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KR102363746B1 - Cd123 특이적 항체 및 항체-약물 접합체 및 그의 용도 - Google Patents

Cd123 특이적 항체 및 항체-약물 접합체 및 그의 용도 Download PDF

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KR102363746B1
KR102363746B1 KR1020207014653A KR20207014653A KR102363746B1 KR 102363746 B1 KR102363746 B1 KR 102363746B1 KR 1020207014653 A KR1020207014653 A KR 1020207014653A KR 20207014653 A KR20207014653 A KR 20207014653A KR 102363746 B1 KR102363746 B1 KR 102363746B1
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마노즈 바부라오 차라티
윤-치 한
마단 카트라가다
니콜 멜리사 피치-니콜라스
로렌스 네이선 터미
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화이자 인코포레이티드
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Abstract

본 발명은 CD123에 특이적으로 결합하는 항체를 제공한다. 본 발명은 또한 이러한 항체를 포함하는 면역접합체 (예를 들어, 항체-약물 접합체 또는 ADC), 핵산을 코딩하는 항체, 및 이러한 항체를 수득하는 방법에 관한 것이다. 본 발명은 또한 CD123을 발현하는 세포와 연관된 상태 (예를 들어, 암 또는 자가면역 질환)의 치료를 위해 이들 항체 및 ADC를 사용하기 위한 치료 방법에 관한 것이다.

Description

CD123 특이적 항체 및 항체-약물 접합체 및 그의 용도
서열 목록에 대한 참조
본 출원은 EFS-웹을 통해 전자적으로 출원되었고, .txt 포맷의 전자적으로 제출된 서열 목록을 포함한다. 상기 .txt 파일은 2017년 10월 27일에 생성된 78 KB의 크기를 갖는 "PC72333_SEQ_LIST_ST25.txt"로 명명된 서열 목록을 포함한다. 상기 .txt 파일에 포함된 서열 목록은 본 명세서의 일부이며, 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
기술분야
본 발명은 CD123에 특이적으로 결합하는 항체, 예를 들어 전장 항체에 관한 것이다. 본 발명은 추가로, CD123 항체를 포함하는 접합체 (예를 들어, 항체-약물 접합체 또는 "ADC"), CD123 항체 또는 그의 접합체를 포함하는 조성물, 및 CD123을 발현하는 세포와 연관된 상태 (예를 들어, 암)를 치료하기 위해 CD123 항체 및 그의 접합체를 사용하는 방법에 관한 것이다.
CD123은 공통 베타 쇄 CD131와 함께 이종이량체를 형성하여 IL-3의 신호 전달을 돕는 인터류킨-3 수용체의 알파 쇄 (IL-3Rα 또는 IL3RAa)이다. IL-3의 생물학적 역할은 다능 세포의 생존 및 증식을 자극하는 것이다. CD123은 급성 골수성 백혈병 (AML) 세포의 증식을 자극하는데 관여하는 것으로 여겨지며, 종양 생물학에서 직접적 기능을 갖는다. CD123은 환자에서의 재발과 연관된 세포 집단인 백혈병성 줄기 세포 (LSC) 상에서 빈번하게 발현된다. 정상 인간 조직 중에서, CD123 발현은 대부분, 인간에서 조혈 세포, 특히 말초 혈액 단핵 세포의 < 0.4%를 구성하는 형질세포양 수지상 세포 (pDC)로 제한된다. 선천성 면역의 구성요소로서, pDC는 바이러스 및 박테리아 자극에 반응하여 대량의 제1형 인터페론 (IFN-α/β)을 생성한다. 중요하게는, CD123은 조혈 줄기 세포 상에서 발현되지 않는다.
백혈병, 림프종 및 골수종의 새로운 사례는 2017년 미국에서 진단되어 추정된 1,688,780건의 새로운 암 사례의 10.2%를 차지하는 것으로 예상된다. CD123은 그의 발현이 > 80%인 급성 골수성 백혈병 (AML)을 비롯한 다양한 혈액 악성종양의 암 세포 상에서 발현된다. CD123을 발현하는 혈액암 세포의 예는 모세포 및 백혈병 줄기 세포를 포함한다. CD123의 발현과 연관된 질환은 AML, 골수이형성 증후군 (MDS; 저위험 및 고위험), 급성 림프구성 백혈병 (ALL, 모든 하위유형), 미만성 대 B-세포 림프종 (DLBCL), 만성 골수성 백혈병 (CML), 및 모구성 형질세포양 수지상 세포 신생물 (BPDCN)을 포함한다.
현재, 이들 질환에 대한 치료는 임상 시험 및 연구 중인 다른 약물과 함께 50개 초과의 개별 약물을 포함한다. 방사선 요법이 또한 혈액암을 치료하는데 통상적으로 사용되고, 때때로 이는 약물 요법과 함께 투여된다. 면역요법, 유전자 요법과 개인맞춤형 의약이 또한 사용된다. 그러나, 이들 요법은 심각한 부작용 및 유해 반응을 가질 수 있다. 따라서, CD123 (IL-3Rα)-발현 혈액암에 대한 신규한 개선된 치료가 필요하다.
개요
본원에 개시된 본 발명은 CD123에 결합하는 항체, 및 CD123에 결합하는 항체를 포함하는 접합체, 예컨대 항체-약물 접합체 (ADC), 및 장애를 치료하기 위해 상기 항체 및 ADC를 제조 및 사용하는 방법에 관한 것이다.
본원은 CD123에 특이적으로 결합하는 항체를 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 CD123에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 제공하며, 여기서 항체는 서열식별번호: 6, 24, 32, 44, 51 또는 64의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (VH)의 3개의 상보성 결정 영역 (CDR)을 포함하는 VH, 및 서열식별번호: 17, 28, 39, 48, 57 또는 71의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (VL)의 3개의 CDR을 포함하는 VL을 포함한다. 일부 실시양태에서, VH는 (i) 서열식별번호: 7, 33, 52 또는 65의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR1; (ii) 서열식별번호: 8, 25, 34, 45, 53 또는 66의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR2; 및 (iii) 서열식별번호: 9, 35, 46 또는 67의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, VL 영역은 (i) 서열식별번호: 18, 40, 58 또는 72의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR1; (ii) 서열식별번호: 19, 42, 60 또는 74의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR2; 및 (iii) 서열식별번호: 20, 42, 60 또는 74의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR3을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, VH는 (i) 서열식별번호: 7의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR1; (ii) 서열식별번호: 25의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR2; 및 (iii) 서열식별번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, VL은 (i) 서열식별번호: 18의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR1; (ii) 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR2; 및 (iii) 서열식별번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR3을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, VH는 서열식별번호: 24에 제시된 서열 또는 CDR 내에 있지 않은 잔기에서 1개 또는 여러 개의 보존적 아미노산 치환을 갖는 그의 변이체를 포함할 수 있고/거나, VL은 서열식별번호: 28에 제시된 아미노산 서열 또는 CDR 내에 있지 않은 아미노산에서 1개 또는 여러 개의 아미노산 치환을 갖는 그의 변이체를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항체는 서열식별번호: 30에 제시된 서열을 포함하는 경쇄 및 서열식별번호: 27에 제시된 서열을 포함하는 중쇄를 포함할 수 있다.
CD123에 특이적으로 결합하며, ATCC 수탁 번호 PTA-124283을 갖는 발현 벡터에 의해 생산된 중쇄 가변 영역 및 ATCC 수탁 번호 PTA-124284를 갖는 발현 벡터에 의해 생산된 경쇄 가변 영역을 포함하는 단리된 항체를 또한 제공한다.
CD123에 특이적으로 결합하며, CD123에의 결합에 대해 서열식별번호: 6, 24, 32, 44, 51 또는 64의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (VH)의 3개의 CDR을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 17, 28, 39, 48, 57 또는 71의 아미노산 서열을 포함하는 VL의 3개의 CDR을 포함하는 VL을 포함하는 항체와 경쟁하는 단리된 항체를 또한 제공한다.
서열식별번호: 7, 8 및 9의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 18, 19 및 20의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 단리된 CD123 항체를 또한 제공한다.
서열식별번호: 7, 25 및 9의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 18, 19 및 20의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 단리된 CD123 항체를 또한 제공한다.
서열식별번호: 33, 34 및 35의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 40, 41 및 42의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 단리된 CD123 항체를 또한 제공한다.
서열식별번호: 33, 45 및 46의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 40, 41 및 42의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 단리된 CD123 항체 항체를 또한 제공한다.
서열식별번호: 52, 53 및 54의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 58, 59 및 60의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 단리된 CD123 항체를 또한 제공한다.
서열식별번호: 65, 66 및 67의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 72, 73 및 74의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 단리된 CD123 항체를 또한 제공한다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 CD123 항체는 특이적 부위에서 조작된 아실 공여자 글루타민-함유 태그를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 태그는 Q, LQG, LLQGG (서열식별번호:77), LLQG (서열식별번호:78), LSLSQG (서열식별번호 79), GGGLLQGG (서열식별번호 80), GLLQG (서열식별번호 81), LLQ, GSPLAQSHGG (서열식별번호 82), GLLQGGG (서열식별번호 83), GLLQGG (서열식별번호 84), GLLQ (서열식별번호 85), LLQLLQGA (서열식별번호 86), LLQGA (서열식별번호 87), LLQYQGA (서열식별번호 88), LLQGSG (서열식별번호 89), LLQYQG (서열식별번호 90), LLQLLQG (서열식별번호 91), SLLQG (서열식별번호 92), LLQLQ (서열식별번호 93), LLQLLQ (서열식별번호 94), LLQGR (서열식별번호 95), LLQGPP (서열식별번호 96), LLQGPA (서열식별번호 97), GGLLQGPP (서열식별번호 98), GGLLQGA (서열식별번호 99), LLQGPGK (서열식별번호 100), LLQGPG (서열식별번호 101), LLQGP (서열식별번호 102), LLQP (서열식별번호 103), LLQPGK (서열식별번호 104), LLQAPGK (서열식별번호 105), LLQGAPG (서열식별번호 106), LLQGAP (서열식별번호 107), 및 LLQLQG (서열식별번호 108)로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 글루타민-함유 태그는 LLQG (서열식별번호: 78)이다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 CD123 항체는 위치 222, 340 또는 370에 아미노산 변형을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 아미노산 변형은 리신으로부터 아르기닌으로의 치환일 수 있다. 일부 실시양태에서, 아미노산 변형은 K222R일 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 CD123 항체는 링커를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 링커는 절단가능할 수 있다. 일부 실시양태에서, 링커는 Ac-Lys-Gly (아세틸-리신-글리신), 아미노카프로산, Ac-Lys-β-Ala (아세틸-리신-β-알라닌), 아미노-PEG2 (폴리에틸렌 글리콜)-C2, 아미노-PEG3-C2, 아미노-PEG6-C2, Ac-Lys-Val-Cit-PABC (아세틸-리신-발린-시트룰린-p-아미노벤질옥시카르보닐), 아미노- PEG6-C2-Val-Cit-PABC, 아미노카프로일-Val-Cit-PABC, [(3R,5R)-1-{3-[2-(2-아미노에톡시)에톡시]프로파노일}피페리딘-3,5-디일]비스-Val-Cit-PABC, [(3S,5S)-1-{3-[2-(2-아미노에톡시)에톡시]프로파노일}피페리딘-3,5-디일]비스-Val-Cit-PABC, 푸트레신, 및 Ac-Lys-푸트레신으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 일부 실시양태에서, 링커는 Ac-Lys-Val-Cit-PABC (아세틸-리신-발린-시트룰린-p-아미노벤질옥시카르보닐)일 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 항체는 불변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 인간화 항체이다. 일부 실시양태에서, 항체는 인간 IgG1, IgG2 또는 IgG2Δa, IgG3 또는 IgG4 하위부류의 것이다. 일부 실시양태에서, 항체는 IgG1 항체이다. 일부 실시양태에서, 항체는 N60G 돌연변이를 포함한다.
작용제에 접합된, 본원에 기재된 바와 같은 CD123 항체를 포함하는 접합체를 또한 제공한다. 일부 실시양태에서, 작용제는 세포독성제, 면역조정제, 영상화제, 치료 단백질, 생체중합체, 및 올리고뉴클레오티드로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 일부 실시양태에서, 작용제는 세포독성제일 수 있다. 일부 실시양태에서, 세포독성제는 안트라시클린, 아우리스타틴, 캄프토테신, 콤브레타스타틴, CBI 이량체, 시클로프로필피롤로인돌린 (CPI) 이량체, CTI 이량체, 돌라스타틴, 두오카르마이신, 에네디인, 겔다나마이신, 인돌리노-벤조디아제핀 이량체, 메이탄신, 퓨로마이신, 피롤로벤조디아제핀 이량체, 탁산, 빈카 알칼로이드, 튜부리신, 헤미아스텔린, 스플라이세오스타틴, 플라디에놀리드, 및 그의 입체이성질체, 동배체, 유사체 또는 유도체로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 일부 실시양태에서, 세포독성제는 CPI 이량체일 수 있다. 일부 실시양태에서, CPI 이량체는 CPI-8314이다. 일부 실시양태에서, CPI 이량체는 하기 구조를 가질 수 있다:
Figure 112020051620549-pct00001
일부 실시양태에서, 세포독성제는 IUPAC 명칭: (8S)-8-(클로로메틸)-6-[(3-{[(1S)-1-(클로로메틸)-5-히드록시-8-메틸-1,6-디히드로피롤로[3,2-e]인돌-3(2H)-일]카르보닐}비시클로[1.1.1]펜트-1-일)카르보닐]-1-메틸-3,6,7,8-테트라히드로피롤로[3,2-e]인돌-4-일 디히드로겐 포스페이트를 가질 수 있다. 일부 실시양태에서, 세포독성제는 C31H31Cl2N4O7P 또는 제약상 허용되는 염 또는 용매화물일 수 있다. 일부 실시양태에서, 세포독성제는 트리플루오로아세트산 (TFA) 염 형태: C31H31Cl2N4O7PㆍC2HF3O2일 수 있다.
다른 실시양태에서, 세포독성제는 MMAD (모노메틸 아우리스타틴 D), 0101 (2-메틸알라닐-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(1S)-2-페닐-1-(1,3-티아졸-2-일)에틸]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아미드), 3377 (N,2-디메틸알라닐-N-{(1S,2R)-4-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-카르복실-2-페닐에틸]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-2-메톡시-1-[(1S)-1-메틸프로필]-4-옥소부틸}-N-메틸-L-발린아미드), 0131 (2-메틸-L-프롤리-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-카르복시-2-페닐에틸]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아미드), 또는 0121 (2-메틸-L-프롤리-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-메톡시-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아미드)일 수 있다.
일부 실시양태에서, 접합체는 식: 항체-(아실 공여자 글루타민-함유 태그)-(링커)-(세포독성제)를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 아실 공여자 글루타민-함유 태그는 아미노산 서열 LLQG (서열식별번호: 78)를 포함할 수 있고, 링커는 아세틸-리신-발린-시트룰린-p-아미노벤질옥시카르보닐을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 아실 공여자 글루타민-함유 태그는 항체에 위치 E294-N297에서 삽입될 수 있다. 일부 실시양태에서, 접합체는 추가로 카바트(Kabat)의 EU 인덱스 넘버링에 따른 항체 위치 222에서 리신으로부터 아르기닌으로의 아미노산 치환 (K222R)을 포함할 수 있다.
치료 유효량의 본원에 기재된 CD123 항체 또는 본원에 기재된 CD123 ADC, 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물을 또한 제공한다.
본원에 기재된 CD123 항체를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 또한 제공한다. 이러한 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터를 또한 제공한다.
본원에 기재된 임의의 CD123 항체를 재조합적으로 생산하는 단리된 숙주 세포를 또한 제공한다. 숙주 세포를 항체가 생산되도록 하는 조건 하에 배양하는 단계, 및 항체를 숙주 세포 또는 배양물로부터 단리하는 단계를 포함하는, 항체를 생산하는 방법을 또한 제공한다.
CD123을 발현하는 세포와 연관된 상태의 치료를 필요로 하는 대상체에게 본원에 기재된 임의의 CD123 항체 또는 임의의 항체의 접합체, 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 치료 유효량의 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 CD123을 발현하는 세포와 연관된 상태를 치료하는 방법을 또한 제공한다. 일부 실시양태에서, 상태는 암이다. 일부 실시양태에서, 암은 급성 골수성 백혈병 (AML), 급성 림프구성 백혈병 (ALL), 모구성 형질세포양 수지상 세포 신생물 (BPDCN), 모발상 세포 백혈병, B-세포 비-호지킨 림프종 (NHL), 다발성 골수종, 악성 형질 세포 신생물, 호지킨 림프종, 결절성 림프구 우세형 호지킨 림프종, 칼러병(Kahler's disease) 및 골수종증, 형질 세포 백혈병, 형질세포종, B-세포 전림프구성 백혈병, 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 만성 골수성 백혈병 (CML), 여포성 림프종, 버킷 림프종(Burkitt's lymphoma), 변연부 림프종, 외투 세포 림프종, 대세포 림프종, 전구체 B-림프모구성 림프종, 골수성 백혈병, 발덴스트롬 마크로글로불린혈증, 미만성 대 B 세포 림프종, 여포성 림프종, 변연부 림프종, 점막-연관 림프 조직 림프종, 소세포 림프구성 림프종, 외투 세포 림프종, 버킷 림프종, 원발성 종격 (흉선) 대 B-세포 림프종, 림프형질세포성 림프종, 발덴스트룀 마크로글로불린혈증, 결절성 변연부 B 세포 림프종, 비장 변연부 림프종, 혈관내 대 B-세포 림프종, 원발성 삼출 림프종, 림프종성 육아종증, T 세포/조직구-풍부 대 B-세포 림프종, 원발성 중추 신경계 림프종, 원발성 피부 미만성 대 B-세포 림프종 (하지 유형), 고령자의 EBV 양성 미만성 대 B-세포 림프종, 염증과 연관된 미만성 대 B-세포 림프종, 혈관내 대 B-세포 림프종, ALK-양성 대 B-세포 림프종, 형질모구성 림프종, HHV8-연관된 다중심적 캐슬만병에서 발생하는 대 B-세포 림프종, 미만성 대 B-세포 림프종과 버킷 림프종 사이의 중간 특색을 갖는 미분류 B-세포 림프종, 미만성 대 B-세포 림프종과 전형적 호지킨 림프종 사이의 중간 특색을 갖는 미분류 B-세포 림프종, 및 다른 B-세포 관련 림프종으로 이루어진 군으로부터 선택된 암일 수 있다. 일부 실시양태에서, 암은 AML이다.
종양 성장 또는 진행의 억제를 필요로 하며 CD123을 발현하는 악성 세포를 갖는 대상체에게 본원에 제공된 임의의 CD123 항체 또는 임의의 항체의 접합체 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 치료 유효량의 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, CD123을 발현하는 악성 세포를 갖는 대상체에서 종양 성장 또는 진행을 억제하는 방법을 또한 제공한다.
CD123을 발현하는 악성 세포의 전이의 억제를 필요로 하는 대상체에게 본원에 제공된 임의의 CD123 항체 또는 임의의 항체의 접합체 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 치료 유효량의 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 CD123을 발현하는 악성 세포의 전이를 억제하는 방법을 또한 제공한다.
종양 퇴행의 유도를 필요로 하며 CD123을 발현하는 악성 세포를 갖는 대상체에게 본원에 제공된 임의의 CD123 항체 또는 임의의 항체의 접합체 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 치료 유효량의 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, CD123을 발현하는 악성 세포를 갖는 대상체에서 종양 퇴행을 유도하는 방법을 또한 제공한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 CD123 발현과 연관된 상태 (예를 들어, 암 또는 자가면역 장애)의 치료가 필요한 대상체에서 상기 상태를 치료하기 위한 본원에 기재된 바와 같은 CD123 항체 또는 CD123 ADC를 포함하는 유효량의 조성물 (예를 들어, 제약 조성물)을 제공한다. 일부 실시양태에서, CD123을 발현하는 악성 세포를 갖는 대상체에서 종양 성장 또는 진행을 억제하기 위한 본원에 기재된 바와 같은 CD123 항체 또는 CD123 ADC를 포함하는 유효량의 조성물 (예를 들어, 제약 조성물)을 제공한다. 일부 실시양태에서, CD123을 발현하는 악성 세포의 전이의 억제를 필요로 하는 대상체에서 상기 억제를 위한 본원에 기재된 바와 같은 CD123 항체 또는 CD123 ADC를 포함하는 유효량의 조성물 (예를 들어, 제약 조성물)을 제공한다. 일부 실시양태에서, CD123을 발현하는 악성 세포를 갖는 대상체에서 종양 퇴행을 유도하기 위한 본원에 기재된 바와 같은 CD123 항체 또는 CD123 ADC를 포함하는 유효량의 조성물 (예를 들어, 제약 조성물)을 제공한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 CD123 발현과 연관된 상태 (예를 들어, 암 또는 자가면역 장애)의 치료를 필요로 하는 대상체에서 상기 상태를 치료하는데 사용하기 위한 본원에 기재된 바와 같은 CD123 항체 또는 CD123 ADC를 제공한다. 일부 실시양태에서, CD123을 발현하는 악성 세포를 갖는 대상체에서 종양 성장 또는 진행을 억제하기 위한 본원에 기재된 바와 같은 CD123 항체 또는 CD123 ADC를 제공한다. 일부 실시양태에서, CD123을 발현하는 악성 세포 전이의 억제를 필요로 하는 대상체에서 상기 전이를 억제하기 위한 본원에 기재된 바와 같은 CD123 항체 또는 CD123 ADC을 제공한다. 일부 실시양태에서, CD123을 발현하는 악성 세포를 갖는 대상체에서 종양 퇴행을 유도하기 위한 본원에 기재된 바와 같은 CD123 항체 또는 CD123 ADC를 제공한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 CD123 발현과 연관된 상태 (예를 들어, 암 또는 자가면역 장애)를 치료하기 위한 의약의 제조에 있어서의 본원에 기재된 바와 같은 CD123 항체 또는 CD123 ADC의 용도를 제공한다. 일부 실시양태에서, 종양 성장 또는 진행을 억제하기 위한 의약의 제조에 있어서의 본원에 기재된 바와 같은 CD123 항체 또는 CD123 ADC의 용도를 제공한다. 일부 실시양태에서, CD123을 발현하는 악성 세포의 전이를 억제하기 위한 의약의 제조에 있어서의 본원에 기재된 바와 같은 CD123 항체 또는 CD123 ADC의 용도를 제공한다. 일부 실시양태에서, 종양 퇴행을 유도하기 위한 의약의 제조에 있어서의 본원에 기재된 바와 같은 CD123 항체 또는 CD123 ADC의 용도를 제공한다.
본원은 또한 항체를 AcLysValCitPABC-DMAE-CO_CPI-000638314 (AcLysPABC-CPI-8314)에 접합시키는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 방법은 30 내지 100 mM의 KPO4 및 150 내지 200 mM의 NaCl을 포함하는 완충제 중에 항체 및 AcLysPABC-CPI-8314를 포함하는 조성물을 제조하는 단계; 상기 조성물에 박테리아 트랜스글루타미나제를 첨가하는 단계; 및 조성물을 인큐베이션시켜 항체가 AcLysPABC-CPI-8314에 접합되도록 하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 조성물의 pH는 7이다. 일부 실시양태에서, 조성물은 항체 mg 당 0.5 내지 2 유닛 (U)의 박테리아 트랜스글루타미나제를 포함한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 항체 mg 당 1 U의 박테리아 트랜스글루타미나제를 포함한다. 일부 실시양태에서, AcLysPABC-CPI-8314는 항체에 대해 10배 몰 과량으로 존재한다. 일부 실시양태에서, 조성물을 연속적인 혼합과 함께 25℃에서 밤새 인큐베이션시킨다. 일부 실시양태에서, 조성물은 7.5% (v/v)의 디메틸 술폭시드 (DMSO)를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 완충제는 30 mM의 KPO4 및 150 mM의 NaCl을 포함한다. 일부 실시양태에서, 완충제는 100 mM의 KPO4 및 200 mM의 NaCl을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 항-종양 항체이다. 일부 실시양태에서, 항-종양 항체는 CD123 항체이다.
도 1은 IL-3 + 항체 ("Ab")로 처리된 세포의 분석으로부터의 웨스턴 블롯 결과를 도시한다. 7G3은 벤치마크 항체이고, 3D1, 18G3 및 16D6은 CD123 항체이고; 8.8은 CD123에 결합하지 않는 음성 대조군 항체이다. STAT5, 인산화 STAT5 및 액틴 수준을 분석하였다.
도 2는 비히클 또는 CD123-ADC (CD123-18G3-CPI)로 처리한 후 동물 모델에서 말초 혈액 (좌측 그래프) 및 골수 (우측 그래프)에 남아있는 종양 세포의 백분율을 보여주는 대표적인 유동 세포측정법 분석을 도시한다.
도 3은 비히클 또는 제시된 용량의 CD123 ADC로 처리된 동물의 생존 기간 (일)을 요약한 그래프를 도시한다.
본원에 개시된 본 발명은 CD123 (예를 들어, 인간 CD123)에 특이적으로 결합하는 항체 및 항체-약물 접합체 (ADC)를 제공한다. 본 발명은 또한 이들 항체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드, 이들 항체를 포함하는 조성물 및 이들 항체를 제조 및 사용하는 방법을 제공한다. 본 발명은 또한 대상체에서 CD123 발현과 연관된 장애, 예컨대 암 또는 자가면역 질환을 치료하는 방법을 제공한다.
일반 기술
본 발명의 실시는 달리 나타내지 않는 한 분자 생물학 (재조합 기술을 포함), 미생물학, 세포 생물학, 생화학 및 면역학의 전형적인 기술을 이용할 것이며, 이들은 관련 기술분야의 숙련범위 내에 있다. 이러한 기술은 다음과 같은 문헌에 상세하게 설명되어 있다: 문헌 [Molecular Cloning: A Laboratory Manual, second edition (Sambrook et al., 1989) Cold Spring Harbor Press; Oligonucleotide Synthesis (M.J. Gait, ed., 1984); Methods in Molecular Biology, Humana Press; Cell Biology: A Laboratory Notebook (J.E. Cellis, ed., 1998) Academic Press; Animal Cell Culture (R.I. Freshney, ed., 1987); Introduction to Cell and Tissue Culture (J.P. Mather and P.E. Roberts, 1998) Plenum Press; Cell and Tissue Culture: Laboratory Procedures (A. Doyle, J.B. Griffiths, and D.G. Newell, eds., 1993-1998) J. Wiley and Sons; Methods in Enzymology (Academic Press, Inc.); Handbook of Experimental Immunology (D.M. Weir and C.C. Blackwell, eds.); Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells (J.M. Miller and M.P. Calos, eds., 1987); Current Protocols in Molecular Biology (F.M. Ausubel et al., eds., 1987); PCR: The Polymerase Chain Reaction, (Mullis et al., eds., 1994); Current Protocols in Immunology (J.E. Coligan et al., eds., 1991); Short Protocols in Molecular Biology (Wiley and Sons, 1999); Immunobiology (C.A. Janeway and P. Travers, 1997); Antibodies (P. Finch, 1997); Antibodies: a practical approach (D. Catty., ed., IRL Press, 1988-1989); Monoclonal antibodies: a practical approach (P. Shepherd and C. Dean, eds., Oxford University Press, 2000); Using antibodies: a laboratory manual (E. Harlow and D. Lane (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1999); The Antibodies (M. Zanetti and J.D. Capra, eds., Harwood Academic Publishers, 1995)].
