다이플루오로메틸-2-메틸-N-(7-메틸티오-1,1,3-트라이메틸-4-인다닐)-5-티아졸카복스아미드, 3-다이플루오로메틸-1-메틸-N-(7-트라이플루오로메톡시-1,1,3-트라이메틸-4-인다닐)-4-피라졸카복스아미드, 4-다이플루오로메틸-2-메틸-N-(7-트라이플루오로메톡시-1,1,3-트라이메틸-4-인다닐)-5-티아졸카복스아미드, 3-다이플루오로메틸-N-(7-플루오로-1,1,3-트라이메틸-4-인다닐)-4-퓨라잔카복스아미드, 4-다이플루오로메틸-N-(7-플루오로-1,1,3-트라이메틸-4-인다닐)-2-메틸티오-5-피리미딘카복스아미드, 3-다이플루오로메틸-N-(7-클로로-1,1,3-트라이메틸-4-인다닐)-1-메틸-4-피라졸카복스아미드, 3-다이플루오로메틸-N-(7-클로로-1,1-다이에틸-3-메틸-4-인다닐)-1-메틸-4-피라졸카복스아미드, 또는 4-다이플루오로메틸-N-(7-플루오로-1,1,3-트라이메틸-4-인다닐)-5-티아다이아졸카복스아미드; B4) 헤테로사이클릭 화합물, 예를 들어 플루아지남, 피리페녹스, 부피리메이트, 사이프로디닐, 페나리몰, 페림존, 메파니피림, 뉴아리몰, 피리메타닐, 트라이포린, 펜피클로닐, 플루다이옥소닐, 알디모프, 도데모프, 펜프로피모프, 트라이데모프, 펜프로피딘, 아이프로디온, 프로사이미돈, 빈클로졸린, 파목사돈, 페나미돈, 옥틸리논, 프로베나졸, 5-클로로-7-(4-메틸-피페리딘-1-일)-6-(2,4,6-트라이플루오로페닐)-[1,2,4]트라이아졸로[1,5-a]피리미딘, 아닐라진, 다이클로메진, 파이로퀼론, 프로퀴나지드, 트라이사이클라졸, 2-부톡시-6-요오도-3-프로필크로멘-4-온, 아시벤졸라-S-메틸, 카프타폴, 캅탄, 다조메트, 폴페트, 페녹사닐, 퀴녹시펜, N,N-다이메틸-3-(3-브로모-6-플루오로-2-메틸인돌-1-설포닐)-[1,2,4]트라이아졸-1-설폰아미드, 5-에틸-6-옥틸-[1,2,4]트라이아졸로[1,5-a]피리미딘-2,7-다이아민, 2,3,5,6-테트라클로로-4-메탄설포닐-피리딘, 3,4,5-트라이클로로-피리딘-2,6-다이-카보니트릴, N-(1-(5-브로모-3-클로로-피리딘-2-일)-에틸)-2,4-다이클로로-니코틴아미드, N-((5-브로모-3-클로로피리딘-2-일)-메틸)-2,4-다이클로로-니코틴아미드, 다이플루메토림, 니트라피린, 도데모프아세테이트, 플루오로이미드, 블라스티시딘-S, 키노메티오나트, 데바카브, 다이펜조콰트, 다이펜조콰트-메틸설파트, 옥솔린산 및 피페랄린; B5) 카바메이트, 예를 들어 만코제브, 마네브, 메탐, 메타설포카브, 메티람, 페르밤, 프로피네브, 티람, 지네브, 지람, 다이에토펜카브, 아이프로발리카브, 벤티아발리카브, 프로파모카브, 프로파모카브 하이드로클로라이드, 4-플루오로페닐 N-(1-(1-(4-시아노페닐)에탄설포닐)부트-2-일)카바메이트, 메틸 3-(4-클로로-페닐)-3-(2-아이소프로폭시카보닐아미노-3-메틸-부티릴아미노)프로파노에이트; 또는 B6) 다른 살진균제, 예를 들어 구아니딘, 도다인, 도다인 유리염기, 이미녹타딘, 구아자틴, 항생제: 카수가마이신, 옥시테트라사이클린 및 그의 염, 스트렙토마이신, 폴리옥신, 발리다마이신 A, 나이트로페닐 유도체: 바이나파크릴, 다이노캅, 다이노부톤, 황-함유 헤테로사이클릴 화합물: 다이티아논, 아이소프로티올란, 유기금속 화합물: 펜틴염, 유기인 화합물: 에디펜포스, 아이프로벤포스, 포세틸, 포세틸-알루미늄, 아인산 및 그의 염, 피라조포스, 톨클로포스-메틸, 유기염소 화합물: 다이클로플루아니드, 플루설파미드, 헥사클로로-벤젠, 프탈리드, 펜사이큐론, 퀸토젠, 티오파네이트, 티오파네이트-메틸, 폴릴플루아니드, 기타: 사이플루펜아미드, 사이목사닐, 다이메티리몰, 에티리몰, 퓨랄락실, 메트라페논 및 스피록사민, 구아자틴-아세테이트, 이미녹타딘-트라이아세테이트, 이미녹타딘-트리스(알베실레이트), 카수가마이신 하이드로클로라이드 하이드레이트, 다이클로로펜, 펜타클로로페놀 및 그의 염, N-(4-클로로-2-나이트로-페닐)-N-에틸-4-메틸-벤젠설폰아미드, 다이클로란, 나이트로탈-아이소프로필, 테크나젠, 바이페닐, 브로노폴, 다이페닐아민, 밀디오마이신, 옥신구리, 프로헥사디온 칼슘, N-(사이클로프로필메톡시이미노-(6-다이플루오로메톡시-2,3-다이플루오로-페닐)-메틸)-2-페닐 아세트아미드, N'-(4-(4-클로로-3-트라이플루오로메틸-페녹시)-2,5-다이메틸-페닐)-N-에틸-N-메틸 폼아미딘, N'-(4-(4-플루오로-3-트라이플루오로메틸-페녹시)-2,5-다이메틸-페닐)-N-에틸-N-메틸 폼아미딘, N'-(2-메틸-5-트라이플루오로메틸-4-(3-트라이메틸실라닐-프로폭시)-페닐)-N-에틸-N-메틸 폼아미딘, 및 N'-(5-다이플루오로메틸-2-메틸-4-(3-트라이메틸실라닐-프로폭시)-페닐)-N-에틸-N-메틸 폼아미딘.

진균 질병 방제를 위한 상기 바실러스 튜린지엔시스 RTI545 균주와 다른 생물방제 균주, 예를 들어 바실러스 서브틸리스 균주, 예를 들어 CH201 또는 QST713 또는 MBI600 또는 RTI477, 바실러스 리케니포르미스 균주, 예를 들어 CH200 또는 RTI184, 바실러스 벨레젠시스 균주, 예를 들어 RTI301, 바실러스 서브틸리스 변종 아밀로리퀘파시엔스 FZB24, 또는 바실러스 아밀로리퀘파시엔스 D747, 또는 이들의 조합과의 혼합물이 주목된다.

본 개시의 조성물 및 방법에서, 상기 조성물은 화학적 살진균제를 포함할 수 있다.

상기 바실러스 튜린지엔시스 RTI545 균주와, 티아벤다졸, 플룩사피록사드, 펜플루펜, 세닥산, 바이테르타놀, 사이프로코나졸, 다이페노코나졸, 플루퀸코나졸, 플루트리아폴, 이프코나졸, 마이클로부타닐, 프로티오코나졸, 트라이아디메폰, 트라이아디메놀, 테부코나졸, 트라이티코나졸, 프로클로라즈, 이마잘릴, 베노밀, 카벤다짐, 하이멕사졸, 아족시스트로빈, 플루옥사스트로빈, 파이라클로스트로빈, 트라이플록시스트로빈, 카복신, 플루톨라닐, 메탈락실, 메페녹삼, 펜티오피라드, 플루오피람, 실티오팜, 플루아지남, 피리메타닐, 플루다이옥소닐, 이프로디온, 트라이사이클라졸, 캅탄, 다조메트, 만코제브, 메탐, 티람, 구아자틴, 톨클로포스-메틸, 펜시큐론, 티오파네이트-메틸, 펜피콕사미드, 메펜트라이플루코나졸, 플루인다피르, 또는 이들의 임의의 혼합물을 포함하는 화학적 진균 방제제와의 혼합물이 바람직하다.

상기 바실러스 튜린지엔시스 RTI545 균주와 플루다이옥소닐, 프로티오코나졸, 메페녹삼, 메탈락실, 테부코나졸, 다이페노코나졸, 티람, 카복심, 카벤다짐, 트라이티코나졸, 펜시큐론, 이마잘릴, 피라클로스트로빈, 세닥산, 트라이플록시스트로빈, 플루퀸코나졸, 플루옥사스트로빈, 아족시스트로빈, 플루트라이아폴, 플룩사피록사드, 펜티오피라드, 펜피콕사미드, 메펜트라이플루코나졸, 플루인다피르 또는 이들의 혼합물과의 혼합물이 보다 바람직하다.

제초제: C1) 아세틸-CoA 카복실라제 억제제(ACC), 예를 들어 사이클로헥세논 옥심 에테르, 예를 들어 알록시딤, 클레토딤, 클로프록시딤, 사이클록시딤, 세톡시딤, 트랄콕시딤, 부트록시딤, 클레폭시딤 또는 테프랄록시딤; 페녹시페녹시프로피온 에스터, 예를 들어 클로다이나포프로파길, 사이할로포프-부틸, 다이클로포프-메틸, 페녹사프로프-에틸, 페녹사프로프-P-에틸, 펜티아프로프에틸, 플루아지포프-부틸, 플루아지포프-P-부틸, 할록시포프-에톡시에틸, 할록시포프-메틸, 할록시포프-P-메틸, 아이속사피리포프, 프로파퀴자포프, 퀴잘로포프-에틸, 퀴잘로포프-P-에틸 또는 퀴잘로포프-테퓨릴; 또는 아릴아미노프로피온산, 예를 들어 플람프로프-메틸 또는 플람프로프-아이소프로필; C2 아세토락테이트 신타제 억제제(ALS), 예를 들어 이미다졸리논, 예를 들어 이마자피르, 이마자퀸, 이미자메타벤즈-메틸(이미자메), 이마자목스, 이마자픽 또는 이마제타피르; 피리미딜 에테르, 예를 들어 피리티오박산, 피리티오박-나트륨, 비스피리박-나트륨.KIH-6127 또는 피리벤족심; 설폰아미드, 예를 들어 플로라슐람, 플루메트슐람 또는 메토슐람; 또는 설포닐유레아, 예를 들어 아미도설퓨론, 아짐설퓨론, 벤설퓨론-메틸, 클로리뮤론-에틸, 클로르설퓨론, 시노설퓨론, 사이클로설파뮤론, 에타메트설퓨론-메틸, 에톡시설퓨론, 플라자설퓨론, 할로설퓨론-메틸, 이마조설퓨론, 메트설퓨론-메틸, 니코설퓨론, 프리미설퓨론-메틸, 프로설퓨론, 피라조설퓨론-에틸, 림설퓨론, 설포메튜론-메틸, 티펜설퓨론-메틸, 트라이아설퓨론, 트라이베뉴론-메틸, 트라이설퓨론-메틸, 트라이토설퓨론, 설포설퓨론, 포람설퓨론 또는 요오도설퓨론; C3) 아미드, 예를 들어 알리도클로르(CDAA), 벤조일프로프-에틸, 브로모뷰티드, 키오르티아미드, 다이펜아미드, 에토벤즈아니디벤즈클로메트), 플루티아미드, 포사민 또는 모날리드; C4) 옥신 제초제, 예를 들어 피리딘카복실산, 예를 들어 클로피랄리드 또는 피클로람; 또는 2,4-D 또는 베나졸린; C5) 옥신 수송 억제제, 예를 들어 나프탈람 또는 다이플루펜조피르; C6) 카로티노이드 생합성 억제제, 예를 들어 벤조페납, 클로마존(다이메타존), 다이플루페니칸, 플루오로클로리돈, 플루리돈, 피라졸리네이트, 피라족시펜, 아이속사플루톨, 아이속사클로르톨, 메소트리온, 슐코트리온(클로르메슐론), 케토스피라독스, 플루르타몬, 노르플루라존 또는 아미트롤; C7) 에놀피루빌쉬키메이트-3-포스페이트 신타제 억제제(EPSPS), 예를 들어 글리포세이트 또는 설포세이트; C8) 글루타민 신시타제 억제제, 예를 들어 바이라나포스(바이알라포스) 또는 글루포시네이트-암모늄; C9) 지질 생합성 억제제, 예를 들어 아닐리드, 예를 들어 아닐로포스 또는 메페나세트; 클로로아세트아닐리드, 예를 들어 다이메테나미드, S-다이메테나미드, 아세토클로르, 알라클로르, 부타클로르, 부테나클로르, 다이에타틸-에틸, 다이메타클로르, 메타자클로르, 메톨라클로르, S-메톨라클로르, 프레틸라클로르, 프로파클로르, 프리나클로르, 테르부클로르, 테닐클로르 또는 자일라클로르; 티오유레아, 예를 들어 부틸레이트, 사이클로에이트, 다이-알레이트, 다이메피페레이트, EPTC. 에스프로카브, 몰리네이트, 페불레이트, 프로설포카브, 티오벤카브(벤티오카브), 트라이-알레이트 또는 베몰레이트; 또는 벤퓨레세이트 또는 퍼플루이돈; C10) 유사분열 억제제, 예를 들어 카바메이트, 예를 들어 아슐람, 카베타미드, 클로르프로팜, 오르벤카브, 프로나미드(프로피자미드), 프로팜 또는 티오카바질; 다이나이트로아닐린, 예를 들어 베네핀, 부트랄린, 다이니트라민, 에탈플루랄린, 플루클로랄린, 오리잘린, 펜다이메탈린, 프로다이아민 또는 트라이플루랄린; 피리딘, 예를 들어 다이티오피르 또는 티아조피르; 또는 부타미포스, 클로르탈-다이메틸(DCPA) 또는 말레익 하이드라지드; C11) 프로토포르피리노겐 IX 옥시다제 억제제, 예를 들어 다이페닐 에테르, 예를 들어 아시플루오르펜, 아시플루오르펜-나트륨, 아클로니펜, 바이페녹스, 클로미트로펜(CNP), 에톡시펜, 플루오로디펜, 플루오로글리코펜-에틸, 포메사펜, 퓨릴옥시펜, 락토펜, 나이트로펜, 나이트로플로오르펜 또는 옥시플루오르펜; 옥사다이아졸, 예를 들어 옥사다이아질 또는 옥사다이아존; 사이클릭 이미드, 예를 들어 아자페니딘, 부타페나실, 카르펜트라존-에틸, 시니돈-에틸, 플루미클로락-펜틸, 플루미옥사진, 플루미프로핀, 플루프로파실, 플루티아세트-메틸, 설펜트라존 또는 티디아지민; 또는 피라졸, 예를 들어 ET-751.JV 485 또는 니피라클로펜; C12) 광합성 억제제, 예를 들어 프로파닐, 피리데이트 또는 피리다폴; 벤조티아다이아지논, 예를 들어 벤타존; 다이나이트로페놀, 예를 들어 브로모페녹심, 다이노세브, 다이노세브-아세테이트, 다이노터브 또는 DNOC; 다이피리딜렌, 예를 들어 사이퍼콰트-클로라이드, 다이펜조콰트-메틸설페이트, 다이콰트 또는 파라콰트-다이클로라이드; 유레아, 예를 들어 클로르브로뮤론, 클로로톨류론, 다이페녹슈론, 다이메퓨론, 다이유론, 에티다이뮤론, 페뉴론, 플루오메튜론, 아이소프로튜론, 아이소유론, 리뉴론, 메타벤즈티아쥬론, 메타졸, 메토벤쥬론, 메톡슈론, 모노리뉴론, 네뷰론, 시듀론 또는 테뷰티유론; 페놀, 예를 들어 브로목시닐 또는 아이옥시닐; 클로리다존; 트라이아진, 예를 들어 아메트린, 아트라진, 시아나진, 데스메인, 다이메타메트린, 헥사지논, 프로메톤, 프로메트린, 프로파진, 시마진, 시메트린, 테르뷰메톤, 테르뷰트린, 테르부틸라진 또는 트라이에타진; 트라이아지논, 예를 들어 메타미트론 또는 메트리뷰진; 유라실, 예를 들어 브로마실, 레나실 또는 테르바실; 또는 비스카바메이트, 예를 들어 데스메디팜 또는 펜메디팜; C13) 상승작용제, 예를 들어 옥시란, 예를 들어 트라이디판; C14) CIS 세포벽 합성 억제제, 예를 들어 아이속사벤 또는 다이클로베닐; C15) 다양한 다른 제초제, 예를 들어 다이클로로프로피온산, 예를 들어 달라폰; 다이하이드로벤조퓨란, 예를 들어 에토퓨메세이트; 페닐아세트산, 예를 들어 클로르페낙(페낙); 또는 아지프로트린, 바르반, 벤슐리드, 벤즈티아쥬론, 벤조플루오르, 부미나포스, 부티다졸, 부튜론, 카펜스트롤, 클로르부팜, 클로르펜프로프-메틸, 클로록슈론, 신메틸린, 큐밀유론, 사이클유론, 사이프라진, 사이프라졸, 다이벤질유론, 다이프로페트린, 다이므론, 에글리나진-에틸, 엔도탈, 에티오진, 플루카바존, 플루오르벤트라닐, 플루폭삼, 아이소카바미드, 아이소프로팔린, 카르부틸레이트, 메플루이디드, 모뉴론, 나프로파미드, 나프로파미드-M, 나프로파닐리드, 니트랄린, 옥사시클로메폰, 펜아이소팜, 피페로포스, 프로시아진, 프로플루랄린, 피리부티카브, 세크부메톤, 설팔레이트(CDEC), 테르부카브, 트라이아지플람, 트라이아조페나미드 또는 트라이메튜론; 또는 이들의 환경적으로 적합한 염.

살선충제 또는 생물살선충제: 베노밀, 클로에토카브, 알독시카브, 티르페이트, 다이아미다포스, 페나미포스, 카두사포스, 다이클로펜티온, 에토프로포스, 펜설포티온, 포스티아제이트, 헤테로포스, 아이사미도포프, 아이사조포스, 포스포카브, 티오나진, 이미시아포스, 메카르폰, 아세토프롤, 벤클로티아즈, 옥사밀, 클로로피크린, 다조메트, 플루엔설폰, 1,3-다이클로로프로펜(텔론), 다이메틸 다이설파이드, 메탐 나트륨, 메탐 칼륨, 메탐염(모든 MITC 생성제), 메틸 브로마이드, 생물학적 토양 개질제(예를 들어 겨자 종자, 겨자 종자 추출물), 토양의 증기 훈증, 알릴 아이소티오시아네이트(AITC), 다이메틸 설페이트, 푸르푸랄(알데하이드), 플루아자인돌리진(DPX-Q8U80), 플루오피람 또는 티옥사자펜.

상기 바실러스 튜린지엔시스 RTI545 균주와 베노밀, 페나미포스, 카두사포스, 에토프로포스, 포스티아제이트, 클로로피크린, 다조메트, 플루엔설폰, 옥사밀, 1,3-다이클로로프로펜(텔론), 메탐 나트륨, 메탐 칼륨, 메탐염(모든 MITC 생성제), 메틸 브로마이드, 알릴 아이소티오시아네이트(AITC), 플루아자인돌리진(DPX-Q8U80), 티옥사자펜, 플루오피람 또는 이들의 임의의 혼합물을 포함하는 화학적 선충 방제제와의 혼합물이 바람직하다.

상기 바실러스 튜린지엔시스 RTI545 균주와 카두사포스, 에토프로포스, 포스티아제이트, 플루엔설폰, 옥사밀, 플루아자인돌리진(DPX-Q8U80), 티옥사자펜, 또는 이들의 임의의 혼합물과의 혼합물이 보다 바람직하다. 본 개시의 조성물 및 방법에서, 상기 조성물은 상기 선충제 카두사포스를 포함할 수 있다.

