KR101446210B1 - Fast and quantitative raman analysis method and apparatus thereof for large-area multiple bio-targets - Google Patents
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Abstract
본 발명은 시료 내 다수 생체 표지자를 정량 분석하는 라만 분석 장치 및 방법에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 종래의 스팟 단위의 분석과 상이하게, 하나 이상의 순차 스캔 구간에 대한 연속적 분광 정보를 한 번의 카메라 동작 기간 중 Read-out함으로써 카메라 동작에 의해 발생하는 노이즈를 줄이면서 스캔 속도를 향상하도록 하여 다차원 다중 표지자 분석의 속도를 매우 향상시키며, 연속 순차 스캔 방식의 특성을 고려하여 단일의 플립미러부를 구성하고 가변 일축과 수직되는 타 축에 대해 플립미러부 전체를 이동시킴으로써 분석의 정밀도는 저하하지 않으면서 해당 축 구동부의 크기와 비용을 절감하도록 하여 라만 분석 장치 구성의 효율성을 높이고, 순차 스캔 구간에 대한 연속적 분광 정보를 기 설정된 분포 및 계수 정보를 포함하는 라만 맵으로 분석하여 분석 결과를 도출함으로써 시료의 정확한 위치 및 절대적 분광 정보보다 속도와 정량 분석에 최적화하도록 하여 다중 질병 진단의 해석 또는 다중 진단 시약의 분석에 매우 적합하며, 자동 초점 조정 센서를 통해 시료를 안착시키는 스테이지를 대물렌즈와 대면하여 움직이며 스캔에 따른 시료 높이 변화를 보정함으로써 광원의 에텐듀를 최소화하도록 하여 라만 이미지의 분석 효율을 더욱 높이는 효과가 있다.The present invention relates to a Raman analysis apparatus and method for quantitatively analyzing a plurality of biomarkers in a sample, and more particularly, to a method and apparatus for analyzing a plurality of biological markers in a sample, The scan speed is improved while reducing the noise generated by the camera operation, thereby greatly improving the speed of the multidimensional multi-marker analysis. In addition, a single flip mirror unit is constructed considering the characteristics of the continuous sequential scanning method, By moving the whole flip mirror part relative to the other axis perpendicular to the one axis, the size and cost of the corresponding axis driving part can be reduced without decreasing the accuracy of the analysis, thereby increasing the efficiency of the Raman analyzer and improving the efficiency of the continuous spectroscopy Map information to a Raman map containing predetermined distribution and coefficient information And it is optimized for velocity and quantitative analysis rather than exact position and absolute spectral information of the sample by deriving the analysis result. Therefore, it is very suitable for analysis of multiple disease diagnosis or analysis of multiple diagnosis reagents. The stage is moved to face the objective lens and the change in the sample height due to the scan is corrected to minimize the etendue of the light source, thereby further improving the analysis efficiency of the Raman image.
Description
본 발명은 라만 신호가 표지된 생체 시료의 분석 장치 및 방법에 관한 것으로, 특히 광범위 시료에 존재하는 다수의 미량 생체 표지자를 고속 정량 분석할 수 있으면서도 크기와 비용을 줄인 시료 내 다수 생체 표지자를 정량 분석하는 라만 분석 장치 및 방법에 관한 것이다.
The present invention relates to an apparatus and a method for analyzing a biological sample labeled with a Raman signal, and more particularly, to a method for quantitatively analyzing a plurality of biological markers in a sample, And more particularly, to a Raman analysis apparatus and method.
라만 분석 장치는 라만 스펙트럼을 측정하는 분광계를 이용하여 라만 스펙트럼이 나타내는 시료의 물성 특징을 분석하는 장치로서, 라만 스펙트럼을 생성하기 위해 레이저를 주로 사용하는 광원과 분광계를 기본으로 구성된다.The Raman spectrometer is a device for analyzing the physical properties of a sample represented by Raman spectra using a spectrometer measuring Raman spectra. The apparatus is based on a light source and a spectrometer, which mainly use a laser to generate Raman spectra.
사용되는 레이저로서는 자외선에서 적외선 파장 영역에 이르는 다양한 파장의 레이저가 상용되고 있으며, 생체 시료를 대상으로 하는 경우에는 주로 가시광선 및 근 적외선 영역의 에너지를 갖는 레이저를 많이 사용한다. 이에는 아르곤 레이저의 514.5nm 라인, 크립톤 레이저의 647nm 라인 및 YAG 등 고체 레이저의 532nm 라인과 660nm 라인과 785nm 라인 등이 그 예이다.As the used laser, various wavelengths of laser ranging from ultraviolet to infrared wavelength are commonly used, and in the case of a biological sample, a laser having energy mainly in visible light and near infrared is used. Examples include the 514.5 nm line of argon laser, the 647 nm line of krypton laser, the 532 nm line, the 660 nm line and the 785 nm line of solid state lasers such as YAG.
분광계로는 레일리 산란 등의 미광(謎光)을 충분히 제거할 필요가 있어서 더블 모노크로메이터를 2개 및 3개를 사용하는 방법이 사용되어 왔는데, 최근에는 우수한 광 특성을 갖는 간섭필터를 사용하고 1개의 모노크로메이터를 사용하는 것이 보편화되었다.
As a spectrometer, it is necessary to sufficiently remove mysterious light such as Rayleigh scattering, and a method using two or three double monochromators has been used. In recent years, an interference filter having excellent optical characteristics has been used It has become common to use one monochromator.
도 1은 종래의 라만 분석 장치의 구성도이며, 도 2는 종래의 라만 분석 방법의 예시도다.FIG. 1 is a configuration diagram of a conventional Raman analyzer, and FIG. 2 is an illustration of a conventional Raman analysis method.
도 1을 참조하면, 종래의 라만 분석 장치에서 레이저 광원(10)으로부터 출발하는 광원은 공간 필터(11:Spatial Filter)와 미러(12:Mirror) 및 다이크로익 미러(13:Dichroic Mirror)로 구성되는 광 경로를 거쳐 X축 미러(14:X-axis Mirror)에 도착한다.1, in the conventional Raman analyzer, a light source starting from a
종래의 라만 분석 장치는 광 경로 상에 X축 및 이와 수직인 Y축으로 움직이는 X축 미러(14:X-axis Mirror) 및 Y축 미러(15:Y-axis Mirror)를 배치하고, 이들을 각각 미세 조정하여 대물렌즈(20)를 통해 광원이 입사되어 스테이지(29) 상의 시료(21)와 만나는 경로를 스팟(Spot)별로 미세하게 이동시킬 수 있다.In the conventional Raman analysis apparatus, an X-axis mirror (14: X-axis mirror) and a Y-axis mirror (15: Y-axis mirror) moving in the X-axis and the Y-axis perpendicular thereto are arranged on the optical path, The path through which the light source is incident through the
X축 미러(14) 및 Y축 미러(15)는 보이스 코일 모터(16,17:Voice Coil Motor) 및 이의 구동을 제어하는 드라이버(18,19)를 통해 미세 조정이 가능하다.The
대물렌즈(20)를 통해 입사한 광원은 시료(21)와 부딪쳐 산란하게 되는데, 대부분은 입사광과 같은 에너지를 가지고 산란하나, 일부는 고유한 정도로 시료(21)와 에너지를 주고받아 비탄성 산란하게 된다.The light source incident through the
이때, 시료(21)의 물성 특성에 따라 광원이 에너지를 잃는 스톡스(Stokes) 산란 및 광원이 에너지를 얻는 안티 스톡스(Anti-Stokes) 산란의 파장은 고유한 형태로 나타나며, 분광계(50)는 에지 필터(28:Edge Filter)를 통해 이를 수집(일반적으로 스톡스 산란)하여 고유한 형태의 스펙트럼으로 표시할 수 있다.Stokes scattering in which the light source loses energy and anti-Stokes scattering in which the light source obtains energy are shown in a unique form according to the physical properties of the
종래의 라만 분석 장치에서는 이러한 스팟 별 스펙트럼 영상을 카메라(40)로 반복적으로 촬영한 후 컴퓨터(30)로 분석하여 시료(21)의 특성을 파악한다.
In the conventional Raman analysis apparatus, the spectral image for each spot is repeatedly photographed by the
상기와 같은 구성은 X축 미러(14)와 Y축 미러(15)를 분리 구성한 후 이를 각각 미세 조정하는 구성(통상, 이를 갈보 미러라 함)으로 인해, 그 정밀도가 고도로 요구되는 고가의 부속품이 복수로 탑재되어야만 하므로 비용이 높아지며, 측정 범위가 넓어질 경우 광학적 왜곡에 의해 중심에서 멀어지는 영역의 품질이 저하되는 문제가 있어 그 측정 영역에 한계가 존재한다. 도한, 레이저 광이 상기 X축 미러(14)와 Y축 미러(15)에 공통적으로 반사되어야 하므로 반사 가능한 물리적 반사 영역 제한에 의해 측정 가능한 시료의 넓이가 제한되는데, 일반적으로 다수 생체 표지자 분석을 위한 시료에 요구되는 넓이에 대응하지 못하고 있는 실정이다.The above-described configuration is advantageous in that a configuration in which the
물론, 미러 대신 스테이지가 움직이는 경우나 이들을 모두 지원하는 경우도 있으나 정밀도 및 속도가 낮고 비용이 높아지며 크기가 커져 경제성과 성능 모두 바람직하지 않다.
Of course, there are cases where the stage is moved instead of the mirror, or both of them are supported, but both the precision and the speed are low, the cost is high, and the size is large.