정의
"항체"는 이뮤노글로불린 분자의 가변 영역에 위치한 적어도 1개의 항원 인식 부위를 통해, 탄수화물, 폴리뉴클레오티드, 지질, 폴리펩티드 등과 같은 표적에 특이적으로 결합할 수 있는 이뮤노글로불린 분자이다. 본원에 사용된 용어는 무손상 폴리클로날 또는 모노클로날 항체 뿐만 아니라 이들의 항원-결합 단편 (예컨대 Fab, Fab', F(ab')2, Fv), 단일쇄 (ScFv) 및 도메인 항체 (예를 들어, 상어 및 낙타류 항체 포함), 및 항체를 포함하는 융합 단백질 및 항원 인식 부위를 포함하는 이뮤노글로불린 분자의 임의의 다른 변형된 구성을 포함한다. 항체는 임의의 부류의 항체, 예컨대 IgG, IgA 또는 IgM (또는 이들의 하위부류)를 포함하며, 항체는 임의의 특정한 부류의 것일 필요는 없다. 항체 중쇄의 불변 영역의 항체 아미노산 서열에 따라, 이뮤노글로불린은 상이한 부류로 지정될 수 있다. 이뮤노글로불린의 5개의 주요 부류: IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM가 존재하고, 이들 중 몇몇은 하위부류 (이소형), 예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2로 추가로 분류될 수 있다. 이뮤노글로불린의 상이한 부류에 상응하는 중쇄 불변 영역은 각각 알파, 델타, 엡실론, 감마 및 뮤로 지칭된다. 이뮤노글로불린의 상이한 부류의 서브유닛 구조 및 3차원 형상이 널리 공지되어 있다.
본원에 사용된 용어 항체의 "항원 결합 단편" 또는 "항원 결합 부분"은 주어진 항원 (예를 들어, CD123)에 특이적으로 결합하는 능력을 보유하는 무손상 항체의 하나 이상의 단편을 지칭한다. 항체의 항원 결합 기능은 무손상 항체의 단편에 의해 수행될 수 있다. 용어 항체의 "항원 결합 단편" 내에 포괄되는 결합 단편의 예는 Fab; Fab'; F(ab')2; 중쇄 가변 영역 (VH) 및 CH1 도메인으로 이루어진 Fd 단편; 항체의 단일 아암의 VL 및 VH 도메인으로 이루어진 Fv 단편; 단일 도메인 항체 (dAb) 단편 (문헌 [Ward et al., Nature 341:544-546, 1989]), 및 단리된 상보성 결정 영역 (CDR)을 포함한다.
표적 (예를 들어, CD123 단백질)에 "우선적으로 결합" 또는 "특이적으로 결합" (본원에서 상호교환가능하게 사용됨)하는 항체, ADC 또는 폴리펩티드는 관련 기술분야에서 널리 이해되는 용어이고, 이러한 특이적 또는 우선적 결합을 결정하는 방법 또한 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다. 분자가 대안적 세포 또는 물질보다 특정한 세포 또는 물질과 더 빈번하게, 더 신속하게, 더 큰 지속기간으로 및/또는 더 큰 친화도로 반응 또는 회합하는 경우에, 분자는 "특이적 결합" 또는 "우선적 결합"을 나타내는 것으로 언급된다. 항체가 다른 물질에 결합하는 것보다 더 큰 친화도, 결합력으로, 더 용이하게 및/또는 더 큰 지속기간으로 결합하는 경우에, 그것은 표적에 "특이적으로 결합" 또는 "우선적으로 결합"한다. 예를 들어, CD123 에피토프에 특이적으로 또는 우선적으로 결합하는 항체는 다른 CD123 에피토프 또는 비-CD123 에피토프에 결합하는 것보다 더 큰 친화도, 결합력으로, 더 용이하게 및/또는 더 큰 지속기간으로 결합하는 항체이다. 또한, 이러한 정의를 읽음으로써, 예를 들어 제1 표적에 특이적으로 또는 우선적으로 결합하는 항체 (또는 모이어티 또는 에피토프)는 제2 표적에 특이적으로 또는 우선적으로 결합할 수 있거나 또는 결합할 수 없는 것으로 이해된다. 따라서, "특이적 결합" 또는 "우선적 결합"은 배타적 결합을 (포함할 수 있지만) 반드시 필요로 하지는 않는다. 일반적으로, 반드시는 아니지만, 결합에 대한 언급은 우선적 결합을 의미한다.
항체의 "가변 영역"은 항체 경쇄의 가변 영역 또는 항체 중쇄의 가변 영역 단독 또는 조합을 지칭한다. 관련 기술분야에 공지된 바와 같이, 중쇄 및 경쇄의 가변 영역은 각각, 초가변 영역으로도 공지된 3개의 상보성 결정 영역 (CDR)에 의해 연결된 4개의 프레임워크 영역 (FR)으로 이루어져 있다. 각 쇄 내의 CDR은 FR에 의해 함께 매우 근접하여 유지되고, 다른 쇄로부터의 CDR과 함께, 항체의 항원 결합 부위의 형성에 기여한다. CDR을 결정하기 위한 2가지 이상의 기술이 있다: (1) 교차-종 서열 가변성을 기초로 하는 접근법 (즉, 문헌 [Kabat et al. Sequences of Proteins of Immunological Interest, (5th ed., 1991, National Institutes of Health, Bethesda MD)]), 및 (2) 항원-항체 복합체의 결정학적 연구를 기초로 하는 접근법 (문헌 [Al-lazikani et al., 1997, J. Molec. Biol. 273:927-948). 본원에 사용된 CDR은 어느 하나의 접근법 또는 두 접근법의 조합에 의해 정의된 CDR을 지칭할 수 있다.
가변 도메인의 "CDR"은 카바트, 코티아의 정의, 카바트 및 코티아 둘 다의 복합, AbM, 접촉, 및/또는 입체형태적 정의, 또는 관련 기술분야에 널리 공지된 임의의 CDR 결정 방법에 따라 확인되는 가변 영역 내의 아미노산 잔기이다. 항체 CDR은 카바트 등에 의해 최초로 정의된 초가변 영역으로서 확인될 수 있다. 예를 들어, 문헌 [Kabat et al., 1992, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th ed., Public Health Service, NIH, Washington D.C.]을 참조한다. CDR의 위치는 또한 코티아 등에 의해 최초로 기재된 루프 구조로서 확인될 수 있다. 예를 들어, 문헌 [Chothia et al., Nature 342:877-883, 1989]을 참조한다. CDR을 확인하는 다른 접근법으로는 카바트와 코티아의 절충안으로서, 옥스포드 몰레큘라 (Oxford Molecular)의 AbM 항체 모델링 소프트웨어 (현재 엑셀리스 (Accelrys) ®)를 이용하여 유도된 "AbM 정의", 또는 문헌 [MacCallum et al., J. Mol. Biol., 262:732-745, 1996]에 설명되어 있는, 관찰된 항원 접촉에 기초한 CDR의 "접촉 정의"를 포함한다. 본원에서 CDR의 "입체형태적 정의"로 지칭되는 또 다른 접근법에서, CDR의 위치는 항원 결합에 대한 엔탈피 기여를 이루는 잔기로서 확인될 수 있다. 예를 들어, 문헌 [Makabe et al., Journal of Biological Chemistry, 283:1156-1166, 2008]을 참조한다. 또 다른 CDR 경계 정의는 상기 접근법 중 하나를 엄격하게 따르지 않을 수 있지만, 그럼에도 불구하고, 특정한 잔기 또는 잔기들의 군 또는 심지어 전체 CDR이 항원 결합에 유의하게 영향을 미치지 않는다는 예측 또는 실험적 발견에 비추어 짧아지거나 길어질 수는 있더라도 카바트 CDR의 적어도 일부와 중첩될 것이다. 본원에 사용된 경우에, CDR은 접근법들의 조합을 포함하여, 관련 기술분야에 공지된 임의의 접근법에 의해 정의되는 CDR을 지칭할 수 있다. 본원에 사용된 방법은 임의의 이들 접근법에 따라 정의된 CDR을 사용할 수 있다. 1개 초과의 CDR을 함유하는 임의의 주어진 실시양태에서, CDR은 카바트, 코티아, 연장형, AbM, 접촉 및/또는 입체형태적 정의 중 임의의 것에 따라 정의될 수 있다.
용어 "폴리펩티드", "올리고펩티드", "펩티드" 및 "단백질"은 임의의 길이, 바람직하게는 비교적 짧은 아미노산 (예를 들어, 10 내지 100개 아미노산)의 쇄를 지칭하는 것으로 본원에서 상호교환가능하게 사용된다. 상기 쇄는 선형 또는 분지형일 수 있으며, 변형된 아미노산을 포함할 수 있고/거나 비-아미노산이 개재될 수도 있다. 상기 용어들은 또한 천연으로 또는 개입에 의해; 예를 들어, 디술피드 결합 형성, 글리코실화, 지질화, 아세틸화, 인산화 또는 임의의 다른 조작 또는 변형, 예컨대 표지 성분과의 접합에 의해 변형된 아미노산 쇄를 포함한다. 또한, 예를 들어, 1개 이상의 아미노산 유사체 (예를 들어, 비천연 아미노산 등 포함) 뿐만 아니라 관련 기술분야에 공지된 다른 변형을 함유하는 폴리펩티드가 상기 정의 내에 포함된다. 폴리펩티드는 단일 쇄 또는 회합된 쇄로서 발생할 수 있는 것으로 이해된다.
본 발명의 항체는 관련 기술분야에 널리 공지된 기술, 예를 들어 재조합 기술, 파지 디스플레이 기술, 합성 기술 또는 이러한 기술의 조합 또는 관련 기술분야에 용이하게 공지된 다른 기술을 이용하여 생산될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Jayasena, S.D., Clin. Chem., 45: 1628-50, 1999 and Fellouse, F.A., et al., J. Mol. Biol., 373(4):924-40, 2007] 참조).
관련 기술분야에 공지된 바와 같이, 본원에서 상호교환가능하게 사용된 "폴리뉴클레오티드" 또는 "핵산"은 임의의 길이의 뉴클레오티드 쇄를 지칭하며, DNA 및 RNA를 포함한다. 상기 뉴클레오티드는 데옥시리보뉴클레오티드, 리보뉴클레오티드, 변형된 뉴클레오티드 또는 염기, 및/또는 이들의 유사체 또는 DNA 또는 RNA 폴리머라제에 의해 쇄에 도입될 수 있는 임의의 기질일 수 있다. 폴리뉴클레오티드는 변형된 뉴클레오티드, 예컨대 메틸화 뉴클레오티드 및 그의 유사체를 포함할 수 있다. 존재하는 경우, 뉴클레오티드 구조에 대한 변형은 쇄의 조립 전 또는 후에 부여될 수 있다. 뉴클레오티드의 서열에 비-뉴클레오티드 성분이 개재될 수 있다. 폴리뉴클레오티드는 중합 후에, 예컨대 표지 성분과의 접합에 의해 추가로 변형될 수 있다. 다른 유형의 변형은, 예를 들어 "캡", 자연 발생 뉴클레오티드 중 1개 이상의 유사체로의 치환, 뉴클레오티드간 변형, 예컨대 예를 들어 비하전된 연결 (예를 들어, 메틸 포스포네이트, 포스포트리에스테르, 포스포아미데이트, 카르바메이트 등)을 갖는 것들 및 하전된 연결 (예를 들어, 포스포로티오에이트, 포스포로디티오에이트 등)을 갖는 것들, 펜던트 모이어티, 예컨대 예를 들어 단백질 (예를 들어, 뉴클레아제, 독소, 항체, 신호 펩티드, 폴리-L-리신 등)을 함유하는 것, 삽입제 (예를 들어, 아크리딘, 프소랄렌 등)를 갖는 것, 킬레이트화제 (예를 들어, 금속, 방사성 금속, 붕소, 산화 금속 등)를 함유하는 것, 알킬화제를 함유하는 것, 변형된 연결 (예를 들어, 알파 아노머 핵산 등)을 갖는 것, 뿐만 아니라 비변형된 형태의 폴리뉴클레오티드(들)를 포함한다. 또한, 당류에 통상적으로 존재하는 임의의 히드록실기는 예를 들어 포스포네이트기, 포스페이트기에 의해 대체될 수 있거나, 표준 보호기에 의해 보호될 수 있거나, 추가의 뉴클레오티드에 대한 추가의 연결을 만들기 위해 활성화될 수 있거나, 고체 지지체에 접합될 수 있다. 5' 및 3' 말단 OH는 인산화될 수 있거나, 아민 또는 1 내지 20개 탄소 원자의 유기 캡핑기 모이어티로 치환될 수 있다. 다른 히드록실이 또한 표준 보호기로 유도체화될 수 있다. 폴리뉴클레오티드는 또한 관련 기술분야에 일반적으로 공지된 리보스 또는 데옥시리보스 당류의 유사 형태, 예를 들어 2'-O-메틸-, 2'-O-알릴, 2'-플루오로- 또는 2'-아지도-리보스, 카르보시클릭 당류 유사체, 알파- 또는 베타-아노머 당류, 에피머 당류, 예컨대 아라비노스, 크실로스 또는 릭소스, 피라노스 당류, 푸라노스 당류, 세도헵툴로스, 비-시클릭 유사체 및 무염기성 뉴클레오시드 유사체, 예컨대 메틸 리보시드를 함유할 수 있다. 하나 이상의 포스포디에스테르 연결은 대안적 연결기에 의해 대체될 수 있다. 이들 대안적 연결 기는 포스페이트가 P(O)S ("티오에이트"), P(S)S ("디티오에이트"), (O)NR2 ("아미데이트"), P(O)R, P(O)OR', CO 또는 CH2 ("포름아세탈")에 의해 대체된 실시양태를 포함하나 이에 제한되지는 않으며, 여기서 각각의 R 또는 R'는 독립적으로 H, 또는 임의로 에테르 (-O-) 연결을 함유하는 치환 또는 비치환된 알킬 (1-20 C), 아릴, 알케닐, 시클로알킬, 시클로알케닐 또는 아르알딜이다. 폴리뉴클레오티드 내의 모든 연결이 동일할 필요는 없다. 상기 기재는 RNA 및 DNA를 비롯한 본원에 지칭된 모든 폴리뉴클레오티드에 적용된다.
관련 기술분야에 공지된 바와 같이 항체의 "불변 영역"은 항체 경쇄의 불변 영역 또는 항체 중쇄의 불변 영역 단독 또는 조합을 지칭한다.
본원에 사용된 "실질적으로 순수한"은 적어도 50% 순도 (즉, 오염물이 없음), 보다 바람직하게는 적어도 90% 순도, 보다 바람직하게는 적어도 95% 순도, 보다 더 바람직하게는 적어도 98% 순도, 가장 바람직하게는 적어도 99% 순도인 물질을 지칭한다.
"숙주 세포"는 폴리뉴클레오티드 삽입물의 혼입을 위한 벡터 (들)에 대해 수용자일 수 있거나 수용자인 개별 세포 또는 세포 배양물을 포함한다. 숙주 세포는 단일 숙주 세포의 자손을 포함하고, 자손은 자연적, 우발적 또는 고의적 돌연변이로 인해 원래 모 세포와 (형태학 또는 게놈 DNA 상보성에서) 반드시 완전하게 동일하지는 않을 수 있다. 숙주 세포는 본 발명의 폴리뉴클레오티드 (들)에 의해 생체내 형질감염된 세포를 포함한다.
관련 기술분야에 공지된 바와 같이, 용어 "Fc 영역"은 이뮤노글로불린 중쇄의 C-말단 영역을 정의하기 위해 사용된다. "Fc 영역"은 천연 서열 Fc 영역 또는 변이체 Fc 영역일 수 있다. 이뮤노글로불린 중쇄의 Fc 영역의 경계가 달라질 수 있지만, 인간 IgG 중쇄 Fc 영역은 통상적으로 위치 Cys226의 아미노산 잔기 또는 Pro230으로부터 그의 카르복실-말단에까지 이어진 것으로 정의된다. Fc 영역 내 잔기의 넘버링은 카바트에서와 같이 EU 인덱스의 넘버링이다. 문헌 [Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md., 1991]. 이뮤노글로불린의 Fc 영역은 일반적으로 2개의 불변 영역인 CH2 및 CH3을 포함한다.
항체와 관련하여 본원에 사용된 용어 "경쟁하다"는 제1 항체 또는 그의 항원 결합 단편 (또는 부분)이 제2 항체 또는 그의 항원-결합 부분의 결합과 충분히 유사한 방식으로 에피토프에 결합하여, 상기 제1 항체와 그의 동족 에피토프의 결합이 제2 항체 부재 하의 제1 항체의 결합과 비교하여 제2 항체의 존재 하에 검출가능하게 감소되는 것을 의미한다. 또한 제2 항체의 그의 에피토프에 대한 결합이 제1 항체 존재 하에 검출가능하게 감소하는 대안적 경우도 해당될 수 있지만 그럴 필요는 없다. 즉, 제1 항체의 그의 각각의 에피토프에 대한 결합을 제2 항체가 억제하지 않으면서 제2 항체의 그의 에피토프에 대한 결합을 제1 항체가 억제할 수 있다. 그러나, 각각의 항체가 동일한 정도, 보다 큰 정도, 또는 보다 적은 정도와 관계없이 다른 항체와 그의 동족 에피토프 또는 리간드와의 결합을 검출가능하게 억제하는 경우에, 항체는 그의 각각의 에피토프(들)의 결합에 대해 서로 "교차-경쟁"하는 것으로 언급된다. 경쟁 및 교차 경쟁 항체 둘 다가 본 발명에 포괄된다. 이러한 경쟁 또는 교차-경쟁이 발생하는 메카니즘 (예를 들어, 입체 장애, 입체형태적 변화, 또는 공통 에피토프 또는 그의 부분에 대한 결합)과 관계없이, 관련 기술분야의 통상의 기술자는 본원에 제공된 교시에 기초하여, 이러한 경쟁 및/또는 교차-경쟁 항체가 포괄되고 본원에 개시된 방법에 유용할 수 있다는 것을 인지할 것이다.
"천연 서열 Fc 영역"은 자연에서 발견되는 Fc 영역의 아미노산 서열과 동일한 아미노산 서열을 포함한다. "변이체 Fc 영역"은 적어도 1개의 아미노산 변형에 의해 천연 서열 Fc 영역의 아미노산 서열과 상이하지만 천연 서열 Fc 영역의 하나 이상의 이펙터 기능을 보유하고 있는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은, 천연 서열 Fc 영역 또는 모 폴리펩티드의 Fc 영역과 비교하여 적어도 1개의 아미노산 치환, 예를 들어 약 1 내지 약 10개의 아미노산 치환, 바람직하게는 약 1 내지 약 5개의 아미노산 치환을 천연 서열 Fc 영역 또는 모 폴리펩티드의 Fc 영역 내에 갖는다. 본원에서의 변이체 Fc 영역은 천연 서열 Fc 영역 및/또는 모 폴리펩티드의 Fc 영역과의 서열 동일성이 적어도 약 80%일 것이고, 가장 바람직하게는 그와의 서열 동일성이 적어도 약 90%, 보다 바람직하게는 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%일 것이다.
본원에 사용된 용어 "CD123"은 임의의 형태의 CD123 및 CD123의 활성 중 적어도 일부를 보유하는 그의 변이체를 지칭한다. 인간 CD123에 대한 구체적 언급과 같이 달리 나타내지 않는 한, CD123은 천연 서열 CD123의 모든 포유동물 종, 예를 들어 인간, 개, 고양이, 말 및 소를 포함한다. 예시적인 CD123 서열이 표 1에 제시된다.
표 1
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본원에 사용된 "CD123 항체"는 CD123에 특이적으로 결합하고, CD123에 의해 매개되는 생물학적 활성 및/또는 하류 사건(들)을 조정하는 항체를 지칭한다. 일부 실시양태에서, CD123 항체는 길항제 항체이다. CD123 길항제 항체는 CD123 생물학적 활성, 예를 들어 CD123에 의해 매개되는 하류 사건, 예컨대 예를 들어 IL-3 결합 및/또는 하류 신호전달, STAT5 인산화 및 다능성 세포의 생존을 (유의하게를 포함하여 임의의 정도로) 차단하거나, 길항하거나, 억제하거나, 또는 감소시키는 항체를 포함한다. CD123 항체 및 CD123 항체-약물 접합체 ("CD123 ADC")의 예가 본원에 제공된다.
본원에 사용된 바와 같은, "치료"는 유익하거나 목적하는 임상 결과를 수득하기 위한 접근법이다. 본 발명의 목적상, 유익하거나 목적하는 임상 결과는 하기 중 하나 이상을 포함하나 이에 제한되지는 않는다: 신생물성 또는 암성 세포 증식의 감소 (또는 파괴), 신생물성 세포 전이의 억제, CD123 연관 질환 (예를 들어, 암 또는 자가면역 질환)의 완화, CD123 연관 질환 (예를 들어, 암 또는 자가면역 질환)으로부터 초래되는 증상의 감소, CD123 연관 질환 (예를 들어, 암 또는 자가면역 질환)을 앓는 환자의 삶의 질 증가, CD123 연관 질환 (예를 들어, 암 또는 자가면역 질환)의 치료를 위해 요구되는 다른 의약의 용량의 감소, CD123 연관 질환 (예를 들어, 암 또는 자가면역 질환)의 진행 지연, CD123 연관 질환 (예를 들어, 암 또는 자가면역 질환)의 치유, 및/또는 CD123 연관 질환 (예를 들어, 암 또는 자가면역 질환)을 갖는 대상체의 생존 연장.
"호전"은 CD123 항체 또는 CD123 ADC를 투여하지 않는 경우와 비교하여 1종 이상의 증상의 감소 또는 개선을 의미한다. "호전"은 또한 증상 지속기간의 단축 또는 감소를 포함한다.
본원에 사용된 바와 같은, 약물, 화합물 또는 제약 조성물의 "유효 투여량" 또는 "유효량"은 한 가지 이상의 유리하거나 목적하는 어떠한 결과에 영향을 미치기에 충분한 양이다. 예방적 용도의 경우, 유익한 또는 목적하는 결과는 질환의 생화학적, 조직학적 및/또는 행동 증상, 그의 합병증 및 질환의 발생 동안 존재하는 중간의 병리학적 표현형을 비롯한, 질환의 위험을 제거 또는 감소시키거나, 질환의 중증도를 경감시키거나, 질환의 개시를 지연시키는 것을 포함한다. 치료적 용도의 경우, 유익하거나 목적하는 결과는 다양한 CD123 연관 질환 또는 상태 (예컨대 예를 들어, 비제한적으로 암)의 1종 이상의 증상의 발생 감소 또는 호전, 질환을 치료하는데 요구되는 다른 의약의 용량의 감소, 또 다른 의약의 효과의 증진, 및/또는 대상체의 CD123 연관 질환의 진행의 지연과 같은 임상 결과를 포함한다. 유효 투여량은 1회 이상의 투여로 투여될 수 있다. 본 발명의 목적상, 약물, 화합물 또는 제약 조성물의 유효 투여량은 예방적 또는 치유적 치료를 직접적으로 또는 간접적으로 달성하기에 충분한 양이다. 임상 상황에서 이해되는 바와 같이, 약물, 화합물 또는 제약 조성물의 유효 투여량은 또 다른 약물, 화합물 또는 제약 조성물과 함께 달성될 수 있거나 또는 그렇지 않을 수 있다. 따라서, "유효 투여량"은 1종 이상의 치료제의 투여와 관련하여 고려될 수 있고, 단일 작용제는 1종 이상의 다른 작용제와 함께 목적하는 결과가 달성될 수 있거나 달성되는 경우 유효량으로 주어진 것으로 고려될 수 있다.
"개체" 또는 "대상체"는 포유동물, 보다 바람직하게는 인간이다. 포유동물은 또한 가축, 스포츠 동물, 애완동물, 영장류, 말, 개, 고양이, 마우스 및 래트를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용된 "벡터"는 숙주 세포에 1종 이상의 관심 유전자(들) 또는 서열(들)을 전달할 수 있는, 바람직하게는 이를 발현시킬 수 있는 구축물을 의미한다. 벡터의 예는 바이러스 벡터, 네이키드 (naked) DNA 또는 RNA 발현 벡터, 플라스미드, 코스미드 또는 파지 벡터, 양이온성 축합제와 관련된 DNA 또는 RNA 발현 벡터, 리포솜에 캡슐화된 DNA 또는 RNA 발현 벡터 및 생산자 세포와 같은 특정 진핵 세포를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용된 "발현 제어 서열"은 핵산의 전사를 지시하는 핵산 서열을 의미한다. 발현 제어 서열은 프로모터, 예컨대 구성적 또는 유도성 프로모터, 또는 인핸서일 수 있다. 발현 제어 서열은 전사시키고자 하는 핵산 서열과 작동가능하게 연결된다.
본원에 사용된 "제약상 허용되는 담체" 또는 "제약상 허용되는 부형제"는 활성 성분과 조합되는 경우에 성분이 생물학적 활성을 유지하도록 하고 대상체의 면역계와 비-반응성인 임의의 물질을 포함한다. 예는 표준 제약 담체, 예컨대 포스페이트 완충 염수 용액, 물, 에멀젼, 예컨대 오일/물 에멀젼, 및 다양한 유형의 습윤제 중 임의의 것을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 에어로졸 또는 비경구 투여에 바람직한 희석제는 포스페이트 완충 염수 (PBS) 또는 통상 (0.9%) 염수이다. 이러한 담체를 포함하는 조성물은 널리 공지된 통상적인 방법에 의해 제제화된다 (예를 들어, 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th edition, A. Gennaro, ed., Mack Publishing Co., Easton, PA, 1990; and Remington, The Science and Practice of Pharmacy 21st Ed. Mack Publishing, 2005] 참조).
본원에 사용된 용어 "아실 공여자 글루타민-함유 태그" 또는 "글루타민 태그"는 트랜스글루타미나제 아민 수용자로서 작용하는 1개 이상의 Gln 잔기(들)를 함유하는 폴리펩티드 또는 단백질을 지칭한다. 예를 들어, PCT 공개 번호 WO2012059882 및 WO2015015448을 참조하며, 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
본원에 사용된 용어 "kon"은 항원에 대한 항체의 회합에 대한 속도 상수를 지칭한다. 구체적으로, 속도 상수 (kon 및 koff) 및 평형 해리 상수는 IgG 및 CD123 단백질 (예를 들어, CD123-Fc 융합 단백질)을 이용하여 측정된다.
본원에 사용된 용어 "koff"는 항체/항원 복합체로부터의 항체의 해리에 대한 속도 상수를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "KD"는 항체-항원 상호작용의 평형 해리 상수를 지칭한다.
본원에서 "약" 값 또는 파라미터에 대한 언급은 해당 값 또는 파라미터 그 자체에 대한 실시양태를 포함 (및 기재)한다. 예를 들어, "약 X"를 언급하는 기재는 "X"의 기재를 포함한다. 수치 범위는 범위를 규정하는 수를 포함한다.
본원에 사용된 CPI는 1,2,8,8a-테트라히드로시클로프로파[c]피롤로[3,2-e]인돌-4(5H)-온 또는 그의 치환 또는 유도체화된 형태를 지칭한다. CPI는 또한 CPI의 세코 형태, 또는 세코-CPI를 지칭할 수 있으며, 이는 또한 8-(클로로메틸)-1-메틸-3,6,7,8-테트라히드로피롤로[3,2-e]인돌-4-올, 또는 그의 치환 또는 유도체화된 형태 (또는 형태들)로 공지되어 있다.
실시양태가 표현 "포함하는"을 사용하여 본원에 기재된 어떠한 실시양태든지, "이루어진" 및/또는 "본질적으로 이루어진"의 관점에서 기재된 다른 유사한 실시양태가 또한 제공되는 것으로 이해된다.
