KR102329235B1

KR102329235B1 - Irak4 저해제로서 신규의 삼중고리 화합물

Info

Publication number: KR102329235B1
Application number: KR1020190148566A
Authority: KR
Inventors: 조희영; 임희종; 박우규; 정대영; 김현영; 윤새봄; 이정옥; 이흥경; 홍빅터석봉; 최지혜
Original assignee: 한국화학연구원
Priority date: 2018-11-21
Filing date: 2019-11-19
Publication date: 2021-11-22
Also published as: KR20200060269A; AU2019383845A1; CN113227095B; EP3885348A4; CN113227095A; JP2022507858A; AU2019383845B2; EP3885348A1; US20220009933A1; JP7233130B2; CN118894861A

Abstract

본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 삼중고리 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 자가면역질환 또는 종양의 예방 또는 치료용 약학적 조성물, 및 상기 삼중고리 화합물을 유효성분으로 함유하는 자가면역질환 또는 종양의 예방 또는 개선용 건강식품 조성물에 관한 것이다.
[화학식 1]

본 발명의 상기 화학식 1로 표시되는 삼중고리 화합물은 IRAK4에 대한 저해 활성이 우수하므로, 자가면역질환 또는 종양의 예방, 치료 또는 개선에 유용하게 사용될 수 있다.

Description

IRAK4 저해제로서 신규의 삼중고리 화합물{Novel tricyclic compound as IRAK4 inhibitors}

본 발명은 IRAK4 저해제로서 신규의 삼중고리 화합물, 상기 삼중고리 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 자가면역질환 또는 종양의 예방 또는 치료용 약학적 조성물, 및 상기 삼중고리 화합물을 유효성분으로 함유하는 자가면역질환 또는 종양의 예방 또는 개선용 건강식품 조성물에 관한 것이다.

IRAK4(Interleukin-1 receptor(IL-1R) associated kinase 4)는 골수성 세포 및 림프구 세포에서 톨유사수용체(TLR)와 인터루킨-1 수용체(IL-1R)의 신호가 세포 내로 전달되는 것을 매개하는 주요한 인산화효소이며, 희귀면역질환인 전신 홍반성 루프스(SLE) 및 림프암 등의 치료타겟으로 활발히 연구되고 있다(Current Topics in Medicinal Chemistry, 2009, 9, 724-737).

루푸스는 원인이 불분명한 자가면역질환으로서 발열, 관절통, 관절염, 부종, 피로, 얼굴홍반, 광과민성, 빈혈, 심근염, 늑막염 및 신경이상의 11가지 기준 중 4가지 이상에 해당되면, 환자의 병력과 신체검진, 실험실 검사 및 면역검사 등을 종합하여 진단한다. 루푸스의 치료제로는 1955년에 승인받은 하이드록시클로로퀸(hydroxychloroquine)이 있으며, 대증요법제제로서 스테로이드, 비스테로이성 소염진통제(NSAID) 및 플라케닐(Plaquenil) 등이 사용되고 있다. 최초의 루푸스 신약인 벤리스타(Benlysta: belimumab, GSK, 2010년)는 BlyS(BAFF)의 B세포 수용체 결합을 억제하여 비정상적인 B 림프구를 억제하는 항체주사제이지만, 비용이 높을 뿐만 아니라 질환을 크게 개선시키지 못하는 문제가 있다.

미만성 거대 B세포 림프종(DLBCL), 특히 활성화 B세포 아형(ABC-DLBCL)의 30% 정도에서는 MYD88 L265P 돌연변이가 발견되며, 이러한 변이암에서는 NF-κB가 과도하게 활성화되어 염증성 사이토카인을 높은 농도로 분비하고 이는 종양의 나쁜 예후와 관련되어진다(J. Exp. Med. 2015: 212, 2189-2201).

IRAK4는 460개의 아미노산으로 되어 있는 IRAK족 구성(IRAK family member)으로서 DNA/RNA를 포함하는 리간드에 의해 톨유사수용체 7/9(TLR7/9)가 활성화되어 인터페론(IFN)과 염증성 사이토카인이 분비되는 것을 조절하며, 백혈구에서 가장 많이 발현되고 있으며 그 다음은 부신피질, 림프절, 갑상선 등의 면역기관세포 순서로 높은 발현을 보인다(PLos ONE. 2012. 7. e49771). IRAK4는 형질세포양수지상세포(pDCs: plasmacytoid dendritic cells)에서 인터페론-α(IFN-α: Interferon-α) 등 염증성 사이토카인의 분비를 매개하므로, IRAK4 저해는 루프스 질환의 바이오 마커인 인터페론-α의 분비를 억제시킬 수 있으며, 실제로 IRAK4, IRAK1의 발현이 억제된 마우스는 루푸스가 발병되지 않고, TLR7/9의 올리고뉴클레오티드 저해제는 동물모델에서 루푸스를 개선시키는 것으로 관찰되었다(J Immunol 2011; 186:1279-1288). 따라서 IRAK4의 저해 화합물은 자가면역질환 및 종양을 치료하거나 개선시킬 가능성이 매우 높다.

IRAK4 저해 화합물은 지난 십여 년간 지속적으로 연구되어져 왔다.

2008년에는 다양한 구조의 아마이드 및 이미다조피리딘 유도체에 대한 3편의 연속보고가 이루어진 바 있다(Bioorg. Med. Chem. Lett. 2008: 18, 3211-3214, 3291-3295, 3656-3660).

IRAK4를 강력하게 저해하는 퀴나졸린 유도체 역시 보고되었으며, 보고된 23번 화합물은 동물실험에서 R848에 의해 유도되는 IL-6를 30% 이상(30 mg/kg), 90% 이상(100 mg/kg) 저해하는 것으로 나타났다(Bioorg. Med. Chem. Lett. 2017: 27, 2721-2726).

이외에도 아미도피라졸 및 아미노피리미디논 유도체로서 다수의 화합물이 공지되었으며(WO2012-129258A1, WO2013-066729A1), 아울러 nM 수준의 IC₅₀ 값을 갖는 헤테로사이클이 치환된 피리딜 화합물도 공지된 바 있다(WO2013-106612A1).

한편, WO2017-033093A1은 IRAK4 조정제로서의 비시클릭-융합된 헤테로아릴 또는 아릴 화합물을 공지하였으며, IRAK4 키나제 활성의 억제제는 자가면역, 종양, 염증, 심혈관 질환, 암 및 대사 질환을 포함한 다양한 질환에 대한 잠재적 치료제임을 다시 확인하였다.

또한, 미국의 제약회사인 화이자는 IRAK4를 저해하는 화합물 PF-06650833을 류마티스 관절염 치료제로서 임상2상을 실시하고 있다.

: PF-06650833

이에, 본 출원인은 IRAK4를 강력하게 저해하며 키나제 선택성이 우수한 새로운 구조의 저해제를 개발하기 위하여, IRAK4 효소에 대한 약효평가, 염증성 사이토카인의 분비변화 및 TLR4/7/9의 신호전달에 의한 염증성 프로모터의 활성변화 등을 평가하고 전신감염 동물모델과 이종이식 림프암 동물모델에서 활성을 확인하여 최적화된 IRAK4 신규 저해구조를 알아내었다.

WO2012-129258A1 WO2013-066729A1 WO2013-106612A1 WO2017-033093A1

본 발명의 목적은 IRAK4를 강력하게 저해하며 키나제 선택성이 우수한 신규 구조의 삼중고리 화합물을 제공하는 데 있다.

본 발명의 다른 목적은 상기 삼중고리 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 자가면역질환 또는 종양의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 데 있다.

본 발명의 또 다른 목적은 상기 삼중고리 화합물을 유효성분으로 함유하는 자가면역질환 또는 종양의 예방 또는 개선용 건강식품 조성물을 제공하는 데 있다.

본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 삼중고리 화합물을 제공한다.

[화학식 1]

[A₁및 A₂는 각각 독립적으로 N 또는 CH이며,

A₃은 N 또는 CR₁이며,

R₁은 수소, 할로겐, -COOR₅ 또는 (C3-C12)헤테로아릴이며,

R₂는 수소, 아미노기, -COOR₆, (C1-C12)헤테로아릴, (C3-C12)사이클로알킬과 융합된 (C1-C12)헤테로아릴, (C6-C12)아릴, 또는 질소, 산소 및 황으로부터 선택되는 하나 이상의 헤테로원자를 포함하는 5원 내지 7원의 헤테로사이클릭아미노이며,

R₃은 수소 또는 (C6-C12)아릴이며,

R₄는 -L₁-L₂-R₇이며,

R₂의 아미노기(-NH₂), (C1-C12)헤테로아릴 또는 (C6-C12)아릴은 (C1-C4)알킬, 할로겐으로 치환된 (C1-C4)알킬, (C1-C4)티오알킬, 아미노기(-NH₂), 메틸아미노기(-NHCH₃), 디메틸아미노기(-N(CH₃)₂), -CH₂OH, (C1-C4)알콕시, 히드록시기(-OH), 할로겐, 메탄술포닐기(-SO₂CH₃), -SO₂N(CH₃)₂, 니트로기(-NO₂), 사이아노기(-CN),

,

,

,

, 및

로 이루어진 군에서 선택된 적어도 하나 이상의 그룹으로 임의로 치환될 수 있으며,

R₃의 (C6-C12)아릴은 니트로기(-NO₂)로 임의로 치환될 수 있으며,

L₁은 -N(R₈)- 또는 -O-이며,

L₂는 -(CH₂)_m-,

,

또는

이며, m은 2 내지 5의 정수이며,

R₇은 -N(R₉)₂, -OR₁₀, -SO₂CH₃, -SO₂N(CH₃)₂, 또는 질소, 산소 및 황으로부터 선택되는 하나 이상의 헤테로원자를 포함하는 5원 내지 7원의 헤테로사이클릭아미노이며,

R₅는 (C1-C4)알킬이며,

R₆은 (C1-C4)알킬이며,

R₈은 수소 또는 (C1-C4)알킬이며,

R₉는 (C1-C4)알킬이며,

R₁₀은 (C1-C4)알킬이며,

R₇의 헤테로사이클릭아미노는 -SO₂CH₃ 및 -COOC(CH₃)₃(-Boc)로 이루어진 군에서 선택된 적어도 하나 이상의 그룹으로 임의로 치환될 수 있으며,

A₃이CR₁이고 R₁이 할로겐, -COOR₅ 또는 (C3-C12)헤테로아릴인 경우 L₂는 -(CH₂)_m-이 아니며,

L₂가 -(CH₂)_m-인 경우 R₇은 -N(R₉)₂및 -OR₁₀중 어느 것도 아니며,

A₃이CR₁이면 R₁및 R₂가 모두 수소인 경우는 제외된다.]

상기 화학식 1에서, Boc는 t-부틸옥시카보닐(t-butyloxycarbonyl: -COOC(CH₃)₃)이다.

상기 화학식 1에서, 상기 R₁인 (C3-C12)헤테로아릴은 바람직하게

,

,

또는

이다.

상기 화학식 1에서, 상기 R₂인 (C1-C12)헤테로아릴, (C3-C12)사이클로알킬과 융합된 (C1-C12)헤테로아릴, 또는 치환된 (C1-C12)헤테로아릴은 바람직하게 하기에서 선택되는 어느 하나이다:

.

상기 화학식 1에서, 상기 R₂인 (C6-C12)아릴 또는 치환된 (C6-C12)아릴은 바람직하게 하기에서 선택되는 어느 하나이다:

.

상기 화학식 1에서, 상기 R₃인 (C6-C12)아릴 또는 치환된 (C6-C12)아릴은 바람직하게

또는

이다.

상기 화학식 1에서, 상기 R₄는 바람직하게 하기에서 선택되는 어느 하나이다:

.

본 발명에 따른 상기 화학식 1로 표시되는 삼중고리 화합물을 보다 구체적으로 예시하면 다음과 같다:

.

본 발명의 상기 화학식 1로 표시되는 삼중고리 화합물은 바람직하게 하기 [반응식 1-1], [반응식 1-2], [반응식 2], [반응식 3] 또는 [반응식 4]에 의하여 제조될 수 있다.

[반응식 1-1]

상기 반응식 1-1에서 R₁, R₂, R₃ 및 R₄는 상기 화학식 1에서 정의된 바와 같다. 상기 반응식 1-1은 화학식 1의 A₁이 CH, A₂가 N, A₃이CR₁인 경우에 대한 제조에 해당하며, 하기의 4단계 과정을 포함하여 이루어진다:

1) 공지의 방법(Adv. Synth. Catal. 2010, 352, 1033-1038)을 사용하여, 화합물(1-1)로부터 화합물(2-1)의 인돌 화합물을 제조하는 단계;

2) 공지의 방법(BioOrg. Med Chem. 2012, 20, 6123)을 사용하여, 화합물(2-1)로부터 화합물(3-1)을 제조하는 단계;

3) 화합물(3-1)을 옥시 염화인(phosphorus oxychloride)과 반응시켜 화합물(4-1)을 제조하는 단계; 및

4) 공지의 방법을 사용하여, 화합물(4-1)의 4번 위치의 염소(-Cl)기를 R₄로 치환하여 화합물(5-1)을 제조하는 단계.

[반응식 1-2]

상기 반응식 1-2에서 R₁, R₂, R₃ 및 R₄는 상기 화학식 1에서 정의된 바와 같으며, X는 할로겐을 나타낸다. 상기 반응식 1-2는 화학식 1의 A₁이 CH, A₂가 N, A₃이CR₁인 경우에 대한 제조에 해당하며, 하기의 5단계 과정을 포함하여 이루어진다:

1) 공지의 방법(Adv. Synth. Catal. 2010, 352, 1033-1038)을 사용하여, 화합물(1-2)로부터 화합물(2-2)의 인돌 화합물을 제조하는 단계;

2) 공지의 방법(BioOrg. Med Chem. 2012, 20, 6123)을 사용하여, 화합물(2-2)로부터 화합물(3-2)을 제조하는 단계;

3) 화합물(3-2)을 옥시 염화인(phosphorus oxychloride)과 반응시켜 화합물(4-2)을 제조하는 단계;

4) 공지의 방법을 사용하여, 화합물(4-2)의 4번 위치의 염소(-Cl)기를 R₄로 치환하여 화합물(5-2)를 제조하는 단계; 및

5) 화합물(5-2)의 치환기 X로부터 R₁및 R₂를 도입하여 화합물(6)을 제조하는 단계.

[반응식 2]

상기 반응식 2에서 R₁, R₂, R₃ 및 R₄는 상기 화학식 1에서 정의된 바와 같으며, Z는 PMB(p-Methoxybenzyl, p-메톡시벤질)를 나타낸다. 상기 반응식 2는 화학식 1의 A₁이 CH, A₂가 N, A₃이CR₁인 경우에 대한 제조에 해당하며, 하기의 4단계 과정을 포함하여 이루어진다:

1) 공지의 방법(WO2006-111648A1)을 사용하여, 화합물(7)로부터 화합물(8)을 제조하는 단계;

2) 화합물(8)을 옥시 염화인(phosphorus oxychloride)과 반응시켜 화합물(9)을 제조하는 단계;

3) 공지의 방법을 사용하여, 화합물(9)의 4번 위치의 염소(-Cl)기를 R₄로 치환하여 화합물(10)을 제조하는 단계; 및

4) 화합물(10)의 Z기를 수소로 치환하여 화합물(11)을 제조하는 단계.

[반응식 3]

상기 반응식 3에서 R₁, R₂, R₃ 및 R₄는 상기 화학식 1에서 정의된 바와 같다. 상기 반응식 3은 화학식 1의 A₁및 A₂가 CH, A₃이CR₁인 경우에 대한 제조에 해당하며, 하기의 5단계 과정을 포함하여 이루어진다:

1) 공지의 방법(Tetrahedron 65 (2009) 5427-5437)을 사용하여, 화합물(12)로부터 화합물(13)을 제조하는 단계;

2) 공지의 방법(WO2010-025872A2)을 사용하여, 화합물(13)으로부터 화합물(14)를 제조하는 단계;

3) 화합물(14)로부터 R₁및 R₂를 도입하여 화합물 (15)를 제조하는 단계;

4) 공지의 방법을 사용하여, 화합물 (15)의 4번 위치의 염소(-Cl)기를 R₄로 치환하여 화합물(16)을 제조하는 단계; 및

5) 화합물(16)의 -SO₂Ph 기를 수소로 치환하여 화합물(17)을 제조하는 단계.

[반응식 4]

상기 반응식 4에서 R₁, R₂, R₃ 및 R₄는 상기 화학식 1에서 정의된 바와 같다. 상기 반응식 4는 화학식 1의 A₁및 A₂가 N, A₃이CR₁인 경우에 대한 제조에 해당하며, 하기의 5단계 과정을 포함하여 이루어진다:

1) 공지의 방법(BioOrg. Med Chem.Lett. 2003, 13, 2003-2007)을 사용하여, 화합물(18)로부터 화합물(19)를 제조하는 단계;

2) 공지의 방법(BioOrg. Med Chem. 2012, 20, 6123)을 사용하여, 화합물(19)로부터 화합물(20)을 제조하는 단계;

3) 화합물(20)을 옥시 염화인(phosphorus oxychloride)과 반응시켜 화합물(21)을 제조하는 단계;

4) 공지의 방법을 사용하여, 화합물(21)의 4번 위치의 염소(-Cl)기를 R₄로 치환하여 화합물(22)를 제조하는 단계; 및

5) 화합물(22)의 치환기 염소(-Cl)기로부터 R₁및 R₂를 도입하여 화합물(23)을 제조하는 단계.

본 발명의 상기 화학식 1로 표시되는 삼중고리 화합물은 약학적으로 허용가능한 염의 형태로 사용될 수 있다. 상기 염으로는 약학적으로나 생리학적으로 허용되는 다양한 유기산 또는 무기산에 의해 형성된 산부가염이 유용하다. 적합한 유기산으로는, 예를 들면 카르복실산, 포스폰산, 술폰산, 아세트산, 프로피온산, 옥탄산, 데칸산, 글리콜산, 락트산, 푸마르산, 숙신산, 아디프산, 말산, 타르타르산, 시트르산, 글루탐산, 아스파르트산, 말레산, 벤조산, 살리실산, 프탈산, 페닐아세트산, 벤젠술폰산, 2-나프탈렌술폰산, 메틸황산, 에틸황산, 도데실황산 등을 사용할 수 있고, 적합한 무기산으로는, 예를 들면 염산, 황산 또는 인산 등을 사용할 수 있다. 또한, 본 발명의 상기 화학식 1로 표시되는 삼중고리 화합물은 약학적으로 허용가능한 염뿐만 아니라, 통상의 방법에 의해 제조될 수 있는 모든 염, 수화물 및 용매화물의 형태로도 사용될 수 있다.

한편, 본 발명의 상기 화학식 1로 표시되는 삼중고리 화합물은 IRAK4를 저해하는 효능을 지니고 있으므로, 자가면역질환 및 종양의 예방, 치료 및 개선에 효과적이다.

이에 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 삼중고리 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 자가면역질환 또는 종양의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다. 본 발명의 상기 약학적 조성물은 상기 화학식 1의 삼중고리 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염에 추가하여 동일 또는 유사한 기능을 나타내는 유효성분을 1종 이상 함유할 수 있다.

본 발명의 상기 약학적 조성물에 있어서, 상기 화학식 1의 삼중고리 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 임상 투여시에 경구 및 비경구의 여러 가지 제형으로 투여될 수 있는데, 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충전제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 제조될 수 있다.

경구투여를 위한 고형 제제에는 정제, 환자, 산제, 과립제, 캡슐제, 트로키제 등이 포함되며, 이러한 고형 제제는 본 발명의 상기 화학식 1의 삼중고리 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염에 전분, 탄산칼슘, 수크로오스(sucrose), 락토오스(lactose) 및 젤라틴 등에서 선택되는 적어도 하나 이상의 부형제를 섞어 조제될 수 있다. 또한, 단순한 부형제 외에 스테아린산 마그네슘, 탈크 등과 같은 윤활제들도 사용될 수 있다. 경구 투여를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제 또는 시럽제 등이 해당되는데, 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.

비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁용제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세롤, 젤라틴 등이 사용될 수 있다.

또한, 본 발명의 상기 화학식 1의 삼중고리 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 인체에 대한 투여량은 환자의 나이, 몸무게, 성별, 투여형태, 건강상태 및 질환 정도에 따라 달라질 수 있으며, 몸무게가 70 kg인 성인 환자를 기준으로 할 때, 일반적으로 0.1 ~ 1000 mg/일이며, 바람직하게는 1 ~ 500 mg/일이며, 또한 의사 또는 약사의 판단에 따라 일정시간 간격으로 1일 1회 내지 수회로 분할 투여할 수도 있다.

본 발명의 상기 약학적 조성물은 자가면역질환 또는 종양의 예방 또는 치료를 위하여 단독으로, 또는 수술, 호르몬 치료, 화학 치료 및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.

나아가 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 삼중고리 화합물을 유효성분으로 함유하는 자가면역질환 또는 종양의 예방 또는 개선용 건강식품 조성물을 제공한다. 본 발명의 상기 건강식품 조성물에서, 상기 화학식 1의 삼중고리 화합물을 식품 첨가물로 사용할 경우, 상기 유도체를 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다.

본 발명의 상기 건강식품 조성물에 있어서, 유효 성분의 함량은 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치 등의 개선)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조 시에 상기 화학식 1의 삼중고리 화합물을 원료에 대하여 15 중량부 이하, 바람직하게는 10 중량부 이하의 양으로 첨가된다. 하지만 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 유효 성분의 함량은 상기 범위일 수 있으나, 안전성 면에서 아무런 문제가 없으면 유효 성분의 함량은 상기 범위 이상일 수도 있다.

본 발명의 상기 약학적 조성물 및 상기 건강식품 조성물에 있어서, 상기 자가면역 질환은 바람직하게 다중 경화증, 건선, 전신 염증 질환, 소장 염증성 질환, 궤양 대장염, 크론 질병, 류마티스 관절염 및 다발성관절염, 국부적 및 전신성 강피증, 전신 홍반 루푸스, 원반 모양의 홍반 루푸스, 피부 루푸스, 피부근염, 다발성 근염, 쇼그렌 증후군, 결절성의 전층동맥염, 자가면역 장질환, 아토피성 피부염 또는 증식성 사구 체신염 등이다.

본 발명의 상기 약학적 조성물 및 상기 건강식품 조성물에 있어서, 상기 종양은 바람직하게 급성 골수 백혈병, 골수 이형성 증후군, 급성 림프구성 백혈병 또는 만성 골수 백혈병 등이다.

본 발명의 상기 화학식 1로 표시되는 삼중고리 화합물은 IRAK4에 대한 저해 활성이 우수하므로, 이와 관련된 각종 질환의 예방, 치료 또는 개선에 유효하며, IRAK4 저해 활성과 관련된 것으로 알려진 자가면역질환 또는 종양의 예방, 치료 또는 개선에 유용하게 사용될 수 있다.

도 1은 본 발명의 삼중고리 화합물의 전신 염증질환에 대한 억제효과를 나타낸다.
도 2는 본 발명의 삼중고리 화합물의 전신 염증질환에 대한 억제효과를 나타낸다.
도 3은 본 발명의 삼중고리 화합물의 항종양효과를 나타낸다.
도 4는 본 발명의 삼중고리 화합물의 항종양효과를 나타낸다.

이하, 실시예 및 실험예를 통해 본 발명을 상세히 설명한다. 단, 하기의 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.

[제조예 1] 6-브로모-4-클로로-9H-피리미도[4,5-b]인돌(화합물 4a)의 제조

단계 1. 화합물 2a 제조

화합물 1a(36 g, 143 mmol)을 디클로로메탄(300 mL)에 녹인 후 트리에틸아민(40 mL, 287 mmol)을 가하고 0^oC에서 삼불화아세트산무수물(trifluoroacetic anhydride)(30 mL, 216 mmol)을 천천히 가한다. 반응종결 후 증류수(2 X 300 mL)로 세척 후 황산나트륨(Na₂SO₄)으로 수분을 제거하고 감압 농축하여 삼불화아세트아미드(trifluoroacetamide) 유도체 50g을 얻었다.

삼불화아세트아미드 유도체를 DMSO(디메틸설폭사이드)-증류수(1:1; 280 mL)에 녹이고, 메틸시아노아세테이트(15 mL, 170 mmol), DL-프롤린(3.3 g, 18.8 mmol), K₂CO₃(40g, 289mmol), CuI(2.73 g, 14.3 mmol)을 가하고, 60^oC에서 14시간 교반하였다. 반응물을 실온으로 냉각 후 고체을 여과하고 메탄올(2 X 100 mL)로 세척 후 여액을 감압농축 하였다. 잔류물에 에틸 아세테이트(EA, 500 mL)와 테트라하이드로퓨란(200 mL)를 가하고 증류수(2 x 200 mL)로 세척 후 황산나트륨(Na₂SO₄)으로 수분을 제거하고 감압 농축한다. 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(헥산:에틸 아세테이트 = 1:5 → 1:2)로 분리하여 화합물 2a를 얻었다(흰색고체, 32 g, 수율 83%).

2a: ¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 3.76(s, 3H), 6.82(s, 2H), 6.99(dd, J = 8.3, 2.0 Hz, 1H), 7.06(d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.61(d, J = 1.8 Hz, 1H), 10.77(s, 1H).

단계 2. 화합물 3a 제조

화합물 2a(15 g, 55.7 mmol)을 포름아마이드(100 mL)에 녹인 후 질소 존재 하에서 185^oC에서 3시간 교반하였다. 반응물을 실온으로 냉각 후, 증류수(100 mL)를 가하고 고체를 여과 후 증류수로 세척(2 X 100 mL)하여 갈색 고체를 얻었다. 건조 후 실리카 겔 관 크로마토그래피(헥산:에틸 아세테이트 = 1:1)로 분리하여 화합물 3a을 얻었다(갈색고체, 9.6 g, 수율 65%).

3a: ¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 7.46(d, J = 2.0 Hz, 2H), 8.06(s, 1H), 8.16(s, 1H), 12.33(s, 1H), 12.37(s, 1H).

단계3. 화합물 4a 제조

화합물 3a(9.2 g, 34.8 mmol)을 POCl₃(phosphorus oxychloride, 옥시 염화인)(800 mL)에 분산 후 110^oC에서 14시간 교반하였다. 반응물을 감압농축 후 얼음물(100 mL)를 가하고 고체를 여과 후 얼음물로 세척(2 X 100 mL)하여 갈색 고체를 얻었다. 건조 후 실리카 겔 관 크로마토그래피(헥산:에틸 아세테이트 = 1:3)로 분리하여 화합물 4a를 얻었다(갈색고체, 8.4 g, 수율 85%).

4a: ¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 7.62(d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.79(dd, J = 8.5, 1.7 Hz, 1H), 8.38(d, J = 1.6 Hz, 1H), 8.83 (s, 1H), 12.96 (s, 1H).

[제조예 2] 메틸 4-클로로-9H-피리미도[4,5-b]인돌-6-카르복실레이트(화합물 4b)의 제조

상기 제조예 1과 동일한 방법으로 화합물 1b로부터 3단계로 화합물 4b를 제조하였다.

4b: ¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 1.38(t, J = 7.1 Hz, 3H), 4.38(q, J = 7.1 Hz, 2H), 7.70(d, J = 8.6 Hz, 1H), 8.19(dd, J = 8.6, 1.3 Hz, 1H), 8.80(s, 1H), 8.85(s, 1H), 13.13(s, 1H).

