KR102407703B1

KR102407703B1 - 반려동물의 종양 질병을 보조적으로 진단하는 바이오마커 검사방법

Info

Publication number: KR102407703B1
Application number: KR1020190135771A
Authority: KR
Inventors: 주후돈; 김현정; 김남호
Original assignee: 바디텍메드(주)
Priority date: 2018-10-30
Filing date: 2019-10-29
Publication date: 2022-06-22
Also published as: KR20200049647A

Abstract

본 발명은 반려동물의 종양 질병 검사방법으로서, 반려동물에서 종양 질병의 보조적 진단을 위한 3가지 바이오마커를 복합적으로 사용하는 방법을 제공한다.상기와 같은 본 발명에 따르면, 반려동물에서 종양 질병의 보조적 진단을 위한 3가지 바이오마커를 복합적으로 사용하는 방법을 사용함으로써, 반려동물에서 나타나는 여러 가지 종양 질병을 탐지하는 종양 질환 양성예측율이 기존에 73%에서 90%까지 증가하는 효과가 있다.

Description

반려동물의 종양 질병을 보조적으로 진단하는 바이오마커 검사방법 {Biomarker Test Method for Ancillary Diagnosis of Companion Tumor Diseases}

본 발명은 반려동물에서 악성종양의 검사방법에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 여러 바이오마커의 조합을 통하여 진단에 사용하는 방법에 관한 것이다.

동물에서 종양 질병은 인간과 달리 정기검진 등 종양 질병에 대하여 적절한 바이오마커의 탐지검사 등 보조적 진단 수단이 없다. 동물에서는 일반 동물병원에서 조형검사, 조직검사 등 정밀검사를 일상적으로 수행할 수 없어 한계가 있다. 일반적으로 사람의 경우에도 단백질이나 DNA, RNA(리보핵산), 대사 물질 등을 이용해 몸 안의 변화를 알아낼 수 있는 지표인 바이오마커를 활용하면 생명체의 정상 또는 병리적인 상태, 약물에 대한 반응 정도 등을 객관적으로 측정한다. 이런 바이오마커를 반려 동물에게도 적용 가능하며, 반려 동물에서도 일반적으로 종양 질병은 여러 가지 염증, 혈관 내 변화를 수반하므로 이들 바이오마커는 종양 질병의 진단과 예후검사에 도움을 줄 수 있다.

그러나 아직까지 반려동물 종양 질병의 진단과 예방, 관리는 인간의 종양 질병 관리와 달리 정밀검사를 일상적으로 사용할 수 없는 비용 및 시스템의 한계가 있으며, 특히 바이오마커를 복합적으로 적용하여 반려동물에 대한 악성종양을 검출하는 방식은 제시되지 않았다.

인간의 경우 정기적 검진 시스템으로 각종 질병 및 종양 질환 등의 예방으로 고령 인구에 대한 건강 관리가 이루어지고 있으나, 반려동물의 경우는 6세 이상의 노령견의 비율이 35%를 넘어감에도 불구하고 정기검진 시스템이 일반적이지 않고 검진 항목도 부족한 것이 현실이다.

따라서 본 발명은 바이오마커를 복합적으로 사용하여 반려동물의 종양 질환을 간단하면서도 높은 정확도로 진단할 수 있는 보조적인 진단 방법을 제시하고자 한다.

본 발명의 목적은, 반려동물의 혈액으로 3종의 바이오마커 검사를 수행함으로써, 반려동물에서 나타나는 여러 가지 종양 질병을 간단하면서도 높은 정확도로 진단할 수 있는 진단 방법을 제안하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 반려동물로부터 채취된 시료 내의 복수의 바이오마커를 측정하여 각각의 바이오마커에 대해 측정값을 생성하는 단계, 상기 바이오마커 측정값과 해당 기준값을 비교하는 단계 및 상기 바이오마커 측정값이 상기 기준값을 초과하는 바이오마커의 개수에 따라 상기 반려동물의 종양 질병의 가능성을 판단하는 단계를 포함하는 반려동물의 종양 질병 검사방법을 제공한다.