도 2는 도 1에 도시한 라만 분석 장치의 정보의 수집 및 분석 방식을 개략적으로 도시한 것으로, 라만 분석 장치가 스팟(22)별로 X축 미러(14) 및 Y축 미러(15)를 미세 조정하여 광 경로(25)를 이동시키며 분광계(50)가 스팟(22)별로 수집(26)한 라만 정보를 분석 툴(35)이 기 설정된 스팟별 정보를 포함하는 라만 맵(36:Raman Map)과 대응시켜 분석한다.
FIG. 2 schematically shows a method of collecting and analyzing information of the Raman analyzer shown in FIG. 1, wherein the Raman analyzer fine-tunes the
앞서 예를 든 도 1의 라만 분석 장치는 반도체 웨이퍼의 크랙 검사나 이물 검사, 미세 시료의 분석 등에 사용되고 있는데, 그 규모가 크고 비용이 높으므로 주로 산업용 장비나 연구/학술용으로 활용된다. 하지만 부피가 크고 비용이 높으며 측정할 수 있는 시료의 면적이 제한적이어서 다중 생체 표지자 분석에는 활용되기 어려운 실정이다.
The Raman analyzer shown in FIG. 1 is used for crack inspection of semiconductor wafers, foreign matter inspection, and analysis of fine samples. Since the scale is large and the cost is high, it is mainly used for industrial equipment and research / academic use. However, it is bulky, expensive and difficult to be used for multi-biomarker analysis because of the limited area of the sample to be measured.
현재 라만 분석 장치 제조사로는 "JY-Horiba"(Horiba Jobin Yvon)사와 "Renishaw"사가 가장 널리 알려져 있다. 상기와 같은 유명 제조사의 라만 분석 장치의 경우 일정한 영역에 대한 스캔 검사가 가능하지만 검사 가능한 영역이 제한적이어서 다수 생체 표지자 분석을 위한 충분한 영역의 시료를 빠르게 검사하기 어렵고, 해상도가 낮아 목표로 하는 품질을 얻기 어려울 뿐만 아니라 고가의 구동부로 구성되어 있어 비용이 높아 생체 표지자 분석의 용도로 보급하기는 현실적으로 어렵다.Currently, "JY-Horiba" (Horiba Jobin Yvon) and "Renishaw" are the most widely known manufacturers of Raman analyzers. In the Raman analyzer of the above-mentioned famous manufacturer, it is possible to perform scan inspection for a certain area, but it is difficult to inspect the sample in a sufficient area for analyzing many biomarkers because the inspection area is limited, It is not easy to obtain, and since it is constituted by an expensive driving part, it is difficult to spread it for biomarker analysis because of high cost.
도 9는 유럽 공개공보 EP1983332A1호에 공개된 "JY-Horiba"사의 라만 분석 장치의 구성도이다.9 is a block diagram of a Raman analyzer of "JY-Horiba " disclosed in European Laid-Open Publication No. EP 1983332A1.
도 9를 참조하면, 해당 라만 분석 장치 역시, X축 미러와 Y축 미러(14a, 14b)가 분리 구성되어있으므로 스캔 영역이 좁고, 정밀 구동을 위한 구동부의 비용이 높아져 생체 표지자 분석 용도로 보급하기 어렵다. 9, since the X-axis mirror and the Y-
한편, "Renishaw"사의 경우 PCT 공개공보 WO 2009/093050A1호를 통해 소위 "라인스캔"이라는 기술로 스캔 속도와 정밀도를 개선하는 기술을 개시하고 있으나, 이는 소정 크기의 라인을 단위로 시료를 분석하되, 해당 시료가 적용된 스테이지가 X, Y축으로 이동하는 구성을 가진 것이다. 이러한 구성을 취함으로써 좀 더 넓은 면적의 시료를 측정할 수 있으나 이러한 구성은 스테이지가 광학 측정부와 연동하여 정밀하게 동작하여야 한다는 점에서 외부 환경에 민감하고, 스테이지 구동을 위한 비용이 높으며, 부피가 커지는 한계가 존재하므로 이 역시 생체 표지자 분석의 용도로 보급하기는 어려운 실정이다.
On the other hand, in the case of "Renishaw", a technique of improving the scanning speed and accuracy by a so-called "line scan" through PCT publication WO 2009 / 093050A1 is disclosed. However, , And the stage to which the sample is applied moves in the X and Y axes. By taking such a configuration, it is possible to measure a sample of a wider area, but such a structure is sensitive to the external environment in that the stage must operate precisely in conjunction with the optical measuring unit, has a high cost for driving the stage, It is difficult to disseminate it for the purpose of biomarker analysis.
한편, 종래의 단일의 생체 표지자를 이용한 질병의 진단은 다량의 시료가 필요하며 그 진단 속도가 매우 느려 진단 비용이 상승하고 많은 수의 진단이 어렵다. 또한, 진단 시약의 후보군을 탐색하기 위해서는 다수의 후보물질을 검사해야 하는데, 후보 물질을 단수로 검사하는 경우 최적의 후보물질 발굴을 위해 긴 탐색시간이 필요하므로 실효성이 낮다.On the other hand, conventional diagnosis of diseases using a single biomarker requires a large amount of samples and the diagnostic rate is very slow, which increases diagnosis cost and makes diagnosis of a large number difficult. Further, in order to search for the candidate group of the diagnostic reagent, a large number of candidate substances must be inspected. In the case of the single substance test, a long search time is required to search the candidate substance.
그에 따라 최근에는 다중 표지자를 이용한 진단 시약의 탐색 및 질병 진단법에 나노 분광학을 적용한 기술이 활용되고 있다. 최근의 가장 각광받는 기술로서는 다중 표지 프로브(Probe)를 이용하여 다수의 바이오 마커에 대한 독립적인 신호를 얻고 이를 한 번에 분석하여 다중 표적을 동시에 검출하는 방식으로, 다양한 방식에 대한 연구가 학계에 보고되고 있다.Recently, nano-spectroscopy has been used to search for diagnostic reagents using multiple markers and to diagnose diseases. Recently, the most popular technique is to acquire independent signals for multiple biomarkers using multiple probe probes, and to simultaneously detect multiple targets by analyzing them at a time. Are reported.
이러한 다중 진단에 적용하는 신호의 Read-out 방식은 종래와 같이 단일 시료를 여러 스팟(spot)에 나눠서 분석하여 검사 항목에 따라 시료의 양이 증가하는 멀티 스팟팅(Multi spotting) 기술이 아니라, 금 또는 은의 나노입자를 이용한 프로브를 제작하여 신호의 민감도를 증가시키는 나노 프로브(nanoprobe) 기술을 통해 정량적 분석 결과를 도출하는 기술로서, 다차원 표지 기술을 통해 다량의 서로 다른 물질의 표지가 동시에 가능하다.The read-out method of the signal applied to the multiple diagnosis is not a multi spotting technique in which a single sample is divided into a plurality of spots to increase the amount of the sample according to the inspection item, Or nanoprobes that increase the sensitivity of signals by fabricating probes using silver nanoparticles. It is possible to simultaneously label large amounts of different materials through multi-dimensional marking technology.
이러한 다중 표지자 진단에 최근 적용되는 가장 일반적인 나노 프로브 기술은 FACS(Fluorescense-Assisted Cell Sorter)와 같은 형광 기반의 다중 측정 기술을 들 수 있는데, 이러한 방식은 형광을 기반으로 측정하기 때문에 단위 측정 물질의 파장 폭이 넓어 다중 진단이 가능한 표지자의 개수가 제한되므로 수백만 개 이상의 후보물질을 표지하거나 탐색하는 분야에는 사용할 수 없다.
The most common nanoprobe technique recently applied to this multi-marker diagnosis is fluorescence-based multi-measurement technique such as Fluorescence-Assisted Cell Sorter (FACS). Since this method is based on fluorescence, Due to its wide breadth, the number of multi-diagnostic markers is limited and can not be used in the field of labeling or searching for millions of candidate substances.
전술한 종래 라만 측정 장치의 구조적 제한과 다중 표지자 분석 방식의 한계에도 불구하고 의료 서비스의 수준이 높아짐에 따라 다중 생체 표지자 분석에 대한 수요가 증가하고 있으므로 다중 생체 표지자 분석을 위한 충분한 넓이의 시료에 대한 분석이 가능한 라만 분석 장치를 일반 병의원에 보급이 가능할 정도의 낮은 비용과 테이블 탑 정도의 소형 크기와 빠른 측정이 가능하면서도 신호의 민감도와 정확도가 높은 새로운 기술이 요구되고 있는 실정이다.
Despite the limitations of the conventional Raman measurement apparatus and the limitations of the multi-marker analysis method, as the level of medical service is increased, the demand for the analysis of multiple biomarkers is increasing. Therefore, A new technology with high sensitivity and high accuracy of signals is required, which enables a low-cost Raman analyzer capable of analyzing to be supplied to general hospitals and a small size and quick measurement of the table top.
한편, 종래의 라만 분석 장치는 스팟이나 일정한 크기의 라인 영상을 반복하여 획득한 후 매 획득한 결과물을 라만 맵과 대응시켜 분석하므로 위치 정보나 그에 따른 라만 정보에 민감한 시료에서는 효율적일 수 있으나, 생체 표지자 분석을 위한 광범위 시료에 존재하는 다수의 미량 생체 표지자를 신속하고 정밀하게 정량분석해야 하는 경우에는 한계가 있다.On the other hand, the conventional Raman analyzer analyzes repeatedly obtained spot images or line images of a predetermined size in correspondence with the Raman map, and thus can be effective in the samples sensitive to the positional information and the Raman information. However, There are limitations in the case of quantitatively analyzing a large number of trace biomarkers present in a wide range of samples for analysis quickly and precisely.