[제조예 3] 7-브로모-4-클로로-9H-피리미도[4,5-b]인돌(화합물 4c)의 제조

상기 제조예 1과 동일한 방법으로 화합물 1c로부터 3단계로 화합물 4c를 제조하였다.

4c: ¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 7.60(dd, J = 8.4, 1.8 Hz, 1H), 7.81(d, J = 1.7 Hz, 1H), 8.22(d, J = 8.5 Hz, 1H), 8.83(s, 1H), 12.94(s, 1H).

[제조예 4] 메틸 4-클로로-9H-피리미도[4,5-b]인돌-7-카르복실레이트(화합물 4d)의 제조

상기 제조예 1과 동일한 방법으로 화합물 1d로부터 3단계로 화합물 4d를 제조하였다.

4d: ¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 3.93(s, 3H), 8.02(dd, J = 8.4, 1.2 Hz, 1H), 8.20(s, 1H), 8.41(d, J = 8.2 Hz, 1H), 8.86(s, 1H).

[제조예 5] 6-브로모-N-(트랜스-4-모르폴리노사이클로헥실)-9H-피리미도[4,5-b]인돌-4-아민(화합물 5aa) 제조

화합물 4a(1.0 g, 1.76 mmol), 트랜스-4-모르폴리노사이클로헥산-1-아민 하이드로클로라이드(trans-4-morpholinocyclohexan-1-amine hydrochloride)(496 mg, 1.91 mmol), 트리에틸아민(0.75 mL, 5.38 mmol)을 DMSO(7 mL)에 녹인 뒤 110℃에서 교반한다. 반응 종결을 확인한 뒤 에틸 아세테이트(20 mL)를 가한 뒤 물(10 mL)로 씻어내고, 물(10 mL)은 에틸 아세테이트(20 mL)로 추출한다. 에틸 아세테이트(40 mL)는 물(2 X 10 mL)을 사용하여 씻어낸 후, 황산나트륨(Na₂SO₄)으로 수분을 제거하고 감압 농축한다. 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(디클로로메탄:에틸 아세테이트:메탄올 = 1:20:1 → 1:6:1)로 분리하여 화합물 5aa를 흰색 고체로 896 mg을 얻는다(58%).

5aa: ¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 1.25-1.40(m, 2H), 1.56-1.68(m, 2H), 1.90-2.03(m, 4H), 2.20-2.27(m, 1H), 2.50(m, 4H), 3.56-3.59(m, 4H), 4.28-4.30(m, 1H), 6.86(d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.38(d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.48(dd, J = 8.6, 1.8Hz, 1H), 8.34(s, 1H), 8.62(d, J = 1.5 Hz, 1H), 12.01(s, 1H).

[제조예 6] 트랜스-N1-(6-브로모-9H-피리미도[4,5-b]인돌-4-일)-N4,N4-디메틸사이클로헥산-1,4-디아민(화합물 5ab) 제조

상기 제조예 5와 동일한 방법으로 화합물 4a(200 mg, 0.70 mmol), 트랜스-N1,N1-디메틸사이클로헥산-1,4-디아민 디하이드로클로라이드(Trans-N1,N1-dimethylcyclohexane-1,4-diamine dihydrochloride)(213 mg, 0.77 mmol), 트리에틸아민(0.49 mL, 3.5 mmol)을 DMSO(6 mL)에 녹인 뒤 110℃에서 교반한다. 반응 종결을 확인한 뒤 에틸 아세테이트(20 mL)를 가한 뒤 물(10 mL)로 씻어내고, 물(10 mL)은 에틸 아세테이트(15 X 3 mL)로 추출한다. 에틸 아세테이트(65 mL)는 물(2 X 10 mL)을 사용하여 씻어낸 후, 황산나트륨(Na₂SO₄)으로 수분을 제거하고 감압 농축한다. 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(메탄올)로 분리한 뒤 테트라하이드로퓨란으로 세척한다. 잔류물을 디에틸에테르(20 mL)로 세척하여 연한 갈색 고체 182 mg을 얻는다 (66%).

5ab: ¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 1.24-2.02(m, 9H), 2.20(s, 9H), 4.26-4.30(m, 1H), 6.86(d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.38(d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.47(dd, J = 8.6, 1.6Hz, 1H), 8.33(s, 1H), 8.62(d, J = 1.5 Hz, 1H), 12.00(s, 1H).

[제조예 7] 6-브로모-N-(트랜스-4-(4-(메틸설포닐)피페라진-1-일)사이클로헥실)-9H-피리미도[4,5-b]인돌-4-아민(화합물 5ac) 제조

화합물 4a(278 mg, 0.98 mmol), 트랜스-4-(4-(메틸설포닐)피페라진-1-일)사이클로헥산-1-아민(Trans-4-(4-(methylsulfonyl)piperazin-1-yl)cyclohexan-1-amine)(260 mg, 0.99 mmol), N,N-디이소프로필에틸아민(N,N-diisopropylethylamine)(2.6 mL, 15 mmol)을 N-메틸-2-피롤리돈(NMP)(3 mL)에 녹인 뒤 마이크로파로 215℃로 가열하여 30분 교반한다. 반응종결을 확인 후 에틸 아세테이트(30 mL)를 가한 뒤 물(2 X 35 mL)로 씻어낸다. 물(70 mL)은 에틸 아세테이트(20 mL)로 씻어낸 뒤, 에틸 아세테이트(50 mL)는 황산나트륨(Na₂SO₄)으로 수분을 제거하고 감압 농축 후 잔류물을 메탄올(10 mL)로 씻어내어 화합물 5ac인 연한 갈색 고체 311 mg을 얻는다(62%).

5ac: ¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 1.33-1.45(m, 2H), 1.57-1.69(m, 2H), 1.86-1.90(m, 2H), 1.99-2.03(m, 2H), 2.61-2.64(m, 4H), 2.87(s, 3H), 3.08-3.11(m, 4H), 4.27-4.91(m, 1H), 6.88(d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.38(d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.47 (d, J = 8.8 Hz, 1H). 8.34(s, 1H), 8.62(s, 1H), 12.00(s, 1H).

[제조예 8] 6-브로모-N-(2-모르폴리노에틸)-9H-피리미도[4,5-b]인돌-4-아민(화합물 5ad) 제조

화합물 4a(100 mg, 0.35 mmol), 2-모르폴리노에탄-1-아민(2-morpholinoethan-1-amine)(68 mg, 0.52 mmol), N,N-디이소프로필에틸아민(N,N-diisopropylethylamine)(0.12 mL, 0.7 mmol)을 N-메틸-2-피롤리돈(NMP)(3 mL)에 녹인 뒤 마이크로파로 215℃로 가열하여 30분 교반한다. 반응종결을 확인 후 에틸 아세테이트(25 mL)를 가한 뒤 물(25 mL)로 씻어낸다. 물(25 mL)은 에틸 아세테이트(25 mL)로 씻어낸 뒤, 에틸 아세테이트(50 mL)는 물(2 X 25 mL)로 씻어낸 후 황산나트륨(Na₂SO₄)으로 수분을 제거하고 감압 농축한다. 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(디클로로메탄:에틸 아세테이트:메탄올 = 15:1:1 → 10:1:1)로 분리하여 화합물 5ad인 연한 노란색 고체 102 mg을 얻는다(76%).

5ad: ¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 2.50(m, 4H), 2.58-2.63(m, J = 7.2 Hz, 2H), 3.58-3.61(m, 4H), 3.73(q, J = 6.6 Hz, 2H), 7.25(t, J = 5.4 Hz, 1H), 7.39-7.42(m, 1H), 7.47-7.51(m, 1H), 8.35(s, 1H), 8.52-8.53(m, 1H), 12.03(s, 1H).

[제조예 9] 6-브로모-N-(3-모르폴리노프로필)-9H-피리미도[4,5-b]인돌-4-아민(화합물 5ae) 제조

화합물 4a(100 mg, 0.35 mmol), 2-모르폴리노프로필-1-아민(2-morpholinopropyl-1-amine)(0.08 mL, 0.52 mmol), N,N-디이소프로필에틸아민(N,N-diisopropylethylamine)(0.12 mL, 0.7 mmol)을 N-메틸-2-피롤리돈(NMP)(3 mL)에 녹인 뒤 가스를 제거 후 마이크로파로 215℃로 가열하여 30분 교반한다. 반응종결을 확인 후 에틸 아세테이트(25 mL)를 가한 뒤 물(25 mL)로 씻어낸다. 물(25 mL)은 에틸 아세테이트(2 X 25 mL)로 씻어낸 뒤, 에틸 아세테이트(75 mL)는 물(2 X 25 mL)로 씻어낸 후 황산나트륨(Na₂SO₄)으로 수분을 제거하고 감압 농축한다. 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(디클로로메탄:에틸 아세테이트:메탄올 = 15:1:1 → 10:1:1)로 분리하여 화합물 5ae인 연한 노란색 고체 127 mg을 얻는다(91%).

5ae: ¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 1.78-1.88(m, 2H), 2.36-2.38(m, 6H), 3.55-3.58(m, 4H), 3.63(q, J = 6.5 Hz, 2H), 7.33(t, J = 5.7 Hz, 1H), 7.39(d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.48(dd, J = 8.6, 1.8 Hz, 1H), 8.34(s, 1H), 8.57(d, J = 1.6 Hz, 1H), 12.00(s, 1H).

[제조예 10] 테르트-부틸 4-(2-((6-브로모-9H-피리미도[4,5-b]인돌-4-일)아미노)에틸) 피페라진-1-카르복실레이트(화합물 5af) 제조

화합물 4a(200 mg, 0.70 mmol), 테르트-부틸 4-(2-아미노에틸)피페라진-1-카르복실레이트(tert-butyl 4-(2-aminoethyl)piperazine-1-carboxylate)(240 mg, 1.05 mmol), N,N-디이소프로필에틸아민(N,N-diisopropylethylamine)(0.24 mL, 1.4 mmol)을 N-메틸-2-피롤리돈(NMP)(6 mL)에 녹인 뒤 마이크로파로 215℃로 가열하여 30분 교반한다. 반응종결을 확인 후 에틸 아세테이트(25 mL)를 가한 뒤 물(25 mL)로 씻어낸다. 물(25 mL)은 에틸 아세테이트(2 X 25 mL)로 추출한다. 에틸 아세테이트(50 mL)는 물(25 X 2 mL)로 씻어낸 후 황산나트륨(Na₂SO₄)으로 수분을 제거하고 감압 농축한다. 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(디클로로메탄:에틸 아세테이트:메탄올 = 20:1:1 → 10:1:1)로 분리하여 화합물 5af인 연한 갈색 고체 79 mg을 얻는다(23%).

5af: ¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 1.40(s, 9H), 2.42-2.46(m, 4H), 2.62(t, J = 7.0 Hz, 2H), 3.73(q, J = 6.2 Hz, 2H), 7.26(t, J = 5.8 Hz, 1H), 7.40(d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.49(dd, J ₁= 8.6, 1.8 Hz, 1H), 8.35(s, 1H), 8.53(d, J = 1.6 Hz, 1H), 12.02(s, 1H).

[제조예 11] 테르트-부틸 4-(4-((6-브로모-9H-피리미도[4,5-b]인돌-4-일)아미노)페닐) 피페라진-1-카르복실레이트(화합물 5ag) 제조

화합물 4a(200 mg, 0.70 mmol), 테르트-부틸 4-(4-아미노페닐)피페라진-1-카르복실레이트(tert-butyl 4-(4-aminophenyl)piperazine-1-carboxylate)(213 mg, 0.76 mmol), 트리에틸아민(0.4 mL, 2.1 mmol)을 DMSO(10 mL)에 녹인 뒤 110℃에서 교반한다. 반응종결을 확인 후 에틸 아세테이트(20 mL)를 가한 뒤 물(10 mL)로 씻어내고, 물(10 mL)은 에틸 아세테이트(20 mL)로 추출한다. 에틸 아세테이트(40 mL)는 물(2 X 10 mL)을 사용하여 씻어낸 후 황산나트륨(Na₂SO₄)으로 수분을 제거하고 감압 농축한다. 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(헥산:에틸 아세테이트 = 12:1 → 1:4)로 분리하여 화합물 5ag인 연한 갈색 고체 174 mg을 얻었다(46%).

5ag: ¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 1.43(s, 9H), 3.3.08-3.12(m, 4H), 3.47-3.50(m, 4H), 6.99(d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.41-7.54(m, 4H), 8.35(s, 1H), 8.57(s, 1H), 8.86(s, 1H), 12.17(s, 1H).

[제조예 12] 4-(2-((6-브로모-9H-피리미도[4,5-b]인돌-4-일)옥시)에틸)모르폴린(화합물 5ah) 제조

2-모르폴리노에틸 알코올(2-morpholinoethyl alcohol)(92 mg, 0.7 mmol)을 디글라임(diglyme)(3 mL)에 녹인 후 NaH(60%, 28 mg, 0.7 mmol)를 0^oC에서 넣은 뒤 상온에서 1시간 교반한다. 화합물 4a(100 mg, 0.35 mmol)을 가하고 100^oC에서 교반한다. 반응종결을 확인 후 물(25 mL)을 가한 뒤 에틸 아세테이트(3 X 25 mL)로 추출 후, 물(2 X 25 mL)로 씻고 황산나트륨(Na₂SO₄)으로 수분을 제거하고 감압 농축한다. 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(디클로로메탄:에틸 아세테이트:메탄올 = 30:1:1 → 20:1:1)으로 분리하여 연한 노란색 고체 115 mg을 얻는다(86%).

5ah: ¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 2.54-2.57(m, 4H), 2.87(t, J = 5.8 Hz, 2H), 3.57-3.60(m, 4H), 4.73(t, J = 5.8 Hz, 2H), 7.52(d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.61(dd, J = 8.7, 1.9 Hz, 1H), 8.11(d, J = 1.8 Hz, 1H), 8.61(s, 1H), 12.46(s, 1H).

[실시예 1] 에틸 4-((트랜스-4-모르폴리노사이클로헥실)아미노)-9H-피리미도[4,5-b]인돌-6-카르복실레이트(화합물 5ba) 제조

화합물 4b(500 mg, 1.81 mmol), 트랜스-4-모르폴리노사이클로헥산-1-아민 하이드로클로라이드(trans-4-morpholinocyclohexan-1-amine hydrochloride)(507 mg, 1.97 mmol), 트리에틸아민(0.76 mL, 5.44 mmol)을 DMSO(6 mL)에 녹인 뒤 110℃에서 20시간 교반한다. 반응 종결을 확인한 뒤 에틸 아세테이트(20 mL)를 가한 뒤 물(10 mL)로 씻어내고, 물(10 mL)은 에틸 아세테이트(20 mL)로 추출한다. 에틸 아세테이트(40 mL)는 물(2 X 10 mL)을 사용하여 씻어낸 후, 황산나트륨(Na₂SO₄)으로 수분을 제거하고 감압 농축한다. 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(디클로로메탄:에틸 아세테이트:메탄올 = 1:10:1 → 1:8:1)로 분리하여 화합물 5ba인 흰색 고체 338 mg을 얻었다(44%).

5ba: ¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 1.35-1.40(m, 6H), 1.60-1.72(m, 2H), 1.90-2.05(m, 4H), 2.27(m, 1H), 2.50(m, 4H), 3.56-3.59(m, 4H), 4.25-4.27(m, 1H), 4.37(q, J = 7.0 Hz, 2H), 7.12(d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.50(d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.98(d, J = 7.5 Hz, 1H), 8.37(s, 1H), 8.93(s, 1H), 12.25(s, 1H).

[실시예 2] 에틸 4-((트랜스-4-(디메틸아미노)사이클로헥실)아미노)-9H-피리미도[4,5-b]인돌-6-카르복실레이트(화합물 5bb) 제조

화합물 4b(500 mg, 1.81 mmol), 트랜스-N1,N1-디메틸사이클로헥산-1,4-디아민 디하이드로클로라이드(Trans-N1,N1-dimethylcyclohexane-1,4-diamine dihydrochloride)(425 mg, 1.97 mmol), 트리에틸아민(0.76 mL, 5.44 mmol)을 DMSO(6 mL)에 녹인 뒤 110℃에서 20시간 교반한다. 반응 종결을 확인한 뒤 에틸 아세테이트(50 mL)를 가한 뒤 물(50 mL)로 씻어내고, 물(50 mL)은 에틸 아세테이트(2 X 30 mL)로 추출한다. 에틸 아세테이트(110 mL)는 물(3 X 50 mL)을 사용하여 씻어낸 후, 황산나트륨(Na₂SO₄)으로 수분을 제거하고 감압 농축한다. 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(디클로로메탄:에틸 아세테이트:메탄올 = 1:3:1 → 메탄올 → 메탄올 + 10% 트리에틸아민)로 분리한 후 감압 농축한 뒤 디에틸에테르로 씻어내어 화합물 5bb인 연한 노란색 고체 392 mg을 얻었다(56%).

5bb: ¹H-NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ 1.29-1.38(m, 6H), 1.64(q, J = 12.4, 11.3 Hz, 2H), 1.87-1.90(m, 2H), 2.01-2.03(m, 2H), 2.20(s, 6H), 4.25-4.27(m, 1H), 4.37(q, J = 7.1 Hz, 2H), 7.11(d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.50(d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.98(dd, J = 8.5, 1.3 Hz, 1H), 8.37(s, 1H), 8.93(s, 1H), 12.25(s, 1H).

[실시예 3] 에틸 4-((4-메톡시페닐)아미노)-9H-피리미도[4,5-b]인돌-6-카르복실레이트(화합물 5bc) 제조

화합물 4b(500 mg, 1.81 mmol), 4-메톡시아닐린(4-methoxyaniline)(0.22 mL, 1.97 mmol), 트리에틸아민(0.76 mL, 5.44 mmol)을 DMSO(6 mL)에 녹인 뒤 110℃에서 20시간 교반한다. 반응 종결을 확인한 뒤 에틸 아세테이트(30 mL)를 가한 뒤 물(10 mL)로 씻어내고, 물(10 mL)은 에틸 아세테이트(10 mL)로 추출한다. 에틸 아세테이트(40 mL)는 물(3 X 15 mL)을 사용하여 씻어낸 후, 황산나트륨(Na₂SO₄)으로 수분을 제거하고 감압 농축한다. 잔류물을 디에틸에테르로 씻어내어 갈색 고체 525 mg을 얻었다(79%).

5bc: ¹H-NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ 1.36(t, J = 7.1 Hz, 3H), 3.78(s, 3H), 4.35(q, J = 7.0 Hz, 2H), 6.97(d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.49(d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.56(d, J = 8.5 Hz, 1H), 8.03(d, J = 8.5 Hz, 1H), 8.39(s, 1H), 8.90(s, 1H), 9.20(s, 1H), 12.43(s, 1H).

[ 제조예 13] 7- 브로모 -N-(트랜스-4- 모르폴리노사이클로헥실 )-9H- 피리미도[4,5-b]인돌 -4-아민(화합물 5ca ) 제조

화합물 4c(52 mg, 0.19 mmol), 트랜스-4-모르폴리노사이클로헥산-1-아민 하이드로클로라이드(trans-4-morpholinocyclohexan-1-amine hydrochloride)(297 mg, 1.15 mmol), 트리에틸아민(0.4 mL, 3.18 mmol)을 DMSO(15 mL)에 녹인 뒤 110℃에서 22시간 교반한다. 반응 종결을 확인한 뒤 에틸 아세테이트(20 mL)를 가한 뒤 물(20 mL)로 씻어내고, 물(20 mL)은 에틸 아세테이트(6 X 15 mL)로 추출한다. 에틸 아세테이트(130 mL)는 소금물(2 X 10 mL)을 사용하여 씻어낸 후, 황산나트륨(Na₂SO₄)으로 수분을 제거하고 감압 농축한다. 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(디클로로메탄:메탄올 = 30:1 → 20:1)로 분리하여 흰색 고체 896 mg을 얻는다(65%).

5ca: ¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 1.36-1.60(m, 3H), 2.02-2.05(m, 2H), 2.34-2.38(m, 3H), 2.59-2.62(m, 4H), 3.73-3.76(m, 4H), 4.29(m, 1H), 4.92(d, J = 7.1 Hz, 1H), 7.43(dd, J = 8.2, 1.6 Hz, 1H), 7.54(d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.66(d, J = 1.6 Hz, 1H), 8.53(s, 1H), 9.10(s, 1H).

[실시예 4] 메틸 4-((트랜스-4-모르폴리노사이클로헥실)아미노)-9H-피리미도[4,5-b]인돌-7-카르복실레이트(화합물 5da) 제조

화합물 4d(52 mg, 0.19 mmol), 트랜스-4-모르폴리노사이클로헥산-1-아민 하이드로클로라이드(trans-4-morpholinocyclohexan-1-amine hydrochloride)(38 mg, 0.20 mmol), 트리에틸아민(26 μL, 0.57 mmol)을 DMSO(9 mL)에 녹인 뒤 110℃에서 18시간 교반한다. 반응 종결을 확인한 뒤 에틸 아세테이트(10 mL)를 가한 뒤 물(10 mL)로 씻어내고, 물(10 mL)은 에틸 아세테이트(2 X 10 mL)로 추출한다. 에틸 아세테이트(40 mL)는 소금물(2 X 10 mL)을 사용하여 씻어낸 후, 황산나트륨(Na₂SO₄)으로 수분을 제거하고 감압 농축한다. 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(디클로로메탄:메탄올 = 10:1)로 분리하여 흰색 고체 48 mg을 얻는다(59%).

5da: ¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 1.29-1.41(m, 3H), 1.55-1.68(m, 3H), 1.89-2.04(m, 5H), 2.24-2.27(m, 2H), 3.56-3.59(m, 4H), 3.89(s, 3H), 4.27-4.30(m, 1H), 6.90(d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.84(dd, J = 8.3, 1.6 Hz, 1H), 8.03(d, J = 1.5 Hz, 1H), 8.38(s, 1H), 8.46(d, J = 8.4 Hz, 1H), 12.15(s, 1H).

[실시예 5] 메틸 4-((4-모르폴리노페닐)아미노)-9H-피리미도[4,5-b]인돌-7-카르복실레이트(화합물 5db) 제조

상기 실시예 4와 동일한 방법으로 화합물 4d(52 mg, 0.19 mmol) 및 4-모르폴리노아닐린(4-morpholinoaniline)(36 mg, 0.20 mmol)을 반응시키는 과정을 거치고, 반응 후 실리카 겔 관 크로마토그래피(디클로로메탄:에틸 아세테이트:메탄올 = 1:20:1)로 분리하여 흰색 고체 45 mg을 얻는다(58%).

5db: ¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 3.10-3.13(m, 4H), 3.75-3.78(m, 4H), 3.91(s, 3H), 6.98(d, J = 8.9 Hz, 2H), 7.50(d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.72(d, J = 8.1 Hz, 1H), 8.26(s, 1H), 8.48(s, 1H), 8.60(d, J = 8.0 Hz, 1H), 9.02(s, 1H).

[실시예 6] 6-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-N-(트랜스-4-모르폴리노사이클로헥실)-9H-피리미도[4,5-b]인돌-4-아민(화합물 6aaa) 제조

스즈키 커플링(Suzuki coupling) 반응이 적용됨으로서, 화합물 5aa의 할로겐기에 대한 치환 반응이 이루어진다.

화합물 5aa(20 mg, 0.04 mmol), 1-메틸-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보로레인-2-일)-1H-피라졸(1-methyl-4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)-1H-pyrazole)(9.9 mg, 0.04 mmol), K₂CO₃(16 mg, 0.12 mmol)을 Dioxane(다이옥세인):H₂O(4:1 in v/v, 1 mL)에 녹인 후, 아르곤 가스로 퍼지하여 산소를 제거하고, Pd(PPh₃)₄(2 mg, 0.002 mmol)을 넣은 뒤 가스를 제거하고 80^oC에서 18시간 교반한다. 반응종결을 확인 후 에틸 아세테이트(10 mL)를 가한 뒤 셀라이트 패드로 여과하여 물(2 X 10 mL)로 세척 후, 황산나트륨(Na₂SO₄)으로 수분을 제거하고 감압 농축한다. 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(디클로로메탄:메탄올 = 20:1 → 10:1)로 분리하여 연한 노란색 고체 11 mg을 얻는다(55%).

6aaa: ¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 1.62-1.66(m, 2H), 1.90-2.09(m, 8H), 3.57-3.60(m, 4H), 3.90(s, 3H), 4.24-4.31(m, 1H), 7.41(d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.56(d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.96(s, 1H), 8.13(s, 1H), 8.34(d, J = 11.5 Hz, 2H), 11.82(s, 1H).

[실시예 7] N-(트랜스-4-모르폴리노사이클로헥실)-6-(피리딘-4-일)-9H-피리미도[4,5-b]인돌-4-아민(화합물 6aab) 제조

상기 실시예 6과 동일한 방법으로 화합물 5aa(50 mg, 0.12 mmol) 및 피리딘-4-일보론산(pyridin-4-ylboronic acid)(19 mg, 0.15 mmol)을 반응시키는 과정을 거치고, 반응 후 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(디클로로메탄:메탄올 = 20:1 → 10:1)로 분리하여 흰색 고체 28 mg을 얻는다(23%).

6aab: ¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 1.31-1.43(m, 2H), 1.58-1.70(m, 2H), 1.91-1.95(m, 2H), 2.05-2.09(m, 2H), 2.23-2.30(m, 2H), 2.50(m, 3H), 3.57-3.60(m, 4H), 4.27-4.31(m, 1H), 6.86(d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.56(d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.81(d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.85(d, J = 6.0 Hz, 2H), 8.36(s, 1H), 8.65(m, 3H), 12.04(s, 1H).

[실시예 8] N-(트랜스-4-모르폴리노사이클로헥실)-6-(피리미딘-5-일)-9H-피리미도[4,5-b]인돌-4-아민(화합물 6aac) 제조

상기 실시예 6과 동일한 방법으로 화합물 5aa(50 mg, 0.11 mmol) 및 피리미딘-5-일보론산(pyrimidin-5-ylboronic acid)(17 mg, 0.14 mmol)을 반응시키는 과정을 거치고, 반응 후 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(디클로로메탄:에틸 아세테이트:메탄올 = 10:10:1 → 5:5:1 → 4:2:1)로 분리하여 흰색 고체 58 mg을 얻는다(99%).

6aac: ¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 1.31-1.44(m, 2H), 1.57-1.70(m, 2H), 1.91-1.94(m, 2H), 2.05-2.08(m, 2H), 2.23-2.30(m, 2H), 2.50(m, 3H), 3.56-3.59(m, 4H), 4.31-4.34(m, 1H), 6.76(d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.58(d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.80(d, J = 8.5 Hz, 1H), 8.37(s, 1H), 8.66(s, 1H), 9.19(s, 1H), 9.29(s, 2H), 12.05(s, 1H).

[실시예 9] 6-(5-메톡시피리딘-3-일)-N-(트랜스-4-모르폴리노사이클로헥실)-9H-피리미도[4,5-b]인돌-4-아민(화합물 6aad) 제조

상기 실시예 6과 동일한 방법으로 화합물 5aa(100 mg, 0.23 mmol) 및 3-메톡시-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보로레인-2-일)피리딘(3-methoxy-5-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)pyridine)(70 mg, 0.29 mmol)을 반응시키는 과정을 거치고, 반응 후 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(디클로로메탄:에틸 아세테이트:메탄올 = 2:4:1 → 1:5:1)로 분리하여 흰색 고체 63 mg을 얻는다(59%).

