KR102141039B1 - Compositions for preventing or treating Psoriasis comprising extract of Rumex acetosella - Google Patents
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Abstract
본 발명은 애기수영 추출물을 포함하는 건선 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다. 구체적으로, 애기수영 추출물을 포함하는 건선 예방 또는 치료용 약학 조성물, 피부 외용제 조성물, 화장료 조성물 및 의약외품 조성물에 관한 것이다. 본 발명에서 제공하는 애기수영 추출물을 포함하는 조성물은 건선 유발에 관여하는 IL6 및 Stat3 시그널의 활성을 감소시키고 각질세포의 세포증식을 억제하며 건선 동물모델의 병변에 도포 시 건선 병변을 완화시키는 효과를 나타내어 건선 예방 또는 치료용 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.The present invention relates to a composition for the prevention or treatment of psoriasis comprising the extract of Arabidopsis. Specifically, the present invention relates to a pharmaceutical composition for preventing or treating psoriasis, a composition for external application for skin, a cosmetic composition, and a quasi-drug composition comprising the extract of Aegiswim. The composition comprising the baby swimming extract provided in the present invention reduces the activity of IL6 and Stat3 signals involved in psoriasis induction, inhibits cell proliferation of keratinocytes and relieves psoriasis lesions when applied to lesions of animal models of psoriasis It can be used as a composition for preventing or treating psoriasis.
Description
본 발명은 애기수영 추출물을 포함하는 건선 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다. 구체적으로, 애기수영 추출물을 포함하는 건선 예방 또는 치료용 약학 조성물, 피부 외용제 조성물, 화장료 조성물 및 의약외품 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a composition for the prevention or treatment of psoriasis comprising the extract of Arabidopsis. Specifically, the present invention relates to a pharmaceutical composition for preventing or treating psoriasis, a composition for external application for skin, a cosmetic composition, and a quasi-drug composition comprising the extract of Aegiswim.
건선(Psoriasis)은 은백색의 비늘로 덮여 있고, 경계가 뚜렷하며 크기가 다양한 붉은색의 구진이나 판을 이루는 발진이 전신의 피부에 반복적으로 발생하는 만성 염증성 피부병이다. 세계 인구의 약 3%가 건선환자이며 국내에서도 전 인구의 2% 정도가 해당된다. 건선은 조직학적으로 각질층의 이상 분화를 특징으로 갖는 것으로써, 그 원인이 확실하게 알려져 있지 않아 유전학적 및 면역학적 연구가 계속되고 있다. 그러나 아직까지도 건선의 병변을 일시적으로 사라지게 하는 방법만이 있을 뿐, 재발을 완전히 막는 치료법은 존재하지 않아 건선 치료제에 대한 수요는 지속적으로 증가하고 있는 상황이다. Psoriasis is a chronic inflammatory skin disease in which rashes forming red papules or plaques of various sizes and covered with silver-white scales occur repeatedly on the skin of the whole body. About 3% of the world's population is psoriasis patients and 2% of the total population in Korea. Psoriasis is histologically characterized by abnormal differentiation of the stratum corneum, and its cause is not clearly known, and genetic and immunological studies are continuing. However, there is still only a method to temporarily eliminate the lesions of psoriasis, and there is no treatment to completely prevent recurrence, so the demand for treatment for psoriasis continues to increase.
전통적인 피부질환 치료제로써 가장 널리 사용되고 있는 스테로이드의 경우 당뇨병, 고혈압 등의 부작용을 유발하고, 그 오남용으로 인해 사회적 문제가 되었으며, 최근 개발되고 있는 면역조절제의 경우, 표적이 되는 특정부분에만 작용하여 안전하게 면역억제 작용을 일으킬 것으로 예상되었던 항체 제제들이 면역장애, 감염, 암 등의 예상치 못한 심각한 부작용을 유발하는 것으로 보고되어, 효과적인 건선 치료를 위해서는 많은 연구가 필요한 실정이다 (Paul, Carle F., et al., Journal of Investigative Dermatology 120.2 (2003): 211-216.).The most widely used steroid as a traditional skin disease treatment causes side effects such as diabetes and hypertension, and has become a social problem due to its abuse, and recently developed immunomodulators act only on specific targeted areas to safely immunize Antibody preparations that were expected to cause inhibitory action have been reported to cause unexpected and serious side effects such as immune disorders, infections, and cancer, and many studies are needed for effective psoriasis treatment (Paul, Carle F., et al. , Journal of Investigative Dermatology 120.2 (2003): 211-216.).
한편, 애기수영(Rumex acetosella )은 마디풀과(Polygonaceae)의 여러해살이풀로, 원산지는 유럽이지만 우리나라 전역 및 전 세계에 귀화하여 분포한다. 뿌리줄기가 옆으로 벋으면서 번식하고, 줄기는 곧게 서며 높이가 20∼50cm이고 털 모양의 돌기가 있으며 모가 난 세로줄이 있고 자줏빛이 돌며 잎과 더불어 신맛이 난다. 뿌리에서 나온 잎은 뭉쳐나고 잎자루가 길며 창 모양이고 끝이 뾰족하며 밑 부분에 귀 같은 돌기가 좌우로 퍼진다. 줄기에 달린 잎은 어긋나고 뿌리에서 나온 잎과 모양이 같으나 크기가 작다. 꽃은 암수딴그루이고 5∼6월에 붉은빛이 도는 녹색으로 피며 줄기 끝에 원추꽃차례를 이루며 달린다. 수꽃은 지름이 3mm이고 꽃받침조각과 수술이 각각 6개이다. 암꽃은 수꽃보다 작고 꽃받침조각이 6개이며 암술이 1개이고 3개로 갈라진 암술대와 잘게 갈라진 암술머리가 있다. 연한 줄기와 잎을 식용으로 사용하며, 한방에서는 줄기와 잎을 소산모(小酸模)라는 약재로 쓰는데, 항암 효과가 있으며 소화기 계통에 효과가 있다. 그러나 애기수영의 건선 관련 효과는 알려진 바가 없다.Meanwhile, baby swimming ( Rumex acetosella ) is a perennial plant of the Polygonaceae family, and its origin is Europe, but it is naturally distributed throughout Korea and around the world. The rhizome grows as it grows to the side, the stem stands upright, 20-50cm high, has hair-like protrusions, has a vertical vertical line, has a purple color, and has a sour taste with leaves. The leaves from the roots are agglomerated, the petioles are long, spear-shaped, pointed, and the ears-like protrusions spread from side to side. The leaves on the stem are misaligned and have the same shape as the leaves from the root, but are small in size. The flowers are male and female, bloom in reddish green in May-June, and run in a conical shape at the end of the stem. The male flower is 3mm in diameter and has 6 calyx pieces and 6 stamens each. The female flower is smaller than the male flower, has 6 calyx pieces, 1 pistil, and 3 pistils and finely divided pistil heads. Light stems and leaves are used for edible use, and in Chinese medicine, stems and leaves are used as medicinal products, such as dissipative mothers, which have anti-cancer effects and have an effect on the digestive system. However, the effects of pity psoriasis on baby swimming are not known.
이와 같은 배경 하에, 본 발명자들은 합성약물보다 안정성이 있는 천연물 추출물을 이용해 건선을 개선 및 치료하는 방법을 개발하고자 예의 연구 노력한 결과, 애기수영 추출물이 건선을 치료하는 효과를 나타냄을 확인하고, 본 발명을 완성하였다.Under such a background, the present inventors tried to develop a method for improving and treating psoriasis using natural extracts that are more stable than synthetic drugs. As a result, it was confirmed that the Aegiswim extract shows the effect of treating psoriasis, and the present invention Was completed.
본 발명의 하나의 목적은 애기수영 추출물을 포함하는 건선 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공하는 것이다.One object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of psoriasis, including extracts of Aegiswim.
본 발명의 다른 하나의 목적은 애기수영 추출물을 포함하는 건선 예방 또는 개선용 피부 외용제 조성물을 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide a composition for external application for skin for preventing or improving psoriasis comprising a baby swimming extract.
본 발명의 또 다른 하나의 목적은 애기수영 추출물을 포함하는 건선 예방 또는 개선용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide a cosmetic composition for the prevention or improvement of psoriasis, including a baby swimming extract.
