Nothing Special   »   [go: up one dir, main page]

KR102396511B1 - 골전이암의 치료 효과 모니터링용 조성물 및 이를 포함하는 키트 - Google Patents

골전이암의 치료 효과 모니터링용 조성물 및 이를 포함하는 키트 Download PDF

Info

Publication number
KR102396511B1
KR102396511B1 KR1020200067694A KR20200067694A KR102396511B1 KR 102396511 B1 KR102396511 B1 KR 102396511B1 KR 1020200067694 A KR1020200067694 A KR 1020200067694A KR 20200067694 A KR20200067694 A KR 20200067694A KR 102396511 B1 KR102396511 B1 KR 102396511B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
cancer
cells
bone metastasis
monitoring
blood
Prior art date
Application number
KR1020200067694A
Other languages
English (en)
Other versions
KR20210150817A (ko
Inventor
조선욱
임석아
이경훈
Original Assignee
서울대학교병원
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 서울대학교병원 filed Critical 서울대학교병원
Priority to KR1020200067694A priority Critical patent/KR102396511B1/ko
Publication of KR20210150817A publication Critical patent/KR20210150817A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR102396511B1 publication Critical patent/KR102396511B1/ko

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57407—Specifically defined cancers
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • G01N33/56966—Animal cells
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57407—Specifically defined cancers
    • G01N33/57415—Specifically defined cancers of breast
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57484—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites
    • G01N33/57496—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites involving intracellular compounds
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/52—Predicting or monitoring the response to treatment, e.g. for selection of therapy based on assay results in personalised medicine; Prognosis

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

본 발명의 조성물 및 키트는 골 전이암 환자에 있어, 유리되는 혈중 순환 조골세포의 바이오마커인 오스테오칼신(Osteocalcin)을 검출할 수 있어 골 전이암의 치료 단계에서 치료 효과를 조기에 확인하여 모니터링할 수 있다. 또한, 본 발명의 골 전이암의 치료 효과 모니터링을 위한 정보제공 방법을 통해 골 전이암 환자 등의 적절한 치료 및 치료 효과를 향상시켜 기대수명을 늘릴 수 있다.