6aad: ¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 1.30-1.42(m, 2H), 1.58-1.70(m, 2H), 1.91-1.94(m, 2H), 2.04-2.08(m, 2H), 2.23-2.29(m, 2H), 2.50(m, 3H), 3.56-3.59(m,4H), 3.94(s, 3H), 4.29-4.31(m, 1H), 6.81(d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.54(d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.74(m, 2H), 8.29(s, 1H), 8.35(s, 1H), 8.60(s, 1H), 8.67(s, 1H), 11.97(s, 1H).

[실시예 10] 5-(4-((트랜스-4-모르폴리노사이클로헥실)아미노)-9H-피리미도[4,5-b]인돌-6-일)피리딘-3-올(화합물 6aae) 제조

상기 실시예 9의 화합물 6aad(40 mg, 88 μmol)을 피리딘·HCl 염(100 mg)과 120^oC에서 1시간 교반한다. 반응종결을 확인 후 에틸 아세테이트(10 mL)를 가한 뒤 물(2 X 10 mL)로 세척 후, 황산나트륨(Na₂SO₄)으로 수분을 제거하고 감압 농축한다. 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(디클로로메탄:메탄올 = 10:1)로 분리하여 연한 노란색 고체 24 mg을 얻는다(62%).

6aae: ¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 1.30-1.43(m, 2H), 1.56-1.71(m, 2H), 1.91-1.94(m, 2H), 2.03-2.07(m, 2H). 2.19-2.22(m, 2H), 2.50(m, 3H), 3.56-3.60(m, 4H), 4.29-4.32(m, 1H), 6.84(d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.49-7.54(m, 2H), 7.63(dd, J = 8.4, 1.4 Hz, 1H), 8.12(d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.35(s, 1H), 8.50(d, J = 1.5 Hz, 1H), 8.56(s, 1H), 9.99(s, 1H), 11.95(s, 1H).

[실시예 11] 6-(5-플루오로피리딘-3-일)-N-(트랜스-4-모르폴리노사이클로헥실)-9H-피리미도[4,5-b]인돌-4-아민(화합물 6aaf) 제조

상기 실시예 6과 동일한 방법으로 화합물 5aa(30 mg, 0.06 mmol) 및 (5-플루오로피리딘-3-일)보론산((5-fluoropyridin-3-yl)boronic acid)(10 mg, 0.07 mmol)을 반응시키는 과정을 거치고, 반응 후 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(디클로로메탄:에틸 아세테이트:메탄올 = 6:1:1 → 5:1:1)로 분리하여 흰색 고체 25 mg을 얻는다(81%).

6aaf: ¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 1.31-1.44(m, 2H), 1.58-1.70(m, 2H), 1.91-1.94(m, 2H), 2.05-2.09(m, 2H), 2.24-2.32(m, 2H), 2.50(m, 3H), 3.57-3.58(m, 4H), 4.30-4.33(m, 1H), 6.79(d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.56(d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.78(d, J = 9.0 Hz, 1H), 8.16(m, 1H), 8.36(s, 1H), 8.56(d, J = 2.7 Hz, 1H), 8.62(s, 1H), 8.98(s, 1H), 12.02(s, 1H).

[실시예 12] 6-(5-(2-(디메틸아미노)에톡시)피리딘-3-일)-N-(트랜스-4-모르폴리노사이클로헥실)-9H-피리미도[4,5-b]인돌-4-아민(화합물 6aag) 제조

N,N-디메틸아미노에틸 알코올(N,N-dimethylaminoethyl alcohol)(22 μL, 0.22 mmol)을 DMSO(2 mL)에 녹인 뒤 NaH(3.5 mg, 2.0 당량)을 넣고 20분 상온 교반한다. 상기 화합물 6aaf(50 mg, 1.0 당량)를 넣은 뒤 80℃에서 교반한다. 반응종결을 확인 후 물(10 mL)를 가한 뒤 에틸 아세테이트(10 mL)로 추출한다. 물(10 mL)은 에틸 아세테이트(5 mL)로 추출한 뒤, 에틸 아세테이트(15 mL)는 물(5 X 3 mL)을 사용하여 씻는다. 에틸 아세테이트는 황산나트륨(Na₂SO₄)으로 수분을 제거하고 감압 농축 후, 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(디클로로메탄:메탄올 = 15:1)로 분리하여 흰색 고체 24 mg을 얻는다(41%).

6aag: ¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 1.31-1.43(m, 2H), 1.57-1.70(m, 2H), 1.91-2.08(m, 4H), 2.27(m, 8H), 2.50(m, 3H), 2.73(m, 2H), 3.57-3.60(m, 4H), 4.25-4.32(m, 3H), 6.83(d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.53(d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.73-7.75(m, 2H), 8.29(d, J = 2.6 Hz, 1H), 8.35(s, 1H), 8.60(s, 1H), 8.67(d, J = 1.5 Hz, 1H), 11.98(s, 1H).

[실시예 13] 6-(6-메톡시피리딘-3-일)-N-(트랜스-4-모르폴리노사이클로헥실)-9H-피리미도[4,5-b]인돌-4-아민(화합물 6aah) 제조

상기 실시예 6과 동일한 방법으로 화합물 5aa(30 mg, 0.06 mmol) 및 (6-메톡시피리딘-3-일)보론산((6-methoxypyridin-3-yl)boronic acid)(11 mg, 0.07 mmol)을 반응시키는 과정을 거치고, 반응 후 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(디클로로메탄:에틸 아세테이트:메탄올 = 6:1:1 → 5:1:1)으로 분리하여 흰색 고체 25 mg을 얻는다(78%).

6aah: ¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 1.32-1.43(m, 2H), 1.58-1.70(m, 2H), 1.91-1.94(m, 2H), 2.04-2.08(m, 2H), 2.21-2.30(m, 2H), 2.50(m, 3H), 3.57-3.58(m, 4H), 3.92(s, 3H), 4.27-4.32(m, 1H), 6.74(d, J = 7.8 Hz, 1H), 6.95(d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.51(d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.63(d, J = 7.2 Hz, 1H), 8.11(d, J = 7.9 Hz, 1H), 8.34(s, 1H), 8.50(s, 1H), 8.62(s, 1H), 11.91(s, 1H).

[실시예 14] N-(트랜스-4-모르폴리노사이클로헥실)-6-(3-니트로페닐)-9H-피리미도[4,5-b]인돌-4-아민(화합물 6aai) 제조

상기 실시예 6과 동일한 방법으로 화합물 5aa(30 mg, 0.06 mmol) 및 (3-니트로페닐)보론산((3-nitrophenyl)boronic acid)(13 mg, 0.07 mmol)을 반응시키는 과정을 거치고, 반응 후 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(디클로로메탄:에틸 아세테이트:메탄올 = 5.5:1:1)으로 분리하여 노란색 고체 24 mg을 얻는다(74%).

6aai: ¹H-NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ 1.32-1.41(m, 2H), 1.60-1.67(m, 2H), 1.91-1.93(m, 2H), 2.06-2.09(m, 2H), 2.24-2.28(m, 2H), 2.50(m, 3H), 3.58(m, 4H), 4.26-4.31(m, 1H), 6.88(d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.57(d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.76(d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.81(t, J = 8.0 Hz, 1H), 8.21(d, J = 7.6 Hz, 1H), 8.27(d, J = 6.7 Hz, 1H), 8.37(s, 1H), 8.56(s, 1H), 8.64(s, 1H), 12.03(s, 1H).

[실시예 15] 6-(3-메톡시페닐)-N-(트랜스-4-모르폴리노사이클로헥실)-9H-피리미도[4,5-b]인돌-4-아민(화합물 6aaj) 제조

상기 실시예 6과 동일한 방법으로 화합물 5aa(30 mg, 0.06 mmol) 및 (3-메톡시페닐)보론산((3-methoxyphenyl)boronic acid)(11 mg, 0.07 mmol)을 반응시키는 과정을 거치고, 반응 후 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(디클로로메탄:에틸 아세테이트:메탄올 = 6:1:1)으로 분리하여 흰색 고체 42 mg을 얻는다(99%).

6aaj : ¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 1.31-1.43(m, 2H), 1.57-1.69(m, 2H), 1.91-1.94(m, 3H), 2.04-2.09(m, 3H), 2.27-2.30(m, 1H), 3.57-3.60(m, 6H), 3.85(s, 3H), 4.27(m, 1H), 6.83-6.86(d, J = 8.1 Hz, 1H), 6.92-6.95(m, 1H), 7.32-7.44(m, 4H), 7.49-7.52(d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.64-7.67(m, 1H), 8.34(s, 1H), 8.52(s, 1H), 11.92(s, 1H).

[실시예 16] 3-(4-((트랜스-4-모르폴리노사이클로헥실)아미노)-9H-피리미도[4,5-b]인돌-6-일) 벤조니트릴 (화합물 6aak) 제조

상기 실시예 6과 동일한 방법으로 화합물 5aa(30 mg, 0.06 mmol) 및 (3-시아노페닐)보론산((3-cyanophenyl)boronic acid)(11 mg, 0.07 mmol)을 반응시키는 과정을 거치고, 반응 후 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(디클로로메탄:에틸 아세테이트:메탄올 = 5.5:1:1)으로 분리하여 흰색 고체 24 mg을 얻는다(78%).

6aak: ¹H-NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ 1.33-1.40(m, 2H), 1.60-1.68(m, 2H), 1.92-1.94(m, 2H), 2.06-2.09(m, 2H), 2.25-2.30(m, 2H), 2.50(m, 3H), 3.57-3.58(m, 4H), 4.26-4.30(m, 1H), 6.81(d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.54(d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.70-7.74(m, 2H), 7.82(d, J = 7.2 Hz, 1H), 8.14(d, J = 7.9 Hz, 1H), 8.26(s, 1H), 8.36(s, 1H), 8.58(s, 1H), 12.00(s, 1H).

[실시예 17] 6-(3,5-디플루오로페닐)-N-(트랜스-4-모르폴리노사이클로헥실)-9H-피리미도[4,5-b]인돌-4-아민(화합물 6aal) 제조

상기 실시예 6과 동일한 방법으로 화합물 5aa(30 mg, 0.06 mmol) 및 (3,5-디플루오로페닐)보론산((3,5-difluorophenyl)boronic acid)(12 mg, 0.07 mmol)을 반응시키는 과정을 거치고, 반응 후 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(디클로로메탄:에틸 아세테이트:메탄올 = 4.5:2:1)으로 분리하여 흰색 고체 25 mg을 얻는다(77%).

6aal: ¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 1.32-1.44(m, 2H), 1.58-1.71(m, 2H), 1.91-1.96(m, 2H), 2.06-2.09(m, 2H), 2.24-2.33(m, 2H), 2.50(m, 3H), 3.57-3.58(m, 4H), 4.26-4.29(m, 1H), 6.82(d, J = 8.9 Hz, 1H), 7.16-7.24(m, 1H), 7.52(d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.55-7.59(m, 2H), 7.74(dd, J = 8.6, 1.6 Hz, 1H), 8.36(s, 1H), 8.54-8.55(m, 1H), 12.00(s, 1H).

[실시예 18] 6-(2,4-디플루오로페닐)-N-(트랜스-4-모르폴리노사이클로헥실)-9H-피리미도[4,5-b]인돌-4-아민(화합물 6aam) 제조

상기 실시예 6과 동일한 방법으로 화합물 5aa(30 mg, 0.06 mmol) 및 (2,4-디플루오로페닐)보론산((2,4-difluorophenyl)boronic acid)(12 mg, 0.07 mmol)을 반응시키는 과정을 거치고, 반응 후 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(디클로로메탄:에틸 아세테이트:메탄올 = 4.5:2:1)으로 분리하여 흰색 고체 23 mg을 얻는다(71%).

6aam: ¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 1.30-1.42(m, 2H), 1.53-1.67(m, 2H), 1.88-1.91(m, 2H), 2.01-2.04(m, 2H), 2.21-2.27(m, 2H), 2.50(m, 3H), 3.57-3.58(m, 4H), 4.27-4.31(m, 1H), 6.73(d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.20-7.27(m, 1H), 7.34-7.42(m, 1H), 7.44-7.53(m, 2H), 7.61-7.69(m, 1H), 8.34(s, 1H), 8.44(s, 1H), 11.95(s, 1H).

[실시예 19] 6-(4-플루오로페닐)-N-(트랜스-4-모르폴리노사이클로헥실)-9H-피리미도[4,5-b]인돌-4-아민(화합물 6aan) 제조

상기 실시예 6과 동일한 방법으로 화합물 5aa(30 mg, 0.06 mmol) 및 (4-플루오로페닐)보론산((4-fluorophenyl)boronic acid)(10 mg, 0.07 mmol)을 반응시키는 과정을 거치고, 반응 후 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(디클로로메탄:에틸 아세테이트:메탄올 = 4.5:2:1)로 분리하여 흰색 고체 16 mg을 얻는다(51%).

6aan: ¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 1.30-1.42(m, 2H), 1.57-1.69(m, 2H), 1.90-2.09(m, 4H), 2.21-2.28(m, 2H), 2.50(m, 3H), 3.56-3.59(m, 4H), 4.24-4.31(m, 1H), 6.79(d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.33(t, J = 8.9 Hz, 2H), 7.50(d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.62(dd, J = 8.4, 1.6 Hz, 1H), 7.78-7.83(m, 2H), 8.34(s, 1H), 8.50(s, 1H), 11.90(s, 1H).

[실시예 20] 5-(4-((트랜스-4-모르폴리노사이클로헥실)아미노)-9H-피리미도[4,5-b]인돌-6-일) 니코티노니트릴 (화합물 6aao) 제조

상기 실시예 6과 동일한 방법으로 화합물 5aa(30 mg, 0.06 mmol) 및 (5-시아노피리딘-3-일)보론산((5-cyanopyridin-3-yl)boronic acid)(11 mg, 0.07 mmol)을 반응시키는 과정을 거치고, 반응 후 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(디클로로메탄:에틸 아세테이트:메탄올 = 20:1:1 → 10:1:1 → 8:1:1)로 분리하여 연한 노란색 고체 29 mg을 얻는다(91%).

6aao: ¹H-NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ 1.34-1.41(m, 2H), 1.60-1.68(m, 2H), 1.91-1.94(m, 2H), 2.06-2.09(m, 2H), 2.25-2.30(m, 2H), 2.50(m, 2H), 3.57-3.59(m, 4H), 4.28-4.35(m, 1H), 6.78(d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.57(d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.82(d, J = 8.5 Hz, 1H), 8.37(s, 1H), 8.65(s, 1H), 8.73(s, 1H), 9.00(s, 1H), 9.37 (s, 1H), 12.08(s, 1H).

[실시예 21] 3-플루오로-5-(4-((트랜스-4-모르폴리노사이클로헥실)아미노)-9H-피리미도[4,5-b]인돌-6-일) 벤조니트릴 (화합물 6aap) 제조

상기 실시예 6과 동일한 방법으로 화합물 6aa(20 mg, 0.044 mmol) 및 3-플루오로-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보로레인-2-일)벤조니트릴(3-fluoro-5-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)benzonitrile)(12 mg, 0.05 mmol)을 반응시키는 과정을 거치고, 반응 후 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(디클로로메탄:에틸 아세테이트:메탄올 = 1:4:1)로 분리하여 흰색 고체 11 mg을 얻는다(53%).

6aap: ¹H-NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ 1.23-1.51(m, 2H), 1.63-1.79(m, 3H), 1.89-1.94(m, 2H), 2.07-2.18(m, 2H), 2.25-2.31(m, 2H), 2.87-2.89(m, 1H), 3.57-3.59(m, 3H), 3.67-3.68(m, 1H), 4.21(t, J = 11.2 Hz, 1H), 4.28-4.32(m, 1H), 6.83(dd, J = 29.4, 7.9 Hz, 1H), 7.54(dd, J = 8.4, 3.5 Hz, 1H), 7.79-7.83(m, 2H), 8.08(d, J = 10.5 Hz, 1H), 8.16-8.20(m, 1H), 8.37(d, J = 7.6 Hz, 1H), 8.60(d, J = 8.3 Hz, 1H), 12.09(d, J = 8.9 Hz, 1H).

[실시예 22] 테르트-부틸 4-(4-(4-((트랜스-4-모르폴리노사이클로헥실)아미노)-9H-피리미도[4,5-b]인돌-6-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카르복실레이트(화합물 6aaq) 제조

상기 실시예 6과 동일한 방법으로 화합물 6aa(30 mg, 0.06 mmol) 및 테르트-부틸 4-(4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보로레인-2-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카르복실레이트(tert-butyl 4-(4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)-1H-pyrazol-1-yl)piperidine-1-carboxylate)(22 mg, 0.06 mmol)를 반응시키는 과정을 거치고, 반응 후 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(디클로로메탄:에틸 아세테이트:메탄올 = 1:8:1 → 1:5:1)로 분리하여 흰색 고체 119 mg을 얻는다(65%).

6aaq: ¹H-NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ 1.33-1.38(m, 4H), 1.44(s, 9H), 1.64(q, J = 11.9, 11.4 Hz, 3H), 1.80-1.94(m, 4H), 2.06-2.07(m, 4H), 2.27(t, J = 12.8 Hz, 2H), 2.89-3.01(m, 2H), 3.58-3.59(m, 4H), 4.09(s, 2H), 4.24-4.29(m, 1H), 4.41(t, J = 11.4 Hz, 1H), 6.62(d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.41(d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.58(d, J = 8.3 Hz, 1H), 8.00(s, 1H), 8.23(s, 1H), 8.33(s, 1H), 8.37(s, 1H), 11.85(s, 1H).

[실시예 23] N-(트랜스-4-모르폴리노사이클로헥실)-6-(1-(피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)-9H-피리미도[4,5-b]인돌-4-아민(화합물 6aar) 제조

상기 실시예 22의 화합물 6aaq(111 mg, 0.20 mmol)에 HCl(4M in dioxane(다이옥산), 10 mL)을 0^oC에서 넣고 상온 교반한다. 반응종결을 확인하고 반응물을 감압농축 후, 잔류물을 디에틸에테르(3 mL)로 씻어내어 흰색 고체 121 mg을 얻어 실시예 24에 이용한다.

6aar: ¹H-NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ 1.74(q, J = 13.1 Hz, 2H), 1.95-2.03(m, 2H), 2.14-2.31(m, 7H), 3.09-3.18(m, 4H), 3.37-3.52(m, 6H), 3.66-3.73(m, 1H), 3.91(t, J = 12.0 Hz, 2H), 3.99-4.01(m, 2H), 4.52-4.56(m, 2H), 7.59(d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.76(d, J = 8.2 Hz, 1H), 8.12(s, 1H), 8.49(s, 1H), 8.57(s, 1H), 8.86(s, 1H), 8.96(s, 1H), 9.10(s, 1H), 11.19(s, 1H), 12.95(s, 1H).

[실시예 24] 6-(1-(1-(메틸설포닐)피페리딘-4-일)-1H-피라졸-4-일)-N-(트랜스-4-모르폴리노사이클로헥실)-9H-피리미도[4,5-b]인돌-4-아민(화합물 6aas) 제조

상기 실시예 23의 화합물 6aar(25 mg, 0.04 mmol) 및 트리에틸아민(0.03 mL, 0.24 mmol)을 디클로로메탄(2 mL)에 녹인 후, 메탄설포닐클로라이드(methanesulfonyl chloride)(4.6 μL, 0.05 mmol)을 넣고 상온 교반한다. 반응종결을 확인하고 반응물을 감압한 뒤, 포화 탄산수소나트륨(sat’d sodium bicarbonate)으로 pH를 7로 조절한다. 에틸 아세테이트(10 mL)를 가하고 물(10 mL)로 씻어낸 후, 황산나트륨(Na₂SO₄)으로 수분을 제거하고 감압 농축한다. 잔류물을 디에틸에테르(5 mL)로 씻어내어 흰색 고체 10 mg을 얻는다(37%).

6aas: ¹H-NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ 1.34-1.41(m, 2H), 1.61-1.69(q, J = 13.5, 11.8 Hz, 2H), 1.91-1.94(m, 3H), 2.02-2.09(m, 5H), 2.18-2.29(m, 4H), 2.95(s, 3H), 2.97-3.00(m, 2H), 3.58(m, 5H), 3.69-3.72(m, 2H), 4.24-4.29(m, 1H), 4.36-4.40(m, 1H), 6.62(d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.41(d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.58(d, J = 7.7 Hz, 1H), 8.01(s, 1H), 8.26(s, 1H), 8.33(s, 1H), 8.37(s, 1H), 11.85(s, 1H).

[실시예 25] 트랜스-N1-(6-(5-플루오로피리딘-3-일)-9H-피리미도[4,5-b]인돌-4-일)-N4,N4-디메틸사이클로헥산-1,4-디아민(화합물 6aba) 제조

상기 실시예 6과 동일한 방법으로 화합물 5ab(102 mg, 0.26 mmol) 및 (5-플루오로피리딘-3-일)보론산((5-fluoropyridin-3-yl)boronic acid)(47 mg, 0.33 mmol)을 반응시키는 과정을 거치고, 반응 후 잔류물을 디에틸에테르로 씻어내어 연한 갈색 고체 57 mg을 얻는다(53%).

6aba: ¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 1.28-1.41(m, 2H), 1.57-1.70(m, 2H), 1.88-1.92(m, 3H), 2.03-2.09(m, 2H), 2.21(s, 6H), 4.27-4.36(m, 1H), 6.80(d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.55(d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.78(dd, J = 8.5, 1.4 Hz, 1H), 8.13-8.18(m, 1H), 8.36(s, 1H), 8.55-8.56(m, 1H), 8.63(s, 1H), 8.98(s, 1H), 12.03(s, 1H).

[실시예 26] 트랜스-N1,N1-디메틸-N4-(6-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-9H-피리미도[4,5-b]인돌-4-일)사이클로헥산-1,4-디아민(화합물 6abb) 제조

상기 실시예 25와 동일한 방법으로 화합물 5ab(74 mg, 0.19 mmol) 및 1-메틸-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보로레인-2-일)-1H-피라졸(1-methyl-4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)-1H-pyrazole)(40 mg, 0.19 mmol)을 반응시키는 과정을 거치고, 반응 후 잔류물을 디에틸에테르로 씻어내어 갈색 고체 19 mg을 얻는다(26%).

6abb: ¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 1.23-2.08(m, 9H), 2.21(s, 9H), 3.90(s, 3H), 4.24-4.31(m, 1H), 6.62(d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.41(d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.56(d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.96(s, 1H), 8.14(s, 1H), 8.32(s, 1H), 8.37(s, 1H), 11.82(s, 1H).

[실시예 27] 6-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-N-(트랜스-4-(4-(메틸설포닐)피페라진-1-일)사이클로헥실)-9H-피리미도[4,5-b]인돌-4-아민(화합물 6aca) 제조

상기 실시예 6과 동일한 방법으로 화합물 5ac(50 mg, 0.09 mmol) 및 1-메틸-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보로레인-2-일)-1H-피라졸(1-methyl-4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)-1H-pyrazole)(23 mg, 0.11 mmol)을 반응시키는 과정을 거치고, 반응 후 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(디클로로메탄:메탄올 = 10:1)로 분리하여 연한 노란색 고체 32 mg을 얻는다(63%).

6aca: ¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 1.37-1.56(m, 4H), 1.98-2.2(m, 2H), 2.38-2.42(m, 2H), 2.73-2.74(m, 4H), 2.79(s, 3H), 3.26-3.29(m, 4H), 4.00(s, 3H), 4.26-4.34(m, 2H), 4.99(d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.51(d, J = 2.8 Hz, 2H), 7.67(d, J = 8.9 Hz, 2H), 7.81(s, 1H), 8.52(s, 1H), 9.06(s, 1H).

[실시예 28] 6-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-N-(2-모르폴리노에틸)-9H-피리미도[4,5-b]인돌-4-아민(화합물 6ada) 제조

상기 실시예 6과 동일한 방법으로 화합물 5ad(50 mg, 0.13 mmol) 및 1-메틸-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보로레인-2-일)-1H-피라졸(1-methyl-4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)-1H-pyrazole)(35 mg, 0.16 mmol)을 반응시키는 과정을 거치고, 반응 후 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(디클로로메탄:에틸 아세테이트:메탄올 = 100:1:1 → 10:1:1)로 분리하여 연한 노란색 고체 43 mg을 얻는다(85%).

6ada: ¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 2.50(m, 4H), 2.63(t, J = 6.9 Hz, 2H), 3.58-3.61(m, 4H), 3.78(q, J = 6.8 Hz, 2H), 3.90(s, 3H), 7.08(t, J = 5.5 Hz, 1H), 7.42 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.56 (dd, J = 8.2, 1.5 Hz, 1H), 7.95(s, 1H), 8.11(s, 1H), 8.33(s, 1H), 8.36(s, 1H), 11.81(s, 1H).

[실시예 29] 6-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-N-(3-모르폴리노프로필)-9H-피리미도[4,5-b]인돌-4-아민(화합물 6aea) 제조

상기 실시예 6과 동일한 방법으로 화합물 5ae(30 mg, 0.07 mmol) 및 1-메틸-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보로레인-2-일)-1H-피라졸(1-methyl-4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)-1H-pyrazole)(18 mg, 0.09 mmol)을 반응시키는 과정을 거치고, 반응 후 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(디클로로메탄:에틸 아세테이트:메탄올 = 8:1:1 → 6:1:1)로 분리하여 흰색 고체 31 mg을 얻는다(99%).

6aea: ¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 1.85-1.91(m, 2H), 2.37-2.41(m, 6H), 3.55-3.57(m, 4H), 3.68(q, 6.5 Hz, 2H), 3.90(s, 3H), 7.18(t, J = 5.9 Hz, 1H), 7.41(d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.55(d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.97(s, 1H), 8.12(s, 1H), 8.31(s, 1H), 8.41(s, 1H), 11.79(s, 1H).

[실시예 30] 테르트-부틸 4-(2-((6-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-9H-피리미도[4,5-b]인돌-4-일)아미노)에틸)피페라진-1-카르복실레이트(화합물 6afa) 제조

상기 실시예 6과 동일한 방법으로 화합물 5af(40 mg, 0.08 mmol) 및 1-메틸-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보로레인-2-일)-1H-피라졸(1-methyl-4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)-1H-pyrazole)(21 mg, 0.10 mmol)을 반응시키는 과정을 거치고, 반응 후 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(디클로로메탄:에틸 아세테이트:메탄올 = 25:1:1 → 15:1:1)로 분리하여 흰색 고체 26 mg을 얻는다(64%).

6afa: ¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 1.39(s, 9H), 2.26-2.28(m, 1H), 2.44-2.46(m, 4H), 2.65(t, J = 6.7 Hz, 3H), 2.72-2.74(m, 1H), 3.78(q, J = 13.8 , 6.6 Hz, 3H), 3.90(s, 3H), 7.09(t, J = 5.6 Hz, 1H), 7.42(d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.56(dd, J = 8.3, 1.2 Hz, 1H), 7.94(s, 1H), 8.10(s, 1H), 8.33(s, 1H), 8.36(s, 1H), 11.81(s, 1H).

[제조예 14] 테르트-부틸 4-(4-((6-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-9H-피리미도[4,5-b]인돌-4-일)아미노)페닐)피페라진-1-카르복실레이트(화합물 6aga) 제조

상기 실시예 6과 동일한 방법으로 화합물 5ag(81 mg, 0.15 mmol) 및 1-메틸-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보로레인-2-일)-1H-피라졸(1-methyl-4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)-1H-pyrazole)(35 mg, 0.18 mmol)을 반응시키는 과정을 거치고, 반응 후 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(헥산:에틸 아세테이트 = 1:2 → 에틸 아세테이트)로 분리하여 연한 분홍색 고체 50 mg을 얻는다(61%).