본 발명의 또 다른 하나의 목적은 애기수영 추출물을 포함하는 건선 예방 또는 개선용 의약외품 조성물을 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide a quasi-psoriasis prevention or improvement quasi-drug composition comprising a baby swimming extract.
본 발명의 또 다른 하나의 목적은 애기수영 추출물을 인간을 제외한 개체에 투여하는 단계를 포함하는 건선 예방 또는 치료 방법을 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide a method for preventing or treating psoriasis comprising the step of administering a baby swimming extract to an individual other than a human.
상기의 과제를 해결하기 위한 하나의 양태로서, 본 발명은 애기수영 추출물을 포함하는 건선 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.As one aspect for solving the above problems, the present invention provides a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of psoriasis, including the extract of Arabidopsis.
이하, 본 발명에서의 애기수영 추출물을 포함하는 건선 예방 또는 치료용 조성물을 구체적으로 설명한다.Hereinafter, a composition for preventing or treating psoriasis, including the baby swimming extract in the present invention will be described in detail.
본 발명에서의 용어, “애기수영(Rumex acetosella)”은 마디풀과(Polygonaceae)의 여러해살이풀로, 원산지는 유럽이지만 우리나라 전역 및 전 세계에 귀화하여 분포한다. 뿌리줄기가 옆으로 벋으면서 번식하고, 줄기는 곧게 서며 높이가 20∼50cm이고 털 모양의 돌기가 있으며 모가 난 세로줄이 있고 자줏빛이 돌며 잎과 더불어 신맛이 난다. 뿌리에서 나온 잎은 뭉쳐나고 잎자루가 길며 창 모양이고 끝이 뾰족하며 밑 부분에 귀 같은 돌기가 좌우로 퍼진다. 줄기에 달린 잎은 어긋나고 뿌리에서 나온 잎과 모양이 같으나 크기가 작다. 꽃은 암수딴그루이고 5∼6월에 붉은빛이 도는 녹색으로 피며 줄기 끝에 원추꽃차례를 이루며 달린다. 수꽃은 지름이 3mm이고 꽃받침조각과 수술이 각각 6개이다. 암꽃은 수꽃보다 작고 꽃받침조각이 6개이며 암술이 1개이고 3개로 갈라진 암술대와 잘게 갈라진 암술머리가 있다. 연한 줄기와 잎을 식용으로 사용하며, 한방에서는 줄기와 잎을 소산모(小酸模)라는 약재로 쓰는데, 항암 효과가 있으며 소화기 계통에 효과가 있다.The term in the present invention, "Baby swimming ( Rumex acetosella )” is a perennial plant of the Polygonaceae family, and its origin is Europe, but it is naturally distributed throughout Korea and around the world. The rhizome grows as it grows to the side, the stem stands upright, 20-50cm high, has hair-like protrusions, has a vertical vertical line, has a purple color, and has a sour taste with leaves. The leaves from the roots are agglomerated, the petioles are long, spear-shaped, pointed, and the ears-like protrusions spread from side to side. The leaves on the stem are misaligned and have the same shape as the leaves from the root, but are small in size. The flowers are male and female, bloom in reddish green in May-June, and run in a conical shape at the end of the stem. The male flower is 3mm in diameter and has 6 calyx pieces and 6 stamens each. The female flower is smaller than the male flower, has 6 calyx pieces, 1 pistil, and 3 pistils and finely divided pistil heads. Light stems and leaves are used for edible use, and in Chinese medicine, stems and leaves are used as medicinal products, such as dissipative mothers, which have anti-cancer effects and have an effect on the digestive system.
본 발명에서의 용어, “건선(Psoriasis)”은 은백색의 비늘로 덮여 있고, 경계가 뚜렷하며 크기가 다양한 붉은색의 구진이나 판을 이루는 발진이 전신의 피부에 반복적으로 발생하는 만성 염증성 피부병으로, 조직학적으로 표피의 증식과 진피의 염증을 특징으로 하며, 인구의 1 내지 2%의 빈도로 나타난다. 건선은 피부에 있는 면역세포인 T세포의 활동성이 증가되어 그 결과 분비된 면역 물질이 피부의 각질세포를 자극하여 각질세포의 과다한 증식과 염증을 일으키는 것으로 밝혀지고 있다. 피부 세포가 빠르게 자라나기 때문에 피부 위에 비듬 같은 각질이 겹겹이 쌓여서 보이게 된다. 그 외에도 유전적 요인, 환경적 요인, 약물, 피부자극, 건조, 상기도 염증, 정신적 스트레스 등이 건선을 일으키거나 악화시키는 요인으로 증명되고 있다.The term "Psoriasis" in the present invention is a chronic inflammatory skin disease in which red papules or rashes of various sized red papules or plaques are repeatedly formed on the skin of the whole body, covered with silver-white scales, and tissues. It is characterized by hyperplasia of the epidermis and inflammation of the dermis, which occurs at a frequency of 1 to 2% of the population. It has been found that psoriasis increases the activity of T cells, the immune cells in the skin, and as a result, secreted immune substances stimulate the skin's keratinocytes, causing excessive proliferation and inflammation of keratinocytes. Because the skin cells grow rapidly, dandruff-like keratin appears on the skin. In addition, genetic factors, environmental factors, drugs, skin irritation, dryness, upper respiratory tract inflammation, and mental stress have been proven to cause or worsen psoriasis.
본 발명에서는 애기수영 추출물이 건선 예방 또는 치료 효과가 있음을 최초로 규명하였다.In the present invention, it was first identified that the Arabidopsis extract has an effect of preventing or treating psoriasis.
본 발명의 건선 예방 또는 치료는 각질세포의 세포 증식 억제를 통해 달성되는 것일 수 있다.Prevention or treatment of psoriasis of the present invention may be achieved through suppressing cell proliferation of keratinocytes.
상기 각질세포의 세포 증식은 면역 물질에 의해 자극받는 것일 수 있고, 상기 면역 물질은 사이토카인일 수 있으며, 구체적으로 IL6일 수 있다. Cell proliferation of the keratinocytes may be stimulated by an immune substance, and the immune substance may be a cytokine, specifically, IL6.
상기 IL6은 피부의 면역반응에 관여하여 외부의 자극에 의해 염증반응을 일으키는 것으로 알려져 있다. 또한, 상기 염증 반응은 피부 상처 치유와 관련된 단백질인 Stat3의 활성과도 연관이 있으며, 상기 Stat3의 과활성으로 인해 피부 상처 치유 효과에 의한 피부 세포 증식이 계속되면서 피부 세포가 필요 이상으로 증식되어 각질이 생겨나고 건선이 유발되는 것으로 알려져 있다.It is known that the IL6 is involved in the immune response of the skin and causes an inflammatory reaction by external stimulation. In addition, the inflammatory response is also associated with the activity of Stat3, a protein related to skin wound healing, and skin cells are proliferated more than necessary due to the skin cell proliferation due to the skin wound healing effect due to the overactivity of Stat3. It is known that this occurs and psoriasis is induced.
본 발명의 건선 예방 또는 치료는 IL6의 활성 감소를 통해 달성되는 것일 수 있으며, 상기 IL6의 활성 감소는 Stat3의 활성 감소를 통해 달성되는 것일 수 있다.The prevention or treatment of psoriasis of the present invention may be achieved through a decrease in the activity of IL6, and the reduction of the activity of IL6 may be achieved through a decrease in the activity of Stat3.
본 발명의 일 실시예에서는 M5를 처리하여 사이토카인 발현을 증가시킨 각질세포에 애기수영 추출물을 처리한 후 IL6의 수준을 확인한 결과, 대조군 대비 IL6가 감소한 것을 확인하였다 (도 3).In one embodiment of the present invention, after treating the Arabidopsis extract with keratinocytes that increased cytokine expression by treating M5, the level of IL6 was confirmed, and it was confirmed that IL6 decreased compared to the control group (FIG. 3).