Description

골전이암의 치료 효과 모니터링용 조성물 및 이를 포함하는 키트 {Composition for monitoring the treatment efficacy of cancer bone metastasis and kit comprising the same}
본 발명은 골전이암의 치료 효과 모니터링용 조성물 및 이를 포함하는 키트에 관한 것이다.
골전이암은 유방, 폐, 위, 자궁, 갑상선 및 전립선 등 다양한 장기에 생긴 암이 시간이 경과함에 따라 뼈로 전이되는 것이며, 암의 골 전이라고도 한다. 상세하게 골전이암은 폐, 유방, 전립선, 신장, 간, 대장, 갑상선, 자궁, 위 및 방광 등의 장기에서 생긴 암이 원발소 병소에서 벗어나 뼈에 전이되어 동일 종류의 종양으로 발육하여 골 파괴를 일으키는 것을 말한다.
모든 암은 뼈로 전이될 수 있으며, 골전이암은 악성 골 종양 중 그 발생 빈도가 가장 흔한 것으로 알려져 있고 보통 다발성으로 발생된다. 암종에 따라 20 내지 85%까지 골전이암을 일으키는 것으로 보고 되고 있다. 다양한 진단, 치료 방법의 발달로 암 환자의 생존율이 증가되고 있으나, 암을 완전히 정복하지 못한 상태이기 때문에 골전이암 환자 수는 증가 추세에 있다.
많은 환자가 생존하는 동안, 통증, 병적 골절, 고칼슘증, 신경 증상, 전신 쇠약 등으로 전신 상태가 좋지 않아 치료에 어려움이 많으며, 이는 환자의 삶의 질을 낮추는 주된 원인들이기도 하다.
골전이암 환자의 8 내지 30%에서 병적 골절(pathologic fracture)이 발생되며, 골전이암 발생 부위의 골 파괴가 진행되면서 골절이 발생하는 경우를 병적 골절이라고 한다. 사지의 장골(long bone)에서 주로 발생된 골전이암은 심한 통증뿐만 아니라 보행 및 기능 장애를 일으키게 되고, 척추골에서 발생하는 경우에는 신경을 압박해서 심각한 신경마비, 대소변 기능 장애를 동반할 수 있다. 또한, 수술을 시행한 환자에서도 1년 생존율이 15 내지 20% 전후로 예후가 좋지 않다.
따라서 골전이암은 초기 진단 및 치료가 중요하며, 치료 반응을 모니터링하며 치료용량 및 방법을 적절하게 설정하는 것이 중요하다. 골전이암의 치료는 수술, 방사성 치료, 항암 치료 등의 여러 치료법을 단일 또는 병합하여 시행하고 있다.
현재 골전이암의 치료 전후 효과 판정은 다른 조직에서와 마찬가지로 영상이미지를 통해 모니터링하고 있으나, 경조직인 골의 특성상 치료 후 스카 형성 및 섬유화 변성 등으로 조직의 결핍이 남게 되면서 실제 치료효과의 판정은 어려운 상황이다. 또한, 골전이암의 치료효과 모니터링으로는 혈액 내의 종양 마커 단백(tumor marker) 또는 골표지자의 사용이 제시되어 있으나, 이들은 골전이암에 대한 특이성이 없어 정확한 치료 효과 판정이 어렵다.
본 발명은 골전이암의 치료단계에서 치료 효과를 모니터링할 수 있는 진단용 조성물 및 키트를 제공하는 것을 목적으로 한다.
또한, 본 발명은 골전이암의 치료 효과 모니터링을 위한 정보제공 방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.
1. 오스테오칼신(Osteocalcin)을 발현하는 혈액 유래 세포를 검출하는 물질을 포함하는 골전이암 치료 효과 모니터링용 조성물.
2. 위 1에 있어서, 상기 오스테오칼신을 발현하는 혈액 유래 세포를 검출하는 물질은 항체, 압타머, DNA, RNA, 단백질, 폴리펩티드로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나인, 골전이암 치료 효과 모니터링용 조성물.
3. 위 1에 있어서, 상기 검출은 오스테오칼신을 발현하는 혈중 순환세포 또는 이의 소기관을 검출하는 것인, 골전이암 치료 효과 모니터링용 조성물.
4. 위 1에 있어서, 상기 세포는 말초혈액단핵구인, 골전이암 치료 효과 모니터링용 조성물.
5. 위 1에 있어서, 상기 세포는 중간엽 줄기세포 유래 조골세포, 조혈모 줄기세포 유래 조골세포 또는 조혈모세포인, 골전이암 치료 효과 모니터링용 조성물.
6. 위 1에 있어서, 상기 암은 간암, 폐암, 방광암, 위암, 유방암, 자궁암, 대장암, 결장암, 혈액암, 난소암, 전립선암, 이자암, 지라암, 고환암, 흉선암, 뇌암, 식도암, 신장암, 담도암, 난소암, 신장암, 갑상선암 또는 피부암 중 선택되는 적어도 하나인, 골전이암 치료 효과 모니터링용 조성물.
7. 위 1에 있어서, 상기 암은 유방암 또는 갑상선암인, 골전이암 치료 효과 모니터링용 조성물.
8. 위 1 내지 7 중 어느 한 항의 조성물을 포함하는 골전이암 치료 효과 모니터링용 키트.