또한, 종래의 라만 분석 장치는 매 측정 위치의 영상을 개별적으로 획득하기 때문에 카메라의 영상 획득 동작 시마다 발생하는 노이즈로 인해 이를 저감시키는 구성이 부가되어야 하므로 정밀도가 낮고 스캔 속도가 느려져 광범위 시료의 다중 진단에 효율적이지 못하다.In addition, since the conventional Raman analyzing apparatus acquires images of each measurement position individually, it is necessary to add a structure for reducing the noise due to noise generated during the image acquisition operation of the camera, so that the accuracy is low and the scan speed is slow, .
특히, 다차원 표지 기술을 통해 다량의 서로 다른 물질을 고속으로 탐색하여 다중 질병을 동시에 진단하거나 진단 시약의 후보군에서 적합한 시약을 탐색하는 분야에서는, 시료의 위치별 라만 정보의 정확성보다는 시료 전체에서의 라만 정보의 확률적 분포 및 그에 이용되는 계수 정보가 분석의 정밀도에 훨씬 더 큰 영향을 미치기 때문에 균일한 측정 환경에서 고속 측정을 통한 연속적 결과 수집이 중요하다.
In particular, in the field of simultaneous diagnosis of multiple diseases by searching a large amount of different materials at high speed through multi-dimensional marking technology or searching for a suitable reagent in a candidate group of diagnostic reagents, Raman information in the entire sample Since the probabilistic distribution of information and the coefficient information used in it have a much greater impact on the accuracy of the analysis, it is important to obtain continuous results through high-speed measurements in a uniform measurement environment.
결국, 아직까지 의료용 생체 표지자 분석을 위한 적절한 수준의 라만 분석 장치가 제공되지 못하고 있으며, 현재의 카메라 촬영 방식이나 분석 방식 또한 생체 표지자 분석에 최적화되지 못한 상황이므로 일반 병,의원에서 다중 생체 표지자 분석을 실시하는 것은 기술적, 경제적으로 어려운 상황이다.
As a result, it has not yet been possible to provide an appropriate level of Raman analyzer for medical biomarker analysis, and since the present camera shooting method and analysis method are not optimized for biomarker analysis, This is a technically and economically difficult situation.
전술한 문제점을 개선하기 위한 본 발명 실시 예의 목적은 종래의 스팟 단위의 분석과 상이하게, 하나 이상의 순차 스캔 구간에 대한 연속적 분광 정보를 한 번의 카메라 동작 기간 중 Read-out함으로써 카메라 동작에 의해 발생하는 노이즈를 줄이면서 스캔 속도를 향상하도록 한 라만 분석 장치 및 방법을 제공하는 것이다.An object of the present invention to overcome the above-mentioned problems is to provide a method and apparatus for detecting consecutive spectral information for at least one sequential scan period by reading out during one camera operation period, And to provide a Raman analysis apparatus and method for improving scan speed while reducing noise.
전술한 문제점을 개선하기 위한 본 발명 실시 예의 다른 목적은 연속 순차 스캔 방식의 특성을 고려하여 단일의 플립미러부를 구성하고 가변 일축과 수직되는 타 축에 대해 플립미러부 전체를 이동시킴으로써 분석의 정밀도는 저하하지 않으면서 해당 축 구동부의 크기와 비용을 절감하도록 한 라만 분석 장치 및 방법을 제공하는 것이다.Another object of the present invention to solve the above problems is to provide a single flip mirror unit in consideration of the characteristics of a continuous sequential scanning method and move the entire flip mirror unit relative to the other axis perpendicular to the variable single axis, The present invention provides a Raman analysis apparatus and method for reducing the size and cost of a corresponding axis driving unit without deteriorating the accuracy of the Raman analysis.
전술한 문제점을 개선하기 위한 본 발명 실시 예의 또 다른 목적은 순차 스캔 구간에 대한 연속적 분광 정보를 기 설정된 분포 및 계수 정보를 포함하는 라만 맵으로 분석 결과를 도출함으로써 시료의 정확한 위치 및 절대적 분광 정보보다 속도와 정량 분석에 최적화하도록 한 라만 분석 장치 및 방법을 제공하는 것이다.It is still another object of the present invention to improve the above-described problems by providing an analysis result of Raman map including consecutive spectral information for a sequential scan section with predetermined distribution and coefficient information, And to provide a Raman analyzer and method that are optimized for speed and quantitative analysis.
전술한 문제점을 개선하기 위한 본 발명 실시 예의 또 다른 목적은 자동 초점 조정 센서를 통해 시료를 안착시키는 스테이지를 대물렌즈와 대면하여 움직이며 스캔에 따른 시료 높이 변화를 보정함으로써 광원의 에텐듀를 최소화하도록 한 라만 분석 장치 및 방법을 제공하는 것이다.
Another object of the present invention is to minimize the etendue of the light source by correcting the change in the sample height according to the scan by moving the stage facing the objective lens with the objective lens by the automatic focus adjustment sensor And to provide a Raman analysis apparatus and method.
상기한 목적을 달성하기 위한 본 발명의 일 실시 예에 따른 시료 내 다수 생체 표지자를 정량 분석하는 라만 분석 장치는 시료에 존재하는 복수 종류의 미량 생체 표지자 정보를 일괄 수집 분석하는 라만 분석 장치로서, 레이저 광원으로부터 제공되는 입사광을 반사시키며 일축에 대한 반사 경로를 기 설정된 범위의 속도로 가변시키는 플립미러부, 상기 플립미러부의 가변 축과 수직되는 타 축을 기준으로 상기 플립미러부를 위치를 상기 플립미러부 가변속도보다 느린 속도로 상기 플립미러부의 동작에 동기시켜 가변시키는 엑추에이터부, 상기 플립미러부와 엑추에이터부를 제어하여 대물렌즈를 통해 상기 시료에 제공되는 입사광이 검사 영역 중 적어도 일부 영역을 연속적으로 순차 스캔하도록 하는 스캔 제어부 및 상기 스캔 제어부에 의해 입사광이 상기 검사 영역을 순차 스캔하면서 발생되는 상기 복수 종류의 생체 표지자에 의한 라만 신호가 혼합된 반사광을 기 설정된 광 경로를 통해 입력받아 해당 반사광에 대한 분광 정보를 카메라를 통해 출력하되, 시료별로 설정된 하나 이상의 순차 스캔 구간에 대한 연속적 분광 정보를 한 번의 카메라 동작 기간 중 출력하는 분광부를 포함한다.According to an aspect of the present invention, there is provided a Raman analyzer for collecting and analyzing a plurality of kinds of trace bio-marker information in a sample, A flip mirror part for reflecting the incident light provided from the light source and varying a reflection path for one axis at a predetermined range of speeds, a position of the flip mirror part relative to the other axis perpendicular to the variable axis of the flip mirror part, And controlling the flip mirror unit and the actuator unit so that incident light provided to the sample through the objective lens continuously scans at least a part of the inspection area in a sequential manner And a scan control unit And the reflected light of the Raman signals generated by the plurality of kinds of biomarkers generated while sequentially scanning the inspection region is input through a predetermined optical path and the spectroscopic information of the reflected light is output through the camera, And a spectroscope unit for outputting the continuous spectroscopic information for the sequential scan period during one camera operation period.
상기 엑추에이터부는 소형 모터, 피에조 엑추에이터, 초음파 엑추에이터를 포함하는 선형 제어 가능한 범용 구동부 구조를 포함하는 것이 바람직하다.Preferably, the actuator unit includes a linearly controllable universal driver structure including a miniature motor, a piezo actuator, and an ultrasonic actuator.
상기 플립미러부는 보이스 코일 모터나 MEMS 구동부를 포함하는 것이 바람직하다.The flip mirror unit may include a voice coil motor and a MEMS driving unit.
상기 스캔 제어부는 상기 시료를 안착시키는 스테이지를 상기 대물렌즈의 대면에 대해 상하 방향으로 움직이며 상기 스캔에 따른 시료 높이 변화를 보정하는 보정부를 더 포함할 수 있다.The scan control unit may further include a correction unit that moves the stage for placing the sample on the opposite surface of the objective lens in the vertical direction and corrects a change in the sample height according to the scan.
상기 분광부는 500 나노미터에서 600 나노미터 사이에서 최고의 양자 효율(Quantum Efficiency)를 갖는 CCD를 포함하는 것이 바람직하며, 시료 목적에 따라 다른 파장 영역대로 선택이 가능하다.The spectroscopic unit preferably includes a CCD having a highest quantum efficiency between 500 nm and 600 nm, and can be selected in different wavelength ranges according to the purpose of the sample.
상기 라만 분석 장치는 탁상형이며 일체형일 수 있다.The Raman analyzer may be tabletop and integral.
한편, 일례로서 상기 시료는 복수 종류의 생체 표지자가 혈액과 혼합된 1 제곱 밀리미터 면적 이상일 수 있다.
On the other hand, as an example, the sample may be more than 1 square millimeter area in which plural kinds of biomarkers are mixed with blood.