또한, 본 발명의 다른 일 실시예에서는 M5를 처리하여 사이토카인 발현을 증가시킨 각질세포에 애기수영 추출물을 처리한 후 Stat3의 활성을 분석한 결과, M5를 처리한 대조군에서는 활성화된 Stat3(pStat3)가 증가한 반면, 애기수영 처리군에서는 pStat3가 감소한 것을 확인하였다 (도 4).In addition, in another embodiment of the present invention, as a result of analyzing the activity of Stat3 after treating the Arabidopsis extract on keratinocytes having increased cytokine expression by treating M5, Stat3 (pStat3) activated in the control group treated with M5 While increased, it was confirmed that pStat3 decreased in the baby swimming treatment group (FIG. 4 ).
본 발명에서의 용어, “추출물”은 어떤 물질을 추출 처리하여 얻어지는 물질을 의미하는 것으로, 구체적으로 상기 본 발명의 애기수영의 추출처리에 의하여 얻어지는 추출액, 상기 추출액의 희석액이나, 농축액, 상기 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 상기 추출액의 조정제물이나 정제물 또는 이들의 혼합물 등, 추출액 자체 및 추출액을 이용하여 형성가능한 모든 제형의 추출물을 포함한다. The term "extract" in the present invention refers to a material obtained by extracting a substance, specifically, the extract obtained by the extraction treatment of the baby swimming of the present invention, the diluent or the concentrate of the extract, or the extract The dried product obtained by drying, the extract or the like, or a mixture or a mixture thereof, includes extracts of the extract itself and all formulations that can be formed using the extract.
상기 애기수영을 추출하는 방법은 특별히 제한되지 않으며, 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용하는 방법에 따라 추출할 수 있다.The method for extracting the baby swimming is not particularly limited, and can be extracted according to a method commonly used in the art.
상기 애기수영 추출물은 애기수영의 뿌리, 줄기, 잎, 꽃, 또는 열매로부터 추출한 것일 수 있으며, 이에 특별히 제한되는 것은 아니다.The extract of the baby swimming may be extracted from the root, stem, leaf, flower, or fruit of the baby swimming, and is not particularly limited thereto.
상기 애기수영 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4의 저급 알콜 및 이들의 혼합 용매로 구성되는 군으로부터 선택되는 용매로 추출한 것을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.The baby water extract includes, but is not limited to, those extracted with a solvent selected from the group consisting of water, lower alcohols having 1 to 4 carbon atoms and mixed solvents thereof.
본 발명에서의 용어, "예방"이란, 본 발명에 따른 애기수영 추출물을 포함하는 조성물의 투여로 안구건조증의 증상을 억제 또는 지연시키는 모든 행위를 말한다.The term "prevention" in the present invention refers to all actions of suppressing or delaying the symptoms of dry eye syndrome by administration of a composition comprising the baby swimming extract according to the present invention.
본 발명에서의 용어, "치료"란, 본 발명에 따른 애기수영 추출물을 포함하는 조성물의 투여로 상기 안구건조증의 증상이 호전되거나 이롭게 변경되는 모든 행위를 말한다.The term "treatment" in the present invention refers to all actions in which symptoms of the dry eye syndrome are improved or beneficially changed by administration of a composition containing the baby swimming extract according to the present invention.
본 발명에서의 용어, "약학 조성물"이란, 질병의 예방 또는 치료를 목적으로 제조된 것을 의미하며, 각각의 통상의 방법에 따라 다양한 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 예컨대, 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽 등의 제형으로 제형화할 수 있고, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 구체적으로, 피부에 도포하기 적합한 형태, 예를 들어, 크림제, 연고제, 겔제 또는 로션제로 제형화하여 사용될 수 있다.The term "pharmaceutical composition" in the present invention means that it is manufactured for the purpose of preventing or treating a disease, and can be used by being formulated in various forms according to each conventional method. For example, powders, granules, tablets, capsules, suspensions, emulsions, syrups, etc. may be formulated into a formulation, and may be used in the form of external preparations, suppositories, and sterile injectable solutions. Specifically, it may be used in a form suitable for application to the skin, for example, formulated in a cream, ointment, gel or lotion.
상기 본 발명의 조성물은, 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 또는 희석제를 추가로 포함하는 건선 예방 또는 치료용 약학 조성물의 형태로 제조될 수 있는데, 상기 담체는 비자연적 담체(non-naturally occuring carrier)를 포함할 수 있다.The composition of the present invention may be prepared in the form of a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of psoriasis, which further comprises a suitable carrier, excipient or diluent commonly used in the manufacture of a pharmaceutical composition. non-naturally occuring carriers.
본 발명에서, 상기 약학 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다.In the present invention, carriers, excipients and diluents that may be included in the pharmaceutical composition include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, starch, acacia rubber, alginate, gelatin, calcium phosphate, Calcium silicate, cellulose, methyl cellulose, microcrystalline cellulose, polyvinyl pyrrolidone, water, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate and mineral oil.
제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 상엽 추출물과 이의 분획물들에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는 데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.In the case of formulation, it is prepared using diluents or excipients such as fillers, extenders, binders, wetting agents, disintegrating agents and surfactants. Solid preparations for oral administration include tablets, pills, powders, granules, capsules, etc. These solid preparations include at least one excipient in the upper leaf extract and its fractions, for example, starch, calcium carbonate , Sucrose (lactose), gelatin, etc. are prepared by mixing. In addition, lubricants such as magnesium stearate and talc are used in addition to simple excipients. Liquid preparations for oral use may include various excipients, such as wetting agents, humectants, sweeteners, fragrances, and preservatives, in addition to water and liquid paraffin, which are simple diluents commonly used for suspending agents, intravenous solutions, emulsions, syrups, etc. have. Formulations for parenteral administration include sterile aqueous solutions, non-aqueous solvents, suspensions, emulsions, lyophilized preparations, and suppositories. Non-aqueous solvents and suspensions may include propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oils such as olive oil, and injectable esters such as ethyl oleate. As a base for suppositories, witepsol, macrogol, tween 61, cacao butter, laurin butter, and glycerogelatin may be used.
본 발명의 약학 조성물의 투여량은 사용목적, 질환의 중독도, 환자의 연령, 체중, 성별, 기왕력, 또는 유효성분으로서 사용되는 물질의 종류 등을 고려하여 당업자가 결정할 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 약학 조성물은 성인 1인당 약 0.1 ng 내지 약 1,000mg/kg, 구체적으로 1 ng 내지 약 1,000mg/kg로 투여할 수 있고, 본 발명의 조성물의 투여빈도는 특별히 이에 제한되지 않으나, 1일 1회 투여하거나 또는 용량을 분할하여 수회 투여할 수 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.The dosage of the pharmaceutical composition of the present invention can be determined by a person skilled in the art in consideration of the purpose of use, the degree of poisoning of the disease, the age, weight, sex, history of the patient, or the type of substance used as an active ingredient. For example, the pharmaceutical composition of the present invention may be administered at about 0.1 ng to about 1,000 mg/kg per adult, specifically 1 ng to about 1,000 mg/kg, and the frequency of administration of the composition of the present invention is particularly limited. However, it can be administered once a day or divided into doses and administered several times. The above dosage does not limit the scope of the invention in any aspect.
본 발명의 약학 조성물은 애기수영 추출물을 1 내지 500μg/ml, 구체적으로 5 내지 400μg/ml, 보다 구체적으로 10 내지 250μg/ml 포함하는 것일 수 있으나 이에 제한되지 않는다.The pharmaceutical composition of the present invention may include, but is not limited to, 1 to 500 μg/ml, specifically 5 to 400 μg/ml, and more specifically 10 to 250 μg/ml, of the Arabidopsis extract.
다른 하나의 양태로서, 본 발명은 애기수영 추출물을 포함하는 건선 예방 또는 개선용 피부 외용제 조성물을 제공한다.In another aspect, the present invention provides a composition for external application for skin for preventing or improving psoriasis comprising a baby swimming extract.
본 발명에서의 용어, “애기수영”, “추출물”, “건선”은 상기에서 기재한 바와 같다.The terms "baby swimming", "extract", and "psoriasis" in the present invention are as described above.