9. 진단 대상으로부터 분리된 시료 내 오스테오칼신을 발현하는 혈액 유래 세포를 검출하는 단계를 포함하는 골전이암 치료 효과를 모니터링하기 위한 정보제공 방법.
10. 위 9에 있어서, 상기 검출은 오스테오칼신을 발현하는 혈중 순환세포 또는 이의 소기관을 검출하는 것인, 골전이암 치료 효과 모니터링을 위한 정보제공 방법.
11. 위 9에 있어서, 상기 세포는 중간엽 줄기세포 유래 조골세포, 조혈모 줄기세포 유래 조골세포 또는 조혈모세포인, 골전이암 치료 효과 모니터링을 위한 정보제공 방법.
12. 위 9에 있어서, 상기 세포는 말초혈액 단핵구인, 골전이암 치료 효과 모니터링을 위한 정보제공 방법.
13. 위 9에 있어서, 상기 암은 간암, 폐암, 방광암, 위암, 유방암, 자궁암, 대장암, 결장암, 혈액암, 난소암, 전립선암, 이자암, 지라암, 고환암, 흉선암, 뇌암, 식도암, 신장암, 담도암, 난소암, 신장암, 갑상선암 또는 피부암 중 선택되는 적어도 하나인, 골전이암 치료 효과 모니터링을 위한 정보제공 방법.
14. 위 9에 있어서, 상기 암은 유방암 또는 갑상선암인, 골전이암 치료 효과 모니터링을 위한 정보제공 방법.
15. 위 1에 있어서, 상기 세포는 CD45+/osteocalcin+인 순환조골세포인, 조성물.
16. 위 9에 있어서, 상기 검출량이 치료 전 대비 감소하면 골전이암 치료 효과가 있는 것으로 판단하는 단계를 더 포함하는, 골전이암 치료 효과 모니터링을 위한 정보제공 방법.
17. 위 9에 있어서, 상기 검출된 세포 중 하기 수학식 1에 따른 순환조골세포의 수(%)를 계산하는 단계를 더 포함하는, 골전이암 치료 효과 모니터링을 위한 정보제공 방법.
[수학식 1]
순환조골세포(%) = (CD15-/osteocalcin+ 세포수)/CD15- 세포수 x 100(%)
(식 중, CD15-/osteocalcin+ 세포는 CD15는 발현하지 않고, 오스테오칼신을 발현하는 혈액 유래 세포이고, CD15- 세포는 CD15를 발현하지 않는 혈액 유래 세포임).
18. 위 17에 있어서, 상기 순환조골세포의 수가 치료 전 대비 감소하면 골전이암 치료 효과가 있는 것으로 판단하는 단계를 더 포함하는, 골전이암 치료 효과 모니터링을 위한 정보제공 방법.
본 발명은 기존에 주로 쓰이는 영상 의학적 기술 보다 간단하고 빠른 방법으로 골전이암의 치료 단계에서 치료효과를 모니터링할 수 있고, 치료효과에 따른 적절한 치료방법을 제안할 수 있어 환자의 생존율 및 기대수명을 향상시킬 수 있다.
도 1은 골전이암 환자에서 암세포 주사 후 1, 2, 3주차에서 in vivo Bioluminescence imaging (Xenogen IVIS, PerkinElmer)를 촬영하여 확인하고, 유방암 마우스 모델을 구축하여 매주 일차별 소동물 광학영상(bioluminescence imaging;BLI)을 확인한 것이다.
도 2는 골전이암 환자에서 Zometa 투여 후, 2, 3주차에서 in vivo Bioluminescence imaging (Xenogen IVIS, PerkinElmer)를 촬영하여 확인한 것이다.
도 3는 6개월 간격으로 측정한 cOC% 값을 나타낸 것으로, 도 3a는 개별환자의 6개월 사이 cOC% 의 변화를 표시한 것으로, 도 3b에서는 6개월/0개월의 변화를 비율로 표시한 것이다.
이하 본 발명을 상세히 설명한다.
본원에서 용어 "혈액 유래 세포"는 혈액에서 얻을 수 있는 모든 세포를 의미하며, 구체적으로 말초혈액단핵구, 중간엽 줄기세포 유래 조골세포, 조혈모 줄기세포 유래 조골세포, 조혈모세포 등을 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본원에서 용어, "치료 효과"는 일반적으로 골전이암에 쓰이는 치료제를 이용하여 치료하였을 경우, 치료 전에 비해 골전이암의 증상 또는 치료 정도가 개선되었는지를 나타내는 것이다.
본 발명은 오스테오칼신(Osteocalcin)을 발현하는 혈액 유래 세포를 검출하는 물질을 포함하는 골전이암 치료 효과 모니터링용 조성물에 관한 것이다.
오스테오칼신(Osteocalcin)을 발현하는 혈액 유래 세포는 예를 들면 말초혈액단핵구일 수 있다. 또한, 예를 들면 중간엽 줄기세포 유래 조골세포, 조혈모 줄기세포 유래 조골세포 또는 조혈모세포일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 오스테오칼신(Osteocalcin)을 발현하는 혈액 유래 세포를 검출하는 물질은 예를 들어, 오스테오칼신, 오스테오칼신으로 번역되는 mRNA, 상기 mRNA로 전사되는 DNA 또는 그의 상보적인 서열의 DNA를 표적으로 하는 항체, 압타머, DNA, RNA, 단백질, 펩타이드 등일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본원에서, "항체"란 항원성 부위에 특이적인 단백질 분자를 의미한다. 본원의 목적상, 항체는 상기 마커 단백질인 오스테오칼신에 특이적으로 결합하는 항체를 의미하며, 모노클로날 항체, 폴리클로날 항체 및 재조합 항체를 모두 포함할 수 있다.