상기와 같은 본 발명에 따르면, 반려동물의 종양 질병을 보조적으로 진단하는 3가지 바이오마커를 복합적으로 사용함으로써, 반려동물에서 나타나는 여러 가지 종양 질병을 탐지하는 종양 질환의 양성 예측율이 기존의 73%에서 90%까지 증가하는 효과가 있다.

도 1은 본 발명의 실시예에 따른 cCRP 검사 방법을 설명하는 도면이다.
도 2는 본 발명의 실시예에 따른 D-dimer 검사 방법을 설명하는 도면이다.
도 3은 본 발명의 실시예에 따른 AFP 검사 방법을 설명하는 도면이다.
도 4는 본 발명의 실시예에 따른 전용 장비의 화면을 도시한다.
도 5는 본 발명의 실시예에 따른 cCRP, D-dimer, AFP카트리지의 면역형광검사 원리를 설명하는 도면이다.
도 6은 본 발명의 실시예에서 사용된 카트리지의 하우징을 설명하는 도면이다.
도 7은 본 발명의 실시예에서 사용된 스트립의 구조를 설명하는 도면이다.
도 8은 본 발명의 실시예에 따라 적용된 시약을 설명하는 도면이다.

이하, 첨부된 도면을 참조하여 본 발명의 실시예를 상세히 설명한다.

본 발명의 일 형태는 반려동물에서 종양 질병을 보조적으로 진단하기 위한 바이오마커 검사방법을 제공한다.

상기 반려동물의 종양 질병 검사방법은 반려동물로부터 채취된 시료 내의 복수의 바이오마커를 측정하여 각각의 바이오마커에 대해 측정값을 생성하는 단계, 상기 바이오마커 측정값과 해당 기준값을 비교하는 단계 및 상기 바이오마커 측정값이 상기 기준값을 초과하는 바이오마커의 개수에 따라 상기 반려동물의 종양 질병의 가능성을 판단하는 단계를 포함한다.

상기 반려동물은 포유류이고, 바람직하게는 개(Dog)일 수 있다.

상기 시료는 반려동물의 세포, 전혈, 혈청, 혈장, 타액, 객담, 뇌척수액 또는 뇨 중에 하나 이상을 선택할 수 있다.

상기 바이오마커 측정은 광학분석 장치인 형광 판독기를 이용하며, 바람직하게는 형광 LFI를 통해 수행될 수 있다. 상기 형광 LFI는 ELISA와 같은 원리로 항체를 이용하여 타겟을 검출하는 면역학적인 방법이나, 일반적인 ELISA는 항체에 효소를 라벨링 하여 검출하는 반면에 형광 LFI는 형광을 라벨링 하는 방식으로 시료 내에 부착된 형광을 읽고 수치화로 전환하여 단백질의 농도를 정량화한다. 더 바람직하게는 상기 형광 LFI 장치 중에 벳 크로마(Vet chroma)를 사용할 수 있다.

상기 형광 LFI를 통해 분석 수행시 측방 유동 분석 스트립에 시료를 인가하여 검출한다.

측방 유동 분석 스트립(100)은 도 6에 그 구성을 도시하고 있다. 도시된 바와 같이, 측방 유동 분석 스트립(100)은 상하로 결합하여 이루어지는 하우징(102) 안에 모세관 유동을 허용하는 다공성 매트릭스(110)가 형성된다. 시료와 검출 버퍼가 혼합된 용액은 샘플 포트(104)를 통해 샘플 패드(120)에 인가되어 다공성 매트릭스(110)로 흐른다. 다공성 매트릭스(110) 상에서 샘플 패드(120)로부터 하류(downstream) 방향으로 테스트라인(140)과 컨트롤라인(160)이 위치한다. 테스트라인(140)과 컨트롤라인(160)에는 캡처 에이전트가 물리흡착 방식으로 고정되어 있다. 캡처 에이전트는 분석물질에 반응하는 특정 항체, 항원, 또는 일정한 서열의 핵산에 교잡하는 올리고뉴클레오타이드일 수 있다. 바람직하게는 상기 캡처 에이전트는 D-dimer, AFP 또는 cCRP 단백질일 수 있다. 다공성 매트릭스(110)의 하류 단부에는 흡수 패드(170)가 배치된다. 흡수 패드(170)는 샘플 포트(104)에 인가된 과량의 액상 시료를 흡수하고, 다공성 매트릭스(110)를 따르는 측방 유동을 유지한다.