본 발명의 측면 또는 실시양태가 마쿠쉬(Markush) 군 또는 다른 대안 군으로 기재되는 경우에, 본 발명은 총괄적으로 열거된 전체 군, 뿐만 아니라 상기 군의 개별인 각각의 구성원, 및 주요 군의 모든 가능한 하위군, 뿐만 아니라 군 구성원 중 하나 이상이 부재하는 주요 군을 포괄한다. 본 발명은 또한 청구된 발명에서 임의의 군 구성원 중 하나 이상의 명확한 배제를 고려한다.
달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술 과학 용어는 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 기술자가 통상적으로 이해하는 것과 동일한 의미를 갖는다. 상충되는 경우, 정의를 포함하여 본 명세서가 우선한다. 본 명세서 및 청구범위 전반에 걸쳐, 용어 "포함" 또는 변형어, 예컨대 "포함하다" 또는 "포함하는"은 언급된 정수 또는 정수 군을 포함하지만, 임의의 다른 정수 또는 정수 군을 배제하지는 않는다는 것을 의미하는 것으로 이해될 것이다. 문맥에서 달리 요구되지 않는 한, 단수 용어는 복수형을 포함할 것이고, 복수 용어는 단수형을 포함할 것이다.
예시적인 방법 및 물질이 본원에 기재되어 있지만, 본원에 기재된 것과 유사하거나 동일한 방법 및 물질도 또한 본 발명의 실시 또는 시험에 사용될 수 있다. 물질, 방법 및 예는 단지 예시적인 것이며, 제한적인 것으로 의도되지 않는다.
CD123 항체 및 항체-약물 접합체
본 발명은 하기 특성: (a) 대상체에서 CD123을 발현하는 악성 세포와 연관된 상태 (예를 들어, 암, 예컨대 비제한적으로 AML, B-ALL, HCL 등)의 1종 이상의 증상을 치료, 예방, 호전시키는 것; (b) (CD123을 발현하는 악성 세포를 갖는) 대상체에서 종양 성장 또는 진행을 억제하는 것; (c) (CD123을 발현하는 1종 이상의 악성 세포를 갖는) 대상체에서 CD123을 발현하는 암 (악성) 세포의 전이를 억제하는 것; (d) CD123을 발현하는 종양을 퇴행 (예를 들어, 장기 퇴행)시키는 것; (e) CD123을 발현하는 악성 세포에서 세포독성 활성을 발휘하는 것 중 임의의 하나 이상을 특징으로 하는, CD123 (예를 들어, 인간 CD123 (예를 들어, 서열식별번호: 1))에 결합하는 항체 및 항-CD123 항체를 포함하는 접합체 (예컨대 항체-약물 접합체 또는 ADC)를 제공한다.
본 발명에 유용한 항체는 모노클로날 항체, 폴리클로날 항체, 항체 단편 (예를 들어, Fab, Fab', F(ab')2, Fv, Fc 등), 키메라 항체, 이중특이적 항체, 이종접합체 항체, 단일 쇄 (ScFv), 그의 돌연변이체, 항체 부분 (예를 들어, 도메인 항체)을 포함하는 융합 단백질, 인간화 항체, 및 항체의 글리코실화 변이체, 항체의 아미노산 서열 변이체, 및 공유 변형된 항체를 포함한 필요한 특이성의 항원 인식 부위를 포함하는 임의의 다른 변형된 형상의 이뮤노글로불린 분자를 포괄할 수 있다. 항체는 뮤린, 래트, 인간 또는 임의의 다른 기원 (키메라 또는 인간화 항체를 포함)일 수 있다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 CD123 항체는 모노클로날 항체이다. 예를 들어, CD123 항체는 인간화 모노클로날 항체, 인간 항체 또는 키메라 모노클로날 항체일 수 있다.
일부 실시양태에서, 항체는 변형된 불변 영역, 예컨대 예를 들어 비제한적으로 면역 반응을 유발하는데 증가된 잠재성을 갖는 불변 영역을 포함한다. 예를 들어, 불변 영역은 Fc 감마 수용체, 예컨대 예를 들어 FcγRI, FcγRIIA 또는 FcγIII에 대한 증가된 친화도를 갖도록 변형될 수 있다. 일부 실시양태에서, 항체는 면역적으로 불활성인 불변 영역, 즉 면역 반응을 유발하는데 감소된 잠재성을 갖는 불변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 불변 영역은 문헌 [Eur. J. Immunol., 29:2613-2624, 1999]; PCT 출원 번호 PCT/GB99/01441; 및/또는 영국 특허 출원 번호 98099518에 기재된 바와 같이 변형된다. Fc는 인간 IgG1, 인간 IgG2, 인간 IgG3 또는 인간 IgG4일 수 있다. Fc는 돌연변이 A330P331 → S330S331을 함유하는 인간 IgG2 (IgG2Δa)일 수 있고, 여기서 아미노산 잔기는 야생형 IgG2 서열에 대해 넘버링된다. 문헌 [Eur. J. Immunol., 29:2613-2624, 1999]. 일부 실시양태에서, 항체는 하기 돌연변이: E233F234L235 → P233V234A235를 포함하는 IgG4의 불변 영역을 포함한다 (IgG4Δc) (여기서, 넘버링은 야생형 IgG4에 대한 것임) (문헌 [Armour et al., Molecular Immunology 40 585-593, 2003]). 또 다른 실시양태에서, Fc는 결실 G236을 갖는 인간 IgG4 E233F234L235 → P233V234A235 (IgG4Δb)이다. 또 다른 실시양태에서, Fc는 힌지 안정화 돌연변이 S228 → P228을 함유하는 임의의 인간 IgG4 Fc (IgG4, IgG4Δb 또는 IgG4Δc)이다 (문헌 [Aalberse et al., Immunology 105, 9-19, 2002]). 또 다른 실시양태에서, Fc는 비-글리코실화된 Fc일 수 있다.
일부 실시양태에서, 불변 영역은 불변 영역 중 글리코실화 인식 서열의 일부인 올리고사카라이드 부착 잔기 (예컨대 Asn297) 및/또는 플랭킹 (flanking) 잔기를 돌연변이시켜 비-글리코실화될 수 있다. 일부 실시양태에서, 불변 영역은 효소적으로 N-연결된 글리코실화에 대해 비-글리코실화된다. 불변 영역은 효소적으로 또는 글리코실화 결핍 숙주 세포에서의 발현에 의해 N-연결된 글리코실화에 대해 비-글리코실화될 수 있다.
CD123에 대한 항체의 결합 친화도를 결정하는 한가지 방법은 항체의 단일기능적 Fab 단편의 결합 친화도를 측정하는 것이다. 단일기능적 Fab 단편을 얻기 위해, 항체 (예를 들어, IgG)는 파파인으로 절단되거나 또는 재조합적으로 발현될 수 있다. 항체의 CD123 Fab 단편의 친화도는 HBS-EP 러닝 완충제 (0.01M HEPES, pH 7.4, 0.15 NaCl, 3 mM EDTA, 0.005% v/v 계면활성제 P20)를 사용하여 미리-고정화된 스트렙타비딘 센서 칩 (SA) 또는 항-마우스 Fc 또는 항-인간 Fc가 장착된 표면 플라즈몬 공명 (비아코어(Biacore)TM3000TM 표면 플라즈몬 공명 (SPR) 시스템, 비아코어TM, 인크(BiacoreTM, INC, 미국 뉴저지주 피스카타웨이))에 의해 측정할 수 있다. 비오티닐화 또는 Fc 융합 인간 CD123를 HBS-EP 완충제에 0.5 μg/mL 미만의 농도로 희석시키고, 가변 접촉 시간을 사용하여 개별 칩 채널을 통해 주입함으로써 2가지 범위의 항원 밀도, 상세한 동역학적 연구의 경우에 50-200 반응 단위 (RU) 또는 스크리닝 검정의 경우에 800-1,000 RU를 달성할 수 있다. 재생 연구는 200회 주입에 걸쳐 칩 상에서 CD123의 활성을 유지하면서 25% v/v 에탄올 중 25 mM NaOH가 결합 Fab를 효과적으로 제거하는 것을 나타내었다. 전형적으로, 정제된 Fab 샘플의 연속 희석물 (0.1-10x 추정된 KD의 범위 농도)을 1분 동안 100μL/분으로 주입하고, 최대 2시간의 해리 시간을 허용한다. Fab 단백질의 농도는 표준으로서 기지의 농도의 Fab (아미노산 분석에 의해 결정됨)를 사용하는 ELISA 및/또는 SDS-PAGE 전기영동에 의해 결정된다. 동역학적 회합 속도 (kon) 및 해리 속도 (koff)는 BIA 평가 프로그램을 사용하여 데이터를 1:1 랭뮤어 (Langmuir) 결합 모델에 포괄적으로 피팅함으로써 동시에 수득한다 (문헌 [Karlsson, R. Roos, H. Fagerstam, L. Petersson, B. (1994). Methods Enzymology 6. 99-110]). 평형 해리 상수 (KD) 값은 koff/kon로서 계산된다. 이러한 프로토콜은 인간 CD123, 또 다른 포유동물의 CD123 (예컨대 마우스 CD123, 래트 CD123 또는 영장류 CD123), 뿐만 아니라 다른 형태의 CD123 (예를 들어, 글리코실화 CD123)을 비롯한 임의의 CD123에 대한 항체의 결합 친화도를 결정하는데 사용하기에 적합하다. 항체의 결합 친화도는 일반적으로 25℃에서 측정하지만, 37℃에서도 또한 측정할 수 있다. CD123 (예컨대 인간 CD123 (예를 들어, 서열식별번호: 1)에 대한 본원에 기재된 바와 같은 CD123 항체의 결합 친화도 (KD)는 약 0.002 nM 내지 약 6500 nM일 수 있다. 일부 실시양태에서, 결합 친화도는 약 6500 nm, 6000 nm, 5986 nm, 5567 nm, 5500 nm, 4500 nm, 4000 nm, 3500 nm, 3000 nm, 2500 nm, 2134 nm, 2000 nm, 1500 nm, 1000 nm, 750 nm, 500 nm, 400 nm, 300 nm, 250 nm, 200 nM, 193 nM, 100 nM, 90 nM, 50 nM, 45 nM, 40 nM, 35 nM, 30 nM, 25 nM, 20 nM, 19 nm, 18 nm, 17 nm, 16 nm, 15 nM, 10 nM, 8 nM, 7.5 nM, 7 nM, 6.5 nM, 6 nM, 5.5 nM, 5 nM, 4 nM, 3 nM, 2 nM, 1 nM, 0.5 nM, 0.3 nM, 0.1 nM, 0.01 nM, 또는 0.002 nM 중 임의의 것이다. 일부 실시양태에서, 결합 친화도는 약 6500 nm, 6000 nm, 5500 nm, 5000 nm, 4000 nm, 3000 nm, 2000 nm, 1000 nm, 900 nm, 800 nm, 250 nM, 200 nM, 100 nM, 50 nM, 30 nM, 20 nM, 10 nM, 7.5 nM, 7 nM, 6.5 nM, 6 nM, 5 nM, 4.5 nM, 4 nM, 3.5 nM, 3 nM, 2.5 nM, 2 nM, 1.5 nM, 1 nM, 또는 0.5 nM 중 임의의 것 미만이다.
본원에 기재된 CD123 항체는 관련 기술분야에 공지된 임의의 방법에 의해 제조될 수 있다. 하이브리도마 세포주의 생산을 위해, 숙주 동물의 면역화 경로 및 스케쥴은 일반적으로 본원에 추가로 기재한 바와 같이 항체 자극 및 생산을 위한 확립된 기술 및 전형적인 기술로 유지된다. 인간 및 마우스 항체의 생산을 위한 일반 기술이 관련 기술분야에 공지되어 있고/있거나 본원에 기재되어 있다.
일부 실시양태에서, CD123 항체는 서열식별번호: 6, 24, 32, 44, 51 또는 64의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (VH)의 3개의 CDR을 포함하는 VH를 포함할 수 있다. 본 발명의 일부 측면에서, 항체는 서열식별번호: 17, 28, 39, 48, 57 또는 71의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (VL)의 3개의 CDR을 포함하는 VL을 포함한다. 본 발명의 일부 측면에서, 항체는 서열식별번호: 6, 24, 32, 44, 51 또는 64의 아미노산 서열을 포함하는 VH의 3개의 CDR을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 17, 28, 39, 48, 57 또는 71의 아미노산 서열을 포함하는 VL의 3개 CDR을 포함하는 VL을 포함한다. 다른 실시양태에서, CD123 항체는 서열식별번호: 7, 8 및 9의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 18, 19 및 20의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함할 수 있다. 다른 실시양태에서, CD123 항체는 서열식별번호: 7, 25 및 9의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 18, 19 및 20의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함할 수 있다. 다른 실시양태에서, CD123 항체는 서열식별번호: 33, 34 및 35의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 40, 41 및 42의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함할 수 있다. 다른 실시양태에서, CD123 항체는 서열식별번호: 33, 45 및 46의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 40, 41 및 42의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함할 수 있다. 다른 실시양태에서, CD123 항체는 서열식별번호: 52, 53 및 54의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 58, 59 및 60의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함할 수 있다. 다른 실시양태에서, CD123 항체는 서열식별번호: 65, 66 및 67의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 72, 73 및 74의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함할 수 있다.
대표적인 CD123 항체 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역은 각각 서열식별번호: 6, 24, 32, 44, 51 및 64 및 서열식별번호: 17, 28, 39, 48, 57 및 71의 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 대표적인 CD123 항체 중쇄 및 경쇄는 각각 서열식별번호: 15, 27, 37, 47, 55 및 69 및 서열식별번호: 23, 30, 43, 49, 62 및 76의 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 대표적인 CD123 항체 서열을 표 2.0에 제시한다.
표 2.0 대표적인 CD123 항체 서열
Figure 112020051620549-pct00003
본원에 제공되는 예시적인 CD123 항체는 표 2.1에 제시된 18G3, 인간화 18G3 (h18G3), 16D6, 인간화 16D6 (h16D6), 3D1 및 20D7을 포함한다. 표 2.1에 제시된 서열은 달리 나타내지 않는 한 아미노산 서열이다.
표 2.1
Figure 112020051620549-pct00004
Figure 112020051620549-pct00005
Figure 112020051620549-pct00006
Figure 112020051620549-pct00007
Figure 112020051620549-pct00008
Figure 112020051620549-pct00009
Figure 112020051620549-pct00010
치환 변이체는, 항체 분자 내의 적어도 1개의 아미노산 잔기가 제거되고 그 위치에 상이한 잔기가 삽입된다. 치환 돌연변이 유발을 위한 가장 관심있는 부위는 초가변 영역을 포함하지만, 프레임워크 변경 또한 고려된다. 보존적 치환은 "보존적 치환"의 표제 하에 표 3에 제시된다. 이러한 치환이 생물학적 활성을 변화시키는 경우에, 표 3에 "예시적인 치환"으로 명명되거나, 또는 아미노산 부류에 대해 하기 추가로 기재된 바와 같은 보다 실질적인 변화를 도입하고 생성물을 스크리닝할 수 있다.
표 3: 아미노산 치환
Figure 112020051620549-pct00011
항체의 생물학적 특성에 있어서의 실질적인 변형은 (a) 치환 영역에서 폴리펩티드 백본의 구조를, 예를 들어 β-시트 또는 나선 입체형태로서 유지하거나, (b) 표적 부위에서 분자의 전하 또는 소수성을 유지하거나, 또는 (c) 측쇄의 벌크를 유지하는데에 있어서의 그의 효과 면에서 상당히 상이한 치환을 선택함으로써 달성된다. 자연 발생 잔기는 공통적인 측쇄 특성을 기초로 하기 군으로 분류된다:
(1) 비-극성: 노르류신, Met, Ala, Val, Leu, Ile;
(2) 전하 없는 극성: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln;
(3) 산성 (음으로 하전됨): Asp, Glu;
(4) 염기성 (양으로 하전됨): Lys, Arg;
(5) 쇄 배향에 영향을 미치는 잔기: Gly, Pro; 및
(6) 방향족: Trp, Tyr, Phe, His.
비-보존적 치환은 이들 부류 중 1개의 구성원을 또 다른 부류로 교환하는 것에 의해 이루어진다.
예를 들어, 이루어질 수 있는 한 가지 유형의 치환은 화학적으로 반응성일 수 있는 항체 내의 1개 이상의 시스테인을 또 다른 잔기, 예컨대 비제한적으로 알라닌 또는 세린으로 교체시키는 것이다. 예를 들어, 비-정규 (non-canonical) 시스테인의 치환이 있을 수 있다. 치환은 항체의 가변 도메인의 CDR 또는 프레임워크 영역에서 또는 불변 영역에서 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, 시스테인은 정규 시스테인이다. 또한, 항체의 적절한 입체형태 유지에 관여하지 않는 임의의 시스테인 잔기가 일반적으로 세린으로 치환되어 분자의 산화 안정성을 개선하고 이상 가교를 방지할 수 있다. 반대로, 시스테인 결합(들)이 항체에 부가되어 그의 안정성을 개선시킬 수 있으며, 이는 특히 항체가 Fv 단편과 같은 항체 단편인 경우이다.
본 발명은 또한 본원에 기재된 CD123 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 접합체를 제공하며, 여기서 항체는 직접적으로 또는 링커를 통해 간접적으로 표적화된 면역요법을 위한 작용제 (예를 들어, 세포독성제)에 접합된다 (예를 들어, 항체-약물 접합체 또는 ADC). 예를 들어, 세포독성제는 종양 (예를 들어, CD123 발현 종양)으로의 세포독성제 모이어티의 표적화된 국부 전달을 위해 본원에 기재된 바와 같은 그의 CD123 항체에 연결되거나 접합될 수 있다.
세포독성제 또는 다른 치료제를 항체에 접합시키는 방법은 다양한 공개물에 기재되어 있다. 예를 들어, 접합 반응이 발생하도록 쇄간 디술피드 결합을 환원시킴으로써 활성화된 시스테인 술프히드릴 기를 통해 또는 리신 측쇄 아민을 통해 항체에서 화학적 변형이 이루어질 수 있다. 예를 들어, 문헌 [Tanaka et al., FEBS Letters 579:2092-2096, 2005, and Gentle et al., Bioconjugate Chem. 15:658-663, 2004]을 참조한다. 규정된 화학량론을 갖는 특이적 약물 접합을 위해 항체의 특이적 부위에서 조작된 반응성 시스테인 잔기가 또한 기재된 바 있다. 예를 들어, 문헌 [Junutula et al., Nature Biotechnology, 26:925-932, 2008]을 참조한다. 트랜스글루타미나제 및 아민 (예를 들어, 반응성 아민을 포함하거나 또는 이에 부착된 세포독성제)의 존재 하에 폴리펩티드 조작함으로써 반응성으로 만든 (즉, 아실 공여자로서 공유 결합을 형성할 수 있는) 아실 공여자 글루타민-함유 태그 또는 내인성 글루타민을 사용한 접합이 또한 국제 WO2012/059882 및 WO2015015448에 기재되어 있으며, 이들은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다. 트랜스글루타미나제는 단백질-글루타민 γ-글루타밀트랜스퍼라제 (EC 2.3.2.13)이고, 이는 전형적으로 리신 잔기와 글루타민 잔기의 pH-의존성 아미드교환을 촉매한다. 본원에 기재된 발명에 사용된 트랜스글루타미나제는 다양한 공급원으로부터 수득 또는 제조될 수 있거나, 또는 하나 이상의 내인성 글루타민 잔기와 하나 이상의 리신 잔기 또는 하나 이상의 반응성 아민을 함유하는 아민 공여자 작용제의 아미드교환을 촉매하도록 조작될 수 있다. ADC를 제조하기 위해 트랜스글루타미나제를 사용하는 방법은 미국 특허 출원 공개 번호 20170043033에 기재되어 있으며, 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
ADC는, 전형적으로 링커의 사용을 통해 약물 작용제에 접합된 항체 성분을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 ADC는 조작된 글루타민-함유 태그, 내인성 글루타민 (예를 들어, 조작이 없는 천연 글루타민, 예컨대 가변 도메인, CDR 등에서의 글루타민), 및/또는 반응성 내인성 글루타민을 통해 아민 공여자 작용제 (예를 들어, 아민 공여자 단위와 함께 링커에 커플링된 소분자)에 부위 특이적으로 접합된 항체를 포함한다.
항체 내의 하나 이상의 아미노산(들)을 변형시킴으로써 (예를 들어, 아미노산 결실, 삽입, 치환 또는 돌연변이), 효소에 의한 탈글리코실화에 의해, 또는 조작된 트랜스글루타미나제와 반응시킴으로써 내인성 글루타민이 반응성이 될 수 있다 (즉, 아민 및 트랜스글루타미나제의 존재 하에 아실 공여자로서 공유 결합을 형성하는 능력이 생길 수 있다). 따라서, 한 측면에서, 다음 식을 포함하는 항체-약물 접합체 (ADC)가 제공된다: 항체-(T-(X-Y-Za)b)c (여기서: T는 1) 특이적 부위에서 조작된 글루타민-함유 태그, 2) 내인성 글루타민, 및/또는 3) 항체 조작 또는 조작된 트랜스글루타미나제에 의해 반응성이 된 내인성 글루타민이고; X는 아민 공여자 단위이고; Y는 링커이고; Z는 작용제 모이어티이고; X-Y-Z는 글루타민-함유 태그, 내인성 글루타민 및/또는 반응성 내인성 글루타민에 부위-특이적으로 접합된 아민 공여자 작용제이고; a는 1 내지 6의 정수이고; b는 1 내지 6의 정수이고; c는 1 내지 20의 정수이며; a, b, 및 c의 곱 (약물-항체 비)은 적어도 약 1임). 항체 상의 글루타민-함유 태그, 내인성 글루타민 및/또는 반응성 글루타민, 및 본원에 기재된 아민 공여자 작용제 (X-Y-Z)는 둘 다 트랜스글루타미나제에 대한 기질이며, 글루타민-함유 태그 및/또는 내인성/반응성 글루타민과 아민 공여자 작용제 사이의 연결은 식 CH2-CH2-CO-NH- (여기서 NH-는 링커 및 작용제 모이어티에 연결된다)의 것이다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 CD123 항체 또는 접합체는 항체의 특이적 부위 (예를 들어, 카르복실 말단, 아미노 말단 또는 CD123 항체 내의 또 다른 부위)에서 조작된 아실 공여자 글루타민-함유 태그를 포함한다. 일부 실시양태에서, 태그는 아미노산 글루타민 (Q) 또는 아미노산 서열 LQG, LLQGG (서열식별번호: 77), LLQG (서열식별번호: 78), LSLSQG (서열식별번호: 79), GGGLLQGG (서열식별번호: 80), GLLQG (서열식별번호: 81), LLQ, GSPLAQSHGG (서열식별번호: 82), GLLQGGG (서열식별번호: 83), GLLQGG (서열식별번호: 84), GLLQ (서열식별번호: 85), LLQLLQGA (서열식별번호: 86), LLQGA (서열식별번호: 87), LLQYQGA (서열식별번호: 88), LLQGSG (서열식별번호: 89), LLQYQG (서열식별번호: 90), LLQLLQG (서열식별번호: 91), SLLQG (서열식별번호: 92), LLQLQ (서열식별번호: 93), LLQLLQ (서열식별번호: 94), LLQGR (서열식별번호: 95), LLQGPP (서열식별번호: 96), LLQGPA (서열식별번호: 97), GGLLQGPP (서열식별번호: 98), GGLLQGA (서열식별번호: 99), LLQGPGK (서열식별번호: 100), LLQGPG (서열식별번호: 101), LLQGP (서열식별번호: 102), LLQP (서열식별번호: 103), LLQPGK (서열식별번호: 104), LLQAPGK (서열식별번호: 105), LLQGAPG (서열식별번호: 106), LLQGAP (서열식별번호: 107) 및 LLQLQG (서열식별번호: 108)를 포함한다.
일부 실시양태에서, 아실 공여자 글루타민-함유 태그는 예를 들어 항체 중쇄 내의 아미노산 잔기 E294-N297을 교체하는 LLQG (서열식별번호: 78)를 포함한다.
또한 아실 공여자 글루타민-함유 태그 및 항체의 위치 222, 340 또는 370 (EU 넘버링 방식)에서의 아미노산 변형을 포함하는 단리된 항체가 제공되며, 여기서 변형은 아미노산 결실, 삽입, 치환, 돌연변이 또는 그의 임의의 조합이다. 일부 실시양태에서, 아미노산 변형은 리신으로부터 아르기닌으로의 치환 (예를 들어, K222R, K340R 또는 K370R)이다.
본 발명의 CD123 항체 또는 항원 결합 단편에 접합될 수 있는 작용제는 세포독성제, 면역조정제, 영상화제, 치료 단백질, 생체중합체 또는 올리고뉴클레오티드를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
세포독성제의 예는 안트라시클린, 아우리스타틴, 돌라스타틴, 콤브레타스타틴, 두오카르마이신, 피롤로벤조디아제핀 이량체, 인돌리노-벤조디아제핀 이량체, 에네디인, 겔다나마이신, 메이탄신, 퓨로마이신, 탁산, 빈카 알칼로이드, 캄프토테신, 튜부리신, 헤미아스텔린, 스플라이세오스타틴, 플라디에놀리드 및 그의 입체이성질체, 동배체, 유사체 또는 유도체를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
일부 측면에서, 약물/작용제는 시클로프로필피롤로인돌린 (CPI) 이량체, CTI 이량체 또는 CBI 이량체이다. CPI 이량체는 가닥-간 DNA 가교 및 강력한 세포독성을 유도한다. PCT 국제 공개 번호 WO2015/110935 (이는 그 전문이 본원에 참조로 포함됨)는 본 발명의 CD123 ADC에 유용한 CPI 및 CBI 이량체를 개시하며, CPI 및 CBI 이량체를 생산하는 방법을 제공한다. 예를 들어, 화학식 C31H31Cl2N4O7P를 갖는 작용제 (8S)-8-(클로로메틸)-6-[(3-{[(1S)-1-(클로로메틸)-5-히드록시-8-메틸-1,6-디히드로피롤로[3,2-e]인돌-3(2H)-일]카르보닐}비시클로[1.1.1]펜트-1-일)카르보닐]-1-메틸-3,6,7,8-테트라히드로피롤로[3,2-e]인돌-4-일 디히드로겐 포스페이트 ("CPI-8314 이량체"로도 공지됨)는 하기 구조를 갖는다:
Figure 112020051620549-pct00012
.
안트라시클린은 박테리아 스트렙토미세스(Strepomyces)로부터 유래되고, 광범위한 암, 예컨대 백혈병, 림프종, 유방암, 자궁암, 난소암 및 폐암을 치료하는데 사용되어왔다. 예시적인 안트라시클린은 다우노루비신, 독소루비신 (즉, 아드리아마이신), 에피루비신, 이다루비신, 발루비신 및 미톡산트론을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
돌라스타틴 및 그의 펩티드성 유사체 및 유도체, 아우리스타틴은 항암 및 항진균 활성을 갖는 것으로 밝혀진 고도로 강력한 항유사분열제이다. 예를 들어, 미국 특허 번호 5,663,149 및 문헌 [Pettit et al., Antimicrob. Agents Chemother. 42:2961-2965, 1998]을 참조한다. 예시적인 돌라스타틴 및 아우리스타틴은 돌라스타틴 10, 아우리스타틴 E, 아우리스타틴 EB (AEB), 아우리스타틴 EFP (AEFP), MMAD (모노메틸 아우리스타틴 D 또는 모노메틸 돌라스타틴 10), MMAF (모노메틸 아우리스타틴 F 또는 N-메틸발린-발린-돌라이소류인-돌라프로인-페닐알라닌), MMAE (모노메틸 아우리스타틴 E 또는 N-메틸발린-발린-돌라이소류인-돌라프로인-노르에페드린), 5-벤조일발레르산-AE 에스테르 (AEVB) 및 다른 신규 아우리스타틴 (예컨대 미국 공개 번호 2013/0129753에 기재된 것)을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 일부 실시양태에서, 아우리스타틴은 하기 구조를 갖는 0101 (2-메틸알라닐-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(1S)-2-페닐-1-(1,3-티아졸-2-일)에틸]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아미드)이다:
Figure 112020051620549-pct00013
.