6aga: ¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 3.08-3.11(m, 4H), 3.48-3.49(m, 4H), 3.88(s, 3H), 7.02(d, J = 8.9 Hz, 2H), 7.46(t, J = 7.9 Hz, 3H), 7.60(d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.92(s, 1H), 8.10(s, 1H), 8.32(s, 1H), 8.38(s, 1H), 8.72(s, 1H), 11.96(s, 1H).

[실시예 31] 6-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-N-(4-(피페라진-1-일)페닐)-9H-피리미도[4,5-b]인돌-4-아민(화합물 6agaa) 제조

상기 제조예 14의 화합물 6aga(36 mg, 0.07 mmol)에 HCl(4M in dioxane(다이옥산), 15 mL)을 0^oC에서 넣고 상온 교반한다. 반응종결을 확인하고 반응물을 감압농축 후, 포화 탄산수소나트륨(sat’d sodium bicarbonate)으로 pH를 9로 조절한 다음 황산나트륨(Na₂SO₄)으로 수분을 제거하고 감압 농축한다. 잔류물을 디에틸에테르(3 mL)로 씻어내어 흰색 고체 14 mg을 얻는다(46%).

6agaa : ¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 2.95-3.17(m, 5H), 3.36-3.39(m, 4H), 3.88(s, 3H), 6.98(d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.41-7.45(m, 3H), 7.57-7.60(m, 1H), 7.92(s, 1H), 8.09(s, 1H), 8.30(s, 1H), 8.37(s, 1H), 8.67(s, 1H), 11.95(s, 1H).

[ 제조예 15] 테르트 -부틸 4-(4-((6-(피리딘-4-일)-9H- 피리미도[4,5-b]인돌 -4-일)아미노)페닐)피페라진-1-카르복실레이트(화합물 6agb) 제조

상기 실시예 6과 동일한 방법으로 화합물 5ag(81 mg, 0.15 mmol) 및 피리딘-4-일보론산(pyridin-4-ylboronic acid)(22 mg, 0.18 mmol)을 반응시키는 과정을 거치고, 반응 후 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(디클로로메탄:에틸 아세테이트 = 1:1 → 에틸 아세테이트 → 에틸 아세테이트:메탄올 = 10:1)로 분리하여 연한 갈색 고체 34 mg을 얻는다(42%).

6agb : ¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 1.44(s, 9H), 3.07-3.11(m, 4H), 3.47-3.50(m, 4H), 7.01(d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.46(d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.60(d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.82-7.88(m, 3H), 8.36(s, 1H), 8.61-8.63(m, 3H), 8.95(s, 1H), 12.20(s, 1H).

[ 실시예 32] N-(4-(피페라진-1-일)페닐)-6-(피리딘-4-일)-9H- 피리미도[4,5-b]인돌 -4- 아민 (화합물 6agba) 제조

상기 제조예 15의 화합물 6agb(26 mg, 0.04 mmol)에 HCl(4M in dioxane(다이옥산), 10 mL)을 0^oC에서 넣고 상온 교반한다. 반응종결을 확인하고 반응물을 감압농축 후, 포화 탄산수소나트륨(sat’d sodium bicarbonate)으로 pH를 9로 조절한 다음 황산나트륨(Na₂SO₄)으로 수분을 제거하고 감압 농축한다. 잔류물을 디에틸에테르(3 mL)로 씻어내어 흰색 고체 46 mg을 얻는다(99%).

6agba : ¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 2.73-7.87(m, 4H), 3.05-3.13(m, 2H), 3.05-3.13(m, 4H), 6.96-7.00(m, 2H), 7.42(d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.59(d, J = 8.2 Hz, 2H), 7.81-7.88(m, 3H), 8.36(s, 1H), 8.61-8.63(m, 3H), 8.94(s, 1H), 12.19(s, 1H).

[ 실시예 33] 4-(2-((6-(1- 메틸 -1H- 피라졸 -4-일)-9H- 피리미도[4,5-b]인돌 -4-일) 옥시 )에틸)모르폴린(화합물 6aha) 제조

상기 실시예 6과 동일한 방법으로 화합물 5ah(30 mg, 0.07 mmol) 및 1-메틸-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보로레인-2-일)-1H-피라졸(1-methyl-4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)-1H-pyrazole)(18 mg, 0.09 mmol)을 반응시키는 과정을 거치고, 반응 후 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(디클로로메탄:에틸 아세테이트:메탄올 = 25:1:1 → 20:1:1 → 15:1:1)로 분리하여 연한 노란색 고체 31 mg을 얻는다(99%).

6aha : ¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 2.58-2.61(m, 4H), 2.91(t, J = 5.7 Hz, 2H), 3.57-3.60(m, 4H), 3.90(s, 3H), 4.75(t, J = 5.7 Hz, 2H), 7.53(d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.66(dd, J = 8.4, 1.6 Hz, 1H), 7.83(s, 1H), 8.11(s, 2H), 8.56(s, 1H), 12.24(s, 1H).

[ 제조예 16] 4-((트랜스-4- 모르폴리노사이클로헥실 )아미노)-9H- 피리미도[4,5-b]인돌 -6- 카르보하이드라자이드 (화합물 6ba) 제조

화합물 5ba(423 mg, 1 mmol)를 에탄올(10 mL)에 녹인 후, 하이드라진 수화물(hydrazine hydrate)(5 mL)를 가한 후 80^oC에서 14시간 교반한다. 반응물을 감압농축 후 증류수(20 mL)를 가하고, 생성된 고체를 여과 후 증류수로 씻고(2 X 10 mL) 건조하여 연한 갈색 고체 385 mg을 얻는다(94%).

6ba : ¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 1.38(q, J = 11.9 Hz, 2H), 1.59(q, J = 12.3 Hz, 2H), 1.91-1.95(m, 2H), 2.07-2.11(m, 2H), 2.24-2.31(m, 2H), 2.49-2.50(m, 3H), 3.57-3.60(m, 4H), 4.27-4.31(m, 1H), 4.53(s, 2H), 6.55(d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.48(d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.88(dd, J = 8.5, 1.5 Hz, 1H), 8.37(s, 1H), 8.66(d, J = 1.6 Hz, 1H), 9.63(s, 1H).

[ 실시예 34] N-(트랜스-4- 모르폴리노사이클로헥실 )-6-(4H-1,2,4- 트리아졸 -3-일)-9H- 피리미도[4,5-b]인돌 -4-아민(화합물 6baa) 제조

화합물 6ba(41 mg, 0.1 mmol)를 아세토나이트릴(2 mL)에 녹인 용액에 에틸 포름이미데이트 염산염(ethyl formimidate hydrochloride)(12 mg, 0.11 mmol)과 트리에틸아민(31 μL, 0.22 mmol)을 가하고, 마이크로파로 150℃로 가열하여 30분 교반한다. 반응 종결을 확인한 뒤 에틸 아세테이트(20 mL)를 가한 뒤 물(10 mL)로 씻어내고, 황산나트륨(Na₂SO₄)으로 수분을 제거하고 감압 농축한다. 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(디클로로메탄:메탄올 = 6:1)로 분리하여 흰색 고체 15 mg을 얻는다(36%).

6baa : ¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 1.35-1.44(m, 2H), 1.60-1.73(m, 2H), 1.91-2.08(m, 4H), 2.28-2.43(m, 4H), 3.58-3.61(m, 4H), 4.10-4.17(m, 1H), 4.25-4.30(m, 1H), 6.72-6.94(m, 1H), 7.51-7.55(m, 1H), 8.02(d, J = 7.8 Hz, 1H), 8.35(d, J = 4.6 Hz, 1H), 8.82-8.89(m, 1H). 11.96-12.08(m, 1H), 13.62-13.99(m, 1H).

[ 실시예 35] 6-(5- 메틸 -4H-1,2,4- 트리아졸 -3-일)-N-(트랜스-4- 모르폴리노사이클로헥실 )-9H- 피리미도[4,5-b]인돌 -4-아민(화합물 6bab) 제조

화합물 6ba(41 mg, 0.1 mmol)를 메탄올(2 mL)에 녹인 용액에 에틸 아세트이미데이트 염산염(ethyl acetimidate hydrochloride)(15 mg, 0.12 mmol)과 1N 수산화나트륨 메탄올 용액(0.12 mL, 0.12 mmol)을 가하고, 70℃로 가열하여 14시간 교반한다. 반응 종결을 확인한 뒤 에틸 아세테이트(20 mL)를 가한 뒤 물(10 mL)로 씻어내고, 황산나트륨(Na₂SO₄)으로 수분을 제거하고 감압 농축한다. 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(디클로로메탄:메탄올 = 7:1)로 분리하여 흰색 고체 21 mg을 얻는다(49%).

6bab : ¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 1.63-1.76(m, 5H), 1.94-1.97(m, 4H), 2.28-2.41(m, 3H), 3.57-3.60(m, 4H), 3.67(s, 3H), 4.17-4.28(m, 2H), 6.87(s, 1H), 7.50(d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.99(d, J = 8.1 Hz, 1H), 8.35(d, J = 4.4 Hz, 1H), 8.80(d, J = 6.6 Hz, 1H), 12.02(s, 1H), 13.63(s, 1H).

[ 실시예 36] 6-(4- 메틸 -4H-1,2,4- 트리아졸 -3-일)-N-(트랜스-4- 모르폴리노사이클로헥실 )-9H- 피리미도[4,5-b]인돌 -4-아민(화합물 6bac) 제조

화합물 6ba(41 mg, 0.1 mmol)를 테트라하이드로퓨란(5 mL)에 녹인 용액에 메틸 이소티오시아네이트(methyl isothiocyanate)(27 mg, 0.37 mmol)를 가하고, 50℃로 가열하여 14시간 교반한다. 반응물을 감압농축 후 1N 수산화나트륨 수용액(4 mL)을 가한 후, 50℃로 가열하여 3시간 교반한다. 반응물에 디클로로메탄(20 mL)을 가한 후, 35% 과산화수소 수용액(0.22 mL)과 아세트산(1.5 mL)를 가한 후 실온에서 2시간 교반한다. 반응 종결을 확인한 뒤 1N 수산화나트륨 수용액으로 중화 후 에틸 아세테이트(20 mL)를 가한 뒤 물(10 mL)로 씻어내고, 황산나트륨(Na₂SO₄)으로 수분을 제거하고 감압 농축한다. 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(디클로로메탄:메탄올 = 7:1)로 분리하여 흰색 고체 11 mg을 얻는다(26%).

6bac : ¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 1.23-1.41(m, 3H), 1.54-1.67(m, 3H), 1.88-2.04(m, 4H), 2.19-2.28(m, 2H), 3.56-3.59(m, 4H), 3.74(s, 1H), 4.25-4.36(m, 1H), 6.85(d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.61(q, J = 8.4 Hz, 2H), 8.37(s, 1H), 8.64(d, J = 15.7 Hz, 2H), 12.12(s, 1H).

[ 실시예 37] 6-(6,7- 디하이드로 -5H- 피롤로[2,1-c][1,2,4]트리아졸 -3-일)-N-(트랜스-4- 모르폴리노사이클로헥실 )-9H-피리미도[4,5-b]인돌-4-아민(화합물 6bad) 제조

화합물 6ba(41 mg, 0.1 mmol)를 2-프로판올(2 mL)에 녹인 용액에 2-메톡시-1-피롤린(2-methoxy-1-pyrroline)(12 mg, 0.12 mmol)을 가하고, 80℃로 가열하여 2시간 교반한다. 반응 종결을 확인한 뒤 에틸 아세테이트(20 mL)를 가한 뒤 물(10 mL)로 씻어내고, 황산나트륨(Na₂SO₄)으로 수분을 제거하고 감압 농축한다. 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(디클로로메탄:메탄올 = 6:1)로 분리하여 흰색 고체 16 mg을 얻는다(35%).

6bad : ¹H-NMR (300 MHz, CD₃OD) δ 1.63-1.69(m, 5H), 2.01-2.04(m, 2H), 2.22-2.30(m, 5H), 2.83-3.08(m, 6H), 3.83-3.86(m, 4H), 4.41(t, J = 7.0 Hz, 2H), 7.65(d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.81(dd, J = 8.4, 1.7 Hz, 1H), 8.37(s, 1H), 8.62(d, J = 1.6 Hz, 1H).

[ 실시예 38] 6-(5- 메틸 -1,3,4- 옥사디아졸 -2-일)-N-(트랜스-4- 모르폴리노사이클로헥실 )-9H- 피리미도[4,5-b]인돌 -4-아민(화합물 6bae) 제조

화합물 6ba(41 mg, 0.1 mmol)를 트리에틸 오르토아세테이트(triethyl orthoacetate)(2 mL)에 녹인 용액에 촉매량의 파라-톨루엔술폰산(para toluenesulfonic acid)(1 mg)을 가하고, 120℃로 가열하여 12시간 교반한다. 반응 종결을 확인한 뒤 감압 농축한다. 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(디클로로메탄:메탄올 = 9:1)로 분리하여 흰색 고체 28 mg을 얻는다(65%).

6bae : ¹H-NMR (300 MHz, CD₃OD) δ 1.53-1.70(m, 3H), 2.01-2.04(m, 3H), 2.13-2.18(m, 2H), 2.24-2.29(m, 2H), 2.66(s, 3H), 2.77-2.80(m, 4H), 3.76-3.79(m, 4H), 7.64-7.67(m, 1H), 8.06(dd, J = 8.5, 1.7 Hz, 1H), 8.37(s, 1H), 8.83-8.84(m, 1H).

[ 실시예 39] 5-(4-((트랜스-4- 모르폴리노사이클로헥실 )아미노)-9H- 피리미도[4,5-b]인돌 -6-일)-2,4-디하이드로-3H-1,2,4-트리아졸-3-온(화합물 6baf) 제조

화합물 6ba(41 mg, 0.1 mmol)를 테트라하이드로퓨란(5 mL)에 녹인 용액에 트리메틸실릴 이소시아네이트(trimethylsilyl isocyanate)(25 μL, 0.15 mmol)를 가하고, 40℃로 가열하여 14시간 교반한다. 반응물을 감압농축 후 1N 수산화나트륨 수용액(2 mL)을 가한 후, 100℃로 가열하여 14시간 교반 후 감압 농축한다. 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(디클로로메탄:메탄올 = 4:1)로 분리하여 흰색 고체 4 mg을 얻는다(9%).

6baf : ¹H-NMR (300 MHz, CD₃OD) 1.69-1.73(m, 5H), 2.28-2.34(m, 4H), 3.16-3.19(m, 4H), 3.34-3.35(m, 4H), 3.70-3.76(m, 1H), 7.55(d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.11(d, J = 8.5 Hz, 1H), 8.36(s, 1H), 8.78(s, 1H).

[ 실시예 40] 4-에틸-5-(4-((트랜스-4- 모르폴리노사이클로헥실 )아미노)-9H- 피리미도[4,5-b]인돌 -6-일)-2,4-디하이드로-3H-1,2,4-트리아졸-3-온(화합물 6bag) 제조

화합물 6ba(41 mg, 0.1 mmol)를 테트라하이드로퓨란(5 mL)에 녹인 용액에 에틸 이소시아네이트(ethyl isocyanate)(10 μL, 0.12 mmol)를 가하고, 40℃로 가열하여 14시간 교반한다. 반응물을 감압농축 후 1N 수산화나트륨 수용액(2 mL)을 가한 후, 100℃로 가열하여 14시간 교반 후 감압 농축한다. 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(디클로로메탄:메탄올 = 6:1)로 분리하여 흰색 고체 9 mg을 얻는다(19%).

6bag : ¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 1.18(t, J = 7.1 Hz, 3H), 1.63-1.76(m, 5H), 2.10-2.22(m, 5H), 3.19-3.23(m, 2H), 3.72-3.80(m, 4H), 4.00-4.07(m, 3H), 4.23-4.40(m, 1H), 7.23(d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.52(d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.99(d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.39(s, 1H), 8.95(s, 1H), 10.68(s, 1H), 11.33(s, 1H).

[제조예 17] 4-((4-메톡시페닐)아미노)-9H-피리미도[4,5-b]인돌-6-카르복시산(화합물 6bc) 제조

화합물 5bc(525 mg, 1.44 mmol)을 테트라하이드로퓨란:메탄올(1:1 in v/v, 50 mL)에 녹인 후 LiOHㆍH₂O(607 mg, 14.48 mmol)을 넣은 뒤 60^oC에서 교반한다. 반응종결을 확인하고 반응물을 감압농축 후, 3N HCl(4.8 mL)을 가한 다음 황산나트륨(Na₂SO₄)으로 수분을 제거하고 감압 농축한다. 잔류물에 에틸 아세테이트(30 mL)를 가한 다음 물(30 mL)로 씻고, 물을 포화 탄산수소나트륨(sat’d sodium bicarbonate)으로 pH를 9로 조절한 다음 물로 세척하여 연한 갈색 고체 393 mg을 얻는다(81%).

6bc : ¹H-NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ 3.78(s, 3H), 6.96(d, J= 8.9 Hz, 2H), 7.50-7.53(m, 3H), 8.02(dd, J = 8.5, 1.3 Hz, 1H), 8.37(s, 1H), 8.99(s, 1H), 9.16(s, 1H), 12.36(s, 1H).

[ 제조예 18] (4- ((4- 메톡시페닐 )아미노)-9H- 피리미도[4,5-b]인돌 -6-일) (모르폴리노)메탄온(화합물 6bca) 제조

화합물 6bc(40 mg, 0.10 mmol), 모르폴린(0.01 mL, 0.20 mmol) 및 HATU(1-[비스(디메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트리아졸로[4,5-b]피리디니움 3-옥사이드 헥사플루오로포스페이트)(53 mg, 0.14 mmol)을 디메틸포름아미드(2 mL)에 녹인 후 상온 교반한다. 반응종결을 확인 후 물을 넣은 뒤, 생성된 고체를 여과 후 물로 세척하여 연한 갈색 고체 31 mg을 얻는다(76%).

6bca : ¹H-NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ 3.62(m, 8H), 3.78(s, 3H), 6.96(d, J = 8.9 Hz, 2H), 7.44(dd, J = 8.2, 1.5 Hz, 1H), 7.52(d, J = 9.0 Hz, 3H), 8.37(s, 1H), 8.46(s, 1H), 8.90(s, 1H), 12.23(s, 1H).

[ 제조예 19] (4- ((4- 메톡시페닐 )아미노)-9H- 피리미도[4,5-b]인돌 -6-일) (4-메틸피페라진-1-일)메탄온 (화합물 6bcb) 제조

상기 제조예 18과 유사한 방법으로 화합물 6bc(40 mg, 0.10 mmol) 및 N-메틸피페라진(0.01 mL, 0.20 mmol)을 반응시키는 것을 통하여, 연한 갈색 고체 31 mg을 얻는다(76%).

6bcb : ¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 2.20(s, 3H), 2.33(m, 4H), 3.50(m, 4H), 3.78(s, 3H), 6.95(d, J = 9.0 Hz, 2H), 7.41(dd, J = 8.0, 1.3 Hz, 1H), 7.51(d, J = 8.8 Hz, 3H), 8.36(s, 1H), 8.43(s, 1H), 8.90(s, 1H), 12.21(s, 1H).

[ 제조예 20] 4-((4- 메톡시페닐 )아미노)-N-(피리딘-3- 일메틸 )-9H- 피리미도[4,5-b]인돌 -6- 카르복사미드 (화합물 6bcc) 제조

상기 제조예 18과 유사한 방법으로 화합물 6bc(40 mg, 0.10 mmol) 및 피리딘-3-일메탄아민(pyridin-3-ylmethanamine)(0.02 mL, 0.20 mmol)을 반응시키는 것을 통하여, 연한 노란색 고체 32 mg을 얻는다(76%).

6bcc : ¹H-NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ 3.78(s, 3H), 4.58(d, J = 5.8 Hz, 2H), 6.97(d, J = 8.9 Hz, 2H), 7.36-7.39(m, 1H), 7.53-7.57(m, 3H), 7.77-7.79(m, 1H), 7.96(dd, J = 8.6, 1.3 Hz, 1H), 8.39(s, 1H), 8.46-8.47(m, 1H), 8.60-8.62(m, 1H), 8.83(s, 1H), 8.91(s, 1H), 8.99(t, J = 6.0 Hz, 1H), 12.30(s, 1H).

[ 제조예 21] 4-((4- 메톡시페닐 )아미노)-N-(2- 모르폴리노에틸 )-9H- 피리미도[4,5-b]인돌 -6- 카르복사미드 (화합물 6bcd) 제조

상기 제조예 18과 유사한 방법으로 화합물 6bc(40 mg, 0.10 mmol) 및 2-모르폴리노에탄-1-아민(2-morpholinoethan-1-amine)(0.02 mL, 0.20 mmol)을 반응시키는 것을 통하여, 갈색 고체 33 mg을 얻는다(74%).

6bcd : ¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 2.43-2.46(m, 4H), 2.50(m, 2H), 3.46(q, J = 6.4 Hz, 2H), 3.57-3.60(m, 4H), 3.78(s, 3H), 6.98(d, J = 9.0 Hz, 2H), 7.52(d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.58(d, J = 8.9 Hz, 2H), 7.89-7.93(m, 1H), 8.29(t, J = 5.9 Hz, 1H), 8.38(s, 1H), 8.82(d, J = 7.7 Hz, 2H), 12.27(s, 1H).

[ 실시예 41] N-(트랜스-4- 모르폴리노사이클로헥실 )-7-(피리딘-4-일)-9H- 피리미도[4,5-b]인돌 -4- 아민 (화합물 6caa) 제조

상기 실시예 6과 유사한 방법으로 화합물 5ca(30 mg, 0.06 mmol) 및 4-피리딜보론산(4-pyridylboronic acid)(1.1 당량)을 반응시키는 과정을 거치고, 반응 후 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(에틸 아세테이트:디클로로메탄:메탄올 = 0.5:5:1)로 분리하여 갈색 고체 21 mg을 얻는다(70%).

6caa : ¹H-NMR (300 MHz, MeOD-d₄+DMSO-d₆) δ 1.59-1.75(m, 4H), 1.95-2.02(m, 2H), 2.19-2.28(m, 4H), 2.90-3.05(m, 4H), 3.79-3.91(m, 4H), 6.46(d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.71(d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.81-7.83(m, 3H), 7.91(s, 1H), 8.30-8.35(m, 2H), 8.61(d, J = 5.0 Hz, 2H).

LC-MS(ESI, m/z): [M+H]⁺= 428.9, 429.9

[ 제조예 22] 메틸 2-(3- 니트로페닐 )-4-(1-(피페리딘-4-일)-1H- 피라졸 -4-일)-9H- 피리미도[4,5-b]인돌 -7-카르복실레이트(화합물 11a) 제조

제조예 22의 화학식에 있어서, PMB는 p-메톡시벤질(p-Methoxybenzyl)을 나타낸다.

단계 1. 화합물 8a 제조

공지의 방법(WO2006-111648A1)으로 인돌 카르복시산 화합물 7a(European Journal of Medicinal Chemistry 39 (2004) 785-791)(225 mg, 0.6 mmol)를 디클로로메탄(30 mL)에 녹인 용액에 옥살릴 클로라이드(oxalyl chloride)(0.11 mL, 1.2 mmol)를 가하고, 촉매량의 N,N-디메틸포름아미드(2 방울)를 가한 후 실온에서 2시간 교반한다. 반응물을 감압농축 후 무수 테트라하이드로퓨란(20 mL)에 녹이고, 2-니트로페닐아미딘 염산염(2-nitrophenylamidine hydrochloride)(390 mg, 0.72 mmol)과 트리에틸아민(0.25 mL, 1.8 mmol)을 가하고 실온에서 15시간 교반한다. 반응종결을 확인 후 에틸 아세테이트(40 mL)를 가한 뒤 물(20 mL)로 씻어내고, 물(20 mL)은 에틸 아세테이트(20 mL)로 추출 후 황산나트륨(Na₂SO₄)으로 수분을 제거하고 감압 농축하여 생성된 고체를 에테르(ether)(20 mL)로 세척하여 노란색 고체를 얻는다. 분리정제 없이 디페닐 에테르(diphenyl ether)(20 mL)에 녹이고, 200^oC에서 2시간 교반 후 실온으로 냉각 후 생성된 고체를 여과 후 디에틸에테르(diethyl ether)(20 mL)로 세척하여 회색 고체 213 mg을 얻었다(73%).

8a: ¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 3.68(s, 3H), 3.88(s, 3H), 5.75(s, 2H), 6.87(d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.28(d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.86-7.93(m, 2H), 8.16(d, J = 8.3 Hz, 1H), 8.21(s, 1H), 8.44-8.47(m, 1H), 8.71(d, J = 8.3 Hz, 1H), 9.11(s, 1H), 13.06(s, 1H).

단계 2. 화합물 9a 제조

상기 제조예 1의 단계 3과 동일한 방법으로, 화합물 8a(195 mg, 0.40 mmol)를 POCl₃(phosphorus oxychloride, 옥시 염화인)(10 mL)과 반응시켜 화합물 9a 180 mg을 얻었다(89%).

9a: ¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 3.67(s, 3H), 3.91(s, 3H), 5.86(s, 2H), 6.87(d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.33(d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.88(t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.99-8.04(m, 1H), 8.32(s, 1H), 8.41(d, J = 8.3 Hz, 2H), 8.93(d, J = 7.9 Hz, 1H), 9.18(t, J = 2.1 Hz, 1H).

단계 3. 화합물 10a 제조

화합물 9a(138 mg, 0.30 mmol), 테르트-부틸 4-(4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보로레인-2-일)-1H-피라졸-1-일)피페리딘-1-카르복실레이트(tert-butyl 4-(4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)-1H-pyrazol-1-yl)piperidine-1-carboxylate)(147 mg, 0.39 mmol), K₃PO₄(191 mg, 90 mmol)을 Dioxane(다이옥세인):H₂O(3:1 in v/v, 4 mL)에 녹인 후, 아르곤 퍼지로 산소를 제거하고, Pd(PPh₃)₄(17 mg, 0.01 mmol)을 넣은 뒤 가스를 제거하고 마이크로파를 사용하여 130^oC에서 20분 교반한다. 반응종결을 확인 후 에틸 아세테이트(20 mL)를 가한 뒤, 셀라이트 패드로 여과하여 물(3 X 20 mL)로 세척 후 황산나트륨(Na₂SO₄)으로 수분을 제거하고 감압 농축한다. 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(에틸 아세테이트:헥산 = 1:1.5 → 1:1 → 2:1 → 3:1)로 분리하여 노란색 고체 132 mg을 얻는다(65%).

10a: ¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 1.51(s, 9H), 2.04-2.17(m, 3H), 2.27-2.33(m, 2H), 2.98(t, J = 12.7 Hz, 2H), 3.75(s, 3H), 3.98(s, 3H), 4.33-4.51(m, 2H), 5.77(s, 2H), 6.85(d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.36(d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.69(t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.99(dd, J = 8.4, 1.2 Hz, 1H), 8.23(d, J = 1.4 Hz, 1H), 8.31-8.37(m, 4H), 9.00-9.03(m, 1H), 9.49-9.50(m, 1H).