컨트롤라인(160)은 테스트라인(140)의 상류 또는 하류 측에 위치할 수 있다. 컨트롤라인(160)에는 양성 또는 음성 대조군 시약, 또는 캡처 에이전트가 고정된다.

형광 LFI에서 검출 가능한 형광 표지는 금 나노입자, 착색된 라텍스 비드, 탄소 나노입자, 셀레늄 나노입자, 은 나노입자, 퀀텀닷(quantum dots), 업 변환 형광체(up converting phosphors), 유기 형광체(organic fluorophores)로 구성된 그룹에서 선택될 수 있다. 바람직하게는 업 변환 형광체(up converting phosphors) 중에서 란탄계열의 형광체 유로퓸(Europium, EU(Eu₂O₃)), 가돌리늄(Gadolinium, Gd(Gd₂O₃)), 터븀(Terbium, Tb(Tb₄O₇)) 또는 이터븀(Ytterbium, Yb(Yb₂O₃)) 원자가 접합한 형광 접합 항체일 수 있다.

상기 바이오마커는 D-dimer, AFP, cCRP 단백질로 이루어진 군에서 하나 이상을 선택할 수 있고, 상기 바이오마커 3종을 모두 선택하여 사용하는 것이 바람직하다.

상기 기준값은 반려동물의 종양 진단 기준이 되는 수치이며, 이는 상기 바이오마커의 컷오프(cut off) 농도값을 기준으로 설정된 값이다. 이때 설정 기준이 된 컷오프 농도값은 바이오마커의 민감도가 80%일 때를 기준으로 설정한 바이오마커 농도 수치이다.

상기 컷오프 농도값은 각각의 바이오마커 별로 상이하여 D-dimer는 66.46 ng/ml 이상이고, AFP는 39.24 ng/ml 이상이며, cCRP는 2.81 ng/ml 이상을 기준으로 한다. 이때 바이오마커의 측정값이 각각의 컷오프 농도값 이상일 경우 반려동물의 종양 진단 여부를 진단할 수 있다.

종양 진단이 가능한 종양에는 상피세포암(SCC(Squamous-cell carcinoma), TCC(transitional cell carcinoma)), 항문종양(Anal sac adenocarcinoma, Perianal adeno carcinoma), 폐종양(Lung adenocarcinoma, Pulmonary adenosquamous cell carcinima), 간암(HCC(Hepatocellular carcinoma)), 림프종(Multicentric lymphoma, lymphoma), 경동맥암(Carotid body tumor), 비강세포암(Nasal cell carcinoma), 난소암(Ovarian carcinoma), 구강 흑색종/비만세포종(melanoma in oral, Mast cell tumor), 기관지확장증/갑상선 낭종(Thyroglosa duct cyst with bronchiectasis), 담낭 점액낭종(gallbladder mucocele), 기저세포종(basal cell carcinoma), 유선종양 등이 있다.

상기 위험군을 분류하는 단계는 상기 바이오마커 측정값이 기준값을 초과하는 바이오마커 개수에 따라 분류할 수 있다.

상기 분류는, 상기 바이오마커 개수가 하나일 경우에는 위험군, 2개일 경우 고위험군, 3개일 경우에는 초고위험군으로 분류하는 것이다.

본 발명은 반려동물에서 상기와 같은 3가지 바이오마커의 검사를 통하여 여러 가지 종양 질병의 보조적 진단정보를 제공하는 방법을 제시한다. 사람에서는 악성종양의 진단을 위하여 AFP, CEA, PSA, CA-12 등 종양의 종류, 단계에 따라 다양한 바이오마커가 스크린 검사 또는 예후검사를 위하여 사용된다. 이들 종양특이 바이오마커의 검사는 보조적 진단수단으로서 이미 많은 문헌에 의하여 그 유효성이 증명되어 왔다.

사람에서는 영상진단, 내시경, 조직검사를 통하여 1차 진단을 시행하고 종양을 특정하고, 해당 종양 특이적인 바이오마커 검사를 통하여 보조적인 정보를 획득하는 방식으로 진단을 시행한다.