본 발명의 적합한 식물 생장 조절제는 하기를 포함한다: 식물 생장 조절제: D1) 안티옥신, 예를 들어 클로피브린산, 2,3,5-트라이-요오도벤조산; D2) 옥신, 예를 들어 4-CPA, 2,4-D, 2,4-DB, 2,4-DEP, 다이클로르프로프, 페노프로프, IAA, IBA, 나프탈렌아세트아미드, α-나프탈렌아세트산, 1-나프톨, 나프톡시아세트산, 칼륨 나프테네이트, 나트륨 나프테네이트, 2,4,5-T; D3) 사이토키닌, 예를 들어 2iP, 벤질아데닌, 4-하이드록시펜에틸 알콜, 키네틴, 제아틴; D4) 고엽제, 예를 들어 칼슘 사이아나미드, 다이메티핀, 엔도탈, 에테폰, 메르포스, 메톡슈론, 펜타클로로페놀, 티디아쥬론, 트라이부포스; D5) 에틸렌 억제제, 예를 들어 아비글리신, 1-메틸사이클로프로펜; D6) 에틸렌 방출제, 예를 들어 ACC, 에타셀라실, 에테폰, 글리옥심; D7) 살정제, 예를 들어 펜리다존, 말레익 하이드라지드; D8) 지베렐린, 예를 들어 지베렐린, 지베렐린산; D9) 생장 억제제, 예를 들어 아브시식산, 안시미돌, 부트랄린, 카바릴, 클로르포늄, 클로르프로팜, 다이케굴락, 플루메트랄린, 플루오리다미드, 포사민, 글리포신, 아이소피리몰, 자스몬산, 말레익 하이드라지드, 메피콰트, 피프록타닐, 프로하이드로자스몬, 프로팜, 티아오지에안, 2,3,5-트라이-요오도벤조산; D10) 모르팍틴, 예를 들어 클로르플루렌, 클로르플루레놀, 다이클로르플루레놀, 플루레놀; D11) 생장 지연제, 예를 들어 클로르메콰트, 다미노지드, 플루르프리미돌, 메플루이디드, 패클로부트라졸, 테트사이클라시스, 유니코나졸; D12) 생장 자극제, 예를 들어 브라시놀리드, 브라시놀리드-에틸, DCPTA, 포르클로르페뉴론, 하이멕사졸, 프로슐러, 트라이아콘타놀; D13) 분류되지 않은 식물 생장 조절제, 예를 들어 바크메데쉬, 벤조플루오르, 부미나포스, 카르본, 콜린 클로라이드, 시오부티드, 클로펜세트, 시아나미드, 사이클라닐리드, 사이클로헥시미드, 사이프로설파미드, 에포콜레온, 에티클로제이트, 에틸렌, 푸펜티오유레아, 푸랄란, 헵토가르질, 홀로설프, 이나벤피드, 카레타잔, 납 아르세네이트, 메타설포카브, 프로헥사디온, 피다논, 신토펜, 트라이아펜테놀, 트라이넥사팍.

본 발명의 화학적 제형은, 실시태양들에서 식재시 침착될 수 있는 다양한 크기의 임의의 적합한 통상적인 형태, 예를 들어 유화 농축물(EC), 현탁 농축물(SC), 서스포-유화액(SE), 캡슐 현탁액(CS), 수분산성 과립(WG), 유화성 과립(EG), 유중 수적형 유화액(EO), 수중 유적형 유화액(EW), 미세유화액(ME), 오일 분산액(OD), 오일 혼화성 유동성(OF), 오일 혼화성 액체(OL), 용해성 농축물(SL), 팽창성 폼(EF) 현탁액, 초저부피 현탁액(SU), 초저부피 액체(UL), 분산성 농축물(DC), 습윤성 분말(WP), 과립(G)으로 존재하거나, 농업적으로 허용 가능한 보조제와 함께 임의의 기술적으로 실현 가능한 제형일 수 있다.

실시태양들에서, 상기 조성물은 0.5 내지 99 중량%의, 약 1x10¹¹ CFU/g 이상의, ATCC 번호 PTA-122161로서 기탁된 바실러스 튜린지엔시스 RTI545 또는 그의 모든 식별 특징을 갖는 그의 돌연변이체의 생물학적으로 순수한 배양물, 및 농업적으로 허용 가능한 보조제를 포함할 수 있다. 하나 이상의 실시태양에서, 상기 바실러스 종을 포함하는 활성 성분은 상기 농업 조성물의 0.5 내지 약 95 중량% 범위의 총 농도로 존재한다, 예를 들어 여기에서 상기 바실러스 종은 상기 전체 조성물의 1, 2, 3, 4 또는 5, 7, 8 또는 10 중량%의 하한 내지 10, 15, 20, 25, 40, 50, 60, 70, 80 또는 90 중량%의 상한 중에서 독립적으로 선택되는 양으로 존재한다. 또 다른 실시태양에서, 농업적으로 허용 가능한 보조제는 상기 전체 조성물의 약 1% 내지 약 99.5%, 예를 들어 1, 2, 3, 4 또는 5 중량%의 하한 내지 10, 15, 20, 25, 40, 50, 60, 70, 80, 90 또는 95 중량%의 상한을 구성한다.

실시태양들에서, 상기 보조제는 액체 담체, 고체 담체, 표면활성제(계면활성제), 점도 개질제, 증점제, 유동성 첨가제, 구조제, 보존제, 살생물제 또는 세균발육저지제, 동결방지제, 결정화 억제제, 현탁제, 염료, 산화방지제, 발포제, 광흡수제, 혼합 보조제, 소포제, 착화제, 중화 또는 pH-조절 물질 및 완충제, 부식 억제제, 향료, 습윤제, 흡수 촉진제, 미량영양소, 가소제, 활주제, 윤활제 및 분산제로 이루어지는 그룹 중에서 선택될 수 있다.

담체는 액체 또는 고체일 수 있다. 상기와 같은 제형에 사용될 수 있는 보조제는 표면활성제, 점도 개질제, 예를 들어 증점제, 보존제, 살생물제 또는 세균발육저지제, 동결방지제, 결정화 억제제, 현탁제, 염료, 산화방지제, 발포제, 광흡수제, 혼합 보조제, 소포제, 착화제, 중화 또는 pH-조절 물질 및 완충제, 부식 억제제, 향료, 습윤제, 흡수 촉진제, 미량영양소, 가소제, 활주제, 윤활제, 분산제 및 또한 액체 및 고체 비료를 포함한다.

실시태양들에서, 본 발명의 조성물을 현탁 농축물(SC), 습윤성 분말(WP) 또는 습윤성 과립(WG)으로서 제형화할 수 있다. 다른 제형 유형은 슬러리 처리용 수분산성 분말(WS), 오일 분산액(OD), 전면시비용 과립(GR), 캡슐 현탁액(CS), 유화성 농축물(EC), 수중 유화액(EW), 용해성 농축물(SL), CS와 SC의 혼합된 제형(ZC), 서스포-유화액(SE)으로서 SC와 EW의 혼합된 제형, 팽창성 폼(EF) 현탁액, 또는 CS와 EW의 혼합된 제형(ZW)을 포함한다. 일부 실시태양에서 상기 조성물을 상기 식물, 식물 부분, 종자 또는 토양에 건조 제형(예를 들어 땅콩상의 건조 종자 코팅 또는 토양내 혼입을 위한 다양한 크기의 분진, 분말 또는 과립)으로서 적용할 수 있는 분진 또는 분말, 또는 과립으로서 제형화할 수 있다.

액체 담체는 용매 및 조-용매, 예를 들어 물, 석유 에테르, 식물성 오일, 산 무수물, 아밀 아세테이트, 부틸렌 카보네이트, 사이클로헥산, 사이클로헥산올, 다이아세톤 알콜, 1,2-다이클로로프로판, 다이에탄올아민, 다이에틸렌 글리콜, 다이에틸렌 글리콜 아비에테이트, 다이에틸렌 글리콜 부틸 에테르, 다이에틸렌 글리콜 에틸 에테르, 다이에틸렌 글리콜 메틸 에테르, 1,4-다이옥산, 다이프로필렌 글리콜, 다이프로필렌 글리콜 메틸 에테르, 다이프로필렌 글리콜 다이벤조에이트, 다이프록시톨, 알킬피롤리돈, 2-에틸헥산올, 에틸렌 카보네이트, 1,1,1-트라이클로로에탄, 알파-피넨, d-리모넨, 에틸 락테이트, 에틸렌 글리콜, 에틸렌 글리콜 부틸 에테르, 에틸렌 글리콜 메틸 아테르, 감마-부티로락톤, 글리세롤, 글리세롤 아세테이트, 글리세롤 다이아세테이트, 글리세롤 트라이아세테이트, 헥사데칸, 헥실렌 글리콜, 아이소보닐 아세테이트, 아이소옥탄, 아이소포론, 아이소프로필 미리스테이트, 락트산, 라우릴아민, 메시틸 옥사이드, 메톡시프로판올, 메틸 라우레이트, 메틸 옥타노에이트, 메틸 올리에이트, 메틸렌 클로라이드, n-헥산, n-옥틸아민, 옥타데칸산, 옥틸아민 아세테이트, 올레산, 올레일아민, 폴리에틸렌 글리콜(PEG), 프로피온산, 프로필 락테이트, 프로필렌 카보네이트, 프로필렌 글리콜, 프로필렌 글리콜 메틸 에테르, 트라이에틸 포스페이트, 트라이에틸렌 글리콜, 자일렌설폰산, 파라핀, 무기오일, 트라이클로로에틸렌, 퍼클로로에틸렌, 고분자량 알콜, 예를 들어 아밀 알콜, 테트라하이드로푸르푸릴 알콜, 헥산올, 옥탄올, 액체 아미드, 예를 들어 N,N-다이메틸옥탄아미드, N,N-다이메틸데칸아미드, N-메틸-N-(2-프로필헵틸)-아세트아미드, N-메틸-N-(2-프로필헵틸)-폼아미드, N-메틸-2-피롤리돈 등을 포함한다. 바람직하게, 액체 담체는 생물활성제가 방제 장소에 적용된 후까지 조성물 중에서 필수적으로 변하지 않은 채로 유지되게 한다. 물이 일반적으로, 농축된 제형의 희석에 선택되는 담체이다.

적합한 고체 담체는 예를 들어 탄수화물, 예를 들어 단일 또는 이중 탄수화물, 예를 들어 슈크로스, 올리고 또는 폴리-사카라이드, 예를 들어 말토덱스트린 또는 펙틴, 활석, 티타늄 다이옥사이드, 피로필라이트 점토, 애터펄자이트 점토, 규조토, 실리카(이산화 규소), 석회석, 벤토나이트, 칼슘 몬모릴로나이트 수용성 염, 예를 들어 아세테이트, 카보네이트, 클로라이드, 시트레이트, 포스페이트 또는 설페이트의 나트륨, 칼륨, 마그네슘, 칼슘 또는 암모늄염, 예를 들어 칼슘 카보네이트, 면실껍질, 밀가루, 콩가루, 부석, 목분, 호두 껍질, 리그닌 및 유사한 물질, 효모 추출물, 어분 또는 이들의 혼합물을 포함한다. 주목할만한 고체 담체는 말토덱스트린, 실리카, 칼슘 카보네이트, 또는 이들의 임의의 혼합물을 포함한다.

계면활성제, 분산제 및 유화제를 포함한 표면 활성제, 점도 향상제, 용매 및 다른 보조제는 독립적으로 최종 제형의 약 0.1 내지 약 25 중량%를 구성할 수 있다.

상기 조성물은 당해 분야에 공지된 매우 넓은 범위의 물질(또한 상업적으로 입수할 수 있다)로부터의 표면-활성 물질(계면활성제, 분산제 및 유화제)을 함유할 수 있다. 표면 활성 물질(본 명세서에서 일반적으로 계면활성제로서 기재됨)은 음이온성, 양이온성, 비이온성 또는 중합체성일 수 있으며 이들을 계면활성제, 분산제, 유화제, 습윤제 또는 현탁제로서 또는 다른 목적에 사용할 수 있다.

계면활성제는 상이한 부류, 예를 들어 양이온성 계면활성제, 음이온성 계면활성제, 비이온성 계면활성제, 이온성 계면활성제 및 양쪽성 계면활성제에 속한다. 본 발명에 따라, 상기 계면활성제는 적용을 위해 상기 제형 중에 또는 탱크 믹스 중에 상기 생물 활성 성분을 분산시키는데 유용한 임의의 계면활성제 또는 2개 이상의 계면활성제들의 조합일 수 있다. 본 발명의 조성물 중의 계면활성제의 양은 약 1 내지 약 15%, 또는 약 1 내지 약 10%, 바람직하게는 약 3 내지 약 8%, 및 보다 바람직하게는 약 5 내지 약 7% w/w의 범위일 수 있다.

일부 바람직한 계면활성제의 예는 양이온성, 비이온성, 음이온성 및/또는 양쪽성 계면활성제를 포함한다.

본 발명에 적합한 비이온성 계면활성제는 에톡실화된 선형 알콜, 에톡실화된 알킬 페놀, 알킬 EO/PO 공중합체, 폴리알킬렌 글리콜 모노부틸 에테르 에톡실화된 지방산/오일, 솔비탄 라우레이트, 폴리솔베이트, 솔비탄 올리에이트, 에톡실화된 지방산 알콜, 또는 알킬 페놀, 알칸올아미드, 또는 알킬로아미드(예를 들어 다이에탄올아미드, 라우르산 모노아이소프로판올아미드, 및 에톡실화된 미리스트아미드), 자이에틸렌 지방산 에스터, 폴리옥시에틸렌 지방 알콜 에테르(예를 들어 알킬아릴 폴리글리콜 에테르), 알킬페놀/알킬렌 옥사이드 부가 생성물, 예를 들어 노닐페놀 에톡실레이트; 알콜/알킬렌 옥사이드 부가 생성물, 예를 들어 트라이데실알콜 에톡실레이트를 포함한다.

음이온계 계면활성제는 알킬-, 알킬아릴- 및 아릴설포네이트 또는 그의 염(예를 들어 라우릴 사르코시네이트, 알킬벤젠설포네이트, 도데실벤젠설포네이트, 알킬나프탈렌설포네이트, 예를 들어 다이부틸나프탈렌설포네이트 또는 C_14-16 올레핀 설포네이트의 나트륨, 칼륨 또는 칼슘염), 알킬-, 알킬아릴- 및 아릴설페이트 또는 그의 염(예를 들어 트라이데데쓰 설페이트, 라우릴 설페이트, 데실 설페이트, 및 다이에탄올암모늄 라우릴 설페이트의 나트륨, 칼륨 또는 칼슘염) 단백질 가수분해산물, 폴리카복실산의 유도체(예를 들어 암모늄 라우릴 에테르 카복실레이트), 올레핀 설포네이트(예를 들어 나트륨 알파 올레핀 설포네이트), 사르코시네이트(예를 들어 암모늄 사이클로헥실 팔미토일 타우리네이트), 숙시네이트(예를 들어 이나트륨 N-옥타데실 설포숙시나메이트), 인 유도체(예를 들어 인산 에스터 및 그의 균등염)을 포함한다.

양이온성 계면활성제는 알킬벤질트라이메틸암모늄 클로라이드, 암모늄 라우릴 설페이트 및 라우라민 옥사이드를 포함한다.

일부 실시태양에서, 계면활성제를 발포제로서 사용할 수 있으며 상기는 상기 제형을 식재시 종자 또는 고랑내에 적용할 수 있게 한다. 상기 발포성 조성물을 물로 임의로 희석하고 가압 기체, 예를 들어 공기와, 발포 매질, 예를 들어 다수의 유리 비드를 포함하는 발포 챔버에서 혼합할 수 있다.

적합한 발포제는 알카놀아미드 또는 알킬로아미드(예를 들어 코카미드, 다이에탄올아미드, 라우르산 모노아이소프로판올아미드, 및 에톡실화된 미리스타미드), 자이에틸렌 지방산 에스터, 폴리옥시에틸렌 지방 알콜 에테르(예를 들어 알킬아릴 폴리글리콜 에테르) 및 플루오로카본(예를 들어 에톡실화된 폴리플루오르화된 알콜)을 포함하는 비이온성 계면활성제; 알킬-, 알킬아릴- 및 아릴설포네이트(예를 들어 나트륨 라우릴 사르코시네이트 및 예를 들어 나트륨 알킬벤젠설포네이트), 알킬-, 알킬아릴- 및 아릴설페이트, 단백질 가수분해산물, 폴리카복실산의 유도체(예를 들어 암모늄 라우릴 에테르 카복실레이트), 올레핀 설포네이트(예를 들어 나트륨 알파 올레핀 설포네이트), 사르코시네이트(예를 들어 암모늄 사이클로헥실 팔리니토일 타우리네이트), 숙시네이트(예를 들어 이나트륨 N-옥타데실 설포숙시나메이트), 인 유도체(예를 들어 인산 에스터 및 그의 균등염)를 포함하는 음이온성 계면활성제; 알킬벤질트라이메틸암모늄 클로라이드를 포함하는 양이온성 계면활성제; 및 베타인을 포함하는 양쪽성 계면활성제일 수 있다. 특히 바람직한 발포제는 나트륨 도데실벤젠 설포네이트(예를 들어 바이오 소프트(Bio-Soft)(등록상표) D-40), 나트륨 C_14-16 올레핀 설포네이트(예를 들어 바이오터지(Bioterge)(등록상표) AS-40), 라우라민 옥사이드(예를 들어 암모닉스(Ammonyx)(등록상표) DO, 암모닉스(등록상표) LO), 암모늄 라우릴 설페이트(예를 들어 스테올(Steol)(등록상표)), 나트륨(세데팔(Cedepal)(등록상표) TD-407) 및 알킬 설페이트(예를 들어 폴리스텝(Polystep)(등록상표) B-25)를 포함한다. 상기 제형 중 발포제의 총 농도는 사용되는 발포제에 따라 변할 것이며 상기 농축된 발포성 제형의 약 0.1% 내지 약 50%, 바람직하게는 약 0.3% 내지 약 30%, 보다 바람직하게는 약 5% 내지 25% 및 훨씬 더 바람직하게는 약 17% 내지 약 23%를 포함할 수 있다.

주목할만한 실시태양은 상기 제형에 의해 생성된 폼의 부피가 약 45분 이상 후에 25%(이하)까지 감소되는 것들을 포함한다. 다른 표면 활성 물질은 비누, 예를 들어 나트륨 스테아레이트; 설포숙시네이트염의 다이알킬 에스터, 예를 들어 나트륨 다이(2-에틸헥실)설포숙시네이트; 솔비톨 에스터, 예를 들어 솔비톨 올리에이트; 4급 아민, 예를 들어 라우릴트라이메틸암모늄 클로라이드, 지방산의 폴리에틸렌 글리콜 에스터, 예를 들어 폴리에틸렌 글리콜 스테아레이트; 에틸렌 옥사이드 및 프로필렌 옥사이드의 블록 공중합체; 및 모노- 및 다이-알킬포스페이트 에스터의 염을 포함한다.

또한 실리콘 계면활성제, 특히 예를 들어 실웨트(Silwet) L-77(등록상표)로서 상업적으로 입수할 수 있는 폴리알킬-옥사이드-개질된 헵타메틸트릴록산, 및 또한 퍼플루오르화된 계면활성제가 적합하다.

이들 중에서, 일부 훨씬 더 특정한 유형의 바람직한 계면활성제는 비-이온성 선형 또는 분지된 알콜 에톡실레이트 계면활성제, 음이온성 인산 에스터 계면활성제(때때로 "포스페이트 에스터" 계면활성제라 칭한다), 및 양이온성 에톡실화된 탈로우 아민 계면활성제를 포함한다.

주목할만한 계면활성제(분산제)는, 바람직하게는 C₈-C₁₄ 알킬기를 포함하는 하나 이상의 알킬 알킬폴리글리코사이드를 포함한다. BASF 코포레이션의 아그니크(Agnique)(등록상표) 제품(코그니스)이 대표적이다. 하나의 실시태양에서, 상기 알킬 d-글리코피라노사이드 계면활성제는 C₈-C₁₀ 알킬 d-글루코피라노사이드의 혼합물, 예를 들어 아그니크(등록상표) PG8105-G를 포함한다. 또 다른 실시태양에서, 상기 알킬 d-글루코피라노사이드 계면활성제는 C₉-C₁₁ 알킬 d-글루코피라노사이드의 혼합물을 포함한다. 바람직한 제품은 약 1.6의 중합도 및 약 13.1의 친수성-친지성 균형(HLB)을 갖는, C₉-C₁₁ 알킬 d-글루코피라노사이드의 혼합물인 아그니크(등록상표) PG9116이다.

