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KR101782005B1 - 암미세환경 어레이 플랫폼 - Google Patents

암미세환경 어레이 플랫폼 Download PDF

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KR101782005B1
KR101782005B1 KR1020150075356A KR20150075356A KR101782005B1 KR 101782005 B1 KR101782005 B1 KR 101782005B1 KR 1020150075356 A KR1020150075356 A KR 1020150075356A KR 20150075356 A KR20150075356 A KR 20150075356A KR 101782005 B1 KR101782005 B1 KR 101782005B1
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cancer
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extracellular matrix
patient
individual
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KR1020150075356A
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김필남
강석구
고일규
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한국과학기술원
연세대학교 산학협력단
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Abstract

본 발명은 암미세환경 어레이 플랫폼의 제작 및 이를 이용한 환자 맞춤형 약물 스크리닝 방법에 관한 것으로, 구체적으로 탈세포화시킨 환자의 세포 외 기질을 이용하여 암미세환경 플랫폼을 제작하고 이를 이용한 약물 스크리닝을 통해 환자 개개인의 암미세환경을 체계적으로 분석할 수 있어 다양한 종류의 암환자에게 맞춤형 치료를 제공할 수 있으며 암이식을 통한 동물 실험을 대체함으로써 시험 비용 절감 및 약물 효능 검증기간의 단축 효과를 기대할 수 있다.

Description

암미세환경 어레이 플랫폼{Cancer micro-environment array platform}
본 발명은 암미세환경 어레이 플랫폼의 제작 및 이를 이용한 환자 맞춤형 약물 스크리닝 방법에 관한 것이다. 특히, 암미세환경 중 세포외기질(extracellular matrix)에 초점을 두고 있으며, 이를 재건하여 약물 스크리닝에 이용하고자 한다.
현재까지 고형암을 타겟으로 하는 약물 스크리닝에 사용되어온 세포 배양 시스템 환경은 생체 내 구조에 비해 매우 단순화되어 약물 내성의 원인이 될 수 있는 구조학적/생물학적 특성을 반영하지 못한다. 따라서 인체 내에서의 고형암이 갖는 복잡하고 동적인 미세환경을 재현하지 못하기에 이러한 모델을 통해서 얻은 데이터는 여러 가지 문제점을 가지고 있다.
첫째, 타 질환에 비해 암의 경우 약물효과가 25% 이하에 미치지 못하며, 특히 약물의 부작용으로 초래되는 환자 사망률이 전체 암환자의 20% 수준으로 높다. 이러한 항암제 반응은 환경적, 생물학적 특성 또는 유전적 특성, 뿐만 아니라 환자 체내에서 일어나는 약물의 약동학적 특성이나 약력학적 특성에 영향을 주는 암미세환경의 차이 등 복잡성을 반영하지 못한 상황에서 기 개발된 약물이 대부분이기 때문에 사용된 항암제가 환자 개개인에 따른 임상적 유효성을 가지지 못했을 가능성을 배제할 수 없다. 둘째, 암조직으로부터 세포를 분리 및 배양하는 조건에서 물리적, 화학적(효소처리) 처리를 하기 때문에 암세포의 생물학적 성상이 바뀌기 때문에, 약물 스크리닝 과정에서 영향을 줄 수 있다. 이러한 in vitro 모델의 단점을 보완하기 위해 환자 유래 암 타종이식을 통한 동물실험 모델을 이용하기도 한다. 하지만 이러한 동물실험 모델의 경우, 인체와는 다른 숙주의 생물학적 특성이 문제가 되며, 암의 체내 이식 후 암 발생 시점까지 최소 6개월 이상이 소요되기 때문에 뇌암과 같이 진행이 빠른 암에는 물리적으로 적용이 불가능하며, 시험에 사용되는 경제적 부담이 크다.
따라서, 최근 생체 내 환경 모방을 통한 세포 배양 시스템이 개발되고 있다. 암세포의 경우 다양한 신호전달 물질 등의 영향을 받는다. 신호전달 물질, 유전자 조절 등과 같은 분자생물학 수준에서의 암 연구는 기존의 세포 배양 시스템을 통해 많은 연구가 되어 있으며, 암 세포 주변을 둘러싸고 있는 세포 외 기질, 혈관, 기질 세포 등과 같은 미세환경에 대한 중요성이 강조되고 있다. 최근 연구 결과에 따르면 환자 개인마다 암미세환경의 차이가 있으며, 암미세환경은 암치료 예후를 결정하는 중요한 인자라는 근거들이 나오고 있다.