상기 모노클로날 항체는 당해 분야에 널리 공지된 하이브리도마 방법, 또는 파지 항체 라이브러리기술을 이용하여 제조될 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다.
상기 폴리클로날 항체는 상기한 단백질 항원을 동물에 주사하고 동물로부터 채혈하여 항체를 포함하는 혈청을 수득하는 것을 포함하는, 당해 분야에 널리 공지된 방법에 의해 생산할 수 있다. 이러한 폴리클로날 항체는 염소, 토끼, 양, 원숭이, 말, 돼지, 소, 개 등의 임의의 동물 종 숙주로부터 제조 가능하나, 이에 제한되지 않을 수 있다.
또한, 본원의 항체에는 키메라 항체, 인간화 항체, 인간항체 등의 특수항체도 포함될 수 있다.
상기 "압타머(aptamer)"란, 그 자체로 안정된 삼차 구조를 가지면서 표적 분자에 높은 친화성과 특이성으로 결합할 수 있는 특징을 가진 특별한 종류의 단일가닥 핵산(DNA, RNA 또는 변형핵산)으로 구성된 폴리뉴클레오티드의 일종을 의미한다. 상술한 바와 같이, 압타머는 항체와 동일하게 항원성 물질에 특이적으로 결합할 수 있으면서도, 단백질보다 안정성이 높고, 구조가 간단하며, 합성이 용이한 폴리뉴클레오티드로 구성되어 있으므로, 항체를 대체하여 사용될 수 있다.
상기 "펩타이드"는 표적 물질에 대한 결합력 높은 장점이 있으며, 열/화학 처리시에도 변성이 일어나지 않는다. 또한 분자 크기가 작기 때문에 다른 단백질에 붙여서 융합 단백질로의 이용이 가능하다. 구체적으로 고분자 단백질 체인에 붙여서 이용이 가능하므로 진단 키트 및 약물전달 물질로 이용될 수 있다.
상기 "검출"은 오스테오칼신을 발현하는 혈중 순환세포 또는 이의 소기관을 검출하는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
또한, 상기 암은 간암, 폐암, 방광암, 위암, 유방암, 자궁암, 대장암, 결장암, 혈액암, 난소암, 전립선암, 이자암, 지라암, 고환암, 흉선암, 뇌암, 식도암, 신장암, 담도암, 난소암, 신장암, 갑상선암 또는 피부암 중 선택되는 적어도 하나일 수 있고, 구체적으로는 유방암 또는 갑상선암일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
또한, 본 발명은 상기 조성물을 포함하는 골전이암 치료 효과 모니터링용 키트에 관한 것이다.
본원의 키트는 마커 성분에 특이적으로 결합하는 항체, 기질과의 반응에 의해서 발색하는 표지체가 접합된 2차 항체 접합체(conjugate), 상기 표지체와 발색 반응할 발색 기질 용액, 세척액 및 효소반응 정지용액 등을 포함할 수 있으며, 사용되는 시약 성분을 포함하는 다수의 별도 패키징 또는 컴파트먼트로 제작될 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다.
본원의 키트는 환자 시료 내 오스테오칼신(Osteocalcin)을 발현하는 혈액 유래 세포의 발현 수준을 측정할 수 있는 제제뿐만 아니라, 발현 수준 분석에 적합한 한 종류 이상의 조성물, 용액 또는 장치를 포함할 수 있다. 예를 들어, 상기 키트는 항체의 면역학적 검출을 위하여 기질, 적당한 완충용액, 검출 라벨로 표지된 2차 항체, 및 발색 기질 등을 포함할 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다.
구체적인 일례로, 상기 키트는 ELISA 키트, 샌드위치 ELISA등 다양한 ELISA 방법을 구현하기 위하여, ELISA를 수행하기 위해 필요한 필수 요소를 포함하는 것을 특징으로 하는 키트일 수 있다. 이러한 ELISA 키트는 상기 단백질들에 대한 특이적인 항체를 포함한다. 항체는 오스테오칼신 또는 N-캐드헤린 단백질에 대한 특이성 및 친화성이 높고 다른 단백질에 교차 반응성이 거의 없는 항체로, 모노클로날 항체, 폴리클로날 항체 또는 재조합 항체일 수 있다. 또한 ELISA 키트는 대조군 단백질에 특이적인 항체를 포함할 수 있다. 그 외 ELISA 키트는 결합된 항체를 검출할 수 있는 시약, 예를 들면, 표지된 2차 항체, 발색단(chromopores), 효소 및 그의 기질 또는 항체와 결합할 수 있는 다른 물질 등을 포함할 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다.