포스페이트 에스터 계면활성제(분산제)는 알콜, 에톡실화된 알콜 또는 에톡실화된 페놀의 포스페이트 에스터를 포함할 수 있다. 상기는 유리산 형태로 존재하거나 나트륨, 칼륨 또는 암모늄 염으로서 중화될 수 있다. 애쉬랜드 코포레이션(Ashland Corporation)의 덱스트롤(Dextrol)(등록상표) 제품, 예를 들어 덱스트롤(등록상표) OC-180이 대표적이다. 상기 포스페이트 에스터는 바람직하게는 노닐 페놀 포스페이트 에스터 및 트라이데실 알콜 에톡실화된 포스페이트 칼륨염 중에서 선택된다.

또 다른 태양에서, 상기 조성물은 증점제, 점도 개질제, 유동성 첨가제 또는 제형을 안정화시키는 구조화제, 예를 들어 정치 또는 침강에 대한 현탁 농축물 또는 오일 분산제를 함유할 수 있다. 적합한 증점제는 쌀, 전분, 아라비아검, 트라가칸트검, 구아 가루, 브리티시검, 전분 에테르 및 전분 에스터, 수지검, 갈락토만난, 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 잔탄검, 카라기난, 셀룰로스 유도체, 메틸 셀룰로스, 카복시메틸셀룰로스, 알기네이트 및 이들의 조합이다. 다른 공지된 상업적인 제품은 라티스(Lattice) NTC 50, 라티스 NTC 60, 메토셀, 점토 및 비검 실리카를 포함할 수 있다.

또 다른 실시태양에서, 본 발명의 조성물은 동결방지제, 예를 들어 글리세린, 에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜, 유레아, 칼슘 클로라이드, 나트륨 나이트레이트, 마그네슘 클로라이드, 및 암모늄 설페이트를 함유할 수 있다.

적합한 보존제는 비제한적으로 C₁₂ 내지 C₁₅ 알킬 벤조에이트, 알킬 p-하이드록시벤조에이트, 알로에베라 추출물, 아스코르브산, 벤즈알코늄 클로라이드, 벤조산, C₉ 내지 C₁₅ 알콜의 벤조산 에스터, 부틸화된 하이드록시톨루엔, 부틸화된 하이드록시아니솔, 3급-부틸하이드로퀴논, 피마자유, 세틸 알콜, 클로로크레졸, 시트르산, 코코아 버터, 코코넛 오일, 다이아졸리디닐 유레아, 다이아이소프로필 아디페이트, 다이메틸 폴리실록산, DMDM 하이단토인, 에탄올, 에틸렌다이아민테트라아세트산, 지방산, 지방 알콜, 헥사데실 알콜, 하이드록시벤조에이트 에스터, 요오도프로피닐 부틸카바메이트, 아이소노닐 아이소-노나노에이트, 호호바 오일, 라놀린 오일, 무기 오일, 올레산, 올리브 오일, 파라벤, 폴리에테르, 폴리옥시프로필렌 부틸 에테르, 폴리옥시프로필렌 세틸 에테르, 칼륨 소르베이트, 프로필 갈레이트, 실리콘 오일, 나트륨 프로피오네이트, 나트륨 벤조에이트, 나트륨 바이설파이트, 소르브산, 스테아릭 지방산, 이산화황, 비타민 E, 비타민 E 아세테이트 및 이들의 유도체, 에스터, 염 및 혼합물을 포함한다. 바람직한 보존제는 나트륨 o-페닐페네이트, 5-클로로-2-메틸-4-아이소티아졸린-3-온, 2-메틸-4-아이소티아졸린-3-온, 및 1,2-벤아이소티아졸린-3-온을 포함한다.

소포제, 예를 들어 시아미터(Xiameter) AFE-100, 다우 코닝 AF, 다우 코닝 1520, 1530 또는 1540을 또한 본 명세서에서 청구된 제형에 사용할 수 있다.

실시태양들에서, 상기 조성물은 물 및 하나 이상의 표면 활성제, 및 하나 이상의 추가적인 보조제를 포함하는 액체 현탁 농축물일 수 있다. 실시태양들에서, 상기 하나 이상의 보조제는 증점제, 점도 개질제, 구조화제 또는 유동성 첨가제, 용매, 보존제, 동결방지제, 및 소포제 중에서 선택될 수 있다. 통상적으로, 상기 현탁 농축물은 조성물의 전달 전에 물로 추가로 희석된다. 실시태양들에서, 상기 액체 조성물은 0.5 내지 20 중량%의, 바실러스 튜린지엔시스 RTI545 또는 그의 모든 식별 특징을 갖는 그의 돌연변이체의 생물학적으로 순수한 배양물; 1 내지 5 중량%의 하나 이상의 표면 활성제; 및 하나 이상의 증점제, 용매, 보존제, 동결방지제, 또는 소포제(각각 독립적으로 조성물의 약 1 중량% 이하를 차지한다)를 포함하는 현탁 농축물일 수 있다.

다른 실시태양들에서, 상기 조성물은 식물성 오일과 같은 오일 중에 분산된 고체 활성 성분 및 하나 이상의 표면 활성제, 및 하나 이상의 추가적인 보조제를 포함하는 액체 오일 분산액일 수 있다. 실시태양들에서, 상기 하나 이상의 보조제는 증점제, 점도 개질제, 구조화제 또는 유동성 첨가제, 용매, 보존제, 동결방지제, 소포제 등 중에서 선택될 수 있다. 통상적으로, 상기 오일 분산액은 조성물의 전달 전에 물로 추가로 희석된다. 실시태양들에서, 상기 액체 조성물은 0.5 내지 20 중량%의, 바실러스 튜린지엔시스 RTI545 또는 그의 모든 식별 특징을 갖는 그의 돌연변이체의 생물학적으로 순수한 배양물; 1 내지 10 중량%의 하나 이상의 표면 활성제; 및 하나 이상의 증점제, 점도 개질제, 구조화제, 유동성 첨가제, 용매, 보존제, 동결방지제, 또는 소포제(각각 독립적으로 조성물의 약 5 중량% 이하를 차지한다)를 포함하는 오일 분산액일 수 있다.

다른 실시태양들에서, 상기 조성물은 분진, 분말, 과립, 건조 습윤성 분말, 확산성 과립, 또는 건조 습윤성 과립의 형태일 수 있으며, 상기 바실러스 튜린지엔시스 RTI545 또는 그의 모든 식별 특징을 갖는 그의 돌연변이체의 생물학적으로 순수한 배양물은 약 1.0x10⁸ CFU/g 내지 약 5x10¹³ CFU/g의 양으로 존재할 수 있다. 실시태양들에서, 상기 조성물은 모노- 또는 다이-사카라이드, 올리고- 또는 폴리-사카라이드, 활석, 티타늄 다이옥사이드, 피로필라이트 점토, 애터펄자이트 점토, 규조토, 실리카, 석회석, 벤토나이트, 칼슘 몬모릴로나이트, 아세테이트, 카보네이트, 클로라이드, 시트레이트, 포스페이트 또는 설페이트의 나트륨, 칼륨, 마그네슘, 칼슘 또는 암모늄염, 면실껍질, 밀가루, 콩가루, 부석, 목분, 호두(예를 들어 땅콩 또는 호두) 껍질, 리그닌, 효모 추출물, 어분 또는 이들의 혼합물로 이루어지는 그룹 중에서 선택된 고체 담체를 포함할 수 있다.

하나의 실시태양에서, 상기 조성물은 5 내지 40%의, 약 1x10¹¹ CFU/g 이상의 생물학적으로 순수한 배양물; 및 말토덱스트린, 실리카, 칼슘 카보네이트, 또는 이들의 임의의 혼합물을 포함한다. 실시태양들에서, 상기 조성물은 5 내지 15%의 말토덱스트린을 포함한다.

실시태양들에서, 상기 조성물은 5 내지 40%의, 약 1x10¹¹ CFU/g 이상의 바실러스 튜린지엔시스 RTI545 또는 그의 모든 식별 특징을 갖는 그의 돌연변이체의 생물학적으로 순수한 배양물; 5 내지 15%의 말토덱스트린; 35 내지 45%의 칼슘 카보네이트; 및 5 내지 15%의 실리카를 포함할 수 있다. 실시태양들에서, 상기 조성물은 습윤성 분말 제형일 수 있다.

하나의 실시태양에서, 상기 조성물은 중량% 기준으로 약 40%의, 약 1x10¹¹ CFU/g 이상의 바실러스 튜린지엔시스 RTI545 또는 그의 모든 식별 특징을 갖는 그의 돌연변이체의 생물학적으로 순수한 배양물; 10%의 말토덱스트린; 40%의 칼슘 카보네이트; 및 10%의 실리카를 포함하는 습윤성 분말 제형일 수 있다.

실시태양들에서, 상기 조성물은 식물 진균성 병원체 감염에 대한 보호를 부여하거나 방제를 위한 식물 종자 처리 또는 고랑내 적용에 유용하다. 종자 처리의 경우, 상기 조성물의 용액 또는 현탁액을 표준 종자 처리 과정을 사용하여 종자에 적용할 수 있다. 상기 조성물을 처리되지 않은 종자 또는 본 명세서에 기재된 바와 같은 하나 이상의 추가적인 작물 보호제로 처리된 종자에 적용할 수 있다. 한편으로, 상기 조성물을 또한 종자 처리 또는 고랑내 적용을 위한 추가적인 작물 보호제와 혼합할 수 있다. 일부 실시태양에서, 추가적인 작물 보호제와 임의로 혼합된 상기 조성물을, 보호하고자 하는 식물의 잎에 적용할 수 있다.

조성물 및 방법의 일부 실시태양에서, 상기 조성물은 식물 생장에 이득이 되고/되거나 식물 해충에 대해 상기 식물의 보호를 부여하기에 적합한 양으로 존재하는, 본 명세서에 기재된 바와 같은 추가적인 농업 작용제(들), 예를 들어 살충제, 살진균제, 살선충제, 살균제, 제초제, 식물 추출물, 식물 생장 조절제, 또는 비료 중 하나 또는 이들의 조합을 추가로 포함한다. 상기 추가적인 농업 작용제는 미생물제, 생물제 또는 화학제일 수 있다.

조성물 및 방법의 일부 실시태양에서, 상기 조성물을 액체 비료와의 상용성을 위해 제형화할 수 있다.

액체 비료와 상용성인 제형은 수화된 알루미늄-마그네슘 실리케이트 및 하나 이상의 분산제를 포함할 수 있다. 본 명세서 및 청구항 전체를 통해 사용되는 바와 같은 "액체 비료와 상용성인 제형"이란 용어는 상기 제형이, 액체 제형으로 식물로 전달하기 위해 비료와의 혼합을 허용하도록 수성 용액 중에서 용해 또는 분산 또는 유화가 가능함을 의미하고자 한다.

주목할만한 실시태양들에서, 액체 비료와 상용성인 제형은 바이펜트린, 예를 들어 바이펜트린; 수화된 알루미늄-마그네슘 실리케이트; 및 슈크로스 에스터, 리그노설페이트, 알킬폴리글리코사이드, 나프탈렌설폰산 폼알데하이드 농축물 및 포스페이트 에스터 중에서 선택된 하나 이상의 분산제를 포함하는 조성물을 포함할 수 있다. 상기 바이펜트린은 바람직하게는 상기 조성물 중의 모든 성분의 전체 중량을 기준으로 1.0 중량% 내지 35 중량%, 보다 특히 15 중량% 내지 25 중량%의 농도로 존재할 수 있다. 상기 바이펜트린 살충제 조성물은 상기 액체 제형 중에 0.1 g/㎖ 내지 0.2 g/㎖ 범위의 농도로 존재할 수 있다. 상기 바이펜트린 살충제는 상기 액체 제형 중에 0.17 g/㎖의 농도로 존재할 수 있다. 상기 분산제 또는 분산제들은 바람직하게는 상기 조성물 중의 모든 성분의 전체 중량을 기준으로 약 0.02 중량% 내지 약 20 중량%의 총 농도로 존재할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 수화된 알루미늄-마그네슘 실리케이트는 몬모릴로나이트 및 애터펄자이트로 이루어지는 그룹 중에서 선택될 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 포스페이트 에스터는 노닐 페놀 포스페이트 에스터 및 트라이데실 알콜 에톡실화된 포스페이트 칼륨염 중에서 선택될 수 있다.

상기 분산제 또는 분산제들은 바람직하게는 상기 조성물 중의 모든 성분의 전체 중량을 기준으로 약 0.02 중량% 내지 약 20 중량%의 총 농도로 존재할 수 있다.

일부 실시태양들에서, 상기 수화된 알루미늄-마그네슘 실리케이트는 몬모릴로나이트 및 애터펄자이트로 이루어지는 그룹 중에서 선택될 수 있다.

일부 실시태양들에서, 상기 포스페이트 에스터는 노닐 페놀 포스페이트 에스터 및 트라이데실 알콜 에톡실화된 포스페이트 칼륨염 중에서 선택될 수 있다.

다른 실시태양들은 동결방지제, 소포제 및 살생물제 중 적어도 하나를 추가로 포함할 수 있다.

또 다른 태양에서, 상기 조성물을, 상기 생물학적 활성 성분들을 본 명세서에 기재된 바와 같은 담체 및 보조제와 유효량으로 합하는 단계에 따른 방법에 의해 제조할 수 있다. 상기 제형화된 조성물을 미분 고체, 과립 또는 분산액 형태의 조성물을 수득하기 위해서 예를 들어 상기 생물학적 활성제를 상기 제형 성분들과 혼합함으로써 제조할 수 있다. 상기 활성 성분들을 또한 다른 성분들, 예를 들어 미분 고체, 무기 오일, 식물성 또는 동물 기원의 오일, 식물성 또는 동물 기원의 변성 오일, 유기 용매, 물, 표면-활성 물질 또는 이들의 조합과 제형화할 수 있다.

일부 실시태양에서, 상기 제형의 성분들을 건식 혼합하거나, 고체 및 액체 성분을 균질화기 또는 다른 적합한 혼합 용기에서 함께 블렌딩할 수도 있다. 균질화에 의한 상기 성분들의 단순한 혼합이 어떠한 형태의 분쇄에도 바람직할 수 있다. 다른 실시태양들에서, 상기 혼합물에, 약 1 내지 약 250 ㎛ 범위의 적합한 입자 크기가 획득될 때까지 분쇄 공정, 예를 들어 건식 분쇄 또는 습식 분쇄를 가할 수 있다. 상기 조성물은 250 ㎛ 미만, 100 ㎛ 미만 또는 바람직하게는 50 ㎛ 미만의 입자 크기를 가질 수 있다. 바람직한 실시태양에서, 상기 혼합물을, 상기 입자 크기의 90%(D90)가 약 50 ㎛ 미만일 때까지 균질화하거나 분쇄시킨다.

하나의 실시태양은 i) ATCC 번호 PTA-122161로서 기탁된 바실러스 튜린지엔시스 RTI545 또는 그의 모든 식별 특징을 갖는 그의 돌연변이체; 및 ii) SC 제형용 보조제; WP 제형용 보조제; 및 WG 제형용 보조제로 이루어지는 그룹 중에서 선택된 하나 이상의 제형 성분을 포함하는 조성물에 관한 것이다.

또 다른 실시태양에서, 상기 조성물은 물 및 하나 이상의 계면활성제, 및 증점제, 용매, 보존제, 동결방지제, pH-조절제 및 소포제 중에서 선택된 하나 이상의 추가적인 보조제를 포함하는 것과 같은 SC의 형태로 존재한다.

하나의 실시태양에서, 상기 SC는 1 내지 20 중량%의, ATCC 번호 PTA-122161로서 기탁된 바실러스 튜린지엔시스 RTI545 또는 그의 모든 식별 특징을 갖는 그의 돌연변이체; 1 내지 5 중량%의 하나 이상의 계면활성제; 및 임의로 하나 이상의 증점제, 용매, 보존제, 동결방지제, 또는 소포제; 및 물을 포함한다. 상기 임의의 증점제, 용매, 보존제, 동결방지제 또는 소포제는 각각 독립적으로 상기 SC 제형의 약 1 중량% 이하를 차지할 수 있다. 상기 SC는 전체 조성물을 100 중량%로 만들기 위해(qs) 모든 다른 성분에 대해 보완적인 양의 물을 포함한다.

상기 조성물은 고체 형태, 예를 들어 분진, 분말, 과립, WP 또는 WG 제형으로 존재할 수 있다. 상기 제형들은 상술한 바와 같은 하나 이상의 고체 담체를 포함한다. 실시태양들에서, WP 또는 WG 제형은 약 1 내지 약 50 중량%, 예를 들어 1 내지 10, 5 내지 10, 또는 5 내지 50, 또는 7 내지 50, 또는 10 내지 50 중량%의, ATCC 번호 PTA-122161로서 기탁된 바실러스 튜린지엔시스 RTI545 또는 그의 모든 식별 특징을 갖는 그의 돌연변이체; 및 말토덱스트린, 칼슘 카보네이트 및 실리카로 이루어지는 그룹 중에서 선택된 하나 이상의 고체 담체를 포함할 수 있다. 습윤성 과립 제형은, 분말이, 예를 들어 상기 분말을 임의로 추가적인 분산제와 함께 수 중에서 희석시키고 응집, 분무 건조 또는 압출에 의해 과립을 형성시킴으로써 보다 큰 과립으로 형성됨을 제외하고 습윤성 분말 과립과 유사하다.

하나의 실시태양에서, 상기 조성물은 2 내지 20 중량%의, ATCC 번호 PTA-122161로서 기탁된 바실러스 튜린지엔시스 RTI545 또는 그의 모든 식별 특징을 갖는 그의 돌연변이체; 약 80 내지 약 90 중량%의 말토덱스트린, 및 약 0.5 내지 약 2 중량%의 실리카를 포함할 수 있다.

또 다른 실시태양에서, 상기 조성물은 5 내지 60(예를 들어 40%)의, ATCC 번호 PTA-122161로서 기탁된 바실러스 튜린지엔시스 RTI545 또는 그의 모든 식별 특징을 갖는 그의 돌연변이체; 약 30 내지 약 50(예를 들어 40%) 중량%의 말토덱스트린, 약 10 내지 20(예를 들어 16%) 중량%의 칼슘 카보네이트 및 약 0.5 내지 약 5(예를 들어 4%) 중량%의 실리카를 포함할 수 있다.

또 다른 실시태양에서, 상기 조성물은 중량%를 기준으로:

5 내지 50%(예를 들어 40%)의, ATCC 번호 PTA-122161로서 기탁된 바실러스 튜린지엔시스 RTI545 또는 그의 모든 식별 특징을 갖는 그의 돌연변이체;

5 내지 15%(예를 들어 10%)의 말토덱스트린;

35 내지 45%(예를 들어 40%)의 칼슘 카보네이트; 및

5 내지 15%(예를 들어 10%)의 실리카

를 포함하는 습윤성 분말 또는 습윤성 과립 제형을 포함한다.

상기 조성물은 식물 종자 처리 또는 고랑내 적용에 유용할 수 있다. 종자 처리의 경우, 상기 조성물의 용액, 슬러리, 페이스트, 젤 또는 축축해진 토양을 표준 종자 처리 과정을 사용하여 종자에 적용할 수 있다. 상기 조성물을 처리되지 않은 종자 또는 본 명세서에 기재된 바와 같은 하나 이상의 추가적인 작물 보호제로 처리된 종자에 적용할 수 있다. 한편으로, 상기 조성물을 또한 종자 처리 또는 고랑내 적용을 위해 추가적인 작물 보호제와 혼합할 수도 있다.

고랑내 적용은 고랑내, 바람직하게는 식재시 작물 종자 부근의 토양을 처리하고 상기 제형을 상기 토양에 혼입시킴을 포함할 수 있다. 고랑내 적용은 액체 또는 고체 제형을 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 상기 고랑내 적용은 상기 조성물을 폼으로 적용함을 포함한다.

실시태양들에서, 상기 제형화된 조성물은 사용전에 희석되는 농축물의 형태일 수 있지만, 사용준비가 된 제형을 또한 제조할 수 있다. 상업적인 제품은 농축물로서 제형화되는 것이 바람직한 반면, 최종 사용자는 통상적으로 토양 또는 식물에 적용하기 위해 희석 제형을 사용할 것이다. 상기 희석물은 예를 들어 물, 액체 비료, 미량영양소, 생물학적 유기체, 오일 또는 용매로 제조될 수 있다.