일부 실시양태에서, 아우리스타틴은 하기 구조를 갖는 3377 (N,2-디메틸알라닐-N-{(1S,2R)-4-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-카르복실-2-페닐에틸]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-2-메톡시-1-[(1S)-1-메틸프로필]-4-옥소부틸}-N-메틸-L-발린아미드)이다:
Figure 112020051620549-pct00014
.
일부 실시양태에서, 아우리스타틴은 하기 구조를 갖는 0131-OMe (N,2-디메틸알라닐-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-3-{[(2S)-1-메톡시-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아미드)이다:
Figure 112020051620549-pct00015
.
다른 실시양태에서, 아우리스타틴은 하기 구조를 갖는 0131 (2-메틸-L-프롤리-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-카르복시-2-페닐에틸]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아미드)이다:
Figure 112020051620549-pct00016
.
다른 실시양태에서, 아우리스타틴은 하기 구조를 갖는 0121 (2-메틸-L-프롤리-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-메톡시-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아미드)이다:
Figure 112020051620549-pct00017
.
캄프토테신은 효소 토포이소머라제 I를 억제하는 세포독성 퀴놀린 알칼로이드이다. 캄프토테신 및 그의 유도체의 예는 토포테칸 및 이리노테칸 및 그의 대사물, 예컨대 SN-38을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
콤브레타스타틴은 종양에서 혈관 파괴 특성을 갖는 천연 페놀이다. 예시적인 콤브레타스타틴 및 그의 유도체는 콤브레타스타틴 A-4 (CA-4) 및 옴브라불린을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
두오카르마이신 및 CC-1065는 세포독성 효력을 갖는 DNA 알킬화제이다. 문헌 [Boger and Johnson, PNAS 92:3642-3649 (1995)]을 참조한다. 예시적인 두오카르마이신 및 CC-1065는 (+)-두오카르마이신 A 및 (+)-두오카르마이신 SA, (+)-CC-1065, 및 국제 출원 PCT/IB2015/050280에 개시된 바와 같은 화합물, 예를 들어 비제한적으로 하기 구조를 갖는 N~2~-아세틸-L-리실-L-발릴-N~5~-카르바모일-N-[4-({[(2-{[({(1S)-1-(클로로메틸)-3-[(5-{[(1S)-1-(클로로메틸)-5-(포스포노옥시)-1,2-디히드로-3H-벤조[e]인돌-3-일]카르보닐}티오펜-2-일)카르보닐]-2,3-디히드로-1H-벤조[e]인돌-5-일}옥시)카르보닐](메틸)아미노}에틸)(메틸)카르바모일]옥시}메틸)페닐]-L-오르니틴아미드:
Figure 112020051620549-pct00018
,
하기 구조를 갖는 N~2~-아세틸-L-리실-L-발릴-N~5~-카르바모일-N-[4-({[(2-{[({(8S)-8-(클로로메틸)-6-[(3-{[(1S)-1-(클로로메틸)-8-메틸-5-(포스포노옥시)-1,6-디히드로피롤로[3,2-e]인돌-3(2H)-일]카르보닐}비시클로[1.1.1]펜트-1-일)카르보닐]-1-메틸-3,6,7,8-테트라히드로피롤로[3,2-e]인돌-4-일}옥시)카르보닐](메틸)아미노}에틸)(메틸)카르바모일]옥시}메틸)페닐]-L-오르니틴아미드:
Figure 112020051620549-pct00019
,
하기 구조를 갖는 N~2~-아세틸-L-리실-L-발릴-N~5~-카르바모일-N-[4-({[(2-{[({(8S)-8-(클로로메틸)-6-[(4-{[(1S)-1-(클로로메틸)-8-메틸-5-(포스포노옥시)-1,6-디히드로피롤로[3,2-e]인돌-3(2H)-일]카르보닐}펜타시클로[4.2.0.0~2,5~.0~3,8~.0~4,7~]옥트-1-일)카르보닐]-1-메틸-3,6,7,8-테트라히드로피롤로[3,2-e]인돌-4-일}옥시)카르보닐](메틸)아미노}에틸)(메틸)카르바모일]옥시}메틸)페닐]-L-오르니틴아미드:
Figure 112020051620549-pct00020
를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
에네디인은 9- 및 10-원 고리 또는 접합된 삼중-이중-삼중 결합의 시클릭계의 존재를 특징으로 하는 항종양 박테리아 생성물 부류이다. 예시적인 에네디인은 칼리케아미신, 에스페라미신, 운시알라미신, 디네미신 및 그의 유도체를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
겔다나마이신은 Hsp90 (열 쇼크 단백질 90)에 결합하고, 항종양 약물로 사용되는 벤조퀴논 안사마이신 항생제이다. 예시적인 겔다나마이신은 17-AAG (17-N-알릴아미노-17-데메톡시겔다나마이신) 및 17-DMAG (17-디메틸아미노에틸아미노-17-데메톡시겔다나마이신)를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
헤미아스텔린 및 그의 유사체 (예를 들어, HTI-286)는 튜불린에 결합하고, 정상적인 미세관 역학을 파괴하며, 화학양론적 양으로 미세관을 탈중합시킨다.
메이탄신 또는 그의 유도체 메이탄시노이드는 튜불린의 중합 억제를 통해 유사분열 동안 미세관 형성을 억제함으로써 세포 증식을 억제한다. 문헌 [Remillard et al., Science 189:1002-1005, 1975]을 참조한다. 예시적인 메이탄신 및 메이탄시노이드는 메르탄신 (DM1) 및 그의 유도체, 뿐만 아니라 안사미토신을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
피롤로벤조디아제핀 이량체 (PBD) 및 인돌리노-벤조디아제핀 이량체 (IGN)는 듀플렉스 DNA에 결합하는 하나 이상의 이민 관능기 또는 그의 등가물을 함유하는 항종양제이다. PBD 및 IGN 분자는 천연 생성물 안트라마이신을 기반으로 하고, 퓨린-구아닌-퓨린 서열에 대해 선호도를 갖는 서열-선택적 방식으로 DNA와 상호작용한다. 예시적인 PBD 및 그의 유사체는 SJG-136을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
스플라이세오스타틴 및 플라디에놀리드는 스플라이싱을 억제하고 스플라이세오솜, SF3b와 상호작용하는 항종양 화합물이다. 스플라이세오스타틴의 예는 스플라이세오스타틴 A, FR901464, 및 하기 구조를 갖는 (2S,3Z)-5-{[(2R,3R,5S,6S)-6-{(2E,4E)-5-[(3R,4R,5R,7S)-7-(2-히드라지닐-2-옥소에틸)-4-히드록시-1,6-디옥사스피로[2.5]옥트-5-일]-3-메틸펜타-2,4-디엔-1-일}-2,5-디메틸테트라히드로-2H-피란-3-일]아미노}-5-옥소펜트-3-엔-2-일 아세테이트를 포함하나 이에 제한되지는 않는다:
Figure 112020051620549-pct00021
플라디에놀리드의 예는 플라디에놀리드 B, 플라디에놀리드 D, 또는 E7107을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
탁산은 항튜불린제 또는 유사분열 억제제로서 작용하는 디테르펜이다. 예시적인 탁산은 파클리탁셀 (예를 들어, 탁솔(TAXOL)®) 및 도세탁셀 (탁소테레(TAXOTERE)®)을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
튜부리신은 미세관을 탈중합시키고 유사분열 정지를 유도하는 것으로 제시된 바 있는 믹소박테리아 균주로부터 단리된 천연 생성물이다. 예시적인 튜부리신은 튜부리신 A, 튜부리신 B, 및 튜부리신 D를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
빈카 알킬로이드 또한 항튜불린제이다. 예시적인 빈카 알킬로이드는 빈크리스틴, 빈블라스틴, 빈데신 및 비노렐빈을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
일부 실시양태에서, 세포독성제는 MMAD (모노메틸 아우리스타틴 D), 0101 (2-메틸알라닐-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-{[(1S)-2-페닐-1-(1,3-티아졸-2-일)에틸]아미노}프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아미드), 3377 (N,2-디메틸알라닐-N-{(1S,2R)-4-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-카르복실-2-페닐에틸]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-2-메톡시-1-[(1S)-1-메틸프로필]-4-옥소부틸}-N-메틸-L-발린아미드), 0131 (2-메틸-L-프롤리-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(1S)-1-카르복시-2-페닐에틸]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아미드), 0131-OMe (N,2-디메틸알라닐-N-[(3R,4S,5S)-3-메톡시-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-1-메톡시-3-{[(2S)-1-메톡시-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아미드), 0121 (2-메틸-L-프롤리-N-[(3R,4S,5S)-1-{(2S)-2-[(1R,2R)-3-{[(2S)-1-메톡시-1-옥소-3-페닐프로판-2-일]아미노}-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필]피롤리딘-1-일}-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일]-N-메틸-L-발린아미드), 및 (2S,3Z)-5-{[(2R,3R,5S,6S)-6-{(2E,4E)-5-[(3R,4R,5R,7S)-7-(2-히드라지닐-2-옥소에틸)-4-히드록시-1,6-디옥사스피로[2.5]옥트-5-일]-3-메틸펜타-2,4-디엔-1-일}-2,5-디메틸테트라히드로-2H-피란-3-일]아미노}-5-옥소펜트-3-엔-2-일 아세테이트로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 작용제는 면역조정제이다. 면역조정제의 예는 간시클로비르, 에타네르셉트, 타크롤리무스, 시롤리무스, 보클로스포린, 시클로스포린, 라파마이신, 시클로포스파미드, 아자티오프린, 미코페놀게이트 모페틸, 메토트렉스트레이트, 글루코코르티코이드 및 그의 유사체, 시토카인, 줄기 세포 성장 인자, 림프독소, 종양 괴사 인자 (TNF), 조혈 인자, 인터류킨 (예를 들어, 인터류킨-1 (IL-1), IL-2, IL-3, IL-6, IL-10, IL-12, IL-18, 및 IL-21), 콜로니 자극 인자 (예를 들어, 과립구-콜로니 자극 인자 (G-CSF) 및 과립구 대식세포-콜로니 자극 인자 (GM-CSF)), 인터페론 (예를 들어, 인터페론-α, -β 및 -γ), "S 1 인자"로 지정된 줄기 세포 성장 인자, 에리트로포이에틴 및 트롬보포이에틴 또는 그의 조합을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
일부 실시양태에서, 작용제 모이어티는 영상화제 (예를 들어, 형광단 또는 킬레이트화제), 예컨대 플루오레세인, 로다민, 란타나이드 인광체 및 그의 유도체 또는 킬레이트화제에 결합된 방사성동위원소이다. 형광단의 예는 플루오레세인 이소티오시아네이트 (FITC) (예를 들어, 5-FITC), 플루오레세인 아미다이트 (FAM) (예를 들어, 5-FAM), 에오신, 카르복시플루오레세인, 에리트로신, 알렉사 플루오르(Alexa Fluor)® (예를 들어, 알렉사 350, 405, 430, 488, 500, 514, 532, 546, 555, 568, 594, 610, 633, 647, 660, 680, 700, 또는 750), 카르복시테트라메틸로다민 (TAMRA) (예를 들어, 5,-TAMRA), 테트라메틸로다민 (TMR) 및 술포로다민 (SR) (예를 들어, SR101)을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 킬레이트화제의 예는 1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸-N,N',N",N"'-테트라아세트산 (DOTA), 1,4,7-트리아자시클로노난-1,4,7-트리아세트산 (NOTA), 1,4,7-트리아자시클로노난,1-글루타르산-4,7-아세트산 (데페록사민), 디에틸렌트리아민펜타아세트산 (DTPA), 및 1,2-비스(o-아미노페녹시)에탄-N,N,N',N'-테트라아세트산) (BAPTA)을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
형광단의 예는 플루오레세인 이소티오시아네이트 (FITC) (예를 들어, 5-FITC), 플루오레세인 아미다이트 (FAM) (예를 들어, 5-FAM), 에오신, 카르복시플루오레세인, 에리트로신, 알렉사 플루오르® (예를 들어, 알렉사 350, 405, 430, 488, 500, 514, 532, 546, 555, 568, 594, 610, 633, 647, 660, 680, 700, 또는 750), 카르복시테트라메틸로다민 (TAMRA) (예를 들어, 5,-TAMRA), 테트라메틸로다민 (TMR) 및 술포로다민 (SR) (예를 들어, SR101)을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
일부 실시양태에서, 치료 또는 진단 방사성동위원소 또는 다른 표지 (예를 들어, PET 또는 SPECT 표지)는 본원에 기재된 바와 같은 CD123 항체 또는 항원 결합 단편에의 접합을 위한 작용제에 혼입될 수 있다. 방사성동위원소 또는 다른 표지의 예는 3H, 11C, 13N, 14C, 15N, 15O, 35S, 18F, 32P, 33P, 47Sc, 51Cr, 57Co, 58Co, 59Fe, 62Cu, 64Cu, 67Cu, 67Ga, 68Ga, 75Se, 76Br, 77Br, 86Y, 89Zr, 90Y, 94Tc, 95Ru, 97Ru, 99Tc, 103Ru, 105Rh, 105Ru, 107Hg, 109Pd, 111Ag, 111In, 113In, 121Te, 122Te, 123I, 124I, 125I, 125Te, 126I, 131I, 131In, 133I, 142Pr, 143Pr, 153Pb, 153Sm, 161Tb, 165Tm, 166Dy, 166H, 167Tm, 168Tm, 169Yb, 177Lu, 186Re, 188Re, 189Re, 197Pt, 198Au, 199Au, 201Tl, 203Hg, 211At, 212Bi, 212Pb, 213Bi, 223Ra, 224Ac, 또는 225Ac를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
일부 실시양태에서, 작용제는 독소, 호르몬, 효소, 및 성장 인자를 포함하나 이에 제한되지는 않는 치료 단백질이다.
독소 단백질 (또는 폴리펩티드)의 예는 디프테리아 (예를 들어, 디프테리아 A 쇄), 슈도모나스(Pseudomonas) 외독소 및 내독소, 리신 (예를 들어, 리신 A 쇄), 아브린 (예를 들어, 아브린 A 쇄), 모데신 (예를 들어, 모데신 A 쇄), 알파-사르신, 알레우리테스 포르디이(Aleurites fordii) 단백질, 디안틴 단백질, 리보뉴클레아제 (RNase), DNase I, 스타필로코쿠스 장독소-A, 미국자리공 항바이러스 단백질, 겔로닌, 디프테린 독소, 피토라카 아메리카나(Phytolaca americana) 단백질 (PAPI, PAPII, 및 PAP-S), 모모르디카 카란티아(momordica charantia) 억제제, 쿠르신, 크로틴, 사파오나리아 오피시날리스(sapaonaria officinalis) 억제제, 미토겔린, 레스트릭토신, 페노마이신, 에노마이신, 트리코테센, 억제제 시스틴 노트 (ICK) 펩티드 (예를 들어, 세라토톡신), 및 코노톡신 (예를 들어, KIIIA 또는 SmIIIa)을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
일부 실시양태에서, 작용제는 생체적합성 중합체이다. 본원에 기재된 바와 같은 CD123 항체 또는 항원 결합 단편은 혈청 반감기 및 생물활성을 증가시키고/거나 생체내 반감기를 연장하기 위해 생체적합성 중합체에 접합될 수 있다. 생체적합성 중합체의 예는 수용성 중합체, 예컨대 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 또는 그의 유도체, 및 쯔비터이온-함유 생체적합성 중합체 (예를 들어, 포스포릴콜린 함유 중합체)를 포함한다.
일부 실시양태에서, 작용제는 올리고뉴클레오티드, 예컨대 안티센스 올리고뉴클레오티드이다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 본원에 기재된 바와 같은 항체의 접합체를 제공하고, 접합체는 식: 항체-(아실 공여자 글루타민-함유 태그)-(링커)-(세포독성제)를 포함하며, 여기서 아실 공여자 글루타민-함유 태그는 항체의 특이적 부위 (예를 들어, 중쇄 또는 경쇄의 카르복실 말단, 항체 중쇄 내의 잔기 T135 이후, 또는 또 다른 부위)에서 조작되고, 태그는 링커 (예를 들어, 하나 이상의 반응성 아민 (예를 들어, 1급 아민 NH2)을 함유하는 링커)에 접합되고, 링커는 세포독성제 (예를 들어, MMAD 또는 다른 아우리스타틴, 예컨대 0101, 0131, 또는 3377)에 접합된다.
1개 이상의 반응성 아민을 함유하는 링커의 예는 Ac-Lys-Gly (아세틸-리신-글리신), 아미노카프로산, Ac-Lys-β-Ala (아세틸-리신-β-알라닌), 아미노-PEG2 (폴리에틸렌 글리콜)-C2, 아미노-PEG3-C2, 아미노-PEG6-C2 (또는 아미노 PEG6-프로피오닐), Ac-Lys-Val-Cit-PABC (아세틸-리신-발린-시트룰린-p-아미노벤질옥시카르보닐), 아미노-PEG6-C2-Val-Cit-PABC, 아미노카프로일-Val-Cit-PABC, [(3R,5R)-1-{3-[2-(2-아미노에톡시)에톡시]프로파노일}피페리딘-3,5-디일]비스-Val-Cit-PABC, [(3S,5S)-1-{3-[2-(2-아미노에톡시)에톡시]프로파노일}피페리딘-3,5-디일]비스-Val-Cit-PABC, 푸트레신 또는 Ac-Lys-푸트레신을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
일부 실시양태에서, (링커)-(세포독성제)는 하기 구조를 갖는 분자식 C63H82Cl2N13O15P의 N2-아세틸-L-리실-L-발릴-N5-카르바모일-N-[4-({[(2-{[({(8S)-8-(클로로메틸)-6-[(3-{[(1S)-1-(클로로메틸)-8-메틸-5-(포스포노옥시)-1,6-디히드로피롤로[3,2-e]인돌-3(2H)-일]카르보닐}비시클로[1.1.1]펜트-1-일)카르보닐]-1-메틸-3,6,7,8-테트라히드로피롤로[3,2-e]인돌-4일}옥시)카르보닐](메틸)아미노}에틸)(메틸)카르바모일]옥시}메틸)페닐]-L-오르니틴아미드이다:
Figure 112020051620549-pct00022
.
일부 실시양태에서, (링커)-(세포독성제)는 하기 구조를 갖는 C63H82Cl2N13O15P의 트리플루오로아세트산 염 형태이다:
Figure 112020051620549-pct00023
.
상기 트리플루오로아세트산 염 형태에 대한 화학식은 C63H82Cl2N13O15PㆍC2HF3O2이다.
일부 실시양태에서, ADC는 1) 항체-LLQG (서열식별번호: 78)-Ac-Lys-Val-Cit-PABC-CPI-8314이다. 일부 실시양태에서, 아실 공여자 글루타민-함유 태그는 항체 중쇄 내의 아미노산 잔기 E294-N297을 교체하는 LLQG (서열식별번호: 78)를 포함한다. 일부 실시양태에서, ADC는 (힌지 내) 위치 K222에서 아미노산 변형을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변형은 K222R이다. 항체의 예는 h18G3, 18G3, h18G3, 16D6, h16D6, 3D1 및 20D7을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 본원에 기재되거나 본원에 기재된 방법에 의해 제조되며 본원에 기재된 특징을 갖는 항체 또는 ADC를 포함하는 제약 조성물을 비롯한 조성물을 포함한다. 본원에 사용된 조성물은 CD123에 결합하는 하나 이상의 항체 또는 ADC를 포함한다. 이들 조성물은 관련 기술분야에 널리 공지된 완충제를 비롯한 적합한 부형제, 예컨대 제약상 허용되는 부형제를 추가로 포함할 수 있다.
CD123 항체 및 그의 ADC의 사용 방법
본 발명의 항체 및 ADC는 치유적 치료 방법 및 진단적 치료 방법을 포함하나 이에 제한되지는 않는 다양한 적용에 유용하다.
한 측면에서, 본 발명은 대상체에서 CD123 발현과 연관된 상태를 치료하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 대상체에서 CD123 발현과 연관된 상태를 치료하는 방법은 상기 치료를 필요로 하는 대상체에게 본원에 기재된 바와 같은 CD123 항체 또는 CD123 ADC를 포함하는 유효량의 조성물 (예를 들어, 제약 조성물)을 투여하는 것을 포함한다. CD123 발현과 연관된 상태는 비정상적 CD123 발현, 변경 또는 이상 CD123 발현, CD123을 발현하는 악성 세포 및 증식성 장애 (예를 들어, 암) 또는 자가면역 장애를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
따라서, 일부 실시양태에서, 암의 치료를 필요로 하는 대상체에게 본원에 기재된 바와 같은 CD123 항체 또는 CD123 ADC를 포함하는 유효량의 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 암을 치료하는 방법을 제공한다. 본원에 사용된 암은 예를 들어 비제한적으로, 다발성 골수종, 악성 형질 세포 신생물, 호지킨 림프종, 결절성 림프구 우세형 호지킨 림프종, 칼러병 및 골수종증, 형질 세포 백혈병, 형질세포종, B-세포 전림프구성 백혈병, 모발상 세포 백혈병 (HCL), B-세포 비-호지킨 림프종 (NHL), 급성 골수성 백혈병 (AML), 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 급성 림프구성 백혈병 (ALL, B-ALL), 만성 골수성 백혈병 (CML), 여포성 림프종, 버킷 림프종, 변연부 림프종, 외투 세포 림프종, 대세포 림프종, 전구체 B-림프모구성 림프종, 모구성 형질세포양 수지상 세포 신생물 (BPDCN), 골수성 백혈병, 발덴스트롬 마크로글로불린혈증, 미만성 대 B 세포 림프종, 여포성 림프종, 변연부 림프종, 점막-연관 림프 조직 림프종, 소세포 림프구성 림프종, 외투 세포 림프종, 버킷 림프종, 원발성 종격 (흉선) 대 B-세포 림프종, 림프형질세포성 림프종, 발덴스트룀 마크로글로불린혈증, 결절성 변연부 B 세포 림프종, 비장 변연부 림프종, 혈관내 대 B-세포 림프종, 원발성 삼출 림프종, 림프종성 육아종증, T 세포/조직구-풍부 대 B-세포 림프종, 원발성 중추 신경계 림프종, 원발성 피부 미만성 대 B-세포 림프종 (하지 유형), 고령자의 EBV 양성 미만성 대 B-세포 림프종, 염증과 연관된 미만성 대 B-세포 림프종, 혈관내 대 B-세포 림프종, ALK-양성 대 B-세포 림프종, 형질모구성 림프종, HHV8-연관된 다중심적 캐슬만병에서 발생하는 대 B-세포 림프종, 미만성 대 B-세포 림프종과 버킷 림프종 사이의 중간 특색을 갖는 미분류 B-세포 림프종, 미만성 대 B-세포 림프종과 전형적 호지킨 림프종 사이의 중간 특색을 갖는 미분류 B-세포 림프종, 및 다른 B-세포 관련 림프종일 수 있다. 일부 실시양태에서, 암은 AML, B-ALL, BPDCN, NHL 또는 HCL이다.
일부 실시양태에서, 종양 성장 또는 진행의 억제를 필요로 하며 CD123을 발현하는 악성 세포를 갖는 대상체에게 본원에 기재된 바와 같은 CD123 항체 또는 CD123 ADC를 포함하는 유효량의 조성물을 투여하는 것을 포함하는, CD123을 발현하는 악성 세포를 갖는 대상체에서 종양 성장 또는 진행을 억제하는 방법을 제공한다. 다른 실시양태에서, CD123을 발현하는 전이 세포의 억제를 필요로 하는 대상체에게 본원에 기재된 바와 같은 CD123 항체 또는 CD123 ADC를 포함하는 유효량의 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 CD123을 발현하는 전이 세포를 억제하는 방법을 제공한다. 다른 실시양태에서, 악성 세포에서의 종양 퇴행의 유도를 필요로 하는 대상체에게 본원에 기재된 바와 같은 CD123 항체 또는 CD123 ADC를 포함하는 유효량의 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 악성 세포에서 종양 퇴행을 유도하는 방법을 제공한다.
일부 실시양태에서, 자가면역 장애의 치료를 필요로 하는 대상체에게 본원에 기재된 바와 같은 CD123 항체 또는 CD123 ADC를 포함하는 유효량의 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 자가면역 장애를 치료하는 방법을 제공한다.
본원에 사용된 자가면역 장애는 전신 홍반성 루푸스, 류마티스 관절염, 당뇨병 (유형 I), 다발성 경화증, 애디슨병, 복강 질환, 피부근염, 그레이브스의 질환, 하시모토의 갑상선염, 하시모토의 뇌병증, 중증 근무력증, 악성 빈혈, 반응성 관절염, 쇼그렌 증후군, 급성 파종성 뇌척수염, 무감마글로불린혈증, 근위축성 측삭 경화증, 강직성 척추염, 항인지질 증후군, 항신테타제 증후군, 아토피성 알레르기, 아토피성 피부염, 자가면역 장병증, 자가면역 용혈성 빈혈, 자가면역 간염, 자가면역 내이 질환, 자가면역 림프증식성 증후군, 자가면역 말초 신경병증, 자가면역 췌장염, 자가면역 다발내분비 증후군, 자가면역 프로게스테론 피부염, 자가면역 혈소판감소성 자반증, 자가면역 두드러기, 자가면역 포도막염, 베체트병, 캐슬만병, 저온 응집소 질환, 크론병, 피부근염, 호산구성 근막염, 위장 유천포창, 굿패스쳐 증후군, 길랑-바레(Guillain-Barre) 증후군, 화농성 한선염, 특발성 혈소판감소성 자반증, 기면증, 심상성 천포창, 악성 빈혈, 다발근염, 원발성 담도 간경변증, 재발성 다발연골염, 류마티스성 열, 측두 동맥염, 횡단성 척수염, 궤양성 결장염, 미분화 결합 조직 질환, 혈관염 및 베게너 육아종증을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 CD123 발현과 연관된 상태 (예를 들어, 암 또는 자가면역 장애)의 치료가 필요한 대상체에서 상기 상태를 치료하기 위한 본원에 기재된 바와 같은 CD123 항체 또는 CD123 ADC를 포함하는 유효량의 조성물 (예를 들어, 제약 조성물)을 제공한다. 일부 실시양태에서, CD123을 발현하는 악성 세포를 갖는 대상체에서 종양 성장 또는 진행을 억제하기 위한 본원에 기재된 바와 같은 CD123 항체 또는 CD123 ADC를 포함하는 유효량의 조성물 (예를 들어, 제약 조성물)을 제공한다. 일부 실시양태에서, CD123을 발현하는 악성 세포의 전이의 억제를 필요로 하는 대상체에서 상기 억제를 위한 본원에 기재된 바와 같은 CD123 항체 또는 CD123 ADC를 포함하는 유효량의 조성물 (예를 들어, 제약 조성물)을 제공한다. 일부 실시양태에서, CD123을 발현하는 악성 세포를 갖는 대상체에서 종양 퇴행을 유도하기 위한 본원에 기재된 바와 같은 CD123 항체 또는 CD123 ADC를 포함하는 유효량의 조성물 (예를 들어, 제약 조성물)을 제공한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 CD123 발현과 연관된 상태 (예를 들어, 암 또는 자가면역 장애)의 치료를 필요로 하는 대상체에서 상기 상태를 치료하는데 사용하기 위한 본원에 기재된 바와 같은 CD123 항체 또는 CD123 ADC를 제공한다. 일부 실시양태에서, CD123을 발현하는 악성 세포를 갖는 대상체에서 종양 성장 또는 진행을 억제하기 위한 본원에 기재된 CD123 항체 또는 CD123 ADC를 제공한다. 일부 실시양태에서, CD123을 발현하는 악성 세포 전이의 억제를 필요로 하는 대상체에서 상기 전이를 억제하기 위한 본원에 기재된 바와 같은 CD123 항체 또는 CD123 ADC을 제공한다. 일부 실시양태에서, CD123을 발현하는 악성 세포를 갖는 대상체에서 종양 퇴행을 유도하기 위한 본원에 기재된 바와 같은 CD123 항체 또는 CD123 ADC를 제공한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 CD123 발현과 연관된 상태 (예를 들어, 암 또는 자가면역 장애)를 치료하기 위한 의약의 제조에 있어서의 본원에 기재된 바와 같은 CD123 항체 또는 CD123 ADC의 용도를 제공한다. 일부 실시양태에서, 종양 성장 또는 진행을 억제하기 위한 의약의 제조에 있어서의 본원에 기재된 바와 같은 CD123 항체 또는 CD123 ADC의 용도를 제공한다. 일부 실시양태에서, CD123을 발현하는 악성 세포의 전이를 억제하기 위한 의약의 제조에 있어서의 본원에 기재된 바와 같은 CD123 항체 또는 CD123 ADC의 용도를 제공한다. 일부 실시양태에서, 종양 퇴행을 유도하기 위한 의약의 제조에 있어서의 본원에 기재된 바와 같은 CD123 항체 또는 CD123 ADC의 용도를 제공한다.