상기한 목적을 달성하기 위한 본 발명의 다른 실시 예에 따른 시료 내 다수 생체 표지자를 정량 분석하는 라만 분석 방법은 시료에 존재하는 복수 종류의 미량 생체 표지자 정보를 일괄 수집 분석하는 라만 분석 장치의 측정 방법으로서, 상기 연속적 분광 정보를 기 설정된 분포 및 계수 정보를 포함하는 라만 맵의 형태로 분석하여 분석 결과를 도출하는 단계를 포함한다.According to another aspect of the present invention, there is provided a method for quantitatively analyzing a plurality of biomarkers in a sample, comprising the steps of: collecting and analyzing a plurality of kinds of trace bio- And analyzing the continuous spectral information in the form of a Raman map including predetermined distribution and coefficient information to derive an analysis result.
이때, 상기 라만 분석 방법은 다차원 다중 표지자 분석 및 측정을 통해 상기 라만 맵 상의 정보를 기초로 복수 질병에 대한 개별적 발병 가능성을 동시에 분석하는 다중 정량 진단을 수행하는 단계를 더 포함할 수 있다.
Here, the Raman analysis method may further include a step of performing multiple quantitative diagnosis simultaneously analyzing the possibility of individual onset of multiple diseases based on the information on the Raman map through multidimensional multiple marker analysis and measurement.
본 발명의 실시 예에 따른 시료 내 다수 생체 표지자를 정량 분석하는 라만 분석 장치 및 방법은 종래의 스팟 단위의 분석과 상이하게, 하나 이상의 순차 스캔 구간에 대한 연속적 분광 정보를 한 번의 카메라 동작 기간 중 Read-out함으로써 카메라 동작에 의해 발생하는 노이즈를 줄이면서 스캔 속도를 향상하도록 하여 다차원 다중 표지자 분석의 속도를 매우 향상시키는 효과가 있다.The Raman analysis apparatus and method for quantitatively analyzing a plurality of biomarkers in a sample according to an embodiment of the present invention differs from the conventional analysis of spot units in that continuous spectral information for one or more sequential scan intervals is read -out to improve the scanning speed while reducing the noise generated by the camera operation, thereby greatly improving the speed of multidimensional multi-marker analysis.
본 발명의 실시 예에 따른 시료 내 다수 생체 표지자를 정량 분석하는 라만 분석 장치 및 방법은 연속 순차 스캔 방식의 특성을 고려하여 단일의 플립미러부를 구성하고 가변 일축과 수직되는 타 축에 대해 플립미러부 전체를 이동시킴으로써 분석의 정밀도는 저하하지 않으면서 해당 축 구동부의 크기와 비용을 절감하도록 하여 라만 분석 장치 구성의 효율성을 높이는 효과가 있다.A Raman analysis apparatus and method for quantifying a plurality of biomarkers in a sample according to an embodiment of the present invention comprises a single flip mirror unit in consideration of the characteristics of a continuous sequential scanning method, It is possible to reduce the size and cost of the shaft driving unit without decreasing the precision of the analysis by moving the whole, thereby improving the efficiency of the Raman analysis apparatus.
본 발명의 실시 예에 따른 시료 내 다수 생체 표지자를 정량 분석하는 라만 분석 장치 및 방법은 순차 스캔 구간에 대한 연속적 분광 정보를 기 설정된 분포 및 계수 정보를 포함하는 라만 맵으로 분석하여 분석 결과를 도출함으로써 시료의 정확한 위치 및 절대적 분광 정보보다 속도와 정량 분석에 최적화하도록 하여 다중 질병 진단의 해석 또는 다중 진단 시약의 분석에 매우 적합한 효과가 있다.The Raman analysis apparatus and method for quantitatively analyzing a plurality of biomarkers in a sample according to an embodiment of the present invention includes analyzing continuous spectral information for a sequential scan section into a Raman map including predetermined distribution and coefficient information, It is optimized for speed and quantitative analysis rather than accurate position and absolute spectral information of the sample, so that it is very suitable for analysis of multiple disease diagnosis or analysis of multiple diagnosis reagent.
본 발명의 실시 예에 따른 시료 내 다수 생체 표지자를 정량 분석하는 라만 분석 장치 및 방법은 자동 초점 조정 센서를 통해 시료를 안착시키는 스테이지를 대물렌즈와 대면하여 움직이며 스캔에 따른 시료 높이 변화를 보정함으로써 광원의 에텐듀를 최소화하도록 하여 라만 이미지의 분석 효율을 더욱 높이는 효과가 있다.
The Raman analysis apparatus and method for quantitatively analyzing a plurality of biomarkers in a sample according to an embodiment of the present invention include a stage for placing a sample through an auto-focus adjustment sensor, facing the objective lens, And the etendue of the light source is minimized to further enhance the analysis efficiency of the Raman image.
도 1은 종래의 라만 분석 장치의 구성도.
도 2는 종래의 라만 분석 방법의 예시도.
도 3은 본 발명의 일 실시 예에 따른 시료 내 다수 생체 표지자를 정량 분석하는 라만 분석 장치의 구성도.
도 4는 본 발명의 일 실시 예에 따른 시료 내 다수 생체 표지자를 정량 분석하는 라만 분석 방법의 예시도.
도 5는 본 발명의 일 실시 예에 따른 플립미러부의 동작 예시도.
도 6은 본 발명의 일 실시 예에 따른 시료 영상 스캔의 예시도.
도 7은 본 발명의 일 실시 예에 따른 빔 스캔 패턴의 예시도.
도 8은 본 발명의 일 실시 예에 따른 시료 내 다수 생체 표지자를 정량 분석하는 라만 분석 방법의 순서도.
도 9는 종래의 라만 분석 장치의 구성도.
도 10은 본 발명의 일 실시 예에 따른 시료 영상 및 스펙트럼의 예시도.1 is a block diagram of a conventional Raman analyzer.
2 is an exemplary diagram of a conventional Raman analysis method;
FIG. 3 is a view showing a configuration of a Raman analyzer for quantitatively analyzing a plurality of biomarkers in a sample according to an embodiment of the present invention. FIG.
4 is a diagram illustrating an example of a Raman analysis method for quantitatively analyzing a plurality of biomarkers in a sample according to an embodiment of the present invention.
5 is a view illustrating an operation example of a flip mirror unit according to an embodiment of the present invention.
FIG. 6 is an exemplary view of a sample image scan according to an embodiment of the present invention; FIG.
7 is an illustration of a beam scan pattern according to an embodiment of the present invention;
8 is a flowchart of a Raman analysis method for quantitatively analyzing a plurality of biomarkers in a sample according to an embodiment of the present invention.
9 is a configuration diagram of a conventional Raman analyzer.
10 is an exemplary view of a sample image and spectrum according to an embodiment of the present invention;
상기한 바와 같은 본 발명을 첨부된 도면들과 실시 예들을 통해 상세히 설명하도록 한다.
BRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS The above and other objects, features and advantages of the invention will become more apparent from the following detailed description of the present invention when taken in conjunction with the accompanying drawings.
도 3은 본 발명의 일 실시 예에 따른 시료 내 다수 생체 표지자를 정량 분석하는 라만 분석 장치의 구성도다.3 is a block diagram of a Raman analyzer for quantitatively analyzing a plurality of biomarkers in a sample according to an embodiment of the present invention.
도 3을 참조하면, 상기 라만 분석 장치는 시료(21)에 존재하는 복수 종류의 미량 생체 표지자 정보를 일괄 수집 분석하는 라만 분석 장치로서, 레이저 광원(10)으로부터 제공되는 입사광을 반사시키며 일축에 대한 반사 경로를 기 설정된 범위의 속도로 가변시키는 플립미러부(81), 상기 플립미러부(81)의 가변 축과 수직되는 타 축을 기준으로 상기 플립미러부(81)를 위치를 상기 플립미러부(81) 가변속도보다 느린 속도로 상기 플립미러부(81)의 동작에 동기시켜 가변시키는 엑추에이터부(60), 상기 플립미러부(81)와 엑추에이터부(60)를 제어하여 대물렌즈(20)를 통해 상기 시료(21)에 제공되는 입사광이 검사 영역 중 적어도 일부 영역을 연속적으로 순차 스캔하도록 하는 스캔 제어부(65,75) 및 상기 스캔 제어부(65,75)에 의해 입사광이 상기 검사 영역을 순차 스캔하면서 발생되는 상기 복수 종류의 생체 표지자에 의한 라만 신호가 혼합된 반사광을 기 설정된 광 경로를 통해 입력받아 해당 반사광에 대한 분광 정보를 카메라(40)를 통해 출력하되, 시료별로 설정된 하나 이상의 순차 스캔 구간에 대한 연속적 분광 정보를 한 번의 카메라 동작 기간 중 출력하는 분광부(50)를 포함한다.3, the Raman analyzer is a Raman analyzer collecting and analyzing a plurality of kinds of trace biomarker marker information existing in the
상기 플립미러부(81)는 도시 및 식별 구분의 편의를 위해 플립미러(80)를 포함하는 사각형으로 도시하였으나, 상기 플립미러(80) 및 상기 가변 축과 상기 타 축 또는 상기 플립미러(80) 및 상기 가변 축의 구동 구성(70,75) 및 상기 타 축의 구동 구성(60,65) 등으로 구성되어 가변 및 이동이 편리하도록 구성할 수 있음은 물론이다.Although the
바람직한 실시 예로서, 상기 라만 분석 장치에서 레이저 광원(10)으로부터 출발하는 입사광은 공간 필터(11:Spatial Filter)와 하나 이상의 미러(12,14:Mirror) 및 다이크로익 미러(13:Dichroic Mirror)로 구성되는 광 경로를 거쳐 플립미러부(81)에 도착한다.In a preferred embodiment of the present invention, incident light originating from the
상기 라만 분석 장치는 광 경로 상에 배치한 플립미러부(81)의 가변 축의 구동부(70)를 통해 가변 축 방향의 광 경로를 빠른 속도로 이동시키며 상기 타 축 방향은 이에 비해 느린 속도로 이동시킨다.The Raman analyzer moves the optical path in the variable axis direction at a high speed through the driving
즉, 스캔 동작을 위해서는 일 축의 고속 구동이 필요하지만, 다른 축의 경우 상대적으로 구동 속도가 느리더라도 무방하다.In other words, high-speed driving of one axis is required for the scanning operation, but the driving speed of the other axis may be relatively slow.