단계 4. 화합물 11a 제조

화합물 10a(25 mg, 34.8 μmol)을 0^oC에서 메탄술폰산(2 mL)에 녹인 후 80^oC에서 교반한다. 반응종결을 확인 후 반응물을 감압농축 후 포화 탄산수소나트륨(sat’d sodium bicarbonate)으로 pH를 9로 조절한 다음, 에틸 아세테이트(2 X 7 mL)로 추출 후 황산나트륨(Na₂SO₄)으로 수분을 제거하고 감압 농축한다. 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(디클로로메탄:메탄올 = 5:1)로 분리하여 갈색 오일 1.3 mg을 얻는다(8%).

11a: ¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 1.91-1.97(m, 4H), 2.27-2.36(m, 4H), 3.94(s, 3H), 4.74-4.81(m, 1H), 7.86-7.94(m, 2H), 8.18(s, 1H), 8.34-8.43(m, 3H), 8.75(s, 1H), 9.01(d, J = 7.9 Hz, 1H), 9.32(s, 1H), 12.95(s, 1H).

[ 실시예 42] 메틸 4-((트랜스-4- 모르폴리노사이클로헥실 )아미노)-2-(3- 니트로페닐 )-9H- 피리미도[4,5-b]인돌 -7-카르복실레이트(화합물 11b) 제조

실시예 42의 화학식에 있어서, PMB는 p-메톡시벤질(p-Methoxybenzyl)을 나타낸다.

단계 1. 화합물 10b 제조

상기 제조예 22의 단계 3과 동일한 방법으로 화합물 9a(45 mg, 0.08 mmol) 및 트랜스-4-모르폴리노사이클로헥산-1-아민 하이드로클로라이드)(trans-4-morpholinocyclohexan-1-amine hydrochloride)(22 mg, 0.08 mmol)을 반응시키는 과정을 거치고, 반응 후 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(디클로로메탄:메탄올 = 10:1)로 분리하여 노란색 고체 17 mg을 얻는다(29%).

10b: ¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 1.42-1.72(m, 3H), 2.00-2.04(m, 1H), 2.12-2.16(m, 2H), 2.46-2.49(m, 3H), 2.69-2.72(m, 4H), 3.74(s, 3H), 3.78-3.81(m, 4H), 3.96(s, 3H), 4.43-4.45(m, 1H), 5.17(d, J = 7.4 Hz, 1H), 5.67(s, 2H), 6.82(d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.31(d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.64(t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.73(d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.99-8.02(m, 1H), 8.16(s, 1H), 8.28-8.31(m, 1H), 8.88-8.91(m, 1H), 9.41(t, J = 2.0 Hz, 1H).

단계 2. 화합물 11b 제조

화합물 10b(17 mg, 0.13 mmol)을 넣은 뒤 0^oC에서 메탄술폰산(2 mL)에 녹인 후 80^oC에서 교반한다. 반응종결을 확인 후 반응물을 감압농축 후 포화 탄산수소나트륨(sat’d sodium bicarbonate)으로 pH를 9로 조절한 다음, 에틸 아세테이트(2 X 7 mL)로 추출 후 황산나트륨(Na₂SO₄)으로 수분을 제거하고 감압 농축한다. 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(디클로로메탄:메탄올 = 5:1)로 분리하여 갈색 오일 1.2 mg을 얻는다(1%).

화합물 11b: ¹H-NMR (300 MHz, CD₃OD) δ 1.28-1.33(m, 3H), 1.85-1.93(m, 2H), 1.99-2.03(m, 4H), 2.52-2.55(m, 3H), 3.73-3.86(m, 4H), 3.96(s, 3H), 4.04-4.18(m, 2H), 7.21(d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.75(t, J = 7.9 Hz, 1H), 7.96-7.99(m, 1H), 8.19(s, 1H), 8.27(d, J = 8.3 Hz, 1H), 8.34-8.37(m, 1H), 8.87(d, J = 7.8 Hz, 1H), 9.32(s, 1H).

[ 실시예 43] 6-(1- 메틸 -1H- 피라졸 -4-일)-N-(트랜스-4- 모르폴리노사이클로헥실 )-9H- 피리미도[2,3-b]인돌 -4-아민(화합물 17a) 제조

단계 1. 화합물 13a 제조

250 mL 둥근바닥 플라스크에 화합물 12a(Tetrahedron 65 (2009) 5427-5437)(677 mg, 3.34 mmol)를 디클로로메탄(20 mL)에 녹인 후 상온 교반한다. 브롬(bromine)(0.2 mL, 4.0 mmol)을 디클로로메탄(1.5 mL)에 녹인 뒤, 상기 250 mL 둥근바닥 플라스크에 천천히 가하고 상온 교반한다. 반응종결을 확인 후 에틸 아세테이트(30 mL)를 가하고 물(2 X 25 mL)로 세척한 뒤, 황산나트륨(Na₂SO₄)으로 수분을 제거하고 감압 농축한다. 잔류물을 테트라하이드로퓨란으로 재결정하여 연한 주황색 고체 270 mg을 얻는다(28%).

13a: ¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 7.37-7.39(d, J = 5.4 Hz, 1H), 7.54-7.56(d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.68-7.71(dd, J ₁= 8.4 Hz, J ₂= 1.5 Hz, 1H), 8.42-8.44(m, 2H), 12.41(brs, 1H).

단계 2. 화합물 14a 제조

100 mL 둥근바닥 플라스크에 화합물 13a(1.0 g, 4.93 mmol)을 넣은 뒤 테트라하이드로퓨란(50 mL)에 녹인 후, 0^oC에서 NaH(142 mg, 1.2 당량)를 넣은 뒤 20분 교반한다. 벤젠설포닐 클로라이드(benzenesulfonyl chloride)(0.94 mL, 1.5 당량)을 상기 100 mL 둥근바닥 플라스크에 넣은 뒤, 상온 교반한다. 반응종결을 확인 후 물(100 mL)를 넣는다. 생성된 고체를 물(150 mL)로 여과하여 흰색 고체 1.07 g을 얻는다(51%).

14a: ¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 7.56-7.65(m, 3H), 7.69-7.74(t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.91-7.95(dd, J ₁= 9.0 Hz, J ₂= 2.1 Hz, 1H), 8.08-8.10(m, 2H), 8.40-8.43(d, J = 9.0 Hz, 1H), 8.50-8.51(d, J = 1.8 Hz, 1H), 8.53-8.55(d, J = 5.4 Hz, 1H).

단계 3. 화합물 15a 제조

화합물 14a(400 mg, 0.94 mmol), 1-메틸-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보로레인-2-일)-1H-피라졸(1-methyl-4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)-1H-pyrazole)(256 mg, 1.22 mmol), K₂CO₃(93 mg, 2.82 mmol)을 Dioxane(다이옥세인):H₂O(4:1 in v/v, 9 mL)에 녹인 후 탈가스(degas)한다. Pd(PPh₃)₄(109 mg, 10 mol%)를 넣고 탈가스(degas)한 뒤, 110℃에서 교반한다. 반응종결 후 에틸 아세테이트(20 mL)를 가하고 셀라이트 패드로 여과 후 물(20 mL)로 씻고, 물층은 다시 에틸 아세테이트(20 mL)로 추출한다. 에틸 아세테이트 층을 합한 후 물(25 mL)로 씻고, 황산나트륨(Na₂SO₄)으로 수분을 제거하고 감압 농축한다. 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(에틸 아세테이트:헥산 = 1:6 → 에틸 아세테이트)로 분리하여 흰색 고체 218 mg을 얻는다(54%).

15a: ¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 3.90(s, 3H), 7.55-7.62(m, 3H), 7.67-7.72(m, 1H), 7.93-7.97(m, 2H), 8.06(m, 1H), 8.09(m, 1H), 8.29(s, 1H), 8.40-8.43(d, J = 8.7 Hz, 1H), 8.49-8.51(m, 2H).

단계 4. 화합물 16a 제조

화합물 15a(805 mg, 1.90 mmol), 트랜스-4-모르폴리노사이클로헥산-1-아민(trans-4-morpholinocyclohexan-1-amine)(450.9 mg, 2.45 mmol), Cs₂CO₃(1.24 g, 3.8 mmol), 잔트포스(Xantphos)(176.2 mg, 16 mol%)를 1,4-다이옥세인(1,4-dioxane)(63 mL)에 녹인 후, 탈가스(degas)하고 상온 교반한다. Pd₂(dba)₃(139 mg, 8 mol%)를 넣은 후, 탈가스(degas)하고 110^oC에서 교반한다. 반응종결을 확인 후 에틸 아세테이트(50 mL)를 가한 후 셀라이트 패드로 여과하고, 유기층을 물(50 mL)로 씻고 황산나트륨(Na₂SO₄)으로 수분을 제거하고 감압 농축한다. 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(디클로로메탄:에틸 아세테이트:메탄올 = 20:20:1 → 5:5:1)로 분리하여 노란색 오일 420 mg을 얻는다(38%).

16a: ¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 1.33-1.49(m, 3H), 2.02-2.07(m, 3H), 2.31-2.36(m, 3H), 2.59-2.60(m, 4H), 3.46-3.49(m, 1H), 3.73-3.75(m, 4H), 3.99(s, 3H), 4.70-4.71(d, J = 7.5, 1H), 6.48-6.49(d, J = 5.5, 1H), 7.37-7.40(t, J = 7.5, 2H), 7.48-7.51(t, J = 7.5, 1H), 7.54-7.56(d, J = 9.0, 1H), 7.62(s, 1H), 7.64(s, 1H), 7.78(s, 1H), 8.11-8.13(d, J = 8.0, 2H), 8.23-8.24(d, J = 6.0, 1H), 8.48-8.49(d, J = 8.5, 1H).

단계 5. 화합물 17a 제조

50 mL 둥근바닥 플라스크에 화합물 16a(420 mg, 0.73 mmol)을 넣은 후, 테트라하이드로퓨란(12 mL)에 녹인 후 상온 교반한다. 1.5M CH₃ONa(2.4 mL, 5.0 당량)를 넣은 후 40^oC에서 교반한다. 반응종결을 확인 후 포화 NaCl 수용액(20 mL)를 가한 뒤, 에틸 아세테이트(2 X 30 mL)로 추출한다. 에틸 아세테이트 층의 수분을 황산나트륨(Na₂SO₄)으로 제거하고 감압 농축 후, 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(디클로로메탄:메탄올 = 10:1)로 분리하여 흰색 고체 199 mg을 얻는다(63%).

17a: ¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 1.36-1.48(m, 2H), 1.56-1.68(m, 2H), 1.91-1.95(m, 2H), 2.12-2.16(m, 2H), 2.24-2.31(m, 1H), 2.50(m, 5H), 3.57-3.60(m, 4H), 3.90(s, 3H), 5.83-5.85(d, J = 8.4, 1H), 6.43-6.45(d, J = 5.7, 1H), 7.35-7.37(d, J = 8.1, 1H), 7.51-7.53(d, J = 8.1, 1H), 7.93(s, 1H), 7.98-8.00(d, J = 5.7, 1H), 8.11(s, 1H), 8.23(s, 1H), 11.37(s, 1H).

[ 실시예 44] 6-(5- 메톡시피리딘 -3-일)-N-(트랜스-4- 모르폴리노사이클로헥실 )-9H- 피리미도[2,3-b]인 돌-4-아민(화합물 17b) 제조

단계 1. 화합물 15b 제조

상기 실시예 43의 단계 3과 동일한 방법으로 화합물 14a(264 mg, 0.62 mmol) 및 3-메톡시-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보로레인-2-일)피리딘(3-methoxy-5-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)pyridine)(189 mg, 0.80 mmol)을 반응시키는 과정을 거치고, 반응 후 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(에틸 아세테이트:헥산 = 1:6 → 에틸 아세테이트)로 분리하여 흰색 고체 140 mg을 얻는다(49%).

15b: ¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 3.95(s, 3H), 7.58-7.72(m, 5H), 8.10-8.15(m, 3H), 8.34-8.36(m, 1H), 8.54-8.58(m, 3H), 8.66(s, 1H).

단계 2. 화합물 16b 제조

상기 실시예 43의 단계 4와 동일한 방법으로 화합물 15b(60 mg, 0.12 mmol) 및 트랜스-4-모르폴리노사이클로헥산-1-아민(trans-4-morpholinocyclohexan-1-amine)(44 mg, 0.24 mmol)를 반응시키는 과정을 거쳐, 노란색 오일 13 mg을 얻고(17%) 분리 정제 없이 단계 3에 사용하였다.

단계 3. 화합물 17b 제조

상기 실시예 43의 단계 5와 동일한 방법을 화합물 16b(13 mg, 0.02 mmol)에 적용시키고, 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(디클로로메탄:메탄올 = 11:1 → 10:1)로 분리하여 흰색 고체 3 mg을 얻는다(32%).

17b: ¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 1.40-1.44(m, 3H), 1.57-1.65(m, 3H), 1.91-1.94(m, 3H), 2.09-2.15(m, 4H), 3.57-3.60(m, 4H), 3.64(s, 3H), 6.47-6.49(d, J = 6.0 Hz, 1H), 7.36-7.40(m, 1H), 7.48-7.50(d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.68-7.73(m, 2H), 8.02-8.04(d, J = 5.7 Hz, 1H), 8.26-8.27(m, 1H), 8.45(s, 1H), 8.65-8.66(m, 1H), 11.55(brs, 1H).

[ 실시예 45] 6-(5- 메톡시피리딘 -3-일)-N-(트랜스-4-(4-( 메틸설포닐 )피페라진-1-일) 사이클로헥실 )-9H-피리미도[2,3-b]인돌-4-아민(화합물 17c) 제조

단계 1. 화합물 16c 제조

상기 실시예 43의 단계 4와 동일한 방법으로 화합물 15b(60 mg, 0.12 mmol) 및 트랜스-4-(4-(메틸설포닐)피페라진-1-일)사이클로헥산-1-아민(trans-4-(4-(methylsulfonyl)piperazin-1-yl)cyclohexan-1-amine)(64 mg, 0.24 mmol)를 반응시키는 과정을 거치고, 반응 후 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(디클로로메탄:에틸 아세테이트:메탄올 = 6:4:1)로 분리하여 노란색 오일 7 mg을 얻는다(8%).

16c: ¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 1.41-1.58(m, 4H), 1.83-1.91(m, 2H), 2.04-2.09(m, 2H), 2.59-2.62(m, 6H), 2.86(s, 3H), 3.08-3.10(m, 4H), 3.94(s, 3H), 7.53-7.58(t, J = 7.8 Hz, 2H), 7.64-7.69(t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.77-7.78(m, 1H), 7.88-7.91(m, 1H), 8.03-8.05(d, J = 7.8 Hz, 1H), 8.08-8.10(d, J = 5.7 Hz, 1H), 8.33-8.34(d, J = 2.7 Hz, 1H), 8.43-8.46(m, 2H), 8.66-8.67(m, 1H).

단계 2. 화합물 17c 제조

상기 실시예 43의 단계 5와 동일한 방법을 화합물 16c(7 mg, 0.01 mmol)에 적용시키고, 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(디클로로메탄:메탄올 = 10:1)로 분리하여 흰색 고체 0.6 mg을 얻는다(10%).

17c: ¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 1.40-1.68(m, 5H), 1.88-1.97(m, 3H), 2.09-2.16(m, 3H), 2.64(s, 3H), 2.86-2.87(m, 2H), 3.11(m, 4H), 3.56(m, 1H), 3.94(s, 3H), 6.06-6.09(d, J = 7.8 Hz, 1H), 6.48-6.50(d, J = 5.7 Hz, 1H), 7.48-7.51(d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.69-7.73(m, 2H), 8.02-8.04(d, J = 5.7 Hz, 1H), 8.27(d, J = 2.3 Hz, 1H), 8.46(s, 1H), 8.66(s, 1H), 11.57(brs, 1H).

[ 실시예 46] 6-(5- 플루오로피리딘 -3일-3- yl )-N-(트랜스-4- 모르폴리노사이클로헥실 )-9H- 피리 도[2',3':4,5]피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민(화합물 23a)제조

단계 1. 화합물 19 제조

공지의 방법(BioOrg. Med Chem.Lett. 2003, 13, 2003-2007)을 사용하여, 2,6-디클로로-3-니트로피리딘(2,6-dichloro-3-nitropyridine)(9.65 g, 50 mmol)을 N,N-디메틸포름아미드(N,N-dimethylformamide)(100 mL)에 녹인 후 메틸 시아노아세테이트(methyl cyanoacetate)(8.8 mL, 100 mmol)를 가한다. 반응용액을 0^oC로 냉각 후 나트륨 테르트-부톡사이드(Sodium tert-butoxide)(9.6 g, 100 mmol)를 가하고 반응물을 실온에서 2시간 교반 한다. 반응물을 얼음물(300 mL)에 붓고 생성된 고체를 여과 후, 물로 씻고(2 X 100 mL) 건조하여 흰색 고체 12.5 g를 얻는다. 분리정제 없이 흰색 고체 12.5 g을 아세트산(200 mL)에 녹인 후 70^oC로 가열하고, 철(Fe)(13.6 g, 240 mmol)을 3회로 나누어 가하고 30분간 교반한다. 반응물을 셀라이트 패드로 여과하고, 아세트산(20 mL)으로 세척 후 여액을 감압 농축한다. 잔류물에 증류수(200 mL)를 가하고 에틸 아세테이트로 추출 후(2 X 300 mL), 유기층을 물(2 X 100 mL)로 세척 후, 황산나트륨(Na₂SO₄)으로 수분을 제거하고 감압 농축한다. 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(헥산:에틸 아세테이트 = 2:3)로 분리하여 연한 노란색 고체 17.0 g을 제조하였다(62%).

19: ¹H-NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ 3.74(s, 3H), 6.87(d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.19(s, 2H), 7.39(d, J = 8.1 Hz, 1H), 10.93(s, 1H).

단계 2. 화합물 20a 제조

상기 제조예 1의 단계 2와 동일한 방법으로 화합물 19(5 g, 22.2 mmol)를 포름아마이드(30 mL)에 녹인 후, 질소 존재 하에서 185^oC에서 3시간 교반하였다. 반응물을 실온으로 냉각 후, 증류수(50 mL)를 가하고 고체를 여과 후 증류수로 세척(2 X 100 mL)하여 갈색 고체를 얻었다. 건조 후 실리카 겔 관 크로마토그래피(헥산:에틸 아세테이트 = 1:1)로 분리하여 화합물 20a 3.1 g을 제조하였다(63%).

20a: ¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 7.36(d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.89(d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.22(s, 1H).

단계 3. 화합물 21a 제조

상기 제조예 1의 단계 3과 동일한 방법으로 화합물 20a(3.0 g, 13.6 mmol)을 POCl₃(phosphorus oxychloride, 옥시 염화인)(50 mL)에 분산 후, 110^oC에서 14시간 교반하였다. 반응물을 감압농축 후 얼음물(100 mL)을 가하고, 고체를 여과 후 얼음물로 세척(2 X 100 mL)하여 갈색 고체를 얻었다. 건조 후 실리카 겔 관 크로마토그래피(헥산:에틸 아세테이트 = 1:3)로 분리하여 화합물 21a 1.25 g을 제조하였다(38%).

21a: ¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 7.69(d, J = 8.6 Hz, 1H), 8.12(d, J = 8.6 Hz, 1H), 8.91(s, 1H). 13.17(s, 1H).

단계 4. 화합물 22a 제조

상기 제조예 5와 동일한 방법으로 화합물 21a(120 mg, 0.5mmol)을 트랜스-4-모르폴리노사이클로헥산-1-아민 하이드로클로라이드(trans-4-morpholinocyclohexan-1-amine hydrochloride)(156 mg, 0.6 mmol), 트리에틸아민(0.24 mL, 1.69 mmol)을 DMSO(3 mL)에 녹인 뒤 110℃에서 교반한다. 반응 종결을 확인한 뒤 에틸 아세테이트(20 mL)를 가한 뒤 물(10 mL)로 씻어내고, 물(10 mL)은 에틸 아세테이트(20 mL)로 추출한다. 에틸 아세테이트(40 mL)는 물(2 X 10 mL)을 사용하여 씻어낸 후, 황산나트륨(Na₂SO₄)으로 수분을 제거하고 감압 농축한다. 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(디클로로메탄:에틸 아세테이트:메탄올 = 1:6:1)로 분리하여 화합물 22a 160 mg을 제조하였다(82%).

22a: ¹H-NMR (500 MHz, CDCl₃) δ 1.54-1.67(m, 4H), 2.03-2.11(m, 2H), 2.33-2.44(m, 3H), 2.63-2.65(m, 4H), 3.77-3.79(m, 4H), 4.24-4.31(m, 1H), 6.53(d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.34(d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.73(d, J = 8.3 Hz, 1H), 8.55(s, 1H), 10.70(s, 1H).

단계 5. 화합물 23a 제조

상기 실시예 6과 동일한 방법으로 화합물 22a(50 mg, 0.11 mmol) 및 (5-플루오로피리딘-3-일)보론산((5-fluoropyridin-3-yl)boronic acid)(20 mg, 0.14 mmol)을 반응시키는 과정을 거치고, 반응 후 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(디클로로메탄:에틸 아세테이트:메탄올 = 6:1:1)로 분리하여 흰색 고체 38 mg을 얻는다(65%).

23a: ¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 1.33-1.45(m, 2H), 1.50-1.62(m, 2H), 1.91-1.95(m, 2H), 2.17-2.21(m, 2H), 2.28-2.36(m, 1H), 2.42-2.50(m, 4H), 3.56-3.59(m, 4H), 4.12-4.15(m, 1H), 6.80(d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.96(d, J = 8.8 Hz, 1H), 8.11(d, J = 8.5 Hz, 1H), 8.45(s, 1H), 8.50(d, J = 10.6 Hz, 1H), 8.62-8.63(m, 1H), 9.30(s, 1H).

[실시예 47] 7-플루오로-6-(5-플루오로피리딘-3-일)-N-(트랜스-4-모르폴리노사이클로헥실)-9H-피리미도[4,5-b]인돌-4-아민(화합물 29a) 제조

단계 1. 화합물 25 제조

상기 실시예 46의 단계 1과 유사한 방법으로 1-브로모-2,5-디플루오로-4-니트로벤젠 24(2.26 g, 9.5 mmol)을 반응시키는 것을 통하여, 연한 갈색 고체 1.25 g을 제조하였다(45%).

25: ¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 3.76 (s, 3H), 6.88 (s, 2H), 7.12 (d, J = 9.4 Hz, 1H), 7.64 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 10.83 (s, 1H).

단계 2. 화합물 26a 제조

상기 실시예 46의 단계 2와 유사한 방법으로 화합물 25(1.25 g, 4.35 mmol)을 반응시키는 것을 통하여, 연한 갈색 고체 860 mg을 제조하였다(70%).

단계 3. 화합물 27a 제조

상기 실시예 46의 단계 3과 유사한 방법으로 화합물 26a(810 mg, 3.05 mmol)을 반응시키는 것을 통하여, 갈색 고체 816 mg을 제조하였다(89%).

단계 4. 화합물 28a 제조

상기 실시예 46의 단계 4와 유사한 방법으로 화합물 27a(805 mg, 1.80 mmol)을 반응시키는 것을 통하여, 흰색 고체 753 mg을 제조하였다(92%).

28a: ¹H-NMR (300 MHz, MeOD-d₄) δ 1.50 (q, J = 12.4 Hz, 2H), 1.64 (q, J = 12.4 Hz, 2H), 2.07-2.13 (m, 2H), 2.16-2.23 (m, 2H), 2.40-2.47 (m, 1H), 2.70 (t, J = 4.8 Hz, 4H), 3.74 (t, J = 4.7 Hz, 4H), 4.25-4.33 (m, 1H), 7.34 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 8.31 (s, 1H), 8.52 (d, J = 6.7 Hz, 1H).

단계 5. 화합물 29a 제조

상기 실시예 46의 단계 5와 유사한 방법으로 화합물 28a(30 mg, 0.06 mmol)을 반응시키는 것을 통하여, 흰색 고체 6.1 mg을 제조하였다(19%).

29a: ¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 1.35 (q, J = 11.5, 10.8 Hz, 3H), 1.59 (q, J = 12.3 Hz, 3H), 1.86-1.95 (m, 2H), 1.99-2.10 (m, 2H), 2.18-2.30 (m, 1H), 2.40-2.60 (m, 2H), 3.57 (t, J = 4.5 Hz, 4H), 4.21-4.38 (m, 1H), 6.81 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.38 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 8.02 (d, J = 10.1 Hz, 1H), 8.36 (s, 1H), 8.52 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 8.64 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 8.76 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 12.16 (s, 1H).

[ 실시예 48] 7- 클로로 -6-(5- 플루오로피리딘 -3-일)-N-(트랜스-4- 모르폴리노사이클로헥실 )-9H- 피리미도[4,5-b]인돌 -4-아민(화합물 35a) 제조

단계 1. 화합물 31 제조

상기 실시예 46의 단계 1과 유사한 방법으로 1-브로모-2-클로로-5-플루오로-4-니트로벤젠 30(10.2 g, 48.73 mmol)을 반응시키는 것을 통하여, 미색 고체 12.4 g을 제조하였다(100%).

31: ¹H-NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ 3.76 (s, 3H), 6.98 (s, 2H), 7.33 (s, 1H), 7.74 (s, 1H), 10.83 (s, 1H).

단계 2. 화합물 32a 제조

상기 실시예 46의 단계 2와 유사한 방법으로 화합물 31(847 mg, 2.79 mmol)을 반응시키는 것을 통하여, 갈색고체 665 mg을 제조하였다(79%).

32a: ¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 7.70 (s, 1H), 8.20 (d, J = 2.9 Hz, 1H), 8.22 (s, 1H), 12.44 (s, 1H), 12.50 (s, 1H).

단계 3. 화합물 33a 제조

상기 실시예 46의 단계 3과 유사한 방법으로 화합물 32a(655 mg, 2.19 mmol)을 반응시키는 것을 통하여, 갈색 고체 589 mg을 제조하였다(84%).

33a: ¹H-NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ 8.16 (s, 1H), 8.85 (s, 1H), 8.94 (s, 1H), 13.47 (s, 1H).

단계 4. 화합물 34a 제조

상기 실시예 46의 단계 4와 유사한 방법으로 화합물 33a(300 mg, 0.94 mmol)을 반응시키는 것을 통하여, 연한 노란색 고체 254 mg을 제조하였다(57%).

34a: ¹H-NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ 1.35 (q, J = 12.5 Hz, 3H), 1.61 (q, J = 12.4 Hz, 3H), 1.88-1.94 (m, 2H), 1.97-2.05 (m, 2H), 2.24 (t, J = 12.0 Hz, 1H), 2.45-2.56 (m, 2H), 3.58 (t, J = 4.5 Hz, 4H), 4.25-4.32 (m, 1H), 6.98 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.62 (s, 1H), 8.36 (s, 1H), 8.83 (s, 1H), 12.14 (s, 1H).

단계 5. 화합물 35a 제조

상기 실시예 46의 단계 5와 유사한 방법으로 화합물 34a(30 mg, 0.06 mmol)을 반응시키는 것을 통하여, 흰색 고체 20.8 mg을 제조하였다(67%).

35a: ¹H-NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ 1.30-1.40 (m, 3H), 1.60 (m, 3H), 1.85-1.91 (m, 2H), 1.96-2.06 (m, 2H), 2.18-2.26 (m, 1H), 2.45-2.57 (m, 2H), 3.54-3.60 (m, 4H), 4.25-4.33 (m, 1H), 6.99 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.62 (s, 1H), 8.33-8.39 (s, 1H), 8.83 (s, 1H), 12.13 (s, 1H).