실시태양들에서, 상기 제형화된 조성물은 식물성 또는 동물 기원의 오일, 무기 오일, 상기와 같은 오일의 알킬 에스터 또는 상기와 같은 오일 및 오일 유도체의 혼합물을 포함하는 첨가제를 추가로 포함할 수 있다. 본 발명에 따른 조성물 중의 오일 첨가제의 양은 분무 혼합물을 기준으로 일반적으로 0.01 내지 10%이다. 예를 들어, 상기 오일 첨가제를 상기 분무 혼합물이 제조된 후에 목적하는 농도로 분무 탱크에 첨가할 수 있다. 실시태양들에서, 오일 첨가제는 무기 오일 또는 식물성 기원의 오일, 예를 들어 대두 오일, 유채 오일 또는 해바라기 오일, 유화된 식물성 오일, 식물성 기원 오일의 알킬 에스터, 예를 들어 메틸 유도체, 또는 동물 기원의 오일, 예를 들어 어유 또는 우지를 포함할 수 있다.

실시예

하기의 실시예들을 본 명세서에 개시된 발명의 요지의 전형적인 실시태양들을 실시하기 위해 당해 분야의 통상적인 숙련가에게 안내를 제공하고자 포함시켰다. 본 발명 및 당해 분야의 일반적인 기술 수준에 비추어, 숙련가들은 하기의 실시예들이 단지 예시를 의도하며 다수의 변화, 변형 및 변경을 본 명세서에 개시된 발명의 요지의 범위로부터 이탈됨 없이 사용할 수 있음을 알 것이다.

실시예 1

서열 분석을 통한 세균 단리물 바실러스 튜린지엔시스 RTI545의 동정

본 명세서에서 RTI545로서 표시되는 식물 관련된 세균 균주를 미국 노쓰 캐롤라이나주 톨 페스큐 그래스 주변의 근권 토양으로부터 단리하였다. 상기 균주 RTI545의 게놈을 서열분석하고, 상기 RTI545 균주의 16S rRNA(서열번호 1) 및 rpoB(서열번호 2) 유전자의 서열들을 BLAST를 사용하여 NCBI 및 RDP 데이터베이스의 다른 공지된 세균 균주들의 서열과 비교하였으며; 상기 비교는 균주 RTI545를 바실러스 세레우스/튜린지엔시스/안트라시스 계통군내에 놓았다. 상기 RTI545 균주 및 관련된 바실러스 종들의 추가적인 계통발생적 분석을 상기 rpoB 유전자에 대한 부트스트랩 일치 가계도(1000 반복)를 사용하여 수행하였다. 상기 rpoB 유전자에 대한 일치 가계도를 도 2에 도시한다. 도 2에서 알 수 있는 바와 같이, 상기 RTI545 균주는 상기 바실러스 세레우스/튜린지엔시스/안트라시스 계통군에서 별도의 가지를 형성한다. DNA 수준에서 상기 rpoB 유전자에 대한 서열의 차이는 RTI545가 상기 바실러스 세레우스/튜린지엔시스/안트라시스 계통군내에 있는 신규의 균주임을 가리킨다. 추가적인 서열 분석은 상기 RTI545 균주가 바실러스 튜린지엔시스 균주에서 종종 발견되는 결정 단백질에 대한 유전자(cry 유전자)가 없음을 밝혀내었다.

또한, MUMmer- 및 BLASTn-기반 평균 뉴클레오타이드 일치성(ANI) 계산(문헌[Richter M, & Rossellσ-Mσra R (2009) Shifting the genomic gold standard for the prokaryotic species definition. Proc Natl Acad Sci USA 106(45):19126-31]) 및 UNIPEPT 분석(문헌[Mesuere, B., Debyser, G., Aerts, M., Devreese, B., Vandamme, P. and Dawyndt, P. (2015), The Unipept metaproteomics analysis pipeline. Proteomics, 15: 1437-1442. doi:10.1002/pmic.201400361])을 모두 사용하는 전체 게놈 서열 분석을 수행하여 상기 RTI545 균주를 상기 바실러스 종들의 밀접하게 관련된 균주와 비교하여 그의 계통발색적 분류를 확인하였다. 상기 MUMmer 및 BLASTn-기반 ANI 산정의 결과를 하기 표 I에 나타낸다. 상기 ANI 및 UNIPEPT(데이터 도시 안 됨) 분석은 모두 RTI545와, 바실러스 튜린지엔시스 및 바실러스 세레우스 모두로서 나타낸 균주들의 공개된 서열간의 상당한 정도의 서열 유사성을 밝혀내었다. 인식된 유형의 균주에 대해 최고의 서열 유사성은 상기 인지된 유형 균주 바실러스 튜린지엔시스 베를리너 ATCC10792에 대한 것이었다. 다시, 상기 앞서 공개된 서열들로부터의 전체 게놈 서열의 차이는 RTI545가 상기 바실러스 세레우스/튜린지엔시스/안트라시스 계통군내에 있는 신규의 바실러스 튜린지엔시스 균주임을 가리킨다.

[표 I]

상기 RTI545 균주는 특허 절차를 목적으로 미생물 기탁의 국제적인 인정에 대한 부다페스트 조약하에서 2015년 5월 12일에 미국 버지니아주 머내서스 소재의 아메리칸 타입 컬쳐 컬렉션(ATCC)에 기탁되었으며 특허 수탁번호 PTA-122161을 갖는다.

RTI545 게놈 16S rDNA 1(서열번호 1)

RTI545 rpoB 유전자(서열번호 2)

실시예 2

바실러스 튜린지엔시스 RTI545 단리물의 항균 성질

주요 식물 병원체들에 대한 균주 RTI545의 길항작용 능력을 플레이트 분석에서 측정하였다. 식물 진균성 병원체에 대한 길항작용의 평가를 위한 플레이트 분석을, 상기 세균 단리물 및 병원성 진균을 3 내지 4 ㎝ 거리로 869 아가 플레이트상에 나란히 생육시킴으로써 수행하였다. 플레이트들을 실온에서 배양하고 생육 양상, 예를 들어 생육 억제, 니치 점유, 또는 효과 없음에 대해서 2주일까지 규칙적으로 조사하였다. 세균성 병원체에 대한 길항성질의 선별의 경우에, 상기 병원체들을 먼저 869 아가 플레이트상에 론으로서 확산시켰다. 후속적으로, RTI545 배양물의 20 ㎕ 분액을 상기 플레이트들에 스폿팅하였다. 플레이트들을 실온에서 배양하고 RTI545가 적용된 위치 주변의 론 중의 억제 대역에 대해 2주일까지 규칙적으로 조사하였다. 상기 길항작용 활성의 요약을 하기 표 II에 나타낸다.

[표 II]

실시예 3

바실러스 튜린지엔시스 RTI545 단리물의 표현형 특성

상기 길항성질 외에, 다양한 표현형 특성을 또한 상기 바실러스 튜린지엔시스 RTI545 균주에 대해서 측정하였으며 데이터를 하기 표 III에 나타낸다. 상기 분석을 하기 표 III에서 본문에 기재된 과정에 따라 수행하였다.

[표 III]

산 및 아세토인 시험.

20 ㎕의 스타터 배양물 풍부 869 배지를 1 ㎖ 메틸 레드 - 보게스 프로스카우어(Voges Proskauer) 배지(시그마 알드리치(Sigma Aldrich) 39484)로 옮겼다. 배양물을 30 ℃ 200 rpm에서 2일간 배양하였다. 0.5 ㎖ 배양물을 옮기고 50 ㎕ 0.2 g/ℓ 메틸 레드를 가하였다. 붉은색은 산 생성을 가리켰다. 남은 0.5 ㎖ 배양물을 0.3 ㎖ 5% 알파-나프톨(시그마 알드리치 N1000)과 혼합한 다음 0.1 ㎖ 40% KOH와 혼합하였다. 샘플을 30분 배양 후에 해석하였다. 붉은색의 발생은 아세토인 생성을 가리켰다. 산 및 아세토인 시험 모두의 경우 접종되지 않은 배지를 음성 대조용으로서 사용하였다(문헌[Sokol et al., 1979, Journal of Clinical Microbiology. 9: 538-540]).

인돌-3-아세트산.

20 ㎕의 스타터 배양물 풍부 869 배지를, 0.5 g/ℓ 트립토판(시그마 알드리치 T0254)이 보충된 1 ㎖ 1/10 869 배지로 옮겼다. 배양물을 30 ℃, 200 RPM에서 암실에서 4-5일간 배양하였다. 샘플을 원심분리시키고 0.1 ㎖ 상등액을 0.2 ㎖ 살코우스키(Salkowski) 시약(35% 과염소산, 10 mM FeCl₃)과 혼합하였다. 암실에서 30분간 배양 후에 분홍색을 생성시킨 샘플을 IAA 합성에 대해 양성으로 기록하였다. IAA(시그마 알드리치 I5148)의 희석물을 양성 비교로서 사용하였으며; 접종되지 않은 배지를 음성 대조용으로서 사용하였다(문헌[Taghavi, et al., 2009, Applied and Environmental Microbiology 75: 748-757]).

포스페이트 용해 시험.

세균을 리터당 10 g 글루코스, 5 g 칼슘 트라이포스페이트, 0.2 g 칼륨 클로라이드, 0.5 g 암모늄 설페이트, 0.2 g 나트륨 클로라이드, 0.1 g 마그네슘 설페이트 헵타하이드레이트, 0.5 g 효모 추출물, 2 ㎎ 망간 설페이트, 2 ㎎ 철 설페이트 및 15 g 아가, pH 7(오토클레이빙됨)로 이루어지는 피코브스카야(Pikovskaya)(PVK) 아가 배지상에 도말하였다. 투명 대역은 포스페이트 용해 세균을 가리켰다(문헌[Sharma et al., 2011, Journal of Microbiology and Biotechnology Research 1: 90-95]).

키티나제 활성.

10% 습윤 중량 콜로이드 키틴을 변형된 PVK 아가 배지(리터당 10 g 글루코스, 0.2 g 칼륨 클로라이드, 0.5 g 암모늄 설페이트, 0.2 g 나트륨 클로라이드, 0.1 g 마그네슘 설페이트 헵타하이드레이트, 0.5 g 효모 추출물, 2 ㎎ 망간 설페이트, 2 ㎎ 철 설페이트 및 15 g 아가, pH 7(오토클레이빙됨))에 가하였다. 세균을 상기 키틴 플레이트상에 도말하였으며; 투명 대역은 키티나제 활성을 가리켰다(문헌[N. K. S. Murthy & Bleakley., 2012. "Simplified Method of Preparing Colloidal Chitin Used for Screening of Chitinase Producing Microorganisms". The Internet Journal of Microbiology. 10(2)]).

프로테아제 활성.

세균을 10% 우유가 보충된 869 아가 배지상에 도말하였다. 투명 대역은 프로테아제 활성을 암시하는, 단백질을 절단하는 능력을 가리켰다(문헌[Sokol et al., 1979, Journal of Clinical Microbiology. 9: 538-540]).

실시예 4

옥수수 종자 발아에 대한 바실러스 튜린지엔시스 단리물 RTI545의 효과

옥수수 종자 발아에 대한 세균 단리물 RTI545의 영양세포의 효과를 하기에 기재된 바와 같이 측정하였다.

RTI545의 영양세포에 대한 분석을 옥수수 종자를 사용하여 수행하였다. RTI545를 동결된 스톡으로부터 869 배지상에 도말하고 30 ℃에서 밤새 생육시켰다. 단리된 콜로니를 상기 플레이트로부터 채집하고 20 ㎖의 869 브로쓰를 함유하는 50 ㎖ 원추형 튜브에 접종하였다. 상기 배양물을 30 ℃ 및 200 RPM에서 진탕시키면서 밤새 배양하였다. 상기 밤샘 배양물을 10,000 RPM에서 10분간 원심분리시켰다. 상등액을 버리고 펠릿을 MgSO₄에 재현탁시켜 세척하였다. 상기 혼합물을 다시 10,000 RPM에서 10분간 원심분리시켰다. 상등액을 버리고 펠릿을 변형된 호글랜드(Hoagland) 용액에 재현탁시켰다. 이어서 상기 혼합물을 희석시켜 초기 농도를 제공하였다. 상기로부터, 2x10⁷ cfu/㎖의 최종 농도를 갖는 상기 RTI545 배양물의 희석물을 제조하였다. 옥수수에 대한 종자 발아 실험을 위해서, 식물 생장 용기를 RTI545 또는 대조용으로 표지하였다. 10개의 종자를 단일 용기에 넣었다. 2x10⁷ cfu/㎖의 농도를 갖는 10 ㎖의 상기 RTI545 현탁액을 상기 용기에 가하고 종자를 21 ℃, 암실에서 배양하였다. 대조용 용기는 종자, 및 세균이 첨가되지 않은 변형된 호그랜드 용액을 함유하였다. 상기 용기의 상을 10 내지 12일 후에 촬영하였다. 도 3A 내지 3B는 상기 RTI545 균주의 존재(도 3A) 및 부재(도 3B)하에서 12일 생장 후의 옥수수 묘목 상이다. 상기 도면들로부터 알 수 있는 바와 같이, 상기 RTI545 균주의 존재는 현저한 생장 이점을 생성시켰다.

실시예 5

옥수수에서 바실러스 튜린지엔시스 RTI545 단리물의 생장 효과

옥수수에서 조기 식물 생장 및 활력에 대한 세균 단리물의 적용 효과를 측정하였다. 상기 실험을, 실온에서 진탕하에 10⁸ CFU/㎖의 세균의 현탁액 중에 2일간 표면 살균된 발아된 옥수수 종자를 접종함으로써 수행하였다(대조용을 또한 세균 없이 수행하였다). 후속적으로, 상기 접종된 종자를, pH 6.5로 제한된 프로믹스(PROMIX) BX가 충전된 1 갤론 포트에 식재하였다. 각각의 처리에 대해서 9개의 포트를 단일 옥수수 종자로 시딩하였다. 포트를 온실에서 14/10시간 명암 주기로 22 ℃에서 배양하고 필요에 따라 주당 2회 물을 댔다.

식재 후 42일째에, 식물을 수확하고 상기 식물의 신선 및 건조 중량을 측정하고 접종되지 않은 대조용 식물에 대해 획득된 데이터에 비교하였다. 상기 옥수수 싹이 튼 바이오매스의 습윤 및 건조 중량을 42일 생장 후에 측정하였다. 상기 옥수수 싹튼 바이오매스의 습윤 중량은, 접종되지 않은 대조용의 147.6 g과 같은 습윤 중량에 대해 상기 바실러스 튜린지엔시스 RTI545 균주로 접종된 식물의 173.7 g과 같았으며, 이는 상기 접종되지 않은 대조용에 비해 17.7%의 습윤 중량이 증가한 것이다. 상기 옥수수 싹튼 바이오매스의 건조 중량은, 접종되지 않은 대조용의 12.4 g과 같은 건조 중량에 대해 상기 바실러스 튜린지엔시스 RTI545 균주로 접종된 식물의 16.0 g과 같았으며, 이는 상기 접종되지 않은 대조용에 비해 29%의 건조 중량이 증가한 것이다. 상기 습윤 및 건조 바이오매스 모두의 현저한 증가로부터 알 수 있는 바와 같이, 상기 RTI545 균주의 존재는 상당한 생장 이점을 생성시켰다.

실시예 6

곤충에 대한 바실러스 튜린지엔시스 RTI545 단리물의 활성

서부 노린재(WPB), 라이구스 헤스페루스(Lygus hesperus), 및 남부 옥수수 뿌리벌레(SCRW), 디아브로티카 운데심푼크타타 호와르디(Diabrotica undecimpunctata howardi)를 길항하는 상기 바실러스 튜린지엔시스 RTI545 균주의 능력을 시험관내 분석에서 평가하였다.

상기 분석을 위해서 바실러스 튜린지엔시스 RTI545를 5 ㎖의 869 배지 중에서, 200 rpm, 및 30 ℃에서 7시간 동안 생육시켰다. 후속적으로, 상기 예비-배양물의 작은 분취량을 869 배지에 100배 희석하고 150 rpm, 30 ℃에서 17시간 동안 생육시켰다. 전체 세균 배양물을 모든 생물분석에 사용하였다. 생물학적 대조용으로서, 바실러스 튜린지엔시스 서브스페시즈 쿠르스타키 HD-1을 동일한 프로토콜에 따라 사용하였다.

WPB에 대한 길항작용에 대해서, 바실러스 튜린지엔시스 RTI545를 직접 분무, 선택 피딩, 및 비-선택 피딩 분석에서 대조용: 869 배지 블랭크, 화학적 대조용 아세페이트(ACEPHATE) 97UP(A.I. = 97% O,S-다이메틸 아세틸포스포아미도티오에이트), 생물학적 대조용 HD-1, 및 처리되지 않은 대조용과 함께 평가하였다. 예상된 바와 같이, 상기 869 배지 블랭크 또는 HD-1 처리의 경우 현저한 사망률(직접 분무 및 비-선택 피딩 분석) 또는 퇴치(선택 피딩 분석)가 관찰되지 않은 반면, 상기 화학적 대조용은 상기 WPB를 죽이고(직접 분무 및 비-선택 피딩 분석) 퇴치하였다(선택 피딩 분석). 바실러스 튜린지엔시스 RTI545는 적용시 직접 분무 및 비-선택 피딩 분석 모두에서 WPB에 대해 현저한 사망률을 제공하지 않았지만; 뜻밖에도, RTI545는 WPB를 선택 분석 아레나에 둔 후 124시간째에 퇴치 양상을 나타내었다. 구체적으로, 상기 WPB를 처리된 및 비-처리된 먹이 소스를 함유하는 용기에 두었을 때, WPB는 상기 비-처리된 먹이 소스에서만 먹이를 먹는 것으로 관찰되었다(데이터 도시 안 됨).

SCRW 유충에 대한 길항작용에 대해서, 바실러스 튜린지엔시스 RTI545 세포를 옥수수 묘목의 선택 피딩 분석에서 평가하고 수 대조용과 비교하였다. 상기 수 대조용과 비교되는 추가적인 처리는 i) 바실러스 튜린지엔시스 서브스페시즈 쿠르스타키 HD-1(HD-1), ii) 화학적 대조용 캡처 LFR(A.I. = 17.15% 바이펜트린), 및 iii) 869 배지였다. 여과지를 절반으로 잘라 각 조각을 100 ㎜ 페트리 디쉬내에 아래로 테이핑하여, 상기 여과지의 2개 절반이 각각 접촉하지 못하게 하였다. 총 0.65 ㎖ 부피의 처리를 상기 처리된 여과지 절반에 적용하였다. 탈이온수를 상기 처리되지 않은 쪽에 적용하였다. 상기 처리되지 않은 대조용의 경우, 상기 여과지의 양쪽 절반을 오직 물로만 처리하였다. 하나의 발아된 옥수수 종자를 각각의 축축한 여과지 절반상에 놓았다. 10초-령 유충을 처리된 및 처리되지 않은 여과지 사이의 중심선에 두었다. 처리당 3개의 반복이 존재하였다. 디쉬를 파라필름(PARAFILM)으로 밀봉하고 평가에 앞서 6일간 실온에서 어두운 환경에서 유지시켰다. 죽은 유충의 장소 및 수를 기록하였다. 여과지의 각 섹션상의 유충의 비율을 제곱근 변환시켜 분포를 표준화하고 ANOVA로 통계 분석하였다. 사후 터키 HSD 검정을 사용하여 처리되지 않은 및 처리된 여과지간의 차이가 유의수준(α = 0.10)인지를 측정하였다.

상기 6일 후 RTI545 세포에 대한 플레이트 분석의 상을 도 4에 도시하며, 상기 플레이트 분석 전부로부터의 데이터를 하기 표 IV에 요약한다. 상기 WPB에 대한 분석에서 관찰되는 바와 같이, 상기 RTI545는 뜻밖에도 상기 SCRW 유충을 퇴치하지만 죽이지는 않았다. 도 4 및 표 IV에서 알 수 있는 바와 같이, 상기 RTI545 배양물은 상기 SCRW 유충의 퇴치에 탁월하였고; 상기 유충의 100%가 상기 여과지의 수-처리된 절반상에 존재하였으며 상기 RTI545 처리된 여과지상에는 상기 유충이 없었다. 대조적으로, 상기 유충은 HD-1 균주에 대해 처리 및 수 대조용 사이에 통계학적으로 균일하게 분할되었다. 상기 바이펜트린 화학적 대조용은 상기 캡처 LFR-처리된 여과지상에 유충의 약 19%가 존재하게 하였다. 상기 결과는 상기 RTI545 균주가 뜻밖에도 상기 옥수수 종자로부터 상기 곤충을 퇴치함에 있어서 상기 화학적 살충제보다 우수하였지만, 상기 곤충을 죽이지는 못했음을 보인다.