상기 라만 분석 장치는 상기 스캔 제어부(65,75)를 통해 이러한 동작을 미세 조정하여 대물렌즈(20)를 통해 입사된 광원이 스테이지(29) 상의 시료(21)와 만나는 지점이 연속적인 경로를 갖도록 구성할 수 있다.The Raman analysis apparatus fine-adjusts such an operation through the
상기 가변 축(예를 들어, X축)의 미세 조정은 액추에이터(Actuator)와 같은 보이스 코일 모터(70:Voice Coil Motor)나 멤스(MEMS:Micro Electro Mechanical Systems) 구동부 및 이의 구동을 제어하는 드라이버(75)를 통해 고속 미세 조정이 가능하다. 이는 상용 갈보 미러(Galvo Mirror)를 이용할 수 있다.The fine adjustment of the variable axis (for example, the X axis) may be performed by using a voice coil motor (70) such as an actuator, a MEMS (Micro Electro Mechanical Systems) 75) can be used for high-speed fine adjustment. It can use the commercial Galvo Mirror.
여기서, 구동부를 MEMS로 할 경우 고정 주파수로 진동하므로 절대 위치 조정은 어렵지만 스캔 구동에는 적합하고 미러도 일체화할 수 있어 크기와 비용을 크게 줄일 수 있다.In this case, when the driving part is a MEMS, since it vibrates at a fixed frequency, it is difficult to adjust the absolute position, but it is suitable for the scan driving and the mirror can be integrated, and the size and cost can be greatly reduced.
그러나, 상기 타 축(예를 들어, Y축)의 조정은 소형 모터(60), 피에조 엑추에이터 혹은 초음파 엑추에이터와 같은 상대적으로 저렴하고 선형 제어가 용이한 모터를 이용할 수 있으며 이의 구동을 제어하는 드라이버(65)를 통해 조정이 가능하다. 이를 통해, 비용을 낮추고 제어 부담을 줄일 수 있다.However, adjustment of the other axis (e.g., the Y axis) can be performed using a relatively inexpensive and linearly controllable motor such as a
한편, 상기 대물렌즈(20)를 통해 입사한 광원은 시료(21)와 부딪쳐 산란하게 되는데, 대부분은 입사광과 같은 에너지를 가지고 산란하나, 일부는 고유한 정도로 시료와 에너지를 주고받아 비탄성 산란하게 된다.On the other hand, a light source incident through the
이때, 시료(21)의 물성 특성에 따라 시료(21)가 에너지를 잃는 스톡스(Stokes) 산란 및 시료가 에너지를 얻는 안티 스톡스(Anti-Stokes) 산란의 파장은 고유한 형태로 나타나며, 상기 분광부(50)는 에지 필터(28:Edge Filter)를 통해 이를 수집(일반적으로 스톡스 산란)하여 고유한 형태의 스펙트럼으로 표시할 수 있다.At this time, the Stokes scattering in which the
상기 라만 분석 장치에서는 시료(21)별로 설정된 하나 이상의 순차 스캔 구간에 대한 연속적 분광 정보를 한 번의 카메라(40) 동작 기간 중 출력하여 컴퓨터(30)로 분석하여 시료(21)의 특성을 파악할 수 있다.In the Raman analyzer, the continuous spectral information for one or more sequential scan intervals set for each
여기서, 상기 카메라(40)의 개별 동작은 카메라 초기화(촬상부 메모리 클린, 자동 노출 조정, 화이트 밸런스 조정 등)와 카메라 셔터 동작에 따른 광 수집, 수집 영상의 출력 포맷 처리의 일련의 과정을 의미한다.
Here, the individual operation of the
도 4는 본 발명의 일 실시 예에 따른 시료 내 다수 생체 표지자를 정량 분석하는 라만 분석 방법의 예시도로서, 본 발명의 실시 예에 따른 라만 분석 장치는 분광부(50)가 이러한 상기 복수 종류의 생체 표지자에 의한 라만 신호가 혼합된 반사광을 기 설정된 광 경로를 통해 입력받아 해당 반사광에 대한 분광 정보를 카메라(40)를 통해 출력하되, 시료(21)별로 설정된 하나 이상의 순차 스캔 구간(22,23)에 대한 연속적 분광 정보(24)를 한 번의 카메라 동작 기간 중 출력하고 이를 분석 툴(35)이 상기 시료 상의 분포 및 계수 정보를 포함하는 라만 맵(37:Raman Map)으로 분석하여 분석 결과를 도출한다.FIG. 4 is a diagram illustrating a Raman analysis method for quantitatively analyzing a plurality of biomarkers in a sample according to an embodiment of the present invention. In the Raman analysis apparatus according to an embodiment of the present invention, And the spectral information of the reflected light is output through the
종래의 라만 분석 장치는 상술한 바와 같이 스팟별 영상을 반복하여 획득한 후 일일이 스팟별 정보를 포함하는 라만 맵과 대응하여 분석하므로 스팟별 위치 정보와 그에 따른 라만 정보에 민감한 시료에서는 효율적일 수 있으나, 상술한 광범위 시료에 존재하는 다수의 미량 생체 표지자를 이른 시간 내에 정량분석이 가능하도록 하는 라만 분석 방법에는 적합하지 않다.The conventional Raman analyzer analyzes the spot image by repeatedly acquiring the image for each spot as described above and analyzes it in correspondence with the Raman map including the spot-specific information, so that it can be efficient in the sample sensitive to the spot information and the Raman information, It is not suitable for the Raman analysis method that enables quantitative analysis of a large number of trace biomarkers existing in the above-mentioned wide sample within an early time.
특히, 다차원 표지 기술을 통해 다량의 서로 다른 물질을 고속으로 탐색하여 다중 질병을 동시에 진단하거나 진단 시약의 후보군에서 적합한 시약을 탐색하는 분야에서는, 시료의 위치별 라만 정보의 정확성보다는 시료 전체에서의 라만 정보의 확률적 분포 및 그에 이용되는 계수 정보가 분석의 정밀도에 훨씬 더 큰 영향을 끼치기 때문이다.In particular, in the field of simultaneous diagnosis of multiple diseases by searching a large amount of different materials at high speed through multi-dimensional marking technology or searching for a suitable reagent in a candidate group of diagnostic reagents, Raman information in the entire sample The probabilistic distribution of information and the coefficient information used for it have a much greater impact on the accuracy of the analysis.
또한, 다중 생체 표지자에 혈액을 적용한 적어도 1 제곱 밀리미터(mm)의 대면적 시료에 대한 측정이 필요하므로 검사 면적의 대형화와 그에 따른 속도 개선이 요구된다.In addition, since it is necessary to measure at least one square millimeter (mm) large area sample to which blood is applied to multiple biomarkers, it is required to enlarge the inspection area and to improve the speed.
더불어, 종래의 라만 분석 장치는 스팟을 단위로 측정하므로 카메라의 스팟별 동작에 의해 매 동작시 발생하는 노이즈로 인해 연속 스캔에 비해 정밀도가 더 낮아지게 된다.In addition, since the conventional Raman analyzer measures the spot as a unit, the precision of the conventional Raman analyzer is lower than that of the continuous scan due to the noise generated in each operation by the operation of each spot of the camera.
아울러, 종래의 라만 분석 장치는 소위 "라인 스캔"으로 불리는 스캐닝 방식을 사용하거나 상술한 멀티 스팟팅 방식을 사용하는 데 이러한 방식들은 본 발명과 같이 연속 영역에 대한 순차 스캔을 수행하지 않고 일부 이상의 영역에 대해 불연속적인 스캔 방식을 수행하게 되어 촬영 동안 발생하는 노이즈가 커지게 된다.In addition, the conventional Raman analyzer uses a scanning method called "line scan" or uses the above-described multispotting method. However, these methods do not perform sequential scanning for a continuous area as in the present invention, The noise generated during the photographing becomes large.
반면, 본 발명의 실시 예에 따른 라만 분석 장치는 종래의 스팟 단위의 분석과 상이하게, 하나 이상의 순차 스캔 구간(전체 영역 또는 소정 분할 영역 등)에 대한 연속적 분광 정보를 한 번의 카메라 동작 기간 중 Read-out하므로 매번 카메라 동작에 의한 초기화 시 발생하는 노이즈를 한번으로 줄이면서 스캔 속도를 향상시키므로 고속 다차원 다중 표지자 분석의 속도와 품질을 향상시킨다.On the other hand, the Raman analysis apparatus according to the embodiment of the present invention differs from the conventional analysis of spots in that continuous spectral information on one or more sequential scan periods (entire region or predetermined region, etc.) -out, it improves the speed and quality of the fast multidimensional multi-marker analysis because it improves the scanning speed by decreasing the noise generated at the initialization by the camera operation every once.