본 발명에 따른 피부 외용제 조성물은 화장품학 또는 피부과학적으로 허용 가능한 매질 또는 기제를 함유하여 제형화될 수 있다. 이는 국소적용에 적합한 모든 제형으로서, 예를 들면, 용액, 겔, 고체, 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는, 이온형(리포좀) 및 비이온형의 소낭 분산제의 형태로, 또는 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이, 팩 또는 콘실 스틱의 형태로 제공될 수 있다. 포말(foam)의 형태로 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태로도 사용될 수 있다. 이들 조성물은 당해 분야의 통상적인 방법에 따라 제조될 수 있다.The composition for external application for skin according to the present invention may be formulated by containing a cosmetic or dermatologically acceptable medium or base. These are all formulations suitable for topical application, for example solutions, gels, solids, dough anhydrous products, emulsions, suspensions, microemulsions, microcapsules, microgranules or ionic forms (liposomes) obtained by dispersing an oil phase in an aqueous phase, and It can be provided in the form of a non-ionic vesicle dispersant, or in the form of a cream, skin, lotion, powder, ointment, spray, pack or conceal stick. It can also be used in the form of a foam or in the form of an aerosol composition further containing a compressed propellant. These compositions can be prepared according to conventional methods in the art.
또한, 본 발명에 의한 피부 외용제 조성물은 지방 물질, 유기용매, 용해제, 농축제, 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제, 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품학 또는 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 상기 보조제는 화장품학 또는 피부과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입된다.In addition, the composition for external application for skin according to the present invention is a fatty substance, an organic solvent, a solubilizer, a thickening agent, a gelling agent, a softening agent, an antioxidant, a suspending agent, a stabilizing agent, a foaming agent, a fragrance, a surfactant, water, and an ionic type Or nonionic emulsifiers, fillers, metal ion blockers, chelating agents, preservatives, vitamins, blockers, wetting agents, essential oils, dyes, pigments, hydrophilic or lipophilic actives, lipid vesicles or any other commonly used in cosmetics. It may contain auxiliaries commonly used in cosmetic or dermatological fields such as ingredients. The adjuvant is introduced in an amount generally used in the cosmetic or dermatological field.
또 다른 하나의 양태로서, 본 발명은 애기수영 추출물을 포함하는 건선 예방 또는 개선용 화장료 조성물을 제공한다.In yet another aspect, the present invention provides a cosmetic composition for preventing or improving psoriasis comprising the Arabidopsis extract.
본 발명에서의 용어, “애기수영”, “추출물”, “건선”은 상기에서 기재한 바와 같다.The terms "baby swimming", "extract", and "psoriasis" in the present invention are as described above.
본 발명에 있어서, 상기 화장료 조성물은 용액, 외용 연고, 크림, 폼, 영양 화장수, 유연 화장수, 팩, 유연수, 유액, 메이크업 베이스, 에센스, 비누, 액체 세정료, 입욕제, 선 스크린 크림, 선 오일, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 로션, 파우더, 비누, 계면 활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 패취 및 스프레이로 구성된 군에서 선택되는 제형으로 제조할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. In the present invention, the cosmetic composition is a solution, ointment for external use, cream, foam, nutrition lotion, soft lotion, pack, softened water, emulsion, makeup base, essence, soap, liquid detergent, bathing agent, sunscreen cream, sun oil, Suspensions, emulsions, pastes, gels, lotions, powders, soaps, surfactant-containing cleansing, oils, powder foundations, emulsion foundations, wax foundations, patches and sprays can be prepared in the formulation selected from the group consisting of, but may It is not limited.
본 발명의 상기 화장료 조성물은 일반 피부 화장료에 배합되는 화장품학적으로 허용 가능한 담체를 1 종 이상 추가로 포함할 수 있으며, 통상의 성분으로 예를 들면 유분, 물, 계면 활성제, 보습제, 저급 알코올, 증점제, 킬레이트제, 색소, 방부제, 향료 등을 적절히 배합할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.The cosmetic composition of the present invention may further include one or more cosmetically acceptable carriers formulated in general skin cosmetics, for example, oil, water, surfactant, moisturizer, lower alcohol, thickener as a common ingredient , Chelating agents, pigments, preservatives, fragrances, etc. may be appropriately blended, but is not limited thereto.
본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 화장품학적으로 허용 가능한 담체는 화장료 조성물의 제형에 따라 다양하다.The cosmetically acceptable carrier included in the cosmetic composition of the present invention may vary depending on the formulation of the cosmetic composition.
본 발명의 제형이 연고, 페이스트, 크림 또는 젤인 경우에는, 담체 성분으로서 동물성 유, 식물성 유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크, 산화 아연 등이 이용될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 이들은 단독으로 사용되거나 2 종 이상 혼합되어 사용될 수 있다.When the formulation of the present invention is an ointment, paste, cream or gel, animal oil, vegetable oil, wax, paraffin, starch, tracant, cellulose derivative, polyethylene glycol, silicone, bentonite, silica, talc, zinc oxide, etc. as carrier components This may be used, but is not limited thereto. These may be used alone or in combination of two or more.
본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는, 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록사이드, 칼슘 실케이트, 폴리아미드 파우더 등이 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로하드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진제를 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 이들은 단독으로 사용되거나 2 종 이상 혼합되어 사용될 수 있다.When the formulation of the present invention is a powder or a spray, lactose, talc, silica, aluminum hydroxide, calcium silicate, polyamide powder, etc. may be used as a carrier component, and in the case of a spray, additionally, chlorofluorohard Propellants such as locarbon, propane/butane or dimethyl ether, but are not limited thereto. These may be used alone or in combination of two or more.
본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는, 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제 등이 이용될 수 있으며, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일 등이 이용될 수 있고, 특히, 목화씨 오일, 땅콩 오일, 옥수수 배종 오일, 올리브 오일, 피마자 오일 및 참깨 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 이용될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 이들은 단독으로 사용되거나 2 종 이상 혼합되어 사용될 수 있다.When the formulation of the present invention is a solution or emulsion, a solvent, solubilizer or emulsifier may be used as a carrier component, such as water, ethanol, isopropanol, ethyl carbonate, ethyl acetate, benzyl alcohol, benzyl benzoate, Propylene glycol, 1,3-butyl glycol oil, and the like can be used, and in particular, cottonseed oil, peanut oil, corn seed oil, olive oil, castor oil and sesame oil, glycerol aliphatic esters, polyethylene glycol or fatty acid esters of sorbitan May be used, but is not limited thereto. These may be used alone or in combination of two or more.
본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는, 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타하이드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 이들은 단독으로 사용되거나 2 종 이상 혼합되어 사용될 수 있다.When the formulation of the present invention is a suspension, liquid diluents such as water, ethanol or propylene glycol as carrier components, suspensions such as ethoxylated isostearyl alcohol, polyoxyethylene sorbitol ester and polyoxyethylene sorbitan ester, micro Crystalline cellulose, aluminum metahydroxide, bentonite, agar or trakant may be used, but is not limited thereto. These may be used alone or in combination of two or more.
본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트,사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 리놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 이들은 단독으로 사용되거나 2 종 이상 혼합되어 사용될 수 있다.When the formulation of the present invention is a surfactant-containing cleansing, aliphatic alcohol sulfate, aliphatic alcohol ether sulfate, sulfosuccinic acid monoester, isethionate, imidazolinium derivatives, methyltaurate, sarcosinate, fatty acid amide as a carrier component Ether sulfates, alkylamidobetaines, aliphatic alcohols, fatty acid glycerides, fatty acid diethanolamides, vegetable oils, linoline derivatives or ethoxylated glycerol fatty acid esters may be used, but are not limited thereto. These may be used alone or in combination of two or more.
본 발명의 화장료 조성물에는 상기 필수 성분과 더불어 필요에 따라 통상 화장료에 배합되는 다른 성분을 배합해도 된다. 구체적으로, 첨가해도 되는 배합 성분으로서는 유지 성분, 보습제, 에몰리엔트제, 계면 활성제, 유기 및 무기 안료, 유기 분체, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, 식물 추출물, pH 조정제, 알콜, 색소, 향료, 혈행 촉진제, 냉감제, 제한(制汗)제, 정제수 등을 들 수 있으나 이에 제한되지 않는다.In the cosmetic composition of the present invention, in addition to the above essential components, other components that are usually blended into a cosmetic may be blended as necessary. Specifically, as a blending component that may be added, fats and oils, moisturizers, emollients, surfactants, organic and inorganic pigments, organic powders, ultraviolet absorbers, preservatives, fungicides, antioxidants, plant extracts, pH adjusters, alcohols, pigments, Flavoring agents, blood circulation accelerators, cooling agents, limiting agents, purified water, and the like.