이 외에도, 상기 키트는 웨스턴 블롯, 면역침전분석법, 보체 고정 분석법, 유세포분석, 또는 단백질 칩 등을 구현하기 위한 키트일 수 있으며, 각 분석 방법에 적합한 부가적인 구성을 추가로 포함할 수 있다. 이 분석 방법들을 통하여, 항원-항체 복합체 형성량을 비교함으로써 골전이암의 치료효과를 모니터링할 수 있다.
상기 "검출" 및 "세포"는 전술한 바와 같다.
또한, 본 발명은 진단 대상으로부터 분리된 시료 내 오스테오칼신(Osteocalcin)을 발현하는 혈액 유래 세포를 검출하는 단계를 포함하는 골전이암 치료 효과 모니터링을 위한 정보제공 방법에 관한 것이다.
진단 대상은 현재 골전이암을 보유하고 있는 동물로서, 상기 동물은 인간을 포함한 포유류일 수 있다.
시료는 진단 대상으로부터 분리된 것으로서, 그 예로는 조직, 세포, 전혈, 혈장, 혈청, 혈액, 또는 뇌척수액 등일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 구체적으로는 혈액, 혈장, 혈청 등일 수 있고, 보다 구체적으로는 말초혈액 단핵구일 수 있다.
오스테오칼신(Osteocalcin)을 발현하는 혈액 유래 세포는 예를 들면 말초혈액단핵구일 수 있다. 또한, 예를 들면 중간엽 줄기세포 유래 조골세포, 조혈모 줄기세포 유래 조골세포 또는 조혈모세포일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
오스테오칼신(Osteocalcin)을 발현하는 혈액 유래 세포를 검출하는 물질의 범위는 전술한 바와 같다.
상기 암의 범위는 전술한 바와 같다.
본 발명은 진단 대상으로부터 분리된 시료 내 오스테오칼신(Osteocalcin)을 발현하는 혈액 유래 세포를 검출하는 것으로서, 이는 예를 들면 오스테오칼신(Osteocalcin)을 발현하는 혈액 유래 세포에 특이적인 항체, 펩타이드, 압타머 또는 단백질을 이용하여 수행되는 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다.
그 구체적인 방법의 예를 들자면 오스테오칼신(Osteocalcin)을 발현하는 혈액 유래 세포에 특이적인 항체를 이용하여 효소면역분석법(ELISA), 방사능면역분석법(radioimmnoassay, RIA), 샌드위치 측정법(sandwich assay), 웨스턴 블롯팅, 면역침강법, 면역조직화학염색법(immnohistochemical staining), 유체 세포 측정법(flow cytometry), 형광활성화 세포분류법(FACS), 효소기질발색법, 항원-항체 응집법 및 단백질 칩으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 방법에 의해 수행되는 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
또한, 본 발명의 방법은 오스테오칼신(Osteocalcin)을 발현하는 혈액 유래 세포의 검출량이 이전의 측정에 비해 감소한 경우 골전이암의 치료 효과가 있다고 판단하는 단계를 더 포함할 수 있다.
전술한 바와 같이, 진단 대상의 시료에서 오스테오칼신(Osteocalcin)을 발현하는 혈액 유래 세포의 검출량이 감소하는 경우 치료 효과가 있고, 검출량이 동일하거나 증가하는 경우 치료 효과가 없다는 정보를 제공할 수 있다.
본 발명은 오스테오칼신을 발현하는 세포의 수(%)를 계산하는 단계를 더 포함할 수 있다.
구체적으로는 CD15를 발현하지 않으면서, 오스테오칼신을 발현하는 혈액 유래 세포를 검출할 수 있다. 림프구 등의 면역세포는 CD15를 발현하므로, 이는 면역세포가 아닌 세포 중 오스테오칼신을 발현하는 혈액 유래 세포를 검출하는 것을 의미한다.
상기 세포의 수는 예를 들면 하기 수학식 1에 따라 계산될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
[수학식 1]
순환조골세포(%) = (CD15-/osteocalcin+ 세포수)/CD15- 세포수 x 100(%)
(식 중, CD15-/osteocalcin+ 세포는 CD15는 발현하지 않고, 오스테오칼신을 발현하는 혈액 유래 세포이고, CD15- 세포는 CD15를 발현하지 않는 혈액 유래 세포임).
상기 순환조골세포의 수가 치료 전 대비 감소하면 골전이암 치료 효과가 있는 것으로 판단할 수 있고, 동일하거나 증가하는 경우 치료 효과가 없다고 판단할 수 있다.
이하, 본 발명을 구체적으로 설명하기 위해 실시예를 들어 상세하게 설명하기로 한다.
실시예