또한, 본 발명의 실시 예에 따른 라만 분석 장치는 순차 스캔 구간에 대한 연속적 분광 정보를 분포 및 계수 정보를 포함하는 라만 맵(37)으로 분석하여 분석 결과를 도출하므로, 시료(21)의 정확한 위치(22) 및 절대적 위치의 분광 정보가 아닌 정량 분석을 요구하는 다중 질병 진단의 해석 또는 다중 진단 시약의 분석에 매우 적합하다.In addition, since the Raman analysis apparatus according to the embodiment of the present invention analyzes the continuous spectral information of the sequential scan section by the
더불어, 본 발명의 실시 예에 따른 라만 분석 장치는 플립미러부(81)의 가동 범위와 이를 타 축으로 이동시키는 엑추에이터부(예를 들어, 소형모터(60), 피에조 엑추에이터, 초음파 엑추에이터)의 가동이 서로 영향을 주지 않으므로(기존 X,Y 구성의 미러부는 각 가동 범위가 광 경로를 감안하여 제한적임), 대면적 시료에 대한 스캔이 가능하므로 1 제곱 밀리미터(mm) 이상의 시료에 대해서도 용이하게 대응할 수 있다.
In addition, the Raman analysis apparatus according to the embodiment of the present invention may include a movable range of the
한편, 다시 도 3을 참조하면, 상기 엑추에이터부(60)는 소형 모터 또는 피에조 엑추에이터, 초음파 엑추에이터 등과 같이 비교적 저렴하고 선형 제어가 용이하면서도 적절한 제어 정밀도를 가지는 범용 구동부와 드라이버로 구성할 수 있다.Referring to FIG. 3 again, the
상기 스캔 제어부(65,75)는 상기 시료(21)를 안착시키는 스테이지(29)를 상기 대물렌즈(20)의 대면에 대해 상하 방향으로 움직이며 상기 스캔에 따른 시료 높이 변화를 보정하는 보정부(미도시)를 더 포함할 수 있다.The
상기 스캔 제어부(65,75)는 자동 초점 조정 센서 등을 구비하여 시료를 안착시키는 스테이지(29)를 대물렌즈(20)와 대면하여 움직이며 스캔에 따른 시료 높이 변화를 감지하고 이를 보정하도록 구성할 수 있는 데, 이러한 경우 광원의 에텐듀를 최소화할 수 있어 라만 이미지의 분석 효율을 더욱 높일 수 있다.The
또한, 상기 라만 분석 장치는 라만 분광뿐만 아니라, 추가 구성을 더 포함하여 구성하여 형광 패턴과 같은 광학 패턴을 더불어 분석하도록 하여 다차원 다중 분석의 결과 신뢰도를 더욱 향상하도록 구성할 수도 있다.In addition, the Raman analyzer may be configured to further include not only Raman spectroscopy but also additional components so as to analyze the optical pattern such as a fluorescent pattern, thereby further improving the reliability of the result of the multidimensional multiple analysis.
한편, 상기 분광부(50)는 라만 스펙트럼의 피크치를 고려하여 가시광선 영역 중 타 파장 대역에 비해 500 나노미터에서 600 나노미터 사이에서 최고의 양자 효율(Quantum Efficiency)를 갖는 CCD(Charged Coupled Device)를 포함하여 구성하는 것이 바람직하지만, 시료의 조건에 따라 다른 파장 영역을 사용할 수 있다.In consideration of the peak value of the Raman spectrum, the
더불어, 상기 라만 분석 장치는 종래의 X,Y축 갈보 미러를 이용하는 경우나 스테이지를 X,Y축으로 조정하는 방식에 비해 플립미러(80) 및 이를 구동, 제어하는 구성(60,70,65,75)이 매우 저렴하며 단일 구성으로 이루어져 크기를 줄일 수 있고 미러로만 X,Y축을 조절하는 경우에 비해 쉽게 대면적 스캔이 가능하도록 구성할 수 있으므로 탁상형 또는 일체형으로 소형화하는데 유리하다.
In addition, the Raman analyzer has a
도 5는 본 발명의 일 실시 예에 따른 플립미러부(81)의 동작 예시도다.5 is an operational example of the
도시된 라만 분석 장치의 스캔 부분은 시료(21) 스캔을 통한 라만 맵의 생성 시에 점(스팟) 단위의 분광 정보 수신이 아닌 연속 정보 수신을 통해 정량 분석하도록 하여 노이즈를 줄이고 속도를 개선하도록 함과 아울러 이러한 동작 방식에 최적화된 스캐너 구조를 적용하여 비용과 크기를 줄이면서 검사 영역을 확장하여, 광범위 시료(21)에 존재하는 다수의 미량 생체 표지자를 대상으로 고속 정량분석이 가능하며 소형 시스템으로 저렴하게 구성할 수 있다.The scan part of the illustrated Raman analyzer is configured to quantitatively analyze continuous information by receiving continuous information instead of receiving spectral information in the spot (spot) unit when generating the Raman map through the scan of the
플립미러부(81)로 입사하는 광원의 광 경로(5)는 플립미러(80)의 가변 축의 회전 운동(71)과 타 축의 이동 운동(61)을 통해 대물렌즈(20)를 통과하여 스테이지(29)의 시료(21) 상에서 검사 영역 전체를 연속적으로 순차 스캔하도록 설정된다.The
특히, 본 발명의 라만 분석 장치는 도 5에 도시한 바와 같이, 플립미러부(80,81)를 단일로 구성하여 그 부피를 줄이며, 다중 분석의 특성상 라만 정보의 분포 정보가 상대적으로 더 중요한 점을 이용하여 X축(71)에 비해 Y축(61)이 저속이며 제어 정밀도가 다소 낮아도 상술한 본 발명의 연속 순차 스캔 방식의 특성 및 정량 분석에 대해서는 동일 성능을 유지할 수 있게 된다.
In particular, as shown in FIG. 5, the Raman analyzer according to the present invention includes a single
도 6은 본 발명의 일 실시 예에 따른 시료 영상 스캔의 예시도다.6 is an illustration of a sample image scan according to an embodiment of the present invention.
도 6을 참조하면, 상기 라만 분석 장치는 시료를 스캔할 때, 일 축은 고속으로 타 축은 상기 일 축에 비해 저속으로 이동하며 시료를 스캐닝(23)한다.Referring to FIG. 6, when the sample is scanned, the Raman analyzer moves one axis at high speed and the other axis at low speed relative to the one axis, thereby scanning (23) the sample.
특히, 나노 분광학을 이용한 진단 시약 후보군 탐색 및 다중 질병의 진단을 위해서는 탐색의 대상 수가 1차원의 표지 기술의 한계를 넘어서므로, 다차원 다중 표지 기술을 활용해야 한다.In particular, multidimensional multi-labeling technology should be utilized because the number of objects to be searched exceeds the limit of one-dimensional marking technology in order to search for candidates of diagnostic reagents using nano spectroscopy and to diagnose multiple diseases.
이러한 다차원 다중 표지 기술에서의 표지 및 탐색 작업은 수백만 개까지의 후보 물질을 표지하거나 탐색할 수도 있으므로, 그 스캔 속도 및 시료 영상에서의 노이즈의 감소가 매우 중요하다.Since labeling and searching operations in this multi-dimensional multi-labeling technique can mark or search up to millions of candidates, it is very important to reduce the scan speed and the noise in the sample image.
또한, 상술한 바와 같이 다중 분석의 특성상 스팟별 라만 정보보다 전체적인 시료 상에서의 라만 정보의 분포 또는 패턴이 그 분석에 있어 더욱 중요하다.Also, as described above, the distribution or pattern of the Raman information on the entire sample is more important in the analysis than the Raman information per spot because of the characteristics of the multiple analysis.
본 발명의 일 실시 예에 따른 라만 분석 장치는 하나 이상의 순차 스캔 구간에 대한 연속적 분광 정보를 한 번의 카메라 동작 기간 중 출력하는 특징적 구성을 통해 빠른 스캔과 정밀한 라만 정보의 패턴 분석이 가능하므로, 다차원 다중 표지자 분석 및 측정을 수행하는 나노 프로브, 진단 시약 및 다중 진단 분야에서 그 실효성이 매우 높다.The Raman analysis apparatus according to an embodiment of the present invention can perform fast scanning and pattern analysis of precise Raman information through a characteristic configuration in which continuous spectral information for one or more sequential scan periods is output during one camera operation period, It is very effective in the fields of nanoprobes, diagnostic reagents and multiple diagnostics that perform marker analysis and measurement.
또한, 다차원 다중 표지자에 대해 라만 분광 신호 패턴뿐만 아니라, 형광 ,그래픽, 광학 패턴을 복합적으로 분석하는 멀티플 신호를 고속 측정하거나 탐색할 수도 있다.In addition, it is possible to measure or search for a multi-channel signal for complex analysis of fluorescence, graphic, and optical patterns as well as Raman spectroscopic signal patterns for multi-dimensional multi-markers.
더불어, 도시된 방식의 스캔 형태 이외에도, 소정의 각도를 가지는 스캔 방식(예를 들어, 브라운관 TV의 비월 주사나 순차 스캔 형태)이나 영역을 분할하여 영역별로 순차 스캔하는 방식 등으로 다양하게 변경 가능하며, 이는 모두 본 발명의 범위에 속한다.
In addition to the above-described scanning method, a scanning method having a predetermined angle (for example, an interlaced scanning or a sequential scanning method of a CRT TV) or a method of dividing an area and sequentially scanning the areas may be used , All of which are within the scope of the present invention.