이에, 본 발명자들은 환자 개개인의 암미세환경을 체계적으로 분석함과 동시에 약물효과 검증 프로토콜 구축을 가능하게 함으로써, 다양한 종류의 암환자에 환자 맞춤형 치료를 제공하고자 현재까지의 체외 배양 시스템에서 시도된 바가 없는 기술로서 환자 대체 치료용 스크리닝 플랫폼을 개발하였으며, 이는 환자 맞춤형 치료법의 개발을 가능하게 하고 이로 인한 환자의 의료비용 절감 효과를 기대할 수 있으며 기존 환자 암 이식을 통한 동물 실험을 대체함으로써, 시험 비용 절감 및 약물 효능 검증기간 단축의 효과를 기대할 수 있다.
본 발명의 목적은 암미세환경 어레이 플랫폼의 제작 및 이를 이용한 환자 맞춤형 약물 스크리닝 방법을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은
1) 개체로부터 조직을 분리한 후 세포를 제거하는 탈세포(decellularization) 단계;
2) 상기 단계 1)의 탈세포화된 조직의 세포 외 기질(extra cellular matrix; ECM) 단백질 성분을 분석하는 단계; 및
3) 상기 단계 2)의 성분분석을 통해 수득한 정보를 이용하여 세포 외 기질을 합성하는 단계를 포함하는 환자 맞춤형 암미세환경 플랫폼 제조 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은
1) 개체로부터 조직을 분리한 후 탈세포 시키는 단계;
2) 상기 단계 1)의 탈세포된 조직을 액상화 시키는 단계; 및
3) 상기 단계 2)의 액상화된 탈세포 조직을 pH 및 온도 조작을 통해 고형화 시키는 단계를 포함하는 환자 맞춤형 암미세환경 플랫폼 제조 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 두 방법으로 제조된 환자 맞춤형 약물 스크리닝용 암미세환경 플랫폼을 제공한다.
아울러, 본 발명은 상기 두 방법으로 제조된 암미세환경 플랫폼에 암세포 및 피검물질을 처리하는 단계를 포함하는 환자 맞춤형 약물 스크리닝 방법을 제공한다.
본 발명은 암미세환경 어레이 플랫폼의 제작 및 이를 이용한 환자 맞춤형 약물 스크리닝 방법에 관한 것으로, 환자 개개인의 암미세환경을 체계적으로 분석할 수 있하여 암미세환경 플랫폼을 이용한 약물 스크리닝을 통해 다양한 종류의 암환자에게 맞춤형 치료를 제공할 수 있다. 또한 암이식을 통한 동물 실험을 대체함으로써 시험 비용 절감 및 약물 효능 검증기간의 단축 효과를 기대할 수 있다.
도 1은 암미세환경 어레이 플랫폼(Cancer micro-environment array platform)을 도식화한 것이다.
도 2는 약물 테스트 플랫폼을 도식화한 것이다.
도 3은 인간 뇌조직의 탈세포(decellularization) 전 및 탈세포 후의 사진 및 조직학 사진을 나타낸 도이다.
도 4는 인간 위조직의 탈세포(decellularization) 전 및 탈세포 후의 사진 및 조직학 사진을 나타낸 도이다.
도 5은 환자의 세포외 기질 재형성 과정을 도식화한 것이다.
도 6은 환자의 세포외 기질을 재형성한 사진을 나타낸 도이다.
도 7은 생쥐 뇌조직의 탈세포 전 및 후의 조직 내 콜라겐 및 GAG(glycoaminoglycan) 농도를 비교한 도이다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명은,
1) 개체로부터 조직을 분리한 후 탈세포(decellularization) 시키는 단계;
2) 상기 단계 1)의 탈세포화된 조직의 세포 외 기질(extra cellular matrix; ECM) 단백질 성분을 분석하는 단계; 및
3) 상기 단계 2)의 성분분석을 통해 수득한 정보를 이용하여 세포 외 기질을 합성하는 단계를 포함하는 환자 맞춤형 암미세환경 플랫폼 제조 방법을 제공한다.