하지만, 동물에서는 사람과 달리 영상진단, 생검과 같은 직접적 종양검사를 시행하는 것은 비용, 기술적 문제, 사회적 문제로 인하여 어려움이 있다. 본 발명자 등은 이러한 점에 착안하여 반려동물의 종양 질병을 완전하지는 않지만 3가지 일반적인 바이오마커 검사 결과의 조합을 통하여 보조적 진단정보를 제공하는 방법을 제시한다.

본 발명의 실시예에서 적용한 바이오마커는 다음과 같다.

1. Canine C-reactive protein(cCRP)

cCRP는 급성 염증 반응의 초기에 간에서 생성되는 급성기단백질(Acute phase Protein : APP)로 염증 반응이나 감염이 일어났을 때 혈액 내에 급격히 증가한다. 따라서 체내의 염증 반응이나 조직 손상에 빠르게 반응하여 감염이나 수술 전후의 모니터링에 사용될 수 있다. 염증은 많은 비정상 상태에 대한 기본적인 반응이므로 CRP 검사는 전신 염증의 존재를 탐지하는데 상대적으로 특이한 반면에 전신 염증의 원인에 대한 정보를 반드시 제공하지는 않는다. CRP 농도는 바이러스성 감염이 있는 개, 활동성 세균성 또는 곰팡이 감염이 있는 개, 일부 유형의 관절염과 같은 만성 염증성 질환이 있는 개, 때로는 암이 있는 개에서 높아진다고 알려져 있다. 따라서 암으로 인해 유발된 염증 발생 시 반려동물 암에서 증가할 것으로 판단된다.

2. D-dimer

범혈관내응고증(DIC)을 진단하는데 있어 중요한 검사법의 하나로 DIC는 혈관내 응고기전이 활성화되고 여기에 이어 섬유소 용해가 계속적으로 일어나는 상태인데 이때 D-dimer가 증가한다. D-dimer는 혈전형성 질환에서도 증가하기 때문에 심부정맥 혈전증(DVT)이나 폐색전증의 진단에도 이용된다. D-dimer 역시 암세포 유발 혈전 발생 시에도 증가할 가능성이 있다고 판단된다.

3. α-페토프로테인[α-fetoprotein : AFP]

α-페토프로테인은 원발성간암(原發性肝癌) 환자의 혈액 중에서 검출된다는 사실이 알려진 후로 임상 검사에 등장하게 되었다. AFP는 간암세포에서 만들어진다는 사실이 확인되고 있으며, 태아간(胎兒肝)과 종양과의 공통 단백이라는 사실에서 암태아단백(癌胎兒蛋白, carcinofetal protein)이라고 일컬어지고 있다. 원발성간암의 90%에서 AFP가 양성이며, 혈중에서 AFP를 검출할 수 없는 원발성간암도 간암세포에서는 만들어지고 있으나 분비되지 않을 뿐이라고 말해지고 있다. 그 밖에 위암의 일부에서도 만들어지고 있으며, 또 간염, 간경변환자에서도 일과성으로 혈중에서 높은 수치를 나타내는 경우가 있다. 고환(睾丸)이나 난소의 태아성 암(胎兒性癌)도 AFP를 생성한다. 따라서 암으로 인해 유발된 염증 발생 시 반려동물 암에서 증가할 것으로 판단된다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지는 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.

실시예 1.

건강한 실험군인 대조군과 악성종양을 가진 실험군의 혈액을 채취하여 준비한다. 준비된 혈액을 원심분리로 분리하여 혈장을 준비한다. 모세관 캡(Capillary cap)의 마개 부분을 이용하여 검사액 뚜껑에 구멍을 낸 다음, 피펫으로 검체(혈장) 또는 정도 관리 물질(Vet chroma의 Quality를 유지화기 위하여 확인하는 Control 시료) 50㎕ 를 취하여 d-Dimer 검사액이 들어있는 튜브에 넣는다. 모세관 캡을 검사액 튜브에 완전히 삽입하고 샘플과 검사액이 잘 석이도록 10번 이상 흔들어 준다. 샘플과 석인 검사액 튜브의 모세관 캡의 마개를 제거하고, 검사액 튜브를 눌러 2 방울을 버린 후, 다음 2 방울을 카트리지의 샘플 투입구에 넣어준다. 분주된 검사 카트리지를 전용 장비에 장착 후 검사를 시작한다. 12분 경과 후, 자동으로 측정된다. 형광 LFI 전용 장비인 벳 크로마(Vet chroma)의 측정값 결과(스크리닝 검사 결과)를 화면에서 확인한다.