도 10은 본 발명의 일 실시 예에 따른 시료 영상과 스펙트럼의 예시도다.10 is an illustration of a sample image and spectrum according to an embodiment of the present invention.
바람직한 실시 예로서, 본 발명의 일 실시 예에 따른 라만 분석 장치는 상술한 바와 같이, 다차원 다중 표지자 분석 및 측정을 위한 라만 분석을 통해 시료 내 표지(1)를 빠른 스캔으로 검출하여 정밀한 라만 정보의 패턴 분석이 가능하다.As a preferred embodiment, the Raman analysis apparatus according to an embodiment of the present invention detects a
바람직한 실시 예로서, 본 발명의 일 실시 예에 따른 라만 분석 장치는 상술한 바와 같이, 다차원 다중 표지자 분석 및 측정을 위한 라만 분석을 통해 시료 내 표지(1)를 빠른 스캔으로 검출하여 정밀한 라만 정보의 패턴 분석이 가능하다. As a preferred embodiment, the Raman analysis apparatus according to an embodiment of the present invention detects a
해당 시료는 0.5 mm * 0.5 mm 크기의 시료에 대한 것으로 532 nm의 레이저 광을 1.5 mW의 출력으로 조사하면서 Point scan 방식에 의한 라만 맵을 얻은 것이 도 10a의 이미지이다. This sample is a sample of 0.5 mm * 0.5 mm in size, and the Raman map obtained by the point scan method is obtained while irradiating a laser beam of 532 nm with an output of 1.5 mW.
이 경우 대면적의 시료를 빠짐없이 측정하는데 약 21분의 시간이 소요되었다. 하지만, 이미지 처리기능을 제거하고 대면적의 시료를 빠진 곳 없이 측정하는데 단 30초~2분의 시간이 소요되었으며 그 측정 결과가 도 10b와 같이 얻어졌다.In this case, it took about 21 minutes to measure a large area sample. However, it took only 30 seconds to 2 minutes to remove the image processing function and to measure a large area sample without missing place, and the measurement result was obtained as shown in FIG. 10B.
즉, 본 발명에서 제안한 방법을 사용하면 대면적의 시료를 빠진 곳 없이 공초점의 고효율 신호 수집 능력을 유지한 채 목적에 따라 측정시간을 희생하면서 이미징 기능을 최대화하거나 이미징 기능을 최소화하면서 측정시간을 최소화할 수 있다.That is, by using the method proposed in the present invention, it is possible to maximize the imaging function while minimizing the imaging function while maintaining the high-efficiency signal collecting ability of the confocal point without missing the large-sized sample, Can be minimized.
한편, 라만 신호는 상당히 미세한 신호이므로 정확한 판정을 위해서는 상당히 오랜 노출 시간이 요구되므로, 더욱 바람직한 실시 예로서 본 발명의 일 실시 예에 따른 라만 분석 장치의 상기 스캔 제어부(65,75)는 상기 시료에 대해 상기 순차 스캔 이전에 라만 방식이 아닌 형광 및 탄성 산란광 스캔 방식으로 상기 시료 내 표지(1)의 위치를 빠른 시간에 확인하는 프리 스캔(Pre-Scan)을 수행하도록 제어하고 이를 바탕으로 신호 발생부만을 재 스캔하는 방식으로 측정 시간을 단축하면서 S/N ratio를 극대화할 수 있다.Since the Raman signal is a very fine signal, a considerably long exposure time is required for accurate determination. Therefore, as a more preferable embodiment, the
예를 들어, 본 발명의 일 실시 예에 따른 라만 분석 장치는 시료 내 표지(1)의 위치만을 일차적으로 확인하기 위해 라만 방식이 아닌 상대적으로 시간이 덜 걸리는 방식으로 이차원 맵(2D MAP)을 작성하는 프리 스캔을 수행한 후, 상기 프리 스캔에 따라 표지의 존재가 확인된 위치(1)에 대해서 라만 측정을 수행하고 그 외의 부분(2)은 스킵하는 방식을 적용할 수 있다.For example, the Raman analysis apparatus according to an exemplary embodiment of the present invention creates a two-dimensional map (2D map) in a manner that takes relatively little time, rather than a Raman scheme, in order to primarily check only the position of the
이러한 프리 스캔 방식의 예로서, 레이저를 이용하여 선형 광을 직접 확인하는 방식, 콘포컬 현미경으로 이미지를 얻는 방식, 표지에 형광을 적용하여 형광 이미지를 얻는 방식 혹은 비전을 통해서 2D 이미지를 얻는 방식 등 라만 방식에 비해 속도가 빠른 다양한 방식을 적용할 수 있다.As an example of such a pre-scan method, there is a method of directly confirming linear light using a laser, a method of obtaining an image by a confocal microscope, a method of obtaining a fluorescent image by applying fluorescence to a label, or a method of obtaining a 2D image through vision It is possible to apply various methods that are faster than the Raman method.
실질적으로 표지가 없는 부분(2)이나 프리 스캔으로 걸러지지 않는 정도의 표지라면 실제 라만 측정을 적용하여도 노이즈로 인식될 수 있으므로, 본 발명의 일 실시 예에 따른 라만 분석 장치는 상술한 프리 스캔 방식의 적용을 통해 품질의 저하 없이 고속 측정을 수행할 수 있게 된다.
The Raman analysis apparatus according to an embodiment of the present invention can detect the presence of the above-mentioned pre-scan (2) because it can be recognized as a noise even if an actual Raman measurement is applied, The high-speed measurement can be performed without deteriorating the quality.
도 7은 본 발명의 일 실시 예에 따른 빔 스캔 패턴의 예시도다.7 is an illustration of a beam scan pattern according to an embodiment of the present invention.
상술한 바와 같이, 상기 라만 분석 장치는 일 축이 타 축에 비해 저속으로 제어하여 플립미러부(81)를 이동시키면서 시료의 영상을 스캔한다. 물론, 이러한 스캔 패턴은 달라질 수도 있다.As described above, the Raman analysis apparatus scans an image of a sample while controlling one axis at a slower speed than the other axis to move the
바람직한 실시 예로서, 상기 라만 분석 장치는 나노 프로브를 이용한 분석에 활용할 경우 상기 레이저 광원(10)으로서 상기 나노 프로브에 최적화된 500-550nm의 파장 영역을 갖는 레이저를 사용할 수 있다.As a preferred embodiment, when the Raman analyzer is used for analysis using a nano-probe, a laser having a wavelength range of 500-550 nm optimized for the nano-probe may be used as the
또한, in vivo 시료에 대해서는 상기 라만 분석 장치에 적외선 분광법을 활용할 수 있도록 근 적외선 레이저(Near Infrared Ray Laser)를 더 구성할 수도 있다.For the in vivo sample, a near infrared ray laser may be further configured to utilize the infrared spectroscopy in the Raman analyzer.
더불어, 상기 라만 분석 장치는 도 3에 도시한 각 구성을 모듈화하여 예를 들어, 각 모듈 간 정렬(Alignment)이 불필요하도록 구성하거나 업그레이드가 용이하도록 구성할 수도 있다.In addition, the Raman analyzer may be configured such that each configuration shown in FIG. 3 is modularized, for example, so that alignment between the modules is unnecessary, or that upgrading is easy.
더욱 바람직하게는, 상기 라만 분석 장치는 상기 에지 필터(28)를 스톡스 산란에 적합하도록 구성하거나, 레이저 광원(10)을 교체식을 구성하여 레이저 교환이 쉽도록 구성할 수도 있다.
More preferably, the Raman analyzer may be configured so that the
도 8은 본 발명의 일 실시 예에 따른 시료 내 다수 생체 표지자를 정량 분석하는 라만 분석 방법의 순서도다.FIG. 8 is a flowchart of a Raman analysis method for quantitatively analyzing a plurality of biomarkers in a sample according to an embodiment of the present invention.
도 8을 참조하면, 상기 라만 분석 방법은 상기 라만 분석 장치의 플립미러부(81)가 레이저 광원(10)으로부터 제공되는 입사광을 반사시키며 일축에 대한 반사 경로를 기 설정된 범위의 속도로 가변시키는 단계(S10), 상기 라만 분석 장치의 엑추에이터부(60)가 상기 플립미러부(81)의 가변 축과 수직되는 타 축을 기준으로 상기 플립미러부(81)를 위치를 상기 플립미러부(81) 가변속도보다 느린 속도로 상기 플립미러부(81)의 동작에 동기시켜 가변시키는 단계(S20), 상기 라만 분석 장치의 스캔 제어부(65,75)가 상기 플립미러부(81)와 엑추에이터부(60)를 제어하여 대물렌즈(20)를 통해 상기 시료(21)에 제공되는 입사광이 검사 영역 중 적어도 일부 영역을 연속적으로 순차 스캔하도록 하는 단계(S30) 및 상기 라만 분석 장치의 분광부(50)가 상기 스캔 제어부(65,75)에 의해 입사광이 상기 검사 영역을 순차 스캔하면서 발생되는 상기 복수 종류의 생체 표지자에 의한 라만 신호가 혼합된 반사광을 기 설정된 광 경로를 통해 입력받아 해당 반사광에 대한 분광 정보를 카메라(40)를 통해 출력하되, 시료별로 설정된 하나 이상의 순차 스캔 구간에 대한 연속적 분광 정보를 한 번의 카메라 동작 기간 중 출력하는 단계(S40)를 포함한다.Referring to FIG. 8, the Raman analysis method includes the steps of reflecting the incident light provided from the
또 다른 바람직한 실시 예로서, 상기 라만 분석 방법은 시료에 존재하는 복수 종류의 미량 생체 표지자 정보를 일괄 수집 분석하는 라만 분석 장치의 라만 분석 방법으로서, 상기 연속적 분광 정보를 분포 및 계수 정보를 포함하는 라만 맵의 형태로 분석하여 분석 결과를 도출하는 단계를 포함한다.In another preferred embodiment, the Raman analysis method is a Raman analysis method of a Raman analysis apparatus collectively analyzing a plurality of kinds of trace biomarker marker information present in a sample, wherein the continuous spectral information is distributed to Raman And analyzing the result in the form of a map to derive an analysis result.