1. 골전이암 마우스 모델 및 골전이 치료제 투여 후 효과 확인
(1) 실험 방법
전임상 연구에서 순환 조골세포 분석을 위해 골전이 암환자의 골수 환경 및 순환 조골세포 분석에 용이한 마우스 모델을 구축하였다. 모든 동물 실험은 서울대학교 동물실험윤리위원회(SNU-170607-6-2)의 승인 후, 철저한 규정 준수 아래 실시하였다. 사람 유래 유방암 세포주를 면역결핍 마우스(balb/c nude mouse)의 정강이뼈에 직접 주사함으로써 골 전이암 환자와 유사한 이상적인 동물 모델을 확보하였다. 구체적으로, 사람 유래 유방암 세포주 MDA-MB-231을 2.0x105/20μl 양으로 마우스 체내 주입 가능한 완충액인 PBS에 준비하여, nude 마우스 오른쪽 정강이뼈 내에 주사하였다. 세포 주사 후 1주차, 2주차에 골전이암 치료제인 zoledronic acid(Zometa) 200ug/kg를 주 1회, 혈관 내 주사로 투여하였다. 종양의 형성 및 치료 효과는 암세포 주사 후 1주차, 2주차, 3주차에 in vivo Bioluminescence imaging (Xenogen IVIS, PerkinElmer)를 촬영하여 확인하였다(도 1a).
(2) 실험 결과
골전이 유방암 마우스 모델을 구축하여 매주 BLI 영상을 확인한 결과, 2주차부터 종양 형성을 확인할 수 있었고(도 1b), 3주차에는 Zometa 투여 군에서 대조군(PBS) 조직의 종양이 줄어들어 있음을 확인하였다(도 1b, 1c).
2. 치료제 투여군에서 순환 조골세포 변화 분석
(1) 실험 방법
상기 실시예 1에서 구축한 골전이암 마우스 모델에서 세포 주사 후 2주차, 3주차에 순환 조골세포의 변화를 분석하기 위해 채혈을 실시하였다. 구체적으로, 마우스를 마취하고 심장 천자를 통해 1 ml 가량 마우스의 전혈 채취하였다. 채혈 시 혈액 응고를 방지하기 위해 채혈 전 주사기 내부를 헤파린 용액으로 코팅하여 사용하고, 채혈 즉시 적혈구 lysis 용액에 넣어 적혈구 용혈 과정을 진행하였다. 상온에서 15 분 방치 후, 1500 rpm으로 5분 원심분리하여 상층액을 제거하였다. 해당 과정은 적혈구가 완전히 없어질 때까지 반복 수행하며, 완전히 깨끗해진 세포는 FBS가 포함된 완충액에 담았다. 이후 항 osteocalcin 항체를 이용하여 염색하고, 유세포 분석을 통해 osteocalcin+ 순환 조골세포를 분석하여 상기 수학식 1에 따른 osteocalcin+ 순환 조골세포(circulating Osteocalcin+ cell, cOC)수(%)를 비교하였다.
(2) 실험 결과
실험 결과 세포 주사 후 2주차, 3주차에 순환 조골세포는 대조군(PBS)에 비해 Zometa 투여군에서 cOC(%)가 유의하게 감소되었다(도 2). 이는 BLI 이미징에서 세포 주사 후 3주차, Zometa 주사 후 2주차에 치료효과가 확인된 것(도 1b)에 비해서 1주 빠른 시점이었다.
3. 유방암 환자에서 Zometa 치료 시 순환조골세포의 치료효과 예측력 검증
(1) 실험 방법
골전이암을 가지고 있는 전이성 유방암 환자 16명을 대상으로 Zometa 치료 전과 6개월 후 말초혈액을 채취하여 순환조골세포를 분석하였다. Zometa 는 4주 간격으로 투여가 되었고, 환자 개인 별로 최소 1회에서 최대 5회까지 투여되었다. 최종 치료 효과의 판정은 골스캔, CT 촬영을 기본으로 임상의사의 판단으로 최대 12개월 째 최종 판단하였다. 12개월 이전에 사망한 3명의 환자에서는 사망 시점에 판단하였다. 표 1은 12개월째 골전이암의 상태를 stable disease(SD)와 progressive disease(PD)로 나누었을 때, 질병 상태에 따른 임상적 특성을 제시하고 있다.
Figure 112020057657084-pat00001
(2) 실험 결과
12개월째 골전이암의 상태를 확인했을 때, SD와 PD로 나누고 이를 각각 Zometa 치료에 반응이 좋은 군으로 나쁜 군으로 간주하였다. SD와 PD 는 각각 8명씩으로 확인되었으나, 유방암의 초기 진단시의 나이가 PD 군에서 많았고, 이외 다른 임상적 특징은 차이가 없었다. 6개월 간격으로 측정한 cOC%를 도 3에 제시하였다.
도 3a에서는 개별 환자의 6개월 사이 cOC% 의 변화를 표시하였고, 도 3b에서는 6개월/0개월의 변화를 비율로 표시하였다. 치료에 좋은 반응을 보인 SD 그룹에서는 6개월/0개월의 변화의 평균값이 <1.0 로 치료 전후 cOC%가 감소한 반면, PD 그룹에서는 6개월/0개월의 변화의 평균값이 <1.0 로 치료 전후 cOC%가 증가하였고, 두 군간의 6개월/0개월의 변화의 평균값은 통계적으로 유의한 차이를 보였다(도 3b).