[ 실시예 49] 7- 클로로 -6-(1- 메틸 -1H- 피라졸 -4-일)-N-(트랜스-4- 모르폴리노사이클로헥실 )-9H- 피리미도[4,5-b]인돌 -4-아민(화합물 35b) 제조

상기 실시예 6과 유사한 방법으로 화합물 34a(50 mg, 0.10 mmol)을 반응시키는 것을 통하여, 연한 갈색 고체 18.6 mg을 제조하였다(37%).

35b: ¹H-NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ 1.35 (q, J = 12.4 Hz, 2H), 1.61 (q, J = 12.6 Hz, 2H), 1.88-1.94 (m, 2H), 1.98-2.05(m, 2H), 2.23 (t, J = 11.6 Hz, 1H), 2.48-2.55 (m, 4H), 3.57 (t, J = 4.3 Hz, 4H), 3.93 (s, 3H), 4.23-4.34 (m, 1H), 6.80 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.82 (s, 1H), 8.06 (s, 1H), 8.34 (s, 1H), 8.40 (s, 1H), 11.95 (s, 1H).

[ 실시예 50] 6-(5- 플루오로피리딘 -3-일)-N-(트랜스-4- 모르폴리노사이클로헥실 )-9H- 피리도[4’,3 ’:4,5]피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민(화합물 41a) 제조

단계 1. 화합물 37 제조

상기 실시예 46의 단계 1과 유사한 방법으로 2,4-디클로로-5-니트로피리딘 36(9.65 g, 50.0 mmol)을 반응시키는 것을 통하여, 연한 갈색 고체 7.56g을 제조하였다(67%).

37: ¹H-NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ 3.77 (s, 3H), 7.25 (s, 2H), 7.35 (s, 1H), 8.07 (s, 1H).

단계 2. 화합물 38a 제조

상기 실시예 46의 단계 2와 유사한 방법으로 화합물 37(2.57 g, 11.39 mmol)을 반응시키는 것을 통하여, 갈색고체 1.4 g을 제조하였다(55%).

38a: ¹H-NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ 7.84 (s, 1H), 8.30 (s, 1H), 8.62 (s, 1H), 12.63 (s, 1H).

단계 3. 화합물 39a 제조

상기 실시예 46의 단계 3과 유사한 방법으로 화합물 38a(1.4 g, 6.34 mmol)을 반응키는 것을 통하여, 갈색 고체 1.32 g을 제조하였다(87%).

39a: ¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 8.17 (s, 1H), 8.83 (s, 1H), 8.95 (s, 1H), 12.76 (s, 1H).

단계 4. 화합물 40a 제조

상기 실시예 46의 단계 4와 유사한 방법으로 화합물 39a(300 mg, 1.25 mmol)을 반응시키는 것을 통하여, 갈색 고체 390 mg을 제조하였다(81%).

40a: ¹H-NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ 1.35 (q, J = 12.1 Hz, 2H), 1.61 (q, J = 12.4 Hz, 2H), 1.88-1.95(m, 2H), 1.97-2.03 (m, 2H), 2.24 (t, J = 11.6 Hz, 1H), 2.48-2.56 (m, 4H), 3.58 (t, J = 4.3 Hz, 4H), 4.26-4.36 (m, 1H), 7.18 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 8.43 (s, 1H), 8.55 (s, 1H), 8.58 (s, 1H), 12.36 (s, 1H).

단계 5. 화합물 41a 제조

상기 실시예 46의 단계 5와 유사한 방법으로 화합물 40a(50 mg, 0.12 mmol)을 반응시키는 것을 통하여, 흰색 고체 27 mg을 제조하였다(46%).

41a: ¹H-NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ 1.33 - 1.43 (m, 3H), 1.66 (q, J = 12.4 Hz, 3H), 1.91-1.97 (m, 2H), 2.05-2.13 (m, 2H), 2.29 (t, J = 11.6 Hz, 1H), 2.48-2.55 (m, 2H), 3.58 (t, J = 4.5 Hz, 4H), 4.27-4.48 (m, 1H), 7.08 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 8.41 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 8.46 (s, 1H), 8.62 (t, J = 2.2 Hz, 1H), 8.90 (s, 1H), 8.95 (s, 1H), 9.36 (s, 1H), 12.41 (s, 1H).

[ 실시예 51] 6-(5- 메톡시피리딘 -3-일)-N-(트랜스-4- 모르폴리노사이클로헥실 )-9H- 피리도[4’,3 ’:4,5]피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민(화합물 41b) 제조

상기 실시예 9와 유사한 방법으로 화합물 40a(50 mg, 0.12 mmol)을 반응시키는 것을 통하여, 흰색 고체 23.9 mg을 제조하였다(40%).

41b: ¹H-NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ 1.38 (q, J = 12.2, 11.7 Hz, 2H), 1.66 (q, J = 12.6 Hz, 2H), 1.90-1.97 (m, 2H), 2.04-2.10 (m, 2H), 2.28 (t, J = 11.7 Hz, 1H), 2.49-2.53 (m, 4H), 3.58 (t, J = 4.5 Hz, 4H), 3.95 (s, 3H), 4.30-4.39 (m, 1H), 7.12 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 8.11 (s, 1H), 8.34 (s, 1H), 8.45 (s, 1H), 8.90 (s, 1H), 8.91 (s, 1H), 9.08 (s, 1H), 12.34 (s, 1H).

[ 실시예 52] 6-(1- 메틸 -1H- 피라졸 -4-일)-N-(트랜스-4- 모르폴리노사이클로헥실 )-9H- 피리도[4’,3 ’:4,5]피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민(화합물 41c) 제조

상기 실시예 6과 유사한 방법으로 화합물 40a(50 mg, 0.12 mmol)을 반응시키는 것을 통하여, 연한 갈색 고체 6.9 mg을 제조하였다(12%).

41c: ¹H-NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ 1.32-1.43 (m, 2H), 1.65 (q, J = 13.4, 12.3 Hz, 2H), 1.90-1.99 (m, 2H), 2.05-2.12 (m, 2H), 2.28 (t, J = 12.2 Hz, 1H), 2.48-2.56 (m, 4H), 3.59 (t, J = 4.6 Hz, 4H), 3.93 (s, 3H), 4.27-4.36 (m, 1H), 6.89 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.07 (s, 1H), 8.21 (s, 1H), 8.42 (s, 1H), 8.48 (s, 1H), 8.71 (s, 1H), 12.13 (s, 1H).

[ 실시예 53] 6-(1- 메틸 -1H- 피라졸 -4-일)-N-(트랜스-4- 모르폴리노사이클로헥실 )-9H- 피리미도[4,5-b]인돌 -4,6-디아민(화합물 6aat) 제조

Pd(OAc)₂(2.9 mg, 10 mol%), 엑스포스(XPhos)(16.6 mg, 30 mol%)을 1,4-다이옥세인(1,4-dioxane)(2.3 mL)에 넣은 후, 탈가스(degas)하고 2분 동안 110^oC에서 교반한다. 화합물 5aa(50 mg, 0.11 mmol), 1-메틸-1H-피라졸-4-아민(1-methyl-1H-pyrazol-4-amine)(11.5 μL, 0.13 mmol), NaO^tBu(36.8 mg, 0.38 mmol)를 넣은 후, 탈가스(degas)하고 110^oC에서 교반한다. 반응종결을 확인 후 에틸 아세테이트(5 mL)를 가한 후, 셀라이트 패드로 여과하고 감압 농축한다. 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(에틸 아세테이트:디클로로메탄:메탄올 = 3:1:1)로 분리하여 붉은색 고체 11.8 mg을 얻는다(22%).

6aat : ¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 1.36 (q, J = 11.8, 10.8 Hz, 2H), 1.52 (q, J = 12.3, 11.4 Hz, 2H), 1.85-1.95 (m, 2H), 2.05-2.15 (m, 2H), 2.24 (t, J = 11.4 Hz, 1H), 2.49-2.51 (m, 4H), 3.58 (t, J = 4.4 Hz, 4H), 3.79 (s, 3H), 4.06-4.19 (m, 1H), 6.31 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.93 (dd, J= 8.6, 2.1 Hz, 1H), 7.20-7.27 (m, 2H), 7.34 (s, 1H), 7.57 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 7.63 (s, 1H), 8.26 (s, 1H), 11.48 (s, 1H).

[ 실시예 54] 6-(1-( 디플루오로메틸 )-1H- 피라졸 -4-일)-N-(트랜스-4- 모르폴리노사이클로헥실 )-9H- 피리미도[4,5-b]인돌 -4-아민(화합물 6aau) 제조

화합물 5aa(50 mg, 0.11 mmol), 1-(디플루오로메틸)-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보로레인-2-일)-1H-피라졸(1-(difluoromethyl)-4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)-1H-pyrazole)(34 mg, 0.13 mmol), tBu₃PBF₄(2 mg, 6 mol%), K₂CO₃(32 mg, 0.23 mmol)을 다이옥세인(Dioxane):H₂O(4:1 in v/v, 2 mL)에 녹인 후 탈가스(degas)한다. Pd₂(dba)₃(3.5 mg, 3.3 mol%)를 넣고 탈가스(degas)한 뒤, 90^oC에서 교반한다. 반응종결을 확인 후 에틸 아세테이트(5 mL)를 가한 후 셀라이트 패드로 여과 후 물(5 mL)로 씻고, 물층은 다시 에틸 아세테이트(3 mL)로 추출한다. 에틸 아세테이트 층을 합한 후 물(5 mL)로 씻고, 황산나트륨(Na₂SO₄)으로 수분을 제거하고 감압 농축한다. 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(에틸 아세테이트:디클로로메탄:메탄올 = 3:1:1)로 분리하여 흰색 고체 15.0 mg을 얻는다(27%).

6aau : ¹H-NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ 1.38 (q, J = 12.5 Hz, 2H), 1.65 (q, J = 12.9, 12.1 Hz, 2H), 1.90-1.98 (m, 2H), 2.05-2.14 (m, 2H), 2.27 (t, J = 11.8 Hz, 1H), 2.45-2.57 (m, 4H), 3.58 (t, J = 4.3 Hz, 4H), 4.25-4.33 (m, 1H), 6.63 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.46 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.70 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.89 (t, J = 59.3 Hz, 1H), 8.34 (s, 1H), 8.38 (s, 1H), 8.49 (s, 1H), 8.70 (s, 1H), 11.94 (s, 1H).

[ 실시예 55] 6-(5-( 디플루오로메틸 )-1,3,4- 옥사디아졸 -2-일)-N-(트랜스-4-모르폴리노사이클로헥실)-9H-피리미도[4,5-b]인돌-4-아민(화합물 6baha) 제조

단계 1. 화합물 6bah 제조

화합물 6ba(100 mg, 0.24 mmol), 하이드라지드(Hydrazide)(100 mg, 0.24 mmol), N,N-디이소프로필에틸아민(DIPEA, N,N-Diisopropylethylamine)(85μL, 0.48 mmol), 디플루오로아세틱무수물(53μL, 0.48 mmol)을 아세토나이트릴(2 mL)에 녹인 후 80^oC에서 교반한다. 반응종결을 확인 후 물에 반응물을 넣고, 에틸 아세테이트(3 X 10 mL)로 추출한다. 유기층은 황산나트륨(Na₂SO₄)으로 수분을 제거하고, 감압 농축 후 잔류물을 디에틸에테르로 세척하여 연한 노란색 고체 101 mg을 얻는다(85%).

단계 2. 화합물 6baha제조

화합물 6bah(95 mg, 0.19 mmol)을 티오닐클로라이드(3 mL)에 넣고 환류 교반한다. 반응종결을 확인 후 감압농축하고, 잔류물을 얼음물(5 mL)에 넣는다. 탄산수소나트륨을 사용하여 중성화시킨 후, 고체를 물로 세척한다. 고체를 실리카 겔 관 크로마토그래피(디클로로메탄:메탄올 = 6:1)로 분리하여 미색 고체 73 mg을 얻는다(80%).

6baha : ¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 1.36 (q, J = 13.1, 11.9 Hz, 3H), 1.67 (q, J = 11.8, 10.7 Hz, 3H), 1.88-1.96 (m, 3H), 2.00-2.10 (m, 3H), 2.20-2.31 (m, 1H), 3.58 (t, J = 4.6 Hz, 4H), 4.24-4.37 (m, 1H), 7.24 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.58 (t, J = 51.6 Hz, 1H), 7.64 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.02-8.08 (m, 1H), 8.40 (s, 1H), 9.07 (s, 1H), 12.39 (s, 1H).

[ 실시예 56] 6-(1- 메틸 -1H- 피라졸 -4-일)-N-(트랜스-4- 모르폴리노사이클로헥실 )-9H-피리도[2',3':4,5]피롤로[2,3-d]피리미딘-4,6-디아민(화합물 23b) 제조

상기 실시예 53과 유사한 방법으로 화합물 22a(50 mg, 0.12 mmol)을 반응시키는 것을 통하여, 연한 갈색 고체 11.1 mg을 제조하였다(19%).

23b: ¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 1.31-1.46 (m, 4H), 1.86-1.98 (m, 2H), 2.25-2.35 (m, 3H), 2.43-2.57 (m, 4H), 3.58 (t, J = 4.5 Hz, 4H), 3.85 (s, 3H), 3.98-4.07 (m, 1H), 6.44 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 6.72 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.50 (s, 1H), 7.64 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.87 (s, 1H), 8.31 (s, 1H), 8.79 (s, 1H), 11.62 (s, 1H).

[ 실시예 57] 4-((6-5- 플루오로피리딘 -3-일)-9H- 피리미도[4,5-b]인돌 -4-일)아미노)- N,N -디메틸피페리딘-1-설폰아미드(화합물 5aiaaa ) 제조

단계 1. 화합물 5ai 제조

화합물 4a(286 mg, 1.01 mmol), 탄산칼륨(K₂CO₃)(280 mg, 2.02 mmol), 4-메톡시벤질 클로라이드(0.16 mL, 1.23 mmol)를 디메틸포름아미드(DMF)(2 m)에 녹인 후 상온교반한다. 반응종결을 확인 후 에틸 아세테이트(5 mL)를 넣고 물 (8 mL)로 세척하고, 물층은 에틸 아세테이트 (2 X 3 mL)를 사용하여 추출한다. 유기층은 물(2 X 5 mL)로 세척 후 황산나트륨(Na₂SO₄)으로 수분을 제거하고, 감압 농축 후 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(헥산:에틸 아세테이트 = 1:1)로 분리하여 연한 갈색 고체 399 mg을 얻는다(98%). 화합물 5ai에 있어서, PMB는 p-메톡시벤질(p-Methoxybenzyl)을 나타낸다.

5ai : ¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 3.68 (s, 3H), 5.67 (s, 2H), 6.84 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.27 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.82 (d, J = 1.3 Hz, 2H), 8.40 (t, J = 1.3 Hz, 1H), 8.93 (s, 1H).

단계 2. 화합물 5aia 제조

상기 실시예 46의 단계 4와 유사한 방법으로 화합물 5ai(200 mg, 0.49 mmol) 및 4-아미노-N,N-디메틸피페리딘-1-설폰아미드 (4-Amino-N,N-dimethylpiperidine-1-sulfonamide)을 반응시키는 것을 통하여, 흰색 고체 263 mg을 제조하였다(92%).

5aia : ¹H-NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ 1.78-1.89 (m, 2H), 1.97-2.04 (m, 2H), 2.45-2.55 (m, 1H), 2.79 (s, 6H), 3.02 (t, J = 12.4 Hz, 2H), 3.67 (s, 3H), 3.68-3.71 (m, 1H), 4.46-4.57 (m, 1H), 5.54 (s, 2H), 6.82 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 7.09 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.20 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 7.49-7.61 (m, 2H), 8.47 (s, 1H), 8.68 (s, 1H).

단계 3. 화합물 5aiaa 제조

상기 실시예 46의 단계 5와 유사한 방법으로 화합물 5aia(100 mg, 0.17 mmol)을 반응시키는 것을 통하여, 흰색 고체 114 mg을 제조하였다(99%).

5aiaa : ¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 1.80-2.24 (m, 5H), 2.79 (s, 6H), 3.03 (t, J = 12.2 Hz, 2H), 3.68 (s, 3H), 3.68-3.78 (m, 1H), 4.47-4.67 (m, 1H), 5.59 (s, 2H), 6.85 (t, J = 7.0 Hz, 2H), 7.02 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.24 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 7.68-7.87 (m, 2H), 8.15 (d, J = 10.5 Hz, 1H), 8.53 (d, J = 24.0 Hz, 2H), 8.68 (s, 1H), 8.97 (s, 1H).

단계 4. 화합물 5aiaaa 제조

화합물 5aiaa(114 mg, 0.19 mmol)을 메탄설포닐 클로라이드(0.4 mL), 트리플루오로아세트산(2 mL)에 녹인 후 60^oC에서 교반한다. 반응종결을 확인 후 감압농축하고 잔류물을 얼음물 (5 mL)에 넣는다. 탄산수소나트륨을 사용하여 중성화시킨 후 에틸 아세테이트(7 mL)를 사용하여 추출한 뒤, 황산나트륨(Na₂SO₄)으로 수분을 제거하고 감압 농축한다. 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(디클로로메탄:메탄올 = 10:1)로 분리하여, 연한 갈색 고체 5 mg을 얻는다(5%).

5aiaaa : ¹H-NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ 1.79-1.90(m, 2H), 1.99-2.07 (m, 2H), 2.78 (s, 6H), 2.99-3.06 (m, 2H), 3.65-3.73 (m, 2H), 4.47-4.56 (m, 1H), 6.91 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.57 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.79 (dd, J = 8.4, 1.7 Hz, 1H), 8.12-8.17 (m, 1H), 8.38 (s, 1H), 8.57 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 8.63-8.66 (m, 1H), 8.97 (t, J = 1.8 Hz, 1H), 12.09 (s, 1H).

[ 실시예 58] 6-(5- 플루오로피리딘 -3-일)-N-(1-( 메틸설포닐 )피페리딘-4-일)-9H- 피리미도[4,5-b]인돌 -4-아민(화합물 5aibaa) 제조

단계 2. 화합물 5aib 제조

상기 실시예 46의 단계 4와 유사한 방법으로 화합물 5ai(200 mg, 0.49 mmol) 및 4-아미노-1-(메틸설포닐)피페리딘(4-Amino-1-(methylsulfonyl)piperidine)을 반응시키는 것을 통하여, 흰색 고체 268 mg을 제조하였다(99%).

5aib : ¹H-NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ 1.81-1.91 (m, 2H), 2.00-2.08 (m, 2H), 2.86-2.94 (s, 5H), 3.64-3.71 (m, 5H), 4.45-4.56 (m, 1H), 5.54 (s, 2H), 6.82 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.10 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.20 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.52 (dd, J = 8.6, 1.8 Hz, 1H), 7.58 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 8.47 (s, 1H), 8.68 (d, J = 1.8 Hz, 1H).

단계 3. 화합물 5aiba 제조

상기 실시예 46의 단계 5와 유사한 방법으로 화합물 5aib(66.6 mg, 0.12 mmol)을 반응시키는 것을 통하여, 갈색 고체 62 mg을 제조하였다(85%).

5aiba : ¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 1.67-2.28 (m, 5H), 2.84-3.05 (m, 4H), 3.54-3.75 (m, 5H), 4.45-4.65 (s, 1H), 5.60 (s, 2H), 6.79-6.94 (m, 2H), 7.02 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.25 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 7.68-7.91 (m, 2H), 8.16 (d, J = 10.5 Hz, 1H), 8.50 (s, 1H), 8.58 (s, 1H), 8.68 (s, 1H), 8.97 (s, 1H).

단계 4. 화합물 5aibaa 제조

상기 실시예 57의 단계 4와 유사한 방법으로 화합물 5aiba(62.0 mg, 0.14 mmol)을 반응시키는 것을 통하여, 흰색 고체 21.1 mg을 제조하였다 (34%).

5aibaa : ¹H-NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ 1.85-1.95 (m, 2H), 2.05-2.13 (m, 2H), 2.87-2.96 (m, 5H), 3.65-3.73 (m, 2H), 4.46-4.57 (m, 1H), 6.93 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.58 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.81 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.16 (d, J = 10.5 Hz, 1H), 8.39 (s, 1H), 8.58 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 8.65 (s, 1H), 8.98 (s, 1H), 12.11 (s, 1H).

[ 실시예 59] 6-(4- 메틸 -1-이미다졸-1-일)-N-(트랜스-4- 모르폴리노사이클로헥실 )-9H-피리미도[4,5-b]인돌-4-아민(화합물 5aicaa) 제조

단계 2. 화합물 5aic 제조

실시예 46의 단계 4와 유사한 방법으로 화합물 5ai(103mg, 0.255mmol)을 반응시키는 것을 통하여, 연한 갈색고체 129mg을 제조하였다(92%).

5aic : ¹H-NMR (500 MHz, CDCl₃) δ 1.42 (q, J = 12.2 Hz, 3H), 1.48-1.56 (m, 1H), 2.01-2.10 (m, 2H), 2.30-2.42 (m, 3H), 2.56-2.66 (m, 4H), 3.74 (s, 3H), 3.74-3.77 (m, 4H), 4.25-4.347 (m, 1H), 4.91 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.53 (s, 2H), 6.79 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.15 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.25 (s, 1H), 7.46 (dd, J = 8.6, 1.8 Hz, 1H), 7.79 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 8.58 (s, 1H).

단계 3. 화합물 5aica 제조

화합물 5aic(30 mg, 0.05 mmol), 4-메틸-1H-이미다졸(6.7 mg, 0.08 mmol), 포타슘 테르트-부톡사이드(Potassium tert-butoxide)(9.61 mg, 0.10 mmol), SPhos(2-Dicyclohexylphosphino-2′,6′-dimethoxybiphenyl)(2.0 mg, 10 mol%)을 톨루엔(2 mL)에 넣은 후 탈가스(degas)한다. Pd₂(dba)₃(2.3 mg, 0.0025 mmol)을 넣고 탈가스 후 110^oC에서 교반한다. 반응종결을 확인 후 에틸 아세테이트(5 mL)를 가한 후, 셀라이트 패드로 여과하고 감압 농축한다. 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(에틸 아세테이트:디클로로메탄:메탄올 = 6:1:1)로 분리하여 노란색 고체 16 mg을 얻는다(53%).

5aica : ¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 1.34-1.63 (m, 5H), 1.97-2.10 (m, 4H), 2.26-2.43 (m, 3H), 2.61 (t, J = 4.6 Hz, 4H), 3.67-3.78 (m, 7H), 4.24-4.38 (m, 1H), 5.01 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 5.58 (s, 2H), 6.78-6.85 (m, 2H), 7.00 (s, 1H), 7.19 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.33 (dd, J = 8.6, 1.9 Hz, 1H), 7.43 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 7.59-7.65 (m, 1H), 7.73 (s, 1H), 8.61 (s, 1H).

단계 4. 화합물 5aicaa 제조

상기 실시예 57의 단계 4와 유사한 방법으로 화합물 5aica(16 mg, 0.02 mmol)을 반응시키는 것을 통하여, 흰색 고체 4.5 mg을 제조하였다(35%).

5aicaa : ¹H-NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ 1.36-1.50 (m, 4H), 1.55-1.68 (m, 3H), 1.93-2.02 (m, 3H), 2.03-2.09 (m, 3H), 2.21 (s, 3H), 3.59-3.69 (m, 4H), 4.28-4.35 (m, 1H), 6.77 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.43 (s, 1H), 7.53 (d, J = 1.1 Hz, 2H), 8.08-8.09 (m, 1H), 8.36 (s, 1H), 8.45 (s, 1H), 12.01 (s, 1H).

[ 실시예 60] 6-(5- 플루오로 -1- 메틸 -1H- 피라졸 -4-일)-N-(트랜스-4- 모르폴리노사이클로헥실 )-9H- 피리 미도[4,5-b]인돌-4-아민 (화합물 5aicba )제조

단계 3. 화합물 5aicb제조

화합물 5aic(68 mg, 0.123 mmol), Bis(pinacolato)diboron(Pin2B)(42 mg, 0.165 mmol), 포타슘 아세테이트(AcOK, potassium acetate)(36 mg, 0.366 mmol)을 1,4-다이옥세인(1,4-dioxane)(2.3 mL)에 넣은 후 탈가스(degas)한다. Pd(dppf)Cl₂(9 mg, 0.0123 mmol)을 넣고 탈가스 후 90^oC에서 교반한다. 반응종결을 확인 후 에틸 아세테이트(5 mL)를 가한 후 셀라이트 패드로 여과하고 감압 농축한다. 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(에틸 아세테이트:헥산 = 3:1)로 분리하여 흰색 고체 52mg을 얻는다(71%).

5aicb : ¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 1.23-1.31 (m, 4H), 1.39 (s, 12H), 1.43-1.54 (m, 4H), 2.00-2.01 (m, 2H), 2.31-2.46 (m, 3H), 2.62 (t, J = 4.4 Hz, 4H), 3.73 (s, 3H), 3.74-3.79 (m, 4H), 4.24-4.39 (m, 1H), 5.17 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.56 (s, 2H), 6.77 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.15 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.39 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.84 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 8.14 (s, 1H), 8.57 (s, 1H). 8.2 Hz, 1H), 8.14 (s, 1H), 8.57 (s, 1H).

단계 4. 화합물 5aicba 제조

5-플루오로-4-아이오도-1-메틸-1H-피라졸(18 mg, 0.085 mmol), 화합물 5aicb(35 mg, 0.06 mmol), K₂CO₃ (37 mg, 0.26 mmol)을 다이옥세인(Dioxane):H₂O(4:1 in v/v, 3 mL)에 녹인 후 탈가스(degas)한다. Pd(PPh₃)₄(6 mg, 5.0 mol%)를 넣고 탈가스(degas)한 뒤 90^oC에서 교반한다. 반응종결을 확인 후 에틸 아세테이트(5 mL)를 가한 후 셀라이트 패드로 여과 후 물(5 mL)로 씻고, 물층은 다시 에틸 아세테이트(3 mL)로 추출한다. 에틸 아세테이트 층을 합한 후 물(5 mL)로 씻고, 황산나트륨(Na₂SO₄)으로 수분을 제거하고 감압 농축한다. 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(에틸 아세테이트:헥산 = 5:1)로 분리하여 흰색 고체 25 mg을 얻는다.

상기 흰색 고체 화합물을 트리플루오로아세트산 2mL에 가하고, 메탄술폰산 0.2 mL를 가한 후 60^oC에서 14시간 교반하였다. 반응물을 감압 농축 후, 탄산수소나트륨 수용액으로 중화시키고 에틸 아세테이트(2 x 3 mL)로 추출한다. 에틸 아세테이트 층을 합한 후 물(5 mL)로 씻고, 황산나트륨(Na₂SO₄)으로 수분을 제거하고 감압 농축한다. 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(에틸 아세테이트:디클로로메탄:메탄올 = 6:1:1)로 분리하여 흰색 고체 10 mg을 얻는다(37%).

[ 실시예 61] 2- 모르폴리노 -N-(트랜스-4- 모르폴리노사이클로헥실 )-5H- 피롤로[2,3-d:4,5-d']디피리미딘 -9-아민(화합물 47a) 제조

단계 1. 화합물 43 제조

상기 실시예 46의 단계 1과 유사한 방법으로 화합물 42(2,4-디클로로-5-니트로피리미딘)(9.4 g, 48.76 mmol)을 반응시키는 것을 통하여, 갈색 고체 5.19 g을 제조한다(45%).

43: ¹H-NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ 3.76 (s, 3H), 7.63 (s, 2H), 8.16 (s, 1H), 11.17 (s, 1H).

단계 2. 화합물 44a 제조

상기 실시예 46의 단계 2와 유사한 방법으로 화합물 43(350 mg, 1.54 mmol)을 반응시키는 것을 통하여, 갈색 고체 495 mg을 제조한다(100%).