또 다른 하나의 양태로서, 본 발명은 애기수영 추출물을 포함하는 건선 예방 또는 개선용 의약외품 조성물을 제공한다.In yet another aspect, the present invention provides a quasi-psoriasis quasi-drug composition for preventing or improving psoriasis comprising the extract.
본 발명에서의 용어, “애기수영”, “추출물”, “건선”은 상기에서 기재한 바와 같다.The terms "baby swimming", "extract", and "psoriasis" in the present invention are as described above.
본 발명에서의 용어, "의약외품"은 사람이나 동물의 질병을 진단, 치료, 개선, 경감, 처치 또는 예방할 목적으로 사용되는 물품들 중 의약품보다 작용이 경미한 물품들을 의미한다. 예를 들어, 약사법에 따른 의약외품은 의약품의 용도로 사용되는 물품을 제외한 것으로, 사람/동물의 질병 치료나 예방에 쓰이는 제품, 인체에 대한 작용이 경미하거나 직접 작용하지 않는 제품 등이 포함된다. The term "quasi-drug" in the present invention refers to articles that are less effective than medicines among articles used for the purpose of diagnosing, treating, improving, alleviating, treating or preventing diseases of humans or animals. For example, quasi-drug products under the Pharmaceutical Affairs Law exclude products used for pharmaceutical use, and include products used for the treatment or prevention of disease in humans/animals, products that have little or no direct action on the human body.
구체적으로, 상기 의약외품은 피부외용제 및 개인위생용품을 포함할 수 있다. 보다 구체적으로 소독청결제, 샤워폼, 가그린, 물티슈, 세제비누, 핸드워시, 또는 연고제일 수 있으나 이에 제한되지는 않는다.Specifically, the quasi-drug may include an external preparation for skin and personal hygiene products. More specifically, it may be a disinfecting cleaner, shower foam, gagreen, wipes, detergent soap, hand wash, or ointment, but is not limited thereto.
본 발명에 따른 상기 조성물을 의약외품 첨가물로 사용할 경우, 상기 조성물을 그대로 첨가하거나 다른 의약외품 또는 의약외품 성분과 함께 사용할 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용할 수 있다. 유효성분의 혼합량은 사용 목적에 따라 적합하게 결정될 수 있다.When the composition according to the present invention is used as a quasi-drug additive, the composition may be added as it is or used with other quasi-drugs or quasi-drug components, and may be suitably used according to a conventional method. The mixing amount of the active ingredient can be appropriately determined according to the purpose of use.
또 다른 하나의 양태로서, 본 발명은 애기수영 추출물을 인간을 제외한 개체에 투여하는 단계를 포함하는 건선 예방 또는 치료 방법을 제공한다.In another aspect, the present invention provides a method for preventing or treating psoriasis comprising the step of administering a baby swimming extract to an individual other than a human.
본 발명에서의 용어, "개체"란, 건선이 발병되었거나 발병할 가능성이 있는 인간을 포함한 모든 동물을 의미할 수 있다. 상기 동물은 인간뿐만 아니라 이와 유사한 증상의 치료를 필요로 하는 소, 말, 양, 돼지, 염소, 낙타, 영양, 개, 고양이 등의 포유동물일 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다.The term "individual" in the present invention may refer to all animals including humans who have had or are likely to develop psoriasis. The animal may be a mammal, such as a cow, a horse, a sheep, a pig, a goat, a camel, an antelope, a dog, a cat, etc., which need treatment for similar symptoms, but are not limited thereto.
본 발명의 상기 예방 또는 치료 방법은 구체적으로, 건선이 발병하였거나 발병할 위험이 있는 개체에 상기 조성물을 약학적으로 유효한 양으로 투여하는 단계를 포함할 수 있다.Specifically, the method for preventing or treating the present invention may include the step of administering the composition in a pharmaceutically effective amount to an individual who has or is at risk of developing psoriasis.
본 발명에서의 용어, "투여"는 어떠한 적절한 방법으로 환자에게 본 발명의 약학적 조성물을 도입하는 것을 의미하며, 본 발명의 조성물의 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 경구 또는 비경구의 다양한 경로를 통하여 투여될 수 있다.The term "administration" in the present invention means the introduction of the pharmaceutical composition of the present invention to a patient in any suitable way, and the route of administration of the composition of the present invention can be varied by oral or parenteral as long as it can reach the target tissue. It can be administered via route.
본 발명에서 제공하는 애기수영 추출물을 포함하는 조성물은 건선 유발에 관여하는 IL6 및 Stat3 시그널의 활성을 감소시키고 각질세포의 세포증식을 억제하며 건선 동물모델의 병변에 도포 시 건선 병변을 완화시키는 효과를 나타내어 건선 예방 또는 치료용 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.The composition comprising the baby swimming extract provided in the present invention reduces the activity of IL6 and Stat3 signals involved in psoriasis induction, inhibits cell proliferation of keratinocytes and relieves psoriasis lesions when applied to lesions of animal models of psoriasis It can be used as a composition for preventing or treating psoriasis.
도 1은 애기수영 추출물의 세포독성을 분석한 그래프이다; CTL, 대조군; DMSO, 음성대조군.
도 2는 각질세포에 대한 애기수영 추출물의 세포증식 억제효과를 나타낸 그래프이다.
도 3은 애기수영 추출물 처리에 따른 건선 관련 사이토카인의 활성을 분석한 그래프이다; M5, M5(IL22, IL1a, TNF-α, Oncostatin M, IL17A) 처리군.
도 4는 애기수영 추출물 처리에 따른 Stat3의 활성을 분석한 도면이다; vehicle, 음성대조군.
도 5는 건선 동물모델에 대한 실험 설계 개략도를 나타낸 도면이다.
도 6은 건선 동물모델의 등에서 애기수영 추출물이 포함된 크림 도포에 따른 건선 병변의 변화를 분석한 도면이다; IMQ, 이미퀴모드; CLO, 클로베타솔(Clobetasol, 더모베이트).
도 7은 건선 동물모델의 귀에서 애기수영 추출물이 포함된 크림 도포에 따른 건선 병변의 변화를 분석한 도면이다.
도 8은 애기수영 추출물의 건선 개선 효능을 PASI 점수로 나타낸 그래프이다.1 is a graph analyzing the cytotoxicity of the Arabidopsis extract; CTL, control; DMSO, Voice Control.
Figure 2 is a graph showing the effect of inhibiting cell proliferation of Arabella swimming extract on keratinocytes.
Figure 3 is a graph analyzing the activity of psoriasis-related cytokines according to the Aegiswim extract treatment; M5, M5 (IL22, IL1a, TNF-α, Oncostatin M, IL17A) treatment group.
4 is a view analyzing the activity of Stat3 according to the treatment of Aegiswim extract; vehicle, Eumseong Control.
5 is a diagram showing an experimental design schematic for an animal model of psoriasis.
6 is a view analyzing the change in psoriasis lesions according to the application of the cream containing the baby swimming extract from the back of the animal model of psoriasis; IMQ, imiquimod; CLO, Clobetasol (Dermobate).
7 is a view analyzing the change in psoriasis lesions according to the application of the cream containing the baby swimming extract from the ear of the animal model of psoriasis.
8 is a graph showing the efficacy of improving psoriasis of Aegiswim extract with PASI score.
이하, 본 발명을 실시예를 통하여 더욱 상세히 설명한다. 그러나 이들 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail through examples. However, these examples are intended to illustrate the present invention, and the scope of the present invention is not limited to these examples.
실시예Example 1. 애기수영 추출물 제조 1. Preparation of Aegi Swimming Extract
본 발명에서 사용한 애기수영 추출물은 메틸알코올 99.9%로 추출한 추출물을 한국식물추출물은행에서 구입하여 사용하였으며, DMSO로 녹여 사용하였다.In the present invention, the Arabidopsis extract was purchased and used as an extract extracted with 99.9% methyl alcohol from the Korea Plant Extract Bank, and dissolved in DMSO.