Claims (18)

  1. 오스테오칼신(Osteocalcin)을 발현하는 혈액 유래 세포를 검출하는 물질을 포함하는 골전이암 치료 효과 모니터링용 조성물.
  2. 청구항 1에 있어서, 상기 오스테오칼신을 발현하는 혈액 유래 세포를 검출하는 물질은 항체, 압타머, DNA, RNA, 단백질, 폴리펩티드로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나인, 골전이암 치료 효과 모니터링용 조성물.
  3. 청구항 1에 있어서, 상기 검출은 오스테오칼신을 발현하는 혈중 순환세포 또는 이의 소기관을 검출하는 것인, 골전이암 치료 효과 모니터링용 조성물.
  4. 청구항 1에 있어서, 상기 세포는 말초혈액단핵구인, 골전이암 치료 효과 모니터링용 조성물.
  5. 청구항 1에 있어서, 상기 세포는 중간엽 줄기세포 유래 조골세포, 조혈모 줄기세포 유래 조골세포 또는 조혈모세포인, 골전이암 치료 효과 모니터링용 조성물.
  6. 청구항 1에 있어서, 상기 암은 간암, 폐암, 방광암, 위암, 유방암, 자궁암, 대장암, 결장암, 혈액암, 난소암, 전립선암, 이자암, 지라암, 고환암, 흉선암, 뇌암, 식도암, 신장암, 담도암, 난소암, 신장암, 갑상선암 또는 피부암 중 선택되는 적어도 하나인, 골전이암 치료 효과 모니터링용 조성물.
  7. 청구항 1에 있어서, 상기 암은 유방암 또는 갑상선암인, 골전이암 치료 효과 모니터링용 조성물.
  8. 청구항 1 내지 7 중 어느 한 항의 조성물을 포함하는 골전이암 치료 효과 모니터링용 키트.
  9. 진단 대상으로부터 분리된 시료 내 오스테오칼신을 발현하는 혈액 유래 세포를 검출하는 단계를 포함하는 골전이암 치료 효과를 모니터링하기 위한 정보제공 방법.
  10. 청구항 9에 있어서, 상기 검출은 오스테오칼신을 발현하는 혈중 순환세포 또는 이의 소기관을 검출하는 것인, 골전이암 치료 효과 모니터링을 위한 정보제공 방법.
  11. 청구항 9에 있어서, 상기 세포는 중간엽 줄기세포 유래 조골세포, 조혈모 줄기세포 유래 조골세포 또는 조혈모세포인, 골전이암 치료 효과 모니터링을 위한 정보제공 방법.
  12. 청구항 9에 있어서, 상기 세포는 말초혈액 단핵구인, 골전이암 치료 효과 모니터링을 위한 정보제공 방법.
  13. 청구항 9에 있어서, 상기 암은 간암, 폐암, 방광암, 위암, 유방암, 자궁암, 대장암, 결장암, 혈액암, 난소암, 전립선암, 이자암, 지라암, 고환암, 흉선암, 뇌암, 식도암, 신장암, 담도암, 난소암, 신장암, 갑상선암 또는 피부암 중 선택되는 적어도 하나인, 골전이암 치료 효과 모니터링을 위한 정보제공 방법.
  14. 청구항 9에 있어서, 상기 암은 유방암 또는 갑상선암인, 골전이암 치료 효과 모니터링을 위한 정보제공 방법.
  15. 청구항 1에 있어서, 상기 세포는 CD45+/osteocalcin+인 순환조골세포인, 조성물.
  16. 청구항 9에 있어서, 상기 세포의 검출량이 치료 전 대비 감소하면 골전이암 치료 효과가 있는 것으로 판단하는 단계를 더 포함하는, 골전이암 치료 효과 모니터링을 위한 정보제공 방법.
  17. 청구항 9에 있어서, 상기 검출된 세포 중 하기 수학식 1에 따른 순환조골세포의 수(%)를 계산하는 단계를 더 포함하는, 골전이암 치료 효과 모니터링을 위한 정보제공 방법.
    [수학식 1]
    순환조골세포(%) = (CD15-/osteocalcin+ 세포수)/CD15- 세포수 x 100(%)
    (식 중, CD15-/osteocalcin+ 세포는 CD15는 발현하지 않고, 오스테오칼신을 발현하는 혈액 유래 세포이고, CD15- 세포는 CD15를 발현하지 않는 혈액 유래 세포임).
  18. 청구항 17에 있어서, 상기 순환조골세포의 수가 치료 전 대비 감소하면 골전이암 치료 효과가 있는 것으로 판단하는 단계를 더 포함하는, 골전이암 치료 효과 모니터링을 위한 정보제공 방법.
KR1020200067694A 2020-06-04 2020-06-04 골전이암의 치료 효과 모니터링용 조성물 및 이를 포함하는 키트 KR102396511B1 (ko)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020200067694A KR102396511B1 (ko) 2020-06-04 2020-06-04 골전이암의 치료 효과 모니터링용 조성물 및 이를 포함하는 키트