44a: ¹H-NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ 8.36 (s, 1H), 8.87 (s, 1H), 12.72 (s, 2H).

단계 3. 화합물 45a 제조

화합물 44a(200 mg, 0.90 mmol), 모르폴린(morpholine)(0.12 mL, 1.35 mmol), K₂CO₃(249 mg, 1.80 mmol)을 DMSO(디메틸설폭사이드)(3 mL)에 녹인 후, 마이크로파를 사용하여 190^oC에서 30분 동안 교반한다. 반응종결을 확인 후 에틸 아세테이트(5 mL)를 가한 후 물(5 mL)로 씻고, 물층은 다시 에틸 아세테이트(2 X 5 mL)로 추출한다. 에틸 아세테이트 층을 합한 후 물(2 X 5 mL)로 씻고, 황산나트륨(Na₂SO₄)으로 수분을 제거하고 감압 농축한다. 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(에틸 아세테이트:디클로로메탄:메탄올 = 10:1:1)로 분리하여 노란색 고체 157 mg을 얻는다(63%).

45a: ¹H-NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ 3.56-3.59 (t, J = 5.0 Hz, 4H), 3.67 (t, J = 4.9 Hz, 4H), 8.17 (s, 1H), 8.59 (s, 1H), 12.21 (s, 2H).

단계 4. 화합물 46a 제조

상기 실시예 46의 단계 3과 유사한 방법으로 화합물 45a(157 mg, 0.57 mmol)을 반응시키는 것을 통하여, 노란색 고체 10.0 mg을 제조하였다(5.9%).

46a: ¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 3.70-3.75 (m, 5H), 3.76-3.80 (m, 4H), 8.83 (s, 1H), 8.87 (s, 1H).

단계 5. 화합물 47a 제조

상기 실시예 46의 단계 4와 유사한 방법으로 화합물 46a(8.0 mg, 0.02 mmol)을 반응시키는 것을 통하여, 연한 노란색 고체 8.9 mg을 제조하였다(73%).

47a: ¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d₆) δ 1.27-1.57 (m, 7H), 1.82-1.95 (m, 3H), 2.07-2.18 (m, 3H), 2.21-2.33 (m, 2H), 3.57 (t, J = 4.6 Hz, 4H), 3.68-3.76 (m, 6H), 3.98-4.14 (m, 1H), 6.44 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 8.39 (s, 1H), 8.59 (s, 1H), 11.83 (s, 1H).

[ 실시예 62] 6-(4- 에톡시 -3- 피리딜 )-N-(트랜스-4- 모르폴리노사이클로헥실 )-6-(피리딘-4-일)-9H- 피 리미도[4,5-b]인돌-4-아민(화합물 48a) 제조

화합물 5aa(55 mg, 0.13 mmol), 2-에톡시피리딘-5-보로닉산(2-ethoxypyridine-5-boronic acid, 25.6 mg, 0.15 mmol), K₂CO₃(53 mg, 0.38 mmol)을 다이옥세인:물(4:1 in v/v in 5 mL)에 녹인 후, 아르곤 가스로 충분히 탈산소화 한다. 그 후, Pd(PPh₃)₄(4.4 mg, 0.0038 mmol)을 넣은 뒤 가스를 제거하고, 80^oC에서 15시간 교반한다. 반응 종결 후 에틸 아세테이트(30 mL)에 묽혀 셀라이트 패드로 여과 후, 물(2 X 15 mL)로 세척한 다음 황산나트륨(Na₂SO₄)으로 수분을 제거하고 감압 농축한다. 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(디클로로메탄:메탄올 = 20:1 → 10:1.5)로 정제하여 연한 노란색 고체 12.2 mg을 얻는다(20%).

48a: ¹H-NMR (400 MHz, CD₃OD-d₄) δ 1.42 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.48-1.66 (m, 4H), 2.07-2.22 (m, 4H), 2.33-2.38 (m, 1H), 2.64-2.65 (m, 4H), 3.71-3.73 (m, 4H), 4.26-4.31 (m, 1H), 4.37 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 6.89 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.57-7.62 (m, 2H), 8.08(dd, J = 8.4, 2.8 Hz, 1H), 8.31(s, 1H), 8.36(s, 1H), 8.47(d, J = 2.4 Hz, 1H).

[ 실시예 63] 6-(3- 메톡시 -4- 피리딜 )-N-(트랜스-4- 모르폴리노사이클로헥실 )-6-(피리딘-4-일)-9H- 피 리미도[4,5-b]인돌-4-아민(화합물 49a) 제조

화합물 5aa(58 mg, 0.14 mmol), 2-메톡시피리딘-4-보로닉산(2-methoxypyridine-4-boronic acid, 62.4 mg, 0.41 mmol), K₃PO₄(86.6 mg, 0.41 mmol)을 에탄올:물(4:1 in v/v in 5 mL)에 녹인 후, 아르곤 가스로 충분히 퍼지하여 산소를 제거한 후, Pd(PPh₃)₄(15.7 mg, 0.014 mmol)을 첨가하고 55^oC에서 15시간 교반한다. 반응 종결 후 반응 혼합물을 감압 농축 후 에틸 아세테이트(30 mL)에 묽혀 셀라이트 패드로 여과한다. 여과액을 물(2 X 15 mL)로 세척한 다음, 황산나트륨(Na₂SO₄)으로 수분을 제거하고 감압 농축한다. 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(디클로로메탄:메탄올 = 20:1 → 10:1.5)로 정제하여 연한 노란색 고체 13.1 mg을 얻는다(21%).

49a: ¹H-NMR (400 MHz, CD₃OD-d₄) δ 1.48-1.67 (m, 4H), 2.08-2.23 (m, 4H), 2.33-2.40 (m, 1H), 2.64-2.66 (m, 4H), 3.71-3.74 (m, 4H), 3.97 (s, 3H), 4.27-4.34 (m, 1H), 7.24 (s, 1H), 7.42 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 7.61 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.77 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.17 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 8.32(s, 1H), 8.53(s, 1H).

[ 실시예 64] 6-(2- 메톡시 -3- 피리딜 )-N-(트랜스-4- 모르폴리노사이클로헥실 )-6-(피리딘-4-일)-9H- 피리미도[4,5-b]인돌 -4-아민(화합물 50a) 제조

화합물 5aa(56 mg, 0.13 mmol), 2-메톡시피리딘-3-보로닉산(2-methoxypyridine-3-boronic acid, 99.4 mg, 0.65 mmol), K₃PO₄(137.9 mg, 0.65 mmol)을 1,2-디메톡시에탄:에탄올:물(4:0.5:0.5 in v/v in 5 mL)에 녹인 후, 아르곤 가스로 퍼지하여 산소를 제거한 후, Pd(PPh₃)₄(15 mg, 0.013 mmol)을 첨가하고 60^oC에서 15시간 교반한다. 반응 혼합물을 감압 농축 후 에틸 아세테이트(30 mL)에 묽혀 셀라이트 패드로 여과한다. 여과액을 물(2 X 15 mL)로 세척한 다음 황산나트륨(Na₂SO₄)으로 수분을 제거하고 감압 농축한다. 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(디클로로메탄:메탄올 = 20:1 → 10:1.5)로 분리하여 연한 노란색 고체 13.1 mg을 얻는다(22%).

50a: ¹H-NMR (400 MHz, CD₃OD-d₄) δ 1.44-1.57 (m, 4H), 2.03-2.20 (m, 4H), 2.33-2.39 (m, 1H), 2.64-2.66 (m, 4H), 3.70-3.73 (m, 4H), 3.95 (s, 3H), 4.21-4.27 (m, 1H), 7.04-7.07 (m, 1H), 7.52-7.60 (m, 2H), 7.82 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 8.12(d, J = 4.0 Hz, 1H), 8.26(s, 1H), 8.31(s, 1H).

[ 실시예 65] 6-(2- 메틸티오 )- 피리미디닐 -N-(트랜스-4- 모르폴리노사이클로헥실 )-6-(피리딘-4-일)-9H-피리미도[4,5-b]인돌-4-아민(화합물 51a) 제조

5aa(20 mg, 0.04 mmol), 2-(메틸티오)-피리미디닐-5-보로닉산 피나콜 에스터(2-(Methylthio)-pyrimidinyl-5-boronic acid pinacol ester, 10.1 mg, 0.04 mmol), K₂CO₃(16 mg, 0.12 mmol)을 다이옥세인(Dioxane):H₂O(4:1 in v/v, 1 mL)에 녹인 후, 아르곤 가스로 퍼지하여 산소를 제거하고, Pd(PPh₃)₄(2 mg, 0.002 mmol)을 넣은 뒤 가스를 제거하고 80^oC에서 18시간 교반한다. 반응종결을 확인 후 에틸 아세테이트(10 mL)를 가한 뒤 셀라이트 패드로 여과하여 물(2 X 10 mL)로 세척 후, 황산나트륨(Na₂SO₄)으로 수분을 제거하고 감압 농축한다. 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(디클로로메탄:메탄올 = 20:1 → 10:1)로 분리하여 연한 노란색 고체 12 mg을 얻는다(58%).

51a: ¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 1.33-1.41 (m, 2H), 1.58-1.67 (m, 2H), 1.91-2.07 (m, 4H), 2.26 (m, 1H), 2.59 (s, 3H), 3.35 (m, 4H), 3.57 (s, 4H), 4.33 (m, 1H), 6.72 (d, 1H), 7.55 (d, 1H), 7.75 (d, 1H), 8.34 (s, 1H), 8.60 (s, 1H), 9.12 (d, 2H), 12.04 (s, 1H).

[ 실시예 66] 6-(1-(사이클로 프로필메틸 ) 피라졸 )-N-(트랜스-4- 모르폴리노사이클로헥실 )-6-(피리딘-4-일)-9H-피리미도[4,5-b]인돌-4-아민(화합물 52a) 제조

상기 실시예 65와 동일한 방법으로 화합물 5aa(60 mg, 0.12 mmol) 및 1-(사이클로프로필메틸)피라졸-4-보론산(1-(cyclopropylmethyl)pyrazole-4-boronic acid, 24.9 mg, 0.15 mmol)을 반응시키는 과정을 거치고, 반응 후 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(디클로로메탄:메탄올= 20:1 → 10:1)로 분리하여 흰색 고체 40 mg을 얻는다(70%).

52a: ¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 0.45 (m, 2H), 0.55 (m,2H), 1.28 (m, 1H), 1.33-1.41 (m, 2H), 1.60-1.68 (m, 2H), 1.91-2.07 (m, 4H), 2.26 (m,1H), 3.37 (m, 4H), 3.57(s, 4H), 4.03(d, 2H), 4.33(m, 1H), 6.72(d, 1H), 7.41(d, 1H), 7.56(d, 1H), 7.97(s, 1H), 8.17(s, 1H), 8.32(s, 1H), 8.37(s, 1H), 11.83(s, 1H).

[ 실시예 67] 6-(3- 피롤로 )-N-(트랜스-4- 모르폴리노사이클로헥실 )-6-(피리딘-4-일)-9H-피리미도[4,5-b]인돌-4-아민(화합물 53a) 제조

상기 실시예 65와 동일한 방법으로 화합물 5aa(60 mg, 0.12 mmol) 및 피롤-3-보론산, 피나콜 에스터(pyrrole-3-boronic acid, pinacole ester, 28.9 mg, 0.15 mmol)을 반응시키는 과정을 거치고, 반응 후 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(디클로로메탄:메탄올= 20:1 → 10:1)로 분리하여 흰색 고체 42 mg을 얻는다(84%).

53a: ¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 1.33-1.41 (m, 2H), 1.60-1.68 (m, 2H), 1.91-2.07(m, 4H), 2.25(m, 1H), 3.36(m, 4H), 3.58(s, 4H), 4.25(m, 1H), 6.54(s, 1H), 6.66(d, 1H), 6.81(s, 1H), 7.21(s, 1H), 7.35(d, 1H), 7.55(d, 1H), 8.30(s, 2H), 10.87(s, 1H), 11.71(s, 1H).

[ 실시예 68] 6-(4- 메틸아미노 -페닐)-N-(트랜스-4- 모르폴리노사이클로헥실 )-6-(피리딘-4-일)-9H- 피 리미도[4,5-b]인돌-4-아민(화합물 54a) 제조

상기 실시예 65와 동일한 방법으로 화합물 5aa(60 mg, 0.12 mmol) 및 4-(N-메틸아미노)페닐 보론산, 피나콜 에스터(4-(N-methylamino)phenyl boronic acid, pinacol ester, 33.5 mg, 0.16 mmol)을 반응시키는 과정을 거치고, 반응 후 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(디클로로메탄:메탄올 = 20:1 → 10:1)로 분리하여 흰색 고체 54 mg을 얻는다(78%).

54a: ¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 1.33-1.41 (m, 2H), 1.60-1.65 (m, 2H), 1.90-2.02(m, 4H), 2.25(m, 1H), 3.36(m, 4H), 3.58(s, 4H), 4.25(m, 1H), 4.52(s, 3H), 5.72(brs, 1H), 6.54(s, 1H), 6.66(d, 1H), 6.81(s, 1H), 7.18(m, 2H), 7.21(s, 1H), 7.25(m, 2H), 7.35(d, 1H), 7.55(d, 1H), 10.87(s, 1H), 11.71(s, 1H).

[ 실시예 69] 6-(1-(1- 에톡시에틸 )-1H- 피라졸 )-N-(트랜스-4- 모르폴리노사이클로헥실 )-6-(피리딘-4-일)-9H-피리미도[4,5-b]인돌-4-아민(화합물 55a) 제조

상기 실시예 65와 동일한 방법으로 화합물 5aa(60 mg, 0.12 mmol) 및 1-(1-에톡시에틸)-1H-피라졸-4-보론산 피나콜 에스터(1-(1-ethoxyethyl)-1H-pyrazole-4-boronic acid pinacol ester, 36.2 mg, 0.15 mmol)을 반응시키는 과정을 거치고, 반응 후 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(디클로로메탄:메탄올 = 20:1 → 10:1)로 분리하여 흰색 고체 36 mg을 얻는다(52%).

55a: ¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 1.06 (m, 3H), 1.35-1.38 (m, 2H), 1.66 (m, 5H), 1.94-2.06 (m, 4H), 2.25 (m, 1H), 3.45 (m, 1H), 3.47(m, 2H), 3.58(m, 4H), 4.25(m, 1H), 5.58(m, 1H), 6.65(brd, 1H), 7.43(d, 1H), 7.61(d, 1H), 8.05(s, 1H), 8.32(d, 2H), 8.40(s, 1H), 11.85(s, 1H).

[ 실시예 70] 6-(2- 메톡시피리미딜 )-N-(트랜스-4- 모르폴리노사이클로헥실 )-6-(피리딘-4-일)-9H- 피리 미도[4,5-b]인돌-4-아민(화합물 56a) 제조

상기 실시예 65와 동일한 방법으로 화합물 5aa(60 mg, 0.12 mmol) 및 2-메톡시피리미딘-5-보론산(2-methoxypyrimidine-5-boronic acid, 25.3 mg, 0.15 mmol)을 반응시키는 과정을 거치고, 반응 후 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(디클로로메탄:메탄올 = 20:1 → 10:1)로 분리하여 흰색 고체 36 mg을 얻는다(52%).

56a: ¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 1.36-1.38 (m, 2H), 1.66 (m, 4H), 1.91-1.94 (m, 4H), 2.26 (m, 1H), 3.58 (m, 4H), 3.99 (s, 3H), 4.31 (m, 1H), 6.73 (d, 1H), 7.55 (d, 1H), 7.71 (d, 1H), 8.35 (s, 1H), 8.43 (s, 1H), 8.56 (s, 1H), 8.82 (s, 1H), 9.06 (s,2H), 12.00 (s, 1H).

[ 실시예 71] 6-(3-티오펜)-N-(트랜스-4- 모르폴리노사이클로헥실 )-6-(피리딘-4-일)-9H-피리미도[4,5-b]인돌-4-아민(화합물 57a) 제조

상기 실시예 65와 동일한 방법으로 화합물 5aa(60 mg, 0.12 mmol) 및 티오펜-3-보론산(Thiophene-3-boronic acid, 22.5 mg, 0.15 mmol)을 반응시키는 과정을 거치고, 반응 후 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(디클로로메탄:메탄올 = 20:1 → 10:1)로 분리하여 흰색 고체 29 mg을 얻는다(48%).

57a: ¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 1.36-1.38 (m, 2H), 1.62-1.65 (m, 2H), 1.91-1.93 (m, 4H), 2.08 (m, 1H), 3.56 (m, 4H), 4.29 (m, 1H), 6.77 (d, 1H), 7.46 (d, 1H), 7.68 (m, 1H), 7.71 (m, 2H), 7.87 (d, 1H), 8.33 (s, 1H), 8.52 (s, 1H), 11.90(s, 1H).

[ 실시예 72] 6-(3- 클로로페닐 )-N-(트랜스-4- 모르폴리노사이클로헥실 )-6-(피리딘-4-일)-9H-피리미도[4,5-b]인돌-4-아민(화합물 58a) 제조

상기 실시예 65와 동일한 방법으로 화합물 5aa(60 mg, 0.12 mmol) 및 3-클로로페닐 보론산(3-chlorophenyl boronic acid, 26.7 mg, 0.15 mmol)을 반응시키는 과정을 거치고, 반응 후 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(디클로로메탄:메탄올 = 20:1 → 10:1)로 분리하여 흰색 고체 38 mg을 얻는다(55%).

58a: ¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 1.34-1.37 (m, 2H), 1.62-1.65 (m, 2H), 1.90-1.93 (m, 4H), 2.25 (m, 1H), 3.56 (m, 4H), 4.28 (m, 1H), 6.87 (d, 1H), 7.42 (d, 1H), 7.50 (m, 2H), 7.66 (d, 1H), 7.83 (d, 1H), 7.84 (s, 1H), 8.35 (s, 1H), 8.55 (s, 1H), 11.98 (s, 1H).

[ 실시예 73] 6-(3,4- 다이메톡시페닐 )-N-(트랜스-4- 모르폴리노사이클로헥실 )-6-(피리딘-4-일)-9H- 피 리미도[4,5-b]인돌-4-아민(화합물 59a) 제조

상기 실시예 65와 동일한 방법으로 화합물 5aa(60 mg, 0.12 mmol) 및 3,4-다이메톡시페닐 보론산(3,4-Dimethoxyphenyl boronic acid, 33.2 mg, 0.15 mmol)을 반응시키는 과정을 거치고, 반응 후 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(디클로로메탄:메탄올 = 20:1 → 10:1)로 분리하여 흰색 고체 29 mg을 얻는다(45%).

59a: ¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 1.34-1.37 (m, 2H), 1.62-1.65 (m, 2H), 1.90-1.93 (m, 4H), 2.25 (m, 1H), 3.57 (m, 4H), 3.80 (s, 3H), 3.88 (s, 3H), 4.28 (m, 1H), 6.80 (d, 1H), 7.07 (d, 1H), 7.30 (m, 1H), 7.49 (d, 1H), 7.64 (d, 1H), 8.33 (s, 1H), 8.47 (s, 1H), 11.88 (s, 1H).

[ 실시예 74] 6-(4- 메탄술포닐 -3- 메틸페닐 )-N-(트랜스-4- 모르폴리노사이클로헥실 )-6-(피리딘-4-일)-9H-피리미도[4,5-b]인돌-4-아민(화합물 60a) 제조

상기 실시예 65와 동일한 방법으로 화합물 5aa(60 mg, 0.12 mmol) 및 (4-메탄술포닐-3-메틸페닐)보론산(33.2 mg, 0.15 mmol)을 반응시키는 과정을 거치고, 반응 후 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(디클로로메탄:메탄올 = 20:1 → 10:1)로 분리하여 흰색 고체 28 mg을 얻는다(51%).

60a: ¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 1.34-1.37 (m, 2H), 1.59-1.65 (m, 2H), 1.91-1.93 (m, 4H), 2.25 (m, 1H), 2.75 (s, 3H), 3.25 (s, 3H), 3.57 (m, 4H), 4.28 (m, 1H), 6.85 (d, 1H), 7.72 (d, 1H), 7.74 (d, 1H), 7.86 (m, 2H), 7.98 (d, 1H), 8.36 (s, 1H), 8.60 (s, 1H), 12.04 (s, 1H).

[ 실시예 75] 6-(4- 다이메틸술폰아미딜 페닐)-N-(트랜스-4- 모르폴리노사이클로헥실 )-6-(피리딘-4-일)-9H-피리미도[4,5-b]인돌-4-아민(화합물 61a) 제조

상기 실시예 65와 동일한 방법으로 화합물 5aa(60 mg, 0.12 mmol) 및 N,N-다이메틸-4-보론벤젠술폰아마이드(45.5 mg, 0.15 mmol)을 반응시키는 과정을 거치고, 반응 후 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(디클로로메탄:메탄올 = 20:1 → 10:1)로 분리하여 흰색 고체 58 mg을 얻는다(63%).

61a: ¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 1.34-1.37 (m, 2H), 1.59-1.65 (m, 2H), 1.91-1.93 (m, 4H), 2.25 (m, 1H), 2.66 (s, 6H), 3.56 (m, 4H), 4.28 (m, 1H), 6.89 (d, 1H), 7.73 (d, 1H), 7.75 (d, 1H), 7.84 (m, 2H), 7.86 (m, 2H), 8.06 (s, 1H), 8.64 (s, 1H), 12.04 (s, 1H).

[ 실시예 76] 6-(2- 다이메틸아미노페닐 )-N-(트랜스-4- 모르폴리노사이클로헥실 )-6-(피리딘-4-일)-9H-피리미도[4,5-b]인돌-4-아민(화합물 62a) 제조

상기 실시예 65와 동일한 방법으로 화합물 5aa(60 mg, 0.12 mmol) 및 2-다이메틸아미노페닐 보론산 피나콜 에스터(58.6 mg, 0.15 mmol)을 반응시키는 과정을 거치고, 반응 후 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(디클로로메탄:메탄올 = 20:1 → 10:1)로 분리하여 흰색 고체 45 mg을 얻는다(56%).

62a: ¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 1.34-1.37 (m, 2H), 1.59-1.65 (m, 2H), 1.91-1.93 (m, 4H), 2.25 (m, 1H), 2.46 (s, 6H), 3.56 (m, 4H), 4.28 (m, 1H), 6.72 (d, 1H), 7.09 (m, 2H), 7.27 (m, 2H), 7.42 (d, 1H), 7.56 (d, 1H), 8.32(s, 1H), 8.40(s, 1H), 11.85(s, 1H).

[ 실시예 77] 6-(4-아미노-3- 피리딜 )-N-(트랜스-4- 모르폴리노사이클로헥실 )-6-(피리딘-4-일)-9H- 피 리미도[4,5-b]인돌-4-아민(화합물 63a) 제조

상기 실시예 65와 동일한 방법으로 화합물 5aa(60 mg, 0.12 mmol) 및 2-아미노피리딘 보론산(28.5 mg, 0.15 mmol)을 반응시키는 과정을 거치고, 반응 후 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(디클로로메탄:메탄올 = 20:1 → 10:1)로 분리하여 흰색 고체 18 mg을 얻는다(32%).

63a: ¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 1.33-1.36 (m, 2H), 1.59-1.63 (m, 2H), 1.89-1.92 (m, 4H), 2.26 (m, 1H), 3.57 (m, 4H), 4.28 (m, 1H), 5.90 (s, 1H), 6.87 (d, 1H), 7.39 (d, 1H), 7.46 (d, 1H), 8.33 (s, 2H), 12.03 (brs, 1H).

[ 실시예 78] 6-(4-아미노-2- 클로로페닐 )-N-(트랜스-4- 모르폴리노사이클로헥실 )-6-(피리딘-4-일)-9H-피리미도[4,5-b]인돌-4-아민(화합물 64a) 제조

상기 실시예 65와 동일한 방법으로 화합물 5aa(60 mg, 0.12 mmol) 및 4-아미노-2-클로로페닐 보론산(41.2 mg, 0.15 mmol)을 반응시키는 과정을 거치고, 반응 후 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(디클로로메탄:메탄올 = 20:1 → 10:1)로 분리하여 흰색 고체 33 mg을 얻는다(52%).

64a: ¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 1.33-1.37 (m, 2H), 1.59-1.63 (m, 2H), 1.86-1.89 (m, 4H), 2.22 (m, 1H), 3.57 (m, 4H), 4.27 (m, 1H), 5.43 (s, 2H), 6.63 (d, 1H), 6.69 (d, 1H), 6.72 (s, 1H), 7.14 (d, 1H), 7.41 (d, 1H), 7.43 (d, 1H), 8.27 (s, 1H), 8.31 (s, 1H), 11.85 (s, 1H).

[ 실시예 79] 6-(3-플루오르-4-( 메틸설포닐 )페닐)-N-(트랜스-4- 모르폴리노사이클로헥실 )-6-(피리딘-4-일)-9H-피리미도[4,5-b]인돌-4-아민(화합물 65a) 제조

상기 실시예 65와 동일한 방법으로 화합물 5aa(60 mg, 0.12 mmol) 및 3-플루오르-4-(메틸설포닐)페닐 보론산(42.3 mg, 0.15 mmol)을 반응시키는 과정을 거치고, 반응 후 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(디클로로메탄:메탄올 = 20:1 → 10:1)로 분리하여 흰색 고체 44 mg을 얻는다(56%).

65a: ¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 1.32-1.37 (m, 2H), 1.59-1.63 (m, 2H), 1.86-1.89 (m, 4H), 2.22 (m, 1H), 3.57 (m, 4H), 3.72 (s, 3H), 4.29 (m, 1H), 6.85 (d, 1H), 7.56 (d, 1H), 7.82 (d, 1H), 7.01 (m, 3H), 8.42 (s, 1H), 8.83 (s, 1H), 12.09 (s, 1H).

[ 실시예 80] 6-(2- 메틸 -4- 피리딜 )-N-(트랜스-4- 모르폴리노사이클로헥실 )-6-(피리딘-4-일)-9H- 피리 미도[4,5-b]인돌-4-아민(화합물 66a) 제조

상기 실시예 65와 동일한 방법으로 화합물 5aa(60 mg, 0.12 mmol) 및 3-피콜린-4-보론산(35.3 mg, 0.16 mmol)을 반응시키는 과정을 거치고, 반응 후 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(디클로로메탄:메탄올 = 20:1 → 10:1)로 분리하여 흰색 고체 35mg을 얻는다(42%).

66a: ¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 1.32-1.37 (m, 2H), 1.59-1.63 (m, 2H), 1.86-1.89 (m, 4H), 2.22 (m, 1H), 2.45 (s, 3H), 3.57 (m, 7H), 4.29 (m, 1H), 6.85 (d, 1H), 7.56 (m, 2H), 7.66 (d, 1H), 8.26 (s, 2H), 8.30 (s, 1H), 8.50 (d, 1H), 8.60 (s, 1H), 12.01 (s, 1H).

[ 실시예 81] 6-(3- 하이드록시 페닐)-N-(트랜스-4- 모르폴리노사이클로헥실 )-6-(피리딘-4-일)-9H- 피 리미도[4,5-b]인돌-4-아민(화합물 67a) 제조

상기 실시예 65와 동일한 방법으로 화합물 5aa(60 mg, 0.12 mmol) 및 3-하이드록시 페닐 보론산(33.2 mg, 0.15 mmol)을 반응시키는 과정을 거치고, 반응 후 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(디클로로메탄:메탄올 = 20:1 → 10:1)로 분리하여 흰색 고체 40mg을 얻는다(61%).