상기 단계 1)의 조직은 암 조직인 것이 바람직하며, 상기 암 조직은 암세포, 세포 외 기질, 혈관 또는 기질 세포를 포함하는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.
상기 단계 1)의 개체로부터 암조직을 분리한 후 조직 내 잔류 혈류를 제거하는 단계를 추가적으로 포함하는 것이 바람직하며, 상기 단계 1)의 탈세포는 조직으로부터 세포 외 기질을 분리하기 위한 것이 바람직하다.
상기 단계 2)의 분석은 웨스턴 블랏(western blot), 항체를 이용한 ELISA 분석, DMMB 분석(Dimethylmethylene Blue Assay), 하이드록시프롤린(hydroxyproline) 분석 또는 LC/MS/MS를 이용할 수 있으며 이에 한정되지 않는다.
또한, 본 발명은
1) 개체로부터 조직을 분리한 후 탈세포 시키는 단계;
2) 상기 단계 1)의 탈세포된 조직을 액상화 시키는 단계; 및
3) 상기 단계 2)의 액상화된 탈세포 조직을 pH 조작을 통해 고형화시키는 단계를 포함하는 환자 맞춤형 암미세환경 플랫폼 제조 방법을 제공한다.
상기 단계 1)의 조직은 암조직인 것이 바람직하며, 상기 암조직은 암세포, 세포 외 기질, 혈관 또는 기질 세포를 포함하는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.
상기 단계 1)의 개체로부터 암조직을 분리한 후 조직 내 잔류 혈류를 제거하는 단계를 추가적으로 포함하는 것이 바람직하며, 상기 단계 1)의 탈세포는 조직으로부터 세포 외 기질을 분리하기 위한 것이 바람직하다.
상기 단계 2)의 액상화는 효소분해를 이용하는 것이 바람직하며, 상기 효소는 펩신(pepsin) 또는 트립신(trypsin)인 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.
상기 단계 3)의 pH는 pH 6.0 내지 8.0인 것이 바람직하며, pH 7.0인 것이 더욱 바람직하나 이에 한정되지 않는다.
본 발명의 환자를 대체하는 치료 및 스크리닝 플랫폼의 목적은, 환자에서 채취한 암 생검(cancer biopsy) 조직 내의 미세 환경을 구성하고 있는 기질 세포, 기질 물질, 암세포, 암 줄기세포 등 환자 개별의 암미세환경 특이성 분석 및 데이터 베이스를 구축하기 위함이며, 또한 암미세환경 어레이 플랫폼 제작을 포함한 환자 맞춤형 다중 표적 항암제를 검증하는 플랫폼 시스템을 제작하기 위함이다(도 1 참조).
본 발명의 구체적인 실시 예에서, 본 발명자들은 암미세환경 어레이 플렛폼을 제작하기 위해, 암 환자로부터 암 조직을 획득한 후, 조직 내 잔류하는 혈액 제거 및 기타 불순물을 제거하기 위해 PBS 혹은 생리식염수로 세척하였다. 세척이 끝난 조직은 탈세포(decellularization) 용액에 넣어 교반하였고, 탈세포가 완료된 조직은 PBS 혹은 정제수로 세척하여 탈세포화용액을 완전히 제거한 후 동결건조하였다.
본 발명자들은 환자의 생검 조직을 이용한 탈세포 전과 후의 형태 및 콜라겐, GAG의 농도를 비교하였으며 그 결과, 환자 생검조직의 탈세포 후 사진에서 세포가 제거되면서 하얀 세포 외 기질만이 남은 것을 확인할 수 있었고(도 3, 4 참조), 탈세포 전 및 후의 위 조직 내 콜라겐 및 GAG 농도 비교 결과 탈세포 전 및 후 조직 내의 콜라겐 및 GAG 농도는 큰 차이가 없음을 확인하였다(도 7 참조).