실시예 2.

상기 실시예 1과 동일하게 수행하되, 상기 d-Dimer 검사액 대신에 AFP 검사액이 들어있는 튜브를 사용하여 수행한다. 분주된 검사 카트리지를 전용 장비에 장착 후 검사를 시작한다. 15분 경과 후, 자동으로 측정된다

실시예 3.

상기 실시예 1과 동일하게 수행하되, 검체의 양의 10㎕ 를 취하고, d-Dimer 검사액 대신에 cCRP 검사액이 들어있는 튜브를 사용하고, 상기 분주된 검사 카트리지를 전용 장비에 장착 후 검사를 시작하되 3분 경과 후 결과를 확인한다.

상기 실시예 1 내지 3에서 수행한 측정 결과는 아래 표 1과 같았다.

Diagnostic Decision (진단명)		스크리닝 검사 결과 (mean concentration, 평균값)
Diagnostic Decision (진단명)		D-dimer [ng/ml]	AFP[ng/ml]	cCRP [mg/L]	No. of Samples
상피세포암	SCC(Squamous-cell carcinoma), TCC(transitional cell carcinoma)	1575.01	81.05	51.6	8
항문종양	Anal sac adenocarcinoma, Perianal adeno carcinoma	1607.09	119.68	44.58	6
폐종양	Lung adenocarcinoma, Pulmonary adenosquamous cell carcinima	4744.23	59.36	119.03	4
간암	HCC(Hepatocellular carcinoma)	3081.97	876.12	43.29	14
림프종	Multicentric lymphoma, lymphoma	179.77	141.18	4.74	24
경동맥암	Carotid body tumor	169.69	46.45	5.58	4
비강세포암	Nasal cell carcinoma	931.64	66.7	12.63	5
난소암	Ovarian carcinoma	3058.38	74.56	59.67	3
구강 흑색종, 비만세포종	melanoma in oral/Mast cell tumor	143.34	31.57	26.16	3
기관지확장증, 갑상선 낭종	Thyroglosa duct cyst with bronchiectasis	1077.66	164.25	299.3	2
담낭 점액낭종	gallbladder mucocele	8738	51.63	123.61	5
기저세포종	basal cell carcinoma	66.67	98.54	16.54	1
종양검체 전체	Cancer group	2114.45	150.93	67.23	79
건강한 개체	Healthy control	149.69	71.09	4.97	30
참고치	Human	250	70	10	-

이때 실시예 1 내지 3의 측정값을 비교할 기준이 되는 종양검사 기준농도는 민감도(Sensitivity)가 80% 이상인 기준의 각각의 마커별 컷오프이며, 해당 농도는 아래 표 2와 같다.

바이오마커	단위	검출범위	정상치	종양 진단	P value	AUC	민감도	특이도
D-Dimer	ng/mL	50-10.000	<250	>=66.46	0.004	0.693	80%	50%
AFP	ng/mL	5-350	<20	>=39.24	0.706	0.527	80%	27%
cCRP	mg/L	5-500	<10	>=2.81	0.245	0.583	80%	23%

상기 표 2에서 측정된 정상군 개체수는 30마리의 개, 질병군(종양 질환)의 개체수는 79마리의 개이고, ROC curve 분석 사용 통계 프로그램은 MediCalc을 사용하였다.

산출예 1.

상기와 같이 D-dimer 개 종양 질환에서의 민감도 80% 기준 컷오프 농도는 66.46 ng/ml, AFP 개 종양 질환에서의 민감도 80% 기준 컷오프 농도는 39.24 ng/ml, cCRP 개 종양 질환에서의 민감도 80% 기준 컷오프 농도는 2.81 ng/ml 임을 확인하였다.

이를 기준으로 측정한 각각의 바이오마커의 평균값은 하기 표 3과 같다.