실험예Experimental Example 1. 각질세포에서 애기수영 추출물의 효능 평가 1.Efficacy evaluation of Arabidopsis extract in keratinocytes
실험예Experimental Example 1-1. 애기수영 추출물의 세포독성 분석 1-1. Cytotoxicity analysis of Arabidopsis extract
애기수영 추출물의 세포독성 여부를 확인하기 위해, DMEM(Dulbecco’s modified Eagle Medium)에 10%(v/v) 소태아혈청(fetal bovine serum, FBS, Gibco) 과 항생제(Antibiotic antimycotic)를 첨가한 후 37℃, 5% CO2의 배양기에서 인간유래 피부 각질세포(keratinocyte)인 HaCaT 세포주를 배양하였다. 세포는 100mm 배양디쉬의 80% 정도 자랐을 때 세포의 탈착을 위하여 PBS로 가볍게 세척한 다음, 트립신-EDTA(Gibco/BRL)를 처리한 후, 37℃에서 8분간 방치하였다가 세포를 채집하였다. 계대 배양은 2 내지 3일에 1회씩 시행하였다.To confirm the cytotoxicity of the baby swimming extract, after adding 10% (v/v) fetal bovine serum (FBS, Gibco) and antibiotic (Antibiotic antimycotic) to DMEM (Dulbecco's modified Eagle Medium) 37 HaCaT cell line, a human-derived skin keratinocyte, was cultured in a 5% CO 2 incubator. When the cells grew to about 80% of a 100 mm culture dish, the cells were lightly washed with PBS for detachment, treated with trypsin-EDTA (Gibco/BRL), left at 37° C. for 8 minutes, and then the cells were collected. Passage culture was performed once every 2-3 days.
배양 후, 세포독성 분석은 WST 1 어세이를 통해 확인하였다. 96웰 플레이트에 3×104 cell/ml의 농도로 분주하여 배양기에서 37℃, 5% CO2를 유지하며 24시간 동안 사전배양 시킨 후 25 내지 800μg/ml의 농도로 애기수영 추출물을 처리하여 24시간 배양하였다. 그 후 수용성 테트라졸륨 염(water-soluble tetrazolium salt, WST-1)을 처리하여 WST-1이 생존 세포의 효소작용에 의해 환원되도록 1시간을 배양하였다. 그 후 마이크로플레이트 리더를 이용하여 450nm에서 측정하였다.After incubation, cytotoxicity analysis was confirmed by WST 1 assay. Dispense in a 96-well plate at a concentration of 3×10 4 cell/ml, maintain 37°C, 5% CO 2 in the incubator, pre-incubate for 24 hours, and treat the baby swimming extract at a concentration of 25 to 800 μg/ml to 24 Incubated for hours. Thereafter, a water-soluble tetrazolium salt (WST-1) was treated and incubated for 1 hour so that WST-1 is reduced by enzymatic action of viable cells. Then, it was measured at 450 nm using a microplate reader.
그 결과, 도 1에 나타낸 바와 같이, 200ug/ml에서 15% 정도의 세포생존율이 감소한 것을 보였으며 그 이하의 농도에서는 세포 독성이 보이지 않았다.As a result, as shown in FIG. 1, it was shown that the cell viability of about 15% was decreased at 200 ug/ml, and no cytotoxicity was observed at a concentration below that.
실험예Experimental Example 1-2. 애기수영 추출물의 각질세포 증식 억제 효과 확인 1-2. Confirmation of the effect of inhibiting the proliferation of keratinocytes in Aegi-Soo extract
건선의 대표적 증상 중 하나로 각질세포의 이상 증식이 알려져 있다. 이와 관련하여, 애기수영 추출물이 각질세포 증식률에 미치는 영향을 확인하기 위해, 세포독성이 나타나지 않는 농도에서 WST 1 어세이를 이용하여 각질세포의 증식률을 확인하였다. 구체적으로, 96웰 플레이트에 피부 각질세포 HaCaT를 3×104 cells/ml의 농도로 분주하여 배양기에서 37℃, 5% CO2를 유지하며 24시간 동안 사전배양 시킨 후 20 내지 160ug/ml의 농도로 애기수영 추출물을 처리하여 48, 72시간 배양하였다. 그 후 WST-1을 처리하여 WST-1이 생존 세포의 효소작용에 의해 환원되도록 1시간을 배양하였다. 그 후 마이크로플레이트 리더를 이용하여 450nm에서 측정하였다. As one of the typical symptoms of psoriasis, abnormal proliferation of keratinocytes is known. In this regard, in order to confirm the effect of the Arabidopsis extract on keratinocyte proliferation rate, the proliferation rate of keratinocytes was confirmed using a WST 1 assay at a concentration at which no cytotoxicity was observed. Specifically, skin keratinocytes HaCaT was dispensed into a 96-well plate at a concentration of 3×10 4 cells/ml, pre-incubated for 24 hours while maintaining 37° C., 5% CO 2 in a incubator, and the concentration of 20 to 160 ug/ml. The extract was treated with Arabidopsis extract and cultured for 48 and 72 hours. Thereafter, WST-1 was treated to incubate 1 hour so that WST-1 is reduced by enzymatic action of viable cells. Then, it was measured at 450 nm using a microplate reader.
그 결과, 도 2에 나타낸 바와 같이, 48시간 배양 후 160ug/ml의 농도에서 20% 정도의 세포 증식이 억제 되는 것을 보였으며 72시간 배양 후 80 및 160ug/ml의 농도에서 20 내지 30% 정도의 세포 증식이 억제되는 것을 확인하였다.As a result, as shown in FIG. 2, after 48 hours of culture, it was shown that cell proliferation of about 20% was suppressed at a concentration of 160 ug/ml, and after 72 hours of culture, at a concentration of 80 to 160 ug/ml, 20 to 30% It was confirmed that cell proliferation was suppressed.
그에 따라, 애기수영 추출물의 각질세포 증식 억제를 통한 건선 치료 가능성을 확인할 수 있었다.Accordingly, it was possible to confirm the possibility of treating psoriasis by suppressing keratinocyte proliferation of the Arabidopsis extract.
실험예Experimental Example 1-3. 애기수영 추출물의 M5 유도 사이토카인 감소 효과 확인 1-3. Confirmation of M5 induced cytokine reduction effect of Arabidopsis extract
사이토카인인 IL6은 염증 반응을 통해 건선을 유발하는 물질로 알려져 있다. 이와 관련하여, 애기수영 추출물의 사이토카인에 대한 영향을 확인하기 위해, HaCaT 세포에 M5 (IL22, IL1a, TNF-α, Oncostatin M, IL17A; J Immunol 2010, 184:5263-5270)를 처리하여 사이토카인의 발현을 증가시킨 후, 애기수영 추출물(20ug/ml 또는 80ug/ml)을 처리하여 IL6의 수준을 분석하였다. The cytokine IL6 is known to cause psoriasis through an inflammatory reaction. In this regard, in order to confirm the effect of the baby swimming extract on the cytokine, HaCaT cells were treated with M5 (IL22, IL1a, TNF-α, Oncostatin M, IL17A; J Immunol 2010, 184:5263-5270) to cytosine. After increasing the expression of Cain, the level of IL6 was analyzed by treating the Arabidopsis extract (20ug/ml or 80ug/ml).
그 결과, 도 3에 나타낸 바와 같이, M5를 처리한 경우 사이토카인이 증가하였으며, M5 처리 후 애기수영 추출물을 처리한 경우 IL6가 유의적으로 감소하는 것을 확인하였다.As a result, as shown in FIG. 3, it was confirmed that cytokines increased when M5 was treated, and that IL6 was significantly decreased when the baby water extract was treated after M5 treatment.
그에 따라, 애기수영 추출물의 IL6 감소를 통한 건선 치료 가능성을 확인할 수 있었다.Accordingly, it was possible to confirm the possibility of treating psoriasis through IL6 reduction of the Arabidopsis extract.