본 발명자들은 환자의 세포 외 기질 정보를 가진 하이드로젤을 제조하여 약물 테스트 플랫폼을 제작하기 위해 상기 동결건조가 끝난 탈세포 조직을 SEM분석 및 단백질 분석(western blot, LC/MS/MS 등)을 통해 단백질 성분 분석을 하였고, 상기와 같은 분석을 통해 환자 정보를 습득한 후, 환자 맞춤형 세포 외 기질 라이브러리 제작 및 라이브러리 정보를 이용한 환자 특이적 세포 외 기질을 합성하여 약물 테스트 플랫폼을 제작하였다.
또한, 본 발명자들은 환자의 암미세환경을 이용한 약물 테스트 플랫폼을 제작하기 위해 상기에서 제작한 동결건조가 끝난 탈세포 조직을 호모게나이저 (homogenizer) 이용하여 파쇄한 후 효소분해하여 액상화 시켰고, 하이드로젤(hydrogel)의 형태로 고형화시켜 환자의 세포 외 기질을 재형성하여 약물 테스트 플랫폼을 제작하였다.
또한, 본 발명은 상기 방법으로 제조된 환자 맞춤형 약물 스크리닝용 암미세환경 플랫폼을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 방법으로 제조된 환자 맞춤형 약물 스크리닝 방법을 제공한다.
상기 약물은 항암제인 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다.
따라서, 본 발명의 암미세환경 플랫폼을 이용한 약물 스크리닝을 통해 환자 개개인의 암미세환경을 체계적으로 분석할 수 있어 다양한 종류의 암환자에게 맞춤형 치료를 제공할 수 있으며 암이식을 통한 동물 실험을 대체함으로써 시험 비용 절감 및 약물 효능 검증기간의 단축 효과를 기대할 수 있다.
이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다.
단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.
< 실시예 1> 암미세환경 어레이 플랫폼(cancer micro-environment array platform)의 제작을 위한 단백질 정보 획득
<1-1> 환자 암을 이용한 탈세포( decellularization ) 과정
본 발명의 환자를 대체하는 치료 및 스크리닝 플랫폼의 목적은, 환자에서 채취한 암 생검(cancer biopsy) 조직 내의 미세 환경을 구성하고 있는 기질 세포, 기질 물질, 암세포, 암 줄기세포 등 환자 개별의 암미세환경 특이성 분석 및 데이터 베이스를 구축하기 위함이며, 또한 암미세환경 어레이 플랫폼 제작을 포함한 환자 맞춤형 다중 표적 항암제를 검증하는 플랫폼 시스템을 제작하기 위함이다. 이에, 하기와 같이 상기 암미세환경 어레이 플렛폼을 제작하였다.
구체적으로, 암 환자로부터 암 조직을 획득한 후, 조직 내 잔류하는 혈액 제거 및 기타 불순물을 제거하기 위해 PBS 혹은 생리식염수로 4℃에서 12 내지 24시간 동안 세척하였다. 세척이 끝난 조직은 탈세포(decellularization)를 위해 도 1과 같이 바닥에 멤브레인이 달린 탈세포화 키트(wall plate)에 넣은 후 탈세포화용액(0.5~3% Triton X-100, 0.05~0.1% NH4OH의 혼합액)에 넣어, 상온에서 1 내지 4일 동안 교반하여 탈세포를 진행시켰으며 탈세포화 용액은 24시간 마다 교체하였다. 탈세포가 완료된 조직은 PBS 혹은 정제수로 5회, 24시간 이상 세척하여 탈세포화용액을 완전히 제거하고, 세척이 끝난 탈세포 조직은 동결건조하였다.
<1-2> 탈세포( decellularization ) 전과 후 조직 내 콜라겐 및 GAG(glycoaminoglycan) 농도 확인
생쥐 뇌 조직을 이용한 탈세포 전과 후의 형태 및 콜라겐, GAG의 농도를 비교하기 위해 하기와 같은 실험을 수행하였다.