또 다른 측면에서, CD123 발현과 연관된 상태를 검출, 진단 및/또는 모니터링하는 방법을 제공한다. 예를 들어, 본원에 기재된 CD123 항체는 검출가능한 모이어티, 예컨대 영상화제 및 효소-기질 표지로 표지화시킬 수 있다. 본원에 기재된 항체는 또한 생체내 진단 검정, 예컨대 생체내 영상화 (예를 들어, PET 또는 SPECT), 또는 염색 시약에 사용될 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 방법은 대상체를 추가의 형태의 요법으로 치료하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 추가 형태의 요법은 화학요법, 방사선, 수술, 호르몬 요법 및/또는 추가의 면역요법을 포함하나 이에 제한되지는 않는 추가의 항암 요법이다.
일부 실시양태에서, 추가 형태의 요법은 본원에 기재된 CD123 항체 또는 CD123 ADC 이외에 하나 이상의 치료제를 투여하는 것을 포함한다. 1종 이상의 치료제는 예를 들어 제2 항체 (예를 들어, 항-VEGF (혈관 내피 성장 인자) 항체 (예를 들어, 아바스틴(AVASTIN)®), 항-HER2 항체 (예를 들어, 헤르셉틴(HERCEPTIN)®), 항-CD25 항체, 항-CD33 항체, 항-CD20 항체 (예를 들어, 리툭산(RITUXAN)®), 항-뮤신-유사 당단백질 항체, 항-TNF 항체, 항-PD-1 또는 PD-L1 항체, 및/또는 표피 성장 인자 수용체 (EGFR) 항체 (예를 들어, 에르비툭스(ERBITUX)®), 혈관신생 억제제, 세포독성제 (예를 들어, 안트라시클린 (예를 들어, 다우노루비신, 독소루비신, 에피루비신,이다루비신, 발루비신, 및 미톡산트론), 탁산 (예를 들어, 파클리탁셀 및 도세탁셀), 돌라스타틴, 두오카르마이신, 에네디인, 겔다나마이신, 메이탄신, 퓨로마이신, 빈카 알칼로이드 (예를 들어, 빈크리스틴), 토포이소머라제 억제제 (예를 들어, 에토포시드), 튜부리신, 피리미딘 유사체 (예를 들어, 플루오로우라실), 백금-함유 작용제 (예를 들어, 시스플라틴, 카르보플라틴, 및 옥살리플라틴), 알킬화제 (예를 들어, 멜팔란, 시클로포스파미드, 또는 카르무스틴) 및 헤미아스텔린), 면역조정제 (예를 들어, 프레드니손), 항염증제 (예를 들어, 덱사메타손), 아로마타제 억제제 (예를 들어, 아나스트로졸, 엑세메스탄, 레트로졸, 보로졸, 포르메스탄, 또는 테스토락톤), 프로테아솜 억제제 (예를 들어, 보르테조밉 예컨대 벨케이드(VELCADE)® ([(1R)-3-메틸-1-[[(2S)-1-옥소-3-페닐-2-[(피라지닐카르보닐)아미노]프로필]아미노]부틸]보론산), 및 다른 작용제 예컨대 타목시펜일 수 있으나 이에 제한되지는 않는다.
예를 들어, 일부 실시양태에서, AML의 치료를 필요로 하는 대상체에게 본원에 기재된 CD123 항체 또는 CD123 ADC 및 1종의 다른 치료제, 예컨대 화학요법제 또는 탈리도미드 또는 그의 유도체 (예를 들어, 레날리도미드)를 포함하는 유효량의 조성물을 투여하는 것을 포함하는, AML을 치료하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 1종의 다른 치료제는 보르테조밉 (예를 들어, 벨케이드®), 멜팔란, 프레드니손, 독소루비신, 레날리도미드, 탈리도미드, 프레드니손, 카르무스틴, 에토포시드, 시스플라틴, 시클로포스파미드 및 빈크리스틴으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 다른 치료제는 보르테조밉 (예를 들어, 벨케이드®), 멜팔란 또는 프레드니손이다. 일부 실시양태에서, 대상체는 이전의 AML 요법에 대해 재발성 또는 불응성이다.
CD123 항체 또는 CD123 ADC는 임의의 적합한 경로를 통해 개체에게 투여될 수 있다. 본원에 기재된 예는 이용가능한 기술을 제한하려는 것이 아니라 예시하기 위한 것임이 관련 기술분야의 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 이해될 것이다. 따라서, 일부 실시양태에서, CD123 항체 또는 CD123 ADC는 공지된 방법에 따라, 예컨대 정맥내 투여, 예를 들어 볼루스로서 또는 일정 기간에 걸친 연속 주입에 의해, 근육내, 복강내, 뇌척수내, 두개내, 경피, 피하, 관절내, 설하, 활막내, 취입, 척수강내, 경구, 흡입 또는 국소 경로를 통해 개체에게 투여된다. 투여는 전신, 예를 들어 정맥내 투여이거나 또는 국부 투여일 수 있다. 제트 네뷸라이저 및 초음파 네뷸라이저를 포함한 액체 제제를 위한 상업적으로 입수가능한 네뷸라이저가 투여에 유용하다. 액체 제제는 직접 분무될 수 있고, 동결건조 분말은 재구성 후에 분무될 수 있다. 대안적으로, CD123 항체 또는 CD123 ADC는 플루오로카본 제제 및 계량 용량 흡입기를 사용하여 에어로졸화될 수 있거나 또는 동결건조 및 분쇄된 분말로서 흡입될 수 있다.
한 실시양태에서, CD123 항체 또는 CD123 ADC는 부위-특이적 또는 표적화된 국부 전달 기술을 통해 투여된다. 부위-특이적 또는 표적화된 국부 전달 기술의 예는 Trop 항체 또는 CD123 ADC의 다양한 이식가능한 데포(depot) 공급원 또는 국부 전달 카테터, 예컨대 주입 카테터, 유치 카테터 또는 바늘 카테터, 합성 이식편, 외피 랩, 션트 및 스텐트 또는 다른 이식형 장치, 부위 특이적 담체, 직접 주사 또는 직접 적용을 포함한다. 예를 들어, PCT 공개 번호 WO 00/53211 및 미국 특허 번호 5,981,568을 참조한다.
CD123 항체 또는 CD123 ADC의 다양한 제제가 투여에 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, CD123 항체 또는 CD123 ADC는 순수하게 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, CD123 항체 (또는 CD123 ADC) 및 제약상 허용되는 부형제가 다양한 제제로 존재할 수 있다. 제약상 허용되는 부형제는 관련 기술분야에 공지되어 있고, 약리학상 유효한 물질의 투여를 용이하게 하는 상대적으로 불활성인 물질이다. 예를 들어, 부형제는 형태 또는 점조도를 제공할 수 있거나 또는 희석제로서 작용할 수 있다. 적합한 부형제는 안정화제, 습윤제 및 유화제, 오스몰농도 변경을 위한 염, 캡슐화제, 완충제, 및 피부 침투 인핸서를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 부형제 뿐만 아니라 비경구 및 경구 약물 전달을 위한 제제가 문헌 [Remington, The Science and Practice of Pharmacy 21st Ed. Mack Publishing, 2005]에 제시되어 있다.
일부 실시양태에서, 이들 작용제는 주사에 의한 (예를 들어, 복강내로, 정맥내로, 피하로, 근육내로 등의) 투여를 위해 제제화된다. 따라서, 이들 작용제는 제약상 허용되는 비히클, 예컨대 염수, 링거액, 덱스트로스 용액 등과 조합될 수 있다. 특정한 투여 요법, 즉 용량, 시기 및 반복은 특정한 개체 및 개체의 의료 병력에 따라 달라질 것이다.
본원에 기재된 CD123 항체 또는 CD123 ADC는 (예를 들어, 복강내로, 정맥내로, 피하로, 근육내로 등의) 주사에 의한 것을 포함한 임의의 적합한 방법을 사용하여 투여될 수 있다. CD123 항체 또는 CD123 ADC는 또한 본원에 기재된 바와 같이 흡입을 통해 투여될 수 있다. 일반적으로, CD123 항체 및 CD123 ADC의 투여를 위해, 초기 후보 투여량은 약 2 mg/kg일 수 있다. 본 발명의 목적상, 전형적인 1일 투여량은 상기 언급한 인자에 따라, 약 3 μg/kg 내지 30 μg/kg 내지 300 μg/kg 내지 3 mg/kg, 내지 30 mg/kg, 내지 100 mg/kg 또는 초과 중 임의의 범위일 수 있다. 예를 들어, 약 1 mg/kg, 약 2.5 mg/kg, 약 5 mg/kg, 약 10 mg/kg 및 약 25 mg/kg의 투여량이 사용될 수 있다. 수일 이상에 걸친 반복 투여의 경우에, 상태에 따라 증상의 목적하는 억제가 나타날 때까지 또는 예를 들어 종양 성장/진행 또는 암 세포의 전이를 억제 또는 지연시키기에 충분한 치료 수준이 달성될 때까지 치료가 지속된다. 한 예시적인 투여 요법은 CD123 항체 또는 CD123 ADC를 약 2 mg/kg의 초기 용량으로 투여한 후에, 매주 약 1 mg/kg의 유지 용량을 투여하거나, 또는 격주로 약 1 mg/kg의 유지 용량을 투여하는 것을 포함한다. 또 다른 예시적인 투여 요법은 매주 또는 매 3주마다 약 0.21, 약 0.5, 또는 약 0.8 mg/kg의 초기 용량을 투여하는 것을 포함한다. 다른 예시적인 투여 요법은 증가하는 용량 (예를 들어, 1 mg/kg의 초기 용량 및 매주 또는 보다 긴 기간마다 하나 이상의 보다 높은 용량으로의 점진적 증가)을 투여하는 것을 포함한다. 진료의가 달성하기를 원하는 약동학적 붕괴 패턴에 따라 다른 투여 요법이 또한 유용할 수 있다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 일주일에 1 내지 4회 투여하는 것이 고려된다. 다른 실시양태에서, 1개월에 1회 투여 또는 1개월마다 또는 3개월마다 1회 투여하는 것이 고려된다. 이러한 요법의 진행은 통상의 기술 및 검정에 의해 용이하게 모니터링된다. 투여 요법 (사용된 CD123 항체 또는 CD123 ADC 포함)은 시간의 경과에 따라 달라질 수 있다.
본 발명의 목적상, CD123 항체 또는 CD123 ADC의 적절한 투여량은 사용된 CD123 항체 또는 CD123 ADC (또는 그의 조성물), 치료될 증상의 유형 및 중증도, 작용제가 치료 목적을 위해 투여되는지의 여부, 선행 요법, 환자의 임상 병력 및 작용제에 대한 반응, 투여된 작용제에 대한 환자의 클리어런스율 및 담당 의사의 판단에 따라 달라질 것이다. 전형적으로 임상의는 목적하는 결과를 달성하는 투여량에 도달할 때까지 CD123 항체 또는 CD123 ADC를 투여할 것이다. 용량 및/또는 빈도는 치료 과정에 따라 달라질 수 있다. 실험적 고려사항, 예컨대 반감기는 일반적으로 투여량의 결정에 기여할 것이다. 예를 들어, 항체의 반감기를 연장시키고 항체가 숙주의 면역계에 의해 공격받는 것을 방지하기 위해 인간 면역계에 상용성인 항체, 예컨대 인간화 항체 또는 완전 인간 항체가 사용될 수 있다. 투여 빈도는 요법의 과정에 따라 결정 및 조정될 수 있고, 반드시는 아니지만 일반적으로, 증상의 치료 및/또는 억제 및/또는 호전 및/또는 지연, 예를 들어 종양 성장 억제 또는 지연 등에 기초한다. 대안적으로, CD123 항체 또는 CD123 ADC의 지속 연속 방출 제제가 적절할 수 있다. 지속 방출을 달성하기 위한 다양한 제제 및 장치는 관련 기술분야에 공지되어 있다.
한 실시양태에서, CD123 항체 또는 CD123 ADC에 대한 투여량은 CD123 항체 또는 그의 CD123 ADC의 하나 이상의 투여(들)를 받은 개체에서 실험적으로 결정될 수 있다. 개체에게 CD123 항체 또는 CD123 길항제의 증분의 투여량이 제공된다. 효능을 평가하기 위해, 질환의 지표를 추적할 수 있다.
본 발명의 방법에 따른 CD123 항체 또는 CD123 ADC의 투여는, 예를 들어 수용자의 생리학적 조건, 투여의 목적이 치료 또는 예방인지의 여부, 및 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 기타 인자들에 따라, 연속적 또는 간헐적일 수 있다. CD123 항체 또는 CD123 ADC의 투여는 본질적으로, 미리 선택된 기간에 걸쳐 연속적일 수 있거나 또는 일련의 이격된 용량일 수 있다.
일부 실시양태에서, 1종 초과의 CD123 항체 또는 CD123 ADC가 존재할 수 있다. 적어도 1, 적어도 2, 적어도 3, 적어도 4, 적어도 5종의 상이한 또는 그 초과의 CD123 항체 또는 CD123 ADC가 존재할 수 있다. 일반적으로, 이들 CD123 항체 또는 CD123 ADC는 서로 불리한 영향을 미치지 않는 보체 활성을 가질 수 있다. 예를 들어, 하기 CD123 항체 중 하나 이상이 사용될 수 있다: CD123 상의 한 에피토프에 대해 지시된 제1 CD123 항체 및 CD123 상의 상이한 에피토프에 대해 지시된 제2 CD123 항체.
본 발명에 따라 사용되는 CD123 항체 또는 CD123 ADC의 치료 제제는 목적하는 순도를 갖는 항체를 임의적인 제약상 허용되는 담체, 부형제 또는 안정화제 (문헌 [Remington, The Science and Practice of Pharmacy 21st Ed. Mack Publishing, 2005])와 혼합하여, 동결건조 제제 또는 수용액의 형태로 저장하기 위해 제조된다. 허용되는 담체, 부형제 또는 안정화제는 사용된 투여량 및 농도에서 수용자에게 비독성이고, 이는 완충제, 예컨대 포스페이트, 시트레이트, 및 다른 유기 산; 염, 예컨대 염화나트륨; 항산화제, 예컨대 아스코르브산 및 메티오닌; 보존제 (예컨대 옥타데실디메틸벤질 암모늄 클로라이드; 헥사메토늄 클로라이드; 벤즈알코늄 클로라이드, 벤제토늄 클로라이드; 페놀, 부틸 또는 벤질 알콜; 알킬 파라벤, 예컨대 메틸 또는 프로필 파라벤; 카테콜; 레조르시놀; 시클로헥산올; 3-펜탄올; 및 m-크레졸); 저분자량 (약 10개 미만의 잔기의) 폴리펩티드; 단백질, 예컨대 혈청 알부민, 젤라틴, 또는 이뮤노글로불린; 친수성 중합체 예컨대 폴리비닐피롤리돈; 아미노산, 예컨대 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌, 또는 리신; 모노사카라이드, 디사카라이드, 및 다른 탄수화물, 예컨대 글루코스, 만노스 또는 덱스트린; 킬레이트화제, 예컨대 EDTA; 당, 예컨대 수크로스, 만니톨, 트레할로스 또는 소르비톨; 염-형성 반대-이온, 예컨대 소듐; 금속 착물 (예를 들어, Zn-단백질 복합체); 및/또는 비-이온성 계면활성제, 예컨대 트윈(TWEEN)TM, 플루로닉스(PLURONICS)TM 또는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)을 포함할 수 있다.
CD123 항체 또는 CD123 ADC를 함유하는 리포솜은 관련 기술분야에 공지된 방법, 예컨대 문헌 [Epstein, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82:3688, 1985; Hwang, et al., Proc. Natl Acad. Sci. USA 77:4030, 1980]; 및 미국 특허 번호 4,485,045 및 4,544,545에 기재된 방법에 의해 제조된다. 순환 시간이 증진된 리포솜이 미국 특허 번호 5,013,556에 개시되어 있다. 특히 유용한 리포솜은 포스파티딜콜린, 콜레스테롤 및 PEG-유도체화된 포스파티딜에탄올아민 (PEG-PE)을 포함하는 지질 조성물을 사용하여 역상 증발 방법에 의해 생성될 수 있다. 리포솜은 목적하는 직경을 갖는 리포솜을 수득하기 위해 규정된 세공 크기의 필터를 통해 압출된다.
활성 성분은 또한, 콜로이드성 약물 전달 시스템 (예를 들어, 리포솜, 알부민 마이크로구체, 마이크로에멀젼, 나노-입자 및 나노캡슐) 또는 마크로에멀젼 내의, 예를 들어 코아세르베이션 기술 또는 계면 중합에 의해 제조된 마이크로캡슐, 예를 들어 히드록시메틸셀룰로스 또는 젤라틴-마이크로캡슐 및 폴리-(메틸메타크릴레이트) 마이크로캡슐 각각 내에 포획될 수 있다. 이러한 기술은 문헌 [Remington, The Science 및 Practice of Pharmacy 21st Ed. Mack Publishing, 2005]에 개시되어 있다.
지속-방출 제제가 제조될 수 있다. 지속-방출 제제의 적합한 예는 항체를 함유하는 고체 소수성 중합체의 반투과성 매트릭스를 포함하며, 이 매트릭스는 성형품, 예를 들어 필름 또는 마이크로캡슐 형태이다. 지속-방출 매트릭스의 예는 폴리에스테르, 히드로겔 (예를 들어, 폴리(2-히드록시에틸-메타크릴레이트) 또는 폴리(비닐알콜)), 폴리락티드 (미국 특허 번호 3,773,919), L-글루탐산 및 7 에틸-L-글루타메이트의 공중합체, 비-분해성 에틸렌-비닐 아세테이트, 분해성 락트산-글리콜산 공중합체, 예컨대 루프론 데포(LUPRON DEPOT)TM (락트산-글리콜산 공중합체 및 류프롤리드 아세테이트로 이루어진 주사가능한 마이크로구체), 수크로스 아세테이트 이소부티레이트, 및 폴리-D-(-)-3-히드록시부티르산을 포함한다.
생체내 투여에 사용될 제제는 멸균되어야 한다. 이는, 예를 들어 멸균 여과 막을 통한 여과에 의해 용이하게 달성된다. 치료적 CD123 항체 또는 CD123 ADC 조성물은 일반적으로 멸균 접근 포트를 갖는 용기, 예를 들어 피하 주사 바늘에 의해 뚫릴 수 있는 마개를 갖는 정맥내 용액 백 또는 바이알 내로 배치된다.
본 발명에 따른 조성물은 경구, 비경구 또는 직장 투여, 또는 흡입 또는 취입에 의한 투여를 위한 단위 투여 형태, 예컨대 정제, 환제, 캡슐, 분말, 과립, 용액 또는 현탁액, 또는 좌제일 수 있다.
고체 조성물, 예컨대 정제를 제조하기 위해, 주요 활성 성분을 제약 담체, 예를 들어 통상적인 정제화 성분, 예컨대 옥수수 전분, 락토스, 수크로스, 소르비톨, 활석, 스테아르산, 스테아르산마그네슘, 인산이칼슘 또는 검, 및 다른 제약 희석제, 예를 들어 물과 혼합하여, 본 발명의 화합물 또는 그의 비-독성 제약상 허용되는 염의 균질 혼합물을 함유하는 고체 예비제제 조성물을 형성한다. 이들 예비제제 조성물을 균질이라고 지칭하는 경우, 이는 활성 성분이 조성물 전체에서 균등하게 분산되어 조성물이 동등하게 효과적인 단위 투여 형태, 예컨대 정제, 환제 및 캡슐로 용이하게 세분될 수 있음을 의미한다. 이러한 고체 예비제제 조성물은 이어서, 본 발명의 활성 성분 0.1 내지 약 500 mg을 함유하는 상기 기재된 유형의 단위 투여 형태로 세분된다. 신규 조성물의 정제 또는 환제는 코팅되거나, 또는 달리 지속 작용 이점을 제공하는 투여 형태를 제공하도록 배합될 수 있다. 예를 들어, 정제 또는 환제는 내부 투여 성분 및 외부 투여 성분을 포함할 수 있고, 후자는 전자의 외피 형태이다. 2개의 성분은 위에서의 붕해에 저항하는 역할을 하고 내부 성분이 무손상 상태로 십이지장을 통과하게 하거나 방출이 지연되게 하는 장용 층에 의해 분리될 수 있다. 다양한 물질이 이러한 장용 층 또는 코팅에 사용될 수 있고, 이러한 물질은 수많은 중합체 산 및 중합체 산과 쉘락, 세틸 알콜 및 셀룰로스 아세테이트와 같은 이러한 물질의 혼합물을 포함한다.
적합한 표면-활성제는 특히, 비-이온성 작용제, 예컨대 폴리옥시에틸렌소르비탄 (예를 들어, 트윈TM 20, 40, 60, 80 또는 85) 및 다른 소르비탄 (예를 들어, 스판(Span)TM 20, 40, 60, 80 또는 85)을 포함한다. 표면-활성제를 갖는 조성물은 편리하게는 0.05 내지 5%의 표면-활성제를 포함할 것이고, 이는 0.1 내지 2.5%일 수 있다. 필요한 경우에 다른 성분, 예를 들어 만니톨 또는 다른 제약상 허용되는 비히클이 첨가될 수 있다는 것이 인지될 것이다.
적합한 에멀젼은 상업적으로 입수가능한 지방 에멀젼, 예컨대 인트라리피드(Intralipid)TM, 리포신(Liposyn)TM, 인포누트롤(Infonutrol)TM, 리포푼딘(Lipofundin)TM 및 리피피산(Lipiphysan)TM을 사용하여 제조될 수 있다. 활성 성분은 사전-혼합된 에멀젼 조성물 중에 용해될 수 있거나, 또는 대안적으로 오일 (예를 들어, 대두 오일, 홍화 오일, 목화씨 오일, 참깨 오일, 옥수수 오일 또는 아몬드 오일), 및 인지질 (예를 들어, 난 인지질, 대두 인지질 또는 대두 레시틴) 및 물과 혼합 시 형성되는 에멀젼 중에 용해될 수 있다. 에멀젼의 장성을 조정하기 위해 다른 성분, 예를 들어 글리세롤 또는 글루코스가 첨가될 수 있음이 인지될 것이다. 적합한 에멀젼은 전형적으로 최대 20%의 오일, 예를 들어 5 내지 20%의 오일을 함유할 것이다. 지방 에멀젼은 0.1 내지 1.0 μm, 특히 0.1 내지 0.5 μm의 지방 액적을 포함할 수 있고, 5.5 내지 8.0 범위의 pH를 갖는다.
에멀젼 조성물은 CD123 항체 또는 CD123 ADC를 인트라리피드TM 또는 그의 성분 (대두 오일, 난 인지질, 글리세롤 및 물)과 혼합하여 제조될 수 있다.
흡입 또는 취입을 위한 조성물은 제약상 허용되는 수성 또는 유기 용매 또는 그의 혼합물 중 용액 및 현탁액, 및 분말을 포함한다. 액체 또는 고체 조성물은 상기 제시된 바와 같은 적합한 제약상 허용되는 부형제를 함유할 수 있다. 일부 실시양태에서, 조성물은 국부 또는 전신 효과를 위해 구강 또는 비강 호흡 경로로 투여된다. 바람직하게 멸균된 제약상 허용되는 용매 중의 조성물은 기체의 사용에 의해 분무될 수 있다. 분무된 용액은 분무 장치로부터 직접 호흡될 수 있거나, 또는 분무 장치는 페이스 마스크, 텐트 또는 간헐적 양압 호흡 기계에 부착될 수 있다. 용액, 현탁액 또는 분말 조성물은 제제를 적절한 방식으로 전달하는 장치로부터, 바람직하게는 경구로 또는 비강으로 투여될 수 있다.
조성물
본 발명의 방법에 사용된 조성물은 유효량의 본원에 기재된 바와 같은 CD123 항체 또는 CD123 ADC를 포함한다. 이러한 조성물의 예, 뿐만 아니라 제제화하는 방법이 또한 이전 섹션 및 하기에 기재된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 1종 이상의 CD123 항체 또는 CD123 ADC를 포함한다. 예를 들어 CD123 항체는 인간 CD123을 인식한다. 일부 실시양태에서, CD123 항체는 인간 항체, 인간화 항체 또는 키메라 항체이다. 일부 실시양태에서, CD123 항체는 목적하는 면역 반응, 예컨대 항체-매개 용해 또는 ADCC를 촉발할 수 있는 불변 영역을 포함한다. 다른 실시양태에서, CD123 항체는 원치않은 또는 바람직하지 않은 면역 반응, 예컨대 항체-매개 용해 또는 ADCC를 촉발하지 않는 불변 영역을 포함한다. 다른 실시양태에서, CD123 항체는 항체의 1개 이상의 CDR(들) (예컨대, 1, 2, 3, 4, 5개, 또는 일부 실시양태에서는 모든 6개의 CDR)을 포함한다.
조성물은 1종 초과의 CD123 항체 또는 CD123 ADC (예를 들어, CD123의 상이한 에피토프를 인식하는 CD123 항체의 혼합물)를 포함할 수 있는 것으로 이해된다. 다른 예시적인 조성물은 동일한 에피토프(들)를 인식하는 1종 초과의 CD123 항체 또는 CD123 ADC, 또는 CD123 (예를 들어, 인간 CD123)의 상이한 에피토프에 결합하는 상이한 종의 CD123 항체 또는 CD123 ADC를 포함한다.