실험예Experimental Example 1-4. 애기수영 추출물의 1-4. Extract of Baby Swim Stat3Stat3 활성 억제 효과 확인 Confirm the inhibitory effect
상기 실험예 1-3의 결과에서 M5에 의해 염증성 사이토카인의 수준이 증가됨을 확인하였는데, 이러한 염증성 사이토카인의 수준에 영향을 미치는 주요 원인으로서 pStat3의 활성이 알려져 있다. 즉, 상기 Stat3가 인산화되어 활성화되면 이에 의하여 염증성 사이토카인의 수준이 증가된다고 알려져 있다. 이에 따라, 본 발명의 애기수영 추출물이 Stat3의 활성에 영향을 미칠 수 있는지 확인하고자 하였다. In the results of Experimental Examples 1-3, it was confirmed that the level of inflammatory cytokines is increased by M5, and the activity of pStat3 is known as a major cause affecting the level of inflammatory cytokines. That is, it is known that when Stat3 is phosphorylated and activated, the level of inflammatory cytokines is thereby increased. Accordingly, the purpose of this invention was to determine whether the extract of Aegiswim can affect the activity of Stat3.
HaCaT 세포를 5×105 cell/well 로 60mm 배양접시에 분주한 뒤 24시간 배양하였다. 그 후 M5 및/또는 각 후보 천연물 추출물을 농도별로 처리하여 4시간 동안 배양 하고 PBS로 세척 한 후 용해 완충액(lysis buffer)을 이용하여 단백질을 추출하였으며, 단백질 샘플은 분석이 진행되기 전까지 -70 ℃에 보관하였다. 본 실험에 사용된 단백질 정량은 BCA 어세이를 사용하였으며 10% SDS-PAGE 겔에 30μg의 단백질을 로딩하여 100V, 2시간 전기영동을 실시하고, 니트로셀룰로오스 블로팅 멤브레인(nitrocellulose blotting membrane)으로 이동시켰다. 한 시간 동안 5% 탈지유로 반응을 정지시킨 후, pSTAT3와 Stat3 항체를 4℃에서 18시간 반응 시켰으며, TBS-T 용액(0.2% Tween 20 함유한 TBS) 으로 10분씩, 3번 세척 후 2차 항체 anti-rabbit IgG HRP linked항체를 1시간 동안 상온에서 반응시킨 후 TBS-T 용액으로 10분씩, 3번 세척하고 ECL 키트를 이용하여 단백질 발현정도를 측정하였다. HaCaT cells were dispensed at a 5×10 5 cell/well in a 60 mm culture dish and cultured for 24 hours. After that, the M5 and/or each candidate natural product extract was treated for each concentration, incubated for 4 hours, washed with PBS, and then extracted with protein using a lysis buffer. Kept in. For the protein quantification used in this experiment, a BCA assay was used, 30 μg of protein was loaded onto a 10% SDS-PAGE gel, and electrophoresis was performed for 100 V for 2 hours, and then transferred to a nitrocellulose blotting membrane. . After stopping the reaction with 5% skim milk for one hour, pSTAT3 and Stat3 antibodies were reacted at 4° C. for 18 hours, washed 10 times with TBS-T solution (TBS containing 0.2% Tween 20), and washed 3 times for 2 hours. The antibody anti-rabbit IgG HRP linked antibody was reacted at room temperature for 1 hour, washed 3 times for 10 minutes with TBS-T solution, and protein expression was measured using an ECL kit.
도 4에서 보듯이 M5 처리에 의해 HaCaT 세포에서 pStat3의 활성이 확연히 증가하였고, 애기수영 추출물의 처리에 의하여 유의적으로 감소됨을 확인하였다.As shown in FIG. 4, it was confirmed that the activity of pStat3 in HaCaT cells was significantly increased by M5 treatment, and significantly decreased by treatment with Arabidopsis extract.
그에 따라, 애기수영 추출물이 건선과 같은 IL6 또는 Stat3 관련 염증성 질환에 대한 효과가 있을 것임을 예측할 수 있었다.Accordingly, it could be predicted that the Arabidopsis extract would have an effect on IL6 or Stat3-related inflammatory diseases such as psoriasis.
실험예Experimental Example 2. 동물모델에서 애기수영 추출물의 효능 평가 2. Evaluation of Efficacy of Baby Swim Extract in Animal Model
실험예Experimental Example 2-1. 2-1. 건선psoriasis 동물모델 등 피부에서의 애기수영 추출물 효능 검증 Efficacy verification of baby swimming extract on skin such as animal models
애기수영 추출물의 건선 치료 효능을 In vivo에서 검증하기 위해, 이미퀴모드(imiquimod, IMQ)를 마우스 피부에 도포하여 건선을 유발한 동물 모델을 이용하였다. 시험에 사용된 이미퀴모드는 알다라 크림(Aldara cream: 5% imiquimod, 3M Health Care Ltd. UK)을 사용하였고, 대조군은 더모베이트(Dermovate, clobetasol 17-propionate 0.5mg/1g, Glaxo Operation, UK)를 사용하였다. In order to verify the efficacy of psoriasis treatment of Aegiswim extract in vivo, an animal model inducing psoriasis by applying imiquimod (IMQ) to mouse skin was used. The imiquimod used in the test was Aldara cream (5% imiquimod, 3M Health Care Ltd. UK), and the control group was Dermovate (clobetasol 17-propionate 0.5 mg/1 g, Glaxo Operation, UK). Was used.
마우스의 등과 귀를 제모하고 시험물질을 도포하여 등과 귀의 두께와 홍반정도를 0, 2, 4, 6일째 각각 측정하였으며, 피부의 두께는 Digimatic Thickness Gage(Mitutoyo, Japan)를 사용하였고, 홍반은 Dermacatchⓡ (Colorix, Swiss)를 사용하여 수치를 측정하여 나타내었다. 알다라 크림을 7주령 Balb/c 마우스의 제모 된 등과 귀 부위에 7일 동안 62.5 mg/day로 도포하여 건선 유사 피부를 유도하였다. By epilating the back and ears of the mouse and applying the test substance, the thickness and erythema of the back and ears were measured on the 0th, 2nd, 4th, and 6th days, respectively, and the thickness of the skin was used with the Digimatic Thickness Gage (Mitutoyo, Japan), and the erythema was Dermacatch. The numerical values were measured using ⓡ (Colorix, Swiss). Aldara Cream was applied to the epilated back and ear areas of 7 week old Balb/c mice at 62.5 mg/day for 7 days to induce psoriasis-like skin.
애기수영 추출물을 연고제형으로 만들어 피부에 도포하였으며, 조성은 다음과 같다. 총 5g제형에 백색바셀린: 4521.6mg, 소르비탄 세스퀴올리에이트: 23.86mg, 프로필렌글리콜: 204.50mg, 애기수영 추출물(5%):250mg (추출물은 0.5% DMSO에 녹임)을 넣고 50℃에서 중탕하며 섞어 주었다. 음성대조군에 사용된 연고는 백색바셀린, 소르비탄 세스퀴올리에이트, 프로필렌글리콜을 포함하여 제조하였다. 애기수영 추출물 연고제형은 6일 동안 IMQ를 도포 후 5시간 뒤 80mg을 등과 귀에 도포하였다. 상기 실험 과정의 개략도를 도 5로 나타내었다. Aegiswim extract was made into an ointment form and applied to the skin, and the composition is as follows. To a total of 5g formulation, add white petrolatum: 4521.6mg, sorbitan sesquioleate: 23.86mg, propylene glycol: 204.50mg, baby swimming extract (5%):250mg (extract dissolved in 0.5% DMSO) and bath in 50℃ And mixed. Ointments used in the negative control were prepared including white petrolatum, sorbitan sesquioleate, and propylene glycol. The ointment formulation of Aegisuyoung extract was applied to the back and ears of
상기 준비된 각 군의 피부조직을 적출한 후 10% 포르말린을 사용하여 24시간 동안 고정시킨 다음, 함수-탈수 처리를 거쳐 파라핀 블록을 제작하여 4um 두께의 미세절편을 만들어 슬라이드글라스에 부착하였다. 제작된 슬라이드는 헤마톡실린 및 에오신(hematoxylin and eosin, H & E) 염색을 시행하여 광학현미경으로 관찰하여 피부 조직의 손상정도를 비교하고 표피의 두께도 정량분석 하였다. After extracting the skin tissues of each group prepared above, 10% formalin was used to fix them for 24 hours, and then, a paraffin block was produced through a water-dehydration treatment to make micro-slices of 4 um thickness and attached to slide glasses. The prepared slides were stained with hematoxylin and eosin (H & E) to observe the degree of damage to the skin tissues by observing it with an optical microscope and quantitatively analyze the thickness of the epidermis.