67a: ¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 1.31-1.35 (m, 2H), 1.59-1.63 (m, 2H), 1.86-1.89 (m, 4H), 2.22 (m, 1H), 3.57 (m, 4H), 4.29 (m, 1H), 6.85 (d, 1H), 6.95 (d, 1H), 7.26 (m, 2H), 7.33 (m, 1H), 7.52 (d, 1H), 7.60(d, 1H), 8.26(s, 1H), 8.50(s, 1H), 9.50(s, 1H), 11.90(s, 1H).

[ 실시예 82] 6-(3- 포밀 페닐)-N-(트랜스-4- 모르폴리노사이클로헥실 )-6-(피리딘-4-일)-9H-피리미도[4,5-b]인돌-4-아민(화합물 68a) 제조

상기 실시예 65와 동일한 방법으로 화합물 5aa(60 mg, 0.12 mmol) 및 3-포밀 페닐 보론산(35.2 mg, 0.15 mmol)을 반응시키는 과정을 거치고, 반응 후 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(디클로로메탄:메탄올 = 20:1 → 10:1)로 분리하여 흰색 고체 38mg을 얻는다(59%).

68a: ¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 1.31-1.35 (m, 2H), 1.59-1.63 (m, 2H), 1.86-1.89 (m, 4H), 2.22 (m, 1H), 3.57 (m, 4H), 4.29 (m, 1H), 6.85 (d, 1H), 7.52 (d, 1H), 7.60 (d, 1H), 8.02 (m, 4H), 8.33 (s, 1H), 8.72 (s, 1H), 10.06 (s, 1H), 12.04 (s, 1H).

[ 실시예 83] 6-(3-N- 메틸아미노카보닐 )페닐)-N-(트랜스-4- 모르폴리노사이클로헥실 )-6-(피리딘-4-일)-9H-피리미도[4,5-b]인돌-4-아민(화합물 69a) 제조

상기 실시예 65와 동일한 방법으로 화합물 5aa(60 mg, 0.12 mmol) 및 3-N-메틸아미노카보닐)페닐 보론산(40.2 mg, 0.15 mmol)을 반응시키는 과정을 거치고, 반응 후 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(디클로로메탄:메탄올= 20:1 → 10:1)로 분리하여 흰색 고체 25mg을 얻는다(43%).

69a: ¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 1.31-1.35 (m, 2H), 1.59-1.63 (m, 2H), 1.86-1.89 (m, 4H), 2.22 (m, 1H), 3.57 (m, 4H), 4.29 (m, 1H), 6.85 (d, 1H), 7.52 (d, 1H), 7.60 (d, 1H), 7.70 (d, 1H), 7.82 (d, 1H), 7.95 (d, 1H), 8.2 (s, 1H), 8.40 (s, 1H), 8.62 (s, 2H), 11.96 (s, 1H).

[ 실시예 84] 6-(4-플루오르-3-( 하이드록시메틸 ))-N-(트랜스-4- 모르폴리노사이클로헥실 )-6-(피리딘-4-일)-9H-피리미도[4,5-b]인돌-4-아민(화합물 70a) 제조

상기 실시예 65와 동일한 방법으로 화합물 5aa(60 mg, 0.12 mmol) 및 4-플루오르-3-(하이드록시메틸) 페닐 보론산(45.3 mg, 0.15 mmol)을 반응시키는 과정을 거치고, 반응 후 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(디클로로메탄:메탄올 = 20:1 → 10:1)로 분리하여 흰색 고체 33mg을 얻는다(51%).

70a: ¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 1.31-1.35 (m, 2H), 1.59-1.63 (m, 2H), 1.86-1.89 (m, 4H), 2.22 (m, 1H), 3.57 (m, 4H), 4.29 (m, 1H), 5.26 (t, 1H), 6.85 (d, 1H), 7.25 (t, 1H), 7.55 (d, 1H), 7.65 (d, 1H), 7.88 (m, 1H), 7.89 (m, 1H), 8.32 (s, 1H), 8.55 (s, 1H), 11.93 (s, 1H).

[ 실시예 85] 6-(5- 포밀 -2- 메틸페닐 )-N-(트랜스-4- 모르폴리노사이클로헥실 )-6-(피리딘-4-일)-9H- 피리미도[4,5-b]인돌 -4-아민(화합물 71a) 제조

상기 실시예 65와 동일한 방법으로 화합물 5aa(60 mg, 0.12 mmol) 및 5-포밀-2-메틸페닐 보론산(46.8 mg, 0.15 mmol)을 반응시키는 과정을 거치고, 반응 후 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피(디클로로메탄:메탄올 = 20:1 → 10:1)로 분리하여 흰색 고체 47mg을 얻는다(58%).

71a: ¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 1.31-1.35 (m, 2H), 1.59-1.63 (m, 2H), 1.86-1.89 (m, 4H), 2.22 (m, 1H), 2.34 (s, 3H), 3.57 (m, 4H), 4.29 (m, 1H), 6.82 (d, 1H), 7.35 (d, 2H), 7.55 (d, 1H), 7.60 (d, 1H), 7.85 (s, 1H), 8.23 (s, 1H), 8.41 (s, 1H), 10.04 (s, 1H), 11.96 (s, 1H).

[ 실시예 86] 화합물 73e 제조

단계 1. 화합물 72b 제조

출발물질 72a(2,2’-싸이오디에탄올)을 디클로로메탄에 녹인 후, 0^oC에서 5분동안 싸이오닐클로라이드를 적가한다. 반응 혼합물을 0^oC에서 1시간동안 교반 후, 반응 종결이 확인되면 차가운 물을 천천히 적가 후 디클로로메탄으로 추출한다. 추출물은 셀라이트 패드로 여과한 다음 황산나트륨(Na₂SO₄)으로 수분을 제거하고, 감압 농축하여 목적 화합물인 투명한 액체를 얻는다.

72b: ¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 2.95 (t, J = 3.6 Hz, 4H), 3.77 (t, J = 3.8 Hz, 4H).

단계 2. 화합물 73b 제조

출발물질 73a(트랜스-엔-박-1,4-시클로헥센디아민 하이드로클로라이드), 탄산칼륨(K₂CO₃)을 디메틸포름아마이드에 녹인 후 2-3분동안 교반한다. 반응 혼합물에 요오드화칼륨(KI)과 화합물 72b(비스(2-클로로에틸)설판)을 첨가 후, 상온에서 15시간동안 교반한다. 반응 종결 후 에틸 아세테이트에 묽혀 셀라이트 패드로 여과 후, 물로 세척한 다음 황산나트륨(Na₂SO₄)으로 수분을 제거하고 감압 농축한다. 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피로 정제하여, 목적화합물인 연한 노란색 고체를 얻는다.

73b: ¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 1.14-1.29 (m, 4H), 1.38 (s, 9H), 1.58-1.74 (m, 4H), 2.57 (m, 1H), 2.67-2.78 (m, 4H), 2.83-2.94 (m, 4H), 3.54 (t, J = 4.0 Hz, 1H).

단계 3. 화합물 73c 제조

출발물질 73b를 디클로로메탄에 녹인 후 염산 용액(4M 다이옥산)을 0^oC에서 천천히 적가한다. 반응 혼합물을 상온에서 1시간동안 교반 후 감압 농축한다. 농축물에 디에틸 에테르를 첨가하여 불순물을 제거하고, 고체를 여과하여 목적화합물인 연한 노란색 고체를 얻는다.

73c: ¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 1.28-1.45 (m, 4H), 1.68-1.94 (m, 4H), 2.57 (m, 1H), 2.73-2.81 (m, 4H), 2.87-2.95 (m, 4H), 3.75 (t, J = 3.8 Hz, 1H).

단계 4. 화합물 73d 제조

출발물질 4a, 화합물 73c, 트리에틸아민을 디메틸설폭사이드에 녹인 후 상온에서 24시간 교반한다. 반응 종결 후 반응 혼합물을 에틸아세테이트에 묽혀 셀라이트 패드에 여과한다. 여과물을 물로 세척하고 황산나트륨(Na₂SO₄)으로 수분을 건조하고, 감압 농축하여 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피로 정제하여 목적화합물인 연한 노란색 고체를 얻는다.

73d: ¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 1.15-1.26 (m, 4H), 1.57-1.75 (m, 4H), 2.61 (m, 1H), 2.75-2.88 (m, 4H), 2.90-3.15 (m, 4H), 3.45 (m, 1H), 7.46 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 7.6 (d, J =9.2 Hz, 1H), 8.05 (s, 1H), 8.27 (s, 1H).

단계 5. 화합물 73e 제조

출발물질 73d, 5-플루오로피리딘-3-보로닉산, 탄산칼륨(K₂CO₃)을 다이옥산:물(4:1 in v/v in 5 mL)에 녹인 후, 아르곤 가스로 충분히 퍼지하여 산소를 제거하고, Pd(PPh₃)₄을 넣은 뒤 가스를 제거하고 80^oC에서 18시간 교반한다. 반응 종결 후 에틸 아세테이트에 묽혀 셀라이트 패드로 여과 후, 물로 세척한 다음 황산나트륨(Na₂SO₄)으로 수분을 제거하고 감압 농축한다. 잔류물을 실리카 겔 관 크로마토그래피로 분리하여 목적화합물인 연한 노란색 고체를 얻는다.

73e: ¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 1.42-1.63 (m, 4H), 1.98-2.21 (m, 4H), 2.28-2.35 (m, 1H), 2.45-2.57 (m, 4H), 3.72-3.74 (m, 4H), 4.35-4.38 (m, 1H), 7.68 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.73 (dd, J = 8.2, 1.8 Hz, 1H), 7.81 (t, J = 2.2, 1H), 8.31 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.41 (s, 1H), 8.49 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 8.58(d, J = 1.6 Hz, 1H).

[ 실험예 1] IRAK4 효소 저해도 평가

384웰-흰색플레이트(저용량)에 최종 농도의 4배가 되게 희석한 화합물 2.5 ㎕를 넣었다. 0.4 ng/㎕의 IRAK4 효소 2.5 ㎕를 넣고 10분간 전반응시켰다. 6 μM 펩타이드 기질(BMKC-2)과 100 μM ATP의 혼합액 5 ㎕를 넣고 상온에서 60분간 반응시킨 후, 10 mM EDTA 2.5 ㎕를 넣고 10분간 다시 반응시켰다. 40 nM 항-포스포 쓰레오닌(anti-phospho Thr) 항체를 2.5 ㎕ 씩 분주하고, 160 ㎍/ml 억셉터 비드(acceptor bead)와 도너 비드의 혼합용액 5 ㎕를 넣은 다음, 60분간 상온에서 반응시켰다. 비드실험용 장비(Fusion alpha-FP Microplate Reader, Perkin Elmer사)를 이용해 형광신호를 측정하였다.

감지된 신호로부터 활성 저해율[%저해도 = (화합물의 평균값 - 음성대조군의 평균값)/(양성대조군의 평균값 - 음성대조군의 평균값) X 100]을 계산하여 [표 1]에 나타내었다. 또한 화합물의 농도별 %저해도를 얻은 후, 이를 비선형회귀분석을 통하여 50% 저해농도(IC₅₀ 값)을 분석하였다.

[표 1]의 기재와 같이, 본 발명의 삼중고리 화합물은 IRAK4 효소에 대한 저해 실험에서 1 ~ 1,000 nM 정도의 IC₅₀을 나타냄으로서, IRAK4에 대한 우수한 저해 활성을 나타낸다. 따라서 본 발명의 삼중고리 화합물은 IRAK4의 유도활성 관련 질환의 예방 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있다.

화합물	IRAK4 효소시험
화합물	%저해도 @ 1μM	IC₅₀ (nM)
5ba(실시예 1)	83	29
5bb(실시예 2)	83	21
5bc(실시예 3)	9	-
5da(실시예 4)	99	128
5db(실시예 5)	< 1	-
6aaa(실시예 6)	100	28
6aab(실시예 7)	100	18.4
6aac(실시예 8)	100	12.6
6aad(실시예 9)	100	4.4
6aae(실시예 10)	100	2.0
6aaf(실시예 11)	100	4.6
6aag(실시예 12)	82	31
6aah(실시예 13)	100	40.0
6aai(실시예 14)	98	67.6
6aaj(실시예 15)	99	159.2
6aak(실시예 16)	98	104.0
6aal(실시예 17)	99	151.4
6aam(실시예 18)	37	243.7
6aan(실시예 19)	82	61.0
6aao(실시예 20)	74	63
6aap(실시예 21)	56	780
6aaq(실시예 22)	59	565
6aar(실시예 23)	78	137
6aas(실시예 24)	79	50
6aba(실시예 25)	83	4
6abb(실시예 26)	82	10
6aca(실시예 27)	100	13.8
6ada(실시예 28)	53	861
6aea(실시예 29)	34	1,528
6afa(실시예 30)	36	1,050
6agaa(실시예 31)	36	1,141
6agba(실시예 32)	42	1,187
6aha(실시예 33)	41	1,042
6baa(실시예 34)	70	308
6bab(실시예 35)	86	210
6bac(실시예 36)	60	842
6bad(실시예 37)	52	928
6bae(실시예 38)	94	8.0
6baf(실시예 39)	70	509
6bag(실시예 40)	79	314
6caa(실시예 41)	50	1,362
11b(실시예 42)	10	-
17a(실시예 43)	100	10.5
17b(실시예 44)	100	7.2
17c(실시예 45)	100	32.6
23a(실시예 46)	91	79

[ 실험예 2] 세포기반 염증성 사이토카인 분비 억제 실험

전혈에서 분리한 PBMC(말초혈액단핵구)를 96웰-플레이트에 분배하였다. TNF-α는 1 x 10⁵ 세포/웰의 밀도로 분주하고, IFN-α는 2 x 10⁵ 세포/웰의 밀도로 분주하고, 최종 농도의 4배가 되도록 희석한 화합물을 처리하여 30분간 전배양하였다. TNF-α는 100 ng/ml LPS(lipopolysaccharide)를 처리하고, IFN-α는 500 nM ODN2216(CpG TLR9 자극원)을 처리하고, 각각 24시간 및 72시간 동안 더 배양하였다. TNF-α는 BD　Biosciences사의 ELISA kit를 사용하여, IFN-α는 PBL　Assay Science사의 ELISA kit를 사용하여, 효소결합 면역흡착 분석법(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)을 수행하였다. ELISA 플레이트에 세포 상등액과 표준약물을 넣고 2시간동안 반응시켰다. 플레이트를 세척하고, 측정항체와 스트렙타비딘-HRP를 차례로 넣었다. 플레이트 세척 후 TMB 기질을 넣고, 어두운 곳에서 반응시켰다. 정지용액을 넣어 반응을 정지시키고, 흡광기(OPTIMax Tunable Microplate Reader, Molecular Devices)를 이용하여 450 nm 및 570 nm에서의 흡광도를 측정하였다. 상기 실험결과를 [표 2]에 나타내었다.

화합물	사이토카인 분비 억제
	TNF-α, %저해도		IFN-α, %저해도
	1 μM	0.1 μM	1 μM	0.1 μM
5ba(실시예 1)	41.3	31.7	73.9	27.0
5bb(실시예 2)	47.0	7.3	90.0	27.3
5da(실시예 4)	40	10	40	10
6aaa(실시예 6)	42	10.5	21	20
6aab(실시예 7)	114	44	94	31
6aac(실시예 8)	86	24	84	21
6aad(실시예 9)	105	42	104	31
6aae(실시예 10)	53	12	92	48
6aaf(실시예 11)	124	51	96	48
6aag(실시예 12)	51.4	16.7	89.5	6.4
6aah(실시예 13)	67	16	79	15
6aai(실시예 14)	62	13	87	32
6aaj(실시예 15)	30	3.2	56	6.4
6aak(실시예 16)	70	16	98	53
6aal(실시예 17)	57	13	70	18
6aam(실시예 18)	28	5	55	9
6aan(실시예 19)	32	9	71	28
6aba(실시예 25)	73.3	39.1	81.3	3.4
6abb(실시예 26)	79.4	17.9	90.4	54.0
6aca(실시예 27)	107	29	99	40
6agaa(실시예 31)	27	17	65	39
6agba(실시예 32)	87	26	74	56
6caa(실시예 41)	40	5	60	40
17a(실시예 43)	75	22	103	67
17b(실시예 44)	63	12	110	76
17c(실시예 45)	88	7	99	23

상기 [표 2]에 나타난 바와 같이, 본 발명의 삼중고리 화합물은 마이크로몰 수준의 농도에서 TNF-α와 IFN-α를 저해하는 효과가 우수한 것을 알 수 있다.

[ 실험예 3] 세포기반 염증성 프로모터 활성도 실험

NF-κB 저해 실험은 THP1-Lucia^TM NF-κB 세포주(Invivogen)를 사용하고, ISG 저해 실험은 THP1-Lucia^TMISG 세포주를 사용하였다. NF-κB 저해 실험의 경우 96웰-플레이트에 1 x 10⁴ 세포/웰의 밀도로 세포를 심었으며, ISG 저해 실험의 경우 96웰-플레이트에 2 x 10⁴ 세포/웰의 밀도로 세포를 심었다. 최종 농도의 4배로 희석한 화합물을 처리하고 30분간 전배양하였다. NF-κB는 100 ng/ml LPS(lipopolysaccharide)를 처리하고, ISG는 1 ㎍/ml Poly(dA:dT)/LyoVec의 자극원을 처리하고, 24시간 배양하였다. 세포 상등액 10 ㎕를 취해 96웰-플레이트에 옮겨 넣었다. 측정기(Envision Multilabel Plate Reader, Perkin Elmer)의 자동분주기를 이용하여, 50 ㎕ 퀀티-루크(Quanti-luc) 용액을 분주하고 발광신호를 측정하였다.

화합물	프로모터 저해
	NF-κB, %저해도		ISG, %저해도
	1 μM	0.1 μM	1 μM	0.1 μM
5ba(실시예 1)	89	48	78	37
5bb(실시예 2)	92	58	73	43
5da(실시예 4)	30	5	20	1
6aaa(실시예 6)	71	23	55	17
6aab(실시예 7)	61	8	54	11
6aac(실시예 8)	64	17	45	7
6aad(실시예 9)	78	33	79	37
6aae(실시예 10)	40	< 1	29	4
6aaf(실시예 11)	82	43	83	24
6aag(실시예 12)	37	12	52	20
6aah(실시예 13)	63	19	47	10
6aai(실시예 14)	36	6	41	9
6aaj(실시예 15)	33	< 1	20	14
6aak(실시예 16)	37	< 1	30	< 1
6aal(실시예 17)	15	< 1	17	1
6aam(실시예 18)	11	< 1	< 1	< 1
6aan(실시예 19)	28	< 1	6	< 1
6aba(실시예 25)	87	40	83	33
6abb(실시예 26)	83	50	73	42
6aca(실시예 27)	85	28	73	23
6agaa(실시예 31)	24	< 1	16	7
6agba(실시예 32)	6	< 1	8	6
6caa(실시예 41)	10	5	10	1
17a(실시예 43)	78	31	93	14
17b(실시예 44)	62	14	80	4
17c(실시예 45)	53	2	52	2

상기 [표 3]에 나타난 바와 같이, 본 발명의 삼중고리 화합물은 마이크로몰 수준의 농도에서 NF-κB 및 ISG 프로모터를 저해하는 효과가 우수하다는 것을 알 수 있다.

[실험예 4] 마우스의 전신 염증질환에 대한 시험약물의 억제효과

실험동물로는 8주령의 C57BL/6(20 ~ 23 g) 마우스를 (주)오리엔트 바이오(성남, 경기도)로부터 공급받아 사용하였다. 마우스를 온도(22 ± 1℃) 및 습도(50 ± 10%)가 자동 조절되는 한국화학연구원 동물실에서 2주일 이상 적응 시킨 후 실험에 사용하였으며, 물과 사료는 자유롭게 섭취하도록 하였다. 본 동물 실험은 한국화학연구원 실험동물위원회의 승인 하에 실시되었다.

전신 염증질환은 LPS(리포폴리사카라이드, lipopolysaccharide, Sigma L2880) 15 mg/kg 용량을 마우스 복강 내로 투여하여 유도하였다. 시험 약물은 10% 크레모포어 용액에 현탁하여 LPS 주사 2시간 전에 경구로 투여하였으며, LPS 투여 1시간 후에 이소플루란으로 마우스를 마취시킨 후 심장으로부터 혈액을 채취하였다. 채취된 혈액을 13,000 rpm에서 15 분간 원심분리하여 혈청을 얻고, -20℃에 보관 후 필요 시 꺼내어, BD　Biosciences사의 ELISA kit를 사용하여 혈청 내의 사이토카인(TNF-α) 함량을 측정하였다. 양성대조군 약물로는 PF-06650833(AstraTech)을 구입하여 사용하였으며, 시험 약물의 전신 염증 억제효과에 대한 통계적 유의성을 student’s T-test 또는 Dunnett’s T-test(SigmaStat, Jandel Scientific) 프로그램을 사용하여 검정하였다. 시험 결과는 도 1 및 도 2에 표시하였다.

시험 결과에 의하면, 본 발명의 화합물 6aad와 6aaf를 50 및 100 mg/kg로 용량 투여 시, PF-06650833 보다 우수한 억제효과를 나타내었다.

[실험예 5] TMD-8이 이식된 스키드 마우스에서의 항종양효과

실험동물로는 스키드(중증복합면역결핍) 마우스(C.B-17/IcrCrj-scid, 암컷)를 일본 찰스리버사로부터 구입하여 사용하였다. 마우스를 온도(22 ± 1℃) 및 습도(50 ± 10%)가 자동 조절되는 동물실에서 2주일 이상 적응시킨 후 실험에 사용하였으며, 물과 사료는 자유롭게 섭취하도록 하였다. 본 동물 실험은 한국화학연구원 실험동물위원회의 승인 하에 실시되었다. B세포 림프종 세포주인 TMD-8 세포주는 한국화학연구원에서 계대 유지한 것을 사용하였다.

스키드 마우스의 종양은 TMD-8 세포를 오른쪽 옆구리 피하에 마우스 당 9 x 10⁶ 개의 세포를 이식하여 유도하였으며, 이식된 종양의 크기가 약 200 mm³에 도달하였을 때 약물투여를 시작하였다(시험기간: 1일). 시험 약물을 20% PEG 400 및 3% Tween 80 용액에 현탁시켜, 1일 1회로 14일간 경구 투여하였다. 시험 약물 투여 후, 2 ~ 3일마다 캘리퍼스를 이용하여 종양의 직경(즉, 긴 지름(a) 및 짧은 지름(b))을 측정하고, 수학식[종양의 크기(mm³) = (a × b²)/2]에 따라 종양의 크기(mm³)를 계산하여 도 3 및 도 4에 나타내었다. 대조 약물로는 PF-06650833(Sigma) 및 이브루티닙(Ibrutinib)(Medichem Express)를 구입하여 사용하였으며, 시험 약물의 항종양효과에 대한 통계적 유의성을 student’s T-test(SigmaStat, Jandel Scientific) 프로그램을 사용하여 검정하였다.

도 3 및 도 4에 의하면, 본 발명의 화합물 6aaf는 PF-06650833과 비교 시 유의적 효과 차이를 보이지는 않았으나 약간 우수한 경향을 나타내었으며, 이브루티닙(Ibrutinib)과 병용투여 시 우수한 효과를 나타내었다. 시험 기간 동안 실험동물의 체중 변화는 별로 없었다.

Claims

하기 화학식 1로 표시되는 삼중고리 화합물:
[화학식 1]

[A₁및 A₂는 각각 독립적으로 N 또는 CH이며,
A₃은 N 또는 CR₁이며,
R₁은 수소, 할로겐, -COOR₅ 또는 (C3-C12)헤테로아릴이며,
R₂는 수소, 아미노기, -COOR₆, (C1-C12)헤테로아릴, (C3-C12)사이클로알킬과 융합된 (C1-C12)헤테로아릴, (C6-C12)아릴, 또는 질소, 산소 및 황으로부터 선택되는 하나 이상의 헤테로원자를 포함하는 5원 내지 7원의 헤테로사이클릭아미노이며,
R₃은 수소 또는 (C6-C12)아릴이며,
R₄는 -L₁-L₂-R₇이며,
R₂의 아미노기(-NH₂), (C1-C12)헤테로아릴 또는 (C6-C12)아릴은 (C1-C4)알킬, 할로겐으로 치환된 (C1-C4)알킬, (C1-C4)티오알킬, 아미노기(-NH₂), 메틸아미노기(-NHCH₃), 디메틸아미노기(-N(CH₃)₂), -CH₂OH, (C1-C4)알콕시, 히드록시기(-OH), 할로겐, 메탄술포닐기(-SO₂CH₃), -SO₂N(CH₃)₂, 니트로기(-NO₂), 사이아노기(-CN),
,
,
,
,
,
,
,
, 및
로 이루어진 군에서 선택된 적어도 하나 이상의 그룹으로 임의로 치환될 수 있으며,
R₃의 (C6-C12)아릴은 니트로기(-NO₂)로 임의로 치환될 수 있으며,
L₁은 -N(R₈)- 또는 -O-이며,
L₂는 -(CH₂)_m-,
,
또는
이며, m은 2 내지 5의 정수이며,
R₇은 -N(R₉)₂, -OR₁₀, -SO₂CH₃, -SO₂N(CH₃)₂, 또는 질소, 산소 및 황으로부터 선택되는 하나 이상의 헤테로원자를 포함하는 5원 내지 7원의 헤테로사이클릭아미노이며,
R₅는 (C1-C4)알킬이며,
R₆은 (C1-C4)알킬이며,
R₈은 수소 또는 (C1-C4)알킬이며,
R₉는 (C1-C4)알킬이며,
R₁₀은 (C1-C4)알킬이며,
R₇의 헤테로사이클릭아미노는 -SO₂CH₃ 및 -COOC(CH₃)₃(-Boc)로 이루어진 군에서 선택된 적어도 하나 이상의 그룹으로 임의로 치환될 수 있으며,
A₃이CR₁이고 R₁이 할로겐, -COOR₅ 또는 (C3-C12)헤테로아릴인 경우 L₂는 -(CH₂)_m-이 아니며,
L₂가 -(CH₂)_m-인 경우 R₇은 -N(R₉)₂및 -OR₁₀중 어느 것도 아니며,
A₃이CR₁이면 R₁및 R₂가 모두 수소인 경우는 제외된다.]
제1항에 있어서,
상기 R₂인 (C1-C12)헤테로아릴, (C3-C12)사이클로알킬과 융합된 (C1-C12)헤테로아릴, 또는 치환된 (C1-C12)헤테로아릴은 하기에서 선택되는 어느 하나인 삼중고리 화합물:

.
제1항에 있어서,
상기 R₂인 (C6-C12)아릴 또는 치환된 (C6-C12)아릴은 하기에서 선택되는 어느 하나인 삼중고리 화합물:

.
제1항에 있어서,
상기 R₄는 하기에서 선택되는 어느 하나인 삼중고리 화합물:

.
제1항에 있어서,
상기 삼중고리 화합물은 하기 구조의 화합물로부터 선택되는 어느 하나인 삼중고리 화합물:

.
제1항 내지 제5항에서 선택되는 어느 한 항에 따른 삼중고리 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 자가면역질환 또는 종양의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
제1항 내지 제5항에서 선택되는 어느 한 항에 따른 삼중고리 화합물을 유효성분으로 함유하는 자가면역질환 또는 종양의 예방 또는 개선용 건강식품 조성물.