일부 실시양태에서, CD123 항체는 하나 이상의 추가의 치료제의 투여와 조합하여 투여될 수 있다. 이들은 화학요법제, 백신, CAR-T 세포-기반 요법, 방사선 요법, 시토카인 요법, 백신, CD123 이중특이적 항체, 다른 면역억제 경로의 억제제, 혈관신생 억제제, T 세포 활성화제, 대사 경로의 억제제, mTOR 억제제, 아데노신 경로의 억제제, 티로신 키나제 억제제 (인리타(inlyta), ALK 억제제 및 수니티닙을 포함하나 이에 제한되지는 않음), BRAF 억제제, 후성적 변형제, IDO1 억제제, Treg 세포 및/또는 골수 유래 억제 세포의 억제제 또는 고갈제, JAK 억제제, STAT 억제제, 시클린-의존성 키나제 억제제, 생물요법제 (VEGF, VEGFR, EGFR, Her2/neu, 다른 성장 인자 수용체, CD20, CD40, CD-40L, CTLA-4, OX-40, 4-1BB, CD123, PD-L1, TIGIT, 및 ICOS에 대한 항체를 포함하나 이에 제한되지 않는다), 면역원성 작용제 (예를 들어, 약독화된 암성 세포, 종양 항원, 항원 제시 세포, 예컨대 종양 유래된 항원 또는 핵산으로 펄스된 수지상 세포, 면역 자극성 시토카인 (예를 들어, IL-2, IFNα2, GM-CSF), 및 면역 자극성 시토카인 (예컨대 GM-CSF이나 이에 제한되지는 않음)을 코딩하는 유전자로 형질감염된 세포)의 투여를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 화학요법제의 예는 알킬화제, 예컨대 티오테파 및 시클로포스파미드; 알킬 술포네이트, 예컨대 부술판, 임프로술판 및 피포술판; 아지리딘, 예컨대 벤조도파, 카르보쿠온, 메투레도파, 및 우레도파; 에틸렌이민 및 메틸라멜라민, 예를 들어 알트레타민, 트리에틸렌멜라민, 트리에틸렌포스포르아미드, 트리에틸렌티오포스포르아미드 및 트리메틸올로멜라민; 아세토게닌 (특히, 불라타신 및 불라타시논); 캄프토테신 (예를 들어, 합성 유사체 토포테칸); 브리오스타틴; 칼리스타틴; CC-1065 (예를 들어, 그의 아도젤레신, 카르젤레신 및 비젤레신 합성 유사체); 크립토피신 (특히, 크립토피신 1 및 크립토피신 8); 돌라스타틴; 두오카르마이신 (예를 들어, 합성 유사체, KW-2189 및 CBI-TMI); 엘레우테로빈; 판크라티스타틴; 사르코딕티인; 스폰지스타틴; 질소 머스타드, 예컨대 클로람부실, 클로르나파진, 콜로포스파미드, 에스트라무스틴, 이포스파미드, 메클로레타민, 메클로레타민 옥시드 히드로클로라이드, 멜팔란, 노벰비킨, 페네스테린, 프레드니무스틴, 트로포스파미드, 우라실 머스타드; 니트로스우레아 예컨대 카르무스틴, 클로로조토신, 포테무스틴, 로무스틴, 니무스틴, 라니무스틴; 항생제, 예컨대 에네디인 항생제 (예를 들어, 칼리케아미신, 특히 칼리케아미신 감마1l 및 칼리케아미신 phil1 (예를 들어, 문헌 [Agnew, Chem. Intl. Ed. Engl., 33:183-186 (1994)]참조); 디네미신 (예를 들어, 디네미신 A); 비스포스포네이트, 예컨대 클로드로네이트; 에스페라미신; 뿐만 아니라 네오카르지노스타틴 발색단 및 관련 색소단백질 에네디인 항생제 발색단), 아클라시노마이신, 악티노마이신, 아우트라마이신, 아자세린, 블레오마이신, 칵티노마이신, 카라비신, 카미노마이신, 카르지노필린, 크로모마이신, 닥티노마이신, 다우노루비신, 데토루비신, 6-디아조-5-옥소-L-노르류신, 독소루비신 (예를 들어, 모르폴리노-독소루비신, 시아노모르폴리노-독소루비신, 2-피롤리노-독소루비신, 및 데옥시독소루비신), PEG화 리포솜 독소루비신, 에피루비신, 에소루비신, 이다루비신, 마르셀로마이신, 미토마이신 예컨대 미토마이신 C, 미코페놀산, 노갈라마이신, 올리보마이신, 페플로마이신, 포트피로마이신, 퓨로마이신, 쿠엘라마이신, 로도루비신, 스트렙토니그린, 스트렙토조신, 투베르시딘, 우베니멕스, 지노스타틴, 조루비신; 항대사물, 예컨대 메토트렉세이트 및 5-플루오로우라실 (5-FU); 폴산 유사체, 예컨대 데노프테린, 메토트렉세이트, 프테로프테린, 트리메트렉세이트; 퓨린 유사체, 예컨대 플루다라빈, 6-메르캅토퓨린, 티아미프린, 티오구아닌; 피리미딘 유사체, 예컨대 안시타빈, 아자시티딘, 6-아자우리딘, 카르모푸르, 시타라빈, 디데옥시우리딘, 독시플루리딘, 에노시타빈, 플록수리딘; 안드로겐, 예컨대 칼루스테론, 드로모스타놀론 프로피오네이트, 에피티오스타놀, 메피티오스탄, 테스토락톤; 항부신제, 예컨대 아미노글루테티미드, 미토탄, 트릴로스탄; 폴산 보충제, 예컨대 프롤린산 산; 아세글라톤; 알도포스파미드 글리코시드; 아미노레불린산; 에닐우라실; 암사크린; 베스트라부실; 비산트렌; 에다트락세이트; 데포파민; 데메콜신; 디아지쿠온; 엘포르미틴; 엘립티늄 아세테이트; 에포틸론; 에토글루시드; 질산갈륨; 히드록시우레아; 렌티난; 로니다민; 메이탄시노이드, 예컨대 메이탄신 및 안사미토신; 미토구아존; 미톡산트론; 모피다몰; 니트라크린; 펜토스타틴; 페나메트; 피라루비신; 로속산트론; 포도필린산 산; 2-에틸히드라지드; 프로카르바진; 라족산; 리족신; 시조푸란; 스피로게르마늄; 테누아존산 산; 트리아지쿠온; 2,2',2"-트리클로로트리에틸아민; 트리코테센 (특히, T-2 독소, 베라큐린 A, 로리딘 A 및 안구이딘); 우레탄; 빈데신; 다카르바진; 만노무스틴; 미토브로니톨; 미토락톨; 피포브로만; 가시토신; 아라비노시드 ("Ara-C"); 시클로포스파미드; 티오테파; 탁소이드, 예를 들어 파클리탁셀 및 도세탁셀; 클로람부실; 겜시타빈; 6-티오구아닌; 메르캅토퓨린; 메토트렉세이트; 백금 유사체 예컨대 시스플라틴 및 카르보플라틴; 빈블라스틴; 백금; 에토포시드 (VP-16); 이포스파미드; 미톡산트론; 빈크리스틴; 비노렐빈; 노반트론; 테니포시드; 에다트렉세이트; 다우노마이신; 아미노프테린; 젤로다; 이반드로네이트; CPT-11; 토포이소머라제 억제제 RFS 2000; 디플루오로메틸오르니틴 (DMFO); 레티노이드 예컨대 레티노산; 카페시타빈; 및 상기 중 임의의 것의 제약상 허용되는 염, 산 또는 유도체를 포함한다. 또한 종양에 대한 호르몬 작용을 조절하거나 억제하는 작용을 하는 항호르몬제, 예컨대 항에스트로겐 및 선택적 에스트로겐 수용체 조정제 (SERM), 예를 들어 타목시펜, 랄록시펜, 드롤록시펜, 4-히드록시타목시펜, 트리옥시펜, 케옥시펜, LY117018, 오나프리스톤 및 토레미펜 (파레스톤); 부신에서 에스트로겐 생산을 조절하는 효소 아로마타제를 억제하는 아로마타제 억제제, 예컨대 예를 들어 4(5)-이미다졸, 아미노글루테티미드, 메게스트롤 아세테이트, 엑세메스탄, 포르메스탄, 파드로졸, 보로졸, 레트로졸 및 아나스트로졸; 및 항안드로겐, 예컨대 플루타미드, 닐루타미드, 비칼루타미드, 류프롤리드 및 고세렐린; 및 상기 중 임의의 것의 제약상 허용되는 염, 산 또는 유도체를 포함한다.
일부 실시양태에서, CD123 항체는 면역 체크포인트 조정제를 표적으로 하는 하나 이상의 다른 치료제, 예컨대 예를 들어 비제한적으로 CD123, PD-1, PD-L1, CTLA-4, LAG-3, B7-H3, B7-H4, B7-DC (PD-L2), B7-H5, B7-H6, B7-H8, B7-H2, B7-1, B7-2, ICOS, ICOS-L, TIGIT, CD2, CD47, CD80, CD86, CD48, CD58, CD226, CD155, CD112, LAIR1, 2B4, BTLA, CD160, TIM1, TIM-3, TIM4, VISTA (PD-H1), OX40, OX40L, GITR, GITRL , CD70, CD27 , 4-1BB, 4-BBL, DR3, TL1A, CD40, CD40L, CD30, CD30L, LIGHT, HVEM, SLAM (SLAMF1, CD150), SLAMF2 (CD48), SLAMF3 (CD229), SLAMF4 (2B4, CD244), SLAMF5 (CD84), SLAMF6 (NTB-A), SLAMCF7 (CS1), SLAMF8 (BLAME), SLAMF9 (CD2F), CD28, CEACAM1(CD66a ), CEACAM3, CEACAM4, CEACAM5, CEACAM6, CEACAM7, CEACAM8, CEACAM1-3AS CEACAM3C2, CEACAM1-15, PSG1-11, CEACAM1-4C1, CEACAM1-4S, CEACAM1-4L, IDO, TDO, CCR2, CD39-CD73-아데노신 경로 (A2AR), BTKs, TIKs, CXCR2, CCR4, CCR8, CCR5, VEGF 경로, CSF-1, 또는 선천성 면역 반응 조정제를 표적으로 하는 작용제와 함께 사용된다. 일부 실시양태에서, CD123 항체는, 예를 들어 항-PD-L1 길항제 항체, 예컨대 예를 들어 BMS-936559 (MDX-1105); CD123 항체, 예컨대 예를 들어 니볼루맙, 펨브롤리주맙, 및 피딜리주맙; 항-CTLA-4 길항제 항체, 예컨대 예를 들어 이필리무맙; 항-LAG-3 길항제 항체, 예컨대 BMS-986016 및 IMP701; 항-TIM-3 길항제 항체; 항-B7-H3 길항제 항체, 예컨대 예를 들어 MGA271; 항-VISTA 길항제 항체; 항-TIGIT 길항제 항체; 항-CD28 길항제 항체; 항-CD80 항체; 항-CD86 항체; 항-B7-H4 길항제 항체; 항-ICOS 효능제 항체; 항-CD28 효능제 항체; 선천성 면역 반응 조정제 (예를 들어, TLR, KIR, NKG2A), 및 IDO 억제제와 함께 사용된다. 일부 실시양태에서, CD123 항체는 4-1BB (CD137) 효능제, 예컨대 예를 들어 PF-05082566 또는 BMS-663513과 함께 사용된다. 일부 실시양태에서, CD123 항체는 OX40 효능제, 예컨대 예를 들어 항-OX-40 효능제 항체와 함께 사용된다. 일부 실시양태에서, CD123 항체는 GITR 효능제, 예컨대 예를 들어 항-GITR 효능제 항체, 예컨대 예를 들어 비제한적으로 TRX518과 함께 사용된다. 일부 실시양태에서, CD123 항체는 IDO 억제제와 함께 사용된다. 일부 실시양태에서, CD123 항체는 시토카인 요법, 예컨대 예를 들어 비제한적으로 IL-15, CSF-1, MCSF-1 등과 함께 사용된다.
일부 실시양태에서, CD123 항체는 하나 이상의 다른 치료 항체, 예컨대 예를 들어 비제한적으로 CD19, CD22, CD40, CD52, 또는 CCR4를 표적으로 하는 항체와 함께 사용된다.
일부 실시양태에서, CD123 항체 요법은 수분 내지 수주 범위의 간격으로 다른 작용제 치료에 앞서 또는 치료 후에 수행될 수 있다. 다른 작용제 및/또는 단백질 또는 폴리뉴클레오티드를 개별적으로 투여하는 실시양태에서는 일반적으로, 각각의 전달 사이에 상당한 기간이 소요되지 않았으므로, 본 발명의 작용제 및 조성물이 대상체에 대해 유리하게 조합된 효과를 발휘할 수 있도록 보장될 것이다. 이러한 경우, 서로 약 12 내지 24시간 내에, 보다 바람직하게는 서로 약 6 내지 12시간 내에 두 양식 모두를 투여할 수 있는 것을 고려한다. 일부 상황에서, 각각의 투여 사이에 수일 (2, 3, 4, 5, 6 또는 7일) 내지 수주 (1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8주)가 경과되는 경우에는, 투여 기간을 상당히 연장시키는 것이 바람직할 수 있다.
일부 실시양태에서, CD123 항체 조성물은 크리조티닙, 팔보시클립, 겜시타빈, 시클로포스파미드, 플루오로우라실, 폴폭스(FOLFOX), 폴린산, 옥살리플라틴, 악시티닙, 수니티닙 말레이트, 토파시티닙, 베바시주맙, 리툭시맙 및 트라스투주맙으로부터 선택된 제2의 작용제를 포함한다.
일부 실시양태에서, CD123 항체 조성물은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 종래 요법을 추가로 포함하는 치료 요법과 조합된다: 수술, 방사선 요법, 화학요법, 표적화 요법, 면역요법, 호르몬 요법, 혈관신생 억제 및 완화 치료.
본 발명에 사용된 조성물은 제약상 허용되는 담체, 부형제 또는 안정화제를 동결건조 제제 또는 수용액 형태로 추가로 포함할 수 있다 (문헌 [Remington: The Science and practice of Pharmacy 21st Ed., 2005, Lippincott Williams and Wilkins, Ed. K. E. Hoover]). 허용되는 담체, 부형제 또는 안정화제는 투여량 및 농도에서 수용자에게 비독성이며, 완충제, 예컨대 포스페이트, 시트레이트, 및 다른 유기 산; 항산화제, 예를 들어 아스코르브산 및 메티오닌; 보존제 (예컨대 옥타데실디메틸벤질 암모늄 클로라이드; 헥사메토늄 클로라이드; 벤즈알코늄 클로라이드, 벤제토늄 클로라이드; 페놀, 부틸 또는 벤질 알콜; 알킬 파라벤, 예컨대 메틸 또는 프로필 파라벤; 카테콜; 레조르시놀; 시클로헥산올; 3-펜탄올; 및 m-크레졸); 저분자량 (약 10개 미만의 잔기) 폴리펩티드; 단백질, 예컨대 혈청 알부민, 젤라틴, 또는 이뮤노글로불린; 친수성 중합체 예컨대 폴리비닐피롤리돈; 아미노산 예컨대 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌, 또는 리신; 모노사카라이드, 디사카라이드, 및 다른 탄수화물, 예를 들어 글루코스, 만노스, 또는 덱스트란; 킬레이트화제, 예컨대 EDTA; 당, 예컨대 수크로스, 만니톨, 트레할로스 또는 소르비톨; 염-형성 반대-이온, 예컨대 소듐; 금속 착물 (예를 들어, Zn-단백질 복합체); 및/또는 비-이온성 계면활성제 예컨대 트윈TM, 플루로닉스TM 또는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)을 포함할 수 있다. 제약상 허용되는 부형제는 본원에 추가로 기재되어 있다.
폴리뉴클레오티드, 벡터, 및 숙주 세포
본 발명은 또한 본 발명의 항체를 코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드, 및 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터 및 숙주 세포를 제공한다. 또 다른 측면에서, 본 발명은 임의의 본 발명의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 조성물 (예컨대, 제약 조성물)을 제공한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 본원에 기재된 항체 중 임의의 것을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터를 포함한다. 또 다른 측면에서, 본 발명은 본원에 기재된 폴리뉴클레오티드 중 임의의 것을 제조하는 방법을 제공한다.
임의의 이러한 서열에 상보적인 폴리뉴클레오티드가 또한 본 발명에 포함된다. 폴리뉴클레오티드는 단일-가닥 (코딩 또는 안티센스) 또는 이중-가닥일 수 있고, DNA (게놈, cDNA 또는 합성) 또는 RNA 분자일 수 있다. RNA 분자는, 인트론을 함유하고 DNA 분자에 1-대-1 방식으로 대응하는 HnRNA 분자, 및 인트론을 함유하지 않는 mRNA 분자를 포함한다. 추가의 코딩 또는 비-코딩 서열이 본 발명의 폴리뉴클레오티드 내에 존재할 수 있으나 반드시 그럴 필요는 없으며, 폴리뉴클레오티드가 다른 분자 및/또는 지지체 물질에 연결될 수 있으나 반드시 그럴 필요는 없다.
폴리뉴클레오티드는 천연 서열 (즉, 항체 또는 그의 부분을 코딩하는 내인성 서열)을 포함할 수 있거나, 또는 이러한 서열의 변이체를 포함할 수 있다. 폴리뉴클레오티드 변이체는 코딩된 폴리펩티드의 면역반응성이 천연 면역반응성 분자에 비해 감소되지 않도록 1개 이상의 치환, 부가, 결실 및/또는 삽입을 함유한다. 코딩된 폴리펩티드의 면역반응성에 대한 효과는 일반적으로 본원에 기재된 바와 같이 평가될 수 있다. 변이체는 천연 항체 또는 그의 부분을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열에 대해 적어도 약 70% 동일성, 보다 바람직하게는 적어도 약 80% 동일성, 보다 더 바람직하게는 적어도 약 90% 동일성, 가장 바람직하게는 적어도 약 95% 동일성을 나타낸다.
2개의 폴리뉴클레오티드 또는 폴리펩티드 서열은, 2개의 서열 내 뉴클레오티드 또는 아미노산의 서열이 하기 기재된 바와 같이 최대한 상응하게 정렬되었을 때 동일한 경우에 "동일"하다고 언급된다. 전형적으로, 2개의 서열 사이의 비교는 비교 윈도우에 걸쳐 서열을 비교하여 서열 유사성의 국부 영역을 확인하고 비교함으로써 수행된다. 본원에 사용된 "비교 윈도우"는 적어도 약 20개의 인접 위치, 통상적으로는 30개 내지 약 75개, 또는 40개 내지 약 50개의 인접 위치의 절편을 지칭하고, 여기서 서열은 2개의 서열이 최적으로 정렬된 후에 동일한 수의 인접 위치의 참조 서열과 비교될 수 있다.
비교를 위한 서열의 최적 정렬은, 디폴트 파라미터를 사용하여 생물정보학 소프트웨어 (디엔에이스타, 인크.(DNASTAR, Inc., 위스콘신주 매디슨))의 레이저진 스위트(Lasergene suite) 내의 메갈라인(Megalign) 프로그램을 사용하여 수행될 수 있다. 이러한 프로그램은 하기 참고문헌에 기재된 여러 정렬식을 구현한다: [Dayhoff, M.O., 1978, A model of evolutionary change in proteins - Matrices for detecting distant relationships. In Dayhoff, M.O. (ed.) Atlas of Protein Sequence and Structure, National Biomedical Research Foundation, Washington DC Vol. 5, Suppl. 3, pp. 345-358; Hein J., 1990, Unified Approach to Alignment and Phylogenes pp. 626-645 Methods in Enzymology vol. 183, Academic Press, Inc., San Diego, CA; Higgins, D.G. and Sharp, P.M., 1989, CABIOS 5:151-153; Myers, E.W. and Muller W., 1988, CABIOS 4:11-17; Robinson, E.D., 1971, Comb. Theor. 11:105; Santou, N., Nes, M., 1987, Mol. Biol. Evol. 4:406-425; Sneath, P.H.A. and Sokal, R.R., 1973, Numerical Taxonomy the Principles and Practice of Numerical Taxonomy, Freeman Press, San Francisco, CA; Wilbur, W.J. and Lipman, D.J., 1983, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 80:726-730].
바람직하게는, "서열 동일성의 백분율"은 적어도 20개 위치의 비교 윈도우에 걸쳐 2개의 최적으로 정렬된 서열을 비교함으로써 결정되며, 여기서 비교 윈도우 내의 폴리뉴클레오티드 또는 폴리펩티드 서열의 부분은 2개 서열의 최적 정렬을 위해 참조 서열 (부가 또는 결실을 포함하지 않음)과 비교하여 20 퍼센트 이하, 통상적으로 5 내지 15 퍼센트, 또는 10 내지 12 퍼센트의 부가 또는 결실 (즉, 갭)을 포함할 수 있다. 백분율은 동일한 핵산 염기 또는 아미노산 잔기가 둘 다의 서열에 존재하는 위치의 수를 결정하여 매칭되는 위치의 수를 산출하고, 매칭되는 위치의 수를 참조 서열 내의 위치의 총 수 (즉, 윈도우 크기)로 나누고, 그 결과에 100을 곱하여 서열 동일성의 백분율을 산출함으로써 계산된다.
변이체는 또한 또는 대안적으로, 천연 유전자, 또는 그의 일부분 또는 상보체와 실질적으로 상동일 수 있다. 이러한 폴리뉴클레오티드 변이체는 천연 항체를 코딩하는 자연 발생 DNA 서열 (또는 상보적 서열)에 중간 정도의 엄격한 조건 하에서 혼성화될 수 있다.
적합한 "중간 정도의 엄격한 조건"은 5X SSC, 0.5% SDS, 1.0 mM EDTA (pH 8.0)의 용액에서 예비세척하고; 50℃-65℃, 5X SSC에서 밤새 혼성화한 후; 0.1 % SDS를 함유하는 각각의 2X, 0.5X 및 0.2X SSC로 65℃에서 20분 동안 2회 세척하는 것을 포함한다.
본원에서 사용되는 "고도로 엄격한 조건" 또는 "고 엄격도 조건"은 (1) 세척시 낮은 이온 강도 및 높은 온도, 예를 들어 50℃에서 0.015 M 염화나트륨/0.0015 M 시트르산나트륨/0.1% 나트륨 도데실 술페이트를 사용하거나, (2) 혼성화 동안에 42℃에서 변성제, 예컨대 포름아미드, 예를 들어 0.1% 소 혈청 알부민/0.1% 피콜(Ficoll)/0.1% 폴리비닐피롤리돈/750 mM 염화나트륨, 75 mM 시트르산나트륨을 함유하는 50 mM 인산나트륨 완충제 (pH 6.5)를 함유하는 50% (v/v) 포름아미드를 사용하거나, 또는 (3) 42℃에서 50% 포름아미드, 5x SSC (0.75 M NaCl, 0.075 M 시트르산나트륨), 50 mM 인산나트륨 (pH 6.8), 0.1% 피로인산나트륨, 5x 덴하르트(Denhardt) 용액, 초음파처리된 연어 정자 DNA (50 μg/mL), 0.1% SDS 및 10% 덱스트란 술페이트를 사용하고, 42℃에서 0.2x SSC (염화나트륨/시트르산나트륨) 및 55℃에서 50% 포름아미드 중에 세척한 후에, 55℃에서 EDTA가 함유된 0.1x SSC로 이루어진 고-엄격도 세척을 수행하는 것이다. 통상의 기술자는 프로브 길이 등과 같은 인자를 수용하기 위해 필요한 경우 온도, 이온 강도 등을 조정하는 방법을 인지할 것이다.
유전자 코드의 축중성으로 인해 본원에 기재된 바와 같은 폴리펩티드를 코딩하는 많은 뉴클레오티드 서열이 존재한다는 것을 관련 기술분야의 통상의 기술자는 인지할 것이다. 이들 폴리뉴클레오티드 중 일부는 임의의 천연 유전자의 뉴클레오티드 서열에 대해 최소 상동성을 보유한다. 그럼에도 불구하고, 코돈 용법에서의 차이로 인해 달라지는 폴리뉴클레오티드가 본 발명에서 구체적으로 고려된다. 또한, 본원에 제공된 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 유전자의 대립유전자가 본 발명의 범주 내에 속한다. 대립유전자는 뉴클레오티드의 하나 이상의 돌연변이, 예컨대 결실, 부가 및/또는 치환으로 인해 변경된 내인성 유전자이다. 생성된 mRNA 및 단백질은 변경된 구조 또는 기능을 가질 수 있지만, 반드시 그러할 필요는 없다. 대립유전자는 표준 기술 (예컨대 혼성화, 증폭 및/또는 데이터베이스 서열 비교)을 사용하여 확인될 수 있다.
본 발명의 폴리뉴클레오티드는 화학적 합성, 재조합 방법 또는 PCR을 사용하여 수득될 수 있다. 화학적 폴리뉴클레오티드 합성 방법은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있으며, 본원에 상세히 기재될 필요가 없다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 본원에 제공되는 서열 및 상업적 DNA 합성기를 사용하여 목적하는 DNA 서열을 생산할 수 있다.
재조합 방법을 사용하여 폴리뉴클레오티드를 제조하는 경우에, 본원에 추가로 논의된 바와 같이, 목적하는 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드가 적합한 벡터 내로 삽입될 수 있고, 이어서 벡터가 복제 및 증폭에 적합한 숙주 세포 내로 도입될 수 있다. 폴리뉴클레오티드는 관련 기술분야에 공지된 임의의 수단에 의해 숙주 세포 내로 삽입될 수 있다. 직접 흡수, 세포내이입, 형질감염, F-교배 또는 전기천공에 의해 외인성 폴리뉴클레오티드를 도입하는 것에 의해 세포가 형질전환된다. 도입되면, 외인성 폴리뉴클레오티드는 세포 내에서 비-통합 벡터 (예컨대 플라스미드)로서 유지될 수 있거나 또는 숙주 세포 게놈 내로 통합될 수 있다. 이와 같이 증폭된 폴리뉴클레오티드는 관련 기술분야에 널리 공지된 방법에 의해 숙주 세포로부터 단리될 수 있다. 예를 들어, 문헌 [Sambrook et al., 1989]을 참조한다.
대안적으로, PCR은 DNA 서열의 재생산을 가능하게 한다. PCR 기술은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있으며, 미국 특허 번호 4,683,195, 4,800,159, 4,754,065 및 4,683,202, 뿐만 아니라 문헌 [PCR: The Polymerase Chain Reaction, Mullis et al. eds., Birkauswer Press, Boston, 1994]에 기재되어 있다.
RNA는 적절한 벡터 내의 단리된 DNA를 사용하여 이를 적합한 숙주 세포 내로 삽입함으로써 수득될 수 있다. 세포가 복제되고 DNA가 RNA로 전사되면, 예를 들어 상기 문헌 [Sambrook et al., 1989]에 제시된 바와 같이 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 널리 공지된 방법을 사용하여 RNA를 단리할 수 있다.
적합한 클로닝 벡터는 표준 기술에 따라 구축될 수 있거나, 또는 관련 기술분야에서 입수가능한 다수의 클로닝 벡터로부터 선택될 수 있다. 선택된 클로닝 벡터는 사용하고자 의도되는 숙주 세포에 따라 달라질 수 있지만, 유용한 클로닝 벡터는 일반적으로 자기-복제 능력을 가질 것이고/거나 특정한 제한 엔도뉴클레아제에 대한 단일 표적을 보유할 수 있고/거나 벡터를 함유하는 클론을 선택하는데 사용될 수 있는 마커에 대한 유전자를 보유할 수 있다. 적합한 예는 플라스미드 및 박테리아 바이러스, 예를 들어 pUC18, pUC19, 블루스크립트(Bluescript) (예를 들어, pBS SK+) 및 그의 유도체, mp18, mp19, pBR322, pMB9, ColE1, pCR1, RP4, 파지 DNA, 및 셔틀 벡터, 예컨대 pSA3 및 pAT28을 포함한다. 이들 및 많은 다른 클로닝 벡터는 상업적 공급업체, 예컨대 바이오라드(BioRad), 스트라테진(Strategene) 및 인비트로젠(Invitrogen)으로부터 입수가능하다.