구체적으로, 콜라겐 농도의 경우 탈세포 전과 후의 생쥐 뇌 조직을 동결건조 후, 조직 10 mg에 2몰 농도의 수산화나트륨(NaOH) 용액 50 마이크로리터(ul)를 첨가하여 120℃에서 20분간 끓였다. 스탠다드 컨트롤(standard control)은 하이드록시프롤린(0 ~ 20 ug)을 2몰 농도의 수산화나트륨(NaOH) 용액 1 밀리리터(ml)에 녹여 사용하였다. 끓인 샘플과 스탠다드 컨트롤 샘플 10 마이크로리터(ul)에 Chloramine T 용액(Chloramine T reagent(1.27 g) + 20 ml n-propanol(50%) + acetate citrate buffer(80 ml)) 90 마이크로리터(ul)를 첨가 후, 상온에서 25분 정치시켰다. 이후 Ehrlich’s reagent 100 마이크로리터(ul) 첨가하여, 65℃에서 30분 정치 후, 550 nm로 흡광도를 측정하여 콜라겐 농도를 구하였다.
GAG(글루코사미노글리칸) 농도를 측정할 때, 스탠다드 컨트롤로 Chondroitin sulfate sodium salt(0 ~ 20 ug)을 사용하였다. 동결건조가 끝난 조직 10 밀리그램(mg)을 papain buffer(125 ug/ml papain, 10 mM cysteine-HCl, 10 mM EDTA + 100 mM Na2HPO4), 1 밀리리터(ml)에 넣어 60℃에서 24시간 분해시킨다. 액상화 된 조직 50 마이크로리터(ul)를 DMMB 용액(Glycine(3.04 g) + NaCl(2.37 g) + DMMB(16 mg) + EtOH(10 ml) + DW(1 L), pH 3.0) 250 마이크로리터(ul)와 혼합 후, 525 nm에서 흡광도를 측정하여, GAG 농도를 구하였다.
그 결과, 도 3 및 4에 나타낸 바와 같이 환자조직의 탈세포 후 사진에서 세포가 제거되면서 하얀 세포 외 기질만이 남은 것을 확인할 수 있었으며(도 3 및 4), 도 7에 나타낸 바와 같이 탈세포 전 및 후의 조직 내 콜라겐 및 GAG 농도 비교 결과 탈세포 전 및 후 조직 내의 콜라겐 및 GAG 농도는 큰 차이가 없음을 확인하였다(도 7).
< 실시예 2> 약물 스크리닝 플랫폼의 제작
<1-1> 환자의 세포 외 기질 정보를 가진 인공 세포 외 기질( 하이드로젤 )의 제작
본 발명에서는, 환자의 세포 외 기질 정보를 가진 하이드로젤을 제조하여 약물 테스트 플랫폼을 제작하기 위해 하기와 같은 실험을 수행하였다.
구체적으로, 도 1에 도식화한 바와 같이 상기 <실시예 1>에서 동결건조가 끝난 탈세포 조직은 SEM 분석 및 단백질 분석(western blot, LC/MS/MS 등)을 통해 단백질 성분 분석을 하였다. 상기와 같이 세포 외 기질 분석을 통해 환자 정보를 습득한 후, 환자 맞춤형 세포 외 기질 라이브러리 제작 및 라이브러리 정보를 이용한 환자 특이적 세포 외 기질을 합성한다. 예를 들어, 제작된 라이브러리 정보에서, 각각의 환자 조직 내 세포 외 기질의 구성성분의 정보(예, 환자 A: fibronectin(10 ug/ml), collagen I(25 ug/ml), collagen IV(20 ug/ml), hyaluronic acid(30 ug/ml), 등)를 이용하여, 동일한 농도의 세포 외 기질 성분을 첨가하여 환자 특이적 세포 외 기질 합성을 합성한다.
<1-2> 환자의 세포 외 기질 재형성
본 발명에서는 환자의 암미세환경을 이용한 약물 테스트 플랫폼을 제작하기 위해 하기와 같은 실험을 수행하였다.
구체적으로, 도 5에 제시한 바와 같이 동결건조가 끝난 탈세포 조직을 막자와 막자사발을 이용하여 파쇄한 후 효소분해(0.01 M HCl(1 mg/ml)에 녹인 pepsin 혹은 trypsin)하여 액상화 시켰다. 그 뒤, NaOH를 이용하여 pH를 7.0에 맞춘 후 37℃에 정치하여 하이드로젤(hydrogel)의 형태로 고형화시켜 환자의 세포 외 기질을 재형성하여 약물 테스트 플랫폼을 제작하였다.