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020200067694A KR102396511B1 (ko) 2020-06-04 2020-06-04 골전이암의 치료 효과 모니터링용 조성물 및 이를 포함하는 키트

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20210150817A KR20210150817A (ko) 2021-12-13
KR102396511B1 true KR102396511B1 (ko) 2022-05-11

Family

ID=78832049

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020200067694A KR102396511B1 (ko) 2020-06-04 2020-06-04 골전이암의 치료 효과 모니터링용 조성물 및 이를 포함하는 키트

Country Status (1)

Country Link
KR (1) KR102396511B1 (ko)

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20010000464A (ko) * 2000-10-02 2001-01-05 김철주 골다공증 진단용 단백질칩
KR101423164B1 (ko) * 2011-11-30 2014-07-30 전자부품연구원 골다공증 진단 장치, 골다공증 진단 방법 및 질병 진단 장치
CN112384806B (zh) * 2018-08-03 2024-07-09 西托根有限公司 癌症的骨转移诊断用组成物及包括其的试剂盒

Also Published As

Publication number Publication date
KR20210150817A (ko) 2021-12-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP6630766B2 (ja) 膵臓癌診断用組成物およびこれを用いた膵臓癌診断方法
JP2020022469A (ja) 血中循環腫瘍細胞に関する方法およびアッセイ
JP6075881B2 (ja) 乳癌のバイオマーカー
JP5774309B2 (ja) 癌マーカーおよび治療ターゲット
CA2712204A1 (en) Small cell lung carcinoma biomarker panel
KR20170141951A (ko) Nckap1을 유효성분으로 포함하는 대장암 진단 또는 대장암 전이 예후 예측용 바이오마커 조성물
KR102521638B1 (ko) 비알코올성 지방간질환의 진단용 마커
KR102396511B1 (ko) 골전이암의 치료 효과 모니터링용 조성물 및 이를 포함하는 키트
KR102429562B1 (ko) 간세포암 진단용 바이오마커 세레브론 및 이에 특이적인 신규한 단일클론항체
ES2967857T3 (es) Composición para el diagnóstico de la metástasis ósea del cáncer y kit que la contiene
KR101952649B1 (ko) Lrp-1을 유효성분으로 포함하는 방사선 저항성 암 진단용 또는 방사선 치료 예후 예측용 바이오마커 조성물
US20180080939A1 (en) Cancer marker and the use thereof
US20210263038A1 (en) Composition for diagnosis of bone metastasis of cancer and kit comprising same
CN115449551A (zh) Tff1和tff3在肺癌骨转移早期诊断中的应用
JP7432578B2 (ja) がんマーカーおよびその用途
JP7012363B2 (ja) がん患者におけるｆｓｔｌ１阻害剤による治療効果を予測するためのバイオマーカー
CN116027038A (zh) 盘状结构域受体2在诊断胶质瘤中的应用及相关的计算机可读介质
JP6601707B2 (ja) 線維化判定方法
KR102737876B1 (ko) 유방암 환자의 선행 항암화학요법 후 예후 예측을 위한 바이오마커 및 이의 용도
WO2013141092A1 (ja) 癌転移マーカー及びそれを用いた癌転移の診断方法
JP2024003567A (ja) 膵癌又は前立腺癌の診断を補助する方法及び膵癌又は前立腺癌の診断用試薬
KR20200084708A (ko) 암의 골전이 진단용 조성물 및 이를 이용한 암의 골전이 진단방법
KR20240109655A (ko) 담도암 진단용 바이오마커
CN115407064A (zh) 肿瘤干细胞血管拟态标志物tem8在制备诊断试剂和试剂盒中的用途
KR20240060024A (ko) 뇌종양 예후 예측용 바이오마커 조성물

Legal Events

Date Code Title Description
PA0109 Patent application

Patent event code: PA01091R01D

Comment text: Patent Application

Patent event date: 20200604

PA0201 Request for examination
PE0902 Notice of grounds for rejection

Comment text: Notification of reason for refusal

Patent event date: 20210817

Patent event code: PE09021S01D

PG1501 Laying open of application
E701 Decision to grant or registration of patent right
PE0701 Decision of registration

Patent event code: PE07011S01D

Comment text: Decision to Grant Registration

Patent event date: 20220418

PR0701 Registration of establishment

Comment text: Registration of Establishment

Patent event date: 20220506

Patent event code: PR07011E01D

PR1002 Payment of registration fee

Payment date: 20220506

End annual number: 3

Start annual number: 1

PG1601 Publication of registration