이때, 상기 분석 결과 도출 단계는 다차원 표지 기술을 기반으로 진단 시약의 후보군을 탐색하고 그 분석 결과를 도출하는 것일 수 있다.At this time, the step of deriving the analysis result may be to search the candidate group of the diagnostic reagent based on the multidimensional labeling technique and to derive the analysis result.
또는, 상기 라만 분석 방법은 상기 라만 맵 상의 정보를 기초로 다차원 다중 표지자 분석 및 측정을 통해 복수 질병에 대한 개별적 발병 가능성을 동시에 분석하는 다중 정량 진단을 수행하는 단계를 더 포함할 수 있다.
Alternatively, the Raman analysis method may further include a step of performing multiple quantitative diagnoses simultaneously analyzing the possibility of individual onset of multiple diseases through multidimensional multi-marker analysis and measurement based on the information on the Raman map.
이상에서는 본 발명에 따른 바람직한 실시 예들에 대하여 도시하고 또한 설명하였다. 그러나 본 발명은 상술한 실시 예에 한정되지 아니하며, 특허 청구의 범위에서 첨부하는 본 발명의 요지를 벗어남이 없이 당해 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 누구든지 다양한 변형 실시가 가능할 것이다.
The foregoing embodiments and advantages are merely exemplary and are not to be construed as limiting the present invention. However, the present invention is not limited to the above-described embodiments, and various changes and modifications may be made by those skilled in the art without departing from the scope of the present invention. .
5: 광 경로 10: 레이저 광원
11: 공간 필터(Spatial Filter) 12: 미러
13: 다이크로익 미러(Dichroic Mirror) 14: X축 미러(X-axis Mirror)
15: Y축 미러(Y-axis Mirror)
16,17: 보이스 코일 모터(Voice Coil Motor)
18,19: 드라이버 20: 대물 렌즈
21: 시료
22: 스팟 23: 연속 스캔 경로
24: 연속적 분광 정보 28: 에지 필터(Edge Filter)
29: 스테이지 30: 컴퓨터
35: 분석 툴(Tool)
36: 스팟별 정보를 포함하는 라만 맵(Raman Map)
36: 분포 및 계수 정보를 포함하는 라만 맵(Raman Map)
40: 카메라 50: 분광부(분광계)
60: 엑추에이터부 65,75: 스캔 제어부
70: 보이스 코일 모터 80: 플립미러
81: 플립미러부5: optical path 10: laser light source
11: Spatial Filter 12: Mirror
13: Dichroic Mirror 14: X-axis Mirror 14:
15: Y-axis mirror
16,17: Voice coil motor (Voice Coil Motor)
18, 19: driver 20: objective lens
21: Sample
22: Spot 23: Continuous scan path
24: Continuous spectroscopic information 28: Edge filter
29: stage 30: computer
35: Analysis Tool
36: Raman Map containing spot-specific information
36: Raman Map containing distribution and coefficient information
40: camera 50: spectroscope (spectrometer)
60:
70: Voice coil motor 80: Flip mirror
81: Flip mirror part
Claims (9)
레이저 광원으로부터 제공되는 입사광을 반사시키며 일축에 대한 반사 경로를 기 설정된 범위의 속도로 가변시키는 플립미러부;
상기 플립미러부의 가변 축과 수직되는 타 축을 기준으로 상기 플립미러부의 위치를 상기 플립미러부 가변속도보다 느린 속도로 상기 플립미러부의 동작에 동기시켜 가변시키는 엑추에이터부;
상기 플립미러부와 엑추에이터부를 제어하여 대물렌즈를 통해 상기 시료에 제공되는 입사광이 검사 영역 중 적어도 일부 영역을 연속적으로 순차 스캔하도록 하는 스캔 제어부;및
상기 스캔 제어부에 의해 입사광이 상기 검사 영역을 순차 스캔하면서 발생되는 상기 복수 종류의 생체 표지자에 의한 라만 신호가 혼합된 반사광을 기 설정된 광 경로를 통해 입력받아 해당 반사광에 대한 분광 정보를 카메라를 통해 출력하되, 시료별로 설정된 하나 이상의 순차 스캔 구간에 대한 연속적 분광 정보를 한 번의 카메라 동작 기간 중 출력하는 분광부;를 포함하는 것을 특징으로 하는 시료 내 다수 생체 표지자를 시료 영역에 대해서 고속으로 정량 분석하는 라만 분석 장치.
A Raman analyzer for collectively analyzing a plurality of kinds of trace biomarker markers present in a sample,
A flip mirror part for reflecting incident light provided from a laser light source and varying a reflection path for one axis at a predetermined range of speed;
An actuator unit for changing the position of the flip mirror unit in synchronization with the operation of the flip mirror unit at a speed lower than the variable speed of the flip mirror unit with respect to the other axis perpendicular to the variable axis of the flip mirror unit;
A scan control unit for controlling the flip mirror unit and the actuator unit so that the incident light provided to the sample through the objective lens sequentially and continuously scans at least a part of the inspection area;
The scan control unit receives the reflected light mixed with the Raman signals generated by the plurality of kinds of biomarkers generated while sequentially scanning the inspection region by the scan control unit through the predetermined optical path and outputs the spectral information about the reflected light through the camera And a spectroscopic unit for outputting consecutive spectroscopic information for at least one sequential scan interval set for each sample during one camera operation period. The apparatus for analyzing a plurality of bio-markers in a sample at a high speed, Analysis device.
선형 제어 가능한 소형 모터, 피에조 엑추에이터 또는 초음파 엑추에이터를 포함하는 것을 특징으로 하는 시료 내 다수 생체 표지자를 정량 분석하는 라만 분석 장치.
2. The apparatus according to claim 1, wherein the actuator section
Characterized in that it comprises a linear motor, a linear motor, a linear motor, a linear motor, a linear motor, a linear motor, a linear motor,
보이스 코일 모터나 MEMS 구동부를 포함하는 것을 특징으로 하는 시료 내 다수 생체 표지자를 정량 분석하는 라만 분석 장치.
The apparatus of claim 1, wherein the flip mirror section
Wherein the biological analyzer comprises a voice coil motor and a MEMS driving unit.
상기 시료를 안착시키는 스테이지를 상기 대물렌즈의 대면에 대해 상하 방향으로 움직이며 상기 스캔에 따른 시료 높이 변화를 보정하는 보정부를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 시료 내 다수 생체 표지자를 정량 분석하는 라만 분석 장치.
The apparatus of claim 1, wherein the scan control unit
Further comprising a correcting unit which moves the stage for placing the sample on the opposite surface of the objective lens in the up and down direction and corrects a change in the sample height according to the scan, .
500 나노미터에서 600 나노미터 사이에서 최고의 양자 효율(Quantum Efficiency)를 갖는 CCD를 포함하는 시료 내 다수 생체 표지자를 정량 분석하는 라만 분석 장치.
The apparatus of claim 1, wherein the spectroscope
A Raman analyzer for quantitatively analyzing a plurality of biomarkers in a sample including a CCD having the highest quantum efficiency between 500 nanometers and 600 nanometers.
상기 플립미러부, 엑추에이터부 및 스캔 제어부는 단일 구성으로 이루어진 탁상형 또는 일체형인 것을 특징으로 하는 시료 내 다수 생체 표지자를 정량 분석하는 라만 분석 장치.
The method according to claim 1,
Wherein the flip mirror unit, the actuator unit, and the scan control unit are a tabletop or an integral unit having a single structure.
시료 면적이 1 제곱 밀리미터 이상인 것을 특징으로 하는 라만 분석 장치.
The method according to claim 1, wherein the sample
Wherein the sample area is at least 1 square millimeter.
a) 상기 연속적 분광 정보를 기 설정된 분포 및 계수 정보를 포함하는 라만 맵의 형태로 분석하여 분석 결과를 도출하는 단계;를 포함하는 시료 내 다수 생체 표지자를 정량 분석하는 라만 분석 방법.
A method for analyzing a plurality of biological markers in a sample using the Raman analyzer according to any one of claims 1 to 7 at a high-speed quantitative analysis,
a) analyzing the continuous spectral information in the form of a Raman map including predetermined distribution and coefficient information to derive an analysis result; and quantitatively analyzing a plurality of biomarkers in the sample.
다차원 다중 표지자 분석 및 측정을 통해 상기 라만 맵 상의 정보를 기초로 복수 질병에 대한 개별적 발병 가능성을 동시에 분석하는 다중 정량 진단을 수행하는 b)단계를 더 포함하는 시료 내 다수 생체 표지자를 정량 분석하는 라만 분석 방법.
9. The method of claim 8,
And b) performing multiple quantitative diagnosis simultaneously analyzing the possibility of individual occurrence of multiple diseases based on the information on the Raman map through multidimensional multi-marker analysis and measurement. Analysis method.
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