< 실시예 3> 암미세환경 어레이 플랫폼을 이용한 개인 맞춤형 약물 스크리닝 및 암 예후 관측
본 발명의 암미세환경 어레이 플랫폼을 이용한 개인 맞춤형 약물 스크리닝을 하기 위해 상기 <실시예 2>에서 제작한 액체 상태의 세포 외 기질을 깊이 500 ㎛, 넓이 6 mm의 PDMS(Polydimethylsiloxane) 마이크로 웰에 첨가한 후, 암세포를 넣고 하이드로젤 형태로 고형화시켜, 암 진행 및 전이 등 암의 예후를 예측할 수 있으며, 본 플랫폼에 약물을 처리하여 환자 맞춤형 약물을 스크리닝할 수 있는 약물 테스트를 수행하였다(도 2).
따라서, 본 발명은 환자 개개인의 암미세환경을 체계적으로 분석함과 동시에 약물효과 검증 프로토콜 구축 및 암의 예후 관측을 가능하게 함으로써, 다양한 종류의 암환자에 환자 맞춤형 치료를 제공할 수 있으며, 이는 현재까지의 체외 배양 시스템에서 시도된 바가 없는 기술로서 환자 대체 치료용 스크리닝 플랫폼이며, 이를 통해 환자 맞춤형 치료법의 개발을 가능하게 하고 환자의 의료비용 절감 효과를 기대할 수 있다. 또한, 기존 환자 암 이식을 통한 동물 실험을 대체함으로써, 시험 비용 절감 및 약물 효능 검증기간 단축의 효과를 기대할 수 있다.

Claims (11)

1) 개체로부터 암 조직을 분리한 후 탈세포(decellularization) 시키는 단계;
2) 상기 단계 1)의 탈세포화된 조직의 세포 외 기질(extra cellular matrix; ECM) 단백질 성분을 분석하는 단계; 및
3) 상기 단계 2)의 성분분석을 통해 수득한 정보를 이용하여 세포 외 기질을 합성하는 단계를 포함하고,
상기 단계 1)에서, 상기 탈세포는 상기 개체로부터 분리된 암 조직을 0.5~3% Triton X-100 및 0.05~0.1% NH4OH을 혼합한 탈세포화용액에 넣은 후 교반하여 수행되며,
상기 단계 3)은,
상기 단계 2)의 성분분석을 통해 수득한 정보로 상기 개체에 대한 맞춤형 세포 외 기질 라이브러리를 제작하고, 이 때 상기 라이브러리는 상기 개체의 특이적 단백질 농도의 정보가 저장되며, 상기 라이브러리를 참조하여 상기 라이브러리에 포함된 상기 개체의 세포외 기질 성분 정보와 동일한 농도의 세포 외 기질 성분을 첨가하여 상기 개체의 특이적 세포 외 기질을 합성하는 것을 특징으로 하는 환자 맞춤형 암미세환경 플랫폼 제조 방법.
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제 1항에 있어서, 상기 암조직은 암세포, 세포 외 기질, 혈관 또는 기질 세포를 포함하는 것을 특징으로 하는 환자 맞춤형 암미세환경 플랫폼 제조 방법.
제 1항에 있어서, 상기 단계 1)의 개체로부터 암조직을 분리한 후 조직 내 잔류 혈류를 제거하는 단계를 추가적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 환자 맞춤형 암미세환경 플랫폼 제조 방법.
제 1항에 있어서, 상기 단계 1)의 탈세포는 조직으로부터 세포 외 기질을 분리하기 위한 것임을 특징으로 하는 환자 맞춤형 암미세환경 플랫폼 제조 방법.
제 1항에 있어서, 상기 단계 2)의 분석은 웨스턴 블랏(western blot), 항체를 이용한 ELISA 분석, DMMB 분석(Dimethylmethylene Blue Assay), 하이드록시프롤린(hydroxyproline) 분석 또는 LC/MS/MS인 것을 특징으로 하는 환자 맞춤형 암미세환경 플랫폼 제조 방법.
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제 1항의 암미세환경 플랫폼에 암세포 및 피검물질을 처리하는 단계를 포함하는 환자 맞춤형 약물 스크리닝 방법.
제 10항에 있어서, 상기 약물은 항암제인 것을 특징으로 하는 환자 맞춤형 약물 스크리닝 방법.
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