	D-dimer		AFP		cCRP
	Diagnostic Decision (진단명)		Diagnostic Decision (진단명)		Diagnostic Decision (진단명)
Vet chroma 측정	Positive	Negative	Positive	Negative	Positive	Negative
Positive	64	15	64	23	63	23
Negative	15	15	15	7	16	7
민감도(Sen.)	81%		81%		80%
특이도(Sep.)	50%		23%		23%
Accuracy	72%		65%		64%
양성 예측율(PPV) =TP/(TP+FP)	81%		74%		73%

상기 표 3을 참조하면 확인 가능한 항목들이 다음과 같다.

상기 Positive 항목은 종양 질환이라고 판정한 개체수를 의미한다. Vet chroma 측정 결과에서의 Positive의 의미를 설명 하자면 정상군 30, 종양 질환 질병군 70개체의 혈액 시료에서 AFP, D-dimer. cCRP를 측정하여 Medcalc 통계 프로그램으로 민감도 80% 기준인 컷오프 농도를 산출 후 그 농도보다 높은 개체를 의미하며, 상기 Negative 항목은 상위 Positive 판단기준인 선정 컷오프 농도보다 하위 개체를 의미한다.

상기 민감도는 종양 질환이 있는 개체군에서 양성 판정을 받을 확률이며, 즉 종양 질환 환자군에서 Vet chroma 측정 결과로 Positive(양성)라고 진단받을 확률을 의미한다.

상기 특이도는 정상군 개체에서 음성 판정을 받을 확률이며, 즉 정상군 개체군에서 벳 크로마 측정 결과로 Negative(음성)이라고 진단받을 확률을 의미한다.

상기 정확도(Accuracy)는 전체 개체군에서 종양 질환이 있는 개체군을 Positive(양성)으로 판단하고, 정상군을 Negative(음성)으로 판단할 확률로, 즉 진단명과 벳 크로마 양성, 음성 판정률이 일치할 확률을 의미한다.

상기 양성 예측율은 양성개체군에서 진단명의 종양 질환이 있을 확률로, 상기 계산식과 의미에 대하여 다음과 같이 설명한다.

		Diagnostic Decision (진단명) Positive	Diagnostic Decision (진단명) Negative		Sub Total
Vet chroma Positive		True positive(TP)	False Positive(FN)		TP+FP
Vet chroma Negative		False Negative(FN)	False Negative(FN)		FN+TN
Sub Total		TP+FN	FP+TN		TP+FP+FN+TN
Sensitivity(민감도)	진단 Positive군에서 Vet chroma 측정결과로 양성 판정 받을 확률			TP/(TP+FN)*100
Specificity(특이도)	진단 Negative에서 Vet chroma 측정결과로 음성 판정 받을 확률			TN/(FP+TN)*100
Accuracy (정확도)	전체개체군에서 종양 질환을 양성으로 정상군을 음성으로 판정할 확률			TP+TN/(TP+FP+FN+TN)*100
Positive predictive value (PPV, 양성 예측율)	Vet chroma 검사기준 양성개체군에서 진단명의 종양 질환(Positive)이 있을 확률			TP/(TP+FP)*100

상기 표 3를 참조하여 상기 양성 예측율을 확인하면, D-dimer마커의 검사를 통해 81% 종양 질병 양성추정률 진단할 수 있으며, 상기 AFP 마커의 검사를 통해 74% 종양 질병 양성추정률 진단 할 수 있고, 상기 cCRP 마커의 검사를 통해 73% 종양 질병 양성추정률 진단할 수 있음을 확인할 수 있었다. 상기와 같이 각각의 마커에서 Positive로 인식되어 양성추정률을 진단 할 수 있는 개체는 그만큼 양성종양일 확률이 높아지면서 양성종양 위험군으로 분류되어 관리할 수 있다.

산출예 2.

실시예 1 내지 실시예 3에서 측정된 마커들을 단일 검사로 검출하여 확인한 결과를 2종씩 분류한 후, 세개의 마커 중 한 개라도 종양 진단에 결과와 일치하면 Potitive, Negative로 인지하여 표 4와 같이 민감도, 특이도, 양성 양성 예측율을 분석한 결과 아래 표 5와 같은 양성 예측율을 얻을 수 있었다.