[표 IV]

옥수수 묘목을 사용하는 SCRW 유충에 대한 선택 피딩 분석을 HD-1 균주 및 RTI545에 대해 반복하였으며, HD-1과 달리 RTI545는 결정 단백질의 생성 유전자("Cry"이라 나타냄)를 함유하지 않는다. SCRW 유충에 의한 옥수수 묘목의 시험관내 선택 플레이트 피딩 분석을 사용하여 퇴치를 측정하였으며 이를 상기 플레이트의 처리되지 않은 쪽의 SCRW 유충의 백분율로서 72시간 후에 기록하였다. 퇴치가 없는 경우에, 상기 플레이트의 처리된 및 비-처리된 절반 모두상에 균등한 50% 분포가 예상될 수 있으며, 이는 0% 퇴치를 가리킨다. 상기 분석의 결과를 하기 표 V에 나타낸다. 상기 실험에서, 상기 바실러스 튜린지엔시스 RTI545 및 바실러스 튜린지엔시스 서브스페시즈 쿠르스타키 HD-1(HD-1)을 상기 분석에서 3일 후에 수 대조용과 비교하여 평가하였다. 다시, 상기 RTI545 배양물은 상기 SCRW 유충의 퇴치에 탁월하였고; 상기 여과지의 수-처리된 절반상에서는 유충의 96%가 존재하였으며 상기 RTI545 세포를 함유하는 절반상에서는 단지 4%만이 존재하였다. 대조적으로, 상기 유충은 상기 HD-1 균주의 경우 처리 및 수 대조용 사이에서 통계학적으로 균일하게 분할되었다(상기 플레이트의 처리되지 않은 쪽에 53%).

[표 V]

옥수수 묘목을 사용하는 SCRW 유충에 대한 선택 피딩 분석을 또한 반복하여 RTI545를 또 다른 바실러스 튜린지엔시스 균주 FD30 및 카노사민과 비교하였다. 게놈 서열 데이터를 근거로, 추정적인 카노사민 생합성 경로가 FD30에서가 아닌 RTI545에서 발견된다. SCRW 유충에 의한 옥수수 묘목의 시험관내 선택 플레이트 피딩 분석을 사용하여 퇴치를 측정하였으며 이를 상기 플레이트의 비-처리된 쪽의 SCRW 유충의 백분율로서 72시간 후에 기록하였다. 퇴치가 없는 경우에, 상기 플레이트의 처리된 및 비-처리된 절반 모두상에 균등한 50% 분포가 예상될 수 있으며, 이는 0% 퇴치를 가리킨다. 상기 분석의 결과를 하기 표 VI에 나타낸다.

[표 VI]

표 VI에 요약된 바와 같이, RTI545는 처리된 여과지와 비-처리된 여과지사이의 중심선에 놓일 때 SCRW 유충에 퇴치 효과를 제공한다. FD30(바실러스 튜린지엔시스)은 동일한 전체적인 효과를 갖지 않는다. 카노사민을 상기 FD30 균주와 병용했을 때 SCRW 회피가 관찰되었다. 2개의 별도의 생물분석에서, 카노사민에 의한 퇴치 효과는 0.1 ㎍/㎖ 내지 100.0 ㎍/㎖의 모든 희석비에서 24시간째에 관찰되었다. 하나의 시험에서, 10 및 100 ㎍/㎖로 카노사민 처리된 여과지는 SCRW에 대해 ≥80% 회피 반응을 제공하였다. 3일 째에, 카노사민 처리된 쪽에 놓인 옥수수에서 최소의 피딩 손상이 관찰되었다. 환언하면, FD30은 3일 째에 상기 처리된 여과지 및 처리되지 않은 여과지에 놓인 유충의 수에 있어서 비통계적인 20% 차이를 가졌으며; 옥수수에 대한 주목할만한 피딩 손상이 상기 FD30 선택 분석의 양쪽에서 발견되었다. 두 번째 시험에서, 30.0 ug/㎖의 카노사민으로 처리된 여과지는 5일까지 완전한 퇴치를 제공하였다(데이터 도시 안됨). 이들 결과를 근거로, WPB 및 SCRW와 같은 곤충종을 퇴치하는 RTI545의 능력은 그의 카노사민 생성에 기인할 수 있다.

실시예 7

선충에 대한 바실러스 튜린지엔시스 RTI545 단리물의 활성

실시예 6의 결과는 곤충종에 대한 TRI545의 퇴치 활성이 카노사민과 같은 화합물의 생성에 기인할 수 있음을 암시한다. 유사하게, 선충에 대한 RTI545의 활성이 또한 상기 균주에 의해 생성된 화합물(들)에 기인할 수 있다. 아가 플레이트상에서의 선충 주화성 분석을 하기에 기재한 바와 같이 수행하여 시험관내에서 상이한 농도의 카노사민 및 RTI545 상등액에 대한 뿌리혹(RKN) 선충 유충(J2)의 반응을 평가하였다.

상기 시험 아레나를 도 6에 개략적으로 도시한다. 9-㎝ 직경 페트리 디쉬를 15 ㎖ 0.75% 피타젤(0.1% MgSO₄.7H₂O 포함)로 충전하였다. 마그네슘 설페이트 헵타하이드레이트 MgSO₄.7H₂O를, 현미경하에서 선충 자국을 관찰할 수 있도록, 수 아가 대신에 사용하였다. 대략 50 ㎕의 용액을 수용할 수 있는 0.5 ㎝ 직경의 웰을 중심으로부터 2 ㎝ 떨어져 상기 디쉬의 반대편에 만들었다. 상기 시험 샘플을 상기 웰에 적용하고 상기 디쉬에 뚜껑을 닫아 방치하여 1시간 동안 확산되게 하였으며, 따라서 상기 웰 주변에 구배가 확립될 수 있었다. 이어서, 5 ㎕의 멸균 증류수 중에 현탁된 75-100 J₂ 단계 뿌리혹 선충을 피펫으로 상기 플레이트의 중심 1.5 ㎝-직경 원에 놓았다. 상기 수 현탁액의 표면 장력이 상실되었을 때, 상기 디쉬를 뚜껑으로 덮고 25 ℃, 암실에서 1 내지 4시간 동안 평평한 플랫폼상에서 배양하였다. 배양 후에 상기 플레이트를, 셋업 후 2h, 3h 및 5h 째에 채점을 위해 선충 이동이 멈추도록 4 ℃로 옮겼다. 각각의 시험 물질에 대해 3회 반복을 수행하였다.

채점을 위해서, 상기 시험 아레나를 16개 대역으로 분할하였으며, 도 6A에 도시된 바와 같이 유인 대역은 1-8로 표시하고 퇴치 대역은 a-h로 표시하였다. 상기 시험 물질로 유인된 선충은 숫자(유인) 대역으로 이동하는 경향이 있었으며, 그 결과 상기 웰들의 배향에 평행한 축을 따라 군집하였다. 퇴치된 선충들은 문자(퇴치) 대역으로 이동하는 경향이 있었을 것이고, 그 결과 상기 웰들의 배향에 수직인 축을 따라 군집하였을 것이다. 주화성 인자(Cf)를, 상기 유인성 대역 중의 선충의 총수를 상기 퇴치성 대역 중의 선충의 총수로 나누어 계산하였다. 2 초과의 Cf는 상기 선충에 대한 유인을 의미하는 반면, 0.5 미만은 퇴치를 가리키고, 0.5 내지 2는 중립으로 간주되었다. 상기 결과를 표 VII에 나타낸다. 상기 주화성 생물분석에서 모든 평가 시점들에서 증류수가 중립인 것으로 밝혀졌다(0.5 내지 2.0의 Cf). 1% 아세트산은 상기 시험의 초기로부터 3h 및 5h 째에 RKN J2에 대해 퇴치를 보였다(Cf<0.5). 2h의 초기 평가 시점에서 아세트산에 대한 Cf는, 아마도 상기 피타젤 배지내로의 상기 화학물질의 느린 확산 및/또는 상기 화학물질에 대한 지연된 선충 반응의 결과로서, 중립이었다(데이터 도시 안 됨). 도 6B는 100 ㎍/㎖로 시험된 카노사민의 분석 사진이며, 여기에서 선충 위치를 나타내는 점들은 중립 분포를 가리킨다. 도 6C는 100% 농도로 시험된 RTI545 상등액의 분석 사진이며, 여기에서 선충 위치를 나타내는 점들은 퇴치 분포를 가리킨다.

[표 VII]

3개의 시험된 모든 카노사민 농도(1, 10 및 20 ㎍/㎖)는 상기 분석에서 퇴치 성질을 나타내지 않았다. 상기 Cf 인자는 모든 시험된 카노사민 비율 및 모든 시험된 시점에서 일관되게 0.5를 초과하였다. 시험된 RTI545 상등액의 모든 비율(1%, 10%, 25%, 50% 및 100%) 및 869 배지의 모든 비율(10%, 25%, 50% 및 100%)은 상기 분석 개시 2h로부터 출발하여 퇴치성(Cf<0.5)으로서 작용한다. J2 선충의 상기와 같은 빠른 반응은 상기 선충 양상을 담당하는 인자가 쉽게 확산되어 구배를 확립시킴을 암시한다. 상기 869 배지의 경우에 시험된 비율에 대한 명백한 용량 반응은 없었다. 그러나, RT545 상등액의 경우에, 시험된 비율에 대한 명백한 반응이 관찰되었다: 보다 높은 상등액 비율은 보다 강한 선충의 반발(보다 낮은 Cf)을 생성시켰다. 그러나, 상기 RTI545 퇴치성 결과는 상기 분석의 869 배지의 강한 활성으로 인해 비-결론적이다.

상기 선충에 대한 카노사민의 퇴치성의 부재는 곤충 분석에 대해 관찰된 경우와 대조적이다. RTI545에 대해 관찰된 선충 퇴치성은 카노사민보다는 일부 다른 인자에 기인하는 듯하다.

RTI545(바실러스 튜린지엔시스) 균주의 밤샘 배양 동안 생성된 화합물 및 순수한 화합물 카노사민을 뿌리혹 선충(RKN)난(멜로이도지네 인코그니타/하플라(Meloidogyne incognita/hapla))의 부화에 대한 상기 화합물들의 잠재적인 효과를 특성화하기 위해서 시험관내에서 평가하였다.

세균 상등액:

상기 분석을 위한 상등액을 수득하기 위해서, 1 루프(약 10 ㎕)의 상기 RTI545 균주를 30 ℃, 200 rpm에서 5 ㎖의 869 배지에서 16h 동안 생육시켰다. 다음날, 600 ㎚에서 1:100 희석물의 광학 밀도(OD)를 측정하여 발아 플라스크의 접종에 필요한 부피를 평가하였다. 상기 세균 배양을 250 ㎖ 발효 플라스크 중의 25 ㎖의 869 배지에서 0.01의 초기 OD로 시작하였다. 세균을 30 ℃, 200 rpm에서 밤새(16h 동안) 생육시켰다. 2 ㎖의 세균 배양물을, OD 및 콜로니 형성 단위(CFU)를 측정하기 위해 남겨두었다. 나머지 배양물을 원심분리시키고(2500 rpm, 15분) 상등액을 0.22 ㎛ 필터를 통해 필터-멸균하였다. 상기 부화 분석을 상기 상등액 수집으로부터 4h 이내에 개시하였다. 상기 상등액을 생물분석이 개시될 때까지 4 ℃에서 유지시켰다.

카노사민(10 ㎎)을 1 ㎖의 탈이온수에 용해시켜 10 ㎎/㎖의 모액을 수득하였다. 200 ㎍/㎖의 농도를 수득하기 위해서, 20 ㎕의 농축된 모액(10 ㎎/㎖)을 990 ㎖의 수에 가하였다. 이어서 연속 희석을 수행하여 각각 20 ㎍/㎖ 및 2 ㎍/㎖의 카노사민 농도를 생성시켰다.

뿌리혹 선충(멜로이도지네 인코그니타 및 멜로이도지네 하플라)의 혼합된 배양물을 사용하였다. 선충난을 블리칭에 의해 토마토 뿌리로부터 추출하고 Opti-prep 원심분리 단계를 사용하여 세정한 다음 물로 2회 세척하였다. 상기 부화 분석을 셋업하기 전에, 초기(배아를 볼 수 있는 난) 및 말기 난(내부에 분화된 유충이 있는 난; J1 또는 J2 단계)의 백분율을, 상기 난들을 현미경하에서 카운트하여 확립시켰다. 오직 신선한 난(상기 분석의 개시 당일에 수집됨)만을 상기 생물분석에 사용하였다.

상기 분석을 24-웰 조직 배양 플레이트에서 수행하였다. 각 웰에 2% 메틸 셀룰로스 중의 75 ㎕의 난 용액(웰당 대략 100개 난)을 75 ㎕의 항생제 용액(300 ㎎/L 스트렙토마이신 + 300 ㎎/L 페니실린) 및 150 ㎕의 각 처리와 혼합하였다. 항생제를 멸균 증류수에 현탁시켰다. 시험 플레이트 중의 항생제의 최종 농도는 75 ㎎/L의 페니실린 및 75 ㎎/L의 스트렙토마이신이었다. 모든 처리는 2% 메틸 셀룰로스를 함유하였다(RKN 난을 처리에 노출하기 전에 메틸 셀룰로스에 현탁시켰다). 메틸 셀룰로스의 첨가는 각 처리에 동일한 수의 접종물의 첨가 정확성을 증가시킨다. 상기 처리를 6회 반복으로 셋업하였다. 각 플레이트를 덮고, 알루미늄 호일로 감싸 25 ℃에서 배양기 세트에 넣었다. 각 웰 중 부화된 유충의 수를 부화 개시로부터 7일 및 14일째에 입체현미경하에서 카운트하였다. 각각의 시점 및 처리에 대해서, 부화 퍼센트를 하기 식에 따라 계산하였다:

부화% = (웰 중 J2의 수)/(분석 시작시 웰 중에 존재하는 난의 수) x 100%

7 및 14일 후 뿌리-혹 선충난의 평균 부화 퍼센트를 표 VIII에 나타낸다. 모든 처리는 오염을 방지하기 위해 항생제(75 ㎎/L의 페니실린 및 75 ㎎/L의 스트렙토마이신)가 보충되었다. 데이터는 6회 반복으로부터의 평균 ± 평균의 표준 편차이다.

[표 VIII]

상기 분석을 위해 수집된 초기 및 말기 난의 백분율은 각각 41% 및 59%였다. 항생제, 보다 낮은 비율의 아그리멕(Agrimek)(등록상표)(0.1 ppm) 및 869 배지 블랭크는 난 부화에 그다지 영향을 미치지 않았다. 화학 표준 아그리멕(등록상표)은 시험관내에서 난 부화를 억제시켰다. 1 ppm의 비율은 14일 후에 72% 난 부화 억제를 야기하였다. 임의의 비율의 RTI545 상등액 및 높은 비율의 아그리멕(등록상표)(1 ppm)에서의 부화는 수 대조용에서보다 현저하게 낮았다. 상기 시험된 RTI545 비율(2.5% 내지 50%) 중에서 용량 반응은 관찰되지 않았을 뿐만 아니라, 이들 비율은 화학 표준 아그리맥(등록상표)에 필적할만하였다. 대조적으로, 다양한 농도의 카노사민(1, 10 및 100 ㎍/㎖)에 노출된 난의 부화 비율은 수 대조용에서보다 더 높았다.

869 배지상에서 밤새 배양으로부터의 RTI545 상등액은 모든 시험된 비율에서 난 부화를 현저하게 억제하였다. RTI545 상등액을 동일한 배지상에서 생육된 3일 배양물로부터 수집시 유사한 결과가 관찰되었다(데이터 도시 안 됨). 상기 난 부화 억제를 담당하는 화합물들은 밤새 및 3일간 생육된 배양물 중에 존재한다.

카노사민은 난 부화에 양의 효과를 가졌다. 카노사민에 노출된 난의 부화 비율은 7일 후 수 대조용에서 배양된 난의 부화 비율보다 80%까지 더 높았다. 이들 결과는 카노사민의 생화학적 성질과 일치한다. 카노사민은 키틴 합성 억제제로서 동정되었다(문헌[Janiak and Milewski, 2001]). 선충 난각은 키틴으로 구성되며 난 부화는 키틴 분해를 수반하고, 반대 과정은 키틴 합성이다.

임의의 이론에 얽매이고자 하는 것은 아니지만, 상기 분석들로부터의 결과는 상기 RTI545의 항-선충 활성이 카노사민에 기인하는 것은 아님을 암시한다. 상기 퇴치성 및 난 부화 분석에서 RTI545 상등액 및 869 배지 추출물의 상이한 양상은 RTI545가 항-선충 수행성능을 제공하는 아직까지 확인되지 않은 화합물을 생성시킴을 암시한다.

실시예 8

옥수수 및 대두 종자를 바실러스 튜린지엔시스 RTI545로 처리함에 의한 생장 및 수율에 대한 효과

옥수수 및 대두 종자를 화학적 살충제와 함께 바실러스 튜린지엔시스 RTI545의 포자로 처리함으로써 곤충 압박하에서 생장 및 수율에 대한 효과를 측정하는 실험을 수행하였다.

생장, 수율, 및 옥수수 해충 방아벌레 및 종자 구더기의 방제 중 하나 이상에 대한 효과를 미국 위스콘신주에서 실지 시험으로 측정하였다. 방아벌레 존재하에서의 조기 식물 생장에 대한 효과를 측정하기 위한 추가적인 실험을 온실에서 수행하였다. 상기 실험들을 하기에 기재하는 바와 같이 수행하였다.

제형:

수 중 바실러스 튜린지엔시스 RTI545 포자 농축물(1.0x10¹⁰ cfu/㎖)을 1.0x10⁶ cfu/종자의 양으로 적용하였다.

맥심(신젠타 크랍 프로텍션 인코포레이티드)을 0.0064 ㎎ AI/커널(A.I. = 플루디옥소닐)로 종자에 적용하였다.

에이프런 XL(신젠타 크랍 프로텍션 인코포레이티드)을 제조사 표지(A.I. = 메페녹삼)에 따라 종자에 적용하였다.

폰초 250, 폰초 500 보티보, 및 폰초 1250 보티보(바이엘 크랍 사이언스)를 각각 제조사 표지(폰초 A.I. = 클로티아니딘 및 보티보 A.I. = 바실러스 피르무스 I-1582)에 따라 종자에 적용하였다.

첫 번째 실지 시험 실험에서, 옥수수 종자를 1) 화학적 대조용 맥심 + 에이프론 XL("FC"라 지칭됨); 2) FC + 살충제 바이펜트론 0.125 ㎎/종자; 3) FC + 폰초 1250(클로티아니딘 1.25 ㎎/종자) 및 보티보(바실러스 피르무스 I-1582); 4) FC + 폰초 250(클로티아니딘 0.25 ㎎/종자); 5) FC + 폰초 500(클로티아니딘 0.5 ㎎/종자) 및 보티보(바실러스 피르무스 I-1582) 및 6) FC + 바이펜트린(0.125 ㎎/종자) + 바실러스 튜린지엔시스 RTI545의 포자를 함유하는 슬러리로 처리하였다.

상기 처리된 옥수수 종자를 미국 위스콘신주에서 별도의 실지 시험으로 방아벌레 해충 및 종자 구더기 감염된 토양에 식재하였다. 하나의 시험에서, 거름을 대지에 가하여 델리아 스페시즈(Delia spp.) 성충이 낳은 난을 유인하였다. 수집되고 분석된 등급은 발아%, 식물 스탠드, 방아벌레 손상%, 종자 구더기 손상%, 식물 활력 및 수율이었다. 곤충 피딩 손상 중증도를 식재 34일 후에 시각적 검사에 의해 평가하고, 식물 활력을 1 내지 5의 규모로 순위를 매겼으며, 이때 1은 매우 나쁨이고 5는 탁월한 식물 활력 등급을 나타낸다.

상기 결과를 하기 표 IX에 나타낸다. 상기 살충제 바이펜트린과 함께 상기 바실러스 튜린지엔시스 RTI545의 포함은 바이펜트린 단독으로 처리된 종자에 비해 발아 퍼센트, 식물 스탠드, 활력 및 방아벌레 및 종자 구더기 모두의 방제에서 상당한 개선을 생성시켰다. 또한, 상기 바실러스 튜린지엔시스 RTI545와 바이펜트린과의 조합의 결과는 방아벌레 방제에서 제품 폰초 1250 보티보와 통계학적으로 균등하였으며 종자 구더기의 방제에서 상기 제품보다 개선을 나타내었다. 이들 데이터는 바실러스 튜린지엔시스 RTI545 및 화학적 살충제, 예를 들어 바이펜트린의 조합에 의한 옥수수 종자 처리가 화학적 살충제 단독의 포함에 비해 곤충 방제를 현저하게 개선시키며 일부 유형의 곤충 방제를 위한 상업적으로 입수할 수 있는 제품보다 우수함을 가리킨다.