발현 벡터는 일반적으로 본 발명에 따른 폴리뉴클레오티드를 함유하는 복제가능한 폴리뉴클레오티드 구축물이다. 이는 발현 벡터가 숙주 세포에서 에피솜으로서 또는 염색체 DNA의 통합 부분으로서 복제가능하여야 한다는 것을 의미한다. 적합한 발현 벡터는 플라스미드, 바이러스 벡터, 예컨대 아데노바이러스, 아데노-연관 바이러스, 레트로바이러스, 코스미드, 및 PCT 공개 번호 WO 87/04462에 개시된 발현 벡터(들)를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 벡터 성분은 일반적으로 다음 중 하나 이상을 포함할 수 있으나 이제 제한되지는 않는다: 신호 서열; 복제 기점; 하나 이상 마커 유전자; 적합한 전사 조절 요소 (예컨대 프로모터, 인핸서 및 종결인자). 발현 (즉, 번역)을 위해서는, 통상적으로 1종 이상의 번역 제어 요소, 예컨대 리보솜 결합 부위, 번역 개시 부위 및 정지 코돈이 또한 요구된다.
관심 폴리뉴클레오티드를 함유하는 벡터는 전기천공, 염화칼슘, 염화루비듐, 인산칼슘, DEAE-덱스트란 또는 다른 물질을 사용한 형질감염; 미세발사체 충격; 리포펙션; 및 감염 (예를 들어, 벡터가 감염원, 예컨대 백시니아 바이러스인 경우)을 포함하는 다수의 적절한 수단 중 임의의 것에 의해 숙주 세포 내로 도입될 수 있다. 도입 벡터 또는 폴리뉴클레오티드의 선택은 종종 숙주 세포의 특색에 좌우될 것이다.
본 발명은 또한 본원에 기재된 폴리뉴클레오티드 중 임의의 것을 포함하는 숙주 세포를 제공한다. 이종 DNA를 과다-발현할 수 있는 임의의 숙주 세포가 관심 항체, 폴리펩티드 또는 단백질을 코딩하는 유전자를 단리하는 목적에 사용될 수 있다. 포유동물 숙주 세포의 비제한적 예는 COS, HeLa 및 CHO 세포를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. PCT 공개 번호 WO 87/04462를 또한 참조한다. 적합한 비-포유동물 숙주 세포는 원핵생물 (예컨대, 이. 콜라이(E. coli) 또는 비. 서브틸리스(B. subtillis)) 및 효모 (예컨대, 에스. 세레비지아에(S. cerevisae), 에스. 폼베(S. pombe); 또는 케이. 락티스(K. lactis))를 포함한다. 바람직하게는, 숙주 세포는 숙주 세포 내에 상응하는 관심 내인성 항체 또는 단백질이 존재하는 경우에, 그보다 약 5배 더 높은 수준, 보다 바람직하게는 10배 더 높은 수준, 보다 더 바람직하게는 20배 더 높은 수준으로 cDNA를 발현한다. CD123에의 특이적 결합에 대해 숙주 세포를 스크리닝하는 것은 면역검정 또는 FACS에 의해 수행된다. 관심 항체 또는 단백질을 과다발현하는 세포가 확인될 수 있다.
키트
본 발명은 또한, 본 발명의 방법에 사용하기 위한 키트를 제공한다. 본 발명의 키트는 본원에 기재된 CD123 항체 또는 CD123 ADC를 포함하는 하나 이상의 용기, 및 본원에 기재된 본 발명의 방법 중 임의의 것에 따른 사용 지침서를 포함한다. 일반적으로, 이러한 지침서는 상기 기재된 치유적 치료를 위해 CD123 항체 또는 CD123 ADC를 투여하는 것에 관한 설명을 포함한다.
본원에 기재된 바와 같은 CD123 항체 또는 CD123 ADC의 사용과 관련한 지침서는 일반적으로, 의도한 처치를 위한 투여량, 투여 스케줄 및 투여 경로에 관한 정보를 포함한다. 용기는 단위 용량, 벌크 패키지 (예를 들어, 다중-용량 패키지) 또는 하위-단위 용량일 수 있다. 본 발명의 키트에 제공되는 지침서는 전형적으로 라벨 또는 패키지 삽입물 (예를 들어, 키트에 포함된 종이 시트) 상의 서면 지침서이지만, 기계-판독가능한 지침서 (예를 들어, 자기 또는 광학 저장 디스크 상에 저장된 지침서)가 또한 허용된다.
본 발명의 키트는 적합한 포장 내에 있다. 적합한 포장은 바이알, 병, 단지, 가요성 포장 (예를 들어, 밀봉된 마일라(Mylar) 또는 플라스틱 백) 등을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 특정 장치, 예컨대 흡입기, 비강 투여 장치 (예를 들어, 아토마이저) 또는 주입 장치, 예컨대 미니펌프와 조합하여 사용하기 위한 포장이 또한 고려된다. 키트는 멸균 접근 포트를 가질 수 있다 (예를 들어, 용기는 정맥내 용액 백 또는 피하 주사 바늘이 관통가능한 마개가 있는 바이알일 수 있다). 용기는 또한 멸균 접근 포트를 가질 수 있다 (예를 들어, 용기는 정맥내 용액 백 또는 피하 주사 바늘이 관통가능한 마개가 있는 바이알일 수 있다). 조성물 중 적어도 하나의 활성제는 CD123 항체이다. 용기는 제2 제약 활성제를 추가로 포함할 수 있다.
키트는 임의로 추가의 성분, 예컨대 완충제 및 설명적 정보를 제공할 수 있다. 통상적으로, 키트는 용기, 및 용기 상에 있거나 용기와 회합된 라벨 또는 포장 삽입물(들)을 포함한다.
생물학적 기탁
본 발명의 대표적인 물질은 2017년 6월 29일에 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션(American Type Culture Collection) (ATCC)에 기탁하였다. ATCC 수탁 번호 PTA-124283을 갖는 벡터는 인간화 CD123 항체 중쇄 서열을 코딩하는 폴리뉴클레오티드이고, ATCC 수탁 번호 PTA-124284를 갖는 벡터는 인간화 CD123 항체 경쇄 서열을 코딩하는 폴리뉴클레오티드이다. 기탁은 특허 절차상 미생물 기탁의 국제적 승인에 관한 부다페스트 조약 및 이러한 조약 (부다페스트 조약) 하의 규정의 조항 하에 이루어졌다. 이것은 기탁일로부터 30년 동안 기탁물의 생존 배양물의 유지를 보장한다. 기탁물은 부다페스트 조약의 조항 하에 ATCC로부터 입수가능할 것이고, 이는 화이자, 인크.(Pfizer, Inc.)와 ATCC 사이의 협정에 따르며, 상기 협정은 관련 미국 특허의 발부 시에 또는 임의의 미국 또는 해외 특허 출원의 공개 시에, 이중 빠른 시점에, 공공에 대한 기탁 배양물의 자손의 영구적이고 비제한적인 이용가능성을 보장하고, 35 U.S.C. 섹션 122 및 그에 대한 미국 특허청장의 규칙 (886 OG 638에 대한 특정한 언급이 있는 37 C.F.R. 섹션 1.14 포함)에 따라 특허 및 상표 청장에 의해 자격이 인정된 것에 대한 자손의 이용가능성을 보장한다.
본 출원의 양수인은 기탁된 물질의 배양물이 적합한 조건 하에 배양될 때 사멸 또는 상실 또는 파괴되는 경우에, 그 물질을 통지 하에 또 다른 동일한 것으로 신속하게 대체할 것에 동의하였다. 기탁 물질의 이용가능성은 그의 특허법에 따른 임의의 정부의 권한 하에 보장된 권리에 반하여 본 발명을 실시하는 것에 대한 허가로 간주되지 않는다.
실시예
하기 실시예는 단지 예시적 목적으로 제공되고, 어떤 방식으로든 본 발명의 범주를 제한하는 것으로 의도되지 않는다. 실제로, 본원에 제시되고 기재된 것들에 더하여 본 발명의 다양한 변형이 상기 설명으로부터 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 명백할 것이며, 첨부된 청구범위의 범주 내에 속할 것이다.
실시예 1: CD123 항체-약물 접합체의 시험관내 세포독성
본 실시예는 다양한 CD123 ADC의 세포독성을 예시한다.
본 연구에서, AML 세포주: MOLM13, MV411, JVM3, 그란타(Granta)519, OCI-AML3, NB4, 및 HL60에서 2D 시험관내 세포독성 검정을 이용하여 다양한 CD123 ADC의 세포독성을 시험하였다. 표 4는 사용된 각각의 세포 각각에 대한 CD123의 발현 수준을 나타낸다.
표 4. 다양한 AML 세포주에서의 CD123의 발현 수준.
Figure 112020051620549-pct00024
시험된 제1 군의 ADC는 AcLysValCitPABC 링커와 함께 CPI에 접합된 CD123 ADC였다. 이들 ADC는 18G3-CPI, 16D6-CPI, 3D1-CPI 및 20D7-CPI였으며, 이들 각각은 ~2의 약물:항체 비 (DAR)를 갖는다. CD123 ADC의 제조는 하기 실시예 5에 상세히 기재되어 있다. ~2의 DAR을 갖는 CPI 작용제를 갖는 대조군 IgG (CD123에 결합하지 않는 IgG) ("Neg.8.8")를 음성 대조군으로서 사용하였다.
2D 시험관내 세포독성 검정을 위해, AML 세포를 ADC 또는 대조군과 함께 하기 용량: 100 ng/ml, 25 ng/ml, 6.25 ng/ml, 1.56 ng/ml, 0.39 ng/ml, 0.09 ng/ml, 0.024 ng/ml, 0.006 ng/ml, 0.002 ng/ml 및 0.0004 ng/ml으로 96 시간 동안 인큐베이션시켰다. 세포 생존율을 셀타이터글로(CelltiterGlo) (프로메가(Promega, 위스콘신주 매디슨))로 측정하고, 발광을 빅터(Victor) 플레이트 판독기 (퍼킨 엘머(Perkin Elmer, 매사추세츠주 월섬)를 사용하여 측정하였다. XL피트(XLfit) (IDBS, 매사추세츠주 보스턴) 4 파라미터 곡선 피트를 사용하여 50% 억제 값 (IC50) 계산을 수행하였다. 결과를 표 5에 요약하였다.
표 5. AML 세포에서의 CD123-CPI ADC의 IC50 값
Figure 112020051620549-pct00025
결과는 CD123-CPI가 CD123을 발현하는 세포에 세포독성이고, 이들이 비특이적 CP1 (Neg8.8-CPI)보다 더 세포독성임을 보여준다. 예를 들어, MOLM13 세포에서, CD123 ADC 18G3-CPI, 16D6-CPI 및 3D1-CPI의 IC50은 각각 0.25 ± 0.04 ng/mL, 0.22 ± 0.05 ng/mL, 0.33 ± 0.06 ng/mL 및 0.32 ± 0.14 ng/mL이다. 대조적으로, Neg.8.8-CPI의 IC50은 ＞88.43 ± 18.66이었다 (표 5, 마지막 열). ~2의 DAR을 갖는 Neg.8.8-CPI는 시험된 최고 용량에서 실질적으로 보다 덜 활성이었다 (표 5, 마지막 열). 제시된 CD123 ADC의 IC50 값은 세포 상의 CD123 발현의 수준과 상당한 상관관계가 있다 (표 4 및 5). 예를 들어, 높은 수준의 CD123을 발현하는 MV411 세포에서 18G3-CPI의 IC50은 0.41 ± 0.07이다. 이와 대조적으로, 낮은 수준의 CD123을 발현하는 NB4 세포에서 18G3-CPI의 IC50은 63.92 ± 36.08이고, CD123을 발현하지 않는 HL60 세포에서 18G3-CPI의 IC50은 ＞84.4 ± 33.30이다.
CD123-18G3 ADC를 상이한 작용제에 접합시켰으며, iPr-칼리케아미신 또는 CTI (글루쿠로니드)는 유사한 세포독성 효과를 갖는다. iPr-칼리케아미신 ("iPr")에 접합된 18G3에 대한 세포독성 검정 결과를 표 6에 요약하였다. CTI (글루쿠로니드)에 접합된 18G3에 대한 세포독성 검정 결과를 표 7에 요약하였다.
표 6: AML 세포에서의 CD123-iPr ADC의 IC50 값.
Figure 112020051620549-pct00026
표 7: AML 세포에서의 CD123-CTI ADC의 IC50 값.
Figure 112020051620549-pct00027
이들 데이터는, ~2의 DAR을 갖는 CD123-ADC가 CD123-발현 암 세포주에서 활성이고 세포 사멸을 유도하지만, CD123을 발현하지 않는 세포에서는 불활성이라는 것을 입증한다. 이는 이들 ADC의 효력 및 특이성을 입증한다.
실시예 2: CD123 항체 및 ADC의 인터류킨-3 (IL-3) 신호전달 경로 및 세포독성
본 실시예는 IL-3 신호전달을 차단하는 CD123 항체의 능력 및 CD123 ADC의 세포독성을 예시한다.
CD123 항체 클론 중 어느 것이 CD123/IL-3Rα-발현 TF-1 세포에서 IL-3 결합 부위에 경쟁적으로 결합하는지를 확인하기 위해 본 연구를 수행하였다. CD123/IL-3Rα-발현 TF-1 세포를 20 ng/ml의 IL-3 및 100 ng/ml, 25 ng/ml, 6.25 ng/ml, 1.56 ng/ml, 0.39 ng/ml, 0.09 ng/ml, 0.024 ng/ml, 0.006 ng/ml, 0.002 ng/ml 및 0.0004 ng/ml 용량의 하기 CD123 항체: 3D1, 18G3 및 16D6와 함께 공동-인큐베이션시켰다. CD123 항체 7G3을 IL-3 신호전달 경로 차단을 나타내는 벤치마크 항체로서 사용하였고, Neg 8.8 항체를 음성 대조군으로서 사용하였다. 세포 생존을 측정하는 CTG 검정을 위해, 세포를 37℃에서 4일 동안 처리하였다. 처리 기간 후, 세포를 수집하고 단백질을 제조하였다. STAT5, 인산화 STAT5 및 액틴 수준을 웨스턴 블롯 분석을 이용하여 분석하였다. 웨스턴 블롯 결과는 도 1에 제시된다.
하류 신호전달 단백질 인산화 STAT5 ("포스포-Stat5")의 존재는 IL-3 신호전달 경로의 활성화를 나타낸다. IL-3 단독 또는 IL-3 ＋ Neg.8.8 대조군 항체 ("8.8")로의 TF-1 세포의 처리는, 포스포-Stat5의 존재에 의해 나타난 바와 같이, IL-3 신호전달을 활성화하였다 (도 1). CD123 항체 7G3으로의 처리는 IL-3 신호전달을 차단하였다. CD123 항체 3D1 또한 이러한 경로를 차단하였다. 대조적으로, CD123 항체 18G3 및 16D6은 IL-3-매개 STAT5 인산화를 차단하지 않았다.
CD123-18G3-CPI 및 CD123-16D6-CPI의 세포독성은 IL-3의 존재 하에 여전히 유지된다 (표 8).
표 8
Figure 112020051620549-pct00028
실시예 3: CD123-ADC의 생체내 효능
본 실시예는 CD123 ADC의 생체내 효능을 예시한다.
CD123 ADC의 항-종양 활성을 급성 골수성 백혈병 (AML) 세포주 이종이식편 모델을 사용하여 생체내에서 시험하였다. 하기 기재된 각각의 모델에 대해 제1 용량을 제0일에 제공하였다. 종양을 1주에 적어도 1회 측정하고, 그의 부피를 식: 종양 부피 (mm3) = 0.5 x (종양 폭2)(종양 길이)로 계산하였다. 각각의 처리군에 대한 평균 종양 부피 (± S.E.M.)를 10마리의 동물을 포함시켜 계산하였다. 모든 동물 실험은 동물 실험 윤리 위원회 (Institutional Animal Care and Use Committee) 지침 및 적절한 동물 연구 승인 하에 실험실 동물 관리의 평가를 위한 협회(Association for Assessment of Laboratory Animal Care)에 의해 승인된 시설에서 수행하였다. CD123 ADC는 편성된 유전자 돌연변이 또는 과다발현된 유전자 및/또는 단백질을 갖는 세포주에서 용량-의존적 방식으로 높은 효능을 나타내었다.
A. H.1 MOLM13 AML 이종이식편
CD123 ADC의 항종양 활성을 NOD/SCID 면역결핍 마우스에서 인간 종양의 생체내 성장으로 조사하였다. 피하 (sc) AML 모델을 위해, 5 X 106개의 MOLM13 세포를 암컷 마우스의 옆구리에 피하 이식하였다. 종양이 평균 부피 200 mm3에 도달하였을 때, 다양한 처리군들 간에 종양 크기의 균일성을 보장하기 위해 동물을 단계화시켰다. MOLM13 AML sc 이종이식편 모델에 PBS 비히클, 0.3 mg/kg 또는 1 mg/kg의 CD123-CPI (18G3, 16D6 또는 3D1) 또는 0.3 mg/kg 또는 1 mg/kg의 대조군 Neg-8.8-CPI를 4일마다 4회 (Q4dx4) 정맥내로 투여하였다. 데이터를 표 9에 요약하였다.
표 9
Figure 112020051620549-pct00029
Figure 112020051620549-pct00030
Neg.8.8-CPI와 비교하여, CD123-CPI는 종양을 유의하게 억제하였다 (표 9). 0.3 mg/kg의 용량에서, 3개의 모든 CD123 ADC: 18G3-CPI, 16D6-CPI 및 3D1-CPI는 세포독성이었다. 제17일에, 각각의 군에서 10마리의 동물 중 10마리가 종양 퇴행을 나타내었다. 이들 마우스 모두는 적어도 연구 종료 시점인 제60일까지 종양이 없는 상태를 유지하였다. 1 mg/kg의 용량의 CD123 ADC에서, 종양 퇴행은 조기에 제12일에 일어났다.
이들 데이터는 CD123-CPI가 MOLM13 AML 이종이식편 종양의 성장을 억제한다는 것을 입증한다.
보다 낮은 용량에서의 CD123-ADC의 효능을 시험하기 위해, 동일한 MOLM13 모델을 사용하여 생체내 효능 연구를 수행하였다. 동물을 상기 기재된 바와 같이 처리하였다. 하기 표 10에 나타낸 바와 같이, 0.1 mg/kg의 CD123-CPI는 모든 마우스에서 용량-의존적 방식으로 종양 성장을 매우 효과적으로 억제하였다 (표 10, 중앙 칼럼 "18G3-CPI" 및 "16D6-CPI"). 대조적으로, Neg. 8.8-CPI-처리된 마우스에서는 종양이 계속 성장하였다 (표 10, 우측 칼럼 "Neg 8.8-CPI").
표 10
Figure 112020051620549-pct00031
Figure 112020051620549-pct00032
CD123-18G3-CTI의 효능을 시험하기 위해, 동일한 MOLM13 모델을 사용하여 생체내 효능 연구를 수행하였다. 동물을 상기 기재된 바와 같이 처리하였다. 표 11에 나타낸 바와 같이, CD123-18G3-CTI로의 처리는 마우스에서 용량-의존적 방식으로 종양 성장을 억제하였다. 대조적으로, Neg. 8.8-CTI 처리된 마우스에서는 종양이 계속 성장하였다.
표 11
Figure 112020051620549-pct00033
Figure 112020051620549-pct00034
B. H.2 MV4-11 AML 이종이식편
면역결핍 마우스를 사용하여 인간 종양의 성장에 대한 CD123 ADC의 효과를 평가하였다. 피하 (sc) AML 모델을 위해, 5 X 106개의 MV4-11 세포를 암컷 NOD-SCID 마우스의 옆구리에 피하 이식하였다. 종양이 평균 부피 200 mm3에 도달하였을 때, 다양한 처리군들 간에 종양 크기의 균일성을 보장하기 위해 동물을 단계화시켰다. MV4-11 AML sc 이종이식편 동물에게 PBS 비히클, 0.1, 0.3 및 0.6 mg/kg 용량의 CD123-CPI 또는 8.8-CPI를 4일마다 4회 (Q4dx4) 정맥내로 투여하였다. 데이터를 표 12에 요약하였다. CD123-18G3-H16-CPI를 Neg 8.8-CPI 및 PBS 비히클과 비교하였다.
0.6 mg/kg 용량의 CD123-CPI가 본 연구에서 시험된 가장 강력한 ADC였으며, 연구가 진행되는 제65일까지 10마리의 동물 중 10마리가 종양이 없는 상태를 유지하였다. 심지어 0.3 mg/kg 용량에서도, 10마리의 마우스 중 9마리는 제25일 근처에서 종양 퇴행을 나타내었으며, 연구가 종료되는 시점까지 제65일에 종양이 없는 상태를 유지하였다. 데이터는 CD123-CPI가 MV4-11 이종이식편 종양의 성장을 억제한다는 것을 입증한다.
표 12
Figure 112020051620549-pct00035
CD123-CTI의 효능을 시험하기 위해, 동일한 MV4-11 모델을 사용하여 생체내 효능 연구를 수행하였다. 동물을 상기 기재된 바와 같이 처리하였다. 표 13에 나타낸 바와 같이, CD123-CTI가 또한 마우스에서 용량-의존적 방식으로 종양 성장을 억제한 반면, Neg. 8.8-CTI 처리된 마우스에서는 종양이 계속 성장하였다.
표 13
Figure 112020051620549-pct00036
Figure 112020051620549-pct00037
이러한 결과는 CD123 ADC가 종양을 치료하는데 매우 효과적이라는 것을 입증한다.
실시예 4: CD123-ADC의 생체내 효능
본 실시예는 AML 환자-유래 파종성 이종이식편 (AML PDX)을 사용하여 생체내에서의 CD123 ADC의 효능을 예시한다.
CD123-CPI의 효능을 적절한 동의 절차에 따라 수득된 환자 골수 세포로 확립된 파종 모델로 생체내 성장에 대해 면역결핍 마우스에서 검사하였다. 표 14는 본 연구에서 사용된 환자 샘플의 요약을 제공한다.
표 14
Figure 112020051620549-pct00038
연구를 위해, 1.0 X 106개의 환자 골수 세포를 방사선 조사된 NSG 마우스의 외측 꼬리 정맥으로 정맥내 주사하였다. 인간 CD45+/CD123+/CD33+ 세포의 생착 (유동 세포측정 염색에 의해 측정된 바에 따라 말초 혈액 중 12-55%)을 기초로 하여 연구를 단계화시키고 무작위화하였다. AML PDX 마우스에게 PBS 비히클 또는 18G3-CPI를 7일마다 2회 (Q7dx2) 정맥내로 투여하였다. 제2/마지막 투여 약 3-5일 후, 희생된 마우스로부터 말초 혈액 및 골수를 수거하였다. 희생된 동물의 골수 및 혈액에 남아있는 종양 세포를 유동 세포측정법에 의해 분석하였다. 결과를 도 2의 그래프 및 표 15에 요약하였다. 표 15에서, 숫자는 말초 혈액 및 골수에 남아있는 종양 세포의 백분율을 나타낸다.
각각의 연구는 군 당 약 6 내지 10마리의 마우스를 갖는다. 데이터는 CD123 ADC가 용량-의존적 방식으로 말초 혈액 및 골수 둘 다에서 종양 세포수를 감소시키는데 효과적임을 입증한다 (도 2 및 표 15).
표 15
Figure 112020051620549-pct00039
CD123-18G3-CPI가 종양 보유 마우스의 전체 생존을 증가시킬 수 있는지 여부를 확인하기 위해, 말초 혈액이 높은 생착, 즉 평균적으로 ~32%의 생착을 나타낼 때 PDX2407을 사용하여 생존 연구를 수행하였다. 마우스에게 PBS 비히클 또는 CD123-CPI를 7일마다 2회 (Q7dx2) 정맥내로 투여하고, 매일 모니터링하였다. 마우스가 임상 징후, 예컨대 기면 및 체중 감소를 나타내었을 때, 마우스를 안락사시켰다 (동물 실험 윤리 위원회 하 실험실 동물 관리의 평가를 위한 협회 지침을 따름).
결과를 도 3의 그래프에 요약하였다. CD123-18G3-CPI로의 처리는 종양 보유 동물의 전체 생존을 용량-의존적 방식으로 연장시켰다. 구체적으로, 0.1 mg/kg 용량의 CD123-18G3-CPI로의 처리는 약 25% 만큼 생존을 연장시켰고, 0.3 mg/kg 용량의 CD123-18G3-CPI로의 처리는 생존 기간을 대략 2배 연장시켰다 (도 3).
이러한 결과는 CD123-ADC로의 처리가 AML의 퇴행을 유도하고 그의 진행을 억제하며, 생존을 연장시킨다는 것을 입증한다.
실시예 5: CD123 항체 약물 접합체 (ADC)의 제조
본 실시예는, 본원에서 "18G3-CPI" 또는 "CD123-18G3-CPI"로도 지칭되는 h18G3-AcLysValCitPABC-DMAE-CO_CPI-000638314, CD123 ADC의 접합 및 제조를 예시한다.
18G3-CPI는 CD123 인간화 mAb 18G3 (상기 표 2.0 및 2.1, "h18G3" 참조), AcLysValCitPABC 링커 및 시클로프로필피롤로인돌린 (CPI) 작용제로 이루어진 ADC이다. K222R, E295L, Q295L, Y296Q, N297G 돌연변이를 상부 힌지 및 Fc에 도입하여 트랜스글루타미나제에 의해 촉매되는 CPI 작용제의 부위-특이적 접합을 가능하게 하였다. CD123-18G3-H16-N60G-K222R 인간화 IgG1 항체 (본원에서 "h18G3"으로 지칭됨)의 경쇄 및 중쇄 아미노산 서열은 하기와 같다:
경쇄:
Figure 112020051620549-pct00040
중쇄:
Figure 112020051620549-pct00041
H16 부위-특이적 돌연변이 서열은 상기 진한 이탤릭체 부분이고, 이는 5개의 H16 부위-특이적 트랜스글루타미나제 돌연변이 K222R (힌지 내), E294L, Q295L, Y296Q 및 N297G를 포함한다. LLQG 서열은 트랜스글루타미나제에 대한 인식 태그이며, 링커-작용제가 Q296에서 접합된다. CDR-H2 내 G (밑줄 표시)는 N60G 돌연변이이다.
링커-작용제, AcLysValCitPABC-DMAE-CO_CPI는 아미노산 Q296에서 부위-특이적으로 접합된다. AcLysValCitPABC-DMAE-CO_CPI-000638314 링커-작용제 구조를 하기에 제시한다.
Figure 112020051620549-pct00042
h18G3을 박테리아 트랜스글루타미나제 (시그마(Sigma), 45 U/mg 단백질)를 사용하여 AcLysValCitPABC-DMAE-CO_CPI-000638314 링커-작용제에 접합시켰다. 특히, 항체를 100 mM의 KPO4, 200 mM의 NaCl을 함유하는 완충제 (pH 7)로 교환하였다. 링커-작용제를 7.5% (v/v)의 디메틸 술폭시드 (DMSO)의 존재 하에 10배 몰 과량으로 항체에 첨가하였다. 항체 mg 당 1 U의 박테리아 트랜스글루타미나제의 첨가에 의해 효소 반응을 개시하고, 연속적인 혼합과 함께 25℃에서 밤새 인큐베이션시켰다.
반응 혼합물을 15% 이소프로필 알콜과 함께 30분 동안 실온에서 인큐베이션시켰다. 이어서 이를 4 부피의 1M KPO4 완충제로 희석하고, 부틸-세파로스(Butyl-Sepharose) HP 칼럼 (GE 라이프사이언시스(GE Lifesciences))을 사용하는 소수성 상호작용 크로마토그래피 (HIC)를 통해 정제하였다. 방법은 결합을 위해 1 M의 KPO4, 50 mM의 트리스(Tris) (pH 7)을 이용하였으며, ADC를 10 CV에 걸쳐 50 mM의 트리스 (pH 7)로 용리시켰다. HIC 정제된 화합물을 20 mM의 히스티딘, 85 mg/mL의 수크로스의 최종 완충제 (pH 5.8)로 투석하였다. ADC는 순도를 위해서는 SEC, 약물-항체 비를 계산하기 위해서는 역상 크로마토그래피를 통해 추가로 특징화되었다. 단백질 농도는 UV 분광광도계를 통해 결정하였다.