	D-dimer-AFP		D-dimer-cCRP		AFP-cCRP
	Diagnostic Decision (진단명)		Diagnostic Decision (진단명)		Diagnostic Decision (진단명)
Vet chroma 측정	Positive	Negative	Positive	Negative	Positive	Negative
Positive	74	14	75	10	75	19
Negative	5	16	4	20	4	11
민감도(Sen.)	94%		95%		95%
특이도(Sep.)	53%		67%		37%
Accuracy	83%		87%		79%
양성 예측율(PPV)=TP/(TP+FP)	84%		88%		80%

상기 표 5를 참조하여 상기 양성 예측율을 확인하면 D-dimer와 AFP의 스크린 검사를 통해서 84% 종양 질병 양성추정률을 진단할 수 있고(단일마커 D-dimer, AFP 검사의 (81, 74%)보다 양성진단율 높아짐), D-dimer와 cCRP의 스크린 검사를 통해서 88% 종양 질병 양성 예측율 진단할 수 있으며(단일마커 D-dimer, cCRP 검사의 (81, 73%)보다 양성진단율 높아짐), AFP와 cCRP의 스크린 검사를 통해서 80% 종양 질병 양성 예측율 진단할 수 있음을(단일마커 AFP, cCRP 검사의 (74, 73%)보다 양성진단율 높아짐) 확인할 수 있다. 이렇게 2개의 마커에서 Positive로 인식된 개체는 1개의 마커에서 Positive로 인식된 개체보다 그만큼 약성종양일 확률이 높아지면서 양성종양 고위험군으로 분류되어 관리할 수 있다.

산출예 3.

실시예 1 내지 실시예 3에서 측정된 마커들을 단일검사로 검출하여 확인한 결과를 토대로, 세 개의 마커 모두를 종양 진단에서 결과와 일치하면 Potitive, Negative로 인지하여 표 4와 같이 민감도, 특이도, 양성 양성 예측율을 분석한 결과 아래 표 6와 같은 양성예측율을 얻을 수 있었다.

	D-dimer-AFP-cCRP
	Diagnostic Decision (진단명)
Vet chroma	Positive	Negative
Positive	77	9
Negative	2	21
민감도(Sen.)	97%
특이도(Sep.)	70%
Accuracy	90%
양성 양성 예측율(PPV)=TP/(TP+FP)	90%

상기 표 6를 참조하면, D-dimer, AFP와 cCRP를 포함하는 3종의 마커 동시 검사 시 반려동물 종양 질환 양성 예측율이 90%로 단일마커나 2종의 마커 결합 검사 시보다 월등히 양성 예측율 높아짐을 확인 할 수 있다. 이렇게 3개의 마커에서 Positive로 인식된 개체는 2개 이하의 마커에서 Positive로 인식된 개체보다 그만큼 약성종양일 확률이 높아지면서 양성종양 초고위험군으로 분류되어 관리할 수 있다.

이상, 본 발명내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 실시양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의해 정의된다고 할 것이다.

100 측방 유동 분석 스트립
102 하우징
104 샘플 포트
110 다공성 매트릭스
120 샘플 패드
140 테스트라인
160 컨트롤라인
170 흡수 패드

Claims

반려동물에서 종양 질병의 보조적 진단을 위한 바이오마커 검사방법에 있어서,
반려동물로부터 채취된 시료를 측방 유동 분석 스트립에 인가하여 상기 시료 내의 D-dimer, AFP 및 cCRP를 바이오마커로 사용하여 각각의 농도를 측정하는 단계;
상기 D-dimer, AFP 및 cCRP 바이오마커 측정값과 각각의 바이오마커의 종양의 종류에 따른 민감도에 따라 설정된 고유의 기준값을 비교하는 단계; 및
상기 바이오마커 측정값이 상기 기준값을 초과하는 바이오마커의 개수에 상기 반려동물의 종양 질병의 가능성을 판단하는 단계를
포함하는 것을 특징으로 하는 바이오마커 검사방법.
제1항에 있어서,
상기 반려동물은 포유류인 것을 특징으로 하는 바이오마커 검사방법.
제1항에 있어서,
상기 시료는 세포, 전혈, 혈청, 혈장, 타액, 객담, 뇌척수액, 뇨 중 적어도 하나인 것을 특징으로 하는 바이오마커 검사방법.
제1항에 있어서,
상기 바이오마커 측정은 형광 LFI를 통해 수행되는 것을 특징으로 하는 바이오마커 검사방법.
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