[표 IX]

두 번째 실지 시험에서 옥수수 종자를 1) 화학적 대조용 맥심 + 에이프론 XL("FC"라 지칭됨); 2) FC + 바이펜트린; 3) FC + 폰초 1250 보티보; 4) FC + 폰초 250; 및 5) FC + 바이펜트린 + RTI545의 포자를 함유하는 상기 첫 번째 시험과 동일한 슬러리로 처리하였다. 상기 처리된 옥수수 종자를 미국 위스콘신주에서 별도의 실지 시험으로 방아벌레의 존재와 함께 식재하였으며 첨가된 대지에 종자 구더기 문제는 없었다. 방아벌레 피딩으로부터의 옥수수 뿌리의 손상을 식재후 41일째에 평가하였다.

상기 결과를 하기 표 X에 나타내며 상기 결과는 상기 표 IX와 유사한 결과를 나타낸다. 구체적으로, 상기 살충제 바이펜트린과 함께 상기 바실러스 튜린지엔시스 RTI545의 포함은 바이펜트린 단독으로 처리된 종자에 비해 발아 퍼센트, 식물 스탠드, 활력 및 방아벌레의 방제에서 상당한 개선을 생성시켰다. 또한, 상기 바실러스 튜린지엔시스 RTI545와 바이펜트린과의 조합의 결과는 방아벌레 방제에서 제품 폰초 1250 보티보와 통계학적으로 균등하거나 더 우수하였다.

[표 X]

화학적 살충제와 RTI545의 포자와의 조합에 의한 종자 처리후 옥수수 실지 시험에서 평균 수율을 폰초 보티보와 비교하여 또한 측정하였다. 상기 결과를 하기 표 XI에 나타낸다. 상기 살충제 바이펜트린과 함께 상기 바실러스 튜린지엔시스 RTI545의 포함은 바이펜트린 단독으로 처리된 종자에 비해 수율의 상당한 개선을 생성시켰다. 또한, RTI545와 바이펜트린과의 조합은 수율 13 부셸/에이커(각각 180.5에서 193.7 및 185.5에서 193.7 부셸/에이커)를 증가시킴으로써(각각 6.8% 및 4.2%의 곡물 수율의 증가를 나타낸다) 폰초 500 보티보 및 폰초 1250 보티보 모두를 능가하였다. 이들 데이터는 RTI545 및 화학적 살충제, 예를 들어 바이펜트린의 조합에 의한 옥수수 종자 처리가 화학적 살충제 단독의 포함에 비해 수율을 상당히 개선시키고, 곤충에 의한 손상을 억제하기 위해 보다 많은 양의 화학적 살충제를 고랑내에 적용해야 하는 필요성을 감소시킴을 가리킨다.

[표 XI]

옥수수 종자를 RTI545의 포자로 처리함에 의한 곤충 압박하의 생장에 대한 효과를 추가로 평가하였다. 일습의 온실 연구에서, 옥수수 종자를 먼저 하기와 같이 기재된 바와 같은 종자 처리 슬러리로 처리하고 이어서 토양이 방아벌레를 함유하지 않는 대조용 세트와 함께, 해충 방아벌레로 감염된 토양에 식재하였다(하나의 종자에 대해서 포트당 10마리의 방아벌레). 상기 종자 처리 슬러리는 하기와 같았다: 1) 화학적 대조용 맥심 + 에이프론 XL("FC"라 지칭됨); 2) FC; 3) FC + 바이펜트린(처리된 모든 처리에 대해서 0125 ㎎/종자); 4) FC + 바이펜트린 + RTI545 5.0x10⁶; 5) FC + 바이펜트린 + RTI545 5.0x10⁶ 열-처리된; 6) FC + 바이펜트린 + RTI545 1.0x10⁶; 7) FC + RTI545 5.0x10⁶; 및 8) FC + 폰초 1250. 상기 처리된 종자들을 발아 퍼센트에 대해 평가하였다.

상기 결과를 하기 표 XII에 나타낸다. 상기 살충제 바이펜트린과 함께 상기 바실러스 튜린지엔시스 RTI545의 포함은 100% 발아를 생성시켰으며, 이는 바이펜트린 단독의 포함에 비해 개선이었고 방아벌레 없는 대조용 및 상기 FC + 폰초 1250 화학적 처리와 균등한 결과를 제공하였다. 방아벌레 피딩은 뿌리를 잘라내어 옥수수 식물 왜화를 야기하며 RTI545 단독 또는 바이펜트린과 RTI545는 살아있는 식물에서 식물 왜화를 감소시켰다. RTI545는 단독으로 식물 손실 방지에 대한 활성을 나타내었으나 왜화에 대한 조기 보호를 제공함에 있어서는 살충제 바이펜트린보다 열등하였다. 그러나, RTI545는 상기 식물이 생장함에 따라 식물 왜화를 방지하는데 보다 유효하였다(데이터 도시 안 됨). 이들 데이터는 옥수수 종자 처리에서 RTI545 포자의 단독 또는 화학적 살충제, 예를 들어 바이펜트린과의 포함이 상기 해충 방아벌레 존재하에서의 식물 건강을 현저하게 개선시킴을 가리킨다.

[표 XII]

바실러스 튜린지엔시스 RTI545의 포자 외에, 화학적 살충제와 함께 화학적 활성 성분의 표준 살진균 조합에 의해 대두 종자를 처리함으로써 수율에 대한 효과를 측정하는 실험을 수행하였다. 상기 실험을 하기에 기재된 바와 같이 수행하였다.

제형:

수 중 RIT545 포자 농축물(10x10¹⁰ cfu/㎖)을 1.0x10⁶ cfu/종자의 양으로 적용하였다.

FC는 2.5 g/100 g 종자(플루디옥소닐), 10 g/100 g(TPM) 및 7.5 g/100 g 종자(메페녹삼)로 종자에 적용된, 플루디옥소닐, TPM, 및 메페녹삼을 함유하는 제형이다.

티아메톡삼을 50 g/100 g 종자로 종자에 적용하였다.

실험에서, 대두 종자를 1) 화학적 대조용 플루디옥소닐/TPM/메페녹삼("FC"); 2) FC + 살충제 티아메톡삼; 및 3) FC + 티아메톡삼 + 바실러스 튜린지엔시스 RTI545의 포자를 함유하는 용액과 혼합하였다. 상기 처리된 대두 종자를 방아벌레 감염된 3개의 부위(N=3)에 식재하고, 수율을 분석하였다.

상기 결과를 하기 표 XIII에 나타낸다. 상기 티아메톡삼과 함께 RTI545 포자의 포함은 티아메톡삼 단독으로 처리된 종자에 비해, 수율을 1.6 부셸/에이커까지(68.2에서부터 69.8까지)(이는 2.3% 수율 증가를 나타낸다) 증가시키는, 수율의 상당한 개선을 생성시켰다. 이들 데이터는 RTI545 및 화학적 살충제의 조합에 의한 대두 종자 처리가 살충제 단독의 포함에 비해 수율을 상당히 개선시키며, 곤충에 의한 손상을 억제하기 위해 보다 많은 양의 화학적 살충제를 고랑내에 적용해야 하는 필요성을 감소시킴을 나타낸다.

[표 XIII]

화학적 살충제와 함께 RTI545의 포자로 종자- 또는 고랑내-처리를 통한 개선된 곤충 방제에 대한 한 가지 가능한 설명을 도 1에 예시한다. 구체적으로, 도 1A는 화학적 살충제 단독(즉 RTI545 없이)으로 종자를 코팅함에 의한 곤충 방제를 도시한다. 도 1A는 맨 왼쪽에 화학적 살충제(내부 원을 둘러싸고 있는 어두운 밴드)로 코팅된 식물 종자(내부 원)를 도시하며, 상기 종자는 상기 식물 근권 중에서 수평 표시로 나타내는 식물 해충에 의해 둘러싸여 있다. 상기 도해의 가운데 부분은 해충으로부터 상기 식물 종자의 뿌리를 보호하는 확산된 살충제와 함께 발아된 식물 종자를 도시한다(보호를 "X" 표시로 나타낸다). 상기 도해의 맨 오른쪽은 상기 뿌리가 상기 화학적 살충제의 확산 대역을 벗어나 생장함에 따라 상기 해충으로부터 상기 식물 종자의 뿌리의 보호가 감소됨을 도시한다. 도 1B는 바실러스 튜린지엔시스 RTI545 포자의 상기 식물 종자상의 코팅에(또는 식재시 부근의 RTI545 포자의 고랑내 적용에)의 첨가가 상기 살충제 코팅 단독 사용에 비해 곤충 방제를 어떻게 개선시키는 지를 도시한다. 구체적으로, 도 1B 도해의 맨 오른쪽은 상기 식물 근권 중의 바실러스 튜린지엔시스 RTI545의 확립의 결과로서, 상기 뿌리가 상기 화학적 살충제의 확산 대역을 벗어나 생장하는 경우에 조차 상기 해충으로부터 상기 식물 종자의 뿌리의 보호가 계속됨을 도시한다.

실시예 9

감염된 토양에서 바실러스 튜린지엔시스 RTI545 단리물에 의한 선충 방제

대두 및 감자에서 선충 감염을 감소시키는 바실러스 튜린지엔시스 RTI545 균주의 능력을 하기에 기재된 바와 같이 측정하였다.

온실 연구를, 1.0 x 10⁶ cfu/종자의 양으로 적용된 RTI545 포자에 의한 종자 처리 효과를 측정하기 위해 남부 뿌리혹 선충으로 감염된 토양에 심은 대두 식물로 수행하였다. 대두 식물을 남부 뿌리혹 선충(멜로이도지네 인코그니타)의 살아있는 난으로 감염된 토양에 심었다. 종자를 제품 폰초 보티보(바이엘 크랍사이언스 LP; A.I. = 40.3% 클로티아니딘, 8.1% 바실러스 피르무스 I-1582) 및 아빅타 컴플리트(신젠타; A.I. = 11.7% 티아메톡삼, 10.3% 아바멕틴, 2.34% 티아벤다졸, 0.3% 플루디옥소닐, 0.23% 메페녹삼, 0.12% 아족시스트로빈)(이들은 별도로 제품 표지에 표시된 비율로 화학적 활성 성분을 함유한다) 각각으로 처리하였다. 상기 데이터를 하기 표 XIV에 나타낸다. 개시 후 63일 째에, RTI545 세포 및 화학적 조합 아빅타 컴플리트로 처리된 종자에 대해 포트당 선충난의 수는 통계학적 차이가 없었으나, RTI545 세포로 처리된 종자에 대한 포트당 선충난의 수는 폰초 보티보로 처리된 종자의 경우보다 적었다. 63일 후에 상기 처리 중 어느 경우에도 포트당 유충수의 통계학적 차이는 없었다. 이는 바실러스 튜린지엔시스 RTI545에 의해 제공된 대두상의 선충 방제에 대한 긍정적인 효과를 입증한다.

[표 XIV]

온실 연구를 글로보데라 스페시즈 선충으로 자연 감염된 토양에 심은 감자 식물로 수행하여 바실러스 튜린지엔시스 RTI545 세포에 의한 상기 토양의 처리 효과를 측정하였다. 상기 실험에서, 뿌리 바이오매스의 g당 포낭의 수에 대한 RTI545 세포에 의한 토양 향상의 효과를 상기 연구 개시후 60일째에 측정하였다. 감자(선충 민감성 품종 "빈체")를, 글로보데라 스페시즈(대조용)로 감염되고 토양 리터당 10E⁹ cfu의 바실러스 튜린지엔시스 RTI545(RTI545) 포자로 향상된 토양에 식재하였다. 상기 결과를 도 5의 그래프에 나타낸다. 추가적인 토양 처리를 상기 연구에 포함시켰다: 비데이트 제품(비데이트; 듀퐁; A.I. = 옥사밀[메토일 N'N'-다이메틸-N-[(메틸 카바모일)옥실)옥시]-1-티오옥스아미미데이트), 바이오액트 제품(바이엘 크랍사이언시즈 LP; A.I. = 파에실로마이세스 릴라시누스 균주 251), 카렉스 제품(카렉스, 뉴팜, 피리다벤), 및 바실러스 튜린지엔시스 서브스페시즈 쿠르스타키 HD-1). 상기 제품들을 제품 표지상에 표시된 비율로 적용하였다. 도 5에서 알 수 있는 바와 같이, RTI545 세포로 처리된 토양에 대한 뿌리 바이오매스의 g당 포낭의 수가 화학적 활성 성분을 함유하는 제품을 포함하는 모든 처리에 비해 현저하게 감소되었다.

실시예 10

리조크토니아가 접종된 바실러스 튜린지엔시스 RTI545에 의한 면실 처리

종자를 병원체 방제를 위해 화학적 활성제 외에 RTI545 균주로 처리했을 때 리조크토니아 질병 압박의 존재하에서 발아, 뿌리 질병, 및 목화 수율에 대한 효과를 조사하기 위한 실험을 수행하였다.

구체적으로, 목화에서의 실험을 하기와 같이 설정하였다: 1) 종자를 처리하지 않았다(UTC); 2) 종자를 제조사의 표지에 따라 플루디옥소닐 + 메페녹삼 + 이미다클로프리드의 베이스 조합으로 처리하였다("B"라 칭한다); 3) 종자를 베이스 + 5 x 10⁺⁵ cfu/종자의 RTI545로 처리하였다(B + RTI545); 및 4) 종자를 표지 설명에 따라 베이스 + 비브란체(활성 성분 세닥산; 신젠타 크랍 프로텍션 인코포레이티드)로 처리하였다(B + 비브란체). 실지 시험을 미국 조지아주에서 수행하였다. 상기 시험은 건조된 접종물을 식재시 종자와, 상기 종자가 생장을 개시했을 때 감염을 제공하기 위해 처방된 비율로 혼합함으로써 리조크토니아로 접종하였다. 평균 목화 발아 퍼센트를 하기 표 XV에 나타낸다.

상기 표 XV의 결과는 상기 베이스 외에 RTI545 포자로 처리한 결과 화학적 베이스 단독의 경우에 비해 발아 퍼센트가 상당히 개선되었음을 나타낸다(67% 대 베이스 단독의 45%). 또한, 베이스 + 화학적으로 활성인 상업적인 제품 비브란체뿐만 아니라 RTI545 처리를 수행하였다. 따라서, RTI545에 의한 종자 처리는 심한 병원체 압박 조건하에서조차 발아의 상당한 개선을 제공할 수 있다.

[표 XV]

실시예 11

바실러스 튜린지엔시스 RTI545로 밀 종자를 처리함에 의한 생장 및 수율에 대한 효과

바실러스 튜린지엔시스 RTI545의 포자 단독, 또는 화학적 살진균제 및 화학적 살충제 중 하나 또는 둘 모두와 함께 처리된 밀 종자에 의한 곤충 압박하의 생장 및 수율에 대한 효과를 측정하기 위해 실험을 수행하였다. 보다 구체적으로, 생장, 수율, 및 밀 해충 방아벌레 및 굼벵이의 방제에 대한 효과를 미국 위스콘신주에서 실지 시험으로 측정하였다. 바실러스 튜린지엔시스 RTI545 포자의 종자 및 종자 + 살진균제 베이스에의 첨가, 및 상기 살진균제 베이스 외에, 2개 농도의 살충제, 바이펜트린과 함께 RTI545 포자의 첨가를 비교하는 실험을 하기에 기재된 바와 같이 수행하였다.

실지 실험에서, 밀 종자를 1) 화학적 살진균제 베이스 다이페노코나졸/테부코나졸/TPM/메페녹산("FC"라 칭함); 2) FC + 바실러스 튜린지엔시스 RTI545의 포자(RTI545 10⁶ cfu/g 종자); 3) FC + 바이펜트린(20 g/종자); 4) FC + 바이펜트린(20 g/종자) + RTI545 10⁶ cfu/g 종자; 5) FC + 바이펜트린(50 g/종자); 및 6) FC + 바이펜트린(50 g/종자) + RTI545 10⁶ cfu/g 종자를 함유하는 슬러리로 처리하였다.

상기 처리된 밀 종자를 미국 위스콘신주에서 실지 시험으로 해충 방아벌레 및 굼벵이로 감염된 토양 중에 식재하였다. 수집되고 분석된 등급은 발아%, 방아벌레 손상%, 구더기 손상%, 식물 활력 및 수율이었다. 곤충 피딩 손상 중증도를 식재 35일 후에 시각적인 검사에 의해 평가하고, 식물 활력을 1 내지 5의 규모로 순위를 매겼으며, 이때 1은 낮은 것이고 5는 매우 활력적임을 나타낸다.

상기 결과를 하기 표 XVI에 나타낸다. 상기 바실러스 튜린지엔시스 RTI545 포자 각각에 의한 종자 처리, 및 상기 살진균제 베이스 단독 또는 상기 살충제, 바이펜트린과 함께 중 어느 하나와 함께 RTI545 포자에 의한 처리는 발아 퍼센트, 활력, 방아벌레 및 굼벵이의 방제 및 수율의 상당한 개선을 생성시켰다. 시험된 모든 경우에, 상기 밀 종자 처리에의 상기 RTI545 포자의 포함은 생장, 활력, 해충 방제 및 수율의 상당한 개선을 생성시켰다.

[표 XVI]

실시예 12

리조크토니아가 접종된 대두의 생장 및 수율에 대한 바실러스 튜린지엔시스 RTI545 종자 처리의 영향

미국 조지아주 키트먼에서, 처리되지 않은 종자 또는 베이스 살진균제/살충제 화학적 처리 또는 상기 합성 베이스 + 세닥산을 포함하는 양성 대조용과 비교된 리조크토니아 보호를 제공하기 위해 상기 베이스에 RTI545를 첨가한 효능을 시험하기 위한 실지 시험을 수행하였다.

대두 품종 cv. 파이오니어(Pioneer) 93Y92의 대두 종자를 화학적 및 생물학적 처리(이들은 종자에 동시에 적용된다)를 위해 제조된 별도의 슬러리로 처리하였다. 종자를 단지에 넣고 상기 생성물이 종자상에 균일하게 코팅될 때까지 변형된 시료 진탕기상에서 진탕시켰다. 상기 베이스 화학적 처리는 1) 12.8 g/L의 플루디옥소닐, 2) 38.4 g/L의 메페녹삼, 3) 38.4 g/L의 티오파네이트-메틸(TPM) 및 4) 256 g/L의 티아메톡삼을 포함하는 4개의 활성물질을 단일 제형으로서 포함하였으며, 41.4 ㎖/140,000 종자로 적용되었다. 비브란체(500 g/L의 세닥산)를 종자 처리로서 양성 대조용 처리에 별도로 적용하였다. 상기 균주 RTI545의 건조 테크니컬을 사용하고 5X10⁵ cfu/종자의 적용률을 성취하기 위해서 수 중에서 희석하였다. 생성물을 물로 적어도 65 ㎖/140,000 종자로 슬러리화시켜 균일한 적용을 보장하였다. 상기 시험은 1.8 m x 9 m 플롯인 무작위 완전 블록 시험(4 반복)을 포함하였다. 상기 대두 품중 cv. 처리된 종자 및 처리되지 않은 종자를 13 종자/m의 시딩 비율로 2.5 ㎝의 깊이 및 90 ㎝의 줄 간격으로 원추 점파기를 사용하여 모래질 토양에 식재하였다. 리토크토니아의 접종물을 혼합하고 상기 종자와 함께 식재하였다. 상기 플롯 및 대두 식물을 통상적인 경작 및 필요에 따른 보충적인 관개를 포함한, 대두에 일반적으로 허용되는 작물 조건하에서 처리하였다. 상기 식물을 발아, 활력(1 내지 5 품질 규모, 5가 최상임)에 대해서 재배 기간동안 평가하고 이어서 수확하여 bu/에이커 및 ㎏/헥타아르로 전환된 수율을 평가하였다. 상기 결과를 하기 표 XVII에 요약한다.

[표 XVII]

상기 리조크토니아의 영향은 스탠드 감소, 활력 감소 및 수율 저하이다. 접종이, 모든 식물 수, 활력 및 수율 평가에 대해서 처리되지 않은 종자에 비해 현저하게 개선되는 베이스 처리에 비추어 유효하였다.