선도 항체(lead antibody)는 3 단계의 정제 후 CHO 풀에서 평가시 88% 수율의 회수 및 99% 순도로 최대 700 mg/L의 매우 우수한 발현을 갖는다. 정제 후 DAR 1.9-2.0 및 55-60%의 접합 수율을 달성함으로써 평가된 바와 같이 18G3의 접합이 매우 잘 수행되었다. 생성된 ADC, CD123-18G3-H16-N60G-K222R-hG1-(Q)AcLysValCitPABC-DMAE-CO_CPI는 우수한 열 안정성 및 분자 완전성을 나타내었다.
실시예 6: 트랜스글루타미나제를 사용하여 항체를 AcLysValCitPABC-DMAE-CO_CPI-000638314에 접합하는 방법
본 실시예는, 본원에서 AcLysPABC-CPI-8314로도 지칭되는 링커-작용제 AcLysValCitPABC-DMAE-CO_CPI-000638314에 대한 항체의 접합을 예시한다.
CPI 링커-세포독성제의 접합. 항체의 H16 부위에 대한 AcLysPABC-CPI-8314 (상기 실시예 5에 제시된 구조)의 접합을 다양한 상이한 파라미터, 예컨대 몰농도 및 염 조성, pH, 효소 농도, 시간 및 온도를 변화시킴으로써 최적화시켰다 (표 16). 간략하게, 항체를 표 16에 제시된 각각의 조건에서 적절한 완충제 및 pH로 완충제 교환하였다. 10배 몰 과량의 AcLysPABC-CPI-8314 링커-작용제를 항체에 첨가하고, 5-10% 디메틸 술폭시드를 첨가하여 반응 혼합물 중에 링커-작용제를 가용화시켰다. 박테리아 트랜스글루타미나제 (0.5-5 U/mg의 항체)의 첨가 후, 반응 혼합물을 소정의 시간 및 온도에서 연속적으로 혼합하였다. 미반응 링커-작용제 및 트랜스글루타미나제 효소를 크기 배제 크로마토그래피 및/또는 소수성 상호작용 크로마토그래피를 통해 제거하였다. 약물-항체 비를 LCMS 또는 RP-HPLC를 통해 계산하였다.
다양한 조건에 대한 항체-약물 비율 (DAR)에 의해 측정된 접합 효율을 표 16에 나타내었다. 예를 들어, 항체를 30 mM의 KPO4, 150 mM의 NaCl을 함유하는 완충제 (pH 7)로 교환하였을 때, 1.6의 DAR이 달성되었다.
이러한 최적화된 조건을 사용하여, CD33, CD123, Her2, PRLR, CD22, 및 다른 항원, 예를 들어 항원을 표적화하는 항체를 링커-작용제 AcLysValCitPABC-DMAE-CO_CPI-000638314에 접합시켰다.
표 16
Figure 112020051620549-pct00043
개시된 교시가 다양한 적용, 방법, 키트, 및 조성물과 관련하여 기재되었지만, 본원의 교시 및 하기 청구된 발명을 벗어나지 않으면서 다양한 변화 및 변형이 이루어질 수 있다는 것을 인지할 것이다. 상기 실시예는 개시된 교시를 보다 잘 예시하기 위해 제공되었으며, 본원에 제시된 교시의 범주를 제한하는 것으로 의도되지 않는다. 본 교시가 이들 예시적 실시양태의 면에서 기재되었지만, 이들 예시적 실시양태의 수많은 변경 및 변형이 과도한 실험 없이 가능하다는 것을 통상의 기술자는 용이하게 이해할 것이다. 모든 이러한 변경 및 변형은 본 교시의 범주 내에 있다.
특허, 특허 출원, 논문, 교재 등을 비롯한 본원에 인용된 모든 참고문헌 및 이에 인용된 참고문헌은, 이들이 이미 포함되지 않을 정도로, 그의 전문이 본원에 참조로 포함된다. 포함된 문헌 및 유사한 자료 중 하나 이상이 비제한적으로 정의된 용어, 용어 용법, 기재된 기술 등에 있어서 본 출원과 상이하거나 모순되는 경우에, 본 출원이 우선한다.
상기 기재 및 실시예는 본 발명의 특정한 구체적 실시양태를 상술하고, 본 발명자들에 의해 고려된 최적 방식을 기재한다. 그러나, 상기의 것이 문서에서 상세하게 나타날 수 있더라도, 본 발명이 많은 방식으로 실시될 수 있고 본 발명이 첨부된 청구범위 및 그의 임의의 등가물에 따라 해석되어야 함을 인지할 것이다.
ATCC PTA-124283 20170629 ATCC PTA-124284 20170629
SEQUENCE LISTING <110> PFIZER INC. Charati, Manoj Baburao Han, Yoon-Chi Katragadda, Madan Pich-Nicholas, Nicole Melissa Tumey, L. Nathan <120> ANTIBODIES AND ANTIBODY-DRUG CONJUGATES SPECIFIC FOR CD123 AND USES THEREOF <130> PC72333 <160> 108 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 380 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro 1 5 10 15 Gly Ser Thr Gly Thr Lys Glu Asp Pro Asn Pro Pro Ile Thr Asn Leu 20 25 30 Arg Met Lys Ala Lys Ala Gln Gln Leu Thr Trp Asp Leu Asn Arg Asn 35 40 45 Val Thr Asp Ile Glu Cys Val Lys Asp Ala Asp Tyr Ser Met Pro Ala 50 55 60 Val Asn Asn Ser Tyr Cys Gln Phe Gly Ala Ile Ser Leu Cys Glu Val 65 70 75 80 Thr Asn Tyr Thr Val Arg Val Ala Asn Pro Pro Phe Ser Thr Trp Ile 85 90 95 Leu Phe Pro Glu Asn Ser Gly Lys Pro Trp Ala Gly Ala Glu Asn Leu 100 105 110 Thr Cys Trp Ile His Asp Val Asp Phe Leu Ser Cys Ser Trp Ala Val 115 120 125 Gly Pro Gly Ala Pro Ala Asp Val Gln Tyr Asp Leu Tyr Leu Asn Val 130 135 140 Ala Asn Arg Arg Gln Gln Tyr Glu Cys Leu His Tyr Lys Thr Asp Ala 145 150 155 160 Gln Gly Thr Arg Ile Gly Cys Arg Phe Asp Asp Ile Ser Arg Leu Ser 165 170 175 Ser Gly Ser Gln Ser Ser His Ile Leu Val Arg Gly Arg Ser Ala Ala 180 185 190 Phe Gly Ile Pro Cys Thr Asp Lys Phe Val Val Phe Ser Gln Ile Glu 195 200 205 Ile Leu Thr Pro Pro Asn Met Thr Ala Lys Cys Asn Lys Thr His Ser 210 215 220 Phe Met His Trp Lys Met Arg Ser His Phe Asn Arg Lys Phe Arg Tyr 225 230 235 240 Glu Leu Gln Ile Gln Lys Arg Met Gln Pro Val Ile Thr Glu Gln Val 245 250 255 Arg Asp Arg Thr Ser Phe Gln Leu Leu Asn Pro Gly Thr Tyr Thr Val 260 265 270 Gln Ile Arg Ala Arg Glu Arg Val Tyr Glu Phe Leu Ser Ala Trp Ser 275 280 285 Thr Pro Gln Arg Phe Glu Cys Asp Gln Glu Glu Gly Ala Asn Thr Arg 290 295 300 Ala Trp Arg Thr Ser Leu Leu Ile Ala Leu Gly Thr Leu Leu Ala Leu 305 310 315 320 Val Cys Val Phe Val Ile Cys Arg Arg Tyr Leu Val Met Gln Arg Leu 325 330 335 Phe Pro Arg Ile Pro His Met Lys Asp Pro Ile Gly Asp Ser Phe Gln 340 345 350 Asn Asp Lys Leu Val Val Trp Glu Ala Gly Lys Ala Gly Leu Glu Glu 355 360 365 Cys Leu Val Thr Glu Val Gln Val Val Gln Lys Thr 370 375 380 <210> 2 <211> 336 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro 1 5 10 15 Gly Ser Thr Gly Thr Lys Glu Asp Pro Asn Pro Pro Ile Thr Asn Leu 20 25 30 Arg Met Lys Ala Lys Ala Gln Gln Leu Thr Trp Asp Leu Asn Arg Asn 35 40 45 Val Thr Asp Ile Glu Cys Val Lys Asp Ala Asp Tyr Ser Met Pro Ala 50 55 60 Val Asn Asn Ser Tyr Cys Gln Phe Gly Ala Ile Ser Leu Cys Glu Val 65 70 75 80 Thr Asn Tyr Thr Val Arg Val Ala Asn Pro Pro Phe Ser Thr Trp Ile 85 90 95 Leu Phe Pro Glu Asn Ser Gly Lys Pro Trp Ala Gly Ala Glu Asn Leu 100 105 110 Thr Cys Trp Ile His Asp Val Asp Phe Leu Ser Cys Ser Trp Ala Val 115 120 125 Gly Pro Gly Ala Pro Ala Asp Val Gln Tyr Asp Leu Tyr Leu Asn Val 130 135 140 Ala Asn Arg Arg Gln Gln Tyr Glu Cys Leu His Tyr Lys Thr Asp Ala 145 150 155 160 Gln Gly Thr Arg Ile Gly Cys Arg Phe Asp Asp Ile Ser Arg Leu Ser 165 170 175 Ser Gly Ser Gln Ser Ser His Ile Leu Val Arg Gly Arg Ser Ala Ala 180 185 190 Phe Gly Ile Pro Cys Thr Asp Lys Phe Val Val Phe Ser Gln Ile Glu 195 200 205 Ile Leu Thr Pro Pro Asn Met Thr Ala Lys Cys Asn Lys Thr His Ser 210 215 220 Phe Met His Trp Lys Met Arg Ser His Phe Asn Arg Lys Phe Arg Tyr 225 230 235 240 Glu Leu Gln Ile Gln Lys Arg Met Gln Pro Val Ile Thr Glu Gln Val 245 250 255 Arg Asp Arg Thr Ser Phe Gln Leu Leu Asn Pro Gly Thr Tyr Thr Val 260 265 270 Gln Ile Arg Ala Arg Glu Arg Val Tyr Glu Phe Leu Ser Ala Trp Ser 275 280 285 Thr Pro Gln Arg Phe Glu Cys Asp Gln Glu Glu Gly Ala Asn Thr Arg 290 295 300 Ala Trp Arg Gly Gly Pro Pro Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys Gly 305 310 315 320 Gly Gly Leu Asn Asp Ile Phe Glu Ala Gln Lys Ile Glu Trp His Glu 325 330 335 <210> 3 <211> 301 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 3 Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro 1 5 10 15 Gly Ser Thr Gly Thr Lys Glu Gly Lys Pro Trp Ala Gly Ala Glu Asn 20 25 30 Leu Thr Cys Trp Ile His Asp Val Asp Phe Leu Ser Cys Ser Trp Ala 35 40 45 Val Gly Pro Gly Ala Pro Ala Asp Val Gln Tyr Asp Leu Tyr Leu Asn 50 55 60 Val 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gtctggagtg gcttggagta atatggtctg gcggaggcac aaattataat 180 tctcgtctca tgtccagact gagcatcacc aaggacaact ccaggagtca agtgttctta 240 aaaatgaaca gtctgcaaac tgatgacacc gccatatatt attgtgtaag agattggggt 300 aacttttact ttgactattg gggccaaggc accactctca cagtctcctc a 351 <210> 6 <211> 117 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 6 Gln Val Lys Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ala Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Gly 20 25 30 Asp Ile Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Val Ile Trp Ser Gly Gly Gly Thr Asn Tyr Asn Ser Arg Leu Met 50 55 60 Ser Arg Leu Ser Ile Thr Lys Asp Asn Ser Arg Ser Gln Val Phe Leu 65 70 75 80 Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Val 85 90 95 Arg Asp Trp Gly Asn Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr 100 105 110 Leu Thr Val Ser Ser 115 <210> 7 <211> 10 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 7 Gly Phe Ser Leu Thr Ser Gly Asp Ile Ser 1 5 10 <210> 8 <211> 16 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 8 Val Ile Trp Ser Gly Gly Gly Thr Asn Tyr Asn Ser Arg Leu Met Ser 1 5 10 15 <210> 9 <211> 9 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 9 Asp Trp Gly Asn Phe Tyr Phe Asp Tyr 1 5 <210> 10 <211> 11 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 10 Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 1 5 10 <210> 11 <211> 98 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 11 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Lys Val <210> 12 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 12 Glu Pro Lys Ser Cys Asp Arg Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 10 15 <210> 13 <211> 110 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 13 Ala Pro Glu Leu Leu 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Pro Pro Cys Pro Ala Pro 225 230 235 240 Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 245 250 255 Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 260 265 270 Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp 275 280 285 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Leu Leu Gln 290 295 300 Gly Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 305 310 315 320 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu 325 330 335 Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 340 345 350 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys 355 360 365 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 370 375 380 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 385 390 395 400 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 405 410 415 Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser 420 425 430 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 435 440 445 Leu Ser Leu Ser Pro Gly 450 <210> 70 <211> 318 <212> DNA <213> Mus musculus <400> 70 gacatccaga tgacccagtc tcctccagtc ctgtctgcat ctgtgggaga cagagtcact 60 ctcagctgca aagcaagtca gaatattaat aagaacttag actggtatca gcaaaagcat 120 ggagaagctc caaaactcct gatatatcat acaaacactt tgcaaatggg catcccatca 180 aggttcagtg gcagtggatc tggtacagat tacgcactca ccatcaccag cctgcagcct 240 gaagatgttg ccacatatta ctgctatcaa tataacagtg ggcccacgtt tggagctggg 300 accaagctgg aactgaga 318 <210> 71 <211> 106 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 71 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Pro Val Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gln Asn Ile Asn Lys Asn 20 25 30 Leu Asp Trp Tyr Gln Gln Lys His Gly Glu Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr His Thr Asn Thr Leu Gln Met Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ala Leu Thr Ile Thr Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Tyr Gln Tyr Asn Ser Gly Pro Thr 85 90 95 Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Arg 100 105 <210> 72 <211> 11 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 72 Lys Ala Ser Gln Asn Ile Asn Lys Asn Leu Asp 1 5 10 <210> 73 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 73 His Thr Asn Thr Leu Gln Met 1 5 <210> 74 <211> 8 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 74 Tyr Gln Tyr Asn Ser Gly Pro Thr 1 5 <210> 75 <211> 10 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 75 Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Arg 1 5 10 <210> 76 <211> 213 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SYNTHETIC CONSTRUCT <400> 76 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Pro Val Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gln Asn Ile Asn Lys Asn 20 25 30 Leu Asp Trp Tyr Gln Gln Lys His Gly Glu Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr His Thr Asn Thr Leu Gln Met Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ala Leu Thr Ile Thr Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Tyr Gln Tyr Asn Ser Gly Pro Thr 85 90 95 Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Arg Arg Thr Val Ala Ala Pro 100 105 110 Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr 115 120 125 Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys 130 135 140 Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu 145 150 155 160 Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser 165 170 175 Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala 180 185 190 Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe 195 200 205 Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 77 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SYNTHETIC CONSTRUCT <400> 77 Gln Leu Gln Gly Leu Leu Gln Gly Gly 1 5 <210> 78 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SYNTHETIC CONSTRUCT <400> 78 Leu Leu Gln Gly 1 <210> 79 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SYNTHETIC CONSTRUCT <400> 79 Leu Ser Leu Ser Gln Gly 1 5 <210> 80 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SYNTHETIC CONSTRUCT <400> 80 Gly Gly Gly Leu Leu Gln Gly Gly 1 5 <210> 81 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SYNTHETIC CONTRUCT <400> 81 Gly Leu Leu Gln Gly 1 5 <210> 82 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SYNTHETIC CONSTRUCT <400> 82 Leu Leu Gln Gly Ser Pro Leu Ala Gln Ser His Gly Gly 1 5 10 <210> 83 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SYNTHETIC CONSTRUCT <400> 83 Gly Leu Leu Gln Gly Gly Gly 1 5 <210> 84 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SYNTHETIC CONSTRUCT <400> 84 Gly Leu Leu Gln Gly Gly 1 5 <210> 85 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SYNTHETIC CONSTRUCT <400> 85 Gly Leu Leu Gln 1 <210> 86 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SYNTHETIC CONSTRUCT <400> 86 Leu Leu Gln Leu Leu Gln Gly Ala 1 5 <210> 87 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SYNTHETIC CONSTRUCT <400> 87 Leu Leu Gln Gly Ala 1 5 <210> 88 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SYNTHETIC CONSTRUCT <400> 88 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Claims (47)

  1. 서열식별번호: 27의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 30의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는, CD123에 특이적으로 결합하는 단리된 항체.
  2. ATCC 수탁 번호 PTA-124283을 갖는 발현 벡터에 의해 생산된 중쇄 가변 영역 및
    ATCC 수탁 번호 PTA-124284를 갖는 발현 벡터에 의해 생산된 경쇄 가변 영역
    을 포함하는, CD123에 특이적으로 결합하는 단리된 항체.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 특정 위치 (specific site)에서 조작된 아실 공여자 글루타민-함유 태그를 포함하는 항체.
  4. 제3항에 있어서, 아실 공여자 글루타민-함유 태그가 Q, LQG, LLQGG (서열식별번호: 77), LLQG (서열식별번호: 78), LSLSQG (서열식별번호: 79), GGGLLQGG (서열식별번호: 80), GLLQG (서열식별번호: 81), LLQ, GSPLAQSHGG (서열식별번호: 82), GLLQGGG (서열식별번호: 83), GLLQGG (서열식별번호: 84), GLLQ (서열식별번호: 85), LLQLLQGA (서열식별번호: 86), LLQGA (서열식별번호: 87), LLQYQGA (서열식별번호: 88), LLQGSG (서열식별번호: 89), LLQYQG (서열식별번호: 90), LLQLLQG (서열식별번호: 91), SLLQG (서열식별번호: 92), LLQLQ (서열식별번호: 93), LLQLLQ (서열식별번호: 94), LLQGR (서열식별번호: 95), LLQGPP (서열식별번호: 96), LLQGPA (서열식별번호: 97), GGLLQGPP (서열식별번호: 98), GGLLQGA (서열식별번호: 99), LLQGPGK (서열식별번호: 100), LLQGPG (서열식별번호: 101), LLQGP (서열식별번호: 102), LLQP (서열식별번호: 103), LLQPGK (서열식별번호: 104), LLQAPGK (서열식별번호: 105), LLQGAPG (서열식별번호: 106), LLQGAP (서열식별번호: 107) 및 LLQLQG (서열식별번호: 108)로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 것인 항체.
  5. 제4항에 있어서, 아실 공여자 글루타민-함유 태그가 LLQG (서열식별번호: 78)인 항체.
  6. 제1항 또는 제2항에 있어서, 링커를 포함하는 항체.
  7. 제6항에 있어서, 링커가 절단가능한 링커인 항체.
  8. 제6항에 있어서, 링커가 Ac-Lys-Gly (아세틸-리신-글리신), 아미노카프로산, Ac-Lys-β-Ala (아세틸-리신-β-알라닌), 아미노-PEG2 (폴리에틸렌 글리콜)-C2, 아미노-PEG3-C2, 아미노-PEG6-C2, Ac-Lys-Val-Cit-PABC (아세틸-리신-발린-시트룰린-p-아미노벤질옥시카르보닐), 아미노-PEG6-C2-Val-Cit-PABC, 아미노카프로일-Val-Cit-PABC, [(3R,5R)-1-{3-[2-(2-아미노에톡시)에톡시]프로파노일}피페리딘-3,5-디일]비스-Val-Cit-PABC, [(3S,5S)-1-{3-[2-(2-아미노에톡시)에톡시]프로파노일}피페리딘-3,5-디일]비스-Val-Cit-PABC, 푸트레신 및 Ac-Lys-푸트레신으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 항체.
  9. 제8항에 있어서, 링커가 Ac-Lys-Val-Cit-PABC (아세틸-리신-발린-시트룰린-p-아미노벤질옥시카르보닐)인 항체.
  10. 항체가 작용제에 접합된, 제1항 또는 제2항의 항체의 접합체.
  11. 제10항에 있어서, 작용제가 세포독성제, 면역조정제, 영상화제, 치료 단백질, 생체중합체 및 올리고뉴클레오티드로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 접합체.
  12. 제11항에 있어서, 세포독성제가 안트라시클린, 아우리스타틴, 캄프토테신, 콤브레타스타틴, CBI 이량체, 시클로프로필피롤로인돌린 (CPI) 이량체, CTI 이량체, 돌라스타틴, 두오카르마이신, 에네디인, 겔다나마이신, 인돌리노-벤조디아제핀 이량체, 메이탄신, 퓨로마이신, 피롤로벤조디아제핀 이량체, 탁산, 빈카 알칼로이드, 튜부리신, 헤미아스텔린, 스플라이세오스타틴, 플라디에놀리드 및 그의 입체이성질체, 동배체, 유사체 또는 유도체로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 접합체.
  13. 제12항에 있어서, 세포독성제가 CPI 이량체인 접합체.
  14. 제13항에 있어서, CPI 이량체가 C31H31Cl2N4O7P 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 용매화물, 예컨대 C31H31Cl2N4O7PㆍC2HF3O2인 접합체.
  15. 제11항에 있어서, 식: 항체-(아실 공여자 글루타민-함유 태그)-(링커)-(세포독성제)를 포함하는 접합체.
  16. 제15항에 있어서, 아실 공여자 글루타민-함유 태그가 아미노산 서열 LLQG (서열식별번호: 78)을 포함하고, 링커가 아세틸-리신-발린-시트룰린-p-아미노벤질옥시카르보닐을 포함하는 것인 접합체.
  17. 서열식별번호: 27을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 30을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체, 링커 및 작용제를 포함하는 항체-약물 접합체.
  18. 서열식별번호: 27을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 30을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체, 아세틸-리신-발린-시트룰린-p-아미노벤질옥시카르보닐 (Ac-Lys-Val-Cit-PABC) 링커, 및 작용제를 포함하는 항체-약물 접합체.
  19. 서열식별번호: 27을 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 30을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체, 아세틸-리신-발린-시트룰린-p-아미노벤질옥시카르보닐 (Ac-Lys-Val-Cit-PABC) 링커, 및 시클로프로필피롤로인돌린 (CPI) 이량체를 포함하는 항체-약물 접합체.
  20. 치료 유효량의 제1항 또는 제2항의 항체 또는 상기 항체가 작용제에 접합되어 있는 상기 항체의 접합체 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는, 암을 치료하기 위한 제약 조성물.
  21. 제1항 또는 제2항의 항체를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 단리된 폴리뉴클레오티드.
  22. 제21항의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터.
  23. 제1항 또는 제2항의 항체를 재조합적으로 생산하는 단리된 숙주 세포.
  24. 제23항의 숙주 세포를 항체가 생산되도록 하는 조건 하에 배양하는 단계, 및
    항체를 숙주 세포 또는 배양물로부터 단리하는 단계
    를 포함하는, 항체를 생산하는 방법.
  25. 제20항에 있어서, 대상체에서 CD123을 발현하는 세포와 연관된 암을 치료하기 위한 제약 조성물.
  26. 제25항에 있어서, 암이 급성 골수성 백혈병 (AML), 급성 림프구성 백혈병 (ALL), 모구성 형질세포양 수지상 세포 신생물 (BPDCN), 모발상 세포 백혈병, B-세포 비-호지킨 림프종 (NHL), 다발성 골수종, 악성 형질 세포 신생물, 호지킨 림프종, 결절성 림프구 우세형 호지킨 림프종, 칼러병(Kahler's disease) 및 골수종증, 형질 세포 백혈병, 형질세포종, B-세포 전림프구성 백혈병, 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 만성 골수성 백혈병 (CML), 여포성 림프종, 버킷 림프종(Burkitt's lymphoma), 변연부 림프종, 외투 세포 림프종, 대세포 림프종, 전구체 B-림프모구성 림프종, 골수성 백혈병, 미만성 대 B 세포 림프종, 점막-연관 림프 조직 림프종, 소세포 림프구성 림프종, 원발성 종격 (흉선) 대 B-세포 림프종, 림프형질세포성 림프종, 발덴스트룀 마크로글로불린혈증, 결절성 변연부 B 세포 림프종, 비장 변연부 림프종, 혈관내 대 B-세포 림프종, 원발성 삼출 림프종, 림프종성 육아종증, T 세포/조직구-풍부 대 B-세포 림프종, 원발성 중추 신경계 림프종, 원발성 피부 미만성 대 B-세포 림프종 (하지 유형), 고령자의 EBV 양성 미만성 대 B-세포 림프종, 염증과 연관된 미만성 대 B-세포 림프종, ALK-양성 대 B-세포 림프종, 형질모구성 림프종, HHV8-연관된 다중심적 캐슬만병에서 발생하는 대 B-세포 림프종, 미만성 대 B-세포 림프종과 버킷 림프종 사이의 중간 특색을 갖는 미분류 B-세포 림프종, 미만성 대 B-세포 림프종과 전형적 호지킨 림프종 사이의 중간 특색을 갖는 미분류 B-세포 림프종, 및 다른 B-세포 관련 림프종으로 이루어진 군으로부터 선택된 암인 제약 조성물.
  27. 제26항에 있어서, 암이 AML인 제약 조성물.
  28. 제20항에 있어서, CD123을 발현하는 악성 세포를 갖는 대상체에서 종양 성장 또는 진행을 억제하기 위한 제약 조성물.
  29. 제27항에 있어서, 대상체에서 CD123을 발현하는 악성 세포의 전이를 억제하기 위한 제약 조성물.
  30. 제20항에 있어서, CD123을 발현하는 악성 세포를 갖는 대상체에서 종양 퇴행을 유도하기 위한 제약 조성물.
  31. 제1항 또는 2항의 항체를 AcLysValCitPABC-DMAE-CO_CPI-000638314 (AcLysPABC-CPI-8314)에 접합시키는 방법이며,
    30 내지 100 mM의 KPO4 및 150 내지 200 mM의 NaCl을 포함하는 완충제 중에 항체 및 AcLysPABC-CPI-8314를 포함하는 조성물을 제조하는 단계;
    상기 조성물에 박테리아 트랜스글루타미나제를 첨가하는 단계; 및
    조성물을 인큐베이션시켜 항체가 AcLysPABC-CPI-8314에 접합되도록 하는 단계
    를 포함하는 방법.
  32. 제31항에 있어서, 조성물의 pH가 7인 방법.
  33. 제31항에 있어서, 조성물이 항체 mg 당 0.5 내지 2 유닛 (U)의 박테리아 트랜스글루타미나제를 포함하는 것인 방법.
  34. 제31항에 있어서, 조성물이 항체 mg 당 1 U의 박테리아 트랜스글루타미나제를 포함하는 것인 방법.
  35. 제31항에 있어서, AcLysPABC-CPI-8314가 항체에 대해 10배 몰 과량으로 존재하는 것인 방법.
  36. 제31항에 있어서, 조성물을 연속적인 혼합과 함께 25℃에서 밤새 인큐베이션시키는 것인 방법.
  37. 제31항에 있어서, 조성물이 7.5% (v/v)의 디메틸 술폭시드 (DMSO)를 추가로 포함하는 것인 방법.
  38. 제31항에 있어서, 완충제가 30 mM의 KPO4 및 150 mM의 NaCl을 포함하는 것인 방법.
  39. 제31항에 있어서, 완충제가 100 mM의 KPO4 및 200 mM의 NaCl을 포함하는 것인 방법.
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