그 결과, 도 6에 나타낸 바와 같이, IMQ를 도포한 군은 vehicle 군에 비하여 홍반과 각질이 현저히 증가하여 건선이 유발되었음을 확인할 수 있었던 반면, IMQ 도포 후 애기수영 추출물을 처리한 그룹은 IMQ 도포군 대비 홍반 및 각질층의 두께가 감소하는 것을 확인할 수 있었다.As a result, as shown in FIG. 6, the group applied with IMQ was able to confirm that psoriasis was induced due to a marked increase in erythema and keratin compared to the vehicle group, whereas the group treated with Arabidopsis extract after IMQ application was applied to the IMQ group It was confirmed that the thickness of the contrast erythema and stratum corneum decreased.
그에 따라, 애기수영 추출물은 홍반 및 각질층의 두께를 감소시키는 방향으로 건선 질환에 효과가 있음을 예측할 수 있었다.Accordingly, it could be predicted that the extract of Arabidopsis was effective for psoriasis disease in the direction of reducing the thickness of the erythema and stratum corneum.
실험예Experimental Example 2-2. 2-2. 건선psoriasis 동물모델 귀 피부에서의 애기수영 추출물 효능 검증 Verification of the effect of baby swimming extract on the skin of animal model ears
실험예 2-1과 같은 방법으로 마우스의 귀에서 실험을 진행하였다. The experiment was conducted in the ear of the mouse in the same manner as in Experimental Example 2-1.
그 결과, 도 7에 나타낸 바와 같이, IMQ를 도포한 군은 vehicle 군에 비하여 홍반, 각질 및 귀의 두께가 현저히 증가한 것을 확인하였다. 이와 반대로, IMQ 도포 후 애기수영 추출물을 처리한 그룹은 IMQ 도포군 대비 홍반 및 각질의 두께가 유의적으로 감소한 것을 확인하였다.As a result, as shown in FIG. 7, it was confirmed that the group applied with IMQ significantly increased the erythema, keratin and ear thickness compared to the vehicle group. On the contrary, it was confirmed that the group treated with the Arabidopsis extract after IMQ application significantly decreased the erythema and keratin thickness compared to the IMQ application group.
그에 따라, 애기수영 추출물이 건선 관련 증상을 완화시키는 것을 확인하여 건선 질환에 효과가 있음을 예측할 수 있었다.Accordingly, it was confirmed that the Aegiswim extract relieves psoriasis-related symptoms, and thus it can be predicted that it is effective for psoriasis disease.
실험예Experimental Example 2-3. 2-3. PASIPASI 점수를 통한 Through score 건선psoriasis 개선 효능 평가 Improvement efficacy evaluation
애기수영 추출물의 건선 개선 효능을 평가하기 위해, 건선 병변의 중증도를 등 피부의 두께, 홍반, 그리고 인설에 대해 PASI 지표(http://pasi.corti.li, ver 1.7.1)에 따라 0점 내지 4점으로 평가하였다. In order to evaluate the efficacy of improving the psoriasis of Aegiswim extract, the severity of psoriasis lesions, such as skin thickness, erythema, and scales are scored according to the PASI index (http://pasi.corti.li, ver 1.7.1) It was evaluated as 4 points.
그 결과, 도 8a에 나타낸 바와 같이, IMQ 군에 비해 애기수영 추출물을 처리한 군에서 등 피부의 두께가 감소한 것을 확인하였다. 또한, 8d에 나타낸 바와 같이, 등 피부의 두께, 홍반, 인설의 점수를 더한 PASI 그래프에서도 IMQ 군에 비해 애기수영 추출물 처리군에서 PASI 점수가 감소한 것으로 나타나 건선병변 중증도가 개선되었음을 보여주었다.As a result, as shown in FIG. 8A, it was confirmed that the thickness of the back skin was reduced in the group treated with the baby swimming extract compared to the IMQ group. In addition, as shown in 8d, the PASI graph of the scores of the thickness of the back skin, erythema, and scales showed that the PASI score was decreased in the Arabidopsis extract treated group compared to the IMQ group, indicating that the psoriasis lesion severity was improved.
종합하면, 건선의 주요 증상중 하나인 각질세포의 과형성 및 염증반응에 대해 시험관내 및 동물실험모델에서 애기수영 추출물의 효능을 평가한 결과, HaCaT 세포에서는 애기수영 추출물에 의해 각질세포의 세포증식률이 감소하여 각질세포의 증식 억제를 통해 건선 치료 효과를 예측할 수 있었으며, IL6와 Stat3의 인산화가 유의적으로 감소함을 확인하여 염증반응 매개 건선 유발 억제 가능성을 확인하였다. 또한, IMQ로 유도한 건선 동물모델에서 애기수영 추출물에 의해 피부의 홍반, 두께, 각질의 정도가 감소한 것으로 나타나 건선 관련 증상을 직접적으로 억제하는 것을 확인하였다. 따라서, 본 발명을 이용하면 건선에 대한 개선 및 치료 효율을 상당히 높일 수 있을 것으로 판단된다.Taken together, the efficacy of the Arabidopsis extract in vitro and in an animal experimental model for the hyperplasia and inflammatory response of keratinocytes, one of the main symptoms of psoriasis, was evaluated. As a result, the cell proliferation rate of keratinocytes by the Arabidopsis extract in HaCaT cells The effect of psoriasis treatment could be predicted by suppressing proliferation of keratinocytes, and the possibility of inhibition of inflammatory response-mediated psoriasis was confirmed by confirming that phosphorylation of IL6 and Stat3 was significantly reduced. In addition, in the animal model of psoriasis induced by IMQ, it was confirmed that the degree of erythema, thickness, and keratin of the skin was reduced by the extract of Aegiswim, which directly suppressed psoriasis-related symptoms. Therefore, it is determined that the improvement and treatment efficiency for psoriasis can be significantly increased by using the present invention.
이상의 설명으로부터, 본 발명이 속하는 기술분야의 당업자는 본 발명이 그 기술적 사상이나 필수적 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 실시될 수 있다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 이와 관련하여, 이상에서 기술한 실시 예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적인 것이 아닌 것으로서 이해해야만 한다. 본 발명의 범위는 상기 상세한 설명보다는 후술하는 특허 청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 등가 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.From the above description, those skilled in the art to which the present invention pertains will appreciate that the present invention may be implemented in other specific forms without changing its technical spirit or essential features. In this regard, the embodiments described above should be understood as illustrative in all respects and not restrictive. The scope of the present invention should be construed as including all changes or modifications derived from the meaning and scope of the following claims rather than the above detailed description and equivalent concepts thereof.
Claims (8)
As a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of psoriasis comprising the extract of Arabidopsis, the prevention or treatment of psoriasis is achieved through inhibition of cell proliferation of keratinocytes, pharmaceutical composition.
상기 건선 예방 또는 치료는 IL6 또는 Stat3의 활성 감소를 통해 달성되는 것인, 약학 조성물.
According to claim 1,
The prevention or treatment of psoriasis is achieved by reducing the activity of IL6 or Stat3, pharmaceutical composition.
상기 조성물은 애기수영 추출물을 10 내지 250μg/ml로 포함하는 것인, 약학 조성물.
According to claim 1,
The composition is a pharmaceutical composition comprising a baby swimming extract 10 to 250μg / ml.
A composition for external application for skin for preventing or improving psoriasis comprising an extract of Aegiswim, wherein the prevention or improvement for psoriasis is achieved through suppressing cell proliferation of keratinocytes, a composition for external application for skin.
As a cosmetic composition for preventing or improving psoriasis comprising the extract of Arabidopsis, the prevention or improvement of psoriasis is achieved through suppressing cell proliferation of keratinocytes, cosmetic composition.
As a quasi-psoriasis quasi-drug composition comprising the Arabidopsis extract, the psoriasis prevention or improvement is achieved through suppressing cell proliferation of keratinocytes, quasi-drug composition.
A method for preventing or treating psoriasis comprising administering a baby swimming extract to an individual other than a human, wherein the prevention or treatment of psoriasis is achieved through suppressing cell proliferation of keratinocytes.
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