상기 화학적 베이스에 RTI545의 첨가는 3개의 모든 평가 시기에서 스탠드의 현저한 증가, 2개의 평가 시기에서 활력의 현저한 증가 및 상기 화학적 베이스에 비해 수치상 더 높은 수율을 생성시켰다. 감소된 스탠드 및 활력 평가는 식물 격감에 기인할 수 있다. 리조크토니아 방제에 공인된 활성물인, 상기 합성적 베이스에의 세닥산의 첨가는 상기 합성적 베이스보다 발아, 활력을 증가시켰고 수치상 더 높은 수율을 생성시켰다. RTI545 첨가는 모든 평가에 대해 상기 세닥산 처리와 유사하였으며, 이는 상기 균주가 상기 시험에서 리조크토니아로부터의 손상을 감소시키는데 동등하게 유효함을 입증한다.

실시예 13

방아벌레 및 종자 구더기로 감염된 실지에 식재된 옥수수의 생장 및 수율에 대한 바실러스 튜린지엔시스 RTI545 종자 처리의 영향

미국 위스콘신주에서 베이스 살진균제(맥심 및 에이프론 XL, 둘 다 5.2 ㎖/㎏으로 적용됨) 또는 상기 베이스 살진균제 및 클로티아니딘(0.25 ㎎/종자) 또는 상기 베이스 살진균제 + 바이펜트린(0.125 ㎎/종자) 또는 상기 베이스 살진균제 + 클로르안트라닐리프롤(0.25 및 0.5 ㎎/종자의 2개 비율이 평가됨) 또는 클로르안트라닐리프롤(0.25 ㎎/종자)과 병용된 바이펜트린(0.125 ㎎/종자)외에 상기 RTI545의 효능을 시험하기 위한 실지 시험을 수행하였다. 높은 보호 수준을 입증하기 위한 양성 대조용으로서, 클로티아니딘을 상기 베이스 살진균제와 함께 1.25 ㎎/종자로 적용하였으며, 이때 상기 높은 비율은 또한 평가되는 낮은 비율의 클로티아니딘의 로딩의 5배를 나타낸다.

옥수수 종자(품종 cv. Ag 벤추어(Venture) G5891)를, 화학적 및 생물학적 처리(이들은 종자에 동시에 적용된다)를 위해 제조된 별도의 슬러리로 처리하였다. 종자를 단지에 넣고 상기 생성물이 종자상에 균일하게 코팅될 때까지 변형된 시료 진탕기상에서 진탕시켰다. 상기 베이스 화학적 처리는 1) 40.3%의 플루디옥소닐, 2) 33.3%의 메페녹삼, 3) 18.4%의 클로르안트라닐리프롤, 4) 600 g/L의 클로티아니딘, 및 5) 400 g/L의 바이펜트린을 포함하는 3개의 상업적인 제형을 포함하였다. 상기 균주 RTI545의 건조 테크니컬을 사용하며 1X10⁶ cfu/종자의 적용률을 성취하기 위해서 수 중에서 희석하였다. 생성물을 적어도 600 ㎖/100 ㎏으로 슬러리화시켜 균일한 적용을 보장하였다. 처리 13은 높은 수준의 방아벌레 보호에 대한 양성 대조용으로서 베이스 + 클로티아니딘 1.25 ㎎/종자이다. 상기 시험은 3 m x 15 m 플롯인 무작위 완전 블록 시험(4 반복)을 포함하였다. 상기 옥수수 종자를 93,900 종자/헥타아르의 시딩 비율, 6.25 ㎝의 깊이 및 75 ㎝의 줄 간격으로 원추 점파기를 사용하여 밀포드 미사질식 양토에 식재하였다. 상기 플롯에서 알을 낳도록 종자 구더기를 유인하기 위해 시딩 후에 상기 플롯 상단에 거름을 뿌렸다. 상기 플롯 및 옥수수 식물을, 구역에 평균 내지 평균 이상의 강우와 함께 최소의 경작을 포함한, 옥수수에 일반적으로 허용되는 작물 조건하에서 처리하였다. 상기 식물을 발아, 활력(1 내지 5 품질 규모, 1 = 낮은 활력 및 5 = 높은 활력 - 플롯의 충만으로 평가됨), 방아벌레 및 종자 구더기에 의한 피딩 손상(50개 식물의 샘플링 및 방아벌레 또는 종자 구더기에 의한 뿌리 손상 평가에 의해 평가됨)에 대해서 재배 기간동안 평가하고 이어서 수확하여 수율을 평가하였다. 상기 결과를 하기 표 XVIII에 요약한다.

[표 XVIII]

상기 방아벌레 피딩의 영향은 스탠드 감소, 활력 감소 및 뿌리 전지에 의한 식물 왜화, 뿌리 손상 및 수율 감소이다. 종자 구더기도 또한 종자에 대한 스탠드 및 피드를 감소시켜 왜화를 야기하였다.

상기 살진균제 베이스에 대한 RTI545의 첨가(처리 2 대 처리 3)는 식재 42일 및 164일 후에 상기 살진균제 베이스에 비해 현저하게 더 높은 발아수를 생성시켰고, 방아벌레 피딩에 의해 야기된 뿌리 손상을 감소시켰으며, 수율을 현저하게 증가시켰다. RTI545가 살충제 보호를 제공하였지만, 상기 보호 수준은 평가된 합성 제품들보다 낮았으며 이는 살충제에 상기 제품을 가하여 만족할만한 수행성능이 보장된다는 이득을 입증한다.

0.25 ㎎/종자로 적용된 클로티아니딘에 대한 RTI545의 첨가(각각 처리 3 및 4)는 4개의 평가 시점 모두에서 발아를 현저하게 증가시켰고, 3개의 평가 시점 모두에서 활력을 현저하게 증가시켰으며, 종자 구더기 및 방아벌레에 의해 야기된 피등 손상을 감소시켰고 수율을 현저하게 증가시켰다. 상기 낮은 비율의 클로티아니딘에 대한 RTI545의 첨가는 1.25 ㎎/종자로 적용된 높은 비율의 클로티아니딘과 유사한 수행성능을 생성시켰다.

바이펜트린에 대한 RT545의 첨가(각각 처리 5 및 6에 대해서 01.25 ㎎/종자)는 하나의 평가 시점에서 발아를 현저하게 증가시켰고, 하나의 평가 시점에서 활력을 현저하게 증가시켰으며, 최종 평가 시점에서 종자 구더기에 의해 야기된 피딩 손상을 현저하게 감소시켰고, 수율을 현저하게 증가시켰다.

클로르안트라닐리프롤에 대한 RTI545의 첨가(각각 처리 7 및 8에 대해서 0.25 ㎎/종자)는 3개의 평가 시점에서 발아를 현저하게 증가시켰고 수율을 현저하게 증가시켰다.

클로르안트라닐리프롤에 대한 RTI545의 첨가(각각 처리 9 및 10에 대해서 0.5 ㎎/종자)는 4개의 평가 시점 모두에서 발아를 현저하게 증가시켰고, 3개의 평가 시점 모두에서 활력을 현저하게 증가시켰으며, 종자 구더기에 의해 야기된 피딩 손상을 현저하게 감소시켰고, 방아벌레 피딩 손상을 수치상 감소시켰으며 수율을 현저하게 증가시켰다. 클로르안트라닐리프롤에 대한 RTI545의 첨가(0.5 ㎎/종자)는 높은 비율의 클로티아니딘(1.25 ㎎/종자)과 유사하게 수행하는 상기 생성물을 생성시켰다.

클로르안트라닐리프롤 및 바이펜트린 조합에 대한 RTI545의 첨가(각각 처리 9 및 10)는 4개의 평가 시점 모두에서 발아를 현저하게 증가시켰고, 3개의 평가 시점 모두에서 활력을 현저하게 증가시켰으며, 종자 구더기 및 방아벌레에 의해 야기된 피딩 손상을 현저하게 감소시켰고, 수율을 현저하게 증가시켰다. 상기 조합에 대한 RTI545의 첨가는 높은 비율의 클로티아니딘(1.25 ㎎/종자)과 유사하거나 개선되게 수행하는 상기 생성물을 생성시켰으며, 이때 상기 처리의 최종 수율은 상기 높은 비율의 클로티아니딘보다 8 bu/에이커 이상 더 높았다.

이들 결과는 RTI545에 의해 제공된 살충제 보호가 합성 살충제의 3개의 독특한 IRAC 부류에 의해 제공된 보호를 증대시킴을 입증한다. 이들 결과는 RTI545가 단독으로 보호를 제공하지만; 유효 살충제와의 조합은 훨씬 더 높은 수준의 이득을 명백하게 보장케 함을 입증한다.

실시예 14

옥수수 실지 시험에서 바실러스 튜린지엔시스 RTI545의 고랑내 적용

방아벌레(멜라노투스 스페시즈) 및 옥수수 뿌리벌레(디아브로티카 스페시즈)에 대한 유효성을 평가하기 위해서 RTI545에 의한 옥수수의 고랑내 처리를 북부 아메리카의 다양한 장소들에서의 다수의 실지 시험으로 연구하였다. 개별적인 북부 아메리카 시험에 대한 처리되지 않은 대조용과 비교된 다수 처리의 수율 및 옥수수 손상에 대한 효과를 모으고 하기 표에서 처리되지 않은 대조용과 비교된 수율 증가% 및 손상 감소%로서 상기 시험에 대한 평균으로 요약하였다. 7개의 시험을 방아벌레에 대해 평가하였다. 18개의 시험을 옥수수 뿌리벌레에 대해 평가하였다. 옥수수 뿌리벌레로부터 중한 손상을 입은 5개의 시험을 별도로 평균하였다.

[표 XIX]

[표 XX]

7개의 방아벌레 시험으로부터의 수율 데이터는 RTI545를 함유하는 처리가 바이펜트린 단독 및 가장 높은 비율의 상업적인 표준 테플루트린보다 약간 유리함을 나타내는 것을 가리킨다. 옥수수 뿌리벌레에 대한 18개 시험으로부터의 데이터는 RTI545를 함유하는 처리로부터의 수율이 바이펜트린 단독 및 가장 높은 비율의 테플루트린과 같거나 약간 더 높은 수율을 나타내는 것을 가리킨다. 이들 18개 시험으로부터의 데이터는 또한 살충제와 함께 RTI545로 처리된 옥수수가 옥수수 뿌리벌레 감염된 토양에서, 최대 비율의 테플루트린의 산업 표준 또는 최대 비율의 바이펜트린보다 또는 RTI545를 단독 처리로 적용했을 때보다 옥수수에 대해 적은 뿌리 손상을 생성시켰음을 가리킨다. 중한 옥수수 뿌리벌레 압박이 존재하는 경우, 손상 평가의 감소는 전형적인 뿌리벌레 압박하에서의 처리와 유사하였지만, 수율 증가 백분율은 더 양호하였다. 전체적으로, 이들 시험으로부터의 데이터는 바이펜트린과 병용된 RTI545가, 처리되지 않은 구역 또는 산업적인 표준인 테플루트린으로 처리된 구역과 비교시 옥수수 수율을 증대시키고 옥수수 뿌리에 대한 곤충 손상을 감소시킬 수 있음을 가리킨다.

실지 시험을 또한 방아벌레(아그리오테스 스페시즈)에 대한 유효성을 평가하기 위해서 유럽에서 RTI545에 의한 옥수수의 고랑내 처리로 수행하였다(데이터 도시 안 됨).

실시예 15

리조크토니아가 접종된 땅콩의 생장 및 수율에 대한 바실러스 튜린지엔시스 RTI545의 영향

실지 시험을 미국 조지아주에서 리토크토니아 솔라니가 접종된 땅콩의 종자 처리로서 본 발명의 생물학적 조합의 효능을 시험하기 위해 수행하였다.

땅콩 종자를 RTI545를 함유하는 종자 100 ㎏당 200 g의 최종 적용률로 건조한 분진 제형으로 처리하여, 종자 g 당 3.0x10⁶ CFU의 RTI545 적용을 생성시켰고 동시에 다이나스티(DYNASTY) PD(플루디옥소닐(2%), 메페녹삼(0.4%) 및 아족시스트로빈(3.2%)을 함유하는 미국 등록 땅콩 제품)를 종자 100 ㎏당 195 g의 적용으로 적용하였다. 종자를 단지에 넣고 상기 생성물이 상기 종자상에 균일하게 코팅될 때까지 진탕하였다.

상기 시험은 6 피트 x 30 피트(약 1.8 m x 9/1 m) 플롯을 사용하는 무작위 완전 블록 시험을 포함하였다. 처리된 및 처리되지 않은 땅콩(아라키스 하이포가에아(Arachis hypogaea) 품종 GA 06) 종자를 식재하였다. 원추형 점파기를 사용하여, 종자를 모래질 양토에 1.25 인치 깊이(3 ㎝)의 36 인치(0.9 m) 줄 간격으로 식재하였다. 상기 플롯을 리조크토니아 스페시즈로 확실히 감염되게 접종하였다. 상기 플롯 및 땅콩 식물을 수확이 준비될 때까지 통상적인 경작 및 필요에 따른 보충적인 관개를 포함한, 대두에 일반적으로 허용되는 작물 조건하에서 처리하였다. 상기 식물을 발아, 활력(1 내지 5 품질 규모)에 대해서 재배 기간동안 평가하고 이어서 수율 평가를 위해 수확하였다. 상기 결과를 하기 표 XXI에 요약한다.

[표 XXI]

모든 종자 처리는 3개의 모든 평가 시기에서 상기 처리되지 않은 대조용(UTC)보다 더 높은 스탠드를 가졌다. 3개의 모든 평가 시기에서, RTI545를 포함한 처리는 최상의 발아를 제공하였다. 상기 처리되지 않은 종자는 3개의 모든 평가시기에서 최저의 활력을 가졌다. 상기 RTI545를 포함한 처리는 상기 UTC 및 상기 베이스 화학물질 처리보다 더 강한 활력을 제공하였다. 모든 생성물은 상기 UTC보다 현저하게 더 높은 수율을 제공하였다. 상기 RTI545를 포함한 처리는 베이스 화학물질 처리를 능가하였다.

실시예 16

썩이 선충에 대한 바실러스 튜린지엔시스 RTI545 종자 처리의 영향

썩이 선충(프라틸렌쿠스 페네트란스(Pratylenchus penetrans))에 대한 활성을 평가하기 위해 종자-처리된 옥수수에 대한 토양 분석을 온실에서 수행하였다. 옥수수(cv. 바이킹(Viking)) 종자를 플루디옥소닐(1.1 ㎖/SU) 및 메탈락실-M(1.1 ㎖/SU)의 베이스 종자 처리로 처리하였다(모든 종자). 일부 종자를 또한 폰초/보티보(클로티아니딘 + 바실러스 피르무스 I-1582, 80 ㎖/SU), RTI545 5 x 10⁵ CFU/종자, RTI545 1 x 10⁶ CFU/종자 또는 RTI545(5 x 10⁵ CFU/종자) + 바실러스 서브틸리스 균주 CH201(2.5 x 10⁶ CFU/종자) + 바실러스 리케니포르미스 균주 CH200(2.5 x 10⁶ CFU/종자) 또는 RTI545(5 x 10⁵ CFU/종자) + 바실러스 벨레젠시스 균주 RTI301(5 x 10⁵ CFU/종자) + 바실러스 리케니포르미스 균주 CH200(2.5 x 10⁶ CFU/종자)의 혼합물로 처리하였다.

한 가지 유형의 분석에서, 상기 처리된 종자를 원추형 용기에서 90 ㎖의 토양(80.4% 모래, 14.8% 토사, 4.8% 진흙, 유기 물질 1.1%, pH 6.9)에 식재하였다. 상기 종자 식재후, 상기 토양을 같은 날에 200 ㎕의 담체(2% 메틸 셀룰로스) 중 종자당 4000 선충(혼합된 단계: J2-성충)으로 접종하였다. 대조용은 접종되지 않은 토양 중 베이스 종자 처리를 갖는 종자를 사용하였다. 상기 시험 식재에 미스트 스프링클러를 사용하여 상부에 물을 댔다. 상기 시험을 윈리조(WinRhizo)(상표) 소프트웨어를 사용하여 전체 뿌리 길이에 대해 발아후 2일(데이터 도시 안 됨) 및 7일째에 평가하였다. 뿌리 길이 데이터 및 선충 감소% 데이터를 α=0.1에서 ANOVA 피셔 시험을 사용하는 ANOVA 분석에 앞서 아크사인 제곱근 변환을 사용하여 변환시켰다.

[표 XXII]

썩이 선충에 의한 옥수수 묘목의 접종은 전체 뿌리 길이를 수치상 감소시켰다. 폰초/보티보(상업적인 표준)로 처리된 묘목의 전체 뿌리 길이는 처리되지 않은 접종된 묘목보다 더 크고, 처리되지 않고 접종되지 않은 묘목과 유사하였다. 상기 RTI545-처리된 묘목의 전체 뿌리 길이는 처리되지 않고 접종된 묘목(30-40%)과 비교시 현저하게 증가하였으며 폰초/보티보로 처리된 묘목의 전체 뿌리 길이보다 수치상 더 컸다.

접종에 2000 선충/종자를 사용하는 유사한 시험을 130 ㎖의 토양에서 수행하였으며 선충 접종후 8주째에 뿌리당 선충수 및 상기 식물의 신선한 상부 중량을 측정하였다. 상기 결과를 표 XXIII에 나타낸다. 썩이 선충 감염은 옥수수 식물의 신선한 상부 중량(FTW)의 심한 감소를 생성시켰다. 상기 접종된 대조용 식물의 FTW는 접종되지 않은 식물과 비교시 50%까지 감소하였다. 높은 비율의 RTI545는 표준 폰초/보티보 및 접종되지 않은 선충 대조용에 비해 통계학적으로 더 큰 FTW를 제공하였다. 상기 결과는 RTI545 종자 처리가 선충 해충의 존재하에서 식물 생장을 지속시킴으로써 선충 감염에 대한 식물 관용을 증가시킴을 가리킨다. 또한, 식물 생장/FTW에 대한 유사한 양의 효과가, RTI545를 다른 균주들: RTI545(1 x 10⁵ CFU/종자) + 바실러스 서브틸리스 균주 CH201(2.5 x 10⁶ CFU/종자) + 바실러스 리케니포르미스 균주 CH200(2.5 x 10⁶ CFU/종자) 또는 RTI545(1 x 10⁵ CFU/종자) + RTI301(5 x 10⁵ CFU/종자) + 바실러스 리케니포르미스 균주 CH200(2.5 x 10⁶ CFU/종자)과 함께 보다 낮은 비율로 사용시 관찰되었다. 그러나, 높은 비율(1.0 x 10⁶ CFU/종자)의 RTI545 종자 처리는 매우 양호한 썩이 선충 방제(상기 뿌리에서 선충수의 50% 감소)를 제공하였다. 폰초/보티보는 선충 뿌리수를 감소시키지 않았다.

[표 XXIII]

RTI545를 2.5x10¹¹ CFU/ha의 비율로 토양 관주로서 적용한 유사한 시험은 아바멕틴에 대한 95%에 비해 뿌리당 썩이 선충수의 71% 감소를 제공하였다. 썩이 선충난 및 성충(2000 개체/포트)으로 감염된 토양이 있는 온실 중 포트에 적용된 토양 관주 시험에서 RTI545는 2.5x10¹³ CFU/ha의 비율로, 카두사포스에 의한 86% 감소에 비해 뿌리당 선충수의 80% 감소를 제공하였다.

실시예 17

토양 관주 분석에서 대두 포낭 선충에 대한 바실러스 튜린지엔시스 RTI545의 영향

대두 포낭 선충(헤테로더마 글리시네스(Heterodera glycines))에 대한 RTI545의 활성을 온실 중 토양 관주 분석에서 조사하였다. 개별적인 대두(cv. AG4730) 종자를 원추형 용기에서 120 ㎖의 토양(80.4% 모래, 14.8% 토사, 4.8% 진흙, 유기물질 1.1, pH 6.9)에 식재하고 개별적인 바닥 물주기로 물을 댔다. 상기 용기에, 식재후 21일째에 용기당 1 ㎖의 2% 메틸 셀룰로스 중 4000 알의 비율로 선충난을 접종하였다. RTI545 및 AGRI-MEK 0.15 EC(a.i. 2% 아바멕틴) 및 베네레이트(VENERATE) XC(94.46% 열-사멸된 부르크홀데리아(Burkholderia) 스페시즈 균주 A396 세포 및 소비된 발아 배지)의 토양 관주(10 ㎖ 부피/100 ㎖ 토양) 적용을 식재후 7 및 21일째에 적용하였다. 상기 시험된 비율은 RTI545 세척된 포자 2.5x10¹² CFU/ha, 2.5x10¹³ CFU/ha 및 2.5x10¹⁴ CFU/ha; 종자 처리 표지 비율에 상응하는 아바멕틴 1 ppm(0.01 ㎎ a.i./식물) 및 10 ppm(0.1 ㎎ a.i./식물); 및 4.5 x 고랑내 비율에 상응하는 베네레이트 XC 5% v/v(500 ㎎/식물)이었다. 상기 시험을 70일째(접종후 7주째)에 평가하였다. 평가를 뿌리 및 토양으로부터 포낭의 추출 및 입체현미경하에서 포낭의 총수를 카운트함으로써 수행하였다.

[표 XXIV]

상기 데이터는 RTI545가 선충 포낭수를 66%까지 감소시켰음을 보인다. 상기 시험된 비율과 활성간에는 뚜렷한 용량 반응이 존재하지 않았다. 상기 RTI545의 활성은 생물학적 표준 베네레이트 XC와 통계학적으로 상이하지 않았다. 화학적 표준 아바멕틴은 최고의 활성을 가졌다. 0.01 ㎎/식물의 비율은 79% 감소를 제공하였고 0.1 ㎎/식물은 96% 감소를 제공하였다.

실시예 18

바실러스 튜린지엔시스 RTI545를 포함하는 현탁 농축물 제형

바실러스 튜린지엔시스 RTI545를 포함하는 전형적인 현탁 농축물을 표 XXV에 요약한다. 상기 농축물은 RTI545의 포자를 적합한 혼합 용기 또는 균질화기에서 다른 성분들과 혼합함으로써 제조되었다.

[표 XXV]

실시예 19

바실러스 튜린지엔시스 RTI545 및 바이펜트린을 포함하는 현탁 농축물 제형

바실러스 튜린지엔시스 RTI545 및 바이펜트린 살충제를 포함하는 전형적인 현탁 농축물을 표 XXVI 및 XXVII에 요약한다. 상기 농축물은 RTI545의 포자를 적합한 혼합 용기 또는 균질화기에서 다른 성분들과 혼합함으로써 제조되었다. 실시예 19C는 식재시 종자 또는 고랑내에 폼으로서 적용될 수 있는 발포성 조성물이다. 상기 발포성 조성물 19C를 물로 임의로 희석하고 발포 배지, 예를 들어 다수의 유리 비드를 포함하는 발포 챔버에서 공기와 같은 가압 기체와 혼합하여 폼을 제조할 수 있다.

[표 XXVI]

[표 XXVII]

고온에서 보관 중 포자 안정성은 하기 표 XXVIII에 나타낸 바와 같이 매우 양호했으며, 상기 표에서 제형 18D는 54 ℃에서 2주간 보관되었고, 이때 RTI545 포자의 약간의 농도 변화가 있었다.

[표 XXVIII]

본 명세서에 언급된 모든 공보, 특허 출원, 특허 및 다른 참고문헌들은 본 명세서에 개시된 발명의 요지가 속하는 분야의 숙련가들의 수준을 가리킨다. 모든 공보, 특허 출원, 특허 및 다른 참고문헌들은 각각의 개별적인 공보, 특허 출원, 특허 및 다른 참고문헌이 구체적이고 개별적으로 참고로 인용됨을 가리키는 바와 동일한 정도로 본 명세서에 참고로 인용된다. 다수의 특허 출원, 특허 및 다른 참고문헌들을 본 명세서에서 언급하지만, 상기와 같은 참조는 이들 서류 중 어느 하나가 당해 분야의 통상적인 일반적인 지식의 일부를 형성한다는 인정을 구성하는 것은 아님을 알 것이다.

상기 발명의 요지를 이해의 명확성을 위해 예시 및 실시예에 의해 일부 상세히 기재하였지만, 몇몇 변화 및 변형을 첨부된 청구항의 범위내에서 실시할 수 있음은 당해 분야의 숙련가들에 의해 이해될 것이다.

[미생물기탁]

기탁기관명: 아메리칸 타입 컬쳐 컬렉션(ATCC)

수탁번호: PTA-122161

수탁일자: 2015년 5월 12일

SEQUENCE LISTING <110> FMC Corporation <120> BACILLUS THURINGIENSIS RTI545 COMPOSITIONS AND METHODS OF USE FOR BENEFITING PLANT GROWTH AND CONTROLLING PLANT PESTS <130> 61107 <140> PCT/US2017/055338 <141> 2017-10-05 <150> US 62/404,275 <151> 2016-10-05 <160> 2 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 1544 <212> DNA <213> Bacillus thuringiensis <400> 1 agaaaggagg tgatccagcc gcaccttccg atacggctac cttgttacga cttcacccca 60 atcatctgtc ccaccttagg cggctggctc caaaaaggtt accccaccga cttcgggtgt 120 tacaaactct cgtggtgtga cgggcggtgt gtacaaggcc cgggaacgta ttcaccgcgg 180 catgctgatc cgcgattact agcgattcca gcttcatgta ggcgagttgc agcctacaat 240 ccgaactgag aacggtttta tgagattagc tccacctcgc ggtcttgcag ctctttgtac 300 cgtccattgt agcacgtgtg tagcccaggt cataaggggc atgatgattt gacgtcatcc 360 ccaccttcct ccggtttgtc accggcagtc accttagagt gcccaactta atgatggcaa 420 ctaagatcaa gggttgcgct cgttgcggga cttaacccaa catctcacga cacgagctga 480 cgacaaccat gcaccacctg tcactctgct cccgaaggag aagccctatc tctagggttt 540 tcagaggatg 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Claims (35)

1. 감수성 식물에서 식물 생장에 이득이 되거나 식물 해충에 대한 보호를 부여하거나 이 둘 모두를 위해 식물에 적용하기 위한,
   ATCC 번호 PTA-122161로서 기탁된 바실러스 튜린지엔시스(Bacillus thuringiensis) RTI545의 생물학적으로 순수한 배양물, 및
   농업적으로 허용 가능한 보조제
   를 포함하는 조성물.
2. 제 1 항에 있어서,
   식물 해충이 곤충, 선충, 식물 진균성 병원체 또는 식물 세균성 병원체를 포함하는 조성물.
3. 제 1 항에 있어서,
   바실러스 튜린지엔시스 RTI545의 생물학적으로 순수한 배양물이 포자 또는 영양세포 또는 무세포(cell-free) 추출물의 형태인 조성물.
4. 제 1 항에 있어서,
   보조제가 식재 기질, 담체, 결합제, 계면활성제, 분산제 또는 효모 추출물을 포함하는 조성물.
5. 제 1 항에 있어서,
   감수성 식물에서 식물 생장에 이득이 되고/되거나 병원성 감염에 대한 보호를 부여하기에 적합한 양으로 존재하는 살충제, 살진균제, 살선충제, 살균제, 생물자극제, 제초제, 식물 추출물, 미생물 추출물, 식물 생장 조절제 및 비료 중 하나 또는 이들의 조합을 또한 포함하는 조성물.
6. 제 1 항에 있어서,
   화학적 살충제를 추가로 포함하는 조성물.
7. 제 6 항에 있어서,
   화학적 살충제가 클로르안트라닐리프롤, 클로르에톡시포스, 클로르피리포스-e, 시안트라닐리프롤, 사이클라닐리프롤, 사이퍼메트린, 다이클로로프로펜, 플루피라디푸론, 감마-사이할로트린, 프로페노포스, 테부피림포스, 테플루트린, 카파-바이펜트린, 카파-테플루트린, 카보퓨란, 카보설판, 옥사밀, 티오디카브, 클로르피리포스, 클로르피리포스-e, 클로르피리포스-메틸, 다이아지논, 포레이트, 테르부포스, 피프로닐, 아세트아미프리드, 클로티아니딘, 이미다클로프리드, 티아클로프리드, 티아메톡삼, 아바멕틴, 플로니카미드, 플루벤다이아미드, 바이펜트린, 람다-사이할로트린, 사이퍼메트린, 제타-사이퍼메트린, 델타메트린, 피리다벤 또는 이들의 임의의 혼합물을 포함하는 조성물.
8. 제 7 항에 있어서,
   화학적 살충제가 바이펜트린을 포함하는 조성물.
9. 제 1 항에 있어서,
   화학적 살진균제를 추가로 포함하는 조성물.
10. 제 9 항에 있어서,
    화학적 살진균제가 티아벤다졸, 플룩사피록사드, 펜플루펜, 세닥산, 바이테르타놀, 사이프로코나졸, 다이페노코나졸, 플루퀸코나졸, 플루트리아폴, 이프코나졸, 마이클로부타닐, 프로티오코나졸, 트라이아디메폰, 트라이아디메놀, 테부코나졸, 트라이티코나졸, 프로클로라즈, 이마잘릴, 베노밀, 카벤다짐, 하이멕사졸, 아족시스트로빈, 플루옥사스트로빈, 파이라클로스트로빈, 트라이플록시스트로빈, 카복신, 플루톨라닐, 메탈락실, 메페녹삼, 펜티오피라드, 플루오피람, 실티오팜, 플루아지남, 피리메타닐, 플루다이옥소닐, 이프로디온, 트라이사이클라졸, 캅탄, 다조메트, 만코제브, 메탐, 티람, 구아자틴, 톨클로포스-메틸, 펜시큐론, 티오파네이트-메틸, 펜피콕사미드, 메펜트라이플루코나졸, 플루인다피르 또는 이들의 임의의 혼합물을 포함하는 조성물.
11. 제 1 항에 있어서,
    화학적 살선충제(nematicide)를 추가로 포함하는 조성물.
12. 제 11 항에 있어서,
    화학적 살선충제가 베노밀, 페나미포스, 카두사포스, 에토프로포스, 포스티아제이트, 클로로피크린, 다조메트, 플루엔설폰, 옥사밀, 1,3-다이클로로프로펜(텔론), 메탐 나트륨, 메탐 칼륨, 메틸 브로마이드, 알릴 아이소티오시아네이트, 플루아자인돌리진, 티옥사자펜, 플루오피람 또는 이들의 임의의 혼합물을 포함하는 조성물.
13. 제 1 항에 있어서,
    액체 비료 또는 작물 영양 제품과 혼화성인 제형인 조성물.
14. 제 13 항에 있어서,
    수화된 알루미늄-마그네슘 실리케이트 및 하나 이상의 분산제를 추가로 포함하는 조성물.
15. 제 13 항에 있어서,
    바이펜트린 살충제를 포함하고, 상기 바이펜트린 살충제가 0.1 g/㎖ 내지 0.2 g/㎖ 범위의 농도로 존재하는 조성물.
16. 감수성 식물에서 식물 생장에 이득이 되거나 식물 해충에 대한 보호를 부여하거나 이 둘 모두를 위한 방법으로서, ATCC 번호 PTA-122161로서 기탁된 바실러스 튜린지엔시스 RTI545의 생물학적으로 순수한 배양물을 포함하는 제 1 항 내지 제 15 항 중 어느 한 항에 따른 조성물을, 상기 식물, 식물 부분, 상기 식물의 종자, 상기 식물의 뿌리, 상기 식물 주변의 토양 또는 생육 배지, 또는 상기 식물의 식재 또는 상기 식물의 종자의 파종 전의 토양 또는 생육 배지에, 상기 감수성 식물에서 상기 식물 생장에 이득이 되고/되거나 상기 식물 해충에 대한 보호를 부여하기에 적합한 양으로 전달함을 포함하는 방법.
17. 감수성 식물에서 식물 생장에 이득이 되거나 식물 해충에 대한 보호를 부여하거나 이 둘 모두를 위한 방법으로서, 상기 식물의 종자를 식재함을 포함하고, 상기 종자가 ATCC PTA-122161로서 기탁된 바실러스 튜린지엔시스 RTI545의 생물학적으로 순수한 배양물을 포함하는 제 1 항 내지 제 15 항 중 어느 한 항에 따른 조성물로 코팅되었고, 상기 종자로부터 상기 식물의 생장이 이득이 되고/되거나 상기 식물 해충에 대한 보호가 부여되는 방법.
18. 제 16 항에 있어서,
    식물이 옥수수, 대두, 감자, 목화, 토마토, 후추, 조롱박, 사탕수수, 땅콩 또는 밀을 포함하는 방법.
19. 제 16 항에 있어서,
    식물 해충이 라이구스 스페시즈(Lygus spp.), 콜레오프테라(Coleoptera), 디아브로티카 스페시즈(Diabrotica spp.), 멜라노투스 스페시즈(Melanotus spp.), 필로파가 스페시즈(Phyllophaga spp.), 리모니우스 스페시즈(Limonius spp.), 아그리오테스 스페시즈(Agriotes spp.), 레피도프테라(Lepidoptera), 페리드로마 스페시즈(Peridroma spp.), 육소아 스페시즈(Euxoa spp.), 아그로티스 스페시즈(Agrotis spp.), 디프테라(Diptera), 하일레미야 스페시즈(Hylemya spp.), 테타노프스 스페시즈(Tetanops sp.), 헤미프테라(Hemiptera), 펨피구스 스페시즈(Pemphigus sp.), 아피스 스페시즈(Aphis sp.), 아고노데루스 스페시즈(Agonoderus sp.), 펠티아 스페시즈(Feltia spp.) 및 이들의 조합으로 이루어지는 그룹 중에서 선택된 곤충을 포함하는 방법.
20. 제 19 항에 있어서,
    식물 해충이 노린재, 뿌리벌레, 방아벌레, 토양에 사는 구더기, 또는 굼벵이 집합체를 포함하는 방법.
21. 제 16 항에 있어서,
    식물 해충이 로틸렌쿨루스 스페시즈(Rotylenchulus　spp.), 자이피네마 스페시즈(Xiphinema　spp.), 호플롤라이무스 스페시즈(Hoplolaimus　spp.), 파라틸렌쿠스 스페시즈(Paratylenchus spp.), 크리코네모이데스 스페시즈(Criconemoides　spp.), 멜로이도지네 스페시즈(Meloidogyne　spp.), 헤미사이클리오포라 스페시즈(Hemicycliophora　spp.), 헬리코틸렌쿠스 스페시즈(Helicotylenchus　spp.), 트리코도루스 스페시즈(Trichodorus spp.), 헤테로데라 스페시즈(Heterodera　spp.), 벨로놀라이무스 스페시즈(Belonolaimus spp.), 틸렌코린쿠스 스페시즈(Tylenchorhynchus　spp.), 글로보데라 스페시즈(Globodera spp.) 및 이들의 조합으로 이루어지는 그룹 중에서 선택된 식물 병원성 선충을 포함하는 방법.
22. 제 21 항에 있어서,
    선충이 멜로이도지네 스페시즈 선충, 프라틸렌쿠스 스페시즈 선충, 글로보데라 스페시즈 선충 또는 헤테로데라 스페시즈 선충을 포함하는 방법.
23. 제 16 항에 있어서,
    식물 해충이 알테르나리아 스페시즈(Alternaria spp.), 아스퍼질러스 스페시즈(Aspergillus spp.), 보트리티스 스페시즈(Botrytis spp.), 세르코스포라 스페시즈(Cercospora spp.), 푸사리움 스페시즈(Fusarium spp.), 피토프토라 스페시즈(Phytophthora spp.), 리조크토니아 스페시즈(Rhizoctonia spp.), 마그나포르테 스페시즈(Magnaporthe spp.), 피티움 스페시즈(Pythium spp.), 모닐리니아 스페시즈(Monilinia spp.), 콜레토트리쿰 스페시즈(Colletotrichum spp.), 스클레로티니아 스페시즈(Sclerotinia spp.) 및 에르위니아 스페시즈(Erwinia spp.)로 이루어지는 그룹 중에서 선택된 식물 진균성 병원체 또는 식물 세균성 병원체를 포함하는 방법.
24. 제 23 항에 있어서,
    식물 진균성 병원체가 리조크토니아 스페시즈를 포함하는 방법.
25. 제 16 항에 있어서,
    식물의 종자에 액체 비료 또는 작물 영양 제품을 전달함을 추가로 포함하는 방법.
26. 감수성 식물에서 식물 생장에 이득이 되고/되거나 식물 해충에 대한 보호를 부여하기에 적합한 양으로 존재하는, ATCC 번호 PTA-122161로서 기탁된 바실러스 튜린지엔시스 RTI545의 생물학적으로 순수한 배양물의 포자를 포함하는 제 1 항 내지 제 15 항 중 어느 한 항에 따른 조성물로 코팅된 식물 종자.
27. 제 26 항에 있어서,
    종자가 옥수수, 대두, 감자, 목화, 토마토, 후추, 조롱박, 사탕수수, 땅콩 또는 밀의 종자를 포함하는, 식물 종자.
28. 제 17 항에 있어서,
    식물이 옥수수, 대두, 감자, 목화, 토마토, 후추, 조롱박, 사탕수수, 땅콩 또는 밀을 포함하는, 방법.
29. 제 17 항에 있어서,
    식물 해충이 라이구스 스페시즈(Lygus spp.), 콜레오프테라(Coleoptera), 디아브로티카 스페시즈(Diabrotica spp.), 멜라노투스 스페시즈(Melanotus spp.), 필로파가 스페시즈(Phyllophaga spp.), 리모니우스 스페시즈(Limonius spp.), 아그리오테스 스페시즈(Agriotes spp.), 레피도프테라(Lepidoptera), 페리드로마 스페시즈(Peridroma spp.), 육소아 스페시즈(Euxoa spp.), 아그로티스 스페시즈(Agrotis spp.), 디프테라(Diptera), 하일레미야 스페시즈(Hylemya spp.), 테타노프스 스페시즈(Tetanops sp.), 헤미프테라(Hemiptera), 펨피구스 스페시즈(Pemphigus sp.), 아피스 스페시즈(Aphis sp.), 아고노데루스 스페시즈(Agonoderus sp.), 펠티아 스페시즈(Feltia spp.) 및 이들의 조합으로 이루어지는 그룹 중에서 선택된 곤충을 포함하는, 방법.
30. 제 29 항에 있어서,
    식물 해충이 노린재, 뿌리벌레, 방아벌레, 토양에 사는 구더기, 또는 굼벵이 집합체를 포함하는, 방법.
31. 제 17 항에 있어서,
    식물 해충이 로틸렌쿨루스 스페시즈(Rotylenchulus　spp.), 자이피네마 스페시즈(Xiphinema　spp.), 호플롤라이무스 스페시즈(Hoplolaimus　spp.), 파라틸렌쿠스 스페시즈(Paratylenchus spp.), 크리코네모이데스 스페시즈(Criconemoides　spp.), 멜로이도지네 스페시즈(Meloidogyne　spp.), 헤미사이클리오포라 스페시즈(Hemicycliophora　spp.), 헬리코틸렌쿠스 스페시즈(Helicotylenchus　spp.), 트리코도루스 스페시즈(Trichodorus spp.), 헤테로데라 스페시즈(Heterodera　spp.), 벨로놀라이무스 스페시즈(Belonolaimus spp.), 틸렌코린쿠스 스페시즈(Tylenchorhynchus　spp.), 글로보데라 스페시즈(Globodera spp.) 및 이들의 조합으로 이루어지는 그룹 중에서 선택된 식물 병원성 선충을 포함하는, 방법.
32. 제 31 항에 있어서,
    선충이 멜로이도지네 스페시즈 선충, 프라틸렌쿠스 스페시즈 선충, 글로보데라 스페시즈 선충 또는 헤테로데라 스페시즈 선충을 포함하는, 방법.
33. 제 17 항에 있어서,
    식물 해충이 알테르나리아 스페시즈(Alternaria spp.), 아스퍼질러스 스페시즈(Aspergillus spp.), 보트리티스 스페시즈(Botrytis spp.), 세르코스포라 스페시즈(Cercospora spp.), 푸사리움 스페시즈(Fusarium spp.), 피토프토라 스페시즈(Phytophthora spp.), 리조크토니아 스페시즈(Rhizoctonia spp.), 마그나포르테 스페시즈(Magnaporthe spp.), 피티움 스페시즈(Pythium spp.), 모닐리니아 스페시즈(Monilinia spp.), 콜레토트리쿰 스페시즈(Colletotrichum spp.), 스클레로티니아 스페시즈(Sclerotinia spp.) 및 에르위니아 스페시즈(Erwinia spp.)로 이루어지는 그룹 중에서 선택된 식물 진균성 병원체 또는 식물 세균성 병원체를 포함하는, 방법.
34. 제 33 항에 있어서,
    식물 진균성 병원체가 리조크토니아 스페시즈를 포함하는, 방법.
35. 제 17 항에 있어서,
    식물의 종자에 액체 비료 또는 작물 영양 제품을 전달함을 추가로 포함하는 방법.
    

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